(57)【要約】【課題】大膜面積を有するセルロース系多孔質中空糸膜を備えても、β−１，３−グルカンの溶出量が少ないウイルス除去フィルターを提供することを目的とする。【解決手段】ハウジングと、該ハウジングに充填されたセルロース系多孔質中空糸膜と、結束材と、を有し、前記セルロース系多孔質中空糸膜の末端は、前記ハウジング内の端部で前記結束材によって固定されており、前記ハウジングの内径は、５０ｍｍ以上１５０ｍｍ以下であり、前記セルロース系多孔質中空糸膜の濾過面積は、１．０ｍ2以上８．０ｍ2以下であり、前記結束材の１．５ＭＰａ加圧試験における変位は、０．５ｍｍ以上２．５ｍｍ以下であり、蛋白濾過試験におけるβ−１，３−グルカンの溶出量が、１０００ｐｇ／ｍＬ以下である、ウイルス除去フィルター。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハウジングと、該ハウジングに充填されたセルロース系多孔質中空糸膜と、結束材と、を有し、前記セルロース系多孔質中空糸膜の末端は、前記ハウジング内の端部で前記結束材によって固定されており、前記ハウジングの内径は、５０ｍｍ以上１５０ｍｍ以下であり、前記セルロース系多孔質中空糸膜の濾過面積は、１．０ｍ2以上８．０ｍ2以下であり、前記結束材の１．５ＭＰａ加圧試験における変位は、０．５ｍｍ以上２．５ｍｍ以下であり、蛋白濾過試験におけるβ−１，３−グルカンの溶出量が、１０００ｐｇ／ｍＬ以下である、ウイルス除去フィルター。
【請求項２】
前記結束材は、ジフェニルメタンジイソシアネート系イソシアネート末端プレポリマー（Ａ）と親水性成分を含むポリオール（Ｂ）とを含むポリウレタン樹脂組成物であり
該ポリウレタン樹脂組成物中の親水性成分含有率が１０％以上２５％以下である、請求項１に記載のウイルス除去フィルター。
【請求項３】
前記ポリウレタン樹脂組成物の６０秒後の混合粘度が、４００ｍＰａ・ｓ以上、２０００ｍＰａ・ｓ以下である、請求項２に記載のウイルス除去フィルター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルス除去フィルターに関する。
【背景技術】
【０００２】
血漿分画製剤やバイオ医薬品の製造においては、ウイルス混入のリスクを避けるため、ウイルス除去工程や、ウイルス不活化工程が必須である。ウイルスを不活化する方法には、加熱処理法や化学薬品処理法（例えば、Ｓｏｌｖｅｎｔ／Ｄｅｔｅｒｇｎｔ（Ｓ／Ｄ）処理）等がある。また、ウイルスを除去する方法には、膜濾過法等がある。膜濾過法は、ふるいわけ原理により、粒子の大きさに応じて分離操作を行うので、分離する対象の化学的特性や熱的性質に拘わらず、大きさのみに応じて、ウイルスを除去できるという利点がある。そのため、近年、ウイルス除去フィルターによる膜濾過法が一般的に採用されている。また、セルロース系ウイルス除去フィルターは素材が親水性の天然素材ゆえ蛋白製剤のフィルターへの吸着が少なく、幅広い製剤の製造において用いられている。
【０００３】
このようなウイルス除去の他、医薬品の製造において、発熱性物質の管理が義務付けられており、現在ではリムルステスト（ＬＡＬ試験）が一般的に用いられている。このＬＡＬ試験をセルロース系ウイルス除去フィルターを用いて製造された医薬品に対して行なった場合、医薬品に実質的に発熱性物質が含まれていなくとも陽性が示される場合がある。このようなＬＡＬ試験において反応する非発熱性物質（以下、「擬陽性物質」ともいう。）としては、β−１，３−グルカンが既に知られており、特許文献１に記載されているようにセルロース系除去フィルターには微量のβ−１，３−グルカンが含まれている。β−１，３−グルカンはＤ−グルコース残基がβ−１，３結合で連なった多糖である。因みにセルロースはβ−１，４−グルカンである。
【０００４】
そのため、セルロース系ウイルス除去フィルターにはβ−１，３−グルカンの製剤への混入抑制が課題として求められる。特に近年の製剤バッチの大規模化により大膜面積を有する中空糸を備えるフィルターも求められているが、大膜面積を有する中空糸を備えるフィルターは従来のフィルターよりβ−１，３−グルカン混入量が増加する問題が発生しやすく、上記課題の重要性がより大きい。
【０００５】
なお、ウイルス除去フィルターについては、特許文献１〜４等が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特公平６−６７４６１号公報
【特許文献２】特許４０２４０４１号公報
【特許文献３】特開２００７−３０７５１３号公報
【特許文献４】特開２００５−０８９４９１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、特許文献１では、擬陽性物質としてβ−１，３−グルカンが考えられるとのみ記載されており、β−１，３−グルカンの低減方法については開示されていない。また、特許文献２、４では、β−１，３−グルカンが擬陽性物質として問題であること自体記載されていない。さらに、特許文献３には、界面活性剤を使用してβ−１，３−グルカンを洗い流すことが記載されているが、この方法は製剤の種類、工程によっては採用できないものである。したがって、大膜面積を有する中空糸を備えるフィルターにおけるβ−１，３−グルカンの溶出量の問題は実質的な解決には至っていない。
【０００８】
本発明は、上記問題点に鑑みてなされたものであり、大膜面積を有するセルロース系多孔質中空糸膜を備えても、β−１，３−グルカンの溶出量が少ないウイルス除去フィルターを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究した結果、結束材の１．５ＭＰａ加圧試験における変位と、蛋白濾過試験におけるβ−１，３−グルカンの溶出量とが所定の範囲内であれば、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
即ち本発明は以下のとおりである。
＜１＞
ハウジングと、該ハウジングに充填されたセルロース系多孔質中空糸膜と、結束材と、を有し、前記セルロース系多孔質中空糸膜の末端は、前記ハウジング内の端部で前記結束材によって固定されており、前記ハウジングの内径は、５０ｍｍ以上１５０ｍｍ以下であり、前記セルロース系多孔質中空糸膜の濾過面積は、１．０ｍ2以上８．０ｍ2以下であり、前記結束材の１．５ＭＰａ加圧試験における変位は、０．５ｍｍ以上２．５ｍｍ以下であり、蛋白濾過試験におけるβ−１，３−グルカンの溶出量が、１０００ｐｇ／ｍＬ以下である、ウイルス除去フィルター。
＜２＞
前記結束材は、ジフェニルメタンジイソシアネート系イソシアネート末端プレポリマー（Ａ）と親水性成分を含むポリオール（Ｂ）とを含むポリウレタン樹脂組成物であり、
該ポリウレタン樹脂組成物中の親水性成分含有率が１０％以上２５％以下である、
前項＜１＞に記載のウイルス除去フィルター。
＜３＞
前記ポリウレタン樹脂組成物の６０秒後の混合粘度が４００ｍＰａ・ｓ以上、２０００ｍＰａ・ｓ以下である、前項＜２＞に記載のウイルス除去フィルター。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、大膜面積を有するセルロース系多孔質中空糸膜を備えても、β−１，３−グルカンの溶出量が少ないウイルス除去フィルターを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】本実施形態のウイルス除去フィルターの一例を示す概略断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明を実施するための形態（以下、「本実施形態」という。）について詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではなく、その要旨を逸脱しない範囲で様々な変形が可能である。
【００１４】
本実施形態に係るウイルス除去フィルターは、ハウジングと、該ハウジングに充填されたセルロース系多孔質中空糸膜と、結束材と、を有し、
前記セルロース系多孔質中空糸膜の末端は、前記ハウジング内の端部で前記結束材によって固定されたものであり、
前記ハウジングの内径は、５０ｍｍ以上１５０ｍｍ以下であり、
前記セルロース系多孔質中空糸膜の濾過面積は、１．０ｍ2以上８．０ｍ2以下であり、
前記結束材の１．５ＭＰａ加圧試験における変位は、０．５ｍｍ以上２．５ｍｍ以下であり、蛋白濾過試験におけるβ−１，３−グルカンの溶出量が、１０００ｐｇ／ｍＬ以下である。
【００１５】
従来、中空糸膜を有するフィルターの製造方法では、高圧蒸気滅菌工程でセルロース中空糸の一部が加水分解し、その時にβ−１，３−グルカンもフィルター充填水中に溶出する。これが中空糸を固定する結束材に何らかの相互作用で吸着する。この吸着は水洗浄では解離しない。この状態で、蛋白や製剤等を流すと吸着したβ−１，３−グルカンが解離して、蛋白液や製剤液中にβ−１，３−グルカンが溶出する。このメカニズムに基づき結束材の組成、性状を種々検討した結果、上記構成を有することによりβ−１，３−グルカンの蛋白製剤等への溶出量を抑制でき、大膜面積フィルターの成型工程収率も維持できる。以下、本発明のセルロース系ウイルス除去フィルターについて具体的に説明する。
【００１６】
図１に本実施形態のウイルス除去フィルターの一例を挙げ、概略断面図を示す。ハウジング４は、図１に示すように、その中にセルロース系多孔質中空糸膜２と、結束材１と、を備える。ハウジング４の内径Ｄは、５０ｍｍ以上１５０ｍｍ以下であり、７０ｍｍ以上１３０ｍｍ以下が好ましい。内径が５０ｍｍ以上であることにより、１．０ｍ2以上の膜面積を確保する中空糸の充填が容易となる。また、内径が１５０ｍｍ以下であることにより、中空糸固定する結束材の強度確保のための多量の充填が不要となり、成形収率がより向上する。なお、ウイルス除去フィルターはハウジングヘッダー３を備えていてもよい。
【００１７】
セルロース系多孔質中空糸膜２は、ハウジング４に充填される。セルロース系多孔質中空糸膜２の末端は、ハウジング４内の端部で結束材１によって固定されている。
【００１８】
本実施形態でいう「セルロース系多孔質中空糸」とは、セルロースを原料として製造された中空糸である。セルロースの種類としては、特に制限はされないが、例えば、再生セルロース、酢酸セルロース、硝酸セルロース等が挙げられる。このなかでも、再生セルロースが典型例である。ここで、「再生セルロース」とは、化学的に処理した天然セルロースから再生したセルロースのことをいう。
【００１９】
本実施形態でいう「多孔質中空糸」とは、細孔が多数存在する多孔質構造で芯が中空になっている糸であり、このような構成により広い膜面積をコンパクトにまとめることができる。そのため分離用の膜として広く用いられており、具体的には多数の中空糸が束ねられた中空糸型フィルターとして、医薬品の製造に広く利用されている。
【００２０】
本実施形態でいう「ウイルス除去フィルター」とは、医薬品の製造に用いられるウイルスを濾過によって除去するフィルターのことであり、医薬品もしくは原薬の製造工程において混入したウイルスを除去する目的等で使用されるが、これに制限されない。その孔径は、医薬品もしくは原薬中に含まれる蛋白質の種類、除去対象ウイルスによって異なるが、通常１０ｎｍ〜１００ｎｍである。
【００２１】
本実施形態で用いるセルロース系多孔質中空糸膜の濾過面積は１．０ｍ2以上、８．０ｍ2以下である。濾過面積が１．０ｍ2以上であることにより、大膜面積を有するセルロース系多孔質中空糸を備えるウイルス除去フィルターとなる。濾過面積が８．０ｍ2以下であることにより、セルロース系多孔質中空糸の本数が多くなりすぎず、セルロース系多孔質中空糸の分散が容易になると共に、ウイルス除去フィルターの成型収率により優れる。
【００２２】
本実施形態のウイルス除去フィルターの蛋白濾過試験におけるβ−１，３−グルカンの溶出量は、１０００ｐｇ／ｍＬ以下であり、８００ｐｇ／ｍＬ以下が好ましく、６００ｐｇ／ｍＬ以下がより好ましい。また、溶出量の下限値は特に制限されず、少ないほど好ましく、より好ましくは０ｐｇ／ｍＬである。溶出量が１０００ｐｇ／ｍＬ以下であることにより、濾過した蛋白製剤中のβ−１，３−グルカンの濃度が低くなり、ＬＡＬ試験や真菌検査で擬陽性になる可能性がより低くなる。β−１，３−グルカンの溶出量は実施例に記載の方法により測定することができる。なお、この値は、実施例に記載の評価法により得られるものであり、実際の医薬品製造工程で検出されるβ−１，３−グルカンの値を指すものではない。蛋白濾過試験におけるβ−１，３−グルカンの溶出量は、結束材の親水性成分が低くなることにより増大し、結束材の親水性成分を高くすることにより減少する傾向にある。
【００２３】
結束材は、ハウジング内で、セルロース系多孔質中空糸膜の末端と、ハウジングの端部とを固定するものである。本実施形態のウイルス除去フィルターで使用する結束材の１．５ＭＰａ加圧試験における変位は、０．５〜２．５ｍｍであり、０．８〜２．０ｍｍが好ましく、１．０〜１．８ｍｍがより好ましい。変位が０．５ｍｍ以上であることにより、結束材が硬すぎず、フィルターの成型工程で剥離しにくい。また、変位が２．５ｍｍ以下であることにより、ウイルス除去フィルターの完全性試験時等の加圧による結束材の変形で中空糸が損傷することを抑制し、リークを抑制することができる。結束材の１．５ＭＰａ加圧試験における変位は、結束材の硬度を高くすることにより増大し、結束材の硬度が低くなることにより減少する傾向にある。
【００２４】
結束材としては、樹脂組成物が好ましく、イソシアネートとポリオールとからなるポリウレタン樹脂組成物がより好ましい。また、溶出物低減や、耐圧性や生産性の観点から、イソシアネート当量とポリオール当量との当量比（α値）は、０．９０〜１．１０が好ましく、０．９５〜１．０５がより好ましい。この当量比（α値）は、ポリオール当量／イソシアネート当量で算出される。なお、ポリオール当量は水酸基価×ポリオール重量／５６．１１で算出され、イソシアネート当量はＮＣＯ含量×イソシアネート重量／４．２で算出される。
【００２５】
上記イソシアネートとしては、分子中にイソシアネート基を含有する化合物であれば特に限定されず、例えば、ヘキサメチレンジイソシアネート等の炭素数２〜１８の脂肪族イソシアネート；イソホロンジイソシアネート等の炭素数４〜１５の脂環式イソシアネート；トルエンジイソシアネート、ジフェニルメタンジイソシアネート（以下、「ＭＤＩ」ともいう。）等の炭素数６〜２０の芳香族イソシアネート；キシリレンジイソシアネート、α，α，α’，α’−テトラメチルキシリレンジイソシアネート等の炭素数８〜１５の芳香脂肪族イソシアネートを挙げることができる。また、イソシアネートとしては、これら一連のイソシアネートにおけるイソシアネート基の一部又は全部について、イソシアヌレート変性、ビュレット変性、アロファネート変性、ウレトジオン変性、ウレトンイミン変性、カルボジイミド変性、オキサゾリドン変性、アミド変性、イミド変性等の変性を行って得られる変性体化合物も挙げることができる。また、上記脂肪族イソシアネート等の一連のイソシアネート又はイソシアネート変性体化合物と、活性水素を有する化合物と、を反応させて得られるイソシアネート基を含有する化合物も用いることができる。ここで、イソシアネートにおける上記「炭素数」とは、分子中のイソシアネート基の炭素原子以外の炭素原子の数をいう。
【００２６】
上記のイソシアネートのなかでも、ＭＤＩ又はＭＤＩの変性体化合物と、活性水素を有する化合物とを反応させて得られるＭＤＩプレポリマーが好ましい。ＭＤＩプレポリマーとしては、特に限定されないが、例えば、ジフェニルメタンジイソシアネート系イソシアネート末端プレポリマー等が挙げられる。このようなＭＤＩプレポリマーを用いることにより、低揮発性であり作業者への負担が少なく、結束材に要求される成型加工性として好適なものが得られ、且つ、結束材の生産性にも優れる。なお、ＭＤＩプレポリマーを得るための反応は、通常行われるウレタン化反応を用いることができる。
【００２７】
上記ポリオールとしては、１分子中に２個以上の水酸基を含有する化合物であれば特に制限されず、例えば、低分子グリコール、ポリエーテルポリオール、ポリエステルポリオール、ポリラクトンポリオール、ポリオレフィンポリオール等の混合物を挙げることができる。
【００２８】
低分子グリコールとしては、特に限定されないが、具体的には、エチレングリコール等の２価のもの又はグリセリン等の３〜８価のもの等が挙げられる。なお、「低分子グリコール」とは、分子量が５０〜１７０のもの等をいう。
【００２９】
ポリエーテルポリオールとしては、特に限定されないが、例えば、上記低分子グリコール等の水酸基を含有する化合物を開始剤とし、これにエチレンオキサイド、プロピレンオキサイド等のアルキレンオキサイドを付加して得られる重合物が挙げられる。より具体的にはプロピレングリコールと、プロピレンオキサイド付加物が挙げられる。
【００３０】
ポリエステルポリオールとしては、特に限定されないが、例えば、ヒマシ油等の上記低分子グリコールとポリカルボン酸との縮合重合により得られる重合物が挙げられる。
【００３１】
ポリラクトンポリオールとしては、特に限定されないが、例えば、低分子グリコール類の重合開始剤に、ε−カプロラクトン等を、有機金属化合物、金属キレート化合物、脂肪酸金属アシル化合物等の触媒の存在下で、付加重合させて得られる重合物が挙げられる。
【００３２】
ポリオレフィンポリオールとしては、特に限定されないが、例えば、ポリブタジエン、又はブタジエンとスチレン若しくはアクリロニトリルとの共重合体の末端に水酸基を導入したポリブタジエンポリオール等が挙げられる。
【００３３】
その他、末端にカルボキシル基及び／又は水酸基を有するポリエステルにアルキレンオキサイド、例えばエチレンオキサイド、プロピレンオキサイド等を付加反応させて得られるポリエーテルエステルポリオールも挙げられる。
【００３４】
ここで「親水性成分」とは、２５℃の水１００質量部に対して１部以上溶解可能な性質を示すものをいう。なお、本実施形態で使用されるポリウレタン中の親水性成分としては、例えば、上記低分子グリコール、上記ポリエーテルポリオールが挙げられる。
【００３５】
また、結束材として使用するポリウレタン樹脂組成物中の親水性成分の含有率は１０〜２５％であることが好ましく、１２〜２０％がより好ましく、１３〜１８％がさらに好ましい。含有率が１０％以上であることにより結束材へのβ−１，３−グルカンの吸着量が減少し、蛋白濾過試験におけるβ−１，３−グルカンの溶出量がより減少する傾向にある。また、２５％以下であることにより、親水性成分が吸湿した場合でも，ポリウレタン樹脂組成物に残留気泡等の外観異常が見られにくい傾向にある。また、結束材の加圧試験における変位量が小さくなり、成型収率が上昇する傾向にある。
【００３６】
ポリウレタン樹脂組成物の６０秒後の混合粘度は４００ｍＰａ・ｓ以上２０００ｍＰａ・ｓ以下が好ましく、６００ｍＰａ・ｓ以上１８００ｍＰａ・ｓ以下がより好ましく、８００ｍＰａ・ｓ以上１６００ｍＰａ・ｓ以下がさらに好ましい。ポリウレタン樹脂組成物の混合粘度が２０００ｍＰａ・ｓ以下であることにより、遠心成型時、ハウジングへの樹脂組成物の流入が早く、中空糸間にポリウレタン樹脂組成物が入らない箇所（鬆）ができにくいため、検査におけるリークが抑制される傾向にある。また、ポリウレタン樹脂組成物の混合粘度が４００ｍＰａ・ｓ以上であることにより、遠心成型時、毛細管現象で中空糸間に樹脂組成物が吸い上げられることが抑制でき、濾過面積が小さくなることが回避できる傾向にある。なお、ポリウレタン樹脂組成物の混合粘度は実施例に記載の方法により測定することができる。
【００３７】
結束材に対するβ−１，３−グルカン吸着量は５００ｐｇ／ｍＬ以下が好ましく、４００ｐｇ／ｍＬ以下がより好ましく、３００ｐｇ／ｍＬ以下がさらに好ましい。吸着量が５００ｐｇ／ｍＬ以下であることにより、蛋白濾過試験におけるβ−１，３−グルカン溶出量が１０００ｐｇ／ｍＬ以下となりやすい傾向にある。また、結束材に対するβ−１，３−グルカン吸着量の下限は特に制限されないが、低いほど好ましく、より好ましくは０ｐｇ／ｍＬである。なお、β−１，３−グルカン吸着量は実施例に記載の方法により測定することができる。
【００３８】
次にウイルス除去フィルターの製造方法について説明する。結束材でハウジングに固定した時の濾過に利用できる中空糸の長さを元に中空糸の内径から１本当たりの膜面積を求め、所定の膜面積になるよう中空糸の本数を計算する。それを重量に換算し、中空糸の束をつくる。延伸成型前に中空糸束の両端をエポキシで目止めし、その後、ハウジングに入れて結束材を遠心成型により両端に注入する。その後、所定のウイルス除去性能があるか検査するため、完全性試験を実施する（方法例は特許３１５３８２９号公報参照）。ヘッダー等（図１の符号３参照）部品を組み付けた後、水充填し、リーク検査する。その後、ノズルキャップ等部品を取付け、滅菌袋に入れた後、滅菌機で滅菌する。これにより、上記ウイルス除去フィルターを得ることができる。
【実施例】
【００３９】
以下の実施例により本実施形態をさらに詳細に説明するが、本実施形態は実施例によって限定されるものではない。なお、測定方法、評価方法等は下記の通りである。
【００４０】
（１）ハウジングの内径
ハウジングの内径とは、図１のＤで示される長さをいう。実施例及び比較例では、内径１００ｍｍ、長さ２４０ｍｍの円筒状のハウジングを用いた。なお、図１において、Ａで示す箇所を一次側、Ｂで示す箇所を二次側という。
【００４１】
（２）セルロース系多孔質中空糸の濾過面積
セルロース系多孔質中空糸の濾過面積は、以下の式で表される。実施例及び比較例では、中空糸内径（ｄ）１５ｎｍ、中空糸有効長（ｌ）１９４ｍｍとし、濾過面積が４．０ｍ2となるよう中空糸本数（ｎ）を調整した。
濾過面積＝１／４・πｄ2×ｌ×ｎ
ｄ：中空糸内径
ｌ：中空糸有効長（実際に濾過に使用できる部分の長さ）
ｎ：中空糸本数
【００４２】
（３）蛋白濾過試験におけるβ−１，３グルカン溶出量の測定方法
以下の方法で蛋白溶液を濾過し、ろ液中のβ−１，３グルカン溶出量（濃度）を評価した。
ａ）５％ＢＳＡ／５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）の作製
アルブミン（粉末）を５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解して、５％ＢＳＡ（Bovine  Serum  Albumin）溶液とした。アルブミン（粉末）は、和光一級アルブミン，ウシ血清由来、ｐH５．２を用いた。
【００４３】
ｂ）濾過試験
実施例及び比較例で作製したウイルス除去フィルターの二次側から充填液を全量抜き、１Ｌ／ｍ2の限外濾過後の純水を一次側に通液してエアー抜きをすると共に、セルロース系多孔質中空糸を洗浄した。この際、セルロース系多孔質中空糸１本あたり（１０Ｌ／ｍ2）の純水濾過を実施した。なお、濾過条件としては、圧縮空気を使用したＤｅａｄ−ｅｎｄ方式を採用し、濾過圧力は３０ｋＰａとした。
次いで、作製した５％ＢＳＡ／５０ｍＭリン酸緩衝液をセルロース系多孔質中空糸１本あたり１Ｌ／ｍ2濾過した。濾過条件としては、圧縮空気を使用したＤｅａｄ−ｅｎｄ方式を採用し、濾過圧力は３０ｋＰａとした。このとき、得られた濾液を０．２５Ｌ／ｍ2ずつ分画して採取した。
【００４４】
ｃ）β−１，３−グルカン溶出量（濃度）の測定方法
実施例及び比較例で作製したウイルス除去フィルターから得られた濾液を分画採取したものについて、グルカテル（生化学工業製）を使用して、ウェルリーダーＳＫ６０３で、分画ごとのβ−１，３−グルカンの溶出量(濃度)を測定した。分画ごとの測定値を平均して、β−１，３−グルカン溶出量（濃度）を求めた。
【００４５】
（４）結束材の１．５ＭＰａ加圧試験における変位の測定方法
以下の方法で、結束材の１．５ＭＰａ加圧時変位量を評価した。
１）糸無しフィルターの作製
内径１００ｍｍのハウジングを準備し、実施例及び比較例で用いたポリウレタン樹脂組成物をハウジングに流し込み、厚み２３ｍｍ、直径１００ｍｍのポリウレタン樹脂組成物を含む評価サンプル（糸無しフィルター）をそれぞれ３本作製した。ポリウレタン樹脂組成物が硬化するまで放置し、硬化後さらに、４５℃で３時間養生を行った。
【００４６】
２）加圧試験
作製した評価サンプルに、ＳＵＳ製のヘッダーを取付けた。ＳＵＳ製ヘッダーに空気が入らないように水を充填し、ＳＵＳ製のヘッダーを水圧試験機に接続した。圧力計を確認しながら、水圧試験機にて結束材面に徐々に水圧を掛けていき、１．５ＭＰａまで加圧し、そのときの結束材面中央部の変形を変位量測定用ダイヤルゲージで測定した。３本測定し、その平均を計算した。
【００４７】
（５）結束材に対するβ−１，３−グルカン吸着量の測定方法
２００ｍＬ三角フラスコに、セルロース系多孔質中空糸２．０ｇと、実施例及び比較例で用いたポリウレタン樹脂組成物から作製したウレタンチップ（寸法５ｍｍ×５ｍｍ×厚さ２ｍｍ）５．０ｇと、を入れ、オートクレーブを使用し１２１℃で４０分間処理した。前記ポリウレタンチップを三角フラスコから取り出し、純水で洗浄した。洗浄後の前記ポリウレタンチップを５０ｍＬビーカーに入れ、５％ＢＳＡ溶液１０ｍＬに浸漬撹拌後、２時間放置した。その後、前記ポリウレタンチップを取り出し、５％ＢＳＡ溶液中のβ−１，３−グルカン量をグルカテル（生化学工業製）を使用し、ウェルリーダーＳＫ６０３で測定した。
【００４８】
（６）ウイルス除去フィルターの成型収率の算出方法
実施例及び比較例のウイルス除去フィルターをそれぞれ９６本作製し、完全性試験及びリーク検査に合格した最終本数を確認し、ウイルス除去フィルター成型収率を算出した。工業的に生産するためには成型収率が７０％以上必要であることが好ましい。
ウイルス除去フィルター成型収率（％）＝最終本数／９６本×１００
【００４９】
（７）完全性試験
完全性試験は、実施例及び比較例のウイルス除去フィルターの製造工程の途中で実施した。遠心成型、ポリウレタン樹脂組成物の養生をした後、SUS製ヘッダーを取り付け、２次側ノズルにパーフルオロカーボン液を循環して流し、１次側ノズルの片方に栓をし、もう一方の一次側ノズルに窒素配管を接続した。その後、所定圧力まで昇圧し、窒素の供給を停止した。その後、所定時間の圧力低下値を読み、規格値と比較し合否判定をした。
【００５０】
（８）リーク検査
リーク検査は、実施例及び比較例のウイルス除去フィルターを用いた。完全性試験後、真空乾燥機でパーフルオロカーボン液を飛ばし、フィルターに水を充填した後、フィルターの１次側ノズルの片方に栓をし、もう一方の１次側ノズルに空気を接続し、１１８ｋＰａの圧力をかけた。中空糸から気泡が発生しないか３０秒確認し、気泡が発生したら不合格とした。
【００５１】
（９）ポリウレタン樹脂組成物の混合粘度の測定方法
実施例及び比較例で用いたポリウレタン樹脂組成物の混合粘度は、以下の方法により測定した。先ず、２５℃に温度調整したイソシアネート成分と硬化剤とを、実施例及び比較例記載の質量比となるよう計量した後、スパチュラを用いて３０秒間手動で攪拌し、各ポリウレタン樹脂組成物を得た。次いで、得られたポリウレタン樹脂組成物のうちの１００ｇをポリプロピレン製のカップに仕込み、２５℃の雰囲気下において、Ｂ型回転粘度計を用い、中空糸膜間への充填性の一指標である混合(攪拌開始)から６０秒後のポリウレタン樹脂組成物の混合粘度を測定した。
【００５２】
（１０）ポリウレタン樹脂組成物の硬度の測定方法
実施例及び比較例で用いたポリウレタン樹脂組成物の硬度は、以下の方法により測定した。先ず、２５℃に温度調整したイソシアネート成分と硬化剤とを、実施例及び比較例記載の質量比となるよう計量し、スパチュラを用いて３０秒間手動で攪拌した後、減圧脱泡（１０〜２０ｋＰａで１分間）を行い、ポリウレタン樹脂組成物を得た。次いで、このポリウレタン樹脂組成物（７５ｇ）をポリプロピレン製のカップに仕込み、これを４５℃で２日間静置キュアした後に脱型し、ポリウレタン樹脂硬化物（硬度測定サンプル）を得た。この硬度測定サンプルを用い、２５℃の温度条件下で、測定瞬間及び測定瞬間から１０秒後のＪＩＳ−Ｄ硬度を測定した。
【００５３】
本実施例、比較例に使用したポリウレタン樹脂組成物は以下のイソシアネート成分、ポリオール成分を混合したものを使用した。
【００５４】
主剤製造例１＜ポリイソシアネート成分「Ａ−１」の製造＞：
温度計、攪拌機、窒素シール管、冷却管を備えた２Ｌサイズの４つ口フラスコの内部を窒素置換した。これに、下記ＭＤＩ（１）を７４７ｇ、下記ポリオール（１）を２５３ｇ仕込み、撹拌を開始した。窒素雰囲気下、７０℃で３時間混合撹拌しながら反応させて、本発明のポリイソシアネート成分（Ａ）に相当するジフェニルメタンジイソシアネート系イソシアネート末端プレポリマー「Ａ−１」を得た。該プレポリマーのＮＣＯ含量は１９．０質量％、２５℃に於ける粘度は１７００ｍＰａ・ｓであった。
【００５５】
主剤製造例２＜ポリイソシアネート成分「Ａ−２」の製造＞：
温度計、攪拌機、窒素シール管、冷却管を備えた２Ｌサイズの４つ口フラスコの内部を窒素置換した。これに、下記ＭＤＩ（２）を６８８ｇ、下記ポリオール（２）を３１２ｇ仕込み、撹拌を開始した。窒素雰囲気下、７０℃で３時間混合撹拌しながら反応させて、本発明のポリイソシアネート成分（Ａ）に相当するジフェニルメタンジイソシアネート系イソシアネート基末端プレポリマー「Ａ−２」を得た。該プレポリマーのＮＣＯ含量は１６．７質量％、２５℃に於ける粘度は３０００ｍＰａ・ｓであった。
【００５６】
〔製造例１：ポリオール成分（Ｂ−１）の調製〕
下記のポリオール（３）を４８．０質量部と、ポリオール（４）を２０．０質量部と、ポリオール（５）を２５．０質量部と、ポリオール（６）を７．０質量部と、を均一混合してポリオール成分（Ｂ−１）を調製した。得られたポリオール成分において、水酸基価及び粘度は表１に示すとおりであった。
【００５７】
〔製造例２〜６：ポリオール成分（Ｂ−２）〜（Ｂ−６）の調製〕
原料の組成を表１に記載の組成としたこと以外は製造例１と同様にしてポリオール成分（Ｂ−２）〜（Ｂ−６）を得た。
【００５８】
原料として用いたＭＤＩ（１）〜（２）およびポリオール（１）〜（６）はそれぞれ下記のとおりである。得られた各ポリオール成分において、水酸基価及び粘度は表１に示すとおりであった。
【００５９】
ＭＤＩ（１）：４，４’−ジフェニルメタンジイソシアネートをカルボジイミド変性したもの、イソシアネート基含有量＝２９．５（質量％）。
ＭＤＩ（２）：４，４’−ジフェニルメタンジイソシアネートをカルボジイミド変性したもの、イソシアネート基含有量＝３０．０（質量％）。
ポリオール（１）：ヒマシ油、平均官能基数＝２．７、平均水酸基価＝１６０（ｍｇＫＯＨ／ｇ）、２５℃に調整した水１００質量部に対して１質量部も溶解しない
ポリオール（２）：分子量７００のポリプロピレングリコール、平均官能基数＝２．０、平均水酸基価＝１６０（ｍｇＫＯＨ／ｇ）、２５℃に調整した水１００質量部に対して２０質量部が溶解した。
ポリオール（３）：「＃１９４４Ｕ（商品名）」（伊藤製油（株）製）、水酸基価＝１１５ＫＯＨｍｇ／ｇ、ヒマシ油変性ポリオール、２５℃に調整した水１００質量部に対して１質量部も溶解しなかった。
ポリオール（４）：「＃１２９６Ｘ（商品名）」（伊藤製油（株）製）、水酸基価＝２６７ＫＯＨｍｇ／ｇ、ヒマシ油変性ポリオール、２５℃に調整した水１００質量部に対して１質量部も溶解しなかった。
ポリオール（５）：「ポリエーテルポリオールＳＰ−６００（商品名）」（ＡＤＥＫＡ（株）製）、水酸基価＝５５０ＫＯＨｍｇ／ｇ、２５℃に調整した水１００質量部に対して２０質量部が溶解した。
ポリオール（６）：Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス［２−ヒドロキシプロピル］エチレンジアミン、水酸基価＝７６０ｍｇＫＯＨｍｇ／ｇ、２５℃に調整した水１００質量部に対して２０質量部が溶解した。
【００６０】
【表１】
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２５℃に温度調整したイソシアネート成分Ａとポリオール成分Ｂを、実施例及び比較例の質量比で、合計質量が１００ｇとなるように混合して混合液を得た。
【００６１】
〔実施例１〕
特許４０２４０４１号公報の実施例１に記載の方法で平均透水孔径１５ｎｍのセルロース系多孔質中空糸を得た。このセルロース系多孔質中空糸を糸長２２０ｍｍに切り揃え、膜面積が４．０ｍ2になるよう中空糸本数を調整し、両端をエポキシで目止めした。その後、内径１００ｍｍのハウジングに、２５℃に温度調整したイソシアネート成分Ａ−１とポリオール成分Ｂ−１とを、表２記載の質量比で混合し、混合液（ポリウレタン樹脂組成物）を得た。このポリウレタン樹脂組成物を用いて、遠心成型によりハウジングに固定した。その後、養生乾燥、目止め部切断をおこない、上述の、完全性試験（設定圧１．４５ＭＰａ）及びリーク検査を実施した。そのときの成型収率は９３．８％と良好であった。なお、親水性成分含有率１５％のポリウレタン樹脂組成物を使用した。
このフィルターを用い、蛋白濾過試験におけるβ−１，３−グルカン溶出量を測定した結果、４８０ｐｇ／ｍＬと低い値であった。使用したポリウレタン樹脂組成物の加圧試験における変位は１．３ｍｍ、硬度は７６→７３、β−１，３−グルカン吸着量は１２０ｐｇ／ｍＬであった。
【００６２】
〔実施例２、３、比較例１〜３〕
用いたイソシアネート成分Ａ、ポリオール成分Ｂの種類と比率のみ変更して、ポリウレタン樹脂組成物を得た。そのほかは実施例１と同様の操作を行い、実施例１と同様に４．０ｍ2フィルターを組み立てた。ポリウレタン樹脂組成物は表２に記載の成分の組合せのものを使用した。親水性成分含有率が１８％、２１％の実施例２，３は蛋白濾過試験におけるβ−１，３−グルカンの溶出量が４５０、４３０、ｇ／ｍＬと低い値を示した。また、フィルター成型収率も８７．５％、７８．１％と工業生産可能なレベルであった。一方、親水性成分含有率が０％の比較例１は蛋白濾過試験におけるβ−１，３−グルカンの溶出量が６５００ｐｇ／ｍＬと非常に多かった。親水性成分含有率が３１％の比較例２は蛋白濾過試験におけるβ−１，３−グルカンの溶出量は４５０ｐｇ／ｍＬと低いもののフィルター成型収率が０％と著しく低かった。また、親水性成分含有率が９％の比較例３は比較例１と比較し、蛋白濾過試験におけるβ−１，３−グルカンの溶出量が低くはなっているものの、製剤の濾過にそのまま使用できるレベルではなかった。
【００６３】
【表２】
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【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明によって、血漿分画製剤やバイオ医薬品等の生物由来製剤に混入の恐れのあるウイルスを除去するフィルターとして産業上の利用可能性を有する。具体的には、大膜面積のセルロース系ウイルス除去フィルターを用いた医薬品の製造において、β−１，３−グルカン混入のより少ない医薬品を提供することが可能になり、医薬品製造における品質管理を容易にすることができる。
【符号の説明】
【００６５】
Ｄ：ハウジングの内径
１：結束剤
２：中空糸
３：ハウジングヘッダー
４：ハウジング
【図１】
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