(57)【要約】【課題】遠心力を付与した場合に内部の培養液が外方へ流出しない細胞培養容器を提供する。【解決手段】細胞培養容器１０は、細胞非接着性であるか、細胞非接着性に変化することが可能な内底面１１ａと、上方開口１１ｂとを有する容器本体１１と、容器本体１１の上方開口１１ｂを覆う蓋体１２とを備えている。蓋体１２の質量は容器本体１１の質量より大きい。このことにより細胞培養容器１０に対して遠心力を付与した際、蓋体１２が容器本体１１を押圧し、容器本体１２内の培養液が外方へ流出することを防止する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞を含有する培養液を収納し、内底面方向へ遠心力を作用させながら、細胞間接着が形成される条件下で細胞培養を行ない、細胞間を接着させて組織を形成して内底面に生体組織を堆積させる細胞培養容器において、
細胞非接着性であるか、細胞非接着性に変化することが可能である内底面を有するとともに、上方開口が設けられた容器本体と、
前記容器本体の上方開口を覆う蓋体と、
を備え、
前記蓋体の質量は前記容器本体の質量より大きいことを特徴とする細胞培養容器。
【請求項２】
前記蓋体の材料の比重は、前記容器本体の材料の比重より大きいことを特徴とする請求項１に記載の細胞培養容器。
【請求項３】
前記蓋体は、透明蓋体本体及び金属部材の二重構造になっていることを特徴とする請求項１又は２に記載の細胞培養容器。
【請求項４】
前記金属部材は、前記蓋体本体のうち観察領域を残して設けられていることを特徴とする請求項３に記載の細胞培養容器。
【請求項５】
前記観察領域は、前記蓋体本体の中央部に少なくとも１ｍｍ角の大きさで設けられていることを特徴とする請求項４に記載の細胞培養容器。
【請求項６】
前記蓋体及び前記容器本体は同一の材料からなり、前記蓋体の比重は、前記容器本体の比重より大きいことを特徴とする請求項１に記載の細胞培養容器。
【請求項７】
前記材料はポリスチレンであり、前記蓋体は前記容器本体より高密度のポリスチレンからなることを特徴とする請求項６に記載の細胞培養容器。
【請求項８】
細胞を含有する培養液を収納し、内底面方向へ遠心力を作用させながら、細胞間接着が形成される条件下で細胞培養を行ない、細胞間を接着させて組織を形成して内底面に生体組織を堆積させる細胞培養容器において、
細胞非接着性であるか、細胞非接着性に変化することが可能である内底面を有するとともに、上方開口が設けられた容器本体と、
前記容器本体の上方開口を覆う蓋体と、
を備え、
前記蓋体の材料の比重は、前記容器本体の材料の比重より大きいことを特徴とする細胞培養容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、厚さ方向に複数の細胞が積層された多層構造を有する生体組織の製造に適した細胞培養容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
コラーゲン等の培養担体上で細胞を培養させて製造される生体組織は細胞密度が低いため、医療目的の移植用組織として適したものではない。移植に適した、細胞密度が高い細胞シートなどの組織を製造する技術はティッシュエンジニアリングの分野において重要な技術であるといえる。しかしながら、従来の高細胞密度の生体組織の製造法には幾つかの問題点が存在する。
【０００３】
細胞を培養支持体上に播種し、細胞シートを形成することは一般に広く行われている。細胞シートの剥離を容易にする目的で、細胞接着面に温度応答性高分子化合物の層を設け、細胞の剥離を促進させる技術も開発されており、異物をほとんど含まない細胞シートの回収が可能である。しかしながらこの方法により形成される細胞シートは単層または３層以下の細胞層から構成されることが通常である。このため、多層化を行うには、細胞シートを複数重ね合わせることが必要である。細胞シートは極めて薄く、取り扱いが困難であるため、複数重ね合わせることは容易でなく手間がかかる。
【０００４】
そこで、移植に適した生体組織を得るため、細胞非接着性であるか、細胞非接着性に変化することが可能である内底面を有する細胞培養容器が開発されている。生体組織を作製する場合、まず細胞を含有する培養液を細胞培養容器に注入する。次に細胞培養容器を遠心分離器に設置して内底面方向への遠心力を作用させながら、細胞間接着が形成される条件下で細胞培養を行ない、細胞間を接着させて組織を形成することにより内底面に生体組織を堆積させている（特許文献１〜３参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１０−１６１９５２号公報
【特許文献２】特開２０１０−１６１９５３号公報
【特許文献３】特開２０１０−１６１９５４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上述のように移植に適した生体組織を得るための細胞培養容器が開発されている。またこのような細胞培養容器は遠心分離機に設置され、細胞培養容器に対して遠心力が付与されて細胞培養が行なわれる。
【０００７】
しかしながら、細胞培養容器を遠心分離機に設置して、細胞培養容器に対して遠心力を付与する場合、遠心力を付与する工程中に細胞培養容器内から培養液が外部へ流出してしまうことがある。
【０００８】
本発明はこのような点を考慮してなされたものであり、遠心力を付与する工程中に内部の培養液が外部へ流出することを防止することができる細胞培養容器を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の一態様による細胞培養容器は、細胞を含有する培養液を収納し、内底面方向へ遠心力を作用させながら、細胞間接着が形成される条件下で細胞培養を行ない、細胞間を接着させて組織を形成して内底面に生体組織を堆積させる細胞培養容器であって、細胞非接着性であるか、細胞非接着性に変化することが可能である内底面を有するとともに、上方開口が設けられた容器本体と、前記容器本体の上方開口を覆う蓋体と、を備え、前記蓋体の質量は前記容器本体の質量より大きいことを特徴とするものである。
【００１０】
本発明の一態様による細胞培養容器は、前記蓋体の材料の比重は、前記容器本体の材料の比重より大きいことを特徴とする。
【００１１】
本発明の一態様による細胞培養容器は、前記蓋体は、蓋体本体及び金属部材の二重構造になっていることを特徴とする。
【００１２】
本発明の一態様による細胞培養容器は、前記金属部材は、前記蓋体本体のうち観察領域を残して設けられていることを特徴とする。
【００１３】
本発明の一態様による細胞培養容器は、前記観察領域は、前記蓋体本体の中央部に少なくとも１ｍｍ角の大きさで設けられていることを特徴とする。
【００１４】
本発明の一態様による細胞培養容器は、前記蓋体及び前記容器本体は同一の材料からなり、前記蓋体の比重は、前記容器本体の比重より大きいことを特徴とする。
【００１５】
本発明の一態様による細胞培養容器は、前記材料はポリスチレンであり、前記蓋体は前記容器本体より高密度のポリスチレンからなることを特徴とする。
【００１６】
本発明の一態様による細胞培養容器は、細胞を含有する培養液を収納し、内底面方向へ遠心力を作用させながら、細胞間接着が形成される条件下で細胞培養を行ない、細胞間を接着させて組織を形成して内底面に生体組織を堆積させる細胞培養容器であって、細胞非接着性であるか、細胞非接着性に変化することが可能である内底面を有するとともに、上方開口が設けられた容器本体と、前記容器本体の上方開口を覆う蓋体と、を備え、前記蓋体の材料の比重は、前記容器本体の材料の比重より大きいことを特徴とする。
【発明の効果】
【００１７】
以上のように本発明によれば、細胞培養容器内に培養液を注入した後、細胞培養容器に対して遠心力を付与した場合、細胞培養容器内から培養液が外方へ流出することを防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の第１の実施形態による細胞培養容器の断面図。
【図２】本発明の第１の実施形態による細胞培養容器の斜視図。
【図３】細胞培養容器を用いた細胞培養の作用を示す図。
【図４】遠心分離機を示す図。
【図５】本発明の第２の実施形態による細胞培養容器の断面図。
【図６】本発明の第２の実施形態による細胞培養容器の斜視図。
【図７】第２の実施形態の変形例による細胞培養容器の断面図。
【図８】第２の実施形態の変形例による細胞培養容器の斜視図。
【図９】本発明の第３の実施形態による細胞培養容器の断面図。
【図１０】本発明の第３の実施形態による細胞培養容器の斜視図。
【図１１】第３の実施形態の変形例による細胞培養容器の断面図。
【図１２】第３の実施形態の変形例による細胞培養容器の斜視図。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明の実施の形態を図面に基づいて説明する。
【００２０】
（第１の実施形態）図１乃至図４は本発明による細胞培養容器１０の第１の実施の形態を示す図である。
【００２１】
細胞培養容器１０は、図１および図２に示すように、細胞非接着性であるか、細胞非接着性に変化することが可能である内底面１１ａを有するとともに上方開口１１ｂを有する容器本体１１と、容器本体１１の上方開口１１ｂを覆う蓋体１２とを備えている。
【００２２】
このような細胞培養容器１０は、内底面１１ａと内側面１１ｃにより囲まれた空間に細胞２を含有する培養液１を収納することができ、内底面１１ａ方向へ遠心力を作用させながら、細胞２間接着が形成される条件下で細胞培養を行うものであり、細胞２間を接着させて組織を形成して内底面１１ａに生体組織を堆積させるものである（図３（ａ）（ｂ）（ｃ）参照）。
【００２３】
この場合、細胞含有培養液１（図３（ａ）（ｂ）（ｃ）参照）を収容する容器部分の内表面のうち少なくとも内底面１１ａが細胞非接着性であるか、細胞非接着性に変化することが可能であればよいが、特に、細胞含有培養液を収容する容器部分の内表面のうち、細胞と接触する表面の全て（例えば容器の内底面１１ａおよび内側面１１ｃ）が細胞非接着性であるか、細胞非接着性に変化することが可能であることが好ましい。
【００２４】
本発明に用いられる細胞としては接着性細胞であれば特に限定されない。そのような細胞としては、例えば、肝臓の実質細胞である肝細胞、クッパー細胞、血管内皮細胞や角膜内皮細胞などの内皮細胞、線維芽細胞、骨芽細胞、砕骨細胞、歯根膜由来細胞、表皮角化細胞などの表皮細胞、気管上皮細胞、消化管上皮細胞、子宮頸部上皮細胞、角膜上皮細胞などの上皮細胞、乳腺細胞、ペリサイト、平滑筋細胞や心筋細胞などの筋細胞、腎細胞、膵ランゲルハンス島細胞、末梢神経細胞や視神経細胞などの神経細胞、軟骨細胞、骨細胞などが挙げられる。これらの細胞は、組織や器官から直接採取した初代細胞でもよく、あるいは、それらを何代か継代させたものでもよい。さらにこれら細胞は、未分化細胞である胚性幹細胞、多分化能を有する間葉系幹細胞などの多能性幹細胞、単分化能を有する血管内皮前駆細胞などの単能性幹細胞、分化が終了した細胞の何れであっても良い。また、細胞は単一種を培養してもよいし二種以上の細胞を共培養してもよい。
【００２５】
これらの細胞は、予め通常の方法で培養させ、培養物をトリプシン処理等で処理し、培養液中に懸濁させた状態で培養容器に収容される。培養液としては、当技術分野で通常用いられる細胞培養用培地であれば特に制限なく用いることができる。例えば、用いる細胞の種類に応じて、ＭＥＭ培地、ＢＭＥ培地、ＤＭＥ培地、αＭＥＭ培地、ＩＭＤＭ培地、ＥＳ培地、ＤＭ−１６０培地、Ｆｉｓｈｅｒ培地、Ｆ１２培地、ＷＥ培地およびＲＰＭＩ１６４０培地等、朝倉書店発行「日本組織培養学会編  組織培養の技術第三版」５８１頁に記載されているような基礎培地を用いることができる。さらに、基礎培地に血清（ウシ胎児血清等）、各種増殖因子、抗生物質、アミノ酸などを加えてもよい。また、Ｇｉｂｃｏ無血清培地（インビトロジェン社）等の市販の無血清培地等を用いることができる。最終的に得られる細胞組織体の臨床応用を考えると動物由来成分を含まない培地を使用することが好ましい。
【００２６】
本発明において、細胞非接着性である表面としては、親水性の表面、具体的には２０℃の静的水接触角が４５°以下である表面が挙げられる。このような表面は、炭素酸素結合を有する有機化合物の皮膜を基材の表面上に形成することにより得ることができる。あるいは基材自体を、親水性を有する材料で構成してもよい。
【００２７】
細胞非接着性表面は、炭素酸素結合を有する有機化合物により形成される、静的水接触角が４５°以下である親水性膜により形成することができる。
【００２８】
炭素酸素結合とは、炭素と酸素との間に形成される結合を意味し、単結合に限らず二重結合であってもよい。炭素酸素結合としてはＣ−Ｏ結合、Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ結合、Ｃ＝Ｏ結合が挙げられる。
【００２９】
親水性膜の主原料としては、水溶性高分子、水溶性オリゴマー、水溶性有機化合物、界面活性物質、両親媒性物質等の親水性有機化合物が挙げられる。これらが相互に物理的または化学的に架橋し、基材と物理的または化学的に結合することにより親水性膜となる。
【００３０】
親水性膜の平均厚さは、０．８ｎｍ〜５００μｍが好ましく、０．８ｎｍ〜１００μｍがより好ましく、１ｎｍ〜１０μｍがより好ましく、１．５ｎｍ〜１μｍが最も好ましい。平均厚さが０．８ｎｍ以上であれば、基板表面の親水性膜で覆われていない領域の影響を受けにくいため好ましい。また、平均厚さが５００μｍ以下であればコーティングが比較的容易である。
【００３１】
基材表面への親水性膜の形成方法としては、基材へ親水性有機化合物を直接吸着させる方法、基材へ親水性有機化合物を直接コーティングする方法、基材へ親水性有機化合物をコーティングした後に架橋処理を施す方法、基材への密着性を高めるために多段階式に親水性膜を形成させる方法、基材との密着性を高めるために基材上に下地層を形成し、次いで親水性有機化合物をコーティングする方法、基板表面に重合開始点を形成し、次いで親水性ポリマーブラシを重合する方法等を挙げることができる。
【００３２】
本発明で用いられる培養容器の内底面をはじめとする内表面の細胞接触領域は、細胞非接着性であることが、組織の剥離の容易性という観点から好ましいが、細胞培養時には細胞接着性であるが剥離の際に細胞非接着性に変化することが可能である表面であってもよい。このような表面は、温度応答性ポリマー、ｐＨ応答性ポリマー及びイオン応答性ポリマーからなる群から選択される少なくとも１種の刺激応答性高分子が共有結合を基材の表面に固定化することにより形成することができる。刺激応答性高分子としては、刺激の付与が容易である温度応答性ポリマーが好ましいがこれには限定されない。
【００３３】
次に、細胞培養容器１０について更に説明する。細胞培養容器１０は上述のように、内底面１１ａと上方開口１１ｂとを有する容器本体１１と、容器本体１１の上方開口１１ｂを覆う蓋体１２とを備え、このうち容器本体１１は円筒状をなすシャーレ型の容器本体となっている。
【００３４】
蓋体１２の質量は、容器本体１１の質量よりも大きくなっている。例えば、蓋体１２を高密度ポリスチレンで作製し、容器本体１１を、蓋体１２に用いたものよりも密度の低いポリスチレンで作製する。
【００３５】
容器本体１１内に上方開口１１ｂから細胞２を含有する培養液１を収納し、容器本体１１の上方開口１１ｂを蓋体１２により覆うことにより、容器本体１１の上方開口１１ｂを蓋体１２により密閉することができる。
【００３６】
蓋体１２の質量が容器本体１１の質量より大きいことにより、後述する遠心分離工程において蓋体１２が容器本体１１を押圧するため、容器本体１１がずれて容器本体１１内の培養液１が外方へ流出することを防止できる。
【００３７】
また、この場合、容器本体１１の上方開口１１ｂを蓋体１２により完全に密封することもでき、容器本体１１内部は外部雰囲気と遮断される。
【００３８】
しかしながら、容器本体１１の上方開口１１ｂを蓋体１２により完全に密封することなく、容器本体１１内の培養液１の外方への流出を防止しつつ、容器本体１１内と外部雰囲気とを連通させて細胞培養により低下する容器本体１１内の二酸化炭素を外部雰囲気から補ってもよい。
【００３９】
次にこのような構成からなる本実施の形態の作用について説明する。
【００４０】
まず図３（ａ）に示すように、容器本体１１内に上方開口１１ｂから細胞２を含有する培養液１を注入する。
【００４１】
次に容器本体１１の上方開口１１ｂを蓋体１２により覆い、容器本体１１の上方開口１１ｂを蓋体１２により密閉する。
【００４２】
次に細胞培養容器１０を図４（ａ）（ｂ）に示す遠心分離機２０に設置する。
【００４３】
図４（ａ）（ｂ）に示すように、遠心分離機２０は回動軸２１と、回動軸２１に固定されたアーム２２と、アーム２２の先端に揺動軸２４を介して揺動可能に取付けられたバスケット２３とを有している。
【００４４】
そして細胞培養容器１０を遠心分離機２０のバスケット２３上に設置し（図４（ａ）参照）、次に回動軸２１を回動させる（図４（ｂ）参照）。
【００４５】
この場合、アーム２２の先端に揺動軸２４を介して取付けられたバスケット２３が上方へ持上げられ、回動軸２１の回動に伴って細胞培養容器１０に対して、容器本体１１の内底面１１ａ方向に向かう遠心力が働く。
【００４６】
容器本体１１の内底面１１ａ側へ遠心力が働くことにより、培養液１中の細胞２間が接着して組織を形成し、内底面１１ａにシート状の生体組織３が堆積する。
【００４７】
このようにしてシート状の生体組織３が他の培養液１と分離される（図３（ｂ）参照）。
【００４８】
次に細胞培養容器１０に対して遠心力を付与する工程について更に述べる。
【００４９】
細胞培養容器１０に収容された培養液１に内底面１１ａ方向への遠心力を作用させることにより、細胞間接着が形成される条件下で細胞培養を行い、細胞間を接着させて組織を形成する。遠心力により細胞２が内底面１１ａの形状に応じて内底面１１ａに密着した状態で、細胞２同士が接着し、所望の形状の組織が形成される。
【００５０】
図４（ａ）（ｂ）に示す遠心分離機２０から付与される遠心力の大きさは、細胞２の機能に悪影響を与えることなく組織の形成が可能な範囲で適宜選択することができる。例えば２Ｇ〜１４４０Ｇが好ましく、２Ｇ〜７２０Ｇがより好ましい。
【００５１】
遠心力が付与されることで、質量の大きい蓋体１２が容器本体１１を押圧し、容器本体１１の上方開口１１ｂが蓋体１２により完全に密封され、培養液１が外方へ流出することを防止できる。
【００５２】
ここで「細胞間接着が形成される条件」とは細胞が活動して細胞同士が接着できる条件を指す。培養する細胞の種類に応じて変動するが、例えば温度条件は２０〜４０℃が好ましく、雰囲気ガス条件としては二酸化炭素濃度が３〜５％であることが好ましく、培養時間としては０．５〜２４時間が好ましい。本発明の有利な特徴の一つは培養時間を短くすることができ、細胞へのダメージを小さくすることができる点にある。培養時間は後述する細胞外マトリクスを別途調製し添加する実施形態では短縮することが可能あり、培養時間を０．５〜３時間とすることができるため好ましい。細胞外マトリクスを添加しない実施形態では、培養時間を１〜２４時間とすることができる。
【００５３】
本実施の形態では培養容器を所望の雰囲気ガス（二酸化炭素濃度５％）で満たされたインキュベータ内で数分間放置したのち、雰囲気ガスが変化しないように培養容器に蓋をして加重培養を行なう。しかしながらこれには限定されず、例えば雰囲気ガスおよび温度が制御されたインキュベータ内であれば培養容器を開放した状態で加重培養を行うこともできる。
【００５４】
遠心力を付与して細胞培養を行なう場合、細胞間接着が形成されれば十分であり、細胞数を増殖により増やすことは必須ではない。培養液中における細胞数を適宜調節することにより、作製される組織の厚さ（すなわち組織の厚さ方向の細胞積層数）を制御することが可能である。このように細胞培養工程において細胞の増殖を行う必要がないため、比較的短時間で組織を得ることができる。また組織の厚さ、形状を自在に調節することができる。
【００５５】
また本実施の形態の細胞培養容器を用いた細胞培養方法によれば、細胞が高密度化された組織を得ることが可能となる。細胞が高密度化された組織は移植用途に好ましい。
【００５６】
次に遠心力を付与する工程の終了後に、得られた生体組織３を細胞培養容器１０の内底面１１ａから剥離し回収する（図３（ｃ）参照）。例えばピペッティング操作などの物理的な操作よって細胞を剥離することができる。細胞培養容器１０の内底面１１ａが細胞非接着性表面であればこの操作は容易であり短時間の培養で組織の作製及び剥離回収が可能である。細胞培養容器１０の内底面１１ａが刺激応答性高分子などの、細胞非接着性に変化する表面である場合には、細胞非接着性となるような環境（例えば下限臨界温度以下の温度）において剥離操作を行う。
【００５７】
以上のように本実施の形態によれば、容器本体１１内に上方開口１１ｂから培養液１を注入した後、容器本体１１の上方開口１１ｂを、容器本体１１より質量の大きい蓋体１２により覆う。細胞培養容器１０を遠心分離機２０のバスケット２３上に設置し、細胞培養容器１０に対して内底面１１ａ側へ向う遠心力を作用させながら細胞培養する場合において、蓋体１２が容器本体１１を押圧し、容器本体１１内の培養液１が外方へ流出することを防止できる。
【００５８】
なお、蓋体１２と容器本体１１の質量の差は大きい方が好ましいが、遠心分離工程では遠心力がかかるため、蓋体１２と容器本体１１の質量の差が小さくても、蓋体１２が容器本体１１を十分に押圧し、容器本体１１内の培養液１が外方へ流出することを防止できる。
【００５９】
細胞培養を行う際、容器本体１１の上方開口１１ｂを蓋体１２で覆った状態で、蓋体１２を介して、容器内の細胞培養状態を観察するため、蓋体１２は、薄い方が好ましく、また、透明性が高い方が好ましい。従って、蓋体１２を、容器本体１１よりも比重の大きい材料で構成し、蓋体１２を薄くすることが好ましい。
【００６０】
（第２の実施形態）図５乃至図８に第２の実施形態に係る細胞培養容器の概略構成を示す。本実施形態は、図１乃至図４に示す第１の実施形態と比較して、蓋体１２が蓋体本体１２ａと金属部材１２ｂの二重構造になっている点が異なる。図５乃至図８において、図１乃至図４に示す第１の実施形態と同一部分には同一符号を付して説明を省略する。
【００６１】
図５及び図６に示すように、金属部材１２ｂは蓋体本体１２ａの外周部に設けられている。ここで図５は容器本体１１及び蓋体１２を示す断面図であり、図６は細胞培養容器１０の斜視図である。
【００６２】
金属部材１２ｂには、例えば、アルミニウム、鉄、銅などを用いることができる。金属部材１２ｂは、蓋体本体１２ａの外周部に接着剤等で固着されていてもよいし、蓋体本体から取り外し可能に嵌合していてもよい。
【００６３】
金属部材１２ｂの設けられた蓋体１２の質量は、容器本体１１の質量よりも大きくなっている。容器本体１１は例えばポリスチレンで構成される。蓋体本体１２ａと金属部材１２ｂの合計質量が、容器本体１１の質量よりも大きくなっていればよく、蓋体本体１２ａの材料は特に限定されない。例えば、蓋体本体１２ａの材料として、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリカーボネイト、ポリエチレン、フッ素樹脂などを用いることができる。
【００６４】
あるいは、図７及び図８に示すように、金属部材１２ｂを、蓋体本体１２ａの上面に設けてもよい。この場合、金属部材１２ｂは、容器本体１２ａの中央部１２ｃの観察領域を除くように設けられることが好ましく、例えば、リング状の金属部材１２ｂを、蓋体本体１２ａの上面の周縁部に設けるとよい。これにより、蓋体本体１２ａの中央部１２ｃを介して、容器内の細胞培養状態を観察することができる。蓋体本体１２ａの中央部１２ｃの観察領域の大きさは、少なくとも１ｍｍ角の大きさを有することが好ましい。蓋体本体１２ａを、フッ素樹脂などの透明性の高い樹脂で構成することで、容器内の細胞培養状態を観察しやすくなる。
【００６５】
本実施の形態の変形例として、金属部材１２ｂに対向するように容器本体１１側に磁石を配置し、蓋体１２の質量と磁力とにより蓋体１２を容器本体１１に固定するようにしてもよい。この場合、蓋体側の金属部材１２ｂを蓋体の質量を増加させつつ磁力を発生させる磁石に代え、容器本体側に金属部材等を設けるものであってもよい。
【００６６】
本実施の形態によれば、上記第１の実施形態と同様に、容器本体１１内に上方開口１１ｂから培養液１を注入した後、容器本体１１の上方開口１１ｂを、容器本体１１より質量の大きい蓋体１２により覆う。そのため、細胞培養容器１０を遠心分離機２０のバスケット２３上に設置し、細胞培養容器１０に対して内底面１１ａ側へ向う遠心力を作用させながら細胞培養する場合において、蓋体１２が容器本体１１を押圧し、容器本体１１内の培養液１が外方へ流出することを防止できる。
【００６７】
（第３の実施形態）図９乃至図１２により本発明の第３の実施の形態について説明する。細胞培養容器３０は、図９、図１０に示すように、複数の液収納部３１Ａと、液収納部３１Ａ間を連結する連結プレート３１Ｂとを有する容器本体３１と、容器本体３１に装着される蓋体３２とを備え、容器本体３１はプレート状の容器本体からなる。
【００６８】
ここで図９は細胞培養容器３０を示す断面図であり、図１０は細胞培養容器３０を示す斜視図である。
【００６９】
図９、図１０に示すように、容器本体３１の各液収納部３１Ａは内底面３１ａと内側面３１ｃとを有し、上方に上方開口３１ｂが形成されている。また容器本体３１の各液収納部３１Ａの上方開口３１ｂは蓋体３２により覆われている。
【００７０】
また、蓋体３２の質量は、容器本体３１の質量よりも大きくなっている。例えば、容器本体３１は通常のポリスチレンで構成され、蓋体３２は高密度ポリスチレンで構成される。
【００７１】
図９、図１０において、容器本体３１の各液収納部３１Ａ内に上方開口３１ｂから細胞２を含む培養液１が注入される（図３（ａ）参照）。その後、容器本体３１の各液収納部３１Ａの上方開口３１ｂが蓋体３２により覆われる。
【００７２】
培養液１が注入された細胞培養容器３０は、その後遠心分離機２０（図４（ａ）（ｂ））参照）に設置される。次に遠心分離機２０により細胞培養容器３０に対して遠心力が付与され、細胞培養が行なわれて、各液収納部３１Ａの内底面３１ａに生体組織３が堆積する（図３（ｂ）参照）。このとき、質量の大きい蓋体３２が容器本体３１を押圧するため、容器本体１１内の培養液１が外方へ流出することを防止できる。
【００７３】
各液収納部３１Ａの内底面３１ａは細胞非接着性であるか、または細胞非接着性に変化することが可能となっている。このため、各液収納部３１Ａの内底面３１ａに堆積した生体組織３をピペッティング操作により容易に剥離して回収することができる（図３（ｃ）参照）。
【００７４】
また細胞培養容器３０は、図１１、図１２に示すように、複数の液収納部３１Ａと、液収納部３１Ａ間を連結する連結プレート３１Ｂとを有するプレート状の容器本体３１と、容器本体３１に装着される、蓋体本体３２ａと金属部材３２ｂの二重構造になった蓋本体３２とを備えていてもよい。
【００７５】
ここで図１１は細胞培養容器３０を示す断面図であり、図１２は細胞培養容器３０を示す斜視図である。
【００７６】
図１１に示すように、容器本体３１の各液収納部３１Ａは内底面３１ａと内側面３１ｃとを有し、上方に上方開口３１ｂが形成されている。また容器本体３１の各液収納部３１Ａの上方開口３１ｂは蓋体３２により覆われている。
【００７７】
蓋体３２は、蓋体本体３２ａと金属部材３２ｂの二重構造になっており、金属部材３２ｂは蓋体本体３２ａの外周部に設けられている。金属部材３２ｂには、例えば、アルミニウム、鉄、銅などを用いることができる。金属部材３２ｂは、蓋体本体３２ａの外周部に接着剤等で固着されていてもよいし、蓋体本体３２ａから取り外し可能に嵌合していてもよい。
【００７８】
金属部材３２ｂの設けられた蓋体３２の質量は、容器本体３１質量よりも大きくなっている。容器本体３１は例えばポリスチレンで構成される。蓋体本体３２ａと金属部材３２ｂの合計質量が、容器本体３１の質量よりも大きくなっていればよく、蓋体本体３２ａの材料は特に限定されない。例えば、蓋体本体３２ａの材料として、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリカーボネイト、ポリエチレン、フッ素樹脂などを用いることができる。
【００７９】
図１１、図１２において、容器本体３１の各液収納部３１Ａ内に上方開口３１ｂから細胞２を含む培養液１が注入される（図３（ａ）参照）。その後、容器本体３１の各液収納部３１Ａの上方開口３１ｂが蓋体３２により覆われる。
【００８０】
培養液１が注入された細胞培養容器３０は、その後遠心分離機２０（図４（ａ）（ｂ）参照）に設置される。次に遠心分離機２０により細胞培養容器３０に対して遠心力が付与され、細胞培養が行なわれて、各液収納部３１Ａの内底面３１ａに生体組織３が堆積する（図３（ｂ）参照）。このとき、質量の大きい蓋体３２が容器本体３１を押圧するため、容器本体１１内の培養液１が外方へ流出することを防止できる。
【００８１】
各液収納部３１Ａの内底面３１ａは細胞非接着性であるか、または細胞非接着性に変化することが可能となっている。このため各液収納部３１Ａの内底面３１ａに堆積した生体組織３をピペッティング操作により容易に剥離して回収することができる（図３（ｃ）参照）。
【００８２】
図１１、図１２に示す構成において、金属部材３２ｂを、蓋体本体３２ａ上面の周縁部に設けてもよい。ただし、観察領域を確保するため、容器本体３１を蓋体３２で覆った際に、各液収納部３１Ａの上方に金属部材３２ｂが位置しないようにする。
【００８３】
上記第１〜第３の実施形態において、容器本体１１、３１に容器本体固定手段を設け、蓋体１２、３２に容器本体固定手段に係合する蓋体固定手段を設けてもよい。例えば、容器本体固定手段および蓋体固定手段の一方は内ねじからなり、他方は外ねじからなる。外ねじと内ねじを係合することで、容器本体１１、３１が蓋体１２により密閉される。このことにより、容器本体１１、３１内の培養液が外方へ流出することをさらに効果的に防止することができる。
【００８４】
なお、蓋体のサイズが（ほぼ）同一である場合、蓋体の質量が容器本体の質量より小さく、かつ蓋体の材料の比重が、容器本体の材料の比重より大きいものは、蓋体の質量が容器本体の質量より小さく、かつ蓋体の材料と容器本体の材料とが同一のものより、蓋体の質量が大きくなるため、容器本体内の培養液の流出防止効果を向上させることができる。
【００８５】
なお、本発明は上記実施形態そのままに限定されるものではなく、実施段階ではその要旨を逸脱しない範囲で構成要素を変形して具体化できる。また、上記実施形態に開示されている複数の構成要素の適宜な組み合わせにより、種々の発明を形成できる。例えば、実施形態に示される全構成要素から幾つかの構成要素を削除してもよい。さらに、異なる実施形態にわたる構成要素を適宜組み合わせてもよい。
【符号の説明】
【００８６】
１０  細胞培養容器
１１  容器本体
１１ａ  内底面
１１ｂ  上方開口
１１ｃ  内側面
１２  蓋体
２０  遠心分離機
３０  細胞培養容器
３１  容器本体
３１Ａ  液収納部
３１Ｂ  連結プレート
３１ａ  内底面
３１ｂ  上方開口
３１ｃ  内側面
３２  蓋体
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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