(57)【要約】      （修正有）【課題】細胞内キナーゼ阻害剤、ならびに、T細胞悪性疾患、B細胞悪性疾患、自己免疫障害、および移植臓器を有する患者のためのそれらの治療的使用の提供。【解決手段】DKC三つ組キナーゼ活性部位に結合するタンパク質キナーゼ阻害剤であって、（a）キナーゼ活性部位における触媒二つ組のリシンのアミノ基に対し水素結合距離内のキナーゼ活性部位に配置されるプロトン受容体；（b）キナーゼ活性部位における触媒二つ組のアスパラギン酸に隣接する水素結合における引き抜き可能なプロトン（c）さらなる電子転位によってβ脱離が起こり、それにより阻害剤におけるマイケル受容体が生成される脱離基（d）キナーゼのヒンジ領域、いくつかの疎水性残基、親水性残基、およびその組み合わせからなる群より選択される、ATP結合部位の一部に対する親和性を有するキナーゼ結合部分を含むタンパク質キナーゼ阻害剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
DKC三つ組キナーゼ活性部位に結合するタンパク質キナーゼ阻害剤であって、
（a）キナーゼ活性部位における触媒二つ組のリシンのアミノ基に対し水素結合距離内のキナーゼ活性部位に配置されるプロトン受容体；
（b）キナーゼ活性部位における触媒二つ組のアスパラギン酸に隣接する水素結合における引き抜き可能なプロトンであって、引き抜き可能なプロトンの除去により、エノール/エノラートまたはチオール/チオラートまたはエナミンへの電子転位が可能な共役系が生じる引き抜き可能なプロトン；
（c）さらなる電子転位によってβ脱離が起こり、それにより阻害剤におけるマイケル受容体が生成される脱離基であって、阻害剤とキナーゼの少なくとも一つの配座はマイケル受容体部分がシステイン求核体から3〜10Åの距離内に位置するような配座であり、酵素のマイケル付加物を形成する反応を生じる、脱離基；
（d）キナーゼのヒンジ領域、いくつかの疎水性残基、親水性残基、およびその組み合わせからなる群より選択される、ATP結合部位の一部に対する親和性を有するキナーゼ結合部分を含み、
ただし
2014098004.tif 000162
ではなく、かつインビトロキナーゼアッセイにおいてITKを0.00085μM〜1μMのIC50で阻害し、かつ/またはBTKを0.00072μM〜1μMのIC50で阻害する、タンパク質キナーゼ阻害剤。
【請求項２】
キナーゼ結合部分が適当な疎水性アリール、ヘテロアリールまたはアルキル基を有するゲートキーパー残基でキナーゼと接触する、請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤。
【請求項３】
キナーゼ結合部分が疎水性アリール、ヘテロアリールまたはアルキル基を有するゲートキーパー残基を回避して内部疎水性部位に接近する、請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤。
【請求項４】
キナーゼ結合部分が、阻害剤のアリールまたはヘテロアリール基にある水素結合受容体および供与体を通じて、主鎖アミド部分への水素結合によりヒンジ領域でキナーゼに接触する、請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤。
【請求項５】
キナーゼ結合部分が少なくとも一つの活性部位疎水性残基と相互作用し、それにより全体の結合エネルギーが高まる、請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤。
【請求項６】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000163
式中、
R3、R4、R5、およびR6は独立して水素または置換されていてもよいC1-C6アルキルであり；
R9は
2014098004.tif 000164
2014098004.tif 000165
から選択され；かつ
R10は水素、-OH、-COOH、-CONH2、または-NCOである。
【請求項７】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000166
式中、
R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり；
R11およびR12は水素、-OCH3、ハロゲン、-NO2、-CN、-CF3、-NCOR'（式中R'は水素またはC1-C4アルキルである）、フェニルオキシ、-OCF3、-NR'R''（式中R'およびR''は独立に水素またはC1-C4アルキルである）、C1-C4アルキル、C1-C4アルコキシ、および-SO2R'（式中R'は水素またはC1-C4アルキルである）から独立に選択され；かつ
R13は水素、C1-C4アルキル、
2014098004.tif 000167
である。
【請求項８】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000168
式中、R1およびR2は（a）独立に水素、置換されていてもよいC1-C6アルキル、ピペリジン、もしくはフラニルであるか；または（b）それらが結合している窒素原子と一緒になって、置換されていてもよいアリールに融合してもしなくてもよい（i）5〜7員の置換されていてもよいアリール、（ii）5〜7員の置換されていてもよいヘテロアリール、もしくは（iii）5〜7員の置換されていてもよい複素環を形成する。
【請求項９】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤：
2014098004.tif 000169
式中、
R3、R4、R5、R6、およびR11は前述の定義のとおりである。
【請求項１０】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000170
式中、
R1、R2、R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり；
R14は水素または=Oであり；かつ
DはCHまたはNHである。
【請求項１１】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000171
式中、
R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり；かつ
R1およびR2は独立に水素、C1-C4アルキル、
2014098004.tif 000172
（式中R15はハロゲンまたはC1-C4アルキルであり、かつR16はC1-C4アルキルである）であるか、またはR1およびR2はそれらが結合している窒素と一緒になって
2014098004.tif 000173
、
2014098004.tif 000174
（式中R17およびR18は独立に水素または-OCH3である）、
2014098004.tif 000175
（式中R1およびR2は独立に水素またはC1-C4アルキルである）、
2014098004.tif 000176
（式中n=1〜4）、およびハロゲンで置換されていてもよいフェニル-C1-C4アルキルから選択されるアリール基を形成する。
【請求項１２】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000177
式中、R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりである。
【請求項１３】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000178
式中、
R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり；かつ
R1は水素であり、R2は
2014098004.tif 000179
である（式中R19は水素および
2014098004.tif 000180
から選択される）か；または
R1およびR2はそれらが結合している窒素と一緒になって
2014098004.tif 000181
であり；
AはNまたはOであり；
R20は一つまたは複数のハロゲンで置換されていてもよいフェニル-C1-C4アルキル、水素、C1-C4アルキル、アミノC1-C4アルキル、
2014098004.tif 000182
であり；
R17およびR18は独立に水素または-OCH3であり；
R21は-CONR'R''、-COR'、
2014098004.tif 000183
であり；かつ
R'およびR''は水素およびC1-C4アルキルから独立に選択される。
【請求項１４】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000184
式中、
R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり；
R22は水素、C1-C4アルキル、-NR'R''、-COH、-COOH、-CNR'R''、および-CONHR'から選択され；かつ
R'およびR''は前述の定義のとおりである。
【請求項１５】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000185
式中、
R3、R4、R5、R6、G、およびG'は前述の定義のとおりであり；
R23は水素、-NR'R''C1-C4直鎖アルキル、C1-C4アルキル、フェニル-C1-C4アルキル、-CONH2、または-COR'R''であり；かつ
R'およびR''は前述の定義のとおりである。
【請求項１６】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000186
式中、R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり、かつR24は
2014098004.tif 000187
である。
【請求項１７】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000188
式中、
Lは
2014098004.tif 000189
であり、かつR3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりである。
【請求項１８】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000190
式中、T、U、V、およびWは水素；ハロゲン；-O；C1-C3アルキル；およびC1-C3アルキルオキシから独立に選択され；かつR25は水素またはC1-C3アルキルである。
【請求項１９】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000191
式中、T、U、V、およびWは水素；ハロゲン；-O；C1-C3アルキル；およびC1-C3アルキルオキシから独立に選択され；かつR8は水素またはC1-C3アルキルである。
【請求項２０】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000192
式中、T、U、V、およびWは水素；ハロゲン；-O；C1-C3アルキル；およびC1-C3アルキルオキシから独立に選択され；かつR8は水素またはC1-C3アルキルである。
【請求項２１】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000193
式中、DはS、O、またはNHである。
【請求項２２】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000194
式中、Dは前述の定義のとおりである。
【請求項２３】
下記の構造式を有する請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩：
2014098004.tif 000195
式中、G'はNHまたはCHである。
【請求項２４】
（a）薬学的に許容される媒体；および
（b）請求項1記載の化合物
を含む組成物。
【請求項２５】
（a）請求項1記載の化合物；および
（b）DKC三つ組キナーゼドメイン
を含む付加物。
【請求項２６】
キナーゼ活性を阻害する方法であって、DKC三つ組キナーゼを請求項1記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と接触させ、それによりDKC三つ組キナーゼのキナーゼ活性が阻害される工程を含む、方法。
【請求項２７】
接触が無細胞系で起こる、請求項26記載の方法。
【請求項２８】
接触が細胞内で起こる、請求項26記載の方法。
【請求項２９】
細胞がインビトロにある、請求項28記載の方法。
【請求項３０】
細胞が患者内にある、請求項29記載の方法。
【請求項３１】
患者が移植臓器、自己免疫疾患、または血液細胞悪性疾患を有する、請求項30記載の方法。
【請求項３２】
DKC三つ組キナーゼに結合している請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤を含む複合体。
【請求項３３】
DKC三つ組キナーゼがITKまたはBTKである、請求項32記載の複合体。
【請求項３４】
DKC三つ組キナーゼに結合している請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤からなる、請求項32記載の複合体。
【請求項３５】
DKC三つ組キナーゼがITKまたはBTKである、請求項34記載の複合体。
【請求項３６】
DKC三つ組キナーゼがITKまたはBTKである、請求項1記載のタンパク質キナーゼ阻害剤。
【請求項３７】
DKC三つ組キナーゼドメインがITKまたはBTKキナーゼドメインである、請求項25記載の付加物。
【請求項３８】
DKC三つ組キナーゼがITKまたはBTKである、請求項26記載の方法。
【請求項３９】
DKC三つ組キナーゼを阻害するための薬物の調製における、請求項1〜23のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項４０】
DKC三つ組キナーゼがITKまたはBTKである、請求項39記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、2006年5月18日提出の同時係属中の特許仮出願第60/801,074号および2006年12月12日提出の第60/869,664号の恩典を主張し、これらは参照により本明細書に組み入れられる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、細胞内キナーゼ阻害剤およびそれらの治療的使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
細胞内キナーゼは免疫系の細胞において重要な機能をはたす。例えば、インターロイキン-2誘導性チロシンキナ−ゼ（ITK）はT細胞の発生および分化において重要な役割を果たし；ホスホリパーゼCγ1（PLCγ1）および活性化T細胞核因子（NFAT）を介してIL-2産生を調節し；Th2細胞分化を仲介し；T細胞のリンパ器官への移動および動員を調節する。ブルトン型チロシンキナーゼ（BTK）はBリンパ細胞の成長および分化を調節するシグナル伝達系路に関与する。BTKは糖タンパク質VI/Fc受容体γ鎖（GPVI-FcRγ）結合コラーゲン受容体シグナリング経路を調節することにより血小板生理学にも関与する。これらの理由により、細胞内キナーゼの阻害剤は、血液細胞悪性疾患、固形腫瘍を治療するためや、例えば、自己免疫障害または臓器移植の患者において免疫系を抑制するために有用である。細胞内キナーゼ阻害剤は、血栓塞栓症のリスクを予防または軽減するためにも有用である。
【発明の概要】
【０００４】
[請求項101]
DKC三つ組キナーゼ活性部位に結合するタンパク質キナーゼ阻害剤であって、
(a)キナーゼ活性部位における触媒二つ組のリシンのアミノ基に対し水素結合距離内のキナーゼ活性部位に配置されるプロトン受容体;
(b)キナーゼ活性部位における触媒二つ組のアスパラギン酸に隣接する水素結合における引き抜き可能なプロトンであって、引き抜き可能なプロトンの除去により、エノール/エノラートまたはチオール/チオラートまたはエナミンへの電子転位が可能な共役系が生じる引き抜き可能なプロトン;
(c)さらなる電子転位によってβ脱離が起こり、それにより阻害剤におけるマイケル受容体が生成される脱離基であって、阻害剤とキナーゼの少なくとも一つの配座はマイケル受容体部分がシステイン求核体から3〜10Åの距離内に位置するような配座であり、酵素のマイケル付加物を形成する反応を生じる、脱離基;
(d)キナーゼのヒンジ領域、いくつかの疎水性残基、親水性残基、およびその組み合わせからなる群より選択される、ATP結合部位の一部に対する親和性を有するキナーゼ結合部分を含み、
ただし
2014098004.tif 000002
ではなく、かつインビトロキナーゼアッセイにおいてITKを0.00085μM〜1μMのIC50で阻害し、かつ/またはBTKを0.00072μM〜1μMのIC50で阻害する、タンパク質キナーゼ阻害剤。
[請求項102]
キナーゼ結合部分が適当な疎水性アリール、ヘテロアリールまたはアルキル基を有するゲートキーパー残基でキナーゼと接触する、請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤。
[請求項103]
キナーゼ結合部分が疎水性アリール、ヘテロアリールまたはアルキル基を有するゲートキーパー残基を回避して内部疎水性部位に接近する、請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤。
[請求項104]
キナーゼ結合部分が、阻害剤のアリールまたはヘテロアリール基にある水素結合受容体および供与体を通じて、主鎖アミド部分への水素結合によりヒンジ領域でキナーゼに接触する、請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤。
[請求項105]
キナーゼ結合部分が少なくとも一つの活性部位疎水性残基と相互作用し、それにより全体の結合エネルギーが高まる、請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤。
[請求項106]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000003
式中、
R3、R4、R5、およびR6は独立して水素または置換されていてもよいC1-C6アルキルであり;
R9は
2014098004.tif 000004
2014098004.tif 000005
から選択され;かつ
R10は水素、-OH、-COOH、-CONH2、または-NCOである。
[請求項107]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000006
式中、
R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり;
R11およびR12は水素、-OCH3、ハロゲン、-NO2、-CN、-CF3、-NCOR'(式中R'は水素またはC1-C4アルキルである)、フェニルオキシ、-OCF3、-NR'R''(式中R'およびR''は独立に水素またはC1-C4アルキルである)、C1-C4アルキル、C1-C4アルコキシ、および-SO2R'(式中R'は水素またはC1-C4アルキルである)から独立に選択され;かつ
R13は水素、C1-C4アルキル、
2014098004.tif 000007
である。
[請求項108]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000008
式中、R1およびR2は(a)独立に水素、置換されていてもよいC1-C6アルキル、ピペリジン、もしくはフラニルであるか;または(b)それらが結合している窒素原子と一緒になって、置換されていてもよいアリールに融合してもしなくてもよい(i)5〜7員の置換されていてもよいアリール、(ii)5〜7員の置換されていてもよいヘテロアリール、もしくは(iii)5〜7員の置換されていてもよい複素環を形成する。
[請求項109]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤:
2014098004.tif 000009
式中、
R3、R4、R5、R6、およびR11は前述の定義のとおりである。
[請求項110]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000010
式中、
R1、R2、R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり;
R14は水素または=Oであり;かつ
DはCHまたはNHである。
[請求項111]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000011
式中、
R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり;かつ
R1およびR2は独立に水素、C1-C4アルキル、
2014098004.tif 000012
(式中R15はハロゲンまたはC1-C4アルキルであり、かつR16はC1-C4アルキルである)であるか、またはR1およびR2はそれらが結合している窒素と一緒になって
2014098004.tif 000013
、
2014098004.tif 000014
(式中R17およびR18は独立に水素または-OCH3である)、
2014098004.tif 000015
(式中R1およびR2は独立に水素またはC1-C4アルキルである)、
2014098004.tif 000016
(式中n=1〜4)、およびハロゲンで置換されていてもよいフェニル-C1-C4アルキルから選択されるアリール基を形成する。
[請求項112]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000017
式中、R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりである。
[請求項113]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000018
式中、
R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり;かつ
R1は水素であり、R2は
2014098004.tif 000019
である(式中R19は水素および
2014098004.tif 000020
から選択される)か;または
R1およびR2はそれらが結合している窒素と一緒になって
2014098004.tif 000021
であり;
AはNまたはOであり;
R20は一つまたは複数のハロゲンで置換されていてもよいフェニル-C1-C4アルキル、水素、C1-C4アルキル、アミノC1-C4アルキル、
2014098004.tif 000022
であり;
R17およびR18は独立に水素または-OCH3であり;
R21は-CONR'R''、-COR'、
2014098004.tif 000023
であり;かつ
R'およびR''は水素およびC1-C4アルキルから独立に選択される。
[請求項114]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000024
式中、
R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり;
R22は水素、C1-C4アルキル、-NR'R''、-COH、-COOH、-CNR'R''、および-CONHR'から選択され;かつ
R'およびR''は前述の定義のとおりである。
[請求項115]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000025
式中、
R3、R4、R5、R6、G、およびG'は前述の定義のとおりであり;
R23は水素、-NR'R''C1-C4直鎖アルキル、C1-C4アルキル、フェニル-C1-C4アルキル、-CONH2、または-COR'R''であり;かつ
R'およびR''は前述の定義のとおりである。
[請求項116]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000026
式中、R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり、かつR24は
2014098004.tif 000027
である。
[請求項117]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000028
式中、
Lは
2014098004.tif 000029
であり、かつR3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりである。
[請求項118]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000030
式中、T、U、V、およびWは水素;ハロゲン;-O;C1-C3アルキル;およびC1-C3アルキルオキシから独立に選択され;かつR25は水素またはC1-C3アルキルである。
[請求項119]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000031
式中、T、U、V、およびWは水素;ハロゲン;-O;C1-C3アルキル;およびC1-C3アルキルオキシから独立に選択され;かつR8は水素またはC1-C3アルキルである。
[請求項120]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000032
式中、T、U、V、およびWは水素;ハロゲン;-O;C1-C3アルキル;およびC1-C3アルキルオキシから独立に選択され;かつR8は水素またはC1-C3アルキルである。
[請求項121]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000033
式中、DはS、O、またはNHである。
[請求項122]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000034
式中、Dは前述の定義のとおりである。
[請求項123]
下記の構造式を有する請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩:
2014098004.tif 000035
式中、G'はNHまたはCHである。
[請求項124]
(a)薬学的に許容される媒体;および
(b)請求項101記載の化合物
を含む組成物。
[請求項125]
(a)請求項101記載の化合物;および
(b)DKC三つ組キナーゼドメイン
を含む付加物。
[請求項126]
キナーゼ活性を阻害する方法であって、DKC三つ組キナーゼを請求項101記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と接触させ、それによりDKC三つ組キナーゼのキナーゼ活性が阻害される工程を含む、方法。
[請求項127]
接触が無細胞系で起こる、請求項126記載の方法。
[請求項128]
接触が細胞内で起こる、請求項126記載の方法。
[請求項129]
細胞がインビトロにある、請求項128記載の方法。
[請求項130]
細胞が患者内にある、請求項129記載の方法。
[請求項131]
患者が移植臓器、自己免疫疾患、または血液細胞悪性疾患を有する、請求項130記載の方法。
[請求項132]
DKC三つ組キナーゼに結合している請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤を含む複合体。
[請求項133]
DKC三つ組キナーゼがITKまたはBTKである、請求項132記載の複合体。
[請求項134]
DKC三つ組キナーゼに結合している請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤からなる、請求項132記載の複合体。
[請求項135]
DKC三つ組キナーゼがITKまたはBTKである、請求項134記載の複合体。
[請求項136]
DKC三つ組キナーゼがITKまたはBTKである、請求項101記載のタンパク質キナーゼ阻害剤。
[請求項137]
DKC三つ組キナーゼドメインがITKまたはBTKキナーゼドメインである、請求項125記載の付加物。
[請求項138]
DKC三つ組キナーゼがITKまたはBTKである、請求項126記載の方法。
[請求項139]
DKC三つ組キナーゼを阻害するための薬物の調製における、請求項101〜123のいずれか一項記載の化合物の使用。
[請求項140]
DKC三つ組キナーゼがITKまたはBTKである、請求項139記載の使用。
発明の詳細な説明
本発明は、本明細書に開示するインビトロキナーゼアッセイにおいて、細胞内キナーゼ、特にITKおよびBTKを、1μM以下のIC50で阻害する化合物を提供する。本発明は、薬学的組成物および化合物の治療的使用法も提供する。治療することができる患者には、血液細胞悪性疾患、固形腫瘍、自己免疫障害、および移植臓器を有するものが含まれる。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】ITKキナーゼドメインをバイオセンサー上に固定し、それが小分子に結合および解離する能力について評価した、BIACORE（登録商標）実験の結果を示す図である。
【図２】ヒトITK（配列番号：1）およびBTK（配列番号：2）の配列を示す図である。
【図３】キナーゼドメインの配列を示す図である。太字のアミノ酸＝ヒンジ；太字の下線付きアミノ酸＝ゲートキーパー；イタリック体で太字のアミノ酸＝Cys442等価物。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
文献および特許データベースの再検討により、ITKまたはBTKキナーゼを阻害する化合物の存在が明らかとなった。しかし、これらの化合物は、本明細書に開示する化合物とは著しく異なる。いくつかの場合に、化合物はピロロピリジンである（例えば、米国2005/0215582号）。他の場合に、化合物は化合物のチアゾリルファミリーに属するジメチル安息香酸メチルである（例えば、米国特許第2004/0077695号）。すべての場合に、これらの出版物で報告された化合物は、以下のパラメーターに基づき、本明細書に開示する化合物とは異なる：化合物は本出願において示す一般構造に対応しておらず；キナーゼ結合部位で見られ、本明細書に記載の最適な化合物阻害能力に必須のアミノ酸三つ組DKCを必要とせず；脱離を起こさず；かつキナーゼ結合ポケットに共有結合しない。
【０００７】
ITKを阻害する本発明の化合物を、例えば、T細胞悪性疾患を治療するために用いることができる。本発明の好ましい化合物は、ITKおよびBTKの両方を各酵素について1μM以下のIC50で阻害する。そのような化合物は、例えば、TおよびB細胞悪性疾患の両方、ならびにEGFRまたはHER陽性腫瘍を治療するために用いることができる。
【０００８】
キナーゼのTecファミリーはSrc相同ドメイン2（SH2）、SH3および触媒キナーゼドメインからなる共通のサブユニット構造を有する。さらに、これらはTec相同領域（TH）およびプレクストリン相同（PH）ドメインの存在によって一義的に特定される。キナーゼのTecファミリーに対して記載される4つの公知の結晶構造がある。これらには（a）リン酸化および非リン酸化スタウロスポリン結合ITKを表す2つの構造（PDBコード1SM2、1SNU）；（b）ITKの非リン酸化アポ型の1つの構造（PDBコード1SNX）、および（c）BTKの非リン酸化アポ型の1つの構造（Mao et al. J. Biol. Chem. 2001, 276, 41435-41443）が含まれる。説明を明白にするために、本開示はこれらのキナーゼ構造をATP結合部位に注目して表し、（a）および（b）のほぼ同じITK構造のものは参照により本明細書に組み入れられる（Brown et al. J. Biol. Chem. 2004, 279, 18727-18732）。統一するために、タンパク質データバンクで表記されているこれらのキナーゼ構造の残基番号を、キナーゼドメインを説明するために本文書の全体を通して組み入れている。ヒトITKのアミノ酸配列を配列番号：1に示す。ヒトBTKのアミノ酸配列を配列番号：2に示す。他のキナーゼおよび他の原料からの配列における同種の残基は異なる番号がつくこともある。
【０００９】
図2を参照して、ITKキナーゼドメイン（残基357〜620）は2つの成分：N末端ローブ（残基357〜437）およびC末端ローブ（残基438〜620）に分解することができる。ほとんどのキナーゼと同様、2つのローブの間の連結領域は下記の柔軟なヒンジ領域であり、触媒活性部位の一部を形成する。Cヘリックスの規則正しい特性により、Glu406、Lys391およびAsp500の触媒として重要な残基がタンパク質キナーゼの活性型に典型的な配向に並ぶ。キナーゼでよく見られるGlyを多く含むループ（残基362〜378）は、活性キナーゼに典型的な伸張し、開いた構造をとる。
【００１０】
ATP結合部位の境界は下記の残基で区切られている：（a）グリシンを多く含むループ（Gly370、Ser371、Gly372、Gln373、Phe374およびGly375）；（b）ヒンジ領域（Phe435、Glu436、Phe437、Met438、Glu439、His440、Gly441およびCys442）；ならびに（c）触媒残基Lys391およびAsp500。加えて、活性部位はAla389、Ile369、Val377、Val419、およびLeu489を含むいくつかの他の疎水性残基ならびに親水性残基Ser499も含む。
【００１１】
他のキナーゼと同様に、ITKのヒンジ領域は、それぞれ水素結合受容体および供与体部位の可能性があるものとして、2つの主鎖カルボニルおよび1つの主鎖アミノ基を含む。同様の主鎖相互作用がキナーゼとATPのアデニン塩基との相互作用において観察され、いくつかの競合的阻害剤がこの概念に従って設計されている。ヒンジ領域のN末端に「ゲートキーパー」残基、Phe435がある。この残基は内部疎水性ポケットへの接近を阻止し、同時に芳香族または疎水性基に対して相互作用する可能性がある部位を提供する。この「ゲートキーパー」残基はITKとBTKとの間の著しい相違である。BTKとITKとの間には全配列の強い同一性が見られるが、BTKの活性部位にはゲートキーパーとして小さいトレオニン残基があることで、後者がSrc/Abl/EGFRなどのいくつかのキナーゼの活性部位に対し重要な類似性を示す正当な理由となる。嵩高いPheゲートキーパーがないことで、これらのキナーゼの内部疎水性ポケットへの接近が可能となり、これはアロステリック阻害剤の設計のため、および疎水性ファーマコフォアの付加を通じてATP競合的阻害剤の親和性を改善するために活用されてきた事実である。
【００１２】
定義
「アルキル」は一価の直鎖または分枝飽和炭化水素基であり、置換されていても無置換でもよい。直鎖または分枝アルキルは典型的には1から12個の間の炭素原子（例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12個）を有する。低級アルキル、または「C1-C6アルキル」は1から6個の間の炭素原子（例えば、1、2、3、4、5、または6個）を有する。任意の置換基にはハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、アミノ、N-アルキルアミノ、N,N-ジアルキルアミノ、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アミノカルバモイル、N-アルキルアミノカルバモイル、N,N-ジアルキルアミノカルバモイル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、カルボキシ、カルボキシアルキル、N-アルキルカルボキサミド、N,N-ジアルキルカルボキサミド、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、トリハロアルキルスルホニルアミノ（例えば、トリフルオロメチルスルホニルアミノ）、アリールチオ、アリールスルフィニル、アリールスルホニル、およびヘテロシクリルが含まれる。直鎖または分枝C1-C6アルキルの例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ブチル、n-ペンチル、sec-ペンチル、tert-ペンチル、n-ヘキシル、イソペンチル、フルオロメチル、トリフルオロメチル、ヒドロキシブチル、ジメチルカルボキシアルキル、アミノアルキル、およびベンジルプロピルである。
【００１３】
「アシル」（または「アルキルカルボニル」）は-C(O)R8基であり、式中、R8は置換されていてもよい低級アルキルである。アシルの例には、アセチル、プロピオニル、n-ブチリル、sec-ブチリル、t-ブチリル、ヨードアセチル、およびベンジルアセチルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００１４】
「アシルオキシ」は-OC(O)R8基であり、式中、R8は置換されていてもよい低級アルキルである。アシルオキシの例には、アセトキシ、プロピオニルオキシ、ブチリルオキシ、トリフルオロアセトキシ、およびジヨードブチリルオキシが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００１５】
「アルコキシ」は-OR8基であり、式中、R8は置換されていてもよい低級アルキルである。アルコキシの例には、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、2-プロポキシ、ブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、フルオロメトキシ、およびヨードエトキシが含まれる。
【００１６】
「アルキルアミノ」は-NR7R8基であり、式中、R7は水素または置換されていてもよい低級アルキルであり、かつR8は置換されていてもよい低級アルキルである。アルキルアミノ基の例は、メチルアミノ、エチルアミノ、イソプロピルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、およびトリフルオロメチルアミノである。
【００１７】
「アルキルアミノカルボニル」（または「アルキルカルバモイル」）は-C(O)NR7R8基であり、式中、R7は水素または置換されていてもよい低級アルキルであり、かつR8は置換されていてもよい低級アルキルである。アルキルアミノカルボニルの例には、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、t-ブチルアミノカルボニル、n-ブチルアミノカルボニル、イソ-プロピルアミノカルボニル、およびトリフルオロメチルアミノカルボニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００１８】
「アルキルアミノスルホニル」は-S(O)2NR7R8基であり、式中、R7は水素または置換されていてもよい低級アルキルであり、かつR8は置換されていてもよい低級アルキルである。アルキルアミノスルホニルの例には、メチルアミノスルホニル、ジメチルアミノスルホニル、およびトリヨードメチルアミノスルホニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００１９】
「アルコキシカルボニル」または「アルキルエステル」は-C(O)OR8基であり、式中、R8は置換されていてもよい低級アルキルである。アルコキシカルボニルの例には、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、sec-ブトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、およびジフルオロメトキシカルボニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００２０】
「アルキルカルボニルアミノ」は-NR7C(O)R8基であり、式中、R7は水素または置換されていてもよい低級アルキルであり、かつR8は置換されていてもよい低級アルキルである。アルキルカルボニルアミノの例には、メチルカルボニルアミノ、イソ-プロピルカルボニルアミノ、およびt-ブチルカルボニルアミノが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００２１】
「アルキルカルボキサミド」は-C(O)NR7R8基であり、式中、R7は水素または置換されていてもよい低級アルキルであり、かつR8は置換されていてもよい低級アルキルである。アルキルカルボキサミドの例は、メチルカルボキサミド、エチルカルボキサミド、イソプロピルカルボキサミド、およびn-プロピルカルボキサミドである。
【００２２】
「アルキルスルホニル」は-S(O)2R8基であり、式中、R8は置換されていてもよい低級アルキルである。アルキルスルホニルの例には、メチルスルホニル、トリフルオロメチルスルホニル、およびプロピルスルホニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００２３】
「アルキルスルホニルアミノ」は-NR7S(O)2R8基であり、式中、R7は水素または置換されていてもよい低級アルキルであり、かつR8は置換されていてもよい低級アルキルである。アルキルスルホニルアミノの例には、メチルスルホニルアミノ、プロピルスルホニルアミノ、およびトリフルオロメチルスルホニルアミノが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００２４】
「アリール」は1つの個々の芳香環、または縮合環の少なくとも1つが芳香族である2つもしくは3つの縮合環の一価芳香族炭素環基である。アリールは一つまたは複数の環上で、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、アミノ、N-アルキルアミノ、N,N-ジアルキルアミノ、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アミノカルバモイル、N-アルキルアミノカルバモイル、N,N-ジアルキルアミノカルバモイル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、カルボキシ、カルボキシアルキル、N-アルキルカルボキサミド、N,N-ジアルキルカルボキサミド、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、トリフルオロメチルスルホニルアミノ、アリールチオ、アリールスルフィニル、アリールスルホニル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキサルキル、アミノアルキル、N-アルキルアミノアルキル、N,N-ジアルキルアミノアルキル、アルキルカルバモイルアルキル、アリールカルバモイルアルキル、アミノカルバモイルアルキル、N-アルキルアミノカルバモイルアルキル N,N-ジアルキルアミノカルバモイルアルキル、アルキルスルホニルアミノアルキル、アリールスルホニルアミノアルキル、アルキルカルボキシ、アルキルカルボキシアルキル、N-アルキルカルボキサミンドアルキル、N,N-ジアルキルカルボキサミンドアルキル、アルキルチオアルキル、アルキルスルフィニルアルキル、アルキルスルホニルアルキル、トリフルオロメチルスルホニルアミノアルキル、アリールチオアルキル、アリールスルフィニルアルキル、およびアリールスルホニルアルキルの一つまたは複数で置換されていてもよい。アリールの例は、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、インダノニル、テトラリニル、テトラロニル、フルオレノニル、フェナントリル、アントリル、およびアセナフチルである。
【００２５】
「アリールアルコキシカルボニル」または「アリールアルキルエステル」は-C(O)OR8X基であり、式中、R8は置換されていてもよい低級アルキルであり、かつXは置換されていてもよいアリールである。アリールオキシカルボニル基の例には、ベンジルエステル、フェニルエチルエステル、およびジメチルフェニルエステルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００２６】
「アリールアルキルカルバモイル」は-C(O)NHR8X基であり、式中、R8は置換されていてもよい低級アルキルであり、かつXは置換されていてもよいアリールである。アリールアルキルカルバモイルの例には、ベンジルカルバモイル、フェニルエチルカルバモイル、およびシアノフェニルカルバモイルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００２７】
「アリールアルキルカルボニル」（または「アラルキルカルボニル」）は-C(O)R8X基であり、式中、R8は置換されていてもよい低級アルキルであり、かつXは置換されていてもよいアリールである。アリールアルキルカルボニル基の例には、フェニルアセチルおよびフルオロフェニルアセチルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００２８】
「アリールアミノカルボニル」（または「アリールカルバモイル」）は-C(O)NXX'基であり、式中、Xは置換されていてもよいアリールであり、かつX'は水素または置換されていてもよいアリールである。アリールアミノカルボニルの例には、フェニルアミノカルボニル、メトキシフェニルアミノカルボニル、ジフェニルアミノカルボニル、およびジメトキシフェニル-アミノカルボニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００２９】
「アリールアミノスルホニル」は-S(O)2NXX'基であり、式中、Xは置換されていてもよいアリールであり、かつX'は水素または置換されていてもよいアリールである。アリールアミノスルホニルの例には、フェニルアミノスルホニル、メトキシフェニルアミノスルホニル、およびトリヨードメチルアミノスルホニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００３０】
「アリールカルボニル」は-C(O)X基であり、式中、Xは置換されていてもよいアリールである。アリールカルボニル基の例には、ベンゾイル、ナフトイル、およびジフルオロフェニルカルボニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００３１】
「アリールカルボニルアミノ」は-NHC(O)X基であり、式中、Xは置換されていてもよいアリールである。アリールカルボニルアミノの例には、フェニルカルボニルアミノ、トシルカルボニルアミノ、およびシアノフェニルカルボニルアミノが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００３２】
「アリールオキシ」は-OXであり、式中、Xは置換されていてもよいアリールである。アリールオキシの例には、フェニルオキシ、ナフチルオキシ、テトラヒドロナフチルオキシ、インダニルオキシ、インダノニルオキシ、ビフェニルオキシ、テトラリニルオキシ、テトラロニルオキシ、フルオレノニルオキシ、フェナントリルオキシ、アントリルオキシ、およびアセナフチルオキシが含まれる。
【００３３】
「アリールオキシカルボニル」または「アリールエステル」は-C(O)OX基であり、式中、Xは置換されていてもよいアリールである。アリールオキシカルボニル基の例には、フェニルエステル、ナフチルエステル、ジメチルフェニルエステル、およびトリフルオロフェニルエステルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００３４】
「アリールスルホニル」は-S(O)2X基であり、式中、Xは置換されていてもよいアリールである。アリールスルホニルの例には、フェニルスルホニル、ニトロフェニルスルホニル、メトキシフェニルスルホニル、および3,4,5-トリメトキシフェニルスルホニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００３５】
「アリールスルホニルアミノ」は-NS(O)2X基であり、式中、Xは置換されていてもよいアリールである。アリールスルホニルアミノの例には、フェニルスルホニルアミノ、ナフチルスルホニルアミノ、2-ブトキシフェニルスルホニルアミノ、4-クロロフェニルスルホニルアミノ、2,5-ジエトキシスルホニルアミノ、4-ヘキシルオキシフェニルスルホニルアミノ、4-メチルフェニルスルホニルアミノ、ナフチルスルホニルアミノ、4-メトキシフェニルスルホニルアミノ、N-メチルフェニルスルホニルアミノ、および4-シアノフェニルスルホニルアミノ、フェニルスルホニルアミノ、4-メチルフェニルスルホニルアミノ、ナフチルスルホニルアミノ、フェニルスルホニルアミノ、および4-メチルフェニルスルホニルアミノが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００３６】
「アリールスルホニルオキシ」は-OS(O)2X基であり、式中、Xは置換されていてもよいアリールである。アリールスルホニルオキシの例には、ベンゼンスルホニルオキシおよび4-クロロ-ベンゼンスルホニルオキシが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００３７】
「シクロアルキル」は、環あたり炭素3から7個の一つまたは複数の環、好ましくは一つからなる一価飽和炭素環基で、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、アミノ、N-アルキルアミノ、N,N-ジアルキルアミノ、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アミノカルバモイル、N-アルキルアミノカルバモイル、N,N-ジアルキルアミノカルバモイル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、カルボキシ、カルボキシアルキル、N-アルキルカルボキサミド、N,N-ジアルキルカルボキサミド、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、トリフルオロメチルスルホニルアミノ、アリールチオ、アリールスルフィニル、アリールスルホニル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキサルキル、アミノアルキル、N-アルキルアミノアルキル、N,N-ジアルキルアミノ アルキル、アルキルカルバモイルアルキル、アリールカルバモイルアルキル、アミノカルバモイルアルキル、N-アルキルアミノカルバモイルアルキル N,N-ジアルキルアミノカルバモイルアルキル、アルキルスルホニルアミノアルキル、アリールスルホニルアミノアルキル、アルキルカルボキシ、アルキルカルボキシアルキル、N-アルキルカルボキサミンドアルキル、N,N-ジアルキルカルボキサミンドアルキル、アルキル チオアルキル、アルキルスルフィニルアルキル、アルキルスルホニルアルキル、トリフルオロメチルスルホニルアミノアルキル、アリールチオアルキル、アリールスルフィニルアルキル、およびアリールスルホニルアルキルの一つまたは複数で置換されていてもよい。シクロアルキルの例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、アダマンチル、シクロオクチル、シクロヘプチル、テトラヒドロ-ナフタレン、メチレンシロヘキシル、インダニル、インデニル、およびフルオレニルである。
【００３８】
「シクロアルキルカルボニル」は-C(O)R基であり、式中、Rは置換されていてもよいシクロアルキル基である。シクロアルキルカルボニル基の例には、シクロブタノイル、シクロペンタノイル、シクロヘキサノイル、およびトリフルオロシクロペンタノイルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００３９】
「ハロゲン」にはフッ素、塩素、臭素、およびヨウ素が含まれる。
【００４０】
「ヘテロアリール」は、窒素、酸素、ケイ素、および硫黄から独立に選択される一つまたは複数のヘテロ原子を含む、環あたり原子4から8個の一つまたは複数の環、好ましくは1から3つの環を有する一価芳香環基である。ヘテロアリールは一つまたは複数の環上で、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、アミノ、N-アルキルアミノ、N,N-ジアルキルアミノ、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アミノカルバモイル、N-アルキルアミノカルバモイル、N,N-ジアルキルアミノカルバモイル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、カルボキシ、カルボキシアルキル、N-アルキルカルボキサミド、N,N-ジアルキルカルボキサミド、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、トリフルオロメチルスルホニルアミノ、アリールチオ、アリールスルフィニル、アリールスルホニル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキサルキル、アミノアルキル、N-アルキルアミノアルキル、N,N-ジアルキルアミノアルキル、アルキルカルバモイルアルキル、アリールカルバモイルアルキル、アミノカルバモイルアルキル、N-アルキルアミノカルバモイルアルキル N,N-ジアルキルアミノカルバモイルアルキル、アルキルスルホニルアミノアルキル、アリールスルホニルアミノアルキル、アルキルカルボキシ、アルキルカルボキシアルキル、N-アルキルカルボキサミンドアルキル、N,N-ジアルキルカルボキサミンドアルキル、アルキルチオアルキル、アルキルスルフィニルアルキル、アルキルスルホニルアルキル、トリフルオロメチルスルホニルアミノアルキル、アリールチオアルキル、アリールスルフィニルアルキル、およびアリールスルホニルアルキルの一つまたは複数で置換されていてもよい。
【００４１】
単環式環系ヘテロアリールの代表例には、アゼチジニル、アゼピニル、アジリジニル、ジアゼピニル、1,3-ジオキソラニル、ジオキサニル、ジチアニル、フリル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリニル、イソチアゾリジニル、イソキサゾリル、イソキサゾリニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、オキサジアゾリル、オキサジアゾリニル、オキサジアゾリジニル、オキサゾリル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラジニル、テトラゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリニル、チアジアゾリジニル、チアゾリル、チアゾリニル、チアゾリジニル、チオフェニル、チオモルホリニル、1,1-ジオキシドチオモルホリニル、チオピラニル、トリアジニル、トリアゾリル、およびトリチアニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００４２】
二環式環系には、アリール基、シクロアルキル基、またはもう一つのヘテロアリール単環式環系に縮合した任意の前述の単環式環系が含まれる。二環式環系の代表例には、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンズオキサゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾジオキシニル、1,3-ベンゾジオキソリル、シンノリニル、インダゾリル、インドリル、インドリニル、インドリジニル、ナフチリジニル、イソベンゾフラニル、イソベンゾチオフェニル、イソインドリル、イソインドリニル、イソキノリル、フタラジニル、ピラノピリジル、キノリル、キノリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、テトラヒドロイソキノリル、テトラヒドロキノリル、およびチオピラノピリジルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００４３】
三環式環系には、アリール基、シクロアルキル基、またはヘテロアリール単環式環系に縮合した任意の前述の二環式環系が含まれる。三環式環系の代表例には、アクリジニル、カルバゾリル、カルボリニル、ジベンゾフラニル、ジベンゾチオフェニル、ナフトフラニル、ナフトチオフェニル、オキサントレニル、フェナジニル、フェノキサチイニル、フェノキサジニル、フェノチアジニル、チアントレニル、チオキサンテニル、およびキサンテニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００４４】
「ヘテロアリールアミノカルボニル」は-C(O)NZZ'基であり、式中、Zは置換されていてもよいヘテロアリールであり、かつZ'は水素または置換されていてもよいヘテロアリールである。ヘテロアリールアミノカルボニルの例には、ピリジニルアミノカルボニル、およびチエニルアミノカルボニル、フラニルアミノカルボニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００４５】
「ヘテロアリールアミノスルホニル」は-S(O)2NZZ'基であり、式中、Zは置換されていてもよいヘテロアリールであり、かつZ'は水素または置換されていてもよいヘテロアリールである。ヘテロアリールアミノスルホニルの例には、チエニルアミノスルホニル、ピペリジニルアミノスルホニル、フラニルアミノスルホニル、およびイミダゾリルアミノスルホニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００４６】
「ヘテロアリールカルボニル」は-C(O)Z基であり、式中、Zは置換されていてもよいヘテロアリールである。ヘテロアリールカルボニル基の例には、ピリジノイル、3-メチルイソキサゾロイル、イソキサゾロイル、チエノイル、およびフロイルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００４７】
「ヘテロアリールスルホニル」は-S(O)2Z基であり、式中、Zは置換されていてもよいヘテロアリールである。ヘテロアリールスルホニルの例には、チエニルスルホニル、フラニルスルホニル、イミダゾリルスルホニル、およびN-メチルイミダゾリルスルホニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００４８】
「ヘテロアリールスルホニルオキシ」は-OS(O)2Z基であり、式中、Zは置換されていてもよいヘテロアリールである。ヘテロアリールスルホニルオキシの一例はチエニルスルホニルオキシである。
【００４９】
「複素環」は、窒素、酸素、ケイ素、および硫黄から独立に選択される一つまたは複数の複素原子をそれぞれ含む1、2、または3つの環を有する飽和または部分不飽和炭素環基である。複素環は無置換でもよく、または任意のもしくはすべての環上で、ハロゲン、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アミノ、N-アルキルアミノ、N,N-ジアルキルアミノ、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アミノカルバモイル、N-アルキルアミノカルバモイル、N,N-ジアルキルアミノカルバモイル、カルボキシ、アルキルカルボキシ、N-アルキルカルボキサミド、N,N-ジアルキルカルボキサミド、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、トリフルオロメチルスルホニルアミノ、アリールチオ、アリールスルフィニル、アリールスルホニル、カルボキシアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキサルキル、アミノアルキル、N-アルキルアミノアルキル、N,N-ジアルキルアミノアルキル、アルキルカルバモイルアルキル、アリールカルバモイルアルキル、アミノカルバモイルアルキル、N-アルキルアミノカルバモイルアルキル N,N-ジアルキルアミノカルバモイルアルキル、アルキルスルホニルアミノアルキル、アリールスルホニルアミノアルキル、アルキルカルボキシアルキル、N-アルキルカルボキサミンドアルキル、N,N-ジアルキルカルボキサミンドアルキル、アルキルチオアルキル、アルキルスルフィニルアルキル、アルキルスルホニルアルキル、トリハロアルキルスルホニルアミノアルキル、アリールチオアルキル、アリールスルフィニルアルキル、およびアリールスルホニルアルキルの一つまたは複数で置換されていてもよい。複素環の例には、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、モルホリニル、チアモルホリニル、ピロリル、フタラミド、スクシナミド、およびマレイミドが含まれる。
【００５０】
「ヘテロシクリルカルボニル」（または「ヘテロシクロカルボニル」）は-C(O)M'基であり、式中、M'は置換されていてもよい複素環である。ヘテロシクリルカルボニルの例には、ピペラジノイル、モルホリノイル、およびピロリジノイルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００５１】
「ヘテロシクリルスルホニル」は-S(O)2Z'基であり、式中、M'は置換されていてもよい複素環である。ヘテロシクリルスルホニルの例には、ピペリジニルスルホニルおよびピペラジニルスルホニルが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００５２】
「ヘテロシクリルスルホニルオキシ」は-OS(O)2M'基であり、式中、M'は置換されていてもよい複素環である。ヘテロシクリルスルホヒルオキシには、3,5,ジメチル-イソキサゾールスルホニルオキシおよびピロリジニルスルホニルオキシが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００５３】
化合物
本発明は、本明細書に記載の個別のメカニズム上の原理を利用する構造を有する、チロシンキナーゼ、特にTec（例えば、ITK、BTK）、Src（Src、Lckなど）およびEGFRキナーゼ（例えば、EGFR1、Her 2、Her 4）、ならびにJakキナーゼ（例えば、Jak3）を阻害する化合物を提供する。このメカニズムは、提唱される阻害化合物を酵素活性部位内で活性化する変換を誘発するために、ITK結晶構造において酸塩基対残基Lys391およびAsp500（本明細書において「触媒二つ組」と呼ぶ）として記載される、キナーゼ触媒機構の利用を提供する。この変換は脱離基を脱離して、活性部位システイン残基と共有結合付加物を形成しうる求電子中間体をインサイチューで生成し、それにより標的酵素の機能を不可逆的に阻害することを含む。このシステイン残基はITK結晶構造においてCys442として特定しうる。ITK、BTK、BMX、Tec、TXK、BLK、EGFr、Her 2、Her 4およびJAK3を含む前述の三つ組を有するキナーゼ群は、DKC三つ組キナーゼと呼ぶ。本発明の様々な態様は、このキナーゼ群、その可能性のある下位群、およびその個々の構成員に関連する。
【００５４】
典型的には求電子マイケル受容体を含むいくつかの化合物は、活性部位に存在する酵素の求核体と共有結合付加物を形成し、標的酵素を不可逆的に阻害することが公知である（Slichenmeyer, W.J.; Elliott, W.C.; Fry, D.W. Semin. Oncol. 2001, 28, 80-85；Shimamura, T.; Ji, H.; Minami, Y.; Thomas, R. K.; Lowell, A.M.; Sha, K.; Greulich, H.; Glatt, K.A.; Meyerson, M.; Shapiro, I.; Wong, K. K. Cancer Res. 2006, 66, 6487-6491）。しかし、本発明に記載の化合物は、求電子中間体を生成する変換がインサイチューで、すなわち酵素活性部位内で優先的に起こるという点で独特である。適当な活性部位の外では、これらの化合物がベータ脱離を起こして他のタンパク質と付加物を生成する可能性ははるかに低い。記載の化合物はまず標的キナーゼの活性部位で結合して、脱離基の脱離を有効に誘発するために関連する触媒残基に関して特定の立体配座をとり、それにより付加物生成中間体を露出しなければならない。この中間体は隣接する活性部位システイン残基と共有結合による不可逆的付加物を生成する。いくつかの態様において、反応は段階的に進行し；他の態様において、反応は協奏的である。好ましい態様において、阻害剤分子の別の部分がキナーゼの、特に活性部位の他の部分と相互作用して、好都合な結合親和性および配置を促進する。そのような相互作用は様々な阻害剤の特異性に寄与するため、単一のキナーゼを阻害する阻害剤もあれば、複数のキナーゼを阻害するものもあり、そのIC50は類似または異なる。発明者らの知るかぎり、これはキナーゼ活性部位において活性阻害剤がインサイチューで生成される初の例である。
【００５５】
キナーゼドメインとの化合物相互作用
反応の動力学を特定することなく、標的キナーゼの阻害は阻害化合物との付加物を生成するための以下の一連の段階を経て起こる：
（1）触媒リジンN-Hが、C=Y（Y=O、S、NOR）官能基の形で存在する化合物中の水素結合受容体Yの水素結合距離（約1.8〜4.0オングストローム）内に配置される。C=Y結合の分極がC=Y基に対してアルファ位の炭素原子でプロトン（HA）の酸性度を高める。
（2）触媒二つ組のアスパラギン酸は塩基として作用するため、酸性プロトンHAを引き抜いて共役カルバニオンを生じ、これは標準の電子転位を通じてY=O、エノール、H-結合エノラートを生成する。Y=Sの場合はチオエノールまたはH-結合チオエノラートを生成し、Y=NORの場合はアルコキシ（R=アルキル）、アリールオキシ（R=アリール）またはヒドロキシ（R=H）エナミンを生成する。
（3）エノール/エノラート/エナミンの生成は、「ベータ脱離」として公知のプロセスにより、C=Yに対してベータ位の炭素に結合した脱離基の脱離を促進する。プロトン化可能なヘテロ原子Zを通じて化合物に結合された脱離基は、任意に化合物の他の部分にさらに連結されていてもよい。
（4）隣接システイン残基のスルフヒドリル基は強い求核種であるため、新しく生成した求電子性の脱離生成物と反応する。この付加反応（チオアルキル化）はキナーゼへの共有結合付加物を生じ、その不可逆的な活性の阻害および抑止を引き起こす。
【００５６】
この化合物群の選択キナーゼに対する阻害活性は、それらが適当な触媒環境の近くに有効に結合する能力、適当な反応性およびベータ脱離基の脱離を可能にする隣接アルファプロトンを有する分極可能なC=Y基（下記の式（I）のC=O）の存在に依存する。
【００５７】
次に、反応性求電子種を生成する脱離プロセスは、触媒環境におけるC=Y基の十分な配置により促進される引き抜き可能なアルファプロトンの除去を必要とする。生成した求電子マイケル受容体は、次いで、鍵となるシステイン残基の反応距離内に配置される必要がある。キナーゼ結合部位における引き抜き可能なプロトンの適当な配置は、下記を含むファーマコフォア成分を通じて達成される：
（i）引き抜き可能なプロトンの隣接C-H結合分極、および触媒対のリシン残基への水素結合の二重の目的に役立つC=Y部分、
（ii）Yから約3〜5Åの距離の結合部位における特定の疎水性残基と相互作用する疎水性アリールまたはヘテロアリール基、
（iii）ヒンジ領域の主鎖と相互作用するいくつか（1から3つ）の疎水性ファーマコフォア、
（vi）以下に説明する関連するシステインのスルフヒドリル基の反応距離内に配置される、C=Y炭素原子からベータ位の炭素原子。
【００５８】
前述のシステインスルフヒドリル基に対する有効な「反応距離」は、酵素が固定された配座に維持されているITK ATP結合部位への阻害剤の結合を試験するコンピューター設計法を用いて、約3〜10Åの範囲で観察される。固定された系における10Åの距離は化学反応を起こすには遠すぎるであろうが、酵素の求核部分と阻害剤の求電子部分は、柔軟な阻害剤結合ならびにシステインの側鎖の周りの一連の低エネルギーバリア回転により容易に一緒にすることができる。キナーゼ系にはよくみられる全体の配座変化はいずれも無視することはできないが、容易に測定できるものでもない。そのような配座変化は、コンピューター予測で想定することができ、二つの反応性部分を共有結合形成のために十分近づけるのに妥当である。
【００５９】
本発明の化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000036
式中、
Arは置換されていてもよいアリールまたは置換されていてもよいヘテロアリールであり；
R3、R4、R5、およびR6は独立に水素または置換されていてもよいC1-C6アルキルであり；かつ
R1およびR2は（a）独立に水素、置換されていてもよいC1-C6アルキル、ピペリジン、もしくはフラニルであるか；または（b）それらが結合している窒素原子と一緒になって、置換されていてもよいアリールに融合してもしなくてもよい（i）5〜7員の置換されていてもよいアリール、（ii）5〜7員の置換されていてもよいヘテロアリール、もしくは（iii）5〜7員の置換されていてもよい複素環を形成する。
【００６０】
いくつかの態様において、Arは下記からなる群より選択される：
2014098004.tif 000037
式中、A、B、E、およびQは独立にCH、O、またはNであり；かつDおよびD'は独立にCH2、NH、O、またはSである。
【００６１】
他の態様において、Arは下記からなる群より選択される：
2014098004.tif 000038
【００６２】
5〜7員複素環の例には下記が含まれる：
2014098004.tif 000039
式中、
GはN、CH、またはSであり；
G'はNH、CH、またはSであり；
n=0〜2であり；
R1およびR2は前述の定義のとおりであり；かつ
R7は水素、置換されていてもよいC1-C6アルキル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールである。
【００６３】
好ましい5〜7員複素環はピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、およびモルホリニルである。ピペラジニルの好ましい置換基はC1-C6アルキル、ジアルキルC1-C6アミノアルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、およびシクロアルキル-アルキルである。ピペリジニルの好ましい置換基はC1-C6アルキルおよびアラルキルである。いくつかの態様において、ピペリジニルはベンゾ縮合してイソキノリニルを形成する。ピロリジニルの好ましい置換基はC1-C6アルキル、アリール、およびアラルキルである。いくつかの態様において、ピロリジニルはベンゾ縮合してイソインドリルを形成する。モルホリニルの好ましい置換基はC1-C6アルキルおよびアリールアルキルである。
【００６４】
いくつかの化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000040
式中、
R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり；
R9は
2014098004.tif 000041
2014098004.tif 000042
2014098004.tif 000043
から選択され；かつ
R10は水素、-OH、-COOH、-CONH2、または-NCOであり、
式中、R9がナフチルである場合、R5およびR6は両方がメチルではない。
【００６５】
これらの化合物の例には下記が含まれる：
2014098004.tif 000044
2014098004.tif 000045
2014098004.tif 000046
2014098004.tif 000047
【００６６】
他の化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000048
式中、
R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり；
R11およびR12は水素、-OCH3、ハロゲン、-NO2、-CN、-CF3、-NCOR'（式中R'は水素またはC1-C4アルキルである）、フェニルオキシ、-OCF3、-NR'R''（式中R'およびR''は独立に水素またはC1-C4アルキルである）、C1-C4アルキル、C1-C4アルコキシ、および-SO2R'（式中R'は水素またはC1-C4アルキルである）から独立に選択され；かつ
R13は水素、C1-C4アルキル、
2014098004.tif 000049
であり、
ただし式（III）は下記の化合物を含まない：
2014098004.tif 000050
2014098004.tif 000051
式（III）の化合物の一例は
2014098004.tif 000052
である。
【００６７】
本発明のいくつかの化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000053
式中、
R1およびR2は前述の定義のとおりであるが、
2014098004.tif 000054
は例外である。
【００６８】
そのような化合物の例には下記の構造式を有するものが含まれる：
2014098004.tif 000055
式中、
GGは水素、ジメチルアミノアルキル、アリール、C1-C6アルキル、シクロヘキシルアルキル、ピリジン、-COCF3；-CONR'R''、または
2014098004.tif 000056
であり；
Jは水素、アラルキル、C1-C6アルキル、-CNHCOOR'、またはNR'R''であり；
Kは水素、ピリジン、アリール、-COOH、-CONR'R''、-COH、または-CNR'R''であり；
Lは水素またはアルキルオキシであり；かつ
R2は前述の定義のとおりである。
【００６９】
式（IV）の他の化合物には下記が含まれる：
2014098004.tif 000057
2014098004.tif 000058
【００７０】
他の化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000059
式中、R3、R4、R5、R6、およびR10は前述の定義のとおりである。
【００７１】
他の化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000060
式中、
R1、R2、R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり；かつ
R14は水素または=Oであり；
かつDはCHまたはNHであるが；
2014098004.tif 000061
は例外である。
【００７２】
他の化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000062
式中、
R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり；かつ
R1およびR2は独立に水素、C1-C4アルキル、
2014098004.tif 000063
（式中R15はハロゲンまたはC1-C4アルキルであり、かつR16はC1-C4アルキルである）であるか、またはR1およびR2はそれらが結合している窒素と一緒になって
2014098004.tif 000064
、
2014098004.tif 000065
（式中R17およびR18は独立に水素または-OCH3である）、
2014098004.tif 000066
（式中R1およびR2は独立に水素またはC1-C4アルキルである）、
2014098004.tif 000067
（n=1〜4）、フェニル-C1-C4アルキル（ハロゲンで置換されていてもよい）から選択されるアリール基を形成するが、
2014098004.tif 000068
は例外である。
【００７３】
他の化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000069
式中、R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりである。
【００７４】
他の化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000070
式中、R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり、R1は水素であり、かつR2は
2014098004.tif 000071
であり、式中R19は水素および
2014098004.tif 000072
から選択されるか；または
R1およびR2はそれらが結合している窒素と一緒になって
2014098004.tif 000073
であり、
AはNまたはOであり；
R20は一つまたは複数のハロゲンで置換されていてもよいフェニル-C1-C4アルキル、水素、C1-C4アルキル、アミノC1-C4アルキル、
2014098004.tif 000074
であり；
R17およびR18は独立に水素または-OCH3であり；
R21は-CONR'R''、-COR'、
2014098004.tif 000075
であり；かつ
R'およびR''は水素およびC1-C4アルキルから独立に選択される。
【００７５】
他の態様において、化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000076
式中、R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり、かつR22は水素、C1-C4アルキル、-NR'R''、-COH、-COOH、-CNR'R''、および-CONHR'から選択され、
式中R'およびR''は前述の定義のとおりである。
【００７６】
他の態様において、化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000077
式中、R3、R4、R5、R6、G、およびG'は前述の定義のとおりであり；かつR23は水素、-NR'R''C1-C4直鎖アルキル、C1-C4アルキル、フェニル-C1-C4アルキル、-CONH2、および-COR'R''であり、
式中R'およびR''は前述の定義のとおりである。
【００７７】
他の態様において、化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000078
R3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりであり、かつR24は
2014098004.tif 000079
である。
【００７８】
他の態様において、化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000080
式中、Lは
2014098004.tif 000081
であり、かつR3、R4、R5、およびR6は前述の定義のとおりである。
【００７９】
いくつかの化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000082
式中、T、U、V、およびWは水素；ハロゲン；-O；C1-C3アルキル；およびC1-C3アルキルオキシから独立に選択され；かつR25は水素またはC1-C3アルキルである。代表的化合物には
2014098004.tif 000083
が含まれる。
【００８０】
他の化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000084
式中、T、U、V、およびWは水素；ハロゲン；-O；C1-C3アルキル；およびC1-C3アルキルオキシから独立に選択され；かつR8は水素またはC1-C3アルキルである。
【００８１】
さらに他の化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000085
式中、T、U、V、およびWは水素；ハロゲン；-O；C1-C3アルキル；およびC1-C3アルキルオキシから独立に選択され；かつR8は水素またはC1-C3アルキルである。
【００８２】
他の化合物は下記の構造式を有する：
2014098004.tif 000086
式中、DはS、O、またはNHであり；すなわち
2014098004.tif 000087
【００８３】
本発明の他の化合物には下記の構造式を有するものが含まれる：
2014098004.tif 000088
式中、Dは前述の定義のとおりであり；すなわち
2014098004.tif 000089
【００８４】
本発明の他の化合物には下記の構造式を有するものが含まれる：
2014098004.tif 000090
式中、G'はNHまたはCHであり；すなわち
2014098004.tif 000091
【００８５】
本発明は実施例15および16において特定される化合物も含む。
【００８６】
本発明の化合物は不斉中心を有していてもよく、ラセミ体、立体異性体、および互変異性体として存在してもよい。本発明は、可能性があるすべてのラセミ体、互変異性体、立体異性体、およびその混合物を含む。
【００８７】
本発明の化合物の適当な調製法を以下の代表例により例示する。出発原料は公知の化合物で、有機化学の標準的方法によって得ることができる。
【００８８】
化合物クレームの条件
本発明の化合物は、好ましくは下記の活性の一つまたは複数を有していない：血管拡張、血圧降下、徐脈、抗うつ、抗不整脈、抗動脈硬化、血清コレステロール低下、トリグリセリドレベル低下、神経弛緩、抗炎症、精神安定、抗痙攣、麻酔、筋弛緩、抗真菌、抗菌、殺虫、燻蒸、駆虫、中枢神経系抑制、鎮静の拮抗、抗頻尿、抗ヒスタミン、抗アレルギー、気管支拡張、鎮痛、鎮痙、ムスカリン拮抗薬、アルツハイマー病に関連する異常にリン酸化された対らせん状フィラメントエピトープの産生を防止または低減、脂質低下、男性避妊、抗殺胞子、酸化窒素産生の阻害、または中枢神経系刺激活性。
【００８９】
下記の化合物のいずれも新規ではない程度に、出願人らは本化合物および/または組成物クレームに対する権利を留保し、これらは以下の特許請求の範囲から化合物および/またはそれらの薬学的に許容される塩を除外する条件を含む：
a.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000092
式中、nは0、1、2、または3であり、かつR1およびR2はそれらが結合している窒素と一緒になって
2014098004.tif 000093
であり、かつYはアルキル、ハロゲン、ハロゲノアルキル、アルキオキシ、アキルチオ、ハロゲノアルキルオキシ、ハロゲノアルキルチオ、シクロアルキル、またはシアン基である；
b.  R3、R4、R5、およびR6がそれぞれ水素であり、かつR1およびR2がそれらが結合している窒素と一緒になって環
2014098004.tif 000094
を形成している場合、Arがフェニルである式（I）の化合物；
c.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000095
式中、Phは置換されていてもよい単環式炭素環アリール基であり、AlkはC1-C3低級アルキルであり、かつAmは三級アミノ基、その塩、N-オキシド、または四級アンモニウム誘導体である；
d.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000096
式中、Ph1およびPh2は単環式カルボン酸アリール基およびその酸付加塩である；
e.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000097
式中、RRは脂肪族、芳香族、およびアリール脂肪族基からなる群より選択され；RR1は水素、脂肪族、芳香族、およびアリール脂肪族基からなる群より選択され；-N(XX)はジアルキルアミンおよび複数のジアルキルアミンからなる群より選択される二級アミンの残基である；
f.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000098
式中、R1およびR2は式（I）の定義のとおりであり、化合物
2014098004.tif 000099
を含む；
g.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000100
式中、R30はエチル-、プロピル-、イソプロピル-、ブチル-、もしくはイソブチル基または5〜7個の炭素原子を有するシクロアルキル基である；
h.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000101
式中、M2は水素、ハロゲン、またはC1-C12アルコキシであり、M1は水素またはハロゲンであり、かつM3およびM4は低級アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素原子と一緒になって（a）複素環式アミノ基もしくはN-低級アルキル四級複素環式アンモニウム基、または（b）トリ低級アルキルアンモニウムである；
i.  下記の構造式を有する化合物またはそのピクリン酸塩：
2014098004.tif 000102
式中、M5は単純または置換アリール基であり、かつM6は単純または置換アミノ基である；
j.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000103
式中、M7はチエニル、フェニルまたは置換フェニルである；
k.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000104
式中、X1、X2、およびX3はそれぞれ独立に水素またはアルキル基であり、かつX5およびX4はそれぞれ独立に水素もしくはアルキル基であるか、またはそれらが結合している窒素原子と一緒になって、Nに加えてN、S、およびOから選択されるさらなるヘテロ原子を任意に含む、5、6、もしくは7個の環原子を有する複素環基を形成する；
l.  R9がフェニルであり、かつR3、R4、R5、およびR6がそれぞれ水素である、式（II）の化合物；
m.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000105
式中、X6は窒素原子と一緒になってピロリジン、ピペリジン、モルホリン、ヘキサメチレンイミン、または3-アザビシクロ-3,2,2ノナンを形成し、化合物
2014098004.tif 000106
を含む；
n.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000107
式中、X7は水素またはフッ素であり；X8はN(X9)フェニル（式中フェニルはC1-C8アルコキシ、C1-C8アルキル、トリフルオロメチル、またはハロゲンで一置換されていてもよい）、-C(OH)(X9)フェニル（式中フェニルはC1-C8アルコキシ、C1-C8アルキル、トリフルオロメチル、またはハロゲンで一置換されていてもよい）、またはフェニル（式中フェニルはC1-C8アルコキシ、C1-C8アルキル、トリフルオロメチル、またはハロゲンで一置換されていてもよい）であり；かつX9は水素、C1-C8アルキル、または低級アルカノイルである；
o.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000108
式中、X9およびX10はそれぞれ1から4個の炭素原子を有する飽和または不飽和脂肪族炭化水素であるか、またはそれらが結合している窒素と一緒になってピロリジノ、ピペリジン、ペルヒドロアゼピノ、およびモルホリノから選択される複素環基を形成する；
p.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000109
式中、X11はC2-C3アルキルである；
q.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000110
式中、X11は水素、ハロゲン、C1-C4アルコキシ、ニトロ、またはC1-C4二級アミンであり；X12は(CH2)nOX13であり；nは2または3であり；かつX13は2つのハロゲン、2つのC1-C4アルキル、ハロゲンとニトロ、ハロゲンとC1-C4アルキル、ハロゲンとC1-C4アルコキシ、またはC1-C4アルコキシとC1-C4アルコイルで二置換されたC1-C4アルコキシフェニル、ニトロフェニル、トリフルオロメチルフェニル、またはフェニルである；
r.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000111
式中、X14、X15、およびX16は独立に水素、ハロゲン、C1-C4アルキル、ハロゲノ-C1-C4アルキル、C1-C4アルコキシ、または3〜8個の炭素原子を有するシクロアルキル基であり、かつX14、X15、およびX16の2つは一緒になってメチレンジオキシまたはエチレンオキシを形成してもよく；X18は水素またはC1-C4アルキルであり；かつX17はピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、またはアゼピニルである；
s.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000112
式中、
Arはアリール基であり；かつX19およびX20は（a）両方ともC1-C6アルキルであるか、または（b）N原子と一緒になって飽和複素環基の残りの構成員を形成し、かつX21は-OH、C1-C6アルキル、またはアリールである；
t.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000113
式中、R1およびR2は独立にアルキル基であるか；またはR1およびR2はそれらが結合している窒素原子と一緒になって置換されていてもよい式
2014098004.tif 000114
の複素環基を完成し；R3は水素またはC1-C4アルキルであり；かつX22、X23、およびX24は独立にC1-C4アルキル、ハロゲン、またはハロゲノ-C1-C4アルキル、C1-C4アルコキシ、アルキルチオ、ハロゲノ-C1-C4アルコキシ、ハロゲノ-C1-C4アルキルチオ、炭素原子3から7個のシクロアルキル、またはシアノである；
u.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000115
式中、Arは無置換アリールまたはヒドロキシル基、低級アルコキシ基もしくはハロゲンで置換されたアリール、あるいは無置換ベンゾ[b]チエニル基またはヒドロキシル基、低級アルキル基、低級アルコキシ基、アリール基もしくはハロゲンで置換されたベンゾ[b]チエニル基であり；R5は水素またはC1-C4アルキルであり；かつX25はピペリジン以外の基である；
v.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000116
式中、L1およびL2は独立にハロゲンまたはアルキルであり；L6およびL7は独立に水素またはアルキルであり；かつL3およびL4は独立に水素もしくは脂肪族基であるか、またはそれらが結合している窒素と一緒になって環を形成する；
w.  R3およびR4が水素である場合、
2014098004.tif 000117
は
2014098004.tif 000118
ではなく、式中L8はカルボニル、スルホニル、メチレン、または置換されていてもよいフェニルで置換されたメチレンであり；かつArはアリール基である、式（I）、（IV）、（VI）、（VII）、（IX）、および（XI）の化合物；
x.  下記の構造式を有する化合物：
2014098004.tif 000119
式中、T1はO、S、またはNT7であり；T7は水素、C1-C4アルキル、およびCH2CH2COAr1であり；T6は水素、C1-C6アルキルであるか、またはT6およびアリール基上の置換基は一緒になってCH2、CH2CH2、CH2O、またはCH2Sであって5もしくは6員環を形成し、式中環はC1-C6アルキルまたはフェニルで置換されていてもよく；T5は水素、C1-C6アルキル、または置換されていてもよいフェニルであり；T2、T3、およびT4は独立に水素またはC1-C6アルキルであり；かつArおよびAr1はアリールまたは置換されていてもよいフェニルである；ならびに
y.  下記の化合物：
2014098004.tif 000120
【００９０】
薬学的製剤
本発明の化合物は当技術分野において周知の方法を用いて医用薬剤として製剤することができる。本発明の薬学的製剤は典型的に、担体と混合し、希釈剤で希釈し、かつ/あるいはカプセル、サシェ、カシェ、紙もしくは他の容器の形の摂取可能な担体により、またはアンプルなどの使い捨て容器により封入またはカプセル化した、少なくとも一つの本発明の化合物を含む。
【００９１】
担体または希釈剤は固体、半固体または液体材料でありうる。本発明の薬学的組成物において用いうる希釈剤または担体のいくつかの例は、乳糖、デキストロース、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、プロピレングリコール、流動パラフィン、白色軟パラフィン、カオリン、微結晶セルロース、ケイ酸カルシウム、シリカポリビニルピロリドン、セトステアリルアルコール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、カカオ脂、カカオの油、落花生油、アルギナート、トラガカント、ゼラチン、メチルセルロース、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、乳酸エチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、トリオレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、およびオレイルアルコールである。
【００９２】
本発明の薬学的組成物は、通常の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、研和、乳化、カプセル化、捕捉、または凍結乾燥法を含む、当技術分野において周知の方法により製造することができる。
【００９３】
注射用に、本発明の物質を、好ましくは酢酸塩、ハンクス液、リンゲル液、または生理食塩緩衝液などの生理的に適合する緩衝液中の水溶液に製剤してもよい。好ましくは、溶液は無菌で、発熱物質を含まない。経粘膜投与用に、浸透する障壁に適した浸透剤を製剤中で用いる。そのような浸透剤は一般に当技術分野において公知である。
【００９４】
経口投与用に、活性化合物を錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁剤などとして製剤することを可能にする薬学的に許容される担体と混合することができる。ゼラチン、糖（例えば、乳頭、ショ糖、マンニトール、またはソルビトール）；セルロース製剤（例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム）；および/またはポリビニルピロリドン（PVP）などの充填剤を用いることもできる。望まれる場合、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩などの崩壊剤を加えてもよい。
【００９５】
糖衣錠の中心は適当なコーティングを施して提供される。このために、濃縮糖溶液を用いてもよく、これは任意にアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および/または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適当な有機溶媒または溶媒混合物を含んでいてもよい。特定のため、または活性化合物用量の異なる組み合わせを特徴づけるために、染料または色素を錠剤または糖衣錠コーティングに加えてもよい。
【００９６】
経口で用いることができる薬学的製剤には、ゼラチン製のプッシュフィットカプセル、ならびにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤製の密封軟カプセルが含まれる。プッシュフィットカプセルは、活性成分を、乳糖などの充填剤、デンプンなどの結合剤および/またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、ならびに任意に安定剤との混合物で含むことができる。軟カプセル中で、活性化合物は脂肪油、流動パラフィン、または液状ポリエチレングリコールなどの適当な液体に溶解または懸濁されていてもよい。加えて、安定剤を添加してもよい。経口投与用のすべての製剤は、好ましくはそのような投与に適当な用量である。
【００９７】
口腔投与用に、組成物は通常の様式で製剤した錠剤またはロゼンジの形であってもよい。
【００９８】
吸入による投与用に、本発明の薬学的製剤を、適当な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適当なガスを用いて、加圧パックまたはネブライザーからエアロゾルスプレーの形で送達することができる。望まれる場合は、計量された量を送達するためにバルブを用いることもできる。吸入器または注入器で用いるための、例えばゼラチン製のカプセルまたはカートリッジは、化合物および乳糖またはデンプンなどの適当な粉末基剤の粉末混合物を入れて製剤してもよい。
【００９９】
本発明の化合物は、注射、例えばボーラス注射または持続注入による非経口投与用に製剤することができる。注射用製剤は、例えばアンプルまたは複数回用量容器の単位用量剤形で、保存剤を添加して提供することができる。組成物は、油性または水性媒体中の懸濁剤、液剤または乳剤などの剤形でもよく、かつ懸濁化剤、安定剤および/または分散剤などの製剤用物質を含有していてもよい。
【０１００】
非経口投与用の薬学的製剤には、活性化合物の水溶液が含まれる。加えて、活性化合物の懸濁剤を、適当な油性注射用懸濁剤として調製してもよい。適当な親油性溶媒または媒体には、ゴマ油などの脂肪油、またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームが含まれる。水性注射用懸濁剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなどの懸濁剤の粘度を高める物質を含有していてもよい。懸濁剤は、任意に、適当な安定剤または高濃度の溶液を調製できるように化合物の溶解性を高める物質を含有していてもよい。
【０１０１】
または、活性成分は、使用する前に適当な媒体、例えば発熱物質を含まない滅菌水で再構成するための粉末の形でもよい。
【０１０２】
化合物は、例えば、カカオ脂または他のグリセリドなどの通常の坐剤基剤を含む坐剤または保持浣腸剤などの直腸用組成物に製剤してもよい。
【０１０３】
本発明の化合物は、典型的には50mM酢酸塩に10mg/ml以上の濃度で可溶かつ安定であり、この緩衝液中で腹腔内および経口送達することができる。いくつかの化合物は、ヒドロキシプロピル-b-シクロデキストリン（HBPCD、3〜5％）に可溶で、この溶媒中で腹腔内および経口送達することができる。静脈内送達用に、化合物を5％マンニトールに懸濁または溶解することができる。
【０１０４】
前述の製剤に加えて、化合物をデポー製剤として調製することもできる。そのような長期間作用製剤は移植（例えば、皮下または筋肉内）または筋肉注射によって投与してもよい。したがって、例えば、化合物は、適当なポリマー材料もしくは疎水性材料（例えば、許容される油中の乳剤として）またはイオン交換樹脂を用いて、あるいは難溶性の誘導体、例えば難溶性の塩として製剤してもよい。
【０１０５】
薬学的組成物は適当な固相またはゲル相の担体または賦形剤を含んでいてもよい。そのような担体または賦形剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールなどのポリマーが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【０１０６】
前述の一般的な剤形に加えて、本発明の化合物は、Alza Corporationから入手可能なALZET（登録商標）浸透圧ポンプを含む、制御放出手段および/または送達装置によって投与してもよい。適当な送達装置は米国特許第3,845,770号；第3,916,899号；第3,536,809号；第3,598,123号；第3,944,064号および第4,008,719号に記載されている。
【０１０７】
治療法
特定された化合物をヒト患者に、単独または適当な担体もしくは賦形剤と混合した薬学的組成物中のいずれかで、血液関連の癌（例えば、リンパ腫および白血病）および自己免疫障害を治療または改善するための用量で投与することができる。移植前、移植中および/または移植後に移植患者の免疫系を抑制するために、細胞内キナーゼ活性の低下も有用である。
【０１０８】
リンパ腫は、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含む、リンパ系におけるBまたはT細胞の悪性成長である。非ホジキンリンパ腫には皮膚T細胞リンパ腫（例えば、セザリー症候群および菌状息肉腫）、びまん性大細胞型リンパ腫、HTLV-1関連T細胞、リンパ腫、結節性末梢T細胞リンパ腫、結節外末梢T細胞リンパ腫、中枢神経系リンパ腫、およびAIDS関連リンパ腫が含まれる。
【０１０９】
白血病には、リンパ性および骨髄性白血病両方の急性および慢性型（例えば、急性リンパ性またはリンパ芽球性白血病、急性骨髄性（myelogenous）白血病、急性骨髄性（myeloid）白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、T細胞前リンパ性白血病、成人T細胞白血病、およびヘアリーセル白血病）が含まれる。
【０１１０】
自己免疫障害には、全身性紅斑性狼蒼、抗リン脂質抗体症候群、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、関節リウマチ、喘息、橋本甲状腺炎、ライター症候群、シェーグレン症候群、ギラン-バレー症候群、重症筋無力症、大血管脈管炎、中血管脈管炎、結節性多発性動脈炎、尋常天疱瘡、強皮症、グッドパスチャー症候群、糸球体腎炎、原発性胆汁性肝硬変、グレーブス病、膜性腎症、自己免疫肝炎、セリアックスプルー、アジソン病、多発性筋炎、皮膚筋炎、単クローン性高ガンマグロブリン血症、第VIII因子欠損症、クリオグロブリン血症、末梢神経障害、IgM多発性神経障害、慢性神経障害、自己免疫溶血性貧血、自己免疫血小板減少性紫斑病、悪性貧血、強直性脊椎炎、脈管炎、炎症性腸疾患、およびI型真性糖尿病が含まれる。自己免疫疾患はTリンパ球、Bリンパ球、肥満細胞、または樹状細胞などの分泌細胞に関与していることがある。本発明の化合物は、タンパク質置換療法を受ける患者および置換に対する抗体を発生する患者を治療するために用いることもできる。
【０１１１】
投与経路
本発明の薬学的製剤は、局所または全身投与することができる。適当な投与経路には、経口、肺、直腸、経粘膜、腸、非経口（筋肉内、皮下、髄内経路を含む）、結節内、くも膜下腔内、直接脳室内、静脈内、腹腔内、鼻内、眼内、経皮、局所、および膣経路が含まれる。詳細に前述したとおり、剤形には錠剤、トローチ、分散剤、懸濁剤、坐剤、液剤、カプセル剤、クリーム、パッチ、ミニポンプなどが含まれるが、それらに限定されるわけではない。標的指向送達システムを用いることもできる（例えば、標的特異的抗体でコーティングしたリポソーム）。
【０１１２】
用量
本発明の薬学的組成物は、少なくとも一つの活性成分を治療上有効な量で含む。「治療上有効な量」は、患者に投与した場合に、治療中の疾患の特徴における測定可能な改善（例えば、検査値の改善、症状の発現の遅延、症状の重症度の軽減、CD25aまたはIL2などの生体マーカーのレベルの改善）をもたらす、活性物質の量である。改善は治療上有効な量の1回投与後に明らかとなりうる。通常、最適な効果を得る、または維持するために、複数回投与を用いる。好ましい態様において、投与頻度は1ヶ月に2回から1週間に1回、1日に数回、例えば1日に1〜4回までの範囲でありうる。別の態様において、投与は徐放性製剤、または長期もしくは持続注入によるものでありうる。投与頻度は一定期間にわたりあらかじめ決めたレベル以上の全身または局所濃度が得られるように選択することができる。期間は投与から投与までの間隔のすべて、もしくはかなりの部分であるか、または徐放もしくは注入の期間を含むことができる。いくつかの態様において、治療スケジュールは、化合物濃度を一定期間（例えば、数日または1週間）維持し、次いで一定期間（例えば、1、2、3、または4週間）投与を停止することにより減衰させることが必要となりうる。
【０１１３】
治療上有効な量の決定は当業者の能力の範囲内である。治療上有効な用量は最初はインビトロ酵素アッセイ、細胞培養アッセイおよび/または動物モデルから推定することができる。例えば、用量を動物モデルで、インビトロ酵素アッセイまたは細胞培養でもとめたIC50（すなわち、ITKまたはBTK活性の最大阻害の半分を達成する試験化合物の濃度）を含む範囲の循環濃度を達成するよう計画することができる。そのような情報はヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために用いることができる。
【０１１４】
関連する疾患の適当な動物モデルは当技術分野において公知である。例えば、Exp Hematol. 34, 284-88, 2006（進行性全身性肥満細胞症および肥満細胞白血病）；Leuk. Lymphoma. 47, 521-29, 2006（急性骨髄性白血病）；Leuk. Lymphoma. 7, 79-86, 1992（播種性ヒトB系統急性リンパ芽球性白血病および非ホジキンリンパ腫）；J. Virol. 79, 9449-57, 2006（成人T細胞白血病）；Neoplasia 7, 984-91, 2005（リンパ腫）；Oligonucleotides 15, 85-93, 005（リンパ腫）；Transfus. Apher. Sci. 32, 197-203, 2005（皮膚T細胞リンパ腫）；Nature 17, 254-56, 1991（濾胞性リンパ腫およびびまん性大細胞リンパ腫）；Cell. Mol. Immunol. 2, 461-65, 2005（重症筋無力症）；Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102, 11823-28, 2005（I型糖尿病）；Arthritis Rheum. 50, 3250-59, 2004（紅斑性狼蒼）；Clin. Exp. Immunol. 99, 294-302, 1995（グレーブス病）；J. Clin. Invest. 116, 905-15, 2006（多発性硬化症）；Pharmacol Res. e-published Feb. 1, 2006（潰瘍性大腸炎）；J. Pathol, e-published March 21, 2006（クローン病）；J. Clin. Invest. 116, 961-973, 2006（関節リウマチ）；Endocrinol. 147, 754-61, 2006（喘息）；Exp Mol Pathol. 77, 161-67, 2004（橋本甲状腺炎）；J. Rheumatol. Suppl. 11, 114-17, 1983（ライター症候群）；Rheumatol. 32, 1071-75, 2005（シェーグレン症候群）；Brain Pathol. 12, 420-29, 2002（ギラン-バレー症候群）；J. Clin. Invest. 110, 955-63, 2002（血管脈管炎）；Vet. Pathol. 32, 337-45, 1995（結節性多発性動脈炎）；Immunol. Invest. 3,47-61, 2006（尋常天疱瘡）；Arch. Dermatol. Res. 297, 333-44, 2006（強皮症）；J. Exp. Med. 191, 899-906, 2000（グッドパスチャー症候群）；J. Vet. Med. Sci. 68, 65-68, 2006（糸球体腎炎）；Liver Int. 25, 595-603, 2005（原発性胆汁性肝硬変）；Clin. Exp. Immunol. 99, 294-302, 1995（グレーブス病）；J. Clin. Invest. 91, 1507-15, 1993（膜性腎症）；J. Immunol. 169, 4889-96, 2002（自己免疫肝炎）；Isr. J. Med. Sci. 15, 348-55, 1979（セリアックスプルー）；Surgery 128, 999-1006, 2000（アジソン病）；J. Neuroimmunol 98, 130-35, 1999（多発性筋炎）；Am. J. Pathol. 120, 323-25, 1985（皮膚筋炎）；Bone 20, 515-20, 1997（単クローン性高ガンマグロブリン血症）；Haemophilia 11, 227-32, 2005（第VIII因子欠損症）；Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94, 233-36, 1997（クリオグロブリン血症）；Pain 110, 56-63, 2004（末梢神経障害）；Ann. Neurol. 49, 712-20, 2001（IgM多発性神経障害）；J. Neurosci. Res: 44, 58-65, 1996（慢性神経障害）；Eur. J. Immunol. 32, 1147-56, 2002（自己免疫溶血性貧血）；Haematologica 88, 679-87, 2003（自己免疫血小板減少性紫斑病）；Curr. Top. Microbiol. Immunol. 293, 153-77, 2005（悪性貧血）；J. Immunol. 175, 2475-83, 2005（強直性脊椎炎）；Inflamm. Res. 53, 72-77, 2004（脈管炎）；Vet. Pathol. 43, 2-14, 2006（炎症性腸疾患）；およびJ. Biol. Chem. 276, -13821, 2001（抗リン脂質抗体症候群）を参照されたい。
【０１１５】
LD50（集団の50％に対して致死的となる用量）およびED50（集団の50％で治療上有効な用量）は細胞培養物および/または実験動物における標準の薬学的方法によって決定することができる。細胞培養アッセイまたは動物試験から得たデータを用いてヒトの初期用量を決定することができる。当技術分野において公知のとおり、用量は用いる剤形および投与経路に応じて変動しうる。
【０１１６】
周知の通り、FDAガイドライン文書「Guidance for Industry and Reviewers Estimating the Safe Starting Dose in Clinical trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers」（HFA-305）は、インビボ動物試験に基づきヒト等価用量（HED）を計算する際に用いるための式を提供している。以下の実施例16に記載する試験に基づき、ヒト等価用量は1.5mg/kgから8mg/kgの間の範囲であるが、いくつかの化合物はHEDにより見積もったものよりも低用量または高用量でかなりの有効性を示す。したがって、全身投与のためのヒト用量は、例えば、1.5mg/kgから3mg/kg；2mg/kgから4mg/kg；5mg/kgから7mg/kg；および4mg/kgから8mg/kgの範囲でありうる。投与する組成物の量は、当然のことながら、治療中の被験者、被験者の体重、障害の重症度、投与様式および医師の判断に依存する。
【０１１７】
本開示において引用するすべての特許、特許出願、および参照文献は特に参照により本明細書に組み入れられる。前述の開示は本発明を一般的に記載している。以下の具体的実施例を参照することでより完全な理解を得ることができるが、これらの実施例は例示のために示すにすぎず、本発明の範囲を限定する意図はない。
【実施例】
【０１１８】
実施例1
1-ナフタレン-2-イル-プロパ-2-エン-1-オールの調製
2014098004.tif 000121
ナフトアルデヒド（5.0g、32.0mmole）を無水テトラヒドロフランに溶解し、-78℃、N2（g）雰囲気下で撹拌した。混合物に臭化ビニルマグネシウム（50ml、THF中1M溶液）を加え、反応混合物を室温まで加温して終夜撹拌した。水で反応停止し、EtOAcと水との間で分配した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して、所望の生成物を黄色油状物で得た（5.0g、85％）。ESI-MS m/z 185 (M+H)+.
【０１１９】
実施例2
1-ナフタレン-2-イル-プロペノンの調製
2014098004.tif 000122
ジクロロメタン（30ml）中の1-ナフタレン-2-イル-プロパ-2-エン-1-オール（1.3g、7.0mmole）の溶液にクロロクロム酸ピリジニウム（1.5g、7.0mmole）を加えた。混合物を室温で酸化が完了するまで撹拌した。溶液をセライトを通してろ過し、溶媒を減圧下で濃縮した。残渣をEtOAcに再度溶解し、水および食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣をHPLCで0〜100％EtOAc-Hx勾配を用いて精製し、所望の生成物を黄色油状物で得た（280mg、22％）。ESI-MS m/z 183 (M+H)+.
【０１２０】
実施例3
1-ナフタレン-2-イル-3-ピペリジン-1-イル-プロパン-1-オンの調製
2014098004.tif 000123
1-ナフタレン-2-イル-プロペノン（10mg、0.05mmole）を96穴ポリプロピレンプレートの1つのウェル中のDMSO（100μl）に溶解した。混合物にピペリジン（12μl、0.10mmole）およびジイソプロピルエチルアミン（17μl、0.1mmole）を加えた。完了後、生成物をHPLCを用いて精製し、所望の生成物を得た（50mm×10mm Phenomenex GEMINI（商標）カラムで30〜100％アセトニトリル-水勾配を用いて）。ESI-MS m/z 268 (M+H)+.
【０１２１】
実施例4
1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン7-オキシドの調製
2014098004.tif 000124
7-アザインドール（10g、84.7mmol）をエーテル（300mL）に室温で溶解した。M-CPBA（29.1g、1.5当量）を分割して加え、手動で撹拌した。すべての酸化剤を加えた後、混合物を室温でさらに3時間撹拌した。LC/MSにより完全な変換が見られた。混合物をろ過し、固体をエーテル（40mL×3）で洗浄し、風乾した。この固体のd6-DMSO中でのNMR分析により、生成物はほとんどが1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン7-オキシドのメタ-クロロ安息香酸塩であることが判明した（オフホワイト、17.9g）；MS: m/z 135.3 [MH+].
【０１２２】
実施例5
4-クロロ-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジンの調製
2014098004.tif 000125
1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン7-オキシドのm-CBA塩（9g）をPOCl3（46mL、7.5当量）に溶解した。混合物を90℃で15時間と、106℃でさらに4時間加熱した。混合物を室温まで冷却し、POCl3のほとんどを高減圧下で蒸留した。残渣をCH3CN（10mL）に溶解した。水（20mL）をゆっくり加えて反応を停止した。得られた混合物を10N NaOHを用いてpH約9に調節した。固体をろ過した。粗製固体をTHF（数ml）に再度溶解し、0〜10％MeOH-DCMを用いてコンビフラッシュにかけ、4-クロロ-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジンをわずかに帯黄色の固体で得た（4g）。MS: m/z 154.9 [MH+].
【０１２３】
実施例6
1-[4-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-4-イル)-フェニル]-エタノンの調製
2014098004.tif 000126
4-クロロ-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン（500mg、3.27mmol) をジオキサン（11mL）に溶解した。4-アセチルフェニルボロン酸（802mg、4.9mmol、1.5当量）、dppfPdCl2（41mg、0.03mmol、0.01当量）およびNa2CO3（2N水溶液、8.6mL）を加えた。混合物を減圧し、N2を流し、160℃で15分間マイクロ波にかけた。この同じ反応を6バッチ行った。粗製混合物を集め、DCM（40mL）と水（20mL）との間で分配した。残渣をヘキサン/EtOAc（0％から100％）を用いてコンビフラッシュにかけ、遊離塩基アザインドール誘導体をわずかに帯黄色の固体で得た。固体をDCM（20mL）に再度溶解し、氷浴中で撹拌した。エーテル中の2M HCl溶液（10mL）を滴下した。沈澱をろ過し、乾燥して、1-[4-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-4-イル)-フェニル]-エタノン（2.5g、48％）を得た。MS: m/z 237.3 [MH+].
【０１２４】
実施例7
1-[3-(2-クロロ-ピリジン-4-イル)-フェニル]-エタノンの調製
2014098004.tif 000127
2-クロロピリジン-4-ボロン酸（11.0g、69.9mmol）、3-ブロモアセトフェノン（11.2mL、83.9mmol、1.2当量）、Na2CO3（35mL、244.65mmol、3.5当量）およびdppfPdCl2（572mg、0.07mmol、0.01当量）をTHF（200mL）中で混合した。混合物を加熱還流し、この温度で6時間続けた。次いで、冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をDCMと水（100mL/40mL）との間で分配した。層を分離し、水層をDCM（2×40mL）でさらに洗浄した。合わせた有機層を乾燥（Na2SO4）し、ろ過した。ろ液を濃縮し、残渣をヘキサン/EtOAc（1/1）を用いてクロマトグラフィにかけ、1-[3-(2-クロロ-ピリジン-4-イル)-フェニル]-エタノンを白色固体で得た（9.5g、58％）。MS: m/z 232.1 [MH+].
【０１２５】
実施例8
N-[4-(3-アセチル-フェニル)-ピリジン-2-イル]-ベンズアミドの調製
2014098004.tif 000128
ジオキサン（12mL）中の1-[3-(2-クロロ-ピリジン-4-イル)-フェニル]-エタノン（500mg、2.16mmol)、ベンズアミド（523mg、4.32mmol、2当量）、キサントホス（120mg、0.21mmol、0.1当量）、Pd(OAc)2（24mg、0.10mmol、0.05当量）、K2CO3（448mg、3.24mmol、1.5当量）の脱気混合物を150℃で1時間マイクロ波照射した。LC/MS制御。変換は出発原料の消失によりほぼ100％であった。二量体（M+：392）が主たる副生成物であった。この時点で出発原料がいくらかでも未反応であれば、キサントホスおよびPd(OAc)2をさらに追加して、混合物をさらに30分間マイクロ波にかけてもよい。次いで、混合物をDCMと水（20mL/10mL）との間で分配した。層を分離し、水層をDCM（2×20mL）でさらに洗浄した。合わせた有機層を乾燥（Na2SO4）し、ろ過した。ろ液を濃縮し、残渣をヘキサン/EtOAc（1/1）を用いてクロマトグラフィにかけ、N-[4-(3-アセチル-フェニル)-ピリジン-2-イル]-ベンズアミドを白色固体で得た（375mg、55％）。MS: m/z 317.1 [MH+].
【０１２６】
実施例9
N-{4-[3-(3-モルホリン-4-イル-プロピオニル)-フェニル]-ピリジン-2-イル}-ベンズアミドの調製
2014098004.tif 000129
N-[4-(3-アセチル-フェニル)-ピリジン-2-イル]-ベンズアミド（200mg、0.632mmol)、モルホリンHCl塩（78mg、0.632mmol、1当量）およびパラホルムアルデヒド（19mg、0.632mmol、1当量）をマイクロ波チューブ内のジオキサン（2mL）中で混合した。これを180℃で15分間照射した。混合物をDCM/水（10mL/5mL）との間で分配した。水層をDCM（2×10mL）でさらに洗浄した。合わせた有機層を乾燥（Na2SO4）し、ろ過した。ろ液を濃縮し、残渣をDCM/MeOH（20/1）を用いてクロマトグラフィにかけ、N-{4-[3-(3-モルホリン-4-イル-プロピオニル)-フェニル]-ピリジン-2-イル}-ベンズアミドをわずかに帯黄色の固体で得た（100mg、38％）。MS: m/z 416.3 [MH+].
【０１２７】
実施例10
1-[3-(2-アミノ-ピリジン-4-イル)-フェニル]-3-モルホリン-4-イル-プロパン-1-オンの調製
2014098004.tif 000130
N-{4-[3-(3-モルホリン-4-イル-プロピオニル)-フェニル]-ピリジン-2-イル}-ベンズアミド（100mg、0.32mmol) をHCl（2mL、6N）中に溶解した。混合物を140℃で30分間マイクロ波照射した。混合物をDCM（20mL）で希釈し、NaOHでpH約9まで中和した。層を分離し、水層をDCM（2×15mL）でさらに洗浄した。合わせた有機層を乾燥（Na2SO4）し、ろ過した。ろ液を濃縮し、残渣を精製して、1-[3-(2-アミノ-ピリジン-4-イル)-フェニル]-3-モルホリン-4-イル-プロパン-1-オン（TFA塩）を白色固体で得た（84mg、78％）。MS: m/z 312.3 [MH+].
【０１２８】
実施例11
N-[4-(3-アセチル-フェニル)-ピリジン-2-イル]-4-tert-ブチル-ベンズアミドの調製
2014098004.tif 000131
N-[4-(3-アセチル-フェニル)-ピリジン-2-イル]-ベンズアミドの調製と同じ方法に従い、N-[4-(3-アセチル-フェニル)-ピリジン-2-イル]-4-tert-ブチル-ベンズアミド（130mg、81％、わずかな不純物）を1-[3-(2-クロロ-ピリジン-4-イル)-フェニル]-エタノン（100mg、0.43mmol）および4-tert-ブチルベンズアミド（153mg、0.86mmol）から得た。MS: m/z 373.1 [MH+].
【０１２９】
実施例12
4-tert-ブチル-N-{4-3-(3-モルホリン-4-イル-プロピオニル)-フェニル]-ピリジン-2-イル}-ベンズアミドの調製
2014098004.tif 000132
1-[3-(2-アミノ-ピリジン-4-イル)-フェニル]-3-モルホリン-4-イル-プロパン-1-オンの調製と同じ方法に従い、4-tert-ブチル-N-{4-3-(3-モルホリン-4-イル-プロピオニル)-フェニル]-ピリジン-2-イル}-ベンズアミド（12mg、30％）をN-[4-(3-アセチル-フェニル)-ピリジン-2-イル]-4-tert-ブチル-ベンズアミド（36mg、0.1mmol）から得た。MS: m/z 472.3 [MH+].
【０１３０】
実施例13
N-[4-(3-アセチル-フェニル)-ピリジン-2-イル]-アセトアミドの調製
2014098004.tif 000133
N-[4-(3-アセチル-フェニル)-ピリジン-2-イル]-ベンズアミドの調製と同じ方法に従い、N-[4-(3-アセチル-フェニル)-ピリジン-2-イル]-アセトアミド（50mg、50％、わずかな不純物）を1-[3-(2-クロロ-ピリジン-4-イル)-フェニル]-エタノン（100mg、0.43mmol）およびアセトアミド（26mg、0.86mmol）から得た。MS: m/z 255.1 [MH+].
【０１３１】
実施例14
N-{4-[3-(3-モルホリン-4-イル-プロピオニル)-フェニル]-ピリジン-2-イル}-アセトアミドの調製
2014098004.tif 000134
1-[3-(2-アミノ-ピリジン-4-イル)-フェニル]-3-モルホリン-4-イル-プロパン-1-オンの調製と同じ方法に従い、N-{4-[3-(3-モルホリン-4-イル-プロピオニル)-フェニル]-ピリジン-2-イル}-アセトアミド（10mg、20％）をN-[4-(3-アセチル-フェニル)-ピリジン-2-イル]-アセトアミド（50mg、0.2mmol）から得た。MS: m/z 354.3 [MH+].
【０１３２】
実施例15
インビトロアッセイ
IL-2産生の測定
ヒトT細胞株を、抗CD3モノクローナル抗体であらかじめコーティングした96穴プレートに播種した。ウェルを未処理のままにするか、または抗CD28で2日間処理した。上清を回収し、ヒトIL-2 ELISAアッセイを用いて、試験化合物存在下または非存在下でのIL-2産生を試験した。
【０１３３】
T細胞増殖アッセイ
ヒトT細胞株を、抗CD3モノクローナル抗体であらかじめコーティングした96穴プレートに播種した。ウェルを未処理のままにするか、または抗CD28で2日間処理した。細胞増殖を、市販のCELLTITER-GLO（商標）アッセイ（Promega）を用い、試験化合物存在下または非存在下で測定した。
【０１３４】
インビトロキナーゼアッセイ
化合物をHITHUNTER（商標）酵素断片相補法（Discoverx）を用いてスクリーニングした。簡単に言うと、組換えにより生成したN-末端His標識ITKキナーゼドメイン（アミノ酸352〜617）を様々な濃度の個々の化合物と共にインキュベートした。ATPおよび基質を加え、キナーゼ反応を2〜16時間進行させた。市販の検出試薬を加え、2〜4時間反応させた。反応を発光により評価した。初期結果を全長組換えITKタンパク質を用いて確認した。
【０１３５】
同様に、HITHUNTER（商標）などの市販の試薬を用いて、別のキナーゼの活性に対する化合物の効果を評価した。組換え精製タンパク質をこれらの試験に用いたため、BTK、LCKおよびERKのキナーゼドメインを発現させた。
【０１３６】
表1の化合物を試験し、1μM未満のIC50でIL-2産生を阻害すること、T細胞増殖を阻害すること、およびITKを阻害することが判明した。
【０１３７】
【表１】
2014098004.tif 000135
2014098004.tif 000136
2014098004.tif 000137
【０１３８】
表2〜5の化合物をインビトロキナーゼアッセイで試験した。
【０１３９】
【表２】
2014098004.tif 000138
2014098004.tif 000139
2014098004.tif 000140
2014098004.tif 000141
2014098004.tif 000142
2014098004.tif 000143
【０１４０】
【表３】
2014098004.tif 000144
2014098004.tif 000145
【０１４１】
【表４】
2014098004.tif 000146
2014098004.tif 000147
2014098004.tif 000148
2014098004.tif 000149
【０１４２】
【表５】
2014098004.tif 000150
2014098004.tif 000151
2014098004.tif 000152
2014098004.tif 000153
2014098004.tif 000154
2014098004.tif 000155
2014098004.tif 000156
2014098004.tif 000157
【０１４３】
実施例16
インビボ試験
いくつかの代表的化合物を、マウスインビボ腫瘍モデルにおける有効性について評価した。NOD/SCIDマウスにT細胞白血病/リンパ腫細胞を腹腔内に移植した。1つの群は媒体だけで治療し（模擬治療）、その一方で他の群はいくつかの小分子阻害剤により腹腔内経路で治療した。腫瘍の成長を、腹腔内洗浄およびFACS分析により評価した。表6に媒体のみで治療した模擬群に対する腫瘍成長の阻害パーセントをまとめている。本試験で評価した化合物の用量は最大耐容量よりも低く、極めて低い毒性しか示さなかった。
【０１４４】
表6の化合物を試験し、示した濃度で腫瘍成長を少なくとも50％阻害した。
【０１４５】
【表６】
2014098004.tif 000158
2014098004.tif 000159
【０１４６】
実施例17
化合物活性メカニズム
この化合物クラスはTecおよびEGFRなどのキナーゼファミリー、ならびに少数の他のキナーゼのキナーゼドメインと選択的に相互作用する。この化合物のクラスは、脱離基のインサイチューでの脱離による反応性アミノエチルC=Y弾頭部の露出を含むメカニズムを通して、キナーゼ結合ドメインのATP結合部位で不可逆的に反応することを示す証拠がある。化合物はC=Y基に隣接する引き抜き可能なプロトンを含み、これは対象となるキナーゼの活性部位で適当な触媒環境に曝された後、ベータ-アミノ官能基の脱離を促進する。この脱離によって反応性求電子種（一般にはマイケル受容体部分と呼ばれる）が生じ、これはキナーゼ活性部位に隣接するシステイン残基があることで、このシステイン残基とインサイチューで生じた求電子種との間の共有結合付加物を速やかに生成する。キナーゼと求核性システインに極めて近い触媒環境との組み合わせは、この作用メカニズムを説明する重要で独特の条件である。下記のデータは、インサイチューでの脱離が本発明で示す化合物の阻害活性を増進することを裏付けている。脱離を妨げる様式で化合物を修飾すると、化合物は阻害活性を示すことができない。
【０１４７】
【表７】
2014098004.tif 000160
【０１４８】
実施例18
キナーゼを選択するための共有結合
関連するシステインの近くでの脱離の結果、化合物とキナーゼドメインとの間で共有結合付加物が生成する。後に続く不可逆的結合は、表面プラズモン共鳴（SPR）および化合物とキナーゼとの共沈を含むいくつかの方法によって示すことができる。
【０１４９】
BIACORE（登録商標）はSPRに基づくタンパク質相互作用アプローチで、これによりキナーゼをセンサーチップに固定し、小分子溶液をキナーゼと反応させる。小分子/キナーゼ相互作用の検出は実時間で行い、SPR反応の差として検出する。図1は、ITKキナーゼドメインをバイオセンサー上に固定し、それが小分子に結合および解離する能力について評価した、BIACORE（登録商標）実験を示している。データは本出願で示す化合物がITKキナーゼドメインに不可逆的に結合することを示している。
【０１５０】
共沈アッセイにおいて、1〜10mMの標識化合物をキナーゼ発現細胞またはキナーゼ欠損細胞いずれかからの細胞溶解物と共にインキュベートする。次いで、標識を用いて化合物および任意の結合タンパク質を沈澱させる。混合物をSDS-PAGEで分離し、タンパク質をウェスタンブロッティングおよび/または質量分析により同定する。
【０１５１】
実施例19
システイン442の付加物生成への寄与
本明細書に示す化合物がTecおよびEGFRキナーゼのキナーゼドメインと相互作用するメカニズムを確認するために、発明者らはITKキナーゼドメインの点突然変異を作成し、それにより鍵となるアミノ酸、すなわちC442をアラニンに変異させた。タンパク質を市販のバキュロウイルス発現系で製造元者の一般的プロトコルを用いて発現させた（Invitrogen、pBlueBac）。タンパク質を標準の技術を用いて発現および精製した。野生型（WT）ITKキナーゼドメインおよびC442Aキナーゼドメインはいずれもキナーゼ活性を示した。WT-ITKの活性は本出願に示す化合物によって阻害されたが、同じ化合物はC442A突然変異型キナーゼドメインには活性を示さなかった。
【０１５２】
【表８】
2014098004.tif 000161
【図１】
2014098004.tif 000196
【図２】
2014098004.tif 000197
【図３】
2014098004.tif 000198
【配列表】
2014098004000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成26年2月20日(2014.2.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
DKC三つ組キナーゼ活性部位に結合するタンパク質キナーゼ阻害剤であって、
（a）キナーゼ活性部位における触媒二つ組のリシンのアミノ基に対し水素結合距離内のキナーゼ活性部位に配置されるプロトン受容体；
（b）キナーゼ活性部位における触媒二つ組のアスパラギン酸に隣接する水素結合における引き抜き可能なプロトンであって、引き抜き可能なプロトンの除去により、エノール/エノラートまたはチオール/チオラートまたはエナミンへの電子転位が可能な共役系が生じる引き抜き可能なプロトン；
（c）さらなる電子転位によってβ脱離が起こり、それにより阻害剤におけるマイケル受容体が生成される脱離基であって、阻害剤とキナーゼの少なくとも一つの配座はマイケル受容体部分がシステイン求核体から3〜10Åの距離内に位置するような配座であり、酵素のマイケル付加物を形成する反応を生じる、脱離基；
（d）キナーゼのヒンジ領域、いくつかの疎水性残基、親水性残基、およびその組み合わせからなる群より選択される、ATP結合部位の一部に対する親和性を有するキナーゼ結合部分を含み、
ただし
2014098004.tif 000199
ではなく、かつインビトロキナーゼアッセイにおいてITKを0.00085μM〜1μMのIC50で阻害し、かつ/またはBTKを0.00072μM〜1μMのIC50で阻害する、タンパク質キナーゼ阻害剤。