(57)【要約】      （修正有）【課題】Ｉ型インターフェロン遺伝子又はインターロイキン３遺伝子の発現増強作用による免疫賦活作用が有効性を示す、各種疾患の予防／治療に有用な免疫賦活剤の提供。【解決手段】一般式（Ｉ）又は一般式（ＩＩ）で表される化合物。2014152117.tif 000004【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはその塩又は下記一般式（ＩＩ）で表される化合物若しくはその塩を有効成分として含有する免疫賦活剤。
【化１】
2014152117.tif 000003
【請求項２】
Ｉ型インターフェロン遺伝子発現増強作用を有する請求項１に記載の免疫賦活剤。
【請求項３】
インターロイキン３遺伝子発現増強作用を有する請求項１又は２に記載の免疫賦活剤。
【請求項４】
前記有効成分はショウガ科植物の抽出物である請求項１〜３の何れか１項に記載の免疫賦活剤。
【請求項５】
請求項１〜４の何れか１項に記載の免疫賦活剤を含有する抗感染剤。
【請求項６】
請求項１〜４の何れか１項に記載の免疫賦活剤を含有するウイルス肝炎予防／治療剤。
【請求項７】
請求項１〜４の何れか１項に記載の免疫賦活剤を含有する飲食品又は動物用飼料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｉ型インターフェロン遺伝子発現増強作用又はインターロイキン３遺伝子発現増強作用による免疫賦活作用が有効性を示す、各種疾患の予防／治療剤として有用な免疫賦活剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年になり、生体内において内在性インターフェロンがウイルス及び微生物感染に対する生体防御機構の中で中心的役割を果たしていると同時に、免疫調節上も重要な役割を果たしていることが明らかにされつつある。インターフェロンの大量製造技術が確立され、培養細胞より天然型インターフェロンが容易に入手可能になったこと、また、微生物によるインターフェロンの大量製造が可能となったことから、これらのインターフェロンを用いて多くの研究結果が積み重ねられてきた。具体的には、インターフェロンについて、抗ウイルス作用、細胞増殖抑制作用及び免疫調節作用等の多彩な生物学的作用が確かめられており、臨床ではＢ型及びＣ型肝炎等のウイルス性疾患治療剤、あるいは癌及び免疫疾患治療剤として既に実用化がなされている。また、インターフェロンはＢ型及びＣ型肝炎における発癌を抑制する効果を有することも示唆されている。上記疾患の多くは他に有効な治療法がないことから、とりわけインターフェロンが重用されている。
【０００３】
インターフェロンの生合成を誘導する物質としては、各種動物ウイルスや、細菌、原生動物等の微生物及びその抽出物、マイトジェン、特異抗原、免疫賦活剤が知られている。例えば、各種天然型二本鎖ＲＮＡやpoly I:Cのような合成二本鎖ＲＮＡ、及びポリアクリル酸や亜塩素酸塩酸化オキシアミロース等の陰イオン性高分子化合物が、インターフェロン誘導作用を有することが知られている。一方、低分子化合物では、フルオレノン類、ピリミジン誘導体、アントラキノン類、アクリジン系化合物等に、インターフェロン誘導作用を持つものが見出されている。しかし、これらの化合物を臨床試験に用いた場合、予想外にインターフェロンの誘導能が低いことと強い副作用あるいは反復投与によるインターフェロン誘導能低下等から、これら化合物のインターフェロン誘導剤としての開発には成功していない。また、イミダゾキノリン類も低分子のインターフェロン誘導剤として知られているが、これら化合物のインターフェロン選択的誘導能は低く、他のサイトカインも同時に誘発することが知られている。
【０００４】
一方、インターロイキン３（IL-3）は、マルチＣＳＦとして知られる分子量20-32kDaの造血因子である。IL-3は、活性化Ｔ細胞、肥満細胞、好酸球によって産生される。IL-3の最も意義の高い生物活性は、造血細胞の分化を刺激し、赤血球、巨核球、顆粒球、マクロファージ、好塩基球、好中球、好酸球、肥満細胞、単球系細胞のコロニー形成を導くことが知られている。これら作用からIL-3産生能の増強は、基礎免疫活性を高めることに繋がり、各種感染症に有効と考えられる。しかし、IL-3を特異的に増加する成分は発見されておらず、安全且つ有効な成分が求められていた。
【０００５】
ところで、ジテルペンは４つのイソプレン単位を含む化合物であり、様々な構造のジテルペンが天然に分布している。ラブダン型の基本骨格を有するジテルペンは、ショウガ科の植物に含まれていることが知られており、特許文献１には、ショウガ科植物のミョウガに含まれるラブダン型ジテルペンアルデヒドであるミョウガトリアールが抗菌作用、血小板凝集抑制作用、５−リポキシゲナーゼ阻害作用を有することが開示されている。また、特許文献２には、ショウガ科植物のアルビニアガランガに含まれるガラナールが抗腫瘍剤となる可能性が開示されている。また、特許文献３には、ミョウガの花序又は蕾からの抽出物が降圧作用、中枢神経抑制作用、コリン作動性神経興奮作用、心臓抑制作用及び抗炎症作用を示すことが開示されている。しかし、ラブダン型ジテルペンアルデヒドあるいはショウガ科植物の抽出物が、Ｉ型インターフェロン遺伝子又はインターロイキン３遺伝子を発現増強し、Ｉ型インターフェロン又はインターロイキン３の産生能を上昇させることや、免疫賦活作用を有することはこれまで知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００６−２４１０６８号公報
【特許文献２】特開昭６３−１６２６４４号公報
【特許文献３】特開昭５５−００９０２１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、Ｉ型インターフェロン遺伝子又はインターロイキン３遺伝子の発現増強作用による免疫賦活作用が有効性を示す、各種疾患の予防／治療に有用な免疫賦活剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、ショウガ科植物であるミョウガの花蕾から単離された特定構造のラブダン型ジテルペンアルデヒドが、Ｉ型インターフェロン遺伝子及びインターロイキン３遺伝子の発現増強作用を有し、生体内でＩ型インターフェロン及びインターロイキン３の産生能を特異的に上昇させ、これらの遺伝子発現増強作用が有効性を示す各種疾患（ウイルス感染症、微生物感染症、ウイルス性肝炎、ウイルス性脳炎等）の予防／治療に効果をもたらすことを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
即ち、本発明は、下記一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはその塩又は下記一般式（ＩＩ）で表される化合物若しくはその塩を有効成分として含有する免疫賦活剤である。
【化１】
2014152117.tif 000002
【００１０】
また、本発明は、前記免疫賦活剤を含有する抗感染剤、ウイルス肝炎予防／治療剤又は飲食品若しくは動物用飼料である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の免疫賦活剤によれば、ヒトを含む動物（特に哺乳類）の生体の機能や恒常性を維持したまま、Ｉ型インターフェロン又はインターロイキン３が有効な各種疾患、例えば、ウイルス感染症、微生物感染症、ウイルス性肝炎、ウイルス性脳炎等を予防又は治療することができる。また、本発明の免疫賦活剤の有効成分は、古来より食用とされてきたミョウガに含まれる成分であり、継続的に服用しても有害な副作用がなく安全性が高いため、本発明の免疫賦活剤は、抗感染剤、ウイルス肝炎予防／治療剤等の医薬としてのみならず、飲食品、動物用飼料としても利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、ヒト由来細胞におけるＩ型インターフェロン遺伝子発現量の変化を示すグラフである。
【図２】図２は、マウス由来細胞におけるインターロイキン３遺伝子発現量の変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の老化抑制剤は、上記一般式（Ｉ）で表される化合物（以下、化合物Ｉともいう）若しくはその塩、又は上記一般式（ＩＩ）で表される化合物（以下、化合物ＩＩともいう）若しくはその塩を有効成分として含有する。本発明の老化抑制剤は、「化合物Ｉ又はその塩」及び「化合物ＩＩ又はその塩」の何れか一方のみを含有していても良く、両方を含有していても良い。また、本発明の老化抑制剤は、有効成分（化合物Ｉ若しくはＩＩ又はそれらの塩）のみからなる形態でも良く、有効成分に加えて他の成分を含む形態でも良い。
【００１４】
本発明の免疫賦活剤の有効成分である化合物Ｉ及びＩＩは、何れもラブダン型ジテルペンアルデヒドである。化合物Ｉは、（４ａＳ，６ａＳ，７Ｓ，１１ａＲ，１１ｂＳ）−４，４，１１ｂ−トリメチル−７−ヒドロキシ−１，２，３，４，４ａ，５，６，７，８，１１，１１ａ，１１ｂ−ドデカヒドロ−６ａＨ−シクロヘプタ［ａ］ナフタレン−６ａ，９−ジカルボアルデヒド〔ＣＡＳ登録番号：１０４０８６−７４−０、化学式：Ｃ20Ｈ30Ｏ3、慣用名：ガラナールＡ（Galanal A）〕、若しくは（４ａＳ，６ａＳ，７Ｒ，１１ａＲ，１１ｂＳ）−４，４，１１ｂ−トリメチル−７−ヒドロキシ−２，３，４，４ａ，５，６，６ａ，７，８，１１，１１ａ，１１ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−シクロヘプタ［ａ］ナフタレン−６ａ，９−ジカルボアルデヒド〔ＣＡＳ登録番号：１０４１１３−５２−２、化学式：Ｃ20Ｈ30Ｏ3、慣用名：ガラナールＢ（Galanal B）〕、又はこれらの混合物（含むラセミ体）であり、上記一般式（Ｉ）に示す化学構造を有する。化合物ＩＩは、（８Ｓ）−１４，２０−シクロラブダン−１２，１４（２０）−ジエン−１５，１６−ジアール〔化学式：Ｃ20Ｈ28Ｏ2、慣用名：ミョウガナール（Mioganal）〕であり、上記一般式（ＩＩ）に示す化学構造を有する。
【００１５】
化合物Ｉの塩及び化合物ＩＩの塩に関しては、種類は特に限定されないが具体的に挙げると、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属の付加塩；マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属の付加塩等が挙げられる。好ましくは薬学的に許容できる塩である。
【００１６】
化合物Ｉ及びＩＩは、ミョウガ等のショウガ科植物から公知の方法により単離（抽出・精製）して得ることができる。即ち、本発明の免疫賦活剤の有効成分は、ショウガ科植物の抽出物であっても良い。しかしながら、本発明で用いる化合物Ｉ及びＩＩ並びにそれらの塩は、そのような植物由来の天然物質に限定されず、公知の化学合成技術若しくは遺伝子組換技術等を使用して生産される化学合成物質若しくは遺伝子組換物質であっても良い。化合物Ｉ及びＩＩを植物から単離する場合、化合物Ｉについては、例えば特許文献２に記載の方法に準じて植物から単離可能であり、化合物ＩＩについては、例えばBiosci. Biotechnol. Biochem (72) 10, 2181-2186, 2008に記載の方法に準じて植物から単離可能である。
【００１７】
化合物Ｉ及びＩＩを含有する植物としては、ショウガ科に属する植物が挙げられ、より具体的には、ショウガ科ショウガ属のミョウガ、ショウガ科ハナミョウガ属のナンキョウ（学名：Alpinia galanga）、ハナミョウガ、ゲットウ等が挙げられる。これらのショウガ科植物の中でも、特に、ミョウガ（とりわけ、その可食部である花蕾）及びナンキョウ（とりわけ、その可食部である地下茎部）は、化合物Ｉ及びＩＩを比較的多量に含有しているため、これらの給源として本発明で好ましく用いられる。
【００１８】
化合物Ｉ及びＩＩは、後述の〔実施例〕の項に記載の試験結果から明らかなように、Ｉ型インターフェロン遺伝子発現増強作用を有し、生体内でＩ型インターフェロンの産生能を特異的に上昇させ得ると共に、インターロイキン３遺伝子発現増強作用を有し、生体内でインターロイキン３の産生能を特異的に上昇させ得る。従って、化合物Ｉ若しくはＩＩ又はそれらの塩を含有する本発明の免疫賦活剤は、上記の遺伝子発現増強作用による優れた免疫賦活作用を示し、Ｉ型インターフェロン又はインターロイキン３が予防／治療に有効に作用する各種疾患や状態、例えば、ウイルス感染症、微生物感染症、ウイルス性肝炎、ウイルス性脳炎等の発生を未然に防ぐことができ、また、既に発症したこれら各種疾患の治療や状態の改善にも使用できる。
【００１９】
また、化合物Ｉ及びＩＩは、食経験が豊富なミョウガやナンキョウ等のショウガ科植物に含まれている成分であることから、長期間継続的に摂取しても生体に有害な作用をもたらす懸念が少ない、安全な化合物である。従って、化合物Ｉ又若しくはＩＩ又はそれらの塩を含有する本発明の免疫賦活剤は、健常者や成人だけでなく、高齢者や病弱者にも、安全且つ継続的に摂取され得るものであり、ヒト又は動物用の医薬の他、ヒト用飲食品若しくは動物用飼料等として、又はそれらを製造するための原料として有用である。本発明には、上述した本発明の免疫賦活剤を含有する医薬、飲食品及び動物用飼料が含まれる。ここでいう「動物」には、ヒト以外の哺乳類が含まれる。
【００２０】
本発明の医薬としては、上述した免疫賦活剤そのものの他に、例えば、抗感染剤、ウイルス肝炎予防／治療剤を例示できる。医薬としての免疫賦活剤並びにこれを含有する抗感染剤及びウイルス肝炎予防／治療剤の剤型は、特に制限されず、化合物Ｉ若しくはＩＩ又はそれらの塩を含有可能な全ての剤型が含まれ、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、ドライシロップ剤、液剤、懸濁剤等の経口剤；吸入剤、経皮製剤、坐剤、点滴剤、注射剤等の非経口剤が挙げられる。
【００２１】
本発明の医薬は、有効成分である化合物Ｉ若しくはＩＩ又はそれらの塩に加えて、必要に応じて薬学的に許容される種々の担体、例えば賦形剤、安定化剤、その他の添加剤等を含有していても良く、あるいは、更に他の薬効成分、例えば各種ビタミン類、ミネラル類、生薬等を含有していても良い。本発明の医薬は、化合物Ｉ若しくはＩＩ又はそれらの塩、あるいはこれらを含有する植物抽出物に、上述の担体及び他の薬効成分を配合し、常法に従って製造することができる。
【００２２】
また、本発明の飲食品及び動物用飼料としては、例えば、ウイルスや微生物の感染予防／改善、ウイルス肝炎の改善効果を企図して、その旨を表示した健康食品、機能性飲食品、特定保健用飲食品、病者用飲食品、家畜・競走馬・鑑賞動物等のための飼料、ペットフードを例示できる。本発明の飲食品及び動物用飼料の形態は、特に制限されず、化合物Ｉ若しくはＩＩ又はそれらの塩を含有可能な全ての形態が含まれ、例えば、固形、半固形又は液状であり得、あるいは、錠剤、チュアブル錠、粉剤、カプセル、顆粒、ドリンク、ゲル、シロップ、経管経腸栄養用流動食等の各種形態であり得る。
【００２３】
本発明の飲食品の形態の具体例としては、緑茶、ウーロン茶や紅茶等の茶飲料、コーヒー飲料、清涼飲料、ゼリー飲料、スポーツ飲料、乳飲料、炭酸飲料、果汁飲料、乳酸菌飲料、発酵乳飲料、粉末飲料、ココア飲料、アルコール飲料、精製水等の飲料、バター、ジャム、ふりかけ、マーガリン等のスプレッド類、マヨネーズ、ショートニング、クリーム、ドレッシング類、パン類、米飯類、麺類、パスタ、味噌汁、豆腐、牛乳、ヨーグルト、スープまたはソース類、菓子（例えばビスケットやクッキー類、チョコレート、キャンディ、ケーキ、アイスクリーム、チューインガム、タブレット）等が挙げられる。尚、動物用飼料は、飲食品とほぼ同様の組成や形態で利用できることから、本明細書における飲食品に関する記載は、特に断らない限り、動物用飼料についても同様に適用される。
【００２４】
本発明の飲食品及び動物用飼料は、化合物Ｉ若しくはＩＩ又はそれらの塩、あるいはこれらを含有する植物抽出物に、通常食されている一般の飲食品や動物用飼料の製造に用いられる他の飲食品素材、各種栄養素、各種ビタミン、ミネラル、アミノ酸、各種油脂、種々の添加剤（例えば呈味成分、甘味料、有機酸等の酸味料、界面活性剤、ｐＨ調整剤、安定剤、酸化防止剤、色素、フレーバー）等を配合して、常法に従って製造することができる。あるいは、通常食されている一般の飲食品又は動物用飼料に、化合物Ｉ若しくはＩＩ又はそれらの塩、あるいはこれらを含有する植物抽出物を配合することにより、本発明の飲食品又は動物用飼料を製造することができる。
【００２５】
本発明の医薬、飲食品又は動物用飼料における有効成分である、化合物Ｉ若しくはＩＩ又はそれらの塩の含有量（両化合物を含有する場合は各化合物の含有量の合計）は、所望の効果が期待できる量であれば良く、医薬の剤型、飲食品若しくは動物用飼料の形態、投与若しくは摂取する個体の種、症状、年齢、性別等に応じて適宜変更され得る。ヒトを対象とする場合、通常、化合物Ｉ若しくはＩＩ又はそれらの塩の投与量（両化合物を含有する場合は各化合物の含有量の合計）は、成人１人（６０ｋｇ換算で）１日当たり１０ｍｇ〜１０ｇであり得る。当該１日投与量は、１回で投与されても良く、数回に分けて投与されても良い。本発明の医薬の剤型若しくは投与レジメン、又は本発明の飲食品若しくは動物用飼料の形態は、当該投与量を適切に管理できるような形であることが望ましい。
【実施例】
【００２６】
本発明を具体的に説明するために実施例を挙げるが、本発明は以下の実施例によって制限されるものではない。
【００２７】
〔実施例１及び２〕
下記（有効成分の単離方法）に従い、ショウガ科植物であるミョウガの花蕾から上記一般式（Ｉ）で表される化合物（ガラナールラセミ体）及び上記一般式（ＩＩ）で表される化合物（ミョウガナール）をそれぞれ単離し、前者を実施例１、後者を実施例２とした。
【００２８】
（有効成分の単離方法）
１．抽出処理
新鮮なミョウガの花蕾を準備し、これを良く水洗して水切りした後スライスし、抽出用試料とした。この抽出用試料６００ｇに３倍量のヘキサンを加えてホモジナイズした後、常温・常圧下で、マグネチックスターラー上で攪拌しながら３０分間抽出処理（１回目抽出処理）を行った。１回目抽出処理で得られた固形分と抽出液とを分離し、該固形分に対して更に同様の条件でヘキサンにて抽出処理（２回目抽出処理）を行い、１回目抽出処理で得られた抽出液と２回目抽出処理で得られた抽出液とを混合した。
２．精製処理
上記抽出処理で得られた抽出液を濾過及び脱水し、ロータリーエバポレーターで濃縮乾固したものを、１５％アセトン−ヘキサン２ｍｌに溶解し、ヘキサンで平衡化したシリカゲル７７２９（メルク製）フラッシュクロマトカラム５０ｇにアプライした。その後１５％アセトン−ヘキサン３００ｍｌで溶出した。その溶出画分をロータリーエバポレーターで１／１０量に濃縮し、分取用ＨＰＬＣ（島津製作所製）で精製した。分取用ＨＰＬＣに関し、カラムは silica-60（ＴＯＳＯＨ）７．８×３００ｍｍを用い、移動相は３．５％アセトン−ヘキサンを用いて流速４．０ｍｌ／ｍｉｎ．で行い、検出波長は２３２ｎｍとした。上記一般式（Ｉ）で表される化合物（ガラナールラセミ体）は、特許文献２に記載の方法で別途単離した標準品のＨＰＬＣの溶出パターンを参考にし、また、上記一般式（ＩＩ）で表される化合物（ミョウガナール）は、Biosci. Biotechnol. Biochem (72) 10, 2181-2186, 2008に記載の方法で別途単離した標準品のＨＰＬＣの溶出パターンを参考にして、画分を分取した。分取した画分を窒素気流下にて濃縮乾固し、純度９５〜９８％の油状物質を得た。
【００２９】
〔試験例１：Ｉ型インターフェロン（IFNβ-１）遺伝子の発現確認試験〕
細胞としてヒト由来単球様細胞THP-1を用いた。細胞は各Wellあたり１×１０6個／ｍｌとなるよう培養プレートに０．５ｍｌずつ分注し、１０％ＦＢＳを含むRPMI1640培地で培養した。被験物質として実施例１（ガラナールラセミ体）又は実施例２（ミョウガナール）を、終濃度で１．２５μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌとなるよう添加し、被験物質無添加の細胞と共に３７℃、５％炭酸ガスの存在下、６時間培養した。培養した細胞から全ＲＮＡをTaKaRa FastPure（登録商標） RNA Kit（タカラバイオ株式会社製）を用いて抽出し、この全ＲＮＡを鋳型にPrimeScript RT reagent Kit（タカラバイオ株式会社製）を用い逆転写反応を行い、ｃＤＮＡを作成した。作成したｃＤＮＡを鋳型に定量的ＰＣＲによりｍＲＮＡ量を定量した。定量的ＰＣＲにはSYBR（登録商標） Premix Ex Taq TM II（タカラバイオ株式会社製）を用い、９５℃５秒、６０℃３０秒の2-Step PCRを用いN=2で測定した。プライマーは以下の配列のものを、終濃度０．４μＭで使用した。定量結果はβアクチンの定量結果で補正した。結果を図１に示す。
ヒトIFNβ-１：5'-CATCTAGCACTGGCTGGAATGAG-3'/5'-TCCAGGACTGTCTTCAGATGGTTTA-3'
β-Actin：5'-TGCACCACACCTTCTACAATGA-3'/ 5'-CAGCCTGGATAGCAACGTACAT-3'
【００３０】
図１から明らかなように、ガラナールラセミ体（実施例１）添加群及びミョウガナール（実施例２）添加群は、これら被験物質無添加の対照（ネガティブコントロール）に比べて、Ｉ型インターフェロン（IFNβ-１）遺伝子発現量が顕著に増大した。このことから、上記一般式（Ｉ）で表される化合物（ガラナール）及び上記一般式（ＩＩ）で表される化合物（ミョウガナール）が、Ｉ型インターフェロン遺伝子発現増強作用を有することが明らかであり、Ｉ型インターフェロンが有効な哺乳類の各種疾患の予防／治療剤として有望であることが確認された。
【００３１】
〔試験例２：インターロイキン３（IL-3）遺伝子の発現確認試験〕
細胞としてマウス由来WEHI-3細胞を用いた。細胞は各Wellあたり１×１０6個／ｍｌとなるよう培養プレートに０．５ｍｌずつ分注し、１０％ＦＢＳを含むRPMI1640培地で培養した。被験物質として実施例１（ガラナールラセミ体）又は実施例２（ミョウガナール）を、終濃度で２．５μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌとなるよう添加し、被験物質無添加の細胞と共に３７℃、５％炭酸ガスの存在下、６時間培養した。培養した細胞から全ＲＮＡをTaKaRa FastPure（登録商標） RNA Kit（タカラバイオ株式会社製）を用いて抽出し、この全ＲＮＡを鋳型にPrimeScript RT reagent Kit（タカラバイオ株式会社製）を用い逆転写反応を行い、ｃＤＮＡを作成した。作成したｃＤＮＡを鋳型に定量的ＰＣＲによりｍＲＮＡ量を定量した。定量的ＰＣＲにはSYBR（登録商標） Premix Ex Taq TM II（タカラバイオ株式会社製）を用い、９５℃５秒、６０℃３０秒の2-Step PCRを用いN=2で測定した。プライマーは以下の配列のものを、終濃度０．４μＭで使用した。定量結果はβアクチンの定量結果で補正した。結果を図２に示す。
マウスIL-3：5'-ACCGTTTAACCAGAACGTTGAATTG-3'/5'-TCCACGAATTTGGACAGGTTTACTC-3'
β-Actin：5'-TGCACCACACCTTCTACAATGA-3'/ 5'-CAGCCTGGATAGCAACGTACAT-3'
【００３２】
図２から明らかなように、ガラナールラセミ体（実施例１）添加群及びミョウガナール（実施例２）添加群は、これら被験物質無添加の対照（ネガティブコントロール）に比べて、インターロイキン３（IL-3）遺伝子発現量が顕著に増大した。このことから、上記一般式（Ｉ）で表される化合物（ガラナール）及び上記一般式（ＩＩ）で表される化合物（ミョウガナール）が、インターロイキン３遺伝子発現増強作用を有することが明らかであり、インターロイキン３が有効な哺乳類の各種疾患の予防／治療剤として有望であることが確認された。
【図１】
2014152117.tif 000005
【図２】
2014152117.tif 000006