(57)【要約】      （修正有）【課題】腫瘍を治療及び／又は予防し、腫瘍の成長を阻害する比較的低毒性の効率的な方法、特に、概して全身化学療法に関連する毒性を更に改善する方法の提供。【解決手段】アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物と組み合わせた抗腫瘍薬の複合物であって、前記アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物が、前記抗腫瘍薬の量を低減し、正常細胞に対する細胞毒性を低くする量で存在する複合物。前記アントシンがアントシンＡ、アントシンＢ、アントシンＣ、アントシンＤ、アントシンＥ、アントシンＦ、アントシンＨ又はアントシンＫである複合物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物と組み合わせた抗腫瘍薬の複合物であって、前記アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物が、前記抗腫瘍薬の量を低減し、正常細胞に対する細胞毒性を低くする量で存在し、前記アントシンが以下の式：
【化１】
2014139153.tif 000008
（式中、
Ｒ１は＝Ｏ又はＯＨであり、Ｒ２はＨ又はＯＨであり、Ｒ３はＨ、＝Ｏ、ＯＨ又はＯ−アセチルであり、Ｒ４はＨ又はＯＨであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＨ又はＯＨであり、Ｒ７は＝Ｏ又はＯＨである）
を有する、複合物。
【請求項２】
前記アントシンがアントシンＡ、アントシンＢ、アントシンＣ、アントシンＤ、アントシンＥ、アントシンＦ、アントシンＨ又はアントシンＫである、請求項１に記載の複合物。
【請求項３】
前記アントシンがアントシンＡである、請求項１に記載の複合物。
【請求項４】
前記アントシンの塩が塩基付加塩及び酸付加塩を含む、請求項１に記載の複合物。
【請求項５】
前記アントシンのエステル誘導体がアルキルアントシン（antcin）、アルキニルアントシン、アルケニル（alkenyl）アントシンである、請求項１に記載の複合物。
【請求項６】
前記アントシンのエステル誘導体が、メチルアントシネートＡ、メチルアントシネートＢ、メチルアントシネートＣ、メチルアントシネートＧ、メチルアントシネートＨ、エチルアントシネートＡ又はエチルアントシネートＢである、請求項１に記載の複合物。
【請求項７】
前記アントシンの組成物がタイワノフンガス・カンフォラータスの抽出物である、請求項１に記載の複合物。
【請求項８】
前記タイワノフンガス・カンフォラータスの抽出物が、タイワノフンガス・カンフォラータスのエタノール抽出物の低極性画分である、請求項７に記載の複合物。
【請求項９】
前記抗腫瘍薬が抗有糸分裂薬、代謝拮抗薬、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード、ＤＮＡを標的とする薬物、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン拮抗薬又はチロシンキナーゼ阻害剤である、請求項１に記載の複合物。
【請求項１０】
前記抗有糸分裂薬がタキソール、パクリタキセル、ドセタキセル、ドセタキセル、ポドフィロトキシン、ビンクリスチン又はビンブラスチンであり、前記代謝拮抗薬が５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、シタラビン、ゲムシタビン、ペントスタチン又はメトトレキサートであり、前記アルキル化剤がシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン又はパラプリジネアチンであり、前記ナイトロジェンマスタードがニトロソウレア、シクロホスファミド又はイホスファミドであり、前記ＤＮＡを標的とする薬物がアドリアマイシン、ドキソルビシン、ファルモルビシン又はエピルビシンであり、前記トポイソメラーゼ阻害剤がカンプトテシン、エトポシド、ミトキサントロン又はドキソルビシンであり、前記ホルモン拮抗薬がタモキシフェン、フルタミド、リュープロレリン、ゴセレリン、シプロテロン又はオクトレオチドであり、前記チロシンキナーゼ阻害剤がイマチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ又はスニチニブである、請求項９に記載の複合物。
【請求項１１】
前記抗有糸分裂薬がパクリタキセル又はドセタキセルであり、前記代謝拮抗薬が５ＦＵであり、前記アルキル化剤がシスプラチン又はカルボプラチンであり、前記ナイトロジェンマスタードがシクロホスファミドであり、前記ＤＮＡを標的とする薬物がドキソルビシンであり、前記トポイソメラーゼ阻害剤がカンプトテシン、ミトキサントロン又はドキソルビシンであり、前記抗エストロゲンがタモキシフェンであり、前記チロシンキナーゼ阻害剤がスニチニブである、請求項９に記載の複合物。
【請求項１２】
前記抗腫瘍薬が５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン、ペントスタチン等のプリン類似体、メトトレキサート、タモキシフェン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン又はパラプリジネアチンである、請求項９に記載の複合物。
【請求項１３】
前記アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物と代謝拮抗薬又はホルモン拮抗薬との組合せが、それぞれ約（about）０．５％（ｗ／ｗ）〜約９５％（ｗ／ｗ）及び約９９．５％（ｗ／ｗ）〜約５％（ｗ／ｗ）の範囲の量で存在する、請求項１に記載の複合物。
【請求項１４】
被験体において腫瘍選択的に腫瘍を阻害及び／又は治療する方法であって、被験体に有効量の請求項１に記載の複合物を投与することを含み、該複合物がアントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物と組み合わせた抗腫瘍薬を含み、該アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物が、前記抗腫瘍薬の量を低減し、正常細胞に対する細胞毒性を低くする量で存在する、方法。
【請求項１５】
前記抗腫瘍薬と前記アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物とを別個に、同時に又は順に投与する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記アントシンがアントシンＡである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記アントシンのエステル誘導体がメチルアントシネートＡ、メチルアントシネートＢ、メチルアントシネートＣ、メチルアントシネートＧ、メチルアントシネートＨ、エチルアントシネートＡ又はエチルアントシネートＢである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記アントシンの組成物が、アントシンを含有するタイワノフンガス・カンフォラータスの抽出物である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記タイワノフンガス・カンフォラータスの抽出物が、タイワノフンガス・カンフォラータスのエタノール抽出物の低極性画分である、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗腫瘍薬が抗有糸分裂薬、代謝拮抗薬、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード、ＤＮＡを標的とする薬物、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン拮抗薬又はチロシンキナーゼ阻害剤である、請求項１４に記載の（of）方法。
【請求項２１】
前記腫瘍が肝細胞癌、肝芽腫、結腸癌、膵臓がん、肝臓がん、乳がん、卵巣がん、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、直腸癌、頭頸部がん又は脳がんからなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍を阻害及び／又は治療する複合物及び方法に関する。特に、本発明は、腫瘍の阻害及び／又は治療における抗腫瘍薬とアントシン又はその誘導体、塩若しくは組成物との複合物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
近年の医学の進歩にもかかわらず、がんは依然として最もよく見られる致死的な疾患の１つである。がんの発症は生涯にわたって加齢とともに増加する（「生涯リスク」）。他のリスク因子には、遺伝的特徴、食生活及び環境曝露（例えば変異原性化学物質、放射線、形質転換ウイルス等に対する曝露）が含まれると考えられる。がんは、各々が特定のタイプの細胞の無制御の成長を特徴とする多種多様な疾患を説明するために使用される用語である。がんは、そのような細胞を含有する組織に生じ、がんが診断時に任意の付加的な組織へと進展していなければ、例えば外科手術、放射線療法又は別のタイプの局所療法によって治療することができる。しかしながら、がんがその原発組織から転移した兆候がある場合、異なる治療アプローチが通常は用いられる。実際には、転移の程度を決定することが不可能なため、何らかの進展の兆候が検出された場合、全身療法アプローチが通常行われる。このアプローチは、がん細胞等の急速に分裂する細胞の成長を妨げる化学療法薬の投与を伴う。
【０００３】
例えば、原発性肝細胞癌（以下、「肝臓がん」と称することもある）は殆どの場合、慢性肝炎が肝硬変に進行した後に現れる。多くのウイルス性肝炎及び肝硬変の患者が認められており、ここ数年で肝臓がんの発生率は増加している。肝臓がんは、例えば肝切除、経皮的局所療法（例えば、高周波アブレーション療法又はエタノール注入療法）、経カテーテル肝動脈塞栓術（ＴＡＥ）、持続動注化学療法又は放射線療法を用いて治療されている。別の例は乳がんである。上皮内小葉癌及び非浸潤性乳管癌は、それぞれ小葉及び乳管に発生しているが、乳房周囲の脂肪組織又は身体の他の領域までは進展していない乳がんである。浸潤性（又は侵襲性）小葉癌及び乳管癌は、それぞれ小葉及び乳管で発生し、乳房の脂肪組織及び／又は身体の他の部位へと進展したがんである。他の乳房のがんとしては、髄様癌、膠様癌、管状腺癌及び炎症性乳がんが挙げられる。乳がん患者に有効な治療は外科手術、免疫療法、放射線療法、化学療法、内分泌療法又はそれらの組合せである。アルキル化剤、代謝拮抗薬（antimetabolites antagonists）、抗がん抗生物質及び植物由来抗がん剤を含む幾つかの化学療法剤が、がんの治療に使用される。しかしながら、がん化学療法に使用される細胞毒性薬の大半は、化学療法的有用性が限られており、高投与量で重篤な副作用を有する。
【０００４】
植物及びキノコは、がんを治療するための新規の天然由来の作用物質の発見及び開発に有益な資源である。タイワノフンガス・カンフォラータス（Taiwanofungus camphoratus）（ガノデルマ・カンフォラータム（Ganoderma comphoratum）、アントロディア・シナモメア（Antrodia cinnamomea）又はアントロディア・カンフォラータ（Antrodia camphorate）とも呼ばれる）は牛樟芝（niu-chang-chih）又は牛樟▲菰▼（niuchang-ku）として知られ、その宿主植物である牛樟（niu-chang）は、台湾の絶滅危惧種であるシナモマム・カネヒライ（Cinnamomum kanehirai）の中国一般名である。従来、タイワノフンガス・カンフォラータスは食中毒、アルコール中毒及び薬物中毒、下痢、腹痛、高血圧、皮膚掻痒並びに肝臓がんの漢方薬として使用されている。トリテルペノイドはタイワノフンガス・カンフォラータスの主成分である。３つのトリテルペノイドであるアントシンＡ、アントシンＢ及びアントシンＣは、エルゴスタン型類似体であり、タイワノフンガス・カンフォラータスの子実体から単離される。アントシンＡ及びアントシンＣは、活性酸素種に対して強力な免疫調節効果を有する。Yun-Chih Hsieh et al.は、アントシンＡ、アントシンＣ及びメチルアントシネート（antcinate）Ａが、正常細胞ではなくヒトがん細胞の増殖を選択的に阻害することができることを更に報告している（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Yun-Chih Hsieh et al., "Methyl Antcinate A from Antrodia camphorate Induces Apoptosis in Human Liver Cancer Cells through Oxidant-Mediated Cofilin- and Bax-Triggered Mitochondrial Pathway," Chem. Res. Toxicol. 2010, 23, pp. 1256-1267
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、腫瘍を治療及び／又は予防し、腫瘍の成長を阻害する比較的低毒性の効率的な方法が必要とされている。特に、概して全身化学療法に関連する毒性を更に改善することが望まれる。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物と組み合わせた抗腫瘍薬を含む複合物であって、前記アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物が、前記抗腫瘍薬の量を低減し、正常細胞に対する細胞毒性（cytotoxicity）を低くする量で存在する、複合物を提供する。
【０００８】
本発明は、被験体において腫瘍選択的に腫瘍を阻害及び／又は治療する方法であって、被験体に有効量の本発明の複合物を投与することを含む、方法も提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】それぞれ５０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ、１５０μｇ／ｍｌ及び２００μｇ／ｍｌの５ＦＵで処理したＨｅｐＧ２細胞の細胞生存率を示す図である。「＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．０５未満であることを表し、「＊＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．００１未満であることを表す。
【図２】それぞれ５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１５μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ及び２５μｇ／ｍｌのアントシンＡと組み合わせた２００μｇ／ｍｌの５ＦＵで処理したＨｅｐＧ２細胞の細胞生存率を示す図である。「＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．０５未満であることを表し、「＊＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．００１未満であることを表す。
【図３】それぞれ５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１５μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ及び２５μｇ／ｍｌのアントシンＡと組み合わせた１００μｇ／ｍｌの５ＦＵで処理したＨｅｐＧ２細胞及びＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞の細胞生存率を示す図である。「＊＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．００１未満であることを表す。
【図４】２００μｇ／ｍｌの５ＦＵ、１００μｇ／ｍｌの５ＦＵ及び２５μｇ／ｍｌのアントシンＡと組み合わせた１００μｇ／ｍｌの５ＦＵで処理した正常ＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞株の細胞生存率を示す図である。「＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．０５未満であることを表し、「＊＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．００１未満であることを表す。
【図５】１０μｇ／ｍｌのアントシンＡと種々の濃度の５−ＦＵとで処理したＨｅｐＧ２及びＣＣＤ−９６６ＳＫの細胞生存率を示す図である。「＊＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．００１未満であることを表す。
【図６】タモキシフェンで処理したＨｅｐＧ２細胞の細胞生存率を示す図である。「＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．０１未満であることを表し、「＊＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．００１未満であることを表す。
【図７】それぞれ５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１５μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ及び２５μｇ／ｍｌのアントシンＡと組み合わせた３．１３μｇ／ｍｌのタモキシフェンで処理したＨｅｐＧ２細胞の細胞生存率を示す図である。「＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．０５未満であることを表し、「＊＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．００１未満であることを表す。
【図８】３．１３μｇ／ｍｌのＴＡＭ及び１５μｇ／ｍｌのアントシンＡと組み合わせた３．１３μｇ／ｍｌのＴＡＭで処理した正常ＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞株の細胞生存率を示す図である。「＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．０５未満であることを表す。
【図９】１０μｇ／ｍｌのアントシンＡと種々の濃度のＴＡＭとで処理したＨｅｐＧ２及びＣＣＤ−９６６ＳＫの細胞生存率を示す図である。「＊＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．００１未満であることを表す。
【図１０】スニチニブで処理したＨｅｐＧ２細胞及びＣＣＤ−９６６ＳＫの細胞生存率を示す図である。「＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．０１未満であることを表し、「＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．０５未満であることを表す。
【図１１】１０μｇ／ｍｌのアントシンＡと種々の濃度のスニチニブとで処理したＨｅｐＧ２及びＣＣＤ−９６６ＳＫの細胞生存率を示す図である。「＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．０５未満であることを表し、「＊＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．００１未満であることを表す。
【図１２】ミトキサントロンで処理したＨｅｐＧ２細胞及びＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞の細胞生存率を示す図である。「＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．０１未満であることを表し、「＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．０５未満であることを表し、「＊＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．００１未満であることを表す。
【図１３】１０μｇ／ｍｌのアントシンＡと種々の濃度のミトキサントロンとで処理したＨｅｐＧ２及びＣＣＤ−９６６ＳＫの細胞生存率を示す図である。「＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．０５未満であることを表し、「＊＊＊」は統計的有意性検定におけるｐ値が０．００１未満であることを表す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明では驚くべきことに、アントシン又はそのエステル誘導体、塩若しくは組成物と組み合わせた抗腫瘍薬が、正常細胞を高生存率に保持しながら、腫瘍細胞の阻害において予期せぬ有効性をもたらすことが見出された。加えて、アントシン又はそのエステル誘導体、塩若しくは組成物が補助療法に役立つという点を考慮すると、それらを組み合わせて使用することによって化学療法における抗腫瘍薬の量を低減することができる。さらに、抗腫瘍薬と組み合わせたアントシン又はそのエステル誘導体、塩若しくは組成物を含む本発明の複合物は、腫瘍細胞を選択的に阻害することができる。
【００１１】
他に規定のない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似又は同等の任意の方法及び材料を、本発明の実施又は試験において使用することができるが、好ましい方法及び材料を説明する。本発明の目的のために、以下の用語を下記に規定する。
【００１２】
「a」及び「an」という用語は、１つ又は２つ以上（すなわち少なくとも１つ）のその冠詞の文法上の対象を指す。
【００１３】
「治療」（"treat," "treatment" or "treating"）という用語は、患者ががんの症状を経験する頻度、程度、重症度及び／又は期間を低減することを意味する。
【００１４】
「予防」（"prevent," "prevention" or "preventing"）という用語は、がんに関連する症状の阻害又は回避を意味する。
【００１５】
「軽減」（"alleviate," "alleviation" or "alleviating"）という用語は、疾患、障害又は病態の１つ又は複数の症状の重症度を低減することを意味する。
【００１６】
「塩」という用語は、遊離塩基の生物学的有効性及び生物学的特性を保持し、無機酸又は有機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、リンゴ酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸等との反応によって得られる塩を指す。
【００１７】
「有効量」という用語は、がんを低毒性で阻害若しくは治療及び／又は予防するのに有効な本発明の複合物の量を意味する。例えば、有効量の本発明の複合物は、がん細胞の数を低減する；腫瘍サイズを低減する；末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害する（すなわち、或る程度遅らせる、好ましくは停止させる）；腫瘍転移を阻害する（すなわち、少なくとも或る程度遅らせる、好ましくは停止させる）；腫瘍成長を或る程度阻害する；アポトーシスを促進する；及び／又は障害に関連する１つ若しくは複数の症状を或る程度緩和することができる。
【００１８】
「被験体」という用語は、動物、通常は哺乳動物、例えば霊長類（ヒト、類人猿、テナガザル、チンパンジー、オランウータン、マカク）、飼育動物（イヌ及びネコ）、家畜（ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）及び実験動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット）を指すことが理解される。被検体としては、動物疾患モデル（例えば、腫瘍易発性マウス、担腫瘍マウス又は腫瘍の異種移植を受けたマウス）が挙げられる。
【００１９】
本明細書中で使用される「腫瘍」という用語は、乳房、前立腺、結腸、肺、膵臓、肝臓、胃、膀胱若しくは生殖器官（子宮頸部、卵巣、子宮内膜等）、脳及び骨髄で発生する腫瘍；黒色腫；又はリンパ腫を含むが、これらに限定されない。
【００２０】
本明細書中で使用される「腫瘍細胞成長を阻害する」という用語は、腫瘍細胞の成長を遅らせること、腫瘍細胞の成長を停止させること、腫瘍細胞の減少又は退行を引き起こすこと、腫瘍浸潤を阻害すること、腫瘍細胞死を引き起こすこと及び転移の減少又は退行を引き起こすことの１つ又は複数を意味する。
【００２１】
一態様では、本発明は、アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物と組み合わせた抗腫瘍薬を含む複合物であって、アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物が、抗腫瘍薬の量を低減し、正常細胞に対する細胞毒性を低くする量で存在する、複合物を提供する。
【００２２】
タイワノフンガス・カンフォラータスのエタノール抽出物及びそれから単離されたアントシン又はその誘導体は、アポトーシスを誘導することによって腫瘍細胞を選択的に阻害することができるが、正常細胞に対して低い毒性を示すため、タイワノフンガス・カンフォラータスのエタノール抽出物及びそれから単離されたアントシン又はその誘導体は、腫瘍に対する作用物質として使用するか、又は化学療法において使用することができる。
【００２３】
アントシンは、タイワノフンガス・カンフォラータスの子実体から単離されるエルゴスタン型トリテルペノイドであり、以下の式：
【化１】
2014139153.tif 000002
（式中、Ｒ１は＝Ｏ又はＯＨであり、Ｒ２はＨ又はＯＨであり、Ｒ３はＨ、＝Ｏ、ＯＨ又はＯ−アセチルであり、Ｒ４はＨ又はＯＨであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＨ又はＯＨであり、Ｒ７は＝Ｏ又はＯＨである）を有する。
【００２４】
アントシンの例としては、アントシンＡ（４α−メチルエルゴスタ−８，２４（２８）−ジエン−３，１１−ジオン−２６−酸）、アントシンＢ（２−メチル−３−メチリデン−６−［（４Ｓ）−４，１０，１３−トリメチル−３，７，１１−トリオキソ−１，２，４，５，６，１２，１４，１５，１６，１７−デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル］ヘプタン酸）、アントシンＣ（４α−メチルエルゴスタ−８，２４（２８）−ジエン−３，１１−トリオン−７Ｐ−２６−酸）、アントシンＤ（４，１４−ヒドロキシ−４α−メチル−３，７，１１−トリオキソ−エルゴスタ−８，２４（２８）−ジエン−２６−酸）、アントシンＥ（５，３，１１−ジオキソ−４α−メチルエルゴスタ−８，１４，２４（２８）−トリン−２６−酸）、アントシンＦ（６，３，１１−ジオキソ−７β−ヒドロキシ−４α−メチルエルゴスタ−８，１４，２４（２８）−トリン−２６−酸）、アントシンＨ（３α，１２α−ジヒドロキシ−４α−メチルエルゴスタ−８，２４（２８）−ジエン−７，１１−ジオン−２６−酸）及びアントシンＫ（４，７−ジメトキシ（dimethoxy）−５−メチル−１，３−ベンゾジオキソール）が挙げられる。アントシンＡ〜アントシンＫの化学式は以下のとおりである：
【化２】
2014139153.tif 000003
【００２５】
【表１】
2014139153.tif 000004
【００２６】
アントシンＡ（４α−メチルエルゴスタ−８，２４（２８）−ジエン−３，１１−ジオン−２６−酸）は、本発明の複合物において使用される好ましい一実施形態であり、以下のような構造式を有する：
【化３】
2014139153.tif 000005
【００２７】
アントシンの塩は塩基付加塩を含む。酸性の本発明のアントシンは、塩基、例えばアルカリ金属水酸化物、例えば水酸化ナトリウム及び水酸化カリウム；アルカリ土類金属水酸化物、例えば水酸化カルシウム、水酸化バリウム及び水酸化マグネシウム；有機塩基、例えばＮ−メチル−Ｄ−グルカミン、コリントリス（ヒドロキシメチル）アミノ−メタン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リシン、Ｎ−エチルピペリジン、ジベンジルアミン等とともに、薬学的に許容可能な塩を含む塩を形成することができる。具体的な塩基との塩としては、ベンザチン塩、カルシウム塩、ジオラミン塩、メグルミン塩、オラミン塩、カリウム塩、プロカイン塩、ナトリウム塩、トロメタミン塩及び亜鉛塩が挙げられる。一実施形態では、アントシンのエステル誘導体として、アルキルアントシン、アルケニルアントシン、アルキニルアントシンが挙げられるが、これらに限定されない。アントシンエステルは、Ｃ１〜８アルキル（例えばメチル、エチル、プロピル及びブチル等）アントシネートＡ、Ｃ１〜８アルキル（例えばメチル、エチル、プロピル及びブチル等）アントシネートＢ、Ｃ１〜８アルキル（例えばメチル、エチル、プロピル及びブチル等）アントシネートＣ、Ｃ１〜８アルキル（例えばメチル、エチル、プロピル及びブチル等）アントシネートＤ、Ｃ１〜８アルキル（例えばメチル、エチル、プロピル及びブチル等）アントシネートＥ、Ｃ１〜８アルキル（例えばメチル、エチル、プロピル及びブチル等）アントシネートＦ、Ｃ１〜８アルキル（例えばメチル、エチル、プロピル及びブチル等）アントシネートＨ及びＣ１〜８アルキル（例えばメチル、エチル、プロピル及びブチル等）アントシネートＫであるのが好ましい。好ましくは、アントシンエステルはメチルアントシネートＡ、メチルアントシネートＢ、メチルアントシネートＣ、メチルアントシネートＧ、メチルアントシネートＨ、エチルアントシネートＡ又はエチルアントシネートＢである。それらの化学式は以下のとおりである：
【化４】
2014139153.tif 000006
【００２８】
【表２】
2014139153.tif 000007
【００２９】
別の実施形態では、アントシンの組成物は、アントシンを含有するタイワノフンガス・カンフォラータスの抽出物である。アントシン又はその誘導体は、タイワノフンガス・カンフォラータスの抽出物中に含まれる。好ましい実施形態の１つは、タイワノフンガス・カンフォラータスのエタノール抽出物の低極性画分である。本発明によると、タイワノフンガス・カンフォラータスのエタノール抽出物の低極性画分は、タイワノフンガス・カンフォラータスをｎ−ヘキサン（n-hexane）で抽出し、得られるエタノール抽出物を、移動相として様々な比率のメタノールと酢酸エチルとの混合物を用いたシリカゲルクロマトグラフィーで溶出させ、低極性画分を回収することによって得ることができる。
【００３０】
本発明の一実施形態によると、タイワノフンガス・カンフォラータスは粉末又は溶液の形態とすることができる。本発明によると、低極性画分を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、分取ＨＰＬＣ又は半分取ＨＰＬＣによって更に精製し、保持時間が２３分〜３５分の画分を得ることができる。好ましくは、保持時間は約２４分〜３３分、約２７分〜３３分又は約２８分〜３３分であり、より好ましくは、保持時間は約２８分〜２９分である。本発明のより好ましい実施形態によると、得られる画分を更に精製してアントシンを得る。
【００３１】
本発明によると、抗腫瘍薬としては、ａ）抗有糸分裂効果を有する薬物、とりわけ細胞骨格要素を標的とするもの、例えばタキサン薬（タキソール、パクリタキセル、ドセタキセル等）、ポドフィロトキシン（podophyllotoxins）又はビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン）等の微小管モジュレーター；ｂ）代謝拮抗薬（５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、シタラビン、ゲムシタビン、ペントスタチン等のプリン類似体、メトトレキサート等）；ｃ）アルキル化剤又はナイトロジェンマスタード（プラチナ薬（シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、パラプリジネアチン（paraplidineatin）、ニトロソウレア、シクロホスファミド又はイホスファミド等）；ｄ）ＤＮＡを標的とする薬物、例えばアドリアマイシン、ドキソルビシン、ファルモルビシン又はエピルビシンといったアントラサイクリン（anthracycline）薬；ｅ）トポイソメラーゼを標的とする薬物、例えばカンプトテシン、エトポシド、ミトキサントロン、ドキソルビシン；ｆ）ホルモン又はホルモン作動薬若しくはホルモン拮抗薬、例えばエストロゲン、抗エストロゲン（タモキシフェン及び関連化合物）及びアンドロゲン、フルタミド、リュープロレリン、ゴセレリン、シプロテロン又はオクトレオチド；ｇ）腫瘍細胞におけるシグナル伝達を標的とする薬物、例えばハーセプチン等の抗体誘導体；ｈ）チロシンキナーゼ阻害剤、例えばイマチニブ、ゲフィチニブ及びエルロチニブ及びスニチニブ、ｉ）腫瘍の転移に影響を与える可能性のある薬物、例えばマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤；ｊ）遺伝子療法剤及びアンチセンス剤；並びにｋ）抗体治療薬が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、抗がん薬は、抗有糸分裂効果を有する薬物、抗有糸分裂薬、代謝拮抗薬、アルキル化剤若しくはナイトロジェンマスタード、ＤＮＡを標的とする薬物、トポイソメラーゼを標的とする薬物又はホルモン拮抗薬である。より好ましくは、抗有糸分裂効果を有する薬物は、タキソール、パクリタキセル、タキソテール、ドセタキセル、ポドフィロトキシン、ビンクリスチン又はビンブラスチンであり、代謝拮抗薬は５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、シタラビン、ゲムシタビン、ペントスタチン又はメトトレキサートであり、アルキル化剤又はナイトロジェンマスタードはシスプラチン、カルボプラチン（carboplatin）、オキサリプラチン、パラプリジネアチン、ニトロソウレア、シクロホスファミド又はイホスファミドであり、ＤＮＡを標的とする薬物はアドリアマイシン、ドキソルビシン、ファルモルビシン又はエピルビシンであり、トポイソメラーゼを標的とする薬物はカンプトテシン、エトポシド、ミトキサントロン又はドキソルビシンであり、ホルモン又はホルモン作動薬若しくはホルモン拮抗薬はエストロゲン、タモキシフェン、アンドロゲン、フルタミド、リュープロレリン、ゴセレリン、シプロテロン（cyproterone）又はオクトレオチドであり、腫瘍細胞におけるシグナル伝達を標的とする薬物はハーセプチンであり、チロシンキナーゼ阻害剤はイマチニブ、ゲフィチニブ及びエルロチニブ又はスニチニブである。より好ましくは、抗有糸分裂効果を有する薬物はパクリタキセル、タキソテール又はドセタキセルであり、代謝拮抗薬は５ＦＵであり、アルキル化剤又はナイトロジェンマスタードはシスプラチン、カルボプラチン又はシクロホスファミドであり、ＤＮＡを標的とする薬物はドキソルビシンであり、トポイソメラーゼを標的とする薬物はカンプトテシン、ミトキサントロン又はドキソルビシンであり、抗エストロゲンはタモキシフェンであり、チロシンキナーゼ阻害剤はスニチニブである。最も好ましくは、抗有糸分裂効果を有する薬物はパクリタキセル又はドセタキセルであり、代謝拮抗薬は５ＦＵであり、アルキル化剤又はナイトロジェンマスタードはシスプラチン又はカルボプラチンであり、ＤＮＡを標的とする薬物はドキソルビシンであり、トポイソメラーゼを標的とする薬物はミトキサントロンであり、抗エストロゲンはタモキシフェンであり、チロシンキナーゼ阻害剤はスニチニブである。
【００３２】
一実施形態では、本発明は、アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物と組み合わせた抗有糸分裂薬、代謝拮抗薬、アルキル化（alkylating）剤、ナイトロジェンマスタード、ＤＮＡを標的とする薬物、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン拮抗薬又はチロシンキナーゼ阻害剤を含む複合物を提供する。複合物は、アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物と組み合わせたパクリタキセル、タキソテール、ドセタキセル、５ＦＵ、シスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、カンプトテシン、ミトキサントロン、タモキシフェン又はスニチニブを含むのが好ましい。別の実施形態では、本発明は、アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物と組み合わせた５−ＦＵ、タモキシフェン、ミトキサントロン又はスニチニブを含む複合物を提供する。
【００３３】
一部の実施形態では、アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物は、抗腫瘍薬の量を低減し、正常細胞に対する細胞毒性を低くする量で存在する。アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物と抗腫瘍薬との組合せは、それぞれ約０．５％（ｗ／ｗ）〜約９５％（ｗ／ｗ）及び約９９．５％（ｗ／ｗ）〜約５％（ｗ／ｗ）、それぞれ約２％（ｗ／ｗ）〜約９０％（ｗ／ｗ）及び約９８％（ｗ／ｗ）〜約１０％（ｗ／ｗ）、それぞれ約４％（ｗ／ｗ）〜約９０％（ｗ／ｗ）及び約９６％（ｗ／ｗ）〜約１０％（ｗ／ｗ）、それぞれ約２％（ｗ／ｗ）〜約８５％（ｗ／ｗ）及び約９８％（ｗ／ｗ）〜約１５％（ｗ／ｗ）、それぞれ約２％（ｗ／ｗ）〜約２５％（ｗ／ｗ）及び約９８％（ｗ／ｗ）〜約７５％（ｗ／ｗ）、それぞれ約５５％（ｗ／ｗ）〜約９０％（ｗ／ｗ）及び約４５％（ｗ／ｗ）〜約１０％（ｗ／ｗ）、それぞれ約１０％（ｗ／ｗ）〜約８０％（ｗ／ｗ）及び約９０％（ｗ／ｗ）〜約２０％（ｗ／ｗ）、それぞれ約１５％（ｗ／ｗ）〜約７０％（ｗ／ｗ）及び約８５％（ｗ／ｗ）〜約３０％（ｗ／ｗ）、それぞれ約２０％（ｗ／ｗ）〜約８０％（ｗ／ｗ）及び約８０％（ｗ／ｗ）〜約２０％（ｗ／ｗ）、それぞれ約２０％（ｗ／ｗ）〜約７０％（ｗ／ｗ）及び約８０％（ｗ／ｗ）〜約３０％（ｗ／ｗ）、それぞれ約２０％（ｗ／ｗ）〜約６０％（ｗ／ｗ）及び約８０％（ｗ／ｗ）〜約４０％（ｗ／ｗ）、それぞれ約２０％（ｗ／ｗ）〜約５０％（ｗ／ｗ）及び約８０％（ｗ／ｗ）〜約５０％（ｗ／ｗ）、それぞれ約３０％（ｗ／ｗ）〜約８０％（ｗ／ｗ）及び約７０％（ｗ／ｗ）〜約２０％（ｗ／ｗ）、それぞれ約３０％（ｗ／ｗ）〜約７０％（ｗ／ｗ）及び約７０％（ｗ／ｗ）〜約３０％（ｗ／ｗ）、それぞれ約３０％（ｗ／ｗ）〜約６０％（ｗ／ｗ）及び約７０％（ｗ／ｗ）〜約４０％（ｗ／ｗ）、それぞれ約４０％（ｗ／ｗ）〜約８０％（ｗ／ｗ）及び約６０％（ｗ／ｗ）〜約２０％（ｗ／ｗ）、それぞれ約４０％（ｗ／ｗ）〜約７０％（ｗ／ｗ）及び約６０％（ｗ／ｗ）〜約３０％（ｗ／ｗ）、それぞれ約５０％（ｗ／ｗ）〜約８０％（ｗ／ｗ）及び約５０％（ｗ／ｗ）〜約２０％（ｗ／ｗ）の範囲の量で存在するのが好ましい。
【００３４】
本発明の複合物を含む医薬配合物は、通常は１つ又は複数の担体又は賦形剤、及び任意で他の治療成分を含む。担体（複数の場合もあり）は一般に、配合物の他の成分と相容性があり、その服用者にとって生理学的に無害であるという意味で「許容可能」である。かかる担体又は賦形剤、例えば充填剤、潤滑剤、結合剤、及び液体配合物用の様々な液体賦形剤が既知である。好適な担体としては、本明細書中で引用される参照文献に開示されているものが挙げられる。
【００３５】
本発明の複合物は、経口投与、非経口投与、鼻内投与、舌下投与若しくは直腸投与、又は吸入若しくは吹入（insufflation）による投与のための錠剤、丸薬、カプセル剤、粉末、顆粒、非経口用の滅菌溶液又は懸濁液、定量エアロゾル又は液体スプレー、点滴剤、アンプル、自動注入装置又は坐剤等の単位投薬形態であるのが好ましい。代替的には、複合物は週１回又は月１回の投与に好適な形態で与えることができる。活性成分を含有する受食性（erodible）ポリマーを想定することができる。錠剤等の固体複合物を調製するには、主活性成分を医薬担体、例えばコーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム又はガム等の従来の錠剤化成分及び他の希釈剤、例えば水と混合して、本発明の化合物又はその塩、誘導体若しくは組成物の均一混合物を含有する固体の予配合（preformulation）複合物を形成する。この予配合複合物を均一と称する場合、成分が複合物全体に均等に分散し、複合物を等しく有効な錠剤、丸薬及びカプセル剤等の単位投薬形態へと容易に分割することができることを意味する。新規の複合物の錠剤又は丸薬をコーティングするか、又は別の形で調合して、持続性作用の利点をもたらす投薬形態を提供することができる。例えば、錠剤又は丸薬は内剤（inner dosage）構成要素及び外剤（outer dosage）構成要素を備えることができ、外剤構成要素は内剤構成要素を覆う外層の形態である。この２つの構成要素を、胃内での崩壊に抵抗する働きをし、内剤構成要素を無傷で十二指腸に通過させるか、又は放出を遅延させる腸溶層で隔てることができる。様々な材料をかかる腸溶層又は腸溶コーティングに使用することができ、かかる材料はシェラック、セチルアルコール及び酢酸セルロース等の材料とともに多数のポリマー酸及びポリマー酸の混合物を含む。
【００３６】
好適な配合物としては、本発明の複合物の水性又は油性の溶液が挙げられる。活性成分の非経口送達に好適な配合物としては、活性成分が溶液に溶解又は懸濁した水性及び非水性の組成物が挙げられる。非経口投与に好適な配合物としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、又は配合物を対象の服用者の血液と等張にする溶質を含有し得る水性及び非水性の滅菌注射液が挙げられる。他の非経口配合物は、懸濁化剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性の滅菌懸濁液を含むことができる。
【００３７】
経口投与に好適な本発明の配合物は、各々がタイワノフンガス・カンフォラータスのエタノール抽出物の低極性画分若しくはアントシンＡ若しくはその薬学的に許容可能な塩を所定量含有するカプセル剤、カシェ剤、ガム剤若しくは錠剤等の個別単位；粉末若しくは顆粒；水性液体若しくは非水性液体中の溶液若しくは懸濁液；又は水中油型液体エマルション若しくは油中水型液体エマルションとして調製される。
【００３８】
直腸投与用の配合物は、好適な基剤とともに坐剤として与えることができる。
【００３９】
肺内投与又は経鼻投与に好適な配合物は、例えば０．０１ミクロン〜２００ミクロンの範囲の粒径（０．１ミクロン刻みで０．０１ミクロン〜５００ミクロンの範囲、例えば０．１ミクロン、０．２ミクロン、０．３ミクロン、０．４ミクロン、０．５ミクロン、１ミクロン、２ミクロン、５ミクロン、３０ミクロン、３５ミクロン等の粒径を含む）を有し、各気管支又は肺胞嚢に到達するように鼻腔からの吸入又は口からの吸入によって投与される。エアロゾル投与又は乾燥粉末投与に好適な配合物は、従来の方法に従って調製することができ、他の治療剤とともに送達することができる。
【００４０】
膣内投与に好適な配合物は、活性成分に加えて当該技術分野で適切であることが知られる担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ジェル、ペースト、フォーム又はスプレー配合物として与えることができる。
【００４１】
経皮投与に好適な配合物は、経皮パッチとして与えることができる。経皮パッチは、ベースライン又は定常状態のニコチンレベルを患者にもたらす。使用期間中にパッチから放出されるタイワノフンガス・カンフォラータスのエタノール抽出物の低極性画分又はアントシンＡ又はその薬学的に許容可能な塩の総量は、使用者の身体の大きさ、ニコチン曝露歴及び治療への応答に応じて異なる。パッチのサイズは、送達すべきニコチンの量に応じて異なる。
【００４２】
本発明の複合物を含む配合物は、単回投与又は複数回投与用の容器、例えば密封アンプル及びバイアルで与えられ、使用直前に滅菌液体担体、例えば注射用蒸留水を添加するだけでよいフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保管することができる。即時注射液及び懸濁液は、先に記載した種類の滅菌粉末、顆粒及び錠剤から調製される。好ましい単位投薬配合物は、本明細書に記載されるような１日用量又は単位１日分割用量（unit daily sub-dose）を含有するものである。
【００４３】
具体的に上述した本発明の複合物に加えて、本発明の配合物が、対象の配合物のタイプを考慮して、当該技術分野の従来の他の作用物質を含み得ること、例えば経口投与に好適な配合物が香味剤又は着色剤を含み得ることが理解されよう。
【００４４】
本発明の複合物を使用すると、本発明の複合物の放出を制御及び調節して、より低頻度の投薬を可能にするか、又は本発明の複合物の薬物動態プロファイル若しくは毒性プロファイルを改善する制御放出性の医薬配合物を提供することができる。
【００４５】
配合物としては、上述した投与経路のいずれかに好適なものが挙げられる。配合物は単位投薬形態で都合よく与えることができ、薬学の技術分野で既知の方法のいずれかによって調製することができる。かかる方法は、活性成分と１つ又は複数の副成分又は賦形剤となる担体とを合わせる工程を含む。一般に、配合物は、活性成分と液体担体若しくは微粉固体担体又はその両方とを一様かつ均質に合わせた後、必要に応じて生成物を成形することによって調製される。例えば、錠剤は、任意で１つ又は複数の副成分とともに圧縮又は成型することによって作製される。圧縮錠は、任意で結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤又は分散剤と混合した、粉末又は顆粒等の自由流動形態の本発明の複合物を好適な機械で圧縮することによって調製することができる。成型錠は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末状活性成分の混合物を好適な機械で成型することによって作製することができる。錠剤は任意でコーティング又は分割してもよく、任意で錠剤からの活性成分の持続放出又は制御放出をもたらすように配合される。
【００４６】
別の態様では、本発明は、腫瘍細胞を低毒性で阻害及び／又は治療する方法であって、有効量の抗腫瘍薬と組み合わせた、アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物を含む有効量の本発明の複合物を被験体に投与することを含む、方法を提供する。本発明の一実施形態によると、アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物と抗腫瘍薬とを別個に、同時に又は順に投与することができる。
【００４７】
本発明によると、抗腫瘍薬と組み合わせたアントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物は、腫瘍細胞を低毒性で選択的に阻害するのに有用である。特に、本発明の複合物は、正常細胞ではなく腫瘍細胞に対して細胞毒性である。アントシン又はその塩若しくはエステル誘導体若しくは組成物を組み合わせて使用することで、抗腫瘍薬の量を減少させることができる。本発明によると、腫瘍は骨髄性リンパ腫、肝細胞癌、肝芽腫、横紋筋肉腫、食道癌、甲状腺癌、神経節芽細胞腫（ganglioblastoma）、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（endotheliosarcoma）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉種（lymphangioendotheliosarcoma）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫（leiomyosarcoma）、横紋皮肉腫（rhabdotheliosarcoma）、結腸癌、膵臓がん、肝臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、血腫、胆管癌、黒色腫、絨毛癌、精上皮腫、胎生癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫（ependymoma）、松果体腫、血管芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病（例えば急性リンパ性白血病）、急性骨髄性白血病（骨髄芽球性（myeloblastic）、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性及び赤白血病）、慢性白血病（慢性骨髄性（顆粒球性）白血病及び慢性リンパ性白血病）、真性赤血球増加症、リンパ腫（ホジキン病及び非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、直腸癌、頭頸部がん、脳がん、原発部位不明のがん、末梢神経系のがん、中枢神経系のがん、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、重鎖病、転移、及び無制御の又は異常な細胞成長を特徴とする任意の疾患又は障害である。腫瘍は肝臓（liver）腫瘍又は乳房腫瘍であるのが好ましい。
【００４８】
一実施形態では、腫瘍は肝臓がんである。肝臓がんには、肝細胞癌（ＨＣＣ）、血管内皮腫、肉腫、肝芽腫又は胆管がん（胆管癌（cholangiocarcinoma））が含まれる。本発明の複合物は、任意でこれらの疾患又は病態を治療する併用療法において使用することができる。併用療法は、本明細書又は本明細書中で引用される参照文献のいずれかで開示される療法又は治療を含む、外科手術、放射線療法、化学療法、細胞毒性剤又は細胞増殖抑制剤と組み合わせた本発明の複合物を含む。好ましくは、本発明の複合物は、化学療法と組み合わせて使用することができる。代替的には、本発明の複合物は、化学療法剤又は補助的な化学療法剤として使用することができる。
【００４９】
治療用途で使用される本発明の複合物の有効用量は、少なくとも治療対象の病態の状況、本発明の複合物が予防的に使用されるか否か（より低用量）、又は悪性腫瘍の重症度及び送達方法等の要因に或る程度依存する。これらの要因は、臨床医によって従来の用量漸増研究を用いて決定される。
【００５０】
任意の好適な投与経路を、患者に有効投与量の本発明の複合物を与えるために利用することができる。例えば、経口経路、直腸経路、非経口経路、経皮経路、経粘膜経路、皮下経路、筋肉内経路、髄腔内経路、肺内経路、経鼻経路又は膣内経路等を必要に応じて利用することができる。
【００５１】
本発明の複合物は、正常細胞ではなく腫瘍細胞を効果的に阻害することができる。したがって、本発明の複合物は、腫瘍細胞を低毒性で選択的に阻害することができる。さらに、アントシン又はそのエステル誘導体、塩若しくは組成物を組み合わせて使用することによって、抗腫瘍薬の量を減少させ、抗腫瘍薬によって引き起こされる副作用を低減することができる。
【実施例】
【００５２】
実施例１  アントシンＡと５−フルオロウラシル（５ＦＵ）との複合物に対する細胞生存率アッセイ（ＭＴＴアッセイ）
２×１０４個のＨｅｐＧ２細胞を９６ウェルプレートの各ウェルに播種し、１０％ＦＢＳ及び１％抗生物質−抗真菌剤溶液を含有するＤＭＥＭ培地とともにインキュベートした。培地を除去した後、対照の６．２５μｇ／ｍｌの５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、２００μｇ／ｍｌの５ＦＵ＋２５μｇ／ｍｌのアントシンＡ、２００μｇ／ｍｌの５ＦＵ＋２０μｇ／ｍｌのアントシンＡ、２００μｇ／ｍｌの５ＦＵ＋１５μｇ／ｍｌのアントシンＡ、２００μｇ／ｍｌの５ＦＵ＋１０μｇ／ｍｌのアントシンＡ、２００μｇ／ｍｌの５ＦＵ＋５μｇ／ｍｌのアントシンＡ、１００μｇ／ｍｌの５ＦＵ＋２５μｇ／ｍｌのアントシンＡ、１００μｇ／ｍｌの５ＦＵ＋２０μｇ／ｍｌのアントシンＡ、１００μｇ／ｍｌの５ＦＵ＋１５μｇ／ｍｌのアントシンＡ、１００μｇ／ｍｌの５ＦＵ＋１０μｇ／ｍｌのアントシンＡ及び１００μｇ／ｍｌの５ＦＵ＋５μｇ／ｍｌのアントシンＡを、ウェルに添加した。２４時間後、作用物質を除去し、１００μｌの０．５％ｍｇ／ｍｌの３−（４，５−ジメチル−チアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）をＭＴＴアッセイのために各ウェルに添加した。３７℃で２時間、暗所でインキュベートした後、溶液を除去し、１００μｌのＤＭＳＯを各ウェルに添加し、１０分間暗所に置いた。溶液を各ウェルから取り出した後、ＥＬＩＳＡリーダーに供して波長５７０ｎｍでの吸光度を検出した。細胞生存率（％）を、対照の吸光度を１００％として用いて算出した。
【００５３】
図１に示されるように、５ＦＵで処理したＨｅｐＧ２細胞のＩＣ５０は２００μｇ／ｍｌであり、細胞は高濃度の５ＦＵ中であっても完全に死滅させることができない。しかしながら、それぞれ５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１５μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ及び２５μｇ／ｍｌのアントシンＡと組み合わせた２００μｇ／ｍｌの５ＦＵで処理した細胞は、ほぼ完全に死滅させることができる（図２）。５ＦＵ濃度を１００μｇ／ｍｌまで低下させ、それぞれ５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１５μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ及び２５μｇ／ｍｌのアントシンＡと組み合わせた１００μｇ／ｍｌの５ＦＵでＨｅｐＧ２細胞を処理すると、細胞をほぼ完全に死滅させることができる（図３）。
【００５４】
さらに、正常ＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞株を、対照の培地、２００μｇ／ｍｌの５ＦＵ、１００μｇ／ｍｌの５ＦＵ及び２５μｇ／ｍｌのアントシンＡと組み合わせた１００μｇ／ｍｌの５ＦＵでそれぞれ処理して、正常細胞に対する本発明の複合物の影響を試験した。図４に示されるように、アントシンＡの添加は５ＦＵで処理した細胞の細胞生存率を増大させることができる。
【００５５】
加えて、ＨｅｐＧ２細胞及びＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞を、それぞれ１２．５μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ及び２００μｇ／ｍｌの５ＦＵと組み合わせた１０μｇ／ｍｌのアントシンＡで処理した場合、がん細胞（ＨｅｐＧ２細胞）を効果的に阻害することができる一方で、正常細胞（ＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞）は高い生存率を有する（図５を参照されたい）。この結果から、アントシンＡが正常細胞を高生存率に維持する（すなわち、正常細胞に対する細胞毒性を低減する）一方で、がん細胞を死滅させる５−ＦＵの効果を高める（すなわち、５−ＦＵの量を低減する）ことができることが示される。
【００５６】
実施例２  アントシンＡとタモキシフェンとの複合物に対する細胞生存率アッセイ（ＭＴＴアッセイ）
３．１３μｇ／ｍｌのタモキシフェン＋２５μｇ／ｍｌのアントシンＡ、３．１３μｇ／ｍｌの５ＦＵ＋２０μｇ／ｍｌのアントシンＡ、３．１３μｇ／ｍｌのタモキシフェン＋１５μｇ／ｍｌのアントシンＡ、３．１３μｇ／ｍｌのタモキシフェン＋１０μｇ／ｍｌのアントシンＡ、３．１３μｇ／ｍｌのタモキシフェン＋５μｇ／ｍｌのアントシンＡを試験サンプルとした以外は、対照、試験条件、材料及び方法は実施例１と同じである。図６に示されるように、タモキシフェンで処理したＨｅｐＧ２細胞のＩＣ５０は８．０２μｇ／ｍｌであり、１２．５μｇ／ｍｌのタモキシフェンで処理した細胞を完全には死滅させることができない。それぞれ５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１５μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ及び２５μｇ／ｍｌのアントシンＡと組み合わせた低濃度のタモキシフェンを用いることで、細胞生存率を有意に低減することができる。図７に示されるように、それぞれ５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１５μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ及び２５μｇ／ｍｌのアントシンＡと組み合わせた３．１３μｇ／ｍｌのタモキシフェン（「ＴＡＭ」）でＨｅｐＧ２細胞を処理すると、細胞生存率はそれぞれ４９．９２％、４１．５２％、３０．８２％、２６．２１％及び２３．１８％である。
【００５７】
さらに、正常ＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞株を、対照の培地、３．１３μｇ／ｍｌのタモキシフェン（「ＴＡＭ」）及び１５μｇ／ｍｌのアントシンＡと組み合わせた３．１３μｇ／ｍｌのＴＡＭでそれぞれ処理して、正常細胞に対する本発明の複合物の影響を試験した。図８に示されるように、アントシンＡの添加はＴＡＭで処理した細胞の細胞生存率を増大させることができる。
【００５８】
加えて、ＨｅｐＧ２細胞及びＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞を、それぞれ０．６２５μｇ／ｍｌ、１．２５μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ及び１０μｇ／ｍｌのＴＡＭと組み合わせた１０μｇ／ｍｌのアントシンＡで処理した場合、がん細胞（ＨｅｐＧ２細胞）を効果的に阻害することができる一方で、正常細胞（ＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞）は高い生存率を有する（図９を参照されたい）。この結果から、アントシンＡが正常細胞を高生存率に維持する（すなわち、正常細胞に対する細胞毒性を低減する）一方で、がん細胞を死滅させるＴＡＭの効果を高める（すなわち、５−ＦＵの量を低減する）ことができることが示される。
【００５９】
実施例３  アントシンＡとスニチニブとの複合物及びアントシンＡとミトキサントロンとの複合物に対する細胞生存率アッセイ（ＭＴＴアッセイ）
対照、試験条件、材料及び方法は実施例１と同じである。図１０に示されるように、スニチニブで処理したＨｅｐＧ２細胞のＩＣ５０は約２５μｇ／ｍｌであり、正常細胞（ＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞）もこの濃度で死滅した。ＨｅｐＧ２細胞及びＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞を、それぞれ５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１５μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ及び２５μｇ／ｍｌのスニチニブと組み合わせた１０μｇ／ｍｌのアントシンＡで処理した場合、がん細胞（ＨｅｐＧ２細胞）を効果的に阻害することができる一方で、正常細胞（ＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞）は高い生存率を有する（図１１を参照されたい）。この結果から、アントシンＡが正常細胞をより高い生存率に維持する（すなわち、正常細胞に対する細胞毒性を低減する）一方で、がん細胞を死滅させるスニチニブの効果を高める（すなわち、５−ＦＵの量を低減する）ことができることが示される。
【００６０】
次にミトキサントロンを検討すると、図１２に示されるように、ミトキサントロンで処理したＨｅｐＧ２細胞のＩＣ５０は約２．５μｇ／ｍｌであり、正常細胞（ＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞）の生存率はこの濃度で低下した。ＨｅｐＧ２細胞及びＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞を、それぞれ２．５μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、６．２５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ及び１２．５μｇ／ｍｌのミトキサントロンと組み合わせた１０μｇ／ｍｌのアントシンＡで処理した場合、がん細胞（ＨｅｐＧ２細胞）を効果的に阻害することができる一方で、正常細胞（ＣＣＤ−９６６ＳＫ細胞）はより高い生存率を有する（図１３を参照されたい）。この結果から、アントシンＡが正常細胞をより高い生存率に維持する（すなわち、正常細胞に対する細胞毒性を低減する）一方で、がん細胞を死滅させるスニチニブの効果を高める（すなわち、５−ＦＵの量を低減する）ことができることが示される。
【００６１】
実施例４  本発明の複合物であるアントシン（Antcin）Ａ及び５ＦＵ、アントシン（Antcin）Ａ及びタモキシフェン、アントシンＡ及びスニチニブ並びにアントシンＡ及びミトキサントロンに対する動物モデル試験
２×１０６個のＨｅｐＧ２ヒト肝臓がん細胞をＮＯＤ−ＳＣＩＤマウスの背部に注射し、腫瘍を形成した。腫瘍が１０×１０ｍｍ３まで成長した後、本発明の複合物である１ｍｇ／ｋｇ量のアントシンＡ及びそれぞれ２０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、１．２５ｍｇ／ｋｇ量の５ＦＵ、１ｍｇ／ｋｇ量のアントシンＡ及びそれぞれ１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．１２５ｍｇ／ｋｇ、０．０６２５ｍｇ／ｋｇ量のタモキシフェン、１ｍｇ／ｋｇ量のアントシンＡ及びそれぞれ２．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ量のスニチニブ、並びに１ｍｇ／ｋｇ量のアントシンＡ及びそれぞれ１．２５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、０．６２５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ量のミトキサントロンを、それぞれマウスの腹腔に毎日注射した。対照としてエタノールをマウスに注射した。１４日間にわたって１日１回注射した後、マウスを屠殺し、腫瘍サイズを測定した。この結果から、本発明の複合物が腫瘍サイズを有意に低減すること（約２０％〜７０％の低減）が示される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【外国語明細書】
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