(57)【要約】      （修正有）【課題】生体細胞においてＡｔｏｈ１遺伝子（例えば、Ｈａｔｈ１）の発現増加をもたらす諸方法によるＡｔｏｈ１発現の増加から利益を得る可能性のある疾患及び／又は障害、例えば聴覚有毛細胞の喪失に関連する聴覚障害若しくは平衡障害、又は異常細胞増殖に関連する障害の治療法の提供。【解決手段】図の化合物を含む医薬組成物。2014156470.tif 000034【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
聴覚有毛細胞の喪失に関連する聴覚障害又は平衡障害治療用の医薬組成物であって、下記の式：
【化１】
2014156470.tif 000033
（式中、
Ｒ１１８、Ｒ１１９、及びＲ１２１の各々は、Ｈであり、
Ｒ１２０は、Ｈ、ハロ、ＮＯ２およびＣ１〜Ｃ３アルキルから選択され、
Ｒ１２２は、水素又は−Ｚ−Ｒａであり、式中、
ＺはＯ又は結合であり、
Ｒａは、
（ｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキルであるか、又は
（ｉｉ）Ｃ７〜Ｃ１１アラルキルであり、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびＣ１〜Ｃ６アルコキシから独立して選択される、１〜５個の置換基で随意に置換されており、
Ｒ１２３は、
（ｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ヒドロキシおよび−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）から独立して選択される１〜３個の置換基で随意に置換されているフェニルであるか、又は
（ｉｉ）Ｃ７〜Ｃ１１アラルキルであり、アラルキルのアリール部分がＮＨ２で随意に置換されているフェニルであるか、又は
（ｉｉｉ）−（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）−Ｚ１−フェニルであり、式中Ｚ１が、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）であり、前記フェニル部分が、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびＣ１〜Ｃ６アルコキシから独立して選択される、１〜５個の置換基で随意に置換されている。）
で示される化合物又はその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２】
処置を必要としている患者の内耳に局所的に投与され、かかる患者の内耳中で、聴覚有毛細胞の特徴を有する細胞を増加させる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
注射によって蝸牛の１つ以上の管腔、内耳道の聴神経幹、又は鼓室階へ投与される、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
聴覚有毛細胞が、外耳聴覚有毛細胞または内耳聴覚有毛細胞である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
Ｒ１２２が−Ｚ−Ｒａである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ＺがＯである、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
Ｒａが、
Ｃ７〜Ｃ１１アラルキルであり、それがハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびＣ１〜Ｃ６アルコキシから独立して選択される、１〜５個の置換基で随意に置換されている、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
Ｒａが、
それぞれのフェニル部分が、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびＣ１〜Ｃ６アルコキシから独立して選択される、１〜２個の置換基で随意に置換されている、ベンジルまたはフェネチルである、
請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
Ｒ１２３が、
フェニルであり、それがＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ヒドロキシおよび−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）から独立して選択される、１〜３個の置換基で随意に置換されている、
請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
Ｒ１２０が、ハロまたはＮＯ２である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
Ｒ１２２が−Ｚ−Ｒａであり、式中Ｒａが、Ｃ７〜Ｃ１１アラルキルであり、それが、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびＣ１〜Ｃ６アルコキシから独立して選択される、１〜５個の置換基で随意に置換されており、ならびに
Ｒ１２３がフェニルであり、それがＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ヒドロキシおよび−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）から独立して選択される、１〜３個の置換基で随意に置換されている、
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
Ｒ１２２が−Ｚ−Ｒａであり、式中ＺがＯであり、Ｒａが、それぞれのフェニル部分が、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびＣ１〜Ｃ６アルコキシから独立して選択される、１〜２個の置換基で随意に置換されているベンジルまたはフェネチルであり、
Ｒ１２３が、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ヒドロキシおよび−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）から独立して選択される、１〜３個の置換基で随意に置換されているフェニルであり、ならびに
Ｒ１２０が、Ｈ、ハロ、及びＮＯ２から選択される、
請求項１〜９および１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記化合物が、
６−クロロ−１−（２−クロロベンジルオキシ）−２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール、
６−クロロ−１−（２−クロロベンジルオキシ）−２−（４−メトキシフェニル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール、
６−クロロ−２−（４−メトキシフェニル）−１−（４−メチルベンジルオキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール、
６−クロロ−１−（３，５−ジメチルベンジルオキシ）−２−（４−メトキシフェニル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール、
６−クロロ−１−（４−メトキシベンジルオキシ）−２−（４−メトキシフェニル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール、
１−（４−メチルベンジルオキシ）−６−ニトロ−２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール、
２，５−ジクロロ−Ｎ−（（１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）メチル）アニリン、
４−（２−（１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）エチル）アニリン、
２−（（４−フルオロフェノキシ）メチル）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール、および
２−（４−メトキシフェニル）−１−フェネチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール
からなる群から選択されるか、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記化合物が、６−クロロ−１−（２−クロロベンジルオキシ）−２−フェニル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール又はその薬学的に許容される塩である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（優先権の主張）
本出願は、３５ＵＳＣ§１１９（ｅ）に基づき、２００８年２月７日に出願された米国特許仮出願第６１／０２７，０３２号の優先権を主張するものであり、これによりその全内容が参照により組み込まれる。
【０００２】
本発明は、一般的に化合物、医薬組成物、及びそれらを使用するための方法を提供し、それらの方法には、生体細胞内のＡｔｏｈ１遺伝子（例えば、Ｈａｔｈ１）の発現増加をもたらす方法が含まれる。より具体的には、本発明は、Ａｔｏｈ１発現の増加から利益を得る可能性のある疾患及び／又は障害の治療に関する。
【背景技術】
【０００３】
最も一般的なタイプの聴力損失の１つは、有毛細胞、音を電気的信号に変換することを担う蝸牛の感覚細胞の喪失により引き起こされる感音難聴である。ヒト内耳は、誕生時に１蝸牛当たり約１５，０００個の有毛細胞を含有しているに過ぎず、これらの細胞は、種々の遺伝的又は環境的要因の結果として失われる場合があるが、失われた細胞又は損傷を受けた細胞が置換されることはあり得ない。しかしながら、転写因子、Ａｔｏｈ１の過剰発現は、蝸牛の感覚器、コルチ器官の上皮細胞から有毛細胞の分化を誘導することができる（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３）。Ａｔｏｈ−１発現は、他の細胞、例えば腸細胞を分化状態へと駆動することにも役割を果たし（非特許文献４）、Ａｔｏｈ−１の過剰発現は、結腸癌細胞の増殖を低減する（非特許文献５）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Zheng and Gao, Nat Neurosci 2000;3:580-586
【非特許文献２】Kawamoto et al., J Neurosci 2003;23:4395-4400
【非特許文献３】Gubbels et al., Nature 2008;455:537-541
【非特許文献４】Aragaki et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 2008 Apr; 368(4):923-929
【非特許文献５】Leow et al., Ann N Y Acad Sci. 2005 Nov; 1059:174-83
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、本明細書に記載されている化合物及びそれらを含有する組成物に関する。例えば、本発明は、本明細書に開示されているように、細胞においてＡｔｏｈ１発現を増加可能な１つ又は複数の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。該組成物は、患者への投与用に製剤化することができる。したがって、医薬組成物は本発明内にあり、組織培養で維持された細胞又は組織への適用に好適な濃縮貯蔵物及び組成物、並びに該化合物及び該組成物の使用方法も本発明内にある。
【０００６】
該組成物が薬学的に許容される場合（つまり、無毒性）、該組成物は、緩衝剤（例えばリン酸緩衝剤）、アミノ酸、尿素、アルコール、アスコルビン酸、リン脂質、ポリペプチド、ＥＤＴＡ、塩化ナトリウム（例えば、生理食塩水）、リポソーム、マンニトール、ソルビトール、水、グリセロール、又はそれらの組み合わせなどの薬学的に許容される担体を含むことができる。保存剤及び染料も含まれていてよい。幾つかの実施形態では、組成物は無菌である。
【０００７】
本明細書に記載されている化合物は、細胞培養（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で維持された細胞の特徴を変更するために使用することができ、組成物及び／又は処理細胞は、治療を必要とする患者に投与することができる。例えば、患者を治療する方法は、（ａ）治療を必要とする患者を選択するステップ、及び（ｂ）治療上有効量の本明細書に記載されている化合物（例えば、投与用に製剤された化合物）を該患者に投与するステップを含む方法により実施することができる。該医薬組成物は、全身的に（例えば、経口的に又は非経口的に）投与することができる。より具体的には、該組成物は、静脈内に、筋肉内に、腹腔内で、舌下に、直腸的に、経膣的に、経皮的に、皮下に、又は吸入により投与することができる。経口的に投与される場合、該組成物は、錠剤（例えば、圧縮錠剤）、丸剤、シロップ、懸濁剤、乳剤、又はカプセルとして製剤化することができる。非経口的に投与される場合、該組成物は、ロゼンジ、滴下剤（例えば、点耳剤）、液剤、浣腸剤、坐剤、又は噴霧剤として製剤することができる。これらの組成物は、カテーテル又はポンプを使用して投与することもできる。
【０００８】
本組成物は、局所的に（例えば、細胞分化及び／又はＡｔｏｈ１の発現が望まれる耳又は他の部位に）投与することもできる。耳に投与する場合、該医薬組成物は、蝸牛の管腔への注射、内耳道の聴神経幹への注射、及び／又は鼓室階への注射により投与することができる。より具体的には、該医薬組成物は、中耳内注射、外耳、中耳、又は内耳への塗布（例えば、それらへの注射）、耳の円形窓からの注射、又は蝸牛嚢からの注射により投与することができる。該医薬組成物は、カテーテル又はポンプを使用して、患者に（例えば、局所的に中耳及び／又は内耳に）投与することもできる。
【０００９】
治療を必要とする患者は、聴覚有毛細胞の喪失に関連する聴覚障害又は平衡障害（imbalance disorder）を有するか又は発症のリスクを有していてもよい。本発明は、任意の特定の機序により機能する化合物に制限されないが、本組成物は、治療により患者の内耳（又は他の標的組織（例えば腫瘍））の細胞においてＡｔｏｈ１遺伝子の発現が効果的に増加されるか、又は聴覚有毛細胞の特徴を有する患者の内耳の細胞数が効果的に増加される場合に使用することができる。聴覚有毛細胞は、外耳聴覚有毛細胞であってもよく、又は内耳聴覚有毛細胞であってもよい。
【００１０】
治療を必要とする患者は、癌を有するか又は発症するリスクがあってもよい。該癌は、消化器癌（例えば、食道、胆嚢、肝臓、膵臓、胃、小腸、大腸、結腸、又は直腸）であり得る。
【００１１】
また、治療を必要とする患者は、小脳果粒ニューロン欠乏症、関節疾患、及び／又は骨関節炎を有するか又は発症するリスクがあってもよい。
【００１２】
１つの実施形態では、聴覚障害又は平衡障害を有する患者を治療する方法は、（ａ）随意に、治療を必要としている患者を選択するステップと、（ｂ）聴覚有毛細胞に分化可能な細胞の集団を取得するステップと、（ｃ）当該細胞の集団を、分化した聴覚有毛細胞の特徴を有する集団中の細胞数を増加させるのに十分な時間、有効量の本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数と、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触させるステップと、（ｄ）当該細胞の集団又はそのサブセット（例えば、より高度に分化した細胞のサブセット）を患者の耳に投与するステップとを含む方法により実施することができる。聴覚有毛細胞に分化可能な細胞の集団には、幹細胞、誘導多能性幹（ｉＰＳ）細胞、前駆細胞、支持細胞、ダイテルス細胞、柱細胞、内部支持細胞（inner phalangeal cell）、視蓋細胞（tectal cell）、ヘンゼン細胞、及び生殖細胞が含まれてもよい。該幹細胞は、成体幹細胞（例えば内耳、骨髄、間葉、皮膚、脂肪、肝臓、筋肉、又は血液に由来する幹細胞）、胚性幹細胞、又は胎盤若しくは臍帯から得られる幹細胞であってもよい。該幹細胞と同様に、該前駆細胞は、内耳、骨髄、間葉、皮膚、脂肪、肝臓、筋肉、又は血液に由来してもよい。該細胞の集団の投与は、（ａ）該細胞を、蝸牛の管腔に、内耳道の聴神経幹に、又は鼓室階に注射することにより、又は（ｂ）該細胞を、蝸牛インプラント内に埋め込むことにより達成することができる。患者が細胞で治療される任意の方法においては、患者は、本化合物のうちの１つ又は複数の化合物でさらに治療されてもよい（その逆も可）。該医薬組成物は、上述のように、全身的に又は局所的に投与することができる。
【００１３】
本発明の他の方法には、細胞の集団中の聴覚有毛細胞の特徴を有する細胞数をｉｎ  ｖｉｔｒｏで増加させる方法が含まれる。これらの方法は、聴覚有毛細胞に分化可能な細胞の集団を取得し、当該細胞の集団を、当該細胞の集団中の聴覚有毛細胞の特徴を有する細胞数を増加させるのに十分な時間、有効量の本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数の化合物と、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで（例えば、細胞培養で）接触させることにより、実施することができる。有毛細胞に分化可能な細胞の集団には、幹細胞、ｉＰＳ細胞、内耳幹細胞、成体幹細胞、骨髄由来幹細胞、胚性幹細胞、間葉系幹細胞、皮膚幹細胞、脂肪由来幹細胞、前駆細胞、内耳前駆細胞、支持細胞、ダイテルス細胞、柱細胞、内部支持細胞、視蓋細胞、ヘンゼン細胞、及び生殖細胞からなる群から選択される細胞が含まれる。
【００１４】
本明細書に記載されている化合物の薬剤としての使用、及び本明細書に記載されている病気の治療用又は予防用の薬剤の製造における、本明細書に記載されている化合物の使用も本発明内にある。例えば、該薬剤は、有毛細胞喪失と関連する聴力損失若しくは平衡失調、又は不必要な細胞増殖と関連する病気を治療又は予防するための方法において使用することができる。本明細書に記載されている病気、例えば有毛細胞喪失と関連する聴力損失若しくは平衡失調、又は不必要な細胞増殖と関連する病気の治療における、記載化合物の使用も本発明内にある。該薬剤は、本明細書に記載されている任意の形態であってもよく、単独で、又は別の治療若しくは活性薬剤と併用して投与することができる。
【００１５】
キット（例えば、情報素材を有する上記に記載されている医薬組成物を含むキット、又は本明細書に記載されている化合物及び情報素材を含むキット）も、本明細書に提供されている。これらのキット内の該細胞は、上述の方法により作製することができ、いずれのキットも、該医薬組成物又は該細胞の集団の投与に好適なデバイス、例えば対象体の内耳への挿入に適合する無菌可撓性カニューレなどの追加的器具を含むことができる。
【００１６】
さらに、本発明は、本明細書に記載されている方法により作製される細胞又は細胞の集団を包含する。
【００１７】
本開示は、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を薬剤として使用することも含み、例えば、それは、聴覚有毛細胞の喪失と関連する聴覚障害又は平衡失調疾患の治療、及び／又は異常な細胞増殖と関連する病気の治療に使用することができる。
【００１８】
聴覚有毛細胞の喪失と関連する聴覚障害又は平衡障害の治療、及び／又は異常細胞増殖と関連する障害の治療に使用することができる、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数の使用も本開示により包含される。
【００１９】
定義
「異常増殖」という用語は、本明細書で使用される場合、任意のタイプの細胞の任意の不必要な過増殖と定義され、前記細胞は正常細胞サイクル進行の制約下になく、前記増殖は腫瘍又は任意の癌の発症に帰着する場合がある。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「治療」は、疾患又は障害の症状の１つ又は複数が寛解されるか又はそうでなければ有益に変更される任意の様式を意味する。本明細書で使用される場合、特定の障害の症状の寛解は、恒久的又は一時的、持続するか又は一過性かに関わらず、本発明の組成物及び方法による治療に起因するか又は関連している可能性のある任意の軽減を指す。
【００２１】
「有効量」及び「治療に有効な」という用語は、本明細書で使用される場合、意図した効果又は生理学的な結果を引き起こすための本明細書の化合物又は医薬組成物の投与の状況内で有効な期間使用された（急性又は慢性投与、及び定期又は連続投与）、本明細書に記載されている１つ又は複数の化合物又は医薬組成物の量又は濃度を指す。
【００２２】
本発明で使用するための１つ又は複数の有効量の化合物又は医薬組成物は、Ａｔｏｈ１発現の増加を促進し、１つ又は複数の細胞の完全又は部分的な分化を促進して、Ａｔｏｈ１発現の増加から利益を得る可能性のある疾患を治療する。例えば、それらは、Ａｔｏｈ１発現の増加から利益を得る可能性のある１つ又は複数の疾患、例えば本明細書に記載されている疾患の１つ又は複数の疾患の発症を予防又は遅延させる、疾患の進行を遅延させる、疾患の効果を寛解させる、又はそう診断された患者の予後を改善する量を含む。例えば、聴覚障害の治療では、聴覚を任意の程度に改善するか又は聴覚障害の任意の症状を停止させる化合物が、治療上有効だろう。細胞の異常増殖の治療では、増殖を低減する化合物が治療上有効だろう。異常細胞増殖の治療では、例えば、前記癌に対して細胞の増殖を低減し、腫瘍サイズを低減し、転移を低減し、血管の増殖を低減する化合物が治療上有効だろう。治療上有効量の化合物は、疾患を治癒する必要はないが、疾患の治療を提供する。
【００２３】
「患者」という用語は、本明細書の全体にわたって、本発明の方法による治療が提供される動物、ヒト、又は非ヒトを記述するために使用される。獣医学的及び非獣医学的応用が企図されている。この用語には、鳥類、爬虫類、両生動物、及び哺乳動物、例えばヒト、他の霊長類、ブタ、マウス及びラットなどのげっ歯動物、ウサギ、モルモット、ハムスター、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ヒツジ、及びヤギが含まれるが、これらに限定されない。典型的な患者には、ヒト、家畜、並びにネコ及びイヌなどの家庭ペットが含まれる。
【００２４】
「ハロ」又は「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素の任意のラジカルを指す。
【００２５】
一般的に、及び他に指示がない限り、置換基（ラジカル）の接頭辞名は、（ｉ）親水素化物の「ａｎｅ」を、接尾辞「イル」、「ジイル」、「トリイル」、「テトライル」などに置き換えるか、又は（ｉｉ）親水素化物の「ｅ」を、接尾辞「イル」、「ジイル」、「トリイル」、「テトライル」などに置き換えるかのいずれかにより、親水素化物から派生する（ここで、自由原子価を有する原子（複数可）には、それを指定する場合、親水素化物の任意の確定している付番と一致するできるだけ低い番号が与えられる）。一般的に認められている略称、例えばアダマンチル、ナフチル、アントリル、フェナントリル、フリル、ピリジル、イソキノリル、キノリル、及びピペリジル、並びに慣用名、例えばビニル、アリル、フェニル、及びチエニルも本明細書の全体にわたって使用される。従来の付番／付文字方式は、置換基の付番、及び縮合環、二環式、三環式、多環式環の命名法についても厳守される。
【００２６】
「アルキル」という用語は、表示数の炭素原子を含有する直鎖又は分岐鎖であってもよい飽和炭化水素鎖を指す。例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキルは、この基がその中に１〜６個の（６個も含む）炭素原子を有してもよいことを示す。任意の原子を、例えば、１つ又は複数の置換基（subsitutent）（例えば、本明細書に記載されているＲａに関する任意の定義に描写されているものなど）により、随意に置換することができる。アルキル基の例には、限定的ではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、及びｔｅｒｔ−ブチルが含まれる。
【００２７】
「ハロアルキル」という用語は、少なくとも１個の水素原子がハロにより置換されているアルキル基を指す。幾つかの実施形態では、複数の水素原子（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４個）が、ハロにより置換されている。これらの実施形態では、該水素原子は各々同じハロゲン（例えばフルオロ）により置換されてもよく、又は該水素原子は異なるハロゲン（例えば、フルオロ及びクロロ）の組み合わせにより置換されてもよい。「ハロアルキル」は、水素が全てハロにより置換されたアルキル部分も含む（本明細書では、例えばトリフルオロメチルなどのペルフルオロアルキル、ペルハロアルキルと呼ばれることもある）。任意の原子を、例えば、１つ又は複数の置換基（例えば、本明細書に記載されているＲｂに関する任意の定義に描写されているものなど）により、随意に置換することができる。
【００２８】
「アラルキル」という用語は、アルキル水素原子がアリール基により置換されているアルキル部分を指す。該アルキル部分の炭素の１つは、アラルキル基を別の部分に結合させる部位として役立つ。任意の環又は鎖の原子を、例えば、１つ又は複数の置換基（例えば、本明細書に記載されているＲｃに関する任意の定義に描写されているものなど）により、随意に置換することができる。「アラルキル」の非限定的な例には、ベンジル、２−フェニルエチル、及び３−フェニルプロピル基が含まれる。
【００２９】
「ヘテロアラルキル」という用語は、アルキル水素原子がヘテロアリール基により置換されているアルキル部分を指す。該アルキル部分の炭素の１つは、アラルキル基を別の部分に結合させる部位として役立つ。ヘテロアラルキルは、アルキル部分にある複数の水素原子がへテロアリール基により置換された基を含む。任意の環又は鎖の原子を、例えば、１つ又は複数の置換基（例えば、本明細書に記載されているＲｃに関する任意の定義に描写されているものなど）により、随意に置換することができる。ヘテロアラルキルには、例えば、２−ピリジルエチルが含まれてもよい。
【００３０】
「アルコキシ」及び「ハロアルコキシ」という用語は、それぞれ、−Ｏ−アルキルラジカル及び−Ｏ−ハロアルキルラジカルを指す。「フェノキシ」という用語は、−Ｏ−フェニルラジカルを指す。
【００３１】
「ヘテロシクリル」という用語は、Ｏ、Ｎ、又はＳから独立して選択される１つ又は複数の（例えば１〜４個の）ヘテロ原子環原子を有する、完全に飽和した単環式、二環式、又は他の多環式環系を指す。該ヘテロ原子又は環炭素は、ヘテロシクリル置換基を別の部分に結合させる部位である。任意の原子を、例えば、１つ又は複数の置換基（例えば、本明細書に記載されているＲｃに関する任意の定義に描写されているものなど）により、随意に置換することができる。ヘテロシクリル基には、例えば、テトラヒドロフリル、テトラヒドロピラニル、ピペリジル（ピペリジノ）、ピペラジニル、モルホリニル（モルホリノ）、ピロリニル、及びピロリジニルが含まれる。
【００３２】
「シクロアルキル」という用語は、完全に飽和している単環式、二環式、三環式、又は他の多環式炭化水素基を指す。任意の原子を、例えば、１つ又は複数の置換基（例えば、本明細書に記載されているＲｃに関する任意の定義に描写されているものなど）により、随意に置換することができる。環炭素は、シクロアルキル基を別の部分に結合する部位として役立つ。シクロアルキル部分には、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、アダマンチル、及びノルボルニル（ビシクロ［２．２．１］ヘプチル（bicycle[2.2.1]heptyl））が含まれる。
【００３３】
「シクロアルケニル」という用語は、部分的に不飽和である単環式、二環式、三環式、又は他の多環式炭化水素基を指す。環炭素（例えば、飽和又は不飽和）は、シクロアルケニル置換基の結合部位である。任意の原子を、例えば、１つ又は複数の置換基（例えば、本明細書に記載されているＲｃに関する任意の定義に描写されているものなど）により、随意に置換することができる。シクロアルケニル部分には、例えば、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、ノルボルネニルが含まれる。
【００３４】
「アリール」という用語は、芳香族単環式又は二環式炭化水素環系を指し、任意の環原子を、例えば、１つ又は複数の置換基（例えば、本明細書に記載されているＲｄに関する任意の定義に描写されているものなど）により、随意に置換することができる。アリール基部分には、フェニル及びナフチルが含まれてもよい。
【００３５】
「へテロアリール」という用語は、Ｏ、Ｎ、又はＳ（並びにそのモノ及びジオキシド、例えば、Ｎ−＞Ｏ−、Ｓ（Ｏ）、ＳＯ２）から独立して選択される１つ又は複数の（例えば１〜６個の）ヘテロ原子環原子を有する芳香族単環式又は二環式炭化水素基を指す。任意の原子を、例えば、１つ又は複数の置換基（例えば、本明細書に記載されているＲｄに関する任意の定義に描写されているものなど）により、随意に置換することができる。へテロアリール基には、ピリジル、チエニル、フリル（フラニル）、イミダゾリル、イソキノリル、キノリル、及びピロリルが含まれてもよい。
【００３６】
Ｃ（Ｏ）という記述は、酸素原子に二重結合された炭素原子を指す。「オキソ」という用語は、二重結合された酸素、つまり、＝Ｏを指す。
【００３７】
「置換基」という用語は、例えば、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アラルキル、ヘテロアラルキル、ヘテロシクリル、シクロアルケニル、アリール、又はへテロアリール基上の任意の原子において「置換された」基を指す。一般的に、特定の可変部分の定義が水素及び非水素（ハロ、アルキル、アリールなど）の可能性の両方を含む場合、「水素以外の置換基（複数可）」という用語は、その特定の可変部分の非水素可能性を総称する。
【００３８】
「１〜５個のＲｄ（など）で随意に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール」など記述は、非置換Ｃ６〜Ｃ１０アリール基及び１〜５個のＲｄで置換された置換Ｃ６〜Ｃ１０アリール基の両方を含むことが意図されている。「随意に置換された」又は「置換された」という修飾語を伴わない、アルキルなどの置換基（ラジカル）接頭辞名の使用は、特定の置換基が置換されていないことを意味すると理解される。しかしながら、「随意に置換された」又は「置換された」という修飾語を伴わない「ハロアルキル」の使用は、少なくとも１個の水素原子がハロにより置換されたアルキル基を意味すると理解される。
【００３９】
説明を容易にするため、本明細書（特許請求の範囲を含む）では、ある基が、「本明細書のどこかで定義されているような」（など）により定義される場合、その特定の基の定義は、最初に述べられた最も幅の広い一般的な定義、並びに本明細書のどこかに述べられている任意の亜一般的及び特定の定義を含むことも理解される。
【００４０】
本出願は、これらの各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２００４年８月３１日に出願された米国特許仮出願第６０／６０５，７４６号明細書、２００５年８月３０日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ第２００５／０３０７１４号パンフレット、２００４年１１月１５日に出願された米国特許出願第１０／９８９，６４９号明細書、２００７年１２月１２日に出願された米国特許出願第１１／９５３，７９７号明細書、２００８年８月７日に出願された米国特許出願第１２／１８７，５４３号明細書、２００６年１１月１５日に出願された米国特許仮出願第６０／８５９，０４１号明細書、２００７年１１月１４日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ第２００７／０８４６５４号パンフレット、２００８年９月１８日に出願された米国特許出願第１２／２３３．０１７号明細書、及び２００８年１１月２４日に出願された米国特許仮出願第６０／８５９，０４１号パンフレットに関する。
【００４１】
別段の記載がない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語は全て、本発明が属する当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。方法及び物質は、本発明で使用するために本明細書に記載されており、当技術分野で公知である他の好適な方法及び物質も使用することができる。これらの物質、方法、及び例は例示に過ぎず、限定を意図していない。出版物、特許出願、特許、配列、データベースエントリー、及び本明細書で言及された他の文献は全て、参照によりそれらの全体が組み込まれる。矛盾が生じた場合、定義を含み本明細書に従う。
【００４２】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び図面、並びに特許請求の範囲から明白になる。 
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】図１Ａ〜１Ｈは、フェノール化合物又はその誘導体の一般化構造を表す図である。図１Ｉ〜１Ｋは、特定のフェノール化合物又はその誘導体の構造を表す図である。
【図２】図２Ａ〜２Ｆは、ベンズアミド化合物又は関連化合物の一般化構造を表す図である。図２Ｇ〜２Ｉは、特定のベンズアミド化合物又は関連化合物の構造を表す図である。
【図３】図３Ａ〜３Ｘは、１つ又は複数のヘテロ環を含む化合物の一般化構造を表す図である。図３Ｙ〜３ＺＺは、１つ又は複数のヘテロ環を含む特定の化合物の構造を表す図である。
【図４】図４Ａ〜４Ｇは、１つ又は複数のフェニル環を含む化合物の一般化構造を表す図である。図４Ｈ〜４Ｉは、１つ又は複数のフェニル環を含む特定の化合物の構造を表す図である。
【図５】図５Ａ〜５Ｅは、５員ヘテロ環系に結合したアミド基を含む化合物の一般化構造を表す図である。図５Ｆ及び５Ｇは、５員ヘテロ環系に結合したアミド基を含む特定の化合物の構造を表す図である。
【図６】図６Ａ〜６Ｏは、別の環系と縮合した５員ヘテロ環系を含む化合物の一般化構造を表す図である。図６Ｐ〜６Ｖは、別の環系と縮合した５員ヘテロ環系を含む特定の化合物の構造を表す図である。
【図７】図７Ａ〜７Ｃは、ピリジン化合物の一般化構造を表す図であり、図７Ｄはピリミジン化合物の一般化構造を表す図である。図７Ｅ〜７Ｆは、特定のピリジン又はピリミジン化合物の構造を表す図である。
【図８】図８Ａ及び８Ｂはアニリン化合物又はアニリン誘導体の一般化構造を表す図である。図８Ｃは特定構造のアニリン又はアニリン誘導体の構造を表す図である。
【図９】〜
【図１１６】Ｍａｔｈ１エンハンサー及び最小プロモーターにより制御されている安定的に発現するルシフェラーゼ遺伝子を有するＨＥＫ細胞におけるＭａｔｈ１発現を示す折れ線グラフである（実施例１を参照）。グラフに示されている化合物番号は、図１から図８に表されている化合物構造に対応する。Ｍａｔｈ１活性化は、実施例１及び実施例２に記載されているハイスループットスクリーニング法を使用して測定された。
【図１１７】ハイスループットスクリーニングを最適化するために実施された実験の結果を示すグラフである。
【図１１８】ハイスループットスクリーニングを最適化するために実施された重複実験の結果を示す点プロットである。
【図１１９】表示化合物と接触させた細胞において、実施例１及び実施例２に記載されているＭａｔｈ１ルシフェラーゼリポーターアッセイを使用して評価されたＭａｔｈ１活性化を示す棒グラフである。これらの化合物の構造は、図１から図８に表されている。これらの化合物についての初期Ａｔｏｈ１活性化結果は、図９〜１１４に見出すことができる。
【図１２０】図１２０Ａは、表示化合物と接触させた細胞において、実施例１及び実施例２に記載されているＭａｔｈ１ルシフェラーゼリポーターアッセイを使用して評価されたＭａｔｈ１活性化を示す棒グラフである。これらの化合物の構造は、図１から図８に表されている。これらの化合物についての初期Ｍａｔｈ１活性化結果は、図９〜１１４に見出すことができる。図１２０Ｂは、図１１７Ａに示されている化合物の構造を示す図である。図１２０Ｃは、表示化合物と接触させた細胞におけるＡｔｏｈ１  ｍＲＮＡ発現を示す図である。
【図１２１】未処理細胞（Ａ）及び化合物（Ｃｐ）Ｃｐ．−００００５４０と接触した細胞（Ｂ）の写真である。有毛細胞特異的マーカーＭａｔｈ１−ＧＦＰ及びミオシン７ａを陽性染色した細胞集団が矢印で示されている。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
本発明は、特に、本明細書に記載されている病気について患者を治療するための化合物及び化合物に関する方法及び／又は医薬組成物を提供する。本治療法は、特定の根本細胞事象が生じるものに限定されないが、本化合物及び組成物は、対象体及び／又は細胞においてＡｔｏｈ１遺伝子の発現を増加させ、それにより例えば、細胞の聴覚有毛細胞への分化を引き起こすことができる。
【００４５】
Ａｔｏｈ−１ 
アト−ナル（atonal）タンパク質相同体１（Ａｔｏｈ１又はアトーナル）は、ショウジョウバエ（Drosophila）神経系の発生における細胞運命決定に重要な役割を果たすと考えられている塩基性ヘリックス−ループ−ヘリックス（ｂＨＬＨ）ドメイン含有タンパク質をコードする前神経遺伝子である（Jarman et al., Cell, 73:1307-1321, 1993）。Ａｔｏｈ１は、コクヌストモドキ（Tribolium castenium）（赤コクヌストモドキ）、トラフグ（Fugu rubripes）（フグ）、ニワトリ（Ｃａｔｈ１）、マウス（Ｍａｔｈ１）、及びヒト（Ｈａｔｈ１）で同定された相同体と、進化的に保存されている（Ben-Arie et al., Hum. Mol. Gene., 5:1207-1216, 1996）。これらの相同体の各々は、長さが同一のｂＨＬＨドメインを含有しており、Ａｔｏｈ１  ｂＨＬＨドメインとの高度な配列同一性を有する。例えば、Ｈａｔｈ１及びＭａｔｈ１遺伝子は、長さがほとんど同一である。これらの分子は、高度に類似のヌクレオチド配列（８６％同一性）、及び高度に類似のｂＨＬＨアミノ酸配列（８９％）も有する。Ｃａｔｈ１のｂＨＬＨドメインは、Ｈａｔｈ１及びＭａｔｈ１のｂＨＬＨドメインと、それぞれ９７％及び９５％同一である。Ｃａｔｈ１のｂＨＬＨは、Ａｔｏｈ１  ｂＨＬＨドメインと６７％同一である。対照的に、他のショウジョウバエコード化タンパク質のｂＨＬＨドメインは、４０〜５０％しか配列同一性を共有しない。
【００４６】
哺乳動物Ａｔｏｈ１相同体の各々は、Ｅボックス（ＣＡＮＮＴＧ（配列番号１））依存性転写を活性化する転写因子として機能し（Arie et al., Hum. Mol. Genet., 9:1207-1216, 1996；Akazawa et al., J. Biol. Chem., 270:8730-8738, 1995）、神経組織及び消化（ＧＩ）管における細胞運命決定の重要な正の調節因子として機能する（Helms et al., Development, 125:919-928, 1998；Isaka et al., Eur. J. Neurosci., 11:2582-2588, 1999；Ben-Arie et al., Development, 127:1039-1048, 2000）。
【００４７】
難聴、骨関節炎、及び異常細胞増殖を治療するための、上記に記載されているＡｔｏｈ１相同体をコードする核酸の使用は、Zoghbiら（米国特許公開第２００４／０２３７１２７号明細書）により記載されている。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「Ａｔｏｈ１」は、任意の及び全てのＡｔｏｈ１関連核酸又はタンパク質配列を指し、Ａｔｏｈ１核酸又はアミノ酸配列に対して、それぞれオーソロガスであるか、又は相同性であるか、又は有意な配列類似性を有する任意の配列を含み、したがって、「Ａｔｏｈ１」という用語は、他の哺乳動物相同体、例えばヒト、マウス、ラットなどを含む。当該配列は、哺乳動物（例えばヒト）を含む任意の動物に存在し得る。Ａｔｏｈ１の核酸及びアミノ配列の例には、以下の配列に限定されないが、Ａｔｏｈ１（例えば、それぞれＮＭ＿００１０１２４３２．１及びＮＰ＿００１０１２４３４．１）（チンパンジー（Pan troglodytes））、Ｈａｔｈ１（例えば、ＮＭ＿００５１７２．１及びＮＰ＿００５１６３．１）（ホモサピエンス（Homo sapiens））、Ｍａｔｈ１（例えば、ＮＭ＿００７５００．４及びＮＰ＿０３１５２６．１）（ハツカネズミ（Mus musculus））、Ａｔｏｈ１（ＮＭ＿００１１０９２３８．１及びＮＰ＿００１１０２７０８．１）（ドブネズミ（Rattus norvegicus））、Ａｔｏｈ１（ＸＭ＿００１１０２２４７．１及びＸＰ＿００１１０２２４７．１）（アカゲザル（Macaca mulatta））、Ａｔｏｈ１（ＮＭ＿００１０９８０９９．１及びＮＰ＿００１０９１５６８．１）（ウシ（Bos taurus））、Ａｔｏｈ１（ＸＭ＿５４４９８６．２及びＸＰ＿５４４９８６．２）（イヌ（Canis lupus familiaris））、及びＣａｔｈ１（例えば、Ｕ６１１４９．１及びＡＦ４６７２９２．１）（ニワトリ（Gallus gallus））、並びにこのタンパク質を参照するために使用される場合がある他の全ての異名、例えばアトーナル、アトーナル相同体１、Ａｔｈ１、及びヘリックス−ループ−ヘリックスタンパク質Ｈａｔｈ１が含まれる。さらに、複数の相同体又は類似配列が動物に存在する場合がある。例えばＧｅｎｅＩＤ：４７４（ホモサピエンス）、ＧｅｎｅＩＤ：１１９２１（ハツカネズミ）、ＧｅｎｅＩＤ：４６１３８０（チンパンジー）、ＧｅｎｅＩＤ：５００１５６（ドブネズミ）、ＧｅｎｅＩＤ：７０４８９３（アカゲザル）、ＧｅｎｅＩＤ：５３９１５８（ウシ）、及びＧｅｎｅＩＤ：４８７８６４（イヌ）を参照されたい。
【００４９】
ヒトＡｔｏｈ１配列との有意な配列類似性（つまり、８０％を超える、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、又は９９％以上の、全配列にわたる類似性）を有する任意の配列（Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＭ＿００５１７２．１及びＮＰ＿００５１６３．１に見出される）を、本方法で使用することができる。２つの核酸配列のパーセント同一性を決定するためには、その２つの配列を、最適な比較目的でアラインする（第１及び第２のアミノ酸又は核酸配列の１つ又は両方に、最適なアラインメントに必要なギャップが導入され、非相同性配列は、比較の目的では無視してもよい）。比較目的のためにアラインされる参照配列の長さは、少なくとも８０％である（幾つかの実施形態では、参照配列の長さの約８５％、９０％、９５％、又は１００％がアラインされる）。その後、対応するヌクレオチド位置のヌクレオチドが比較される。第１の配列の位置が、第２の配列の対応する位置と同じヌクレオチドにより占められている場合、その分子はその位置で同一である。２つの配列間のパーセント同一性は、その２つの配列により共有される同一位置の数の関数であり、その２つの配列を最適にアラインメントするために導入が必要なギャップの数及び各ギャップの長さを考慮している。
【００５０】
配列の比較、及び２つの配列間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。例えば、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムに組み込まれているNeedleman及びWunsch（(1970) J. Mol. Biol. 48:444-453）アルゴリズムを使用し、ギャップペナルティが１２で、ギャップ伸長ペナルティが４で、フレームシフトギャップペナルティが５のＢｌｏｓｓｕｍ６２スコアリングマトリックスを使用して決定することができる。
【００５１】
化合物
本発明は、細胞においてＡｔｏｈ１発現を増加可能な化合物を提供する。幾つかの実施形態では、Ａｔｏｈ１発現の増加は著しい増加である。幾つかの実施形態では、Ａｔｏｈ１発現の増加は、例えば、基線を超えた約１〜１０％、１１〜２０％、２１〜３０％、３１〜４０％、４１〜５０％、５１〜６０％、６１〜７０％、７１〜８０％、８１〜９０％、９１〜１００％、１０１〜２００％、２０１〜３００％、３０１〜４００％、４０１〜５００％、５０１〜１０００％、１００１〜１００００％、１０００１〜１０００００％もしくはそれ以上の範囲であってもよい。Ａｔｏｈ１の増加は、倍増として表現することもでき、例えば１００％の増加は１倍の増加であり、１０００％の増加は１０倍の増加などである。その代わりに又はそれに加えて、Ａｔｏｈ１発現の増加は、細胞、例えば非聴覚有毛細胞（つまり聴覚有毛細胞以外の細胞、例えば先駆細胞又は幹細胞）の、聴覚有毛細胞への又はそれへと向かう分化を促進するのに十分である。
【００５２】
本明細書に記載されている方法のどの方法でも使用することができる化合物は、フェノール化合物（又はそれらの硫黄類似体、例えばフェニルチオール）、又はフェニルエーテル（又はチオエーテル）、例えば直鎖又は環式フェニルエーテルなどの、そのような化合物に由来する化合物である。例えば、そのような化合物は、図１Ａ〜１Ｈに示されている構造により一般的に表すことができ、図１Ｉ〜１Ｋに示されている構造により具体的に例示することができる。任意のフェノール化合物（又は硫黄類似体）は中性であってもよく、又は塩形態、例えばそのリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、又はカルシウム塩であってもよい。
【００５３】
そのようなフェノール化合物及び誘導体（又はそれらの硫黄類似体）は、図１Ａの構造により記述されており、図中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、ＸはＯ（図１Ｂを参照）又はＳであり（図１Ｃを参照）、Ｒ１は、Ｈ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。例えば、１６個までの炭素原子及び随意に１つ又は複数のＮ、Ｏ、Ｓ、又はＦ原子を含む部分は、アルコキシ基又はトリフルオロメチル基であってもよい。
【００５４】
図１Ｄを参照すると、特定の実施形態では、Ｒ１及びＲ２は一緒になって、１６個までの炭素原子及び随意に１つ又は複数のＮ、Ｏ、Ｓ、又はＦ原子を各々含む１つ又は複数の環系を形成する。
【００５５】
図１Ｅを参照すると、特定の実施形態では、Ｒ１はＨであり、すなわち化合物はフェノールである。
【００５６】
図１Ｆ〜１Ｈを参照すると、ある実施形態では、フェノール誘導体は環状エーテル誘導体である。例えば、これらの分子の環状エーテル部分は、カルボニル基（図１Ｆを参照）及び／又は炭素−炭素二重結合（図１Ｇを参照、両方を含有）を組み込むことにより剛性にすることができる。他の実施形態では、そのような環状エーテル誘導体は、環状エーテル系付近に第２の環系を組み込むことにより剛性にすることができる。特定の実施形態では、環状エーテル誘導体は、図１Ｆの構造により表されており、図中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。他の特定の実施形態では、環状エーテル誘導体は、図１Ｇの構造により表されており、図中、Ｒ１２及びＲ１３は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。他の特定の実施形態では、環状エーテル誘導体は、図１Ｈの構造により表されており、図中、Ｒ１４及びＲ１５は一緒になって、１６個までの炭素原子及び随意に１つ又は複数のＮ、Ｏ、Ｓ、又はＦ原子を各々含む１つ又は複数の環系を形成し、Ｒ１６、Ｒ１７、及びＲ１８は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。
【００５７】
本化合物は、ベンズアミド化合物及び／又は関連化合物である。そのような化合物は、図２Ａ〜２Ｆに示されている構造により一般的に表すことができ、図２Ｇ〜２Ｉに示されている構造により具体的に例示することができる。本ベンズアミド又は関連化合物はいずれも、中性であってもよく、又は塩形態であってもよい。
【００５８】
本ベンズアミド又は関連化合物は、図２Ａの構造により記述することができ、図中、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、及びＲ２４は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ２４及びＲ２６は、各々独立してＨ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。
【００５９】
図２Ａの化合物では、Ｒ２４及びＲ２５は一緒になって、１６個までの炭素原子及び随意に１つ又は複数のＮ、Ｏ、Ｓ、又はＦ原子を各々含む１つ又は複数の環系を形成することができる。そのような化合物は、図２Ｂの構造により表すことができる。例えば、そのような化合物は、図２Ｃ及び２Ｄにより示されている構造を有していてもよく、図中、Ｒ２７、Ｒ２８、Ｒ２９、Ｒ３１、及びＲ３２は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ２６は、Ｈ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。
【００６０】
他のベンズアミド関連化合物及び誘導体は、図２Ｅ及び２Ｆの構造により記述されており、図中、Ｒ３３、Ｒ３４、Ｒ３５、Ｒ３６、及びＲ３７は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ３９、Ｒ４０、Ｒ４１、及びＲ４２は、各々独立してＨ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。
【００６１】
本化合物は、Ｏ、Ｓ、又はＮなどのもう１つのヘテロ原子を含む３、４、５、６、又は７員環系などの、１つ又は複数のヘテロ環系であるか又はそれらを含むことできる。例えば、当該１つ又は複数の環系は、Ｏ、Ｓ、又はＮなどの１、２、３、４、又は５個のヘテロ原子さえ含むことができる。多くの実施形態では、これらの環系は芳香族である。例えば、そのような化合物は、図３Ａ〜３Ｘに示されている構造により一般的に表すことができ、図３Ｙ〜３ＺＺに示されている構造で具体的に例示することができる。当該１つ又は複数の環系であるか又はそれを含む任意の記載されている化合物は、中性であってもよく、又は塩形態であってもよい。
【００６２】
１つ又は複数のヘテロ環系であるか又はそれらを含む化合物は、図３Ａの構造により記述されており、図中、Ｒ４３及びＲ４４は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、ＸはＯ（図３Ｂ）又はＳ（図３Ｃ）である。
【００６３】
１つ又は複数のヘテロ環系であるか又はそれらを含む化合物は、図３Ｄの構造により記述されており、図中、Ｒ４５、Ｒ４６、及びＲ４８は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ４７及びＲ４９は、各々独立してＨ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。
【００６４】
１つ又は複数のヘテロ環系であるか又はそれらを含む化合物は、図３Ｅの構造により記述されており、図中、Ｒ５０、Ｒ５１、Ｒ５２、及びＲ５３は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、ＸはＯ（図３Ｆ）又はＳ（図３Ｇ）である。
【００６５】
１つ又は複数のヘテロ環系であるか又はそれらを含む化合物は、図３Ｈの構造により記述されており、図中、Ｒ５５、Ｒ５６、及びＲ５７は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ５４は、Ｈ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。例えば、具体的な実施形態では、図３Ｉに示されているように、Ｒ５４及びＲ５５は一緒になって、１６個までの炭素原子及び随意に１つ又は複数のＮ、Ｏ、Ｓ、又はＦ原子を各々含む１つ又は複数の環系を形成することができる。
【００６６】
１つ又は複数のヘテロ環系であるか又はそれらを含む化合物は、図３Ｊの構造により記述されており、図中、Ｒ５７、Ｒ５９、及びＲ６０は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ５８は、Ｈ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。例えば、具体的な実施形態では、図３Ｋに示されているように、Ｒ５６及びＲ５９は一緒になって、１６個までの炭素原子及び随意に１つ又は複数のＮ、Ｏ、Ｓ、又はＦ原子を各々含む１つ又は複数の環系を形成することができる。例えば、具体的な実施形態では、図３Ｌに示されているように、Ｒ５７及びＲ６０は一緒になって、１６個までの炭素原子及び随意に１つ又は複数のＮ、Ｏ、Ｓ、又はＦ原子を各々含む１つ又は複数の環系を形成することができる。例えば、具体的な実施形態では、図３Ｍに示されているように、Ｒ５７及びＲ６０並びにＲ５８及びＲ５９は一緒になって、１６個までの炭素原子及び随意に１つ又は複数のＮ、Ｏ、Ｓ、又はＦ原子を各々含む１つ又は複数の環系を形成することができる。
【００６７】
１つ又は複数のヘテロ環系であるか又はそれらを含む化合物は、図３Ｎの構造により記述されており、図中、Ｒ６１、Ｒ６２、及びＲ６４は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ６３は、Ｈ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。例えば、具体的な実施形態では、図３Ｏに示されているように、Ｒ６１及びＲ６２は一緒になって、１６個までの炭素原子及び随意に１つ又は複数のＮ、Ｏ、Ｓ、又はＦ原子を各々含む１つ又は複数の環系を形成することができる。
【００６８】
１つ又は複数のヘテロ環系であるか又はそれらを含む化合物は、図３Ｐの構造により記述されており、図中、Ｒ６５及びＲ６６は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、ＸはＯ（図３Ｑ）又はＳ（図３Ｒ）である。
【００６９】
１つ又は複数のヘテロ環系であるか又はそれらを含む化合物は、図３Ｓの構造により記述されており、図中、Ｒ６７、Ｒ６８、及びＲ６９は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、ＸはＯ（図３Ｔ）又はＳ（図３Ｕ）である。
【００７０】
１つ又は複数のヘテロ環系であるか又はそれらを含む化合物は、図３Ｖの構造により記述されており、図中、Ｒ７０、Ｒ７１、及びＲ７２は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、ＸはＯ（図３Ｗ）又はＳ（図３Ｘ）である。
【００７１】
本化合物は、本明細書に記載されている任意の方法で使用することができ、縮合フェニル環系、例えばフラボノイド、クマリン、又は他の類似した系の一部であるものなどの１つ又は複数のフェニル環であるか又はそれらを含む。例えば、そのような化合物は、図４Ａ〜４Ｇに示されている構造により一般的に表すことができ、図４Ｈ及び４Ｉに示されている構造で具体的に例示することができる。１つ又は複数の環系であるか又はそれを含む任意の記載されている化合物は、中性であってもよく、又は塩形態であってもよい。
【００７２】
１つ又は複数のフェニル環であるか又はそれらを含む化合物は、図４Ａの構造により記述されており、図中、Ｒ７４、Ｒ７５、Ｒ７６、Ｒ７８、及びＲ７９は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。例えば、具体的な実施形態では、図４Ｂに示されているように、Ｒ７６及びＲ７７は一緒になって、１６個までの炭素原子及び随意に１つ又は複数のＮ、Ｏ、Ｓ、又はＦ原子を各々含む１つ又は複数の環系を形成することができる。例えば、図４Ｂの構造は、図４Ｃ及び図４Ｄの化合物により記述することができ、図中、Ｒ８１、Ｒ８２、Ｒ８３、及びＲ８４は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。例えば、Ｒ７６及びＲ７７が一緒になって１つ又は複数の環系を形成する他の具体的な実施形態では、これらの化合物は、図４Ｅ〜４Ｇの構造により表すことができ、図中、Ｒ８５、Ｒ８６、Ｒ８７、及びＲ８８は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ８９は、Ｈ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。
【００７３】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されている任意の方法で使用することができる化合物は、Ｏ、Ｓ、又はＮなどのもう１つのヘテロ原子を含むものなどの５員へテロ環系に結合したアミド基を含む。例えば、当該１つ又は複数の環系は、Ｏ、Ｓ、又はＮなどの１、２、３、４、又は５個のヘテロ原子さえ含むことができる。多くの実施形態では、これらの環系は芳香族である。例えば、そのような化合物は、図５Ａ〜５Ｅに示されている構造により一般的に表すことができ、図５Ｆ〜５Ｇに示されている構造で具体的に例示することができる。当該１つ又は複数の環系であるか又はそれを含む任意の記載されている化合物は、中性であってもよく、又は塩形態であってもよい。
【００７４】
ある実施形態では、５員へテロ環系に結合したアミド基を含むそのような化合物は、図５Ａの構造により記述されており、図中、Ｒ９２、Ｒ９３、及びＲ９４は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ９０及びＲ９１は、各々独立してＨ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、ＸはＯ（図５Ｂ）又はＳ（図５Ｃ）である。例えば、具体的な実施形態では、Ｒ９０及びＲ９１は一緒になって、１６個までの炭素原子を含み、随意に１つ又は複数のＮ、Ｏ、Ｓ、又はＦ原子で置換された１つ又は複数の環系を形成することができる（図５Ｄを参照）。
【００７５】
他のある実施形態では、５員へテロ環系に結合したアミド基を含むそのような化合物は、図５Ｅの構造により記述されており、図中、Ｒ９７及びＲ９８は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ９５、Ｒ９６、及びＲ９９は、各々独立してＨ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。
【００７６】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されている任意の方法で使用することができる化合物には、例えば１つ又は複数の４、５、６、７、又は８員環系を形成する１つ又は複数の他の環系と縮合した５員ヘテロ環系が含まれる。例えば、そのような化合物は、図６Ａ〜６Ｏに示されている構造により一般的に表すことができ、図６Ｐ〜６Ｖに示されている構造で具体的に例示することができる。当該１つ又は複数の環系であるか又はそれを含む任意の記載されている化合物は、中性であってもよく、又は塩形態であってもよい。
【００７７】
幾つかの実施形態では、１つ又は複数の他のヘテロ環系と縮合した５員ヘテロ環系を含む化合物は、図６Ａにより記述されており、図中、Ｒ１００、Ｒ１０１、Ｒ１０２、Ｒ１０３、Ｒ１０４、及びＲ１０５は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、ＸはＳ（図６Ｂを参照）又はＯ（図６Ｃを参照）である。
【００７８】
他の実施形態では、１つ又は複数の他の環系と縮合した５員ヘテロ環系を含む化合物は、図６Ｄにより記述されており、図中、Ｒ１０６、Ｒ１０７、Ｒ１０８、Ｒ１０９、Ｒ１１０、Ｒ１１１、Ｒ１１２、Ｒ１１３、Ｒ１１４、及びＲ１１５は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、ＸはＳ（図６Ｅを参照）又はＯ（図６Ｆを参照）である。
【００７９】
特定の実施形態では、１つ又は複数の他の環系と縮合した５員ヘテロ環系を含む化合物は、図６Ｇにより記述されており、図中、Ｒ１１８、Ｒ１１９、Ｒ１２０、Ｒ１２１、Ｒ１２３は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ１２３は、Ｈ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。
【００８０】
特定の実施形態では、１つ又は複数の他の環系と縮合した５員ヘテロ環系を含む化合物は、図６Ｈにより記述されており、図中、Ｒ１２４、Ｒ１２５、Ｒ１２６、及びＲ１２７は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ１２８及びＲ１２９は一緒になって、１６個までの炭素原子及び随意に１つ又は複数のＮ、Ｏ、Ｓ、又はＦ原子を含む１つ又は複数の環を形成する。例えば、図６Ｈの化合物は、図６Ｉにより記述されてもよく、式中、Ｒ１３０、Ｒ１３１、Ｒ１３２、及びＲ１２８は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ１２９は、Ｈ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。
【００８１】
他の特定の実施形態では、１つ又は複数の他の環系と縮合した５員ヘテロ環系を含む化合物は、図６Ｊにより記述されており、図中、Ｒ１３４、Ｒ１３５、Ｒ１３６、Ｒ１３７、Ｒ１４０、及びＲ１４１は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ１３９は、Ｈ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。例えば、図６Ｋを参照すると、具体的な実施形態では、Ｒ１４０及びＲ１４１は一緒になって、１６個までの炭素原子及び随意に１つ又は複数のＮ、Ｏ、Ｓ、又はＦ原子を各々含む１つ又は複数の環を形成する。
【００８２】
幾つかの実施形態では、１つ又は複数の他の環系と縮合した５員ヘテロ環系を含む化合物は、図６Ｌにより記述されており、図中、Ｒ１４３、Ｒ１４４、Ｒ１４５、Ｒ１４６、及びＲ１４７は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、ＸはＳ（図６Ｍを参照）又はＯ（図６Ｎを参照）である。
【００８３】
さらに他の実施形態では、１つ又は複数の他の環系と縮合した５員ヘテロ環系を含む化合物は、図６Ｏにより記述されており、図中、Ｒ１４９、Ｒ１５０、Ｒ１５１、及びＲ１５２は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ１５３は、Ｈ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。
【００８４】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されている任意の方法で使用することができる化合物は、ピリジン又はピリミジンである。例えば、そのような化合物は、図７Ａ〜７Ｄに示されている構造により一般的に表わすことができ、図７Ｅ及び７Ｆに示されている構造で具体的に例示することができる。ピリジン又はピリミジンである任意の記載されている化合物は、中性であってもよく、又は塩形態、例えばその塩酸塩であってもよい。
【００８５】
幾つかの実施形態では、該ピリジン化合物は、図７Ａにより記述されており、図中、Ｒ１５５、Ｒ１５６、Ｒ１５７、Ｒ１５９、及びＲ１６０は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。幾つかの具体的な実施形態では、Ｒ１５６及びＲ１５７（図７Ｂを参照）、又はＲ１５６及びＲ１５７並びにＲ１５９及びＲ１６０（図７Ｃを参照）は一緒になって、１６個までの炭素原子及び随意に１つ又は複数のＮ、Ｏ、Ｓ、又はＦ原子を各々含む１つ又は複数の環を形成する。
【００８６】
幾つかの実施形態では、該ピリミジン化合物は、図７Ｄにより記述されており、図中、Ｒ１６１、Ｒ１６２、Ｒ１６３、及びＲ１６４は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。
【００８７】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されている任意の方法で使用することができる化合物は、アニリン又はアニリン誘導体である。例えば、そのような化合物は、図８Ａ及び８Ｂに示されている構造により一般的に表わすことができ、図８Ｃに示されている構造で具体的に例示することができる。ピリジン又はピリミジンである任意の記載されている化合物は、中性であってもよく、又は塩形態であってもよい。
【００８８】
幾つかの実施形態では、該アニリン化合物は、図８Ａにより記述されており、図中、Ｒ１７０、Ｒ１７１、Ｒ１７２、Ｒ１７３、及びＲ１７４は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ１７５及びＲ１７６は、互いに独立してＨ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。
【００８９】
幾つかの実施形態では、該アニリン誘導体化合物は、図８Ｂにより記述されており、図中、Ｒ１７８、Ｒ１７９、Ｒ１８０、及びＲ１８１は、各々独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分であり、Ｒ１７７は、Ｈ、又は１６個までの炭素原子及び随意に１つ若しくは複数のＮ、Ｏ、Ｓ、若しくはＦ原子を含む部分である。
【００９０】
幾つかの実施形態では、これらの化合物は、図６Ｇに描写されている式を有してもよい。
【化１】
2014156470.tif 000002
【００９１】
幾つかの実施形態では、
Ｒ１１８、Ｒ１１９、Ｒ１２０、及びＲ１２１の各々は、Ｈ、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、及びＣ１〜Ｃ３ハロアルコキシから独立して選択され、
Ｒ１２２は水素又は−Ｚ−Ｒａであり、式中、
ＺはＯ又は結合であり、
Ｒａは、
（ｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６ハロアルキルであり、各々が１〜３個のＲｂで随意に置換されているか、又は
（ｉｉ）Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル又はＣ３〜Ｃ１０シクロアルケニルであり、各々が１〜５個のＲｃで随意に置換されているか、又は
（ｉｉｉ）Ｃ７〜Ｃ１１アラルキル又は６〜１１個の原子を含むヘテロアラルキルであり、各々が１〜５個のＲｃで随意に置換されているか、又は
（ｉｖ）Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むヘテロアリールであり、各々が１〜５個のＲｄで随意に置換されており、
Ｒ１２３は、
（ｉ）水素であるか、又は
（ｉｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６ハロアルキルであり、各々が１〜３個のＲｂで随意に置換されているか、又は
（ｉｉｉ）Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むヘテロアリールであり、１〜５個のＲｄで随意に置換されているか、又は
（ｉｖ）Ｃ７〜Ｃ１１アラルキル又は６〜１１個の原子を含むヘテロアラルキルであり、各々が１〜５個のＲｃで随意に置換されているか、又は
（ｖ）−（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）−Ｚ１−（Ｃ６〜Ｃ１０アリール）であり、式中Ｚ１がＯ、Ｓ、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）であり、アルキル部分が、随意に１〜３個のＲｂで置換されており、アリール部分が、随意に１〜５個のＲｄで置換されているか、又は
（ｖｉ）−（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）−Ｚ２−（５〜１０個の原子を含むヘテロアリール）であり、式中Ｚ２がＯ、Ｓ、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）であり、アルキル部分が、随意に１〜３個のＲｂで置換され、ヘテロアリール部分が、随意に１〜５個のＲｄで置換されているか、又は
（ｖｉｉ）−（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）−Ｚ３−（Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル）であり、式中Ｚ３がＯ、Ｓ、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）であり、アルキル部分が、随意に１〜３個のＲｂで置換され、シクロアルキル部分が、随意に１〜５個のＲｃで置換されており、
Ｒｂは各出現において、独立して、
（ｉ）ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ又はＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシであるか、又は
（ｉｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ又はＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシから独立して選択される１〜３個の置換基で随意に置換されるＣ３〜Ｃ７シクロアルキルであり、
Ｒｃは各出現において、独立して、
（ｉ）ハロ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、又はオキソであるか、又は
（ｉｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６ハロアルキルであり、
Ｒｄは各出現において、独立して、
（ｉ）ハロ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ又はＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、ニトロ、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、又はシアノであるか、又は
（ｉｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６ハロアルキルである。
【００９２】
実施形態は、以下の特徴の１つ又は複数を含むことができる。
【００９３】
可変部分Ｒ１１８、Ｒ１１９、Ｒ１２０、及びＲ１２１
ある実施形態では、Ｒ１１８、Ｒ１１９、Ｒ１２０、及びＲ１２１の各々は水素である。他の実施形態では、Ｒ１１８、Ｒ１１９、Ｒ１２０、及びＲ１２１の各々は、Ｈ、ハロ、及びＮＯ２から独立して選択される。さらに別の実施形態では、Ｒ１１８、Ｒ１１９、Ｒ１２０、及びＲ１２１（例えばＲ１２０）の１つは、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、又はＣ１〜Ｃ３ハロアルコキシ（例えばハロ、例えばクロロ、又はＮＯ２）であり、他は水素である（例えば、Ｒ１１８、Ｒ１１９、Ｒ１２０、及びＲ１２１（例えばＲ１２０）の１つは、ハロ及びＮＯ２であり、他は水素である）。
【００９４】
可変部分Ｒ１２２
ある実施形態では、Ｒ１２２は、−Ｚ−Ｒａであってもよい。実施形態は、以下の特徴の１つ又は複数を含むことができる。
【００９５】
ＺはＯであってもよい。
【００９６】
Ｚは結合であってもよい。
【００９７】
Ｒａは、 
（ｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６ハロアルキルであってもよく、各々が１〜３個のＲｂで随意に置換されているか、又は
（ｉｉｉ）Ｃ７〜Ｃ１１アラルキル又は６〜１１個の原子を含むヘテロアラルキルであってもよく、各々が１〜５個のＲｃで随意に置換されている。
【００９８】
例えば、Ｒａは、
（ｉ）各々が１〜３個のＲｂで随意に置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであってもよく、又は
（ｉｉｉ）各々が１〜５個のＲｂで随意に置換されているＣ７〜Ｃ１１アラルキルであってもよい。
【００９９】
Ｒａは、Ｃ７〜Ｃ１１アラルキル又は６〜１１個の原子を含むヘテロアラルキルであってもよく、各々が１〜５個のＲｃで随意に置換されている（例えば、１〜５個のＲｃで随意に置換されているＣ７〜Ｃ１１アラルキル）。例えば、Ｒａは、ベンジル又はフェネチルであってもよく、該フェニル部分は、１〜５個（例えば、１〜４個、１〜３個、１〜２個、又は１個、例えば１〜２個又は１個）のＲｃ（例えば、ハロ（例えばクロロ）、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ（例えばＯＣＨ３）、又はＣ１〜Ｃ６アルキル（例えばＣＨ３）で随意に置換されている。ある実施形態では、ＺはＯであってもよい。
【０１００】
Ｒａは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６ハロアルキルであってもよく、各々が１〜３個のＲｂで随意に置換されている（例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキルの各々が１〜３個のＲｂで随意に置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル）。例えば、ＲａはＣＨ３であってもよい。ある実施形態では、Ｚは結合であってもよい。
【０１０１】
ある実施形態では、Ｒ１２２は水素であってもよい。
【０１０２】
可変部分Ｒ１２３
ある実施形態では、Ｒ１２３は、
（ｉｉｉ）Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むヘテロアリールであってもよく、各々が１〜５個のＲｄで随意に置換されているか、又は 
（ｉｖ）Ｃ７〜Ｃ１１アラルキル又は６〜１１個の原子を含むヘテロアラルキルであってもよく、各々が１〜５個のＲｃで随意に置換されているか、又は
（ｖ）−（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）−Ｚ１−（Ｃ６〜Ｃ１０アリール）であってもよく、式中Ｚ１がＯ、Ｓ、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）であり、アルキル部分が随意に１〜３個のＲｂで置換されており、アリール部分が随意に１〜５個のＲｄで置換されている。
【０１０３】
例えば、Ｒ１２３は、
（ｉｉｉ）１〜５個のＲｄで随意に置換されているＣ６〜Ｃ１０アリールであってもよく、又は 
（ｉｖ）１〜５個のＲｃで随意に置換されているＣ７〜Ｃ１１アラルキルであってもよく、又は
（ｖ）−（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）−Ｚ１−（Ｃ６〜Ｃ１０アリール）であってもよく、式中Ｚ１がＯ、Ｓ、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）であり、アルキル部分が随意に１〜３個のＲａで置換され、アリール部分が随意に１〜５個のＲｄで置換されている。
【０１０４】
実施形態では、Ｒ１２３は、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むヘテロアリールであってもよく、各々が１〜５個のＲｄで随意に置換されている（例えば、１〜５個のＲｄで随意に置換されているＣ６〜Ｃ１０アリール）。例えば、Ｒ１２３はフェニルであってもよく、１〜５個（例えば、１〜４個、１〜３個、１〜２個、又は１個）のＲｄ（例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、例えばＯＣＨ３）で随意に置換されている。
【０１０５】
実施形態では、Ｒ１２３は、Ｃ７〜Ｃ１１アラルキル又は６〜１１個の原子を含むヘテロアラルキルであってもよく、各々が１〜５個のＲｃで随意に置換されている（例えば、１〜５個のＲｃで随意に置換されているＣ７〜Ｃ１１アラルキル）。例えば、Ｒ１２３は、ベンジル又はフェネチルであってもよく、フェニル部分は、１〜５個（例えば、１〜４個、１〜３個、１〜２個、又は１個）のＲｃ（例えば、ハロ（例えばクロロ）、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ（例えば、ＯＣＨ３）、Ｃ１〜Ｃ６アルキル（例えば、ＣＨ３）、ＮＨ２、又はヒドロキシルで随意に置換されている。
【０１０６】
実施形態では、Ｒ１２３は、−（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）−Ｚ１−（Ｃ６〜Ｃ１０アリール）であってもよく、式中、Ｚ１は、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、又はＮ（ＣＨ３）であり、アルキル部分は、１〜３個のＲｂで随意に置換されており、アリール部分は、１〜５個のＲｄで随意に置換されている。例えば、Ｒ１２３は、−（ＣＨ２）−Ｚ１−（フェニル）であってもよく、フェニル部分が１〜５個（例えば、１〜４個、１〜３個、１〜２個、又は１個）のＲｄ（例えば、ハロ（例えばクロロ）、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ（例えばＯＣＨ３）、Ｃ１〜Ｃ６アルキル（例えばＣＨ３）、ＮＨ２、又はヒドロキシルで随意に置換されている。
【０１０７】
化合物のサブセットは、
Ｒ１２２が−Ｚ−Ｒａであり、Ｒａが、Ｃ７〜Ｃ１１アラルキル又は６〜１１個の原子を含むヘテロアラルキルであってもよく、各々が１〜５個のＲｃで随意に置換されており（例えば、１〜５個のＲｃで随意に置換されているＣ７〜Ｃ１１アラルキル、例えばベンジル又はフェネチル）、及び 
Ｒ１２３が、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むヘテロアリールであってもよく、各々が１〜５個のＲｄで随意に置換されているもの（例えば、１〜５個のＲｄで随意に置換されているＣ６〜Ｃ１０アリール、例えばフェニル）を含む。
【０１０８】
実施形態は、以下の特徴の１つ又は複数を含むことができる： 
【０１０９】
Ｒｃ及びＲｄは、本明細書のどこかで定義されている通りであってもよい。
【０１１０】
ＺはＯであってもよい。
【０１１１】
Ｒ１１８、Ｒ１１９、Ｒ１２０、及びＲ１２１の各々は水素である。他の実施形態では、Ｒ１１８、Ｒ１１９、Ｒ１２０、及びＲ１２１の各々は、Ｈ、ハロ、及びＮＯ２から独立して選択される。さらに別の実施形態では、Ｒ１１８、Ｒ１１９、Ｒ１２０、及びＲ１２１（例えば、Ｒ１２０）の１つは、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、又はＣ１〜Ｃ３ハロアルコキシ（例えばハロ、例えばクロロ、又はＮＯ２）であり、他は水素であり（例えば、Ｒ１１８、Ｒ１１９、Ｒ１２０、及びＲ１２１（例えばＲ１２０）の１つは、ハロ及びＮＯ２であり、他は水素である）、例えば、それらのうちの１つはハロ（例えばクロロ）又はニトロ、例えばハロ（例えばクロロ）であり、他は水素である。
【０１１２】
例えば、
Ｒ１２２は、−Ｚ−Ｒａであり、式中、ＺはＯであり、Ｒａは、１〜５個のＲｃで随意に置換されたＣ７〜Ｃ１１アラルキルであり、 
Ｒ１２３は、１〜５個のＲｄで随意に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであり、
Ｒ１１８、Ｒ１１９、Ｒ１２０、及びＲ１２１の各々は水素であってもよく、又はＲ１１８、Ｒ１１９、Ｒ１２０、及びＲ１２１の各々は、独立してハロ（例えばクロロ）又はニトロ、例えばハロ（例えばクロロ）であってもよく、又はＲ１１８、Ｒ１１９、Ｒ１２０、及びＲ１２１の１つは、ハロ（例えばクロロ）又はＮＯ２、例えばハロ（例えばクロロ）であってもよく、他は水素である。
【０１１３】
別の例として、Ｚは結合であり、上記の例における定義が当てはまる。
【０１１４】
図６Ｇに描写されている式を有する化合物の例には、ＣＰ−００００４８９、ＣＰ−００００５４０、ＣＰ−００００５５０、ＣＰ−００００５５３、ＣＰ−００００５５４、ＣＰ−００００５５７、ＣＰ−００００５７１、ＣＰ−００４７６５９、ＣＰ−００６４４８３、ＣＰ−００６６８２９、ＣＰ−００６９９６１、ＣＰ−００７４８０６、ＣＰ−００８０７７３、ＣＰ−００９１８１８、ＣＰ−０１０９９５３、ＣＰ−０１０５７７２、及びＣＰ−０１９３１８４が含まれる。
【０１１５】
図６Ｇに描写されている式を有する化合物の他の例には、以下が含まれる。
【化２】
2014156470.tif 000003
【０１１６】
幾つかの実施形態では、当該化合物は、図６Ｌに描写されている式を有していてもよい。
【化３】
2014156470.tif 000004
【０１１７】
幾つかの実施形態では、
ＸはＯ又はＳであり、
Ｒ１４３、Ｒ１４４、Ｒ１４５、及びＲ１４６の各々は、Ｈ、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルコキシ、及び−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）から独立して選択され、
Ｒ１４７はＮＲｅＲｆであり、式中、Ｒｅ及びＲｆの一方は水素又はＣ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒｅ及びＲｆの他方は
（ｉ）−Ｃ（Ｏ）Ｒｇであり、式中Ｒｇは、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むヘテロアリールであり、各々が１〜５個のＲｈで随意に置換されているか、又は
（ｉｉ）Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、
又は
Ｒ１４７は、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むヘテロアリールであり、各々が１〜５個のＲｈで随意に置換されているか、
又は
Ｒ１４７は、−ＳＣＨ２Ｒｉであり、式中Ｒｉは、
（ｉ）Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むヘテロアリールであり、各々が１〜５個のＲｈで随意に置換されているか、又は
（ｉｉ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲｅＲｆであり、式中、Ｒｅ及びＲｆの一方は水素又はＣ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒｅ及びＲｆの他方は、−Ｃ（Ｏ）Ｒｇであり、式中、Ｒｇは、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むへテロアリールであり、各々が１〜５個のＲｈで随意に置換されている、ならびに、
Ｒｈは各出現において、独立して、
（ｉ）ハロ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ又はＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、ニトロ、又はシアノであるか、又は
（ｉｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６ハロアルキルである。
【０１１８】
実施形態は、以下の特徴の１つ又は複数を含むことができる。
【０１１９】
可変部分Ｘ
ＸはＳであってもよい。
【０１２０】
ＸはＯであってもよい。
【０１２１】
可変部分Ｒ１４３、Ｒ１４４、Ｒ１４５、及びＲ１４６
ある実施形態では、Ｒ１４３、Ｒ１４４、Ｒ１４５、及びＲ１４６の各々は水素である。
他の実施形態では、Ｒ１４３、Ｒ１４４、Ｒ１４５、及びＲ１４６の１つは、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルコキシ、又は−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）であり、他は水素である。
【０１２２】
可変部分Ｒ１４７
ある実施形態では、Ｒ１４７はＮＲｅＲｆであってもよく、式中、Ｒｅ及びＲｆの一方は水素又はＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、水素）であり、Ｒｅ及びＲｆの他方は、
（ｉ）−Ｃ（Ｏ）Ｒｇであり、式中Ｒｇは、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むヘテロアリールであり、各々が１〜５個のＲｈで随意に置換されているか、又は    （ｉｉ）Ｃ１〜Ｃ３アルキルである。
【０１２３】
実施形態では、Ｒ１４７はＮＲｅＲｆであってもよく、式中、Ｒｅ及びＲｆの一方は、水素又はＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、水素）であり、Ｒｅ及びＲｆの他方は、−Ｃ（Ｏ）Ｒｇであり、式中、Ｒｇは、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むへテロアリールであり、各々が１〜５個のＲｈで随意に置換されている。
【０１２４】
例として、Ｒｇは、１〜５個（例えば、１〜４個、１〜３個、１〜２個、又は１個）のＲｈ（例えば、ハロ（例えば、クロロ）、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ（例えば、ＯＣＨ３）、又はＣ１〜Ｃ６アルキル（例えば、ＣＨ３）で随意に置換されたフェニルであってもよい。
【０１２５】
別の例として、Ｒｇは、１〜２個（例えば、１個）のＲｈ（例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキル（例えば、ＣＨ３））で随意に置換されている、５〜６個（例えば、５個）の原子を含むへテロアリールであってもよい。
【０１２６】
ある実施形態では、
ＸはＳであってもよく、 
Ｒ１４７はＮＲｅＲｆであってもよく、式中、Ｒｅ及びＲｆの一方は水素又はＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、水素）であり、Ｒｅ及びＲｆの他方は、
（ｉ）−Ｃ（Ｏ）Ｒｇであり、式中Ｒｇは、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むヘテロアリールであり、各々が１〜５個のＲｈで随意に置換されているか、又は    （ｉｉ）Ｃ１〜Ｃ３アルキルである
（例えば、Ｒｅ及びＲｆの一方は、水素又はＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、水素）であり、Ｒｅ及びＲｆの他方は、−Ｃ（Ｏ）Ｒｇであり、式中Ｒｇは、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むへテロアリールであり、各々が１〜５個のＲｈで随意に置換されている）。
【０１２７】
Ｒｇ及びＲｈは、本明細書のどこかで定義されている通りであってもよい。
【０１２８】
ある実施形態では、Ｒ１４３、Ｒ１４４、Ｒ１４５、及びＲ１４６の各々は水素である。  他の実施形態では、Ｒ１４３、Ｒ１４４、Ｒ１４５、及びＲ１４６の１つは、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルコキシ、又は−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）であり、他は水素である。
【０１２９】
図６Ｌに描写されている式を有する化合物の例には、ＣＰ−００６４９１７、ＣＰ−００６７２３３、ＣＰ−００６８５７８、ＣＰ−０１０３０１４、ＣＰ−０１０５７７７、ＣＰ−０１０７０６０、ＣＰ−００２９３００、ＣＰ−００７９９８３、及びＣＰ−０１０３９７８が含まれる。
【０１３０】
幾つかの実施形態では、これらの化合物は、図６Ａに描写されている式を有していてもよい。
【化４】
2014156470.tif 000005
【０１３１】
幾つかの実施形態では、
ＸはＯ又はＳであり、
Ｒ１００、Ｒ１０１、Ｒ１０２、及びＲ１０３の各々は、Ｈ、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルコキシから独立して選択されるか、又は
Ｒ１００、Ｒ１０１、Ｒ１０２、及びＲ１０３の任意の隣りあった２対は、それらが結合されている炭素原子と一緒になって、５個又は６個の総環原子を含む縮合ヘテロ環を形成し、該ヘテロ環は、Ｃ１〜Ｃ３アルキル及びオキソから独立して選択される１〜３個の置換基で随意に置換されており、
Ｒ１０４は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｊＲｋであり、式中、Ｒｊ及びＲｋの一方は水素又はＣ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒｊ及びＲｋの他方は
（ｉ）５〜６ヘテロシクリルで随意に置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであるか、又は
（ｉｉ）ハロ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルコキシ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、及び縮合Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル環から独立して選択される１〜５個の置換基で随意に置換されている５〜６個の原子を含むへテロアリールであり、
又は
Ｒ１０４は、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルコキシ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）から独立して選択される１〜５個の置換基で随意に置換されている５〜６個の原子を含むへテロアリールであり、ならびにＲ１０５は、ハロ又はＣ１〜Ｃ３アルキルである。
【０１３２】
実施形態は、以下の特徴の１つ又は複数を含むことができる。
【０１３３】
可変部分Ｘ
ＸはＳであってもよい。
【０１３４】
ＸはＯであってもよい。
【０１３５】
可変部分Ｒ１００、Ｒ１０１、Ｒ１０２、及びＲ１０３
ある実施形態では、Ｒ１００、Ｒ１０１、Ｒ１０２、及びＲ１０３の各々は水素である。他の実施形態では、Ｒ１００、Ｒ１０１、Ｒ１０２、及びＲ１０３の１つは、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルコキシであるか、又は−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）であり、他は水素である。
【０１３６】
可変部分Ｒ１０４
ある実施形態では、Ｒ１０４は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｊＲｋであり、式中、Ｒｊ及びＲｋの一方は水素又はＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、水素）であり、Ｒｊ及びＲｋの他方は、
（ｉ）５〜６ヘテロシクリルで随意に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルであるか、又は
（ｉｉ）ハロ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルコキシ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、及び縮合Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル環から独立して選択される１〜５個の置換基で随意に置換された５〜６個の原子を含むへテロアリールである。
【０１３７】
例としては、Ｒｊ及びＲｋの一方は、水素又はＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、水素）であり、Ｒｊ及びＲｋの他方は、ハロ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルコキシ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、及び縮合Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキル環から独立して選択される１〜５個の置換基で随意に置換されている５〜６個の原子を含むへテロアリールである。
【０１３８】
可変部分Ｒ１０５
Ｒ１０５は、クロロ又はＣＨ３であってもよい。
【０１３９】
図６Ａに描写されている式を有する化合物の例には、ＣＰ−００７９１７５、ＣＰ−００８７３３６、ＣＰ−００６４３１４、ＣＰ−００６８５７７、及びＣＰ−０１０２４０４が含まれる。
【０１４０】
幾つかの実施形態では、これらの化合物は、図３Ａに描写されている式を有していてもよい。
【化５】
2014156470.tif 000006
【０１４１】
幾つかの実施形態では、
Ｒ４３は、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むヘテロアリールであり、各々が１〜５個のＲｍで随意に置換されており、
Ｒ４４は、
（ｉ）Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むへテロアリールであり、各々が１〜５個のＲｍで随意に置換されているか、又は
（ｉｉ）−Ｚ４−（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、式中、
Ｚ４は結合又はＮＨであり、
Ｃ１〜Ｃ６アルキルは、
（ａ）オキソ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択される１〜３個の置換基で随意に置換されている５〜６個の原子を含むヘテロシクリル、又は
（ｂ）１〜５個のＲｍで随意に置換されているフェノキシ、のうちの１つで置換されており、
Ｒｍは各出現において、独立して、
（ｉ）ハロ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ又はＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、ニトロ、又はシアノであるか、又は
（ｉｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６ハロアルキルである。
【０１４２】
実施形態は、以下の特徴の１つ又は複数を含むことができる。
【０１４３】
可変部分Ｒ４３
ある実施形態では、Ｒ４３は、１〜５個のＲｍで随意に置換されているＣ６〜Ｃ１０アリールであってもよい。例えば、Ｒ４３は、１〜５個（例えば、１〜４個、１〜３個、１〜２個、又は１個）のＲｍ（例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキル（例えば、ＣＨ３））で随意に置換されているフェニルであってもよい。
【０１４４】
ある実施形態では、Ｒ４３は、５〜６個の原子を含むヘテロアリールであってもよく、その各々の原子が１〜５個のＲｍで随意に置換される。
【０１４５】
可変部分Ｒ４４
ある実施形態では、Ｒ４４は、１〜５個のＲｍで随意に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであってもよい。例えば、Ｒ４４は、１〜５個（例えば、１〜４個、１〜３個、１〜２個、又は１個）のＲｍ（例えば、ハロ（例えば、クロロ）、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ（例えば、ＯＣＨ３）、又はＣ１〜Ｃ６アルキル（例えば、ＣＨ３））で随意に置換されたフェニルであってもよい。
【０１４６】
図３Ａに描写されている式を有する化合物の例には、ＣＰ−００６７１０８、ＣＰ−００６７２４６、ＣＰ−００６８３９５、ＣＰ−００６８９２９、ＣＰ−００６８９６１、ＣＰ−００７０１６４、ＣＰ−００７０３６７、ＣＰ−００７９６４２、ＣＰ−０１０４９０４、及びＣＰ−０１３０６６５が含まれる。
【０１４７】
幾つかの実施形態では、これらの化合物は、図３Ｕに描写されている式を有していてもよい。
【化６】
2014156470.tif 000007
【０１４８】
幾つかの実施形態では、
Ｒ６７及びＲ６８の各々は、独立して
（ｉ）水素であるか、又は
（ｉｉ）Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むへテロアリールであり、各々が１〜５個のＲｎで随意に置換されているか、又は
（ｉｉｉ）ＮＨ２であるか、又は
（ｉｖ）−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、
Ｒ６９は、ＮＲｅＲｆであり、式中、Ｒｅ及びＲｆの一方は水素又はＣ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒｅ及びＲｆの他方は、
（ｉ）水素であるか、又は
（ｉｉ）１〜５個のＲｎで随意に置換されているＣ６〜Ｃ１０アリール又は５〜６個の原子を含むへテロアリールであるか、又は
（ｉｉｉ）−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり、式中、Ｃ１〜Ｃ６アルキルは、１〜５個のＲｎで随意に置換されているフェノキシで置換されており、
Ｒｎは各出現において、独立して、
（ｉ）ハロ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ又はＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、ニトロ、又はシアノであるか、又は
（ｉｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６ハロアルキルであるか、又は
（ｉｉｉ）フェニルである。
【０１４９】
実施形態は、以下の特徴の１つ又は複数を含むことができる。
【０１５０】
可変部分Ｒ６７及びＲ６８
ある実施形態では、Ｒ６７及びＲ６８の１つは、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むへテロアリールであり、各々が１〜５個のＲｎで随意に置換されている。
【０１５１】
可変部分Ｒ６９
ある実施形態では、Ｒｏ及びＲｐの一方は、水素又はＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、水素）であり、Ｒｏ及びＲｐの他方は、１〜５個のＲｎで随意に置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール又は５〜６個の原子を含むへテロアリールである。
【０１５２】
図３Ｕに描写されている式を有する化合物の例には、ＣＰ−００６３１８２、ＣＰ−００７１８６２、ＣＰ−００７２０３６、ＣＰ−０１０５３４３、ＣＰ−０１２２９４９、及びＣＰ−０１３４３８１が含まれる
【０１５３】
幾つかの実施形態では、これらの化合物は、図３Ｅに描写されている式を有していてもよい。
【化７】
2014156470.tif 000008
【０１５４】
幾つかの実施形態では、
ＸはＯ又はＳであり、
Ｒ５０及びＲ５３は、各々独立して、
（ｉ）水素であるか、又は
（ｉｉ）−Ｃ（Ｏ）Ｒｑであるか、又は
（ｉｉｉ）Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むヘテロアリールであるが、各々が１〜５個のＲｒで随意に置換されており、
ただし、Ｒ５０及びＲ５３の少なくとも１つは水素以外であり、
Ｒ５１及びＲ５２は、各々独立して水素又はハロであり、
Ｒｑは、
（ｉｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキルであるか、又は
（ｉｉ）―ＮＲｓＲｔであり、式中、
（ａ）Ｒｓ及びＲｔの一方は水素であり、他方は、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むへテロアリール（各々が１〜５個のＲｒで随意に置換されている）、１〜５個のＲｒで随意に置換されているフェノキシで置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル、又はアリール部分が１〜５個のＲｒで随意に置換されている−Ｏ−Ｎ＝Ｃ（ＮＨ２）（Ｃ６〜Ｃ１０アリール）であるか、又は
（ｂ）Ｒｓ及びＲｔは、各々が結合されている窒素原子と一緒になって、５〜６個の原子を含むヘテロシクリルを形成するか、又は
（ｉｉｉ）アリール部分が１〜５個のＲｒで随意に置換されている−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ６〜Ｃ１０アリール）であり、
Ｒｒは各出現において、独立して、
（ｉ）ハロ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ又はＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、ニトロ、又はシアノであるか、又は
（ｉｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６ハロアルキルである。
【０１５５】
ある実施形態では、Ｒ５０及びＲ５３の一方は−Ｃ（Ｏ）Ｒｑであり、Ｒ５０及びＲ５３の他方は、水素、又はＣ６〜Ｃ１０アリール若しくは５〜１０個の原子を含むへテロアリールである（各々が１〜５個のＲｒで随意に置換されている）。実施形態では、Ｒｑは−ＮＲｓＲｔであってもよい。
【０１５６】
図３Ｅに描写されている式を有する化合物の例には、ＣＰ−００６１７７７、ＣＰ−００６６００８、ＣＰ−００７２２５３、ＣＰ−００９９２８９、ＣＰ−０００８５４５、ＣＰ−００６０８５２、ＣＰ−００７２１５６、ＣＰ−００７２２７１、ＣＰ−０１０４７６６、及びＣＰ−０１１０３５２が含まれる。
【０１５７】
幾つかの実施形態では、これらの化合物は、図３Ｎに描写されている式を有していてもよい。
【化８】
2014156470.tif 000009
【０１５８】
幾つかの実施形態では、
Ｒ６１、Ｒ６２、及びＲ６４の各々は、独立して
（ｉ）水素であるか、又は
（ｉｉ）Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むへテロアリールである（各々が１〜５個のＲｕで随意に置換されている）か、又は
（ｉｉｉ）アリール部分が１〜５個のＲｕで随意に置換されている−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）（Ｃ６〜Ｃ１０アリール）であるか、又は
（ｉｖ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲｖＲｗであり、式中、Ｒｖ及びＲｗの一方は水素であり、Ｒｖ及びＲｗの他方は、１〜５個のＲｕで随意に置換されているＣ６〜Ｃ１０アリール、又はオキソで随意に置換されているＣ７〜Ｃ１１アラルキルであるか、又は
（ｖ）ＮＨ２又はヒドロキシメチルであり、
Ｒ６３は、
（ｉ）水素であるか、又は
（ｉｉ）Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むへテロアリールである（各々が１〜５個のＲｕで随意に置換されている）か、又は
（ｉｉｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒｕは各出現において、独立して、
（ｉ）ハロ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ又はＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、ニトロ、又はシアノであるか、又は
（ｉｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル又はＣ１〜Ｃ６ハロアルキルである。
【０１５９】
ある実施形態では、Ｒ６１、Ｒ６２、及びＲ６４のうち２つは、水素以外である。
【０１６０】
図３Ｎに描写されている式を有する化合物の例には、ＣＰ−００００４７７、ＣＰ−００６３３７５、ＣＰ−００６４２３１、ＣＰ−００６５１０５、ＣＰ−００７０８４４、ＣＰ−００７０８８６、及びＣＰ−０１０４７６５が含まれる。
【０１６１】
幾つかの実施形態では、これらの化合物は、図３Ｖに描写されている式を有していてもよい。
【０１６２】
ある実施形態では、Ｒ７０は、本明細書のどこかに記載されているようなアミド（つまり、一般式‐Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ’を有する）又は逆アミド（つまり、一般式−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’’’を有する）であってもよい。
【０１６３】
ある実施形態では、Ｒ７１は水素であってもよい。
【０１６４】
ある実施形態では、Ｒ７２は、
（ｉ）Ｃ１〜Ｃ６アルキルであってもよく、又は 
（ｉｉ）各々が、ハロ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ又はＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、ニトロ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及びＣ１〜Ｃ６ハロアルキルから独立して選択される１〜５個の置換基で随意に置換されているＣ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むヘテロアリールであってもよい。
【０１６５】
図３Ｖに描写されている式を有する化合物の例には、ＣＰ−００６５６６５、ＣＰ−００７５６２７、及びＣＰ−００７５６５６が含まれる
【０１６６】
幾つかの実施形態では、これらの化合物は、図７Ｄに描写されている式を有していてもよい。
【０１６７】
ある実施形態では、ピリミジン環は、以下から独立して選択される１〜２個の置換基で置換されていてもよい： 
（ｉ）５〜６個の原子を含むヘテロシクリル、又は
（ｉｉ）各々が、ハロ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ又はＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、ニトロ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及びＣ１〜Ｃ６ハロアルキルから独立して選択される１〜５個の置換基で随意に置換されているＣ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の原子を含むヘテロアリール。
【０１６８】
他の実施形態では、ピリミジン環は、縮合環で置換されていてもよい。
【０１６９】
図７Ｄに描写されている式を有する化合物の例には、ＣＰ−００５９５４７、ＣＰ−００５９５６３、ＣＰ−００５９６４２、ＣＰ−００６４３８２、ＣＰ−００６７０５３、ＣＰ−００７２７２０、及びＣＰ−００７９８１０が含まれる。
【０１７０】
幾つかの実施形態では、これらの化合物は、図７Ａに描写されている式を有していてもよい。
【０１７１】
ある実施形態では、ピリジン環は、本明細書のどこかに記載されているようなアミド又は逆アミドで置換されていてもよい。
【０１７２】
他の実施形態では、ピリミジン環は、１つ又は複数の縮合環で置換されていてもよい。
【０１７３】
図７Ａに描写されている式を有する化合物の例には、ＣＰ−００６０７２９、ＣＰ−００６６７５１、ＣＰ−００６９９３４、ＣＰ−００７６６２７、ＣＰ−００８０２７６、ＣＰ−００８９９６６、ＣＰ−００２９２７８、及びＣＰ−０１３０５８６が含まれる。
【０１７４】
本明細書に記載されている化合物のいずれかの混合物も、本明細書に記載されている任意の方法で使用することができる。
【０１７５】
合成方法
本発明の化合物は、Bionet社、Maybridge社、Chemdiv社、ChemBridge社、Peakdale社、IFLAB/Life Chemicals社、Enamine社、Microsource社、又はTimtec社などの供給業者から商業的に取得することができる。その代わり又はそれに加えて、本明細書に記載されている化合物は、市販の出発物質及び試薬、又は従来の有機化学物質合成法により調製することができる出発物質及び試薬から、本明細書に記載されている方法（又はその変法）及び／又は従来の有機化学物質合成法により合成することができる。本明細書に記載されている化合物は、反応混合物から分離し、さらにカラムクロマトグラフイー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、又は再結晶法などの方法により精製することができる。当業者であれば理解できるように、本明細書の式の化合物を合成するさらなる方法は、当業者には自明であろう。さらに、種々の合成ステップは、所望の化合物を生成するために別の順序でつまり順番で実施されてもよい。本明細書に記載されている化合物の合成に有用な合成化学変換及び保護基法（保護及び脱保護）は、当技術分野で公知であり、例えば、以下に記載されているものが含まれる：Larock, Comprehensive Organic Transformations, 2d.ed., Wiley-VCH Publishers (1999)；Wuts and Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Ed., John Wiley and Sons (2007)；Fieser and Fieser, Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994)；及びPaquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995)、並びにこれらの続版。
【０１７６】
ベンゾイミダゾール含有化合物 
図６Ｇに描写されている式を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００００４８９、ＣＰ−００００５４０、ＣＰ−００００５５０、ＣＰ−００００５５３、ＣＰ−００００５５４、ＣＰ−００００５５７、ＣＰ−００００５７１、ＣＰ−００４７６５９、ＣＰ−００６４４８３、ＣＰ−００６６８２９、ＣＰ−００６９９６１、ＣＰ−００７４８０６、ＣＰ−００８０７７３、ＣＰ−００９１８１８、ＣＰ−０１０５７７２、及びＣＰ−０１０９９５３は、表１（項目１〜１７）に示されている供給業者から商業的に取得した。本開示に記載されている他のベンゾイミダゾール１〜１４（スキーム１）は、商業的に取得することができる。
【化９】
2014156470.tif 000010
スキーム１
【０１７７】
図６Ｇに描写されている式を有する他の化合物は、例えば、ＣＰ−００００５４０の合成が記載されているKokare et al., Protein & Peptide Letters, 14:259-263, 2007に記載の化学を使用して取得することができる。分子の特定部分に変異が組み込まれたベンゾイミダゾール類似体は、十分に確立されている化学を使用して、スキーム２により調製することができる。１Ｈ−ベンゾイミダゾール中間体が市販されている場合、アルキル化反応を行って、Ｒ１置換基を導入することができる（Ａ経路）。市販のベンゾイミダゾールの他の合成を使用して、種々の置換基を分子の異なる位置に導入することができる。しかしながら、非対称置換１Ｈ−ベンゾイミダゾールの場合、２つの他の経路を使用することができる。Ｒ３が電子求引基である場合、２−フルオロニトロベンゼンの芳香族求核置換を使用して（Ｂ経路）、２−アミノニトロベンゼン中間体を生成することができる。他の類似体の場合、Ｒ１基を導入する２−アミノニトロベンゼンのアルキル化（Ｃ経路）に従って、同じ中間体を生成することができる。ニトロ基のアミノ基への還元は、確立されている還元プロトコールを用いて行うことができる。そのような１，２−ジアミンのアルデヒドによる酸化的環化又はカルボン酸による縮合によって、所望のベンゾイミダゾール類似体が生成する。
【０１７８】
スキーム２：ベンゾイミダゾール類似体の合成
【０１７９】
ベンゾチアゾール含有化合物
図６Ｌに描写されている式（Ｘ＝Ｓ）を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００６４９１７、ＣＰ−００６７２３３、ＣＰ−００６８５７８、ＣＰ−０１０３０１４、ＣＰ−０１０５７７７、及びＣＰ−０１０７０６０は、表１（項目１８〜２３）に示されている供給業者から商業的に取得した。図６Ｌに描写されている式（Ｘ＝Ｓ）を有する化合物は、例えば、ローソン試薬を使用したオルト−ハロベンズアミドの環化により、又はチオアニリドの酸化により取得することができる。図６Ｌに描写されている式（Ｘ＝Ｓ）を有する他の化合物も、例えば、Song et al., Eur. J. Med. Chem. 43(7):1519-1524, 2008に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１８０】
ベンゾキサゾール含有化合物
図６Ｌに描写されている式（Ｘ＝Ｏ）を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００２９３００、ＣＰ−００７９９８３、及びＣＰ−０１０３９７８は、表１（項目２４〜２７）に示されている供給業者から商業的に取得した。図６Ｌに描写されている式（Ｘ＝Ｏ）を有する他の化合物は、例えば、Boyd, Sci. Synth. 11:481-492, 2002に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１８１】
キナゾリノン含有化合物 
図２Ｇに含まれているキナゾリノン誘導体は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００３４３６０及びＣＰ−００３６１８７は、表１（項目２７〜２８）に示されている供給業者から商業的に取得した。図２Ｃに描写されている式を有する他の化合物は、例えば、Connolly et al., Tetrahedron 61(43):10153-10202, 2005に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１８２】
ベンズイミダゾピリミジン含有化合物 
図６Ｉに描写されている式を有するベンズイミダゾピリミジン化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００５００９５及びＣＰ−０１３１７６３は、表１（項目２９〜３０）に示されている供給業者から商業的に取得した。
【０１８３】
ベンゾフラン含有化合物
図６Ａに描写されている式（Ｘ＝Ｏ）を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００７９１７５及びＣＰ−００８７３３６は、表１（項目３１〜３２）に示されている供給業者から商業的に取得した。図６Ａに描写されている式（Ｘ＝Ｏ）を有する他の化合物は、例えば、Hou, et al., Progress in Heterocyclic Chemistry 17:142-171, 2005に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１８４】
ベンゾチオフェン含有化合物 
図６Ａに描写されている式（Ｘ＝Ｓ）を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００６４３１４、ＣＰ−００６８５７７、及びＣＰ−０１０２４０４は、表１（項目３３〜３５）に示されている供給業者から商業的に取得した。図６Ａに描写されている式（Ｘ＝Ｓ）を有する他の化合物は、例えば、Bravo et al., J. Heterocyclic Chem., 7(4):967-8, 1970、又はRayner et al., Sci. Synth. 10:155-181, 2005のいずれか一方に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１８５】
インドール含有化合物 
図６Ｊに描写されている式を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００１０５３９、ＣＰ−００７２０９６、ＣＰ−００７８４４８、及びＣＰ−０１０３９７８は、表１（項目３６〜３８）に示されている供給業者から商業的に取得した。図６Ｊに描写されている式を有する他の化合物は、例えば、Humphrey et al., Chem. Rev., 106(7):2875-2911, 2006に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１８６】
キノリン含有化合物 
図７Ｅ及び７Ｆに含まれているキノリン誘導体は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００７２０９２及びＣＰ−００８７７９９は、表１（項目３９〜４０）に示されている供給業者から商業的に取得した。他のキノリン化合物は、例えば、Larsen et al., Sci. Synth. 15:389-549, 2005に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１８７】
ベンゾトリアゾール含有化合物
図６Ｏに描写されている式を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−０００９８８３及びＣＰ−００７０８７１は、表１（項目４１〜４２）に示されている供給業者から商業的に取得した。図６Ｏに描写されている式を有する他の化合物は、例えば、Katritzky et al., Chem. Rev. 98(2):409-548, 1998に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１８８】
本発明のクマリン含有化合物、ベンゾピラン含有化合物、テトラヒドロキノリン含有化合物、ベンゾピラノン含有化合物、及びベンゾピラジン含有化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、図１に含まれている化合物ＣＰ−００６３５０８、ＣＰ−００００９２８、ＣＰ−０００５０６９、ＣＰ−００９６４３３、及びＣＰ−００４５０６１は、表１（項目４３〜４７）に示されている供給業者から商業的に取得した。他のクマリン含有化合物、ベンゾピラン含有化合物、テトラヒドロキノリン含有化合物、ベンゾピラノン含有化合物、及びベンゾピラジン含有化合物は、例えば、Borges et al., Curr. Med. Chem. 12(8):887-916, 2005；Schweizer et al., Chemistry of Heterocyclic Compounds 31:11-139, 1977；Katritzky et al., Tetrahedron 52(48):15031-15070, 1996；Williams et al., Sci. Synth. 14:347-638, 2003；Kress et al., Progress in Heterocyclic Chemistry 4:186-203, 1992に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１８９】
ピリジン含有化合物 
図７Ａに描写されている式を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００６０７２９、ＣＰ−００６６７５１、ＣＰ−００６９９３４、ＣＰ−００７６６２７、ＣＰ−００８０２７６、ＣＰ−００８９９６６、ＣＰ−００２９２７８、及びＣＰ−０１３０５８６は、表１（項目４８〜５５）に示されている供給業者から商業的に取得した。図７Ａに描写されている式を有する他の化合物は、例えば、Li et al., Bioorg. & Med. Chem. Lett. 17(8):2347-2350, 2007、又はin Spitzner et al., Sci. Synth. 15:11-255, 2005のいずれか一方に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１９０】
ピリミジン含有化合物 
図７Ｄに描写されている式を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００５９５４７、ＣＰ−００５９５６３、ＣＰ−００５９６４２、ＣＰ−００６４３８２、ＣＰ−００６７０５３、ＣＰ−００７２７２０、及びＣＰ−００７９８１０は、表１（項目５６〜６２）に示されている供給業者から商業的に取得した。図７Ｄに描写されている式を有する他の化合物は、例えばLuo et al., Tetrahedron Lett. 43(33), 5739-5742, 2002、又はvon Angerer et al., Sci. Synth. 16:379-572, 2004のいずれか一方に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１９１】
フラン含有化合物
図３Ｅに描写されている式（Ｘ＝Ｏ）を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００６１７７７、ＣＰ−００６６００８、ＣＰ−００７２２５３、及びＣＰ−００９９２８９は、表１（項目６３〜６６）に示されている供給業者から商業的に取得した。図３Ｅに描写されている式（Ｘ＝Ｏ）を有する他の化合物は、例えば、Kort et al., J. Med. Chem. 51(3):407-416, 2008、又はKonig et al., Sci. Synth. 9:183-286, 2001のいずれか一方に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１９２】
チオフェン含有化合物 
図３Ｅに描写されている式（Ｘ＝Ｓ）を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−０００８５４５、ＣＰ−００６０８５２、ＣＰ−００７２１５６、ＣＰ−００７２２７１、ＣＰ−０１０４７６６、及びＣＰ−０１１０３５２は、表１（項目６７〜７２）に示されている供給業者から商業的に取得した。図３Ｅに描写されている式（Ｘ＝Ｓ）を有する他の化合物は、例えば、Kaizerman et al., J. Med. Chem. 46(18):3914-3929, 2003、又はSchatz et al., Sci. Synth. 10:287-392, 2001のいずれか一方に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１９３】
チアゾール含有化合物 
図３Ｕに描写されている式を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００６３１８２、ＣＰ−００７１８６２、ＣＰ−００７２０３６、ＣＰ−０１０５３４３、ＣＰ−０１２２９４９、及びＣＰ−０１３４３８１は、表１（項目７３〜７８）に示されている供給業者から商業的に取得した。図３Ｕに描写されている式を有する他の化合物は、例えば、Narayana et al., Phosphorus, Sulfur and Silicon and the Related Elements 181(6):1381-1389, 2006、又はKikelj et al., Sci. Synth. 11:627-806, 2002のいずれか一方に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１９４】
ピラゾール含有化合物 
図３Ｎに描写されている式を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００００４７７、ＣＰ−００６３３７５、ＣＰ−００６４２３１、ＣＰ−００６５１０５、ＣＰ−００７０８４４、ＣＰ−００７０８８６、及びＣＰ−０１０４７６５は、表１（項目７９〜８５）に示されている供給業者から商業的に取得した。図３Ｎに描写されている式を有する他の化合物は、例えば、McKeown et al., Bioorg. & Med. Chem. Lett., 16(18):4767-4771, 2006、又はStanovnik, et al., Sci. Synth. 12:15-226, 2003のいずれか一方に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１９５】
イソキサゾール含有化合物 
図３Ｖに描写されている式を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００６５６６５、ＣＰ−００７５６２７、及びＣＰ−００７５６５６は、表１（項目８６〜８８）に示されている供給業者から商業的に取得した。図３Ｖに描写されている式を有する他の化合物は、例えば、Wakefield, Sci. Synth. 11:229-288, 2002に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１９６】
オキサジアゾール含有化合物 
図３Ａに描写されている式を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００６７１０８、ＣＰ−００６７２４６、ＣＰ−００６８３９５、ＣＰ−００６８９２９、ＣＰ−００６８９６１、ＣＰ−００７０１６４、ＣＰ−００７０３６７、ＣＰ−００７９６４２、ＣＰ−０１０４９０４、及びＣＰ−０１３０６６５は、表１（項目８９〜９８）に示されている供給業者から商業的に取得した。図３Ａに描写されている式を有する他の化合物は、例えば、Grant et al., J. Org. Chem. 73(18):7219-7223, 2008、又はHemming, et al., Sci. Synth. 13:127-184, 2004のいずれか一方に記載されている化学を使用して取得することができる。
【０１９７】
ベンズアミド含有化合物
図２Ａに描写されている式を有する化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−０００５１８６、ＣＰ−０００７９９１、及びＣＰ−００６１５６６は、表１（項目９９〜１０１）に示されている供給業者から商業的に取得した。図２Ａに描写されている式を有する他の化合物は、当業者に公知である方法の使用、例えば、対応する安息香酸及びアミンの縮合により取得することができる。
【０１９８】
当該１，３，４−オキサジアゾール含有化合物、トリアゾリン含有化合物、ピラゾリン含有化合物、ジヒドロピリドン含有化合物、トリアゾール含有化合物、インドリン含有化合物、及びイミドアゾトリアジン含有化合物は、商業的に取得することができるか、又は従来の合成法を使用して合成することができる。例えば、化合物ＣＰ−００６２０３０、ＣＰ−０００７９９４、ＣＰ−００３９０７３、ＣＰ−０００４１１６、ＣＰ−００６１４０１、ＣＰ−００６４２８６、ＣＰ−０１１０６４４、及びＣＰ−００５１０９２は、表１（項目１０２〜１０９）に示されている供給業者から商業的に取得した。 
【表１−１】
2014156470.tif 000011
【表１−２】
2014156470.tif 000012
【表１−３】
2014156470.tif 000013
【表１−４】
2014156470.tif 000014
【表１−５】
2014156470.tif 000015
【表１−６】
2014156470.tif 000016
【表１−７】
2014156470.tif 000017
【表１−８】
2014156470.tif 000018
【表１−９】
2014156470.tif 000019
【表１−１０】
2014156470.tif 000020
【表１−１１】
2014156470.tif 000021
【表１−１２】
2014156470.tif 000022
【表１−１３】
2014156470.tif 000023
【表１−１４】
2014156470.tif 000024
【表１−１５】
2014156470.tif 000025
【表１−１６】
2014156470.tif 000026
【表１−１７】
2014156470.tif 000027
【表１−１８】
2014156470.tif 000028
【表１−１９】
2014156470.tif 000029
Ａ表１に示されている系統名は、ＣｈｅｍＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａバージョン９．０．１ソフトウェアを使用して、以下のように生成した。系統名は、表１に示されている化学構造の各々をＣｈｅｍＤｒａｗの描画窓に入力し、化合物を選択し、構造メニュー下の「構造を名称に変換」ツールを選択することにより生成した。
【０１９９】
治療法
本発明は、Ａｔｏｈ１発現の増加から利益を得る可能性のある疾患及び／又は障害を治療するための、本明細書に記載されている化合物の使用に関する方法を提供する。一般的に、本治療法は、Ａｔｏｈ１の発現レベルを増加させ、それにより標的細胞の部分的な又は完全な分化を促進するために、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を使用することを伴う。そのような治療から利益を得ることができる疾患は、Ａｔｏｈ１レベルの増加が、疾患、例えば、Ａｔｏｈ１発現の増加に起因する完全な又は部分的な分化細胞が、（１）喪失又は損傷細胞又は組織、例えば機能的細胞、例えば聴覚有毛細胞を置換する役目を果たす、及び／又は（２）細胞、例えば癌細胞の有害集団の増殖を防止する疾患の１つ又は複数の症状を治療するものである。
【０２００】
一般的に、本発明は、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を患者に投与するステップを提供する。その代わりに又はそれに加えて、本発明は、１つ又は複数の標的細胞、例えば幹細胞、ｉＰＳ細胞、前駆細胞、及び／又は支持細胞を、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数と接触させて、それらの細胞が成熟細胞タイプ、例えば有毛細胞へと又はそれに向かって完全に又は部分的に分化することを促進するステップ、１つ又は複数の細胞、例えば本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数と、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触した細胞、前駆細胞、及び／又は支持細胞を患者に投与するステップ、及び／又は１つ又は複数の細胞、例えば本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数と、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触した細胞、前駆細胞、及び／又は支持細胞を、本化合物の１つ又は複数と併用して患者に投与するステップを提供する。
【０２０１】
聴覚有毛細胞の喪失 
有毛細胞を生成可能な細胞は内耳に存在するが、内耳における自然な有毛細胞再生は低いことが広く受け入れられている（Li et al., Trends Mol. Med., 10, 309-315 (2004)；Li et al., Nat. Med., 9, 1293-1299 (2003)；Rask-Andersen et al., Hear. Res., 203, 180-191 (2005)）。その結果、喪失又は損傷有毛細胞は、自然な生理学的過程（例えば、細胞分化）により適切に置換することができず、有毛細胞の喪失が生じる。多くの個体では、そのような有毛細胞の喪失により、例えば感音性聴力損失、聴覚障害、及び平衡障害が生じ得る。内耳の有毛細胞の数を増加させるという治療戦略は、有毛細胞喪失、例えばこれらの症状の１つ又は複数を有する患者に有益であろう。
【０２０２】
有毛細胞発生におけるＡｔｏｈ１の重要性は十分立証されている。例えば、Ｍａｔｈ１は、有毛細胞発生、並びに内耳前駆細胞の内耳支持細胞及び／又は有毛細胞への分化に必要である（Bermingham et al. , Science, 284:1837-1841, 1999））。それに加えて、成熟モルモットの内リンパにおけるアデノウイルス媒介性Ｍａｔｈ１過剰発現により、成熟蝸牛の非感覚細胞が未成熟有毛細胞へと分化することがもたらされる（Kawamoto et al., J. Neurosci., 23:4395-4400, 2003）。これらの研究には２つ意味するところがある。第１に、これらの研究は、成熟蝸牛の非感覚細胞が、感覚細胞、例えば有毛細胞に分化する能力を保持していることを実証する。第２に、これらの研究は、Ｍａｔｈ１過剰発現が、非感覚細胞からの有毛細胞分化を指図するのに必要かつ十分であることを実証する。その後の研究は、アデノウイルス媒介性Ａｔｏｈ１過剰発現が、実験的に聴力を失わせた動物モデルにおいて有毛細胞再生を誘導し、聴力閾値を実質的に改善させることを実証することによりこれらの知見を進展させた（Izumikawa et al., Nat. Med., 11:271-276, 2005）。
【０２０３】
対象体及び／又は細胞若しくは組織のＡｔｏｈ１レベルを増加可能な化合物が、本明細書に提供されている。本明細書に記載されているように、これらの化合物は、Ａｔｏｈ１発現の増加を促進し、それにより内耳の感覚細胞又は細胞（複数）、例えば有毛細胞への又はそれへと向かう、標的細胞又は細胞（複数）の分化を促進する。耳に位置する細胞又は有毛細胞に分化可能な細胞から有毛細胞分化を促進するための、これらの化合物の使用は、少なくとも、Berminghamら、上記、Kawamotoら、上記、Izumikawaら、上記により以前に記載されている実験データによって十分に支持されている。結果的に、本明細書に記載されている化合物は、患者の有毛細胞喪失に起因する疾患及び障害を治療するために使用することができる。
【０２０４】
本発明は、有毛細胞の喪失に起因する聴力障害を有する患者、又は発症するリスクのある患者を治療するための化合物及び方法を提供する。幾つかの実施形態では、本治療法は、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を患者に投与して、例えば患者の耳（例えば、内耳）の聴覚有毛細胞の形成を促進させ、及び／又は患者の内耳に元々存在する非有毛細胞タイプから、完全な又は部分的な聴覚有毛細胞分化を促進することにより、患者の耳（例えば、内耳）の聴覚有毛細胞の数を増加させるステップを含む。
【０２０５】
幾つかの実施形態では、本治療法は、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を患者に投与して、例えば患者の内耳の聴覚有毛細胞（例えば、内耳及び／又は外耳聴覚有毛細胞）の形成を促進させ、及び／又は患者の内耳に元々存在する非有毛細胞タイプから、完全な又は部分的な聴覚有毛細胞分化を促進することにより、患者の内耳の聴覚有毛細胞（例えば、内及び／又は外聴覚有毛細胞）の数を増加させるステップを含む。
【０２０６】
有毛細胞（例えば、内及び／又は外有毛細胞）に分化可能な細胞の例には、内耳幹細胞、ｉＰＳ細胞、前駆細胞、及び／又は支持細胞（例えば、ダイテルス細胞、柱細胞、内部支持細胞、視蓋細胞、及びヘンゼン細胞）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２０７】
本発明は、有毛細胞に完全に又は部分的に分化可能な１つ又は複数の細胞を、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数と接触させて、内耳の成熟細胞タイプ、例えば有毛細胞（例えば、内及び／又は外有毛細胞）へと又はそれに向かって、それらの細胞の完全な又は部分的な分化を促進するステップも含む。有毛細胞に分化可能な代表的な細胞には、幹細胞（例えば、内耳幹細胞、成体幹細胞、骨髄由来幹細胞、胚性幹細胞、間葉系幹細胞、皮膚幹細胞、ｉＰＳ細胞、及び脂肪由来幹細胞）、前駆細胞（例えば、内耳前駆細胞）、支持細胞（例えば、ダイテルス細胞、柱細胞、内部支持細胞、視蓋細胞、及びヘンゼン細胞）、及び／又は生殖細胞が含まれるが,これらに限定されない。
【０２０８】
その代わりに又はそれに加えて、本方法は、有毛細胞（例えば、内及び／又は外有毛細胞）に分化可能であり、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数の細胞と、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触させた１つ又は複数の細胞を、患者の耳（例えば内耳）に投与するステップ（細胞療法）を含む。最後に、本方法は、有毛細胞（例えば、内及び／又は外有毛細胞）に分化可能であり、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数の細胞と、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触させた１つ又は複数の細胞を、本化合物の１つ又は複数と併用して、患者の耳（例えば内耳）に投与するステップ（併用療法）を含む。
【０２０９】
本発明は、耳の感覚細胞、例えば有毛細胞として機能可能な１つ又は複数の細胞への１つ又は複数の細胞の分化（例えば、完成な又は部分的な分化）を促進することにより、聴覚障害、難聴、及び前庭障害などの、有毛細胞喪失、及び耳の細胞喪失の結果として発生する任意の障害を治療するために使用することができる。
【０２１０】
幾つかの実施形態では、本方法は、有毛細胞喪失のリスクのある患者及び／又は有毛細胞喪失を有する患者を選択するステップを含む。その代わりに又はそれに加えて、本方法は、感音性聴力損失のリスクのある患者及び／又は感音性聴力損失を有する患者を選択するステップを含む。例えば、聴力損失を経験しているか又は発症するリスクのある任意のヒトは、本明細書に記載されている治療法の候補である。聴力損失を有するか又は発症するリスクのあるヒトは、平均的なヒトほど良好に聞き取ることができないか、又は聴力損失を経験する前のヒトほど良好に聞き取ることができない。例えば、聴覚は、少なくとも５、１０、３０、５０％以上減退する場合がある。
【０２１１】
対象体に、任意の理由で又は任意のタイプの事象の結果として、有毛細胞喪失に関連する聴力損失が生じ得る。例えばヒトは、遺伝的又は先天的欠陥のために耳が聞こえない場合があり、例えばヒトは、遺伝的又は先天的欠陥のために、生まれた時から耳が聞こえない場合があり、又は徐々に聴覚を失っていった結果として耳が聞こえないか又は難聴である場合がある。別の例では、ヒトは、耳の構造への物理的外傷などの外傷性事象、突然の大音響又は大音響への長期間曝露の結果として耳が聞こえないか又は難聴になる場合がある。例えば、コンサート会場、空港滑走路、及び建築現場への長期間曝露は、内耳損害及びその後の聴力損失を引き起こす場合がある。ヒトは、化学物質誘導聴器毒性を経験する場合があり、聴器毒には、抗腫瘍薬、サリチル酸塩、キニーネ、及びアミノグリコシド抗生物質を含む治療薬、食品又は医薬品中の混入物質、及び環境又は産業汚染物質が含まれる。ヒトは、老化に起因する聴覚障害を有する場合があり、又はヒトは耳鳴（耳の中で響く音を特徴とする）を有する場合がある。
【０２１２】
本発明に記載の化合物及び方法を使用する治療に好適なヒトには、両側及び片側前庭機能障害を含む前庭機能障害を有するヒトが含まれてもよい。前庭機能障害とは、浮動性めまい、平衡失調、回転性めまい、嘔気、及び不鮮明な視覚を含み、聴覚問題、疲労、及び認識機能の変化を伴う場合がある症状を特徴とする内耳機能障害である。前庭機能障害は、遺伝的又は先天的欠陥、ウイルス又は細菌感染などの感染症、又は外傷性若しくは非外傷性傷害などの傷害の結果である場合がある。前庭機能障害は、最も一般的には、障害の個々の症状（例えば、回転性めまい、嘔気、及び不鮮明な視覚）を測定することにより検査される。 その代わりに又はそれに加えて、本発明に記載の化合物及び方法は、聴力損失、難聴、又は内耳機能の喪失に関連する他の聴力障害の進行を防止、低減、又は遅延させるなど、予防的に使用することができる。例えば、１つ又は複数の化合物を含有する組成物は、聴覚障害に影響を与え得る第２の治療薬と共に（例えば、その前に、その後で、又はそれと同時に）投与することができる。そのような耳毒性薬物には、抗生物質ネオマイシン、カナマイシン、アミカシン、バイオマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、エリスロマイシン、バンコマイシン、及びストレプトマイシン；シスプラチンなどの化学療法薬；トリサリチル酸コリンマグネシウム、ジクロフェナク、ジフルニサル、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナム酸塩、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、サルサレート、スリンダク、及びトルメチンなどの非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）；利尿薬；アスピリンなどのサリチル酸塩；並びにキニーネ及びクロロキンなどの特定のマラリア治療薬が含まれる。例えば、化学療法を受けているヒトを、本明細書に記載されている化合物及び方法を使用して治療することができる。例えば、化学療法薬シスプラチンは、聴力損失を引き起こすことが知られている。したがって、１つ又は複数の化合物を含有する組成物を、シスプラチン副作用の重症度を防止又は減少させるために、シスプラチン療法と共に（例えば、その前に、その後で、又はそれと同時に）投与することができる。そのような組成物は、第２の治療薬の前に、その後で、及び／又はそれと同時に投与することができる。これらの２つの作用剤は、異なる投与経路により投与されてもよい。
【０２１３】
本発明に記載の化合物及び方法は、感音性有毛細胞喪失に起因する聴力障害の治療に適切である。感音性有毛細胞喪失を有する患者は、有毛細胞喪失領域におけるらせん神経節ニューロンの喪失に帰着することが多い蝸牛有毛細胞の変性を経験する。そのような患者は、コルチ器官の支持細胞の喪失、並びに側頭骨物質中の縁郭、らせん靭帯、及び血管条の変性を経験する場合もある。これらの患者は、細胞の有毛細胞への分化を引き起こす作用剤、又は内耳に移植若しくは注入された有毛細胞を含有する組織移植片による治療を受けることができる。
【０２１４】
内耳の細胞を生成する方法を下記に提供する。耳細胞又は耳細胞前駆体は、マウス又はヒトなどの哺乳動物から単離された幹細胞から生成することができ、上記細胞は、胚性幹細胞、又は内耳、中枢神経系、血液、皮膚、目、又は骨髄などの成熟（例えば、成体）組織に由来する幹細胞であってもよい。幹細胞を培養し耳細胞（例えば有毛細胞）への分化を誘導するためには下記に記載されているどの方法も使用することができる。
【０２１５】
一般的に、本明細書に記載されている化合物及び方法は、耳の有毛細胞増殖を発生させるため、及び／又は耳（例えば、内耳、中耳、及び／又は外耳）の有毛細胞の数を増加させるために使用することができる。例えば、耳の有毛細胞の数は、治療前の有毛細胞の数と比較して、約２倍、３倍、４倍、６倍、８倍、又は１０倍以上増加させることができる。この新しい有毛細胞増殖は、対象体の聴力の少なくとも部分的な改善を効果的に回復又は確立することができる。例えば、作用剤の投与により、聴力損失を約５、１０、１５、２０、４０、６０、８０、１００％以上改善させることができる。
【０２１６】
治療の後、適切な場合は、聴覚、又は内耳障害と関係する他の症状における改善について、ヒトを検査することができる。聴覚を測定するための方法は周知であり、純音聴力検査法、空気伝導検査法、及び骨伝導検査法が含まれる。これらの検査では、ヒトが聞くことができる音の大きさ（強度）及び音の高さ（周波数）の範囲が測定される。ヒトの聴覚検査法には、聴性行動反応法（７か月まで幼児用）、視覚補強検索聴力検査法（visual reinforcement orientation audiometry）（７か月から３歳までの児童）、及び３歳より年上の児童用の遊戯聴力検査法が含まれる。蝸牛有毛細胞の機能を検査するためには、耳音響放射検査法を使用することができ、蝸電図法は、蝸牛の機能及び脳への神経経路の最初の部分に関する情報を提供する。幾つかの実施形態では、治療は、変更して若しくは変更せずに継続してもよく、又は中止してもよい。
【０２１７】
異常細胞増殖
細胞増殖は、通常、複数のチェックポイント及び保護機構により管理される厳密に制御された過程である。これらのチェックポイント又は保護機構の１つ又は複数が、例えば、遺伝子突然変異により迂回される又は破綻すると、異常細胞増殖が生じる。異常細胞増殖の結果は、癌性増殖又は腫瘍の形成である。最も悪性度の高い癌性増殖は、典型的には侵襲性及び転移性である。それほど悪性度の高くない良性増殖は、侵襲性又は転移性ではないが、転移性になる可能性を保持していることが多い。
【０２１８】
幾つかの実施形態では、本発明は、Ａｔｏｈ１発現の増加から利益を得る可能性のある異常細胞増殖及び／又は癌を治療するための方法及び組成物に関する。Ａｔｏｈ１発現の増加から利益を得ることができる異常増殖細胞又は癌性細胞は、例えばリアルタイムＰＣＲ及び当業者により容易に実施することができる他の技術を使用して、細胞内のＡｔｏｈ１発現レベルを決定することにより識別することができる。そのような決定は、異常増殖細胞又は癌性細胞の試料を対象体から取得し、該試料から遺伝物質（例えば、ＤＮＡ及びＲＮＡ）を単離し、該試料に由来するｍＲＮＡを逆転写し、Ａｔｏｈ１配列にハイブリダイズするように設計されたオリゴヌクレオチドを使用してＡｔｏｈ１配列を増幅することにより実施することができる。Ａｔｏｈ１発現の増加から利益を得ることができる異常増殖細胞又は癌性細胞は、該細胞試料中で検出不能なＡｔｏｈ１発現を有する。その代わりに又はそれに加えて、上記の決定は、非癌性細胞対照を使用して繰り返される。その後、対照におけるＡｔｏｈ１発現は、癌性試料中のＡｔｏｈ１発現と比較される。Ａｔｏｈ１発現の増加から利益を得ることができる異常増殖細胞又は癌性細胞は、該非癌性対照より低いＡｔｏｈ１発現を示す。一般的に、Ａｔｏｈ１発現の増加から利益を得ることができる異常増殖細胞又は癌性細胞は、低い又は検出不能なＡｔｏｈ１発現を有するだろう。
【０２１９】
幾つかの実施形態では、本発明は、消化器系の異常細胞増殖及び／又は癌を治療するための方法及び組成物に関する。例示的な癌には、食道、胆嚢、肝臓、膵臓、胃、小腸、大腸（結腸）、及び直腸の癌が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２０】
消化器系の異常細胞増殖及び/又は癌を治療するための本発明の使用への支持は、以下の研究により提供される：通常、腸上皮は、胚形成中に１個の多能性幹細胞から派生する４つの主要な細胞タイプからなる。第１の細胞タイプは吸収腸細胞又は円柱細胞であり、第２の細胞タイプは粘液分泌杯状細胞であり、第３の細胞タイプは調節ペプチド分泌腸内分泌細胞であり、第４の細胞タイプは抗菌ペプチド分泌パネート細胞である。健常動物は、これらの４つの細胞タイプの各々を有する。しかしながら、Ｍａｔｈ１欠損トランスジェニックマウスでは、杯状細胞、腸内分泌細胞、及びパネート細胞が欠乏した。この観察により、発生中の腸における、これらの３つの細胞タイプへと向かう細胞運命決定（例えば、分化）に、Ｍａｔｈ１が必要であるという結論に至った（Yang et al., Science, 294:2155-2158, 2001）。Ｈａｔｈ１発現は、正常な胃粘膜と比較して、５つの胃癌細胞系統において存在しないことも実証されている。これは、胃癌の発生にＨａｔｈ１発現の喪失が役割を果たしている可能性があるという事実を支持する（Sekine et al., Biochem. Biophys., Res. Comm., 344:1166-1171, 2006）。結腸癌細胞系統におけるＨａｔｈ１及びＭａｔｈ１発現の減少も、他所で報告されている（Leow et al., Cancer Res., 64:6050-6057, 2004及びLeow et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1059:174-183, 2005）。しかしながら、これらの研究は、悪性度の高い結腸癌細胞系統におけるＨａｔｈ１過剰発現が細胞増殖の著しい阻害をもたらすこと、そしてこの増殖減少は、悪性度の高い結腸癌細胞が癌性ではない杯状細胞に又はそれらに向かって分化するために生じることも実証している。したがって、これらのデータは、例えば、腸上皮の非癌性細胞に又はそれに向うそのような細胞の分化を促進することにより増殖胃癌細胞の数を減少させることによって、消化器癌がＡｔｏｈ１発現の増加から利益を得る可能性のあるということを明白に示唆する。結果的に、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を用いて、消化器癌を有する患者を治療することができる。
【０２２１】
一般的に、本発明は、消化器癌を有するか又は発症するリスクのある患者を治療するための化合物及び方法を提供する。そのような患者を識別するための方法を下記に記載する。本治療法は、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を患者に投与して、消化器癌を治療するステップ（直接療法）を含む。
【０２２２】
幾つかの実施形態では、本方法は、消化器癌のリスクのある患者及び／又は消化器癌を有する患者を選択する方法を含む。
【０２２３】
消化器癌を有する患者を識別する方法は、当技術分野において公知である。例えば、スクリーニングには、内視鏡検査（例えば、経口及び／又は直腸）の使用が含まれてもよい。スクリーニングには、これらに限定されないが、例えばＣＫ２０、ＭＵＣ２、ＭＵＣ５Ａ、ＭＵＣ６、ＤＡＳ−１、及びＣＤＸ２を含むが、これらに限定されない種々の免疫組織化学的マーカーを検出する検査も含まれてよい。
【０２２４】
本発明は、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を使用した、消化器癌を有するか又は発症のリスクのある患者のための治療を提供するのに有用である。本治療法は、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を患者に投与して、胃癌細胞の完全な又は部分的な分化を促進するステップを含む。
【０２２５】
幾つかの実施形態では、本発明は、結腸直腸癌を治療するための方法及び組成物に関する。結腸直腸癌を有する個体を識別するためのスクリーニングは、当技術分野において公知である。例えば、結腸直腸癌用のスクリーニングには、以下が含まれる：便中の血液を検査する便潜血検査（ＦＯＢＴ）、直腸中の触覚的異常を検査する直腸指診（ＤＲＥ）、直腸及び結腸下部の視覚的異常を探索するＳ状結腸鏡検査、直腸及び結腸全体の視覚化を可能にする結腸鏡検査、並びに直腸及び結腸の放射線検査を可能にするバリウム注腸二重造影（ＤＣＢＥ）。多くの場合、異常結腸直腸組織の生検又はポリープ切除は、組織が癌性であることを確認するために検査される。
【０２２６】
結腸直腸癌を有する個体は、デュークス尺度、アストラ−コラー尺度、及びＡＪＣＣ／ＴＮＭ尺度などの癌病期尺度により分類することができる。個体の癌悪性度分類は、癌細胞が受けた逆分化の程度、つまり腫瘍の細胞が、依然として結腸又は直腸細胞の特徴をどれくらい保持しているかを示す。病期分類は、個人の全体的な疾患病期を示す。幾つかの体系では、病期分類は、０（最初期）からＩＶ（最も進行した病期）までローマ数字で表される。第０期では、当該癌は、結腸又は直腸の内側管壁にのみ見出される。第Ｉ期では、当該癌は、結腸又は直腸のより多くの内壁に広がっている。第ＩＩ期では、当該癌は、結腸又は直腸の外側から付近の組織に広がっているが、リンパ節には広がっていない。第ＩＩＩ期では、癌は、付近のリンパ節に広がっているが、体内の他の部分には広がっていない。第ＩＶ期では、当該癌は、体内の他の部分に広がっている。結腸直腸癌は、肝臓及び／又は肺に広がる傾向がある。（ここに記載した第０期及び第ＩＶ期は、デューク尺度では、それぞれＡ期及びＤ期に対応する）。結腸直腸癌のスクリーニング、診断、及び病期分類に関するさらなる情報は、Frei et al., Cancer Medicine, BC Decker Inc., Hamilton, Ontario (2003)に見出すことができる。
【０２２７】
本発明は、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を使用した、結腸直腸癌を有するか（例えば、第０期〜第ＩＶ期）又は発症のリスクのある患者のための治療を提供するのに有用である。本治療法は、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を患者に投与して、結腸直腸癌細胞の完全な又は部分的な分化を促進するステップを含む。
【０２２８】
幾つかの実施形態では、結腸癌の治療を受けているか又は治療を終えた患者を、例えば上述の方法を使用して再評価し、療法の有効性を決定することができる。幾つかの実施形態では、治療は、変更して若しくは変更せずに継続してもよく、又は中止してもよい。
【０２２９】
他の病状
Ａｔｏｈ１発現は、小脳及び背側脊髄においても報告されており、例えば発生に重要な役割を有している（Bermingham et al.、上記、及びHelms et al.、上記）。Ａｔｏｈ１は、内耳に見出されるもの以外の神経細胞及び組織の細胞分化の促進に役割を担っているのは明らかである。したがって、本明細書に記載されている化合物及び医薬組成物は、Ａｔｏｈ１発現の増加から利益を得る可能性のある、そのような組織の疾患及び／又は障害の治療にも使用することができる。
【０２３０】
その代わりに又はそれに加えて、本発明は、小脳果粒ニューロン欠乏症、関節疾患、及び骨関節炎を治療するために使用することができる。
【０２３１】
Ａｔｏｈ１発現の増加から利益を得ることができる症状は、例えば、上述のＲＴ−ＰＣＲ法を使用して、細胞内のＡｔｏｈ１発現レベルを決定することにより識別することができる。一般的に、Ａｔｏｈ１発現の増加から利益を得ることができる症状は、低い又は検出不能なＡｔｏｈ１発現を示すだろう。
【０２３２】
聴覚有毛細胞喪失を治療するための投与経路
直接療法
投与経路は、治療されている疾患に依存して変動する。有毛細胞喪失及び／又は感音性聴力損失は、全身投与及び／又は局所投与を使用した直接療法を使用して治療することができる。幾つかの実施形態では、当該投与経路は、患者の医療提供者又は臨床医により、例えば患者を評価した後で決定することができる。幾つかの実施形態では、個々の患者の療法を個別に作成することができ、例えば１つ又は複数の化合物、投与経路、及び投与の頻度を個別化することができる。或いは、治療は、例えば１つ又は複数の事前に選択された化合物及び事前に選択された投与経路及び投与の頻度を使用する標準的治療方針を使用して実施することができる。
【０２３３】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を、患者に、例えば有毛細胞喪失の治療が必要であると識別された患者に、全身投与経路を使用して投与することができる。全身投与経路には、非経口投与経路、例えば静脈注射、筋肉内注射、及び腹膜腔内注射；経腸投与経路、例えば経口経路、ロゼンジ、圧縮錠剤、丸剤、錠剤、カプセル剤、滴下剤（例えば、点耳剤）、シロップ剤、懸濁剤、及び乳剤による投与；直腸内投与、例えば肛門坐剤又は浣腸；膣坐剤；尿道坐剤；経皮投与経路；及び吸入（例えば鼻内噴霧）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３４】
その代わりに又はそれに加えて、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を、患者に、例えば有毛細胞喪失の治療が必要であると識別された患者に、局所投与経路を使用して投与することができる。そのような局所投与経路には、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を、患者の耳に及び／又は患者の内耳に、例えば注射により及び／又はポンプを使用して投与することが含まれる
【０２３５】
幾つかの実施形態では、医薬組成物は、例えば注射器、例えば単回投与注射器を使用して、蝸牛の管腔（例えば、中央階、Ｓｃ前庭、及びＳｃ鼓室）になどの、耳に注射することができる（例えば、耳介投与）。例えば、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数は、鼓室内注射（例えば、中耳への）、並びに／又は外耳、中耳、及び／若しくは内耳への注射により投与することができる。そのような方法は、当技術分野において、例えば、ヒト耳へのステロイド及び抗生物質の投与に日常的に使用されている。注射は、例えば、耳の円形窓から又は蝸牛嚢からであってもよい。他の内耳投与法が、当技術分野において公知である（例えば、Salt and Plontke, Drug Discovery Today, 10:1299-1306, 2005を参照）。
【０２３６】
別の投与方法では、当該医薬組成物は、カテーテル又はポンプにより、原位置で投与することができる。カテーテル又はポンプにより、医薬組成物を、例えば、蝸牛管腔又は耳の円形窓及び／又は結腸の管腔に向けることができる。本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数の、耳、例えばヒト耳への投与に好適な例示的な薬物送達装置及び方法は、McKennaら（米国特許公開第２００６／００３０８３７号明細書）及びJacobsenら(米国特許第７，２０６，６３９号明細書)により記載されている。幾つかの実施形態では、カテーテル又はポンプは、例えば、外科手術中に患者の耳（例えば、外耳、中耳、及び／又は内耳）に配置することができる。幾つかの実施形態では、カテーテル又はポンプは、例えば外科手術の必要がない患者の耳（例えば、外耳、中耳、及び／又は内耳）に配置することができる。
【０２３７】
その代わりに又はそれに加えて、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数は、蝸牛インプラント又は外耳に着装する補聴器などの機械的デバイスと組み合わせて投与することができる。本発明と共に使用するのに好適な代表的な蝸牛インプラントは、Edgeら（米国特許公開第２００７／００９３８７８号明細書）により記載されている。
【０２３８】
幾つかの実施形態では、上述の投与方法は、任意の順番で組み合わせることができ、同時でもよく又は間隔をおいてもよい。
【０２３９】
その代わりに又はそれに加えて、本発明は、例えば、ＣＤＥＲデータ標準マニュアル（CDER Data Standards Manual）、改定版番号００４（fda.give/cder/dsm/DRG/drg00301.htmから入手可能）に記載されているような、食品医薬品局が認可した方法のいずれかにより投与することができる。
【０２４０】
細胞療法
一般的に、本明細書に記載されている細胞療法は、内耳の成熟細胞タイプ（例えば有毛細胞）への又はそれに向かう細胞の完全な又は部分的な分化を促進するためにｉｎ  ｖｉｔｒｏで使用することができる。その後、そのような方法から生じる細胞を、そのような治療を必要とする患者に移植するか又は埋め込むことができる。好適な細胞タイプを識別及び選択するための方法、選択された細胞の完全な又は部分的な分化を促進するための方法、完全に又は部分的に分化した細胞タイプを識別するための方法、及び完全に又は部分的に分化した細胞を埋め込むための方法を含む、これらの方法を実施するのに必要な細胞培養法は、下記で説明されている。
【０２４１】
細胞の選択
本発明で使用するのに好適な細胞には、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数と例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで接触した際に、内耳の成熟細胞、例えば有毛細胞（例えば、内及び／又は外有毛細胞）に完全に又は部分的に分化可能な細胞が含まれるが、これらに限定されない。有毛細胞に分化可能な例示的な細胞には、幹細胞（例えば、内耳幹細胞、成体幹細胞、骨髄由来幹細胞、胚性幹細胞、間葉系幹細胞、皮膚幹細胞、ｉＰＳ細胞、及び脂肪由来幹細胞）、前駆細胞（例えば、内耳前駆細胞）、支持細胞（例えば、ダイテルス細胞、柱細胞、内部支持細胞、視蓋細胞、及びヘンゼン細胞）、及び／又は生殖細胞が含まれるが、これらに限定されない。内耳感覚細胞を置換するための幹細胞の使用は、Liら（米国特許公開第２００５／０２８７１２７号明細書）、Liら（米国特許第１１／９５３，７９７号明細書）に記載されている。内耳感覚細胞を置換するための骨髄由来幹細胞の使用は、Edgeら、（国際公開ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８４６５４号パンフレット）に記載されている。ｉＰＳ細胞は、例えば、Takahashi et al., Cell, Volume 131, Issue 5, Pages 861-872 (2007)；Takahashi and Yamanaka, Cell 126, 663-76 (2006)；Okita et al., Nature 448, 260-262 (2007)；Yu, J. et al., Science 318(5858):1917-1920 (2007)；Nakagawa et al., Nat. Biotechnol. 26:101-106 (2008)；及びZaehres and Schoeler, Cell 131(5):834-835 (2007)に記載されている。
【０２４２】
そのような好適な細胞は、１つ又は複数の組織特異的遺伝子の存在を分析する（例えば、質的に又は量的に）ことにより識別することができる。例えば、遺伝子発現は、１つ又は複数の組織特異的遺伝子のタンパク質産物を検出することにより検出することができる。タンパク質検出技術には、適切な抗原に対する抗体を使用して（例えば、細胞抽出液又は全細胞を使用して）タンパク質を染色することが必要である。この場合、適切な抗原は、組織特異的遺伝子発現のタンパク質産物である。原理的には、第１の抗体（つまり抗原に結合する抗体）を標識することができるが、第１の抗体に対する第２の抗体（例えば抗ＩｇＧ）を使用することが、より一般的である（及び視覚化を向上させる）。この第２の抗体は、一次抗体及びしたがって抗原の位置を認識することができるように、蛍光色素、又は比色反応に適切な酵素、又は金ビーズ（電子顕微鏡用）、又はビオチン−アビジン系と結合される。
【０２４３】
組織特異的遺伝子発現は、遺伝子から転写されたＲＮＡの検出によってもアッセイすることができる。ＲＮＡ検査法には、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、ノーザンブロット分析、及びＲＮＡｓｅ保護アッセイが含まれる。
【０２４４】
幹細胞（例えば、未分化細胞）を識別するために使用することができる例示的な組織特異的遺伝子には、例えば、ｎｅｓｔｉｎ、ｓｏｘ１、ｓｏｘ２、ｍｕｓａｓｈｉ、ＮｅｕｒｏＤ、Ａｔｏｈ１、ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｎ１が含まれるが、これらに限定されない。その代わりに又はそれに加えて、幹細胞は、そのような細胞タイプがｉｎ  ｖｉｔｒｏで示す固有の性質の１つ又は複数に基づいて選択することができる。例えば、幹細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、単離細胞の増殖により球体を形成する特徴的な能力を示すことが多い。したがって、球体を識別及び単離することにより、内耳の分化細胞の作製に使用するために成熟組織から幹細胞を単離する過程を支援することができる。例えば、幹細胞は、無血清ＤＭＥＭ／高グルコース及びＦ１２培地（１：１混合）で培養することができ、Ｎ２及びＢ２７溶液並びに増殖因子を補完することができる。ＥＧＦ、ＩＧＦ−１、及びｂＦＧＦなどの増殖因子は、培養中の球体形成を増強することが実証されている。
【０２４５】
前駆細胞及び／又は内耳前駆細胞（例えば、完全には分化していない又は部分的に分化した細胞）を識別するために使用することができる例示的な組織特異的遺伝子には、Ｂｒｎ３ｃ、ｉｓｌｅｔ１、及びＰａｘ２などの特定の内耳特異的標識遺伝子に加えて、例えば、ｎｅｓｔｉｎ、ｓｏｘ２、及びｍｕｓａｓｈｉが含まれるが、これらに限定されない。
【０２４６】
完全に分化した細胞（例えば、支持細胞）を識別するために使用することができる例示的な組織特異的遺伝子には、例えば、ｐ２７ｋｉｐ、ｐ７５、Ｓ１００Ａ、Ｊａｇｇｅｄ−１、及びＰｒｏｘ１が含まれるが、これらに限定されない。
【０２４７】
内耳感覚細胞として機能可能な完全に分化した細胞を識別するために使用することができる例示的な組織特異的遺伝子には、例えば、ミオシンＶＩＩａ、Ｍａｔｈ１、α９アセチルコリン受容体、エスピン、パルブアルブミン３、及びＦ−アクチン（ファロイジン）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２４８】
その代わりに又はそれに加えて、完全に分化していると考えられる細胞（例えば、内耳感覚細胞として機能可能な細胞）を生理学的検査にかけて、成熟有毛細胞に存在するだろうコンダクタンスチャネル（conductance channel）が存在し活性があるかどうかを決定することができる。
【０２４９】
その代わりに又はそれに加えて、内耳有毛細胞は、エフリンＢ２、エフリンＢ３、ｔｒｋＢ、ｔｒｋＣ、ＧＡＴＡ３、及びＢＦ１を含むが、これらに限定されないらせん神経節に特異的なマーカーの発現を分析することにより、他の完全に分化した内耳の細胞（例えば、らせん神経節）から区別することができる。
【０２５０】
幾つかの実施形態では、好適な細胞は、ヒト、マウス、ラット、ブタ、ヒツジ、ヤギ、又は非ヒト霊長類などの哺乳動物から得ることができる。例えば、幹細胞は、マウス卵形嚢斑から識別及び単離されている（Li et al., Nature Medicine 9:1293-1299, 2003）。当該細胞は、それらがその後再投与されることになる患者から取得することもできる。
【０２５１】
幾つかの実施形態では、好適な細胞（例えば、幹細胞、前駆細胞、及び／又は支持細胞）は、動物の内耳から単離することができる。より具体的には、好適な細胞は、蝸牛のコルチ器官、蝸牛の蝸牛軸（中心）、蝸牛のらせん神経節、球形嚢斑の前庭感覚上皮、卵形嚢斑、又は半規管の内襞から取得することができる。しかしながら、該幹細胞、前駆細胞、及び／又は支持細胞は、骨髄、血液、皮膚、又は目などの他の組織から取得することもできる。使用されるこれらの細胞は、単一の供給源（例えば、耳、又は耳内の構造若しくは組織）、又は供給源の組み合わせ（例えば、耳、及び１つ又は複数の末梢組織（例えば、骨髄、血液、皮膚、又は目））から取得することができる。
【０２５２】
その代わりに又はそれに加えて、方法には、動物の内耳から組織を取得することが含まれ、その組織は卵形嚢斑の少なくとも一部を含む。動物は、マウス、ラット、ブタ、ウサギ、ヤギ、ウマ、ウシ、イヌ、ネコ、霊長類、又はヒトなどの哺乳動物であってもよい。該単離された組織は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）などの中性緩衝液に懸濁されてもよく、その後、組織消化酵素（例えばトリプシン、ロイペプチン、及びキモトリプシンなど）若しくは酵素の組み合わせ、又は粉砕などの機械的（例えば、物理的）な力に接触させて、該組織をより小さな部分に分解する。その代わりに、又はそれに加えて、組織破壊の機序を両方とも使用することができる。例えば、該組織を、約０．０５％の酵素（例えば、約０．００１％、０．０１％、０．０３％、０．０７％、又は１．０％の酵素）中で、約５、１０、１５、２０、又は３０分間インキュベートしてもよく、インキュベーション後、細胞を機械的に破壊してもよい。当該破壊した組織は、フィルター又は細孔ピペットなどのデバイスに通過させてもよく、それにより分化細胞又は細胞残屑から幹細胞又は前駆細胞を分離する。この細胞の分離は、細孔径が連続的により小さくなる一連のフィルターによる細胞のろ過を含むことができる。例えば、該ろ過細孔径は、約８０μｍ以下から、約７０μｍ以下、約６０μｍ以下、約５０μｍ以下、約４０μｍ以下、約３０μｍ以下、約３５μｍ以下、又は約２０μｍ以下に及んでもよい。
【０２５３】
取得した細胞は、幹細胞及び／又は前駆細胞の濃縮集団を構成してもよく、組織内の全ての（又は本質的に全ての）分化細胞又は他の細胞物質からの単離は、達成されてもよいが、「単離された」の定義を満たすのに必要ではない。完全な純度は必要ではない。本発明は、本明細書に記述されている単離手順により取得される細胞を包含する。当該細胞は、凍結保護物質と混合して保管してもよく、又はキットに包装してもよい。いったん取得してから、幹細胞及び／又は前駆細胞は、培養中で増殖させることができる。
【０２５４】
細胞の混合集団が使用される場合、試験集団内の幹細胞の割合は変動する場合がある。例えば、集団は、少数の幹細胞（例えば約１〜１０％）、中程度の割合の幹細胞（例えば、約１０〜９０％（例えば、約２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、７５、８０、又は８５％の幹細胞））、又は多数の幹細胞（例えば、集団の少なくとも９０％（例えば、９２、９４、９６、９７、９８、又は９９％）が幹細胞であり得る）を含んでもよい。これらの細胞は、完全に又は部分的に分化した内耳の細胞に分化する能力を有する（例えば、該細胞は、１つ又は複数の聴覚タンパク質を発現する細胞に分化する多機能性幹細胞であってもよい）。部分的に分化した細胞は、患者に有益性（例えば聴覚の改善）を付与するのに十分な数及びタイプの聴覚特異的タンパク質を発現する限り、本治療法（治療又は予防に関わりなく）に有用である。
【０２５５】
分化法
一般的に、分化は、内耳の成熟感覚細胞、例えば有毛細胞への又はそれへと向かう細胞の完全な又は部分的な分化を促進するのに十分な時間、好適な標的細胞及び／又は細胞集団を、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数と接触させることにより促進することができる。
【０２５６】
例えば上述の方法により識別された好適な細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養することができる。一般的に、標準的培養法が、本明細書に記載されている方法で使用される。適切な培地は、Li et al. Nature Medicine 9:1293-1299, 2003など、当技術分野において記述されている。幹細胞培養用の増殖培地は、増殖因子の１つ又は複数又は任意の組み合わせを含有することができる。例えば、増殖培地は、幹細胞の分化を防止する白血病抑制因子（ＬＩＦ）を含有することができる。
【０２５７】
細胞は、培養皿の個々のウエルに分けて培養することができる。単離された細胞からの球体形成（浮遊クローンコロニー）をモニターすることができ、該球体は、球体をばらばらにして（例えば、物理的方法によって）該細胞を分離することにより増幅することができ、さらなる球体を形成するために該細胞を再び養殖することができる。その後、そのような培養細胞を、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数と接触させることができる。
【０２５８】
その代わりに又はそれに加えて、追加的な誘導プロトコールと組み合わせて、細胞を本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数と接触させてもよい。増殖因子治療（例えば、本明細書に記載されているような、ＥＧＦ、ＦＧＦ、及びＩＧＦによる治療）及びニューロトロフィン治療（例えば、本明細書に記載されているような、ＮＴ３及びＢＤＮＦによる治療）を含む、神経組織発生能力を有する幹細胞の神経前駆細胞への分化を誘導するための当技術分野で公知であるいくつかの誘導プロトコールが存在する。他の分化プロトコールが、当技術分野において公知である。例えば、Corrales et al., J. Neurobiol. 66(13):1489-500 (2006)；Kim et al., Nature 418:50-6 (2002)；Lee et al., Nat. Biotechnol. 18:675-9 (2000)；及びLi et al., Nat. Biotechnol. 23:215-21 (2005)を参照されたい。
【０２５９】
追加的な誘導プロトコールの一例として、好適な細胞は、前駆細胞への分化を誘導する補完的増殖因子の存在下で増殖される。これらの補完的増殖因子が該培地に添加される。補完的増殖因子のタイプ及び濃度を調整して、細胞の増殖特徴を調節し（例えば、細胞を刺激又は感作して分化させる）、ニューロン、膠細胞、支持細胞、又は有毛細胞などの分化細胞の生存を可能にする。
【０２６０】
例示的な補完的増殖因子には、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、及び上皮増殖因子（ＥＧＦ）が含まれるが、これらに限定されない。或いは、該補完的増殖因子には、神経栄養因子ニューロトロフィン−３（ＮＴ３）及び脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）が含まれてもよい。増殖因子の例示的な濃度は、例えば、約１００ｎｇ／ｍＬから約０．５ｎｇ／ｍＬにまで及んでいてもよい（例えば、約６０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約３０ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍｌ、又は約５ｎｇ／ｍＬなどの、約８０ｎｇ／ｍＬから約３ｎｇ／ｍＬまで）。
【０２６１】
その代わりに又はそれに加えて、当該培地は、増殖因子を欠く培地と交換することができる。例えば、当該培地は、Ｎ２及びＢ２７溶液で補完された無血清ＤＭＥＭ／高グルコース及びＦ１２培地（１：１混合）であってもよい。等価な代替的培地及び栄養素も使用することができる。培養条件は、当技術分野で公知の方法を使用して最適化することができる。
【０２６２】
幾つかの実施形態では、内耳細胞に変換された細胞の検出を容易にするレポーター遺伝子を発現するように操作された幹細胞を使用して、分化を促進するその能力について化合物を試験することができる。これらの操作された幹細胞は、リポーター細胞系統を作り上げる。レポーター遺伝子は、その発現をアッセイすることができる任意の遺伝子であり、そのような遺伝子には、限定ではないが、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、α−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコールトランスアセチラーゼ（ＣＡＴ）、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、アセチルコリンエステラーゼ、及びβ−ガラクトシダーゼが含まれる。他の随意的な蛍光レポーター遺伝子には、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、及び青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）、又は対になったタンパク質が識別可能な波長で蛍光を発すれば、これらの任意の対の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０２６３】
レポーター遺伝子は、前駆細胞及び異なる分化程度の細胞を含む内耳の細胞では活性があるが、幹細胞では活性がないプロモーターの制御下にあってもよい。理想的には、プロモーターは、分化細胞又は前駆細胞中で安定的に上方制御されて、部分的に又は完全に分化した表現型の評価（例えば、レポーター遺伝子の発現、及び内耳で発現されることが知られている遺伝子のさらなる識別）を可能にする。
【０２６４】
完全な又は部分的な分化を分析するための方法
本明細書で開示されている化合物の１つ又は複数と接触した細胞を分析して、完全なもしくは部分的な分化が生じたかどうかを決定することができる。上述したように、そのような決定は、組織特異的遺伝子の存在又は非存在を分析することにより実施することができる（細胞の選択を参照）。その代わりに又はそれに加えて、有毛細胞を生理学的検査により識別し、細胞が、成熟有毛細胞又はらせん神経節細胞に特徴的なコンダクタンスチャネルを生成するかどうかを決定することができる。そのような細胞は、上述のマーカーを使用して、らせん神経節細胞と区別することができる。
【０２６５】
二次アッセイを使用して、細胞が内耳の細胞に分化したという追加的な証拠を確認又は提供することができる。例えば、内耳の細胞を識別するためのマーカーとして有用な遺伝子は、排他的に特定の細胞タイプにおいて（例えば、排他的に有毛細胞において、又は排他的にらせん神経節の細胞において）発現されてもよく、又は該細胞は、他の少数の細胞タイプ（好ましくは、多くても１、２、３、４、又は５つの他の細胞タイプ）においても発現される場合がある。例えば、エフリンＢ１及びエフリンＢ２は、らせん神経節細胞において発現され、網膜細胞においても発現される。したがって、エフリンＢ１又はエフリンＢ２発現の検出は、幹細胞がらせん神経節細胞に分化したという決定的な証明ではない。二次アッセイを使用して、細胞がらせん神経節の細胞へと成長したことを確認することができる。そのようなアッセイは、推定される細胞タイプで発現されることが知られているの複数の遺伝子を検出することを含む。例えば、エフリンＢ１及び／又はエフリンＢ２を発現する細胞を、ＧＡＴＡ３、ｔｒｋＢ、ｔｒｋＣ、ＢＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ３、ＣＳＰ、ＧＦＡＰ、及びＩｓｌｅｔ１の１つ又は複数の発現についてもアッセイすることができる。これらの追加的な遺伝子が発現されるという決定は、幹細胞がらせん神経節細胞に分化したという追加的な証拠である。
【０２６６】
二次アッセイは、有毛細胞において典型的には発現されない遺伝子発現の非存在又はタンパク質の非存在を検出することも含む。そのような陰性マーカーには、成熟有毛細胞では発現されないが、内耳の支持細胞では発現される汎サイトケラチン遺伝子が含まれる（Li et al., Nat. Med. 9:1293-1299, 2003）。
【０２６７】
内耳感覚細胞、例えば有毛細胞へと向かう完全な又は部分的な分化を遂げたと確認される細胞を、患者へ移植又は埋め込むことができる。
【０２６８】
埋め込み方法
例えば、上述の方法により生成された部分的及び／又は完全に分化した細胞は、細胞懸濁液などの形態で、蝸牛の管腔などへの注射により耳の中に移植又は埋め込むことができる。注射は、例えば、耳の円形窓から又は蝸牛を取り囲む骨嚢からであってもよい。これらの細胞は、円形窓から内耳道の聴神経幹又は鼓室階に注射することができる。
【０２６９】
移植又は埋め込まれた細胞の生着能力を向上させるために、分化に先立って細胞を改変してもよい。例えば、前駆細胞又は分化細胞の１つ又は複数の抗アポトーシス遺伝子を過剰発現するように、細胞を操作してもよい。Ｆａｋチロシンキナーゼ又はＡｋｔ遺伝子は、この目的のために有用であり得る抗アポトーシス遺伝子候補であり、ＦＡＫ又はＡｋｔの過剰発現は、らせん神経節細胞の細胞死を防止し、培養されたコルチ器官などの別の組織に移植した際に、生着を促進することができる（例えば、Mangi et al., Nat. Med. 9:1195-201, 2003を参照）。αｖβ３インテグリンを過剰発現する神経前駆細胞は、インテグリンがラミニン基質上でらせん神経節ニューロンからの神経突起伸張を媒介することが示されているように、神経突起を組織外植片へと伸長させる能力の増強を示す場合がある。別の例では、エフリンＢ２及びエフリンＢ３発現を、ＲＮＡｉによるサイレンシング、又は外来性ｃＤＮＡ発現による過剰発現などにより変更させて、ＥｐｈＡ４シグナル伝達事象を修飾することができる。らせん神経節ニューロンは、エフリンＢ２及びＢ３の細胞表面発現により媒介されるＥｐｈＡ４からのシグナルにより誘導されることが示されている（Brors et al., J. Comp. Neurol. 462:90-100, 2003）。この誘導シグナルの不活性化は、成体内耳にあるそれらの標的に到達するニューロンの数を増加させることができる。ニューロトロフィンＢＤＮＦ及びＮＴ３などの外来性因子、及びＬＩＦを組織移植片に添加して、ｉｎ  ｖｉｖｏで、及びｅｘ  ｖｉｖｏの組織培養中で、標的組織へと向かう神経突起の伸張及び神経突起の成長を増強することができる。感覚ニューロンの神経突起伸張は、ニューロトロフィン（ＢＤＮＦ、ＮＴ３）及びＬＩＦの添加により増強することができる（Gillespie et al., NeuroReport 12:275-279, 2001）。
【０２７０】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されている細胞は、例えば、Edgeら（米国特許公開第２００７／００９３８７８号明細書）に記載されているように、蝸牛インプラントに使用することができる、蝸牛インプラントとは、聴力損失、特に重症〜深刻な聴力損失を経験しているヒトの聴力を改善するために使用される電子デバイスである。これらのデバイスは、典型的には「外部」及び「内部」部分を含む。該外部部分は、マイクロホンを含み、耳の後ろに設置されており、環境の音を検出することができる。その後、該音は、スピーチプロセッサと呼ばれる小型コンピュータによりデジタル化及び処理される。該外部部品は、プロセッサユニットと呼ばれる場合がある。マイクロホン及びスピーチプロセッサに加えて、該インプラントの外部部分は、バッテリーなどの動力源及び外部アンテナ送信コイルを含むことができる。該内部部分は、耳近辺の皮膚下に挿入される、一般的に刺激器／受信ユニットと呼ばれる電子デバイスである（図１を参照）。該スピーチプロセッサによるコード化シグナル出力は、埋め込まれた個体の側頭骨の陥凹内に設置されている埋め込み刺激器／受信ユニットに経皮的に送信される。この経皮的送信は、刺激器／受信ユニットを備える埋め込みアンテナ受信コイルと通信するために配置されている外部アンテナ送信コイルとの間でもたらされる誘導結合の使用により生じる。この通信は、典型的には無線周波数（ＲＦ）リンクにより提供されるが、他のそのようなリンクが提唱及び実装されており、それらの成功の度合いは様々である。
【０２７１】
埋め込み刺激器／受信ユニットは、典型的には、外部プロセッサ部品からコード化シグナル及び電力を受信するアンテナ受信コイルと、コード化シグナルを処理し、電極アセンブリーに刺激シグナルを出力する刺激器とを含み、電気刺激を直接聴神経に加えて、元の検出された音に対応する聴覚感覚を生成する。
【０２７２】
電子デバイスに接続された電極は、内耳に挿入される。当該電極は、蝸牛の長さに沿って広がる開放接点を有し異なる周波数の音を表す電線束であってもよい。電極の数は、５、１０、１５、１８、２０、２２、２４、２６、又は２８個の電極など、１から約３０個の電極まで変動してもよい。
【０２７３】
併用療法
幾つかの実施形態では、本発明は、上述の直接投与法及び細胞治療法を使用し、本明細書に記述されている化合物の１つ又は複数を用いて患者を治療するための方法を提供する。
【０２７４】
異常細胞増殖を治療するための投与経路
投与経路は、治療されている疾患に依存して変動する。異常細胞増殖及び／又は癌は、直接治療を使用して、例えばＣＤＥＲデータ標準マニュアル、バージョン番号００４（fda.give/cder/dsm/DRG/drg00301.htmから入手可能）に記載されているような、食品医薬品局が認可した方法の１つ又は複数に従い、例えば、全身投与及び／又は局所投与を使用して治療することができる。
【０２７５】
幾つかの実施形態では、投与経路は、患者の医療提供者又は臨床医により、例えば患者を評価した後で決定することができる。幾つかの実施形態では、個々の患者の療法を個別にカスタマイズすることができ、例えば１つ又は複数の化合物、投与経路、及び投与の頻度を個別化することができる。或いは、療法は、例えば１つ又は複数の事前選択された化合物及び事前選択された投与経路及び投与の頻度を使用する標準的治療方針を使用して実施することができる。
【０２７６】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を、患者に、例えば有毛細胞喪失の治療が必要であると識別された患者に、全身投与経路を使用して投与することができる。全身投与経路には、非経口投与経路、例えば静脈注射、筋肉内注射、及び腹膜腔内注射；経腸投与経路、例えば経口経路、ロゼンジ、圧縮錠剤、丸剤、錠剤、カプセル剤、滴下剤、シロップ剤、懸濁剤、及び乳剤による投与；直腸内投与、例えば肛門坐剤又は浣腸；膣坐剤；尿道坐剤；経皮投与経路；及び吸入（例えば鼻内噴霧）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２７７】
その代わり又はそれに加えて、本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を、患者に、例えば有毛細胞喪失の治療が必要であると識別された患者に、局所投与経路を使用して投与することができる。例えば、１つ又は複数の当該化合物は、例えば腫瘍を取り除くための外科手術中に投与することができ、癌性部位及びその周辺の１つ又は複数の部位への注射により又は局所的に実施することができる。
【０２７８】
医薬製剤
本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を含有する（つまり活性成分として）医薬組成物は、意図した投与方法に従って製剤化される。
【０２７９】
本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数は、対象体への直接投与用の医薬組成物として製剤化することができる。本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数を含有する医薬組成物は、１つ又は複数の生理学的に許容される担体又は賦形剤を使用して、従来の様式で製剤化することができる。例えば、医薬組成物は、局所投与又は全身投与、例えば滴下剤若しくは注射による耳への投与、吹送投与（耳へなど）、静脈内投与、局所的投与、又は経口投与用に製剤化することができる。
【０２８０】
投与用の医薬組成物の性質は投与方法に依存し、当業者であれば容易に決定することができる。幾つかの実施形態では、該医薬組成物は無菌又は滅菌可能である。本発明に記載の治療用組成物は、担体つまり賦形剤を含有してもよく、それらの多くは当業者に公知である。使用することができる賦形剤には、緩衝剤（例えば、クエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、及び重炭酸緩衝剤）、アミノ酸、尿素、アルコール、アスコルビン酸、リン脂質、ポリペプチド（例えば血清アルブミン）、ＥＤＴＡ、塩化ナトリウム、リポソーム、マンニトール、ソルビトール、水、及びグリセロールが含まれる。核酸、ポリペプチド、低分子、及び本発明に記載の他の調節化合物は、任意の標準的投与経路により投与することができる。例えば、投与は、非経口、静脈内、皮下、又は経口であってもよい。調節化合物は、対応する投与経路に従って、種々の方法で製剤化することができる。例えば、液状液剤は、耳への滴下による投与用に、注射用に、又は摂取用に作製することができ、ゲル剤又は散剤は、摂取又は局所塗布用に作製することができる。そのような製剤を作製するための方法は周知であり、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990に見出すことができる。
【０２８１】
本明細書に記載されている化合物の１つ又は複数は、例えば、医薬組成物として注射により直接的及び／又は局所的に、又は外科的設置により、例えば内耳に及び／又は結腸に投与することができる。該医薬組成物の量は、有効量と記述してもよく、又は細胞に基づく組成物の量は、治療上有効量と記述してもよい。ある期間にわたる適用が望ましいか又は所望の場合、本発明の組成物は、徐放製剤又は埋め込み可能デバイス（例えば、ポンプ）に配置することができる。
【０２８２】
その代わりに又はそれに加えて、該医薬組成物は、注射による、例えば、ボーラス注射又は持続注入による全身性非経口投与用に処方することができる。そのような製剤は、単位剤形で、例えばアンプルで、又は多用量容器で、添加保存剤と共に提供することができる。当該組成物は、油性又は水性媒体中の懸濁剤、液剤、又は乳剤などの形態をしていてもよく、懸濁化剤、安定化剤、及び／又は分散剤などの製剤用作用剤を含有してもよい。或いは、活性成分は、使用前に好適な媒体、例えば、滅菌発熱性物質除去蒸留水で構成するための粉末形態にあってもよい。
【０２８３】
以前に記述されている製剤に加えて、当該組成物はデポ製剤として製剤化することもできる。そのような長時間作用型の製剤は、埋め込み（例えば、皮下に）により投与することができる。したがって、例えば、当該組成物は、好適なポリマー又は疎水性材料（例えば許容される油中乳剤として）又はイオン交換樹脂と共に、又は例えば難溶性塩のような難溶性誘導体として製剤化することができる。
【０２８４】
全身性経口投与用に製剤化された医薬組成物は、結合剤（例えば、事前にゼラチン化されたトウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶性セルロース、又はリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、又はシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプン又はデンプングリコール酸ナトリウム）；又は湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容される賦形剤と共に、従来手段により調製された錠剤又はカプセル剤の形態をしていてもよい。該錠剤は、当技術分野で周知の方法によりコーティングすることができる。経口投与用の液体製剤は、例えば液剤、シロップ剤、又は懸濁剤の形態をしていてもよく、又は使用前に水又は他の好適な媒体で構成するための乾燥製品として提供されてもよい。そのような液体製剤は、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体、又は水素化食用脂）；乳化剤（例えば、レシチン又はアカシア）；非水性媒体（例えば、アーモンド油、油状エステル、エチルアルコール、又は分留植物油）；及び保存剤（例えば、メチル若しくはプロピル−ｐ−ヒドロキシ安息香酸又はソルビン酸）などの薬学的に許容される添加剤と共に、従来手段により調製することができる。製剤は、緩衝剤塩、香味料、着色料、及び甘味料を必要に応じて含有することもできる。経口投与用の製剤は、活性化合物の放出制御をもたらすために、好適に製剤化されてもよい。
【０２８５】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されている医薬組成物は、上述の方法のいずれかにより製剤化された化合物の１つ又は複数、及び本明細書に記載されている方法で取得した１つ又は複数の細胞を含むことができる。
【０２８６】
有効用量／治療用量
本明細書に記載されている化合物及び医薬組成物の毒性及び治療効能は、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％に治療上有効な用量）を決定するために培養中の細胞又は実験動物のいずれか一方を使用して、標準的医薬手順により決定することができる。毒性と治療効果と間の用量比は、治療指数であり、比率ＬＤ５０／ＥＤ５０として表現することができる。高い治療の指数を示すポリペプチド又は他の化合物が好ましい。
【０２８７】
細胞培養アッセイ及びさらなる動物研究から得られるデータは、ヒトで使用するための用量範囲を策定するために使用することができる。そのような化合物の用量は、好ましくは、毒性がほとんどないか又はなく、ヒトの聴力に対して悪影響がほとんどないか又はないＥＤ５０を含む循環濃度範囲内にある。該用量は、使用される剤形及び使用される投与経路に依存して、この範囲内で変動してもよい。本明細書に記載されている方法で使用される任意の化合物の場合、治療上有効用量は、細胞培養アッセイから初期推定することができる。該用量は、細胞培養で決定されるようなＩＣ５０（すなわち、症状の最大半量阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿中濃度範囲を達成するために、動物モデルで策定することができる。そのような情報を使用して、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定することができる。分化作用剤の例示的な用量は、１日当たり、少なくとも約０．０１から３０００ｍｇまで、例えば、１日当たり１ｋｇ当たり、少なくとも約０．００００１、０．０００１、０．００１、０．０１、０．１、１、２、５、１０、２５、５０、１００、２００、５００、１０００、２０００、又は３０００ｍｇ以上である。
【０２８８】
当該製剤及び投与経路は、治療されている疾患又は障害及び治療されている特定のヒトにあわせることができる。対象体は、１用量の該作用剤を、１週間、１か月、６か月、１年以上の間、１日１回又は２回以上受容することができる。該治療は、ヒトの生涯にわたってなど、無期限に継続することができる。治療は、等間隔又は不規則な間隔（１日おきに１回、又は１週当たり２回）で投与することができ、投与の量及びタイミングは、治療過程の全体にわたって調整することができる。この用量は、治療計画の過程にわたって一定のままであってもよく、又は治療過程にわたって減少又は増加されてもよい。
【０２８９】
一般的に、この用量は、毒性、刺激性、又はアレルギー反応などの望ましくない副作用がない予防及び治療の両方に関する意図目的を容易にする。個人的な必要性は変動する場合があるが、有効量の製剤の至適範囲を決定することは、当業者の技術範囲内にある。ヒト用量は、動物研究から容易に推定することができる（Katocs et al., Chapter 27 inRemington’s Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990）。一般的に、有効量の製剤を提供するのに必要な用量は、当業者によって調整することができ、受容者の年齢、健康状態、身体状態、体重、並びに疾患又は障害のタイプ及び範囲、治療の頻度、必要に応じて併用治療の性質、並びに所望の効果（複数可）の性質及び範囲を含む幾つかの要因に依存して変動する（Nies et al., Chapter 3, In: Goodman & Gliman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Ed., Hardman et al., eds., McGraw-Hill, New York, N.Y., 1996）。
【０２９０】
キット
本明細書に記載されている化合物及び医薬組成物は、分化するように誘導された細胞（例えば、例えば有毛細胞若しくは有毛様細胞に分化した幹細胞、前駆細胞、及び/又は支持細胞）及び/又は有毛細胞に分化可能な細胞として、キットで提供することができる。当該キットは、本明細書に記載されている化合物及び医薬組成物並びにそのような細胞の組み合わせも含むことができる。当該キットは、（ａ）本化合物を含む組成物などにある１つ又は複数の化合物、（ｂ）分化するように誘導された細胞（例えば、例えば有毛細胞若しくは有毛様細胞に分化した幹細胞、前駆細胞、及び/又は支持細胞）及び/又は有毛細胞に分化可能な細胞、（ｃ）情報素材、及び（ａ）〜（ｃ）の任意の組み合わせを含む。幾つかの実施形態では、（ａ）及び/又は（ｂ）は、（ａ）及び/又は（ｂ）を直接的に患者の耳（例えば、中耳又は内耳）に直接投与するのに好適な注射器（例えば、事前充填された使い捨ての単回投与注射器）で提供することができる。幾つかの実施形態では、（ａ）及び/又は（ｂ）は、（ａ）及び/又は（ｂ）を直接的に患者の耳（例えば、中耳又は内耳）に直接投与するのに好適な、上述のようなカテーテル及びポンプシステムで提供することができる。該情報素材は、本明細書に記載されている方法及び/又は本明細書に記載されている方法用の作用剤の使用に関する説明用素材、指示用素材、マーケッティング用素材、又は他の素材であってもよい。例えば、該情報素材は、聴覚有毛細胞喪失聴覚及び/又は異常細胞増殖を有するか又は発症するリスクがある対象体を治療するための化合物の使用に関する。当該キットは、分化作用剤を細胞（培養中の又はｉｎ  ｖｉｖｏの）に投与するための、及び/又は細胞を患者に投与するための器具一式も含むことができる。
【０２９１】
１つの実施形態では、該情報素材は、ヒト治療に好適な様式で、例えば、好適な用量、剤形、又は投与方法（例えば、本明細書に記載されている用量、剤形、又は投与方法）で、該医薬組成物及び/又は細胞（複数可）を投与するための説明書を含むことができる。別の実施形態では、該情報素材は、好適な対象体、例えばヒト、例えば聴覚有毛細胞喪失及び/又は異常細胞増殖を有しているか又は発症するリスクがあるヒトに、該医薬組成物を投与するための説明書を含むことができる。
【０２９２】
当該キットの情報素材は、その形態が限定されていない。多くの場合、該情報素材（例えば、説明書）は、印刷された文書、図面、及び/又はラベル若しくは印刷シートなどの写真などの印刷物で提供される。しかしながら、該情報素材は、ブライユ、コンピューター読取可能な材料、録画、又は録音などの他の形式で提供することもできる。むろん、該情報素材は、形式の任意の組み合わせで提供することもできる。
【０２９３】
分化作用剤に加えて、当該キットの組成物は、溶媒若しくは緩衝液、安定化剤、保存剤、芳香成分若しくは他の化粧用成分、及び/又は本明細書に記載されている症状若しくは疾患を治療するための第２の作用剤などの、他の成分を含むことができる。或いは、他の成分は、当該キットに含まれているが、該作用剤とは異なる組成物又は容器に含まれていてもよい。そのような実施形態では、当該キットは、作用剤及び他の成分を混合するための説明書、又は他の成分と一緒に１つ又は複数の化合物を使用するための説明書を含むことができる。
【０２９４】
当該キットは、医薬組成物用の１つ又は複数の容器を含むことができる。幾つかの実施形態では、当該キットは、組成物及び情報素材用の個別の容器、仕切り、又は区画を含有している。例えば、該組成物は、ボトル（例えば、滴下剤を耳に投与するためなどの滴下ボトル）、バイアル、又は注射器に含有させることができ、情報素材はプラスチックの袋又は包みに含有させることができる。他の実施形態では、当該キットの個別の構成要素は、単一の分割されていない容器内に含有されている。例えば、該組成物は、ラベル形態で情報素材を貼り付けたボトル、バイアル、又は注射器に含有されている。幾つかの実施形態では、当該キットは、各々が医薬組成物の１つ又は複数の単位剤形（例えば、本明細書に記載されている剤形）を含有している、複数の（例えば一群の）個々の容器を含む。例えば、当該キットは、各々が医薬組成物の単回単位用量を含有する複数の注射器、アンプル、ホイルの包み、又はブリスター包装を含んでいてもよい。当該キットの容器は気密性及び/又は防水性であってもよく、これらの容器には，特定の使用のための表示がなされていてもよい。例えば、容器には、聴覚障害を治療するための使用であるという表示を付けることができる。
【０２９５】
上記で述べたように、当該キットは、随意に該組成物の投与に好適なデバイス（例えば、注射器、ピペット、鉗子、滴下器（例えば耳滴下器）、スワブ（例えば、綿スワブ又は木製スワブ）、又は任意のそのような送達デバイス）を含む。
【実施例】
【０２９６】
本発明は、以下の例においてさらに説明されており、それらは特許請求の範囲に記載されている本発明の範囲を限定するものではない。
【０２９７】
（実施例１）
ハイスループットスクリーニングの最適化
Ｍａｔｈ１エンハンサー及び最小プロモーターにより制御されるルシフェラーゼ遺伝子を安定的に発現するヒト胚腎臓（ＨＥＫ）細胞系統を、１４４，０００個の低分子のハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）に使用して、Ｍａｔｈ１発現（つまり、転写及び/又は翻訳）を増加させる化合物を識別した。そのような化合物は、幹細胞、前駆細胞、及び支持細胞の、有毛細胞への又はそれへと向かう変換を増加させるために使用することができる。そのような化合物を識別するスクリーニングは、Liら（米国特許公開第２００５／０２８７１２７号明細書）、Liら（米国特許出願第１１／９５３，７９７号明細書）により記載されている。
【０２９８】
１μＭのレチノイン酸をＭａｔｈ１−ルシフェラーゼリポーターコンストラクトの活性化に関する陽性対照として使用して、ＨＴＳを最適化した。レチノイン酸は、周知の一般的な、成熟細胞タイプへの分化誘導因子である。
【０２９９】
Ｍａｔｈ１ルシフェラーゼリポーターを安定的に発現するＨＥＫ細胞を、３８４ウエルプレートに播種し、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を含有する培地で終夜培養した。該Ｍａｔｈ１エンハンサーの活性化は、ルシフェラーゼ検出剤を添加した後のプレートリーダーでの発光増加により測定した。このアッセイを、細胞数、インキュベーション時間、培地の容積、細胞融解試薬、及びルシフェラーゼ試薬に関して最適化した。発光レベルを、レチノイン酸（１μＭ）を有する及び有していないＭａｔｈ１−ルシフェラーゼコンストラクト、並びに/又はＭａｔｈ１エンハンサー及び最小プロモーター領域を有する及び有していないルシフェラーゼコンストラクトを有する細胞で比較した。
【０３００】
データは、Ｍａｔｈ１ルシフェラーゼリポーターがレチノイン酸に感受性があり、アッセイが低バックグラウンドを有したことを示した。１μＭレチノイン酸で処理された細胞のルシフェラーゼ活性には、未処理細胞と比較して、一貫して１．８倍の増加があった。該エンハンサーを有していない該プロモーターからの発光レベルは低かった。
【０３０１】
アッセイ感度を向上させ、変動係数（ＣＶ）を低減させるために、より高感度のルシフェラーゼ試薬（BriteLiteルシフェラーゼリポーターアッセイ試薬、Perkin Elmer社）を使用し、トリトンＸ−１００を溶解試薬に添加して、細胞の完全な溶解を確実にした。これらの変更後、４．２％のＣＶを記録した。これらの条件を全ハイスループットスクリーニングに使用した。化合物が陽性である発光閾値は、対照（例えば、ＤＭＳＯと接触させた細胞）より２倍の増加と定義した。
【０３０２】
該化合物との接触時間及び細胞密度を以下のように最適化した。最適な接触時間は、Ｍａｔｈ１活性が最大で、細胞の喪失が最小限であった時間を提供するように決定した。これを、種々の濃度のレチノイン酸を使用して実施した。
【０３０３】
最大発光は、レチノイン酸の存在下で６０時間インキュベーションした後で観察されたが、５０％への著しいシグナルの低減が、７２時間の時点で観察された。４８時間の時点では、発光がプラトーに近く、試験時間中で最も高いシグナル−バックグラウンド比を有する。したがって、４８時間をアッセイの終了点として選択した。
【０３０４】
最適な細胞密度は、Ｍａｔｈ１ルシフェラーゼリポーターの活性を、３８４ウエルプレートに１ウエル当たり２０００〜４００００個の細胞をまいたウエルで比較する細胞滴定実験を実施することにより実施した。その後、レチノイン酸と接触させた細胞を、レチノイン酸と接触させなかった細胞と比較した。細胞生存率アッセイも実施して、Ｍａｔｈ１ルシフェラーゼリポーターを発現する細胞の生存能を確認した。
【０３０５】
該細胞生存率アッセイは、１ウエル当たり２０００から１００００細胞の範囲では、線形の細胞数増加を示した。８０００及び１５０００細胞を有するウエルで生成されたシグナルには差異はなく、それは、１ウエル当たり１００００細胞を超える密度での生存率が実験中に低減した可能性があることを示唆する。未処理細胞とレチノイン酸処理細胞との間の最も大きな差異が、１ウエル当たり８０００細胞の密度で観察された。これらの結果に基づき、アッセイパラメーターを、１ウエル当たり８０００細胞、試験化合物又は公知の活性化因子の存在下又は非存在下で４８時間のインキュベーション期間になるように選択した。
【０３０６】
（実施例２）
Ａｔｏｈ−１発現の活性化因子を識別するハイスループットスクリーニング
細胞を３８４ウエルプレートにまき、増殖因子の非存在下、５％ＣＯ２、３７℃で、終夜結合を可能にさせた。Ｍａｔｈ１活性化は、ルシフェラーゼ検出剤を添加した後のプレートリーダーでの発光増加により測定した。発光を、２４、４８、及び７２時間で評価した。これらの条件を使用して、ハーバード大学神経変性疾患創薬研究所（ＬＤＤＮ、Harvard University Laboratory's for Drug Discovery in Neurodegeneration）の低分子ライブラリーに含有されている１４４，０００個の化合物をスクリーニングした。
【０３０７】
ＨＴＳは、３８４ウエルにまいたＨＥＫ−Ｍａｔｈ１細胞を使用して実施した。針移入（pin transfer）を使用して、１つの化合物をウエルごとに添加した。各化合物の終濃度は１００μＭであった。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で４８時間、化合物の存在下でインキュベートした。その後、細胞溶解産物を回収し、生物発光を決定した。発光値は、ＤＭＳＯに対して標準化して比較した。
【０３０８】
約２００００個の化合物を、ロボットシステム（Beckman社製Biomek FX）を用いて、１週当たり５０枚の３８４ウエルプレートでスクリーニングした。化合物を、０．７μＭの平均終濃度（０．０４％ＤＭＳＯ中）でスクリーニングし、各プレートは、陽性対象として１６ウエルの１μＭレチノイン酸、及び媒体対照として１６ウエルの０．０４％ＤＭＳＯを含有していた。化合物処理細胞についての試験化合物のパーセント発光活性化を、ＤＭＳＯ処理細胞に対して決定した。
【０３０９】
初期スクリーニングは、重複プレートを使用して実施し、１０，０００個を超える化合物のライブラリーをアッセイした。図１１７Ｂで示されているように、４０個の化合物が、ＤＭＳＯで観察されたＭａｔｈ１発現レベルと比較して、Ｍａｔｈ１エンハンサー活性を少なくとも２倍増加させることが観察された（つまり、４０個の化合物が陽性だった）。陽性対照を有するウエル間の変動に関するＺ因子は、図１１７Ａに示されている。Ｚ因子とは、陽性対照と陰性対照との間のシグナル窓の大きさに基づく、各アッセイプレートのデータ品質を反映する、ＨＴＳの統計パラメーターである。その後、対照とのシグナル変動性を算出した（Zhang et al., J. Biomol. Screen. 4:67-73, 1999）。０．４未満のＺ因子を示す任意のプレートにスクリーニングを繰り返した。
【０３１０】
図１１８Ａ及び図１１８Ｂで示されているように、同様の結果が、反復重複実験で観察された。これにより、結果としてＨＴＳ法の信頼性及び再現性がもたらされる。
【０３１１】
スクリーニングされた１４４，０００個の化合物のうち、９２１個が、６０％を超えるＭａｔｈ１ルシフェラーゼリポーター発現の増加を促進することが見出された。的中率は０．４７％だった。観察された最大活性化は１６０％だった（例えば、ＤＭＳＯと比較して）。
【０３１２】
その後、これらの化合物の各々を、０．１、１、及び５μＭの最終アッセイ濃度で、応答の用量依存性について再試験した。識別された９２１個の陽性化合物の中で、７８９個の化合物が、０．１、１、及び１０μＭ濃度で、用量応答の増加を誘起した。この観察は、的中の特異性を支持する。合計で、試験された９２１個の化合物のうち８２％が、Ｍａｔｈ１ルシフェラーゼリポーターを再現性よく活性化し、２９％がある程度の毒性を示した。
【０３１３】
これらの実験の後で、これらの化合物を再評価し、良好な物理化学的特性（つまり、低分子量、反応性官能側鎖基又は他の望ましくない分子モチーフの欠如）を有し、Ｍａｔｈ１−ルシフェラーゼの強力な活性化及び無毒性を示したものをさらに調査した。
【０３１４】
さらなる評価のために選択された化合物の総数は、１１０個の化合物である。これらの化合物の構造は、図１から図８に示されている。これらの化合物により促進されたＭａｔｈ１発現の増加は、図９〜１１６に示されている。
【０３１５】
（実施例３）
ＲＴ−ＰＣＲによる陽性化合物の評価
実施例２で識別された１１０個の化合物の群から無作為に選択した１０個の化合物を、以下のようにさらに評価した。ＨＥＫ細胞を、１ウエル当たり１０００００細胞の密度で、９６ウエルプレートに播種した。播種１日後、０．１、１、及び５μＭの各陽性化合物を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）ＤＭＥＭ溶液のウエルごとに添加した。その後、該化合物を添加した４８時間後に細胞を溶解させ、Ｍａｔｈ１発現を、上述のようにルシフェラーゼリポーターアッセイを使用して、及びリアルタイムＰＣＲを使用して分析した。
【０３１６】
図１１９に示されているように、１０個の無作為に選択した化合物のうち４個が、Ｍａｔｈ１発現の２倍を超える増加を促進した。
【０３１７】
図１２０Ａで示されているように、ＨＴＳと一致して、４個の無作為に選択した化合物は全て、ルシフェラーゼリポーターアッセイを使用して決定されたようなＭａｔｈ１発現の２倍を超える増加を促進した。
【０３１８】
ＲＮＡも単離し、Ｍａｔｈ１転写物を、ハイスループットＲＴ−ＰＣＲを使用して増幅した。図１２０Ｃに示されているように、４個の無作為に選択した化合物は全て、ＤＭＳＯ対照と比較して、Ｍａｔｈ１  ｍＲＮＡ発現の増加を少なくとも２倍促進した。ＣＰ．−０１９３１８４及びＣＰ．−００００５４０は、Ｍａｔｈ１  ｍＲＮＡ発現の最も高い増加を促進した。図１２０Ｂは、４個の無作為に選択した試料の構造を示す。
【０３１９】
これらのデータは、実施例２で示されたデータを確認する。
【０３２０】
（実施例４）
有毛細胞分化による陽性化合物の評価
内耳幹細胞を、実施例２に記載されている１１０個の陽性化合物の群から無作為に選択した化合物ＣＰ．−００００５４０と接触させた。
【０３２１】
図１２１Ｂで示されているように、ＣＰ．−００００５４０は、図１２１Ａで示されているような、化合物ＣＰ．−００００５４０と接触させなかった細胞と比較して、有毛細胞特異的マーカーＭａｔｈ１−ＧＦＰ及びミオシン７ａで共標識された細胞の数を増加させた。有毛細胞分化は、対照の１．６％と比較して、総細胞の５．１％に増加した。
【０３２２】
（実施例５）
陽性化合物の第２段階評価
陽性化合物を全て、それらがＭａｔｈ１  ｍＲＮＡを上方制御する能力について評価し、実施例２でなされた観察を確認した。
【０３２３】
Ｍａｔｈ１  ｍＲＮＡ発現レベルを、実施例３に記載されているようにＲＴ−ＰＣＲを使用して分析した。
【０３２４】
（実施例６）
陽性化合物の第３段階評価
陽性化合物を、マウス内耳由来幹細胞からの有毛細胞の収率を増加させるそれらの能力について評価した。陽性化合物を、感覚神経性疾患マウスモデルの内耳でｉｎ  ｖｉｖｏでも評価する。
【０３２５】
単離された細胞を、実施例３、４、及び５においてｉｎ  ｖｉｔｒｏで識別された０．１、１、及び５μＭの各陽性化合物に接触させた。
【０３２６】
化合物を、損傷内耳マウスモデル、例えば、ゲンタマイシン処理マウスモデル及び／又はｆｌｏｘカスパーゼトランスジェニックマウスモデルの内耳にも添加した。これらのモデルを使用して、ヒト難聴で生じるような毒素損傷による有毛細胞喪失後に有毛細胞を再生する化合物の能力を試験する。
【０３２７】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの結果を、有毛細胞特異的マーカー、ミオシンＶＩＩａ、Ｍａｔｈ１、エスピン、Ｂｒｎ３．１、Ｆアクチン（ファロイジン）、Ｉ−９−アセチルコリン受容体、及び／又はｐ２７ｋｉｐ１の１つ又は複数を検出することにより評価した。抗体は、培養細胞と共にインキュベートし、ＦＩＴＣ又はローダミンに結合された二次抗体を結合させることにより検出した。個々の細胞の蛍光は共焦点顕微鏡を使用して観察し、陽性細胞のパーセントを定量化した。各化合物の３つの異なる濃度の影響も決定した。
【０３２８】
細胞を生理学検査にも供し、成熟有毛細胞に存在するだろうチャネルが（１）存在したこと、及び（２）活性だったことを識別する。
【０３２９】
Ｉｎ  ｖｉｖｏでの結果は、４、８、及び１２週時点で評価する。有毛細胞再生は、上述のように免疫細胞化学法を使用して評価する。機能回復は、小動物生理の専門施設で日常的に実施されている方法を使用して評価する。
【０３３０】
（実施例７）
内耳前駆細胞分化の評価
限定数の陽性化合物を、骨髄由来内耳前駆細胞の有毛細胞への分化を促進するそれらの能力について評価する。実験は、最初は、骨髄由来内耳前駆細胞（例えば、間葉系幹細胞（ＭＳＣ））、及びルシフェラーゼ発現がミオシンＶＩＩ１エンハンサー領域及びプロモーターにより駆動されるルシフェラーゼリポーターコンストラクトを使用して実施する。これは、有毛細胞の強力なプロモーターである。ミオシンＶＩＩａエンハンサー領域及びプロモーターも、ＧＦＰに作用可能に連結されていた。陽性結果は、ミオシンＶＩＩａ用に改変された、実施例３〜６に記載されている方法を使用するＲＴ−ＰＣＲ及び免疫細胞化学法を使用して確認する。
【０３３１】
（実施例８）
化合物の薬学的特徴付け
最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）及び半数致死量又は致死量５０％（ＬＤ５０）を、実施例２で識別された化合物の各々について、標準的検査技術を使用して決定した。ＩＣ５０は、生物学的又は生化学的機能の阻害における、化合物の有効性の尺度である。ＬＤ５０は、試験集団のメンバーの半分を死滅させるのに必要な化合物の量である。
【０３３２】
各化合物のＩＣ５０及びＬＤ５０値を表２に示す。
【表２−１】
2014156470.tif 000030
【表２−２】
2014156470.tif 000031
【表２−３】
2014156470.tif 000032
【０３３３】
（実施例９）
マウス蝸牛から単離された内耳前駆細胞を使用した化合物の特徴付け
実施例２に記載されている方法により識別された化合物を、マウス蝸牛から単離されたマウス内耳前駆細胞の有毛細胞への分化を促進するそれらの能力に関して試験した。
【０３３４】
蝸牛幹細胞を、以前に記載されているように（Oshimaら、上記）、Ａｔｏｈ１−ｎＧＦＰマウスから単離する。上述のように、Ａｔｏｈ１エンハンサーエレメントが活性化されると、これらの動物は核内型の高感度緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現する（Chenら及びLumpkinら、上記）。したがって、これらの動物から得られた細胞は、蛍光顕微鏡を使用して、内耳前駆細胞の有毛細胞への分化を追跡するために使用することができる。
【０３３５】
手短に言えば、内耳前駆細胞を、１〜３日齢の第２又は第３世代の動物から取得する。その後、１ウエル当たり３００球体の密度で細胞をまき（Oshima et al., J Assoc Res Otolaryngol 8:18-31, 2007、及びMartinez-Monedero et al., J Neurobiol 66:319-331, 2008）、６ウエルプレート表面への結合を可能にし、増殖因子の存在下で培養した。細胞を、Ｎ２及びＢ２７を含有するが増殖因子を含まないＤＭＥＭ培地で培養し、化合物と接触させ、３〜１０日間培養中で維持した。細胞分化は、Ａｔｏｈ１リポーターに由来する核内ＧＦＰ発現緑色蛍光を検討することにより、及び化合物で処理された培養中で、成熟有毛細胞マーカーミオシンＶＩＩａ及びエスピンを染色することにより、２４、７２分、及び１０８時間の時点の対照と比較してモニターする。
【０３３６】
陽性結果は、実施例３〜６及び７に記載されている方法を使用し、ＲＴ−ＰＣＲ及び免疫細胞化学法を使用して確認する。
【０３３７】
（実施例１０）
マウスコルチ器官外植片を使用した化合物の特徴付け 
実施例２で識別された化合物を、マウスコルチ器官外植片で新しい有毛細胞の形成を促進するそれらの能力に関して試験する。
【０３３８】
手短に言えば、外植片を、Ａｔｏｈ１−ＧＦＰマウスから解剖により準備する。コルチ器官を、コラーゲンでコーティングされたプレート上で培養し、血清含有培地で終夜培養する。化合物を、以前に記載されているようにプレーティング時に培養液に添加した（Shiら及びMartinez-Monederoら、上記）。培養物を、分析に先立って、Ｂ２７サプリメント（Invitrogen社）を含有するＤＭＥＭで３〜１０日間維持した。
【０３３９】
有毛細胞列の外側の培養物の上皮細胞から生じる有毛細胞の形成を、自動化システムを使用した定量的免疫組織化学法を使用してモニターし、ＧＦＰ陽性細胞の出現を検出する。
【０３４０】
（実施例１１）
化合物の最適化
ナノモル範囲の効能及び細胞毒性の低減を提供するために、化合物を最適化する。
【０３４１】
上述の医薬化学法を使用して化合物を改変する。吸収、分布、代謝、及び排泄（ＡＤＭＥ）研究を実施して、下記に記載されているように、対数Ｐ測定、水溶解度評価、マウス肝臓ミクロソーム安定性測定、及び血漿タンパク質結合分析を評価する。
【０３４２】
以下の試験は、１Ｈ  ＮＭＲにより決定されるような、少なくとも９５％まで合成及び精製された化合物を使用して実施する。追加的な分析技術（つまり、１３Ｃ  ＮＭＲ、ＩＲ、融点、ＭＳ、及び／又は元素分析）も、構造及び純度を決定するために使用する。光学的に純粋な物質は、キラル固定相ＨＰＬＣによっても評価する。化合物の構造は、２Ｄ  ＮＭＲ及びＸ線結晶法を使用して評価する。
【０３４３】
化合物の対数Ｐ値は、試験管中の７５０ｍＬの１−オクタノール緩衝液（ｐＨ７．４）に１５ｍＬの化合物貯蔵液（ＤＭＳ中１０ｍＭ）を添加することにより決定する。３ｍＬのテストステロン（ＤＭＳＯ中５０ｍＭ）を対照として使用する。これらの試料を室温で１時間回転させた後、試料を１時間静置させて層の分離を可能にする。４００ｍＬの各層を取り出し、別々の容器に入れる。その後、各試料を５０％メタノール水溶液に連続希釈する。化合物及びテストステロンの検量線は、５０％メタノール水溶液を使用して調製し、試料は、ＬＣ／ＭＳモニタリングを使用して分析する。各相にある試験化合物の計算濃度の比率を、検量線内に入る各相由来の最小希釈試料を使用して、２つの重複実験の各々について独立して算出する。対数Ｐは、２つの計算比率の平均のＬｏｇ１０を取ることにより算出する。
【０３４４】
化合物の水溶解度評価は、最低限１ｍｇの各試験化合物を、ｐＨ７．４に調整された１ｍＬの０．０７Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４緩衝液と混合することにより決定する。その後、試料を２時間振とうした後、室温での１２時間静置を可能にする。その後、試料で飽和させた０．４５ミクロンのナイロン注射器フィルターで、試料をろ過する。その結果生じたろ過液を、エレクトロスプレーイオン化を使用するＬＣ／ＭＳによりアッセイする（Ｎ＝２）。
【０３４５】
化合物の化学的代謝安定性を、貯溜されたマウス肝臓ミクロソームを使用して決定する。１ｍｇ／ｍＬのミクロソームタンパク質及び１ｍＭのＮＡＤＰＨと混合した化合物を、０、１５、３０、及び６０分間インキュベートする。テストステロン及びプロパノロールを陽性対照として使用する。ＮＡＤＰＨ非存在下の化合物及びミクロソームを、陰性対照として使用する。試料の反応停止をアセトニトリルで実施し、１０，０００ＲＰＭで１０分間遠心分離して、タンパク質沈殿を容易にする。試料上清を、ＬＣ／ＭＳを使用して分析する（Ｎ＝３）。検量線を、４つの濃度（１００％、３０％、１０％、及び３％）を用いて作成し、残りの試験化合物を４つの時点で決定する。
【０３４６】
血漿タンパク結合研究は、化合物（５μｍ、０．５％の最終ＤＭＳＯ濃度）、緩衝液、及び１０％血漿（緩衝液中の容積／容積）を含有する溶液を調製することにより実施する。各ウエルが半透過性セルロース膜（分子量カットオフ１０，０００）により２つに分割されている９６ウエル透析プレートを組み立てる。緩衝液を膜の一方の側に、血漿溶液をその反対側に添加する。その後、これらのプレートを密閉し、オービタルシェーカーに設置し、３７℃でインキュベートする。血漿及び緩衝液で調製した標準物質を、透析プレートを用いて３７℃でインキュベートする。各化合物の対応する溶液を、タンデム型質量分析機（ＬＣ−ＭＳ−ＭＳ）によりカセットで分析する。各化合物を重複して試験する。
【０３４７】
平衡化の後、試料を膜の両側から取り出す。化合物の各バッチの溶液を２つの群（無血漿及び血漿含有）と混合し、カセットを、無血漿溶液（６ポイント）及び血漿含有溶液（７ポイント）の２組の較正基準を使用してＬＣ−ＭＳ−ＭＳで分析する。試料を定量化して、結合した化合物の量を、同じマトリックスで調製した検量線を使用して決定する。
【０３４８】
（実施例１２）
ｉｎ  ｖｉｖｏ薬物動態、毒性、及び製剤研究
化合物を、マウス脳への脳室内（ｉｃｖ）注射を使用して投与し、用量研究を実施して、この経路経由で投与することができる化合物の最大用量を決定する。
【０３４９】
３ｍｇ／ｋｇの化合物の腹腔内（ＩＰ）投与又は蝸牛内投与を使用して、薬物動態研究を実施し、用量、及び蝸牛、関連組織における化合物の濃度を決定する。血漿及び蝸牛組織中の化合物レベルを、２４時間にわたって９つの時点で測定する。
【０３５０】
経口投与される化合物を、３ｍｇ／ｋｇ体重の濃度で、２％ヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリンなどの製剤に溶解させる。蝸牛内投与される化合物を、以前に記載されているように投与する（Chen et al., J. Neurosci. Methods, 150:67-73, 2006）。手短に言えば、マウスを麻酔にかけ、チューブを蝸牛開口部に挿入して、鼓室階への接近手段を提供する。その後、溶液中の化合物を、毎時１μＬの流量で６時間にわたり注射器ポンプにより送達する。その後、手術部位を閉じ、動物（これらのマウス）を種々の時点で検査する。
【０３５１】
（実施例１３）
動物難聴モデルを使用したｉｎ  ｖｉｖｏ研究
１０週齢マウスを、約１１６ｄＢ  ＳＰＬのオクターブバンド（８〜１６ｋＨｚ）音に２時間曝露する。ＣＢＡ／ＣａＪマウスでは、この音量は、蝸牛の下半分全体の外有毛細胞を破壊し、内毛細胞及び支持細胞は、蝸牛中央のより限定された領域で破壊される（Wang et al., J. Ass. Res. Otolaryngol., 3:248-268, 2002）。さらに、ニューロンは、内毛細胞が破壊される領域で７日以内に縮退し始める。そのようなマウスを、回復期間後にＡＢＲ及びＤＰＯＡＥについて検査する。蝸牛を解剖し、凍結切片又は全載標本の切断後にそれらを免疫染色した。細胞分裂は、凍結切片を染色するＢｒｄＵ及び抗体を注射することにより動物中で評価する。細胞死はＴＵＮＥＬ法により評価する。有毛細胞、支持細胞、及びらせん神経節ニューロンの数を計数した。
【０３５２】
音処理したマウスに、化合物（１ｍｇ／１０ｇ体重）を音処理の１週間後に注射する。試料を、４、８、１４、及び２１日の時点で分析し、有毛細胞の計数を、蝸牛らせんの長さ全体で実施する。
【０３５３】
機能評価は、以前に記載されているように（Kujawa and Liberman, J. Neurophysiol, 78:3095-3106, 1997；及びMaison et al. , J. Neurophysiol, 90:2941-2949, 2003）、ＤＰＯＡＥ及びＡＢＲの振幅対レベル機能の測定を使用して実施する。
【０３５４】
他の実施形態
本発明はその詳細な説明と共に記述されているが、先述の説明は例示を目的としており、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲により定義されることが理解されるべきである。他の態様、利点、及び改変は、以下の特許請求の範囲内である。
【図１−１】
2014156470.tif 000035
【図１−２】
2014156470.tif 000036
【図１−３】
2014156470.tif 000037
【図１−４】
2014156470.tif 000038
【図１−５】
2014156470.tif 000039
【図２−１】
2014156470.tif 000040
【図２−２】
2014156470.tif 000041
【図２−３】
2014156470.tif 000042
【図２−４】
2014156470.tif 000043
【図２−５】
2014156470.tif 000044
【図３−１】
2014156470.tif 000045
【図３−２】
2014156470.tif 000046
【図３−３】
2014156470.tif 000047
【図３−４】
2014156470.tif 000048
【図３−５】
2014156470.tif 000049
【図３−６】
2014156470.tif 000050
【図３−７】
2014156470.tif 000051
【図３−８】
2014156470.tif 000052
【図３−９】
2014156470.tif 000053
【図３−１０】
2014156470.tif 000054
【図３−１１】
2014156470.tif 000055
【図４−１】
2014156470.tif 000056
【図４−２】
2014156470.tif 000057
【図４−３】
2014156470.tif 000058
【図４−４】
2014156470.tif 000059
【図５−１】
2014156470.tif 000060
【図５−２】
2014156470.tif 000061
【図５−３】
2014156470.tif 000062
【図６−１】
2014156470.tif 000063
【図６−２】
2014156470.tif 000064
【図６−３】
2014156470.tif 000065
【図６−４】
2014156470.tif 000066
【図６−５】
2014156470.tif 000067
【図６−６】
2014156470.tif 000068
【図６−７】
2014156470.tif 000069
【図６−８】
2014156470.tif 000070
【図６−９】
2014156470.tif 000071
【図６−１０】
2014156470.tif 000072
【図７−１】
2014156470.tif 000073
【図７−２】
2014156470.tif 000074
【図７−３】
2014156470.tif 000075
【図８】
2014156470.tif 000076
【図９】
2014156470.tif 000077
【図１０】
2014156470.tif 000078
【図１１】
2014156470.tif 000079
【図１２】
2014156470.tif 000080
【図１３】
2014156470.tif 000081
【図１４】
2014156470.tif 000082
【図１５】
2014156470.tif 000083
【図１６】
2014156470.tif 000084
【図１７】
2014156470.tif 000085
【図１８】
2014156470.tif 000086
【図１９】
2014156470.tif 000087
【図２０】
2014156470.tif 000088
【図２１】
2014156470.tif 000089
【図２２】
2014156470.tif 000090
【図２３】
2014156470.tif 000091
【図２４】
2014156470.tif 000092
【図２５】
2014156470.tif 000093
【図２６】
2014156470.tif 000094
【図２７】
2014156470.tif 000095
【図２８】
2014156470.tif 000096
【図２９】
2014156470.tif 000097
【図３０】
2014156470.tif 000098
【図３１】
2014156470.tif 000099
【図３２】
2014156470.tif 000100
【図３３】
2014156470.tif 000101
【図３４】
2014156470.tif 000102
【図３５】
2014156470.tif 000103
【図３６】
2014156470.tif 000104
【図３７】
2014156470.tif 000105
【図３８】
2014156470.tif 000106
【図３９】
2014156470.tif 000107
【図４０】
2014156470.tif 000108
【図４１】
2014156470.tif 000109
【図４２】
2014156470.tif 000110
【図４３】
2014156470.tif 000111
【図４４】
2014156470.tif 000112
【図４５】
2014156470.tif 000113
【図４６】
2014156470.tif 000114
【図４７】
2014156470.tif 000115
【図４８】
2014156470.tif 000116
【図４９】
2014156470.tif 000117
【図５０】
2014156470.tif 000118
【図５１】
2014156470.tif 000119
【図５２】
2014156470.tif 000120
【図５３】
2014156470.tif 000121
【図５４】
2014156470.tif 000122
【図５５】
2014156470.tif 000123
【図５６】
2014156470.tif 000124
【図５７】
2014156470.tif 000125
【図５８】
2014156470.tif 000126
【図５９】
2014156470.tif 000127
【図６０】
2014156470.tif 000128
【図６１】
2014156470.tif 000129
【図６２】
2014156470.tif 000130
【図６３】
2014156470.tif 000131
【図６４】
2014156470.tif 000132
【図６５】
2014156470.tif 000133
【図６６】
2014156470.tif 000134
【図６７】
2014156470.tif 000135
【図６８】
2014156470.tif 000136
【図６９】
2014156470.tif 000137
【図７０】
2014156470.tif 000138
【図７１】
2014156470.tif 000139
【図７２】
2014156470.tif 000140
【図７３】
2014156470.tif 000141
【図７４】
2014156470.tif 000142
【図７５】
2014156470.tif 000143
【図７６】
2014156470.tif 000144
【図７７】
2014156470.tif 000145
【図７８】
2014156470.tif 000146
【図７９】
2014156470.tif 000147
【図８０】
2014156470.tif 000148
【図８１】
2014156470.tif 000149
【図８２】
2014156470.tif 000150
【図８３】
2014156470.tif 000151
【図８４】
2014156470.tif 000152
【図８５】
2014156470.tif 000153
【図８６】
2014156470.tif 000154
【図８７】
2014156470.tif 000155
【図８８】
2014156470.tif 000156
【図８９】
2014156470.tif 000157
【図９０】
2014156470.tif 000158
【図９１】
2014156470.tif 000159
【図９２】
2014156470.tif 000160
【図９３】
2014156470.tif 000161
【図９４】
2014156470.tif 000162
【図９５】
2014156470.tif 000163
【図９６】
2014156470.tif 000164
【図９７】
2014156470.tif 000165
【図９８】
2014156470.tif 000166
【図９９】
2014156470.tif 000167
【図１００】
2014156470.tif 000168
【図１０１】
2014156470.tif 000169
【図１０２】
2014156470.tif 000170
【図１０３】
2014156470.tif 000171
【図１０４】
2014156470.tif 000172
【図１０５】
2014156470.tif 000173
【図１０６】
2014156470.tif 000174
【図１０７】
2014156470.tif 000175
【図１０８】
2014156470.tif 000176
【図１０９】
2014156470.tif 000177
【図１１０】
2014156470.tif 000178
【図１１１】
2014156470.tif 000179
【図１１２】
2014156470.tif 000180
【図１１３】
2014156470.tif 000181
【図１１４】
2014156470.tif 000182
【図１１５】
2014156470.tif 000183
【図１１６】
2014156470.tif 000184
【図１１７】
2014156470.tif 000185
【図１１８】
2014156470.tif 000186
【図１１９】
2014156470.tif 000187
【図１２０】
2014156470.tif 000188
【図１２１】
2014156470.tif 000189