(57)【要約】【課題】  優れた樹状突起負制御剤及びこれを用いる樹状突起正御抑剤のスクリーニング方法を提供すること。【解決手段】  ツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.）、特に好ましくはツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.）の葉の抽出物を有効成分とする樹状突起負制御剤；前記樹状突起負制御は、樹状突起形成抑制、樹状突起退縮、又は樹状突起活性化抑制であるのが好適である。ツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.）の抽出物を用いる樹状突起制御剤のスクリーニング方法。【選択図】図２
2014198670.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.）の抽出物を有効成分とする樹状突起負制御剤。
【請求項２】
前記ツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.）の抽出物が、葉の抽出物である請求項１記載の樹状突起負制御剤。
【請求項３】
前記ツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.）の抽出物が、水、アルコール類、含水アルコール類から選ばれるもので抽出されたものである請求項１又は２記載の樹状突起負制御剤。
【請求項４】
前記ツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.）の抽出物が、緑茶又はウーロン茶の抽出物であることを特徴とする請求項１〜３の何れか１項記載の樹状突起負制御剤。
【請求項５】
前記緑茶が、玉露である請求項４記載の樹状突起負制御剤。
【請求項６】
前記ウーロン茶が、紅ウーロン茶である請求項４記載の樹状突起負制御剤。
【請求項７】
前記樹状突起負制御が、メラノサイト樹状突起負制御である請求項１〜６の何れか１項記載の樹状突起負制御剤。
【請求項８】
前記樹状突起の負制御は、樹状突起形成抑制、樹状突起退縮又は樹状突起活性化抑制である請求項１〜７の何れか１項記載の樹状突起負制御剤。
【請求項９】
ツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.）の抽出物を用いる樹状突起制御剤のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、樹状突起負制御剤及び樹状突起制御剤のスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
樹状突起は、神経細胞が、外部からの刺激や他の神経細胞の軸索から送り出される情報を受け取るために、細胞体から樹木の枝のように分岐した複数の突起のことをいう。
また、近年、神経細胞以外の細胞の樹状突起の役割も注目されている。例えば、成熟したメラニン顆粒を含むメラノソームは、細胞内を移動し、メラノサイトの樹状突起から隣接のケラチノサイトに受け渡されている。この際にメラノサイトの樹状突起の形成が重要と考えられているものの、樹状突起形成の仕組が十分に解明されていない。
このようなことから、樹状突起の制御に関する研究がさらに進められている。
例えば、特許文献１には、神経細胞の再生などに有用な、Ｒａｃ活性促進剤をスクリーニングすべく、Ｒａｃの活性を抑制し、樹状突起を同じレベルに収縮させる技術を提供することが提案されている。
また、例えば、特許文献２には、ミカン科オウバクのエッセンスからなる、メラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤が提案されている。
また、例えば、特許文献３には、酵母抽出物を有効成分とするメラノサイト樹状突起形成抑制剤が提案されている。
しかしながら、樹状突起の形成がどのようなプロセスを経て形成されるかは、依然不明な点があり、樹状突起の形成を制御することが可能な物質のさらなる研究開発が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００６−０６７９４０号公報
【特許文献２】特開２００１−１９９８６６号公報
【特許文献３】特開２００３−２５２７４２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
よって、本発明は、かかる実情に鑑み、優れた樹状突起負制御剤及びこれを用いる樹状突起正制御剤のスクリーニング方法を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
そこで、本発明者らは、鋭意検討した結果、天然由来のため安全性が高いと考えられるツバキ科チャ属チャノキの抽出物が、樹状突起を負制御することを見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、ツバキ科チャ属チャノキの抽出物を有効成分とする樹状突起負制御剤を提供するものである。
前記ツバキ科チャ属チャノキの抽出物が、葉の抽出物であってもよい。
前記植物抽出物が、水、アルコール類、含水アルコール類から選ばれるものであるのが好適である。前記アルコール類が、炭素数１〜４であるのが好適である。前記アルコール類が、メタノール、エタノール、１，３−ブチレングリコールから選ばれるものであってもよい。前記含水濃度が０〜５０vol％であってもよい。
前記ツバキ科チャ属チャノキの抽出物がウーロン茶又は緑茶の抽出物であってもよい。
前記ウーロン茶の抽出物が、紅ウーロン茶であってもよい。
前記緑茶の抽出物が、玉露であってもよい。
前記樹状突起負制御が、樹状突起の形成を抑制すること、樹状突起を退縮させること、樹状突起の活性化を抑制することであってもよい。
前記樹状突起が、メラノサイトの樹状突起であってもよい。
【０００６】
また、本発明は、ツバキ科チャ属チャノキの抽出物を適用することを特徴とする樹状突起制御方法。当該樹状突起制御方法は、樹状突起制御試験に用いる方法又は体外に取り出した若しくは人工的に製造した細胞又は組織に用いる方法であるのが好適である。
また、本発明は、ツバキ科チャ属チャノキの抽出物を用いる樹状突起正制御剤のスクリーニング方法を提供するものである。
【０００７】
ここで、本開示の樹状突起抑制とは、樹状突起の正負抑制のことをいう。当該負制御とは、生命現象のうち活性を抑制する方向の制御のことをいい、当該正制御とは、生命現象のうち活性を促進する方向の制御のことをいう。
樹状突起負制御とは、例えば、樹状突起の形成を抑制すること、樹状突起を退縮させること、樹状突起の活性化を抑制すること等が挙げられる。また、樹状突起正制御とは、例えば、樹状突起の形成が促進されること、樹状突起が伸長すること、樹状突起が活性化すること等が挙げられる。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、優れた樹状突起負制御剤及びこれを用いる樹状突起正御抑剤のスクリーニング方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ウーロン茶抽出物を添加した３０分後にα−メラノサイト刺激ホルモンを添加し、３日培養後のメラノサイトの樹状突起の形成状況を示す写真図である。なお、活性化状態の０（対照）、０．１、０．３、０．５ｖｏｌ％は、ウーロン茶抽出物の最終濃度である。バーの長さは１００μｍである。
【図２】ウーロン茶抽出物を添加した３０分後にα−メラノサイト刺激ホルモンを添加し、３日培養後のメラノサイトの樹状突起の形成抑制効果を示す図である。なお、０ｖｏｌ％（αＭＳＨ無添加）、活性化状態の０（対照）、０．１、０．３、０．５ｖｏｌ％は、ウーロン茶抽出物の最終濃度である。また、縦軸には全細胞に占める樹状突起を有する細胞の割合（％）を示した。
【図３】緑茶抽出物を添加した３０分後にα−メラノサイト刺激ホルモンを添加し、３日培養後のメラノサイトの樹状突起の形成状況を示す写真図である。なお、活性化状態の０（対照）、０．１、０．３、０．５ｖｏｌ％は、緑茶抽出物の最終濃度である。バーの長さは１００μｍである。
【図４】緑茶抽出物を添加した３０分後にα−メラノサイト刺激ホルモンを添加し、３日培養後のメラノサイトの樹状突起の形成抑制効果を示す図である。縦軸は全細胞中の樹状突起細胞の割合を示すものである。なお、０ｖｏｌ％（αＭＳＨ無添加）、活性化状態の０（対照）、０．１、０．３、０．５ｖｏｌ％は、緑茶抽出物の最終濃度である。
【図５】左図は、カシス抽出物を添加した３０分後にα−メラノサイト刺激ホルモンを添加し、３日培養後のメラノサイトの樹状突起の形成状況を示す写真図である。右図は、センプクカ抽出物を添加後にα−メラノサイト刺激ホルモンを添加し、３日培養後のメラノサイトの樹状突起の形成状況を示す図である。なお、０（αＭＳＨ無添加）、０（活性化状態の対照）、１．０ｖｏｌ％は、カシス抽出物、センプクカ抽出物のそれぞれの最終濃度である。バーの長さは１００μｍである。
【図６】左図は、カシス抽出物を添加した３０分後にα−メラノサイト刺激ホルモンを添加し、３日培養後のメラノサイトの樹状突起の形成抑制効果を示す図である。右図は、センプクカ抽出物を添加した３０分後にα−メラノサイト刺激ホルモンを添加し、３日培養後のメラノサイトの樹状突起の形成抑制効果を示す図である。なお、０（αＭＳＨ無添加）、０（活性化状態の対照）、１．０ｖｏｌ％は、カシス抽出物、センプクカ抽出物のそれぞれの最終濃度である。また、縦軸には全細胞に占める樹状突起を有する細胞の割合（％）を示した。
【図７】α−メラノサイト刺激ホルモンを添加した３日後にウーロン茶抽出物を添加し、３日培養後のメラノサイトの樹状突起の退縮状況を示す写真図である。なお、活性化状態の０（対照）、０．３、０．５ｖｏｌ％は、ウーロン茶抽出物の最終濃度である。また、α−メラノサイト刺激ホルモン添加３日後の写真は、代表的な１枚を示した。バーの長さは１００μｍである。
【図８】α−メラノサイト刺激ホルモンを添加した３日後にウーロン茶抽出物を添加し、３日培養後のメラノサイトの樹状突起の退縮効果を示す図である。なお、活性化状態の０（対照）、０．３、０．５ｖｏｌ％は、ウーロン茶抽出物の最終濃度である。バーの長さは１００μｍである。また、縦軸には全細胞に占める樹状突起を有する細胞の割合（％）を示した。
【図９】α−メラノサイト刺激ホルモンを添加した３日後に緑茶抽出物を添加し、３日培養後のメラノサイトの樹状突起の退縮状況を示す写真図である。なお、活性化状態の０（対照）、０．１、０．３、０．５ｖｏｌ％は、緑茶抽出物の最終濃度である。バーの長さは１００μｍである。
【図１０】α−メラノサイト刺激ホルモンを添加した３日後に緑茶抽出物を添加し、３日培養後のメラノサイトの樹状突起の退縮効果を示す図である。縦軸は全細胞中の樹状突起細胞の割合を示すものである。なお、活性化状態の０（対照）、０．１、０．３、０．５ｖｏｌ％は、緑茶抽出物の最終濃度である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本開示に用いられるツバキ科チャ属チャノキは、その種類や産地は特に限定されない。以下の例示から選ばれる１種又は２種以上のものを用いることが可能である。
【００１１】
本開示に用いられるツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.、Camellias sinensis）は、葉、茎、木部、根、実、花等のいずれの部位を抽出に供してもよく、２以上の部位を混合して抽出に供してもよい。抽出物の安定性及び、優れた樹状突起負制御作用の観点から、チャノキの部位としては茎又は葉が好ましく、葉が特に好ましい。
【００１２】
抽出に供するチャノキは、生あるいは乾燥物の別を問わず、また、既製の紅茶、プアール茶等の発酵茶、ウーロン茶、包種茶等の半発酵茶、緑茶、釜煎り緑茶、ほうじ茶等の不発酵茶等を抽出に供してもよい。抽出物の安定性及び、優れた樹状突起負制御作用の観点から、ウーロン茶又は緑茶を抽出に供するのが好ましい。
【００１３】
本開示に用いられるウーロン茶は、ツバキ（Camellia）科チャ属チャノキ（Thea sinensis L.）の葉の半発酵物である。ウーロン茶は種や産地によりそれぞれ発酵度が異なり、武夷岩茶、鉄観音、鳳凰単叢、紅ウーロン茶（香檳とも呼ばれる）、凍頂烏龍茶、文山包種、高山茶等が知られている。発酵度とは発酵が進むに連れ葉が赤くなる面積の程度であり、目視観測のため正確な数値ではないが概ね１５〜８０％とされている。その中でも発酵度が５０％を超えた高発酵度のものを特に紅ウーロン茶と呼ぶ。抽出物の安定性及び、優れた樹状突起負制御作用の観点から、紅ウーロン茶が好ましい。
【００１４】
本開示に用いられる緑茶は、ツバキ（Camellia）科チャ属チャノキ（Thea sinensis L.）の葉を発酵させていない茶である。緑茶は種や産地、製法等により異なり、玉露、煎茶、新茶、かぶせ茶、粉茶、ほうじ茶、抹茶、狭山茶、宇治茶、龍井茶、碧螺春等が知られている。この中でも、収穫前の茶葉を被覆して日光を遮り、アミノ酸を増加させたものを玉露と呼ぶ。抽出物の安定性及び、優れた樹状突起負制御作用の観点から、玉露が好ましい。
【００１５】
本開示に用いられるツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.）抽出物は、上記チャノキをそのまま若しくは粉砕物とした後抽出操作に供するか、乾燥後必要に応じて粉砕して抽出操作に供して調製することができる。乾燥粉砕物は、チャノキの葉、茎、木部、根、実、花等をそのまま乾燥した後粉砕するか、又は生のまま細かく切断した後乾燥することによって調製することができる。   
【００１６】
本発明はチャノキからの抽出物（以下、チャノキ抽出物と略す）を用いたものである。前記チャノキ抽出物の調製法は特に限定はされず、例えばチャノキの葉を、低温（例えば４℃未満）若しくは常温（例えば４〜４０℃）〜加温（例えば４０〜１００℃）下で溶媒により抽出することにより得られる。
【００１７】
抽出に使用する溶媒としては、一般的には水、低級１価アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等）、低級エステル類（酢酸エチル等）、炭化水素（ベンゼン、ヘキサン、ペンタン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、エーテル類（ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジプロピルエーテル）、アセトニトリル等が挙げられる。なお、「低級」における炭素の数は１〜４であるのが好ましい。
【００１８】
好ましい抽出方法の例としては、ツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.）の葉を日光にさらし、もみほぐしたのち釜煎りを行い乾燥し、これに含水濃度０〜１００vol％（好適には含水濃度０〜５０ｖｏｌ％）のエチルアルコール又は１，３−ブチレングリコールを加え、加温して抽出を行ったのち濾過し、得られたろ液を５０℃にて減圧濃縮を行い、軟エキスを得る。この軟エキスに水及び１，３−ブチレングリコールを加えて５０ｖｏｌ％１，３−ブチレングリコール溶液とし、１週間ほど放置して熟成させ、再びろ過を行う方法が挙げられる。ろ過の際に、活性炭等のろ過剤を用いて夾雑物や着色物等の不純物を除去してもよい。なお、含水濃度１００ｖｏｌ％とは水のことである。
【００１９】
前記チャノキ抽出物は、そのまま有効成分として用いてもよいし、必要に応じて、抽出溶媒の除去、ろ過やイオン交換樹脂等の脱臭、脱色等の精製処理を施した後に使用してもよい。さらに液体クロマトグラフィー等の分離精製手段を用いて、活性の高い画分等を得ることも可能である。
【００２０】
前記チャノキ抽出物は、抽出液単独で又は異なる抽出方法にて得られた抽出液を混合して、そのまま用いるか、又は当該抽出物を希釈、濃縮又は乾燥させて、液状、粉末状又はペースト状に調製して用いることもできる。
【００２１】
ところで、樹状突起は細胞間の何らかの受け渡しに関与していると考えられるため、医薬分野及び化粧分野においても樹状突起形成の仕組が研究されている。樹状突起を有する細胞として、例えばプルキンエ細胞やメラノサイト等が知られているが、これらの樹状突起を制御することで、この樹状突起が形成されることによって発生する症状又は状態の予防、治療又は改善等に利用することができる。
例えば、プルキンエ細胞は神経系に関与する細胞であるが、プルキンエ細胞の樹状突起を制御することができる剤があれば、その剤を神経細胞の再生等に利用することも可能である。また、メラニン生成が増大した場合には、メラノサイトの樹状突起を負制御することで、ケラチノサイトへのメラニンの移行を抑制することができ、最終的にシミ、ソバカス等のような色素沈着を抑制する剤に使用することも可能である。
【００２２】
そして、後記実施例に示すように、樹状突起形成抑制試験及び樹状突起形成後の樹状突起退縮試験において、本開示のチャノキ抽出物が、樹状突起形成抑制作用、樹状突起退縮作用等といった樹状突起の負制御が可能であることが認められた。
従って、本開示のチャノキ抽出物は、樹状突起負制御（例えば、樹状突起形成抑制作用、樹状突起退縮作用等）を有するため、当該チャノキ抽出物を含有させて有効成分とする樹状突起負制御剤（例えば、樹状突起形成抑制剤、樹状突起退縮剤等）として使用することが可能である。
本開示のチャノキ抽出物は、樹状突起負制御（例えば、樹状突起形成抑制作用、樹状突起退縮作用等）のために使用してもよく、また樹状突起負制御剤（例えば、樹状突起形成抑制剤、樹状突起退縮剤等）等の上述のような使用を目的とした各種製剤に使用することができ、これら各種製剤を製造するために使用することも可能である。
本開示のチャノキ抽出物は、樹状突起負制御（樹状突起形成抑制作用、樹状突起退縮作用等）を有し、樹状突起形成による各種症状や状態を、予防、改善及び／又は治療を図るための方法に使用することができる。よって、本開示のチャノキ抽出物は、ヒトを含む動物に摂取又は投与して、樹状突起形成による各種症状や状態等の予防、改善及び／又は治療を図るための方法に使用することが可能である。
【００２３】
よって、本開示のチャノキ抽出物は、樹状突起負制御（樹状突起形成抑制作用、樹状突起退縮作用等）のために、皮膚外用剤、化粧料（好適には美白化粧料）、医薬品、医薬部外品、食品や機能性食品（例えば特定保健用食品等）等に配合することが可能であり、本開示の製剤は、これら皮膚外用剤、化粧料等として有用である。
本開示のチャノキ抽出物は、特に皮膚外用剤、化粧料（好適には美白化粧料）、医薬部外品、医薬品等に用いるのが好適であり、皮膚に塗布など接触させる製剤が好適である。皮膚外用剤、化粧料として、例えば化粧水、乳液（水中油型等）、クリーム（油中水型等）、パック化粧料、リキッドファンデーション、軟膏剤、養毛剤等が挙げられる。
【００２４】
本開示のチャノキ抽出物の含有量は、製剤中に、乾燥固形分として好ましくは０．００００１〜５質量％であり、より好ましくは０．０００１〜２質量％である。この範囲内であれば、該植物抽出物を安定に配合することができ、かつ優れた樹状突起負制御作用を発揮することができる。また、抽出液を使用する場合は、溶質である乾燥固形分の含有量が上記範囲内であれば、その抽出液濃度は何ら限定されるものではない。
【００２５】
本開示のチャノキ抽出物は、チロシナーゼ阻害剤、メラニン生成抑制剤、抗炎症剤、メラニン排出促進剤等の樹状突起制御以外の作用機序により美白効果を発揮する薬剤と併用するのが好ましい。これにより、相乗的な美白効果を発揮させることが可能となる。
チロシナーゼ阻害剤及びメラニン生成抑制剤の例としては、Ｌ−アスコルビン酸及びその誘導体、並びにそれらの塩（アスコルビン酸−２−グルコシド、リン酸アスコルビルマグネシウム、リン酸アスコルビルナトリウム、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸等）、ハイドロキノン及びその誘導体（アルブチン等）、トラネキサム酸及びその誘導体（トラネキサム酸セチル、トランス−４−アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸メチルアミド等）、サリチル酸及びその誘導体（４−メトキシサリチル酸等）並びにそれらの塩、エラグ酸及びその誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アデノシン−１−リン酸、リノール酸、５，５’−ジプロピル−ビフェニル２，２’−ジオール、４−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ブタノール又はその誘導体、レゾルシンおよびその誘導体（４−ｎ−ブチルレゾルシノール等）、胎盤抽出物、カミツレエキス，ニコチン酸アミド等が挙げられるが、アスコルビン酸−２−グルコシド、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、又はアルブチンが好ましい。抗炎症剤としては、トラネキサム酸及びその誘導体、グリチルリチン酸ジカリウム等のグリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸ステアリル等のグリチルレチン酸誘導体、サリチル酸及びその誘導体、カミツレエキス等が挙げられるが、トラネキサム酸、グリチルレチン酸ジカリウム又はグリチルレチン酸ステアリルが好ましい。メラニン排出促進剤としてはニコチン酸アミド等のニコチン酸誘導体やアデノシン−１−リン酸及びその誘導体等があげられるが、ニコチン酸アミド又はアデノシン−１−リン酸が好ましい。
【００２６】
なお、前記製剤には、本開示のチャノキ抽出物の他、必要に応じて任意の成分を組み合わせて使用してもよい。他の成分としては、薬学的に許容される成分であればよく、例えば、細胞賦活剤、抗酸化剤、保湿剤、紫外線防止剤、溶剤（水、アルコール類等）、油剤、界面活性剤、増粘剤、粉体、キレート剤、ｐＨ調整剤、乳化剤、安定化剤、着色剤、光沢剤、矯味剤、矯臭剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、浸透圧調整剤、香料等が挙げられ、これらを目的とする製剤に応じて配合すればよい。
また、前記製剤の形態は、特に限定されず、液状、ペースト状、ゲル状、固形状、粉末状等の何れの形態でもよい。
【００２７】
また、本開示のチャノキ抽出物は樹状突起制御方法に使用することができ、当該樹状突起制御方法は、樹状突起制御試験に使用することも可能であり、また動物から採取した樹状突起を有する細胞を原材料として、医薬品（細胞医薬等）；医療材料（人工的代用品又は代替物等）；これらの中間段階の生産物を製造するための方法又はこれらを分析するための方法に使用することも可能である。
【００２８】
また、本開示のチャノキ抽出物は、樹状突起を負制御することから、前記チャノキ抽出物を、樹状突起を正制御することが可能な剤のスクリーニング方法に使用することができる。これにより、樹状突起制御剤又は樹状突起制御作用を有する物質をスクリーニング又は樹状突起制御の評価を行うことが可能である。また、被験物質及びチャノキ抽出物の添加タイミングを同時期又は別々にすることで異なる作用機序の物質を探索することも可能である。
【００２９】
本開示のチャノキ抽出物と被験物質を添加した状態と、樹状突起が形成されていない状態又は樹状突起が負制御されている状態と比較して、樹状突起が伸長した場合、又は樹状突起の形成が促進された場合等の樹状突起が正制御された場合には、被験物質を樹状突起正制御剤として判断することができる。なお、本開示のチャノキ抽出物と既知の樹状突起正制御剤を添加することで、樹状突起が負制御されている状態にすることも可能である。
また、本開示のチャノキ抽出物と既知の樹状突起正制御剤を添加した際の樹状突起形成状態と、当該樹状突起正制御剤と被験物質を添加した際の樹状突起の形成状態とを対比し、本開示のチャノキ抽出物を添加したときよりも樹状突起が負制御されていた場合には、被験物質を良好な樹状突起負抑制剤として判断することができる。
【００３０】
前記判断方法は、特に限定されないが、以下にその一例を挙げる。
例えば、位相差顕微鏡（オリンパス社製）で細胞形態の写真を撮影し、樹状突起保有細胞（双極性の細胞から新たに１箇所以上の樹状突起の形成が確認された細胞）の数を数えて、樹状突起保有細胞数／総細胞数×１００％を算出する。対照との対比により被験物質の樹状突起制御の正負を判断する。
【００３１】
以下に、本開示のチャノキ抽出物を用いた樹状突起正制御剤の探索方法の好適な一例を挙げる。
本開示のチャノキ抽出物の存在下で、メラノサイトを培養し、これに被験物質を加え、メラノサイトの樹状突起の形態変化を観察することにより、樹状突起形成促進剤をスクリーニングすることができる。
このとき、メラノサイト活性化因子を添加してもよい。メラノサイト活性化因子として、例えばα−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ：melanocyte stimulating hormome）、幹細胞増殖因子（ＳＣＦ：Stem cell factor）、エンドセリン−１（Endothelin-1）等が挙げられる。
メラノサイトの場合には、ケラチノサイトへのメラノソームへの移行が促進されるため、白髪改善等の物質探索に応用することができる。
【００３２】
上記樹状突起制御方法、樹状突起制御剤のスクリーニング方法及び樹状突起制御の評価方法における培養条件は、使用する樹状突起を有する細胞に応じた公知の培養条件、培地条件等で行えばよい。
例えば、正常メラノサイトを使用する場合には、正常メラノサイトを培養可能な公知の培養条件で行えばよい。培養増殖用培地として、市販のメラノサイト用培地等を使用してもよい。
培養温度は、使用するメラノサイトの由来に対応する培養可能な温度であればよく、例えばヒト由来の場合２０℃〜４０℃、好ましくは３７℃程度であればよい。二酸化炭素濃度は、５ｖｏｌ％程度であればよい。
【００３３】
また、プルキンエ細胞を用いる場合には、本開示のチャノキ抽出物の存在下で、プルキンエ細胞を公知の培養方法にて培養し、樹状突起が正制御されるのを評価することで、神経再生促進等の物質探索に応用することができる。
【００３４】
なお、本技術は、以下の構成を採用することも可能である。
〔１〕ツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.）の抽出物を有効成分とする樹状突起負制御剤。
〔２〕前記ツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.）の抽出物が、葉の抽出物である〔１〕に記載の樹状突起負制御剤。
〔３〕前記ツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.）の抽出物が、水、アルコール類、含水アルコール類から選ばれるもので抽出されたものである〔１〕又は〔２〕に記載の樹状突起負制御剤。
〔４〕前記ツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.）の抽出物が、緑茶又はウーロン茶の抽出物であることを特徴とする〔１〕〜〔３〕の何れかに記載の樹状突起負制御剤。
〔５〕  前記緑茶が、玉露である〔４〕に記載の樹状突起負制御剤。
〔６〕  前記ウーロン茶が、紅ウーロン茶である〔４〕に記載の樹状突起負制御剤。
〔７〕  前記樹状突起負制御が、メラノサイト樹状突起負制御である〔１〕〜〔６〕の何れかに記載の樹状突起負制御剤。
〔８〕  前記樹状突起の負制御は、樹状突起形成抑制、樹状突起退縮又は樹状突起活性化抑制である〔１〕〜〔７〕の何れかに記載の樹状突起負制御剤。
〔９〕  ツバキ（Theaceae）科チャ属チャノキ（Thea  sinensis  L.）の抽出物を用いる樹状突起制御剤のスクリーニング方法。
【実施例】
【００３５】
以下、実施例、参考例、比較例、試験例、製造例等を挙げ、本発明（本技術）をさらに具体的に説明するが、本発明（本技術）はこれら実施例等に何ら制約されるものではない。
【００３６】
＜製造例１：紅ウーロン茶抽出物の製造＞
紅ウーロン茶（東方美人 発酵度約７０％：台湾製）１００ｇを粉砕し、１Lの５０％エタノール水溶液に入れ、３０℃で２５時間抽出した。不溶物を濾過後、濾液を減圧下で濃縮して固形のウーロン茶抽出物１８ｇを得た。
＜製造例２：凍頂ウーロン茶抽出物の製造＞ 
ウーロン茶（凍頂烏龍茶 発酵度約２０％：台湾製）１００ｇを粉砕し、５０％ジプロピレングリコール溶液1Ｌにて適宜攪拌しながら４０℃で２０時間抽出した。その後、２４時間放置して沈殿物をろ過して除去し、抽出物を得た。本抽出物の固形分濃度は２．０％であった。   
＜製造例３：武夷ウーロン茶抽出物の製造＞ 
ウーロン茶（武夷岩茶 発酵度約４０％：中国製）１００ｇを粉砕し、精製水1Ｌに適宜攪拌しながら冷暗所で７２時間抽出、ろ過した。このろ液が半量になるまで減圧下で濃縮し１，３ブチレングリコール及び精製水を加え１，３ブチレングリコール濃度が３０％になるように調整した。本抽出物の固形分濃度は５．０％であった
＜製造例４：玉露抽出物の製造＞
玉露（日本製）１００ｇを粉砕し、１Ｌの８０％エタノール水溶液に入れ、ゆるやかに加温抽出した。不溶物を濾過後、濾液を減圧下で濃縮して固形の玉露抽出物８．０ｇを得た。
＜製造例５：かぶせ茶抽出物の製造＞ 
かぶせ茶（日本製）１００ｇを粉砕し、５０％ジプロピレングリコール溶液１Ｌにて適宜攪拌しながら４０℃で２０時間抽出した。その後、３日間放置して沈殿物をろ過して除去し、抽出物を得た。本抽出物の固形分濃度は３．０％であった。
＜製造例６：ほうじ茶抽出物の製造＞ 
ほうじ茶（中国製）１００ｇを粉砕し、精製水1Ｌに適宜攪拌しながら冷暗所で７２時間抽出、ろ過した。このろ液が半量になるまで減圧下で濃縮し１，３−ブチレングリコール及び精製水を加え１，３ブチレングリコール濃度が３０％になるように調整した。本抽出物の固形分濃度は４．０％であった
【００３７】
＜試験例１：メラノサイト樹状突起形成抑制試験＞
〔実施例１：ウーロン茶抽出物〕
上記製造例１で製造した紅ウーロン茶抽出物の固形分濃度が１．０％になるように５０％の１，３−ブチレングリコール水溶液で調製した溶液を用いて、メラノサイト樹状突起形成抑制作用を調べた。
詳細には、６穴プレートにＨＭＧＳ増殖添加剤入りの表皮メラノサイト（メラニン細胞）培地を適量添加し、正常ヒト表皮メラノサイト（メラニン細胞）を１×１０5個播種して、３７℃、二酸化炭素濃度５ｖｏｌ％中に静置培養した。培養２日後、ＨＭＧＳ増殖添加剤からＢＰＥを抜いた培地に交換して、製造例１で製造したウーロン茶抽出物を培地中の濃度が０（活性化状態の対照）、０．１、０．３、０．５ｖｏｌ％となるようにした３０分後、α−ＭＳＨを最終濃度が１０−8ｍｏｌ／Ｌになるように添加し、混和した。
３日後、位相差顕微鏡（オリンパス社製）で細胞形態の写真を撮影し、樹状突起保有細胞（双極性の細胞から新たに１箇所以上の樹状突起の形成が確認された細胞）と全細胞の数を数えて、樹状突起保有細胞数／総細胞数×１００を算出し、結果を図１、表１及び図２に示した。
〔試薬類〕
表皮メラノサイト(メラニン細胞)基礎培地：Medium 254培地；ヒト表皮メラニン細胞培養用の無菌の液体培地M-254-500（Life Technologies社製）
HMGS増殖添加剤：HMGS増殖添加剤分注キットKM-6350 （倉敷紡績株式会社製）
正常ヒト表皮メラノサイト（メラニン細胞）：Human Epidermal Melanocytes, neonatal(HEMn-LP)；新生児由来 lightly pigmented donor C-002-5C（Life Technologies社製）
α−ＭＳＨ：α−メラノサイト刺激ホルモンM4135（シグマ社製）
【００３８】
【表１】
2014198670.tif 000003
【００３９】
〔実施例２：緑茶抽出物〕
上記製造例４で製造した玉露抽出物の固形分濃度が１．６％になるように５０％の１，３−ブチレングリコール水溶液で調製した溶液を用いて、メラノサイト樹状突起形成抑制作用を調べた。具体的には、試料の「ウーロン茶抽出物」を「玉露抽出物」に代えた以外は、上記〔実施例１〕と同様にしてメラノサイト樹状突起形成抑制試験を行った。その結果を表２、及び図３、４に示す。
【００４０】
【表２】
2014198670.tif 000004
【００４１】
〔比較例１、２：カシス抽出物、センプクカ抽出物〕
試料の「ウーロン茶抽出物」を「カシス抽出物」に代えた以外は、上記〔実施例１〕と同様にしてメラノサイト樹状突起形成抑制試験を行った（比較例１）。
カシス抽出物は、カシス（Ribes nigrum L.）の果実１０ｇに精製水５０ｇを加え、５０℃にて３日間加温抽出したのち濾過して得た。この抽出物の乾燥固形分は３．１％であった。
試料の「ウーロン茶抽出物」を「センプクカ抽出物」に代えた以外は、上記〔実施例１〕と同様にしてメラノサイト樹状突起形成抑制試験を行った（比較例２）。
センプクカ抽出物は、センプクカ：オグルマ（Inula britannica Linne’ var chinensis）の花１０ｇに、５０体積エタノールを含むエタノール・水混合液５００ｇを加え、室温で３日間抽出を行ったのち濾過して得た。この抽出物の乾燥固形分は０．３％であった。
比較例１及び２の結果を図５及び６に示す。
【００４２】
＜試験例２：メラノサイト樹状突起退縮試験＞
〔実施例３：ウーロン茶抽出物〕
α−ＭＳＨ・ウーロン茶抽出物の添加・観察の順序・スケジュール・濃度を変更した以外は、前記試験例１と同様にして行った。活性化剤としてα−ＭＳＨを添加した３日後に、メラノサイトの樹状突起が十分に形成されているのを確認してからウーロン茶抽出物を添加し、さらに３日培養してから観察した。その結果を図７に示す。
細胞の樹状突起が既に活性化して伸長していても、ウーロン茶抽出物を添加することで、伸長していた樹状突起を退縮させることが認められた。樹状突起保有細胞数／総細胞数×１００を算出した結果を表３及び図８に示した。
【００４３】
【表３】
2014198670.tif 000005
〔実施例４：緑茶抽出物〕
上記製造例４で製造した玉露抽出物の固形分濃度が１．６％になるように５０％の１，３−ブチレングリコール水溶液で調製した溶液を用いて、メラノサイト樹状突起退縮作用を調べた。具体的には、試料の「ウーロン茶抽出物」を「玉露抽出物」に代えた以外は、上記〔実施例３〕と同様にしてメラノサイト樹状突起退縮試験を行った。その結果を表４、及び図９、１０に示す。
【００４４】
【表４】
2014198670.tif 000006
【００４５】
カシス抽出物及びセンプクカ抽出物は、美白効果があることが知られているが、樹状突起の形成抑制作用がないことが認められた。これに対し、ウーロン茶抽出物は、樹状突起の負制御作用があることが認められた。具体的には、ウーロン茶抽出物と同時期に樹状突起活性化剤を添加した場合、樹状突起の形成又は伸長の抑制が認められた。緑茶抽出物にも、ウーロン茶抽出物と同様の効果が認められた。
また、先に樹状突起活性化剤を添加し、樹状突起を活性化させて伸長させた後に、ウーロン茶抽出物を添加した場合でも、伸長した樹状突起が退縮したことが認められた。また、緑茶抽出物にも、ウーロン茶抽出物と同様の効果が認められた。特に、伸長した樹状突起を退縮させたことは、メラニン生成量が多くとも美白作用効果を発現させること、また、既に形成された色素沈着を改善することを可能にする。このような樹状突起の負制御は、従来美白効果として探索されていたチロシナーゼ阻害作用、メラニン生成抑制作用、抗炎症作用、メラニン排出促進作用等とは異なる作用と考えられる。
このため、本開示のチャノキ抽出物と、樹状突起制御以外の作用機序により美白効果を発揮する薬剤（例えば、チロシナーゼ阻害剤、メラニン生成抑制剤、抗炎症剤、メラニン排出促進剤等）とを併用することで、相乗的な美白効果を発揮する可能性が高い。
また、樹状突起を介する細胞間の物質の授受を抑制する作用が、新たな化粧用途及び医薬用途等に繋がる可能性がある。従来のようなメラニンの合成量を抑制する方向性でないことも、新たな美白剤や白髪改善剤、神経再生促進剤等の探求方法として有望と考えられる。
【００４６】
〔処方例１：可溶化型化粧水〕
（成分）                                                    （質量％）
１．ＰＯＥ（４０モル）硬化ヒマシ油                            ０．５
２．ＰＯＥ（１２モル）ジオレエート                            ０．３
３．アスタキサンチン                                          ０．０５
４．１，３−ブチレングリコール                                ２．０
５．グリセリン                                                ２．０
６．エタノール                                              １５．０
７．トラネキサム酸                                            ２．０
８．製造例１の紅ウーロン茶抽出物                              ０．１
９．乳酸ナトリウム                                            ０．２
１０．パラオキシ安息香酸メチル                                ０．１
１１．精製水                                                  残  量
（製造方法）
Ａ．成分１〜６を混合溶解する。
Ｂ．成分７〜１１を混合溶解する。
Ｃ．ＢにＡを加え、化粧水を得た。
本処方例１の可溶化型化粧水は、肌に潤いを与え、長時間にわたって皮膚の乾燥を防ぎ、保湿効果に優れたものであり、また連用することで肌の色が明るくなり肌の透明感がますものであった。
【００４７】
〔処方例２：乳化化粧水〕
（成分）                                                    （質量％）
１．大豆由来水素添加リン脂質                                  ０．５
２．セトステアリルアルコール                                  ０．１
３．ポリオキシエチレン（１０モル）コレステロールエーテル      ０．２
４．酢酸−ｄｌ−α−トコフェロール                            ０．１
５．スクワラン                                                ０．１
６．ヒドロキシエチルセルロース                                ０．０３
７．精製水                                                    残量
８．グリチルレチン酸ステアリル                                ０．２５
９．製造例２の凍頂ウーロン茶抽出物                            ０．０２
１０．リン酸一水素二ナトリウム                                ０．１
１１．リン酸二水素一ナトリウム                                ０．１
１２．グリセリン                                              ３．０
１３．ジプロピレングリコール                                  ２．０
１４．エタノール                                              ７．０
１５．香料                                                    適量
（製造方法）
Ａ．成分１〜５を７５℃に加熱し、均一に混合溶解する。
Ｂ．成分６、７を７５℃に加熱し、均一に混合溶解する
Ｃ．ＡにＢを添加し、乳化する。
Ｄ．Ｃを冷却し、成分８〜１５を添加し、乳化型化粧水を得た。
本処方例２の乳化化粧水は、肌に潤いを与え、長時間にわたって皮膚の乾燥を防ぎ、保湿効果に優れたものであり、また連用することで肌の色が明るくなり肌の透明感がますものであった。
【００４８】
〔処方例３：乳液〕
（成分）                                                    （質量％）
１．モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン        １．０
２．セスキオレイン酸ソルビタン                                ０．５
３．トリオクタン酸グリセリル                                  ０．５
４．ホホバ油                                                  ０．５
５．スクワラン                                                ０．５
６．精製水                                                    残量
７．エデト酸二ナトリウム                                      ０．１
８．メチルパラベン                                            ０．２
９．フェノキシエタノール                                      ０．５
１０．グリセリン                                              ５．０
１１．プロパンジオール                                        １．０
１２．プロピレングリコール                                    ２．０
１３．乳酸ナトリウム                                          ０．５
１４．２−Ｏ−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸（注１）  １．０
１５．製造例３の武夷ウーロン茶抽出物                          ０．００５
１６．キサンタンガム                                          ０．０５
１７．精製水                                                １０．０
１８．エタノール                                              ３．０
１９．香料                                                    適量
（注１）：株式会社林原社製
（製造方法）
Ａ：成分１６を７０℃に加熱した成分１７で膨潤する。      
Ｂ：成分１〜５を７０℃で加熱混合する。      
Ｃ：成分６〜１３を７０℃で加熱溶解後、Ｂに添加し、乳化する。      
Ｄ：Ｃを室温まで冷却後、成分１４、１５、１８、１９とＡを添加し、美容液を得た。  
本処方例３の乳液は、肌に潤いを与え、長時間にわたって皮膚の乾燥を防ぎ、保湿効果に優れたものであり、また連用することで肌の色が明るくなり肌の透明感がますものであった。
【００４９】
〔処方例４：日焼け止め〕
（成分）                                                          （質量％）
１．ステアリン酸                                                    １．０
２．モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０モル）ソルビタン          ０．５
３．セスキオレイン酸ソルビタン                                      ０．５
４．ベヘニルアルコール                                              ０．５
５．２−エチルヘキサン酸グリセリル                                  ２．０
６．パラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル                        １０．０
７．ジエチルアミノヒドロキシベンゾイル安息香酸ヘキシル              ２．０
８．ジメチコジエチルベンザルマロネート                              １．０
９．Ｔｉｎｏｓｏｒｂ  Ｓ  （注２）                                  １．０
１０．オクチルトリアゾン                                            ０．５
１１．ジプロピレングリコール                                      １０．０
１２．トリエタノールアミン                                          １．０
１３．精製水                                                          残量
１４．グリセリン                                                    ５．０
１５．１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
１６．Ｔｉｎｏｓｏｒｂ  Ｍ  （注２）                                １．０
１７．アクリル酸／メタクリル酸アルキルエステル共重合体（注３）      ０．２
１８．精製水                                                        ５．０
１９．製造例４の玉露抽出物                                          ０．１
２０．クエン酸                                                      ０．1
２１．コハク酸二ナトリウム                                          ０．１
２２．エタノール                                                  １０．０
２３．防腐剤                                                          適量
２４．香料                                                            適量
（注２）  ＢＡＳＦ社製
（注３）  ＣＡＲＢＯＰＯＬ  １３８２（ＬＵＢＲＩＺＯＬ  ＡＤＶＡＮＣＥＤ  ＭＡＴＥＲＩＡＬＳ社製）
（製造方法）
Ａ：成分１〜１０を８０℃にて均一に溶解する。
Ｂ：成分１１〜１９を８０℃にて均一に溶解する。
Ｃ：ＢにＡを添加し、乳化する。
Ｄ：Ｃを攪拌冷却し、成分２０〜２４を添加し、日焼け止めを得た。
本処方例４の日焼け止めは、肌に潤いを与え、長時間にわたって皮膚の乾燥を防ぎ、保湿効果に優れたものであり、また連用することで肌の色が明るくなり肌の透明感がますものであった。
【００５０】
〔処方例５：ファンデーション〕
（成分）                                                          （質量％）
１．ポリオキシエチレンメチルシロキサン・ポリオキプロピレンオレイル
メチルシロキサン・ジメチルシロキサン共重合体  （注４）          ２．０
２．ＰＥＧ−３ジメチコン  （注５）                                  １．０
３．ジメチルポリシロキサン                                          ５．０
４．ジメチルポリシロキサン処理赤酸化鉄                              １．０
５．ジメチルポリシロキサン処理黄酸化鉄                              １．５
６．ジメチルポリシロキサン処理黒酸化鉄                              ０．５
７．ジメチルポリシロキサン処理酸化チタン                          １０．０
８．ジメチルポリシロキサン処理タルク                                ５．０
９．パラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル                          ５．０
１０．グリチルレチン酸ステアリル                                    ０．５
１１．セスキオレイン酸ソルビタン                                    ０．５
１２．精製水                                                          残量
１３．１，３−ブチレングリコール                                  １５．０
１４．製造例５のかぶせ茶抽出物                                      ０．５
１５．クエン酸ナトリウム                                            ０．１
１６．リン酸二水素一ナトリウム                                      ０．１
１７．フェニルベンズイミダゾールスルホン酸                          ０．３
１８．トリエタノールアミン                                          １．７
１９．防腐剤                                                          適量
２０．香料                                                            適量
（注４）  ＫＦ−６０２６（信越化学工業社製）
（注５）  ＫＦ−６０１５（信越化学工業社製）
（製造方法）
Ａ：成分１〜３を均一に混合する。
Ｂ：成分４〜１１をローラーにて均一に分散する。
Ｃ：ＡにＢを添加し、均一混合する。
Ｄ：成分１２〜２０を混合溶解する。
Ｅ：ＣにＤを添加して、乳化し、ファンデーションを得た。
本処方例５のファンデーションは、肌に潤いを与え、長時間にわたって皮膚の乾燥を防ぎ、保湿効果に優れたものであり、また連用することで肌の色が明るくなり肌の透明感がますものであった。
【００５１】
〔処方例６：不織布含浸タイプパック料〕
（成分） （％）   
１．ポリオキシエチレン（２５）フィトスタノール（ＨＬＢ１４．５）     １．０   
２．ステアリルアルコール                                             ０．２   
３．セタノール                                                       ０．２   
４．水添大豆リン脂質                                                 ０．３   
５．プロピレングリコール                                           １０．０   
６．ジグリセリン                                                     ８．０   
７．流動パラフィン                                                   １．０   
８．メドウフォーム油                                                 ０．５   
９．マイクロクリスタリンワックス                                     ５．０   
１０．精製水                                                         １．０   
１１．エタノール                                                     ３．０   
１２．精製水                                                           残量   
１３．アスコルビン酸グルコシド                                       ２．０   
１４．製造例６のほうじ茶抽出物                                       ０．３
１５．加水分解ヒアルロン酸（分子量３０００）                         １．０
１６．水酸化ナトリウム                                                 適量   
１７．香料                                                           ０．０１   
（製造方法）   
Ａ：成分１〜６を８０℃で溶解混合する。   
Ｂ：成分７〜９を８０℃に加熱し、Ａに添加したのち、７５℃に加熱した成分１０を加えて乳化した。   
Ｃ：これを冷却、脱泡し、水中油型液状組成物を調製し、成分１１〜１７を加えて混合した原液を、不織布に含浸させ、不織布含浸タイプパック料を得た。   
本処方例６の不織布含浸タイプパック料は、肌に潤いを与え、長時間にわたって皮膚の乾燥を防ぎ、保湿効果に優れたものであり、また連用することで肌の色が明るくなり肌の透明感がますものであった。なお、不織布含浸タイプパック料に含浸させた原液の平均乳化滴径は１９０ｎｍであった。  
【００５２】
〔処方例７：養毛料〕
（成分）                                                    （質量％）
１．スエルチアニン                                            １．５
２．イチョウエキス                                            ０．５
３．トラネキサム酸                                            １．０
４．製造例１の紅ウーロン茶抽出物                              １．０
５．グリセリン                                                ２．０
６．精製水                                                    残量
７．Ｄ−パントテニルアルコール                                ０．３
８．ヒノキチオール                                            ０．０２
９．セファランチン                                            ０．００１
１０．酢酸トコフェロール                                      ０．０１
１１．Ｌ−メントール                                          ０．２
１２．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                          ０．２
１３．エタノール                                            ６０
（製造方法）
Ａ．成分１〜６を混合溶解する。
Ｂ．成分７〜１３を混合溶解する。
Ｃ．ＡにＢを加え、養毛料を得た。
本処方例７の養毛料は、頭皮に潤いを与え、長時間にわたって頭皮の乾燥を防ぎ、保湿効果に優れたものであった。
【００５３】
〔処方例８：軟膏〕
（配合成分）                                              （質量％）
１．ステアリルアルコール                                    １８．０
２．モクロウ                                                ２０．０
３．ポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸エステル          ０．２５
４．グリセリンモノステアリン酸エステル                        ０．３
５．ワセリン                                                ４０．０
６．精製水                                                    残量
７．グリセリン                                              １０．０
８．アデノシン−１−リン酸                                    ０．５
９．製造例４の玉露抽出物                                      １．０
（製造方法）
Ａ．１〜５を７０℃で均一に混合する。
Ｂ．６〜８を７０℃に加温する。
Ｃ．ＡにＢを加え、乳化する。
Ｄ．Ｃを冷却し、９を添加し、軟膏を得た。
本処方例８の軟膏は、肌に潤いを与え、長時間にわたって皮膚の乾燥を防ぎ、保湿効果に優れたものであり、また連用することで肌の色が明るくなり肌の透明感がますものであった。
【図１】
2014198670.tif 000007
【図２】
2014198670.tif 000008
【図３】
2014198670.tif 000009
【図４】
2014198670.tif 000010
【図５】
2014198670.tif 000011
【図６】
2014198670.tif 000012
【図７】
2014198670.tif 000013
【図８】
2014198670.tif 000014
【図９】
2014198670.tif 000015
【図１０】
2014198670.tif 000016