(57)【要約】      （修正有）【課題】ＨＳＰ９０を標的とするＨＳＰ９０阻害剤と他の抗腫瘍剤との併用療法の提供。【解決手段】一般式（１）で表されるトリアゾール化合物（Ａ）と、ゲムシタビン（Ｂ）を組み合わせる。2014034531.tif 000017［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子、Ｙは硫黄原子または酸素原子、ｍは０〜４の整数、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
2014034531.tif 000012
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）と、ゲムシタビン（Ｂ）を組み合わせた抗腫瘍剤。
【請求項２】
更に、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）を含有する請求項１に記載の抗腫瘍剤。
【請求項３】
前記一般式（１）において、Ｘがエチル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、２，２−ジメチルプロピル基、２−プロピニル基、２−ブチニル基、ハロゲン原子である請求項１または２に記載の抗腫瘍剤。
【請求項４】
前記一般式（１）において、ｍが０または１であり、Ａがモルホリノ基、４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基である請求項１または２に記載の抗腫瘍剤。
【請求項５】
一般式（１）
【化２】
2014034531.tif 000013
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）を有効成分として含有する事を特徴とする、ゲムシタビンの抗腫瘍効果を増強させる抗腫瘍効果増強剤。
【請求項６】
一般式（１）
【化３】
2014034531.tif 000014
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）を有効成分として含有する事を特徴とする、ゲムシタビン及び上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の併用療法の抗腫瘍効果を増強させる抗腫瘍効果増強剤。
【請求項７】
前記一般式（１）において、Ｘがエチル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、２，２−ジメチルプロピル基、２−プロピニル基、２−ブチニル基、ハロゲン原子である請求項５または６に記載の抗腫瘍効果増強剤。
【請求項８】
前記一般式（１）において、ｍが０または１であり、Ａがモルホリノ基、４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基である請求項５または６に記載の抗腫瘍効果増強剤。
【請求項９】
癌治療におけるゲムシタビンの投与において、一般式（１）
【化４】
2014034531.tif 000015
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）を併用で投与する事を特徴とする前記ゲムシタビンの抗腫瘍効果を増強させる方法。
【請求項１０】
癌治療におけるゲムシタビン及び上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の併用療法の投与において、一般式（１）
【化４】
2014034531.tif 000016
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）を併用で投与する事を特徴とする前記ゲムシタビン及び上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の併用療法の抗腫瘍効果を増強させる方法。
【請求項１１】
前記一般式（１）において、Ｘがエチル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、２，２−ジメチルプロピル基、２−プロピニル基、２−ブチニル基、ハロゲン原子である、請求項９または１０に記載の抗腫瘍効果を増強させる方法。
【請求項１２】
前記一般式（１）において、ｍが０または１であり、Ａがモルホリノ基、４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基である、請求項９または１０に記載の抗腫瘍効果を増強させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＨＳＰ９０阻害活性を有するトリアゾール化合物と、ゲムシタビンを含む抗腫瘍剤に関する。また、前記ＨＳＰ９０阻害活性を有するトリアゾール化合物を含有することを特徴とする、ゲムシタビンの抗腫瘍効果増強剤、並びにゲムシタビンの抗腫瘍効果を増強させる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
悪性腫瘍疾患の治療のため、新たな抗腫瘍化学療法の開発が求められている。近年では、細胞増殖に関与するシグナル伝達に関わる増殖因子や増殖因子受容体、並びにシグナル伝達経路に関わるタンパク質等の各種機能性分子が認知されてきている。そこで、これらの機能性分子を標的として、その機能を抑制させることを作用機作とする分子標的抗腫瘍剤が開発されている。
【０００３】
熱ショックタンパク（Ｈｅａｔ  Ｓｈｏｃｋ  Ｐｒｏｔｅｉｎ；ＨＳＰ）は細胞内に存在する分子シャペロンであり、その分子量によってＨＳＰ９０、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ４０、ｓｍａｌｌ  ＨＳＰｓなど、幾つかのファミリーに分類される機能性分子である。分子シャペロンとは、タンパク質の機能的高次構造の形成を促進するため、標的タンパク質と一時的に複合体を形成するタンパク質の総称である。すなわち、分子シャペロンは、タンパク質の折り畳みや会合を助け、凝集を抑止する活性を持つ。
ＨＳＰ９０は、細胞内の全可溶性タンパク質の１〜２％を占める豊富に存在する分子シャペロンであり、細胞質に一様に分布しており、主に二量体として存在する。ＨＳＰ９０は、ＡＴＰに依存して、変性又は折り畳み状態ではないタンパク質の折り畳みを行う機能を担う。ＨＳＰ９０は、細胞内のシグナル伝達系に関わる多様なタンパク質と相互作用することが知られている。すなわちＨＳＰ９０は、多様な標的タンパク質の機能発現に必要な場合が多く、その作用機作は、ＨＳＰ９０が不安定な折り畳み状態にあるタンパク質を特異的に認識して、これと結合して複合体を形成する生化学的特性に基づいている。タンパク質の折り畳みにおけるＨＳＰ９０単独の活性は弱く、同様の折り畳み活性を持つＨＳＰ７０、ｐ２３など他の分子シャペロン（コシャペロン）と共同で機能している。
癌関連のシグナル伝達に関わる多様な標的タンパク質（ステロイドレセプター、Ｒａｆ セリンキナーゼ、チロシンキナーゼ類）は、ＨＳＰ９０にその構造構築を依存している。したがって、ＨＳＰ９０が細胞周期の制御、細胞の癌化・増殖・生存シグナルに深く関与していることが明らかになっている。
【０００４】
ヒト腫瘍では多くのシグナル分子の調節が失われており、これらのシグナル分子の機能を維持するために、腫瘍はＨＳＰ９０を必要としている（非特許文献１）。したがって、ＨＳＰ９０に作用して、その機能を阻害する化合物は、癌関連のシグナル伝達に関わる多様な標的タンパク質の分解を引き起こすことが分かっており、それに基づき癌細胞の増殖を抑制することが知られている。すなわちＨＳＰ９０阻害剤は、標的タンパク質とＨＳＰ９０を含むシャペロン複合体の構成を変化させ、該複合体から離脱した標的タンパク質を主にユビキチン・プロテアソ−ム系で分解させる。これによりＨＳＰ９０の標的タンパク質量が減少し、それに伴う下流へのシグナル伝達を遮断し、癌細胞の増殖を抑制することにより抗腫瘍効果をもたらす。
特に、癌化する過程では複数の遺伝子異常が蓄積されており、タンパク質の変異が生じている。すなわち癌細胞では、生成した変異タンパク質が多く、正常タンパク質からなる正常細胞と比較して、より多くのシャペロン活性を必要とする。このため、多くの癌細胞ではＨＳＰ９０の発現量が増加していることが知られている。これらのことから、ＨＳＰ９０阻害剤は、正常細胞ではなく癌細胞に選択的に作用することが期待される。さらに癌細胞は、異常なタンパク質発現が認められる事に加え、低酸素状態、栄養飢餓状態に置かれており、一種のストレス状態下にあるため、ＨＳＰ９０によるシャペロン活性への依存度合いが高いことが考えられる。したがって癌細胞は、ＨＳＰ９０阻害剤に対する感受性が、正常細胞と比較して高いことが期待される。そこでＨＳＰ９０を標的分子とするＨＳＰ９０阻害剤の探索的研究、並びにその抗腫瘍効果の検証がなされている。
【０００５】
ＨＳＰ９０阻害剤の探索的研究として、特許文献１には、５−（２，４−ジヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾール−３−オン誘導体が、ＨＳＰ９０阻害活性を備え、且つ癌細胞増殖阻害活性を兼ね備える化合物である事を記載している。該化合物は動物実験においても優れた抗腫瘍効果を示し、制癌剤として有望であることが報告されている。また、特許文献２または特許文献３でも、ＨＳＰ９０阻害活性を有するトリアゾール化合物を報告している。
【０００６】
ゲムシタビンは代謝拮抗剤に属するフッ化ピリミジン系の抗腫瘍剤であり、塩酸ゲムシタビン（ジェムザール（登録商標））として上市されている。ゲムシタビンは、投与後、細胞内で代謝されて活性型のヌクレオチドである二リン酸化物及び三リン酸化物となり、これらが、ＤＮＡ合成を直接的及び間接的に阻害することにより殺細胞作用を示すことが知られている。塩酸ゲムシタビンは、臨床において非小細胞肺癌、膵臓癌、胆道癌、尿路上皮癌、乳癌、卵巣癌を適応症とする抗腫瘍剤として承認されている。塩酸ゲムシタビンは、これらの臨床使用において、塩酸ゲムシタビンの単独化学療法、またはシスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、等の他の抗腫瘍剤との併用療法で用いられている。
【０００７】
悪性腫瘍疾患は、薬物療法の医療満足度が十分でなく、治療効果を高める事を目的に複数の薬剤を組み合せて用いる併用化学療法が行なわれている。すなわち、抗腫瘍効果の作用機作や副作用の種類が異なる複数の薬剤を組み合わせた併用化学療法が開発されており、治療成績の向上に貢献している。特に近年では、細胞増殖に関与するシグナル伝達に関わる分子を標的とする分子標的抗腫瘍剤が開発され、臨床に供されている。したがって、これら分子標的抗腫瘍剤を用い、更により治療効果の高い併用療法の確立が希求されている。
【０００８】
ＨＳＰ９０阻害剤は、ＨＳＰ９０と標的タンパク質との複合体形成機能を阻害する事により、癌細胞の増殖阻害作用を発揮する抗腫瘍剤である。この抗腫瘍効果の増強を目的に、ＨＳＰ９０阻害剤と他の抗腫瘍剤との併用療法が報告されている。特に、ＨＳＰ９０阻害活性を有するトリアゾール化合物やその類似化合物を用いた他剤併用療法について、多くの報告がなされている。例えば、特許文献４には、ＨＳＰ９０阻害活性を有するトリアゾール化合物とパクリタキセルとの併用を記載している。特許文献５は、ＨＳＰ９０阻害活性を有するトリアゾール化合物とトポイソメラーゼＩＩ阻害剤との併用を挙げ、エトポシドとの併用を記載している。特許文献６は、ＨＳＰ９０阻害活性を有するトリアゾール化合物とＶＥＧＦ阻害剤との併用を挙げ、ベバシズマブとの併用を記載している。特許文献７は、ＨＳＰ９０阻害活性を有するトリアゾール化合物とＥＧＦＲ阻害剤との併用を挙げ、エルロチニブとの併用を記載している。また特許文献８は、ＨＳＰ９０阻害活性を有するオキサゾール化合物と、ｍＴＯＲ阻害剤の併用を挙げ、エベロリムスとの併用を記載している。特許文献９には、ＨＳＰ９０阻害活性を有するオキサゾール化合物と、トラスツズマブとの併用を記載している。
一方、ＨＳＰ９０阻害剤とゲムシタビンとの併用療法は、例えば非特許文献２には、タネスピマイシン（Ｔａｎｅｓｐｉｍｙｃｉｎ；１７−ＡＡＧ）とゲムシタビンの併用療法による第１相臨床試験が報告されている。しかしながら、ＨＳＰ９０活性を有するトリアゾール誘導体とゲムシタビンとの併用療法の報告はなされていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｈｓｐ９０ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓａｓ ｎｏｖｅｌ ｃａｎｃｅｒｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ．  Ｔｒｅｎｄｓ ＭｏｌＭｅｄ．２００２； ８（４ Ｓｕｐｐｌ．）： ｐ．Ｓ５５−６１．
【非特許文献２】Ａ  Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｔａｎｅｓｐｉｍｙｃｉｎ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｏｖａｒｉａｎ  ａｎｄ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ，  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１２，  １２４：２，  ２１０−２１５
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開ＷＯ２００６／０９５７８３号
【特許文献２】国際公開ＷＯ２００９／０２３２１１号
【特許文献３】国際公開ＷＯ２００７／１３４６７８号
【特許文献４】国際公開ＷＯ２０１１／０４９９４６号
【特許文献５】国際公開ＷＯ２０１１／１４９８２４号
【特許文献６】国際公開ＷＯ２０１１／１３３５２１号
【特許文献７】国際公開ＷＯ２０１１／１３３５２０号
【特許文献８】国際公開ＷＯ２０１０／０６０９３７号
【特許文献９】国際公開ＷＯ２０１０／０６０９３９号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
癌細胞の生存にＨＳＰ９０が依存することから、ＨＳＰ９０を標的分子とする抗腫瘍剤の開発が進められている。本発明の目的は、治療効果の高い薬物療法として、このＨＳＰ９０阻害剤を用いた他の抗腫瘍剤との併用療法を提供することである。すなわちＨＳＰ９０阻害剤として、５−（２，４−ジヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾール−３−オン誘導体と他の抗腫瘍剤による、優れた治療効果を発揮する併用療法を提供する事を課題とする。
また、前記５−（２，４−ジヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾール−３−オン誘導体が、既存の抗腫瘍剤の治療効果増強作用を発揮し、既存の抗腫瘍剤の抗腫瘍効果増強剤としての用途を提供する事にある。
また別の観点では、多様な悪性腫瘍に対する化学療法剤として用いられているゲムシタビン療法について、更に治療効果を高める併用療法を提供する事を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは鋭意検討の結果、一般式（１）で示される５−（２，４−ジヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾール−３−オン誘導体とゲムシタビンの組み合せが、それぞれの単独使用による抗腫瘍効果と比較し、顕著に優れた抗腫瘍効果を発揮する事を見出した。すなわち、本発明は、以下の構成を要旨とする。
（１）下記一般式（１）
【化１】
2014034531.tif 000002
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）と、ゲムシタビン（Ｂ）を組み合わせた抗腫瘍剤。
（２）本発明の別の態様として、下記一般式（１）
【化２】
2014034531.tif 000003
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）、ゲムシタビン（Ｂ）、及び上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）を組み合わせた抗腫瘍剤。
【００１３】
（３）また本発明は別の観点によると、下記一般式（１）
【化３】
2014034531.tif 000004
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）を有効成分として含有する事を特徴とする、ゲムシタビンの抗腫瘍効果を増強させる抗腫瘍効果増強剤、を包含する。
（４）若しくは、下記一般式（１）
【化４】
2014034531.tif 000005
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）を有効成分として含有する事を特徴とする、ゲムシタビン及び上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の併用療法の抗腫瘍効果を増強させる抗腫瘍効果増強剤、を包含する。
【００１４】
（５）また、本発明は、癌治療におけるゲムシタビンの投与において、下記一般式（１）
【化５】
2014034531.tif 000006
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）を併用で投与する事を特徴とする、ゲムシタビンの抗腫瘍効果を増強させる方法、を包含する。
（６）若しくは、本発明は、癌治療におけるゲムシタビン及び上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の併用療法の投与において、下記一般式（１）
【化６】
2014034531.tif 000007
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）を併用で投与する事を特徴とする、ゲムシタビン及び上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の併用療法の抗腫瘍効果を増強させる方法、を包含する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によると、５−（２，４−ジヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾール−３−オン誘導体とゲムシタビンを組み合せて使用する事により、治療効果が向上した抗腫瘍薬物療法を提供する事ができる。従来臨床治療に用いられている塩酸ゲムシタビン療法に、前記トリアゾール誘導体を適用する事により、塩酸ゲムシタビンの抗腫瘍効果を増強し、治療効果を向上させることができる。
したがって従来方法による抗腫瘍効果の更なる向上が達成できると共に、ゲムシタビンに対する感受性が低下した悪性腫瘍に対して、十分な腫瘍増殖抑制作用をもたらし治療効果を維持する事ができる。
更に、それぞれ抗腫瘍剤の単独使用と同程度の抗腫瘍効果を得る場合において、各々の抗腫瘍剤の用量を相対的に減量することができ、望ましくない薬理作用の発現を抗腫瘍効果に悪影響を及ぼすことなく軽減する事ができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】ヒト膵癌細胞ＢｘＰＣ３の皮下移植マウスを用いた、ゲムシタビン（Ｂ）、トリアゾール化合物（Ａ−１）、及び比較トリアゾール化合物（Ｄ）の各単剤療法、並びに、ゲムシタビン（Ｂ）とトリアゾール化合物（Ａ−１）の併用療法、ゲムシタビン（Ｂ）と比較トリアゾール化合物（Ｄ）の併用療法の抗腫瘍効果を示す図である。
【図２】ヒト膵癌細胞ＨＰＡＣの皮下移植マウスを用いた、ゲムシタビン（Ｂ）、トリアゾール化合物（Ａ−１）の各単剤療法、並びにゲムシタビン（Ｂ）とトリアゾール化合物（Ａ−１）の併用療法の抗腫瘍効果を示す図である。
【図３】ヒト膵癌細胞ＢｘＰＣ３の皮下移植マウスを用いた、ゲムシタビン（Ｂ）、トリアゾール化合物（Ａ−１）、及びエルロチニブ（Ｃ−１）の各単剤療法、並びに、ゲムシタビン（Ｂ）、本発明のトリアゾール化合物（Ａ−１）及びエルロチニブ（Ｃ−１）の併用療法を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、一般式（１）で示されるトリアゾール化合物（Ａ）と、ゲムシタビン（Ｂ）を組み合せて用いることを特徴とする。更に、任意に上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）を組み合せて用いる事を特徴とする。以下にその詳細について説明する。
本発明において、ＨＳＰ９０阻害活性を有するトリアゾール化合物（Ａ）は、前記一般式（１）で示されるトリアゾール化合物である。すなわち、該トリアゾール環において、Ｙ基の置換位置を３位とし、Ａ基を有するフェニル基の置換位置を４位とし、Ｘ基を有する２，４−ジヒドロキシフェニル基の置換位置を５位とする［１，２，４］トリアゾール誘導体である。
前記一般式（１）で表されるトリアゾール化合物は、ケト−エノール互変異性体が存在し、下記一般式（１Ｋ）で示されるケト型異性体構造を取り得る。すなわち本発明において、前記（１）及び（１Ｋ）は同一化合物であり、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ）は、一般式（１Ｋ）で示される化合物も包含するものである。
【００１８】
【化７】
2014034531.tif 000008
【００１９】
一般式（１）のＸは、置換基を有していてもよい直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、置換基を有していてもよい炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子である。以下にＸの説明をする。
一般式（１）におけるＸとして、直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基が挙げられる。該アルキル基として好ましくは、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、２，２−ジメチルプロピル基、ｎ−へキシル基、シクロヘキシル基、ｎ−ヘプチル基、シクロヘキシルメチル基、ｎ−オクチル基、シクロヘキシルエチル基、等を挙げることができる。
該アルキル基は置換基を有しても良い。置換基を有する場合の置換基としては、例えば、メルカプト基、水酸基、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、炭素環または複素環アリール基、炭素数１〜４アルキルチオ基、アリールチオ基、炭素数１〜４アルコキシ基、アリールオキシ基、脂肪族又は芳香族アミノ基、アシル基、カルボキシル基、等を挙げることができる。Ｘとして置換基を有する該アルキル基の例としては、２，２，２−トリクロロエチル基、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、トリフルオロメチル−２，２，２−トリフルオロエチル基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチル基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル基、モルホリニルメチル基、ピペリジニルメチル基、ヒドロキシメチル基、１−ヒドロキシエチル基、２−ヒドロキシエチル基、１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル基、メトキシエチル基、メトキシメチル基、ベンジル基、２−フェニルエチル基、ピリジルメチル基、等を挙げることができる。
Ｘにおける直鎖状または分岐状の炭素数１〜８アルキル基としては、エチル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、２，２−ジメチルプロピル基が好ましく、イソプロピル基が特に好ましい。
【００２０】
一般式（１）のＸとして、炭素数２〜１０のアルキニル基が挙げられる。該アルキニル基は、１−アルキニル基または２−アルキニル基である。該アルキニル基としては置換基を有していても良い。置換基を有する場合の置換基としては、ハロゲン原子、炭素環または複素環アリール基、炭素数１〜４アルキルオキシ基、炭素数１〜４アルキルチオ基、脂肪族又は芳香族アミノ基、アシル基、アルキルシリル基、等が挙げられる。好ましい１−アルキニル基としてはエチニル基、３，３−ジメチルブタ−１−イニル基、２−フェニル−エチニル基、２−トリメチルシリル−１−エチニル基、等が挙げられる。２−アルキニル基としては、例えばプロパ−２−イニル基、ブタ−２−イニル基、３−フェニルプロパ−２−イニル基、４，４−ジメチルペンタ−２−イニル基、３−トリメチルシリルプロパ−２−イニル基、等が挙げられる。炭素数２〜１０の２−アルキニル基が好ましく、プロパ−２−イニル基またはブタ−２−イニル基が特に好ましい。
【００２１】
一般式（１）のＸとして、ハロゲン原子が挙げられる。ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子を示す。ハロゲン原子としては、臭素原子が好ましい。
【００２２】
一般式（１）のＸとして、炭素数１〜８の直鎖状または分岐状のアルキル基、または炭素数２〜１０の２−アルキニル基が好ましい。置換基Ｘとして特に好ましくは、エチル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、プロパ−２−イニル基またはブタ−２−イニル基である。
【００２３】
一般式（１）において、Ａは置換基を有するアミノ基を表す。Ａにおける置換基を有するアミノ基としては、脂肪族１級アミノ基または脂肪族２級アミノ基が挙げられる。
脂肪族１級アミノ基としては、炭素数１〜８の直鎖状、分岐状または環状アルキル基を有するＮ−アルキルアミノ基を挙げることができる。例えばメチルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ｎ−ブチルアミノ基、シクロヘキシルアミノ基、等が挙げられる。脂肪族２級アミノ基としては、炭素数１〜８の直鎖状、分岐状または環状アルキル基を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ基、若しくは環状の２級アミノ基が挙げられる。Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノ基としては、例えばジメチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−ブチルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−シクロヘキシルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルアミノ基、等が挙げられる。脂肪族の環状の２級アミノ基としては、モルホリノ基、４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基、等が挙げられる。Ａで表される脂肪族アミノ基としては、脂肪族の環状の２級アミノ基が好ましく、モルホリノ基、４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基が好ましい。中でもモルホリノ基または４−メチルピペラジン−１−イル基が特に好ましい。
一般式（１）において、ｍは０乃至４の整数を表す。中でもｍは０または１が好ましい。
すなわち一般式（１）における−（ＣＨ２）ｍ−Ａ基としては、ｍが０または１であり、Ａが脂肪族の環状の２級アミノ基が好ましく、モルホリノ基、メチル−モルホリノ基、４−メチルピペラジン−１−イル基、メチル−４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、メチル−ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基、メチル−ピロリジン−１−イル基が特に好ましい。
【００２４】
本発明における前記トリアゾール化合物（Ａ）として、特に好ましい例を以下に挙げる。
５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン；（Ａ−１）、
４−イソプロピル−６−｛５−メルカプト−４−［４−（モルホリン−４−イル）−フェニル］−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル｝−ベンゼン−１，３−ジオール；（Ａ−２）、
４−イソプロピル−６−｛５−メルカプト−４−［４−（モルホリン−４−イルメチル）−フェニル］−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル｝−ベンゼン−１，３−ジオール；（Ａ−３）、
４−｛５−ヒドロキシ−４−［４−（モルホリン−４−イル）−フェニル］−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル｝−６−イソプロピル−ベンゼン−１，３−ジオール；（Ａ−４）、
４−｛５−ヒドロキシ−４−［４−（モルホリン−４−イルメチル）−フェニル］−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル｝−６−イソプロピル−ベンゼン−１，３−ジオール；（Ａ−５）、
５−［５−（ブチン−２−イル）−２，４−ジヒドロキシ−フェニル］−４−［４−（モルホリン−４−イルメチル）−フェニル］−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン；（Ａ−６）、
４−（ブチン−２−イル）−６−｛５−メルカプト−４−［４−（モルホリン−４−イルメチル）−フェニル］−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−ベンゼン−１，３−ジオール；（Ａ−７）、
４−ブロモ−６−｛５−メルカプト−４−［４−（モルホリン−４−イル）−フェニル］−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル｝−ベンゼン−１，３−ジオール；（Ａ−８）、
５−［２，４−ジヒドロキシ−５−（プロピン−２−ニル）−フェニル］−４−［４−（モルホリン−４−イルメチル）−フェニル］−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン；（Ａ−９）
【００２５】
本発明の一般式（１）に係るトリアゾール化合物（Ａ）は、公知の製造方法により製造する事ができる。例えば、国際公開ＷＯ２００６／０９５７８３号に開示される製造方法に従い、合成することができる。例えば、上記５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン；（Ａ−１）は、前記特許文献の実施例２−５にて製造方法が開示されており、その記載の方法に従い合成することができる。その他の誘導体も前述の先行技術文献に開示の方法に従い調製できる。
【００２６】
本発明の前記トリアゾール化合物（Ａ）は酸又は塩基と塩を形成する場合もあり、一般式（１）で表される化合物の塩を用いても良い。酸との塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩等の無機酸塩や、トリフロロ酢酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機酸との塩を挙げることができる。塩基との塩としては、例えばナトリウム塩等を挙げることができる。これらの塩は、定法によって製造することができる。
本発明の前記トリアゾール化合物（Ａ）は、薬理活性有効成分をそのまま用いても良く、製剤基剤と併せて注射剤、点滴剤、錠剤、カプセル剤、散剤等の通常使用されている製剤を調製して使用して良い。製剤化に当たり、製剤基剤として通常使用されている薬学的に許容される担体、例えば結合剤、滑沢剤、崩壊剤、溶剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定化剤、懸濁化剤、保存剤、無痛化剤、色素、香料が使用できる。該トリアゾール化合物（Ａ）は、上記医薬製剤化され、経静脈投与、経動脈投与、皮下投与、経口投与、経粘膜投与、等の周知の投与経路にて投与する事ができる。
【００２７】
次に本発明におけるゲムシタビン（Ｂ）について説明する。本発明で用いるゲムシタビンは、化学名が（＋）−２'−デオキシ−２'，２'−ジフルオロシチジンであり、代謝拮抗作用を有する抗腫瘍剤である。臨床上は一般的には、ゲムシタビン塩酸塩として用いられる。本発明においてゲムシタビンは遊離塩基であっても、他の医薬品として容認される塩であっても良く、更には生体内でゲムシタビンを遊離するプロドラッグであっても良い。好ましくはゲムシタビン塩酸塩を用いる事が望ましい。ゲムシタビン塩酸塩は、ジェムザール（登録商標）として、該ゲムシタビン塩酸塩と製剤添加剤を含む凍結乾燥製剤として市場に流通しており、本発明でもこの市場流通品を用いる事ができる。該凍結乾燥製剤は、注射用水等の適当な溶解液にて溶液調製し、点滴にて静脈内投与に供される。
【００２８】
本発明に係る、前記ＨＳＰ９０阻害作用を有する前記トリアゾール化合物（Ａ）と、ゲムシタビン（Ｂ）を組み合わせた抗腫瘍剤とは、該トリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）を１人の患者に対して投与される使用態様を含む抗腫瘍剤を表すものである。つまり、該トリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）を、悪性腫瘍疾患患者に対して併用で処理することを意図するものである。すなわち１人の患者に、該トリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）を同時に、または逐次に、または前後して個別に投与することを含む抗腫瘍剤を指す。したがって、該トリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）を含む抗腫瘍剤の態様として特に限定されるものではなく、これらが併用で投与できる状態であれば良い。例えば、該トリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）が別個の製剤であって良い。また、該トリアゾール化合物（Ａ）と該ゲムシタビン（Ｂ）を混合して、一体に調製された医薬製剤であっても良い。また別の態様として、該トリアゾール化合物（Ａ）を含む製剤型、及びゲムシタビン（Ｂ）を含む製剤型を備え、これらを併用使用することを企図したキットであって良い。また、該トリアゾール化合物（Ａ）を含む製剤型、及びゲムシタビン（Ｂ）を含む製剤型、並びに前記２つの製剤型を含有する容器を含むキットの態様を挙げる事ができる。
本発明において、該トリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）は同時投与して用いて良く、該トリアゾール化合物（Ａ）を投与した後、ゲムシタビン（Ｂ）を投与しても、その逆であっても良い。該トリアゾール化合物（Ａ）及びゲムシタビン（Ｂ）の前記投与とは、それぞれの薬剤について、単回投与、間歇投与、連日投与、等の医薬品で容認される一般的な投与方法を含むものである。
【００２９】
本発明において、該トリアゾール化合物（Ａ）及びゲムシタビン（Ｂ）のそれぞれの投与量は、適切な臨床試験により抗腫瘍効果と副作用を確認しつつ決められるべきである。好ましくは、ゲムシタビンを至適許容投与量にて間歇的に投与する設定にて、該トリアゾール化合物（Ａ）を適宜に増用量する臨床試験を行う事により、該トリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）のそれぞれの投与量設定をすることができる。しかしながら本発明は、該トリアゾール化合物（Ａ）によるゲムシタビンの抗腫瘍効果の増強を達し得ることから、ゲムシタビンの用量は最大至適許容用量から減量して用いる事を可能とする。したがって、ゲムシタビンの投与用量は適宜増減して設定されるべきである。該トリアゾール化合物（Ａ）及びゲムシタビン（Ｂ）の各投与用量設定方法は、当業者には自明な試験方法であり、適切な臨床試験方法に基づき、その結果によって直接決定することが出来る。
なお、動物を用いた基礎的抗腫瘍試験結果に基づくと、該トリアゾール化合物（Ａ）の成人に対する１回当たりの投与量は０．１〜１０００ｍｇで用いる事が好ましい。一方、ゲムシタビンの１回当たりの投与量は、公知の薬理活性結果に基づき、成人に対して５００〜５０００ｍｇで用いる事が好ましい。したがって、本発明における該トリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）は、これらの投与量を適宜組み合せて用いることができる。臨床使用におけるゲムシタビンは、成人に対して１０００〜１２５０ｍｇ／ｍ２（体表面積当たり）を点滴静脈内投与し、これを１週間毎に２乃至３回繰り返す投与方法が推奨されている。本発明において、ゲムシタビン（Ｂ）は臨床推奨投与用量で用いる事が好ましく、推奨投与用量を基準に適宜、増減用量して用いることが好ましい。
【００３０】
本発明の抗腫瘍剤は悪性腫瘍疾患の治療に用いられる。本発明による治療に適用される悪性腫瘍は、特に限定されるものではなく、乳癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、直腸結腸癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞癌、前立腺癌、肝細胞癌、胃癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭部及び頸部の癌、メラノーマ、卵巣癌、胆管癌、中皮腫、及び多発性骨髄腫、等広く一般の癌治療に適用することができる。特に、ゲムシタビン療法が有効である悪性腫瘍疾患の治療に用いる事が好ましく、非小細胞肺癌、膵臓癌、胆道癌、尿路上皮癌、手術不能又は再発乳癌、がん化学療法後に増悪した卵巣癌の治療に適する。また、ゲムシタビンに対する感受性が低下した非細胞肺癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌に対しても適用することができる。
【００３１】
本発明は、該トリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）を組み合わせた抗腫瘍剤に、更に上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）を組み合わせた抗腫瘍剤を包含する。
本発明で用いるＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）は、チロシンキナーゼ活性を有する細胞膜貫通型受容体であるＥＧＦＲを標的分子として、ＥＧＦＲの自己リン酸化を抑制し、ＥＧＦＲへのリガンドの結合により引き起こされる細胞増殖シグナルの伝達を阻害することにより、ＥＧＦＲを発現または過剰発現する腫瘍細胞の増殖を抑制することを主作用機作とする抗腫瘍剤を表す。本発明において、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）は、ＥＧＦＲのリン酸化を抑制する化合物であれば特に限定されず用いる事ができる。現在、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤としては、エルロチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブ、アファチニブ（ＢＩＢＷ２９９２）、ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２）、等が知られており、これらをＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の好ましい例として挙げる事ができる。これらのエルロチブ、タパチニブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ネラチニブは、各薬理活性有効成分をそのまま使用しても良く、遊離塩基体、または医薬品として容認される塩で用いても良く、更には、生体内でこれら薬理活性有効成分を遊離するプロドラッグであっても良い。好ましくは、エルロチニブ（Ｃ−１）、ラパチニブ（Ｃ−２）、またはゲフィチニブ（Ｃ−３）が挙げられ、該トリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）に組み合わせて用いる抗腫瘍剤として例示することができる。特に好ましいＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）としてはエルロチニブ（Ｃ−１）であり、該トリアゾール化合物（Ａ）、ゲムシタビン（Ｂ）及びエルロチニブ（Ｃ−１）を組み合わせた抗腫瘍剤を挙げる事ができる。
これらのＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、賦形剤と共に医薬製剤として調製したものを用いて良い。特にエルロチニブ（Ｃ−１）、ラパチニブ（Ｃ−２）、またはゲフィチニブ（Ｃ−３）は、それぞれエルロチニブ・塩酸塩（タルセバ（登録商標）錠）、ラパチニブ・トシル酸塩（タイケルブ（登録商標）錠）、ゲフィチニブ（イレッサ（登録商標）錠）として経口投与用錠剤が流通している。したがって、該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）は、市場流通品をそのまま用いて良く、経口的に投与する事が好ましい。
【００３２】
該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）の１回当たりの投与量は、公知の薬理活性結果に基づき１〜５０００ｍｇで用いる事が好ましい。特に、該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）としてエルロチニブを用いる場合、１回当たりの投与量は５０〜３００ｍｇであり連日投与することが好ましい。因みに、エルロチニブの臨床使用は、成人に対しエルロチニブ・塩酸塩として１００ｍｇまたは１５０ｍｇを１日１回経口的に投与する投与用法が推奨されている。また、ラパチニブを用いる場合は、１回当たりの投与量は５００〜３０００ｍｇであり、連日投与することが好ましい。一般的にラパチニブは、成人に対しラパチニブ・トシル酸塩として１２５０ｍｇを１日１回、経口的に投与されており、乳癌治療においてはカペシタビンとの併用で用いられている。また、ゲフィチニブを用いる場合は、１回当たりの投与量は１００〜５００ｍｇであり、連日投与することが好ましい。ゲフィチニブの推奨投与用法は、成人に対し経口投与にて１日１回、ゲフィチニブとして２５０ｍｇを用いることである。本発明において、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）は、それぞれの臨床推奨投与用量で用いる事が好ましく、推奨投与用量を基準に適宜、増減用量して用いることが好ましい。
【００３３】
本発明の該トリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）、及び任意にＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）を組み合わせた抗腫瘍剤は、更に他の抗腫瘍剤を組み合せて用いる事もできる。他の抗腫瘍剤は特に限定されるものではなく、抗腫瘍剤として認可されている医薬品を用いる事ができる。すなわち、シクロホスファミド、イホスファミド、マイトマイシンＣ等のアルキル化剤、シスプラチン、カルボプラチン、オギザリプラチン等の白金錯体、ドキソルビシン、エピルビシン、ピラルビシン、アムルビシン等のアントラサイクリン系抗腫瘍剤、エトポシド、エトポシドホスフェート、テニポシド等のエトポシド類、イリノテカン、ノギテカン等のカンプトテシン類、パクリタキセル、ドセタキセル等のタキサン類、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン等のビンカアルカロイド類、５‐フルオロウラシル、テガフール、テガフール・ウラシル合剤（ＵＦＴ）、テガフール・ギメラシル・オテラシルカルシウム合剤（Ｓ−１）、フルツロン、カペシタビン、シトシンアラビノシド等の核酸代謝拮抗剤、メトトレキサート、ペメトレキセド等の葉酸代謝拮抗剤、プレドニゾロン、デキサメタゾン等のステロイド類、トラスツズマブ、セツキシマブ等の抗ＥＧＦＲ抗体、ベバシズマブ等の抗ＶＥＧＦ抗体を用いることができる。
【００３４】
本発明の特に好ましいトリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）の組み合わせ例を挙げる。
該トリアゾール化合物（Ａ）は、５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン；（Ａ−１）を用いる事が好ましく、前記（Ａ−１）とゲムシタビンの組み合わせは、非小細胞肺癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、の治療において有効である。すなわち、該（Ａ−１）とゲムシタビン（Ｂ）の各有効用量を投与する事を含む非小細胞肺癌、膵癌、乳癌、卵巣癌の治療方法を提供する事ができる。
また、前記（Ａ−１）とゲムシタビン（Ｂ）に、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）としてエルロチニブ（Ｃ−１）を組み合わせが好ましい。前記（Ａ−１）、ゲムシタビン（Ｂ）及びエルロチニブ（Ｃ−１）の組み合わせは、非小細胞肺癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、の治療において有効である。すなわち、該（Ａ−１）とゲムシタビン（Ｂ）及びエルロチニブ（Ｃ−１）の各有効用量を投与する事を含む非小細胞肺癌、膵癌、乳癌、卵巣癌の治療方法を提供する事ができる。
【００３５】
本願は、ゲムシタビンを用いる癌治療において、前記トリアゾール化合物（Ａ）がゲムシタビンの抗腫瘍効果を増強する作用を示す事を見出したことに基づき、該トリアゾール化合物（Ａ）がゲムシタビンの抗腫瘍効果増強剤となる新たな用途発明を開示するものである。また、別の発明の態様として、ゲムシタビンとＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の併用療法を用いる癌治療において、前記トリアゾール化合物（Ａ）が、ゲムシタビンとＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の併用療法の抗腫瘍効果を増強する作用を示す事を見出したことに基づき、該トリアゾール化合物（Ａ）が、ゲムシタビンとＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の併用療法の抗腫瘍効果増強剤となる新たな用途発明を開示するものである。
また、本願の更に別の観点では、前記トリアゾール化合物（Ａ）をゲムシタビンと併用で投与する事による、ゲムシタビンの抗腫瘍効果を増強する方法を開示するものである。加えて、前記トリアゾール化合物（Ａ）を、ゲムシタビンとＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の併用療法に更に併用で投与する事による、ゲムシタビンとＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の併用療法の抗腫瘍効果を増強する方法を開示するものである。
【００３６】
ゲムシタビンの抗腫瘍効果増強を目的に、該トリアゾール化合物（Ａ）を用いるためには、ゲムシタビンの至適許容投与量で単回または間歇的に投与する設定にて、該トリアゾール化合物（Ａ）の至適用量を単回、間歇、または連日投与をする事により達成される。
該トリアゾール化合物（Ａ）の成人に対する１回当たりの投与量は０．１〜１０００ｍｇで用いる事が好ましい。これを単回投与、若しくは間歇的に投与する事が好ましい。
ゲムシタビンの１回当たりの投与量は、公知の薬理活性結果に基づき１〜１０００ｍｇで用いる事が好ましく、これらを適宜組み合せて用いることができる。臨床においてゲムシタビンは、成人に対して１０００〜１２５０ｍｇ／ｍ２（体表面積当たり）を点滴静脈内投与し、これを１週間毎に２乃至３回繰り返す投与方法が推奨されている。本発明において、ゲムシタビン（Ｂ）は臨床推奨投与用量で用いる事が好ましく、推奨投与用量を基準に適宜、増減用量して用いることが好ましい。
【００３７】
また、ゲムシタビンとＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の併用療法の抗腫瘍効果増強を目的に、該トリアゾール化合物（Ａ）を用いるためには、ゲムシタビン及びＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の併用療法の至適許容投与量で、それぞれを連日または間歇的に投与する設定にて、該トリアゾール化合物（Ａ）の至適用量を単回、間歇、または連日投与をする事により達成される。
該トリアゾール化合物（Ａ）の成人に対する１回当たりの投与量は０．１〜１０００ｍｇで用いる事が好ましい。これを単回投与、若しくは間歇的に投与する事が好ましい。
ゲムシタビンの１回当たりの投与量は、公知の薬理活性結果に基づき１〜１０００ｍｇで用いる事が好ましい。臨床においてゲムシタビンは、成人に対して１０００〜１２５０ｍｇ／ｍ２（体表面積当たり）を点滴静脈内投与し、これを１週間毎に２乃至３回繰り返す投与方法が推奨されている。
また、該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）の１回当たりの投与量は、公知の薬理活性結果に基づき１〜５０００ｍｇで用いる事が好ましく、これらを適宜組み合せて用いることができる。該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤としてエルロチニブを用いる場合、１回当たりの投与量は５０〜３００ｍｇであり連日投与することが好ましい。因みに、臨床使用におけるエルロチニブのゲムシタビンとの併用療法におけるエルロチニブの用法は、成人に対し１００ｍｇを１日１回経口的に投与することが投与用法として推奨されている。
本発明において、ゲムシタビンは臨床推奨投与用量で用いる事が好ましく、推奨投与用量を基準に適宜、増減用量して用いることが好ましい。また、ゲムシタビンとＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の併用療法は臨床推奨投与用量で用いる事が好ましく、推奨投与用量を基準に適宜、増減用量して用いることが好ましい。
【００３８】
すなわち本発明によると、ゲムシタビン、またはゲムシタビンとＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の併用療法による悪性腫瘍治療において、該トリアゾール化合物（Ａ）を併せて使用する事により、抗腫瘍効果の増強作用が発揮され、より高い治療効果を達成できる。若しくは、ゲムシタビン、またはゲムシタビンとＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の併用療法に対する薬剤感受性が低下した悪性腫瘍に対しても、ゲムシタビン、またはゲムシタビンとＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の併用療法の薬剤治療に、該トリアゾール化合物（Ａ）を組み合わせることで薬剤感受性を回復させる事ができ、ゲムシタビン、またはゲムシタビンとＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の併用療法による薬物治療を長期に継続させることができる。更に、それぞれ抗腫瘍剤の単独使用と同程度の抗腫瘍効果を得る場合において、各々の抗腫瘍剤の用量を相対的に減量することができ、望ましくない薬理作用の発現を抗腫瘍効果に悪影響を及ぼすことなく軽減する事ができる。
【実施例】
【００３９】
本発明の一般式（１）で表されるトリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）を組み合せて用いる事の有用性を実施例にて説明する。
１．供試薬剤
本発明の一般式（１）で表されるトリアゾール化合物（Ａ）として、５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン；（Ａ−１）を用いた。当該（Ａ−１）は、国際公開ＷＯ２００６／０９５７８３号の実施例２−５に開示される製造方法に従い合成した。また、比較例として公知のＨＳＰ９０阻害剤である比較トリアゾール化合物（化合物Ｄ；Ｇａｎｅｔｅｓｐｉｂ）を用いた。該比較トリアゾール化合物（化合物Ｄ：Ｇａｎｅｔｅｓｐｉｂ）は、国際公開ＷＯ２００７／１３９９５２号の実施例４に開示される製造方法に従い合成した。ゲムシタビン（Ｂ）はジェムザール（登録商標）注射用２００ｍｇを用いた。エルロチニブ（Ｃ−１）はＥｒｌｏｔｉｎｉｂ  Ｈｙｄrｏｃｈｌｏrｉｄｅ（ＬＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）を用いた。
ゲムシタビン（Ｂ）は日本薬局方生理食塩液に溶解して投与に供した。エルロチニブ（Ｃ）は６％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標、Ｃｙｄｅｘ社製）に溶解して投与に供した。比較トリアゾール化合物（Ｄ：Ｇａｎｅｔｅｓｐｉｂ）はジメチルスルフォキシドに溶解し、クレモフォール（登録商標）ＲＨ４０を２０％含有させた日本薬局方ブドウ糖注射液で１０倍希釈して投与に供した。トリアゾール（Ａ−１）は日本薬局方ブドウ糖注射液に溶解して投与に供した。
【００４０】
２．移植腫瘍
ヒト膵臓癌細胞株であるＢｘＰｃ−３（ＡＴＣＣカタログナンバー、ＣＲＬ−１６８７）を、１０％ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ−１６４０メディウム中で増殖させた。増殖させたＢｘＰｃ−３細胞は、１×１０７個程度をＨＢＳＳにて懸濁し、ヌードマウス皮下に注射した。細胞が腫瘍を形成したのち、腫瘍を取り出して腫瘍片を作成し、ヌードマウス皮下へ套管針を用いて移植した。同様の操作で移植を繰り返し、腫瘍を維持させ、移植腫瘍を調製した。
また、ヒト膵臓癌細胞株であるＨＰＡＣ（ＡＴＣＣカタログナンバー、ＣＲＬ−２１１９）を、０．００２ｍｇ／ｍＬインシュリン、０．００５ｍｇ／ｍＬトランスフェリン、４０ｎｇ／ｍＬヒドロコルチゾン、１０ｎｇ／ｍL  ＥＧＦ、５％ＦＢＳを添加したＤ−ＭＥＭ／Ｆ−１２メディウム中で増殖させた。増殖させたＨＰＡＣ細胞は、１×１０７個程度をＨＢＳＳにて懸濁し、ヌードマウス皮下に注射した。細胞が腫瘍を形成したのち、腫瘍を取り出して腫瘍片を作成し、ヌードマウス皮下へ套管針を用いて移植した。同様の操作で移植を繰り返し、腫瘍を維持させ、移植腫瘍を調製した。
【００４１】
３．腫瘍皮下移植マウスによる抗腫瘍試験
ヌードマウスで継代維持したヒト膵臓癌腫瘍であるＢｘＰｃ−３またはＨＰＡＣを、各ヌードマウスの背側部皮下に套管針を用いて移植した。腫瘍体積が概ね１００〜１５０ｍｍ３に達したときに、供試薬剤の投与を開始した。腫瘍の計測は，投与開始日から観察期間終了まで週２回行い、腫瘍の長径（Ｌ）と短径（Ｗ）をノギスを用いて測定した。計測した腫瘍の長径と短径を用いて、腫瘍体積を式（Ｌ×Ｗ２×１／２）から算出した。
【００４２】
［試験例１］
ヒト膵臓癌腫瘍ＢｘＰｃ−３皮下移植ヌードマウスをヒト膵臓癌異種移植片モデルとして用いて、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ−１）とゲムシタビン（Ｂ）を組み合わせた抗腫瘍効果を、各（Ａ−１）、ゲムシタビン（Ｂ）及び比較トリアゾール（化合物Ｄ；Ｇａｎｅｔｅｓｐｉｂ）の各単独投与、並びに比較トリアゾール化合物（Ｄ）とゲムシタビン（Ｂ）の併用投与による抗腫瘍効果と比較した。
各薬剤の投与量及び用法は、トリアゾール化合物（Ａ−１）は１０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を６回、尾静脈内に投与した。ゲムシタビン（Ｂ）は１５０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を６回、尾静脈内に投与した。比較例トリアゾール化合物（Ｄ）は１５０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を６回、尾静脈内に投与した。併用投与は、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ−１）とゲムシタビン（Ｂ）の併用投与は、該トリアゾール化合物（Ａ−１）を１０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を６回、尾静脈内に投与すると共に、ゲムシタビン（Ｂ）を１５０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を６回、尾静脈内に投与した。また、比較トリアゾール化合物（Ｄ）とゲムシタビン（Ｂ）の併用投与は、該トリアゾール化合物（Ｄ）を１５０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を６回、尾静脈内投与すると共に、ゲムシタビン（Ｂ）を１５０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を６回、尾静脈内に投与した。
各薬剤投与群（５群）に無投与群（コントロール群）を加えて、異種移植片モデル各群５匹にて抗腫瘍試験を行なった。投与開始から４２日目における各群腫瘍体積を、無投与群の腫瘍体積を１００とした相対腫瘍体積（Ｔ／Ｃ（％））として表１に示した。Ｔ／Ｃ（％）は、式（投与群相対腫瘍体積／無投与群相対腫瘍体積×１００）により算出した。また、投与開始日の腫瘍体積を１とした相対腫瘍体積を算出した経時的腫瘍増殖曲線を図１に示した。
【００４３】
［表１］ヒト膵臓癌腫瘍ＢｘＰｃ−３皮下移植ヌードマウスによる抗腫瘍効果試験結果
2014034531.tif 000009
【００４４】
本試験例１において、比較トリアゾール化合物（Ｄ）群で２匹、比較トリアゾール化合物（Ｄ）とゲムシタビン（Ｂ）の併用投与群において１匹の毒性死が認められた。したがって比較トリアゾール化合物及び比較トリアゾール化合物とゲムシタビンの併用投与は、最大耐性投与量以上の用量設定の可能性がある。
表１及び図１から明らかなように、投与開始後から４２日目において、ゲムシタビン（Ｂ）は無投与群に対して７０％の腫瘍増殖抑制をもたらした。トリアゾール化合物（Ａ−１）の単独投与は３８％の増殖抑制をもたらした。これに対し、該トリアソール化合物（Ａ−１）とゲムシタビン（Ｂ）を組み合わせて投与すると、腫瘍増殖抑制作用が８５％と強力に増強された抗腫瘍効果がもたらされた。一方、比較トリアゾール化合物（Ｄ）の単独投与は５０％の増殖抑制を示し、トリアゾール化合物（Ａ−１）の単独投与を上回る抗腫瘍効果を示した。それにも関わらず、該比較トリアゾール化合物（Ｄ）とゲムシタビン（Ｂ）の併用投与は８０％の増殖抑制作用であり、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ−１）とゲムシタビン（Ｂ）の併用投与による抗腫瘍効果より劣る結果となった。比較トリアゾール化合物（Ｄ）投与群、及び比較トリアゾール化合物（Ｄ）とゲムシタビン（Ｂ）の併用群において毒性死亡例が認められており、過剰投与量傾向であったことを考慮すると、トリアゾール化合物（Ａ−１）とゲムシタビン（Ｂ）の併用投与が、比較トリアゾール化合物（Ｄ）とゲムシタビン（Ｂ）の併用投与と比較して、顕著に優れた抗腫瘍効果を奏する事が示された。
以上の結果は、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）を組み合わせて投与する薬物治療が、既存のＨＳＰ９０阻害剤とゲムシタビンの併用と比較して優れた抗腫瘍効果を奏することを明らかとすることができた。
【００４５】
［試験例２］
ヒト膵臓癌腫瘍ＨＰＡＣ皮下移植ヌードマウスをヒト膵臓癌異種移植片モデルとして用いて、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ−１）とゲムシタビン（Ｂ）を組み合わせた抗腫瘍効果を、トリアゾール化合物（Ａ−１）、ゲムシタビン（Ｂ）の各単独投与による抗腫瘍効果と比較した。
各薬剤の投与量及び用法は、トリアゾール化合物（Ａ−１）は２０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を３回、尾静脈内に投与した。ゲムシタビン（Ｂ）は２０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を３回、尾静脈内に投与した。これに対し、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ−１）とゲムシタビン（Ｂ）の併用投与は、該トリアゾール化合物（Ａ−１）を２０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を３回、尾静脈内に投与すると共に、ゲムシタビン（Ｂ）を２０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を３回、尾静脈内に投与した。
各薬剤投与群（３群）に無投与群（コントロール群）を加えて、異種移植片モデル各群５匹にて抗腫瘍試験を行なった。投与開始から２１日目における各群腫瘍体積を、無投与群の相対腫瘍体積を１００とした相対腫瘍体積（Ｔ／Ｃ（％））を表２に示した。Ｔ／Ｃ（％）は、式（投与群相対腫瘍体積／無投与群相対腫瘍体積×１００）により算出した。また、投与開始日の腫瘍体積を１とした相対腫瘍体積を算出した経時的腫瘍増殖曲線を図２に示した。
【００４６】
［表２］ヒト膵臓癌腫瘍ＨＰＡＣ皮下移植ヌードマウスによる抗腫瘍効果試験結果
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【００４７】
表２及び図２から明らかなように、投与開始後から２１日目において、ゲムシタビン（Ｂ）は無投与群に対して５３％の腫瘍増殖抑制をもたらした。また、トリアゾール化合物（Ａ−１）は４５％の増殖抑制をもたらした。これに対し、該トリアゾール化合物（Ａ−１）とゲムシタビン（Ｂ）を組み合わせて投与すると、腫瘍増殖抑制作用が８５％と抗腫瘍効果の顕著な増強がもたらされた。以上の結果から、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）を組み合わせて投与する薬物治療が、優れた抗腫瘍効果を達成できることが示された。
【００４８】
［試験例３］
ヒト膵臓癌腫瘍ＢｘＰｃ−３皮下移植ヌードマウスをヒト膵臓癌異種移植片モデルとして用いて、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ−１）、ゲムシタビン（Ｂ）、及び上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）としてエルロチニブ（Ｃ−１）を組み合わせた抗腫瘍効果を、トリアゾール化合物（Ａ−１）、ゲムシタビン（Ｂ）及びエルロチニブ（Ｃ−１）の各単独投与による抗腫瘍効果と比較した。
各薬剤の投与量及び用法は、トリアゾール（Ａ−１）は２０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を３回、尾静脈内に投与した。ゲムシタビン（Ｂ）は１５０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を３回、尾静脈内に投与した。エルロチニブ（Ｃ−１）は５０ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回回を２１日間、経口的に投与した。これに対し、本発明に係るトリアゾール（Ａ−１）とゲムシタビン（Ｂ）及びエルロチニブ（Ｃ−１）の併用投与は、該トリアゾール化合物（Ａ−１）を２０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を３回、尾静脈内に投与すると共に、ゲムシタビン（Ｂ）を１５０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を３回、尾静脈内に投与し、更にエルロチニブ（Ｃ−１）を５０ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回を２１日間、経口的に投与した。
各薬剤投与群（４群）に無投与群（コントロール群）を加えて、異種移植片モデル各群５匹にて抗腫瘍試験を行なった。投与開始から２１日目における各群腫瘍体積を、無投与群の相対腫瘍体積を１００とした相対腫瘍体積（Ｔ／Ｃ（％））を表３に示した。Ｔ／Ｃ（％）は、式（投与群相対腫瘍体積／無投与群相対腫瘍体積×１００）により算出した。また、投与開始日の腫瘍体積を１とした相対腫瘍体積を算出した経時的腫瘍増殖曲線を図３に示した。
【００４９】
［表３］ヒト膵臓癌腫瘍ＢｘＰｃ−３皮下移植ヌードマウスによる抗腫瘍効果試験結果
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【００５０】
表３及び図３から明らかなように、投与開始後から２１日目において、ゲムシタビン（Ｂ）は無投与群に対して５６％の腫瘍増殖抑制をもたらした。また、トリアゾール化合物（Ａ−１）は５１％の増殖抑制をもたらした。エルロチニブ（Ｃ−１）は３４％の増殖抑制をもたらした。これに対し、該トリアゾール化合物（Ａ−１）とゲムシタビン（Ｂ）及びエルロチニブ（Ｃ−１）を組み合わせて投与すると、腫瘍増殖抑制作用が９６％と抗腫瘍効果の顕著な増強がもたらされた。
以上の結果から、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ）とゲムシタビン（Ｂ）及びＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｃ）を組み合わせて投与する薬物治療が、優れた抗腫瘍効果を達成できることが示された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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