(57)【要約】【課題】本発明の目的は、胃癌患者、結腸・直腸癌患者、及び小細胞肺癌患者のうち、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤に対して反応性（感受性）が低いノンレスポンダーに対して治療効果を示す腫瘍治療用薬剤を提供することである。【解決手段】前記課題は、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤と、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤とを併用することを特徴とする腫瘍治療用薬剤によって解決することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤と、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤とを併用することを特徴とする腫瘍治療用薬剤。
【請求項２】
前記化合物が、更に抗腫瘍活性を有している、請求項１に記載の腫瘍治療用薬剤。
【請求項３】
前記免疫抑制性細胞が、ミエロイド由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、請求項１又は２に記載の腫瘍治療用薬剤。
【請求項４】
前記免疫抑制性細胞が、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である、請求項１又は２に記載の腫瘍治療用薬剤。
【請求項５】
前記化合物が、ゲムシタビン、ホスホジエステラーゼ−５（ＰＤＥ−５）阻害化合物、オールトランスレチノイン酸（all-trans-retinoic acid:ＡＴＲＡ）、アルギナーゼ阻害化合物、スニチニブ、シクロホスファミド、デニロイキンジフチトックス（Denileukin diftitox）、ＣＴＬＡ−４阻害化合物、ＣＤ２５阻害化合物、及びＩＬ−２Ｒ阻害化合物からなる群から選択される化合物である、請求項１に記載の腫瘍治療用薬剤。
【請求項６】
カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤であって、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤と併用されることを特徴とする抗腫瘍剤。
【請求項７】
前記化合物が、更に抗腫瘍活性を有している、請求項６に記載の抗腫瘍剤。
【請求項８】
前記免疫抑制性細胞が、ミエロイド由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、請求項６又は７に記載の抗腫瘍剤。
【請求項９】
前記免疫抑制性細胞が、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である、請求項６又は７に記載の抗腫瘍剤。
【請求項１０】
前記化合物が、ゲムシタビン、ホスホジエステラーゼ−５（ＰＤＥ−５）阻害化合物、オールトランスレチノイン酸（all-trans-retinoic acid:ＡＴＲＡ）、アルギニン阻害化合物、スニチニブ、シクロホスファミド、デニロイキンジフチトックス（Denileukin diftitox）、ＣＴＬＡ−４阻害化合物、ＣＤ２５阻害化合物、及びＩＬ−２Ｒ阻害化合物からなる群から選択される化合物である、請求項６に記載の抗腫瘍剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤を用いた腫瘍治療用薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
カワラタケから抽出される蛋白多糖体は、抗腫瘍活性などを示す。例えば、特開昭６０−４５５３３号公報（特許文献１）には、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分とする抗腫瘍剤などが記載されている。このような蛋白多糖体のなかで、カワラタケ由来の蛋白多糖体の一種であるＰＳＫ（登録商標）（商品名「クレスチン」（登録商標））は、皮内投与や静脈内投与だけでなく、経口投与によっても抗腫瘍活性を示すことが特長であり、臨床的にも経口投与製剤として用いられている。
【０００３】
ＰＳＫは、約１８〜３８％の蛋白質を含む蛋白多糖体であり、５０００以上（ゲル濾過法）の分子量、例えば５０００〜３０００００（ゲル濾過法）の分子量を有するものである。主要画分の糖部分はβ−Ｄ−グルカンで、このグルカン部分の構造は、１→３、１→４及び１→６結合を含む分枝構造である。
【０００４】
カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤（例えば、ＰＳＫ）は、胃癌（手術例）患者、及び結腸・直腸癌（治癒切除例）患者における化学療法との併用による生存期間の延長、並びに小細胞肺癌に対する化学療法等との併用による奏功期間の延長の効果が確認されており、胃癌患者、結腸・直腸癌患者、及び小細胞肺癌患者への適用が認可されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開昭６０−４５５３３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、胃癌患者、結腸・直腸癌患者、及び小細胞肺癌患者において、ＰＳＫの投与の効果が低いノンレスポンダーが存在する。すなわち、胃癌患者、結腸・直腸癌患者、及び小細胞肺癌患者には、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤に対して反応性（感受性）が低いノンレスポンダーが存在している。したがって、本発明の目的は、これらのノンレスポンダーに対しても治療効果を示す腫瘍治療用薬剤、又は抗腫瘍剤を提供することである。
【０００７】
また、胃癌患者、結腸・直腸癌患者、及び小細胞肺癌患者以外の癌患者へのＰＳＫの適用は、現在のところ認められていない。本発明のさらなる目的は、ＰＳＫの適用が認められていない癌患者に対して、副作用の少ないカワラタケ由来の蛋白多糖体を用いた腫瘍治療用薬剤、又は抗腫瘍剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、カワラタケ由来の蛋白多糖体の、悪性腫瘍に対する治療効果を増強することのできる化合物について、鋭意研究した結果、免疫抑制性細胞に対する阻害活性を有する化合物を、カワラタケ由来の蛋白多糖体と組み合わせて併用投与することにより、カワラタケ由来の蛋白多糖体の癌細胞の増殖に対する抑制効果が増強し、多くの癌に対する優れた腫瘍治療用薬剤となり得ることを見出した。本発明は、こうした知見に基づくものであり、以下の発明を包含する。
【０００９】
本発明は、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤と、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤とを併用することを特徴とする腫瘍治療用薬剤に関する。本発明に係る腫瘍治療用薬剤では、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤に対して反応性が低いノンレスポンダーに対しても、高い治療効果を奏する。
【００１０】
本発明の腫瘍治療用薬剤では、前記化合物が、更に抗腫瘍活性を有していることが好ましい。免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物が、抗腫瘍活性を有することにより、腫瘍の治療において相乗効果が得られる。
【００１１】
また、本発明の腫瘍治療用薬剤では、前記免疫抑制性細胞が、ミエロイド由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）であることが好ましい。前記化合物が、ＭＤＳＣの阻害活性を有することによって、ＭＤＳＣによるカワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤の作用の抑制を解消し、腫瘍治療用薬剤治療効果を向上させることが可能である。
【００１２】
また、本発明の腫瘍治療用薬剤では、前記免疫抑制性細胞が、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）であることが好ましい。前記化合物が、Ｔｒｅｇの阻害活性を有することによって、Ｔｒｅｇによるカワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤の作用の抑制を解消し、腫瘍治療用薬剤治療効果を向上させることが可能である。
【００１３】
本発明の腫瘍治療用薬剤では、前記化合物が、ゲムシタビン、ホスホジエステラーゼ−５（ＰＤＥ−５）阻害化合物、オールトランスレチノイン酸（all-trans-retinoic acid:ＡＴＲＡ）、アルギナーゼ阻害化合物、スニチニブ、シクロホスファミド、デニロイキンジフチトックス（Denileukin diftitox）、ＣＴＬＡ−４阻害化合物、ＣＤ２５阻害化合物、及びＩＬ−２Ｒ阻害化合物からなる群から選択される化合物であることが好ましい。
【００１４】
また、本発明は、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤であって、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤と併用されることを特徴とする抗腫瘍剤に関する。本発明に係る抗腫瘍剤では、特にカワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤に対して反応性が低いノンレスポンダーに対しても、高い治療効果を奏する。
【００１５】
本発明の抗腫瘍剤では、前記化合物が、更に抗腫瘍活性を有していることが好ましい。免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物が、抗腫瘍活性を有することにより、腫瘍の治療において相乗効果が得られ、更に本発明の抗腫瘍剤が認可されていない腫瘍に対しても、治療効果が得られる。
【００１６】
また、本発明の抗腫瘍剤では、免疫抑制性細胞が、ミエロイド由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）であることが好ましい。前記化合物が、ＭＤＳＣの阻害活性を有することによって、ＭＤＳＣによるカワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤の作用の抑制を解消し、本発明の抗腫瘍剤の治療効果を向上させることが可能である。
【００１７】
また、本発明の抗腫瘍剤では、前記免疫抑制性細胞が、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）であることが好ましい。前記化合物が、Ｔｒｅｇの阻害活性を有することによって、Ｔｒｅｇによるカワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤の作用の抑制を解消し、本発明の抗腫瘍剤の治療効果を向上させることが可能である。
【００１８】
また、本発明の抗腫瘍剤では、前記化合物が、ゲムシタビン、ホスホジエステラーゼ−５（ＰＤＥ−５）阻害化合物、オールトランスレチノイン酸（all-trans-retinoic acid:ＡＴＲＡ）、アルギニン阻害化合物、スニチニブ、シクロホスファミド、デニロイキンジフチトックス（Denileukin diftitox）、ＣＴＬＡ−４阻害化合物、ＣＤ２５阻害化合物、及びＩＬ−２Ｒ阻害化合物からなる群から選択される化合物であることが好ましい。
【発明の効果】
【００１９】
本発明の腫瘍治療用薬剤によれば、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤と、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤とを併用して投与することにより、癌細胞の増殖を抑制し、高い治療効果を得ることができる。すなわち、本発明の腫瘍治療用薬剤は、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤に対して反応性（感受性）が低いノンレスポンダーに対しても、高い治療効果を奏する。
【００２０】
また、本発明の腫瘍治療用薬剤は、ＰＳＫなどのカワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤の適用が認可されていない腫瘍に対しても癌細胞の増殖を抑え、更には退縮させることができる効果も併せて奏する。
【００２１】
例えば、現在、乳癌はＰＳＫなどのカワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤の適用が認可されていないが、本発明の腫瘍治療用薬剤では、癌細胞の増殖を抑え、更には退縮させることもできる。さらに、本発明に用いる免疫抑制細胞阻害剤が、免疫抑制性細胞の阻害活性及び（直接的）細胞傷害（障害）活性を有している場合には、本発明の腫瘍治療用薬剤は、互いの化合物が本来有する効果を相乗した効果を示す。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】実施例１における腫瘍治療用薬剤の腫瘍体積の抑制効果を示したグラフ、並びに抗腫瘍剤及び免疫抑制細胞阻害剤の投与スケジュールを示した図である。
【図２】実施例２における腫瘍治療用薬剤の腫瘍体積の抑制効果を示したグラフ、並びに抗腫瘍剤及び免疫抑制細胞阻害剤の投与スケジュールを示した図である。
【図３】実施例３における腫瘍治療用薬剤の腫瘍体積の抑制効果を示したグラフである。
【図４】実施例４における腫瘍治療用薬剤の腫瘍体積の抑制効果を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
[１]腫瘍治療用薬剤
本発明の腫瘍治療用薬剤は、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤と、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤とを併用するものである。本発明に係る腫瘍治療用薬剤における抗腫瘍剤および免疫抑制細胞阻害剤の詳細について、以下に記載する。
【００２４】
なお、本明細書等における「併用」とは、カワラタケ由来の蛋白多糖体と、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物とを含む腫瘍治療用薬剤を１剤として投与することを意味する。更に、それぞれ単独製剤の形態であるカワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤と、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤とを、同時に又は時間差をおいて、２剤で投与することも併せて意味する。後者の場合、抗腫瘍剤と免疫抑制細胞阻害剤との投与回数は同じであってもよいし、異なっていてもよい。
【００２５】
（カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤）
カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤としては、例えばＰＳＫを挙げることができる。ＰＳＫは、商品名「クレスチン」の名称で販売されており、カワラタケ菌ＣＭ１０１株〔ＦＥＲＭ−Ｐ２４１２（ＡＴＣＣ２０５４７）〕の菌糸体を水系溶媒、例えば、熱水又はアルカリ溶液（例えば、アルカリ金属の水酸化物、特には水酸化ナトリウムの水溶液）で抽出し、精製した後に乾燥して得ることができる。主要画分の糖部分はβ−Ｄ−グルカンで、このグルカン部分の構造はβ１→３、β１→４及びβ１→６結合を含む分枝構造である。主な構成単糖はグルコースやマンノースであり、約１８〜３８％のタンパク質を含む。タンパク質の構成アミノ酸は、アスパラギン酸やグルタミン酸等の酸性アミノ酸と、バリンやロイシン等の中性アミノ酸が多く、リジンやアルギニン等の塩基性アミノ酸は少ない。
【００２６】
本明細書等において、カワラタケはＣＭ１０１株に限定されるものではなく、抗腫瘍活性を有する蛋白多糖体を含むものであればよい。また、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤は、抗腫瘍活性を有するものであれば、限定されるものではない。例えば、ＰＳＫ、並びにＰＳＫのジェネリック医薬品であるアスクレ（日医工）、クレチール末（沢井製薬）、チオレスチン散（長生堂）、チオレスチン散（田辺製薬販売）、カルボクリン末（大洋薬品工業）、及びカルボクリン末（日本ケミファ）であってもよい。
【００２７】
カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤は、胃癌（手術例）患者、及び結腸・直腸癌（治癒切除例）患者における化学療法との併用による生存期間の延長、並びに小細胞肺癌に対する化学療法等との併用による奏功期間の延長の効果が確認されており、胃癌患者、結腸・直腸癌患者、及び小細胞肺癌患者への適用が認可されている。
【００２８】
（免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤）
本発明の腫瘍治療用薬剤に用いられる免疫抑制細胞阻害剤は、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む。免疫抑制性細胞は、生体の免疫反応を抑制する機能を有する細胞であれば、特に限定されるものではない。免疫抑制性細胞としては、例えば、ミエロイド由来サプレッサー細胞（以下、ＭＤＳＣと称することがある）、及び制御性Ｔ細胞（以下、Ｔｒｅｇと称することがある）を挙げることができる。ミエロイド由来サプレッサー細胞及び制御性Ｔ細胞について以下に説明する。
【００２９】
（ミエロイド由来サプレッサー細胞）
ＭＤＳＣは、免疫抑制能を有する骨髄系細胞の総称である。ＭＤＳＣは、不均一な細胞群であり、Ｔ細胞、マクロファージ、及びＮＫ細胞と相互作用する。また、癌患者の末梢血及び腫瘍組織において増加していることが報告されている。マウスのＭＤＳＣの表面マーカーとしては、特に限定されるものではないが、ＣＤ１１ｂ+、Ｇｒ１+を挙げることができる。また、ＣＤ３１+及びＩＬ−４αをマーカーとしてもよい。また、ヒトのＭＤＳＣの表面マーカーはＣＤ１１ｂ+、Ｇｒ１+、ＣＤ１４+/-、及びＨＬＡ−ＤＲlowとされているが、特異的なマーカーは同定されていない。したがって、ヒトのＭＤＳＣは、後述の免疫抑制機能のいずれか１つを有するものであれば、前記のマーカーを有する細胞に限定されるものではない。
【００３０】
ＭＤＳＣの免疫抑制機能は、ＭＤＳＣに発現している誘導性一酸化窒素シンターゼ（inducible nitric-oxide synthase 2：以下、ＮＯＳ２と称する）、及びアルギナーゼ１（arginase-１：以下、ＡＲＧ１と称する）の２つの酵素に関連している。ＮＯＳ２は、ＮＯの産生を介してＴ細胞のＩＬ−２レセプターシグナル伝達を抑制しアポトーシスを誘導する。一方、ＡＲＧ１は、アルギニンの代謝酵素で、アルギニンを周囲の環境から消費することにより、Ｔ細胞の機能を抑制する。更に、ＭＤＳＣの免疫抑制機能としては、ＭＤＳＣが分泌しているＴＧＦ−β及びＩＬ−１０による免疫抑制、及びＭＤＳＣ存在によるシステイン欠乏も報告されている。
【００３１】
（制御性Ｔ細胞）
Ｔｒｅｇは、Ｔ細胞又は樹状細胞などの免疫担当細胞に抑制的に働くＴ細胞であり、ヒト腫瘍組織又は末梢血中でＴｒｅｇの増加が認められている。ヒトのＴｒｅｇの表面マーカーは限定されるものではないが、ＣＤ４+、ＣＤ２５+（ＩＬ−２レセプターα鎖）とされており、健常人の末梢血のＣＤ４+細胞の５〜１０％を占めている。また、Ｔｒｅｇは、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体（glucocorticoid-induced TNF receptor：GITR）、細胞傷害性Tリンパ球抗原４（Cytotoxic T lymphocyte antigen 4：CTLA-4)、及びＦＯＸＰ３を恒常的に発現している。ＣＤ４+Ｔｒｅｇには、ＩＬ−１０産生性Ｔｒ１、ＴＧＦ−β産生性Ｔｈ３、自然発生Ｔｒｅg（ｎＴｒｅｇ）及び誘導性Ｔｒｅg（ｉＴｒｅｇ）が報告されている。ｎＴｒｅｇは、生理的には、胸線において中枢性免疫寛容を逃れた自己反応性Ｔ細胞を末梢で抑制することにより、自己免疫疾患の発症を予防している。
【００３２】
（免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物）
免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物としては、例えばＭＤＳＣの機能を阻害する化合物、Ｔｒｅｇの機能を阻害する化合物、並びにＭＤＳＣ及びＴｒｅｇの機能を阻害する化合物を挙げることができる。
【００３３】
本明細書等において、「ＭＤＳＣの機能を阻害する」とは、ＭＤＳＣの細胞を減少させること、ＭＤＳＣから分泌された免疫抑制物質を阻害すること、ＭＤＳＣの免疫抑制物質の分泌を阻害すること、又はＭＤＳＣによる抗原提示能およびエフェクター能の阻害を抑制することなどを含む。なお、本明細書等における「Ｔｒｅｇの機能を阻害する」とは、上述したＭＤＳＣに関する記載におけるＭＤＳＣをＴｒｅｇに読み換えればよい。また、ここでの「減少」とは、ＭＤＳＣ又はＴｒｅｇの誘導抑制及び排除を意味する。
【００３４】
ＭＤＳＣの機能を阻害する化合物としては、ゲムシタビン、ホスホジエステラーゼ−５（ＰＤＥ−５）阻害化合物（例えば、sildenafil、tadalafil、及びvardenafil）、オールトランスレチノイン酸（all-trans-retinoic acid:以下、ＡＴＲＡと称する）、又はアルギナーゼ阻害化合物（例えば、boronic-acid derivative 2(S)-amino-6-boronohexanoinic acid(ABH), S-(2boronoethyl)-L-cystein(BEC)）、COX-2阻害剤（SC58236）、KIT-specific antibody、Nitroaspirin、VitaminD3、avastin、VEGF-trap、Doxorubicin、5-FU、cyclophosphamideを挙げることができる。例えば、ＡＴＲＡは、ＭＤＳＣを分化誘導し、ＭＤＳＣの免疫抑制活性を阻害する。また、boronic-acid derivative 2(S)-amino-6-boronohexanoinic acid(ABH)、及びS-(2boronoethyl)-L-cystein(BEC)は、アルギニンのアナログである。
【００３５】
Ｔｒｅｇの機能を阻害する化合物としては、シクロホスファミド、デニロイキンジフチトックス（Denileukin diftitox）、ＣＴＬＡ−４阻害化合物（例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体）、ＣＤ２５阻害化合物（例えば、抗ＣＤ２５抗体）、及びＩＬ−２Ｒ阻害化合物（例えば、抗ＩＬ−２Ｒ抗体）を挙げることができる。デニロイキンジフチトックスは、ＩＬ−２とジフテリアとの融合タンパクであり、ＣＤ２５陽性細胞を傷害する。
【００３６】
ＭＤＳＣ及びＴｒｅｇの機能を阻害する化合物としては、スニチニブ（Sunitinib）を挙げることができる。
【００３７】
免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物は、免疫抑制性細胞の阻害活性に加えて、抗腫瘍活性（直接的細胞傷害活性）を有することが好ましい。これによって、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物は、免疫抑制性細胞を阻害することにより、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤の抗腫瘍効果を増強すると共に、自身が腫瘍細胞を抑制することができる。
【００３８】
したがって、免疫抑制性細胞の阻害活性に加えて、抗腫瘍活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤を用いた腫瘍治療用薬剤では、腫瘍細胞の増殖抑制に対して相乗効果が得られることになる。
【００３９】
免疫抑制性細胞の阻害活性を有し、かつ、抗腫瘍活性（直接的細胞傷害活性）を有する化合物としては、ゲムシタビン、シクロホスファミド、及びスニチニブを挙げることができる。免疫抑制性細胞の阻害活性を有し、かつ、抗腫瘍活性を有する化合物において、免疫抑制性細胞の阻害活性を示す有効量と、抗腫瘍活性を示す有効量とが異なる場合は、少なくとも免疫抑制性細胞の阻害活性を示す量の当該化合物を投与する。
【００４０】
（ゲムシタビン）
ゲムシタビンは、下記式（１）で表わされる化合物であり、ゲムシタビン塩酸塩を含む医薬組成物が、非小細胞癌、膵癌、胆道癌、尿路上皮癌、及び手術不能又は再発乳癌に適用される抗腫瘍剤（商品名：ジェムザール）として認可され、販売されている。また、ゲムシタビンは、乳癌、膀胱癌、及び卵巣癌などにも有効であると報告されている。なお、ゲムシタビンの作用は、ＤＮＡ合成阻害、アポトーシスの誘導、及びＭＤＳＣの減少である。
【００４１】
【化１】
2014001141.tif 000002
【００４２】
ゲムシタビンの抗腫瘍剤としての投与は、非小細胞肺癌、膵癌、胆道癌、尿路上皮癌の場合、１回あたり１０００ｍｇ／ｍ2のゲムシタビンを３０分かけて点滴静注することで行う。週１回投与を３週連続し、４週目は休薬する。これを１コースとして投与を繰り返す。なお、患者の状態により適宜減量する。また、手術不能又は再発乳癌の場合、ゲムシタビンとして１回あたり１２５０ｍｇ／ｍ2のゲムシタビンを３０分かけて点滴静注する。この場合は、週１回投与を２週連続し、３週目は休薬する。これを１コースとして投与を繰り返す。
【００４３】
（シクロホスファミド）
シクロホスファミドは、下記式（２）で表わされる化合物であり、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫（ホジキン病、リンパ肉腫、細網肉腫）、肺癌、乳癌、急性白血病、真性多血症、子宮頸癌、子宮体癌、卵巣癌、神経腫瘍（神経芽腫、網膜芽腫）、及び骨腫瘍への適用が認可されている。また、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、咽頭癌、胃癌、膵癌、肝癌、結腸癌、睾丸腫瘍、絨毛性疾患（絨毛癌、破壊胞状奇胎、胞状奇胎）、横紋筋肉腫、及び悪性黒色腫には、他の抗悪性腫瘍剤と併用で認可されている。更に、乳癌（手術可能例における術前、あるいは術後化学療法）では、他の抗悪性腫瘍剤との併用療法で、認可されている。シクロホスファミドは、少量投与により、Ｔｒｅｇの機能を阻害する化合物である。
【００４４】
【化２】
2014001141.tif 000003
【００４５】
シクロホスファミドの抗腫瘍剤としての投与は、単独で投与する場合、成人には１日１回１００ｍｇのシクロホスファミド（無水物換算）を静脈内に注射することで行う。患者が耐えられる場合には、１日あたりの投与量を２００ｍｇに増量する。シクロホスファミドは、総量３０００〜８０００ｍｇを投与するが、効果が認められたときは、できる限り長期間持続する。
【００４６】
（スニチニブ）
スニチニブは、下記式（３）で表される化合物であり、イマチニブ抵抗性の消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、及び根治切除不能又は転移性の腎細胞がんへの適用が認可されており、商品名スーテントとして販売されている。スニチニブは、Ｔｒｅｇ及びＭＤＳＣの機能を阻害する化合物であり、主な機能は、血管新生に関与するＶＥＧＦ（血管内皮細胞増殖因子）受容体と、腫瘍増殖に関与するＰＤＧＦ（血小板由来増殖因子）受容体など複数の受容体を標的としている。
【００４７】
【化３】
2014001141.tif 000004
【００４８】
スニチニブの抗腫瘍剤としての投与は、成人には１日１回５０ｍｇのスニチニブを４週間連日経口投与することで行う。その後２週間は休薬する。これを１コースとして投与を繰り返す。なお、患者の状態により適宜減量する。
【００４９】
（腫瘍治療用薬剤の利点）
カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤は、癌患者の生体防御機能、具体的には免疫機能を回復及び増強させることにより、抗腫瘍効果を発揮すると考えられている。従って、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤を、癌患者に投与することによって、癌患者の免疫抑制細胞（例えば、ＭＤＳＣ又はＴｒｅｇ）が阻害される。このように、免疫抑制細胞の阻害により免疫機能の抑制が解除されることによって、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤の免疫賦活作用が、更に増強されることになる。
【００５０】
したがって、ワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤と、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤とを併用することにより、これまでカワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤の免疫賦活作用が免疫抑制性細胞により阻害されていた対象（例えば、カワラタケ由来の蛋白多糖体を用いた抗腫瘍剤の治療に対して、反応性の低いノンレスポンダー、及びカワラタケ由来の蛋白多糖体を用いた抗腫瘍剤の適用が認可されていない癌の患者）に対して治療効果を高めることができる。
【００５１】
また、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤が抗腫瘍活性を有する場合には、カワラタケ由来の蛋白多糖体を用いた抗腫瘍剤の抗腫瘍活性との相乗効果を期待することができる。
【００５２】
なお、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤は、現在、胃癌患者、結腸・直腸癌患者、及び小細胞肺癌患者以外の癌患者への適用は現在認められていない。したがって、本発明では、胃癌患者、結腸・直腸癌患者、及び小細胞肺癌患者以外の癌患者にも、癌患者に対して副作用の少ないカワラタケ由来の蛋白多糖体を用いた薬剤であって、高い治療効果が得られる腫瘍治療用薬剤を提供することも目的としている。
【００５３】
ここで、免疫抑制細胞阻害剤の有する抗腫瘍活性が胃癌、結腸・直腸癌、及び小細胞肺癌以外の腫瘍に対する活性の場合には、胃癌、結腸・直腸癌、及び小細胞肺癌以外の腫瘍に対してもカワラタケ由来の蛋白多糖体を用いた抗腫瘍剤の治療効果が得られることになる。すなわち、免疫抑制細胞阻害剤が胃癌、結腸・直腸癌、及び小細胞肺癌以外の腫瘍に対しても抗腫瘍活性（直接的細胞傷害活性）を有する場合に、本発明に係る腫瘍治療用薬剤を用いることによって、胃癌、結腸・直腸癌、及び小細胞肺癌以外の癌患者に対する治療に、副作用の小さいカワラタケ由来の蛋白多糖体を用いた抗腫瘍剤を提供することができる。
【００５４】
更に、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤の適用が認められていない腫瘍、及び抗腫瘍活性を有する免疫抑制細胞阻害剤が抗腫瘍剤として適用が認められていない腫瘍に対しても、本発明の腫瘍治療用薬剤は有効である。
【００５５】
（腫瘍治療用薬剤の剤形について）
本発明の腫瘍治療用薬剤の剤形は、抗腫瘍剤と免疫抑制細胞阻害剤とが、それぞれ単独製剤として分離している２剤でもよく、抗腫瘍剤（カワラタケ由来の蛋白多糖体）と免疫抑制細胞阻害剤（免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物）とが混合している１剤でもよい。
【００５６】
カワラタケ由来の蛋白多糖体と、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物の組み合わせ比率（１剤における配合比率、又は２剤における使用比率）は、癌治療に有効な量であれば、特に限定されるものではない。
【００５７】
（腫瘍治療用薬剤が１剤の場合）
腫瘍治療用薬剤が１剤の場合、カワラタケ由来の蛋白多糖体及び免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物の配合比率は、腫瘍の治療に有効であれば特に限定されるものではない。また、腫瘍治療用薬剤の剤形も、特に限定されるものではなく、例えばカプセル剤、マイクロカプセル剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、粉末等、慣用の医薬製剤の形で経口投与することができる。また、静注、筋注等の注射剤等、慣用の医薬製剤の形で非経口（例えば、静注、筋注、皮下投与、腹腔内投与、直腸投与、経皮投与）投与することもできる。
【００５８】
各種製剤は、通常用いられている賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤化剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化剤などを用いて常法により製造することができる。使用可能な無毒性の上記添加剤としては、例えば、乳糖、果糖、ブドウ糖、でん粉、ゼラチン、炭酸マグネシウム、合成ケイ酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース又はその塩、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、シロップ、ワセリン、グレセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硫酸ソーダ、リン酸ナトリウムなどが挙げられる。
【００５９】
また、腫瘍治療用薬剤の投与方法、投与量、投与期間、投与間隔は、例えば患者の体重、年齢、症状の程度などによって適宜設定することができる。
【００６０】
（腫瘍治療用薬剤が１剤の場合の利点）
腫瘍治療用薬剤を１剤とすることにより、患者に対して複数の薬剤を投与することを避けることができる。すなわち、これまでと同様に１剤を投与することで癌細胞の増殖が抑制され、高い治療効果が得られるため、薬剤投与に対する患者の負担の増加を避けることができる。
【００６１】
（腫瘍治療用薬剤が２剤の場合）
腫瘍治療用薬剤が、抗腫瘍剤と免疫抑制細胞阻害剤とに分離している２剤の場合、抗腫瘍剤と免疫抑制細胞阻害剤との使用比率は、悪性腫瘍の治療に有効であれば特に限定されるものではない。また、抗腫瘍剤及び免疫抑制細胞阻害剤の剤形も特に限定されるものではなく、前記の１剤の腫瘍治療用薬剤の剤形と同様の剤形を用いることができる。また、投与方法、投与量、及び投与期間、投与間隔も、例えば患者の体重、年齢、症状の程度などによって適宜設定することができる。
【００６２】
例えば、抗腫瘍剤としてＰＳＫを用い、免疫抑制細胞阻害剤としてゲムシタビンを用いる場合、１コースの投与量として、ゲムシタビンは１回あたり１０００ｍｇ／ｍｍ2の週１回の静脈内投与を２週連続し、ＰＳＫは１日３ｇを２週目から３週間にかけて、連日経口投与するようにすればよい。あるいは、１コースの投与量として、ゲムシタビンは１回あたり１０００ｍｇ／ｍｍ2の週１回の静脈内投与を３週連続し、ＰＳＫは１日３ｇを２週目から３週間にかけて、連日経口投与するようにしてもよい。
【００６３】
もちろん、上記の投与法は一例であり、他の投与法であってもよい。ヒトへの抗腫瘍剤と免疫抑制細胞阻害剤の投与方法、投与量、投与期間、及び投与間隔等は、管理された臨床治験によって決定されることが望ましい。
【００６４】
（腫瘍治療用薬剤が２剤の場合の利点）
抗腫瘍活性を有している免疫抑制細胞阻害剤を用いる場合、腫瘍治療用薬剤を２剤とすることにより、一方の薬剤を休薬している間であってももう一方の薬剤を投与し続けることができる。例えば、一方の薬剤の副作用が大きく、もう一方の薬剤の副作用が小さい場合、副作用の大きい薬剤を投与する必要がない場合であっても副作用の大きい薬剤を投与しなければならないため、患者にとって負担が大きくなる虞がある。腫瘍治療用薬剤を２剤とすることで、副作用の大きい薬剤を休薬させている間であっても、副作用の小さいもう一方の薬剤を投与することができるようになる。
【００６５】
このように、腫瘍治療用薬剤を２剤とすることにより、癌細胞の増殖が抑制することで高い治療効果が得つつ、副作用に対する患者の負担の増加を避けることができる。
【００６６】
本発明の腫瘍治療用薬剤における、抗腫瘍剤及び免疫抑制細胞阻害剤のそれぞれの適切な組み合わせ比率（配合比率、又は使用比率）投与量、及び投与期間、投与間隔を設定するに当たっては、制御された臨床試験により決定されることが好ましい。抗腫瘍剤及び免疫抑制細胞阻害剤の併用のための、投与方法、投与量、投与期間、及び投与間隔については、本発明の腫瘍治療用薬剤の添付文書又はパンフレットに記載すればよい。
【００６７】
（腫瘍治療用薬剤の治療対象となる腫瘍）
本発明の腫瘍治療用薬剤の治療対象となる腫瘍は、特に限定されるものではなく、以下のものを挙げることができる。
（１）ＰＳＫの適用がある癌（胃癌、結腸・直腸癌、及び小細胞肺癌）
（２）ゲムシタビンの適用がある癌（非小細胞癌、膵癌、胆道癌、尿路上皮癌、及び手術不能又は再発乳癌）
（３）シクロホスファミドの適用がある癌（多発性骨髄腫、悪性リンパ腫（ホジキン病、リンパ肉腫、細網肉腫）、肺癌、乳癌、急性白血病、真性多血症、子宮頸癌、子宮体癌、卵巣癌、神経腫瘍（神経芽腫、網膜芽腫）、骨腫瘍、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、咽頭癌、胃癌、膵癌、肝癌、結腸癌、睾丸腫瘍、絨毛性疾患（絨毛癌、破壊胞状奇胎、胞状奇胎）、横紋筋肉腫、悪性黒色腫、乳癌（手術可能例における術前、あるいは術後化学療法））
（４）スニチニブの適用がある癌（イマチニブ抵抗性の消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、及び根治切除不能又は転移性の腎細胞がん）
（５）その他の癌（扁平上皮癌、膠芽腫、外陰癌、肝臓癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、子宮癌（例えば、子宮内膜細胞腫、子宮頸癌、又は子宮内膜癌）、唾液腺癌、腎臓癌、甲状腺癌、膀胱癌、頭頸部癌、食道癌、前立腺癌、神経系の癌（例えば神経芽細胞種）、網膜癌、皮膚癌、白血病、脳腫瘍、骨肉種、移行上皮癌）
腫瘍治療用薬剤の治療対象となる腫瘍は、これらの中でも、非小細胞肺癌、膵癌、胆道癌、尿路上皮癌、胃癌、結腸・直腸癌、小細胞肺癌であることが好ましい。
【００６８】
[２]カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤
本発明のカワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤は、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤と併用される。
【００６９】
カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤は、上述した腫瘍治療用薬剤における抗腫瘍剤と同様のものであるため、詳細な説明については省略する。また、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤と併用投与する免疫抑制細胞阻害剤としては、上述した腫瘍治療用薬剤における免疫抑制細胞阻害剤と同様のものを用いることができる。
【００７０】
抗腫瘍剤を免疫抑制細胞阻害剤と併用するにあたってのそれぞれの適切な使用比率、投与量、及び投与期間、投与間隔は、制御された臨床試験により決定されることが好ましい。抗腫瘍剤を免疫抑制細胞阻害剤と併用するための、投与方法、投与量、投与期間、及び投与間隔等については、抗腫瘍剤の添付文書又はパンフレットに記載すればよい。
【００７１】
抗腫瘍剤の治療対象となる腫瘍は、特に限定されるものではないが、前記の腫瘍治療用薬剤の治療対象となる腫瘍を挙げることができ、好ましくは、非小細胞肺癌、膵癌、胆道癌、尿路上皮癌、胃癌、結腸・直腸癌、小細胞肺癌である。
【００７２】
[３]免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤
本明細書等に記載の免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤は、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤と併用される。
【００７３】
免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤は、前記腫瘍治療用薬剤における免疫抑制細胞阻害剤である。また、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤と併用投与する抗腫瘍剤は、前記腫瘍治療用薬剤におけるカワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤を用いることができる。
【００７４】
本明細書の免疫抑制細胞阻害剤における、免疫抑制細胞阻害剤と抗腫瘍剤とのそれぞれの適切な使用比率、投与量、及び投与期間、投与間隔を設定するに当たっては、制御された臨床試験により決定される。本発明の免疫抑制細胞阻害剤の添付文書又はパンフレットには、免疫抑制細胞阻害剤と抗腫瘍剤とを併用するための、投与方法、投与量、投与期間、及び投与間隔等が記載される。
【００７５】
[４]腫瘍治療方法
本明細書は、カワラタケ由来の蛋白多糖体を有効成分として含む抗腫瘍剤と、免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物を含む免疫抑制細胞阻害剤とを、腫瘍の治療が必要な対象に、有効量で投与することを含む、腫瘍治療方法を開示する。
【００７６】
本治療方法において用いられる免疫抑制細胞阻害剤は、更に抗腫瘍活性を有することが好ましい。また、本治療方法において用いられる免疫抑制細胞阻害剤が阻害活性を有する免疫抑制性細胞は、例えばミエロイド由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）及び制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。免疫抑制細胞阻害剤は、ＭＤＳＣおよびＴｒｅｇの双方に阻害活性を有していてもよいし、いずれか一方に対してのみ阻害活性を有していてもよい。
【００７７】
免疫抑制性細胞の阻害活性を有する化合物としては、ゲムシタビン、ホスホジエステラーゼ−５（ＰＤＥ−５）阻害化合物、オールトランスレチノイン酸（all-trans-retinoic acid:ＡＴＲＡ）、アルギナーゼ阻害化合物、スニチニブ、シクロホスファミド、デニロイキンジフチトックス（Denileukin diftitox）、ＣＴＬＡ−４阻害化合物、ＣＤ２５阻害化合物、及びＩＬ−２Ｒ阻害化合物を挙げることができる。
【００７８】
本発明は上述した実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、実施形態に開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【実施例】
【００７９】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
【００８０】
《実施例１》
本実施例では、乳癌細胞を移植したマウスにおける本発明の腫瘍治療用薬剤の効果を検討するために、ＰＳＫ及びゲムシタビン（ジェムザール注射液）の併用投与の効果を検討した。雌のＢＡＬＢ／ｃマウスに、マウス乳癌細胞株４Ｔ１を、１匹あたり１ｘ１０5個皮下に移植した。乳癌細胞が２００ｍｍ3に増殖した時点で、８匹ずつ４群（ＰＳＫ及びゲムシタビン投与群、ＰＳＫ単独投与群、ゲムシタビン単独投与群、及び非投与群）に分けた。ゲムシタビンは、群分け直後及び７日後に、１２０ｍｇ／ｋｇの用量で、腹腔内に投与した。ゲムシタビンを２回投与後、翌日よりＰＳＫを週に３回、５０ｍｇ／ｋｇの用量で、腹腔内に投与した。非投与群においては、ゲムシタビン又はＰＳＫのコントロールとして、生理食塩水を腹腔内に投与した。群分け後、７日、１４日、２１日の腫瘍体積を測定した。ＰＳＫ最終投与の翌日、剖検し腫瘍重量を測定した。
【００８１】
投与スケジュール及び結果を図１に示す。図１は、腫瘍治療用薬剤の乳癌移植マウスにおける腫瘍体積および腫瘍重量の抑制効果を示したグラフ、並びに抗腫瘍剤及び免疫抑制細胞阻害剤の投与スケジュールを示した図である。
【００８２】
図１に示す投与スケジュールは、ＰＳＫ及びゲムシタビン投与群における各薬剤の投与スケジュールである。なお、投与スケジュールの「Ｇ」はゲムシタビンを、「Ｐ」はＰＳＫを示す。すなわち、ゲムシタビン単独投与群では、投与スケジュールにおいてＰＳＫの投与を行わないスケジュールであり、ＰＳＫの代わりに生理食塩水を投与した。一方、ＰＳＫ単独投与群は、投与スケジュールにおいてゲムシタビンの投与を行わないスケジュールであり、ゲムシタビンの代わりに、生理食塩水を投与したスケジュールとなる。
【００８３】
図１に示すように、ＰＳＫ単独投与群では抗腫瘍傾向を示すものの有意差は認められなかったが、一方で、ゲムシタビンは単独で抗腫瘍効果を示した。
【００８４】
さらに、ゲムシタビンとＰＳＫとを併用することにより有意に腫瘍体積、及び腫瘍重量に対し併用効果が認められた。また、図１におけるゲムシタビン単独投与群では１４日以降に腫瘍体積が増加しているように、ゲムシタビンの休薬により腫瘍の増殖は促進されるが、ＰＳＫ及びゲムシタビン投与群においてゲムシタビンの休薬中にＰＳＫのみを投与することにより、その増殖促進（回復）を抑制した。より具体的には、ゲムシタビン単独投与群では、腫瘍体積が約６００ｍｍ3増加しているのに対し、ＰＳＫ及びゲムシタビン投与群では、わずかに約１００ｍｍ3程度の増加に抑制していた。すなわち、ゲムシタビンを休薬している際にＰＳＫを投与することにより、腫瘍体積の増殖を約１／６に抑制することができた。
【００８５】
また、ＰＳＫ及びゲムシタビン投与群、ＰＳＫ単独投与群、ゲムシタビン単独投与群、及び非投与群の剖検時の腫瘍重量を比較すると、ＰＳＫ及びゲムシタビン投与群の非投与群に対する腫瘍重量の減少量は、ＰＳＫ単独投与群、及びゲムシタビン単独投与群の減少量を加えたものより多く、ＰＳＫ及びゲムシタビン投与群における併用効果は、相乗効果があると考えられる。
【００８６】
なお、図１中の白三角（△）はＰＳＫ及びゲムシタビン投与群、黒三角（▲）はゲムシタビン単独投与群、白菱形（◇）はＰＳＫ単独投与群、及び黒菱形（◆）は非投与群を示す。
【００８７】
《実施例２》
本実施例では、実施例１におけるゲムシタビンの投与回数を増加させ、ＰＳＫ及びゲムシタビンの併用投与の効果を検討した。ゲムシタビンの投与を、群分け直後、７日後、１４日後、及び２１日後に変更したことを除いては、実施例１の操作を繰り返した。
【００８８】
投与スケジュール及び結果を図２に示す。図２は、腫瘍治療用薬剤の乳癌移植マウスにおける腫瘍体積および腫瘍重量の抑制効果を示したグラフ、並びに抗腫瘍剤及び免疫抑制細胞阻害剤の投与スケジュールを示した図である。
【００８９】
図２に示す投与スケジュールは、ＰＳＫ及びゲムシタビン投与群における各薬剤の投与スケジュールである。なお、投与スケジュールの「Ｇ」はゲムシタビンを、「Ｐ」はＰＳＫを示す。すなわち、ゲムシタビン単独投与群では、投与スケジュールにおいてＰＳＫの投与を行わないスケジュールとなる。一方、ＰＳＫ単独投与群は、投与スケジュールにおいてゲムシタビンの投与を行わないスケジュールであり、ゲムシタビンの代わりに、生理食塩水を投与したスケジュールとなる。
【００９０】
本投与スケジュールにおいても、４Ｔ１細胞に対し、ＰＳＫ単独投与では抗腫瘍傾向を示すものの有意差は認められないが、ゲムシタビンは単独で抗腫瘍効果を示した。
【００９１】
さらに、ゲムシタビンとＰＳＫとの併用することにより有意に腫瘍体積、及び腫瘍重量に対し併用効果が認められた。図２に示すように、ゲムシタビン単独投与群において７日〜２１日目で腫瘍体積が増加しているものの、本実施例におけるＰＳＫ及びゲムシタビン投与群では、腫瘍体積の増加抑制に留まらず７日〜２１日目で腫瘍体積を減少させることができた。より具体的には、ゲムシタビン単独投与群では、７日〜２１日目の間に腫瘍体積が約２００ｍｍ3増加しているのに対し、ＰＳＫ及びゲムシタビン投与群では、腫瘍体積を０近くまで減少させることができた。
【００９２】
また、７日目以降、ＰＳＫの投与開始と共に腫瘍体積の減少が始まっていることから腫瘍体積の減少にＰＳＫが大きく影響を与えていることが示された。
【００９３】
なお、図２中の白三角（△）はＰＳＫ及びゲムシタビン投与群、黒三角（▲）はゲムシタビン単独投与群、白菱形（◇）はＰＳＫ単独投与群、及び黒菱形（◆）は非投与群を示す。
【００９４】
《実施例３》
本実施例では、ゲムシタビンの投与量を減少させた場合の、ＰＳＫ及びゲムシタビン（ジェムザール注射液）の併用投与の効果を検討した。ゲムシタビンの投与量を、１２０ｍｇ／ｋｇの用量に代えて、６０ｍｇ／ｋｇの用量を用いたことを除いては、実施例１の操作を繰り返した。
【００９５】
結果を、図３に示す。図３は、腫瘍治療用薬剤の乳癌移植マウスにおける腫瘍体積の抑制効果を示したグラフである。図３に示すように、ＰＳＫ単独投与群では抗腫瘍傾向を示すものの有意差は認められなかったが、一方で、ゲムシタビンは単独で抗腫瘍効果を示した。
【００９６】
さらに、ゲムシタビンとＰＳＫとを併用することにより有意に腫瘍体積に対し併用効果が認められた。また、図３におけるゲムシタビン単独投与群では１４日以降に腫瘍体積が増加しているように、ゲムシタビンの休薬により腫瘍の増殖は促進されるが、ＰＳＫ及びゲムシタビン投与群においてゲムシタビンの休薬中にＰＳＫのみを投与することにより、その増殖促進（回復）を抑制した。より具体的には、ゲムシタビン単独投与群では、腫瘍体積が約５００ｍｍ3増加しているのに対し、ＰＳＫ及びゲムシタビン投与群では、ほとんど増加しなかった。
【００９７】
ＰＳＫ及びゲムシタビン投与群、ＰＳＫ単独投与群、ゲムシタビン単独投与群、及び非投与群の剖検日の前日の腫瘍体積を比較すると、ＰＳＫ及びゲムシタビン投与群の非投与群に対する腫瘍体積の減少量は、ＰＳＫ単独投与群、及びゲムシタビン単独投与群の減少量を加えたものより多く、ＰＳＫ及びゲムシタビン投与群における併用効果は、相乗効果があると考えられる。また、ゲムシタビンの６０ｍｇ／ｋｇの用量であっても、十分な抗腫瘍効果が得られた。
【００９８】
なお、図３中の白四角（□）はＰＳＫ及びゲムシタビン（６０ｍｇ／ｋｇ）投与群、黒四角（■）はゲムシタビン（６０ｍｇ／ｋｇ）単独投与群、白菱形（◇）はＰＳＫ単独投与群、及び黒菱形（◆）は非投与群を示す。
【００９９】
《実施例４》
本実施例では、ゲムシタビンの投与量を減少させた場合の、ＰＳＫ及びゲムシタビン（ジェムザール注射液）の併用投与の効果を検討した。ゲムシタビンの投与量を、１２０ｍｇ／ｋｇの用量に代えて、６０ｍｇ／ｋｇの用量を用いたことを除いては、実施例２の操作を繰り返した。
【０１００】
結果を、図４に示す。図４は、腫瘍治療用薬剤の乳癌移植マウスにおける腫瘍体積の抑制効果を示したグラフである。図４に示すように、４Ｔ１細胞に対し、ＰＳＫ単独投与では抗腫瘍傾向を示すものの有意差は認められないが、ゲムシタビンは単独で抗腫瘍効果を示した。
【０１０１】
さらに、ゲムシタビンとＰＳＫとの併用することにより有意に腫瘍体積に対し併用効果が認められた。図４に示すように、ゲムシタビン単独投与群において７日〜２１日目で腫瘍体積が増加しているものの、本実施例におけるＰＳＫ及びゲムシタビン投与群では、７日〜２１日目で腫瘍体積はほとんど増加しなかった。より具体的には、ゲムシタビン単独投与群では、７日〜２１日目の間に腫瘍体積が約２００ｍｍ3増加しているのに対し、ＰＳＫ及びゲムシタビン投与群では、腫瘍体積の増加は見られなかった。ゲムシタビンの投与量を１２０ｍｇ／ｋｇから６０ｍｇ／ｋｇに減少させても、十分な抗腫瘍効果が得られた。
【０１０２】
なお、図４中の腫瘍体積のグラフにおいて、白四角（□）はＰＳＫ及びゲムシタビン（６０ｍｇ／ｋｇ）投与群、黒四角（■）はゲムシタビン（６０ｍｇ／ｋｇ）単独投与群、白菱形（◇）はＰＳＫ単独投与群、及び黒菱形（◆）は非投与群を示す。
【産業上の利用可能性】
【０１０３】
本発明の腫瘍治療用薬剤は、ＰＳＫを有効成分として含む抗腫瘍剤に対して反応性（感受性）の低いノンレスポンダーに対する治療効果を高める薬剤として好適に利用することができると共に、現時点でＰＳＫを有効成分として含む抗腫瘍剤の適用が認められていない癌患者に対しても高い治療効果を有する薬剤として利用することができる。
【図１】
2014001141.tif 000005
【図２】
2014001141.tif 000006
【図３】
2014001141.tif 000007
【図４】
2014001141.tif 000008