(57)【要約】【課題】花粉症の予防及び症状抑制等に用いられるマイクロニードルアレイを提供する。【解決手段】基板（合成樹脂フィルム、金属箔等）と、基板に立設されたマイクロニードルとを備えるマイクロニードルアレイであって、マイクロニードルは、培養液から抽出された酢酸菌（グルコノバクター属等）を含む抽出物を含有する。また、抽出物は、物理的、化学的又は生物学的に破砕処理されていることが好ましい。更に、マイクロニードルは、抽出物と、ヒアルロン酸と、セルロース系樹脂（カルボキシメチルセルロース等）とを含有することが好ましい。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
基板と、前記基板に立設されたマイクロニードルとを備えるマイクロニードルアレイにおいて、
前記マイクロニードルは、培養液から抽出された酢酸菌を含む抽出物を含有することを特徴とするマイクロニードルアレイ。
【請求項２】
前記抽出物が物理的、化学的又は生物学的に破砕処理された請求項１に記載のマイクロニードルアレイ。
【請求項３】
前記酢酸菌がグルコノバクター属である請求項１又は２に記載のマイクロニードルアレイ。
【請求項４】
花粉症の予防及び症状抑制に用いられる請求項１乃至３のうちのいずれか１項に記載のマイクロニードルアレイ。
【請求項５】
前記マイクロニードルは、前記抽出物と、ヒアルロン酸と、セルロース系樹脂とを含有する請求項１乃至４のうちのいずれか１項に記載のマイクロニードルアレイ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はマイクロニードルアレイに関する。更に詳しくは、本発明は、培養液から抽出された酢酸菌を含む抽出物がマイクロニードルに含有されており、特に花粉症の予防及び症状抑制に有効なマイクロニードルアレイに関する。
【背景技術】
【０００２】
生体が異物を排除する免疫機構には、全ての生物に備わっている自然免疫と、脊椎動物にのみ備わっている獲得免疫とがある。自然免疫は全ての生体に生まれながらにして備わっている異物、即ち、健康な自己には存在しない死細胞、侵入微生物等を認識し、排除する機構である。従って、自然免疫が健常に機能しておれば健康であり、自然免疫が何らかの理由で健常に機能していない場合は不健康であると言える。自然免疫が正常に機能していないことにより発症すると推測される疾患としては、感染症、代謝病、認知症、アレルギー性疾患等が挙げられる。
【０００３】
一方、獲得免疫は、異物に対する特異的な受容体が遺伝子組替を伴って造られることを基盤とする異物排除機構であり、細胞障害性Ｔ細胞を主要なエフェクターとする細胞性免疫と、抗体を主要なエフェクターとする液性免疫とに分類される。また、細胞性免疫機構の活性化は液性免疫を抑制し、液性免疫機構の活性化は細胞性免疫を抑制するため、相互に相反する機構となっている。
【０００４】
また、アレルギー性疾患はＩ型、II型、III型、IV型に分類され、これらのうちでもＩ型のアレルギーは日本では４〜５人に１人が罹患していると推定され、殆どのアレルギー性疾患がＩ型である。このＩ型アレルギーは５種類ある抗体（ＩｇＤ、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）のうち、ＩｇＥ抗体が生活環境に多く存在する花粉、ハウスダスト等に対して造られるために発症する。そして、本来、免疫バランスが正常であれば、環境に多く存在する物質に対してはＩｇＥが産生され難い。
【０００５】
主要な不足物質はエンドトキシン［グラム陰性菌の糖脂質であるリポ多糖（ＬＰＳ；lipopolysaccharide）］であり、ＬＰＳは多くのグラム陰性菌の細胞外膜に存在する。このＬＰＳは多細胞動物の免疫細胞を活性化させる物質であり、リピドＡと呼ばれる構造と多糖部とからなる。また、リムラス反応（カブトガニの血球に含有されるリピドＡと結合することで酵素活性が誘導されるタンパク質ファクターＣに基づいて開始されるゲル化反応）陽性物質である。
【０００６】
更に、グラム陰性菌の１種である酢酸菌は酢を産生するグラム陰性菌であり、世界各国で造酢に用いられているが、これまで酢酸菌に生物活性を有するＬＰＳが存在するか否か不明であった。しかし、近年、酢酸菌にマクロファージ活性化作用及びリムラス活性等の生物活性を有するＬＰＳが存在することが明らかになった。また、ＬＰＳを含有する酢酸菌発酵エキスの腹腔内投与はＩ型アレルギー性の皮膚炎（アトピー性皮膚炎モデル）に対する急性のＩ型アレルギー作用を抑制することも知られている（例えば、特許文献１参照。）。
【０００７】
また、従来、皮膚表層及び皮膚角質層に修飾効果等を与えるために、薬効成分を含有する液状物質、軟膏剤、クリーム製剤、テープ製剤等が用いられており、所定部位に塗布又は貼着することにより、薬物を皮膚及び粘膜を透過させて投与している。更に、近年、皮膚表層及び皮膚角質層の特定の場所に薬効成分を十分に供給する方法として、マイクロニードルアレイが提案されている。例えば、マルトース等の生体内で溶解消失する糖質からなり、一辺又は直径が０．１〜１００μｍの正方形又は円形の断面を有し、長さが０．５〜５００μｍの角柱状又は円柱状のパイルを基板上に設けたマイクロパイルが知られている（例えば、特許文献２参照。）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特表２０１２−５０４０３４号公報
【特許文献２】特開２００６−３４６１２６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
前述のように、免疫バランスが正常であれば、環境に多く存在する物質に対してはＩｇＥが産生され難い。しかし、２０世紀末頃より、先進諸国では、花粉及びハウスダストに対するアレルギー性疾患患者が急増している。その原因として、環境からの自然免疫活性化物質の摂取不足が問題であることが示唆されている。そこで、マクロファージ活性化作用及びリムラス活性化作用等の生物活性を有するＬＰＳが存在することが明らかになった酢酸菌を、生体に十分に供給することに着目した。
【００１０】
ＩｇＥ型のアレルギーのうちで最も罹患者が多い花粉症は、空気中に飛散するスギなどの花粉に持続的に暴露されることで発症するものであるが、生活環境から飛散する花粉を除去することは通常の生活では困難である。そのため、花粉が飛散する時期には常に花粉に暴露され続けることになる。そこで、Ｉ型のアレルギーに罹患し難い体質を誘導する安全な素材の開発が重要となり、安全性の観点で、食品として食経験のあるグラム陰性菌である酢酸菌を花粉症の発症及び症状抑制に有効な素材として利用する技術の開発が望まれる。
【００１１】
しかし、従来のように、薬効成分を含有する液状物質、軟膏剤、クリーム製剤、テープ製剤等を、皮膚に塗布又は貼着し、薬物を皮膚及び粘膜を透過させて投与する方法では、発汗、洗浄、外圧等により消失したり脱落することがある。また、これらの薬物は薬効成分を皮膚に浸透させ体内に拡散することにより薬効を発揮するものであるが、皮膚表層及び皮膚角質層は体内への異物の侵入を抑止するバリアー機能を有している。そのため、薬理効果を発揮するのに十分な薬効成分を吸収させるのは困難であり、且つ皮膚表層及び皮膚角質層の特定の場所に薬効成分を確実に供給することは容易ではない。
【００１２】
そこで、酢酸菌をマイクロニードルアレイに含有させ、皮膚に刺入させることで、酢酸菌を体内に効率よく、且つ十分に供給することに想い到った。このようにすれば、薬物が消失したり脱落することがないとともに、バリアー機能を有する皮膚表層及び皮膚角質層に薬物の供給を阻害されることもない。
本発明は、このような知見に基づいてなされたものである。
【００１３】
本発明は上述の従来の状況に鑑みてなされたものであり、培養液から抽出された酢酸菌を含む抽出物がマイクロニードルに含有されており、特に花粉症の予防及び症状抑制に有効なマイクロニードルアレイを提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は以下のとおりである。
１．基板と、前記基板に立設されたマイクロニードルとを備えるマイクロニードルアレイにおいて、前記マイクロニードルは、培養液から抽出された酢酸菌を含む抽出物を含有することを特徴とするマイクロニードルアレイ。
２．前記抽出物が物理的、化学的又は生物学的に破砕処理された前記１．に記載のマイクロニードルアレイ。
３．前記酢酸菌がグルコノバクター属である前記１．又は２．に記載のマイクロニードルアレイ。
４．花粉症の予防及び症状抑制に用いられる前記１．乃至３．のうちのいずれか１項に記載のマイクロニードルアレイ。
５．前記マイクロニードルは、前記抽出物と、ヒアルロン酸と、セルロース系樹脂とを含有する前記１．乃至４．のうちのいずれか１項に記載のマイクロニードルアレイ。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のマイクロニードルアレイによれば、生物活性を有するＬＰＳが存在する酢酸菌を、皮膚を経由して生体に効率よく供給することができる。また、マイクロニードルは極めて小径であるため、皮膚表層及び皮膚角質層に刺入しても痛みを感じることはなく、出血することもない。更に、穿刺創は速やかに閉塞され、穿刺跡が残ることもない。
また、抽出物が物理的、化学的又は生物学的に破砕処理された場合は、ヒアルロン酸等の他の成分と混合し易く、マイクロニードルアレイを作製するための粘性組成物をより容易に調製することができる。
更に、酢酸菌がグルコノバクター属である場合は、増殖性に優れ、菌収量も多いため、生物活性を有するＬＰＳが十分に存在するマイクロニードルアレイとすることができる。
また、花粉症の予防及び症状抑制に用いられる場合は、皮膚に刺入させることで、酢酸菌を体内に効率よく、且つ十分に供給することができるため、効率よく予防及び症状抑制をすることができる。
更に、マイクロニードルが、抽出物と、ヒアルロン酸と、セルロース系樹脂とを含有する場合は、粘性組成物を容易に調製することができ、刺入が容易であり、酢酸菌を体内に効率よく、且つ十分に供給し得るマイクロニードルアレイとすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】円形の基板にマイクロニードルが立設されたマイクロニードルアレイの平面図である。
【図２】図１のマイクロニードルアレイの斜視図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、基板と、この基板に立設されたマイクロニードルとを備え、マイクロニードルは、培養液から抽出された酢酸菌を含む抽出物を含有することを特徴とする。
【００１８】
［１］マイクロニードルアレイ
（１）マイクロニードルアレイの材質、形状及び寸法
マイクロニードルアレイは、基板と、この基板に立設されたマイクロニードルとを備え、マイクロニードルには酢酸菌を含む抽出物が含有されている。
基板の材質は特に限定されず、基板は各種の合成樹脂及び金属を用いて形成することができる。合成樹脂としては、ポリメチルメタクリレート等のポリエステル系樹脂、酢酸セルロース、エチルセルロース等のセルロース系樹脂、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン−プロピレン共重合体等のポリオレフィン系樹脂、ナイロン６等のポリアミド系樹脂、スチレン−イソプレン−スチレン共重合体等のスチレン系樹脂及びポリウレタン系樹脂等が挙げられ、これらはフィルムに成形され、基板として用いられる。また、金属としては、アルミニウム及び銅等が挙げられ、これらは箔に成形され、基板として用いられる。更に、基板は後述するようにマイクロニードルと同一の材質とすることもできる。
【００１９】
基板の形状も特に限定されず、円形、楕円形、正方形、長方形等の各種の形状とすることができる。また、基板の寸法も特に限定されず、厚さは、材質にもよるが、皮膚に刺入するときに容易に破損することのない厚さであればよい。この厚さは、例えば、５〜２０００μｍ、特に１０〜１０００μｍとすることができる。また、基板の大きさ（円形であるときは直径、その他の形状であるときは最大寸法）も特に限定されず、供給される酢酸菌の所要量等にもよるが、５〜５０ｍｍ、特に５〜２５ｍｍとすることができる。
【００２０】
マイクロニードルの材質も、刺入後、容易に溶解し、酢酸菌を生体に供給することができる限り、特に限定されない。マイクロニードルは、酢酸菌を含む抽出物の他、ヒアルロン酸及びその塩、セルロース系樹脂（微小繊維状セルロース等）、ポリビニルピロリドン、デキストラン、ゼラチン、グリセリン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ポリソルベート、カルボマー、ガッチガム、グアガム、グルコマンナン、グルコサミン、ダンマルガム、レンネットカゼイン、ローカストビーンガム、サイリウムシードガム、ザンタンガム、アラビノガラクタン、アラビアガム、アルギン酸、ゼラチン、ゼランガム、カラギナン、カラヤガム、カードラン、キトサン、キチン、タラガム、タマリンドガム、トラガントガム、ファーセレラン、ペクチン及びプルラン等を用いて形成することができる。
【００２１】
マイクロニードルは、酢酸菌を含む抽出物と、ヒアルロン酸及びその塩、並びにセルロース系樹脂とを用いて形成することが好ましい。セルロース系樹脂としては、例えば、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等のヒドロキシアルキルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース等のアルキルセルロースなどが挙げられる。これらのセルロース系樹脂のうちでは、カルボキシメチルセルロース及びヒドロキシプロピルメチルセルロースが好ましく、カルボキシメチルセルロースが特に好ましい。
【００２２】
マイクロニードルの形状も特に限定されないが、皮膚に刺入されるため、刺入が容易であり、且つ痛み等の苦痛を伴わない形状であることが好ましい。そのため、マイクロニードルの形状は、細長い円錐台又は角錐台、特に円錐台であることが好ましい。また、マイクロニードルの寸法は、形状が円錐台である場合、底部の直径は１００〜１０００μｍ、特に１００〜５００μｍであり、先端部の直径は２０〜８０μｍ、特に３５〜６５μｍであることが好ましい。
【００２３】
マイクロニードルの底部の直径が１００〜１０００μｍであれば、マイクロニードルが皮膚内に刺入されることで、酢酸菌が十分に供給されるとともに、皮膚に刺入するときに折損することがなく、刺入時に痛み等の苦痛を伴うこともない。また、先端部の直径が２０〜８０μｍである場合も、皮膚に刺入するときに折損することがなく、刺入時に痛み等の苦痛を伴うこともない。
【００２４】
更に、マイクロニードルの高さは５００〜２０００μｍ、特に７００〜１５００μｍであることが好ましい。マイクロニードルの高さが５００μｍ以上、特に７００μｍ以上であれば、酢酸菌を皮膚表層のみでなく、皮膚角質層を含む所定深さまで供給することができる。一方、高さが２０００μｍ以下、特に１５００μｍ以下であれば、皮膚に刺入するときに折損することがない。また、各々のマイクロニードル間のピッチ（それぞれのマイクロニードルの底部の中心点間の距離である。）は、１０００〜３０００μｍ、特に１０００〜２５００μｍであることが好ましい。ピッチが１０００〜３０００〜μｍであれば、皮膚に容易に刺入することができるとともに、所定部位に酢酸菌を十分に供給することができる。
【００２５】
（２）マイクロニードルアレイの製造方法
マイクロニードルアレイの製造方法は特に限定されず、例えば、特表２０１２−５０４０３４号公報に記載された方法により製造することができる。
具体的には、（ａ）基板上に粘性組成物を用意する段階と、（ｂ）リフティング支持体の接触突起を粘性組成物に接触させる段階と、（ｃ）粘性組成物に送風して粘性組成物を凝縮及び凝固させる段階と、（ｄ）段階（ｃ）の結果物を切断してマイクロ構造体を形成させる段階と、を備えるソリッドマイクロ構造体（マイクロニードルアレイ）の製造方法である。
【００２６】
段階（ａ）では、基板上への粘性組成物の用意がなされる。即ち、マイクロ構造体を製造するために利用される物質は粘性組成物である。この粘性組成物は、リフティング支持体への接触時にリフティングされてマイクロ構造体を形成できる能力を持つ組成物である。また、段階（ｂ）では、粘性組成物にリフティング支持体の接触突起を接触させる。このように、粘性組成物の特性である粘性を利用してマイクロ構造体を製造するためには、先ずリフティング支持体を下降させて接触突起を粘性組成物に接触させることが必要である。尚、通常、粘性組成物に接触させたリフティング支持体をリフティングさせ、粘性組成物を引き上げる操作をする。
【００２７】
更に、段階（ｃ）では、粘性組成物に送風して粘性組成物を凝縮及び凝固させマイクロ構造体の中間体を製造する。ここで、凝縮とは、流体状態の粘性物質が凝固される過程において、当初の体積と比較して体積が低減する過程である。また、段階（ｄ）では、段階（ｃ）の結果物において中間体の有効長を含む部位を切断して、最終的にマイクロ構造体を製造する。切断は多様な方法で実施することができ、例えば、物理的な切断、又はレーザー照射による切断などが挙げられる。
【００２８】
また、マイクロニードルアレイは、マイクロニードルの形状が穿設された鋳型に、酢酸菌を含む抽出物と、ヒアルロン酸及びその塩、並びにセルロース系樹脂等とを水に溶解させて調製した粘性組成物などを鋳型表面に流延させ、乾燥した後、脱型して製造することもできる。
【００２９】
上述のように、鋳型を用いてマイクロニードルアレイを製造する場合、鋳型表面に流延された粘性組成物は鋳型に穿設された細孔に注入され、マイクロニードルが形成される。この場合、マイクロニードルのみを形成し、又は極薄の基板を一体に形成し、その表面に前述の合成樹脂フィルム及び金属箔等を貼着させ、マイクロニードルアレイを製造することができる。また、所要量の粘性組成物を流延させ、乾燥した後、脱型し、マイクロニードルとともに所定厚さの基板を同時に一体に成形し、製造することもできる。基板とマイクロニードルとを同時に一体に成形した場合、マイクロニードルと基板とは材質が同一となり、基板とマイクロニードルとの一体化、及び工程の簡略化という観点で好ましい。
【００３０】
［２］酢酸菌を含む抽出物
（１）酢酸菌の分離及び培養
酢酸菌は、リンゴ、スモモ、カキ、ブドウ、カスピ海ヨーグルト等の各種の食品から分離することができる。分離の方法は特に限定されないが、例えば、上述の食品の所定量を酢酸菌選択培地に投入し、室温で数日間静置し、それぞれの食品に由来する酢酸菌を増殖させる。その後、培養液の培地の一部を培地プレートに塗布し、所定温度で数日間培養させることで酢酸菌のコロニーを形成させ、次いで、コロニーを採取し、分離することができる。また、水にグルコース、グリセロール、酵母エキス等を配合した後、オートクレーブ等を用いて殺菌した培地を作製し、これに上述の酢酸菌のコロニーを加え、所定温度で数日間培養し、酢酸菌培養液を調製することができる。
【００３１】
（２）酢酸菌を含む抽出物の調製
上記（１）のようにして調製される酢酸菌培養液を、遠心分離機により数分間遠心分離させた後、上清を除き、固形分を回収する。次いで、この固形分に所要量の蒸留水を加え、一部を所定容量のチューブに移す。その後、所要量の蒸留水を更に加え、ボルテックスミキサー等の攪拌機により数分間激しく攪拌し、次いで、沸点に近い高温で所定時間加熱した後、室温まで冷却させる。その後、ポリトロン等の破砕機により数分間破砕した後、再び数分間遠心分離させ、上清、即ち、酢酸菌を含む抽出物を調製する。
【００３２】
（３）破砕処理
酢酸菌を含む抽出物は破砕処理してもよく、この抽出物の破砕処理によって、含有される酢酸菌そのものが破砕される。また、破砕処理する方法は、物理的、化学的及び生物学的のいずれの方法であってもよく、例えば、加熱処理（熱により細胞構成成分が砕片となることで菌体が破砕される。）、超音波処理（超音波による分子振動が起こり、細胞構成成分が砕片となることで菌体が破砕される。）、高圧処理（圧力による物理的な破砕である。）、浸透圧ショック処理（浸透圧により菌体が破砕される。）等の処理方法が挙げられる。
【００３３】
また、凍結融解処理（凍結時の膨張により菌体に力が加わり破砕される。）、ホモジナイザー処理（回転羽根の攪拌により菌体に力が加わり破砕される。）、キャビテーション処理（圧変化により発生する衝撃波により菌体に力が加わり破砕される。）、フレンチプレス処理（高圧下から大気圧に減圧することで菌体を破砕する方法であり、キャビテーション処理の１種である。）及びガラスビーズ処理（ガラスビーズとの摩擦により菌体が破砕される。）等の処理方法であってもよい。
【００３４】
更に、プロテアーゼ、尿素及び各種の界面活性剤などの添加処理（細胞膜を酵素的に分解したり、尿素及び界面活性剤などの変性剤により細胞膜を砕片させる。）により抽出物を化学的及び生物学的に破砕処理することもできる。この処理方法では、糖脂質の変性による活性の低下が防止され、又は少なくとも低下が抑制されるため好ましい。
【００３５】
［３］酢酸菌の種類
抽出物に含まれる酢酸菌の種類は特に限定されず、各種の酢酸菌を用いることができる。この酢酸菌としては、グルコノバクター属、アセトバクター属、アシディカルダス属、アシディフィラム属、アシディスファエラ属、アシドセラ属、アシドモナス属、アサイア属、ベルナピア属、クラウロコッカス属、グルコナセトバクター属、グラヌリバクター属、コザキア属、リーアヒバクター属、ムリコッカス属、ネオアサイア属、オレオモナス属、パラクラウロコッカス属、ロドピラ属、ロゼオコッカス属、ルブリテピダ属、サカリバクター属、ステラ属、スワミナサニア属、テイココッカス属及びザヴァルジニア属等の酢酸菌が挙げられる。これらの酢酸菌のうちでは、グルコノバクター属、アセトバクター属、アシドモナス属、アサイア属、グルコナセトバクター属、グラヌリバクター属、コザキア属及びネオアサイア属等の酢酸菌が好ましい。また、増殖性に優れ、菌収量も多いため、グルコノバクター属の酢酸菌がより好ましい。
【実施例】
【００３６】
以下、実施例により本発明を具体的に説明する。
実施例１
（１）酢酸菌の分離
酢酸菌の分離は、カキ１ｇ程度を酢酸菌選択培地（グルコース１質量％、エタノール０．５質量％、ポリペプトン１．５質量％、酢酸０．３質量％、シクロヘキシミド０．０２質量％、他は蒸留水であり、合計量が１００質量％である。）２０ｍＬに投入し、室温（２０〜２５℃）で５日間静置した。この操作によりカキ由来の酢酸菌を増殖させた。その後、培養後の培地の一部を農大改変培地プレート（グルコース２．０質量％、酵母エキス１．５質量％、ポリペプトン１．０質量％、グリセロール１．０質量％、エタノール２．０質量％、寒天１．５質量％を含有する。）に塗り拡げ、３０℃で培養し、３日後にカキに含まれる酢酸菌のコロニーを採取した。
【００３７】
（２）酢酸菌の培養
グルコース１０〜３０ｇ、グリセロール１０〜３０ｇ、酵母エキス１０〜２０ｇ、ポリペプトン１０〜２０ｇ、ソイペプトン１０〜２０ｇ、トリプトン１０〜２０ｇを蒸留水に配合し、全量を１Ｌとした。その後、これをオートクレーブにより滅菌した培地を作製し、これに上記（１）のカキに含まれる酢酸菌のコロニーを加え、３０℃で３〜５日間培養した。
【００３８】
（３）酢酸菌を含む抽出物の調製
カキ由来酢酸菌の培養液をｐＨ７．０に調整した後、回転数３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、次いで、上清を除き、固形分を回収した。その後、この固形分に等量の蒸留水を加え、一部を容量５０ｍＬのチューブに移した。次いで、等量の蒸留水を更に加え、ボルテックスミキサーにより５分間激しく攪拌した後、ブロックヒーターを用いて９５℃で３０分間加熱した。次いで、冷却し、４℃で１０分間、回転数１５０００ｒｐｍで遠心分離した後、上清を分離し、この上清における酢酸菌のＬＰＳ含有量をエンドスペシーにより測定したところ、１５．７μｇ／ｍｇであった。
【００３９】
（４）マイクロニードルアレイの製造
前述の特表２０１２−５０４０３４号公報に記載された方法によりマイクロニードルアレイを製造した。
上記（３）で調製した酢酸菌を含む抽出物３５μｇ又は１７９μｇ、ヒアルロン酸０．２ｇ及びカルボキシメチルセルロース０．２ｇを、２０ｍＬの蒸留水に溶解させて調製した粘性組成物１００μＬを、ポリウレタン製であり、直径１０ｍｍ、厚さ１５０μｍの円形の基板に塗布した。その後、直径４００μｍの４×４＝１６本の等間隔に形成された接触突起を有するリフティング支持体を塗布された粘性組成物に接触させた。次いで、５分間送風して粘性組成物に含有されるヒアルロン酸を徐々に硬化させ、接触突起と粘性組成物とが強く接触するように凝固させた。
【００４０】
その後、弱い送風を維持しつつ、リフティング支持体を０．６ｍｍ／分の速度で３０秒間リフティングさせ、次いで、速度を０．２ｍｍ／分にして２分３０秒間リフティングさせてマイクロニードル中間体を形成した。このリフティング工程が終了した後、１５〜２０分間ほど強く送風して粘性組成物を硬化させ、マイクロニードルの形態に成形した。次いで、微細はさみを用いて硬化が完了したマイクロニードルの頂部をカットし、マイクロニードルアレイを製造した。
【００４１】
製造されたマイクロニードルアレイ１（図１、２参照）は、直径１０ｍｍの円形の基板３上に４×４本、計１６本のマイクロニードル２が平面形状が正方形となるような配置で、且つ等間隔に立設された形態である。また、それぞれのマイクロニードルの上端部の直径は５０μｍ、下端部の直径は１５０μｍ、有効長は１０００μｍであった。更に、１６本のマイクロニードルの合計量で、酢酸菌を含む抽出物が０．１３μｇ（抽出物の溶解量が３５μｇの場合）又は０．６７μｇ（抽出物の溶解量が１７９μｇの場合）含有されていた。また、エンドスペシーにより、ＬＰＳ含有量を測定したところ、１６本のマイクロニードルの合計量で、２．１ｎｇ（抽出物の溶解量が３５μｇの場合）又は１０．５ｎｇ（抽出物の溶解量が１７９μｇの場合）であった。
【００４２】
（５）マウスを用いた花粉症抑制評価試験
ＢＡＬＢ／ｃ系雄性マウス２５匹を５匹／群の５群に分けた。また、スギ花粉に対する免疫化を以下のようにして実施した。
即ち、マウスに精製スギ花粉抗原（アサヒフードアンドヘルスケア社製、商品名「Ｃｒｙｊ１」）溶液と、水酸化アルミニウムゲルを混合して調製した懸濁液０．３ｍＬ［１μｇ（抗原量）／マウス］を、初回免疫日及び４日経過後の２回、腹腔内投与した（１次免疫）。その後、初回免疫日から１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日及び１６日経過後の各日に１回、上述の精製スギ花粉抗原溶液（１００μｇ／ｍＬ）５μＬをマウスの鼻孔内に注入して（０．５μｇ／マウス）経鼻感作（２次免疫）を行った。
【００４３】
また、初回免疫日並びに１７日、２１日及び２３日経過後にマウスから採血した血液中の血漿を用いてＩｇＥレベルを測定し、ＩｇＥレベルの上昇を確認することにより、精製スギ花粉抗原の誘発による感作を確認した。ＩｇＥ分析は、市販のマウスＩｇＥ抗体測定キット（森永生化学研究所製）を用いて行った。
【００４４】
対照群（１）は免疫化しない群、対照群（２）は免疫化するが酢酸菌を含む抽出物を与えない群である。一方、試験群（１）は、免疫化し且つ酢酸菌を含む抽出物０．６６μｇ／匹／日を飲水投与した群、試験群（２）は、免疫化し且つ酢酸菌を含む抽出物を０．１３μｇ含有する前述のマイクロニードルアレイ１個／匹／日を腹部に貼り付けた群、試験群（３）は、免疫化し且つ酢酸菌を含む抽出物を０．６７μｇ含有する前述のマイクロニードルアレイ１個／匹／日を腹部に貼り付けた群である。
【００４５】
花粉症抑制の評価は、以下のようにして実施した。
即ち、初回免疫日から２３日経過後のマウスの血中ＩｇＥレベルを測定した後、精製スギ花粉抗原（１００μｇ／ｍＬ）をマウスの鼻孔内に注入して（０．５μｇ／マウス）鼻症状を誘発させ、次いで、５分間の鼻掻き行動の回数を測定することにより評価した。結果を表１に記載する。尚、表１の鼻掻き行動回数は対照群（１）、（２）及び試験群（１）〜（３）の各々の５匹のマウスの平均値である。
【００４６】
【表１】
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【００４７】
表１の結果によれば、免疫化しない対照群（１）のマウスでは、血漿中のＩｇＥ濃度は通常の値であり、鼻掻き行動回数も、日常のマウスの鼻掻き行動であり、基準となる値である。一方、免疫化するが酢酸菌抽出物を与えない対照群（２）では、ＩｇＥ濃度が大きく上昇するとともに、鼻掻き行動回数も対照群（１）と比べて約４倍になっており、花粉症を発症しているものと考えられる。また、酢酸菌を含む抽出物を与えた試験群（１）〜（３）では、対照群（２）と比べて、ＩｇＥ濃度が低く、鼻掻き行動回数も大きく減少しており、花粉症の症状が抑制されていることが分かる。特に、酢酸菌抽出物を０．６７μｇと多量に含有するマイクロニードルアレイを貼り付けた群である試験群（３）では、花粉症抑制の作用効果がより顕著である。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
本発明は、グラム陰性菌の１種であり、ＬＰＳが存在する酢酸菌を含む抽出物を含有するマイクロニードルアレイにより、アレルギー性疾患のうちでも最も多い花粉症の発症の防止、及び症状の抑制に係る技術分野において利用することができる。
【符号の説明】
【００４９】
１；マイクロニードルアレイ、２；マイクロニードル、３；基板。
【図１】
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【図２】
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