(57)【要約】【課題】新規なＷｎｔ／β−ｃａｔｅｎｉｎシグナル伝達阻害剤を創出する。【解決手段】  下記式（１）で示される光学活性非対象ビスインドールを有効成分として含むＷｎｔシグナル伝達阻害剤。2014162731.tif 000010  ここでＲ１およびＲ２は、おのおの独立して、Ｈ、Ｍｅ、Ｅｔ、Ｂｎ、Ｔｓ、Ｍｓ、Ａｃ、Ｂｚ、ＭＯＭ、ＭＥＭ、ＳＥＭ、Ａｌｌｏｃを用いることができる。また、ＸおよびＹは、おのおの独立して、Ｈ、Ｍｅ、Ｅｔ、Ｂｎ、ハロゲン、アルコキシ、アミノ、アシル基、ニトロ基を用いることができる。ＸおよびＹは、インドールもしくはオキシインドール骨格のベンゼン環上であれば、いずれ位置に複数結合していてもかまわない。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で示される光学活性非対象ビスインドール化合物及びその塩の少なくともいずれかを用いてＷｎｔシグナル伝達を阻害する方法。
【化１】
2014162731.tif 000008
【請求項２】
下記式（１）で示される光学活性非対象ビスインドール化合物及びその塩の少なくともいずれかを有効成分として含むＷｎｔシグナル伝達阻害剤。
【化２】
2014162731.tif 000009
（ここでＲ１およびＲ２は、おのおの独立して、Ｈ、Ｍｅ、Ｅｔ、Ｂｎ、Ｔｓ、Ｍｓ、Ａｃ、Ｂｚ、ＭＯＭ、ＭＥＭ、ＳＥＭ、又はＡｌｌｏｃである。また、ＸおよびＹは、おのおの独立して、Ｈ、Ｍｅ、Ｅｔ、Ｂｎ、ハロゲン、アルコキシ、アミノ、アシル基、又はニトロ基である。ＸおよびＹは、インドールもしくはオキシインドール骨格のベンゼン環上であれば、いずれ位置に複数結合していてもかまわない。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非対象光学活性ビスインドール化合物及びその塩の少なくともいずれかを用いてＷｎｔシグナルの伝達を制御する方法及びその伝達阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｗｎｔシグナルとは、分子量約４万の分泌性糖たんぱく質であるＷｎｔたんぱくにより活性化される、細胞の増殖、分化を制御するシグナル伝達経路である。通常、β−ｃａｔｅｎｉｎは  Ａｘｉｎ，ＡＰＣ，ＧＳＫ−３β等と複合体を形成し、ＧＳＫ−３βによるリン酸化を受けユビキチン−プロテアソーム系で分解される。一方、Ｗｎｔたんぱくが受容体に結合すると、細胞内たんぱく質ＤｖｌによりＧＳＫ−３βが抑制される。それによりβ−ｃａｔｅｎｉｎのリン酸化が阻害され、β−ｃａｔｅｎｉｎは細胞質内に蓄積する。このβ−ｃａｔｅｎｉｎが核内へ移行し、転写因子であるＴＣＦ／ＬＥＦと結合し、下流の標的遺伝子であるこれらの遺伝子の転写が亢進されることになる。
【０００３】
Ｗｎｔシグナルは細胞の増殖、分化を制御するだけでなく、がんをはじめ、糖尿病、アルツハイマー病などの種々の疾患との関わりが示唆されている。従って、Ｗｎｔ／β−ｃａｔｅｎｉｎシグナルを阻害する化合物は、これら疾患の治療薬の開発につながる。
【０００４】
現在、Ｗｎｔ／β−ｃａｔｅｎｉｎシグナルの伝達を阻害する化合物として、下記非特許文献１乃至５に示すものが今までに報告されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｅｍａｍｉ，Ｋ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．２００４，１０１，１６７０７−１６７１３．
【非特許文献２】Ｐａｒｋ，Ｃ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２００５，３２８，２２７−２３４．
【非特許文献３】Ｐａｒｋ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００６，７０，９６０−９６６．
【非特許文献４】Ｃｈｅｎ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２００９，５，１００−１０７．
【非特許文献５】Ｔｈｏｒｎｅ，Ａ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１０，６，８２９−８３６．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、Ｗｎｔ／β−ｃａｔｅｎｉｎシグナルの伝達を阻害する化合物の報告数は比較的少ない。毒性が低く、阻害活性の高い分子の開発が望まれている。
【０００７】
そこで、本発明は、上記課題を鑑み、新規なＷｎｔ／β−ｃａｔｅｎｉｎシグナル伝達
阻害剤及び伝達を阻害する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記目的を達成する本発明の一観点に係るＷｎｔシグナルの伝達を阻害する方法は、下記式（１）で示される光学活性非対象ビスインドール化合物及びその塩の少なくともいずれかを用いることを特徴とする。
【化１】
2014162731.tif 000002
【０００９】
また、本発明の他の一観点に係るＷｎｔシグナル阻害剤は、下記式（１）で示される光学活性非対象ビスインドール化合物及びその塩の少なくともいずれかを有効成分として含むことを特徴とする。
【化２】
2014162731.tif 000003
【００１０】
なお、上記式において、Ｒ１およびＲ２は、おのおの独立して、Ｈ、Ｍｅ、Ｅｔ、Ｂｎ、Ｔｓ、Ｍｓ、Ａｃ、Ｂｚ、ＭＯＭ、ＭＥＭ、ＳＥＭ、又はＡｌｌｏｃである。また、ＸおよびＹは、おのおの独立して、Ｈ、Ｍｅ、Ｅｔ、Ｂｎ、ハロゲン、アルコキシ、アミノ、アシル基、又はニトロ基である。ＸおよびＹは、インドールもしくはオキシインドール骨格のベンゼン環上であれば、いずれ位置に複数結合していてもかまわない。
【発明の効果】
【００１１】
以上、本発明により、光学活性な非対象ビスインドール化合物及びその塩の少なくともいずれかを用いた、新規なＷｎｔ／β−ｃａｔｅｎｉｎシグナル阻害剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】実施例におけるルシフェラーゼ発現のイメージを示す図である。
【図２】実施例におけるTCF/β-cateninの転写阻害活性評価の結果を示す図である。
【図３】実施例におけるTCF/β-cateninの転写阻害活性評価の結果を示す図である。
【図４】実施例におけるルシフェラーゼの非発現に関するイメージを示す図である。
【図５】実施例におけるTOP/FOP assayの結果を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下、本発明の実施形態について、図面を用いて詳細に説明する。ただし、本発明は多くの異なる形態による実施が可能であり、以下に示す実施形態、実施の例示にのみ限定されるわけではない。
【００１４】
本実施形態に係る光学活性非対象ビスインドール化合物は、下記式（１）で示され、下記化合物を用いることで、Ｗｎｔシグナルの伝達を阻害する方法を実現できる。また、下記化合物は、Ｗｎｔシグナル阻害剤となる。
【化３】
2014162731.tif 000004
【００１５】
なお上記式中、Ｒ１およびＲ２は、おのおの独立して、Ｈ、Ｍｅ、Ｅｔ、Ｂｎ、Ｔｓ、Ｍｓ、Ａｃ、Ｂｚ、ＭＯＭ、ＭＥＭ、ＳＥＭ、Ａｌｌｏｃを用いることができる。また、ＸおよびＹは、おのおの独立して、Ｈ、Ｍｅ、Ｅｔ、Ｂｎ、ハロゲン、アルコキシ、アミノ、アシル基、ニトロ基を用いることができる。ＸおよびＹは、インドールもしくはオキシインドール骨格のベンゼン環上であれば、いずれ位置に複数結合していてもかまわない。
【００１６】
Ｗｎｔシグナルは細胞の増殖、分化を制御するだけでなく、がんをはじめ、糖尿病、アルツハイマー病などの種々の疾患との関わりが示唆されており、本化合物はこれらの有用な薬剤となりうる。
【００１７】
薬剤として用いる場合、上記化合物のほか、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、賦形剤、希釈剤（例えば蒸留水）、ｐＨ緩衝材（例えばリン酸緩衝生理食塩水）、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤等の各種調剤用配合剤成分を含有することができる。
【００１８】
また本実施形態に係るＷｎｔシグナル阻害剤は、その使用形態に応じて経口的に又は非経口的に投与することができるが、長期にわたるリハビリ等を考慮すると経口的であることが好ましく、脳溢血や脳梗塞等の発病段階では非経口的であることが好ましい。経口的な投与としては通常用いられる投与形態、例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁液、油剤、乳化剤等の投与形態を採用することができる。非経口的な投与としては、通常用いられる投与形態、例えば上記の液剤、懸濁液等にしたものを点滴や注射により投与する形態、直接損傷部位に投与する形態等を採用することができる。
【００１９】
本実施形態において、光学活性非対象ビスインドール化合物は薬学的に許容される塩となっていてもよい。ここで「薬学的に許容される塩」とは、上記化合物の有効性を有したものであり、生物学的に有害でない塩を意味し、限定されるわけではないが、上記化合物と酸又は塩基との結合により生ずる塩を意味する。
【００２０】
また、本実施形態に係る光学活性ビスインドール化合物は、合成できる限りにおいて限定されるわけではないが、“Ａｒａｉ，Ｔ．；Ｙ．Ｙａｍａｍｏｔｏ；Ａｗａｔａ，Ａ．；Ｋａｍｉｙａ，Ｋ．；Ｉｓｈｉｂａｓｈｉ，Ｍ．；Ａｒａｉ，Ｍ．Ａ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１３，５２，ａｃｃｅｐｔｅｄ．[ＤＯＩ：  １０．１００２／ａｎｉｅ．２０１２０８９１８]”を参照し、イサチン由来のニトロアルケン１とインドール２を反応させることで合成できる。
【化４】
2014162731.tif 000005
【００２１】
なお、上記式（１）の合成に用いた触媒を形成する下記式（２）で示される配位子は、合成できる限りにおいて限定されるわけではないが、例えば特許第５１３１８１８号明細書、又は“Ｙｏｋｏｙａｍａ，Ｎ．；Ａｒａｉ，Ｔ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．２００９，３２８５-３２８７．”を参照することによって合成できる。
【化５】
2014162731.tif 000006
【００２２】
以上、本実施形態により、光学活性な非対象ビスインドール化合物を用いた、新規なＷｎｔ／β−ｃａｔｅｎｉｎシグナル阻害剤を提供することができる。
【実施例】
【００２３】
上記本実施形態に係る光学活性非対象インドール誘導体として、以下に示す化合物（３ａ−３ｒ）を１８種合成した。
【化６】
2014162731.tif 000007
【００２４】
光学活性ビスインドール化合物（３ａ-３ｒ）のＷｎｔシグナリング阻害活性を、ＴＣＦの結合領域を有するＬｕｃｉｆｅｒａｓｅレポータープラスミドが導入された細胞株を用いて評価した。β−ｃａｔｅｎｉｎ／ＴＣＦ複合体がＴＣＦ結合部位に結合すると、転写が活性化されルシフェラーゼが発現する。そこにルシフェラーゼの基質であるルシフェリンを加え、ルミノメーターで発光量を測定することで、転写阻害活性を評価できる。この場合のイメージを図１に示すとともに、この結果を図２、３に示しておく。なお図２、３において、クエルセチン（Ｑｕｅ．）（２７．７μＭ）をｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｓｔａｎｄａｒｄとして用い、ｃｏｎｔｒｏｌ（ＤＭＳＯ）のルシフェラーゼ活性を１００％とした。
【００２５】
この結果、光学活性ビスインドール化合物（３ａ−３ｒ）の多くから、ルシフェラーゼを転写する活性を低下させる化合物が見出された。
【００２６】
特に、化合物３ｄおよび化合物３ｑは、細胞毒性が低く阻害活性の高い化合物であり、化合物３ｄのＩＣ５０は１１．２μＭ、３ｑのＩＣ５０は１１．０μＭであった。
【００２７】
また、化合物３ｄおよび化合物３ｑを用いる阻害活性評価において、ＴＣＦの結合領域に変異を導入すると、阻害活性が失われたため、これらの化合物は、Ｗｎｔシグナリング選択的な阻害剤であるといえる。この場合のイメージを図４に示しておくとともに、この結果を図５に示しておく。
【００２８】
以上の通り、本実施例により、Ｗｎｔシグナリグ阻害剤として新規な光学活性ビスインドール化合物を創出することができた。
【産業上の利用可能性】
【００２９】
Ｗｎｔシグナルは細胞の増殖、分化を制御するだけでなく、がんをはじめ、糖尿病、アルツハイマー病などの種々の疾患との関わりが示唆されており、Ｗｎｔシグナルを制御する低分子化合物はこれらの治療薬となる可能性がある。
【図１】
2014162731.tif 000011
【図２】
2014162731.tif 000012
【図３】
2014162731.tif 000013
【図４】
2014162731.tif 000014
【図５】
2014162731.tif 000015