(57)【要約】【課題】処理すべき液体を、無駄なく優れた精度で処理することができる処理装置を提供すること。【解決手段】本発明の処理装置１は、複数のウェル１０１を備えるウェル形成部１０８と、ウェル形成部１０８の底面の周囲を取り囲むように配置されたフレーム部１０９とを有し、ウェル形成部１０８に対応する位置に底面側で凹部１１０が形成されているマルチウェルフィルタープレート１００と、マルチウェルフィルタープレート１００の下側に配置され、複数のウェル２０１を備えるウェル形成部２０２を有し、ウェル形成部２０２が凹部１１０に挿入可能な大きさに設定されているマルチウェルプレート２００とを備え、マルチウェルプレート２００は、マルチウェルフィルタープレート１００の下側に配置する際に凹部１１０内にウェル形成部２０２が挿入され、これにより、ウェル形成部２０２の上端が上下方向でフレーム部１０９の下端より上側に位置する。【選択図】図３
2014070188.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の第１のウェル、該第１のウェルの底部に収納されたフィルター、および前記第１のウェルの底面を貫通する貫通孔を備える第１のウェル形成部と、該第１のウェル形成部の前記底面側の周囲を取り囲むように配置された第１の外枠部とを有し、前記第１のウェル形成部に対応する位置に、前記底面側で凹部が形成されているマルチウェルフィルタープレートと、
該マルチウェルフィルタープレートの下側に配置され、複数の前記第１のウェルに対応する複数の第２のウェルを備える第２のウェル形成部を有し、該第２のウェル形成部が前記凹部に挿入可能な大きさに設定されているマルチウェルプレートとを備える処理装置であって、
前記マルチウェルプレートは、前記マルチウェルフィルタープレートの下側に配置する際に、前記凹部内に前記第２のウェル形成部が挿入され、これにより、前記第２のウェル形成部の上端が、上下方向で、前記第１の外枠部の下端より上側に位置するように設定されていることを特徴とする処理装置。
【請求項２】
前記マルチウェルフィルタープレートは、複数の前記第２のウェルが臨む前記底面に、それぞれ、下側に突出する複数の突出部を備え、
該突出部の下端は、上下方向で、前記第２のウェルの上端と一致、または前記第２のウェルの上端より下側に位置する請求項１に記載の処理装置。
【請求項３】
前記突出部は、前記第２のウェルに挿通可能な大きさに設定される請求項２に記載の処理装置。
【請求項４】
前記第１のウェル形成部と前記第２のウェル形成部との離間距離は、１０ｍｍ以下である請求項１ないし３のいずれかに記載の処理装置。
【請求項５】
前記マルチウェルプレートは、前記第２のウェル形成部を取り囲むように配置された第２の外枠部を有し、
前記第２のウェル形成部は、その上端が前記第２の外枠部の上端から突出している請求項１ないし４のいずれかに記載の処理装置。
【請求項６】
前記マルチウェルフィルタープレートの前記第１のウェルの上下に生じた力差に基づいて、前記フィルターおよび前記貫通孔を介して、前記第１のウェルの下側に流出された液体が、前記マルチウェルプレートの前記第２のウェル内に供給される請求項１ないし５のいずれかに記載の処理装置。
【請求項７】
前記力差は、圧力差である請求項６に記載の処理装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、処理装置、特に、糖タンパク質が有する糖鎖を精製する際に用いられる処理装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖鎖とは、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、キシロース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、シアル酸等の単糖およびこれらの誘導体がグリコシド結合によって鎖状に複数結合した分子の総称である。
【０００３】
糖鎖は、非常に多様性に富んでおり、天然に存在する生物が有する様々な機能に関与する物質である。糖鎖は生体内でタンパク質や脂質等に結合した複合糖質として存在することが多く、生体内の重要な構成成分の一つである。生体内の糖鎖は細胞間情報伝達、タンパク質の機能や相互作用の調整等に深く関わっていることが明らかになりつつある。
【０００４】
糖鎖を有する生体高分子としては、例えば、細胞の安定化に寄与する植物細胞の細胞壁のプロテオグリカン、細胞の分化、増殖、接着、移動等に影響を与える糖脂質、および細胞間相互作用や細胞認識に関与している糖タンパク質等が挙げられるが、これらの高分子の糖鎖が、互いに機能を代行、補助、増幅、調節、あるいは阻害しあいながら高度で精密な生体反応を制御する機構が次第に明らかにされつつある。さらに、このような糖鎖と細胞の分化増殖、細胞接着、免疫、および細胞の癌化との関係が明確にされれば、この糖鎖工学と、医学、細胞工学、あるいは臓器工学とを密接に関連させて新たな展開を図ることが期待できる（非特許文献１）。
【０００５】
特に細胞表面に存在する糖鎖は、様々な生体反応の足場として重要な役割をしている事が明らかとなってきた。例えば、レセプターとの相互作用異常による疾病の発生、あるいはエイズウイルスやインフルエンザウイルス等の感染、病原性大腸菌Ｏ１５７の毒素やコレラ毒素の細胞への侵入に関わるとされている。また、ある種の癌細胞では特異的な糖鎖が細胞表面に現れる等、細胞表面糖鎖は細胞に個性をあたえる重要な分子とされている。
【０００６】
これらの解析のため、糖鎖構造解析の技術が開発されており、これらの技術は、複合糖質からの糖鎖切り出し、糖鎖の分離精製、糖鎖の標識化等の工程を組み合わせたものであるが、これらの工程はきわめて煩雑である。
【０００７】
具体的には、細胞表面の糖鎖を解析する方法として、例えば、糖鎖を含有する溶液を用意する工程と、糖鎖を含有する溶液を糖鎖と特異的に結合する捕捉担体に接触させて、この捕捉担体上に糖鎖を捕捉する工程と、捕捉担体に結合した糖鎖以外の物質を除去する工程と、捕捉担体に結合した糖鎖を再遊離させる工程と、再遊離した糖鎖を捕捉担体と分離して精製する工程とを有する方法が提案されている（例えば、特許文献１参照。）。
【０００８】
このような糖鎖の解析方法において、例えば、再遊離した糖鎖を捕捉担体と分離して精製する工程では、フィルターを備えるウェルを複数有するマルチウェルフィルタープレートを用いて、ウェルの上下で圧力差を生じさせることで、フィルターにより、溶液中に含まれる再遊離した糖鎖と、捕捉担体とを分離し、その後、マルチウェルフィルタープレートの下側に、複数のウェルを有するマルチウェルプレートを配置し、マルチウェルフィルタープレートのウェルに対応する、マルチウェルプレートのウェルに、再遊離した糖鎖を含む溶液を選択的に供給させることにより、再遊離した糖鎖が精製される。
【０００９】
この再遊離した糖鎖を精製する工程で、その精製率を向上させるには、再遊離した糖鎖を含む溶液が、マルチウェルフィルタープレートが有するウェルから、これに対応するマルチウェルプレートが有するウェルへ優れた精度で受け渡しされることが求められる。しかしながら、再遊離した糖鎖を含む溶液のウェル同士間の受け渡しが、マルチウェルフィルタープレートが有するウェルの上下で生じさせた圧力差を用いて行われていることに起因して、前記圧力差の大きさによっては、フィルターを透過した糖鎖を含む溶液が飛散する。その結果、マルチウェルプレートの隣接するウェル同士間で、コンタミが生じるため、再遊離した糖鎖の精製率が低下するという問題が生じる。
【００１０】
なお、このような問題は、マルチウェルフィルタープレートとマルチウェルプレートとを用いた糖鎖の精製に限らず、これらを用いたサイズ除去、ビーズ・レジン・ベースアッセイ、サンプル濃縮・脱塩・精製等についても同様に生じている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開第２００９−１３３６９６号公報
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ioffe  E.,  Stanley  P.,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.,  91,  pp.728−732  （1994）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は、処理すべき液体を、無駄なく優れた精度で処理することができる処理装置を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
このような目的は、下記（１）〜（７）に記載の本発明により達成される。
（１）  複数の第１のウェル、該第１のウェルの底部に収納されたフィルター、および前記第１のウェルの底面を貫通する貫通孔を備える第１のウェル形成部と、該第１のウェル形成部の前記底面側の周囲を取り囲むように配置された第１の外枠部とを有し、前記第１のウェル形成部に対応する位置に、前記底面側で凹部が形成されているマルチウェルフィルタープレートと、
該マルチウェルフィルタープレートの下側に配置され、複数の前記第１のウェルに対応する複数の第２のウェルを備える第２のウェル形成部を有し、該第２のウェル形成部が前記凹部に挿入可能な大きさに設定されているマルチウェルプレートとを備える処理装置であって、
前記マルチウェルプレートは、前記マルチウェルフィルタープレートの下側に配置する際に、前記凹部内に前記第２のウェル形成部が挿入され、これにより、前記第２のウェル形成部の上端が、上下方向で、前記第１の外枠部の下端より上側に位置するように設定されていることを特徴とする処理装置。
【００１５】
（２）  前記マルチウェルフィルタープレートは、複数の前記第２のウェルが臨む前記底面に、それぞれ、下側に突出する複数の突出部を備え、
該突出部の下端は、上下方向で、前記第２のウェルの上端と一致、または前記第２のウェルの上端より下側に位置する上記（１）に記載の処理装置。
【００１６】
（３）  前記突出部は、前記第２のウェルに挿通可能な大きさに設定される上記（２）に記載の処理装置。
【００１７】
（４）  前記第１のウェル形成部と前記第２のウェル形成部との離間距離は、１０ｍｍ以下である上記（１）ないし（３）のいずれかに記載の処理装置。
【００１８】
（５）前記マルチウェルプレートは、前記第２のウェル形成部を取り囲むように配置された第２の外枠部を有し、
前記第２のウェル形成部は、その上端が前記第２の外枠部の上端から突出している上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の処理装置。
【００１９】
（６）  前記マルチウェルフィルタープレートの前記第１のウェルの上下に生じた力差に基づいて、前記フィルターおよび前記貫通孔を介して、前記第１のウェルの下側に流出された液体が、前記マルチウェルプレートの前記第２のウェル内に供給される上記（１）ないし（５）のいずれかに記載の処理装置。
（７）  前記力差は、圧力差である上記（６）に記載の処理装置。
【発明の効果】
【００２０】
本発明の処理装置によれば、処理すべき液体を、無駄なく優れた精度で処理することができるため、液体の無駄を的確に防止または抑制することができる。また、同時に複数種の液体（多検体）を処理することが可能となる。
【００２１】
そのため、この処理装置を、糖鎖の分離に用いた場合には、簡単な作業でかつ無駄なく優れた精度で糖鎖をハイスループットに分離することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】糖鎖の精製方法に用いられる精製装置の第１実施形態を示す分解斜視図である。
【図２】糖鎖の精製方法に用いられる精製装置の第１実施形態を示す斜視図である。
【図３】図２に示す精製装置のＡ−Ａ線断面図である。
【図４】糖タンパク質から糖鎖を精製する糖鎖の精製方法を説明するための縦断面図である。
【図５】糖タンパク質から糖鎖を精製する糖鎖の精製方法を説明するための縦断面図である。
【図６】糖タンパク質から糖鎖を精製する糖鎖の精製方法を説明するための縦断面図である。
【図７】糖タンパク質から糖鎖を精製する糖鎖の精製方法を説明するための縦断面図である。
【図８】糖鎖の精製方法に用いられる精製装置の第２実施形態を示す縦断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下、本発明の処理装置について、好適実施形態に基づいて詳細に説明する。
なお、以下では、本発明の処理装置を、糖タンパク質が有する糖鎖の精製方法に用いられる精製装置に適用した場合を一例に説明する。
【００２４】
＜精製装置＞
＜＜第１実施形態＞＞
まず、精製装置の第１実施形態について説明する。
【００２５】
図１は、糖鎖の精製方法に用いられる精製装置の第１実施形態を示す分解斜視図、図２は、糖鎖の精製方法に用いられる精製装置の第１実施形態を示す斜視図、図３は、図２に示す精製装置のＡ−Ａ線断面図（なお、図３（ａ）は、精製装置にマルチウェルプレートを装着した場合を表し、図３（ｂ）は、精製装置にトレイを装着した場合を表す。）である。なお、説明の都合上、以下の説明では、図１〜図３中の上側を「上」、下側を「下」と言う。
【００２６】
図１〜図３に示す精製装置１は、マルチウェルフィルタープレート１００と、このマルチウェルフィルタープレート１００を支持する第１の支持台４００と、マルチウェルプレート２００と、トレイ３００と、これらマルチウェルプレート２００またはトレイ３００を支持する第２の支持台５００とを有している。
【００２７】
マルチウェルフィルタープレート１００は、第１の支持台４００が備える凹部４０５内に挿入して用いられるものであり、全体形状が平板状をなし、その厚さ方向（上下方向）に設けられた、複数（本実施形態では９６個）のウェル（穴部）１０１を備えている。
【００２８】
これらのウェル（第１のウェル）１０１は、それぞれ、図３に示すように、その下側に底面１０３を備える構成をなしており、さらに、この底面１０３のほぼ中心に対応して、貫通孔１０４が設けられている。これにより、この貫通孔１０４を介した、ウェル１０１に供給（収納）された液体の外部への流出が、底面１０３側から許容される。
【００２９】
貫通孔１０４の孔径は、好ましくは０．１ｍｍ〜１ｍｍ程度、より好ましくは０．２ｍｍ〜０．７ｍｍ程度に設定される。
【００３０】
また、マルチウェルフィルタープレート１００は、複数のウェル１０１が形成されたウェル形成部（第１のウェル形成部）１０８と、このウェル形成部１０８の底面１０３側の周囲（外周部）を取り囲むように枠状に配置されたフレーム部（第１の外枠部）１０９とを有する構成をなしている。
【００３１】
このフレーム部１０９を備えるものとすることで、マルチウェルフィルタープレート１００は、ウェル形成部１０８に対応する位置に、底面１０３側で凹部１１０が形成されている形状をなすものとなる。そのため、ウェル形成部１０８の底面（下面）１０３は、マルチウェルフィルタープレート１００の厚さ方向（上下方向）で、フレーム部１０９の下端（下面）よりも上側に位置している。
【００３２】
さらに、ウェル１０１の下側（底面１０３側）には、貫通孔１０４を塞ぐようにフィルター１０５が配置されている。このフィルター１０５と貫通孔１０４の孔径との関係により、マルチウェルフィルタープレート１００の静置時には、ウェル１０１に供給された液体が貫通孔１０４を介して、その外部へ流出することが阻害される。
【００３３】
これに対して、後述するように、マルチウェルフィルタープレート１００を精製装置１に装着して、吸引ポンプを用いて、第２の支持台５００が有する凹部５０５内を吸引した際には、前記液体のフィルター１０５の透過が許容される。そのため、前記液体が貫通孔１０４を介して、その外部に、底面１０３側から流出される。
【００３４】
フィルター１０５の素材としては、特に限定されないが、例えば、多孔性フィルムおよび不織布等が挙げられる。また、その構成材料としては、ポリテトラフルオロエチレン、セルロースエステル、フッ化ビニリデン、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレンおよびナイロン等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００３５】
なお、このフィルター１０５には親水処理が施されているのが好ましい。これにより、前記液体の透過性の向上を図ることができる。
【００３６】
この親水処理は、例えば、界面活性剤、水溶性シリコン、ポリプロピレングリコール等を付与（塗布）等することにより行うことができる。
【００３７】
フィルター１０５が備える細孔の孔径は、好ましくは０．１〜５０μｍ程度、より好ましくは０．２〜２０μｍ程度、さらに好ましくは０．４〜１０μｍに設定される。これにより、前記液体に含まれる液状成分の透過は許容されるとともに、後述するようなポリマー粒子２０の透過は確実に許容されなくなる。
【００３８】
なお、マルチウェルフィルタープレート１００のフィルター１０５を除く各部の構成材料としては、特に限定されないが、例えば、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリテトラフルオロエチレン等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００３９】
第１の支持台４００は、マルチウェルフィルタープレート１００を支持するための部材であり、平板状をなし、その中央部で開口する開口部４０２を備える底部４０１と、底部４０１の外縁に沿って上方に突出するように設けられた上側外壁４０３と、底部４０１の外縁に沿って下方に突出するように設けられた下側外壁４０４とを有している。
【００４０】
このような上側外壁４０３で取り囲まれることにより凹部４０５が形成され、この凹部４０５内に、マルチウェルフィルタープレート１００を挿入することで、マルチウェルフィルタープレート１００が第１の支持台４００により支持される。
【００４１】
また、底部４０１の開口部４０２の縁部に沿って溝が設けられており、この溝に対応するようにパッキン（シール部材）４０７が配置されている。これにより、凹部４０５内にマルチウェルフィルタープレート１００を挿入した際に、開口部４０２と精製装置１の外部との連通が許容されなくなる。
【００４２】
また、上側外壁４０３は、対向する２つの長辺の中央部において、厚さ方向（上下方向）に直交する方向に開口部４０８を有する構成をなしており、これにより、凹部４０５内に挿入（載置）されたマルチウェルフィルタープレート１００の出し入れを容易に行うことができるようになる。
【００４３】
さらに、下側外壁４０４で取り囲まれることにより凹部４０６が形成され、この凹部４０６の内周面に沿って、後述する第２の支持台５００が有する突出部５０２を挿入することで、第２の支持台５００上に第１の支持台４００が固定される。
【００４４】
なお、本実施形態では、上側外壁４０３の外周面と下側外壁４０４の外周面とが、一体的に形成されていることで、１つの平坦面により構成されている。
【００４５】
また、第１の支持台４００の構成材料としては、特に限定されないが、例えば、ポリカーボネート、アクリル系樹脂、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン共重合体（ＡＢＳ樹脂）のような樹脂材料、ステンレス鋼等のＦｅ系合金、ＣｕまたはＣｕ系合金、ＡｌまたはＡｌ系合金のような金属系材料、アルミナ、アパタイト、窒化アルミのようなセラミックス系材料等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００４６】
マルチウェルプレート２００は、第２の支持台５００が備える凹部５０５内に挿入して用いられるものである。
【００４７】
このマルチウェルプレート２００は、マルチウェルフィルタープレート１００と同様に、その全体形状が平板状をなし、その厚さ方向（上下方向）に設けられた、複数（本実施形態では９６個）のウェル（穴部）２０１を備えている。
【００４８】
これらのウェル（第２のウェル）２０１は、その下側に底面２０３を備え、この底面２０３側で貫通しない構成をなしており、これにより、ウェル１０１に供給（収納）された液体がその内部に貯留される。
【００４９】
なお、マルチウェルフィルタープレート１００が備える各ウェル１０１と、マルチウェルプレート２００が備える各ウェル２０１とは、各プレート１００、２００同士を、マルチウェルフィルタープレート１００を上側にして上下方向に重ね合わせたとき、それぞれ、上下方向に対応して配置するように設定されている。そのため、後に詳述するように、各ウェル１０１が備える貫通孔１０４を通過して底面１０３側から外部へ流出された液体は、各ウェル１０１に対応するように配置された各ウェル２０１に対して、選択的に供給されることとなる。
【００５０】
また、マルチウェルプレート２００は、複数のウェル２０１が形成されたウェル形成部（第２のウェル形成部）２０２と、このウェル形成部２０２の周囲を取り囲むように配置されたフレーム部（第２の外枠部）２０４とを有する構成をなしており、ウェル形成部２０２の厚さは、フレーム部２０４の厚さより厚くなっている。これにより、ウェル形成部２０２の上面（上端）は、フレーム部２０４の上面（上端）から突出する。
【００５１】
そして、このウェル形成部２０２は、の平面視形状が第１の支持台４００の開口部４０２およびマルチウェルフィルタープレート１００の凹部１１０に挿入可能な大きさに設定されている。したがって、第２の支持台５００の凹部５０５内にマルチウェルプレート２００を配置した状態で、第２の支持台５００上に、第１の支持台４００の凹部４０５内にマルチウェルフィルタープレート１００が配置された第１の支持台４００を載置すると、図３（ａ）に示すように、ウェル形成部２０２を開口部４０２内と凹部１１０内との双方に挿入させることができる。
【００５２】
なお、マルチウェルプレート２００の構成材料としては、例えば、マルチウェルフィルタープレート１００のフィルター１０５を除く各部の構成材料として挙げたものと同様のものが挙げられる。
【００５３】
トレイ３００は、マルチウェルプレート２００と同様に第２の支持台５００が備える凹部５０５内に挿入して用いられるものである。すなわち、精製装置１を用いた糖鎖の精製方法で施される処理の種類に応じて、トレイ３００またはマルチウェルプレート２００が凹部５０５内に挿入される。
【００５４】
このトレイ３００は、上述したマルチウェルプレート２００と、複数のウェル２０１が形成されたウェル形成部２０２に対応する位置に、１つの凹部３０１を備えていること以外は、同様の構成をなしている。
【００５５】
トレイ３００を、このような凹部３０１を備える構成とすることで、図３（ｂ）に示すように、第２の支持台５００の凹部５０５内にトレイ３００を配置した状態で、第２の支持台５００上に第１の支持台４００を載置した際に、マルチウェルフィルタープレート１００の各ウェル１０１から貫通孔１０４を介して流出された液体を、トレイ３００の凹部３０１内に一括して貯留することができるようになる。
【００５６】
なお、トレイ３００は、図１等に示すように、マルチウェルプレート２００のフレーム部２０４に対応する位置で突出する凸部を有する構成に限らず、その中心部側に凹部３０１が形成されている限りにおいて、凸部の形成が省略されたものであってもよい。
【００５７】
また、トレイ３００の構成材料としては、例えば、マルチウェルフィルタープレート１００のフィルター１０５を除く各部の構成材料として挙げたものと同様のものが挙げられる。
【００５８】
調整板６００は、トレイ３００またはマルチウェルプレート２００に先立って、第２の支持台５００が備える凹部５０５内に挿入して用いられるものである。
【００５９】
すなわち、調整板６００は、トレイ３００またはマルチウェルプレート２００と、調整板６００とを、調整板６００が下側になるように重ね合わせた状態で、凹部５０５内に挿入して用いられるものである。
【００６０】
この調整板６００は、平板状をなしており、その厚さの異なるものが複数枚用意されている。
【００６１】
そして、凹部５０５内に挿入するマルチウェルプレート２００の種類に応じて、適切な厚さのものを選択することで、マルチウェルプレート２００（ウェル形成部２０２）の上面と、マルチウェルフィルタープレート１００（ウェル形成部１０８）の底面１０３との離間距離を所望の大きさに設定することができるようになる。
【００６２】
なお、調整板６００の構成材料としては、例えば、マルチウェルフィルタープレート１００のフィルター１０５を除く各部の構成材料として挙げたものと同様のものが挙げられる。
【００６３】
第２の支持台５００は、マルチウェルプレート２００またはトレイ３００を支持するための部材であり、平板状をなす底部５０１と、底部５０１の外縁に沿って上方に突出するように設けられた外壁５０３とを有している。
【００６４】
このような外壁５０３で取り囲まれることにより、その内側に凹部５０５が形成され、この凹部５０５内にマルチウェルプレート２００またはトレイ３００を挿入することで、マルチウェルプレート２００またはトレイ３００が第２の支持台５００により支持される。
【００６５】
また、外壁５０３は、外壁５０３の内縁に沿って上方に突出する突出部５０２を有している。この突出部５０２は、第１の支持台４００が備える凹部４０６の内周面に沿って、挿入し得るように設定されており、これにより、第２の支持台５００上に第１の支持台４００を載置した際に、突出部５０２が第１の支持台４００の凹部４０６に挿入されることで、第２の支持台５００上に第１の支持台４００が固定される。
【００６６】
外壁５０３の上面には、突出部５０２を取り囲むように溝が設けられており、この溝に対応するようにパッキン（シール部材）５０７が配置されている。これにより、第２の支持台５００上に第１の支持台４００を載置した際に、支持台４００、５００同士間での外部との連通が許容されなくなる。
【００６７】
さらに、外壁５０３は、外壁５０３の側面に、凹部５０５に貫通する貫通孔５０６を有している。この貫通孔５０６には、吸引ポンプ（図示せず）を連結し得るように構成されており、かかる吸引ポンプを作動させることで、凹部５０５内を減圧することができる。
【００６８】
なお、第２の支持台５００の構成材料としては、例えば、第１の支持台４００の構成材料として挙げたものと同様のものが挙げられる。
【００６９】
以上のような各部材で構成される精製装置１は、図３（ａ）に示すように、第１の支持台４００の凹部４０５にマルチウェルフィルタープレート１００を挿入し、さらに、第２の支持台５００の凹部５０５にマルチウェルプレート２００を挿入して用いる第１の使用方法と、図３（ｂ）に示すように、第１の支持台４００の凹部４０５にマルチウェルフィルタープレート１００を挿入し、さらに、第２の支持台５００の凹部５０５にトレイ３００を挿入して用いる第２の使用方法との２つの使用方法で用いられるが、以下、これらの使用方法について説明する。
【００７０】
まず、第１の使用方法では、第１の支持台４００の凹部４０５にマルチウェルフィルタープレート１００を挿入し、さらに第２の支持台５００の凹部５０５に調整板６００およびマルチウェルプレート２００を挿入し、この状態で、第２の支持台５００上に、第１の支持台４００を載置する（図２、図３（ａ）参照。）。
【００７１】
これにより、マルチウェルフィルタープレート１００が凹部４０５内に挿入され、マルチウェルプレート２００が凹部５０５内に挿入され、マルチウェルプレート２００のウェル形成部２０２が第１の支持台４００の開口部４０２に挿入され、さらに、第２の支持台５００の突出部５０２が第１の支持台４００の凹部４０６に挿入される。その結果、マルチウェルフィルタープレート１００の各ウェル１０１に対応して、マルチウェルプレート２００の各ウェル２０１が配置された状態で、第２の支持台５００上に、第１の支持台４００が固定される。
【００７２】
また、かかる状態では、パッキン５０７により、支持台４００、５００同士間での外部との連通が許容されておらず、パッキン４０７により、第１の支持台４００とマルチウェルフィルタープレート１００との間での連通が許容されていないため、マルチウェルフィルタープレート１００と、第１の支持台４００と、第２の支持台５００とで形成される内部空間を、外部に対して閉鎖された閉鎖空間とすることができる。
【００７３】
したがって、貫通孔５０６に連結された吸引ポンプを作動させて、凹部５０５を減圧することで、前記閉鎖空間をその外部に対して負圧とすることができる。そのため、マルチウェルフィルタープレート１００のウェル１０１内ではフィルター１０５を介して、その上下で圧力差が生じることから、この圧力差に基づいて、ウェル１０１内の液体がフィルター１０５を透過する。したがって、各ウェル１０１から貫通孔１０４を介して液体を流出させることができ、その結果、これらのウェル１０１に対応する、マルチウェルプレート２００のウェル２０１内に液体が供給される。
【００７４】
さらに、この第１の使用方法では、プレート１００、２００同士を、マルチウェルフィルタープレート１００を上側にして上下方向に重ね合わせたとき、マルチウェルフィルタープレート１００が備える各ウェル１０１と、マルチウェルプレート２００が備える各ウェル２０１とは、それぞれ、上下方向に対応して配置されるが、本発明では、この際の、プレート１００、２００の上下方向における位置関係は、以下のようになっている。
【００７５】
すなわち、マルチウェルフィルタープレート１００は、前述のとおり、ウェル形成部１０８とフレーム部１０９とを有し、ウェル形成部１０８に対応する位置に、底面１０３側で凹部１１０が形成されている形状をなし、マルチウェルプレート２００は、ウェル形成部２０２を有し、このウェル形成部２０２が凹部１１０に挿入可能な大きさに設定されている。これにより、プレート１００、２００同士を上下方向に重ね合わせると、ウェル形成部２０２が凹部１１０に挿入される。その結果、ウェル形成部２０２の上端（上面）は、マルチウェルフィルタープレート１００の厚さ方向（上下方向）で、フレーム部１０９の下端（下面）よりも上側に位置することとなる。
【００７６】
このように、ウェル形成部２０２の上端（上面）が、前記厚さ方向で、フレーム部１０９の下端（下面）よりも上側に位置することで、ウェル形成部１０８の下端（底面１０３）とウェル形成部２０２の上端（上面）との離間距離を小さく設定することができる。これにより、貫通孔１０４を通過した液体が底面１０３側でたとえ飛散したとしても、このウェル１０１に対応する、ウェル２０１内に溶解液２６を高効率に供給することができる。
【００７７】
このような離間距離は、具体的には、好ましくは１０ｍｍ以下、より好ましくは０．５ｍｍ以上、１０ｍｍ以下、さらに好ましくは０．５ｍｍ以上、３ｍｍ以下に設定される。離間距離をかかる範囲内に設定することにより、前記効果をより顕著に発揮させることができる。
【００７８】
なお、前述のとおり、ウェル形成部２０２は、凹部１１０に挿入可能な大きさに設定されている。その結果、プレート１００、２００同士を上下方向に重ね合わせた際に、ウェル形成部２０２を凹部１１０に挿入させることができ、さらに、ウェル形成部２０２と凹部１１０との間に空間が形成されることとなる。かかる空間が形成されるため、凹部５０５を減圧して、前記閉鎖空間をその外部に対して負圧とした際に、マルチウェルフィルタープレート１００のウェル１０１内において、フィルター１０５を介した、その上下で圧力差が確実に生じることとなる。
【００７９】
次に、第２の使用方法では、第１の支持台４００の凹部４０５にマルチウェルフィルタープレート１００を挿入し、さらに第２の支持台５００の凹部５０５に調整板６００およびトレイ３００を挿入し、この状態で、第２の支持台５００上に、第１の支持台４００を載置する（図２、図３（ｂ）参照。）。
【００８０】
第２の使用方法では、第２の支持台５００の凹部５０５に調整板６００およびトレイ３００を挿入すること以外は、第１の使用方法と同様である。
【００８１】
このような第２の使用方法によっても、マルチウェルフィルタープレート１００と、第１の支持台４００と、第２の支持台５００とで形成される内部空間を、外部に対して閉鎖された閉鎖空間とすることができる。
【００８２】
したがって、第１の使用方法と同様に、貫通孔５０６に連結された吸引ポンプを作動させて、凹部５０５を減圧することで、各ウェル１０１から貫通孔１０４を介して液体を流出させることができる。その結果、各ウェル１０１から流出した液体を、マルチウェルフィルタープレート１００の下側に位置するトレイ３００が有する凹部３０１に一括して貯留することができる。
【００８３】
なお、この第２の使用方法では、各ウェル１０１から流出した液体を、一括して凹部３０１に貯留すれば良いことから、凹部３０１の開口部と、貫通孔１０４との離間距離を必要以上に小さくさせる必要がないため、第２の支持台５００の凹部５０５に対する調整板６００の挿入を省略するようにしてもよい。
【００８４】
また、本実施形態では、精製装置１において、マルチウェルフィルタープレート１００の各ウェル１０１が有するフィルター１０５の下側を、その上側より負圧とすることでフィルター１０５に液体を透過させる構成としたが、かかる構成に限らず、精製装置は、フィルター１０５の上側を、その下側より正圧とすることでフィルター１０５に液体を透過させる構成のものであってもよい。
【００８５】
以上のような精製装置（マニホールド）１を用いて、例えば、以下のようにして、糖鎖を備える糖タンパク質から糖鎖が精製される。
【００８６】
＜精製方法＞
図４〜図７は、糖タンパク質から糖鎖を精製する糖鎖の精製方法を説明するための縦断面図である。また、以下の説明では、図４〜図７中の上側を「上」、下側を「下」という。
【００８７】
なお、以下に示す糖鎖を精製する精製方法では、電気泳動により分離されたゲル中の糖タンパク質から糖鎖を精製する場合について説明する。
【００８８】
以下に示す糖鎖の精製方法では、［１］糖タンパク質が保持されたゲルを得る工程と、［２］ゲルを糖鎖遊離手段で処理することで糖鎖を遊離させる工程と、［３］遊離した糖鎖をゲルから溶出させて糖鎖を含有する溶液を得る工程と、［４］糖鎖を含有する溶液を糖鎖と特異的に結合する捕捉担体に接触させて、この捕捉担体上に糖鎖を捕捉する工程と、［５］上記捕捉担体に結合しなかった糖鎖以外の物質を除去する工程と、［６］捕捉担体が備える官能基を失活させる工程と、［７］捕捉担体に結合した糖鎖を再遊離するとともに、この糖鎖を他の化合物でラベル化する工程と、［８］ラベル化された糖鎖を精製する工程とを有する。
【００８９】
なお、［１］〜［８］の工程は一連の流れとして作業することができるが、個々の工程において作業を停止しその状態で保存することも可能である。従って、工程［８］のみを別途作業してもよい。また、用いる糖鎖の純度によっては、前半の糖鎖精製工程を省き、工程［４］以降の作業のみを行うことも可能である。
【００９０】
以下、各工程について詳述する。
［１］まず、糖タンパク質を含有する試料を用意し、この試料に対して所定の処理を施すことにより、糖タンパク質が保持されたゲルを得る。
【００９１】
用意する糖タンパク質を含む試料としては、特に限定されないが、例えば、全血、血清、血漿、尿、唾液、細胞、組織等の生体試料が挙げられる。また、予め所定の方法を用いて精製された、または未精製の糖タンパク質をも用いることができる。
【００９２】
なお、この試料は脱脂、脱塩、タンパク質分画糖の方法により前処理されていてもよい。
【００９３】
次いで、試料を、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳ変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動）や、等電点電気泳動とＳＤＳ−ＰＡＧＥを組み合わせた二次元電気泳動等の所定処理を施すことにより、ゲル中において試料に含まれる糖タンパク質を分離する。
【００９４】
次いで、泳動後のゲルを、例えば、クーマシーブリリアントブルー等の染色剤を用いて染色する。これにより、染色された糖タンパク質が保持されたゲルを得ることができる。
【００９５】
［２］次に、染色された糖タンパク質を備える電気泳動後のゲルにおいてバンドを確認し、このバンドを、刃物等を用いて切り出す。そして、これを刃物等で細片化し、染色剤を洗浄除去したのち、ゲル内に保持されている糖タンパク質から、糖鎖遊離手段を用いて糖鎖を遊離させる。
【００９６】
糖鎖を遊離させる手段としては、特に限定されないが、例えば、N−グリコシダーゼまたはO−グリコシダーゼを用いたグリコシダーゼ処理、ヒドラジン分解、アルカリ処理によるβ脱離等の方法を用いることができる。
【００９７】
なお、Ｎ型糖鎖の分析を行う場合は、Ｎ−グリコシダーゼを用いる方法が好ましい。また、Ｎ−グリコシダーゼ処理に先立って、トリプシンやキモトリプシン等を用いてプロテアーゼ処理を行ってもよい。
【００９８】
［３］次に、糖鎖遊離処理後のゲルを取り出し、このゲルを、洗浄液を用いてリンスすることで、遊離された糖鎖をゲルから洗浄液中に溶出させる。そして、洗浄液中においてゲルを沈殿させた後、この上清を回収することで、糖鎖を含有する溶液を得る。
【００９９】
洗浄液としては、特に限定されないが、例えば、水、各種緩衝液、各種有機溶媒等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【０１００】
なお、この溶液は、必要に応じて濃縮することで、溶液中における糖鎖の含有率を増大させるようにしてもよい。
【０１０１】
また、前記工程［１］〜［３］における、糖タンパク質を含有する試料からの糖タンパク質の分離および糖タンパク質からの糖鎖の遊離は、電気泳動処理を施すことにより得られたゲル中から糖鎖を遊離することにより行うこととしたが、この場合に限定されず、アフィニティークロマトグラフィ処理やイオン交換クロマトグラフィー処理を前記試料に施すことにより精製された糖タンパク質から糖鎖を遊離するようにしてもよい。さらに、前記試料からの糖タンパク質の精製を省略してもよい場合には、前記試料に含まれる糖タンパク質に対して直接糖鎖を遊離させる処理を施すようにしてもよい。
【０１０２】
［４］次に、糖鎖を含有する溶液を糖鎖と特異的に結合する捕捉担体に接触させて、この捕捉担体上に糖鎖を捕捉する。
【０１０３】
ここで、糖鎖は生体内物質のなかで唯一、アルデヒド基をもつ物質である。すなわち、糖鎖は、水溶液等の状態で環状のヘミアセタール型と、非環状型のアルデヒド型とが平衡で存在する物質である。
【０１０４】
これに対して、タンパク質、核酸および脂質等の糖鎖以外の生体内物質には、通常、アルデヒド基が含まれていない。
【０１０５】
このことから、アルデヒド基と特異的に反応して安定な結合を形成する官能基を有する捕捉担体を利用すれば、糖鎖のみを選択的に捕捉することが可能である。
【０１０６】
アルデヒド基と特異的に反応する官能基としては、例えば、ヒドラジド基、オキシルアミノ基、アミノ基、セミチオカルバジド基およびそれらの誘導体が好ましく、ヒドラジド基またはオキシルアミノ基がより好ましく用いられる。オキシルアミノ基とアルデヒド基との反応によって生じるオキシム結合、およびヒドラジド基とアルデヒド基との反応によって生じるヒドラゾン結合は、酸処理等によって容易に切断されるため、糖鎖を捕捉したのち、糖鎖を担体から簡単に切り離すことができる。
【０１０７】
なお、一般的に、生理活性物質の捕捉・担持にはアミノ基が多用されているが、アミノ基とアルデヒド基の反応によって生じる結合（シッフ塩基）は結合力が弱いため、還元剤等を用いた二次処理が必要であることから、アミノ基は糖鎖の捕捉には好ましくない。
【０１０８】
糖鎖を捕捉するための担体としては、ポリマー粒子を用いることが好ましい。さらに、このポリマー粒子は、少なくとも表面の一部に糖鎖のアルデヒド基と特異的に反応する官能基を有した固体またはゲル粒子であることが好ましい。
【０１０９】
ポリマー粒子が固体粒子またはゲル粒子であれば、ポリマー粒子に糖鎖を捕捉させた後に、マルチウェルフィルタープレート１００が備えるウェル１０１を用いて、かかる粒子を容易に回収することができる。
【０１１０】
このようなポリマー粒子としては、例えば、下記一般式（１）で表されるものが挙げられる。
【０１１１】
【化１】
2014070188.tif 000003
【０１１２】
以下、捕捉担体としてポリマー粒子２０を用い、ポリマー粒子２０上に糖鎖を捕捉する方法について説明する。
【０１１３】
［４−１］まず、ポリマー粒子２０を、純水２１中に分散させて、ポリマー粒子が分散された粒子分散液２２を得る。
【０１１４】
このポリマー粒子２０の形状は、特に限定されないが、例えば、球状またはそれに類する形状が好ましい。
【０１１５】
ポリマー粒子２０が球状の場合、平均粒径は、好ましくは０．０５〜１０００μｍ程度、より好ましくは０．０５〜２００μｍ程度、さらに好ましくは０．１〜２００μｍ程度、最も好ましくは０．１〜１００μｍ程度に設定される。平均粒径が下限値未満では、ポリマー粒子２０を遠心分離やろ過で回収することが困難となるおそれがある。また、平均粒径が上限値を超えると、ポリマー粒子２０と、後述する試料溶液との接触面積が少なくなり、糖鎖捕捉の効率が低下するおそれがある。
【０１１６】
［４−２］次に、図４（ａ）に示すように、第１の支持台４００の凹部４０５にマルチウェルフィルタープレート１００を挿入し、さらに第２の支持台５００の凹部５０５に調整板６００およびトレイ３００を挿入し、この状態で、第２の支持台５００上に、第１の支持台４００を載置する。すなわち、本工程では、精製装置１の第２の使用方法が適用される。
【０１１７】
そして、この状態で、前記工程［４−１］で予め調製した粒子分散液２２をマルチウェルフィルタープレート１００が備えるウェル１０１内に供給した後、精製装置１の吸引ポンプを作動させることで、マルチウェルフィルタープレート１００と、第１の支持台４００と、第２の支持台５００とで形成される内部空間を負圧とし、これにより、ウェル１０１内の粒子分散液２２を吸引する（図４（ｂ）参照。）。
【０１１８】
これにより、粒子分散液２２中の純水２１はフィルター１０５を透過する。これに対して、フィルター１０５の細孔径と、ポリマー粒子２０の粒径との関係により、ポリマー粒子２０はフィルター１０５を透過することができない。そのため、フィルター１０５を透過した純水２１が、貫通孔１０４を介して、マルチウェルフィルタープレート１００の下側に位置するトレイ３００内に選択的に供給される。
【０１１９】
その結果、図４（ｃ）に示すように、ポリマー粒子２０がマルチウェルフィルタープレート１００のウェル１０１内に単独で充填された状態となる。
【０１２０】
［４−３］次に、図４（ｄ）に示すように、前記工程［３］で得られた糖鎖を含有する溶液（以下、「糖鎖含有液２３」という。）を、ポリマー粒子２０が充填されたマルチウェルフィルタープレート１００のウェル１０１内に供給する。
【０１２１】
［４−４］次に、糖鎖含有液２３を加熱することで、供給した糖鎖含有液２３が乾燥するまで、糖鎖含有液２３を一定の温度範囲に保つ（図４（ｅ）参照。）。
【０１２２】
これにより、ポリマー粒子２０と、糖鎖含有液２３中に含まれる糖鎖とが反応し、ポリマー粒子２０上に糖鎖が捕捉される。
【０１２３】
この際の反応系のｐＨは、好ましくは２〜９、より好ましくは２〜７であり、さらに好ましくは２〜６である。なお、ｐＨ調整は、例えば、前記工程［４−３］の後に、各種緩衝液または有機溶媒を添加することにより行うことができる。
【０１２４】
糖鎖捕捉時の温度は、好ましくは４〜１００℃程度、より好ましくは２０〜９０℃程度、さらに好ましくは３０〜８０℃程度、最も好ましくは４０〜８０℃程度の温度範囲に保たれるように設定する。
【０１２５】
また、反応時間、すなわち溶液が乾燥するまでの時間は、かかる温度範囲に設定した場合、通常、０．１〜３時間程度、好ましくは、０．６〜２時間程度に設定される。
【０１２６】
かかる条件で、ポリマー粒子２０と糖鎖とを反応させることで、ポリマー粒子２０上に糖鎖が確実に捕捉されることとなる。
【０１２７】
なお、本実施形態のように、糖鎖含有液２３が乾燥するまで加熱する構成とすることにより、ポリマー粒子２０と糖鎖との反応率の向上を確実に図ることができる。
【０１２８】
なお、糖鎖含有液２３を加熱する方法としては、特に限定されず、例えば、精製装置１の全体を加熱するようにしてもよいし、マルチウェルフィルタープレート１００を選択的に加熱するようにしてもよい。
【０１２９】
以上のような工程［４−１］〜［４−４］を経ることで、ポリマー粒子２０上に糖鎖が捕捉される。
【０１３０】
なお、ポリマー粒子２０がヒドラジド基を有するものである場合、ヒドラジド基と、糖鎖が有する還元末端との間で、下記式（２）で表される反応が進行することで、ポリマー粒子２０上に糖鎖が捕捉される。
【０１３１】
【化２】
2014070188.tif 000004
【０１３２】
以上のように、マルチウェルフィルタープレート１００を備える精製装置１を用いることで、マルチウェルフィルタープレート１００の静置時には、ウェル１０１において、供給された液体の反応を進行させることができる。さらに、精製装置１を用いたマルチウェルフィルタープレート１００の吸引により、ウェル１０１に供給した液体中に含まれる固定成分と、液状成分との分離を容易に行うことができる。
【０１３３】
［５］次に、捕捉担体に捕捉された糖鎖以外の物質を除去する。
ここで、上記のように捕捉担体としてポリマー粒子２０を用いた場合、ポリマー粒子２０に捕捉された糖鎖以外の物質としては、例えば、ポリマー粒子２０に捕捉されなかった糖鎖の他、ポリマー粒子２０の表面に、非特異的に吸着している糖鎖以外の夾雑物（タンパク質、脂質等）が挙げられる。
そのため、本工程［５］では、これらの物質を洗浄することで除去する。
【０１３４】
以下、前記工程［４］と同様に、マルチウェルフィルタープレート１００が備えるウェル１０１を用いて、ポリマー粒子２０に捕捉された糖鎖以外の物質（以下、この物質を「洗浄物質」ということもある。）を洗浄除去する場合について説明する。
【０１３５】
［５−１］まず、図５（ａ）に示すように、前記工程［４−４］において得られた、マルチウェルフィルタープレート１００のウェル１０１中で乾燥したポリマー粒子２０に対して、洗浄液２４を添加する。
【０１３６】
洗浄液２４としては、特に限定されないが、水、各種緩衝液、各種有機溶媒等が挙げられ、これらを適宜組み合わせて用いることができる。
【０１３７】
［５−２］次に、精製装置１を前記工程［４−２］で説明した状態を維持したまま、すなわち、精製装置１の第２の使用方法を適用して、精製装置１の吸引ポンプを作動させることで、マルチウェルフィルタープレート１００と、第１の支持台４００と、第２の支持台５００とで形成される内部空間を負圧とし、これにより、ウェル１０１内の洗浄液２４を吸引する（図５（ｂ）参照。）。
【０１３８】
その結果、洗浄液２４を、フィルター１０５を透過させることで、図５（ｃ）に示すように、マルチウェルフィルタープレート１００にポリマー粒子２０を残存させた状態で、マルチウェルフィルタープレート１００から選択的に洗浄液２４を、トレイ３００に除去することができるとともに、洗浄液２４中に溶解した洗浄物質を除去することができる。
【０１３９】
これら工程［５−１］および工程［５−２］で構成される洗浄を、複数回（繰り返して）行うことで、洗浄物質を洗浄液２４中に溶解させた状態で、トレイ３００に分離することができるため、洗浄物質を糖鎖が捕捉されたポリマー粒子２０から確実に除去することができる。
【０１４０】
すなわち、工程［５−１］および工程［５−２］において、フィルター１０５を備えるウェル１０１を複数有するマルチウェルフィルタープレート１００を用いて、ポリマー粒子２０に結合した糖鎖以外の物質を除去する洗浄液２４を、ウェル１０１中のポリマー粒子２０に供給した後、フィルター１０５の下側を負圧にすることでウェル１０１の上下で圧力差が生じ、その結果、フィルター１０５により洗浄液２４とポリマー粒子２０とが分離されることとなる。
【０１４１】
なお、この場合、まず水または緩衝液を洗浄液２４として用いて十分にポリマー粒子２０を洗浄したのち、さらに有機溶媒の洗浄液２４で洗浄し、必要に応じてこれら洗浄液２４による洗浄を繰り返し行い、最後に有機溶媒の洗浄液２４で洗浄するのが好ましい。これにより、洗浄物質、特に、非特異的にポリマー粒子２０の表面に吸着する夾雑物をより確実に除去することができるようになる。
【０１４２】
［６］次に、捕捉担体が備える官能基を失活させる。
本工程では、前記工程［４］において、糖鎖の捕捉に用いられなかった、捕捉担体が備える官能基（糖鎖のアルデヒド基と特異的に反応する官能基）を失活させる。
【０１４３】
これにより、次工程［７］において、捕捉担体（ポリマー粒子２０）に結合した糖鎖を再遊離させた際に、この糖鎖が再度捕捉担体に捕捉されてしまうのを、確実に防止することができる。
【０１４４】
捕捉担体が備える官能基の失活は、例えば、前記官能基を失活させる機能を有する失活液を、捕捉担体に接触させることにより行うことができる。
【０１４５】
また、このような失活液の捕捉担体への接触は、前記工程［５−１］および前記工程［５−２］で構成される洗浄における洗浄液２４に代えて失活液を用い、前記工程［５−１］および前記工程［５−２］を施すようにすればよい。
【０１４６】
さらに、失活液としては、特に限定されないが、官能基がヒドラジド基である場合、例えば、無水酢酸、無水コハク酸等の酸無水物が挙げられる。これにより、官能基を容易に失活させることができる。
【０１４７】
［７］次に、捕捉担体に結合した糖鎖を再遊離させるとともに、この糖鎖を他の化合物（以下、「化合物Ａ」と言うこともある。）で置換する。
【０１４８】
なお、この化合物Ａとしては、蛍光物質、吸光物質および放射性物質等のラベル化物質を備えるラベル化試薬が好ましく用いられる。
【０１４９】
以下、前記工程［４］、［５］と同様に、マルチウェルフィルタープレート１００が備えるウェル１０１を用いて、化合物Ａで糖鎖をラベル化する場合について説明する。
【０１５０】
［７−１］まず、図５（ｄ）に示すように、化合物Ａを含有する化合物含有液２５を、糖鎖が捕捉されたポリマー粒子２０が充填されたマルチウェルフィルタープレート１００のウェル１０１内に添加する。
【０１５１】
マルチウェルフィルタープレート１００のウェル１０１内に添加する化合物Ａの添加量は、糖鎖が捕捉されたポリマー粒子２０に対して、過剰量となっているのが好ましい。これにより、次工程［７−２］における糖鎖に対する化合物Ａの置換率の向上を図ることができる。
【０１５２】
具体的には、化合物Ａの添加量は、ポリマー粒子２０が有する糖鎖と特異的に反応する官能基量に対して、好ましくは１．５倍量以上、より好ましくは３倍量以上、さらに好ましくは５倍量以上であり、最も好ましくは１０倍量以上に設定される。
【０１５３】
［７−２］次に、化合物含有液２５を加熱することで、添加した化合物含有液２５が乾燥するまで、化合物含有液２５を一定の温度範囲に保つ（図５（ｅ）参照。）。
【０１５４】
これにより、捕捉された糖鎖はポリマー粒子２０から切り離され、それとほぼ同時に糖鎖に化合物Ａが付加することとなるため、糖鎖は化合物Ａでラベル化されることとなる。
【０１５５】
この際の反応系のｐＨは、好ましくは２〜９、より好ましくは２〜７であり、さらに好ましくは２〜６である。なお、ｐＨ調整は、例えば、前記工程［７−１］の後に、各種緩衝液を添加することにより行うことができる。
【０１５６】
ラベル化時の温度は、好ましくは４〜１００℃程度、より好ましくは２０〜９０℃程度、さらに好ましくは３０〜８０℃程度、最も好ましくは４０〜８０℃程度の温度範囲に保たれるように設定する。
【０１５７】
また、反応時間、すなわち溶液が乾燥するまでの時間は、かかる温度範囲に設定した場合、通常、０．１〜３時間程度、好ましくは、０．６〜２時間程度に設定される。
かかる条件で、ラベル化を行うことで、糖鎖が確実に化合物Ａによりラベル化される。
【０１５８】
なお、本実施形態のように、化合物含有液２５が乾燥するまで加熱する構成とすることにより、糖鎖と化合物Ａとの反応率の向上を確実に図ることができる。
【０１５９】
以上のような工程［７−１］、［７−２］を経ることで、糖鎖が化合物Ａでラベル化される。
【０１６０】
なお、化合物Ａとしては、アミノオキシ基またはヒドラジド基を有する化合物が好ましく用いられ、ポリマー粒子２０がヒドラジド基を有するものである場合、特に、下記化学式（３）で表されるN−aminooxyacetyl−tryptophanyl（arginine methyl ester）が好ましく用いられる。
【０１６１】
【化３】
2014070188.tif 000005
【０１６２】
また、この化合物Ａとしては、前記化合物の他、芳香族アミンで構成される蛍光物質を用いることができる。
【０１６３】
化合物Ａとして、このような芳香族アミンを用いた場合、捕捉された糖鎖は、まずポリマー粒子２０から切り離されて再遊離した後に、化合物Ａによりラベル化されることとなる。
【０１６４】
以下、化合物Ａとして芳香族アミンを用いて、糖鎖を化合物Ａでラベル化する場合について説明する。
【０１６５】
［７−１’］まず、糖鎖を再遊離させる糖鎖遊離液を、糖鎖が捕捉されたポリマー粒子２０が充填されたマルチウェルフィルタープレート１００のウェル１０１内に添加する。
【０１６６】
［７−２’］次に、糖鎖遊離液を加熱することで、添加した糖鎖遊離液が乾燥するまで、糖鎖遊離液を一定の温度範囲に保つ。
【０１６７】
これにより、捕捉された糖鎖がポリマー粒子２０から切り離されることで、糖鎖は再遊離する。
【０１６８】
この際の反応系のｐＨは、好ましくは２〜９、より好ましくは２〜７であり、さらに好ましくは２〜６である。このｐＨ調整が、前記工程［７−１’］における糖鎖遊離液の添加により行われ、各種緩衝液が糖鎖遊離液として用いられる。
【０１６９】
糖鎖遊離時の温度は、好ましくは４〜１００℃程度、より好ましくは２５〜９０℃程度、さらに好ましくは３０〜８０℃程度、最も好ましくは６０〜８０℃程度の温度範囲に保たれるように設定する。
【０１７０】
また、反応時間、すなわち溶液（糖鎖遊離液）が乾燥するまでの時間は、かかる温度範囲に設定した場合、通常、０．１〜３時間程度、好ましくは、０．６〜２時間程度に設定される。
【０１７１】
かかる条件で、糖鎖の再遊離を行うことで、糖鎖がポリマー粒子２０から確実に切り離される。
【０１７２】
なお、本実施形態のように、糖鎖遊離液が乾燥するまで加熱する構成とすることにより、糖鎖の遊離率の向上を確実に図ることができる。
【０１７３】
［７−３’］次に、化合物Ａとして芳香族アミンを含有する化合物含有液２５を、ポリマー粒子２０から糖鎖が遊離している、マルチウェルフィルタープレート１００のウェル１０１内に添加する。
【０１７４】
芳香族アミン（化合物Ａ）としては、特に限定されないが、例えば、２−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ、２−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ、８−Ａｍｉｎｏｐｙｒｅｎｅ−１，３，６−ｔｒｉｓｕｌｆｏｎａｔｅ、８−Ａｍｉｎｏｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ−１，３，６−ｔｒｉｓｕｌｐｈｏｎａｔｅ、２−Ａｍｉｎｏ９（１０Ｈ）−ａｃｒｉｄｏｎｅ、５−Ａｍｉｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ、Ｄａｎｓｙｌｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ、７−Ａｍｉｎｏ−４−ｍｅｔｈｙｌｃｏｕｍａｒｉｎｅ、３−Ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ、７−Ａｍｉｎｏ−１−ｎａｐｈｔｈｏｌおよび３−（Ａｃｅｔｙｌａｍｉｎｏ）−６−ａｍｉｎｏａｃｒｉｄｉｎｅ等が挙げられる。中でも２−ａｍｉｎｏｂｅｎｚａｍｉｄｅまたは２−ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄであるのが好ましい。これらの化合物は、試薬としての入手、反応の簡便性から好適に用いられる。
【０１７５】
また、芳香族アミンとして２−ａｍｉｎｏｂｅｎｚａｍｉｄｅまたは２−ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄを用いる場合、一般的な条件では０．３５ｍｏｌ／Ｌで使用されるが、本工程では、化合物含有液２５添加後のウェル１０１内の溶液、すなわち、再遊離した糖鎖を含む溶液における芳香族アミンの濃度は、好ましくは０．５ｍｏｌ／Ｌ以上、より好ましくは１．４ｍｏｌ／Ｌ以上に設定される。これにより、化合物Ａによる糖鎖の標識効率を向上させることが可能となる。ただし、濃度が３ｍｏｌ／Ｌ以上になると、後工程［８］において、反応に使用されなかった芳香族アミン（化合物Ａ）を除去するのが困難となるおそれがあるため、最も好ましい濃度は１．４ｍｏｌ／Ｌ以上３ｍｏｌ／Ｌ以下に設定される。
【０１７６】
また、液量に関して、ウェル１０１内に充填されたポリマー粒子２０で規定する場合、通常はポリマー粒子２０が浸る程度の液量、例えば、５ｍｇのポリマー粒子２０に対して５０μＬ程度に設定されるが、液量（容量）を倍量の１００μＬ程度に設定するのが好ましい。これにより、化合物Ａによる糖鎖の標識効率を向上させることが可能となる。ただし、液量は１００μＬを超えても良いが、一定量を超えると、後工程［８］において、反応に使用されなかった芳香族アミン（化合物Ａ）を除去するのが困難となるおそれがあるため、最も好まし液量は１００μＬ〜２００μＬの間に設定される。
【０１７７】
より具体的には、芳香族アミンとして２−ａｍｉｎｏｂｅｎｚａｍｉｄｅを用いる場合、ウェル１０１内に、1.4 M 2−Aminobenzamide, 1 M sodium cyanoborohydrideの濃度になるように３０％酢酸／ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解させた溶液１００μＬを化合物含有液２５として添加する。
【０１７８】
［７−４’］次に、化合物含有液２５を加熱することで、化合物含有液２５を一定の温度範囲に保つ。
【０１７９】
これにより、ポリマー粒子２０から再遊離している糖鎖は化合物Ａと反応し、その結果、糖鎖は化合物Ａでラベル化されることとなる。
【０１８０】
この際の反応系のｐＨは、好ましくは２〜９、より好ましくは２〜７であり、さらに好ましくは２〜６である。
【０１８１】
ラベル化時の温度は、好ましくは０〜１００℃程度、より好ましくは４〜９５℃程度、さらに好ましくは３０〜９０℃程度の温度範囲に保たれるように設定する。
【０１８２】
また、反応時間は、かかる温度範囲に設定した場合、通常、０．１〜２０時間程度、好ましくは、０．６〜１２時間程度に設定される。
【０１８３】
より具体的には、芳香族アミンとして２−ａｍｉｎｏｂｅｎｚａｍｉｄｅを用いた場合、化合物含有液２５を３０〜７０℃の温度範囲で加熱して、１〜１０時間程度、反応する。
かかる条件で、ラベル化を行うことで、糖鎖が確実に化合物Ａによりラベル化される。
【０１８４】
なお、化合物Ａとして芳香族アミンを用いた場合、前記工程［７−２］で説明したような、化合物含有液２５の乾燥を省略することができる。
【０１８５】
以上のような工程［７−１’］〜［７−４’］によっても、糖鎖が化合物Ａでラベル化される。
【０１８６】
［８］次に、化合物Ａでラベル化された糖鎖（以下、「ラベル化糖鎖」と言うこともある。）を精製する。
【０１８７】
ここで、上記のようにポリマー粒子２０に捕捉された糖鎖を再遊離させることで、ラベル化糖鎖を得た場合、化合物Ａでラベル化された糖鎖以外に、マルチウェルフィルタープレート１００中に含まれる物質としては、糖鎖が遊離したポリマー粒子２０および糖鎖のラベル化に使用されなかった化合物Ａ（以下、「未使用化合物Ａ」と言うこともある。）が挙げられる。
【０１８８】
そのため、本工程［８］では、これらポリマー粒子２０および未使用化合物Ａを除去することで、ラベル化糖鎖の精製を行う。
【０１８９】
以下、前記工程［４］〜［７］と同様に、マルチウェルフィルタープレート１００が備えるウェル１０１を用いて、ラベル化糖鎖を精製する場合について説明する。
【０１９０】
［８−１］まず、図６（ａ）に示すように、前記工程［７−２］において得られた、乾燥したラベル化糖鎖と、ポリマー粒子２０とがウェル１０１中に収納されたマルチウェルフィルタープレート１００を第１の支持台４００の凹部４０５に挿入し、さらに第２の支持台５００の凹部５０５に調整板６００およびマルチウェルプレート２００を挿入し、この状態で、第２の支持台５００上に、第１の支持台４００を載置する。すなわち、本工程では、精製装置１の第１の使用方法が適用される。
【０１９１】
そして、この状態で、溶解液２６をマルチウェルフィルタープレート１００が備えるウェル１０１内に添加する。
【０１９２】
溶解液２６としては、ラベル化糖鎖を溶解し得る液剤であればよく、特に限定されるものではないが、水、各種緩衝液、各種有機溶媒等が挙げられる。
【０１９３】
なお、前記工程［７−２］における化合物含有液２５の加熱によりポリマー粒子２０が乾燥していない場合には、本工程［８−１］におけるウェル１０１内への溶解液２６の添加を省略することができる。
【０１９４】
さらに、化合物Ａとして、芳香族アミンで構成される蛍光物質を用いた場合には、前記工程［７−１’］〜［７−４’］で得られる化合物Ａでラベル化された糖鎖が乾燥していないため、この場合についても、本工程［８−１］におけるウェル１０１内への溶解液２６の添加を省略することができる。
【０１９５】
［８−２］次に、精製装置１の吸引ポンプを作動させることで、マルチウェルフィルタープレート１００と、第１の支持台４００と、第２の支持台５００とで形成される内部空間を負圧とし、これにより、ウェル１０１内の溶解液２６を吸引する（図６（ｂ）参照。）。
【０１９６】
これにより、図６（ｃ）に示すように、溶解液２６を、フィルター１０５を透過させることで、マルチウェルフィルタープレート１００のウェル１０１にポリマー粒子２０を残存させた状態で、マルチウェルフィルタープレート１００のウェル１０１から選択的に溶解液２６を、このウェル１０１に対応する位置のマルチウェルプレート２００が備えるウェル２０１内に貯留することができるとともに、この溶解液２６中に溶解したラベル化糖鎖をマルチウェルプレート２００のウェル２０１に移動させることができる。その結果、ラベル化糖鎖とポリマー粒子２０とが分離される。
【０１９７】
すなわち、工程［８−２］において、フィルター１０５を備えるウェル１０１を複数有するマルチウェルフィルタープレート１００を用いて、溶解液２６をウェル１０１中に供給した後、フィルター１０５の下側を負圧にすることでウェル１０１の上下で圧力差を生じさせ、その結果、ラベル化糖鎖とポリマー粒子２０とが分離される。
【０１９８】
なお、この際、未使用化合物Ａも、通常、溶解液２６に対して溶解性を示すため、溶解液２６に溶解した状態で、マルチウェルプレート２００のウェル２０１側に移動する。
【０１９９】
なお、精製装置１の第１の使用方法では、前述したように、ウェル形成部２０２の上端（上面）が、前記厚さ方向で、フレーム部１０９の下端（下面）よりも上側に位置するよう設定されている。これにより、貫通孔１０４を通過した液体が底面１０３側でたとえ飛散したとしても、このウェル１０１に対応する、ウェル２０１内に溶解液２６を高効率に供給することができる。
【０２００】
［８−３］次に、フィルター１０５に代えて、シリカゲル１０６がウェル１０１の下側に配置されたマルチウェルフィルタープレート（マルチウェルシリカゲルプレート）１００’を用意し、このマルチウェルフィルタープレート１００’を第１の支持台４００の凹部４０５に挿入し、さらに第２の支持台５００の凹部５０５に調整板６００およびトレイ３００を挿入し、この状態で、第２の支持台５００上に、第１の支持台４００を載置する。
【０２０１】
そして、図７（ａ）に示すように、前記工程［８−２］において、マルチウェルプレート２００の各ウェル２０１に分離された、ラベル化糖鎖を含有する溶解液２６をアセトニトリル等の非水溶媒で希釈し、マルチウェルフィルタープレート１００’のシリカゲル１０６を備えるウェル１０１内に供給する。
【０２０２】
これにより、図７（ｂ）に示すように、ウェル１０１のシリカゲル１０６を透過した溶解液２６が貫通孔１０４を介して、各ウェル１０１に対応するトレイ３００の凹部３０１に液滴として流出することとなる。
【０２０３】
この際、シリカゲル１０６をアセトニトリル等の非水溶媒で希釈した溶解液２６が透過するため、溶解液２６に含まれるラベル化糖鎖と未使用化合物Ａとは、シリカゲルに吸着する。
【０２０４】
［８−４］次に、図７（ｂ）の状態を維持したまま、さらに、マルチウェルフィルタープレート１００’のウェル１０１内にアセトニトリル等の非水溶媒を供給し、シリカゲル１０６を洗浄する。
【０２０５】
ここで、シリカゲルへの吸着力は、未使用化合物Ａよりもラベル化糖鎖の方が高い。したがって、ウェル１０１内に非水溶媒を供給してシリカゲル１０６を洗浄することで、未使用化合物Ａの少なくとも一部をシリカゲルから除去することができる。
【０２０６】
［８−５］次に、図７（ｃ）に示すように、第１の支持台４００の凹部４０５に、マルチウェルフィルタープレート１００’を挿入し、さらに第２の支持台５００の凹部５０５に、トレイ３００に代えてマルチウェルプレート２００を挿入し、この状態で、第２の支持台５００上に、第１の支持台４００を載置する。
【０２０７】
その後、マルチウェルフィルタープレート１００’内に水２７を加え、シリカゲルを透過させることにより、未使用化合物Ａの混在が的確に防止または抑制された状態で、図７（ｄ）に示すように、マルチウェルプレート２００のウェル２０１に、水２７中に溶解した状態で、ラベル化糖鎖が精製（分離）されることとなる。
【０２０８】
以上のように工程［８−３］〜［８−５］において、シリカゲル１０６を備えるウェル１０１を複数有するマルチウェルフィルタープレート（マルチウェルシリカゲルプレート）１００’を用いることで、シリカゲル１０６に対するラベル化糖鎖と未使用化合物Ａとの吸着力の差に基づいて、ラベル化糖鎖が未使用化合物Ａから分離される。
【０２０９】
以上のような工程を経ることで、精製装置１を用いて、化合物Ａでラベル化された糖鎖が精製される。
【０２１０】
なお、捕捉担体の官能基を失活する必要がない場合には、本工程［６］を省略するようにしてもよい。
【０２１１】
また、化合物Ａでラベル化された糖鎖は、MALDI−TOF MSに代表される質量分析、さらに高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の手法で分析することができる。
【０２１２】
特に、糖鎖が前述した化学式（３）で表されるN−aminooxyacetyl−tryptophanyl（arginine methyl ester）でラベル化されている場合、MALDI−TOF MSを用いて高感度分析を行うことができる。
【０２１３】
このような糖鎖の精製方法によれば、簡単な作業で優れた精度で糖鎖を分離精製することができる。さらに、複数のウェルに供給された処理液を一括して処理することができるため、一度の精製処理で、多量の糖鎖を精製することができるようになる。
【０２１４】
また、上述したような糖鎖の精製方法においては、補足担体（ポリマー粒子２０）および精製装置１を用い、吸引ポンプを用いたウェル１０１の上下での圧力差や、フィルター１０５を用いたろ過等の手段を利用することで、前述した従来法と比較して、工程の簡略化を図ることができるため、コストと時間の無駄の減少を実現することができる。
【０２１５】
＜＜第２実施形態＞＞
次に、精製装置の第２実施形態について説明する。
図８は、糖鎖の精製方法に用いられる精製装置の第２実施形態を示す縦断面図である。
【０２１６】
以下、第２実施形態の精製装置について、前記第１実施形態の精製装置との相違点を中心に説明し、同様の事項については、その説明を省略する。
【０２１７】
図８に示す精製装置１は、マルチウェルフィルタープレート１００の構成が異なる以外は、図１〜３に示す精製装置１と同様である。
【０２１８】
すなわち、第２実施形態の精製装置１おいて、マルチウェルフィルタープレート１００は、ウェル形成部１０８における底面１０３の貫通孔１０４に対応する位置、すなわち、マルチウェルプレート２００が備えるウェル２０１が臨む位置に下側に突出する複数（本実施形態では９６個）の突出部１０７を備えている。より詳しくは、本実施形態では、突出部１０７は、図８に示すように、底面１０３で開口する貫通孔１０４の開口部を取り囲むように突出して設けられている。
【０２１９】
また、この突出部１０７は、その外径の大きさが、マルチウェルプレート２００が備えるウェル２０１の内径の大きさよりも小さくなっている。すなわち、突出部１０７は、ウェル２０１に挿通可能な大きさに設定されている。その結果、マルチウェルフィルタープレート１００の下側に、マルチウェルプレート２００を配置した際に、すなわち、凹部１１０にウェル形成部２０２を挿入させた際に、突出部１０７の下端を、マルチウェルフィルタープレート１００の厚さ方向（上下方向）で、ウェル２０１の上端よりも下側に位置させることができるようになる。これにより、貫通孔１０４を通過した液体が底面１０３側でたとえ飛散したとしても、このウェル１０１に対応する、ウェル２０１内に溶解液２６をより高効率に供給することができる。
【０２２０】
なお、本実施形態では、図８に示すように、突出部１０７の下端は、マルチウェルフィルタープレート１００の厚さ方向（上下方向）で、ウェル２０１の上端よりも下側に位置しているが、この場合に限定されず、突出部１０７の下端は、前記厚さ方向で、ウェル２０１の上端と一致していてもよい。すなわち、突出部１０７の下端は、前記厚さ方向で、ウェル２０１の上端と一致、またはウェル２０１の上端より下側に位置していればよい。
なお、各部の寸法は、前記第１実施形態の精製装置１と同様である。
【０２２１】
以上、本発明の処理装置を図示の実施形態に基づいて説明したが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【０２２２】
また、本発明の処理装置の各部の構成は、同様の機能を発揮し得る任意のものと置換することができ、または、任意の構成のものを付加することもできる。
【０２２３】
さらに、前記実施形態では、精製装置において、マルチウェルフィルタープレートの各ウェルが有するフィルターの下側を、その上側より負圧とすることでフィルターに液体を透過させる構成としたが、かかる場合に限らず、フィルターにおける液体の透過は、マルチウェルフィルタープレートに付与された遠心力によって行われるようにしてもよい。さらに、液体の粘度等が低く液体がフィルターを容易に透過する場合には、重力すなわち自由落下により、液体がフィルターを透過するようにしてもよい。
【０２２４】
すなわち、フィルター（ウェル）の上下に生じる力差は、フィルターの下側を、その上側より負圧とする圧力差に限らず、フィルターの上側に位置する液体に遠心力や、重力を作用させることにより得ることができる。
【０２２５】
さらに、前記実施形態では、精製装置を用いて糖タンパク質から糖鎖を精製する場合、すなわち、マルチウェルフィルタープレートとマルチウェルプレートとを用いて糖鎖を精製する場合について説明したが、かかる場合に限定されず、マルチウェルフィルタープレートとマルチウェルプレートとを備える装置を、サイズ除去、ビーズ・レジン・ベースアッセイ、サンプル濃縮・脱塩・精製等に適用することができる。
【符号の説明】
【０２２６】
１                精製装置
２０              ポリマー粒子
２１              純水
２２              粒子分散液
２３              糖鎖含有液
２４              洗浄液
２５              化合物含有液
２６              溶解液
２７              水
１００、１００’    マルチウェルフィルタープレート
１０１            ウェル
１０３            底面
１０４            貫通孔
１０５            フィルター
１０６            シリカゲル
１０７            突出部
１０８            ウェル形成部
１０９            フレーム部
１１０            凹部
２００            マルチウェルプレート
２０１            ウェル
２０２            ウェル形成部
２０３            底面
２０４            フレーム部
３００            トレイ
３０１            凹部
４００            第１の支持台
４０１            底部
４０２            開口部
４０３            上側外壁
４０４            下側外壁
４０５            凹部
４０６            凹部
４０７            パッキン
４０８            開口部
５００            第２の支持台
５０１            底部
５０２            突出部
５０３            外壁
５０５            凹部
５０６            貫通孔
５０７            パッキン
６００            調整板
【図１】
2014070188.tif 000006
【図２】
2014070188.tif 000007
【図３】
2014070188.tif 000008
【図４】
2014070188.tif 000009
【図５】
2014070188.tif 000010
【図６】
2014070188.tif 000011
【図７】
2014070188.tif 000012
【図８】
2014070188.tif 000013