(57)【要約】【課題】ＡＩ−２を阻害する活性を有し、齲蝕又は歯周病の予防及び治療等に有効な、ＡＩ−２の提供。【解決手段】プレゴンを有効成分とするＡＩ−２阻害剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
プレゴンを有効成分とするＡＩ−２阻害剤。
【請求項２】
プレゴンを有効成分とする歯周病の予防又は治療剤。
【請求項３】
プレゴンを有効成分とする齲蝕の予防又は治療剤。
【請求項４】
プレゴンを０．０００１質量％以上１質量％以下で含有する請求項１記載のＡＩ−２阻害剤、請求項２記載の歯周病の予防又は治療剤、又は請求項３記載の齲蝕の予防又は治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、感染症の予防又は治療に有用なオートインデューサー−２（以下、「ＡＩ−２」と称する）阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
自然界において、微生物は様々な環境下で生存しなければならない。貧栄養、温度変化、ｐＨ変化はもちろんのこと、生体内においては貪食細胞又は抗菌性液性因子（補体、抗体、リゾチーム等）が存在する環境での生存を余儀なくされる。このような状況下で、細菌は自らの存在環境の変化を敏感に感知する機構を獲得してきた。そうした機構の１つとして、細菌は特異的な情報伝達物質を介して環境における自らの密度を感知し、その密度に応じて自らの様々な生物活性を巧妙に制御していることが明らかとなっている。このような細胞間の情報伝達機構は、クオラムセンシングシステムと称される。
【０００３】
クオラムセンシングは、発光性海洋細菌であるビブリオ・フィシェリ及びビブリオ・ハーベイにおいて最初に報告された。しかし、最近では、多くの細菌における一般的な遺伝子調節機構であると認識されている。この現象により、細菌は、生物発光、スウォーミング、バイオフィルム形成、タンパク質分解酵素の産生、抗生物質の合成、遺伝子受容能の発達、プラスミド接合伝達、病原因子産生及び胞子形成などといった活動を一斉に行うことができる。
【０００４】
クオラムセンシングシステムを有する細菌は、オートインデューサーと呼ばれるシグナル伝達分子を合成し、放出し、そのシグナル伝達分子に応答して、遺伝子発現を細胞密度の関数として制御する。これまで、アシルホモセリンラクトンがオートインデューサー−１（ＡＩ−１）として、４，５−ジヒドロキシ−２，３−ペンタンジオンがオートインデューサー−２（ＡＩ−２）として同定されている。
【０００５】
ビブリオ属細菌、緑膿菌、セラチア、エンテロバクター等臨床上重要な細菌がクオラムセンシングにＡＩ−１を利用することが報告されている。また、ビブリオ・ハーベイが、種内連絡には種特異性の高いＡＩ−１を利用し、種間連絡には種特異性の低いＡＩ−２を利用することが知られている（非特許文献１）。さらに最近の研究では、ある種の病原性細菌がＡＩ−２による種間でのクオラムセンシングにより、病原因子の産生を調節していることも示されている。このような病原性細菌としては、齲蝕原因菌であるストレプトコッカス・ミュータンス（Streptococcus  mutans）、齲蝕とは相関性が無い歯周組織の疾患である歯周病の原因と言われているポリフィロモナス・ジンジバリス等が挙げられる。そして、生体内において、ＡＩ−２量と歯周病の症状とが相関関係を有することも明らかにされている（特許文献１及び２）。
【０００６】
したがって、ＡＩ−２を阻害する物質は、各種感染症の予防又は治療に有用であると考えられ、これまでに、フラノン化合物、シクロペンテン化合物などが報告されている（例えば、特許文献１、３及び４）。
【０００７】
一方、プレゴンは、香料として使われている物質である。しかしながら、プレゴンにＡＩ−２阻害作用があること、また齲蝕や歯周病等の口腔疾患に対して有用であることはこれまでに知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００９−１１４１２０号公報
【特許文献２】特開２０１０−２５６１９０号公報
【特許文献３】特表２００３−５３２６９８号公報
【特許文献４】特表２００５−５０６９５３号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Bassler et al.Bacteriol.179:4043-4045,1997
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、ＡＩ−２を阻害する活性を有し、齲蝕又は歯周病の予防又は治療等に有効な、ＡＩ−２阻害剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者等は、上記課題に鑑み鋭意検討を行った結果、プレゴンがＡＩ−２を阻害する活性を有し、齲蝕や歯周病の予防又は治療に対して有用であることを見出した。
【００１２】
すなわち、本発明は以下の１）〜３）に係るものである。
１）プレゴンを有効成分とするＡＩ−２阻害剤。
２）プレゴンを有効成分とする齲蝕の予防又は治療剤。
３）プレゴンを有効成分とする歯周病の予防又は治療剤。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、優れたＡＩ−２阻害活性を有し、齲蝕や歯周病等の予防又は治療に有用な医薬品、医薬部外品若しくは食品、又は医薬品等に配合して同効果を付与するための素材を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明に用いるプレゴンは、下記式で表される環状モノテルペン化合物（５−メチル−２−（１−メチルエチリデン）シクロヘキサノン）である。斯かるプレゴンには、立体異性体が存在し、本発明では、純粋な立体異性体又はそれらの混合物を用いることができる。
【００１５】
【化１】
2014136696.tif 000002
【００１６】
本発明に用いるプレゴンは広く一般に入手できる。市販のものを用いてもよいし、通常の合成方法により化学合成しても良い。例えば、シトロネル酸を無水酢酸中、少量の硫酸で処理することにより、得ることができる（香料化学総覧[III]、廣川書店、1979）。
【００１７】
本発明において、プレゴンは、そのまま使用してもよいし、溶媒に溶解／分散させて用いてもよい。ここで、溶媒としては特に制限はないが、水、エタノール、ポリオール類（プロピレングリコール、ブチレングリコール、グリセリン、及びポリエチレングリコール等）、及びこれらの混液が挙げられる。
【００１８】
本発明におけるＡＩ−２としては、下記式で表される４，５−ジヒドロキシ−２，３−ペンタンジオン（本明細書において、ＤＰＤともいう）、及びＤＰＤが有するＡＩ−２活性と同等のＡＩ−２活性を有する化合物が挙げられる。
【００１９】
【化２】
2014136696.tif 000003
【００２０】
前記ＤＰＤは、細菌のＡＩ−２受容体と結合するときにボロンを取り込んで、フラノシルボレートジエステルに変換される。本発明におけるＡＩ−２には、前記フラノシルボレートジエステルが包含される。また、ＤＰＤはリン酸化されてリン酸化ＤＰＤ（Phospho-DPD）となり、ＡＩ−２活性を発現することが知られていることから（例えば、Taga  M．et  al.，Mol．Microbiol.，2001，42，p．777-793参照）、本発明におけるＡＩ−２には、リン酸化ＤＰＤも包含される。
【００２１】
前記フラノシルボレートジエステル及びPhospho-DPDの化学構造式を以下に示す。
【００２２】
【化３】
2014136696.tif 000004
【００２３】
本発明においてＡＩ−２を阻害することは、ＡＩ−２がクオラムセンシングを介して細菌に及ぼす影響を阻害することをさし、ＡＩ−２活性を阻害すること、ＡＩ−２を分解すること、ＡＩ−２のＡＩ−２受容体への結合を阻害することなどが包含される。
【００２４】
本発明においてＡＩ−２活性は、ＡＩ−２がクオラムセンシングシステムを有する細菌に影響を及ぼす活性、すなわち、ＡＩ−２を介するクオラムセンシングによりもたらされる細菌の機能を促進する活性をさす。細菌は、ＡＩ−２を介するクオラムセンシングにより、発光、スウォーミング、バイオフィルム形成、タンパク質分解酵素の産生、抗生物質の合成、遺伝子受容能の発達、プラスミド接合伝達、病原因子産生及び胞子形成等を行うことが知られている。したがって、ＡＩ−２活性は、換言すれば、ＡＩ−２を認識する細菌、すなわちＡＩ−２受容体を有する細菌による生物発光、スウォーミング、バイオフィルム形成、タンパク質分解酵素の産生、抗生物質の合成、遺伝子受容能の発達、プラスミド接合伝達、病原因子産生及び／又は胞子形成の活性ということができる。本発明においてＡＩ−２活性は、特に、細菌の病原因子産生活性をさす。
【００２５】
前記病原因子としては、例えば、エンテロトキシン、アデニル酸シクラーゼ毒素、アドヘシン、アルカリプロテアーゼ、溶血毒、炭疽毒素、ＡＰＸ毒素、α毒素、β毒素、δ毒素、Ｃ２毒素、Ｃ３毒素、ボツリヌス毒素、束状線毛構造サブユニット、Ｃ５Ａペプチダーゼ、心臓毒、走化性、コレラ毒素、毛様体毒素、クロストリジウム細胞毒、クロストリジウム神経毒、コラーゲン接着遺伝子、細胞溶解素、嘔吐毒素、内毒素、表皮剥脱毒素、外毒素、細胞外エラスターゼ、フィブリノゲン、フィブロネクチン結合タンパク質、線維状赤血球凝集素、フィンブリア、ゼラチナーゼ、赤血球凝集素、ロイコトキシン、リポタンパク質シグナルペプチダーゼ、リステリオリシンＯ、Ｍタンパク質、神経毒、非フィンブリアアドヘシン類、浮腫因子、透過酵素、百日咳毒素、ホスホリパーゼ、線毛、孔形成毒素、プロリンパーミアーゼ、セリンプロテアーゼ、志賀毒素、破傷風毒素、チオール活性化細胞溶解素、気管細胞溶解素、ウレアーゼなどが挙げられるが、本発明はこれらに制限されない。
【００２６】
ＡＩ−２活性は、ＡＩ−２を認識することにより発光するレポーター細菌、好ましくはＡＩ−２受容体及びルシフェラーゼを有する細菌を用いるバイオアッセイにより測定することができる（例えば、Keersmaecker  S．C．J．et  al.，J．Biol．Chem.，2005，280(20)，p．19563-19568参照）。具体的には、ビブリオ・ハーベイ（Vibrio  harveyi）ＢＢ１７０株をレポーター細菌とし、被検化合物の存在下で培養し、培養後の発光強度をケミルミネッセンス計などで測定することにより、ＡＩ−２活性を測定することができる。
【００２７】
本発明のＡＩ−２阻害剤で影響を及ぼすことができる細菌、換言すれば、本発明のＡＩ−２阻害剤で増殖・生育を抑制できる細菌は、ＡＩ−２によりその機能、例えば、生物発光、スウォーミング、バイオフィルム形成、タンパク質分解酵素の産生、抗生物質の合成、遺伝子受容能の発達、プラスミド接合伝達、病原因子産生及び胞子形成などが促進される細菌である。例えば、ＡＩ−２受容体を有する細菌、好ましくはＡＩ−２受容体を有し、ＡＩ−２を産生する細菌を対象とすることができる。
【００２８】
ＡＩ−２を阻害することにより影響を及ぼす、又は増殖・生育を抑制することができる細菌としては、例えば、ビブリオ（Vibrio）属細菌、シュードモナス（Pseudomonas）属細菌、ポルフィロモナス（Porphyromonas）属細菌、エルシニア（Yersinia）属細菌、エシェリキア（Escherichia）属細菌、サルモネラ（Salmonella）属細菌、ヘモフィルス（Haemophilus）属細菌、ヘリコバクター（Helicobacter）属細菌、バシラス（Bacillus）属細菌、ボレリア（Borrelia）属細菌、ナイセリア（Neisseria）属細菌、カンピロバクター（Campylobacter）属細菌、デイノコッカス（Deinococcus）属細菌、ミコバクテリウム（Mycobacterium）属細菌、エンテロコッカス（Enterococcus）属細菌、ストレプトコッカス（Streptococcus）属細菌、シゲラ（Shigella）属細菌、エロモナス（Aeromonas）属細菌、エイケネラ（Eikenella）属細菌、クロストリジウム（Clostridium）属細菌、スタフィロコッカス（Staphylococcus）属細菌、ラクトバシラス（Lactobacillus）属細菌、アクチノバシラス（Actinobacillus）属細菌、アクチノマイセス（Actinomyces）属細菌、バクテロイデス（Bacteroides）属細菌、カプノサイトファガ（Capnocytophaga）属細菌、クレブシエラ（Klebsiella）属細菌、ハロバシラス（Halobacillus）属細菌、フゾバクテリウム（Fusobacterium）属細菌、エルウィニア（Erwinia）属細菌、エルベネラ（Elbenella）属細菌、リステリア（Listeria）属細菌、マンヘミア（Mannheimia）属細菌、ペプトコッカス（Peptococcus）属細菌、プレボテラ（Prevotella）属細菌、プロテウス（Proteus）属細菌、セラチア（Serratia）属細菌、ベイロネラ（Veillonella）属細菌及びアグリゲイティバクター（Aggregatibacter）属細菌などが挙げられる。より具体的には、ビブリオ・ハーベイ（Vibrio  harveyi）、ビブリオ・フィシェリ（Vibrio  fischeri）、コレラ菌（Vibrio  cholerae）、腸炎ビブリオ（Vibrio  parahaemolyticus）、ビブリオ・アルギノリチカス（Vibrio  alginolyticus）、シュードモナス・ホスホレウム（Pseudomonas  phosphoreum）、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas  gingivalis）、エルシニア・エンテロコリチカ（Yersinia  enterocolitica）、大腸菌（Escherichia  coli）、ネズミチフス菌（Salmonella  typhimurium）、インフルエンザ菌（Haemophilus  influenzae）、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter  pylori）、枯草菌（Bacillus  subtilis）、ボレリア・ブルグドルフェリ（Borrelia  burgfdorferi）、髄膜炎菌（Neisseria  meningitidis）、淋菌（Neisseria  gonorrhoeae）、ペスト菌（Yersinia  pestis）、カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter  jejuni）、デイノコックス・ラジオデュランス（Deinococcus  radiodurans）、結核菌（Mycobacterium  tuberculosis）、エンテロコッカス・フェカリス（Enterococcus  faecalis）、肺炎レンサ球菌（Streptococcus  pneumoniae）、化膿レンサ球菌（Streptococcus  pyogenes）、ストレプトコッカス・ミュータンス（Streptococcus  mutans）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus  aureus）、箕田赤痢菌（Shigella  flexneri）、シゲラ・ボイディ（Shigella  boydii）、セレウス菌（Bacillus  cereus）、バシラス・クブチリス（Bacillus  cubtilis）、エロモナス・ハイドロフィラ（Aeromonas  hydrophila）、チフス菌（Salmonella  enterica）、エイケネラ・コロデンス（Eikenella  corrodens）、ヘリコバクター・ヘパティカス（Helicobacter  hepaticus）、ウェルシュ菌（Clostridium  perfringens）、スタフィロコッカス・ハエモリティカス（Staphylococcus  haemolyticus）、ラクトバシラス・ガセリ（Lactobacillus  gasseri）、ラクトバシラス・アシドフィラス（Lactobacillus  acidophilus）、ラクトバシラス・ロイテリ（Lactobacillus  reuteri）、ラクトバシラス・サリバリウス（Lactobacillus  salivarius）、ラクトバシラス・カゼイ（Lactobacillus  casei）、ストレプトコッカス・サンギニス（Streptococcus  sanguinis）、ストレプトコッカス・アンギノーサス（Streptococcus  anginosus）、ストレプトコッカス・オラリス（Streptococcus  oralis）、ストレプトコッカス・ボビス（Streptococcus  bovis）、ストレプトコッカス・ゴルドニ（Streptococcus  gordonii）、ストレプトコッカス・ミティス（Streptococcus  mitis）、アクチノバシラス・アクチノマイセテムコミタンス（Actinobacillus  actinomycetemcomitans）、ビブリオ・ブルニフィカス（Vivrio  vulnificus）、ビブリオ・ミミクス（Vibrio  mimicus）、ビブリオ・アングイラルム（Vibrio  anguillarum）、ラクトバシラス・ラムノサス（Lactobacillus  rhamnosus）、エルウィニア・アミロボラ（Erwinia  amylovora）、エルウィニア・カロトバラ（Erwinia  carotovara）、ハロバシラス・ハロフィラス（Halabacilus  halophilus）、セラチア・ピムチカ（Serratia  pymuthica）、セラチア・マルセセンス（Serratia  marcescens）、バクテロイデス・フラジリス（Bacteroides  fragilis）、バクテロイデス・ブルガタス（Bacteroides  vulgatus）、バクテロイデス・ディスタソニス（Bacteroides  distasonis）、リステリア・モノサイトジェネス（Listeria  monocytogenes）、スタフィロコッカス・エピデルミディス（Staphylococcus  epidermidis）、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium  difficile）、エロモナス・ハイドロフィリア（Aeromonas  hydrophilia）、マンヘイミア・ハエモライティカ（Mannhemia  haemolytica）、クレブシエラ・ニューモニアエ（Klebsiella  pneumoniae）、バシラス・アンスラシス（Bacillus  anthracis）、カンピロバクター・コリ（Campylobacter  coli）、カンピロバクター・レクタス（Campylobacter  rectus）、プロテウス・ミラビリス（Proteus  mirabilis）、アクチノマイセス・ナエスランディ（Actinomyces  naeslundii）、アクチノマイセス・ビスコーサス（Actinomyces  viscosus）、アクチノマイセス・イスラエリー（Actinomyces  israelii）、ペプトコッカス・アナエロビウス（Peptococcus  anaerobius）、フゾバクテリウム・ヌクレアタム（Fusobacterium  nucleatum）、ベイロネラ・パルラ（Veillonella  parvula）、カプノサイトファガ・スプティゲナ（Capnocytophaga  sputigena）、プレボテラ・インタメディア（Prevotella  intermedia）及びアグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（Aggregatibacter  actinomycetemcomitans）などが挙げられる。
【００２９】
本発明のＡＩ−２阻害剤の有効成分は、ストレプトコッカス・ミュータンス、ポルフィロモナス・ジンジバリス、ストレプトコッカス・オラリス、ストレプトコッカス・ゴルドニ、ストレプトコッカス・サンギニス、ストレプトコッカス・ミティス、アクチノマイセス・ナエスランディ、ペプトコッカス・アナエロビウス、アクチノバシラス・アクチノマイセテムコミタンス、フゾバクテリウム・ヌクレアタム、ベイロネラ・パルラ、カプノサイトファガ・スプティゲナ、プレボテラ・インタメディア及びラクトバシラス・サリバリウスなどに対するＡＩ−２の阻害に対し、特に好ましく用いられる。
【００３０】
プレゴンは、後記実施例に示すように、ビブリオ・ハーベイにおけるＡＩ−２活性を抑制する。生体内において、ＡＩ−２量と歯周病の症状とが相関関係を有し、ＡＩ−２阻害剤を投与することにより歯槽骨の吸収が抑制され、歯周病等の口腔内感染症の症状を低減できる（前記特許文献1及び２参照）。したがって、プレゴンは、ＡＩ−２を利用するクオラムセンシングシステムを有する細菌に関連する感染症の症状を低減するために使用できる。ここで、感染症としては、好適には口腔、食道及び気道等における感染症が挙げられ、より具体的には、ストレプトコッカス・ミュータンス等により引き起こされる齲蝕；ポルフィロモナス・ジンジバリス等により引き起こされる歯肉炎、歯骨炎等の歯周病などが挙げられる（Yoshida  A．et  al.,Appl．Environ．Microbiol.，2005，71(5)，p．2372-2380；Wen  Z．T．et  al.，J．Bacteriol.，2004，189(9)，p．2682-2691；Osaki  T.  et  al.，J．Med．Microbiol.，2006，55(Pt11)，p．1477-1485；及びOhtani  K．et  al.，Mol．Microbiol.，2002，44(1)，p．171-179等参照）。
ここで、当該「使用」は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。ここで、「非治療的」とは、医療行為、すなわち治療による人体への処理行為を含まない概念である。
すなわち、プレゴンは、ＡＩ−２阻害剤、歯周病予防又は治療剤、齲蝕予防又は治療剤（以下、ＡＩ−２阻害剤等と称する）として使用することができ、さらにこれらの剤を製造するために使用することができる。
また、ＡＩ−２阻害剤を適用することにより、ＡＩ−２を介した細菌の種間でのクオラムセンシングが阻害され、歯垢原因物質の産生を抑制することができる。したがって、プレゴンは歯垢形成抑制剤としても使用できる。
【００３１】
また、後記実施例に記載のとおり、プレゴンは感染症の原因菌に対して抗菌性を示さない濃度でＡＩ−２阻害活性を有する。従って、この場合の、本発明のＡＩ−２阻害剤等は、非抗菌性のＡＩ−２阻害剤等であり、抗菌作用によらず、ＡＩ−２を認識する病原細菌による各種感染症、特に歯周病や齲蝕の予防、治療若しくは改善を可能とする。したがって、抗菌性の歯周病又は齲蝕の予防又は治療剤とは区別される。尚、「非抗菌性」とは、細菌の増殖及び／又は生育を抑制しないことをさす。
【００３２】
尚、本明細書において、歯周病又は齲蝕の予防には、歯周病又は齲蝕の発症を抑えること及び遅延させることが含まれ、歯周病又は齲蝕になる前の予防だけではなく、治療後の歯周病又は齲蝕の再発に対する予防も含まれる。本明細書において歯周病又は齲蝕の治療には、歯周病又は齲蝕を治癒すること、症状を改善すること及び症状の進行を抑えることが包含される。
【００３３】
本発明のＡＩ−２阻害剤等の投与対象は、好ましくは温血脊椎動物であり、より好ましくは哺乳動物である。本明細書において哺乳動物は、例えば、ヒト、並びにサル、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタなどの非ヒト哺乳動物が挙げられる。本発明のＡＩ−２阻害剤等は、ヒト、サルなどの霊長類、特にヒトへの投与に好適である。歯周病又は齲蝕に罹患しているヒト、歯周病又は齲蝕と診断されているヒト、歯周病又は齲蝕に罹患する可能性があるヒト、歯周病又は齲蝕を予防する必要があるヒトに投与することが特に好ましい。
【００３４】
当該ＡＩ−２阻害剤等は、それ自体、ＡＩ−２阻害、齲蝕、歯周病等の細菌性口腔疾患の予防、治療又は改善効果を発揮する、ヒト若しくは動物用の医薬品、医薬部外品又は食品であってもよく、又は当該医薬品、医薬部外品、食品等に配合して使用される素材又は製剤であってもよい。このとき、当該ＡＩ−２阻害剤等には、本発明のプレゴンを単独で、又はこれ以外に、必要に応じて、後述の配合すべき対象物において許容される担体等を配合してもよい。なお、当該製剤は配合すべき対象物に応じて常法により製造することができる。
また、食品としては、ＡＩ−２阻害、齲蝕又は歯周病の予防又は治療、改善等の生理機能をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した飲食品、機能性飲食品、病者用飲食品、特定保健用食品等を包含する。
【００３５】
上記医薬品（医薬部外品も含む）の剤形は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、静脈内注射、筋肉注射剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤、湿布剤、パップ剤、軟膏、ローション、クリーム、口腔用製剤等の何れでもよく、投与形態も、経口投与（内用）、非経口投与（外用、注射）の何れであってもよいが、好ましい形態は経口投与である。
このような種々の剤型の医薬製剤は、プレゴンを単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせることにより調製することができる。
【００３６】
上記食品の形態は、固形、半固形又は液状であり得、例えば、パン類、ケーキ類、麺類、菓子類、ゼリー類、冷凍食品、アイスクリーム類、乳製品、飲料等の各種食品の他、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）が挙げられる。また、飲料は、例えば、果汁飲料、炭酸飲料、茶系飲料、ニアウオーター、スポーツ飲料、乳飲料、アルコール飲料、清涼飲料等が挙げられる。
種々の形態の食品は、プレゴンを単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせることにより調製することができる。
【００３７】
本発明のＡＩ−２阻害剤等の投与量は、ＡＩ−２を阻害しうる量であればよく、投与方法、年齢、症状等により適宜決定することができる。例えば、プレゴンとして、１日あたり、体重１ｋｇあたり、経口投与で通常０．００００１ｍｇ以上、好ましくは０．０００１ｍｇ以上、通常１ｍｇ以下、好ましくは０．１ｍｇ以下であり、例えば０．００００１〜１ｍｇ、好ましくは０．０００１〜０．１ｍｇが挙げられる。
【００３８】
本発明のＡＩ−２阻害剤におけるプレゴンの含有量は、上記投与量を達成するように適宜決定できる。例えば、本発明のＡＩ−２阻害剤等において、プレゴンの含有量は０．０００１質量％以上が好ましく、０．００１質量％以上がより好ましく、１質量％以下が好ましく、０．１質量％以下がより好ましい。例えば０．０００１〜１質量％、好ましくは０．００１〜０．１質量％が挙げられる。
【００３９】
上述した実施形態に関し、本発明においてはさらに以下の態様が開示される。
＜１＞プレゴンを有効成分とするＡＩ−２阻害剤。
＜２＞プレゴンを有効成分とする歯周病の予防又は治療剤。
＜３＞プレゴンを有効成分とする齲蝕の予防又は治療剤。
＜４＞プレゴンを有効成分とする歯垢形成抑制剤。
＜５＞プレゴンを有効成分とする歯槽骨吸収抑制剤。
＜６＞前記＜１＞〜＜５＞において、プレゴンの含有量は、０．０００１質量％以上１質量％以下である。
＜７＞前記＜１＞において、ＡＩ−２阻害は、ストレプトコッカス・ミュータンス、ポリフィロモナス・ジンジバリス、ストレプトコッカス・オラリス、ストレプトコッカス・ゴルドニ、ストレプトコッカス・サンギニス、ストレプトコッカス・ミティス、アクチノマイセス・ナエスランディ、ペプトコッカス・アナエロビウス、アクチノバシラス・アクチノマイセテムコミタンス、フゾバクテリウム・ヌクレアタム、ベイロネラ・パルラ、カプノサイトファガ・スプティゲナ、プレボテラ・インタメディア及びラクトバシラス・サリバリウスからなる群より選ばれる少なくとも１種に対するＡＩ−２活性の阻害である。
＜８＞前記＜１＞〜＜６＞において、ＡＩ−２阻害、歯周病の予防又は治療、齲蝕の予防又は治療、歯垢形成抑制及び歯槽骨吸収抑制は非抗菌性である。
＜９＞前記＜１＞〜＜８＞において、形態は口腔用製剤である。
＜１０＞前記＜１＞〜＜８＞において、形態は食品、好ましくは飲料である。
【００４０】
＜１１＞ＡＩ−２阻害に使用するためのプレゴン。
＜１２＞歯周病の予防又は治療に使用するためのプレゴン。
＜１３＞齲蝕の予防又は治療に使用するためのプレゴン。
＜１４＞歯垢形成抑制に使用するためのプレゴン。
＜１５＞歯槽骨吸収抑制に使用するためのプレゴン。
＜１６＞前記＜１１＞〜＜１５＞において、プレゴンの使用量（投与量）は、１日あたり、体重１ｋｇあたり、０．００００１ｍｇ以上１ｍｇ以下である。
＜１７＞前記＜１１＞において、ＡＩ−２阻害は、ストレプトコッカス・ミュータンス、ポリフィロモナス・ジンジバリス、ストレプトコッカス・オラリス、ストレプトコッカス・ゴルドニ、ストレプトコッカス・サンギニス、ストレプトコッカス・ミティス、アクチノマイセス・ナエスランディ、ペプトコッカス・アナエロビウス、アクチノバシラス・アクチノマイセテムコミタンス、フゾバクテリウム・ヌクレアタム、ベイロネラ・パルラ、カプノサイトファガ・スプティゲナ、プレボテラ・インタメディア及びラクトバシラス・サリバリウスからなる群より選ばれる少なくとも１種に対するＡＩ−２活性の阻害である。
＜１８＞前記＜１１＞〜＜１６＞において、ＡＩ−２阻害、歯周病の予防又は治療、齲蝕の予防又は治療、歯垢形成抑制及び歯槽骨吸収抑制は非抗菌性である。
＜１９＞前記＜１１＞〜＜１８＞において、使用は非治療的な使用である。
【００４１】
＜２０＞ＡＩ−２阻害剤を製造するためのプレゴンの使用。
＜２１＞歯周病の予防又は治療剤を製造するためのプレゴンの使用。
＜２２＞齲蝕の予防又は治療剤を製造するためのプレゴンの使用。
＜２３＞歯垢形成抑制剤を製造するためのプレゴンの使用。
＜２４＞歯槽骨吸収抑制剤を製造するためのプレゴンの使用。
＜２５＞前記＜２０＞のＡＩ−２阻害剤、＜２１＞の歯周病の予防又は治療剤、＜２２＞の齲蝕の予防又は治療剤、＜２３＞の歯垢形成抑制剤及び＜２４＞の歯槽骨吸収抑制剤において、プレゴンの含有量は、０．０００１質量％以上１質量％以下である。
＜２６＞前記＜２０＞において、ＡＩ−２阻害は、ストレプトコッカス・ミュータンス、ポリフィロモナス・ジンジバリス、ストレプトコッカス・オラリス、ストレプトコッカス・ゴルドニ、ストレプトコッカス・サンギニス、ストレプトコッカス・ミティス、アクチノマイセス・ナエスランディ、ペプトコッカス・アナエロビウス、アクチノバシラス・アクチノマイセテムコミタンス、フゾバクテリウム・ヌクレアタム、ベイロネラ・パルラ、カプノサイトファガ・スプティゲナ、プレボテラ・インタメディア及びラクトバシラス・サリバリウスからなる群より選ばれる少なくとも１種に対するＡＩ−２活性の阻害である。
＜２７＞前記＜２０＞〜＜２６＞において、ＡＩ−２阻害、歯周病の予防又は治療、齲蝕の予防又は治療、歯垢形成抑制及び歯槽骨吸収抑制は非抗菌性である。
【００４２】
＜２８＞プレゴンを有効量投与又は摂取するＡＩ−２阻害方法。
＜２９＞プレゴンを有効量投与又は摂取する歯周病の予防又は治療方法。
＜３０＞プレゴンを有効量投与又は摂取する齲蝕の予防又は治療方法。
＜３１＞プレゴンを有効量投与又は摂取する歯垢形成抑制方法。
＜３２＞プレゴンを有効量投与又は摂取する歯槽骨吸収抑制方法。
＜３３＞前記＜２８＞〜＜３２＞において、プレゴンの投与又は摂取量は、１日あたり、体重１ｋｇあたり、０．００００１ｍｇ以上１ｍｇ以下である。
＜３４＞前記＜２８＞において、ＡＩ−２阻害は、ストレプトコッカス・ミュータンス、ポリフィロモナス・ジンジバリス、ストレプトコッカス・オラリス、ストレプトコッカス・ゴルドニ、ストレプトコッカス・サンギニス、ストレプトコッカス・ミティス、アクチノマイセス・ナエスランディ、ペプトコッカス・アナエロビウス、アクチノバシラス・アクチノマイセテムコミタンス、フゾバクテリウム・ヌクレアタム、ベイロネラ・パルラ、カプノサイトファガ・スプティゲナ、プレボテラ・インタメディア及びラクトバシラス・サリバリウスからなる群より選ばれる少なくとも１種に対するＡＩ−２活性の阻害である。
＜３５＞前記＜２８＞〜＜３３＞において、ＡＩ−２阻害、歯周病の予防又は治療、齲蝕の予防又は治療、歯垢形成抑制及び歯槽骨吸収抑制は非抗菌性である。
＜３６＞前記＜２８＞〜＜３５＞において、方法は非治療的である。
【実施例】
【００４３】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００４４】
実施例１  ＡＩ−２阻害活性
（１）AI-2測定用菌株・培地作成
AI-2バイオアッセイ系のためのレポーター菌株はビブリオ・ハーベイVibrio harveyi BB170株（ATCC BAA-1117）を用いた。AB（Autoinducer Bioassay）培地はBasslerらの方法を参照し調製した（Mol Microbiol,9(4),773-786,1993）。0.2% Vitamin-free casamino acids（Difco、和光）、0.3M NaCl（和光）、0.05M MgSO4・7H2O（和光）の溶液を任意の濃度のKOH溶液（和光）でpH7.5に調整し、オートクレーブ後室温で保存した。1M リン酸カリウムバッファー（1M KH2PO4 21.1ml+1M K2HPO4 28.9ml）10ml、0.1M L-arginine(free-base、和光) 10ml、1mg/ml thiamine HCl（和光） 1ml、10μg/ml riboflavin（和光）1ml、glycerol（和光）20mlをよく混和後、濾過滅菌したもの42mlを上記溶液1Lに対し添加した。
【００４５】
（２）レポーター菌の調製及びプレゴンのAI-2阻害活性の測定
Marine Agar2216（Difco）で30℃、好気条件下で培養したレポーター菌株を、3mlのMarine Broth2216（Difco）に一白金耳植菌し、これを好気条件下8時間、30℃、200rpmで振盪培養を行った。またAB培地に上記菌液200μl植菌し、更に好気条件下16時間、30℃、200rpmで振盪培養を行った。この菌液をAB培地で5000倍に希釈し、レポーター菌液とした。このレポーター菌液と、プレゴン溶液を、9：1の割合で混和し、室温で10分プレインキュベートした後、AI-2（4,5-dihydroxy-2,3-pentanedione、OMM Scientific、終濃度10μM）を添加し、30℃にて好気振盪培養し、4時間後の発光強度をケミルミネッセンス計（ベルトールド）で測定した。AI-2阻害活性は10μM AI-2が惹起する発光強度を完全に抑制した場合を100とした相対値で示した。（+）-プレゴン（SIGMA）は終濃度が10または60μMになるように調製した。尚、陽性対照としては、AI-2阻害化合物として既知である4-bromo-5-(4-methoxyphenyl)-2-(5H)-furanone（SIGMA）を用いた（特開2009-114120号公報）。
【００４６】
【表１】
2014136696.tif 000005
【００４７】
表１の結果から明らかなように、本発明のＡＩ−２阻害剤は、有効成分の濃度に依存してＡＩ−２阻害活性が上昇すると共に、既知のＡＩ−２阻害化合物に比して、同等もしくはそれ以上のＡＩ−２阻害活性を有する。
【００４８】
生体内において、ＡＩ−２量とある種の感染症の症状とが相関関係を有し、本発明のＡＩ−２阻害剤の有効成分を投与することにより歯周病、齲蝕等の感染症の症状を低減できる。したがって、本発明のＡＩ−２阻害剤は、感染症の１種である、歯肉炎、歯骨炎等の歯周病、齲蝕等、感染症の予防及び治療剤として有効である。
【００４９】
（３）レポーター菌への抗菌試験
上記と同様に調製したレポーター菌液を5000倍に希釈し、終濃度が60μMになるように調製したプレゴン水溶液を９：１の割合で混和し、好気条件下で３０℃、４時間インキュベートした。さらに、培養菌液をＡＢ培地で任意に希釈しMarine Agar2216（Difco）に播種し、３０℃で１日培養後、コロニー数をカウントし生菌数を算出した。なお、コントロールはＡＢ培地を用いた。
【００５０】
結果
表２に示すように、プレゴンは濃度依存的なAI-2阻害活性を示すと共に、プレゴンのレポーター菌に対する抗菌作用は認められなかった。したがって、本発明のＡＩ−２阻害剤の有効成分は、歯周病、齲蝕の原因菌等の病原性細菌に対する殺菌能を示すものではなく、病原性細菌の種間連絡に利用されるＡＩ−２の活性を阻害するものであることを示すものである。
【００５１】
【表２】
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