(57)【要約】【課題】ＦＤ（機能性胃腸症）、特にストレスによる胃排泄能が低下して引き起こされる悪心等の上腹部不快感の改善剤の提供。【解決手段】下記一般式（Ｉ）（式（Ｉ）中、Ｒ１は炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表す。）で表されるアズレン誘導体を有効成分とすることを特徴とする、機能性胃腸症改善剤、及び前記一般式（Ｉ）で表されるアズレン誘導体を有効成分とすることを特徴とする、抗ストレス性胃排泄遅延症改善剤。［化１］2014185097.tif 000010【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）
【化１】
2014185097.tif 000006
（式（Ｉ）中、Ｒ１は炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表す。）
で表されるアズレン誘導体を有効成分とすることを特徴とする、機能性胃腸症改善剤。
【請求項２】
前記アズレン誘導体が下記式（Ｉａ）
【化２】
2014185097.tif 000007
で表される、請求項１に記載の機能性胃腸症改善剤。
【請求項３】
下記一般式（Ｉ）
【化３】
2014185097.tif 000008
（式（Ｉ）中、Ｒ１は炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表す。）
で表されるアズレン誘導体を有効成分とすることを特徴とする、抗ストレス性胃排泄遅延症改善剤。
【請求項４】
前記アズレン誘導体が下記式（Ｉａ）
【化４】
2014185097.tif 000009
で表される、請求項３に記載の抗ストレス性胃排泄遅延症改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、機能性胃腸症（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｄｙｓｐｅｐｓｉａ：ＦＤ）、特にストレスによる胃排泄能が低下して引き起こされる悪心等の上腹部不快感の改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＦＤは、胃潰瘍や胃癌等の器質的疾患が確認されず、内視鏡など諸検査において異常を認めないにも拘わらず、心窩部領域に慢性的消化器症状を有する症候群である（例えば、非特許文献１及び２参照。）。その病態生理には、胃排泄遅延や適応性弛緩不全などの消化管運動障害が関与していることが示唆されている（例えば、非特許文献３参照。）。消化管運動障害は、ストレスや様々な心理的要因によっても引き起こされるものであり（例えば、非特許文献４参照。）、ストレスによって胃排泄が抑制される。このため、ストレス等の心理的要因によって、ＦＤ症状が誘導されると考えられている（例えば、非特許文献５〜８参照。）実際に、ＦＤ患者はしばしば健常者と比べて、心理的あるいは身体的不安や、抑うつ気分を合併している傾向がある（例えば、非特許文献９及び１０参照。）
【０００３】
胃酸抑制薬や胃粘膜保護剤によって、消化管運動が改善される。そこで、ＦＤの治療にも、胃酸抑制薬や胃粘膜保護剤が使用されている。例えば、ＦＤの治療には、５−ＨＴ３受容体アンタゴニストや５−ＨＴ４受容体アゴニストが用いられている。また、９種の植物抽出物を含み、植物由来のアズレン化合物を含むＳＴＷ５（製品名：Ｉｂｅｒｏｇａｓｔ（登録商標））もＦＤの治療に有効であるとの報告がある（例えば、非特許文献１１参照。）しかしながら、これらの薬剤によりＦＤ症状が改善される作用機序は明らかではない。特に胃粘膜保護剤における消化管運動改善のメカニズムは、不明な部分が少なくない。
【０００４】
近年、カミツレ油の主成分であるアズレン化合物の誘導体であって、天然のアズレン化合物よりも安定性の高いエグアレンナトリウム（Ｅｇｕａｌｅｎ  Ｓｏｄｉｕｍ）（製品名：アズロキサ（登録商標））が開発され、臨床においても使用が可能となった（例えば、特許文献１参照。）。エグアレンナトリウムは、抗炎症・抗アレルギー作用（例えば、非特許文献１２及び１３参照。）の他、高齢者等の胃酸分泌が低下した胃内や、酸分泌抑制薬によりｐＨが中性となった胃内においても潰瘍部位に選択的に付着し、潰瘍及びその周辺のペプシン活性低下作用（例えば、非特許文献１４参照。）、局所でのトロンボキサンＡ２拮抗作用（例えば、非特許文献１５及び１６参照。）、線維芽細胞増殖因子（ｂ−ＦＧＦ）増強作用（例えば、非特許文献１７及び１８参照。）、局所血管新生作用及び創傷治癒促進作用（例えば、非特許文献１９参照。）を示すことが知られている。これらの報告から、エグアレンナトリウムとＨ２ＲＡ（ヒスタミンＨ２受容体拮抗薬）の併用が、ＰＰＩ（プロトンポンプ阻害薬）と同様の胃潰瘍治癒促進作用を有していることが明らかとなり(例えば、非特許文献２０参照。)、日本消化器病学会「消化性潰瘍診療ガイドライン（２００９年)」(非特許文献２１参照。)において、胃潰瘍に対するシメチジンとエグアレンナトリウムの併用治療が推奨されている。さらに、シメチジン単独投与に比べてエグアレンナトリウム併用療法では、腹部症状消失効果が高いことも報告されている（例えば、非特許文献２２参照。）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特公平１−４９２５９号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Feinle-Bissetら、Current  Treatment  Options  in  Gastroenterology、２００３年、第６巻、第２８９〜２９７ページ。
【非特許文献２】Holtmannら、Digestive  Diseases  and  Sciences、２００４年、第４９巻、第６７２〜６７９ページ。
【非特許文献３】Tackら、Gastroenterology、２００１年、第１２１巻、第５２６〜５３５ページ。
【非特許文献４】Whiteheadら、Gastroenterology  Clinics  of  North  America、１９９６年、第２５巻、第２１〜３４ページ。
【非特許文献５】Mistiaenら、Hepatogastroenterology、２００２年、第４９巻、第１４５７〜１４６０ページ。
【非特許文献６】Martinezら、Peptides、２００４年、第２５巻、第１７３３〜１７４４ページ。
【非特許文献７】Tsukadaら、BIOLOGICAL  and  PHARMACEUTICAL  BULLETIN、２００３年、第２６巻、第３６８〜３７０ページ。
【非特許文献８】Plotskyら、Endocrinology、１９８４年、第１１４巻、第１６４〜１７３ページ。
【非特許文献９】Richter、Scandinavian  Journal  of  Gastroenterology、１９９１年、第２６巻、第ｓ１８２号、第４０〜４６ページ。
【非特許文献１０】Leeら、Journal  of  Psychosomatic  Research、２０００年、第４９巻、第９３〜９９ページ。
【非特許文献１１】Simmenら、Phytomedicine、２００６年、第１３巻、第ＳＶ５１〜５５ページ。
【非特許文献１２】藤村智恵子、「関西医科大学雑誌」、１９６１年、第１３巻、第１２２ページ。
【非特許文献１３】岡部進ら、「応用薬理」、応用薬理研究会発行、１９７５年、第９巻、第３１ページ。
【非特許文献１４】上田房雄ら、「薬理と治療」、１９８７年、第１５巻、第３６６７〜３６７２ページ。
【非特許文献１５】Mochizukiら、Scandinavian  Journal  of  Gastroenterology、１９８９年、第２４巻、第ｓ１６２号、第１９４〜１９７ページ。
【非特許文献１６】Motizukiら、International  Congress  of  New  Drug  Development、１９９１年、ＰＤ８（２５０）。
【非特許文献１７】小出典子ら、Ulcer  Research、１９９８年、第２５巻、第２号、第２２５〜２２８ページ。
【非特許文献１８】若林修一ら、Ulcer  Research、１９９８年、第２５巻、第２号、第２２９〜２３２ページ。
【非特許文献１９】佐藤正雄ら、「薬物動態」、日本薬物動態学会発行、１９９０年、第５巻、第６号、第８４５〜８５１ページ。
【非特許文献２０】三好秋馬ら、「薬理と治療」、ライフ・サイエンス出版株式会社発行、１９９０年、第２７巻、第５号、第８５３〜８６８ページ。
【非特許文献２１】日本消化器病学会編、「消化性潰瘍ガイドライン」、株式会社南江堂発行、２００９年。
【非特許文献２２】藤沢智雄ら、「新薬と臨床」、株式会社医薬情報研究所発行、２０１２年、第６１巻、第４号、第８６８〜８７４ページ。
【非特許文献２３】Iwaら、Neuroscience  Letters、２００６年、第３９９巻、第６〜１０ページ。
【非特許文献２４】Nakadeら、American  Journal  of  Physiology−Regulatory,   Integrative  and  Comparative  Physiology、２００５年、第２８８巻、第Ｒ４２７〜Ｒ４３２ページ。
【非特許文献２５】Kidoら、Journal  of  Pharmacological  Sciences、２００５年、第９８巻、第１６１〜１６７ページ。
【非特許文献２６】Scarpignatoら、Arch．Int．Pharmacodyn．Ther．、１９８０年、第２４６巻、第２８６〜２９４ページ。
【非特許文献２７】Gondimら、Autonomic  Neuroscience−Basic、２００１年、第８７巻、第５２〜５８ページ。
【非特許文献２８】Kalinら、Brain  Research、１９９４年、第６５６巻、第１８２〜１８６ページ。
【非特許文献２９】Tacheら、American  Journal  of  Physiology、１９８７年、第２５３巻、第Ｇ２４１〜Ｇ２４５ページ。
【非特許文献３０】Bingamanら、Neuroendocrinology、１９９４年、第５９巻、第２２８〜２３４ページ。
【非特許文献３１】Makinoら、Brain Research、１９９９年、第８５０巻、第１３６〜１４３ページ。
【非特許文献３２】Siaudら、Cell  Tissue  Research、１９９０年、第２５９巻、第５３５〜５４２ページ。
【非特許文献３３】Uvnas-Mobergら、「Vagal  Nerve  Function  (Journal  of  the  Autonomic  Nervous  System)」、Elsevier  Science  Ltd発行、１９８３年、第１４１〜１５５ページ。
【非特許文献３４】Leeら、Neurogastroenterology  and  Motility、１９９７年、第９巻、第２２１〜２２９ページ。
【非特許文献３５】Monnikesら、American  Journal  of  Physiology、１９９２年、第２６２巻、第Ｇ１３７〜Ｇ１４３ページ。
【非特許文献３６】Lewisら、The Journal of Physiology、２００２年、第５４３巻、第１３５〜１４６ページ。
【非特許文献３７】Nakadeら、American  Journal  of  Physiology−Regulatory,   Integrative  and  Comparative  Physiology、２００２年、第２８２巻、第Ｒ１７８２〜Ｒ１７８８ページ。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
前述のように、エグアレンナトリウムについては、Ｈ２ＲＡと併用することによって、胃潰瘍に対する治療効果が奏されることが明らかとなっているものの、エグアレンナトリウム単独投与による効果や、潰瘍のないＦＤに対する効果等については、いまだ明らかにされていない。
【０００８】
本発明は、ＦＤ、特にストレスによる胃排泄能が低下して引き起こされる悪心等の上腹部不快感の改善剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、拘束ストレスラットの胃排遅延モデルにおいて、エグアレンナトリウム単独投与により、ストレス誘発性の胃排泄能低下を改善し得ることを見出し、本発明を完成させた。
【００１０】
すなわち、本発明は、以下の［１］〜［４］の機能性胃腸症改善剤及び抗ストレス性胃排泄遅延症改善剤を提供する。
［１］  下記一般式（Ｉ）（式（Ｉ）中、Ｒ１は炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表す。）で表されるアズレン誘導体を有効成分とすることを特徴とする、機能性胃腸症改善剤。
【００１１】
【化１】
2014185097.tif 000002
【００１２】
［２］  前記アズレン誘導体が、下記式（Ｉａ）で表される、前記［１］の機能性胃腸症改善剤。
【００１３】
【化２】
2014185097.tif 000003
【００１４】
［３］  前記一般式（Ｉ）（式（Ｉ）中、Ｒ１は炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表す。）で表されるアズレン誘導体を有効成分とすることを特徴とする、抗ストレス性胃排泄遅延症改善剤。
［４］  前記アズレン誘導体が、前記式（Ｉａ）で表される、前記［３］の抗ストレス性胃排泄遅延症改善剤。
【発明の効果】
【００１５】
本発明に係るＦＤ改善剤及び抗ストレス性胃排泄遅延症改善剤は、単独で投与されることにより、ＦＤ、特にストレスによる胃排泄能が低下して引き起こされる上腹部不快感を改善し得るため、ＦＤの治療に好適に用いられる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】正常ラットの胃排泄に対するエグアレンナトリウムの作用を調べた結果を示した図である。
【図２】拘束ストレス下胃排泄遅延ラットの胃排泄に対するエグアレンナトリウムの効果を調べた結果を示した図である。
【図３】拘束ストレス下胃排泄遅延ラットの視床下部中のＣＲＦ濃度に対するエグアレンナトリウムの効果を調べた結果を示した図である。
【図４】迷走神経切断による胃排泄遅延ラットに対するエグアレンナトリウムの効果を調べた結果を示した図である。
【図５】脳室内ＣＲＦ投与されたラットの胃排泄量変化とエグアレンナトリウムの効果を調べた結果を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明及び本願明細書において、ＦＤ（機能性胃腸症）とは、消化性潰瘍やガン症状のような器質的疾患が認められず、胃の内容物の停滞に基づく腹部の膨満感、悪心・嘔吐、上腹部痛、食欲不振あるいは便通異常等の上腹部不定愁訴の続く病態を言い、消化管の器質的疾患が見られなくても、患者のＱＯＬを低下させる再現性のある消化器症状が認められる症状をいう。当該胃腸症はこれまで慢性胃炎や胃炎として診断されてきた疾患であり、腹部痛、胃もたれ、胸やけ等の症状を呈することを特徴とする。近年、開業医外来の患者の４〜６割が機能性胃腸症といわれており、ピロリ菌の除去療法により増加傾向にある。
【００１８】
本発明に係るＦＤ改善剤及び抗ストレス性胃排泄遅延症改善剤（以下、まとめて「本発明に係る改善剤」ということがある。）は、下記一般式（Ｉ）（式（Ｉ）中、Ｒ１は炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表す。）で表されるアズレン誘導体を有効成分とすることを特徴とする。
【００１９】
【化３】
2014185097.tif 000004
【００２０】
前記一般式（Ｉ）中、Ｒ１は炭素数１〜６のアルキル基を表す。Ｒ１のアルキル基としては、直鎖アルキル基であってもよく、分岐鎖アルキル基であってもよい。当該アルキル基としては、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−へキシル基等が挙げられる。本発明において有効成分として用いるアズレン誘導体としては、Ｒ１がメチル基、エチル基、又はｎ−プロピル基が好ましく、エチル基がより好ましい。
【００２１】
前記一般式（Ｉ）中、Ｒ２は、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表す。当該アルキル基としては、前記Ｒ１で挙げられたものと同様のものが挙げられる。本発明において有効成分として用いるアズレン誘導体としては、Ｒ２が水素原子、メチル基、又はエチル基が好ましく、水素原子がより好ましい。
【００２２】
前記一般式（Ｉ）中、Ｒ３は、Ｒ２とは独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表す。当該アルキル基としては、前記Ｒ１で挙げられたものと同様のものが挙げられる。本発明において有効成分として用いるアズレン誘導体としては、Ｒ３がメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓ−ブチル基、又はｔ−ブチル基が好ましく、ｉ−プロピル基がより好ましい。
【００２３】
本発明において有効成分として用いるアズレン誘導体は、溶媒分子を含む溶媒和物であってもよい。当該溶媒分子としては、水、エタノール、メタノール、グリセロール等が挙げられる。当該溶媒和物としては、水和物が好ましい。
【００２４】
本発明において有効成分として用いるアズレン誘導体としては、特に、下記式（Ｉａ）で表されるアズレン誘導体（エグアレンナトリウム）を用いることが好ましく、エグアレンナトリウムの水和物（エグアレンナトリウム：水＝１：１／３）を用いることがより好ましい。
【００２５】
【化４】
2014185097.tif 000005
【００２６】
前記一般式（Ｉ）で表されるアズレン誘導体は、オキサアズラノン、５−イソプロピルオキサアズラノン等の公知の化合物から、例えば、特許文献１に記載の合成方法等の常法により製造することができる。また、市販の化合物をそのまま用いることもできる。
【００２７】
本発明に係る改善剤は、通常の方法によって、散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、チュアブル剤などの固形剤、溶液剤、シロップ剤などの液剤、又は、注射剤、スプレー剤などに製剤化することができる。これらの製剤は、経口投与されることが好ましい。
【００２８】
本発明に係る改善剤は、有効成分である前記一般式（Ｉ）で表されるアズレン誘導体に、製剤上の必要に応じて、適宜の薬学的に許容される担体、例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、溶剤、崩壊剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤、無痛化剤、防腐剤、抗酸化剤、矯味矯臭剤、着色剤などを配合して製剤化される。 
【００２９】
賦形剤としては、乳糖、ブドウ糖、Ｄ−マンニトールなどの糖類、でんぷん類、結晶セルロースなどのセルロース類などの有機系賦形剤、リン酸二カルシウム、炭酸カルシウム、カオリンなどの無機系賦形剤などが挙げられる。結合剤としては、α化デンプン、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、Ｄ−マンニトール、トレハロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコールなどが挙げられる。滑沢剤としては、ステアリン酸、ステアリン酸塩などの脂肪酸塩、タルク、珪酸塩類などが挙げられる。溶剤としては、精製水、生理的食塩水などが挙げられる。崩壊剤としては、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、化学修飾されたセルロースやデンプン類、アルギン酸などが挙げられる。溶解補助剤としては、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、トレハロース、安息香酸ベンジル、エタノール、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなどが挙げられる。懸濁化剤あるいは乳化剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、アラビアゴム、ゼラチン、レシチン、モノステアリン酸グリセリン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース類、ポリソルベート類、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などが挙げられる。等張化剤としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、糖類、グリセリン、尿素などが挙げられる。安定化剤としては、ポリエチレングリコール、デキストラン硫酸ナトリウム、その他のアミノ酸類などが挙げられる。無痛化剤としては、ブドウ糖、グルコン酸カルシウム、塩酸プロカインなどが挙げられる。防腐剤としては、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸などが挙げられる。抗酸化剤としては、亜硫酸塩、アスコルビン酸などが挙げられる。矯味矯臭剤としては、医薬及び食品分野において通常に使用される甘味料、香料などが挙げられる。着色剤としては、医薬及び食品分野において通常に使用される着色料が挙げられる。 
【００３０】
本発明に係る改善剤によって改善される症状としては、例えば、悪心、嘔吐、吐き気、胸焼け、膨満感、胃もたれ、ゲップ、胸中苦悶感、胸痛、胃部不快感、食欲不振、嚥下障害等の代表的な上部消化管不定愁訴、及び関連した愁訴、例えば息切れ、息苦しさ、意欲低下、喉頭閉塞・異物感（漢方でいう「梅核気」）、易疲労感、肩こり、緊張、口のかわき（口渇・口乾）、呼吸促迫、四肢熱感・冷感、集中困難、焦燥感、睡眠障害、頭痛、全身倦怠感、動悸、寝汗、不安感、ふらつき感、めまい感、熱感、のぼせ、発汗、腹痛、便秘、抑鬱感等が挙げられる。
【００３１】
本発明に係る改善剤によって改善される症状としては、特に、胃排泄能の低下により誘発される症状が挙げられる。本発明に係る改善剤は、特に、ストレス誘発性の胃排泄能低下による症状の改善を目的とする抗ストレス性胃排泄遅延症改善剤として投与されることが好ましい。
【００３２】
本発明に係る改善剤の投与対象は、ＦＤを発症した個体（例えば、ヒトのほか、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、イヌ、トリ等の家畜や家禽、及びマウス、ラット等の実験動物。以下、同様。）、該機能性消化管障害等を罹患する可能性のある個体等が挙げられる。また、本発明に係る改善剤の投与量は、有効成分により所望の改善効果を与えられるために十分な量であればよく、投与対象の生物種、性別、年齢、体重、食餌、投与の形態、ＦＤ等の症状、ＦＤ等を誘発するリスクの程度、消化管の器質性疾患の症状等によって異なる。例えば、成人（体重６０ｋｇとして）に対する有効成分の１日当たりの投与量は、１〜５００ｍｇが好ましく、１０〜２００ｍｇがより好ましく、１０〜５０ｍｇが更に好ましい。このような投与量を１回又は数回に分けて投与することができる。
【００３３】
本発明に係る改善剤は、前記一般式（Ｉ）で表されるアズレン誘導体以外の有効成分を含んでいてもよい。当該有効成分としては、例えばＨ２受容体拮抗薬、プロトンポンプ阻害薬等の酸分泌抑制剤、５−ＨＴ受容体作用剤、Ｄ２拮抗剤等の運動機能改善剤、ムスカリン受容体拮抗薬、抗ガストリン薬、抗コリン薬等の制酸剤、テプレノン、プラウノトール、オルノプロスチル、エンプロスチル、ミソプロストール、レバミピド、スクラルファート、ポラプレジンク、アズレン、グルタミン、アルジオキサ、ゲファルナート、エカベトナトリウム等の粘膜保護剤、スルファサラジン、５−ＡＳＡ製剤、ステロイド、レミケード等の炎症性大腸炎治療剤を含有することができる。これらは１種又は２種以上を含有することができる。
【実施例】
【００３４】
次に実施例等を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３５】
［実施例１］
拘束ストレスラットの胃排泄遅延効果を用いて、その胃排泄遅延に対するエグアレンナトリウムの作用を検討した。
【００３６】
＜実験動物＞
以下の実験は、実験動物のケアと使用に関する国際倫理指針に厳格に従い、実験動物管理委員会の承認の下に行われた。拘束ストレスラットの作製及び胃排泄実験には、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系雄性ラットのうち、体重が２２０〜２５０ｇのものを用いた。実験動物取り扱いについては、恒温恒湿（２２±２℃、６０±１０％）環境下で、１２時間の明−暗サイクル（点灯：08:00〜20:00）とし、食物と水は、実験期間を除いて自由に与えられた。
【００３７】
＜拘束ストレス下胃排泄遅延ラットモデル＞
Iwaらによる既報の方法(非特許文献２３及び２４参照。) に従い、ラットを、直径６０ｍｍ、長さ１５０ｍｍの円筒状ステンレス性容器内に９０分間拘束後解放した（ストレス処理）。このストレス処理を１日１回、７日間継続することにより、拘束ストレス下胃排泄遅延ラットモデルを作製した。
【００３８】
＜エグアレンナトリウム＞
エグアレンナトリウムとしては、エグアレンナトリウム水和物（Ｃ１５Ｈ１７ＮａＯ３Ｓ・１／３Ｈ２Ｏ）である「アズロキサ（登録商標）」（寿製薬株式会社製）を用いた。エグアレンナトリウムは、蒸留水に溶解又は懸濁後、５、１０、又は２０ｍｇ／ｋｇ／３ｍＬ用量で経口投与した。コントロール群には、同量の蒸留水のみを実験期間中投与した。
【００３９】
＜胃排泄量測定＞
Kidoら、Scarpignatoら及びGondimらによって報告された方法（非特許文献２５〜２７参照。）に従い、フェノールレッド（ＰＲ）添加メチルセルロース食(ＭＣ食：蒸留水によって希釈された１．５ｇ／１００ｍＬのメチルセルロースに、５０ｍｇ／１００ｍＬとなるようにＰＲを加えて撹拌したもの)を用いた。実験は、まず、ＭＣ食を１．５ｍＬ投与し、投与直後又は２０分後に速やかに屠殺し、胃食道接合部及び幽門輪を挟み、胃を摘出した。摘出した胃（胃サンプル）は、０．１Ｍ  水酸化ナトリウム水溶液１００ｍＬを加えてホモジナイズし、室温で６０分間静置した後、上清５ｍＬにトリクロロ酢酸（２０ｗ／ｖ％）を０．５ｍＬ加えて３０００ｒｐｍで１０分間遠心処理した。遠心処理により得られた上清１ｍＬに、０．５Ｍ  水酸化ナトリウム水溶液４ｍＬを加え、５６０ｎｍの吸光度（Ｄ５６０値）を測定した。
【００４０】
胃排泄量（Ｇａｓｔｒｉｃ  ｅｍｐｔｙｉｎｇ）は以下の計算方法にて算出した。下記式中、「Ａ」は「ＰＲ投与直後の胃サンプルから回収されたＰＲ全量」を意味し、「Ｂ」は「ＰＲ投与から２０分後の胃サンプルに残存しているＰＲ量」を意味する。
【００４１】
胃排泄量（％）＝（１−［Ｂ］／［Ａ］）×１００
【００４２】
＜ＣＲＦ測定＞
ＣＲＦ（Ｃｏｒｔｉｃｏｔｏｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）は視床下部室傍核（ＰＶＮ）などで生産される４１個のアミノ酸からなる神経ペプチドであり、ストレス応答時に、視床下部から分泌され、それが下垂体前葉からの副腎皮質刺激ホルモン(ＡＣＴＨ)の分泌を促進し、さらに副腎皮質の活動を促進する(例えば、非特許文献８参照。)。拘束ストレスにより、ＰＶＮと扁桃体にて、ＣＲＦのｍＲＮＡ及びＣＲＦが増加すると知られており(例えば、非特許文献２８参照。)、これらの知見から、その内因性ＣＲＦは、拘束ストレス応答に重要な役割を果たしていると示唆され、げっ歯類では、ストレス負荷により胃排泄量が変化する報告が多数ある（例えば、非特許文献２３、２４、及び２９参照。）
【００４３】
視床下部摘出方法は既出の通り(例えば、非特許文献３０及び３１参照。) ラットを屠殺後すぐに脳を氷上に摘出し、視床下部を切り出した。なお、非特異的ストレス応答を避けるために最後の治療ラットを屠殺後６０分間経過してから、別の部屋で１匹ずつ処理された。組織サンプルは、２Ｎ  酢酸１ｍＬ中でホモジナイズした後、３分間煮沸し、次いで３０００ｒｐｍで２０分間遠心分離処理し、得られた上清を新しいチューブに移して凍結乾燥し、測定を行うまで−７０℃で保存した。ＣＲＦのタンパク質レベルは、ＥＬＩＳＡキット（ｍｏｕｓｅ／ｒａｔ  ＣＲＦ−ＨＳ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ、製品番号：ＹＫ１３１、矢内原研究所株式会社製）を用いて、当該キットに添付のプロトコールに従って測定した。
【００４４】
＜迷走神経切断＞
胃消化管運動においては自律神経の関与も重要な要素であり、様々な消化管ホルモンが自律神経系の活動促進又は抑制に関与していることが知られている（例えば、非特許文献３２及び３３参照。）。迷走神経は脳室内ＣＲＦ投与により活動促進し、胃運動調節を行っていると考えられている（例えば、非特許文献２９、３４〜３６参照。）。
【００４５】
迷走神経切断は、Tacheらの方法(非特許文献２９参照。)に準じて行った。具体的には、迷走神経切断群の手術は、ペントバルビタールを腹腔内に投与して麻酔した後に、剣状突起周囲を毛刈りし、アルコールで消毒した。剣状突起より尾部側へ正中線で４ｃｍ程度切開し、開創器で広げ、横隔膜と肝臓との間の膜（鎌状間膜）を切り、食道の両側にある迷走神経を確認した。迷走神経を食道から剥離し、電磁ピンセットで上下を焼き、５ｍｍ程度切り取った。左右両方とも同様に切除し、ペニシリンを滴下して閉腹した。シャム手術群の手術は、開腹し、迷走神経を確認し、ペニシリンを滴下して閉腹した。
【００４６】
＜ＣＲＦ脳室内投与＞
−７０℃で保存されているＣＲＦ（シグマケミカル社製、米国）を使用直前に生理食塩水で希釈したものを投与した。投与はNakadeらの報告のように(非特許文献３７参照。)、４％イソフルレン麻酔下でラットを定位に置き、マイクロシリンジを用いて脳脊髄液の存在を確認した後に、脳槽内にＣＲＦ（１μｇ）又は生理食塩水を注入した。
【００４７】
＜統計処理＞
データは、ＳＰＳＳ１１．０の統計パッケージを用いて分析した。分散（ＡＮＯＶＡ）とＴｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの多重比較分析は、統計的有意性を評価するために使用した。ｐ<０．０５を統計的に有意とみなし、すべての結果は、ｍｅａｎ±ｓ.ｅ.として示した。
【００４８】
１．正常ラット胃排泄に対するエグアレンナトリウムの作用
２４匹のラットを無作為に６匹ずつ４グループに分け、１８時間絶食させつつ、１グループには蒸留水のみ投与し（ノーマル群）、残る３グループにはそれぞれ、エグアレンナトリウムを５、１０、又は２０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与した。絶食後、ＭＣ食を投与して胃排泄量測定を行った。
各グループの胃排泄量測定結果を図１に示す。絶食の状況下でＭＣ食を与えた正常ラットの胃排泄量は、エグアレンナトリウム投与下では用量依存性に増加傾向がみられたものの、５及び１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与群では有意差は認められなかった。エグアレンナトリウム２０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与群にのみ、有意差を持って胃排泄量増加が認められた。
【００４９】
２．拘束ストレス下胃排泄遅延ラットに対するエグアレンナトリウムの効果
２４匹のラットを無作為に６匹ずつ４グループに分け、７日間、１グループには蒸留水のみ投与し（コントロール群）、残る３グループにはそれぞれ、エグアレンナトリウムを５、１０、又は２０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与した。また、１日１回、ストレス処理を行った。８日目に、各ラットについて胃排泄量測定及びＣＲＦ濃度測定を行った。
【００５０】
各グループの胃排泄量測定結果と、正常ラット（ノーマル群）の胃排泄量測定結果（前記１）を図２に示す。コントロール群とノーマル群の結果から明らかなように、拘束ストレスにより、正常ラットに比し有意に（ｐ＜０．０５）胃排泄量が低下した。また、コントロール群とエグアレンナトリウム投与群の結果を比較したところ、エグアレンナトリウム投与により、胃排泄量は用量依存性に優位に（ｐ＜０．０１）改善した。
【００５１】
各グループの視床下部中のＣＲＦ濃度（ｎｇ／ｍｇ）と、正常ラット（ノーマル群）の視床下部中のＣＲＦ濃度の測定結果を図３に示す。コントロール群とノーマル群の結果から明らかなように、拘束ストレス下胃排泄遅延ラットでは、正常ラットに比し、ＣＲＦ濃度は優位に（ｐ＜０．０１）増加した。また、コントロール群とエグアレンナトリウム投与群の結果を比較したところ、拘束ストレス下胃排泄遅延ラットのＣＲＦ濃度は、エグアレンナトリウム投与によってはさほど影響を受けなかった。
【００５２】
３．迷走神経切断による胃排泄遅延ラットに対するエグアレンナトリウムの効果
２４匹のラットを無作為に６匹ずつ４グループに分け、１グループにはシャム手術を行い（ＳＯ群）、１グループにはシャム手術後に１日１回ストレス処理を行い（ＳＯ＋ＲＳ群）、１グループには迷走神経切除手術後に１日１回ストレス処理を行い（ＶＧ＋ＲＳ群）、残る１グループには迷走神経切除手術後に１日１回ストレス処理を行い、かつエグアレンナトリウム（２０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を投与した（ＶＧ＋ＲＳ＋ＥＳ群）。手術から７日経過後に、各ラットの胃排泄量を測定した。
各グループの胃排泄量測定結果を図４に示す。ＳＯ群とＳＯ＋ＲＳ群の結果から明らかなように、シャム手術をしたラットでも、拘束ストレス下で胃排泄は遅延した（ｐ＜０．０１）。一方、迷走神経切断手術を施行したラット（ＶＧ＋ＲＳ群とＶＧ＋ＲＳ＋ＥＳ群）では、拘束ストレスを負荷しても、ＳＯ＋ＲＳ群とは異なり、有意な胃排泄遅延は認められなかった（ＳＯ群に対し、ｐ＞０．０５、ＳＯ＋ＲＳ群に対し、ｐ＜０．０１）。ＶＧ＋ＲＳ群とＶＧ＋ＲＳ＋ＥＳ群を比較したところ、拘束ストレス下迷走神経手術施行ラットに対してエグアレンナトリウムを投与することにより、胃排泄能の改善がわずかではあるが有意に認められた（ｐ＜０．０５）。
【００５３】
４．脳室内ＣＲＦ投与されたラットの胃排泄量変化とエグアレンナトリウムの効果
１８匹のラットを無作為に６匹ずつ３グループに分け、１グループにはＣＲＦを脳室内に投与し（ＣＲＦ群）、１グループには迷走神経切除手術後にＣＲＦを脳室内に投与し（ＶＧ＋ＣＲＦ群）、残る１グループにはエグアレンナトリウム（２０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を７日間投与した後にＣＲＦを脳室内に投与し（ＥＳ＋ＣＲＦ群）、各ラットの胃排泄量を測定した。
各グループの胃排泄量測定結果と、正常ラット（ノーマル群）の胃排泄量測定結果（前記１）を図５に示す。ノーマル群とＣＲＦ群とＶＧ＋ＣＲＦ群の結果から明らかなように、脳槽内にＣＲＦ（１μｇ）を投与することによって、ラットの胃排泄量は著明に低下した（ｐ＜０．０１）が、迷走神経切断後有意に改善し（ｐ＜０．０１）、正常ラット胃排泄量とほぼ同等量となった。一方で、ノーマル群とＣＲＦ群とＥＳ＋ＣＲＦ群を比較したところ、ＣＲＦ投与後の胃排泄遅延は、エグアレンナトリウム投与にて著明に増加したものの、その効果は限定的であり、正常ラット胃排泄量より有意に低下していた（ｐ＜０．０１）。
【００５４】
以上の結果をまとめると、エグアレンナトリウムの単独投与により、正常ラットと迷走神経切断されたラットの両方において、胃排泄量が促進された。また、エグアレンナトリウムの単独投与により、拘束ストレスによって誘発される胃排泄遅延が優位に改善された。これらの結果から、エグアレンナトリウム単独投与により、胃排泄が促進され、ストレス下胃排泄遅延が改善されることが明らかとなった。
【００５５】
一方で、エグアレンナトリウム投与は、視床下部のＣＲＦ濃度には影響を与えなかった。また、拘束ストレスによる胃排泄遅延は迷走神経切断によって改善するが、エグアレンナトリウム投与によりその遅延をさらに改善させることができた。脳室内ＣＲＦ投与により誘発された胃排泄遅延も迷走神経切断によって改善し、エグアレン投与によっても有意に改善されたが、その改善効果は迷走神経切断よりも低かった。これらの結果から、エグアレンナトリウムは、視床下部−迷走神経系を介さない作用により、拘束ストレス下胃排泄遅延を改善することが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００５６】
本発明に係るＦＤ改善剤及び抗ストレス性胃排泄遅延症改善剤は、胃排泄能の改善効果を有するため、ＦＤ、特にストレスによる胃排泄能が低下して引き起こされる悪心等の上腹部不快感の治療等に用いることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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