(57)【要約】【課題】本発明では、従来の涙小管閉鎖剤と比較して、より確実に涙小管を閉鎖できる涙小管閉鎖剤を提供する。【解決手段】上記課題を解決するために研究した結果、単量体率の高いコラーゲンを涙点閉鎖剤に用いることで、より確実に涙小管を閉鎖することができることを見出して、本発明を完成した。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
単量体と重合体を含むコラーゲンを含む涙小管閉鎖剤であって、該単量体が９０％以上であることを特徴とする涙小管閉鎖剤。
【請求項２】
前記単量体と前記重合体の合計のコラーゲン濃度が１．０％〜５．０％である請求項１に記載の涙小管閉鎖剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ドライアイ症状等を改善するための単量体コラーゲンを主成分とする液状で注入可能な涙小管閉鎖剤に関する。
に関する。
【背景技術】
【０００２】
ドライアイ症状を改善するための一つの手段として、涙小管からの涙の流出を防ぐためにコラーゲン溶液を涙点より涙小管に注入し、体温でコラーゲン溶液をゲル形成させることにより涙小管を閉鎖することが行われている（参照：特許文献１）。
しかし、特許文献１で開示されているコラーゲン溶液はゲル形成するのに時間がかかるため、涙小管に注入したコラーゲン溶液の一部がゲル形成する前に流れ出してしまい、涙小管の十分な閉鎖ができないことがあった。該不十分な閉鎖を防止するため、注入後、患者は加温するためのホットアイマスクを装着し、１０分間程度処置用ベッドで仰臥位のまま待つ必要があるなど、余計な器具を用いたり、患者に不自由を強いたりする必要があった（参照：非特許文献１）。
【０００３】
特許文献１で開示されているコラーゲンゲルは、多少の涙液通過が存在するため、より強い遮断効果を有する涙小管閉鎖剤の開発が望まれていた。
加えて、ゲル形成前の溶液の状態での粘度が高いため、涙小管への注入が行いにくいとの欠点があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平８−１２５９２
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】眼科手術第２１巻第４号  ２００８年  液状涙道プラグ「キープティア」  濱野孝
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従来のコラーゲン溶液と比較して、溶液状態での粘度が低く、注入後は体温によって速やかにゲル形成し、かつ配向性の高いコラーゲン線維からなるコラーゲン溶液を用いて、より確実に涙小管を閉鎖できる涙小管閉鎖剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するために研究した結果、従来の涙小管閉鎖剤で使用されているコラーゲン溶液には、通常、単量体のコラーゲンと重合体のコラーゲンの両者が含まれていることを確認した。
例えば、特許文献１の涙小管閉鎖剤用のアテロコラーゲン溶液（以下、「原料アテロコラーゲン溶液」と称する場合がある）は、ゲル濾過クロマトグラフィー分析により、単量体コラーゲンが７４.４％であり、残りは重合体コラーゲンであることを確認した（図１）。
【０００８】
本発明者らは、コラーゲン溶液を速やかにゲル形成する方法を鋭意探索した結果、涙点閉鎖剤として実用可能なコラーゲン濃度が１％以上においては、単量体コラーゲンの比率が高いほど、速やかにゲル形成することを見いだした。加えて、コラーゲン濃度が０．１％程度では、単量体コラーゲンの比率が高いほど、ゆっくりとゲル形成することも併せて見出した。
さらに、単量体コラーゲンは、配向性が高く、コラーゲン密度の高い太いコラーゲン線維を形成するため、涙液の通過量を低減し、より涙小間の閉鎖感を高められる。さらには単量体コラーゲンの比率が高いほど、コラーゲン溶液の粘度は下がることも見出したので、涙小管への注入も容易になる。
【０００９】
以上より、単量体率の高いコラーゲンを涙点閉鎖剤に用いることで、より確実に涙小管を閉鎖する涙小管閉鎖剤を提供できる。
また、本発明では、使用している原料が従来から涙小管閉鎖に使用されているコラーゲンから一部の重合体を除去したものであり、新たな物質を添加していないので、安全性、刺激性等に対しては従来品と同じであり、安心して使用することができる。
【００１０】
すなわち、本発明は以下の通りである。
１．単量体と重合体を含むコラーゲンを含む涙点より注入可能な涙小管閉鎖剤であって、該単量体が９０％以上であることを特徴とする涙小管閉鎖剤。
２．前記単量体と前記重合体の合計のコラーゲン濃度が１．０％〜５．０％である前項１に記載の涙小管閉鎖剤。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の涙小管閉鎖剤は、従来の涙小管閉鎖剤と比較して、下記の効果を有するので、従来の涙小管閉鎖剤よりも使用しやすくかつドライアイ症状の改善をより確実に行うことができる。
（１）粘度が低いことにより涙小管への注入が容易である。
（２）涙小管へ注入後のコラーゲンは迅速にゲル形成する。
（３）ゲル形成後には太いコラーゲン線維を形成するため、涙小管の閉鎖効果が高まる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】従来の涙小管閉鎖剤用のアテロコラーゲン溶液（原料アテロコラーゲン）のゲル濾過クロマトグラフィー分析結果。
【図２】本発明の涙小管閉鎖剤用の単量体率の高いコラーゲン溶液のゲル濾過クロマトグラフィー分析結果。
【図３】単量体率の低いコラーゲン溶液のゲル濾過クロマトグラフィー分析結果。
【図４】各コラーゲン溶液のゲル形成能の測定結果。
【図５】各コラーゲン溶液のゲル形成時間の算出結果。
【図６】各コラーゲン溶液のゲル形成後のコラーゲン線維状態のＳＥＭ画像。
【図７】各コラーゲン溶液の粘度の測定結果。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
（本発明の涙小管閉鎖剤）
本発明の「涙小管閉鎖剤」は、単量体と重合体を含むコラーゲンを含む涙点より注入可能な涙小管閉鎖剤であって、該単量体が９０％以上であることを特徴とする。
なお、単量体コラーゲンとは、「他のコラーゲン分子との間に架橋が無く、コラーゲン分子の最少単位」を意味する。また、涙小管閉鎖剤に含まれる単量体コラーゲンの割合は、自体公知のゲル濾過クロマトグラフィー分析により算出することができる。
【００１４】
（コラーゲン）
本発明で使用するコラーゲン原料は、体温付近でゲル形成し、濃度が１％以上のときは、単量体率の高いコラーゲンが、単量体率の低いコラーゲンに比べ、速くゲル形成するものであれば特に限定されない。例えば、現在、涙小管閉鎖剤として使用実績のあるウシ皮由来のアテロコラーゲンが好ましい。
本発明で使用するコラーゲン原料の製造方法は、ウシ皮由来のアテロコラーゲン原料より、重合体コラーゲンを除去して得られた単量体率の高いコラーゲン溶液のｐＨを最終的に中性に調整し、コラーゲン濃度を１％以上になるように調整する。
【００１５】
本発明の涙小管閉鎖剤に主成分として含まれる単量体コラーゲン濃度は、９０％以上、好ましくは９３％以上、より好ましくは９５％以上、最も好ましくは９８％以上である。
さらに、本発明の涙小管閉鎖剤に含まれる単量体と重合体の合計のコラーゲン濃度は、１．０％（１０ｍｇ／ｍｌ）〜５．０％（５０ｍｇ／ｍｌ）であり、好ましくは２．０％（２０ｍｇ／ｍｌ）〜４．０％（４０ｍｇ／ｍｌ）であり、より好ましくは２．５％（２５ｍｇ／ｍｌ）〜３．５％（３５ｍｇ／ｍｌ）である。
【００１６】
以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００１７】
（本発明の涙小管閉鎖剤で使用する単量体率の高いコラーゲン溶液の作製）
原料アテロコラーゲン溶液（製造元：株式会社高研）を、溶液（１ｍＭ ＨＣｌ／４６０ｍＭ ＮａＣｌ）に溶解して、０.３％アテロコラーゲン酸性溶液を調製した。この酸性溶液を、２０℃の恒温槽で撹拌し、コラーゲンを部分的にゲル形成させ、さらに遠心分離によってゲルを沈殿させ、沈殿物を取り除いた。
さらに、沈殿物を取り除いた上清の温度を段階的に３７℃まで上げながら、同様の手順を複数回繰り返して、重合体コラーゲンを取り除いた。
重合体コラーゲンを取り除いた沈殿物を１ｍＭＨＣｌに再溶解させ、さらに、外液１ｍＭＨＣｌに透析し、脱塩処理を行った。
次に、凍結乾燥にて乾燥し、その凍結乾燥物を蒸留水にて膨潤させ、１Ｍ ＨＣｌを添加し、均一なコラーゲン溶液になるように溶解して溶解液を得た。
最後に、リン酸緩衝液を該溶解液に加えて中和し、コラーゲン濃度３％の単量体率の高いコラーゲン中性溶液を作製した。
【００１８】
（本発明の涙小管閉鎖剤で使用する単量体率の高いコラーゲン溶液の単量体の含有率の確認）
コラーゲン濃度３％の単量体率の高いアテロコラーゲン中性溶液のゲル濾過クロマトグラフィー分析を行った結果、単量体コラーゲンが９８．６％であり（図２）、原料アテロコラーゲン溶液の７４．４％と比べ、単量体率が高いことを確認した。
さらに、精製初段階で得られた沈殿物である重合体率の高いコラーゲン中性溶液のゲル濾過クロマトグラフィー分析を行った結果、単量体コラーゲン率が５７．５％であることを確認した（図３）。なお、該コラーゲン中性溶液を単量体率の低いコラーゲン（単量体率５７．５％）として以後の実施例に使用した。
【実施例２】
【００１９】
（本発明の涙小管閉鎖剤で使用する単量体率の高いコラーゲン溶液のゲル形成時間の確認）
実施例１で作製した３％の単量体率の高いコラーゲン（単量体９７％）、３％の単量体率の低いコラーゲン（単量体５８％）及び３％の原料アテロコラーゲン溶液（従来の涙小管閉鎖剤で使用しているコラーゲン：７４％）を吸光マイクロプレートリーダーで測定した（図４）。この測定結果の最大勾配時間をゲル形成時間とした（図５）。
図５の結果から明らかなように、コラーゲンの単量体率が高いほど、短時間でゲル形成することを確認した。より詳しくは、本発明の涙小管閉鎖剤で使用する単量体率の高いコラーゲン溶液は、従来の涙小管閉鎖剤の使用していたコラーゲン溶液と比較して、約２倍の速さでゲル形成することができる。
すなわち、本発明の涙小管閉鎖剤は、従来の涙小管閉鎖剤と比較して、コラーゲン溶液のゲル形成に時間がかからないために、涙小管に注入したコラーゲン溶液の一部がゲル形成する前に流れ出することが少ない。
【実施例３】
【００２０】
（本発明の涙小管閉鎖剤で使用する単量体率の高いコラーゲン溶液のゲル形成後の画像解析）
単量体率の異なる各コラーゲン溶液（１％）のゲル形成後のコラーゲン線維のＳＥＭ画像を図６に示す。図６の画像から明らかなように、単量体率が高いほど、太く長い線維を形成していることを確認した。一方、単量体率が低いほど、細く短い線維を形成していることを確認した。
すなわち、単量体比率の高いコラーゲンは、ゲル形成すると、単量体比率の低いコラーゲンと比較して、太いコラーゲン線維を形成するため、涙小管の閉鎖効果が高まる。
【実施例４】
【００２１】
（本発明の涙小管閉鎖剤で使用する単量体率の高いコラーゲン溶液の粘性の確認）
単量体率の異なる各コラーゲン溶液（１％）のゲル形成後の粘度を測定した（図７）。図７の結果から明らかなように、単量体率が高いほど、粘度が低くなることを確認した。また、３％コラーゲン溶液でも同様の結果が得られると考えられる。
すなわち、本発明の涙小管閉鎖剤で使用する単量体率の高いコラーゲン溶液は、従来の涙小管閉鎖剤で使用していたコラーゲン溶液と比較して、粘度が低いことにより涙小管への注入が容易である。
【００２２】
（総論）
上記すべての実施例の結果より、本発明の涙小管閉鎖剤は、従来の涙小管閉鎖剤と比較して、下記の優れた効果を有する。
（１）粘度が低いことにより涙小管への注入が容易である。
（２）涙小管へ注入後のコラーゲンは迅速にゲル形成する。
（３）ゲル形成後には太いコラーゲン線維を形成するため、涙小管の閉鎖効果が高まる。
【産業上の利用可能性】
【００２３】
優れた涙小管閉鎖剤を提供することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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