(57)【要約】【課題】天然由来で安全性が高く、メラノサイトの増殖を抑制する効果に優れたメラニン産生細胞増殖抑制剤及びそれを含む皮膚外用剤を提供する。【解決手段】カクレイト目フノリ科フクロフノリを含水率０〜４５容量％のアルコールで抽出したフクロフノリ抽出物を有効成分とすることを特徴とするメラニン産生細胞増殖抑制剤である。前記アルコールは、エタノール、メタノール、１−プロパノール、イソプロピルアルコール及びブタノールより選ばれる１以上の一価アルコール、又は１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール及びグリセリンより選ばれる１以上の多価アルコールであることが好ましく、高アルコール含量であることが好ましい。また、前記メラニン産生細胞増殖抑制剤を含むことを特徴とする皮膚外用剤である。【選択図】図１
2014185140.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カクレイト目フノリ科フクロフノリを含水率０〜４５容量％のアルコールで抽出したフクロフノリ抽出物を有効成分とすることを特徴とするメラニン産生細胞増殖抑制剤。
【請求項２】
前記アルコールは、エタノール、メタノール、１−プロパノール、イソプロピルアルコール及びブタノールより選ばれる１以上の一価アルコールであることを特徴とする請求項１記載のメラニン産生細胞増殖抑制剤。
【請求項３】
前記アルコールは、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール及びグリセリンより選ばれる１以上の多価アルコールであることを特徴とする請求項１記載のメラニン産生細胞増殖抑制剤。
【請求項４】
前記メラニン産生細胞増殖抑制剤は、酢酸エチルに可溶な成分であることを特徴とする請求項１乃至３いずれか記載のメラニン産生細胞増殖抑制剤。
【請求項５】
請求項１乃至４いずれか記載のメラニン産生細胞増殖抑制剤を含むことを特徴とする皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然由来で安全性が高く、メラノサイトの増殖を抑制する効果に優れた、カクレイト目フノリ科フクロフノリのアルコール抽出物を有効成分とするメラニン産生細胞増殖抑制剤及びそれを含む皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚のしみ・そばかすなどの色素沈着は、ホルモンの異常や紫外線、皮膚局所の炎症が原因となってメラニンが過剰に形成され、これが皮膚内に沈着するものと考えられている。皮膚の色素沈着の原因となるこのメラニンは、表皮基底層にある色素細胞（メラノサイト）内のメラノソームと呼ばれる小器官において生成され、生成したメラニンは周囲角化細胞（ケラチノサイト）に取り込まれる。このメラノサイト内におけるメラニンは、チロシンが酵素チロシナーゼの作用によりドーパキノンを経て酵素的または非酵素的な酸化反応により黒色のメラニンへと変化して生成されることが知られている。
【０００３】
このような色素沈着を改善する方法として、メラニン色素の生成に働く重要な酵素であるチロシナーゼ活性を阻害する方法が数多く報告されている。一例として、ビタミンＣ又はその誘導体、アルブチン、コウジ酸などの適用が挙げられる。しかしながら、上述の成分は、安定性、浸透性が悪い、あるいは紫外線や炎症等による色素沈着には十分な効果を示さないなどの問題点がある。
【０００４】
色素沈着に対してより満足のできる効果を発揮するには、チロシナーゼ活性阻害とは別のアプローチが重要と考えられ、メラニンを生成するメラノサイト自体の増殖を抑制することが色素沈着抑制に重要な役割を果たすと考えられる。メラノサイトの増殖を抑制する物質として、シャクヤク抽出物、タイソウ抽出物、カンゾウ抽出物、ヨクイニン抽出物等の天然抽出物（例えば、特許文献１）、ビタミンＤ誘導体、ビタミンＣ誘導体などが報告されている。
【０００５】
ところで、フクロフノリのようなカクレイト目フノリ科の紅藻は、日本や韓国などの海域に生息する紅藻で、日本では古くから食用として海藻サラダや味噌汁の具材、蕎麦のつなぎとして利用されている。近年、フノリ科海藻の水溶性の熱水抽出物である多糖のフノランに歯の再石灰化などの機能が発見され利用されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００４−１９６６６９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、特許文献１に記載されている天然抽出物のメラノサイト増殖抑制効果は満足のできるものではなく、更なる改善の余地がある。また、フノリ科海藻の水溶性の熱水抽出物の機能は発見され応用が進んでいるが、アルコール抽出成分における機能性については未だ知られていない。
【０００８】
本発明は、上記問題点に鑑みてなされたものであり、天然由来で安全性が高く、メラノサイトの増殖を抑制する効果に優れたメラニン産生細胞増殖抑制剤及びそれを含む皮膚外用剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、以上の目的を達成するために、鋭意検討した結果、カクレイト目フノリ科フクロフノリのアルコール抽出物が、天然由来で安全性が高く、メラノサイトの増殖を抑制する効果に優れていることを見出し、本発明に至った。すなわち本発明は、カクレイト目フノリ科フクロフノリを含水率０〜４５容量％のアルコールで抽出したフクロフノリ抽出物を有効成分とすることを特徴とするメラニン産生細胞増殖抑制剤に関する。
【００１０】
また、本発明は、上記メラニン産生細胞増殖抑制剤を含むことを特徴とする皮膚外用剤に関する。
【発明の効果】
【００１１】
以上のように、本発明によれば、天然由来で安全性が高く、メラノサイトの増殖を抑制する効果に優れたメラニン産生細胞増殖抑制剤及びそれを含む皮膚外用剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】実施例１に係る抽出物を添加した後のＢ１６Ｆ１培養細胞の顕微鏡写真である。
【図２】実験例１に係るエタノール抽出物を使用して添加量を変えた実験におけるメラノーマ細胞数の変化を示すグラフである。
【図３】実施例１に係るエタノール抽出物と他の美白化粧品成分を使用して添加量を変えた実験におけるメラノーマ細胞数の変化を示すグラフである。
【図４】抽出溶媒のエタノール濃度（含水率）を変えた実験におけるメラノーマ細胞数の変化を示すグラフである。
【図５】エタノール抽出物を酢酸エチルで分画した実験におけるメラノーマ細胞数の変化を示すグラフである。
【図６】実施例１に係るエタノール抽出物と他のメラノサイト増殖抑制天然抽出物を使用して添加量を変えた実験におけるメラノーマ細胞数の変化を示すグラフである。
【図７】実験例６に係る１，３−ブチレングリコール抽出物を使用して添加量を変えた実験におけるメラノーマ細胞数の変化を示すグラフである。
【図８】抽出溶媒の１，３−ブチレングリコール濃度（含水率）を変えた実験におけるメラノーマ細胞数の変化を示すグラフである。
【図９】１，３−ブチレングリコール抽出物を酢酸エチルで分画した実験におけるメラノーマ細胞数の変化を示すグラフである。
【図１０】実験例９に係るプロピレングリコール抽出物を使用して添加量を変えた実験におけるメラノーマ細胞数の変化を示すグラフである。
【図１１】抽出溶媒のプロピレングリコール濃度（含水率）を変えた実験におけるメラノーマ細胞数の変化を示すグラフである。
【図１２】プロピレン抽出物を酢酸エチルで分画した実験におけるメラノーマ細胞数の変化を示すグラフである。
【図１３】抽出溶媒を変えた実験におけるメラノーマ細胞数の変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明に用いられるフクロフノリ（Ｇｌｏｉｏｐｅｌｔｉｓ  ｆｕｒｃａｔａ）は、カクレイト目フノリ科（Ｅｎｄｏｃｌａｄｉａｃｅａｅ）の紅藻（Ｒｈｏｄｏｐｈｙｔａ）であり、上記紅藻は、藻体のまま使用しても、あるいは粉砕した粉末品を使用してもよい。
【００１４】
本発明に係るメラニン産生細胞増殖抑制剤において、上記フクロフノリは、含水率０〜４５容量％のアルコールを用いて有効成分が抽出される。抽出方法としては、特に限定されないが、例えば、浸漬法、向流抽出法、超臨界抽出法などのような公知の方法を採用することができる。
【００１５】
抽出溶媒のアルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロピルアルコール及びブタノール等の１価アルコール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール及びグリセリン等の多価アルコールが挙げられる。上記抽出溶媒は、単独で、又は２種以上を組み合わせて用いることができる。上記抽出溶媒は、いずれを用いても効果は同等であるが、保存性が高い点から、特に、１，３−ブチレングリコールが好ましい。
【００１６】
また、上記抽出溶媒の含水率は、４５容量％以下であればよく、４０容量％以下がより好ましく、１０容量％以下が特に好ましい。
例えば、上記抽出溶媒がエタノールの場合、含水率が４５容量％を超えると、すなわちエタノールが５５容量％未満であると、海藻が吸水膨潤し扱いづらい、水溶性成分が多くなり後処理がしにくい、さらに増殖抑制効果が見られないなどの問題がある。そのため、エタノールの比率は５５容量％以上であることが好ましく、６０容量％以上がより好ましく、９０容量％以上が特に好ましい。
【００１７】
上記抽出溶媒は、少なくともフクロフノリ藻体が十分浸漬する量が必要であり、その重量比率は、大きいと抽出はしやすいが、後に抽出溶媒を分離し有効成分を回収する際に手間を要する。このため、フクロフノリに対し２〜１０倍量（重量）の抽出溶媒であることが好ましい。
【００１８】
また、抽出液のｐＨは４〜８の範囲に保持されることが好ましく、必要ならば上記の抽出溶媒に、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、アルギニンなどのアルカリ性調整剤や、クエン酸、塩酸、リン酸、硫酸などの酸性調整剤等を配合し、所望のｐＨとなるように調整してもよい。また、抽出温度は１０〜９０℃が好ましく、抽出時間は１時間以上であることが好ましい。
【００１９】
抽出後のフクロフノリ残渣は、フィルター濾過や遠心分離（スクリューデカンターなど）にて分離され、フクロフノリ抽出液がさらに純度を必要とする場合には、珪藻土等の助剤を用いて精製濾過される。また、フクロフノリ抽出液は、濃縮機（エバポレータなど）等により所望の濃度として使用しても良い。フクロフノリ抽出液から得られるフクロフノリ抽出物の形態については特に制限はなく、液状、ペースト状、ゲル状等いずれの形態で用いることもできる。さらに、必要があれば、乾固させて固体状にしたり、真空乾燥等により粉末化することもできる。
【００２０】
また、本発明に係るメラニン産生細胞増殖抑制剤は、さらに酢酸エチルに可溶な成分であることが好ましく、上記のようにして得られたフクロフノリ抽出物は、さらに酢酸エチルを用いて可溶成分を分画されることが好ましい。
したがって、本発明に係るメラニン産生細胞増殖抑制剤は、カクレイト目フノリ科フクロフノリを含水率０〜４５容量％のアルコールで抽出する第１工程と、前記第１工程で得られたフクロフノリ抽出物を酢酸エチルで抽出する第２工程とによって得られることがより好ましい。
【００２１】
本発明に係るメラニン産生細胞増殖抑制剤は、種々の分野において使用可能であり、特に化粧料、医薬品、医薬部外品等の分野において好適に用いることができる。本発明のメラニン産生細胞増殖抑制剤は皮膚外用剤に配合されて、本発明の皮膚外用剤が提供される。
【００２２】
本発明に係る皮膚外用剤におけるカクレイト目フノリ科フクロフノリのアルコール抽出物の配合量は、外用剤全量中、乾燥物として０．０１〜８０質量％、好ましくは０．５〜６０質量％である。０．０１質量％未満であると、本発明の効果が十分に発揮されず、８０質量％を超えると製剤化が難しく、さらにさほど大きな効果の向上もみられないため好ましくない。
【００２３】
本発明の皮膚外用剤は、本発明のメラニン産生細胞増殖抑制剤を皮膚外用剤の基剤に配合して製造される。本発明の皮膚外用剤には、必須成分であるメラニン産生細胞増殖抑制剤以外に、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００２４】
本発明に係る皮膚外用剤は、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤等、従来皮膚外用剤に用いるものであればいずれでもよく、剤型は特に問わない。
【実施例】
【００２５】
以下、本発明を実施例に基づいて具体的に説明するが、これらは本発明を限定するものではない。
【００２６】
［試料の調整］
＜実験例１：フクロフノリと他の海藻のエタノール抽出物を使用した実験＞
（実施例１）
フクロフノリ（長崎県産）１００ｇに９０容量％エタノール２００ｍＬを加え、５５℃で１日間浸漬後、遠心分離および吸引ろ過により、ろ液のみを得た。さらにろ液のエタノールを５０℃の減圧下で留去し、残溶液を乾燥して乾燥固形物状の実施例１に係る抽出物７．６ｇを得た。
【００２７】
（比較例１）
フクロフノリをテングサ（静岡県産）に変えたこと以外は実施例１と同様にして、比較例１に係る抽出物３．６ｇを得た。
【００２８】
（比較例２）
フクロフノリをオゴノリ（熊本県産）に変えたこと以外は実施例１と同様にして、比較例２に係る抽出物４．２ｇを得た。
【００２９】
（比較例３）
フクロフノリをチガイソ（北海道産）に変えたこと以外は実施例１と同様にして、比較例３に係る抽出物４．５ｇを得た。
【００３０】
（比較例４）
フクロフノリをマフノリ（長崎県産）に変えたこと以外は実施例１と同様にして、比較例４に係る抽出物４．４ｇを得た。
【００３１】
（比較例５）
フクロフノリをスギノリ（長崎県産）に変えたこと以外は実施例１と同様にして、比較例５に係る抽出物１．１ｇを得た。
【００３２】
（比較例６）
フクロフノリをトサカノリ（鹿児島県産）に変えたこと以外は実施例１と同様にして、比較例６に係る抽出物４．１ｇを得た。
【００３３】
（比較例７）
フクロフノリをワカメ（岩手県産）に変えたこと以外は実施例１と同様にして、比較例７に係る抽出物０．７ｇを得た。
【００３４】
（比較例８）
フクロフノリをコンブ（北海道産）に変えたこと以外は実施例１と同様にして、比較例８に係る抽出物３．５ｇを得た。
【００３５】
（比較例９）
フクロフノリをヒジキ（広島県産）に変えたこと以外は実施例１と同様にして、比較例９に係る抽出物１．０ｇを得た。
【００３６】
＜実験例２：フクロフノリと他の美白化粧品成分を使用した実験＞
（比較例１０）
実施例１に係る抽出物の代わりに、コウジ酸（和光純薬工業製）を用いた。
【００３７】
（比較例１１）
実施例１に係る抽出物の代わりに、Ｌ−シスチン（和光純薬工業製）を用いた。
【００３８】
（比較例１２）
実施例１に係る抽出物の代わりに、アスタキサンチン（富士化学工業製）を用いた。なお、上記アスタキサンチン（富士化学工業製）は、アスタキサンチンとしての濃度が実施例１に係る抽出物の濃度と同一になるように換算して使用した。
【００３９】
＜実験例３：抽出溶媒のエタノール濃度（含水率）を変えた実験＞
（実施例２〜６）
フクロフノリ（長崎県産）１００ｇに６０〜１００容量％（すなわち、含水率４０〜０容量％）エタノール各２００ｍＬを加え、５５℃で１日間浸漬後、遠心分離および吸引ろ過により、ろ液のみを得た。さらにろ液を留去し、乾燥固形物状の実施例２〜６に係る抽出物を得た。なお、６０容量％エタノール抽出液からは１０．０ｇ（実施例２）、同じく７０容量％からは９．０ｇ（実施例３）、８０容量％からは９．２ｇ（実施例４）、９０容量％からは７．６ｇ（実施例５）、１００容量％からは７．２ｇ（実施例６）の抽出物をそれぞれ得た。
【００４０】
（比較例１３〜１８）
フクロフノリ（長崎県産）１００ｇに０〜５０容量％（すなわち、含水率１００〜５０容量％）エタノール各５００ｍＬを加え、５５℃で１日間浸漬後、遠心分離および吸引ろ過により、ろ液のみを得た。さらにろ液を留去し、乾燥固形物状の比較例１３〜１８に係る抽出物を得た。なお、０容量％エタノール抽出液（水抽出液）からは１０．２ｇ（比較例１３）、１０容量％エタノール抽出液からは１５．８ｇ（比較例１４）、同じく２０容量％からは１９．２ｇ（比較例１５）、３０容量％からは２６．６ｇ（比較例１６）、４０容量％からは２８．０ｇ（比較例１７）、５０容量％からは１２．０ｇ（比較例１８）の抽出物をそれぞれ得た。
【００４１】
＜実験例４：エタノール抽出物を酢酸エチルで分画した実験＞
（実施例７）
実施例５で得られたフクロフノリの９０容量％エタノール抽出物０．５ｇに酢酸エチル１０ｍＬを添加して遠心分離して上清部を得た後、酢酸エチルを留去して酢酸エチル可溶部０．０２５ｇを得た。
【００４２】
（参考例１）
実施例５で得られたフクロフノリの９０容量％エタノール抽出物０．５ｇに酢酸エチル１０ｍＬを添加して遠心分離して沈殿部を得た後、酢酸エチルを留去して酢酸エチル不溶部０．４６ｇを得た。
【００４３】
＜実験例５：フクロフノリのエタノール抽出物と他のメラノサイト増殖抑制天然抽出物を使用した実験＞
なお、下記抽出物のうち賦形剤で希釈されたものは、抽出物としての濃度が実施例１に係る抽出物の濃度と同一になるように換算して使用した。
（比較例１９）
実施例１に係る抽出物の代わりに、ヨクイニン抽出物（丸善製薬製）を用いた。
【００４４】
（比較例２０）
実施例１に係る抽出物の代わりに、カンゾウ抽出物（丸善製薬製）を用いた。
【００４５】
（比較例２１）
実施例１に係る抽出物の代わりに、タイソウ抽出物（丸善製薬製）を用いた。
【００４６】
＜実験例６：フクロフノリと他の海藻の１，３−ブチレングリコール抽出物を使用した実験＞
（実施例８）
フクロフノリ（長崎県産）１００ｇに９０容量％１，３−ブチレングリコール２００ｍＬを加え、９０℃で１日間浸漬後、遠心分離および吸引ろ過により、ろ液のみを得た。さらにろ液の１，３−ブチレングリコールを５０℃の減圧下で留去し、残溶液を乾燥して乾燥固形物状の実施例８に係る抽出物８．８ｇを得た。
【００４７】
（比較例２２）
フクロフノリをテングサ（静岡県産）に変えたこと以外は実施例８と同様にして、比較例２２に係る抽出物３．９ｇを得た。
【００４８】
（比較例２３）
フクロフノリをオゴノリ（熊本県産）に変えたこと以外は実施例８と同様にして、比較例２３に係る抽出物４．１ｇを得た。
【００４９】
（比較例２４）
フクロフノリをチガイソ（北海道産）に変えたこと以外は実施例８と同様にして、比較例２４に係る抽出物４．４ｇを得た。
【００５０】
（比較例２５）
フクロフノリをマフノリ（長崎県産）に変えたこと以外は実施例８と同様にして、比較例２５に係る抽出物４．５ｇを得た。
【００５１】
（比較例２６）
フクロフノリをスギノリ（長崎県産）に変えたこと以外は実施例８と同様にして、比較例２６に係る抽出物０．９ｇを得た。
【００５２】
（比較例２７）
フクロフノリをトサカノリ（鹿児島県産）に変えたこと以外は実施例８と同様にして、比較例２７に係る抽出物３．９ｇを得た。
【００５３】
（比較例２８）
フクロフノリをワカメ（岩手県産）に変えたこと以外は実施例８と同様にして、比較例２８に係る抽出物０．９ｇを得た。
【００５４】
（比較例２９）
フクロフノリをコンブ（北海道産）に変えたこと以外は実施例８と同様にして、比較例２９に係る抽出物３．７ｇを得た。
【００５５】
（比較例３０）
フクロフノリをヒジキ（広島県産）に変えたこと以外は実施例８と同様にして、比較例３０に係る抽出物１．３ｇを得た。
【００５６】
＜実験例７：抽出溶媒の１，３−ブチレングリコール濃度（含水率）を変えた実験＞
（実施例９〜１３）
フクロフノリ（長崎県産）１００ｇに６０〜１００容量％（すなわち、含水率４０〜０容量％）１，３−ブチレングリコール各２００ｍＬを加え、９０℃で１日間浸漬後、遠心分離および吸引ろ過により、ろ液のみを得た。さらにろ液を留去し、乾燥固形物状の実施例９〜１３に係る抽出物を得た。なお、６０容量％１，３ブチレングリコール抽出液からは１２．０ｇ（実施例９）、同じく７０容量％からは９．８ｇ（実施例１０）、８０容量％からは９．４ｇ（実施例１１）、９０容量％からは８．３ｇ（実施例１２）、１００容量％からは７．９ｇ（実施例１３）の抽出物をそれぞれ得た。
【００５７】
（比較例３１〜３６）
フクロフノリ（長崎県産）１００ｇに０〜５０容量％（すなわち、含水率１００〜５０容量％）１，３−ブチレングリコール各５００ｍＬを加え、９０℃で１日間浸漬後、遠心分離および吸引ろ過により、ろ液のみを得た。さらにろ液を留去し、乾燥固形物状の比較例３１〜３６に係る抽出物を得た。なお、０容量％１，３−ブチレングリコール抽出液（水抽出液）からは１０．２ｇ（比較例３１）、１０容量％１，３−ブチレングリコール抽出液からは１６．２ｇ（比較例３２）、同じく２０容量％からは２０．２ｇ（比較例３３）、３０容量％からは２６．８ｇ（比較例３４）、４０容量％からは２９．２ｇ（比較例３５）、５０容量％からは１４．５ｇ（比較例３６）の抽出物をそれぞれ得た。
【００５８】
＜実験例８：１，３−ブチレングリコール抽出物を酢酸エチルで分画した実験＞
（実施例１４）
実施例１２で得られたフクロフノリの９０容量％１，３−ブチレングリコール抽出物０．５ｇに酢酸エチル１０ｍＬを添加して遠心分離して上清部を得た後、酢酸エチルを留去して酢酸エチル可溶部０．０２６ｇを得た。
【００５９】
（参考例２）
実施例１２で得られたフクロフノリの９０容量％１，３−ブチレングリコール抽出物０．５ｇに酢酸エチル１０ｍＬを添加して遠心分離して沈殿部を得た後、酢酸エチルを留去して酢酸エチル不溶部０．４６ｇを得た。
【００６０】
＜実験例９：フクロフノリと他の海藻のプロピレングリコール抽出物を使用した実験＞
（実施例１５）
フクロフノリ（長崎県産）１００ｇに９０容量％プロピレングリコール２００ｍＬを加え、９０℃で１日間浸漬後、遠心分離および吸引ろ過により、ろ液のみを得た。さらにろ液のプロピレングリコールを５０℃の減圧下で留去し、残溶液を乾燥して乾燥固形物状の実施例１５に係る抽出物８．５ｇを得た。
【００６１】
（比較例３７）
フクロフノリをテングサ（静岡県産）に変えたこと以外は実施例１５と同様にして、比較例３７に係る抽出物３．６ｇを得た。
【００６２】
（比較例３８）
フクロフノリをオゴノリ（熊本県産）に変えたこと以外は実施例１５と同様にして、比較例３８に係る抽出物３．９ｇを得た。
【００６３】
（比較例３９）
フクロフノリをチガイソ（北海道産）に変えたこと以外は実施例１５と同様にして、比較例３９に係る抽出物４．０ｇを得た。
【００６４】
（比較例４０）
フクロフノリをマフノリ（長崎県産）に変えたこと以外は実施例１５と同様にして、比較例４０に係る抽出物４．１ｇを得た。
【００６５】
（比較例４１）
フクロフノリをスギノリ（長崎県産）に変えたこと以外は実施例１５と同様にして、比較例４１に係る抽出物０．７ｇを得た。
【００６６】
（比較例４２）
フクロフノリをトサカノリ（鹿児島県産）に変えたこと以外は実施例１５と同様にして、比較例４２に係る抽出物３．６ｇを得た。
【００６７】
（比較例４３）
フクロフノリをワカメ（岩手県産）に変えたこと以外は実施例１５と同様にして、比較例４３に係る抽出物０．７ｇを得た。
【００６８】
（比較例４４）
フクロフノリをコンブ（北海道産）に変えたこと以外は実施例１５と同様にして、比較例４４に係る抽出物３．４ｇを得た。
【００６９】
（比較例４５）
フクロフノリをヒジキ（広島県産）に変えたこと以外は実施例１５と同様にして、比較例４５に係る抽出物１．１ｇを得た。
【００７０】
＜実験例１０：抽出溶媒のプロピレングリコール濃度（含水率）を変えた実験＞
（実施例１６〜２０）
フクロフノリ（長崎県産）１００ｇに６０〜１００容量％（すなわち、含水率４０〜０容量％）プロピレングリコール各２００ｍＬを加え、９０℃で１日間浸漬後、遠心分離および吸引ろ過により、ろ液のみを得た。さらにろ液を留去し、乾燥固形物状の実施例１６〜２０に係る抽出物を得た。なお、６０容量％プロピレングリコール抽出液からは１１．６ｇ（実施例１６）、同じく７０容量％からは９．４ｇ（実施例１７）、８０容量％からは９．１ｇ（実施例１８）、９０容量％からは８．０ｇ（実施例１９）、１００容量％からは７．６ｇ（実施例２０）の抽出物をそれぞれ得た。
【００７１】
（比較例４６〜５１）
フクロフノリ（長崎県産）１００ｇに０〜５０容量％（すなわち、含水率１００〜５０容量％）プロピレングリコール各５００ｍＬを加え、９０℃で１日間浸漬後、遠心分離および吸引ろ過により、ろ液のみを得た。さらにろ液を留去し、乾燥固形物状の比較例４６〜５１に係る抽出物を得た。なお、０容量％プロピレングリコール抽出液（水抽出液）からは９．９ｇ（比較例４６）、１０容量％プロピレングリコール抽出液からは１５．８ｇ（比較例４７）、同じく２０容量％からは１９．９ｇ（比較例４８）、３０容量％からは２６．４ｇ（比較例４９）、４０容量％からは２９．０ｇ（比較例５０）、５０容量％からは１４．４ｇ（比較例５１）の抽出物をそれぞれ得た。
【００７２】
＜実験例１１：プロピレングリコール抽出物を酢酸エチルで分画した実験＞
（実施例２１）
実施例１９で得られたフクロフノリの９０容量％プロピレングリコール抽出物０．５ｇに酢酸エチル１０ｍＬを添加して遠心分離して上清部を得た後、酢酸エチルを留去して酢酸エチル可溶部０．０２２ｇを得た。
【００７３】
（参考例３）
実施例１９で得られたフクロフノリの９０容量％プロピレングリコール抽出物０．５ｇに酢酸エチル１０ｍＬを添加して遠心分離して沈殿部を得た後、酢酸エチルを留去して酢酸エチル不溶部０．４２ｇを得た。
【００７４】
＜実験例１２：抽出溶媒を変えた実験＞
（実施例２２）
フクロフノリ（長崎県産）１００ｇに９０容量％メタノール２００ｍＬを加え、５５℃で１日間浸漬後、遠心分離および吸引ろ過により、ろ液のみを得た。さらにろ液のメタノールを５０℃の減圧下で留去し、残溶液を乾燥して乾燥固形物状の実施例２２に係る抽出物５．６ｇを得た。
【００７５】
（実施例２３）
抽出溶媒の９０容量％メタノールを９０容量％１−プロパノールに変えたこと以外は実施例２２と同様にして、実施例２３に係る抽出物４．８ｇを得た。
【００７６】
（実施例２４）
抽出溶媒の９０容量％メタノールを９０容量％イソプロピルアルコールに変えたこと以外は実施例２２と同様にして、実施例２４に係る抽出物５．３ｇを得た。
【００７７】
（実施例２５）
抽出溶媒の９０容量％メタノールを９０容量％ブタノールに変えたこと以外は実施例２２と同様にして、実施例２５に係る抽出物４．７ｇを得た。
【００７８】
（実施例２６）
フクロフノリ（長崎県産）１００ｇに９０容量％グリセリン２００ｍＬを加え、９０℃で１日間浸漬後、遠心分離および吸引ろ過により、ろ液のみを得た。さらにろ液のグリセリンを５０℃の減圧下で留去し、残溶液を乾燥して乾燥固形物状の実施例２６に係る抽出物４．７ｇを得た。
【００７９】
［機能評価］
以上の実施例１乃至２６、比較例１乃至５１、及び参考例１乃至３に係る試料について、メラニン産生細胞であるＢ１６Ｆ１細胞の増殖抑制効果を調べた。
（１）Ｂ１６Ｆ１細胞の培養
マウス由来のＢ１６Ｆ１メラノーマ培養細胞（２×１０４ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌ）を使用した。１０％ＦＢＳを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ培地）中でＣＯ２インキュベーター（９５％空気、５％二酸化炭素）内、３７℃の条件下で培養した。培養２４時間後に試料溶液を終濃度（抽出乾燥物換算濃度）で０μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、１０００μｇ／ｍＬになるように添加し、さらに３日間培養を続け、以下の方法で細胞数の測定を行った。
（２）細胞数の測定
Ｂ１６Ｆ１培養細胞をトリプシン／ＥＤＴＡで剥離し、ＰＢＳで希釈、その後、トリパンブルーで死細胞を染色し、顕微鏡写真を撮影することで、顕微鏡下で生細胞数を測定した。顕微鏡写真を図１に示す。また、含水エタノール抽出物を添加して測定したメラノーマ細胞数をグラフにした結果を図２乃至図６に示し、含水１，３−ブチレングリコール抽出物を添加して測定したメラノーマ細胞数をグラフにした結果を図７乃至図９に示し、含水プロピレングリコール抽出物を添加して測定したメラノーマ細胞数をグラフにした結果を図１０乃至図１２に示す。加えて、含水メタノール抽出物、含水１−プロパノール抽出物、含水イソプロピルアルコール抽出物、含水ブタノール抽出物、含水グリセリン抽出物を添加して測定したメラノーマ細胞数をグラフにした結果を図１３に示す。
【００８０】
［評価結果］
図１より、フクロフノリの９０容量％エタノール抽出物をＢ１６Ｆ１メラノーマ培養細胞に添加して培養したところ、増殖が抑制されたことが分かった。
図２より、対照として、他の海藻であるテングサ、オゴノリ、チガイソ、マフノリ、スギノリ、トサカノリ、ワカメ、コンブおよびヒジキの９０容量％エタノール抽出物と比較したが、実施例１に係る抽出物が最も効果が高かった。
図３より、対照として、美白作用があり市販の化粧品等の成分でもある、コウジ酸、Ｌ−シスチンおよびアスタキサンチンと比較したが、実施例１に係る抽出物が最も効果が高かった。
図４より、含水エタノール濃度ごとのメラノーマ細胞数を調べたところ、５５％濃度以上でメラノーマ細胞数が減少することが分かった。
図５より、含水エタノールの抽出物を酢酸エチルに可溶または不溶の分画を行い比較したところ、酢酸エチルに可溶部のみに効果があることが分かった。
図６より、対照として、メラノサイトの増殖を抑制するとされている天然抽出物であるヨクイニン抽出物、カンゾウ抽出物、タイソウ抽出物と比較したが、実施例１に係る抽出物が最も効果が高かった。
【００８１】
図７より、フクロフノリの９０容量％１，３−ブチレングリコール抽出物をＢ１６Ｆ１細胞に添加して培養したところ、増殖が抑制されたことが分かり、対照として、他の海藻であるテングサ、オゴノリ、チガイソ、マフノリ、スギノリ、トサカノリ、ワカメ、コンブおよびヒジキの１，３−ブチレングリコール抽出物と比較したが、実施例８に係る抽出物が最も効果が高かった。
図８より、含水１，３−ブチレングリコール濃度ごとのメラノーマ細胞数を調べたところ、含水エタノールの場合と同様に５５％濃度以上でメラノーマ細胞数が減少することが分かった。
図９より、含水１，３−ブチレングリコールの抽出物を酢酸エチルに可溶または不溶の分画を行い比較したところ、酢酸エチルに可溶部のみに効果があることが分かった。
【００８２】
図１０より、フクロフノリの９０容量％プロピレングリコール抽出物をＢ１６Ｆ１細胞に添加して培養したところ、増殖が抑制されたことが分かり、対照として、他の海藻であるテングサ、オゴノリ、チガイソ、マフノリ、スギノリ、トサカノリ、ワカメ、コンブおよびヒジキのプロピレングリコール抽出物と比較したが、実施例１５に係る抽出物が最も効果が高かった。
図１１より、含水プロピレングリコール濃度ごとのメラノーマ細胞数を調べたところ、含水エタノールや含水１，３−プロピレングリコールの場合と同様に５５％濃度以上でメラノーマ細胞数が減少することが分かった。
図１２より、含水プロピレングリコールの抽出物を酢酸エチルに可溶または不溶の分画を行い比較したところ、酢酸エチルに可溶部のみに効果があることが分かった。
【００８３】
図１３より、含水メタノール抽出物、含水１−プロパノール抽出物、含水イソプロピルアルコール抽出物、含水ブタノール抽出物、含水グリセリン抽出物も、含水エタノール、含水１，３−ブチレングリコール、含水プロピレングリコールと同様に、メラノーマ細胞数を減少させることが分かった。
【図２】
2014185140.tif 000003
【図３】
2014185140.tif 000004
【図４】
2014185140.tif 000005
【図５】
2014185140.tif 000006
【図６】
2014185140.tif 000007
【図７】
2014185140.tif 000008
【図８】
2014185140.tif 000009
【図９】
2014185140.tif 000010
【図１０】
2014185140.tif 000011
【図１１】
2014185140.tif 000012
【図１２】
2014185140.tif 000013
【図１３】
2014185140.tif 000014
【図１】
2014185140.tif 000015