(57)【要約】【課題】食品あるいは天然の植物に由来する物質であって、脂肪細胞からの、アディポネクチンの産生を促進する物質を提供する。【解決手段】桑葉抽出物、マンゴスチン果皮抽出物、α−マンゴスチン、γ−マンゴスチン、カカオ種子抽出物、カカオ外皮抽出物、高麗人参抽出物またはライチポリフェノールから選ばれる１種類、または２種以上の混合物からなるアディポネクチン産生促進剤を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
桑葉抽出物、マンゴスチン果皮抽出物、α−マンゴスチン、γ−マンゴスチン、カカオ種子抽出物、カカオ外皮抽出物、高麗人参抽出物またはライチ由来ポリフェノールから選ばれる１種類、または２種以上の混合物からなるアディポネクチン産生促進剤。
【請求項２】
請求項の１のアディポネクチン産生促進剤を含む飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はアディポネクチン産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
アディポネクチンは脂肪細胞で産生されるホルモンの一種であり、脂肪組織中に特異的に発現する遺伝子ａｐＭ１（ａｄｉｐｏｓｅ  ｍｏｓｔ  ａｂｕｎｄａｎｔ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ）にコードされ、２４４個のアミノ酸より成り、血中では多量体を形成する。
【０００３】
内臓脂肪の細胞内に存在するアディポネクチン遺伝子と肥満には相関性があることが報告されている。アディポネクチンの遺伝子は内臓脂肪内に存在し、肥満になれば減少しやすく、減少すれば、高コレストロール血漿、糖尿病、脂質異常（高ＴＧ、低ＨＤＬコレステロール血漿）高血圧、メタボリックシンドロームなどの複合型リスク症候群を引き起こす（非特許文献１）。
【０００４】
本発明は、食品あるいは天然の植物に由来する物質であって、脂肪細胞からの、アディポネクチンの産生を促進する物質を提供する。本発明の提供により、高コレストロール血漿、糖尿病、脂質異常、高血圧、メタボリックシンドローム、肥満などの予防、改善が期待される。
【０００５】
本発明の実施例で使用した、食品あるいは天然の植物について、以下に説明をする。
【０００６】
桑（Ｍｕｌｂｅｒｒｙ）は、クワ科（Ｍｏｒａｃｅａｅ）、クワ属（Ｍｏｒｕｓ）の植物である。
【０００７】
特許文献１はクワ属植物由来のＣＢ１受容体阻害活性物質を開示し、その物質が、抗肥満効果を有すると開示する。特許文献２は桑葉が糖吸収抑制物質である旨を記載する。特許文献３は、桑葉をデキストリンに吸着させ、粉末化させた、血糖値情報抑制組成物を開示する。
【０００８】
マンゴスチン（Ｇａｒｃｉｎｉａ  ｍａｎｇｏｓｔａｎａ  Ｌ．）はオトギリソウ科（Ｈｙｐｅｒｉｃａｃｅａｅ）フクギ属（Ｇａｒｃｉｎｉａ）の植物である。
【０００９】
マンゴスチンは、抗肥満効果があるという説がある。マンゴスチンのアディポネクチン産生促進効果については報告がないが、特許文献４は、クロモン類の投与によりアディポネクチン産生を増大する方法が記載され、さらに、クロモンがガルシニア属を含む植物から抽出されることが記載されている。ただし、マンゴスチンに関しては開示はない。
また、特許文献５はＧａｒｃｉｎｉａ属植物の植物体に含まれるポリイソプレニル化ベンゾフェノン誘導体を含有するリパーゼ阻害活性を有する抗肥満剤を開示する。
【００１０】
カカオ（Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ  ｃａｃａｏ  Ｌ．）は、アオイ科  （Ｍａｌｖａｃｅａｅ）カカオ属  （Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ）の植物である。カカオ種子とは、カカオの果実の種子を指す。カカオ外皮とは、カカオ種子に付着する皮（シェル）を指す。カカオの外皮はカカオハスクと呼ばれることもある。
【００１１】
高麗人参（Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ  Ｃ．Ａ．Ｍｅｙ．）は、オタネニンジンともいい、ウコギ科  （Ａｒａｌｉａｃｅａｅ）トチバニンジン属  （Ｐａｎａｘ）の植物である。
オタネニンジンと糖尿病との関連についての報告（特許文献６、７、８など）あるいは、血糖値の効果に関する報告（特許文献９、１０、１１）は複数存在する。
【００１２】
また、特許文献１２はニンジンエキスを含有する肥満改善剤が記載されている。また、特許文献１３はオタネニンジンの花抽出物を含有する抗肥満剤が記載されている。
【００１３】
ライチ（Ｌｉｔｃｈｉ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）はムクロジ科（  Ｓａｐｉｎｄａｃｅａ）ｅレイシ属（Ｌｉｔｃｈｉ）の植物である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】特開２０１０−０８３７９６号公報
【特許文献２】特開２０１０−２８５４２５号公報
【特許文献３】特開２０１１−０５７７０号公報
【特許文献４】特表２０１０−５１５７４３号公報
【特許文献５】特開２０００−４４４６８号公報
【特許文献６】特開昭６１−２５１６２５号公報
【特許文献７】特開２０１０−１３２６２５号公報
【特許文献８】特公平３−０６９３２８号公報
【特許文献９】特公平５−０３２０２９号公報
【特許文献１０】特許第２６０２２９５号公報
【特許文献１１】特開２０１０−２７５１９３号公報
【特許文献１２】特開２００８−１８９６０９号公報
【特許文献１３】特開２０１０−１５５７８７号公報
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ｈｏｔａｍｉｓｌｉｇｉｌ  ＧＳ．、１（２）：１０７（２００５）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明では、食品あるいは天然の植物に由来する物質であって、脂肪細胞からの、アディポネクチンの産生を促進する物質を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明は、桑葉抽出物、マンゴスチン果皮抽出物、α−マンゴスチン、γ−マンゴスチン、カカオ種子抽出物、カカオ外皮抽出物、高麗人参抽出物またはライチポリフェノールから選ばれる１種類、または２種以上の混合物からなるアディポネクチン産生促進剤を提供する。
【発明の効果】
【００１８】
本発明の、アディポネクチン産生促進剤は、糖尿病、動脈硬化、メタボリックシンドロームの予防、抑制、肥満の予防、抑制等の効果が期待される。
本発明のアディポネクチン産生促進剤は、古来より食されている食品、あるいは天然の植物に由来する物質であるから、人体に対する安全性が高いと考えられ、また、消費者に対するイメージも良い。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明は、桑葉抽出物、マンゴスチン果皮抽出物、α−マンゴスチン、γ−マンゴスチン、カカオ種子抽出物、カカオ外皮抽出物、高麗人参抽出物またはライチ由来ポリフェノールから選ばれる１種類、または２種以上の混合物からなるアディポネクチン産生促進剤を提供する。
また、本発明は、上記アディポネクチン産生促進剤を含む飲食品を提供する。
【００２０】
桑葉抽出物とは、桑の葉から、溶媒により抽出された抽出物をいう。
マンゴスチン果皮抽出物とは、マンゴスチン果皮から溶媒により抽出された抽出物をいう。
【００２１】
α−マンゴスチンとは、次の式１の構造をもつ化合物であり、マンゴスチン果皮より抽出が可能である。
【化１】
2014034562.tif 000002
【００２２】
γ−マンゴスチンとは、次の式２の構造をもつ化合物であり、マンゴスチン果皮より抽出が可能である。
【化２】
2014034562.tif 000003
【００２３】
カカオ種子抽出物は、カカオ種子あるいはカカオ種子に由来する材料より抽出される。すなわち、カカオ種子抽出物は、カカオ種子、カカオ豆（カカオ種子から発酵乾燥工程を経て得られたもの）、カカオニブ（カカオ豆から外皮を取り除いたもの）、カカオ外皮、カカオマス（カカオ豆の胚乳部分を粉砕焙煎してすり潰したもの）、カカオバター（カカオマスから抽出された油脂）、ココアケーキ（カカオニブまたはカカオマスから油脂を一部除いたもの）、ココアパウダー（ココアケーキを粉砕したもの）を原料とした抽出物を含む。カカオ外皮抽出物はカカオの外皮から抽出される。高麗人参抽出物は高麗人参の根から抽出される。
【００２４】
なお、本明細書で抽出という場合、抽出方法は特に限定されないが、方法の例としては、原料を溶媒に浸漬し、抽出し、濾過後、濾液として得る方法を挙げられる。濾液を減圧乾燥して濃縮して、あるいは粉末としてもよいし、さらに精製してもよい。精製の方法としては、抽出に用いられる溶媒は、特に限定されないが、好ましくは極性溶媒であり、好ましい例としてメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、２−プロパノール、ｎ―ブタノール、アセトン、酢酸エチル、および水からなる群から選択される極性溶媒あるいはそれらの混合溶媒を上げることができる。経口投与剤又は飲食品として用いることを考慮すると、抽出溶剤として、エタノール、又は水とエタノールとの組み合わせを用いることが安全性の点において好ましい。抽出の温度や時間は溶媒の種類、原料の状態（生または乾燥品、粉砕物または粉末など）によって適宜決めることができる。
【００２５】
ライチ由来ポリフェノールはライチ果実より得ることができる。ライチ由来ポリフェノールはオリゴマーに低分子化されていてもよい。ライチ由来ポリフェノールの製造については、再表２００６／０９０８３０を参照することができる。
【００２６】
アディポネクチン産生促進剤は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、アディポネクチンの産生を促進する。
【００２７】
アディポネクチン産生促進剤を含む飲食品とは、本発明のアディポネクチン促進剤を含む、飲食品をいう。飲食品は限定されることなく、菓子、冷菓、乳製品、清涼飲料、酒類、調理済み食品、甘味類、野菜、果物、豆、穀類、肉、魚介類などを含む生鮮食品、油脂類などを例示することができる。
【実施例】
【００２８】
桑葉抽出物、マンゴスチン果皮抽出物、α−マンゴスチン、γ−マンゴスチン、カカオ種子抽出物、カカオ外皮抽出物、高麗人参抽出物、オリゴノール（これら８種の物質を各々、あるいは総称して、試料という場合がある）を対象として、それぞれが有するアディポネクチン産生促進活性を確認した、それらの実験手順および結果を以下に記す。なお、上記８種の他、カワラケツメイ抽出物、ＧＡＢＡ（ｇａｍｍａ−ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ、γアミノ酪酸）、キシリトール、ジンセノサイドＲｇ３（高麗人参抽出物の一種）の４種についても以下に記す細胞を用いたアディポネクチン産生試験を行ったが、これらについては、効果が見られなかったため、結果は省略する。
【００２９】
（１）各試料の調製
桑葉抽出物の調製
桑葉を含水エタノールで５０℃で２時間抽出し濾過した。得られた抽出液を３５℃〜４５℃で減圧濃縮した後、スプレードライで乾燥し、抽出物を得た。
【００３０】
マンゴスチン果皮抽出物の調整
マンゴスチンの果皮を５０％エタノールで８０℃で２回抽出した後、６０℃で減圧濃縮後、得られた抽出液を遠心分離し、沈殿物を得た。この沈殿物を５０％エタノールに再度溶解させた後、６０℃で減圧濃縮を行い、得られた沈殿物を真空乾燥させ、マンゴスチン抽出物を得た。
【００３１】
α−マンゴスチン、γ−マンゴスチンの調製
マンゴスチンの未乾燥果皮１ｋｇを１０Ｌのメタノールに浸漬し、２４時間室温下抽出した。濾過後、濾液をエバポレーターで減圧乾燥し、８０ｇの抽出物を得た。得られた抽出物８０ｇを３５０ｍｌの酢酸エチルに溶解後、２００ｍｌの水で２回洗浄した。酢酸エチル画分をエバポレーターで溶媒を溜去させ２０ｇの乾燥物を得た。この乾燥物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。溶出はヘキサン−酢酸エチル系で漸次、極性をあげるグラジエント溶出を行い、３つの画分を得た。最初に得られた画分（５ｇ）を再度、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル、１０：９０→３０：７０→５０：５０）で精製し、黄色結晶状の試料としてα−マンゴスチン２ｇを得た。２つめの画分（２ｇ）を再度シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル、３０：７０→５０：５０、続いて酢酸エチルのみ、最後に酢酸エチル−メタノール、５０：５０）で精製し、黄色非結晶状の試料としてγ−マンゴスチン５００ｍｇを得た。
【００３２】
カカオ種子抽出物の調製
ココアパウダー２５ｇを２５０ｍｌの５０％エタノールで７０℃で２時間抽出し、ロータリーエバポレーターで抽出液からエタノールを減圧留去凍結乾燥し、５.９７gの抽出物を得た。
【００３３】
カカオ外皮抽出物の調製
カカオ外皮３５ｇを３５０ｍｌの５０％エタノールで７０℃で2時間抽出しロータリーエバポレーターで抽出液からエタノールを減圧留去凍結乾燥し、５．６２ｇの抽出物を得た。
【００３４】
高麗人参抽出物の調製
高麗人参の根茎を粉砕した後、３０％エタノールで攪拌抽出を行い、冷却後、残渣を除いた抽出液を採取した。残渣部分を再度３０％エタノールで攪拌抽出を行い、冷却後残渣を除いた抽出液を採取した。上記の抽出液を混合し、濾過、濃縮した。濃縮したものを噴霧乾燥し、高麗人参抽出物を得た。
【００３５】
ライチ由来ポリフェノールとして、株式会社アミノアップ化学より市販されているオリゴノールを使用した。  
【００３６】
（２）細胞を用いたアディポネクチン産生試験
インフォームドコンセントが得られた被験者（７名）から手術時に嫡出された脂肪組織を得た。脂肪組織をリン酸緩衝生理食塩水で数回洗浄して血管を取り除いた後に細断した。上記のとおり細断した組織に、０．１％ＩＩ型コラゲナーゼ溶液（シグマーアルドリッチ社製）１０ｍｌを加え、３７℃でよく攪拌しながら１時間インキュベートした。その後、メッシュフィルター（ＢＤファルコン社製）でろ過し、１０分間、７８０×ｇで遠心分離した。遠心分離により得られたペレットを脂肪前駆細胞培養用培地（ＰＭ−１、Ｚｅｎ−Ｂｉｏ社製）に懸濁し、３７℃、５％ＣＯ２下でコンフルエントまで増殖させた。これらの細胞を脂肪細胞に分化させるために、３７℃、５％ＣＯ２下、脂肪細胞分化培地（ＤＭ−２、Ｚｅｎ−Ｂｉｏ社製）で処理した。ＤＭ−２処理８日後、水もしくはＤＭＳＯを添加したＡＭ−１培地、又は溶媒に溶解した各試料を添加したＡＭ−１培地（培地中サンプル添加濃度は結果表の「培地添加濃度」に当たる）（ＡＭ−１：脂肪細胞培養用培地、Ｚｅｎ−Ｂｉｏ社製）に交換し、４８時間後と９６時間後の上清アディポネクチン濃度を測定した。上清アディポネクチン濃度は、AlphaLISA human adiponectin assay（Perkinelmer（パーキンエルマー）社製）を用いて、該キットに添付のプロトコールに従い測定した。
【００３７】
各試料はそれぞれ複数の濃度で検討を行った。表１に、加えた試料名と、用いた溶媒を示す。なお、各試料は溶媒に溶解され、これをＡＭ−１培地１５０μｌに１μｌ添加された。表１に各試料の最終添加濃度を示す。対照群では、水またはＤＭＳＯを培地１５０μｌに対し１μｌ加えた。
【００３８】
【表１】
2014034562.tif 000004
【００３９】
指標として、試料添加４８時間後（培養開始から１０日目）のアディポネクチン分泌量（ｄａｙ１０）と、サンプル添加９６時間後（培養開始から１２日目）の分泌量（ｄａｙ１２）、さらにそれらの比をＡＰＲ（Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｒａｔｉｏ）＝ｄａｙ１２／ｄａｙ１０を求めた。
【００４０】
表中ｄａｙ１０の値またはｄａｙ１２の値がコントロール（水もしくはＤＭＳＯ）値よりも高ければ、アディポネクチンの分泌が促進していると考えた。またＡＰＲ値が高いことは、アディポネクチンの分泌が維持されていると考えられる。
【００４１】
（３）細胞を用いたアディポネクチン産生試験の結果
細胞試験の結果を、表２から表１８に記す。ｃａｓｅ番号は、細胞が由来する被験者を示す。なお、表２から表１９における、Ｄａｙ１０、  Ｄａｙ１２における結果の単位はｎｇ／ｍｌである。  Ｄａｙ１０、  Ｄａｙ１２において、対照と比較して、アディポネクチン産生の促進が観察された結果にはアンダーラインを付す。
【００４２】
【表２】
2014034562.tif 000005
【００４３】
【表３】
2014034562.tif 000006
【００４４】
桑葉抽出物は、ｃａｓｅ３７については、１０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌのＤａｙ１０、Ｄａｙ１２において、対照群よりも高いアディポネクチン産生を示した。ｃａｓｅ４５については、すべての濃度において、Ｄａｙ１０、Ｄａｙ１２のいずれも、対照群よりも高いアディポネクチン産生を示した。
【００４５】
【表４】
2014034562.tif 000007
【００４６】
【表５】
2014034562.tif 000008
【００４７】
【表６】
2014034562.tif 000009
【００４８】
マンゴスチン果皮抽出物は、ｃａｓｅ４５については、１μｇ／ｍｌのＤａｙ１０およびＤａｙ１２において、１００μｇ／ｍｌのＤａｙ１２において、対照群よりも高いアディポネクチン産生を示した。
【００４９】
Ｃａｓｅ４９については、１μｇ／ｍｌの１２において、対照群よりも高いアディポネクチン産生を示した。Ｃａｓｅ５１については、１μｇ／ｍｌのＤａｙ１０、Ｄａｙ１２において、対照群よりも高いアディポネクチン産生を示した。
【００５０】
【表７】
2014034562.tif 000010
【００５１】
α−マンゴスチンは０．４μｇ／ｍｌのＤａｙ１０および４μｇ／ｍｌ、０．４μｇ／ｍｌのＤａｙ１２において、対照群よりも高いアディポネクチン産生を示した。γ―マンゴスチンは、０．０２μｇ／ｍｌのＤａｙ１０、Ｄａｙ１２において、対照群よりも高いアディポネクチン産生を示した。
【００５２】
【表８】
2014034562.tif 000011
【００５３】
【表９】
2014034562.tif 000012
【００５４】
カカオ種子抽出物は、ｃａｓｅ３７では、１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌのＤａｙ１０、Ｄａｙ１２において、ｃａｓｅ４５では１００μｇ／ｍｌで、Ｄａｙ１０、Ｄａｙ１２において、対照群よりも高いアディポネクチン産生を示した。
【００５５】
【表１０】
2014034562.tif 000013
【００５６】
【表１１】
2014034562.tif 000014
【００５７】
カカオ外皮抽出物は、ｃａｓｅ３７については、１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌのＤａｙ１０において、対照群よりも高いアディポネクチン産生を示した。Ｃａｓｅ４５については、１００μｇ／ｍｌで、Ｄａｙ１０、Ｄａｙ１２において、対照群よりも高いアディポネクチン産生を示した。
【００５８】
【表１２】
2014034562.tif 000015
【００５９】
【表１３】
2014034562.tif 000016
【００６０】
高麗人参抽出物は、ｃａｓｅ３７については、１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌのＤａｙ１０において、対照群よりも高いアディポネクチン産生を示した。ｃａｓｅ４５については、１０μｇ／ｍｌで、Ｄａｙ１０、Ｄａｙ１２において、対照群よりも高いアディポネクチン産生を示した。
【００６１】
【表１４】
2014034562.tif 000017
【００６２】
オリゴノールは、１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌのＤａｙ１０、Ｄａｙ１２において、対照群よりも高いアディポネクチン産生を示した。
【００６３】
（４）細胞を用いたアディポネクチン産生試験（組み合わせ）
桑葉抽出物とマンゴスチン果皮抽出物をたについては、組み合わせて用いた場合について試験した。結果を以下に示す。
【００６４】
【表１５】
2014034562.tif 000018
【００６５】
【表１６】
2014034562.tif 000019
【００６６】
【表１７】
2014034562.tif 000020
【００６７】
マンゴスチン果皮抽出物１μｇ／ｍｌと桑葉抽出物を１０μｇ／ｍｌ添加した場合、ｃａｓｅ３２及びｃａｓｅ３７については、Ｄａｙ１０、Ｄａｙ１２において、ｃａｓｅ４８については、Ｄａｙ１２において、対照群よりも高いアディポネクチン産生を示した。
【００６８】
【表１８】
2014034562.tif 000021
【００６９】
【表１９】
2014034562.tif 000022
【００７０】
マンゴスチン果皮抽出物１μｇ／ｍｌとオリゴノールを１０μｇ／ｍｌ添加した場合、ｃａｓｅ５２ではＤａｙ１０、Ｄａｙ１２において、ｃａｓｅ４８ではＤａｙ１２において対照群よりも高いアディポネクチン産生を示した。
【００７１】
（５）マンゴスチン果皮抽出物のアディポネクチン産生ｉｎ  ｖｉｖｏ試験
インフォームドコンセントが得られた被験者（２名）に３ヶ月間、マンゴスチン果皮抽出物を一日あたり４００ｍｇと桑葉抽出物を一日あたり６００ｍｇ経口投与した。摂取開始時及び、摂取開始約２ヵ月後、摂取開始約３ヵ月後の血清中アディポネクチン濃度を、AlphaLISA human adiponectin assay（Perkinelmer（パーキンエルマー）社製）を用いて、該キットに添付のプロトコールに従い測定した。
【００７２】
インフォームドコンセントが得られた被験者（４名）に３ヶ月間、マンゴスチン果皮抽出物を一日あたり４００ｍｇを経口投与した。摂取開始時及び、摂取開始約３ヵ月後の血清中アディポネクチン濃度を、AlphaLISA human adiponectin assay（Perkinelmer（パーキンエルマー）社製）を用いて、該キットに添付のプロトコールに従い測定した。試験結果を表２０に示す。
【００７３】
【表２０】
2014034562.tif 000023
【００７４】
表２０では、ＣＡＳＥ３７、  ＣＡＳＥ３９の両者において、摂取開始時と比較して、摂取２ヶ月後、３ヵ月後の血清中アディポネクチン量は増加していた。
また、表に示さない、Ｃａｓｅ３７は、摂取開始時は９．０８、約３ヶ月後は８．４３、Ｃａｓｅ３９は、摂取開始時は６．６３、約３ヶ月後は７．１７であり、いずれにおいても、マンゴスチン抽出物の摂取後のアディポネクチンの平均値は、摂取前と比べて高かった。  なお、表２１に４名の平均値を示す。
【００７５】
【表２１】
2014034562.tif 000024