(57)【要約】【課題】  患者が増加しつつある頻尿や尿失禁の治療に有効な医薬を開発するに当たり、有効なスクリーニング手段を提供すること。【解決手段】  メスラットの両側総腸骨静脈と子宮静脈を結紮し、４週以上飼育することを特徴とする骨盤うっ血モデルラットの作製方法、当該作製方法により得られる骨盤うっ血モデルラットおよびこのモデルラットを用いた頻尿治療薬のスクリーニング方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
メスラットの両側総腸骨静脈と子宮静脈を結紮し、４週以上飼育することを特徴とする骨盤うっ血モデルラットの作製方法。
【請求項２】
請求項１記載の作製方法により作製される骨盤うっ血モデルラット。
【請求項３】
請求項２記載の骨盤うっ血モデルラットに被験薬剤を投与し、その頻尿抑制程度を評価することを特徴とする頻尿治療薬のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、骨盤うっ血モデルラットおよびその作製方法に関し、更に詳細には、頻尿や尿失禁などに有効な医薬品開発に利用しうる骨盤うっ血モデルラットおよびその作製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
排泄に関する疾患、例えば頻尿や尿失禁は重大な疾患とはいえないが、通常生活する上では、日々の買い物等の外出や、旅行等に対する制約になり、また精神的にも大きな負担となるため、生活のＱＯＬ（クオリティ・オブ・ライフ）を低下させるものである。日本においては、近年の高齢化に伴い、頻尿や、尿失禁の患者が増加しており、その治療法に関し関心が高まっている。
【０００３】
このような頻尿や尿失禁は、尿意切迫感のある過活動膀胱の場合と、尿意切迫感のない頻尿の場合がある。尿意切迫感のあるときには通常は自分の意志では抑制できない膀胱収縮、つまり無抑制膀胱収縮が出現している。過活動膀胱には下部尿路自体に原因がある排尿筋過活動の場合と、中枢神経系に原因がある排尿筋過反射の場合がある。尿意切迫感のない頻尿の原因には膀胱のうっ血も挙げられており、それらは慢性前立腺炎の原因のひとつともいわれている。
【０００４】
現在、頻尿や尿失禁の治療には、原因の如何に関わらず過活動膀胱治療薬が使用されており、その多くは抗コリン作用を主とする薬剤である。しかしながら、抗コリン作用を有する薬剤であっても尿意切迫感のない頻尿、つまり過活動膀胱ではない頻尿に対する効果は十分ではないことがあり、新たな、頻尿や尿失禁の治療に有効な医薬を開発するための手段の開発が求められている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、患者が増加しつつある頻尿や尿失禁の治療に有効な医薬を開発するに当たり、有効なスクリーニング手段を提供することをその課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、頻尿や尿失禁等に有効な医薬に関し、検討を行っていたところ、過活動膀胱でない頻尿の原因のひとつが骨盤うっ血であることを知った。
【０００７】
そして、そのような骨盤うっ血の症状を有する動物を作製すれば、頻尿や尿失禁の治療手段を研究するために有効であると考え、ラットを用いて検討を行っていたところ、メスラットの両側総腸骨静脈と性腺静脈を結紮すれば、無菌性慢性膀胱炎を有する骨盤うっ血モデルラットが得られることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち本発明は、メスラットの両側総腸骨静脈と子宮静脈を結紮し、４週以上飼育することを特徴とする骨盤うっ血モデルラットの作製方法である。
【０００９】
また本発明は、上記作製方法により作製される骨盤うっ血モデルラットである。
【００１０】
更に本発明は、上記骨盤うっ血モデルラットに被験薬剤を投与し、その頻尿抑制程度を評価することを特徴とする頻尿治療薬のスクリーニング方法である。
【発明の効果】
【００１１】
従来、頻尿や、尿失禁に有効な化合物のスクリーニングは、脳梗塞モデル、慢性期脊髄損傷モデル、閉塞膀胱モデルなどの動物が用いられていたが、これらは無排尿性膀胱収縮（臨床でいう無抑制膀胱収縮）を伴う過活動膀胱モデルであった。本発明の骨盤うっ血モデルラットは無排尿性膀胱収縮を伴わない頻尿モデルであり、過活動膀胱以外の頻尿に有効な化合物のスクリーニング試験を行うことが可能となった。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の骨盤うっ血モデルラットは、メスラットの両側総腸骨静脈と子宮静脈を結紮した後、これを４週以上飼育することにより作製される。
【００１３】
使用されるラットとしては、メスのラットであれば特に制約はなく、一般に動物実験に使用される各種系統のラットを挙げることができる。例えば、ＳＤラット、Ｆｉｓｈｅｒラット、Ｗｉｓｔａｒラット、Ｗｉｓｔａｒ Ｈａｎｎｏｖｅｒ／Ｒｃｃラット、Ｗｉｓｔａｒ／ＳＴラット、Ｄｏｎｒｙｕラット等を用いることができる。好ましいのは、排尿関連実験で使用頻度が多いという理由で、ＳＤラットである。
【００１４】
また、このラットの両側総腸骨静脈と子宮静脈の結紮は、ラットをイソフルレン等による吸入麻酔下、下腹部を正中切開してから行われる。この結紮は、両側総腸骨静脈と子宮静脈の両者でなければならず、例えば、両側総腸骨静脈のみの場合は、試験に適した骨盤うっ血モデルラットとはならない。
【００１５】
このように両側総腸骨静脈および子宮静脈を結紮したラットは、結紮直後では骨盤うっ血状態が安定せず、頻尿の現象もまちまちであるので、結紮後４週間ほど飼育し、安定した骨盤うっ血状態となってからモデルラットとして使用する。
【００１６】
この骨盤うっ血モデルラットを用いて、例えば、頻尿治療薬剤の候補となる化合物をスクリーニングするには、次の如くすれば良い。
【００１７】
すなわち、骨盤うっ血に伴う頻尿の治療に有用である可能性がある化合物を、本モデルラットに投与した後、ラットの膀胱内圧測定を行い、それらを投与しない本モデルラット、または化合物の投与前に比べて、膀胱収縮間隔の有意な延長(頻尿の改善)があるかどうかを調べ、有意な延長が認められたものを、頻尿治療剤候補化合物として選び出すことができる。なお、本モデルラットへの化合物の投与は、餌に添加して与えたり、化合物を静脈投与したり、膀胱内投与したりして行うことができる。
【実施例】
【００１８】
次に実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に何ら製薬されるものではない。
【００１９】
実  施  例  １
骨盤うっ血モデルラットの作製：
ＳＤ系メスラットを用い、吸入麻酔下に下腹部正中切開して両側総腸骨静脈を結紮し、子宮静脈も両側結紮して骨盤うっ血群とした。一方、何ら操作しないラットをコントロール群とし、上記静脈の剥離操作のみで静脈結紮しないラットをシャム群とした。
【００２０】
静脈処理の２日後、１週後、２週後および４週後にウレタン浅麻酔拘束下で連続膀胱内圧測定を行い、開腹して下部尿路の状態を観察し、骨盤うっ血群とコントロール群の２群間と、骨盤うっ血群とシャム群の２群間で比較した。また、頻尿となる術後週数で自発運動量を測定して痛みの間接的評価を行った。
【００２１】
この結果を表１に示すが、コントロール群に比べて、骨盤うっ血群では静脈処理２日後には連続膀胱内圧測定上、排尿間隔（膀胱収縮間隔）が短縮するラットと延長するラットがいて一定せず、表１に示すように静脈結紮１週後ではコントロール群より有意に延長したが、２週後には差はなくなり、４週後には逆に有意に短縮した。また、膀胱基線圧や最大膀胱収縮圧には群間差がなかった。
【００２２】
【表１】
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【００２３】
更に、静脈処理の４週後のシャム群と骨盤うっ血群の比較でも、表２に示すように、骨盤うっ血群の膀胱収縮間隔は有意に短縮していたが、膀胱基線圧や最大膀胱収縮圧には群間差がなかった。
【００２４】
【表２】
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【００２５】
なお、膀胱をそのままの状態およびエバンスブルーで着色した状態を目視で観察した結果では、骨盤うっ血群の骨盤内静脈は拡張し、膀胱は静脈結紮後一貫して浮腫状で肥厚していた。血管透過性の指標としての膀胱壁からのエバンスブルー漏出量は、シャム群（１．１±０．１ｍｇ／ｍｌ）に比べて骨盤うっ血群（１．３±０．２ｍｇ／ｍｌ）で有意（P＜０．０５）に増加していた。また、痛みの間接的評価としての自発運動量の評価では、ラットの活動期である暗期の自発運動量は、シャム群（１７４５６±１７０２カウント）に比べて骨盤うっ血群（１４９７９±２１４１カウント）で有意（P＜０．０５）に低下していた。ラットの睡眠期である明期の自発運動量には群間差がなかった。
【００２６】
この結果、メスラットの両側総腸骨静脈と子宮静脈を結紮し、４週経過後には頻尿の骨盤うっ血モデルラットが作製できることがわかった。
【００２７】
実  施  例  ２
骨盤うっ血モデルラットの頻尿に対する薬剤の静脈内投与の影響：
実施例１で得たメスの骨盤うっ血モデルラット（１群６匹）に、ウレタン麻酔下、経尿道的にカテーテルを膀胱に挿入し、連続膀胱内圧測定を行なった。
【００２８】
公知の頻尿治療薬であるプロピベリン塩酸塩１ｍｇ／ｋｇを大腿静脈から投与し、頻尿の抑制状況を、膀胱収縮間隔を用いて測定した。比較としては、骨盤うっ血モデルラットのプロピベリン塩酸塩１ｍｇ／ｋｇ投与前の膀胱収縮間隔を用いた。この結果を表３に示す。
【００２９】
【表３】
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【００３０】
表３に示すように、プロピベリン塩酸塩１ｍｇ／ｋｇ投与により、骨盤うっ血モデルラットの膀胱収縮間隔はプロピベリン塩酸塩投与前より有意に延長し（７．９±１．０→１３．５±１．１分、P＜０．０５）、この薬剤により骨盤うっ血モデルラットでの頻尿が改善されることがわかった。
【００３１】
実  施  例  ３
骨盤うっ血モデルラットの頻尿に対する薬剤の経口投与の影響：
実施例１で得た骨盤うっ血モデルラットに対し、結紮処理１日目から飲料水に混合した試験薬剤を４週間、継続的に投与した。投与した薬剤は、公知の血管透過性亢進抑制剤のカルバゾクロムスルホン酸ナトリウム（０．２５ｍｇ／ｍｌ）であった。
【００３２】
実施例２と同様に、骨盤うっ血モデルラットの膀胱内圧測定を行い、薬剤を投与していない（薬剤未投与）群と比較して、薬剤投与ラットの頻尿の改善を検討した。この結果を表４に示す。
【００３３】
【表４】
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【００３４】
表４に示すように、薬剤投与ラットの膀胱収縮間隔（１０．６±０．５分）は薬剤未投与群（７．９±１．０分）より有意（P＜０．０５）に延長し、カルバゾクロムスルホン酸の投与により、骨盤うっ血モデルラットでの頻尿が改善されることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本モデルラットは、過活動膀胱でない頻尿のひとつの原因である骨盤うっ血を有する動物であるため、骨盤うっ血に関連する、例えば、頻尿等に対する治療法の開発に有効に利用することができる。例えば、この動物に頻尿治療薬剤の候補とされる化合物を投与し、当該化合物の有する頻尿抑制効果を公知の過活動膀胱治療薬剤と比較することで、頻尿や、尿失禁に有効な化合物をスクリーニングすることができる。