(57)【要約】【課題】    重篤な副作用がなく連用できる、滑膜増殖に起因する疾患の予防、治療のための滑膜増殖抑制剤を提供する。【解決手段】  ダイオウ属に属する植物の水抽出物を有効成分とする滑膜増殖抑制剤。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ダイオウ属に属する植物の水抽出物を有効成分とする滑膜増殖抑制剤。
【請求項２】
ダイオウ属に属する植物がダイオウである請求項１記載の増殖抑制剤。
【請求項３】
変形性関節症の予防治療剤である請求項１または２に記載の増殖抑制剤。
【請求項４】
ダイオウ属に属する植物を水で抽出することを特徴とする滑膜増殖抑制剤の製造方法。
【請求項５】
ダイオウ属に属する植物を水で抽出したのち、製剤化することを特徴とする請求項４に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ダイオウ属に属する植物の水抽出物を有効成分とする滑膜の増殖抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
漢方生薬である大黄は、タデ目（Polygonales）、タデ科（Polygonaceae ）に属する多年性植物であるダイオウ属の植物の根茎を処理して得られる漢方生薬を指し、強い寫下作用が知られているほか、抗炎症作用などが知られている。
【０００３】
また、近年、食用として用いられているダイオウ属植物には、整腸作用などがあることが知られている。
【０００４】
特許文献１には、ダイオウ抽出物を有効成分として含有するメラニン生成抑制剤、活性酸素消去剤、過酸化脂質生成抑制剤、抗アレルギー剤、ヒスタミン遊離抑制剤などが記載されている。特許文献２には、大黄の抽出物を有効成分とするアポトーシス誘導剤が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０００−２８１５２８号公報
【特許文献２】特開２００８−８１４１２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明者らは鋭意研究の結果、ダイオウ属に属する植物の水抽出物中に、関節の重要な構成物である滑膜または滑膜細胞の増殖抑制効果があることを見出し、本発明を完成したものであって、本発明の目的は重篤な副作用がなく連用できる、滑膜増殖に起因する疾患の予防、治療のための滑膜細胞増殖抑制剤を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ダイオウ属に属する植物の水抽出物を有効成分とする滑膜増殖抑制剤である。
また、本発明は、ダイオウ属に属する植物がダイオウであることを特徴とする。
【０００８】
また、本発明は、変形性関節症の予防、治療剤であることを特徴とする。
また、本発明は、ダイオウ属に属する植物を水で抽出することを特徴とする滑膜増殖抑制剤の製造方法である。
【０００９】
また、本発明は、ダイオウ属に属する植物を水で抽出したのち、製剤化することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のダイオウ属に属する植物の水抽出物は、関節における滑膜の増殖を強力に抑制する。
【００１１】
この滑膜もしくは滑膜細胞の増殖抑制効果は、関節炎の悪化を防ぐ上で、極めて重要な効果である。
【００１２】
すなわち、人体における関節のうちで、膝関節はもっとも重要な関節であって、関節炎といえば膝関節の炎症を指すほどであるが、たとえば膝の関節炎では、次のような機作で、症状が悪化していくとされている。
【００１３】
まず、変形性膝関節炎では、何らかの原因で関節の軟骨が傷み、軟骨がすり減ると、周囲の負担のかかっていない部位に異常軟骨や骨棘として増殖して関節の変形が進行する。このような変化に伴い、関節内の滑膜組織が炎症を起こし異常に増殖して関節内に水が貯留する。
【００１４】
また関節リウマチにおいては、顕著に滑膜が増殖することが主病変であり、血管新生、リンパ球の浸潤、滑膜増殖が特徴として認められるとされる。
【００１５】
さらに、本来滑膜には２種類の細胞が存在し、ひとつは滑液を造る細胞群であり、もう一つは廃物処理を行う食細胞群である。健常人においては両者のバランスが保たれているが、関節リウマチでは、このバランスがくずれ、滑膜が増殖して軟骨や骨を破壊するとされている。また滑膜は、インターロイキン―１βの刺激によって炎症性メディエータを産生し、その刺激によって炎症を悪化させて、軟骨の侵食や滑膜の増殖を引き起こすともいわれている。
【００１６】
これ以外にも、たとえば色素性絨毛結節性滑膜炎や屈筋腱滑膜炎などの関節滑膜の増殖が原因となる疾患がある。
【００１７】
したがって、関節部位における滑膜または滑膜細胞の増殖を抑制することは、多くの関節関連疾患の予防、治療に有効であるが、本発明の水抽出物は滑膜または滑膜細胞の増殖を抑制することによって、前記疾患の悪化を阻止できるので、種々の関節関連疾患に有用な薬剤である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の有効成分の１例として、実施例１のダイオウ乾燥茎の水抽出物の高速液体クロマトグラフィによる溶出曲線を示すグラフである。
【図２】実験例１において、ノーマル群ラットの関節および付近組織の関節を脱灰処理後、実験例１に記載のとおり処理した後、ＡＢ−ＰＡＳ染色した切片標本の写真である。
【図３】実験例１において、コントロール群ラットの関節および付近組織の関節を脱灰処理後、実験例１に記載のとおり処理した後、ＡＢ−ＰＡＳ染色した切片標本の写真である。
【図４】実験例１において、ダイオウ水抽出物の低用量投与群ラットの関節および付近組織の関節を脱灰処理後、実験例１に記載のとおり処理した後、ＡＢ−ＰＡＳ染色した切片標本の写真である。
【図５】実験例１において、ダイオウ水抽出物の中用量投与群ラットの関節および付近組織の関節を脱灰処理後、実験例１に記載のとおり処理した後、ＡＢ−ＰＡＳ染色した切片標本の写真である。
【図６】実験例１において、ノーマル群ラットの関節および付近組織の関節を脱灰処理後、実験例１に記載のとおり処理した後、ＴＢ染色した切片標本の写真である。
【図７】実験例１において、コントロール群ラットの関節および付近組織の関節を脱灰処理後、実験例１に記載のとおり処理した後、ＴＢ染色した切片標本の写真である。
【図８】実験例１において、ダイオウ水抽出物の低用量投与群ラットの関節および付近組織の関節を脱灰処理後、実験例１に記載のとおり処理した後、ＴＢ染色した切片標本の写真である。
【図９】実験例１において、ダイオウ水抽出物の中用量投与群ラットの関節および付近組織の関節を脱灰処理後、実験例１に記載のとおり処理した後、ＴＢ染色した切片標本の写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明において、ダイオウの水抽出物は、凍結乾燥した場合の外観が淡黄色〜赤褐色の粉末であり、凍結乾燥させたものを、水に溶解した際のｐＨは４．０〜５．５を示す。
【００２０】
さらに、該水抽出物は、固形物換算で総繊維を約６８〜７５重量％、脂質を含むパラフィンを約０．５〜１．０重量％、さらには水溶性炭水化物を約２．５〜５．０重量％含んでいる。
【００２１】
また、本発明の水抽出物を、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）で確認した場合には、図１に示すとおり、３個のブロードなピーク成分が見出される。
【００２２】
すなわち、カラムとしてユニゾンＵＫ−Ｃ１８（商品名、インタクト社製）  ４．６×１５０ｍｍ、移動相として水、アセトニトリルを用いるグラジエント法で、流速１ｍＬ／ｍｉｎで展開した場合には、保持時間１３ｍｉｎに第１のピーク、１５ｍｉｎに第２のピーク、３０ｍｉｎに第３のピークを検出する。
なお、検出は、ＵＶ−Ｖｉｓ検出器を用いて波長２５４ｎｍで行った。
【００２３】
図１に示すクロマトグラムの縦軸は検出波長２５４ｎｍに対する各ピーク成分の相対吸収強度を示している。第１ピーク成分および第２ピーク成分に比較して第３ピーク成分の検出波長２５４ｎｍに対する吸収強度は低いことが認められる。
【００２４】
本発明において、被抽出物であるダイオウ属に属する植物として、当該属に属する植物であればよく、特に制限されない。かかるダイオウ属に属する植物としては、ダイオウ（Rheum officinale Baillon）の他、チョウセンダイオウ（R.coreanum Naka）、マルバダイオウ（R.rhaponticum L）、ショウヨウダイオウ（R.palmatum L）、モミジバダイオウ（R.tangaticum Maximowicz）、カラダイオウ（R.undulatum L）、シンシュウダイオウ（R.coreanum Nakai×R.palmatum L.)、波葉ダイオウ（R.frazenbachii Munt）などのほか、学名として（R.emodi Wall.）、（R.macrocarpum A.Los.）、（R.moorcroftiana Royle）、（R.nobile Hook. f. etThoms）、（R.webbiannum Royle）、（R.tataricum）、（R.maximoviczii）などで表わされる、種間雑種を含む種々のものを好適に使用することができる。
【００２５】
また、ダイオウ属に属する植物（以下、単にダイオウという）の抽出部位は特に制限がなく、葉、茎、根茎など、すべての部位を使用できるが、ダイオウの茎の部分が好ましい。
【００２６】
ダイオウは、採取したままで、または採取したのち乾燥し、あるいは粉砕、摩砕、圧縮するなどしたのち、水で抽出すればよい。
とりわけ、ダイオウは生育良好で完熟した茎が好適である。
【００２７】
水抽出方法は、特に制限されず、たとえば、水にダイオウを浸漬して静置してもよく、また浸漬して攪拌してもよい。ダイオウに対する水の量も特に制限はないが、たとえばダイオウ１重量部に対して水を５〜５０重量部、好ましくは２０〜４０重量部、とりわけ好ましくは２５〜３５重量部使用すればよい。
【００２８】
抽出は、常温ないし加温下に実施することができ、たとえば、５０〜８０℃、好ましくは６０〜７０℃で実施すればよい。また、抽出時間は、特に限定されないが、前記各温度で１〜２４時間、好ましくは２〜６時間である。
【００２９】
かくして得られた本発明のダイオウの水抽出（以下、単に抽出物ということがある）は、そのままでもよいが、ろ過、濃縮、濃縮乾固、凍結乾燥などの後処理をすることもできる。
【００３０】
なお、抽出原料としてのダイオウにはシュウ酸が多く含まれており、とりわけ葉にはその含有量が高く、これらはそのままでは使用上、望ましくないので、シュウ酸を除去することが好ましい。
【００３１】
シュウ酸の除去は、たとえば、水抽出物を加温下に減圧濃縮する過程において析出するシュウ酸の結晶を、ろ過、静置または遠心分離などによって除去して、実施することができる。
【００３２】
かくして得られたダイオウ水抽出物は、目的に応じて、製剤化することにより、より好適に使用することができる。
【００３３】
本発明の抽出物は、優れた滑膜増殖抑制効果を有するので、滑膜増殖に起因する種々の疾患の予防、治療剤として使用することができる。
【００３４】
本発明の抽出物を、滑膜または滑膜細胞増殖抑制のために使用する場合の有効量は、滑膜の増殖に起因する疾患の種類や症状、患者の性別や年齢、全身状態によって、相違するものの、概ね２０〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは４０〜８０ｍｇ／ｋｇ、とりわけ好ましくは６０〜７０ｍｇ／ｋｇである。
【００３５】
滑膜の増殖に起因する疾患としては、変形性関節症、神経原性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎のほか、痛風、色素性絨毛結節性滑膜炎や屈筋腱滑膜炎があげられる。
【００３６】
これらの用途においては、本発明の抽出物は固形剤、液剤の種々の製剤形態とすることができ、また投与経路に応じて経口剤、外用剤などの種々の形態とすることができる。
【００３７】
かかる製剤形態としては、たとえば抽出物に賦形剤、滑沢剤、結合剤、着色剤などを混合して、造粒、打錠し、さらに要すれば被覆剤で被覆するか、またはカプセルに充填することにより、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、粉末などの経口用の固形製剤とすることができるほか、浸剤・煎剤や適当な処理をして流エキス、リモナーデ剤などの経口用液剤としてもよい。
【００３８】
また、油脂、高級アルコール、高級脂肪族炭化水素、Ｏ／Ｗ型エマルジョンなどの基剤に、本発明の抽出物を混合して軟膏剤、クリーム剤、乳剤、リニメント剤とするか、あるいは水性溶媒に溶解・乳化してローション剤などの外用剤とすることもできる。
【００３９】
あるいは、抽出物を抽出液のままろ過し、必要に応じて、矯味剤、着色剤などと混合してドリンク剤などの液剤とすることができる。
【００４０】
本発明の抽出物を前記製剤として使用する場合には、その配合量は、用途や剤形によっても相違するが、概ね製剤中に、抽出物が、固形物として１．０〜１０重量％程度含まれるように配合するのが適当である。
【００４１】
前記製剤において、賦形剤としてはブドウ糖、乳糖、ショ糖、麦芽糖、トレハロースなどの水溶性糖類、コーンスターチ、デンプン、結晶セルロースなどの多糖類、グリシンなどのアミノ酸類、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトールなどの糖アルコール類、クエン酸カルシウム、リン酸カリウム、リン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムなどのリン酸塩またはケイ酸塩があげられる。
【００４２】
また、滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムなどのステアリン酸アルカリ土類金属塩、タルク、シリカ、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ素などのケイ素化合物、ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖ベヘン酸エステルなどのショ糖高級脂肪酸エステル、グリセリンベヘン酸エステルなどのグリセリン高級脂肪酸エステルがあげられる。
【００４３】
結合剤としては、シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビット、トラガント、ポリビニルピロリドン、デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、デキストリン、エチルセルロースなどがあげられる。
【００４４】
着色剤としては、β−カロチン、タール色素、レーキ色素、カラメル、酸化鉄、銅クロロフィル、食用赤色２号、３号、食用黄色４号、５号、食用緑色３号、食用青色１号、２号、これらのアルミニウムレーキ、三二酸化鉄、黄色三二酸化鉄などがあげられる。
【００４５】
また、外用剤の基材である天然動植物油脂としては、たとえば、オリーブ油、ミンク油、ヒマシ油、パーム油、牛脂、月見草油、ヤシ油、カカオ油、マカデミアナッツ油などがあげられる。またロウとしては、たとえば、ホホバ油、ミツロウ、ラノリン、カルナウバロウ、キャンデリラロウなどがあげられる。高級アルコールとしては、たとえば、ラウリルアルコール、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコールなどがあげられる。
【００４６】
高級脂肪酸としては、たとえば、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、ベヘニン酸、ラノリン脂肪酸などがあげられる。高級脂肪族炭化水素としては、たとえば、流動パラフィン、固形パラフィン、スクワラン、ワセリン、セレシン、マイクロクリスタリンワックスなどがあげられる。合成エステル油としては、たとえば、ブチルステアレート、ヘキシルラウレート、ジイソプロピルアジペート、ジイソプロピルセバケート、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソプロピルミリステート、イソプロピルパルミテートイソプロピルミリステート、セチルイソオクタノエート、ジカプリン酸ネオペンチルグリコールなどがあげられる。
【００４７】
シリコーン誘導体としては、たとえば、メチルシリコーン、メチルフェニルシリコーンなどのシリコーン油などがあげられる。また、界面活性剤としては、アルキル硫酸塩、脂肪酸塩、アルキルリン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテルのリン酸塩や硫酸塩などのアニオン性界面活性剤があげられる。非イオン性界面活性剤としては、たとえば、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリグリセリン脂肪酸エステルなどがあげられる。両面活性剤としては、たとえば、アルキルベタイン、ホスホベタイン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトールおよびこれらのリゾ体の他、ホスホファチジン酸とその塩があげられる。
【００４８】
さらには、多価アルコールとしては、たとえば、エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコールなどのポリエチレングリコール類、プロピレングリコール、ジプロピレングリコールなどのポリプロピレングリコール類、１，３−ブチレングリコール、１，４−ブチレングリコールなどのブチレングリコール類、グリセリン、ジグリセリンなどのポリグリセリン類、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、マルチトールなどの糖アルコール類、グリセリン類のエチレンオキシド（以下、ＥＯと略記）、プロピレンオキシド（以下、ＰＯと略記）付加物、糖アルコール類のＥＯ、ＰＯ付加物、ガラクトース、グルコース、フルクトースなどの単糖類とそのＥＯ、ＰＯ付加物、マルトース、ラクトースなどの多糖類とそのＥＯ、ＰＯ付加物などの多価アルコールがあげられる。
以下、実験例および実施例により、本発明をさらに詳細に説明する。
【実施例】
【００４９】
実験例１
＜材料＞
６週齢のＳＤ系雄性ラットを１週間の飼育した後、体重を指標に、各群が均等になるように群分けし、群別に飼育した。
【００５０】
各群１０匹で４０匹を使用した。また有効成分として、実施例１で得られたダイオウ水抽出物の濃縮物（以下、ダイオウ抽出物という）を用いた。
【００５１】
＜実験方法＞
１週間の飼育後、ダイオウ投与群として中用量（固形物換算２５０ｍｇ／ｋｇ）、低用量（同１２５ｍｇ／ｋｇ）の２投与群、コントロール群（薬剤無投与）、ノーマル群（無処理）とした。
【００５２】
ダイオウ投与群には、ダイオウ抽出物５重量％となるようアラビアゴム末水溶液に懸濁させ、５ｍｌ／ｋｇの液量で１日１回、午後４時〜５時の間に、ラットに経口投与する。
【００５３】
１週間投与したのち、ノーマル群を除く、ラットの膝関節腔に４％パパインを注射し、注射量は０．１５ｍｌ／匹で、３日間毎に１回注射し、連続３回注射する。パパインを注射する際にも、ダイオウ抽出物を１日１回経口投与する。
【００５４】
＜評価方法＞
最後のパパイン注射後、１４日目にラットを致死させ、膝関節および付近組織を取り出し、中性ホルマリンで固定し、２０％ＥＤＴＡ溶液（ｐＨ７．１５）に浸して脱灰する。２日毎にＥＤＴＡ溶液を交換し、１４日後、組織脱灰を終了した。
【００５５】
得られた標本を固定し、関節最大面から解剖し、エタノール脱水、キシレンを用いて透徹化した後、パラフィン包埋し、ミクロトームによって４．０〜５．０μｍ連続切片標本を作製した。
【００５６】
脱パラフィンした後、組織標本を、ヘマトキシリン・ エオジン（ＨＥ）、アルシアン青−ＰＡＳ（ＡＢ−ＰＡＳ）およびトルイジンブルー（ＴＢ）染色した。
【００５７】
関節軟骨および周辺滑膜病変を、組織学的スコアリング法を用いてダイオウの変形性関節炎における滑膜増殖抑制効果を確認した。
【００５８】
（ａ）関節のう滑膜病変のスコア
観察項目
関節のう滑膜に増殖なし＝１
関節のう滑膜に軽度増殖や肥厚＝２
関節のう滑膜に中度増殖、小指状関節腔内への侵入を認める＝３
関節のう滑膜に重度増殖、絨毛状或いは乳頭状関節腔内への侵入を認める＝４
【００５９】
（ｂ）関節透明軟骨病変のスコア
関節軟骨表面は滑らか、欠損なし＝１
関節軟骨表面局所欠損、局所繊維組織軽度増殖＝２
関節軟骨表面大きい欠損を認め、局所繊維組織顕著に増殖＝３
関節表面透明軟骨が消失あるいは厳重欠損を認め、繊維組織に代わる＝４
【００６０】
（ｃ）アルシアン青−ＰＡＳ（ＡＢ−ＰＡＳ）およびトルイジンブルー（ＴＢ）染色のスコア
通常に染色＝１
染色度は軽度低め＝２
染色度は中度低め＝３
染色度は重度低め＝４
【００６１】
（ｄ）統計学的処理
数値は平均値±標準誤差で表わし、対照群と被検物群との平均値の差の検討には、一元配置の分散分析後、Ｄｕｎｎｅｔの方法を用いた。なお、いずれの場合も危険率が１％未満（ｐ＜０．０１、＊＊）および５％未満（ｐ＜０．０５、＊）の場合を有意差ありと判定した。
【００６２】
＜結果＞
結果は、表１に示すとおりである。
【００６３】
【表１】
2014024816.tif 000002
【００６４】
表中、ダイオウ（低）はダイオウ抽出物の低用量を投与した群であることを示し、同様に（中）は中用量を投与した群であることを示す。
【００６５】
＜病理検査結果＞
ノーマル群：関節表面に薄い透明軟骨が覆い、軟骨表面は滑らか、欠損および繊維化は認められなかった。
【００６６】
関節のう腔内部表面に滑膜細胞が覆い、滑膜組織の増殖は認めなかった。図２および図６に示すように、軟骨ＡＢ−ＰＡＳおよびＴＢ染色反応は陽性であった。
【００６７】
コントロール群：関節軟骨表層は破壊され、欠損例、脱落例も観察された。軟骨細胞は減少し、配列に乱れを生じて、局所的に繊維組織が著しく増生し、限局性繊維化が発生した。
【００６８】
関節のう滑膜組織は増生し、絨毛状あるいは乳頭状関節腔内への侵入が認められた。
滑膜組織の充血、水種、炎症細胞浸潤、繊維化や肉芽組織が形成された。
【００６９】
図３および図７に示すように、軟骨ＡＢ−ＰＡＳおよびＴＢ染色反応は、弱陽性あるいは着色できず、軟骨組織のムコ多糖は減少あるいは喪失していた。
【００７０】
ダイオウ低用量投与群：関節軟骨表面欠損例は少ない。軽度破壊された例も認められる。
軟骨細胞配列はやや乱れ、関節滑膜増生が認められた。
【００７１】
図４および図８に示すように軟骨のＡＢ−ＰＡＳおよびＴＢ染色反応は陽性であった。
ＡＢ−ＰＡＳ染色反応での色は濃いものの、その範囲はノーマル群よりも少ないものもあった。
ＴＢ染色反応では、染色範囲および色もコントロール群より濃く、細胞配列が改善された。
【００７２】
ダイオウ中用量投与群：関節軟骨表面欠損例は少ない。軽度破壊された例も認められる。
軟骨細胞配列はやや乱れ、関節滑膜増生が認められた。
【００７３】
図５および図９に示すように軟骨のＡＢ−ＰＡＳおよびＴＢ染色反応は陽性であった。
ＡＢ−ＰＡＳ染色反応での色は濃いものの、その範囲はノーマル群よりも少なかった。
ＴＢ染色反応では、染色範囲および色もコントロール群より濃く、細胞数が多いことが確認された。
【００７４】
＜考察＞
変形関節炎の病理的特徴は、関節軟骨表面損傷、局所繊維組織増殖あるいは繊維化し、関節滑膜増殖および繊維化も伴って生じる。
【００７５】
実験例では、光学顕微鏡検査結果より、コントロール群では関節炎の症状を持ち、関節のう滑膜組織増殖、絨毛状或いは乳頭状関節腔内への侵入などが認められ、滑膜下組織の充血、水種、炎症細胞浸潤、繊維化や肉芽組織が形成した。
【００７６】
これに対して、ダイオウ投与群では、コントロール群における前記所見が大幅に改善されている。
【００７７】
上記の結果から、本発明の抽出物は、変形性関節炎に対して強い予防、治療効果を有することが明らかである。
【００７８】
ＡＢ−ＰＡＳ染色は病理組織、臨床病理、血液学の分野でＰＡＳ（Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｃｈｉｆｆ）反応、フォイルゲン反応に多用される染色試薬であり、脂肪族アルデヒドと鋭敏に反応して、赤―紫色を呈するので、細胞内染色や中性ムコ多糖、糖タンパクなど、多糖類の染色やリポタンパクを構成する脂質の染色に広く利用されている。本実験例では、抽出物投与群はコントロール群よりも濃く染色されていることから、関節炎においてムコ多糖の消失を抑制していることが明らかとなった。
【００７９】
アルシアンブルーは、酸性ムコ多糖の硫酸基とカルボキシル基に特異的に結合し、タンパク多糖質やコラーゲンを染色する。ｐＨ２．５では硫酸基、カルボキシル基の両方が染まるが、ｐＨ１．０以下では硫酸基とのみ結合することが知られている。また、アルシアンブルーはＰＡＳ染色との重染色に使用され、中性ムコ多糖、酸性ムコ多糖の染め分けが可能である。
【００８０】
正常軟骨細胞は、タンパク多糖質を分泌し、アルシアンブルーより均一に染色され、軟骨細胞変性や壊死に伴うタンパク多糖質の分泌減少によって染色不整となる。本実験例においては、コントロール群は、著しい染色不整や染色が薄い、あるいは染色できない例が多く、関節炎の症状を示したが、本発明の抽出物投与群では染色が改善されており、本発明の抽出物は軟骨基質中のタンパク多糖質を増加させることが明らかとなった。
【００８１】
実施例１  
ダイオウの乾燥茎１重量部を、水３０重量部に、温度６０℃で２時間浸漬する。ついで、ダイオウの茎を除去し得られる水抽出液２５重量部を、４０℃で減圧濃縮して、析出するシュウ酸をろ過助剤を加えて濾別し、３〜６重量部となるまで濃縮することにより、本発明のダイオウ抽出物を得た。
【００８２】
得られた抽出物は、淡黄色〜茶褐色のペーストであり、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）による分析では、図１に示すように３個のピークを有していた。
【図１】
2014024816.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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