(57)【要約】      （修正有）【課題】安全な天然物由来であるペルオキシソーム増殖剤応答性受容体δ（ＰＰＡＲδ）リガンド剤、及び、筋線維の遅筋タイプ増加剤の提供。【解決手段】ヤマブシタケ、ユキレイタケ、ミカン柱頭、ミカン花弁及びトマト葉のいずれか一種以上のエタノール抽出物を有効成分とするＰＰＡＲδ活性化剤により、筋線維の遅筋タイプ増加剤が提供される。本発明の上記の遅筋タイプ増加剤は、安全であり、家畜の肉質の向上に有効である。抽出剤としてはエタノール以外にも水、ｎ−ヘキサン等との混合溶液が好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤマブシタケ、ユキレイタケ、ミカン柱頭、ミカン花弁及びトマト葉からなる群より選択される少なくとも一種以上の植物体を含有するペルオキシソーム増殖剤応答性受容体δ（ＰＰＡＲδ）活性化剤。
【請求項２】
ヤマブシタケ、ユキレイタケ、ミカン柱頭、ミカン花弁及びトマト葉からなる群より選択される少なくとも一種以上の植物体抽出物を有効成分とするＰＰＡＲδ活性化剤。
【請求項３】
ヤマブシタケ、ユキレイタケ、ミカン柱頭、ミカン花弁及びトマト葉からなる群より選択される少なくとも一種以上の植物体抽出物が、エタノール抽出物である請求項２に記載のＰＰＡＲδ活性化剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のＰＰＡＲδ活性化剤を含有する遅筋増加剤。
【請求項５】
請求項４記載の遅筋増加剤を含有する家畜飼料。
【請求項６】
ヤマブシタケ、ユキレイタケ、ミカン柱頭、ミカン花弁及びトマト葉からなる群より選択される少なくとも一種以上の植物体を、水、エタノールまたはｎ−ヘキサン溶液で抽出することを特徴とする、ＰＰＡＲδ活性化剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は天然物由来のＰＰＡＲδ活性化剤及び遅筋増加剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
骨格筋の核内受容体であるｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｄｅｌｔａ（以下、ＰＰＡＲδと称する）の活性化は骨格筋の遅筋タイプの筋線維を増加させ、骨格筋の脂肪代謝を活性化し、体脂肪を減少させることが知られている（非特許文献１）。
【０００３】
食肉としての観点から、遅筋タイプの筋線維が増加すると、タウリン、カルニチン、鉄分、呈味性遊離アミノ酸量が増加し、さらに軟らかさやジューシーさの評価が高まると言われている（非特許文献２）。
【０００４】
ヤマブシタケ及びヤマブシタケの有機溶媒等による抽出物等が、体脂肪や内臓脂肪、肝臓脂肪の低下効果を有し、安全な脂質代謝促進剤であることが開示されている（特許文献１）。イワヨモギのエタノール抽出物（非特許文献３）あるいはエンジュに含まれる化合物（非特許文献４）がＰＰＡＲδに作用するという発表もある。
【０００５】
このように、ＰＰＡＲδの活性化は、肥満の抑制、脂肪酸代謝の活性化、体脂肪の燃焼促進、血中中性脂肪の減少、脂肪肝の抑制、持久力の向上等につながることから、ＰＰＡＲδの活性化剤は、肥満の予防、脂肪酸酸化活性化剤、体脂肪燃焼促進剤、持久力向上剤として有効であると考えられている。
【０００６】
そのため、このような目的でＰＰＡＲδ活性化剤の研究、開発も盛んに行われ、これまでに多くの研究が報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１０−１１１５８６号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Y. Wang et al., PLoS Biol., 2(10), e294 (2004)
【非特許文献２】Y.K. Kang et al., Meat Sci., 89(4), 384-389 (2011)
【非特許文献３】S.Y. Cho et al., PLoS One, 7(3), e33815 (2012)
【非特許文献４】T.H. Quang et al., Phytother. Res., Oct 30. doi: 10.1002/ptr.4871. [Epub ahead of print](2012)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
従って、本発明の目的は安全性の高い天然物由来のＰＰＡＲδ活性化剤及び、安全でかつ家畜の肉質を向上させる骨格筋の遅筋増加剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、鋭意研究の結果、ヤマブシタケ、ユキレイタケ、ミカン柱頭、ミカン花弁、トマト葉の有機溶剤抽出物が脂肪酸代謝活性化、体脂肪燃焼促進、肥満抑制、脂肪肝抑制として有用であり、ＰＰＡＲδ活性化剤であることを見出した。
【００１１】
したがって、本発明は以下のとおりである。
１．ヤマブシタケ、ユキレイタケ、ミカン柱頭、ミカン花弁及びトマト葉からなる群より選択される少なくとも一種以上の植物体を含有するペルオキシソーム増殖剤応答性受容体δ（ＰＰＡＲδ）活性化剤。
２．ヤマブシタケ、ユキレイタケ、ミカン柱頭、ミカン花弁及びトマト葉からなる群より選択される少なくとも一種以上の植物体抽出物を有効成分とするＰＰＡＲδ活性化剤。
３．ヤマブシタケ、ユキレイタケ、ミカン柱頭、ミカン花弁及びトマト葉からなる群より選択される少なくとも一種以上の植物体抽出物が、エタノール抽出物である前項２に記載のＰＰＡＲδ活性化剤。
４．前項１〜３のいずれか１項に記載のＰＰＡＲδ活性化剤を含有する遅筋増加剤。
５．前項４記載の遅筋増加剤を含有する家畜飼料。
６．ヤマブシタケ、ユキレイタケ、ミカン柱頭、ミカン花弁及びトマト葉からなる群より選択される少なくとも一種以上の植物体を、水、エタノールまたはｎ−ヘキサン溶液で抽出することを特徴とする、ＰＰＡＲδ活性化剤の製造方法。
【発明の効果】
【００１２】
健康機能食品として用いられる本発明の遅筋増加剤により、骨格筋の脂肪代謝を活性化し、無理なく少ない使用量で、安全に効率よく体脂肪を減少させることができる。
また、家畜の飼料成分として用いることにより、家畜の筋線維の遅筋タイプを増加させ、畜肉の柔らかさやジューシーさを高めることができる。さらに食味性や栄養価の向上も期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、各種農作物抽出物のＰＰＡＲδアゴニスト活性を示す図である。
【図２】図２（ａ）及び（ｂ）は、ヤマブシタケヘキサン抽出物のシリカゲルクロマトグラフィーフラクションのＰＰＡＲδアゴニスト活性（分画画分Ｆｒ１−１１）を示す図である。
【図３】図３は、ヤマブシタケｎ−ヘキサン抽出物分画物Ｆｒ３−（２，３）−１とＦｒ３−（２，３）−２のＰＰＡＲδアゴニスト活性を示す図である。
【図４】図４は、ヤマブシタケｎ−ヘキサン抽出物のラット筋細胞（単離筋線維）におけるＰＰＡＲδアゴニスト活性を示す図である。
【図５】図５は、ミカン花弁エタノール抽出物のラット筋細胞（単離筋線維）におけるＰＰＡＲδアゴニスト活性を示す図である。
【図６】図６は、ヤマブシタケｎ−ヘキサン抽出物Ｆｒ３−（２，３）−１のラット筋細胞（単離筋線維）におけるＰＰＡＲδアゴニスト活性を示す図である。
【図７】図７（ａ）及び（ｂ）は、ヤマブシタケ５％配合食２４時間給餌後のマウス腓腹筋におけるＰＰＡＲδ標的遺伝子ＰＤＫ４とＵＣＰ３の発現量を示す図である。
【図８】図８は、ヤマブシタケ５％配合食８週間給餌後のマウスの筋持久力を示す図である。
【図９】図９（ａ）は、Ｆｒ３のＧＣ−ＥＩＭＳクロマトグラムを示す図である。図９（ｂ）は、推定される化合物を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明において、ヤマブシタケ、ユキレイタケ、ミカン柱頭、ミカン花弁、クコ、青トマト外皮（水抽出）及びトマト葉の任意の部位、又はそれらの組み合わせを使用することができる.
【００１５】
上記原料は、そのまま又は凍結乾燥・粉砕して抽出工程に付し、目的の抽出物を得ることが出来るが、乾燥・粉砕して抽出することが好ましい。粉砕方法や粉砕物の大きさについては特に制限はないが、粉砕物の粒径としては、好ましくは１μｍ〜１０ｍｍ、より好ましくは１００μｍ〜５００μｍである。上記出物は天然成分由来であり安全性も高い。
【００１６】
本発明の有機溶剤抽出物を得るために用いる溶剤としては、極性溶剤及び非極性溶剤のいずれをも使用することができ、これらを混合して用いることもできる。更に、有機溶剤が水を含んでもよい。
【００１７】
有機溶剤としては、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール及びイソブタノール等のアルコール類；エチレングリコール及びプロピレングリコール等の多価アルコール類；ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン及び石油エーテル等の炭化水素類；アセトニトリル及びプロピオニトリル等のニトリル類；アセトン及びメチルケトン等のケトン類；酢酸メチル及び酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロキシフラン及びジエチルエーテル等の鎖状並びに環状エーテル類；エチレングリコール、ジエチレングリコール及びポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン及びクロロホルム等のハロゲン化炭化水素類等が挙げられ、これらは単独で又は２種以上を組み合わせて使用できる。
【００１８】
これら有機溶剤のうち、アルコール類、ヘキサン及び水・アルコール類混合有機溶剤が好ましく、特に、水・エタノール混合有機溶剤、エタノール及びｎ−ヘキサンが好ましい。
【００１９】
ここで、アルコール類として、炭素数１〜５の低級アルコール類が好ましく、炭素数１〜３の低級アルコール類がより好ましい。本発明では、最初にエタノールで抽出し、必要に応じ更にｎ−ヘキサンで抽出することが好ましい。
【００２０】
水とアルコールの混合比率については、特に制限されることはないが、水／アルコールが９０／１〜１／１００であることが好ましく、より好ましくは２／１〜１／１００（質量比）である。
【００２１】
本発明では、ヤマブシタケ、ユキレイタケ、ミカン柱頭、ミカン花弁、クコ、青トマト外皮（水抽出）及びトマト葉等を凍結乾燥し粉砕した後、有機溶剤を用いて常温（０〜３０℃）又は加温下で抽出することにより抽出物が得られる。
【００２２】
上記の原料１質量部に対して、１０質量部の有機溶剤を用いるのが好ましく、このときの抽出温度は、０〜４０℃が好ましく、また抽出時間は２４〜７２時間が好ましい。
抽出工程は、固液抽出、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出又は攪拌等の手段を用いることができ、好ましくは攪拌を伴う固液抽出である。
【００２３】
得られた抽出物は、有機溶剤を除去した後、分離精製手段、例えば、活性炭処理、液々分配、カラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、ゲルろ過又は精密蒸留等を行った後、適宜な溶剤で希釈した希釈液として用いてもよく、又は濃縮エキスや乾燥粉末としたり、ペースト状に調製してもよい。
【００２４】
一方、ヤマブシタケ、ユキレイタケ、ミカン柱頭、ミカン花弁、クコ、青トマト外皮（水抽出）又はトマト葉抽出物をシリカゲルクロマトグラフィーにより、各フラクション（Ｆｒ）に分画し、次に活性の高いフラクションを複数回、少なくとも二回分画し、ＰＰＡＲδアゴニスト活性をＲＣＡＳ法により測定し、最も活性の高いフラクションを採取することが好ましい。
【００２５】
ＰＰＡＲδ活性化作用を有する抽出物は、ＰＰＡＲδ活性化剤、脂肪酸代謝活性化剤、体脂肪燃焼促進剤及び遅筋増加剤として使用することができ、ＰＰＡＲδ活性化剤等の製造のために使用することができる。
【００２６】
ＰＰＡＲδ活性化剤は、ヒト若しくは動物用の食品、飼料、医薬品又は医薬部外品として使用可能である。また、有機溶剤抽出物は、脂肪酸代謝活性化、体脂肪燃焼促進及び脂肪肝抑制等の作用効果があるので、食品、機能性食品及び特定保健用食品に応用できる。
【００２７】
マウスを用いた動物実験で効果が見られた投与量と、ヒトとの代謝活性の差から推測された本発明の抽出物の臨床的投与量は、年令、体重、患者の感受性及び症状の程度等により異なるが、通常効果的な投与量として、成人一日あたり好ましくは１０〜５０ｇ、より好ましくは５０〜７０ｇ程度である。しかし、必要により前記の範囲外の量を用いることもできる。
【００２８】
ＰＰＡＲδ活性化剤等を含有する抽出物を医薬品及び医薬部外品として用いる場合の投与形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤若しくはシロップ剤等による経口投与又は注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤若しくは外用剤等による非経口投与が挙げられる。
【００２９】
また、このような種々の剤型の製剤を調製するには、本発明の有機溶剤抽出物を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、界面活性剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、香料若しくは希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
【００３０】
また、これらの投与形態のうち、好ましい形態は経口投与であり、経口用液体製剤を調製する場合は、緩衝剤、安定化剤等を加えて常法により製造することができる。経皮投与する場合は、対象となる皮膚の状態等に応じて軟膏剤、乳化剤、ローション剤又は懸濁剤等として投与することができ、かかる投与方法において用いられる経皮投与用製剤は、通常用いられる方法を用いることができる。
【００３１】
ＰＰＡＲδ活性化剤等を食品として用いる場合の形態としては、乳製品、飲料又はスープ類等の各種食品の他、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤及びシロップ等）が挙げられる。
【００３２】
その場合、甘味料、酸味料、保存料、香料、着色料、賦形剤、安定剤、湿潤剤、吸収促進剤又はｐＨ調整剤等の種々の添加成分を配合することができる。
【００３３】
これらのものに対する有機溶剤抽出物の配合量はその使用形態により異なるが、食品の形態では、全組成中、乾燥物換算で通常０．０００１〜１０質量％、さらに０．００２〜２質量％とするのが好ましい。
【００３４】
本発明において、抽出物を家畜飼料に添加する場合、抽出物と魚類等の肉類、蛋白質、穀物類、ぬか類、ビタミン類及びミネラル類等一般に用いられる飼料原料、更に一般的に飼料に使用されるゲル化剤、保型剤、ｐＨ調整剤及び栄養補強剤等を混合して用いることができる。
【実施例】
【００３５】
以下、本発明を具体的に説明するために、実施例及び試験例を挙げる。しかしながら、本発明は、かかる実施例等によって何ら制限されるものではない。
（実施例１）
［各種農作物の抽出物調製］
ヤマブシタケ、ユキレイタケ、ミカン柱頭、ミカン花弁、クコ、青トマト外皮（水抽出）及びトマト葉を凍結乾燥させ、乾燥体を作製した。乾燥体にエタノール（乾燥体１ｇあたりエタノール１０ｍＬ）を加え、１日間振とう抽出し、吸引濾過によってエタノール抽出液を得た。抽出作業は同様にしてさらに２回行った。エタノール抽出液はロータリーエバポレーターを用い溶媒を除去した後、ドラフト内で風乾し、真空デシケーターで乾燥させ、エタノール抽出物とした。抽出したのちの抽出残渣はドラフト内で風乾後、真空デシケーター内で乾燥した。
【００３６】
得られた抽出残渣に超純水を加え、振とうしながら４時間抽出した水抽出液は遠心分離後（３０００ｒｐｍ，１０分）、上澄みをろ紙でろ過した。この作業をもう１回繰り返した。水抽出液は凍結乾燥し、水抽出物を得た。さらにヤマブシタケ子実体に関しては、エタノール抽出物にｎ−ヘキサンを加え、１日間振とう抽出し、吸引濾過によってｎ−ヘキサン抽出液を得た。抽出作業は同様にさらに２回行った。得られたｎ−ヘキサン抽出液はエタノール抽出物と同様に乾燥させｎ−ヘキサン抽出物とした。
【００３７】
（実施例２）
［各種農作物のＰＰＡＲδアゴニストとしての作用の検討］
・ヤマブシタケ（水抽出、エタノール抽出、ｎ−ヘキサン抽出）
・ユキレイタケ（水抽出、エタノール抽出）
・エノキ（水抽出、エタノール抽出）
・ミカン柱頭（水抽出、エタノール抽出）
・ミカン花弁（水抽出、エタノール抽出）
・クコ（エタノール抽出）
・青トマト外皮（水抽出）
・トマト葉（エタノール抽出）
についてそのＰＰＡＲδアゴニスト活性を核内受容体コファクターアッセイ系［ＥｎＢｉｏ  ＲＣＡＳ  ｆｏｒ  ＰＰＡＲδ（藤倉化成株式会社）］により測定した結果を図１に示した。ポジティブコントロールとして合成ＰＰＡＲδアゴニストＧＷ５０１５１６を用い、６．２５μＭ  ＧＷ５０１５１６の値を１００％とした相対活性を示した。
【００３８】
ヤマブシタケ（水抽出物、エタノール抽出物）、ユキレイタケ（水抽出物）、ミカン柱頭（水抽出物）、ミカン花弁（水抽出物）、クコ（エタノール抽出物）、青トマト  外皮（水抽出）にはほとんど活性は認められなかったが、ヤマブシタケ（ヘキサン抽出物）、ユキレイタケ（エタノール抽出物）、ミカン柱頭（エタノール抽出物）、ミカン花弁（エタノール抽出物）及びトマト葉（エタノール抽出物）には明らかな活性が認められた。またどのようなキノコでも活性が認められるわけではなく、エノキでは水抽出物とエタノール抽出物共に活性はほとんど認められなかった。
【００３９】
（実施例３）
［ヤマブシタケヘキサン抽出物のクロマトグラフィー分画物のＰＰＡＲδアゴニストとしての作用の検討］
ヤマブシタケヘキサン抽出物を以下に記すシリカゲルクロマトグラフィーにより、１１のフラクション（Ｆｒ）に分画した。シリカゲル８００ｇをｎ−ヘキサンでスラリー状にし、オープンカラム（φ  ４．２５×６０．０ｃｍ，３４０９．２ｃｍ３）に充填した。このカラムを用いて、ｎ−ヘキサンと酢酸エチルのグラジエントで流し、Ｆｒ１からＦｒ１１に分けた。次に活性が高かったＦｒ３を再度以下に記すカラムを用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて分画した。
【００４０】
シリカゲル１００ｇをｎ−ヘキサンでスラリー状にし、オープンカラム（φ  １．７×３０．０ｃｍ，２８８．４９ｃｍ３）に充填した。ｎ−ヘキサンとクロロホルムを用いグラジエントで流し、結果としてＦｒ３−１からＦｒ３−４まで４つのフラクションを得た。Ｆｒ３−２と３−３を混合し［Ｆｒ３−（２，３）］、その画分をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにてさらに分画した。シリカゲル５ｇをｎ−ヘキサンでスラリー状にし、オープンカラム（φ  ０．５×３０．０ｃｍ，２３．５５ｃｍ３）に充填した。ｎ−ヘキサンとクロロホルムを１：１の割合で混合した溶媒を流し、２つのフラクション［Ｆｒ３−（２，３）−１，Ｆｒ３−（２，３）−２］を得た。
【００４１】
以上のフラクションのＰＰＡＲδアゴニスト活性をＲＣＡＳ法により測定した結果を示した（Ｆｒ３−１と３−４は測定していない）。その結果、図２（ａ）及び（ｂ）に示すように、最初にヤマブシタケヘキサン抽出物から分画した１１のフラクションのうち、Ｆｒ３，４，５，６に活性成分が含まれ、Ｆｒ３で最も活性が高いことが分かった。図３に示すように、Ｆｒ３−（２，３）−１，Ｆｒ３−（２，３）−２は、Ｆｒ３−（２，３）−１でより高い活性が見られた。なお、図２（ａ）、（ｂ）及び図３の各フラクションの添加量は０．０５％ヘキサン抽出物（分画前）に相当する量とした。
【００４２】
（実施例４）
［ヤマブシタケｎ−ヘキサン抽出物とミカン花弁エタノール抽出物の筋細胞（筋線維）におけるＰＰＡＲδアゴニストとしての作用の検討］
ＲＣＡＳで観察された活性が、筋細胞（筋線維）でも観察されるか、ラットから単離・培養した筋線維を用いて検討を行った。まず５週齢Ｆｉｓｃｈｅｒ３４４ラット雄（ＫＢＴオリエンタル）の後肢の足の裏の筋組織である短趾屈筋を単離した。
【００４３】
単離した筋組織はコラゲナーゼ溶液で処理後、ピペッティングにより筋細胞（筋線維）をほぐし、重力沈降による精製後、ディッシュに播種した。単離培養した筋線維の培地にヤマブシタケヘキサン抽出物あるいはミカン花弁エタノール抽出物を添加し、１２時間培養後、ＰＰＡＲδの標的遺伝子であるＰＤＫ４のｍＲＮＡ発現量をリアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより調べた。ＰＤＫ４の発現量はハウスキーピング遺伝子の一種ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ−ｇｕａｎｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＨＰＲＴ）で補正した。
【００４４】
その結果、図４及び５に示すように、ヤマブシタケのｎ−ヘキサン抽出物の低濃度添加区およびミカン花弁エタノール抽出物添加区でＰＤＫ４の発現量の有意な増加が見られた。そして図６に示すように、Ｆｒ３−（２，３）−１を０．００２％添加した実験区においてＰＤＫ４の発現量は、合成アゴニストＧＷ５０１５１６に匹敵するレベルまで、顕著に増加した。
【００４５】
（実施例５）
［マウスを用いた２４時間ヤマブシタケ配合飼料摂食試験］
実施例４の細胞実験において筋線維に対しヤマブシタケ抽出画分がＰＰＡＲδアゴニストとして作用することが示唆されたため、ｉｎ  ｖｉｖｏで骨格筋に対して、ＰＰＡＲδアゴニスト活性が観察されるかを検証するために、マウスを用い実験を行った。
【００４６】
８匹の８週齢Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス雄（ＫＢＴオリエンタル）を１週間予備飼育した後、乾燥ヤマブシタケを５％含有する飼料あるいは対照飼料を２４時間自由に摂食させた（各群４匹）。マウスは室温２２．０±２．０℃、湿度５５±１０％で環境下で飼育し、水は自由に与えた。２４時間の給餌終了後、長趾伸筋を摘出し、ＴＲＩｚｏｌでＲＮＡを抽出した後、ＰＰＡＲδの標的遺伝子であるＰＤＫ４とＵＣＰ３のｍＲＮＡ発現量をリアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより調べた。発現量はハウスキーピング遺伝子の一種ＨＰＲＴで補正した。
【００４７】
その結果、図７（ａ）及び（ｂ）に示すように、ヤマブシタケ摂取群で、ＰＰＡＲδ標的遺伝子のＰＤＫ４とＵＣＰ３の有意な増加が見られた。
【００４８】
（実施例６）
［マウスを用いた８週間ヤマブシタケ配合飼料摂食試験］
実施例５の２４時間摂食実験において、ヤマブシタケの摂取がマウスの骨格筋に対し、ＰＰＡＲδアゴニストとして作用することが示唆されたため、長期的な摂取の後、マウスの筋特性に変化が見られるか調べる実験を行った。
【００４９】
８週齢Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス雄（ＫＢＴオリエンタル）を１週間予備飼育した後、乾燥ヤマブシタケを５％含有する飼料あるいは対照飼料を８週間対照区と摂食量を揃えて摂食させた（各群７−８匹）。マウスは室温２２．０±２．０℃、湿度５５±１０％で環境下で飼育し、水は自由に与えた。８週間の飼育後、ガス麻酔下のマウスの筋機能を、脛骨神経の電気刺激による強制的な筋収縮により調べた。
【００５０】
その結果、図８に示すように、ヤマブシタケ摂取群で、筋持久力の有意な増加が見られた。最大筋力は変化がなかった。筋持久力の増加は遅筋タイプの特性と一致するものである。
【００５１】
（実施例７）
［ヤマブシタケヘキサン抽出物に含まれるＰＰＡＲδアゴニスト成分の推定］
ヤマブシタケヘキサン抽出物のシリカゲルクロマトグラフィー分画物のうち、最も活性が高かったＦｒ  ３をＧＣ−ＥＩＭＳ  分析に供した。図９（ａ）に、解析クロマトグラムを示した。予備的かつ定性的な結果であるが、図９（ｂ）に示すように、長鎖脂肪酸であるオレイン酸、ステアリン酸及び分岐鎖脂肪酸である１３−メチルテトラデカン酸が活性候補物質として挙げられた。
【産業上の利用可能性】
【００５２】
本発明のヤマブシタケ、ユキレイタケ、ミカン柱頭、ミカン花弁若しくはトマト葉のいずれか一種以上のエタノール抽出物はそのまま、又は慣用の担体等と共に、骨格筋の遅筋タイプ増加を目的として、食品分野においては種々の日常の飲食物等に配合し健康機能食品等として、さらに家畜及びペット等を含む動物用飼料に用い得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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