(57)【要約】      （修正有）【課題】新たな代謝促進剤組成物の提供。【解決手段】式（１）2014070053.tif 000008で示される化合物及び特定のレスベラトロール誘導体を有効成分とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）：
【化１】
2014070053.tif 000006
及び式（２）：
【化２】
2014070053.tif 000007
で示される２種のレスベラトロール誘導体を有効成分とすることを特徴とする代謝促進剤組成物。
【請求項２】
前記式（１）及び前記式（２）で示される２種のレスベラトロール誘導体の重量比が１：９〜９：１である請求項１に記載の代謝促進剤組成物。
【請求項３】
脂肪組織の代謝を促進する請求項１又は２記載の代謝促進剤組成物。
【請求項４】
請求項１〜３いずれか１項に記載の代謝促進剤組成物を含有することを特徴とするＰＧＣ−１遺伝子発現促進剤。
【請求項５】
請求項１〜３いずれか１項に記載の代謝促進剤組成物を含有することを特徴とするミトコンドリア脱共役タンパク質遺伝子発現促進剤。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の代謝促進剤組成物を含有することを特徴とする概日リズム調整剤。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の代謝促進剤組成物を含有する食品、医薬品又は医薬部外品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、代謝促進剤組成物に関するものである。また、本発明は、前記代謝促進剤組成物を用いたＰＧＣ−１遺伝子発現促進剤、ミトコンドリア脱共役タンパク質遺伝子発現促進剤及び概日リズム調整剤並びに前記代謝促進剤組成物を含有する食品、医薬品、医薬部外品に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在の社会生活においては、過剰なストレスや食物摂取、運動不足が蔓延している。これらが原因となるメタボリックシンドロームが大きな社会問題になっている。メタボリックシンドロームとは、内蔵脂肪型肥満に加えて高血糖、高血圧、脂質異常のうち二つ以上を併せ持った状態であり、動脈硬化のリスクが高くなる。
【０００３】
メタボリックシンドロームの原因として、過剰な脂肪・糖質といったエネルギー源の摂取が挙げられる。過剰に摂取されたエネルギー源は体内に脂肪という形で脂肪組織に蓄積される。この脂肪の蓄積がメタボリックシンドロームの原因の一つである。つまり、この脂肪の蓄積を抑制、又は脂肪の消費を亢進させることでメタボリックシンドロームの予防、改善又は治療が可能であるとされている。
【０００４】
体内の脂肪の消費を亢進する、つまりエネルギー代謝を亢進させるには、最も確実な方法として運動が挙げられる。しかし、不定期な生活を余儀なくされる現代社会においては定期的に運動を行うことが困難であることが多い。このような現状から、エネルギー代謝を亢進させる薬剤等を用いた新しいメタボリックシンドロームの予防、改善方法が求められている。
【０００５】
生体エネルギー代謝の研究においては、１９９８年、骨格筋のエネルギー代謝を包括的に制御する新たな因子としてＰＧＣ−１α（ＰＰＡＲγ  Ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ）が同定されている（非特許文献１）。ＰＧＣ−１αは核内受容体であるＰＰＡＲγ（Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  γ）の活性化を亢進することで下流遺伝子の発現を亢進することが明らかとなっている。エネルギー代謝の高い組織ではＰＧＣ−１αが転写調節因子ＰＰＡＲγの活性化に重要な機能を有していることが明らかとなっている（非特許文献２）。また、ＰＧＣ−１αは、時計遺伝子活動とエネルギー代謝の相互作用にも関与する重要なタンパク質であり、ＰＧＣ−１アルファを欠損したマウスが代謝や体温の日照リズムを失うことが知られている（非特許文献３）。従って、ＰＧＣ−１αは代謝亢進、さらには動物などの生物に存在する生理現象である概日リズムの調節などの重要なターゲットとされている。
【０００６】
ＰＧＣ−１α発現亢進作用の有用性を示す先行技術としては、ＰＧＣ−１遺伝子を導入して過剰発現させたトランスジェニックマウスの作成（特許文献１）が挙げられる。該トランスジェニックマウスは、１）対照マウスより大きな褐色脂肪組織重量を有する、２）褐色脂肪組織の脂肪滴は対照マウスの脂肪滴よりも小さく、数が多い、３）体重が小さい、４）エネルギー消費量が多い等の特徴が観察されている（特許文献１の実施例３等）。
【０００７】
ＰＧＣ−１αの発現亢進が上記のように有効性が高いことが予測されることからＰＧＣ−１α発現亢進作用に関する先行技術が報告されている。例えば、β２受容体を刺激するクレンブテロールを有効成分とするＰＧＣ−１α発現促進剤（特許文献２）、本わさび等のアブラナ科植物を有効成分とする肥満防止剤（特許文献３）、ベンゾイミダゾール誘導体を有効成分とするミトコンドリア機能活性化剤（特許文献４）、スフィンゴミエリンを有効成分とするミトコンドリア機能向上剤（特許文献５）、スピロスタン型サポニン及び不飽和脂肪酸を有効成分とする脂肪燃焼促進剤（特許文献６）等が挙げられる。
【０００８】
一方、メタボリックシンドロームに関連する研究が盛んに行われているなかで、肥満予防に重要な遺伝子として、ミトコンドリア脱共役タンパク質をコードしているＵＣＰ（脱共役タンパク質：Ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）ファミリーが知られている。
【０００９】
ＵＣＰファミリーは、脊椎動物体内の様々な部位で発現していることが知られている。例えば、褐色脂肪組織にはＵＣＰ−１、白色脂肪組織、骨格筋、腎臓、肝臓等にはＵＣＰ−２、筋組織にはＵＣＰ−３がそれぞれ発現していることが知られている。
【００１０】
ＵＣＰファミリーはまた、その発現と肥満は深い関わりがあることが知られている。例えば、１）肥満動物及びヒトではＵＣＰの発現が低下している、２）肥満し難い動物ではＵＣＰの発現量が高い、３）ＵＣＰノックダウンマウスでは肥満になる、４）ＵＣＰトランスジェニックマウスでは肥満しない等のことが知られている。
【００１１】
このように、ＵＣＰファミリーの発現を亢進させることの有効性から、ＵＣＰ発現を促進する技術が報告されている。例えば、フコキサンチンを有効成分とするＵＣＰ発現促進剤（特許文献７）、スイレン科もしくはハス科植物種子の極性溶媒抽出エキスを有効成分とする熱産生タンパク質発現促進剤（特許文献８）、カプサイシン及びカプサイシノイド様物質を有効成分とする脂質代謝改善組成物（特許文献９）、ピンクロックローズ抽出物を有効成分とする脱共役蛋白質発現促進剤（特許文献１０）等が報告されている。
【００１２】
以上のように、ＰＧＣ−１やＵＣＰのように代謝に関連する作用を促進する化合物や素材が提案されているが、より優れた代謝促進作用を有する新規素材の開発が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】特開２００２−３０６０２１号公報
【特許文献２】特開２００７−２１７３６８号公報
【特許文献３】特開２００６−３２８０５６号公報
【特許文献４】特開２００４−６７６２９号公報
【特許文献５】特開２０１１−１５７３２８号公報
【特許文献６】特開２０１２−３１１５３号公報
【特許文献７】特開２０１０−２７００２１号公報
【特許文献８】特開２００３−１１３１００号公報
【特許文献９】特許第４８０３９７１号公報
【特許文献１０】特開２０１１−１６２５２０号公報
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｃｅｌｌ，９２，ｐ８２９−８３８（１９９８）
【非特許文献２】Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，１，３６１−３７０（２００５）
【非特許文献３】香川靖雄編著「時間栄養学」第４版、日本栄養・食糧学会監修、女子栄養大学出版部、２０１２年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明者らは、代謝促進作用に関する前記の状況を鑑みて、新規な代謝促進剤を開発すべく鋭意検討を行った。その結果、２種類のレスベラトロール誘導体を含む組成物が、代謝亢進を引き起こすことが知られているＰＧＣ−１α遺伝子発現促進作用及びＵＣＰ−２遺伝子発現促進作用を併せ持つことを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１６】
したがって、本発明は、２種の新規レスベラトロール誘導体を有効成分とする新たな代謝促進剤組成物、該代謝促進剤組成物を含むＰＧＣ−１遺伝子発現促進剤、ミトコンドリア脱共役タンパク質遺伝子発現促進剤及び概日リズム調整剤、並びに食品、医薬品及び医薬部外品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明の要旨は、
〔１〕式（１）：
【００１８】
【化１】
2014070053.tif 000002
【００１９】
及び式（２）：
【００２０】
【化２】
2014070053.tif 000003
【００２１】
で示される２種のレスベラトロール誘導体を有効成分とすることを特徴とする代謝促進剤組成物、
〔２〕前記式（１）及び前記式（２）で示される２種のレスベラトロール誘導体の重量比が１：９〜９：１である前記〔１〕記載の代謝促進剤組成物、
〔３〕脂肪組織の代謝を促進する前記〔１〕又は〔２〕記載の代謝促進剤組成物、
〔４〕前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載の代謝促進剤組成物を含有することを特徴とするＰＧＣ−１遺伝子発現促進剤、
〔５〕前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載の代謝促進剤組成物を含有することを特徴とするミトコンドリア脱共役タンパク質遺伝子発現促進剤、
〔６〕前記〔１〕〜〔３〕のいずれか１項に記載の代謝促進剤組成物を含有することを特徴とする概日リズム調整剤、
〔７〕前記〔１〕〜〔３〕いずれか記載の代謝促進剤組成物を含有する食品、医薬品又は医薬部外品
に関する。
【発明の効果】
【００２２】
本発明の代謝促進剤組成物は、脂肪組織の代謝促進に関与するＰＧＣ−１α及びミトコンドリア脱共役タンパク質の遺伝子発現をいずれも促進する作用を有していることから、新規な代謝促進剤として有用である。
また、本発明の代謝促進剤組成物は、ＰＧＣ−１遺伝子発現促進剤、ミトコンドリア脱共役タンパク質遺伝子発現促進剤の有効成分としても有用である。
また、本発明の代謝促進剤組成物は、ＰＧＣ−１遺伝子発現促進作用を有することから、新規な概日リズム調整剤の有効成分としても有用である。
また、本発明の代謝促進剤組成物を、代謝促進、メタボリックシンドロームの改善、概日リズムの調整などを目的として、食品、医薬品、医薬部外品に添加することだできる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は実施例１で生成したレスベラトロール誘導体であるＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３のＨＰＬＣのクロマトグラムを示す。図中、Ｒ３がＵＨＡ４００２、Ｒ４がＵＨＡ４００３を含むピークである。
【図２】図２は実施例２で行った、ＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３を混合した組成物（ＵＨＡ４００２／ＵＨＡ４００３）を添加した白色脂肪細胞でのＰＧＣ−１α遺伝子発現量の定量結果を示すグラフである。ＰＧＣ−１αは細胞内のエネルギー代謝を幅広く制御している遺伝子であり、この発現量の上昇は細胞内のエネルギー代謝が亢進していることを示す。
【図３】図３は実施例３で行った、ＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３を混合した組成物（ＵＨＡ４００２／ＵＨＡ４００３）を添加した白色脂肪細胞でのＵＣＰ−２遺伝子発現量の定量結果を示すグラフである。ＵＣＰ−２はミトコンドリアに局在する代謝関連タンパク質であり、この発現量の上昇は細胞内のエネルギー代謝が亢進していることを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００２５】
本発明において、「代謝促進剤」とは、脂肪細胞において、脂肪細胞の代謝促進に関連するＰＧＣ−１α及びＵＣＰ−２の遺伝子発現量を上昇させることができる薬剤をいう。
前記脂肪細胞における各遺伝子の発現については、具体的には、後述の実施例に記載の方法により測定することができる。
【００２６】
本発明の代謝促進剤は、式（１）：
【００２７】
【化３】
2014070053.tif 000004
【００２８】
及び式（２）：
【００２９】
【化４】
2014070053.tif 000005
【００３０】
で示される２種のレスベラトロール誘導体を有効成分とすることを特徴とする。以下、これら２種のレスベラトロール誘導体を、「レスベラトロール誘導体（１）及び（２）」と略す。
【００３１】
前記レスベラトロール誘導体（１）及び（２）における炭素−炭素２重結合は、いずれもトランス又はシスであってよく、シス体とトランス体との混合物を含む。
【００３２】
また、前記レスベラトロール誘導体（１）及び（２）には、塩の形態のものも含む。この場合の塩は、薬学的に許容される塩であればよい。前記薬学的に許容される塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩、バリウム塩等のアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩；アルミニウムヒドロキシド塩等の金属ヒドロキシド塩；アルキルアミン塩、ジアルキルアミン塩、トリアルキルアミン塩、アルキレンジアミン塩、シクロアルキルアミン塩、アリールアミン塩、アラルキルアミン塩、複素環式アミン塩等のアミン塩；α−アミノ酸塩、ω−アミノ酸塩等のアミノ酸塩；ペプチド塩又はそれらから誘導される第１級、第２級、第３級若しくは第４級アミン塩等が挙げられる。これらの薬学的に許容される塩は、１種を単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
【００３３】
前記レスベラトロール誘導体（１）及び（２）は、例えば、レスベラトロールを原料とし、レスベラトロールを金属塩の存在下で加熱することにより製造できる。前記製造方法は、撹拌下又は無撹拌下に実施できる。前記製造方法の一実施形態では、適切な溶媒中にて、金属塩の存在下に、レスベラトロールを加熱することにより、レスベラトロール誘導体（１）及び（２）が得られる。より具体的には、レスベラトロールを適切な溶媒に溶解させてレスベラトロール含有溶液を調製し、この溶液に金属塩を加えて加熱することにより、レスベラトロール誘導体（１）及び（２）が得られる。
【００３４】
前記製造方法において、原料として用いられるレスベラトロールにはトランス体とシス体の構造異性体が存在し、加熱や紫外線によってトランス体とシス体の変換が一部生じる。本発明では、レスベラトロールとしては、トランス体及びシス体のいずれを用いても良く、あるいはトランス体とシス体との混合物を用いてもよい。また、レスベラトロールは、ブドウ果皮、ピーナッツ果皮、イタドリ等の植物原料からの抽出物、精製物、凍結乾燥品等の天然由来のものであっても、化学合成された純度の高い化成品であっても良い。なお、天然由来のレスベラトロールを用いる場合は、完全に精製されたものである必要はなく、後述のように所望の生成反応が進み最終的に本発明で用いるレスベラトロール誘導体（１）及び（２）が得られるから、レスベラトロール以外の成分を含む混合物も使用できる。また、レスベラトロールには、塩、エーテル、エステル等の誘導体もあるが、前記製造方法では、これらの誘導体も原料として使用することができる。ただし、レスベラトロール誘導体（１）及び（２）の収率の観点からは、塩、エーテル、エステル等のレスベラトロール誘導体をレスベラトロール換算で１重量％以上含有する混合物が原料として望ましい。
前記レスベラトロール含有原料としては、ブドウ果皮、ピーナッツ果皮、イタドリ等の原料からの抽出物、該抽出物の凍結乾燥品等を使用してもよい。
【００３５】
レスベラトロールを溶解する溶媒としては、水、水と有機溶媒との混合溶媒、有機溶媒等を使用できるが、レスベラトロールの水に対する溶解度が著しく低いことから、水と有機溶媒との混合溶媒及び有機溶媒が好ましい。ここで、有機溶媒としては、レスベラトロールを溶解可能なものであれば特に限定されないが、安全性やコスト面等の観点から、メタノール、エタノール等の低級アルコール類を好ましく使用できる。また、前記混合溶媒における水と有機溶媒との混合割合についても、レスベラトロールを十分に溶解できれば、特に制限はない。最終的に得られる反応液からレスベラトロール誘導体（１）及び（２）を単離及び精製することなく、該反応液をそのまま食品等に添加する場合は、安全性や法規面から有機溶媒としてエタノールや含水エタノールを使用することが望ましい。
【００３６】
レスベラトロールを含有する溶液（以下「レスベラトロール含有溶液」ということがある。）中のレスベラトロール濃度は特に限定されないが、その濃度が高いほど、溶媒使用量が少なくて済むといったメリットもあるため、各々の溶媒に対しレスベラトロールが飽和する濃度近くが好ましい。
また、レスベラトロールは、レスベラトロール含有溶液中においてレスベラトロール誘導体（１）及び（２）の生成反応前に完全に溶解していなくともよい。
【００３７】
本発明では、レスベラトロール含有溶液の加熱開始時のｐＨを８．０以上、１３．０未満に調整することが好ましい。レスベラトロール含有溶液のｐＨが８．０以上であれば、レスベラトロール誘導体（１）及び（２）の生成反応が効率的に進む。レスベラトロール含有溶液のｐＨが１３．０を超えると、前記生成反応と同時に、副反応や目的化合物の分解反応も一方で生じるために、最終的なレスベラトロール誘導体（１）及び（２）の収量が低下するおそれがある。ｐＨ調整方法としては、例えば、レスベラトロール含有溶液を調製した後にｐＨ調整剤を添加してｐＨを調整する方法、レスベラトロール含有溶液の調製時に前もって溶媒のｐＨを調整する方法等が挙げられる。
【００３８】
レスベラトロール含有溶液中に添加される金属塩としては、酸性塩、塩基性塩、正塩のいずれでもよく、また、単塩、複塩、錯塩のいずれでもよい。さらに、金属塩は１種類であっても、複数種類の混合物であってもよい。金属塩の例としては、食品添加物として認可されているものが安全性の面で好ましい。例えば、食品に添加することが認められているマグネシウム塩、カルシウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、亜鉛塩、銅塩等が挙げられる。これらは１種を単独で使用でき又は２種以上を併用できる。
【００３９】
また、市販の金属塩の混合物も使用できる。市販品としては、例えば、ミネラルプレミックス（商品名、グルコン酸亜鉛、クエン酸鉄アンモニウム、乳酸カルシウム、グルコン酸銅、リン酸マグネシウムを主成分としたミネラル混合物）、ミネラルウォーター等が挙げられる。
なお、レスベラトロール含有溶液中の金属塩の含有量は特に限定されず、レスベラトロール誘導体（１）及び（２）を生成可能な量であればよい。
【００４０】
レスベラトロール含有溶液の加熱は、好ましくは１１０℃以上の温度下で行なわれる。これにより、レスベラトロール誘導体（１）及び（２）の生成反応が効率的に進行する。また、使用する溶媒の沸点を考慮すると、加熱と共に加圧することが望ましい。加圧加熱方法の具体例としては、例えば、開放容器にレスベラトロール含有溶液を入れ、該溶液に含まれる溶媒の沸点を超える高温で前記容器を加熱する方法、密閉容器にレスベラトロール含有溶液を入れて前記容器を加熱する方法、レトルト装置やオートクレーブを用いて加圧加熱する方法等、少なくとも部分的に溶液温度が１１０℃以上に達するように加熱することが好ましい。収率の面から、溶液温度が均一に１１０℃〜１５０℃になることが、さらに好ましい。加熱時間も加熱温度と同様に限られたものではなく、効率的に目的の反応が進行する時間条件とすればよい。特に、加熱時間は加熱温度との兼ね合いによるものであり、加熱温度に応じた加熱時間にすることが望ましい。例えば、１３０℃付近で加熱する場合は、５分〜１２０分の加熱時間が望ましい。また、加熱は、一度でも良いし、複数回に分けて繰り返し加熱しても良い。複数回に分けて加熱する場合、蒸発した溶媒を補うために溶媒を新たに追加して加熱を行うことが好ましい。
【００４１】
加熱によるレスベラトロール誘導体（１）及び（２）の生成反応の終了は、例えば、ＨＰＬＣによる成分分析によりレスベラトロール誘導体（１）及び（２）の生成量を確認して判断すればよい。
【００４２】
得られる反応液中は、本発明で用いるレスベラトロール誘導体（１）及び（２）を含有する。また、安全な原料のみを用いた工程でレスベラトロール誘導体（１）及び（２）を製造した場合には、レスベラトロール誘導体（１）及び（２）を含む反応液の状態で食品、医薬品又は医薬部外品に使用できる。例えば、天然由来のレスベラトロールを含水エタノール溶媒に溶解し、ミネラルウォーターやミネラルプレミックスを添加して加熱した場合には、得られる反応液を食品、医薬品又は医薬部外品の原料の一つとして使用できる。
【００４３】
また、風味面での改良やさらなる高機能化を望む場合は、前記反応液を濃縮してレスベラトロール誘導体（１）及び（２）の濃度を高めることや、前記反応液を精製しレスベラトロール誘導体（１）及び（２）の純品を得ることが行なわれる。濃縮及び精製は、公知の方法で実施可能である。例えば、クロロホルム、酢酸エチル、エタノール、メタノール等を用いた溶媒抽出法や炭酸ガスによる超臨界抽出法等で抽出してレスベラトロール誘導体（１）及び（２）を濃縮できる。また、カラムクロマトグラフィーを利用して濃縮や精製を施すことも可能である。再結晶法や限外ろ過膜等の膜処理法も適用可能である。
【００４４】
また、前記反応液からレスベラトロール誘導体（１）及び（２）を分離して回収する場合には、カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ等を用いてもよい。
【００４５】
前記濃縮物や精製物を、必要に応じて、減圧乾燥や凍結乾燥して溶媒除去することで、粉末状のレスベラトロール誘導体（１）及び（２）を得ることができる。
【００４６】
本発明の代謝促進剤組成物は、前記のようにして得られるレスベラトロール誘導体（１）及び（２）を有効成分として含有する。このような代謝促進剤組成物は、例えば、レスベラトロール誘導体（１）及び（２）の精製物どうしを混合して調製してもよいし、レスベラトロール含有溶液を加熱して得られる、レスベラトロール誘導体（１）及び（２）以外の化合物を含めた粗製物の状態でもよい。本発明の代謝促進剤組成物中におけるレスベラトロール誘導体（１）及び（２）の含有量は、高いほど所望の効果が得られるが、少なくとも総重量に対して０．１重量％以上含まれていればよい。
【００４７】
また、本発明の代謝促進剤組成物中における、前記レスベラトロール誘導体（１）及び（２）の重量比は、ＰＧＣ−１α及びＵＣＰ−２の遺伝子発現量を有意に上昇させることができる観点から、１：９〜９：１であればよい。
【００４８】
本発明の代謝促進剤組成物は、レスベラトロールにはない優れたＰＧＣ−１α遺伝子発現促進作用及びＵＣＰ−２遺伝子発現促進作用を有している。ＰＧＣ−１αやＵＣＰ−２は、いずれも体の各部、中でも脂肪組織の代謝を促進して、熱産生を促進することが知られていることから、本発明の代謝促進剤組成物は、抗肥満作用及び体への脂肪の蓄積を抑制し、エネルギー消費量の低下によるメタボリックシンドロームの予防及び治療作用を有する代謝促進剤として有用である。
また、本発明の代謝促進剤組成物は、ＰＧＣ−１遺伝子発現促進剤及びミトコンドリア脱共役タンパク質遺伝子発現促進剤の有効成分として有用である。また、本発明の代謝促進剤組成物は、新規な概日リズム調整剤の有効成分としても有用である。
【００４９】
本発明のＰＧＣ−１遺伝子発現促進剤、ミトコンドリア脱共役タンパク質遺伝子発現促進剤及び概日リズム調整剤における前記代謝促進剤組成物の含有量は特に限定されず、製剤形態、投与方法、投与目的等に応じて広い範囲から適宜選択できるが、好ましくはレスベラトロール誘導体（１）及び（２）の総量が本発明の薬剤全量の０．０００１〜１．０重量％程度となるように調整すればよい。
以下においては、代謝促進剤組成物、ＰＧＣ−１遺伝子発現促進剤、ミトコンドリア脱共役タンパク質遺伝子発現促進剤及び概日リズム調整剤をまとめて本発明の薬剤と総称することがある。
【００５０】
本発明の薬剤の投与量としては、患者の性別、年齢、生理的状態、病態（肥満の進み具合等）、製剤形態、投与経路、投与回数、薬剤における有効成分濃度等に応じて広い範囲から適宜選択できるが、例えば、成人１日当たり、レスベラトロール誘導体（１）及び（２）の総量が０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ程度、好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ程度であればよい。投与は、例えば、１日当たり１回又は数回に分けてもよい。
【００５１】
本発明の薬剤は、医薬品として製剤化してもよい。この製剤形態としては特に限定されず、例えば、注射剤、坐剤、点眼剤、軟膏剤、エアゾール剤等の非経口剤、錠剤、被覆錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、丸剤、懸濁剤、乳剤、トローチ剤、チュアブル錠、シロップ剤等の経口剤等が挙げられる。製剤化の際には、薬学的に許容される担体、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、希釈剤、安定化剤、等張化剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤等が用いられる。
【００５２】
担体や賦形剤としては、例えば、乳糖、ショ糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、マルトース、マンニトール、エリスリトール、キシリトール、マルチトール、イノシトール、デキストラン、ソルビトール、アルブミン、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸、メチルセルロース、グリセリン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００５３】
滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール及びこれらの混合物等が挙げられる。
結合剤としては、例えば、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、エチルセルロース、水、エタノール、リン酸カリウム及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００５４】
崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００５５】
希釈剤としては、例えば、水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類及びこれらの混合物等が挙げられる。
安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸、チオグリコール酸、チオ乳酸及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００５６】
等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ホウ酸、ブドウ糖、グリセリン及びこれらの混合物等が挙げられる。
ｐＨ調整剤及び緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、クエン酸、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００５７】
さらに本発明の薬剤は、増量剤、可溶化剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、抗酸化剤、細菌抑制剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を含んでいてもよい。
【００５８】
また、本発明の薬剤を食品の形態に製剤化してもよい。食品としては特に限定されず、例えば、飲料、アルコール飲料、ゼリー、菓子、機能性食品、健康食品、健康志向食品等が挙げられる。保存性、携帯性、摂取の容易さ等を考慮すると、菓子類が好ましく、菓子類の中でも、ハードキャンディ、ソフトキャンディ、グミキャンディ、タブレット、チューイングガム等が好ましい。
【００５９】
また、本発明の薬剤をワインに添加することにより、ワインの健康機能効果をさらに増強したアルコール飲料が得られる。食品分野の中でも、このアルコール飲料のように、嗜好性と健康機能効果とを併せ持った食品は、社会ニーズが非常に高い。よって、本発明の薬剤を食品の形態に製剤化することにより、社会的ニーズに応えることが可能になる。本発明の薬剤を食品の形態に製剤化する場合、レスベラトロール誘導体（１）及び（２）の該食品における含有量は、通常０．００１〜２０重量％程度である。
【００６０】
また、本発明の薬剤を医薬部外品の形態に製剤化してもよい。医薬部外品としては特に限定されないが、例えば、歯磨き剤、マウスウオッシュ、マウスリンス等の口腔用医薬部外品が好ましい。この場合、有効成分であるレスベラトロール誘導体（１）及び（２）の医薬部外品における含有量は、通常０．００１〜３０重量％程度である。
【実施例】
【００６１】
次に本発明を実施例に基いて詳細に説明するが、本発明はかかる実施例にのみ限定されるものではない。なお、以下の実施例において、「％」及び「部」は、特に断らない限り、それぞれ「重量％」及び「重量部」を意味する。
【００６２】
（実施例１：ＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３の生成及び単離・精製）
トランス−レスベラトロール（東京化成工業（株）製）７００ｍｇをエタノール１４ｍＬに溶解し、２．５％ＮａＨＣＯ3水溶液を１４ｍＬ加えて、レスベラトロール含有溶液（ｐＨ９．９）を得た。このレスベラトロール含有溶液をオートクレーブ（商品名：ＳＡＮＹＯ  ＬＡＢＯ  ＡＵＴＯＣＬＡＶＥ、三洋電機（株）製、以下同じ）にて１３０℃で２０分間加熱した。得られた反応液に、エタノール１４ｍＬ及び５．０％ＮａＨＣＯ3水溶液１４ｍＬを加え、再度、オートクレーブにて１３０℃で２０分間加熱した。得られた反応液のうち１ｍＬをメタノールにて全量５０ｍＬにメスアップし、このうちの１０μＬをＨＰＬＣにより分析した。その結果を図１に示す。
【００６３】
ＨＰＬＣ分析は以下の条件にて行った。
カラム：逆相用カラム「Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ（登録商標）Ｃ−３０−ＵＧ−５」（４．６ｍｍｉ．ｄ．×２５０ｍｍ、野村化学（株）製）
移動相：Ａ；Ｈ2Ｏ（０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ））、Ｂ；アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
注入：１０μＬ
検出：２５４ｎｍ
勾配（容量％）：８０％Ａ／２０％Ｂから２０％Ａ／８０％Ｂまで３０分間、２０％Ａ／８０％Ｂから１００％Ｂまで５分間、１００％Ｂで１０分間（全て直線）
【００６４】
図１に示すように、反応液のクロマトグラムでは、原料であるレスベラトロールとは相違する複数のピーク（Ｒ１〜Ｒ５）が確認され、このうち、Ｒ３のピークに含まれる化合物をＵＨＡ４００２と命名した。またＲ４に含まれる化合物をＵＨＡ４００３と命名した。ＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３を分取し、ＨＰＬＣにより精製し、常法により乾燥したところ、褐色粉末状の物質であった。
【００６５】
ＵＨＡ４００２の分子量を高分解能ＦＡＢ−ＭＳ（高速原子衝撃質量分析）にて測定したところ、４３９．４８０３であり、理論値との比較から、以下の分子式を得た。
理論値Ｃ28Ｈ23Ｏ5（Ｍ＋Ｈ）+：４３９．４７９２
分子式Ｃ28Ｈ22Ｏ5
【００６６】
次に、ＵＨＡ４００２を核磁気共鳴（ＮＭＲ）測定に供し、１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲ並びに各種２次元ＮＭＲデータの解析から、ＵＨＡ４００２が前記式（１）で表される構造を有することを確認した。
【００６７】
ＵＨＡ４００３の分子量を高分解能ＦＡＢ−ＭＳ（高速原子衝撃質量分析）にて測定したところ、４３９．４８０３であり、理論値との比較から、以下の分子式を得た。
理論値Ｃ28Ｈ23Ｏ5（Ｍ＋Ｈ）+ ：４３９．４７９２
分子式Ｃ28Ｈ22Ｏ5
【００６８】
次に、前記ＵＨＡ４００３を核磁気共鳴（ＮＭＲ）測定に供し、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ及び各種２次元ＮＭＲデータの解析から、前記ＵＨＡ４００３が前記式（２）で表される構造を有することを確認した。
【００６９】
（実施例２  ＰＧＣ−１α遺伝子発現量の定量）
ＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３含有組成物によるＰＧＣ−１α遺伝子の発現量を、３Ｔ３―Ｌ１細胞（マウス由来脂肪前駆細胞）を用いて評価した。
【００７０】
試料にはレスベラトロール、本発明品であるＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３含有組成物（混合比１：１）の２種類を用いた。各試料をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、和光純薬工業（株）製）に１０ｍＭの濃度で溶解させて評価試験に使用した。
【００７１】
培養は、１０％ウシ胎児血清（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社製）及び１％アンチバイオティック−アンチマイコティック（ギブコ（ＧＩＢＣＯ）社製）を含むＤＭＥＭ培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  ｍｅｄｉｕｍ、シグマ（Ｓｉｇｍａ）社製）を用いた。
【００７２】
試験に使用する脂肪細胞は定法に従って調製した。つまり、細胞培養用６ウェルディッシュ（日本ベクトン・ディッキンソン（株）製）に３Ｔ３―Ｌ１細胞を５×１０4ｃｅｌｌｓ／ｍＬで２ｍＬ播種して３７℃、５％ＣＯ2条件下で４８時間培養し、１００％コンフルエントしたものを毎日培地交換しながらさらに４８時間培養した。その後、培地を、脂肪細胞分化試薬（商品名：ＡｄｉｐｏＩｎｄｕｃｅｒ  Ｒｅａｇｅｎｔ、タカラバイオ（株）製）に付属の、インスリン、デキサメタゾン及びイソブチルメチルキサンチンをそれぞれ１％、０．５％及び０．１％添加した分化用ＤＭＥＭ培地２ｍＬに交換し、３７℃、５％ＣＯ2条件下で４８時間分化・培養した。分化させた脂肪細胞の培地を、インスリン１％を含むＤＭＥＭ培地（維持培地）に交換し、７日間培養した脂肪細胞を試験に使用した。
【００７３】
試験は以下のように行った。７日間培養した脂肪細胞に各試料を１０μＬ（レスベラトロール終濃度５０μＭ、ＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３の各終濃度２５μＭ）添加し、２日間培養した。なお、溶媒であるＤＭＳＯのみを０．５％添加したものをコントロールとした。
【００７４】
培養終了後、細胞よりＲＮＡ抽出キット（商品名：ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ（登録商標）ＲＮＡ  ＩＩ、タカラバイオ（株）製）を用いて全量ＲＮＡを抽出・精製した。得られたＲＮＡを２ステップリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ用逆転写試薬（商品名：ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＲＴ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ、タカラバイオ（株）製）の取扱説明書に準じて逆転写反応を行った。
【００７５】
つまり５×（Ｐｒｉｍｅｓｃｒｉｐｔ（登録商標）  ＲＴ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ）４μＬ及び全量ＲＮＡ  １μｇを混合し、ＲＮａｓｅ  Ｆｒｅｅ  ｄＨ2Ｏで全量を２０μＬにした。ＰＣＲ用サーマルサイクラー（商品名：ＧｅｎｅＡｍｐ（登録商標）ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ  ９７００、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社製）を使用して１サイクルが「３７℃×１５分→８５℃×５秒」であるプログラムにて逆転写反応を行った。逆転写反応液をリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ用希釈試薬（商品名：ＥＡＳＹ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ、タカラバイオ（株）製）にて１０倍希釈した希釈液をリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析に使用した。
【００７６】
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析は定法に従って行った。解析には、ＥＣＯ  Ｒｅａｌｔｉｍｅ  ＲＴ―ＰＣＲ  ｓｙｓｔｅｍ」（商品名、イルミナ（株）製）を使用した。プライマーには、ＰＧＣ−１αフォワードプライマー（プライマーＩＤ：ＭＡ１１４５０９−Ｆ）及びＰＧＣ−１αリバースプライマー（プライマーＩＤ：ＭＡ１１４５０９−Ｒ）を使用した。細胞内遺伝子の内部標準はβ−アクチンとし、そのプライマーとして、ＡＣＴＢフォワードプライマー（プライマーＩＤ：ＭＡ０５０３６８−Ｆ）及びＡＣＴＢリバースプライマー（プライマーＩＤ：ＭＡ０５０３６８−Ｒ）（前記４種のプライマーはいずれもタカラバイオ（株）製）を使用した。
【００７７】
反応にはリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ試薬（商品名：ＳＹＢＲ（登録商標）Ｐｒｅｍｉｘ  ＥＸ  ｔａｑ  II（Ｔｌｉ  ＲＮａｓｅＨ  Ｐｌｕｓ）、タカラバイオ（株）製）を使用した。反応液は４８ウェルＰＣＲプレート（イルミナ（株）製）中に、２×（ＳＹＢＲ  Ｐｒｅｍｉｘ  ＥＸ  ｔａｑ  II（Ｔｌｉ  ＲＮａｓｅＨ  Ｐｌｕｓ））５μＬ、フォワードプライマー（５０μＭ）０．０８μＬ、リバースプライマー（５０μＭ）０．０８μＬ、逆転写反応液２μＬ及び（ｄＨ2Ｏ）２．８４μＬ（総量１０μＬ）を混合して『９５℃×３０秒→「９５℃×１５秒→６０℃×１分」×４０サイクル→９５℃×１５秒→５５℃×１５秒→９５℃×１５秒』のプログラムにてＰＣＲ反応を行った。
【００７８】
得られた各細胞中のβ−アクチンとＰＧＣ−１αのＣｔ値（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  Ｃｙｃｌｅ：一定の増幅量（閾値）に達するサイクル数）からＰＧＣ−１α遺伝子発現量の相対値を算出した。結果を図２に示した。
【００７９】
図２の結果より、ＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３含有組成物（ＵＨＡ４００２／ＵＨＡ４００３）においてレスベラトロール（Ｒｅｓｖｒａｔｒｏｌ）と比較し、約２．５倍高い、優れたＰＧＣ−１α発現促進作用が確認された。
このようにＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３含有組成物は、ＰＧＣ−１α発現促進作用を有することから、脂肪細胞の代謝を亢進する作用、具体的には、ＰＧＣ−１遺伝子発現促進作用に基づく抗肥満作用及びメタボリックシンドローム予防・治療作用を有していることが明らかである。
また、式（１）で示されるＵＨＡ４００２及び式（２）で示されるＵＨＡ４００３の２種を有効成分として含む本発明の薬剤は、ＰＧＣ−１遺伝子発現促進剤としても使用でき、さらにはＰＧＣ−１α発現促進作用を有することから概日リズム調整剤としても使用できることがわかる。
【００８０】
（実施例３  ＵＣＰ−２遺伝子発現量の定量）
ＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３含有組成物によるＵＣＰ−２遺伝子の発現量を、３Ｔ３―Ｌ１細胞（マウス由来脂肪前駆細胞）を用いて評価した。
【００８１】
試料にはレスベラトロール、本発明品であるＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３含有組成物（混合比１：１）の２種類を用いた。各試料をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、和光純薬工業（株）製）に１０ｍＭの濃度で溶解させて評価試験に使用した。
【００８２】
評価試験は、実施例２と同様の方法にて行った。
【００８３】
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析は定法に従って行った。解析には、ＥＣＯ  Ｒｅａｌｔｉｍｅ  ＲＴ―ＰＣＲ  ｓｙｓｔｅｍ」（商品名、イルミナ（株）製）を使用した。プライマーには、ＵＣＰ−２フォワードプライマー（プライマーＩＤ：ＭＡ１１２９８８−Ｆ）及びＵＣＰ−２リバースプライマー（プライマーＩＤ:ＭＡ１１２９８８−Ｒ）を使用した。細胞内遺伝子の内部標準はβ−アクチンとし、そのプライマーとして、ＡＣＴＢフォワードプライマー（プライマーＩＤ：ＭＡ０５０３６８−Ｆ）及びＡＣＴＢリバースプライマー（プライマーＩＤ：ＭＡ０５０３６８−Ｒ）（前記４種のプライマーはいずれもタカラバイオ（株）製）を使用した。
【００８４】
反応にはリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ試薬（商品名：ＳＹＢＲ（登録商標）Ｐｒｅｍｉｘ  ＥＸ  ｔａｑ  II（Ｔｌｉ  ＲＮａｓｅＨ  Ｐｌｕｓ）、タカラバイオ（株）製）を使用した。反応液は４８ウェルＰＣＲプレート（イルミナ（株）製）中に、２×（ＳＹＢＲ  Ｐｒｅｍｉｘ  ＥＸ  ｔａｑ  ＩＩ（Ｔｌｉ  ＲＮａｓｅＨ  Ｐｌｕｓ））５μＬ、フォワードプライマー（５０μＭ）０．０８μＬ、リバースプライマー（５０μＭ）０．０８μＬ、逆転写反応液２μＬ及び（ｄＨ2Ｏ）２．８４μＬ（総量１０μＬ）を混合して『９５℃×３０秒→「９５℃×１５秒→６０℃×１分」×４０サイクル→９５℃×１５秒→５５℃×１５秒→９５℃×１５秒』のプログラムにてＰＣＲ反応を行った。
【００８５】
得られた各細胞中のβ−アクチンとＵＣＰ−２のＣｔ値（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  Ｃｙｃｌｅ：一定の増幅量（閾値）に達するサイクル数）からＵＣＰ−２遺伝子発現量の相対値を算出した。結果を図３に示した。
【００８６】
図３の結果より、ＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３含有組成物においてレスベラトロールと比較し、約３倍以上高い、優れたＵＣＰ−２発現促進作用が確認された。
このようにＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３含有組成物は、ＵＣＰ−２発現促進作用を有することから、脂肪細胞の代謝を亢進する作用、具体的には、ＵＣＰ−２発現促進作用に基づく抗肥満作用及びメタボリックシンドローム予防・治療作用も有していることが明らかである。
また、ＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３含有組成物を有効成分として含む本発明の薬剤は、ミトコンドリア脱共役タンパク質遺伝子発現促進剤としても使用できることがわかる。
【００８７】
（実施例４：ＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３を含有する食品）
実施例２と同様にして得られたＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３含有組成物の１ｇを、エタノール１００ｍＬに溶解し、得られた溶液に砂糖５００ｇ及び水飴４００ｇを混合溶解し、更に生クリーム１００ｇ、バター２０ｇ、練乳７０ｇ及び乳化剤１．０ｇを混合した。得られた混合物を、真空釜にて−５５０ｍｍＨｇ減圧下及び１１５℃の温度下で濃縮し、水分値３．０重量％のミルクハードキャンディを得た。
【００８８】
（実施例５：ＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３を含有する医薬品）
実施例２と同様にして得られたＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３含有組成物の１ｇをエタノールに溶解し、得られた溶液を微結晶セルロースに吸着させて、減圧乾燥した。このＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３吸着体を用い、下記の配合で打錠品を得た。
ＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３含有組成物吸着体
１０部（４００２及びＵＨＡ４００３として）
コーンスターチ              ２３部
乳糖                        １２部
カルボキシメチルセルロース    ８部
微結晶セルロース            ３２部
ポリビニルピロリドン          ４部
ステアリン酸マグネシウム      ３部
タルク                        ８部
【００８９】
（実施例６：４００２及びＵＨＡ４００３を含有する医薬部外品）
実施例２と同様にして得られたＵＨＡ４００２及びＵＨＡ４００３含有組成物の１．２ｇの１０ｍＬエタノール溶液、タウリン２０ｇ、ビタミンＢ１硝酸塩０．１２ｇ、安息香酸ナトリウム０．６ｇ、クエン酸４ｇ、砂糖６０ｇ及びポリビニルピロリドン１０ｇを精製水に溶解し、全量を１０００ｍＬにメスアップした。なお、ｐＨは、希塩酸を用いて３．２に調整した。得られた溶液１０００ｍＬのうち５０ｍＬをガラス瓶に充填し、８０℃で３０分間滅菌して、医薬部外品であるドリンク剤を得た。
【図１】
2014070053.tif 000009
【図２】
2014070053.tif 000010
【図３】
2014070053.tif 000011