(57)【要約】【課題】優れたＧＬＰ−１分泌促進作用を有し、且つ安全性が高い医薬品、医薬部外品、食品、飼料及びそれらに配合可能な素材を提供する。【解決手段】カシュウイモ又はその抽出物を有効成分とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カシュウイモ又はその抽出物を有効成分とするＧＬＰ−１分泌促進剤。
【請求項２】
カシュウイモ又はその抽出物を有効成分とする食欲抑制剤。
【請求項３】
カシュウイモ又はその抽出物を有効成分とする心機能悪化の予防及び／又は改善剤。
【請求項４】
カシュウイモ又はその抽出物を有効成分とする動脈硬化の予防及び／又は改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＧＬＰ−１（Glucagon-like peptide-1）分泌促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、脂質異常症、高血圧症等の生活習慣病が大きな問題となっている。生活習慣病においては、遺伝因子の他、食生活等の生活習慣が発症に寄与すると考えられている。また肥満は、消費カロリー量に対して摂取カロリー量が過剰となることが発生の原因の一つとなっている。これら生活習慣病や肥満を予防、改善するには生活習慣の改善が有効と考えられているが、生理系統を調節して生活習慣病の発症や肥満の予防に有用な素材、特に日常的に摂取できる飲食品として利用可能な素材への期待が高まっている。
【０００３】
ＧＬＰ−１は、胃排泄や胃酸分泌の抑制、及び食欲と摂食の抑制等の中枢神経系に対する作用を有することが知られ、中枢神経系に存在するＧＬＰ−１受容体を介して食欲と摂食抑制効果が発揮されることが報告されている（非特許文献１）。従って、ＧＬＰ−１の分泌を高めることは、食欲抑制に有用である。
【０００４】
更にＧＬＰ−１は、心筋細胞、心内膜、冠動脈の血管内皮細胞や平滑筋に存在するＧＬＰ−１の受容体を介したシグナル伝達により、心筋細胞内のｃＡＭＰを高め心筋収縮力を増強させたり、ＮＯ産生を促して、ＧＬＵＴ１を介した糖取込みを増加させて心機能改善作用を示すことが報告されている。ＧＬＰ−１は、血管内皮細胞上に存在するＧＬＰ−１Ｒを介したシグナル伝達により血管内皮細胞からのＮＯ産生を増加させ、血管弛緩反応を改善させることが報告されている（非特許文献２）。ＮＯ産生の増加には、血小板凝集抑制作用(非特許文献３)や、血栓形成を促進する因子であるＰＡＩ１を抑制する作用(非特許文献４)があり、動脈硬化を改善させることが報告されている。また、Ｄａｈｌ食塩感受性ラットにＧＬＰ−１、エキセナチド（ＧＬＰ−１受容体作動薬）アナログを投与（４週間、皮下投与）することにより、収縮期血圧が有意に低下することが報告されている（非特許文献５）。
従って、ＧＬＰ−１の効果を高めることは、心機能改善、動脈硬化改善、高血圧等の生活習慣病の改善に有用である。
【０００５】
しかし、ＧＬＰ−１の活性本体はポリペプチドであり、ＧＬＰ−１を経口摂取すると、消化管内で消化酵素により消化・分解され易く、生体内での半減期は非常に短い。そのため、体外からＧＬＰ−１を投与しても、その血中濃度を一定に保つのは非常に困難である。従って、生体内でのＧＬＰ−１濃度を長時間にわたって高めるためには、体外からのＧＬＰ−１の投与よりも内因性ＧＬＰ−１の分泌を促進することが望ましい。
【０００６】
ここで培養系での研究から、ＧＬＰ−１の分泌を促進する物質として、パルミチン酸、オレイン酸、肉加水分解物（ＭＨ）、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）、カルバコール、フォルスコリン、イオノマイシン、酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ）、必須アミノ酸（ＥＡＡ）、ロイシン、イソロイシン、スキムミルク、カゼイン、レプチン、ムスカリン性受容体Ｍ１、Ｍ２、キラヤ又はその抽出物、リゾホスファチジルイノシトール又はその塩が、これまでに報告されている（非特許文献６〜１０、特許文献１〜２）。
【０００７】
一方、カシュウイモは、ヤモノイモ科の植物であり、当該カシュウイモ又はその抽出物はリパーゼ阻害（特許文献３）、血糖降下作用（特許文献４）を有し、糖尿病治療（特許文献５）に有効であることが報告されている。
しかしながら、カシュウイモと、ＧＬＰ−１分泌促進との関係については知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０１２−１３１７４２号公報
【特許文献２】国際公開第２０１２／０８６４０６号
【特許文献３】特開２００５−８５７２号公報
【特許文献４】特開２００２−１５４９７８号公報
【特許文献５】特開平０８−３２５１５９号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Eur J Pharmacol, 2002, 440(2-3):269-279
【非特許文献２】医学のあゆみ, 2012, 241(7):507-516
【非特許文献３】Br J Pharmacol. 1987;92:181-187
【非特許文献４】Arterioscler Thromb Vasc Biol. 1998;18:1771-1779., Eur J Biochem. 2000;267:1001-1007
【非特許文献５】Cardiovascular Diabetology 2010, 9:32
【非特許文献６】Endocrinology, 2001, 142(10):4522-4528
【非特許文献７】Journal of Endocrinology, 2006, 191,159-170
【非特許文献８】Nutrition, 2009, 25(3):340-349
【非特許文献９】Endocrinology, 2003, 144(7):3244-3250
【非特許文献１０】Diabetes, 2006, 52(2):252-259
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、優れたＧＬＰ−１分泌促進作用を有し、且つ安全性が高い医薬品、医薬部外品、食品、飼料及びそれらに配合可能な素材を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題を解決すべく研究を行った結果、カシュウイモの抽出物にＧＬＰ−１分泌促進作用があることを見出した。
【００１２】
すなわち、本発明は、下記に係るものである。
（１）カシュウイモ又はその抽出物を有効成分とするＧＬＰ−１分泌促進剤。
（２）カシュウイモ又はその抽出物を有効成分とする食欲抑制剤。
（３）カシュウイモ又はその抽出物を有効成分とする心機能悪化の予防及び／又は改善剤。
（４) カシュウイモ又はその抽出物を有効成分とする動脈硬化の予防及び／又は改善剤。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤等は、優れたＧＬＰ−１分泌促進作用を有し、かつ長期間摂取しても安全性も高いことから、食欲抑制、胃排泄抑制、心機能悪化の予防及び／又は改善、動脈硬化の予防及び／又は改善の効果を発揮し得る医薬品、医薬部外品及び食品、或いはこれらへ配合するための素材又は製剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】カシュウイモの抽出物による、ＥＬＩＳＡによりＧＬＰ−１分泌を測定した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明において、「ＧＬＰ−１分泌促進」とは、経口摂取した場合に、消化管粘膜上皮の内分泌細胞（Ｌ細胞）からのＧＬＰ−１分泌を促進すること、あるいは食事、特に脂質を多く含む食事を摂取することで引き起こされる生体内でのＧＬＰ−１分泌を促進することをいう。あるいは、主として食後に生じる生体内でのＧＬＰ−１分泌に伴う血中ＧＬＰ−１濃度上昇を増強するか、上昇したＧＬＰ−１濃度を維持するか、又は上昇したＧＬＰ−１濃度の低下を抑制することをいう。
【００１６】
「食欲抑制」とは、食欲ないしは摂食量の低下、それに伴う体重増加の抑制をいう。当該抑制はＧＬＰ−１の中枢神経系の視床下部摂食中枢を介する作用が主である。
本発明において、「予防」とは、個体における疾患若しくは症状の発症の防止又は遅延、あるいは個体の疾患若しくは症状の発症の危険性を低下させることをいう。「改善」とは、疾患、症状又は状態の好転、疾患、症状又は状態の悪化の防止又は遅延、あるいは疾患又は症状の進行の逆転、防止又は遅延をいう。
「心機能改善」とは、心臓の筋収縮力を増強させたり、心筋のインスリン感受性と心臓の糖取り込みを増強させ、それに伴う心機能を改善することをいう。当該作用はＧＬＰ−１の心臓への直接作用だけでなく、脳から迷走神経により伝達される神経刺激を介する作用もある。
「動脈硬化改善」とは、ｅＮＯＳ活性化を介して内皮依存性の血管拡張反応を改善することで動脈硬化を改善することをいう。当該作用は、ＧＬＰ−１の血管内皮細胞のＧＬＰ−１Ｒを介したシグナル伝達による作用のみならず、動脈壁への単球・マクロファージの集積と炎症反応を抑制させたり、腸管のカイロミクロン分泌調節を介する作用も含む。
「食後」とは摂取した食事中の炭水化物がおおむね吸収されるまでの時間を指し、食事の摂取後の直後（０分）から６時間後まで、好ましくは５時間後まで、より好ましくは４時間後まで、更に好ましくは３時間後までの時間をいう（Diabete Care,2001,24(4):775-778）。
【００１７】
本発明において、カシュウイモはヤモノイモ科ヤマノイモ属のDioscorea bulbifera Linn.をいう。
【００１８】
斯かるカシュウイモは、いずれの任意の部位、例えば全草、葉、茎、芽、花、蕾、根、根茎、仮球茎、球茎、塊茎、種子等、又はそれらの組み合わせを使用することができるが、塊根を用いるのが好ましい。
斯かるカシュウイモは、そのまま、又はそれを圧搾することにより得られる搾汁、カシュウイモの乾燥物若しくはその粉砕物、或いはこれから抽出した抽出物として用いることができるが、抽出物として用いるのが好ましい。
【００１９】
上記抽出物としては、カシュウイモを常温又は加温下抽出するか、又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出すること等の、既知の抽出方法により得られる各種溶剤抽出物、又はその希釈液、その濃縮液、その乾燥末、ペースト若しくはその活性炭処理したものが挙げられる。
【００２０】
既知の抽出方法としては、例えば、固液抽出、液液抽出、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌等が挙げられる。抽出時間を短縮する場合には、攪拌を伴う固液抽出が望ましい。この固液抽出の好適な条件の一例としては、１０〜１００℃下、１００〜４００ｒｐｍ／ｍｉｎで１〜３０分間の攪拌が挙げられる。浸漬の好適な一例として、１０〜５０℃で、１時間〜１４日間の浸漬が挙げられる。また、抽出時間を短縮する場合には、攪拌を伴う固液抽出が望ましい。
上記抽出物の酸化を防止するため、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する手段を併用してもよい。
【００２１】
抽出のための溶剤には、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができる。溶剤の具体例としては、例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；スクワラン、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；トルエン等の芳香族炭化水素類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；及び超臨界二酸化炭素；ピリジン類；油脂、ワックス等その他オイル類等の有機溶剤；ならびにこれらの混合物が挙げられる。好適には、水、アルコール類、アルコール−水混合液、炭化水素類が挙げられ、アルコール−水混合液、炭化水素類がより好ましい。アルコール類としては炭素数１〜５のアルコール類が好ましく、エタノールがより好ましい。炭化水素類としてはヘキサンが好ましい。
【００２２】
抽出のための溶剤としてアルコール−水混合液を使用する場合には、アルコール類と水との配合割合（容量比）としては、０．００１〜１００：９９．９９９〜０が好ましく、５〜９５：９５〜５がより好ましく、２０〜８０：８０〜２０が更に好ましい。エタノール水溶液の場合、エタノール濃度が、好ましくは４０容量％以上、より好ましくは４５容量％以上である。また好ましくは４０〜１００容量％、より好ましくは７０〜９５容量％である。
【００２３】
溶剤の使用量としては、カシュウイモ（乾燥質量換算）１ｇに対して好ましくは１ｍＬ以上、より好ましくは５ｍＬ以上、好ましくは１００ｍＬ以下、より好ましくは５０ｍＬ以下である。また、好ましくは１〜１００ｍＬ、より好ましくは８〜５０ｍＬである。抽出時間としては、好ましくは１分間以上、より好ましくは１０分間以上、好ましくは３０日間以下、より好ましく１０日間以下である。また好ましくは１分間〜３０日間、より好ましくは１０分間〜１０日間である。このときの抽出温度は、好ましくは０℃以上、より好ましくは１０℃以上、更に好ましくは２０℃以上、好ましくは溶媒沸点以下、より好ましくは１００℃以下、更に好ましくは９０℃以下である。また、好ましくは０℃〜溶媒沸点、より好ましくは１０〜１００℃、更に好ましくは２０〜９０℃である。
【００２４】
斯くして得られる抽出物は、抽出液や画分をそのまま用いてもよく、適宜な溶媒で希釈した希釈液として用いてもよく、或いは濃縮エキスや乾燥粉末としたり、ペースト状に調製したものでもよい。また、凍結乾燥し、用時に、通常抽出に用いられる溶剤、例えば水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、水・エタノール混液、水・プロピレングリコール混液、水・ブチレングリコール混液等の溶剤で希釈して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００２５】
上記抽出物は、食品上・医薬品上許容し得る規格に適合し本発明の効果を発揮するものであれば粗精製物であってもよく、更に得られた粗精製物を既知の分離精製方法を適宜組み合わせてこれらの純度を高めてもよい。精製手段としては、有機溶剤沈殿、遠心分離、限界濾過膜、高速液体クロマトグラフやカラムクロマトグラフ等が挙げられる。
【００２６】
後記実施例に示すように、カシュウイモの抽出物は、下部消化管（回腸〜結腸）細胞からのＧＬＰ−１分泌を促進する作用を有する。従って、上記カシュウイモ又はその抽出物は、ＧＬＰ−１分泌促進に有用であり、これらには、食欲抑制、胃排泄抑制効果が期待できる（上記非特許文献１）。更には、血管保護強化効果により、心機能悪化の予防及び／又は改善、動脈硬化の予防及び／又は改善効果が期待できる（上記非特許文献２〜５）。
【００２７】
従って、上記カシュウイモ又はその抽出物は、ＧＬＰ−１分泌促進剤、食欲抑制剤、心機能悪化の予防及び／又は改善剤、動脈硬化の予防及び／又は改善剤（以下、「ＧＬＰ−１分泌促進剤等」とする）として、使用することができ、更にこれらの剤を製造するために使用することができる。
【００２８】
当該ＧＬＰ−１分泌促進剤等は、それ自体、ヒトを含む動物に摂取又は投与した場合にＧＬＰ−１分泌促進、食欲抑制、体重減少、心機能悪化の予防及び／又は改善、動脈硬化の予防及び／又は改善の各効果を発揮する、ヒト若しくは動物用の医薬品、医薬部外品、食品、又は飼料であってもよく、或いは当該医薬品、医薬部外品、食品又は飼料に配合して使用される素材又は製剤であってもよい。
【００２９】
また、当該食品には、運動不足者や中高年者等におけるＧＬＰ−１分泌促進、食欲抑制、心機能悪化の予防及び／又は改善、動脈硬化の予防及び／又は改善をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した食品、機能性食品、病者用食品、特定保健用食品が包含される。これらの食品は機能表示が許可された食品であるため、一般の食品と区別することができる。
【００３０】
上記ＧＬＰ−１分泌促進剤等を、ヒト又は動物に投与して使用する場合の使用は、治療的使用であっても、非治療的使用であってもよい。
ここで、「非治療的」とは、医療行為を含まない、すなわちヒトを手術、治療又は診断する方法を含まない概念である。
【００３１】
上記カシュウイモ又はその抽出物を含有する上記医薬品（医薬部外品も含む）の剤型は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、静脈内注射剤、筋肉注射剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤、湿布剤、バップ剤、軟膏、ローション、クリーム等のいずれでもよい。投与形態も経口投与（内用）、非経口投与（外用、注射）のいずれであってもよい。これらの投与形態のうち、好ましい形態は経口投与である。
【００３２】
また、このような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、上記カシュウイモ又はその抽出物を其々単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤、本発明以外の薬効成分等を適宜組み合わせて調製することができる。また、経口用液体製剤は、嬌味剤、緩衝剤、安定化剤等を加えて常法により調製することができる。
【００３３】
経口投与用製剤中の、上記カシュウイモ又はその抽出物の含有量は、固形分濃度として、一般的に好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、好ましくは２０質量％以下、より好ましくは１０質量％以下である。また、好ましくは０．０１〜１０質量％、より好ましくは０．０５〜５質量％である。
【００３４】
上記カシュウイモ又はその抽出物を含有する上記食品の形態としては、清涼飲料水、茶系飲料、コーヒー飲料、果汁飲料、炭酸飲料、ジュース、ゼリー、ウエハース、ビスケット、パン、麺、ソーセージ等の飲食品や栄養食等の各種食品の他、更には、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）の栄養補給用組成物が挙げられる。
【００３５】
種々の形態の食品は、上記カシュウイモ又はその抽出物を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤、本発明以外の有効成分等を適宜組み合わせて調製することができる。
【００３６】
当該食品飼料中の、上記カシュウイモ又はその抽出物の含有量は、一般的に好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、好ましくは１０質量％以下、より好ましくは５質量％以下である。また、好ましくは０．０１〜１０質量％、より好ましくは０．０５〜５質量％である。
【００３７】
また、飼料としては、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、犬、猫、小鳥、リス等に用いるペットフード等の飼料等が挙げられ、上記食品と同様の形態に調製できる。
【００３８】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤等の摂取量は、対象の種、体重、性別、年齢、状態又はその他の要因に従って変動し得る。投与の用量、経路、間隔、及び摂取の量や間隔は、当業者によって適宜決定され得るが、成人に対して１日あたり、上記カシュウイモ又はその抽出物（乾燥物換算）として、一般的に好ましくは２０μｇ／６０ｋｇ体重以上、より好ましくは２００μｇ／６０ｋｇ体重以上、更に好ましくは２ｍｇ／６０ｋｇ体重以上、好ましくは１０００ｍｇ／６０ｋｇ体重以下、より好ましくは５００ｍｇ／６０ｋｇ体重以下、更に好ましくは２００ｍｇ／６０ｋｇ体重以下である。また、好ましくは２０μｇ〜２０００ｍｇ／６０ｋｇ体重、より好ましくは２００μｇ〜１０００ｍｇ／６０ｋｇ体重、更に好ましくは２〜５０００ｍｇ／６０ｋｇ体重である。
【００３９】
投与又は摂取対象者としては、病者又は健常者に関わらず、それを必要若しくは希望する人であれば特に限定されないが、運動不足者や中高年者が好ましい。また肥満患者だけでなく、太りやすい体質の者、又は適切な体重維持を望む者等に適用することができ、特にこれらの対象者において食欲旺盛な対象者が好ましい。あるいは、心機能が低下していたり、血管内皮機能が低下し、動脈硬化症や高血圧症の患者だけでなく、その予備群にも適用することができる。
【００４０】
上述した実施形態に関し、本発明においては以下の態様が開示される。
＜１＞カシュウイモ又はその抽出物を有効成分とするＧＬＰ−１分泌促進剤。
＜２＞カシュウイモ又はその抽出物を有効成分とする食欲抑制剤。
＜３＞カシュウイモ又はその抽出物を有効成分とする心機能悪化の予防及び／又は改善剤。
＜４＞カシュウイモ又はその抽出物を有効成分とする動脈硬化の予防及び／又は改善剤。
＜５＞ＧＬＰ−１分泌促進剤を製造するための、カシュウイモ又はその抽出物の使用。
＜６＞食欲抑制剤を製造するための、カシュウイモ又はその抽出物の使用。
＜７＞心機能悪化の予防及び／又は改善剤を製造するための、カシュウイモ又はその抽出物の使用。
＜８＞動脈硬化の予防及び／又は改善剤を製造するための、カシュウイモ又はその抽出物の使用。
＜９＞ＧＬＰ−１分泌促進に使用するための、カシュウイモ又はその抽出物。
＜１０＞食欲抑制に使用するための、カシュウイモ又はその抽出物。
＜１１＞心機能悪化の予防及び／又は改善に使用するための、カシュウイモ又はその抽出物。
＜１２＞動脈硬化の予防及び／又は改善に使用するための、カシュウイモ又はその抽出物。
＜１３＞非治療的に使用するための、＜９＞〜＜１２＞に記載の植物又はそれらの抽出物。
＜１４＞カシュウイモ又はその抽出物を、ヒト若しくは動物に投与又は摂取するＧＬＰ−１分泌促進方法。
＜１５＞カシュウイモ又はその抽出物を、ヒト若しくは動物に投与又は摂取する食欲抑制方法。
＜１６＞カシュウイモ又はその抽出物を、ヒト若しくは動物に投与又は摂取する心機能悪化の予防及び／又は改善方法。
＜１７＞カシュウイモ又はその抽出物を、ヒト若しくは動物に投与又は摂取する動脈硬化の予防及び／又は改善方法。
＜１８＞非治療的方法である、＜１４＞〜＜１７＞に記載の方法。
＜１９＞カシュウイモ又はその抽出物を有効成分とする胃排泄抑制剤。
＜２０＞カシュウイモ又はその抽出物を有効成分とする血管保護強化剤。
＜２１＞＜１＞〜＜２０＞のいずれかにおいて、上記抽出物は、好ましくは水抽出物またはエタノール水溶液抽出物である。
【実施例】
【００４１】
製造例１：カシュウイモ抽出物の調製
ヤマノイモ科カシュウイモの塊根（Kathmandu産、不二化成より入手）の細断物４０ｇに、５０ｖｏｌ％エタノール水４００ｍＬを加え、室温、静置条件にて、１５日間抽出した。その後、ろ過により非抽出部と分離し、カシュウイモ５０ｖｏｌ％エタノール抽出液３１５ｍＬを得た。本抽出液の蒸発残分を測定したところ、０．９６％（ｗ／ｖ）であった。
【００４２】
上記製造例で得られた抽出物を、５０ｖｏｌ％エタノール水により抽出物濃度１％（ｗ／ｖ）となるように希釈し、試験サンプルとした。コントロールとしては、５０ｖｏｌ％エタノール水を用いた。
ＮＣＩ−Ｈ７１６細胞(ヒト結腸由来細胞；ATCCより購入、Dr. Herbert K. Oieらにより開発され、agencies of the United States Public Health Serviceから供給)は３７℃、５％ＣＯ2存在下で培養した。培養液は、ＲＰＭＩ１６４０(10%ウシ胎児血清含有、高グルコース；Invitrogen社)を用いた。上記細胞を、マトリゲル(100μL/well(N=4)となるように播き、ＤＭＥＭ(10%ウシ胎児血清含有、高グルコース；Invitrogen社)培地で培養した。３日後に当該培地を試験サンプル/ＰＭＡ（Phorbol 12-myristate 13-acetate）(陽性コントロール)を含むＫＲＢ(Krebs-Ringer bicarbonate、Sigma社)buffer・0.2%BSAに交換し、２時間培養した後、培地を回収した。培地はdiprotin-A(DPP4阻害剤、Sigma社)、及びPMSF(Phenylmethylsulfonyl fluoride、セリンプロテアーゼ阻害剤、Sigma社)を加えた微量遠心管に回収し、浮遊した細胞を除去した後、ＧＬＰ−１定量まで−８０℃で保存した。培地中ＧＬＰ−１はGLUCAGON-LIKE PEPTIDE-1 (ACTIVE) ELISA KIT (LINCO Research)を用いたＥＬＩＳＡにより定量した。その結果を図１及び表１に示す。
【００４３】
【表１】
2014201567.tif 000002
【００４４】
表１及び図１より、カシュウイモ抽出物は０．００１％、０．０１％の濃度において、細胞のＧＬＰ−１分泌を有意に促進した。
【図１】
2014201567.tif 000003