(57)【要約】      （修正有）【課題】神経変性病の治療的処置に有用な、または、筋肉弛緩薬、鎮痛薬、または一般的な麻酔薬への補助剤として有用な化合物を提供する。【解決手段】以下の構造で表わされる化合物又はその薬学的に許容される塩。2014166987.tif 000050［各ＸはＯＨ，又はＯＣＨ3；各Ｒ1は独立して，１〜５個の炭素原子の低級アルキル；各Ｒ2は独立して，Ｈ又は１〜５個のＣの低級アルキル；但し，窒素原子上のＲ1及びＲ2は同一］【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造：
【化１】
2014166987.tif 000047
［式中，各Ｘは，独立して，１またはそれ以上のＢｒ，Ｆ，１〜５個の炭素原子の低級アルキル，ＯＨ，またはＯＣＨ3であり，各Ｒ1は，独立して，１〜５個の炭素原子の低級アルキル，またはＯＨであり，および各Ｒ2は，独立して，Ｈまたは１〜５個の炭素原子の低級アルキルであるが，ただし，窒素原子上のＲ1およびＲ2は同一である］
を有する化合物またはその薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】
以下の構造：
【化２】
2014166987.tif 000048
［式中，各Ｘは，独立して，１またはそれ以上のＢｒ，Ｆ，１〜５個の炭素原子の低級アルキル，またはＯＣＨ3であり，各Ｒ1は，独立して，１〜５個の炭素原子の低級アルキル，またはＯＨであり，および各Ｒ2は，独立して，Ｈまたは１〜５個の炭素原子の低級アルキルであるが，ただし，窒素原子上のＲ1およびＲ2は同一である］
を有する，請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容しうる塩。
【請求項３】
ＸはＦである，請求項２記載の化合物。
【請求項４】
以下の構造：
【化３】
2014166987.tif 000049
［式中，ＸはＯＨであり，各Ｒ1は，独立して，１〜５個の炭素原子の低級アルキルであり，および各Ｒ2は，独立して，Ｈまたは１〜５個の炭素原子の低級アルキルであるが，ただし，窒素原子上のＲ1およびＲ2は同一である］
を有する化合物またはその薬学的に許容しうる塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は，神経保護薬，抗痙攣薬，抗不安薬，鎮痛薬，筋肉弛緩薬，または一般的な麻酔薬への補助薬として有用な化合物に関する。本発明は，限定されないが，総体および巣状虚血症ならびに出血性発作を含む神経障害および神経病，頭部外傷，脊髄損傷，心拍停止または新生児窮迫（neonataldistress）における低酸素誘発性神経細胞損傷，癲癇，不安，ならびに，アルツハイマー病，ハンチントン病およびパーキンソン病などの神経変性病の治療に有用な方法にも関する。本発明は，受容体作動性（receptor-operated）カル
シウムチャネル上の新規部位で活性であり，これにより，神経保護薬，抗痙攣薬，抗不安薬，鎮痛薬，筋肉弛緩薬または一般的な麻酔薬への補助薬としての治療的利用能を有し，および／または前記神経障害および神経病の治療のための有効な治療的利用能を有する化合物についてのスクリーニング方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
以下は，関連技術の説明であり，請求の範囲についての従来技術であると認められるものはない。
【０００３】
グルタミン酸（glutamate）は，哺乳動物脳において主要な興奮性神経伝達物質である
。グルタミン酸は，薬理学的にいくつかのサブタイプに区別され得る１つ以上のグルタミン酸受容体と結合または相互作用する。哺乳動物の中枢神経系（ＣＮＳ）には，選択的作動薬であるＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸(ＮＭＤＡ)，カイニン酸（ＫＡ）およびα−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチルイソオキサゾール−４−プロピオン酸（ＡＭＰＡ）によって薬理学的に定義されたイオノトロピック（ionotropic）グルタミン酸受容体の３つの主要なサブタイプがある。ＮＭＤＡ受容体は，発作，頭部外傷，脊髄損傷，癲癇，不安，およびアルツハイマー病などの神経変性病を含む種々の神経科病理学に関連している［ワトキンズ（Ｗatkins）およびコリングリッジ(Ｃollingridge)，ザ・ＮＭＤＡ・レセ
プター(ＴheＮＭＤＡ Ｒeceptor)，オックスフォード（Ｏxford）：ＩＲＬプレス，１９
８９]。侵害受容および無痛におけるＮＭＤＡ受容体についての役割も要求された［ディ
ッケンソン(Ｄickenson)，終結のための治療：有効な鎮痛薬としてのＮＭＤＡ受容体拮抗薬(Ａcure for wind-up: ＮＭＤＡ receptor antagonists as potential analgesics)，
トレンズ・イン・ファーマコロジカル・サイエンシズ（ＴrendsＰharmacol.Ｓci.）１１
：３０７，１９９０]。さらに近年，ＡＭＰＡ受容体は，それらのかかる神経科病理学へ
の可能な貢献について広範囲に研究された[フィッシャー（Ｆisher）およびボゴウススラヴスキー(Ｂogousslavsky)，急性虚血性発作についての有効な治療への開発(Ｅvolvingtoward effective therapy for acute ischemic stroke)，ジャーナル・オブ・アメリカン
・メディカル・アソシエイション（Ｊ.Ａmer.Ｍed.Ａssoc.）２７０：３６０，１９９３
；ヤマグチ（Ｙamaguchi）ら，ＡＭＰＡ／カイニン酸拮抗薬の抗痙攣活性：最大電気ショックおよび化学的痙攣発作モデルにおけるＧＹＫＩ５２４６６およびＮＢＱＸの比較（Ａnticonvulsantactivity of ＡＭＰＡ／kainate antagonists: comparison of ＧＹＫＩ 
５２４６６ and ＮＢＱＸ inmaximal electroshock and chemocinvulsant seizure models)，Ｅpilepsy Ｒes．１５：１７９，１９９３]。
【０００４】
内因性神経伝達物質であるグルタミン酸によって活性化されると，ＮＭＤＡ受容体は，関連イオンチャネルを介して細胞外カルシウム（Ｃa2+）およびナトリウム（Ｎa+）を流
入させる。ＮＭＤＡ受容体は，カイニン酸またはＡＭＰＡ受容体（以下を参照）よりもかなり多くのＣa2+を流入させ，受容体作動性Ｃa2+チャネルの例である。一般に，該チャネルは，簡単に開口され，これにより，細胞内Ｃa2+の濃度（[Ｃa2+]i）の局在化された一
過性の増加が行われ，次いで，細胞の機能的活性が変えられる。しかしながら，ＮＭＤＡ受容体の慢性的な刺激により得られる[Ｃa2+]iの長期増加は，細胞に対して毒性であり，細胞死を導く。ＮＭＤＡ受容体の刺激により生じる[Ｃa2+]iの慢性的な上昇は，発作の後の神経変性の主な原因であると言われている［チョイ(Ｃhoi)，グルタミン酸神経毒性お
よび神経系の疾患(Ｇlutamateneurotoxicity and diseases of the nervous system)，ニューロン（Ｎeuron）１：６２３，１９８８]。ＮＭＤＡ受容体の過剰刺激は，また，いくつかの形態の癲癇[ディングレディン（Ｄingledine）ら，癲癇における興奮性アミノ酸受容体(Ｅxcitatoryamino acid receptors in epilepsy)，トレンズ・イン・ファーマコロ
ジカル・サイエンシズ（Ｔrends Ｐharmacol.Ｓci.）１１：３３４，１９９０）]，不安
［ウィリー（Ｗiley）およびバルスター(Ｂalster)，抗不安効果のためのＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸拮抗薬の症状発現前の評価:リビュー(Ｐreclinicalevaluation of Ｎ−methyl−Ｄ−aspartate antagonists for antianxiety effects: Ａreview)，マルチプル・シグマ・アンド・ＰＣＰ・レセプター・リガンズ：メカニズムス・フォー・ニューロモジュレーション・アンド・ニューロプロテクション？(ＭultipleＳigma and ＰＣＰ Ｒeceptor Ｌigands: Ｍechanisms for Ｎeuromodulation and Ｎeuroprotection？)，ＮＰＰブックス，ミシガン州アナーバー，第８０１〜８１５頁，１９９２]，および痛覚過敏状
態［ディッケンソン(Ｄickenson)，終結のための治療：有効な鎮痛薬としてのＮＭＤＡ受容体拮抗薬(Ａcure for wind-up: ＮＭＤＡ receptor antagonists as potential analgesics)，トレンズ・イン・ファーマコロジカル・サイエンシズ（ＴrendsＰharmacol.Ｓci.）１１：３０７，１９９０］の病因に関係すると言われている。
【０００５】
ＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体の活性は，選択的拮抗薬によって標的とされ得る種々のモジュレートリー部位によって調節される。ホスホン酸ＡＰ５などの競合的拮抗薬は，グルタミン酸結合部位で作用するが，一方，フェンシクリジン(ＰＣＰ)，ＭＫ−８０１またはマグネシウム（Ｍg2+）などの非競合的拮抗薬は，関連イオンチャネル内で作用
する(イオノフォア)。７−クロロキヌレン酸などの化合物で選択的に遮断され得るグリシン結合部位もある。グリシンが共作動薬（co-agonist）として作用し，その結果，グルタミン酸およびグリシンがＮＭＤＡ受容体媒介応答を充分に誘発するために必要であるということを示す証拠がある。ＮＭＤＡ受容体機能のモジュレーションのための他の有効な部位として，亜鉛（Ｚn2+）結合部位およびシグマリガンド結合部位が挙げられる。さらに
，スペルミンなどの内因性ポリアミン類は，特異的な部位に結合すると思われ，そこで，ＮＭＤＡ受容体機能の効力を増す[ランソム（Ｒansom）およびステック（Stec），グルタミン酸，グリシンおよびポリアミン類によってＮＭＤＡ受容体−イオンチャネル複合体に結合する[3Ｈ]ＭＫ−８０１の協同モジュレーション(Ｃooperativemodulation of［3Ｈ］ＭＫ−８０１ binding to the ＮＭＤＡ receptor-ion channelcomplex by glutamate，glycine and polyamines)，ジャーナル・オブ・ニューロケミストリー（Ｊ.Ｎeurochem.）５１：８３０，１９８８]。ＮＭＤＡ受容体機能に対するポリアミン類の増強する効果は
，ポリアミン類についての特異的な受容体部位を介して媒介される；作動活性，拮抗活性および逆作動活性を示すポリアミン類が開示されている[レノルズ(Ｒeynolds)，アルカインは，ＮＭＤＡ受容体上のポリアミン部位の競合拮抗薬である(Ａrcaineis a competitive antagonist of the polyamine site on the ＮＭＤＡ receptor)，ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Ｅurop.Ｊ.Ｐharmacol.）１７７：２１５，１９９０
；ウィリアムズ（Ｗilliams）ら，ＮＭＤＡ受容体のポリアミン認識部位での作動効果，
拮抗効果，および逆作動効果を有するポリアミン類の特徴付け(Ｃharacterizationof polyamines having agonist，antagonist，and inverse agonist efects at thepolyamine recognition site of the ＮＭＤＡ receptor)，ニューロン（Ｎeuron）５：１９９，１９９０]。放射リガンド結合研究は，さらに，高濃度のポリアミン類がＮＭＤＡ受容体機能
を阻害することを示した［レノルズ（Ｒeynolds）およびミラー(Ｍiller)，イフェンプロジルは，ＮＭＤＡ受容体拮抗薬の新規タイプである：ポリアミン類との相互作用(Ｉfenprodilis a novel type od ＮＭＤＡ receptor antagonist: Ｉnteraction with polyamine
s)，モレキュラー・ファーマコロジー（Ｍolec.Ｐharmacol.)３６：７５８，１９８９；
ウィリアムズ（Ｗilliams）ら，[3Ｈ]ＭＫ−８０１のＮＭＤＡ受容体への結合に対するポリアミン類の効果：ポリアミン認識部位の存在についての薬理学的証拠(Ｅffectsof polyamines on the binding of[3Ｈ]ＭＫ−８０１ to the ＮＭＤＡreceptor: Ｐharmacologicalevidence for the existence of a polyamine recognition site)，モレキュラー・ファーマコロジー（Ｍolec.Ｐharmacol.）３６：５７５，１９８９；サッカン（Ｓaccan）
およびジョンソン(Ｊohnson)，ＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体に結合する[3Ｈ]Ｔ
ＣＰに対するポリアミン類の刺激効果および阻害効果の特徴付け(Ｃharacterizationof the stimulatory and inhibitory effects of polyamines on [3Ｈ]ＴＣＰbinding to the
ＮＭＤＡ receptor-ionophore complex)，モレキュラー・ファーマコロジー（Ｍolec.Ｐharmacol.）３７：５７２，１９９０]。パッチクランプ電気生理学的研究により，作動薬または拮抗薬のいずれかとしてポリアミン受容体で作用することが予め示された化合物によってこの阻害が生じることが判明したので，ＮＭＤＡ受容体に対するポリアミン類のこの阻害効果は，おそらく，非特異的効果であろう（すなわち，ポリアミン受容体を介して媒介されない）［ドネバン（Ｄonevan）ら，アルカインは，オープン・チャネル・メカニズムによってＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体応答を遮断する：培養した海馬ニューロンにおける全細胞および単一チャネル・レコーディング研究(ＡrcaineＢlocks Ｎ−
Ｍethyl−Ｄ−Ａspartate Ｒeceptor Ｒesponses by an Ｏpen Ｃhannel Ｍechanism: Ｗhole-Ｃelland Ｓingle-Ｃhannel Ｒecording Ｓtudies in Ｃultured Ｈippocampal Ｎeurons)，モレキュラー・ファーマコロジー（Ｍolec．Ｐharmacol.）４１：７１７，１９
９２；ロック（Ｒock）およびマクドナルド(Ｍacdonald)，スペルミンおよび関連ポリア
ミン類は，ＮＭＤＡ受容体単一チャネルコンダクタンスの電位依存性減少を生じる(Ｓpermineand Ｒelated Ｐolyamines Ｐroduce a Ｖoltage−Ｄependent Ｒeduction of ＮＭ
ＤＡ Ｒeceptor Ｓingle−ＣhannelＣonductance)，モレキュラー・ファーマコロジー（
Ｍolec.Ｐharmacol.）４２：１５７，１９９２]。最近の研究により，グルタミン酸受容
体の分子多様性（moleculardiversity）が判明した[ナカニシ(Ｎakanishi)，グルタミン
酸受容体の分子多様性および脳機能についての密接な関係(Ｍolecular Ｄiversityof Ｇlutamate Ｒeceptors and Ｉmplications for Ｂrain Ｆunction)，サイエンス（Ｓcience）２５８：５９７，１９９２]。
【０００６】
各々異なる遺伝子によってコードされている少なくとも５種類のＮＭＤＡ受容体サブユニット（ＮＭＤＡＲ１およびＮＭＤＡＲ２Ａ〜ＮＭＤＡＲ２Ｄ）が現在までに同定されている。ＮＭＤＡＲ１において，代替スプライシングは，少なくとも６つのさらなるイソ形態を生じる。ＮＭＤＡＲ１が必要なサブユニットであり，ＮＭＤＡＲ１と，ＮＭＤＡＲ２の異なるメンバーとの組合せが充分に機能的なＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体を形成することは，明らかである。かくして，ＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体は，少なくともＮＭＤＡＲ１およびＮＭＤＡＲ２サブユニットからなるヘテロ−オリゴマー構造体として定義される；まだ発見されていないが，さらなるサブユニットの存在は，この定義によって除外されない。ＮＭＤＡＲ１は，グルタミン酸，グリシン，Ｍg2+，ＭＫ−８０
１，およびＺn2+についての結合部位を有することが判明した。シグマリガンドおよびポ
リアミン類についての結合部位は，ＮＭＤＡ受容体サブユニット上に局在していなかったが，イフェンプロジルは，最近，ＮＭＤＡＲ２Ｂサブユニットでの方がＮＭＤＡＲ２Ａサブユニットでよりも有効であることが報告された［ウィリアムズ(Ｗilliams)，イフェン
プロジルは，Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体のサブタイプを区別する：組換えヘテロメリック受容体での選択性およびメカニズム（Ｉfenprodildiscrimates subtype of the Ｎ-Ｍethyl−Ｄ−aspartate receptor: selectivity andmechanisms at recombinant
heteromeric receptors）]。
【０００７】
ＡＭＰＡおよびカイニン酸受容体のいくつかの異なるサブタイプもクローンされる[ナ
カニシ（Ｎakanishi）ら，グルタミン酸受容体の分子多様性および脳機能についての密接
な関係(ＭolecularＤiversity of Ｇlutamate Ｒeceptors and Ｉmplications for Ｂrain Ｆunction)，サイエンス（Ｓcience）２５８：５９７，１９９２]。ＧluＲ１，ＧluＲ
２，ＧluＲ３，およびＧluＲ４（ＧluＲＡ〜ＧluＲＤとも称される）と称されるＡＭＰＡ受容体が特に関連しており，各々，フリップおよびフロップと称される２つの形態のうち一方で存在し，ＲＮＡ代替スプライシングによって生じる。ＧluＲ１，ＧluＲ３およびＧluＲ４は，ホモメリック（homomeric）またはヘテロメリック（heteromeric）受容体として発現されると，Ｃa2+に対して透過性があり，したがって，受容体作動性Ｃa2+チャネルの例である。単独または他のサブユニットと組み合わせたＧluＲ２の発現は，Ｃa2+に対
して非常に非透過性である受容体を生じる。insituで研究したほとんどのＡＭＰＡ受容体は，Ｃa2+透過性ではないので（前記した），in situでのかかる受容体は，少なくとも１つのＧluＲ２サブユニットを有すると思われる。さらにまた，ＧluＲ２サブユニットは，推定のポア形成膜内外領域II内にアルギニン残基を含有するという事実によって機能的に異なるという仮説が設けられる；ＧluＲ１，ＧluＲ３およびＧluＲ４は，全て，この棄却域（Ｑ／Ｒ部位と称される，ここで，ＱおよびＲは，各々，グルタミンおよびアルギニンについての一文字呼称である）にグルタミン残基を含有する。ＡＭＰＡ受容体の活性は，選択的拮抗薬によって標的とされ得る多くのモジュレートリー部位によって調節される[
アナレイ（Ｈonore）ら，キノキサリンジオン類：８４ｂ４な競合的非ＮＭＤＡグルタミ
ン酸受容体拮抗薬（Ｑuinoxalinediones:potent competitive non-ＮＭＤＡglutamate receptor antagonists)，サイエンス（Ｓcience）２４１：７０１，１９８８；ドネバン（
Ｄonevan）およびロガヴスキー(Ｒogawski)，ＧＹＫＩ５２４６６，２，３−ベンゾジア
ゼピンは，ＡＭＰＡ／カイニン酸受容体応答の非常に選択的な非競合拮抗薬である（ＧＹＫＩ ５２４６６，ａ２，３−benzodiazepine，isa highly selective，noncompetitive antagonist of ＡＭＰＡ／kainate receptorresponses)，ニューロン（Ｎeuron）１０：
５１，１９９３]。ＮＢＱＸなどの競合的拮抗薬は，グルタミン酸結合部位で作用し，一
方，ＧＹＫＩ ５２４６６などの化合物は，関連したアロステリックな部位で非競合的に
作用すると思われる。
【０００８】
ＮＭＤＡ受容体で競合的または非競合的拮抗薬として作用する化合物は，種々のイン・ビトロ神経毒性アッセイ［メルドラム（Ｍeldrum）およびガースウェイト(Ｇarthwaite)
，興奮性アミノ酸神経毒性および神経変性病（Ｅxcitatoryamino acid neurotoxicity and neurodegenerative disease)，トレンズ・イン・ファーマコロジカル・サイエンイズ（ＴrendsＰharmacol.Ｓci.）１１：３７９，１９９０］および発作のイン・ビボモデル［
スキャットン(Ｓcatton)，虚血性脳血管疾患におけるＮＭＤＡ受容体拮抗薬の治療的潜在能力（Ｔherapeuticpotential of ＮＭＤＡ receptor antagonists in ischemic cerebrovascular disease)，ドラッグ・ストラテジズ・イン・ザ・プリベンション・アンド・ト
リートメント・オブ・ストローク(ＤrugＳtrategies in the Ｐrevention and Ｔreatment of Ｓtroke)，ＩＢＣ・テクニカル・サーバシズ・リミテッド（ＩＢＣＴechnical Ｓervices Ｌtd.)，１９９０］において，ニューロン細胞死を予防するのに有効であると言われている。かかる化合物は，有効な抗痙攣薬［メルドラム(Ｍeldrum)，癲癇における興奮性アミノ酸神経伝達物質および抗痙攣薬治療(Ｅxcitatoryamino acid neurotransmission
in epilepsy and anticonvulsant therapy)，エキサイテイトリー・アミノ・アシッズ(
ＥxcitatoryＡmino Ａcids)，メルドラム(Ｍeldrum)，モロニ(Ｍoroni)，サイモン(Ｓimon)，およびウッズ（Ｗoods）編，ニューヨーク：レイベン・プレス(ＲavenＰress)，第６５５頁，１９９１]，抗不安薬［ウィリー（Ｗiley）およびバルスター(Ｂalster)，抗不
安効果のためのＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸拮抗薬の症状発現前の評価：リビュー(
Ｐreclinicalevaluation of Ｎ−methyl−Ｄ−aspartate antagonists for antianxiety effects: Ａreview)，マルチプル・シグマ・アンド・ＰＣＰ・レセプター・リガンズ：メカニズムス・フォー・ニューロモジュレーション・アンド・ニューロプロテクション？(
ＭultipleＳigma and ＰＣＰ Ｒeceptor Ｌigands: Ｍechanisms for Ｎeuromodulation and Ｎeuroprotection？)，ＮＰＰブックス，ミシガン州アナーバー，第８０１〜８１５
頁，１９９２]，および鎮痛薬［ディッケンソン(Ｄickenson)，終結のための治療：有効
な鎮痛薬としてのＮＭＤＡ受容体拮抗薬(Ａcure for wind-up: ＮＭＤＡ receptor antagonists as potential analgesics)，トレンズ・イン・ファーマコロジカル・サイエンシ
ズ（ＴrendsＰharmacol.Ｓci.）１１：３０７，１９９０］でもあり，あるＮＭＤＡ受容
体拮抗薬は，アルツハイマー病に関連する痴呆を減少させる[ヒューズ(Ｈughes)，痴呆の治療へのメルツ新規アプローチ(Ｍerz'novel approach to the treatemnt of dementia)
，スクリプト（Ｓcript）第１６６６号：２４，１９９１]。
【０００９】
同様に，ＭＡＰＡ受容体拮抗薬は，かかる神経障害および神経病の治療のために有効な治療薬として強い監視下に入った。ＡＭＰＡ受容体拮抗薬は，虚血性発作および癲癇の動物モデルにおいて，各々，神経保護活性［フィッシャー（Ｆisher）およびボゴウススラ
ヴスキー(Ｂogousslavsky)，急性虚血性発作についての有効な治療への開発(Ｅvolvingtoward effective therapy for acute ischemic stroke)，ジャーナル・オブ・アメリカン
・メディカル・アソシエイション（Ｊ.Ａmer.Ｍed.Ａssoc.）２７０：３６０，１９９３
］および抗痙攣活性［ヤマグチ（Ｙamaguchi）ら，ＡＭＰＡ／カイニン酸拮抗薬の抗痙攣活性：最大電気ショックおよび化学的痙攣発作モデルにおけるＧＹＫＩ５２４６６およびＮＢＱＸの比較(Ａnticonvulsant activity of ＡＭＰＡ／kainate antagonists: comparisonof ＧＹＫＩ ５２４６６and ＮＢＱＸ in maximal electroshock and chemocinvulsant seizuremodels)，Ｅpilepsy Ｒes．１５：１７９，１９９３］を有することが判明し
た。
【００１０】
哺乳動物ＣＮＡ中に存在するニコチン性コリン作動性受容体は，受容体作動性Ｃa2+チ
ャネルの別の例である［デネリス（Ｄeneris）ら，ニューロンのニコチン性アセチルコリン受容体の薬理学的および機能的多様性(Ｐharmacologicaland functional diversity of
neuronal nicotinic acetylcholine receptors)，トレンズ・イン・ファーマコロジカル・サイエンシズ（ＴrendsＰharmacol．Ｓci.）１２：３４，１９９１]。いくつかの異な
る受容体サブユニットがクローン化され，これらのサブユニットは，例えばゼノプス（Ｘenopus）卵母細胞中で，発現して，それらの関連したカチオンチャネルについての機能的受容体を形成することができる。かかる受容体−イオノフォア複合体は，ヘテロペンタメリック構造であるという仮説が設けられる。虚血性発作，癲癇および神経変性病などの神経障害および神経病の病理学におけるニコチン性受容体作動性Ｃa2+チャネルの可能な役
割は，探求されていない。
【００１１】
ある種のクモおよびスズメバチ（wasp）の毒が，哺乳動物ＣＮＳにおけるグルタミン酸受容体に対して活性を有するアリールアルキルアミン毒（ポリアミン毒，アリールアミン毒，アシルポリアミン毒またはポリアミンアミド毒とも称される）を含有することは，従前に開示されている［ジャクソン（Ｊackson）およびアシャーウッド(Ｕsherwood)，興奮性アミノ酸伝達の要素を解剖するための道具としてクモ毒（Ｓpidertoxins as tools for
dissecting elements of excitatory amino acid transmission)，トレンズ・イン・ニ
ューロサイエンシズ（ＴrendsＮeurosci.）１１：２７８，１９８８；ジャクソン（Ｊackson）およびパークス（Ｐarks)，クモ毒：神経生物学における最近の応用(Ｓpider Ｔoxins:Ｒecent Ａpplications In Ｎeurobiology)，Ａnnu.Ｒev.Ｎeurosci．１２：４０５，１９８９；サッコマノ（Ｓaccomano）ら，ポリアミンクモ毒：固有の薬理学的道具(Ｐolyaminespider toxins: Ｕnique pharmacological tools)，Ａnnu.Ｒep.Ｍed.Ｃhem. ２４:２８７，１９８９；アシャーウッド（Ｕsherwood）およびブラグブロー(Ｂlagbrough)，
グルタミン酸受容体に影響を及ぼすクモ毒：治療学的神経化学におけるポリアミン類(ＳpiderＴoxins Ａffecting Ｇlutamate Ｒeceptors: Ｐolyanimes in Ｔherapeutic Ｎeurochemistry)，ファーマコロジー・アンド・セラピューティクス（Ｐharmacol.Ｔherap.）
５２：２４５，１９９１；カワイ(Ｋawai)，クモ毒の神経活性毒(ＮeuroactiveＴoxins of Ｓpider Ｖenoms)，ジャーナル・オブ・トキシコロジー：トキシン・リビューズ（Ｊ.
Ｔoxicol.Ｔoxin Ｒev.）１０：１３１，１９９１を参照]。アリールアルキルアミン毒は，まず，哺乳動物ＣＮＳにおけるグルタミン酸受容体のＡＭＰＡ／カイニン酸サブタイプの選択的拮抗薬であると報告された[カワイ（Ｋawai）ら，哺乳動物脳におけるグルタミ
ン作動性シナプスに対するクモ毒の効果(Ｅffectof a spider toxin on glutaminergic synapses in the mammalian brain)，Ｂiomed.Ｒes．３：３５３，１９８２；サイト（Ｓaito）ら，クモ毒（ＪＳＴＸ）は，海馬錐体ニューロンにおいてグルタミン酸シナプスを
遮断する(ＳpiderＴoxin（ＪＳＴＸ）blocks glutamate synapse in hippocampal pyramidal neurons)，ブレイン・リサーチ（ＢrainＲes.）３４６：３９７，１９８５；サイト
（Ｓaito）ら，イン・ビトロでの海馬ＣＡ１ニューロンに対するクモ毒（ＪＳＴＸ）の効果（Ｅffects of aspider toxin（ＪＳＴＸ）onhippocampal ＣＡ１ neurons in vitro)
，ブレイン・リサーチ（Ｂrain Ｒes.）４８１：１６，１９８９；アカイケ（Ａkaike）
ら，クモ毒は，単離した海馬錐体ニューロンにおける興奮性アミノ酸応答を遮断する(Ｓpidertoxin blocks excitatory amino acid responses in isolated hippocampal pyramidalneurons)，ニューロサイエンス・レターズ（Ｎeurosci.Lett.）７９：３２６，１９８
７；アッシュ（Ａshe）ら，アルギオトキシン−６３６は，ラット海馬ＣＡ１錐体ニュー
ロンにおける興奮性シプス伝達を遮断する(Ａrgiotoxin−６３６blocks excitatory synaptic transmission in rat hippocampal ＣＡ１pyramidalneurons)，ブレイン・リサーチ（Ｂrain Ｒes.）４８０：２３４，１９８９；ジョーンズ（Ｊones）ら，フィラントトキシンは，イン・ビボでラット脳幹ニューロンのキスカル酸誘発性，ＡＭＰＡ誘発性およびカイニン酸誘発性であるが，ＮＭＤＡ誘発性ではない興奮を遮断する(Ｐhilanthotoxinblocks quisqualate-induced，ＡＭＰＡ-induced and kainate-induced，but not ＮＭＤＡ-inducedexcitation of rat brainstem neurones in vivo)，ブリテイッシュ・ジャーナ
ル・オブ・ファーマコロジー（Ｂr.Ｊ.Ｐharmacol.）１０１：９６８，１９９０]。
【００１２】
続く研究により，ある種のアリールアルキルアミン毒は，種々のグルタミン酸受容体で無効かつ非選択的であるが，他のアリールアルキルアミン類は，哺乳動物ＣＮＳにおけるＮＭＤＡ受容体活性化によって媒介される応答を拮抗する際に非常に有効かつ選択的であることが判明した[ミューラー（Mueller）ら，イン・ビトロでのラット海馬におけるＮＭＤＡ受容体媒介伝達に対するポリアミンクモ毒の効果(Ｅffectsof polyamine spider toxins on ＮＭＤＡ receptor-mediated transmission in rathippocampus in vitro)，Ｓoc.Ｎeurosci.Ａbst．１５：９４５，１９８９；ミューラー（Ｍueller）ら，アリールアミンクモ毒は，ラット海馬スライスにおけるＮＭＤＡ受容体媒介シナプス伝達を拮抗する(
Ａrylaminespider toxins antagonize ＮＭＤＡ receptor-mediated synaptic transmission in rathippocampal slices)，シナプス（Ｓynapse）９：２４４，１９９１；パーク
ス（Ｐarks）ら，ポリアミンクモ毒は，小脳顆粒ニューロンにおけるサイトゾルカルシウムのＮＭＤＡ受容体媒介増加を遮断する（Ｐolyaminespider toxins block ＮＭＤＡreceptor-mediated increases in cytosolic calcium in cerebellar granule neurons)，Ｓoc.Ｎeurosci.Ａbst.１５：１１６９，１９８９；パークス（Ｐarks）ら，ジョウゴグモ（アゲレノプシス・アペルタ）毒からのアリールアミン毒は，哺乳動物脳におけるＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体機能を拮抗する(Ａrylaminetoxins from funnel-web spider（Ａgelenopsis aperta）venom antagonize Ｎ−methyl−Ｄ−aspartatereceptor function in mammalian brain)，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ. Ｂiol.Ｃhem.）２６６：２１５２３，１９９１；プリーストリィ（Ｐriestley）ら，クモ毒アルギオトキシン−６３６によるラット皮質ニューロン上の興奮性アミノ酸に対する応答の拮抗作用(Ａntagonismof responses to excitatory amino acids on rat cortical neurones by the spidertoxin，argiotoxin−６３６)，ブリテイッシュ・ジャーナル・オブ
・ファーマコロジー（Ｂr.Ｊ.Ｐharmacol.）９７：１３１５，１９８９；ドラグーン（Ｄraguhn）ら，アルギオトキシン−６３６は，ゼノプス卵母細胞において発現されたＮＭＤＡ活性化イオンチャネルを阻害する（Ａrgiotoxin−６３６inhibits ＮＭＤＡ-activated
ion channels expressed in Ｘenopus oocytes)，ニューロサイエンス・レターズ（Ｎeu
rosci.Ｌett.）１３２：１８７，１９９１；キスキン（Ｋiskin）ら，アゲレノプシス・
アペルタクモの毒からの非常に有効かつ選択的なＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体拮抗薬(Ａhighly potent and selective Ｎ−methyl−Ｄ−aspartate receptor antagonist from thevenom of the Ａgelenopsis aperta spider)，ニューロサイエンス（Ｎeuroscience）５１：１１，１９９２；ブラックリィ（Ｂrackley）ら，ポリアミン含有毒によ
る天然およびクローン化カイニン酸およびＮＭＤＡ受容体の選択的拮抗作用(Ｓelectiveantagonism of native and cloned kainate and ＮＭＤＡ receptors bypolyamine-containing toxins)，ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド・イクスペリメンタル・セラピューティクス（Ｊ.Ｐharmacol.Ｅxp.Ｔherap.）２６６：１５７３，１９９３；ウィ
リアムズ(Ｗilliams)，Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体に対するアゲレノプシス
・アペルタ毒の効果：ポリアミン様および高親和性拮抗作用(Ｅffectsof Ａgelenopsis aperta toxins on the Ｎ−methyl−Ｄ−aspartate receptor：Ｐolyamine−likeand high−affinity antagonist actions)，ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド・イクスペリメンタル・セラピューティクス（Ｊ.Ｐharmacol.Ｅxp.Ｔherap.）２６６：２３１
，１９９３]。アリールアルキルアミン毒フィラントトキシンによるニコチン性コリン作
動性受容体の阻害も報告された[ロゼンタル（Ｒozental）ら，フィラントトキシンによる脊椎動物および昆虫のニコチン性アセチルコリン受容体のアロステリック阻害(Ａllostericinhibition of nicotinic acetylcholine receptors of vertebrates and insects byphilanthotoxin)，ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド・イクスペリメンタル・セラピューティクス（Ｊ.Ｐharmacol.Ｅxp.Ｔherap.）２４９：１２３，１９８９]。
【００１３】
パークス（Ｐarks）ら［ジョウゴグモ（アゲレノプシス・アペルタ）毒は，哺乳動物脳におけるＮ−メチル-Ｄ−アスパラギン酸受容体機能を拮抗する（Ａrylaminetoxins from
funnel-web spider（Ａgelenopsis aperta）venomantagonize Ｎ−methyl−Ｄ−aspartatereceptor function in mammalian brain)，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミ
ストリー（Ｊ.Ｂiol.Ｃhem.)２６６：２１５２３，１９９１］は，哺乳動物脳におけるＮＭＤＡ受容体機能を拮抗するアリールアルキルアミンクモ毒（α−アガトキシン）を開示している。該著者は，アリールアルキルアミン毒の作用機序を検討しており，ＮＭＤＡ受容体作動性イオンチャネルがα−アガトキシンおよびほとんどの有望な他のクモ毒アリールアルキルアミン類の作用の有望な部位であることを示す。彼らは，以下のように開示している：「脊椎動物脳における内因性ポリアミン類がＮＭＤＡ受容体の機能をモジュレートするという発見は，アリールアミン毒がグルタミン酸受容体上のポリアミン結合部位を介してそれらの拮抗作用を生じることを示す。ブラックリィ（Ｂrackley）らは，ラット
またはヒヨコの脳由来のｍＲＮＡを注射したゼノプス卵母細胞における興奮性アミノ酸の適用によって誘発されたスペルミンおよびフィラントトキシン４３３の効果を研究した。これらの著者は，グルタミン酸受容体機能を拮抗する濃度よりも低い濃度で，スペルミンおよびフィラントトキシンが，共に，興奮性アミノ酸およびいくつかの他の神経伝達物質の効果を強くすることを報告した。これらおよび他のデータに基づいて，ブラックリィらは，アリールアミン毒が，興奮可能な細胞の膜に非特異的に結合することによって，膜流動性および別の受容体機能を低下させると推断した。レノルズ（Ｒenolds)は，アルギオ
トキシン６３６が，グルタミン酸，グリシンまたはスペルミジンに対して無感性である方法で[3Ｈ]ＭＫ−８０１のラット脳膜への結合を阻害することを報告した。この著者は，
アルギオトキシン６３６が，ＮＭＤＡゲートイオンチャネル中に位置するＭg2+部位の１
つに結合することによるＮＭＤＡ受容体複合体に対する新規阻害性効果を発揮すると推断した。ウィリアムズ（Ｗilliams）らによって報告された結合データもまたアルギオトキ
シン６３６がＮＭＤＡ受容体上のポリアミンモジュレートリー部位では主に作用しないが，むしろ，直接作用してイオンチャネルの活性依存性ブロックを生じるという推断を支持している。フェニルシクリジンおよびケタミンなどの化合物が，節足動物筋肉グルタミン酸受容体および哺乳動物ＮＭＤＡ受容体の両方に関連するイオンチャネルを遮断することは，既に知られている。かくして，脊椎動物および無脊椎動物グルタミン酸受容体は，こ
とによると二価の陽イオン結合部位に関係するかもしれない受容体機能のアロステリックモジュレーターに対するさらなる結合部位を分担することは可能らしい。明確には，アリールアミン類がかかる新規な調節部位を定義するかを決定するために多くのさらなる研究が必要とされるであろう。」
【００１４】
アシャーウッド（Ｕsherwood）およびブラグブロー（Ｂlagbrough）［グルタミン酸受
容体に影響を及ぼすクモ毒：治療学的神経化学におけるポリアミン類(ＳpiderＴoxins Ａffecting Ｇlutamate Ｒeceptors: Ｐolyanimes in Ｔherapeutic Ｎeurochemistry)，ファーマコロジー・アンド・セラピューティクス（Ｐharmacol.Ｔherap.）５２：２４５，
１９９１］は，アリールアルキルアミン毒に対する提案された細胞内結合部位がＱＵＩＳ−Ｒチャネル選択性フィルターに関する膜電位場内にあったことを開示している。該著者は，ポリアミンアミド毒に対する結合部位がローカスト（locust）筋肉のＱＵＩＳ−Ｒによってゲーティングされるチャネルの内部入口への接近を生じることを仮定している。該著者は，また，かかる毒，アルキセオトキシン−６３６が，培養されたラットの皮質ニューロンにおいてＮＭＤＡ受容体を選択的に拮抗することにも注目している。
【００１５】
ガラク（Ｇullak）ら［新規ＮＭＤＡ拮抗薬Ａrg-６３６のＣＮＳ結合部位(ＣＮＳ binding sites of the novel ＮＭＤＡantagonist Ａrg-６３６)，Ｓoc.Ｎeurosci.Ａbst．１５：１１６８，１９８９］は，クモ毒のポリアミン（アリールアルキルアミン）毒成分としてのアルギオトキシン−６３６（Ａrg−６３６）を開示している。この毒は，非競合形態でｃＧＭＰのＮＭＤＡ誘導性上昇を遮断すると言われている。該著者は，以下のように開示している：「[125Ｉ]Ａrg-６３６は，１１.２５μＭおよび２８.９５pmol／mgタンパクのＫdおよびＢmax値でラット前脳膜に結合した（特異性８０％）。他の公知のポリアミン類，および最近発見されたアゲレノプシス・アペルタ（Ａgelenopsisaperta）由来のポリアミン類の結合阻害能は，機能性ＮＭＤＡ拮抗薬としての神経活性に匹敵する。試験した他の化合物は，全く，特異的結合を遮断することができなかった。」
【００１６】
次いで，該著者は，ポリアミン類（アリールアルキルアミン類）が膜イオンチャネルと相互作用することによってＮＭＤＡへの応答を拮抗することを開示している。
【００１７】
シーモア（Ｓeymour）およびメナ（Ｍena）［ポリアミンクモ毒成分アルギオトキシン
−６３６のイン・ビボＮＭＤＡ拮抗性（Ｉｎ vivo ＮＭＤＡantagonist activity of the
polyamine spider venom component，aggiotoxin-６３６)，Ｓoc.Ｎeurosci.Ａbstr．１５：１１６８，１９８９］は，ＤＢＡ／２マウスにおいて聴源発作に対して有効である投与量で運動活性に有意には影響を及ぼさないこと，および，皮下投与（ｓ.ｃ.）される３２mg／kgの最小有効投与量でＮＭＤＡ誘発性発作を有意に拮抗することを示すと言われる研究を開示している。
【００１８】
ヘロルド（Ｈerold）およびヤクシュ（Ｙaksh）［ラットにおける，２つのアシルポリ
アミンクモ毒であるＡＲ６３６およびＡＧ４８９の鞘内注射による麻酔および筋肉弛緩（Ａnesthesiaand muscle relaxation with intrathecal injections of ＡＲ６３６ and 
ＡＧ４８９，twoacylpolyamine spider toxins，in rats)，アネスシージオロジー（Ａnesthesiology）７７：５０７，１９９２］は，アリールアルキルアミンアルギオトキシン
−６３６（ＡＲ６３６）は，ラットにおける鞘内投与後に筋肉弛緩および麻酔を生じるが，アガトキシン−４８９（ＡＧ４８９）は，生じないことを示すと言われる研究を開示している。
【００１９】
ウィリアムズ（Ｗilliams）［Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体に対するアゲレ
ノプシス・アペルタ毒の効果：ポリアミン様および高親和性拮抗作用(Ｅffectsof Ａgelenopsis aperta toxins on the Ｎ-methyl−Ｄ−aspartate receptor: Ｐolyamine-likean
d high-affinity antagonist actions)，ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド
・イクスペリメンタル・セラピューティクス（Ｊ.Ｐharmacol.Ｅxp.Ｔherap.）２６６：
２３１，１９９３］は，α−アガトキシン（アリールアルキルアミン類）Ａgel−４８９
およびＡgel−５０５が刺激性ポリアミン受容体での作用によってラット脳から調製した
膜上の[3Ｈ]ＭＫ−８０１のＮＭＤＡ受容体への結合を増強する；ポリアミン受容体作動
薬がＡgel−４８９およびＡgel−５０５の刺激効果を妨げ，ポリアミン受容体拮抗薬がＡgel−５０５の刺激効果を阻害したことを報告している。より高い濃度のＡgel−４８９およびＡgel−５０５，ならびに試験された全ての濃度のアルギオトキシン−６３６は，[3
Ｈ]ＭＫ−８０１の結合に対する阻害効果を有した。−７０mＶで電位クランプしたゼノプス（Ｘenopus）卵母細胞において，Ａgel−５０５は，１３nＭのＩＣ50でＮＭＤＡへの応答を阻害した；このＡgel−５０５の効果は，[3Ｈ]ＭＫ−８０１結合に影響を及ぼした濃度よりも約１０,０００倍低い濃度で生じた。カイニン酸への応答は，Ａgel−５０５３０nＭによって１１％だけ阻害された。Ａgel−５０５によるＮＭＤＡ誘発性電流の拮抗作用は，毒のオープン−チャネル遮断効果と一致した，強い電位性であった。ウィリアムズ（Ｗilliams）は，以下のように開示している：「α−アガトキシンは，ＮＭＤＡ受容体上
での正のアロステリックポリアミン部位で相互作用することができるが，この相互作用によって生じた刺激効果は，高親和性として毒の分離作用により機能的アッセイで受容体の非競合的拮抗薬を遮蔽する」
【００２０】
ブラックリィ（Ｂrackley）ら［ポリアミン含有毒による天然およびクローン化カイニ
ン酸およびＮＭＤＡ受容体の選択的拮抗作用（Ｓlectiveantagonism of native and cloned kainate and ＮＭＤＡ receptors bypolyamine-containing toxins)，ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド・イクスペリメンタル・セラピューティクス（Ｊ.Ｐharmacol.Ｅxp.Ｔherap.）２６６：１５７３，１９９３］は，ポリアミン含有毒（アリールア
ルキルアミン類）フィラントトキシン−３４３（ＰｈＴＸ−３４３）およびアルギオトキシン−６３６（Ａgr-６３６）が，ラット脳ＲＮＡを注射したゼノプス（Ｘenopus）卵母
細胞におけるカイニン誘発性およびＮＭＤＡ誘発性電流の可逆的な，非競合的な，一部電位依存性の拮抗作用を生じることを報告している。Ａrg−６３６は，カイニン酸誘発性応答（ＩＣ50＝０.０７μＭ）と比較してＮＭＤ誘発性応答（ＩＣ50＝０.０４μＭ）について選択的であることが判明し，一方，ＰｈＴＸ−３４３は，ＮＭＤＡ誘発性応答（ＩＣ50＝２.５μＭ）と比較してカイニン酸誘発性応答（ＩＣ50＝０.１２μＭ）について選択的であった。Ａrg−６３６は，クローン化されたＧluＲ１（ＩＣ50＝３.４μＭ）またはＧluＲ１＋ＧluＲ２サブユニット（ＩＣ50＝約３００μＭ）のいずれかを発現する卵母細胞
におけるカイニン酸への応答よりもクローン化ＮＭＤＡＲ１サブユニット（ＩＣ50＝０.
０９μＭ）を発現するゼノプス（Ｘenopus）卵母細胞におけるＮＭＤＡへの応答を有効に拮抗した。他方，ＰｈＴＸ−３４３は，ＮＭＤＡＲ１（ＩＣ50＝２.１９μＭ）およびＧluＲ１（ＩＣ50＝２.８μＭ）を拮抗する際に等しい効力を有したか，ＧluＲ１＋ＧluＲ２サブユニット（ＩＣ50＝２７０μＭ）に対してはあまり有効ではなかった。
【００２１】
ラディッチュ（Ｒaditsch）ら［アルギオトキシン−６３６によるクローン化ＮＭＤＡ
受容体のサブユニット特異的遮断(Ｓubunit-specificblock of cloned ＮＭＤＡ receptors by argiotoxin-６３６)，ＦＥＢＳ・レターズ（ＦＥＢＳ Ｌett.）３２４：６３，１
９９３］は，たとえ受容体サブユニットの全てが推定のポア形成膜内外領域II（前記Ｑ／Ｒ部位）においてアスパラギン酸残基を含有するとしても，Ａrg−６３６が，ＮＭＤＡＲ１＋ＮＭＤＡＲ２Ｃサブユニット（ＩＣ50＝４６０nＭ）よりもＮＭＤＡＲ１＋ＮＭＤＡ
Ｒ２Ａサブユニット（ＩＣ50＝９nＭ）またはＮＭＤＡＲ１＋ＮＭＤＡＲ２Ｂサブユニッ
ト（ＩＣ50＝２.５nＭ）を発現するゼノプス（Ｘenopus）卵母細胞における応答を有効に拮抗することを報告している。該著者は，ＮＭＤＡＲ１＋ＮＭＤＡＲ２ＡおよびＮＭＤＡＲ１＋ＮＭＤＡＲ２Ｃチャネル間のＡrg−６３６選択性の大きな差異が「他の構造的決定因子によって与えられなければならない」ことを開示している。
【００２２】
ハーリッツ（Ｈerlitz）ら［アルギオトキシンは，ＡＭＰＡ受容体チャネルにおける分子的差異を決定する(Ａrgiotoxin detectsmolecular differences in ＡＭＰＡ receptor
channels)，ニューロン（Ｎeuron）１０：１１３１，１９９３］は，Ａrg−６３６が，
オープンチャネル遮断に匹敵する電位依存性および用途依存性手段で，ＡＭＰＡ受容体のサブタイプを拮抗することを報告している。Ａrg-６３６は，ＧluＲＡiサブユニット（Ｋi＝０.３５μＭ），ＧluＲＣiサブユニット（Ｋi＝０.２３μＭ），またはＧluＲＤiサブユニット（Ｋi＝０.４３μＭ）からなるＣa2+透過性ＡＭＰＡ受容体を拮抗するが，一方
，１０μＭまでの濃度のＣa2+非透過性ＧluＲＢiサブユニットに対して実質的に効果的ではない。これらの研究者によって報告された他のデータは，推定のポア形成膜内外領域IIにおけるＱ／Ｒ部位がＡrg−６３６ポテンシーおよびＣa2+透過性を測定するのに主に重
要なものであることを強く示している。
【００２３】
ブラッシュク（Ｂlaschke）ら［単一のアミノ酸は，アルファーアミノ−３−ヒドロキ
シ−５−メチルイソオキサゾール−４−プロピオン酸／カイニン酸受容体チャネルのサブユニット特異的クモ毒遮断を決定する（Ａsingleamino aciddetermines the subunit-specific spider toxin block of α−amino−３−hydroxy−５−methylisoxazole−４−propionate／kainatereceptor channels)，プロシーディングズ・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・ユーエスエイ（Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ）９０：６
５２８，１９９３］は，アリールアルキルアミンＪＳＴＸ−３が，ＧluＲ１サブユニット（ＩＣ50＝０.０４μＭ）またはＧluＲ３サブユニット（ＩＣ50＝０.０３μＭ）を発現するゼノプス（Ｘenopus）卵母細胞への応答を有効に拮抗するが，ＧluＲ２サブユニットが存在する発現受容体が毒によって実質的に影響を及ぼさないことを報告している。部位特異的突然変異誘発研究は，毒効力に影響を及ぼす主な部位としてＱ／Ｒ部位に強い影響を及ぼす。
【００２４】
ナカニシ（Ｎakanishi）ら［フィラントトキシン類似体を用いる伝達受容体の生物有機化学的研究(Ｂioorganic studies oftransmitter receptors with philanthotozin analogs)，ピュア・アンド・アプライド・ケミストリー（Ｐure Ａppl.Ｃhem.）印刷中］は，
多くの非常に有効な光親和性標識フィラントトキシン（ＰｈＴＸ）類似体を合成した。かかる類似体は，受容体作動性カルシウムチャネル受容体についてのモデル系としてニコチン性コリン作動性受容体を発現することにおいて研究した。これらの研究者は，これらのＰhＸＴ類似体が，細胞質表面付近の部位に結合する毒の疎水性頭部を用いてイオンチャ
ネルを遮断し，一方，ポリアミン尾部が細胞質側部からイオンチャネル中に伸びていることを示している。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２５】
発明の概要
出願人は，クモおよびスズメバチ毒におけるアリールアルキルアミン類（しばしば，アリールアミン毒，ポリアミン毒，アシルポリアミン毒またはポリアミンアミド毒とも称される）の構造的多様性および生物学的活性を試験し，これらの毒に存在するアリールアルキルアミン類のいくつかが，哺乳動物ＣＮＳにおけるグルタミン酸受容体作動性Ｃa2+チ
ャネルの有効な非競合的拮抗薬として作用することを測定した。これらのアリールアルキルアミン化合物は，該化合物の構造内にポリアミン部分を含有するが，該化合物は，あるタイプの受容体作動性Ｃa2+チャネルに対して非常に有効かつ特異的な効果を有すること
において，他の公知の簡単なポリアミン類とは異なる。
【００２６】
リード構造物として天然のアリールアルキルアミン類を用いて，多くの類似体を合成し，試験した。毒から単離および精製されたアリールアルキルアミン類についての最初の発
見は，合成アリールアルキルアミン類の利用を確立した。これらの化合物は，発作および癲癇のイン・ビボモデルにおいて効力を示した小さな分子（分子量＜８００）である。ＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体を受容体作動性Ｃa2+チャネルのモデルとして用いた
。選択されたアリールアルキルアミン類は，新規メカニズムによってＮＭＤＡ受容体媒介性応答を遮断することが判明した。さらにまた，これらの化合物の固有行動薬理学的プロフィールは，それらがＮＭＤＡレセプターの他の阻害薬を特徴付けるＰＣＰ様精神異常作用性および認識欠損を生じそうにないことを示す。最終的に，該アリールアルキルアミン類は，それらがクローン化され発現されたＡＭＰＡ受容体のある種のサブタイプ，すなわち，Ｃa2+を透過可能なものを拮抗することができるという点でＮＭＤＡ受容体拮抗薬の
中で独特である。したがって，該アリールアルキルアミン類は，受容体サブタイプの薬理学的定義とは無関係のサイトゾルＣa2+のグルタミン酸受容体媒介性増加を拮抗すること
ができる化合物の唯一の公知の分類である。さらに，該アリールアルキルアミン類は，他の受容体作動性Ｃa2+チャネル，ニコチン性コリン作動性受容体を阻害する。サイトゾル
Ｃa2+の過剰かつ延長された増加がいくつかの神経障害および神経病の原因に関係してい
たとすれば，かかるアリールアルキルアミン類により，種々の神経障害および神経病のための新規治療の研究が導かれる。
【００２７】
出願人は，選択されたアリールアルキルアミン類がこれまで定義されなかったＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体上の新規部位で高い親和性で結合すること，および，該アリールアルキルアミン類が，ＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体上の公知の部位（グルタミン酸結合部位，グリシン結合部位，ＭＫ−８０１結合部位，Ｍg2+結合部位，Ｚn2+結合部位，ポリアミン結合部位，シグマ結合部位）のいずれでも高い親和性で結合しないことを測定した。この測定により，出願人は，治療的に有用な化合物および他の治療学的に有用な化合物の研究についてのリード化合物の両方を提供する有用な化合物を同定することができる方法およびプロトコールを研究した。これらの化合物は，この新規アリールアルキルアミン結合部位で結合する化合物についてスクリーニングすることによって，ならびにかかる化合物が必要とされる生物学的，薬理学的，および生理学的性質を有するかを測定することによって定義することができる。
【００２８】
かくして，第１の態様では，本発明は，非競合的拮抗薬として１つ以上の受容体作動性Ｃa2+チャネルで活性な治療学的に有用な化合物についてスクリーニングする方法を特徴
とするものである。かかる化合物は，代替的にまたはさらに，生物農薬または薬理学的道具（tool）として有用である。当該方法は，化合物１，化合物２または化合物３として本明細書に記載しており，以下に示す構造式を有するアリールアルキルアミン類によって結合された部位で受容体作動性Ｃa2+チャネルに結合する化合物を同定する工程を含む。
【００２９】
【化１】
2014166987.tif 000002
【００３０】
好ましい具体例では，本発明は，ＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体の一部，カルシウム透過性ＡＭＰＡ受容体−イオノフォア複合体の一部，または，ニコチン性コリン作動性受容体−イオノフォア複合体の一部である受容体作動性カルシウムチャネルで活性な１つ以上の化合物を同定するための方法を特徴とし，ここで，治療用途は，神経障害または神経病の治療のため，または，神経保護薬，抗痙攣薬，抗不安薬，鎮痛薬，筋肉弛緩薬もしくは一般的な麻酔薬中の補助薬としてである。
【００３１】
「治療学的に有用な化合物」とは，障害または病気の症状の治療において有用な化合物を意味する。スクリーニング方法によって発見された化合物は，臨床試験が実際の治療的利用性を判断するために行われていないので，治療における有効な利用性を有するものとして特徴付けられる。
【００３２】
「神経障害または神経病」とは，限定されないが，総体および巣状虚血性ならびに出血性発作，頭部外傷，脊髄損傷，心拍停止または新生児窮迫におけるような低酸素誘発性神経細胞損傷，癲癇，不安および神経変性病を含む神経系の障害または病気を意味する。また，「神経障害または神経病」とは，神経保護薬，抗痙攣薬，抗不安薬，鎮痛薬，筋肉弛緩薬および／または一般的な麻酔薬中の補助薬が有用であると示されるか，推奨されるかまたは処方される病状および状態を意味する。
【００３３】
「神経変性病」とは，限定されないが，アルツハイマー病，ハンチントン病およびパーキンソン病を含む疾患を意味する。
【００３４】
「神経保護薬」とは，神経障害または神経病に関連するニューロンの死を予防する能力を有する化合物を意味する。
【００３５】
「抗痙攣薬」とは，単純な部分発作，複雑な部分発作，癲癇重積持続状態，および頭部手術を含む頭部損傷の後に生じるような外傷性発作などの症状によって生じる癲癇を減少
させる能力を有する化合物を意味する。
【００３６】
「抗不安薬」とは，不安の特徴である危惧，半信半疑および恐怖の感情を免荷する能力を有する化合物を意味する。
【００３７】
「鎮痛薬」とは，麻酔または意識の喪失を生じずに，侵害受容性刺激の知覚を変えることによって痛みを免荷する能力を有する化合物を意味する。
【００３８】
「筋肉弛緩薬」とは，筋肉の緊張を減少させる化合物を意味する。
【００３９】
「一般的な麻酔薬中の補助薬」とは，意識の喪失に関連する痛みを知覚する能力の喪失を生じる際に麻酔薬と共に有用な化合物を意味する。
【００４０】
関連する態様では，本発明は，アリールアルキルアミン類である化合物１，化合物２および化合物３のうちの１つによって結合された部位で受容体作動性カルシウムチャネルに結合する化合物からなる医薬組成物を投与する工程からなる神経病または神経障害を有する患者の治療方法であって，該化合物が，かかる受容体作動性カルシウムチャネルで有効かつ選択的な非競合的拮抗薬であり，以下の薬理的特性および生理学的特性：受容体作動性カルシウムチャネル機能のイン・ビトロでの生化学的および電気生理学的アッセイにおける効果，イン・ビボ抗痙攣活性，イン・ビボ神経保護活性，イン・ビボ抗不安活性，およびイン・ビボ鎮痛活性のうち１つ以上を有し；該化合物が，また，以下の薬理的効果：該化合物が，ラットの海馬スライスにおける長期間薬効増強作用の誘発を妨害せず，治療的投与量で，認識力を損なわず，運動動作を中断せず，ニューロンの空胞形成を生じず，最小の心臓血管活性を有し，鎮静または異常興奮性を生じず，最小のＰＣＰ様乱用潜在能力を有し，最小のＰＣＰ様精神異常作用性を有するという薬理効果の１つ以上を有することを特徴とする神経病または神経障害を有する患者の治療方法を特徴とするものである。「最小の」とは，薬物のいずれの副作用も平均個体によって許容されること，および，該薬物が標的疾患の治療に用いることができることを意味する。かかる副作用は，当該技術分野でよく知られており，ＦＤＡによって慣用的に，標的疾患のための薬物を認可する場合に最小とみなされている。
【００４１】
治療は，最初に標準的な臨床学的方法によって神経障害または神経病に罹っている患者を同定し，次いで，かかる患者を本発明の組成物で治療する工程を含む。
【００４２】
「有効な」とは，当該化合物が，ＮＭＤＡ受容体，Ｃa2+透過性ＡＭＰＡ受容体および
ニコチン性コリン作動性受容体を含む受容体作動性カルシウムチャネルで，１０μＭ以下，好ましくは，１００nＭ以下，さらに好ましく１nＭ以下のＩＣ50値を有することを意味する。
【００４３】
「選択的」とは，当該化合物が前記定義の受容体作動性カルシウムチャネルで有効であり，他の神経伝達物質受容体，神経伝達物質受容体作動性イオンチャネル，または，電位依存性イオンチャネルで，１０倍以上，好ましくは，５０倍以上，より好ましくは，１００倍以上有効ではないことを意味する。
【００４４】
「受容体作動性カルシウムチャネル機能の生化学および電気生理学的アッセイ」とは，生化学または電気生理学的手段によって受容体作動性カルシウムチャネルの機能的活性を検出するように設計されたアッセイを意味する。かかるアッセイの例としては，限定されないが，培養されたラット小脳顆粒細胞中のサイトゾルカルシウムについてのｆｕｒａ−２蛍光アッセイ(実施例１および実施例２を参照)，パッチクランプ電気生理学的アッセイ(実施例３および実施例２７を参照)，ラット海馬スライスシナプス伝達アッセイ(実施例
５を参照)，放射リガンド結合アッセイ(実施例４，実施例２４，実施例２５，および実施例２６を参照)，およびイン・ビトロ神経保護アッセイ（実施例６を参照）が挙げられる
。
【００４５】
「効力」とは，所望の活性の統計学的に有意なレベルが選択された化合物を用いて検出可能であることを意味する；「有意な」とは，ｐ＜０.０５レベルで統計学的有意さを意
味する。
【００４６】
「神経保護活性」とは，限定されないが，総体および巣状虚血性および出血性発作，頭部外傷，脊髄損傷，心拍停止または新生児窮迫におけるような低酸素誘発性神経細胞損傷，ならびに，アルツハイマー病，ハンチントン病およびパーキンソン病などの神経変性を含む神経障害または神経病の治療における効力を意味する（以下の実施例７および８を参照）。
【００４７】
「抗痙攣活性」とは，単純な部分発作，複雑な部分発作，癲癇重積持続状態，および頭部手術を含む頭部損傷の後に生じるような外傷性発作などの症状によって生じる痙攣を軽減する効力を意味する（以下の実施例９および１０を参照）。
【００４８】
「抗不安活性」とは，化合物が，不安の特徴である危惧，半信半疑および恐怖の感情を軽減することを意味する。
【００４９】
「鎮痛活性」とは，化合物が，通常痛む刺激に応じる痛みの欠如を生じることを意味する。かかる活性は，限定されないが，以下のものを含む急性および慢性疼痛の臨床症状において有用である：プレエンプティブ（preemptive）手術前無痛法；真性糖尿病および多発硬化症で生じるような末梢ニューロパシー；幻想肢痛；カウザルギー；帯状ヘルペスで生じるような神経痛；脊髄損傷で見られるような中枢痛；痛覚過敏；および異痛症。「神経痛」とは，神経の分布における痛みを意味する。「中枢痛」とは，中枢神経系の損傷に関連する痛みを意味する。「痛覚過敏」とは，通常痛む刺激に対する増加した応答を意味する。「異痛症」とは，通常痛みを引き起こさない刺激による痛みを意味する（以下の実施例１１〜１４を参照)。
【００５０】
「ラットの海馬スライスにおける長期薬効増強作用の誘発」とは，求心性シャファー側副線維の強直性電気的刺激の，イン・ビトロに維持されるラット海馬スライスにおけるシャファー側副−ＣＡ１錐体細胞経路でのシナプス伝達の強度の長期増加を誘起する能力を意味する（実施例１９を参照）。
【００５１】
「治療投与量」とは，疾患の１つ以上の症候または患者の状態をある程度は免荷する化合物の量を意味する。さらに，「治療投与量」とは，疾患もしくは症状に関連するかまたは疾患もしくは症状の原因となる生理学的または生化学的パラメーターを一部または完全に正常に戻す量を意味する。一般的には，化合物のＥＣ50（拮抗薬の場合，ＩＣ50）に依存し，ならびに，患者に関連する年齢，大きさ，および疾患に依存して，化合物の約１nmol〜１umolの量である。
【００５２】
「認識力を損なう」とは，記憶の取得または学習した課題の動作を損なう能力を意味する（実施例２０）。「認識力を損なう」とは，また，プロセスおよび理論を思考する正常な合理性を妨害する能力を意味する。
【００５３】
「運動機能を中断する」とは，運動活性を有意に変える能力(実施例１５)，または，有意な運動失調，立直り反射の損失，鎮静，または筋肉弛緩を誘起する能力（実施例１６を参照）を意味する。
【００５４】
「運動活性」とは，正常な歩行運動を行う能力を意味する。
【００５５】
「立直り反射」とは，動物，典型的には齧歯動物の，背臥位置においた後，自分自身で正す能力を意味する。
【００５６】
「ニューロン空胞形成」とは，帯状皮質またはレトロスプレーニアル（retro-splenial）皮質のニューロンにおける空胞の生成を意味する(実施例１８を参照)。
【００５７】
「心臓血管活性」とは，限定されないが，平均動脈血圧および心拍数を含むパラメーターの有意な変化を誘起する能力を意味する(実施例２１および２２を参照)。
【００５８】
「異常興奮性」とは，興奮性刺激に対する増強された感受性を意味する。異常興奮性は，しばしば，薬物を投与した齧歯動物における運動活性の有意な増大として証明される(
実施例１５を参照)。
【００５９】
「鎮静」とは，鎮静効果または活性および興奮を鎮めることを意味する。鎮静は，しばしば，薬物を投与した齧歯動物における運動活性の有意な減少として証明される(実施例
１５を参照)。
【００６０】
「ＰＣＰ様乱用潜在能力」とは，ヒトによるＰＣＰ（すなわち，「合成ヘロイン」）の娯楽的使用におけるような，違法に用いられる薬物の潜在能力を意味する。ＰＣＰ様乱用潜在能力は，薬物の，ＰＣＰを生理食塩水と識別するように訓練された齧歯動物においてＰＣＰを汎化させる能力によって予想することができると思われる(実施例１７を参照)。
【００６１】
「ＰＣＰ様精神異常作用活性」とは，薬物の，幻視，パラノイア，動揺，および錯乱を含む急性精神病に似ている一連の行動的徴候をヒトにおいて誘起する能力を意味する。ＰＣＰ様精神異常作用活性は，薬物の，運動失調，頭部ウィービング(weaving)，異常興奮
性，およびＰＣＰを生理食塩水と識別するように訓練された齧歯動物におけるＰＣＰの汎化を生じる能力によって齧歯動物において予想することができると思われる(実施例１５
，実施例１６および実施例１７を参照)。
【００６２】
「運動失調」とは，筋肉協調の欠損を意味する。
【００６３】
「頭部ウィービング」とは，頭部が，ゆっくりと，左右に広く，繰り返し動かされるＰＣＰによる齧歯動物において誘起された常同性行動を意味する。
【００６４】
さらなる態様では，本発明は，式：
【化２】
2014166987.tif 000003
［式中，Ａrは，適当に置換された芳香族環，環系または他の疎水性部分であり；Ａrは，所望により，独立して，炭素原子１〜５個の低級アルキル，ハロゲン原子１〜７個で置換されている炭素原子１〜５個の低級ハロアルキル，炭素原子１〜５個の低級アルコキシ，ハロゲン，ニトロ，アミノ，炭素原子１〜５個の低級アルキルアミノ，アミド，炭素原子１〜５個の低級アルキルアミド，シアノ，ヒドロキシル，スルフヒドリル，炭素原子２〜４個の低級アシル，スルホンアミド，炭素原子１〜５個のアルキルスルホンアミド，炭素
原子１〜５個の低級アルキルスルホキシド，炭素原子１〜５個の低級ヒドロキシアルキル，炭素原子１〜５個の低級アルキルケト，または炭素原子１〜５個の低級チオアルキルから選択される１〜５個の置換基で置換されていてもよい５〜７員環を有する，芳香族(例
えば，フェニルなどの炭素環式アリール基，ならびにナフチル，１,２,３,４−テトラヒ
ドロナフチル，インダニルおよびインデニルなどの二環式炭素環式アリール環系)，ヘテ
ロ芳香族(例えば，インドリル，ジヒドロインドリル，キノリニルおよびイソキノリニル
ならびにそれらに関する１,２,３,４−テトラヒドロ−および２−オキソ−誘導体)，脂肪環式（環式脂肪族），もしくはヘテロ脂肪環式環または環系（単環，二環，または三環）であってもよく，
ｍは，各々，０〜３の整数であり，
ｋは，各々，１〜１０の整数であり，
ｊは，各々，同一または異なって，１〜１２の整数であり，
Ｒ1およびＲ2は，各々，独立して，水素，炭素原子１〜５個の低級アルキル，炭素原子１〜５個の低級アルキルアミノ，炭素原子１〜５個の低級アルキルアミド，炭素原子１〜５個の低級モノ−，ジ−，またはトリフルオロアルキル，ヒドロキシ，アミジノ，グアニジノ，または典型的な一般的なアミノ酸側鎖からなる群から選択されるか，または，付随した炭素原子を用いて，Ｒ1およびＲ2は，一緒になって，カルボニルを形成し，
Ｚは，各々，窒素，酸素，硫黄，アミド，スルホンアミドおよび炭素からなる群から選択される］
で示されるポリアミン型化合物またはその類似体（すなわち，ポリヘテロ原子性分子）である，神経障害または神経病を有する患者の治療に有用な化合物を特徴とするものである。
【００６５】
末端−ＮＲ1Ｒ2基がＮ−エチル（Ｒ1＝Ｈ，Ｒ2＝ＣＨ2ＣＨ3）である化合物は，高血圧などの望ましくない心臓血管副作用の非常に減少された発生率および重篤度に関連するので，該化合物は，これらの特に好ましい具体例である。
【００６６】
好ましい芳香族ヘッドグループとしては，限定されないが，以下のものが挙げられる：
【化３】
2014166987.tif 000004
【化４】
2014166987.tif 000005
化学構造が前記一般式によって網羅される公知の化合物は，本発明から除かれる。
【００６７】
さらに好ましい具体例では，当該化合物は，化合物４〜１８のグループから選択される。ここで，かかる化合物は，以下の式を有する：
【化５】
2014166987.tif 000006
【化６】
2014166987.tif 000007
【化７】
2014166987.tif 000008
【００６８】
本発明は，また，化合物４〜１８またはその医薬的に許容される塩を含む種々の本発明化合物の組成物および医薬的に許容される担体および投与量におけるその医薬組成物またはその医薬的に許容される塩を特徴とするものである。
【００６９】
「医薬組成物」とは，医薬的に許容される担体中の本発明化合物の治療有効量，すなわち，当該化合物を添加して，溶解させることができるか，または，当該化合物の投与を促進することができる製剤を意味する。医薬的に許容される担体の例としては，水，生理食塩水，および生理的緩衝化食塩水が挙げられる。かかる医薬組成物は，好適な投与量で提供される。かかる組成物は，一般に，ＦＤＡまたは非Ｕ.Ｓ.国でのそれと同等のものによって特定の障害の治療における使用について認可されているものである。
【００７０】
出願人は，単純化アリールアルキルアミン類（以下，参照）が，ＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体の有効な非競合的拮抗薬であることも判定した(以下の実施例２３を参照)。単純化アリールアルキルアミン類は，前記化合物４〜１８によって例示されたアリールアルキルアミン類とは異なる。例えば，かかる化合物は，ＮＭＤＡ受容体媒介性機能を拮抗する濃度よりも約１〜５０倍高い範囲の濃度で[3Ｈ]ＭＫ−８０１によって標識化され
他部位に結合する。かかる単純化アリールアルキルアミン類は，以下のさらなる生物学的特性の１つ以上を有する：有意な神経保護活性，有意な抗痙攣活性，有意な鎮痛活性，有
効な神経保護，抗痙攣および鎮痛投与量で齧歯動物においてＰＣＰ様常同性行動（異常興奮性および頭部ウィービング）がないこと，有効な神経保護，抗痙攣および鎮痛投与量でＰＣＰ識別アッセイにおけるＰＣＰの汎化がないこと，有効な神経保護，抗痙攣および鎮痛投与量でニューロン空胞形成がないこと，電位感受性カルシウムチャネルに対する有意に有効ではない活性，および有効な神経保護，抗痙攣および鎮痛投与量で最小の血圧降下活性。
【００７１】
さらなる態様では，本発明は，下記構造式からなる医薬組成物を投与することからなる神経病または神経障害を有する患者の治療方法を特徴とするものである：
【化８】
2014166987.tif 000009
[式中，Ｘは，各々，独立して，１個以上のＨ，Ｂr，Ｃl，Ｆ，低級アルキル，および／
またはＯＣＨ3であってよく，Ｒ1は，各々，独立して，Ｈ，低級アルキル，ＯＨ，Ｏ−アルキルまたはＯ−アシルであってよく，Ｒ2は，各々，独立して，Ｈまたは低級アルキル
であってよい]；または
【化９】
2014166987.tif 000010
［式中，Ｘは，各々，独立して，１個以上のＨ，Ｂr，Ｃl，Ｆ，低級アルキル，および／またはＯＣＨ3であってよく，Ｒ1は，各々，独立して，Ｈ，低級アルキル，ＯＨ，Ｏ−アルキル，またはＯ−アシルであってよく，Ｒ2は，各々，独立して，Ｈまたは低級アルキ
ルであってよい］；または
【化１０】
2014166987.tif 000011
［式中，ｎ＝１〜６，Ｘは，各々，独立して，１個以上のＨ，Ｂr，Ｃl，Ｆ，低級アルキル，および／またはＯＣＨ3であってよく，Ｒ1は，Ｈ，低級アルキル，ＯＨ，Ｏ−アルキル，またはＯ−アシルであってよく，Ｒ2は，Ｈまたは低級アルキルであってよい］；ま
たは
【化１１】
2014166987.tif 000012
［式中，ｎ＝１〜６，Ｘは，各々，独立して，１個以上のＨ，Ｂr，Ｃl，Ｆ，低級アルキル，および／またはＯＣＨ3であってよく，Ｒ1は，Ｈ，低級アルキル，ＯＨ，Ｏ−アルキル，またはＯ−アシルであってよく，Ｒ2は，各々，独立して，Ｈまたは低級アルキルで
あってよい］。
【００７２】
化学構造が前記一般式によって網羅されている公知の化合物は，本発明から除く。
【００７３】
好ましい具体例では，医薬組成物は，化合物１９〜５３またはその医薬的に許容される塩からなる。
【化１２】
2014166987.tif 000013
【化１３】
2014166987.tif 000014
【化１４】
2014166987.tif 000015
【化１５】
2014166987.tif 000016
【化１６】
2014166987.tif 000017
【化１７】
2014166987.tif 000018
【００７４】
さらなる具体例は，化合物１９またはその医薬的に許容される塩からなる組成物および医薬的に許容される担体および投与量における医薬組成物またはその医薬的に許容される塩を包含する。
【００７５】
本発明の他の特徴および長所は，その好ましい具体例の以下の説明および請求の範囲から明らかであろう。
【発明を実施するための形態】
【００７６】
好ましい具体例の説明
以下は，治療的に有用な化合物を同定し，神経障害および神経病の治療に利用することができる方法および試験の詳細な説明である。化合物１，化合物２または化合物３の利用によって，該試験を例示するが，同様の生物活性を有する他の化合物を用いて（発見したように），試験を改良することができる。標準的な方法を用いて分子モデル化のために化合物１，化合物２または化合物３などのリード化合物を用いることができるか，または，天然ライブラリー中の現存または新規の化合物を以下の方法によってスクリーニングすることができる。
【００７７】
１つの重要な方法は，化合物を標準的な放射リガンド結合法（放射性標識アリールアルキルアミン結合アッセイ）で素早くスクリーニングして，受容体作動性Ｃa2+チャネル上
の同一部位で結合するものを化合物１，化合物２または化合物３と同定することができる手段である。かかる放射リガンド結合研究からのデータは，化合物が，受容体作動性Ｃa2+チャネル上の公知の部位（例えば，ＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体上のグルタミ
ン酸結合部位，グリシン結合部位，ＭＫ−８０１結合部位，Ｚn2+結合部位，Ｍg2+結合部位，シグマ結合部位，またはポリアミン結合部位）での作用を介して[3Ｈ]アリールアル
キルアミン結合を阻害しないことも確認するであろう。このスクリーニング試験は，莫大な数の潜在的に有用な化合物を同定し，他のアッセイにおける活性についてスクリーニン
グさせる。当業者は，受容体作動性Ｃa2+チャネル上のアリールアルキルアミン部位への
結合の検出のための他の迅速なアッセイが発明され，本発明で用いることができることを理解するであろう。
【００７８】
さらなる試験は，前記放射リガンド結合アッセイを用いて得られた結果を拡大する電気生理学的（パッチクランプ）法を利用する。かかる結果は，アリールアルキルアミン部位に結合する化合物が，アリールアルキルアミン類自体と共通の以下の性質を有する受容体作動性Ｃa2+チャネルの機能的な非競合的拮抗薬であることを確認するであろう：用途依
存性遮断として証明されたオープンチャネル遮断ならびに遮断からの電位依存性開始および反転。かかる結果は，該化合物が受容体作動性Ｃa2+チャネル上の前記部位（ＮＭＤＡ
受容体−イオノフォア複合体上のグルタミン酸結合部位，グリシン結合部位，ＭＫ−８０１結合部位，Ｚn2+結合部位，Ｍg2+結合部位，シグマ結合部位，またはポリアミン結合部位）でそれらの主要な活性を有しないことも確認するであろう。
【００７９】
さらに，組換えＤＮＡ技術を用いて，かかる試験をさらに迅速に行うこともできる。例えば，標準的な方法を用いて，新規アリールアルキルアミン結合部位をコードする遺伝子（すなわち，受容体）を同定し，クローン化することができる。これは，いくつかの方法のうちの１つにおいて行うことができる。例えば，アリールアルキルアミン親和性カラムを調製し，カラムを通過した該アリールアルキルアミン受容体を含有する細胞または組織からの膜を可溶化することができる。該受容体分子は，カラムに結合し，かくして，単離される。次いで部分アミノ酸配列情報を得ることができ，これにより，受容体をコードする遺伝子を単離することができる。別法としては，ｃＤＮＡ発現ライブラリーを調製し，該ライブラリーのサブフラクションを，それらの，かる受容体を正常には発現しない細胞（例えば，ＣＨＯ細胞，マウスＬ細胞，ＨＥＫ２９３細胞，またはゼノプス（Ｘenopus）卵母細胞）上にアリールアルキルアミン受容体を与える能力について試験する。この方法では，受容体をコードするクローンを含有するライブラリーフラクションを同定する。活性ライブラリーフラクションの連続サブフラクショネーションおよびアッセイは，最終的に，アリールアルキルアミン受容体をコードする単一クローンを生じる。同様に，ハイブリッド阻害またはハイブリッド消耗（depletion）クローニングを用いることができる。
ゼノプス（Ｘenopus）卵母細胞に，適当な組織または細胞源（例えば，ヒト脳組織）からのｍＲＮＡを注入する。該アリールアルキルアミン受容体の発現を，例えば，化合物１，化合物２または化合物３によって遮断することができるカルシウムのＮＭＤＡまたはグルタミン酸刺激性流入として検出する。ゼノプス（Ｘenopus）卵母細胞中への注入前にｃＤＮＡまたはｃＲＮＡをえり抜きのｍＲＮＡにハイブリダイズさせた場合のｃＤＮＡクローンのこの受容体の発現を遮断する能力について該ｃＤＮＡクローンを試験する。次いで，この効果の原因であるクローンを前記方法によって単離する。受容体遺伝子を単離した後，標準的な方法を用いて，アリールアルキルアミン類を結合するのに充分なポリペプチドまたはその一部（アリールアルキルアミン結合ドメイン）を同定する。さらに，標準的な方法を用いて，組換え技術によって，全体の受容体またはアリールアルキルアミン結合ドメインを発現することができる。該受容体または結合ドメインを単離し，生化学的試薬として用いることができ，その結果，以下に例示する競合アッセイを用いるよりも，単純な直接結合アッセイを用いることができる。すなわち，新規アリールアルキルアミン受容体で結合する化合物についてスクリーニングを開始する。この方法では，多数の化合物を，例えば，新規アリールアルキルアミン受容体またはアリールアルキルアミン結合ドメインを含有するカラムに通すことによって，同時にスクリーニングし，カラムに結合する化合物について分析を行うことができる。さらなる試験は，分子生物学的技術（クローン化ＮＭＤＡ，ＡＭＰＡまたはニコチン性コリン作動性受容体の発現）およびパッチクランプ電気生理学的技術の組合せを用いる。詳細には，クローン化され，発現された前記受容体−イオンフォア複合体サブユニットでの効力について，アリールアルキルアミン類似体を迅速にスクリーニングすることができる。いずれのアミノ酸残基がアリールアルキルアミン
効力を測定する際に重要であるかを同定する試みにおいて部位特異的突然変異誘発を用いることができる。
【００８０】
哺乳動物ＣＮＳにおける受容体作動性カルシウムチャネルの有効かつ選択な拮抗薬についてのアッセイ
薬物の望ましい性質としては，以下のものが挙げられる：ＮＭＤＡ，ＡＭＰＡおよびニコチン性コリン作動性受容体−イオノフォア複合体中に存在するもののような受容体作動性Ｃa2+チャネルについての高い親和性および選択性（他の神経伝達受容体，神経伝達受
容体作動性イオンチャネル，または電位依存性イオンチャネルにより媒介される応答と比較した）および受容体作動性Ｃa2+チャネルの非競合的拮抗作用。
【００８１】
ＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体を受容体作動性Ｃa2+チャネルの例として用いる
。ＮＭＤＡ受容体の活性化は，カチオン選択性チャネルを開口し，それにより，細胞外Ｃa2+およびＮa+が流入し，その結果，[Ｃa2+]iの増加および細胞膜の脱分極を生じる。Ｎ
ＭＤＡ受容体上のアリールアルキルアミン化合物の活性を検出するための主要なアッセイとして[Ｃa2+]iの測定を用いた。精製したアリールアルキルアミン類，合成アリールアルキルアミン類，およびアリールアルキルアミン類の合成類似体を，グルタミン酸受容体活性を測定する能力を有するイン・ビトロアッセイでの活性について試験した。詳述した試験のために種々のクモ種の毒中に存在するアリールアルキルアミン類を選択した。これらの毒中に存在するアリールアルキルアミンは，構造的に異なるが，化合物１〜３によって表されるクラスの基本構造を有する。他のより単純化された合成類似体は，一般的に，アルキル(ポリ)アミン部分に結合した好適に置換された芳香族発色基からなる（以下の化合物１９〜５３を参照）。
【００８２】
グルタミン酸受容体活性の機能的インデックスを提供し，高い処理量スクリーニングを行わせしめる主要なアッセイを研究した。蛍光指示薬ｆｕｒａ−２を負荷したラット小脳顆粒細胞の一次培養物を用いて，ＮＭＤＡおよびその共作動性グリシンによって誘起された[Ｃa2+]iの変化を測定した。このアッセイは，非常に選択的かつ正確なＮＭＤＡ受容体活性のインデックスを提供する。ＮＭＤＡによって誘起される[Ｃa2+]iの増加は，グリシンの存在に依存しており，グルタミン酸，グリシン，またはＭＫ−８０１結合部位で作用する細胞外Ｍg2+または拮抗薬によって遮断される。ＮＭＤＡ／グリシンによって誘起さ
れる[Ｃa2+]iの増加は，電位選択性Ｃa2+チャネルの遮断薬による阻害に対するそれらの
不応性による脱分極により生じるものとは容易に区別される。[Ｃa2+]iの測定が電気生理学的およびリガンド結合研究によって得られた結果を確証する適合度は，かかる測定がＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体の活性化を厳密に反映することを示す。
【実施例】
【００８３】
実施例１：ＮＭＤＡ受容体機能の有効な非競合的阻害
培養したラット小脳顆粒細胞中の[Ｃa2+]iのＮＭＤＡ受容体媒介性増加に対するアリールアルキルアミン類の選択的阻害効果を測定した。[Ｃa2+]iの増加は，種々の濃度の各試験化合物の存在または不在下で，ＮＭＤＡ／グリシン（５０μＭ／１μＭ）の添加によって誘導された。ＩＣ50値は，試験化合物当たり２〜８種類の実験を用いて各試験化合物について得られ，標準誤差レベルは，各化合物について平均値の１０％未満であった。
【００８４】
試験されたアリールアルキルアミン類の全てが，ＮＭＤＡ／グリシンによって誘導された小脳顆粒細胞中の[Ｃa2+]iの増加を遮断した。化合物１または化合物２と構造上類似のある種のアリールアルキルアミン類は，ＮＭＤＡ受容体を選択的に遮断するのが知られている文献において最も有効な化合物であるＭＫ−８０１（ＩＣ50＝３４ｎＭ）とほぼ同様に有効である。化合物３は，ＩＣ50＝２ｎＭを有しており，すなわち，ＭＫ−８０１よりも１７倍有効であった。試験されたアリールアルキルアミン類の多くは，ＡＰ５（ＩＣ50
＝１５μＭ）などの競合的拮抗薬よりも有効であった。アリールアルキルアミン類の阻害効果は，ＮＭＤＡまたはグリシンの濃度を増加させることによって克服されなかった。すなわち，ＮＭＤＡまたはグリシンのいずれについてもＥＣ50において変化が見られなかった。かくして，アリールアルキルアミン類は，ＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体での非競合的拮抗薬であり，グルタミン酸またはグルタミン結合部位のいずれでも作用しない。
【００８５】
実施例２：カイニン酸およびＡＭＰＡ受容体機能に対する活性
小脳顆粒細胞中の[Ｃa2+]iの測定値を用いて，この組織中に存在する天然のカイニン酸およびＡＭＰＡ受容体の活性化をモニターすることもできる。これらの作動薬によって誘発された[Ｃa2+]iの増加は，ＮＭＤＡ／グリシンによって誘発されたものよりも小さいが，かかる応答は，強く，これを用いて，薬理学的に定義されたグルタミン酸受容体サブタイプに対するアリールアルキルアミン類の作用の特異性を正確に評価することができる。[Ｃa2+]iの比較測定は，アリールアルキルアミン類の受容体特異性において明確な識別を示した。ＪＳＴＸ−２［ネフィラ・クラバータ（Ｎephilaclavata）クモからのジョロ・
スパイダー（Ｊoro Ｓpider）毒素］などのよう，カイニン酸（１００μＭ）またはＡＭ
ＰＡ（３０μＭ）によって誘発された応答の有効な拮抗薬もあった。他方，化合物１によって，および化合物２によって定義された２つの構造的分類の範囲内のアリールアルキルアミン類は，ＮＭＤＡによって誘発された応答を選択的に阻害することが判明した(約１
００倍の効力差を示す)。かくして，化合物１および化合物２などのアリールアルキルア
ミン類は，小脳顆粒細胞におけるＮＭＤＡ受容体媒介性応答の有効かつ選択的な阻害薬である。
【００８６】
実施例３：パッチクランプ電気生理学的研究
成体ラット脳から単離した皮質または海馬ニューロンに対するパッチクランプ電気生理学的研究は，化合物１，化合物２および化合物３の作用機序へのさらなる洞察を提供した。これらの研究は，ＮＭＤＡ受容体によって媒介される応答に対するアリールアルキルアミン類の有効かつ選択的な阻害効果を示した。かくして，化合物１などの化合物は，カイニン酸への応答に影響を及ぼすことなくナノモル濃度でＮＭＤＡへの応答を遮断した。皮質および海馬ニューロンにおけるアリールアルキルアミン類の選択的阻害効果を示すこれらの結果は，該アリールアルキルアミン類が哺乳動物ＣＮＳ内の種々の領域におけるＮＭＤＡ受容体を標的とすることを示す。さらにまた，これらの化合物の阻害効果は，用途依存性および電位依存性であったことが判明した。これは，これらの化合物がオープン・チャネルを遮断しており，この作用によって非競合的ＮＭＤＡ受容体拮抗薬として機能することを強く示している。しかしながら，重要なことには，該アリールアルキルアミン類は，特に，それらの作用の開始の電位依存性および効果の可逆性に関して，Ｍg2+およびＭ
Ｋ−８０１の両方により区別されることができた。
【００８７】
実施例４：放射リガンド結合アッセイ
放射リガンド結合研究は，化合物１および化合物２などのアリールアルキルアミン類が作用の固有部位を有することを示した。それらは，ある点でＭＫ−８０１のように作用するが(前記した非競合的オープン−チャネル遮断)，それらは，ＮＭＤＡ受容体媒介性応答を完全に遮断する濃度で結合する[3Ｈ]ＭＫ−８０１を置換できない。これらのようなア
ッセイは，また，該アリールアルキルアミン類が，ＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体上で公知のＭＫ−８０１，Ｍg2+またはポリアミン結合部位に高い親和性で結合しないこ
とを示す。該アリールアルキルアミン類は，ＮＭＤＡ受容体媒介性応答を遮断する濃度でグルタミン酸，グリシンまたはシグマ結合部位のいずれにも直接結合しない[3Ｈ]化合物
２は，化合物２の作用機序を探究するために結合研究において用いるための，特に，他の類似体の活性を評価するためおよび新しいリード構造物を検出するために高処理量スクリーンにおいて用いるための放射リガンドとして合成された。[3Ｈ]化合物５について，同
様のアプローチが採られた。化合物１および化合物２などの化合物が，他の公知の化合物が現在存在しないＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体上の部位を標的とすることは，明らかである。分子レベルでの該アリールアルキルアミン類の作用の新規部位は，行動レベルでの著しい治療的利点に変わる。以下に説明するとおり，該アリールアルキルアミン類は，ＮＭＤＡ受容体の他の非競合的拮抗薬とは全く異なる行動プロフィールを有する。
【００８８】
実施例５：シナプス伝達研究
前記発見は，ある種のアリールアルキルアミン類，特に，化合物１および化合物２に構造的に関連するアリールアルキルアミン類が新しいメカニズムを介して作用し，作用の部位が数種類の脳からのニューロンに対するＮＭＤＡ受容体媒介性応答を有効かつ選択的に阻害することを示す。さらに該アリールアルキルアミン類の選択的阻害作用を評価するために，ＮＭＤＡまたはＡＭＰＡ受容体によって媒介されたシナプス伝達に対するそれらの効果を評価した。
【００８９】
シェファー側副線維およびＣＡ１錐体細胞のシナプスでのグルタミン酸媒介性伝達を，海馬を含有するラット脳のスライスにおいて測定した。このアッセイは，グルタミン酸のシナプス前放出によって引き起こされるシナプス後脱分極を電気生理学的に測定し，ＮＭＤＡまたはＡＭＰＡ受容体によって媒介されるシナプス伝達を容易に区別することができる。化合物１，化合物２および化合物３などのアリールアルキルアミン類は，ＮＭＤＡ受容体媒介性応答に対する選択的阻害効果を発揮し，非常に高い濃度でのみＡＭＰＡ受容体によって媒介される応答を抑制することが判明した。例えば，化合物１は，ＮＭＤＡ受容体媒介性応答についてのＩＣ50２０μＭを有するが，ＡＭＰＡ受容体媒介性応答についてのＩＣ50は，６４７μＭであった。これらの結果は，アリールアルキルアミン類がＮＭＤＡ受容体によって媒介されるシナプス伝達を選択的に阻害することができることを示す。アゲレノプシス・アペルタ（Ａgelenopsisaperta）の毒に存在する他の天然アリールアルキルアミン類は，同様に，ラット海馬におけるＮＭＤＡ受容体媒介性応答に対する有効かつ選択的阻害効果を発揮する。
【００９０】
全体として，これらの種々の研究の結果は，相補的であり，一緒になって，哺乳動物ＣＮＳにおけるＮＭＤＡ受容体に対する有効かつ選択的な阻害活性を有する構造的に新規な化合物を同定する。さらに，これらの化合物は，ＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体上の固有の部位を標的とする。化合物１，化合物２および化合物３は，治療学的に重要なエンドポイントを模擬実験する種々のイン・ビトロおよびイン・ビボアッセイにおけるさらなる研究について選択された。
【００９１】
神経保護活性
神経保護薬の望まれる特性としては，以下のものが挙げられる。（１）該薬物は，経口経路または注射可能な経路によって投与することができる(すなわち，胃，腸または血管
系において有意には分解せず，かくして，治療的に有効な量で治療されるべき組織に達する)。かかる薬物は，それらの生物学的利用能を測定するために齧歯動物において容易に
試験される。（２）該薬物は，虚血性発作（発作，仮死）または外傷性損傷（頭部外傷，脊髄損傷）後に投与されると，神経保護活性（すなわち，効力）を示す。（３）該薬物は，認識障害，運動動作の中断(disruption)，鎮静または異常興奮性，ニューロン空胞形成，心臓血管活性，ＰＣＰ様乱用潜在能力，またはＰＣＰ様精神異常作用性などの副作用が全くないか，または最小の該副作用を有する。
【００９２】
グルタミン酸は，生理学的シナプス伝達物質であるが，グルタミン酸への長期にわたる曝露は，ニューロン細胞死を導く。グルタミン酸によって引き起こされる神経変性の多くは，ＮＭＤＡ受容体によって媒介されることが明らかであり，サイトゾルＣa2+の長期に
わたって上昇したレベルにより直接的に生じる。現在，ＮＭＤＡおよびＡＭＰＡ受容体が
発作および他の虚血性／低酸素性事象の後のニューロン変性を媒介する際に主要な役割を果たすという点について広範囲の実験的支持がある[チョイ(Ｃhoi)，グルタミン酸神経毒および神経系の疾患(Ｇlutamateneurotoxicity and diseases of the nervous systems)
，ニューロン（Ｎeuron）１：６２３，１９８８]。この証拠のほとんどは，ＮＭＤＡまたはＡＭＰＡ受容体の競合的または非競合的拮抗薬の，イン・ビトロおよびイン・ビボの両方のモデルにおけるニューロン細胞死を有効に遮断する能力に基づいている。したがって，化合物１，化合物２および化合物４を，かかる活性を検出するように設計された標準的なアッセイにおいて神経保護効果について試験した。
【００９３】
実施例６：皮質ニューロン保護
アリールアルキルアミン類のイン・ビトロ神経保護効果を評価するために，培養中で増殖したマウス皮質ニューロンを５分間ＮＭＤＡに曝露し，２４時間後の細胞死を，死亡細胞から放出される細胞質酵素である乳酸テヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の放出を測定することによってモニターした[チョイ（Ｃhoi）ら，皮質細胞培養物中のグルタミン酸神経毒（Ｇlutamateneurotoxicity in corticalcell culture)，ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス（Ｊ.Ｎeurosci.）７：３５７，１９８７]。ＮＭＤＡへの曝露は，皮質ニューロンの約８０％を殺した。ＮＭＤＡと一緒に含まれる化合物１または化合物２は，各々，７０μＭおよび３０μＭのＩＣ50値で細胞死を予防した。該アリールアルキルアミン類の有効な濃度は，他の競合的ＮＭＤＡ受容体拮抗薬のものよりも高いが，競合的拮抗薬のものと同様である。ＮＭＤＡ受容体拮抗薬の有効な濃度は，特定の実験条件および研究された細胞のタイプ（皮質，海馬，線条体）に依存して変化する。この神経保護効果は，同様に，これらの化合物の，ＮＭＤＡ受容体によって引き起こされる細胞外Ｃa2+の流入を遮断す
る能力により生じる。
【００９４】
有効な治療効果を測定するためのより厳密な試験は，イン・ビボ発作モデルを含んだ。これらのモデルでは，血液供給は，脳への主動脈をクランプすることによって一時的に遮断される。この種の２つのイン・ビボモデルを用いて，化合物１，化合物２および化合物４のニューロン細胞損失を予防する能力を測定した。
【００９５】
実施例７：両側の頸動脈閉塞
第１のアッセイは，アレチネズミ（gerbil）において行われた前脳虚血の両側の一般的な頸動脈閉塞モデルであった[カーピアク（Ｋarpiak）ら，虚血性発作における薬物の研
究のための動物モデル(Ａnimalmodels for the study of drugs in ischemic stroke)，
Ａnn.Ｒev.Ｐharmacol.Ｔoxicol．２９：４０３，１９８９；ギンズバーグ（Ｇinsberg）およびバスト(Ｂusto)，大脳虚血の齧歯動物モデル(Ｒodentmodels of cerebral ischemia)，ストローク（Ｓtroke）２０：１６２７，１９８９]。脳への血流を，頸動脈をクランプすることによって７分間中断した。血流を回復させた３０分後に，腹腔内投与される（ｉ.ｐ.）単投与として試験化合物を投与した。これらの実験の経過の間，動物の中心体温を３７℃に維持して，低温反応を予防した。多くのＮＭＤＡ受容体拮抗薬は，低温症を引き起こし，この効果は，これらの化合物のほとんどの保護効果の原因であり得る。脳のセクションを銀染色し，形態計測分析によって死亡を定量化することによって，４日後にニューロン細胞死について脳を試験した。化合物２（２０mg／kg）は，試験された脳の全ての領域（海馬，線条，新皮質の領域ＣＡ１）におけるニューロン細胞死を有意に（ｐ＜０.０５）保護した。１mg／kg程度の低い投与量は，線条の完全な（＞９８％）保護を提供
した。保護の程度は，非競合的ＮＭＤＡ拮抗薬であるＭＫ−８０１の同様の投与量を用いて達成される保護と比較できる。
【００９６】
次の実験では，化合物１（１０mg／kg）は，虚血後７日目に測定したアレチネズミ海馬の領域ＣＡ１におけるニューロン死の量の２３％減少を生じたが，一方，化合物４（１０mg／kg）は，９０％保護を提供した。
【００９７】
実施例８：中大脳動脈閉塞
ラットにおいて行った発作の中大脳動脈モデル［カーピアク（Ｋarpiak）ら，虚血性発作における薬物の研究のための動物モデル(Ａnimal modelsfor the study of drugs in ischemic stroke)，Ａnn.Ｒev.Ｐharmacol.Ｔoxicol．２９：４０３，１９８９；ギンズバーグ（Ｇinsberg）およびバスト(Ｂusto)，大脳虚血の齧歯動物モデル(Ｒodentmodels of
cerebral ischemia)，ストローク（Ｓtroke）２０：１６２７，１９８９］は，それがより制限された脳梗塞において生じ，これにより，異なる種類の発作（巣状血栓性発作）に近づくので，アレチネズミのモデルとは異なる。この発作モデルを用いる第１の研究では，１つの大脳動脈を手術的結紮（surgicalligation）によって永久に閉塞した。単回の腹腔内（ｉ.ｐ.）注射によって，閉塞の３０分後に試験化合物を投与した。これらの実験の経過の間，動物の中心体温を３７℃に維持して，低温反応を予防した。２４時間後，脳をニューロン細胞損失について組織学的に評価した。梗塞量は，１０個のスライドからの組織学的蒼白の領域を用いて，各連続セクション間の距離を積分して算出した。化合物１の単回投与（３０mg／kg）は，ＭＫ−８０１の最大有効投与量（１０mg／kg）と同等にニューロン細胞損失に対して有意に（ｐ＜０.０５）保護することが判明した（約１５％保護
）。化合物２（２０mg／kg）を用いる予備試験は，同様の傾向を示した。
【００９８】
ラットにおける巣状大脳虚血の第２の研究では，頸動脈を介して中大脳動脈の領域へ縫合糸の小片を通すことによって，中大脳動脈を永久に閉塞した。中心体温を３７℃に維持した。虚血性事象の開始直後に投与した化合物４（１０mg／kg，ｉ.ｐ.）は，２４時間後に記録した脳梗塞の量の統計学的に有意な減少（２０％）を生じた。
【００９９】
ラットにおける巣状大脳虚血の第３のモデルでは，ローズ・ベンガル顔料を用いるフォト血栓法（photothrombotic method）によって虚血性梗塞を生じた。虚血性事象の３０分後に投与した化合物４（１０mg／kg，ｉ.ｐ.）は，非競合的ＮＭＤＡ受容体拮抗薬であるＭＫ−８０１を用いて示したと同様に梗塞の量の２０％減少を生じた。
【０１００】
ラットにおける巣状大脳虚血の第４のモデルでは，頸動脈を介して中大脳動脈の領域へ縫合糸の小片を通すことによって，中大脳動脈を一時的に閉塞した。２時間の虚血期間後，縫合糸を引き抜いた。中心体温を３７℃に維持した。虚血事象の開始直後に投与した化合物４（１０mg／kg，ｉ.ｐ.）は，７２時間後に記録した脳梗塞の量の統計学的に有意な減少（２０％）を生じた。
【０１０１】
主な化合物のいくつかの重要な特徴は，これらのイン・ビボ結果から明らかになる。第１に，最も重要なことには，化合物１，化合物２および化合物４は，発作の数種類のイン・ビボモデルにおいて神経保護効果を示す。アレチネズミのアッセイは，心拍停止または周産期低酸素症などの一過性の完全な脳虚血および低酸素症についてのモデルである。ラットのアッセイは，永久的および一時的な巣状大脳虚血のモデルである。化合物１および化合物４が永久的巣状発作モデルにおいて神経保護的であることの発見は，薬物の梗塞の部位への接近性が一般的に大きくない周縁領域に制限されるので，驚くべきことである。それにもかかわらず，化合物１および化合物４は，ダメージの程度を有意に（ｐ＜０.０
５）制限した。第２に，当該化合物は虚血事象後に投与すると有効である。これは，薬物が壊死性ダメージを有効に停止させる梗塞の後の「機会の窓(windowof opportunity)」であると思われるので，重要である。この時間がヒトにおいてどの程度長いかは，正確には定義されておらず，おそらく梗塞のタイプに依存して変わるであろう。しかしながら，本質的な観察は，変性プロセスが始まった後にこれらの化合物がニューロン細胞死の蔓延を予防することができるということである。最後に，化合物１，化合物２および化合物４は，非経口投与すると有効であり，それらが血液−脳バリヤーを透過することを示す。
【０１０２】
抗痙攣活性
抗痙攣薬の望まれる特性としては，以下のことが挙げられる：該薬物は，経口または注射可能な経路によって投与することができ，該薬物は，限定されないが，単純な部分発作，複雑な部分発作，痙攣重積状態，および頭部手術を含む頭部損傷の後に生じるような外傷誘発性発作が挙げられるいくつかの発作タイプに対して有効な抗痙攣活性を示し；該薬物は，認識障害，運動動作の中断，鎮静または異常興奮性，ニューロン空胞形成，心臓血管活性，ＰＣＰ様乱用潜在能力，またはＰＣＰ様精神異常作用性などの副作用が全くないか，または最小の該副作用を有する。
【０１０３】
グルタミン酸は，脳における主要な興奮性伝達物質であり，かくして，発作活性において主要な役割を果たし，癲癇の病因に寄与する。癲癇においてグルタミン酸受容体についての主要な役割に好都合である事象のほとんどは，グルタミン酸受容体作動薬が発作を誘発すること，および，ＮＭＤＡおよびＡＭＰＡ受容体拮抗薬がイン・ビボで投与されると有効な抗痙攣薬であることを示す薬理学的研究に由来する。癲癇の臨床的に異なる形態に関連した種々の発作および行動的効果を含む多くのイン・ビボモデルがある。かくして，同一のメカニズムが発作活性の全ての活性の基礎となると仮定するのは単純化し過ぎるので，いくつかのモデルにおいて効果について試験することは，慎重なことである。
【０１０４】
実施例９：痙攣毒遮断活性
最初の研究では，アリールアルキルアミン類の，カイニン酸，ピクロトキシンまたはビククリンによって誘発された発作を遮断する能力を実験した。これらの痙攣毒の各々は，異なるメカニズムを介して作用し，カイニン酸によって誘発された発作は，ピクロトキシンまたはビククリンによって誘発された発作とは定性的に異なる。これらの実験では，ピクロトキシンまたはビククリン投与の５分前，およびカイニン酸投与の５分後，いくつかのアリールアルキルアミン毒素を含有するアゲレノプシス・アペルタ（Ａgelenopsisaperta）毒のフラクションを静脈内（ｉｖ）投与した。該アリールアルキルアミン類は，これらの３つの薬剤の全てによって誘発された発作を減少させた。ピクロトキシンまたはビククリンの効果は，１９匹の対照動物の全てが２５分以内に死亡するほど猛烈であった。対照的に，該アリールアルキルアミン類で前処理された９匹の動物には，死亡しなかった。要するに，該アリールアルキルアミン類で処理した動物の約半分だけは，いずれの痙攣も全く示さず，これらの症状は，１時間以内に軽減された。これらの結果は，明らかにアリールアルキルアミン類の抗痙攣効果を示し，さらに，精製したアリールアルキルアミン類およびそれらの類似体を用いる研究を刺激した。
【０１０５】
実施例１０：発作刺激
研究のこの第２のグループにおいて，まず，３種類の発作誘発性試験パラダイムを用い，化合物１のようなアリールアルキルアミン類が２つのかかるパラダイムにおいて有効な抗痙攣薬であることを証明した。第１の２つのモデルは，聴覚原性発作の傾向にあるＤＢＡ／２マウ又を用いた。音（１０９ｄＢのベル音）またはＮＭＤＡ（５６mg／kg）の腹腔内（ｉ.ｐ.）投与によって発作を誘発した。痙攣刺激の１５〜３０分前に試験物質を投与した。聴覚原性刺激後１分間，または，ＮＭＤＡ投与後１５分間，間代性発作の数を記録した。化合物１，化合物２ならびに化合物３および化合物４などのいくつかの他のアリールアルキルアミン類は，いずれかの刺激によって誘発された発作を抑制した。例えば，化合物２は，聴覚原性刺激について０.１３mg／kgｓ.ｃ.のＥＤ50およびＮＭＤＡ刺激につ
いて０.０８３mg／kg ｓ.ｃ.のＥＤ50を有した。同様に，聴覚原性発作モデルにおける化合物についてのＥＤ50（０.０８mg／kg）は，ＭＫ−８０１についてのＥＤ50（０.０２mg／kg）に近づいた。対照的に，化合物１または化合物２は，ｉ.ｐ．ＮＭＤＡによって誘
発されたＣＦ−１マウスにおいて発作を減少させることにおいて５０mg／kgｓ.ｃ.までの投与量で有効であった。
【０１０６】
実験の第２の独立したシリーズでは，化合物１および化合物４は，各々，１４.３mg／kgおよび〜１５mg／kgのＩＣ50値で腹腔内注射後に反射性癲癇の他の遺伝的に罹病性のマ
ウスモデルにおいて音によって誘発された発作を予防することが見いだされた。これらの化合物は，０.６３μg（化合物１）および４.７７μg（化合物４）のＩＣ50値で脳室内（ｉ.ｃ.ｖ.）注射後にフリングス（Ｆrings）マウスにおける聴覚原性発作に対して非常に有効であった。化合物１は，また，４μgｉ.ｃ.ｖ.の投与量でＣＦ１マウスにおいて最大の電気ショックによって誘発された発作に対して有効であることが判明した。
【０１０７】
反射性癲癇の遺伝的に罹病性のマウスモデル（フリングスマウス）を用いるさらなる研究では，ｉ.ｃ.ｖ.注射によって投与した化合物９，化合物１２および化合物１４は，各
々，４.７７μg，１２.２μgおよび１３.９μgのＩＣ50値で音誘発性発作を予防した。これらの集合的な発見は，化合物１，化合物２および化合物４などのアリールアルキルアミン類が，癲癇性（聴覚原性）および非癲癇性（化学的痙攣性）発作を予防する際に有効である。活性のこの一般化されたパターンは，アリールアルキルアミン類が発作活性を制御する際に臨床的に有用であることを示す。さらに，発作活性のイン・ビボモデルにおける化合物１，化合物２および特に化合物４の有効性は，これらの化合物が低投与量で非経口投与した場合の治療的に関連した効果を有することができ，脳室中に直接投与した場合に特に有効であることを示す。
【０１０８】
鎮痛活性
鎮痛薬の望まれる特性としては，以下のことが挙げられる：該薬物は，経口または注射可能な経路によって投与することができ，該薬物は，鎮痛活性を示し，該薬物は，認識障害，運動動作の中断，鎮静または異常興奮性，ニューロン空胞形成，心臓血管活性，ＰＣＰ様乱用潜在能力，またはＰＣＰ様精神異常作用性などの副作用が全くないか，または最小の該副作用を有する。
【０１０９】
グルタミン酸およびＮＭＤＡ受容体媒介性応答は，ある種の疼痛知覚における役割を果たす[ディケンソン(Ｄickenson)，終結のための治療：有効な鎮痛薬としてのＮＭＤＡ受
容体拮抗薬(Ａcure for wind up: ＮＭＤＡ receptor antagonists as potential analgestics)，トレンズ・イン・ファーマコロジカル・サイエンシズ（ＴrendsＰharmacol.Ｓci.）１１：３０２，１９９０]。したがって，化合物１，化合物２，化合物３および化合物４の起こり得る鎮痛効果を実験した。
【０１１０】
実施例１１：身もだえ（writhing）応答試験
実験の第１シリーズでは，身もだえ応答（腹部伸張）を誘発する不快な刺激物（２−フェニル−１,４−ベンゾキノン，ＰＢＱ）を動物に投与した。典型的には，５分間の観察
において生じた身もだえの数を記録する。モルヒネなどの古典的な鎮痛薬は，ＰＢＱ誘発性身もだえの数の減少に有効である(４mg／kgｉ.ｐ.で身もだえ応答の１００％遮断)。非ステロイド系抗炎症薬は，同様に，このモデルにおいて有効である。化合物１(２mg／kg)，化合物２（２mg／kg）および化合物３（１mg／kg）は，ＰＢＱの３０分前にｓ.ｃ.またはｉ.ｐ.投与した場合，９５％よりも大きく身もだえ応答を抑制した。これらの結果は，化合物１，化合物２および化合物３が内臓痛を緩和することを示す。
【０１１１】
研究の同様のシリーズでは，化合物１および化合物４は，各々，１０mg／kgおよび１mg／kgのＩＣ50値でｉ.ｐ.注射後にマウスにおいて酢酸誘発性身もだえを阻害することが判明した。
【０１１２】
実施例１２：ホットプレート試験
さらなるアッセイにおいて鎮痛活性について，化合物１を試験した。鎮痛活性のこのモデルでは，ホットプレート（５０℃）上に置く３０分前に試験物質をマウスにｓ.ｃ.投与
した。脚をなめたりプレートから跳び退いたりするのに要した時間は，鎮痛活性のインデックスであり，有効な鎮痛薬は，なめたり跳んだりするまでの潜伏時間を増加させる。モルヒネ（５.６mg／kg）は，跳ぶまでの潜伏時間を７６５％増加させた。化合物１は，同
様に，このアッセイで有効であり，４および３２mg／kgの投与量で，各々，脚なめまでの潜伏時間を１３６％増加させ，跳ぶまでの潜伏時間を３６０％増加させた。
【０１１３】
ホットプレートアッセイにおける化合物１の鎮痛効果は，反転性グリッドアッセイ（以下を参照）において低下した動作を付随しなかった。これは，ホットプレートから跳び退くまでの潜伏時間の増加が，損なわれた運動能力を単純に反映しないことを示す。一緒に，これらのデータは，化合物１が有意な鎮痛活性を有することを示す。
【０１１４】
実験の後者のシリーズでは，化合物１および化合物４は，クモ膜下内（ｉ.ｔｈ）経路
によって投与される場合，ラットにおいて有意な鎮痛活性を有することが示された。これらの実験では，侵害受容刺激として５２℃のホットプレートを用いた。化合物１（０.３
〜３nmol）および化合物４（０.３〜３nmol）は，投与量依存性および時間依存性抗侵害
受容効果を生じた；これらのアリールアルキルアミン類は，有効性および効力に関してモルヒネ（０.３〜３nmol）と同様であった。他方，ＮＭＤＡ受容体拮抗薬であるＭＫ−８
０１は，このアッセイにおいて無効であった(３〜３０nmol)。
【０１１５】
実施例１３：尾のフリック（flick）試験
この標準的なアッセイでは，熱的侵害受容刺激は，エンドポイントとして取られた尾をフリックするかまたは引っ込めるまでの潜伏時間を有する５２℃の温水であった。化合物１（０.３〜３nmol）および化合物４（０.３〜３nmol）は，ｉ.ｔｈ.投与後の投与量依存性および時間依存性鎮痛効果を生じた。これらのアリールアルキルアミン類は，有効性および効力に関してモルヒネ（０.３〜３nmol）と同様であった。他方，ＮＭＤＡ受容体拮
抗薬であるＭＫ−８０１は，このアッセイでは無効であった(３〜３０nmol)。
【０１１６】
実施例１４：ホルマリン試験
雄性のスプレイグードーリー種ラットを，左後ろ足中に５０μlの容量の希ホルマリン
（５％）を注射する前に少なくとも１時間，観察チャンバーに慣らした。動物によって示されたフリンチ（flinch）の数を計数することによって，該足の背面中にホルマリンをｓ.ｃ.注射した直後に動作応答をモニターした。ホルマリン注射後，少なくとも５０分間，動作をモニターし，初期応答（ホルマリン後０〜１０分）および後期応答（ホルマリン後２０〜５０分）として記録した。ホルマリンの１０分前（予備処理）またはホルマリンの１０分後（後処理）化合物を５μlの容量でクモ膜下内（ｉ.ｔｈ.）注射した。
【０１１７】
ホルマリンの足底内投与は，フリンチ動作の典型的な二相性応答（一般的に，初期および後期応答として記載されている）を生じた。ホルマリンへの予備処理として投与された化合物１（０.３〜１０nmol）または化合物４（０．３〜１０nmol）のクモ膜下内投与は
，初期および後期のフリンチ動作を有効に示した。このアリールアルキルアミン類による予備処理の効果は，モルヒネ（１〜０nmol）またはＭＫ−８０１（１〜３０nmol）による予備処理についてみられた効果と同様であった。
【０１１８】
ホルマリン後に投与した化合物１（０.３〜１０nmol ｉ.ｔｈ.）は後期フリンチの阻害を生じたが，有意さは１０nmolの投与量でのみ達成された。ホルマリン後に投与した化合物４（０.３〜１０nmol）は，３および１０nmolの投与量で達成された有意さで後期フリ
ンチの有意な阻害を生じた。該アリールアルキルアミン類の活性のこの鎮痛プロフィールはモルヒネ（１〜１０nmol）のホルマリン後投与について見られたプロフィールと同様である；しかしながら，ＭＫ−８０１（１〜３０nmol）のホルマリン後投与は，後期フリンチに影響を及ぼさなかった。
【０１１９】
ホットプレート，尾のフリックおよびホルマリンアッセイについて得られた結果は，一緒になって，化合物１および化合物４などのアリールアルキルアミン類が，急性疼痛のいくつかの齧歯動物モデルにおいて有意な鎮痛活性を有することを示す。ホルマリンアッセイは，さらに，アリールアルキルアミン類が慢性疼痛の動物モデルにおいて有効であることを示す。重要なことには，該アリールアルキルアミン類は，ホルマリン刺激後に投与した場合，有意な鎮痛活性を有する。この活性のプロフィールは，該アリールアルキルアミン類をＭＫ−８０１などの標準的なＮＭＤＡ受容体拮抗薬と明確に区別する。
【０１２０】
アリールアルキルアミン類の副作用
ＮＭＤＡ受容体が種々の脳機能において重要な役割を果たすとすれば，この受容体の拮抗薬が典型的にはある種の歓迎されない副作用に関連することが見いだされても驚くことではない。実際，それは，ＮＭＤＡ受容体を標的とする治療の開発に対する主要な障害を提供するこの特性である。競合的および非競合的拮抗薬の両方を特徴付ける主な副作用は，ＰＣＰ様精神異常作用性，運動動作の障害，鎮静または異常興奮性，認識能力の障害，ニューロン空胞形成，または心臓血管効果［ウィレッツ（Ｗilletts）ら，ＮＭＤＡ受容
体拮抗薬の行動薬理学(Ｔhe behavioral pharmacology of ＮＭＤＡ receptor antagonists)，トレンズ・イン・ファーマコロジカル・サイエンシズ（ＴrendsＰharmacol.Ｓci.）１１：４２３，１９９０；オルニィー（Ｏlney）ら，フェンシクリジンおよび関連薬物による大脳皮質ニューロンにおいて誘発される病理学的変化(Ｐathologicalchanges induced in cerebrocortical neurons by phencyclidine and related drugs)，サイエンス（Ｓcience）２４４：１３６０，１９８９］である。ＮＭＤＡ受容体媒介性応答の阻害に関連する精神異常作用効果は，ＭＫ−８０１結合部位で作用するフェンシクリジン（ＰＣＰ）または「合成ヘロイン(angeldust)」への応答における典型である。認識能の障害は，Ｎ
ＭＤＡ受容体が学習および記憶において正常に果たす重要な役割に関連する。
【０１２１】
ＡＭＰＡ受容体拮抗薬の副作用プロフィールに関しては，比較的にあまり知られていない。しかしながら，かかる化合物が運動障害，運動失調および深い鎮静をも誘発することが明らかになってきた。
【０１２２】
運動障害，鎮静および精神異常作用活性を指し示す動物モデルならびに学習および記憶のイン・ビトロおよびイン・ビボモデルにおいて，アリールアルキルアミン類の活性を試験した。
【０１２３】
（ａ）ＰＣＰ様精神異常作用活性
齧歯動物において，ＮＭＤＡ受容体の競合的および非競合的拮抗薬は，活動過剰，頭部ウィービングおよび運動失調によって特徴付けられたＰＣＰ様セロタイプ動作を生じる[
ウィレッツ（Ｗilletts）ら，ＮＭＤＡ受容体拮抗薬の行動薬理学(Ｔhebehavioral pharmacology of ＮＭＤＡ receptor antagonists)，トレンズ・イン・ファーマコロジカル・
サイエンシズ（ＴrendsＰharmacol Ｓci.）１１：４２３，１９９０；スネル（Ｓnell）
およびジョンソン(Ｊohnson)，健康および疾患における興奮性アミノ酸(ＥxcitatoryＡmino Ａcids in Ｈealth and Ｄisease)，ジョン・ウィリー・アンド・サンズ(Ｊohn Ｗiley ＆ Ｓons)，第２６１頁，１９８８]。本発明者らは，アリールアルキルアミン類がかかる動作を誘発するかを研究した。さらに，本発明者らは，該アリールアルキルアミン類がＰＣＰを生理食塩水と識別するように訓練したラットにおいてＰＣＰの代わりになるか[
ウィレッツ（Ｗilletts）ら，ＮＭＤＡ受容体拮抗薬の行動薬理学(Ｔhebehavioral pharmacology of ＮＭＤＡ receptor antagonists)，トレンズ・イン・ファーマコロジカル・
サイエンシズ（ＴrendsＰharmacol.Ｓci.）１１：４２３，１９９０]，および，該アリールアルキルアミン類がＰＣＰ様ニューロン空胞形成を誘発するか［オルニィ（Ｏlney）ら，フェンシクリジンおよび関連薬物による大脳皮質ニューロンにおいて誘発される病理学
的変化(Ｐathological changes induced in cerebrocortical neurons by phencyclidine
and related drugs)，サイエンス（Ｓcience）２４４：１３６０，１９８９］を研究し
た。
【０１２４】
実施例１５：運動活性
第１のアッセイは，試験物質の末梢（ｓ.ｃ.またはｉ.ｐ.）投与の後の最初の１時間の間，運動活性を単純にモニターする。活性チャンバー中に入れる１５分前にマウスに化合物１を投与した。６０分間，光電管グリッドにおけるブレイクの数を計数することによって定量化した。このアッセイでは，ＭＫ−８０１（０.２５mg／kgｐ.ｏ.）は，運動活性
の２〜３倍の増加を生じる。しかしながら，化合物１は，３２mg／kgｓ.ｃ.で試験した場合でさえ，活動過剰を誘発せず，実際，それを抑制する傾向にあった。マウスにおいて精製したアリールアルキルアミン類を用いるこの結果は，アゲレノプシス・アペルタ（Ａgelenopsisaperta）からの完全なアリールアルキルアミン類含有フラクションが静脈内注射される場合にＰＣＰ様動作症候群を誘発しないが，軽い鎮静効果を生じると思われるラットにおいて得られた初期の結果を補足する。
【０１２５】
実施例１６：運動障害
一般化された運動障害についての第１のアッセイでは，反転グリッドアッセイにおいて化合物１を試験した。このアッセイでは，動物を，反転することができる回転式金属棒から吊り下げられたワイヤー中空グリッド上に置く。次いで，該動物の，頂上に昇る能力またはグリッドにぶらさがる能力について，該動物を評価する。重篤な運動障害を有する動物は，グリッドから落ちる。このアッセイは，運動失調，立直り反射の損失，鎮静，または筋肉弛緩により生じる「行動中断(behavioraldisruption)」のインデックスを提供する。これらの試験では，３２mg／kg ｓ.ｃ.で投与した化合物１は，グリッドが反転した場
合，ＤＢＡ／２マウスの自分自身を直す能力を減少させなかった（ｐ＞０.０５）。化合
物２は，同様に，２０mg／kgｓ.ｃ.の投与量で投与した場合，ＤＢＡ／２マウスにおける運動動作に対する効果を有しなかった（ｐ＞０.０５）。これらの投与量は，ＤＢＡ／２
マウスにおける音誘発性発作を予防するために必要とする投与量（前記実施例１０を参照）よりも非常に高かった。
【０１２６】
急性運動障害の第２のアッセイは，ロートロッドアッセイであった。このアッセイでは，フリングス（Ｆrings）およびＣＦ１マウスに試験化合物を注射し，６ｒｐｍの速度で
回転する節だらけのロッド上に置いた。該マウスの，長時間，平衡を維持する能力を測定した；３回の試行の各々において１分間，ロートロッド上で平衡を維持することができなかったこれらのマウスは，障害を負っていると考えられた。化合物１は，１６.８mg／kg
ｉ.ｐ.のＴＤ50（試験動物の５０％において運動毒性を生じた投与量）でフリングスマウスにおいて急性運動障害を生じた。この投与量は，フリングスマウスにおける音誘発性発作を予防する投与量（前記実施例１０を参照）と同様である。しかしながら，フリングスマウスにおける化合物１の有効投与量および毒性投与量の間の非常に明らかな分離が，当該化合物をｉ.ｃ.ｖ.投与する場合にある。この場合，化合物の投与量が１.５６μgｉ.ｃ.v.を超えるまで(０.６３μgのＥＤ50の＞２倍)，明らかな運動毒性が明らかではなかっ
た。最終的に，ＣＦ１における運動障害は，４μgのｉ.ｃ.v.投与後に化合物１について
示された。
【０１２７】
化合物４，化合物９，化合物１２および化合物１４をフリングスマウスにｉ.ｃ.ｖ.注
射によって投与し，急性運動障害を測定した。化合物４，９，１２および１４についてのＴＤ50は，各々，８〜１６μg，１４.８μg，３０.２μgおよび３０.８μgであった。こ
れらのＴＤ50値は，抗痙攣効力についての有効なＩＣ50値（前記実施例１０を参照）よりも２〜３倍高かった；有効投与量および毒性投与量の間の明確な分離が示された。
【０１２８】
実施例１７：ＰＣＰ識別
このアッセイでは，食物促進のためにレバーを押すように訓練したラットは，該ラットのカゴにおける２本のレバーのうち正しい方を選択しなければならない。該ラットが正しいレバーを選択するために有する唯一の刺激は，該ラットにＰＣＰまたは賦形剤を注射したかを検出する能力である。約２カ月の訓練の後，ラットは，ＰＣＰを賦形剤注射と識別することに対して非常に良好になり，次いで，該ラットがＰＣＰとして識別するかを判断するために他の薬物を用いて試験することができる。この方法で試験する場合，ＰＣＰ様中毒を生じることが知られている他の薬物は，ＰＣＰの代わりになる。これらの薬物としては，ケタミンなどの種々のＰＣＰ類似体および非競合的ＮＭＤＡ受容体拮抗薬であるＭＫ−８０１が挙げられる。
【０１２９】
化合物１（１〜３０mg／kg ｉ.ｐ.）は，ＰＣＰの代わりにならず，かくして，ＰＣＰ
様識別刺激効果が完全に欠けている。３０mg／kg ｉ.ｐ.で，試験した動物７匹のうち１
匹だけがいずれのレバーについても全く反応しなかった。かくして，化合物１の動作的に有効な投与量範囲が評価されたことが明らかである。試験化合物のラットにおけるＰＣＰ様効果を生じる能力がそれらのヒトにおけるＰＣＰ様精神異常作用活性および乱用傾向性を生じる能力の予言となると思われるので，これらの結果は，化合物１などのアリールアルキルアミン類がヒトにおけるかかる有害な副作用を欠くであろうということを強く示す。
【０１３０】
実施例１８：ニューロン空胞形成
ＰＣＰおよびＭＫ−８０１などの化合物のラットへの投与は，ニューロン空胞と称される神経毒性効果を生じる。かかる化合物の単回投与の後，特定の中枢神経，特に，帯状皮質およびレトロスプレーニアル皮質における中枢神経に空胞が見られる。かかる空胞形成は，１００mg／kgｉ.ｐ.の単回の高投与量で化合物１で処理されたラットにおいては，存在しなかった。
【０１３１】
運動活性，運動障害，ＰＣＰ識別およびニューロン空胞形成に対する結果は，一緒になって，アリールアルキルアミン類が，ヒトにおいてＰＣＰ様副作用が全くないであろうということを強く示す。
【０１３２】
（ｂ）認識障害
記憶および学習におけるＮＭＤＡ受容体の役割を仮定するための主要な理由の１つは，ラットの海馬において長期薬効増強作用（ＬＴＰ）についての細胞研究から導く。ＬＴＰは，短くしかも強いシナプス刺激によって生じたシナプス応答の大きさの長期永続性増加である。この現象の発見以来，脊椎動物脳における学習の卓越した細胞モデルになった［テイラー（Ｔeyler）およびディスセンナ(Ｄiscenna)，長期薬効増強作用(Ｌong-termpotentiation)，Ａnnu.Ｒev.Ｎeurosci．１０：１３１，１９８７]。シェーファー側副枝に
よって形成されたシナプスでのＣＡ１錐体細胞への伝達は，ＮＭＤＡおよびＡＭＰＡ受容体によって媒介される。短い強直刺激後，個体群スパイクの大きさ（シナプス伝達の測定）は，非常に増加し，数時間そのままである。ＮＭＤＡ受容体の全ての公知の競合的および非競合的拮抗薬がラットの海馬においてＬＴＰを遮断するが，一方，非ＮＭＤＡ受容体の拮抗薬が効果を有しないことが示された[コリングリッジ（Ｃollingridge）およびデイヴィス(Ｄavis)，ザ・ＮＭＤＡ・レセプター(ＴheＮＭＤＡ Ｒeceptor)，ＩＲＬプレス，第１２３頁，１９８９]。これは，記憶および学習におけるＮＭＤＡ受容体の役割を支持
する。
【０１３３】
実施例１９：ＬＴＰアッセイ
ラット海馬のスライスにおけるＬＴＰに対する効果について，選択されたアリールアルキルアミン類および文献標準試料の効果を試験した。予想されるように，全ての慣用の競
合的ＮＭＤＡ受容体拮抗薬（ＡＰ５およびＡＰ７）および非競合的ＮＭＤＡ受容体拮抗薬（ＭＫ−８０１およびイフェンプロジル）は，海馬におけるＬＴＰの誘発を阻害した。毎回１秒間，１００Ｈzの，５００ミリ秒ごとに分けた３回試行からなる強直誘発性刺激を
導出する前に，試験化合物をラット海馬のスライスに３０〜６０分間注いだ。持続性筋強直後さらに１５分間，応答の大きさをモニターした。強直誘発性刺激は，シナプス応答の大きさにおいて，平均９５％の増加を生じた。ＬＴＰの誘発は，競合的ＮＭＤＡ受容体拮抗薬（ＡＰ５，ＡＰ７）または非競合的ＮＭＤＡ受容体拮抗薬（ＭＫ−８０１，イフェンプロジル）によって有意に（ｐ＜０.０５）遮断された。全く驚くべきことに，対照応答
の阻害を生じた高濃度（１００〜３００μＭ）で用いた場合でさえ，試験したアリールアルキルアミン類（化合物１，化合物２，化合物３など）のうちＬＴＰの誘発を遮断したもの（ｐ＞０.０５）は全くなかった。
【０１３４】
これらの結果は，アリールアルキルアミン類のもう１つの固有かつ重要な特徴を目立たせる。アリールアルキルアミン類は，ＬＴＰの誘発を遮断しないＮＭＤＡ受容体の選択的かつ有効な拮抗薬であることを示す化合物の第１の，および，現在では唯一の類である。これは，同様に，アリールアルキルアミン類の作用の新規メカニズムおよび部位を反映し，ＮＭＤＡ受容体上の新規部位を標的とする薬物が，同様に，ＬＴＰに対する効果を欠いていることを示す。ＬＴＰは，哺乳動物のＣＮＳにおける学習および記憶についての主要な細胞モデルであるので，それは，さらに，かかる薬物が認識動作に対する有害な効果を欠いているであろうということを示す。
【０１３５】
実施例２０：学習試験
イン・ビボ学習パラダイムにおける，より有効な合成アリールアルキルアミン類似体のうちの１つである化合物３を用いる予備実験は，これらの薬物が認識動作に対する効果を欠いていることを示す。この試験では，食物報酬のためにＴ迷路において方向転換を互い違いにするようにラットを訓練した。ＭＫ−８０１を比較のために含んだ。試験の１５分前に試験化合物をｉ.ｐ.投与した。対照動物は，この時の正しい選択約８０％を行った。ＭＫ−８０１の増加した投与量は，正しい選択の数を徐々に減少させ，この行動の衰退は，活動過剰を伴った。対照的に，化合物３は，該動物の正しい選択を行う能力を害しなかった(ｐ＞０.０５)。試験した最高投与量で，化合物３は，運動活性の多少の減少，正確
には，ＭＫ−８０１を用いて観察された反対の効果を生じた。
【０１３６】
ＭＫ−８０１は，運動活性の増加と同時に学習動作を減少させたが，齧歯動物および霊長類において異なるパラダイムを用いる他の研究は，学習および運動に対する効果の間の明確な分離を示した。かくして，競合的ＮＭＤＡ受容体拮抗薬および非競合的ＮＭＤＡ受容体拮抗薬は，共に，運動行動の如何なる明白な変化をも生じない投与量で学習を害する。これは，慣用のＮＭＤＡ受容体拮抗薬が他の副作用とは無関係に学習を害することを示す。Ｔ迷路アッセイの結果は，化合物３および他のアリールアルキルアミン類が，運動活性の多少の減少を生じる投与量でさえ，学習を害しないことを示す。
【０１３７】
１つのさらなる観察は，これらの学習試験から現れる。試験の２日目の動物の最初の応答は，ランダムであり，したがって，前日の試験の最後の応答に依存しなかった。かくして，対照動物は，この時の最初の選択約５０％を正しく行った。ＭＫ−８０１は，この最初の選択に対する効果を有しなかった。しかしながら，前日に化合物３を投与した動物は，非常にしばしば最初の選択を正しく行った。対照動物とは異なって，化合物３で処理した動物は，それらが前日の最後の選択を記憶していたかのように行動した。
【０１３８】
実験の第２のシリーズでは，モリスウォーター迷路タスク（Ｍorris water maze task
）における学習に対する化合物４の効果を評価した。この試験では，環状のスチール製タンク中の固定された位置に隠されたプラットホームを置き，水面下２cmに沈めた。各ラッ
トに，１０分間の試行間隔で１日当たり試行３回を５日間行った。３つの予め決定した開始位置のうちの１つで，鼻をタンクの壁に向けて水中にラットを置くことによって試行を開始した。開始位置の順序は，毎日変えた。学習を，プラットホームまで泳ぐのに必要な時間の減少として測定した。動物が試行の開始後６０秒以内にプラットホームの位置を捜し当てられなかった場合，該ラットを該プラットホームに手でガイドした。該動物は，タンクから離れる前に１０秒間，プラットホーム上にとどまった。５日目の最後の訓練試行の１０分後，該動物にプローブ試験を行った。この１試行タスクのためにプラットホームを取り除き，動物を６０秒間泳がせて，プラットホーム位置についての空間的偏向を評価した。このタスクから２つの測定値を記録した：プラットホームがあった領域を最初に横切るまでの潜伏時間，および横切る合計回数。各ラットに化合物４を合計５回注射した。実験の最初のシリーズでは，化合物４を毎日１０mg／kgｉ.ｐ.で５日間投与した。この処理方針は，学習を害した；しかしながら，これらの動物は，化合物４の反復投与により，有意な体重損失および異常な行動サイン（「震え」，運動障害，泳ぎの困難さ）を体験した。次の研究では，訓練の最初に４日間，６匹の動物に１mg／kgｉ.ｐ.を投与し，一方，２匹の動物には，この期間，５mg／kg ｉ.ｐ.を投与した。訓練の最終日に，両方のグル
ープに１０mg／kgを投与した。１mg／kgの動物および５mg／kgの動物は，共に，隠されたプラットホームの位置を学習する際の障害を示さず，最後の１０mg／kg投与は，動物の既に学習したタスクを行う能力において障害を生じなかった。
【０１３９】
これらの学習タスクの結果は，有望である。それらは，アリールアルキルアミン類が，他のＮＭＤＡ受容体拮抗薬に特徴的に備わっている学習および記憶欠損を欠いていることを示す。実際，アリールアルキルアミン類がヌートロピックでさえあることを示す（記憶エンハンサー）。
【０１４０】
（ｃ）心臓血管効果
ある種のアリールアルキルアミン類によるイン・ビボ研究は，これらの化合物の，特に高投与量での，血圧降下効果を示した。これらの結果に基づいて，心臓血管機能に対するアリールアルキルアミン類の効果の系統的研究を行った。
【０１４１】
実施例２１：Ｃa2+チャネル阻害
本発明者らは，アリールアルキルアミン類のいくつかが電位感受性Ｃa2+チャネル，特
に，ジヒドロピリジンによる阻害に対して感受性のあるもの（Ｌ型チャネル）の全く有効な阻害薬であることを見いだした。血管の平滑筋に対するかかる効果は，血管を膨張し，血圧の低下を生じ，かくして，血圧降下を生じることが予想される。
【０１４２】
小脳顆粒細胞およびラット大動脈平滑筋細胞系Ａ7r５細胞において，アリールアルキルアミン類のジヒドロピリジン感受性Ｃa2+チャネルを阻害する能力を試験した。化合物２
は，小脳顆粒細胞において，ＮＭＤＡに対する応答を遮断するのに必要な濃度よりも１００倍高い濃度で[Ｃa2+]iの脱分極誘発性増加を阻害した（各々，ＩＣ50値は２４μＭおよび１６１μＭ）。全体的に，本発明者らは，ＮＭＤＡ受容体に対する有効性とは相互に関係のない電位感受性Ｃa2+チャネルに対する広範囲の有効性を観察した。これは，電位感
受性Ｃa2+チャネルに対して低い有効性を有する非常に有効性のあるＮＭＤＡ拮抗薬であ
る化合物の研究に導くであろうということを示す。実際，化合物１（小脳顆粒細胞中におけるＮＭＤＡ受容体媒介性応答に対して１０２nＭのＩＣ50を有する）は，小脳顆粒細胞
における電位感受性Ｃa2+チャネルの比較的乏しい阻害薬であり（ＩＣ50＝２５７μＭ，
Ａ7r５細胞において電位感受性Ｃa2+流入に対する効果を実質的には有しない（ＩＣ50＝
８０８μＭ）。
【０１４３】
しかしながら，アリールアルキルアミン類は，電位感受性Ｃa2+チャネルの無差別の遮
断薬ではない。それらは，例えば，小脳プルキンエ細胞における電位感受性Ｃa2+チャネ
ル（Ｐ型チャネル）または神経伝達物質放出に関係すると考えられるこれらのチャネル（Ｎ−チャネル）に影響を及ぼさない。電位感受性Ｃa2+チャネルを遮断するアリールアル
キルアミン類は，特にＬ型Ｃa2+チャネルを標的とすると思われる。さらにまた，前記の
とおり，この効果には，高度の構造的特異性がある。例えば，あるアリールアルキルアミンは，Ｌ型チャネルを通るＣa2+流入を遮断することにおいて別のアリールアルキルアミ
ンよりも５７倍有効である。ここで，化合物間の唯一の構造的差異がヒドロキシル基の存在または不在である。
【０１４４】
実施例２２：イン・ビボ心臓血管研究
アリールアルキルアミン類である化合物１および化合物２は，イン・ビボ発作モデルにおいて有効な投与量（１０〜３０mg／kg ｓ.ｃ.）で麻酔したラットにおける平均動脈血
圧（ＭＡＢＰ）の適度な低下（２０〜４０mmＨg）を生じる。より詳細には，化合物４の
血圧降下効果を評価した。化合物４は，１０mg／kgｉ.ｐ.の投与量で投与した場合に約９０〜１２０分間持続した平均動脈血圧の顕著な低下（４０mmＨg）を誘発した；それは，
ラットのこの同一のグループにおいて，化合物４が中大脳動脈閉塞の縫合モデル（前記実施例８を参照）において有意な神経保護を提供したことであった。化合物４が巣状虚血性発作のローズ・ベンガル・フォト血栓モデル（ＲoseＢengal photothrombotic model）において（前記実施例８を参照）神経保護活性を示したラット研究において同様の結果が得られた。脳脊髄を穿刺したラット標本を用いるさらなる研究は，化合物４の血圧降下活性が，末梢的に媒介された効果であることを強く示す。化合物４によって生じた血圧降下および徐脈は，アトロピンを用いて予備処理されたラットにおいて維持され，これらの効果がコリン作動性メカニズムによって媒介されないことを示す。同様に，化合物４は，化学的交感神経切除したラット（神経節遮断薬で予備処理された）において血圧降下および徐脈を誘発し，これらの効果が交感神経系を介して媒介されないことを示す。
【０１４５】
これらの発見に基づいて，化学的試みが，（１）神経保護のためにより低い投与量が必要とされるために，脳中へのアリールアルキルアミンの摂取を増強し，（２）電位感受性Ｃa2+チャネルよりも受容体作動性Ｃa2+チャネルについてのアリールアルキルアミン類の選択性（有効性比）を増大させることによって，心臓血管副作用を最小にするであろうということが予想される。
【０１４６】
単純化された合成アリールアルキルアミン類の化学的性質および生物学的活性
単純化されたアリールアルキルアミン類は，以下の構造式からなる：
【化１８】
2014166987.tif 000019
[式中，Ｘは，各々，独立して，１個以上のＨ，Ｂr，Ｃl，Ｆ，低級アルキル，および／
またはＯＣＨ3であってよく，Ｒ1は，各々，独立して，Ｈ，低級アルキル，ＯＨ，Ｏ−アルキルまたはＯ−アシルであってよく，Ｒ2は，各々，独立して，Ｈまたは低級アルキル
であってよい]；または
【化１９】
2014166987.tif 000020
[式中，Ｘは，各々，独立して，１個以上のＨ，Ｂr，Ｃl，Ｆ，低級アルキル，および／
またはＯＣＨ3であってよく，Ｒ1は，各々，独立して，Ｈ，低級アルキル，ＯＨ，Ｏ−アルキルまたはＯ−アシルであってよく，Ｒ2は，各々，独立して，Ｈまたは低級アルキル
であってよい]；または
【化２０】
2014166987.tif 000021
[式中，ｎ＝１〜６，Ｘは，各々，独立して，１個以上のＨ，Ｂr，Ｃl，Ｆ，低級アルキ
ル，および／またはＯＣＨ3であってよく，Ｒ1は，Ｈ，低級アルキル，ＯＨ，Ｏ−アルキル，またはＯ−アシルであってよく，Ｒ2は，Ｈまたは低級アルキルであってよい]；または
【化２１】
2014166987.tif 000022
[式中，ｎ＝１〜６，Ｘは，各々，独立して，１個以上のＨ，Ｂr，Ｃl，Ｆ，低級アルキ
ル，および／またはＯＣＨ3であってよく，Ｒ1は，Ｈ，低級アルキル，ＯＨ，Ｏ−アルキル，またはＯ−アシルであってよく，Ｒ2は，各々，独立して，Ｈまたは低級アルキルで
あってよい]。
【０１４７】
これらの化合物は，より複雑な前記化合物１，２および３の代わりに本発明において潜在的に有用であるかもしれない。
【０１４８】
かかる単純化アリールアルキルアミン類の例としては，限定されないが，以下の構造式を有する化合物１９〜５３が挙げられる。
【０１４９】
【化２２】
2014166987.tif 000023
【化２３】
2014166987.tif 000024
【化２４】
2014166987.tif 000025
【化２５】
2014166987.tif 000026
【化２６】
2014166987.tif 000027
【化２７】
2014166987.tif 000028
【化２８】
2014166987.tif 000029
【０１５０】
実施例２３：化合物１９および類似体の生物活性
化合物１９〜５３は，培養物中で増殖したラット小脳顆粒細胞中の[Ｃa2+]iのＮＭＤＡ誘発性増加に対して高い効力を有した。ＮＭＤＡに対する応答に対する化合物１９の阻害効果は，非競合的であった。化合物１９〜３７は，ラット海馬および皮質組織から調製した膜における[3Ｈ]ＭＫ−８０１結合を阻害した(第１表)。
【０１５１】
化合物１９は，以下のさらなる生物活性を有した：ｉ.ｐ.投与（ＥＤ50＝２６.４mg／kgおよびＴＤ50（ロートロッド）＝４３.８mg／kg）後のマウスにおける最大電気ショック誘発性発作に対する有意な（対照と比較してｐ＜０.０５）抗痙攣活性；経口（ｐ.ｏ.）
投与（ＥＤ50＝３５mg／kg）後のマウスにおける最大電気ショック誘発性発作に対する，または，３０mg／kgでの運動障害についての有意な抗痙攣活性；１６mg／kgｉ.ｐ.でのホットプレートおよびＰＢＱ誘発性身もだえアッセイにおける有意な鎮静活性：ラットにおける３０mg／kg ｉ.ｐ.でのＰＣＰ様常同症行動（異常興奮性および頭部ウィービング）
がないこと；３０mg／kgｉ.ｐ.の行動活性投与量までの投与量でのＰＣＰ識別アッセイにおけるＰＣＰへの一般化がないこと。化合物１９は，ラット小脳顆粒細胞におけるＫＣl
の脱分極濃度（ＩＣ50＝１０.２μＭ）によって誘発される[Ｃa2+]i，の増加を拮抗する
ことにおいて有意に有効でなく，１００mg／kgまでの投与量でラットにおいてｓ.ｃ.投与した場合，血圧に対する効果を有しなかった。しかしながら，実施例１９は，１００μＭで試験した場合，ラット海馬スライスにおけるＬＴＰの誘発を遮断した。
【０１５２】
化合物２０は，以下のさらなる生物活性を有した：ｉ.ｐ.投与後のマウスにおける最大電気ショック誘発性発作に対する有意な抗痙攣活性（ＥＤ50＝２０.１mg／kgおよびＴＤ50（ロートロッド）＝２０.６mg／kg）；３０mg／kgで運動障害を伴うが，３０mg／kgまでの投与量での経口（ｐ.ｏ.）投与後のマウスにおける最大電気ショック誘発性発作に対する有意な抗痙攣活性がないこと；ｉ.ｐ.投与（ＥＤ50＝２.１mg／kgおよびＴＤ50＝１９.
９mg／kg）および経口投与（ＥＤ50＝９.７mg／kgおよびＴＤ50＝２１.８／mg／kg）後の反射性癲癇の一般的に罹病性のマウスモデル（フリングスマウス）における音誘発性発作に対する有意な抗痙攣活性；一時的巣状虚血症のラットモデルにおける有意な神経保護活性（中大脳動脈閉塞の直後に１回目の投与および６時間後に２回目の投与をする１mg／kgｉ.ｐ.の２回投与の後の梗塞量の５１％減少；中大脳動脈閉塞の２時間後（すなわち，再灌流時）に１回目の投与および６時間後に２回目の投与をする１mg／kg ｉ.ｐ.の２回投
与の後の梗塞量の４３％減少）；１０mg／kgｉ.ｐ.の行動的に活性な投与量までの投与量でＰＣＰ識別アッセイにおいてＰＣＰへの一般化がないこと；１０および３０mg／kg ｉ.ｐ.の投与量で投与した場合のニューロン空胞形成がないこと；１５μmol／kgｉ.ｖ.または１０mg／kg ｉ.ｐ.までの投与量での有意な心臓血管活性がないこと。
【０１５３】
化合物２１は，以下のさらなる生物活性を有した：ｉ.ｐ.投与（ＥＤ50＝３.４１mg／kgおよびＴＤ50（振動）＝１５.３mg／kg）後の反射性癲癇の一般的な罹病性のマウスモデル（フリングスマウス）における音誘発性発作に対する有意な抗痙攣活性。
【０１５４】
化合物２２は，以下のさらなる生物活性を有した：ｉ.ｐ.投与（ＥＤ50＝４.９０mg／kgおよびＴＤ50（反転グリッド）＝２６.８mg／kg）および経口投与（ＥＤ50＝５.１mg／kgおよびＬＤ50＝１８.３mg／kg）後の反射性癲癇の一般的な罹病性のマウスモデル（フリングスマウス）における音誘発性発作に対する有意な抗痙攣活性；１５μmol／kg（４.４７mg／kg）ｉ.ｖ.以下の投与量での有意な心臓血管活性がないこと。
【０１５５】
これらの単純化合成アリールアルキルアミン類を用いて得られた結果は，一緒になって，かかる単純化分子が，化合物１，２および３と同様に，受容体作動性Ｃa2+チャネル上
のアリールアルキルアミン結合部位と特異的には相互に作用し合わないことを示す。特に，化合物１９〜５３は，ＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体の機能を拮抗するものよりも約１〜５０倍の範囲の濃度で[3Ｈ]ＭＫ−８０１によって標識された部位に結合する。
しかしながら，治療薬与量の化合物１９〜５３がＰＣＰ様常同症行動を生じないか，薬物識別アッセイにおいてＰＣＰを置換しないか，またはニューロン空胞形成を誘発しないという事実は，かかる化合物が，神経障害および神経病についてのリード化合物または薬物候補として有用であるということを示す。[3Ｈ]ＭＫ−８０１によって標識された部位に
対して低い親和性（ＭＫ−８０１と比較して）で結合する化合物が，治療的利用能を有し，ＭＫ−８０１自体などの高親和性拮抗薬によって有されるものよりも優れた副作用プロフィールを有する[ロガヴスキー(Ｒogawski)，興奮性アミノ酸拮抗薬の治療的潜在性：チャネル遮断薬および２,３−ベンゾジアゼピン(Ｔherapeuticpotential of excitatory amino acid antagonists: channel blockers and 2,3-benzodiazepines)，トレンズ・イン
・ファーマコロジカル・サイエンシズ（ＴrendsＰharmacol.Ｓci.）１４：３２５，１９
９３]。[3Ｈ]ＭＫ−８０１によって標識された部位に対する化合物１９〜５３の低い親和性（ＭＫ−８０１と比較して）により，化合物１９〜５３は，低い親和性の非競合的拮抗薬のこの一般的なクラスに入れられる。
【０１５６】
受容体作動性カルシウムチャネル上の新規調節的部位の同定
前記定義のとおり治療学的に有用な特性を有するアリールアルキルアミン類を同定すると，ＮＭＤＡ，ＡＭＰＡおよびニコチン性コリン作動性受容体−イオノフォア複合体内に存在するものなどの受容体作動性Ｃa2+チャネル上の重要なアリールアルキルアミン結合
部位で作用する化合物を同定することができる。
【０１５７】
好適な試験の例は，以下のとおりである：
実施例２４：ラット皮質または小脳における放射リガンド結合
以下のアッセイを高処理量アッセイとして利用して，産生物ライブラリー（例えば，主要な製薬会社での天然産生物ライブラリーおよび化合物ファイル）をスクリーニングする
ことができ，この固有のアリールアルキルアミン部位で活性を有する化合物の新しいクラスを同定することができる。次いで，これらの新しいクラスの化合物は，受容体作動性Ｃa2+チャネル上のアリールアルキルアミン結合部位を標識とする薬物開発プログラムのた
めに化学的なリード構造として利用される。このアッセイによって同定された化合物は，神経障害または神経病の治療への新しい治療的アプローチを提供する。かかる化合物の例としては，前記の一般的な化学式において与えられるものが挙げられる。慣用の実験を行って，所望の活性を有するこれらの化合物を同定することができる。
【０１５８】
ラット脳膜は，以下のように変更して，ウイリアムズ（Ｗilliams）らの方法［[3Ｈ]ＭＫ−８０１のＮＭＤＡ受容体への結合に対するポリアミンの効果：ポリアミン認識部位の存在についての薬理学的証拠(Ｅffectsof polyamines on the binding of[3Ｈ]ＭＫ−８
０１ to the ＮＭＤＡreceptor:Ｐharmacological evidence for the existence of a polyamine recognition site)，モレキュラー・ファーマコロジー（Ｍolec.Ｐharmacol.）
３６：５７５，１９８９］に従って調製される：体重１００〜２００gの雄性スプレーグ
−ドーリー種ラット［ハーラン・ラボラトリーズ(ＨarlanＬaboratories)］を断頭によって殺す。ラット２０匹からの皮質または小脳を浄化し，解剖する。得られた脳組織を，５mＭ Ｋ−ＥＤＴＡ（pＨ７.０）を含有する０.３２Ｍシュークロース３００ml中，最も低
いセッティングで，ポリトロンホモジナイザーを用いて４℃でホモジナイズする。ホモジナートを１,０００×ｇで１０分間遠心分離し，上清を除去し，３０,０００×ｇで３０分間遠心分離する。得られたペレットを５mＭＫ−ＥＤＴＡ（pＨ７.０）２５０ml中に再懸
濁させ，氷上で１５分間撹拌し，次いで，３０,０００×ｇで３０分間遠心分離する。ペ
レットを５mＭ Ｋ−ＥＤＴＡ（pＨ７.０）３００mlに再懸濁し，３２℃で３０分間インキュベートする。次いで，該懸濁液を１００,０００×ｇで３０分間遠心分離する。膜を，
５mＭＫ−ＥＤＴＡ（pＨ７.０）５００ml中に再懸濁させることによって洗浄し，３２℃
で３０分間インキュベートし，１００，０００×ｇで３０分間遠心分離する。３０分間のインキュベーションを含む洗浄工程を繰り返す。最終ペレットを５mＭＫ−ＥＤＴＡ（pＨ７.０）６０mlに再懸濁させ，−８０℃でアリコートで貯蔵する。このアッセイにおいて
利用した広範囲な洗浄工程は，膜標本中に存在するグルタミン酸およびグリシン（ＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体での共作動薬）の濃度を最小にする試みにおいて設計された。
【０１５９】
[3Ｈ]アリールアルキルアミンを用いる結合アッセイを行うために，ＳＰＭ［シナプス
プラズマ膜(Ｓynaptic Ｐlasma Ｍembranes)］のアリコートを解凍し，３０mＭＥＰＰＳ
／１mＭ Ｋ−ＥＤＴＡ（pＨ７.０）３０mlに再懸濁させ，１００,０００×ｇで３０分間
遠心分離した。ＳＰＭを緩衝液Ａ（３０mＭ ＥＰＰＳ／１ mＭ Ｋ−ＥＤＴＡ，pＨ７.０
）中に再懸濁する。この反応混合物に[3Ｈ]アリールアルキルアミンを添加する。結合ア
ッセイは，ポリエチレン試験管中で行われる。最終インキュベーション容量は，５００μlである。非特異的結合は，１００μＭ非放射性アリールアルキルアミンの存在下で測定
される。二重試料を０℃で１時間インキュベートする。アッセイは，氷冷緩衝液Ａ（３ml）の添加，次いで，０.３３％ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）中に予備浸漬されたガラス
繊維フィルター［シュライヒャー・アンド・シュール（Ｓchleicher＆ Ｓchuell）Ｎo.３０］上での濾過によって終わらせる。該フィルターを別の緩衝液Ａ（３ml）で３回洗浄し，3Ｈについて３５〜４０％の効率でシンチレーションカウンティングによって，放射能
を測定する。
【０１６０】
前記アッセイを確認するために，以下の実験も行われる：
（ａ）予備浸漬されたガラス繊維フィルターを介して種々の濃度の[3Ｈ]アリールアルキ
ルアミンを含有する緩衝液Ａ（５００μl）を通すことによって，[3Ｈ]アリールアルキルアミンのフィルターへの非特異的結合の量を測定する。該フィルターを別の緩衝液Ａ（３ml）で４回洗浄し，3Ｈについて３５〜４０％の効率でシンチレーションカウンティング
することによって，フィルターに結合した放射能を測定する。０.３３％ＰＥＩで予備処
理されないフィルターでは，3Ｈ−リガンドの８７％がフィルターに結合したことが判明
した。０.３３％ＰＥＩによる予備浸漬は，非特異的に結合を添加した全リガンドの０.５〜１.０％に減少させる。
【０１６１】
（ｂ）緩衝液ＡにＳＰＭを再懸濁することによって飽和曲線を作成する。該アッセイ緩衝液（５００μl）は，タンパク６０μgを含有する。[3Ｈ]アリールアルキルアミンを，ハ
ーフーログ・ユニット（half-logunit）で１.０nＭ〜４００μＭの範囲で用いる。該データから飽和曲線を作成し，スキャッチャード分析法［スキャッチャード(Ｓcatchard)，小さな分子およびイオンについてのタンパクの吸引(Ｔheattractions of proteins for small molecules and ions)，アナルス・オブ・ニューヨーク・アカデミー・オブ・サイエンシズ（Ａnn.Ｎ.Ｙ.Ａcad.Ｓci.）５１：６６０，１９４９］によって見かけのＫD値およ
びＢmax値を測定した。ヒル・プロット［ヒル(Ｈill)，興奮モードに対する理論を用いる，電流の作用下，筋肉および神経におけるイオン濃度の変化の新しい数学的処理（Ａ new
mathematical treatment of chamges of ionic concentrations in muscle and nerve under the action of electric currents，with a theory to their mode of excitation)，ジャーナル・オブ・フィジオロジー（Ｊ.Ｐhysiol.）４０：１９０，１９１０］の作成によって，[3Ｈ]アリールアルキルアミンの結合の協同性を測定する。
【０１６２】
（ｃ）緩衝液ＡにＳＰＭを再懸濁させることによって，結合のタンパク（受容体）濃度への依存性を測定する。該アッセイ緩衝液（５００μl）は，そのＫD値と等しい濃度の[3Ｈ]アリールアルキルアミンおよび増加する濃度のタンパクを含有する。[3Ｈ]アリールアルキルアミンの特異的結合は，存在するタンパク（受容体）の量と正比例すべきである。
【０１６３】
（ｄ）緩衝液ＡにＳＰＭを再懸濁することによって，リガンドー受容体結合のタイムコースを測定する。該アッセイ緩衝液（５００μＭ）は，そのＫD値と等しい濃度の[3Ｈ]アリールアルキルアミンおよびタンパク１００μgを含有する。二重試料を，０℃で，変化す
る時間，インキュベートする；平衡に達した時を測定し，全ての次のアッセイで，この時点を慣例的に用いる。
【０１６４】
（ｅ）競合実験によって，結合部位の薬理を分析することができる。かかる実験では，[3Ｈ]アリールアルキルアミンの濃度およびタンパクの量は，一定に維持されるが，一方，
試験（競合）薬物の濃度は，変えられる。このアッセイにより，競合薬についてのＩＣ50および見かけのＫDが測定される［チェン（Ｃheng）およびプルソフ(Ｐrusoff)，酵素反
応の５０％阻害（ＩＣ50）を生じる阻害薬の濃度と阻害定数との関係(Ｒelationshipbetween the inhibition constant（Ｋi）and the concentration ofinhibitor which causes
５０ percent inhibition（ＩＣ50）of an enzymaticreaction)，Ｊ．Ｂiochem.Ｐharmacol．２２：３０９９，１９７３]。ヒル・プロット分析法によって，競合薬の結合の協同性を測定する。
【０１６５】
[3Ｈ]アリールアルキルアミンの特異的結合は，ＮＭＤＡ−，ＡＭＰＡ−およびニコチ
ン性コリン作動性受容体−イオノフォア複合体内に存在するものなどの受容体作動性Ｃa2+チャネル上の新規部位への結合を表す。それとして，他のアリールアルキルアミン類は
，競合的形態の[3Ｈ]アリールアルキルアミンの結合と競合すべきであり，このアッセイ
におけるそれらの有効性は，受容体作動性Ｃa2+チャネルの機能的アッセイにおけるそれ
らの阻害有効性と相互に関係すベきである(例えば，ラット小脳顆粒細胞の培養物中の[Ｃa2+]iのＮＭＤＡ受容体誘発性増加)。逆に言えば，受容体作動性Ｃa2+チャネル上の他の
公知の部位で活性を有する化合物（例えば，ＭＫ−８０１，Ｍg2+，ポリアミン）は，競
合的方法で[3Ｈ]アリールアルキルアミン結合を置換すべきではない)。むしろ，非競合的相互作用を示す[3Ｈ]アリールアルキルアミン結合の複雑なアロステリックモジュレーシ
ョンが生じることは予想される。予備実験では，ＭＫ−８０１は，１００μＭまでの濃度で[3Ｈ]アリールアルキルアミン結合を示さなかった。
【０１６６】
（ｆ）平衡になった後に[3Ｈ]アリールアルキルアミンの結合を測定することによって(前記（ｄ）を参照)，解離速度を評価するための研究を行い，該反応混合物に大過剰の非放
射性競合薬を添加する。次いで，種々の時間間隔で，［3Ｈ］アリールアルキルアミンの
結合をアッセイする。このアッセイを用いて，［3Ｈ］アリールアルキルアミンの結合の
会合および解離速度を測定する［タイトラー(Ｔiteler)，多ドーパミン受容体：ドーパミン薬理学における受容体結合研究(ＭultipleＤopamine Ｒeceptors: Ｒeceptor Ｂinding
Ｓtudies in Ｄopamine Ｐharmacology)，マルセル・デッカー,インコーポレィテッド(
Ｍarcel Ｄekker，Ｉnc.)，ニューヨーク，１９８３]。さらなる実験は，このパラメーターの温度依存性を理解するために，反応温度（０℃〜３７℃）を変えることを含む。
【０１６７】
実施例２５：小脳顆粒細胞における放射リガンド結合
８日齢のラットから小脳顆粒ニューロンの一次培養物を得，ポリ−Ｌ−リシンで被覆したアクラー（Ａclar）プラスチックスクェア上で平板培養する。プラスチックスクェアを２４ウエル培養プレートに置き，各ウエルに顆粒細胞約７.５×１０5個を添加する。該培養物を，シトシンアラビノシド（１０μＭ，最終）の添加前２４時間，大気中５％ＣＯ2
の湿潤雰囲気中，３７℃で，２５mＭＫＣl，１０％ウシ胎児血清[ハイクローン・ラボラ
トリーズ(ＨyＣlone Ｌaboratories)]，２mＭグルタミン，１００μg／mlゲンタマイシン，５０Ｕ／mlペニシリン，および５０μg／mlストレプトマイシンを含有するイーグル培
地［ハイクローン・ラボラトリーズ(ＨyＣloneＬaboratories)］中に維持する。平板培養後６〜８日目に受容体結合実験のために細胞を用いるまで，培養培地を変化させない。
【０１６８】
[3Ｈ]アリールアルキルアミンを用いて結合アッセイを行うために，該反応混合物は，
２４ウエルプレートの各ウエル中，緩衝液Ａ（２０mＭ Ｋ−ＨＥＰＥＳ，１mＭＫ−ＥＤ
ＴＡ，pＨ７.０）２００μlからなる。この反応混合物に[3Ｈ]アリールアルキルアミンを添加する。１００μＭ非放射性アリールアルキルアミンの存在下，非特異的結合を測定する。三重試料を０℃で１時間インキュベートする。細胞をアクラースクェアから手動により掻き集め，それをポリプロピレン試験管中に入れることによって，アッセイを終わらせた。この方法で全細胞から調製した膜を氷冷緩衝液Ａ１０mlに再懸濁し，０.３３％ＰＥ
Ｉ中で予備浸漬されたガラス繊維フィルター［シュライヒャー・アンド・シュール Ｎo. ３０］で濾過する。該フィルターを別の緩衝液Ａ３mlで３回洗浄し，3Ｈについて３５〜
４０％の効率でシンチレーションカウンティングすることによって，フィルター上の放射能を測定する。非特異的結合を最小にするために，濾過よりもむしろ遠心分離によってアッセイを終わらせる。
【０１６９】
初期結合のために膜の代わりに細胞を用いる以外は，実質的に前記に従って，該アッセイを特徴付け確認するための特異的な実験を行う。結合アッセイにより，スキャッチャード分析法［小さな分子およびイオンについてのタンパクの吸引(Ｔheattractions of proteins for small molecules and ions)，アナルス・オブ・ニューヨーク・アカデミー・オブ・サイエンシズ（Ａnn.Ｎ.Ｙ.Ａcad.Ｓci.）５１：６６０，１９４９］によってＩＣ50値および見かけのＫD値を測定する。ヒル・プロット分析法［興奮モードに対する理論を
用いる，電流の作用下，筋肉および神経におけるイオン濃度の変化の新しい数学的処理（Ａnew mathematical treatment of chamges of ionic concentrations in muscle andnerve under the action of electric currents，with a theory to their mode ofexcitation)，ジャーナル・オブ・フィジオロジー（Ｊ.Ｐhysiol.）４０：１９０，１９１０］に
よって，競合薬の結合の協同性を測定する。[3Ｈ]アリールアルキルアミンの特異的結合
は，受容体作動性カルシウムチャネル上の新規な部位への結合を示す。
【０１７０】
実施例２６：組換え受容体結合アッセイ
以下は，本発明の有用な化合物についての迅速なスクリーニングアッセイの一例である。このアッセイでは，標準的な方法を用いて，ヒトのような好適な生物からのアリールアルキルアミン結合部位（受容体）をコードするｃＤＮＡまたは遺伝子クローンを得る。適当な発現ベクター中でクローンの異なるフラグメントを発現させて，化合物１，化合物２または化合物３を結合する能力を保持する受容体から入手可能な最小のポリペプチドを得る。この方法では，これらの化合物についての新規アリールアルキルアミン受容体を含むポリペプチドを同定することができる。安定にトランスフェクトした哺乳動物細胞系（例えば，ＨＥＫ２９３細胞）を利用して，アリールアルキルアミン受容体を発現することによってかかる実験を促進させることができる。
【０１７１】
別法としては，選択化合物と接触する（または隣接する）アリールアルキルアミン受容体のアミノ酸残基を修飾し，これにより同定可能になるような方法で，該アリールアルキルアミン受容体を化学的に修飾した化合物１，化合物２または化合物３と化学的に反応させることができる。次いで，化合物１，化合物２または化合物３と相互に作用するかを測定され，該分子に結合するのに充分であるこれらのアミノ酸を含有するアリールアルキルアミン受容体のフラグメントを，標準的な発現ベクターを用いて，前記のとおり，組換え的に発現することができる。
【０１７２】
標準的な化学的方法を用いて，所望の結合特性を有する組換えポリペプチドを固相支持体に結合することができる。次いで，この固相または親和性マトリックスを化合物１，化合物２または化合物３と接触させて，これらの化合物がカラムに結合することができることを示し，化合物を固相から除去される条件を同定する。次いで，化合物の大きなライブラリーを用いて，この方法を繰り返して，親和性マトリックスに結合することができるこれらの化合物を測定し，次いで，化合物１，化合物２または化合物３と同様の方法で放出することができる。しかしながら，アリールアルキルアミン結合のために用いたものと異なる条件下で結合能を有する化合物を得るために，二者択一的な結合および放出条件を利用してもよい（例えば，良好な模擬生理学的条件が病原的状態で特に遭遇した条件）。かくして，結合するこれらの化合物は，液体培地または抽出物中に存在する化合物の非常に大きなコレクションから選択することができる。
【０１７３】
前記のアリールアルキルアミン結合ポリペプチドへの結合能を有する化合物を同定すると，次いで，種々のアッセイにおいて，これらの化合物を容易に試験して，それらまたはそれらの簡単な誘導体が前記神経障害および神経病の治療的処置のために有用な化合物であるかを判定することができる。
【０１７４】
別の方法では，天然アリールアルキルアミン受容体をカラムまたは他の固相支持体に結合させることができる。次いで，受容体上の他の部位を結合する試薬によって競争されないこれらの化合物を同定することができる。かかる化合物は，受容体上の新規な結合部位を定義する。かくして，他の公知化合物によって競争される化合物は，公知の部位に結合するか，または，公知の結合部位と重複する新規部位に結合する。それにもかかわらず，かかる化合物は，構造的に公知化合物と異なり，治療薬として有用である作用薬または拮抗薬の新規化学的クラスを定義する。すなわち，競合アッセイを用いて，本発明の有用な化合物を同定することができる。
【０１７５】
実施例２７：パッチクランプ電気生理学的アッセイ
ＮＭＤＡ−，ＡＭＰＡ−またはニコチン性コリン作動性受容体−イオノフォア複合体中に存在するもののような受容体作動性Ｃa2+チャネル上の新規アリールアルキルアミン結
合部位で非常に有効かつ競合的な形態で相互に作用すると前記放射リガンド結合アッセイで同定された選択化合物について，以下のアッセイを行った。このパッチクランプアッセ
イは，予め選択した化合物の作用部位および作用機序についてのさらなる関連データを提供する。特に，受容体作動性Ｃa2+チャネルの例としてＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複
合体を用いて，アリールアルキルアミン結合部位で相互に作用する化合物の以下の薬理学的および生理学的特性を測定する：ＮＭＤＡ受容体媒介性イオン電流を遮断する時の有効性および効力，グルタミン酸およびグリシンに関する遮断の非競合的性質，作用の用途依存性，作用の電位依存性，遮断の開始および反転に関する両者，遮断および非遮断（反転）の速度，および遮断のオープンチャネルメカニズム。かかるデータにより，アリールアルキルアミン結合部位で相互に作用する化合物がアリールアルキルアミン類の固有の生理学的プロフィールを維持し，ＮＭＤＡ受容体−イオノフォア複合体上の公知の部位（グルタミン酸結合部位，グリシン結合部位，ＭＫ−８０１結合部位，Ｍg2+結合部位，Ｚn2+結合部位，シグマ結合部位，ポリアミン結合部位）でそれらの主な活性を有しないことが確認される。
【０１７６】
標準的な方法［ドネヴァン（Ｄonevan）ら，アルカイン・ブロックス・Ｎ−メチル−Ｄ−アスパルテート・レセプター・レアルカインは，オープンチャネルメカニズムによるＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体応答を遮断する：培養した海馬ニューロンにおける全細胞および単一チャネル記録研究（Ａrcaineblocks Ｎ−methyl−Ｄ−aspartate receptor responses by an open channel mechanism:whole-cell and single-channel recording studies in cultured hippocampal neurons)，モレキュラー・ファーマコロジー（Ｍolec.Ｐharmacol.）４１：７２７，１９９２；ロック（Ｒock）およびマクドナルド(Ｍacdonald)，スペルミンおよび関連ポリアミン類は，ＮＭＤＡ受容体単一チャネルコンダクタンスの電位依存性減少を生じる（Ｓpermineand related polyamines produce a voltage-dependent reduction of ＮＭＤＡ receptorsingle-channel conductance)，モレキュラ
ー・ファーマコロジー（Ｍolec.Ｐharmacol.)４２：１５７，１９９２］を用いて，哺乳
動物ニューロン（海馬，皮質，小脳顆粒細胞）のパッチクランプ記録を行う。
【０１７７】
別法として，受容体作動性Ｃa2+チャネルの特異的サブユニットを発現させて，ゼノプ
ス（Ｘenopus）卵母細胞または安定にトランスフェクトした哺乳動物細胞系（例えば，ＨＥＫ２９３細胞）について，パッチクランプ実験を行うことができる。この方法では，例えば，種々のグルタミン酸受容体サブタイプ（例えば，ＮＭＤＡＲ１，ＮＭＤＡＲ２Ａ〜ＮＭＤＡＲ２Ｄ，ＧluＲ１〜ＧluＲ４）での有効性および効力を測定することができる。部位特異的突然変異誘発を用いることによって，これらのグルタミン酸受容体サブタイプに対するアリールアルキルアミン類の作用の部位に関するさらなる情報を得ることができる。
【０１７８】
実施例２８：アリールアルキルアミン類の合成
化合物１，化合物２および化合物３などのアリールアルキルアミン類は，標準的な方法によって合成される[ジャシス（Ｊasys）ら，アルギオトキシンの全合成（Ｔhetotal synthesis of argiotoxins）６３６，６５９および６７３，テトラヘドロン・レターズ（Ｔetrahedron Ｌett.）２９：６２２３，１９８８；ネイソン（Ｎason）ら，神経毒性ネフィラクモ毒の合成：ＮＳＴＸ−３およびＪＳＴＸ−３（Ｓynthesisof neurotoxic Ｎephila
spider venoms：ＮＳＴＸ−３ and ＪＳＴＸ−３)，テトラヘドロン・レターズ（ＴetrahedronＬett.）３０：２３３７，１９８９]。アリールアルキルアミン類似体の合成の特
定の例を以下に示す。
【０１７９】
化合物４の合成は，以下のとおり行った：
１,４−ジアミノブタン（２０３.４g，２.３１２mmol）のメタノール（５０mＬ）中溶
液をアクリロニトリル（ＡＮ，１３５g，２.５４３mol）で４０ml／時の速度で処理した
。該反応を室温（２０〜２６℃）で１６時間撹拌した。ＧＣ−ＭＳは，生成物Ａ６４％[
ＧＣ−ＭＳ（Ｒt＝４.２６分）ｍ／ｚ（相対強度）１４１(Ｍ＋,４)，１２４(８)，１０
１(４２)，８３(１００)，７０(６５)，５６(６３)，４２(８１)]，および二付加物Ｂ３
６％［ＧＣ−ＭＳ（Ｒt＝７.５０分）ｍ／ｚ（相対強度）１９４(Ｍ+,１３)，１５４(２
３)，１２３(４５)，９６(１５)，８３(１００)，７０(２４)，５６(２９)，４２(４０)
］を示した。クーゲルロール蒸留により，透明な油状物として生成物Ａ（１２０g）（３
７％）を得た。３−ブロモ−１−プロピルアミン・臭化水素酸塩（１０２.４g，４６８mmol）およびジ炭酸ジ−tert−ブチル（１００.１g，４６２mmol）のＤＭＦ（６００mＬ）
中溶液をトリエチルアミン（７０mＬ，５００mmol）で処理し，該反応を室温で１時間撹
拌した。該反応を，Ｈ2Ｏ５００mＬおよびジエチルエーテル５０mＬを含有する分液漏斗
に移した。該混合物を平衡化させ，水性層を取り出した。エーテル層を１％ＨＣl（３×
）で洗浄し，Ｋ2ＣＯ3で乾燥させ，減少させて，生成物Ｃ（１０５g）（９５％）を得た
。
【０１８０】
Ａ（８０g，５６７mmol）およびＫＦ−セライト（１３７g，セライト上５０重量％）のアセトニトリル（１Ｌ）中溶液をアセトニトリル（１００mＬ）中の臭化物Ｃ（１０５g，４４４mmol）で１時間かけて処理した。次いで，該反応を５０℃で２４時間撹拌した。ＧＣ−ＭＳは，臭化物Ｃが消費されたことを示した。該反応を冷却し，濾過し，油状物に濃縮した。この物質をエーテル（５００mＬ）に溶解させ，水（５００mＬ）を用いて平衡化させた。エーテル層を取り出し，水性相をエーテル（４×５００mＬ），次いで，エーテ
ル−ジクロロメタン（１：１，５００mＬ）で１回で洗浄した。この方法により，未反応
ニトリルＡ（水性フラクション）を生成物Ｄから分離した。有機洗液を合わせ，濃縮して，油状物１２０gを得た。この物質をヘキサン−ジクロロメタン（１：１）中のシリカカ
ラム（乾燥シリカ１５００cm3）に付し，ヘキサン−ジクロロメタン（１：１）からジク
ロロメタンまでメタノール−ジクロロメタン（１：９）までメタノール−ジクロロメタン−イソプロピルアミン（１０：９０：１）までの複合体勾配液を用いて洗浄した（３００mＬ／分）。同様のフラクション（ＴＬＣ分析）を合わせ，濃縮して，生成物Ｄ９３g（臭化物Ｃから７０％）を得た。13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣl3）により，ｄ１５５.８，１１８.５，７７.７，４９.３，４８.６，４７.３，４４.７，３８.７，２９.６，２８.１，２７.
４，２７.３，１８.３が得られた（文献の値と一致した）。
【０１８１】
Ｄ（９３g，３１２mmol）のジクロロメタン（２００mＬ）中溶液をジ炭酸ジ−tert−ブチル（８０g，３６７mmol）で強い還流を与える速度で処理した。該反応を室温で１６時
間撹拌し，シリカ３００cm3に吸着させた。これを，真空中，濃縮乾固し，シリカカラム
（乾燥シリカ１０００cm3を含有する１０cmｉ.ｄ.）の上部に付した。該カラムをヘキサ
ンから酢酸エチル−ヘキサン（３：２）の勾配液で洗浄した。同様のフラクションを合わせ，濃縮して，生成物Ｅ（８９g）（４９％）を得た。
【０１８２】
Ｅ（８９g，１７９mmol）および二水酸化パラジウム（２０g）の酢酸（３００mＬ）中
溶液を，室温で２時間，５５ｐ.ｓ.ｉ.水素で水素添加した。該反応を濾過し，濃い油状
物に濃縮した。この物質をジクロロメタンに溶解させ，平衡相のpＨが塩基性（pＨ１４）になるまで，１ＮＮaＯＨで処理した。ジクロロメタンを取り出し，水性層をジクロロメ
タンでさらに３回洗浄した。有機洗液を合わせ，乾燥させ，油状物に濃縮した。ジクロロメタンからメタノール−ジクロロメタン−イソプロピルアミン（１０：９０：１）までの勾配液を用いてクロマトグラフィー（シリカ）に付して，生成物Ｆ（５５g）（６１％）
を得た。
【０１８３】
前記のとおり，鎖伸長を繰り返した。Ｆ（５５g，１１０mmol）のメタノール中溶液を
アクリロニトリル（６.１g，１１６mmol）で処理し，ＴＬＣ分析によって示されるように反応が完了するまで，室温で撹拌した。該反応を濃縮し，ジクロロメタンに溶解させ，ジ炭酸ジ−tert−ブチル（２６.４g，１２１mmol）で処理した。該反応を，完了するまで室温で撹拌し，生成物を，ヘキサンから酢酸エチル−ヘキサン（３：２）の勾配液を用いて
クロマトグラフィー（シリカ）に付して精製した。これにより，純粋なＧ（３２g）（４
９％）および半純粋な物質（主としてＧを含有する）２３gを得た。Ｇ（３２g，４９mmol）および二水酸化パラジウム（３２g）の酢酸（３００mＬ）中溶液を，室温で２時間，５５p.s.i.水素で水素添加した。該反応を，Ｆを生じる反応についてと同一の形態で処理した。これにより，生成物Ｈ２４g（Ｆから３３％）を得た。前記のとおり，鎖伸長を繰り
返して，ポリアミンＩ（２１g）（７０％）を得た。
【０１８４】
５−フルオロインドール−３−酢酸（２g，１０.４mmol）およびｐ−ニトロフェノール（１.６g，１１.６mmol）のジクロロメタン（２５０mＬ）中溶液をＤＣＣ（２.４g，１１.６mmol）で処理し，該反応を室温で２４時間撹拌した。該反応混合物をポリアミンＩ（
２１g，２５mmol）のジクロロメタン中撹拌溶液中に直接濾過した。該反応を室温で４時
間撹拌し，ジクロロメタンからメタノール−ジクロロメタン−イソプロピルアミン（５０：９５０：１）の勾配液を用いてクロマトグラフィー（シリカ）に付して，生成物Ｊ（８.７g）（出発インドールから８５％）を得た。
【０１８５】
Ｊ（８.７g，８.８mmol）のアセトニトリル（１.８Ｌ）中溶液を濃ＨＣl（２００mL）
で処理し，該反応を，室温で４時間，アルコン下で撹拌した。該反応を濾過し，沈殿物を回収して，化合物４（５.５３g）（９３％）を得た。該物質は，分析用ＲＰ−ＨＰＬＣによって純度９８.７％であることが判明した。
ＵＶmax（０.１％ＴＦＡ）２８４nm（ε６１４０）。
【化２９】
2014166987.tif 000030
【０１８６】
化合物５の合成は，以下のとおり行った。化合物６，７，８および１０は，以下に記載した以外は同様の方法で調製した。
【０１８７】
ジアミノペンタン（４９g，０.４８mmol）およびトリエチルアミン（４８g，０.４３mmol）のジオキサン２００mＬ中溶液にジ炭酸ジ−tert−ブチル（５３.４g，ジクロロメタ
ン２００mＬ中０.１４mmol）の溶液を３０分間かけて添加した。該反応をさらに２時間撹拌し，次いで，真空中，溶媒を除去した。得られた固体をエーテル中に取り，５０mＭ水
酸化ナトリウムで３回，食塩水で１回洗浄し，硫酸ナトリウムで乾燥させ，真空中，濃縮した。得られた油状物を２０％酢酸エチル／ヘキサンに溶解させ，９cm×２０cmシリカカラムに付した。該カラムを２０％〜３５％酢酸エチル／ヘキサンで，次いで，５％エタノール／クロロホルムで，最後に，５％エタノール／５％イソプロピルアミン／クロロホルムで溶離した。生成物を含有する（ＧＣ−ＭＳによって同定した）フラクション（最終溶媒で溶離した）をプールし，真空中，濃縮して，化合物Ａ（２０.１g）を得た。
【０１８８】
ベンズアルデヒド（１１g，０.１０４mmol）および化合物Ａ（２０.１g，０.０９９mol）を一緒に混合し，渦巻撹拌した。２０分後，無水エタノール２０mＬを添加し，さらに
１０分間撹拌し，次いで，真空中，エタノールおよび水を除去した。油状物を乾燥エタノール５０mＬ中に取り，これをホウ水素化ナトリウム（３.７４g，０.０９９mol）に添加
した。該反応を室温で一晩撹拌した。溶媒を真空除去し，残留物をエーテルおよび５０m
Ｍ水酸化ナトリウム中に取った。水層を分離し，エーテル層を５０mＭ水酸化ナトリウム
で２回，食塩水で１回洗浄し，硫酸ナトリウムで乾燥させ，真空中，濃縮して，化合物Ｂ（２８.８g）（９９％）を得た。
【０１８９】
化合物Ｂ（２８.８g，０.０９８５mol）をアセトニトリル４００mＬに溶解させ，次い
で，フッ化カリウム／セライト（２２.９g，０.１９７mol）およびＮ−(３−ブロモ−プ
ロピル)フタルイミド（３９.６１g，０.１４７mol）を添加した。反応をアルゴン下で１
０.５時間加熱還流した。冷却後，該反応を濾過し，固体をアセトニトリルで洗浄した。
合わせたアセトニトリル溶液を，真空中，濃縮して，濃い黄色の油状物を得た。該油状物をエタノール１Ｌ中に取り，これにヒドラジン９.３mＬを添加した。該溶液をアルゴン下で２.２５時間加熱還流した。溶媒を真空除去し，残留物をエーテルおよび５０mＭ水酸化ナトリウム中に取った。エーテル層を分離し，硫酸ナトリウムで乾燥させ，真空中，ストリップして，粗製化合物Ｃ（３３.４g）を得た。該粗製物質を９cm×３０cmシリカカラム上でのクロマトグラフィーに付してジクロロメタン／メタノール／イソプロピルアミン（９４：５：１）で溶離して，化合物Ｃ（２６.９g）を得た。
【０１９０】
ベンズアルデヒド（８.５４g，０.０８１mol）および化合物Ｃ（２６.９g，００７６７mol）を一緒に混合し，渦巻撹拌した。３０分後，無水エタノール２０mＬを添加し，さらに４５分間撹拌し，次いで，真空中，エタノールおよび水を除去した。油状物を乾燥エタノール８０mＬ中に取り，これにホウ水素化ナトリウム（２.９g，０.０７６７mol）を添
加した。該反応を室温で一晩撹拌した。溶媒を真空除去し，残留物をエーテルおよび５０mＭ水酸化ナトリウム中に取った。水層を分離し，エーテル層を５０mＭ水酸化ナトリウムで２回，食塩水で１回洗浄し，炭酸カリウムで乾燥させ，真空中，濃縮して，化合物Ｄ（３２.６g）（９６％）を得た。
【０１９１】
化合物Ｄ（３２.６g，０.０７４２mol）をアセトニトリル３００mＬに溶解させ，次い
で，フッ化カリウム／セライト（１７.２４g，０.１４８mol）およびＮ−(３−ブロモ−
プロピル)フタルイミド（２９.８３g，０.１１１mol）を添加した。該反応をアルゴン下
で１５.２５時間加熱還流した。冷却後，該反応を濾過し，固体をアセトニトリルで洗浄
した。合わせたアセトニトリル溶液を真空中でストリップした。油状物をエタノール７５０mＬ中に取り，これにヒドラジン７mＬを添加した。該溶液をアルゴン下で２時間加熱還流した。溶媒を真空除去し，残留物をエーテルおよび５０mＭ水酸化ナトリウム中に取っ
た。エーテル層を分離し，硫酸ナトリウムで乾燥させ，真空中でストリップした。粗製物質を９cm×３０cmシリカカラム上でのクロマトグラフィーに付してジクロロメタン／メタノール／イソプロピルアミン（９４：５：１）で溶離して，化合物Ｅ（３１.９g）を得た。
【０１９２】
化合物Ｅ（１８.２２g，３６.７mmol）およびトリ−ＣＢＺ−アルギニンＮ−ヒドロキ
シスクシンイミドエステル（２５g，３７.１mmol）をジクロロメタン１００mＬに溶解さ
せ，室温で２日間，撹拌した。該反応混合物をクロロホルムで希釈し，５０mＭ水酸化ナ
トリウムで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ，溶媒を真空除去して，化合物Ｅ（４０.４g）を得た。この物質をさらには精製せずに次工程で用いた。
【０１９３】
化合物Ｆを５０％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン４００mＬに溶解させ，２時間撹
拌した。溶媒を真空除去し，残留物をクロロホルム／１００mＭ水酸化ナトリウム中に取
った。クロロホルム層を分離し，硫酸ナトリウムで乾燥させ，真空中，ストリップした。粗製化合物Ｇを精製せずに次工程で用いた。
【０１９４】
工程Ｇからの化合物Ｇの全て（約３６mmol）をＢoc−アスパラギン−ニトロフェニルエ
ステル（１２.７２g，３６mmol）と一緒にジクロロメタン１７５mＬに溶解させた。該反
応を室温で２日間撹拌し，次いで，クロロホルム中で希釈し，５０mＭ水酸化ナトリウム
で５回，食塩水で１回抽出し，硫酸ナトリウムで乾燥させ，真空中，ストリップした。粗製油状物を９cm×３０cmシリカカラム上でのクロマトグラフィーに付してジクロロメタン／メタノール／イソプロピルアミン（９４：５：１）で溶離して，化合物Ｈ（２９.３g）を得た。
【０１９５】
化合物Ｈ（７.２９g，６.３mmol）を５０％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン５０mＬに溶解させ，アルゴン下で１時間撹拌した。溶媒を真空除去し，残留物をクロロホルムおよび５０mＭ水酸化ナトリウムに溶解させた。層を分離し，水層をクロロホルムでさらに
１回抽出した。合わせたクロロホルム抽出物を食塩水で洗浄し，炭酸カリウムで乾燥させ，真空中，ストリップした。残留固体を少量のクロロホルムに溶解させ，エーテルを用いて沈殿させた。固体を濾過し，エーテルで洗浄し，真空乾燥させて，化合物Ｉ（５.６１g）を得た。
【０１９６】
化合物Ｉ（２１４mg，０.２mmol）をクロロホルム２mＬに溶解させた。この溶液に２−メトキシ−フェニル酢酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（５８mg，０.２２mmol
）を添加し，該溶液を室温で一晩撹拌した。該反応混合物をクロロホルムで希釈し，希水酸化ナトリウムで洗浄した。クロロホルム層を分離し，硫酸ナトリウムで乾燥させ，真空中，ストリップして，化合物Ｊを得，これを直接次工程で用いた。
【０１９７】
工程Ｊからの化合物Ｊの全てを酢酸５mＬに溶解させた。水酸化パラジウム−炭（１０
０mg）を添加し，該反応を水素下（水素充填バルーンから）に置き，一晩撹拌した。該反応を０.２ミクロンのシリンジフィルターを介して濾過して触媒を除去し，得られた溶液
を凍結乾燥させた。残留物を０.１５トリフルオロ酢酸に溶解させ，Ｃ−１８カラム（１
０mm×２５０mmＶydac Ｃ−１８）上でのクロマトグラフィーに付してアセトニトリルで
溶離した。生成物を含有するフラクションを凍結乾燥させて，ＴＦＡ塩として標記化合物５（９０mg）を得た。
【０１９８】
化合物６の合成は，工程Ｈにおいて，化合物Ｇを，Ｂoc−アスパラギンｐ−ニトロフェニルエステルの代わりにＢoc−フェニルアラニンＮ−ヒドロキシスクシシンイミドエステルと反応させた以外は，化合物５についての方法と同様の方法で行った。
【０１９９】
化合物７の合成は，工程Ｈにおいて，化合物ＧをＢoc−アスパラギンｐ−ニトロフェニルエステルの代わりにＢoc−ロイシンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと反応させた以外は，化合物５についての方法と同様の方法で行った。
【０２００】
化合物８の合成は，工程Ｆにおいて，化合物Ｅをトリ−ＣＢＺ−アルギニン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルの代わりにＣＢＺ−リシンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと反応させること以外は，化合物５についての方法と同様の方法で行った。
【０２０１】
化合物１０の合成は，工程Ｊにおいて，化合物Ｉを２−メトキシフェニル酢酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルの代わりに２−ベンジルオキシフェニル酢酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルにカップリングさせること以外は，化合物５についてと同様の方法で行った。
【０２０２】
【化３０】
2014166987.tif 000031
【化３１】
2014166987.tif 000032
【０２０３】
化合物９の合成は，以下のとおり行った：
１,３−ジアミノプロパン（１００g，１.３５mol）のメタノール（１００mＬ）中溶液
にアクリロニトリル（７９g，１.４８mol）を１０分間かけて滴下した。該反応を室温で
４時間撹拌し，油状物に濃縮した。この物質を減圧下で蒸留し，Ｎ−シアノエチル−１,
３−ジアミノプロパン，Ａ（６６g）（３９％）を９５〜１１５℃の沸騰範囲で回収した
。
【０２０４】
Ａ（６６g，５２０mmol）のジクロロメタン（１Ｌ）中溶液にジ炭酸ジ−tert−ブチル
（２５０g，１.１４mol）を添加した。該反応を室温で１６時間撹拌した。この後，該反
応を１.０ＮＮaＯＨ（１回）で洗浄し，無水炭酸カリウムで乾燥させ，油状物に濃縮した。ヘキサンから酢酸エチル−ヘキサン（１：１）までの勾配液を用いてクロマトグラフィ
ー（シリカ）に付して，生成物Ｂ（７３g）（４３％）を得た。
【０２０５】
Ｂ（７３g，２２２mmol）および二水酸化パラジウム（１０g，２０％Ｐd）の酢酸（７
５０ml）中溶液を，室温で４時間，５５ｐ.ｓ.ｉ.水素下で水素添加した。該反応混合物
を濾過し，触媒を酢酸（３×１００mＬ）で洗浄した。濾液および酢酸洗液を合わせ，濃
い油状物に濃縮した。この物質をジクロロメタン（１Ｌ）および１ＮＮaＯＨ（１Ｌ）の
間で平衡化させた。有機層を分離し，無水Ｋ2ＣＯ3で乾燥させ，濃縮して，生成物Ｃ（７３.５g）（１００％）を得た。
【０２０６】
Ｃ(６９.６g，２１０mmol)のメタノール（３００mＬ）中溶液をアクリロニトリル（１
１.２g，２１１mmol）で１０分間滴下処理し，該反応を室温で１６時間撹拌した。この後，該反応を油状物に濃縮した。この物質のジクロロメタン（３００mＬ）中溶液をジ炭酸
ジ−tert−ブチル（４６.１g，２１１mmol）で処理し，該反応を室温で１６時間撹拌した。この後，該反応混合物を油状物に濃縮した。ヘキサンから酢酸エチル−ヘキサン（１：１）までの勾配液を用いてクロマトグラフィー（シリカ）に付して，生成物Ｄ（７９.５g）（７７％）を得た。
【０２０７】
Ｄ（７９.５g，１６２mmol）および二水酸化パラジウム（４g，２０％Ｐd）の酢酸（８００mＬ）中溶液を，室温で４時間，５ｐ.ｓ.ｉ.水素で水素添加した。この後，該反応混合物を濾過し，触媒を酢酸（３×１００mＬ）で洗浄した。濾液および酢酸洗液を合わせ
，濃い油状物に濃縮した。この物質をジクロロメタン（１Ｌ）および１ＮＮaＯＨ（１Ｌ
）の間で平衡化した。有機層を分離し，無水炭酸カリウムで乾燥し，濃縮して，生成物Ｅ（７９g）（１００％）を得た。
【０２０８】
Ｅ(１.４g，２.８７mmol)，５−フルオロ−インドール−３−酢酸(５０７mg，２.６２mmol)，および１−トリヒドロキシベンゾトリアゾール（８５８mg，６.３５mol）の溶液をＤＭＦ（５mＬ）中で混合し，クロロホルム（５mＬ）中のＤＣＣ（５９４mg，２.８８mmol）で処理した。該反応混合物を室温で４時間撹拌し，次いで，濾過し，濃縮した。ジク
ロロメタンからメタノール−ジクロロメタン（１：９）までの勾配液を用いてクロマトグラフィー（シリカゲル）に付して，生成物Ｆ（１.１g）（５８％）を得た。
【０２０９】
アミドＦ（１.１g，１.６６mmol）のアセトニトリル（３６mＬ）中溶液を濃ＨＣl（４mＬ）を用いて１分間かけて滴下処理した。該反応を室温で４時間撹拌した。アセトニトリルを真空蒸発させ，粗製生成物を，全容量１０mＬまで水に溶解させた。この物質を，０.１％ＨＣlからアセトニトリルまでの勾配液を用いて，１０個のアリコート（１mＬ）において，ＶyadacＲＰ（Ｃ18，２０×２.５cm ｉ.ｄ.）を介してクロマトグラフィーに付し
，２８０nmで光学密度を測定して，化合物９（４８３mg）（８０％）を得た。ＦＡＢＭＳの測定値（Ｍ+Ｈ）ｍ／ｚ＝３６４。
【０２１０】
【化３２】
2014166987.tif 000033
【０２１１】
化合物１１の合成は，以下のとおり行った：
エチルアミン・塩酸塩（１００g，１.２３mol）のメタノール（５００mＬ）中溶液を０℃に冷却し，トリエチルアミン(１３０g，１.２９mol)，次いで，アクリロニトリル（６
５.２g，１.２３mol）で処理した。次いで，反応を室温に加温し，１６時間撹拌した。これにジクロロメタン（３００mＬ）中のジ炭酸ジ-tert−ブチル（２６８g，１.２３mol）
を添加した。該反応を室温で４時間撹拌し，濃縮し，ジエチルエーテルに溶解させた。これを１０％ＨＣl（３回），０.１Ｎ  ＮaＯＨ（３回）および食塩水（１回）で洗浄した
。エーテルフラクションをＫ2ＣＯ3で乾燥させ，濃縮して，油状物として生成物Ａ（２２０g）（９１％）を得た。ＧＣ−ＭＳ（Ｒt＝３.９６４分）ｍ／ｚ（相対強度）１９８（
Ｍ+，２），１４３(７)，１２５(２７)，９７(３１)，５７(１００)。
【０２１２】
Ａ（５０g，２５３mmol）および二水酸化パラジウム（５g）の酢酸（３００mＬ）中溶
液を，室温で１６時間，７０ｐ.ｓ.ｉ.水素で水素添加した。該反応を濾過し，触媒を酢
酸（３回）で洗浄した。濾液および酢酸洗液を合わせ，濃い油状物に濃縮した。この物質をジクロロメタン（５００mＬ）に溶解させ，平衡化相のpＨが塩基性（pＨ１４）になる
まで，１ＮＮaＯＨで処理した。有機層を除去し，Ｋ2ＣＯ3で乾燥させ，濃縮して，油状
物として生成物Ｂ（３９.０６g）（７６％）を得た。
【０２１３】
Ｂ（３９.０６g，１９３.４mmol）のメタノール（５０mＬ）中溶液をベンズアルデヒド（２０.５g，１９３.４mmol）および無水ＭgＳＯ4で処理した。該反応を室温で８時間撹
拌し，ホウ水素化ナトリウム（７.３g，１９３mmol）のエタノール（３００mＬ）中溶液
中に直接注いだ。該反応を室温で４時間撹拌し，希ＨＣlでクエンチし，真空中，濃縮し
た。酸性溶液を１ＮＮaＯＨで塩基性化し，該生成物をエーテル中に抽出した。エーテル
層を乾燥させ，濃縮して，油状物として生成物Ｃ １９.５g（３５％）を得た。
【０２１４】
Ｃ（１９.５g，６６.８mmol）のアセトニトリル（１００mＬ）中溶液をＮ−(３−ブロ
モプロピル)フタルイミド(１９.７g，７３mmol)，ＫＦ−セライト（８.５g，５０％ＫＦ
）で処理し，１６時間還流させた。次いで，該反応を濾過し，濃縮して，中間体Ｄを得た。この物質のメタノール（５００mＬ）中溶液をヒドラジン（１５mＬ）で処理し，４時間還流させた。この後，該反応を白色固体に濃縮し，エーテル−１ＮＮaＯＨに溶解させた
。水性層を取り出し，残存するエーテルを１Ｎ ＮaＯＨ（３回），食塩水で洗浄し，油状物に濃縮した。クロロホルムからクロロホルム−メタノール（９：１）までの勾配液を用いてクロマトクラフィー（シリカ）に付して，透明な油状物として生成物Ｅ（６.４７g）（２８％）を得た。
【０２１５】
Ｅ（６.４７g，１８.５mmol）のメタノール（５０mＬ）中溶液をベンズアルデヒド（２.０６g，１９.５mmol）および無水ＭgＳＯ4で処理し，室温で８時間撹拌した。この後，
該反応をホウ水素化ナトリウム（１g，２６mmol）のエタノール（３００mＬ）中溶液中に直接注ぎ，室温で４時間撹拌した。該反応を希ＨＣlでクエンチし，濃縮した。この物質
をエーテル中に懸濁させ，pＨ１４まで１ＮＮaＯＨで処理した。エーテル層を分離し，Ｋ2ＣＯ3で乾燥させ，濃縮し，油状物として中間体Ｆ（６.２３g）を得た。この物質のアセトニトリル（５０mＬ）中溶液をＮ−(３−ブロモプロピル)フタルイミド(５.４g，２０mmol)，ＫＦ−セライト（２.３g）で処理し，１６時間還流させた。該反応を濾過し，濃縮
した。メタノール（３００mＬ）中の中間体Ｇを含有するこの物質をヒドラジン（１０mＬ）で処理し，４時間還流させた。この後，該反応を白色固体に濃縮し，エーテル−１ＮＮaＯＨに溶解させた。水性層を取り出し，残存するエーテルを１Ｎ ＮaＯＨ（３回），食
塩水で洗浄し，油状物に濃縮した。クロロホルムからクロロホルム−メタノール（９：１）までの勾配液を用いてシリカを介してクロマトグラフィー（シリカ）に付して，透明な油状物として生成物Ｈ（４.５g）（４９％）を得た。
【０２１６】
５−フルオロ−３−インドール酢酸（２g，１０.４mmol）およびｐ−ニトロフェノール（１.６g，１１.６mmol）のクロロホルム−ＤＭＦ（１００：１，２００mＬ）中溶液をＤＣＣ（２.１８g，１０.６mmol）で処理し，該反応を室温で１６時間撹拌した。活性エス
テルＩを含有する反応混合物をＨ（４.５g，９mmol）の撹拌溶液中に直接濾過した。この反応を室温で４時間撹拌し，エーテル３００mＬ中に注いだ。エーテル層を１ＮＮaＯＨ(
６回)，食塩水で洗浄し，乾燥させ，油状固体に濃縮した。この物質を，クロロホルム−
メタノールを用いて小さなシリカプラグを介してクロマトグラフィーに付して，中間体Ｊを得た。この物質および触媒量の二水酸化パラジウムの酢酸（２００mＬ）中溶液を，室
温で２時間，６０ｐ.ｓ.ｉ.水素下で水素添加した。該反応を濾過し，触媒を酢酸（３回
）で洗浄した。濾液および洗液を合わせ，濃縮して，濃い油状物としてＫを得た。この物質のアセトニトリル（２０mＬ）中溶液を濃ＨＣl（２mＬ）で処理し，該反応を，室温で
２時間，窒素下で撹拌した。該反応を濾過し，沈殿物（粗製化合物１１）をＨ2Ｏ（１５mＬ）に溶解させた。該生成物の濃度は，ＵＶによって２３３mＭと測定された。分析用Ｒ
ＰＨＰＬＣは，該生成物が純度９１％であることを示した。この物質の一部（アリコート１００μＬ）を，０.１％ＨＣlからアセトニトリルまでの勾配液（１％／分）を用いてＶydacＲＰ（Ｃ18，２５×２cm）を介してクロマトグラフィーに付して，２８０nmでの光学密度をモニターして，純粋な化合物１１を得た。ＵＶmax（０.１％ＴＦＡ）２８４nm(ｅ
６１４０)。
【０２１７】
【化３３】
2014166987.tif 000034
【０２１８】
化合物１２の合成は，以下のとおり行った：
４,９−ジオキサ−１,１２−ドデカンジアミン（５０g，２４５mmol）のジオキサン（
５００mＬ）中溶液をジ炭酸ジ−tert-ブチル（５.８８g，２７mmol）のジオキサン（３００mＬ）中溶液で６０分間かけて滴下処理した。該反応を室温で２４時間撹拌し，白色固
体に減少させた。この物質を水−ヘキサンに分配させた。有機フラクションおよび水性フラクションのＧＣ−ＭＳは，生成物Ａを有するヘキサンフラクション中の二付加物および水性フラクション中の出発ジアミンを示した。水性層を分離し，エーテルで洗浄した。ＧＣ−ＭＳ分析は，エーテル層中の生成物Ａおよび水性層中の出発ジアミンを示した。エーテル層を分離し，硫酸ナトリウムで乾燥させ，濃縮して，透明な油状物として生成物Ａ（１０.２g）（１４％）を得た。ＧＣ−ＥＩＭＳ（Ｒt＝８.８６分），ｍ／ｚ（相対強度）２０５(Ｍ+１,５)，１４８(５９)，１３０(１６)，１１４(１７)，１００(１６)，７４(
６１)，５８(１００)。
【０２１９】
５−フルオロ−インドール−３−酢酸（２g，１０.４mmol）およびｐ−ニトロフェノール（１.７３g，１２.４mmol）のクロロホルム−ＤＭＦ（７５：１，１２５mＬ）中溶液をＤＣＣ（２.２５g，１０.９mmol）で処理し，該反応を室温で２４時間撹拌した。次いで
，これをＡ（５.２g，１７.１mmol）のクロロホルム（１００mＬ）中撹拌溶液中に直接濾過した（ＤＣＵを除去）。この添加後，トリエチルアミン（２g，２０mmol）を添加し，
反応を室温で４時間撹拌した。溶液をエーテル（６００mＬ）に添加し，１ＮＮaＯＨ（６×１００mＬ），１０％ＨＣl（１×１００mＬ）および食塩水で洗浄した。有機層を乾燥
させ(硫酸ナトリウム)，透明な油状物に濃縮した。クロロホルム−メタノール（５０：１）を用いてクロマトグラフィー（シリカ）に付して，透明な油状物として生成物Ｂ（４.
９３g）（インドールからの９９％）を得た。
【０２２０】
化合物Ｂ（４.９３g，１０.３mmol）のアセトニトリル（５０mＬ）中溶液を濃ＨＣl（
５mＬ）で処理し，該溶液を室温で４時間撹拌した。真空中で溶媒を蒸発させ，水から凍
結乾燥させて，濃い油状物として化合物１２（５.２６g，９９％）を得た。1Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤＣl3，遊離塩基）ｄ９.９２(１Ｈ,ｂｒ ｓ），７.３０(１Ｈ,ｄｄ,Ｊ＝９Ｈz,Ｊ＝４Ｈz)，７.２０(１Ｈ,ｄｄ,Ｊ＝９Ｈz,Ｊ＝２Ｈz)，７.１９(１Ｈ,ｓ)，６.９４(１Ｈ,ｄ
ｔ,Ｊ＝９Ｈz,Ｊ＝２)，６.３０(１Ｈｂｒ ｔ)，３.６７(２Ｈ,ｓ)，３.５６(２ｈ,ｔ,Ｊ＝６ｈz)，３.４０(２Ｈ,ｔ,Ｊ＝６Ｈz)，３.３２(４Ｈ,ｂｒ ｔ,Ｊ＝６Ｈz)，３.１０(
２Ｈ,ｔ,Ｊ＝７Ｈz)，２.８８(２Ｈ,ｔ,Ｊ＝７Ｈz)，１.７９(２Ｈ,ｐ,Ｊ＝６Ｈz)，１.
７２(２Ｈ,ｂｒｍ)，１.６４(２Ｈ,ｐ,Ｊ＝６Ｈz)，１.４４(２Ｈ,ｍ)，１.３６(２Ｈ,ｍ)；13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣl3，遊離塩基）ｄ１７１.２，１２５.７，１１２.１，１１２.
０，１１０.８，１１０.４，１０４.４，１０３.８，１０３.５，７１.０，７０.９，７
０.０，６９.４，３９.９，３８.５，３３.４，３２.９，２８.８，２６.５，２６.４。
【０２２１】
【化３４】
2014166987.tif 000035
【０２２２】
化合物１３〜１８は，前記に従って標準的な方法で合成した。
【０２２３】
実施例２９：単純化されたアリールアルキルアミン類の合成
化合物２０の合成は，以下のとおり行った： 水素化ナトリウム（１.２１g，５０mmol
）のジメトキシエタン中溶液をシアノメチルホスホン酸ジエチル（８.８６g，５０mmol）で処理し，該反応を室温で４時間撹拌した。これにＤＭＥ中の３,３'−ジフルオロベンゾフェノン（１０g，４６mmol）を添加した。該反応を室温で２４時間撹拌し，Ｈ2Ｏでクエンチし，ジエチルエーテルおよび水に分配させた。エーテルフラクションをＮa2ＳＯ4で
乾燥させ，濃縮した。この物質のＧＣ−ＭＳは，生成物Ａ９０％および出発ベンゾフェノン１０％を示した。
【０２２４】
この物質の，触媒量のＰd(ＯＨ)2を有するエタノール中溶液を，室温で４時間，５５ｐ.ｓ.ｉ.水素で水素添加した。該反応を濾過し，触媒をエタノール（３回）で洗浄した。
濾液およびエタノール洗液を合わせ，濃縮した。この物質のＧＣ−ＭＳは，生成物Ｂ９０％および出発ベンゾフェノン１０％を示した。
【０２２５】
この物質のＴＨＦ中溶液をＴＨＦ中の１Ｍ Ｂ2Ｈ6 ７０mＬ（７０mmol）で処理し，１
時間還流した。冷却後，該反応を６ＮＨＣl（５０mＬ）で処理し，さらに１時間還流させた。冷却後，該反応を１０Ｎ ＮaＯＨでpＨ１４に塩基性化し，エーテルで平衡化させた
。エーテル層を取り出し，１０％ＨＣlで洗浄した。酸性洗液を合わせ，１０ＮＮaＯＨでpＨ１４に塩基性化し，ジクロロメタン（３回）で抽出した。有機洗液を合わせ，Ｎa2Ｓ
Ｏ4で乾燥させ，濃縮して，油状物を得た。この物質のＧＣ−ＭＳは，化合物２０１００
％を示した。ＧＣ−ＥＩＭＳ（Ｒt＝７.１１分）ｍ／ｚ（相対強度）２４７(Ｍ＋,３１)
，２３０(１００)，２１５(３０)，２０１(５２)，１８３(６３)，１３４(２３)，１２１(１６)，１０１(２１)，９５(１５)，７７(１５)。ジエチルエーテル中のこの物質を濾過し，エーテル中１ＭＨＣl ３５mＬで処理した。沈殿物を回収し，乾燥させ，水−エタノ
ールから再結晶して，塩酸塩として化合物２０（１.０４５g）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣl3）ｄ８.２８(３Ｈ,ｂｒ ｓ)，７.２８−７.１７(２Ｈ,ｍ)，７.０２−６.８６(６Ｈ,ｍ)，４.１１(１Ｈ,ｔ,Ｊ＝８Ｈz)，２.８９(２Ｈ,ｂｒ t，Ｊ＝８Ｈz)，２.４８(２Ｈ,
ｂｒｔ,Ｊ＝７Hz)；13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣl3）ｄ １６４.６，１６１.３，１４４.８，１４４.７，１３０.４，１３０.３，１２３.３，１２３.２，１１４.７，１１４.５，１１
４.１，１１３.８，４７.４，３８.４，３２.７。
【０２２６】
【化３５】
2014166987.tif 000036
【０２２７】
化合物２１，化合物３３および化合物３４の合成を以下のとおり行った：
撹拌棒，隔壁，およびアルゴン原料を装着した１００mlの丸底フラスコに，ＴＨＦ ３
０mＬ中の化合物１（２.４３g，１０mmol）を充填した。該溶液を−７８℃に冷却し，１
Ｍ（ＴＨＦ）リチウムビス(トリメチルシリル)アミド１１mＬ（１１mmol）で滴下処理し
た。該反応を−７８℃で３０分間撹拌し，過剰のヨードメタン（５０mmol，３.１mＬ）で滴下処理した。該反応を−５８℃で３０分間撹拌した。該反応からのアリコートのＧＣ−ＥＩ−ＭＳ分析は，出発ニトリル１の消費を示した。該反応を水でクエンチし，ジエチルエーテルで希釈し，分液漏斗に移した。エーテル層を１０％ＨＣl（３回），食塩水（１
回）で洗浄し，無水ＭgＳＯ4で乾燥させ，茶色の油状物に濃縮した。この物質を，減圧下，蒸留して（クーゲロール，１００℃），透明な油状物１.５gを得た。この物質のＧＣ−ＥＩ−ＭＳは，所望の生成物２を含有することを示した。（Ｒt＝７.３５分）ｍ／ｚ（相対強度）２５７(Ｍ+,３)，２０３(１００)，１８３(５９)，１７０(５)，１３３(４)，１
０９(３)；1Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣl3)７.４−６.９(８Ｈ,ｍ)，４.０１(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝１０Ｈz)，３.３８(１Ｈ,ｄｑ,Ｊ＝７,１０Ｈz)，１.３２(３Ｈ,ｄ,Ｊ＝７Ｈz)；13Ｃ−ＮＭＲ
（ＣＤＣl3）１９.４，３０.５，５４.２，１１４.５，１１４.６，１１４.７，１１４.
９，１１５.０，１１５.３，１２３.３，１２３.４，１２３.６，１２３.７，１３０.５
，１３０.６，１３１.７。
【０２２８】
６０ｐ.ｓ.ｉ.水素下，ＥtＯＨ：水酸化ナトリウム水溶液（２当量）（９５：５）中，ラニーニッケルを用いて，２の触媒反応によって，生成物３を合成した。ＧＣ−ＥＩ−ＭＳ（Ｒt＝７.２５分）ｍ／ｚ（相対強度）２６１(Ｍ+,２０)，２４４(３５)，２２９(１
６)，２１５(１７)，２０１(８０)，１８３(１００)，１３３(４２)，１１５(２７)，１
０９(４７)，９５(２０)；1Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤＣl3）７.３−６.８(８Ｈ，ｍ)，３.６２(１Ｈ,ｄ,Ｊ＝１０Ｈz)，２.７０(１Ｈ,Ｍ)，２.４０(２Ｈ,ｍ)，１.７３(２Ｈ,ｍ)，０.９
１(３Ｈ,ｄ,Ｊ＝７Ｈz)。この反応シーケンスにおける生成物３が化合物２１と一致する
ことに注意する。
【０２２９】
１０％ＩＰＡ−ヘキサン（１００mg／mＬ）中の生成物２を，アリコート５００μＬで
，１０ml／分で１０％ＩＰＡ−ヘキサンを用いてＣhiral Ｃel ＯＤ（２.０×２５cm）を介してクロマトグラフィーに付して，２５４nmでの光学密度を測定した。これにより，２つの光学的に純粋な鏡像異性体４および５を得た(分析用キラルＨＰＬＣによって測定し
た；これら２つの化合物の立体化学がこの時に挙げられていなかったことに注意する)。
これら２つの化合物は，それらのＧＣ−ＥＩ−ＭＳおよび1Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおい
て生成物２（前記データ）と同一であった。
【０２３０】
鏡像異性体４および５の各々は，以下の方法で，ジメチルスルフィド−ボラン複合体を用いて別々に分割された。化合物（４または５）のＴＨＦ中溶液を加熱還流し，過剰（２当量）の１Ｍ（ＴＨＦ中）ジメチルスルフィド−ボラン複合体で処理し，該反応を３０分間還流した。この後，該反応を０℃に冷却し，６ＮＨＣlで処理した。該反応を３０分間
還流させた。この後，該反応を分液漏斗に移し，１０Ｎ ＮaＯＨでpＨ＞１２に塩基性化
し，生成物（６または７）をエーテル中に抽出した。エーテル層を食塩水で洗浄し，無水ＭgＳＯ4で乾燥させ，油状物に濃縮した。生成物を５％メタノール−クロロホルムを用いて分取用ＴＬＣによって精製した。個々の鏡像異性体の各々（６および７）は，それらのＧＣ−ＥＩ−ＭＳおよび1Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおいて生成物３（前記データ）と同一
であることが判明した。このスキームにおける生成物６および７は，化合物３３および３４と一致することが判明した。
【０２３１】
【化３６】
2014166987.tif 000037
【０２３２】
化合物２２の合成は，以下のとおり行った。化合物２３は，同様の方法で合成した。
水素化ナトリウム（３.０７g，７６.８mmol）のＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド３５０m
Ｌ中懸濁液にホスホノ酢酸トリエチル（１７.２g，７６.８mmol）をゆっくりと添加した
。１５分後，該溶液に３,３'−ジフルオロベンゾフェノン（１５.２g，６９.８mmol）を
添加し，さらに１８時間撹拌した。該反応混合物を水でクエンチし，水およびエーテルに分配した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し，無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を真空蒸発させて，黄色油状物として３,３−ビス(３−フルオロフェニル)アクリル酸エ
チル１９.７gを得た。
【０２３３】
３,３−ビス(３−フルオロフェニル)アクリル酸エチル（１９.７g，６８.４mmol）のエタノール２００mＬ中溶液に水酸化パラジウム−炭（３.５g）を添加した。該混合物を６
０ｐｓｉの水素下で３時間振盪し，次いで，濾過し，真空蒸発させて，無色油状物として生成物Ａ１９.５gを得た。
【０２３４】
エチルエーテルＡ（１９.２g）を，１０Ｎ水酸化ナトリウム５０mＬと一緒に６日間撹
拌することによって加水分解した。次いで，該反応混合物を水５０mＬで希釈し，濃ＨＣlでpＨ０に酸性化した。水性混合物をエーテルで３回抽出し，該エーテル抽出物を硫酸マ
グネシウムで乾燥させ，蒸発させて，白色粉末として３,３−ビス(３−フルオロフェニル)プロピオン酸を得た。
【０２３５】
３,３−ビス(３−フルオロフェニル)プロピオン酸（１３g，４９.６mmol）を塩化チオ
ニル５０mＬ（６８５mmol）に溶解させ，室温で一晩撹拌した。過剰の塩化チオニルを回
転式エバポレーターで真空除去して，黄色油状物として生成物Ｂ（１３.７g）を得た。
【０２３６】
乾燥ＴＨＦ（１００mＬ）に溶解させた酸塩化物Ｂ（１３.７g，４９mmol）に鉄(III)アセチルアセトナート（０.５２g，１.４７mmol）を添加した。次いで，塩化メチルマグネ
シウム（１６.３mＬ，４９mmol）をシリンジポンプによって１時間かけて添加した。該反応をさらに１時間撹拌し，次いで，エーテル／５％ＨＣl中に添加することによってクエ
ンチした。エーテル層を分離し，５％ＨＣlおよび飽和ＮaＣlで洗浄し，硫酸ナトリウム
で乾燥させた。溶媒を真空蒸発させて，黄色油状物として４,４−ビス（３−フルオロフ
ェニル）−２−ブタノンを得た。粗製油状物を，溶離液としてヘプタン／酢酸エチルを用いてシリカゲル上で精製した。
【０２３７】
エタノール２.５mＬ中の４,４−ビス(３−フルオロフェニル)−２−ブタノン（５.７g
，２１.９mmol）にピリジン（１.９１g，２４.１mmol）およびメトキシルアミン塩酸塩（２.０１g，２４.１mmol）を添加した。該反応を室温で一晩撹拌し，エーテル／５％ＨＣl中に注いだ。エーテル層を分離し，５％ＨＣlおよび飽和ＮaＣlで洗浄し，硫酸ナトリウ
ムで乾燥させた。溶媒を真空蒸発させて，４,４−ビス(３−フルオロフェニル)−２−ブ
タノンのＯ−メチルオキシム６.２６gを得た。
【０２３８】
ＴＨＦ（１５mＬ）中のホウ水素化ナトリウム（４.１g，１０８.３mmol）に四塩化ジルコニウム（６.３１ｇ，２７.１mmol）をゆっくりと添加した。この混合物を１５分間撹拌し，ＴＨＦ（６mＬ）中のオキシム（６.２６g，２１.７mmol）を５分間かけて添加した。室温で３時間撹拌した後，該反応を５０mＭ水酸化ナトリウム，次いで，エーテルをゆっ
くりと添加することによって後処理した。水性層をエーテルで４回抽出し，合わせたエーテル抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を真空蒸発させて，化合物２２（５.３g）を得た。
【０２３９】
【化３７】
2014166987.tif 000038
【０２４０】
化合物２４の合成を以下のとおり行った。化合物２５〜２９は，同様の方法で製造した。
マグネシウム屑（０.９５g，３９.２mmol）の無水ジエチルエーテル１５０ml中懸濁液
を１−ブロモ−３−フルオロベンゼン（６.８３g，３９.２mmol）をシリンジを介して滴
下処理した。１.５時間後，該溶液を，０℃の無水ジエチルエーテル１００ml中のｏ−ア
ニスアルデヒド（５.０g，３６.７mmol）を含有するフラスコにカニューレを介して移し
，２時間撹拌した。該反応混合物を水を用いてクエンチし，水およびエーテルに分配した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し，無水硫酸マグネシウムで乾燥させて，生成物Ａ（７.９０g）（収率９３％）を得た。
【０２４１】
アルコールＡ（７.９０g，３４.０mmol）のジクロロメタン１００ml中溶液にジクロム
酸ピリジニウム（１６.０g，４２.５mmol）を添加し，該反応を２時間撹拌した。該反応
混合物にジエチルエーテル３００mlを添加し，黒色溶液を３０cmのシリカゲルプラグを介して濾過し，さらにエーテル５００mlで洗浄した。真空中，溶媒の蒸発の後，固体をアセトンから再結晶して，生成物Ｂ（７.４５g）（収率９５％）を得た。
【０２４２】
水素化ナトリウム（１.５８g，３９.５mmol）のＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド１００ml中懸濁液にシアノメチルホスホン酸ジエチル（７.０g，３９.５mmol）を添加した。３０
分後，該溶液にケトンＢを添加し，さらに２時間撹拌した。該反応混合物を水でクエンチし，水およびエーテルに分配した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し，無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を真空蒸発させて，薄黄色油状物を得た。
【０２４３】
ガラスボンベ中，該油状物をエタノール１００mlおよび１０Ｎ ＮaＯＨ（２０ml）に溶解させた。該溶液に，水に懸濁した触媒量のラニーニッケル（約１５モル％）を添加した。該反応混合物を，パー・ハイドロジェネーター（ＰarrＨydrogenator）で１２時間，６０ｐ.ｓ.ｉ.Ｈ2下で振盪した。過剰のラニーニッケルを濾去した後，該溶液をクロロホルムで抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し，無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過後，該油状物をクロロホルムおよびメタノール中でシリカゲルカラムに付した。溶媒を真空蒸発させて，薄黄色油状物を得た。ＧＣ−ＥＩＭＡ（Ｒt＝８.１０分）ｍ／ｚ（相対強度）２５９(１００)，２４２(４４)，２１３(４８)，１８３(４２)，１３６(５０)，１０９(９４)，９１(６０)，７７(２５)。次いで，油状物をジエチルエーテル中の塩化水素で酸性化した。エーテルを蒸発させて，薄黄色固体を得，これを熱アセトニトリル中で再結晶して，化合物２４（白色針状物）３.４５g（収率４２.１％）を得た。
【化３８】
2014166987.tif 000039
【０２４４】
化合物３０の合成を以下のとおり行った。化合物３１は，同様の方法で製造した。
無水ジエチルエーテル１５０ml中にマグネシウム屑（０.９５g，３９.１mmol）を含有
する懸濁液に１−ブロモ−３−フルオロベンゼン（６.８５g，３９.１mmol）をシリンジ
を介して滴下処理した。１.５時間後，該溶液を，０℃の無水ジエチルエーテル１００ml
中の３−クロロベンズアルデヒド（５.０g，３５.６mmol）を含有するフラスコにカニュ
ーレを介して移し，２時間撹拌した。該反応混合物を水を用いてクエンチし，水およびエーテルに分配した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し，無水硫酸マグネシウムで乾燥させ
て，生成物Ａ（８.４０g）（収率＞９９％）を得た。
【０２４５】
アルコールＡ（８.４０g，３５.５mmol）のジクロロメタン１００ml中溶液にクロロク
ロム酸ピリジニウム（１５.０g，３９.８mmol）を添加し，１８時間撹拌した。該反応混
合物にジエチルエーテル３００mlを添加し，黒色溶液を３０cmのシリカゲルプラグを介して濾過し，さらにエーテル５００mlで洗浄した。溶媒の蒸発後，固体をアセトンから再結晶して，生成物Ｂ（６.３１g）（収率７６％）を得た。
【０２４６】
水素化ナトリウム（１.２g，２９.６mmol）のＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド１００ml中懸濁液にシアノメチルホスホン酸ジエチル（５.２g，２９.６mmol）をゆっくりと添加し
た。３０分後，該溶液にケトンＢを添加し，さらに６時間撹拌した。該反応混合物を水でクエンチし，水およびエーテルに分配した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し，無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を真空蒸発させて，黄色固体を得た。
【０２４７】
ガラスボンベ（glass bomb）中，該油状物をエタノール１００mlおよび１０ＮＮaＯＨ
（２０ml）に溶解させた。該溶液に，アルミナ上で懸濁した触媒量のロジウム（約３５モル％）を添加した。該反応混合物を，パー・ハイドロジェネーターで２４時間，６０ｐ.
ｓ.ｉ.Ｈ2下で振盪した。過剰のロジウムを濾去した後，該溶液をクロロホルムで抽出し
た。合わせた有機層を食塩水で洗浄し，無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過および真空中の溶媒の蒸発の後，油状物をテトラヒドロフラン１００ml中に取った。ジボラン（２３.４ml，１.０Ｍ）を添加し，溶液を１.５時間還流した。溶媒を真空蒸発し，６ＮＨ
Ｃl（５０ml）を注意深く添加した。該溶液を１時間還流した。冷却した後，該混合物を
１０Ｎ ＮａＯＨでpＨ１４に塩基性化し，ジクロロメタンおよび水に分配した。合わせた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ，濾過した。溶媒の蒸発後，黄色油状物をクロロホルムおよびメタノール中でシリカゲルカラムに付した。溶媒を真空蒸発して，黄色油状物を得た。ＧＣ−ＥＩＭＳ（Ｒt＝８.１５分）ｍ／ｚ（相対強度）２６３(１７)，２４６(２１)，２１１(８４)，１９６(３３)，１８３(１００)，１６５(１９)，１３３(１９)。次いで，該油状物をジエチルエーテル中の塩化水素で酸性化した。エーテルを蒸発して，化合物３０（白色固体）０.９６gを得た。
【０２４８】
【化３９】
2014166987.tif 000040
【０２４９】
化合物３５の合成を以下のとおり行った。化合物３６〜３７は，同様の方法で製造した。
０℃の３−フルオロベンズアルデヒド（３.０g，２４.２mmol）のジエチルエーテル１
５０ml中溶液をテトラヒドロフラン中３.０Ｍ塩化エチルマグネシウム（１２.７ml，２５.４mmol）でシリンジを介して処理した。４時間後，該反応混合物を水でクエンチし，水
およびエーテルに分配した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し，無水硫酸マグネシウムで乾燥させて，生成物Ａ（４.２５g）を得た。
【０２５０】
Ａのジクロロメタン中溶液にクロロクロム酸ピリジニウム（６.３５g，３０.３mmol）
を添加し，１８時間撹拌した。該反応混合物にジエチルエーテル３００mlを添加し，黒色溶液を３０cmのシリカゲルプラグを介して濾過し，さらにエーテル５００mlで洗浄した。溶媒の蒸発後，固体をアセトンから再結晶して，生成物Ｂ（３.０５g）を得た。溶媒を真空蒸発させて，薄黄色油状物を得た。
【０２５１】
水素化ナトリウム（１.１g，２６.４mmol）のＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド１００ml中懸濁液にシアノメチルホスホン酸ジエチル（４.７g，２６.４mmol）を添加した。３０分
後，該溶液にケトンＢを添加し，さらに６時間撹拌した。該反応混合物を水でクエンチし，水およびエーテルに分配した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し，無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を真空蒸発させて，黄色油状物を得た。
【０２５２】
ガラスボンベ中，該油状物をエタノール１００mlおよび１０Ｎ ＮaＯＨ（２０ml）に溶解させた。該溶液に，水に懸濁した触媒量のラニーニッケル（約１５モル％）を添加した。該反応混合物を，パー・ハイドロジェネーターで２４時間，６０ｐ.ｓ.ｉ.Ｈ2下で振盪した。過剰のラニーニッケルを濾去した後，該溶液をクロロホルムで抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し，無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過後，該油状物をクロ
ロホルムおよびメタノール中でシリカゲルカラムに付した。溶媒を真空蒸発して，薄黄色油状物を得た。ＧＣ−ＥＩＭＳ（Ｒt＝３.４５分）ｍ／ｚ（相対強度）１６７(４)，１５０(６３)，１３５(５８)，１０９(１００)，９６(５３)，７５(４８)。次いで，該油状物をジエチルエーテル中の塩化水素で酸性化した。エーテルの蒸発により，薄黄色固体が得られ，これを熱アセトニトリル中で再結晶して，化合物３５（２.２g）を得た。
【０２５３】
【化４０】
2014166987.tif 000041
【０２５４】
化合物３８の合成を以下のとおり行った。
３,３−ビス(３−フルオロフェニル)プロピオニトリル（１.５g，６.１７mmol）の−７０℃のＴＨＦ ２５０mＬ中懸濁液にブチルリチウム（ヘキサン中４.２５mＬ，６.８mmol
）をシリンジによって５分間かけて添加した。該溶液を５分間撹拌し，次いで，ヨウ化メチル（１.７５g，１２.３mmol）を１分間かけて添加した。次いで，該反応混合物を室温
に加温した。エーテルで希釈し，５％ＨＣlおよび水で希釈することによって後処理した
。エーテル層を硫酸ナトリウムで乾燥させ，蒸発させて，黄色油状物としてメチル化したニトリル１.５gを得た。
【０２５５】
０℃のジクロロメタン５０mＬ中の３,３−ビス(３−フルオロフェニル)−２−メチルプロピオニトリル（１.４６ｇ，５.７mmol）に水素化ジイソブチルアルミニウム（１.０２mＬ，５.７mmol）をシリンジによって１０分間かけて添加した。該反応を０℃で３０分間
，次いで，室温でさらに２時間撹拌した。該反応を，１０％ＨＣl（２００mＬ）を添加することによって後処理し，４０℃で３０分間撹拌し，次いで，該生成物をジクロロメタンで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ，蒸発させて，生成物Ａ（１.３６ｇ）
を得た。
【０２５６】
アルデヒドＡ（１.３６g，５.２３mmol）の０℃のエーテル４０mＬ中溶液に臭化メチルマグネシウム（エーテル中５.２３mＬ，５.２３mmol）を添加した。該反応を室温で３時
間撹拌し，次いで希ＨＣlでクエンチした。エーテル層を分離し，硫酸ナトリウムで乾燥
させ，蒸発して，４,４−ビス(３−フルオロフェニル)−３−メチルブタン−２−オール
１.４８gを得た。
【０２５７】
アルコール（１.４g，５.０７mmol）のジクロロメタン３００mＬ中溶液にクロロクロム酸ピリジニウム（１.２g，５.５８mmol）を添加し，該混合物を一晩撹拌した。次いで，
該反応をエーテル１００mＬで希釈し，セライトプラグを介して濾過した。溶媒を蒸発さ
せて，生成物Ｂ（１.３９g）を得た。
【０２５８】
メトキシルアミン塩酸塩（０.４５g，５.３８mmol）およびピリジン（０.４４mＬ，５.３８mmol）のエタノール３０mＬ中溶液にケトンＢ（１.３g，４.９mmol）を添加し，一晩撹拌した。次いで，エタノールを蒸発し，残留物をエーテルおよび１０％ＨＣl中に取っ
た。エーテル層を分離し，１０％ＨＣlで１回洗浄し，硫酸ナトリウムで乾燥し，蒸発し
て，Ｏ−メチルオキシム１.４gを得た。
【０２５９】
ホウ水素化ナトリウム（０.８７ｇ，２３.１mmol）のＴＨＦ（５mＬ）中懸濁液に四塩
化ジルコニウム（１.３５g，５.８mmol）を添加し，該溶液を１５分間撹拌し，次いで，
さらにＴＨＦ５mＬを添加した。次いで，ＴＨＦ（５mＬ）中のＯ−メチルオキシム（１.
４ｇ，４.６mmol）を添加し，該混合物を一晩撹拌した。ＴＨＦを真空蒸発によって除去
し，残留物を１０％水酸化ナトリウムで処理した。発泡が止んだ後，エーテルを添加し，層を分離した。水性層をエーテルで４回抽出し，合わせたエーテル抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させた。エーテルを蒸発させて，化合物３８（１.２５ｇ）を得た。
【０２６０】
【化４１】
2014166987.tif 000042
【０２６１】
化合物３２および化合物３９〜５３を前記の標準的な方法に従って合成した。
【０２６２】
実施例３０：合成したアリールアルキルアミン類の生物特性
実施例２８および実施例２９に記載に従って合成した化合物を実施例に詳述した種々の生物特性について試験した。
【０２６３】
第１表
【表１】
2014166987.tif 000043
【表２】
2014166987.tif 000044
【表３】
2014166987.tif 000045
【０２６４】
ＲＣＧＣアッセイにおけるＩＣ50値の[3Ｈ]ＭＫ−８０１結合アッセイにおけるＩＣ50
値との比較は，本発明のアリールアルキルアミン類がＭＫ−８０１結合部位への結合のものとは異なるメカニズムによるＮＭＤＡ受容体活性を阻害することを示す。ＮＭＤＡ受容体機能を阻害する化合物の濃度は，[3Ｈ]ＭＫ−８０１によって標識された部位で競合す
る濃度よりも数桁低い。しかしながら，これは，化合物１９〜５３によって例示された単純化アリールアルキルアミン類についてまったくない。かかる化合物は，ラット小脳顆粒細胞アッセイにおいてＮＭＤＡ受容体媒介性機能を拮抗するものよりも約１〜５０倍高い範囲の濃度で[3Ｈ]ＭＫ−８０１によって標識された部位に結合する。
【０２６５】
第２表
【表４】
2014166987.tif 000046
【０２６６】
本発明のアリールアルキルアミン化合物類の優れた特性は，ＮＭＤＡ受容体媒介性シナプス伝達を抑制する濃度がＬＴＰを阻害しないという事実によって示される。さらにまた，化合物９および１１などの化合物は，ラットにおける全身系投与の後に血圧降下応答を生じるが，これらの化合物によって生じた血圧降下効果は，比較的短期間のものである(
約３０分間)。さらに，化合物１２および１４は，各々，３７.３μmol／kgｉ.ｖ.および
１５μmol／kg ｉ.ｖ.までの投与量で心臓血管活性を有しない。
【０２６７】
製剤化および投与
ここで説明するように，本発明の有用な化合物およびそれらの医薬的に許容される塩は，神経障害または神経病を試験するのに用いられる。これらの化合物は，典型的には，ヒト患者のための治療において用いられるが，それらは，他の霊長類，ブタ，ウシおよび家禽などの家畜動物，ウマ，イヌおよびネコなどのスポーツ動物ならびにペットのような他の脊椎動物における類似のまたは同一の疾患を治療するためにも用いられる。
【０２６８】
治療用および／または診断用用途において，本発明化合物は，全身および局所または局在化投与を含む種々の投与の形態のために製剤化することができる。技術および製剤化は，一般的に，レミントンズ・ファーマシューティカル・サイエンシズ（Ｒemington'sＰharmaceutical Ｓciences）［マック・パブリッシング・カンパニー(Ｍack Ｐublishing Ｃo.)，ペンシルベニア州イーストン］に開示されている。
【０２６９】
正確な製剤化，投与経路および投与量は，患者の症状を考慮して個々の医師によって選択され得る。(例えば，フィングル（Fingl）ら，ザ・ファーマコロジカル・ベイシス・オブ・セラピューティクス（ＴheＰharmacological Ｂasis of Ｔherapeutics)，１９７５
，第１章，第１頁を参照)。
【０２７０】
診療する医師は，毒性または臓器不全のために，投与を停止，中断または調節する方法および時を知っているだろうということに注意すべきである。逆に言えば，診療する医師は，臨床的応答が充分ではなかった場合，治療をより高いレベルに調節すること（毒性を排除しつつ）も知っているであろう。関心のある腫瘍形成性障害の管理において投与された投与量の多さは，治療されるべき症状の重篤度および投与経路によって変わるであろう。症状の重篤度は，例えば，標準的な予後評価方法によって部分的に評価されてもよい。さらに，投与量およびおそらく投与回数は，個々の患者の年齢，体重，および応答に従っても変わるであろう。前記で検討したものと同一のプログラムを獣医学において用いてもよい。
【０２７１】
治療される特異的な症状によって，かかる薬剤は，全身的または局所的に製剤化および投与されてもよい。製剤化および投与の技術は，レミントンズ・ファーマシューティカル・サイエンシズ［マック・パブリッシング・カンパニー，ペンシルベニア州イーストン］に開示されている。好適な経路としては，いくつか挙げるとすれば，経口，直腸，経皮，膣，経粘膜，または腸投与；筋肉内，皮下，髄内注射，および，鞘内，直接脳室内，静脈内，腹腔内，鼻腔内，または眼内注射を含む非経口デリバリーが挙げられる。
【０２７２】
注射については，本発明の薬剤は，水溶液中で，好ましくは，ハンクス溶液，リンゲル溶液，または生理食塩緩衝液などの生理学的に適合する緩衝液中で製剤化される。かかる経粘膜投与については，透過されるべきバリヤーに適切な浸透剤が製剤化において用いられる。
【０２７３】
本発明のプラクティスについて記載した化合物を全身系投与に適当な投薬に製剤化するための医薬的に許容される担体の使用は，本発明の範囲内である。担体および好適な製造業務の正しい選択について，本発明の組成物，特に，溶液として製剤化された組成物は，静脈内注射によるような非経口投与される。該化合物は，当該技術分野でよく知られている医薬的に許容される担体を用いて経口投与に適切な投薬に容易に製剤化することができる。かかる担体は，本発明の化合物を，治療されるべき患者による経口摂取のための錠剤，丸剤，カプセル剤，液剤，ゲル剤，シロップ剤，スラリー剤，懸濁液剤として製剤化することを可能にする。
【０２７４】
細胞内投与される予定の薬剤は，当業者によく知られている技術を用いて投与される。例えば，かかる薬剤は，リポソーム中に被包され，前記のとおり投与される。リポソームは，水性内部を有する球状の脂質二層構造である。リポソーム形成時に水溶液中に存在する全ての分子は，水性内部に取り込まれる。リポソーム内容物は，共に，外部の微小環境から保護されており，リポソームは，細胞膜と融合するので，細胞質中に有効に運搬される。さらに，それらの疎水性のために，小さな有機分子は，直接細胞内投与される。
【０２７５】
本発明の使用に好適な医薬組成物としては，活性成分がその予定の目的を達成するために有効な量で含有される組成物が挙げられる。有効量の決定は，特に，ここで挙げられた詳細な説明を考慮にいれて，当業者の能力内である。
【０２７６】
該活性成分に加えて，これらの医薬組成物は，活性化合物の医薬的に使用することができる調製物への加工処理を促進する賦形剤および補助剤からなる好適な医薬的に許容される担体を含有する。経口投与のために製剤化された調製物は，錠剤，糖衣丸，カプセル剤または溶液剤の形態であってもよい。
【０２７７】
本発明の医薬組成物は，自体公知の方法で，例えば，慣用の混合，溶解，顆粒化，糖衣丸調製，すりつぶし，乳化，被包化，エントラッピングまたは凍結乾燥プロセスによって，調製される。
【０２７８】
非経口投与用医薬製剤としては，水溶性形態の活性化合物の水溶液が挙げられる。さらに，活性化合物の懸濁液は，適切な油性注射用懸濁液として調製される。好適な凍結乾燥溶媒または賦形剤としては，ゴマ油などの脂肪油，または，オレイン酸エチルまたはトリグリセリドなどの合成脂肪酸油，またはリポソームが挙げられる。水性注射用懸濁液は，カルボキシメチルセルロースナトリウム，ソルビトールまたはデキストランなどの懸濁液の粘性を増加させる物質を含有してもよい。所望により，懸濁液は，好適な安定化剤または非常に濃縮した溶液を調製させるために化合物の溶解性を増加させる薬剤を含有してもよい。
【０２７９】
経口用医薬組成物は，活性化合物を固体賦形剤と混合し，所望により，得られた混合物を摩砕し，顆粒の混合物を加工処理することにより，所望により錠剤または糖衣丸を得るために好適な補形剤を添加した後，得ることができる。好適な賦形剤は，特に，ラクトース，シュークロース，マンニトールまたはソルビトールを含む糖などの充填剤；セルロース調製物，例えば，トウモロコシデンプン，小麦デンプン，米デンプン，ジャガイモデンプン，ゼラチン，トラガカントガム，メチルセルロース，ヒドロキシプロピルメチルセルロース，カルボキシメチルセルロースナトリウム，および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。所望により，架橋ポリビニルピロリドン，寒天，またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムのようなその塩などの崩壊剤を添加してもよい。
【０２８０】
糖衣丸コアに好適なコーティングを付す。この目的のために，濃縮された糖溶液を用い，所望により，アラビアガム，タルク，ポリビニルピロリドン，カルボポールガム，ポリエチレングリコール，および／または二酸化チタン，ラッカー溶液，ならびに好適な有機溶媒または溶媒混合物を含有してもよい。同定のため，または，活性化合物投薬の異なる組合せを特徴付けるために，錠剤または糖衣丸コーティングに染料または顔料を添加してもよい。
【０２８１】
経口用に用いることができる医薬調製物としては，ゼラチンから作られたプッシューフィットカプセル，ならびにゼラチンから作られた軟らかなシールドカプセル，およびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤が挙げられる。プッシューフィットカプセルは，活性成分を，ラクトースなどの充填剤，デンプンなどの結合剤，および／またはタルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤，および，所望により，安定化剤と混合して含有することができる。軟カプセルにおいては，活性成分は，脂肪油，液体パラフィン，または液体ポリエチレングリコールなどの好適な液体中に溶解または懸濁させてもよい。さらに，安定化剤を添加してもよい。
【０２８２】
他の具体例は，以下の請求の範囲内である。
【手続補正書】
【提出日】平成26年1月17日(2014.1.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造：
【化１】
2014166987.tif 000051
［式中，ＸはＯＨまたはＯＣＨ3であり，各Ｒ1は，独立して，１〜５個の炭素原子の低級アルキルであり，および各Ｒ2は，独立して，Ｈまたは１〜５個の炭素原子の低級アルキルであるが，ただし，窒素原子上のＲ1およびＲ2は同一である］
を有する化合物またはその薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】
ＸはＯＨである，請求項１記載の化合物。
【請求項３】
請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容しうる塩を，任意に医薬的に許容される担体との組み合わせで含む，神経障害または神経病を治療するための医薬組成物。
【請求項４】
以下の構造：
【化２】
2014166987.tif 000052
［式中，ＸはＯＨまたはＯＣＨ3であり，各Ｒ1は，独立して，１〜５個の炭素原子の低級アルキルであり，および各Ｒ2は，独立して，Ｈまたは１〜５個の炭素原子の低級アルキルであるが，ただし，窒素原子上のＲ1およびＲ2は同一である］
を有する化合物またはその薬学的に許容しうる塩を含む，神経障害または神経病を治療するための医薬組成物。
【請求項５】
神経障害または神経病が，総体虚血または巣状虚血または出血性発作，頭部外傷，脊髄損傷，低酸素誘発性神経細胞損傷，てんかん，不安または神経変性病である，請求項４記載の医薬組成物。
【請求項６】
神経変性病がアルツハイマー病，ハンチントン病またはパーキンソン病である，請求項５記載の医薬組成物。
【請求項７】
化合物が，神経保護薬，抗痙攣薬，抗不安薬，鎮痛薬，筋肉弛緩薬および／または一般的な麻酔薬中の補助薬である，請求項４記載の医薬組成物。
【請求項８】
化合物が鎮痛薬である，請求項４記載の医薬組成物。