(57)【要約】【課題】本発明は、高い美白効果のみならず、良好な安全性をも備えたメラノソーム輸送阻害剤及びこれを含有する皮膚外用剤を提供する。【解決手段】オウゴニンを有効成分として含有することを特徴とするメラノソーム輸送阻害剤を提供する。また、前記メラノソーム輸送阻害剤を含有する皮膚外用剤を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
オウゴニンを有効成分として含有することを特徴とするメラノソーム輸送阻害剤。
【請求項２】
前記オウゴニンが、オウゴン抽出物、オウゴン以外の植物の抽出物、又は有機合成物由来であることを特徴とする請求項１に記載のメラノソーム輸送阻害剤。
【請求項３】
前記オウゴニンの濃度が、０．００００１質量％以上であることを特徴とする請求項１又は２に記載のメラノソーム輸送阻害剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載のメラノソーム輸送阻害剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項５】
メラノソーム輸送阻害作用を有さない美白剤をさらに含有することを特徴とする請求項４に記載の皮膚外用剤。
【請求項６】
前記美白剤が、チロシナーゼ活性阻害剤であることを特徴とする請求項５に記載の皮膚外用剤。
【請求項７】
前記チロシナーゼ活性阻害剤が、アスコルビン酸、アスコルビン酸塩及びその誘導体、ハイドロキノン、ハイドロキノンの塩及び配糖体、プラセンタエキス、アルブチン、エラグ酸、リノール酸、又はトラネキサム酸からなる群から選択されることを特徴とする請求項５又は６に記載の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、メラノソーム輸送阻害剤及び該輸送阻害剤を含有する皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚のシミ及びソバカスは、紫外線等の刺激、ホルモンの異常又は遺伝的要素等の原因により表皮の基底膜に局在するメラノサイトが異常活性化して過剰なメラニン色素を合成し、そのメラニン色素が皮膚内に異常沈着することにより生じる（非特許文献１）。そのため、メラノサイト内におけるメラニン合成を阻害することに主眼を置いた研究、治療等が従来から行われている。
【０００３】
一方、メラニンは皮膚の色を決める黒色の色素であり、皮膚に存在するメラノサイトと呼ばれる細胞内のメラノソームと呼ばれる細胞内小器官で生成される。メラニンが蓄積されて黒色化したメラノソームは、種々の輸送関連タンパク質によりメラノサイトの核周辺から樹状突起の末端へと輸送され、周りの表皮細胞に受け渡される。そして、紫外線等の刺激によりメラノソームが表皮細胞に過剰に蓄積されることによってシミが生じる。
【０００４】
近年、メラニン色素を細胞外へ分泌するまで保持するオルガネラであるメラノソームの細胞内輸送は、様々なタンパク質により制御されることが報告された（非特許文献２）。また、膜輸送の制御に関わる低分子量Ｇタンパク質であるＲａｂ２７aの不活性化剤（特許文献１）、Ｒａｂ２７ａのエフェクターと呼ばれる結合分子であるＳｌｐ−２ａ（特許文献２）、及びＳｌａｃ２−ａ（特許文献３）のタンパク質量低減剤等が報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００７−１３７８２１号公報
【特許文献２】特開２０１０−２２９０４３号公報
【特許文献３】特開２０１１−１３２１９５号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Prota, G. J., Invest. Dermatol. (1980), 75: 122-127.
【非特許文献２】Kuroda, T. S. et al., Nat. Cell Biol. (2004), 6: 1195-1203.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は上記事情に鑑み、高い美白効果のみならず、良好な安全性をも備えたメラノソーム輸送阻害剤及びこれを含有する皮膚外用剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行った。すなわち、本発明者らは、メラニン合成を阻害する効果のある天然物を中心にスクリーニングしたところ、オウゴン抽出物が高い美白効果を有することを見出した。また、オウゴン抽出物に含まれる成分のうち、オウゴニンが最も強い美白効果を有することを見出した。さらに、オウゴン抽出物が有する高い美白効果のメカニズムを調査したところ、オウゴン抽出物の添加によりメラノソームの輸送に関連するＭｌｐｈ［ｍｅｌａｎｏｐｈｉｌｉｎ（別名：ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ  ｌａｃｋｉｎｇ  Ｃ２  ｄｏｍａｉｎｓ−ａ（Ｓｌａｃ２−ａ））］タンパク質量が低減したため、メラノサイト中におけるメラノソーム輸送を阻害することにより、強い美白効果を奏していることが示された。
【０００９】
すなわち、本発明においては、オウゴニンを有効成分として含有することを特徴とするメラノソーム輸送阻害剤を提供する。
前記オウゴニンは、オウゴン抽出物、オウゴン以外の植物の抽出物、又は有機合成物由来であることが好適である。
前記オウゴニンの濃度は、０．００００１質量％以上であることが好適である。
また、本発明においては、上記メラノソーム輸送阻害剤を含有する皮膚外用剤を提供する。
上記皮膚外用剤は、メラノソーム輸送阻害作用を有さない美白剤をさらに含有することが好適である。
前記美白剤は、チロシナーゼ活性阻害剤であることが好適である。
前記チロシナーゼ活性阻害剤は、アスコルビン酸、アスコルビン酸塩及びその誘導体、ハイドロキノン、ハイドロキノンの塩及び配糖体、プラセンタエキス、アルブチン、エラグ酸、リノール酸、又はトラネキサム酸からなる群から選択されることが好適である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のメラノソーム輸送阻害剤及びこれを含有する皮膚外用剤によれば、高い美白効果のみならず、良好な安全性をも提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】試験例２において得られた、オウゴンエキスに含まれる各フラボノイドの美白効果を評価したグラフである。
【図２】実施例１の評価方法１において得られた、Ｍｌｐｈタンパク質に関するウエスタンブロッティングの結果である。（ａ）はオウゴン抽出物を添加した時のＭｌｐｈタンパク質、（ｂ）はオウゴニンを添加した時のＭｌｐｈタンパク質の結果である。
【図３】実施例１の評価方法２において得られた、顕微鏡観察結果である。（ａ）は無添加のマウスＢ１６メラノーマ細胞、（ｂ）はオウゴン抽出物を添加したマウスＢ１６メラノーマ細胞、（ｃ）はオウゴニンを添加したマウスＢ１６メラノーマ細胞の顕微鏡観察写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
メラノソーム輸送阻害剤
本発明者らは、メラニン合成を阻害する効果のある天然物を中心にスクリーニングしたところ、オウゴン抽出物が高い美白効果を有することを見出した。また、オウゴン抽出物に含まれる美白有効成分のうち、オウゴニンが最も強い美白効果を有することを見出した。すなわち、本発明に係るメラノソーム輸送阻害剤は、オウゴニンを有効成分として含有することを特徴とする。
このオウゴニンは、オウゴン抽出物、オウゴン以外の植物の抽出物、又は有機合成物由来であることが好適である。オウゴン抽出物は、具体的には、シソ科のタツナミソウ属に属する植物であるコガネバナ（学名：Scutellaria baicalensis Georgi.）の根から周囲の皮（外皮）を取り除いたものである、生薬オウゴン（以下、単に「オウゴン」という）の抽出物である。また、オウゴニンは、例えば、３，４，５‐ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｏｌとｃｉｎｎａｍｏｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅとの反応によって得られるように、様々な有機合成反応を利用することによっても得ることができる。このような各種合成よって得られるオウゴニン（合成オウゴニン）についても、本発明に係るメラノソーム輸送阻害剤の有効成分として含有させることができる。オウゴニンは、日本薬局方に記載の生薬オウゴンに含まれるフラボノイドであり、生薬オウゴンの有機溶媒による抽出、濾過又は遠心分離による固形物の除去、シリカゲルカラム、ＨＰＬＣ等のクロマトグラフィー法による精製によっても得られる。さらに、オウゴニンは、既に試薬として市販されているので、本発明のメラノソーム輸送阻害剤に、市販のオウゴニンを添加して利用することも可能である。
本発明に係るメラノソーム輸送阻害剤中に含まれるオウゴニンの濃度は、高濃度であればあるほど好ましく、例えば、０．００００１質量％以上であり、その上限値は３０質量％である。なお、３０質量％を超える濃度においても高い美白効果を発揮することができるが、上述したような範囲であれば十分高い効果を得ることができる。
【００１３】
オウゴン抽出物に含まれるオウゴニンの濃度は、高濃度であればあるほど好ましく、例えば、０．０１〜５０質量％以上であり、より好ましくは０．１〜５０質量％である。０．０１質量％未満の濃度では、美白効果が弱く、また、十分な効果を発揮するためには製剤中での配合量が多くなりすぎてしまう場合があるからであり、５０質量％を超える濃度においては、現在の技術ではその抽出が困難である場合があるからである。なお、所望の濃度でなくとも、そのオウゴン抽出物を濃縮等することによって、５０質量％を超えるオウゴニン濃度とすることができる。
【００１４】
オウゴン抽出物の含有量は、固形分に換算して、好ましくは０．０００１〜２０質量％であり、より好ましくは０．００１〜１０質量％である。このような範囲であれば、オウゴン抽出物を安定に配合することができ、かつ、後述するように、細胞内に存在するＭｌｐｈタンパク質に対して十分な低減作用を示すからである。
【００１５】
オウゴン抽出物の抽出方法は、例えば、オウゴンの全草、根、根茎、葉、種子、花を微粉末としたもの、あるいは水及び／又は有機溶媒で浸漬抽出し、残渣を濾別して得られる抽出液、この抽出液から溶媒を除去したもの、あるいはこれらの微粉末、抽出液、溶媒除去物を適当な溶媒等で溶解、分散、希釈することにより行われる。
抽出溶媒としては、メタノールやエタノール等のアルコール、又は１，３−ブチレングリコール等の低極性溶媒を用いることが好ましい。このような抽出溶媒であれば、所望のオウゴン抽出物を得ることができるからである。
【００１６】
さらに、本発明者らは、オウゴン抽出物が有する高い美白効果のメカニズムを調査したところ、オウゴン抽出物の添加によりメラノソームの輸送に関連するＭｌｐｈタンパク質量が低減したことから、メラノサイト中におけるメラノソーム輸送を阻害することにより、強い美白効果を奏していることを見出した。Ｍｌｐｈタンパク質は、メラノサイト中におけるメラノソーム輸送に関与するタンパク質である。このメラノソームの輸送が阻害されると、メラノサイトで生成したメラニンを、ケラチノサイトに受け渡すことが阻害されるため、肌の色素沈着を抑制することができる。一方、従来の美白剤、コウジ酸、アルブチンには、メラノソーム輸送阻害作用がないことを本発明者らは確認している。従って、本発明のメラノソーム輸送阻害剤に基づく肌の色素沈着を抑制する効果は、従来のコウジ酸やアルブチン等を含有する美白用化粧料が奏する美白効果（メラニンの合成抑制効果）とは作用機序の点で異なるものである。
以上のことから、本発明者らは、オウゴニンがメラノソーム輸送阻害剤としての機能を有することに想到した。
【００１７】
オウゴニンを含む本発明のメラノソーム輸送阻害剤を、メラノソーム輸送阻害作用を有さない他の美白剤と併用することにより、当該他の美白剤を単独で使用するよりも美白効果を更に高める相乗効果を奏することができる。
上記メラノソーム輸送阻害作用を有さない美白剤としては、好ましくはチロシナーゼ活性阻害剤である。一般的に用いられる美白剤のうち、そのほとんどがチロシナーゼ活性阻害剤である。同じ作用機序に基づく美白剤、例えばチロシナーゼ活性阻害剤を複数又は多量に配合しても、美白効果は高まりにくく、また、その効果に対する安全性の面からも不安がある。しかし、上述したような作用機序の異なる美白剤、すなわち、チロシナーゼ活性阻害剤とメラノソーム輸送阻害剤を組み合わせることによって、少量でも高い美白効果を奏し、かつ、優れた安全性をも提供することが可能となる。
チロシナーゼ活性阻害剤としては、特に限定されるものではなく、アスコルビン酸、アスコルビン酸塩及びその誘導体、ハイドロキノン、ハイドロキノンの塩及び配糖体、プラセンタエキス、アルブチン、エラグ酸、リノール酸、又はトラネキサム酸等が挙げられる。
【００１８】
皮膚外用剤
本発明に係る皮膚外用剤は、上記メラノソーム輸送阻害剤を含有する。本発明に係る皮膚外用剤は、上記メラノソーム輸送阻害剤を、皮膚外用剤全量に対して、好ましくは０．００１〜５０質量％含有する。少なくとも０．００１質量％以上含有していれば、メラノソーム輸送阻害効果が最小限得られる濃度に相当するからであり、多くとも５０質量％以下であれば、メラノソーム輸送阻害効果が得られ且つ安全性も得られるからである。
【００１９】
本発明のメラノソーム輸送阻害剤は、化粧料、医薬品、医薬部外品など外皮に適用される皮膚外用剤として用いることができる。したがって、その剤型として水溶性系（ローション系）、可溶化系、乳化系（Ｗ／Ｏ型、Ｏ／Ｗ型）、粉末系、軟膏系、油液系、ジェル系、水−油二層系、水−油−粉末三層系など幅広い形態に使用することができる。また、本発明の皮膚外用剤は、上記メラノソーム輸送阻害剤の他に、本発明の効果を損なわない範囲で、皮膚外用剤に通常用いられる他の成分、例えば、水、アルコール、油剤、界面活性剤、増粘剤、粉体、キレート剤、防腐剤、ｐＨ調整剤、各種薬効剤、動植物、微生物由来の抽出物、色素、香料等を、必要に応じて適宜、配合することができる。また、美白剤、抗酸化剤、細胞賦活剤、抗炎症剤、紫外線防止剤等の薬効成分を併用することにより、本発明の効果を更に高めたり、もしくは他の効果をさらに付加したりすることもできる。
【００２０】
本発明の皮膚外用剤の剤型としては、例えば、ローション、油剤、乳剤、クリーム、軟膏等が挙げられる。また、乳液、クリーム、化粧水、美容液、シート状マスク、洗浄料、メーキャップ化粧料等の様々な形態の化粧料として提供することも可能である。
【００２１】
本発明に係る皮膚外用剤は、メラノソーム輸送阻害作用を有さない美白剤をさらに含有することができる。このような美白剤としては、上述したようなチロシナーゼ活性阻害剤を用いることができる。オウゴニンを含む本発明のメラノソーム輸送阻害剤と、メラノソーム輸送阻害作用を有さない他の美白剤とを含有する皮膚外用剤は、当該他の美白剤のみを含有する皮膚外用剤よりも美白効果を更に高める相乗効果を奏することができる。
【００２２】
以上のように、本発明の皮膚外用剤は、オウゴニンがメラノソーム輸送阻害剤の有効成分として作用し、特に美肌等を目的とした美白用化粧品として有効である。
【実施例】
【００２３】
以下、実施例、製剤例等を用いて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２４】
（試験例１）
美白に有効とされる植物エキス１３５種類から、メラニン合成を阻害する効果のある植物エキスについてスクリーニングを行った。その結果、オウゴンエキスが最も高い美白効果を有することが示された。
【００２５】
（試験例２）
オウゴンエキスに含まれる美白有効成分を特定するため、オウゴンエキスについて抽出条件の検討を二段階に分けて行った。
オウゴン乾燥品の粉末を、４種類の溶媒（ｎ−ヘキサン、酢酸エチル、メタノール及び水）を用いてそれぞれ抽出した試料について美白効果の検証を行った。活性のあった抽出試料については、さらに０％、２５％、５０％、７５％及び１００％メタノールを用いて段階的に抽出し、各抽出画分について美白効果の検証を行った。その結果、２５％及び７５％メタノールの２種類の抽出画分について美白活性を見出した。
オウゴンエキスの組成はフラボノイドを中心としたものであり、主として５種類のフラボノイド配糖体とアグリコン、すなわち、バイカリン（ｂａｉｃａｌｉｎ）、オウゴノシド（ｗｏｇｏｎｏｓｉｄｅ）、バイカレイン（ｂａｉｃａｌｅｉｎ）、オウゴニン（ｗｏｇｏｎｉｎ）、及びオロキシリンＡ（ｏｒｏｘｙｌｉｎ  Ａ）から構成されている。美白活性のあった２５％及び７５％メタノール画分について高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて解析を進めたところ、２５％メタノール画分にはフラボノイド配糖体、７５％メタノール画分にはアグリコンが含まれていた。
そこで、各フラボノイドについて美白効果の検証を進めた。その結果を図１に示す。図１中、矢印Ａは美白のボーダーラインを、矢印Ｂは細胞生存率のボーダーラインをそれぞれ示している。
図１より、オウゴンエキスに含まれる各フラボノイドのうち、美白効果があるのはバイカリン（ｂａｉｃａｌｉｎ）とオウゴニン（ｗｏｇｏｎｉｎ）であることが示された。
なお、試験例２は有効成分を特定することを目的として行った試験であるため、試薬としての扱いやすさの面を考慮して、抽出溶媒としてメタノールを使用した。以下の実施例１については、実際に皮膚外用剤に配合するオウゴン抽出物であるため、抽出溶媒としてエタノールを使用した。
【００２６】
（実施例１）
オウゴンの乾燥品を粉砕し、細かくすりつぶしたもの（０．５ｇ）を、９９．５％エタノール１０ｍＬに浸漬及び混和し、超音波で５分間抽出後、常温で一晩静置した。パスツールピペットで上清を分取し、孔径０．４５μｍのフィルター（ナカライテスク社製）を用いて濾過により不溶物を除去した。濾過後の抽出試料はエバポレーターを用いて溶媒を除去した。エバポレーターによる濃縮後に残った水分はエタノールを少量加えて共沸させ、シリカゲルデシケーターに４日間放置した後、秤量した。このようにして得られたオウゴン抽出物量は２１．８７ｍｇであった。以下の例では、この抽出物をエタノールに溶解し、濃度を１５ｍｇ／ｍｌに調製したものをオウゴン抽出物として用いた。
【００２７】
（評価方法１：Ｍｌｐｈタンパク質量の低減能についての評価）
マウスＢ１６メラノーマ細胞を含むメラニン産生細胞において、メラノソームが輸送される際に、Ｍｌｐｈタンパク質が働くことが知られている。そこで、Ｍｌｐｈの発現を指標としてウェスタンブロッティング法にて測定し、オウゴン抽出物及びオウゴニン添加時のＭｌｐｈ発現阻害作用について評価した。なお、恒常的に発現することで知られているＧｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（以下、Ｇａｐｄｈと称する。）を標準タンパク質として測定した。
【００２８】
マウスＢ１６メラノーマ細胞に、実施例１のオウゴン抽出物を最終濃度が０．２３％となるよう、あるいは５０μＭのオウゴニンを添加して３日後に細胞を回収した。タンパク質の調製については、細胞溶解用の緩衝液（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％  ＮＰ−４０、１％  ｓｏｄｉｕｍｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅおよびプロテアーゼ阻害剤）により溶解し、タンパク質の抽出を行った。一定のタンパク質量をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、セミドライブロッター（Ｂｉｏ−Ｒａｄ社製）を用いてＰｏｌｙｖｉｎｙｌｉｄｅｎｅ  ｄｉｆｌｕｏｒｉｄｅ膜（ＰＶＤＦ膜）にそのタンパク質を転写した。その後、ブロッキング溶液（５％スキムミルクをリン酸緩衝液で溶解したもの）中で１時間インキュベートした。ＰＶＤＦ膜は抗Ｍｌｐｈ抗体と共に４℃で一晩インキュベートさせた。ＰＶＤＦ膜を洗浄後、ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＨＲＰ）結合２次抗体に１時間曝露し、最後に、Ｗａｋｏ社製イムノスターで検出を行った。オウゴン抽出物及びオウゴニンを添加していない対照試料と比較し、検出されたバンドの濃さから、各タンパク質量の変化を決定した。
【００２９】
オウゴン抽出物及びオウゴニンで処理したそれぞれの細胞から検出されたＭｌｐｈタンパク質量を、それぞれのバンドの濃さから比較した。その結果を図２に示す。図２中、（ａ）はオウゴン抽出物を添加した時のＭｌｐｈタンパク質、（ｂ）はオウゴニンを添加した時のＭｌｐｈタンパク質の結果である。図２より、対照試料と比較してＭｌｐｈタンパク質のバンドが薄くなったことから、オウゴン抽出物及びオウゴニンで処理した試料はＭｌｐｈタンパク質量が減少したと考えられる。なお、バイカリンについても同様の評価を行ったが、オウゴン抽出物及びオウゴニンで処理した試料ほどバンドの濃さは薄くならなかった（図示せず）。
【００３０】
（評価方法２：メラノソーム輸送阻害能についての評価）
マウスＢ１６メラノーマ細胞を用い、１０％ＦＢＳを含むＤ−ＭＥＭ培地にて培養した。実施例１のオウゴン抽出物を最終濃度が０．２３％となるよう、あるいはオウゴニンを最終濃度が５０μＭとなるように添加し、３日後の細胞の様子を顕微鏡により観察した。
【００３１】
各顕微鏡観察結果を図３に示す。図３中、（ａ）は無添加のメラノサイト、（ｂ）はオウゴン抽出物を添加したメラノサイト、（ｃ）はオウゴニンを添加したメラノサイトの顕微鏡観察写真である。図３（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の各写真において、黒い斑点として観察されるのがメラノソームである。図３（ａ）に示される無添加のメラノサイト内では、核周辺で合成されたメラノソームが末端部まで一様に分布している様子が観察された。一方、図３（ｂ）及び（ｃ）に示されるオウゴン抽出物及びオウゴニンを添加したメラノサイト内では、合成されたメラノソームは核近傍に凝集し、偏局在している様子が観察された。すなわち、オウゴン抽出物及びオウゴニンの添加により、メラノソーム輸送が阻害されていると考えられる。以上のことから、オウゴン抽出物及びオウゴニンのメラノソーム輸送阻害能が確認された。
【００３２】
（製剤例1：化粧水）
下記の成分（３）、（４）及び（８）〜（１１）を混合溶解した（混合物Ａ）。次いで、下記の成分（１）、（２）、（５）〜（７）及び（１２）を混合溶解した（混合物Ｂ）。得られた混合物Ａと混合物Ｂを均一に混合し、化粧水を得た。
（組成）                                                    （％）
（１）グリセリン                                            ７．０
（２）１，３−ブチレングリコール                            ６．５
（３）ポリオキシエチレンソルビタン
モノラウリン酸エステル（２０Ｅ．Ｏ．）              １．２
（４）エタノール                                            ５．０
（５）乳酸                                                  ０．０５
（６）乳酸ナトリウム                                        ０．１
（７）コラーゲン                                            １．０
（８）オウゴン抽出物＊                                      ０．５
（９）アスコルビン酸２−グルコシド                          ０．５
（１０）防腐剤                                              ０．１
（１１）香料                                                ０．１
（１２）精製水                                                残量
＊実施例１にて得られたオウゴン抽出物（固形分換算１．５質量％、オウゴニン含量０．３％）
【００３３】
（製剤例２：乳液）
下記の成分（１０）を加熱し、７０℃で保持した（溶液Ａ）。次いで、下記の成分（１）〜（９）及び（１１）を加熱混合し、７０℃で保持した（混合物Ｂ）。得られた混合物Ｂに溶液Ａを加えて混合し、均一に乳化した（混合物Ｃ）。得られた混合物Ｃを冷却した後、下記の成分（１２）〜（１５）を加え、均一に混合して乳液を得た。
（組成）                                                    （％）
（１）ポリオキシエチレンソルビタン
モノステアレート（１０Ｅ．Ｏ．）                    １．０
（２）ポリオキシエチレンソルビット
テトラオレエート（６０Ｅ．Ｏ．）                    ０．５
（３）グリセリルモノステアレート                            １．０
（４）ステアリン酸                                          ０．５
（５）ベヘニルアルコール                                    ０．５
（６）スクワラン                                            ８．０
（７）エタノール                                            ５．０
（８）オウゴン抽出物＊                                      ０．０１
（９）アルブチン                                            １．０
（１０）精製水                                                残量
（１１）防腐剤                                              ０．１
（１２）カルボキシビニルポリマー                            ０．２
（１３）水酸化ナトリウム                                    ０．１
（１４）ヒアルロン酸                                        ０．１
（１５）香料                                                ０．１
＊実施例１にて得られたオウゴン抽出物（固形分換算１．５質量％、オウゴニン含量０．３％）
【００３４】
（製剤例３：クリーム）
下記の成分（１１）を加熱し、７０℃で保持した（溶液Ａ）。次いで、下記の成分（１）〜（８）を加熱混合し、７０℃で保持した（混合物Ｂ）。得られた混合物Ｂに溶液Ａを加えて混合し、均一に乳化した（混合物Ｃ）。得られた混合物Ｃを冷却した後、下記の成分（９）〜（１０）を加え、均一に混合してクリームを得た。
（組成）                                                    （％）
（１）流動パラフィン                                       ２３.０
（２）ワセリン                                               ７.０
（３）ベヘニルアルコール                                     １.０
（４）ステアリン酸                                           ２.０
（５）ミツロウ                                               ２.０
（６）ソルビタンモノステアレート                             １.５
（７）ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート           ２.５
（２０Ｅ.Ｏ.）
（８）防腐剤                                                 ０.１
（９）香 料                                                  ０.１５
（１０）オウゴン抽出物＊                               １０.０
（１１）精製水                                                残量
＊実施例１にて得られたオウゴン抽出物（固形分換算１．５質量％、オウゴニン含量０．３％）
【００３５】
（製剤例４：リキッドファンデーション）
下記の成分（１）〜（７）を混合溶解した（溶液Ａ）。この溶液Ａに下記の成分（１３）〜（１８）を加え、均一に混合し、７０℃で保持した（混合物Ｂ）。次いで、下記の成分（８）〜（１２）を均一に溶解し、７０℃で保持した（混合物Ｃ）。得られた混合物Ｃに混合物Ｂを添加して、均一に乳化した（混合物Ｄ）。得られた混合物Ｄを冷却した後、下記の成分（１９）及び（２０）を添加してリキッドファンデーションを得た。
（組成）                                                    （％）
（１）液状ラノリン                                          ２．０
（２）流動パラフィン                                        ５．０
（３）ステアリン酸                                          ２．０
（４）セタノール                                            １．０
（５）自己乳化型
モノステアリン酸グリセリン                          １．０
（６）パラメトキシケイ皮酸
−２−エチルヘキシル                                  ８．０
（７）防腐剤                                                ０．１
（８）グリセリン                                            ５．０
（９）トリエタノールアミン                                  １．０
（１０）カルボキシメチルセルロース                          ０．２
（１１）ベントナイト                                        ０．５
（１２）精製水                                                残量
（１３）酸化チタン                                          ６．０
（１４）微粒子酸化チタン                                    ２．０
（１５）微粒子酸化亜鉛                                      ５．０
（１６）マイカ                                              ２．０
（１７）タルク                                              ４．０
（１８）着色顔料                                            ４．０
（１９）オウゴン抽出物＊                                    ０．０１
（２０）香料                                                ０．１
＊実施例１にて得られたオウゴン抽出物（固形分換算１．５質量％、オウゴニン含量０．３％）
【００３６】
（製剤例５：日やけ止め乳液）
下記の成分（１）〜（１１）を混合分散した（分散液Ａ）。次いで、下記の成分（１２）〜（１５）を混合分散した（分散液Ｂ）。得られた分散液Ａに分散液Ｂを添加して、均一に乳化した（混合物Ｃ）。得られた混合物Ｃに下記の成分（１６）及び（１７）を添加して日やけ止め乳液を得た。
（組成）                                                    （％）
（１）ポリオキシアルキレン変性
オルガノポリシロキサン                              １．０
（２）ジメチルポリシロキサン                                ５．０
（３）オクタメチルシクロテトラシロキサン                  ２０．０
（４）イソノナン酸イソトリデシル                            ５．０
（５）パラメトキシケイ皮酸
−２−エチルヘキシル                              １０．０
（６）防腐剤                                                ０．１
（７）香料                                                  ０．１
（８）シリコーン処理微粒子酸化チタン                        ８．０
（９）シリコーン処理微粒子酸化亜鉛                          ７．０
（１０）ポリスチレン末                                      ３．０
（１１）トリメチルシロキシケイ酸                            ０．５
（１２）ジプロピレングリコール                              ３．０
（１３）エタノール                                        １０．０
（１４）精製水                                                残量
（１５）食塩                                                ０．２
（１６）オウゴン抽出物＊                                    １．０
（１７）リン酸−Ｌ−アスコルビル
マグネシウム                                      ３．０
＊実施例１にて得られたオウゴン抽出物（固形分換算１．５質量％、オウゴニン含量０．３％）
【００３７】
（実施例２：メラノソーム輸送阻害剤を含有する皮膚外用剤の評価試験）
製剤例１〜５の皮膚外用剤について、以下の方法により肌への美白効果を評価した。
（評価方法）
シミ、色素沈着に悩む被験者各１０名に、毎日朝夕２回、製剤例１〜５の皮膚外用剤を顔面に塗布してもらい、１ヶ月間連用した後に肌への効果を専門評価者により目視評価した。製剤例１〜５の各化粧料が、「シミが目立ちにくくなった」、「シミがやや目立ちにくくなった」、「シミがやや目立つ」、「シミが目立つ」のうち、いずれかの評価区分に該当するかを判定し、以下の判定基準により評価した。
（判定基準）
「シミが目立ちにくくなった」又は「シミがやや目立ちにくくなった」と評価した人が８名以上である場合には、「◎」とし、「シミが目立ちにくくなった」又は「シミがやや目立ちにくくなった」と評価した人が５〜７名以上である場合には、「○」とし、「シミが目立ちにくくなった」、「シミがやや目立ちにくくなった」と評価した人が２〜４名以上である場合には、「△」とし、「シミが目立ちにくくなった」、「シミがやや目立ちにくくなった」と評価した人が１名以下である場合には、「×」とした。
【００３８】
上記判定基準に基づき、製剤例１の化粧料は「○」、製剤例２の化粧料は「○」、製剤例３の化粧料は「◎」、製剤例４の化粧料は「○」、製剤例５の化粧料は「◎」という判定結果が得られた。この結果より、上記製剤例１〜５の化粧料は、皮膚に適用することにより、シミが目立ちにくくなり、かつ、皮膚を白くする作用がある化粧料であることが確認された。なお、これらの処方において皮膚刺激性は見られなかった。
【符号の説明】
【００３９】
Ａ  美白のボーダーライン
Ｂ  細胞生存率のボーダーライン
【図１】
2014051441.tif 000002
【図２】
2014051441.tif 000003
【図３】
2014051441.tif 000004