(57)【要約】【課題】コーニファイドエンベロップおよびタイトジャンクションの形成を促進することによって、皮膚機能を改善することのできる剤の提供。【解決手段】カルニチンおよびその塩ならびにカルニチンの誘導体およびその塩の中から選択される、少なくとも一種を有効成分として含む、表皮関連因子活性剤を提供すること。好ましくは下記一般式（１）で示される化合物を含む表皮関連因子活性剤。  【化１】2014221748.tif 000025（式中、Ｒ０は炭素数１〜３８の脂肪族炭化水素基、水素原子、−ＣＯＲ１のいずれかを表す。Ｒ１は炭素数１〜３７の脂肪族炭化水素基を示す。）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルニチンおよびその塩ならびにカルニチンの誘導体およびその塩の中から選択される、少なくとも一種を有効成分として含むことを特徴とする、表皮関連因子活性剤。
【請求項２】
前記表皮関連因子活性剤が、タイトジャンクション形成促進剤である、請求項１に記載の表皮関連因子活性剤。
【請求項３】
前記表皮関連因子活性剤が、コーニファイドエンベロップ形成促進剤である、請求項１に記載の表皮関連因子活性剤。
【請求項４】
前記カルニチンおよびその塩ならびにカルニチンの誘導体およびその塩が、下記一般式（１）で表わされる化合物および一般式（２）で表わされる化合物であることを特徴とする、請求項１に記載の表皮関連因子活性剤。
【化１】
2014221748.tif 000019
（式中、Ｒ０は炭素数１〜３８の脂肪族炭化水素基、水素原子、−ＣＯＲ１のいずれかを表す。Ｒ１は炭素数１〜３７の脂肪族炭化水素基を示す。）
【化２】
2014221748.tif 000020
（式中、Ｒ０は前記式（１）と同様であり、Ｘ−はｍ価の無機アニオンまたはｍ価の有機アニオンを表し、Ｙ＋はｎ価の無機カチオンまたはｎ価の有機カチオンを表す。ｍおよびｎはそれぞれ独立に１〜４の整数を表す。）
【請求項５】
前記一般式（１）で表わされる化合物が下記一般式（３）で表わされる化合物であり、前記一般式（２）で表わされる化合物が下記一般式（４）で表わされる化合物である、請求項１〜３のいずれかに記載の表皮関連因子活性剤。
【化３】
2014221748.tif 000021
（式中、Ｒ１は前記式（１）と同様である）
【化４】
2014221748.tif 000022
（式中、Ｒ１は前記式（１）と同様であり、Ｘ−およびＹ＋は前記式（２）と同様である）
【請求項６】
前記一般式（３）で表わされる化合物が下記一般式（５）で表わされる化合物であり、前記一般式（４）で表わされる化合物が下記一般式（６）で表わされる化合物である、請求項５に記載の表皮関連因子活性剤。
【化５】
2014221748.tif 000023
（式中、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立に、炭素数１〜１８の脂肪族炭化水素基を表す）
【化６】
2014221748.tif 000024
（式中、Ｒ２およびＲ３は前記式（５）と同様であり、Ｘ−およびＹ＋は前記式（２）と同様である）
【請求項７】
前記式（５）および式（６）中のＲ２およびＲ３がそれぞれ独立に、炭素数３〜１６の脂肪族炭化水素基であることを特徴とする請求項６に記載の表皮関連因子活性剤。
【請求項８】
前記式（５）および式（６）のそれぞれにおいて、Ｒ２およびＲ３のいずれか一方がｎ−ヘキシル基であり、他方がｎ−オクチル基であることを特徴とする請求項６に記載の表皮関連因子活性剤。
【請求項９】
前記式（２）、（４）および（６）中のＸ−が、水酸化物イオン、硝酸イオン、硫酸イオン、炭酸イオン、炭酸水素イオン、ハロゲン化物イオン、蟻酸イオン、酢酸イオン、クエン酸イオン、酒石酸イオン、シュウ酸イオン、フマル酸イオン、炭素数３〜２０の脂肪酸のアニオン、カルニチンおよびその誘導体のアニオン、アスコルビン酸のアニオン、アスコルビルリン酸およびその誘導体のアニオンからなる群より選ばれるアニオンであることを特徴とする、請求項４〜８のいずれかに記載の表皮関連因子活性剤。
【請求項１０】
前記式（２）、（４）および（６）中のＹ＋が、水素イオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、亜鉛イオン、アンモニウムイオン、カルニチンおよびその誘導体のカチオンからなる群より選ばれるカチオンであることを特徴とする、請求項４〜９のいずれかに記載の表皮関連因子活性剤。
【請求項１１】
カルニチンおよびその塩ならびにカルニチンの誘導体およびその塩の中から選択される少なくとも一種の含有量が０．２〜５００ｍＭであることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれかに記載の表皮関連因子活性剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は皮膚機能改善因子の形成促進剤、特にコーニファイドエンベロープ（ＣＥ）形成促進効果、タイトジャンクション（ＴＪ）形成促進効果に優れた皮膚機能改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は体の最も外側に存在しており、細菌などの外界からの刺激や生体内からの過度の水分蒸散を防ぐ機能を有している。このような機能の低下は、様々な皮膚疾患や肌荒れ等の皮膚トラブルの原因とも考えられている。
皮膚においては、表皮細胞が基底細胞から有棘細胞、顆粒細胞、さらには角層細胞へと約４週間かけて角化し、最後に垢となってはがれ落ちる、ターンオーバーを繰り返している。
【０００３】
ターンオーバーの過程で、ケラチン線維を主成分とし、角質細胞を包むコーニファイドエンベロープ（以下ＣＥ）が形成される。有棘層上層から顆粒層にかけてＣＥを構成するインボルクリンやロリクリン等の前駆体蛋白質が合成され、さらに角層に至る過程で酵素トランスグルタミナーゼによってこれらが架橋されることで、不溶化したＣＥが形成される。このようなＣＥは、健康な角層の働きに必要不可欠である。すなわち、ＣＥの形成および成熟化は、皮膚機能向上に重要な役割を果たしている。
【０００４】
また、タイトジャンクション（以下ＴＪ）は、顆粒層の細胞の周囲にベルト状に存在し、隣接する細胞同士を密着させるだけでなく、細胞と細胞の隙間をシールすることで物質の透過を制御する役割を果たしている。したがって、水や物質が細胞間隙を透過するのを防ぐ機能を有しているため、クローディンやオクルディンなどのＴＪ構成タンパク質が何らかの原因で減少した場合、ＴＪの構造的な破壊が起こり、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎や各種感染症などの皮膚症状が引き起こされる。
【０００５】
近年、このような観点からＣＥやＴＪの機能を高めるような素材を探索する試みがなされている。ＣＥ機能を向上させる成分としては、アミジノスルホン酸のＣＥ形成・成熟促進作用（特許文献１）、イミダゾリジノン誘導体のＣＥ形成・成熟促進作用（特許文献２）、真珠層由来のミネラルによるＣＥ前駆体蛋白質ロリクリンの発現促進作用（特許文献３）などが報告されている。
【０００６】
また、ＴＪ機能を向上させる成分としては核酸のＴＪ形成促進作用（特許文献４）、トコフェロ−ル誘導体のＴＪ形成促進作用（特許文献５）、スイカズラ科スイカズラ属キンギンカより得られる植物抽出物のＴＪ形成促進作用（特許文献６）などが報告されている。
【０００７】
なお、カルニチンおよびその誘導体、またはその塩に関しては、これまでに、脂肪分解促進作用、セラミド産生促進作用、透過バリア強度強化作用、抗老化作用などを有することが知られている（例えば特許文献７〜１０）。しかし、該化合物が直接的にＣＥやＴＪの形成を促進して皮膚機能改善効果を示すことに関する報告はなされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許第４７１７５３７号
【特許文献２】特開２００８−３０３１８７号公報
【特許文献３】特開２０１０−１０５９２４号公報
【特許文献４】特開平０９−０３０９７８号公報
【特許文献５】特開２００７−２１０９４８号公報
【特許文献６】特開２００９−２６９９００号公報
【特許文献７】特開２０００−１６９１６号公報
【特許文献８】特許第４７８０８１７号
【特許文献９】特開平１１−３０２１４３号公報
【特許文献１０】特開２００７−２５４３７３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
これまで見出されたＣＥ形成促進作用やＴＪ形成促進作用を有する成分は、期待される様な効果が得られなかったり、製剤中の安定性、安全性、経済面などに課題を有し、いまだ満足のいくもではなかった。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
このような事情により、本発明者らは鋭意研究検討した結果、カルニチンおよびカルニチン誘導体、またはその塩が優れたＣＥ形成促進効果およびＴＪ形成促進効果を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち本発明は、下記［１］〜［１１］にかかるものである。
［１］カルニチンおよびその塩ならびにカルニチンの誘導体およびその塩の中から選択される、少なくとも一種を有効成分として含む、表皮関連因子活性剤。
［２］前記表皮関連因子活性剤が、タイトジャンクション形成促進剤である、［１］に記載の表皮関連因子活性剤
［３］前記表皮関連因子活性剤が、コーニファイドエンベロップ形成促進剤である、［１］に記載の表皮関連因子活性剤
【００１１】
［４］  前記カルニチンおよびその塩ならびにカルニチンの誘導体およびその塩が、下記一般式（１）で表わされる化合物および一般式（２）で表わされる化合物であることを特徴とする、［１］に記載の表皮関連因子活性剤。
【化１】
2014221748.tif 000002
（式中、Ｒ０は炭素数１〜３８の脂肪族炭化水素基、水素原子、−ＣＯＲ１のいずれかを表す。Ｒ１は炭素数１〜３７の脂肪族炭化水素基を示す）
【化２】
2014221748.tif 000003
（式中、Ｒ０は前記式（１）と同様であり、Ｘ−はｍ価無機アニオンまたは有機アニオンを表し、Ｙ＋はｎ価の無機カチオンまたは有機カチオンを表す。ｍおよびｎはそれぞれ独立に１〜４の整数を表す）
【００１２】
［５］  前記一般式（１）で表わされる化合物が下記一般式（３）で表わされる化合物であり、前記一般式（２）で表わされる化合物が下記一般式（４）で表わされる化合物である、［１］〜［３］のいずれかに記載の表皮関連因子活性剤。
【化３】
2014221748.tif 000004
（式中、Ｒ１は前記式（１）と同様である）
【化４】
2014221748.tif 000005
（式中、Ｒ１は前記式（１）と同様であり、Ｘ−およびＹ＋は前記式（２）と同様である）
【００１３】
［６］  前記一般式（３）で表わされる化合物が下記一般式（５）で表わされる化合物であり、前記一般式（４）で表わされる化合物が下記一般式（６）で表わされる化合物である、［５］に記載の表皮関連因子活性剤。
【化５】
2014221748.tif 000006
（式中、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立に、炭素数１〜１８の脂肪族炭化水素基を表す）
【化６】
2014221748.tif 000007
（式中、Ｒ２およびＲ３は前記式（５）と同様であり、Ｘ−およびＹ＋は前記式（２）と同様である）
［７］  前記式（５）および式（６）中のＲ２およびＲ３がそれぞれ独立に、炭素数３〜１６の脂肪族炭化水素基であることを特徴とする［６］に記載の表皮関連因子活性剤。
［８］  前記式（５）および式（６）のそれぞれにおいて、Ｒ２およびＲ３のいずれか一方がｎ−ヘキシル基であり、他方がｎ−オクチル基であることを特徴とする［６］に記載の表皮関連因子活性剤。
［９］  前記式（２）、（４）および（６）中のＸ−が、水酸化物イオン、硝酸イオン、硫酸イオン、炭酸イオン、炭酸水素イオン、ハロゲン化物イオン、蟻酸イオン、酢酸イオン、クエン酸イオン、酒石酸イオン、シュウ酸イオン、フマル酸イオン、炭素数３〜２０の脂肪酸のアニオン、カルニチンおよびその誘導体のアニオン、アスコルビン酸のアニオン、アスコルビルリン酸およびその誘導体のアニオンからなる群より選ばれるアニオンであることを特徴とする、［４］〜［８］のいずれかに記載の表皮関連因子活性剤。
［１０］  前記式（２）、（４）および（６）中のＹ＋が、水素イオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、亜鉛イオン、アンモニウムイオン、カルニチンおよびその誘導体のカチオンからなる群より選ばれるカチオンであることを特徴とする、［４］〜［９］のいずれかに記載の表皮関連因子活性剤。
［１１］  カルニチンおよびその塩ならびにカルニチンの誘導体およびその塩の中から選択される少なくとも一種の含有量が０．２〜５００  ｍＭであることを特徴とする、［１］〜［１０］のいずれかに記載の表皮関連因子活性剤。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の表皮関連因子活性剤は、皮膚表面の因子を活性化することによる皮膚改善等の効果が期待できるため、医薬品、医薬部外品、化粧料等に幅広く適用することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明について具体的に説明する。
本発明の表皮関連因子活性剤は、カルニチンおよびその塩ならびにカルニチンの誘導体およびその塩の中から選択される少なくとも一種を有効成分として含有する。すなわち、本発明の表皮関連因子活性剤は、カルニチン、カルニチン誘導体、カルニチンの塩、およびカルニチン誘導体の塩のうちのいずれか１つを含有すればよく、あるいはこれらのうちの２つ以上を含有していてもよい。また、２種以上のカルニチン誘導体、２種以上のカルニチンの塩、２種以上のカルニチン誘導体の塩を含有してもよい。
【００１６】
＜カルニチンおよびその誘導体＞
本発明の表皮関連因子活性剤に用いられるカルニチンおよびカルニチンの誘導体は特に限定されず、合成されたものであっても、天然より抽出されたものであってもよい。
カルニチンは下記の構造を有する化合物である。
【００１７】
【化７】
2014221748.tif 000008
カルニチンの誘導体としては限定されないが、例えばカルニチンの炭素原子に結合した水素原子がアルキル基、水酸基、ニトロ基、アミノ基、スルホニル基、アルコキシ基等の置換基で置換されたもの、水酸基の水素原子が脂肪族炭化水素基等で置換されたものなどが挙げられる。中でも、水酸基の水素原子が脂肪族炭化水素基等で置換された誘導体が好ましい。
【００１８】
カルニチンおよびカルニチン誘導体は、好ましくは下記一般式（１）の構造で示される。
【００１９】
【化８】
2014221748.tif 000009
式（１）中、Ｒ０は炭素数１〜３８の脂肪族炭化水素基、水素原子、−ＣＯＲ１のいずれかを表す。Ｒ１は炭素数１〜３７の脂肪族炭化水素基を示す。Ｒ０およびＲ１が表す脂肪族炭化水素基およびＲ１は、分岐を有していてもいなくてもよく、飽和でも不飽和でもよい。中でもＲ０は、水素原子または−ＣＯＲ１であることが好ましい。
【００２０】
Ｒ０が脂肪族炭化水素基である場合、炭素数は１〜２５であることが好ましく、５〜１８であることがより好ましい。またＲ０は脂肪族炭化水素基である場合、飽和の脂肪族炭化水素基であることが好ましく、アルキル基であることがより好ましい。アルキル基は、分岐と直鎖いずれでも良い。
【００２１】
Ｒ１は炭素数１〜２４であることが好ましく、炭素数４〜１７であることがより好ましい。Ｒ１の示す脂肪族炭化水素基は、Ｒ０において説明した脂肪族炭化水素基と同様のものが好ましい。
上記一般式（１）は、さらに好ましくは下記一般式（３）で示される。
【００２２】
【化９】
2014221748.tif 000010
（式（３）中、Ｒ１は式（１）におけるものと同様である。）
上記一般式（３）は、さらに好ましくは下記一般式（５）で示される。
【００２３】
【化１０】
2014221748.tif 000011
式（５）中、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立に炭素数１〜１８の脂肪族炭化水素基を表す。Ｒ２およびＲ３は、分岐を有していてもいなくてもよく、飽和でも不飽和でもよい。前記Ｒ２およびＲ３は、いずれか一方が炭素数１〜１６  の脂肪族炭化水素基であり、他方が炭素数３〜１６の脂肪族炭化水素基であることが好ましい。さらに、前記Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に炭素数３〜１６の脂肪族炭化水素基であることがより好ましく、それぞれ独立に炭素数４〜１２の脂肪族炭化水素基であることがさらに好ましい。さらに、Ｒ２およびＲ３はいずれか一方がｎ−ヘキシル基であり、他方がｎ-オクチル基であることがより好ましい。
【００２４】
なお、カルニチン誘導体のカルニチン部位は通常Ｌ型である。さらに、一般式（５）で表わされるカルニチン誘導体は、Ｒ２およびＲ３を備えたα−分岐型のアシル基を有しているため、Ｒ２およびＲ３が相互に異なる場合には分岐点のα炭素原子が不斉炭素原子となり、光学異性体が存在する。本発明のカルニチン誘導体においては、前記α炭素原子に基づく光学異性体については特に限定されず、そのいずれであってもよく、それら光学異性体の混合物であってもよい。
【００２５】
一般式（５）で表わされるカルニチン誘導体は、Ｒ２およびＲ３を備えたα−分岐型のアシル基を有しているため、水性媒体存在下においても、分岐鎖によるエステル結合部位への電子供与性の低減効果によりアシル基が加水分解され難く、長期間にわたって安定に存在できるものと考えられる。
【００２６】
Ｒ２およびＲ３は具体的には、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ  ｅ  ｃ−ブチル基、ｔ  ｅ  ｒ  ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、４−メチルペンチル基、２−エチルブチル基、ｎ−へプチル基、２−メチルヘキシル基、３−メチルヘキシル基、４−メチルヘキシル基、２−エチルペンチル基、３−エチルペンチル基、ｎ−オクチル基、２−メチルヘプチル基、３−メチルヘプチル基、４−メチルヘプチル基、５−メチルヘプチル基、６−メチルヘプチル基、２−エチルヘキシル基、３−エチルヘキシル基、４−エチルヘキシル基、２−プロピルペンチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基、ｎ−ウンデシル基、ｎ−ドデシル基、ｎ−トリデシル基、ｎ−テトラデシル基、ｎ−ペンタデシル基、ｎ−ヘキサデシル基、ｎ−へプタデシル基、ｎ−オクタデシル基、イソステアリル基などの直鎖または分岐のアルキル基が挙げられる。
【００２７】
またＲ２およびＲ３として具体的には、例えば、１０−ウンデセニル基、９−ヘキサデセニル基、シス−９−オクタデセニル基、１１−オクタデセニル基、シス，シス−９，１２−オクタデカジエニル基、９，１２，１５−オクタデカトリエニル基、６，９，１２−オクタデカトリエニル基、９，１１，１３−オクタデカトリエニル基などの直鎖または分岐のアルケニル基が挙げられる。
【００２８】
これらのうち、好ましいＲ２およびＲ３の組合せとしては、Ｒ２とＲ３とが、メチル基とメチル基、メチル基とエチル基、メチル基とｎ−プロピル基、メチル基とイソプロピル基、メチル基とｎ−ブチル基、メチル基とｎ−ペンチル基、メチル基とｎ−ヘキシル基、メチル基とｎ−オクチル基、メチル基とｎ−デシル基、メチル基とｎ−テトラデシル基、メチル基とｎ−ヘキサデシル基、エチル基とエチル基、エチル基とｎ−プロピル基、エチル基とイソプロピル基、エチル基とｎ−ブチル基、エチル基とイソプロピル基、エチル基とｎ−ブチル基、エチル基とｎ−ペンチル基、エチル基とｎ−ヘキシル基、エチル基とｎ−オクチル基、エチル基とｎ−デシル基、エチル基とｎ−テトラデシル基、エチル基とｎ−ヘキサデシル基、ｎ−プロピル基とｎ−プロピル基、ｎ−プロピル基とｎ−ブチル基、ｎ−プロピル基とｎ−ペンチル基、ｎ−プロピル基とｎ−ヘキシル基、ｎ−ブチル基とｎ−ヘキシル基、ｎ−ブチル基とｎ−オクチル基、ｎ−ヘキシル基とｎ−オクチル基である組合せが挙げられる。中でも、ｎ−ヘキシル基とｎ−オクチル基の組み合わせが最も好ましい。
なお、本発明の表皮関連因子活性剤には、上記Ｒ２とＲ３との組合せによって特定されるカルニチン誘導体を１種単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２９】
＜カルニチンおよびその誘導体の塩＞
本発明の表皮関連因子活性剤は、カルニチンの塩および前記カルニチン誘導体の塩の少なくともいずれか一方を含有することができる。前記塩は、具体的には下記一般式（２）で示される化合物であり、さらに好ましくは一般式（４）で示される化合物であり、さらに好ましくは一般式（６）で示される化合物である。
【００３０】
【化１１】
2014221748.tif 000012
（式中、Ｒ０は前記式（１）と同様であり、Ｘ−はｍ価の無機アニオンまたはｍ価の有機アニオンを表し、Ｙ＋はｎ価の無機カチオンまたはｎ価の有機カチオンを表す。ｍおよびｎはそれぞれ独立に、１〜４の整数である）
【００３１】
【化１２】
2014221748.tif 000013
（式中、Ｒ１は前記式（１）と同様であり、Ｘ−およびＹ＋は前記式（２）と同様である。）
【００３２】
【化１３】
2014221748.tif 000014
（式中、Ｒ１は前記式（５）と同様であり、Ｘ−およびＹ＋は前記式（２）と同様である。）
【００３３】
式（２）、（４）および（６）中、Ｘ−はｍ価の無機アニオンまたはｍ価の有機アニオンを表し、医学的に許容されるアニオンであることが好ましい。ｍは１〜４の整数である。例えばｍが２の場合においては、ひとつのＸ−イオンと２分子のカルニチンのカチオン部が対をなす形をとる。ｍが３および４の場合においても同様である。その具体例としては、例えば、水酸化物イオン、硝酸イオン、硫酸イオン、炭酸イオン、炭酸水素イオン及びハロゲン化物等の無機イオン；  蟻酸イオン、酢酸イオン、クエン酸イオン、酒石酸イオン、シュウ酸イオン、フマル酸イオン、分岐を有していてもよい炭素数３〜２０の飽和もしくは不飽和脂肪酸のアニオン、カルニチンおよびその誘導体のアニオン、アスコルビン酸のアニオン、アスコルビルリン酸およびその誘導体のアニオン等の有機イオン；が挙げられる。これらの中でも、皮膚外用剤、とくに化粧料としての配合性の点からは、水酸化物イオン、ハロゲン化物イオン、クエン酸イオン、ハロゲン化クエン酸イオン、カルニチンおよびその誘導体のアニオンが好ましく、ハロゲン化物イオンが最も好ましい。
【００３４】
また式（２）、（４）および（６）中、Ｙ＋はｎ価の無機カチオンまたはｎ価の有機カチオンを表し、ｎは１〜４の整数である。例えばｎが２の場合においては、ひとつのＹ＋イオンと２分子のカルニチンのアニオン部が対をなす形をとる。ｎが３および４の場合においても同様である。Ｙ＋は医学的に許容されるカチオンであることが好ましく、その具体例としては、例えば、水素イオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、亜鉛イオン、アンモニウムイオン、カルニチンおよびその誘導体のカチオンが挙げられる。これらの中でも、皮膚外用剤、特に化粧料としての配合性の点から水素イオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルニチンおよびその誘導体のカチオンが好ましく、水素イオンが最も好ましい。
【００３５】
本発明の表皮関連因子活性剤には、上記Ｘ−、Ｙ＋、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の組合せによって特定されるカルニチンおよびその誘導体の塩を１種単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。またカルニチン塩を含む製剤において、Ｘ−およびＹ＋はそれぞれ一種単独のイオンでもよいし、複数種のイオンの混合物でもよい。Ｘ−とＹ＋の価数は必ずしも一致している必要はない。
【００３６】
本発明の表皮関連因子活性剤において、カルニチンおよびその塩ならびにカルニチンの誘導体およびその塩の中から選択される少なくとも一種の含有量は、表皮関連因子活性剤全量中、通常０．２〜５００ｍＭ、好ましくは１．０〜２５０ｍＭ、より好ましくは２．０〜１００ｍＭ、さらに好ましくは１０〜５０ｍＭである。なお、上記含有量は、カルニチンまたはその誘導体を単独で使用する場合にはカルニチンまたはその誘導体の量を、またカルチニンの塩またはカルニチン誘導体の塩を単独で使用する場合にはカルチニンの塩またはカルニチン誘導体の塩の量を、これらを併せて用いる場合には併用されるこれら成分の合計量を意味している。
【００３７】
このような量で、カルニチンおよびその塩ならびにカルニチンの誘導体およびその塩の中から選択される少なくとも一種が表皮関連因子活性剤に含まれていると、表皮関連因子を効果的に活性することができ、この表皮関連因子活性剤を例えば化粧料等の皮膚外用剤に使用した場合には、皮膚外用剤に求められる効能効果を十分に発揮でき好ましい。
【００３８】
本発明の表皮関連因子活性剤には、上記カルニチンおよびその塩ならびにカルニチンの誘導体およびその塩のほか、効果が損なわれない限り、一般に表皮関連因子活性剤に用いられる成分が含有されていてもよい。また、水やアルコール等の溶媒にカルニチンの誘導体およびその塩が分散された状態で用いてもよい。本発明の表皮関連因子活性剤を化粧料等の皮膚外用剤に用いる場合には、一般に化粧料等の皮膚外用剤に用いられる成分を本発明の効果を損なわない範囲で配合してもよい。
【００３９】
＜処方例＞
本発明の表皮関連因子活性剤を用いて化粧料等を調製することができる。例えば、表１に示す成分を基に、化粧料を調製することができる。（表中の値は全量を１００％とする質量％である）
【００４０】
例えば、表１に示すＡ、Ｂ、Ｃの各組成物をそれぞれ８５℃に加温し均一に混合し組成物Ａ〜Ｃを調製する。ついで、組成物Ａをホモミキサーにかけながら該組成物Ａに組成物Ｂ（表皮関連因子活性剤）、組成物Ｃをこの順序で徐々に添加する。次いで３０℃付近まで氷冷しながら攪拌を続けた後、室温まで放冷し、化粧料１〜５を得ることができる。
【００４１】
【表１】
2014221748.tif 000015
表中、単位はｗｔ％である。
【００４２】
そのほか、特開２００７−１１９４４１号公報の実施例に記載の方法などによっても化粧料を調製することができる。
【実施例】
【００４３】
［実施例１］  コーニファイドエンベロップ（ＣＥ）形成能評価試験
正常ヒト表皮角化細胞（ＫＵＲＡＢＯ社）をＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２培地  （ＫＵＲＡＢＯ社）で培養した。２４ウェルプレートに表皮細胞を１×１０５個／ｃｍ２で播種し、３７℃、５％ＣＯ２下でコンフルエントの状態になるまで培養した。その後、１．８ｍＭ  Ｃａ２＋含有のＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２培地に換え、２−ヘキシルデカン酸Ｌ−カルニチン塩酸塩を終濃度１０μＭになるように添加した。４日間培養後、細胞を回収して、上清を除去し、２％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、２０ｍＭ  ジチオスレイトール（ＤＴＴ）を加え１５分間、１００℃で加温した。１％酢酸、５０％エタノールを加え、遠心分離（１５，０００ｒｐｍ、５分間）して上清を除去した。こうして得られた不溶物をＣＥとし、不溶物に１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡを加えて顕微鏡で観察し、ＣＥの生成量をカウントした。結果を表２に示す。
【００４４】
［比較例１］
２−ヘキシルデカン酸Ｌ−カルニチン塩酸塩を添加しなかったこと以外は実施例１と同様に、ＣＥの生成量をカウントした。結果を表２に示す。
【００４５】
【表２】
2014221748.tif 000016
その結果、表１に示すように、２−ヘキシルデカン酸Ｌ−カルニチン塩酸塩で培養した細胞ではコントロールに対して、ＣＥの量が有意に増大した。すなわちカルニチン誘導体は、優れたＣＥ形成促進効果を有することが明らかとなった。
【００４６】
［実施例２］ＣＥ前駆体タンパク質及び架橋酵素タンパク質の遺伝子発現
正常ヒト表皮角化細胞（ＫＵＲＡＢＯ社）をＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２培地  （ＫＵＲＡＢＯ社）で培養した。２４ウェルプレートに表皮細胞を７．５×１０３個／ｃｍ２で播種し、３７℃，５％ＣＯ２下でコンフルエントの状態になるまで培養した。その後、２−ヘキシルデカン酸Ｌ−カルニチン塩酸塩を終濃度１０μＭになるように添加して、２４時間培養後、総ＲＮＡを抽出し、得られたＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。合成したｃＤＮＡをテンプレートに、定量リアルタイムＰＣＲでロリクリン、インボルクリンおよびトランスグルタミナーゼ１遺伝子の発現量を定量した。内部標準遺伝子として化合物添加により発現に変動が見られないハウスキーピング遺伝子としてＧＡＰＤＨの発現量を定量し、標準化した。結果を表３に示す。
【００４７】
［比較例２］
２−ヘキシルデカン酸Ｌ−カルニチン塩酸塩を添加しない他は実施例２と同様にして、ＧＡＰＤＨの発現量を定量し、標準化した。結果を表３に示す。
【００４８】
【表３】
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表３に示すように、カルニチン誘導体は、ロリクリン、インボルクリンおよびトランスグルタミナーゼ１のｍＲＮＡの発現を亢進した。
【００４９】
［実施例３］    タイトジャンクション形成能評価試験
正常ヒト表皮角化細胞（ＫＵＲＡＢＯ社）をＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２培地  （ＫＵＲＡＢＯ社）で培養した。２４ウェルプレートに表皮細胞を７．５×１０３個／ｃｍ２で播種し、３７℃、５％ＣＯ２下でコンフルエントの状態になるまで培養した。その後、２−ヘキシルデカン酸Ｌ−カルニチン塩酸塩を終濃度１０μＭになるように添加して、２４時間培養後、総ＲＮＡを抽出し、得られたＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。得られたｃＤＮＡをテンプレートに、定量リアルタイムＰＣＲでオクルディンおよびクローディン１遺伝子の発現量を定量した。内部標準遺伝子として化合物添加により発現に変動が見られないハウスキーピング遺伝子としてＧＡＰＤＨの発現量を定量し、標準化した。結果を表４に示す。
【００５０】
［比較例３］２−ヘキシルデカン酸Ｌ−カルニチン塩酸塩を添加しなかった以外は実施例３と同様に、ＧＡＰＤＨの発現量を定量し、標準化した。結果を表４に示す。
【表４】
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表４に示すように、カルニチン誘導体は、クローディン１およびオクルディンのｍＲＮＡの発現を亢進した。