(57)【要約】【課題】抗認知機能障害剤を提供する。【解決手段】ブテア  スペルバ又はその抽出物を有効成分とする抗認知機能障害剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ブテア  スペルバ又はその抽出物を有効成分とする抗認知機能障害剤。
【請求項２】
ブテア  スペルバの抽出物がブテア  スペルバの低級アルコール抽出物である請求項１記載の抗認知機能障害剤。
【請求項３】
低級アルコールがエタノールである請求項２記載の抗認知機能障害剤。
【請求項４】
認知機能障害が、短期記憶障害、長期記憶障害、物体認識記憶障害又は空間記憶障害である請求項１〜３のいずれか１項記載の抗認知機能障害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗認知機能障害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
少子高齢化社会が到来した我が国では、認知症患者が増加する傾向にあり、大きな社会問題となっている。認知症とは特定の病名ではなく、正常な発達によって獲得された認知機能が障害され、日常生活や社会生活に支障を生じた状態で、一群の症状を意味する。例えば、記憶、学習、見当識、注意機能、実行機能といった認知機能の障害が見られる。
認知症の発症原因となる疾患には様々なものが知られているが、アルツハイマー病が最も多く、認知症の約５割を占める。アルツハイマー病は、大脳や海馬の神経細胞が進行性に変性・脱落することにより発症すると考えられているものの未だ明確な結論は得られていない。
【０００３】
現在、認知症の治療薬としては、アセチルコリンエステラーゼ阻害作用を示すタクリンやドネペジル等が市販されている。しかし、これらの薬物による治療は対症療法に限られ、また副作用からその使用は制限的である。そのため、長期に渡って継続して服用でき、認知症の発症を予防できるような安全で有効性の高い新たな物質の開発が求められている。
また、近年、アルツハイマー病患者が高頻度にうつ症状を示すことが報告され、抑うつが認知症の初期症状、前駆症状であるという考えも支持されつつある。したがって、認知機能障害に対する作用のみならず、うつに対する作用を併せ持つ物質は認知症の予防等により有用と考えられる。
【０００４】
一方、マメ科植物ブテア  スペルバ（Ｂｕｔｅａ  ｓｕｐｅｒｂａ）は、古くから特に高齢者の滋養強壮に用いられている安全性の高い植物である。また、ブテア  スペルバは、勃起障害、精力増強に有用であること（非特許文献１）、血小板凝集阻害作用を有すること（特許文献１）等が報告されている。
しかしながら、ブテア  スペルバと認知機能障害との関連については知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００４−１３１３９０号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ａｓｉａｎ  Ｊ  Ａｎｄｒｏｌ、２００３年９月、第５巻、ｐ．２４３−２４６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、抗認知機能障害剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、天然物中に認知機能の障害に有用な物質を鋭意探索した結果、ブテア  スペルバが障害された認知機能を有意に改善する作用を有することを見出した。また、ブテア  スペルバはうつ様行動を改善させたことから、抗うつ作用を併せ持つことを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、ブテア  スペルバ又はその抽出物を有効成分とする抗認知機能障害剤により上記課題を解決したものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の抗認知機能障害剤は、障害された認知機能を有意に改善する作用を有する。また、当該剤は、抗うつ作用を併せ持つと共に、副作用が少なく、安全性に優れるため長期間の服用も可能であり、認知症の予防及び治療に極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】新規物体認知行動試験の結果を示す図である。
【図２】改変型Ｙ−迷路試験の結果を示す図である。
【図３】恐怖条件付け試験の結果を示す図である。
【図４】尾懸垂試験の結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明で用いられるブテア  スペルバ（Ｂｕｔｅａ  ｓｕｐｅｒｂａ）はマメ科コチョウ亜科に属する熱帯植物の一種である。斯かる植物は、根、茎、花、葉等いずれの任意の部位を使用することができるが、根を用いるのが好ましい。
ブテア  スペルバは、そのまま用いても乾燥させて用いてもよく、更にそれらを処理して用いてもよい。処理としては、例えば、切断、破砕、磨砕、粉砕等が挙げられる。
【００１３】
ブテア  スペルバの抽出物は、ブテア  スペルバをそのままもしくは乾燥させ、又はそれらを処理した後に抽出工程に付すことによって得ることができる。ブテア  スペルバの抽出物としては、市販されているもの、常法により得られる各種溶媒抽出物であってもよい。
ブテア  スペルバの抽出物を得る抽出手段は、特に制限されず、例えば、固液抽出、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌等の手段を用いることができる。
【００１４】
抽出のための溶媒としては、例えば、水、低級アルコール、多価アルコール、ケトン類、エステル類、エーテル類、ポリエーテル類、炭化水素類、芳香族炭化水素類、ハロゲン化炭化水素類、超臨界二酸化炭素、オイル類、これらの混合物等が挙げられる。なかでも、水、低級アルコール、低級アルコール−水混合液が好ましい。
低級アルコールとしては、炭素数１〜５のアルコールが好ましく、メタノール、エタノール、プロパノールがより好ましく、エタノールが特に好ましい。
【００１５】
抽出のための溶媒として低級アルコール−水混合液を使用する場合には、低級アルコールと水との配合割合（容量比）としては、０．００１〜１００：９９．９９９〜０が好ましく、５〜９５：９５〜５がより好ましい。エタノール水溶液の場合、エタノール濃度が５０〜９５（ｖ／ｖ）％であることが好ましい。
【００１６】
溶媒の使用量としては、ブテア  スペルバ（乾燥質量換算）１ｇに対して１〜１００ｍＬが好ましく、抽出時間としては、３０分間〜２日間が好ましく、１時間〜１２時間がより好ましい。このときの抽出温度は、０℃〜溶媒沸点、より好ましくは２０〜１００℃である。このような抽出が終了してから溶媒を分取し、更に溶媒を加えて抽出する操作を数回繰り返すのが好ましい。
【００１７】
斯くして得られるブテア  スペルバの抽出物は、抽出液や画分をそのまま用いてもよく、適宜な溶媒で希釈した希釈液として用いてもよく、或いは濃縮エキスや乾燥粉末としたり、ペースト状に調製したものでもよい。また、凍結乾燥し、用時に、抽出に用いられる溶媒、例えば水等で希釈して用いることもできる。
【００１８】
ブテア  スペルバの抽出物は、食品上・医薬品上許容し得る規格に適合し本発明の効果を発揮するものであれば粗精製物であってもよく、さらに得られた粗精製物を公知の分離精製方法を適宜組み合わせてこれらの純度を高めてもよい。精製手段としては、有機溶媒を用いる沈殿法、遠心分離、限界濾過膜、高速液体クロマトグラフやカラムクロマトグラフ等が挙げられる。
【００１９】
ブテア  スペルバ又はその抽出物は、後述する実施例に示すように、嗅球摘出（ＯＢＸ）により低下した認知機能を改善する効果を示した。また、嗅球摘出（ＯＢＸ）マウスは、うつ様症状も呈することが知られているが、ブテア  スペルバの抽出物は、尾懸垂試験における無動時間を有意に短縮し、抗うつ効果を示した。従って、本発明は、ブテア  スペルバ又はその抽出物を有効成分とする抗認知機能障害剤を提供する。
本明細書で云う認知機能障害には、脳内の情報処理によって実現する機能、例えば記憶、学習、知覚、思考、判断、見当識、注意、実行等の機能における障害や、アルツハイマー病に代表される老人性認知症が含まれる。
【００２０】
本発明の抗認知機能障害剤は、認知機能障害、とりわけ短期／長期記憶障害、物体認識記憶障害、空間記憶障害、老人性認知症を予防、治療及び／又は改善するための医薬品、食品又は飼料等の他の組成物の製造のために使用することができる。
これら医薬品、食品及び他の組成物は、本発明の効果を奏する限り、必要に応じて、薬学的に許容される担体、添加剤、他の有効成分、薬理成分等を含有していてもよい。
【００２１】
上記医薬品、食品及び他の組成物における抗認知機能障害剤の含有量は、ブテア  スペルバの乾燥物換算として、好ましくは０．５質量％以上、より好ましくは１質量％以上、更に好ましくは１０質量％以上であり、他方、好ましくは１００質量％以下、より好ましくは９０質量％以下、更に好ましくは５０質量％以下である。
【００２２】
医薬品は任意の投与形態で投与され得る。投与形態としては、例えば注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与又は錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与が挙げられる。
このような種々の剤型の医薬品を調製するには、薬学的に許容される担体、例えば賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
【００２３】
また、食品又は他の組成物の形態は、固形、半固形又は液状であり得る。食品としては、例えば、パン類、ケーキ類、麺類、菓子類、ゼリー類、冷凍食品、アイスクリーム類、乳製品、飲料等の各種食品の他、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）が挙げられる。
種々の形態の食品又は他の組成物を調製するには、他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
【００２４】
本発明の抗認知機能障害剤の投与量又は摂取量は、対象者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、経口投与又は摂取の場合成人１人当たり、ブテア  スペルバの乾燥物換算として、１日あたり０．１〜２０ｍｇ／ｋｇとすることが好ましく、１ｍｇ〜１０ｍｇ／ｋｇとするのがより好ましい。
【実施例】
【００２５】
1.ブテア  スペルバ抽出物（ＳＯ）の調製
ブテア  スペルバの根の乾燥粉砕物５２ｇを９５（ｖ／ｖ）％エタノール２００ｍＬで水浴中７５℃、２時間加熱し、抽出ろ過した。この過程を３回繰り返し、全抽出液を併せて減圧濃縮した。濃縮液は  ４０℃で３日間、真空乾燥し、抽出物として４．６３ｇを回収した（１ｇ乾燥根粉末は０．０８９ｇ抽出物に相当）。
ブテア  スペルバの（成人）での一日摂取量はブテア  スペルバ乾燥物で１０ｍｇ／ｋｇ／日とみなし、その１０倍から３０倍容量である１００ｍｇ／ｋｇ／日及び３００ｍｇ／ｋｇ／日に相当する抽出物を実験期間中にモデル動物に経口投与した。
【００２６】
２．嗅球摘出（ＯＢＸ）マウスの作製
９週齢ｄｄＹ系雄性マウスを用いた。ペントバルビタール麻酔下で頭蓋を切開して、嗅球を吸引除去した。尚、切開部位には局所麻酔薬リドカインを塗布した。嗅球摘出を行わず、同様の手術を行ったマウスを偽手術群とした。施術３日後より、ブテア  スペルバ抽出物、タクリン（ＴＨＡ、２．５ｍｇ／ｋｇ／日）或いはイミプラミン（ＩＭＰ、１０ｍｇ／ｋｇ／日；腹腔内投与）の投与を開始し、投与は１日１回、実験期間中継続した。
手術２週間後より次の行動実験を開始した。
【００２７】
３．新規物体認知試験
短期記憶を評価するために新規物体認知試験を行った。本試験はサンプル試行とテスト試行から成る。サンプル試行では約５０ｃｍ四方の観察箱に同一形状物体を２個設置し、その中にマウスを１匹入れて各物体（Ｏ１，  Ｏ２）に対して関心を示す時間を測定した。一旦マウスをケージに戻し、３０分後にテスト試行を実施した。テスト試行では２つの物体のうち、１つを色・形状の異なる新規物体、他の一つはサンプル試行で使用した物体のコピーとし、マウスが各物体に関心を示す時間を測定した。
識別指数ＤＩは、下記の式より求めた。
ＤＩ＝＝（ＴＮ  −  ＴＦ）／（ＴＮ  ＋  ＴＦ）
ここでＴＮは新規物体に関心を示した時間、ＴＦは既知物体に対して関心を示した時間を意味する。
試験には、偽手術群、ＯＢＸ−水投与群、ブテア  スペルバ抽出物（１００ｍｇ／ｋｇ／日）投与群（ＳＯ（１００）と表記、以下同じ）、ブテア  スペルバ抽出物（３００ｍｇ／ｋｇ／日）投与群（ＳＯ（３００）と表記、以下同じ）、タクリン投与群（ＴＨＡ（２．５）と表記、以下同じ）の５群を用意し、各群１０匹とした。なお、実験期間中、偽手術群、ＯＢＸ−水投与群にはブテア  スペルバ抽出物の代わりに水を投与した。
統計処理は、サンプル試行における新規物体と既知物体に対する探索時間の差はｐａｉｒｅｄ  ｔ−ｔｅｓｔで評価した。また識別指数については、偽手術群とＯＢＸ−水投与群との比較をｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔにより、ＯＢＸ−水投与群と薬物投与群との比較を一元配置分散分析の後、Ｓｔｕｄｅｎｔ−Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ  ｔｅｓｔで行った。危険率Ｐが０．０５未満の場合を有意と判定した。結果を図１に示す。
【００２８】
図１より、ＯＢＸ−水投与群では新規物体の探索時間が偽手術群と比べて有意に短縮し、新規物体認知行動に障害が発現した。一方、ブテア  スペルバ抽出物（１００ｍｇ／ｋｇ／日）投与群、ブテア  スペルバ抽出物（３００ｍｇ／ｋｇ／日）投与群、タクリン投与群では新規物体に対する探索時間は既知物体に対する探索時間よりも有意に長く、新規物体認知障害の改善が認められた。
【００２９】
４．改変型Ｙ−迷路試験
短期の空間認知記憶を評価するために改良型Ｙ−迷路試験を用いた。本試験はサンプル試行とテスト試行から成り、サンプル試行では一つのアームを閉鎖したＹ−字型迷路に５分間マウスを入れ、自由に探索させた。その後、ケージに戻し、サンプル試行の３０分後にテスト試行を行った。テスト試行では全アームを解放した条件で、再びマウスを迷路に５分間入れて自由に探索させた。この間、マウスが新規アームに滞在する割合を算出した。
試験には、偽手術群、ＯＢＸ−水投与群、ブテア  スペルバ抽出物（１００ｍｇ／ｋｇ／日）投与群、ブテア  スペルバ抽出物（３００ｍｇ／ｋｇ／日）投与群、タクリン投与群の５群を用意し、各群１０匹とした。なお、実験期間中、偽手術群、ＯＢＸ−水投与群にはブテア  スペルバ抽出物の代わりに水を投与した。
統計処理は、偽手術群とＯＢＸ−水投与群との比較をｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔにより、ＯＢＸ−水投与群と薬物投与群との比較を一元配置分散分析の後、Ｓｔｕｄｅｎｔ−Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ  ｔｅｓｔで行った。危険率Ｐが０．０５未満の場合を有意と判定した。尚、実験中、迷路から抜け出て動物（１匹）についてはデータ解析から除いた。結果を図２に示す。
【００３０】
図２より、ＯＢＸ−水投与群の新規アームにおける探索時間は偽手術群に比べて有意に短縮し、空間認知行動障害が発現した。一方、ブテア  スペルバ抽出物（１００ｍｇ／ｋｇ／日）投与群、ブテア  スペルバ抽出物（３００ｍｇ／ｋｇ／日）投与群、タクリン投与群では、新規アーム内におけるマウスの探索時間はＯＢＸ−水投与群と比べて有意に延長し、偽手術群のレベルまで回復した。
【００３１】
５．恐怖条件付け試験
実験第１日目はマウスを観察箱にいれ、３分間慣らした後、ブザー音を与えつつ床から電気ショックを負荷した。これを１分間間隔で５回反復し、恐怖記憶を形成させた。実験第２日目には観察箱から電気ショックを流すグリッドを除いた条件で，再びマウスを観察箱に入れた。この状態で３分間行動を観察し、この間、動物は電気ショックを受けた環境から恐怖を想起して動きを停止（フリーズ）させる時間を測定し，文脈的記憶として評価した。その後、ブザー音を提示して更に恐怖経験を想起させ、条件記憶とした。０．０５  ｃｍ2／ｓｅｃ以下の動きを停止と定義し、恐怖経験の想起を判定した。
試験には、偽手術群、ＯＢＸ−水投与群、ブテア  スペルバ抽出物（１００ｍｇ／ｋｇ／日）投与群、ブテア  スペルバ抽出物（３００ｍｇ／ｋｇ／日）投与群、タクリン投与群の５群を用意し、各群８−９匹とした。なお、実験期間中、偽手術群、ＯＢＸ−水投与群にはブテア  スペルバ抽出物の代わりに水を投与した。結果を図３に示す。
【００３２】
図３より、ＯＢＸ−水投与群ではブザー音で想起させた条件記憶の障害が発症した。この記憶は蛋白合成を必要とする長期記憶として知られている。ブテア  スペルバ抽出物（１００ｍｇ／ｋｇ／日）投与群、ブテア  スペルバ抽出物（３００ｍｇ／ｋｇ／日）投与群、タクリン投与群では、この記憶障害が改善されている傾向が認められた。
【００３３】
６．尾懸垂試験
ＯＢＸマウスのうつ様行動を測定した。マウス尾部を観察箱内の床より５０ｃｍの位置に懸垂し、逃避不可能なストレスを８分間負荷した。無動を０．０５  ｃｍ2／ｓｅｃ以下の動きと定義し、測定開始２分後より６分間無動時間をＳＭＡＲＴ  ｓｙｓｔｅｍで解析した。
試験には、偽手術群、ＯＢＸ−水投与群、ブテア  スペルバ抽出物（１００ｍｇ／ｋｇ／日）投与群、ブテア  スペルバ抽出物（３００ｍｇ／ｋｇ／日）投与群、タクリン投与群、ＩＭＰ投与群（ＩＭＰ（１０）と表記）の６群を用意し、各群１０匹とした。実験期間中、偽手術群、ＯＢＸ群にはブテア  スペルバ抽出物の代わりに水を投与した。
統計処理は、偽手術群とＯＢＸ−水投与群との比較をｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔにより、ＯＢＸ−水投与群と薬物投与群との比較を一元配置分散分析の後、Ｓｔｕｄｅｎｔ−Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ  ｔｅｓｔで行った。危険率Ｐが０．０５未満の場合を有意と判定した。結果を図４に示す。
【００３４】
図４より、偽手術群と比べＯＢＸ−水投与群では無動時間が有意に延長し、うつ様行動が発現した。一方、ブテア  スペルバ抽出物（３００ｍｇ／ｋｇ／日）投与群、ＩＭＰ投与群では、いずれもＯＢＸ−水投与群と比べて有意に無動時間が短縮した。
【００３５】
以上より、ブテア  スペルバの反復摂取又は投与によって、認知機能の障害の改善を図れることが確認された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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