(57)【要約】      （修正有）【課題】インスリン非依存性糖尿病および肥満の治療のための、インビボでの長い血漿内半減期を有するＮ末端において修飾されたグルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド（ＧＩＰ）、及びＧＩＰ受容体作動薬または拮抗薬の提供。【解決手段】グルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチドのアナログの新規の系列、前記化合物を含む医薬組成物、ならびにＧＩＰ受容体に仲介される病気、例えばインスリン非依存性糖尿病および肥満の治療のためのＧＩＰ受容体作動薬または拮抗薬としての前記化合物の使用。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容できる塩
(R2R3)-A1-A2-A3-Gly4-Thr5-Phe6-A7-Ser8-Asp9-Tyr10-A11-Ile12-A13-A14-Asp15-Lys16-Ile17-His18-Gln19-Gln20-Asp21-Phe22-Val23-Asn24-Trp25-Leu26-Leu27-Ala28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-A35-A36-A37-A38-A39-A40-A41-A42-A43-R1
（Ｉ）
ここで：
A1はCpa、His、4Hppa、3-Pal、4-Pal、(X4,X5,X6,X7,X8)Phe、Taz、3Thi、7HO-Tic、Tyr(Ac)、Tyr(Me)、3Br-Tyr、3,5Br-Tyr、3Cl-Tyr、3F-Tyr、hTyr、3I-Tyr、3,5I-Tyr、2,6Me-Tyr、3MeO-Tyr、3NO2-Tyr、または3OH-Tyrであり;
A2はAla、Aib、D-Ala、またはGlyであり;
A3はGlu、4Hyp、またはhProであり;
A7はIle、またはAccであり;
A11はSer、Acc、またはAibであり;
A13はAla、またはAibであり;
A14はMet、Acc、またはNleであり;
A29はGlnであり、または欠失しており;
A30はLysであり、または欠失しており;
A31はGlyであり、または欠失しており;
A32はLysであり、または欠失しており;
A33はLysであり、または欠失しており;
A34はAsnであり、または欠失しており;
A35はAspであり、または欠失しており;
A36はTrpであり、または欠失しており;
A37はLysであり、または欠失しており;
A38はHisであり、または欠失しており;
A39はAsnであり、または欠失しており;
A40はIle、Accであり、または欠失しており;
A41はThr、Accであり、または欠失しており;
A42はGlnであり、または欠失しており;
A43はHis、Cys、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Lys43(N-C(O)-(CH2)10-CH3)であり、または欠失しており;
R1はOH、NH2、(C1-C30)アルコキシ、またはNH-X2-CH2-Z0であり、ここでX2は(C0-C30)炭化水素部分であり、Z0はH、OH、CO2H、またはCONH2であり；
R2およびR3のそれぞれはH、(C1-C30)アルキル、(C1-C30)ヘテロアルキル、(C1-C30)アシル、(C2-C30)アルケニル、(C2-C30)アルキニル、アリール(C1-C30)アルキル、またはアリール(C1-C30)アシルからなるグループから独立して選択され；R2が(C1-C30)アシル、またはアリール(C1-C30)アシルである場合、R3はH、(C1-C30)アルキル、(C1-C30)ヘテロアルキル、(C2-C30)アルケニル、(C2-C30)アルキニル、またはアリール(C1-C30)アルキルであり； 
s、t、xおよびyのそれぞれは、それぞれの出現に関して独立して１と３０を含めた１から３０までの整数であり；
X4、X5、X6、X7およびX8のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してH、F、CF3、Cl、Br、I、(C1-10)アルキル、置換された(C1-10)アルキル、アリール、置換されたアリール、OH、NH2、-CH2NH2、NO2、またはCNであり;
ただし、
A1が4Hppaである場合、R2およびR3は欠失しており；
さらに、その化合物は１、２および３位において１個より多くのアミノ酸の置換または修飾を含み；
さらに、１位のアミノ酸が修飾されている場合、それは：
（ａ）Ｎ末端アルキル化；
（ｂ）Ｎ末端アセチル化；
（ｃ）Ｎ末端アシル化；
（ｄ）Ｎ末端イソプロピル基の付加；または
（ｅ）Ｎ末端ピログルタミン酸の付加、
により修飾されておらず、そして
（ｆ）その化合物は４位〜４３位において少なくとも１個のアミノ酸の置換または修飾を含む。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物、またはその医薬的な塩：
ここで：
Accが存在する場合、
A7がA5c、またはA6cであるか;
A11がA5cであるか;
A14がA5cであるか；
A40がA5cであるか;または、
A41がA5cである。
【請求項３】
(4Hppa1, Aib2, A5c7, Nle14)hGIP(1-30)-NH2(SEQ ID NO:4);
(4Hppa1, Aib2, Nle14)hGIP(1-30)-NH2 (SEQ ID NO:8);
(4Hppa1, 4Hyp3, A6c7)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:10);
(4Hppa1, hPro3, A6c7)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:11);
(4Hppa1, Aib2, hPro3, Nle14)hGIP(1-30)-NH2(SEQ ID NO:12);
(His1, Aib2, 13, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:13);
(3,5Br-Tyr1, Aib2, 13, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:14);
(His1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:15);
(3,5Br-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:16);
(3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:17);
(3Br-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:18);
(3I-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:19);
(3,5I-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:20);
(4NH2-Phe1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:21);
(hTyr1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:22);
(Cpa1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:23);
(4NH2CH2-Phe1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:24);
(3,4,5F-Phe1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:25);
(3F-Phe1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:26);
(3,4F-Phe1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:27);
(3,5F-Phe1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:28);
(3OH-Phe1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:29);
(3OH-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:30);
(3MeO-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:31);
[Tyr(Ac)1, Aib2, A5c11, 41]hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:32);
(2,6Me-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:33);
[Tyr(Me)1, Aib2, A5c11, 41]hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:34);
(4F-Phe1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:35);
(4-Pal1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:36);
(3-Pal1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:37);
(Taz1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:38);
(3NO2-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:39); 
(3Thi1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:40);
(4CN-Phe1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:41);
(3F-Tyr1, Gly2, A5c11, 40)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:42);
(3F-Phe1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:44);
(2,6Me-Tyr1, Aib2, A5c11, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:56);
(2,6Me-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:57);
(2,6Me-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:58);
(3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, His43)hGIP(1-43)-OH;
(3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, 14, His43)hGIP(1-43)-OH;
(3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:63);
(3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:64);
[3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, Cys43(スクシンイミド-N-(CH2)11-CH3)]hGIP(1-43)-OH;
(3Br-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:67);
(3Br-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:68);
(3MeO-Tyr1, Aib2, A5c11, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:69);
(3MeO-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:70);
(3MeO-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, 41, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:71);
(7HO-Tic1, Aib2, A5c11, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:73);
(4Me-Phe1, Aib2, A5c11, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:74);
(4CN-Phe1, Aib2, A5c11, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:75);
(hTyr1, Aib2, A5c11, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:76);
[3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Lys43(N-C(O)-(CH2)10-CH3)]hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:77);
(3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Cys43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:79); もしくは
[3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, 14, Cys43(スクシンイミド)]hGIP(1-43)-OH;
である請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項４】
A1は4Hppaであり；A43は欠失しており；A2、A3、A7、A11およびA14の少なくとも１つは天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基ではない、請求項１に記載の化合物、またはその医薬的な塩。
【請求項５】
A1はTyr(Ac)、Tyr(Me)、3Br-Tyr、3,5Br-Tyr、3Cl-Tyr、3F-Tyr、hTyr、3I-Tyr、3,5I-Tyr、2,6Me-Tyr、3MeO-Tyr、3NO2-Tyr、または3OH-Tyrであり;A2はAib、D-Ala、またはGlyであり;A3、A11、A13、A14、A40、A41およびA43の少なくとも１つは天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基ではない、請求項１に記載の化合物、またはその医薬的な塩。
【請求項６】
A2はAib、D-Ala、またはGlyであり;A3、A11、A13、A14、A40、A41およびA43の少なくとも２つは天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基ではない、請求項５に記載の化合物、またはその医薬的な塩。
【請求項７】
A1は4CN-Phe、3F-Phe、4F-Phe、3,4F-Phe、3,4,5F-Phe、3,5F-Phe、4NH2-Phe、4NH2CH2-Phe、または3OH-Pheであり; A2はAib、D-Ala、またはGlyであり; A11はA5cであり; A14およびA41の少なくとも１つは天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基では無い、請求項１に記載の化合物、またはその医薬的な塩。
【請求項８】
A2はAibである、請求項７に記載の化合物、またはその医薬的な塩。
【請求項９】
(3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:17);
(3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Cys43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:79);
(3Br-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:68);
(3Br-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:18);
[Tyr(Ac)1, Aib2, A5c11, 41]hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:32);
(3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:64);
(3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:63);
(3MeO-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:31);
[3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, 14, Cys43(スクシンイミド)]hGIP(1-43)-OH;
(3F-Phe1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:26);
(4Hppa1, Aib2, Nle14)hGIP(1-30)-NH2 (SEQ ID NO:8);
(His1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:15);
(3OH-Phe1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:29);
[Tyr(Me)1, Aib2, A5c11, 41]hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:34);および
(3Thi1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:40)
からなるグループから選択される、請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１０】
前記化合物が
(3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:17)
である、請求項９に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１１】
前記化合物が
(3MeO-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:31)
である、請求項９に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１２】
A1およびA2の間のペプチド結合が偽ペプチド結合により置き換えられている、請求項１または請求項２に記載の化合物、またはその医薬的な塩。
【請求項１３】
さらに共有結合的に連結されたＰＥＧ部分を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩であって、
前記ＰＥＧ部分はその化合物にCys(マレイミド)リンカーを介して共有結合的に連結されてCys(スクシンイミド-N-PEG)を形成しており、
前記ＰＥＧは5K PEG、10K PEG、20K PEG、30K PEG、40K PEG、50K PEG、および60K PEGからなるグループから選択されてCys(スクシンイミド-N-5K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-10K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-20K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-30K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-40K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-50K PEG)、またはCys(スクシンイミド-N-60K PEG)、またはその医薬的に許容できる塩を形成している、
化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項１４】
有効量の請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項１５】
ＧＩＰ受容体の結合により仲介される病気または疾患を治療するために使用される請求項１４に記載の医薬組成物であって、前記の病気または疾患が１型糖尿病、２型糖尿病、肥満、インスリン抵抗性、グルコース不耐性、脂肪肝、グルカゴノーマ、気道の分泌障害、代謝障害、関節炎、骨粗鬆症、中枢神経系疾患、再狭窄、神経変性疾患、腎不全、うっ血性心不全、ネフローゼ症候群、硬変、肺水腫、高血圧、および摂食の減少および／または体重の低下が望まれる障害からなるグループから選択される、医薬組成物。
【請求項１６】
前記の糖尿病が２型糖尿病である、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
高血糖症、高インスリン血症、グルコース耐性障害、空腹時血糖障害、脂質代謝異常、高トリグリセリド血症、およびインスリン抵抗性からなるグループから選択される、糖尿病に関連する障害を治療するために使用される、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
インスリンの分泌を刺激するために使用される、請求項１４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グルコース依存性インスリン分泌刺激(insulinotropic)ポリペプチドの新規のアナログ、前記化合物を含む医薬組成物、および前記化合物の、ＧＩＰ受容体に仲介される病気、例えばインスリン非依存性糖尿病および肥満の治療のためのＧＩＰ受容体作動薬または拮抗薬としての使用の領域に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド（“ＧＩＰ”、“胃抑制性ポリペプチド”としても知られている；SEQ ID NO:1）は、小腸の腸管内分泌(enteroendorine)Ｋ
細胞により、経口栄養摂取に応答して血流中に分泌される４２残基のペプチドである。ＧＩＰは胃酸の分泌を抑制し、それは経口グルコース摂取の後の膵ベータ細胞からのインスリンの分泌に関する強力な刺激薬であることが示されている（“インクレチン作用”）（Creutzfeldt, W., et al., 1979, Diabetologia, 16:75-85）。
【０００３】
グルコースおよび他の栄養素の摂取により誘導されるインスリンの放出は、ホルモン性および神経性の要因の両方によるものである（Creutzfeldt, W., et al., 1985, Diabetologia, 28:565-573）。いくつかの胃腸調節ペプチドがインクレチン類として提案されて
おり、これらの候補の中で、ＧＩＰおよびグルカゴン様ペプチド１（“ＧＬＰ−１”）のみが食後のインスリン放出の生理的刺激薬であると考えられるための必要条件を満たすようである（Nauck, et al., 1989, J. Clin. Endorinol. Metab., 69:654-662）。ＧＩＰ
およびＧＬＰ−１の合同の作用は、腸膵島軸(enteroinsular axis)の完全なインクレチン作用を説明するのに十分であることが示されている（Fehmann, H. C., et al., 1989, FEBS Lett., 252:109-112）。
【０００４】
当業者には周知であるように、ＧＩＰの既知の、および可能性のある用途は様々であり、多様である。従って、この発明の化合物の、作動薬作用を誘発するための投与は、ＧＩＰ自体と同じ作用および用途を有し得る。ＧＩＰのこれらの様々な用途は次のように要約することができる：１型糖尿病、２型糖尿病（Visboll, T., 2004, Dan. Med. Bull., 51:364-70）、インスリン抵抗性（ＷＯ  ２００５／０８２９２８）、肥満（Green, B. D.,
et al., 2004, Current Pharmaceutical Design, 10:3651-3662）、代謝障害（Gault, V. A., et al., 2003, BioChem. Biophys. Res. Commun., 308:207-213）、中枢神経系疾
患、神経変性疾患、うっ血性心不全、低血糖症、ならびに摂食の減少および体重の低下が望まれる障害からなるグループから選択される疾患の治療。膵島において、ＧＩＰはインスリンの分泌を急激に増進するだけでなく、それはプロインスリンの転写および翻訳の増進を通してインスリンの産生も刺激し（Wang, et al., 1996, Mol. Cell. Endocrinol., 116:81-87）、膵ベータ細胞の成長および生存を増進する（Trumper, et al., 2003, Diabetes, 52:741-750）。膵臓に対するインスリンの分泌を増進する作用に加え、ＧＩＰはインスリンの標的組織にも直接作用して血漿グルコースを低下させる：脂肪（Eckel, et al., 1979, Diabetes, 28:1141-1142）および筋肉（O’Harte, et al., 1998, J. Endocrinol., 156:237-243）におけるグルコースの取り込みの増進、ならびに肝臓のグルコースの生成の抑制（Elahi, D., et al., 1986, Can.J. Physiol. Pharmacol., 65:A18）。
【０００５】
加えて、本発明に従うＧＩＰ受容体拮抗薬は、動物の腸からのグルコースの吸収を抑制、阻止または低減する。この観察に従い、ＧＩＰ拮抗薬を含む療法組成物は、インスリン非依存性糖尿病を有する患者において経口グルコースに対する耐性を向上させるために、哺乳類、例えばヒトにおいて、その哺乳類の腸からのグルコースの吸収を抑制、阻止また
は低減することにより肥満を予防、抑制または低減するために用いられてよい。
【０００６】
しかし、修飾されていないＧＩＰの療法薬としての使用は、約２分というインビボでの短い半減期により制限される（Said and Mutt, 1970, Science, 169:1217-1218）。血清
中では、インクレチン類ＧＩＰおよびＧＬＰ−１は共にジペプチジルペプチダーゼＩＶ（“ＤＰＰＩＶ”）により分解される。ＧＩＰのタンパク質分解に対する安定性の向上は、その受容体におけるＧＩＰの活性を維持するだけでなく、これがさらに重要なのだが、その一部がＧＩＰ受容体の拮抗薬として働くＧＩＰ断片の生成を防ぐ（Gault, et al., 2002, J. Endocrinol., 175:525-533）。報告された修飾には、Ｎ末端のチロシンの修飾（O
’Harte, et al., 2002, Diabetologia, 45:1281-1291）、２位のアラニンの変異（Hinke, et al., 2002, Diabetes, 51:656-661）３位のグルタミン酸の変異（Gault, et al., 2003, BioChem. Biophys. Res. Commun., 308:207-213）、および１３位のアラニンの変異（Gault, et al., 2003, Cell Biol. International, 27:41-46）を通した、ＧＩＰのＮ
末端のＤＰＰＩＶによるタンパク質分解からの保護が含まれていた。
【０００７】
下記の特許出願は、ＧＩＰアナログの様々な標的器官の機能に対する作用およびそれらの療法薬としての使用の可能性に関して出願された：
ＰＣＴ公開ＷＯ  ００／５８３６０は、インスリンの放出を刺激するＧＩＰのペプチジルアナログを開示している。特に、この出願はGIP(1-42)のＮ末端から少なくとも１５ア
ミノ酸残基を含む特定のペプチジルアナログ、例えば１、２および３位において正確に１アミノ酸の置換または修飾を含むＧＩＰのアナログ、例えば[Pro3]GIP(1-42)を開示して
いる。
【０００８】
ＰＣＴ公開ＷＯ  ９８／２４４６４は、本質的にＧＩＰの配列の７〜３０位に対応する２４アミノ酸のポリペプチドで構成されるＧＩＰの拮抗薬、インスリン非依存性糖尿病を治療する方法、およびインスリン非依存性糖尿病の患者においてグルコース耐性を向上させる方法を開示している。
【０００９】
ＰＣＴ公開ＷＯ  ０３／０８２８９８は、ＧＩＰのＣ末端を切り詰めた断片およびＮ末端を修飾したアナログ、ならびにＤＰＰＩＶ特異的切断部位の近くに還元されたペプチド結合またはアミノ酸の変更を有する様々なＧＩＰアナログを開示している。この出願はさらに、ＧＩＰの可能性のある受容体結合部位の間に異なるリンカーを有するアナログを開示している。この出願の化合物は、ＧＩＰ受容体に仲介される病気、例えばインスリン非依存性糖尿病および肥満の治療において有用であると主張されている。
【００１０】
配合物中で安定であり、タンパク質分解に対する感受性の低下およびクリアランスの低下の結果もたらされるインビボでの長い血漿内半減期を有する一方でそれぞれの作動薬または拮抗薬作用を誘発するためのＧＩＰ受容体への結合親和性を維持している、ＧＩＰの改良されたアナログに関する必要性が存在する。さらに、本明細書で説明する本発明の化合物の他の療法的作用の中で、血漿グルコースレベルのより厳重な制御は、長期の糖尿病性合併症を予防し、それにより患者に改善された生活の質を提供する可能性がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】ＷＯ  ２００５／０８２９２８
【特許文献２】ＷＯ  ００／５８３６０
【特許文献３】ＷＯ  ９８／２４４６４
【特許文献４】ＷＯ  ０３／０８２８９８
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Creutzfeldt, W., et al., 1979, Diabetologia, 16:75-85
【非特許文献２】Creutzfeldt, W., et al., 1985, Diabetologia, 28:565-573
【非特許文献３】Nauck, et al., 1989, J. Clin. Endorinol. Metab., 69:654-662
【非特許文献４】Fehmann, H. C., et al., 1989, FEBS Lett., 252:109-112
【非特許文献５】Visboll, T., 2004, Dan. Med. Bull., 51:364-70
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【非特許文献７】Gault, V. A., et al., 2003, BioChem. Biophys. Res. Commun., 308:207-213
【非特許文献８】Wang, et al., 1996, Mol. Cell. Endocrinol., 116:81-87
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【非特許文献１０】Eckel, et al., 1979, Diabetes, 28:1141-1142
【非特許文献１１】O’Harte, et al., 1998, J. Endocrinol., 156:237-243
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【非特許文献１６】Hinke, et al., 2002, Diabetes, 51:656-661
【非特許文献１７】Gault, et al., 2003, BioChem. Biophys. Res. Commun., 308:207-213
【非特許文献１８】Gault, et al., 2003, Cell Biol. International, 27:41-46
【発明の概要】
【００１３】
１観点において、本発明は次の式（Ｉ）のＧＩＰのペプチド変種に関し：
(R2R3)-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-A35-A36-A37-A38-A39-A40-A41-A42-A43-R1、
（Ｉ）
ここで：
A1はCpa、His、4Hppa、2-Pal、3-Pal、4-Pal、(X4,X5,X6,X7,X8)Phe、Taz、3Thi、7HO-Tic、Tyr(Ac)、Tyr(Me)、β-Tyr、3Br-Tyr、3,5Br-Tyr、3Cl-Tyr、2F-Tyr、3F-Tyr、hTyr、3I-Tyr、3,5I-Tyr、αMe-Tyr、2,6Me-Tyr、3MeO-Tyr、3NH2-Tyr、3NO2-Tyr、3OH-Tyr、または3(HO-CH2)Tyrであり;
A2はAla、Abu、D-Abu、Acc、Aib、β-Ala、D-Ala、Gaba、Gly、Ser、D-Ser、Thr、D-Thr、Val、またはD-Valであり;
A3はGlu、Aib、Asp、N-Me-Asp、Dhp、Dmt、N-Me-Glu、3Hyp、4Hyp、4Ktp、Pro、hPro、Thz、またはTicであり;
A4はGly、Acc、Aib、またはβ-Alaであり;
A5はThr、Acc、Aib、またはSerであり;
A6はPhe、Acc、Aib、Aic、Cha、1Nal、2Nal、2-Pal、3-Pal、4-Pal、(X4,X5,X6,X7,X8)Phe、またはTrpであり;
A7はIle、Abu、Acc、Aib、Ala、Cha、Leu、Nle、Phe、Tle、またはValであり;
A8はSer、Aib、またはThrであり;
A9はAsp、Aib、またはGluであり;
A10はTyr、Acc、Cha、1Nal、2Nal、2-Pal、3-Pal、4-Pal、Phe、または(X4,X5,X6,X7,X8)Pheであり;
A11はSer、Acc、Aib、Nle、またはThrであり;
A12はIle、Abu、Acc、Aib、Ala、Cha、Leu、Nle、Phe、Tle、またはValであり;
A13はAla、Acc、Aib、β-Ala、D-Ala、Gly、またはSerであり;
A14はMet、Abu、Acc、Aib、Ala、Cha、Ile、Leu、Nle、Phe、Tle、またはValであり;
A15はAsp、Aib、またはGluであり;
A16はLys、Amp、Apc、Arg、hArg、Orn、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、またはPen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり;
A17はIle、Abu、Acc、Aib、Ala、Cha、Leu、Nle、Phe、Tle、またはValであり;
A18はHis、Amp、Arg、2-Pal、3-Pal、4-Pal、Phe、またはTyrであり;
A19はGln、Aib、またはAsnであり;
A20はGln、Aib、またはAsnであり;
A21はAsp、Aib、またはGluであり;
A22はPhe、Acc、Aib、Aic、Cha、1Nal、2Nal、2-Pal、3-Pal、4-Pal、(X4,X5,X6,X7,X8)Phe、またはTrpであり;
A23はVal、Abu、Acc、Aib、Ala、Cha、Ile、Leu、Nle、またはTleであり;
A24はAsn、Aib、またはGlnであり;
A25はTrp、Acc、Aib、1Nal、2Nal、2-Pal、3-Pal、4-Pal、Phe、または(X4,X5,X6,X7,X8)Pheであり;
A26はLeu、Acc、Aib、Cha、Ile、Nle、Phe、(X4,X5,X6,X7,X8)Phe、またはTleであり;
A27はLeu、Acc、Aib、Cha、Ile、Nle、Phe、(X4,X5,X6,X7,X8)Phe、またはTleであり;
A28はAla、Acc、またはAibであり;
A29はGln、Aib、Asnであり、または欠失しており;
A30はLys、Amp、Apc、Arg、hArg、Orn、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A31はGly、Aib、Acc、β-Ala、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A32はLys、Amp、Apc、Arg、hArg、Orn、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A33はLys、Amp、Apc、Arg、hArg、Orn、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A34はAsn、Aib、Gln、Ser、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A35はAsp、Aib、Glu、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A36はTrp、Acc、Aib、1Nal、2Nal、2-Pal、3-Pal、4-Pal、Phe、(X4,X5,X6,X7,X8)Phe、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A37はLys、Amp、Apc、Arg、hArg、Orn、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A38はHis、Amp、2-Pal、3-Pal、4-Pal、Phe、Tyr、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A39はAsn、Aib、Gln、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A40はIle、Acc、Aib、Ser、Thr、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A41はThr、Acc、Aib、Asn、Gln、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A42はGln、Acc、Aib、Asn、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
A43はAcc、Ado、Aib、Ala、Asn、Asp、His、Gln、Phe、Thr、Trp、Orn(N-C(O)-(CH2)10-CH3)、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)、Cys(スクシンイミド-N-アルキル)、hCys(スクシンイミド-N-アルキル)、Pen(スクシンイミド-N-アルキル)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)、Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)であり、または欠失しており;
R1はOH、NH2、(C1-C30)アルコキシ、またはNH-X2-CH2-Z0であり、ここでX2は(C0-C30)炭化水素部分であり、Z0はH、OH、CO2H、またはCONH2であり；
R2、R3、R4およびR5のそれぞれはH、(C1-C30)アルキル、(C1-C30)ヘテロアルキル、(C1-C30)アシル、(C2-C30)アルケニル、(C2-C30)アルキニル、アリール(C1-C30)アルキル、アリール(C1-C30)アシル、置換された(C1-C30)アルキル、置換された(C1-C30)ヘテロアルキル、置換された(C1-C30)アシル、置換された(C2-C30)アルケニル、置換された(C2-C30)アルキニル、置換されたアリール(C1-C30)アルキル、および置換されたアリール(C1-C30)アシルからなるグループから独立して選択され；R2が(C1-C30)アシル、アリール(C1-C30)アシル、置換された(C1-C30)アシル、または置換されたアリール(C1-C30)アシルである場合、R3はH、(C1-C30)アルキル、(C1-C30)ヘテロアルキル、(C2-C30)アルケニル、(C2-C30)アルキニル、アリール(C1-C30)アルキル、置換された(C1-C30)アルキル、置換された(C1-C30)ヘテロアルキル、置換された(C2-C30)アルケニル、置換された(C2-C30)アルキニル、または置換されたアリール(C1-C30)アルキルであり；さらにR4が(C1-C30)アシル、アリール(C1-C30)アシル、置換された(C1-C30)アシル、または置換されたアリール(C1-C30)アシルである場合、R5はH、(C1-C30)アルキル、(C1-C30)ヘテロアルキル、(C2-C30)アルケニル、(C2-C30)アルキニル、アリール(C1-C30)アルキル、置換された(C1-C30)アルキル、置換された(C1-C30)ヘテロアルキル、置換された(C2-C30)アルケニル、置換された(C2-C30)アルキニル、または置換されたアリール(C1-C30)アルキルであり；
nは、それぞれの出現に関して独立して１と５を含めた１から５までの整数であり；
s、t、xおよびyのそれぞれは、それぞれの出現に関して独立して１と３０を含めた１から３０までの整数であり；
X4、X5、X6、X7およびX8のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してH、F、CF3、Cl、Br、I、(C1-10)アルキル、置換された(C1-10)アルキル、アリール、置換されたアリール、OH、NH2、-CH2NH2、NO2、またはCNであり;
ただし、
A1が4Hppaである場合、R2およびR3は欠失しており；
さらに、その化合物の１、２および３位の１個より多くのアミノ酸が置換または修飾されており；
さらに、１位のアミノ酸が修飾されている場合、それは次のものにより修飾されていない：
（ａ）Ｎ末端アルキル化；
（ｂ）Ｎ末端アセチル化；
（ｃ）Ｎ末端アシル化；
（ｄ）Ｎ末端イソプロピル基の付加；または
（ｅ）Ｎ末端ピログルタミン酸の付加。
【００１４】
上記の式（Ｉ）に含まれる化合物の部分集合（Ａ）は下記のものである：
A1はCpa、His、4Hppa、2Pal、3Pal、4Pal、3Br-Phe、4CF3-Phe、3Cl-Phe、4CN-Phe、3F-Phe、4F-Phe、3,4F-Phe、3,5F-Phe、3,4,5F-Phe、4Me-Phe、4NH2-Phe、4NH2CH2-Phe、3OH-Phe、Taz、3Thi、7HO-Tic、Tyr(Ac)、Tyr(Me)、β-Tyr、3Br-Tyr、3,5Br-Tyr、3Cl-Tyr、2F-Tyr、3F-Tyr、hTyr、3I-Tyr、3,5I-Tyr、αMe-Tyr、2,6Me-Tyr、3MeO-Tyr、3NH2-Tyr、3NO2-Tyr、3OH-Tyr、または3(HO-CH2)Tyrであり;
A2はAla、Aib、Glyであり;
A3はGlu、4Hyp、またはhProであり;
A4はGlyであり;
A5はThrであり;
A6はPheであり;
A7はIle、A5c、またはA6cであり;
A8はSerであり;
A9はAspであり;
A10はTyrであり;
A11はSer、A5c、またはAibであり;
A12はIleであり;
A13はAlaまたはAibであり;
A14はMet、A5c、またはNleであり;
A15はAspであり;
A16はLysであり;
A17はIleであり;
A18はHisであり;
A19はGlnであり;
A20はGlnであり;
A21はAspであり;
A22はPheであり;
A23はValであり;
A24はAsnであり;
A25はTrpであり;
A26はLeuであり;
A27はLeuであり;
A28はAlaであり;
A29はGlnであり;
A30はLysであり;
A31はGlyであり、または欠失しており;
A32はLysであり、または欠失しており;
A33はLysであり、または欠失しており;
A34はAsnであり、または欠失しており;
A35はAspであり、または欠失しており;
A36はTrpであり、または欠失しており;
A37はLysであり、または欠失しており;
A38はHisであり、または欠失しており;
A39はAsnであり、または欠失しており;
A40はIle、A5cであり、または欠失しており;
A41はThr、A5cであり、または欠失しており;
A42はGlnであり、または欠失しており;
A43はHis、Cys(スクシンイミド-N-(CH2)11-CH3)、Orn(N-C(O)-(CH2)10-CH3)であり、または欠失しており;
ただし、その化合物は４位〜４３位において少なくとも１個のアミノ酸の置換または修
飾を含む。
【００１５】
前記の部分集合（Ａ）の化合物の部分集合は、A1が4Hppaであり；A43が欠失しており；A2、A3、A7、A11およびA14の少なくとも１つが天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基では無い部分集合である。
【００１６】
前記の部分集合（Ａ）の化合物の別の部分集合（Ｂ）は、A1がTyr(Ac)、Tyr(Me)、β-Tyr、3Br-Tyr、3,5Br-Tyr、3Cl-Tyr、2F-Tyr、3F-Tyr、hTyr、3I-Tyr、3,5I-Tyr、αMe-Tyr、2,6Me-Tyr、3MeO-Tyr、3NH2-Tyr、3NO2-Tyr、3OH-Tyr、または3(HO-CH2)Tyrであり;A2がA5c、A6c、Aib、D-Ala、Gly、またはSerであり;A3、A11、A13、A14、A40、A41およびA43の少なくとも１つが天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基では無い部分集合であ
る。
【００１７】
前記の部分集合（Ｂ）の化合物の部分集合は、A2がAib、D-Ala、またはGlyであり;A3、A11、A13、A14、A40、A41およびA43の少なくとも２つが天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基では無い部分集合である。
【００１８】
前記の部分集合（Ａ）の化合物の別の部分集合（Ｃ）は、A1が3Br-Phe、3Cl-Phe、4CN-Phe、3F-Phe、4F-Phe、3,4F-Phe、3,4,5F-Phe、3,5F-Phe、4NH2-Phe、4NH2CH2-Phe、または3OH-Pheであり;A2がA5c、A6c、Aib、D-Ala、Gly、またはSerであり;A11がA5cであり;A14およびA41の少なくとも１つが天然のＧＩＰの対応する位置のアミノ酸残基では無い部分集合である。
【００１９】
前記の部分集合（Ｃ）の化合物の部分集合は、A2がAibである部分集合である。
【００２０】
本発明の別の観点は、上記の式（Ｉ）に含まれ、A1およびA2の間のペプチド結合が偽ペプチド結合により置き換えられており、A1-A2がA1-Ψ-(CH2-NH)A2であるＧＩＰのペプチ
ド変種に関する。
【００２１】
本発明の好ましい化合物は次のものである：
実施例１：  (4Hppa1, Aib2, A5c7, Nle14)hGIP(1-30)-NH2(SEQ ID NO:4);
実施例２：  (4Hppa1, Aib2, 11, Nle14)hGIP(1-30)-NH2(SEQ ID NO:5);
実施例３：  (4Hppa1, Aib2, A5c7)hGIP(1-30)-NH2(SEQ ID NO:6);
実施例４：  (4Hppa1, Aib2, 11)hGIP(1-30)-NH2(SEQ ID NO:7);
実施例５：  (4Hppa1, Aib2, Nle14)hGIP(1-30)-NH2(SEQ ID NO:8);
実施例６：  (4Hppa1, Aib2)hGIP(1-30)-NH2 (SEQ ID NO:9);
実施例７：  (4Hppa1, 4Hyp3, A6c7)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:10);
実施例８：  (4Hppa1, hPro3, A6c7)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:11);
実施例９：  (4Hppa1, Aib2, hPro3, Nle14)hGIP(1-30)-NH2(SEQ ID NO:12);
実施例１０：  (His1, Aib2, 13, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:13);
実施例１１：  (3,5Br-Tyr1, Aib2, 13, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:14);
実施例１２：  (His1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:15);
実施例１３：  (3,5Br-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:16);
実施例１４：  (3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:17);
実施例１５：  (3Br-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:18);
実施例１６：  (3I-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:19);
実施例１７：  (3,5I-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:20);
実施例１８：  (4NH2-Phe1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:21);
実施例１９：  (hTyr1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:22);
実施例２０：  (Cpa1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:23);
実施例２１：  (4NH2CH2-Phe1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:24);
実施例２２：  (3,4,5F-Phe1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:25);
実施例２３：  (3F-Phe1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:26);
実施例２４：  (3,4F-Phe1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:27);
実施例２５：  (3,5F-Phe1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:28);
実施例２６：  (3OH-Phe1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:29);
実施例２７：  (3OH-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:30);
実施例２８：  (3MeO-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:31);
実施例２９：  [Tyr(Ac)1, Aib2, A5c11, 41]hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:32);
実施例３０：  (2,6Me-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:33);
実施例３１：  [Tyr(Me)1, Aib2, A5c11, 41]hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:34);
実施例３２：  (4F-Phe1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:35);
実施例３３：  (4-Pal1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:36);
実施例３４：  (3-Pal1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:37);
実施例３５：  (Taz1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:38);
実施例３６：  (3NO2-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:39);
実施例３７：  (3Thi1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:40);
実施例３８：  (4CN-Phe1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:41);
実施例３９：  (3F-Tyr1, Gly2, A5c11, 40)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:42);
実施例４０：  [Tyr1-Ψ-(CH2-NH)Gly2, A5c11, 41]hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:43);
実施例４１：  (3F-Phe1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:44);
実施例４２：  (3Cl-Phe1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:45);
実施例４３：  (3Br-Phe1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:46);
実施例４４：  (3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:47);
実施例４５：  (3Br-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:48);
実施例４６：  (β-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:49);
実施例４７：  (3F-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:50);
実施例４８：  (2F-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:51);
実施例４９：  (αMe-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:52);
実施例５０：  (3NH2-Tyr1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:53);
実施例５１：  (2-Pal1, Aib2, A5c11, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:54);
実施例５２：  [3(HO-CH2)Tyr1, Aib2, A5c11, 41]hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:55);
実施例５３：  (2,6Me-Tyr1, Aib2, A5c11, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:56);
実施例５４：  (2,6Me-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:57);
実施例５５：  (2,6Me-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:58);
実施例５６：  (3F-Phe1, Aib2, A5c11, 14, 41)hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:59);
実施例５７：  (3F-Phe1, Aib2, A5c11, 41, Nle14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:60);
実施例５８：  (3F-Phe1, Aib2, A5c11, 41, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:61);
実施例５９：  (3F-Phe1, Aib2, A5c11, 14, 41, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:62);
実施例６０：  削除された
実施例６１：  (3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, His43)hGIP(1-43)-OH;
実施例６２：  (3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, 14, His43)hGIP(1-43)-OH;
実施例６３：  (3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:63);
実施例６４：  (3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:64);
実施例６５：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Orn43(N-C(O)-(CH2)10-CH3)]hGIP(1-
43)-OH (SEQ ID NO:65);
実施例６６：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Cys43(スクシンイミド-N-(CH2)11-CH3)]hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:66);
実施例６７：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, Orn43(N-C(O)-(CH2)10-CH3)]hGIP(1-43)-OH;
実施例６８：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, Cys43(スクシンイミド-N-(CH2)11-CH3)]hGIP(1-43)-OH;
実施例６９：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, 14, Orn43(N-C(O)-(CH2)10-CH3)]hGIP(1-43)-OH;
実施例７０：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, 14, Cys43(スクシンイミド-N-(CH2)11-CH3)]hGIP(1-43)-OH;
実施例７１：  (3Br-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:67);
実施例７２：  (3Br-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:68);
実施例７３：  (3MeO-Tyr1, Aib2, A5c11, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:69);
実施例７４：  (3MeO-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:70);
実施例７５：  (3MeO-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, 41, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:71);
実施例７６：  (4CF3-Phe1, Aib2, A5c11, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:72);
実施例７７：  (7HO-Tic1, Aib2, A5c11, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:73);
実施例７８：  (4Me-Phe1, Aib2, A5c11, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:74);
実施例７９：  (4CN-Phe1, Aib2, A5c11, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:75);
実施例８０：  (hTyr1, Aib2, A5c11, His43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:76);
実施例８１：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, Lys43(N-C(O)-(CH2)10-CH3)]hGIP(1-43)-OH;
実施例８２：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, 14, Lys43(N-C(O)-(CH2)10-CH3)]hGIP(1-43)-OH;
実施例８３：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Lys43(N-C(O)-(CH2)10-CH3)]hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:77); 
実施例８４：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, Lys43(N-C(O)-(CH2)10-CH3)]hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:78);
実施例８５：  (3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Cys43)hGIP(1-43)-OH (SEQ ID NO:79);
実施例８６：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, Cys43(スクシンイミド)]hGIP(1-43)-OH;および
実施例８７：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, 14, Cys43(スクシンイミド)]hGIP(1-43)-OH。
【００２２】
本発明の別の観点によると、上記で要約された、および添付された特許請求の範囲において主張される、本発明に従う化合物は、さらに共有結合的に連結されたＰＥＧ部分を含んでいてよく、ここで前記ＰＥＧ部分はその化合物にCys(マレイミド)、hCys(マレイミド)、またはPen(マレイミド)リンカーを介して共有結合的に連結されてCys(スクシンイミド-N-PEG)、hCys(スクシンイミド-N-PEG)、またはPen(スクシンイミド-N-PEG)を形成しており、ここで“スクシンイミド-N-PEG”は以下で定義されるように線状または分枝状のどちらかである。そのＰＥＧ部分は約２，０００から約８０，０００までの平均分子量を有し、好ましくはそのＰＥＧ部分は5K PEG、10K PEG、20K PEG、30K PEG、40K PEG、50K PEG
、および60K PEGからなるグループから選択されてCys(スクシンイミド-N-5K PEG)、Cys(
スクシンイミド-N-10K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-20K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-30K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-40K PEG)、Cys(スクシンイミド-N-50K PEG)、Cys(スク
シンイミド-N-60K PEG)、hCys(スクシンイミド-N-5K PEG)、hCys(スクシンイミド-N-10K 
PEG)、hCys(スクシンイミド-N-20K PEG)、hCys(スクシンイミド-N-30K PEG)、hCys(スク
シンイミド-N-40K PEG)、hCys(スクシンイミド-N-50K PEG)、hCys(スクシンイミド-N-60K
PEG)、Pen(スクシンイミド-N-5K PEG)、Pen(スクシンイミド-N-10K PEG)、Pen(スクシンイミド-N-20K PEG)、Pen(スクシンイミド-N-30K PEG)、Pen(スクシンイミド-N-40K PEG)
、Pen(スクシンイミド-N-50K PEG)、またはPen(スクシンイミド-N-60K PEG)を形成している。
【００２３】
ＰＥＧ化は１６、３０および３１〜４３位のアミノ酸残基のいずれか１個において、好ましくは３２、３３および４３位のアミノ酸残基のいずれか１個において起こり、それによりCys(スクシンイミド-N-PEG)、hCys(スクシンイミド-N-PEG)、またはPen(スクシンイ
ミド-N-PEG)がそのアミノ酸残基の位置のいずれか１箇所に配置される。
【００２４】
さらに、上記の式（Ｉ）は、A44〜A47の位置にＰＥＧ化部位を提供するように拡張されてよい。本発明のそのようなＰＥＧ化された化合物のＣ末端はアミド化されていてよく、例えば(4Hppa1, Aib2, A5c7, Nle14)hGIP(1-30)-NH2(SEQ ID NO:4)であり、またはそれは遊離酸のままであってよく、例えば(4Hppa1, Aib2, A5c7, Nle14)hGIP(1-30)-OH (SEQ ID
NO:96)である。
【００２５】
そのようなＰＥＧ化された化合物の好ましい化合物は次のものである：
実施例８８：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Cys43(スクシンイミド-N-20K PEG)]hGIP(1-43)-NH2(SEQ ID NO:80);
実施例８９：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Cys43(スクシンイミド-N-30K PEG)]hGIP(1-43)-NH2(SEQ ID NO:81);
実施例９０：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, Cys43(スクシンイミド-N-20K PEG)]hGIP(1-43)-NH2;
実施例９１：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, Cys43(スクシンイミド-N-30K PEG)]hGIP(1-43)-NH2;
実施例９２：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Cys43(スクシンイミド-N-60K PEG)]hGIP(1-43)-NH2(SEQ ID NO:82);
実施例９３：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, Cys43(スクシンイミド-N-60K PEG)]hGIP(1-43)-NH2 (SEQ ID NO:83);
実施例９４：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, Cys43(スクシンイミド-N-60K PEG)]hGIP(1-43)-NH2;
実施例９５：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, 14, Cys43(スクシンイミド-N-60K PEG)]hGIP(1-43)-NH2;
実施例９６：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Cys43(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-20K PEG)]hGIP(1-43)-NH2 (SEQ ID NO:84);
実施例９７：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Cys32(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2 (SEQ ID NO:85);
実施例９８：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Cys33(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2 (SEQ ID NO:86);
実施例９９：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, Cys43(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-20K PEG)]hGIP(1-43)-NH2;
実施例１００：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, Cys32(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2;
実施例１０１：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, Cys33(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2;
実施例１０２：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Cys43(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-O-CH2-CH(20K PEG)-CH2-20K PEG)]hGIP(1-43)-NH2 (SEQ ID NO:87);
実施例１０３：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Cys32(スクシンイミド-N-(CH2)2-C
(O)NH-(CH2)3-O-CH2-CH(20K PEG)-CH2-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2 (SEQ ID NO:88);
実施例１０４：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, Nle14, Cys33(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-O-CH2-CH(20K PEG)-CH2-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2 (SEQ ID NO:89);
実施例１０５：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, Cys43(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-O-CH2-CH(20K PEG)-CH2-20K PEG)]hGIP(1-43)-NH2;
実施例１０６：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, Cys32(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-O-CH2-CH(20K PEG)-CH2-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2;
実施例１０７：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, Nle14, Cys33(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-O-CH2-CH(20K PEG)-CH2-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2;
実施例１０８：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, Cys43(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-20K PEG)]hGIP(1-43)-NH2 (SEQ ID NO:90);
実施例１０９：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, Cys32(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2 (SEQ ID NO:91);
実施例１１０：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, Cys33(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2 (SEQ ID NO:92);
実施例１１１：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, 14, Cys43(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-20K PEG)]hGIP(1-43)-NH2;
実施例１１２：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, 14, Cys32(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2;
実施例１１３：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, 14, Cys33(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2;
実施例１１４：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, Cys43(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-O-CH2-CH(20K PEG)-CH2-20K PEG)]hGIP(1-43)-NH2 (SEQ ID NO:93);
実施例１１５：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, Cys32(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-O-CH2-CH(20K PEG)-CH2-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2 (SEQ ID NO:94);
実施例１１６：  [3Cl-Tyr1, Aib2, A5c11, 14, Cys33(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-O-CH2-CH(20K PEG)-CH2-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2 (SEQ ID NO:95);
実施例１１７：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, 14, Cys43(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-O-CH2-CH(20K PEG)-CH2-20K PEG)]hGIP(1-43)-NH2;
実施例１１８：  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, 14, Cys32(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-O-CH2-CH(20K PEG)-CH2-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2;および
実施例１１９:  [3Cl-Tyr1, D-Ala2, A5c11, 14, Cys33(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-O-CH2-CH(20K PEG)-CH2-20K PEG)]hGIP(1-42)-NH2。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本出願は、下記の一般的に理解されている略語を用いる：
Abu:    α-アミノ酪酸
Acc:    1-アミノ-1-シクロ(C3-C9)アルキルカルボン酸
A3c:    1-アミノ-1-シクロプロパンカルボン酸
A4c:    1-アミノ-1-シクロブタンカルボン酸
A5c:    1-アミノ-1-シクロペンタンカルボン酸
A6c:    1-アミノ-1-シクロヘキサンカルボン酸
Act:    4-アミノ-4-カルボキシテトラヒドロピラン
Ado:    12-アミノドデカン酸
Aib:    α-アミノイソ酪酸
Aic:    2-アミノインダン-2-カルボン酸
AlaまたはA:    アラニン
β-Ala:    ベータ-アラニン
Amp:    4-アミノ-フェニルアラニン;
Apc:    4-アミノ-4-カルボキシピペリジン:
ArgまたはR:    アルギニン
hArg:    ホモアルギニン
AsnまたはN:    アスパラギン
AspまたはD:    アスパラギン酸
Aun:    11-アミノウンデカン酸
Ava:    5-アミノ吉草酸
Cha:    β-シクロヘキシルアラニン
Cpa:    4-Cl-フェニルアラニン
CysまたはC:    システイン
Dhp:    3,4-デヒドロプロリン
Dmt:    5,5-ジメチルチアゾリジン-4-カルボン酸
Gaba:    γ-アミノ酪酸
GlnまたはQ:    グルタミン
GluまたはE:    グルタミン酸
GlyまたはG:    グリシン
HisまたはH:    ヒスチジン
4Hppa:    3-(4-ヒドロキシフェニル)プロピオン酸
3Hyp:    3-ヒドロキシプロリン
4Hyp:    4-ヒドロキシプロリン
IleまたはI:    イソロイシン
4Ktp:    4-ケトプロリン
LeuまたはL:    ロイシン
LysまたはK:    リシン
MetまたはM:    メチオニン
Nle:    ノルロイシン
NMe-Tyr:    N-メチル-チロシン
1Nalまたは1-Nal:    β-(1-ナチフル)アラニン
2Nalまたは2-Nal:    β-(2-ナチフル)アラニン
Nle:    ノルロイシン
Nva:    ノルバリン
Orn:    オルニチン
2Palまたは2-Pal:    β-(2-ピリジニル)アラニン
3Palまたは3-Pal:    β-(3-ピリジニル)アラニン
4Palまたは4-Pal:    β-(4-ピリジニル)アラニン
Pen:    ペニシラミン
PheまたはF:    フェニルアラニン
(3,4,5F)Phe:    3,4,5-トリフルオロフェニルアラニン
(2,3,4,5,6)Phe:    2,3,4,5,6-ペンタフルオロフェニルアラニン
3,4,5F-Phe:    3,4,5-トリフルオロ-フェニルアラニン
3,4F-Phe:    3,4-ジフルオロ-フェニルアラニン
3,5F-Phe:    3,5-ジフルオロ-フェニルアラニン
3Br-Phe:    3-ブロモ-フェニルアラニン
3Cl-Phe:    3-クロロ-フェニルアラニン
3F-Phe:    3-フルオロ-フェニルアラニン
3OH-Phe:    3-ヒドロキシ-フェニルアラニン
4CN-Phe:    4-シアノ-フェニルアラニン
4F-Phe:    4-フルオロ-フェニルアラニン
4NH2CH2-Phe:    4-アミノメチル-フェニルアラニン
4NH2-Phe:    4-アミノ-フェニルアラニン
ProまたはP:    プロリン
hPro:    ホモプロリン
Psu:    N-プロピルスクシンイミド
SerまたはS:    セリン
Taz:    β-(4-チアゾリル)アラニン
3Thiまたは3-Thi:    β-(3-チエニル)アラニン
ThrまたはT:    スレオニン
Thz:    チオプロリン
Tic:    テトラヒドロイソキノリン-3-カルボン酸
Tle:    tert-ロイシン
TrpまたはW:    トリプトファン
TyrまたはY:    チロシン
Tyr(Ac):    チロシン(アセチル)
Tyr(Me):    チロシン(O-メチル)
β-Tyr:    β-チロシン
αMe-Tyr:    α-メチル-チロシン
2,6Me-Tyr：    2,6-ジメチル-チロシン
2F-Tyr:    2-フルオロ-チロシン
3,5Br-Tyr:    3,5-ジブロモ-チロシン
3,5I-Tyr:    3,5-ジヨード-チロシン
3Br-Tyr:    3-ブロモ-チロシン
3Cl-Tyr:    3-クロロ-チロシン
3F-Tyr:    3-フルオロ-チロシン
3I-Tyr:    3-ヨード-チロシン
3MeO-Tyr:    3-O-メチル-チロシン
3NH2-Tyr：    3-アミノ-チロシン
3NO2-Tyr:    3-ニトロ-チロシン
3(OH-CH2)Tyr：    3-メチルヒドロキシ-チロシン
3OH-Tyr:    3-ヒドロキシ-チロシン
ValまたはV:    バリン。
【００２７】
本明細書において用いられる特定の他の略語を次のように定義する：
Boc:    tert-ブチルオキシカルボニル
BSA:    ウシ血清アルブミン
DCM:    ジクロロメタン
DIPEA:    ジイソプロピルエチルアミン
DMF:    ジメチルホルムアミド
ESI:    エレクトロスプレーイオン化
Fmoc:    9-フルオレニルメチルオキシカルボニル
HBTU:    2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート
HOBT:    1-ヒドロキシベンゾトリアゾール
HPLC:    高速液体クロマトグラフィー
IBMX:    イソブチルメチルキサンチン
LC-MS:  液体クロマトグラフィー−質量分析
NMP:    N-メチルピロリドン
5K PEG:  ポリエチレングリコールであって、他の官能基または部分、例えばリンカー
を含んでいてよく、下記で定義されるように線状または分枝状のどちらかであり、約５，０００の平均総分子量を有するポリエチレングリコール
10K PEG:  ポリエチレングリコールであって、他の官能基または部分、例えばリンカーを含んでいてよく、下記で定義されるように線状または分枝状のどちらかであり、約１０
，０００の平均総分子量を有するポリエチレングリコール
20K PEG:  ポリエチレングリコールであって、他の官能基または部分、例えばリンカーを含んでいてよく、下記で定義されるように線状または分枝状のどちらかであり、約２０，０００の平均総分子量を有するポリエチレングリコール
30K PEG:  ポリエチレングリコールであって、他の官能基または部分、例えばリンカーを含んでいてよく、下記で定義されるように線状または分枝状のどちらかであり、約３０，０００の平均総分子量を有するポリエチレングリコール
40K PEG:  ポリエチレングリコールであって、他の官能基または部分、例えばリンカーを含んでいてよく、下記で定義されるように線状または分枝状のどちらかであり、約４０，０００の平均総分子量を有するポリエチレングリコール
50K PEG:  ポリエチレングリコールであって、他の官能基または部分、例えばリンカーを含んでいてよく、下記で定義されるように線状または分枝状のどちらかであり、約５０，０００の平均総分子量を有するポリエチレングリコール
60K PEG:  ポリエチレングリコールであって、他の官能基または部分、例えばリンカーを含んでいてよく、下記で定義されるように線状または分枝状のどちらかであり、約６０，０００の平均総分子量を有するポリエチレングリコール
tBu:    tert-ブチル
TIS:    トリイソプロピルシラン
Trt:    トリチル
TFA:    トリフルオロ酢酸
TFFH:    テトラメチルフルオロホルムアミジニウム  ヘキサフルオロホスフェート
Z:    ベンジルオキシカルボニル
“4CF3-Phe”、すなわち4-トリフルオロメチル-フェニルアラニンは次の構造を有する
：
【００２８】
【化１】
2014051501.tif 000002
【００２９】
“7HO-Tic”、すなわち7-ヒドロキシ-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-3-カルボン
酸は次の構造を有する：
【００３０】
【化２】
2014051501.tif 000003
【００３１】
“Tyr1-Ψ-(CH2-NH)”は次の構造を有する：
【００３２】
【化３】
2014051501.tif 000004
【００３３】
本明細書で用いられるギリシャ文字プサイ“Ψ”は、ペプチド結合が偽ペプチド結合により置き換えられていることを示す。アミノ酸配列の名前において、用語Ψの形式はA1-
Ψ-(X-X’)A2であり、ここでA1はそのカルボニル基が修飾されてＸになっているアミノアシル基であり、A2はそのα−アミノ基が修飾されてＸ’になっているアミノアシル基である。ＸおよびＸ’はTyr-Ψ-(CH2-NH)Glyのように結合により隔てられた一連の元素記号として示される。
【００３４】
“Cys(スクシンイミド-N-アルキル)”は次の構造を有する：
【００３５】
【化４】
2014051501.tif 000005
【００３６】
“Cys(Psu)”は次の構造を有する：
【００３７】
【化５】
2014051501.tif 000006
【００３８】
“Orn(N-C(O)-(CH2)12-CH3)”は次の構造を有する：
【００３９】
【化６】
2014051501.tif 000007
【００４０】
“Cys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)”は次の構造を有し：
【００４１】
【化７】
2014051501.tif 000008
【００４２】
ここで、x = １〜３０、およびy = １〜３０である。
【００４３】
“hCys(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)”は次の構造を有し：
【００４４】
【化８】
2014051501.tif 000009
【００４５】
ここで、x = １〜３０、およびy = １〜３０である。
【００４６】
“Pen(スクシンイミド-N-(CH2)x-C(O)-NH-(CH2)y-CH3)”は次の構造を有し：
【００４７】
【化９】
2014051501.tif 000010
【００４８】
ここで、x = １〜３０、およびy = １〜３０である。
【００４９】
“Cys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)”は次の構造を有し：
【００５０】
【化１０】
2014051501.tif 000011
【００５１】
ここで、s = １〜３０、およびt = １〜３０である。
【００５２】
“hCys(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)”は次の構造を有し：
【００５３】
【化１１】
2014051501.tif 000012
【００５４】
ここで、s = １〜３０、およびt = １〜３０である。
【００５５】
“Pen(スクシンイミド-N-(CH2)s-NH-C(O)-(CH2)t-CH3)”は次の構造を有し：
【００５６】
【化１２】
2014051501.tif 000013
【００５７】
ここで、s = １〜３０、およびt = １〜３０である。
【００５８】
“Cys(スクシンイミド-N-PEG)”は次の構造を有する：
【００５９】
【化１３】
2014051501.tif 000014
【００６０】
“hCys(スクシンイミド-N-PEG)”は次の構造を有する：
【００６１】
【化１４】
2014051501.tif 000015
【００６２】
“Pen(スクシンイミド-N-PEG)”は次の構造を有する：
【００６３】
【化１５】
2014051501.tif 000016
【００６４】
“Cys(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-PEG)”は次の構造を有する：
【００６５】
【化１６】
2014051501.tif 000017
【００６６】
“Cys(スクシンイミド-N-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)3-O-CH2-CH(PEG)-CH2-PEG)”は次の構造を有する：
【００６７】
【化１７】
2014051501.tif 000018
【００６８】
Ｎ末端のアミノ酸を除いて、この開示における全てのアミノ酸の略語（例えばAla）は-NH-C(R)(R’)-CO-の構造を表しており、ここでRおよびR’はそれぞれ独立して水素またはアミノ酸の側鎖（例えば、Alaに関してはR = CH3およびR’ = H）であり、またはRおよびR’は繋がれて環系を形成していてよい。Ｎ末端アミノ酸に関しては、その略語は(R2R3)N-C(R)(R’)-CO-の構造を表し、ここでR2およびR3は上記の式（Ｉ）で定義されたものである。
【００６９】
用語“(C1-C30)炭化水素部分”は、アルキル、アルケニルおよびアルキニルを含み、アルケニルおよびアルキニルの場合ではC2-C30がある。
【００７０】
この発明のペプチドは、本明細書において別の形式、例えば(A5c2)hGIP(1-42)-OH (SEQ
ID NO:3)によっても表され、それはカッコの間に置かれた天然の配列から置換されたア
ミノ酸（例えば、hGIP中のAla2の代わりにA5c2）を有する。カッコの間の数字は、そのペプチド中に存在するアミノ酸の番号を表す（例えば、hGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:1)はhGIPに関するペプチド配列のアミノ酸１〜４２である）。hGIP(1-30)-NH2 (SEQ ID NO:2)中
の名称“NH2”は、そのペプチドのＣ末端がアミド化されていることを示し；hGIP(1-42) (SEQ ID NO:1)またはhGIP(1-42)-OH (SEQ ID NO:1)はＣ末端が遊離酸であることを意味する。
【００７１】
ヒトのＧＩＰ(“hGIP”)は次のアミノ酸配列を有する：
【００７２】
【化１８】
2014051501.tif 000019
【００７３】
“アシル”は、R’’-C(O)-を指し、ここでR’’はH、アルキル、置換されたアルキル
、ヘテロアルキル、置換されたヘテロアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アリール、アルキルアリール、または置換されたアルキルアリールである。
【００７４】
“アルキル”は１個以上の炭素原子を含む炭化水素基を指し、ここで多数の炭素原子は
、もし存在するならば、単結合によりつながっている。アルキル炭化水素基は直鎖であってよく、または１個以上の分枝または環式基を含んでいてよい。
【００７５】
“置換されたアルキル”は、炭化水素基の１個以上の水素原子が、ハロゲン（すなわちフッ素、塩素、臭素およびヨウ素）、-OH、-CN、-SH、-NH2、-NHCH3、-NO2、ハロゲンで
置換された-C1-20アルキル、-CF3、-OCH3、-OCF3、および-(CH2)0-20-COOHからなるグル
ープから選択される１個以上の置換基で置き換えられているアルキルを指す。異なる態様において、１、２、３または４個の置換基が存在する。-(CH2)0-20-COOHの存在は、結果
としてアルキル酸の生成をもたらす。-(CH2)0-20-COOHを含む、またはそれで構成される
アルキル酸の例には、2-ノルボルナン酢酸、tert-酪酸および3-シクロペンチルプロピオ
ン酸が含まれる。
【００７６】
“ヘテロアルキル”は、炭化水素基中の炭素原子の１個以上が次の基：アミノ、アミド、-O-、-S-、またはカルボニルの内の１個以上で置き換えられているアルキルを指す。異なる態様において、１または２個のヘテロ原子が存在する。
【００７７】
“置換されたヘテロアルキル”は、炭化水素基の１個以上の水素原子が、ハロゲン、-OH、-CN、-SH、-NH2、-NHCH3、-NO2、ハロゲンで置換された-C1-20アルキル、-CF3、-OCH3、-OCF3、および-(CH2)0-20-COOHからなるグループから選択される１個以上の置換基で置き換えられているヘテロアルキルを指す。異なる態様において、１、２、３または４個の置換基が存在する。
【００７８】
“アルケニル”は、２個以上の炭素で構成され、１個以上の炭素−炭素二重結合が存在する炭化水素基を指す。アルケニル炭化水素基は直鎖であってよく、または１個以上の分枝または環式基を含んでいてよい。
【００７９】
“置換されたアルケニル”は、１個以上の水素がハロゲン、-OH、-CN、-SH、-NH2、-NHCH3、-NO2、ハロゲンで置換された-C1-20アルキル、-CF3、-OCH3、-OCF3、および-(CH2)0-20-COOHからなるグループから選択される１個以上の置換基で置き換えられているアルケニルを指す。異なる態様において、１、２、３または４個の置換基が存在する。
【００８０】
“アリール”は、共役パイ電子系を有する少なくとも１個の環を有し、３個までの共役した、または縮合した環系を含む、場合により置換された芳香族基を指す。アリールには炭素環式アリール、ヘテロ環式アリールおよびビアリール基が含まれる。好ましくは、アリールは５または６員環である。ヘテロ環式アリールに関して好ましい原子は、１個以上の硫黄、酸素および／または窒素である。アリールの例には、フェニル、1-ナフチル、2-ナフチル、インドール、キノリン、2-イミダゾール、および9-アントラセンが含まれる。アリール置換基は、-C1-20アルキル、-C1-20アルコキシ、ハロゲン、-OH、-CN、-SH、-NH2、-NO2、ハロゲンで置換された-C1-20アルキル、-CF3、-OCF3、および-(CH2)0-20-COOH
からなるグループから選択される。異なる態様において、アリールは０、１、２、３または４個の置換基を含む。
【００８１】
“アルキルアリール”は“アリール”に結合した“アルキル”を指す。
【００８２】
合成
この発明のペプチドは、標準的な固相ペプチド合成により調製することができる。例えば、Stewart, J. M., et al., 1984, Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Co., 第２版を参照。R1がNH-X2-CH2-CONH2、すなわち、Z0 = CONH2である場合、そのペプチドの合
成はRinkアミドMBHA樹脂にカップリングしたFmoc-HN-X2-CH2-CONH2を用いて出発する。R1がNH-X2-CH2-COOH、すなわち、Z0 = COOHである場合、そのペプチドの合成はWang樹脂に
カップリングしたFmoc-HN-X2-CH2-COOHを用いて出発する。この特定の工程に関して、２
モル当量のFmoc-HN-X2-COOH、HBTUおよびHOBtならびに１０モル当量のDIPEAを用いる。カップリングの時間は約８時間である。
【００８３】
A5c、A6c、および／またはAibを含むこの発明のＧＩＰアナログの合成において、これ
らの残基およびそれらのすぐ後ろの残基に関するカップリング時間は２時間である。
【００８４】
上記の一般式の置換基R2およびR3は、Ｎ末端アミノ酸A1の遊離アミンに、当技術で既知の標準的な技法により結合させることができる。例えばアルキル基、例えば(C1-C30)アルキルは、還元的アルキル化を用いて結合させることができる。ヒドロキシアルキル基、例えば(C1-C30)ヒドロキシアルキルも還元的アルキル化を用いて結合させることができ、ここで遊離のヒドロキシ基はtert-ブチルエステルを用いて保護される。アシル基、例えば-C(O)X3は、完了した樹脂を塩化メチレン中で３モル当量の遊離酸およびジイソプロピルカルボジイミド両方と約１時間混合することによる、遊離酸、例えば-X3COOHのＮ末端アミ
ノ酸の遊離アミンへのカップリングにより結合させることができる。3-フルオロ-4-ヒド
ロキシフェニル酢酸のように遊離酸が遊離のヒドロキシ基を含む場合、カップリングは追加の３モル当量のHOBTと共に実施されるべきである。
【００８５】
下記の実施例は、この発明のペプチドを作るための合成法を記述し、その方法は当業者には周知である。当業者には他の方法も知られている。実施例は説明のために提供されるのであって、本発明の範囲を限定することを意味するものでは決して無い。
【００８６】
実施例１:(4Hppa1, Aib2, A5c7, Nle14)hGIP(1-30)-NH2
表題のペプチドを、Applied Biosystems(米国カリフォルニア州フォスターシティ)モデル433Aペプチド合成機上で、フルオレニルメチルオキシカルボニル(Fomc)化学に基づいて自動的に合成した。0.72 mmol/gの置換を有するRinkアミドMBHA(4-メチルベンズヒドリルアミン)樹脂(Nova Biochem、米国カリフォルニア州ラホヤ)を用いた。Fomcアミノ酸のカー
トリッジはAnaSpec(米国カリフォルニア州サンノゼ)からのものであった。側鎖の保護を
有するFomcアミノ酸は次のものであった：Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-A5C-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、およびFmoc-Glu(OtBu)-OHおよびFmoc-Aib-OH。3-(4-ヒドロキシフェニル)-プロピオン酸(4Hppa)はSigma-Aldrich(米国ミズーリ州セントルイス)から購入した。合成は0.25 mmolスケールで行った
。ABI 433Aペプチド合成機を、次の反応サイクルを行うようにプログラムした：（１）NMPによる洗浄、（２）１０分間の、NMP中20%ピペリジンによるFmoc保護基の除去、（３）NMPによる洗浄−Fomcサイクルの洗浄および除去の間に、Fomcアミノ酸(4当量、1 mmol)をDMF中0.45Mの2-(1-H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,2,3-テトラメチルウロニウム  ヘ
キサフルオロホスフェート/1-ヒドロキシ-ベンゾトリアゾール(HBTU/HOBT)の溶液2 mlを
用いてまず予め活性化し(pre-activated)；この活性化されたアミノ酸エステル、1mlの2Mジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)および2.5 mlのNMPを樹脂に添加した−ならびに（４）予め活性化したアミノ酸を用いた１時間のカップリング。A5cとその次のPheおよびAib
とその次の4Hppaのカップリングは、３時間に延長された。樹脂を配列に従って連続的に
ダブルカップリングした。ペプチド鎖の組み立てが終了した後、保護されたペプチド−樹脂を、TFA、H2O、TIS (15 ml / 1.28ml /1.35 ml)の混合物中で３時間で切断した。それ
を濾過して140 mlの冷エーテルの中に入れ、遠心分離して沈殿物を得た。この粗生成物を20mlの50% AcOH中で溶解し、180 mlの水で希釈した。それをC18 DYNAMAX-100 A0(Varian
、米国カリフォルニア州ウォールナットクリーク)のカラム(4 x 43cm)を用いる逆相分取HPLC上で精製した。そのカラムを20% Bから45% Bまでの４５分間の直線勾配を用いて溶離
し、ここでAは水中0.1% TFAであり、BはCH3CN中0.1% TFAであった。MSおよびHPLCにより
チェックした後、全ての純粋な画分をまとめて凍結乾燥した。その化合物の純度は99.90%であった。エレクトロスプレーイオン化質量分析(ESI-MS)での分析は3510.8の分子量を与え、これは計算された分子量3510.93と一致する。
【００８７】
実施例１１:(3,5Br-Tyr1, Aib2, 13, Nle14)hGIP(1-42)-OH
表題のペプチドを、Applied Biosystems(米国カリフォルニア州フォスターシティ)モデル433Aペプチド合成機上で、フルオレニルメチルオキシカルボニル(Fomc)化学に基づいて自動的に合成した。0.59 mmol/gの置換を有するFmoc-Gln(Trt)-wang樹脂(Novabiochem.、米国カリフォルニア州ラホヤ)を用いた。Fomcアミノ酸のカートリッジはAnaSpec(米国カリ
フォルニア州サンノゼ)からのものであった。側鎖の保護を有するFomcアミノ酸は次のも
のであった：Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、およびFmoc-Aib-OH。3,5Br-Tyr-OHはChem-Impex international(米国イリノイ州ウッドデール)からのものであった。合成は0.25 mmolスケールで行った。ABI 433Aペプチド合成機を、次の反応サイクルを
行うようにプログラムした：（１）NMPによる洗浄、（２）１０分間の、NMP中20%ピペリ
ジンによるFmoc保護基の除去、（３）NMPによる洗浄−Fomcサイクルの除去およびその後
の洗浄の間に、Fomcアミノ酸(4当量、1 mmol)をDMF中0.45Mの2-(1-H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,2,3-テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート/1-ヒドロキシ-ベンゾトリアゾール(HBTU/HOBT)の溶液2 mlを用いてまず予め活性化し；この活性化されたアミノ酸エステル、1mlの2Mジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)および2.5 mlのNMPを
樹脂に添加した−ならびに（４）予め活性化したアミノ酸を用いた１時間のカップリング。A5cとその次のIleのカップリングは、３時間に延長された。3,5Br-Tyr-OHのカップリングは、PYAOP [(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)オキシトリス(ピロリジノ)ホスホニウム  ヘキサフルオロホスフェート]をカップリング試薬として用いてDIPEAおよびペンタフルオロフェノールの存在下で手動で行った。樹脂を配列に従って連続的にダブルカップリングした。ペプチド鎖の組み立てが終了した後、保護されたペプチド−樹脂を、Na2CO3/DMF/DBU (1/0.5/0.1)を含む溶液で２時間処理し、次いでFomcを25%ピペリジンを用いて４
５分間で切断した。それをTFA、H2O、TIS、チオアニソールおよびフェノール(12 ml / 0.64 /0.64/0.5/0.5)の混合物中で３時間で切断し、次いで濾過して140 mlの冷エーテルの
中に入れた。遠心分離の後に沈殿物が得られた。この粗生成物を20mlの50% AcOH中で溶解し、180 mlの水で希釈し、C18 DYNAMAX-100 A0(Varian、米国カリフォルニア州ウォール
ナットクリーク)のカラム(4 x 43cm)を用いる逆相分取HPLC上で精製した。そのカラムを20% Bから45% Bまでの４５分間の直線勾配を用いて溶離し、ここでAは水中0.1% TFAであり、BはCH3CN中0.1% TFAであった。MSおよびHPLCによりチェックした後、全ての純粋な画分をまとめて凍結乾燥した。その純度は99.90%であった。ESI質量分析は5150.8を示した。
【００８８】
実施例２２:(3,4,5F-Phe1, Aib2, A5c11, Nle14)hGIP(1-42)-OH
側鎖を保護したFmoc-[Aib2, A5c11, Nle14]hGIP(2-42)-Wang樹脂を、Applied Biosystemsモデル433Aペプチド合成機(米国カリフォルニア州フォスターシティ)上で、フルオレニルメチルオキシカルボニル(Fomc)化学を用いて合成した。0.59 mmol/gの置換を有するFmoc-Gln(Trt)-wang樹脂(Novabiochem.、米国カリフォルニア州サンディエゴ)を用いた。用い
たFomcアミノ酸(AnaSpec、米国カリフォルニア州サンノゼ)は、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Aib-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(tBu)-OH、Fmoc-A5c-OH、 Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、およびFmoc-Val-OHであった。合成は0.2 mmolスケールで行った
。Fomc基を、N-メチルピロリドン(NMP)中20%ピペリジンを用いて３０分間処理することにより除去した。それぞれのカップリングの工程において、Fmocアミノ酸(3当量、0.3 mmol
)をNMP中0.45Mの2-(1-H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,2,3-テトラメチルウロニウム
ヘキサフルオロホスフェート/1-ヒドロキシ-ベンゾトリアゾール(HBTU/HOBT)の溶液2 ml中でまず予め活性化した。この活性化されたアミノ酸エステル、1mlのジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)および1 mlのNMPを樹脂に添加した。ABI 433Aペプチド合成機を、次の反応サイクルを行うようにプログラムした：（１）NMPによる洗浄、（２）３０分間の、NMP中20%ピペリジンによるFmoc保護基の除去、（３）NMPによる洗浄、（４）予め活性化したFmocアミノ酸を用いた３時間のカップリング、（５）NMPによる洗浄、および（６）予
め活性化したFmocアミノ酸を用いた３時間のカップリング。１当量のTFFH (テトラメチルフルオロホルムアミジニウム  ヘキサフルオロホスフェート；Perceptive Biosystems、
英国ウォーリントン)を、１０位および１１位におけるFmoc-A5c-OHおよびFmoc-Tyr(tBu)-OHのカップリングに添加した。樹脂を表題ペプチドの配列に従って連続的にダブルカップリングした。ペプチド鎖を組み立てた後、樹脂をN,N-ジメチルホルムアミド(DMF)および
ジクロロメタン(DCM)を用いることにより完全に洗浄した。
【００８９】
433A上でのペプチド鎖の組み立ての終了時に、ペプチド−樹脂をシェーカー上の反応容器に移し、Fomcを25% Pip/DMFを用いて３０分間で除去した。樹脂をDMFで洗浄した。Fmoc-Phe(3,4,5-F)-OH (1.0 mmole)を、PyAOP(1(7-アザベンゾトリアゾール-1-イルオキシト
リス(ピロリジノ)ホスホニウム-ヘキサフルオロホスフェート、Applied Biosystems、6 mmole)、ペンタフルオロフェノール(Oakwood Products；米国サウスカロライナ州ウェストコロンビア) (2.0 mmole)およびDIPEA (2.0 mmole)を用いてカップリングした。Fmoc基を上記のように除去した。
【００９０】
表題ペプチドを切断するため、樹脂をTFA、H2Oおよびトリイソプロピルシラン(TIS) (9.5 ml / 0.85 ml /0.8 ml)の混合物で４時間処理した。樹脂を濾過して除き、濾液を200 mlのエーテルの中に注いだ。沈殿物を遠心分離により集めた。粗生成物をアセトニトリルおよび水の混合物中で溶解し、C18 Luna (Phenomenex)のカラム(250-21.2mm)を用いる逆
相分取HPLCシステム上で精製した。そのカラムを100% A〜55% A:45% Bの直線勾配を用い
て８０分間にわたって溶離し、ここでAは水中0.1% TFAであり、Bはアセトニトリル中0.1%
TFAであった。その画分を分析的HPLCによりチェックし、純粋な生成物を含む画分をまとめて凍結乾燥すると、156.5 mg (15.5%)の白色固体が得られた。HPLCを用いて純度を調べ、おおよそ99.90%であることが分かった。エレクトロスプレーイオン化質量分析(ESI-MS)での分析は、5041.5の分子量を与えた。
【００９１】
実施例４０:[Tyr1Ψ(CH2NH)Gly2, A5c11, 41]hGIP(1-42)-OH
Ａ．(Gly2, A5c11, 41)hGIP(2-42)-OHのペプチド鎖の合成
Liberty Peptide Synthesizer (CEM；米国ノースキャロライナ州マシューズ)上で、0.20 mmoleスケールで、マイクロ波支援Fmoc化学を用いてそれを組み立てた。プレロードされ
た(Pre-loaded)Fmoc-Gln(Trt)-Wang樹脂(0.59 mmole/g；Novabiochem，米国カリフォルニア州サンディエゴ)を用いてＣ末端酸ペプチド（C-terminal acid peptide）を生成した。その樹脂(0.423 g)を50 mlコニカルチューブの中に、15 mlのジメチルホルムアミド(DMF)と共に置き、合成機上の樹脂の位置に入れた。次いでその樹脂を、自動化されたプロセスにより定量的に反応容器に移した。0.25 mmoleスケールでの合成のための標準的なLiberty合成プロトコルを用いた。このプロトコルには、DMF中の0.1M N-ヒドロキシベンゾトリ
アゾール(HOBT)を含む20% ピペリジン7 mlを用いた最初の処理によるＮ末端のFmoc部分の脱保護が含まれている。その最初の脱保護の工程は、マイクロ波電力（４５ワット、最大温度７５℃）および窒素による泡立て（３秒間オン／７秒間オフ）を用いて３０秒間であった。次いで反応容器から液体を排出し(drained)、それが３分間の期間であること以外
は第１の処理と同じである第２のピペリジン処理を行った。次いで樹脂から液体を排出し、DMFで数回、完全に洗浄した。サイクル２はFmoc-A5c-OHのカップリングであり、次いでそのDMF中0.2Mのストック溶液(2.5 ml、5当量)、続いて1.0 mlのDMF中0.45M (4.5当量)HB
TU [2-(1H-ベンゾ-トリアゾール-1-イル)-1, 1, 3, 3-テトラメチルウロニウム  ヘキサ
フルオロホスフェート]を添加した。これに続き0.5 mlのNMP (N-メチルピロリジノン(N-methylpyrrollidinone))中2M (10当量) DIPEA (ジイソプロピルエチルアミン)を添加した
。カップリングの工程は、２０ワットのマイクロ波電力、７５℃の最大温度、および同程度の窒素による泡立てを用いて５分間行った。最初のカップリングの工程の後、反応容器から液体を排出して廃棄し、カップリングを１回繰り返した。Fmoc A5cの後のサイクル３は積極的なカップリング(aggressive coupling)を用い、ここでカップリングの工程は２
０ワットのマイクロ波電力を用いて最大温度９０℃で１０分間行われた。全てのアミノ酸を、サイクル３２のFmoc A5c-OHおよびその後のFmoc Tyr(tBu)-OHに積極的なカップリン
グを適用したこと以外は、サイクル２において記述したアミノ酸と同様にして導入した。シークエンス全体を通して二重カップリングの方法を用いた。サイクル２、４、２０、２１、２６、２７、３１、３６、３７、３８、３９、４１はカップリングの工程のすぐ後にキャッピングの手順を含んでいた。キャッピングは、NMP中の0.015M HOBTを含む0.5M無水酢酸7 mlおよび2M DIPEA溶液2 mlの添加により、多段階マイクロ波プロトコルを用いて行った：５０ワットの電力で３０秒間（最大温度６５℃）、続いて３０秒間のマイクロ波電力オフ、続いて第２ラウンドの３０秒間のマイクロ波電力オン（５０ワット）、次いで再び３０秒間のマイクロ波電力無し。次いで樹脂から液体を排出し、DMFで完全に洗浄した
。次のアミノ酸(Advanced Chemtech，米国ケンタッキー州ルイスビル)を用いた：サイク
ル2: Fmoc-A5c-OH; サイクル3: Fmoc-Ile-OH; サイクル4: Fmoc-Asn(Trt)-OH; サイクル5: Fmoc-His(Trt)-OH; サイクル6: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル7: Fmoc-Trp(Boc)-OH; サイクル8: Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル9: Fmoc-Asn(Trt)-OH; サイクル10: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル11: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル12: Fmoc-Gly-OH; サイクル13: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル14: Fmoc-Gln(Trt)-OH; サイクル15: Fmoc-Ala-OH; サイクル16: Fmoc-Leu-OH; サイクル17: Fmoc-Leu-OH; サイクル18: Fmoc-Trp(Boc)-OH; サイクル19: Fmoc-Asn(Trt)-OH; サイクル20: Fmoc-Val-OH; サイクル21: Fmoc-Phe-OH; サイクル22: Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル23: Fmoc-Gln(Trt)-OH; サイクル24: Fmoc-Gln(Trt)-OH; サイクル25: Fmoc-His(Trt)-OH; サイクル26: Fmoc-Ile-OH; サイクル27: Fmoc-Lys(Boc)-OH; サイクル28: Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル29: Fmoc-Met-OH; サイクル30: Fmoc-Ala-OH; サイクル31: Fmoc-Ile-OH; サイクル32:Fmoc-A5C-OH、サイクル33: Fmoc-Tyr(tBu)-OH、サイクル34:Fmoc-Asp(OtBu)-OH; サイクル35: Fmoc-Ser(tBu)-OH; サイクル36: Fmoc-Ile-OH; サイクル37: Fmoc-Phe-OH; サイクル38: Fmoc-Thr(oBu))-OH; サイクル39: Fmoc-Gly-OH、サイクル40: Fmoc-Glu(OtBu)-OH、およびサイクル41: Fmoc-Gly-OH。Fmoc-His(Trt)-OHに関するカップリングのプロトコルは、標準的なプロトコルを少し修正したバー
ジョンであった。最初の２分間マイクロ波電力をオフにし、続いてマイクロ波電力オンで４分間（２０ワット；最大温度５０℃）行った。ペプチド鎖の組み立てが終了した後、樹脂をDMF中20%ピペリジンで４０分間処理してＮ末端のFmocを脱保護した。
【００９２】
Ｂ．Fmoc-Tyr(tBu)-CHOの合成
Fmoc-Tyr(tBu)-OHをN-メトキシ-N-メチル-α-(Fmoc-Tyr(tBu)-カルボキサミドに変換した。100ml DCM中のFmoc-Tyr(tBu)-OH(4.6g ,10 mmol)を、氷浴においてO,N-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(1 g, 10 mmol)、HOBT (1.37 g, 10.1 mmol、およびDIPEA (5.25 ml,
30 mmol)と１５分間混合し、それにEDC (2.11 g, 11 mmol)を添加した。反応溶液を室温で１５時間攪拌した。それをDCMで希釈し、それを飽和NaHCO3(50 ml x 3)、10 %クエン酸(50 ml x 3)およびブライン(50 ml x 3)により連続的に洗浄した。全てのDCM層をMgSO4で乾燥させた後、それを取り外す(stripped down)と4.62 gが得られ、MS 503.4 (MW 503.6)であった。
【００９３】
N-メトキシ-N-メチル-α-(Fmoc-Tyr(tBu)-カルボキサミドを還元してFmoc-Tyr(tBu)-CHOにした。水素化リチウムアルミニウム(36 ml, 1M)を、N-メトキシ-N-メチル-α-(Fmoc-Tyr(tBu)-カルボキサミド(3.6 g, 7.1 mmol)の冷却された60 mlの攪拌THF溶液に、５０分
間でゆっくりと添加した。還元は２０分間で終了した。混合物を100 mlの0.5 N KHSO4を
用いて0.5時間加水分解した。それを200 mlのエーテルで抽出した。全ての有機層を10% KHSO4(50 ml x 2)、ブライン(50 ml x 3)で洗浄し、次いでMgSO4で乾燥させた。溶媒を蒸
発させると粗製のアルデヒド生成物が得られた。
【００９４】
5 ml DMF中の上記の粗製のFmoc-Tyr(tBu)-CHO(3.115 mmol)を、5 ml DMFを含むペプチ
ド(Gly2, A5c11, 41)hGIP(2-42)-樹脂(0.2 mmol)の中に100 μl AcOHと共に添加した。それをNaBH3CN(0.1957 g)で１時間処理し、次いで２番目の部分のNaBH3CN(0.1957 g)を添加した。それをもう１回繰り返し、次いで樹脂を一夜振とうした。樹脂を洗浄した後、25%
ピペリジンを用いて４５分間でFmocを切断した。それをTFA、H2O、TIおよびDTT (15 ml /
1.28 ml / 1.35 ml / 0.75 g)の溶液を用いて３時間で切断し、次いで濾過して140 mlの冷エーテルの中に入れた。遠心分離の後に沈殿物が得られた。この粗生成物を20mlの50% AcOH中で溶解し、180 mlの水で希釈し、C18 DYNAMAX-100 A0(Varian、米国カリフォルニ
ア州ウォールナットクリーク)のカラム(4 x 43cm)を用いる逆相分取HPLC上で精製した。
そのカラムを20% Bから45% Bまでの４５分間の直線勾配を用いて溶離し、ここでAは水中0.1% TFAであり、BはCH3CN中0.1% TFAであった。MSおよびHPLCによりチェックした後、全
ての純粋な画分をまとめて凍結乾燥した。その純度は98.93%であった。ESI質量分析は4989.7を示し、これは計算された分子量4989.67と一致した。
【００９５】
当業者は、本発明の他のペプチドを、前記の実施例において開示された合成手順に類似した合成手順を用いて調製することができる。本明細書において例示した化合物に関する物理的データを表１に示す。
【００９６】
表１
【００９７】
【表１−１】
2014051501.tif 000020
【００９８】
【表１−２】
2014051501.tif 000021
【００９９】
機能的アッセイ
Ａ．インビトロｈＧＩＰ受容体結合アッセイ
ヒトの組換えＧＩＰ受容体を発現しているCHO-K1クローン細胞を、氷冷した50mM トリス-HCl中でBrinkman Polytron（設定６、１５秒）を用いてホモジナイズし、次いで39,000 gでの１０分間の遠心分離を２回、間で新しい緩衝液に再懸濁して行うことにより、インビトロ受容体結合アッセイのための膜を調製した。そのアッセイに関して、洗浄した膜調製物の部分量(aliquots)を、50mM トリス-HCl、0.1 mg/mlバシトラシン、および0.1% BSA中0.05nM [125I]GIP (約2200 Ci/mmol)と共に２５℃で１００分間保温した。最終的なアッ
セイ体積は0.5 mlであった。Brandel濾過マニホールドを用いてGF/Cフィルター（0.5%ポ
リエチレンイミンに予め浸したもの）を通して急速に濾過することにより、保温を終了させた。次いでそれぞれのチューブおよびフィルターを、5 ml部分量の氷冷した緩衝液で３回洗浄した。
【０１００】
特異的な結合は、結合した全ての放射性リガンドから1000nMのＧＩＰの存在下で結合した放射性リガンドを引いたものとして定義された。本明細書で例示した化合物に関するインビトロｈＧＩＰ受容体結合のデータを表２に示す。
【０１０１】
Ｂ．ヒトおよびラットの血漿内半減期アッセイ
ＧＩＰペプチド(50 μL 1 mg/ml)を450μLの血漿（ヒトまたはラット）に添加し、短時間ボルテックスし(vertexed)、３７℃で保温した。０、１、２、３、４、８、２４、３２、４８、５６、７２時間の時点のような様々な時点において50 μLを分離し、マイクロ遠心チューブの中で5 μLのギ酸および150 μLのアセトニトリルと混合し、ボルテックスし(v
ertexed)、10K rpmで１０分間遠心分離した。上清を注入バイアルに移し、LC-MSにより分析した。LC-MSシステムはESIプローブを有するAPI4000質量分析器で構成されていた。正
イオンモードおよび完全スキャン検出を用いた。HPLCでの分離を、Luna 3μ C8 (2), 2 x
30 mmカラム上で、90% Aから90% Bまでの勾配を用いて、0.3 ml/分の流速において１０
分間で実施した。緩衝液Aは水中1%ギ酸であり、緩衝液Bは1%ギ酸アセトニトリルであった。本明細書で例示した化合物に関するヒトおよびラットの血漿内半減期のデータを表２に示す。
【０１０２】
表２
【０１０３】
【表２−１】
2014051501.tif 000022
【０１０４】
【表２−２】
2014051501.tif 000023
【０１０５】
Ｃ．環状ＡＭＰ刺激の測定
1 x 105個のヒトの組換えＧＩＰ受容体を発現しているCHO-K1細胞またはRIN-5Fインスリ
ノーマ細胞を、２４ウェル細胞培養プレート(Corning Incorporate，米国ニューヨーク州コーニング)の中に一夜まいた。そのアッセイに関して、細胞を0.55mM IBMX(Sigma，米国ミズーリ州セントルイス)を含むpH 7.3に調節したハンクス緩衝塩溶液(Sigma，米国ミズ
ーリ州セントルイス)500 μl中で１０分間前保温した(preincubated)。次いでＧＩＰまたはそのアナログを、100 nMの濃度で添加した。３７℃で３０分間の保温の後、プレートを氷上に置き、500 μlの氷冷無水エタノールを添加して反応を止めた。ウェルの内容物を
集め、４℃において2,700 gで２０分間遠心分離して細胞破壊片を除去した。上清中のcAMPレベルを放射性免疫測定 (New England Nuclear，米国マサチューセッツ州ボストン)に
より決定した。
【０１０６】
Ｄ．正常なラットにおけるインビボでのインスリン分泌の測定
おおよそ275〜300 gの体重を有するオスのスプラーグドーリーラットを実験の対象として用いた。処理の前の日に、クロロハイドレートの下で頚静脈を通して右心房カニューレを挿入した。それぞれのカニューレを100 u/mlヘパリン生理食塩水で満たし、結んだ。化合物またはビヒクル(生理食塩水/0.25% BSA)を投与する前に、おおよそ１８時間ラットを絶食させた。実験の日に、化合物の部分量を解かし、室温に戻し、完全にボルテックスした。溶液から生じる化合物のあらゆる兆候に関して注意深くチェックした。化合物/グルコ
ースの注入の１０分前に、500 μlの血液試料を吸い出し、等体積のヘパリン添加生理食
塩水(10 u/ml)と入れ替えた。時間０において、カニューレを通して500 μlの血液試料を吸い出した。次に、ビヒクルまたは化合物の適切な用量のどちらかをカニューレの中に注入し、グルコース(1 g/kg)またはビヒクルの溶液で押し入れた。最後に、500 μlの体積
のヘパリン添加生理食塩水(10 u/ml)を用いて残ったグルコースをカニューレを通して押
し入れた。さらに500 μlの血液試料を、グルコースの投与の２．５、５、１０、および
２０分後に吸い出した；それぞれの直後に500 μlのヘパリン添加生理食塩水(10 u/ml)をカニューレを通して大量瞬時(bolus)静脈内注入した。血漿を血液試料から遠心分離によ
り集め、インスリン含有量に関するアッセイまで−２０℃で保管した。実施例１４および２８の化合物のインビボでの作用を示す総インスリン分泌の数値を、表３においてまとめる。
【０１０７】
表３
【０１０８】
【表３】
2014051501.tif 000024
【０１０９】
投与
この発明のペプチドは、医薬的に許容できる塩類の形で提供することができる。その塩類の例には、有機酸（例えば酢酸、乳酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、またはパモ酸(pamoic acid)）、無機酸（例えば塩酸、硫酸、またはリン酸）およびポリマー性の酸（例え
ばタンニン酸、カルボキシメチルセルロース、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、またはポリ乳酸−ポリグリコール酸のコポリマー類）により形成される塩類が含まれるが、それらに限定されない。本発明のペプチドの塩を作る典型的な方法は当技術では周知であり、標準的な塩交換の方法により成し遂げることができる。従って、本発明のペプチドのTFA塩（TFA塩は分取HPLCを用いてTFAを含む緩衝溶液で溶離することによるペプチドの精製の結果
得られる）は別の塩に、例えばそのペプチドを少量の0.25 N酢酸水溶液中で溶解することにより酢酸塩に変換することができる。得られた溶液をセミ分取(semi-prep)HPLCカラム(Zorbax, 300 SB, C-8)に適用する。そのカラムを（１）0.1N酢酸アンモニウム水溶液で０．５時間、（２）0.25N酢酸水溶液で０．５時間、および（３）4 ml/分の流速における直線勾配(３０分間にわたる20%〜100%の溶液B）（溶液Aは0.25 N酢酸水溶液であり；溶液B
はアセトニトリル/水80：20中0.25 N酢酸である）を用いて溶離する。ペプチドを含む画
分を集め、凍結乾燥させる。
【０１１０】
この発明の組成物中の有効成分の用量は異なっていてよい；しかし、有効成分の量は適切な剤形が得られるようなものである必要がある。選択される用量は、望まれる療法的作用に、投与経路に、および治療の期間に依存する。一般に、この発明の活性に関する有効な用量は1 x 10-7〜200 mg/kg/日、好ましくは1 x 10-4〜100 mg/kg/日の範囲であり、それは１回量として、または多数回の用量に分けて投与することができる。
【０１１１】
この発明の化合物は、経口、非経口（例えば筋内、腹膜内、静脈内または皮下の注射、または埋め込み）、経鼻、膣内、直腸内、舌下、または局所的投与経路により投与することができ、それぞれの投与経路に適した剤形を提供するために医薬的に許容できるキャリヤーと共に配合することができる。
【０１１２】
経口投与のための固体剤形には、カプセル、錠剤、丸剤、粉末および顆粒が含まれる。その固体剤形において、有効化合物は少なくとも１種類の不活性な医薬的に許容できるキ
ャリヤー、例えばスクロース、ラクトースまたはデンプンと混合される。その剤形はその不活性な希釈剤以外の追加の物質、例えば潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムも含むことができ、それが通常の慣習である。カプセル、錠剤および丸剤の場合、その剤形は緩衝剤も含んでいてよい。錠剤および丸剤はさらに腸溶コーティングを用いて調製することができる。
【０１１３】
経口投与のための液体剤形には、当技術で一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば水を含む、医薬的に許容できる乳濁液、溶液、懸濁液、シロップ、エリキシルおよび同様のものが含まれるが、それらに限定されない。その不活性な希釈剤の他に、組成物は補助剤、例えば湿潤剤、乳濁化および懸濁化剤、ならびに甘味料、香味料および香料も含むことができる。
【０１１４】
非経口投与のためのこの発明に従う製剤には、無菌の水溶液または非水溶液、懸濁液、乳濁液および同様のものが含まれるが、それらに限定されない。非水性溶媒またはビヒクルの例には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油およびトウモロコシ油、ゼラチン、ならびに注射可能な有機エステル類、例えばオレイン酸エチルが含まれる。その剤形は補助剤、例えば保存、湿潤、乳濁化および分散剤も含んでいてよい。それらは例えば細菌を保持するフィルターを通す濾過により、組成物中に滅菌剤を組み込むことにより、組成物を照射することにより、または組成物を加熱することにより滅菌されてよい。それらは、滅菌水または何らかの他の無菌の注射可能な媒体に使用の直前に溶解することができる無菌の固体組成物の形で製造することもできる。
【０１１５】
直腸内または膣内投与のための組成物は好ましくは坐剤であり、それは有効物質に加えて賦形剤、例えばカカオ脂(coca butter)または坐剤ワックスを含んでいてよい。
【０１１６】
経鼻または舌下投与のための組成物も、当技術で周知の標準的な賦形剤を用いて調製される。
【０１１７】
さらに、この発明の化合物は徐放性組成物、例えば下記の特許および特許出願において記述されている徐放性組成物で投与することができる。米国特許第５，６７２，６５９号は、生理活性薬剤およびポリエステルを含む徐放性組成物を教示する。米国特許第５，５９５，７６０号は、生理活性薬剤をゲル化可能な(gelable)形で含む徐放性組成物を教示
する。米国特許第５，８２１，２２１号は、生理活性薬剤およびキトサンを含むポリマー性徐放性組成物を教示する。米国特許第５，９１６，８８３号は、生理活性薬剤およびシクロデキストリンを含む徐放性組成物を教示する。ＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／３８５３６は、生理活性薬剤の吸収性徐放性組成物を教示する。ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／０４９１６は、療法薬、例えばペプチドを含む微粒子を水中油プロセスで作るためのプロセスを教示する。ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／０９１６６は、療法薬、例えばペプチドおよびリン酸化ポリマーを含む複合体を教示する。ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／２５８２６は、療法薬、例えばペプチドおよび重合可能ではないラクトンを含むポリマーを含む複合体を教示する。
【０１１８】
別途定義しない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的な用語はこの発明が属する技術の当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。また、本明細書で言及された全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献をそれぞれそのまま本明細書に援用する。
【配列表】
2014051501000001.app