(57)【要約】【課題】薬剤誘発性蛋白尿を的確に予測できる検査方法を提供する。【解決手段】ヒト白血球抗原であるHLA-DRB1*08:02又はDQB1*04:02を検出する。薬剤誘発性に起因する薬剤は、ブシラミン、金チオリンゴ酸ナトリウム、D-ペニシラミン等である。蛋白尿は関節リウマチに伴う蛋白尿である。蛋白尿の発症の可能性が高いと特定された患者には、蛋白尿を誘発しにくい薬剤の投与や治療方針を選択し、決定する機会を得ることができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト白血球抗原であるHLA-DRB1*08:02又はDQB1*04:02を検出することを特徴とする、薬剤誘発性蛋白尿を予測するための検査方法。
【請求項２】
薬剤誘発性に起因する薬剤がブシラミンである請求項１に記載の薬剤誘発性蛋白尿を予測するための検査方法。
【請求項３】
薬剤誘発性に起因する薬剤が金チオリンゴ酸ナトリウムである請求項１に記載の薬剤誘発性蛋白尿を予測するための検査方法。
【請求項４】
薬剤誘発性に起因する薬剤がD-ペニシラミンである請求項１に記載の薬剤誘発性蛋白尿を予測するための検査方法。
【請求項５】
前記蛋白尿が関節リウマチに伴う蛋白尿である請求項１乃至４の何れか１項に記載の薬剤誘発性蛋白尿を予測するための検査方法。
【請求項６】
HLA-DRB1*08:02又はDQB1*04:02からなる薬剤誘発性蛋白尿の予測検査用ヒト白血球抗原マーカー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬剤誘発性蛋白尿を予測するための検査方法、及び、薬剤誘発性蛋白尿の予測検査のためのマーカーに関する。
【背景技術】
【０００２】
関節リウマチ（RA：rheumatoid arthritis）は全身性の炎症性疾患で、関節の破壊を引き起こす。抗リウマチ薬には蛋白尿（腎障害の指標となる。）を起こす薬剤が多く知られており、関節リウマチの経過中に蛋白尿が認められることがある。蛋白尿は軽微なものからネフローゼを来たすものまであるが、組織にて糸球体へのアミロイド蛋白の沈着が高度な場合はより大量の蛋白尿を生じやすく、一方で、血管壁優位にアミロイドが沈着する場合は蛋白尿が軽微であっても腎機能低下が生じやすい。
【０００３】
血液中の蛋白が漏出すると、通常蛋白の50％以上を占めるアルブミンという蛋白が減少し、組織に余分な水分が残り、組織にあふれる状態であるむくみが発生する。また肺に余分な水分があふれると息苦しさが発生する。
【０００４】
高頻度に蛋白尿をきたす抗リウマチ薬としては、例えば、ブシラミン(Bucillamine)、D-ペニシラミン(Penicillamine)、金チオリンゴ酸ナトリウム(Sodium Aurothiomalate)等が知られている。
【０００５】
非特許文献１及び２には、ヨーロッパ系人種において、金チオリンゴ酸ナトリウム又はD-ペニシラミンによる蛋白尿発症のリスクと、HLA(ヒト白血球抗原)-DR3が関連することが記載されているが、その関連性の程度は十分なものとはいえない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Speerstra et al. J Rheumatol. 1983;10:948-53.
【非特許文献２】Pachoula-Papasteriades et al. Dis Markers. 1986;4:35-41.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、薬剤誘発性蛋白尿を的確に予測できる検査方法及びヒト白血球抗原マーカーを提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明にかかる薬剤誘発性蛋白尿を予測するための検査方法は、ヒト白血球抗原であるHLA-DRB1*08:02又はDQB1*04:02を検出することを特徴とする。
【０００９】
本発明にかかる薬剤誘発性蛋白尿の予測検査用ヒト白血球抗原マーカーは、HLA-DRB1*08:02又はDQB1*04:02からなることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、薬剤誘発性蛋白尿を的確に予測することができる。即ち、薬剤誘発性蛋白尿の発症可能性が高い患者を特定することができるので、本発明により特定された患者には、蛋白尿を誘発しにくい薬剤の投与や治療方針を選択し、決定する機会を得ることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、添付の図面を参照して本発明の実施形態について具体的に説明するが、当該実施形態は本発明の原理の理解を容易にするためのものであり、本発明の範囲は、下記の実施形態に限られるものではなく、当業者が以下の実施形態の構成を適宜置換した他の実施形態も、本発明の範囲に含まれる。
【００１２】
本発明者らは、ヒト白血球抗原であるHLA-DRB1*08:02又はDQB1*04:02を検出することにより、薬剤誘発性蛋白尿を的確に予測できることを見いだして、この新知見に基づいて発明を完成させた。
【００１３】
本実施形態において蛋白尿を誘発させる薬剤は、特に限定されるものではないが、例えば、ブシラミン、金チオリンゴ酸ナトリウム、D-ペニシラミン等である。またこれら以外にも、例えば、メトトレキサート、ブシラミン、サラゾスルファピリジン、レフルノミド、タクロリムス、ミゾリビン、オーラノフィン、インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、トシリズマブ、アバタセプト、ゴリムマブ等についても、蛋白尿を誘発させる薬剤の対象とすることができる。
【００１４】
本実施形態において、薬剤誘発性蛋白尿とは、薬剤により誘発される蛋白尿であればよく特に限定されないが、特に好ましくは、関節リウマチ（RA）患者における、薬剤により誘発される蛋白尿である。
【００１５】
ヒトMHC分子であるHLA分子は、第６染色体短腕部の6p21.3の約4,000kbp内に存在するMHC領域によりコードされた遺伝子群に支配される遺伝子産物である。このMHC領域は、殆どの真核細胞膜表面上に表現されるHLA-A,B,C抗原系を支配するクラスI遺伝子領域と、B細胞やマクロファージ等の限定された組織あるいは細胞にしか表現されていない細胞特異的なHLA-DP,DQ,DR抗原系を支配するクラスII 遺伝子領域、および補体成分と21-ヒドロキシラーゼ等を支配するクラスIII遺伝子領域より構成されている。HLAクラスII分子は、MHCクラスII遺伝子領域にコードされる27kDaの膜結合型蛋白α鎖と、分子量34kDaの膜結合型蛋白β鎖とによって構成されている。クラスII分子β鎖は、遺伝的多型性に富むことが知られている。
【００１６】
HLA-DRB1とDQB1の遺伝子座は、６番染色体上のすぐ近くに位置しており、強い連鎖不平衡にあるため、DRB1*08:02-DQB1*04:02のハプロタイプを形成している。このハプロタイプを持っていることは、薬剤誘発性蛋白尿の発症リスクに強い関連を有する。
【００１７】
本実施形態において、HLA-DRB1*08:02又はDQB1*04:02の検出方法は、自体公知の方法または今後開発されるあらゆる方法を適用することができる。例えば、HLA-DRB1*08:02又はDQB1*04:02を判別しうるDNA断片（特定DNA断片）をポリメラーゼ連鎖反応（PCR）により増幅し、得られたPCR産物を直接的に同定することで、検出することができる。このような方法による検出は、自体公知の市販の検出用キットを利用して行うことができる。
【００１８】
本発明の検査方法が適用される検体は、特に限定されるものではないが、例えばヒト由来の血液、尿、髄液、口腔粘膜等とすることができる。これら検体は、本実施形態の検査方法に適用されるとき、適当な緩衝液等で適宜希釈して使用することができる。例えば、PCR法を実施する場合、PCRを阻害する物質の影響を避けたり、低減化させることを目的として、適当な緩衝液で検体を適宜希釈して試料とすることが好ましい。ここにおいて、被検者より採取したものを検体といい、検査に供するために前処理したものを便宜上試料といい、それぞれ区別して用いられる。本実施形態の検査方法が適用される試料として、また、上記試料から調製した核酸試料を使用することもできる。核酸試料の調製は、自体公知の核酸調製法により実施することができる。核酸試料として、好ましくはゲノムDNAを用いる。調製した核酸は直接検出に使用してもよく、あるいは分析前に所望の領域をPCR又はその他の増幅法を用いることにより酵素的に増幅してもよい。
【実施例】
【００１９】
以下、実施例に基づいて本発明を詳細に説明する。本実施例の試験は、独立行政法人国立病院機構相模原病院の倫理委員会の承認を得て同院において遺伝子情報を扱う臨床研究として、「ヒトゲノム・遺伝子解析研究に関する倫理指針」および「臨床研究に関する倫理指針」を遵守して、行ったものである。
【００２０】
本実施例では、各種HLAにつき、ブシラミン誘発性蛋白尿の既往のあるRA患者と、ブシラミン誘発性蛋白尿の既往のないRA患者とを比較することにより、ブシラミン誘発性蛋白尿への関連性を検討した。
【００２１】
白血球の抗原型は、WAKFlow(R) HLAタイピング試薬（Wakunaga）を用いて測定した。具体的には、RA患者より末梢静脈血約７mlを採取し、ゲノムDNAを抽出し、抽出したゲノムDNAからPCR-SSO法によりHLAをタイピングし、関連解析を行なった。
【００２２】
下記表１に示すように、ブシラミン誘発性蛋白尿の既往のある日本人RA患者２５人と、ブシラミン誘発性蛋白尿の既往のない日本人RA患者４６０人とについて、調べた。
【００２３】
【表１】
2014235058.tif 000002
【００２４】
既往のあるRA患者と、既往のないRA患者のブシラミンの平均服用量±SDはそれぞれ、150±68 mg/日、157±65 mg/日、ブシラミン投与の平均投与期間±SDはそれぞれ0.6±0.5年、2.4±3.2年であった。
【００２５】
上記表１に示されるように、ブシラミンによる蛋白尿はHLA-DRB1*08:02とDQB1*04:02に強く関連することが新たに明らかになった。また、DRB1*08:02-DQB1*04:02 ハプロタイプ(P=7.65X10-7, オッズ比48.11, 95%信頼区間 11.17-207.12)にも強い関連を示した。
【００２６】
これにより、HLA-DRB1*08:02又はDQB1*04:02をもつRA患者では、ブシラミン投与による薬剤誘発性蛋白尿を起こしやすいと考えられるところ、このような患者に対してはブシラミンの投与を控えることで、薬剤誘発性蛋白尿の発症を減少させることが可能になると考えられる。
【００２７】
HLA-DRB1マーカーを用いたブシラミン誘発性蛋白尿の発症予測法の感度は28.0%、特異度は98.5%、陽性尤度比は18.4、陰性尤度比は0.731であった。ブシラミン誘発性蛋白尿の有病率は5.3%であるという報告(Nephron Clin Pract. 2006;104:c15)に基づくと、DRB1*08:02陽性例のリスクは50.5%に、陰性例では3.9%になると推測される。また、1例のブシラミン誘発性蛋白尿発症を防ぐためにスクリーニングをする必要がある症例数は74例となる。これは実用に耐える十分低い値であると考えられ、HLAマーカーを用いたブシラミン誘発性蛋白尿の発症予測法は薬剤選択の重要な情報となりうることが判明した。
【００２８】
なお、上記の実施例では薬剤としてブシラミンを使用した例を記載しているが、ブシラミンは、D-ペニシラミン及び金チオリンゴ酸ナトリウムとSH化合物である点において共通しており、また、ブシラミンは、D-ペニシラミン及び金チオリンゴ酸ナトリウムと慢性腎症を発症させる（参考文献：Am J Kidney Dis. 2002 Apr;39(4):706-12. Nagahama K, Matsushita H, Hara M, Ubara Y, Hara S, Yamada A. Bucillamine induces membranous glomerulonephritis.  Adv Exp Med Biol. 1989;252:247-56. Hall CL. The natural course of gold and penicillamine nephropathy: a longterm study of 54 patients.）点においても共通している。そのため、HLA-DRB1*08:02又はDQB1*04:02をもつRA患者では、D-ペニシラミン又は金チオリンゴ酸ナトリウム投与によっても蛋白尿が誘発されると考えられる。
【産業上の利用可能性】
【００２９】
蛋白尿を誘発しにくい薬剤の投与や治療方針を選択する場合に有益である。