(57)【要約】      （修正有）【課題】グルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチドのアナログの新規の系列、前記化合物を含む医薬組成物、ならびにＧＩＰ受容体に仲介される病気、例えばインスリン非依存性糖尿病および肥満の処置のためのＧＩＰ受容体作動薬または拮抗薬としての前記化合物の使用を提供する。【解決手段】式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容できる塩。(R2R3)-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-A35-A36-A37-A38-A39-A40-A41-A42-A43-R1（Ｉ）。Anは特定のアミノ酸。有効量の前記化合物を含む、医薬組成物。インスリンの分泌を刺激するための、前記医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容できる塩
(R2R3)-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-A35-A36-A37-A38-A39-A40-A41-A42-A43-R1、
（Ｉ）
ここで：
A1は欠失しており;  
A2はAla、4Hppa、Aibであり、または欠失しており;
A3はGlu、4Hyp、Proであり、または欠失しており;
A4はGlyであり、または欠失しており;
A5はThrであり、または欠失しており;
A6はPheであり、または欠失しており;
A7はIle、A5c、A6c、CH3-(CH2)8-C(O)-A6c、 CH3-(CH2)4-C(O)-A6cであり、または欠失しており;
A8はSerであり;
A9はAspであり;
A10はTyrであり;
A11はSer、A5c、A6c、またはAibであり;
A12はIleであり;
A13はAla、Aibであり、または欠失しており;
A14はMet、A6c、またはNleであり;
A15はAspであり;
A16はLysであり;
A17はIleであり;
A18はHisであり;
A19はGlnであり;
A20はGlnであり;
A21はAspであり;
A22はPheであり;
A23はValであり;
A24はAsnであり;
A25はTrpであり;
A26はLeuであり;
A27はLeuであり;
A28はAlaであり;
A29はGlnであり;
A30はLysであり;
A31はGly、Cys(Hsu)、Cys(Psu)、2Nal、D-2Nal、Orn(N-C(O)-(CH2)4-CH3)、Orn(N-C(O)-(CH2)8-CH3)、または欠失しており;
A32はLysであり、または欠失しており;
A33はLysであり、または欠失しており;
A34はAsn、Cys(Psu)、Orn(N-C(O)-(CH2)8-CH3)であり、または欠失しており;
A35はAsp、Cys(Psu)であり、または欠失しており;
A36はTrp、Cys(Psu)であり、または欠失しており;
A37はLys、Cys(Psu)であり、または欠失しており;
A38はHis、Cys(Psu)であり、または欠失しており;
A39はAsn、Cys(Psu)であり、または欠失しており;
A40はIle、Cys(Psu)であり、または欠失しており;
A41はThrであり、または欠失しており;
A42はGlnであり、または欠失しており;
A43はGln、Lys(N-C(O)-(CH2)10-CH3であり、または欠失しており;
ここで、Cys(Psu)が5K PEG、10K PEG、20K PEG、30K PEG、40K PEG、50K PEG、および60K PEGからなるグループから選択される基で置換されてCys(スクシンイミド-N-5K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-10K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-20K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-30K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-40K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-50K PEG)およびCys(スクシンイミド-N-60K PEG)を形成してもよく；
R1はOH、NH2、(C1-C30)アルコキシ、またはNH-X2-CH2-Z0であり、ここでX2は(C0-C30)炭化水素部分であり、Z0はH、OH、CO2H、またはCONH2であり；
R2およびR3のそれぞれはH、(C1-C30)アルキル、(C1-C30)ヘテロアルキル、(C1-C30)アシル、(C2-C30)アルケニル、(C2-C30)アルキニル、アリール(C1-C30)アルキル、およびアリール(C1-C30)アシルからなるグループから独立して選択され；R2が(C1-C30)アシルまたはアリール(C1-C30)アシルである場合、R3はH、(C1-C30)アルキル、(C1-C30)ヘテロアルキル、(C2-C30)アルケニル、(C2-C30)アルキニルまたはアリール(C1-C30)アルキルであり； 
ただし、A2が4Hppaである場合、R2およびR3は欠失しており；
また、A2、A3、A7、A11、A13、A14、A31、A34、A35、A36、A37、A38、A39およびA40の少なくとも１つは、天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基では無い。  
【請求項２】
請求項１に記載の化合物、またはその医薬的な塩：
ここで：
A2は欠失しており;
A3は欠失しており;
A4は欠失しており;
A5は欠失しており;
A6は欠失しており;
A7はIle、A5c、A6c 、CH3-(CH2)8-C(O)-A6c、 またはCH3-(CH2)4-C(O)-A6cであり;
A8はSerであり;
A9はAspであり;
A10はTyrであり;
A11はSerであり;
A12はIleであり;
A13はAla、またはAibであり；
A14はMetであり;
A31はGly、Cys(Hsu)、Cys(Psu)、2Nal、D-2Nal、Orn(N-C(O)-(CH2)4-CH3)、またはOrn(N-C(O)-(CH2)8-CH3)であり;
A32はLysであり;
A33はLysであり;
A34はAsn、Cys(Psu)、またはOrn(N-C(O)-(CH2)8-CH3)であり;
A35はAsp、またはCys(Psu)であり;
A36はTrp、またはCys(Psu)であり;
A37はLys、またはCys(Psu)であり;
A38はHis、またはCys(Psu)であり;
A39はAsn、またはCys(Psu)であり;
A40はIle、またはCys(Psu)であり;
A41はThrであり;
A42はGlnであり;
A43は欠失している。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物、ここで、前記化合物は次のものである：
[Ac-A6c7, Cys(Psu)40]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:5);
[Ac-A6c7, Cys(Psu)39]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:6);
[Ac-A6c7, Cys(Psu)38]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:7);
[Ac-A6c7, Cys(Psu)36]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:8);
[Ac-A6c7, Cys(Psu)35]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:9);
[Ac-A6c7, Cys(Psu)34]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:10);
[Ac-A6c7, Cys(Psu)31]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:13);
[Ac-A6c7, Orn31(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:16);
[Ac-A6c7, Orn31(N-C(O)-(CH2)4-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:19);
[A6c7, Orn31(N-C(O)-(CH2)4-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:20);
[CH3-(CH2)4-C(O)-A6c7, Orn31(N-C(O)-(CH2)4-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:21);
[Ac-A6c7, Orn34(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:22);
[A6c7, Orn34(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:23);
[CH3-(CH2)8-C(O)-A6c7, Orn34(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:24);
[Ac-A6c7, Cys(Hsu)31]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:25);
[A6c7, Cys(Hsu)31]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:26);
(Ac-A6c7, 2Nal31)hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:27);
(Ac-A6c7, D-2Nal31)hGIP(7-42)-OH;
(Ac-4Hyp3, A6c7)hGIP(3-42)-OH (SEQ ID NO:28);
[Ac-A6c7, Cys(Psu)31]hGIP(7-34)-NH2 (SEQ ID NO:30);
[Ac-A6c7, Cys(Psu)31]hGIP(7-31)-NH2 (SEQ ID NO:31);
(Ac-Phe6, A6c7)hGIP(6-30)-NH2 (SEQ ID NO:34);
[Ac-Phe6, A6c7, Cys(Psu)31]hGIP(6-31)-NH2 (SEQ ID NO:35);
[A6c7, Cys(Psu)31]hGIP(6-31)-NH2 (SEQ ID NO:36);
(A5c7, Nle14)hGIP(6-30)-NH2 (SEQ ID NO:37);
(A6c7, Nle14)hGIP(6-30)-NH2 (SEQ ID NO:38);
(Aib11, Nle14)hGIP(6-30)-NH2 (SEQ ID NO:39);
[Orn31(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(8-42)-OH (SEQ ID NO:41);
(4Hppa2, 4Hyp3, A6c7)hGIP(2-42)-OH (SEQ ID NO:44);
(4Hppa2, Pro3, Nle14)hGIP(2-42)-OH (SEQ ID NO:45);
(4Hppa2, Aib13)hGIP(2-42)-OH (SEQ ID NO:46);
(4Hppa2, A6c14)hGIP(2-42)-OH (SEQ ID NO:47);
(4Hppa2, A6c11)hGIP(2-42)-OH (SEQ ID NO:48);もしくは
[Aib2, A5c11, Nle14, Lys43(N-C(O)-(CH2)10-CH3)]hGIP(2-43)-OH (SEQ ID NO:49);
またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項４】
請求項２に記載の化合物、ここで、前記化合物は次のものである：
[Ac-A6c7, Cys(Psu)40]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:5);
[Ac-A6c7, Cys(Psu)39]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:6);
[Ac-A6c7, Cys(Psu)38]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:7);
[Ac-A6c7, Cys(Psu)36]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:8);
[Ac-A6c7, Cys(Psu)35]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:9);
[Ac-A6c7, Cys(Psu)34]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:10);
[Ac-A6c7, Cys(Psu)31]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:13);
[Ac-A6c7, Orn31(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:16);
[Ac-A6c7, Orn31(N-C(O)-(CH2)4-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:19);
[A6c7, Orn31(N-C(O)-(CH2)4-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:20);
[CH3-(CH2)4-C(O)-A6c7, Orn31(N-C(O)-(CH2)4-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:21);
[Ac-A6c7, Orn34(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:22);
[A6c7, Orn34(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:23);
[CH3-(CH2)8-C(O)-A6c7, Orn34(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:24);
[Ac-A6c7, Cys(Hsu)31]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:25);
[A6c7, Cys(Hsu)31]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:26);
(Ac-A6c7, 2Nal31)hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:27);もしくは
(Ac-A6c7, D-2Nal31)hGIP(7-42)-OH;
またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項５】
請求項１または２に記載の化合物、またはその医薬的な塩、ここで：A43は欠失しており；A2は4Hppaであり；A3、A7、A11、A13およびA14の少なくとも１つは天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基では無い。
【請求項６】
請求項１または２に記載の化合物、またはその医薬的な塩、ここで：A2〜A5およびA31〜A43は欠失しており；A7、A11およびA14の少なくとも１つは天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基では無い。
【請求項７】
請求項１または２に記載の化合物、またはその医薬的な塩、ここで：A2〜A7およびA43は欠失しており；A31は天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基では無い。
【請求項８】
請求項１または２に記載の化合物、またはその医薬的な塩、ここで：A2〜A5およびA43は欠失しており；A7およびA31の少なくとも１つは天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基では無い。
【請求項９】
請求項１または２に記載の化合物、またはその医薬的な塩、ここで：A2〜A5およびA32〜A43は欠失しており；A7およびA31の少なくとも１つは天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基では無い。
【請求項１０】
請求項１に記載の化合物、ここで、前記化合物は次のものである：
(Ac-A6c7, Gln43)hGIP(7-43)-OH (SEQ ID NO:29);またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩、ここで、３１位または３４−４０位のアミノ酸のいずれか１つにあるCys(Psu)がCys(スクシンイミド-N-PEG)であり、前記ＰＥＧ部分は5K PEG、10K PEG、20K PEG、30K PEG、40K PEG、50K PEG、および60K PEGからなるグループから選択されてCys(スクシンイミド-N-5K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-10K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-20K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-30K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-40K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-50K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-60K PEG)をけいせいしている、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１２】
有効量の請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項１３】
ＧＩＰ受容体の結合により仲介される病気または疾患を処置するための医薬組成物であって、前記の病気または疾患が１型糖尿病、２型糖尿病、肥満、インスリン抵抗性、グルコース不耐性、脂肪肝、グルカゴノーマ、気道の分泌障害、代謝障害、関節炎、骨粗鬆症、中枢神経系疾患、再狭窄、神経変性疾患、腎不全、うっ血性心不全、ネフローゼ症候群、硬変、肺水腫、高血圧、および摂食の減少および／または体重の低下が望まれる障害からなるグループから選択される、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記の糖尿病が２型糖尿病である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
糖尿病に関連する障害を処置する方医薬組成物あって、前記の糖尿病に関連する障害が高血糖症、高インスリン血症、グルコース耐性障害、空腹時血糖障害、脂質代謝異常、高トリグリセリド血症、およびインスリン抵抗性からなるグループから選択される、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
インスリンの分泌を刺激するための、請求項１２に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グルコース依存性インスリン分泌刺激(insulinotropic)ポリペプチドの新規のアナログ、前記化合物を含む医薬組成物、および前記化合物の、ＧＩＰ受容体に仲介される病気、例えばインスリン非依存性糖尿病および肥満の処置のためのＧＩＰ受容体作動薬または拮抗薬としての使用の領域に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド（“ＧＩＰ”、“胃抑制性ポリペプチド”としても知られている）は、小腸の腸管内分泌(enteroendorine)Ｋ細胞により、経口栄養摂取に応答して血流中に分泌される４２残基のペプチドである。ＧＩＰは胃酸の分泌を抑制し、それは経口グルコース摂取の後の膵ベータ細胞からのインスリンの分泌に関する強力な刺激薬であることが示されている（“インクレチン作用”）（Creutzfeldt, W., et al., 1979, Diabetologia, 16:75-85）。
【０００３】
グルコースおよび他の栄養素の摂取により誘導されるインスリンの放出は、ホルモン性および神経性の要因の両方によるものである（Creutzfeldt, W., et al., 1985, Diabetologia, 28:565-573）。いくつかの胃腸調節ペプチドがインクレチン類として提案されて
おり、これらの候補の中で、ＧＩＰおよびグルカゴン様ペプチド１（“ＧＬＰ−１”）のみが食後のインスリン放出の生理的刺激薬であると考えられるための必要条件を満たすようである（Nauck, et al., 1989, J. Clin. Endorinol. Metab., 69:654-662）。ＧＩＰ
およびＧＬＰ−１の合同の作用は、腸膵島軸(enteroinsular axis)の完全なインクレチン作用を説明するのに十分であることが示されている（Fehmann, H. C., et al., 1989, FEBS Lett., 252:109-112）。
【０００４】
当業者には周知であるように、ＧＩＰの既知の、および可能性のある用途は様々であり、多様である。従って、この発明の化合物の、作動薬作用を誘発するための投与は、ＧＩＰ自体と同じ作用および用途を有し得る。ＧＩＰのこれらの様々な用途は次のように要約することができる：１型糖尿病、２型糖尿病（Visboll, T., 2004, Dan. Med. Bull., 51:364-70）、インスリン抵抗性（ＷＯ  ２００５／０８２９２８）、肥満（Green, B. D.,
et al., 2004, Current Pharmaceutical Design, 10:3651-3662）、代謝障害（Gault, V. A., et al., 2003, BioChem. Biophys. Res. Commun., 308:207-213）、中枢神経系疾
患、神経変性疾患、うっ血性心不全、低血糖症、ならびに摂食の減少および体重の低下が望まれる障害からなるグループから選択される疾患の処置。膵島において、ＧＩＰはインスリンの分泌を急激に増進するだけでなく、それはプロインスリンの転写および翻訳の増進を通してインスリンの産生も刺激し（Wang, et al., 1996, Mol. Cell. Endocrinol., 116:81-87）、膵ベータ細胞の成長および生存を増進する（Trumper, et al., 2003, Diabetes, 52:741-750）。膵臓に対するインスリンの分泌を増進する作用に加え、ＧＩＰはインスリンの標的組織にも直接作用して血漿グルコースを低下させる：脂肪（Eckel, et al., 1979, Diabetes, 28:1141-1142）および筋肉（O’Harte, et al., 1998, J. Endocrinol., 156:237-243）におけるグルコースの取り込みの増進、ならびに肝臓のグルコースの生成の抑制（Elahi, D., et al., 1986, Can.J. Physiol. Pharmacol., 65:A18）。
【０００５】
加えて、本発明に従うＧＩＰ受容体拮抗薬は、動物の腸からのグルコースの吸収を抑制、阻止または低減する。この観察に従い、ＧＩＰ拮抗薬を含む療法組成物は、インスリン非依存性糖尿病を有する患者において経口グルコースに対する耐性を向上させるために、哺乳類、例えばヒトにおいて、その哺乳類の腸からのグルコースの吸収を抑制、阻止また
は低減することにより肥満を予防、抑制または低減するために用いられてよい。
【０００６】
しかし、修飾されていないＧＩＰの療法薬としての使用は、約２分というインビボでの短い半減期により制限される（Said and Mutt, 1970, Science, 169:1217-1218）。血清
中では、インクレチン類ＧＩＰおよびＧＬＰ−１は共にジペプチジルペプチダーゼＩＶ（“ＤＰＰＩＶ”）により分解される。ＧＩＰのタンパク質分解に対する安定性の向上は、その受容体におけるＧＩＰの活性を維持するだけでなく、これがさらに重要なのだが、その一部がＧＩＰ受容体の拮抗薬として働くＧＩＰ断片の生成を防ぐ（Gault, et al., 2002, J. Endocrinol., 175:525-533）。報告された修飾には、Ｎ末端のチロシンの修飾（O
’Harte, et al., 2002, Diabetologia, 45:1281-1291）、２位のアラニンの変異（Hinke, et al., 2002, Diabetes, 51:656-661）３位のグルタミン酸の変異（Gault, et al., 2003, BioChem. Biophys. Res. Commun., 308:207-213）、および１３位のアラニンの変異（Gault, et al., 2003, Cell Biol. International, 27:41-46）を通した、ＧＩＰのＮ
末端のＤＰＰＩＶによるタンパク質分解からの保護が含まれていた。
【０００７】
下記の特許出願は、ＧＩＰアナログの様々な標的器官の機能に対する作用およびそれらの療法薬としての使用の可能性に関して出願された：
ＰＣＴ公開ＷＯ  ００／５８３６０は、インスリンの放出を刺激するＧＩＰのペプチジルアナログを開示している。特に、この出願はGIP(1-42)のＮ末端から少なくとも１５ア
ミノ酸残基を含む特定のペプチジルアナログ、例えば１、２および３位において正確に１アミノ酸の置換または修飾を含むＧＩＰのアナログ、例えば[Pro3]GIP(1-42)を開示して
いる。
【０００８】
ＰＣＴ公開ＷＯ  ９８／２４４６４は、本質的にＧＩＰの配列の７〜３０位に対応する２４アミノ酸のポリペプチドで構成されるＧＩＰの拮抗薬、インスリン非依存性糖尿病を処置する方法、およびインスリン非依存性糖尿病の患者においてグルコース耐性を向上させる方法を開示している。
【０００９】
ＰＣＴ公開ＷＯ  ０３／０８２８９８は、ＧＩＰのＣ末端を切り詰めた断片およびＮ末端を修飾したアナログ、ならびにＤＰＰＩＶ特異的切断部位の近くに還元されたペプチド結合またはアミノ酸の変更を有する様々なＧＩＰアナログを開示している。この出願はさらに、ＧＩＰの可能性のある受容体結合部位の間に異なるリンカーを有するアナログを開示している。この出願の化合物は、ＧＩＰ受容体に仲介される病気、例えばインスリン非依存性糖尿病および肥満の処置において有用であると主張されている。
【００１０】
配合物中で安定であり、タンパク質分解に対する感受性の低下およびクリアランスの低下の結果もたらされるインビボでの長い血漿内半減期を有する一方でそれぞれの作動薬または拮抗薬作用を誘発するためのＧＩＰ受容体への結合親和性を維持している、ＧＩＰの改良されたアナログに関する必要性が存在する。さらに、本明細書で説明する本発明の化合物の他の療法的作用の中で、血漿グルコースレベルのより厳重な制御は、長期の糖尿病性合併症を予防し、それにより患者に改善された生活の質を提供する可能性がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】ＷＯ  ２００５／０８２９２８
【特許文献２】ＷＯ  ００／５８３６０
【特許文献３】ＷＯ  ９８／２４４６４
【特許文献４】ＷＯ  ０３／０８２８９８
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Creutzfeldt, W., et al., 1979, Diabetologia, 16:75-85
【非特許文献２】Creutzfeldt, W., et al., 1985, Diabetologia, 28:565-573
【非特許文献３】Nauck, et al., 1989, J. Clin. Endorinol. Metab., 69:654-662
【非特許文献４】Fehmann, H. C., et al., 1989, FEBS Lett., 252:109-112
【非特許文献５】Visboll, T., 2004, Dan. Med. Bull., 51:364-70
【非特許文献６】Green, B. D., et al., 2004, Current Pharmaceutical Design, 10:3651-3662
【非特許文献７】Gault, V. A., et al., 2003, BioChem. Biophys. Res. Commun., 308:207-213
【非特許文献８】Wang, et al., 1996, Mol. Cell. Endocrinol., 116:81-87
【非特許文献９】Trumper, et al., 2003, Diabetes, 52:741-750
【非特許文献１０】Eckel, et al., 1979, Diabetes, 28:1141-1142
【非特許文献１１】O’Harte, et al., 1998, J. Endocrinol., 156:237-243
【非特許文献１２】Elahi, D., et al., 1986, Can. J. Physiol. Pharmacol., 65:A18
【非特許文献１３】Said and Mutt, 1970, Science, 169:1217-1218
【非特許文献１４】Gault, et al., 2002, J. Endocrinol., 175:525-533
【非特許文献１５】O’Harte, et al., 2002, Diabetologia, 45:1281-1291
【非特許文献１６】Hinke, et al., 2002, Diabetes, 51:656-661
【非特許文献１７】Gault, et al., 2003, BioChem. Biophys. Res. Commun., 308:207-213
【非特許文献１８】Gault, et al., 2003, Cell Biol. International, 27:41-46
【発明の概要】
【００１３】
１観点において、本発明は次の式（Ｉ）のＧＩＰのペプチド変種に関し：
(R2R3)-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-A35-A36-A37-A38-A39-A40-A41-A42-A43-R1、
（Ｉ）
ここで：
A1は欠失しており;
A2はAla、Abu、D-Abu、Acc、Aib、β-Ala、D-Ala、Gaba、Gly、4Hppa、Ser、D-Ser、Thr、D-Thr、Val、D-Valであり、または欠失しており;
A3はGlu、Aib、Asp、NMe-Asp、Dhp、Dmt、NMe-Glu、3Hyp、4Hyp、4Ktp、Pro、hPro、Thz、Ticであり、または欠失しており;
A4はGly、Acc、Aib、β-Alaであり、または欠失しており;
A5はThr、Acc、Aib、Serであり、または欠失しており;
A6はPhe、Acc、Aib、Aic、Cha、1Nal、2Nal、2-Pal、3-Pal、4-Pal、(X4,X5,X6,X7,X8)Phe、Trpであり、または欠失しており;
A7はIle、Abu、Acc、Aib、Ala、Cha、Leu、Nle、Phe、Tle、Valであり、または欠失し
ており;
A8はSer、Aib、Chc-Ser、Thrであり、または欠失しており;
A9はAsp、Aib、Gluであり、または欠失しており;
A10はTyr、Acc、Cha、1Nal、2Nal、2-Pal、3-Pal、4-Pal、Phe、(X4,X5,X6,X7,X8)Phe
であり、または欠失しており;
A11はSer、Acc、Aib、Thrであり、または欠失しており;
A12はIle、Abu、Acc、Aib、Ala、Cha、Leu、Nle、Phe、Tle、Valであり、または欠失しており;
A13はAla、β-Ala、D-Ala、Acc、Aib、Gly、Serであり、または欠失しており;
A14はMet、Abu、Acc、Aib、Ala、Cha、Ile、Leu、Nle、Phe、Tle、またはValであり;
A15はAsp、Aib、またはGluであり;
A16はLys、Amp、Apc、Arg、hArg、Orn、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スク
シンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、またはPen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり;
A17はIle、Abu、Acc、Aib、Ala、Cha、Leu、Nle、Phe、Tle、またはValであり;
A18はHis、Amp、Arg、2-Pal、3-Pal、4-Pal、Phe、またはTyrであり;
A19はGln、Aib、またはAsnであり;
A20はGln、Aib、またはAsnであり;
A21はAsp、Aib、またはGluであり;
A22はPhe、Acc、Aib、Aic、Cha、1Nal、2Nal、2-Pal、3-Pal、4-Pal、(X4,X5,X6,X7,X8)PheまたはTrpであり;
A23はVal、Abu、Acc、Aib、Ala、Cha、Ile、Leu、Nle、またはTleであり;
A24はAsn、Aib、またはGlnであり;
A25はTrp、Acc、Aib、1Nal、2Nal、2-Pal、3-Pal、4-Pal、Phe、または(X4,X5,X6,X7,X8)Pheであり;
A26はLeu、Acc、Aib、Cha、Ile、Nle、Phe、(X4,X5,X6,X7,X8)Phe、またはTleであり;
A27はLeu、Acc、Aib、Cha、Ile、Nle、Phe、(X4,X5,X6,X7,X8)PheまたはTleであり;
A28はAla、Acc、またはAibであり;
A29はGln、Aib、Asnであり、または欠失しており;
A30はLys、Amp、Apc、Arg、hArg、Orn、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スク
シンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A31はGly、Aib、Acc、β-Ala、2Nal、D-2Nal、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠
失しており;
A32はLys、Amp、Apc、Arg、hArg、Orn、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スク
シンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A33はLys、Amp、Apc、Arg、hArg、Orn、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スク
シンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(
スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A34はAsn、Aib、Gln、Ser、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アル
キル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A35はAsp、Aib、Glu、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシン
イミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(
スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A36はTrp、Acc、Aib、1Nal、2Nal、2-Pal、3-Pal、4-Pal、Phe、(X4,X5,X6,X7,X8)Phe
、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミ
ド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシン
イミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A37はLys、Amp、Apc、Arg、hArg、Orn、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スク
シンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A38はHis、Amp、Phe、2-Pal、3-Pal、4-Pal、Tyr、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミ
ド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A39はAsn、Aib、Gln、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシン
イミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(
スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A40はIle、Acc、Aib、Ser、Thr、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイ
ミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A41はThr、Acc、Aib、Asn、Gln、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイ
ミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A42はGln、Aib、Acc、Asn、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A43はAcc、Aib、Ala、Asp、Gln、Phe、Thr、Trp、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(
スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミ
ド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
R1はOH、NH2、(C1-C30)アルコキシ、またはNH-X2-CH2-Z0であり、ここでX2は(C0-C30)
炭化水素部分であり、Z0はH、OH、CO2H、またはCONH2であり；
R2、R3、R4およびR5のそれぞれはH、(C1-C30)アルキル、(C1-C30)ヘテロアルキル、(C1-C30)アシル、(C2-C30)アルケニル、(C2-C30)アルキニル、アリール(C1-C30)アルキル、
アリール(C1-C30)アシル、置換された(C1-C30)アルキル、置換された(C1-C30)ヘテロアルキル、置換された(C1-C30)アシル、置換された(C2-C30)アルケニル、置換された(C2-C30)アルキニル、置換されたアリール(C1-C30)アルキル、および置換されたアリール(C1-C30)アシルからなるグループから独立して選択され；R2が(C1-C30)アシル、アリール(C1-C30)アシル、置換された(C1-C30)アシル、または置換されたアリール(C1-C30)アシルである場合、R3はH、(C1-C30)アルキル、(C1-C30)ヘテロアルキル、(C2-C30)アルケニル、(C2-C30)アルキニル、アリール(C1-C30)アルキル、置換された(C1-C30)アルキル、置換された(C1-C30)ヘテロアルキル、置換された(C2-C30)アルケニル、置換された(C2-C30)アルキニル
、または置換されたアリール(C1-C30)アルキルであり；さらにR4が(C1-C30)アシル、アリール(C1-C30)アシル、置換された(C1-C30)アシル、または置換されたアリール(C1-C30)アシルである場合、R5はH、(C1-C30)アルキル、(C1-C30)ヘテロアルキル、(C2-C30)アルケ
ニル、(C2-C30)アルキニル、アリール(C1-C30)アルキル、置換された(C1-C30)アルキル、置換された(C1-C30)ヘテロアルキル、置換された(C2-C30)アルケニル、置換された(C2-C30)アルキニル、または置換されたアリール(C1-C30)アルキルであり；
nは、それぞれの出現に関して独立して１と５を含めた１から５までの整数であり；
s、t、xおよびyのそれぞれは、それぞれの出現に関して独立して１と３０を含めた１から３０までの整数であり；
X4、X5、X6、X7およびX8のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してH、F、Cl、Br、I、(C1-10)アルキル、置換された(C1-10)アルキル、アリール、置換されたアリール、OH、NH2、NO2、またはCNであり；
ただし、A2が4Hppaである場合、R2およびR3は欠失している。
【００１４】
上記の式（Ｉ）に含まれる化合物の部分集合（Ａ）は下記のものである：
A2はAla、4Hppaであり、または欠失しており;
A3はGlu、4Hyp、Proであり、または欠失しており;
A4はGlyであり、または欠失しており;
A5はThrであり、または欠失しており;
A6はPheであり、または欠失しており;
A7はIle、A5c、A6cであり、または欠失しており;
A8はSer、Chc-Serであり、または欠失しており;
A9はAspであり、または欠失しており;
A10はTyrであり、または欠失しており;
A11はSer、A6c、Aibであり、または欠失しており;
A12はIleであり、または欠失しており;
A13はAla、Aibであり、または欠失しており;
A14はMet、A6c、またはNleであり;
A15はAspであり;
A16はLysであり;
A17はIleであり;
A18はHisであり;
A19はGlnであり;
A20はGlnであり;
A21はAspであり;
A22はPheであり;
A23はValであり;
A24はAsnであり;
A25はTrpであり;
A26はLeuであり;
A27はLeuであり;
A28はAlaであり;
A29はGlnであり;
A30はLysであり;
A31はGly、Cys(Hsu)、Cys(Psu)、2Nal、D-2Nal、Orn(N-C(O)-(CH2)4-CH3)、Orn(N-C(O)-(CH2)8-CH3)、Orn(N-C(O)-(CH2)12-CH3)であり、または欠失しており;
A32はLys、Cys(Psu)であり、または欠失しており;
A33はLys、Cys(Psu)であり、または欠失しており;
A34はAsn、Cys(Psu)、Orn(N-C(O)-(CH2)8-CH3)であり、または欠失しており;
A35はAsp、Cys(Psu)であり、または欠失しており;
A36はTrp、Cys(Psu)であり、または欠失しており;
A37はLys、Cys(Psu)であり、または欠失しており;
A38はHis、Cys(Psu)であり、または欠失しており;
A39はAsn、Cys(Psu)であり、または欠失しており;
A40はIle、Cys(Psu)であり、または欠失しており;
A41はThrであり、または欠失しており;
A42はGlnであり、または欠失しており;
A43はGlnであり、または欠失しており;
ただし、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A11、A13、A14、A31、A32、A33、A34、A35、A36、A37、A38、A39およびA40の少なくとも１つは、天然のＧＩＰの対応する位置のア
ミノ酸残基では無い。
【００１５】
前記の部分集合（Ａ）の化合物の部分集合は下記のものである：
A2は欠失しており;
A3は欠失しており;
A4は欠失しており;
A5は欠失しており;
A6は欠失しており;
A7はA5cまたはA6cであり;
A8はSerであり;
A9はAspであり;
A10はTyrであり;
A11はSerであり;
A12はIleであり;
A13はAlaであり;
A14はMetであり;
A31はGly、Cys(Hsu)、Cys(Psu)、2Nal、D-2Nal、Orn(N-C(O)-(CH2)4-CH3)、Orn(N-C(O)-(CH2)8-CH3)、またはOrn(N-C(O)-(CH2)12-CH3)であり;
A32はLysまたはCys(Psu)であり;
A33はLysまたはCys(Psu)であり;
A34はAsn、Cys(Psu)、またはOrn(N-C(O)-(CH2)8-CH3)であり;
A35はAspまたはCys(Psu)であり;
A36はTrpまたはCys(Psu)であり;
A37はLysまたはCys(Psu)であり;
A38はHisまたはCys(Psu)であり;
A39はAsnまたはCys(Psu)であり;
A40はIleまたはCys(Psu)であり;
A41はThrであり;
A42はGlnであり;および
A43は欠失している。
【００１６】
前記の部分集合（Ａ）の化合物の部分集合は、A43が欠失しており、A2が4Hppaであり、A3、A7、A11、A13およびA14の少なくとも１つが天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸
残基では無い部分集合である。
【００１７】
前記の部分集合（Ａ）の化合物の別の部分集合は、A2〜A5およびA31〜A43が欠失しており、A6、A7、A11およびA14の少なくとも１つが天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基では無い部分集合である。
【００１８】
前記の部分集合（Ａ）の化合物の別の部分集合は、A2〜A7およびA43が欠失しており、A8およびA31の少なくとも１つが天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基では無い部分集合である。
【００１９】
前記の部分集合（Ａ）の化合物の別の部分集合は、A2〜A5およびA43が欠失しており、A6、A7およびA31の少なくとも１つが天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基では無い部分集合である。
【００２０】
前記の部分集合（Ａ）の化合物の別の部分集合は、A2〜A5およびA32〜A43が欠失しており、A6、A7およびA31の少なくとも１つが天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基で
は無い部分集合である。
【００２１】
式（Ｉ）の好ましい化合物は次のものである：
実施例１：  (Ac-A6c7)hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:4);
実施例２：  [Ac-A6c7, Cys(Psu)40]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:5);
実施例３：  [Ac-A6c7, Cys(Psu)39]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:6);
実施例４：  [Ac-A6c7, Cys(Psu)38]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:7);
実施例５：  [Ac-A6c7, Cys(Psu)36]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:8);
実施例６：  [Ac-A6c7, Cys(Psu)35]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:9);
実施例７：  [Ac-A6c7, Cys(Psu)34]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:10);
実施例８：  [Ac-A6c7, Cys(Psu)33]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:11);
実施例９：  [Ac-A6c7, Cys(Psu)32]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:12);
実施例１０：  [Ac-A6c7, Cys(Psu)31]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:13);
実施例１１：  [Ac-A6c7, Cys(Psu)37]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:14);
実施例１２：  [Ac-A6c7, Orn31(N-C(O)-(CH2)12-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:15);
実施例１３：  [Ac-A6c7, Orn31(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:16);
実施例１４：  [A6c7, Orn31(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:17);
実施例１５：  [CH3-(CH2)8-C(O)-A6c7, Orn31(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(7-42)-OH 
(SEQ ID NO:18);
実施例１６：  [Ac-A6c7, Orn31(N-C(O)-(CH2)4-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:19);
実施例１７：  [A6c7, Orn31(N-C(O)-(CH2)4-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:20);
実施例１８：  [CH3-(CH2)4-C(O)-A6c7, Orn31(N-C(O)-(CH2)4-CH3)]hGIP(7-42)-OH 
(SEQ ID NO:21);
実施例１９：  [Ac-A6c7, Orn34(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:22);
実施例２０：  [A6c7, Orn34(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:23);
実施例２１：  [CH3-(CH2)8-C(O)-A6c7, Orn34(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(7-42)-OH 
(SEQ ID NO:24);
実施例２２：  [Ac-A6c7, Cys(Hsu)31]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:25);
実施例２３：  [A6c7, Cys(Hsu)31]hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:26);
実施例２４：  (Ac-A6c7, 2Nal31)hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:27);
実施例２５：  (Ac-A6c7, D-2Nal31)hGIP(7-42)-OH;
実施例２６：  (Ac-4Hyp3, A6c7)hGIP(3-42)-OH (SEQ ID NO:28);
実施例２７：  (Ac-A6c7, Gln43)hGIP(7-43)-OH (SEQ ID NO:29);
実施例２８：  [Ac-A6c7, Cys(Psu)31]hGIP(7-34)-NH2(SEQ ID NO:30);
実施例２９：  [Ac-A6c7, Cys(Psu)31]hGIP(7-31)-NH2(SEQ ID NO:31);
実施例３０：  [Ac-Phe6, A6c7, Cys(Psu)31]hGIP(6-42)-OH (SEQ ID NO:32);
実施例３１：  [A6c7, Cys(Psu)31]hGIP(6-42)-OH (SEQ ID NO:33);
実施例３２：  (Ac-Phe6, A6c7)hGIP(6-30)-NH2 (SEQ ID NO:34);
実施例３３：  [Ac-Phe6, A6c7, Cys(Psu)31]hGIP(6-31)-NH2(SEQ ID NO:35);
実施例３４：  [A6c7, Cys(Psu)31]hGIP(6-31)-NH2(SEQ ID NO:36);
実施例３５：  (A5c7, Nle14)hGIP(6-30)-NH2 (SEQ ID NO:37);
実施例３６：  (A6c7, Nle14)hGIP(6-30)-NH2 (SEQ ID NO:38);
実施例３７：  (Aib11, Nle14)hGIP(6-30)-NH2 (SEQ ID NO:39);
実施例３８：  [Ac-Asp9, Cys(Psu)33]hGIP(9-42)-OH (SEQ ID NO:40);
実施例３９：  [Orn31(N-C(O)-(CH2)8-CH3)]hGIP(8-42)-OH (SEQ ID NO:41);
実施例４０：  [Chc-Ser8, Cys(Psu)31]hGIP(8-42)-OH (SEQ ID NO:42);
実施例４１：  [CH3-(CH2)4-C(O)-Ser8, Cys(Psu)31]hGIP(8-42)-OH (SEQ ID NO:43);
実施例４２：  (4Hppa2, 4Hyp3, A6c7)hGIP(2-42)-OH (SEQ ID NO:44);
実施例４３：  (4Hppa2, Pro3, Nle14)hGIP(2-42)-OH (SEQ ID NO:45);
実施例４４：  (4Hppa2, Aib13)hGIP(2-42)-OH (SEQ ID NO:46);
実施例４５：  (4Hppa2, A6c14)hGIP(2-42)-OH (SEQ ID NO:47);
実施例４６：  (4Hppa2, A6c11)hGIP(2-42)-OH (SEQ ID NO:48);および
実施例４７：  [Aib2, A5c11, Nle14, Lys43(N-C(O)-(CH2)10-CH3)]hGIP(2-43)-OH (SEQ ID NO:49)。
【００２２】
本発明の別の観点によると、上記で要約された、および添付された特許請求の範囲において主張される、本発明に従う化合物は、さらに共有結合的に連結されたＰＥＧ部分を含んでいてよく、ここで前記ＰＥＧ部分はその化合物にCys(マレイミド)、hCys(マレイミド)、またはPen(マレイミド)リンカーを介して共有結合的に連結されてCys(スクシンイミド-N-PEG)、hCys(スクシンイミド-N-PEG)、またはPen(スクシンイミド-N-PEG)を形成しており、ここで“スクシンイミド-N-PEG”は以下で定義されるように線状または分枝状のどちらかである。そのＰＥＧ部分は約２，０００から約８０，０００までの平均分子量を有し、好ましくはそのＰＥＧ部分は5K PEG、10K PEG、20K PEG、30K PEG、40K PEG、50K PEG
、および60K PEGからなるグループから選択されてCys(スクシンイミド-N-5K PEG)、Cys(
スクシンイミド-N-10K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-20K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-3
0K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-40K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-50K PEG)、Cys(スク
シンイミド-N-60K PEG)、hCys(スクシンイミド-N-5K PEG)、hCys(スクシンイミド-N-10K PEG)、hCys(スクシンイミド-N-20K PEG)、hCys(スクシンイミド-N-30K PEG)、hCys(スク
シンイミド-N-40K PEG)、hCys(スクシンイミド-N-50K PEG)、hCys(スクシンイミド-N-60K
PEG)、Pen(スクシンイミド-N-5K PEG)、Pen(スクシンイミド-N-10K PEG)、Pen(スクシンイミド-N-20K PEG)、Pen(スクシンイミド-N-30K PEG)、Pen(スクシンイミド-N-40K PEG)
、Pen(スクシンイミド-N-50K PEG)、またはPen(スクシンイミド-N-60K PEG)を形成している。
【００２３】
ＰＥＧ化は１６、３０および３１〜４３位のアミノ酸残基のいずれか１個において、好ましくは３２、３３および４３位のアミノ酸残基のいずれか１個において起こり、それによりCys(スクシンイミド-N-PEG)、hCys(スクシンイミド-N-PEG)、またはPen(スクシンイ
ミド-N-PEG)がそのアミノ酸残基の位置のいずれか１箇所に配置される。
【００２４】
さらに、上記の式（Ｉ）は、A44〜A47の位置にＰＥＧ化部位を提供するように拡張されてよい。本発明のそのようなＰＥＧ化された化合物のＣ末端はアミド化されていてよく、例えば(Ac-A6c7)hGIP(7-42)-NH2 (SEQ ID NO:50)であり、またはそれは遊離酸のままであってよく、例えば(Ac-A6c7)hGIP(7-42)-OH (SEQ ID NO:4)である。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本出願は、下記の一般的に理解されている略語を用いる：
Abu:    α-アミノ酪酸
Acc:    1-アミノ-1-シクロ(C3-C9)アルキルカルボン酸
A3c:    1-アミノ-1-シクロプロパンカルボン酸
A4c:    1-アミノ-1-シクロブタンカルボン酸
A5c:    1-アミノ-1-シクロペンタンカルボン酸
A6c:    1-アミノ-1-シクロヘキサンカルボン酸
Act:    4-アミノ-4-カルボキシテトラヒドロピラン
Ado:    12-アミノドデカン酸
Aib:    α-アミノイソ酪酸
Aic:    2-アミノインダン-2-カルボン酸
AlaまたはA:    アラニン
β-Ala:    ベータ-アラニン
Amp:    4-アミノ-フェニルアラニン;
Apc:    4-アミノ-4-カルボキシピペリジン:
ArgまたはR:    アルギニン
hArg:    ホモアルギニン
AsnまたはN:    アスパラギン
AspまたはD:    アスパラギン酸
Aun:    11-アミノウンデカン酸
Ava:    5-アミノ吉草酸
Cha:    β-シクロヘキシルアラニン
Chc:    シクロヘキシルカルボン酸
CysまたはC:    システイン
D-Ala:    D-アラニン
Dhp:    3,4-デヒドロプロリン
Dmt:    5,5-ジメチルチアゾリジン-4-カルボン酸
Gaba:    γ-アミノ酪酸
GlnまたはQ:    グルタミン
GluまたはE:    グルタミン酸
GlyまたはG:    グリシン
HisまたはH:    ヒスチジン
4Hppa:    3-(4-ヒドロキシフェニル)プロピオン酸
Hsu:    N-ヘキシルスクシンイミド
3Hyp:    3-ヒドロキシプロリン
4Hyp:    4-ヒドロキシプロリン
hPro:    ホモプロリン
IleまたはI:    イソロイシン
4Ktp:    4-ケトプロリン
LeuまたはL:    ロイシン
LysまたはK:    リシン
MetまたはM:    メチオニン
Nle:    ノルロイシン
NMe-Tyr:    N-メチル-チロシン
1Nalまたは1-Nal:    β-(1-ナチフル)アラニン
2Nalまたは2-Nal:    β-(2-ナチフル)アラニン
Nle:    ノルロイシン
Nva:    ノルバリン
Orn:    オルニチン
2Palまたは2-Pal:    β-(2-ピリジニル)アラニン
3Palまたは3-Pal:    β-(3-ピリジニル)アラニン
4Palまたは4-Pal:    β-(4-ピリジニル)アラニン
Pen:    ペニシラミン
PheまたはF:    フェニルアラニン
(3,4,5F)Phe:    3,4,5-トリフルオロフェニルアラニン
(2,3,4,5,6)Phe:    2,3,4,5,6-ペンタフルオロフェニルアラニン
ProまたはP:    プロリン
Psu:    N-プロピルスクシンイミド
SerまたはS:    セリン
Taz:    β-(4-チアゾリル)アラニン
3Thi:    β-(3-チエニル)アラニン
ThrまたはT:    スレオニン
Thz:    チオプロリン
Tic:    テトラヒドロイソキノリン-3-カルボン酸
Tle:    tert-ロイシン
TrpまたはW:    トリプトファン
TyrまたはY:    チロシン
ValまたはV:    バリン。
【００２６】
本明細書において用いられる特定の他の略語を次のように定義する：
Acn:    アセトニトリル
Boc:    tert-ブチルオキシカルボニル
BSA:    ウシ血清アルブミン
DCM:    ジクロロメタン
DIPEA:    ジイソプロピルエチルアミン
DMF:    ジメチルホルムアミド
DTT:    ジチオスレイトール(dithiothrieitol)
ESI:    エレクトロスプレーイオン化
Fmoc:    9-フルオレニルメチルオキシカルボニル
HBTU:    2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウム  ヘキ
サフルオロホスフェート
HOBT:    1-ヒドロキシベンゾトリアゾール
HPLC:    高速液体クロマトグラフィー
IBMX:    イソブチルメチルキサンチン
LC-MS:  液体クロマトグラフィー−質量分析
Mtt:    メチルトリチル
NMP:    N-メチルピロリドン
5K PEG:  ポリエチレングリコールであって、他の官能基または部分、例えばリンカー
を含んでいてよく、下記で定義されるように線状または分枝状のどちらかであり、約５，０００の平均総分子量を有するポリエチレングリコール
10K PEG:  ポリエチレングリコールであって、他の官能基または部分、例えばリンカーを含んでいてよく、下記で定義されるように線状または分枝状のどちらかであり、約１０，０００の平均総分子量を有するポリエチレングリコール
20K PEG:  ポリエチレングリコールであって、他の官能基または部分、例えばリンカーを含んでいてよく、下記で定義されるように線状または分枝状のどちらかであり、約２０，０００の平均総分子量を有するポリエチレングリコール
30K PEG:  ポリエチレングリコールであって、下記で定義されるように線状または分枝状のどちらかであり、他の官能基または部分、例えばリンカーを含んでいてよく、約３０，０００の平均総分子量を有するポリエチレングリコール
40K PEG:  ポリエチレングリコールであって、他の官能基または部分、例えばリンカーを含んでいてよく、下記で定義されるように線状または分枝状のどちらかであり、約４０，０００の平均総分子量を有するポリエチレングリコール
50K PEG:  ポリエチレングリコールであって、他の官能基または部分、例えばリンカーを含んでいてよく、下記で定義されるように線状または分枝状のどちらかであり、約５０，０００の平均総分子量を有するポリエチレングリコール
60K PEG:  ポリエチレングリコールであって、他の官能基または部分、例えばリンカーを含んでいてよく、下記で定義されるように線状または分枝状のどちらかであり、約６０，０００の平均総分子量を有するポリエチレングリコール
tBu:    tert-ブチル
TIS:    トリイソプロピルシラン
Trt:    トリチル
TFA:    トリフルオロ酢酸
Z:    ベンジルオキシカルボニル
“Cys(スクシンイミド-N-アルキル)”は次の構造を有する：
【００２７】
【化１】
2014051505.tif 000002
【００２８】
“Cys(Hsu)”は次の構造を有する：
【００２９】
【化２】
2014051505.tif 000003
【００３０】
“Cys(Psu)”は次の構造を有する：
【００３１】
【化３】
2014051505.tif 000004
【００３２】
“Orn(N-C(O)-(CH2)12-CH3)”は次の構造を有する：
【００３３】
【化４】
2014051505.tif 000005
【００３４】
“Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)”は次の構造を有し：
【００３５】
【化５】
2014051505.tif 000006
【００３６】
ここで、x = １〜３０、およびy = １〜３０である。
【００３７】
“hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)”は次の構造を有し：
【００３８】
【化６】
2014051505.tif 000007
【００３９】
ここで、x = １〜３０、およびy = １〜３０である。
【００４０】
“Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)”は次の構造を有し：
【００４１】
【化７】
2014051505.tif 000008
【００４２】
ここで、x = １〜３０、およびy = １〜３０である。
【００４３】
“Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)”は次の構造を有し：
【００４４】
【化８】
2014051505.tif 000009
【００４５】
ここで、s = １〜３０、およびt = １〜３０である。
【００４６】
“hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)”は次の構造を有し：
【００４７】
【化９】
2014051505.tif 000010
【００４８】
ここで、s = １〜３０、およびt = １〜３０である。
【００４９】
“Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)”は次の構造を有し：
【００５０】
【化１０】
2014051505.tif 000011
【００５１】
ここで、s = １〜３０、およびt = １〜３０である。
【００５２】
“Cys(スクシンイミド-N-PEG)”は次の構造を有する：
【００５３】
【化１１】
2014051505.tif 000012
【００５４】
“hCys(スクシンイミド-N-PEG)”は次の構造を有する：
【００５５】
【化１２】
2014051505.tif 000013
【００５６】
“Pen(スクシンイミド-N-PEG)”は次の構造を有する：
【００５７】
【化１３】
2014051505.tif 000014
【００５８】
“Cys(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-PEG)”は次の構造を有する：
【００５９】
【化１４】
2014051505.tif 000015
【００６０】
“Cys(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-O-CH2-CH(PEG)-CH2-PEG)”は次の構造を有する：
【００６１】
【化１５】
2014051505.tif 000016
【００６２】
Ｎ末端のアミノ酸を除いて、この開示における全てのアミノ酸の略語（例えばAla）は-NH-C(R)(R’)-CO-の構造を表しており、ここでRおよびR’はそれぞれ独立して水素またはアミノ酸の側鎖（例えば、Alaに関してはR = CH3およびR’ = H）であり、またはRおよびR’は繋がれて環系を形成していてよい。Ｎ末端アミノ酸に関しては、その略語は(R2R3)N-C(R)(R’)-CO-の構造を表し、ここでR2およびR3は上記の式（Ｉ）で定義されたものである。
【００６３】
用語“(C1-C30)炭化水素部分”は、アルキル、アルケニルおよびアルキニルを含み、アルケニルおよびアルキニルの場合ではC2-C30がある。
【００６４】
この発明のペプチドは、本明細書において別の形式、例えば(A5c2)hGIP(1-42)-OH (SEQ
ID NO:3)によっても表され、それはカッコの間に置かれた天然の配列から置換されたア
ミノ酸（例えば、hGIP中のAla2の代わりにA5c2）を有する。カッコの間の数字は、そのペプチド中に存在するアミノ酸の番号を表す（例えば、hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:1)はhGIPに関するペプチド配列のアミノ酸１〜４２である）。hGIP(1-30)-NH2 (SEQ ID NO:2)中
の名称“NH2”は、そのペプチドのＣ末端がアミド化されていることを示し；hGIP(1-42) (SEQ ID NO:1)またはhGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:1)はＣ末端が遊離酸であることを意味する。
【００６５】
ヒトのＧＩＰ(“hGIP”)は次のアミノ酸配列を有する：
【００６６】
【化１６】
2014051505.tif 000017
【００６７】
“アシル”は、R’’-C(O)-を指し、ここでR’’はH、アルキル、置換されたアルキル
、ヘテロアルキル、置換されたヘテロアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アリール、アルキルアリール、または置換されたアルキルアリールである。
【００６８】
“アルキル”は１個以上の炭素原子を含む炭化水素基を指し、ここで多数の炭素原子は、もし存在するならば、単結合によりつながっている。アルキル炭化水素基は直鎖であってよく、または１個以上の分枝または環式基を含んでいてよい。
【００６９】
“置換されたアルキル”は、炭化水素基の１個以上の水素原子が、ハロゲン（すなわちフッ素、塩素、臭素およびヨウ素）、-OH、-CN、-SH、-NH2、-NHCH3、-NO2、ハロゲンで
置換された-C1-20アルキル、-CF3、-OCH3、-OCF3、および-(CH2)0-20-COOHからなるグル
ープから選択される１個以上の置換基で置き換えられているアルキルを指す。異なる態様において、１、２、３または４個の置換基が存在する。-(CH2)0-20-COOHの存在は、結果
としてアルキル酸の生成をもたらす。-(CH2)0-20-COOHを含む、またはそれで構成される
アルキル酸の例には、2-ノルボルナン酢酸、tert-酪酸および3-シクロペンチルプロピオ
ン酸が含まれる。
【００７０】
“ヘテロアルキル”は、炭化水素基中の炭素原子の１個以上が次の基：アミノ、アミド、-O-、-S-、またはカルボニルの内の１個以上で置き換えられているアルキルを指す。異なる態様において、１または２個のヘテロ原子が存在する。
【００７１】
“置換されたヘテロアルキル”は、炭化水素基の１個以上の水素原子が、ハロゲン、-OH、-CN、-SH、-NH2、-NHCH3、-NO2、ハロゲンで置換された-C1-20アルキル、-CF3、-OCH3、-OCF3、および-(CH2)0-20-COOHからなるグループから選択される１個以上の置換基で置き換えられているヘテロアルキルを指す。異なる態様において、１、２、３または４個の置換基が存在する。
【００７２】
“アルケニル”は、２個以上の炭素で構成され、１個以上の炭素−炭素二重結合が存在する炭化水素基を指す。アルケニル炭化水素基は直鎖であってよく、または１個以上の分枝または環式基を含んでいてよい。
【００７３】
“置換されたアルケニル”は、１個以上の水素がハロゲン、-OH、-CN、-SH、-NH2、-NHCH3、-NO2、ハロゲンで置換された-C1-20アルキル、-CF3、-OCH3、-OCF3、および-(CH2)0-20-COOHからなるグループから選択される１個以上の置換基で置き換えられているアルケニルを指す。異なる態様において、１、２、３または４個の置換基が存在する。
【００７４】
“アリール”は、共役パイ電子系を有する少なくとも１個の環を有し、３個までの共役した、または縮合した環系を含む、場合により置換された芳香族基を指す。アリールには炭素環式アリール、ヘテロ環式アリールおよびビアリール基が含まれる。好ましくは、アリールは５または６員環である。ヘテロ環式アリールに関して好ましい原子は、１個以上の硫黄、酸素および／または窒素である。アリールの例には、フェニル、1-ナフチル、2-ナフチル、インドール、キノリン、2-イミダゾール、および9-アントラセンが含まれる。アリール置換基は、-C1-20アルキル、-C1-20アルコキシ、ハロゲン、-OH、-CN、-SH、-NH2、-NO2、ハロゲンで置換された-C1-20アルキル、-CF3、-OCF3、および-(CH2)0-20-COOH
からなるグループから選択される。異なる態様において、アリールは０、１、２、３または４個の置換基を含む。
【００７５】
“アルキルアリール”は“アリール”に結合した“アルキル”を指す。
【００７６】
合成
この発明のペプチドは、標準的な固相ペプチド合成により調製することができる。例えば、Stewart, J. M., et al., 1984, Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Co., 第２版を参照。R1がNH-X2-CH2-CONH2、すなわち、Z0 = CONH2である場合、そのペプチドの
合成はRinkアミドMBHA樹脂にカップリングしたFmoc-HN-X2-CH2-CONH2を用いて出発する。R1がNH-X2-CH2-COOH、すなわち、Z0 = COOHである場合、そのペプチドの合成はWang樹脂
にカップリングしたFmoc-HN-X2-CH2-COOHを用いて出発する。この特定の工程に関して、
２モル当量のFmoc-HN-X2-COOH、HBTUおよびHOBtならびに１０モル当量のDIPEAを用いる。
カップリングの時間は約８時間である。
【００７７】
A5c、A6c、および／またはAibを含むこの発明のＧＩＰアナログの合成において、これ
らの残基およびそれらのすぐ後ろの残基に関するカップリング時間は２時間である。
【００７８】
上記の一般式の置換基R2およびR3は、Ｎ末端アミノ酸A1の遊離アミンに、当技術で既知の標準的な技法により結合させることができる。例えばアルキル基、例えば(C1-C30)アルキルは、還元的アルキル化を用いて結合させることができる。ヒドロキシアルキル基、例えば(C1-C30)ヒドロキシアルキルも還元的アルキル化を用いて結合させることができ、ここで遊離のヒドロキシ基はtert-ブチルエステルを用いて保護される。アシル基、例えば-C(O)X3は、完了した樹脂を塩化メチレン中で３モル当量の遊離酸およびジイソプロピルカルボジイミド両方と約１時間混合することによる、遊離酸、例えば-X3COOHのＮ末端アミ
ノ酸の遊離アミンへのカップリングにより結合させることができる。3-フルオロ-4-ヒド
ロキシフェニル酢酸のように遊離酸が遊離のヒドロキシ基を含む場合、カップリングは追加の３モル当量のHOBTと共に実施されるべきである。
【００７９】
下記の実施例は、この発明のペプチドを作るための合成法を記述し、その方法は当業者には周知である。当業者には他の方法も知られている。実施例は説明のために提供されるのであって、本発明の範囲を限定することを意味するものでは決して無い。
【実施例】
【００８０】
実施例２:[Ac-A6c7, Cys(Psu)40]hGIP(7-42)-OH
Liberty Peptide Synthesizer (CEM；米国ノースキャロライナ州マシューズ)上で、0.1
mmoleスケールで、マイクロ波支援Fmoc化学を用いる固相ペプチド合成を用いてペプチドを組み立てた。プレロードされた(Pre-loaded)Fmoc-Gln(Trt)-Wang樹脂(0.59 mmole/g；Novabiochem，米国カリフォルニア州サンディエゴ)を用いてＣ末端酸ペプチド（C-terminal acid peptide）を生成した。その樹脂(0.17 g)を50 mlコニカルチューブの中に、15 mlのジメチルホルムアミド(DMF)と共に置き、合成機上の樹脂の位置に入れた。次いでその
樹脂を、自動化されたプロセスにより定量的に反応容器に移した。0.1 mmoleスケールで
の合成のための標準的なLiberty合成プロトコルを用いた。このプロトコルには、DMF中の0.1M N-ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)を含む20% ピペリジン7 mlを用いた最初の
処理によるＮ末端のFmoc部分の脱保護が含まれている。その最初の脱保護の工程は、マイクロ波電力（４５ワット、最大温度７５℃）および窒素による泡立て（３秒間オン／７秒間オフ）を用いて３０秒間であった。次いで反応容器から液体を排出し(drained)、それ
が３分間の期間であること以外は第１の処理と同じである第２のピペリジン処理を行った。次いで樹脂から液体を排出し、DMFで数回、完全に洗浄した。次いでDMF中で0.2Mのストック溶液として調製した保護されたアミノ酸Fmoc-Thr(tBu)-OH(2.5 ml, 5当量)、続いて1.0 mlのDMF中0.45M (4.5当量) HBTU [2-(1H-ベンゾ-トリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート]を添加した。これに続き0.5 mlのNMP
(N-メチルピロリジノン(N-methylpyrrollidinone))中2M (10当量) DIPEA (ジイソプロピルエチルアミン)を添加した。カップリングの工程は、２０ワットのマイクロ波電力、７
５℃の最大温度、および同程度の窒素による泡立てを用いて５分間行った。
【００８１】
最初のカップリングの工程の後、反応容器から液体を排出して廃棄し、カップリングの工程を繰り返した。次いでサイクル１と同様のサイクル２を開始した。全てのアミノ酸を同様にして導入し、シークエンス全体を通して二重カップリングの方法を用いた。サイクル１〜３、１９〜２０、２５〜２６および３０〜３４は、カップリングの工程のすぐ後にキャッピングの手順を含んでいた。キャッピングは、NMP中の0.015M HOBTを含む0.5M無水酢酸7 mlおよび2M DIPEA溶液2 mlの添加により、多段階マイクロ波プロトコルを用いて行った：５０ワットの電力で３０秒間（最大温度６５℃）、続いて３０秒間のマイクロ波電
力オフ、続いて第２ラウンドの３０秒間のマイクロ波電力オン（５０ワット）、次いで再び３０秒間のマイクロ波電力無し。次いで樹脂から液体を排出し、DMFで完全に洗浄した
。次のアミノ酸(Advanced Chemtech，米国ケンタッキー州ルイスビル)を用いた：サイク
ル1: Fmoc-Thr(OtBu)-OH; サイクル2: Fmoc-Cys(Trt)-OH; サイクル3: Fmoc-Asn(Trt)-OH; サイクル4: Fmoc-His(Trt)-OH; サイクル5: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル6: Fmoc-Trp(Boc)-OH; サイクル7: Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル8: Fmoc-Asn(Trt)-OH; サイクル9: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル10: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル11: Fmoc-Gly-OH; サイクル12: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル13: Fmoc-Gln(Trt)-OH; サイクル14: Fmoc-Ala-OH; サ
イクル15: Fmoc-Leu-OH; サイクル16: Fmoc-Leu-OH; サイクル17: Fmoc-Trp(Boc)-OH; サイクル18: Fmoc-Asn(Trt)-OH; サイクル19: Fmoc-Val-OH; サイクル20: Fmoc-Phe-OH; サイクル21: Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル22: Fmoc-Gln(Trt)-OH; サイクル23: Fmoc-Gln(Trt)-OH; サイクル24: Fmoc-His(Trt)-OH; サイクル25: Fmoc-Ile-OH; サイクル26: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル27: Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル28: Fmoc-Met-OH; サイクル29: Fmoc-Ala-OH; サイクル30: Fmoc-Ile-OH; サイクル31: Fmoc-Tyr(tBu)-Ser(psiMe,Me,Pro)-OH; サイクル32: Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル33: Fmoc-Ser(tBu)-OH;およびサイクル34: Fmoc-A6c-OH。一度ペプチドのバックボーンが完成したら、樹脂をピペリジン溶液
で処理してＮ末端のFmoc基を除去し、続いてＮ末端をアセチル化するために標準的なキャッピングの手順で処理した。次いで樹脂をDMFで完全に洗浄し、次いで移動用の溶媒とし
てDMFを用いて50 mlコニカルチューブに戻した。
【００８２】
5 mlの次の試薬で処理することによりその樹脂を脱保護し、樹脂から切り離した：5% TIS、2%水、5% (w/v)ジチオスレイトール(DTT)、88% TFA、および３．５時間混合させた。濾液を45 mlの冷無水エチルエーテルの中に集めた。沈殿物を冷却遠心機において3500 RPMで１０分間遠心分離してペレットにした。エーテルをデカントし、ペプチドを新しいエ
ーテル中で再懸濁した。そのエーテルでの仕上げを合計２回行った。最後のエーテルでの洗浄の後、ペプチドを風乾させて残留したエーテルを除去した。ペプチドのペレットを8 mlのアセトニトリル(Acn)、続いて8 mlの脱イオン水中で再懸濁し、完全に溶解させた。
次いでそのペプチド溶液を質量分析により分析した。エレクトロスプレーイオン化を用いた質量分析は4358.0ダルトンの質量を含む主生成物を同定した；これはアセチル化された線状生成物と一致する。その粗生成物（おおよそ500 mg）を、250 x 4.6 mm C18カラム(Phenomenex;米国カリフォルニア州トーランス)を用いるHPLCにより、３０分間にわたる2〜80%アセトニトリル(0.1% TFA)の勾配を用いて分析した。分析的HPLCは、38%の純度を有する生成物を同定した。次いでその粗製のペプチドを、C18逆相カラムを備えた分取HPLC上
で、10 ml/分の流速で50分間にわたる10〜60%アセトニトリル(0.1% TFA)を用いて精製し
た。次いでその精製したペプチドを凍結乾燥すると、15 mgのペプチドが得られた。次い
でその線状のペプチドをN-プロピルマレイミド(Pma)を用いて誘導体化し、システイン側
鎖上のプロピルスクシンイミド(Psu)誘導体を生成した。精製した線状ペプチドを、炭酸
アンモニウムを用いてpH 6.5に調節した水の中で5 mg/mlで溶かした(brought up)。５当
量のPmaを、３０秒間一定して攪拌しながら添加した。次いでその誘導体化したペプチド
の溶液を質量分析により分析した。質量分析は、4498.6ダルトンの質量を含む主生成物を同定した；これは望まれるPsu誘導体化生成物と一致する。次いでその生成物を分取HPLC
により前回と同様の勾配を用いて再精製した。その精製された生成物を、純度に関してHPLCにより(95.2%)、および質量分析により(4498.6ダルトン)分析し、続いて凍結乾燥した
。凍結乾燥の後、4.3 mgの精製された生成物が得られ、これは1%の収率を表している。
【００８３】
実施例１２:[Ac-A6c7, Orn(N-C(O)-(CH2)12-CH3)31]hGIP(7-42)-OH
Liberty Peptide Synthesizer (CEM；米国ノースキャロライナ州マシューズ)上で、0.1
mmoleスケールで、マイクロ波支援Fmoc化学を用いる固相ペプチド合成を用いてペプチドを組み立てた。プレロードされたFmoc-Gln(Trt)-Wang樹脂(0.59 mmole/g；Novabiochem，米国カリフォルニア州サンディエゴ)を用いてＣ末端酸ペプチドを生成した。その樹脂(0.
17 g)を50 mlコニカルチューブの中に、15 mlのジメチルホルムアミド(DMF)と共に置き、合成機上の樹脂の位置に入れた。次いでその樹脂を、自動化されたプロセスにより定量的に反応容器に移した。0.1 mmoleスケールでの合成のための標準的なLiberty合成プロトコルを用いた。このプロトコルには、DMF中の0.1M N-ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)を含む20% ピペリジン7 mlを用いた最初の処理によるＮ末端のFmoc部分の脱保護が含まれている。その最初の脱保護の工程は、マイクロ波電力（４５ワット、最大温度７５℃）および窒素による泡立て（３秒間オン／７秒間オフ）を用いて３０秒間であった。次いで反応容器から液体を排出し、それが３分間の期間であること以外は第１の処理と同じである第２のピペリジン処理を行った。次いで樹脂から液体を排出し、DMFで数回、完全に洗浄
した。次いでDMF中で0.2Mのストック溶液として調製した保護されたアミノ酸Fmoc-Thr(tBu)-OH(2.5 ml, 5当量)、続いて1.0 mlのDMF中0.45M (4.5当量) HBTU [2-(1H-ベンゾ-トリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート]を添加した。これに続き0.5 mlのNMP (N-メチルピロリジノン(N-methylpyrrollidinone))中2M
(10当量) DIPEA (ジイソプロピルエチルアミン)を添加した。カップリングの工程は、２０ワットのマイクロ波電力、７５℃の最大温度、および同程度の窒素による泡立てを用いて５分間行った。
【００８４】
最初のカップリングの工程の後、反応容器から液体を排出して廃棄し、カップリングの工程を繰り返した。次いでサイクル１と同様のサイクル２を開始した。全てのアミノ酸を同様にして導入し、シークエンス全体を通して二重カップリングの方法を用いた。サイクル１〜３、１９〜２０、２５〜２６および３０〜３４は、カップリングの工程のすぐ後にキャッピングの手順を含んでいた。キャッピングは、NMP中の0.015M HOBTを含む0.5M無水酢酸7 mlおよび2M DIPEA溶液2 mlの添加により、多段階マイクロ波プロトコルを用いて行った：５０ワットの電力で３０秒間（最大温度６５℃）、続いて３０秒間のマイクロ波電力オフ、続いて第２ラウンドの３０秒間のマイクロ波電力オン（５０ワット）、次いで再び３０秒間のマイクロ波電力無し。次いで樹脂から液体を排出し、DMFで完全に洗浄した
。次のアミノ酸(Advanced Chemtech，米国ケンタッキー州ルイスビル)を用いた：サイク
ル1: Fmoc-Thr(tBu)-OH; サイクル2: Fmoc-Ile-OH; サイクル3: Fmoc-Asn(Trt)-OH; サイクル4: Fmoc-His(Trt)-OH; サイクル5: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル6: Fmoc-Trp(Boc)-OH; サイクル7: Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル8: Fmoc-Asn(Trt)-OH; サイクル9: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル10: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル11: Fmoc-Orn(Mtt)-OH; サイクル12: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル13: Fmoc-Gln(Trt)-OH; サイクル14: Fmoc-Ala-OH; サイクル15: Fmoc-Leu-OH; サイクル16: Fmoc-Leu-OH; サイクル17: Fmoc-Trp(Boc)-OH; サイクル18: Fmoc-Asn(Trt)-OH; サイクル19: Fmoc-Val-OH; サイクル20: Fmoc-Phe-OH; サイクル21: Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル22: Fmoc-Gln(Trt)-OH; サイクル23: Fmoc-Gln(Trt)-OH; サイクル24: Fmoc-His(Trt)-OH; サイクル25: Fmoc-Ile-OH; サイクル26: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル27: Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル28: Fmoc-Met-OH; サイクル29: Fmoc-Ala-OH; サイクル30: Fmoc-Ile-OH; サイクル31: Fmoc-Tyr(tBu)-Ser(psiMe,Me,Pro)-OH; サイクル32: Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル33: Fmoc-Ser(tBu)-OH;およびサイクル34: Fmoc-A6c-OH。Fmoc-His(Trt)-OHに関するカップリングのプロトコルは、標準的なプ
ロトコルを少し修正したバージョンであった。最初の２分間マイクロ波電力をオフにし、続いてマイクロ波電力オンで４分間（２０ワット；最大温度５０℃）行った。一度ペプチドのバックボーンが完成したら、樹脂をピペリジン溶液で処理してＮ末端のFmoc基を除去し、続いてＮ末端をアセチル化するために標準的なキャッピングの手順で処理した。次いで樹脂を12 mlのジクロロメタン(DCM)中1%トリフルオロ酢酸(TFA) / 5%トリイソプロピルシラン(TIS)で５分間、N2の散布の程度（sparge rate）を５秒間のオンおよび１０秒間のオフで処理した。次いで樹脂から液体を排出し、再度DCM中1% TFA / 5% TISで５分間処理した。オルニチン側鎖からMtt部分を効果的に除去するため、これを合計７回行った。そ
の樹脂をDCMを用いて数回、完全に洗浄し、次いでオルニチンのδＮ上の残留したTFA塩を中和するために標準的なピペリジン処理により処理した。DMF中0.2M溶液として調製した
ミリスチン酸(CH3-(CH2)12-COOH; AldRiCH，米国ミズーリ州セントルイス)を、標準的な
アミノ酸のカップリングのプロトコルを用いてオルニチン側鎖にカップリングさせた。次いで樹脂をDMFで完全に洗浄し、次いで移動用の溶媒としてDMFを用いて50 mlコニカルチ
ューブに戻した。
【００８５】
5 mlの次の試薬で処理することによりその樹脂を脱保護し、樹脂から切り離した：5% TIS、2%水、5% (w/v)ジチオスレイトール(DTT)、88% TFA、および３．５時間混合させた。濾液を45 mlの冷無水エチルエーテルの中に集めた。沈殿物を冷却遠心機において3500 RPMで１０分間遠心分離してペレットにした。エーテルをデカントし、ペプチドを新しいエ
ーテル中で再懸濁した。そのエーテルでの仕上げを合計２回行った。最後のエーテルでの洗浄の後、ペプチドを風乾させて残留したエーテルを除去した。ペプチドのペレットを8 mlのアセトニトリル(Acn)、続いて8 mlの脱イオン水中で再懸濁し、完全に溶解させた。
次いでそのペプチド溶液を質量分析により分析した。エレクトロスプレーイオン化を用いた質量分析は4636.5ダルトンの質量を含む主生成物を同定した；これは望まれる生成物と一致する。その粗生成物を、250 x 4.6 mm C18カラム(Phenomenex;米国カリフォルニア州トーランス)を用いるHPLCにより、３０分間にわたる2〜80%アセトニトリル(0.1% TFA)の
勾配を用いて分析した。分析的HPLCは、37%の純度を有する生成物を同定した。次いでそ
のペプチドを、C18カラムを備えた分取HPLC上で、同様の溶離勾配を用いて精製した。そ
の精製された生成物を、純度に関してHPLCにより(95.20%)、および質量分析により(4636.6ダルトン)再分析し、続いて凍結乾燥させた。凍結乾燥の後、3 mgの精製された生成物が得られ、これは0.6%の収率を表している。
【００８６】
実施例２２:[Ac-A6c7, Cys(Hsu)31]hGIP(7-42)-OH
Liberty Peptide Synthesizer (CEM；米国ノースキャロライナ州マシューズ)上で、0.1
mmoleスケールで、マイクロ波支援Fmoc化学を用いる固相ペプチド合成を用いてペプチドを組み立てた。プレロードされたFmoc-Gln(Trt)-Wang樹脂(0.59 mmole/g；Novabiochem，米国カリフォルニア州サンディエゴ)を用いてＣ末端酸ペプチドを生成した。その樹脂(0.17 g)を50 mlコニカルチューブの中に、15 mlのジメチルホルムアミド(DMF)と共に置き、合成機上の樹脂の位置に入れた。次いでその樹脂を、自動化されたプロセスにより定量的に反応容器に移した。0.1 mmoleスケールでの合成のための標準的なLiberty合成プロトコルを用いた。このプロトコルには、DMF中の0.1M N-ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)を含む20% ピペリジン7 mlを用いた最初の処理によるＮ末端のFmoc部分の脱保護が含まれている。その最初の脱保護の工程は、マイクロ波電力（４５ワット、最大温度７５℃）および窒素による泡立て（３秒間オン／７秒間オフ）を用いて３０秒間であった。次いで反応容器から液体を排出し、それが３分間の期間であること以外は第１の処理と同じである第２のピペリジン処理を行った。次いで樹脂から液体を排出し、DMFで数回、完全に洗浄
した。次いでDMF中で0.2Mのストック溶液として調製した保護されたアミノ酸Fmoc-Thr(tBu)-OH(2.5 ml, 5当量)、続いて1.0 mlのDMF中0.45M (4.5当量) HBTU [2-(1H-ベンゾ-トリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート]を添加した。これに続き0.5 mlのNMP (N-メチルピロリジノン(N-methylpyrrollidinone))中2M
(10当量) DIPEA (ジイソプロピルエチルアミン)を添加した。カップリングの工程は、２０ワットのマイクロ波電力、７５℃の最大温度、および同程度の窒素による泡立てを用いて５分間行った。
【００８７】
最初のカップリングの工程の後、反応容器から液体を排出して廃棄し、カップリングの工程を繰り返した。次いでサイクル１と同様のサイクル２を開始した。全てのアミノ酸を同様にして導入し、シークエンス全体を通して二重カップリングの方法を用いた。サイクル１〜３、１９〜２０、２５〜２６および３０〜３４は、カップリングの工程のすぐ後にキャッピングの手順を含んでいた。キャッピングは、NMP中の0.015M HOBTを含む0.5M無水酢酸7 mlおよび2M DIPEA溶液2 mlの添加により、多段階マイクロ波プロトコルを用いて行
った：５０ワットの電力で３０秒間（最大温度６５℃）、続いて３０秒間のマイクロ波電力オフ、続いて第２ラウンドの３０秒間のマイクロ波電力オン（５０ワット）、次いで再び３０秒間のマイクロ波電力無し。次いで樹脂から液体を排出し、DMFで完全に洗浄した
。次のアミノ酸(Advanced Chemtech，米国ケンタッキー州ルイスビル)を用いた：サイク
ル1: Fmoc-Thr(OtBu)-OH; サイクル2: Fmoc-Ile-OH; サイクル3: Fmoc-Asn(Trt)-OH; サ
イクル4: Fmoc-His(Trt)-OH; サイクル5: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル6: Fmoc-Trp(Boc)-OH; サイクル7: Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル8: Fmoc-Asn(Trt)-OH; サイクル9: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル10: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル11: Fmoc-Cys(Trt)-OH; サイク
ル12: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル13: Fmoc-Gln(Trt)-OH; サイクル14: Fmoc-Ala-OH; 
サイクル15: Fmoc-Leu-OH; サイクル16: Fmoc-Leu-OH; サイクル17: Fmoc-Trp(Boc)-OH; サイクル18: Fmoc-Asn(Trt)-OH; サイクル19: Fmoc-Val-OH; サイクル20: Fmoc-Phe-OH; サイクル21: Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル22: Fmoc-Gln(Trt)-OH; サイクル23: Fmoc-Gln(Trt)-OH; サイクル24: Fmoc-His(Trt)-OH; サイクル25: Fmoc-Ile-OH; サイクル26: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル27: Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル28: Fmoc-Met-OH; サイクル29: Fmoc-Ala-OH; サイクル30: Fmoc-Ile-OH; サイクル31: Fmoc-Tyr(tBu)-Ser(psiMe,Me,Pro)-OH; サイクル32: Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル33: Fmoc-Ser(tBu)-OH;およびサイクル34: Fmoc-A6c-OH。一度ペプチドのバックボーンが完成したら、樹脂をピペリジン溶
液で処理してＮ末端のFmoc基を除去し、続いてＮ末端をアセチル化するために標準的なキャッピングの手順で処理した。次いで樹脂をDMFで完全に洗浄し、次いで移動用の溶媒と
してDMFを用いて50 mlコニカルチューブに戻した。
【００８８】
5 mlの次の試薬で処理することによりその樹脂を脱保護し、樹脂から切り離した：5% TIS、2%水、5% (w/v)ジチオスレイトール(DTT)、88% TFA、および３．５時間混合させた。濾液を45 mlの冷無水エチルエーテルの中に集めた。沈殿物を冷却遠心機において3500 RPMで１０分間遠心分離してペレットにした。エーテルをデカントし、ペプチドを新しいエ
ーテル中で再懸濁した。そのエーテルでの仕上げを合計２回行った。最後のエーテルでの洗浄の後、ペプチドを風乾させて残留したエーテルを除去した。ペプチドのペレットを8 mlのアセトニトリル(Acn)、続いて8 mlの脱イオン水中で再懸濁し、完全に溶解させた。
次いでそのペプチド溶液を質量分析により分析した。エレクトロスプレーイオン化を用いた質量分析は4414.9ダルトンの質量を含む主生成物を同定した；これはその線状生成物と一致する。その粗生成物（おおよそ500 mg）を、250 x 4.6 mm C18カラム(Phenomenex;米国カリフォルニア州トーランス)を用いるHPLCにより、３０分間にわたる2〜80%アセトニ
トリル(0.1% TFA)の勾配を用いて分析した。分析的HPLCは、58%の純度を有する生成物を
同定した。次いでその粗製のペプチドをN-ヘキシルマレイミド(Hma)を用いて誘導体化し
、システイン側鎖上のヘキシルスクシンイミド(Hsu)誘導体を生成した。粗製の線状ペプ
チドを、炭酸アンモニウムを用いてpH 6.5に調節した水の中で5 mg/mlで溶かした。５当
量のHmaを、３０秒間一定して攪拌しながら添加した。過剰なHmaを５当量のジチオスレイトール(DTT)を用いて抑えた(quenched)。次いでその誘導体化したペプチドの溶液を質量
分析により分析した。質量分析は、4596.1ダルトンの質量を含む主生成物を同定した；これは望まれるHsu誘導体化生成物と一致する。次いでその生成物を分取HPLCにより前回と
同様の勾配を用いて再精製した。その精製された生成物を、純度に関してHPLCにより(95.4%)、および質量分析により(4596.4ダルトン)分析し、続いて凍結乾燥した。凍結乾燥の
後、28.1 mgの精製された生成物が得られ、これは6.1%の収率を表している。
【００８９】
本明細書で開示されたＰＥＧ化されたＧＩＰ化合物は、実質的に実施例２の化合物の合成に関して記述された手順に従って、出発物質として実施例２において用いられたN-プロピルマレイミドの代わりにPEG-マレイミドを用いることにより合成することができる。
【００９０】
当業者は、本発明の他のペプチドを、前記の実施例において開示された合成手順に類似した合成手順を用いて調製することができる。本明細書において例示した化合物に関する
物理的データを表１に示す。
【００９１】
表１
【００９２】
【表１−１】
2014051505.tif 000018
【００９３】
【表１−２】
2014051505.tif 000019
【００９４】
機能的アッセイ
Ａ．インビトロｈＧＩＰ受容体結合アッセイ
ヒトの組換えＧＩＰ受容体を発現しているCHO-K1クローン細胞を、氷冷した50mM トリ
ス-HCl中でBrinkman Polytron（設定６、１５秒）を用いてホモジナイズし、次いで39,000 gでの１０分間の遠心分離を２回、間で新しい緩衝液に再懸濁して行うことにより、イ
ンビトロ受容体結合アッセイのための膜を調製した。そのアッセイに関して、洗浄した膜調製物の部分量(aliquots)を、50mM トリス-HCl、0.1 mg/mlバシトラシン、および0.1% BSA中0.05nM [125I]GIP (おおよそ2200 Ci/mmol)と共に２５℃で１００分間保温した。最
終的なアッセイ体積は0.5 mlであった。Brandel濾過マニホールドを用いてGF/Cフィルタ
ー（0.5%ポリエチレンイミンに予め浸したもの）を通して急速に濾過することにより、保温を終了させた。次いでそれぞれのチューブおよびフィルターを、5 ml部分量の氷冷した緩衝液で３回洗浄した。特異的な結合は、結合した全ての放射性リガンドから1000nMのＧＩＰの存在下で結合した放射性リガンドを引いたものとして定義された。本明細書で例示した化合物に関するインビトロｈＧＩＰ受容体結合のデータを表２に示す。
【００９５】
Ｂ．ヒトおよびラットの血漿内半減期アッセイ
ＧＩＰペプチド(50 μL 1 mg/ml)を450μLの血漿（ヒトまたはラット）に添加し、短時間ボルテックスし(vertexed)、３７℃で保温した。０、１、２、３、４、８、２４、３２、４８、５６、７２時間の時点のような様々な時点において50 μLを分離し、マイクロ遠心チューブの中で5 μLのギ酸および150 μLのアセトニトリルと混合し、ボルテックスし(vertexed)、10K rpmで１０分間遠心分離した。上清を注入バイアルに移し、LC-MSにより分析した。LC-MSシステムはESIプローブを有するAPI4000質量分析器で構成されていた。
正イオンモードおよび完全スキャン検出を用いた。HPLCでの分離を、Luna 3μ C8 (2), 2
x 30 mmカラム上で、90% Aから90% Bまでの勾配を用いて、0.3 ml/分の流速において１
０分間で実施した。緩衝液Aは水中1%ギ酸であり、緩衝液Bは1%ギ酸アセトニトリルであった。本明細書で例示した化合物に関するヒトおよびラットの血漿内半減期のデータを表２に示す。
【００９６】
表２
【００９７】
【表２−１】
2014051505.tif 000020
【００９８】
【表２−２】
2014051505.tif 000021
【００９９】
Ｃ．環状ＡＭＰ刺激の測定
1 x 105個のヒトの組換えＧＩＰ受容体を発現しているCHO-K1細胞またはRIN-5Fインス
リノーマ細胞を、２４ウェル細胞培養プレート(Corning Incorporate，米国ニューヨーク州コーニング)の中に一夜まいた。そのアッセイに関して、細胞を0.55mM IBMX(Sigma，米国ミズーリ州セントルイス)を含むpH 7.3に調節したハンクス緩衝塩溶液(Sigma，米国ミ
ズーリ州セントルイス)500 μl中で１０分間前保温した(preincubated)。次いでＧＩＰまたはそのアナログを、100 nMの濃度で添加した。３７℃で３０分間の保温の後、プレートを氷上に置き、500 μlの氷冷無水エタノールを添加して反応を止めた。ウェルの内容物
を集め、４℃において2,700 gで２０分間遠心分離して細胞破壊片を除去した。上清中のcAMPレベルを放射性免疫測定 (New England Nuclear，米国マサチューセッツ州ボストン)
により決定した。
【０１００】
投与
この発明のペプチドは、医薬的に許容できる塩類の形で提供することができる。その塩類の例には、有機酸（例えば酢酸、乳酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、またはパモ酸(pamoic acid)）、無機酸（例えば塩酸、硫酸、またはリン酸）およびポリマー性の酸（例え
ばタンニン酸、カルボキシメチルセルロース、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、またはポリ乳酸−ポリグリコール酸のコポリマー類）により形成される塩類が含まれるが、それらに限定されない。本発明のペプチドの塩を作る典型的な方法は当技術では周知であり、標準的な塩交換の方法により成し遂げることができる。従って、本発明のペプチドのTFA塩（TFA塩は分取HPLCを用いてTFAを含む緩衝溶液で溶離することによるペプチドの精製の結果
得られる）は別の塩に、例えばそのペプチドを少量の0.25 N酢酸水溶液中で溶解することにより酢酸塩に変換することができる。得られた溶液をセミ分取(semi-prep)HPLCカラム(Zorbax, 300 SB, C-8)に適用する。そのカラムを（１）0.1N酢酸アンモニウム水溶液で０．５時間、（２）0.25N酢酸水溶液で０．５時間、および（３）4 ml/分の流速における直線勾配(３０分間にわたる20%〜100%の溶液B）（溶液Aは0.25 N酢酸水溶液であり；溶液B
はアセトニトリル/水80：20中0.25 N酢酸である）を用いて溶離する。ペプチドを含む画
分を集め、凍結乾燥させる。
【０１０１】
この発明の組成物中の有効成分の用量は異なっていてよい；しかし、有効成分の量は適切な剤形が得られるようなものである必要がある。選択される用量は、望まれる療法的作用に、投与経路に、および処置の期間に依存する。一般に、この発明の活性に関する有効な用量は1 x 10-7〜200 mg/kg/日、好ましくは1 x 10-4〜100 mg/kg/日の範囲であり、それは１回量として、または多数回の用量に分けて投与することができる。
【０１０２】
この発明の化合物は、経口、非経口（例えば筋内、腹膜内、静脈内または皮下の注射、または埋め込み）、経鼻、膣内、直腸内、舌下、または局所的投与経路により投与することができ、それぞれの投与経路に適した剤形を提供するために医薬的に許容できるキャリヤーと共に配合することができる。
【０１０３】
経口投与のための固体剤形には、カプセル、錠剤、丸剤、粉末および顆粒が含まれる。その固体剤形において、有効化合物は少なくとも１種類の不活性な医薬的に許容できるキャリヤー、例えばスクロース、ラクトースまたはデンプンと混合される。その剤形はその不活性な希釈剤以外の追加の物質、例えば潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムも含むことができ、それが通常の慣習である。カプセル、錠剤および丸剤の場合、その剤形は緩衝剤も含んでいてよい。錠剤および丸剤はさらに腸溶コーティングを用いて調製することができる。
【０１０４】
経口投与のための液体剤形には、当技術で一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば水を含む、医薬的に許容できる乳濁液、溶液、懸濁液、シロップ、エリキシルおよび同様のものが含まれるが、それらに限定されない。その不活性な希釈剤の他に、組成物は補助剤、例えば湿潤剤、乳濁化および懸濁化剤、ならびに甘味料、香味料および香料も含むことができる。
【０１０５】
非経口投与のためのこの発明に従う製剤には、無菌の水溶液または非水溶液、懸濁液、乳濁液および同様のものが含まれるが、それらに限定されない。非水性溶媒またはビヒクルの例には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油およびトウモロコシ油、ゼラチン、ならびに注射可能な有機エステル類、例えばオレイン酸エチルが含まれる。その剤形は補助剤、例えば保存、湿潤、乳濁化および分散剤も含んでいてよい。それらは例えば細菌を保持するフィルターを通す濾過により、組成物中に滅菌剤を組み込むことにより、組成物を照射することにより、または組成物を加熱することにより滅菌されてよい。それらは、滅菌水または何らかの他の無菌の注射可能な媒体に使用の直前に溶解することができる無菌の固体組成物の形で製造することもできる。
【０１０６】
直腸内または膣内投与のための組成物は好ましくは坐剤であり、それは有効物質に加えて賦形剤、例えばカカオ脂(coca butter)または坐剤ワックスを含んでいてよい。
【０１０７】
経鼻または舌下投与のための組成物も、当技術で周知の標準的な賦形剤を用いて調製される。
【０１０８】
さらに、この発明の化合物は徐放性組成物、例えば下記の特許および特許出願において記述されている徐放性組成物で投与することができる。米国特許第５，６７２，６５９号は、生理活性薬剤およびポリエステルを含む徐放性組成物を教示する。米国特許第５，５９５，７６０号は、生理活性薬剤をゲル化可能な(gelable)形で含む徐放性組成物を教示
する。米国特許第５，８２１，２２１号は、生理活性薬剤およびキトサンを含むポリマー性徐放性組成物を教示する。米国特許第５，９１６，８８３号は、生理活性薬剤およびシ
クロデキストリンを含む徐放性組成物を教示する。ＰＣＴ公開ＷＯ９９／３８５３６は、生理活性薬剤の吸収性徐放性組成物を教示する。ＰＣＴ公開ＷＯ００／０４９１６は、療法薬、例えばペプチドを含む微粒子を水中油プロセスで作るためのプロセスを教示する。
【０１０９】
別途定義しない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的な用語はこの発明が属する技術の当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。また、本明細書で言及された全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献をそれぞれそのまま本明細書に援用する。
【配列表】
2014051505000001.app