(57)【要約】      （修正有）【課題】光老化による皺改善の治療又は予防に極めて有用に使用しうる植物抽出物又はその抽出物から分離された化合物の提供。【解決手段】皺形成と関連した重要な要素であるコラーゲン分解酵素−１の発現を抑制することにより、コラーゲンの分解を抑制して新たなコラーゲンの生成を促進させ、光老化による皺を改善する効果がある、肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮から分離、精製された抽出物またはその抽出物から分離されたフラグリンＡ，オーストバイリグナン７，リカリンＥ及びメースリグナン等のリグナン系化合物を有効成分として含有する皮膚皺改善用組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１のフラグリンＡ（ｆｒａｇｒｉｎＡ），化学式２のオーストバイリグナン７（ａｕｓｔｏｂａｉｌｉｇｎａｎ），化学式３のリカリンＥ（ｌｉｃａｒｉｎ  Ｅ）及び化学式４のメースリグナン（ｍａｃｅｌｉｇｎａｎ）からなる群より選ばれたリグナン系化合物（ｌｉｇｎａｎ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）を有効成分として含有する皮膚皺改善用組成物。
【化６】
2014221804.tif 000031
（１）
2014221804.tif 000032
（２）
2014221804.tif 000033
（３）
2014221804.tif 000034
（４）
【請求項２】
前記リグナン系化合物は、肉荳蒄（ｎｕｔｍｅｇ）又は肉荳蒄仮種皮（ａｒｉｌ  ｏｆ  ｎｕｔｍｅｇ）から抽出されたことを特徴とする請求項１記載の皮膚皺改善用組成物。
【請求項３】
化学式１のフラグリンＡ（ｆｒａｇｒｉｎＡ），化学式２のオーストバイリグナン７（ａｕｓｔｏｂａｉｌｉｇｎａｎ７），化学式３のリカリンＥ（ｌｉｃａｒｉｎ  Ｅ）及び化学式４のメースリグナン（ｍａｃｅｌｉｇｎａｎ）からなる群より選ばれたリグナン系化合物の皮膚皺改善用製剤の製造の為の用途。
【請求項４】
化学式１のフラグリンＡ（ｆｒａｇｒｉｎＡ），化学式２のオーストバイリグナン７（ａｕｓｔｏｂａｉｌｉｇｎａｎ７），化学式３のリカリンＥ（ｌｉｃａｒｉｎ  Ｅ）及び化学式４のメースリグナン（ｍａｃｅｌｉｇｎａｎ）からなる群より選ばれたリグナン系化合物のコラーゲン合成誘導剤の製造の為の用途。
【請求項５】
化学式１のフラグリンＡ（ｆｒａｇｒｉｎＡ），化学式２のオーストバイリグナン７（ａｕｓｔｏｂａｉｌｉｇｎａｎ７），化学式３のリカリンＥ（ｌｉｃａｒｉｎ  Ｅ）及び化学式４のメースリグナン（ｍａｃｅｌｉｇｎａｎ）からなる群より選ばれたリグナン系化合物のコラーゲン分解抑制剤の製造の為の用途。
【請求項６】
化学式１のフラグリンＡ（ｆｒａｇｒｉｎＡ），化学式２のオーストバイリグナン７（ａｕｓｔｏｂａｉｌｉｇｎａｎ７），化学式３のリカリンＥ（ｌｉｃａｒｉｎ  Ｅ）及び化学式４のメースリグナン（ｍａｃｅｌｉｇｎａｎ）からなる群より選ばれたリグナン系化合物を、有効量で含有することを特徴とする皺改善剤。
【請求項７】
化学式１のフラグリンＡ（ｆｒａｇｒｉｎＡ），化学式２のオーストバイリグナン７（ａｕｓｔｏｂａｉｌｉｇｎａｎ７），化学式３のリカリンＥ（ｌｉｃａｒｉｎ  Ｅ）及び化学式４のメースリグナン（ｍａｃｅｌｉｇｎａｎ）からなる群より選ばれたリグナン系化合物を、有効量で含有することを特徴とするコラーゲン合成誘導剤。
【請求項８】
化学式１のフラグリンＡ（ｆｒａｇｒｉｎＡ），化学式２のオーストバイリグナン７（ａｕｓｔｏｂａｉｌｉｇｎａｎ７），化学式３のリカリンＥ（ｌｉｃａｒｉｎ  Ｅ）及び化学式４のメースリグナン（ｍａｃｅｌｉｇｎａｎ）からなる群より選ばれたリグナン系化合物を、有効量で含有することを特徴とするコラーゲン分解抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は２００７年６月２０日出願された大韓民国特許出願第１０−２００７−００６０１７８号を優先権として主張し、前記明細書全体は本発明の参考文献である。
【０００２】
本発明は肉荳蒄（ｎｕｔｍｅｇ）又は肉荳蒄仮種皮（ａｒｉｌ  ｏｆ  ｎｕｔｍｅｇ）から分離、精製したリグナン系化合物の皺改善用途に関するものであり、より詳細には肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物又はその抽出物より分離されたリグナン（ｌｉｇｎａｎ）系の物質にして、化学式１のフラグリンＡ（ｆｒａｇｒｉｎＡ）、化学式２のオーストバイリグナン７（ａｕｓｔｏｂａｉｌｉｇｎａｎ７）、化学式３のリカリンＥ（ｌｉｃａｒｉｎＥ）及び化学式４のメースリグナン（ｍａｃｅｌｉｇｎａｎ）を有効成分として含む皮膚皺改善用組成物、前記抽出物又は化合物の皮膚皺改善、コラーゲン合成誘導又はコラーゲン分解抑制の用途及び前記抽出物又は化合物の皮膚皺改善方法、コラーゲン合成誘導方法又はコラーゲン分解抑制方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
通常、皺は長期間繰返される筋肉運動により形成される皮膚の自然的な老化現象の一つである。皮膚老化は大別して自然老化又は、内因性老化と外的老化とに区分され、自然老化は遺伝的原因によるものであることから調節が難しいものの、外的老化は環境的原因によるものである為、人為的な調節が容易である。従って、外的老化を防止する為の研究が持続され、特に長期間紫外線露出により進行される外因性光老化に伴う皺形成を防止する為の研究が注目されている（Ｇｉｌｃｈｒｅ  ｓｔ  Ｂ．Ａ．，Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１９８９：２１：６１０−６１３）。
【０００４】
外因性皮膚老化である光老化の臨床的特徴は、肌が荒く弾力性がなくなり、不規則的な色素沈着が発生し、深い皺寄りが増加するのである。特に、美容の対象として重要な顔面、頭部等の皺形成には光老化の影響が大きいものとして糾明されていて、抗皺化粧品開発の基礎研究として、人体皮膚や動物モデルを利用した光老化と皺形成に関する研究が活発に進行されている。抗老化と皺形成に関しては、今まで皮膚の主要合成成分であるコラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）の合成、分解等の基礎的な生理代謝変化を検討した結果が多数報告されている（Ｌａｖｋｅｒ  Ｒ．Ｍ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｃ．，１９９５：１２３−１３５）。
【０００５】
皮膚老化に影響を及ぼす外部因子等は、風、温度、湿度、煙草の煙、公害、紫外線等があり、特に紫外線による老化を光老化と言う。多量の紫外線に露出されると、皮膚には高濃度の活性酸素（ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ）が生成され、皮膚の酵素的、非酵素的抗酸化防御系を崩壊させる。これにより皮膚組織の主蛋白質であるコラーゲンが著しく減少され、この際コラーゲン減少に重要な影響を及ぼすのがコラーゲン分解酵素（ＭＭＰ−１，ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１−１）である。コラーゲン分解酵素は、細胞外基質（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍａｔｒｉｘ）と基底膜（ｂａｓｅｍｅｎｔ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）の分解に関与する酵素であり、紫外線照射により、皮膚内のコラーゲン分解酵素−１活性が増加し、コラーゲンを著しく崩壊させるため、コラーゲン分解酵素−１等が、真皮層のコラーゲン崩壊に影響を及ぼして皺形成に極めて重要な役割をしているとの研究結果等が報告されている（Ｓｉｍ  Ｇ．Ｓ．，Ｋｉｍ  Ｊ．Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｋｏｒ．Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００５：２０（１）：４０−４５）。
【０００６】
現在開発されている皮膚皺改善有効成分等は、細胞毒性の為一部化粧品原料として使用できないか、又は極めて不安定な為、特別な安定化システムが必要な場合があり、高い分子量で皮膚への伝達が容易でない為、特別な伝達体系が必要であり、皮膚皺の改善効果が可視的でない問題点を有している。従って、最近ではレチノイド（ｒｅｔｉｎｏｉｄ）を含有した皮膚保護剤へと関心が漸次集中されつつあって、現在レチノイドは日光により蓄積された結果である皺寄り、肌の厚化、垂れ、弾力減少等の光老化現象を解決する手段として利用されている。しかしながら、レチノイドは極めて不安定な化合物であり、紫外線、水分、熱、酸素に敏感な為、容易に化学的な変化を起こす問題点を有し、これを解決する為の天然物由来の有効成分開発に研究が集中されている実情である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ここで本発明者等は皺改善に効果的に使用できる天然物由来の化合物を探して長期間探索した結果、肉荳蒄抽出物や肉荳蒄仮種皮の抽出物及びその抽出物から分離、精製されたリグナン（ｌｉｇｎａｎ）系の物質にして、フラグリンＡ（ｆｌａｇｒｉｎＡ），オーストバイリグナン７（ａｕｓｔｏｂａｉｌｉｇｎａｎ７）、リカリンＥ（ｌｉｃａｒｉｎＥ）、メースリグナン（ｍａｃｅｌｉｇｎａｎ）が皺改善に卓越な効果を有することを糾明することにより、本発明を完成した。
【０００８】
従って、本発明の目的は肉荳蒄（ｎｕｔｍｅｇ）抽出物、肉荳蒄仮種皮（ａｒｉｌ  ｏｆ  ｎｕｔｍｅｇ）の抽出物と、その抽出物から分離、精製されたたリグナン（ｌｉｇｎａｎ）系の物質としてフラグリンＡ（ｆｌａｇｒｉｎＡ），オーストバイリグナン７（ａｕｓｔｏｂａｉｌｉｇｎａｎ７）、リカリンＥ（ｌｉｃａｒｉｎＥ）、メースリグナン（ｍａｃｅｌｉｇｎａｎ）の新規な用途を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記のような目的を達成する為に、本発明は化学式１のフラグリンＡ（ｆｌａｇｒｉｎＡ）、化学式２のオーストバイリグナン７（ａｕｓｔｏｂａｉｌｉｇｎａｎ７）、化学式３のリカリンＥ（ｌｉｃａｒｉｎＥ）及び化学式４のメースリグナン（ｍａｃｅｌｉｇｎａｎ）からなる群より選ばれた、リグナン系化合物を有効成分として含有する皮膚皺改善用組成物を提供する。
【００１０】
さらに、本発明は前記リグナン系化合物の皮膚皺改善用製剤、コラーゲン合成誘導剤又はコラーゲン合成抑制剤の製造の為の用途を提供する。
【００１１】
さらに、本発明は前記リグナン系化合物を、これを必要とする個体に有効量を塗布又は投与することを特徴とする皺改善方法、コラーゲン合成誘導方法又はコラーゲン合成抑制方法を提供する。
【００１２】
さらに、本発明は肉荳蒄（ｎｕｔｍｅｇ）抽出物、又は肉荳蒄仮種皮（ａｒｉｌ  ｏｆ  ｎｕｔｍｅｇ）の抽出物を有効成分として含有する皮膚皺改善用組成物を提供する。さらに、本発明は肉荳蒄（ｎｕｔｍｅｇ）抽出物、又は肉荳蒄仮種皮（ａｒｉｌ  ｏｆ  ｎｕｔｍｅｇ）の抽出物の皮膚皺改善用製剤、コラーゲン合成誘導剤又はコラーゲン合成抑制剤の製造の為の用途を提供する。
【００１３】
さらに、本発明は肉荳蒄（ｎｕｔｍｅｇ）抽出物、又は肉荳蒄仮種皮（ａｒｉｌ  ｏｆ  ｎｕｔｍｅｇ）の抽出物を、これを必要とする個体に有効量を塗布又は投与することを特徴とする皺改善方法、コラーゲン合成誘導方法又はコラーゲン合成抑制方法を提供する。
【００１４】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１５】
本発明は肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物及びその抽出物から分離されたリグナン系の物質である、下記化学式１のフラグリンＡ、下記化学式２のオーストバイリグナン７、下記化学式３のリカリンＥ、下記化学式４のメースリグナンの新規な用途を提供することにその特徴がある。
【化１】
2014221804.tif 000002
（１）
2014221804.tif 000003
（２）
2014221804.tif 000004
（３）
2014221804.tif 000005
（４）
【００１６】
肉荳蒄は熱帯地方で栽培される多年生植物のミリスチカフラグランス（Ｍｙｒｉｓｔｉｃａ  ｆｒａｇｒａｎｓ）のであり、古くから香辛料として利用されてきた。肉荳蒄の仮種皮はヘリコバクターピロリ菌の成長抑制活性（Ｉｎ  Ｖｉｖｏ．，１７；５４１−４，２００３）、肝臓の解毒作用機能の活性化（Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，３１；５１７−２１，１９９３）、皮膚疣の化学的予防作用（Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．，５６；５９−６３，１９９１）、抗炎活性（Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４９；１５６−６３，１９９９）等が報告された。しかしながら、未だに肉荳蒄や肉荳蒄仮種皮の皺改善効果に対しては今まで全く報告された例がない。
【００１７】
本発明のリグナン系化合物は肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮から、当業界に公知の溶媒抽出法及びクロマトグラフィーを利用した分離方法により分離、精製し得る。
【００１８】
肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮における抽出は、例えば、水、エタノール、メタノール、プロパノール（ｐｒｏｐａｎｏｌ）、イソプロパノール（ｉｓｏｐｒｏｐａｎｏｌ）、ブタノール（ｂｕｔａｎｏｌ）のような炭素数１乃至６個のアルコール、アセトン、エーテル、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロライド、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル（ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ  ｅｔｈｅｒ）、ジエチルエーテル、ベンゼンのような有機溶媒の中で選ばれた、いずれか一つ又はこれらの混合溶媒を利用して抽出できる。好ましくは、水又は炭素数１乃至６個のアルコールを利用して抽出できる。  
【００１９】
抽出時の肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮の溶媒の比率は、特に限定はされないものの、肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮粉末に溶媒を１倍乃至２０倍（重量基準）に添加できる。好ましくは、抽出効率を増加させる為に、肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮粉末に対して溶媒を２倍乃至５倍（重量基準）に添加できる。
【００２０】
抽出時の温度は常圧下の室温で行うことが好ましく、抽出時間は抽出温度によって異なるものの、６時間乃至９６時間、好ましくは、３６時間乃至７２時間かけて抽出する。さらに、抽出時撹拌器（ｓｈａｋｅｒ）で撹拌する場合に一層抽出効率を増大させ得る。抽出に使用される肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮は、収穫後、洗滌してそのまま使用するか又は乾燥して使用できる。乾燥方法としては日干、陰干し、熱風乾燥及び自然乾燥する方法を全て使用できる。さらに、抽出効率を増大させる為に肉荳蒄、肉荳蒄仮種皮又はその乾燥体を粉砕機で粉砕して使用できる。
【００２１】
肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮抽出物の製造は、例えば、干した肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮を４倍乃至１０倍の抽出溶媒と共に抽出装置に入れて１〜５日間放置して抽出し、これを濃縮器で濃縮及び乾燥して抽出物を得られる。
【００２２】
前記のように得られた抽出物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ｃｏｌｕｍｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を利用して、極性に伴う分画物を得るか又は、分離された特定分画物を再び逆相カラムクロマトグラフィー（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｈａｓｅ  ｃｏｌｕｍｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及び高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を介して、フラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンを分離し得る。前記フラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンは、肉荳蒄又は肉荳蒄仮種皮から全て分離精製し得る。しかしながら、有効成分の抽出及び分離精製方法は必ずしも前記の方法に限定されるものではない。
【００２３】
前記に開示された本発明の肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンは、人体皮膚繊維芽細胞で紫外線照射により、誘導されたコラーゲン分解酵素−１（ＭＭＰ−１，ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１）の生成を濃度依存的に抑制し、コラーゲン（ｔｙｐｅ−１  ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ）合成を増加させる。同時に、毛のない鼠においても紫外線照射後処理したとき、コラーゲンの合成を増加させた。
【００２４】
従って、本発明は肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物及びその抽出物から分離、精製されたフラグリンＡ、アウストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンを有効成分として含有する皮膚皺改善用組成物を提供する。前記組成物は化粧料組成物又は食品組成物でもあり得る。
【００２５】
前記の化粧料組成物は、本発明の肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、アウストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンと共に、化粧料組成物の製造分野で一般的に使用される一つ以上の賦形剤及び添加剤を含み、当分野の公知された方法により容易に製造できる。
【００２６】
より具体的に本発明の化粧料組成物は、本発明の肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンを有効成分として含有し、皮膚学的に許容可能な賦形剤と共に、基礎化粧品組成物（化粧水、クリーム、エッセンス、クレンジングフォーム及びクレンジング）ウォーターのような洗顔剤、パック、ボディオイル、マッサージクリーム）、色素化粧品組成物（ファウンデーション、リップスティック、マスカラ、メーキャップベース）、頭髪製品組成物（シャンプー、リンス、ヘアコンデーショナー、ヘアゲル）及び石鹸等の形態で製造し得る。前記賦形剤ではこれに限定はされないものの、例えば、皮膚軟化剤、皮膚浸透増強剤、着色剤、芳香剤、乳化剤、濃化剤、及び溶媒を含むことができる。さらに、香料、色素、殺菌剤、酸化防止剤、防腐剤及び保濕剤等を追加して含むことができ、物性改善を目的に漸増剤、無機塩類、合成高分子物質等を含み得る。
【００２７】
例えば、本発明の肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンを含む洗顔剤及び石鹸を製造する場合には、通常の洗顔剤及び石鹸ベースに、本発明の抽出物又はリグナン系化合物を添加して容易に製造できる。クリームを製造する場合には、一般的な水中油滴型（Ｏ／Ｗ）のクリームベースに、本発明の抽出物又はリグナン系化合物を添加して製造することができる。ここに香料、キレート剤、色素、酸化防止剤、防腐剤等と物性改善を目的とした蛋白質、ミネラル、ビタミン等合成又は天然素材を追加して添加し得る。
【００２８】
前記本発明の化粧品組成物に含有される肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンの含量は、化粧料組成物総重量に対して、０．００５乃至１０重量％、好ましくは、０．０１乃至５重量％範囲で含有し得る。０．００５重量％未満の濃度では皺改善効果を得難く、１０重量％超配合すると使用量に比べて皺改善効果が微々たるもので、組成物の安定性の面で非経済的である。
【００２９】
さらには、本発明に伴う肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンは食品組成物の形態で提供される。本発明の食品組成物は機能性食品（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｆｏｏｄ）、栄養補助剤（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、健康食品（ｈｅａｌｔｈ  ｆｏｏｄ）及び食品添加剤（ｆｏｏｄ  ａｄｄｉｔｉｖｅｓ）等の全ての形態を含む。前記類型の食品組成物は、当業界に公知された通常的な方法により多様な形態で製造できる。
【００３０】
例えば、健康食品には、本発明の肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンを、お茶、ジュース及びドリンクの形態で製造して飲用に供するか又は、顆粒化、カプセル化及び粉末化して摂取することができる。さらに、本発明の抽出物又はリグナン系化合物と、皮膚皺の改善及び予防効果があるとして知られた公知の活性成分と共に混合して組成物の形態で製造できる。
【００３１】
さらに、機能性食品には、飲料（アルコール性飲料を含む）、果実及びその加工食品（例：果物缶詰、瓶詰、ジャム、マーマレード等）、魚類、肉類及びその加工食品（例：：ハム、ソセージ、コーンビーフ等）、パン類及び麺類（例：うどん、そば、ラーメン、スパゲッティー、マカロニ等）、果汁、各種ドリンク、クッキー、飴、乳製品（例：バター、チーズ等）、食用植物油脂、マーガリン、植物性蛋白質、レトルト食品、冷凍食品、各種調味料（例：お味噌、醤油、ソース等）等に本発明の抽出物又はリグナン系化合物を添加して製造できる。
【００３２】
さらに、本発明の抽出物又はリグナン系化合物を食品添加剤の形態で使用するには、粉末又は濃縮液形態に製造して使用し得る。
本発明の食品組成物の内、本発明の抽出物又はリグナン系化合物の好ましい含量としては、食品の全体重量に対して約０．０００１乃至５０重量％を含め得る。
【００３３】
さらに、本発明は肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンの皮膚皺改善用製剤の製造の為の用途を提供する。従って、肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンのコラーゲン合成誘導剤の製造の為の用途及び肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカメースリグナンのコラーゲン分解抑制剤の製造の為の用途を提供する。さらに本発明は、肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮抽出物の抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンをそれらを必要とする個体に、有効量を塗布又は投与することを特徴とする皮膚皺改善方法を提供する。同時に、肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンを、それらを必要とする個体に、有効量を塗布又は投与することを特徴とするコラーゲン合成を誘導する方法及び肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物、及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンを、それらを必要とする個体に有効量を塗布又は投与することを特徴とするコラーゲン分解を抑制する方法を提供する。
【００３４】
前記にて肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナン及びこれらの効果に対しては、前記記載の通りで、前記にて“有効量”とは、本発明の肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンが投与対象である個体内で、皮膚皺改善、コラーゲン合成誘導又はコラーゲン分解抑制の効果を表す量を言い、前記“個体（ｓｕｂｊｅｃｔ）”とは、哺乳動物、特に人間を含む動物を意味する。前記個体は皺改善を必要とする人間でもあり得る。本発明の肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンは、前記記載の効果の中で望む効果が導出されるまで投与することができ、当業界に公知された方法により経口又は非経口の多様な経路で投与できる。
【発明の効果】
【００３５】
本発明の肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンは、皺形成と関連した重要な要素であるコラーゲン分解酵素−１（ＭＭＰ−１，ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１）の発現を抑制することにより、コラーゲンの分解を抑制して新たなコラーゲン（ｔｙｐｅ−１  ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ）の生成を促進させ、光老化による皺を改善する効果がある。従って、本発明の肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥとメースリグナンは、光老化による皺改善の治療又は予防に極めて有用に使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は肉荳蒄仮種皮からフラグリンＡ及びオーストバイリグナン７を分離する工程図である。
【図２】図２は本発明の肉荳蒄仮種皮の７５％メタノール抽出物によるコラーゲン分解酵素−１抑制活性を示したグラフである。
【図３】図３は本発明のフラグリンＡによるコラーゲン分解酵素−１抑制活性を示したグラフである。
【図４】図４は本発明のオーストバイリグナン７によるコラーゲン分解酵素−１抑制活性を示したグラフである。
【図５】図５は肉荳蒄仮種皮からリカリンＥを分離する工程図である。
【図６】図６は肉荳蒄からメースリグナンを分離する工程図である。
【図７】図７は本発明の抽出物及びリグナン化合物の皮膚塗布時皺改善効果を確認したものである。
【図８】図８は本発明の抽出物及びリグナン化合物の経口投与の際、皺改善効果を確認したものである。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
以下、本発明を実施例により詳細に説明する。
ただし、下記実施例は本発明を例示するのみ、本発明の内容が下記実施例に限定されるものではない。
【００３８】
実施例１
肉荳蒄仮種皮からフラグリンＡ及びオーストバイリグナン７の分離精製及び構造決定
＜１−１＞フラグリンＡ及びオーストバイリグナン７の分離及び精製
乾燥粉砕した肉荳蒄仮種皮１００ｇに７５％メタノール４００ｍｌを添加して常温で二日間放置した。抽出された溶液を濾過して真空濃縮し、肉荳蒄仮種皮の７５％メタノール抽出物（１３．２６ｇ）を製造し、前記７５％メタノール抽出物をエチルアセテート、ブタノール、水で分画した。エチルアセテート分画物（１０．２９ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用して、クロロホルムとエチルアセテートを９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒で溶出させ、分画物Ｖ（０．５２）と分画物ＶＩ（０．１９ｇ）を得た。分画物Ｖをクロロホルムとエチルアセテートとアセトン２４：０．３：１（ｖ／ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒でカラムクロマトグラフィーして分画物Ｖ−Ｃ（０．０５ｇ）を得た。以降、分画物Ｖ−Ｃをリサイクリング高性能液体クロマトグラフィーを利用して１００％メタノールで溶出させ、単一物質分画のフラグリンＡ  Ｖ−Ｃ−２（０．０３ｇ）を得た。さらに、分画物ＶＩをクロロホルムとエチルアセテートとアセトン３０：１：２（ｖ／ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒でカラムクロマトグラフィして分画物ＶＩ−Ｂ（０．５２ｇ）を得た。以降、分画物ＶＩ−ＢをＲｐ−１８リサイクリング高性能液体クロマトグラフィーを利用して１００％メタノールで溶出させ、単一物質分画であるオーストバイリグナン７  ＶＩ−Ｂ−５（０．０１１ｇ）を得た。このような分離工程図を図１に示した。
【００３９】
＜１−２＞単一物質Ｖ−Ｃ−２の構造分析
前記分離された単一物質Ｖ−Ｃ−２の構造を決定する為に、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルと１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを、それぞれ６００ＭＨｚと１５０ＭＨｚ（溶媒：ＣＤＣｌ３）で測定した。１Ｈ−ＮＭＲと１３Ｃ−ＮＭＲの結果を総合的に分析して表１に示した。
【００４０】
【表１】
2014221804.tif 000006
【００４１】
１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルと１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの結果を基に、１Ｈ−１Ｈの相関関係と１Ｈ−１３Ｃの相関関係を測定する為に、１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトルと１Ｈ−１３Ｃ  ＨＭＢＣスペクトルを測定した。前記分離された単一物質の質量分析の為、ＦＡＢ／ＭＳを測定し、本化合物はＦＡＢ／ＭＳで［Ｍ］＋がｍ／ｚ３５８で観測され、分子量が３５８であり、分子式はＣ２１Ｈ２６Ｏ５であった。
【００４２】
以上の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ、１Ｈ−１３Ｃ  ＨＭＢＣ及びＦＡＢ／ＭＳに対する結果と、既に記載された参考文献（Ｍ．Ｈａｔｔｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３５，２，６６８，１９８７）を介して分離された単一物質は、下記化学式１で表示されるフラグリンＡ（ｆｒａｇｒｉｎ  Ａ，２−（４−アリル−２，６−ジメトキシフェノキシ）−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−プロパン、２−（４−ａｌｌｙｌ−２，６−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｏｘｙ）−１−（４−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−ｐｒｏｐａｎｅ）であることが確認された。
【化２】
2014221804.tif 000007
（１）
【００４３】
＜１−３＞単一物質ＶＩ−Ｂ−５の構造分析
前記分離された単一物質ＶＩ−Ｂ−５の構造を決定する為に、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルと、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルをそれぞれ６００ＭＨｚと１５０ＭＨｚ（溶媒：ＣＤＣｌ３）で測定した。
【００４４】
１Ｈ−ＮＭＲと１３Ｃ−ＮＭＲの結果を総合的に分析して表２に示した。
【００４５】
【表２】
2014221804.tif 000008
【００４６】
１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルと１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの結果を基に、１Ｈ−１Ｈの相関関係と１Ｈ−１３Ｃ相関関係を測定する為に、１Ｈ−１ＨＣＯＳＹスペクトルと１Ｈ−１３ＣＨＭＢＣスペクトルを測定した。前記分離された単一物質の質量分析の為、ＦＡＢ／ＭＳを測定し、本化合物はＦＡＢ／ＭＳで［Ｍ］＋がｍ／ｚ３４２で観測され、分子量が３４２であり、分子式はＣ２０Ｈ２２Ｏ５であった。
【００４７】
以上の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、１Ｈ−１ＨＣＯＳＹ、１Ｈ−１３Ｃ  ＨＭＢＣ及びＦＡＢ／ＭＳに対する結果と、既に記載された参考文献（ＳＴ．Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｕｓｔ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．，２８，８１，１９７５）を介して、分離された単一物質は、下記化学式２で表示されるオーストバイリグナン７（ａｕｓｔｏｂａｉｌｉｇｎａｎ７）であることが確認された。
【化３】
2014221804.tif 000009
（２）
【００４８】
実施例２
細胞増殖効果
皮膚の皺改善効果を検定する細胞増殖効果を観察する為に、繊維芽細胞を利用したＭＴＴ試験法［３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ  ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄ］を行った。
【００４９】
先ず、人体正常繊維芽細胞（ｈｕｍａｎ  ｎｏｒｍａｌ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ）を９６−ウェルプレート（９６−ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ）の各ウェルに２×１０５  細胞になるように分株して、牛胎児血清（ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ）１０％が含有されたディエムイエム（ＤＭＥＭ）培地で３７℃、５％ＣＯ２条件下で２４時間１次培養した。前記１次培養段階以後に本発明の試料を濃度別に処理してセリウム（ｓｅｒｕｍ）がない培地に替えて４８時間２次培養した。前記２次培養段階以後ＭＴＴ溶液１００μｌずつを培地に添加し、４時間放置した後培地を除去した。各ウェル当りジメチルスルホキシド（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）溶液１００μｌずつを添加して２０分間撹拌した後、マイクロプレート判読器（ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  ｒｅａｄｅｒ）で５４０ｎｍで吸光度を測定した。
【００５０】
＜実験例１＞
肉荳蒄仮種皮の抽出物とフラグリンＡ及びオーストバイリグナン７の細胞増殖効果
肉荳蒄仮種皮の７５％メタノール抽出物と、その抽出物から分離精製されたフラグリンＡ及びオーストバイリグナン７の細胞増殖効果を、前記実施例２の方法により測定した。前記ＭＴＴ試験での対照群は試料を処理していない培養液で設定した後、吸光度を測定してその結果を下記表３に示した。
【００５１】
【表３】
2014221804.tif 000010
【００５２】
表３に示した通り、本発明の肉荳蒄仮種皮抽出物と、フラグリンＡ及びオーストバイリグナン７は、比較群より細胞増殖効果が優れたことを確認することができた。
【００５３】
実施例３
繊維芽細胞紫外線照射及び試料処理とそれに伴うコラーゲン分解酵素−１の発現抑制活性測定
繊維芽細胞を２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度で６０ｍｍディッシュ（ｄｉｓｈ）に培養して約８５％水準に達するまで培養した。紫外線（ＵＶ）照射前に培地を除去した後、ＰＢＳで洗滌して培地内セリウム成分を除去した後、２０Ｊ／ｃｍ２の照射量で紫外線を照射した。紫外線照射後培養培地はセリウムを添加していないジエムイエム（ＤＭＥＭ）培地に試料を混合処理して４８時間培養した。
【００５４】
コラーゲン分解酵素−１の発現抑制活性度を測定する為に、ウェスタンブロット（ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ）法を利用した。繊維芽細胞に紫外線を照射した後、試料を処理して４８時間培養した培地を利用してコラーゲン分解酵素−１の発現程度を測定し、繊維芽細胞が培養された培地内の総蛋白質量はブラッドフォード（ｂｒａｄｆｏｒｄ）法を利用して定量した。
【００５５】
抽出された蛋白質は１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルに電気泳動させ、ニトロセルロース細胞膜（ｎｉｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）でゲルの蛋白質を転移させた。メンブレンがこれ以上他の未知の蛋白質により汚染されないように５％脱脂粉乳を利用して１時間常温で反応させ、コラーゲン分解酵素−１（ＭＭＰ−１）の１次抗体を５％脱脂粉乳に、１：１０００の比率で希釈して２時間常温で反応させた。１次抗体反応後１０分ずつ３回に亙ってＴＢＳＴ（Ｔｒｉｓ−ｂｕｆｆｅｒ  Ｓａｌｉｎｅ  Ｔｗｅｅｎ  ２０）で揺さぶりながら洗滌した。コラーゲン分解酵素−１（ＭＭＰ−１）の１次抗体を認知する２次抗体を、５％脱脂粉乳に１：１０００になるように希釈して１時間常温で反応させ、１次抗体の時と同様に１０分ずつ３回に亙ってＴＢＳＴ（Ｔｒｉｓ−ｂｕｆｆｅｒ  Ｓａｌｉｎｅ  Ｔｗｅｅｎ  ２０）で揺さぶりながら洗滌した後、化学発光法（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）で現像した。
【００５６】
＜実験例２＞
肉荳蒄仮種皮の抽出物処理の際コラーゲン分解酵素−１の発現量測定
肉荳蒄仮種皮７５％メタノール抽出物のコラーゲン分解酵素−１抑制活性効果を測定する為に、前記実施例３のウェスタンブロット法を利用してコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現程度を調査した。その結果、肉荳蒄仮種皮の抽出物を濃度別（３．５及び１０μｇ／ｍｌ）に一緒に処理した実験群と、ジメチルスルホキシド（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）０．０１％処理した陰性対照群、及びジメチルスルホキシド０．０１％処理し、ＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２を照射した陽性対照群を比較した。
【００５７】
その結果、図２に示した通り、肉荳蒄仮種皮の抽出物はコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現を濃度依存的に抑制し、処理した全ての濃度からＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２を照射した陽性対照群と比較した時、有意的な差（＊＊，ｐ＜０．０１；＊，ｐ＜０．０５）を示した。例えば、１０μｇ／ｍｌをそれぞれ処理した時、比較化合物であるビタミンＣのコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現抑制活性は、陰性対照群に比べて約２０％の抑制活性を示し、本発明の肉荳蒄仮種皮の抽出物により示された活性は６０％であることを確認した。これにより、本発明の天然物質である肉荳蒄仮種皮の抽出物が、抗老化剤の指標物質であるコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現抑制活性を示したばかりでなく、公知された抗老化物質であるビタミンＣと類似した活性を示して効率的にコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現を抑制することが分った。
【００５８】
＜実験例３＞
フラグリンＡ処理の際のコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現量測定
フラグリンＡのコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現抑制活性を測定する為に、フラグリンＡを濃度別（３．５及び１０μＭ）に一緒に処理した実験群と、ジメチルスルホキシド０．０１％処理した陰性対照群及びジメチルスルホキシド０．０１％とＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２を照射した陽性対照群を比較した。
【００５９】
その結果、図３に示した通り、フラグリンＡはコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現程度を濃度依存的に減少させ、処理した全ての濃度からＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２を照射した陽性対照群と比較した時、有意的な差（＊＊，ｐ＜０．０１；＊，ｐ＜０．０５）を示した。例えば、１０μＭをそれぞれ処理した時、比較化合物であるビタミンＣのコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現抑制活性は、陰性対照群に比べて約２０％の抑制活性を示し、本発明のフラグリンＡによる活性は、陰性対照群に比べて約６５％減少させることを確認した。これは、本発明の天然物質であるフラグリンＡが抗老化剤の指標物質であるコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現抑制活性を示したばかりでなく、公知された抗老化物質であるビタミンＣと類似した活性を示して効率的にコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現を抑制することが分った。
【００６０】
＜実験例４＞
オーストバイリグナン７処理の際のコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現量測定
オーストバイリグナン７のコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現抑制活性を測定する為に、オーストバイリグナン７を濃度別（３．５及び１０μＭ）に一緒に処理した実験群と、ジメチルスルホキシド０．０１％処理した陰性対照群及びジメチルスルホキシド０．０１％とＵＶ２０  Ｊ／ｃｍ２  を照射した陽性対照群を比較した。
その結果、図４に示した通り、オーストバイリグナン７はコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現程度を濃度依存的に減少させ、処理した全ての濃度からＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２を照射した陽性対照群と比較した時、有意的な差（＊＊，ｐ＜０．０１；＊，ｐ＜０．０５）を示した。例えば、１０μＭをそれぞれ処理した時、比較化合物であるビタミンＣのコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現抑制活性は、陰性対照群に比べて約２０％の抑制活性を示し、本発明のオーストバイリグナン７による活性は、陰性対照群に比べて約６５％減少させることを確認した。これは、本発明の天然物質であるオーストバイリグナン７が抗老化剤の指標物質であるコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現抑制活性を示したばかりでなく、公知された抗老化物質であるビタミンＣと類似した活性を示して効率的にコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現を抑制することが分った。
【００６１】
実施例４
肉荳蒄仮種皮のエタノール抽出物のコラーゲン分解酵素−１の発現抑制活性測定
乾燥粉砕した肉荳蒄仮種皮１００％にエタノール４００ｍｌを添加して常温で２日間放置した。抽出された溶液を濾過して真空濃縮し、肉荳蒄仮種皮のエタノール抽出物（１３．９８ｇ）を製造した。
【００６２】
前記製造されたエタノール抽出物に対して、前記実施例３と同一な方法でコラーゲン分解酵素−１の発現抑制活性を検定した結果、ＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２  を照射した陽性対照群と比較して、エタノール抽出物を１０μｇ／ｍｌ処理した群においてコラーゲン分解酵素−１の発現が６５％減少した。
【００６３】
実施例５
肉荳蒄仮種皮のヘキサン抽出物のコラーゲン分解酵素−１の発現抑制活性測定
乾燥粉砕した肉荳蒄仮種皮１００％にヘキサン４００ｍｌを添加して常温で２日間放置した。抽出された溶液を濾過して真空濃縮し、肉荳蒄仮種皮のヘキサン抽出物（１６．７３ｇ）を製造した。
【００６４】
前記製造された抽出物に対して、前記実施例３と同一な方法でコラーゲン分解酵素−１の発現抑制活性を検定した結果、ＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２を照射した陽性対照群と比較して、抽出物を１０μｇ／ｍｌ処理した群において、コラーゲン分解酵素−１の発現が５５％減少した。
【００６５】
実施例６乃至９
本発明の抗老化及び皺改善用組成物を含有する化粧水の製造
前記実施例４で製造された肉荳蒄仮種皮のエタノール抽出物を利用して、実施例６〜９の組成を有する化粧水を製造した。抽出物を１０．０，１．０，０．１，０．０１重量％の４種の濃度にして、それぞれエタノール一定量に溶解させ、エタノールで重量を調整して均一に混和させた（表４参照）。
【００６６】
【表４】
2014221804.tif 000011
【００６７】
実施例１０乃至１３
肉荳蒄仮種皮抽出物を含有するクリームの製造
前記実施例４で製造された肉荳蒄仮種皮のエタノール抽出物を利用して、実施例１０乃至１３の組成を有するクリームを製造した。先ず、成分２〜６は７５〜８０℃で溶解させ、成分７〜１０を同温度で溶解させた。成分７〜１０を成分２〜６に乳化させ、粗抽出物を１０．０，１．０，０．１，０．０１％の濃度でそれぞれ添加し、再混合した後最後に香料を添加して精製水で定量を合わせた（表５参照）。
【００６８】
【表５】
2014221804.tif 000012
【００６９】
実施例１４乃至１７
フラグリンＡを含有する化粧水の製造
本発明のフラグリンＡを利用して実施例１４乃至１７の組成を有する化粧水を製造した。フラグリンＡを５．０，０．１，０．０１，０．００１％の４種の濃度にしてそれぞれ水一定量に溶解させ、リン酸水溶液と混合した。エタノールとグリセリン、プロピレングリコールを混合して前記にて製造した混合物に添加して混合しながら香料、保存料を追加して水で重量を調整して均一に混和させた（表６参照）。
【００７０】
【表６】
2014221804.tif 000013
【００７１】
実施例１８乃至２１
フラグリンＡを含有するクリームの製造
本発明のフラグリンＡを利用して実施例１８乃至２１の組成を有するクリームを製造した。先ず、成分２〜６は７５〜８０℃で溶解させ、成分７〜１０を同温度で溶解させた。成分７〜１０を成分２〜６に乳化させ、フラグリンＡを５．０，０．１，０．０１，０．００１％の濃度でそれぞれ添加して再混合した後、最後に香料を添加して精製水で定量を合わせた（表７参照）。
【００７２】
【表７】
2014221804.tif 000014
【００７３】
実施例２２乃至２５
オーストバイリグナン７を含有する化粧水の製造
本発明のオーストバイリグナン７を利用して、実施例２２〜２５の組成を有する化粧水を製造した。オーストバイリグナン７を５．０，０．１，０．０１，０．００１％の４種の濃度にして、それぞれ水一定量に溶解させた後、リン酸水溶液と混合した。エタノールとグリセリン、プロピレングリコールを混合して既に製造した混合物に添加して混合しながら、保存料を追加して水で重量を調整して均一混和させた（表８参照）。
【００７４】
【表８】
2014221804.tif 000015
【００７５】
実施例２６乃至２９
オーストバイリグナン７を含有するクリームの製造
本発明のオーストバイリグナン７を利用して、実施例２６乃至２９の組成を有するクリームを製造した。先ず、成分２〜６は７５〜８０℃で溶解させ、成分７〜１０を同じ温度で溶解させた。成分７〜１０を成分２〜６に乳化させた後、オーストバイリグナン７を５．０，０．１，０．０１，０．００１％の濃度でそれぞれ添加して再混合した後、最後に香料を添加して精製水で定量を合わせた（表９参照）。
【００７６】
【表９】
2014221804.tif 000016
【００７７】
＜実験例４＞
肉荳蒄仮種皮抽出物含有組成物のコラーゲン合成量測定（Ｉｎ  ｖｉｖｏ）
毛のない鼠（ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｏｕｓｅ）に紫外線を４週間毎日１回（ＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２）照射し、実施例６〜１３の肉荳蒄仮種皮含有組成物をそれぞれ４週間毎日１００ｍｌずつ背部位に塗布した後、生検して組織学的にコラーゲンの形成を測定した。この際、新たに生成されたコラーゲン量の測定は免疫染色した後、これを画像分析を介して測定した。その結果を下記表１０に示した。
【００７８】
【表１０】
2014221804.tif 000017
【００７９】
前記表１０に示した通り、肉荳蒄仮種皮のエタノール抽出物の含量が増加するほど、コラーゲン合成量が増加し、化粧水よりクリームの場合、さらに高い活性を示すことが確認できた。これは化粧水よりクリームの残存力がより高い為と判断される。
【００８０】
＜実験例５＞
フラグリンＡ含有組成物のコラーゲン合成量測定（ｉｎ  ｖｉｖｏ）
毛のない鼠（ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｏｕｓｅ）に紫外線を４週間毎日１回（ＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２）照射し、実施例１４〜２１のフラグリンＡが含有された組成物をそれぞれ４週間毎日１００ｍｌずつ背部位に塗布した後、生検して組織学的にコラーゲンの形成を測定した。この際、新たに生成されるコラーゲン量の測定は免疫染色した後、これを画像分析を介して測定した。その結果を下記表１１に示した。
【００８１】
【表１１】
2014221804.tif 000018
【００８２】
前記表１１に示した通り、フラグリンＡの含量が増加するほど、コラーゲン合成量が増加し、化粧水よりクリームの場合、さらに高い活性を示すことが確認できた。これは化粧水よりクリームの残存力がより高い為と判断される。
【００８３】
＜実験例６＞
オーストバイリグナン７含有組成物のコラーゲン合成量測定（ｉｎ  ｖｉｖｏ）
毛のない鼠（ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｏｕｓｅ）に紫外線を４週間毎日１回（ＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２）照射し、実施例２２〜２９のオーストバイリグナン７が含量された組成物をそれぞれ４週間毎日１００ｍｌずつ背部位に塗布した後、生検して組織学的にコラーゲンの形成を測定した。この際、新たに生成されたコラーゲン量の測定は免疫染色した後、これを画像分析を介して測定した。その結果を下記表１２に示した。
【００８４】
【表１２】
2014221804.tif 000019
【００８５】
前記表１２に示した通り、オーストバイリグナン７の含量が増加するほど、コラーゲン合成量が増加され、化粧水よりクリームの場合、さらに高い活性を示すことが確認できた。これは化粧水よりクリームの残存力がより高い為と判断される。
【００８６】
実施例３０
肉荳蒄仮種皮からのリカリンＥの分離及び精製
＜３０−１＞リカリンＥの分離及び精製
乾燥粉砕した肉荳蒄仮種皮１００ｇ（乾燥重量）に９５嵩％エタノール４００ｍｌを添加して常温で２日間放置した。前記溶液をワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）濾過紙第２番を利用して濾過した。前記過程を２回繰返した。エタノール濾過液を真空濃縮して凍結乾燥し、肉荳蒄仮種皮のエタノール粗抽出物（２６．６１ｇ）を製造した。エタノール抽出物をエチルアセテート、ブタノール、水で順に分画してエチルアセテート分画物（１８．４４ｇ）を得た。エチルアセテート分画物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６６；７０−２３０  ｍｅｓｈ）を利用して、クロロホルムとエチルアセテートを９：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒で溶出させ、分画物II（３．０４ｇ）を得た。真空回転濃縮機で溶媒を完全に除去して肉荳蒄仮種皮の粗抽出物を製造した。以降、分画物IIをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６６；７０−２３０  ｍｅｓｈ）を利用して、クロロホルムとヘキサンとエチルアセテートとアセトンを１５：１０：０．１：０．１（ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒で溶出させ、分画物II−Ｂを得た。分画物II−Ｂをｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ＨＰＬＣを利用して１００％メタノールで溶出させ、単一物質分画II−Ｂ−２（０．０１６ｇ）を得た。このような分離工程図を図５に示した。
【００８７】
＜３０−２＞構造分析
前記分離された単一物質II−Ｂ−２の構造を決定する為に、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルと１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを、それぞれ６００ＭＨｚと１５０ＭＨｚ（溶媒：ＤＭＳＯ）で測定し、ＤＥＰＴスペクトルを測定した。１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲの結果を総合的に分析して表１３に示した。
【００８８】
【表１３】
2014221804.tif 000020
【００８９】
＜３０−３＞質量分析
前記分離された単一物質の質量分析の為、ＦＡＢ／ＭＳを測定し、本化合物はＦＡＢ／ＭＳにおいて［Ｍ］＋がｍ／ｚ３２４で観測され、分子量が３２４であり、分子式はＣ２０Ｈ２０Ｏ４であった。
【００９０】
以上の１Ｈ−ＮＭＲ，１３Ｃ−ＮＭＲ，ＤＥＰＴ及びＦＡＢ／ＭＳに対する結果と、既に発表された研究報告（Ｈａｒｖｅｙ  Ｄ．Ｊ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．，１１０：９１−１０２，１９７５）を比較分析して同定した結果、分離された単一物質は下記化学式３で表示されるリカリンＥ（ＬｉｃａｒｉｎＥ）であることが確認された。
【化４】
2014221804.tif 000021
（３）
【００９１】
＜実験例７＞
リカリンＥ処理時のコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現量測定
リカリンＥのコラーゲン分解酵素−１蛋白質発現抑制活性を測定する為に、前記実施例３のウェスタンブロット法を利用して発現量を照射した結果、リカリンＥを３，５，１０μＭでそれぞれ処理した時、ＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２を照射した陽性対照群と比較してそれぞれ３５％，４７％及び７３％のコラーゲン分解酵素−１抑制活性を示した。
【００９２】
これは、本発明の天然物質であるリカリンＥが抗老化剤の指標物質であるコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現を効率的に抑制することを意味する。
【００９３】
実施例３１乃至３４
リカリンＥを含有する化粧水の製造
本発明のリカリンＥを利用して実施例３１乃至３４の組成物を有する化粧水を製造した。リカリンＥを５．０，０．１，０．０１，０．００１％の４種の濃度として、それぞれ水一定量に溶解させ、リン酸水溶液と混合した。エタノールとグリセリン、プロピレングリコールを混合して前記製造した混合物に添加して混合しながら香料、保存料を追加して水で重量を調整して均一に混和させた（表１４参照）。
【００９４】
【表１４】
2014221804.tif 000022
【００９５】
実施例３５乃至３８
リカリンＥを含有するクリームの製造
本発明のリカリンＥを利用して、実施例３５乃至３８の組成を有するクリームを製造した。先ず、成分２〜６は７５〜８０℃で溶解させ、成分７〜１０を同じ温度で溶解させた。成分７〜１０を成分２〜６に乳化させ、リカリンＥを５．０，０．１，０．０１，０．００１％の濃度でそれぞれ添加して再混合した後、最後に香料を添加して精製水で定量を合わせた（表１５参照）。
【００９６】
【表１５】
2014221804.tif 000023
【００９７】
＜実験例８＞
リカリンＥが含有された組成物のコラーゲン合成量測定（Ｉｎ  ｖｉｖｏ）
毛のない鼠（ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｏｕｓｅ）に紫外線を４週間毎日１回（ＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２）照射し、実施例３１〜３８のリカリンＥが含量された組成物をそれぞれ４週間毎日１００ｍｌずつ背部位に塗布した後、生検して組織学的にコラーゲンの形成を測定した。この際、新たに生成されるコラーゲン量の測定は免疫染色した後、これを画像分析を介して測定した。その結果を下記表１６に示した。
【００９８】
【表１６】
2014221804.tif 000024
【００９９】
前記表１６に示した通り、リカリンＥの含量が増加するほど、コラーゲン合成量が増加し、化粧水よりクリームの場合、より高い活性を示すことが確認できた。これは化粧水よりクリームの残存力がより高い為と判断される。
【０１００】
実施例３９
リスチカフラグランスからメースリグナンの分離及び精製
＜３９−１＞メースリグナンの分離及び精製
乾燥粉砕した肉荳蒄１００ｇに７５％メタノール４００ｍｌを添加して常温で２日間放置した。抽出された溶液を濾過して真空濃縮し、肉荳蒄メタノール抽出物（７ｇ）を製造し，前記抽出物をエチルアセテート、ブタノール、水で分画してそれぞれの分画溶液を真空濃縮して、エチルアセテート分画物、ブタノール分画物及び水分画物を収得した。エチルアセテート分画物（４．２ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６６；７０−２３０  ｍｅｓｈ）を利用して、ヘキサンとエチルアセテートを１０：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒で溶出させ、分画物III（１ｇ）を得た。分画物IIIをヘキサンとエチルアセテート２０：１（ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒でシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６６；７０〜２３０  ｍｅｓｈ）して、分画物III−Ｂ（０．５２ｇ）を得た。以降、分画物III−ＢをＲｐ−１８カラムクロマトグラフィー（Ｍｅｒｃｋ  ＬｉＣｈｒｐｏｒｅｏ；２５−４０μｍ）を利用して８０％メタノールで溶出させ、単一物質分画物III−Ｂ−２（０．５ｇ）を得た。このような分離工程図を図６に示した。
【０１０１】
＜３９−２＞構造分析
前記分離された単一物質III−Ｂ−２の構造を決定する為に、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルと１Ｈ−ＮＭＲスペクトルをそれぞれ６００ＭＨｚと１５０ＭＨｚ（溶媒：ＤＭＳＯ）で測定した。１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルと１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの結果を基に１Ｈ−１Ｈの相関関係と１Ｈ−１３Ｃの相関関係を測定する為に、１Ｈ−１ＨＣＯＳＹスペクトルと１Ｈ−１３Ｃ  ＨＭＢＣスペクトルを測定した。１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ、１Ｈ−１３ＣのＨＭＢＣの結果を総合的に分析して下記表１７に示した。
【０１０２】
【表１７】
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【０１０３】
＜３９−３＞質量分析
前記分離された単一物質III−Ｂ−２の質量分析の為、ＥＩ／ＭＳを測定し、本化合物はＥＩ／ＭＳにおいて［Ｍ］＋がｍ／ｚ３２８で観測され、分子量が３２８であり、分子式はＣ２０Ｈ２４Ｏ４であった。
【０１０４】
＜３９−４＞比旋光度測定
前記分離された単一物質III−Ｂ−２  ２０ｍｇをクロロホルム（ＣＨＣ１３）２ｍｌに溶解させ、比旋光度測定器（Ｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒ；Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒ，ＡＰ・−５８９，Ｒｏｄｕｌｐｈ，ＮＪ，ＵＳＡ）で比旋光度（［α］Ｄ）値を測定した結果［α］Ｄ＝＋４．０（ＣＨＣ１３，ｃ＝１．０）として示された。
【０１０５】
以上の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、１Ｈ−１ＨＣＯＳＹ、１Ｈ−１３ＣＨＭＢＣ，ＥＩ／ＭＳ及び［α］Ｄに対する結果と、既に発表された研究報告（Ｗｏｏ，Ｗ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６：１５４２−１５４３，１９８７）を比較分析して同定した結果、分離された単一物質は下記化学式４で表示されるメースリグナン（ｍａｃｅｌｉｇｎａｎ）であることが確認された。
【０１０６】
【化５】
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（４）
【０１０７】
＜実験例９＞
メースリグナン処理時コラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現量測定
メースリグナンのコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現抑制活性を測定する為に、前記実施例３のウェスタンブロット法を利用して発現量を調査した結果、メースリグナンを３，５，１０μＭでそれぞれ処理した時、ＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２を照射した陽性対照群と比較してそれぞれ３１％、４２％及び６３％のコラーゲン分解酵素−１抑制活性を示した。これは本発明の天然物質であるメースリグナンが、抗老化剤の指標物質であるコラーゲン分解酵素−１の蛋白質発現を効率的に抑制することを意味する。
【０１０８】
実施例４０
肉荳蒄のエタノール抽出物のコラーゲン分解酵素−１の発現抑制活性測定
乾燥粉砕した肉荳蒄１００ｇにエタノール４００ｍｌを添加して、常温で２日間放置した。抽出された溶液を濾過して真空濃縮し、肉荳蒄エタノール抽出物（１２．７ｇ）を製造した。
【０１０９】
前記製造されたエタノール抽出物に対して前記実施例３と同一な方法でコラーゲン分解酵素−１の発現抑制活性を検定した結果、エタノール抽出物をそれぞれ５μｇ／ｍｌと１０μｇ／ｍｌ処理した群より、ＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２を照射した陽性対照群と比較して、コラーゲン分解酵素−１の発現がそれぞれ３８％と７５％減少した。
【０１１０】
実施例４１
肉荳蒄のヘキサン抽出物のコラーゲン分解酵素−１の発現抑制活性測定
乾燥粉砕した肉荳蒄１００ｇにヘキサン４００ｍｌを添加して常温で２日間放置した。抽出された溶液を濾過して真空濃縮し、肉荳蒄エタノール抽出物（２６．６ｇ）を製造した。
【０１１１】
前記製造されたヘキサン抽出物に対して、前記実施例３と同一な方法でコラーゲン分解酵素−１の発現抑制活性を検定した結果、ヘキサン抽出物をそれぞれ５μｇ／ｍｌと１０μｇ／ｍｌ処理した群で、ＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２を照射した陽性対照群と比較して、コラーゲン分解酵素−１の発現がそれぞれ３２％と６８％減少した。
【０１１２】
＜実験例１０＞
肉荳蒄抽出物及びメースリグナンのｉｎ  ｖｉｖｏ皺改善効能検証
実験動物は６週令の雌ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｏｕｓｅ（Ｓｋｈ：ＨＲ−１）を１週間適応期を経て、温度２３±３℃、相対湿度５０±５％、明暗周期１２時間（０７：００〜１９：００／照明時間）に維持しながら飼育した。試料はマウス専用試料を自由給餌し、飲水は水道水を自由給水した。ＵＶ照射は週３回同一な時間に実施し、ＵＶ照射量は１週次は５０ｍＪ／ｃｍ２、２週次は１００ｍＪ／ｃｍ２、３週次は２００ｍＪ／ｃｍ２、以降、最終の週までは２５０ｍＪ／ｃｍ２で照射した。正常群（ｃｏｎｔｒｏｌ）、ＵＶ対照群（ＵＶ  ｃｏｎｔｒｏｌ）、ＵＶ／肉荳蒄抽出物及びＵＶ／メースリグナンの総４個群に区分した。実験物質の塗布は６％（ｗ／ｖ）肉荳蒄抽出物と２０ｍＭメースリグナン溶液をそれぞれ５０μｌずつ塗布した。この時、肉荳蒄抽出物とメースリグナンエタノール：ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ＝７：３（ｖ／ｖ）の混合液に溶解した。
【０１１３】
実験終了後皺改善効果の判定の為、ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｏｕｓｅの背部位にシリコンポリマー（ＳＩＬＦＬＯ  ｉｍｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｍａｔｅｒｉａｌ）を利用してｒｅｐｌｉｃａを採取して皺形成を分析した結果、図７に示した通り、ＵＶ照射後肉荳蒄抽出物とメースリグナンを塗布した群全てから、ＵＶを照射した対照群に比べて皺が著しく抑制されることを確認することができた。図７でＡは正常群、ＢはＵＶを照射した対照群、Ｃは肉荳蒄抽出物塗布群、Ｄはメースリグナン塗布群を示した。
【０１１４】
＜実験例１１＞
肉荳蒄抽出物及びメースリグナンの口腔投与によるｉｎ  ｖｉｖｏ皺改善効能検証
実験動物は６週令の雌ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｏｕｓｅ（Ｓｋｈ：ＨＲ−１）を１週間適応期を経て、温度２３±３℃、相対湿度５０±５％、明暗周期１２時間（０７：００〜１９：００／照明時間）に維持しながら飼育した。試料はマウス専用試料を自由給餌し、飲水は水道水を自由給水した。ＵＶ照射は週３回同一な時間に実施し、ＵＶ照射量は１週次は５０ｍＪ／ｃｍ２、２週次は１００ｍＪ／ｃｍ２、３週次は２００ｍＪ／ｃｍ２、以降、最終の週までは２５０ｍＪ／ｃｍ２で照射した。正常群（ｃｏｎｔｒｏｌ）、ＵＶ対照群（ＵＶ  ｃｏｎｔｒｏｌ）、ＵＶ／肉荳蒄抽出物及びＵＶ／メースリグナンの総４個群に区分した。実験物質は肉荳蒄抽出物とメースリグナンをそれぞれ２００ｍｇ／ｋｇと２０ｍｇ／ｋｇで経口投与した。この時、肉荳蒄抽出物とメースリグナンは０．２５％ＣＭＣ（ｃａｒｂｏｘｙｌ  ｍｅｔｈｙｌ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）溶液に溶解した。実験終了後皺改善効果の判定の為、ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｏｕｓｅの背部位にシリコンポリマー（ＳＩＬＦＬＯ  ｉｍｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｍａｔｅｒｉａｌ）を利用してｒｅｐｌｉｃａを採取して皺形成を分析した結果、図８に示した通り、ＵＶ照射後肉荳蒄抽出物とメースリグナンを経口投与した群全てから、ＵＶを照射した対照群に比べて皺が著しく抑制されることを確認することができた。図８でＡは正常群、ＢはＵＶを照射した対照群、Ｃは肉荳蒄抽出物経口投与群、Ｄはメースリグナン経口投与群を示した。
【０１１５】
実施例４２乃至４５
メースリグナンを含有する化粧水の製造
本発明のメースリグナンを利用して、実施例４２乃至４５の組成を有する化粧水を製造した。メースリグナンを５．０，０．１，０．０１，０．００１％の４種の濃度にして、それぞれ水の一定量に溶解させ、リン酸水溶液と混合した。エタノールとグリセリン、プロピレングリコールを混合して前記にて製造した混合物に添加して混合しながら香料、保存料を追加して水で重量を調整して均一に混和させた（表１８参照）。
【０１１６】
【表１８】
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【０１１７】
実施例４６乃至４９
メースリグナンを含有するクリームの製造
本発明のメースリグナンを利用して、実施例４６乃至４９の組成を有するクリームを製造した。先ず、成分２〜６は７５〜８０℃で溶解させ、成分７〜１０を同じ温度で溶解した。成分７〜１０を成分２〜６に乳化させ、メースリグナンを５．０，０．１，０．０１，０．００１％の濃度で、それぞれ添加して再混合した後、最後に香料を添加して精製水で定量を合わせた（表１９参照）。
【０１１８】
【表１９】
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【０１１９】
＜実験例１１＞
メースリグナン含有組成物のコラーゲン合成量測定（Ｉｎ  ｖｉｖｏ）
毛のない鼠（ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｏｕｓｅ）に紫外線を４週間毎日１回（ＵＶ２０Ｊ／ｃｍ２）照射し、実施例４０〜４７のメースリグナンが含量された組成物をそれぞれ４週間、毎日１００ｍｌずつ背部位に塗布した後、生検して組織学的にコラーゲンの形成を測定した。この際、新たに生成されるコラーゲン量の測定は免疫染色した後、これを画像分析を介して測定した。その結果を下記表２０に示した。
【０１２０】
【表２０】
2014221804.tif 000029
【０１２１】
前記表２０に示した通り、メースリグナンの含量が増加するほど、コラーゲン合成量が増加し、化粧水よりクリームの場合、より高い活性を示すことが確認できた。これは化粧水よりクリームの残存力がより高い為と判断される。
【０１２２】
実施例５０乃至５３
本発明のリグナン化合物を含む飲料の製造
通常の飲料生産方法により、下記表２１に示した通りの成分を混合して（全体１０００ｍｌ）１時間かけて、約８５℃で撹拌しながら混合して製造された溶液を滅菌することにより、本発明のリグナン化合物を含む飲料を製造した。
【０１２３】
【表２１】
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【産業上の利用可能性】
【０１２４】
上述した通り、本発明の肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥ、メースリグナンは皺の形成と関連した重要な要素であるコラーゲン分解酵素−１（ＭＭＰ−１，ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１）の発現を抑制することにより、コラーゲンの分解を抑制して新たなコラーゲン（ｔｙｐｅ−１  ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ）の生成を促進させ、光老化による皺を改善する効果がある。従って、本発明の肉荳蒄抽出物、肉荳蒄仮種皮の抽出物及びその抽出物から分離精製されたフラグリンＡ、オーストバイリグナン７、リカリンＥ、メースリグナンは光老化による皺改善の治療又は予防に極めて有用に使用し得る。
【図１】
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【図５】
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【図６】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図７】
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【図８】
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