(57)【要約】【課題】新規の癌細胞検出用又は肝細胞検出用プローブや、該化合物を含む癌細胞又は肝細胞に薬物を送達するための薬物担体を提供すること。【解決手段】肝細胞に特異的に発現するトランスポータータンパク質であるＬＳＴ−１や、癌細胞に特異的に発現するトランスポータータンパク質であるＬＳＴ−２の新規の輸送基質を同定し、同定されたＬＳＴ−１及び／又はＬＳＴ−２の輸送基質を、癌細胞検出用又は肝細胞検出用プローブや、該化合物を含む癌細胞又は肝細胞に薬物を送達するための薬物担体として使用する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＳＴ−１及び／又はＬＳＴ−２を介して輸送される化合物を含む癌細胞検出用プローブであって、前記化合物が、以下の一般式（Ｉ）〜（IV）で表される化合物からなる群より選択される１種又は２種以上である、癌細胞検出用プローブ。
一般式（Ｉ）；
【化１】
2014051463.tif 000061
［式中、Ｒ１、Ｒ２は、同一又は相異なってもよく、水酸基、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のアルコキシ基で置換されたフェニル基、若しくはナフチル基を表し、Ｗは、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基、アルカリ金属原子、若しくは４級アンモニウムカチオンを表す。］
一般式（II）；
【化２】
2014051463.tif 000062
［式中、Ｒ１は、前記と同じ意味を表し、Ｒ３、Ｒ４は、同一又は相異なってもよく、炭素数１〜３のアルキル基を表し、若しくは、Ｒ３及びＲ４は、窒素原子と一緒になって形成された５〜７員環の含窒素複素環を形成していてもよい。］ 
一般式（III）；
【化３】
2014051463.tif 000063
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、前記と同じ意味を表す。］
一般式（IV）；
【化４】
2014051463.tif 000064
［式中、Ｗ、Ｒ３は、前記と同じ意味を表し、Ｒ５は、窒素原子が結合手を持つ５員環の含窒素芳香族環を表す。］ 
【請求項２】
化合物が、以下の一般式（Ｉ’）で表される２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸である、請求項１記載の癌細胞検出用プローブ。
一般式（Ｉ’）；
【化５】
2014051463.tif 000065
【請求項３】
化合物が、以下の一般式（II’）で表される７−［（４−メトキシフェニル）スルホニルアミノ］−Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシアミドである、請求項１記載の癌細胞検出用プローブ。
一般式（II’）；
【化６】
2014051463.tif 000066
【請求項４】
化合物が、以下の一般式（III’）で表される３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミドである、請求項１記載の癌細胞検出用プローブ。
一般式（III’）；
【化７】
2014051463.tif 000067
【請求項５】
化合物が、以下の一般式（IV’）で表され３−［３−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチルインドール−１−イル］プロパン酸である、請求項１記載の癌細胞検出用プローブ。
一般式（IV’）；
【化８】
2014051463.tif 000068
【請求項６】
化合物が、検出可能なマーカーで標識されている、請求項１〜５のいずれかに記載の癌細胞検出用プローブ。
【請求項７】
癌が、乳癌、胆管癌、肝癌、脳腫瘍、胃癌、大腸癌、又は膵臓癌である、請求項１〜６のいずれかに記載の癌細胞検出用プローブ。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の癌細胞検出用プローブを備える、癌細胞検出用キット。
【請求項９】
ＬＳＴ−１及び／又はＬＳＴ−２を介して輸送される化合物を含む、癌細胞に薬物を送達するための薬物担体であって、前記化合物が、以下の一般式（Ｉ）〜（IV）で表される化合物からなる群より選択される１種又は２種以上である、薬物担体。
一般式（Ｉ）；
【化９】
2014051463.tif 000069
［式中、Ｒ１、Ｒ２は、同一又は相異なってもよく、水酸基、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のアルコキシ基で置換されたフェニル基、若しくはナフチル基を表し、Ｗは、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基、アルカリ金属原子、若しくは４級アンモニウムカチオンを表す。］ 
一般式（II）；
【化１０】
2014051463.tif 000070
［式中、Ｒ１は、前記と同じ意味を表し、Ｒ３、Ｒ４は、同一又は相異なってもよく、炭素数１〜３のアルキル基を表し、若しくは、Ｒ３及びＲ４は、窒素原子と一緒になって形成された５〜７員環の含窒素複素環を形成していてもよい。］ 
一般式（III）；
【化１１】
2014051463.tif 000071
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、前記と同じ意味を表す。］ 
一般式（IV）；
【化１２】
2014051463.tif 000072
［式中、Ｗ、Ｒ３は、前記と同じ意味を表し、Ｒ５は、窒素原子が結合手を持つ５員環の含窒素芳香族環を表す。］ 
【請求項１０】
化合物が、以下の一般式（Ｉ’）で表される２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸である、請求項９記載の薬物担体。
一般式（Ｉ’）；
【化１３】
2014051463.tif 000073
【請求項１１】
化合物が、以下の一般式（II’）で表される７−［（４−メトキシフェニル）スルホニルアミノ］−Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシアミドである、請求項９記載の薬物担体。
一般式（II’）；
【化１４】
2014051463.tif 000074
【請求項１２】
化合物が、以下の一般式（III’）で表される３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミドである、請求項９記載の薬物担体。
一般式（III’）；
【化１５】
2014051463.tif 000075
【請求項１３】
化合物が、以下の一般式（IV’）で表され３−［３−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチルインドール−１−イル］プロパン酸である、請求項９記載の薬物担体。
一般式（IV’）；
【化１６】
2014051463.tif 000076
【請求項１４】
薬物が、抗癌剤である、請求項９〜１３のいずれかに記載の薬物担体。
【請求項１５】
癌が、乳癌、胆管癌、肝癌、脳腫瘍、胃癌、大腸癌、又は膵臓癌である、請求項９〜１４のいずれかに記載の薬物担体。
【請求項１６】
請求項９〜１５のいずれかに記載の薬物担体と抗癌剤とを含む、癌治療剤。
【請求項１７】
ＬＳＴ−１及び／又はＬＳＴ−２を介して輸送される化合物を含む肝細胞検出用プローブであって、前記化合物が、以下の一般式（Ｉ）〜（IV）で表される化合物からなる群より選択される１種又は２種以上である、肝細胞検出用プローブ。
一般式（Ｉ）；
【化１７】
2014051463.tif 000077
［式中、Ｒ１、Ｒ２は、同一又は相異なってもよく、水酸基、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のアルコキシ基で置換されたフェニル基、若しくはナフチル基を表し、Ｗは、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基、アルカリ金属原子、若しくは４級アンモニウムカチオンを表す。］
一般式（II）；
【化１８】
2014051463.tif 000078
［式中、Ｒ１は、前記と同じ意味を表し、Ｒ３、Ｒ４は、同一又は相異なってもよく、炭素数１〜３のアルキル基を表し、若しくは、Ｒ３及びＲ４は、窒素原子と一緒になって形成された５〜７員環の含窒素複素環を形成していてもよい。］ 
一般式（III）；
【化１９】
2014051463.tif 000079
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、前記と同じ意味を表す。］ 
一般式（IV）；
【化２０】
2014051463.tif 000080
［式中、Ｗ、Ｒ３は、前記と同じ意味を表し、Ｒ５は、窒素原子が結合手を持つ５員環の含窒素芳香族環を表す。］ 
【請求項１８】
化合物が、以下の一般式（Ｉ’）で表される２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸である、請求項１７記載の肝細胞検出用プローブ。
一般式（Ｉ’）；
【化２１】
2014051463.tif 000081
【請求項１９】
化合物が、以下の一般式（II’）で表される７−［（４−メトキシフェニル）スルホニルアミノ］−Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシアミドである、請求項１７記載の肝細胞検出用プローブ。
一般式（II’）；
【化２２】
2014051463.tif 000082
【請求項２０】
化合物が、以下の一般式（III’）で表される３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミドである、請求項１７記載の肝細胞検出用プローブ。
一般式（III’）；
【化２３】
2014051463.tif 000083
【請求項２１】
化合物が、以下の一般式（IV’）で表され３−［３−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチルインドール−１−イル］プロパン酸である、請求項１７記載の肝細胞検出用プローブ。
一般式（IV’）；
【化２４】
2014051463.tif 000084
【請求項２２】
化合物が、検出可能なマーカーで標識されている、請求項１７〜２１のいずれかに記載の肝細胞検出用プローブ。
【請求項２３】
請求項１７〜２２のいずれかに記載の肝細胞検出用プローブを備える、肝細胞検出用キット。
【請求項２４】
ＬＳＴ−１及び／又はＬＳＴ−２を介して輸送される化合物を含む、肝細胞に薬物を送達するための薬物担体であって、前記化合物が、以下の一般式（Ｉ）〜（IV）で表される化合物からなる群より選択される１種又は２種以上である、薬物担体。
一般式（Ｉ）；
【化２５】
2014051463.tif 000085
［式中、Ｒ１、Ｒ２は、同一又は相異なってもよく、水酸基、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のアルコキシ基で置換されたフェニル基、若しくはナフチル基を表し、Ｗは、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基、アルカリ金属原子、若しくは４級アンモニウムカチオンを表す。］ 
一般式（II）；
【化２６】
2014051463.tif 000086
［式中、Ｒ１は、前記と同じ意味を表し、Ｒ３、Ｒ４は、同一又は相異なってもよく、炭素数１〜３のアルキル基を表し、若しくは、Ｒ３及びＲ４は、窒素原子と一緒になって形成された５〜７員環の含窒素複素環を形成していてもよい。］
一般式（III）；
【化２７】
2014051463.tif 000087
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、前記と同じ意味を表す。］
一般式（IV）；
【化２８】
2014051463.tif 000088
［式中、Ｗ、Ｒ３は、前記と同じ意味を表し、Ｒ５は、窒素原子が結合手を持つ５員環の含窒素芳香族環を表す。］
【請求項２５】
化合物が、以下の一般式（Ｉ’）で表される２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸である、請求項２４記載の薬物担体。
一般式（Ｉ’）；
【化２９】
2014051463.tif 000089
【請求項２６】
化合物が、以下の一般式（II’）で表される７−［（４−メトキシフェニル）スルホニルアミノ］−Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシアミドである、請求項２４記載の薬物担体。
一般式（II’）；
【化３０】
2014051463.tif 000090
【請求項２７】
化合物が、以下の一般式（III’）で表される３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミドである、請求項２４記載の薬物担体。
一般式（III’）；
【化３１】
2014051463.tif 000091
【請求項２８】
化合物が、以下の一般式（IV’）で表され３−［３−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチルインドール−１−イル］プロパン酸である、請求項２４記載の薬物担体。
一般式（IV’）；
【化３２】
2014051463.tif 000092
【請求項２９】
薬物が、肝臓疾患治療用薬物である、請求項２４〜２８のいずれかに記載の薬物担体。
【請求項３０】
肝臓疾患が、ウィルス性急性肝炎、ウィルス性劇症肝炎、ウィルス性慢性肝炎、ウィルス性肝硬変、アルコール性脂肪肝、アルコール性肝炎、又はアルコール性肝硬変である、請求項２４〜２９のいずれかに記載の薬物担体。
【請求項３１】
請求項２４〜３０のいずれかに記載の薬物担体と、肝臓疾患治療用薬物とを含む、肝臓疾患治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＬＳＴ−１やＬＳＴ−２を介して輸送される化合物を含む癌細胞検出用又は肝細胞検出用プローブや、かかる化合物を含む癌細胞又は肝細胞に薬物を送達するための薬物担体等に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＬＳＴ（liver-specific organic anion transporter）−１、及びＬＳＴ−２は、有機アニオントランスポーターファミリーに含まれるタンパク質であり、内因性や外因性の様々な有機アニオンの輸送に関与することが知られている。ＬＳＴ−１とＬＳＴ−２は、ともに正常な生体内においては肝臓に特異的に発現しているが、ＬＳＴ−２の発現量は、ＬＳＴ−１と比較してわずかであり、ＬＳＴ−１の数十分の１程度であることが明らかにされている。また、ＬＳＴ−２は、大腸癌、肝癌、胆管、胆のう癌、膵癌、胃癌などの様々な消化器癌組織において、高発現していることが知られている（特許文献１及び２、非特許文献１）。
【０００３】
ＬＳＴ−１とＬＳＴ−２の共通の輸送基質としては、胆汁酸等が知られている。また、ＬＳＴ−２は、抗がん剤であるメトトレキサート（ＭＴＸ）の輸送に深く関与することが明らかにされており、ＬＳＴ−２発現細胞ではＭＯＣＫ細胞に比べて有意にＭＴＸの取り込みが増加し、さらに、ＭＴＸに対する感受性も有意に増加することが報告されている（特許文献１及び２、非特許文献１）。
【０００４】
上述のように、ＬＳＴ−１は正常な肝臓に局在しており、また、ＬＳＴ−２は癌細胞に局在していることから、ＬＳＴ−１やＬＳＴ−２の輸送基質は、肝細胞又は癌細胞を検出するためのプローブや、様々な薬物を肝細胞又は癌細胞に送達するための薬物担体などに有効に利用できると考えられる。しかし、ＬＳＴ−１やＬＳＴ−２の基質については不明な点が多く残されており、プローブや薬物担体として使用可能なＬＳＴ−１やＬＳＴ−２の輸送基質はこれまでに明らかにされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００４−６７５６３
【特許文献２】特開２００５−２８７３５３
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Takaaki, Abe, et al., Gastroenterology, (2001), 120, 1689-1699
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
発明の課題は、ＬＳＴ−１やＬＳＴ−２によって輸送される化合物を同定し、該化合物を利用した癌細胞検出用又は肝細胞検出用プローブや、該化合物を含む癌細胞又は肝細胞に薬物を送達するための薬物担体を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、ＬＳＴ−１やＬＳＴ−２によって輸送される化合物を同定するために、約３００００種のアニオン性化合物を含む化合物ライブラリーを用いてスクリーニングを行った。具体的には、本発明者はまず、化合物ライブラリーの中から化合物の構造に基づいて５０９７種の化合物を選択し、さらに、ＬＳＴ−１又はＬＳＴ−２発現細胞を用いた胆汁酸取込み阻害試験を行うことによって、５０９７種の化合物の中からＬＳＴ−１やＬＳＴ−２によって輸送される化合物の候補となる１６種の化合物を同定した。この１６種の化合物による胆汁酸取込み阻害作用についてさらに詳細な実験を行い、最終的に、ＬＳＴ−０２（２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸；ＣＩＤ６６１２３５８）、ＬＳＴ−０４（７−［（４−メトキシフェニル）スルホニルアミノ］−Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシアミド；ＣＩＤ４４１５０６９）、ＬＳＴ−０１（３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミド；ＣＩＤ３８７７１７９）、ＬＳＴ−０３（３−［３−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチルインドール−１−イル］プロパン酸；ＣＩＤ５３５５５）の４種の化合物が、ＬＳＴ−１やＬＳＴ−２によって輸送されることを明らかにした。
続いて、本発明者は、上記４種の化合物について、細胞毒性試験、細胞取り込み試験等を行い、これらの化合物がいずれも細胞毒性の低い化合物であることを確認し、さらに、ＬＳＴ−０２がＬＳＴ−２に特異的な輸送基質であること、ＬＳＴ−０１がＬＳＴ−１に特異的な輸送基質であること、ＬＳＴ−０３がＬＳＴ−１及びＬＳＴ−２の両方の輸送基質であることを見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、（１）ＬＳＴ−１及び／又はＬＳＴ−２を介して輸送される化合物を含む癌細胞検出用プローブであって、前記化合物が、以下の一般式（Ｉ）〜（IV）で表される化合物からなる群より選択される１種又は２種以上である、癌細胞検出用プローブや、
一般式（Ｉ）；
【００１０】
【化１】
2014051463.tif 000002
【００１１】
［式中、Ｒ１、Ｒ２は、同一又は相異なってもよく、水酸基、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のアルコキシ基で置換されたフェニル基、若しくはナフチル基を表し、Ｗは、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基、アルカリ金属原子、若しくは４級アンモニウムカチオンを表す。］
一般式（II）；
【００１２】
【化２】
2014051463.tif 000003
【００１３】
［式中、Ｒ１は、前記と同じ意味を表し、Ｒ３、Ｒ４は、同一又は相異なってもよく、炭素数１〜３のアルキル基を表し、若しくは、Ｒ３及びＲ４は、窒素原子と一緒になって形成された５〜７員環の含窒素複素環を形成していてもよい。］
一般式（III）；
【００１４】
【化３】
2014051463.tif 000004
【００１５】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、前記と同じ意味を表す。］ 
一般式（IV）；
【００１６】
【化４】
2014051463.tif 000005
【００１７】
［式中、Ｗ、Ｒ３は、前記と同じ意味を表し、Ｒ５は、窒素原子が結合手を持つ５員環の含窒素芳香族環を表す。］
（２）化合物が、以下の一般式（Ｉ’）で表される２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸である、上記（１）記載の癌細胞検出用プローブや、
一般式（Ｉ’）；
【００１８】
【化５】
2014051463.tif 000006
【００１９】
（３）化合物が、以下の一般式（II’）で表される７−［（４−メトキシフェニル）スルホニルアミノ］−Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシアミドである、上記（１）記載の癌細胞検出用プローブや、
一般式（II’）；
【００２０】
【化６】
2014051463.tif 000007
【００２１】
（４）化合物が、以下の一般式（III’）で表される３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミドである、上記（１）記載の癌細胞検出用プローブや、
一般式（III’）；
【００２２】
【化７】
2014051463.tif 000008
【００２３】
（５）化合物が、以下の一般式（IV’）で表され３−［３−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチルインドール−１−イル］プロパン酸である、上記（１）記載の癌細胞検出用プローブや、
一般式（IV’）；
【００２４】
【化８】
2014051463.tif 000009
【００２５】
（６）化合物が、検出可能なマーカーで標識されている、上記（１）〜（５）のいずれかに記載の癌細胞検出用プローブや、（７）癌が、乳癌、胆管癌、肝癌、脳腫瘍、胃癌、大腸癌、又は膵臓癌である、上記（１）〜（６）のいずれかに記載の癌細胞検出用プローブや、（８）上記（１）〜（７）のいずれかに記載の癌細胞検出用プローブを備える、癌細胞検出用キットに関する。
【００２６】
また本発明は、（９）ＬＳＴ−１及び／又はＬＳＴ−２を介して輸送される化合物を含む、癌細胞に薬物を送達するための薬物担体であって、前記化合物が、以下の一般式（Ｉ）〜（IV）で表される化合物からなる群より選択される１種又は２種以上である、薬物担体や、
一般式（Ｉ）；
【００２７】
【化９】
2014051463.tif 000010
【００２８】
［式中、Ｒ１、Ｒ２は、同一又は相異なってもよく、水酸基、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のアルコキシ基で置換されたフェニル基、若しくはナフチル基を表し、Ｗは、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基、アルカリ金属原子、若しくは４級アンモニウムカチオンを表す。］ 
一般式（II）；
【００２９】
【化１０】
2014051463.tif 000011
【００３０】
［式中、Ｒ１は、前記と同じ意味を表し、Ｒ３、Ｒ４は、同一又は相異なってもよく、炭素数１〜３のアルキル基を表し、若しくは、Ｒ３及びＲ４は、窒素原子と一緒になって形成された５〜７員環の含窒素複素環を形成していてもよい。］
一般式（III）；
【００３１】
【化１１】
2014051463.tif 000012
【００３２】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、前記と同じ意味を表す。］
一般式（IV）；
【００３３】
【化１２】
2014051463.tif 000013
【００３４】
［式中、Ｗ、Ｒ３は、前記と同じ意味を表し、Ｒ５は、窒素原子が結合手を持つ５員環の含窒素芳香族環を表す。］
（１０）化合物が、以下の一般式（Ｉ’）で表される２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸である、上記（９）記載の薬物担体や、
一般式（Ｉ’）；
【００３５】
【化１３】
2014051463.tif 000014
【００３６】
（１１）化合物が、以下の一般式（II’）で表される７−［（４−メトキシフェニル）スルホニルアミノ］−Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシアミドである、上記（９）記載の薬物担体や、
一般式（II’）；
【００３７】
【化１４】
2014051463.tif 000015
【００３８】
（１２）化合物が、以下の一般式（III’）で表される３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミドである、上記（９）記載の薬物担体や、
一般式（III’）；
【００３９】
【化１５】
2014051463.tif 000016
【００４０】
（１３）化合物が、以下の一般式（IV’）で表され３−［３−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチルインドール−１−イル］プロパン酸である、上記（９）記載の薬物担体や、
一般式（IV’）；
【００４１】
【化１６】
2014051463.tif 000017
【００４２】
（１４）薬物が、抗癌剤である、上記（９）〜（１３）のいずれかに記載の薬物担体や、（１５）癌が、乳癌、胆管癌、肝癌、脳腫瘍、胃癌、大腸癌、又は膵臓癌である、上記（９）〜（１４）のいずれかに記載の薬物担体や、（１６）上記（９）〜（１５）のいずれかに記載の薬物担体と抗癌剤とを含む、癌治療剤に関する。
【００４３】
さらに本発明は、（１７）ＬＳＴ−１及び／又はＬＳＴ−２を介して輸送される化合物を含む肝細胞検出用プローブであって、前記化合物が、以下の一般式（Ｉ）〜（IV）で表される化合物からなる群より選択される１種又は２種以上である、肝細胞検出用プローブや、
一般式（Ｉ）；
【００４４】
【化１７】
2014051463.tif 000018
【００４５】
［式中、Ｒ１、Ｒ２は、同一又は相異なってもよく、水酸基、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のアルコキシ基で置換されたフェニル基、若しくはナフチル基を表し、Ｗは、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基、アルカリ金属原子、若しくは４級アンモニウムカチオンを表す。］
一般式（II）；
【００４６】
【化１８】
2014051463.tif 000019
【００４７】
［式中、Ｒ１は、前記と同じ意味を表し、Ｒ３、Ｒ４は、同一又は相異なってもよく、炭素数１〜３のアルキル基を表し、若しくは、Ｒ３及びＲ４は、窒素原子と一緒になって形成された５〜７員環の含窒素複素環を形成していてもよい。］
一般式（III）；
【００４８】
【化１９】
2014051463.tif 000020
【００４９】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、前記と同じ意味を表す。］
一般式（IV）；
【００５０】
【化２０】
2014051463.tif 000021
【００５１】
［式中、Ｗ、Ｒ３は、前記と同じ意味を表し、Ｒ５は、窒素原子が結合手を持つ５員環の含窒素芳香族環を表す。］
（１８）化合物が、以下の一般式（Ｉ’）で表される２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸である、上記（１７）記載の肝細胞検出用プローブや、
一般式（Ｉ’）；
【００５２】
【化２１】
2014051463.tif 000022
【００５３】
（１９）化合物が、以下の一般式（II’）で表される７−［（４−メトキシフェニル）スルホニルアミノ］−Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシアミドである、上記（１７）記載の肝細胞検出用プローブや、
一般式（II’）；
【００５４】
【化２２】
2014051463.tif 000023
【００５５】
（２０）化合物が、以下の一般式（III’）で表される３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミドである、上記（１７）記載の肝細胞検出用プローブや、
一般式（III’）；
【００５６】
【化２３】
2014051463.tif 000024
【００５７】
（２１）化合物が、以下の一般式（IV’）で表され３−［３−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチルインドール−１−イル］プロパン酸である、上記（１７）記載の肝細胞検出用プローブや、
一般式（IV’）；
【００５８】
【化２４】
2014051463.tif 000025
【００５９】
（２２）化合物が、検出可能なマーカーで標識されている、上記（１７）〜（２１）のいずれかに記載の肝細胞検出用プローブや、（２３）上記（１７）〜（２２）のいずれかに記載の肝細胞検出用プローブを備える、肝細胞検出用キットに関する。
【００６０】
また本発明は、（２４）ＬＳＴ−１及び／又はＬＳＴ−２を介して輸送される化合物を含む、肝細胞に薬物を送達するための薬物担体であって、前記化合物が、以下の一般式（Ｉ）〜（IV）で表される化合物からなる群より選択される１種又は２種以上である、薬物担体や、
一般式（Ｉ）；
【００６１】
【化２５】
2014051463.tif 000026
【００６２】
［式中、Ｒ１、Ｒ２は、同一又は相異なってもよく、水酸基、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のアルコキシ基で置換されたフェニル基、若しくはナフチル基を表し、Ｗは、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基、アルカリ金属原子、若しくは４級アンモニウムカチオンを表す。］
一般式（II）；
【００６３】
【化２６】
2014051463.tif 000027
【００６４】
［式中、Ｒ１は、前記と同じ意味を表し、Ｒ３、Ｒ４は、同一又は相異なってもよく、炭素数１〜３のアルキル基を表し、若しくは、Ｒ３及びＲ４は、窒素原子と一緒になって形成された５〜７員環の含窒素複素環を形成していてもよい。］
一般式（III）；
【００６５】
【化２７】
2014051463.tif 000028
【００６６】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、前記と同じ意味を表す。］
一般式（IV）；
【００６７】
【化２８】
2014051463.tif 000029
【００６８】
［式中、Ｗ、Ｒ３は、前記と同じ意味を表し、Ｒ５は、窒素原子が結合手を持つ５員環の含窒素芳香族環を表す。］
（２５）化合物が、以下の一般式（Ｉ’）で表される２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸である、上記（２４）記載の薬物担体や、
一般式（Ｉ’）；
【００６９】
【化２９】
2014051463.tif 000030
【００７０】
（２６）化合物が、以下の一般式（II’）で表される７−［（４−メトキシフェニル）スルホニルアミノ］−Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシアミドである、上記（２４）記載の薬物担体や、
一般式（II’）；
【００７１】
【化３０】
2014051463.tif 000031
【００７２】
（２７）化合物が、以下の一般式（III’）で表される３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミドである、上記（２４）記載の薬物担体や、
一般式（III’）；
【００７３】
【化３１】
2014051463.tif 000032
【００７４】
（２８）化合物が、以下の一般式（IV’）で表され３−［３−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチルインドール−１−イル］プロパン酸である、上記（２４）記載の薬物担体や、
一般式（IV’）；
【００７５】
【化３２】
2014051463.tif 000033
【００７６】
（２９）薬物が、肝臓疾患治療用薬物である、上記（２４）〜（２８）のいずれかに記載の薬物担体や、（３０）肝臓疾患が、ウィルス性急性肝炎、ウィルス性劇症肝炎、ウィルス性慢性肝炎、ウィルス性肝硬変、アルコール性脂肪肝、アルコール性肝炎、又はアルコール性肝硬変である、上記（２４）〜（２９）のいずれかに記載の薬物担体や、（３１）上記（２４）〜（３０）のいずれかに記載の薬物担体と、肝臓疾患治療用薬物とを含む、肝臓疾患治療剤に関する。
【発明の効果】
【００７７】
ＬＳＴ−２に特異的な輸送基質であるＬＳＴ−０２は、癌検出用のプローブや、癌治療用の薬物担体として利用することができ、また、ＬＳＴ−１に特異的な輸送基質であるＬＳＴ−０１は、肝細胞検出用のプローブや、肝臓病治療用の薬物担体として利用することができる。本発明によれば、安全且つ効率的な癌又は肝臓疾患の診断・治療等が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】ＬＳＴ−１又はＬＳＴ−２発現細胞における、ＥＲ−０６８９３４、ＥＲ−２１５７１０−９０、ＥＲ−０４６００３（ＬＳＴ−０２）、ＥＲ−０２１１５７、ＥＲ−１９６９６７−９０、及びＥＲ−１５０３００−９０（ＬＳＴ−０１）の胆汁酸輸送阻害率を調べた結果を示す図である。
【図２】ＬＳＴ−１又はＬＳＴ−２発現細胞における、ＥＲ−８０６６６６−００、ＥＲ−２５１３８８−９０、ＥＲ−２７６９６７−９０、ＥＲ−２１２１７７−９０（ＬＳＴ−０４）、ＥＲ−３０４６６２−９０、及びＥＲ−３０５６６４−９０の胆汁酸輸送阻害率を調べた結果を示す図である。
【図３】ＬＳＴ−１又はＬＳＴ−２発現細胞における、ＥＲ−２２４７５６−９０、ＥＲ−０７０３５８（ＬＳＴ−０３）、ＥＲ−１８６３８２−９０、及びＥＲ−２５０２１８−９０の胆汁酸輸送阻害率を調べた結果を示す図である。
【図４】ＬＳＴ−１又はＬＳＴ−２発現細胞における、ＬＳＴ−０３及びＬＳＴ−０１の胆汁酸輸送阻害率を調べた結果を示す図である。図中、「ＥＲ−０７０３５８」は、ＬＳＴ−０３（３−［３−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチルインドール−１−イル］プロパン酸；ＣＩＤ５３５５５）を示し、「ＥＲ−１５０３００−９０」はＬＳＴ−０１（３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミド；ＣＩＤ３８７７１７９）を示す。
【図５】ＬＳＴ−１又はＬＳＴ−２発現細胞における、ＬＳＴ−０２及びＬＳＴ−０４の胆汁酸輸送阻害率を調べた結果を示す図である。図中、「ＥＲ−０４６００３」は、ＬＳＴ−０２（２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸；ＣＩＤ６６１２３５８）を示し、「ＥＲ−２１２１７７−９０」は、ＬＳＴ−０４（７−［（４−メトキシフェニル）スルホニルアミノ］−Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシアミド；ＣＩＤ４４１５０６９）を示す。
【図６】ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、ＬＳＴ−０１、及びＬＳＴ−０３の細胞毒性について調べた結果を示す図である。図中、「ＭＴＸ」はメトトレキセートを、「Ｅ１」はＬＳＴ−０２（２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸；ＣＩＤ６６１２３５８）を、「Ｅ２」はＬＳＴ−０４（７−［（４−メトキシフェニル）スルホニルアミノ］−Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシアミド；ＣＩＤ４４１５０６９）を、「Ｅ３」はＬＳＴ−０１（３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミド；ＣＩＤ３８７７１７９）を、「Ｅ４」はＬＳＴ−０３（３−［３−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチルインドール−１−イル］プロパン酸；ＣＩＤ５３５５５）をそれぞれ示す。また、図の縦軸は、各化合物の０．００００３μＭ添加区における生細胞数を１００としたときの、０．０００１〜１００μＭ添加区における生細胞数を示し、図の横軸は、それぞれの化合物の添加濃度を示す。
【図７】ＬＳＴ−１又はＬＳＴ−２発現細胞による、ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、ＬＳＴ−０１、及びＬＳＴ−０３の取込みついて調べた結果を示す図である。図中、「ＥＲ−０４６００３」はＬＳＴ−０２を、「ＥＲ−２１２１７７−９０」はＬＳＴ−０４を、「ＥＲ−１５０３００−９０」はＬＳＴ−０１を、「ＥＲ−０７０３５８」はＬＳＴ−０３をそれぞれ示し、また、「ＯＡＴＰ１Ｂ１」はＬＳＴ−１発現細胞を、「ＯＡＴＰ１Ｂ３」はＬＳＴ−２発現細胞をそれぞれ示す。
【図８】ＬＳＴ−１（ＯＡＴＰ１Ｂ１）発現細胞における、ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、ＬＳＴ−０１、及びＬＳＴ−０３の胆汁酸取込み阻害作用について調べた結果を示す図である。図中、「ＥＲ−０４６００３」はＬＳＴ−０２を、「ＥＲ−２１２１７７−９０」はＬＳＴ−０４を、「ＥＲ−１５０３００−９０」はＬＳＴ−０１を、「ＥＲ−０７０３５８」はＬＳＴ−０３をそれぞれ示し、また、「ＯＡＴＰ１Ｂ１−５」及び「２ｎａｉＯＡＴＰ１Ｂ３」は、同一のＬＳＴ−１遺伝子を導入した異なる細胞株をそれぞれ示す。図の縦軸は、Ｍｏｃｋ細胞におけるＣＤＣＡ−ＮＢＤの蛍光強度を１００としたときの、ＯＡＴＰ１Ｂ１−５細胞又は２ｎａｉＯＡＴＰ１Ｂ３細胞におけるＣＤＣＡ−ＮＢＤの蛍光強度を示し、図の横軸は、化合物による処理時間（分）を示す。
【図９】ＬＳＴ−２（ＯＡＴＰ１Ｂ３）発現細胞における、ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、ＬＳＴ−０１、及びＬＳＴ−０３の胆汁酸取込み阻害作用について調べた結果を示す図である。図中、「ＥＲ−０４６００３」はＬＳＴ−０２を、「ＥＲ−２１２１７７−９０」はＬＳＴ−０４を、「ＥＲ−１５０３００−９０」はＬＳＴ−０１を、「ＥＲ−０７０３５８」はＬＳＴ−０３をそれぞれ示す。図の縦軸は、Ｍｏｃｋ細胞におけるＣＤＣＡ−ＮＢＤの蛍光強度を１００としたときの、ＬＳＴ−２（ＯＡＴＰ１Ｂ３）細胞におけるＣＤＣＡ−ＮＢＤの蛍光強度を示し、図の横軸は、化合物による処理時間（分）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００７９】
本発明の癌細胞検出用プローブ（以下、かかるプローブを「癌用プローブ」と記載する場合がある）としては、以下の一般式（Ｉ）〜（IV）で表される化合物からなる群より選択される１種又は２種以上の、ＬＳＴ−１及び／又はＬＳＴ−２を介して輸送される化合物（以下、これらの化合物を「本化合物」と総称する場合がある）を含むものであれば特に制限されず、また、本発明の癌細胞に薬物を送達するための薬物担体（以下、かかる薬物担体を「癌用薬物担体」と記載する場合がある）としては、本化合物を含むものであれば特に制限されないが、上記本発明の癌用プローブ又は癌用薬物担体は、「ＬＳＴ−２を介して輸送される化合物」を含むものであることが特に好ましく、上記「ＬＳＴ−２を介して輸送される化合物」としては、具体的には、以下の一般式（Ｉ）で表されるＬＳＴ−２を介して輸送される化合物を好適に例示することができる。
【００８０】
さらに、本発明の肝細胞検出用プローブ（以下、かかるプローブを「肝用プローブ」と記載する場合がある）としては、本化合物を含むものであれば特に制限されず、また、本発明の肝細胞に薬物を送達するための薬物担体（以下、かかる薬物担体を「肝用薬物担体」と記載する場合がある）としては、本化合物を含むものであれば特に制限されないが、上記本発明の肝用プローブ又は肝用薬物担体は、「ＬＳＴ−１を介して輸送される化合物」を含むものであることが特に好ましく、上記「ＬＳＴ−１を介して輸送される化合物」としては、具体的には、以下の一般式（III）で表されるＬＳＴ−１を介して輸送される化合物を好適に例示することができる。
一般式（Ｉ）；
【００８１】
【化３３】
2014051463.tif 000034
【００８２】
［式中、Ｒ１、Ｒ２は、同一又は相異なってもよく、水酸基、炭素数１〜３のアルキル基、炭素数１〜３のアルコキシ基で置換されたフェニル基、若しくはナフチル基を表し、Ｗは、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基、アルカリ金属原子、若しくは４級アンモニウムカチオンを表す。］
一般式（II）；
【００８３】
【化３４】
2014051463.tif 000035
【００８４】
［式中、Ｒ１は、前記と同じ意味を表し、Ｒ３、Ｒ４は、同一又は相異なってもよく、炭素数１〜３のアルキル基を表し、若しくは、Ｒ３及びＲ４は、窒素原子と一緒になって形成された５〜７員環の含窒素複素環を形成していてもよい。］
一般式（III）；
【００８５】
【化３５】
2014051463.tif 000036
【００８６】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、前記と同じ意味を表す。］
一般式（IV）；
【００８７】
【化３６】
2014051463.tif 000037
【００８８】
［式中、Ｗ、Ｒ３は、前記と同じ意味を表し、Ｒ５は、窒素原子が結合手を持つ５員環の含窒素芳香族環を表す。］
【００８９】
上記「一般式（Ｉ）で表される化合物」としては、特に制限されないが、例えば、以下の一般式（Ｉ’）で表される２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸を好適に例示することができる。
一般式（Ｉ’）；
【００９０】
【化３７】
2014051463.tif 000038
【００９１】
また、上記「一般式（II）で表される化合物」としては、特に制限されないが、例えば、以下の一般式（II’）で表される７−［（４−メトキシフェニル）スルホニルアミノ］−Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシアミドを好適に例示することができる。
一般式（II’）；
【００９２】
【化３８】
2014051463.tif 000039
【００９３】
さらに、上記「一般式（III）で表される化合物」としては、特に制限されないが、例えば、以下の一般式（III’）で表される３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミドを好適に例示することができる。
一般式（III’）；
【００９４】
【化３９】
2014051463.tif 000040
【００９５】
また、上記「一般式（IV）で表される化合物」としては、特に制限されないが、例えば、以下の一般式（IV’）で表され３−［３−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチルインドール−１−イル］プロパン酸を特に好適に例示することができる。
一般式（IV’）；
【００９６】
【化４０】
2014051463.tif 000041
【００９７】
これらの化合物の合成法としては、以下の例に挙げることができるが、これらの方法に限られず、一般的に知られている合成法を用いることができる。また、以下に挙げた化合物は、シグマ−アルドリッチ社、東京化成、和光純薬、関東化学などで入手可能である。また、反応溶媒、反応温度に関して特に記載のない場合は、通常その反応に利用される溶媒、温度で反応が行われる。また、反応は、アルゴン若しくは乾燥させた窒素雰囲気下で行われる。
【００９８】
上記一般式（Ｉ’）で表される、２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸は、以下の方法により合成することができる。
２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸は、４−メチルチオフェン−２−カルボン酸を出発物質として合成することができる。まず、４−メチルチオフェン−２−カルボン酸を対応するメチルエステル１へと誘導化する。このエステル化は、メタノール中の４−メチルチオフェン−２−カルボン酸に酸触媒を作用させることで行う。この反応では酸触媒として、硫酸、トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸等の、硫酸及びその誘導体を用いることができる。メチルエステル１をＮ−ブロモスクシンイミド（以下ＮＢＳ）を作用させることで、チオフェン骨格が臭素化された２を得る。得られた２に対して、パラジウム触媒を用いたカップリング反応より、カップリング体３を得る。カップリング反応としては、Heck反応、鈴木カップリング、Stilleカップリング反応等を利用できる。再度、３に対してＮＢＳを作用させることで、４位のメチル基を臭素化した４を得る。４の臭素原子とニトリル基との求核置換反応を行うことで、ニトリル置換体５を得る。このとき用いることのできる求核剤としては、シアン化リチウム、シアン化ナトリウム、シアン化カリウム等を用いることができる。反応性を増すために、溶媒は非プロトン性の極性溶媒を用いることが好ましいが、これに限られない。このニトリル置換体５のメチルエステル部分を塩基条件で加水分解し、カルボン酸部位をもつ６を得る。ここで塩基としては、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化セシウムなどを用いることができる。カルボン酸６とフェニルアミンとをアミド化することで、アミド７を得る。アミド化剤としては、カルボジイミド系の脱水剤やヒドロキシトリアゾール系の脱水剤を用いると良い。７のニトリル部位を無水メタノール中、塩化水素を作用させることでメチルエステルへと変換し、得られたメチルエステル体８を加水分解することで、目的の２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸の合成を達成する。ここで用いられる加水分解反応としては、上記に示した塩基条件での加水分解反応を用いることができる。
【００９９】
【化４１】
2014051463.tif 000042
【０１００】
上記一般式（II’）で表される、７−［（４−メトキシフェニル）スルホニルアミノ］−Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシアミドは、以下の方法により合成することができる。
７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸と２−モルホリノエチルアミンとをアミド化することで９を得る。９のニトロ基をアミノ基へと還元した１０と４−メトキシベンゼンスルホニルクロリドと反応させ、スルホンアミドとすることで７−［（４−メトキシフェニル）スルホニルアミノ］−Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシアミドを合成することができる。
ニトロ基の還元条件としては、水素雰囲気下、パラジウム／炭素を用いることで還元を行うことができる。アミド化の条件としては上述の条件を用いることができる。また、スルホンアミドは対応するスルホニルクロリドとアミンとを塩基条件下で混合することで容易に合成でき、このとき塩基としては、トリエチルアミン、トリブチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基）等のトリアルキルアミンを用いることができる。
【０１０１】
【化４２】
2014051463.tif 000043
【０１０２】
上記一般式（III’）で表される、３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミドは、以下の方法により合成することができる。
４−アミノ−３-メチル安息香酸メチルをジアゾニウム塩１１に変換し、このジアゾニウム塩に二酸化硫黄を作用させることで対応するスルホン酸塩化物１２を得る。ジアゾニウム塩への変換方法としてはGriess法を用いることができ、ジアゾニウム塩からスルホン酸塩化物を得るにはSandmeyer反応を用いることができる。スルホン酸塩化物１２とフェニルアミンとを硫酸アミド化とすることで１３を得る。アミド化の条件としては、塩基条件下１２とフェニルアミンとを反応させればよく、ここで用いられる塩基としては、トリエチルアミン、トリブチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ヒューニッヒ塩基）等のトリアルキルアミン及びピリジン及びその誘導体等を用いることが出来る。硫酸アミド１３のメチルエステル部位を加水分解することで、カルボン酸１４を得ることができ、これをアミド化することで３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミドを合成することができる。加水分解、アミド化の条件としては上述の条件を用いることができる。
【０１０３】
【化４３】
2014051463.tif 000044
【０１０４】
上記一般式（IV’）で表される、３−［３−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチルインドール−１−イル］プロパン酸は、以下の方法により合成することができる。
２−メチルインドール−３−カルボン酸エチルエステルを還元することで、アルコール体１５を得る。このとき還元剤と溶媒の組み合わせとしては、リチウムアルミニウムヒドリド／ＴＨＦ、ジイソブチルアルミニウムヒドリド／ジクロロメタン等が用いられる。１５に対して、トリフェニルホスフィン存在下でＮＢＳを作用させることで、水酸基を臭素へ置換し１６を合成する。１６に対して、塩基存在下、塩化ｔ−ブトキシカルボニルを反応させることで、インドールの窒素を保護した後に、保護体１７の臭素とイミダゾールを置換することで、１８を得る。求核置換反応は、ＴＨＦ若しくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中でイミダゾールの窒素上の水素原子を水素化ナトリウムを用いてナトリウムと置換した後に、１７と反応させることで目的の置換体１８を得る。続いて、インドール骨格の窒素上の保護基を塩酸ジオキサン溶液（無水）を用いて除去し１９とする。３−ブロモプロピオン酸から合成した３−ブロモプロピオン酸ｔ−ブチルエステルと１９との置換反応を、先の１７とイミダゾールとの置換反応と同様に行い２０を合成した後に、エステル部分のｔ−ブチル基を塩酸ジオキサン溶液（無水）を用いて除去することで、目的の３−［３−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチルインドール−１−イル］プロパン酸を合成することができる。
【０１０５】
【化４４】
2014051463.tif 000045
【０１０６】
上記本化合物の中でも、上記一般式（Ｉ’）で表される２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸は、「ＬＳＴ−２を介して輸送される化合物」として、本発明の癌用プローブ又は癌用薬物担体に特に好適に使用することができる。後述の実施例に記載の実験結果により、上記一般式（Ｉ’）で表される２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸は、ＬＳＴ−２により輸送され、且つ、ＬＳＴ−１により輸送されない化合物であること、また、その細胞毒性は極めて低いことが示されている。このような結果は、上記一般式（Ｉ’）で表される２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸が、細胞毒性の少ない、ＬＳＴ−２に特異的な輸送基質として利用できることを明確に示唆するものである。また、乳癌においては、ＬＳＴ−２がエストロン硫酸を輸送して癌の発育に関与していることが知られていることから、上記一般式（Ｉ’）で表される２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸は、それ自体を抗癌剤として利用できる可能性がある。
【０１０７】
また、上記本化合物の中でも、上記一般式（III’）で表される３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミドは、「ＬＳＴ−１を介して輸送される化合物」として、本発明の肝用プローブ又は肝用薬物担体に特に好適に使用することができる。後述の実施例に記載の実験結果により、上記一般式（III’）で表される３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミドは、ＬＳＴ−１により輸送され、且つ、ＬＳＴ−２により輸送されない化合物であること、また、その細胞毒性は極めて低いことが示されている。このような結果は、上記一般式（III’）で表される３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミドは、細胞毒性の少ない、ＬＳＴ−１に特異的な輸送基質として利用できることを明確に示唆するものである。また、上記一般式（III’）で表される３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミドは、肝臓の残存機能を測るプローブとしても利用できる可能性がある。
【０１０８】
上記本発明の癌用プローブ又は肝用プローブは、検出可能なマーカーで標識された本化合物を含むものであってもよく、上記検出可能なマーカーとしては、従来知られている化合物標識用のマーカーであれば特に制限されるものではないが、例えば、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ、６２Ｃｕ、６８Ｇａ、８２Ｒｂ、３Ｈ、１４Ｃ、１２５Ｉ等の放射性同位体や、ダンシルクロライド、テトラメチルローダミンイソチオシアネート等の蛍光物質や、ビオチン、ジゴキシゲニンのような生物学的に関連する結合構造や、生物発光化合物や、化学発光化合物や、金属キレート等を具体的に挙げることができる。中でも、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ、６２Ｃｕ、６８Ｇａ、８２Ｒｂ等の放射性同位体で標識された本化合物は、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）用の癌用プローブ又は肝用プローブとして特に好適に使用することができる。また、上記本発明の癌用プローブ又は肝用プローブは、インビボ及びインビトロのどちらにおいても使用することができる。
【０１０９】
上記本発明の癌用プローブは、ＬＳＴ−１又はＬＳＴ−２を発現する癌細胞であればどのような癌細胞の検出においても使用することができるが、中でも、乳癌、胆管癌、肝癌、脳腫瘍、胃癌、大腸癌、膵臓癌等のＬＳＴ−２を高発現する癌細胞の検出に使用することが特に好ましい。
【０１１０】
本発明の癌細胞検出用キット（以下、かかるキットを「癌用キット」と記載する場合がある）は、上記本発明の癌用プローブを備えたものであれば特に制限されないが、上記検出可能なマーカーで標識された本化合物を含む癌用プローブを備えたものであることが好ましく、また、本発明の肝細胞検出用キット（以下、かかるキットを「肝用キット」と記載する場合がある）は、上記本発明の肝用プローブを備えるものであれば特に制限されないが、上記検出可能なマーカーで標識された本化合物を含む肝用プローブを備えたものであることが好ましい。また、本発明の癌用キット又は肝用キットは、試料を調製するための緩衝液等や、上記検出可能なマーカーを検出するための、基質、発色剤、蛍光剤、発光剤等をさらに含むものであってもよい。
【０１１１】
上記本発明の癌用薬物担体によって送達される薬物は抗癌剤であることが好ましく、上記抗癌剤としては特に制限されないが、具体的には、例えば、メトトレキサート、ミトキサントロン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビスアントレン、エトポシド、ゲフィチニブ、イマチニブ、イリノテカン、トポテカン、ＳＮ−３８、フラボピリドール、ＣＩ１０３３、タモキシフェン等を好適に挙げることができる。また、本発明の癌用薬物担体は、ＬＳＴ−１又はＬＳＴ−２を発現する癌細胞であればどのような癌細胞であっても薬物を送達することができるが、中でも、乳癌、胆管癌、肝癌、脳腫瘍、胃癌、大腸癌、膵臓癌等のＬＳＴ−２を高発現する癌細胞に薬物を送達するために使用することが特に好ましい。
【０１１２】
本発明の癌治療剤は、上記本発明の癌用薬物担体と、上記抗癌剤とを含むものであれば特に制限されないが、必要に応じて、薬理学的に許容し得る担体、賦形剤、希釈剤、添加剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、潤滑剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶化剤、溶剤、ゲル化剤、栄養剤等をさらに添加することができ、具体的には、水、生理食塩水、動物性脂肪及び油、植物油、乳糖、デンプン、ゼラチン、結晶性セルロース、ガム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、グリセリンを例示することができる。
【０１１３】
上記本発明の肝用薬物担体によって送達される薬物は、肝臓疾患治療用薬物であれば特に制限されないが、具体的には、例えば、ラミブジン、アデフォビル、エンテカビル等の抗ウィルス薬や、プレドニゾロン等の副腎皮質ステロイドホルモンや、インターフェロン等を好適に挙げることができ、また、上記肝臓疾患としては、特に制限されないが、ウィルス性急性肝炎、ウィルス性劇症肝炎、ウィルス性慢性肝炎、ウィルス性肝硬変、アルコール性脂肪肝、アルコール性肝炎、アルコール性肝硬変等を好適に例示することができる。
【０１１４】
本発明の肝臓疾患治療剤は、上記本発明の肝用薬物担体と、上記肝臓疾患治療用薬物とを含むものであれば特に制限されるものではなく、必要に応じて、薬理学的に許容し得る担体、賦形剤、希釈剤、添加剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、潤滑剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶化剤、溶剤、ゲル化剤、栄養剤等をさらに添加することができ、具体的には、水、生理食塩水、動物性脂肪及び油、植物油、乳糖、デンプン、ゼラチン、結晶性セルロース、ガム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、グリセリンを例示することができる。
【０１１５】
また、本発明の他の態様としては、上記本発明の癌治療剤を、癌の治療を必要とする患者に投与することにより、癌を治療する方法や、上記本発明の肝臓疾患治療剤を、肝臓疾患の治療を必要とする患者に投与することにより、肝臓疾患を治療する方法や、癌治療剤として使用のための本化合物や、肝臓疾患治療剤として使用のための本化合物や、癌治療剤を製造するための本化合物及び抗癌剤の使用や、肝臓疾患治療剤を製造のための本化合物及び肝臓疾患治療用薬物の使用を挙げることができる。
【０１１６】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【０１１７】
［一次スクリーニング］
約３００００種のアニオン性化合物を含む化合物ライブラリー（エーザイ社製）から、化合物の構造に基づいて５０９７種の化合物を選択し、これらの化合物のうち、ＬＳＴ−１及び／又はＬＳＴ−２により基質として認識される化合物をスクリーニングした。具体的には、ヒト肝癌由来細胞株ＨｅｐＧ２を４ｘ１０４細胞／ウェル(９０μＬ)で、ｐｏｌｙＤ−ｌｙｓｉｎｅコートプレート（９６ウェル）に播種して２４時間培養し、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるＬＳＴ−１（ＮＣＢＩタンパク質アクセッション番号：ＮＰ＿００６４３７．３）を強制発現させるためのアデノウイルスベクター（以下、「ＬＳＴ−１発現ベクター」と記載する場合がある）、又は、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるＬＳＴ−２（ＮＣＢＩタンパク質アクセッション番号：ＮＰ＿０６２８１８．１）を強制発現させるためのアデノウイルスベクター（以下、「ＬＳＴ−２発現ベクター」と記載する場合がある）を１０μＬ（ＬＳＴ−１発現ベクター：２５０ｍｏｉ、ＬＳＴ−２発現ベクター：４０ｍｏｉ）を添加した。さらに２４時間培養した後に、培地を除去してＫＨバッファーで1回洗浄し、８０μＬのＫＨバッファーを添加して３７℃で１５分間インキュベートした。このようにして作製したＬＳＴ−１又はＬＳＴ−２過剰発現細胞に、上記５０９７種の化合物（５０倍希釈化合物）と、３０μＭフルオレセイン標識胆汁酸とを１０μＬずつ添加し、３７℃で２０分間インキュベートした。氷冷ＫＢバッファー（ＢＳＡ入り）で反応を止めて、さらに氷冷ＫＨバッファーで洗浄した後に、１００μＬのＬｙｓｉｓバッファーで培養細胞を処理し、蛍光強度を測定した。
【０１１８】
化合物とフルオレセイン標識胆汁酸とを添加したときのＬＳＴ−１過剰発現細胞の蛍光強度が、フルオレセイン標識胆汁酸のみを添加したときのＬＳＴ−１過剰発現細胞による蛍光強度と比較して５０％以上である場合、該化合物はＬＳＴ−１による胆汁酸輸送を５０％以上阻害しない化合物であると考えられる。また、化合物とフルオレセイン標識胆汁酸とを添加したときのＬＳＴ−２過剰発現細胞の蛍光強度が、フルオレセイン標識胆汁酸のみを添加したときのＬＳＴ−２過剰発現細胞による蛍光強度と比較して５０％以下のである場合、該化合物はＬＳＴ−２による胆汁酸輸送を５０％以上阻害する化合物であると考えられる。一次スクリーニングの結果、実験に用いた５０９７種の化合物のうち、２６１種の化合物が、ＬＳＴ−１による胆汁酸輸送を５０％以上阻害しない化合物であって、且つ、ＬＳＴ−２による胆汁酸輸送を５０％以上阻害する化合物であることが明らかとなった。これらの２６１種の化合物は、ＬＳＴ−２の特異的に認識・輸送される基質の候補物質であると考えられた。表１に一次スクリーニングの結果を示す。
【０１１９】
【表１】
2014051463.tif 000046
【実施例２】
【０１２０】
［二次スクリーニング］
一次スクリーニングにより、ＬＳＴ−２の特異的な輸送基質の候補物質として抽出された２６１種の化合物を、その構造に基づいてクラスタリングし、５１のクラスターに分類した。各クラスターにおける代表的化合物を５０種選択し（構造的に可能性の低いものはこの時点で選択しなかった）、二次スクリーニングに用いた。５０種の化合物を様々な濃度に希釈して（２倍刻みで、４種類の濃度）、実施例１と同様の方法で胆汁酸輸送阻害率を測定し、候補物質をさらに１６種の化合物に絞り込んだ。
【０１２１】
選択した１６種の化合物の胆汁酸輸送阻害率を再度測定した。測定は、実施例１と同様の方法で行ったが、９６ウェルプレートではなく、２４ウェルェルプレートに播種した細胞を用いた。図１〜３に結果を示すように、１６種の化合物のうち、ＬＳＴ−０２（２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（フェニルカルバモイル）チオフェン−３−イル］酢酸；ＣＩＤ６６１２３５８）、ＬＳＴ−０４（７−［（４−メトキシフェニル）スルホニルアミノ］−Ｎ−（２−モルホリン−４−イルエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシアミド；ＣＩＤ４４１５０６９）、ＬＳＴ−０１（３−メチル−Ｎ−（２−メチルフェニル）−４−（フェニルスルファモイル）ベンズアミド；ＣＩＤ３８７７１７９）、ＬＳＴ−０３（３−［３−（イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチルインドール−１−イル］プロパン酸；ＣＩＤ５３５５５）の４つの化合物が、特にＬＳＴ−２に対して特異的な胆汁酸輸送阻害作用を示すことが明らかとなった。
【０１２２】
以上のようにして選択された４種の化合物（ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、ＬＳＴ−０１、ＬＳＴ−０３）について、さらに再現実験を行った。実施例２と同様の実験を行った結果（ｎ＝２）、上記４種の化合物はいずれもＬＳＴ−２に対して胆汁酸輸送阻害作用を示すことが確認された（図４及び５）。特に、ＬＳＴ−０２は、ＬＳＴ−１に対しては胆汁酸輸送阻害作用を示さず、ＬＳＴ−２に対してのみ胆汁酸輸送阻害作用を示したことから、ＬＳＴ−０２はＬＳＴ−２に特異的な輸送基質である可能性が示唆された。一方、ＬＳＴ−０１は、ＬＳＴ−１に対しても濃度依存的な胆汁酸輸送阻害作用が認められたことから、ＬＳＴ−０１はＬＳＴ−１に特異的な輸送基質である可能性が示唆された。また、ＬＳＴ−０４及びＬＳＴ−０３は、ＬＳＴ−１及びＬＳＴ−２の両方に対して、弱い胆汁酸輸送阻害作用を示したことから、これらの化合物はＬＳＴ−１又はＬＳＴ−２のどちらかに特異的な輸送基質ではないことが示唆された。
【実施例３】
【０１２３】
［細胞毒性試験］
実施例２により選択された４種の化合物（ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、ＬＳＴ−０１、ＬＳＴ−０３）の細胞毒性を、生細胞数測定試薬（Cell Count Reagent SF；ナカライテスク株式会社製）を用いて測定した。
具体的には、対数増殖期にあるヒト大腸癌由来ＯＡＴＰ１Ｂ３（ＬＳＴ−２）発現細胞株（ＡＴＣＣより購入）を、５０００細胞／ウェルの濃度になるように計数し、９６ウェルマイクロタイタープレートに１００μＬ／ウェルずつ播種し、炭酸ガスインキュベーター内で２４時間前培養した。ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、ＬＳＴ−０１、ＬＳＴ−０３、メトトレキセート（ＭＴＸ）、及びＤＭＳＯを、最終濃度が０．００００３μＭ〜１００μＭとなるように各ウェルに添加し、さらに、炭酸ガスインキュベーター内で４８時培養した。培養後、Cell count regent SFを各ウェルに１０μＬずつ添加し、炭酸ガスインキュベーター内で１〜４時間呈色反応を行った。その後、マイクロプレートリーダーｍｏｄｅｌ５５０（Ｂｉｏ−Ｒａｄ社製）を用いて、４５０ｎｍ（参照波長６００ｎｍ以上）の吸光度を測定した。
【０１２４】
細胞毒性試験の結果を図６に示す。ＭＴＸはＬＳＴ−２発現細胞に取り込まれ、０．０１μＭという低い濃度でも殺細胞効果を示したが、ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、ＬＳＴ−０１、及びＬＳＴ−０３はいずれも１μＭの濃度でも殺細胞効果を示さなかった。これらの結果から、ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、ＬＳＴ−０１、及びＬＳＴ−０３は細胞毒性が少ない化合物であることが示唆された。特に、ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０１、及びＬＳＴ−０３は、１μＭでも殺細胞効果が認められなかったことから、極めて細胞毒性の少ない化合物であることが示唆された。
【実施例４】
【０１２５】
［細胞への取り込み実験］
上記４種の化合物（ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、ＬＳＴ−０１、ＬＳＴ−０３）が、ＬＳＴ−１（以下、ＬＳＴ−１を「ＯＡＴＰ１Ｂ１」と記載する場合がある）又はＬＳＴ−２（以下、ＬＳＴ−２を「ＯＡＴＰ１Ｂ３」と記載する場合がある）を発現する細胞に取り込まれるかどうかを確認した。
ＬＳＴ−１安定発現細胞、ＬＳＴ−２安定発現細胞、及びｍｏｃｋ細胞に、ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、ＬＳＴ−０１、及びＬＳＴ−０３をそれぞれ１０μＭ添加して、１０分後に細胞を回収した。回収後の細胞を、氷冷した緩衝液で３回洗浄し、１ｍＬの水に懸濁した。さらに、遠心分離して上清１００μＬを回収し、上清中に含まれるＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、ＬＳＴ−０１、及びＬＳＴ−０３を、オンラインカラムスイッチングＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法を用いて定量した。
【０１２６】
前処理カラムとして、ＭＡＹＩ−ＯＤＳ（Ｇ）カラム（１０ｍｍ  ｘ  ４．６ｍｍｉ．ｄ．，；島津製作所製）を使用し、前処理移動相として２０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ７．０）を５分間送液した。次いで、バルブを切り替えてカラムの先端に濃縮した化合物を分析カラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ｐｒｏＣ１８、１５０×２．０ｍｍｉ．ｄ．）に通導した。ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、及びＬＳＴ−０１の測定では、２０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ．７）／メタノール（７：３，ｖ／ｖ）を移動相として用いて分離し、ＬＳＴ−０３の測定では、２０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ．７）／メタノール（１：１，ｖ／ｖ）移動相として用いて分離した。また、ＨＰＬＣは、Ｎａｎｏｓｐａｃｅ  ＳＩ−２（資生堂製）を、質量分析計は、ＡＰＩ５０００（アプライドバイオシステムズ社製）を使用した。ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、及びＬＳＴ−０１は、正イオンモードにて、ＬＳＴ−０３は負イオンモードにて測定を行った。ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、ＬＳＴ−０１、及びＬＳＴ−０３はそれぞれ、ｍ／ｚ３６８．４＞ｍ／ｚ２７５．１、ｍ／ｚ４５９．５＞ｍ／ｚ２０１、ｍ／ｚ３８１．５＞ｍ／ｚ９２．８、ｍ／ｚ２８２．３＞ｍ／ｚ６６．５をモニターする選択反応モニタリングにて定量を行った。
【０１２７】
質量分析の結果を図７に示す。ＬＳＴ−０２の取込みは、ＬＳＴ−２発現細胞においてのみ認められ、ＬＳＴ−１発現細胞においては認められなかった。これに対し、ＬＳＴ−０１の取込みは、ＬＳＴ−１発現細胞においてのみ認められ、ＬＳＴ−２発現細胞においては認められなかった。また、ＬＳＴ−０３の取込みは、ＬＳＴ−１発現細胞及びＬＳＴ−２発現細胞の両方においても認められた。さらに、ＬＳＴ−０４の取込みは、ＬＳＴ−１発現細胞及びＬＳＴ−２発現細胞のいずれにおいても認められなかった。これらの結果から、ＬＳＴ−０２及びＬＳＴ−０１はそれぞれ、ＬＳＴ−２及びＬＳＴ−１の特異的な輸送基質であること、また、ＬＳＴ−０３はＬＳＴ−２及びＬＳＴ−１の両方の輸送基質であることが示唆された。
【実施例５】
【０１２８】
［胆汁酸輸送阻害試験］
ＬＳＴ−１（ＯＡＴＰ１Ｂ１）安定発現細胞、ＬＳＴ−２（ＯＡＴＰ１Ｂ３）安定発現細胞、及びｍｏｃｋ細胞を用いて、上記４種の化合物（ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、ＬＳＴ−０１、ＬＳＴ−０３）の胆汁酸輸送阻害作用を経時的に調べた。ＬＳＴ−１安定発現細胞、ＬＳＴ−２安定発現細胞、及びｍｏｃｋ細胞を、９６ウェルプレートに８ｘ１０３細胞／ウェルとなるように播種して２４時間培養した、その後、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８によって核染色を行い、次いで、蛍光ラベルした０．１μＭ胆汁酸（ＣＤＣＡ−ＮＢＤ）と、ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、ＬＳＴ−０１、又はＬＳＴ−０３を組み合わせて添加し、０、１０、及び２０分後の胆汁酸取込み量を測定した。測定は、IN CellAnalyzer 1000 Object Intensity Module（ＧＥヘルスケア社製）を使用して行った。また、ＣＤＣＡ−ＮＢＤの測定は、励起波長４６０ｎｍ、蛍光波長５３５ｎｍで行い、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８の測定は、励起波長３６０ｎｍ、蛍光波長４７５ｎｍで行った。
【０１２９】
図８及び９に、ＬＳＴ−１（ＯＡＴＰ１Ｂ１）発現細胞、及びＬＳＴ−２（ＯＡＴＰ１Ｂ３）発現細胞を用いた胆汁酸輸送阻害試験の結果をそれぞれ示す。ＬＳＴ−１発現細胞における胆汁酸の取り込みは、ＬＳＴ−０１により阻害されることが明らかとなった。一方、図９に示すように、ＬＳＴ−２発現細胞における胆汁酸の取り込みは、ＬＳＴ−０２、ＬＳＴ−０４、及びＬＳＴ−０３により阻害されることが明らかとなった。これらの化合物による胆汁酸取り込み阻害作用は、化合物の添加と同時に認められた。
【０１３０】
以上の結果から、ＬＳＴ−０２はＬＳＴ−２の特異的な輸送基質であり、また、ＬＳＴ−０１はＬＳＴ−１の特異的な輸送基質であることが示された。従って、ＬＳＴ−０２及びＬＳＴ−０１は、特定の細胞を検出するためのプローブや、特定の細胞に薬物を送達するための薬物担体として利用することが可能である。
【実施例６】
【０１３１】
［化合物の合成］
ＬＳＴ−０２及びＬＳＴ−０１をそれぞれ合成した。また、ＰＥＴ用プローブとして使用するために、ＬＳＴ−０２のデスメチル体を合成した。具体的な合成方法は、以下に示す通りである。
【０１３２】
測定機器
１Ｈ  ＮＭＲはテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を内部標準（０．００ｐｐｍ）として用い、Bruker Avance III  ４００ＭＨｚ、Bruker Fourier  ３００ＭＨｚ及び Varian  III  plus  ３００ＭＨｚを用いて測定した。
LCMSはAgilent LC/MSD 1200 Series
カラム：ＯＤＳ２０００（５０×４．６ｍｍ，５μｍ)
イオン化モード：ＥＳ（＋）または（−）
Ｔ＝３０℃; 流速＝１．５ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２１４ｎｍ
又は、
カラム：Welchrom ＸＢ−Ｃ１８（５０×４．６ｍｍ，５μｍ)
イオン化モード：ＥＳ（＋）または（−）
Ｔ＝３０℃; 流速＝１．５ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：２１４ｎｍ及び２５４ｎｍ
で測定した。
【０１３３】
［ＬＳＴ−０２及びそのデスメチル体の合成］
１．４−メチルチオフェン−２−カルボン酸メチルの合成
【０１３４】
【化４５】
2014051463.tif 000047
【０１３５】
１００ｍＬのメタノールに４−メチルチオフェン−２−カルボン酸（５ｇ，３５．２ｍｍｏｌ）と硫酸（６．９ｇ，７０．４ｍｍｏｌ）とを混ぜ、８０℃で４時間攪拌した。デカンテーションにより不溶物を取り除き、減圧下で溶液を濃縮した。濃縮後の残渣を酢酸エチルで抽出し、濃縮することで、４−メチルチオフェン−２−カルボン酸メチル（５．３ｇ）を得た。
【０１３６】
２．５−臭化−４−メチルチオフェン−２−カルボン酸メチルの合成
【０１３７】
【化４６】
2014051463.tif 000048
【０１３８】
１００ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に４−メチルチオフェン−２−カルボン酸（１ｇ，６．４１ｍｍｏｌ）とＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ；１．３６ｇ，７．６ｍｍｏｌ）とを混ぜ、６５℃で４時間攪拌した。反応を、水を添加することで終結させ、混合溶液を酢酸エチルを用いて抽出した。有機層を硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、ろ過後、濃縮して５−臭化−４−メチルチオフェン−２−カルボン酸メチル（８．８ｇ）を得た。
【０１３９】
３．５−（４−メトキシフェニル）−４−メチルチオフェン−２−カルボン酸メチルの合成
【０１４０】
【化４７】
2014051463.tif 000049
【０１４１】
８０ｍＬのジオキサンに５−臭化−４−メチルチオフェン−２−カルボン酸メチル（８．８ｇ，３７．４４ｍｍｏｌ），４−メトキシフェニルボロン酸（８．５３ｇ，５６．１７ｍｍｏｌ），炭酸セシウム（２４．４ｇ，７４．８８ｍｍｏｌ），及び二塩化パラジウム  １，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン錯体（０．４ｇ）とを混ぜ、６０℃で２時間攪拌した。反応液をろ過した後に、減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、５−（４−メトキシフェニル）−４−メチルチオフェン−２−カルボン酸メチル（７．５ｇ）を得た。
【０１４２】
４．４−ブロモメチル−５−（４−メトキシフェニル）−チオフェン−２−カルボン酸メチルの合成
【０１４３】
【化４８】
2014051463.tif 000050
【０１４４】
７５ｍＬの四塩化炭素に５−（４−メトキシフェニル）−４−メチルチオフェン−２−カルボン酸メチル（７．５ｇ，２８．６ｍｍｏｌ），ＮＢＳ（5.09ｇ，２８．６ｍｍｏｌ)，及びアゾビスイソブチロニトリル（１．５ｇ）とを混ぜ、加熱還流下で２時間攪拌した。反応液をろ過した後に、減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、４−ブロモメチル−５−（４−メトキシフェニル）−チオフェン−２−カルボン酸メチル（１１ｇ）を得た。
【０１４５】
５．４−シアノメチル−５−（４−メトキシフェニル）−チオフェン−２−カルボン酸メチルの合成
【０１４６】
【化４９】
2014051463.tif 000051
【０１４７】
１００ｍＬのＤＭＦに４−ブロモメチル−５−（４−メトキシフェニル）−チオフェン−２−カルボン酸メチル（１１ｇ，３２．２ｍｍｏｌ）とシアン化ナトリウム（１．５８ｇ，３２．０ｍｍｏｌ）とを混ぜ、室温で一晩攪拌した。 反応混合物を酢酸エチルで抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後に、ろ過し、濃縮することで、４−シアノメチル−５−（４−メトキシフェニル）−チオフェン−２−カルボン酸メチル（５．３ｇ）を得た。
【０１４８】
６．４−シアノメチル−５−（４−メトキシフェニル）−チオフェン−２−カルボン酸の合成
【０１４９】
【化５０】
2014051463.tif 000052
【０１５０】
１００ｍＬのＴＨＦ／水の混合溶媒に４−シアノメチル−５−（４−メトキシフェニル）−チオフェン−２−カルボン酸メチル（５．３ｇ，１８．４６ｍｍｏｌ)と水酸化リチウム１水和物（１．５５ｇ，３６．９ｍｍｏｌ）とを混ぜ、５０℃で２時間で攪拌した。反応混合物を濃縮し、１Ｍ塩酸を用いてｐＨを３〜５に調整した後に濾取することで、４−シアノメチル−５−（４−メトキシフェニル）−チオフェン−２−カルボン酸（４．４ｇ）を得た。
【０１５１】
７．［４−シアノメチル−５−（４−メトキシフェニル）（２−チエニル）］−Ｎ−ベンズアミドの合成
【０１５２】
【化５１】
2014051463.tif 000053
【０１５３】
５０ｍＬのＤＭＦに４−シアノメチル−５−（４−メトキシフェニル）−チオフェン−２−カルボン酸（４．４ｇ，１６．１１ｍｍｏｌ），フェニルアミン（１．５７９ｇ，１６．９２ｍｍｏｌ），２−（１Ｈ−７−アザベンゾトリアゾール−テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ：６．４ｇ，１６．９２ｍｍｏｌ），及びトリエチルアミン（３．２５ｇ，３２．２２ｍｍｏｌ）を混ぜ、室温で１時間攪拌した。水で反応を停止した後、混合物を酢酸エチルで抽出した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、［４−シアノメチル−５−（４−メトキシフェニル）（２−チエニル）］−Ｎ−ベンズアミド（４．７ｇ）を得た。
【０１５４】
８．２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（Ｎ−フェニルカルバモイル）−３−チエニル］酢酸メチル
【０１５５】
【化５２】
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【０１５６】
１００ｍＬのメタノールに［４−シアノメチル−５−（４−メトキシフェニル）（２−チエニル）］−Ｎ−ベンズアミド（５．０ｇ，１３．１２ｍｍｏｌ）を混ぜ、室温で一晩攪拌した。この混合溶液を濃縮することで２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（Ｎ−フェニルカルバモイル）−３−チエニル］酢酸メチル（４．４ｇ）を得た。
【０１５７】
９．２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（Ｎ−フェニルカルバモイル）−３−チエニル］酢酸（ＬＳＴ−０２）
【０１５８】
【化５３】
2014051463.tif 000055
【０１５９】
５０ｍＬのＴＨＦ／水の混合溶媒に２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（Ｎ−フェニルカルバモイル）−３−チエニル］酢酸メチル（２ｇ，５．２４ｍｍｏｌ)と水酸化リチウム１水和物（０．４４ｇ，１０．４９ｍｍｏｌ）とを混ぜ、５０℃で２時間で攪拌した。反応混合物を濃縮し、１Ｍ塩酸を用いてｐＨを３〜５に調整した後に濾取することで、２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（Ｎ−フェニルカルバモイル）−３−チエニル］酢酸（１．５ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．６２（ｓ，１Ｈ），１０．２５（ｓ，１Ｈ），８．０１（ｓ，１Ｈ），７．７６−７．７３（ｄ，２Ｈ），７．４９−７．４４（ｄ，２Ｈ），７．３８−７．３３（ｔ，２Ｈ），７．１３−７．０５（ｍ，３Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．５７（ｓ，２Ｈ）．
ＬＣＭＳ（溶離液：８０％水／２０％アセトニトリル〜５％水／９５％アセトニトリル、６分間かけてリニアでグラジエントし、最後に３０秒間維持した）
純度＞９５％, Ｒｔ＝３．２３８分
ＭＳ  Ｃａｌｃｄ．：３６７；ＭＳ  Ｆｏｕｎｄ：３６８（［Ｍ＋Ｈ］＋）. 
【０１６０】
１０．２−［２−（４−ヒドロキシフェニル）−５−（Ｎ−フェニルカルバモイル）−３−チエニル］酢酸メチル（ＬＳＴ−０２のデスメチル体）
【０１６１】
【化５４】
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【０１６２】
５０ｍＬのＴＨＦ／水の混合溶媒に２−［２−（４−メトキシフェニル）−５−（Ｎ−フェニルカルバモイル）−３−チエニル］酢酸メチル（２ｇ，５．２４ｍｍｏｌ)と三臭化ホウ素（３．９５ｇ，１５．７２ｍｍｏｌ）とを混ぜ、室温で一晩攪拌した。反応を、メタノールを添加することで終結させ、濃縮し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーに供することで精製し、２−［２−（４−ヒドロキシフェニル）−５−（Ｎ−フェニルカルバモイル）−３−チエニル］酢酸メチル（１ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１０．２４（ｓ，１Ｈ），１０．２５（ｓ，１Ｈ），９．８４（ｓ，１Ｈ），７．９６（ｓ，１Ｈ），７．７５−７．７２（ｄ，２Ｈ），７.３８−７．３１（ｍ，４Ｈ），７．１３−７．１０（ｍ，１Ｈ），６．８９−６．８７（ｍ，２Ｈ），３．７０（ｓ，２Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ）．
ＬＣＭＳ（溶離液：８０％水／２０％アセトニトリル〜５％水／９５％アセトニトリル、６分間かけてリニアでグラジエントし、最後に３０秒間維持した）
純度＞９５％, Ｒｔ＝３．２３８分
ＭＳ  Ｃａｌｃｄ．：３６７；ＭＳ  Ｆｏｕｎｄ：３６８（［Ｍ＋Ｈ］＋）.
【０１６３】
［ＬＳＴ−０１の合成］
１．４−（クロロスルホニル）−３−メチル安息香酸メチル
【０１６４】
【化５５】
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【０１６５】
−１０℃に冷やした４−アミノ−３−メチル安息香酸メチル（３０ｇ，０．１８ｍｏｌ）の濃塩酸（１２０ｍＬ）と氷酢酸（４０ｍＬ）との溶液に、亜硝酸ナトリウム（２１ｇ，０．２７ｍｏｌ）水溶液（４０ｍＬ）を溶液温度が０℃を越えない割合で添加した。添加後、混合物を−１０度でさらに４５分間攪拌し、ジアゾニウム塩を形成させた。三つ首フラスコに氷酢酸（１００ｍｌ）を充填し、二酸化硫黄ガスを３０分間吹き込んだ。その後、二塩化銅（２５ｇ，０．１４ｍｏｌ）を前記の無色の溶液に加え、二酸化硫黄ガスを３０分間、溶液が薄い黄色になるまで吹き込んだ。先に調製したジアゾニウム塩を溶液温度が３０℃を越えない割合で添加し、 その後１時間室温で攪拌した。反応混合物を氷浴に注ぐことで沈殿を生じ、これをジクロロメタンで抽出した。有機層を水とブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた後に濃縮して、４−（クロロスルホニル）−３−メチル安息香酸メチル（２０ｇ，４４％）を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ２．８３（ｓ，３Ｈ），３．９７（ｓ，３Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．０７（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１６６】
２．３−メチル−４−（フェニルアミノスルホニル）安息香酸メチル
【０１６７】
【化５６】
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【０１６８】
４−（クロロスルホニル）−３−メチル安息香酸メチル（２０ｇ，８１ｍｍｏｌ），フェニルアミン（７．５ｇ，８１ｍｍｏｌ），及びピリジン（８０ｍｌ）のジクロロメタン溶液（２００ｍｌ）を室温で一晩攪拌した。これを濃縮して得た残渣を６Ｎ−塩酸を用いてｐＨ＜１に調整し、ろ過により薄桃色の固体を得た。この固体を水洗し、水に懸濁した後に、炭酸ナトリウム水溶液を加えた。これを、酢酸エチル（２×２５０ｍｌ）で抽出し、有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮することで、３−メチル−４−（フェニルアミノスルホニル）安息香酸メチル（２０ｇ，８１％）を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ２．６８（ｓ，３Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），７．０２−７．０８（ｍ，３Ｈ），７．２０（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１６９】
３．３−メチル−４−（フェニルアミノスルホニル）安息香酸
【０１７０】
【化５７】
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【０１７１】
３−メチル−４−（フェニルアミノスルホニル）安息香酸（１０ｇ，３３ｍｍｏｌをTHF（５０ｍｌ）に溶解し、８Ｎの水酸化リチウム水溶液（５０ｍｌ）を加え、室温で３０分間攪拌した。これを濃縮後、酢酸エチルで洗浄し、水層をｐＨ＜４に調整した後に、ろ過を行い、乾燥させることで３−メチル−４−（フェニルアミノスルホニル）安息香酸（８．５ｇ，９０％）を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，３００ＭＨｚ）：δ２．６２（ｓ，３Ｈ），６．９８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．２０（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），７．８１−７．８６（ｍ，２Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ）．
【０１７２】
４．Ｎ−２−メチルフェニル  ３−メチル−４−（フェニルアミノスルホニル）安息香酸アミド（化合物２）
【０１７３】
【化５８】
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【０１７４】
３−メチル−４−（フェニルアミノスルホニル）安息香酸（２．０ｇ，６．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（２０ｍＬ）に、ＨＡＴＵ（５．０ｇ，１３ｍｍｏｌ）とジイソプロピルエチルアミン（２．６ｇ、２０ｍＬ）を加え、室温で３０分間攪拌した。反応混合液に、２−メチルフェニルアミン（０．８６ｇ，８．０ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を室温で一晩攪拌した。反応液を、氷水に注いだ後に、酢酸エチルで抽出し、有機層を水とブラインで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後に、ろ過し、減圧下で濃縮し、濃縮物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液：石油エーテル／酢酸エチル６：１）に供することで、１．５ｇのN−２−メチルフェニル  ３−メチル−４−（フェニルアミノスルホニル）安息香酸アミド（収率５７％）で得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）：δ１０．６０（ｓ，１Ｈ），１０．０２（ｓ，１Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９１−７．８７（ｍ，２Ｈ），７．３１−７．１７（ｍ，６Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．０２−６．９９（ｍ，１Ｈ），２．６７（ｓ，３Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ）．
ＬＣＭＳ：（溶離液：（酢酸アンモニウム０．０２％含有）７０％水／３０％アセトニトリル〜（酢酸アンモニウム０．０２％含有）５％水／９５％アセトニトリル、６分間かけてリニアでグラジエントし、最後に３０秒間維持した）
純度＞９５％, Ｒｔ＝３．０８７分
ＭＳ  Ｃａｌｃｄ．：３８０；ＭＳ  Ｆｏｕｎｄ：３７９（［Ｍ−１］−）．
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2014051463.tif 000100
【図９】
2014051463.tif 000101
【配列表】
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