(57)【要約】【課題】本発明の目的は、ポリカチオン性ポリマーを利用して、食品、化粧料、医薬等に使用した際に優れた抗菌作用を付与し得る抗菌剤を提供することである。【解決手段】、アニオン性両親媒性物質及びポリアニオン性ポリマーよりなる群から選択される少なくとも１種のアニオン性物質と、ポリカチオン性ポリマーを含む複合粒子は、これらのアニオン性物質とポリカチオン性ポリマーが単独で有する抗菌作用を格段に向上させて発揮させることができ、より有効な抗菌剤となり得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アニオン性両親媒性物質及びポリアニオン性ポリマーよりなる群から選択される少なくとも１種のアニオン性物質と、ポリカチオン性ポリマーとを含有する複合粒子を有効成分とする抗菌剤。
【請求項２】
前記アニオン性両親媒性物質が、アニオン性リン脂質である、請求項１に記載の抗菌剤。
【請求項３】
前記ポリアニオン性ポリマーが、ポリリン酸又はその塩である、請求項１に記載の抗菌剤。
【請求項４】
前記ポリカチオン性ポリマーが、カチオン性タンパク質、カチオン性ポリペプチド及びカチオン性多糖類よりなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１〜３のいずれかに記載の抗菌剤。
【請求項５】
前記複合粒子のゼータ電位が、２５℃且つｐＨ４で、＋３０ｍＶ以上である、請求項１〜４のいずれかに記載の抗菌剤。
【請求項６】
前記複合粒子が、前記アニオン性物質を含む溶液と、前記ポリカチオン性ポリマーを含む溶液を混合することにより得られる粒子である、請求項１に記載の抗菌剤。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載の抗菌剤を含む、食品。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれかに記載の抗菌剤を含む、医薬品。
【請求項９】
請求項１〜６のいずれかに記載の抗菌剤を含む、化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗菌剤に関する。具体的には、本発明は、抗菌性複合粒子を有効成分として含み、食品、化粧料、医薬等に使用した際に優れた抗菌作用を付与し得る抗菌剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
食品、化粧料、医薬品等の製品には、微生物の増殖による品質劣化を抑制するために、抗菌剤が配合されている。また、内装材、カーテン、段ボール、机、椅子等の日用品についても、微生物の繁殖による悪臭や変色を抑制するために、抗菌剤を用いて抗菌作用を付与することが行われている。従来、抗菌剤については、安全性、抗菌作用等の観点から種々の検討がなされており、その用途に応じて様々な抗菌剤が開発されている。
【０００３】
食品、化粧料、医薬品等の分野では、抗菌剤として、カチオン性化合物が広く利用されている。カチオン性化合物は、細菌等の細胞壁を構成するリン脂質やシアル酸等のアニオン性物質とイオン的に引き合う結果、細菌の遊走等の自由度を阻害することにより、抗菌作用を発揮すると考えられている。従来、抗菌剤として使用されるカチオン性化合物としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム等のカチオン性低分子化合物や、キトサン、リゾチーム、ポリリジン、プロタミン、ナイシン、カチオン化オリゴ糖等のポリカチオン性ポリマーが知られている。しかしながら、カチオン性低分子化合物は、刺激が強く、用途や使用量が制限されるという欠点がある。一方、ポリカチオン性ポリマーは、抗菌作用が弱いという欠点がある。
【０００４】
そこで、近年、ポリカチオン性ポリマーを使用して優れた抗菌作用を付与する技術が種々報告されている。例えば、特許文献１には、キトサンとカテキン類を含有する抗菌剤組成物は、優れた抗菌作用を示すことが報告されている。また、特許文献２には、リゾチーム及びトリクロサンを含む溶液を乾燥してなる乾燥物を含有する抗菌剤は、相乗的に増強された抗菌活性を発現すると共に、より広い抗菌スペクトルを示すことが報告されている。しかしながら、従来、ポリカチオン性ポリマーを特定の複合粒子にすることにより、抗菌作用を増強して発揮させ得ることについては報告されていない。
【０００５】
近年、食品、化粧料、医薬品等の分野に限らず、衣食住を初めとする生活関連分野において、抗菌剤を用いた微生物の制御が益々重要になっており、より有効な抗菌剤の開発が切望されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００９−０９１３２２号公報
【特許文献２】特開２０１０−０７０４９３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、ポリカチオン性ポリマーを利用して、食品、化粧料、医薬等に使用した際に優れた抗菌作用を付与し得る抗菌剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、前記課題を解決すべく鋭意検討を行ったところ、アニオン性両親媒性物質及びポリアニオン性ポリマーよりなる群から選択される少なくとも１種のアニオン性物質と、ポリカチオン性ポリマーを含む複合粒子は、これらのアニオン性物質とポリカチオン性ポリマーが単独で有する抗菌作用を格段に向上させて発揮させることができ、より有効な抗菌剤となり得ることを見出した。本発明は、かかる知見に基づいて更に検討を重ねることにより完成したものである。
【０００９】
即ち、本発明は、下記に掲げる態様の発明を提供する。
項１．  アニオン性両親媒性物質及びポリアニオン性ポリマーよりなる群から選択される少なくとも１種のアニオン性物質と、ポリカチオン性ポリマーとを含有する複合粒子を有効成分とする抗菌剤。
項２．  前記アニオン性両親媒性物質が、アニオン性リン脂質である、項１に記載の抗菌剤。
項３．  前記ポリアニオン性ポリマーが、ポリリン酸又はその塩である、項１に記載の抗菌剤。
項４．  前記ポリカチオン性ポリマーが、カチオン性タンパク質、カチオン性ポリペプチド及びカチオン性多糖類よりなる群から選択される少なくとも１種である、項１〜３のいずれかに記載の抗菌剤。
項５．  前記複合粒子のゼータ電位が、２５℃且つｐＨ４で、＋３０ｍＶ以上である、項１〜４のいずれかに記載の抗菌剤。
項６．  前記複合粒子が、前記アニオン性物質を含む溶液と、前記ポリカチオン性ポリマーを含む溶液を混合することにより得られる粒子である、項１に記載の抗菌剤。
項７．  項１〜６のいずれかに記載の抗菌剤を含む、食品。
項８．  項１〜６のいずれかに記載の抗菌剤を含む、医薬品。
項９．  項１〜６のいずれかに記載の抗菌剤を含む、化粧料。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の抗菌剤は、特定のアニオン性物質とポリカチオン性ポリマーが複合粒子を形成していることにより、これらが有する抗菌作用を格段に向上させて発揮させることが可能になっている。そのため、本発明の抗菌剤は、食品、化粧料、医薬等に対して、抗菌作用を備えさせて、細菌や真菌の増殖による品質劣化を抑制するのに有効である。また、本発明の抗菌剤は、カチオン性タンパク質やカチオン性ポリペプチドを安定化させる効果も奏し得る。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】実施例２で得られたコロイド溶液中の複合粒子のゼータ電位と粒子径の関係を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の抗菌剤は、アニオン性両親媒性物質及びポリアニオン性ポリマーよりなる群から選択される少なくとも１種のアニオン性物質と、ポリカチオン性ポリマーとを含有する複合粒子を有効成分とすることを特徴とする。以下、本発明の抗菌剤について詳述する。
【００１３】
複合粒子
本発明の抗菌剤の有効成分は、アニオン性両親媒性物質及びポリアニオン性ポリマーよりなる群から選択される少なくとも１種のアニオン性物質と、ポリカチオン性ポリマーを含有する複合粒子である。
【００１４】
前記アニオン性両親媒性物質とは、アニオン性の親水基と、直鎖又は分岐鎖の炭化水素鎖、芳香族環、複素環等の親油基を有する物質である。アニオン性両親媒性物質の中でも、アニオン性の親水基と直鎖又は分岐鎖の炭化水素鎖からなる親油基を有する物質は、複合粒子の形成能が高く、本発明において好適に使用される。このようなアニオン性両親媒性物質として、具体的には、リゾレシチン（酵素処理レシチン）、レシチン等のアニオン性リン脂質；Ｎ−アシルアミノ酸塩；ラウリル硫酸ナトリウム等のアルキル硫酸塩；ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸ナトリウム等のポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩；ラウリル硫酸トリエタノールアミン等のアルキル硫酸エステル塩；ステアロイルメチルタウリンナトリウム；ドデシルベンゼンスルホン酸トリエタノールアミン；テトラデセンスルホン酸ナトリウム；ポリオキシエチレンラウリルエーテルリン酸及びその塩、Ｎ−ラウロイルグルタミン酸及びその塩等が挙げられる。これらのアニオン性両親媒性物質の中でも、好ましくはアニオン性リン脂質、更に好ましくはレシチン、リゾレシチンが挙げられる。これらのアニオン性両親媒性物質は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００１５】
また、前記ポリアニオン性ポリマーとは、アニオン性の親水基を有するモノマーを構成単位として２つ以上有するポリマーである。本発明で使用されるポリアニオン性ポリマーには、アニオン性の親水基を有していないモノマーが構成単位として含まれていてもよい。本発明で使用されるポリアニオン性ポリマーとして、具体的には、重合リン酸及びその塩；ポリアクリル酸及びその塩；ポリメタクリル酸及びその塩；ヘパリン、ヘパリン硫酸、コンドロイチン硫酸、デキストラン硫酸、ポリタングステン酸、ホスホタングステン酸、ヒアルロン酸、デルマタン硫酸、オリゴガラクツロン酸等のアニオン性多糖類；ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸等のアニオン性ポリペプチド等が挙げられる。これらのポリアニオン性ポリマーの中でも、好ましくは重合リン酸及びその塩が挙げられる。これらのポリアニオン性ポリマーは、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００１６】
前記ポリアニオン性ポリマーの重合度については、ポリアニオン性ポリマーの種類等に応じて適宜設定すればよい。例えば、重合リン酸塩の場合であれば、その重合度としては、通常２〜１０、好ましくは２〜６、更に好ましくは３が挙げられる。
【００１７】
また、前記ポリカチオン性ポリマーとは、カチオン性の親水基を有するモノマーを構成単位として２つ以上有するポリマーである。本発明で使用されるポリカチオン性ポリマーには、抗菌作用を発揮可能であることを限度として、カチオン性の親水基を有していないモノマーが構成単位として含まれていてもよい。
【００１８】
本発明で使用されるポリカチオン性ポリマーとして、具体的には、リゾチーム、パパイン、酸処理ゼラチン等のカチオン性タンパク質；キトサン（キトサンオリゴ糖、分解キトサンを含む）、キチン等のカチオン性多糖類；ポリリジン、ポリヒスチジン、ポリアルギニン、プロタミン、ヒストン、オルニチン、ナイシン等のカチオン性ポリペプチド；スペルミン、スペルミジン等のポリアミン等が挙げられる。これらのポリカチオン性ポリマーの中でも、より一層有効に抗菌作用を発揮させるという観点から、好ましくはカチオン性タンパク質、カチオン性ポリペプチド及びカチオン性多糖類、更に好ましくはリゾチーム、ポリリジン、プロタミン、ナイシン及びキトサンが挙げられる。これらのポリカチオン性ポリマーは、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００１９】
前記ポリカチオン性ポリマーの重合度については、ポリカチオン性ポリマーの種類等に応じて異なるが、例えば、例えば３〜１０００、好ましくは１０〜５００、更に好ましくは１０〜１５０が挙げられる。ここで、ポリカチオン性ポリマーの重合度とは、カチオン性タンパク質又はカチオン性ポリペプチドの場合は、そのアミノ酸数を示す。
【００２０】
前記複合粒子において、アニオン性物質とポリカチオン性ポリマーの比率については、特に制限されないが、抗菌作用をより一層効果的に発揮させるという観点から、アニオン性物質のマイナス電荷数とポリカチオン性ポリマーのプラス電荷数の比率が１：０．５〜１：２００、好ましくは１：１〜１：１００、更に好ましくは１：２〜１：６となる範囲が挙げられる。
【００２１】
更に、前記複合粒子には、前記アニオン性物質及びポリカチオン性ポリマー以外に、非イオン性両親媒性物質が含まれていてもよい。特に、前記アニオン性物質としてアニオン性両親媒性物質を使用する場合おいて、更に非イオン性両親媒性物質を含有させると、抗菌作用をより一層増強して発揮させることが可能になる。
【００２２】
前記非イオン性両親媒性物質としては、具体的には、脂肪酸の炭素数が８〜２２のグリセリン脂肪酸エステル、脂肪酸の炭素数が８〜２２のポリグリセリン脂肪酸エステル、脂肪酸の炭素数が８〜２２のショ糖脂肪酸エステル、アルキル基の炭素数が８〜２２のポリオキシエチレンアルキルエーテル、アルキル基の炭素数が８〜２２のポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル類、アルキル基の炭素数が８〜２２のポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレンアルキルエーテル、脂肪酸の炭素数が８〜２２のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、脂肪酸の炭素数が８〜２２のポリオキシエチレンプロピレングリコール脂肪酸エステル等が挙げられる。これらの中でも、好ましくはグリセリン脂肪酸エステルが挙げられる。これらの非イオン性両親媒性物質は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００２３】
コア層に非イオン性両親媒性物質を含有させる場合、その含有量については、特に制限されないが、例えば、複合粒子に含まれるアニオン性物質の総量１００重量部当たり、非イオン性両親媒性物質が１０〜５００重量部、好ましくは２０〜３００重量部、更に好ましくは５０〜２００重量部となる範囲が挙げられる。
【００２４】
前記複合粒子は、前記アニオン性物質とポリカチオン性ポリマーが静電的相互作用によって結合することにより複合化した構造になる。また、前記複合粒子が非イオン性両親媒性物質を含む場合、非イオン性両親媒性物質は、前記アニオン性物質とポリカチオン性ポリマーの少なくとも一方（好ましくは前記アニオン性物質）と一緒に、ミセルを形成した状態で複合粒子に組み込まれた状態になって、複合化した構造になる。前記複合粒子の好適な一態様として、前記アニオン性物質が粒子を形成し、その表面を被覆するように前記ポリカチオン性ポリマーが結合している構造が挙げられる。また、非イオン性両親媒性物質を含む場合、前記複合粒子の好適な一態様として、前記アニオン性物質及び非イオン性両親媒性物質を含む１次粒子を形成し、その１次粒子の表面を被覆するように前記ポリカチオン性ポリマーが結合している構造が挙げられる。限定的な解釈を望むものではないが、前記複合粒子の表面にポリカチオン性ポリマーが局在化されて存在することにより、優れた抗菌作用を発揮させることが可能になっていると考えられる。
【００２５】
本発明で使用される複合粒子のゼータ電位については、特に制限されないが、２５℃且つｐＨ４で、＋３０ｍＶ以上、好ましくは＋４０ｍＶ以上、更に好ましくは＋４５〜＋７５ｍＶが挙げられる。前記複合粒子が、このようなゼータ電位を充足することにより、一層効果的な抗菌作用を発揮させることが可能になる。
【００２６】
また、本発明で使用される複合粒子の平均粒子径については、特に制限されるものではなく、使用するアニオン性物質及びポリカチオン性ポリマーの種類や組み合わせに応じて適宜設定されるが、例えば、０．０５〜１０μｍ、好ましくは０．０５〜１μｍ、更に好ましくは０．０５〜０．１μｍが挙げられる。なお、前記平均粒子径は、レーザー回析分光法によって測定される体積平均粒子径である。
【００２７】
本発明の抗菌剤において、前記複合粒子は分散媒を含まない状態で提供されてもよいが、分散媒に分散させたコロイド粒子の状態で提供することが好ましい。前記複合粒子をコロイド粒子にする際に使用される分散媒については、特に制限されないが、好ましくは水が挙げられる。また、前記複合粒子をコロイド粒子として分散させた場合、そのコロイド溶液のｐＨについては、通常３〜８、好ましくは４〜７、更に好ましくは４〜６が挙げられる。
【００２８】
本発明の抗菌剤において、前記複合粒子の濃度については、抗菌剤の用途、複合粒子の種類等に応じて適宜設定されるが、例えば、０．５〜１００重量％、好ましくは１〜１００重量％、更に好ましくは２〜１０重量％が挙げられる。
【００２９】
また、本発明の抗菌剤には、本発明の効果を妨げない範囲で、エタノール、イソプロピルアルコール等の低級アルコール；グリセリン、ジグリセリン、ジプロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール等の多価アルコール；ラウリルアルコール、ステアリルアルコール等の高級アルコール；ｐＨ調整剤、酸化防止剤、着色剤、香料、界面活性剤等の添加剤が含まれていてもよい。これらの添加剤を配合する場合、前記散媒中に含有させればよい。
【００３０】
複合粒子の製造方法
前記複合粒子の製造方法については、特に制限されないが、一例として、下記第１〜３工程を含む方法が挙げられる。
第１工程：前記アニオン性物質を含む溶液（以下、第１液）を調製する工程
第２工程：前記ポリカチオン性ポリマーを含む溶液（以下、第２液）を調製する工程
第３工程：前記第１液と第２液を混合することにより、前記複合粒子を形成させる工程
【００３１】
前記第１工程における第１液の調製は、分散媒（好ましくは水）中に前記アニオン性物質を通常０．０１〜１０重量％、好ましくは０．１〜５重量％、更に０．５〜３重量％となるように添加し、混合することによって行うことができる。また、複合粒子に非イオン性両親媒性物質を含有させる場合には、前記第１工程において、ポリカチオン性ポリマーと共に非イオン性両親媒性物質を添加して混合するとよい。
【００３２】
また、前記第２工程における第２液の調製は、分散媒（好ましくは水）中に前記ポリカチオン性ポリマーを通常０．０１〜１０重量％、好ましくは０．１〜５重量％、更に０．５〜３重量％添加することにより行われる。また、第２液中でポリカチオン性ポリマーがカチオン性を示すように、ｐＨが３〜８、好ましくは３．５〜７、更に好ましくは３．５〜６になるように酸を添加しておくことが好ましい。
【００３３】
また、前記第３工程での第１液と第２液の混合において、これらの混合比については、第１液のアニオン性物質濃度、第２液のポリカチオン性ポリマーの濃度等に応じて適宜設定されるが、一例として、第１液１００重量部に対して、第２液が１〜１００００重量部、好ましくは１０〜１０００重量部、更に好ましくは５０〜２００重量部となる比率が挙げられる。
【００３４】
前記第３工程で得られた混合液は、前記アニオン性物質とポリカチオン性ポリマーを含む複合粒子がコロイド粒子として生成しており、当該混合液をそのまま本発明の抗菌剤として使用することができる。また、当該混合液を、必要に応じて、濃縮、複合粒子を形成していない成分の除去、乾燥等の処理に供して、本発明の抗菌剤として使用してもよい。
【００３５】
抗菌剤の使用態様
本発明の抗菌剤は、優れた抗菌作用を示すので、食品、化粧料、医薬、衛生用品、塗料、樹脂製品、紙質製品、繊維製品等の抗菌対象物中に添加することにより、これらの対象物に優れた抗菌作用を付与することができる。これらの抗菌対象物の中でも、本発明の抗菌剤の好適な適用対象として、食品、化粧料、及び医薬が挙げられる。抗菌対象物中の本発明の抗菌剤の添加量については、抗菌対象物の種類等に応じて適宜設定されるが、例えば、本発明の抗菌剤に含まれる複合粒子量の重量換算で、０．０００００１〜６重量％、好ましくは０．００００１〜１重量％、更に好ましくは０．０００１〜０．０５重量％が挙げられる。
【００３６】
更に、本発明の抗菌剤は、抗菌スプレーとして、抗菌対象表面に塗布又は噴霧することによって、抗菌対象表面に優れた抗菌作用を付与することもできる。このような抗菌対象表面としては、特に制限されないが、例えば、衣料、寝具、カーテン等の繊維製品；居室、トイレ、浴室、キッチン、洗面所等の硬質面；ソファー、絨毯、椅子、机等の家具；段ボール、紙等の紙質製品；カット野菜、パン、ケーキ類、ハム、ソーセージ、かまぼこ、ゆで卵、おにぎり、漬物、麺類等の食品；絆創膏、ガーゼ、包帯等の医薬関連製品等が挙げられる。抗菌対象表面に噴霧又は塗布して使用する場合、本発明の抗菌剤は、必要に応じて、水等の水性媒体で、前記複合粒子が０．１〜２０重量％、好ましくは０．５〜１０重量％、更に好ましくは１〜５重量％となるように希釈して使用される。
【実施例】
【００３７】
以下に、実施例等に基づいて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【００３８】
試験例１
１．抗菌剤の調製
（実施例１）
水９９重量部に対して酵素処理レシチン（「ＳＬＰホワイトリゾ」、辻製油株式会社製）１重量部を加え攪拌混合することにより第１液（乳化液）を調製した。
また、別途、水９７重量部に対して、キトサン（「ＬＬＷＰ」、株式会社キミカ製）１重量部を加え、その後５０重量%の乳酸水溶液２重量部を加え攪拌混合することにより第２液を調製した。
次いで、上記で得られた第１液と第２液を重量比１：１で混合し、更に水酸化ナトリウムにてｐＨ４に調整することにより、コロイド溶液を得た。
【００３９】
（比較例１）
実施例１で使用した第２液と水を重量比１：１で混合することにより、キトサン含有溶液を調製した。
【００４０】
（比較例２）
実施例１で使用した第１液と水を重量比１：１で混合することにより、酵素処理レシチン含有溶液を調製した。
【００４１】
２．抗菌作用の評価
直径９０ｍｍのシャーレに、実施例１及び比較例１−２で得られた各溶液を表１に示す濃度となるように添加した標準寒天培地（標準寒天培地「ニッスイ」顆粒、日水製薬株式会社製）を作成した。なお、当該培地のｐＨは７に調整した。次いで、Bacillus cereus（ＮＢＲＣ１５３０５）を１０５ｃｆｕ／シャーレで植菌し、３５℃で４８時間培養して、シャーレ上のコロニー数を計測した。計測されたコロニー数に基づいて、下記基準に従って抗菌作用を分類した。
−  ：コロニーの形成が全く認められない。
±  ：１シャーレ当たり１〜１０個のコロニーが形成されている。
＋  ：１シャーレ当たり１１〜１０００個以上のコロニーが形成されている。
＋＋：１シャーレ当たり１０００個以上のコロニーが形成されている。
【００４２】
得られた結果を表１に示す。表１から明らかなように、比較例１のキトサン含有溶液では抗菌作用が認められず、また比較例２の酵素処理レシチン含有溶液では僅かな抗菌作用しか示さなかったが、実施例１のコロイド溶液では非常に強い抗菌作用が認められた。
【００４３】
【表１】
2014001166.tif 000002
【００４４】
試験例２
１．抗菌剤の調製
（実施例２）
実施例１で使用した第１液９９．５重量部にグリセリン脂肪酸エステル（「サンソフト７００Ｐ２」、太陽化学株式会社製）０．５重量部を加え攪拌混合することにより第1a液（乳化液）を調製した。
上記で得られた第1a液と、実施例１で使用した第２液を重量比１：１で混合し、更に水酸化ナトリウムにてｐＨ４に調整することにより、コロイド溶液を得た。
【００４５】
（比較例３）
水９９．７５重量部にグリセリン脂肪酸エステル（「サンソフト７００Ｐ２」、太陽化学株式会社製）０．２５重量部を加え攪拌混合することにより、グリセリン脂肪酸エステル含有溶液を調製した。
【００４６】
２．抗菌作用の評価
実施例２及び比較例３で得られた各溶液を用いて、上記試験例１と同様の方法で、抗菌作用を評価した。また、比較のために、上記試験例１に示す比較例１−２の各溶液の抗菌作用についても同様に試験を行った。
【００４７】
得られた結果を表２に示す。表２から明らかなように、グリセリン脂肪酸エステル単独（比較例３）では、抗菌作用が認められなかったが、酵素処理レシチン、グリセリン脂肪酸エステル及びキトサンを含む複合粒子を使用した場合（実施例２）では、格段に優れた抗菌作用を示していた。また、表１及び２から明らかなように、実施例２のコロイド溶液は、実施例１のコロイド溶液よりも、優れた抗菌作用を示しており、複合粒子に、酵素処理レシチン及びキトサンと共に、グリセリン脂肪酸エステルを含有させることにより、抗菌作用が格段に向上することが確認された。
【００４８】
【表２】
2014001166.tif 000003
【００４９】
試験例３
１．抗菌剤の調製
（実施例３）
水９９重量部に対して、キトサン製剤ＮＣ−Ｋ（株式会社キミカ製）１重量部を加え、第2a液を調製した。なお、キトサン製剤ＮＣ−Ｋには、カニキトサン３５重量％、乳酸１５重量％、及びデキストリン５０重量％が含まれている製剤である。
実施例１で使用した第１液と、上記で得られた第2a液を重量比１：１で混合し、コロイド溶液（ｐＨ４．７）を得た。
【００５０】
（比較例４）
上記で得られた第2a液と水を重量比１：１で混合することにより、キトサン含有溶液を調製した。
【００５１】
２．抗菌作用の評価
実施例３及び比較例４で得られた各溶液を用いて、上記試験例１と同様の方法で、抗菌作用を評価した。また、比較のために、上記試験例１に示す比較例２の溶液の抗菌作用についても同様に試験を行った。
【００５２】
得られた結果を表３に示す。この結果から、キトサンの種類を変更してコロイド溶液を調製しても、優れた抗菌作用が発揮されることが確認された。
【００５３】
【表３】
2014001166.tif 000004
【００５４】
試験例４
１．抗菌剤の調製
（実施例４）
水９８．５重量部に対して、キトサン（「イカキトサン」、焼津水産化学工業株式会社製）０．５重量部を加え、その後５０重量％の乳酸水溶液１重量部を加え攪拌混合することにより第2b液を調製した。
実施例１で使用した第１液を水と重量比１：１で混合し、更に上記で得られた第2b液を重量比１：１で混合することにより、コロイド溶液（ｐＨ４．９）を得た。なお、本実施例では、第１液と第2b液の混合液に対するｐＨ調整は行わなかった。
【００５５】
（比較例５）
上記で得られた第2b液と水を重量比１：１で混合することにより、キトサン含有溶液を調製した。
【００５６】
２．抗菌作用の評価
実施例４及び比較例５で得られた各溶液を用いて、上記試験例１と同様の方法で、抗菌作用を評価した。また、比較のために、上記試験例１に示す比較例２の溶液の抗菌作用についても同様に試験を行った。
【００５７】
得られた結果を表４に示す。この結果から、上記試験例３と同様に、キトサンの種類を変更してコロイド溶液を調製しても、優れた抗菌作用が発揮されることが確認された。
【００５８】
【表４】
2014001166.tif 000005
【００５９】
試験例５
１．抗菌剤の調製
（実施例５）
水９９．９重量部に対して酵素処理レシチン（「ＳＬＰホワイトリゾ」、辻製油株式会社製）０．１重量部を加え攪拌混合することにより第1b液（乳化液）を調製した。
また、別途、水９９．４５重量部に対して、卵白リゾチーム（キユーピー株式会社製）０．５重量部を加え、その後５０重量%の乳酸水溶液０．０５重量部を加え攪拌混合することにより第2c液を調製した。
次いで、上記で得られた第1b液と第2c液を重量比１：１で混合することにより、コロイド溶液を得た。
【００６０】
（比較例６）
実施例５で使用した第2c液と水を重量比１：１で混合することにより、リゾチーム含有溶液を調製した。
【００６１】
（比較例７）
実施例１で使用した第1b液と水を重量比１：１で混合することにより、酵素処理レシチン含有溶液を調製した。
【００６２】
２．抗菌作用の評価
実施例５及び比較例６−７で得られた各溶液を用いて、培地のｐＨを６に調整した以外は上記試験例１と同様の方法で、抗菌作用を評価した。
【００６３】
得られた結果を表５に示す。この結果から、複合粒子に含有させるポリカチオン性ポリマーとしてリゾチームを使用しても、優れた抗菌作用が発揮されることが確認された。
【００６４】
【表５】
2014001166.tif 000006
【００６５】
試験例６
１．抗菌剤の調製
（実施例６）
水９８．８９重量部に対してトリポリリン酸ナトリウム（太平化学産業株式会社製）０．１１重量部を加え、その後５０重量%の乳酸水溶液１重量部を加え攪拌混合することにより第1c液を調製した。  また、別途、水９７重量部に対して、キトサン（「キトサンF」、株式会社キミカ製）１重量部を加え、その後５０重量%の乳酸水溶液２重量部を加え攪拌混合することにより第2d液を調製した。
次いで、上記で得られた第1c液と第2d液を重量比１：１で混合することにより、コロイド溶液を得た。
【００６６】
（比較例８）
実施例６で使用した第2d液と水を重量比１：１で混合することにより、キトサン含有溶液を調製した。
【００６７】
（比較例９）
実施例１で使用した第1c液と水を重量比１：１で混合することによりトリポリリン酸Ｎａ含有溶液を調製した。
【００６８】
２．抗菌作用の評価
実施例６及び比較例８−９で得られた各溶液を用いて、上記試験例５と同様の方法で、抗菌作用を評価した。
得られた結果を表６に示す。この結果から、リゾチーム及びトリポリリン酸ナトリウムを含有する複合粒子であっても、上記実施例１〜５と同様に、優れた抗菌作用が発揮されることが確認された。
【００６９】
【表６】
2014001166.tif 000007
【００７０】
試験例７
１．抗菌剤の調製
（実施例７）
水９９．９３１重量部に対して酵素処理レシチン（「ＳＬＰホワイトリゾ」、辻製油株式会社製）０．０２３重量部を加え、その後５０重量％の乳酸水溶液０．０４６重量部を加え攪拌混合することにより第1d液（乳化液）を調製した。
また、別途、水９６重量部に対して、パパイン（「パパイン３００」、日本バイオコン株式会社製）２重量部を加え、その後５０重量％の乳酸水溶液２重量部を加え攪拌混合することにより第2e液を調製した。
次いで、上記で得られた第1d液と第2e液を重量比１：１で混合することにより、コロイド溶液を得た。
【００７１】
（比較例１０）
実施例７で使用した第2e液と水を重量比１：１で混合することにより、パパイン含有溶液を調製した。
【００７２】
（比較例１１）
実施例１で使用した第1d液と水を重量比１：１で混合することにより酵素処理レシチン含有溶液を調製した。
【００７３】
２．抗菌作用の評価
直径９０ｍｍのシャーレに、実施例７及び比較例１０−１１で得られた各溶液を表７に示す濃度になるように添加した標準寒天培地（標準寒天培地「ニッスイ」顆粒、日水製薬株式会社製）を作成した。なお、当該培地のｐＨは７に調整した。次いで、Bacillus cereus（ＮＢＲＣ１５３０５）を２２００ｃｆｕ／シャーレに植菌し、３５℃で４８時間培養して、シャーレ上のコロニー数を計測した。また、比較のために、実施例７及び比較例１０−１１で得られた各溶液を添加していない標準寒天培地を用いて、上記と同様に試験して、シャーレ上のコロニー数を計測した。
【００７４】
結果を表７に示す。この結果から、酵素処理レシチン及びパパインを含む複合粒子であっても、非常に強い抗菌作用が発揮されることが確認された。
【００７５】
【表７】
2014001166.tif 000008
【００７６】
試験例８
１．抗菌剤の調製
（実施例８）
実施例１で使用した第２液９６重量部に酸処理ゼラチン（「ゼラチンＡＰ−１００ビ粉」、株式会社ニッピ製）４重量部を加え撹拌混合することにより第2f液を調整した。
実施例２で使用した第1a液（乳化液）と、上記で得られた第2f液を重量比１：１で混合し、更に水酸化ナトリウムにてｐＨ５．９に調整することにより、コロイド液を得た。
【００７７】
（比較例１２）
上記で得られた第2f液と水を重量比１：１で混合することにより、キトサン、ゼラチン含有溶液を調整した。
【００７８】
（比較例１３）
実施例２で使用した第1a液（乳化液）と水を重量比１：１で混合することにより、酵素処理レシチン・グリセリン脂肪酸エステル含有溶液を調製した。
【００７９】
２．抗菌作用の評価
実施例２及び８並びに比較例１２−１３で得られた各溶液を用いて、上記試験例１と同様の方法で、抗菌作用を評価した。また比較にために、上記試験例２に示す実施例２の溶液の抗菌作用についても同様に試験を行った。
【００８０】
結果を表８に示す。この結果からも、コア層に酵素処理レシチン、カニキトサン及び酸処理ゼラチンを含む複合粒子は、格段に優れた抗菌作用を備えていることが確認された。
【００８１】
【表８】
2014001166.tif 000009
【００８２】
試験例９
１．抗菌剤の調製
（実施例９）
実施例１で使用した第２液９９．４重量部に卵白リゾチーム（株式会社キユーピー）０．６重量部を加え拡販混合することにより第2g液を調整した。
実施例２で使用した第1a液（乳化液）と、上記で得られた第2g液を重量比１：１で混合し、更に水酸化ナトリウムにてｐＨ４．０に調整することにより、コロイド溶液を得た。
【００８３】
（比較例１４）
実施例９で使用した第2g液と水を重量比１：１で混合することにより、キトサン・リゾチーム含有溶液を調整した。
【００８４】
２．抗菌作用の評価
直径９０ｍｍのシャーレに、実施例２、９並びに比較例１３及び１４で得られた各溶液を表１に示す濃度となるように添加した標準寒天培地（標準寒天培地「ニッスイ」顆粒、日水製薬株式会社製）を作成した。なお、当該培地のｐＨは７に調整した。次いで、Leuconostoc mesenteroides（ＮＢＲＣ３４２６）を１０５ｃｆｕ／シャーレで植菌し、３５℃で４８時間培養して、シャーレ上のコロニー数を計測した。計測されたコロニー数に基づいて、下記基準に従って抗菌作用を分類した。
−  ：コロニーの形成が全く認められない。
±  ：１シャーレ当たり１〜１０個のコロニーが形成されている。
＋  ：１シャーレ当たり１１〜１０００個以上のコロニーが形成されている。
＋＋：１シャーレ当たり１０００個以上のコロニーが形成されている。
【００８５】
得られた結果を表９に示す。この結果から、酵素処理レシチン、グリセリン脂肪酸エステル、キトサン及びリゾチームを含む複合粒子でも、格段に優れた抗菌作用を発揮できることが確認された。
【００８６】
【表９】
2014001166.tif 000010
【００８７】
試験例１０
１．抗菌剤の調製
（実施例１０）
実施例１で使用した第２液９９．８重量部に、５０％ポリリジン粉末（ＪＮＣ）を０．１部加え攪拌混合することにより第２ｈ液を調製した。実施例２で使用した第1a液（乳化液）と、上記で得られた第2ｈ液を重量比１：１で混合し、コロイド液を得た。
【００８８】
（比較例１５）
実施例１０で使用した第２ｈ液と水を重量比１：１で混合することにより、キトサン・ポリリジン含有溶液を調整した。
【００８９】
２．抗菌作用の評価
直径９０ｍｍのシャーレに、実施例２、１０並びに比較例１３及び１５で得られた各溶液を表１に示す濃度となるように添加したポテトデキストロース寒天培地（日水製薬株式会社製）を作成した。なお、当該培地のｐＨは５．６に調整した。次いで、Aspilgillus niger NBRC4407を１０４ｃｆｕ／シャーレで植菌し、２５℃で４８時間培養して、シャーレ上のコロニー数を計測した。計測されたコロニー数に基づいて、下記基準に従って抗菌作用を分類した。
−  ：コロニーの形成が全く認められない。
１〜１００  ：１シャーレ当たりのコロニー数。
＋  ：１シャーレ当たり１００〜５００個以上のコロニーが形成されている。
＋＋：１シャーレ当たり５００個以上のコロニーが形成されている。
【００９０】
得られた結果を表１０に示す。この結果から、酵素処理レシチン、グリセリン脂肪酸エステル、キトサン及びポリリジンを含む複合粒子でも、格段に優れた抗菌作用を発揮できることが確認された。
【００９１】
【表１０】
2014001166.tif 000011
【００９２】
試験例１１
１．抗菌剤の調製
（実施例１１）
実施例２で得られたコロイド溶液を限外ろ過膜（マイクローザＵＦペンシル型モジュール  ＡＨＰ−００１３、旭化成ケミカルズ株式会社製）を用いコロイド溶液の体積が１／６になるまで濃縮を行った。濃縮したコロイド溶液１０重量部水を５０重量部加え、濃縮前の体積に戻し濃縮コロイド溶液とした。
２．抗菌作用の評価
実施例１１及び実施例２で得られた各溶液を用いて、上記試験例１と同様の方法で、抗菌作用を評価した。
【００９３】
得られた結果を表１１に示す。この結果、コロイド溶液を濃縮しても抗菌作用は影響を受けないことが確認された。
【００９４】
【表１１】
2014001166.tif 000012
【００９５】
試験例１２
実施例２で得られたコロイド溶液を２５℃、３７℃、及び５０℃の加熱条件で、１６８時間保存した。その後、各温度条件で保存したコロイド溶液中の複合粒子について、粒子径、ゼータ電位、及び各コロイド溶液の抗菌作用について測定を行った。コロイド粒子の粒子径については、レーザ回析式粒度分布測定装置（「SALD−３１００」、島津製作所製）を用いて測定した。また、ゼータ電位については、コロイド粒子ゼータ電位測定装置（Model５０１、ＰＥＭＫＥＮ社製）を用いて２５℃で測定した。更に、コロイド溶液の抗菌作用については、Bacillus cereus（ＮＢＲＣ１５３０５）に対する最小発育阻止濃度を寒天平板希釈法によって測定した。
【００９６】
温度、ゼータ電位、及び抗菌作用の関係について表１２に示し、ゼータ電位と複合粒子の粒子径の関係について図１に示す。この結果から、保存温度が高まると、ゼータ電位が低下し、それに伴って粒子径が増大することが明らかになった。更に、ゼータ電位の低下に伴って、抗菌作用も減弱化されることが明らかとなった。
【００９７】
【表１２】
2014001166.tif 000013
【図１】
2014001166.tif 000014