(57)【要約】【課題】新たな免疫賦活剤及び免疫療法剤を提供すること。【解決手段】（Ａ）脂肪族アルコール類と、（Ｂ）下記一般式（１）で表されるピロリドン類とを組み合わせてなる免疫賦活剤。  一般式（１）2014005236.tif 000004（式中、Ｒ1は、水素原子または炭素数１〜１２のアルキル基を示す。）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）脂肪族アルコール類と、（Ｂ）下記一般式（１）で表されるピロリドン類とを組み合わせてなる免疫賦活剤。
一般式（１）
【化１】
2014005236.tif 000003
（式中、Ｒ1は、水素原子または炭素数１〜１２のアルキル基を示す。）
【請求項２】
成分（Ａ）と成分（Ｂ）とが一の製剤中に含まれるものである請求項１記載の免疫賦活剤。
【請求項３】
前記脂肪族アルコール類が、飽和又は不飽和の炭素数８〜２０の直鎖又は分枝アルコールである請求項１又は２記載の免疫賦活剤。
【請求項４】
前記ピロリドン類が、Ｎ−メチルピロリドンまたはＮ−エチルピロリドンである請求項１〜３のいずれか１項に記載の免疫賦活剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の免疫賦活剤を含有する免疫療法剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫賦活剤及び免疫療法剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫療法は、元来生体が有している外来抗原排除という免疫応答を利用する療法であり、免疫系を賦活させることで疾患を治療するものである。免疫療法には、皮下、皮内、経皮投与法などがあり、免疫賦活剤と抗原とを順次に或いは同時に投与することで自然免疫系を活性化し、投与抗原に対する高い特異的免疫応答を期待している。抗原が皮膚に投与された場合、表皮に常在するランゲルハンス細胞、真皮に常在する真皮樹状細胞が、抗原の捕獲及び所属リンパ節内での抗原特異的Ｔ細胞への抗原提示において中心的役割を果たしている（特許文献１）。
【０００３】
一方、リンパ節内における抗原特異的Ｂ細胞、又はＴ細胞を効率的に誘導するためには、免疫賦活物質の投与が不可欠となる。そのような免疫賦活物質として、二価の不飽和カルボン酸エステル、コレラ毒素等の他、脂肪族アルコール、遊離脂肪酸、脂肪酸誘導体が知られている。これらの免疫賦活剤は経皮投与による皮膚刺激性は低いが、ハプテンの経皮投与に対する免疫応答や、抗体産生亢進などの作用を有する（特許文献２、３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１０−５９２０１号公報
【特許文献２】国際公開第２００８／０９３７７２号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００７／０１５４４１号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、従来の免疫賦活剤の効果は十分でなく、さらに優れた免疫賦活剤及びそれを用いた免疫療法剤が望まれていた。
従って、本発明の課題は、新たな免疫賦活剤及び免疫療法剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで、本発明者は、種々の成分を用いて表皮ランゲルハンス細胞及び真皮樹状細胞に高発現するＭＨＣクラスII分子及びその表面活性化分子の活性化を指標として免疫賦活作用を検討してきたところ、脂肪族アルコール類と特定のピロリドン類との組み合わせが強い免疫賦活能を有し、免疫療法剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、（Ａ）脂肪族アルコール類と、（Ｂ）下記一般式（１）で表されるピロリドン類とを組み合わせてなる免疫賦活剤、及び免疫療法剤を提供するものである。
一般式（１）
【０００８】
【化１】
2014005236.tif 000002
【０００９】
（式中、Ｒ1は、水素原子または炭素数１〜１２のアルキル基を示す。）
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、既存アジュバントである脂肪族アルコール類にピロリドン類を添加することで、皮膚に常在する表皮ランゲルハンス細胞及び真皮樹状細胞を活性化させ、リンパ節移行を促進させるので、優れた免疫賦活剤が提供できるとともに、その免疫賦活剤を含む免疫療法剤が提供できる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】脂肪族アルコール類とピロリドン類との組み合わせの、ＭＨＣクラスII分子の活性化を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の免疫賦活剤は、（Ａ）脂肪族アルコール類［成分（Ａ）］と、（Ｂ）一般式（１）で表されるピロリドン類［成分（Ｂ）］とを組み合わせてなるものである。
【００１３】
脂肪族アルコール類としては、飽和又は不飽和の炭素数８〜２０の直鎖又は分枝アルコールであることが好ましく、飽和又は不飽和の炭素数が１０〜２０の直鎖又は分枝アルコールがより好ましい。具体的には、デカノール、ラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、パルミチルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、オクチルドデカノール、オレイルアルコール等が挙げられる。これらの中でもオレイルアルコールが特に好ましい。
これらの脂肪族アルコール類は、１種を用いてもよく２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１４】
ピロリドン類を示す一般式（１）中、Ｒ1としては炭素数１〜１２のアルキル基が好ましく、炭素数１〜６のアルキル基がより好ましく、炭素数１〜３のアルキル基がさらに好ましい。Ｒ1の具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基が挙げられるが、メチル基、エチル基が特に好ましい。すなわち、ピロリドン類（１）としては、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−エチルピロリドンが特に好ましい。これらのピロリドン類は１種を用いてもよいし、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１５】
（Ａ）脂肪族アルコール類と（Ｂ）ピロリドン類（１）とを組み合わせて用いれば、後記実施例に示すように、抗原提示細胞を含む限られた免疫系細胞にのみ発現するＭＨＣクラスII分子及びその表面活性化分子のリンパ節移行を増大させる作用を有することから、これらの組み合わせは、ヒトを含む哺乳動物の免疫賦活剤として有用であり、免疫療法剤として有用である。
【００１６】
本発明の免疫賦活剤は、（Ａ）脂肪族アルコール類と（Ｂ）ピロリドン類（１）とを組み合わせて投与できればよく、同時投与であっても、互いに逐次投与であってもよい。また、（Ａ）脂肪族アルコール類と（Ｂ）ピロリドン類（１）とは、投与経路が同一でも、互いに異なっていてもよいし、一の製剤であっても、別個の製剤であってもよい。
【００１７】
本発明の免疫療法剤は、上記の免疫賦活剤を含むものであり、好ましくはさらに抗原を含むものである。本発明の免疫療法剤は、免疫賦活剤および抗原を含む１つの製剤としてもよいし、免疫賦活剤および抗原を別体の製剤として含むキットであってもよい。また、他の免疫賦活剤、免疫調節剤、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、ＴＬＲ賦活剤（イミキモド、ＣｐＧヌクレオチド）等と併用してもよい。
【００１８】
本発明の免疫賦活剤及び免疫療法剤の投与方法としては、経皮投与、経粘膜投与、経口投与、皮下注射、皮内注射等が挙げられるが、経皮投与がより好ましい。本発明の免疫賦活剤と抗原を併用して投与する場合には、その抗原特異的免疫応答を誘導することができる。抗原の投与は、本発明の免疫賦活剤と抗原とを同時に投与してもよく、また本発明の免疫賦活剤を投与した後に抗原を投与してもよい。
【００１９】
上記抗原としては、免疫応答を引き起こすことができる分子であれば、特に制限はないが、例えばペプチドまたはタンパク質が挙げられる。ペプチドとしては、天然由来のペプチドまたは合成ペプチドのいずれでもよく、３〜２５のアミノ酸残基からなるペプチドが好ましい。タンパク質としては、天然由来のタンパク質または合成タンパク質のいずれでもよい。具体的には、癌抗原（腫瘍抗原）、種々のウイルス由来抗原、感染原因菌由来抗原、種々のアレルギー原因抗原等が挙げられる。
【００２０】
本発明の免疫賦活剤又は免疫療法剤中の成分（Ａ）の含有量は、０．００００１質量％以上が好ましく、０．００１質量％以上がより好ましく、０．１質量％以上がさらに好ましい。なお、本発明の免疫賦活剤又は免疫療法剤の剤形が、後述する貼付剤である場合には、貼付剤の粘着層中に粘着剤を含むことが必要であるため、貼付剤の粘着層中の成分（Ａ）の含有量は、０．００００１〜２５質量％が好ましく、０．００１〜２０質量％がより好ましく、０．１〜１５質量％がさらに好ましい。
【００２１】
また、本発明の免疫賦活剤又は免疫療法剤中の成分（Ｂ）の含有量は、０．００００１質量％以上が好ましく、０．００１質量％以上がより好ましく、０．１質量％以上がさらに好ましい。なお、本発明の免疫賦活剤又は免疫療法剤の剤形が、後述する貼付剤である場合には、貼付剤の粘着層中の成分（Ｂ）の含有量は、０．００００１〜２５質量％が好ましく、０．００１〜２０質量％がより好ましく、０．１〜１５質量％がさらに好ましい。
【００２２】
また、成分（Ａ）と成分（Ｂ）との含有質量比（成分（Ａ）：成分（Ｂ））は、１：９９〜９９：１が好ましく、７０：３０〜９９：１がより好ましい。
【００２３】
また、本発明の免疫賦活剤及び免疫療法剤には、希釈剤、溶解助剤、吸収促進剤等として、常温で液状又はペースト状の成分が含まれていてもよく、例えば、流動パラフィン、スクワラン、イソパラフィン等の炭化水素類；パラフィン系プロセスオイル、ナフテン系プロセスオイル等の石油系オイル；ホホバ油、ヒマシ油、ヒマワリ油、オリーブ油、ごま油、サフラワー油、スクワレン等の天然動植物油脂類；メチルフェニルポリシロキサン、メチルポリシロキサン等のシリコーン類；ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸、イソステアリン酸、オレイン酸等の高級脂肪酸類；アルキルグリセリルエーテル等の界面活性剤；水等が挙げられ、これらのうち１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００２４】
本発明の免疫賦活剤又は免疫療法剤の剤形は、注射用剤または経皮投与剤であることが好ましく、経皮投与剤であることがより好ましい。経皮投与剤は、注射用剤と比較して、非侵襲的であること、また操作が塗る、貼るなどの単純な作業になるため、医療従事者である必要がなく、患者自身によっても作業可能である点で優れている。このような経皮投与剤の具体的な剤形としては、液剤、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤、スプレー剤等の他、パップ剤、テープ剤等の貼付剤などが挙げられる。これらの中でも貼付剤であることがより好ましく、角質剥離機能を有する貼付剤であることが特に好ましい。
【００２５】
角質剥離機能を有する貼付剤は、その粘着力をＪＩＳ  Ｚ０２３７に準拠した測定方法（対ベークライト板）で、好ましくは３〜２０Ｎ／２５ｍｍ程度に調整することにより得ることができる。
【００２６】
角質剥離機能を有する貼付剤の剥離により、皮膚表皮角質層を物理的に破壊させることができ、通常免疫賦活剤の適用後に適用される抗原の経皮吸収性を向上させることが出来るうえ、角質剥離機能を有する貼付剤の剥離による皮膚表皮角質層の破壊により皮膚下層に存在する抗原提示細胞（特に表皮ランゲルハンス細胞）の活性化が引き起こされる。すなわち、免疫賦活成分による皮膚下層に存在する抗原提示細胞（例えば表皮ランゲルハンス細胞や真皮樹状細胞など）の活性化と、皮膚表皮角質層の破壊による皮膚下層に存在する抗原提示細胞（特に表皮ランゲルハンス細胞）の活性化の両方を一つの貼付剤で行うことができる。
【００２７】
免疫療法剤として、免疫賦活剤と併用して抗原を投与する場合には、その抗原特異的免疫応答を誘導することができる。
抗原を投与する場合には、上記免疫賦活剤の投与と同時または約９６時間以内に、好ましくは約７２時間以内に、特に好ましくは約４８時間以内に、抗原を投与する。
【００２８】
抗原は、そのまま投与してもよいが、抗原投与剤の形態にするのが好ましく、抗原投与剤の剤形は、注射用剤または経皮投与剤であることが好ましく、経皮投与剤であることがより好ましい。この理由は、皮下注射された抗原は投与された局所から拡散するのに時間がかかり、皮膚下層中に点在する抗原提示細胞（例えば表皮ランゲルハンス細胞や真皮内樹状細胞等）に捕獲される効率が低くなるためである。これに対して、経皮投与の場合には、表皮角質層が皮膚透過のバリアとなってしまい、抗原の経皮吸収性が低いことが問題となるが、上記のように、皮膚表皮角質層を破壊することで劇的に抗原の経皮吸収性が高まるうえ、皮下注射に比べて皮膚表皮の比較的広い範囲に抗原が投与されるため、皮膚下層中に点在する抗原提示細胞に捕獲される効率が高くなるという利点を有する。
【実施例】
【００２９】
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。
【００３０】
実施例１
成分（Ａ）としてのオレイルアルコール（東京化成工業社製、製品コードＯ００５８）９７質量部と、成分（Ｂ）としてＮ−メチル−ピロリドン（ＮＭＰ）３質量部とを混ぜて、本発明の免疫賦活剤１を調製した。
【００３１】
比較例１
オレイルアルコールをそのまま比較用製剤１とした。
【００３２】
比較例２
リン酸緩衝液（ＧＩＢＣＯ社製、商品名「ＰＢＳ（−）」）をそのまま比較用製剤２とした。
【００３３】
試験例１
８〜１０週齢Ｃ５７ＢＬ/６マウス（日本クレアより購入）背中を除毛クリームで除毛し、それから２日後に、免疫賦活剤１、比較用製剤１、２をそれぞれ５０μｌ塗布した。次いで、２４時間後に鼠径リンパ節を取り出し、ピンセットにより単一細胞化し、これらの細胞をリン酸緩衝液（ＥＤＴＡ０.５ｍＭ）に懸濁して細胞懸濁液を調製した。この懸濁液に抗マウスＣＤ１６・ＣＤ３２抗体（バイオレジェンド製、クローン名：９３）を添加した。その後、細胞懸濁液に表皮ランゲルハンス細胞及び真皮樹状細胞に高発現するＭＨＣクラスII（Ｉ−Ａb）分子を認識する、ＰＥ標識抗マウスＩ−Ａb抗体（バイオレジェンド製、クローン名：ＡＦ６−１２０１）を添加した。また、それと同時に各種活性化分子に対するマウス抗体（全てＡＰＣ標識で、ＣＤ４０（バイオレジェンド製、クローン名：３／２３）・ＣＤ５４（バイオレジェンド製、クローン名：ＹＮ１/１．７．４）・ＣＤ８０（バイオレジェンド製、クローン名：１６−１０Ａ１）・ＣＤ８６（バイオレジェンド製、クローン名：ＧＬ−１））もそれぞれ添加した。４℃、３０分間反応後、フローサイトメータ解析を行った。フローサイトメータ測定は、測定直前に核内染色物質である７−ＡＡＤ（ベックマン・コールター製）を添加し、７−ＡＡＤ陽性である死細胞画分を排除することで実施した。
【００３４】
その結果、図１より、免疫賦活剤１は、比較用製剤１、２と比較して、Ｉ−Ａb、Ｉ−Ａb／ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ８０、ＣＤ８６全ての項目において割合が顕著に亢進されており、成分（Ａ）および成分（Ｂ）の併用は免疫賦活剤として有用であることが分かる。
【図１】
2014005236.tif 000005