(57)【要約】【課題】Ｔ細胞が活性化されにくい高齢者、特に高齢敗血症患者などに対して効果的な、Ｔ細胞活性化剤および当該物質を利用した治療薬を提供する。【解決手段】インターロイキン１５（ＩＬ−１５）を有効成分として含有し、高齢の（特に敗血症に罹患している）個体または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患（たとえばがん、糖尿病またはＨＩＶ感染症）に罹患している個体のＴ細胞を作用の対象とすることを特徴とするＴ細胞活性化剤、ならびに当該Ｔ細胞活性化剤を含有し、高齢の個体または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患している個体の治療用であることを特徴とする医薬品。ＩＬ−１５がＩＬ−１５受容体α鎖（ＩＬ−１５Ｒα）と複合体を形成していてもよい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
インターロイキン１５（ＩＬ−１５）を有効成分として含有し、高齢の個体または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患している個体のＴ細胞を作用の対象とすることを特徴とする、Ｔ細胞活性化剤。
【請求項２】
前記高齢の個体が高齢の敗血症に罹患している個体である、請求項１に記載のＴ細胞活性化剤。
【請求項３】
前記Ｔ細胞が活性化しにくい疾患が、がん、糖尿病またはＨＩＶ感染症である、請求項１に記載のＴ細胞活性化剤。
【請求項４】
前記ＩＬ−１５がＩＬ−１５受容体α鎖（ＩＬ−１５Ｒα）と複合体を形成している、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＴ細胞活性化剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のＴ細胞活性化剤を含有し、高齢の個体または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患している個体の治療用であることを特徴とする医薬品。
【請求項６】
高齢の敗血症に罹患している個体の治療用である、請求項５に記載の医薬品。
【請求項７】
がん、糖尿病またはＨＩＶ感染症に罹患している個体の治療用である、請求項５に記載の医薬品。
【請求項８】
前記ＩＬ−１５がＩＬ−１５受容体α鎖（ＩＬ−１５Ｒα）と複合体を形成している、請求項５〜７のいずれか一項に記載の医薬品。
【請求項９】
生体外で、またはヒトを除く哺乳動物の生体内で、高齢の個体または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患している個体のＴ細胞に、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＴ細胞活性化剤を作用させるステップを含むことを特徴とする、Ｔ細胞活性化方法。
【請求項１０】
高齢のヒトを除く哺乳動物の個体、または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患しているヒトを除く哺乳動物に、請求項５〜８のいずれか一項に記載の医薬品を投与するステップを含むことを特徴とする、治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｔ細胞活性化剤およびそれを含有する医薬品、ならびにそれらを用いるＴ細胞活性化方法および治療方法に関する。より詳しくは、本発明は、活性化しにくい状況にあるＴ細胞を活性化させることで疾患に対する治療効果を発揮することのできる、Ｔ細胞活性化剤およびそれを含有する医薬品、ならびにそれらを用いるＴ細胞活性化方法および治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン１５（ＩＬ−１５）は、受容体がγc鎖を有する点で共通しているＩＬ−２レセプターファミリーに属するサイトカインである。なお、ＩＬ−２レセプターファミリーには、ＩＬ−１５の他、ＩＬ−２，ＩＬ−４，ＩＬ−７，ＩＬ−９，ＩＬ−１５およびＩＬ−２１が含まれる。ＩＬ−１５のレセプターはＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、樹状細胞などに発現しており、ＩＬ−１５はこれらの細胞を介した様々な免疫機能に関係している。たとえば、ＩＬ−１５は、活性化したＣＤ８＋Ｔ細胞のエフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞への分化の促進や、ＮＫ細胞の樹状細胞によるプライミングのために必要とされる。
【０００３】
一方、敗血症は、激しい炎症反応を引き起こした後、それを沈静化するために免疫が一定期間抑制される症状（immunoparalysisと呼ばれる）を引き起こす疾患である。この免疫抑制期には病原体の侵入を防御することが困難であり、院内感染などによる生命の危機に脅かされることになる。特に、高齢者（６５歳以上）の敗血症患者の予後は悪く、死亡率は成人（１８〜６４歳）の敗血症患者の４倍となる（非特許文献１）。
【０００４】
ＩＬ−１５が有する多様な免疫機能への関与を考慮すれば、ＩＬ−１５は敗血症の治療に有効な成分の候補となる。たとえば、ＩＬ−１５はインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）の産生量を増加させる能力を有するので、免疫抑制の原因となる単球やマクロファージの機能不全を抑制することができ、敗血症の治療にとって有益である。また、ＩＬ−１５はＣＤ８＋Ｔ細胞による溶解作用を向上させるので、微生物を制御することにとっても有益である。しかしながら、ＩＬ−１５を投与することによるこのような効果が期待される一方で、ＩＬ−１５ノックアウトマウスが敗血症後の生存率を向上させるという報告もなされており、敗血症等の治療に対するＩＬ−１５の貢献には未解明な部分が残されている。
【０００５】
非特許文献２では、ＩＬ−１５の治療的な投与が、敗血症に起因する免疫抑制を防いだり、敗血症モデルマウスの生存率を向上させる効果を有するかなどが検証されている。その結果、たとえば、敗血症モデルマウスにＩＬ−１５を投与することにより、敗血症に伴って減少したＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞などの細胞数を回復させたり（Fig. 1）、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞のうちＩＦＮ−γを産生するものの割合を増やしてＩＦＮ−γの産生量を回復させたりする効果が得られ（Fig. 7）、最終的に敗血症後の生存率を改善する効果が発揮されることが記載されている（Fig. 8）。しかしながら、非特許文献１の実験で用いられている敗血症モデルマウスは６〜８週齢と若齢であり、高齢敗血症患者またはそのモデル動物に対してＩＬ−１５がどのような効果を有するかは開示されていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Crit. Care Med. 2013; 41:
【非特許文献２】J. Immunol. 2010; 184: 1401-1409
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、Ｔ細胞が活性化されにくい高齢者、特に高齢敗血症患者などに対して効果的な、Ｔ細胞活性化剤および当該物質を利用した治療薬を提供することを課題の一つとする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明者は、活性化しにくい高齢敗血症患者由来のＴ細胞にＩＬ−１５を添加すると大きな活性化効果が得られること、また高齢（２０〜２２月齢）の敗血症モデルマウスにＩＬ−１５（ＩＬ−１５・ＩＬ−１５Ｒα複合体）を投与することにより、腹腔内の細菌数を減少させ、敗血症後の生存率を向上させる効果が得られることなどを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は一つの側面においてＩＬ−１５を有効成分として含有する特定のＴ細胞活性化剤を提供し、さらなる側面においてそのようなＴ細胞活性化剤を含有する特定の医薬品を提供する。また、本発明は異なる側面において前記Ｔ細胞活性化剤を使用する特定のＴ細胞活性化方法を提供し、さらなる側面において前記医薬品を使用する特定の治療方法を提供する。具体的には、本発明はたとえば下記の事項を包含する。
【００１０】
［１］  インターロイキン１５（ＩＬ−１５）を有効成分として含有し、高齢の個体または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患している個体のＴ細胞を作用の対象とすることを特徴とする、Ｔ細胞活性化剤。
【００１１】
［２］  前記高齢の個体が高齢の敗血症に罹患している個体である、［１］に記載のＴ細胞活性化剤。
［３］  前記Ｔ細胞が活性化しにくい疾患が、がん、糖尿病またはＨＩＶ感染症である、［１］に記載のＴ細胞活性化剤。
【００１２】
［４］  前記ＩＬ−１５がＩＬ−１５受容体α鎖（ＩＬ−１５Ｒα）と複合体を形成している、［１］〜［３］のいずれか一項に記載のＴ細胞活性化剤。
［５］  ［１］〜［４］のいずれか一項に記載のＴ細胞活性化剤を含有し、高齢の個体または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患している個体の治療用であることを特徴とする医薬品。
【００１３】
［６］  高齢の敗血症に罹患している個体の治療用である、［５］に記載の医薬品。
［７］  がん、糖尿病またはＨＩＶ感染症に罹患している個体の治療用である、［５］に記載の医薬品。
【００１４】
［８］  前記ＩＬ−１５がＩＬ−１５受容体α鎖（ＩＬ−１５Ｒα）と複合体を形成している、［５］〜［７］のいずれか一項に記載の医薬品。
［９］  生体外で、またはヒトを除く哺乳動物の生体内で、高齢の個体または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患している個体のＴ細胞に、［１］〜［４］のいずれか一項に記載のＴ細胞活性化剤を作用させるステップを含むことを特徴とする、Ｔ細胞活性化方法。
【００１５】
［１０］  高齢のヒトを除く哺乳動物の個体、または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患しているヒトを除く哺乳動物に、［５］〜［８］のいずれか一項に記載の医薬品を投与するステップを含むことを特徴とする、治療方法。
【発明の効果】
【００１６】
ＩＬ−１５を有効成分として含有する本発明のＴ細胞活性化剤を使用することにより、高齢の個体、特に高齢の敗血症に罹患している個体または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患している個体のＴ細胞を飛躍的に活性化させることができるため、それらの疾患の治療効果を向上させる、たとえば致死率を低下させることができるようになる。
【００１７】
なお、本発明により奏される作用効果は特定の作用機序に束縛されるものではないが、一つの可能性として、たとえば高齢敗血症患者においては、ＩＬ−１５によってＴ細胞が活性化されることにより有用なサイトカインの産生が向上し、このサイトカインがマクロファージを活性化して感染病原体の排除を促進する結果、敗血症後の生存率が改善することになるものと推測される。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、実施例１に関する結果を示すグラフである。データは平均値±標準誤差を表す。（ａ）若齢健常者群（Young/Healthy donor）、高齢健常者群（Elderly/Healthy donor）および高齢敗血症患者群（Elderly Sepsis）それぞれに由来するＣＤ４＋Ｔ細胞集団について、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体の混合物（CD3/8）の添加の有無（-, +）、ＩＬ−１５の添加の有無（-, 2ng/mL, 10ng/mL, 50ng/mL）および３７℃２４時間のインキュベーション（24h culture）の有無（-, +）の組み合わせによる処理方法を変えたときの、活性化したＣＤ４＋Ｔ細胞の割合の対比。（ｂ）同様に、ＣＤ８＋Ｔ細胞集団について、活性化したＣＤ８＋Ｔ細胞の割合の対比。
【図２】図２は、実施例２に関する結果を示すグラフである。（ａ）若齢マウスのＣＬＰ腹膜炎敗血症モデル（Young+CLP）と高齢マウスのＣＬＰ腹膜炎敗血症モデル（Aged+CLP）の生存率の対比。（ｂ）高齢マウスのＣＬＰ腹膜炎敗血症モデルについて、ＩＬ−１５投与群（Aged+IL-15）およびＩＬ−１５非投与群（Aged）の生存率の対比。（ｃ）血液中（左）および腹腔洗浄液中（右）の細菌数について、ＩＬ−１５投与群（CLP+IL-15）およびＩＬ−１５非投与群（PBS+IL-15）の対比。＊p<0.05（Mann-Whiteny U検定）
【発明を実施するための形態】
【００１９】
−Ｔ細胞活性化剤−
本発明のＴ細胞活性化剤は、ＩＬ−１５を有効成分として含有し、活性化しにくい状態になっているＴ細胞、具体的には、高齢の個体または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患している個体（以下「高齢者等」と総称する。）のＴ細胞を作用の対象とする。なお、「高齢の個体」には「高齢の敗血症に罹患している個体」も包含され、「敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患している個体」は、高齢の個体であっても（つまりもう一つの条件を同時に満たしていても）、非高齢の個体であってもよい。
【００２０】
ＩＬ−１５は、in vitroの培養実験では単独で用いてもよいが、in vivoの生体内への投与実験ではＩＬ−１５Ｒαを結合させた状態で用いると半減期が４時間から２０時間へ延びてＴ細胞活性化作用を増強させることができるため好ましい。（組換え型）ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαをあらかじめ結合させた複合体は製品化されており容易に入手することができる。また、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαを個別に用意し、Ｔ細胞に作用させる前にあらかじめこれらをインキュベートして複合体を形成させるようにしてもよい。
【００２１】
活性化の対象とされる「Ｔ細胞」には、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞が包含されるほか、ＮＫ細胞も包含される。
「個体」は、ヒトおよびヒト以外の動物、特に哺乳動物を包含する。動物は、たとえばマウス、ラット、モルモット、ウサギ、ヤギ、ネコ、イヌ、ブタ、サルなどのヒトの疾患のモデル動物として一般的に用いられている哺乳動物であってもよいし、愛玩用の哺乳動物（ペット）であってもよい。なお、敗血症、がん、糖尿病、ＨＩＶ感染症などの各種の疾患に罹患した動物またはそれらのモデル動物は、公知の手法により作製することができる。
【００２２】
「高齢」は、ヒトの場合は６５歳以上を指し、モデル動物としてのマウスの場合は２０月齢以上を指す。一方、「非高齢」（成人ないし成体）は、ヒトの場合は１８〜６４歳を指し、モデル動物としてのマウスの場合は６〜１９月齢を指す。その他の動物についての「高齢」および「非高齢」（成体）も、Ｔ細胞の活性化の程度が上述したようなヒトまたはマウスについての「高齢」および「非高齢」と同様の関係となる、所定の年齢または月齢の範囲を指す。
【００２３】
「Ｔ細胞が活性化しにくい疾患」としては、高齢者等と同程度またはそれ以上にＴ細胞が活性化しにくい疾患、たとえば、がん、糖尿病、ＨＩＶ感染症が挙げられる。
高齢者等のＴ細胞は、高齢の個体または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患している個体の生体内に存在するものであってもよいし、それらの個体から採取したＴ細胞またはそれに由来する培養Ｔ細胞のように生体外に存在するものであってもよい。
【００２４】
一般的に、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞などのＴ細胞は、たとえば、ＣＤ３および／またはＣＤ２８を刺激する（インビトロでは典型的には抗ＣＤ３抗体および／または抗ＣＤ２８抗体を接触させる）ことにより活性化するが、高齢者等のＴ細胞における活性化の程度は、非高齢の健常者の個体に比べて著しく劣る。
【００２５】
本発明では、ＩＬ−１５を用いることにより、高齢者等のＴ細胞の活性化の程度を向上させることができる。すなわち、通常のＣＤ３／２８抗体の刺激では十分に活性化できないＴ細胞に、ＩＬ−１５を添加することで濃度依存的にＴ細胞の再活性化を促進できる。また、その結果としてＴ細胞を増殖させ、活性化したＴ細胞の数を増加させることができる。
【００２６】
なお、非高齢者の健常者においては、Ｔ細胞を活性化させる刺激のみを加えた場合であっても、活性化したＴ細胞の細胞集団中に占める割合は一定程度の水準にまで上昇し、ＩＬ−１５をＴ細胞に作用させた後にＴ細胞を活性化させる刺激を加えた場合にさらにその割合が上昇する余地は限られている。高齢者等においては、Ｔ細胞を活性化させる刺激のみを加えた場合に活性化したＴ細胞が細胞集団中に占める割合は低い水準までしか上昇せず、ＩＬ−１５をＴ細胞に作用させた後にＴ細胞を活性化させる刺激を加えた場合にその割合が上昇する余地が比較的大きい。したがって、本発明において「Ｔ細胞が活性化しにくい」とは、活性化したＴ細胞の細胞集団中に占める割合について、無処理の場合（それでも多少のＴ細胞は活性化している）とＴ細胞を活性化させる刺激のみを加えた場合の前記割合の差（上昇幅）が、健常な非高齢者における前記割合の差（上昇幅）よりも統計学的に有意に低い（Ｐ＜０．０５）、たとえば統計学的に有意に低く、かつ前記割合が１／２以下である状態を指す、と定義することも可能である。
【００２７】
さらに、本発明の一側面（たとえば高齢の敗血症に罹患している個体）にあっては、活性化したＴ細胞の細胞集団中に占める割合について、無処理の場合とＴ細胞を活性化させる刺激のみを加えた場合の前記割合の差（上昇幅）に有意差が認められないので、「Ｔ細胞が活性化しにくい」をこのように定義することも可能である。本発明の作用効果は、特にこのような活性化しにくいＴ細胞に対して使用した場合に顕著に表れる。
【００２８】
なお、有意差の有無を検定するための統計学的手法は、分析内容や採取されるサンプル（サンプル数、群の数など）に応じて適切なものを選択することができるが、上記の検定においてはたとえば二元配置分散分析（two-way ANOVA）やMann-WhitneyのU検定を用いることができる。また通常は、有意水準には０．０５が用いられｐ値が０．０５未満（ｐ＜０．０５）の場合に有意差があると判定される。
【００２９】
Ｔ細胞の活性化の程度は、細胞集団中で「活性化マーカー  ＣＤ２５」を発現しているものの割合を測定するなど、公知の手法により評価することができる。
Ｔ細胞活性化剤は、有効成分としてＩＬ−１５のみを含有するものであってもよいし、ＩＬ−１５に加えてＴ細胞活性化作用を有するその他の物質を含有するものであってもよい。また、Ｔ細胞活性化剤は、そのような有効成分のみからなる物質（ＩＬ−１５自体、ＩＬ−１５およびその他の有効成分との混合物）の形態で使用してもよいし、有効成分を適切な溶媒（たとえばＰＢＳ）に溶解させて溶液を調製した上で使用してもよい。
【００３０】
このような本発明に係るＴ細胞活性化剤は、次に述べるような本発明に係る医薬品（医薬組成物）の有効成分として使用することが好適であるが、Ｔ細胞活性化剤の用途はそのような実施形態に限定されるものではない。たとえば、治療行為以外の試験的な用途、具体的には、Ｔ細胞の活性化の作用機序や特定の疾患の治療効果などの詳細を検証するために、ヒトまたはヒト以外の動物の生体に投与して生体内（インビボ）で作用させるような実施形態、あるいはヒトまたはヒト以外の動物から採取したＴ細胞またはそれに由来する培養Ｔ細胞に添加して生体外（インビトロ）で作用させるような実施形態が挙げられる。
【００３１】
−医薬品−
本発明に係る医薬品は、上述したような本発明に係るＴ細胞活性化剤を含有し、高齢の個体または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患している個体の治療用である。この医薬品はさらに任意で、本発明のＴ細胞活性化剤（ＩＬ−１５）以外の有効成分、剤形に応じた製薬学的に許容される担体、その他一般的な医薬品に用いられている製薬学的添加物などを含有していてもよい。すなわち、本発明に係る医薬品は、それらの成分を含有する医薬組成物として調製することができる。
【００３２】
医薬品の剤型は、たとえば、皮下、筋肉内もしくは静脈内投与用の注射剤、点滴剤の中から選択することが可能である。このような剤型の医薬品（医薬組成物）は、一般的な製造方法により製造することができる。たとえば、注射剤であれば、適切な希釈剤（生理食塩水、ブドウ糖注射液、乳糖注射液、マンニット注射液等）にＴ細胞活性化剤（ＩＬ−１５）を溶解し、濾過滅菌等の滅菌処理を施してアンプル等の密封容器に充填することにより製造することができ、日本薬局方に基づいて凍結乾燥した形態の注射剤や塩化ナトリウムと混合した粉末注射剤として製造してもよい。
【００３３】
医薬組成物中の有効成分の含有量は、使用の実施形態（投与方法）などを考慮しながら適切な範囲で調整すればよいが、医薬組成物の総重量に対して、通常０．０５〜９９重量％、好ましくは０．１〜７０重量％、より好ましくは０．１〜５０重量％の量である。
【００３４】
−方法−
本発明に係るＴ細胞活性化方法は、高齢の個体または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患している個体のＴ細胞に、上述したような本発明に係るＴ細胞活性化剤を作用させるステップを含む。このＴ細胞の活性化方法は、生体外で実施してもよいし、生体内で実施してもよい。また、個体は、ヒトであってもよいしヒトを除く哺乳動物であってもよい。Ｔ細胞の活性化方法を生体外で実施する場合、たとえばＴ細胞活性化剤を培地に添加することによりＴ細胞に作用させることができる。一方、Ｔ細胞の活性化方法を生体内で実施する場合、医薬品に準じた実施形態で個体に投与することによりＴ細胞に作用させることができる。
【００３５】
Ｔ細胞の活性化方法においてＴ細胞に作用させるＴ細胞活性化剤（有効成分であるＩＬ−１５換算）の量は、目的とする効果に応じて適切な範囲で調節すればよい。たとえば、Ｔ細胞活性化剤を培地に添加する場合、培地中のＩＬ−１５の濃度が、好ましくは２ｎｇ／ｍＬ以上、より好ましくは１０ｎｇ／ｍＬ以上、さらに好ましくは５０ｎｇ／ｍＬ以上となるようにする。なお、この場合の培地中のＩＬ−１５の濃度の上限値は特に限定されるものではないが、通常は濃度が１０〜５０ｎｇ／ｍＬ以下の範囲で調節される。
【００３６】
本発明に係る治療方法は、高齢の個体、または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患に罹患している個体に、上述したようなＴ細胞活性化剤を含有する本発明に係る医薬品を投与するステップを含む。この治療方法を実施する個体は、ヒトであってもよいしヒトを除く哺乳動物であってもよい。
【００３７】
「治療」には、治療的処置および予防的処置が包含される。その治療の効果としては、疾患の発症または再発の予防、症候の緩和、疾患の進行の抑制、症状の緩和または軽減、回復などが包含され、いわゆる免疫アンチエイジングとして知られている免疫力の向上に健康を増進する効果も期待することができる。治療の効果は、各種の疾患に関する公知の手法によって評価することができる。
【００３８】
高齢個体の敗血症または敗血症以外のＴ細胞が活性化しにくい疾患の治療方法において、個体に投与する医薬品（有効成分であるＩＬ−１５換算、以下同様）の量、すなわち１回あたりの投与量および投与回数（頻度）は、疾患の種類および目的とする治療効果に応じて、また投与対象の年齢、体重、疾患の重篤度、投与経路、薬物動態などを考慮しながら、適切な範囲で調節すればよい。たとえば、高齢者敗血症のモデル動物としてのマウス（体重はおよそ２０〜２５ｇ）に対して注射により投与する場合、１回あたりＩＬ−１５が１．５μgとなるようにすることが好ましく、ヒトへの投与量（μg／ｋｇ体重）はこれから換算して調節することができる。
【実施例】
【００３９】
［実施例１］
若年健常人、高齢健常人および高齢敗血症患者から８ｍＬの末梢血を採取し、遠心分離（2800ｒｐｍ、20分間）にかけて単核球を採取した。抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体の混合物の添加の有無（−，＋）、ＩＬ−１５（Peprotech社、recombinant human IL-15、Cat# 200-15）の添加の有無（−，２ｎｇ／ｍＬ，１０ｎｇ／ｍＬ，５０ｎｇ／ｍＬ）および３７℃２４時間のインキュベーションの有無（−，＋）の組み合わせによる処理方法を変えながら、１ｍＬのＲＰＭＩ培地中で採取された末梢血単核球を培養した。各処理方法の具体的な内容は下記表に示す通りである。各処理群の培養細胞について、ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞それぞれの総数およびそれらの中で活性化したＣＤ２５＋細胞の数を、フローサイトメーター（FACScan）、抗ＣＤ４抗体−ＦＩＴＣコンジュゲート、抗ＣＤ８抗体−ＰＥＣｙ５コンジュゲートおよび抗ＣＤ２５−ＰＥコンジュゲート（以上BD Pharmingen社）を用いて測定した。
【００４０】
【表１】
2014201537.tif 000002
【００４１】
ＣＤ４＋細胞に関する結果を図１（ａ）に、ＣＤ８＋細胞に関する結果を図１（ｂ）に示す。
若年者健常人群においては、ＩＬ−１５を添加しなくても、２４時間インキュベーション後に抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体を添加する処理（処理方法３）だけでその添加処理前（処理方法２）よりも活性化ＣＤ４＋細胞および活性化ＣＤ８＋細胞の割合は飛躍的に上昇した。ＩＬ−１５を添加した場合（処理方法４〜６）、活性化ＣＤ４＋細胞および活性化ＣＤ８＋細胞の割合はＩＬ−１５非添加群（処理方法３）と比較して有意な上昇を認めた。
【００４２】
これに対して、高齢者健常人群においては、若年者健常人群と同様に抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体を添加する処理（処理方法３）だけでもその添加処理前（処理方法２）より活性化ＣＤ４＋細胞および活性化ＣＤ８＋細胞の割合は一定程度上昇したが、その上昇幅は若年者健常人群よりも有意に低かった（ｐ＜０．０５、Mann-Whitney U検定）。そして、ＩＬ−１５を添加することにより（処理方法４〜６）、活性化ＣＤ４＋細胞および活性化ＣＤ８＋細胞の割合はもう一段上昇し、若年者健常人群で抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体を添加する処理だけを行った場合（処理方法３）と同等以上の水準にまで上昇させることができた。
【００４３】
また、高齢敗血症患者群は、若年者健常人群や高齢者健常人群とは異なり、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体を添加するだけでは（処理方法３）その添加前（処理方法２）と比べて活性化ＣＤ４＋細胞および活性化ＣＤ８＋細胞の割合に有意な上昇を認めなかった。しかしながら、ＩＬ−１５を培地中に２ｎｇ／ｍＬ添加することにより（処理方法４）それらの活性化の程度は統計学的有意に上昇し（ｐ＜０．０５、Mann-Whitney U検定）、ＩＬ−１５を培地中に１０ｎｇ／ｍＬ（処理方法５）または５０ｎｇ／ｍＬ（処理方法６）添加することによって活性化の程度をより一層上昇させることができ、若年者健常人群で抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体を添加する処理だけを行った場合（処理方法３）と有意差なく同等の水準にまで上昇させることができた。
以上の結果より、ＩＬ−１５が高齢者および高齢敗血症患者のＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を再活性化する作用は大きい。
【００４４】
［実施例２］
以下の実験では、若齢マウスとして６〜８週齢のオスのマウス、高齢マウスとして２０月齢のオスのマウス（いずれもCD-1、Charles River Laboratories社、体重20〜25ｇ）を用いた。
【００４５】
まず、若齢マウス（ｎ＝８）および高齢マウス（ｎ＝８）を用いて、盲腸結紮・穿孔（cecal ligation and puncture: CLP）による腹膜炎敗血症モデルマウスを作製し、生存率を測定した。結果は図２（ａ）に示す通りである。若齢マウス群は一定の生存率を達成できたが、高齢マウス群は最終的に生存率が０％になり、若齢マウス群に比べて予後が不良であった。
【００４６】
続いて、高齢マウスからなる２つの群（それぞれｎ＝６）について、一方の群（ＩＬ−１５投与群）は、上記と同様のＣＬＰ処置をした後、３時間後に１．５μｇのＩＬ−１５をＰＢＳ（リン酸緩衝液）に溶解して皮下投与し、もう一方の群（ＩＬ−１５非投与群）は、上記と同様のＣＬＰ処置をした後、３時間後に１．５μｇのＩＬ−１５を含有しないＰＢＳのみを皮下投与した。結果は図２（ｂ）に示す通りである。ＩＬ−１５投与群は、前述した若齢マウス群と同程度の生存率を達成できた。なお、この実施例におけるＩＬ−１５はＩＬ−１５・ＩＬ−１５Ｒα複合体（Ebioscience社、mouse IL-15R/IL-15 complex recombinant protein carrier free、Cat# 34-8152）として添加しており、上記添加量はＩＬ−１５のみの量に相当する。
【００４７】
さらに、前記ＩＬ−１５投与群およびＩＬ−１５非投与群と同様の高齢ＣＬＰモデルマウスについて、末梢血および腹腔洗浄液を採取し、血液寒天培地に塗布し３７℃で２４時間培養後、コロニー数を測定した。結果は図２（ｃ）に示す通りである。ＩＬ−１５投与群はＩＬ−１５非投与群に比べて腹腔洗浄液中の細菌数が有意に低減しており（ｐ＜０．０５、Mann-Whitney U検定）、ＩＬ−１５の投与によりマクロファージが活性化して細菌を効率的に排除できることが、ＩＬ−１５投与群の敗血症後の生存率の高さに寄与しているものと考えられる。
【図１】
2014201537.tif 000003
【図２】
2014201537.tif 000004