(57)【要約】【課題】可食経験の有る植物由来の抽出物を用いて、経口摂取により肌のくすみを改善する経口肌色改善剤を提供する。【解決手段】式    【化１】2014019692.tif 000009で表されるクロセチンまたはその薬理学的に許容しうる塩を有効成分とし、肌のくすみを改善することを特徴とする経口肌色改善剤。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2014019692.tif 000008
で表されるクロセチンまたはその薬理学的に許容しうる塩を有効成分とし、肌のくすみを改善することを特徴とする経口肌色改善剤。
【請求項２】
クロセチンが水溶液中に分散し、且つ該クロセチンの粒子径がメジアン径で０．５μｍ未満であることを特徴とする請求項１に記載の経口肌色改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クロセチンまたはその薬理学的に許容し得る塩を有効成分とし、肌のくすみを改善できる経口肌色改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
「くすみ」は、加齢とともに肌に出現してくる現象であり、具体的には、肌の赤みが減少して黄みが増し、肌の透明感が喪失され、老廃物によるにごり感があり、肌が色ムラになった状態を総合的に表す用語である。くすみは、肌の明度が落ちて容易に暗く見えることから、女性にとって美容上の大きな問題であり、その対策が望まれてきている。
【０００３】
また、くすみは、加齢に伴う角質層の肥厚による濁りや陰影、皮膚の赤みの低下、色素の沈着、皮膚の弾力の低下、皮膚の黄色化、汗や皮脂等の汚れ等の多数の要因が相互に関与することによって発生すると考えられている。このため、肌のシミなどの改善に有用とされる物質であっても、より多くの要因が関与するくすみについては効果的に改善できない場合が多い。
【０００４】
一方、カロテノイドの一種であり、クチナシの果実、サフランの雌しべなどの可食経験の有る植物から抽出されるクロセチンについては、グルタチオンの産生を促進することが報告されている（特許文献１）。グルタチオンの産生促進は、肝斑や炎症後の色素沈着などに有用であるとされているものの、より多くの要因が関与して発生するくすみについて十分な改善効果を有することは確認されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００８−７４７２１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、可食経験の有る植物由来の抽出物を用いて、経口摂取により肌のくすみを改善する経口肌色改善剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記課題を解決するため、鋭意検討した結果、クロセチンの経口摂取により肌のくすみが改善されることを見出し、この知見に基づいて本発明をなすに至った。
【０００８】
即ち、本発明は、
［１］．下記式
【０００９】
【化１】
2014019692.tif 000002
で表されるクロセチンまたはその薬理学的に許容しうる塩を有効成分とし、肌のくすみを改善することを特徴とする経口肌色改善剤、
［２］．クロセチンが水溶液中に分散し、且つ該クロセチンの粒子径がメジアン径で０．５μｍ未満であることを特徴とする前記［１］に記載の経口肌色改善剤、
からなっている。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の経口肌色改善剤は、経口摂取することにより、肌のくすみを改善し、肌の明度を上昇させる効果を発揮する。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明で用いられるクロセチンは、式
【００１２】
【化２】
2014019692.tif 000003
で表される化合物である。このクロセチンは、通常、カロテノイド系の黄色色素であるクロシン（クロセチンのジゲンチオビオースエステル）を加水分解することにより得られる。クロシンは、アカネ科クチナシ（Ｇａｒｄｅｎｉａ ａｕｇｕｓｔａ ＭＥＲＲＩＬ ｖａｒ．ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒａ ＨＯＲＴ．，Ｇａｒｄｅｎｉａ ｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ ＥＬＬＩＳ）の果実、サフランの柱頭の乾燥物などに含まれるが、クロシンを得るための工業的原料としてはクチナシの果実が好ましく用いられる。
【００１３】
本発明において、上記植物基原からクロシンを抽出する方法に制限はなく、例えば、粉砕されたクチナシの乾燥果実から水またはアルコール（例えば、メタノール、エタノールなど）、或いはそれらの混合液を用いて抽出するなどの公知の方法が用いられる。抽出条件は、例えば水・アルコール混合液を用いた場合、室温（約０〜３０℃）〜５０℃で約１〜１８時間が好ましく、約３０〜４０℃で約２〜４時間がより好ましい。抽出操作は通常複数回繰り返される。
【００１４】
クロシンを含む抽出液は自体公知の方法により濃縮され、通常、濃縮液として冷蔵保存される。また、該抽出液は、更に吸着樹脂処理或いは膜分離処理し、ゲニポサイドなどのイリドイド配糖体を除去しクロシンの濃度を高めることが、好ましく行われる。
【００１５】
クロシンの加水分解は常法に従って行われてよく、通常、酸、アルカリ或いは適当な加水分解酵素の作用で行われる。ここで酸としては、例えば塩酸、硫酸およびリン酸などが挙げられ、アルカリとしては例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウムおよび炭酸カリウムなどが挙げられる。また加水分解酵素としては、β−グルコシダーゼなどが挙げられる。
【００１６】
工業的には、クロシンの加水分解がアルカリによる加水分解であるのが好ましい。該加水分解は、攪拌および／または加熱下で行われることが好ましく、例えば、攪拌下、約２０〜７０℃、好ましくは約４０〜６０℃に加熱し、約１〜２４時間、好ましくは約３〜５時間行われ得る。
【００１７】
また、クロシンの加水分解がアルカリによるものである場合、通常、加水分解終了後、反応液に塩酸、硫酸またはリン酸などの無機酸、もしくはクエン酸などの有機酸の水溶液を適量加え、液性をｐＨ約４．０以下、好ましくはｐＨ約１．０〜３．０にするか、または反応液を塩酸、硫酸またはリン酸などの無機酸、もしくはクエン酸などの有機酸の水溶液に加え、液性をｐＨ約４．０以下、好ましくはｐＨ約１．０〜３．０にすることで、クロセチンを析出させる。その後、クロセチンを析出させた混合液を、遠心分離するか或いはろ紙もしくはろ布に通してろ過することにより、クロセチンをペースト状の固形物として回収できる。
【００１８】
また、クロシンの加水分解が酸による加水分解である場合、通常、加水分解と同時にクロセチンが析出するため、反応液は懸濁液として得られる。反応終了後、得られた懸濁液を、遠心分離するか或いはろ紙もしくはろ布に通してろ過することにより、クロセチンをペースト状の固形物として回収できる。
【００１９】
このようにして得られたクロセチン（ペースト状の固形物）には、通常、酸、中和塩および原料由来の不純物が固形物表面に付着しているため、該不純物を除去する目的で、洗浄処理が行われる。該処理は、例えば、上記ペースト状の固形物を十分量の水を用いて水洗するなど、公知の方法を用いて行ってよい。次に、例えば棚式の通風乾燥機または真空乾燥機などを用いて、好ましくは窒素ガスの雰囲気下約５０℃を越えない温度で乾燥し、固形物に残留する水を除去してもよい。
【００２０】
本発明に用いられるクロセチンとしては、上記ペースト状の固形物を水洗したもの、または水洗したものを乾燥したものが好ましく用いられるが、更に、これらクロセチン（クロセチン組成物）を精製した精製クロセチンを用いてもよい。ここで、クロセチンを精製する方法に制限は無く、例えばカラムクロマトグラフィー、再結晶など自体公知の方法が用いられる。
【００２１】
本発明において、クロセチンの薬理学的に許容しうる塩としては、例えば、ナトリウム、カリウムなどの第１族元素の塩、マグネシウム、カルシウムなどの第２族元素の塩、ピリジン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミンなどの医薬的に許容される有機アミノ化合物の塩などが挙げられる。
【００２２】
本発明の経口肌色改善剤は、上記クロセチンもしくはその薬理学的に許容しうる塩をそのまま、あるいは医薬品添加物、食品添加物および食品素材などを適宜配合し、常法に従い、例えば液剤（ドリンク剤など）、散剤、顆粒剤、錠剤、マイクロカプセル、ソフトカプセル、ハードカプセル、油脂組成物、Ｏ／Ｗ型乳化液、Ｗ／Ｏ型乳化液または可溶化液などの形態の製剤として製造され得る。
【００２３】
上記製剤１００質量％中、クロセチンの含有量は、純度１００質量％のクロセチンに換算して、通常約０．０００１〜５０質量％、好ましくは約０．００１〜２０質量％、より好ましくは約０．０１〜５質量％である。
【００２４】
ここで、上記した製剤の形態の中でも、腸等の体内でのクロセチンの吸収率および吸収速度を高める観点から、クロセチンが水溶液中に分散し、且つ該クロセチンの粒子径がメジアン径で０．５μｍ未満の液剤が好ましい。
【００２５】
このような液剤の製造には、クロセチンの水分散性を高めたクロセチン製剤を用いることができる。該クロセチン製剤の製造方法としては、糖類を含有する水溶液中にクロセチンを分散して分散液を調製する際に、該分散液のクロセチンの粒子径（メジアン径）を約０．５μｍ未満とする方法が挙げられる。より具体的には、例えば下記の方法１および２を例示できる。
【００２６】
［方法１］
水洗したクロセチン（ペースト状の固形物）を水に懸濁して得た懸濁液を、室温（約０〜３０℃）〜１００℃、好ましくは約４０〜６５℃に加温した糖類を含有する水溶液に加え、これを高圧式均質化処理機を用いて処理することにより、クロセチン製剤を得る。
【００２７】
［方法２］
水洗したクロセチン（ペースト状の固形物）を水に懸濁して得た懸濁液を高圧式均質化処理機を用いて処理する。得られた処理液を、室温（約０〜３０℃）〜１００℃、好ましくは約４０〜６５℃に加温した糖類を含有する水溶液に加え、攪拌機、加熱用のジャケットおよび邪魔板等を備えた通常の攪拌・混合槽を用いて攪拌し、クロセチン製剤を得る。
【００２８】
上記糖類としては特に制限はなく、例えばブドウ糖、果糖、ガラクトースなどの単糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖などの二糖、澱粉、加工澱粉、アミロース、アミロペクチン、デキストリン、シクロデキストリンなどの多糖、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオースおよびマルトヘキサオースなどのマルトオリゴ糖などの少糖、アラビアガム、カラギナン、カラヤガム、寒天、キサンタンガム、グアーガム、タマリンドシードガム、トラガントガム、ペクチンおよびローカストビーンガムなどの多糖類、ソルビトール、マンニトール、マルチトールまたは還元水飴などの糖アルコールなどが挙げられ、好ましくはアラビアガムなどの多糖類などである。
【００２９】
上記高圧式均質化処理機としては、例えばクレアミックスＷモーション（エムテクニック社製）、ＡＰＶゴーリンホモジナイザー（ＡＰＶ社製）、マイクロフルイダイザー（みづほ工業社製）、アルティマイザー（スギノマシン社製）またはナノマイザー（大和製罐社製）などが挙げられる。該均質化処理機による操作条件としては、装置の仕様により異なり一様ではないが、例えば約５〜８０ＭＰａで１パス(単回数処理)又は多パス（複数回数処理）とするのが好ましい。
【００３０】
上記攪拌機としては、例えばＴＫホモミクサー（特殊機化工業社製）またはクレアミックス（エムテクニック社製）などの高速回転式分散・乳化機が好ましく用いられる。該分散・乳化機の操作条件としては、例えば実験室用の小型機では、回転数約２０００〜２００００ｒｐｍ、攪拌時間約５〜６０分間を例示できる。
【００３１】
上記処理により得られる分散液中のクロセチンの粒子径（メジアン径）は約０．５μｍ未満であることが好ましく、約０．４μｍ未満であることがより好ましい。該粒子径が０．５μｍを超えると、得られたクロセチン製剤を配合して製造した経口肌色改善剤のクロセチンの沈殿抑制が十分でなく、また、体内でのクロセチンの吸収率および吸収速度の観点から好ましくない。一方、該粒子径が小さすぎると、粒子が凝集し分散状態が保たれなくなり好ましくないため、その下限は、通常０．０６μｍ程度である。
【００３２】
本発明に従うクロセチン製剤１００質量％中には、クロセチン約０．０５〜６質量％、好ましくは約０．５〜５質量％、糖類を約０．０５〜６０質量％、好ましくは約１〜３０質量％、残余が水となるように調整するのが好ましい。また、クロセチンと糖類の比率は、約１：１〜１：１０、好ましくは約１：２〜１：６となるように調整するのが好ましい。
【００３３】
なお、上記方法１および２により製造されるクロセチン製剤は、クロセチンが水溶液中に分散した水分散性のものであるが、これら水分散性のクロセチン製剤を自体公知の方法により乾燥し、粉末状のクロセチン製剤としても良い。
【００３４】
乾燥方法としては、例えば、噴霧乾燥、ドラム乾燥、ベルト乾燥、真空乾燥あるいは真空凍結乾燥などが挙げられ、好ましくは真空凍結乾燥または噴霧乾燥である。
【００３５】
真空凍結乾燥に使用される装置としては特に制限は無く、自体公知の装置を使用することができる。真空凍結乾燥の方法は自体公知の方法に従って良く、例えば、水分散性のクロセチン製剤（好ましくは該製剤と適量の水およびデキストリンなどの賦形剤とを混合したもの）を−２０℃以下、約−３０〜−４０℃にて凍結させ、得られた凍結物を約１０〜１００Ｐａ程度の真空下、約３０〜６０℃で加熱しながら、約１０〜７２時間乾燥するのが好ましい。得られた凍結乾燥物を自体公知の方法により粉砕し、好ましくは篩い分けすることにより粉末状のクロセチン製剤を得ることができる。得られる粉末状のクロセチン製剤の乾燥減量は通常約５質量％以下、好ましくは約１〜３質量％である。
【００３６】
噴霧乾燥に使用される装置としては特に制限は無く、噴射式噴霧乾燥装置または回転円盤式噴霧乾燥装置など、公知の装置を使用することができる。また、噴霧乾燥の操作条件としては、例えば分散液を加圧ノズル式噴霧乾燥装置に供給し、熱風入口温度約１２０〜１７０℃、好ましくは約１４０〜１５０℃、排気温度約７０〜１４０℃、好ましくは約８５〜９０℃の条件下で噴霧乾燥し、乾燥物をサイクロンで捕集することにより、粉末状のクロセチン製剤を得ることができる。得られる粉末状のクロセチン製剤の平均粒子径は約２０〜２００μｍ、好ましくは約６０〜１００μｍである。また、その乾燥減量は約１０質量％以下が好ましく、約７質量％以下であることがより好ましい。
【００３７】
上記粉末状のクロセチン製剤の好ましい実施態様の一例は、該製剤１００質量％中、クロセチンを約０．１〜１０質量％、好ましくは約０．２〜４質量％、糖類を約９０〜９９．９質量％、好ましくは約９６〜９９．８質量％を含む粉末である。その色価は約５０〜１０００が好ましく、約１００〜４００であることがより好ましい。
【００３８】
上記クロセチン製剤（粉末状のクロセチン製剤を含む）を用いて「クロセチンが水溶液中に分散し、且つ該クロセチンの粒子径がメジアン径で０．５μｍ未満の液剤」を調製する方法に特に制限はないが、例えば、クロセチン製剤、甘味料、酸味料などの各原材料を水に加えて充分混合して溶解・分散した後に、除菌フィルターでろ過して容器に無菌充填するなどの方法により容易に調製することができる。
【００３９】
更に、本発明の経口肌色改善剤は、飲食品の形態をとることが可能である。該飲食品としては、例えば清涼飲料、ドロップ、キャンディ、チューインガム、チョコレート、グミ、ヨーグルト、アイスクリーム、プリン、ゼリー菓子、クッキーなどが挙げられる。
【００４０】
上記飲食品１００質量％中、クロセチンもしくはその薬理学的に許容しうる塩の含有量は、純度１００質量％のクロセチンに換算して、通常約０．００００３〜１０質量％、好ましくは約０．０１〜５質量％である。
【００４１】
また、本発明の経口肌色改善剤は、クロセチンもしくはその薬理学的に許容しうる塩を有効成分として単独で用いることができるほか、皮膚の健康維持に良いとされる他の成分、例えば、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ナイアシン、ビオチン、パントテン酸、ビタミンＣ、ビタミンＥなどのビタミン類、亜鉛、セレン、硫黄、カルシウム、鉄などのミネラル類、β−カロテン、α−カロテン、リコピン、フィトエン、フィトフルエン、アスタキサンチン、ルテイン、ゼアキサンチン、カプサンチン、カプソルビン、β−クリプトキサンチン、フコキサンチン、ビキシン、ノルビキシンなどのカロテノイド類、アントシアニン、アントシアニジン、プロアントシアニジン、カテキン、ヒドロキシチロソール、オレウロペイン、イソフラボン配糖体又はそのアグリコンなどのポリフェノール類、さらにはアルギニン、グリシン、メチオニン、システイン、オルニチンなどのアミノ酸、シスチン、グルタチオン、コラーゲン又はその分解物などのたんぱく質又はその分解物（ペプチド）、ヒアルロン酸、グルクロン酸、コンドロイチン硫酸などのグリコサミノグルカン、シトルリン、タウリン、グルコサミン、コウジ酸、α−リポ酸、ＣｏＱ１０、スクワレン、エラスチン、セラミドなどと組み合わせて用いることが可能である。
【００４２】
本発明の経口肌色改善剤を経口摂取する際のクロセチンもしくはその薬理学的に許容しうる塩の成人１日当たりの用量は、純度１００質量％のクロセチンに換算して、約０．１〜５００ｍｇの範囲である。
【００４３】
以下に本発明を実施例に基づいてより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００４４】
［クロセチン組成物の製造］
粉砕したクチナシの乾燥果実３０ｋｇにエタノール・水混合液（５０：５０）６０Ｌを加え、室温で３時間攪拌した後吸引ろ過した。ろ過後、抽出残にエタノール・水混合液（５０：５０）６０Ｌを加え、室温で３０分間攪拌した後吸引ろ過する操作を２回繰り返し、ろ液として計約１７５Ｌの抽出液を得た。この抽出液を、ロータリーエバポレーターを用いて約６０℃、約４ｋＰａの条件で濃縮し、濃縮物１（色価＝約５７０）約１０．５ｋｇを得た。
【００４５】
得られた濃縮物１に精製水を加えて１００Ｌとし、得られた溶液を吸引ろ過し、ろ液をアンバーライトＸＡＤ−７（オルガノ社製）５０Ｌを充填したカラムに流速ＳＶ＝０．５で通液した。続いて、精製水４００Ｌをカラムに流速ＳＶ＝０．５で通液し、排出液を廃棄した。次にエタノール・水混合液（７０：３０）５０Ｌを流速ＳＶ＝０．５で通液し、色素を脱着・溶出した。得られた溶出液を、エバポレータを用いて約６０℃、約４ｋＰａの条件で濃縮し、クロシンを含む濃縮物２（色価＝約１６００）約３．５ｋｇを得た。
【００４６】
得られた濃縮物２と４０質量％水酸化ナトリウム水溶液６００ｇとを混合し、撹拌下６０℃で約３．５時間加水分解反応を行った。反応終了後、反応液を４質量％リン酸水溶液１５Ｌに加えて酸性とした後、そのまま約３時間室温で放置した。次に、析出した沈殿を遠心分離（１０，０００×ｇ、１０分間）により回収し、更に水５Ｌで洗浄し、遠心分離する操作を２回繰り返し、ペースト状の固形物であるクロセチン組成物（色価＝約２０００）約２７５０ｇを得た。該クロセチン組成物中のクロセチン含有量は約５．５質量％であった。
【００４７】
なお、上記色価は、下記の［色価測定方法］により測定した。
【００４８】
［色価測定方法］
１）測定する吸光度が０．３〜０．７の範囲になるように、試料を精密に量り、ジメチルスルホキシドに溶かして正確に１００ｍｌとする。
２）その５ｍｌを正確に量り、Ｋｏｌｔｈｏｆｆ氏緩衝液（５０ｍＭ Ｎａ２ＣＯ３−５０ｍＭ Ｎａ２Ｂ４Ｏ７，ｐＨ１０．０）を加えて５０ｍｌとする。
３）その５ｍｌを正確に量り、Ｋｏｌｔｈｏｆｆ氏緩衝液（ｐＨ１０．０）を加えて５０ｍｌとする。
４）その５ｍｌを正確に量り、Ｋｏｌｔｈｏｆｆ氏緩衝液（ｐＨ１０．０）を加えて５０ｍｌとし、試験溶液とする。
５）Ｋｏｌｔｈｏｆｆ氏緩衝液（ｐＨ１０．０）を対照とし、液層の長さ１ｃｍで４２０ｎｍ付近の極大吸収部における吸光度Ａを測定し、次式により色価を求める。
【００４９】
【数１】
2014019692.tif 000004
【００５０】
［クロセチン製剤の製造］
（１）試作品１の製造
先に調製したクロセチン組成物（色価＝約２０００）６８５．０ｇを精製水４３６．０ｇで懸濁し、クロセチン懸濁液１１２１．０ｇを得た。次に３０００ｍＬ容ビーカーにアラビアガム（商品名：サンアラビック；三栄薬品貿易社製）１４９．４ｇ、精製水７７９．０ｇを加え、４０℃に加温して溶解した後、該クロセチン懸濁液を加え均一に混合した。得られた混合液を８３メッシュ篩に通した後、マイクロフルイダイザー（みづほ工業社製；Ｌ−２１０Ｚチャンバー装着）を用いて５０ＭＰａで２パス処理し、処理液を得た。この処理液中のクロセチンの粒子径は約０．３４μｍであった。
次いで、該処理液２０４９．４ｇに対して、デキストリン（商品名：サンデック＃３００；三和澱粉株式会社製）１２９３．８ｇを加えて、混合した。得られた混合液を、縦２９８ｍｍ、横４３５ｍｍ、高さ２５ｍｍの金属製トレイに充填し、凍結乾燥機（型式：ＤＣ５００；ヤマト科学社製）を用いて、−３５℃で２４時間予備凍結した後、真空度１３Ｐａの条件下、棚温５０℃で約２７〜２８時間かけて凍結乾燥した。得られた凍結乾燥物を０．５ｍｍのスクリーンを有するピンミルを用いて粉砕し、粉末状のクロセチン製剤（試作品１；クロセチン含有量２．５％）１４９３ｇを得た。
【００５１】
（２）試作品２の製造
先に調製したクロセチン組成物（色価＝約２０００）３４２．５ｇを精製水２１７．０ｇで懸濁し、クロセチン懸濁液５５９．５ｇを得た。次に１０００ｍＬ容液量計にアラビアガム（商品名：サンアラビック；三栄薬品貿易社製）７４．７ｇ、精製水３８９．５ｇを加え、４０℃に加温して溶解した後、該クロセチン懸濁液５５９．５ｇを加え均一に混合した。得られた混合液を８３メッシュ篩に通した後、４０℃に保温しながらクレアミックス（エムテクニック社製）を用いて回転数１７０００ｒｐｍ、１２分間攪拌し、処理液を得た。得られた処理液中のクロセチンの粒子径は約０．７７μｍであった。
次いで、該処理液１０２３．７ｇに対して、デキストリン（商品名：サンデック＃３００；三和澱粉株式会社製）６４６．４ｇを加えて、混合した。得られた混合液を、縦２９８ｍｍ、横４３５ｍｍ、高さ２５ｍｍの金属製トレイに充填し、凍結乾燥機（型式：ＤＣ５００；ヤマト科学社製）を用いて、−３５℃で２４時間予備凍結した後、真空度１３Ｐａの条件下、棚温５０℃で約２７〜２８時間かけて凍結乾燥した。得られた凍結乾燥物を０．５ｍｍのスクリーンを有するピンミルを用いて粉砕し、粉末状のクロセチン製剤（試作品２；クロセチン含有量２．５％）７４６ｇを得た。
【００５２】
（３）試作品３の製造
１０００ｍＬ容液量計にアラビアガム（商品名：サンアラビック；三栄薬品貿易社製）１４９．４ｇ、精製水１８５０．２ｇを加え、４０℃に加温して溶解した後、市販のクロセチン（商品名：クロビットＰ；理研ビタミン株式会社製）４９．８ｇを加え、均一に混合した。得られた混合液を４０℃に保温しながらクレアミックス（エムテクニック社製）を用いて回転数１７００ｒｐｍ、１２分間撹拌し、処理液を得た。得られた処理液中のクロセチンの粒子径は約２．８３μｍであった。
次いで、該処理液２０４９．４ｇに対して、デキストリン（商品名：サンデック＃３００；三和澱粉株式会社製）１２９３．８ｇを加えて、混合した。得られた混合液を、縦２９８ｍｍ、横４３５ｍｍ、高さ２５ｍｍの金属製トレイに充填し、凍結乾燥機（型式：ＤＣ５００；ヤマト科学社製）を用いて、−３５℃で２４時間予備凍結した後、真空度１３Ｐａの条件下、棚温５０℃で約２７〜２８時間かけて凍結乾燥した。得られた凍結乾燥物を０．５ｍｍのスクリーンを有するピンミルを用いて粉砕し、粉末状のクロセチン製剤（試作品３；クロセチン含有量２．５％）１４９３ｇを得た。
【００５３】
［粒子径の測定方法］
上記クロセチン製剤（試作品１〜３）の製造における粒子径の測定では、レーザー回折／分散粒度分布測定機（型式：ＬＡ−９２０；堀場製作所社製）を使用し、粒子径の大きさを体積頻度からメジアン径として算出した。なお、クロセチンの粒子径は水を媒体として測定した。
【００５４】
［経口肌色改善剤の製造］
表１の配合組成に従い、全ての原材料をタンクに仕込み混合した。十分混合した後、液は２００メッシュストレーナーによるろ過を行い、全量４２４ｋｇの分散液を得た。
分散液はプレート式殺菌機（９８±２℃、３秒間保持）による殺菌を行った後、５０ｍＬずつ褐色瓶へ充填、キャッピングした（充填時の温度は６５℃以上）。キャッピング後、パストライザー（シャワー殺菌機）を用いて殺菌し、エアーにより水滴除去して経口肌色改善剤１〜３（５０ｍＬ／１本のドリンク剤；クロセチン含有量０．０１５質量％）を得た。また、経口肌色改善剤１〜３に分散するクロセチンの粒子径（メジアン径）を上述の方法に従い測定した。結果を表２に示す。
なお、水分散性を付与するための製剤化がなされていない市販のクロセチン（商品名：クロビットＰ；クロセチン含有量７５％；理研ビタミン製）は、イオン交換水に加えて混合しても分散せずにタンク内で浮上するため、経口肌色改善剤４を製造することはできなかった。
【００５５】
【表１】
2014019692.tif 000005
【００５６】
【表２】
2014019692.tif 000006
【００５７】
［試験例］
［経口摂取による肌のくすみ改善評価試験］
くすみによる肌の明度低下に対するクロセチンの改善効果を検証するため、経口肌色改善剤１を被験薬としたオープン試験を実施した。
【００５８】
（１）肌の明度測定
顔面のくすみ、色むらが気になる３０歳から５０歳までの日本人女性ボランティア４４名を対象に、被験薬として経口肌色改善剤１を８週間連続摂取（１本／日）させ、摂取前後の肌の明度を測定して比較した。
測定は、先ず被験者が洗顔後、恒温恒湿室（湿度５０％±１０％、室温２２℃±２℃に設定）にて安静な状態で肌を３０分馴化させた後、スキントーン・カラースケール（インフォワード社製）を用いて、被験者の左耳朶下の付け根と唇の左端とを結ぶ直線上の中心付近の肌について行った。より具体的には、１ＹＲ、３ＹＲ、５ＹＲ、７ＹＲ、９ＹＲの５色相からなるスケールのうち、被験者の肌色にもっとも近いスケールを選択し、そのスケール上で被験者の肌の色と最もコントラストが小さい色の明度を被験者の肌の明度値とした。また、被験薬の摂取後の明度測定では、摂取前の測定で用いたスケールと同一色相のものを使用した。
試験結果として、被験薬摂取前後の肌の明度値の平均値および標準偏差を表３に示す。
【００５９】
【表３】
2014019692.tif 000007
【００６０】
表３の結果は、集計されたデータに基づき対応のあるｔ検定を行ったところ、摂取前と摂取後において有意な差（危険率１％未満）が認められ、被験薬の摂取により肌の明度が有意に上昇することを示している。
【００６１】
（２）アンケート調査
被験薬の摂取後にアンケート調査を実施し、くすみの改善効果に関する被験者の体感を調べた。
アンケート調査における質問は、被験薬の摂取前と比べた摂取後の肌の状態に関して、質問１「肌の感じが明るくなった」、質問２「顔のくすみが減少した」とした。質問への回答では、１．「そう思う」、２．「ややそう思う」、３．「どちらともいえない」、４．「あまりそう思わない」５．「そう思わない」の中から被験者自身が最も近いと思うものを選択させた。
その結果、質問１「肌の感じが明るくなった」に対し、１．「そう思う」または２．「ややそう思う」を選択した被験者の割合は６８．２％（３０／４４）であった。また、質問２「顔のくすみが減少した」に対し、同様の選択をした被験者の割合は６１．４％（２７／４４）であった。
【００６２】
以上の結果から、本発明の経口肌色改善剤は、肌のくすみを改善し、肌の明度を上昇させる効果を奏することが明らかである。