(57)【要約】【課題】細胞に対する特異性を有する、糖鎖高分子の提供。【解決手段】式（２）で表される構造単位を有する重合体。2014047170.tif 000015（式中、Ｒ1は水素原子又はメチル基を示し、Ｒ2及びＲ3はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示し、Ｘは直接結合または炭素数１〜２４の二価の有機基を示し、Ｇは糖由来の構造を示す）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）で表される化合物。
【化１】
2014047170.tif 000011
（式中、Ｒ1は水素原子又はメチル基を示し、Ｒ2及びＲ3はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示し、Ｘは直接結合または炭素数１〜２４の二価の有機基を示し、Ｇは糖由来の構造を示す）
【請求項２】
Ｇが、下記式（３）で示される構造である請求項１記載の化合物。
【化２】
2014047170.tif 000012
（式中、Ｇ1は、単糖残基、アミノ糖残基又はオリゴ糖残基を示し、＊は式（１）中の窒素原子と結合する位置を示す。）
【請求項３】
Ｘが、炭素数３〜１１の直鎖状若しくは分岐状のアルカンジイル基、又は炭素数３〜８のシクロアルカンジイル基である請求項１又は２記載の化合物。
【請求項４】
式（２）で表される構造単位を有する重合体。
【化３】
2014047170.tif 000013
（式中、Ｒ1は水素原子又はメチル基を示し、Ｒ2及びＲ3はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示し、Ｘは直接結合または炭素数１〜２４の二価の有機基を示し、Ｇは糖由来の構造を示す）
【請求項５】
Ｇが、下記式（３）で示される構造である請求項４記載の重合体。
【化４】
2014047170.tif 000014
（式中、Ｇ1は、単糖残基、アミノ糖残基又はオリゴ糖残基を示し、＊は式（１）中の窒素原子と結合する位置を示す。）
【請求項６】
Ｘが、炭素数３〜１１の直鎖状若しくは分岐状のアルカンジイル基、又は炭素数３〜８のシクロアルカンジイル基である請求項４又は５記載の重合体。
【請求項７】
請求項４〜６のいずれか１項記載の重合体を含有する表面処理剤。
【請求項８】
表面の少なくとも一部に請求項４〜６のいずれか１項記載の重合体を有する生体適合性材料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化合物、重合体、表面処理剤及び生体適合性材料に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖鎖は構造が複雑であり、同じ生体分子であるＤＮＡやタンパク質よりも応用の為の開発が遅れている。しかし、近年、糖鎖の研究が急速に進展し、種々の分野への模索も進められてきている。例えば、種々のレクチン等のタンパク質や細胞と特異的に相互作用する糖鎖が明らかになりつつある。
【０００３】
かかる糖鎖の機能の解明に伴い、種々の高分子の開発もなされており、例えば糖鎖高分子で修飾した細胞培養基材（特許文献１）、抗血栓性材料（特許文献２）やコンタクトレンズの表面親水化剤（特許文献３）などが提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平８−３１７７８６号公報
【特許文献２】特許第２７５３６１７号公報
【特許文献３】特開２００７−７２４１７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、細胞に対する特異性を有する新たな糖鎖高分子を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、式（１）で表される化合物を提供するものである。
【０００７】
【化１】
2014047170.tif 000002
【０００８】
（式中、Ｒ1は水素原子又はメチル基を示し、Ｒ2及びＲ3はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示し、Ｘは直接結合または炭素数１〜２４の二価の有機基を示し、Ｇは糖由来の構造を示す）
【０００９】
また、本発明は、式（２）で表される構造単位を有する重合体を提供するものである。
【００１０】
【化２】
2014047170.tif 000003
【００１１】
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｘ及びＧは前記と同じ）
【００１２】
また、本発明は、上記式（２）で表される構造単位を有する重合体を含有する表面処理剤を提供するものである。
さらに、本発明は、表面の少なくとも一部に、上記式（２）で表される構造単位を有する重合体を有する生体適合性材料を提供するものである。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の重合体を表面に有する材料は、細胞に対する特異性を有する。従って、本発明の重合体を表面に有する材料は、細胞培養基材等の生体適合性材料として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明の重合体を表面に有する材料中で細胞を培養した様子を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の化合物は、下記式（１）で表される。
【００１６】
【化３】
2014047170.tif 000004
【００１７】
（式中、Ｒ1は水素原子又はメチル基を示し、Ｒ2及びＲ3はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示し、Ｘは直接結合または炭素数１〜２４の二価の有機基を示し、Ｇは糖由来の構造を示す）
【００１８】
式（１）中、Ｒ1は水素原子又はメチル基を示すが、このうちメチル基がより好ましい。
【００１９】
Ｒ2及びＲ3で示される炭素数１〜６のアルキル基としては、直鎖状でも分岐状でもよく、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ｎ−ヘキシル基等が挙げられる。このうち、糖を導入する際に立体障害として働くのを防止する観点から炭素数１〜４のアルキル基が好ましく、炭素数１〜３のアルキル基がより好ましい。
また、Ｒ2及びＲ3としては、両者が水素原子である場合が特に好ましい。
【００２０】
Ｇで示される糖由来の構造としては、単糖、アミノ糖又はオリゴ糖由来の構造が挙げられる。ここで単糖としては、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、キシロース、アラビノース等が挙げられ、アミノ糖としては、Ｎ−アセチルグルコサミン、グルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトサミン、ラミナリビオース等が挙げられる。オリゴ糖（二糖を含む）としては、トレハロース、ネオトレハロース、マルトース、セロビオース、ゲンチオビオース、ラクトース、メリビオース、ルチノース、スクロース、ツラノース、ビシアノース、セロトリオース、ゲンチアノース、イソパノース、マルトトリオース、ラフィノース、リコテトラオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マンノビオース等が挙げられる。ここでオリゴ糖は、２〜１０糖を示す。これらのＧで示される糖由来の構造のうち、細胞に対する特異性の点からオリゴ糖由来の構造が好ましい。
【００２１】
Ｇの構造と式（１）中の窒素原子とは、アミド結合により結合しているのが好ましい。例えば、Ｇで示される構造の具体例としては、下記式（３）で示される構造が挙げられる。
【００２２】
【化４】
2014047170.tif 000005
【００２３】
（式中、Ｇ1は、前記の単糖残基、アミノ糖残基又はオリゴ糖残基を示し、＊は式（１）中の窒素原子と結合する位置を示す。）
なお、本発明においては、単糖残基、アミノ糖残基又はオリゴ糖残基とは、式（１）中の窒素原子との結合に関与しない、残りの糖部分をいう。
【００２４】
Ｘは直接結合または炭素数１〜２４の二価の有機基を示すが、炭素数１〜２４の二価の有機基が好ましい。二価の有機基の例としては、二価の炭化水素基等が挙げられる。二価の炭化水素基は、直鎖状、分岐状、環状のいずれでもよい。
【００２５】
直鎖状および分岐状の二価の炭化水素基の例としては、アルカンジイル基が挙げられる。
アルカンジイル基としては、糖鎖モノマーの水に対する溶解性の観点から炭素数３〜１１が好ましく、炭素数３〜８がより好ましい。具体例としては、メタン−１，１−ジイル基、エタン−１，１−ジイル基、エタン−１，２−ジイル基、プロパン−１，１−ジイル基、プロパン−１，２−ジイル基、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−２，２−ジイル基、ブタン−１，２−ジイル基、ブタン−１，３−ジイル基、ブタン−１，４−ジイル基、ペンタン−１，４−ジイル基、ペンタン−１，５−ジイル基、ヘキサン−１，５−ジイル基、ヘキサン−１，６−ジイル基、ヘプタン−１，７−ジイル基、オクタン−１，８ージイル基等が挙げられる。
【００２６】
環状の二価の炭化水素基の例としては、シクロアルカンジイル基が挙げられる。シクロアルカンジイル基としては、糖鎖モノマーの水に対する溶解性の観点から炭素数３〜１１が好ましく、炭素数３〜８がより好ましい。具体例としては、シクロプロパン−１，２−ジイル基、シクロプロパン−１，３−ジイル基、シクロブタン−１，２−ジイル基、シクロブタン−１，３−ジイル基、シクロペンタン−１，２−ジイル基、シクロペンタン−１，４−ジイル基、シクロヘキサン−１，２−ジイル基、シクロヘキサン−１，４−ジイル基、シクロヘプタン−１，２−ジイル基、シクロオクタン−１，２−ジイル基等が挙げられる。また、これらのシクロアルカンジイル基の結合形態は、シクロヘキサン−１，２−ジイルのように隣り合う位置で結合していても、シクロヘキサン−１，４−ジイルのように離れた位置で結合していてもよいが、好ましくは糖を主鎖部分から離す観点からヘキサン−１，４−ジイル等のように離れた位置で結合している形態である。
【００２７】
本発明の重合体は、下記式（２）で表される構造単位を有する。
【００２８】
【化５】
2014047170.tif 000006
【００２９】
式（２）中のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｘ及びＧは、前記式（１）の場合と同様である。
【００３０】
本発明の重合体は、式（２）で表される構造単位を有する重合体であるが、他の重合性モノマーとの共重合体であってもよい。
【００３１】
他の重合性モノマーとしては、特に限定されないが、スチレン類、（メタ）アクリレート類および（メタ）アクリルアミド類から選ばれる１種以上の単量体であることが好ましい。
【００３２】
スチレン類の具体例としては、スチレン、４−メチルスチレン、２，４−ジメチルスチレン、２，４，６−トリメチルスチレン、４−エチルスチレン、４−イソプロピルスチレン、４−ｔｅｒｔ−ブチルスチレン、α−メチルスチレン等が挙げられる。
【００３３】
また、（メタ）アクリレート類の具体例としては、（メタ）アクリル酸メチル、（メタ）アクリル酸エチル等の（メタ）アクリル酸Ｃ1-10アルキル；（メタ）アクリル酸メトキシエチル等の（メタ）アクリル酸Ｃ1-10アルコキシＣ1-10アルキル等が挙げられる。
【００３４】
また、（メタ）アクリルアミド類の具体例としては、Ｎ，Ｎ−ジエチル（メタ）アクリルアミド等のＮ，Ｎ−ジＣ1-10アルキル（メタ）アクリルアミド；Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド等のＮ−Ｃ1-10アルキル（メタ）アクリルアミドの他、（メタ）アクリロイルモルホリン、（メタ）アクリロイルピロリジン、（メタ）アクリロイルピペリジン等が挙げられる。
【００３５】
また、本発明の重合体の数平均分子量（Ｍn）としては、５０００〜１００万が好ましく、糖の多価効果による効果的な細胞接着の観点から６０００〜２０万がより好ましく、７０００〜１０万が特に好ましい。
また、分子量分布（Ｍw／Ｍn）としては、細胞培養の再現性の観点から１．０〜６．０がより好ましい。
なお、上記重量平均分子量（Ｍｗ）および数平均分子量（Ｍｎ）は、東ソー社製  ＴＳＫｇｅｌ  α−Ｍカラムを用い、流量：０．５ミリリットル／分、溶出溶媒：ＮＭＰ溶媒（Ｈ3ＰＯ4：０．０１６Ｍ、ＬｉＢｒ：０．０３０Ｍ）、カラム温度：４０℃の分析条件で、ポリスチレンを標準とするゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）により測定した。
【００３６】
本発明の式（１）で表される化合物は、例えば次の反応式に従って製造することができる。
【００３７】
【化６】
2014047170.tif 000007
【００３８】
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｘ及びＧ1は前記と同じ）
【００３９】
式（１’）の化合物は、例えば、糖ラクトン体（４）とジアミン類（５）とを反応させて式（６）の化合物を得、次いでこれにジ（メタ）アクリル酸無水物（７）を反応させることにより製造される。
【００４０】
糖ラクトン体（４）は、触媒存在下、糖を脱水反応させることで得ることができる。
上記触媒としては、例えば、ヨウ素、クロム等が挙げられ、その合計使用量としては、糖１質量部に対し、１．０〜３．０質量部が好ましく、１．２〜２．５質量部がより好ましい。
【００４１】
また、脱水反応は、糖とアルカリ性基質とを反応させることで行うことができる。アルカリ性基質としては、例えば水酸化カリウム、水酸化カルシウム等が挙げられ、その使用量としては、糖１質量部に対し、４〜１０質量部が好ましく、５〜７質量部がより好ましい。
【００４２】
また、本反応には溶媒を使用してもよい。溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール等が挙げられ、これらの溶媒は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。これら溶媒の合計使用量は、糖１質量部に対し、１５〜４０質量部が好ましく、２０〜３０質量部がより好ましい。
【００４３】
また、本反応の反応時間は特に限定されないが、通常０．５〜２４時間であり、反応温度は、溶剤の沸点以下で適宜選択すればよいが、通常-３０〜８０℃程度である。
【００４４】
また、本反応後の精製は、例えば、プロトン型イオン交換樹脂を用いた酸性分画、
逆相カラムクロマトグラフィーによる分取等の手段を適宜組み合わせて行えばよい。
【００４５】
化合物（６）は、得られた糖ラクトン体（４）にジアミン類（５）を反応させて得ることができる。
【００４６】
上記ジアミン類（５）としては、例えば、１，４−シクロヘキサンジアミン、１，６-ヘキサメチレンジアミン、１，６−ジアミノヘキサン等が挙げられ、その使用量としては、糖ラクトン体（４）１質量部に対し、１．５〜５．０質量部が好ましく、２．０〜４．０質量部がより好ましい。
【００４７】
また、本反応は、窒素雰囲気下で反応させることが好ましい。
【００４８】
また、本反応には溶媒を使用してもよい。溶媒としては、例えば、ジメチルホルムアミド、メタノール等が挙げられ、これらの溶媒は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。これら溶媒の合計使用量は、糖ラクトン体（４）１質量部に対し、４０〜１５０質量部が好ましく、５０〜１００質量部がより好ましい。
【００４９】
また、本反応の反応時間は特に限定されないが、通常０．５〜２４時間であり、反応温度は、溶剤の沸点以下で適宜選択すればよいが、通常-３０〜８０℃程度である。
【００５０】
また、本反応後の精製は、必要に応じて、ろ過、洗浄、乾燥、再結晶、再沈殿、透析、遠心分離、各種溶媒による抽出、中和、クロマトグラフィー等の通常の手段を適宜組み合わせて行えばよい。
【００５１】
式（１’）の化合物は、得られた化合物（６）とジ（メタ）アクリル酸無水物（７）を反応させることにより得ることができる。
【００５２】
上記ジ（メタ）アクリル酸無水物としては、例えば、ジメタクリル酸無水物、ジアクリル酸無水物等が挙げられ、その使用量としては、化合物（６）１質量部に対し、０．３〜０．７質量部が好ましく、０．４〜０．６質量部がより好ましい。
【００５３】
また、本反応には溶媒を使用してもよい。溶媒としては、例えば、ジメチルホルムアミド、メタノール等が挙げられ、これらの溶媒は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。これら溶媒の合計使用量は、化合物（６）１質量部に対し、４０〜１５０質量部が好ましく、５０〜１００質量部がより好ましい。
【００５４】
また、本反応の反応時間は特に限定されないが、通常０．５〜２４時間であり、反応温度は、溶剤の沸点以下で適宜選択すればよいが、通常−３０〜８０℃程度である。
【００５５】
また、本反応後の精製は、必要に応じて、ろ過、洗浄、乾燥、再結晶、再沈殿、透析、遠心分離、各種溶媒による抽出、中和、クロマトグラフィー等の通常の手段を適宜組み合わせて行えばよい。
【００５６】
次に本発明の重合体の製造法について説明する。
本発明の重合体は、式（１）の化合物及び必要に応じてその他のモノマーを重合開始剤の存在下で重合させることにより得ることができる。
【００５７】
上記重合開始剤としては、例えば、２，２’−アゾビス（イソブチロニトリル）、ジメチル２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオネート）、２，２’−アゾビス−２，４−ジメチルバレロニトリル、４，４’−アゾビス（４−シアノバレリックアシッド）、２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）ジヒドロクロライド、２，２’−アゾビス[Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン]ハイドライト等のアゾ系開始剤；ジ（３，５，５−トリメチルヘキサノイル）パーオキサイド、過酸化ベンゾイル等の過酸化物が挙げられ、この中でも水溶性のものが好ましい。また、これら重合開始剤は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用でき、重合開始剤の合計使用量は、化合物（１） 及び使用するその他のモノマーの合計量に対し、通常０．００３〜０．０５質量倍程度である。
【００５８】
また、本反応には溶媒、連鎖移動剤を使用してもよい。溶媒としては、水、ベンジルアルコール、エチレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノメチルエーテルアセテート、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド等が挙げられ、これら溶媒は１種を単独でまたは２種以上を組み合わせて使用できる。これら溶媒の合計使用量は、化合物（１）及び使用するその他のモノマーの合計量に対し、通常０．５〜１５質量倍程度である。
また、上記連鎖移動剤としては、α−メチルスチレンダイマー、メルカプトエタノール、チオグリセロール、ｔｅｒｔ−ドデシルメルカプタン等が挙げられる。これら連鎖移動剤の合計使用量は、化合物（１）に対し、通常０．００２〜０．０２質量倍程度である。
【００５９】
また、本重合後の精製は、必要に応じて、ろ過、洗浄、乾燥、再結晶、再沈殿、透析、遠心分離、各種溶媒による抽出、中和、クロマトグラフィー等の通常の手段を適宜組み合わせて行えばよい。
【００６０】
本発明の重合体は、タンパクや細胞との特異性に優れており、細胞培養基材、抗血栓材料、ターゲット物質の認識材料等のバイオ系材料として有用である。また、本発明の重合体は、水、ジメチルスルホキシド等の溶媒に可溶であることから、各種材料の表面処理剤として使用できる。従って、本発明の重合体を表面の少なくとも一部に有する材料は、細胞培養基材、タンパク質処理基材、生化学反応用基材、抗血栓材料、ターゲット物質の認識材料、診断材料等の生体適合性材料として有用である。
【００６１】
本発明の表面処理剤を適用できる材料としては、ガラス、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリメタクリル酸メチル等の樹脂等が挙げられる。
【００６２】
本発明の表面処理剤による各種材料表面処理手段としては、塗布、スピンコーティング等が挙げられる。特に塗布が好ましく、重合した糖鎖高分子溶液を表面処理したい部位に接触させればよい。例えば、高分子水溶液を材料に接触させた後、水により洗浄し、乾燥させる方法が挙げられる。
【００６３】
材料の表面処理は、材料表面の少なくとも一部、例えば細胞培養等で使用する部分のみでもよく、全体でもよい。シャーレなどの場合には、少なくとも内側が表面処理されていればよい。
【００６４】
本発明の表面処理剤中における本発明の重合体の含有量は溶媒の種類によって異なるが通常０．００００１〜１５質量％が好ましく、基板上への糖鎖高分子の効率的な修飾の観点から０．０００１〜１０質量％がより好ましい。溶媒としては、疎水部を効果的に表面と接合させることから、水が好ましい。また、本発明の表面処理剤中には、本発明の重合体以外に、他のコーティング剤や防腐剤等を含有させることができる。
【実施例】
【００６５】
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００６６】
実施例１
（１）ラクトースのラクトン化
ラクトース１２ｇをメタノール３００ｍｌに分散させ、４０℃に加熱した。これに、ヨウ素１８ｇのメタノール溶液を滴下し、４０分間反応させた。これに、４ＮのＫＯＨメタノール溶液を、ヨウ素の着色が無くなるまで添加した。沈澱を濾取し、冷メタノールで数回洗浄後、エーテルで洗浄した。その後、得られた結晶をごく少量の水に溶解し、アンバーライト１２０Ｂのプロトン型イオン交換樹脂にアプライし、酸性分画を単離した。得られた水溶液にメタノールとエタノールを添加してエバポレーションした。完全に乾固したのち、再び、メタノールとエタノールを加えて溶解し、エバポレーションした。この操作を数回繰り返し、ラクトノラクトンを得た。
【００６７】
【化７】
2014047170.tif 000008
【００６８】
（２）シクロヘキサンジアミンとの反応
上記のラクトノラクトン１ｇをＤＭＦ８０ｍｌに溶解させ、窒素雰囲気下、氷浴中において、１，４−シクロヘキサンジアミン３．２ｇ、ＤＭＦ１０ｍｌ溶液中に、３０分以上かけて滴下させた。その後、０℃で１２時間反応させた後、貧溶媒（酢酸エチル、クロロホルム）中に滴下させ、沈殿物をろ取したのち、水に溶解させ、クロロホルムで洗浄させ、凍結乾燥することで、９９８ｍｇ（収率７８．７％）の片末端アミンの６−ラクトビオンアミドシクロヘキシルアミン（ＬＡＣＨＡ）を得た。
【００６９】
（３）ジメタクリル酸無水物との反応
上記のＬＡＣＨＡ９８０ｍｇをＤＭＦ５０ｍｌに溶解させたのち、ＤＭＦ１０ｍｌに溶解させたジメタクリル酸無水物４００ｍｇを氷浴中で１０分以上かけて滴下させた。その後、０℃で５時間反応させた後、ニンヒドリンによる呈色が確認されなくなったことで反応の終了を確認した。
反応溶液を貧溶媒（酢酸エチル、クロロホルム）中に滴下させ、沈殿物をろ取したのち、逆相カラムクロマトグラフィーを用いて精製し、凍結乾燥することで、９１５ｍｇ（収率８１．２％）の６−ラクトビオンアミドシクロヘキシルメタクリルアミド（ＬＡＣＨＭＡ）を得た。
【００７０】
【化８】
2014047170.tif 000009
【００７１】
（４）ＬＡＣＨＭＡの構造確認
得られたＬＡＣＨＭＡの構造を1ＨＮＭＲ、13ＣＮＭＲおよびＩＲにより確認した。
1ＨＮＭＲスペクトルでは、５．２〜５．６ｐｐｍにビニル基に由来するピーク、３．６〜４．５ｐｐｍにラクトビオン酸に由来するピーク、３．３，３．５，１．２〜１．８ｐｐｍにスペーサーであるシクロヘキサンに由来するピーク、１．７ｐｐｍにＣ＝Ｃ−ＣＨ3に由来するピークが見られた。
13ＣＮＭＲスペクトルでは、１７４．００，１７４．１４ｐｐｍ付近にアミド結合のＣ＝Ｏのピーク、１２０．８７，１４３．１０ｐｐｍにビニル基の二重結合のピーク、６１．７０〜８１．９０，１０４．１８ｐｐｍにラクトビオン酸由来のピーク、２７．２１，２８．７７ｐｐｍにスペーサーであるシクロヘキサン由来のＣＨ−ＣＨ2由来のピーク、４５．３５，４７．７０ｐｐｍにＮＨ−ＣＨのピーク、１９．６１ｐｐｍにＣ＝Ｃ−ＣＨ3由来のピークが見られた。
ＩＲスペクトルでは、２５００〜３３００ｃｍ-1 に幅広い−ＯＨおよびＣ＝Ｏのピーク、１６３０ｃｍ-1と１４５０ｃｍ-1にアミド基のピーク、１３８０ｃｍ-1にＣ＝Ｃビニル基の二重結合のピークが見られた。
ＬＡＣＨＭＡの構造が確認された。
【００７２】
（５）重合
上記で合成し、構造を確認したＬＡＣＨＭＡ（２００ｍｇ）をＨ2Ｏ（１．５ｍｌ）に溶解し、重合開始剤として４，４’−アゾビス（４−シアノバレリックアシッド）（ＡＣＶＡ）（１．１ｍｇ）を添加した。その溶液を窒素条件下で６０℃に加熱して１５時間重合させ、ＰＬＡＣＨＭＡ（約１５０ｍｇ）を得た。このＰＬＡＣＨＭＡの数平均分子量は８２，０００であった。
【００７３】
【化９】
2014047170.tif 000010
【００７４】
実施例２
実施例１においてラクトースをマルトースに、１，４−シクロヘキサンジアミンを１，６−ジアミノヘキサンに変えた以外は同様の操作にてポリ（６−マルトビオンアミドへキシルメタクリルアミド）（以下、ＰＭＡＨＭＡと略す）を得た。このＰＭＡＨＭＡの数平均分子量は２０，０００であった。
【００７５】
実施例３
上記で合成した糖鎖高分子ＰＬＡＣＨＭＡを用いてヒト肝ガン細胞（ＷＲＬ）を以下のように培養した。
（１）ポリマーコーティング
滅菌下で０．０１質量％に調整したＰＬＡＣＨＭＡ水溶液を６ｗｅｌｌ培養フラスコに各１ｍｌ添加し、一昼夜放置して、コーティングした。その後、ポリマー溶液を除き、滅菌したＰＢＳあるいは純水でフラスコを３回洗浄して、直ちに培養に用いた。
【００７６】
（２）細胞培養
無血清培地中、３×１０5細胞/ｍｌに調整されたヒト肝ガン細胞（ＷＲＬ）を６ｗｅｌｌ培養フラスコに１ｍｌずつ加え、３７℃、５％ＣＯ2にて培養した。
４時間、２４時間、４８時間後、７２時間後に、細胞観察を行い、細胞のモルホロジーを撮影した。４時間の観察後、培地を１０％ＦＢＳ添加の無血清培地に変更した。
その結果、ＰＬＡＣＨＭＡは良好な細胞接着が見られ、４時間後でもほとんどの細胞が接着傾向にある（図１）。また、２４時間後では、石垣状の増殖細胞も見られるが、細胞が集塊を作り、３次元的な構造を取るいわゆるスフェロイドが観察された（図１）。
【００７７】
実施例４
ＰＬＡＣＨＭＡをＰＭＡＨＭＡに変更した以外は実施例３と同様にして細胞培養試験を行った。
その結果、ＰＭＡＨＭＡは、７２時間後においても細胞接着は見られず、細胞に対して高い忌避活性が確認できた。
【００７８】
比較例１
ポリマーコーティングを行わない以外は実施例３と同様にして細胞培養試験を行った。
その結果、ｗｅｌｌ培養フラスコ表面が疎水面であることから細胞は固定化されず、非特異吸着した細胞のみが増殖されることが確認された。
【００７９】
以上より、本発明の重合体は、細胞に対する優れた特異性を有することが分かった。
【図１】
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