(57)【要約】      （修正有）【課題】メチオニンアミノペプチダーゼ−２（MetAP-2）の過剰発現又は過剰活性に関連した又は関係のある状態を処置するための経口投与用のMetAP-2阻害剤を含む組成物及び製剤の提供。【解決手段】親水性ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）モエティ及び疎水性ポリｄ，Ｌ−乳酸（ＰＬＡ）モエティを有するＰＥＧ−ＰＬＡジブロック共重合体に６−Ｏ−（Ｎ−クロロアセチルカルバモイル）フマギロール（ＴＮＰ−４７０）のようなＭｅｔＡＰ−２阻害剤が共有結合したもの（ロダミン）を配合した組成物。2014208679.tif 000017【選択図】図１２
2014208679.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗増殖活性を有するメチオニンアミノペプチダーゼ−２（ＭｅｔＡＰ−２）阻害剤製剤を含む組成物であって、該製剤が、親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むブロック共重合体と共有結合で連結したＭｅｔＡＰ−２阻害剤を含む、組成物。
【請求項２】
ＭｅｔＡＰ−２阻害剤が不可逆性ＭｅｔＡＰ−２阻害剤である、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
ＭｅｔＡＰ−２阻害剤がフマギロール誘導体である、請求項１または２のいずれか一項記載の組成物。
【請求項４】
ＭｅｔＡＰ−２阻害剤が可逆性ＭｅｔＡＰ−２阻害剤である、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
ブロック共重合体がジブロック共重合体である、請求項１〜４のいずれか一項記載の組成物。
【請求項６】
ＭｅｔＡＰ−２阻害剤が、ブロック共重合体の疎水性モエティと共有結合で連結している、請求項１〜５のいずれか一項記載の組成物。
【請求項７】
ブロック共重合体の疎水性重合体モエティが、ポリ（ｄ，Ｌ−乳酸）、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、およびポリ（プロピレンオキシド）からなる群より選択される、請求項１〜６のいずれか一項記載の組成物。
【請求項８】
疎水性モエティが、ポリ（ｄ，Ｌ−乳酸）（ＰＬＡ）重合体である、請求項１〜７のいずれか一項記載の組成物。
【請求項９】
親水性モエティが、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）重合体である、請求項１〜８のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１０】
重合体が、親水性ＰＥＧモエティおよび疎水性ＰＬＡモエティを有するＰＥＧ−ＰＬＡジブロック共重合体を含むジブロック共重合体である、請求項１〜９のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１１】
製剤が経口投与用に製剤化されている、請求項１〜１０のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１２】
製剤が、局所投与用、ＩＶ投与用、腹膜投与用、注射用、経眼投与用、坐剤投与用、経肺投与または吸入用、および経鼻投与用に製剤化されている、請求項１〜１１のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１３】
抗増殖活性が抗腫瘍活性である、請求項１〜１２のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１４】
フマギロール誘導体が、６−Ｏ−（Ｎ−クロロアセチルカルバモイル）フマギロール（ＴＮＰ−４７０）、６−Ｏ−（４−メトキシアニリン）アセチルフマギロール；６−Ｏ−（３，４，５−トリメトキシアニリン）アセチルフマギロール；６−Ｏ−（４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルエトキシ）アニリン）アセチルフマギロール；６−Ｏ−（シクロプロピルアミノ）アセチルフマギロール；６−Ｏ−（シクロブチルアミノ）アセチルフマギロール；４−（（シクロプロピルアミノ）アセチル）オキシ−２−（１，２−エポキシ−１，５−ジメチル−４−ヘキセニル）−３−メトキシ−１−クロロメチル−１シクロヘキサノール；４−（（シクロブチルアミノ）アセチル）オキシ−２−（１，２−エポキシ−１，５ジメチル−４−ヘキセニル）−３−メトキシ−１−クロロメチル−１−シクロヘキサノールからなる群より選択される誘導体を含む、請求項２〜１３のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１５】
フマギロール誘導体が６−Ｏ−（Ｎ−クロロアセチルカルバモイル）フマギロール（ＴＮＰ−４７０）を含む、請求項２〜１４のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１６】
ＭｅｔＡＰ−２阻害剤が、ベンガミド（bengamide）、スルホンアミド、ベスタチン、３−アミノ−２−ヒドロキシアミド、ヒドロキシアミド、アシルヒドラジン、オバシリン（ovacillin）、可逆性ＭｅｔＡＰ−２阻害剤、および不可逆性ＭｅｔＡＰ−２阻害剤からなる群より選択される、請求項１、２、または４〜１５のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１７】
抗増殖活性を有するＭｅｔＡＰ−２阻害剤を含むジブロック共重合体組成物を生成する方法であって、該ＭｅｔＡＰ−２阻害剤を、親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むジブロック共重合体と共有結合させる工程を含む、方法。
【請求項１８】
ＭｅｔＡＰ−２阻害剤が抗血管形成活性を有するフマギロール誘導体である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
ＭｅｔＡＰ−２阻害剤が不可逆性ＭｅｔＡＰ−２阻害剤である、請求項１７または１８のいずれか一項記載の方法。
【請求項２０】
ＭｅｔＡＰ−２阻害剤が可逆性ＭｅｔＡＰ−２阻害剤である、請求項１７記載の方法。
【請求項２１】
ＭｅｔＡＰ−２阻害剤が、６−Ｏ−（Ｎ−クロロアセチルカルバモイル）フマギロール（ＴＮＰ−４７０）を含む、請求項１７〜１９のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
請求項１７〜２１のいずれか一項記載の方法により作製された、ＭｅｔＡＰ−２阻害剤を含むジブロック共重合体組成物。
【請求項２３】
ＭｅｔＡＰ−２阻害剤が抗増殖活性を有するフマギロール誘導体である、請求項２２記載のジブロック共重合体組成物。
【請求項２４】
フマギロール誘導体が、６−Ｏ−（Ｎ−クロロアセチルカルバモイル）フマギロール（ＴＮＰ−４７０）を含む、請求項２３記載のジブロック共重合体組成物。
【請求項２５】
その病理にＭｅｔＡＰ−２活性が関与しているかまたはＭｅｔＡＰ−２活性に依存している状態の処置のための医薬の製造における、請求項１〜１６のいずれか一項記載の組成物の使用。
【請求項２６】
状態が腫瘍活性を含む、請求項２５記載の使用。
【請求項２７】
状態が、癌、転移性腫瘍、乾癬、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、甲状腺過形成、子癇前症、関節リウマチおよび骨関節炎、アルツハイマー病、肥満、胸水、アテローム性動脈硬化、子宮内膜症、糖尿病性／その他の網膜症、眼血管新生、ＩＬ−２治療に関連した浮腫およびその他の浮腫、マラリア、ＳＡＲＳ、ＨＩＶ、ヘルペス、ループス、ＩＰＦ、ＣＯＰＤ、喘息、嚢胞性繊維症、移植片拒絶、アレルギー反応、多発性硬化症、細菌感染、ウイルス感染、血管透過性亢進が関与しているかまたは血管透過性亢進を特徴とする状態、炎症、ならびに脊髄損傷からなる群より選択される、請求項２５または２６のいずれか一項記載の使用。
【請求項２８】
抗血管形成活性を有するフマギロール誘導体の製剤を含む組成物であって、該製剤が親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むブロック共重合体と共有結合している該誘導体を含む、組成物。
【請求項２９】
ブロック共重合体がジブロック共重合体である、請求項２８記載の組成物。
【請求項３０】
製剤が、フマギロール誘導体と共有結合しているブロック共重合体を含むミセルを含む、請求項２８記載の組成物。
【請求項３１】
フマギロール誘導体がブロック共重合体の疎水性モエティと共有結合している、請求項２８記載の組成物。
【請求項３２】
ブロック共重合体の疎水性重合体モエティが、ポリ（ｄ，Ｌ−乳酸）、ポリ（Ｌ−リジン）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、ポリ（プロピレンオキシド）からなる群より選択される、請求項２８記載の組成物。
【請求項３３】
疎水性モエティが、ポリ（ｄ，Ｌ−乳酸）（ＰＬＡ）重合体である、請求項３２記載の組成物。
【請求項３４】
ブロック共重合体の親水性重合体モエティが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項２８記載の組成物。
【請求項３５】
重合体が、親水性ＰＥＧモエティおよび疎水性ＰＬＡモエティを有するＰＥＧ−ＰＬＡジブロック共重合体を含むジブロック共重合体である、請求項２８記載の組成物。
【請求項３６】
製剤が経口投与用に製剤化されている、請求項２８記載の組成物。
【請求項３７】
抗血管形成活性が抗腫瘍活性である、請求項２８記載の組成物。
【請求項３８】
フマギロール誘導体が、６−Ｏ−（Ｎ−クロロアセチルカルバモイル）フマギロール（ＴＮＰ−４７０）、６−Ｏ−（４−メトキシアニリン）アセチルフマギロール；６−Ｏ−（３，４，５−トリメトキシアニリン）アセチルフマギロール；６−Ｏ−（４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルエトキシ）アニリン）アセチルフマギロール；６−Ｏ−（シクロプロピルアミノ）アセチルフマギロール；６−Ｏ−（シクロブチルアミノ）アセチルフマギロール；４−（（シクロプロピルアミノ）アセチル）オキシ−２−（１，２−エポキシ−１，５−ジメチル−４−ヘキセニル）−３−メトキシ−１−クロロメチル−１シクロヘキサノール；４−（（シクロブチルアミノ）アセチル）オキシ−２−（１，２−エポキシ−１，５ジメチル−４−ヘキセニル）−３−メトキシ−１−クロロメチル−１−シクロヘキサノールからなる群より選択される誘導体を含む、請求項２８記載の組成物。
【請求項３９】
フマギロール誘導体が、６−Ｏ−（Ｎ−クロロアセチルカルバモイル）フマギロール（ＴＮＰ−４７０）を含む、請求項３８記載の組成物。
【請求項４０】
抗血管形成活性を有するフマギロール誘導体を含むジブロック共重合体ミセルを生成する方法であって、該フマギロール誘導体を、親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むジブロック共重合体と共有結合させる工程、ならびに得られた結合体のミセルを形成させる工程を含む、方法。
【請求項４１】
フマギロール誘導体が６−Ｏ−（Ｎ−クロロアセチルカルバモイル）フマギロール（ＴＮＰ−４７０）を含む、請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
請求項４０記載の方法によって作製された、フマギロール誘導体を含むジブロック共重合体ミセル。
【請求項４３】
フマギロール誘導体が６−Ｏ−（Ｎ−クロロアセチルカルバモイル）フマギロール（ＴＮＰ−４７０）を含む、請求項４２記載のジブロック共重合体ミセル。
【請求項４４】
ＰＥＧ重合体がキャッピングされたＰＥＧ重合体である、請求項９または３４記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、2007年6月26日出願の米国仮出願第60/937,198号および2008年5月20日出願の第61/054,595号（これらの内容は、参照により本明細書に完全に組み入れられる）の35U.S.C.§119(e)に基づく恩典を主張する。
【０００２】
発明の領域
本発明は、一般に、疾患に通じる望まれない細胞増殖に関してMetAP-2発現の程度に依存している疾患または障害の処置のための抗増殖性重合体治療用化合物に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
新たに出現してきたデータは、遍在性の真核生物酵素「メチオニンアミノペプチダーゼ2型」（MetAP-2）が多くの疾患に関与していることを強く示している（Kass 2007、Yeh 2005、Bo 2004、Bringardner 2008、Zhang 2001、Watanabe 2006）。MetAP-2の役割は未だ完全には理解されていないが、MetAP-2の発現および活性（MetAP-2の過剰発現または過剰活性を含むが、必ずしもこれらに限定はされない）が、疾患進行および病期と相関していることは明らかである（Salvukumar 2006）。MetAP-2活性を阻害する化合物は、多様な疾患に対する有意義な治療的利益に通じるかもしれない。
【０００４】
腫瘍成長が血管形成依存性であることは、血管形成阻害剤の現行の臨床試験のための科学的根拠を提供する、生物学的証拠および薬理学的証拠の両方によって支持され、遺伝学的証拠により確認されている、広く認められている仮説である。悪性固形腫瘍を有する患者の研究において、腫瘍血管形成の増加、ならびに血管内皮増殖因子（VEGF/VPF）、塩基性繊維芽細胞増殖因子（bFGF）、およびインターロイキン-8（IL-8）のような血管形成促進性因子のレベルの上昇は、生存率の減少および再発リスクの増加と相関している。血管形成の重要性は、抗血管形成剤が多様な動物モデルにおける腫瘍成長を阻害するという観察によってさらに支持される。
【０００５】
米国において、現在、30種を超える血管形成阻害剤が、後期癌のための様々な臨床試験を受けている。これらの血管形成阻害剤のうちの一つ、O-(クロルアセチル-カルバモイル)フマギロール（TNP-470）は、低分子量の合成化合物である。フマギロールは、真菌アスペルギルス・フミガーツス・フレセニウス（Aspergillus fumigatus fresenius）により分泌される化合物であるフマギリンの加水分解に由来するアルコールである3。TNP-470は、インビトロで強力な内皮阻害剤である30。最近、TNP-470は、可能性のある新たな抗癌剤として試験されている。フマギリンのアナログであるAGM-1470とも呼ばれるTNP-470は、血管形成の最も強力な阻害剤のうちの一つである。TNP-470の抗血管形成特性は、動物における種々の腫瘍モデルに対して、そして前立腺癌、乳癌、肺癌、および子宮頸癌のような多様な悪性病変に関する臨床試験において試験された。
【０００６】
動物モデルにおいて、TNP-470は、公知の薬剤の中で最も広い抗癌スペクトルを有する32,31。TNP-470は、マウスにおいて、マウス腫瘍の成長を91％、ヒト腫瘍を100％、転移性腫瘍を100％、阻害した(参照31に概説されている)。大部分の研究において、マウスは、隔日で、30mg/kgという同一の最適用量で皮下処理された。臨床試験において、TNP-470は、単一の薬剤として使用された時、抗腫瘍活性の証拠を示し、多数の客観的な応答が、再発性悪性病変および難治性悪性病変に関して報告された17,19,23。また、従来の化学療法と組み合わせて使用された場合の見込みも示したが20,34、抗腫瘍活性が見られる高い化学療法薬用量では、多くの患者が神経毒性(倦怠感、稀な発作、無力症、不安、および不快)を経験する20,21,22,23。抗血管形成活性に加えて、TNP-470は、血管漏出も阻害または防止する。
【０００７】
メチオニンアミノペプチダーゼ-2（MetAP-2）は、抗血管形成性フマギロール誘導体（例えば、TNP-470）の標的として同定された41。MetAP-2との複合体を形成したフマギリンの結晶構造が、Liuらにより報告された42。
【０００８】
TNP-470は、一般に、注射、例えば、筋肉内もしくは静脈内の送達系を介して、または数日毎に与えられる連続静脈内注入により投与される。TNP-470はまた、典型的に、低頻度の間隔で特定の期間にわたり高い用量で投与され、例えば、TNP-470は化学療法薬として高い用量で投与される。TNP-470は、一般に、経口投与はされない。
【発明の概要】
【０００９】
概要
本発明は、MetAP-2阻害剤を含む組成物および製剤、ならびに疎水性モエティおよび親水性モエティを含むブロック共重合体と会合しているMetAP-2阻害剤を含む組成物および製剤に、一部、関する。いくつかの態様において、MetAP-2阻害剤は、親水性モエティおよび疎水性モエティを含むブロック共重合体の一部である疎水性モエティを含むブロック共重合体と会合している。いくつかの態様において、親水性モエティおよび疎水性モエティを含むブロック共重合体はミセルを形成する。
【００１０】
MetAP-2阻害剤を含む組成物および製剤は、MetAP-2発現（MetAP-2の過剰発現または過剰活性を含むが、これらに限定はされない）が関与しているかまたはMetAP-2発現に関連している疾患または障害の処置において使用され得る。従って、本発明は、本明細書に記載されたようにして製剤化されたMetAP-2阻害剤を含む組成物を投与する工程を含む、その病理に関してMetAP-2活性が関与しているかまたはMetAP-2活性を必要とする状態を処置する方法に関する。
【００１１】
本発明の一つの局面は、不可逆性MetAP-2阻害剤、例えば、抗増殖活性を有するフマギロールのアナログまたは誘導体の製剤を含む組成物に関する。ここで、製剤は、親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むブロック共重合体と会合しているMetAP-2阻害剤を含む。一つの態様において、不可逆性阻害剤は、例えば、MetAP-2阻害剤のベンガミド（bengamide）クラスのメンバーであり、ここで、製剤は、親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むブロック共重合体と会合している。
【００１２】
本発明のもう一つの局面は、可逆性阻害剤、例えば、ベスタチンクラス阻害剤または3-アミノ-2-ヒドロキシアミドおよび関連ヒドロキシアミドならびにアシルヒドラジンの製剤を含む組成物に関する。ここで、製剤は、親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むブロック共重合体と会合している。
【００１３】
いくつかの態様において、ブロック共重合体はジブロック共重合体であり、例えば、フマギリンのアナログ／誘導体またはそのベンガミドアナログは、ジブロック共重合体のようなブロック共重合体の疎水性モエティと会合している。そのような場合、フマギリンのアナログ／誘導体またはベンガミドアナログは、そのようなジブロック共重合体の疎水性モエティに関連している。
【００１４】
いくつかの態様において、製剤は、MetAP-2の可逆性または不可逆性の阻害剤と会合しているブロック共重合体を含むミセルを含む。
【００１５】
従って、本発明は、少なくとも、以下の局面および態様を包含する。
【００１６】
一つの局面において、抗増殖活性を有するメチオニンアミノペプチダーゼ-2（MetAP-2）阻害剤製剤を含む組成物が、本明細書に記載される。ここで、製剤は、親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むブロック共重合体と共有結合で連結したMetAP-2阻害剤を含む。
【００１７】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面の一つの態様において、MetAP-2阻害剤はフマギロール誘導体である。
【００１８】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、MetAP-2阻害剤は不可逆性MetAP-2阻害剤である。
【００１９】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、MetAP-2阻害剤は可逆性MetAP-2阻害剤である。
【００２０】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、ブロック共重合体はジブロック共重合体である。
【００２１】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、MetAP-2阻害剤は、ブロック共重合体の疎水性モエティと共有結合で連結している。
【００２２】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、ブロック共重合体の疎水性重合体モエティは、ポリ(d,L-乳酸)、ポリ(カプロラクトン)（PCL）、およびポリ(プロピレンオキシド)からなる群より選択される。
【００２３】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、疎水性モエティはポリ(d,L-乳酸)（PLA）重合体である。
【００２４】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、疎水性重合体モエティは1〜15kDaである。例えば、疎水性重合体モエティは、1〜10kDa、1〜8kDa、1〜5kDa、1〜3kDa、3〜15kDa、5〜15kDa、8〜15kDa、10〜15kDa、12〜15kDa、2〜12kDa、または4〜10kDa、6〜8kDaのサイズであり得る。この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、疎水性重合体はおよそ2kDaである。
【００２５】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、親水性モエティはポリ(エチレングリコール)（PEG）重合体である
【００２６】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、親水性重合体モエティは1〜15kDaである。例えば、親水性重合体モエティは、1〜10kDa、1〜8kDa、1〜5kDa、1〜3kDa、3〜15kDa、5〜15kDa、8〜15kDa、10〜15kDa、12〜15kDa、2〜12kDa、4〜10kDa、6〜8kDaのサイズであり得る。この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、親水性重合体はおよそ2kDaである。
【００２７】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、重合体は、親水性PEGモエティおよび疎水性PLAモエティを有するPEG-PLAジブロック共重合体を含むジブロック共重合体である。
【００２８】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、製剤は経口投与用に製剤化される。
【００２９】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、製剤は局所投与用に製剤化される。
【００３０】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、製剤は、とりわけ、経口、IV、腹膜、注射（例えば、皮下、筋肉内等）、点眼または経眼、坐剤、局所、経肺（吸入を含む）、および経鼻経路による投与用に製剤化され、可逆性または不可逆性のMetAP-2阻害剤を含む。
【００３１】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、抗増殖活性は、抗腫瘍活性または血管透過性を正常化する活性である。
【００３２】
この局面および本明細書に記載されたその他の全ての局面のもう一つの態様において、MetAP-2阻害剤は抗血管形成活性を有し、血管形成により媒介される状態の処置のための薬の調製、および／または血管形成により媒介される状態を処置する方法において有用である。
【００３３】
抗増殖活性および／または抗血管形成活性を有するフマギロール誘導体に関するこの局面および本明細書に記載された全ての局面のもう一つの態様において、フマギロール誘導体は、6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）、6-O-(4-メトキシアニリン)アセチルフマギロール；6-O-(3,4,5-トリメトキシアニリン)アセチルフマギロール；6-O-(4-(N,N-ジメチルエトキシ)アニリン)アセチルフマギロール；6-O-(シクロプロピルアミノ)アセチルフマギロール；6-O-(シクロブチルアミノ)アセチルフマギロール；4-((シクロプロピルアミノ)アセチル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5-ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1シクロヘキサノール；4-((シクロブチルアミノ)アセチル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1-シクロヘキサノールからなる群より選択される誘導体を含む。
【００３４】
抗増殖活性および／または抗血管形成活性を有するフマギロール誘導体に関するこの局面および本明細書に記載された全ての局面のもう一つの態様において、フマギロール誘導体は6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（即ち、TNP-470）を含む。
【００３５】
この局面および本明細書に記載された全ての局面のもう一つの態様において、MetAP-2阻害剤は、ベンガミド、スルホンアミドMetAP-2阻害化合物、ベスタチン、3-アミノ-2-ヒドロキシアミドMetAP-2阻害化合物、ヒドロキシアミドMetAP-2阻害化合物、アシルヒドラジンMetAP-2阻害化合物、オバシリン（ovacillin）、可逆性MetAP-2阻害剤、および不可逆性MetAP-2阻害剤からなる群より選択される。
【００３６】
もう一つの局面において、親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むブロック共重合体と共有結合で連結した、抗増殖活性を有するMetAP-2阻害剤を含むMetAP-2阻害剤製剤を投与する工程を含む、状態の病理にMetAP-2活性が必要とされるかまたは関与している状態を処置する方法が、本明細書に記載される。
【００３７】
一つの態様において、状態は、血管形成により媒介される状態である。血管形成により媒介される状態には、非限定的な例として、癌、転移性腫瘍、腹水形成、乾癬、加齢黄斑変性（AMD）、甲状腺過形成、子癇前症、関節リウマチおよび骨関節炎、アルツハイマー病、肥満、胸水、アテローム性動脈硬化、子宮内膜症、糖尿病性／その他の網膜症、血管新生緑内障および角膜血管新生のような眼血管新生、ならびにIL-2治療に関連した浮腫、ならびにその他の型の異常な血管増殖が含まれる。
【００３８】
一つの態様において、MetAP-2活性が関与している状態は、腫瘍活性を含む。
【００３９】
一つの態様において、状態は、癌、転移性腫瘍、乾癬、加齢黄斑変性（AMD）、甲状腺過形成、子癇前症、関節リウマチおよび骨関節炎、アルツハイマー病、肥満、胸水、アテローム性動脈硬化、子宮内膜症、糖尿病性／その他の網膜症、眼血管新生、IL-2治療に関連した浮腫およびその他の浮腫、マラリア、SARS、HIV、ヘルペス、ループス、IPF、COPD、喘息、嚢胞性繊維症、移植片拒絶、アレルギー反応、多発性硬化症、細菌感染、ウイルス感染、血管透過性亢進が関与しているかまたは血管透過性亢進を特徴とする状態、炎症、ならびに脊髄損傷からなる群より選択される。
【００４０】
もう一つの局面において、MetAP-2阻害剤を、親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むジブロック共重合体と結合させる工程を含む、抗増殖活性を有するMetAP-2阻害剤を含むジブロック共重合体組成物を生成する方法が、本明細書に記載される。
【００４１】
一つの態様において、MetAP-2阻害剤は、抗増殖活性および／または抗血管形成活性を有するフマギロール誘導体である。
【００４２】
もう一つの局面において、本明細書に記載された方法により作製された、MetAP-2阻害剤を含むジブロック共重合体組成物が、本明細書に記載される。一つの態様において、MetAP-2阻害剤は、抗増殖活性および／または抗血管形成活性を有するフマギロール誘導体である。一つの態様において、フマギロール誘導体は、6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）およびその代謝物を含む。
【００４３】
もう一つの局面において、その病理に関してMetAP-2活性に依存しているかまたはMetAP-2活性が関与している状態の処置のための薬の製造における、本明細書に記載されたMetAP-2阻害剤ブロック共重合体製剤の使用が、本明細書に記載される。
【００４４】
一つの態様において、状態は腫瘍活性を含む。
【００４５】
もう一つの態様において、状態は、癌、転移性腫瘍、乾癬、加齢黄斑変性（AMD）、甲状腺過形成、子癇前症、関節リウマチおよび骨関節炎、アルツハイマー病、肥満、胸水、アテローム性動脈硬化、子宮内膜症、糖尿病性／その他の網膜症、眼血管新生、IL-2治療に関連した浮腫およびその他の浮腫、マラリア、SARS、HIV、ヘルペス、ループス、IPF、COPD、喘息、嚢胞性繊維症、移植片拒絶、アレルギー反応、多発性硬化症、細菌感染、ウイルス感染、異常な血管系または血管透過性亢進が関与しているかまたはそれらを特徴とする状態、炎症、ならびに脊髄損傷からなる群より選択される。
【００４６】
もう一つの局面において、MetAP-2阻害剤を、親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むジブロック共重合体と結合させる工程、ならびに得られた結合体のミセルを形成させる工程を含む、MetAP-2阻害剤を含むジブロック共重合体ミセルを生成する方法が、本明細書に記載される。
【００４７】
もう一つの局面において、MetAP-2阻害剤を含むジブロック共重合体ミセルの作製が、本明細書に記載される。
【００４８】
本発明のその他の局面は以下に開示される。
[請求項1001]
抗増殖活性を有するメチオニンアミノペプチダーゼ-2（MetAP-2）阻害剤製剤を含む組成物であって、該製剤が、親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むブロック共重合体と共有結合で連結したMetAP-2阻害剤を含む、組成物。
[請求項1002]
MetAP-2阻害剤が不可逆性MetAP-2阻害剤である、請求項1001記載の組成物。
[請求項1003]
MetAP-2阻害剤がフマギロール誘導体である、請求項1001または1002のいずれか一項記載の組成物。
[請求項1004]
MetAP-2阻害剤が可逆性MetAP-2阻害剤である、請求項1001記載の組成物。
[請求項1005]
ブロック共重合体がジブロック共重合体である、請求項1001〜1004のいずれか一項記載の組成物。
[請求項1006]
MetAP-2阻害剤が、ブロック共重合体の疎水性モエティと共有結合で連結している、請求項1001〜1005のいずれか一項記載の組成物。
[請求項1007]
ブロック共重合体の疎水性重合体モエティが、ポリ(d,L-乳酸)、ポリ(カプロラクトン)（PCL）、およびポリ(プロピレンオキシド)からなる群より選択される、請求項1001〜1006のいずれか一項記載の組成物。
[請求項1008]
疎水性モエティが、ポリ(d,L-乳酸)（PLA）重合体である、請求項1001〜1007のいずれか一項記載の組成物。
[請求項1009]
親水性モエティが、ポリ(エチレングリコール)（PEG）重合体である、請求項1001〜1008のいずれか一項記載の組成物。
[請求項1010]
重合体が、親水性PEGモエティおよび疎水性PLAモエティを有するPEG-PLAジブロック共重合体を含むジブロック共重合体である、請求項1001〜1009のいずれか一項記載の組成物。
[請求項1011]
製剤が経口投与用に製剤化されている、請求項1001〜1010のいずれか一項記載の組成物。
[請求項1012]
製剤が、局所投与用、IV投与用、腹膜投与用、注射用、経眼投与用、坐剤投与用、経肺投与または吸入用、および経鼻投与用に製剤化されている、請求項1001〜1011のいずれか一項記載の組成物。
[請求項1013]
抗増殖活性が抗腫瘍活性である、請求項1001〜1012のいずれか一項記載の組成物。
[請求項1014]
フマギロール誘導体が、6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）、6-O-(4-メトキシアニリン)アセチルフマギロール；6-O-(3,4,5-トリメトキシアニリン)アセチルフマギロール；6-O-(4-(N,N-ジメチルエトキシ)アニリン)アセチルフマギロール；6-O-(シクロプロピルアミノ)アセチルフマギロール；6-O-(シクロブチルアミノ)アセチルフマギロール；4-((シクロプロピルアミノ)アセチル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5 20ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1シクロヘキサノール；4-((シクロブチルアミノ)アセチル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1-シクロヘキサノールからなる群より選択される誘導体を含む、請求項1002〜1013のいずれか一項記載の組成物。
[請求項1015]
フマギロール誘導体が6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）を含む、請求項1002〜1014のいずれか一項記載の組成物。
[請求項1016]
MetAP-2阻害剤が、ベンガミド（bengamide）、スルホンアミド、ベスタチン、3-アミノ-2-ヒドロキシアミド、ヒドロキシアミド、アシルヒドラジン、オバシリン（ovacillin）、可逆性MetAP-2阻害剤、および不可逆性MetAP-2阻害剤からなる群より選択される、請求項1001、1002、または1004〜1015のいずれか一項記載の組成物。
[請求項1017]
親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むブロック共重合体と共有結合で連結した、抗増殖活性を有するMetAP-2阻害剤を含むMetAP-2阻害剤製剤を投与する工程を含む、その病理に関してMetAP-2活性が関与しているかまたはMetAP-2活性に依存している状態を処置する方法。
[請求項1018]
MetAP-2阻害剤がフマギロール誘導体である、請求項1017記載の方法。
[請求項1019]
MetAP-2阻害剤が不可逆性MetAP-2阻害剤である、請求項1017または1018のいずれか一項記載の方法。
[請求項1020]
MetAP-2阻害剤が可逆性MetAP-2阻害剤である、請求項1017〜1019のいずれか一項記載の方法。
[請求項1021]
ブロック共重合体がジブロック共重合体である、請求項1017〜1020のいずれか一項記載の方法。
[請求項1022]
MetAP-2阻害剤がブロック共重合体の疎水性モエティと会合している、請求項1017〜1021のいずれか一項記載の方法。
[請求項1023]
ブロック共重合体の疎水性重合体モエティが、ポリ(d,L-乳酸)、ポリ(カプロラクトン)（PCL）、ポリ(プロピレンオキシド)からなる群より選択される、請求項1017〜1022のいずれか一項記載の方法。
[請求項1024]
疎水性モエティが、ポリ(d,L-乳酸)（PLA）重合体である、請求項1017〜1023のいずれか一項記載の方法。
[請求項1025]
親水性モエティが、ポリ(エチレングリコール)（PEG）重合体である、請求項1017〜1024のいずれか一項記載の方法。
[請求項1026]
重合体が、親水性PEGモエティおよび疎水性PLAモエティを有するPEG-PLAジブロック共重合体を含むジブロック共重合体である、請求項1017〜1025のいずれか一項記載の方法。
[請求項1027]
抗増殖組成物が抗腫瘍活性を有する、請求項1017〜1026のいずれか一項記載の方法。
[請求項1028]
フマギロール誘導体が、6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）；6-O-(4-メトキシアニリン)アセチルフマギロール；6-O-(3,4,5-トリメトキシアニリン)アセチルフマギロール；6-O-(4-(N,N-ジメチルエトキシ)アニリン)アセチルフマギロール；6-O-(シクロプロピルアミノ)アセチルフマギロール；6-O-(シクロブチルアミノ)アセチルフマギロール；4-((シクロプロピルアミノ)アセチル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5 20ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1シクロヘキサノール；4-((シクロブチルアミノ)アセチル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1-シクロヘキサノールからなる群より選択される誘導体を含む、請求項1018〜1027のいずれか一項記載の方法。
[請求項1029]
フマギロール誘導体が6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）を含む、請求項1018〜1028のいずれか一項記載の方法。
[請求項1030]
MetAP-2阻害剤が、ベンガミド、スルホンアミドMetAP-2阻害剤、ベスタチン、3-アミノ-2-ヒドロキシアミドMetAP-2阻害剤、ヒドロキシアミドMetAP-2阻害剤、アシルヒドラジンMetAP-2阻害剤、オバシリン、可逆性MetAP-2阻害剤、および不可逆性MetAP-2阻害剤からなる群より選択される、請求項1017または1019〜1027のいずれか一項記載の方法。
[請求項1031]
MetAP-2阻害剤がジブロック共重合体のPLAモエティと会合している、請求項1017〜1030のいずれか一項記載の方法。
[請求項1032]
状態が腫瘍活性を含む、請求項1017〜1031のいずれか一項記載の方法。
[請求項1033]
抗増殖活性を有するMetAP-2阻害剤を含むジブロック共重合体組成物を生成する方法であって、該MetAP-2阻害剤を、親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むジブロック共重合体と結合させる工程を含む、方法。
[請求項1034]
MetAP-2阻害剤が抗血管形成活性を有するフマギロール誘導体である、請求項1033記載の方法。
[請求項1035]
MetAP-2阻害剤が不可逆性MetAP-2阻害剤である、請求項1033または1034のいずれか一項記載の方法。
[請求項1036]
MetAP-2阻害剤が可逆性MetAP-2阻害剤である、請求項1033記載の方法。
[請求項1037]
MetAP-2阻害剤が、6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）を含む、請求項1033〜1035のいずれか一項記載の方法。
[請求項1038]
請求項1033〜1038のいずれか一項記載の方法により作製された、MetAP-2阻害剤を含むジブロック共重合体組成物。
[請求項1039]
MetAP-2阻害剤が抗増殖活性を有するフマギロール誘導体である、請求項1038記載のジブロック共重合体組成物。
[請求項1040]
フマギロール誘導体が、6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）を含む、請求項1039記載のジブロック共重合体組成物。
[請求項1041]
状態が、癌、転移性腫瘍、乾癬、加齢黄斑変性（AMD）、甲状腺過形成、子癇前症、関節リウマチおよび骨関節炎、アルツハイマー病、肥満、胸水、アテローム性動脈硬化、子宮内膜症、糖尿病性／その他の網膜症、眼血管新生、IL-2治療に関連した浮腫およびその他の浮腫、マラリア、SARS、HIV、ヘルペス、ループス、IPF、COPD、喘息、嚢胞性繊維症、移植片拒絶、アレルギー反応、多発性硬化症、細菌感染、ウイルス感染、血管透過性亢進が関与しているかまたは血管透過性亢進を特徴とする状態、炎症、ならびに脊髄損傷からなる群より選択される、請求項1017〜1032のいずれか一項記載の方法。
[請求項1042]
その病理にMetAP-2活性が関与しているかまたはMetAP-2活性に依存している状態の処置のための医薬の製造における、請求項1001〜1016のいずれか一項記載の組成物の使用。
[請求項1043]
状態が腫瘍活性を含む、請求項1042記載の使用。
[請求項1044]
状態が、癌、転移性腫瘍、乾癬、加齢黄斑変性（AMD）、甲状腺過形成、子癇前症、関節リウマチおよび骨関節炎、アルツハイマー病、肥満、胸水、アテローム性動脈硬化、子宮内膜症、糖尿病性／その他の網膜症、眼血管新生、IL-2治療に関連した浮腫およびその他の浮腫、マラリア、SARS、HIV、ヘルペス、ループス、IPF、COPD、喘息、嚢胞性繊維症、移植片拒絶、アレルギー反応、多発性硬化症、細菌感染、ウイルス感染、血管透過性亢進が関与しているかまたは血管透過性亢進を特徴とする状態、炎症、ならびに脊髄損傷からなる群より選択される、請求項1042または1043のいずれか一項記載の使用。
[請求項1045]
抗血管形成活性を有するフマギロール誘導体の製剤を含む組成物であって、該製剤が親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むブロック共重合体と会合している誘導体を含む、組成物。
[請求項1046]
ブロック共重合体がジブロック共重合体である、請求項1045記載の組成物。
[請求項1047]
製剤が、フマギロール誘導体と会合しているブロック共重合体を含むミセルを含む、請求項1045記載の組成物。
[請求項1048]
フマギロール誘導体がブロック共重合体の疎水性モエティと会合している、請求項1045記載の組成物。
[請求項1049]
ブロック共重合体の疎水性重合体モエティが、ポリ(d,L-乳酸)、ポリ(L-リジン)、ポリ(アスパラギン酸)、ポリ(カプロラクトン)（PCL）、ポリ(プロピレンオキシド)からなる群より選択される、請求項1045記載の組成物。
[請求項1050]
疎水性モエティが、ポリ(d,L-乳酸)（PLA）重合体である、請求項1049記載の組成物。
[請求項1051]
ブロック共重合体の親水性重合体モエティが、ポリエチレングリコール（PEG）である、請求項1045記載の組成物。
[請求項1052]
重合体が、親水性PEGモエティおよび疎水性PLAモエティを有するPEG-PLAジブロック共重合体を含むジブロック共重合体である、請求項1045記載の組成物。
[請求項1053]
製剤が経口投与用に製剤化されている、請求項1045記載の組成物。
[請求項1054]
抗血管形成活性が抗腫瘍活性である、請求項1045記載の組成物。
[請求項1055]
フマギロール誘導体が、6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）、6-O-(4-メトキシアニリン)アセチルフマギロール；6-O-(3,4,5-トリメトキシアニリン)アセチルフマギロール；6-O-(4-(N,N-ジメチルエトキシ)アニリン)アセチルフマギロール；6-O-(シクロプロピルアミノ)アセチルフマギロール；6-O-(シクロブチルアミノ)アセチルフマギロール；4-((シクロプロピルアミノ)アセチル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5 20ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1シクロヘキサノール；4-((シクロブチルアミノ)アセチル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1-シクロヘキサノールからなる群より選択される誘導体を含む、請求項1045記載の組成物。
[請求項1056]
フマギロール誘導体が、6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）を含む、請求項1055記載の組成物。
[請求項1057]
抗血管形成活性を保持しているフマギロール誘導体の製剤を含む組成物を経口投与する工程を含む、血管形成により媒介される状態を処置する方法であって、該フマギロール誘導体を含む該製剤が、親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むブロック共重合体と会合している、方法。
[請求項1058]
ブロック共重合体がジブロック共重合体である、請求項1057記載の方法。
[請求項1059]
製剤が、フマギロール誘導体と会合しているブロック共重合体を含むミセルを含む、請求項1057記載の方法。
[請求項1060]
フマギロール誘導体がブロック共重合体の疎水性モエティと会合している、請求項1057記載の方法。
[請求項1061]
ブロック共重合体の疎水性重合体モエティが、ポリ(d,L-乳酸)、ポリ(L-リジン)、ポリ(アスパラギン酸)、ポリ(カプロラクトン)（PCL）、ポリ(プロピレンオキシド)からなる群より選択される、請求項1057記載の方法。
[請求項1062]
疎水性モエティがポリ(d,L-乳酸)（PLA）重合体である、請求項1061記載の方法。
[請求項1063]
ブロック共重合体の親水性重合体モエティが、ポリエチレングリコール（PEG）である、請求項1057記載の方法。
[請求項1064]
重合体が、親水性PEGモエティおよび疎水性PLAモエティを有するPEG-PLAジブロック共重合体を含むジブロック共重合体である、請求項1057記載の方法。
[請求項1065]
抗血管形成活性が抗腫瘍活性である、請求項1057記載の方法。
[請求項1066]
フマギロール誘導体が、6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）、6-O-(4-メトキシアニリン)アセチルフマギロール；6-O-(3,4,5-トリメトキシアニリン)アセチルフマギロール；6-O-(4-(N,N-ジメチルエトキシ)アニリン)アセチルフマギロール；6-O-(シクロプロピルアミノ)アセチルフマギロール；6-O-(シクロブチルアミノ)アセチルフマギロール；4-((シクロプロピルアミノ)アセチル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5 20ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1シクロヘキサノール；4-((シクロブチルアミノ)アセチル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1-シクロヘキサノールからなる群より選択される誘導体を含む、請求項1057記載の方法。
[請求項1067]
フマギロール誘導体が6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）を含む、請求項1057記載の方法。
[請求項1068]
製剤が、ジブロック共重合体により形成されたジブロック共重合体ミセルを含む、請求項1058記載の方法。
[請求項1069]
フマギロール誘導体が、ジブロック共重合体のPLAモエティと会合している、請求項1064記載の方法。
[請求項1070]
血管形成により媒介される状態が腫瘍活性を含む、請求項1057記載の方法。
[請求項1071]
抗血管形成活性を有するフマギロール誘導体を含むジブロック共重合体ミセルを生成する方法であって、該フマギロール誘導体を、親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むジブロック共重合体と結合させる工程、ならびに得られた結合体のミセルを形成させる工程を含む、方法。
[請求項1072]
フマギロール誘導体が6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）を含む、請求項1071記載の方法。
[請求項1073]
請求項1071記載の方法によって作製された、フマギロール誘導体を含むジブロック共重合体ミセル。
[請求項1074]
フマギロール誘導体が6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）を含む、請求項1073記載のジブロック共重合体ミセル。
[請求項1075]
血管形成により媒介される状態が、癌、転移性腫瘍、乾癬、加齢黄斑変性（AMD）、甲状腺過形成、子癇前症、関節リウマチおよび骨関節炎、アルツハイマー病、肥満、胸水、アテローム性動脈硬化、子宮内膜症、糖尿病性／その他の網膜症、眼血管新生、IL-2治療に関連した浮腫およびその他の浮腫からなる群より選択される、請求項1057記載の方法。
[請求項1076]
PEG重合体がキャッピングされたPEG重合体である、請求項1009、1051、または1063のいずれか一項記載の組成物。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】ブロック共重合体、およびTNP-470と結合したブロック共重合体のNMRスペクトルを示す。NMRパターンの差異は、エチレンジアミンおよびTNP-470の重合体との結合を確証する。
【図２】TNP-470結合の前後のmPEG-PLA-en重合体のアミンレベルを示す。TNBSA反応は、実施例に記載されるようにして実施された；450nm吸収のレベルは、遊離型アミンのレベルを示す。
【図３】TNP-470ポリマーソームのサイズ範囲を示す。TNP-470ポリマーソームの直径分布を示す典型的なDLSグラフ。
【図４】図4Aは、MetAP-2阻害剤ポリマーソームによるヒト臍静脈上皮細胞（HUVEC）増殖の阻害を示す。（62.5〜1000nMのTNP-470当量を含む）種々の濃度のTNP-470ミセルが、WST-1により測定されたように、HUVECに対する細胞分裂阻害効果を示した（*p＜0.0005）。図4Bは、HUVEC増殖がMetAP-2阻害剤を含まない重合体ミセルによっては影響を受けなかったことを示す。MetAP-2阻害剤ポリマーソームの二倍濃度の担体ですら、増殖の有意差は検出されなかった。
【図５】図5Aは、腫瘍体積に対するMetAP-2阻害剤ポリマーソームの効果を示す。C57/BLマウスへのTNP-470重合体ミセルの14〜18日間の毎日の経口投与の間に測定された腫瘍体積（*p＜0.05）。図5Bは、マウスの体重に対するTNP-470ポリマーソームの効果を示す。マウスは隔日で計量された。結果は各群のマウスの平均体重である。
【図６Ａ】TNP-470と修飾mPEG-PLAとの間の結合反応の図解を示す。
【図６Ｂ】水中に分散したロダミン（Lodamin）のTEM画像である。水中でのインキュベーションの後の異なる時点におけるミセルの球状構造が示される。バー＝10nm。
【図６Ｃ】HPLCにより決定されるような30日間にわたるロダミンからのTNP-470放出である。ミセルが、胃液pH＝1.2(■)またはPBS pH＝7.4(□)の中でインキュベートされ、放出されたTNP-470の分析がデュプリケートで行われた。結果は平均値±SDとして提示される。
【図７Ａ】ミセルとのインキュベーションの0分目、20分目、および24時間目におけるHUVEC（FL2high）によるローダミン（Rhodamine）標識mPEG-PLAミセルの取り込みのフローサイトメトリー分析を示す。インキュベーション2時間後、4時間後、および7時間後は、24時間のインキュベーション後と類似のパターンを示した（図示せず）。
【図７Ｂ】種々の濃度のロダミン（50〜1,000nM TNP-470当量）によるHUVEC増殖の阻害を示す。空の重合体ミセルも、対照として添加された（n＝8、*P＜0.0005）。
【図７Ｃ】ロダミン（60nM TNP-470当量）により隔日で処理された細胞（●）、未処理の細胞（□）、および媒体により処理された細胞（◇）のHUVEC成長曲線を示す。
【図７Ｄ】角膜マイクロポケットアッセイにおける角膜における血管新生面積の定量化を示す（n＝10、平均値±SD）。対照と比較した、ロダミンで処理されたマウス（15mg/kg、毎日）における血管形成の阻害を示す。
【図８Ａ】ロダミンにより処理されたマウスの組織抽出物および血清の蛍光シグナルを示す。マウス（n＝3）に、経口6-クマリン標識重合体ミセルの一回用量を与えた（150μl、30mg/ml）。データは、3匹の異なるマウスの値を示す。自己蛍光は、未処理マウスに由来する組織抽出物の蛍光シグナルを差し引くことにより省かれた。標識された細胞のパーセントが各器官について測定された。
【図８Ｂ】経口投与後の異なる時点の後に測定されたマウス血清中の蛍光シグナルのレベルを示す。結果は、標準較正曲線により計算されたミセル濃度として提示されている。
【図８Ｃ】指定された器官から単離されたFL2high陽性細胞の割合を示す（対照マウスのものに対する、処理された腫瘍のFL2high細胞の数の比率)。
【図８Ｄ】ルイス肺癌を保持しているマウスから採取された三つの代表的な器官（腫瘍、肝臓、脳）からの単一細胞懸濁物の、制御された酵素分解の後のFACS分析グラフを示す。FL2highは、mPEG-PLA-ローダミンミセルを含有している細胞を表す。
【図９Ａ】確立された原発腫瘍-ルイス肺癌腫瘍に対する遊離型TNP-470または結合型TNP-470の効果を示す。等しい用量のロダミン（×）または水（□）と比較した、経口的に与えられた遊離型TNP-470（■）（30mg/kg、隔日）の効果(各群n＝5マウス、*P＜0.05)を示す。
【図９Ｂ】経管栄養による異なる頻度および用量のロダミン：30mg/kg、隔日（×）、15mg/kg、隔日（○）、15mg/kg、毎日（●）、および水（□）の18日間のルイス肺癌体積を示す（各群n＝5マウス、*P＜0.05）。
【図９Ｃ】ルイス肺癌に対する媒体、空のmPEG-PLAミセルの効果を示す（各群n＝5マウス、*P＜0.05）。
【図９Ｄ】C57B1/6Jにおける、B16/F10マウス黒色腫腫瘍に対する、15mg/kgの用量で毎日与えられたロダミン（●）の効果を示す。水が対照として与えられた（□）（各群n＝5マウス、*P＜0.05）。
【図９Ｅ】それぞれ30mg/kgで隔日および15mg/kgで毎日の経口ロダミンによる処理の18日後のマウス、ならびに未処理マウスから除去された代表的なルイス肺癌およびB16/F10腫瘍を示す。
【図９Ｆ】皮下（30mg/kg、隔日）遊離型TNP-470または経管栄養により与えられた水により処理されたマウスと比較した、処理されたマウスに対するロダミン（10日間、30mg/kg、隔日）の神経毒性を示す。平均台試験を足滑りエラーにより定量化し、1メートル当たりの滑り回数が提示される（各群n＝4〜5マウス）。*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.0001（結果は平均値±SEである）。
【図９Ｇ】経口重合体ミセルTNP-470（ロダミン）による処理後1日目および18日目のマウスの体重を示す。
【図１０Ａ】細胞注射の20日後の、B16/F10腫瘍を有する、ロダミンで処理されたマウスまたは未処理マウスから除去された肝臓を示す。対照肝臓は、広汎な巨視的な悪性結節および広範な肝硬変を伴い拡大した。
【図１０Ｂ】B16/F10腫瘍を有する、ロダミンで処理されたマウスまたは未処理マウスから除去された脾臓を示す。対照脾臓は、正常な脾臓形態学を有する処理されたマウスと比較して、大きい腫瘤を有していた。
【図１０Ｃ】B16/F10腫瘍を有する処理されたマウス対対照マウスの生存曲線を示す(n＝7)。処理は細胞注射後3日目（TX）（矢印）に開始された。
【図１１】図11Aは、ヌードマウスにおける確立されたヒト膠芽腫腫瘍（U87-MG腫瘍）の成長に対する経口経管投与されたロダミンの効果を示す：経口的に与えられたロダミン（黒菱形）（15mg/kg、毎日）、水（■）（各群n＝5〜10マウス、*p＜0.05)。図11Bは、15mg/kgの用量で毎日、飲料水に含まれ与えられたロダミン（■）の効果を示す。ロダミンを含む水は3日毎に交換された。*p＜0.05（結果は平均値±SEである）。マウスは、確立されたヒト膠芽腫腫瘍（U87-MG腫瘍）の成長を有していた。
【図１２】IP（n＝9、□）、経口（n＝10、実線）で、15mg/kg TNP-470当量の用量で毎日与えられたロダミンにより処理されたC57/B1マウス、または未処理マウス（n＝10、黒菱形）のカプランマイヤー生存曲線を示す。
【図１３】図13Aは、マトリゲル移植片における血管形成に対するロダミンの効果を示す。移植片は注射後8日目にマウスから除去された。図13Bは、ロダミンにより処理されたマウスおよび未処理マウスにおけるマトリゲルに取り込まれた細胞のFACS分析を示す。CD45-CD31+は内皮細胞を表す。
【図１４】MetAP-2阻害剤と結合した一部親水性、一部疎水性のジブロック共重合体、および形成されたジブロック共重合体ミセル（ポリマーソーム）の模式図を示す。
【図１５】MetAP-2阻害剤を官能化し、それらに共重合体をカップリングするための例示的なアプローチの概略図を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
詳細な説明
本発明は、疎水性モエティおよび親水性モエティを含むブロック共重合体と会合しているMetAP-2阻害剤を含む組成物および製剤に、一部、関する。本発明は、経口投与用に製剤化されたMetAP-2阻害剤を含む組成物に、一部、関する。いくつかの態様において、組成物は、疎水性モエティを含むブロック共重合体とのMetAP-2阻害剤の会合を含む。ここで、疎水性モエティは、親水性モエティおよび疎水性モエティを含むブロック共重合体の一部である。いくつかの態様において、親水性モエティおよび疎水性モエティを含むブロック共重合体はミセルを形成する。
【００５１】
従って、本発明は、本明細書に開示されたようにして製剤化されたMetAP-2阻害剤を含む組成物を投与する工程を含む、状態の病理にMetAP-2活性が関与しているかまたは必要とされる状態を処置する方法に関する。一つの態様において、組成物は経口投与用に製剤化されるが、その他の経路も特に企図される。一つの態様において、状態は、増殖性状態および／または血管形成により媒介される状態であり、方法は、本明細書に開示されたようにして製剤化されたMetAP-2阻害剤を含む組成物を経口投与する工程を含む。その他の投与経路も、本明細書において後述されるように、特に企図される。
【００５２】
メチオニンアミノペプチダーゼは、新生タンパク質からのN末端メチオニンの除去のために不可欠である。この除去に続いて、ミリスチン酸を含む多様な分子が、不安定なオープンなN末端に付着する。この酸は、新生タンパク質の疎水性を変化させ、特異的な細胞局在および機能をもたらす。癌遺伝子Srcの場合のように、いくつかの場合、この機能は病理学的疾患に通じ得る46。最近、二つの主要な型のアミノペプチダーゼのうちの一つ、MetAP-2が、それ自体、可能性のある癌遺伝子として同定された47。細胞増殖におけるその重要性はよく立証されている45。
【００５３】
この知識の結果として、とりわけ、フマギリンクラスおよびオバシリンクラス、ベンガミド、ベスタチン、ピリミジン、スルホンアミドを含む、MetAP-2活性（過剰活性を含むが、これに限定はされない）を標的とし阻害するための多数の治療薬のクラスが合成された（Bernier 2005）。いずれも臨床的に成功していないが、それは、一部には、それらの生体分布の非特異性のためであり、一部には、急速すぎるクリアランス、短い半減期、神経系との許容されないレベルの相互作用、または血液脳関門の通過のような乏しいPK（薬物動態学的）プロファイルのためである。これらの問題は、不要な毒性副作用として現われる。
【００５４】
可逆性および不可逆性のMetAP-2阻害剤クラスの両方に関連しているこれらの問題を克服するため、多くの試みがなされており、それらは、大部分が、低分子の製剤化、合成、または高分子量（＞60kDa）重合体との結合によっている。しかしながら、いずれの製剤も、短すぎる血漿半減期（フマギリンクラスの化合物TNP-470の場合、薬物については数分、代謝物については2時間未満）、スルホンアミドおよびベスタチンによる体重減少、ベンガミドによる予測不能の心血管事象、製造の困難さ、疑問のある安定性、長期的に患者に投薬することができない点、およびより高分子量の重合体と結合した薬物の場合のようなクリアランスの欠如または遅すぎるクリアランスを含む、克服できない短所を示した。やはり、これらの欠陥の大半も、非特異的な体内分布が原因であるかもしれない。従って、全毒性が限定されており、安定しており、疾患の症状に依って複数の投与経路を提供することができる用量および方法で、MetAP-2阻害剤を患者に投与することが望ましい。
【００５５】
さらに、多くのMetAP-2阻害剤、特に、フマギロールクラスのものは、水溶性に乏しく（1.9mg/ml；米国特許第5,536,623号参照）、従って、経口的に与えられた場合、低い吸収および生物学的利用能を有する。従って、治療、投与、および安全性の観点から、これらのMetAP-2阻害剤の修飾は高度に望ましい。
【００５６】
MetAP-2阻害剤を投与するためには、経口、局所、吸入、または点眼剤により投与された場合の、乏しい水溶性、低い吸収、非特異的な体内分布、および乏しい生物学的利用能のような、低分子MetAP-2阻害剤の化学的特性に関連したいくつかの問題を克服しなければならない。これらの特性のため、MetAP-2阻害剤の大多数は、現在、排他的に注射（即ち、筋肉内および静脈内）を介した投与用に製剤化されている。
【００５７】
本明細書において証明されるように、本発明者らは、とりわけTNP-470のようなMetAP-2阻害剤を、MetAP-2阻害剤をジブロック共重合体、例えば、PEG-PLAを含むジブロック共重合体に結合させることにより、注射以外の別の投与経路用に製剤化する組成物を発見した。本発明者らは、（本明細書において「ブロック共重合体-MetAP-2阻害剤結合体」とも呼ばれる）そのようなMetAP-2阻害剤とブロック共重合体との結合が、経口投与、局所投与、吸入、点眼剤、または腹膜投与のため高度に適当な製剤であることを発見した。経口またはその他の注射以外の投与経路のための利点を有する一方、注射（例えば、筋肉内、皮下等）によっても、本明細書に記載されたブロック共重合体組成物が投与され得ることも、本明細書において企図される。
【００５８】
本発明者らは、MetAP-2阻害剤がそのアミンを通して修飾PEG-PLA重合体に成功裡に結合し、ナノサイズのポリマーソームを形成したことを証明する。本発明者らは、TEMにより得られた画像を使用して、球状ミセルが形成されたことを証明する。DLSによるサイズ測定は、10ナノメートル付近の低いサイズ分布範囲を示した。蛍光標識ポリマーソームの共焦点顕微鏡検画像を使用することにより、本発明者らは、ヒト臍静脈内皮細胞（HUVEC）による急速な取り込みを証明する。MetAP-2阻害剤ポリマーソームが添加された時、HUVEC増殖の有意な阻害が示された（それに対して、担体自体には効果がなかった）。
【００５９】
マウスに対して行われたインビボ研究は、TNP470ミセルの毎日の経口投与を与えられたC57/BLマウスにおける皮下ルイス肺癌腫瘍の有意な阻害を示した。15mg/kg TNP-470当量という用量が、マウスの体重減少なしに、63％の阻害を示した。
【００６０】
従って、本発明者らは、TNP-470のようなMetAP-2阻害剤をジブロック共重合体と結合させることが、経口投与製剤としての製剤化のために有用であること、そのようなMetAP-2阻害剤-ジブロック共重合体結合体が、とりわけ、癌、RA、ウイルス感染、細菌もしくは真菌の感染、および浮腫のような異常な血管もしくは透過性亢進性の血管に関連したもの、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、炎症、または本明細書に記載されるかもしくは当技術分野において公知であるようなMetAP-2活性が関与しているかもしくは必要とされるその他の状態のような、その病理にMetAP-2活性が関与しているかまたは必要とされる状態を処置する方法において有用であることを発見した。
【００６１】
第一に、一つの態様は、ロダミンと名付けられた、強力な抗腫瘍効力および抗転移効力を有する経口抗増殖性／抗血管形成性MetAP-2阻害剤重合体薬物である。本発明者らは、その物理化学的特性を特徴決定し、このTNP470に由来する重合体プロドラッグが、その抗増殖活性および抗血管形成活性を保持しながら、薬物の限界を成功裡に克服することを示す。ロダミンは、ジブロック共重合体：PEG PLAへのTNP470の結合により作製される。この重合体薬物の両親媒性は、水性媒体中でのミセルの自己集合を可能にする26。この構造において、TNP-470は、胃の酸性環境から保護されるコアに位置しており、従って、経口利用可能性が可能である。さらに、生体適合性であり、よく特徴決定されている重合体の使用を活用する27,28。
【００６２】
経口投与されたロダミンは、腸において効率的に吸収され、腫瘍組織に蓄積する。角膜マイクロポケットアッセイおよびマウス腫瘍モデルにおけるHUVEC増殖の阻害により証明されるように、薬物は、細胞増殖および血管形成を有意に阻害する。ロダミンは、黒色腫および肺癌のモデルにおいて証明されたように原発腫瘍の成長を有意に阻害した。特に、経口ロダミンは、肝毒性またはその他の副作用を引き起こすことなく、黒色腫腫瘍細胞の肝臓転移を成功裡に防止し、マウス生存を延長させた。
【００６３】
さらに、遊離型TNP-470により引き起こされた神経学的障害とは異なり、ロダミンは血液脳関門を通過せず、従って、マウスにおいて神経毒性を引き起こさなかった。これらの結果は、ロダミンが、有効な抗腫瘍特性および抗転移特性を有する安全な維持薬としての良好な候補であることを示す。
【００６４】
従って、本発明者らは、MetAP-2阻害剤のジブロック共重合体への結合が、とりわけ、経口投与製剤のような製剤のため有用であること、そのようなフマギロール誘導体-ジブロック共重合体結合体が、とりわけ、癌およびAMDのような血管形成により媒介される状態および障害を含む増殖性障害を処置する方法において有用であることを発見した。
【００６５】
定義：
「MetAP-2阻害剤」という用語は、少なくとも、米国特許第6,548,477号または米国特許第7,030,262号（いずれも参照により本明細書に組み入れられる）に記載されたようなMetAP-2アッセイにおいて、そのような薬剤の非存在下に比べて少なくとも20％、好ましくは、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％、またはそれ以上、最高100％（完全または100％の阻害を含む）、MetAP-2の活性を阻害する薬剤をさす。可逆性および不可逆性のMetAP-2阻害剤が、当技術分野において公知であり、「MetAP-2阻害剤」という用語に包含される。抗増殖性活性を有する本明細書に記載されるようなフマギロール誘導体は、その用語が本明細書において使用されるように、MetAP-2阻害剤である。フマギロールクラスおよびオバシリンクラスのMetAP-2阻害剤は、MetAP-2の触媒部位でヒスチジン231のイミダゾール窒素との共有結合を形成するよう反応する反応性のスピロエポキシド（spiroepoxide）モエティを有する。可能性のある不可逆性MetAP-2阻害剤による分子的モデリングは、所定の候補阻害剤が、酵素のヒスチジン231と反応するか否か、従って、所望の阻害活性を有するか否かを、当業者が容易に予測することを可能にするであろう。同様に、Wangらにより証明されたように、合理的設計アプローチが、可逆性MetAP-2阻害剤を調製するために使用され得る43。
【００６６】
「フマギロール誘導体」という用語には、下記式Iにより表される化合物が包含される：
2014208679.tif 000003
【００６７】
式中、Xが-OHであり、かつYがハロゲンであるか、またはXおよびYは連結しオキシラン環を形成しており、Bは-(C=O)-または-CH2-であり、R1は水素、ヒドロキシル、-CN；NO2、-CF3；ホルミル；C1-C4チオアルキル、アセトアミド；アセトキシ；C1-C6アルキル、C1-C4アミノアルキル、C1-C4アルキルアミノアルキル；C1-C4ジアルキルアミノアルキル；C1-C6アルキルオキシ、C1-C6アミノアルキルオキシ；C1-C4アルキルアミノアルコキシ、C1-C4ジアルキルアミノアルコキシ、アミノ；C1-C6アルキルアミノ；C1-C4ジアルキルアミノ；C1-C4ヒドロアルキル；C1-C4アルキルオキシカルボン酸等を表す。フマギロール誘導体は、参照により本明細書に完全に組み入れられる、欧州特許出願0354787、0357061、および0415294、ならびに日本特許出願JP-A01-233275、ならびに米国特許第5,290,807号に開示されている。PPI-2458のようなその他のMetAP-2阻害性フマギロール誘導体は、Bernier et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101: 10768-10773 (2004)に記載されている。本明細書に記載されるようなフマギロール誘導体は、少なくとも、例えば、当技術分野において公知であり、本明細書において後に記載されるようなHUVEC増殖アッセイにおいて試験された時、抗血管形成活性を有する。「フマギロール誘導体」という用語は、式Iのフマギロールの誘導体をさし、「フマギロール誘導体ブロック共重合体結合体」とは、ブロック共重合体と結合したそのような誘導体をさすことが理解されるべきである。同様に、「MetAP-2阻害剤」とは阻害剤自体をさし、「MetAP-2阻害剤ブロック共重合体結合体」とは、ブロック共重合体と結合したMetAP-2阻害剤をさす。
【００６８】
本明細書において使用されるように、「増殖」という用語は、腫瘍または炎症または透過性亢進性の異常な血管系、ウイルス感染、細菌感染、および真菌感染の場合のように、不要なまたは望ましくない生理学的結果をもたらす細胞の発達をさす。血管形成は、増殖過程であることが理解されるべきである。従って、ある種の場合において、「増殖」という用語は、血管の発達に適用され得る。そのような発達は、本明細書において「血管形成」とも呼ばれる。いくつかの場合において、「血管形成」という用語は、本明細書において使用されるように、とりわけ、腫瘍の成長、転移、AMD、および関節炎のようなある種の病理学的状態により誘発される、内皮細胞の増殖および遊走を特徴とする、既存の血管からの新たな血管の出芽をさす。「増殖」という用語は、ウイルス、細菌、真菌、微胞子虫等の増殖にも適用され得ることに注意すべきである。いずれの型の「増殖」をさしているのかは、用語の前後関係から明白になるであろう。
【００６９】
「抗増殖活性」という用語は、疾患に対抗するため、体内の望まれない細胞または血管の成長または新たな作出を阻害するか、抑制するか、またはそれらの速度を低下させる薬剤の特性をさす。抗増殖活性を有する化合物または薬剤とは、本明細書において使用されるように、MetAP-2を阻害し、例えば、不要な血管形成において増殖中の不要な細胞の抑制に通じる薬剤である。MetAP-2を阻害し、細胞死に通じる薬剤も、「抗増殖活性」という用語に包含される。
【００７０】
本明細書において使用されるように、「抗血管形成活性」という用語は、疾患に対抗するため、体内の血管の成長または新たな作出を阻害するか、抑制するか、またはそれらの速度を低下させる薬剤をさす。抗血管形成活性を有する化合物または薬剤とは、本明細書において使用されるように、血管の形成、または異常なもしくは透過性亢進の特性を有する血管系の形成を阻害することができる薬剤である。血管透過性に関連した疾患には、非増殖性糖尿病性網膜症および糖尿病性腎症のような糖尿病の血管合併症、ネフローゼ症候群、肺高血圧、または繊維症、熱傷浮腫、腫瘍浮腫、脳腫瘍浮腫、IL-2治療に関連する浮腫、およびその他の浮腫に関連する疾患、炎症性障害、脊髄損傷からの合併症、線維性障害、ならびにウイルス感染、細菌感染、および真菌感染を含む感染が含まれる。
【００７１】
本明細書において使用されるように、「抗増殖活性を保持している」という用語は、MetAP-2阻害剤に由来する所定の化合物が、そのMetAP-2阻害剤の抗増殖活性の少なくとも20％を有することを意味する。従って、所定のフマギロール誘導体は、フマギロールの抗増殖活性の少なくとも20％を保持しているのであれば、「抗増殖活性を保持している」であろう。
【００７２】
本明細書において使用されるように、「抗血管形成活性を保持している」という用語は、所定のフマギロール誘導体が、本明細書に記載されるような血管形成のHUVECアッセイにおいてTNP-470の抗血管形成活性の少なくとも20％を有することを意味する。
【００７３】
本明細書に記載されるようなMetAP-2阻害剤製剤は、血管からの細胞増殖刺激因子の漏出を防止するためにも使用され得る。即ち、MetAP-2阻害剤は、血管透過性亢進を低下させるかまたは防止し、そのような透過性の部位における刺激因子の蓄積を防止することができる。
【００７４】
本明細書において使用されるように、「阻害する」または「阻害」という用語は、癌における腫瘍成長および／または腫瘍転移の低下または防止を意味する。阻害には、腫瘍の成長および転移の速度の低下も含まれる。腫瘍成長速度は、対照、同一の型の未処置の腫瘍と比較して、約20％、約30％、約40％、約50％、約60％、約70％、約80％、約90％、約100％、約125％、約150％、またはそれ以上、低下させられ得る。阻害とは、対照、同一の型の未処置の腫瘍と比較して、少なくとも10％、少なくとも20％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、最大100％（腫瘍なし）（100％を含む）の腫瘍のサイズの低下（細胞障害活性により引き起こされる低下を非限定的に含む）も意味する。腫瘍の成長および／または転移の防止とは、処置投与の開始時からの腫瘍のサイズの無増加も意味する。防止とは、当技術分野において公知の方法により、新たな転移性腫瘍が検出されず（即ち、癌のさらなる蔓延がない）、かつ／または腫瘍マーカーの量の増加が検出されない現状維持も意味する。
【００７５】
本明細書において使用されるように、「MetAP-2により媒介される状態」という用語は、不適切な細胞増殖、例えば、不適切な血管形成を含むか、または、例えば、MetAP-2活性に起因する血管透過性亢進を含むかに関わらず、MetAP-2活性が状態の病理に寄与している疾患または障害をさす。MetAP-2の過剰発現または過剰活性が関与している場合もあるが、状態に関与している発現または活性は必ずしも過剰発現または過剰活性ではない。即ち、正常なレベルのMetAP-2活性も、病理学的状態に寄与する場合があり、そのような場合、治療の標的と見なされるべきである。MetAP-2活性が病理に関与しているかまたは病理に必要とされる状態の例には、癌、転移性腫瘍、乾癬、加齢黄斑変性（AMD）、甲状腺過形成、子癇前症、関節リウマチおよび骨関節炎、アルツハイマー病、肥満、胸水、アテローム性動脈硬化、子宮内膜症、糖尿病性／その他の網膜症、眼血管新生、IL-2治療に関連した浮腫およびその他の浮腫、マラリア、SARS、HIV、ヘルペス、ループス、IPF、COPD、喘息、嚢胞性繊維症、移植片拒絶、アレルギー反応、多発性硬化症、細菌感染、ウイルス感染、ならびに血管透過性亢進が関与しているかまたは血管透過性亢進を特徴とする状態が含まれるが、これらに限定はされない。血管形成により媒介される状態とは、異常な血管増殖の直接の結果である、MetAP-2により媒介される状態、疾患、または障害のサブセット（例えば、とりわけ、当技術分野において公知であり、かつ／または本明細書に記述された糖尿病性網膜症および血管腫）である。
【００７６】
本明細書において使用されるように、「血管形成により媒介される状態」という用語は、疾患の病理学的進行のために豊富な血液供給および血管増殖に依存している障害および疾患（例えば、転移性腫瘍）、または異常な血管増殖の直接の結果である疾患もしくは障害（例えば、糖尿病性網膜症および血管腫）をさす。非限定的な例には、異常な血管増殖、血管新生、透過性亢進、腹水形成、乾癬、加齢黄斑変性、網膜症、甲状腺過形成、子癇前症、関節リウマチおよび骨関節炎、アルツハイマー病、肥満、胸水、アテローム性動脈硬化、子宮内膜症、糖尿病性／その他の網膜症、血管新生緑内障および角膜血管新生のような眼血管新生が含まれる。
【００７７】
本明細書において使用されるように、「腫瘍」という用語は、少なくとも一部分、血管形成性の血管系を含有していることを特徴とする形質転換細胞の塊を意味する。形質転換細胞は、急速な、新たな成長を開始させる刺激が停止した後ですら継続する制御されていない新生物細胞増殖を特徴とする。「腫瘍」という用語は、腫瘍実質細胞を含み、腫瘍実質細胞塊に浸潤する血管形成性の血管を含む支持間質も含むよう、広義に使用される。腫瘍は一般に悪性腫瘍、即ち、転移能を有する癌（即ち、転移性腫瘍）であるが、腫瘍は非悪性（即ち、非転移性腫瘍）である場合もある。腫瘍は、天然経過が致命的である新生物疾患、癌の最大の特徴である。癌細胞は、侵襲および転移の特性を示し、高度に未分化である。腫瘍は、本明細書に記載された治療法に包含される血管形成により媒介される疾患のうちの一つである。
【００７８】
本明細書において使用されるように、「腫瘍」という用語は、特定の型の腫瘍、例えば、とりわけ、神経芽腫、髄芽腫、髄膜腫、および膠芽腫を含む脳腫瘍；頭頸部癌、甲状腺癌、内分泌腫瘍、食道癌、小細胞および非小細胞肺癌、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、肝臓癌、悪性リンパ腫、急性および慢性の白血病、カポジ肉腫、神経膠腫、血管腫、骨肉腫、軟部組織肉腫、悪性黒色腫、皮膚癌、前立腺癌、乳癌、絨毛癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌、および間葉系腫瘍に関しても使用される。本明細書に開示された方法および組成物に関して、上記リストにリンパ腫および白血病が含まれていることから強調されるように、非固形「腫瘍」も、本明細書に記載されたようにして製剤化されたMetAP-2阻害剤の投与から利益を得ることができることも、理解されるべきである。
【００７９】
本明細書において使用されるように、「転移」または「転移性腫瘍」という用語は、固形腫瘍である原発腫瘍とは別の体内の他の場所において成長する、剥離し輸送された細胞から発生した二次腫瘍をさす。原発腫瘍とは、本明細書において使用されるように、それが存在している位置または器官に起因し、他の位置からその位置に転移したのではない腫瘍をさす。本明細書において使用されるように、「悪性腫瘍」とは、侵襲および転移の特性を有し、一般に、高度の退形成を示すものである。退形成とは、未熟なまたはより低分化の形態への細胞の復帰であり、大部分の悪性腫瘍において起こる。
【００８０】
「ポリマーソーム」および「重合体ミセル」という用語は、同一のブロック共重合体組成物をさすために、本明細書において交換可能に使用される。
【００８１】
「ヘテロ重合体」としても公知の「共重合体」という用語は、本明細書において使用されるように、ただ一つの単量体が使用される同種重合体とは対照的に、二種（またはそれ以上）の単量体種に由来する重合体をさす。共重合とは、共重合体を化学合成するために使用される方法をさす。
【００８２】
「ブロック共重合体」という用語は、本明細書において使用されるように、複数のサブユニット（またはオリゴマー）型を含む重合体をさし、ここで、共重合体は、あるサブユニット型を含む重合体の領域が、第二のサブユニット型を含む重合体領域に隣接したものを含み、例えば、ブロック共重合体という用語は、共有結合により連結した二種以上の同種重合体サブユニットから構成された共重合体をさす。同種重合体サブユニットの結合は、ジャンクションブロックとして公知の、中間の非反復サブユニットを必要とするかもしれない。ブロック共重合体は異なる重合単量体のブロックから構成される。ブロック共重合体は、「ミクロ相分離し」周期的なナノストラクチャーを形成することができるため、興味深い。ブロック共重合体は、本明細書中の下記セクション「共重合体」においてさらに詳細に記載される。
【００８３】
「ジブロック共重合体」という用語は、本明細書において使用されるように、2個の別個のブロックを含むブロック共重合体をさす。三種の別個のブロックを含むブロック共重合体は、トリブロック共重合体と呼ばれる。テトラブロック、マルチブロック等を有することも可能である。
【００８４】
「親水性の」という用語は、本明細書において使用されるように、典型的には電荷極性を有し、水素結合が可能であり、従って、油またはその他の疎水性溶媒より容易に水に溶解することができる分子または分子の部分をさす。親水性分子は極性分子としても公知であり、容易に水分を吸収し、吸湿性であり、水と容易に相互作用する強い極性基を有する分子である。「親水性の」重合体は、その用語が本明細書において使用されるように、25℃で少なくとも100mg/mlの水への溶解度を有する。
【００８５】
「疎水性の」という用語は、本明細書において使用されるように、無極性で、他の中性分子および無極性溶媒を好む傾向がある分子をさす。疎水性分子は、水中で、しばしばクラスターを形成する。疎水性表面上の水は、高い接触角を示すであろう。疎水性分子の例には、アルカン、油、脂肪、および油性物質全般が含まれる。疎水性材料は、水からの油除去、石油流出の管理、および極性化合物から無極性化合物を除去するための化学的分離過程のため使用される。疎水性分子は、無極性分子としても公知である。疎水性分子は、容易に水を吸収しないか、または、例えば、疎水性コロイドのように、水により悪影響を受ける。「疎水性の」重合体とは、その用語が本明細書において使用されるように、25℃で10mg/ml未満、好ましくは5mg/ml未満、1mg/ml未満、またはそれ以下の水への溶解度を有する。
【００８６】
「疎水性薬物」という用語は、本明細書において使用されるように、10mg/ml未満の水への溶解度を有する、生物学的または薬理学的な活性を有し、治療目的に適応しているかまたは使用される、有機または無機の化合物または物質をさす。MetAP-2阻害剤、特に、フマギロール誘導体は、疎水性薬物である傾向がある。
【００８７】
「ミセル」という用語は、本明細書において使用されるように、界面活性分子のある配置をさす（界面活性剤は、無極性親油性「テール」および極性親水性「ヘッド」を含む)。その用語が本明細書において使用されるように、ミセルは、水性溶液中で、無極性テールが内側を向き、極性ヘッドが外側を向いた配置を有する。ミセルは、典型的には、低分子の凝集により形成されたコロイド粒子であり、通常、いくつかの種の液状媒体、例えば、水に懸濁した微視的な粒子であり、1ナノメートルと1マイクロメートルの間のサイズを有する。典型的なミセルは、水性溶液中で、親水性「ヘッド」領域が、周囲の溶媒に接し、疎水性テール領域をミセル中心に隔離する、凝集物を形成する。この型のミセルは、順相ミセル（水中油型ミセル）として公知である。逆ミセルは、中央にヘッド基を有し、テールが外側に延びている（油中水型ミセル）。ミセルは、およそ球形である。楕円体、円筒形、および二重層のような形を含むその他の相も可能である。ミセルの形およびサイズは、その界面活性分子の分子幾何学、ならびに界面活性剤濃度、温度、pH、およびイオン強度のような溶液条件の関数である。ミセル形成の過程は、ミセル化として公知である。
【００８８】
「治療的に有効な量」という用語は、その量が、そのような状態を有する典型的な対象に投与された時、その病理のためMetAP-2活性に依存している疾患、状態、または障害に関連したマーカーまたは症状の治療的にまたは予防的に有意な低下または測定可能な抑制をもたらすのに十分な量をさす。マーカーまたは症状の治療的にまたは予防的に有意な低下とは、対照または未処置の対象と比較して、例えば、約10％、約20％、約30％、約40％、約50％、約60％、約70％、約80％、約90％、最大100％（100％を含む）（即ち、無症状または非疾患個体に特徴的なレベルのマーカー）である。または、もしくはさらに、「治療的に有効な量」とは、MetAP-2の発現または活性の低下（即ち、少なくとも10％、好ましくは少なくとも20％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％、またはそれ以上の低下）を直接または間接的に提供する量をさすこともできる。状態が例えば癌であるいくつかの態様において、「治療的に有効な量」という用語は、癌患者において、安全であり、かつ転移の発生およびさらなる蔓延を防止するかまたは遅延させるのに十分な量をさす。その量は、癌を治癒するか、もしくは癌の寛解を引き起こすか、癌進行の経過を遅くするか、腫瘍成長を遅くするかもしくは阻害するか、腫瘍転移を遅くするかもしくは阻害するか、転移部位における二次腫瘍の確立を遅くするかもしくは阻害するか、または新たな腫瘍転移の形成を阻害することもできる。
【００８９】
「処置する」または「処置」という用語は、疾患の進行または蔓延を防止または減速することを目的とした、治療的処置および予防的または防止的な措置（防止とは、疾患を発症する可能性の低下、例えば、少なくとも20％低下した可能性をさすことも理解される)の両方をさす。有益な、または所望の臨床的結果には、検出可能であるかまたは検出不可能であるかに関わらず、症状の軽減、疾患の程度の減退、疾患の安定した（即ち、悪化しない）状態、疾患進行の遅れまたは減速、疾患状態の寛解または緩和、および緩解（部分的または完全）が含まれるが、これらに限定はされない。「処置」とは、処置を受けなかった場合に予想される生存と比較した生存の延長を意味することもできる。処置を必要とする者には、疾患を有すると既に診断された者が含まれる。疾患が、例えば、癌である場合、処置を必要とする者には、転移を発症する可能性が高い者が含まれる。
【００９０】
「組成物」または「薬学的組成物」という用語は、本明細書において交換可能に使用され、当技術分野において慣習的であり、哺乳動物、好ましくは、ヒトまたはヒト細胞への投与に適した薬学的に許容される担体のような賦形剤を通常含む組成物または製剤をさす。そのような組成物は、とりわけ、経口、IV、腹膜、注射（例えば、皮下、筋肉内等）、点眼剤または経眼経路、坐剤、局所、経肺（吸入を含む）、および経鼻経路を含む（がこれらに限定はされない）多数の経路のうちの一つまたは複数を介した投与のために特別に製剤化され得る。
【００９１】
「重合体薬物送達組成物」という用語は、本明細書において使用されるように、薬物およびブロック共重合体の組み合わせをさす。
【００９２】
本明細書において使用されるように、「薬」という用語は、関連する状態からの回復を促進し、かつ／または関連する状態の症状を軽減する薬剤をさす。
【００９３】
「薬学的に許容される担体」とは、ターゲティングされた送達組成物を混合し、かつ／または対象に送達するための薬学的に許容される手段を意味する。「薬学的に許容される担体」という用語は、本明細書において使用されるように、薬物製剤を可溶化するか、安定化するか、または制御されたフォーマットで個体に薬物を送達するのに必要な特性を薬物製剤に提供する、液状または固形の充填材、希釈剤、賦形剤、溶媒、または封入材料のような、薬学的に許容される材料、組成物、または媒体を意味する。「担体」は、ある器官または身体部分から、もう一つの器官または身体部分への、対象薬剤の運搬または輸送にも関与し得る。各担体は、製剤の他の要素と適合性であるという意味において「許容され」なければならず、対象、例えば、ヒトへの投与と適合性である。本明細書に記載されるようなジブロック共重合体は、その用語が本明細書において使用されるように、薬学的に許容される担体である。その他の薬学的に許容される担体が、本明細書に記載されるようなブロック共重合体担体と組み合わせて使用され得る。薬学的に許容される担体は、薬物に対する免疫応答の発生を促進しない。
【００９４】
「重合体溶液」、「水性溶液」等の用語は、そのような溶液に含有されたブロック共重合体に関して使用された時、そのようなブロック共重合体を有する、水に基づく、即ち、水性の組成物、または、具体的には、機能的な濃度で溶解したMetAP-2阻害剤-PLA-PEG結合体のような本明細書に記載されたような共重合体結合体をさす。重合体溶液には、本明細書に記載されるような結合共重合体と水とを含む組成物の全ての流動性のある形態が含まれる。重合体溶液は、生理学的に妥当な温度（温度＜45℃）で、投与のために許容される形態で薬物を可溶化するよう作用する。
【００９５】
「水性溶液」という用語には、本明細書において使用されるように、添加剤を含まない水、または薬学的製剤の調製において一般的に使用されるような、pH緩衝剤、浸透圧調整のための成分、抗酸化剤、保存剤、薬物安定化剤等のような添加剤もしくは賦形剤を含有している水性溶液が含まれる。
【００９６】
「薬物製剤」という用語は、本明細書において使用されるように、薬物と重合体との全ての組み合わせ、例えば、薬物溶液を形成するよう薬物と混合された重合体溶液、ならびに、後に、薬物溶液を形成するよう水性環境へと溶解させられる、未溶解重合体と薬物との混合物、即ち、重合体薬物送達組成物をさす。
【００９７】
「投与」という用語は、本明細書において使用されるように、有効な量でのヒトおよび動物への製剤の提示をさし、自己投与されるか、または医療実務者により投与されるかに関わらず、投薬または薬物投与のための全ての経路を含む。経口投与が好ましい。
【００９８】
「生分解性の」という用語は、本明細書において使用されるように、非毒性成分が形成されるよう、体内でブロック共重合体が化学的に崩壊または分解し得ることを意味する。分解の速度は、薬物放出の速度と同一であってもよいし、または異なっていてもよい。
【００９９】
「PLA」という用語は、本明細書において使用されるように、乳酸の縮合、またはラクチドの開環重合に由来する重合体をさす。
【０１００】
「生分解性ポリエステル」という用語は、本明細書において使用されるように、好ましくは、D,L-ラクチド、D-ラクチド、L-ラクチド、D,L-乳酸、D-乳酸、L-乳酸、グリコリド（glycolide）、グリコール酸、ε-カプロラクトン、ε-ヒドロキシヘキサン酸、γ-ブチロラクトン、γ-ヒドロキシ酪酸、δ-バレロラクトン、δ-ヒドロキシ吉草酸、ヒドロキシ酪酸、リンゴ酸からなる群より選択される単量体から合成される、任意の生分解性ポリエステル、およびそれらの共重合体をさす。
【０１０１】
本明細書において使用されるように、「患者」という用語は、処置を投与する必要のある、ヒトを含む哺乳動物をさす。
【０１０２】
「対象」および「個体」という用語は、本明細書において交換可能に使用され、本明細書に記載されるような組成物による処置（予防的処置を含む）が提供される動物、例えば、ヒトをさす。「哺乳動物」という用語は、単数形の「哺乳動物」および複数形の「哺乳動物」を包含するものとし、ヒト、類人猿、サル、オランウータン、およびチンパンジーのような霊長類；イヌおよびオオカミのようなイヌ科の動物；ネコ、ライオン、およびトラのようなネコ科の動物；ウマ、ロバ、およびシマウマのようなウマ科の動物、ウシ、ブタ、およびヒツジのような食用動物；シカおよびキリンのような有蹄動物；マウス、ラット、ハムスター、およびモルモットのようなげっ歯動物；ならびにクマを含むが、これらに限定はされない。好ましくは、哺乳動物はヒト対象である。本明細書において使用されるように、「対象」とは、哺乳動物、好ましくは、ヒトをさす。「個体」、「対象」、および「患者」という用語は、交換可能に使用される。
【０１０３】
本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数形（”a”、”an”、および”the”）には、前後関係が明白にそうでないことを指示しない限り、複数の指示対象が含まれる。従って、例えば、「薬物」を送達するための組成物の言及は、二種以上の薬物の言及を含んでいる。本発明の説明および特許請求の範囲の記載において、以下の用語法が下記の定義に従って使用されるであろう。
【０１０４】
MetAP-2阻害剤
多数のMetAP-2阻害剤が当技術分野において公知であり、任意の種類のMetAP-2阻害剤が、本明細書に記載されるような製剤および使用のために企図される。即ち、それらのうちの任意のものが、その病理にMetAP-2活性が関係しているか、関連しているか、または必要とされる疾患、障害、または状態を処置するための対象への送達のため、ブロック共重合体結合体として有益に調製され得ることが、特に、本明細書において企図される。本明細書に記載されるようにして製剤化されたMetAP-2阻害剤は、抗増殖活性を保持している。即ち、本明細書に記載されるようなブロック共重合体結合体により製剤化されたMetAP-2阻害剤は、本明細書に記載されるようなMetAP-2アッセイにおいて測定されるように、単独の阻害剤の抗増殖活性（抗血管形成活性を含むが、これに限定はされない）の意味のある部分を保持しているであろう。
【０１０５】
しかしながら、より具体的には、フマギロール誘導体、オバリシン（ovalicin）、アントラニル酸スルホンアミド（Wang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105: 1838-1843 (2008)）、例えば、A-800141、ベンガミド、ベスタチン（Wang et al., Cancer Res. 63: 7861-7869により記載されたA-357300およびその他のような可逆性MetAP-2阻害剤を含むが、これらに限定はされない)、トリアゾール(例えば、米国特許第7,303,082号に記載された化合物、および、例えば、Garrabrant et al., Angiogenesis 7: 91-96 (2004)により記載された化合物を参照のこと)、3-アミノ-2-ヒドロキシアミド、ヒドロキシアミド、ならびにアシルヒドラジンを含む（がこれらに限定はされない）MetAP-2阻害剤が、本明細書に記載された製剤および方法において使用するために企図される。
【０１０６】
様々なクラスのMetAP-2阻害剤が、例えば、米国特許第7,348,307号、第7,268,111号、第7,157,420号、第7,105,482号、第7,084,108号、第7,037,890号、第6,919,307号、第6,548,477号、第6,242,494号、第6,288,228号、第6,849,757号、第6,887,863号、第4,831,135号、第7,122,345号、および第7,030,262号、ならびに米国公開特許出願第20070254843号、第20070161570号、第20070117758号、第20070010452号、第20060223758号、第20060069028号、第20050239878号、第20050059585号、第20030109671号、第20020193298号、および第20020151493号（これらの各々の開示は参照により本明細書に組み入れられる）に記載されている。記載されたMetAP-2阻害剤は、各々、MetAP-2に関連した疾患、障害、または状態の処置のための、本明細書に記載されるようなMetAP-2阻害剤ブロック共重合体結合体としての製剤化に適している可能性がある。
【０１０７】
本明細書に記載されるような組成物を生成するため、当業者に公知の標準的な化学的アプローチが、MetAP-2阻害剤をブロック共重合体と結合させるために使用され得る；特定のアプローチは、選択されたMetAP-2阻害剤の型に依るであろう。例えば、アルコール官能性を有するMetAP-2阻害剤は、フマギロールを官能化するために使用されるのと同一の型の合成（例えば、クロロアセチルイソシアネートとの反応、それに続く一次アミン官能性を保持している重合体との反応）を使用して、PEG-PLAにカップリングされ得る。一例として、化合物A-357300は、アミン保護の後にこのようにしてカップリングされ得る。例えば、図15を参照のこと。類似したカップリングが、例えば、(1-ヒドロキシメチル-2-メチル-プロピル)-カルバミン酸-(3R, 4S, 5S, 6R)-5-メトキシ-4-[(2R,3R)-2-メチル-3-(3-メチル-ブタ-2-エニル)-オキシラニル]-1-オキサ-スピロ[2.5]オクタ-6-イルエステルのような化合物をカップリングするために使用され得る（米国特許第6,548,477号参照）。そのような結合を可能にするアルコール官能性を有する付加的なフマギリン誘導体は、例えば、米国特許第7,087,768号（Hanら）に記載されている。例えば、その中の実施例35を参照のこと。
【０１０８】
MetAP-2活性についてのアッセイも、当技術分野において公知である。アッセイは、例えば、米国特許第6,548,477号および第7,030,262号に記載されている。任意のそのようなアッセイが、所定の化合物のMetAP-2阻害活性または本明細書に記載されるような所定のMetAP-2阻害剤ブロック共重合体結合体の活性を評価するために使用され得る。しかしながら、疑問の回避のため、MetAP-2阻害剤は、以下の二種のMetAP-2アッセイのいずれかにおいて、それが投与される細胞または対象に対して実質的に毒性でない投薬量または濃度で、MetAP-2阻害（少なくとも20％、好ましくは、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％、最大100％（完全な阻害））を示すであろう。
a. Li and Chang, (1996) Biochem. Biophys. Res. Commun. 227:152-159に記載されるようにして、組換えヒトMetAP-2を発現させ、昆虫細胞から精製する。次いで、様々な量の候補MetAP-2阻害化合物を、1nM精製組換えヒトMetAP-2を含有している緩衝液H(10mM Hepes、pH7.35、100mM KCl、10％グリセロール、および0.1M Co.sup.2+)に添加し、30分間37℃でインキュベートする。酵素反応を開始させるため、メチオニン残基を含有しているペプチド、例えば、Met-Gly-Metを、1mMの濃度で反応混合物に添加する。続いて、Zou et al. (1995) Mol. Gen Genetics 246:247-253の方法を使用して、放出されたメチオニンを異なる時点（例えば、0分、2分、3分、および5分）で定量化する。MetAP-2阻害を、候補阻害剤を欠く対照と比較してスコア化する。公知のMetAP-2阻害剤、例えば、TNP-470、または、例えば、本明細書に記載されるようなTNP-470ブロック共重合体結合体と比較してスコア化してもよい。
b. MetAP-2の触媒活性の阻害についてのアッセイを、96穴マイクロタイタープレートにおいて実施することができる。試験すべき化合物を、10mMでジメチルスルホキシドに溶解させ、アッセイ緩衝液（50mM HEPES、pH7.4、100mM NaCl）で10倍希釈する。阻害について試験される各化合物の溶液10マイクロリットルを、プレートの各細胞へ導入する。アッセイ緩衝液10mLが置かれた細胞において得られた結果を、酵素活性のゼロ阻害とする。1ウェル当たり全部で90mL、100mM MnCl2を含有しているアッセイ緩衝液84mL、L-アミノ酸オキシダーゼ（Sigma Catalog No. A-9378, およそ11mg/mL）1mL、西洋ワサビペルオキシダーゼ（10mg/mLの濃度でアッセイ緩衝液に溶解させたSigma Catalog No. P-8451）1mL、50mMの濃度でアッセイ緩衝液に溶解させたトリペプチドMet-Ala-Ser（Bachem）1mL、オルトジアニシジン（dianisidine）(Sigma Catalog No. D-1954、10mg/mLの濃度で新鮮に生成された水溶液）1mL、および1.5mg/mLの最終濃度のMetAP-2からなる混合物を、迅速に混合し、試験化合物または対照化合物を含有している各細胞へ添加する。450ナノメートルにおける吸光度を、自動プレートリーダ（例えば、Molecular Devices, California, USA）を使用して、20分間、20秒毎に測定する。各ウェルについて計算されたVmax（mOD/分）を、MetAP-2活性を表すために使用する。各候補阻害剤のIC50を、阻害剤濃度に対して残存活性をプロットすることにより入手する。
MEtAP-2阻害活性についてアッセイする前に、いくつかのプロドラッグは前処理（例えば、酵素的加水分解または非特異的加水分解）を必要とするかもしれないことに注意されたい。
【０１０９】
フマギロール誘導体
MetAP-2阻害剤の一つのクラスとして、フマギロール誘導体が、本明細書に記載された組成物および方法において、経口投与用に製剤化される。本明細書がMetAP-2阻害剤に言及する場合には、常に、抗増殖活性および抗血管形成活性を有するフマギロール誘導体が言及されているとも言えることが理解されるべきである。本明細書に記載された組成物および方法において有用なフマギロール誘導体は、抗増殖活性（抗血管形成活性を含むが、これに限定はされない）、即ち、HUVECアッセイ（下記参照）において測定されるようなTNP-470の抗増殖活性の少なくとも50％を保持している。この基準を満たす多数のフマギロール誘導体が、当技術分野において公知である。一つの態様において、本明細書に開示されるような組成物および製剤において使用するために適当なフマギロール誘導体は、参照により本明細書に完全に組み入れられる米国特許出願第5,290,807号に記載されている。
【０１１０】
その他の態様において、本明細書に開示されるような組成物および製剤において使用するために適当なフマギロール誘導体は、参照により本明細書に組み入れられる米国特許第5,166,172号；第5,290,807号；第5,180,738号、および第5,164,410号に開示されるような一般式IIにより表される。さらなる態様において、本明細書に開示されるような組成物および製剤において使用するためのフマギロール誘導体は、参照により本明細書に完全に組み入れられる国際特許出願WO03/027104に列挙されている。
【０１１１】
一つの態様において、フマギロール誘導体は、以下に示される国際特許出願WO03/027104の式IIIのフマギロールの誘導体であるTNP-470としても既知の6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロールである。
【０１１２】
式III：
2014208679.tif 000004
【０１１３】
フマギリンおよび6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）の構造は以下に示される：
【０１１４】
2014208679.tif 000005
【０１１５】
TNP-470の合成は、参照により本明細書に完全に組み入れられる米国特許第5,180,738号および第5,290,807号に開示されている。
2014208679.tif 000006
【０１１６】
フマギリンは、参照により本明細書に完全に組み入れられる米国特許第5,135,919号に、抗増殖性であり、抗血管形成活性を有することが開示されている。さらに、参照により本明細書に完全に組み入れられる米国特許第5,180,738号；第5,164,410号；第5,196,406号；第5,166,172号；および第5,290,807号に、様々なフマギロール誘導体が、抗増殖性であり、抗血管形成活性を有することが開示されている。PPI-2458のようなその他のMetAP-2阻害性フマギロール誘導体が、参照により本明細書に組み入れられるBernier et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101: 10768-10773 (2004)に記載されている。特に、6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロールまたはTNP-470（Takeda Chemical Industries, Ltd. of Japanより入手可能）としても公知のフマギロール誘導体(3R,4S,5S,6R)-5-メトキシ-4-(2R,3R)-2-メチル-3-(3-メチル-2-ブテニル)-オキシラニル)-1-オキサスピロ(2,5)オクタ-6-イル(クロロアセチル)カルバメートが、特に強力な抗増殖性かつ抗血管形成性の化合物である。Bhargavaらは、Angiogenesis in Health and Disease, G. M. Rubanyi, ed., Marcel/Dekkker: 2000のチャプター26（387〜406頁）においてTNP-470を概説している。フマギロール誘導体が抗増殖活性を有するか否かは、本明細書に記載されるような増殖アッセイを使用して決定され得る。同様に、増殖が血管形成を含む場合には、抗血管形成活性を、実施例に示されるか、または本明細書に開示されるような血管形成アッセイを使用して測定することができる。
【０１１７】
いくつかの態様において、フマギロール誘導体には、例えば、O-(3,4-ジメトキシシナモイル)フマギロール；O-(4-メトキシシナモイル)フマギロール；O-(3,4,5-トリメトキシシナモイル)フマギロール；O-(4-クロロシナモイル)フマギロール；4-(3,4,5-トリメトキシシナモイル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5-ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1-シクロヘキサノール；O-(4-トリフルオロメチルシナモイル)フマギロール；O-(4-ニトロシナモイル)フマギロール；O-(3,4-ジメトキシ-6-ニトロシナモイル)フマギロール；O-(4-アセトキシシナモイル)ニマギロール（nimagillol）；O-(4-ヒドロキシシナモイル)フマギロール；O-(4-アセトキシ-3,5-ジメトキシシナモイル)フマギロール；O-(3,5-ジメトキシ-4-ヒドロキシシナモイル)フマギロール；4-(4-メトキシシナモイル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5-ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1-シクロヘキサノール；O-(4-ジメチルアミノシナモイル)フマギロール；O-(4-アミノシナモイル)フマギロール；O-(4-シアノシナモイル)フマギロール；O-(3,4,5-トリメトキシシンナミル)フマギロール；O-(4-ジメチルアミノエトキシシナモイル)フマギロール；O-(3-ジメチルアミノメチル-4-メトキシシナモイル)フマギロール；O-(3,4-メチレンジオキシシナモイル)フマギロール；O-(3,4-ジメトキシ-6-アミノシナモイル)フマギロール；O-(4-エチルアミノシナモイル)フマギロール；O-(4-エチルアミノエトキシシナモイル)フマギロール；O-(4-ジメチルアミノシンナミル)フマギロール；および4-(4-ジメチルアミノシナモイル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5-ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1-シクロヘキサノールが含まれるが、これらに限定はされない。
【０１１８】
いくつかの態様において、フマギロール誘導体には、式Iの誘導体、例えば、（1）6-O-(4-メトキシアニリン)アセチルフマギロール；（2）6-O-(3,4,5-トリメトキシアニリン)アセチルフマギロール；（3）6-O-(2,4-ジメトキシアニリン)アセチルフマギロール；（4）6-O-(3,4-ジメトキシアニリン)アセチルフマギロール；（5）6-O-(3,4-ジメトキシ-6-ニトロアニリン)アセチル5フマギロール；（6）6-O-(3,4-ジメトキシ-6-シアンアニリン)アセチルフマギロール；（7）6-O-(4-アリルオキシアニリン)アセチルフマギロール；（8）6-O-(4-(2-アセトキシエトキシ)アニリン)アセチルフマギロール；（9）6-O-(3-シアノ-4-メトキシアニリン)アセチルフマギロール；（10）6-O-(3-(ジメチルアミノメチル)-4-メトキシアニリン)アセチルフマギロール；（11）6-O-(4-(2-メチルプロポキシアニリン)アセチルフマギロール；（12）6-O-(3-イソプロポキシ-4-メトキシアニリン)アセチル15フマギロール；（13）6-O-(4-(N,N-ジメチルエトキシ)アニリン)アセチルフマギロール；（14）6-O-(3,5-ジイソプロピル-4-メトキシアニリン)アセチルフマギロール；（15）6-O-(3,5-ジメチル-4-メトキシアニリン)アセチルフマギロール；（16）6-O-(3-イソプロピル-4-エトキシ-6-メチルアニリン)アセチルフマギロール；（17）6-O-(4-プロピルオキシアニリン)アセチルフマギロール；（18）6-c-(アニリン)アセチルフマギロール；（19）6-O-(4-クロロアニリン)アセチルフマギロール；（20）6-O-(4-ジメチルアミノアニリン)アセチルフマギロール；（21）6-O-(4-ヒドロキシアニリン)アセチルフマギロール；（22）6-O-(4-アミノアニリン)アセチルフマギロール；（23）6-O-(3,4-メチレンジオキシアニリン)アセチルフマギロール；（24）6-O-(4-ニトロアニリン)アセチルフマギロール；（25）6-O-(2,3,4-トリメトキシ-6-アミノアニリン)アセチルフマギロール；（26）6-O-(4-アセトキシ-3,5-ジメトキシアニリン)アセチルフマギロール；（27）6-O-(3,4-ジメトキシ-5-ヒドロキシアニリン)アセチルフマギロール；（28）6-O-(4-ジメチルアミノエトキシアニリン)アセチルフマギロール；（29）6-O-(4-エチルアミノアニリン)アセチルフマギロール；（30）6-O-(4-エチルアミノエトキシアニリン)アセチルフマギロール；（31）6-O-(3-ジメチルアミノメチル-4 メトキシアニリン)アセチルフマギロール；（32）6-O-(4-トリフルオロメチルアニリン)アセチルフマギロール；（33）6-O-(4-アセトキシアニリン)アセチルフマギロール；（34）6- O-(4-シアノアニリン)アセチルフマギロール；（35）6-O-(4-ヒドロキシエトキシアニリン)アセチルフマギロール；（36）6-O-(5-アミノ-2-メトキシピリジン)アセチルフマギロール；（37）6-O-(5-メトキシピリミジン-2-アミノ)アセチルフマギロール；（38）6-o-(3-メトキシ-6-アミノピリダジン)アセチルフマギロール；（39）4-((4-メトキシアニリン)アセチル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1シクロヘキサノール；（40）4-((3,4,5-トリメトキシアニリン) アセチル)オキシ-2-(1,2 5エポキシ-1,5-ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1シクロヘキサノール；（41）6-O-(エチルアミノ)アセチルフマギロール；（42）6-O-(イソプロピルアミノ)アセチルフマギロール；（43）6-O-(1-プロピルアミノ)アセチルフマギロール；（44）6-O-(1-ブチルアミノ)アセチルフマギロール；（45）6-O-(sec-ブチルアミノ)アセチルフマギロール；（46）6-O-(2-メチル-ブチルアミノ)アセチルフマギロール；（47）6-O-(t-ブチルアミノ)アセチルフマギロール；（48）6-O-(ペンチルアミノ)アセチルフマギロール；（49）6-O-(1-メチル-ブチルアミノ)アセチルフマギロール；（50）6-O-(1-エチル-プロピルアミノ)アセチルフマギロール；（51）6-O-(1-メチル-ペンチルアミノ)アセチルフマギロール；（52）6-O-(1,2-ジメチル-ブチルアミノ)アセチルフマギロール；（53）6-O-(1,2,2-トリメチル-プロピルアミノ)アセチル20フマギロール；（54）6-O-(1-isoプロピル-2-メチルプロピルアミノ)アセチルフマギロール；（55）6-O-(3-メチルブチルアミノ)アセチルフマギロール；（56）6-O-(2-メチルアリルアミノ) アセチルフマギロール；（57）6-O-(4-メチル-ヘプタ-2,4-ジエニルアミノ)アセチルフマギロール；（58）6-O-(1,5-ジメチル-4-ヘキセニルアミノ)アセチルフマギロール；（59）6-O-(1,1-ジメチル-2-プロピニルアミノ)アセチルフマギロール；（60）6-O-(プロパ-2-エニルアミノ)アセチルフマギロール；（61）6-O-(2-ブロモ-エチルアミノ)アセチルフマギロール；（62）6-O-(クロロエチニルアミノ)アセチルフマギロール；（63）6-O-(シクロプロピルアミノ)アセチルフマギロール；（64）6-O-(シクロブチルアミノ)アセチルフマギロール；（65）6-O-(シクロペンチルアミノ)アセチルフマギロール；（66）6-O-(シクロヘキシルアミノ)アセチルフマギロール；（67）6-O-(4-tert-ブチルシクロヘキシルアミノ)アセチルフマギロール；（68）6-O-(2-ジメチルアミノ-1-メチルエチルアミノ)アセチル15フマギロール；（69）6-O-(2-ジメチルアミノ-プロピルアミノ)アセチルフマギロール；（70）6-O-(2-メトキシ-2-メチル-プロピルアミノ)アセチルフマギロール；（71）6-O-(2-オキソ-プロピルアミン)アセチルフマギロール；（72）6-O-(1,1-ジメチル-3-オキソブチルアミノ)アセチルフマギロール；（73）6-O-(エチル-2-アミノアセテート)アセチルフマギロール；（74）6-O-(アラニン-メチルエステルアミノ)アセチルフマギロール；（75）6-O-(メチル-2-アミノ-3,3-ジメチルブタノエート)アセチルフマギロール；（76）6-O-(アリルグリシン-メチルエステル)アセチルフマギロール；（77）6-O-(2,2-ジメトキシ-エチルアミノ)アセチルフマギロール；（78）4-((シクロプロピルアミノ)アセチル)オキシ-2-(1,2-エポキシ1,5-ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1 5シクロヘキサノール；（79）4-((シクロブチルアミノ)アセチル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5-:ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1-1シクロヘキサノール；および（80）6-O-(クロロ)アセチルフマギロールが含まれるが、これらに限定はされない。
【０１１９】
式Iの化合物のうち、本明細書に開示されるような方法および組成物において有用なフマギロール誘導体には、例えば、（1）6-O-(4-メトキシアニリン)アセチルフマギロール；（2）6-O-(3,4,5-トリメトキシアニリン)アセチルフマギロール；（3）6-O-(4-(N,N-ジメチルエトキシ)アニリン)アセチルフマギロール；（4）6-O-(シクロプロピルアミノ)アセチルフマギロール；（5）6-O-(シクロブチルアミノ)アセチルフマギロール；（6）4-((シクロプロピルアミノ)アセチル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5 20ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1シクロヘキサノール；および（7）4-((シクロブチルアミノ)アセチル)オキシ-2-(1,2-エポキシ-1,5ジメチル-4-ヘキセニル)-3-メトキシ-1-クロロメチル-1-シクロヘキサノールが含まれるが、これらに限定はされない。上記の化合物の構造式は、参照により本明細書に組み入れられる国際特許出願WO03/027104の表中に示されている。
【０１２０】
抗増殖処置または抗血管形成処置の活性を増強するため、フマギロール誘導体を含むMetAP-2阻害剤による補助的処置の使用が実施され得る。従って、一つの態様において、その病理にMetAP-2活性が関連しているか、MetAP-2活性を特徴とするか、またはMetAP-2活性を必要とする疾患、障害、または状態の処置のための、MetAP-2阻害剤ブロック共重合体結合体を含む本明細書に開示されるような組成物の、他の薬剤と併せた使用が、本発明に包含される。これらには、炎症性疾患（とりわけ、リウマチおよび乾癬）、糖尿病性網膜症、および癌のような異常に刺激された血管新生を含む疾患が含まれるが、これらに限定はされない。
【０１２１】
共重合体
本発明の一つの局面は、本明細書に開示されるようなMetAP-2阻害剤、例えば、TNP-470の可溶化および製剤化のための担体としての共重合体の使用に関する。共重合体とは、複数の型のサブユニットを含む重合体である。即ち、共重合体はAのサブユニットおよびBのサブユニット等を含むことができる。いくつかの態様において、共重合体は、例えば、異なる型のサブユニットを含む反復構造を有する交互共重合体であり、例えば、交互共重合体は下記式を有することができる：
2014208679.tif 000007
【０１２２】
いくつかの態様において、本明細書に開示されるようなMetAP-2阻害剤は、MetAP-2阻害剤-ブロック共重合体結合体を形成するようブロック共重合体と会合させられる。
【０１２３】
本明細書に記載された組成物および方法において有用な重合体は、ブロック共重合体である。ブロック共重合体は、複数の型のサブユニットを含むが、交互共重合体の代わりに、ブロック共重合体は、あるサブユニット型のサブユニットのブロックの後に、もう一つのサブユニット型のサブユニットのブロックが続いたものを少なくとも含む。例えば、二種のサブユニット、例えば、AおよびBを含むブロック共重合体は、
2014208679.tif 000008
という式を有することができる。異なるサブユニットの数は異なっていてもよく、例えば、
2014208679.tif 000009
であってもよい。ジブロック共重合体は重合体サブユニットの二種の異なるブロックを含むブロック共重合体であり、トリブロック共重合体は重合体サブユニットの三種の異なるブロックを含むブロック共重合体であり、テトラブロック共重合体は、共重合体サブユニットの四種の異なるブロックを含むブロック共重合体である（以下同様）。
【０１２４】
本明細書において使用されるように、ブロック共重合体は、疎水性単量体の重合体を含む少なくとも一つの第一のブロックおよび親水性単量体から構成された重合体を含む少なくとも一つの第二のブロックを含む重合体である（図14参照）。「ブロック」共重合体は、異なる単量体がブロックで接続されていない非ブロック共重合体とは対照的に、一つの型の重合体のブロック（例えば、親水性単量体のブロック）が、もう一つの型の重合体のブロック（例えば、疎水性単量体のブロック）と接続されたものを含むという点で、非ブロック共重合体と異なる。例えば、単量体AおよびBのブロック共重合体の場合、ブロック共重合体は、例えば、
2014208679.tif 000010
という構造を有するであろう。同一の単量体サブユニットの非ブロック共重合体は、例えば、
2014208679.tif 000011
という構造または
2014208679.tif 000012
という構造を有するであろう。ブロック共重合体のブロックは、その用語が本明細書において使用されるように、1ブロック当たり少なくとも5個の単量体を有するであろう（即ち、A単量体およびB単量体のブロック共重合体の場合、Aブロックは少なくとも5A単量体長であり、かつBブロックは少なくとも5B単量体長であろう)。いくつかの態様において、同種重合体ブロックは少なくとも10単量体長、15単量体長、20単量体長、またはそれ以上であろう。ブロック共重合体は、その用語が本明細書において使用されるように、異なるブロック長を有していてもよい（しかし、各ブロックは少なくとも5単量体長であろう）−ブロック長の違いは、ブロック共重合体のある種の構造、例えば、ミセルを形成する能力に影響を及ぼし得る。いくつかの場合において、ブロック共重合体の親水性ブロックを構成する単量体は、異なる親水性単量体サブユニットを含んでいてもよく、同様に、いくつかの態様において、ブロック共重合体の疎水性ブロックを構成する単量体は、異なる疎水性単量体サブユニットを含んでいてもよい。
【０１２５】
ジブロック共重合体は、原子移動フリーラジカル重合（ATRP）、可逆的付加開裂連鎖移動（RAFT）、開環メタセシス重合（ROMP）、およびリビングカチオン重合またはリビングアニオン重合のようなリビング重合技術を使用して生成され得る。
【０１２６】
ブロック共重合体は、例えば、一つのブロックが疎水性であり、他のブロックが親水性である場合、「ミクロ相分離し」周期的なナノストラクチャーを形成することができる。ミクロ相分離とは、油と水のものに類似した状況である。油と水は混じり合わず、マクロ相分離する。「油様の」第一のブロックおよび「水様の」第二のブロックを有する場合、ブロック共重合体はミクロ相分離を起こす。ブロックは、相互に可能な限り遠く離れることを求めるが、それらは共有結合で結合しており、従って、極めて遠く離れることはない。「ミクロ相分離」において、「油」ブロックおよび「水」ブロックは、親水性ブロックが水性溶液に接するよう球の外部に配置され、疎水性ブロックが内部疎水性コアを形成する、本質的に球状の配置を含む、ミセルを含む、ナノメートルサイズの構造を形成する。熱力学的用語が、異なるブロックが相互作用する様子を記載することができる。相互作用パラメーター「カイ」は、二種のブロックが化学的にどの程度異なっているか、そしてそれらがミクロ相分離するか否かの指標を与える。一般に、カイと分子量との積が大きい（10.5を越える）場合、そのブロックはミクロ相分離するであろう。反対に、カイと分子量との積が小さすぎる（10.5未満である）場合、異なるブロックは相分離するのではなく混じり合うことができる。
【０１２７】
いくつかの態様において、両親媒性ブロック共重合体は、例えば、疎水性薬物を水性環境へと可溶化する有効な薬物担体として、本発明の製剤および組成物において有用である。例えば、自己会合特性を示す両親媒性ブロック共重合体は、参照により本明細書に組み入れられるEP No. 0397307およびEP0583955およびEP0552802に開示されている。
【０１２８】
いくつかの態様において、本明細書に記載された共重合体の疎水性ブロックに含まれる有用な生分解性ポリエステルは、例えば、例えば、D,L-ラクチド、D-ラクチド、L-ラクチド、D,L-乳酸、D-乳酸、L-乳酸、グリコリド、グリコール酸、ε-カプロラクトン、ε-ヒドロキシヘキサン酸、γ-ブチロラクトン、γ-ヒドロキシ酪酸、δ-バレロラクトン、δ-ヒドロキシ吉草酸、ヒドロキシ酪酸、リンゴ酸より選択される単量体から合成された生分解性ポリエステルのオリゴマーまたは重合体、およびそれらの共重合体である。より好ましくは、生分解性ポリエステルは、D,L-ラクチド、D-ラクチド、L-ラクチド、D,L-乳酸、D-乳酸、L-乳酸、グリコリド、グリコール酸、ε-カプロラクトン、ε-ヒドロキシヘキサン酸からなる群より選択される単量体から合成されたもの、およびそれらの共重合体である。最も好ましくは、生分解性ポリエステルは、D,L-ラクチド、D-ラクチド、L-ラクチド、D,L-乳酸、D-乳酸、L-乳酸、グリコリド、グリコール酸からなる群より選択される単量体から合成されたもの、およびそれらの共重合体である。
【０１２９】
いくつかの態様において、ブロック共重合体には、ポリエステル結合を含有している疎水性ポリエステル、例えば、ポリ乳酸（PLA）、ポリグリコール酸（PGA）、ポリ(D,L-乳酸グリコール酸)（PLGA）、ポリ(カプロラクトン)、ポリ(バレロラクトン)、ポリ(ヒドロキシブチレート)、およびポリ(ヒドロキシバレレート)が含まれるが、これらに限定はされない。
【０１３０】
いくつかの態様において、ブロック共重合体は疎水性重合体を含み、例えば、該ブロック共重合体は、ポリ(d,L-乳酸)、ポリ(L-リジン)、ポリ(アスパラギン酸)、ポリ(カプロラクトン)（PCL）、ポリ(プロピレンオキシド)からなる群より選択される。いくつかの態様において、疎水性重合体モエティは1〜15kDaである。例えば、疎水性重合体モエティは、0.5〜10kDa、1〜8kDa、1〜5kDa、1〜3kDa、3〜15kDa、5〜15kDa、8〜15kDa、10〜15kDa、12〜15kDa、2〜12kDa、4〜10kDa、6〜8kDaのサイズを有する。いくつかの態様において、疎水性重合体は、およそ2kDa、例えば、1.5kDa、2kDa、または2.5kDaである。特定の態様において、本明細書に開示されるような組成物において有用な疎水性モエティは、ポリ(d,L-乳酸)（PLA）重合体、例えば、1kDa（1000Da）のポリ(d,L-乳酸)（PLA）重合体である。
【０１３１】
いくつかの態様において、共重合体は、親水性重合体、例えば、これに限定はされないが、ポリエテングリコール（PEG）重合体（当技術分野においてポリ(エチレンオキシド)（PEO）またはポリ(オキシエチレン)とも呼ばれる）を含む。いくつかの態様において、親水性重合体は、一方の末端がキャッピングされていてもよい。いくつかの態様において、キャッピング基はアルコキシである。例えば、開示されるような組成物において有用な親水性重合体は、メトキシ基によりキャッピングされ得る。いくつかの態様において、親水性重合体は1〜15kDaである。例えば、開示されるような組成物において有用な親水性重合体モエティは、1〜10kDa、1〜8kDa、1〜5kDa、1〜3kDa、3〜15kDa、5〜15kDa、8〜15kDa、10〜15kDa、12〜15kDa、2〜12kDa、4〜10kDa、6〜8kDaのサイズを有する。いくつかの態様において、親水性重合体は、およそ2kDa、例えば、1.5kDa、2kDa、または2.5kDaである。特定の態様において、親水性重合体は、ポリ(エチレングリコール)（PEG）重合体、例えば、2kDa（2000Da）のポリ(エチレングリコール)（PEG）重合体である。
【０１３２】
いくつかの態様において、共重合体は、親水性PEG単量体のブロックおよび疎水性単量体PLAのブロックを含むPEG-PLAジブロック共重合体を含むジブロック共重合体を含む。
【０１３３】
共重合体の親水性ブロックは、共有結合により、例えば、エステル結合またはウレタン結合等により、疎水性ブロックとカップリングされ得る。イソシアネートのようなカップリング剤の存在下での二官能性疎水性ブロックのいずれかの末端への単官能性親水性ブロックのカップリングと同様に、縮合重合法および開環重合法が利用され得る。さらに、カップリング反応は、カルボニルジイミダゾール、無水コハク酸、N-ヒドロキシスクシンイミド、p-ニトロフェニルクロロホルメート等のような活性化剤による官能基の活性化の後に行われてもよい。
【０１３４】
いくつかの態様において、共重合体の親水性ブロックは、適切な分子量のPEG単量体または誘導体化されたPEG単量体を含むことができる。PEGは、特に好都合な生体適合性、非毒性特性、親水性、可溶化特性、および患者の体内からの迅速なクリアランスを有する。
【０１３５】
共重合体の疎水性ブロックも、生分解性かつ生体適合性の生分解性ポリエステル単量体を含むべきである。共重合体の疎水性生分解性ポリエステルブロックのインビトロおよびインビボの分解は、よく理解されており、分解生成物は容易に代謝され、かつ／または患者の体内から排除される。
【０１３６】
TNP-470のようなフマギロール誘導体を含むMetAP-2阻害剤は、本明細書に開示されるようなブロック共重合体を使用して可溶化されるかまたは分散させられ得る。本明細書に開示されるようなブロック共重合体を使用することの一つの利点は、水性または親水性の環境において限られた可溶性または分散性を有しているTNP-470のようなMetAP-2阻害剤が、増強された可溶性および／または分散性を有し、経口投与を介して投与され得るという点である。ブロック共重合体を使用することのもう一つの利点は、MetAP-2阻害剤のベンガミドクラス、またはスルホンアミドクラス、または阻害剤のベスタチンクラスと比べて改善された体内分布である。
【０１３７】
ブロック共重合体MetAP-2結合体は、本明細書中の実施例に開示されるようにして、ミセルとして調製され得る。もう一つの態様において、参照により本明細書に完全に組み入れられる米国特許出願6,623,729に開示され、さらに以下の工程で例示される方法を使用して、MetAP-2阻害剤の徐放のためのブロック共重合体ミセルを調製することができる。
【０１３８】
工程1：ブロック共重合体の調製。一端にヒドロキシル基を有する疎水性部分を含有し、もう一端に親水性部分を含有しているブロック共重合体を、触媒としてのスズオクテート（stannous octate）の存在下で、生分解性ポリエステル重合体とポリエチレングリコール（PEG）重合体との共重合により調製する：共重合は、真空条件下で、2〜6時間、160〜200クアドラチャー（quadrature）で実施される。ポリエステル重合体には、ポリ乳酸（PLA）、ポリグリコール酸（PGA）、ポリ(D,L-乳酸グリコール酸)（PLGA）、ポリ(カプロラクトン)、ポリ(バレロラクトン)、ポリ(ヒドロキシブチレート)、またはポリ(ヒドロキシバレレート)が含まれ、いくつかの態様において、PLAおよびメトキシポリエチレングリコールが、ポリエチレングリコール重合体として使用される。
【０１３９】
工程2：ブロック共重合体の官能基の活性化によるリンカーの結合。ブロック共重合体を有機溶媒に溶解させ、ピリジンおよび窒素の存在下で室温でリンカーと反応させる：有機溶媒には、塩化メチレンが含まれるが、これに限定はされず、リンカーには、p-ニトロフェニルクロロホルメート、カルボニルジイミダゾール（CDI）、N,N'-ジスクシンイミジルカルボネート（DSC）、またはこれらの化合物の混合物、好ましくは、p-ニトロフェニルクロロホルメートが含まれる。反応は、1:2:2〜1:2:6の範囲のブロック共重合体：リンカー：ピリジンのモル比で、2〜6時間、実施される。
【０１４０】
工程3：薬物と生分解性重合体との結合体の調製。薬物とブロック共重合体との結合体のミセル単量体を入手するため、リンカーと結合したブロック共重合体を、共有結合により、薬物と結合させる。ここで、ヒドラジンとの反応により得られたブロック共重合体が使用され得る：ヒドラジンと反応したブロック共重合体は、フマギロール誘導体のようなMetAP-2阻害剤のケトン基にリンカーを結合させることにより、ミセル単量体を形成し、ヒドラジン反応なしのブロック共重合体は、フマギロール誘導体のようなMetAP-2阻害剤のアミン基にリンカーを結合させることにより、ミセル単量体を形成する。好ましくは、MetAP-2阻害剤はTNP-470である。別の態様において、その他のMetAP-2阻害剤が、共重合体結合のために同様に適当である。さらにもう一つの態様において、その他の薬物または化学療法剤、例えば、以下に限定はされないが、ドキソルビシン、アドリアマイシン、シスプラチン、タキソール、および5-フルオロウラシルのような抗癌剤が、MetAP-2阻害剤に加えて使用される。
【０１４１】
工程4：徐放性ミセルの調製。工程3において調製されたミセル単量体を、徐放性ミセルを調製するために水性溶液に分散させる。ミセル単量体をある濃度で分散させた場合、熱力学的平衡により自発的にミセルが形成される。このようにして調製された徐放性ミセルは、インビボで、加水分解および酵素作用によって薬物を放出し、放出された薬物は遊離型薬物と同一の効果を発揮する。
【０１４２】
MetAP-2阻害剤の共重合体との結合
本明細書に開示された組成物および方法において、MetAP-2阻害剤、例えば、TNP-470は、ブロック共重合体と会合させられる。
【０１４３】
本明細書において使用されるように、「と会合している」という用語は、あるエンティティがもう一つのエンティティと物理的に会合しているかまたは接触していることを意味する。従って、ブロック共重合体「と会合している」MetAP-2阻害剤は、共有結合または非共有結合のいずれかでブロック共重合体に接続されている。会合は共有結合性であることが好ましい。会合が共有結合性である場合、特に、会合はリンカーモエティにより媒介され得る。「会合」または「相互作用」または「と会合している」という用語は、本明細書において交換可能に使用され、MetAP-2阻害剤、例えば、TNP-470のブロック共重合体との会合または相互作用に関して使用されるように、直接結合または間接結合のいずれかによる、MetAP-2阻害剤と、ブロック共重合体、例えば、親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むジブロック共重合体との間の会合をさす。
【０１４４】
間接結合には、MetAP-2阻害剤とブロック共重合体とがリンカーモエティを介して付着しており、例えば、それらが直接連結していない、MetAP-2阻害剤とブロック共重合体との間の会合が含まれる。リンカーモエティには、化学的リンカーモエティが含まれるが、これに限定はされない。いくつかの態様において、MetAP-2阻害剤と共重合体との間のリンカーは、例えば、p-ニトロフェニルクロロホルメート、カルボニルジイミダゾール（CDI）、N,N'-ジスクシンイミジルカルボネート（DSC）、シスアコニット酸無水物、およびこれらの化合物の混合物からなる群より選択されるリンカーと、重合体を反応させることにより形成される。
【０１４５】
直接結合には、リンカーモエティが必要とされない結合が含まれる。一つの態様において、直接結合には、二種のモエティ、即ち、MetAP-2阻害剤およびブロック共重合体が相互に誘引されるよう相互作用する、化学的または物理的な相互作用が含まれる。直接相互作用の例には、共有結合性相互作用、非共有結合性相互作用、疎水性／親水性結合、イオン結合（例えば、静電気的、クーロン誘引、イオン双極子、電荷移動）、ファンデルワールス、または水素結合、および共有結合の形成を含む化学結合が含まれる。従って、一つの態様において、TNP-470のようなMetAP-2阻害剤とブロック共重合体とは、リンカーを介して連結せず、例えば、それらは直接連結する。さらなる態様において、MetAP-2阻害剤とブロック共重合体とは静電気的に相互に会合する。
【０１４６】
一つの態様において、リンカーはペプチドリンカーである。もう一つの態様において、ペプチドリンカーは、酵素的に切断可能、例えば、結合を切断してMetAP-2阻害剤を放出するプロテアーゼ酵素により切断可能である。最も好ましくは、ペプチド結合は、予め選択された細胞酵素、例えば、癌細胞または増殖中の内皮細胞のリソソームに見出されるものにより切断され得る。または、酸加水分解リンカーは、エステル結合またはアミド結合を含み、例えば、シス-アコニチル結合である。pH感受性リンカーも使用され得る。結合体のリンカーの切断は、活性MetAP-2阻害剤の放出をもたらす。従って、MetAP-2阻害剤は、薬剤の活性を改変しない方式で重合体と結合しなければならない。リンカーは、好ましくは、少なくとも一つの切断可能なペプチド結合を含む。好ましくは、リンカーは、特異的結合および選択された細胞酵素による切断を可能にするために十分なアミノ酸ユニットを好ましくは含む酵素により切断可能なオリゴペプチド基である。好ましくは、リンカーは、少なくとも2アミノ酸長であり、より好ましくは、少なくとも3アミノ酸長である。切断可能なリンカーは、例えば、参照により本明細書に組み入れられる米国特許第7,332,523号に記載されている。好ましいペプチドリンカーの一例は、Gly-Phe-Leu-Glyである（米国特許第7,332,523号参照）。その他のリンカーは当業者に公知である。
【０１４７】
薬学的組成物および投与：
本明細書に開示されるような製剤および組成物におけるMetAP-2阻害剤は、哺乳動物、例えば、ヒトにおいて、MetAp-2が過剰発現しているかまたは過剰活性である状態を含む（がこれらに限定はされない）、状態の病理のためMetAP-2活性が関与しているかまたは必要とされる状態を処置する方法において特に有用である。本明細書において「MetAP-2依存性の疾患または障害」とも呼ばれるそのような状態は、癌、腹水形成、乾癬、加齢黄斑変性、甲状腺過形成、子癇前症、関節リウマチおよび骨関節炎、アルツハイマー病、肥満、胸水、アテローム性動脈硬化、子宮内膜症、糖尿病性／その他の網膜症、血管新生緑内障、加齢黄斑変性、血管種、および角膜血管新生、HIV、HPV、ヘルペス、およびその他のウイルスの感染、炭疽、IPF、COPD、多発性硬化症、その他の硬化性疾患、移植片拒絶、ループス、喘息、ならびにMetAP-2活性に関連している本明細書に記載されたその他の状態を含む（がこれらに限定はされない）群より選択される。
【０１４８】
一つの態様において、MetAP-2依存性の疾患または障害は、細胞が急速に分裂中の新生物癌細胞であり、新生物細胞が腫瘍の継続的な成長を維持するために効率的な血液供給を必要とする、癌である。本明細書において使用されるように、癌とは、周辺組織に侵襲し、新たな身体部位に転移する傾向がある未分化細胞の増殖を特徴とする様々な悪性新生物をさし、そのような悪性新生物成長を特徴とする病理学的状態もさす。血管は、体内の他の場所に転移し蔓延するための導管を提供する。転移部位に到着すると、癌細胞は、次いで、新たな血液供給ネットワークの確立にとりかかる。本明細書に開示されるような製剤および組成物におけるMetAP-2阻害剤の投与は、一次疾患部位で、そして、癌の場合には、二次腫瘍部位で、増殖を阻害するのに有用であり；本発明の態様は、疾患の進行を防止し制限するために役立つ。疾患を永続させるために細胞、一次細胞、内皮細胞、隣接細胞、またはその他の細胞のいずれかの継続的な増殖を必要とする任意の疾患が、候補標的である。例えば、本明細書に記載されるような癌の処置の候補には、肛門、膀胱、胆管、骨、脳、乳房、子宮頚部、結腸／直腸、子宮内膜、食道、眼、胆嚢、頭頸部、肝臓、腎臓、喉頭、肺、縦隔（胸部）、口腔、卵巣、膵臓、陰茎、前立腺、皮膚、小腸、胃、脊髄、尾骨、精巣、甲状腺、および子宮に見出される癌腫および肉腫が含まれるが、これらに限定はされない。癌腫の型には、乳頭腫／癌腫、絨毛癌、内胚葉洞腫瘍、奇形腫、腺腫／腺癌、黒色腫、繊維腫、脂肪腫、平滑筋腫、横紋筋腫、中皮腫、血管腫、骨腫、軟骨腫、神経膠腫、リンパ腫／白血病、扁平上皮癌、小細胞癌、大細胞未分化癌、基底細胞癌、および副鼻腔未分化癌が含まれる。肉腫の型には、胞状軟部肉種のような軟部組織肉腫、血管肉腫、皮膚線維肉腫、類線維腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、骨外性軟骨肉腫、骨外性骨肉腫、繊維肉腫、血管外皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、リンパ肉腫、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫、およびアスキン腫瘍、ユーイング肉腫（原始神経外胚葉性腫瘍）、悪性血管内皮腫、悪性シュワン腫、骨肉腫、および軟骨肉腫が含まれる。血管腫の形態の皮膚または内臓における血管の異常な発達および成長も、本明細書に記載された方法に従って処置され得る。
【０１４９】
一つの態様において、MetAP-2依存性の疾患または障害は加齢黄斑変性である。滲出型または血管新生型の加齢黄斑変性において発生するものに類似している、眼の脈絡叢から網膜への異常な血管成長に、VEGFが寄与することは、公知である。しばしばAMDまたはARMD（加齢黄斑変性）とも呼ばれる黄斑変性は、65歳以上のアメリカ人における視力喪失および失明の主要な原因である。新しい血管が、網膜下で成長し（血管新生）、血液および体液へと漏出するためには、内皮細胞が増殖しなければならない。この増殖は、不均一であり、上記の漏出をもたらし、それが光感受性網膜細胞に永久の傷害を引き起こし、それらの細胞は死滅し、中央視内の盲点または黄斑を作出する。
【０１５０】
一つの態様において、MetAP-2依存性の疾患または障害は、糖尿病性網膜症（糖尿病性眼疾患に関連した異常な血管成長）である。糖尿病性網膜症および未熟児網膜症（ROP）においては、血管形成を促進するVEGFが放出される。従って、これらの疾患または障害は、血管形成性の疾患または障害である。正常な血管が、糖尿病による微小の血塊により傷害を受けた時に、網膜（眼の背部の光感受性組織）により放出されるVEGFは、その受容体を作動させ、新たな血管成長をもたらす連鎖反応を点火させる。しかしながら、あまりに急速に不均一に増殖したバックアップ血管は、不完全であるため、漏出し、出血し、網膜を剥離する瘢痕組織を助長して、重度の視力喪失をもたらす。そのような成長は、先進国の若い人々における失明の主要な原因である糖尿病性網膜症の最大の特徴である。一つの態様において、処置を必要とする対象は、イヌまたはネコのような哺乳動物、好ましくは、ヒトであり得る。
【０１５１】
一つの態様において、MetAP-2依存性の疾患または障害は、関節リウマチである44。関節リウマチ（RA）は、滑膜組織膨潤、白血球進入、および既存の血管からの新たな血管成長を特徴とする。この疾患は、未同定の抗原に対する免疫学的応答として起こると考えられている。関節リウマチ（RA）における関節の滑膜裏打ちの膨張、ならびに基底の軟骨および骨のパンヌスによるその後の侵襲は、酸素および栄養素の増加した需要に対処するため、滑膜への血管供給の増加を必要とする。内皮細胞増殖は、現在、RAにおけるパンヌスの形成および維持において重要な事象として認識されている（Paleolog,E.M.,2002）。従って、RAは血管形成に関連した疾患または障害である。初期のRAですら、最も初期の組織学的観察のいくつかは血管である。単核浸潤物は、豊富な血管系と共に、滑膜組織を特徴付ける。内皮細胞増殖は炎症性パンヌスの形成に不可欠であり、それなしでは、白血球進入は起こり得ない（Koch, A. E., 2000）。新血管の形成の破壊は、炎症部位への栄養素の送達を防止するのみならず、血管透過性因子としてのRAにおける強力な血管形成促進因子VEGFの付加的な活性による関節膨潤を低下させることもできる。
【０１５２】
一つの態様において、MetAP-2依存性の疾患または障害はアルツハイマー病である。アルツハイマー病（AD）は、世界的に、認知症の最も一般的な原因である。ADは、ニューロン変性に通じ、最終的に認知症に通じる過剰の脳アミロイド沈着を特徴とする。ADの正確な原因はまだ知られていない。疫学的研究により、非ステロイド性抗炎症薬、スタチン、ヒスタミンH2受容体ブロッカー、またはカルシウムチャンネルブロッカー（全て抗増殖効果を有する心血管薬である）の長期使用が、アルツハイマー病を防止し、かつ／またはAD患者の予後に影響を及ぼすらしいことが示されている。従って、ADにおいて、脳血管における内皮細胞増殖が、ADにおける重要な役割を果たすかもしれないこと、即ち、ADが血管形成と関係のある疾患または血管形成により媒介される疾患であり得ることが推測された。アルツハイマー病において、脳内皮は、ベータアミロイド斑のための前駆体基質、および皮質ニューロンを選択的に死滅させる神経毒性ペプチドを分泌する。さらに、血管系におけるアミロイド沈着は、血管新生に通じる内皮細胞アポトーシスおよび内皮細胞活性化に通じる。血管形成は、VEGFアンタゴニストSU4312によっても、スタチンによっても阻止され得、このことは、抗増殖戦略または抗血管形成戦略が、ADにおける内皮細胞活性化に干渉し得ること（Schultheiss C, el. al., 2006；Grammas P., et. al., 1999）、そしてADの防止および／または処置のために使用され得ることを示している。
【０１５３】
一つの態様において、MetAP-2依存性の疾患または障害は肥満である。MetAP-2阻害剤TNP-470は、マウスにおける食事により誘導された肥満または遺伝的な肥満を防止し得ることが示されている（Ebba Brakenhielm et. al., Circulation Research, 2004;94:1579）。TNP-470は、脂肪組織における血管分布を低下させ、それにより、脂肪組織の成長速度および肥満の進行を阻害した。従って、肥満は、血管形成と関係のある、または血管形成により媒介される疾患または障害である。
【０１５４】
一つの態様において、MetAP-2依存性の疾患または障害は子宮内膜症である。過剰の子宮内膜血管形成が、子宮内膜症の病原における重要な機序として提唱されている（Healy, DL., et. al., 1998）。子宮内膜症を有する患者の子宮内膜は、増強された内皮細胞増殖を示す。さらに、正常な女性と比較して、子宮内膜症を有する女性の子宮内膜には、より多くの血管における細胞接着分子インテグリンvβ3の上昇した発現が存在する。内皮細胞増殖を阻害する戦略は、子宮内膜症を処置するために使用され得る。
【０１５５】
一つの態様において、MetAP-2依存性の疾患または障害を処置する方法は、癌の処置に適用可能である；本明細書に開示されるような方法は、全ての癌腫、血液由来癌、および肉腫に適用可能である。好ましくは、癌は、肛門、膀胱、胆管、骨、脳、乳房、子宮頚部、結腸／直腸、子宮内膜、食道、眼、胆嚢、頭頸部、肝臓、腎臓、喉頭、肺、縦隔（胸部）、口腔、卵巣、膵臓、陰茎、前立腺、皮膚、小腸、胃、脊髄、尾骨、精巣、甲状腺、および子宮に見出される、乳頭腫／癌腫、絨毛癌、内胚葉洞腫瘍、奇形腫、腺腫／腺癌、黒色腫、繊維腫、脂肪腫、平滑筋腫、横紋筋腫、中皮腫、血管腫、骨腫、軟骨腫、神経膠腫、リンパ腫／白血病、扁平上皮癌、小細胞癌、大細胞未分化癌、基底細胞癌、副鼻腔未分化癌、胞状軟部肉種のような軟部組織肉腫、血管肉腫、皮膚線維肉腫、類線維腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、骨外性軟骨肉腫、骨外性骨肉腫、繊維肉腫、血管外皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、リンパ肉腫、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫、およびアスキン腫瘍、ユーイング肉腫（原始神経外胚葉性腫瘍）、悪性血管内皮腫、悪性シュワン腫、骨肉腫、および軟骨肉腫からなる群より選択される。
【０１５６】
本明細書に開示されるような製剤および組成物におけるMetAP-2阻害剤は、哺乳動物における腫瘍形成部位における血管形成を含む細胞増殖を阻害する方法において、特に有用である45。そのような部位にそのような多様な方式で投与された本明細書に開示されるような製剤および組成物におけるMetAP-2阻害剤は、その部位における内皮細胞増殖および血管形成を防止または阻害し、それにより、腫瘍の進行および成長を阻害する。結合体により増殖を防止または阻害することにより防止または阻害され得る腫瘍には、黒色腫、腺癌、肉腫、胸腺腫、リンパ腫、肺腫瘍、肝臓腫瘍、結腸腫瘍、腎臓腫瘍、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、子宮腫瘍、乳房腫瘍、前立腺腫瘍、腎臓腫瘍、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、脳腫瘍、精巣腫瘍、骨腫瘍、筋肉腫瘍、胎盤腫瘍、胃腫瘍、転移等が含まれるが、これらに限定はされない。
【０１５７】
いくつかの態様において、MetAP-2阻害剤を含む本明細書に開示されるような組成物は、血管内皮細胞の増殖を阻害することができ、従って、抗血管形成効果または血管形成の阻害を有する。従って、MetAP-2阻害剤を含む本明細書に開示されたような組成物は、癌の成長および転移を阻害する方法、例えば、炎症性疾患、糖尿病性網膜症、関節リウマチ、乾癬を含む（がこれらに限定はされない）不適切な血管形成が起こるかまたは血管内皮細胞の増殖が起こるその他の様々な疾患を処置する方法のような、MetAP-2が病理に関与している血管形成により媒介される状態を処置する方法において使用され得る。従って、本明細書に開示されるようなMetAP-2阻害剤を含む組成物は、癌転移阻害剤、または癌、炎症性疾患、糖尿病性網膜症、関節リウマチ、乾癬、および未熟児網膜症のようなその他の網膜症に対する治療剤として使用され得る。
【０１５８】
本明細書に記載されるような薬学的組成物における活性要素の実際の投薬量レベルは、特定の対象または患者のための所望の治療的応答を達成するために有効な活性化合物の量が得られるよう、変動し得る。選択される投薬量レベルは、特定のMetAP-2阻害剤の活性、投与組成物の型（即ち、例えば、錠剤経口投与であるか、液体経口投与であるか、経眼投与であるか、局所投与であるか、吸入であるか）、処置される状態の重度、ならびに処置される患者の状態および過去の病歴に依るであろう。
【０１５９】
化合物、例えば、本明細書に記載されるようなMetAP-2阻害剤の「治療的に有効な量」という語句は、医学的処置に適用可能な合理的な利益／リスク比で障害を処置するために十分な化合物の量を意味する。しかしながら、本明細書に開示されるような組成物および製剤の全一日用法は、正当な医学的判断の範囲内で主治医により決定されることが理解されるであろう。「治療的に有効な量」とは、その用語が本明細書において使用されるように、疾患を根治する必要はない。むしろ、治療的に有効な量は、治療剤、例えば、MetAP-2-ブロック共重合体結合体を含む本明細書に開示されるような組成物がない場合の進行と比較して、疾患の進行（非限定的な例として、腫瘍または新生物の成長）を少なくとも遅くするであろう。従って、治療剤が実際に疾患を排除することは、好ましいが、必要ではない。
【０１６０】
特定の対象のための具体的な治療的に有効な用量レベルは、処置される障害および障害の重度；利用される特定の化合物の活性；利用される特定の組成物；患者の年齢、体重、全身状態、性別、および食事；利用される特定の化合物の投与の時間、投与の経路、および排泄速度；処置の継続時間；利用される本明細書に開示されるような組成物および製剤と組み合わせてまたは同時に使用される薬物；等の医学分野において周知の因子を含む多様な因子に依るであろう。例えば、個々の患者のケアのため、適宜、所望の治療効果を達成するために必要とされるより低いレベルで化合物の用量を開始し、所望の効果が達成されるまで徐々に投薬量を増加させるか、または高レベルで化合物の用量を開始し、所望の効果が達成されるまで徐々に投薬量を減少させることは、十分に当技術分野の技術の範囲内である。
【０１６１】
本明細書に開示されるような組成物は、予防的にまたは治療的に有効な量で投与され得る。本明細書に開示されるような製剤および組成物は、薬学的に許容される担体と共に投与され得る。予防的にまたは治療的に有効な量とは、少なくとも部分的に、所望の効果を達成するため、または処置される特定の疾患もしくは障害の開始を遅延させるか、進行を阻害するか、または開始もしくは進行を全て停止させるために必要な量を意味する。そのような量は、当然、処置される特定の状態、状態の重度、および年齢、健康状態、サイズ、体重、および同時処置を含む個々の患者のパラメーターに依るであろう。これらの因子は、当業者に周知であり、ルーチンの実験法のみを用いて解明され得る。最大用量、即ち、正当な医学的判断による最も高い安全な用量が使用されることが一般に好ましい。しかしながら、より低い用量または耐容用量も、医学的な理由、心理学的な理由、または事実上その他の理由のため、投与され得ることが、当業者によって理解されるであろう。
【０１６２】
「有効量」という用語は、本明細書において使用されるように、疾患または障害の症状のうちの少なくともいくつかを軽減するための薬学的組成物の治療剤の量をさす。「有効量」という用語の意味には、所望の効果を提供するために十分な薬理学的組成物の量が含まれる。必要とされる正確な量は、処置される腫瘍の型、腫瘍の重度、腫瘍の薬物耐性レベル、処置される種、対象の年齢および全身状態、投与モード等のような因子に依って変動するであろう。従って、正確な「有効量」を明示することは可能ではない。しかしながら、所定の症例のための適切な「有効量」は、ルーチンの実験法のみを使用して当業者によって決定され得る。
【０１６３】
処置の効力は、通常の技術を有する実務者によって判断され得る。実施例に開示されるように、効力は、癌および腫瘍の動物モデル、例えば、癌を有するげっ歯動物の処置において査定され得、癌の少なくとも一つの症状の減少、例えば、腫瘍のサイズの低下または腫瘍の成長速度の減速もしくは停止に通じる組成物または製剤の処置または投与は、有効な処置を示す。
【０１６４】
所定の製剤（例えば、ブロック共重合体と会合しているMetAP-2阻害剤）の効力は、癌の実験動物モデル、例えば、野生型のマウスもしくはラット、または、好ましくは、本明細書中の下記実施例に記載されたものと同種の腫瘍細胞の移植を使用しても、判断され得る。実験動物モデルを使用する場合、処置の効力は、癌の症状の低下、例えば、腫瘍のサイズの低下、または腫瘍の成長速度の減速もしくは停止が、処理された動物において、未処理動物より早く起こった場合に、証明される。「より早く」とは、減少、例えば、腫瘍のサイズの減少が、少なくとも5％早く、好ましくはそれ以上に早く、例えば、一日早く、2日早く、3日早く、またはそれ以上に早く起こることを意味する。
【０１６５】
さらに、投与される各成分の量は、投与が、1日1回であるか、1日2回であるか、1日3回であるか、1日4回であるか、週1回であるか；または週に数回、例えば、週に2回もしくは3回もしくは4回であるか、のような投与の頻度にも依る。
【０１６６】
単なる一つの例として、TNP-470投与を、全てのMetAP-2阻害剤全般の投与法の代表例としてさらに詳しく記載する。6-O-(N-クロロアセチルカルバモイル)フマギロール（TNP-470）について、以下の情報が、投与の一般的な指針として役立つかもしれない。通常、本明細書に開示されるような製剤および組成物は、1日1回〜1日数回、例えば、1日2回、1日3回、または1日4回、投与される。別の態様において、本明細書に開示されるような製剤および組成物は、所定の週に複数回投与されることになっている場合、例えば、週3〜5回、投与され得る。いくつかの投与モード、例えば、IV投与においては、低い頻度で、例えば、1週間毎または2週間毎に投薬することが望ましい；ブロック共重合体結合体化合物は、そのような計画において有用であり得る。
【０１６７】
例えば、一つの態様において、処置を必要とする対象のための本明細書に開示されるような製剤および組成物におけるMetAP-2阻害剤の適当な用量は、従来使用されている体重1キログラム当たり約1mg〜約2000mg TNP-470当量という用量範囲に従って使用され得る。しかしながら、一般に、フマギロール誘導体の従来の用量は、米国特許第5,290,807号に開示されるように、約0.1mg/kg体重〜40mg/kg体重、好ましくは、約0.5mg/kg体重〜20mg/kg体重である。腫瘍成長の維持が目標である（即ち、目標が腫瘍の成長を弱めることである）別の態様において、化学療法のために使用される閾値未満の用量が使用され得る。例えば、適当な用量は、従来使用されている化学療法用量未満であり得、例えば、体重1キログラム当たり約1μg〜1mgまたは0.1μg〜1mgまたは1mg〜10mg TNP-470という用量範囲が使用され得る。
【０１６８】
いくつかの態様において、TNP-470が週1回投与される場合、それは、約20〜約200mg/m2/週の量で；好ましくは、約40〜約180mg/m2/週の量で；最も好ましくは、約135〜約175mg/m2/週の量で投与され得る。いくつかの態様において、TNP-470が毎日投与される場合、それは、約1〜約10mg/m2/日の量で；例えば、約1.25〜約5mg/m2/日の量で；または約1〜約3mg/m2/日の量で投与され得る。連続投与の場合、成分は、通常、週の少なくとも連続5日間投与される。いくつかの態様において、フマギロール誘導体を含む本明細書に開示されるような組成物の有効量は、本明細書に開示されるような抗血管形成アッセイを使用して決定され得、いくつかの態様において、有効量は、従来の有効用量として使用されている量より少ない。類似した投薬計画が、本明細書に開示されるようなその他のMetAP-2阻害剤組成物の製剤化のため適用され得る。
【０１６９】
別の態様において、許容されない毒性がないのであれば、より高い用量が使用され得る。例えば、約50〜約500mg/m2/週またはそれ以上の範囲およびこの範囲内の部分範囲の投薬量が、特に企図される。従って、約120〜350mg/m2/週、200〜400mg/m2/週等の範囲の投薬量が、特に企図される。
【０１７０】
本明細書に開示されるような組成物および製剤の好ましい投与経路は、経口投与である。経口投与用の固形の剤形には、例えば、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤が含まれるが、これらに限定はされない。そのような固形の剤形において、本明細書に開示されるような組成物は、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸水素カルシウムのような、少なくとも一つの不活性の薬学的に許容される賦形剤もしくは担体、ならびに／または（a）デンプン、乳糖、ショ糖、グルコース、マンニトール、およびケイ酸のような増量剤もしくはエクステンダー（extender）；（b）カルボキシメチルセルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖、およびアラビアゴムのような結合剤；（c）グリセロールのような加湿剤；（d）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカのデンプン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩、および炭酸ナトリウムのような崩壊剤；（e）パラフィンのような溶液遅延（solution retarding）剤；（f）四級アンモニウム化合物のような吸収加速剤；（g）セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセリンのような湿潤剤；（h）カオリンおよびベントナイト粘土のような吸収剤、ならびに（i）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形のポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムのような滑沢剤、ならびにそれらの混合物と混合され得る。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合、剤形は、緩衝剤も含むかもしれない。
【０１７１】
類似の型の固形組成物は、高分子量ポリエチレングリコール等と同様にラクトースまたは乳糖のような等賦形剤を使用して、軟および硬充填ゼラチンカプセル剤における充填剤としても利用され得る。活性成分は、適宜、前記賦形剤のうちの一つまたは複数を含む、マイクロカプセル形態であってもよい。経口投与用の投薬単位形態への本明細書に開示されたような薬学的製剤の調製において、選択された化合物は、乳糖、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アミロペクチン、セルロース誘導体、ゼラチン、またはその他の適当な要素のような固形の粉末要素、ならびにステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、フマル酸ステアリルナトリウム、およびポリエチレングリコールロウのような崩壊剤および滑沢剤と混合され得る。次いで、混合物は、顆粒剤へと加工されるか、または錠剤へと圧縮される。
【０１７２】
さらに、局所（例えば、経口粘膜、呼吸粘膜）投与および／または経口投与のための組成物は、当技術分野において公知であり、本明細書に記載されるような液剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放性製剤、口腔洗浄剤、または散剤を形成することができる。組成物は、安定剤および保存剤も含み得る。担体、安定剤、および佐剤の例については、University of the Sciences in Philadelphia (2005) Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons, 21st Edを参照のこと。組成物は、吸入（経肺、経鼻）、経眼（点眼剤）、舌下、坐剤、または局所（例えば、軟膏）で投与されてもよい。
【０１７３】
抗増殖処置の活性を増強するため、補助的処置の使用が企図される。特に、TNP-470のようなMetAP-2阻害剤は、炎症性疾患（とりわけ、リウマチおよび乾癬）、糖尿病性網膜症、癌、ならびに本明細書中の他の箇所に記述されたようなその他の疾患および状態のような、異常に刺激された血管新生により誘導される疾患の処置の効力を増強するため、様々な他の薬物による処置と併せて試験されている。
【０１７４】
軟ゼラチンカプセル剤は、植物油、脂肪、または軟ゼラチンカプセル剤のために適当なその他の媒体の中に、本発明の活性化合物または活性化合物の混合物を含有しているカプセル剤により調製され得る。硬ゼラチンカプセル剤は、活性化合物の顆粒剤を含有し得る。硬ゼラチンカプセル剤は、ラクトース、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、ジャガイモデンプン、コーンスターチ、アミロペクチン、セルロース誘導体、またはゼラチンのような固形の粉末要素と組み合わせられた治療剤と共に、ターゲティングモエティおよび担体粒子を含む、ターゲティングされた送達組成物も含有し得る。
【０１７５】
経口投与用の液状の剤形には、薬学的に許容される乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、およびエリキシル剤が含まれる。活性成分に加えて、液状の剤形は、例えば、水、または本明細書に記載されるようなジブロック共重合体のミセルの維持と適合性のその他の溶媒のような当技術分野において一般的に使用されている不活性の希釈剤を含有しているかもしれない。経口投与用の液状の調製物は、そのような溶媒がミセル形態の維持と適合性である限り、シロップ剤または懸濁剤、例えば、0.2％〜20重量％の活性要素を含有し、残りが糖または糖アルコールおよびエタノール、水、グリセロール、プロピレングリコール、およびポリエチレングリコールの混合物からなるような液剤または懸濁剤の形態で調製されてもよい。所望により、そのような液状調製物は、着色剤、風味剤、サッカリン、およびカルボキシメチルセルロース、またはその他の濃化剤を含有しているかもしれない。経口投与用の液状調製物は、使用前に適当な溶媒により再生される乾燥粉末の形態で調製されてもよい。
【０１７６】
不活性の希釈剤の他に、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、風味剤、ならびに芳香剤のような佐剤も含み得る。
【０１７７】
経皮貼付剤も、本明細書に開示されるような製剤および組成物の、身体の特定の領域への制御された送達を提供するために使用され得る。そのような剤形は、妥当な媒体に成分を溶解させるかまたは分配することにより生成され得る。吸収増強剤も、皮膚を介した化合物の流入を増加させるために使用され得る。速度は、速度制御膜を提供することにより、または重合体マトリックスもしくはゲルへ化合物を分散させることにより、制御され得る。そのような経皮貼付剤は、炎症性疾患、例えば、とりわけ、リウマチおよび乾癬、糖尿病性網膜症、ならびに癌、例えば、皮膚癌または（乾癬のような）その他の皮膚と関係のある血管新生状態または悪性病変のような、異常に刺激された血管新生が起こっている身体の部分を処置するために有用である。
【０１７８】
局所投与のさらなる形態は、例えば、糖尿病性網膜症または未熟児網膜症（ROP）のような網膜症のための処置としての、または自己免疫疾患、アレルギー状態もしくは炎症状態、および角膜移植のような免疫により媒介される眼の状態の処置のための、眼に対するものである。本発明の成分は、眼の角膜、ならびに内部領域、例えば、前眼房、後眼房、硝子体、眼房水、硝子体液、角膜、虹彩／毛様体、水晶体、脈絡膜／網膜、および強膜に成分が浸透することを可能にするために十分な期間にわたり、眼の表面に接して維持されるよう、薬学的に許容される眼科用媒体で送達され得る。薬学的に許容される眼科用媒体は、例えば、軟膏または封入材料であり得る。
【０１７９】
別の態様において、本明細書に開示されるような組成物および製剤は、直腸投与または膣投与を介しても投与され得る。そのような態様において、本明細書に開示されるような組成物および製剤は、室温では固形であるが、体温においては液状であり、従って、直腸または膣の腔内で融解して活性成分を放出する、カカオ脂、ポリエチレングリコール、または坐剤ロウのような適当な非刺激性の賦形剤または担体と、本発明の化合物を混合することにより調製され得る坐剤の形態であってもよい。
【０１８０】
直腸投与または膣投与のための投薬単位は、（i）中性脂肪基剤と混合された活性物質を含有している坐剤の形態で；（ii）植物油、パラフィン油、もしくはゼラチン直腸カプセル剤のためのその他の適当な媒体と混合された活性物質を含有しているゼラチン直腸カプセル剤の形態で；（iii）既製の微小浣腸剤の形態で；または（iv）投与直前に適当な溶媒で再生される乾燥微小浣腸製剤の形態で、調製され得る。
【０１８１】
活性要素をさらに保護するため、本明細書に記載されたMetAP-2阻害剤共重合体結合体は、胃酸分泌阻害剤および／または制酸剤と混合してまたは組み合わせて使用され得る。
【０１８２】
胃酸分泌阻害剤には、例えば、H2ブロッカー（例えば、ファモチジン、シメチジン、ラニチジン塩酸塩等）およびプロトンポンプ阻害剤（例えば、ランソプラゾール、オメプラゾール等）が含まれる。制酸剤としては、炭酸マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化マグネシウム、酸化マグネシウム、および水酸化マグネシウムのような、胃内のpHレベルを上昇させる化合物が利用され得る。本明細書に開示されるような組成物および製剤の経口剤形は、胃酸の影響を軽減するため、胃酸分泌阻害剤および／または制酸剤の投与により胃内pHを増加させた後、投与され得る。
【０１８３】
または、本明細書に開示されるような組成物および製剤は、MetAP-2阻害剤-ブロック共重合体結合体を含む経口投与用の腸溶コーティング調製物の形態をとり得る。いくつかの態様において、腸溶コーティングフィルムによるコーティングのための、MetAP-2阻害剤を含有しているコアは、脂肪性基剤を使用して調製されてもよいし、または脂肪性基剤を使用しない他の公知の製剤化により調製されてもよい。いくつかの態様において、コーティング剤によるコーティングのための薬物含有コアの形態の、本明細書に開示されるような組成物および製剤は、例えば、錠剤、丸剤、および顆粒剤であり得る。
【０１８４】
コアに含有される賦形剤の例は、スクロース、ラクトース、マンニトール、およびグルコースのような糖類、デンプン、結晶セルロース、ならびにリン酸カルシウムである。有用な結合剤には、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、マクロゴール、プルロニックF-68、アラビアゴム、ゼラチン、およびデンプンが含まれる。有用な崩壊剤には、カルボキシメチルセルロースカルシウム（ECG505）、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ac-Di-Sol）、ポリビニルピロリドン、および低置換度ヒドロキシプロピルセルロース（L-HPC）が含まれる。有用な滑沢剤および抗凝集剤には、タルクおよびステアリン酸マグネシウムが含まれる。
【０１８５】
腸溶コーティング剤は、酸性pHで実質的に不溶性であり、かつ弱酸性pH〜塩基性pHの範囲で少なくとも部分的に可溶性である腸溶性重合体である。酸性pHの範囲は、約0.5〜約4.5、好ましくは約1.0〜約2.0である。弱酸性pH〜塩基性pHの範囲は、約5.0〜約9.0、好ましくは約6.0〜約7.5である。特に、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルアセテートスクシネート(Shin-Etsu Chemicals)、メタクリル酸共重合体（Rhon-Pharma, Eudragit（登録商標）L-30D-55、L100-55、L100、S100等）等が、腸溶コーティング剤の例として挙げられる。これらの材料は、腸溶性組成物として直接使用された場合ですら、安定性に関して有効である。
【０１８６】
ミセル形成の場合には、例えば、約0.01μm〜約1000μm、またはより好ましくは約0.01〜約5μm（約10nm〜約5,000nm）の粒径を有する球状の微粒子が生成される。この形成は、実施例に開示されるか、または日本特許出願JP-A-223533/1991に開示されるような方法によって実施され得る。いくつかの態様において、約50〜500nm、例えば、約50〜100nm、100〜150nm、150〜200nm、200〜250nm、250〜300nm、300〜350nm、350〜400nm、450〜500nmのミセルが、本明細書に開示されるような組成物において有用である。いくつかの態様において、実施例に開示されるように、ミセルは約130nmである。
【０１８７】
組成物中のMetAP-2阻害剤の濃度または含量は、組成物の物理化学的特性によって適切に選択され得る。組成物が液状である場合、濃度は約0.0005〜30％(w/v)、好ましくは約0.005〜約25％(w/v)である。組成物が固形である場合、含量は約0.01〜約90％(w/w)、好ましくは約0.1〜約50％(w/w)である。
【０１８８】
必要であれば、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、エチルアルコール、塩化ベンザルコニウム、フェノール、クロロブタノール等）、抗酸化剤（例えば、ブチルヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル、パルミチン酸アスコルビル、アルファ-トコフェロール等）、および濃化剤（例えば、レシチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ステアリン酸アルミニウム等）のような添加剤が、本明細書に開示されるような組成物および製剤において使用され得る。
【０１８９】
記載されたようなジブロック共重合体結合体は、一般に、さらなる乳化剤を必要としないことが注意される。にも関わらず、必要であれば、本明細書に開示されるような組成物および製剤と共に付加的な乳化剤を使用してもよい。使用され得る乳化剤の例には、薬学的に許容されるリン脂質および非イオン性界面活性剤が含まれる。乳化剤は、個々に、または二種以上の組み合わせで使用され得る。リン脂質には、天然に存在するリン脂質、例えば、卵黄レシチン、大豆レシチン、およびそれらの水素化生成物、ならびに合成リン脂質、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン等が含まれる。それらのうち、卵黄レシチン、大豆レシチン、および卵黄または大豆に由来するホスファチジルコリンが好ましい。非イオン性界面活性剤には、ポリエチレン-プロピレン共重合体、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル、水素化ヒマシ油-ポリオキシエチレン誘導体、ポリオキシエチレンソルビタン誘導体、ポリオキシエチレンソルビトール誘導体、ポリオキシエチレンアルキルエーテルスルフェート等のような、約800〜約20000の範囲の分子量を有する高分子界面活性剤が含まれる。乳化剤の割合は、最終的な投与可能な組成物における濃度が、約0.1〜約10％、好ましくは約0.5〜約5％の範囲になるよう選択される。
【０１９０】
前記成分に加えて、抗酸化剤またはキレート化剤のような、本明細書に開示されたような組成物および製剤の安定性をさらに改善するための安定剤、重量モル浸透圧濃度を調整するための等張化剤、乳化力を改善するための補助的乳化剤、および／または乳化剤の安定性を改善するための乳化安定剤が、組み入れられ得る。使用され得る等張化剤には、例えば、グリセリン、糖アルコール、単糖、二糖、アミノ酸、デキストラン、アルブミン等が含まれる。これらの等張化剤は、個々に、または二種以上の組み合わせで使用され得る。使用され得る乳化安定剤には、コレステロール、コレステロールエステル、トコフェロール、アルブミン、脂肪酸アミド誘導体、多糖、多糖脂肪酸エステル誘導体等が含まれる。
【０１９１】
本明細書に開示されるような組成物および製剤は、水への曝露により現れる粘性のために消化管粘膜に付着することができる粘性発生（viscogenic）物質をさらに含み得る。粘性発生物質の例には、重合体（例えば、アクリル酸およびそれらの塩の重合体または共重合体）および天然に存在する粘性発生物質（例えば、ムチン、寒天、ゼラチン、ペクチン、カラゲーニン、アルギン酸ナトリウム、イナゴマメゴム、キサンタンゴム、トラガカントゴム、アラビアゴム、キトサン、プルラン、ロウ様デンプン、スクラルファート、カードラン、セルロース、およびそれらの誘導体）が含まれるが、薬学的に許容される限り、特にこれらに限定されない。さらに、活性薬物の放出の制御のため、または製剤目的のため、経口組成物の調製のために従来使用されている添加剤が添加され得る。添加剤の例には、賦形剤（例えば、ラクトース、コーンスターチ、タルク、結晶セルロース、糖粉末、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、軽質無水ケイ酸、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、L-システイン等）、結合剤（例えば、デンプン、スクロース、ゼラチン、アラビアゴム粉末、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、プルラン、デキストリン等）、崩壊剤（例えば、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスカルメロースナトリウム等）、陰イオン性界面活性剤（例えば、アルキル硫酸ナトリウム等）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン-ヒマシ油誘導体等）、制酸剤および粘膜保護剤（例えば、水酸化マグネシウム、酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、硫酸アルミニウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、ケイ酸アルミン酸マグネシウム、スクラルファート等）、シクロデキストリンおよび対応するカルボン酸（例えば、マルトシル-ベータ-シクロデキストリン、マルトシル-ベータ-シクロデキストリン-カルボン酸等）、着色剤、矯昧剤、吸着剤、防腐剤、保湿剤、帯電防止剤、崩壊遅延剤等が含まれる。これらの添加剤の割合は、基剤の安定性および吸収を維持することができる範囲から、適切に選択され得る。
【０１９２】
本発明の経口投与用の本明細書に開示されるような組成物および製剤は、風味剤も含み得る。そのような薬剤には、例えば、アニス油、ラベンダー油、レモン油、オレンジ精油、バラ油、粉末緑茶、ベルガモット油、(アルファ[litre])ボルネオール、ナチュラルピールエキストラクト（Natural Peal Extract）AH-10、糖、ビターエッセンス（bitter essence）、マツ香料等が含まれる。
【０１９３】
ミセル、例えば、約0.1nm〜約1000nmの粒径を有する球状微粒子の形成の場合、この形成は、当技術分野において公知の方法によって達成され得る（例えば、JP-A-223533/1991）。いくつかの態様において、50〜500nm、例えば、約50〜100nm、100〜150nm、150〜200nm、200〜250nm、250〜300nm、300〜350nm、350〜400nm、450〜500nmのミセルが、本明細書に開示されるような組成物において有用である。いくつかの態様において、ミセルは、実施例に開示されるように、約130nmである。
【０１９４】
本明細書に開示されるような組成物および製剤は、低い毒性と共に強力な薬理学的活性を示すことができ、従って、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、サル、ウシ、イヌ、ヒト等）における、とりわけ、MetAP-2関連疾患の防止および処置のための薬として有用である。該MetAP-2関連疾患には、例えば、（1）関節リウマチのような炎症性疾患、（2）糖尿病性網膜症、ならびに（3）良性および悪性の腫瘍（例えば、胃癌、食道癌、十二指腸癌、舌癌、咽頭癌、脳腫瘍、神経鞘腫、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝癌、腎臓癌、乳癌、胆道癌、膵臓癌、前立腺癌、子宮癌、子宮頚癌、卵巣癌、膀胱癌、皮膚癌、悪性黒色腫、甲状腺癌、骨肉腫、血管腫、血管繊維腫、網膜肉腫、陰茎癌、小児固形腫瘍、エイズにおけるカポジ肉腫等（再発および他の器官への転移を含む））、特発性肺線維症または嚢胞性繊維症のような繊維性疾患が含まれる。本明細書に開示されるような組成物および製剤の剤形が、長期にわたり活性物質の副作用の発現を引き起こさないか、または腎臓によるもしくはその他のクリアランス機序の欠如による長期の血中循環もしくは器官組織への沈着による新たな副作用に寄与しない範囲の有効血中濃度を保証する場合、それは特に有用である。
【０１９５】
一般に、本明細書に記載されたフマギロール誘導体ジブロック共重合体製剤が、経口で有効であるために、腸溶コーティングは必要とされない。しかしながら、安定性の見地から、本明細書に開示されるような組成物および製剤が、腸溶性組成物としての使用のため上述のような腸溶コーティング剤によりコーティングされたカプセルシェルに充填されることは、有利であり得る。カプセルシェルとしては、例えば、軟カプセル（例えば、R. P. Sealerの製品）および硬ゼラチンカプセルが使用される。
【０１９６】
本明細書に開示されるような液状または固形の組成物および製剤は、経口投与され得る。液状の場合、それは、例えば、組成物のエリキシル剤もしくは懸濁剤を飲むことにより、または、別法として、経口投与用のカテーテルもしくはゾンデを介して、消化管へ直接投与されてもよいし、または硬カプセル剤もしくは軟カプセル剤の単位剤形で通常の様式で投与されてもよい。固形の場合、それは、通常の様式で、散剤、カプセル剤、錠剤等として経口投与され得る。それは、適当な分散媒に再分散させられ、液状で投与されてもよい。乳癌の患者（体重：50kg）を例とすると、本明細書に開示されるような組成物の経口用量は、約1mg〜約3g/日、好ましくは約10mg〜約1g/日のMetAP-2阻害剤である。いくつかの態様において、本明細書に開示されるような組成物の経口用量は、約25mg〜約1g/日の範囲内であり、いくつかの態様において、25mg〜1g/日未満、例えば、約10mg〜約0.5g/日のMetAP-2阻害剤である。
【０１９７】
本明細書に開示されるような組成物および製剤は、MetAP-2阻害剤の体内分布、安定性、および取り込みの特性を増強し、それらの薬理学的活性を増加させ、従って、非経口投与を必要とすることなく、治療効力のより良好な保証が達成される。本明細書に開示されるような組成物および製剤の剤形は、安定しており、経口投与において増殖活性に対する注目すべき阻害活性を示し、従って、臨床的に有利な経口薬として使用され得る。
【０１９８】
懸濁剤は、活性成分に加えて、懸濁化剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、およびソルビタンエステル、微晶質セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、およびトラガカントゴム、またはこれらの物質の混合物等を含有し得る。
【０１９９】
妥当な流動度は、例えば、レシチンのようなコーティング材料の使用により、分散の場合には必要とされる粒径の維持により、そして界面活性剤の使用により、維持され得る。
【０２００】
一つの態様において、特に、脳および関連器官（例えば、髄膜および脊髄）の治療において使用する場合、送達は組成物の鼻腔内投与による。これらの系と共に、眼内投与も可能である。適当な製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th and 18th Eds., Mack Publishing, Easton, Pa. (1980 and 1990)およびIntroduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4th Edition, Lea & Febiger, Philadelphia (1985)（各々、参照により本明細書に組み入れられる）に見出され得る。
【０２０１】
一つの態様において、本発明は、本明細書に開示されるような製剤および組成物がタキソール、シクロホスファミド、シスプラチン、ガンシクロビル等のような化学療法剤と組み合わせて使用される組み合わせ治療を包含する。化学療法剤は、本明細書に記載されるようなミセルに含まれていてもよい。そのような治療は、処置される対象または患者が、よく血管新生した大きい既存の腫瘤を有する状況において、特に有用である。化学療法剤は、腫瘤を低下させるために役立ち、結合体は腫瘤の内部または周囲の血管新生を防止または阻害する。化学療法剤は、通常使用される用量より低い用量でも投与され得、そのような用量において、抗増殖剤として作用するかもしれない。第二の治療は、本明細書に開示されるような組成物の投与と比べて先に、間に、後に、またはそれらの組み合わせで、対象に投与され得る。抗増殖治療は当技術分野において周知であり、本発明の方法において使用するために包含される。治療には、アルキル化剤、細胞分裂阻害剤、抗生物質、または代謝拮抗薬、抗血管形成剤等が含まれるが、これらに限定はされない。そのような化学療法には、CPT-11、テモゾロマイド、またはプラチン化合物の投与が含まれ得る。放射線療法には、例えば、X線照射、w照射、γ照射、またはマイクロ波が含まれ得る。
【０２０２】
「化学療法剤」（"chemothaerapeutic agent"または"chemothaerapy agent"）という用語は、本明細書において交換可能に使用され、癌および新生物、例えば、脳腫瘍および神経膠腫の処置において使用され得、そのような障害を処置することができる薬剤をさす。いくつかの態様において、化学療法剤は、細胞障害性の型へと活性化され得るプロドラッグの形態をとっていてもよい。化学療法剤は、当業者に一般的に公知であり、本発明において使用するために包含される。例えば、腫瘍および神経膠腫の処置のための化学療法薬には、テモゾロマイド（Temodar）、プロカルバジン（Matulane）、およびロムスチン（CCNU）が含まれるが、これらに限定はされない。静脈内に（IVにより、血管に挿入された針を介して）与えられる化学療法には、ビンクリスチン（OncovinまたはVincasar PFS）、シスプラチン（Platinol）、カルムスチン（BCNU、BiCNU）、およびカルボプラチン（Paraplatin）、メトトレキサート（RheumatrexまたはTrexall）、イリノテカン（CPT-11）；エルロチニブ；オキサリプラチン；アントラサイクリン-イダルビシンおよびダウノルビシン；ドキソルビシン；メルファランおよびクロラムブシルのようなアルキル化剤；シスプラチナム（cis-platinum）、メトトレキサート、ならびにビンデシンおよびビンブラスチンのようなアルカロイドが含まれる。
【０２０３】
もう一つの態様において、本発明は、本明細書に開示されるような製剤および組成物が、細胞分裂阻害剤、抗VEGF、および／またはp53再活性化剤と組み合わせて使用される組み合わせ治療を包含する。細胞分裂阻害剤とは、細胞の成長および増幅を阻害または抑制することができる薬剤である。癌の処置において使用される細胞分裂阻害剤の例には、パクリタクセル、5-フルオロウラシル、5-フルオロウリジン、マイトマイシン-C、ドキソルビシン、およびゾタロリムスが含まれる。その他の癌治療薬には、マリマスタットのようなマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、増殖因子アンタゴニスト、シグナル伝達阻害剤、およびプロテインキナーゼC阻害剤が含まれる。
【０２０４】
もう一つの態様において、本明細書に記載された方法は、抗VEGF剤と併せて投与される。抗VEGF剤のいくつかの例には、ベバシズマブ（Avastin（商標））、VEGF Trap、CP-547,632、AG13736、AG28262、SU5416、SU11248、SU6668、ZD-6474、ZD4190、CEP-7055、PKC412、AEE788、AZD-2171、ソラフェニブ、バタラニブ、ペガプタニブ八ナトリウム、IM862、DC101、アンギオザイム（angiozyme）、Sirna-027、カプロスタチン、ネオバスタット、ラニビズマブ、サリドマイド、およびアスペルギルス・フミガーツスにより分泌される血管阻害化合物フマギリン（別名：アメバシリン（Amebacilin）、フギリン（Fugillin）、フマジル（Fumadil）B、フマジル）（A. G. Scientific, catalog #F1028）の合成アナログであるAGA-1470が含まれる。
【０２０５】
本明細書において使用されるように、「抗VEGF剤」という用語は、VEGF受容体タンパク質の機能の阻害を含む、VEGFタンパク質の機能の阻害により、細胞の成長、増殖、および生存を促進するシグナル伝達経路に対して直接の効果を生ずる化合物または薬剤をさす。「薬剤」または「化合物」という用語は、本明細書において使用されるように、アンチセンス核酸のような修飾された核酸および未修飾の核酸、siRNAまたはshRNAのようなRNAi剤、ペプチド、ペプチドミメティック、受容体、リガンド、ならびに抗体を含む、有機または無機の分子を意味する。好ましいVEGF阻害剤には、例えば、AVASTIN（登録商標）（ベバシズマブ）、Genentech, Inc.（South San Francisco, CA）の抗VEGFモノクローナル抗体、VEGF Trap（Regeneron/Aventis）が含まれる。付加的なVEGF阻害剤には、CP-547,632（3-(4-ブロモ-2,6-ジフルオロベンジルオキシ)-5-[3-(4-ピロリジン1-イルブチル)-ウレイド]-イソチアゾール-4-カルボン酸アミド塩酸塩；Pfizer Inc., NY）、AG13736、AG28262（Pfizer Inc.）、SU5416、SU11248、およびSU6668（元Sugen Inc.、現在はPfizer, New York, New York）、ZD-6474（AstraZeneca）、VEGF-R2およびVEGF-R1を阻害するZD4190（AstraZeneca）、CEP-7055（Cephalon Inc., Frazer, PA）、PKC412（Novartis）、AEE788（Novartis）、AZD-2171）、NEXAVAR（登録商標）（BAY43-9006、ソラフェニブ；Bayer PharmaceuticalsおよびOnyx Pharmaceuticals）、バタラニブ（PTK-787、ZK-222584としても公知：Novartis & Schering：AG）、MACUGEN（登録商標）(ペガプタニブオクタソディウム（pegaptanib octasodium）、NX-1838、EYE-001、Pfizer Inc./Gilead/Eyetech）、IM862（グルファニドジソディウム（glufanide disodium）、Cytran Inc. of Kirkland, Washington, USA）、VEGFR2選択的モノクローナル抗体DC101（ImClone Systems, Inc.）、Ribozyme（Boulder, Colorado）およびChiron（Emeryville, California）の合成リボザイムであるアンギオザイム、Sirna-027（siRNAに基づくVEGFR1阻害剤、Sirna Therapeutics, San Francisco, CA）、Caplostatin、VEGF受容体の可溶性外部ドメイン、Neovastat（AEterna Zentaris Inc； Quebec City, CA)、ならびにそれらの組み合わせが含まれる。
【０２０６】
さらにもう一つの態様において、本発明は、本明細書に開示されるような製剤および組成物が、関節リウマチ、肥満、子宮内膜症、特発性肺線維症（IPF）、ループス、およびアルツハイマー病の処置において使用される治療薬、理学療法、および／または行動精神療法と組み合わせてまたは併せて使用される組み合わせ治療を包含する。
【０２０７】
関節リウマチの処置の例としては、アスピリンおよび（イブプロフェンまたはナプロキセンのような）非ステロイド性抗炎症薬またはNSAIDSを含む、疼痛および局所炎症を減少させる治療薬、ならびに異常な滑膜組織（関節の内側を裏打ちしている組織）の成長を減少させながら疼痛および炎症を減少させるその他の免疫抑制薬が存在する。これらの薬物には、メトトレキサートおよび低用量の（プレドニゾンまたはコルチゾンのような）副腎皮質ステロイドが含まれる。関節リウマチを処置するために使用されるその他の薬物治療には：（ヒドロキシクロロキンのような）抗マラリア薬物治療、金、スルファサラジン、ペニシラミン、シクロホスファミド、シクロスポリン、ミノサイクリン、インターロイキン受容体アンタゴニスト、および抗IL2抗体が含まれる。
【０２０８】
特定の態様において、本明細書に開示されるような製剤および組成物は、参照により本明細書に完全に組み入れられる国際出願WO2003/086178ならびに米国特許出願US2005/0203013およびUS2005/0112063に開示されるような、非増殖性糖尿病性網膜症および腎症のような糖尿病の血管合併症、ネフローゼ症候群、肺高血圧、熱傷浮腫、腫瘍浮腫、脳腫瘍浮腫、IL-2治療関連浮腫およびその他の浮腫関連疾患のような血管透過性に関連した疾患の処置のために使用される治療と併せて投与するために特に有用である。特定の態様において、本明細書に開示されるような製剤および組成物は、国際出願WO2003/086178ならびに米国特許出願US2005/0203013およびUS2005/0112063に開示されるような、IL-2治療の制限因子がIL-2治療関連浮腫であるような場合に、IL-2治療と併せて投与するために特に有用である。
【０２０９】
アルツハイマー病のための処置には、非ステロイド性抗炎症薬（NSAID）、エストロゲン、プレドニゾンのようなステロイド、ビタミンE、メマンチン、ドネペジル、リバスチグミン、タクリン、およびガランタミンが含まれるが、これらに限定はされない。ホリスティック薬には、ギンナン抽出物のような例が含まれる。
【０２１０】
子宮内膜症の処置には、組み合わせ経口避妊薬（エストロゲン＋プロゲスチン）、（メドロキシプロゲステロンのような）プロゲスチン、ダナゾール（テストステロンに関連した合成ホルモン）、性腺刺激ホルモン放出ホルモンアゴニスト（ブセレリン、ゴセレリン、リュープロリド、およびナファレリンのようなGnRHアゴニスト）、ならびに疼痛管理のための非ステロイド性抗炎症薬（NSAID）が含まれるが、これらに限定されると解釈されるべきではない。
【０２１１】
肥満のための処置オプションの例には、食事制限および栄養的助言、運動計画、胃バイパス手術、ならびにフェンフルラミンとフェンテルミンとの組み合わせ（しばしば、フェンフェンと呼ばれる）、オーリスタット、シブトラミン、フェンテルミン、ベンズフェタミン、ジエチルプロピオン、マチンドール、およびフェンジメトラジンのような薬物が含まれる。
【０２１２】
別の態様において、製剤および組成物は、いくつかのミセルがMetAP-2阻害剤を含んでおり、他のミセルが他の治療剤、例えば、化学療法剤および抗新生物剤を含んでいる、複数のミセルを含むことができる。
【０２１３】
対象へ投与される際の本明細書に開示されるような薬学的組成物の量は、当然、処置される対象、罹患の重度、投与の様式、処方する医師の判断等に依存するであろう。
【０２１４】
製剤および薬学的組成物は、所望により、ターゲティング部分および免疫応答誘発部分を含有している担体部分を含有している一つまたは複数の単位剤形を含有し得る、FDA承認キットのような、適当なコンテナ（例えば、パックまたはディスペンサー装置）で提示され得る。
【０２１５】
増殖アッセイ
一般に、当業者は、所定の薬剤、例えば、フマギロール誘導体が抗増殖剤または抗血管形成剤であるか否かを承知しているであろう。疑問の回避のため、増殖または血管形成に対する所定の薬剤の影響を評価するための多数のインビトロまたはインビボのアッセイのうちのいずれかを使用することができる。本発明に係るMetAP-2阻害剤ブロック共重合体結合体を含む組成物または製剤が、血管形成により媒介される状態に関連した疾患を処置または防止し得るか否かは、下記実施例に示されるようなマウスモデルにおけるその効果により決定され得る。しかしながら、少なくとも、本明細書に記載されるようなMetAP-2阻害剤ブロック共重合体は、本明細書中の実施例に記載されるようなHUVECアッセイにおいて抗増殖活性（即ち、TNP-470の抗増殖活性の少なくとも50％）を有するであろう。
【０２１６】
本明細書に開示されたような組成物および製剤が、抗増殖活性または抗血管形成活性を有するか否かを決定するためのもう一つの有用なアッセイは、比較的容易であり、比較的迅速な結果を提供するため、内皮細胞増殖調節因子の効果を評価するために高頻度に使用されているCAMアッセイである。本明細書に記載された方法および組成物において有用な増殖調節因子は、Iruela-Arispe et al., 1999, Circulation 100: 1423-1431により記載された修飾CAMアッセイにおいて微小血管の数を修飾するであろう。この方法は、CAM上に置かれたコラーゲンゲルペレットへの新たな毛細血管の垂直の成長に基づく。Iruela-Arispeらにより記載されたようなアッセイにおいては、試験薬剤の存在下または非存在下で、コラーゲンゲルにFGF-2（50ng/ゲル）またはVEGF（250ng/ゲル）のような増殖因子を補足する。増殖応答の程度を、CAMの循環系に注入されたFITC-デキストラン（50μg/mL）（Sigma）を使用して測定する。蛍光強度の程度は、毛細管密度の変動に平行する；この相関の直線性は、5〜540の毛細管の範囲で観察され得る。例えば、CCDカメラによる画像の取得により、形態測定分析を実施する。次いで、画像を分析パッケージ、例えば、NHImage 1.59へインポートすることにより分析し、蛍光強度の測定を陽性ピクセルとして入手する。各データポイントを、同一CAM中に存在する自己の陽性対照および陰性対照と比較し、陽性対照（VEGFまたはFGF-2のみ）を100％と見なし、陰性対照（媒体のみ）を0％と見なして、阻害率として解釈する。群がランダム群と有意に異なるか否かをチェックするため、例えば、Yatesの補正による偶発性の分析により、データの統計的評価を実施する。
【０２１７】
血管形成性の増殖をモニタリングするために特別に設計された付加的なアッセイを含む付加的な増殖アッセイが、当技術分野において公知であり、本明細書に記載された方法および組成物において使用するためのMetAP-2阻害剤を評価するために使用され得る。これらには、例えば、角膜マイクロポケットアッセイ、ハムスター頬嚢アッセイ、マトリゲルアッセイおよびその変法、ならびに共培養アッセイが含まれる。Donovanらは、ヒト背景で血管形成調節剤を評価するために開発された三種の異なるインビトロアッセイの比較を記載している（参照により本明細書に組み入れられるDonovan et al., 2001, Angiogenesis 4: 113-121）。簡単に説明すると、調査されたアッセイには、以下のものが含まれる：（1）低継代数ヒト内皮細胞（ヒト臍静脈内皮細胞、HUVEC）が、血管形成調節剤を含む、または含まないマトリゲル（Becton Dickinson, Cedex, France）でコーティングされたウェルに播種される基本的なマトリゲルアッセイ；（2）「増殖因子低下（growth factor reduced）」またはGFRマトリゲルを使用する類似したマトリゲルアッセイ；および（3）初代ヒト繊維芽細胞およびHUVECが、付加的な血管形成調節剤と共に、または調節剤なしで共培養され、繊維芽細胞が、HUVECの分化および細管形成を支持する細胞外マトリックスおよびその他の因子を産生する共培養アッセイ。Donovanらの論文において、共培養アッセイは、インビボの微小血管ネットワークに最も精密に類似した微小血管ネットワークを提供した。しかしながら、基本的なマトリゲルアッセイおよびGFRマトリゲルアッセイも、所定のフマギロール誘導体が、本明細書に記載された方法および組成物に必要であるような血管形成阻害剤であるか否かを評価するため、当業者によって使用され得る。最後に、インビトロ血管形成アッセイキットは、Chemicon(Millipore)より市販されている。Fibrin Gel In Vitro Angiogenesis Assay KitはChemicon Catalog No. ECM630である。
【０２１８】
他の増殖アッセイは、国際出願WO2003/086178ならびに米国特許出願US2005/0203013およびUS2005/0112063に開示されており、透過性基質（例えば、「Transwells」のコラーゲンによりコーティングされたインサート）上で内皮細胞をアッセイし、アッセイを試験化合物（例えば、フマギロール誘導体ブロック共重合体結合体）と接触させ、アッセイをマーカー（例えば、FITC標識）ならびに透過性誘導剤（例えば、とりわけ、血管内皮増殖因子（VEGF）および血小板活性化因子（PAP））で処理し、対照と比較してマーカーの拡散速度を測定することを含む。血管透過性に影響を与えることが見出された化合物は、さらに、既存の方法を使用して、抗増殖活性について試験され得る。そのようなブロック共重合体結合体で処置されている患者における、抗増殖性または抗血管形成性の薬剤としてのMetAP-2阻害剤ブロック共重合体結合体の生物学的有効性は、例えば、国際出願WO2003/086178ならびに米国特許出願US2005/0203013およびUS2005/0112063に開示されるような、当業者に一般的に公知の方法により査定され得る。一つのアプローチは、対象をMetAP-2ブロック共重合体結合体により処置する前に、ヒスタミンの皮内注射を患者に投与し、ヒスタミンにより誘導された局所浮腫を測定することを含む。次いで、対象をMetAP-2阻害剤ブロック共重合体結合体により処置し、MetAP-2阻害剤ブロック共重合体結合体による対象の処置の後、再びヒスタミンの皮内注射を対象に投与し、ヒスタミンにより誘導された局所浮腫を測定すること。MetAP-2阻害剤ブロック共重合体結合体による処置の前に見られたものと比較した、ヒスタミンにより誘導された局所浮腫の測定の減少は、化合物が生物学的に有効であることを示す。
【０２１９】
非増殖性糖尿病性網膜症を防止または処置することができる本明細書に開示されるような組成物または製剤は、内皮細胞増殖のインビトロ研究により、そしてストレプトゾトシンのような糖尿病性網膜症の他のモデルにおいて試験され得る。さらに、カラードプラ画像法が、眼の病理における薬物の作用を評価するために使用され得る（Valli et al., Ophthalmologica 209(13): 115-121 (1995)）。カラードプラ画像法は、構造の二次元画像化および血流の評価を同時に可能にする超音波法における最近の進歩である。従って、網膜症は、そのような技術を使用して分析され得る。本明細書に開示されるような組成物および製剤が投与される様式は、非増殖性網膜症を含む血管透過性亢進に関連した疾患の処置が、予防的であるか、または治療的であるか、に一部依存する。例えば、本明細書に開示されるような組成物および製剤が網膜症の処置のために投与される様式は、網膜症の原因に、一部、依存する。特に、糖尿病は網膜症の主要な原因であるため、前糖尿病性網膜症状態が検出されるや否や、本明細書に開示されるような組成物および製剤が防止的に投与され得る。
【０２２０】
本発明は、本明細書に記載された特定の方法論、プロトコル、試薬等に限定されず、従って、変動し得ることが理解されるべきである。本明細書において使用される用語は、特定の態様を記載することのみを目的とし、特許請求の範囲によってのみ定義される本発明の範囲を制限するためのものではない。
【０２２１】
実施例または特記された場合を除き、本明細書において使用される要素の量または反応条件を表す全ての数字が、必ず、「約」という用語により修飾されるものと理解されるべきである。割合に関して使用された場合、「約」という用語は、±1％を意味し得る。以下の実施例により、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の範囲はそれらに限定されるべきではない。
【実施例】
【０２２２】
実施例
本明細書に提示された実施例は、経口投与または別の投与のためのMetAP-2阻害剤の方法、組成物、および製剤に関する。本願の全体にわたって、様々な刊行物が参照される。刊行物およびそれら刊行物内に引用された参照、全ての開示が、本発明が関する技術の状態をより完全に記載するため、参照により完全に本願に組み入れられる。以下の実施例は、特許請求の範囲の範囲を本発明に限定するためのものではなく、ある種の態様を例示するためのものである。当業者に想到される例示された方法の任意の変動が、本発明の範囲内に含まれるものとする。
【０２２３】
方法
略語：
mPEG-PLA＝メトキシ-ポリ(エチレングリコール)-ポリ(乳酸)、Suc＝コハク酸化（succinated）；EDC＝エチル(ジエチルアミノプロピル)カルボジイミド；NHS＝N-ヒドロキシスクシンイミド；en＝エチレンアミン；DDW＝二重蒸留水；DMF＝ジメチルホルムアミド；DMSO＝ジメチルスルホキシド。
【０２２４】
動物
全ての動物手法がBoston Children's Hospitalの指針に準じて実施され、プロトコルはInstitutional Animal Care and Use Committeeにより承認された。
【０２２５】
TNP-470のLog D測定
水溶性は、薬物の経口吸収に影響を与える重要な化学的特性のうちの一つである。TNP-470の腸吸収を予測するため、本発明者らは、25℃におけるオクタノール中の薬物濃度と水中の薬物濃度との比率により決定される疎水性パラメーターであるLog-D値を測定した（Analiza, Cleveland OH）。高いLog-D値（＞2）は、低い水溶性を示し、従って、薬物の乏しい経口利用可能性を示す。この研究のため、TNP-470（30mM）のLog-D値を、血漿および胃のpH：それぞれ、pH＝7.4およびpH＝2で測定した。
【０２２６】
PEG-PLA-MetAP-2ポリマーソーム（重合体ミセル）の調製
公知のMetAP-2阻害剤TNP-470（Takeda）を、その活性、疎水性、および乏しい薬物動態学的プロファイル（Placidi, Cancer Res. 55, 3036-3042 (1995)参照）のために選び、二工程結合を使用して、ジブロック共重合体に結合させた（図6A）。第一工程において、遊離型のカルボン酸末端基を有するコハク酸化モノメトキシ-ポリ(エチレングリコール)ポリ(乳酸)（mPEG2000-PLA1000）（Advanced Polymers Materials Inc.）を、エチレンジアミン（Sigma-Aldrich）と反応させた。コハク酸化mPEG-b-PLA-OOCCH2CH2COOH（500mg）をDMSOに溶解させ、1:10:20（それぞれ、重合体：EDC：NHS）のモル比で、エチル(ジエチルアミノプロピル)カルボジイミド（EDC）およびN-ヒドロキシスクシンイミド（NHS）と反応させた。別のアプローチにおいては、同一の量のコハク酸化mPEG-b-PLA-OOCCH2CH2COOHが、pH6で、10mlのMES緩衝液に溶解させられ、触媒はN-ヒドロキシスクシンイミド（スルホ-NHS）である。5倍モル過剰のエチレンジアミンを添加し、25℃で4時間反応させた。次いで、重合体溶液をDMSOに対して透析したところ（MWCO1000, Spectra/Por Biotech Regenerated Cellulose VWR）、65％の反応効率が得られた。第二工程において、アミン含有重合体をTNP-470（350gr）と混合し、DMSOに溶解させ、溶液を25℃で4時間撹拌した。再生セルロース透析バッグ（MWCO1000, Spectra/Por Biotech Regenerated Cellulose, VWR）を使用して、二重蒸留水に対して結合体のDMSO溶液を透析することにより、重合体ミセルを形成させたところ、高い取り込み効率（＞90％）を有するミセルおよび0.8〜1％(w/w)の遊離型薬物が得られた。次いで、ミセルを凍結乾燥し、使用時まで、乾燥環境で-20℃で保存した。
【０２２７】
ローダミン標識重合体ミセルを、類似したプロトコルを使用して形成させた。mPEG-PLAを、DMSO中で、N末端アミン基を介して、Lissamine rhodamine B sulfonyl chloride（Molecular Probes, Eugene, OR）と結合した。緑色蛍光重合体ミセルについては、一般的に使用されている疎水性マーカー6-クマリン（Sigma-Aldrich, MO, USA）を、最終透析工程の前に、0.1％w/wで重合体溶液に添加した。
【０２２８】
NMR分析による結合の特徴決定
各反応工程について核磁気共鳴（NMR）分光計分析（NERCE/BEID, Harvard Medical School）を実施し、質量分析法（Proteomic core, Harvard Medical School）を結合体に対して実施した。エチレンジアミンのmPEG-PLAとの結合（第一反応工程、図6A）およびTNP-470のアミンを介した重合体との結合（第二工程、図6A）の効率を評価するため、本発明者らは、比色定量アミン検出試薬を使用した：2,4,6-トリニトロベンゼンスルホン酸（TNBSA）（Pierce, Rockford IL）を使用した。TNBSAは一級アミンと反応して黄色の生成物を生じ、その強度が450nmで測定される。重合体中のアミン濃度を計算するため、アミノ酸の直線較正曲線を使用した。重合体ミセルへのTNP-470負荷を測定するため、本発明者らは、PLA分解を加速する500μl NaOH（0.1N）において10mg/mlのロダミンをインキュベートした。37℃で振とうしながら（100r.p.m）一夜インキュベートした後、本発明者らは、試料にアセトニトリルを添加し（1:1 NaOH：アセトニトリル）、TNP-470の濃度について分析した。TNP-470濃度は、高速液体クロマトグラフィ系（HPLC, System Gold（登録商標）Microbore, Beckman Coulter）を使用して測定された。各試料の一部20μlを、Nova-pak C18カラム（3.9×150mm i.d.：Waters）に注入し、TNP-470の較正曲線を使用して分析した。TNP-470のアミンとの結合も、TNBSA試薬を使用して測定し、反応に添加された全薬物から未結合薬物を差し引くことにより確認した。
【０２２９】
アミン決定
エチレンジアミンの重合体との結合の第一工程、および遊離型アミンによるTNP470結合反応の第二工程を、2,4,6-トリニトロベンゼンスルホン酸（TNBSA）試薬（Pierce, Rockford IL）を使用して、さらに確証した。TNBSAは、遊離型アミノ基とカップリングし、高度に色素生産性の誘導体を形成することができる高感度のアッセイ試薬である。反応は、0.1M重炭酸ナトリウム緩衝液中の0.01％(w/v)TNBSAの添加の後に実施された。TNP-470結合の前後の一連のPEG-PLA重合体濃度を、37℃で2時間TNBSAと反応させ、黄色の色をプレートリーダを使用して測定した。
【０２３０】
アミンモル濃度と450nmにおける色吸収との間の相関を、アスパラギン酸について行われた標準曲線によって決定した。
【０２３１】
細胞培養
マウスルイス肺癌（LLC）およびB16/F10黒色腫細胞を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）（ATCC, Manassas, VA, USA）から入手した。ヒト臍血管内皮細胞（HUVEC）を、Cambrex （USA）から購入した。製造業者により推奨されるような培地において細胞を培養し、維持した。腫瘍細胞については、10％ウシ胎仔血清を含むダルベッコ修飾イーグル培地を使用し、HUVECについては、2％ウシ胎仔血清およびEGM-2の補足を含有しているEMB-2（Cambrex Bio Science Walkersville, Inc.）を使用した。
【０２３２】
HUVEC増殖アッセイ
HUVECを、50〜1,000nM 遊離型TNP-470（0.12〜2.4mg/mlミセル）に等しい異なる濃度のロダミンに曝し、37℃で48時間、低血清培地中でインキュベートした。担体の可能性のある細胞障害効果を排除するために、空ミセルを対照としてHUVECに添加した（4.8mg/ml）。WST-1増殖アッセイ（Roche Diagnostics）を使用した。細胞生存性を、未処理細胞に対する、処理された細胞の450nmにおけるホルマザン吸光度の割合として計算した。データは2回の別々の実験における4連の試料に由来した。HUVEC成長速度に対するロダミン（60nM TNP-470当量、隔日）の効果を、5日目まで毎日HUVEC細胞を計数することにより評価し、未処理細胞または媒体（ロダミンと同一の濃度）で処理された細胞の数と比較した。
【０２３３】
重合体ミセルのHUVECによる取り込みおよびその細胞内局在
HUVECによる重合体ミセルの取り込みを評価するため、6-クマリン標識PEG-PLAミセルまたはmPEG-PLAと結合したローダミンを使用した。HUVECを、EGM-2培地（Cambrex）で24穴プレートに播種し（1ウェル当たり2×104）、一夜付着させた。蛍光標識ミセル（10mg/ml）を、5分間、超音波処理機（bath sonicator）上で懸濁させ、懸濁物20μlを培養細胞に添加した。指定された時点（20分、2時間、4時間、7時間、および24時間）の後、細胞をPBSで3回洗浄し、フローサイトメトリーにより分析するか、または4％パラホルムアルデヒドで固定した。共焦点顕微鏡検のため、細胞をDAPI含有Vectashild（Vector, Laboratories, Burlingame, CA）を使用してマウントした。光学的切片を、488nmアルゴン、543nm HeNe、および405nmダイオードレーザーを装備したLeica TCS SP2 AOBS a x40対物レンズを使用してスキャンした。ロダミンの内皮細胞内への移行を研究するため、6-クマリン標識重合体ミセルのエンドリソソームとの共局在を突き止めるため共焦点顕微鏡検を使用した。標識ミセルの細胞培地への添加（15μg/ml）の後、1時間まで、異なる時点で生HUVEC細胞を画像化した。この時点で、酸性細胞内小胞：エンドソームおよびリソソームの検出のため、LysoTracker Red（登録商標）（Molecular Probes, Eugene, OR）を培地に添加した。20分のインキュベーションの後、細胞を、488nmアルゴン、543nm HeNe、および405nmダイオードレーザーにより、光学的切片を使用して、共焦点により画像化した。
【０２３４】
重合体ミセル内部移行がエンドサイトーシスを通して起こることをさらに確証するため、37℃における細胞取り込みと比較して、低温条件（4℃）での細胞取り込みを測定した。HUVECを、24時間、2枚の24穴プレートに15,000細胞/mlの濃度で播種した。低温室（4℃）および37℃で、蛍光標識された重合体ミセル（15μg/ml）を添加し、異なる時点（20分、30分、40分、および60分（n＝3））でインキュベートした。指定された時点の後、細胞をPBSで3回洗浄し、100μlの溶解緩衝液（BD Biosciences）で溶解させた。細胞抽出物を、488nm/530nmでの励起／放出により、Wallac 1420 VICTORプレートリーダ（Perkin-Elmer Life Sciences）において蛍光シグナルについて測定した。
【０２３５】
透過型電子顕微鏡検（TEM）によるMetAP-2阻害剤重合体ミセルの形態学
MetAP-2阻害剤ポリマーソームの形態学を研究するため、透過型電子顕微鏡検（TEM）画像を、調製の日および調製後1週間目に取得した。二重蒸留水に分散した重合体ミセルを、cryo-TEM（JEOL 2100 TEM, Harvard University-CNS）により画像化した。
【０２３６】
MetAP-2阻害剤ポリマーソームからのインビトロのTNP-470放出
TNP-470の動力学的放出を研究するため、ロダミン（20mg）を、1mlのPBS pH＝7.4または模擬胃液（HCL：ddw pH＝1.2）のいずれかと共にインキュベートした。数日毎に、上清を採取し、TNP-470濃度について分析し、TNP-470の累積放出グラフを決定した。TNP-470濃度はHPLCを使用して測定された。TNP-470は、水中50％アセトニトリルの移動相で6分目にピークとして検出された。流速は1ml/分であり、検出は210nmの波長でモニタリングされた。
【０２３７】
MetAP-2阻害剤重合体ミセルのサイズ
重合体ミセルの平均サイズおよびサイズ分布を、Dynamic Light Scatterer（DLS, DynaPro, Wyatt Technology）により決定した。測定は、Dynamic V6ソフトウェアを使用して、25℃で行われた。二重蒸留水に分散した1.5または2mg/mlのロダミン（TNP-470ポリマーソーム）を、DLSによる20回の連続読み取りにより測定した。構造的安定性を評価するため、24時間後にも、ミセルのサイズを測定した。
【０２３８】
インビボのMetAP-2阻害剤ポリマーソームの抗腫瘍活性の評価
動物手法はChildren's Hospitalの動物施設において実施された。8週齢雄C57BL/6マウス（Jackson Laboratories, Bar Harbor, MA）の背部に1×106個のルイス肺癌細胞（LLC）を皮下注射した。腫瘍が体積100mm3に達した時、マウスを五群に分け、12日間、毎日、経管栄養針を使用して経口投与されたTNP-470重合体ミセルにより処理した。異なる用量のポリマーソームを毎日与えた：それぞれ、15mg/kg（5匹）、30mg/kg（3匹）、60mg/kg（1匹）TNP-470当量（それぞれ、1匹当たり5、10、20mg 重合体薬物）。対照群は、同一用量の薬物を含まないポリマーソームを与えられたマウス5匹、および飲料水を与えられたマウス5匹であった。
【０２３９】
2日毎に、マウスの体重をモニタリングし、腫瘍寸法をノギスを使用して測定した。腫瘍体積を楕円体の式によって計算した。
【０２４０】
胃腸管における重合体ミセルの吸収動力学
細胞取り込み研究に類似した様式で蛍光マーカーにより標識された重合体ミセルを追跡するため、非侵入的なIVIS200インビボイメージングシステム（Xenogen system 3.0）を使用した。蛍光性ポリマーソームを、3匹のヌードマウスに経口的に与え、イソフルランチャンバーを使用してマウスに麻酔を施し、異なる期間の後に画像を採取した。画像は全て同一の条件の下で取得された。
【０２４１】
角膜マイクロポケットアッセイ
ロダミンの抗血管形成特性を評価するため、以前に詳述されたような角膜マイクロポケット血管形成アッセイを実施した29。80ngの担体なしの組換えヒトbFGFまたは160ngのVEGF（R&D Systems, Minneapolis, MN）を含有しているペレットを、麻酔下にあるマウスの角膜に作出されたマイクロポケットへ移植した。マウスを、6日間、毎日、15mg/kg TNP-470当量のロダミンにより処理し、次いで、血管成長面積を細隙灯を使用して測定した。血管新生の面積は、以下の方程式を使用して、へりから測定された血管長と、角膜の周りの時計時間との積により、血管面積として計算された：血管面積（mm2）＝[π×時計時間×血管長（mm）×0.2mm]。
【０２４２】
ロダミンの体内分布、腸吸収、および毒性
全ての体内分布研究のため、本発明者らは、ロダミンを追跡するために蛍光性マーカーを使用した。マウスに、3日間、経口経管栄養により、6-クマリン標識mPEG-PLAを投与した（1.5mg/mlを100μl）。処理の3日目、8時間の絶食の後、動物を屠殺し、脾臓、腎臓、脳、肺、肝臓、腸、胃、および膀胱を収集した。蛍光性6-クマリンを、25℃で、48時間、ホルムアミドとのインキュベーションにより組織から抽出した。試料を遠心分離し、上清の蛍光シグナル強度を、488nm/530nmでの励起／放出によってWallac 1420 VICTORプレートリーダ（Perkin-Elmer Life Sciences）により検出した。結果を、対応する組織におけるタンパク質レベルに対して規準化した。処理されたマウスにおけるそれぞれの読み取りから未処理マウス器官の蛍光シグナルを差し引くことにより、組織自己蛍光を補正した。同様に、マウス血清中の蛍光シグナルのレベルを、488nm/530nmでの励起／放出読み取りを使用して、異なる時点（1時間、2時間、4時間、8時間、24時間、48時間、および72時間）で測定した。
【０２４３】
腫瘍保持マウスにおける異なる組織への細胞取り込みを分析するため、PEG-PLAローダミンミセル（1.5mg/mlを100μl）または水を、3日間、LLC腫瘍（200mm3）を保持しているC57B1/6Jマウスに経口投与した。器官を除去し、単一細胞懸濁物を入手するため、37℃で、コラゲナーゼ（Liberase Blendzyme 3；Roche Diagnostics Corp., IN）中で50分間インキュベートした。未処理マウスのものと比較して、異なる組織細胞へのミセルの取り込みを定量化するため、これらの懸濁物をフローサイトメトリーにより分析した。
【０２４４】
腸吸収を評価するため、mPEG-PLA-ローダミンミセルを、8時間の絶食の後にC57B1/6Jマウスに経口投与した。2時間後、マウスを屠殺し、小腸の2.5cmの小片を除去し、洗浄し、組織診および共焦点顕微鏡検により分析した。ローダミン標識重合体ミセルを、488nmアルゴンレーザーラインを有する共焦点顕微鏡検（Leica TCS SP2 AOBS）により検出した。アクチンフィラメントをファロイジン-FITC（Sigma）により染色し、核をDAPI（Sigma）により染色した。腸へのロダミンの取り込みをさらに研究するため、高解像度画像をcryo-TEMを用いて画像化した。（上記のように）処理されたマウスおよび未処理マウスから腸を切り出し、直ちに、25℃で、2時間、新鮮に調製されたPBS pH7.4中4％パラホルムアルデヒドに浸漬した。試料を、PBSで洗浄し、4℃で30％スクロース溶液に一夜移し、OCTで包埋し、加工まで-80℃で維持した。各々10μmの15個の切片を調製し、共焦点顕微鏡検またはTEMのため加工した。4個のTEM試料を、新鮮に調製された2％パラホルムアルデヒド、2.5％グルタルアルデヒド、0.025％CaCl2を含む0.1Mカコジル酸ナトリウム緩衝液、pH7.4で30分間固定し、続いて、25℃で30分間、1％四酸化オスミウムを含む0.1Mシムコリジン（sym collidine）緩衝液pH7.4で後固定し、2％酢酸ウラニルで一括染色し、脱水し、逆プラスチックカプセル下で包埋した。急速凍結および解凍のサイクルにより、試料をカバーガラスからはずした。LEICA UCTウルトラミクロトームを使用してダイアモンドナイフにより対面で薄い切片を切断した。標本をJEOL 2100 TEMを使用して調査した。
【０２４５】
組織毒性を排除するため、肝臓、腸、肺、および腎臓の組織学的分析（H&E）を実施した（Beth-Israel pathology department, BIDMC）。さらに肝臓毒性を排除するため、本発明者らは、肝酵素：ALT、ASTの血清レベルを分析した（Shriners Burns Hospital, Boston, MAで行われた）。これらの研究を、20日間ロダミンで処理されたマウス（15mg/kg TNP-470当量、毎日）に対して実施し、未処理マウス（n＝3〜4）と比較した。
【０２４６】
インビボのロダミンの経口投与および原発腫瘍実験
動物手法は、8週齢C57B1/6J雄マウス（Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME）を使用して、Children's Hospital Bostonの動物施設において実施された。
【０２４７】
腫瘍実験のため：LLC細胞（1×106）またはB16/F10黒色腫細胞（1×106）を、8週齢C57B1/6J雄マウス（Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME）に皮下移植した。遊離型TNP-470の経口利用可能性をロダミンのものと比較した。30mg/kg（隔日）の用量の遊離型TNP-470、および等価な用量のロダミン（100μl中6mgロダミン/日）をLLC腫瘍保持マウス（およそ100mm3）に投与し、18日間、腫瘍成長を追跡調査した。遊離型薬物は、二重蒸留水中の懸濁物として与えられ、各投薬前に新鮮に調製された。さらに、本発明者らは、ロダミン処理の異なる用量および頻度を比較した：15mg/kg、毎日、15mg/kg、隔日、30mg/kg、隔日。媒体（薬物を含まない重合体）の可能性のある効果を排除するため、マウスの一つの群に、薬物を含まないミセルを与え、水で処理されたマウスと腫瘍進行を比較した。
【０２４８】
黒色腫腫瘍実験のため、15mg/kg、毎日の用量のロダミンを、B16/F10黒色腫を保持しているマウスに投与した。全ての実験において、腫瘍サイズおよび動物体重を、2日毎にモニタリングした。腫瘍体積は、以下のように二つの直径でノギスにより測定された：(幅)2×(長さ)×0.52。上記のロダミン用量は、全て、TNP-470当量として提示されていることに注意すること。
【０２４９】
ロダミンの経口投与および肝臓転移実験
転移の発生および防止に対する経口ロダミン処置の効果を調査するため、脾臓注射により肝臓転移を起こさせた。C57B1/6Jマウス（n＝14）にイソフルラン麻酔を施し、手術のために準備した。小さな腹部切開を左側腹部に生成し、脾臓を単離した。B16/F10腫瘍細胞を含む懸濁物（50μl、血清を含まないDMEM培地中5×105）を、30ゲージ針により脾臓に注射し、脾臓を腹腔に戻した。創傷を縫合および金属クリップにより閉じた。2日後、マウスを二群に分け、一方の群を、経管栄養により、経口ロダミン（15mg/kg）で毎日処理し、第二の群には経管栄養により水を投与した。20日後、本発明者らは実験を終結させた。マウスを屠殺し、剖検し、肝臓および脾臓を外科的解剖により除去し、画像化し、組織診を実施した。組織形態学を評価し、転移を検出するため、肝臓および脾臓の組織を、ヘマトキシリン＆エオシンにより染色した。肝臓内のB16/F10細胞を特異的に検出するため、抗マウス黒色腫抗体（HMB45、abCAM）を使用し、DAB染色を使用して、免疫組織化学を実施した。
【０２５０】
平均台運動協調性試験による神経毒性の評価
わずかに修飾された平均台運動協調性試験を、三つのマウス群に対して実施した：経口ロダミンにより処理されたマウス（30mg/kg当量、隔日）、遊離型TNP-470（30mg/kg）を皮下注射されたマウス、および（経管栄養により投与された）水により処理されたマウス。マウスを14日間前処理し（各群n＝4〜5）、次いで、マウスを1時間手技室に順応させ、その後、3回のトライアルで広い（幅20mm×長さ1m）平均台を渡る練習をさせた。全てのマウスが、足滑りエラーを起こすことなく、広い台を渡った。次いで、マウスを、3回のトライアルで狭い（幅4mm×長さ1m）台で練習させた。練習トライアルの終了時、フリージング行動は観察されず、マウスは台に置かれてから4秒以内に歩き始めた。次いで、各々3回、台を渡るテストトライアルを3回（1匹当たり全部で9回の歩行）受ける間、マウスを録画した。マウスの疲労を回避するため、3回のトライアルは、少なくとも1時間、間隔をあけた。録画された歩行を、足滑りエラーの回数および歩行時間についてスコア化した。異なる群の実験およびスコアリングは、全て、マウスの処理計画を承知していない研究者により実施された。
【０２５１】
腫瘍組織における血管形成、増殖、およびアポトーシスに対するMetAP-2阻害剤ポリマーソームの効果
処理（15mg/kg、毎日、TNP-470当量）の14日後に、2匹のランダムなロダミンにより処理されたマウスまたは未処理マウスから除去されたLLC腫瘍の厚さ8μmの凍結切片に対して、組織の組織学的評価を実施した。腫瘍を切片化し、細胞マーカーについて分析し、20個の顕微鏡視野（400倍）を画像化した。
【０２５２】
組織形態学を検出するため、組織をヘマトキシリン＆エオシンにより染色した。免疫組織化学を、Vectastain Elite ABCキット（Vector Laboratories, Burlingame, CA）を使用して実施した。一次抗体には、微小血管染色のためのCD31（BD Biosciences, San Jose, CA）および抗Ki-67（DAKO, CA, USA）による増殖の検出が含まれていた。検出は、陽性の茶色染色をもたらす3,3'-ジアミノベンジジン色素原を使用して実施された。アポトーシス細胞は、会社のプロトコルに従い、キット（Roche）を使用して、末端デオキシヌクレオチドトランスフェラーゼにより媒介されるdUTP-ビオチンニックエンド標識（TUNEL）と組織を反応させることにより検出された。同一の組織で、抗CD31および二次FITC抗マウス抗体（Jackson ImmunoResearch）結合抗体（緑色）により血管を検出し、DAPI（青色）により核を検出した。
【０２５３】
統計
インビトロデータは平均値±SDとして提示され、インビボデータは平均値±SEとして提示される。群間の差は独立両側スチューデントt検定を使用して査定され、P＜0.05が統計的に有意と見なされた。
【０２５４】
実施例1
ブロック共重合体ミセル（ポリマーソーム）は、（パクリタクセルのような）低い水溶性を有する疎水性薬物の送達のために提唱されている。ポリ(ラクチド)-ポリ(エチレングリコール）（PLA-PEG）のようなジブロック共重合体の両親媒性は、水性媒体中でのミセルの形成を可能にする。水性環境において、ジブロック共重合体は、疎水性重合体と薬物との会合により形成された疎水性コア、および親水性重合体、一般的にはPEGにより形成された親水性シェルの構造へと自己集合する。
【０２５５】
（参照により本明細書に組み入れられる）米国特許第4,745,160号に開示されるようなブロック共重合体は、親水性成分としてポリエチレングリコールを有し、疎水性成分としてポリ(D-乳酸)、ポリ(L-乳酸)、またはポリ(D,L-乳酸)を有する、非水溶性、両親媒性、非架橋直鎖型、分岐型、またはグラフトブロック共重合体を形成させるために使用されている。
【０２５６】
（参照により本明細書に組み入れられる）米国特許第5,543,158号に開示されるようなブロック共重合体は、ポリ(アルキレングリコール)およびポリ(乳酸)から本質的になる非水溶性ブロック共重合体から形成された、水に懸濁した固形粒子であるナノ粒子または微粒子を形成することが記載されている。ブロック共重合体の分子量は高く、共重合体は水に不溶性である。ナノ粒子または微粒子において、共重合体の生分解性モエティは、ナノ粒子または微粒子のコアにあり、ポリ(アルキレングリコール)モエティは、細網内皮系によるナノ粒子または微粒子の取り込みを減少させるために十分に有効な量でナノ粒子または微粒子の表面上にある。ナノ粒子は、有機溶媒にブロック共重合体および薬物を溶解させ、超音波処理または攪拌により油および水の乳剤を形成させ、沈殿の後、薬物を含有しているナノ粒子を収集することにより調製される。それは、疎水性薬物の可溶化を提供しない。
【０２５７】
本発明者らは、MetAP-2阻害剤TNP-470が、そのアミンを通して修飾PEG-PLA重合体に成功裡に結合し、ナノサイズのポリマーソームを形成したことを証明する。結合過程の概略図は、図6Aに示される。工程Iは、末端にアミンを有する重合体をもたらす、コハク酸化mPEG-PLAとエチレンジアミンとの間の反応を示す。工程IIは、アミン反応性高分子とTNP-470の末端塩素との間の反応を示す。次いで、結合体は、重合体ミセルが形成されるよう、TNP-470過剰で、水に対して透析される。本発明者らは、TEMにより取得された画像を使用して、球状ミセルが形成され、DLSによるサイズ測定が、およそ10ナノメートルの低いサイズ分布の範囲を示したことを証明する。蛍光標識ポリマーソームの共焦点顕微鏡検画像を使用することにより、本発明者らは、ヒト臍静脈内皮細胞（HUVEC）による迅速な取り込み、およびTNP-470ポリマーソームが添加された時、（担体自体には効果がなかったのに対して）HUVEC増殖の有意な阻害が示されたことを証明する。
【０２５８】
マウスに対して行われたインビボ研究は、TNP470ミセルの毎日の経口投与を与えられたC57/BLマウスにおける皮下ルイス肺癌腫瘍の有意な阻害を示した。15mg/kg TNP-470当量という用量が、マウスの体重減少なしに63％の阻害を示した。
【０２５９】
異なる反応工程からのNMR結果を図1に示す。結果は、元の重合体のカルボン酸基を介したエチレンジアミンの結合、およびTNP-470のアミンを介した重合体との結合を示す。
【０２６０】
アミン決定。重合体のアミンおよび薬物の末端塩素を介したTNP-470の修飾PEG-PLAとの結合をさらに確証するため、遊離型アミノ基の検出のためのTNBSA試薬反応を実施した。結果（図2）によると、重合体にはエチレンジアミンが飽和していた。修飾重合体のアミン基のモル濃度と450nmにおける吸収との間の相関が、アスパラギン酸について行われた標準曲線からの理論値により決定された（図示せず）。さらに、TNP-470結合の後、遊離型アミンは検出されず、このことから、重合体には、重合体のアミン基を介して結合したTNP-470が飽和していたことが示された。
【０２６１】
透過型電子顕微鏡検（TEM）によるMetAP-2阻害剤重合体ミセルの形態学。TNP-470-ミセルの形態学を研究するため、透過型電子顕微鏡検（TEM）画像を、調製の日に取得した（データ示さず）。
【０２６２】
二重蒸留水に分散したポリマーソームを、cryo-TEM（JEOL 2100 TEM, Harvard university-CNS）により画像化した。画像は、自己集合したポリマーソームが、均一の球状の形態学を有していたことを示す。
【０２６３】
HUVEC増殖。HUVECの増殖に対する異なる濃度のTNP-470ポリマーソームの効果を、WST-1試薬を使用して評価した。図4は、48時間のインキュベーションの後の増殖の阻害を示す。図4Aは、TNP-470ミセルの効果を示し、図4Bは、薬物を含まないミセルのHUVECに対する効果を示す。HUVEC増殖の有意な阻害が、62.5nM〜1000nM TNP-470当量である0.3mg/ml〜2.4mg/mlのミセルで検出された（それぞれ、88％および95％の阻害）。同一濃度のTNP-470を含まない重合体ミセルも、二倍濃度（4.8mg/ml）も、HUVEC増殖に対する有意な効果を示さなかった。
【０２６４】
実施例2
細胞取り込み研究。インビトロ条件でのHUVECによるポリマーソーム取り込みの動力学を評価するため、HUVECを蛍光性ポリマーソームと共にインキュベートし、洗浄し、共焦点顕微鏡検により画像化した。HUVECを、20分間、4時間、および24時間、ミセルと共にインキュベートした。20分後、ミセルは既に細胞に取り込まれており、細胞質内に位置していた（データ示さず）。2時間後、4時間後、7時間後、および24時間後、取り込みは増加し、ミセルは細胞質内に濃縮スポットとして検出された（データ示さず）。
【０２６５】
PEG-PLA-MetAP-2阻害剤ミセルのインビボの効果。皮下LLC腫瘍を保持しているC57/BLマウスは、経口的に与えられたPEG-PLA-TNP-470ミセルにより処理された時、腫瘍成長の阻害を示した。図5Aに示されるように、全ての用量が、14日間の毎日の処理の後に既に有意な効果を示した。対照群は14日目に屠殺しなければならず、処理は18日目まで継続した。最も低い用量（15mg/kg TNP-470当量）は、マウスの体重減少なしに、14日後、腫瘍成長の有意な阻害（63％）（*p＜0.05）を示し、30mg/kgおよび60mg/kg TNP-470当量というより高い用量は、それぞれ74％、75％の阻害を示したが、ほぼ20％の体重減少も引き起こした（図5B）。
【０２６６】
胃腸管における重合体ミセルの吸収。非侵襲的なXenogen系を、経口投与後のポリマーソームの吸収動力学を追跡するために使用した。ミセルは、投与後10分以内に胃腸管に集中した（GI track）（データ示さず）。明らかに、吸収は迅速であり、1時間後、蛍光シグナルは膀胱および前立腺の近くに見出された。24時間後、シグナルは依然として検出可能であった。
【０２６７】
実施例3
MetAP-2阻害剤ポリマーソームの化学的および物理的な特徴決定
TNP-470の経口利用可能性を予測するため、ロダミンの疎水性をlog-Dパラメーターを使用して測定した。測定されたLog-D値は、pH＝2で2.39、pH＝7.4で2.57であった。高いLog-D値（＞2）は、極めて低い水への溶解度を示す。この特性は、設計されたロダミンが、改善された溶解度および経口利用可能性を有することを示す。
【０２６８】
ロダミンの製剤化およびTNP-470の結合は、「方法」に詳細に記載される。ロダミンの化学的および物理的な特性を特徴決定した。まず、TNP-470のmPEG-PLAとの結合は、3H NMR（データ示さず）およびmPEG-PLA-TNP-470についての3687という平均m/zを示す質量分析により確認された。図6Aは、ロダミン調製の反応を示す。アミン検出試薬を使用して、エチレンジアミンのmPEG-PLAへの組み入れ効率が65％であることが決定され、第二工程において、TNP-470は、＞90％という高い効率で結合していることが示された。ロダミンは、HPLCにより決定されるように、0.8〜1％(w/w)の遊離型TNP-470を含有していた。調製の日に、DLSにより、ロダミンの平均サイズおよびサイズ分布を決定し（図3）、ロダミン安定性を評価するため、10日間の水性媒体中でのインキュベーションの後にも決定した（n＝4）。調製の日、ミセルの大半（90％）が、直径7.8〜8nmであり、より大きい粒子（200〜400nm）の集団は小さかった。サイズは、10日後、ほぼ不変のままであった。
【０２６９】
ロダミンの形態学を、TEMにより特徴決定した（図6B）。画像は、重合体ミセルが均一の球状の構造を獲得し、それが37℃の水中での2週間のインキュベーションの後に安定したままであったことを示した。薬物はミセル構造のPLAコアに位置しており、PLAは水性環境において自然に加水分解されるため、本発明者らは、ロダミンからのTNP-470の放出動力学を研究した。PBS（pH＝7.4）または胃液（pH＝1.2）中でのインキュベーションの後、TNP-470の徐放動力学が得られた。TNP-470は、28日間にわたり放出され、インキュベーションの初日の後、およそ30％の初期のピークバーストがあった（図6C）。
【０２７０】
内皮細胞はエンドサイトーシスによりMetAP-2阻害剤ポリマーソームを取り込む
まず、HUVECによる重合体ミセルの取り込みおよびその動力学を評価した。HUVECを、20分間、2時間、4時間、および7時間、6-クマリン標識mPEG-PLAミセルと共にインキュベートし、共焦点顕微鏡検により画像化した。共焦点画像は、20分および7時間のインキュベーション期間の後の、6-クマリンにより標識された重合体ミセルのHUVECへの取り込みを示す（データ示さず）。標識ミセル（15μg/ml、緑色）の細胞培地への添加の1時間後、生HUVEC細胞を画像化した。エンドソームおよびリソソームを検出するためにLysoTracker Red（登録商標）を使用した。ミセルとエンドリソソームとの間の重ね合わせは、黄色／オレンジ色で表される（データ示さず）。早くもインキュベーションの20分後に、ミセルは細胞により取り込まれ、細胞質内に位置していた。2時間後、取り込みは最大となり、4〜7時間後、ミセルは細胞質内に明確な凝集物として検出された。同一のインキュベーション時間で、ローダミン標識重合体ミセルと共にインキュベートされたHUVECのフローサイトメトリー分析は、2時間後の最大取り込みを確認したが（図7A）、2〜24時間のインキュベーションの間に差は観察されなかった。生細胞分析において、Lyso-tracker染色のミセルとの共局在は、取り込みのエンドサイトーシス機序を示唆する。低温条件でのミセルのHUVECとのインキュベーションは、ミセルの取り込みを最大55％低下させ、このことから、エンドサイトーシス過程が確認された（データ示さず）。
【０２７１】
MetAP-2阻害剤ポリマーソームは内皮細胞の増殖を阻害する
重合体ミセル取り込み研究の後、内皮細胞の増殖に対するロダミンの効果を評価した。ロダミン（62.5nM〜1,000nM TNP-470当量）は、48時間後、それぞれ88％〜95％、HUVEC増殖を阻害した（図7B）。ロダミン（60nM TNP-470当量）により処理されたHUVECの成長は、未処理細胞または媒体のみにより処理された細胞と比較して、完全に阻害された。実質的な細胞障害効果は見出されなかった（図7C）。
【０２７２】
MetAP-2阻害剤ポリマーソームはインビボでVEGFおよびbFGFにより誘導される血管形成を阻害する
ロダミンの抗増殖特性および抗血管形成特性を、角膜マイクロポケットアッセイ29によりインビボで評価した。マウスを、6日間、毎日、経口ロダミン（15mg/kg、毎日）または媒体により処理した。未処理マウスの代表的な眼においては、新たに形成された血管が、bFGFペレットに向かって成長した（データ示さず）。処理されたマウスは、代表的な眼において、bFGFにより誘導される血管形成の阻害を示す。増殖面積の定量化（図7D）は、媒体と比較して、血管形成の31％の阻害を示した（P＝0.00016、n＝10）。類似した結果が、角膜におけるVEGF165（160ng）により誘導される血管形成についても得られ（データ示さず）、この場合、ロダミンは血管面積の40％の阻害をもたらした。
【０２７３】
重合体ミセル：腸による吸収
mPEG-PLA-ローダミンミセルの腸吸収を研究するため、マウスに経口重合体ミセルを投与した。2時間後、マウスを安楽死させ、単離された小腸の小片を固定し、共焦点顕微鏡検を使用して画像化した。ロダミンにより処理されたマウスの消化管上皮細胞の組織学的切片を、TEMにより観察した。重合体ミセルは、小腸の管腔側を裏打ちする円柱上皮に集中的に取り込まれていた。小腸絨毛の高い拡大率において、ミセルは、固有層および血管の近傍に明白に検出され、このことは、経上皮吸収を示している。単一の消化管上皮細胞の高分解能TEM画像において、薬物が負荷された多くのエンドソームが検出された（データ示さず）。微絨毛（MV）構造、および重合体ミセルが負荷されたエンドソーム（データ示さず）が検出される。バー＝500nm（左）および200nm（右）。共焦点顕微鏡検画像も、TEM観察を確認する。血管の近くの固有層に重合体ミセルが検出され得ることに注意すること。アクチンフィラメントはファロイジン-FITCにより染色され、核はDAPIにより標識され、mPEG-PLAはローダミンにより標識された。バー＝5μm。これらの小胞は、未処理マウスの腸内のものとは、コントラストおよび数が異なっていた。これらのデータは、エンドサイトーシスによって腸の絨毛構造にロダミンが吸収されたという前提を支持している。
【０２７４】
重合体ミセルの体内分布、腫瘍への蓄積、および毒性
3日間、蛍光標識PEG-PLAミセルによりマウスを処理することによって、経口投与された標識MetAP-2阻害剤ポリマーソームの体内分布および組織取り込みを研究した。組織を採集した後、組織薬物濃度を、色素抽出またはフローサイトメトリーにより定量化した。蛍光色素抽出法の結果（図8A）は、予想通り、高濃度の蛍光シグナルが胃および小腸に検出され、肝臓が最も高いレベルを示すことを示した。重要なこととして、脳は、蛍光シグナルの存在を示さなかった。血清中には、経口投与の1時間後に既に標識ミセルが検出され、2時間後にピークに達し、72時間まで検出された。従って、腫瘍保持マウスにおいて、酵素消化された組織のフローサイトメトリー分析（図8CおよびD）は、肝臓による標識ミセルの大きい取り込みおよび脳細胞による取り込みの欠如を証明した。重要なこととして、ミセルの最も高い取り込みは、腫瘍細胞に検出された。図8Cに、FL2high細胞、即ち、ローダミン標識ミセルを吸収した細胞の割合が示されている。総合すると、これらの結果は、薬物が、主として腫瘍および胃腸器官（より低い程度であるが）に集中し、脳には集中しないことを示している。
【０２７５】
MetAP-2阻害剤ポリマーソームにより処理されたマウス（15mg/kg TNP-470当量、毎日、20日間）の肝臓、腸、肺、および腎臓の組織学的分析（H＆E）において、未処理マウスと比較して、組織異常は検出されなかった（データ示さず）。さらに、未処理マウスと比較して、MetAP-2阻害剤ポリマーソームにより処理されたマウスのマウス血清肝酵素プロファイルに有意な差は見出されなかった。ロダミンにより処理された群において、ALT濃度は41±9u/1、ASTは120±39u/lであり、未処理群において、ALT濃度は37.5±4u/1、AST濃度は152±131u/lであった。
【０２７６】
MetAP-2阻害剤ポリマーソームは原発腫瘍成長を阻害する
腫瘍保持マウスにおいて、抗癌剤としてのロダミンの生物学的効力を評価した。マウスに（30mg/kg、隔日）という用量の経口遊離型TNP-470を与えた場合、皮下LLC腫瘍の成長の阻害は観察されなかった（図9A）。しかしながら、等価な用量のロダミンは、腫瘍成長の有意な阻害をもたらした（図9A）。この阻害は、12日間のロダミン処理の後に観察され、18日目には、83％、腫瘍成長が阻害された。ロダミンの異なる投薬戦略：15mg/kg、毎日、30mg/kg、隔日、および15mg/kg、隔日を試験したところ、それぞれ、87％、77％、および74％の腫瘍体積阻害をもたらした（図9B）。媒体（PEG-PLA）は、腫瘍成長に対する効果を示さず、未処理対照マウスに類似していた（図9C）。
【０２７７】
もう一つの腫瘍モデルにおいては、B16/F10黒色腫腫瘍を皮下に誘導した。それらの成長も経口ロダミン（15mg/kg、毎日）により阻害された。この処理は、4日目の時点で有効であり、13日後、77％の体積阻害が得られた（図9D）。いずれの腫瘍モデルにおいても、明白な副作用または体重減少は検出されなかった。しかしながら、より高い用量のロダミン：30mg/kg、毎日、および60mg/kg、隔日は、実質的な腫瘍阻害を示したが、体重減少を伴っていた（データ示さず）。図9Eは、処理された、または未処理の、LLCまたはB16/F10腫瘍の代表的な腫瘍を示す。
【０２７８】
MetAP-2阻害剤ポリマーソームはマウスにおいて神経毒性を引き起こさなかった
ロダミンが血液脳関門を通過しないことを体内分布研究が示したため、逃れた遊離型薬物の可能性のある脳への浸透が、神経毒性および小脳機能障害をもたらし得るか否かを、本発明者らはさらに試験した。これを調査するため、マウスを高感度の運動協調性試験：狭い（4mm）平均台30の歩行に供した。図9Fに示されたように、ロダミンにより処理されたマウス（30mg/kg、隔日、14日間）は、このチャレンジにおいて、対照（水処理）マウスと類似の成績を示したが、遊離型TNP-470（30mg/kg、隔日）を注射されたマウスは、2倍以上のエラーを起こした（P＜0.0001）。これらの結果は、ロダミン処理が、非結合型TNP-470処理により観察された小脳神経毒性を回避することを示している。
【０２７９】
経口MetAP-2阻害剤ポリマーソームは、腫瘍における血管形成および細胞増殖を阻害し、腫瘍細胞アポトーシスを誘導する
LLC腫瘍の組織学的構造に対するロダミンの効果を試験した。処理された腫瘍および未処理腫瘍の両方が、密な細胞構造を示した（データ示さず）。ルイス肺癌（LLC）腫瘍を、ロダミンにより処理されたマウスまたは未処理マウスから除去し、切片化した。組織形態学を検出するため、組織をヘマトキシリン＆エオシン（H＆E）により染色した。抗CD31による免疫染色を、微小血管を検出するために使用し、細胞増殖のため抗Ki67核抗原を使用した。TUNEL染色をアポトーシス細胞の検出のために使用した。細胞核をDAPIにより染色した。切片をエオシン（核）により対比染色した。未処理マウスの腫瘍は、CD-31免疫染色により証明されるような明白な管腔構造を有する大小血管の網状機構を有していた。対照的に、ロダミンにより処理された腫瘍は、極めて小さな未発達の血管を形成した（データ示さず）。核マーカーKI-67により検出されたように、ロダミンにより処理された腫瘍は、未処理腫瘍より少ない細胞増殖を示した。組織におけるアポトーシスの検出のためのTUNEL染色は、ロダミン処理腫瘍における増強されたアポトーシスを示した。ロダミンにより処理された腫瘍は、より少ない血管を有し、主に腫瘍細胞の高レベルのアポトーシスを有していた。対照組織において、アポトーシス細胞は、腫瘍の被膜に見出されたが、組織の中心にはあまり見出されなかった。
【０２８０】
さらに、MetAP-2阻害剤TNP-470の新たな経口製剤は、マウスにおいて、体重減少またはその他の明白な副作用を引き起こさなかった（図9G）
【０２８１】
MetAP-2阻害剤ポリマーソームは肝臓転移の発生を防止する
B16/F10の脾臓注射後の肝臓転移に対する経口ロダミン投与の効果を試験した。経口ロダミン処理は、肝臓転移の発生に劇的な影響を与えた。18日間の処理の後、マウスを剖検した。全ての未処理マウスが腹水を有し、それらの拡大した肝臓は巨視的な悪性結節および広範囲の肝硬変を有していた（図10A）。対照的に、ロダミンにより処理されたマウスは、腹部および肝臓に巨視的な転移を有していなかった（図10A）。それらの器官は正常な形態学を有し、体重減少またはその他の明白な副作用は見出されなかった。免疫組織学は、肝臓内にほんの少数の散発的なB16/F10細胞を示したが、それらは病変へと発達しなかった（データ示さず）。処理されたマウス7匹のうち1匹のみが、肝臓に悪性結節を有していたが、その肝臓は未処理対照のものより小さく、より少ない肝硬変を有していた。全てのロダミンにより処理されたマウスの脾臓が、対照マウスの拡大した脾臓に見出されたうっ血と比較して、正常な形態学を有していた（図10B）。脾臓へのB16/F10細胞注射の20日後、対照マウス7匹のうち4匹が死亡したが、処理されたマウスは全て生存していた（図10C）。
【０２８２】
この研究において、本発明者らは、強力な抗増殖性かつ抗転移性の薬物としての、ロダミンと名付けられたMetAP-2阻害剤TNP-470の非毒性経口製剤の開発を初めて記載する。高度に強力な抗増殖／抗血管形成剤であるTNP-470は、癌維持療法および転移防止のための慢性投与のための有力な候補である。
【０２８３】
本発明者らが直面した問題は、TNP-470が、低い水溶性を示す高いLog D値により例示されるように、極めて乏しい経口利用可能性を有するという事実に基づいていた35。薬物を経口投与に適したものにするため、それをmPEG-PLAと結合してmPEG-PLA-TNP-470重合体ミセル、即ち、ロダミンを形成させることにより、活性を保持しながら、TNP-470のこの特性を改変した。有機溶媒にのみ溶解可能なTNP-470とは異なり、ロダミンは、水に懸濁して、PEG-PLAの両親媒性により引き起こされる重合体ミセルを形成することができる26。この構造において、薬物は、厳しい胃腸環境から保護されるミセルのコアに位置する36。重合体ミセルは、以前に、疎水性薬物の送達37、38および遺伝子送達39に使用されている。ロダミンは、TEMにより画像化されるように、ナノミセルの安定的な球状の形態学を獲得した。さらに、生分解性かつ生体適合性の重合体であるPLAは、水性環境において加水分解し、TNP-470の徐放を可能にする。インビトロ研究は、（胃および血漿両方のpH条件において）薬物の大半が4日以降に放出される、ほぼ1ヶ月にわたるロダミンからのTNP-470の連続的な放出を示し、酸性環境はPLAの分解を加速すると公知であるが、本発明者らは15日目に軽微な効果のみを観察した。理論により拘束されることは望まないが、一つの可能性のある説明は、PLAコアへの水浸透を遅延させ、この層の拡散を介した薬物の放出を遅くするPEGシェルのマスク効果であるかもしれない。培養物において、ロダミンは、エンドサイトーシスを介して内皮細胞に迅速に取り込まれ、HUVECの増殖および成長の速度の阻害により証明されるように、遊離型TNP-470の元の抗血管形成活性を保持していた。
【０２８４】
PEG-PLAミセルは、蛍光性マーカーを使用することにより示されたように、消化管上皮層に粘膜下にまで浸透した。消化管上皮細胞へのロダミン浸透の機序は、高分解能TEM画像法により検出されたように、エンドサイトーシスを介したものであると考えられる。血清において、標識ミセルは、投与後少なくとも72時間という長い血液循環時間を有していた。これは、投与後2時間までマウス血清中に検出された遊離型薬物と比較して有意な増加である。経口投与は、薬物を腸から肝臓へと直接送達するため、体内分布は肝臓における比較的高い濃度を示した。しかしながら、20日間の毎日のロダミン処理の後、組織診および肝酵素プロファイルにより、肝臓毒性は観察されなかった。
【０２８５】
マウスに経口的に与えられたロダミンは、実質的な抗増殖効果（83％の低下）を示したが、経口的に与えられた遊離型TNP-470には効果がなかった。LLC成長に対する効果は用量依存性であり、30mg/kg、隔日は、15mg/kg、隔日より有効であり、15mg/kg、毎日という用量は、30mg/kg、隔日（2日毎に与えられる二倍用量）より有効であった。ロダミンの類似の抗増殖効果は、黒色腫B16/F10腫瘍でも観察され、元の遊離型TNP-470と同様の、ロダミンの広範囲の生物学的効果が確認された。LLC腫瘍組織に対して実施された免疫組織化学的研究は、ロダミンにより誘導される増殖および血管形成の低下を示した。TUNEL染色を使用して、本発明者らは、ロダミン処理後の高レベルの腫瘍細胞アポトーシスを検出したが、対照においては、アポトーシスの多くが腫瘍の被膜上で起こっていた。これらの結果は、ロダミンによる血管形成の防止が腫瘍細胞アポトーシスに通じ、従って、ロダミンが、抗血管形成薬であるのみならず細胞障害薬でもあることを示している。
【０２８６】
経口ロダミンの最も注目すべき効果のうちの一つは、マウスにおける肝臓転移の防止である。肝臓転移は、多くの腫瘍型において極めて一般的であり、しばしば、不良な予後および生存率と関連している。本発明者らは、マウスにおける脾臓注射後の脾臓から肝臓微小血管系へのB16/F10の移行時間が極めて速いことが見出されている（15分後、注射された細胞の20％）、肝臓転移の誘導のための脾臓内モデルを選んだ40。B16/F10細胞を脾臓に注射されたマウスは、低い生存率を有していた。それらは、注射の20日後に、腹水、肝臓内の巨視的な悪性結節、および広範囲な肝硬変を発症した。しかしながら、経口ロダミンにより処理されたマウスは、全て、この時点まで生存し、他の明白な副作用なしに、正常な肝臓（1匹以外）および脾臓の形態学を有していた。処理されたマウスの肝臓の免疫組織学は、未処理マウスに見出された大きい転移性腫瘍と比較して、18日間の経口ロダミン処理の間、休止状態のままであった、いくつかの稀な散発的なB16/F10細胞を示した。ロダミンの二次腫瘍成長に対する効果が、原発腫瘍に対する効果に加えて存在することに注意するべきである。
【０２８７】
理論により拘束されることは望まないが、この劇的な効果は、ロダミンが胃腸管において吸収され、門脈を介して肝臓に多量に集中する、経口投与経路によるものであるかもしれない。これらの結果は、ロダミンが、異なる腫瘍型に関連した肝臓転移の発生を防止し得ることを示す。重要なこととして、重合体ミセルのこの特性は、肝臓転移を標的とするための、他の抗血管形成薬または抗癌薬の経口利用可能性を可能にするために使用されるかもしれない。
【０２８８】
要約すると、経口ロダミンは、マウスにおける固形腫瘍および転移の処置において治療的に有効である。それは、以下の重要な利点を追加しながら、遊離型TNP-470の抗増殖特性を確保している：経口利用可能性、改善された体内分布、腫瘍蓄積、連続的な放出、改善された溶解度、妥当なクリアランス、および低い関連副作用。公知の既存の腫瘍の処置または抑制のための使用に加えて、とりわけ、腫瘍再発を防止するための長期維持的な血管形成阻害剤としての、癌患者のための使用が企図される。さらに、加齢黄斑変性、子宮内膜症、および関節リウマチのような慢性のMetAP-2関連疾患のための維持療法としての使用も企図される。その他の企図される使用は、本明細書中の他の箇所に記載されている。
【０２８９】
実施例4
MetAP-2阻害剤ポリマーソームは膠芽腫腫瘍成長を阻害する
ヒト脳腫瘍（U87MG、膠芽腫）に対するロダミンの効果を、皮下腫瘍を保持しているヌードマウスを使用して研究した。腫瘍がおよそ100mm3の体積になった時点で、ロダミンによる処理を開始した。15mg/kg TNP-470当量という一日用量で経管栄養により与えられたロダミンは、30日後に、70％、腫瘍体積を阻害した（図11A）。同一の用量で飲料水に含めてロダミンを与えた場合、腫瘍体積の71％の阻害が42日後に得られた（図11B）。
【０２９０】
実施例5
MetAP-2阻害剤ポリマーソームは肺転移を保持しているマウスの生存を延長する
C57/B1マウスの尾血管に2.5×105個のB16/F10細胞を注射した。注射の翌日、マウスを三群に分けた：10匹のマウスに、ロダミン（15mg/kg TNP-470当量）の毎日の経口投与を与え、9匹のマウスに、同一のロダミン用量でIP注射を与え、10匹のマウスは未処理のままにした。処理後40日目まで、マウス生存を追跡調査した。
【０２９１】
ロダミンにより処理されたマウスは、カプランマイヤー生存曲線に見られるように、延長された生存を示した（図12）。32日後、全ての対照マウスが死亡したが、IPロダミン処理群および経口ロダミン群においては、40日目に、それぞれ6匹および5匹のマウスが生存していた。
【０２９２】
実施例6
MetAP-2阻害剤ポリマーソームはマトリゲル血管形成における血管形成を阻害する
インビボマトリゲル血管形成アッセイを、ロダミンの抗血管形成特性を査定するために実施した。4℃で一夜維持したマトリゲル（BD bioscience）を、1μg/mlという最終FGF-2濃度が得られるよう繊維芽細胞増殖因子-2（FGF-2）と混合した。9匹のC57/B1マウスに、2箇所において、マトリゲル（500μl）を皮下注射した。3匹のマウスは、ロダミンによる毎日の経口処理を受けた（15mk/kg/日 TNP-470当量）。3匹のマウスにおいては、マトリゲルをロダミン（5mg/ml）と混合し、それ以上の処理は実施せず、マトリゲル移植片を有する3匹の未処理マウスを、対照として使用した。
【０２９３】
8日後、マウスを安楽死させ、マトリゲル移植片を採集し、PBSで2回洗浄し、次いで移植片のうちの一つを、直ちにドライアイス上で凍結させ、CD-31抗体を使用した血管の組織学査定のために使用した。第二の移植片は、コラゲナーゼ（Librease, Roche）を使用して酵素消化し、単一細胞懸濁物を入手し、それを、CD-31抗体およびCD-45抗体を使用して、内皮細胞の数を定量化するために、FACSにより再び分析した（内皮細胞はCD31+CD45-である）。
【０２９４】
ロダミンにより処理されたマウス（マトリゲルとロダミンとの混合物を有するマウスまたはロダミンにより経口的に処理されたマウスの両方）の移植片は、移植片内の血管の有意な低下を示した（図13A）。組織診は、ロダミンにより処理されたマウスにおいて、より少ない血管およびより密度の低い組織を示した。FACS分析は、移植片に誘引された内皮細胞の割合の70％の低下を示唆している（図13B）。
【０２９５】
本明細書中および本願の全体にわたって引用された参照は、参照により本明細書に組み入れられる。
【０２９６】
以上、本発明を、理解の明瞭の目的のため、例示および例によってある程度詳細に記載したが、当業者は、ある種の変化および修飾が、添付の特許請求の範囲の本旨および範囲を逸脱することなく実施され得ることを容易に確認するであろう。
【０２９７】
参照
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図９Ｆ】
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【図９Ｇ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年6月25日(2014.6.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むブロック共重合体と共有結合で連結したメチオニンアミノペプチダーゼ−２（ＭｅｔＡＰ−２）阻害剤を含む、その病理にＭｅｔＡＰ−２活性が関与しているかまたはＭｅｔＡＰ−２活性に依存している状態を処置するための組成物であって、血液脳関門の通過が妨げられ、
該共重合体が親水性ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）モエティおよび疎水性ポリ（ｄ，Ｌ−乳酸）（ＰＬＡ）モエティを有するＰＥＧ−ＰＬＡジブロック共重合体を含み、
該ＭｅｔＡＰ−２阻害剤が、６−Ｏ−（Ｎ−クロロアセチルカルバモイル）フマギロール（ＴＮＰ−４７０）を含み、
経口投与用に製剤化されている、組成物。
【請求項２】
ＭｅｔＡＰ−２阻害剤が、ブロック共重合体の疎水性モエティと共有結合で連結している、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
状態が腫瘍活性である、請求項１または２記載の組成物。
【請求項４】
状態が、癌、転移性腫瘍、乾癬、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、甲状腺過形成、子癇前症、関節リウマチおよび骨関節炎、アルツハイマー病、肥満、胸水、アテローム性動脈硬化、子宮内膜症、糖尿病性／その他の網膜症、眼血管新生、ＩＬ−２治療に関連した浮腫およびその他の浮腫、マラリア、ＳＡＲＳ、ＨＩＶ、ヘルペス、ループス、ＩＰＦ、ＣＯＰＤ、喘息、嚢胞性繊維症、移植片拒絶、アレルギー反応、多発性硬化症、細菌感染、ウイルス感染、血管透過性亢進が関与しているかまたは血管透過性亢進を特徴とする状態、炎症、ならびに脊髄損傷からなる群より選択される、請求項１または２記載の組成物。
【請求項５】
親水性重合体モエティおよび疎水性重合体モエティを含むブロック共重合体と共有結合しているフマギロール誘導体を含む、血管形成を阻害するための組成物であって、
該共重合体が親水性ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）モエティおよび疎水性ポリ（ｄ，Ｌ−乳酸）（ＰＬＡ）モエティを有するＰＥＧ−ＰＬＡジブロック共重合体を含み、
該フマギロール誘導体が、６−Ｏ−（Ｎ−クロロアセチルカルバモイル）フマギロール（ＴＮＰ−４７０）を含み、
経口投与用に製剤化されている、組成物。
【請求項６】
フマギロール誘導体と共有結合しているブロック共重合体を含むミセルを含む、請求項５記載の組成物。
【請求項７】
腫瘍活性を阻害するための、請求項５または６記載の組成物。
【請求項８】
ＰＥＧ重合体がキャッピングされたＰＥＧ重合体である、請求項１〜７のいずれか一項記載の組成物。