(57)【要約】【課題】膜小胞を簡易に分取・転写して標本を作製する。【解決手段】軸方向に貫通する第１の内孔を有する第１の筒体３と、該第１の筒体３に、前記第１の内孔を閉塞する位置に固定され、細胞の大きさよりも小さく、膜小胞の大きさよりも大きい孔径の多数の透孔を有する第１のフィルタ１と、軸方向に貫通する第２の内孔を有する第２の筒体４と、該第２の筒体４の一端面に、前記第２の内孔を閉塞する位置に固定され、前記膜小胞の大きさよりも小さな孔径の多数の透孔を有する第２のフィルタ２と、該第２のフィルタ２の外面側に前記第１のフィルタ１が間隔を空けて配置されるように前記第１の筒体３と前記第２の筒体４とを軸方向に着脱可能に連結する連結部とを備える標本作製デバイス１００を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
軸方向に貫通する第１の内孔を有する第１の筒体と、
該第１の筒体に、前記第１の内孔を閉塞する位置に固定され、細胞の大きさよりも小さく、膜小胞の大きさよりも大きい孔径の多数の透孔を有する第１のフィルタと、
軸方向に貫通する第２の内孔を有する第２の筒体と、
該第２の筒体の一端面に、前記第２の内孔を閉塞する位置に固定され、前記膜小胞の大きさよりも小さな孔径の多数の透孔を有する第２のフィルタと、
該第２のフィルタの外面側に前記第１のフィルタが間隔を空けて配置されるように前記第１の筒体と前記第２の筒体とを軸方向に着脱可能に連結する連結部とを備える標本作製デバイス。
【請求項２】
前記連結部が、前記第２の筒体の前記第２のフィルタが保持されている端面に向かって先細になるテーパ面と、前記第１の筒体の前記第１の内孔端部に形成され、前記テーパ面に密着させられる形状のテーパ内面とを備える請求項１に記載の標本作製デバイス。
【請求項３】
前記連結部が、前記第１の筒体の前記第１の内孔に形成された雌ねじ部と、前記第２の筒体の外面に形成され、前記雌ねじ部に締結される雄ねじ部とを備える請求項１に記載の標本作製デバイス。
【請求項４】
軸方向に貫通する内孔を有し、前記連結部と反対側の前記第１の筒体の端部に連結されて前記検体を保持する検体保持部を備える請求項１に記載の標本作製デバイス。
【請求項５】
前記第１の筒体と前記第２の筒体とを軸方向に接続する中空の接続部を備える請求項１に記載の標本作製デバイス。
【請求項６】
軸方向に貫通する第３の内孔を有する第３の筒体と、
該第３の筒体に、前記第３の内孔を閉塞する位置に固定され、細胞の大きさより大きい孔径の多数の透孔を有する第３のフィルタと、
前記第１のフィルタの外面側に前記第３のフィルタが間隔を空けて配置されるように前記第１の筒体と前記第３の筒体とを軸方向に着脱可能に連結する他の連結部とを備える請求項１に記載の標本作製デバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、標本作製デバイスに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、被検細胞を観察するために、被検細胞を含む検体をフィルタに通し、フィルタ上に捕捉された被検細胞をフィルタごとパラフィン包埋した後に、薄切して切片とすることにより標本を作製する方法が知られている（例えば、特許文献１参照。）。また、膜小胞を分取する方法としては、超遠心分離により分取される方法が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特許第４５９２４３４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、特許文献１に記載された方法では、フィルタ上に捕捉された被検細胞をフィルタごと薄切して標本とすることから、標本中の被検細胞を断面として観察することとなってしまう。また、薄切されたフィルタの断面を観察することから、標本中の被検細胞数がわずかとなってしまうという不都合がある。
また、膜小胞を分取するには超遠心機のような特別な装置が必要となる。
【０００５】
本発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、膜小胞を簡易に分取・転写して標本を作製することができる標本作製デバイスを提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を提供する。
本発明の一態様は、軸方向に貫通する第１の内孔を有する第１の筒体と、該第１の筒体に、前記第１の内孔を閉塞する位置に固定され、細胞の大きさよりも小さく、膜小胞の大きさよりも大きい孔径の多数の透孔を有する第１のフィルタと、軸方向に貫通する第２の内孔を有する第２の筒体と、該第２の筒体の一端面に、前記第２の内孔を閉塞する位置に固定され、前記膜小胞の大きさよりも小さな孔径の多数の透孔を有する第２のフィルタと、該第２のフィルタの外面側に前記第１のフィルタが間隔を空けて配置されるように前記第１の筒体と前記第２の筒体とを軸方向に着脱可能に連結する連結部とを備える標本作製デバイスである。
【０００７】
本態様によれば、第１の筒体と第２の筒体とを連結部により軸方向に連結し、細胞および膜小胞を含む検体を、最初に第１のフィルタ，次に第２のフィルタの順に通過するように流動させると、検体内の細胞が第１のフィルタにより捕捉される。一方、第１のフィルタを通過した膜小胞は第２のフィルタの外面側に捕捉される。この後に、連結部による連結を解除して第１の筒体と第２の筒体とを切り離すと、第２の筒体の端面に保持された第２のフィルタの外面に捕捉された膜小胞が外部に露出させられるので、スライド硝子等を接触させて膜小胞を簡易に転写することができる。
【０００８】
上記態様においては、前記連結部が、前記第２の筒体の前記第２のフィルタが保持されている端面に向かって先細になるテーパ面と、前記第１の筒体の前記第１の内孔端部に形成され、前記テーパ面に密着させられる形状のテーパ内面とを備えることとしてもよい。
本態様によれば、第２の筒体のテーパ面と第１の筒体のテーパ内面とが連結される。このようにすることで、高い密着性をもって第１の筒体と第２の筒体とを連結することができる。よって、検体をフィルタに通すために加圧または吸引濾過した場合であっても、第１の筒体と第２の筒体とが高い密着性をもって連結していることにより、その圧に耐えることができる。また、検体が第１の筒体の第１の内孔から第２の筒体の第２の内孔を通過する際に、検体の一部が筒体の外部への漏れ出すのを防止することができる。
【０００９】
上記態様においては、前記連結部が、前記第１の筒体の前記第１の内孔に形成された雌ねじ部と、前記第２の筒体の外面に形成され、前記雌ねじ部に締結される雄ねじ部とを備えることとしてもよい。
本態様によれば、第１の筒体の第１の内孔に形成された雌ねじ部と第２の筒体の外面に形成された雄ねじ部とが連結される。このようにすることで、高い密着性をもって第１の筒体と第２の筒体とを連結することができる。よって、検体をフィルタに通すために加圧または吸引濾過した場合であっても、第１の筒体と第２の筒体とが高い密着性をもって連結していることにより、その圧に耐えることができる。また、検体が第１の筒体から第２の筒体を通過する際に、検体の一部が筒体の外部への漏れ出すのを防止することができる。
【００１０】
上記態様においては、軸方向に貫通する内孔を有し、前記連結部と反対側の前記第１の筒体の端部に連結されて前記検体を保持する検体保持部をさらに備えることとしてもよい。
本態様によれば、筒状の検体保持部を第２の筒体が連結されている連結部と反対側の第１の筒体の端部に軸方向に連結し、検体保持部の内孔に検体を入れると、フィルタろ過前の検体が検体保持部に保持される。このようにすることで、細胞および膜小胞を含む検体が、検体保持部から第１のフィルタ，第２のフィルタの順に通過する。また、検体保持部を第１の筒体に連結したまま遠心分離を行うことにより、検体の遠心ろ過を行うことができる。
【００１１】
上記態様においては、前記第１の筒体と前記第２の筒体とを軸方向に接続する中空の接続部をさらに備えることとしてもよい。
本態様によれば、第１の筒体と第２の筒体とが中空の接続部を介して軸方向に連結されることにより、第２の筒体と第１の筒体との間に空間が形成される。このようにすることで、第１の筒体の端面に第２のフィルタに対向するように第１のフィルタが保持されている場合に、第２の筒体の端面に保持された第２のフィルタと第１のフィルタが接触するのを防止することができる。よって、検体中の膜小胞を損失することなく第２のフィルタの外面に捕捉することができる。
また、中空の接続部を介して第１の筒体の端部と第２の筒体の端部とを軸方向に連結することで、高い密閉性をもって第１の筒体と第２の筒体とを連結することができる。よって、検体をフィルタに通すために加圧または吸引濾過した場合であっても、第１の筒体と第２の筒体とが高い密閉性をもって連結していることにより、その圧に耐えることができる。また、検体が第１の筒体から第２の筒体を通過する際に、検体の一部が筒体の外部への漏れ出すのを防止することができる。
【００１２】
上記態様においては、軸方向に貫通する第３の内孔を有する第３の筒体と、該第３の筒体に、前記第３の内孔を閉塞する位置に固定され、細胞の大きさより大きい孔径の多数の透孔を有する第３のフィルタと、前記第１のフィルタの外面側に前記第３のフィルタが間隔を空けて配置されるように前記第１の筒体と前記第３の筒体とを軸方向に着脱可能に連結する他の連結部とさらに備えることとしてもよい。
本態様によれば、第３の筒体と第１の筒体，第１の筒体と第２の筒体とをそれぞれ軸方向に連結し、細胞および膜小胞を含む検体を、最初に第３のフィルタ，次に第１のフィルタ，最後に第２のフィルタの順に通過するように流動させると、各細胞より大きな細胞塊や異物等が第３のフィルタにより捕捉され、検体内の細胞が第１のフィルタにより捕捉される。このようにすることで、検体中の細胞よりも大きな物質をあらかじめ第３のフィルタで取り除くことができる。よって、多量の検体または密度の高い検体を流動した場合に第１のフィルタが目詰まりするのを防止することができる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、検体から膜小胞を簡易に分取・転写して標本を作製することができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明の第１の実施形態に係る標本作製デバイスを示す全体構成図である。
【図２】図１の標本作製デバイスを用いた標本作成方法の一例を示す図である。
【図３】図１の標本作製デバイスを用いた標本作成方法の一例を示す図である。
【図４】図１の標本作製デバイスを用いた標本作成方法の一例を示す図である。
【図５】本発明の第２の実施形態に係る標本作製デバイスを示す全体構成図である。
【図６】図５の標本作製デバイスの変形例を示す全体構成図である。
【図７】本発明の第３の実施形態に係る標本作製デバイスを示す（ａ）全体構成図および（ｂ）断面図である。
【図８】図７の標本作製デバイスの変形例を示す全体構成図である。
【図９】図７の標本作製デバイスの他の変形例を示す全体構成図である。
【図１０】図７の標本作製デバイスの他の変形例を示す全体構成図である。
【図１１】本発明の第４の実施形態に係る標本作製デバイスを示す全体構成図である。
【図１２】図１１の標本作製デバイスを用いて作成した標本の観察画像を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の第１の実施形態に係る標本作製デバイス１００について図面を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る標本作製デバイス１００は、図１に示されるように、細胞の大きさよりも小さく、膜小胞の大きさよりも大きい孔径の多数の透孔を有する第１のフィルタ１と、膜小胞の大きさよりも小さな孔径の多数の透孔を有する第２のフィルタ２と、軸方向に貫通する第１の内孔を有する円筒状の第１の筒体３と、軸方向に貫通する第２の内孔を有する円筒状の第２の筒体４とを備えている。
【００１６】
第１のフィルタ１は、第１の筒体３の一端面であって、第１の内孔を閉塞する位置に固定されている。第２のフィルタ２は、第２の筒体４の一端面であって、第２の内孔を閉塞する位置に固定されている。また、第２のフィルタ２の外面側に第１のフィルタ１が間隔を空けて配置されるように、第１の筒体３と第２の筒体４とを軸方向に着脱可能に連結する連結部を有する。連結部は、第２の筒体４の第２のフィルタ２が保持されている端面に向かって先細になるテーパ面５と、第１の筒体３の第１の内孔端部に形成されてテーパ面５に密着させられる形状のテーパ内面１５とで構成されている。
【００１７】
本発明の第１の実施形態に係る標本作製デバイス１００を用いた標本作成方法を図２から図４を参照して以下に説明する。
図２に示されるように、第１の筒体３のテーパ内面１５と第２の筒体４のテーパ面５とを擦り合わせるように係合（摩擦係合）する。この係合により、第１の筒体３と第２の筒体４とが、高い密着性をもって軸方向に固定されるので、第１の筒体３と第２の筒体４との連結が外れることなく、吸引または加圧によるろ過や遠心ろ過を行うことができる。
よって、検体Ａが第１の筒体３の第１の内孔から第２の筒体４の第２の内孔を通過するときに、検体Ａの一部が筒体３，４の外部への漏れ出すのを防止することができる。
【００１８】
次に、第１のフィルタ１，第２のフィルタ２の順に通過するように、細胞Ｃと膜小胞Ｅとを含む検体Ａを吸引ろ過する。この吸引ろ過により、検体Ａ内の細胞Ｃは、第１のフィルタ１により捕捉される。一方、第１のフィルタ１を通過した膜小胞Ｅは第２のフィルタ２の外面側に捕捉される。
次に、図３に示されるように、第１の筒体３のテーパ内面１５と第２の筒体４のテーパ面５とによる連結を解除して、第１の筒体３と第２の筒体４とを分離すると、第２の筒体４の端面に保持されている第２のフィルタ２の外面に捕捉された膜小胞Ｅが外部に露出する。
この膜小胞Ｅが捕捉された第２のフィルタ２の外面に、スライド硝子の表面を接触させると、図４に示されるように、膜小胞Ｅがスライド硝子に転写される。このように、検体Ａから膜小胞Ｅを簡易に分取・転写して標本を作製することができる。
【００１９】
上記第１の実施形態において、第１の筒体３および第２の筒体４は、円筒状であることとしたがこの形状に限られるものではなく、２つの筒体を連結して検体が通過できるものであればいかなる断面形状を有していてもよい。筒体の大きさは、例えば、内径φ約２ｍｍから２０ｍｍ、長さ２０ｍｍ以上であることとするがこれに限られるものではない。また、筒体の素材は、例えば、汎用ポリマ製（例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリスチレン、塩化ビニル等）であることとするがこれに限られるものではない。また、適度な弾性（弾性率：３×１０４ｋｇ／ｃｍ２以下）を有するプラスチック、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ＡＢＳ等を第１の筒体３と第２の筒体４の素材に用いることとしてもよい。このようにすることで、さらに密着性の高い筒体の係合が可能となる。
第１のフィルタ１，第２のフィルタ２を第１の筒体３，第２の筒体４の一端面にそれぞれ貼付するために、アクリル樹脂、エポキシ樹脂、シリコーン樹脂、ウレタン樹脂等のような、一般的な接着剤を用いることとしてもよい。
【００２０】
検体Ａに含まれ得る細胞Ｃの大きさは、細胞の種類によって異なる。ヒト細胞の場合、精子は約２．５μｍ、赤血球や白血球といった血液細胞は直径約１０μｍ、肝細胞や血管内皮細胞は直径約３０μｍ、神経細胞や筋細胞は約１００μｍ、卵細胞は約２００μｍである。このように、体内の一般的な細胞の大きさは、約数μｍから２００μｍの範囲にあるといえる。一方、細胞が分泌する膜小胞の直径は、約数ｎｍから１００ｎｍであり、上述した一般的な細胞よりも小さい。上記膜小胞は、疾患の新たなバイオマーカとしての利用性が注目されている。よって、細胞と膜小胞のように、大きさの異なる生体組織を含んだ検体から、膜小胞のみの標本を作製することは、研究分野のみならず、医療分野においても重要になる。
【００２１】
上記第１の実施形態において、第１のフィルタ１の孔の大きさは、細胞Ｃの大きさよりも小さく、膜小胞Ｅの大きさよりも大きい孔径の多数の透孔を有することとしたが、上述した細胞Ｃの大きさの観点から、第１のフィルタ１は、一般的な細胞を捕捉することができる、約０．１μｍから１００μｍの孔径を有するフィルタであることとすることが好ましい。より好ましくは、第１のフィルタ１の孔径は、０．１μｍから１０μｍであることとする。
また、上記第１の実施形態において、第２のフィルタ２は、膜小胞Ｅの大きさよりも小さな孔径の多数の透孔を有することとしたが、上述した膜小胞Ｅの大きさの観点から、膜小胞を捕捉することができる、約０．００１μｍから０．１μｍの孔径を有するフィルタであることが好ましい。より好ましくは、第２のフィルタ２の孔径は、０．００１μｍから０．０２μｍであることとする。
【００２２】
第１のフィルタ１および第２のフィルタ２の素材は、例えば、酢酸セルロース、芳香族ポリアミド、ポリビニルアルコール、ポリスルホン、ポリフッ化ビニリデン、ポリエチレン、ポリアクリロニトリル、ポリプロピレン、ポリカーボネートのいずれかからなるフィルタであることとする。これらの素材以外にも、精密ろ過膜、限外ろ過膜、逆浸透膜の素材として用いられるあらゆるものをフィルタ素材の選択肢に含むこととする。
【００２３】
本発明の第２の実施形態に係る標本作製デバイス２００について図５を参照して以下に説明する。図１に示す第１の実施形態の標本作製デバイス１００と異なるのは、連結部の構成のみであり、その他の部分の構成は第１の実施形態の標本作製デバイス１００と同様であるため、同様な部分には同じ符号を付して説明を省略する。
第１の筒体３と第２の筒体４との連結部は、第２のフィルタに対向する側の第１の筒体３の一端部の第１の内孔に形成された雌ねじ部（ねじ受け）７と、第２の筒体４の第２のフィルタ２側外面に形成され、雌ねじ部７に締結される雄ねじ部（ねじ山）６とで構成されている。
【００２４】
第１の筒体３の第１の内孔に形成された雌ねじ部７と第２の筒体４の外面に形成された雄ねじ部６とがねじ止めにより連結される。このようにすることで、検体Ａがフィルタを通過する方向に対して第１の筒体３と第２の筒体４とを固定することができる。よって、検体Ａをフィルタに通すために加圧または吸引濾過した場合であっても、第１の筒体３と第２の筒体４とが高い密着性をもって連結していることにより、その圧に耐えることができる。また、検体Ａが第１の筒体３から第２の筒体４を通過する際に、検体Ａの一部が筒体の外部への漏れ出すのを防止することができる。
【００２５】
本発明の第２の実施形態の変形例に係る標本作製デバイス２１０について図６を参照して以下に説明する。図５に示す第２の実施形態の標本作製デバイス２００と異なるのは、検体保持部８と第１の筒体３とが連結されている点のみであり、その他の部分の構成は第２の実施形態の標本作製デバイス２００と同様であるため、同様な部分には同じ符号を付して説明を省略する。
【００２６】
第１の筒体３には、第１のフィルタ１が貼付されている側の端部に雄ねじ部１６が形成されている。検体保持部８は、内孔を有する筒体であって、その一端部に雌ねじ部１７が形成されている。検体保持部８の雌ねじ部１７と、第１の筒体３の端部に形成された雄ねじ部１６とが連結された状態で、検体保持部８の内孔にフィルタろ過前の検体Ａが保持されることとなる。その後、吸引ろ過を行うことにより、細胞Ｃおよび膜小胞Ｅを含む検体Ａが、検体保持部８から第１のフィルタ１，第２のフィルタ２の順に通過する。
検体保持部８を第１の筒体３に連結したまま遠心分離を行うことにより、標本作製デバイス２１０で検体Ａの遠心ろ過を行うことができる。
シリンジなどを用いて加圧によるろ過を行うために、検体保持部８の他端部にシリンジの注射口と連結可能なシリンジ連結部の構成をさらに有することとしてもよい。
【００２７】
本発明の第３の実施形態に係る標本作製デバイス３００について図７を参照して以下に説明する。図１に示す第１の実施形態の標本作製デバイス１００と異なるのは、第１の筒体３と第２の筒体４の連結が、Ｏリングで構成された接続部であるジョイント９を介して連結されている点のみであり、その他の部分の構成は第１の実施形態の標本作製デバイス１００と同様であるため、同様な部分には同じ符号を付して説明を省略する。なお、Ｏリングは、軟質熱可塑性プラスチックまたはシリコンゴム等のエラストマで形成されている。
【００２８】
図７（ａ）に示されるように、ジョイント９は、第１の筒体３と第２の筒体４との間に配置される。より具体的には、図７（ｂ）に示されるように、第２の筒体４の端部に配置されている第２のフィルタ２と、第１の筒体３に配置されている第１のフィルタ１との間に隙間が形成されるように、Ｏリングで構成されたジョイント９を介して、第１の筒体３と第２の筒体４とが連結されている。
このようにすることで、第２の筒体４の端面に保持された第２のフィルタ２と第１のフィルタ１が接触するのを防止することができる。よって、検体Ａ中の膜小胞Ｅを損失することなく第２のフィルタ２の外面に捕捉することができる。
【００２９】
本発明の第３の実施形態の変形例に係る標本作製デバイス３１０について図８を参照して以下に説明する。図７に示す第３の実施形態の標本作製デバイス３００と異なるのは、接続部の構成および第１のフィルタ１の配置位置のみであり、その他の部分の構成は第３の実施形態の標本作製デバイス３００と同様であるため、同様な部分には同じ符号を付して説明を省略する。
図８に示されるように、第１のフィルタ１は、第２のフィルタ２に対向するように第１の筒体３に配置されている。また、第１のフィルタ１が配置されている側の第１の筒体３の端部にフランジ１０が形成されている。第２のフィルタ２が配置されている側の第２の筒体４の端部にフランジ２０が形成されている。
【００３０】
Ｏリングで構成されたジョイント９を挟んで、第１のフィルタ１と第２のフィルタ２が対向するように第１の筒体３と第２の筒体４を配置し、ジョイント１９で覆う。ジョイント１９は、ジョイント９を挟むフランジ１０，２０を向い合せた状態で、筒体３，４を嵌め込むことができる大きさの溝が形成されている。このようなジョイント１９の溝に第１の筒体３，第２の筒体４の一端部を嵌め込むようにしてフランジ１０，２０をジョイント１９で覆い、第１の筒体３と第２の筒体４とを固定する。
このようにすることで、検体Ａが第１の筒体３から第２の筒体４を通過する際に、検体Ａの一部が筒体の外部への漏れ出すのを防止することができる。
【００３１】
本発明の第３の実施形態の他の変形例に係る標本作製デバイス３２０について図９を参照して以下に説明する。図７に示す第３の実施形態の標本作製デバイス３００と異なるのは、接続部の構成および第１のフィルタ１の配置位置のみであり、その他の部分の構成は第３の実施形態の標本作製デバイス３００と同様であるため、同様な部分には同じ符号を付して説明を省略する。
図９に示されるように、第１のフィルタ１が配置されている側の第１の筒体３の端部に雄ねじ部２６が形成され、第２のフィルタ２が配置されている側の第２の筒体４の端部に雄ねじ部６が形成されている。そして、第２の筒体４の端部に配置されている第２のフィルタ２と、第１の筒体３の端部に配置されている第１のフィルタ１との間に隙間が形成されるように、接続部であるジョイント２９を介して第１の筒体３と第２の筒体４とが軸方向に連結されている。
【００３２】
ジョイント２９は、両端部に雌ねじ部２７，３７が設けられた中空の接続部である。ジョイント２９の雌ねじ部３７と第１の筒体３の雄ねじ部２６が連結され、ジョイント２９の雌ねじ部２７と第２の筒体４の雄ねじ部６とが連結される。このようにすることで、第２の筒体４と第１の筒体３との間に空間が形成され、各筒体の端面に保持された第２のフィルタ２と第１のフィルタ１が接触するのを防止することができる。よって、検体Ａ中の膜小胞Ｅを損失することなく第２のフィルタ２の外面に捕捉することができる。
【００３３】
また、ジョイント２９を介して第１の筒体３の端部と第２の筒体４の端部とを軸方向に連結することで、高い密閉性をもって第１の筒体３と第２の筒体４とを連結することができる。よって、検体Ａをフィルタに通すために加圧または吸引濾過した場合であっても、第１の筒体３と第２の筒体４とが高い密閉性をもって連結していることにより、その圧に耐えることができる。また、検体Ａが第１の筒体３から第２の筒体４を通過する際に、検体Ａの一部が筒体の外部への漏れ出すのを防止することができる。
【００３４】
本発明の第３の実施形態の他の変形例に係る標本作製デバイス３３０について図１０を参照して以下に説明する。図７に示す第３の実施形態の標本作製デバイス３００と異なるのは、接続部の構成および第１のフィルタ１の配置位置のみであり、その他の部分の構成は第３の実施形態の標本作製デバイス３００と同様であるため、同様な部分には同じ符号を付して説明を省略する。
図１０に示されるように、第１のフィルタ１は、第２のフィルタ２に対向するように第１の筒体３の端部に配置されている。第１のフィルタ１と第２のフィルタ２との間に隙間が形成されるように、Ｏリングで構成されたジョイント９を介して第１の筒体３と第２の筒体４とが接続されている。この接続部に、シールテープ３９を巻く。シールテープ３９は、軟質熱可塑性プラスチック（パラフィンまたはテフロン（登録商標）等）からなることとするがこれに限られるものではない。
【００３５】
ジョイント９を介して第１の筒体３と第２の筒体４とが連結されていることにより、第２の筒体４の端面に保持された第２のフィルタ２と、この第２のフィルタ２に対向するように第１の筒体３に保持された第１のフィルタ１が接触するのを防止することができる。よって、検体Ａ中の膜小胞Ｅを損失することなく第２のフィルタ２の外面に捕捉することができる。
また、接続部に、シールテープ３９を巻くことで検体Ａが第１の筒体３から第２の筒体４を通過する際に、検体Ａの一部が筒体の外部への漏れ出すのを防止することができる。
【００３６】
本発明の第４の実施形態に係る標本作製デバイス４００について図１１を参照して以下に説明する。図１に示す第１の実施形態の標本作製デバイス１００と異なるのは、第３のフィルタ１１を備える第３の筒体２３を有する点および第１の筒体３と第３の筒体２３との連結部の構成のみであり、その他の部分の構成は第１の実施形態の標本作製デバイス１００と同様であるため、同様な部分には同じ符号を付して説明を省略する。
標本作製デバイス４００は、図１１に示されるように、軸方向に貫通する第３の内孔を有する第３の筒体２３と、この第３の筒体２３に、第３の内孔を閉塞する位置に固定され、細胞の大きさより大きい孔径の多数の透孔を有する第３のフィルタ１１とを備えている。そして、第１のフィルタ１の外面側に第３のフィルタ１１が間隔を空けて配置されるように第１の筒体３と第３の筒体２３とが軸方向に着脱可能に連結している。第３のフィルタ１１は、好ましくは、一般的な細胞より大きい細胞収塊やゴミを捕捉することができる、約５０μｍから１０００μｍの孔径を有するフィルタであることとする。
【００３７】
第１の筒体３と第３の筒体２３との連結部は、第１の筒体３の第１のフィルタ１が保持されている端面に向かって先細になるテーパ面２５と、第３の筒体２３の第３の内孔端部に形成され、テーパ面２５に密着させられる形状のテーパ内面３５とから成形されている。
【００３８】
第３の筒体２３と第１の筒体３，第１の筒体３と第２の筒体４とをそれぞれ軸方向に連結されているので、細胞Ｃおよび膜小胞Ｅを含む検体Ａは、最初に第３のフィルタ１１，次に第１のフィルタ１，最後に第２のフィルタ２の順に通過する。
このようにすることで、各細胞Ｃより大きな細胞塊や異物等が第３のフィルタ１１により捕捉されるので、検体Ａ中の細胞Ｃよりも大きな物質が、あらかじめ第３のフィルタ１１１で取り除くことができる。よって、多量の検体または密度の高い検体を流動した場合であっても、第１のフィルタ１が目詰まりするのを防止することができる。
【００３９】
また、第３の筒体２３のテーパ内面３５と第１の筒体３のテーパ面２５とを擦り合わせるように係合（摩擦係合）するので、検体Ａが第１のフィルタ１を通過する方向に対して筒同士が高い密着性をもって固定される。これにより、第１の筒体３と第３の筒体２３とが、吸引または加圧によるろ過や遠心ろ過が可能な程度に係合されることとなる。よって、検体Ａが第３の筒体２３の第３の内孔から第１の筒体３の第１の内孔を通過する際に、検体Ａの一部が筒体の外部への漏れ出すのを防止することができる。
【００４０】
以上、本発明の各実施形態について図面を参照して詳述してきたが、具体的な構成はこの実施形態に限られるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲の設計変更等も含まれる。例えば、本発明を上記の各実施形態を適宜組み合わせた実施形態に適用してもよい。
【００４１】
次に、本発明の第４の実施形態に係る標本作製デバイス４００を用いた標本作成の一実施例について以下に説明する。
（実験方法）
Ｈｅｌａ細胞（ＪＣＲＢ細胞バンク，ＪＣＲＢ９００４）を、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，１２４８３−０２０）および抗生物質（Ｇｉｂｃｏ，１５２４００６２）を含むＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ，１１９６５０９２）培地および５％ＣＯ２インキュベーターを用いて、３７℃で培養した。
培養上清１０ｍＬ（検体Ａ）を採取し、メタノール（Ｗａｋｏ，１３１−０１８２６）を等量加えた溶液をサンプル溶液とした。
上記サンプル溶液を、孔径７００ｎｍの第３のフィルタ１１，孔径２２０ｎｍの第１のフィルタ１，孔径２０ｎｍの第２のフィルタ２の順にフィルタろ過（Ｂｉｏｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，５１４６）した。
【００４２】
孔径２０ｎｍの第２のフィルタ２を取り出し、第２のフィルタ２の上面がスライドグラス上に接触するように貼り付けた。アルミホイル小片を第２のフィルタ２上に載せ、その上からローラを転がしてフィルターを圧着させた。圧着後、９５％エタノール（Ｗａｋｏ，０５８−００４８６）に浸漬した。
スライドグラスを９５％エタノールから取り出し、７０％エタノール、５０％エタノール、ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，７００１３−０３２）の順に浸漬した。スライドグラス上の余分なＰＢＳを除去し、１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ，Ａ９６４７）を含むＰＢＳを２００ｕＬ載せ、１５分静置した。
【００４３】
静置後、スライドグラス上の余分なＰＢＳを除去し、抗ＣＤ９抗体（ＥＸＢＩＯ，１０−２０８−Ｃ１００）溶液，２０ｕｇ／ｍＬを載せ、３７℃で１５分静置した。
静置後、抗体溶液を除去し、ＰＢＳで３回洗浄した。
洗浄後、ローダミン標識抗マウス−ＩｇＧ抗体（ＧｅｎｅＴｅｘ，ＧＴＸ２７０７２），１ｕｇ／ｍＬを載せ、３７℃で１５分静置した。
静置後、余分な抗体溶液を除去し、ＰＢＳで３回洗浄した後、カバーグラスを載せて封入したものを膜小胞Ｅのサンプル標本とした。
培養上清（検体Ａ）の代わりに、１０％ＦＢＳおよび抗生物質を含むＤＭＥＭ培地１０ｍＬを用いて、同様に処理したものをネガティブコントロールとした。
蛍光顕微鏡（ＩＸ７０，ＯＬＹＭＰＵＳ）およびＣＣＤカメラ（ＤＰ７２，ＯＬＹＭＰＵＳ）を用いて、励起波長５４３ｎｍ，蛍光波長５６０ｎｍから６２０ｎｍの蛍光画像を撮像した。
【００４４】
（結果）
結果を図１２に示す。ネガティブコントロール（図１２左）では、蛍光がほとんど見られないが、サンプル標本（図１２右）では、数十ｎｍから数百ｎｍ程度の蛍光を放つ、染色された膜小胞Ｅが観察された。このように、フィルタにより膜小胞Ｅを分離し、膜小胞Ｅからなるスライド標本を作製することができるといえる。
【符号の説明】
【００４５】
Ａ  検体
Ｃ  細胞
Ｅ  膜小胞
１  第１のフィルタ
２  第２のフィルタ
３  第１の筒体
４  第２の筒体
５，２５  テーパ面
６，１６，２６  雄ねじ部
７，１７，２７，３７  雌ねじ部
８  検体保持部
９，１９，２９  ジョイント
１０，２０  フランジ
１１  第３のフィルタ
１５，３５  テーパ内面
２３  第３の筒体
３９  シールテープ
１００，２００，３００，４００  標本作製デバイス
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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