(57)【要約】      （修正有）【課題】癌細胞の生存に大きく関与するＨＳＰ９０を標的とするＨＳＰ９０阻害剤と他の抗腫瘍剤との併用療法の提供。【解決手段】下記一般式（１）2014034533.tif 000011で表されるトリアゾール化合物（Ａ）と、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を組み合わせた抗腫瘍剤。【選択図】図１
2014034533.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
2014034533.tif 000008
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）と、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を組み合わせた抗腫瘍剤。
【請求項２】
前記一般式（１）において、Ｘがエチル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、２，２−ジメチルプロピル基、２−プロピニル基、２−ブチニル基、ハロゲン原子である請求項１に記載の抗腫瘍剤。
【請求項３】
前記一般式（１）において、ｍが０または１であり、Ａがモルホリノ基、４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基である請求項１に記載の抗腫瘍剤。
【請求項４】
前記上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）が、エルロチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブから選択される１種以上である請求項１に記載の抗腫瘍剤。
【請求項５】
更に、ゲムシタビンを含有する請求項１に記載の抗腫瘍剤。
【請求項６】
一般式（１）
【化２】
2014034533.tif 000009
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）を有効成分として含有する事を特徴とする、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の抗腫瘍効果を増強させる抗腫瘍効果増強剤。
【請求項７】
前記一般式（１）において、Ｘがエチル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、２，２−ジメチルプロピル基、２−プロピニル基、２−ブチニル基、ハロゲン原子である請求項６に記載の抗腫瘍効果増強剤。
【請求項８】
前記一般式（１）において、ｍが０または１であり、Ａがモルホリノ基、４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基である請求項６に記載の抗腫瘍効果増強剤。
【請求項９】
癌治療における上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の投与において、一般式（１）
【化３】
2014034533.tif 000010
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）を併用で投与する事を特徴とする前記上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の抗腫瘍効果を増強させる方法。
【請求項１０】
前記一般式（１）において、Ｘがエチル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、２，２−ジメチルプロピル基、２−プロピニル基、２−ブチニル基、ハロゲン原子である、請求項９に記載の上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の抗腫瘍効果を増強させる方法。
【請求項１１】
前記一般式（１）において、ｍが０または１であり、Ａがモルホリノ基、４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基である、請求項９に記載の上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の抗腫瘍効果を増強させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＨＳＰ９０阻害活性を有するトリアゾール化合物と、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤を組み合わせた抗腫瘍剤に関する。また、前記ＨＳＰ９０阻害活性を有するトリアゾール化合物を含有することを特徴とする、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の抗腫瘍効果増強剤、並びに上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の抗腫瘍効果を増強させる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
悪性腫瘍疾患の治療のため、新たな抗腫瘍化学療法の開発が求められている。近年では、細胞増殖に関与するシグナル伝達に関わる増殖因子や増殖因子受容体、並びにシグナル伝達経路に関わるタンパク質等の各種機能性分子が認知されてきている。そこで、これらの機能性分子を標的として、その機能を抑制させることを作用機作とする分子標的抗腫瘍剤が開発されている。
【０００３】
熱ショックタンパク（Ｈｅａｔ  Ｓｈｏｃｋ  Ｐｒｏｔｅｉｎ；ＨＳＰ）は細胞内に存在する分子シャペロンであり、その分子量によってＨＳＰ９０、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ４０、ｓｍａｌｌ  ＨＳＰｓなど、幾つかのファミリーに分類される機能性分子である。分子シャペロンとは、タンパク質の機能的高次構造の形成を促進するため、標的タンパク質と一時的に複合体を形成するタンパク質の総称である。すなわち、分子シャペロンは、タンパク質の折り畳みや会合を助け、凝集を抑止する活性を持つ。
ＨＳＰ９０は、細胞内の全可溶性タンパク質の１〜２％を占める豊富に存在する分子シャペロンであり、細胞質に一様に分布しており、主に二量体として存在する。ＨＳＰ９０は、ＡＴＰに依存して、変性又は折り畳み状態ではないタンパク質の折り畳みを行なう機能を担う。ＨＳＰ９０は、細胞内のシグナル伝達系に関わる多様なタンパク質と相互作用することが知られている。すなわちＨＳＰ９０は、多様な標的タンパク質の機能発現に必要な場合が多く、その作用機作は、ＨＳＰ９０が不安定な折り畳み状態にあるタンパク質を特異的に認識して、これと結合して複合体を形成する生化学的特性に基づいている。タンパク質の折り畳みにおけるＨＳＰ９０単独の活性は弱く、同様の折り畳み活性を持つＨＳＰ７０、ｐ２３など他の分子シャペロン（コシャペロン）と共同で機能している。
癌関連のシグナル伝達に関わる多様な標的タンパク質（ステロイドレセプター、Ｒａｆ セリンキナーゼ、チロシンキナーゼ類）は、ＨＳＰ９０にその構造構築を依存している。したがって、ＨＳＰ９０が細胞周期の制御、細胞の癌化・増殖・生存シグナルに深く関与していることが明らかになっている。
【０００４】
ヒト腫瘍では多くのシグナル分子の調節が失われており、これらのシグナル分子の機能を維持するために、腫瘍はＨＳＰ９０を必要としている（非特許文献１）。したがって、ＨＳＰ９０に作用して、その機能を阻害する化合物は、癌関連のシグナル伝達に関わる多様な標的タンパク質の分解を引き起こすことが分かっており、それに基づき癌細胞の増殖を抑制することが知られている。すなわちＨＳＰ９０阻害剤は、標的タンパク質とＨＳＰ９０を含むシャペロン複合体の構成を変化させ、該複合体から離脱した標的タンパク質を主にユビキチン・プロテアソ−ム系で分解させる。これによりＨＳＰ９０の標的タンパク質量が減少し、それに伴う下流へのシグナル伝達を遮断し、癌細胞の増殖を抑制する事により抗腫瘍効果をもたらす。
特に、癌化する過程では複数の遺伝子異常が蓄積されており、タンパク質の変異が生じている。すなわち癌細胞では、生成した変異タンパク質が多く、正常タンパク質からなる正常細胞と比較して、より多くのシャペロン活性を必要とする。このため、多くの癌細胞ではＨＳＰ９０の発現量が増加していることが知られている。これらのことから、ＨＳＰ９０阻害剤は、正常細胞ではなく癌細胞に選択的に作用することが期待される。さらに癌細胞は、異常なタンパク質発現が認められる事に加え、低酸素状態、栄養飢餓状態に置かれており、一種のストレス状態下にあるため、ＨＳＰ９０によるシャペロン活性への依存度合いが高いことが考えられる。したがって癌細胞は、ＨＳＰ９０阻害剤に対する感受性が、正常細胞と比較して高いことが期待される。そこでＨＳＰ９０を標的分子とするＨＳＰ９０阻害剤の探索的研究、並びにその抗腫瘍効果の検証がなされている。
【０００５】
ＨＳＰ９０阻害剤の探索的研究として、特許文献１には、５−（２，４−ジヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾール−３−オン誘導体が、ＨＳＰ９０阻害活性を備え、且つ癌細胞増殖阻害活性を兼ね備える化合物である事を記載している。該化合物は動物実験においても優れた抗腫瘍効果を示し、制癌剤として有望であることが報告されている。また、特許文献２または特許文献３でも、ＨＳＰ９０阻害活性を有するトリアゾール化合物を報告している。
【０００６】
ヒト上皮増殖因子受容体ファミリーに属する上皮増殖因子受容体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＥＧＦＲ（ｅｒｂＢ１またはＨＥＲ−１））は、細胞外リガンド結合領域、膜貫通領域及び細胞内チロシンキナーゼ領域から構成されているチロシンキナーゼ活性を有する膜貫通型受容体で、分子量１７０ＫＤａのＩ型膜貫通型糖タンパクである。ＥＧＦＲはその構造において、他のｅｒｂＢファミリータンパクであるｅｒｂＢ２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ｅｒｂＢ３（ＨＥＲ３）、ｅｒｂＢ４（ＨＥＲ４）と相同性を示し、ＥＧＦＲはｅｒｂＢファミリータンパクとホモ又はヘテロダイマー（二量体）を形成する。ＥＧＦＲ細胞外リガンド結合領域に、上皮増殖因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ：ＥＧＦ）や形質転換増殖因子−α（ＴＧＦ−α）等のリガンドが結合すると、ＥＧＦＲは二量体を形成し、各受容体分子上のチロシン残基が相互に自己リン酸化される。この自己リン酸化に引き続いて、下流の細胞内シグナル伝達系が活性化され、細胞増殖のためのシグナルが核へと伝達され、細胞増殖を刺激する一連の事象が起こる事になる。
ＥＧＦＲは上皮性組織や間葉組織などの正常組織に発現しており、細胞の増殖、再生、分化、発生などの過程で主要な役割を担っている。その一方で、ＥＧＦＲの発現レベル及びその発現頻度は、腫瘍細胞では正常細胞よりも高く、頭頸部癌、乳癌、肺癌、大腸癌、前立腺癌、腎癌、子宮癌、卵巣癌、及び膀胱癌など多くの固形癌で過剰発現していることが報告されており、ＥＧＦＲの過剰発現が腫瘍の進行度、予後、化学療法抵抗性に関与していると考えられている。したがって、ＥＧＦＲを含むシグナル伝達に関わる受容体タンパク分子は、癌治療における新しい標的分子のひとつと考えられている。特に、ＥＧＦＲからのシグナル伝達の契機となるＥＧＦＲチロシンキナーゼの活性化は、腫瘍における細胞周期亢進、アポトーシス抑制、浸潤、転移、血管新生等の腫瘍増殖に関与すると考えられている。
ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害作用を主作用機作とする抗腫瘍剤として、エルロチニブ（タルセバ（登録商標））、ラパチニブ（タイケルブ（登録商標））、ゲフィチニブ（イレッサ（登録商標））、等が知られている。これらはＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害作用によりＥＧＦＲの自己リン酸化を抑制し、ＥＧＦＲへのリガンドの結合により引き起こされる細胞増殖シグナルの伝達を阻害する事により細胞の分裂を阻害する。したがって、ＥＧＦＲを発現する腫瘍細胞の細胞分裂を阻害し、腫瘍増殖を抑制する効果を示す。
【０００７】
悪性腫瘍疾患は薬物療法の医療満足度が十分でなく、治療効果を高める事を目的に複数の薬剤を組み合せて用いる併用化学療法が行なわれている。すなわち、抗腫瘍作用の作用機作や副作用の種類が異なる複数の薬剤を組み合わせた併用化学療法が開発されており、治療成績の向上に貢献している。特に近年では、細胞増殖に関与するシグナル伝達に関わる分子を標的とする分子標的抗腫瘍剤が開発され、臨床に供されている。したがって、これら分子標的抗腫瘍剤を用い、更により治療効果の高い併用療法の確立が希求されている。
ＨＳＰ９０阻害剤においても、抗腫瘍効果向上や薬剤耐性腫瘍に対する感受性向上を目的に、他の抗腫瘍剤との併用療法が試みられている（非特許文献２）。
ＨＳＰ９０阻害剤は、ＨＳＰ９０と標的タンパク質との複合体形成機能を阻害する事により癌細胞増殖阻害作用を発揮する。したがって、ＨＳＰ９０阻害剤と、その標的タンパク質（クライアントタンパク質）の機能阻害を作用機構とする抗腫瘍剤との併用は、抗腫瘍効果の増強が期待される。ＨＳＰ９０のクライアントタンパク質としてＥＧＦＲが知られていることから、ＥＧＦＲからのシグナル伝達機能を阻害するＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と、ＨＳＰ９０阻害剤の併用療法が検討されている。特許文献４は、ＨＳＰ９０阻害活性を有するトリアゾール化合物とエルロチニブとの併用を記載している。また非特許文献３には、ＨＳＰ９０阻害剤として知られるＩＰＩ−５０４とラパチニブとの併用使用が記載されている。更に非特許文献４には、ＨＳＰ９０阻害剤として知られる１７−ＡＡＧとゲフィチニブとの併用について記載している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｈｓｐ９０  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｓ  ｎｏｖｅｌ ｃａｎｃｅｒ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ．  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２００２， ８：４（Ｓｕｐｐｌ．），Ｓ５５−６１．
【非特許文献２】Ｈｓｐ９０  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ：Ｔｈｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｂｅｎｅｆｉｔｓ  ｏｆ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｏｆ  Ｈｓｐ９０  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２０１２，８３：８,  ９９５−１００４．
【非特許文献３】Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ＩＰＩ−５０４，ａ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｈｅａｔ  ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ９０  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｕｍａｎ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｈｕｍａｎ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  ｍｏｄｅｌｓ  ａｓ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ａｇｅｎｔ  ａｎｄ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ  ｏｒ  ｌａｐａｔｉｎｉｂ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２００９，８，２１３１−２１４１
【非特許文献４】Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ＺＤ１８３９（Ｉｒｅｓｓａ）  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  １７−ＡＡＧ  ｏｎ  ｇｌｉｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，２００６，４５，２８８−３０１
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開ＷＯ２００６／０９５７８３号
【特許文献２】国際公開ＷＯ２００９／０２３２１１号
【特許文献３】国際公開ＷＯ２００７／１３４６７８号
【特許文献４】国際公開ＷＯ２０１１／１３３５２０号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
癌細胞の生存にＨＳＰ９０が依存することから、ＨＳＰ９０を標的分子とする抗腫瘍剤の開発が進められている。本発明の目的は、このＨＳＰ９０阻害剤を用いたより治療効果の高い薬物療法として、他の抗腫瘍剤との併用療法を提供することである。すなわちＨＳＰ９０阻害剤として５−（２，４−ジヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾール−３−オン誘導体と他の抗腫瘍剤による、優れた治療効果を発揮する併用療法を提供する事を課題とする。
また、別の観点によると、５−（２，４−ジヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾール−３−オン誘導体が、既存の抗腫瘍剤の治療効果増強作用を発揮し、既存の抗腫瘍剤の抗腫瘍効果増強剤としての用途を提供する事にある。
更に別の観点では、悪性腫瘍治療のためのＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤療法において、更に治療効果を高める併用療法を提供する事を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは鋭意検討の結果、一般式（１）で示される５−（２，４−ジヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾール−３−オン誘導体とＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を組み合せが、それぞれの単独使用による抗腫瘍効果と比較し、顕著に優れた抗腫瘍効果を発揮する事を見出した。すなわち、本発明は、以下の構成を要旨とする。
（１）下記一般式（１）
【化１】
2014034533.tif 000003
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）と、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を組み合わせた抗腫瘍剤。
【００１２】
（２）別の観点によると、下記一般式（１）
【化２】
2014034533.tif 000004
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）を有効成分として含有する事を特徴とする、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の抗腫瘍効果を増強させる抗腫瘍効果増強剤。
【００１３】
（３）また、癌治療における上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の投与において、下記一般式（１）
【化３】
2014034533.tif 000005
［式中、Ｘは直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子を示し、Ｙは硫黄原子または酸素原子を示し、ｍは０〜４の整数を示し、Ａは置換基を有するアミノ基を示す］で表されるトリアゾール化合物（Ａ）を併用で投与する事を特徴とする、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤の抗腫瘍効果を増強させる方法、を包含する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によると、５−（２，４−ジヒドロキシフェニル）−［１，２，４］トリアゾール−３−オン誘導体とＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を組み合せて使用する事により、治療効果が向上した抗腫瘍薬物療法を提供する事ができる。従来臨床治療に用いられているＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤療法に、前記トリアゾール誘導体を適用する事により、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の抗腫瘍効果を増強し、治療効果を向上させることができる。
したがって従来方法による抗腫瘍効果の更なる向上が達成できると共に、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に対する感受性が低下した悪性腫瘍に対して、十分な腫瘍増殖抑制作用をもたらし治療効果を維持する事ができる。
更に、それぞれ抗腫瘍剤の単独使用と同程度の抗腫瘍効果を得る場合において、各々の抗腫瘍剤の用量を相対的に減量することができ、望ましくない薬理作用の発現を抗腫瘍効果に悪影響を及ぼすことなく軽減する事ができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ヒト膵癌細胞ＢｘＰＣ３の皮下移植マウスを用いた、エルロチニブ（Ｂ−１）、トリアゾール化合物（Ａ−１）、ゲムシタビン（Ｃ−１）及び比較ＨＳＰ９０阻害剤（Ｄ）の各単剤療法、並びに、エルロチニブ（Ｂ−１）とトリアゾール化合物（Ａ−１）の併用療法、及びエルロチニブ（Ｂ−１）と比較ＨＳＰ９０阻害剤（Ｄ）の併用療法、並びにエルロチニブ（Ｂ−１）とトリアゾール化合物（Ａ−１）及びゲムシタビン（Ｃ−１）の併用療法の抗腫瘍効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、一般式（１）で示されるトリアゾール化合物（Ａ）と、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を組み合せて用いることを特徴とする。更に、任意にゲムシタビンを組み合せて用いる事を特徴とする。以下にその詳細について説明する。
本発明において、ＨＳＰ９０阻害活性を有するトリアゾール化合物（Ａ）は、前記一般式（１）で示されるトリアゾール化合物である。すなわち、該トリアゾール環において、Ｙ基の置換位置を３位とし、Ａ基を有するフェニル基の置換位置を４位とし、Ｘ基を有する２，４−ジヒドロキシフェニル基の置換位置を５位とする［１，２，４］トリアゾール誘導体である。
前記一般式（１）で表されるトリアゾール化合物は、ケト−エノール互変異性体が存在し、下記一般式（１Ｋ）で示されるケト型異性体構造を取り得る。すなわち本発明において、前記（１）及び（１Ｋ）は同一化合物であり、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ）は、一般式（１Ｋ）で示される化合物も包含するものである。
【００１７】
【化４】
2014034533.tif 000006
【００１８】
一般式（１）のＸは、置換基を有していてもよい直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、置換基を有していてもよい炭素数２〜１０のアルキニル基、またはハロゲン原子である。以下にＸの説明をする。
一般式（１）におけるＸとして、直鎖状または分岐状の炭素数１〜８のアルキル基が挙げられる。該アルキル基として好ましくは、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、２，２−ジメチルプロピル基、ｎ−へキシル基、シクロヘキシル基、ｎ−ヘプチル基、シクロヘキシルメチル基、ｎ−オクチル基、シクロヘキシルエチル基、等を挙げることができる。
該アルキル基は置換基を有しても良い。置換基を有する場合の置換基としては、例えば、メルカプト基、水酸基、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、炭素環または複素環アリール基、炭素数１〜４アルキルチオ基、アリールチオ基、炭素数１〜４アルコキシ基、アリールオキシ基、脂肪族又は芳香族アミノ基、アシル基、カルボキシル基、等を挙げることができる。Ｘとして置換基を有する該アルキル基の例としては、２，２，２−トリクロロエチル基、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、トリフルオロメチル−２，２，２−トリフルオロエチル基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチル基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル基、モルホリニルメチル基、ピペリジニルメチル基、ヒドロキシメチル基、１−ヒドロキシエチル基、２−ヒドロキシエチル基、１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル基、メトキシエチル基、メトキシメチル基、ベンジル基、２−フェニルエチル基、ピリジルメチル基、等を挙げることができる。
Ｘにおける直鎖状または分岐状の炭素数１〜８アルキル基としては、エチル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、２，２−ジメチルプロピル基が好ましく、イソプロピル基が特に好ましい。
【００１９】
一般式（１）のＸとして、炭素数２〜１０のアルキニル基が挙げられる。該アルキニル基は、１−アルキニル基または２−アルキニル基である。該アルキニル基としては置換基を有していても良い。置換基を有する場合の置換基としては、ハロゲン原子、炭素環または複素環アリール基、炭素数１〜４アルキルオキシ基、炭素数１〜４アルキルチオ基、脂肪族又は芳香族アミノ基、アシル基、アルキルシリル基、等が挙げられる。好ましい１−アルキニル基としてはエチニル基、３，３−ジメチルブタ−１−イニル基、２−フェニル−エチニル基、２−トリメチルシリル−１−エチニル基、等が挙げられる。２−アルキニル基としては、例えばプロパ−２−イニル基、ブタ−２−イニル基、３−フェニルプロパ−２−イニル基、４，４−ジメチルペンタ−２−イニル基、３−トリメチルシリルプロパ−２−イニル基、等が挙げられる。炭素数２〜１０の２−アルキニル基が好ましく、プロパ−２−イニル基またはブタ−２−イニル基が特に好ましい。
【００２０】
一般式（１）のＸとして、ハロゲン原子が挙げられる。ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子を示す。ハロゲン原子としては、臭素原子が好ましい。
【００２１】
一般式（１）のＸとして、炭素数１〜８の直鎖状または分岐状のアルキル基、または炭素数２〜１０の２−アルキニル基が好ましい。置換基Ｘとして特に好ましくは、エチル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、プロパ−２−イニル基またはブタ−２−イニル基である。
【００２２】
一般式（１）において、Ａは置換基を有するアミノ基を表す。Ａにおける置換基を有するアミノ基としては、脂肪族１級アミノ基または脂肪族２級アミノ基が挙げられる。
脂肪族１級アミノ基としては、炭素数１〜８の直鎖状、分岐状または環状アルキル基を有するＮ−アルキルアミノ基を挙げることができる。例えばメチルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ｎ−ブチルアミノ基、シクロヘキシルアミノ基、等が挙げられる。脂肪族２級アミノ基としては、炭素数１〜８の直鎖状、分岐状または環状アルキル基を有するＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ基、若しくは環状の２級アミノ基が挙げられる。Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノ基としては、例えばジメチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−ブチルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−シクロヘキシルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルアミノ基、等が挙げられる。脂肪族の環状の２級アミノ基としては、モルホリノ基、４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基、等が挙げられる。Ａで表される脂肪族アミノ基としては、脂肪族の環状の２級アミノ基が好ましく、モルホリノ基、４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基が好ましい。中でもモルホリノ基または４−メチルピペラジン−１−イル基が特に好ましい。
一般式（１）において、ｍは０乃至４の整数を表す。中でもｍは０または１が好ましい。
すなわち一般式（１）における−（ＣＨ２）ｍ−Ａ基としては、ｍが０または１であり、Ａが脂肪族の環状の２級アミノ基が好ましく、モルホリノ基、メチル−モルホリノ基、４−メチルピペラジン−１−イル基、メチル−４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、メチル−ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基、メチル−ピロリジン−１−イル基が特に好ましい。
【００２３】
本発明における前記トリアゾール化合物（Ａ）として、特に好ましい例を以下に挙げる。
５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン；（Ａ−１）、
４−イソプロピル−６−｛５−メルカプト−４−［４−（モルホリン−４−イル）−フェニル］−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル｝−ベンゼン−１，３−ジオール；（Ａ−２）、
４−イソプロピル−６−｛５−メルカプト−４−［４−（モルホリン−４−イルメチル）−フェニル］−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル｝−ベンゼン−１，３−ジオール；（Ａ−３）、
４−｛５−ヒドロキシ−４−［４−（モルホリン−４−イル）−フェニル］−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル｝−６−イソプロピル−ベンゼン−１，３−ジオール；（Ａ−４）、
４−｛５−ヒドロキシ−４−［４−（モルホリン−４−イルメチル）−フェニル］−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル｝−６−イソプロピル−ベンゼン−１，３−ジオール；（Ａ−５）、
５−［５−（ブチン−２−イル）−２，４−ジヒドロキシ−フェニル］−４−［４−（モルホリン−４−イルメチル）−フェニル］−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン；（Ａ−６）、
４−（ブチン−２−イル）−６−｛５−メルカプト−４−［４−（モルホリン−４−イルメチル）−フェニル］−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−ベンゼン−１，３−ジオール；（Ａ−７）、
４−ブロモ−６−｛５−メルカプト−４−［４−（モルホリン−４−イル）−フェニル］−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル｝−ベンゼン−１，３−ジオール；（Ａ−８）、
５−［２，４−ジヒドロキシ−５−（プロピン−２−ニル）−フェニル］−４−［４−（モルホリン−４−イルメチル）−フェニル］−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン；（Ａ−９）
【００２４】
本発明の一般式（１）に係るトリアゾール化合物（Ａ）は、公知の製造方法により製造する事ができる。例えば、国際公開ＷＯ２００６／０９５７８３号に開示される製造方法に従い、合成することができる。例えば、上記５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン；（Ａ−１）は、前記特許文献の実施例２−５にて製造方法が開示されており、その記載の方法に従い合成することができる。その他の誘導体も前述の先行技術文献に開示の方法に従い調製できる。
【００２５】
本発明の前記トリアゾール化合物（Ａ）は酸又は塩基と塩を形成する場合もあり、一般式（１）で表される化合物の塩を用いても良い。酸との塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩等の無機酸塩や、トリフロロ酢酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機酸との塩を挙げることができる。塩基との塩としては、例えばナトリウム塩等を挙げることができる。これらの塩は、定法によって製造することができる。
本発明の前記トリアゾール化合物（Ａ）は、薬理活性有効成分をそのまま用いても良く、製剤基剤と併せて注射剤、点滴剤、錠剤、カプセル剤、散剤等の通常使用されている製剤を調製して使用して良い。製剤化に当たり、製剤基剤として通常使用されている薬学的に許容される担体、例えば結合剤、滑沢剤、崩壊剤、溶剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定化剤、懸濁化剤、保存剤、無痛化剤、色素、香料が使用できる。該トリアゾール化合物（Ａ）は、上記医薬製剤化され、経静脈投与、経動脈投与、皮下投与、経口投与、経粘膜投与、等の周知の投与経路にて投与する事ができる。
【００２６】
次に、本発明における上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）について説明する。本発明で用いるＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、ＥＧＦＲを標的分子としてＥＧＦＲの自己リン酸化を抑制し、ＥＧＦＲへのリガンドの結合により引き起こされる細胞増殖シグナルの伝達を阻害することにより、ＥＧＦＲを発現する腫瘍細胞の増殖を抑制することを主作用機作とする抗腫瘍剤を表す。本発明において、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、ＥＧＦＲのリン酸化を抑制する化合物であれば特に限定されず用いる事ができる。現在、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤としては、エルロチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブ、アファチニブ（ＢＩＢＷ２９９２）、ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２）、等が知られており、これらを本発明に係る好ましいＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）として挙げる事ができる。
当該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）は、上述したエルロチブ、ラパチニブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ネラチニブの各薬理活性有効成分をそのまま使用しても良く、若しくは遊離塩基体または医薬品として容認されるその他の塩であっても良く、更には、生体内でこれら薬理活性有効成分を遊離するプロドラッグであっても良い。
本発明におけるＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）として、特に好ましくは、エルロチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブであり、エルロチニブ・塩酸塩、ラパチニブ・トシル酸塩、ゲフィチニブ（遊離塩基体）を用いる事が好ましい。これらのＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、それぞれエルロチニブ・塩酸塩（タルセバ（登録商標））、ラパチニブ・トシル酸塩（タイケルブ（登録商標））、ゲフィチニブ（イレッサ（登録商標）が、賦形剤と共に医薬製剤として調製され、経口用錠剤として流通している。したがって、本発明に係るＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）も市場流通品をそのまま用いる事が好ましく、経口的に投与する事が好ましい。
【００２７】
本発明において、前記ＨＳＰ９０阻害作用を有する前記トリアゾール化合物（Ａ）と、前記ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を組み合わせた抗腫瘍剤とは、該トリアゾール化合物（Ａ）と該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を、１人の患者に対して投与される使用態様を含む抗腫瘍剤を表すものである。つまり、該トリアゾール化合物（Ａ）と該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を、悪性腫瘍疾患患者に対して併用で処理することを意図するものである。すなわち、１人の患者に、該トリアゾール化合物（Ａ）と該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を同時に、または逐次に、または前後して個別に投与することを含む抗腫瘍剤を指す。したがって、該トリアゾール化合物（Ａ）と、前記ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を含む抗腫瘍剤の態様として、特に限定されるものではなく、これらが併用で投与できる状態であれば良い。例えば、該トリアゾール化合物（Ａ）と該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）が別個の製剤であって良い。また、該トリアゾール化合物（Ａ）と該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を混合して、一体に調製された医薬製剤であっても良い。また別の態様として、該トリアゾール化合物（Ａ）を含む製剤型、及び該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を含む製剤型を備え、これらを併用使用することを企図したキットであって良い。または、該トリアゾール化合物（Ａ）を含む製剤型、及び該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を含む製剤型、並びに前記２つの製剤型を含有する容器を含むキットの態様を挙げる事ができる。
本発明において、該トリアゾール化合物（Ａ）と該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）は同時投与して用いて良く、該トリアゾール化合物（Ａ）を投与した後、該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を投与しても、その逆であっても良い。また、該トリアゾール化合物（Ａ）は単回投与または間歇的投与であって、該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）は連日投与の組み合わせであっても良い。該トリアゾール化合物（Ａ）及び該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）の前記投与とは、それぞれの薬剤について、単回投与、間歇投与、連日投与、等の医薬品で容認される一般的な投与方法を含むものである。例えば、該トリアゾール化合物（Ａ）を１回投与し、該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を連日投与する態様であって良く、該トリアゾール化合物（Ａ）は比較的短時間の静脈内点滴投与で、該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）は連日経口投与で用いても良い。
【００２８】
本発明において、該トリアゾール化合物（Ａ）及び該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）のそれぞれの投与量は、適切な臨床試験により抗腫瘍効果と副作用を確認しつつ決められるべきである。好ましくは、該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を至適許容投与量にて、連日または完結的に投与する設定にて、該トリアゾール化合物（Ａ）を適宜に増量する臨床試験により該トリアゾール化合物（Ａ）と該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）のそれぞれの投与量設定をすることができる。しかしながら、本発明は該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の抗腫瘍効果の増強を達し得ることから、該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の減量を可能とするものである。したがって、該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の至適投与量は適宜増減されるべきである。これらの投与量設定方法は、当業者には自明な試験方法であり、適切な臨床試験方法に基づき、その結果によって直接決定することが出来る。
なお、動物を用いた基礎的抗腫瘍試験結果に基づくと、該トリアゾール化合物（Ａ）の１回当たりの投与量は０．１〜１０００ｍｇで用いる事が好ましい。一方、該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）の１回当たりの投与量は、公知の薬理活性結果に基づき１〜５０００ｍｇで用いる事が好ましく、これらを適宜組み合せて用いることができる。特に、該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）としてエルロチニブを用いる場合、１回当たりの投与量は５０〜３００ｍｇであり連日投与することが好ましい。因みに、エルロチニブの臨床使用は、成人に対しエルロチニブ・塩酸塩として１００ｍｇまたは１５０ｍｇを１日１回経口的に投与する用法が推奨されている。また、ラパチニブを用いる場合は、１回当たりの投与量は５００〜３０００ｍｇであり、連日投与することが好ましい。一般的にラパチニブは、成人に対しラパチニブ・トシル酸塩として１２５０ｍｇを１日１回、経口的に投与されており、乳癌治療においてはカペシタビンとの併用で用いられている。また、ゲフィチニブを用いる場合は、１回当たりの投与量は１００〜５００ｍｇであり、連日投与することが好ましい。ゲフィチニブの推奨投与用法は、成人に対し経口投与にて１日１回、ゲフィチニブとして２５０ｍｇを用いることである。本発明において、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）は、それぞれの臨床推奨投与用量で用いる事が好ましく、推奨投与用量を基準に適宜、増減用量して用いることが好ましい。
【００２９】
本発明の抗腫瘍剤は悪性腫瘍疾患の治療に用いられる。本発明による治療に適用される悪性腫瘍は、特に限定されるものではなく、乳癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、直腸結腸癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞癌、前立腺癌、肝細胞癌、胃癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭部及び頸部の癌、メラノーマ、卵巣癌、胆管癌、中皮腫、及び多発性骨髄腫、等広く一般の癌治療に適用することができる。特に、ＥＧＦＲの異常発現や活性化が増殖要因として寄与している悪性腫瘍の治療に適する。すなわち、ＥＧＦＲの過剰発現や変異型ＥＧＦＲの過剰発現が認められる癌種であり、乳癌、非小細胞肺癌、小細胞癌、膀胱癌、脳腫瘍、頭頸部癌、胃癌、膵臓癌、肝細胞癌、胆管癌、直腸結腸癌、中皮腫、及び多発性骨髄腫に対する治療に適する。特に、扁平上皮癌および乳癌、脳腫瘍の一部でＥＧＦＲの過剰発現や変異が認められており、乳癌、非小細胞肺癌、悪性神経膠腫やグリア芽腫といった脳腫瘍の治療において本発明の抗腫瘍剤を適用することができる。また、エルロチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブ、等のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に対する感受性が低下した乳癌、非小細胞肺癌に対しても適用することができる。
【００３０】
本発明の該トリアゾール化合物（Ａ）とＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を組み合わせた抗腫瘍剤は、更に他の抗腫瘍剤（Ｃ）を組み合せて用いる事もできる。他の抗腫瘍剤（Ｃ）は特に限定されるものではなく、抗腫瘍剤として認可されている医薬品を用いる事ができる。すなわち、シクロホスファミド、イホスファミド、マイトマイシンＣ等のアルキル化剤、シスプラチン、カルボプラチン、オギザリプラチン等の白金錯体、ドキソルビシン、エピルビシン、ピラルビシン、アムルビシン等のアントラサイクリン系抗腫瘍剤、エトポシド、エトポシドホスフェート、テニポシド等のエトポシド類、イリノテカン、ノギテカン等のカンプトテシン類、パクリタキセル、ドセタキセル等のタキサン類、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン等のビンカアルカロイド類、５―フルオロウラシル、テガフール、テガフール・ウラシル合剤（ＵＦＴ）、テガフール・ギメラシル・オテラシルカルシウム合剤（Ｓ−１）、フルツロン、カペシタビン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド等の核酸代謝拮抗剤、メトトレキサート、ペメトレキセド等の葉酸代謝拮抗剤、プレドニゾロン、デキサメタゾン等のステロイド類、トラスツズマブ、セツキシマブ等の抗ＥＧＦＲ抗体、ベバシズマブ等の抗ＶＥＧＦ抗体を用いることができる。特に、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤との併用効果が認められている薬剤の併用は好ましく、その他の抗腫瘍剤（Ｃ）としてカペシタビン、ゲムシタビン、トラスツツズマブから選択される１種以上との併用が好ましい。
【００３１】
本発明の特に好ましいトリアゾール化合物（Ａ）とＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）の組み合わせ例を挙げる。
該トリアゾール化合物（Ａ）は、５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン；（Ａ−１）を用いる事が好ましい。
前記（Ａ−１）とエルロチニブ（Ｂ−１）の組み合わせが好ましく、非小細胞肺癌、膵臓癌の治療において有効である。すなわち、該（Ａ−１）とエルロチニブ（Ｂ−１）の各有効用量を投与する事を含む非小細胞肺癌、または膵臓癌の治療方法を提供する事ができる。さらに該（Ａ−１）とエルロチニブ（Ｂ−１）に、更にゲムシタビン（Ｃ−１）を組み合わせた抗腫瘍剤は、顕著な抗腫瘍効果を発揮する事から特に好ましい。該（Ａ−１）とエルロチニブ（Ｂ−１）及びゲムシタビン（Ｃ−１）のそれぞれの有効用量を投与する事により、膵臓癌の有効な治療方法を提供する事ができる。
また前記（Ａ−１）とラパチニブ（Ｂ−２）の組み合わせも好ましく、乳癌、非小細胞肺癌、の治療において有効である。すなわち、該（Ａ−１）とラパチニブ（Ｂ−２）の各有効用量を投与する事を含む乳癌、または非小細胞肺癌の治療方法を提供する事ができる。更に該（Ａ−１）とラパチニブ（Ｂ−２）に、更にカペシタビン（Ｃ−２）を組み合わせて、それぞれの有効投与量を投与する事による乳癌の治療方法を提供することができる。若しくは、該（Ａ−１）とラパチニブ（Ｂ−２）に、更にトラスツズマブ（Ｃ−３）を組み合わせて、それぞれの有効投与量を投与する事による乳癌の治療方法を提供することができる。
また前記（Ａ−１）とゲフィチニブ（Ｂ−３）の組み合わせも好ましく、非小細胞肺癌の治療において有効である。すなわち、該（Ａ−１）とゲフィチニブ（Ｂ−３）の各有効用量を投与する事を含む非小細胞肺癌の治療方法を提供する事ができる。
【００３２】
本願は、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を用いる癌治療において、前記トリアゾール化合物（Ａ）が該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の抗腫瘍効果を増強する作用を示す事を見出したことに基づき、該トリアゾール化合物（Ａ）が、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の抗腫瘍効果増強剤とする新たな用途発明を開示するものである。
また、本願の更に別の観点では、前記トリアゾール化合物（Ａ）をＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と併用で投与する事による、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の抗腫瘍効果を増強する方法を開示するものである。
該トリアゾール化合物（Ａ）により抗腫瘍効果が増強されるＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤とは、前述と同義である。好ましくはエルロチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ネラチニブ、が挙げられる。特に好ましくは、エルロチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブである。
【００３３】
該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の抗腫瘍効果増強を目的に、該トリアゾール化合物（Ａ）を用いるためには、該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の至適許容投与量で連日または間歇的に投与する設定にて、該トリアゾール化合物（Ａ）の至適用量を単回、間歇、または連日投与をする事により達成される。
該トリアゾール化合物（Ａ）の成人に対する１回当たりの投与量は０．１〜１０００ｍｇで用いる事が好ましい。これを単回投与、若しくは間歇的に投与する事が好ましい。
該ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の１回当たりの投与量は、公知の薬理活性結果に基づき１〜５０００ｍｇで用いる事が好ましく、これらを適宜組み合せて用いることができる。特に、該ＥＧＦＲ阻害剤としてエルロチニブを用いる場合、１回当たりの投与量は５０〜３００ｍｇであり連日投与することが好ましい。ラパチニブを用いる場合は、１回当たりの投与量は５００〜３０００ｍｇであり、連日投与することが好ましい。ゲフィチニブを用いる場合は、１回当たりの投与量は１００〜５００ｍｇであり、連日投与することが好ましい。このＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の投与において、該トリアゾール化合物（Ａ）を１回当たりの投与量は０．１〜１０００ｍｇで用いる事が好ましい。該トリアゾール化合物（Ａ）の投与量は、抗腫瘍効果の反応性を確認した上で、適宜増減しても良い。
【００３４】
すなわち本発明によると、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤による悪性腫瘍治療において、該トリアゾール化合物（Ａ）を併せて使用する事により、抗腫瘍効果の増強作用が発揮され、より高い治療効果を達成できる。若しくは、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に対する薬剤感受性が低下した悪性腫瘍に対しても、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の薬剤治療に、該トリアゾール化合物（Ａ）を組み合わせることで薬剤感受性を回復させる事ができ、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤による薬物治療を長期に継続させることができる。更に、それぞれ抗腫瘍剤の単独使用と同程度の抗腫瘍効果を得る場合において、各々の抗腫瘍剤の用量を相対的に減量することができ、望ましくない薬理作用の発現を抗腫瘍効果に悪影響を及ぼすことなく軽減する事ができる。
【実施例】
【００３５】
本発明の一般式（１）で表されるトリアゾール化合物（Ａ）とＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を組み合せて用いる事の有用性を実施例にて説明する。
１．供試薬剤
本発明の一般式（１）で表されるトリアゾール化合物（Ａ）として、５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル）−４−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン；（Ａ−１）を用いた。当該（Ａ−１）は、国際公開ＷＯ２００６／０９５７８３号の実施例２−５に開示される製造方法に従い合成した。また、比較例として既存のＨＳＰ９０阻害剤化合物である５−(２,４−ジヒドロキシ−５−イソプロピル−フェニル)−４−(４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル)−イソオキサゾール−３−カルボン酸エチルアミド（化合物Ｄ：ＮＶＰ−ＡＵＹ−９２２）を用いた。該比較ＨＳＰ９０阻害剤（化合物Ｄ：ＮＶＰ−ＡＵＹ−９２２）は、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，５１（２），１９６−２１８（２００８）に記載の方法に従い合成し、定法によりメタンスルホン酸塩を調製して、試験に供した。ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）としてエルロチニブ（Ｂ−１）を採用した。エルロチニブ（Ｂ−１）はＥｒｌｏｔｉｎｉｂ  Ｈｙｄrｏｃｈｌｏrｉｄｅ（ＬＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）をそのまま用いた。ゲムシタビン（Ｃ−１）はジェムザール（登録商標）注射用２００ｍｇをそのまま用いた。
エルロチニブ（Ｂ−１）は６％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標、Ｃｙｄｅｘ社製）に溶解して投与に供した。ゲムシタビン（Ｃ−１）は日本薬局方生理食塩液に溶解して供した。ＨＳＰ９０阻害剤であるトリアゾール（Ａ−１）、及び比較ＨＳＰ９０阻害剤（化合物Ｄ：ＮＶＰ−ＡＵＹ−９２２）は日本薬局方ブドウ糖注射液に溶解して投与に供した。
【００３６】
２．移植腫瘍
ヒト膵臓癌細胞株であるＢｘＰｃ−３（ＡＴＣＣカタログナンバー、ＣＲＬ−１６８７）を、１０％ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ−１６４０メディウム中で増殖させた。増殖させたＢｘＰｃ−３細胞は、１×１０７個程度をＨＢＳＳにて懸濁し、ヌードマウス皮下に注射した。細胞が腫瘍を形成したのち、腫瘍を取り出して腫瘍片を作成し、ヌードマウス皮下へ套管針を用いて移植した。同様の操作で移植を繰り返し、腫瘍を維持させ、移植腫瘍を調製した。
【００３７】
３．腫瘍皮下移植マウスによる抗腫瘍試験
ヌードマウスで継代維持したヒト膵臓癌腫瘍であるＢｘＰｃ−３を、各ヌードマウスの背側部皮下に套管針を用いて移植した。腫瘍体積が概ね１００〜１５０ｍｍ３に達したときに、供試薬剤の投与を開始した。腫瘍の計測は，投与開始日から観察期間終了まで週２回行い、腫瘍の長径（Ｌ）と短径（Ｗ）をノギスを用いて測定した。計測した腫瘍の長径と短径を用いて，腫瘍体積を式（Ｌ×Ｗ２×１／２）から算出した。
【００３８】
［試験例１］
ヒト膵臓癌腫瘍ＢｘＰｃ−３皮下移植ヌードマウスをヒト膵臓癌異種移植片モデルとして用いて、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ−１）とエルロチニブ（Ｂ−１）の併用療法、及び該トリアゾール化合物（Ａ−１）とエルロチニブ（Ｂ−１）及びゲムシタビン（Ｃ−１）の併用療法による抗腫瘍効果を、トリアゾール化合物（Ａ−１）、エルロチニブ（Ｂ−１）、ゲムシタビン（Ｃ−１）及び比較ＨＳＰ９０阻害剤（化合物Ｄ：ＮＶＰ−ＡＵＹ−９２２）の各単独投与、並びに比較ＨＳＰ９０阻害剤（Ｄ）とエルロチニブ（Ｂ−１）の併用投与による抗腫瘍効果と比較した。
各薬剤の投与量及び用法は、トリアゾール（Ａ−１）は最大耐用量の１／２量となる２０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を３回、尾静脈内に投与した。エルロチニブ（Ｂ−１）を５０ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回を２１日間、経口的に投与した。ゲムシタビン（Ｃ−１）は１５０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を３回、尾静脈内に投与した。比較ＨＳＰ９０阻害剤（Ｄ）は最大耐用量の１／２量となる４０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を３回、尾静脈内に投与した。併用投与は、本発明に係るトリアゾール（Ａ−１）とエルロチニブ（Ｂ−１）の併用投与は、該トリアゾール化合物（Ａ−１）を２０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を３回、尾静脈内に投与すると共に、エルロチニブ（Ｂ−１）を５０ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回を２１日間、経口的に投与した。また、本発明に係るトリアゾール（Ａ−１）とエルロチニブ（Ｂ−１）及びゲムシタビン（Ｃ−１）の併用投与は、該トリアゾール化合物（Ａ−１）を２０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を３回、尾静脈内に投与すると共に、エルロチニブ（Ｂ−１）を５０ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回を２１日間、経口的に投与し、更にゲムシタビン（Ｃ−１）を１５０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を３回、尾静脈内に投与した。一方、比較ＨＳＰ９０阻害剤（Ｄ）とエルロチニブ（Ｂ−１）の併用投与は、該比較ＨＳＰ９０阻害剤（Ｄ）を４０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回を３回、尾静脈内投与すると共に、エルロチニブ（Ｂ−１）を５０ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回を２１日間、経口的に投与した。
各薬剤投与群（７群）に無投与群（コントロール群）を加えて、異種移植片モデル各群５匹にて抗腫瘍試験を行なった。投与開始から２１日目における各群腫瘍体積を、無投与群の相対腫瘍体積を１００とした相対腫瘍体積（Ｔ／Ｃ（％））を表１に示した。Ｔ／Ｃ（％）は、式（投与群相対腫瘍体積／無投与群相対腫瘍体積×１００）により算出した。また、投与開始日の腫瘍体積を１とした相対腫瘍体積を算出した経時的腫瘍増殖曲線を図１に示した。
【００３９】
［表１］ヒト膵臓癌腫瘍ＢｘＰｃ−３皮下移植ヌードマウスによる抗腫瘍効果試験結果
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【００４０】
表１及び図１から明らかなように、投与開始後から２１日目において、エルロチニブ（Ｂ−１）は無投与群に対して３４％の腫瘍増殖抑制をもたらした。トリアゾール化合物（Ａ−１）の単独投与は５１％の増殖抑制をもたらした。これに対し、該トリアゾール化合物（Ａ−１）とエルロチニブ（Ｂ−１）を組み合わせて投与すると、腫瘍増殖抑制作用が８０％と強力に増強された抗腫瘍効果がもたらされた。一方、比較ＨＳＰ９０阻害剤（Ｄ）の単独投与は、該（Ａ−１）と同じ最大耐用量の１／２量において３％の増殖抑制しか示さなず、該比較ＨＳＰ９０阻害剤（Ｄ）とエルロチニブ（Ｂ−１）の併用投与は４６％の増殖抑制作用を示した。したがって、比較ＨＳＰ９０阻害剤（Ｄ）とエルロチニブ（Ｂ−１）の併用は、エルロチニブ（Ｂ−１）単独投与の増殖抑制率が３４％から僅かな上乗せ効果に留まる結果であり、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ−１）とエルロチニブ（Ｂ−１）の併用投与による抗腫瘍効果より劣る結果となった。トリアゾール化合物（Ａ−１）は最大耐用量の１／２用量での試験であるにも関わらず、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ−１）とエルロチニブ（Ｂ−１）の併用投与が顕著に優れた抗腫瘍効果を示した。
以上の結果から、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ）とＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）を組み合わせて投与する薬物治療が、既存のＨＳＰ９０阻害剤とＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の組み合わせよりも優れた抗腫瘍効果が得られることが明らかとなった。
また本試験において、ゲムシタビン（Ｃ−１）の単独投与は５６％の増殖抑制をもたらした。これに対し、トリアゾール化合物（Ａ−１）とエルロチニブ（Ｂ−１）及びゲムシタビン（Ｃ−１）を組み合わせて投与すると、腫瘍増殖抑制作用が９６％と抗腫瘍効果の顕著な増強がもたらされた。以上の結果から、本発明に係るトリアゾール化合物（Ａ）とＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（Ｂ）及びゲムシタビン（Ｃ−１）を組み合わせて投与する薬物治療が、優れた抗腫瘍効果を達成できることが示された。
【図１】
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