(57)【要約】【課題】ＴＲＰＡ１の活性化を効果的に抑制することができるＴＲＰＡ１の活性抑制剤およびＴＲＰＡ１の活性抑制方法を提供すること。【解決手段】ＴＲＰＡ１の活性を抑制する活性抑制剤であって、水酸基を有するビシクロヘプタン構造を有するビシクロヘプタンオール化合物を含有することを特徴とするＴＲＰＡ１の活性抑制剤、およびＴＲＰＡ１の活性を抑制する活性抑制方法であって、水酸基を有するビシクロヘプタン構造を有するビシクロヘプタンオール化合物をＴＲＰＡ１と接触させることを特徴とするＴＲＰＡ１の活性抑制方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＲＰＡ１の活性を抑制する活性抑制剤であって、水酸基を有するビシクロヘプタン構造を有するビシクロヘプタンオール化合物を含有することを特徴とするＴＲＰＡ１の活性抑制剤。
【請求項２】
前記ビシクロヘプタンオール化合物が、式（Ｉ）：
【化１】
2014065690.tif 000015
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０はそれぞれ独立して水素原子、水酸基、炭素数１〜４のアルキル基、カルボキシル基、アミノ基またはアルデヒド基、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ独立して水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を示す。ただし、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つの基は水酸基である）
で表される化合物である請求項１に記載のＴＲＰＡ１の活性抑制剤。
【請求項３】
ＴＲＰＡ１の活性を抑制する活性抑制方法であって、水酸基を有するビシクロヘプタン構造を有するビシクロヘプタンオール化合物をＴＲＰＡ１と接触させることを特徴とするＴＲＰＡ１の活性抑制方法。
【請求項４】
前記ビシクロヘプタンオール化合物が、式（Ｉ）：
【化２】
2014065690.tif 000016
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０はそれぞれ独立して水素原子、水酸基、炭素数１〜４のアルキル基、カルボキシル基、アミノ基またはアルデヒド基、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ独立して水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を示す。ただし、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つの基は水酸基である）
で表される化合物である請求項３に記載のＴＲＰＡ１の活性抑制方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＴＲＰＡ１の活性抑制剤に関する。さらに詳しくは、本発明は、ＴＲＰＡ１の活性抑制剤およびＴＲＰＡ１の活性抑制方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚外用剤、頭髪外用剤などの外用剤には、例えば、清涼化剤、パラベン類、アルカリ剤などが配合されている。これらの清涼化剤、パラベン類およびアルカリ剤は、一過性受容体電位チャネルの１つであるＴＲＰＡ１を活性化し、活性化されたＴＲＰＡ１を介して不快な刺激を引き起こすことが、本発明者らによって見出されている（例えば、特許文献１〜４参照）。
【０００３】
しかしながら、近年、使用者の安全意識の高まりから、不快な刺激を与えないか、または不快な刺激が少ない外用剤が好まれる傾向にある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００８−７９５２８号公報
【特許文献２】特開２００９−８２０５３号公報
【特許文献３】特開２００９−２２５７３３号公報
【特許文献４】特開２０１２−０６２３０４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、前記従来技術に鑑みてなされたものであり、ＴＲＰＡ１の活性を効果的に抑制するＴＲＰＡ１の活性抑制剤およびＴＲＰＡ１の活性抑制方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
すなわち、本発明の要旨は、
（１）ＴＲＰＡ１の活性を抑制する活性抑制剤であって、水酸基を有するビシクロヘプタン構造を有するビシクロヘプタンオール化合物を含有することを特徴とするＴＲＰＡ１の活性抑制剤、
（２）前記ビシクロヘプタンオール化合物が、式（Ｉ）：
【０００７】
【化１】
2014065690.tif 000002
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０はそれぞれ独立して水素原子、水酸基、炭素数１〜４のアルキル基、カルボキシル基、アミノ基またはアルデヒド基、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ独立して水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を示す。ただし、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つの基は水酸基である）
で表される化合物である前記（１）に記載のＴＲＰＡ１の活性抑制剤、
（３）ＴＲＰＡ１の活性を抑制する活性抑制方法であって、水酸基を有するビシクロヘプタン構造を有するビシクロヘプタンオール化合物をＴＲＰＡ１と接触させることを特徴とするＴＲＰＡ１の活性抑制方法、ならびに
（４）前記ビシクロヘプタンオール化合物が、式（Ｉ）：
【０００８】
【化２】
2014065690.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０はそれぞれ独立して水素原子、水酸基、炭素数１〜４のアルキル基、カルボキシル基、アミノ基またはアルデヒド基、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ独立して水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を示す。ただし、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つの基は水酸基である）
で表される化合物である前記（３）に記載のＴＲＰＡ１の活性抑制方法
に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のＴＲＰＡ１の活性抑制剤およびＴＲＰＡ１の活性抑制方法は、ＴＲＰＡ１の活性を効果的に抑制するという優れた効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】試験例１において、被験試料の種類とＴＲＰＡ１活性抑制率との関係を調べた結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明のＴＲＰＡ１の活性抑制剤（以下、「活性抑制剤」という）は、ＴＲＰＡ１の活性を抑制する活性抑制剤であって、水酸基を有するビシクロヘプタン構造を有するビシクロヘプタンオール化合物を含有することを特徴とする。
【００１２】
前記水酸基を有するビシクロヘプタン構造を有するビシクロヘプタンオール化合物（以下、「ビシクロヘプタンオール化合物」という）は、ＴＲＰＡ１アゴニストによるＴＲＰＡ１の活性化を抑制してＴＲＰＡ１の活性を抑制する。したがって、本発明の活性抑制剤は、前記ビシクロヘプタンオール化合物を含有しているので、当該活性抑制剤をＴＲＰＡ１と接触させることにより、ＴＲＰＡ１の活性を抑制することができる。
【００１３】
前記ビシクロヘプタンオール化合物としては、例えば、式（Ｉ）：
【００１４】
【化３】
2014065690.tif 000004
【００１５】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０はそれぞれ独立して水素原子、水酸基、炭素数１〜４のアルキル基、カルボキシル基、アミノ基またはアルデヒド基、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ独立して水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を示す。ただし、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つの基は水酸基である）
で表される化合物などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。
【００１６】
式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立して水素原子、水酸基、炭素数１〜４のアルキル基、カルボキシル基、アミノ基またはアルデヒド基である。ただし、式（Ｉ）において、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つの基が水酸基である。アルキル基の炭素数は、ＴＲＰＡ１の活性に対する抑制作用を十分に発現させる観点から、１以上であり、当該活性抑制剤をヒトに用いる場合において、ヒトの皮膚に対する十分な親和性を確保する観点から、４以下、好ましくは３以下である。前記アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、イソブチル基およびｔｅｒｔ−ブチル基が挙げられる。式（Ｉ）においては、ＴＲＰＡ１の活性に対する抑制作用を十分に発現させるとともに、当該活性抑制剤をヒトに用いる場合において、ヒトの皮膚に対する十分な親和性を確保する観点から、Ｒ１およびＲ６のいずれかがメチル基であることが好ましい。
【００１７】
式（Ｉ）において、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立して、水素原子または炭素数１〜４のアルキル基である。アルキル基は、前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０におけるアルキル基と同様である。Ｒ１１およびＲ１２は、ＴＲＰＡ１の活性に対する抑制作用を十分に発現させるとともに、当該活性抑制剤をヒトに用いる場合において、ヒトの皮膚に対する十分な親和性を確保する観点から、好ましくは水素原子またはメチル基である。
【００１８】
式（Ｉ）で表される化合物としては、例えば、式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ１１およびＲ１２がメチル基であり、Ｒ２およびＲ３のいずれか一方が水酸基であり、他方が水素原子であり、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０が水素原子である化合物（以下、「ビシクロヘプタンオール化合物Ａ」という）；式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ１１およびＲ１２がメチル基であり、Ｒ９およびＲ１０のいずれか一方が水酸基であり、他方が水素原子であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が水素原子である化合物（以下、「ビシクロヘプタンオール化合物Ｂ」という）；式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ１１およびＲ１２がメチル基であり、Ｒ２およびＲ３のいずれか一方がメチル基であり、他方が水酸基であり、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０が水素原子である化合物（以下、「ビシクロヘプタンオール化合物Ｃ」という）；式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ１１およびＲ１２がメチル基であり、Ｒ９およびＲ１０のいずれか一方がメチル基であり、他方が水酸基であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が水素原子である化合物（以下、「ビシクロヘプタンオール化合物Ｄ」という）；式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ４およびＲ５がメチル基であり、Ｒ２およびＲ３のいずれか一方が水酸基であり、他方が水素原子であり、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０が水素原子である化合物（以下、「ビシクロヘプタンオール化合物Ｅ」という）；式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ４およびＲ５がメチル基であり、Ｒ９およびＲ１０のいずれか一方が水酸基であり、他方が水素原子であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が水素原子である化合物（以下、「ビシクロヘプタンオール化合物Ｆ」という）などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの化合物には、立体異性体も包含される。
【００１９】
式（Ｉ）で表される化合物の具体例としては、前記ビシクロヘプタンオール化合物Ａの１つである式（Ｉａ）：
【００２０】
【化４】
2014065690.tif 000005
【００２１】
で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕、前記ビシクロヘプタンオール化合物Ａの１つである式（Ｉｂ）：
【００２２】
【化５】
2014065690.tif 000006
【００２３】
で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕、前記ビシクロヘプタンオール化合物Ａの１つである式（Ｉｃ）：
【００２４】
【化６】
2014065690.tif 000007
【００２５】
で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕、前記ビシクロヘプタンオール化合物Ａの１つである式（Ｉｄ）：
【００２６】
【化７】
2014065690.tif 000008
【００２７】
で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕、前記ビシクロヘプタンオール化合物Ｃの１つである式（Ｉｅ）：
【００２８】
【化８】
2014065690.tif 000009
【００２９】
で表わされる化合物〔（１Ｓ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オール〕、前記ビシクロヘプタンオール化合物Ｃの１つである式（Ｉｆ）：
【００３０】
【化９】
2014065690.tif 000010
【００３１】
で表わされる化合物〔（１Ｒ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オール〕、前記ビシクロヘプタンオール化合物Ｅの１つである式（Ｉｇ）：
【００３２】
【化１０】
2014065690.tif 000011
【００３３】
で表わされる化合物〔［１Ｒ，４Ｓ，（＋）］−１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕、前記ビシクロヘプタンオール化合物Ｅの１つである式（Ｉｈ）：
【００３４】
【化１１】
2014065690.tif 000012
【００３５】
で表わされる化合物〔［１Ｓ，４Ｒ，（−）］−１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。
【００３６】
前記ビシクロヘプタンオール化合物のなかでは、ＴＲＰＡ１の活性に対する抑制作用を十分に発現させる観点から、式（Ｉ）で表わされる化合物が好ましく、ビシクロヘプタンオール化合物Ａ、ビシクロヘプタンオール化合物Ｂ、ビシクロヘプタンオール化合物Ｃ、ビシクロヘプタンオール化合物Ｄ、ビシクロヘプタンオール化合物Ｅおよびビシクロヘプタンオール化合物Ｆがより好ましく、式（Ｉａ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕、式（Ｉｂ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕、式（Ｉｃ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕、式（Ｉｄ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕、式（Ｉｅ）で表わされる化合物〔（１Ｓ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オール〕、式（Ｉｆ）で表わされる化合物〔（１Ｒ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オール〕、式（Ｉｇ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，４Ｓ，（＋）］−１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕および式（Ｉｈ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，４Ｒ，（−）］−１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕がより好ましい。
【００３７】
前記ビシクロヘプタンオール化合物は、単独で用いてもよく、２種類以上を混合して用いてもよく、ラセミ混合物であってもよい。
【００３８】
前記ビシクロヘプタンオール化合物の製造方法は、当該ビシクロヘプタンオール化合物の種類などによって異なることから、一概には決定することができないので、ビシクロヘプタンオール化合物の種類に応じて適宜選択することが好ましい。前記製造方法としては、例えば、タカサゴギク、竜脳樹、ラベンダーなどの植物の抽出物、藍藻類などの代謝産物などから単離する製造方法などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。例えば、式（Ｉａ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕は、竜脳樹などのフタバガキ科植物、ウマノスグサ科植物、ヒノキ科植物、ニクズク科植物、ショウガ科植物などから得られる抽出物を蒸留することなどによって得ることができる。式（Ｉｂ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕は、タカサゴギクなどのキク科植物、フトモモ科植物、クスノキ科植物、オミナエシ科植物などから得られる抽出物を蒸留することなどによって得ることができる。式（Ｉｃ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕は、高圧水素添加法によって［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールを合成したときの副生成物を単離することなどによって得ることができる。式（Ｉｅ）で表わされる化合物〔（１Ｓ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オール〕は、例えば、藍藻類の代謝産物を精製するこなどによって得ることができる。式（Ｉｇ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，４Ｓ，（＋）］−１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕は、例えば、松科の植物精油またはフェンネル油を精製することなどによって得ることができる。本発明においては、ビシクロヘプタンオール化合物は、市販のものを用いることもできる。
【００３９】
本発明の活性抑制剤におけるビシクロヘプタンオール化合物の含有量は、ビシクロヘプタンオール化合物の種類、本発明の活性抑制剤の用途などによって異なることから、一概には決定することができないので、ビシクロヘプタンオール化合物の種類、本発明の活性抑制剤の用途などに応じて適宜設定することが好ましい。本発明の活性抑制剤における前記ビシクロヘプタンオール化合物の含有量は、通常、ＴＲＰＡ１の活性に対する抑制作用を十分に発現させる観点から、好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、さらに好ましくは０．０１質量％以上であり、ヒトの皮膚に対する十分な新和性を確保する観点から、好ましくは１００質量％以下である。
【００４０】
本発明の活性抑制剤は、本発明の目的が妨げられない範囲内で、例えば、水、ｐＨ調整剤、キレート化剤、安定化剤などの他の成分を含有していてもよい。なお、本発明の活性抑制剤が前記成分を含有する場合、本発明の目的が妨げられない範囲で、本発明の活性抑制剤中において、前記ビシクロヘプタンオール化合物と前記成分とが複合体を形成していてもよい。
【００４１】
前記ＴＲＰＡ１は、刺激受容体としての機能を発現する一過性受容体電位チャネル（ＴＲＰチャネル）の１つである。前記ＴＲＰＡ１のアミノ酸配列は、配列番号：２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００７３３２）に示される。なお、本発明においては、ＴＲＰＡ１は、配列番号：２に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドの活性と同等の活性（以下、「ＴＲＰＡ１活性」という）を示すものであれば、配列番号：２に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドの変異体であってもよい。前記変異体としては、（Ａ）配列番号：２に示される配列において、１または数個のアミノ酸残基の置換、欠失または挿入を有し、前記ＴＲＰＡ１活性を示すポリペプチド、（Ｂ）配列番号：２に示される配列に対する配列同一性が８０％以上であるアミノ酸配列からなり、前記ＴＲＰＡ１活性を示すポリペプチドなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。なお、前記（Ａ）において、前記「１個または数個」とは、１〜３０個であるが、好ましくは１〜２０個、より好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜３個、特に好ましくは１個または２個をいう。また、「配列同一性」は、配列番号：２に示されるアミノ酸配列（参照配列）に対して、評価対象のアミノ酸配列（クエリー配列）を、Ｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ：１０、ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ：３、Ｇａｐ  Ｃｏｓｔｓ（Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１、Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  １）およびＭａｔｒｉｘ：ＢＬＳＵＭ６２の条件でＢＬＡＳＴアルゴリズムに基づくＰＲＯＴＥＩＮ  ＢＬＡＳＴを用いてアライメントして算出された値をいう。前記（Ｂ）において、配列同一性は、前記ＴＲＰＡ１活性を示す範囲であればよく、８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、さらに好ましくは９８％以上、特に好ましくは１００％である。
【００４２】
前記ＴＲＰＡ１活性としては、例えば、細胞におけるイオン流束の調節能、細胞における膜電位の調節能などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。細胞におけるイオン流束の調節能としては、例えば、細胞外から細胞内への陽イオンの輸送能などが挙げられる。また、細胞における膜電位の調節能としては、例えば、電流の発生能などが挙げられる。これらのＴＲＰＡ１活性は、ＴＲＰＡ１アゴニストがＴＲＰＡ１に結合して当該ＴＲＰＡ１が活性化することによって発現される。前記陽イオンとしては、例えば、カルシウムイオン、ナトリウムイオンなどが挙げられる。
【００４３】
前記ＴＲＰＡ１アゴニストとしては、例えば、メントール、エタノール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、アルカリ剤（例えば、アンモニア、モノエタノールアミン、水酸化カリウムなど）、アリルイソチオシアネート、メチルパラベン、アリシン、イシリン、過酸化水素、ブラジキニン、アクロレイン、香油成分（例えば、シトラール、オイゲノール、シンナムアルデヒドなど）などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。
【００４４】
前記ＴＲＰＡ１の活性に対する本発明の活性抑制剤の抑制作用は、例えば、ＴＲＰＡ１を発現する細胞（以下、「ＴＲＰＡ１発現細胞」という）内におけるカルシウムイオン濃度、前記ＴＲＰＡ１発現細胞内における電流などに基づいて評価することができる。
【００４５】
ＴＲＰＡ１発現細胞内におけるカルシウムイオン濃度を用いる場合、前記抑制作用は、例えば、
（Ａ１）  ＴＲＰＡ１発現細胞と被験物質（活性抑制剤）とＴＲＰＡ１アゴニストとを接触させ、前記ＴＲＰＡ１発現細胞内におけるカルシウムイオン濃度〔「カルシウムイオン濃度（Ａ）」という〕を測定するステップ、
（Ａ２）  ＴＲＰＡ１発現細胞とＴＲＰＡ１アゴニストとを接触させ、前記ＴＲＰＡ１発現細胞内におけるカルシウムイオン濃度〔「カルシウムイオン濃度（Ｂ）」という〕を測定するステップ、および
（Ａ３）  前記ステップ（Ａ１）で得られたカルシウムイオン濃度（Ａ）と前記ステップ（Ａ２）で得られたカルシウムイオン濃度（Ｂ）とを比較するステップ
を行なうことにより評価することができる（「評価法Ａ」という）。前記ステップ（Ａ３）において、カルシウムイオン濃度（Ｂ）と比べてカルシウムイオン濃度（Ａ）が減少している場合、当該被験物質は、ＴＲＰＡ１の活性に対する抑制作用を有すると評価することができる。また、前記カルシウムイオン濃度（Ａ）とカルシウムイオン濃度（Ｂ）との間の差が大きいほど、当該被験物質は、高い抑制作用を有すると評価することができる。
【００４６】
前記カルシウムイオン濃度は、例えば、カルシウムキレート化剤に基づく蛍光試薬（以下、「蛍光カルシウム指示薬」ともいう）をＴＲＰＡ１発現細胞に導入し、当該細胞内のカルシウムイオンに前記蛍光カルシウム指示薬を結合させ、カルシウムイオンと結合した蛍光カルシウム指示薬の蛍光強度を調べる方法などによって測定することができる。前記蛍光カルシウム指示薬としては、カルシウムイオンと結合し、蛍光カルシウム指示薬の量によってその蛍光特性が変化するのであればよく、例えば、ＦＵＲＡ  ２、ＦＵＲＡ  ２−ＡＭ、Ｆｌｕｏ−３などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。
【００４７】
ＴＲＰＡ１発現細胞内における電流を用いる場合、前記抑制作用は、例えば、
（Ｂ１）  ＴＲＰＡ１発現細胞と被験物質（活性抑制剤）とＴＲＰＡ１アゴニストとを接触させ、前記ＴＲＰＡ１発現細胞内における一定電位下での電流〔「電流（Ａ）」という〕を測定するステップ、
（Ｂ２）  ＴＲＰＡ１発現細胞とＴＲＰＡ１アゴニストとを接触させ、前記ＴＲＰＡ１発現細胞内における前記（１）における電位と同じ電位下での電流〔「電流（Ｂ）」という〕を測定するステップ、および
（Ｂ３）  前記ステップ（Ｂ１）で得られた電流（Ａ）と前記ステップ（Ｂ２）で得られた電流（Ｂ）とを比較するステップ
を行なうことにより評価することができる（「評価法Ｂ」という）。前記ステップ（Ｂ３）において、電流（Ｂ）と比べて電流（Ａ）が小さい場合、当該被験物質は、ＴＲＰＡ１の活性に対する抑制作用を有すると評価することができる。また、前記電流（Ａ）と電流（Ｂ）との間の差が大きいほど、当該被験物質は、高い抑制作用を有すると評価することができる。前記電流は、例えば、パッチクランプ法などによって測定することができる。
【００４８】
前記ビシクロヘプタンオール化合物によれば、ＴＲＰＡ１の活性発現を抑制することができる。本発明のＴＲＰＡ１の活性抑制方法（以下、「活性抑制方法」という）は、ＴＲＰＡ１の活性を抑制する活性抑制方法であって、前記ビシクロヘプタンオール化合物をＴＲＰＡ１と接触させることを特徴とする。
【００４９】
本発明の活性抑制方法によれば、前記ビシクロヘプタンオール化合物が用いられているので、例えば、ヒトの皮膚に存在する感覚神経に含まれるＴＲＰＡ１、口腔などの粘膜下に存在する感覚神経に含まれるＴＲＰＡ１などの活性を効果的に抑制することができる。
【００５０】
前記ビシクロヘプタンオール化合物のなかでは、ＴＲＰＡ１の活性を効果的に抑制する観点から、式（Ｉ）で表わされる化合物が好ましく、ビシクロヘプタンオール化合物Ａ、ビシクロヘプタンオール化合物Ｂ、ビシクロヘプタンオール化合物Ｃ、ビシクロヘプタンオール化合物Ｄ、ビシクロヘプタンオール化合物Ｅおよびビシクロヘプタンオール化合物Ｆがより好ましく、式（Ｉａ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕、式（Ｉｂ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕、式（Ｉｃ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕、式（Ｉｄ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕、式（Ｉｅ）で表わされる化合物〔（１Ｓ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オール〕、式（Ｉｆ）で表わされる化合物〔（１Ｒ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オール〕、式（Ｉｇ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，４Ｓ，（＋）］−１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕および式（Ｉｈ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，４Ｒ，（−）］−１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕がより好ましい。
【００５１】
前記ビシクロヘプタンオール化合物とＴＲＰＡ１との接触は、ＴＲＰＡ１を含む部位、例えば、皮膚を構成する細胞に前記ビシクロヘプタンオール化合物を供給することによって行なうことができる。
【００５２】
前記ＴＲＰＡ１と接触させる前記ビシクロヘプタンオール化合物の量は、本発明の活性抑制方法の適用対象などによって異なることから、一概には決定することができないので、本発明の活性抑制方法の適用対象などに応じて適宜設定することが好ましい。前記ＴＲＰＡ１と接触させる前記ビシクロヘプタンオール化合物の量は、例えば、本発明の活性抑制方法の適用対象が皮膚に存在する感覚神経に含まれるＴＲＰＡ１である場合、通常、ＴＲＰＡ１の活性に対する抑制作用を十分に発現させる観点から、皮膚１０ｃｍ２あたり、好ましくは１０μｇ以上、より好ましくは１００μｇ以上であり、皮膚への負荷を抑制する観点から、好ましくは１００ｍｇ以下、より好ましくは１０ｍｇ以下である。
【００５３】
ＴＲＰＡ１の活性に対する本発明の活性抑制方法による抑制作用は、前記活性抑制剤によるＴＲＰＡ１の活性に対する抑制作用の評価と同様の手法によって評価することができる。
【００５４】
本発明の活性抑制方法は、皮膚における不快な刺激感との関連性があるＴＲＰＡ１の活性を抑制することから、例えば、当該活性抑制方法を皮膚と接触したときに不快な刺激を与える可能性がある成分を含む外用剤を使用するときに、前記ビシクロヘプタンオール化合物と前記外用剤とを併用して当該活性抑制方法を行なうことにより、皮膚における細胞に含まれるＴＲＰＡ１の活性を抑制し、不快な刺激を抑制することができる。したがって、本発明のＴＲＰＡ１の活性抑制方法は、敏感肌を有するヒトが前記外用剤の使用する際に適用するのに好適である。
【００５５】
また、本発明の活性抑制剤によれば、皮膚における不快な刺激感との関連性があるＴＲＰＡ１の活性を抑制することから、皮膚における不快な刺激を抑制することができる。したがって、本発明の活性抑制剤は、前記ＴＲＰＡ１アゴニストなどのＴＲＰＡ１を活性化する成分が配合された外用剤において、前記成分によるＴＲＰＡ１の活性化を抑制する有効成分として用いることができる。
【００５６】
前記外用剤は、ＴＲＰＡ１を活性化する成分が配合された外用剤であって、前記成分によるＴＲＰＡ１の活性化を抑制する有効成分として前記ＴＲＰＡ１の活性抑制剤を含有することを特徴とする。したがって、かかる外用剤によれば、ＴＲＰＡ１を活性化する成分による不快な刺激などのＴＲＰＡ１の活性化に基づく不快な刺激を低減することができる。
【００５７】
また、本明細書において、「ＴＲＰＡ１を活性化する成分」とは、ＴＲＰＡ１アゴニストのうち、外用剤に用いることができる成分をいう。かかるＴＲＰＡ１を活性化する成分としては、例えば、前記評価法Ａと同様の操作を行なったときに、ステップ（Ａ３）において、カルシウムイオン濃度（Ｂ）と比べ、カルシウムイオン濃度（Ａ）が増加していることを示す成分、前記評価法Ｂを行なったときに、ステップ（Ｂ３）において、電流（Ｂ）と比べ、電流（Ａ）が大きいことを示す成分などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。前記ＴＲＰＡ１を活性化する成分としては、例えば、メントール、エタノール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、アルカリ剤（例えば、アンモニア、モノエタノールアミン、水酸化カリウムなど）、アリルイソチオシアネート、メチルパラベン、アリシン、イシリン、過酸化水素、アクロレイン、香油成分（例えば、シトラール、オイゲノール、シンナムアルデヒドなど）などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。
【００５８】
前記外用剤中の前記活性抑制剤に含まれる前記ビシクロヘプタンオール化合物のなかでは、ＴＲＰＡ１の活性に対する抑制作用を十分に発現させる観点から、式（Ｉ）で表わされる化合物が好ましく、ビシクロヘプタンオール化合物Ａ、ビシクロヘプタンオール化合物Ｂ、ビシクロヘプタンオール化合物Ｃ、ビシクロヘプタンオール化合物Ｄ、ビシクロヘプタンオール化合物Ｅおよびビシクロヘプタンオール化合物Ｆがより好ましく、式（Ｉａ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕、式（Ｉｂ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕、式（Ｉｃ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕、式（Ｉｄ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕、式（Ｉｅ）で表わされる化合物〔（１Ｓ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オール〕、式（Ｉｆ）で表わされる化合物〔（１Ｒ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オール〕、式（Ｉｇ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，４Ｓ，（＋）］−１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕および式（Ｉｈ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，４Ｒ，（−）］−１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕がより好ましい。
【００５９】
外用剤の剤形は、外用剤の用途などに応じて適宜選択することができる。外用剤の剤形としては、例えば、ローション、クリーム、フォーム、乳液、ジェル、パック、粉剤、エアゾール剤、貼付剤などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。
【００６０】
前記外用剤には、皮膚に直接適用される化粧料などの皮膚外用剤、皮膚に接触することがある頭髪外用剤などが包含される。前記外用剤は、好ましくは不快な刺激を感じやすい敏感肌用の外用剤である。
【００６１】
本明細書において、「敏感肌」とは、皮膚のバリア機能が低下しており、平均的な肌では反応しない物質、刺激などに対しても過敏に反応し、肌のかゆみ、肌のかさつきなどの状態が生じやすい傾向がある肌をいう。
【００６２】
前記皮膚外用剤としては、例えば、ボディーローション、デオドラント化粧料（例えば、デオドラントローション、デオドラントジェル、デオドラントスプレー、デオドラントロールオン、デオドラントペーパーなど）、化粧水、乳液、スキンケアクリーム、トニック、スティック化粧料、リップ、皮膚脱色剤（ボディーブリーチング剤）、洗浄料（例えば、ボディーシャンプー、クレンジング剤、洗顔剤、固形石鹸など）、シート化粧料（例えば、拭き取り用シート、シートパック剤など）、貼付剤（例えば、パップ剤など）、髭剃り用化粧料（例えば、シェービングジェルなど）などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。
【００６３】
また、前記頭髪外用剤としては、例えば、洗髪用化粧料（例えば、シャンプー、リンスなど）、育毛剤、ヘアカラー、ヘアブリーチ、パーマ液、ヘアスタイリング剤（例えば、ヘアトニックなど）などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。
【００６４】
前記外用剤における前記活性抑制剤の含有量は、前記ＴＲＰＡ１を活性化する成分の種類およびその量、前記ＴＲＰＡ１活性抑制剤の種類、外用剤の用途などによって異なることから、一概には決定することができないので、前記ＴＲＰＡ１を活性化する成分の種類およびその量、前記ＴＲＰＡ１活性抑制剤の種類、外用剤の用途などに応じて適宜設定することが好ましい。通常、前記外用剤における前記活性抑制剤の含有量は、当該外用剤における式（Ｉ）で表される化合物の含有量が、ＴＲＰＡ１の活性に対する抑制作用を十分に発現させる観点から、好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、さらに好ましくは０．０１質量％以上、特に好ましくは０．１質量％以上となり、皮膚に対する負荷を抑制する観点から、好ましくは１０質量％以下、より好ましくは０．１質量％以下となるように調整されることが望ましい。
【００６５】
前記ＴＲＰＡ１を活性化する成分に対する前記活性抑制剤の量は、前記ＴＲＰＡ１を活性化する成分の種類や量、前記ＴＲＰＡ１活性抑制剤の種類、外用剤の用途などによって異なることから、一概には決定することができないので、前記ＴＲＰＡ１を活性化する成分の種類や量、前記ＴＲＰＡ１活性抑制剤の種類、外用剤の用途などに応じて適宜設定することが好ましい。通常、前記ＴＲＰＡ１を活性化する成分に対する前記活性抑制剤の量は、前記ＴＲＰＡ１を活性化する成分１００質量部あたりの式（Ｉ）に示される化合物の量が、前記ＴＲＰＡ１を活性化する成分による不快な刺激を抑制する観点から、好ましくは１質量部以上、より好ましくは１０質量部以上となり、適度な冷感を得る観点から、好ましくは５００質量部以下、より好ましくは２００質量部以下となるように調整されることが望ましい。
【００６６】
前記外用剤には、上記「ＴＲＰＡ１を活性化する成分」の他に、本発明の目的が妨げられない範囲で、例えば、ＴＲＰＡ１を活性化する成分以外の高級アルコール、ロウ、炭化水素油、脂肪酸、油脂、エステル油、シリコーン油などの油剤；陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤などの界面活性剤；ＴＲＰＡ１を活性化する成分以外の多価アルコール、糖、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸誘導体などの保湿剤；増粘剤、酸化防止剤、キレート剤、ＴＲＰＡ１を活性化する成分以外のｐＨ調整剤、ＴＲＰＡ１を活性化する成分以外の香料、色素、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、ビタミン、アミノ酸、ＴＲＰＡ１を活性化する成分以外の防腐剤、水などの成分が配合されていてもよい。
【００６７】
なお、前記活性抑制剤に含まれるビシクロヘプタンオール化合物が、式（Ｉａ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕、式（Ｉｂ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕、式（Ｉｃ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕、式（Ｉｄ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕、式（Ｉｇ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，４Ｓ，（＋）］−１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕または式（Ｉｈ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，４Ｒ，（−）］−１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕である場合、前記活性抑制剤は、ＴＲＰＡ１の活性化に基づく不快な刺激を抑制し、しかもヒトの皮膚に清涼感を与えることができる。したがって、式（Ｉａ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕、式（Ｉｂ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕、式（Ｉｃ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕、式（Ｉｄ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕、式（Ｉｇ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，４Ｓ，（＋）］−１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕または式（Ｉｈ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，４Ｒ，（−）］−１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕を含有する活性抑制剤は、前記外用剤において、メントールなどのＴＲＰＡ１を活性化する成分の代わりに清涼化剤として用いることもできる。
【００６８】
以上説明したように、前記外用剤は、ヒトの皮膚に対する不快な刺激を低減することができることから、不快な刺激を感じやすい敏感肌用の外用剤として有用である。
【実施例】
【００６９】
以下に実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は、かかる実施例のみに限定されるものではない。
【００７０】
（実施例１）
水酸基を有するビシクロヘプタン構造を有するビシクロヘプタンオール化合物の１つである式（Ｉａ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕と式（Ｉｂ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕とのラセミ混合物をその濃度が５ｍＭとなるように２５℃で溶媒Ａ〔組成：１４０ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭ塩化マグネシウム、２ｍＭ塩化カルシウム、１０ｍＭグルコースおよび１０ｍＭヘペス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）〕に溶解させ、活性抑制剤を得た。
【００７１】
（実施例２）
実施例１において、式（Ｉａ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕と式（Ｉｂ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕とのラセミ混合物を用いる代わりに、式（Ｉｃ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕と式（Ｉｄ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕とのラセミ混合物を用いたことを除き、実施例１と同様の操作を行なうことにより、活性抑制剤を得た。
【００７２】
（実施例３）
実施例１において、式（Ｉａ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕と式（Ｉｂ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕とのラセミ混合物を用いる代わりに、水酸基を有するビシクロヘプタン構造を有するビシクロヘプタンオール化合物の１つである式（Ｉｅ）で表わされる化合物〔（１Ｓ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オール〕を用いたことを除き、実施例１と同様の操作を行なうことにより、活性抑制剤を得た。
【００７３】
（比較例１）
１，８−シネオールをその濃度が５ｍＭとなるように２５℃で溶媒Ａ〔組成：１４０ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭ塩化マグネシウム、２ｍＭ塩化カルシウム、１０ｍＭグルコースおよび１０ｍＭヘペス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）〕に溶解させ、試料を得た。
【００７４】
（比較例２）
比較例１において、１，８−シネオールを用いる代わりに、ＴＲＰＡ１の活性との関連性がないグリセリンを用いたことを除き、実施例１と同様に操作を行ない、試料を得た。
【００７５】
（製造例１）
ヒトＴＲＰＡ１をコードするｃＤＮＡ〔配列番号：１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿００７３３２）に示される塩基配列の６３位〜３８８８位のポリヌクレオチド〕を、哺乳動物細胞用ベクター〔インビトロジェン社製、商品名：ｐｃＤＮＡ３．１（＋）〕のクローニングサイトに挿入し、ヒトＴＲＰＡ１発現ベクターを得た。得られたヒトＴＲＰＡ１発現ベクター１μｇと、遺伝子導入用試薬〔インビトロジェン社製、商品名：ＰＬＵＳ  Ｒｅａｇｅｎｔ（プラスリージェント）、カタログ番号：１１５１４−０１５〕６μＬとを混合し、混合物Ｉを得た。また、遺伝子導入用カチオン性脂質〔インビトロジェン社製、商品名：リポフェクタミン（登録商標）、カタログ番号：１８３２４−０１２〕４μＬと、血清使用量低減培地〔インビトロジェン社製、商品名：ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）Ｉ  Ｒｅｄｕｃｅｄ−Ｓｅｒｕｍ  Ｍｅｄｉｕｍ（カタログ番号：１１０５８０２１）〕２００μＬとを混合し、混合物ＩＩを得た。
【００７６】
また、５体積％二酸化炭素雰囲気中、３７℃に維持された直径３５ｍｍのシャーレ上の１０質量％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地中において、５×１０５細胞のＨＥＫ２９３細胞を７０％のコンフルエンシーになるまで培養した。
【００７７】
得られた細胞培養物に、前記混合物Ｉと混合物ＩＩとを添加することにより、ＨＥＫ２９３細胞に前記ヒトＴＲＰＡ１発現ベクターを導入し、ＴＲＰＡ１発現細胞を得た。
【００７８】
（試験例１）
製造例１で得られたＴＲＰＡ１発現細胞を、細胞内カルシウムイオン測定用試薬であるＦＵＲＡ  ２−ＡＭ（インビトロジェン社製）を最終濃度５μＭで含む１０質量％ウシ胎仔血清含有ＤＭＥＭ培地中、室温で６０分間インキュベーションすることにより、前記ＴＲＰＡ１発現細胞にＦＵＲＡ  ２−ＡＭを導入し、ＦＵＲＡ  ２−ＡＭ導入ＴＲＰＡ１発現細胞を得た。
【００７９】
得られたＦＵＲＡ  ２−ＡＭ導入ＴＲＰＡ１発現細胞を循環定温チャンバー付蛍光測定装置〔浜松ホトニクス（株）製、商品名：ＡＲＧＵＳ−５０〕の各チャンバーに入れた。その後、チャンバー中のＦＵＲＡ  ２−ＡＭ導入ＴＲＰＡ１発現細胞を、溶媒Ａ〔組成：１４０ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭ塩化マグネシウム、２ｍＭ塩化カルシウム、１０ｍＭグルコースおよび１０ｍＭヘペス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）〕で洗浄した。
【００８０】
つぎに、洗浄後のＦＵＲＡ  ２−ＡＭ導入ＴＲＰＡ１発現細胞が入ったチャンバーにＴＲＰＡ１のアゴニストを入れ、ＦＵＲＡ  ２−ＡＭ導入ＴＲＰＡ１発現細胞と前記アゴニストとを混合した。なお、前記アゴニストとして、１ｍＭメントールを含有する溶媒Ａを用いた。
【００８１】
その後、チャンバーにおいて、励起波長３４０ｎｍにおけるＴＲＰＡ１発現細胞に導入され、かつ細胞内のカルシウムイオンに結合したＦＵＲＡ  ２−ＡＭに基づく蛍光の強度（以下、「蛍光強度３４０ｎｍ」という）および励起波長３８０ｎｍにおけるＴＲＰＭ１発現細胞に導入されたＦＵＲＡ  ２−ＡＭに基づく蛍光の強度（以下、「蛍光強度３８０ｎｍ」という）を測定した。
【００８２】
測定された蛍光強度３４０ｎｍおよび蛍光強度３８０ｎｍから、Δ蛍光強度比アゴニストを算出した。前記Δ蛍光強度比試料は、式（ＩＩ）：
【００８３】
【数１】
2014065690.tif 000013
【００８４】
に基づいて算出した。なお、前記対照は、溶媒Ａである。
【００８５】
また、前記アゴニストを単独で用いる代わりに、被験試料として、実施例１で得られたＴＲＰＡ１活性抑制剤、実施例２で得られたＴＲＰＡ１活性抑制剤、実施例３で得られたＴＲＰＡ１活性抑制剤、比較例１で得られた試料または比較例２で得られた試料を用いたことを除き、前記アゴニストを用いた場合と同様にして蛍光強度３４０ｎｍおよび蛍光強度３８０ｎｍを測定した。
【００８６】
測定された蛍光強度３４０ｎｍおよび蛍光強度３８０ｎｍから、Δ蛍光強度比被験試料を算出した。前記Δ蛍光強度比被験試料は、式（ＩＩＩ）：
【００８７】
【数２】
2014065690.tif 000014
【００８８】
に基づいて算出した。
【００８９】
算出されたΔ蛍光強度比アゴニストとΔ蛍光強度比被験試料とから、ＴＲＰＡ１の活性に対する抑制率を算出した。なお、抑制率は、式（ＩＶ）：
【００９０】
抑制率（％）＝（Δ蛍光強度比アゴニスト−Δ蛍光強度比被験試料）／Δ蛍光強度比アゴニスト×１００    （ＩＶ）
【００９１】
にしたがって算出した。
【００９２】
試験例１において、被験試料の種類と抑制率との関係を調べた結果を図１に示す。図中、１は被験試料として実施例１で得られたＴＲＰＡ１活性抑制剤を用いたときのＴＲＰＡ１活性抑制率、２は被験試料として実施例２で得られたＴＲＰＡ１活性抑制剤を用いたときのＴＲＰＡ１活性抑制率、３は被験試料として実施例３で得られたＴＲＰＡ１活性抑制剤を用いたときのＴＲＰＡ１活性抑制率、４は被験試料として比較例１で得られた試料を用いたときのＴＲＰＡ１活性抑制率、５は被験試料として比較例２で得られた試料を用いたときのＴＲＰＡ１活性抑制率を示す。
【００９３】
図１に示された結果から、実施例１で得られたＴＲＰＡ１活性抑制剤を用いたときのＴＲＰＡ活性抑制率（図１中、１）、実施例２で得られたＴＲＰＡ１活性抑制剤を用いたときのＴＲＰＡ１活性抑制率（図１中、２）および実施例３で得られたＴＲＰＡ１活性抑制剤を用いたときのＴＲＰＡ１活性抑制率（図１中、３）は、それぞれ、約９０％、約９２％および９１％であることがわかる。一方、対照としてのグリセリンが含まれた比較例２で得られた試料を用いたときの抑制率（図中、５）は、０％以下であることから、実施例１で得られた活性抑制剤に含まれる式（Ｉａ）で表わされる化合物〔［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オール〕と式（Ｉｂ）で表わされる化合物〔［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オール〕とのラセミ混合物、実施例２で得られた活性抑制剤に含まれる［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物および実施例３で得られた活性抑制剤に含まれる（１Ｓ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オールは、いずれも、ブロッカーとして働き、メントールによって引き起こされるＴＲＰＡ１の活性化によって発現するＴＲＰＡ１の活性を抑制することが示唆される。また、比較例１で得られた試料を用いたときのＴＲＰＡ１活性抑制率は、約７１％であることから、実施例１で得られた活性抑制剤に含まれる［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物、実施例２で得られた活性抑制剤に含まれる［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物および実施例３で得られた活性抑制剤に含まれる（１Ｓ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オールは、１，８−シネオールと比べ、ＴＲＰＡ１の活性をより効果的に抑制することがわかる。
【００９４】
また、ビシクロヘプタンオール化合物として、［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物、［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物または（１Ｓ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オールを用いる代わりに、当該［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物、［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物または（１Ｓ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オール以外のビシクロヘプタンオール化合物を用いたときも、［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物、［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物および（１Ｓ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オールを用いたときと同様の傾向が見られる。
【００９５】
（試験例２）
試験例１において、メントールの代わりに、ＴＲＰＡ１に対する既知のアゴニストであるアリルイソチオシアナートを用い、当該アリルイソチオシアナートの濃度が２０μＭとなるように調整したことを除き、試験例１と同様の操作を行ない、実施例１で得られた活性抑制剤、実施例２で得られた活性抑制剤および実施例３で得られた活性抑制剤それぞれを用いたときの抑制率を算出する。その結果、実施例１で得られた活性抑制剤に含まれる［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物、実施例２で得られた活性抑制剤に含まれる［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物および実施例３で得られた活性抑制剤に含まれる（１Ｓ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オールは、いずれも、ブロッカーとして働き、アリルイソチオシアナートによって引き起こされるＴＲＰＡ１の活性化により発現するＴＲＰＡ１の活性を抑制することが示唆される。
【００９６】
また、ビシクロヘプタンオール化合物として、［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物、［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物または（１Ｓ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オールを用いる代わりに当該［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物、［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物または（１Ｓ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オール以外のビシクロヘプタンオール化合物を用いたときも、［１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｓ，２Ｒ，４Ｓ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物、［１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，（＋）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２β−オールと［１Ｒ，２Ｒ，４Ｒ，（−）］−１，７，７−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２α−オールとのラセミ混合物または（１Ｓ）−１，２，７，７−テトラメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オールを用いたときと同様の傾向が見られる。
【００９７】
以上の結果から、式（Ｉ）で表わされる化合物などの水酸基を有するビシクロヘプタン構造を有するビシクロヘプタンオール化合物は、ＴＲＰＡ１の活性を抑制することから、ＴＲＰＡ１の活性抑制剤として有用であることが示唆される。また、前記ビシクロヘプタンオール化合物は、ＴＲＰＡ１を介する不快な刺激を抑制することができることから、メントールなどのＴＲＰＡ１を活性化する成分を含む外用剤において、当該成分によるＴＲＰＡ１の活性化を抑制する有効成分として有用であることが示唆される。
【図１】
2014065690.tif 000017
【配列表】
2014065690000001.app