(57)【要約】【課題】本発明の目的は、副作用を生じるおそれが少なく、効果的に睡眠障害を改善することができる剤を提供することである。【解決手段】本発明は、ロイシンを有効成分として含有してなる睡眠改善剤を提供する。また、本発明は、グリシン及び／又はアラニンをさらに含有する睡眠改善剤を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ロイシンを有効成分として含有してなる、睡眠改善剤。
【請求項２】
ロイシンがＤ−ロイシンである、請求項１に記載の剤。
【請求項３】
グリシンをさらに含有する、請求項１又は２に記載の剤。
【請求項４】
アラニンをさらに含有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の剤。
【請求項５】
アラニンがＤ−アラニンである、請求項４に記載の剤。
【請求項６】
睡眠改善が不眠症の改善である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の剤。
【請求項７】
不眠症が、入眠障害、中途覚醒、早朝覚醒または熟眠障害である、請求項６に記載の剤。
【請求項８】
睡眠改善が概日リズム睡眠障害の改善である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の剤。
【請求項９】
概日リズム睡眠障害が睡眠相後退症候群である、請求項８に記載の剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミノ酸を含有してなる睡眠改善剤に関し、より詳細には、ロイシンを含有してなる睡眠改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、社会生活の変化に伴い、日常的なストレス等により睡眠障害に悩む人々が増加している。その自覚症状としては、従来は「睡眠時間が短い」等の睡眠の量に関する症状であったところから、「寝付きが悪い」、「眠りが浅い」、「何度も目覚める」、「目覚めが悪い」、「熟睡感がない」、「昼間に眠気がある」等の睡眠の質的な症状へと変化している。睡眠は、身体の休息のみならず、身体をコントロールする大脳を休め、肉体的及び精神的なストレスを解消するために重要な役割を果たす。そのため、睡眠機能の障害は慢性的な疲労や集中力、判断力、記憶力の低下を引き起こし、日常生活や社会生活の上で様々な障害をもたらす。
【０００３】
肉体的及び精神的なストレスから身体を守るためには、十分な睡眠時間を確保することに加えて睡眠の質を向上させることが重要である。一般に、夜間における健常人の睡眠は、レム睡眠（浅い眠りで、身体は眠っているが脳は活動している状態）とノンレム睡眠（深い眠りで、レム睡眠以外の状態）との睡眠相により構成されている。健常人の睡眠では、入眠後３０分から１時間程度で最も深いノンレム睡眠に入り、その後は６０〜１２０分間の間隔で浅くなったり深くなったりを繰り返す睡眠周期を経た後、覚醒に到る。また、睡眠周期中のレム睡眠は時間の経過とともに長くなり、ノンレム睡眠の深度は次第に浅くなる傾向が見られる。このような睡眠のバランスが崩れることにより睡眠の質が低下し、睡眠障害の自覚症状が顕在化する。
【０００４】
睡眠障害を軽減するためには、寝具や睡眠時の環境を改善する等のほか、ベンゾジアゼピン系睡眠薬、チエノジアゼピン系睡眠薬、バルビツール酸系睡眠薬等の医療用医薬品、及び塩酸ジフェンヒドラミンを主とする一般用医薬品が広く使用されている。医療用医薬品は、主に慢性的な睡眠障害と診断されている患者に対して処方されており、比較的強い中枢抑制作用を有する。このため、医師の診断が必要であり、軽度の睡眠障害である患者に対しては処方されにくい。また、起床時の頭重感、悪心、頭痛、薬物依存性、持ち越し効果等の副作用を生じるおそれもある。一方、一般用医薬品は、軽度又は一時的な睡眠障害を改善するために販売されている。特に、抗ヒスタミン剤である塩酸ジフェンヒドラミンは、一時的な寝付きの悪さや浅い眠り等の症状を緩和するために睡眠障害に悩む多くの人々に服用されている。しかし、該症状の緩和に十分量の抗ヒスタミン剤を服用すると、起床時においても睡眠効果が持続し、過剰な眠気のために起床時の目覚めの良さに対する十分な効果は期待できない。起床時における眠気を減弱させるために抗ヒスタミン剤を減量すると、寝付きの悪さや浅い眠りを十分に改善できず、目覚めはさらに悪化するという問題がある。このことから、睡眠障害に対して十分な改善効果を有すると同時に、副作用を生じるおそれのない睡眠改善剤が望まれている。
【０００５】
これまでに、グリシンが熟眠障害の改善効果を有することが報告されている（特許文献１）。グリシンは、食品添加剤として認められているアミノ酸であり、多くの食品に含まれている。そのため副作用を生じる可能性は極めて低く、十分に安全性が確保された素材であるといえる。アミノ酸は、食品のみならず生体内にも存在することから、一般に他の薬剤よりも副作用のおそれがないと考えられている。アミノ酸の睡眠改善効果に関する研究結果は他にも報告されており、例えば、分岐鎖アミノ酸の慢性腎障害患者に対する睡眠の質の改善効果や（特許文献２）、プロリン及びシステインの脳室内投与による睡眠作用等が挙げられる（非特許文献１、２）。しかし、その一方で、ヒスチジンは脳室内投与をしても睡眠作用を示さないことが報告されている（非特許文献３）。このように、アミノ酸の睡眠への効果はアミノ酸の種類によって異なっている。また、その効果の程度もアミノ酸の種類によって異なることが考えられる。そのため、副作用のおそれのないアミノ酸の中でも、より優れた睡眠改善効果を奏する素材が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第４９１３４１０号公報
【特許文献２】特開平７−３２４０３０号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Hamasu K et al., Amino Acids. 2010 Jan;38(1):57-64.
【非特許文献２】Yamane H et al., Anim Sci J. 2009 Aug;80(4):428-32.
【非特許文献３】Tomonaga S et al., Brain Res Bull. 2004 Mar;63(1):75-82.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、副作用を生じるおそれが少なく、効果的に睡眠障害を改善することができる剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、アミノ酸の一種であるロイシンを投与することによって睡眠の障害が効果的に改善されること、及びロイシンがグリシンの睡眠改善作用を増強することを見出した。また、本発明者らは、ロイシン以外にもアラニンに睡眠改善作用があること、及びロイシンとアラニンとを併用すると睡眠改善効果が向上することを見出した。これらの知見に基づき、本発明者らはさらに研究を重ねることによって、本発明を完成するに至った。
【００１０】
即ち、本発明は以下に関する。
［１］ロイシンを有効成分として含有してなる、睡眠改善剤。
［２］ロイシンがＤ−ロイシンである、上記［１］に記載の剤。
［３］グリシンをさらに含有する、上記［１］又は［２］に記載の剤。
［４］アラニンをさらに含有する、上記［１］〜［３］のいずれかに記載の剤。
［５］アラニンがＤ−アラニンである、上記［４］に記載の剤。
［６］睡眠改善が不眠症の改善である、上記［１］〜［５］のいずれかに記載の剤。
［７］不眠症が、入眠障害、中途覚醒、早朝覚醒または熟眠障害である、上記［６］に記載の剤。
［８］睡眠改善が概日リズム睡眠障害の改善である、上記［１］〜［５］のいずれかに記載の剤。
［９］概日リズム睡眠障害が睡眠相後退症候群である、上記［８］に記載の剤。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、効果的に睡眠障害を改善することができる睡眠改善剤を提供することができる。本発明の睡眠改善剤は、その有効成分がアミノ酸であることから、副作用を生じるおそれが少ないという点で安全性に優れており、日常的に連用することも可能である。上記睡眠障害の改善により、「睡眠時間が短い」等の睡眠の量のみならず、「寝付きが悪い」、「眠りが浅い」、「何度も目覚める」、「目覚めが悪い」、「熟睡感がない」、「昼間に眠気がある」等の睡眠の質も改善することができる。
【００１２】
また、本発明の睡眠改善剤によれば、睡眠障害の改善を通じて、睡眠障害によって引き起こされる慢性的な疲労、ならびに集中力、判断力および記憶力の低下（具体的には、日中傾眠、仕事の能率低下、事故、イライラ、短気、起床時の頭痛、気分の変調、性欲減退、幻覚、難聴、夜間の異常行動等）を防止することができ、さらには睡眠障害により惹起される各種症状による社会的不適応、不安および鬱状態を防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、Ｄ−ロイシン投与後３時間の睡眠構造の割合を示したグラフである。
【図２】図２は、Ｄ−ロイシン群及び対照群の睡眠時間を示した図である。上の図は、両群の１０分毎の睡眠時間の変化を示したグラフであり、グラフの縦軸は睡眠時間（分）、横軸は被験物質投与後の時間（分）を示す。左下の図は、両群の睡眠潜時（分）を示す。右下の図は、両群の睡眠時間（分）を示す。
【図３】図３は、Ｄ−ロイシンの自発行動量に対する効果を示したグラフである。上の図はＤ−ロイシンを１．７５ｇ／ｋｇ投与した場合、左下の図はＤ−ロイシンを０．８７ｇ／ｋｇ投与した場合、右下の図はＤ−ロイシンを０．４４ｇ／ｋｇ投与した場合のグラフをそれぞれ示す。いずれのグラフも、縦軸は自発行動量（回数）を示し、横軸は被験物質投与後の時間（分）を示す。
【図４】図４は、Ｄ−ロイシンおよびＬ−ロイシンの自発行動量に対する効果について比較したグラフである。グラフの縦軸は自発行動量（回数）を示し、横軸は被験物質投与後の時間（分）を示す。
【図５】図５は、被験物質投与後１５０分間のグリシンおよびＤ−ロイシンの併用効果について示したグラフである。グラフの縦軸は自発行動量を示し、横軸は各群を示す。
【図６】図６は、被験物質投与後３０分毎のグリシンおよびＤ−ロイシンの併用効果について示したグラフである。グラフの縦軸は自発行動量を示し、横軸は３０分毎の時間を示す。
【図７】図７は、Ｄ−ロイシン高含有餌の時間帯別摂取による行動の位相後退作用および位相前進作用を示した図である。
【図８】図８は、Ｄ−アラニンの自発行動量に対する効果を示したグラフである。グラフの縦軸は自発行動量（回数）を示し、横軸は被験物質投与後の時間（分）を示す。
【図９】図９は、Ｄ−アラニンの深部体温に対する効果を示したグラフである。グラフの縦軸は深部体温（℃）を示し、横軸は被験物質投与前後の時間（分）を示す。
【図１０】図１０は、被験物質投与後１５０分間のＤ−アラニンおよびＤ−ロイシンの併用効果について示したグラフである。グラフの縦軸は自発行動量を示し、横軸は各群を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、ロイシンを有効成分として含有してなる睡眠改善剤を提供する。
【００１５】
本発明の睡眠改善剤に含まれるロイシンは、Ｌ体（Ｌ−ロイシン）、Ｄ体（Ｄ−ロイシン）又はこれらの混合物（例えば、ラセミ体）のいずれであってもよいが、本発明では、好ましくはＤ体及びＤ体とＬ体との混合物が使用され、より好ましくはＤ体が使用される。
【００１６】
本発明の睡眠改善剤は、好ましくは他の分岐鎖アミノ酸（イソロイシン、バリン）を含有しない。
【００１７】
本発明においてロイシンは、動物や植物に由来する天然のもの、或いは化学合成法、発酵法、酵素法、遺伝子組換え法によって得られるもののいずれを使用してもよい。
Ｌ−ロイシンは、例えば、Escherichia属、Brevibacterium属、Corynebacterium属又はSerratia属に属するＬ−ロイシン生産菌又はそれらの変異株を用いた発酵法により製造することができる。
Ｄ−ロイシンは、例えば、Alcaligenes属、Pseudomonas属、Streptomyces属又はVariovorax属に属する細菌由来のＤ−アミノアシラーゼを用いた加水分解法により製造することができる。具体的には、Ｎ−アシルロイシンのラセミ体を合成した上で、Ｄ−アミノアシラーゼを用いてＮ−アシル−Ｄ−ロイシンを特異的に加水分解し、加水分解後の混合物の中から溶解度の差異等を利用してＤ−ロイシンを分離することができる。
【００１８】
本発明において用いられるロイシンは、遊離体のみならず、塩の形態であってもよい。塩の形態としては、酸付加塩や塩基との塩等を挙げることができ、薬理学的に許容される塩を選択することが好ましい。そのような塩としては、例えば、無機酸との塩、有機酸との塩、無機塩基との塩、有機塩基との塩が挙げられる。
【００１９】
無機酸との塩としては、例えば、ハロゲン化水素酸（塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸等）、硫酸、硝酸、リン酸等との塩が挙げられる。
有機酸との塩としては、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、クエン酸等との塩が挙げられる。
無機塩基との塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アンモニウムとの塩等が挙げられる。
有機塩基との塩としては、例えば、エチレンジアミン、プロピレンジアミン、エタノールアミン、モノアルキルエタノールアミン、ジアルキルエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン等との塩が挙げられる。
【００２０】
本発明の睡眠改善剤は、有効成分そのままであってもよく、或いは、製剤上の必要に応じて、適宜の薬学的に許容される担体を配合して、自体公知の方法により医薬として製剤化されていてもよい。薬学的に許容される担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、溶剤、崩壊剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤、無痛化剤、防腐剤、抗酸化剤、矯味矯臭剤、着色剤等が挙げられる。
【００２１】
賦形剤としては、乳糖、ブドウ糖、Ｄ−マンニトールなどの糖類、でんぷん類、結晶セルロースなどのセルロース類などの有機系賦形剤、炭酸カルシウム、カオリンなどの無機系賦形剤などが、結合剤としては、α化デンプン、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、Ｄ−マンニトール、トレハロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコールなどが、滑沢剤としては、ステアリン酸、ステアリン酸塩などの脂肪酸塩、タルク、珪酸塩類などが、溶剤としては、精製水、生理的食塩水などが、崩壊剤としては、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、化学修飾されたセルロースやデンプン類などが、溶解補助剤としては、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、トレハロース、安息香酸ベンジル、エタノール、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなどが、懸濁化剤あるいは乳化剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、アラビアゴム、ゼラチン、レシチン、モノステアリン酸グリセリン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース類、ポリソルベート類、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などが、等張化剤としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、糖類、グリセリン、尿素などが、安定化剤としては、ポリエチレングリコール、デキストラン硫酸ナトリウム、その他のアミノ酸類などが、無痛化剤としては、ブドウ糖、グルコン酸カルシウム、塩酸プロカインなどが、防腐剤としては、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸などが、抗酸化剤としては、亜硫酸塩、アスコルビン酸などが、矯味矯臭剤としては、医薬分野において通常に使用される甘味料、香料などが、着色剤としては、医薬分野において通常に使用される着色料が挙げられる。
【００２２】
製剤化された本発明の睡眠改善剤の剤形は、特に限定されないが、経口投与用として、例えば、散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、チュアブル剤等の固形剤、溶液剤、シロップ剤等の液剤等とすることができる。また、上記剤形は、非経口投与用として、例えば、注射剤、輸液剤、経鼻・経肺用スプレー剤等とすることもできる。
【００２３】
本発明の睡眠改善剤はまた、食品としても有用である。本明細書において「食品」とは、食品全般（飲料を含む）を意味し、消費者庁の特別用途食品制度に規定される特別用途食品（病者用食品、特定保健用食品）や、ダイエタリーサプリメント（栄養補助食品）も包含するものである。
【００２４】
本発明の睡眠改善剤を食品として利用する場合、本発明の睡眠改善剤は有効成分そのままであってもよいが、適宜の食品として許容される担体を用いて自体公知の方法により製剤化されていてもよい。製剤化された本発明の睡眠改善剤の剤形としては、例えば、散剤、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤等が挙げられるが、特にこれらに限定されない。食品として許容される担体としては、例えば、加工用食材、調味料、香料、甘味料等が挙げられ、上記の薬学的に許容される担体も含まれる。また、製剤化に際しては、ビタミン類や他の栄養補給用添加剤等を配合することもできる。
【００２５】
製剤化された場合の本発明の睡眠改善剤におけるロイシンの含有量は、特に限定されるものではなく、本発明の効果を奏するのに必要な量を含有するように適宜調整することができる。ロイシンの含有量は、剤形の種類や使用される担体の種類によっても異なるが、製剤の全重量に対し、例えば０．０１５〜１００重量％であり、好ましくは０．０２〜９９重量％であり、より好ましくは０．０２５〜９８．５重量％であり、さらに好ましくは０．０３〜９８重量％である。尚、ロイシンが塩を形成する場合、含有量の計算は、その塩を遊離体に換算した上で行うものとする。
【００２６】
本発明の睡眠改善剤によれば、睡眠障害を改善することができる。本明細書において「睡眠障害」とは、入眠又は睡眠に何らかの異常のある状態をいい、睡眠の量の低下及び睡眠の質の低下を包含する。睡眠の量の低下の症状としては、例えば、寝入るまでの時間の増加、中途覚醒又は早朝覚醒による不十分な睡眠時間等が挙げられる。また、睡眠の質の低下の症状としては、例えば、睡眠時刻のずれ、深い睡眠（ノンレム睡眠）の減少、レム睡眠の減少、中途覚醒による睡眠の分断、活動時間帯での居眠り等が挙げられる。睡眠障害の診断では、通常、複数の質問項目からなるテストが利用される。また、確定診断のためには、脳波測定または脳波測定を含む複数の項目を計測する睡眠ポリグラフィーを利用することができる。診断結果は、国際的に認められている基準に従い分類することができる（The International Classification of Sleep Disorder, ICSD）。尚、本明細書において「改善」は、睡眠障害及びそれにより発生する症状の修復、抑制（進行の遅延）、緩和、調節及び防止（発生防止及び再発防止の両方を含む）を包含する意味で使用される。
【００２７】
本発明において、睡眠障害には、睡眠異常、概日リズム睡眠障害、睡眠時随伴症、精神障害に関連する睡眠障害、身体的疾患に関連する睡眠障害、及び薬物に関連する睡眠障害等が含まれる。
【００２８】
睡眠異常は、不眠症及び過眠症の概念を包含する。不眠症は、入眠障害、中途覚醒、早朝覚醒又は熟眠障害のいずれかの訴えがあることをいう。また、過眠症は、日中の過剰な眠気又は実際に眠り込むことが繰り返し見られる状態をいう。いずれも持続期間は少なくとも１ヶ月間とされるが、特にこれに限定されない。睡眠異常の具体例としては、精神生理性不眠症、原発性過眠症、ナルコレプシー、睡眠時無呼吸症候群、反復性過眠症、突発性過眠症、周期性四肢運動障害、むずむず脚症候群、時間帯域変化症候群、環境因性睡眠障害等が挙げられる。
【００２９】
概日リズム睡眠障害とは、昼夜のサイクルと体内時計のリズムとが合わないため、１日の中で社会的に要求される時間帯、或いは自ら望む時間帯に睡眠をとることができず、活動に困難をきたすような睡眠障害である。概日リズム睡眠障害には、明け方まで寝付けず早朝に起床するのが困難な睡眠相後退症候群と、夕方早くから眠くなり早朝に覚醒する睡眠相前進症候群とが包含される。
【００３０】
睡眠時随伴症は、睡眠の経過中に生じる心身機能の異常の総称であり、その具体例としては、特に限定されないが、睡眠時遊行症、夜驚症、レム睡眠行動障害、睡眠麻痺等が挙げられる。
【００３１】
精神障害に関連する睡眠障害の原因となる疾患としては、例えばうつ病、躁病、精神分裂病等が挙げられる。また、身体的疾患に関連する睡眠障害の原因となる疾患としては、例えばアルツハイマー型痴呆、脳血管性痴呆、パーキンソン病等が挙げられる。薬物に関連する睡眠障害としては、例えば、抗痙攣薬、抗不安薬、抗精神病薬、精神賦活薬、抗パーキンソン病薬、抗癌薬、ホルモン剤等により誘発される睡眠障害が挙げられる。
【００３２】
本発明の睡眠改善剤は、ノンレム睡眠期の割合およびノンレム睡眠時間を顕著に増加させることから、安定した睡眠を維持するという効果において特に優れている。これにより、本発明の睡眠改善剤は、睡眠の量のみならず、深い眠り、目覚める回数の低減、十分な熟睡感といった点で睡眠の質も効果的に改善することができる。そのため、本発明の睡眠改善剤は不眠症に適用することが好ましく、その中でも、中途覚醒、早朝覚醒および熟眠障害に適用することが特に好ましい。
【００３３】
また、本発明の睡眠改善剤は、覚醒期の割合を低下させたり睡眠潜時を短縮させたりすることから、寝付きを良くするという点で睡眠の質を改善することができる。そのため、本発明の睡眠改善剤は、上述した中途覚醒、早朝覚醒および熟眠障害への適用のみならず、入眠障害に適用することも好ましい。
【００３４】
さらに、本発明の睡眠改善剤は概日リズムの調節作用を有することから、概日リズム睡眠障害に適用することも好ましい。特に、本発明の睡眠改善剤は概日リズムの前進に寄与するため、概日リズム睡眠障害の中でも睡眠相後退症候群に対して有用である。概日リズムの調節作用を通じて、時差症状（時差ぼけ）、シフトワークに伴う体調不良および視力低下の改善、ならびに視覚障害時の体内時計調節等を図ることができる。
【００３５】
本発明の睡眠改善剤の適用対象としては、哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サル等）が挙げられる。本発明の睡眠改善剤の適用対象は、好ましくはヒトである。尚、ヒト以外の哺乳動物に適応する場合、本発明の睡眠改善剤の投与量は、動物の体重若しくは大きさに応じて適宜加減すればよい。
【００３６】
本発明の睡眠改善剤を医薬として用いる場合の投与方法は、経口投与及び非経口投与のいずれであってもよい。対象への負担を軽減する観点からは、本発明の睡眠改善剤は対象に対して経口投与することが好ましい。一方、経口投与が困難な対象に対しては、輸液として経静脈又は経動脈投与することができる。
【００３７】
本発明の睡眠改善剤の成人１日当たりの投与量（摂取量）は、対象患者の年齢、体重、症状、投与方法等によっても異なるが、有効成分であるロイシンの重量として、通常０．０００６２５〜２．０g/kg/day（体重１kgあたりの一日あたりの摂取量）であり、好ましくは０．０００７〜１．５g/kg/dayであり、より好ましくは０．０００７５〜１．０g/kg/dayであり、さらに好ましくは０．０００８〜０．５g/kg/dayである。ロイシンが塩を形成している場合、投与量の計算は、その塩を遊離体に換算した上で行うものとする。
【００３８】
本発明で使用する有効成分であるアミノ酸の投与量について算出する際、本発明の目的である睡眠改善のために使用される薬剤の有効成分として前記の算定範囲が決められているので、これとは別目的で、例えば通常の食生活の必要から、あるいは別の疾患の治療目的で、摂取または投与されるアミノ酸についてはこれを前記算定に含める必要はない。例えば、通常の食生活から摂取される一日あたりのアミノ酸の量を前記本発明における有効成分の一日あたりの投与量から控除して算定する必要はない。
【００３９】
本発明においては、上記の１日量を、１回、又は必要に応じて２〜数回、好ましくは朝晩の２回に分割して適宜の間隔をあけて投与する。投与の時期としては、特に限定されないが、例えば起床時、就寝前、食前、食間、食後、等、好ましくは起床時と就寝前が挙げられる。上述した通り、本発明の睡眠改善剤は概日リズムを前進させ得ることから、起床時や朝食時（食前、食間、食後）、シフトワーク時の就業前等のような早朝や活動開始時に投与することも可能であり、それによって夜間の入眠を効果的に促進することができる。
【００４０】
本発明の睡眠改善剤の投与期間は、本発明の効果が得られる限りにおいて特に限定されないが、投与直後の睡眠効果を望む場合においては、通常１日以上、好ましくは３日以上である。また、その場合、本発明の睡眠改善剤は、通常毎日、好ましくは入眠困難時に投与される。一方、概日リズムの前進効果を望む場合においては、本発明の睡眠改善剤の投与期間は、通常１日以上、好ましくは３日以上である、より好ましくは４日以上である。また、その場合、本発明の睡眠改善剤は、通常、時差症状期間中やシフトワーク期間中、好ましくはその期間の起床から６時間以内、さらに好ましくはその期間の起床時に投与される。
【００４１】
本発明の睡眠改善剤は、グリシンをさらに含有することができる。グリシンは、上述したように熟眠障害を改善する作用を有しており、睡眠の質を改善する効果を奏する。本発明の睡眠改善剤に含まれるロイシンは、かかるグリシンの睡眠改善効果を増強する作用を有している。
【００４２】
本発明においてグリシンは、動物や植物に由来する天然のもの、或いは化学合成法、発酵法、酵素法、遺伝子組換え法によって得られるもののいずれを使用してもよい。また、本発明において用いられるグリシンは、遊離体のみならず、塩の形態であってもよい。かかる塩の形態としては、特に限定されないが、上記に例示したものが挙げられる。
【００４３】
本発明の睡眠改善剤において、ロイシンとグリシンとは併用される態様であってよい。ここで、本明細書において「併用」とは、一の有効成分の投与の前、同時、又は後における他の有効成分の使用を意味し、また、各有効成分を混合させた配合剤としての使用も含むことを意味する。本発明においては、ロイシン及びグリシンの両方を使用し、且つ、グリシンの睡眠改善効果が増強される限り、それらの投与形態は限定されない。
【００４４】
このような投与形態としては、例えば、（１）ロイシンとグリシンとを同時に製剤化して得られる単一の製剤の投与、（２）ロイシンとグリシンとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での同時投与、（３）ロイシンとグリシンとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での時間差をおいての投与、（４）ロイシンとグリシンとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での同時投与、（５）ロイシンとグリシンとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での時間差をおいての投与（例えば、ロイシンを先に投与し、次いでグリシンを投与するという順序、或いはその逆の順序での投与）等が挙げられる。本発明においては、投与回数や投与の手間を省略するという観点から、上記（１）又は（２）の投与形態が好ましく、上記（１）の投与形態がより好ましい。
【００４５】
本発明の睡眠改善剤におけるグリシンの含有量は、特に限定されるものではなく、本発明の効果を奏するのに必要な量を含有するように適宜調整することができる。グリシンが塩を形成する場合、含有量の計算は、その塩を遊離体に換算した上で行うものとする。
【００４６】
本発明の睡眠改善剤に含まれるロイシンおよびグリシンの比（重量比）は、本発明の効果を有する範囲で適宜調整することが可能である。例えば、両アミノ酸の比（ロイシン：グリシン）は、重量比として、通常０．００５：１．０〜１．０：１．０であり、好ましくは０．０１：１．０〜０．８：１．０であり、より好ましくは０．０２：１．０〜０．６：１．０である。尚、ロイシンおよびグリシンが塩を形成する場合、重量比の計算は、各アミノ酸の塩を全て遊離体に換算した上で行うものとする。ここで、本明細書において「重量比」は、本発明の睡眠改善剤に含まれるそれぞれのアミノ酸の重量の比を示し、例えば、２種のアミノ酸を１つの組成物中に含めた場合には個々のアミノ酸の含有量の比であり、２種のアミノ酸のそれぞれを別個に２つの組成物中に含めた場合には、各組成物に含まれる各アミノ酸の重量の比である。
【００４７】
本発明においてグリシンの投与量（摂取量）、投与期間および投与間隔は、対象患者や症状等に応じて適宜設定することができる。グリシンの投与量は、特に限定されないが、通常０．００２０８〜２．５g/kg/day（体重１kgあたりの一日あたりの摂取量）であり、好ましくは０．００２５〜２．０g/kg/day、より好ましくは０．０１２５〜１．５g/kg/dayである。尚、グリシンが塩を形成している場合、上記投与量の計算は、その塩を遊離体に換算した上で行うものとする。グリシンの投与期間および投与間隔は特に限定されず、例えば、本発明の睡眠改善剤の投与期間および投与間隔と合わせることができる。
上記ロイシンと同様に、グリシンの投与量について算出する際は、本発明の目的である睡眠改善のために使用される薬剤の有効成分として前記の算定範囲が決められているので、これとは別目的で、例えば通常の食生活の必要から、あるいは別の疾患の治療目的で、摂取または投与されるグリシンについてはこれを前記算定に含める必要はない。
【００４８】
上述したように、本発明の睡眠改善剤を投与するに際しては、ロイシンおよびグリシンを同時期に投与してもよく、ロイシンを先に投与した後、グリシンを投与してもよいし、グリシンを先に投与し、その後でロイシンを投与してもよい。
【００４９】
本発明の睡眠改善剤は、アラニンをさらに含有することができる。アラニンは、ロイシンの睡眠改善効果を高める作用を有している。そのため、アラニンとロイシンとの併用は本発明において好ましい一つの態様である。また、上述したようにロイシンはグリシンの睡眠改善作用を増強することから、アラニンとロイシンとの併用においてさらにグリシンを組み合わせて用いることは、本発明において別の好ましい一つの態様である。尚、後述の実施例で示されるように、アラニンはそれ自体が睡眠改善作用を有している。そのため、アラニンを単独で有効成分として用いることも可能である。
【００５０】
本発明において用いられるアラニンは、Ｌ体（Ｌ−アラニン）、Ｄ体（Ｄ−アラニン）又はこれらの混合物（例えば、ラセミ体）のいずれであってもよいが、本発明では、好ましくはＤ体及びＤ体とＬ体との混合物が使用され、より好ましくはＤ体が使用される。
【００５１】
本発明においてアラニンは、動物や植物に由来する天然のもの、或いは化学合成法、発酵法、酵素法、遺伝子組換え法によって得られるもののいずれを使用してもよい。
Ｌ−アラニンは、例えば、アスパラギン酸脱炭酸酵素又は当該酵素活性を有する細菌（Xanthomonas属など）を用いてＬ−アスパラギン酸を酵素的に変換することにより製造することができる。
Ｄ−アラニンは、例えば、Brevibacterium属又はCorynebacterium属に属するＤ−アラニン生産菌又はそれらの変異株を用いた発酵法や、アラニンラセマーゼを用いてＬ−アラニンを酵素的に変換することにより製造することができる。
【００５２】
また、本発明において用いられるアラニンは、遊離体のみならず、塩の形態であってもよい。かかる塩の形態としては、特に限定されないが、上記に例示したものが挙げられる。
【００５３】
本発明においてアラニンが用いられる場合、本発明の睡眠改善剤は、上述した効果に加えて、特に深部体温を低下させる効果を奏し、深い眠り、目覚める回数の低減、十分な熟睡感等のような睡眠の質の改善を促す。そのため、アラニンが用いられる場合においても、本発明の睡眠改善剤は不眠症に適用することが好ましく、中でも中途覚醒、早朝覚醒および熟眠障害に適用することがより好ましい。
【００５４】
アラニンは、ロイシンおよびグリシンと併用することができ、その投与形態は本発明の効果を奏する限り特に限定されない。アラニンは、ロイシンの睡眠改善効果を高めることから、特にロイシンと併用することが好ましい。
【００５５】
アラニンをロイシンと併用する場合、その投与形態としては、例えば、（１）ロイシンとアラニンとを同時に製剤化して得られる単一の製剤の投与、（２）ロイシンとアラニンとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での同時投与、（３）ロイシンとアラニンとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での時間差をおいての投与、（４）ロイシンとアラニンとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での同時投与、（５）ロイシンとアラニンとを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での時間差をおいての投与（例えば、ロイシンを先に投与し、次いでアラニンを投与するという順序、或いはその逆の順序での投与）等が挙げられる。本発明においては、投与回数や投与の手間を省略するという観点から、上記（１）又は（２）の投与形態が好ましく、上記（１）の投与形態がより好ましい。
【００５６】
本発明の睡眠改善剤におけるアラニンの含有量は、特に限定されるものではなく、本発明の効果を奏するのに必要な量を含有するように適宜調整することができる。尚、アラニンが塩を形成する場合、含有量の計算は、その塩を遊離体に換算した上で行うものとする。
【００５７】
本発明の睡眠改善剤に含まれるロイシンおよびアラニンの比（重量比）は、本発明の効果を有する範囲で適宜調整することが可能である。例えば、両アミノ酸の比（ロイシン：アラニン）は、重量比として、通常０．００５：１．０〜１．０：１．０であり、好ましくは０．０１：１．０〜０．８：１．０であり、より好ましくは０．０２：１．０〜０．６：１．０である。尚、ロイシンおよびアラニンが塩を形成する場合、重量比の計算は、各アミノ酸の塩を全て遊離体に換算した上で行うものとする。
【００５８】
本発明においてアラニンの投与量（摂取量）、投与期間および投与間隔は、対象患者や症状等に応じて適宜設定することができる。アラニンの投与量は、特に限定されないが、通常０．００２０８〜２．５g/kg/day（体重１kgあたりの一日あたりの摂取量）であり、好ましくは０．００６２５〜２．０g/kg/day、より好ましくは０．０１２５〜１．５g/kg/dayである。尚、アラニンが塩を形成している場合、上記投与量の計算は、その塩を遊離体に換算した上で行うものとする。アラニンの投与期間および投与間隔は特に限定されず、例えば、本発明の睡眠改善剤の投与期間および投与間隔と合わせることができる。
【００５９】
上述したように、本発明の睡眠改善剤を投与するに際しては、ロイシンおよびアラニンを同時期に投与してもよく、ロイシンを先に投与した後、アラニンを投与してもよいし、アラニンを先に投与し、その後でロイシンを投与してもよい。
【００６０】
本発明においてロイシン、グリシンおよびアラニンの３種のアミノ酸を用いる場合、その投与形態としては、特に限定されないが、例えば、（１）上記３種のアミノ酸を同時に製剤化して得られる単一の製剤の投与、（２）上記３種のアミノ酸を別々に製剤化して得られる３種の製剤の同一経路での同時投与、（３）上記３種のアミノ酸を別々に製剤化して得られる３種の製剤の同一投与経路での時間差をおいての投与、（４）上記３種のアミノ酸を別々に製剤化して得られる３種の製剤の異なる投与経路での同時投与、（５）上記３種のアミノ酸を別々に製剤化して得られる３種の製剤の異なる投与経路での時間差をおいての投与等が挙げられる。本発明においては、投与回数や投与の手間を省略するという観点から、上記（１）又は（２）の投与形態が好ましく、上記（１）の投与形態がより好ましい。また、上記３種のアミノ酸のうちいずれか２種の任意のアミノ酸は同時に製剤化されていてもよく、かかる製剤と残りの１種のアミノ酸を製剤化して得られる製剤とを同一又は異なる経路にて同時に又は時間差をおいて投与することができる。上記３種のアミノ酸について、投与されるアミノ酸の順序は特に限定されず、２種の任意のアミノ酸が製剤化された場合であっても、その製剤と残りの１種のアミノ酸とが投与される順序は特に限定されない。
【００６１】
本発明の睡眠改善剤におけるロイシン、グリシンおよびアラニンの比（重量比）は、本発明の効果を有する範囲で適宜調整することが可能である。例えば、上記３種のアミノ酸の比（ロイシン：グリシン：アラニン）は、重量比として、通常０．００５：０．５：０．００５〜１.０：１．０：１．０であり、好ましくは０．０１：０．５:０．０５〜０．８：１．０：１．０であり、より好ましくは０．０２：０．５：０．５〜０．６：１．０：１．０である。尚、上記３種のアミノ酸が塩を形成する場合、重量比の計算は、各アミノ酸の塩を全て遊離体に換算した上で行うものとする。
【００６２】
上述したように、ロイシン、グリシンおよびアラニンの３種のアミノ酸は同時期に投与してもよく、或いは時間差をおいて投与してもよい。上記３種のアミノ酸のうち２種の任意のアミノ酸が製剤化された場合であっても、残りの１種のアミノ酸との投与間隔は特に制限されず、上記と同様にすることができる。
【００６３】
以下、実施例により、本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００６４】
（実施例１）
四宮ら（Psychopharmacol. Berl., 173:1-2, 203, 2004）が確立したラット睡眠障害モデルを用いてD-ロイシンの睡眠改善効果を評価した。
【００６５】
＜測定方法＞
雄性Wistarラット（200〜300g）を麻酔下にて手術を行い、腹腔内に脳波測定用テレメトリー送信器（TL11M2-F40-EET：DSI社）を挿入し、脳波取得用電極を頭部、筋電位取得用電極を頚部に埋め込んだ。術後は10日間の回復期間を設け、全期間中、自由摂食、自由飲水とした。
休息期である明期の開始からストレス負荷を3時間かけて睡眠障害状態とし、これらのラットについて被験物質投与後3時間の睡眠脳波を測定した。ストレス負荷および睡眠脳波測定は四宮らの方法に準じて実施した。具体的にはケージ内に足場として金網を置き、この金網の1cm下に水面が来るように水を張ることでラットにストレス負荷がかかる状態を作成し、ストレス負荷開始から3時間後に被験物質を投与し、投与後3時間における脳波および筋電図のデータを測定した。
【００６６】
＜データ解析＞
脳波および筋電図はテレメトリー送信器から受信ボードに無線で伝送され、受信ボードからデータ変換マトリックスを介して、PC内に内臓のソフトウェア（Dataquest）に取り込み、波形を観察した。睡眠-覚醒周期は取り込んだ脳波、筋電図及び行動量からコンピューターによる自動解析の後、最終的に目視による確認を行い、各エポックを覚醒期、ノンレム睡眠期、レム睡眠期のいずれかに分類した。なお、覚醒期は高振幅筋電図および低振幅脳波でシータ波（4〜8Hz）活動が認められる場合、ノンレム睡眠は低振幅筋電図および高振幅脳波でデルタ波（1〜4Hz）活動が中心の場合、レム睡眠は低振幅筋電図および低振幅脳波でシータ波活動が中心の場合として判定した。
睡眠時間の評価は、測定開始から3時間に占める覚醒期、ノンレム睡眠期、レム睡眠期の時間の割合を算出して比較した。
睡眠潜時の評価は、測定開始後、60秒以上連続するノンレム睡眠が始めて出現した時間として評価した。
【００６７】
＜被験物質＞
対照群のラットには5重量%カルボキシメチルセルロース水溶液を投与し、D-ロイシン群のラットには対照群に投与した試料に体重kgあたり0.87gのD-ロイシンを添加したものを投与した。投与は経口ゾンデを用いて行った。
【００６８】
＜結果＞
睡眠障害条件下の被験物質投与後3時間における覚醒期、ノンレム睡眠期、レム睡眠期の時間の割合を図１に示す。対照群に比較して、D-ロイシン群では覚醒期の割合が有意に低下し、ノンレム睡眠期の割合も有意に増加した。即ち、D-ロイシンの投与により睡眠が顕著に改善されることが認められた。
また、睡眠障害条件下の被験物質投与後3時間における10分毎のノンレム睡眠時間変化、睡眠潜時、投与90〜140分後のノンレム睡眠時間を図２に示す。D-ロイシン群では、対照群に比べて投与100、110、130分後で有意にノンレム睡眠時間が増加し、さらに睡眠潜時が短縮する傾向にあった。また、D-ロイシン群では投与90〜140分後のノンレム睡眠量が有意に増加していた。これらの結果から、D-ロイシンの投与は睡眠の質の改善、すなわち寝つきを良くし、安定した睡眠を与えることが認められた。
【００６９】
（実施例２）
睡眠時は自発行動量が減少するため、自発行動量を示す数値は睡眠を評価する間接指標として用いられる。そこで、D-ロイシンの濃度依存効果を評価するため、1.75g/kg、0.87g/kg、0.44g/kgの3つの濃度で自発行動量を測定した。
【００７０】
＜測定方法＞
9〜11週令の雄性C57Bl/6Jマウスを用い、明期開始2時間後から自発行動量測定装置（MELQUEST, MV-40）にて自発行動量を評価した。
【００７１】
＜被験物質＞
対照群のマウスには5重量%カルボキシメチルセルロース水溶液を投与し、D-ロイシン群のマウスには対照群に投与した試料に体重kgあたり1.75g、0.87g、0.44gのD-ロイシンを添加したものを投与した。投与は経口ゾンデを用いて行った。
【００７２】
＜結果＞
以上の結果を図３に示す。D-ロイシン（1.75g/kg）で最も大きな自発行動量低下作用が示され、続いて0.87g/kg、0.44g/kgの順に大きな自発行動量低下作用が示された。尚、0.44g/kgでは有意な差は見られなかった。これにより、D-ロイシンには濃度依存的な睡眠改善効果があることが認められた。
【００７３】
（実施例３）
ロイシンの光学異性体であるD-ロイシンおよびL-ロイシンについて、自発行動量低下作用の違いを評価した。
【００７４】
＜測定方法＞
上記実施例２と同じとした。
【００７５】
＜被験物質＞
対照群のマウスには5重量%カルボキシメチルセルロース水溶液を投与し、D-ロイシン群およびL-ロイシン群のマウスには、対照群に投与した試料に体重kgあたり1.75gのD-ロイシンおよびL-ロイシンをそれぞれ添加したものを投与した。投与は経口ゾンデを用いて行った。
【００７６】
＜結果＞
D-ロイシン群およびL-ロイシン群での自発行動量低下作用について比較した結果を図４に示す。D-ロイシン群では、対照群に比べて有意な自発行動量の低下が見られた。また、L-ロイシン群では、対照群との差はD-ロイシン群ほど大きくないものの、一部の時間帯では自発行動量が有意に低下していた。これらの結果から、D-ロイシンおよびL-ロイシンは共に睡眠改善作用を有することが考えられた。
【００７７】
（実施例４）
睡眠改善作用を有するグリシンとD-ロイシンとの同時投与による自発行動量低下作用について評価した。
【００７８】
＜測定方法＞
上記実施例２と同じとした。
【００７９】
＜被験物質＞
対照群のマウスには5重量%カルボキシメチルセルロース水溶液を投与し、それ以外の群のマウスには、それぞれ以下に示した量のグリシンおよびD-ロイシンを添加した試料を投与した。投与は経口ゾンデを用いて行った。
グリシン（1.5g）群  （グリシン：1.5g/kg）
グリシン（1g）群  （グリシン：1g/kg）
D-ロイシン（0.5g）群  （D-ロイシン：0.5g/kg）
グリシン（1g）＋D-ロイシン（0.5g）群  （グリシン：1g/kg、D-ロイシン：0.5g/kg）
【００８０】
＜結果＞
以上の結果を図５および図６に示す。投与後150分間における自発行動量について、グリシン（1.5g）群、グリシン（1g）群およびD-ロイシン（0.5g）群の自発行動量は対照群と有意な差は見られなかったが、グリシン（1g/kg）とD-ロイシン（0.5g/kg）とを同時投与したグリシン（1g）＋D-ロイシン（0.5g）群では自発行動量の有意な低下が見られた。また、グリシン（1g）＋D-ロイシン（0.5g）群では、投与30〜60分後、投与60〜90分後で有意に自発行動量が低下しており、その差はグリシン（1.5g）群よりも顕著に大きかった。これらの結果より、D-ロイシンにはグリシンの睡眠改善作用を増強する効果があると考えられた。
【００８１】
（実施例５）
24時間暗条件で飼育したマウスに対するD-ロイシンの位相後退作用及び位相前進作用を評価した。
24時間暗条件でマウスを飼育すると、外部情報（光の明暗周期）が得られなくなるため、マウスは生物時計固有の周期で活動するようになる（同調から自由になったという意味でフリーラン（自由継続）とも称する）。この自由継続周期を24時間に換算して横軸に示し、概日時刻とした場合、その前半の12時間は主観的明期（生物時計で昼と判断している時間帯：CT0-12）、後半は主観的暗期（生物時計で夜と判断している時間帯：CT12-24）と称される。
このような条件下で、マウスの自発行動量を放出赤外線検出型の自発行動量センサー（株式会社ニューロサイエンス、NS-AS01）を用いて測定した。さらにD-ロイシンを餌１gあたり6mg添加した餌を用意し、一日のうちの4時間だけ通常の餌と置き換えて摂食させた。摂取させる時間はCT2-6（主観的明期の前半）、CT8-12（主観的明期の後半）、CT14-18（主観的暗期の前半）、CT20-24（主観的暗期の後半）の4つの時間帯に分けた。このような餌の置き換えを4日間行った後に行動パターンの位相変化を判定した。
判定基準日をD-ロイシン高含有餌の最終摂取日の4日後に設定した場合のマウスの行動開始時刻の位相のずれを図７に示した。その結果、主観的明期ではD-ロイシンの効果は認められなかったが、主観的暗期の後半での摂取により、概日リズムを前進させることが明らかとなった。
【００８２】
以上の実施例１〜５の結果より、D-ロイシンおよびL-ロイシンは、概日リズムの調節、睡眠量の増加、睡眠の質の改善や入眠促進作用を有することが明らかとなり、概日リズム睡眠障害を含む睡眠障害の改善に有効であることが確認された。これにより、D-ロイシンおよびL-ロイシンは、時差ぼけやシフトワークに伴う体調不良等の概日リズム睡眠障害や、眠りが浅い、目覚めが悪い、寝付きが悪いといった睡眠に関する不満を解消することに優れた効果を示すことがわかった。
【００８３】
（実施例６）
睡眠状態の間接指標である自発行動量を用い、D-アラニンの自発行動量低下作用について評価した。
【００８４】
＜測定方法＞
9〜11週令の雄性C57Bl/6Jマウスを用い、明期開始2時間後から自発行動量測定装置（MELQUEST, MV-40）にて行動量を評価した。
【００８５】
＜被験物質＞
対照群のマウスには5重量%カルボキシメチルセルロース水溶液を投与し、D-アラニン群のマウスには対照群に投与した試料に体重kgあたり1.19gのD-アラニンを添加したものを投与した。投与は経口ゾンデを用いて行った。
【００８６】
＜結果＞
結果を図８に示す。図８に示されたように、D-アラニンの投与によりマウスの自発行動量が低下する傾向が示された。これにより、D-アラニンは睡眠改善作用を有することが確認された。
【００８７】
（実施例７）
睡眠時は深部体温が低下することが知られており、深部体温を示す数値は睡眠を評価する間接指標として用いられる。そこで、深部体温に対するD-アラニン（1.19g/kg）の効果を評価した。
【００８８】
＜測定方法＞
9週令の雄性C57Bl/6Jマウスを麻酔下にて手術を行い、腹腔内に深部体温測定用テレメトリー送信器（TA10TA-F20：DSI社）を埋め込んだ。術後は10日間の回復期間を設け、全期間中、自由摂食、自由飲水とした。
【００８９】
＜データ解析＞
深部体温はテレメトリー送信器から受信ボードに無線で伝送され、受信ボードからデータ変換マトリックスを介して、PC内に内臓のソフトウェア（Dataquest）に取り込み、深部体温を5分毎に取得した。評価時間は測定開始前60分から投与後150分とした。
【００９０】
＜被験物質＞
対照群のマウスには5重量%カルボキシメチルセルロース水溶液を投与し、D-アラニン群のマウスには対照群に投与した試料に体重kgあたり1.19gのD-アラニンを添加したものを投与した。投与は経口ゾンデを用いて行った。
【００９１】
以上の結果を図９に示す。その結果、D-アラニン群ではマウスの深部体温が低下する傾向が示された。この結果より、D-アラニンが睡眠改善作用を有することが示唆された。
【００９２】
（実施例８）
上述した通り、実施例１〜５の結果によりD-ロイシンが睡眠改善作用を有することが示された。そこで、D-ロイシンとD-アラニンとの併用効果を調べるため、両者の同時投与による自発行動量低下作用について評価した。
【００９３】
＜測定方法＞
上記実施例６と同じとした。
【００９４】
＜被験物質＞
対照群のマウスには5重量%カルボキシメチルセルロース水溶液を投与し、それ以外の群のマウスには、それぞれ以下に示した量のD-ロイシンおよびD-アラニンを添加した試料を投与した。投与は経口ゾンデを用いて行った。
D-アラニン（1.5g）群  （D-アラニン：1.5g/kg）
D-ロイシン（0.5g）群  （D-ロイシン：0.5g/kg）
D-アラニン（1g）+D-ロイシン（0.5g）群  （D-アラニン：1g/kg、D-ロイシン：0.5g/kg）
【００９５】
＜結果＞
以上の結果を図１０に示す。その結果、D-アラニンとD-ロイシンとを組み合わせて投与することにより、D-アラニンまたはD-ロイシンの単独投与に比べて、自発行動量がより低下する傾向が見られた。この結果から、D-アラニンにはD-ロイシンの睡眠改善作用を増強させる効果があることが示唆された。このようにD-ロイシンの効果が高められることから、D-アラニンには他のD-アミノ酸についても、その効果を高める作用を有することが考えられた。
【００９６】
以上の実施例６〜８の結果より、D-アラニンは自発行動量や深部体温を低下させたことから、睡眠改善作用を有しているものと考えられ、睡眠障害の改善に有用であることが示唆された。さらに、睡眠改善効果が確認されたD-ロイシンと組み合わせて投与することで、D-ロイシンの効果が増強されることが示された。D-アラニンは、特に、眠りが浅い、目覚めが悪い、寝付きが悪いといった睡眠に関する不満を解消することに優れた効果を示すことがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００９７】
本発明の睡眠改善剤は効果的に睡眠障害を改善することができるとともに、その有効成分はアミノ酸であるため安全性の点でも優れている。そのため、本発明の睡眠改善剤は医薬分野で利用可能である。また、アミノ酸は多くの食品に含まれており経口摂取が可能であることから、本発明の睡眠改善剤は食品分野においても有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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