(57)【要約】【課題】Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓに由来する抗原、及び免疫処置におけるその使用を提供すること。【解決手段】本発明は、ＩＬ−８及び類似基質を切断することができないが、それでもＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに対する防御作用を誘導する能力を維持する、ＧＡＳ５７の変異体を提供する。本発明は、ＧＡＳ５７に特異的に結合し、ＩＬ−８及び類似基質を切断するその能力を阻害する、抗体も提供する。変異体は、とりわけ、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに対する防御作用を誘導するワクチン組成物において有用である。抗体は、例えば、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ感染症を処置するための治療用物質として有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫学及びワクチン学の分野に属する。特に、本発明は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓに由来する抗原、及び免疫処置におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
組換えタンパク質として発現され、Ｅ．ｃｏｌｉから精製されるＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群レンサ球菌、ＧＡＳ）抗原ＧＡＳ５７は、マウスにおいてＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓによる致死的曝露に対して防御活性を誘導する。しかし、ＧＡＳ５７は、インターロイキン８（ＩＬ−８）などのヒトケモカインを切断し、不活性化するプロテアーゼである（非特許文献１、非特許文献２）。ＧＡＳ５７のこの性質は、起こり得る副作用のために、ワクチン組成物におけるその使用を妨げ得る。したがって、ヒトケモカインを切断することができないが、それでもＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに対する防御を誘導する能力を維持するＧＡＳ５７抗原が当分野で求められている。ＧＡＳ５７抗原に特異的に結合し、ＩＬ−８及び他の基質を切断するＧＡＳ５７の能力を低下させる、抗体も当分野で求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ｅｄｗａｒｄｓら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２００５）１９２，７８３−９０
【非特許文献２】Ｈｉｄａｌｇｏ−Ｇｒａｓｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ．（２００６）２５，４６２８−３７
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、ＩＬ−８のようなヒトケモカインを切断することができないが、それでもＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに対する防御を誘導する能力を維持する、（本明細書では「ＧＡＳ５７変異体抗原」、「ＧＡＳ５７変異体」、「変異体ＧＡＳ５７抗原」と称する）Ｓｐｙ０４１６又はＧＡＳ５７の変異体を提供する。本発明のＧＡＳ５７変異体は、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに対する防御を誘導するワクチン組成物に有用である。本発明は、野生型ＧＡＳ５７に特異的に結合し、ＩＬ−８及び類似基質を切断するＧＡＳ５７の能力を阻害する、抗体も提供する。抗体は、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ感染症の防止及び／又は処置のための治療用物質として有用であることが予見される。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
アミノ酸Ｄ１５１、Ｈ２７９及びＳ６１７からなる群より選択される１個以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸変化を含む精製変異体ＧＡＳ５７抗原であって、前記アミノ酸位置が配列番号１に従って付番され、インターロイキン８（ＩＬ−８）に対する前記精製変異体ＧＡＳ５７抗原のタンパク質分解活性が、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動又はＥＬＩＳＡアッセイによって検出される場合、野生型ＧＡＳ５７に比べて少なくとも５０％低減される、精製変異体ＧＡＳ５７抗原。
（項目２）
Ｄ１５１Ａ及びＳ６１７Ａからなる群より選択される少なくとも１個のアミノ酸置換を含む、項目１に記載の精製変異体ＧＡＳ５７抗原。
（項目３）
配列番号２［Ｄ１５１Ａ］、配列番号３又は配列番号４を含む、項目２に記載の精製変異体ＧＡＳ５７抗原。
（項目４）
第２のＧＡＳ抗原を含む融合タンパク質である、項目１に記載の精製変異体ＧＡＳ５７抗原。
（項目５）
担体タンパク質に結合した、項目１に記載の精製変異体ＧＡＳ５７抗原。
（項目６）
前記担体タンパク質が、細菌毒素、細菌トキソイド、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質、熱ショックタンパク質、百日咳タンパク質、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅタンパク質Ｄ、サイトカイン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素Ａ、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素Ｂ及び鉄取り込みタンパク質からなる群より選択される、項目５に記載の精製変異体ＧＡＳ５７抗原。
（項目７）
項目１に記載の精製変異体ＧＡＳ５７抗原をコードする核酸分子。
（項目８）
配列番号２、配列番号３及び配列番号４からなる群より選択されるアミノ酸配列をコードする、項目７に記載の核酸分子。
（項目９）
配列番号６、配列番号７及び配列番号８に示されるコード配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、項目６に記載の核酸分子。
（項目１０）
野生型ＧＡＳ５７に特異的に結合し、ヒトＩＬ−８を切断する野生型ＧＡＳ５７の能力を阻害する、抗体の調製物。
（項目１１）
ＣＸＣＬ１／ＧＲＯα、ＣＸＣＬ２／ＧＲＯβ、ＣＸＣＬ３／ＧＲＯγ、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１α、ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１β、ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１γ、ＣＸＣＬ５／ＥＮＡ７８、ＣＸＣＬ６／ＧＣＰ−２、ＣＸＣＬ７／ＮＡＰ−２、ＣＸＣＬ９／ＭＩＧ、ＣＸＣＬ１０／ＩＰ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４及びＣＸＣＬ１６からなる群より選択されるヒトケモカインを切断する野生型ＧＡＳ５７の能力も阻害する、項目１０に記載の抗体の調製物。
（項目１２）
前記抗体が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆｖ分子、非共有結合性ヘテロ二量体単鎖Ｆｖ分子（ｓＦｖ）、二量体抗体断片構築物、三量体抗体断片構築物、ミニボディ又はその混合物である、項目１０に記載の抗体の調製物。
（項目１３）
（ａ）（ｉ）アミノ酸Ｄ１５１、Ｈ２７９及びＳ６１７からなる群より選択される１個以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸変異を含む精製変異体ＧＡＳ５７抗原であって、前記アミノ酸位置が配列番号１に従って付番され、インターロイキン８（ＩＬ−８）に対する前記精製変異体ＧＡＳ５７抗原のタンパク質分解活性が、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動又はＥＬＩＳＡアッセイによって検出される場合、野生型ＧＡＳ５７に比べて少なくとも５０％低減される、精製変異体ＧＡＳ５７抗原、
（ｉｉ）前記精製変異体ＧＡＳ５７抗原をコードする核酸分子、及び
（ｉｉｉ）野生型ＧＡＳ５７に特異的に結合し、ＩＬ−８を切断する前記野生型ＧＡＳ５７の能力を阻害する、抗体の調製物
から選択される活性作用物質と、
（ｂ）薬学的に許容される担体と
を含む、組成物。
（項目１４）
小児ワクチンに有用である活性作用物質を更に含む、項目１３に記載の組成物。
（項目１５）
前記活性作用物質が、
（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｃｈｏｒｉｎｅｂａｃｔｅｒｉｍ  ｄｉｐｈｔｅｒｉａｅ、呼吸器合胞体ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、風疹ウイルス及びロタウイルスのポリペプチド抗原からなる群より選択されるポリペプチド抗原、並びに
（ｂ）前記ポリペプチド抗原をコードする核酸分子
からなる群より選択される、項目１４に記載の組成物。
（項目１６）
高齢者又は免疫不全個体用ワクチンに有用である第２の活性作用物質を更に含む、項目１３に記載の組成物。
（項目１７）
前記第２の活性作用物質が、
（ａ）Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅａｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、インフルエンザウイルス及びパラインフルエンザウイルスのポリペプチド抗原からなる群より選択されるポリペプチド抗原、並びに
（ｂ）前記ポリペプチド抗原をコードする核酸分子
からなる群より選択される、項目１６に記載の組成物。
（項目１８）
野生型ＧＡＳ５７タンパク質分解活性を阻害する方法であって、野生型ＧＡＳ５７を項目１０に記載の抗体の調製物と接触させることを含む、方法。
（項目１９）
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓによる感染症を処置又は防止する方法であって、
（ａ）（ｉ）アミノ酸Ｄ１５１、Ｈ２７９及びＳ６１７からなる群より選択される１個以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸変異を含む精製変異体ＧＡＳ５７抗原であって、前記アミノ酸位置が配列番号１に従って付番され、インターロイキン８（ＩＬ−８）に対する前記精製変異体ＧＡＳ５７抗原のタンパク質分解活性が、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動又はＥＬＩＳＡアッセイによって検出される場合、野生型ＧＡＳ５７に比べて少なくとも５０％低減される、精製変異体ＧＡＳ５７抗原、
（ｉｉ）前記精製変異体ＧＡＳ５７抗原をコードする核酸分子、及び
（ｉｉｉ）野生型ＧＡＳ５７に特異的に結合し、ＩＬ−８を切断する前記野生型ＧＡＳ５７の能力を阻害する、抗体の調製物
から選択される活性作用物質と、
（ｂ）薬学的に許容される担体と
を含む有効量の組成物をそれを必要とする個体に投与することを含む、方法。
（項目２０）
（ａ）（ｉ）アミノ酸Ｄ１５１、Ｈ２７９及びＳ６１７からなる群より選択される１個以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸変異を含む精製変異体ＧＡＳ５７抗原であって、前記アミノ酸位置が配列番号１に従って付番され、インターロイキン８（ＩＬ−８）に対する前記精製変異体ＧＡＳ５７抗原のタンパク質分解活性が、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動又はＥＬＩＳＡアッセイによって検出される場合、野生型ＧＡＳ５７に比べて少なくとも５０％低減される、精製変異体ＧＡＳ５７抗原、
（ｉｉ）前記精製変異体ＧＡＳ５７抗原をコードする核酸分子、及び
（ｉｉｉ）野生型ＧＡＳ５７に特異的に結合し、ＩＬ−８を切断する前記野生型ＧＡＳ５７の能力を阻害する、抗体の調製物
から選択される活性作用物質を含む容器と、
（ｂ）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓによる感染症を処置又は防止する組成物を使用するための説明書と
を含む、キット。
（項目２１）
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓによる感染症の防止又は処置用組成物を製造する方法であって、
（ａ）（ｉ）アミノ酸Ｄ１５１、Ｈ２７９及びＳ６１７からなる群より選択される１個以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸変異を含む精製変異体ＧＡＳ５７抗原であって、前記アミノ酸位置が配列番号１に従って付番され、インターロイキン８（ＩＬ−８）に対する前記精製変異体ＧＡＳ５７抗原のタンパク質分解活性が、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動又はＥＬＩＳＡアッセイによって検出される場合、野生型ＧＡＳ５７に比べて少なくとも５０％低減される、精製変異体ＧＡＳ５７抗原、
（ｉｉ）前記精製変異体ＧＡＳ５７抗原をコードする核酸分子、及び
（ｉｉｉ）野生型ＧＡＳ５７に特異的に結合し、ＩＬ−８を切断する前記野生型ＧＡＳ５７の能力を阻害する、抗体の調製物
から選択される活性作用物質と、
（ｂ）薬学的に許容される担体と
を組み合わせることを含む、方法。
（項目２２）
前記活性作用物質が前記変異体ＧＡＳ５７抗原又は前記抗体であり、前記変異体ＧＡＳ５７抗原又は前記抗体が、
（ａ）前記変異体ＧＡＳ５７抗原又は前記抗体をコードする発現構築物を含む宿主細胞を培養すること、及び
（ｂ）前記変異体ＧＡＳ５７抗原又は前記抗体を回収すること
を含む方法によって製造される、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓによる感染症を処置又は防止するための医薬品の製造における活性作用物質の使用であって、前記活性作用物質が、
（ａ）アミノ酸Ｄ１５１、Ｈ２７９及びＳ６１７からなる群より選択される１個以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸変異を含む精製変異体ＧＡＳ５７抗原であって、前記アミノ酸位置が配列番号１に従って付番され、インターロイキン８（ＩＬ−８）に対する前記精製変異体ＧＡＳ５７抗原のタンパク質分解活性が、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動又はＥＬＩＳＡアッセイによって検出される場合、野生型ＧＡＳ５７に比べて少なくとも５０％低減される、精製変異体ＧＡＳ５７抗原、
（ｂ）前記精製変異体ＧＡＳ５７抗原をコードする核酸分子、及び
（ｃ）野生型ＧＡＳ５７に特異的に結合し、ＩＬ−８を切断する前記野生型ＧＡＳ５７の能力を阻害する、抗体の調製物
からなる群より選択される、使用。
（項目２４）
療法に使用される、項目１〜６のいずれか一項に記載の精製変異体ＧＡＳ５７抗原、項目７〜９のいずれか一項に記載の核酸分子、項目１０〜１２のいずれか一項に記載の抗体の調製物、又は項目１３〜１７のいずれか一項に記載の組成物。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓによる感染症を処置又は防止するための、項目１〜６のいずれか一項に記載の精製変異体ＧＡＳ５７抗原、項目７〜９のいずれか一項に記載の核酸分子、項目１０〜１２のいずれか一項に記載の抗体の調製物、又は項目１３〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】野生型ＧＡＳ５７によるＩＬ−８の切断を示すＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルの顕微鏡写真。
【図２−１】野生型ＧＡＳ５７（問い合わせ、配列番号１）とＣ５ａペプチダーゼセリンプロテアーゼ（Ｓｂｊｃｔ、配列番号９）のＢＬＡＳＴアラインメント。
【図２−２】野生型ＧＡＳ５７（問い合わせ、配列番号１）とＣ５ａペプチダーゼセリンプロテアーゼ（Ｓｂｊｃｔ、配列番号９）のＢＬＡＳＴアラインメント。
【図３】ＧＡＳ５７点変異体Ｄ１５１ＡがＩＬ−８切断能力を失ったことを示すＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルの顕微鏡写真。
【図４】ＧＡＳ５７点変異体Ｄ１５１ＡがＩＬ−８切断能力を失ったことを示すＥＬＩＳＡアッセイの結果を示したグラフ。
【図５】図５Ａは、ＧＡＳ５７単一変異体Ｄ１５１Ａ及びＳ６１７Ａ並びに二重変異体Ｄ１５１Ａ＋Ｓ６１７ＡがＧＡＳ５７タンパク質分解活性を失ったことを示すＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルの顕微鏡写真。図５Ｂは、ＧＡＳ５７単一変異体Ｄ１５１Ａ及びＳ６１７Ａ並びに二重変異体Ｄ１５１Ａ＋Ｓ６１７ＡがＧＡＳ５７タンパク質分解活性を失ったことを示すＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルの顕微鏡写真。
【図６】単一変異体Ｄ１５１Ａ及びＳ６１７Ａ並びにＧＡＳ５７二重変異体Ｄ１５１Ａ＋Ｓ６１７ＡがＧＡＳ５７タンパク質分解活性を失ったことを示すＥＬＩＳＡアッセイの結果を示したグラフ。
【図７】野生型ＧＡＳ５７が、１５０．５ｋＤａ及び２３．４ｋＤａの２個のポリペプチド断片に翻訳後修飾されたことを示すＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルの顕微鏡写真。
【図８】ＧＡＳ５７変異体Ｄ１５１Ａ、Ｓ６１７Ａ及びＤ１５１Ａ＋Ｓ６１７Ａが、野生型と比較して、１５０．５ｋＤａ及び２３．４ｋＤａの２個のポリペプチド断片に翻訳後修飾されないことを示すＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルの顕微鏡写真（黒矢印）。その代わりに、プロセシングされていないタンパク質に対応する１７４ｋＤａの主要バンドが、不活性変異体系統に対応するレーンに存在する（灰色矢印）。
【図９】２つの異なる実験条件においてＧＡＳ５７に対するポリクローナル抗血清によるＧＡＳ５７媒介性ＩＬ−８切断の用量依存的阻害を示すＥＬＩＳＡアッセイ結果。図９Ａ、８時間インキュベーション、０．１μｇ／ｍｌＧＡＳ５７。図９Ｂ、２４時間インキュベーション、０．０５μｇ／ｍｌＧＡＳ５７。
【図１０−１】図１０Ａは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸１〜５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−２】図１０Ｂは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸５１〜１００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−３】図１０Ｃは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸１０１〜１５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−４】図１０Ｄは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。触媒三残基（ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ｔｒｉａｄ）Ｄは太字黒色文字である。アミノ酸１５１〜２００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−５】図１０Ｅは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸２０１〜２５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−６】図１０Ｆは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。触媒三残基Ｈは太字黒色文字である。アミノ酸２５１〜３００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−７】図１０Ｇは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸３０１〜３５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−８】図１０Ｈは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸３５１〜４００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−９】図１０Ｉは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸４０１〜４５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−１０】図１０Ｊは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸４５１〜５００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−１１】図１０Ｋは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸５０１〜５５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−１２】図１０Ｌは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸５５１〜６００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−１３】図１０Ｍは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。触媒三残基Ｓは太字黒色文字である。アミノ酸６０１〜６５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−１４】図１０Ｎは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸６５１〜７００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−１５】図１０Ｏは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸７０１〜７５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−１６】図１０Ｐは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸７５１〜８００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−１７】図１０Ｑは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸８０１〜８５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−１８】図１０Ｒは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸８５１〜９００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−１９】図１０Ｓは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸９０１〜９５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−２０】図１０Ｔは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸９５１〜１０００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−２１】図１０Ｕは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸１００１〜１０５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−２２】図１０Ｖは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸１０５１〜１１００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−２３】図１０Ｗは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸１１０１〜１１５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−２４】図１０Ｘは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸１１５１〜１２００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−２５】図１０Ｙは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸１２０１〜１２５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−２６】図１０Ｚは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸１２５１〜１３００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−２７】図１０ＡＡは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸１３０１〜１３５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−２８】図１０ＢＢは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸１３５１〜１４００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−２９】図１０ＣＣは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸１４０１〜１４５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−３０】図１０ＤＤは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸１４５１〜１５００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−３１】図１０ＥＥは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸１５０１〜１５５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−３２】図１０ＦＦは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸１５５１〜１６００（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す。）。
【図１０−３３】図１０ＧＧは、異なる系統／Ｍタイプ由来のＧＡＳ５７抗原のアラインメント。アミノ酸１６０１〜１６５０（上部のアミノ酸番号は、ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１のアミノ酸配列を指す）。ｇａｓ５７Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１；ｇａｓ５７Ｍ１＿３１０７５、配列番号１０；ｇａｓ５７Ｍ１＿３１２３７、配列番号１１；ｇａｓ５７Ｍ１＿３３４８、配列番号１２；ｇａｓ５７Ｍ２＿３４５８５、配列番号１３；ｇａｓ５７Ｍ３，１＿２１３９８、配列番号１４；ｇａｓ５７Ｍ４４−６１＿２０８３９、配列番号１５；ｇａｓ５７Ｍ６，３１＿２００２２、配列番号１６；ｇａｓ５７Ｍ１１＿２０６４８、配列番号１７；ｇａｓ５７Ｍ２３＿２０７１、配列番号１８；ｇａｓ５７Ｍ１８，３＿４０１２８、配列番号１９；ｇａｓ４７Ｍ４＿１００９２、配列番号２０；ｇａｓ５７Ｍ４＿３０９６８、配列番号２１；ｇａｓ５７Ｍ６，３１＿２２６９２、配列番号２２；ｇａｓ５７Ｍ６８，５＿２２８１４、配列番号２３；ｇａｓ５７Ｍ６８＿２３６２３、配列番号２４；ｇａｓ５７Ｍ２＿１００６４、配列番号２５；ｇａｓ５７Ｍ２＿１００６５、配列番号２６；ｇａｓ５７Ｍ７７＿１０２５１、配列番号２７；ｇａｓ５７Ｍ７７＿１０５２７、配列番号２８；ｇａｓ５７Ｍ７７＿２０６９６、配列番号２９；ｇａｓ５７Ｍ８９＿２１９１５、配列番号３０；ｇａｓ５７Ｍ８９＿２３７１７、配列番号３１；ｇａｓ５７Ｍ９４＿１０１３４、配列番号３２；ｇａｓ５７Ｍ２８＿１０１６４、配列番号３３；ｇａｓ５７Ｍ２８＿１０２１８、配列番号３４；ｇａｓ５７Ｍ２９＿１０２６６、配列番号３５；ｇａｓ５７Ｍ２８＿１０２９９、配列番号３６；ｇａｓ５７Ｍ２８＿３０１７６、配列番号３７；ｇａｓ５７Ｍ２８＿３０５７４、配列番号３８；ｇａｓ５７Ｍ６，９＿２１８０２、配列番号３９；ｇａｓ５７Ｍ７５＿２０６７１、配列番号４０；ｇａｓ５７Ｍ７５＿３０６０３、配列番号４１；ｇａｓ５７Ｍ７５＿３０２０７、配列番号４２；ｇａｓ５７Ｍ２２＿２０６４１、配列番号４３；ｇａｓ５７Ｍ２２＿２３４６５、配列番号４４；ｇａｓ５７Ｍ３，１＿３０６１０、配列番号４５；ｇａｓ５７Ｍ３，１＿４０６０３、配列番号４６；ｇａｓ５７Ｍ３，２８＿２４２１４、配列番号４７；ｇａｓ５７Ｍ３，３４＿１０３０７、配列番号４８；ｇａｓ５７Ｍ４＿４０４２７、配列番号４９；ｇａｓ５７Ｍ３＿２７２１、配列番号５０；ｇａｓ５７Ｍ１２＿１０２９６、配列番号５１；ｇａｓ５７Ｍ１２＿１００３５、配列番号５２；ｇａｓ５７Ｍ１２＿２００６９、配列番号５３；ｇａｓ５７Ｍ１２＿２２４３２、配列番号５４；ｇａｓ５７Ｍ４＿４０４９９、配列番号５５；及びｇａｓ５７Ｍ６，１＿２１２５９、配列番号５６；ｇａｓ５７Ｍ７５＿２０６７１、配列番号８０。
【図１１】ヒトケモカインのアラインメント。ＧＡＳ５７は、２個の太字の下線部のアミノ酸間でＣＸＣＬ８（ＩＬ−８）（配列番号８１）を切断する。ＣＸＣＬ４、配列番号５７；ＣＸＣＬ７／ＮＡＰ−２、配列番号５８；ＣＸＣＬ１／ＧＲＯα、配列番号５９；ＣＸＣＬ２／ＧＲＯβ、配列番号６０；ＣＸＣＬ３／ＧＲＯγ、配列番号６１；ＣＸＣＬ６／ＧＣＰ−２、配列番号６２；ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１α、配列番号６３；ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１γ、配列番号６４；ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１β、配列番号６５；ＣＸＣＬ９／ＭＩＧ、配列番号６６；ＣＸＣＬ１０／ＩＰ１０、配列番号６７；及びＣＸＣＬ１１、配列番号６８。
【図１２】ＧＡＳ５７によるＣＸＣケモカインの切断を示すＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルの顕微鏡写真。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
変異体ＧＡＳ５７抗原
「ＧＡＳ５７」は、「Ｓｐｙ０４１６」（Ｍ１）、「ＳｐｙＭ３＿０２９８」（Ｍ３）、「ＳｐｙＭ１８＿０４６４」（Ｍ１８）及び「ｐｒｔＳ」とも称される。ＧＡＳ５７は、推定上の細胞エンベローププロテイナーゼとしても同定された。国際公開第０２／３４７７１号及び米国特許出願公開第２００６／０２５８８４９号を参照されたい。１７個の異なるＭタイプ（１、２、３、４、６、１１、１２、１８、２２、２３、２８、４４／６１、６８、７５、７７、８９、９４）に由来する４９個のＧＡＳ５７配列がある。Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌによれば、１７個の異なるＭタイプは、米国において、咽頭炎症例の９５％超及び侵襲性ＧＡＳ分離物の約６８％を占める。野生型ＧＡＳ５７抗原のアミノ酸配列を配列番号１、１０〜５６及び８０として配列リストに示す。野生型ＧＡＳ５７は、２種類の非共有結合ペプチドを含む（実施例５及び図７参照）。
【０００７】
本発明による変異体ＧＡＳ５７抗原は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ又はＥＬＩＳＡのいずれかによって検出して、インターロイキン８（ＩＬ−８）に対して、野生型ＧＡＳ５７よりも少なくとも５０％（例えば、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９又は１００％）低いタンパク質分解活性を有するが（実施例２及び３参照）、免疫原性である。例えば、本発明による変異体ＧＡＳ５７抗原は、マウスモデルにおいてＧＡＳ致死的曝露に対する防御を付与する（実施例４）。好ましくは、本発明の変異体ＧＡＳ５７は、ＣＸＣＬ１／ＧＲＯα（例えば、配列番号５９）、ＣＸＣＬ２／ＧＲＯβ（例えば、配列番号６０）、ＣＸＣＬ３／ＧＲＯγ（例えば、配列番号６１）、ＣＸＣＬ４（例えば、配列番号５７）、ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１α（例えば、配列番号６３）、ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１β（例えば、配列番号６５）、ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１γ（例えば、配列番号６４）、ＣＸＣＬ５／ＥＮＡ７８（例えば、配列番号８２）、ＣＸＣＬ６／ＧＣＰ−２（例えば、配列番号６２）、ＣＸＣＬ７／ＮＡＰ−２（例えば、配列番号５８）、ＣＸＣＬ９／ＭＩＧ（例えば、配列番号６６）、ＣＸＣＬ１０／ＩＰ１０（例えば、配列番号６７）、ＣＸＣＬ１１（例えば、配列番号６８）、ＣＸＣＬ１３（例えば、配列番号８３）、ＣＸＣＬ１４（例えば、配列番号８４）、ＣＸＣＬ１６（例えば、配列番号８５）などの別のヒトサイトカインも切断しない。予想外に、本発明のＧＡＳ５７変異体は単一ポリペプチドであり、翻訳後プロセシング（成熟）を受けて２種類の非共有結合ペプチドを形成する野生型ＧＡＳ５７とは対照的である（実施例５及び６）。単一ペプチドの形のかかる抗原を得る能力は、ワクチン目的の組換えタンパク質の製造を容易にする。
【０００８】
本発明のＧＡＳ５７変異体としては、配列番号１に示す野生型ＧＡＳ５７配列に従って付番されたアミノ酸Ｄ１５１、Ｈ２７９又はＳ６１７の１個以上におけるアミノ酸変化（すなわち、置換、欠失又は挿入）を有するものが挙げられる（図１０参照）。
【０００９】
本発明のＧＡＳ５７変異体は、位置Ｄ１５１、Ｈ２７９及び／又はＳ６１７における単一、二重又は三重アミノ酸変化を含む（「単一変異体」、「二重変異体」、「三重変異体」）。したがって、ＧＡＳ５７変異体は、以下を含むことができる。
【００１０】
ｉ．Ｄ１５１Ａ（配列番号２）、Ｄ１５１Ｒ、１５１Ｎ、Ｄ１５１Ｃ、Ｄ１５１Ｑ、Ｄ１５１Ｅ、Ｄ１５１Ｇ、Ｄ１５１Ｈ、Ｄ１５１Ｉ、Ｄ１５１Ｌ、Ｄ１５１Ｋ、Ｄ１５１Ｍ、Ｄ１５１Ｆ、Ｄ１５１Ｐ、Ｄ１５１Ｓ、Ｄ１５１Ｔ、Ｄ１５１Ｗ、Ｄ１５１Ｙ又はＤ１５１Ｖ、
ｉｉ．Ｈ２７９Ａ、Ｈ２７９Ｒ、Ｈ２７９Ｎ、Ｈ２７９Ｄ、Ｈ２７９Ｃ、Ｈ２７９Ｑ、Ｈ２７９Ｅ、Ｈ２７９Ｇ、Ｈ２７９Ｉ、Ｈ２７９Ｌ、Ｈ２７９Ｋ、Ｈ２７９Ｍ、Ｈ２７９Ｆ、Ｈ２７９Ｐ、Ｈ２７９Ｓ、Ｈ２７９Ｔ、Ｈ２７９Ｗ、Ｈ２７９Ｙ又はＨ２７９Ｖ、
ｉｉｉ．Ｓ６１７Ａ（配列番号３）、Ｓ６１７Ｒ、Ｓ６１７Ｎ、Ｓ６１７Ｄ、Ｓ６１７Ｃ、Ｓ６１７Ｑ、Ｓ６１７Ｅ、Ｓ６１７Ｇ、Ｓ６１７Ｈ、Ｓ６１７Ｉ、Ｓ６１７Ｌ、Ｓ６１７Ｋ、Ｓ６１７Ｍ、Ｓ６１７Ｆ、Ｓ６１７Ｐ、Ｓ６１７Ｔ、Ｓ６１７Ｗ、Ｓ６１７Ｙ、又はＳ６１７Ｖ、
ｉｖ．ΔＤ１５１又はΔＨ２７９又はΔＳ６１７、及び
ｖ．Ｄ１５１Ａ＋Ｓ６１７Ａ（配列番号４）などのその組合せ。
【００１１】
本発明のＧＡＳ５７変異体抗原は、上記ＧＡＳ５７変異体抗原と別のＧＡＳ抗原を含む融合ポリペプチドも含む。ＧＡＳ抗原は、例えば、国際公開第０２／３４７７１号に開示されており、
【００１２】
【化１】
2014230547.tif 000002
が挙げられるが、それだけに限定されない。ＧＡＳ抗原としては、
【００１３】
【化２】
2014230547.tif 000003
も挙げられる。
【００１４】
本発明は、単一ポリペプチドであり、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ又はＥＬＩＳＡによって測定してＩＬ−８を切断せず、免疫原性であり、マウスモデルにおいてＧＡＳ致死的曝露に対する防御を付与する、ＧＡＳ５７変異体の等価物も含む。かかる等価物としては、Ｎ又はＣ末端における最高約４０個のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９又は４０個のアミノ酸）の欠失を含めて、Ｄ１５１、Ｈ２７９又はＳ６１７以外の位置におけるアミノ酸の欠失、挿入及び／又は置換を有する変異体ＧＡＳ５７抗原を挙げることができる。したがって、かかる等価物は、上述したように、アミノ酸Ｄ１５１、Ｈ２７９又はＳ６１７及びＳ６１７の１個以上におけるアミノ酸変化を有することに加えて、Ｄ１５１、Ｈ２７９又はＳ６１７以外の位置における欠失、挿入及び／又は置換を有するＧＡＳ５７変異体を含む。
【００１５】
核酸分子
本発明は、変異体ＧＡＳ５７抗原をコードする核酸分子を含む。本発明は、かかる分子に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子も含む。特定の配列に応じて、配列同一性の程度は、好ましくは５０％を超える（例えば、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）。ヌクレオチド配列間の同一性は、好ましくは、パラメータギャップオープンペナルティ＝１２及びギャップエクステンションペナルティ＝１のアフィンギャップ検索を利用して、ＭＰＳＲＣＨプログラム（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）中で実装されるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定される。
【００１６】
本発明は、これらの分子とハイブリッド形成することができる核酸分子も提供する。ハイブリダイゼーション反応は、異なる「ストリンジェンシー」の条件下で実施することができる。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーを増加させる条件は、当分野では周知であり、公表されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，１９８９の７．５２ページを参照されたい。（ストリンジェンシーを増加させるための）関連条件の例としては、インキュベーション温度２５℃、３７℃、５０℃、５５℃及び６８℃、緩衝剤濃度１０Ｘ  ＳＳＣ、６Ｘ  ＳＳＣ、１Ｘ  ＳＳＣ及び０．１Ｘ  ＳＳＣ（ここで、ＳＳＣは０．１５Ｍ  ＮａＣｌと１５ｍＭクエン酸塩の緩衝剤である。）並びに別の緩衝系を使用したその等価物、ホルムアミド濃度０％、２５％、５０％及び７５％、インキュベーション時間５分間から２４時間、１、２回以上の洗浄段階、洗浄インキュベーション時間１、２又は１５分間、並びに洗浄溶液６Ｘ  ＳＳＣ、１Ｘ  ＳＳＣ、０．１Ｘ  ＳＳＣ又は脱イオン水が挙げられる。ハイブリダイゼーション技術及びその最適化は当分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９；Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄｓ．，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  ｅｄ．，１９９９；米国特許第５，７０７，８２９号；Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ３０，１９８７を参照されたい。
【００１７】
一部の実施形態においては、本発明の核酸分子は、ストリンジェンシーの低い条件下で標的とハイブリッド形成する。別の実施形態においては、本発明の核酸分子は、中程度のストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成する。好ましい実施形態においては、本発明の核酸分子は、ストリンジェンシーの高い条件下でハイブリッド形成する。ストリンジェンシーの低いハイブリダイゼーション条件の例は、５０℃及び１０Ｘ  ＳＳＣである。中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件の例は、５５℃及び１Ｘ  ＳＳＣである。ストリンジェンシーの高いハイブリダイゼーション条件の例は、６８℃及び０．１Ｘ  ＳＳＣである。
【００１８】
変異体ＧＡＳ５７抗原の製造
組換え製造
遺伝コードの重複性は周知である。したがって、野生型ＧＡＳ５７タンパク質又は本発明のＧＡＳ５７変異体タンパク質をコードする任意の核酸分子（ポリヌクレオチド）を使用して、このタンパク質を組換え製造することができる。野生型ＧＡＳ５７、ＧＡＳ５７変異体Ｄ１５１Ａ、ＧＡＳ５７変異体Ｓ６１７Ａ及びＧＡＳ変異体Ｄ１５１Ａ＋Ｓ６１７Ａをコードするヌクレオチド配列の例をそれぞれ配列番号５、６、７及び８に示す。野生型ＧＡＳ５７をコードする核酸分子は、標準核酸精製技術を用いて適切なＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ細菌から単離することもでき、又はポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ）などの増幅技術を用いて、若しくは自動合成装置を使用することによって、合成することもできる。Ｃａｒｕｔｈｅｒｓら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２１５  ２２３，１９８０；Ｈｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２２５  ２３２，１９８０；Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１０，１０５−１１，１９８４；Ｇｒａｎｔｈａｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．９，ｒ４３−ｒ７４，１９８１を参照されたい。
【００１９】
ｃＤＮＡ分子は、標準分子生物学技術を用いて、ｍＲＮＡをテンプレートとして使用して、作製することができる。その後、当分野で周知である分子生物学技術を用いて、ｃＤＮＡ分子を複製することができる。ＰＣＲなどの増幅技術を使用し、ゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡをテンプレートとして使用して、本発明のポリヌクレオチドの追加のコピーを得ることができる。
【００２０】
必要に応じて、ポリペプチド又はｍＲＮＡ産物のクローニング、プロセシング及び／又は発現を改変する変更を含めて、ただしそれだけに限定されない、抗原をコードする配列を種々の理由のために変更する当分野で一般的に知られた方法を使用して、ポリヌクレオチドを操作することができる。無作為な断片化並びに遺伝子断片及び合成オリゴヌクレオチドのＰＣＲ再構築によるＤＮＡシャフリングを使用して、ヌクレオチド配列を操作することができる。例えば、部位特異的変異誘発を使用して、新しい制限酵素認識部位を挿入し、グリコシル化パターンを変え、コドン優先度を変化させ、スプライスバリアントを産生し、変異を導入することなどができる。
【００２１】
精製タグ配列の付加、コドン最適化などの配列修飾を使用して、発現を促進することができる。例えば、Ｎ末端リーダー配列を、ポリヒスチジン（「ＨＩＳ」）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（「ＧＳＴ」）などのタグタンパク質をコードする配列で置換することができる。かかるタグタンパク質を使用して、発現タンパク質の精製、検出及び安定性を促進することができる。特定の原核生物又は真核生物宿主に好ましいコドンを選択して、タンパク質発現率を増加させることができ、又は天然配列から産生される転写物の半減期よりも長い半減期などの望ましい諸性質を有するＲＮＡ転写物を産生することができる。これらの方法は、当分野で周知であり、国際公開第０５／０３２５８２号に更に記載されている。
【００２２】
発現ベクター
変異体ＧＡＳ５７抗原をコードする核酸分子を、挿入されるコード配列の転写及び翻訳に必要なエレメントを含む発現ベクターに挿入することができる。当業者に周知である方法を使用して、コード配列並びに適切な転写及び翻訳調節エレメントを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法としては、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ組換えＤＮＡ技術、合成技術及びｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝的組換えが挙げられる。
【００２３】
宿主細胞
変異体ＧＡＳ５７抗原を産生するための宿主細胞は、原核生物でも真核生物でもよい。Ｅ．ｃｏｌｉが好ましい宿主細胞であるが、他の適切な宿主としてはＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｒｅｍｏｒｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｌａｃｔａｍｉｃａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｃｉｎｅｒｅａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ（例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、酵母、バキュロウイルス、ほ乳動物細胞などが挙げられる。
【００２４】
宿主細胞系統は、挿入配列の発現を調節するその能力、又は発現されるポリペプチドを所望の様式でプロセシングする能力について選択することができる。ポリペプチドのかかる修飾としては、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化及びアシル化が挙げられるが、それだけに限定されない。ポリペプチドの「プレプロ」体を切断する翻訳後プロセシングを使用して、正確な挿入、折りたたみ及び／又は機能を促進することもできる。翻訳後活性に対して特定の細胞機構及び特徴的な機序を有する異なる宿主細胞がＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９）から入手可能であり、異種タンパク質の正確な修飾及びプロセシングを確実にするように選択することができる。国際公開第０１／９８３４０号を参照されたい。
【００２５】
確立された技術を用いて発現構築物を宿主細胞に導入することができる。確立された技術としては、トランスフェリン−ポリカチオン媒介性ＤＮＡ導入、裸の又は封入された核酸でのトランスフェクション、リポソーム媒介性細胞融合、ＤＮＡ被覆ラテックスビーズの細胞内輸送、原形質体融合、ウイルス感染、電気穿孔法、「遺伝子銃」法、及びＤＥＡＥ又はリン酸カルシウム媒介性トランスフェクションが挙げられるが、それだけに限定されない。
【００２６】
発現ベクターで形質転換された宿主細胞を、細胞培養からのタンパク質の発現及び回収に適切な条件下で培養することができる。形質転換細胞によって産生されるタンパク質は、使用するヌクレオチド配列及び／又は発現ベクターに応じて、分泌させることができ、又は細胞内に収容することができる。原核又は真核細胞膜を介した可溶性抗原の分泌を誘導するシグナル配列を含むように発現ベクターを設計できることを当業者は理解している。
【００２７】
精製
抗原を細胞培養培地から公知方法によって精製することができるように、組換え産生された変異体ＧＡＳ５７抗原中にシグナル輸出（ｅｘｐｏｒｔ）配列を含めることができる。あるいは、組換え産生された本発明の変異体ＧＡＳ５７抗原は、当分野で周知である方法を使用して、操作された宿主細胞から単離することができ、タンパク質、炭水化物、または脂質などの細胞中の他の成分から分離することができる。かかる方法としては、サイズ排除クロマトグラフィー、硫酸アンモニウム分画法、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー及び調製用ゲル電気泳動が挙げられるが、それだけに限定されない。精製変異体ＧＡＳ５７抗原の調製物は少なくとも８０％純粋であり、好ましくは、調製物は９０％、９５％又は９９％純粋である。調製物の純度は、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動などの当分野で公知の任意の手段によって評価することができる。必要に応じて、変異体ＧＡＳ５７抗原は、例えば尿素を用いて、可溶化することができる。
【００２８】
化学合成
変異体ＧＡＳ５７抗原は、例えば固相技術を使用して、合成することができる。例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９  ５４，１９６３；Ｒｏｂｅｒｇｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６９，２０２  ０４，１９９５を参照されたい。タンパク質合成は、手動技術又は自動で実施することができる。自動合成は、例えばＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３１Ａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して、実施することができる。場合によっては、変異体ＧＡＳ５７抗原の断片を別々に合成し、化学的方法によって組み合わせて、完全長分子を生成させることができる。
【００２９】
ＧＡＳ５７抗体
本発明は、野生型ＧＡＳ５７に特異的に結合し、ＧＡＳ５７のＩＬ−８切断能力を実質的に削減又は排除する、抗体も提供する。本発明の一部の抗体は、上述したように、変異体ＧＡＳ５７にも特異的に結合する。好ましい抗体は、ＩＬ−８のホモログ（例えば、ＣＸＣＬ１／ＧＲＯα、ＣＸＣＬ２／ＧＲＯβ、ＣＸＣＬ３／ＧＲＯγ、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１α、ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１β、ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１γ、ＣＸＣＬ５／ＥＮＡ７８、ＣＸＣＬ６／ＧＣＰ−２、ＣＸＣＬ７／ＮＡＰ−２、ＣＸＣＬ９／ＭＩＧ、ＣＸＣＬ１０／ＩＰ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４及びＣＸＣＬ１６）などの別の基質を切断するＧＡＳ５７の能力も削減又は排除する。抗体が免疫化学的分析法に使用されたときに非ＧＡＳ５７タンパク質を用いて与えられる検出シグナルの少なくとも５、１０又は２０倍高い検出シグナルを与える場合、抗体は野生型又は変異体ＧＡＳ５７に「特異的に結合する」。好ましくは、野生型又は変異体ＧＡＳ５７に特異的に結合する抗体は、免疫化学的分析法において非ＧＡＳ５７タンパク質を検出せず、野生型ＧＡＳ５７を溶液から免疫沈降させることができる。本発明による抗体は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ又はＥＬＩＳＡによって検出して、インターロイキン８（ＩＬ−８）に対するＧＡＳ５７のタンパク質分解活性を野生型ＧＡＳ５７に比べて少なくとも５０％（例えば、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９又は１００％）低減することができる。
【００３０】
好ましい実施形態においては、本発明の抗体は、野生型又は変異体ＧＡＳ５７組換え抗原で免疫されＧＡＳに曝露された動物において壊死性病変の進行を遮断する。
【００３１】
本明細書では「抗体」とは、完全免疫グロブリン分子、及び野生型ＧＡＳ５７に、さらに場合によってはＧＡＳ５７変異体抗原に、特異的に結合するその断片を含む。これらとしては、ハイブリッド（キメラ）抗体分子（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４９，２９３−９９，１９９１、米国特許第４，８１６，５６７号）；Ｆ（ａｂ’）２及びＦ（ａｂ）断片並びにＦｖ分子；非共有結合性ヘテロ二量体（例えば、Ｉｎｂａｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．６９，２６５９−６２，１９７２；Ｅｈｒｌｉｃｈら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９，４０９１−９６，１９８０）；単鎖Ｆｖ分子（ｓＦｖ）（例えば、Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５，５８９７−８３，１９８８）；二量体及び三量体抗体断片構築物；ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）（例えば、Ｐａｃｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  ３１，１５７９−８４，１９９２；Ｃｕｍｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４９Ｂ，１２０−２６，１９９２）；ヒト化抗体分子（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２，３２３−２７，１９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９，１５３４−３６，１９８８；及び１９９４年９月２１日に公開された英国特許出願公開第２，２７６，１６９号）；及びかかる分子から得られる任意の機能的断片、並びにファージディスプレイなどの非従来的プロセスによって得られる抗体が挙げられる。
【００３２】
ＧＡＳ５７抗体の産生
変異体又は野生型ＧＡＳ５７抗原を使用して、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、又はヒトなどのほ乳動物を免疫して、ポリクローナル抗体を産生することができる。必要に応じて、ＧＡＳ５７抗原をウシ血清アルブミン、サイログロブリン、キーホールリンペットヘモシアニンなどの担体タンパク質と複合化することができる。宿主種に応じて、種々のアジュバントを使用して免疫応答を増大させることができる。かかるアジュバントとしては、フロイントアジュバント、無機質ゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、及び表面活性物質（例えば、リゾレシチン、Ｐｌｕｒｏｎｉｃポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油乳濁液、キーホールリンペットヘモシアニン及びジニトロフェノール）が挙げられるが、それだけに限定されない。ヒトに使用されるアジュバントのうち、ＢＣＧ（ｂａｃｉｌｌｉ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）及びＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍが特に有用である。
【００３３】
野生型又は変異体ＧＡＳ５７抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体は、培養中の連続細胞系による抗体分子の産生を提供する任意の技術によって調製することができる。これらの技術としては、ハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術及びＥＢＶハイブリドーマ技術が挙げられるが、それだけに限定されない（Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ２５６，４９５−９７，１９８５；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ８１，３１  ４２，１９８５；Ｃｏｔｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８０，２０２６−３０，１９８３；Ｃｏｌｅら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．６２，１０９−２０，１９８４）。
【００３４】
さらに、マウス抗体遺伝子をヒト抗体遺伝子に接合して適切な抗原特異性及び生物活性を有する分子を得る、「キメラ抗体」の製造のために開発された技術を使用することができる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１，６８５１−５５，１９８４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１２，６０４−０８，１９８４；Ｔａｋｅｄａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１４，４５２−５４，１９８５）。モノクローナル及び他の抗体を「ヒト化」して、それを治療に使用したときに、患者が抗体に対する免疫応答を開始するのを防止することもできる。かかる抗体は、療法に直接使用されるヒト抗体に配列が十分類似し、又は少数の重要な残基の変更を必要とし得る。げっ歯類抗体とヒト配列の配列差は、個々の残基の部位特異的変異誘発によってヒト配列の残基と異なる残基を置換することによって、又は相補性決定領域全体のグレーティング（ｇｒａｔｉｎｇ）によって、最小化することができる。
【００３５】
あるいは、ヒト化抗体を、以下に示すように、組換え方法によって産生することができる。特定の抗原に特異的に結合する抗体は、米国特許第５，５６５，３３２号に開示されているように、部分的又は完全にヒト化された抗原結合部位のいずれかを含み得る。ヒトモノクローナル抗体は、Ｓｉｍｍｏｎｓら、ＰＬｏＳ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ４（５），９２８−３６，２００７に記載のようにｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製することができる。
【００３６】
あるいは、単鎖抗体の産生について記述された技術は、当分野で公知の方法によって、特定の抗原に特異的に結合する単鎖抗体を産生するように適合され得る。関連した特異性を有するが、イディオタイプ組成の異なる抗体を、無作為コンビナトリアル免疫グロビンライブラリーから鎖シャッフリングによって生成させることができる（Ｂｕｒｔｏｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８，１１１２０−２３，１９９１）。
【００３７】
単鎖抗体は、ハイブリドーマｃＤＮＡをテンプレートとして使用した、ＰＣＲなどのＤＮＡ増幅法によって構築することもできる（Ｔｈｉｒｉｏｎら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｅｖ．５，５０７−１１，１９９６）。単鎖抗体は、単一又は二重特異性とすることができ、二価又は四価とすることができる。四価二重特異性単鎖抗体の構築は、例えば、Ｃｏｌｏｍａ＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５，１５９−６３，１９９７に教示されている。二価二重特異性単鎖抗体の構築は、Ｍａｌｌｅｎｄｅｒ＆Ｖｏｓｓ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９，１９９−２０６，１９９４に教示されている。
【００３８】
単鎖抗体をコードするヌクレオチド配列は、以下に示すように、手動又は自動ヌクレオチド合成によって構築し、標準組換えＤＮＡ法によって発現構築物にクローン化し、細胞に導入して、コード配列を発現させることができる。あるいは、単鎖抗体は、例えば糸状ファージ技術を用いて、直接産生することができる（Ｖｅｒｈａａｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ６１，４９７−５０１，１９９５；Ｎｉｃｈｏｌｌｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６５，８１−９１，１９９３）。
【００３９】
ＧＡＳ５７抗原に特異的に結合する抗体は、リンパ球集団におけるｉｎ  ｖｉｖｏ産生を誘導することによって、又は免疫グロブリンライブラリー若しくは文献に開示された高度に特異的な結合試薬のパネルをスクリーニングすることによって、製造することもできる（Ｏｒｌａｎｄｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６，３８３３  ３８３７，１９８９；Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４９，２９３  ２９９，１９９１）。
【００４０】
キメラ抗体は、国際公開第９３／０３１５１号に開示されたように構築することができる。国際公開第９４／１３８０４号に記載の「ダイアボディ」など、免疫グロブリンから誘導され多価多重特異性である結合タンパク質を調製することもできる。
【００４１】
抗体は、当分野で周知の方法によって精製することができる。例えば、抗体を、関連する抗原が結合したカラムを通過させて親和性精製することができる。次いで、結合した抗体を高塩濃度の緩衝液を用いてカラムから溶出させることができる。
【００４２】
薬剤組成物
本発明は、医薬品として（例えば、免疫原性組成物又はワクチンとして）使用される組成物も提供する。本発明の組成物は、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ感染の結果として起こる疾患を防止及び／又は処置するのに有用であり、ポリペプチド、核酸分子又は抗体であり得る少なくとも１種類の活性作用物質（ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）を含む。前記疾患は、例えば、菌血症、髄膜炎、産じょく熱、しょう紅熱、丹毒、咽頭炎、膿か疹、壊そ性筋膜炎、筋炎又は毒素性ショック症候群であり得る。
【００４３】
本発明による薬剤組成物は予防又は治療のいずれかに使用することができるが、典型的には予防に使用することができる。したがって、本発明は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｐｙｏｇｅｎｅｓ感染の治療又は予防処置のための方法を含む。動物は、好ましくはほ乳動物、最も好ましくはヒトである。方法は、治療又は予防量の本発明の免疫原性組成物を動物に投与することを含む。本発明は、動物におけるＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ感染症の治療又は予防処置のための本発明の免疫原性組成物も提供する。
【００４４】
変異体ＧＡＳ５７抗原又は変異体ＧＡＳ５７抗原をコードする核酸分子を含む組成物は、好ましくは免疫原性組成物であり、より好ましくはワクチン組成物である。かかる組成物のｐＨは、好ましくは６から８、好ましくは約７である。ｐＨは、緩衝剤の使用によって維持することができる。組成物は、無菌であり得、及び／又は発熱物質を含まなくあり得る。組成物は、ヒト組織（例えば、血液）に対して等張性にすることができる。
【００４５】
本発明の一部の組成物は、本明細書に記載の１種類以上の変異体ＧＡＳ５７抗原を含む。本発明の別の組成物は、変異体ＧＡＳ５７抗原（単数又は複数）を、さらに場合によっては、組成物に含めることができる別の抗原を、コードする１種類以上の核酸分子を含む（下記参照）。例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ＆Ｔｏｒｒｅｓ（１９９７）Ｓｅｍｉｎａｒｓ
ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９：２７１−２８３；Ｄｏｎｎｅｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ａｎｎ．Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５：６１７−６４８；Ｓｃｏｔｔ−Ｔａｙｌｏｒ＆Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ（２０００）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ  ９：４７１−４８０；Ａｐｏｓｔｏｌｏｐｏｕｌｏｓ＆Ｐｌｅｂａｎｓｋｉ（２０００）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２：４４１−４４７；Ｉｌａｎ（１９９９）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  １：１１６−１２０；Ｄｕｂｅｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ６：７２３−７３２；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ＆Ｐｅｒｔｍｅｒ（２０００）Ａｄｖ  Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓ  ５５：１−７４；Ｄｏｎｎｅｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １６２（４  Ｐｔ  ２）：Ｓ１９０−１９３；Ｄａｖｉｓ（１９９９）Ｍｔ．Ｓｉｎａｉ  Ｊ．Ｍｅｄ．６６：８４−９０を参照されたい。典型的には、核酸分子は、例えばプラスミドの形の、ＤＮＡ分子である。
【００４６】
本発明の更に別の組成物は、上述したように野生型ＧＡＳ５７抗原に特異的に結合する少なくとも１種類の抗体、又はかかる抗体をコードする核酸分子を含む。
【００４７】
一部の実施形態においては、本発明の組成物は、１つを超えるタイプの活性作用物質（例えば、ポリペプチド抗原及び核酸分子；ポリペプチド抗原及び抗体；核酸分子及び抗体；ポリペプチド抗原、核酸分子及び抗体）を含むことができる。
【００４８】
一部の実施形態においては、本発明の組成物は、１種類以上の追加の活性作用物質を含むことができる。かかる作用物質としては、（ａ）本発明の別の変異体ＧＡＳ５７抗原、（ｂ）小児ワクチンに有用であるポリペプチド抗原、（ｃ）高齢者又は免疫不全個体用ワクチンに有用であるポリペプチド抗原、（ｄ）（ａ）〜（ｃ）をコードする核酸分子、及び（ａ）〜（ｃ）に特異的に結合する抗体が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４９】
追加の抗原
本発明の組成物は、本発明の治療又は予防方法に使用される１種類以上の抗原と併せて投与することができる。好ましい抗原としては下記のものが挙げられる。さらに、本発明の組成物を使用して、下記病原体のいずれかによって引き起こされる感染症を処置又は防止することができる。下記抗原との組合せに加えて、本発明の組成物は、本明細書に記載のアジュバントと組み合わせることもできる。
【００５０】
本発明で使用される抗原としては、下に示す以下の抗原の１種類以上、又は下記病原体の１種類以上に由来する抗原が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００５１】
Ａ．細菌性抗原
本発明における使用に適切な細菌性抗原としては、細菌から単離、精製又は誘導することができるタンパク質、多糖、リポ多糖及び外膜小胞が挙げられる。さらに、細菌性抗原としては、溶菌液及び不活化細菌製剤を挙げることができる。細菌性抗原は、組換え発現によって産生することができる。細菌性抗原は、好ましくは、その生活環の少なくとも１時期中に細菌表面に露出するエピトープを含む。細菌性抗原は、好ましくは、複数の血清型にわたって保存される。細菌性抗原は、下記細菌の１種類以上に由来する抗原、及び下に明記する特異抗原例を含む。
【００５２】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ：ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ抗原としては、Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙ及び／又はＢなどのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群から精製又は誘導される、（参考文献１〜７で特定されたものなどの）タンパク質、（多糖、オリゴ糖又はリポ多糖を含めた）糖類、又は外膜小胞（参考文献８、９、１０、１１）を挙げることができる。ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓタンパク質抗原は、接着（ａｄｈｅｓｉｏｎｓ）、オートトランスポーター、毒素、Ｆｅ獲得（ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ）タンパク質及び膜結合タンパク質（好ましくは、内在性外膜タンパク質）から選択することができる。
【００５３】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ：Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗原としては、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに由来する（多糖又はオリゴ糖を含めた）糖類及び／又はタンパク質を挙げることができる。糖抗原は、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ及び３３Ｆから選択することができる。タンパク質抗原は、国際公開第９８／１８９３１号、国際公開第９８／１８９３０号、米国特許第６，６９９，７０３号、米国特許第６，８００，７４４号、国際公開第９７／４３３０３号及び国際公開第９７／３７０２６号で特定されたタンパク質から選択することができる。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅタンパク質は、ポリヒスチジン三つ組（ｔｒｉａｄ）ファミリー（ＰｈｔＸ）、コリン結合タンパク質ファミリー（ＣｂｐＸ）、ＣｂｐＸ切り詰め型（ｔｒｕｎｃａｔｅ）、ＬｙｔＸファミリー、ＬｙｔＸ切り詰め型、ＣｂｐＸ切り詰め型−ＬｙｔＸ切り詰め型キメラタンパク質、ニューモリシン（Ｐｌｙ）、ＰｓｐＡ、ＰｓａＡ、Ｓｐ１２８、Ｓｐ１０１、Ｓｐ１３０、Ｓｐ１２５又はＳｐ１３３から選択することができる。
【００５４】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群レンサ球菌）：Ａ群レンサ球菌抗原としては、（ＧＡＳ４０を含めて）国際公開第０２／３４７７１号又は国際公開第２００５／０３２５８２号で特定されたタンパク質、（国際公開第０２／０９４８５１号、並びにＤａｌｅ，Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９９）１７：１９３−２００及びＤａｌｅ，Ｖａｃｃｉｎｅ  １４（１０）：９４４−９４８に記載のものを含めた）ＧＡＳ  Ｍタンパク質断片の融合物、フィブロネクチン結合タンパク質（Ｓｆｂ１）、レンサ球菌性ヘム結合タンパク質（Ｓｈｐ）、及びストレプトリジンＳ（ＳａｇＡ）を挙げることができる。他のＡ群レンサ球菌抗原としては、
【００５５】
【化３】
2014230547.tif 000004
が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００５６】
Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ：Ｍｏｒａｘｅｌｌａ抗原としては、国際公開第０２／１８５９５号及び国際公開第９９／５８５６２号で特定された抗原、外膜タンパク質抗原（ＨＭＷ−ＯＭＰ）、Ｃ抗原、及び／又はＬＰＳが挙げられる。
【００５７】
Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ：ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原としては、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来のｐｅｔｕｓｓｉｓホロ毒素（ＰＴ）及び線維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）が挙げられ、場合によってはパータクチン及び／又は凝集原２及び３抗原との組合せが挙げられる。
【００５８】
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ抗原としては、ＳｔａｐｈＶＡＸ（商標）など、場合によっては無毒組換えＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ外毒素Ａと複合化された、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ５及び８型きょう膜多糖、又は表面タンパク質、インベイシン（ロイコシジン、キナーゼ、ヒアルロニダーゼ）、食作用（ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｅｎｇｕｌｆｍｅｎｔ）を阻害する表面因子（きょう膜、プロテインＡ）、カロテノイド、カタラーゼ産生、プロテインＡ、凝固酵素、凝固因子、及び／又は真核細胞膜を溶解する（場合によっては、無毒化された）膜傷害性毒素（ヘモリシン、ロイコトキシン、ロイコシジン）に由来する抗原が挙げられる。
【００５９】
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ：Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ抗原としては粘液関連抗原（ＳＡＡ）が挙げられる。
【００６０】
Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ（破傷風）：破傷風抗原としては、好ましくは本発明の組成物と併せて／複合化して担体タンパク質として使用される、破傷風トキソイド（ＴＴ）が挙げられる。
【００６１】
Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ（ジフテリア）：ジフテリア抗原としては、ＣＲＭ１９７などの、好ましくは無毒化された、ジフテリア毒素が挙げられる。さらに、ＡＤＰリボシル化を調節する、阻害する、又はＡＤＰリボシル化に関連することが可能な抗原が、本発明の組成物との組合せ／同時投与／複合化のために企図される。ジフテリアトキソイドは担体タンパク質として使用することができる。
【００６２】
Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ（Ｈｉｂ）：Ｈｉｂ抗原としてはＨｉｂ糖抗原が挙げられる。
【００６３】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ抗原としては、エンドトキシンＡ、Ｗｚｚタンパク質、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＬＰＳ、より具体的にはＰＡＯ１（Ｏ５血清型）から単離されるＬＰＳ、及び／又は外膜タンパク質Ｆ（ＯｐｒＦ）を含めた外膜タンパク質が挙げられる（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２００１
Ｍａｙ；６９（５）：３５１０−３５１５）。
【００６４】
Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ。細菌性抗原は、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａに由来し得る。
【００６５】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群レンサ球菌）：Ｂ群レンサ球菌抗原としては、（タンパク質ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６及びＧＢＳ３２２を含めて、さらに血清型Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ／ｃ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＶＩＩＩ由来の糖抗原を含めて）国際公開第０２／３４７７１号、同０３／０９３３０６号、同０４／０４１１５７号又は同２００５／００２６１９号で特定されたタンパク質又は糖抗原が挙げられる。
【００６６】
Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ：ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ抗原としては、ＰｏｒＢ（Ｚｈｕら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００４）２２：６６０−６６９参照）などのＰｏｒ（又はポーリン）タンパク質、ＴｂｐＡ及びＴｂｐＢ（Ｐｒｉｃｅら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００４）７１（１）：２７７−２８３参照）などの移行（ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇ）結合タンパク質、（Ｏｐａなどの）混濁（ｏｐａｃｉｔｙ）タンパク質、還元修飾可能な（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ−ｍｏｄｉｆｉａｂｌｅ）タンパク質（Ｒｍｐ）、並びに外膜小胞（ＯＭＶ）調製物（Ｐｌａｎｔｅら、Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ（２０００）１８２：８４８−８５５参照。）例えば、国際公開第９９／２４５７８号、同９９／３６５４４号、同９９／５７２８０号、同０２／０７９２４３号も参照されたい。）が挙げられる。
【００６７】
Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ：Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ抗原としては、血清型Ａ、Ｂ、Ｂａ及びＣ（トラコーマの病原体、失明の原因）、（性病性リンパ肉芽腫に関連した）血清型Ｌ１、Ｌ２＆Ｌ３、並びに血清型Ｄ〜Ｋに由来する抗原が挙げられる。Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｓ抗原としては、ＰｅｐＡ（ＣＴ０４５）、ＬｃｒＥ（ＣＴ０８９）、ＡｒｔＪ（ＣＴ３８１）、ＤｎａＫ（ＣＴ３９６）、ＣＴ３９８、ＯｍｐＨ−ｌｉｋｅ（ＣＴ２４２）、Ｌ７／Ｌ１２（ＣＴ３１６）、ＯｍｃＡ（ＣＴ４４４）、ＡｔｏｓＳ（ＣＴ４６７）、ＣＴ５４７、Ｅｎｏ（ＣＴ５８７）、ＨｒｔＡ（ＣＴ８２３）及びＭｕｒＧ（ＣＴ７６１）を含めて、国際公開第００／３７４９４号、同０３／０４９７６２号、同０３／０６８８１１号又は同０５／００２６１９号で特定された抗原も挙げることができる。
【００６８】
Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ（梅毒）：梅毒抗原としてはＴｍｐＡ抗原が挙げられる。
【００６９】
（軟性下かんを引き起こす）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ：ｄｕｃｒｅｙｉ抗原としては外膜タンパク質（ＤｓｒＡ）が挙げられる。
【００７０】
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ又はＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ：抗原としては、米国特許第６，７５６，３６１号に記載の三糖繰り返し又は他のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ由来の抗原が挙げられる。
【００７１】
Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ：Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ抗原としては、Ｃａｇ、Ｖａｃ、Ｎａｐ、ＨｏｐＸ、ＨｏｐＹ及び／又はウレアーゼ抗原が挙げられる。
【００７２】
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ：抗原としては、Ｓ．ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ抗原の１６０ｋＤａ赤血球凝集素が挙げられる。
【００７３】
Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ抗原としてはＬＰＳが挙げられる（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２００２  Ａｕｇｕｓｔ；７０（８）：４４１４）。
【００７４】
Ｅ．ｃｏｌｉ：Ｅ．ｃｏｌｉ抗原は、腸毒性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＥＴＥＣ）、腸管凝集性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＥＡｇｇＥＣ）、分散接着性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＤＡＥＣ）、腸病原性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＥＰＥＣ）及び／又は腸管出血性Ｅ．ｃｏｌｉ（ＥＨＥＣ）に由来し得る。
【００７５】
Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ（炭そ）：Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ抗原は、場合によっては無毒化され、Ａ成分（致死因子（ＬＦ）及び浮腫因子（ＥＦ））から選択することができ、そのどちらも防御抗原（ＰＡ）として知られる共通Ｂ成分を共有し得る。
【００７６】
Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ（ペスト）：ペスト抗原としては、Ｆ１きょう膜抗原（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２００３  Ｊａｎ；７１（１））：３７４−３８３、ＬＰＳ（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．１９９９  Ｏｃｔ；６７（１０）：５３９５）、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ  Ｖ抗原（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．１９９７  Ｎｏｖ；６５（１１）：４４７６−４４８２）が挙げられる。
【００７７】
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ：ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原としては、場合によっては陽イオン性脂質小胞中に処方された、リポタンパク質、ＬＰＳ、ＢＣＧ抗原、抗原８５Ｂ（Ａｇ８５Ｂ）及び／又はＥＳＡＴ−６の融合タンパク質（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２００４  Ｏｃｔｏｂｅｒ；７２（１０）：６１４８）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（Ｍｔｂ）イソクエン酸デヒドロゲナーゼ関連抗原（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００４  Ａｕｇ  ２４；１０１（３４）：１２６５２）、及び／又はＭＰＴ５１抗原（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２００４  Ｊｕｌｙ；７２（７）：３８２９）が挙げられる。
【００７８】
Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ：抗原としては、外膜プロテインＡ及び／又はＢ（ＯｍｐＢ）（Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．２００４  Ｎｏｖ  １；１７０２（２）：１４５）を含めた外膜タンパク質、ＬＰＳ、及び表面タンパク質抗原（ＳＰＡ）（Ｊ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．１９８９  Ｊｕｎ；２  Ｓｕｐｐｌ：８１）が挙げられる。
【００７９】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ。細菌性抗原は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓに由来し得る。
【００８０】
Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ：抗原としては、国際公開第０２／０２６０６号で特定されたものが挙げられる。
【００８１】
Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ：抗原としては、プロテイナーゼ抗原、ＬＰＳ、特にＶｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ  ＩＩのリポ多糖、Ｏ１  Ｉｎａｂａ  Ｏ特異的多糖、Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａ  Ｏ１３９、ＩＥＭ１０８ワクチンの抗原（Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２００３  Ｏｃｔ；７１（１０）：５４９８−５０４）、及び／又は閉鎖帯毒素（Ｚｏｔ）が挙げられる。
【００８２】
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ（腸チフス）：抗原としては、きょう膜多糖、好ましくは複合体（Ｖｉ、すなわちｖａｘ−ＴｙＶｉ）が挙げられる。
【００８３】
Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（ライム病）：抗原としては、（ＯｓｐＡ、ＯｓｐＢ、ＯｓｐＣ、ＯｓｐＤなどの）リポタンパク質、ＯｓｐＥ関連タンパク質（Ｅｒｐｓ）などの他の表面タンパク質、（ＤｂｐＡなどの）デコリン結合タンパク質、並びにＰ３９及びＰ１３に関連した抗原などの抗原的に可変のＶＩタンパク質（内在性膜タンパク質、Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２００１  Ｍａｙ；６９（５）：３３２３−３３３４）、ＶｌｓＥ抗原変異タンパク質（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９９  Ｄｅｃ；３７（１２）：３９９７）が挙げられる。
【００８４】
Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ：抗原としては、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ外膜タンパク質（ＯＭＰ）が挙げられる。
【００８５】
Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ：抗原としては、ＯＭＰ  Ａを含めたＯＭＰ、又は場合によっては破傷風トキソイドと複合化された、多糖が挙げられる。
【００８６】
本発明の更なる細菌性抗原は、上記のいずれかのきょう膜抗原、多糖抗原又はタンパク質抗原であり得る。更なる細菌性抗原としては、外膜小胞（ＯＭＶ）調製物も挙げることができる。さらに、抗原としては、上記細菌のいずれかの生、弱毒化及び／又は精製バージョンが挙げられる。本発明の抗原は、グラム陰性又はグラム陽性菌に由来し得る。本発明の抗原は、好気性又は嫌気性菌に由来し得る。
【００８７】
さらに、上記細菌由来の糖類（多糖、ＬＰＳ、ＬＯＳ又はオリゴ糖）のいずれも、担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）などの別の作用物質又は抗原と複合化することができる。かかる複合化は、米国特許第５，３６０，８９７号及びＣａｎ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９８４  Ｍａｙ；６２（５）：２７０−５に記載されるように、糖上のカルボニル部分からタンパク質上のアミノ基への還元的アミノ化によってもたらされる直接複合化であり得る。あるいは、糖類は、スクシンアミド、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９６及びＣＲＣ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ，１９９３に記載の別の結合などのリンカーを介して複合化することができる。
【００８８】
Ｂ．ウイルス抗原
本発明における使用に適切なウイルス抗原としては、不活化（又は死滅）ウイルス、弱毒ウイルス、スプリットウイルス製剤、精製サブユニット製剤、ウイルスから単離、精製又は誘導することができるウイルスタンパク質、及びウイルス様粒子（ＶＬＰ）が挙げられる。ウイルス抗原は、細胞培養又は他の基質上で増殖されたウイルスに由来し得る。あるいは、ウイルス抗原を組換え発現させることができる。ウイルス抗原は、好ましくは、その生活環の少なくとも１時期中にウイルス表面に露出するエピトープを含む。ウイルス抗原は、好ましくは、複数の血清型又は単離物にわたって保存される。ウイルス抗原としては、下記ウイルスの１種類以上に由来する抗原、及び下に明記する特異抗原例が挙げられる。
【００８９】
オルソミクソウイルス：ウイルス抗原は、インフルエンザＡ、Ｂ及びＣ型などのオルソミクソウイルスに由来し得る。オルソミクソウイルス抗原は、赤血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、基質タンパク質（Ｍ１）、膜タンパク質（Ｍ２）、転写酵素成分（ＰＢ１、ＰＢ２及びＰＡ）の１種類以上を含めて、ウイルスタンパク質の１種類以上から選択することができる。好ましい抗原としては、ＨＡ及びＮＡが挙げられる。
【００９０】
インフルエンザ抗原は、汎流行期間（毎年）のインフルエンザ系統に由来し得る。あるいは、インフルエンザ抗原は、汎発性の汎流行を引き起こす可能性がある系統（すなわち、現在流布する系統における赤血球凝集素よりも新しい赤血球凝集素を有するインフルエンザ系統、又はトリ被験体において病原性であり、人間集団において水平伝播する可能性があるインフルエンザ系統、又はヒトに対して病原性であるインフルエンザ系統）に由来し得る。
【００９１】
パラミクソウイルス科ウイルス：ウイルス抗原は、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、モルビリウイルス（麻疹）などのパラミクソウイルス科ウイルスに由来し得る。
【００９２】
ニューモウイルス：ウイルス抗原は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ウシ呼吸器合胞体ウイルス、マウス肺炎ウイルス、シチメンチョウ鼻気管炎ウイルスなどのニューモウイルスに由来し得る。好ましくは、ニューモウイルスはＲＳＶである。ニューモウイルス抗原は、表面タンパク質融合物（Ｆ）、糖タンパク質（Ｇ）及び低分子疎水性タンパク質（ＳＨ）、基質タンパク質Ｍ及びＭ２、ヌクレオカプシドタンパク質Ｎ、Ｐ及びＬ、並びに非構造タンパク質ＮＳ１及びＮＳ２を含めて、以下のタンパク質の１種類以上から選択することができる。好ましいニューモウイルス抗原としては、Ｆ、Ｇ及びＭが挙げられる。例えば、Ｊ  Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．２００４  Ｎｏｖ；８５（Ｐｔ  １１）：３２２９）を参照されたい。ニューモウイルス抗原は、キメラウイルスにおいても処方することができ、又はキメラウイルスに由来することもできる。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶとＰＩＶの両方の成分を含み得る。
【００９３】
パラミクソウイルス：ウイルス抗原は、パラインフルエンザウイルス１〜４型（ＰＩＶ）、流行性耳下腺炎、センダイウイルス、シミアンウイルス５、ウシパラインフルエンザウイルス、及びニューカッスル病ウイルスなどのパラミクソウイルスに由来し得る。好ましくは、パラミクソウイルスは、ＰＩＶ又は流行性耳下腺炎である。パラミクソウイルス抗原は、以下のタンパク質の１種類以上から選択することができる：赤血球凝集素−ノイラミニダーゼ（ＨＮ）、融合タンパク質Ｆ１及びＦ２、核タンパク質（ＮＰ）、リンタンパク質（Ｐ）、大型タンパク質（Ｌ）及び基質タンパク質（Ｍ）。好ましいパラミクソウイルスタンパク質としては、ＨＮ、Ｆ１及びＦ２が挙げられる。パラミクソウイルス抗原は、キメラウイルスにおいても処方することができ、又はキメラウイルスに由来することもできる。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶとＰＩＶの両方の成分を含み得る。市販流行性耳下腺炎ワクチンは、一価の形の、又は麻疹及び風疹ワクチン（ＭＭＲ）と組み合わせて、弱毒生流行性耳下腺炎ウイルスを含む。
【００９４】
モルビリウイルス：ウイルス抗原は、麻疹などのモルビリウイルスに由来し得る。モルビリウイルス抗原は、以下のタンパク質の１種類以上から選択することができる：赤血球凝集素（Ｈ）、糖タンパク質（Ｇ）、融合因子（Ｆ）、大型タンパク質（Ｌ）、核タンパク質（ＮＰ）、ポリメラーゼリンタンパク質（Ｐ）及び基質（Ｍ）。市販麻疹ワクチンは、典型的には流行性耳下腺炎及び風疹（ＭＭＲ）と組み合わせて、弱毒生麻疹ウイルスを含む。
【００９５】
ピコルナウイルス：ウイルス抗原は、エンテロウイルス、ライノウイルス、ヘパルナウイルス、カルジオウイルス、及びアフトウイルスなどのピコルナウイルスに由来し得る。ポリオウイルスなどのエンテロウイルスに由来する抗原が好ましい。
【００９６】
エンテロウイルス：ウイルス抗原は、ポリオウイルス１、２又は３型、コクサッキーＡウイルス１から２２及び２４型、コクサッキーＢウイルス１から６型、エコーウイルス（ＥＣＨＯ）ウイルス）１から９、１１から２７及び２９から３４型、エンテロウイルス６８から７１型などのエンテロウイルスに由来し得る。好ましくは、エンテロウイルスはポリオウイルスである。エンテロウイルス抗原は、好ましくは、以下のカプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３及びＶＰ４の１種類以上から選択される。市販ポリオワクチンとしては、不活化ポリオワクチン（ＩＰＶ）及び経口ポリオウイルスワクチン（ＯＰＶ）が挙げられる。
【００９７】
ヘパルナウイルス：ウイルス抗原は、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）などのヘパルナウイルスに由来し得る。市販ＨＡＶワクチンとしては、不活化ＨＡＶワクチンが挙げられる。
【００９８】
トガウイルス：ウイルス抗原は、ルビウイルス、アルファウイルス、又はアルテリウイルスなどのトガウイルスに由来し得る。風疹ウイルスなどのルビウイルスに由来する抗原が好ましい。トガウイルス抗原は、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｃ、ＮＳＰ−１、ＮＳＰＯ−２、ＮＳＰ−３又はＮＳＰ−４から選択することができる。トガウイルス抗原は、好ましくは、Ｅ１、Ｅ２又はＥ３から選択される。市販風疹ワクチンとしては、典型的には流行性耳下腺炎及び麻疹ワクチン（ＭＭＲ）と組み合わせた、低温適応生ウイルスが挙げられる。
【００９９】
フラビウイルス：ウイルス抗原は、ダニ媒介脳炎（ＴＢＥ）、デング熱（１、２、３又は４型）、黄熱病、日本脳炎、西ナイル脳炎、セントルイス脳炎、ロシア春夏脳炎、ポワッサン脳炎などのフラビウイルスに由来し得る。フラビウイルス抗原は、ＰｒＭ、Ｍ、Ｃ、Ｅ、ＮＳ−１、ＮＳ−２ａ、ＮＳ２ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂ及びＮＳ５から選択することができる。フラビウイルス抗原は、好ましくは、ＰｒＭ、Ｍ及びＥから選択される。市販ＴＢＥワクチンとしては、不活化ウイルスワクチンが挙げられる。
【０１００】
ペスチウイルス：ウイルス抗原は、ウシウイルス性下痢（ＢＶＤＶ）、ブタコレラ（ＣＳＦＶ）、又はボーダー病（ＢＤＶ）などのペスチウイルスに由来し得る。
【０１０１】
ヘパドナウイルス：ウイルス抗原は、Ｂ型肝炎ウイルスなどのヘパドナウイルスに由来し得る。ヘパドナウイルス抗原は、表面抗原（Ｌ、Ｍ及びＳ）、コア抗原（ＨＢｃ、ＨＢｅ）から選択することができる。市販ＨＢＶワクチンとしては、表面抗原Ｓタンパク質を含むサブユニットワクチンが挙げられる。
【０１０２】
Ｃ型肝炎ウイルス：ウイルス抗原は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に由来し得る。ＨＣＶ抗原は、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ１／Ｅ２、ＮＳ３４５ポリタンパク質、ＮＳ３４５コアポリタンパク質、コア、及び／又は非構造領域由来のペプチドの１種類以上から選択することができる（Ｈｏｕｇｈｔｏｎら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ（１９９１）１４：３８１）。
【０１０３】
ラブドウイルス：ウイルス抗原は、リッサウイルス（狂犬病ウイルス）、及びベシクロウイルス（ＶＳＶ）などのラブドウイルスに由来し得る。ラブドウイルス抗原は、糖タンパク質（Ｇ）、核タンパク質（Ｎ）、大型タンパク質（Ｌ）、非構造タンパク質（ＮＳ）から選択することができる。市販狂犬病ウイルスワクチンは、ヒト二倍体細胞又は胎仔アカゲザル肺細胞上で増殖された死滅ウイルスを含む。
【０１０４】
カリシウイルス科：ウイルス抗原は、ノーウォークウイルス、ならびにハワイウイルス、及びスノーマウンテン（Ｓｎｏｗ  Ｍｏｕｎｔａｉｎ）ウイルスなどのノーウォーク様ウイルスなどのカリシウイルス科に由来し得る。
【０１０５】
コロナウイルス：ウイルス抗原は、コロナウイルス、ＳＡＲＳ、ヒト呼吸器コロナウイルス、トリ伝染性気管支炎（ＩＢＶ）、マウス肝炎ウイルス（ＭＨＶ）及びブタ伝染性胃腸炎ウイルス（ＴＧＥＶ）に由来し得る。コロナウイルス抗原は、スパイク（Ｓ）、エンベロープ（Ｅ）、基質（Ｍ）、ヌクレオカプシド（Ｎ）及び赤血球凝集素−エステラーゼ糖タンパク質（ＨＥ）から選択することができる。好ましくは、コロナウイルス抗原はＳＡＲＳウイルスに由来する。ＳＡＲＳウイルス抗原は国際公開第０４／９２３６０号に記載されている。
【０１０６】
レトロウイルス：ウイルス抗原は、オンコウイルス、レンチウイルス、又はスプーマウイルスなどのレトロウイルスに由来し得る。オンコウイルス抗原は、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−２又はＨＴＬＶ−５に由来し得る。レンチウイルス抗原は、ＨＩＶ−１又はＨＩＶ−２に由来し得る。レトロウイルス抗原は、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｘ、ｔａｔ、ｒｅｘ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｕ及びｖｐｒから選択することができる。ＨＩＶ抗原は、ｇａｇ（ｐ２４ｇａｇ及びｐ５５ｇａｇ）、ｅｎｖ（ｇｐ１６０及びｇｐ４１）、ｐｏｌ、ｔａｔ、ｎｅｆ、ｒｅｖ  ｖｐｕ、ミニタンパク質（好ましくは、ｐ５５ｇａｇ及びｇｐ１４０ｖ欠失）から選択することができる。ＨＩＶ抗原は、以下の系統の１種類以上に由来し得る：ＨＩＶＩＩＩｂ、ＨＩＶＳＦ２、ＨＩＶＬＡＶ、ＨＩＶＬＡＩ、ＨＩＶＭＮ、ＨＩＶ−１ＣＭ２３５、ＨＩＶ−１ＵＳ４。
【０１０７】
レオウイルス：ウイルス抗原は、オルトレオウイルス、ロタウイルス、オルビウイルス、又はコルチウイルスなどのレオウイルスに由来し得る。レオウイルス抗原は、構造タンパク質λ１、λ２、λ３、μ１、μ２、σ１、σ２若しくはσ３又は非構造タンパク質σＮＳ、μＮＳ若しくはσ１ｓから選択することができる。好ましいレオウイルス抗原は、ロタウイルスに由来し得る。ロタウイルス抗原は、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４（又は切断産物ＶＰ５及びＶＰ８）、ＮＳＰ１、ＶＰ６、ＮＳＰ３、ＮＳＰ２、ＶＰ７、ＮＳＰ４又はＮＳＰ５から選択することができる。好ましいロタウイルス抗原としては、ＶＰ４（又は切断産物ＶＰ５及びＶＰ８）及びＶＰ７が挙げられる。
【０１０８】
パルボウイルス：ウイルス抗原は、パルボウイルスＢ１９などのパルボウイルスに由来し得る。パルボウイルス抗原は、ＶＰ−１、ＶＰ−２、ＶＰ−３、ＮＳ−１及びＮＳ−２から選択することができる。好ましくは、パルボウイルス抗原はカプシドタンパク質ＶＰ−２である。
【０１０９】
デルタ肝炎ウイルス（ＨＤＶ）：ウイルス抗原は、ＨＤＶ、特にＨＤＶ由来のδ抗原に由来し得る（例えば、米国特許第５，３７８，８１４号参照）。
【０１１０】
Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）：ウイルス抗原はＨＥＶに由来し得る。
【０１１１】
Ｇ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）：ウイルス抗原はＨＧＶに由来し得る。
【０１１２】
ヒトヘルペスウイルス：ウイルス抗原は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、水痘−帯状ほう疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ７）、ヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ８）などのヒトヘルペスウイルスに由来し得る。ヒトヘルペスウイルス抗原は、前初期タンパク質（α）、初期タンパク質（β）及び後期タンパク質（γ）から選択することができる。ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２系統に由来し得る。ＨＳＶ抗原は、糖タンパク質ｇＢ、ｇＣ、ｇＤ及びｇＨ、融合タンパク質（ｇＢ）、又は免疫回避タンパク質（ｇＣ、ｇＥ又はｇＩ）から選択することができる。ＶＺＶ抗原は、コア、ヌクレオカプシド、テグメント又はエンベロープタンパク質から選択することができる。弱毒生ＶＺＶワクチンが市販されている。ＥＢＶ抗原は、早期抗原（ＥＡ）タンパク質、ウイルスカプシド抗原（ＶＣＡ）、及び膜抗原（ＭＡ）の糖タンパク質から選択することができる。ＣＭＶ抗原は、カプシドタンパク質、（ｇＢ、及びｇＨなどの）エンベロープ糖タンパク質及びテグメントタンパク質から選択することができる。
【０１１３】
パポバウイルス：抗原は、パピローマウイルス、及びポリオーマウイルスなどのパポバウイルスに由来し得る。パピローマウイルスとしては、ＨＰＶ血清型１、２、４、５、６、８、１１、１３、１６、１８、３１、３３、３５、３９、４１、４２、４７、５１、５７、５８、６３及び６５が挙げられる。好ましくは、ＨＰＶ抗原は血清型６、１１、１６又は１８に由来する。ＨＰＶ抗原は、カプシドタンパク質（Ｌ１）及び（Ｌ２）、又はＥ１〜Ｅ７、又はその融合物から選択することができる。ＨＰＶ抗原は、好ましくは、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）中に処方される。ポリオミアウイルス（Ｐｏｌｙｏｍｙａｖｉｒｕｓ）としては、ＢＫウイルス及びＪＫウイルスが挙げられる。ポリオーマウイルス抗原は、ＶＰ１、ＶＰ２又はＶＰ３から選択することができる。
【０１１４】
本発明の組成物に関連して企図される、Ｖａｃｃｉｎｅｓ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐｌｏｔｋｉｎ  ａｎｄ  Ｏｒｅｎｓｔｅｉｎ  ｅｄ．２００４）；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍｕｒｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄ．２００２）；Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗ．Ｋ．Ｊｏｋｌｉｋ  ｅｄ．１９８８）；Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓ  ａｎｄ  Ｄ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ，ｅｄｓ．１９９１）に含まれる抗原、組成物、方法及び微生物を更に提供する。
【０１１５】
Ｃ．真菌抗原
本発明において使用される真菌抗原は、下記真菌の１種類以上に由来し得る。
【０１１６】
真菌抗原は、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ  ｆｌｏｃｃｕｓｕｍ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ  ａｕｄｏｕｉｎｉ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ  ｃａｎｉｓ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ  ｄｉｓｔｏｒｔｕｍ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ  ｅｑｕｉｎｕｍ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ  ｇｙｐｓｕｍ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ  ｎａｎｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｃｏｎｃｅｎｔｒｉｃｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｅｑｕｉｎｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｇａｌｌｉｎａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｇｙｐｓｅｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｍｅｇｎｉｎｉ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｑｕｉｎｃｋｅａｎｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｒｕｂｒｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｓｃｈｏｅｎｌｅｉｎｉ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｔｏｎｓｕｒａｎｓ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ、Ｔ．ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ  ｖａｒ．ａｌｂｕｍ、ｖａｒ．ｄｉｓｃｏｉｄｅｓ、ｖａｒ．ｏｃｈｒａｃｅｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｖｉｏｌａｃｅｕｍ及び／又はＴｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｆａｖｉｆｏｒｍｅを含めて、皮膚糸状菌に由来し得る。
【０１１７】
真菌病原体は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｙｄｏｗｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｇｌａｕｃｕｓ、Ｂｌａｓｔｏｓｃｈｉｚｏｍｙｃｅｓ  ｃａｐｉｔａｔｕｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｎｏｌａｓｅ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｐａｒａｋｗｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉ、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｃａｒｒｉｏｎｉｉ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｄｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃｌａｖａｔｕｍ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ、Ｐｙｔｈｉｕｍｎ  ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ、Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ  ｏｖａｌｅ、Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｂｏｕｌａｒｄｉｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ、Ｓｃｅｄｏｓｐｏｒｉｕｍ  ａｐｉｏｓｐｅｒｕｍ、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ  ｂｅｉｇｅｌｉｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍａｒｎｅｆｆｅｉ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ種、Ｆｏｎｓｅｃａｅａ種、Ｗａｎｇｉｅｌｌａ種、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ種、Ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓ種、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ種、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ種、Ｍｕｃｏｒ種、Ａｂｓｉｄｉａ種、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ種、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ種、Ｓａｋｓｅｎａｅａ種、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ種、Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ種、Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ種、Ｆｕｓａｒｉｕｍ種、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ種、Ｍｏｎｏｌｉｎｉａ種、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ種、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ種、Ｐｉｔｈｏｍｙｃｅｓ種及びＣｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ種に由来し得る。
【０１１８】
真菌抗原を生産するプロセスは当分野で周知である（米国特許第６，３３３，１６４号参照）。好ましい方法では、細胞壁が実質的に除去された又は少なくとも部分的に除去された真菌細胞から入手可能な不溶性画分から抽出され、分離された可溶化画分であって、プロセスが、生きている真菌細胞を得るステップ、細胞壁が実質的に除去された又は少なくとも部分的に除去された真菌細胞を得るステップ、細胞壁が実質的に除去された又は少なくとも部分的に除去された真菌細胞を破裂させるステップ、不溶性画分を得るステップ、及び不溶性画分から可溶化画分を抽出し、分離するステップを含むことを特徴とする。
【０１１９】
Ｄ．ＳＴＤ抗原
本発明の組成物は、性感染症（ＳＴＤ）に由来する１種類以上の抗原を含むことができる。かかる抗原は、クラミジア、陰部ヘルペス、（ＨＣＶなどの）肝炎、性器いぼ、淋疾、梅毒及び／又は軟性下かんなどのＳＴＤに対する予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｓ）又は治療を提供することができる（国際公開第００／１５２５５号参照）。抗原は、１種類以上のウイルス又は細菌性ＳＴＤに由来し得る。本発明において使用されるウイルス性ＳＴＤ抗原は、例えば、ＨＩＶ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１及びＨＳＶ−２）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）及び肝炎（ＨＣＶ）に由来し得る。本発明において使用される細菌性ＳＴＤ抗原は、例えば、Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｅ．ｃｏｌｉ及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅに由来し得る。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１２０】
Ｅ．呼吸器抗原
本発明の組成物は、呼吸器疾患を引き起こす病原体に由来する１種類以上の抗原を含むことができる。例えば、呼吸器抗原は、オルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、ＶＺＶ、及びコロナウイルス（ＳＡＲＳ）などの呼吸器ウイルスに由来し得る。呼吸器抗原は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓなどの呼吸器疾患を引き起こす細菌に由来し得る。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１２１】
Ｆ．小児用ワクチン抗原
本発明の組成物は、小児被験体における使用に適切な１種類以上の抗原を含むことができる。小児被験体は、典型的には、約３歳未満、約２歳未満又は約１歳未満である。小児用抗原は、６か月、１、２又は３年にわたって複数回投与することができる。小児用抗原は、小児集団を標的にし得るウイルス、及び／又は小児集団が感染しやすいウイルスに由来し得る。小児用ウイルス抗原としては、オルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ及び流行性耳下腺炎）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、及び水痘帯状ほう疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）の１種類以上に由来する抗原が挙げられる。小児用細菌性抗原としては、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群レンサ球菌）、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ（破傷風）、Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ（ジフテリア）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ（Ｈｉｂ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群レンサ球菌）及びＥ．ｃｏｌｉの１種類以上に由来する抗原が挙げられる。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１２２】
Ｇ．高齢者又は免疫不全個体における使用に適切な抗原
本発明の組成物は、高齢者又は免疫不全個体における使用に適切な１種類以上の抗原を含むことができる。かかる個体は、標的抗原に対する免疫応答を改善するために、より頻繁に、より高用量で、又はアジュバント添加処方で、ワクチン接種する必要があり得る。高齢者又は免疫不全個体における使用を対象にすることができる抗原としては、以下の病原体の１種類以上に由来する抗原が挙げられる：Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群レンサ球菌）、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ（破傷風）、Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ（ジフテリア）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ（Ｈｉｂ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群レンサ球菌）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、Ｃｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、オルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ及び流行性耳下腺炎）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、水痘帯状ほう疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１２３】
Ｈ．青年用ワクチンにおける使用に適切な抗原
本発明の組成物は、青年被験体における使用に適切な１種類以上の抗原を含むことができる。青年は、以前に投与された小児用抗原の追加免疫を必要とすることがある。青年における使用に適切であり得る小児用抗原は上述されている。さらに、青年は、性行為開始前に防御又は治療免疫を確実にするためにＳＴＤ病原体に由来する抗原を受ける対象になり得る。青年における使用に適切であり得るＳＴＤ抗原は上述されている。
【０１２４】
Ｉ．抗原処方
本発明の別の態様においては、吸着した抗原を有する微粒子を製造する方法を提供する。この方法は、（ａ）（ｉ）水と、（ｉｉ）洗剤と、（ｉｉｉ）有機溶媒と、（ｉｖ）ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ酸無水物及びポリシアノアクリラートからなる群より選択される生分解性ポリマーとを含む混合物を分散させることによって乳濁液を提供することであって、ポリマーは、典型的には、有機溶媒に対して約１％から約３０％の濃度で混合物中に存在し、洗剤は、典型的には、約０．００００１：１から約０．１：１（より典型的には、約０．０００１：１から約０．１：１、約０．００１：１から約０．１：１、又は約０．００５：１から約０．１：１）の重量対重量の洗剤対ポリマー比で混合物中に存在する、提供すること；（ｂ）乳濁液から有機溶媒を除去すること；及び（ｃ）抗原を微粒子表面に吸着させることを含む。ある実施形態においては、生分解性ポリマーは、有機溶媒に対して約３％から約１０％の濃度で存在する。
【０１２５】
本明細書において使用される微粒子は、滅菌可能な無毒の生分解性材料で形成される。かかる材料としては、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ酸無水物、ＰＡＣＡ及びポリシアノアクリラートが挙げられるが、それだけに限定されない。好ましくは、本発明で使用される微粒子は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、特に、ポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」）、又はポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（「ＰＬＧ」又は「ＰＬＧＡ」）などのＤ，Ｌ−ラクチドとグリコリド若しくはグリコール酸の共重合体、又はＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンの共重合体から誘導される。微粒子は、様々な分子量を有する、さらにＰＬＧなどの共重合体の場合には様々なラクチド：グリコリド比を有する、種々の重合体出発材料のいずれかから誘導することができ、その選定は主として選択の問題であり、同時投与される巨大分子にある程度依存する。これらのパラメータについては、以下でより詳細に考察する。
【０１２６】
更なる抗原としては、外膜小胞（ＯＭＶ）調製物を挙げることもできる。
【０１２７】
追加の処方方法及び抗原（特に腫よう抗原）は、米国特許出願第０９／５８１，７７２号に記載されている。
【０１２８】
Ｊ．抗原の参考文献
以下の参考文献は、本発明の組成物に関連して有用な抗原を含む。
【０１２９】
【数１】
2014230547.tif 000005
【０１３０】
【数２】
2014230547.tif 000006
【０１３１】
【数３】
2014230547.tif 000007
上記特許、特許出願及び学術論文すべての内容を、本明細書において完全に示されたが如く、参照により本明細書に援用する。
【０１３２】
糖又は炭水化物抗原を使用する場合、糖又は炭水化物抗原は、好ましくは、免疫原性を高めるために担体タンパク質と複合化される。Ｒａｍｓａｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｌａｎｃｅｔ  ３５７（９２５１）：１９５−１９６；Ｌｉｎｄｂｅｒｇ（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ  １７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ２８−３６；Ｂｕｔｔｅｒｙ＆Ｍｏｘｏｎ（２０００）Ｊ  Ｒ  Ｃｏｌｌ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ  Ｌｏｎｄ  ３４：１６３−１６８；Ａｈｍａｄ＆Ｃｈａｐｎｉｃｋ（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ  １３：１１３−１３３，ｖｉｉ；Ｇｏｌｄｂｌａｔｔ（１９９８）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４７：５６３−５６７；欧州特許第０  ４７７  ５０８号；米国特許第５，３０６，４９２号；国際公開第９８／４２７２１号；Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ（ｅｄｓ．Ｃｒｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．）ＩＳＢＮ  ３８０５５４９３２６、特にｖｏｌ．１０：４８−１１４；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ＩＳＢＮ：０１２３４２３３６８又は０１２３４２３３５Ｘを参照されたい。好ましい担体タンパク質は、ジフテリア、又は破傷風トキソイドなどの細菌毒素又はトキソイドである。ＣＲＭ１９７ジフテリアトキソイドが特に好ましい。
【０１３３】
他の担体ポリペプチドとしては、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質（ＥＰ−Ａ−０３７２５０１）、合成ペプチド（ＥＰ−Ａ−０３７８８８１及びＥＰ−Ａ０４２７３４７）、熱ショックタンパク質（国際公開第９３／１７７１２号及び国際公開第９４／０３２０８号）、百日咳タンパク質（国際公開第９８／５８６６８号及びＥＰ  Ａ  ０４７１１７７号）、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のプロテインＤ（国際公開第００／５６３６０号）、サイトカイン（国際公開第９１／０１１４６号）、リンホカイン、ホルモン、成長因子、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素Ａ又はＢ（国際公開第００／６１７６１号）、鉄取り込みタンパク質（国際公開第０１／７２３３７号）などが挙げられる。混合物がセリグラフ（ｓｅｒｉｇｒａｐｈ）ＡとＣの両方からのきょう膜糖を含む場合、ＭｅｎＡ糖：ＭｅｎＣ糖の比（ｗ／ｗ）は１より大きい（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１以上）ことが好ましいことがある。種々の糖類を同じ又は異なるタイプの担体タンパク質と複合化することができる。任意の適切な複合化反応を、必要に応じて任意の適切なリンカーと一緒に、使用することができる。
【０１３４】
毒性タンパク質抗原は、必要に応じて無毒化することができる（例えば、化学的及び／又は遺伝的手段による百日咳毒素の無毒化）。
【０１３５】
薬学的に許容される担体
本発明の組成物は、典型的には、上記成分に加えて、１種類以上の「薬学的に許容される担体」を含む。これらの担体としては、組成物を受ける個体に有害な抗体の産生をそれ自体が誘発しない任意の担体が挙げられる。適切な担体は、典型的には、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、重合体アミノ酸、アミノ酸共重合体、及び（油滴、又はリポソームなどの）脂質凝集体などの大きく代謝の遅い巨大分子である。かかる担体は当業者に周知である。組成物は、水、食塩水、グリセロールなどの希釈剤も含むことができる。さらに、湿潤剤又は乳化剤、ｐＨ緩衝物質などの補助物質も存在することができる。薬学的に許容される成分の徹底した考察は、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ．２０ｔｈ  ｅｄ．，ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２で得られる。
【０１３６】
免疫調節剤
アジュバント
本発明のワクチンは、他の免疫調節剤と併せて投与することができる。特に、組成物は、通常、アジュバントを含む。本発明で使用されるアジュバントとしては、下に示す以下のものの１種類以上が挙げられるが、それだけに限定されない。
【０１３７】
Ａ．無機質含有組成物
本発明におけるアジュバントとしての使用に適切な無機質含有組成物としては、アルミニウム塩、及びカルシウム塩などの無機塩が挙げられる。本発明は、水酸化物（例えば、オキシ水酸化物）、リン酸塩（例えば、ヒドロキシリン酸塩、オルトリン酸塩）、硫酸塩（例えば、Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ．．．（１９９５）ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ＆Ｎｅｗｍａｎ．ＩＳＢＮ：０３０６４４８６７Ｘ．Ｐｌｅｎｕｍ．の８及び９章参照）などの無機塩、又は種々の無機化合物の混合物（例えば、場合によっては過剰のリン酸塩を含む、リン酸塩と水酸化物アジュバントの混合物）を含み、該化合物は任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶、アモルファスなど）をとり、塩（単数又は複数）に吸着していることが好ましい。無機質含有組成物は、金属塩粒子として処方することもできる（国際公開第００／２３１０５号）。
【０１３８】
アルミニウム塩は、Ａｌ３＋の用量が０．２から１．０ｍｇ／用量であるように本発明のワクチンに含めることができる。
【０１３９】
一実施形態においては、本発明において使用されるアルミニウム系アジュバントは、ミョウバン（硫酸アルミニウムカリウム（ＡｌＫ（ＳＯ４）２））、又はリン酸緩衝液中の抗原をミョウバンと混合し、続いて水酸化アンモニウム、又は水酸化ナトリウムなどの塩基で滴定し、沈殿させることによってｉｎ−ｓｉｔｕで形成されるものなどのミョウバン誘導体である。
【０１４０】
本発明のワクチン処方に使用される別のアルミニウム系アジュバントは、表面積約５００ｍ２／ｇの優れた吸着剤である水酸化アルミニウムアジュバント（Ａｌ（ＯＨ）３）又は結晶性オキシ水酸化アルミニウム（ＡｌＯＯＨ）である。あるいは、水酸化アルミニウムアジュバントのヒドロキシル基の一部又は全部の代わりにリン酸基を含む、リン酸アルミニウムアジュバント（ＡｌＰＯ４）又はヒドロキシリン酸アルミニウムが提供される。本明細書で提供する好ましいリン酸アルミニウムアジュバントは、アモルファスであり、酸性、塩基性及び中性媒体に可溶である。
【０１４１】
別の一実施形態においては、本発明のアジュバントは、リン酸アルミニウムと水酸化アルミニウムの両方を含む。そのより詳細な一実施形態においては、アジュバントは、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１又は９：１を超える重量比のリン酸アルミニウムと水酸化アルミニウムなど、水酸化アルミニウムよりも多量のリン酸アルミニウムを含む。更により詳細には、ワクチン中のアルミニウム塩は、ワクチン用量当たり０．４から１．０ｍｇ、又はワクチン用量当たり０．４から０．８ｍｇ、又はワクチン用量当たり０．５から０．７ｍｇ、又はワクチン用量当たり約０．６ｍｇで存在する。
【０１４２】
一般に、好ましいアルミニウム系アジュバント（単数又は複数）、又はリン酸アルミニウム対水酸化アルミニウムなどの複数のアルミニウム系アジュバントの比は、抗原が所望のｐＨでアジュバントと反対の電荷を保有するように、分子間の静電引力の最適化によって選択される。例えば、リン酸アルミニウムアジュバント（等電点＝４）は、ｐＨ７．４でリゾチームを吸着するが、アルブミンを吸着しない。アルブミンを標的にする場合には、水酸化アルミニウムアジュバントが選択されるであろう（ｉｅｐ  １１．４）。あるいは、リン酸塩による水酸化アルミニウムの前処理は、その等電点を低下させ、より塩基性の抗原に対して水酸化アルミニウムを好ましいアジュバントにする。
【０１４３】
Ｂ．油乳濁液
本発明におけるアジュバントとしての使用に適切な油乳濁液組成物は、ＭＦ５９（マイクロフルイダイザーを用いてサブミクロン粒子中に処方された５％スクアレン、０．５％ＴＷＥＥＮ（商標）８０及び０．５％Ｓｐａｎ８５）などのスクアレン−水乳濁液を含む。国際公開第９０／１４８３７号を参照されたい。Ｐｏｄｄａ，Ｖａｃｃｉｎｅ（２００１）１９：２６７３−２６８０；Ｆｒｅｙら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：４２３４−４２３７も参照されたい。ＭＦ５９は、ＦＬＵＡＤ（商標）インフルエンザウイルス三価サブユニットワクチンにおいてアジュバントとして使用される。
【０１４４】
組成物における使用に特に好ましいアジュバントは、サブミクロンの水中油型乳濁液である。本明細書において使用される好ましいサブミクロン水中油型乳濁液は、４〜５％ｗ／ｖスクアレン、０．２５〜１．０％ｗ／ｖＴＷＥＥＮ（商標）８０□（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート）及び／又は０．２５〜１．０％ＳＰＡＮ８５（商標）（トリオレイン酸ソルビタン）及び必要に応じてＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルアトミニル（ｉｓｏｇｌｕａｔｍｉｎｙｌ）−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−フイドロキシホスホホリルオキシ（ｈｕｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈｏｐｈｏｒｙｌｏｘｙ））−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）を含むサブミクロン水中油型乳濁液など、異なる量のＭＴＰ−ＰＥを場合によっては含む、スクアレン／水乳濁液、例えば、「ＭＦ５９」として知られるサブミクロン水中油型乳濁液である（国際公開第９０／１４８３７号；米国特許第６，２９９，８８４号及び同６，４５１，３２５号、並びにＯｔｔら、ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．ａｎｄ  Ｎｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．ｅｄｓ．）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９５，ｐｐ．２７７−２９６）。ＭＦ５９は、Ｍｏｄｅｌ  １１０Ｙマイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）などのマイクロフルイダイザーを用いてサブミクロン粒子中に処方された、４〜５％ｗ／ｖスクアレン（例えば、４．３％）、０．２５〜０．５％ｗ／ｖＴＷＥＥＮ（商標）８０及び０．５％ｗ／ｖＳＰＡＮ８５（商標）を含み、必要に応じて様々な量のＭＴＰ−ＰＥを含む。例えば、ＭＴＰ−ＰＥは、用量当たり約０〜５００μｇ、より好ましくは用量当たり０〜２５０μｇ、最も好ましくは用量当たり０〜１００μｇの量で存在し得る。本明細書では「ＭＦ５９−０」という用語は、ＭＴＰ−ＰＥを含まない上記サブミクロン水中油型乳濁液を指し、ＭＦ５９−ＭＴＰという用語は、ＭＴＰ−ＰＥを含む処方を表す。例えば、「ＭＦ５９−１００」は用量当たりＭＴＰ−ＰＥ  １００μｇを含むなどである。本明細書において使用される別のサブミクロン水中油型乳濁液ＭＦ６９は、４．３％ｗ／ｖスクアレン、０．２５％ｗ／ｖＴＷＥＥＮ（商標）８０及び０．７５％ｗ／ｖＳＰＡＮ８５（商標）、並びに場合によってはＭＴＰ−ＰＥを含む。更に別のサブミクロン水中油型乳濁液は、ＳＡＦとしても知られるＭＦ７５であり、やはりサブミクロン乳濁液中に微少流動化された、１０％スクアレン、０．４％ＴＷＥＥＮ（商標）８０、５％ＰｌｕｒｏｎｉｃブロックドポリマーＬ１２１及びｔｈｒ−ＭＤＰを含む。ＭＦ７５−ＭＴＰは、用量当たりＭＴＰ−ＰＥ  １００〜４００μｇなどのＭＴＰを含むＭＦ７５処方を表す。
【０１４５】
組成物において使用されるサブミクロン水中油型乳濁液、その製造方法、及びムラミルペプチドなどの免疫賦活剤は、国際公開第９０／１４８３７号及び米国特許第６，２９９，８８４号及び同６，４５１，３２５号に詳述されている。
【０１４６】
完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）及び不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）を本発明におけるアジュバントとして使用することもできる。
【０１４７】
Ｃ．サポニン処方
サポニン処方を本発明におけるアジュバントとして使用することもできる。サポニンは、広範な植物種の樹皮、葉、茎、根、さらには花に存在する異種グループのステロールグリコシド及びトリテルペノイドグリコシドである。Ｑｕｉｌｌａｉａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの木の樹皮から単離されるサポニンは、アジュバントとして広範に研究されてきた。サポニンは、Ｓｍｉｌａｘ  ｏｒｎａｔａ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ）、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ  ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ｂｒｉｄｅｓ  ｖｅｉｌ）及びＳａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（ｓｏａｐ  ｒｏｏｔ）から商業的に入手することもできる。サポニンアジュバント処方としては、ＱＳ２１などの精製処方、及びＩＳＣＯＭなどの脂質処方が挙げられる。
【０１４８】
サポニン組成物は、高性能薄層クロマトグラフィー（ＨＰ−ＴＬＣ）及び逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を用いて精製されてきた。ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−Ｂ及びＱＨ−Ｃを含めて、これらの技術を用いた特定の精製画分が確認された。好ましくは、サポニンはＱＳ２１である。ＱＳ２１の製造方法は、米国特許第５，０５７，５４０号に開示されている。サポニン処方は、コレステロールなどのステロールも含むことができる（国際公開第９６／３３７３９号参照）。
【０１４９】
サポニンとコレステロールの組合せを使用して、免疫賦活複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる独特の粒子を形成することができる。ＩＳＣＯＭは、典型的には、ホスファチジルエタノールアミン、又はホスファチジルコリンなどのリン脂質も含む。任意の公知のサポニンをＩＳＣＯＭに使用することができる。好ましくは、ＩＳＣＯＭは、Ｑｕｉｌ  Ａ、ＱＨＡ及びＱＨＣの１種類以上を含む。ＩＳＣＯＭは、さらに、欧州特許第０１０９９４２号、国際公開第９６／１１７１１号及び国際公開第９６／３３７３９号に記載されている。場合によっては、ＩＳＣＯＭは追加の洗剤（単数又は複数）がなくてもよい。国際公開第００／０７６２１号を参照されたい。
【０１５０】
サポニン系アジュバントの開発の総説は、Ｂａｒｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ
Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９８）３２：２４７−２７１に見いだすことができる。Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ
Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９８）３２：３２１−３３８も参照されたい。
【０１５１】
Ｄ．ビロソーム及びウイルス様粒子（ＶＬＰ）
ビロソーム及びウイルス様粒子（ＶＬＰ）を本発明におけるアジュバントとして使用することもできる。これらの構造体は、一般に、場合によってはリン脂質と組み合わせられた又は一緒に処方された、ウイルス由来の１種類以上のタンパク質を含む。それらは、一般に非病原性、非複製性であり、一般にいかなる未変性ウイルスゲノムも含まない。ウイルスタンパク質は、組換え産生することができ、又はウイルス全体から単離することができる。ビロソーム又はＶＬＰにおける使用に適切なこれらのウイルスタンパク質としては、（ＨＡ、又はＮＡなどの）インフルエンザウイルス、（コア、又はカプシドタンパク質などの）Ｂ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、シンドビスウイルス、ロタウイルス、口蹄疫ウイルス、レトロウイルス、ノーウォークウイルス、ヒトパピローマウイルス、ＨＩＶ、ＲＮＡファージ、（コートタンパク質などの）Ｑβファージ、ＧＡファージ、ｆｒファージ、ＡＰ２０５ファージ、及び（レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１などの）Ｔｙに由来するタンパク質が挙げられる。ＶＬＰは、国際公開第０３／０２４４８０号、国際公開第０３／０２４４８１号、並びにＮｉｉｋｕｒａら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００２）２９３：２７３−２８０；Ｌｅｎｚら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１）５２４６−５３５５；Ｐｉｎｔｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２００３）１８８：３２７−３３８；及びＧｅｒｂｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００１）７５（１０）：４７５２−４７６０において更に考察されている。ビロソームは、例えば、Ｇｌｕｃｋら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００２）２０：Ｂ１０−Ｂ１６において更に考察されている。免疫増強再構成インフルエンザビロソーム（ＩＲＩＶ）が、鼻腔内三価ＩＮＦＬＥＸＡＬ（商標）製品｛Ｍｉｓｃｈｌｅｒ＆Ｍｅｔｃａｌｆｅ（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ  ２０  Ｓｕｐｐｌ  ５：Ｂ１７−２３｝及びＩＮＦＬＵＶＡＣ  ＰＬＵＳ（商標）製品においてサブユニット抗原送達系として使用されている。
【０１５２】
Ｅ．細菌又は微生物誘導体
本発明における使用に適切なアジュバントは、以下のものなどの細菌又は微生物誘導体を含む。
【０１５３】
（１）腸内細菌リポ多糖（ＬＰＳ）の非毒性誘導体
かかる誘導体としては、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）及び３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が挙げられる。３ｄＭＰＬは、４、５又は６本のアシル化鎖を有する３脱Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡの混合物である。３脱Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡの好ましい「小粒子」形態が欧州特許第０  ６８９  ４５４号に開示されている。３ｄＭＰＬのかかる「小粒子」は、０．２２ミクロンの膜を通してろ過滅菌するのに十分な小ささである（欧州特許第０  ６８９  ４５４号参照）。別の非毒性ＬＰＳ誘導体としては、アミノアルキルグルコサミニドホスファート誘導体などのモノホスホリルリピドＡ模倣物、例えばＲＣ５２９が挙げられる。Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ  ９：２２７３−２２７８を参照されたい。
【０１５４】
（２）リピドＡ誘導体
リピドＡ誘導体としては、ＯＭ−１７４などのＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ由来のリピドＡの誘導体が挙げられる。ＯＭ−１７４は、例えば、Ｍｅｒａｌｄｉら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：２４８５−２４９１及びＰａｊａｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：８３６−８４２に記載されている。
【０１５５】
（３）免疫賦活性オリゴヌクレオチド
本発明におけるアジュバントとしての使用に適切な免疫賦活性オリゴヌクレオチドとしては、ＣｐＧモチーフ（非メチル化シトシンとそれに続くグアノシンを含み、リン酸結合によって連結された配列）を含むヌクレオチド配列が挙げられる。回文構造又はポリ（ｄＧ）配列を含む細菌二本鎖ＲＮＡ又はオリゴヌクレオチドも、免疫賦活性であることが判明した。
【０１５６】
ＣｐＧは、ホスホロチオアート修飾などのヌクレオチド修飾／類似体を含み得、二本鎖又は一本鎖であり得る。場合によっては、グアノシンは、２’−デオキシ−７−デアザグアノシンなどの類似体で置換することができる。可能な類似体置換の例については、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００３）３１（９）：２３９３−２４００、国際公開第０２／２６７５７号及び国際公開第９９／６２９２３号を参照されたい。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、Ｋｒｉｅｇ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００３）９（７）：８３１−８３５；ＭｃＣｌｕｓｋｉｅ，ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＭＳ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（２００２）３２：１７９−１８５；国際公開第９８／４０１００号；米国特許第６，２０７，６４６号；米国特許第６，２３９，１１６号及び米国特許第６，４２９，１９９号に更に考察されている。
【０１５７】
モチーフＧＴＣＧＴＴ、ＴＴＣＧＴＴなどのＣｐＧ配列は、ＴＬＲ９に向けることができる。Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ
Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ（２００３）３１（ｐａｒｔ  ３）：６５４−６５８を参照されたい。ＣｐＧ−Ａ  ＯＤＮなどのＣｐＧ配列は、Ｔｈ１免疫応答を誘導することに対して特異的であり得、又はＣｐＧ−Ｂ  ＯＤＮなどのＣｐＧ配列は、Ｂ細胞応答を誘導することに対してより特異的であり得る。ＣｐＧ−Ａ及びＣｐＧ−Ｂ  ＯＤＮは、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）１７０（８）：４０６１−４０６８；Ｋｒｉｅｇ，ＴＲＥＮＤＳ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００２）２３（２）：６４−６５及び国際公開第０１／９５９３５号に考察されている。好ましくは、ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ  ＯＤＮである。
【０１５８】
好ましくは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端を受容体認識に利用できるように構築される。場合によっては、２個のＣｐＧオリゴヌクレオチド配列をその３’末端で結合させて、「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒ）」を形成することができる。例えば、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ｅｔ  ａｌ．，ＢＢＲＣ（２００３）３０６：９４８−９５３；Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ（２００３）３１（ｐａｒｔ  ３）：６６４−６５８；Ｂｈａｇａｔら、ＢＢＲＣ（２００３）３００：８５３−８６１及び国際公開第０３／０３５８３６号を参照されたい。
【０１５９】
（４）ＡＤＰリボシル化毒素及びその無毒化誘導体
細菌ＡＤＰリボシル化毒素及びその無毒化誘導体を本発明におけるアジュバントとして使用することができる。好ましくは、このタンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉ（すなわち、Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性エンテロトキシン「ＬＴ）、コレラ（「ＣＴ」）又は百日咳（「ＰＴ」）に由来する。無毒化ＡＤＰリボシル化毒素の粘膜アジュバントとしての使用は国際公開第９５／１７２１１号に記載され、非経口アジュバントとしての使用は国際公開第９８／４２３７５号に記載されている。好ましくは、アジュバントは、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、及びＬＴＲ１９２Ｇなどの無毒化ＬＴ変異体である。ＡＤＰリボシル化毒素及びその無毒化誘導体、特にＬＴ−Ｋ６３及びＬＴ−Ｒ７２のアジュバントとしての使用は、以下の参考文献に見いだすことができる：Ｂｅｉｇｎｏｎら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００２）７０（６）：３０１２−３０１９；Ｐｉｚｚａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ（２００１）１９：２５３４−２５４１；Ｐｉｚｚａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（２０００）２９０（４−５）：４５５−４６１；Ｓｃｈａｒｔｏｎ−Ｋｅｒｓｔｅｎら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０００）６８（９）：５３０６−５３１３；Ｒｙａｎら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９９）６７（１２）：６２７０−６２８０；Ｐａｒｔｉｄｏｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．（１９９９）６７（３）：２０９−２１６；Ｐｅｐｐｏｌｏｎｉら、Ｖａｃｃｉｎｅｓ（２００３）２（２）：２８５−２９３；及びＰｉｎｅら、（２００２）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ（２００２）８５（１−３）：２６３−２７０。アミノ酸置換の数値基準は、好ましくは、Ｄｏｍｅｎｉｇｈｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（１９９５）１５（６）：１１６５−１１６７に記載のＡＤＰリボシル化毒素のＡ及びＢサブユニットのアラインメントに基づく。
【０１６０】
Ｆ．生体接着剤及び粘膜付着剤
生体接着剤及び粘膜付着剤を本発明におけるアジュバントとして使用することもできる。適切な生体接着剤としては、エステル化ヒアルロン酸ミクロスフェア（Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｃｏｎｔ．Ｒｅｌｅ．７０：２６７−２７６）、又はポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖及びカルボキシメチルセルロースの架橋誘導体などの粘膜付着剤が挙げられる。キトサン及びその誘導体を本発明におけるアジュバントとして使用することもできる。国際公開第９９／２７９６０号を参照されたい。
【０１６１】
Ｇ．微粒子
微粒子を本発明におけるアジュバントとして使用することもできる。生分解性及び非毒性である材料（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ酸無水物、ポリカプロラクトンなど）とポリ（ラクチドｃｏグリコリド）から形成される微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍから約１５０μｍ、より好ましくは直径約２００ｎｍから約３０μｍ、最も好ましくは直径約５００ｎｍから約１０μｍの粒子）が好ましく、場合によっては、（例えば、ＳＤＳで）負に帯電した表面又は（例えば、ＣＴＡＢなどの陽イオン洗剤で）正に帯電した表面を有するように処理される。
【０１６２】
Ｈ．リポソーム
アジュバントとしての使用に適切なリポソーム処方の例は、米国特許第６，０９０，４０６号、米国特許第５，９１６，５８８号及び欧州特許第０  ６２６  １６９号に記載されている。
【０１６３】
Ｉ．ポリオキシエチレンエーテル及びポリオキシエチレンエステル処方
本発明における使用に適切なアジュバントとしては、ポリオキシエチレンエーテル及びポリオキシエチレンエステルが挙げられる。国際公開第９９／５２５４９号。かかる処方は、さらに、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（国際公開第０１／２１２０７号）、及びオクトキシノールなどの少なくとも１種類の追加の非イオン界面活性剤と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテル又はエステル界面活性剤（国際公開第０１／２１１５２号）を含む。
【０１６４】
好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群から選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ラウレス９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリル（ｓｔｅｏｒｙｌ）エーテル、ポリオキシセイレン（ｐｏｌｙｏｘｙｔｈｅｙｌｅｎｅ）−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル及びポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
【０１６５】
Ｊ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ）
ＰＣＰＰ処方は、例えば、Ａｎｄｒｉａｎｏｖら、“Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｙｄｒｏｇｅｌ  ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ  ｂｙ  ｃｏａｃｅｒｖａｔｉｏｎ  ｏｆ
ａｑｕｅｏｕｓ  ｐｏｌｙｐｈｏｐｈａｚｅｎｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（１９９８）１９（１−３）：１０９−１１５及びＰａｙｎｅら、“Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ｆｒｏｍ  Ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｅｎｅ  Ｍａｔｒｉｃｅｓ”，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗ（１９９８）３１（３）：１８５−１９６に記載されている。
【０１６６】
Ｋ．ムラミルペプチド
本発明におけるアジュバントとしての使用に適切なムラミルペプチドの例としては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル（ｎｏｒｍｕｒａｍｙｌ）−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、及びＮアセチルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミニル−ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）が挙げられる。
【０１６７】
Ｌ．イミダゾキノリン化合物
本発明においてアジュバントを使用するのに適切なイミダゾキノリン化合物の例としては、イミキモド及びその類似体が挙げられ、Ｓｔａｎｌｅｙ，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ（２００２）２７（７）：５７１−５７７；Ｊｏｎｅｓ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ
Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ（２００３）４（２）：２１４−２１８；並びに米国特許第４，６８９，３３８号、同５，３８９，６４０号、同５，２６８，３７６号、同４，９２９，６２４号、同５，２６６，５７５号、同５，３５２，７８４号、同５，４９４，９１６号、同５，４８２，９３６号、同５，３４６，９０５号、同５，３９５，９３７号、同５，２３８，９４４号及び同５，５２５，６１２号に更に記載されている。
【０１６８】
Ｍ．チオセミカルバゾン化合物
チオセミカルバゾン化合物、並びにすべて本発明におけるアジュバントとしての使用に適切である化合物を処方し、製造し、スクリーニングする方法の例としては、国際公開第０４／６０３０８号に記載のものが挙げられる。チオセミカルバゾンは、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核細胞の刺激に特に有効である。
【０１６９】
Ｎ．トリプタントリン化合物
トリプタントリン化合物、並びにすべて本発明におけるアジュバントとしての使用に適切である化合物を処方し、製造し、スクリーニングする方法の例としては、国際公開第０４／６４７５９号に記載のものが挙げられる。トリプタントリン化合物は、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核細胞の刺激に特に有効である。
【０１７０】
本発明は、上で特定した１種類以上のアジュバントの態様の組合せを含むこともできる。例えば、以下のアジュバント組成物を本発明において使用することができる。
【０１７１】
（１）サポニンと水中油型乳濁液（国際公開第９９／１１２４１号）、
（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）（国際公開第９４／００１５３号参照）、
（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール、
（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ１２（場合によっては＋ステロール）（国際公開第９８／５７６５９号）、
（５）３ｄＭＰＬと例えばＱＳ２１及び／又は水中油型乳濁液との組合せ（欧州特許出願第０８３５３１８号、同０７３５８９８号及び同０７６１２３１号参照）、
（６）サブミクロン乳濁液に微少流動化された、又はより大粒径の乳濁液を生成するようにボルテックス撹拌された、１０％スクアラン、０．４％Ｔｗｅｅｎ８０、５％ＰｌｕｒｏｎｉｃブロックポリマーＬ１２１及びｔｈｒ−ＭＤＰを含む、ＳＡＦ、
（７）２％スクアレンと、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０と、モノホスホリリピド（ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｉｐｉｄ）Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）及び細胞壁骨格（ＣＷＳ）からなる群からの１種類以上の細菌細胞壁成分、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））とを含む、ＲＩＢＩ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）、並びに
（８）１種類以上の（アルミニウム塩などの）無機塩＋（３ｄＰＭＬなどの）ＬＰＳの非毒性誘導体。
【０１７２】
（９）（アルミニウム塩などの）１種類以上の無機塩＋（ＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列などの）免疫賦活性オリゴヌクレオチド。
【０１７３】
Ｏ．ヒト免疫調節物質
本発明におけるアジュバントとしての使用に適切なヒト免疫調節物質としては、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２など）、インターフェロン（例えば、インターフェロンγ）、マクロファージコロニー刺激因子、腫よう壊死因子などのサイトカインが挙げられる。
【０１７４】
アルミニウム塩及びＭＦ５９は、注射用インフルエンザワクチンで使用される好ましいアジュバントである。細菌毒素及び生体接着剤は、経鼻ワクチンなどの経粘膜送達ワクチンで使用される好ましいアジュバントである。
【０１７５】
上記特許、特許出願及び学術論文すべての内容を、本明細書において完全に示されたが如く、参照により本明細書に援用する。
【０１７６】
治療方法
本発明は、療法に使用される上記組成物を提供する。本発明は、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに対する免疫応答を誘導又は増大させる上記組成物を提供する。本発明は、上記組成物を使用してＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに対する免疫応答を誘導又は増大させる方法を提供する。免疫応答は、好ましくは防御性であり、（全身性及び粘膜免疫を含めた）抗体及び／又は細胞性免疫を含み得る。免疫応答としては二次免疫応答が挙げられる。
【０１７７】
ティーンエイジャー並びによちよち歩きの幼児及び乳児を含めた小児は、予防用ワクチンを受けることができる。治療ワクチンは、典型的には、ティーンエイジャー又は成体に投与される。小児用ワクチンは、例えば、安全性、投与量、免疫原性などを評価するために、成体に投与することもできる。
【０１７８】
本発明によって防止又は処置することができるＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓに起因する疾患としては、（レンサ球菌性咽喉炎などの）咽頭炎、しょう紅熱、膿か疹、丹毒、蜂巣炎、敗血症、毒素性ショック症候群、壊そ性筋膜炎、並びにリウマチ熱、及び急性糸球体腎炎などの続発症が挙げられるが、それだけに限定されない。組成物は、他のレンサ球菌性細菌、例えばＧＢＳに対しても有効であり得る。
【０１７９】
免疫応答の有効性を決定する試験
治療処置の有効性を評価する一方法は、本発明の組成物の投与後にＧＡＳ感染をモニターすることを含む。予防処置の有効性を評価する一方法は、本発明の組成物中の変異体ＧＡＳ５７抗原に対する免疫応答を組成物の投与後にモニターすることを含む。
【０１８０】
本発明の免疫原性組成物の成分タンパク質の免疫原性を評価する別の一方法は、変異体ＧＡＳ５７抗原に組換え的にであり、患者の血清又は粘膜分泌物を免疫ブロットによってスクリーニングすることである。タンパク質と患者血清との間の陽性反応は、患者が当該タンパク質に対して免疫応答を以前に開始したこと、すなわち、タンパク質が免疫原であることを示す。この方法を使用して、免疫優性タンパク質及び／又はエピトープを特定することもできる。
【０１８１】
治療処置の有効性を調べる別の一方法は、本発明の組成物の投与後にＧＡＳ感染をモニターすることを含む。予防処置の有効性を調べる一方法は、組成物の投与後にＧＡＳ５７に対する免疫応答を（ＩｇＧ１及びＩｇＧ２ａ産生レベルをモニターすることなどの）全身的と（ＩｇＡ産生レベルをモニターすることなどの）粘膜的の両方でモニターすることを含む。典型的には、血清特異的抗体応答は、免疫後曝露前に測定されるが、粘膜特異的抗体体応答は免疫後曝露後に測定される。
【０１８２】
本発明のワクチン組成物は、宿主、例えばヒトへの投与前にｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ
ｖｉｖｏ動物モデルにおいて評価することができる。特に有用なマウスモデルとしては、腹腔内免疫処置後に腹腔内曝露又は鼻腔内曝露のいずれかを行うマウスモデルが挙げられる。
【０１８３】
本発明の免疫原性組成物の有効性は、ＧＡＳを有する動物モデル、例えばモルモット又はマウスに免疫原性組成物を投与することによって、ｉｎ  ｖｉｖｏで決定することもできる。免疫原性組成物は、曝露血清型と同じ血清型に由来してもしなくてもよい。
【０１８４】
ｉｎ  ｖｉｖｏ有効性モデルとしては、以下が挙げられるが、それだけに限定されない：（ｉ）ヒトＧＡＳ血清型を使用したネズミ感染モデル、（ｉｉ）マウスにおいて特に病原性であるＭ２３系統など、マウスに適合されたＧＡＳ系統を使用したネズミモデルであるネズミ疾患モデル、及び（ｉｉｉ）ヒトＧＡＳ単離物を使用した霊長類モデル。
【０１８５】
免疫応答は、Ｔｈ１免疫応答とＴｈ２応答の一方又は両方であり得る。免疫応答は、改善された、増強された、又は変化した免疫応答であり得る。免疫応答は、全身性免疫応答と粘膜免疫応答の一方又は両方であり得る。好ましくは、免疫応答は、増強されたシステム及び／又は粘膜応答である。
【０１８６】
増強された全身性及び／又は粘膜免疫は、増強されたＴｈ１及び／又はＴｈ２免疫応答を反映する。好ましくは、増強された免疫応答は、ＩｇＧ１及び／又はＩｇＧ２ａ及び／又はＩｇＡの産生の増加を含む。
【０１８７】
好ましくは、粘膜免疫応答はＴｈ２免疫応答である。好ましくは、粘膜免疫応答は、ＩｇＡ産生の増加を含む。
【０１８８】
活性化Ｔｈ２細胞は抗体産生を増強し、したがって、細胞外感染に応答する際に価値がある。活性化Ｔｈ２細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６及びＩＬ−１０の１種類以上を分泌することができる。Ｔｈ２免疫応答は、ＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ、及び将来の防御のための記憶Ｂ細胞の産生をもたらし得る。
【０１８９】
Ｔｈ２免疫応答は、（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０などの）Ｔｈ２免疫応答に関連するサイトカインの１種類以上の増加、又はＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ及び記憶Ｂ細胞の産生の増加の１つ以上を含み得る。好ましくは、増強されたＴｈ２免疫応答は、ＩｇＧ１産生の増加を含む。
【０１９０】
Ｔｈ１免疫応答は、ＣＴＬの増加、（ＩＬ−２、ＩＦＮγ、及びＴＮＦβなどの）Ｔｈ１免疫応答に関連するサイトカインの１種類以上の増加、活性化マクロファージの増加、ＮＫ活性の増加、又はＩｇＧ２ａ産生の増加の１つ以上を含み得る。好ましくは、増強されたＴｈ１免疫応答は、ＩｇＧ２ａ産生の増加を含む。
【０１９１】
本発明の免疫原性組成物、特に、本発明の１種類以上の変異体ＧＡＳ５７抗原を含む免疫原性組成物は、単独で、又は別のＧＡＳ抗原と組み合わせて、Ｔｈ１及び／又はＴｈ２応答を誘導する能力のある免疫調節剤と場合によっては一緒に、使用することができる。
【０１９２】
本発明は、アルミニウム塩などの無機塩およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドなどの１種類以上の免疫調節剤を含む、免疫原性組成物も含む。最も好ましくは、免疫原性組成物は、アルミニウム塩とＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドの両方を含む。あるいは、免疫原性組成物は、無毒化ＡＤＰリボシル化毒素などのＡＤＰリボシル化毒素とＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドとを含む。好ましくは、免疫調節剤の１種類以上は、アジュバントを含む。アジュバントは、Ｔｈ１アジュバント及びＴｈ２アジュバントからなる群の１種類以上から選択することができる。
【０１９３】
本発明の組成物は、好ましくは、ＧＡＳ感染に効果的に対処するために、細胞性免疫応答と体液性免疫応答の両方を誘発する。この免疫応答は、好ましくは、１種類以上のＧＡＳ抗原への曝露に迅速に応答することができる持続性（例えば、中和）抗体及び細胞性免疫を誘導する。
【０１９４】
特に好ましい一実施形態においては、免疫原性組成物は、中和抗体応答を誘導する１種類以上の変異体ＧＡＳ５７抗原（単数又は複数）と細胞性免疫応答を誘導する１種類以上の変異体ＧＡＳ５７抗原（単数又は複数）とを含む。このようにして、中和抗体応答が初期のＧＡＳ感染を防止又は阻止しつつ、増強されたＴｈ１細胞応答を誘導することができる細胞性免疫応答がＧＡＳ感染の更なる伝播を防止する。
【０１９５】
本発明の組成物は、一般に、患者に直接投与される。本発明の組成物は、単独で、又は組成物の一部として、多種多様な経路で投与することができる。特定の組成物には、より有効な免疫応答、好ましくはＣＭＩ応答を生じる、又は副作用を誘発する可能性がより低い、又は投与がより容易である、特定の経路が有利であり得る。
【０１９６】
送達方法としては、非経口注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内又は間質内注射）、並びに直腸、経口（例えば、錠剤、噴霧）、膣、局所、経皮（例えば、国際公開第９９／２７９６１号参照）、経皮（例えば、国際公開第０２／０７４２４４号及び国際公開第０２／０６４１６２号参照）、鼻腔内（例えば、国際公開第０３／０２８７６０号参考）、眼、耳及び肺又は他の粘膜投与が挙げられる。
【０１９７】
例として、本発明の組成物は、全身経路、粘膜経路若しくは経皮経路によって投与することができ、又は特定の組織に直接投与することができる。本明細書では「全身投与」という用語は、任意の非経口投与経路を含むが、それだけに限定されない。特に、非経口投与としては、皮下、腹腔内、静脈内、動脈内、筋肉内又は胸骨内注射、静脈内、動脈内又は腎臓透析注入技術が挙げられるが、それだけに限定されない。好ましくは、全身性非経口投与は、筋肉内注射である。本明細書では「粘膜投与」という用語は、経口、鼻腔内、膣内、直腸内、気管内、腸管内及び眼投与を含むが、それだけに限定されない。
【０１９８】
投薬処置は、単回投与計画でも複数回投与計画でもよい。複数回投与は、一次免疫計画及び／又は追加免疫計画に使用することができる。複数回投与計画では、種々の用量を同一又は異なる経路、例えば、非経口初回刺激（ｐｒｉｍｅ）及び粘膜追加免疫、粘膜初回刺激及び非経口追加免疫などによって投与することができる。
【０１９９】
本発明の組成物は、種々の形態で調製することができる。例えば、組成物を注射用として、液剤又は懸濁剤として、調製することができる。注射前の液体ビヒクル中の溶液又は懸濁液に適切な固体形態を調製することもできる（例えば、凍結乾燥組成物）。組成物は、錠剤又はカプセル剤、噴霧剤、（場合によっては風味をつけた）シロップ剤など、経口投与用に調製することができる。組成物は、例えば微粉又は噴霧剤を使用した吸入器として、肺投与のために調製することができる。組成物は、坐剤又は膣坐剤として調製することができる。組成物は、経鼻、耳又は眼投与のために、例えば滴剤として、調製することができる。組成物は、組み合わせた組成物を患者への投与直前に水で再構成するように設計されたキット形式とすることができる。かかるキットは、液状の１種類以上の変異体ＧＡＳ５７又は別の抗原と、１種類以上の凍結乾燥抗原とを含むことができる。
【０２００】
ワクチンとして使用される免疫原性組成物は、免疫学的有効量の変異体ＧＡＳ５７又は別の抗原（又は抗原をコードする核酸分子）、及び必要に応じて抗生物質などの任意の他の成分を含む。「免疫学的有効量」は、単一用量で、又は連続したものの一部として、個体に投与したときに、測定可能な免疫応答を増加させる量、又は臨床症状を防止若しくは軽減する量である。
【０２０１】
本発明の免疫原性組成物は、抗生物質処置計画と組み合わせて投与することができる。一実施形態においては、本発明の抗原の投与前に、又は本発明の１種類以上の変異体ＧＡＳ５７抗原を含む組成物の投与前に、抗生物質を投与する。
【０２０２】
別の一実施形態においては、本発明の変異体ＧＡＳ５７抗原の投与後に抗生物質を投与する。ＧＡＳ感染の処置における使用に適切な抗生物質の例としては、ペニシリン若しくはその誘導体又はクリンダマイシン、セファロスポリン、糖ペプチド（例えば、バンコマイシン）及びサイクロセリンが挙げられるが、それだけに限定されない。
【０２０３】
しかし、組成物中の活性作用物質の量は、処置される個体の健康状態及び体調、年齢、処置される個体の分類群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、個体の免疫系の抗体合成能力、所望の防御の程度、ワクチンの処方、処置する医師の医学的状況評価、並びに他の関連する要因に応じて変化する。量は比較的広い範囲内にあり、通常の試験によって決定することができる。
【０２０４】
キット
本発明は、本発明の組成物の１個以上の容器を含むキットも提供する。組成物は、液状とすることができ、又は凍結乾燥させることができ、個々の抗原も同様にすることができる。組成物のために適切な容器としては、例えば、瓶、バイアル、シリンジ及び試験管が挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックを含めて、種々の材料で形成することができる。容器は、無菌の出入口を有することができる（例えば、容器は、皮下注射針を突き刺すことができるストッパーを有する静脈注射液のバッグ又はバイアルとすることができる。）。
【０２０５】
キットは、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、又はデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝液を含む第２の容器を更に含むことができる。キットは、別の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針及びシリンジを含めて、末端利用者に有用である他の材料を含むこともできる。キットは、別の活性作用物質、例えば抗生物質を含む第２又は第３の容器を含むこともできる。
【０２０６】
キットは、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに対する免疫を誘導する方法、又はＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ感染症を処置する方法についての説明書を含む添付文書を含むこともできる。添付文書は、未認可の添付文書草案とすることができ、又はＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（ＦＤＡ）若しくは他の規制行政機関によって認可された添付文書とすることができる。
【０２０７】
この開示に引用されたすべての特許、特許出願及び参考文献を参照により本明細書に明確に援用する。上記開示は、本発明を全般的に説明するものである。より完全な理解は、以下の具体例を参照することによって得ることができる。以下の具体例は、単なる説明のためのものにすぎず、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【０２０８】
（実施例１）
精製野生型組換えＧＡＳ５７は、ＩＬ−８及び他のＣＸＣサイトカインを切断する。
【０２０９】
野生型ＧＡＳ５７をＨｉｓタグ付き又はタグなしタンパク質のいずれかとしてＥ．ｃｏｌｉから発現させ、精製した。すべての変種は、Ｎ末端リーダー配列なし及びＣ末端膜貫通ドメインなしで発現された（配列番号７８及び７９参照）。詳細には、ｇａｓ５７遺伝子をＭ１＿ＳＦ３７０ゲノムから以下のプライマーを用いてＰＣＲ増幅させた。
【０２１０】
【化４】
2014230547.tif 000008
プライマー５７Ｆ及び５７Ｒを使用して、Ｈｉｓタグ付き型を得、プライマー５７Ｆ及び５７ｓｔｏｐＲを使用して、タグなし型を得た。ＰＣＲ産物をＮｄｅＩ−ＸｈｏＩを用いて消化し、それぞれ同じ酵素で切断したｐＥＴ２１ｂ＋及びｐｅｔ２４ｂ＋断片に連結させた。
【０２１１】
Ｅ．ｃｏｌｉ  ＢＬ２１（ＤＥ３）エレクトロコンピテント細胞を連結反応で形質転換した。正しい挿入物を有するプラスミド（ｐＥＴ２１＿５７ｈｉｓ及びｐＥＴ２４＿５７）を保有するカナマイシン耐性コロニーをコロニーＰＣＲによって特定し、ＧＡＳ５７遺伝子の配列を陽性クローンの１つから決定した。
【０２１２】
ＧＡＳ５７を発現する陽性クローンを２５℃で撹拌下で液体培養で増殖させ、培養物に１ｍＭ  ＩＰＴＧを添加することによって組換えタンパク質の発現を得た。Ｈｉｓタグ付きＧＡＳ５７タンパク質の精製を金属イオンアフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）によって実施した。タグなし型のＧＡＳ５７の精製を３つのクロマトグラフィー段階、すなわちイオン交換クロマトグラフィー（Ｑ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＨＰ）、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー及びゲルろ過クロマトグラフィーによって実施した。図７及び８は、精製野生型タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析結果である。
【０２１３】
ＧＡＳ５７タンパク質分解活性を試験するために、ＩＬ−８を２つの異なる濃度の精製ＧＡＳ５７と一緒に漸増時間インキュベートし、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で泳動させて、最初の８ｋＤａ  ＩＬ−８タンパク質から切断された不活性６ｋＤａタンパク質への変換を実証した。結果を図１に示す。
【０２１４】
図１２は、種々のケモカイン（１０μｇ／ｍｌ）をＧＡＳ５７（１μｇ／ｍｌ）と一緒に又はＧＡＳ５７なしで３７℃で２４時間インキュベートした類似の実験の結果である。試料を１８％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で泳動させた。
【０２１５】
（実施例２）
ＧＡＳ５７変異体の調製
Ｃ５ａプロテアーゼと比較することによって（図２）、プロテアーゼの触媒部位を構成すると推定されるＧＡＳ５７中の３個のアミノ酸を特定した：Ｄ１５１、Ｈ２７９及びＳ６１７。不活性型の酵素を得るために、アミノ酸変化Ｄ１５１Ａ及び／又はＳ６１７Ａを生じるヌクレオチド置換をＳｐｌｉｃｉｎｇ  ｂｙ  Ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ  Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  ＰＣＲ（ＳＯＥ−ＰＣＲ）によってＧＡＳ５７コード配列に導入した。
【０２１６】
置換Ｄ１５１Ａ
３つのＰＣＲ反応を実施した。
【０２１７】
【表１】
2014230547.tif 000009
次いで、ＰＣＲ産物３をＮｄｅ−Ｓａｌを用いて消化し、同じ酵素で消化されたｐＥＴ２１＿５７ｈｉｓに導入した。正しいインフレーム置換を含むクローン（ｐＥＴ２１＿５７ｈｉｓ＿Ｄ１５１Ａ）をＤＮＡ塩基配列決定法によって選択した。
【０２１８】
置換Ｓ６１７Ａ
３つのＰＣＲ反応を実施した。
【０２１９】
【表２】
2014230547.tif 000010
次いで、ＰＣＲ産物６をＳａｌ−Ｘｈｏを用いて消化し、同じ酵素で消化されたｐＥＴ２１＿５７ｈｉｓに導入した。正しいインフレーム置換を含むクローン（ｐＥＴ２１＿５７ｈｉｓ＿Ｓ６１７Ａ）をＤＮＡ塩基配列決定法によって選択した。
【０２２０】
置換Ｄ１５１Ａ＋Ｓ６１７Ａ
ＰＣＲ産物６は、消化されたＳａｌ−Ｘｈｏであり、同じ酵素で消化されたｐＥＴ２１＿５７ｈｉｓ＿Ｄ１５１Ａに導入された。正しいインフレーム置換を含むクローン（ｐＥＴ２１＿５７ｈｉｓ＿Ｄ１５１Ａ＋Ｓ６１７Ａ）をＤＮＡ塩基配列決定法によって選択した。
【０２２１】
実施例１の野生型ＧＡＳ５７について上述したように、単一及び二重変異体タンパク質を発現させ、精製した。
【０２２２】
（実施例３）
点変異Ｄ１５１Ａは、ＧＡＳ５７タンパク質分解活性の不活性化をもたらす。
【０２２３】
ＧＡＳ５７変異体Ｄ１５１Ａを組換えＨｉｓタグ付きタンパク質として発現させた。２種類のアッセイによって、この変異体がＩＬ−８切断能力を失ったことが実証された。
【０２２４】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
ＩＬ−８を野生型ＧＡＳ５７又はＧＡＳ５７変異体Ｄ１５１Ａと一緒にインキュベートした。インキュベーション混合物をＳＤＳ−ＰＡＧＥに載せ、銀染色によって明らかにした。結果を図３に示す。野生型ＧＡＳ５７（レーン２及び３）は２本のバンドを放出した：８ｋＤａ（活性型）及び６ｋＤａ（不活性な切断されたＩＬ−８）。対照的に、ＧＡＳ５７  Ｄ１５１Ａ変異体は、対照反応（酵素なし）と同様に、非切断ＩＬ−８に対応する１本のバンドしか放出しなかった。
【０２２５】
ＥＬＩＳＡ
ＩＬ−８を野生型ＧＡＳ５７又はＧＡＳ５７変異体Ｄ１５１Ａと一緒に３つの異なる濃度でインキュベートし、このサイトカインに特異的であるが、切断された不活性型を認識することができない抗体を用いて、インキュベーション混合物を非切断ＩＬ−８の存在について試験した。結果を図４に示す。結果は、０、８及び２４時間反応後の非切断ＩＬ−８の百分率として表され、以下のように計算された。
【０２２６】
【数４】
2014230547.tif 000011
式中、「対照混合物」は、時点０において酵素を含まない反応混合物である。
【０２２７】
図４に示すように、野生型ＧＡＳ５７は、より低濃度でも８時間後にＩＬ−８をほぼ完全に不活性化したが、変異体酵素で処理されたＩＬ−８では不活性化は認められなかった。
【０２２８】
（実施例４）
ＧＡＳ５７変異体Ｓ６１７Ａ及びＧＡＳ５７二重変異体Ｄ１５１Ａ＋Ｓ６１７Ａは、ＩＬ−８を切断しない。
【０２２９】
ＧＡＳ５７変異体Ｓ６１７Ａ及びＧＡＳ５７二重変異体Ｄ１５１Ａ＋Ｓ６１７ＡをＨｉｓタグ付きタンパク質として発現させ、実施例２に記載のようにＩＬ−８不活性化実験において試験した。
【０２３０】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
ＩＬ−８を野生型ＧＡＳ５７（Ｈｉｓタグ付き又はタグなし）、又はＧＡＳ５７変異体Ｄ１５１Ａ、Ｓ６１７Ａ及びＤ１５１ＡＳ＋Ｓ６１７Ａの各々と一緒に２４時間インキュベートした。インキュベーション混合物をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルに載せ、銀染色によって出現させた。２つの実験の結果を図５Ａ及び５Ｂに示す。ＧＡＳ５７  Ｓ６１７Ａ変異体とＧＡＳ  Ｄ１５１＋Ｓ６１７Ａ変異体のどちらも、野生型ＧＡＳ５７の１００倍高い濃度でもＩＬ−８を切断することができない。
【０２３１】
ＥＬＩＳＡ
同じ試料を使用して、ＥＬＩＳＡアッセイを実施し、単一及び二重アミノ酸置換によってＧＡＳ５７のＩＬ−８切断能力が除去されることが確認された。図６に示す結果は、変異体が２４時間インキュベーション後に非切断ＩＬ−８の１００％を放出することを示しており、野生型ＧＡＳ５７によって放出される２０〜４０％と対比される。
【０２３２】
（実施例５）
ＧＡＳ５７変異体の防御能力は、野生型ＧＡＳ５７を用いて得られる防御能力に類似している。
【０２３３】
ＧＡＳ５７変異体Ｄ１５１Ａ及びＤ１５１Ａ＋Ｓ６１７Ａを使用して、マウスを免疫し、ＧＡＳ致死的投与に対する防御を付与する能力を野生型ＧＡＳ５７と比較して試験した。２つの実験（各２０匹のマウス）の結果を下に要約し、平均生存％として表す。
【０２３４】
【表３】
2014230547.tif 000012
（実施例６）
精製不活性変異体は単一ペプチドとして出現し、２個の非共有結合タンパク質断片の形でのみ存在する野生型ＧＡＳ５７と対比される。
【０２３５】
野生型ＧＡＳ５７は、約２３ｋＤａの１個と１５０ｋＤａの１個の主に２個の断片の形で得られる。２個の断片は、Ｎｉキレート親和性精製又はゲルろ過では分離されないが、ＳＤＳ−ＰＡＧＥでは２本の異なるバンドとして出現する（図７）。Ｎ末端の配列決定によって、２３ｋＤａ断片がＧＡＳ５７のＮ末端部分（配列番号１のアミノ酸３４〜２４４）であり、１５０ｋＤａ断片がＣ末端領域（配列番号１のアミノ酸２４５〜１６０３）であることが確認された。
【０２３６】
野生型ＧＡＳ５７とは対照的に、本発明のＧＡＳ５７変異体は、より高分子量（１７４ｋＤａ）のタンパク質として得られ、２３ｋＤａバンドは存在しない（部分的に精製された野生型ＧＡＳ５７及びＧＡＳ５７変異体をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルに載せた実験結果を示す図８を参照されたい。）。
【０２３７】
（実施例７）
ポリクローナル抗血清によるＧＡＳ５７媒介性ＩＬ−８切断の用量依存的阻害
ＧＡＳ５７野生型及び不活性変異体に特異的なマウス抗血清を、ＣＤ１マウスを精製組換えタンパク質で免疫することによって生成させた。
【０２３８】
ＧＡＳ５７抗血清（１：５０及び１：５０００）と一緒に又はなしで、ＩＬ−８（１０μｇ／ｍｌ）を野生型ＧＡＳ５７と一緒に２つの異なる条件でインキュベートした：（１）８時間インキュベーション、ＧＡＳ５７  ０．１μｇ／ｍｌ、及び（２）２４時間インキュベーション、ＧＡＳ５７  ０．０５μｇ／ｍｌ。次いで、インキュベーション混合物を非切断ＩＬ−８の存在についてＥＬＩＳＡによって試験した。図９Ａ及び９Ｂに示す結果は、マウス抗血清によるＧＡＳ５７媒介性ＩＬ−８切断の用量依存的阻害を示した。
【図１】
2014230547.tif 000013
【図２−１】
2014230547.tif 000014
【図２−２】
2014230547.tif 000015
【図３】
2014230547.tif 000016
【図４】
2014230547.tif 000017
【図５】
2014230547.tif 000018
【図６】
2014230547.tif 000019
【図７】
2014230547.tif 000020
【図８】
2014230547.tif 000021
【図９】
2014230547.tif 000022
【図１０−１】
2014230547.tif 000023
【図１０−２】
2014230547.tif 000024
【図１０−３】
2014230547.tif 000025
【図１０−４】
2014230547.tif 000026
【図１０−５】
2014230547.tif 000027
【図１０−６】
2014230547.tif 000028
【図１０−７】
2014230547.tif 000029
【図１０−８】
2014230547.tif 000030
【図１０−９】
2014230547.tif 000031
【図１０−１０】
2014230547.tif 000032
【図１０−１１】
2014230547.tif 000033
【図１０−１２】
2014230547.tif 000034
【図１０−１３】
2014230547.tif 000035
【図１０−１４】
2014230547.tif 000036
【図１０−１５】
2014230547.tif 000037
【図１０−１６】
2014230547.tif 000038
【図１０−１７】
2014230547.tif 000039
【図１０−１８】
2014230547.tif 000040
【図１０−１９】
2014230547.tif 000041
【図１０−２０】
2014230547.tif 000042
【図１０−２１】
2014230547.tif 000043
【図１０−２２】
2014230547.tif 000044
【図１０−２３】
2014230547.tif 000045
【図１０−２４】
2014230547.tif 000046
【図１０−２５】
2014230547.tif 000047
【図１０−２６】
2014230547.tif 000048
【図１０−２７】
2014230547.tif 000049
【図１０−２８】
2014230547.tif 000050
【図１０−２９】
2014230547.tif 000051
【図１０−３０】
2014230547.tif 000052
【図１０−３１】
2014230547.tif 000053
【図１０−３２】
2014230547.tif 000054
【図１０−３３】
2014230547.tif 000055
【図１１】
2014230547.tif 000056
【図１２】
2014230547.tif 000057
【配列表】
2014230547000001.app
【外国語明細書】
2014230547000001.pdf