(57)【要約】      （修正有）【課題】生きた細胞をフィルタ上で単離するかまたはその遺伝子材料を抽出するための装置および方法の提供。【解決手段】空気入口を有する区画（１０２）の下方開口部に少なくとも一時的にフィルタ（１０８）を取り付ける工程と、細胞を含む液体を前記区画に挿入する工程と、針不透過性に、少なくとも一時的に前記区画開口部に取り付けて、前記フィルタを前記針と前記区画の前記内部空間との間に配置する工程と、周囲圧力と比べて陰圧になった真空管の栓を前記針で穿孔する工程と、前記真空管からの陰圧によって前記フィルタに通して前記液体を吸引し、前記フィルタが前記細胞を保持する工程とを含むことを特徴とする。【選択図】図１
2014060996.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
固定された細胞もしくは生きた細胞をフィルタ上で単離するかまたは前記生きた細胞から遺伝子材料を抽出するための装置であって、
前記細胞を含む液体を入れるための内部空間と、下方開口部と、空気入口とを有する区画と、
前記区画にそれぞれ運動するように構成される可動手段と、
前記区画の開口部および／または前記可動手段によって維持されるフィルタは、液体を前記フィルタに通すときに前記細胞を保持するように設計され、
前記区画開口部と、少なくとも一時的に、不透過性の単一ユニットを形成する針と、前記フィルタは前記針と前記区画の前記内部空間の間に位置し、前記針は、前記フィルタを通して前記液体を吸引するため周囲圧力に関連する陰圧と共に真空管のプラグを貫通するよう設計され、
前記区画と前記針を包囲する保護シリンダとの間の接続手段は、前記フィルタを通して前記液体の吸引している間前記真空管の少なくとも一部分を囲むように構成され、
前記可動手段と前記区画は、前記フィルタに力を加えおよび前記フィルタを通して前記液体の吸引したあと前記フィルタを解放するためにそれぞれ運動するように構成されることを特徴とする装置。
【請求項２】
少なくとも一時的に、前記保護シリンダを備える請求項１に記載の装置。
【請求項３】
前記接続手段は一時的なものであり、かつ前記真空管と一緒に前記保護シリンダを取り外すことを可能にする、請求項１または２のいずれか一項に記載の装置。
【請求項４】
前記保護シリンダは、前記接続手段に面する前記保護シリンダの開口部を密封する可動フィルムと、前記可動フィルムを取り外した後に、前記真空管を前記保護シリンダに挿入するように構成された開口部とを備える、請求項１〜３のいずれか一項に記載の装置。
【請求項５】
前記区画の前記下方開口部に一時的に接続されるように構成されたサージカルスチール製の可動フィルタ支持体をさらに備える、請求項１〜４のいずれか一項に記載の装置。
【請求項６】
前記フィルタ支持体の厚さは、前記フィルタ支持体が走査可能であるように適合されている、請求項５に記載の装置。
【請求項７】
前記フィルタ支持体は識別器を有する、請求項５または６のいずれか一項に記載の装置。
【請求項８】
不浸透性および取り外し可能なように前記区画に取り付けられた取り外し可能な末端部を更に含み、前記末端部は前記可動手段および前記区画の相対運動を制限するよう構成されたことを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載の装置。
【請求項９】
生きた細胞をフィルタ上で単離するかまたは前記生きた細胞の遺伝子材料を抽出するための方法であって、この方法は、
フィルタを空気入口をさらに有する区画の下方開口部に一時的に取り付けるか、前記区画それぞれで運転するよう構成された可動手段に取り付けるスッテプ、
前記細胞を含む液体を前記区画に挿入するステップと、
針を、不透過性に、少なくとも一時的に前記区画開口部に取り付けて、前記フィルタを前記針と前記区画の前記内部空間との間に配置するステップと、
保護シリンダを前記区画に少なくとも一時的に固定し、その後、前記保護シリンダが前記針を包囲するステップと、
前記針を用いて、周囲圧力と比べて陰圧になった真空管の栓を穿孔し、前記真空管を、前記穿孔工程の間、前記保護シリンダ中に挿入するステップと、
前記真空管からの前記陰圧によって前記フィルタを通して前記液体を吸引し、前記フィルタが前記細胞を保持するステップと、
前記フィルタに力を加えおよび前記フィルタを解放するために前記可動手段および前記区画それぞれを運転するステップと
から構成されることを特徴とする方法。
【請求項１０】
前記保護シリンダを前記真空管と一緒に取り外すステップを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記保護シリンダは、前記接続手段に面する前記保護シリンダの開口部を密封する可動フィルムを備え、前記真空管を前記保護シリンダに挿入する前に前記可動フィルムを取り外すステップをさらに含む、請求項９または１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記吸引のステップおよび前記可動手段と前記フィルタを解放する前記区画それぞれを運転するステップの間に、不浸透性および取り外し可能なように前記区画に取り付けられた取り外し可能な末端部を取り外すスッテプを更に有し、前記末端部は前記可動手段と前記区画の関連する動作を制限するよう構成されたことを特徴とする請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、全ての細胞解析（細胞学、免疫化学、ＦＩＳＨ検査など）を実施するために生きた細胞もしくは固定された細胞をフィルタ上で単離および／もしくは培養するか、またはフィルタ上で単離された生きた細胞もしくは固定された細胞から必要に応じて増幅された遺伝子材料を抽出するための装置および方法に関する。本発明は、特に、液体（とりわけ、血液）の中に存在する特定の細胞を単離および／もしくは培養すること、またはこれらの特定の細胞の遺伝子材料を抽出することに応用される。
【背景技術】
【０００２】
特定の血液細胞（例えば、腫瘍細胞または栄養膜細胞）は非常に少ない割合でしか存在しないため、細胞学的解析を行なう前に計数しなければならない。
【０００３】
ホルムアルデヒドをベースにした結合緩衝液を血液試料に適用して、所望の細胞を固定した後、得られた液体を多孔質フィルタに通すことが知られている。次に、このフィルタを用いて、実験室において顕微鏡下でフィルタ上の所望の細胞を検討する。しかしながら、この手順を用いて生きた細胞を得ることはできない。
【０００４】
そこで、本発明者は、生きた細胞が得られれば、特定のマーカーを同定することができ、腫瘍または栄養膜細胞の遺伝子異常を診断する際に、分子生物学の技術、細胞遺伝学の技術およびＦＩＳＨ（「蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション」の頭字語）の技術を良い条件で適用することができるであろうと判断した。
【０００５】
本発明は、標準的な実験室検査に合った条件で、生きた細胞を回収し、その後、好適な増殖因子が存在する適切な培地中で培養することを可能にすることによって、これらの欠点を解消し、この要求に応えることを目的とする。
【０００６】
本発明は、フィルタ上で単離された細胞から必要に応じて増幅された遺伝子材料の抽出と、標的治療に対する感受性と抵抗性または遺伝子異常に関する変動および遺伝子発現レベルの検出にも関する。
【０００７】
本発明は、特に、液体（とりわけ、血液）の中に存在する特定の細胞のＤＮＡまたはＲＮＡの回収と潜在的な均一増幅に応用される。
【０００８】
例えば、文献ＰＣＴ／ＦＲ２００６／０００５６２号から、ホルムアルデヒドをベースにした結合緩衝液を血液試料に適用して、求める所望の細胞を固定した後、得られた液体を多孔質フィルタに通すことが知られている。次に、このフィルタを実験室において顕微鏡下で解析し、細胞をフィルタ上で検出する。次に、細胞をフィルタ上で採取して、解析（例えば、遺伝子解析）を行なうことができる。
【０００９】
しかしながら、この手順は、必要とされる時間、材料および作業精度のために、合理的なコストで大規模に再現することができない。そこで、大規模にかつ低コストで再現すれば、腫瘍細胞と栄養膜細胞の両方に対して分子生物学解析を行なうことができるであろう。さらに、ホルムアルデヒドで細胞を固定すると、良質な遺伝子材料を得ることができず、ＤＮＡは一部分解されて、周囲のタンパク質との架橋を形成し、ＲＮＡ抽出はほぼ不可能になる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、標準的な実験室検査に合った条件下で、検討中の細胞から細胞材料（特に、ＲＮＡおよびＤＮＡ）の大部分を良好な状態で回収することを可能にすることによって、これらの欠点を解消し、この要求に応えることを目的とする。本発明により、ホルムアルデヒドを含むまたは含まない固定剤を用いて固定された細胞を単離することができるようになることにも留意すべきである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
この目的のために、本発明は、一態様によると、固定された細胞または生きた細胞をフィルタ上で単離するための装置であって、
−該細胞を含む液体を入れるための内部空間と、下方開口部と、空気入口とを備える区画と、
−液体をフィルタに通すときに該細胞を保持するための、該区画開口部と少なくとも一時的に単一ユニットを形成するフィルタと、
−該区画開口部と、少なくとも一時的に、不透過性の単一ユニットを形成する針と、を備え、前記フィルタは、前記針と区画の内部空間との間に位置し、該針は、該フィルタを通して液体を吸引するために周囲圧力と比べて陰圧になった真空管の栓に穴を開けるような設計になっていることを特徴とする、装置に関する。
【００１２】
これらの特徴のおかげで、この装置は、目的の固定された生きた細胞を、もしくは、細胞学的な特性を解析するための実験、および任意の他の細胞試験のための細胞遺伝学的実験を行なうための培養に完全に合った状態の生きた細胞を、フィルタ上で単離および回収すること、またはそれらから遺伝子材料を抽出することができる。
【００１３】
この回収はフィルタ上で直接行ない、所望の細胞が失われることはほとんどない。こうして、検討中の細胞の大部分を、低いコストで、良好な状態で、実験室での通常の培養に合った条件下で回収する。単離された細胞は、培養する前または培養した後に、細胞実験または分子生物学実験に用いることができる。
【００１４】
本発明を構成する装置により、特定の細胞の細胞材料を、例えば、
−該特定の細胞の直径と他の細胞の直径の中間の直径の微細孔を有するフィルタに、液体の大半および該他の細胞を通す濾過ステップと、
−溶解ステップ（これに次ぐ、該区画内でのＤＮＡおよび／またはＲＮＡ増幅の有無は問わない）と、
−溶解された細胞の遺伝子材料をフィルタ上で回収するステップとを終了した後に、迅速かつ効率的に回収することもできる。
【００１５】
本発明を構成する装置は、多くの利点を有する：１／ラックの上でまたは装置を手に持ったまま濾過を行ない、時間と材料をかなり節約することができる（特に、真空ポンプやアダプターボックスを使用しなくて済む）。
２／無菌フード内で濾過を行なうことができる。
３／装置を斜めにして、さらには、ほぼ水平にして、濾過を行なうことができる。
４／条件が完全に標準化され、試料採取管が所定の真空吸引力を用いて標準化された方法で提供される。
５／使用の条件が安全条件の強化を含むので、装置を無菌フード内で完全に操作することができる。その上、回収された血液は操作者と接触しないので、真空管が満たされたら、それを普通の血液試料採取管のように取り外すことができる。
【００１６】
特定の特徴によれば、上述した本発明の装置は、区画と、針を包囲し、かつ液体をフィルタの方に吸引する間、少なくとも部分的に真空管を包囲する作りになっている保護シリンダとの間の接続手段をさらに備えている。
【００１７】
このような構成のおかげで、ユーザは、誤って針で刺すことから保護される。さらに、保護シリンダをガイドとして用いることで、真空管の位置決めがより簡単になっている。
また、真空管は、吸引の間、所定の位置により強固に保持され、それにより、真空管が動いたり、ずれたりして、空気が真空管の栓の中で針の横を通って真空管に入り込むのを防いでいる。ユーザが誤って針に触れることがないので、ユーザによる試料汚染の危険は最小限に抑えられる。
【００１８】
特定の特徴によれば、上で簡潔に記載したような本発明の装置は、少なくとも一時的に、該保護シリンダを備えている。
【００１９】
このようにして、針と、試料と、ユーザの保護を確保している。
【００２０】
特定の特徴によれば、該接続手段は一時的なものであり、真空管や針と一緒に保護シリンダを取り外すことが可能である。
【００２１】
このようにして、保護シリンダを区画から分離した後に、針とユーザの保護を保証している。
【００２２】
特定の特徴によれば、該保護シリンダは、接続手段に面するその開口部を密封する取外し可能なフィルムを備えており、真空管は、この開口部を通して保護シリンダに挿入される。
【００２３】
このような構成のおかげで、ユーザがフィルムを取り外した後に、真空管が挿入される。このフィルムは、ユーザと針からのより優れた保護を与えるだけでなく、試料が汚染される危険も減らす。
【００２４】
特定の特徴によれば、本発明の装置は、区画の下方開口部に一時的に接続されるように作られたサージカルスチールでできた取外し可能なフィルタ支持体をさらに備えている。
【００２５】
このような構成のおかげで、フィルタをそのホルダーとともに取り外し、フィルタ上に回収された細胞を培養もしくは解析するかまたはそれらから遺伝子材料を抽出することができる。その上、スチールは、フィルタ上に回収された細胞に対して毒性がない。
【００２６】
特定の特徴によれば、該リングは、走査可能な厚さに設計されている。
【００２７】
特定の特徴によれば、該リングは識別器を有する。
【００２８】
こうして、この識別器、ひいては、回収された細胞を、患者と関連付けることができる。ミスはこのようにして防がれる。
【００２９】
特定の特徴によれば、本発明の装置は、フィルタ支持体に力を加えて、該フィルタ支持体を解放するための該区画に対する移動手段をさらに備えている。
【００３０】
濾過モジュール全体は無菌状態であり、分子生物学に通常適用される基準を用いて製造されるので、フィルタ上の生きた細胞または遺伝子材料のいかなる汚染または劣化も防ぐことができる。区画の中身は、適切な層流フード下で操作する間、無菌状態に保たれる。
こうして、細胞を単離および培養するかまたはそれらの遺伝子材料を解析するための全てのステップを無菌条件下で行なうことができる。
【００３１】
特定の特徴によれば、本発明の装置は、不透過性でかつ取外し可能であるように区画に取り付けられた取外し可能な先端部を備えている。この取外し可能な先端部は、該力を加えて、該フィルタ支持体を解放することを可能にする移動手段と区画の相対運動を制限する作りになっている。
【００３２】
このような構成のおかげで、フィルタホルダーは所定の位置に確実に保持される。さらに、この先端部は、フィルタホルダーをしぶきと汚染から保護することができる。
【００３３】
こうして、濾過の間、フィルタを保持し、その後、先端部を取り外し、移動手段と区画をそれぞれ動かして力を加えることで、フィルタ支持体を解放することにより、フィルタを解放して、回収することができる。
【００３４】
第２の態様によれば、本発明は、生きた細胞をフィルタ上で単離するかまたはその遺伝子材料を抽出するためのプロセスであって、
−空気入口をさらに有する区画の下方開口部に少なくとも一時的にフィルタを取り付ける工程と、
−該細胞を含む液体を該区画に挿入する工程と、
−針を、不透過性に、少なくとも一時的に該区画開口部に取り付けて、フィルタを針と区画の内部空間との間に配置する工程と、
−周囲圧力と比べて陰圧になった真空管の栓を該針で穿孔する工程と、
−真空管からの陰圧により、該フィルタを通して液体を吸引し、該フィルタが該細胞を保持する工程と、を含むことを特徴とする、プロセスに関する。
【００３５】
特定の特徴によれば、上で簡潔に説明したような本発明のプロセスには、さらに、
−保護シリンダを少なくとも一時的に区画に固定し、その後、該保護シリンダが針を包囲する工程と、
−穿孔ステップの間、真空管を保護シリンダに挿入する工程と、が含まれる。
【００３６】
このプロセスの利点、目的および特定の特徴は、上で簡潔に説明したような本発明の装置の利点、目的および特定の特徴と同様であるので、ここでは繰り返さない。
【００３７】
本発明の他の利点、目的および特徴は、添付の図面に関する以下の記述から明らかになるであろう。なお、この記述は、説明を目的としたものであって、決して網羅的なものではない。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】本発明を構成する装置の第１の実施形態の部品の組立ての概略斜視図である。
【図２Ａ】使用前の装置の第１の実施形態を切断した概略断面図である。
【図２Ｂ】使用前の装置の第１の実施形態を切断した概略断面図である。
【図２Ｃ】使用前の装置の第１の実施形態を、図２Ａの切断面と垂直に交わる切断面で切断した概略断面図である。
【図２Ｄ】使用前の装置の第１の実施形態を、図２Ｂの切断面と垂直に交わる切断面で切断した概略断面図である。
【図３Ａ】本発明を構成する装置の第１の実施形態の実行ステップの概略立面図である。
【図３Ｂ】本発明を構成する装置の第１の実施形態の実行ステップの概略断面図である。
【図３Ｃ】本発明を構成する装置の第１の実施形態の実行ステップの概略断面図である。
【図３Ｄ】本発明を構成する装置の第１の実施形態の実行ステップの概略断面図である。
【図３Ｅ】本発明を構成する装置の第１の実施形態の実行ステップの概略立面図である。
【図３Ｆ】本発明を構成する装置の第１の実施形態の実行ステップの概略立面図である。
【図３Ｇ】本発明を構成する装置の第１の実施形態の実行ステップの概略立面図である。
【図３Ｈ】本発明を構成する装置の第１の実施形態の実行ステップの概略断面図である。
【図３Ｉ】本発明を構成する装置の第１の実施形態の実行ステップの概略断面図である。
【図３Ｊ】本発明を構成する装置の第１の実施形態の実行ステップの概略断面図である。
【図３Ｋ】本発明を構成する装置の第１の実施形態の実行ステップの概略断面図である。
【図３Ｌ】本発明を構成する装置の第１の実施形態の実行ステップの概略断面図である。
【図３Ｍ】本発明を構成する装置の第１の実施形態の実行ステップの概略断面図である。
【図３Ｎ】本発明を構成する装置の第１の実施形態の実行ステップの概略断面図である。
【図３Ｏ】本発明を構成する装置の第１の実施形態の実行ステップの概略断面図である。
【図４】本発明を構成するプロセスの第１の特定の実施形態で実行されるステップのフローチャートである。
【図５】本発明を構成する装置の第２の特定の実施形態の部品の組立ての概略斜視図である。
【図６Ａ】使用前の装置の第２の実施形態を切断した概略断面図である。
【図６Ｂ】使用前の装置の第２の実施形態を、図６Ａの切断面と垂直に交わる切断面で切断した概略断面図である。
【図６Ｃ】使用前の装置の第２の実施形態を切断した概略断面図である。
【図６Ｄ】使用前の装置の第２の実施形態を、図６Ｃの切断面と垂直に交わる切断面で切断した概略断面図である。
【図７Ａ】本発明を構成する装置の第２の実施形態で実行されるステップの概略立面図である。
【図７Ｂ】本発明を構成する装置の第２の実施形態で実行されるステップの概略断面図である。
【図７Ｃ】本発明を構成する装置の第２の実施形態で実行されるステップの概略断面図である。
【図７Ｄ】本発明を構成する装置の第２の実施形態で実行されるステップの概略断面図である。
【図７Ｅ】本発明を構成する装置の第２の実施形態で実行されるステップの概略立面図である。
【図７Ｆ】本発明を構成する装置の第２の実施形態で実行されるステップの概略立面図である。
【図７Ｇ】本発明を構成する装置の第２の実施形態で実行されるステップの概略立面図である。
【図７Ｈ】本発明を構成する装置の第２の実施形態で実行されるステップの概略断面図である。
【図７Ｉ】本発明を構成する装置の第２の実施形態で実行されるステップの概略断面図である。
【図７Ｊ】本発明を構成する装置の第２の実施形態で実行されるステップの概略断面図である。
【図７Ｋ】本発明を構成する装置の第２の実施形態で実行されるステップの概略断面図である。
【図７Ｌ】本発明を構成する装置の第２の実施形態で実行されるステップの概略断面図である。
【図８】本発明を構成する装置の第２の実施形態に組み込まれたフィルタ支持体の断面図である。
【図９】本発明を構成するプロセスの第２の特定の実施形態で実行されるステップのフローチャートである。
【図１０】使用前の装置の特定の実施形態の概略図である。
【図１１】保護フィルムを取り外した後、真空管を挿入する前の、図１０に示した装置の実施形態の概略図である。
【図１２】真空管を挿入した後の、図１０と１１に示した装置の実施形態の概略図である。
【図１３】真空管と保護シリンダを取り外した時の、図１０〜１２に示した装置の実施形態の概略図である。
【図１４】本発明を構成するプロセスの特定の実施形態で実行されるステップのフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
以下の図面の説明において、システムは、液体（とりわけ、血液）の濾過を想定したものであり、これは、フィルタ支持体を取り外すための手段を備えている。しかしながら、本発明は、これらの好ましい実施形態に限定されるものではなく、液体を入れるための区画と、この区画の開口部に少なくとも一時的に取り付けられるフィルタと、この区画の開口部に少なくとも一時的にかつ漏れることがないように取り付けられる針とを備え、予め装填された真空管の栓に穴を開けている間、針がフィルタを通して吸引した液体を送り、このフィルタ上に目的の細胞が保持される、任意のシステムにまで及ぶ。
【００４０】
針は、真空管の栓を貫通する設計の、極細の先端（図３Ｂ〜図３Ｄ参照）と、区画の下端またはフィルタ支持体を収容する設計の、より広いアパーチャとを有する。真空管の陰圧は相当に大きく、空間は濾過される液体の容積よりも大きい。
【００４１】
針を区画から取り外すことができる好ましい実施形態では、区画が目的の細胞を含む液体で満たされたら、細胞を回収するために、針のアパーチャを区画の開口部に合わせて、その後、針の細い先端で真空管の栓に穴を開ける。陰圧がかかっているので、液体の濾過は、通常６０秒以内に、自動的に起こる。
【００４２】
このように、装置を手に持って濾過を行なうことができる。特に、真空ポンプを備えたり、またはポンプに区画用のアダプターボックスを備えたりする必要がもうないので、これは、時間と材料の大きな節約になる。
【００４３】
さらに、無菌フード内で濾過を行なうことができるため、装置を傾けたり、または水平に置くことすらもできる。
【００４４】
次に、取外し可能なフィルタ支持体と、この取外し可能なフィルタ支持体をそれに触れることなく区画から取り外すための手段とを有する実施形態を記載する。
【００４５】
図１に、リザーバまたは区画１０２と、先端部１０４と、シール１０６と、フィルタおよびその支持体１０８と、移動手段１１０と、シール１１２と、空気入口（図示せず）のある栓１１４を示す。
【００４６】
区画１０２は円筒形である。その上端は、空気入口以外は不透過性となるように、栓１１４で密封することができる。区画１０２の下端は、移動手段１１０の突出部をガイドする、隙間の空いた不連続なリングを外面に有し、該リングは、移動手段１１０の本体をガイドする。
【００４７】
この移動手段１１０は全体が円筒形であり、先端部１０４に向かって延びる２つの突出部を有する。これらの突出部は、フィルタ支持体１０８の直径よりも小さな距離だけ互いに離れた状態で先端部１０４に向かって狭まっていく。後で説明するように、この特別な形状、特に、突出部１１６が互いに向かって湾曲している形状により、移動手段１１０は、先端部１０４から取り外した後に、フィルタ支持体１０８に圧力をかけることができ、そのため、フィルタ支持体は、移動手段１１０がフィルタ支持体１０８の方に動いている間に、フィルタとともに、区画１０２から解放される。
【００４８】
移動手段１１０の突出部１１６の端部と区画１０２の下端は、細胞培養箱または細胞培養ウェルに挿入される作りになっている。他方、区画１０２の端部の不連続なリングは、区画を細胞培養箱または細胞培養ウェルの縁部に支持することができるような直径を有している。
【００４９】
区画１０２の下方開口部には、先端部またはアダプター１０４が配置されているので、この区画は、不透過性、無菌性、かつ取外し可能になっている。この先端部１０４は、区画１０２の外壁を締め付けており、区画１０２の直径よりも小さな直径の先細になった下方開口部を有している。
【００５０】
先端部またはアダプター１０４のこの先細になった下方開口部は、針のアパーチャの漏れのない機械的な取り付けが可能なよう、十分に長い（図３Ｂ〜図３Ｄ参照）。
【００５１】
側方突起部１１８を有する区画１０２の下端の形状に合う形で、先端部１０４は、公知の方法で該突起部を締め付けるための回転ロック手段を有する。このように、先端部１０４は、濾過ステップの間、フィルタホルダーを所定の位置に確実に保持する。さらに、先端部１０４は、フィルタをしぶきと汚染から保護する。
【００５２】
取り付けられたときに、区画１０２の下端は、フィルタ支持体１０８によって保持されるフィルタに向かって開いている開口部を有する。フィルタ支持体それ自体は、一方が区画１０２の下端によって、もう一方が先端部１０４によって、所定の位置に保持される。
【００５３】
フィルタ支持体１０８は、第１の実施形態では、リング形のワッシャの形状をしている。フィルタには微細な孔が開いている。このフィルタは、フィルタ支持体１０８の底に貼り付いた後、ワッシャとともに区画１０２の下端に挿入される。
【００５４】
取外し可能なフィルタ支持体１０８は、リング形をしていて、かつサージカルスチールでできていることが好ましい。実際、スチールは、フィルタ上に回収される細胞に対して毒性がない。さらに、サージカルスチールでできたフィルタ支持体は、プラスチックでできている場合よりも取外しが簡単で、かつより強固である。該リングは、走査可能な厚さに設計されていることが好ましい。このリングは、識別器を有することが好ましい。このように、この識別器、ひいては、回収された細胞を、患者と関連付けることができる。ミスはこのようにして防がれる。
【００５５】
あるいは、フィルタ支持体１０８はＰＶＣでできており、厚さは、０．４ｍｍ以下、好ましくは０．３ｍｍ未満である。その外径は、例えば、１２．６ｍｍである。フィルタ支持体１０８が取り付けられるフィルタの直径は、例えば、５．９ｍｍである。
【００５６】
区画１０２と、先端部１０４と、移動手段１１０は、例えば、ポリプロピレンで作られている。シール１０６と１１２は、例えば、シリコーンでできている。
【００５７】
図２Ａと図２Ｃは、図１に示した部品が組み立てられた状態の、本発明を構成する装置の第１の実施形態の垂直軸断面図である。図２Ｂと２Ｄは、それぞれ、図２Ａと２Ｃの部品を拡大した詳細図である。図２Ａと図２Ｄには、図１に関して説明した要素が見られる。
【００５８】
図３Ａは、装置が格納された構成になっているときの立面図である。図３Ｂは、先端部１０４が針１８０のアパーチャ１８１に挿入されるところを示す。この針には、非常に細い、傾斜したもう１つの端部１８２があり、真空管の栓に穴を開け易くなっている。針１８０のアパーチャ１８１は、プラスチックでできていることが好ましい。針１８０の端部１８２は、金属製であることが好ましい。液体（例えば、血液）（図示せず）を、その上方開口部を通して区画１０２に導入する前または導入した後に、針１８０を先端部１０４の上に配置することができる。
【００５９】
図３Ｃは、針１８０が先端部１０４に不透過性に接続されて、真空管１８５の栓１８６に穴が開き始めるところを示す。
【００６０】
図３Ｄは、針１８０により栓１８６に完全に穴が貫通し、陰圧の真空管１８５の内部と、目的の細胞を含む液体が入った区画１０２の空間とが、フィルタ１０８を通してつながっているところを示す。真空管１８５の内部空間は、濾過される液体の容積よりも大きい。
【００６１】
吸引時には、区画１０２の中に存在する液体中の、直径がより大きい一部の細胞がフィルタ１０８に保持されるのに対し、液体の大半と、溶解した細胞の中身および（必要に応じて）壁と、回収する細胞よりもサイズが小さい細胞は、フィルタ１０８を通して、真空管１８５の中に吸引される。
【００６２】
次に、図３Ｅと図３Ｆに示すように、先端部１０４を回転させて突出部１１８から解放し、取り外す。次に、図３Ｇと図３Ｈに示すように、区画１０２の先端を細胞培養箱または培養ウェル１３０の中に挿入する。
【００６３】
上で説明するとともに図３Ｉに示すように、移動手段１１０の突出部１１６の近くにある端部と区画１０２の下端は、細胞培養箱または培養ウェルに挿入されるよう設計されている。対照的に、区画１０２の端部の不連続なリングは、培養箱または培養ウェル１３０の縁部にリングを支持することができる程度の直径を有する。
【００６４】
より正確には、図３Ｊと図３Ｋに示すように、移動手段１１０は、この位置でまだ、区画１０２の軸に平行に移動することができる。
【００６５】
図３Ｎと図３Ｍに示すように、この移動の際には、操作者の指によって動かされる移動手段の突出部１１６が、フィルタ支持体１０８に対して垂直方向の力を上から下に及ぼし、フィルタ支持体を区画１０２の下端から解放する。すると、フィルタとフィルタ支持体１０８は、細胞培養箱または培養ウェル１３０の中に落下する。
【００６６】
最後に、図３Ｏに示すように、区画１０２と移動手段１１０を細胞培養箱または細胞培養ウェル１３０から取り外す。
【００６７】
図４は、これらのステップの実行をまとめたものである。
【００６８】
ステップ２０２では、装置の部品を組み立てる。ステップ２０３では、栓１１４を取り外す。ステップ２０４では、先端部１０４を針１８０のアパーチャ１８１に挿入する。ステップ２０５では、単離され、場合により培養される細胞を含む液体（例えば、血液）を、区画１０２の上端から導入する。
【００６９】
ステップ２０６では、針１８０の尖端部１８２を栓１８６の中心近くに配置し、圧力を区画１０２にかけて、針の端部が、真空管１８５の陰圧下または真空圧下の内部空間に達するまで、針を栓１８６に貫通させる。
【００７０】
ステップ２１０では、目的の細胞よりも小さい細胞と、溶解された細胞と、区画１０２の中に存在する液体の大半とを真空管１８５に吸引することにより濾過を行ない、目的の細胞をフィルタ１０８上に保持する。
【００７１】
ステップ２１２では、真空管１８５と針１８０を取り外す。ステップ２１４では、先端部１０４を取り外す。ステップ２１６では、区画１０２の端部を細胞培養箱または細胞培養ウェルに挿入する。
【００７２】
ステップ２１８では、移動手段と区画をそれぞれ移動させて、フィルタ支持体１０８に力を加えて、それを解放し、フィルタとともに細胞培養箱または細胞培養ウェル１３０に落下するようにする。ステップ２２０では、区画１０２と移動手段１１０を細胞培養箱または細胞培養ウェル１３０から取り外す。
【００７３】
ステップ２２２では、細胞培養ウェル１３０の中で公知の方法で細胞培養を行なう。フィルタの上面（その面には、フィルタ上で単離された細胞が保持されている）の周りに支持体１０８が存在することで、細胞がフィルタから離れるのを防いでいることに留意する。
【００７４】
目的の生きた細胞の培養をフィルタ上で行なうステップ２２２では、フィルタを、例えば、目的の細胞の増殖に適した因子を含むマトリゲルの薄層で被覆する（または目的の生きた細胞が入っているプレートウェルおよび／もしくは培養フラスコの底にあらかじめ入れておいたマトリゲル（登録商標）の層と接触させる）。
【００７５】
ステップ２２４で、細胞またはその遺伝子材料を観察したいときは、ピンセットを用いてフィルタ支持体１０８を取り出す。これは、フィルタ支持体１０８の上面の側方に円筒形の穴またはくぼみが存在することによって容易になる。
【００７６】
次に、フィルタ支持体１０８をガラススライド上に置き、フィルタの使われていない上面に適した直径の円板形のカバーガラスでフィルタを被覆することができる。細胞の解析またはその遺伝子材料の抽出を公知の方法で行なう。
【００７７】
図５に、リザーバまたは区画３０２と、先端部３０４と、シール３０６と、フィルタ支持体３０８と、移動手段３１０と、シール３１２と、栓３１４を示す。
【００７８】
区画３０２は全体が円筒形である。その上端は、空気入口（図示せず）以外、栓３１４で塞いで気密にすることができる。区画３０２の下端は、外面に、側方リブ３５２の形態で機械的に接続されるとき以外は、区画３０２の本体と分離しているシリンダ３５０を有する。このシリンダ３５０は、移動手段３１０の本体の内径に対応する外径を有しており、移動手段を移動時にガイドすることができる。シリンダ３５０には、移動手段３１０の突出部３１６を挿入して、長手方向に滑らせることができる設計の開口部３５４が設けられている。
【００７９】
移動手段３１０は全体が円筒形であり、先端部３０４に向かって延びる２つの突出部３１６を有する。これらの突起部３１６は、フィルタ支持体３０８の直径よりも小さな距離だけ互いに離れた状態で先端部３０４に向かって狭まっていく。後で説明するように、この特別な形状、特に、突出部３１６が互いに向かって湾曲している形状により、移動手段３１０は、先端部３０４から取り外した後に、フィルタ支持体３０８に圧力をかけることができ、そのため、フィルタ支持体は、移動手段３１０がフィルタ支持体３０８の方に移動している間に、フィルタとともに、区画３０２から解放される。
【００８０】
側方突起部３１８を有する区画３０２の下端の形状に合う形で、先端部３０４は、公知の方法で該突起部を締め付けるための回転ロック手段を有する。このように、先端部３０４は、濾過ステップの間、フィルタホルダーを所定の位置に確実に保持する。さらに、先端部３０４は、フィルタをしぶきと汚染から保護する。
【００８１】
取り付けられたときに、区画３０２の下端は、フィルタ支持体３０８によって保持されるフィルタに向かって開いている開口部を有する。フィルタ支持体それ自体は、一方が区画３０２の下端によって、もう一方が先端部３０４によって、所定の位置に保持される。
【００８２】
図８に示すように、第２の実施形態中のフィルタ支持体３０８は、エッペンドルフ管の形状に適した形状をしている。
【００８３】
特に、
−支持体３０８の上部内側は、エッペンドルフ管の上部内側と似た形状をしているため、該支持体の上方開口部をエッペンドルフ管の栓で閉じることができ、
−支持体３０８の上部外側は、エッペンドルフ管の上部外側の形状と適合しているため、フィルタ支持体３０８をエッペンドルフ管の最上部に挿入することができる。
【００８４】
さらに、フィルタ支持体３０８は、フィルタ上に保持された細胞を溶解させるとともに、細胞溶解物と遺伝子材料をフィルタ支持体からエッペンドルフ管へと遠心分離で移すことを可能にするカラムとして機能する。
【００８５】
フィルタ支持体３０８は、ポリカーボネートプラスチックでできていることが好ましい。区画３０２と、先端部３０４と、移動手段３１０は、例えば、ポリプロピレンから作られる。シール３０６と３１２は、例えば、シリコーンでできている。
【００８６】
図６Ａと図６Ｃは、図５に示した部品が組み立てられた状態の本発明による装置の第２の実施形態を、それぞれ互いに垂直な軸で切断した断面図である。図６Ｂと図６Ｄは、それぞれ図６Ａと図６Ｃの部品を拡大した詳細図である。図６Ａ〜図６Ｄには、図５に関して説明した要素が見られる。
【００８７】
図７Ａは、装置が格納された構成になっているときの立面図である。図７Ｂ〜図７Ｄは、先端部の符号が３０４であることを除いて、図３Ｂ〜図３Ｄと同一である。
【００８８】
図７Ｅと図７Ｆに示すように、先端部３０４を回転させて突起部３１８から解放し、取り外す。次に、図７Ｇ、図７Ｈ、図７Ｉに示すように、区画３０２の先端を、エッペンドルフ管３３０が取り付けられたエッペンドルフ管支持体３２８の中に挿入する。
【００８９】
図７Ｊと７Ｋに示すように、次に、移動手段３１０は、区画３０２の軸に平行に下ろされる。移動手段３１０の突出部３１６が、操作者の指によって動かされるにつれて、フィルタ支持体３０８に対して下向きの力を及ぼし、フィルタ支持体を区画３０２の下端から解放する。すると、フィルタとフィルタ支持体３０８は、エッペンドルフ管３３０の中に落下する。
【００９０】
最後に、図７Ｌに示すように、区画３０２と移動手段３１０を取り外す。
【００９１】
図９は、これらのステップの実行をまとめたものである。
【００９２】
ステップ４０２では、装置の部品を組み立てる。ステップ４０３では、栓を取り外す。
ステップ４０４では、栓３０４を針１８０のアパーチャ１８１の中に挿入する。ステップ４０５では、濾過され、場合により培養される細胞を含む液体（例えば、血液）を、区画３０２の上端から導入する。
【００９３】
ステップ４０６では、針１８０の尖端部１８２を栓１８６の中心近くに配置し、力を区画３０２にかけて、針の端部が、陰圧または真空圧になっている真空管１８５の内部空間に達するまで、針を栓１８６に貫通させる。
【００９４】
ステップ４１０では、区画３０２の中に存在する目的の細胞よりも小さい細胞と、溶解された細胞と、液体の大半を真空管１８５に吸引することにより濾過を行なう。
【００９５】
ステップ４１２では、真空管１８５と針１８０を取り外す。ステップ４１４では、先端部３０４を取り外す。ステップ４１６では、区画３０２の先端をエッペンドルフ管支持体に挿入する。
【００９６】
ステップ４１８では、移動手段と区画をそれぞれ移動させ、フィルタ支持体に力をかけてそれを解放し、エッペンドルフ管に落下するようにする。最後に、ステップ４２０では、区画３０２と移動手段３１０を取り外し、エッペンドルフ管に再び栓をする。
【００９７】
次に、エッペンドルフ管を、例えば、ゲノム全体が予め増幅されたまたは増幅されていない遺伝子材料の溶解、遠心分離および回収のステップについて公知の方法で使用する。
【００９８】
ステップ４２２と４２４では、遠心分離後にエッペンドルフ管の底に回収される遺伝子材料（特に、所望の細胞に由来するＤＮＡとＲＮＡ）に対して解析を行なう。増幅されたＤＮＡをマトリックスとして用いて、標的治療に対する感受性または抵抗性の変動を検出する。それに加えて、またはその代わりに、ＲＴ変換によりＲＮＡから得られ、かつ増幅されたｃＤＮＡ（「ｃ」は相補的を意味する）をマトリックスとして用いて、標的治療に対する感受性または抵抗性に関する遺伝子発現レベルを検出する。妊婦から採取した血液から濾過した栄養膜細胞から得られた遺伝子材料を用いると、潜在的な遺伝子異常を同定することができる。
【００９９】
フォワードプライマーおよびリバースプライマーの対とプローブの対とを定量的リアルタイムＰＣＲ（「ポリメラーゼ連鎖反応」）で用いて、所定の容量の増幅された遺伝子材料（特に、ＤＮＡ）を採取し、標的治療に対する感受性または抵抗性の変動を検出する。
【０１００】
示された実施形態で実施される標的治療に対する感受性と抵抗性の変動についての研究の原理は、以下の通りである。アレル識別または「ＳＮＰジェノタイピングアッセイ」（ＳＮＰは単一ヌクレオチド多型の頭字語である）により、遺伝子の偶発的変異の有無について情報を収集することができる。アレル識別の第１のステップ４２２は、目的の配列を増幅するための２つのプライマーと、２つのプローブ（例えば、ＴａｑＭａｎ（登録商標））とを用いて行なわれる定量的リアルタイムＰＣＲ反応である。これらのプローブの一方が突然変異した配列を認識し、もう一方が正常な配列を認識する。これら２つのプローブは、異なる蛍光色素（例えば、正常な配列にハイブリダイズするプローブについては「ＶＩＣ」蛍光色素、突然変異した配列にハイブリダイズするプローブについては「ＦＡＭ」蛍光色素）と関連している。第２のステップ４２４では、ＦＡＭおよび／またはＶＩＣ蛍光色素によって生じる初期の蛍光と最終的な蛍光を測定するアレル識別プログラムを用いる。このプログラムにより、各試料中に存在する様々な配列を区別することができる。
−ＶＩＣ蛍光のみの増加は、正常な配列のホモ接合プロファイルを示す。
−ＦＡＭ蛍光のみの増加は、突然変異した配列のホモ接合プロファイルを示す。
−ＶＩＣ蛍光とＦＡＭ蛍光の両方の増加は、ヘテロ接合プロファイルを示す。
【０１０１】
これらのプローブは、２つのプライマーの間で対になり、その関連した蛍光の色に基づいて、突然変異の有無を明らかにする。
【０１０２】
他の実施形態では、例えば、５０サイクルの定量的リアルタイムＰＣＲ（「ポリメラーゼ連鎖反応」の頭字語）で、フォワードプライマーおよびリバースプライマーの対と、プローブとを用いて、標的治療に対する感受性および抵抗性に関する遺伝子発現レベルを検出するために、所定の容量の遺伝子材料（特に、ＲＴ（「逆転写」の頭字語）によってｃＤＮＡに変換され、増幅されるＲＮＡ）を採取する。
【０１０３】
上記の各々の実施形態では、フィルタは、好ましくは、ポリカーボネートプラスチックから作られ、親水性の表面処理が施されている。そのようなフィルタを用いることで、細胞を特に溶解させたときに、特定の細胞の保持が増大し、他の細胞またはその中身の付着が減る。
【０１０４】
フィルタは、固定される（すなわち、堅固にされる）同じ細胞に用いられる対応する値よりも、例えば、１μｍだけ小さい値を中心としていることが好ましい細孔直径を有する。
【０１０５】
例えば、固定された細胞の細孔の直径が７．５μｍを中心としていたとすると、フィルタの直径は、より小さい値（例えば、６．５μｍ）を中心とする。直径は分散しているため、７μｍを超える直径を有する細孔はほとんどない。
【０１０６】
本発明を血液細胞に適用するために、フィルタは、密度が５０，０００〜２００，０００個の細孔／ｃｍ2、好ましくは、約１００，０００個の細孔／ｃｍ2の細孔を有する。
【０１０７】
ポリカーボネートプラスチックフィルタを用いているおかげで、必要とされる陰圧は、従来技術のシステムのものよりもはるかに小さく、１／４程度である。これにより、フィルタ上で回収しようとする細胞の劣化が防がれる。
【０１０８】
別の変化形が存在する場合、区画を培養ウェルまたはエッペンドルフ管の方に移動させることによって、力を加えてフィルタ支持体を移動手段から解放するまで、フィルタ支持体１０８または３０８は移動手段に機械的に取り付けられている。区画１０２または３０２の下端と移動手段１１０または３１０の役割を逆にし、ガラススライド、培養ウェルまたはエッペンドルフ管の中または手前でフィルタ支持体を保持するのが後者で、区画の上端に圧力がかけられたときに、それを解放するのが前者であるようにすることは、前述の実施形態の説明を基にして、当業者が容易に実施できる変更である。
【０１０９】
図１０〜図１４は、本発明の特定の実施形態および本発明を構成するプロセスに関するものであり、これらは、真空管用の保護ガイドシリンダを用いている。
【０１１０】
これらの特定の実施形態は上記の実施形態のどれかを補足するものであるが、図１〜図４に示す実施形態に合わせて、図１０〜図１４を示すことにした。
【０１１１】
図１０〜図１３に、区画１０２と、移動手段１１０と、２つの接続手段５０４および５２０によって区画１０２に取り付けられた保護シリンダ５０２を示す。
【０１１２】
保護シリンダは、接続手段部品５０４と、艶消しされた部品５０６と、透明の部品５０８と、区画１０２に面する開口部にあるフィルム５１０を備えている。
【０１１３】
部品５２０は、区画１０２の端部の内側で形成される。図１３は、区画１０２と同軸の関係で円筒形部品の側方に配置された４つの突起部を備える部品５２０の特定の実施形態を示す。この実施形態では、部品５０４は、これらの突起部の溝に対応する外形を有する４つの溝から構成されている。これらの溝５２４は、突起部５２２に適合する作りの開口部から保護シリンダ５０２の内部に向かって楕円形に延びており、図１３の矢印で示すように保護シリンダ５０２を回転させることによって、各突起部５２２が対応する溝５２４に入り、保護シリンダ５０２が区画１０２に締め付けられるようになる。
【０１１４】
保護シリンダ５０２は、針１８０を有する先端部に以下のように取り付けられる。針１８０は、部品５２４の下部（ここは、区画５０２に面する部分である）に埋め込まれている。部品５２４は、４本のスポークにより動力で部品５０６に取り付けられる。これらのスポークは部品５０４表面にあり、部品５０６表面にある４つの溝に挿入される。
【０１１５】
部品５０６の役割は、針１８０を隠すことである。透明の部品５０８によって、ユーザは、濾過の状況や濾過の終了を確認することができる。
【０１１６】
シリンダ５０２の下方開口部全体を被覆し密封するフィルム５１０が取り付けられ、その外側部はシリンダ５０２から少しの距離だけ延びている（図１０に示す）。このように外側部にあることで、フィルム５１０は簡単に取り外すことができる。
【０１１７】
フィルム５１０は、ユーザが針１８０に触れないように保護する。フィルム５１０はまた、針１８０が目詰まりする、および／または汚染される危険から保護する。
【０１１８】
シリンダ５０２は、濾過装置の使用目的（それぞれ、細胞学的研究、分子生物学研究および培養研究）に応じて、例えば、青色、緑色または黄色に色分けされている。
【０１１９】
図１１において、濾過される液体が区画１０２に挿入され、フィルム５１０が取り外された後に、栓１８６を嵌めた真空管１８５が保護ガイドシリンダ５０２に挿入されることに留意されたい。次に、真空管１８５に力が加えられ、上で説明したように、針１８０が栓１８６に穴を開ける。
【０１２０】
こうして作られた、図１２に示す組立品では、もともと真空管１８５の中に存在する陰圧によって、区画１０２の中に存在する液体が濾過される。
【０１２１】
図１１において、濾過される液体が区画１０２に挿入され、フィルム５１０が取り外された後に、その栓１８６を嵌めた真空管１８５が保護ガイドシリンダに挿入されることに留意されたい。次に、真空管１８５に押力が加えられ、先に記載したように、針１８０が栓１８６に穴を開ける。
【０１２２】
こうして作られた、図１２に示す組立品では、もともと真空管１８５の中に存在する陰圧によって、区画１０２の中に存在する液体が濾過される。
【０１２３】
図１３に示すように、濾過が終わると、保護シリンダ５０２とその中の針１８０が一緒に取り外される。
【０１２４】
図１４は、これらのステップの実行をまとめたものである。
【０１２５】
ステップ６０２では、装置の部品を組み立てる。ステップ６０３では、栓１１４を取り外す。ステップ６０４では、単離され、場合により培養される細胞を含む液体（例えば、血液）を、区画１０２の上端から導入する。
【０１２６】
ステップ６０５では、真空管１８５が保護シリンダ５０２に挿入され、これは、針１８０の尖端部１８２を栓１８６の中心近くに配置する効果を有する。ステップ６０６では、拮抗する力を加えることにより、針の端部が、陰圧または真空圧になった真空管１８５の内部空間に達するまで、針を栓１８６に貫通させる。
【０１２７】
ステップ６１０では、目的の細胞よりも小さい細胞と、全ての溶解された細胞と、区画１０２の中に存在する液体の大半とを真空管１８５に吸引することにより濾過を行ない、目的の細胞をフィルタ１０８上に保持する。
【０１２８】
ステップ６１２では、保護シリンダ５０２と、真空管１８５と、針１８０を取り外す。
【０１２９】
これ以降のステップは、他の実施形態に関して既に説明されており、これらの実施形態に依存する。それゆえ、それらを再びここで記載することはしない。
【０１３０】
前述のことから、保護シリンダが区画に取り付けられている間、ユーザは、誤って針で刺すことから保護されることが理解される。さらに、真空管の位置決めは、保護シリンダによって提供されるガイダンスによって容易になる。真空管は、吸引の間、所定の位置に強固に保持される。これにより、真空管が動いたり、ずれたりして、空気が真空管の栓の中で針の横を通って真空管に侵入するのを防いでいる。ユーザが誤って針に触れることがないので、ユーザによる試料汚染の危険は最小限に抑えられる。
【０１３１】
好ましくは、図１０〜図１３に示すように、本発明を構成する装置は、少なくとも一時的に、該保護シリンダを備える。他の実施形態では、組立ては、使用直前に行なわれる。
【０１３２】
好ましくは、図１０〜図１３に示すように、接続手段は一時的なものであり、保護シリンダを真空管と一緒に取り外すことを可能にする。別の変化形が存在する場合、これら２つの部分を２つの連続するステップで取り外す。
【０１３３】
実施形態では、本発明を構成する装置は、外バッグに、２つの内バッグを含むキットの形態で提示され、
−第１の内バッグは、図２Ａ、図６Ａおよび図１０に示すような、組み立てられた装置を含み、
−第２の内バッグは、針、真空管、培養ウェルおよび円形スライドならびに／もしくはエッペンドルフ管、または装置を使用するための他の有用な付属品を含む。
【０１３４】
本発明を使用すれば、危険度の高い細胞（例えば、羊水細胞）採取を回避すると同時に、例えば、羊水穿刺の細胞培養を行なうことができる。さらに、フィルタ支持体１０８がリザーバと同じような形状をしているという事実によって、この支持体の中で免疫細胞化学反応や蛍光インサイチュ・ハイブリダイゼーション（「ＦＩＳＨ」）反応を直接行なうことができる。
【図１】
2014060996.tif 000003
【図２Ａ】
2014060996.tif 000004
【図２Ｂ】
2014060996.tif 000005
【図２Ｃ】
2014060996.tif 000006
【図２Ｄ】
2014060996.tif 000007
【図３Ａ】
2014060996.tif 000008
【図３Ｂ】
2014060996.tif 000009
【図３Ｃ】
2014060996.tif 000010
【図３Ｄ】
2014060996.tif 000011
【図３Ｅ】
2014060996.tif 000012
【図３Ｆ】
2014060996.tif 000013
【図３Ｇ】
2014060996.tif 000014
【図３Ｈ】
2014060996.tif 000015
【図３Ｉ】
2014060996.tif 000016
【図３Ｊ】
2014060996.tif 000017
【図３Ｋ】
2014060996.tif 000018
【図３Ｌ】
2014060996.tif 000019
【図３Ｍ】
2014060996.tif 000020
【図３Ｎ】
2014060996.tif 000021
【図３Ｏ】
2014060996.tif 000022
【図４】
2014060996.tif 000023
【図５】
2014060996.tif 000024
【図６Ａ】
2014060996.tif 000025
【図６Ｂ】
2014060996.tif 000026
【図６Ｃ】
2014060996.tif 000027
【図６Ｄ】
2014060996.tif 000028
【図７Ａ】
2014060996.tif 000029
【図７Ｂ】
2014060996.tif 000030
【図７Ｃ】
2014060996.tif 000031
【図７Ｄ】
2014060996.tif 000032
【図７Ｅ】
2014060996.tif 000033
【図７Ｆ】
2014060996.tif 000034
【図７Ｇ】
2014060996.tif 000035
【図７Ｈ】
2014060996.tif 000036
【図７Ｉ】
2014060996.tif 000037
【図７Ｊ】
2014060996.tif 000038
【図７Ｋ】
2014060996.tif 000039
【図７Ｌ】
2014060996.tif 000040
【図８】
2014060996.tif 000041
【図９】
2014060996.tif 000042
【図１０】
2014060996.tif 000043
【図１１】
2014060996.tif 000044
【図１２】
2014060996.tif 000045
【図１３】
2014060996.tif 000046
【図１４】
2014060996.tif 000047