(57)【要約】      （修正有）【課題】新生児を始めとする乳幼児等の幼年期の個体における胃腸の感染性疾患又は胃腸の炎症性疾患の治療に用いられる組成物の提供。【解決手段】１つ以上のα１，２フコシルグリカン類を含む治療用組成物。特にα１，２フコシルグリカン類が、α１，２結合でコア配列に結合したフコース末端を含み、前記コア配列はガラクトース（β１−３）Ｎ−アセチルグルコサミン−Ｒ1又はガラクトース（β１−４）Ｎ−アセチルグルコサミン−Ｒ2（Ｒ1及びＲ2はそれぞれ独立してＨ、小ラジカル、単糖、二糖または多糖である）である治療用組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）個体からの生体サンプル中の少なくとも１つの分泌抗原のレベルを測定すること、および、
（ｂ）少なくとも１つの前記分泌抗原の測定レベルを、所定の値または所定の値の範囲と比較すること、
を含み、少なくとも１つの前記分泌抗原の測定レベルが前記所定の値と異なるか、または、前記所定の値の範囲から外れる場合に、前記個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする、壊死性腸炎のリスクがある個体の同定方法。
【請求項２】
前記個体が乳幼児である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記乳幼児が、新生児、低出生体重児、超低出生体重児、または未熟児である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
少なくとも１つの前記分泌抗原が、α１，２結合フコース抗原および／またはα２，３シアル化抗原を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
少なくとも１つの前記分泌抗原が、Ｈ−１抗原、Ｈ−２抗原、ルイスｂ抗原およびルイスｙ抗原並びにこれらの誘導体からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記誘導体が、ルイスａ、ルイスｘ、ルイスｂまたはルイスｙのシアル化型である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記誘導体が、Ｈ−１、Ｈ−２、ルイスａ、ルイスｘ、ルイスｂまたはルイスｙの硫酸化型である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記生体サンプルが、体液または組織である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記体液が、唾液、血液、血漿、血清、尿、糞便、羊水、粘液、涙、またはリンパ液を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記体液が唾液を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
測定工程がイムノアッセイを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも１つの前記分泌抗原が、Ｈ−１、Ｈ−２、ルイスｂおよびルイスｙ並びにこれらの誘導体からなる群から選択され、前記測定レベルが前記所定の値よりも小さいか、または、前記所定の値の範囲よりも小さい場合に、前記個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記所定の値または前記所定の値の範囲が、分泌者であるとされる個体の集団における少なくとも１つの前記分泌抗原の平均値を示す、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
少なくとも１つの分泌抗原の前記測定レベルが、分泌者のコントロール集団でみられる平均レベルよりも少なくとも１０％小さい場合に、前記個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
少なくとも１つの前記分泌抗原がＨ−２抗原である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
少なくとも１つの前記分泌抗原がシアル化ルイスａまたはその誘導体であり、前記測定レベルが前記所定の値よりも大きいか、または、前記所定の値の範囲よりも大きい場合に、前記個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記乳幼児が、新生児、低出生体重児、超低出生体重児、または未熟児である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記生体サンプルが体液または組織である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記体液が、唾液、血液、血漿、血清、尿、糞便、羊水、粘液、涙、またはリンパ液を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記体液が唾液を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
測定工程がイムノアッセイを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記所定の値または前記所定の値の範囲が、分泌者であるとされる個体の集団における少なくとも１つの前記分泌抗原の平均値を示す、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
（ａ）個体からの生体サンプル中の少なくとも１つの分泌抗原のレベルを測定すること、および、
（ｂ）少なくとも１つの前記分泌抗原の測定レベルを、所定の値または所定の値の範囲と比較すること、
を含み、少なくとも１つの前記分泌抗原の測定レベルが前記所定の値と異なるか、または、前記所定の値の範囲から外れる場合に、前記個体は胃腸障害のリスクがあるとする、胃腸障害のリスクがある個体の同定方法。
【請求項２４】
前記個体が乳幼児である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記乳幼児が、新生児、低出生体重児、超低出生体重児、または未熟児である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
測定される前記抗原が、α１，２結合フコース抗原および／またはα２，３シアル化抗原を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記分泌抗原が、Ｈ−１抗原、Ｈ−２抗原、ルイスｂ抗原およびルイスｙ抗原並びにこれらの誘導体からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記誘導体が、ルイスａ、ルイスｘ、ルイスｂまたはルイスｙのシアル化型である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記誘導体が、ルイスａ、ルイスｘ、ルイスｂまたはルイスｙの硫酸化型である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記生体サンプルが、体液または組織である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３１】
前記体液が、唾液、血液、血漿、血清、尿、糞便、羊水、粘液、涙、またはリンパ液を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記体液が唾液を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
測定工程がイムノアッセイを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項３４】
少なくとも１つの前記分泌抗原が、Ｈ−１、Ｈ−２、ルイスｂおよびルイスｙ並びにこれらの誘導体からなる群から選択され、前記測定レベルが前記所定の値よりも小さいか、または、前記所定の値の範囲よりも小さい場合に、前記個体は胃腸障害のリスクがあるとする、請求項２２に記載の方法。
【請求項３５】
前記所定の値または前記所定の値の範囲が、分泌者であるとされる個体の集団における少なくとも１つの前記分泌抗原の平均値を示す、請求項２２に記載の方法。
【請求項３６】
少なくとも１つの分泌抗原の前記測定レベルが、分泌者のコントロール集団でみられる平均レベルよりも少なくとも１０％小さい場合に、前記個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする、請求項２２に記載の方法。
【請求項３７】
少なくとも１つの前記抗原がＨ−２抗原である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３８】
前記胃腸障害が胃腸性炎症である、請求項２２〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記胃腸障害が胃腸感染症である、請求項２２〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記障害が後期発症敗血症である、請求項２２〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記胃腸感染症が、ブドウ球菌種、黄色ブドウ球菌、大腸菌、連鎖球菌種、エンテロバクター属菌種、クレブシエラ属菌種、バシラス属菌種、セラチア属菌種、カンジダ属菌種、ノーウォークおよび他のノロウイルス、カンピロバクター属菌種、ビブリオ属菌種、バクテロイデス属菌種、クロストリジウム属菌種、またはランブル鞭毛虫の１つ以上による感染を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
（ａ）個体からの生体サンプル中の少なくとも１つの分泌抗原のレベルを測定すること、
（ｂ）少なくとも１つの前記分泌抗原の測定レベルを、所定の値または所定の値の範囲と比較すること、
（ｃ）少なくとも１つの前記分泌抗原の前記測定レベルが前記所定の値と異なるか、または、前記所定の値の範囲から外れる場合に、前記個体は壊死性腸炎のリスクがあるとすること、および、
（ｄ）前記個体が壊死性腸炎のリスクがあるとした場合に、壊死性腸炎のリスクを治療または低減させる工程を行なうこと、
を含む、方法。
【請求項４３】
前記工程（ｄ）が、前記個体に対してα１，２フコシルグルカン類、プロバイオティック有機体またはプレバイオティック剤の１つ以上を投与することを含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
（ａ）患者からの生体サンプル中のＦＵＴ２タンパク質またはＦＵＴ２をコードするｍＲＮＡのレベルを測定すること、および、
（ｂ）ＦＵＴ２タンパク質またはＦＵＴ２をコードするｍＲＮＡの測定レベルを、所定の値または所定の値の範囲と比較すること、
を含み、ＦＵＴ２タンパク質またはＦＵＴ２をコードするｍＲＮＡの測定レベルが前記所定の値または前記所定の値の範囲よりも小さい場合に、前記個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする、壊死性腸炎のリスクがある個体の同定方法。
【請求項４５】
（ａ）個体からの生体サンプルを準備すること、および、
（ｂ）前記個体が、ＦＵＴ２の発現または活性を低下させる遺伝子変異を有するＦＵＴ２遺伝子を有するか否かを決定すること、
を含み、前記個体がＦＵＴ２の発現または活性を低下させる遺伝子変異を有するＦＵＴ２遺伝子を有する場合に、前記個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする、壊死性腸炎のリスクがある個体の同定方法。
【請求項４６】
（ａ）個体からの生体サンプル中の少なくとも１つの分泌抗原のレベルを測定すること、および、
（ｂ）少なくとも１つの前記分泌抗原の測定レベルを、所定の値または所定の値の範囲と比較すること、
を含み、少なくとも１つの前記分泌抗原の測定レベルが前記所定の値と異なるか、または、前記所定の値の範囲から外れる場合に、前記個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする、死亡のリスクがある個体の同定方法。
【請求項４７】
前記個体が乳幼児である、請求項４６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
連邦支援研究に関する記載
本明細書に記載の研究のための財政的支援は連邦政府によってなされたものであり、連邦政府は本発明について何らかの権利を有しうる。
【０００２】
技術分野
本願の開示は医療診断の分野に関し、より詳細には、幼年期における炎症性障害および感染性障害を評価および治療するための材料および方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
幼年期における炎症性障害および感染性障害は、深刻な罹患率および死亡率と関連しうる。周産期に発生する炎症性障害および感染性障害（例えば、壊死性腸炎（ＮＥＣ）、敗血症、および絨毛羊膜炎）は、新生児の死亡率における主要な原因である。ＮＥＣは、新生児に発生する最も一般的な胃腸性の医学的および／または外科的な緊急疾患であり、超低出生体重児の７〜１３％に発生し、腸の損傷および腸管壊死により特徴づけられる。ＮＥＣ全体の死亡率は２０〜４０％の範囲にあり、また、未熟児の死亡率は５０％を超えることが報告されている。症例の約３０％において外科的侵襲を要し、外科的手術に関連した死亡率は５０％もあることが報告されている。
【０００４】
幼年期の炎症性障害および感染性障害の生存者であっても、重篤な短期および長期にわたる病的不全（代謝性合併症、反復性感染、神経発達の不良転帰、および成長の不良転帰など）に罹患する可能性があり、場合によっては繰り返しの外科的侵襲や長期入院を要することもありうる。
【発明の概要】
【０００５】
概要
本明細書に記載の方法は、部分的には、我々が、乳幼児が死亡の高いリスクに瀕しているか否か、または、特定の炎症性もしくは感染性の障害（例えば、壊死性腸炎、敗血症、胃腸感染症、呼吸器感染症、および尿路感染症）を発症しやすいか否かを評価する方法を発見したことに基づいている。
【０００６】
本明細書には：
（ａ）個体からの生体サンプル中の少なくとも１つの分泌抗原のレベルを測定すること、および、
（ｂ）少なくとも１つの前記分泌抗原の測定レベルを、所定の値または所定の値の範囲と比較すること、
を含み、少なくとも１つの前記分泌抗原の測定レベルが前記所定の値と異なるか、または、前記所定の値の範囲から外れる場合に、前記個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする、壊死性腸炎のリスクがある個体の同定方法が開示される。
【０００７】
いくつかの実施形態において：個体は乳幼児（乳幼児は、例えば、新生児、低出生体重児、超低出生体重児、または未熟児である）である；少なくとも１つの分泌抗原は、α１，２結合フコース抗原および／またはα２，３シアル化抗原を含む；少なくとも１つの前記分泌抗原は、Ｈ−１抗原、Ｈ−２抗原、ルイスｂ抗原およびルイスｙ抗原並びにこれらの誘導体からなる群から選択される；当該誘導体は、ルイスａ、ルイスｘ、ルイスｂまたはルイスｙのシアル化型である；当該誘導体は、Ｈ−１、Ｈ−２、ルイスａ、ルイスｘ、ルイスｂまたはルイスｙの硫酸化型である；生体サンプルは、体液または組織である；当該体液は、唾液、血液、血漿、血清、尿、糞便、羊水、粘液、涙、またはリンパ液を含む；当該体液は唾液を含む；測定工程はイムノアッセイを含む；少なくとも１つの分泌抗原はＨ−１、Ｈ−２、ルイスｂおよびルイスｙ並びにこれらの誘導体からなる群から選択され、測定レベルが所定の値よりも小さいか、または、所定の値の範囲よりも小さい場合に、個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする；所定の値または所定の値の範囲は、分泌者であるとされる個体の集団における少なくとも１つの分泌抗原の平均値を示す；少なくとも１つの分泌抗原の測定レベルが、分泌者のコントロール集団でみられる平均レベルよりも少なくとも１０％小さい場合に、個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする；少なくとも１つの分泌抗原はＨ−２抗原である；
ある場合には、少なくとも１つの分泌抗原がシアル化ルイスａまたはその誘導体であり、測定レベルが所定の値よりも大きいか、または、所定の値の範囲よりも大きい場合に、個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする。この方法のある実施形態において：乳幼児は、新生児、低出生体重児、超低出生体重児、または未熟児である；生体サンプルは体液または組織である；当該体液は、唾液、血液、血漿、血清、尿、糞便、羊水、粘液、涙、またはリンパ液を含む；当該体液は、唾液を含む；測定工程はイムノアッセイを含む；所定の値または所定の値の範囲は、分泌者であるとされる個体の集団における少なくとも１つの分泌抗原の平均値を示す。
【０００８】
本明細書にはまた：
（ａ）個体からの生体サンプル中の少なくとも１つの分泌抗原のレベルを測定すること、および、
（ｂ）少なくとも１つの前記分泌抗原の測定レベルを、所定の値または所定の値の範囲と比較すること、
を含み、少なくとも１つの前記分泌抗原の測定レベルが前記所定の値と異なるか、または、前記所定の値の範囲から外れる場合に、前記個体は胃腸障害のリスクがあるとする、胃腸障害のリスクがある個体の同定方法が開示される。
【０００９】
この方法のいくつかの実施形態において：個体は乳幼児である（例えば、新生児、低出生体重児、超低出生体重児、または未熟児）；測定される抗原は、α１，２結合フコース抗原および／またはα２，３シアル化抗原を含む；分泌抗原は、Ｈ−１抗原、Ｈ−２抗原、ルイスｂ抗原およびルイスｙ抗原並びにこれらの誘導体からなる群から選択される；当該誘導体は、ルイスａ、ルイスｘ、ルイスｂまたはルイスｙのシアル化型である；当該誘導体は、ルイスａ、ルイスｘ、ルイスｂまたはルイスｙの硫酸化型である；生体サンプルは、体液または組織である；当該体液は、唾液、血液、血漿、血清、尿、糞便、羊水、粘液、涙、またはリンパ液を含む；当該体液は唾液を含む；測定工程はイムノアッセイを含む；少なくとも１つの分泌抗原は、Ｈ−１、Ｈ−２、ルイスｂおよびルイスｙ並びにこれらの誘導体からなる群から選択され、測定レベルが所定の値よりも小さいか、または、所定の値の範囲よりも小さい場合に、個体は胃腸障害のリスクがあるとする；所定の値または所定の値の範囲は、分泌者であるとされる個体の集団における少なくとも１つの分泌抗原の平均値を示す；少なくとも１つの分泌抗原の測定レベルが、分泌者のコントロール集団でみられる平均レベルよりも少なくとも１０％小さい場合に、個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする；少なくとも１つの抗原はＨ−２抗原である；胃腸障害は胃腸性炎症である；胃腸障害は胃腸感染症である；当該障害は後期発症敗血症である；当該胃腸感染症は、ブドウ球菌種、黄色ブドウ球菌、大腸菌、連鎖球菌種、エンテロバクター属菌種、クレブシエラ属菌種、バシラス属菌種、セラチア属菌種、カンジダ属菌種、ノーウォークおよび他のノロウイルス、カンピロバクター属菌種、ビブリオ属菌種、バクテロイデス属菌種、クロストリジウム属菌種、またはランブル鞭毛虫の１つ以上による感染を含む。
【００１０】
本明細書にはさらに：
（ａ）個体からの生体サンプル中の少なくとも１つの分泌抗原のレベルを測定すること、
（ｂ）少なくとも１つの前記分泌抗原の測定レベルを、所定の値または所定の値の範囲と比較すること、
（ｃ）少なくとも１つの前記分泌抗原の前記測定レベルが前記所定の値と異なるか、または、前記所定の値の範囲から外れる場合に、前記個体は壊死性腸炎のリスクがあるとすること、および、
（ｄ）前記個体が壊死性腸炎のリスクがあるとした場合に、壊死性腸炎のリスクを治療または低減させる工程を行なうこと、
を含む、方法が開示される。
【００１１】
本明細書にはまた：
（ａ）患者からの生体サンプル中のＦＵＴ２タンパク質またはＦＵＴ２をコードするｍＲＮＡのレベルを測定すること、および、
（ｂ）ＦＵＴ２タンパク質またはＦＵＴ２をコードするｍＲＮＡの測定レベルを、所定の値または所定の値の範囲と比較すること、
を含み、ＦＵＴ２タンパク質またはＦＵＴ２をコードするｍＲＮＡの測定レベルが前記所定の値または前記所定の値の範囲よりも小さい場合に、前記個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする、壊死性腸炎のリスクがある個体の同定方法が開示される。
【００１２】
本明細書には：
（ａ）個体からの生体サンプルを準備すること、および、
（ｂ）前記個体が、ＦＵＴ２の発現または活性を低下させる遺伝子変異を有するＦＵＴ２遺伝子を有するか否かを決定すること、
を含み、前記個体がＦＵＴ２の発現または活性を低下させる遺伝子変異を有するＦＵＴ２遺伝子を有する場合に、前記個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする、壊死性腸炎のリスクがある個体の同定方法が開示される。
【００１３】
本明細書には：
（ａ）個体（例えば、乳幼児）からの生体サンプル中の少なくとも１つの分泌抗原のレベルを測定すること、および、
（ｂ）少なくとも１つの前記分泌抗原の測定レベルを、所定の値または所定の値の範囲と比較すること、
を含み、少なくとも１つの前記分泌抗原の測定レベルが前記所定の値と異なるか、または、前記所定の値の範囲から外れる場合に、前記個体は壊死性腸炎のリスクがあるとする、死亡のリスクがある個体の同定方法。
【００１４】
特に規定しない限り、本明細書において用いられるすべての技術用語および科学用語は、本発明の属する技術分野における当業者によって一般的に理解されるのと同一の意味を有するものとする。本発明を実施するためには、本明細書に記載されている方法および材料に類似した、またはこれと均等なものも用いられうるが、以下には適当な方法および材料を記載する。本明細書において言及されているすべての公報類、特許出願、特許、および他の文献は、その全体が参照により引用されている。矛盾が存在する場合には、本願明細書の記載が優先する。また、記載の材料、方法および実施例は例示のためのものにすぎず、何ら限定を意図したものではない。
【００１５】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、添付の図面および以下の詳細な説明に示されている。本発明の他の特徴、目的、および利点は、これらの詳細な説明および図面、並びに特許請求の範囲から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１Ａ】マウス結腸におけるフコシルトランスフェラーゼおよびＦｕｔ２ｍＲＮＡの発現。（Ａ）通常マウス（ＣＯＮＶ）、無菌（ＧＦ）マウスおよび元無菌（ＸＧＦ）マウスにおけるα１，２／３−フコシルトランスフェラーゼ。
【図１Ｂ】マウス結腸におけるフコシルトランスフェラーゼおよびＦｕｔ２ｍＲＮＡの発現。（Ｂ）α１，２／３−フコシルトランスフェラーゼ活性。
【図１Ｃ】マウス結腸におけるフコシルトランスフェラーゼおよびＦｕｔ２ｍＲＮＡの発現。（Ｃ）ＣＯＮＶ、細菌欠乏（ＢＤ）マウスおよび細菌回復（ＸＢＤ）マウスにおけるＦｕｔ２ ｍＲＮＡ。
【図１Ｄ】マウス結腸におけるフコシルトランスフェラーゼおよびＦｕｔ２ｍＲＮＡの発現。（Ｄ）ＵＥＡ−１レクチンおよび対応するノマルスキー画像により検出されたα１，２−フコシル化グリカンの発現。
【図２Ａ】（Ａ）腸でのフコシル化の細菌活性化にはＴＬＲ４の発現が必要である。
【図２Ｂ】（Ｂ）細菌回復マウスにおける粘膜フコシル化の活性化にはＴＬＲ４リガンドで十分である。
【図３Ａ】Ｂ． ｆｒａｇｉｌｉｓによる単一コロニー化は腸のフコシル化を誘導する。
【図３Ｂ】Ｂ． ｆｒａｇｉｌｉｓによる単一コロニー化は腸のフコシル化を誘導する。
【図４】ヒストグラムは、２４例のＮＥＣ例または死亡例（上段）および１６８例のコントロール（下段）を比較するための、光学密度（ＯＤ）として測定された唾液中のＨ−２抗原、Ｌｅｙ抗原、およびｓＬｅａ抗原の分布を示す。８〜１４日目（第２週）に、サンプルを回収した。表は、ＣＡＲＴ分析により同定されたリスク群を比較するための、ＮＥＣまたは死亡の発生率、相対リスクおよびｐ値を示す。三角印は、高リスク群と低リスク群とを最も適切に区別するための、ＣＡＲＴ分析により同定された各抗原の連続値におけるカットポイントを示す（ノード）。表中、このカットポイントは、各抗原に対して付与されている。Ｈ−２についてのみ、ＮＥＣ例および死亡例をコントロールと比較すると、ＯＤ値分布が有意に異なる（Ｐ＝０．００４、ウィルコクソン・マン・ホイットニー検定）。
【図５】ＣＡＲＴ分析の模式図。
【図６】シンシナティＮＩＣＵのＥＬＢＷ（＜１０００ｇ）の乳幼児１９２人から第２週に回収した唾液サンプルからＥＩＡにより測定したＨ−２抗原およびｓＬｅＡ抗原の光学密度（ＯＤ）の散布図；２４人（１２．５％）はＮＥＣに罹患したか、または死亡した。ＣＡＲＴ分析により高リスクセットおよび低リスクセットを体系的に同定して、症例と非症例（non-case）の誤判別を最小化した。高リスクに対するＨ−２のカットポイントは、ＯＤ＜０．６２７と決定された（最小値３８％、非分泌者の乳幼児を含む）。Ｈ−２の高リスク群では、７３人の乳幼児で１８症例が発生した（発生率＝２４．７％）のに対し、１１９人の乳幼児では６症例であった（発生率＝５．０％；相対リスク［ＲＲ］＝４．９、９５％信頼区間［ＣＩ］＝２．０〜１１．８、Ｐ＜０．０００１）。高リスクに対するｓＬｅａのカットポイントは、ＯＣ＞０．３１８と決定された（最高値７６％）。双方の高リスク群中の乳幼児（Ｈ−２低発現およびｓＬｅａの高ＯＤ値により定義される）は、すべての他の乳幼児（低リスクセットとして定義され、１３８人の乳幼児のうち７症例（発生率＝５．１％）を含んでいた）の合計と比較して、５４人の乳幼児のうち１７症例（発生率＝３１．５％）の図に示す高リスクセットを構成した。この分類の組み合わせによって、高リスク対低リスクの非常に有意な分割がもたらされた（ＲＲ＝６．２、９５％ＣＩ ２．７〜１４．１、Ｐ＜０．０００１）。
【図７Ａ】ヒトの「分泌者」であるＦＵＴ２ｍＲＮＡの配列。
【図７Ｂ】ヒトの「分泌者」であるＦＵＴ２ｍＲＮＡの配列。
【図８】ヒトの「分泌者」であるＦＵＴ２ポリペプチドの配列。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
詳細な説明
ＡＢＨおよびルイス組織−血液型抗原は、グリカン鎖の末端構造を示す炭水化物である。Ｈ型の組織−血液型抗原（例えば、Ｈタイプ１抗原およびＨタイプ２抗原、ルイスｂ抗原およびルイスｙ抗原）は、α１，２結合したフコース末端を特徴とする。哺乳動物では、Ｈ型の組織−血液型抗原は、外部環境に直接接触している器官（例えば、上気道、鼻上皮および器官、並びに、陰部−尿路、尿管および膣、並びに、赤血球上、末梢神経系の特定ニューロン、胸腺上皮および皮膚）の上皮細胞などの広範なタイプの組織に見られる。いくつかのヒト集団において、約８０％の個体はＨ型の組織−血液型抗原を体液（例えば、唾液、乳汁、血清、涙、汗および精液）中に可溶型で発現している。これらのヒト集団における残りの約２０％の個体では、体液中の可溶型のＨ型組織−血液型抗原は存在しない型であるか、または極めて低レベルで確認される。これらの２つの表現型は、「分泌者」および「非分泌者」とそれぞれ称されており、可溶型のＨ型組織−血液型抗原は一般に、分泌抗原と称されている。他のヒト集団においては、非分泌者である個体の百分率は２０％未満である。
【００１８】
分泌者と非分泌者の亜集団間の表現型の相違の基礎は、フコシルトランスフェラーゼ２酵素をコードするＦＵＴ２遺伝子における遺伝子多型に起因しており、当該酵素は本技術分野において、α（１，２）フコシルトランスフェラーゼ２、ＥＣ２．４．１．６９、ＳＥ２、ＳＥＣ２、フコシルトランスフェラーゼ−２（分泌者）、ＧＤＰ−Ｌ−フコース：β−Ｄ−ガラクトシド２−α−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ２、ガラクトシド２−α−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ２、分泌者血液型α−２−フコシルトランスフェラーゼ、分泌者因子、および膜貫通タンパク質２とも称されている。このＦＵＴ２遺伝子はまた、本技術分野において分泌遺伝子（Ｓｅ）とも称されている。
【００１９】
ＦＵＴ２の遺伝子産物であるＦＵＴ２は、ＧＤＰ−β−Ｌ−フコースおよびβ−Ｄ−ガラクトシル−Ｒ（ここで、Ｒは、糖タンパク質または糖脂質でありうる）からのα−Ｌ−フコシル−１，２−β−Ｄ−ガラクトシル−Ｒ構造の生成を触媒する。ＦＵＴ２は、通常内胚葉由来の多くの器官（消化管、咽頭、肝、気道、膀胱、尿道および内分泌腺など）で発現しているが、これらの器官の内部では、ＦＵＴ２の発現は組織の分化パターン（例えば、扁平上皮のケラチン化対非ケラチン化、腺組織の管対腺房、並びに、特定の細胞タイプ（例えば、子宮内膜における分泌細胞対繊毛細胞、および唾液腺における粘液細胞対漿液細胞））の関数でもある。分泌者は機能性ＦＵＴ２を発現し、非分泌者は機能性ＦＵＴ２を発現できない。このため、可溶性のＨ型組織−血液型抗原は合成されず、よって非分泌者の体液中には分泌されない。
【００２０】
実施例の欄に記載の実験によれば、分泌者の状態および乳幼児のシアル化グリカンエピトープの発現はＮＥＣおよび死亡のリスクと相関していることが示される。より詳細には、Ｈ−２抗原を唾液中にほとんどまたはまったく発現していない超低出生体重児（ＥＬＢＷ）または未熟児、および高レベルのシアル化ルイスａ抗原を唾液中に発現している乳幼児は、中レベルまたは高レベルのＨ−２抗原を唾液中に発現している乳幼児、またはシアル化ルイスａ抗原を唾液中にほとんどまたはまったく発現していない乳幼児と比較して、ＮＥＣ、後期発症敗血症および死亡といった臨床的な有害転帰を生じる傾向が有意に高いのである。
【００２１】
本明細書には、炎症性障害または感染性障害（例えば、ＮＥＣ、胃腸感染症、または後期発症敗血症）を生じるリスクのある個体の同定に関連した材料および方法が開示されている。より詳細には、乳幼児の分泌者としての状態を評価することによって、当該乳幼児は炎症性障害または感染性障害（例えば、ＮＥＣ、胃腸感染症、または後期発症敗血症）のリスクがあると同定されうる。ある実施形態では、分泌抗原をまったく発現していない乳幼児、または参照サンプルと比較して低レベルの分泌抗原を発現している乳幼児が、ＮＥＣ、胃腸感染症または後期発症敗血症のリスクがあると分類されうる。他の実施形態では、参照サンプルと比較して高レベルのシアル化ルイスａ（ｓＬｅａ）抗原を発現している乳幼児が、ＮＥＣ、胃腸感染症または後期発症敗血症のリスクがあると分類されうる。
【００２２】
本明細書にはまた、炎症性障害または感染性障害（例えば、ＮＥＣ、胃腸感染症、または後期発症敗血症）を生じるリスクのある個体の治療および管理の方法が開示されている。ある実施形態では、分泌者としての状態によってＮＥＣ、胃腸感染症または後期発症敗血症のリスクがあると同定された個体は、保護剤（例えば、プロバイオティック有機体またはα１，２フコシルグリカン類などのプレバイオティック剤）を含む特定の治療法を用いて治療されうる。ある実施形態では、乳幼児に対して供される母乳中の分泌抗原のレベルを評価し、参照サンプルと比較した食物源中の分泌抗原のレベルに基づいて当該乳幼児に対して保護剤（例えば、α１，２フコシルグリカン類、プロバイオティック有機体またはプレバイオティック剤）を含む特定の治療法を施すことにより、分泌者としての状態によってＮＥＣ、胃腸感染症または後期発症敗血症のリスクがあると同定された個体の治療の経過が評価されうる。
【００２３】
分泌抗原
分泌抗原（すなわち、Ｈ型１抗原およびＨ型２抗原、ルイスｂ抗原およびルイスｙ抗原）は、α１，２結合でのフコース末端を含むグリカン類である。本明細書で用いられる場合、「グリカン類」との語は、グリコシド結合（すなわち、１つの単糖の（αまたはβ配置の）アノマー性ヒドロキシ基と第２の単糖における利用可能な任意のヒドロキシ基との間での共有結合であって、さらなる修飾（例えば、さらなる他の単糖単位、ポリペプチド、脂質または他の生体分子もしくは非生体分子との結合）とは無関係である）によって結合された２つ以上のサブユニットである単糖単位の化合物を意味する。少数（典型的には３〜３５またはそれより多く）の構成糖を含有する糖ポリマーは、「オリゴ糖」と称されうる。本明細書に記載のすべてのオリゴ糖は、非還元糖（すなわち、Ｇａｌ）の名称または略称と、それに続くグリコシド結合の配置（αまたはβ）、環結合（１または２）、そして次の糖（すなわち、ＧｌｃＮａｃ）の名称または略称を用いて、分子の還元末端へと向かって記載されている。標準的な糖生物学の命名法のレビューについては、Essentials of Glycobiology,  Varki et al., eds., 1999, Cold Spring Harbor Laboratory Pressを参照されたい。
【００２４】
分泌抗原の具体的な形態は多様であり、部分的には、最小二糖前駆体の構造またはコア配列（特定の抗原はこのコア配列から作製される）に依存しうる。このコア配列は、ラクトタイプＩ構造のガラクトース（β１−３）Ｎ−アセチルグルコサミン−Ｒ（ここでは「Ｇａｌ（β１−３）ＧｌｃＮＡｃ」と略する）またはラクトタイプＩＩ構造のガラクトース（β１−４）Ｎ−アセチルグルコサミン−Ｒ（ここでは「Ｇａｌ（β１−４）ＧｌｃＮＡｃ」と略する）のいずれであってもよい。最小の、非共役のコア配列において、ＲはＨまたは他の小分子ラジカルである。二糖前駆体はまた、オリゴ糖として、または糖脂質、ペプチド、タンパク質、ムチンもしくは他の高分子のグリカン部位として、より長いグリカン類と共役していてもよい。
【００２５】
ここで例えば、Ｈ−１抗原は、タイプＩ前駆体のガラクトース部位へのα１，２結合によるフコース残基のＦＵＴ２（またはＦＵＴ１）触媒性の付加（これにより、｛フコース（α１−２）ガラクトース（β１−３）Ｎ−アセチルグルコサミン｝（ここでは｛Ｆｕｃ（α１−２）Ｇａｌ（β１−３）ＧｌｃＮＡｃ｝と略する）なる構造が生成する）による当該タイプＩ前駆体を由来とするものである。このＨ−１抗原は、他の分泌抗原であるルイスｂの構造的前駆体である。このルイスｂ分泌抗原は、Ｈ−１構造に加えて、ＧｌｃＮＡｃ部位への非末端のα１，４結合による第２のフコース残基を｛フコース（α１−２）ガラクトース（β１−３）［フコース（α１−４）］Ｎ−アセチルグルコサミン｝（ここでは｛Ｆｕｃ（α１−２）Ｇａｌ（β１−３）［Ｆｕｃ（α１−４）］ＧｌｃＮＡｃ｝と略する）の配置で含む。
【００２６】
これに対応して、Ｈ−２抗原は、タイプＩＩ前駆体のガラクトース部位へのα１，２結合によるフコース残基のＦＵＴ２（またはＦＵＴ１）触媒性の付加（これにより、｛フコース（α１−２）ガラクトース（β１−４）Ｎ−アセチルグルコサミン｝（ここでは｛Ｆｕｃ（α１−２）Ｇａｌ（β１−４）ＧｌｃＮＡｃ｝と略する）なる構造が生成する）による当該タイプＩＩ前駆体を由来とするものである。このＨ−２抗原は、他の分泌抗原であるルイスｙの構造的前駆体である。このルイスｙ分泌抗原は、Ｈ−２構造に加えて、ＧｌｃＮＡｃ部位への非末端のα１，３結合による第２のフコース残基を｛フコース（α１−２）ガラクトース（β１−４）［フコース（α１−３）］Ｎ−アセチルグルコサミン｝（ここでは｛Ｆｕｃ（α１−２）Ｇａｌ（β１−４）［Ｆｕｃ（α１−３）］ＧｌｃＮＡｃ｝と略する）の配置で含む。
【００２７】
分泌抗原は、α１，２フコースで置換された単一のコア配列を含んでもよく、この際、Ｒは、Ｈまたは他の小ラジカルである。あるいは、分泌抗原は、繰り返しの置換コア配列を含んでもよく、この際、Ｒは、他のコア配列である。単一のコア配列および繰り返しコア配列は、より大きな糖の内部に存在しうる。よって、分泌抗原を含有するオリゴ糖は、例えば、三糖、四糖、五糖などでありうる。分泌抗原はまた、他の高分子（例えば、ポリペプチドまたは脂質）に対して共有結合していてもよい。単一の置換コア配列はまた、ポリペプチドまたは脂質に対して直接結合していてもよく、例えば、Ｒは、タンパク質もしくは脂質であってもよいし、またはポリペプチドもしくは脂質に結合した多糖中に存在していてもよい。分泌抗原は、Ｎ−結合グリコシル化を介して（すなわち、アスパラギン残基を介して）、またはＯ−結合グリコシル化を介して（例えば、セリン、スレオニン、ヒドロキシプロリン、チロシンもしくは他のヒドロキシ基含有残基を介して）ポリペプチドに共有結合していてもよい。分泌抗原を含む糖タンパク質としては、例えば、以下に限定されないが、ムチン類、胆汁酸塩活性化リパーゼ（ＢＳＳＬ）、およびラクトアドヘリンが挙げられる。分泌抗原を有する脂質としては、以下に限定されないが、Ｈ−１糖脂質、Ｈ−２糖脂質、Ｌｅｘ糖脂質、およびＬｅｙ糖脂質が挙げられる。
【００２８】
ルイス抗原
ルイス抗原は、α１，３−またはα１，４−結合フコシル化オリゴ糖部位であるルイスエピトープを含有する（すなわち、Ｈ−１、Ｈ−２、Ｌｅａ、Ｌｅｂ、Ｌｅｘおよび／もしくはＬｅｙエピトープを含有する）任意のグリカンとして存在しうる。ルイス抗原としては、遊離オリゴ糖類、糖脂質類、糖タンパク質類、ムチン類、グリコサミノグリカン類、および糖ペプチド類が挙げられる。個体は、上述したＨ−１、Ｈ−２、Ｌｅａ、Ｌｅｂ、Ｌｅｘおよび／またはＬｅｙエピトープを発現するグリカン類を発現することができる。
【００２９】
シアル化抗原
シアル化抗原は、遊離オリゴ糖類、糖脂質類（例えば、ガングリオシド類）、糖タンパク質類、ムチン類、グリコサミノグリカン類、および糖ペプチド類などの、シアル化抗原を含有する任意のグリカンとして存在しうる。個体は、ガングリオシド類並びに、シアル化ルイスａ（ｓＬｅａ）、ｓＬｅｂ、ｓＬｅｘおよび／またはｓＬｅｙエピトープを発現する他のグリカン類などの、シアル化エピトープを発現することができる。
【００３０】
分泌抗原のアッセイ
１以上の分泌抗原のレベルは、分泌抗原を含むことが本技術分野において知られている任意の体液中で測定されうる。体液の例としては、以下に限定されないが、唾液、血清、血漿、乳汁、羊水、汗、尿、涙、粘液、リンパ液、および糞便が挙げられる。体液サンプルは、分泌抗原の構造を保存したままにできる、本技術分野において公知の任意の常法を用いて個体から回収されうる。唾液サンプルは、綿棒、ティッシュ、吸引、掻爬を用いて、または個体に口を漱がせ、チューブもしくは回収容器中に吐き出させることによって回収されうる。血液サンプルは、静脈穿刺術によって得ることができる。血清サンプルは、血餅としてもよい血液サンプルを遠心分離するなどの常法を用いて全血から調製されうる。血漿サンプルは、ヘパリンなどの抗凝血剤で処理された血液サンプルを遠心分離することによって得られる。乳汁は、手動で、または機械的圧搾によって回収されうる。生体サンプルは、回収後速やかに、分泌抗原についてアッセイされうる。あるいは、またはこれに加えて、分泌抗原の構造を保存できる本技術分野において公知の方法（例えば、凍結、乾燥、または凍結乾燥）を用いて、生体サンプルを後の分析のために保管してもよい。
【００３１】
生体サンプル中の特定の分泌抗原のレベルを測定した後、これらのレベルは標準参照レベルと比較されうる。標準参照レベルは通常、個体の大集団から得られた平均的な分泌抗原レベルを表す。参照集団は、年齢、体重、民族的背景または全般的な健康について、問題となる個体と類似している個体を含んでもよい。参照集団のＦＵＴ２の遺伝子型は、既知であっても未知であってもよい。こうして、患者サンプル中の分泌抗原レベルは、１）野生型ＦＵＴ２を発現し、体液が分泌抗原を含有している個体、２）ＦＵＴ２の変異型を発現し、中程度から低いＦＵＴ２活性を示し、体液が低レベルの分泌抗原を含有している個体、または、３）ＦＵＴ２活性をほとんどまたはまったく示さず、体液が分泌抗原を含んでいない個体から得られる値と比較されうる。
【００３２】
一般に、上昇した分泌抗原のレベルは、コントロールサンプルで見られる分泌抗原のレベルよりも大きいか、または、分泌者である健常個体の集団からのサンプルで見られる分泌抗原の平均レベルよりも大きい任意の分泌抗原レベルでありうる。減少した分泌抗原のレベルは、コントロールサンプルで見られる分泌抗原のレベルよりも小さいか、または、分泌者である健常個体の集団からのサンプルで見られる分泌抗原の平均レベルよりも小さい任意の分泌抗原レベルでありうる。分泌者である健常個体の集団からのサンプルで見られる分泌抗原の平均レベルを測定するには、任意の集団サイズが用いられうる。健常個体の集団からのサンプルにおける分泌抗原の平均レベルを、より多くのサンプル集団由来の測定においてより正確に測定するには、例えば、２〜２５０（例えば、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０またはより多くの個体）の集団が用いられうる。
【００３３】
減少した分泌抗原レベルは、コントロールサンプルで見られるレベル、または健常個体の集団からのサンプルで見られる分泌抗原レベルよりも１０、２０、３０、５０、６０、７０、８０、９０、１００％小さいものでありうる。ある場合には、減少した分泌抗原レベルは、コントロールサンプルで見られるレベル、または健常個体の集団からのサンプルで見られる分泌抗原の平均レベルよりも２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍またはそれ以上低いものであってもよい。
【００３４】
ある場合には、サンプル中の特定の分泌抗原の特定のレベルがコントロールサンプルまたはより大きい集団と比較して低いかまたは正常であるか否かを測定するのに、参照チャートが用いられうる。例えば、参照チャートは、問題となる個体と年齢、在胎月齢、民族的背景または全般的な健康が同じである健康な乳幼児で見られる分泌抗原レベルの正常範囲を含みうる。この参照チャートを用いて、サンプル中で測定される分泌抗原の任意のレベルが、コントロールサンプルと比較して、またはより大きい集団由来の平均値と比較して、低いか、正常であるか、または上昇しているものとして分類されうる。
【００３５】
あるいは、またはこれに加えて、生体サンプル中の分泌抗原のレベルは１つ以上の追加の生体マーカー（例えば、Ｐ抗原またはシアル化抗原などの、発現が個体の分泌者としての状態とは独立している他の組織−血液型抗原）のレベルに対して「規格化」されてもよい。すなわち、追加のマーカーのレベルは、同時または別の場面のいずれかにおいて、分泌抗原のレベルと並行して上昇しうる。この追加マーカーは、サンプル調製、取扱い、および保管、並びに日常のアッセイにおける変動に対する内部コントロールとして機能しうる。分泌抗原および追加マーカーのレベルの値は、比率として表現されてもよく、この比率が参照のサンプルまたは集団について得られた類似の比率と比較されてもよい。有用な第２マーカーの例としては、以下に限定されないが、発現が分泌者（ＦＵＴ２）の発現とは独立しているルイス抗原（すなわち、ルイスａおよびルイスｘ）が挙げられる。ルイス抗原は一般的に、コア配列として、１以上のフコシル残基で置換されたラクトタイプＩ構造またはラクトタイプＩＩ構造を有する炭化水素を含む。よって例えば、有用な第２のマーカーは、ルイスａ｛ガラクトース（β１−３）［フコース（α１−４）］Ｎ−アセチルグルコサミン｝（ここでは｛Ｇａｌ（β１−３）Ｆｕｃ（α１−４）ＧｌｃＮＡｃ｝」と略する）もしくはルイスｘ｛ガラクトース（β１−４）［フコース（α１−３）］Ｎ−アセチルグルコサミン｝（ここでは｛Ｇａｌ（β１−４）Ｆｕｃ（α１−３）ＧｌｃＮＡｃ｝」と略する）、またはこれらのエピトープのシアル化型、硫酸化型もしくはスルホシアル化型でありうる。一般的に発現している他の非ルイス血液型抗原もまた用いられてもよく、Ｌｕａ（ルーテルａ）、Ｐ１＆Ｐ２（Ｐ血液型系の主要な抗原）、Ｍ＆Ｎ、Ｆｙａ＆Ｆｙｂ（ダフィー式の抗原）などが挙げられる。
【００３６】
また、個体の遺伝子発現レベルの確率的変動は生体系には一般的であることから、その発現が個体の分泌者としての状態とは独立していることが知られている２以上の追加の生体マーカーのパネルに対して分泌抗原のレベルを規格化することが望ましいかもしれない。この手法によれば、分泌抗原レベルがより正確に測定されうる。
【００３７】
参照サンプルの分泌抗原レベルと比較して、個体における分泌抗原の相対レベルを算出したら、当該個体の胃腸炎、壊死性腸炎、後期発症敗血症または死亡に関する相対リスクが評価されうる。相対リスクを評価するための本技術分野において公知の任意の統計的手法が用いられうる。１つの適法な手法は、分類・回帰ツリー（ＣＡＲＴ）特性曲線分析である。ＣＡＲＴ分析は、ノンパラメトリック回帰法のファミリーに属し、個体の高リスク群および低リスク群への分類を最適化する決定木を構築するための再帰分割に基づくものである。このＣＡＲＴ分析は、試験の感度（すなわち、検出された真の症例の数）と特異性（すなわち、正確さ）とのバランスに基づき、予測値を最大化して、症例と非症例との誤判別を最小化する、連続型変数におけるカットポイントを体系的に決定するのに適用されうる。これらの２つの変数はまた、正の予測値および負の予測値として考慮されることができ、診断の正確さと関連している。ＣＡＲＴ分析により作製された決定木は、曲線下面積（ＡＵＣ）を決定するための受信者操作特性曲線（ＲＯＣ）分析によって検証されうる。なお、このＡＵＣは、症例と非症例とを区別するための決定木の関係の有効性を示すものである。
【００３８】
一例では、ＣＡＲＴ分析によって、Ｈ−２の唾液中発現（ＯＤ値により測定）で低分泌者または非分泌者（すなわち、３８パーセンタイル以下）と分類された個体はＮＥＣおよび死亡のリスクが増大していることが示されている。そして、分泌抗原のレベルが３８、３３、３０、２５、２０、１５、１０、５またはそれ以下のパーセンタイル値である個体は、分泌抗原レベルが３８パーセンタイルよりも大きい個体よりもＮＥＣに罹患し、または死亡する傾向が４〜５倍である。分泌抗原をほとんどまたはまったく発現していない個体では、最高リスク群は高レベルのシアル化ルイスａ抗原をも発現している個体によって規定される。分泌抗原をほとんどまたはまったく発現しておらず、高レベルのシアル化ルイスａ抗原を発現している乳幼児では、他のすべての乳幼児と比較してＮＥＣまたは死亡のリスクが６倍を超える。よって、高リスク群は、ほとんどもしくはまったくないＨ−２抗原の発現単独によって、または、ほとんどもしくはまったくないＨ−２抗原と中〜高レベルのシアル化ルイスａ抗原との組み合わせによって規定されうる。この組み合わせと、他の臨床指標に基づき、臨床医は、患者がＮＥＣのリスクがある可能性を予測し、適宜治療計画を調整することができる。
【００３９】
個体の分泌者としての状態は、種々の手法によって決定されうる。分泌抗原のレベルは、体液中で直接測定されうる。例えば、分泌抗原のレベルは、免疫ベースのアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ、ラジオイムノアッセイ、免疫検出と共役した１次元または２次元の電気泳動）を用いて、または表面プラズモン共鳴ベースのバイオセンサを用いて、またはクロマトグラフィ技術（例えば、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）もしくはガスクロマトグラフィ（ＧＣ））を用いて、または分光分析（例えば、質量分析）によって、測定されうる。あるいは、またはこれに加えて、標準的な酵素的手法を用いて生体サンプル中のＦＵＴ２活性が測定されうる。また、本技術分野において周知の種々の手法（例えば、ＲＴ−ＰＣＲもしくは定量的ＲＴ−ＰＣＲ（例えば、Kroupis C, Stathopoulou A, Zygalaki E, Ferekidou L, Talieri M, Lianidou ES. Clin Biochem. 2005 Jan;38(1):50-7, Dyer J, Chisenhall DM, Mores CN. J Virol Methods. 2007 Oct;145(1):9-13）、または、ｃＤＮＡもしくはオリゴヌクレオチドマイクロアレイなどの定量的なハイブリダイゼーションベースの技術（例えば、Duggan D. J., Bittner M., Chen Y., Meltzer P. and Trent J. M. Nat Genet 21(1 Suppl):10-4 (1999); Cheung V. G., Morley M., Aguilar F., Massimi A., Kucherlapati R. and Childs G. Nat Genet 21(1 Suppl):15-9 (1999)））を用いてＦＵＴ２ ｍＲＮＡレベルを定量してもよい（生体サンプル中のＦＵＴ２活性のレベルの代わりとして）。
【００４０】
ヒト分泌型ＦＵＴ２ ｍＲＮＡの配列を図７に示し（ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセッション番号ＮＭ＿０００５１１．４）、ヒト分泌型ＦＵＴ２タンパク質の配列を図８に示す（ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アクセッション番号ＮＰ０００５０２．４）。
【００４１】
最終的に、個体のＦＵＴ２の遺伝子型は、一塩基多型分析（ＳＮＰ）またはＲＴ−ＰＣＲベースの技術によって決定されうる。
【００４２】
イムノアッセイ
イムノアッセイ法は、本技術分野の当業者には周知である。特定の分泌ルイス抗原（例えば、Ｈ−１、Ｈ−２、ルイスｂ、およびルイスｙ）並びに他のルイス抗原（例えば、ルイスａおよびルイスｘ）を検出する抗体試薬は、抗体作製のための常法を用いて作製され、または商業的販売者から購入されうる。抗体は、モノクローナルもしくはポリクローナル、またはこれらの組み合わせでありうる。有用な抗体としては、分泌抗原またはグリカンエピトープに特異的な、モノクローナルおよびポリクローナル抗体、単一鎖抗体、キメラ抗体、二価／二重特異性抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、および相補性決定領域（ＣＤＲ）−グラフト抗体が挙げられ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、キャメルボディまたはミクロ抗体などの抗体断片もまた挙げられる。また、特定の分泌抗原に特異的に結合してこれを検出できる核酸試薬またはペプチドアプタマー試薬は、文献に記載の常法を用いて作製されうる（例えば、分子診断のための大規模アッセイにおけるアプタマー類の利用、Brody E. N., Willis M. C., Smith J. D., Jayasena S., Zichi D. and Gold L. Mol Diagn4(4):381-8 (1999)）。
【００４３】
そして、ある実施形態では、特異的な抗Ｈ−１、抗Ｈ−２、抗ルイスｂ、もしくは抗ルイスｙモノクローナル抗体またはアプタマーは、Ｈ−１およびＨ−２、ルイスｂ、並びにルイスｙ以外の抗原に対して、それぞれ約１×１０５Ｋａ未満の結合親和性を有しうる。ある実施形態では、抗Ｈ−１、抗Ｈ−２、抗ルイスｂ、または抗ルイスｙ抗体は、Ｈ−１、Ｈ−２、ルイスｂ、およびルイスｙに対して少なくとも１×１０８Ｋａの親和性で結合するモノクローナル抗体である。
【００４４】
抗Ｈ−１、抗Ｈ−２、抗ルイスｂ、および抗ルイスｙ抗体またはアプタマーを作製するには、それぞれ任意の形態（最小の三糖もしくは二糖構造またはそのエピトープ含有断片、およびこれらのエピトープを含有する任意のグリカンなど）のＨ−１およびＨ−２、ルイスｂ、並びにルイスｙが用いられうる。特に適切な抗Ｈ−１、抗Ｈ−２、抗ルイスｂ、および抗ルイスｙ抗体またはアプタマーは、インビボでそれぞれの標的を認識してこれに結合するのに十分な親和性および特異性を有するものである。本明細書で用いられる場合、エピトープとの語は、グリカンの抗原決定基を意味する。
【００４５】
炭水化物に特異的に結合する抗体またはアプタマーは、１）結合活性のしきいレベルを示し、および／または２）既知の関連グリカン分子とは有意に交差反応しない分子でありうる。抗体またはアプタマーの結合親和性は、本技術分野における当業者により、例えばスキャッチャード解析（Scatchard, Ann. NY Acad. Sci. 51: 660-672, 1949）によって、容易に決定されうる。ある実施形態では、抗体またはアプタマーはその標的エピトープまたは疑似デコイに対して、標的グリカンにつき当該標的グリカンといくらかの相同性を有する他のグリカンに対するよりも、少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、１００倍、１０３倍、１０４倍、１０５倍、１０６倍またはそれ以上の親和性をもって結合することができる。
【００４６】
ある実施形態において、抗体またはアプタマーは、Ｈ−１もしくはＨ−２、ルイスｂ、またはルイスｙに対して、１０−４Ｍ未満、１０−７未満、１０−９未満もしくはそれ以下の高い親和性で、またはｎＭ未満の親和性（０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１ｎＭまたはさらに低い場合もある）で結合する。ある実施形態において、抗体またはアプタマーのＨ−１もしくはＨ−２、ルイスｂ、またはルイスｙに対する結合親和性は、少なくとも１×１０６Ｋａである。ある実施形態において、抗体またはアプタマーのＨ−１もしくはＨ−２、ルイスｂ、またはルイスｙに対する結合親和性は、少なくとも５×１０６Ｋａであり、少なくとも１×１０７Ｋａであり、少なくとも２×１０７Ｋａであり、少なくとも１×１０８Ｋａであり、またはこれよりも大きい。抗体またはアプタマーはまた、自身のＨ−１および／もしくはＨ−２、ルイスａ、ルイスｂ、ルイスｘ、並びに／またはルイスｙに対する結合親和性の観点から記載され、または特定されてもよい。ある実施形態において、結合親和性は、５×１０−２Ｍ未満、５×１０−５Ｍ〜５×１０−７Ｍ、５×１０−８Ｍ〜５×１０−１０Ｍ、５×１０−１２Ｍ〜５×１０−１４Ｍ、またはそれより小さいＫｄを有するものである。
【００４７】
抗体またはアプタマーは、本技術分野の当業者に公知のクロマトグラフィ法（イオン交換およびゲル濾過クロマトグラフィ（例えば、Caine et al., Protein Expr. Purif. (1996) 8(2):159-166））によって精製されうる。あるいは、またはこれに加えて、抗体またはアプタマーは商業的販売者（例えば、Abcam、Biovendor Laboratory、Calbiochem、Signet Laboratories、Accurate Chemical and Scientific Corporation、およびEMD）から購入されてもよい。
【００４８】
分泌抗原のレベルは、本技術分野の当業者に公知の任意のイムノアッセイ形式を用いて生体サンプル中で測定されうる。例えば、非競合イムノアッセイでは、分泌抗原は２つの抗体（捕捉抗体および検出抗体）の間に「サンドイッチ」される。一般に、捕捉抗体はチューブまたはウェルなどの固相に共有結合または非共有結合しており、検出抗体はＥＬＩＳＡアッセイの場合には酵素と共役しており、ＲＩＡアッセイの場合には放射性標識されている。ＥＬＩＳＡアッセイでは、検出抗体は酵素に共有結合していてもよいし、生体共役を介して酵素と連結された二次抗体によって自身が検出されてもよい。抗体の特異的な結合は、開裂によって検出可能で定量可能なシグナルを生成する酵素の基質（例えば、発色性分子または蛍光性分子）を添加することによって分析される。ＲＩＡアッセイでは、抗体の特異的な結合は担体に結合した放射能のレベルを測定することによって定量される。
【００４９】
競合的なイムノアッセイでは、サンプル中の抗原（分析対象）は、標識された抗原（トレーサー）と、限られた数の抗体結合部位を求めて競合する。抗体に結合していない過剰な分析対象から、結合した抗体を分離する。未知のサンプル中の分析対象の量は、ガンマカウンタまたは分光光度計で測定された標識抗原の量に逆比例する。競合的なイムノアッセイの例としては、二重抗体ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、被覆チューブＲＩＡ、および被覆ウェル酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）が挙げられる。用いられうる固相担体のいくつかの例としては、プレート、チューブ、ポリスチレンビーズ、ナイロン、ニトロセルロース、セルロースアセテート、ガラスファイバおよび他のタイプの多孔質ポリマーが挙げられる。適当な標識としては、放射性核種、フルオロフォア、化学蛍光標識、生物発光標識、酵素が挙げられ、例えばＥＬＩＳＡ系で用いられる場合には、金コロイドまたは量子ドットなどの染料または粒子が挙げられる。
【００５０】
１以上の特定の分泌抗原およびルイス抗原を同時に検出するように設計されたアッセイ系およびキットもまた、本願の方法の範囲内のものである。当該キットは、ディップスティック、フロースルーまたはマイグラトリーといった形式であってもよいし、本技術分野の当業者に公知の他の形式であってもよい。所望により、アッセイを自動化して標準化を保障し、高スループットを達成することができる。
【００５１】
ＦＵＴ２活性のアッセイ
ＦＵＴ２活性は、ＦＵＴ２に特異的な、本技術分野において公知の任意の常法を用いて、生体サンプル中で測定されうる。例えば、３μＭ ＧＤＰ−［１４Ｃ］フコース、５ｍＭ ＡＴＰ、２５ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．０）、４０μｇ全タンパク質（細胞抽出物由来）、およびアクセプタ基質としてフェニルβ−Ｄ−ガラクトシドまたはアシアロフェツインを含有する２０μＬの反応体積中で、フコシルトランスフェラーゼアッセイが行なわれうる。反応混合物を３７℃にて２時間インキュベートし、水１ｍＬの添加によって終結させる。反応産物をＣ１８逆相カラムを通すことによって、疎水性のフコシル化フェニルβ−Ｄ−ガラクトシド産物を精製する。放射性標識アシアロフェツイン産物は、マイクロファイバメンブレン（ＧＦ／Ｃ；Whatman）を用いた濾過により精製し、液体シンチレーションカウントによって放射能を測定する。Nanthakumar NN, Dai D, Newburg DS, Walker WA．The role of indigenous microflora in the development of murine intestinal fucosyl- and sialyltransferases. FASEB J (November 15, 2002) 10.1096/fj.02-0031fje (summary: FASEB J 2003;17:44-6)。
【００５２】
ＦＵＴ２ジェノタイピング解析
ＦＵＴ２のジェノタイピングは、本技術分野において公知の任意の常法（例えば、ＳＮＰ解析またはＲＴ−ＰＣＲ技術）により、行われうる。ＦＵＴ２活性レベルの低下をもたらすものとして同定されているＳＮＰとしては、ＴＲＰ１４３ＴＥＲ（４２８Ｇ−Ａ）およびＩＬＥ１２９ＰＨＥ（３８５Ａ−Ｔ）が挙げられる。ＦＵＴ２遺伝子の完全な欠損もまた、ある非分泌者では観察されている。一塩基多型（ＳＮＰ）を検出するための手法は本技術分野において周知である：例えば、Ahmadian A., Gharizadeh B., Gustafsson A. C., Sterky F., Nyren P., Uhlen M. and Lundeberg J.Anal Biochem 280(1):103-10 (2000); Griffin T. J., Hall J. G., Prudent J. R. and Smith L. M. Proc Natl Acad Sci U S A 96(11):6301-6 (1999); Nickerson D. A., Kaiser R., Lappin S., Stewart J., Hood L. and Landegren U. Proc Natl Acad Sci U S A 87(22):8923-7 (1990)。
【００５３】
他のアッセイ
α−１−フコースと特異的に反応するレクチンであるハリエニシダ（Ulex europaeus）レクチンが、分泌抗原（特に、Ｈ−２）を検出するための基礎として用いられうる。金コロイドに共役したハリエニシダレクチンを、適当な条件下で分泌抗原を含有するサンプルに曝露すると、ハリエニシダ−金コロイドは凝集し、検出可能な色の変化をもたらす。
【００５４】
概説すると、金コロイドの安定化に要するハリエニシダ（ＵＥＡ１）（Sigma-Aldrich; St Louis, MO）の最小量および最適ｐＨ条件を決定した後、ＵＥＡ１を金コロイドに共役させる。ニトロセルロース片上に、未処理の被検唾液２μＬを添加し、５ｂ分間静置して乾燥させる；カゼインの１．０％ＴＢＳ溶液２００μＬを添加し、室温にて３分間インキュベートする。カゼイン溶液を廃棄する；ＵＥＡ１−金コロイド共役体１５０μＬを、カゼインの０．０５％ＴＢＳ溶液で適切に希釈して添加し、１０分間インキュベートする。検出可能な色の変化が生じたら、サンプル中に分泌抗原が存在することが示される。コントロールサンプルは、Ｈ−２陽性またはＨ−２陰性であることが既知の唾液サンプルである。
【００５５】
治療の手法
本明細書に開示されている方法はまた、感染性障害および炎症性障害のリスクがある乳幼児の治療にもまた有用である。治療によって、感染性障害または炎症性障害の一部またはすべての兆候および症状が完全にまたは部分的に除去され、症状の重篤性が低減され、発症が遅らせられ、あるいは後続して生じる症状の進行または重篤性が緩和されうる。
【００５６】
上記の治療方法は、感染性障害および炎症性障害に有用である。この方法は、満期出産児、未熟児または超低出生体重児に用いられうる。満期出産児は、３７〜４２週の在胎期間を経て出生したものである；未熟児は通常、３７週未満の在胎期間で出生したものである。超低出生体重児（ＥＬＢＷ）は通常、１０００ｇ（２ポンド３オンス）未満の出生体重により規定される。ＥＬＢＷの乳幼児の大部分はまた、未熟児のなかでも最も若く、通常は２７週以下の在胎期間で出生する。低出生体重児（＜２５００ｇ）の約１０人に１人が、ＥＬＢＷの乳幼児である。
【００５７】
本明細書に記載の方法を用いて検出されうる感染性障害および炎症性障害としては、壊死性腸炎（ＮＥＣ）、胃腸感染症、胃腸炎、および敗血症が挙げられる。これらの障害は、疾患、損傷または未知の原因の結果であることもあり、また、個体の遺伝的構成の影響を受けることもある。
【００５８】
ＮＥＣでは、腸管の一部が壊死（すなわち、組織死）を起こす。ＮＥＣは消化管に症状を引き起こすが、重篤な症例では深刻な全身性の症状をもたらす。初期症状はわずかなものである場合があり、摂食不耐性、胃内容排出遅延、腹部の膨満および／または圧痛、イレウス／腸音遅延、並びに、進行段階では、腹壁紅斑および血便の１つ以上が挙げられる。全身性の兆候は非特異的なものであり、無呼吸、倦怠感、末梢循環不全、ショック（進行した症例）、心血管虚脱および出血性素因（消費性凝固障害）の任意の組み合わせが挙げられる。検査所見の非特異的な異常としては、低ナトリウム血症、代謝性アシドーシス、血小板減少症、左方移動を伴う白血球減少症または白血球増加症、好中球減少症、プロトロンビン時間延長および活性化部分トロンボプラスチン時間延長、フィブリノゲンの減少、並びにフィブリン分解物の上昇（消費性凝固障害の症例）。正確な病因は不明であるが、多因子性であって、異常細菌叢、腸虚血および／または再灌流障害、並びに腸管粘膜の未成熟のいずれかまたはすべてを伴うものであろう。
【００５９】
幼年期における胃腸感染症は、下痢、糞便中の粘液または血液の存在、嘔吐、脱水、口渇、倦怠感、粘膜の乾燥、泉門の陥没、皮膚緊張の低下、毛細血管充満時間、頻脈、弱い脈拍、低血圧、および皮膚緊張のテンティングまたは喪失といった症状を伴う。感染の作用因子は、細菌、真菌、ウイルスまたは寄生生物でありうる。細菌性の作用因子の例としては、以下に限定されないが、ブドウ球菌種、黄色ブドウ球菌、大腸菌、連鎖球菌種、エンテロバクター属菌種、クレブシエラ属菌種、バシラス属菌種、セラチア属菌種、サルモネラ属菌種、シゲラ属菌種、カンピロバクター属菌種、エルシニア属菌種、およびクロストリジウム・ディフィシルが挙げられる。真菌性の作用因子の例としては、以下に限定されないが、カンジダ属菌種が挙げられる。寄生生物の例としては、以下に限定されないが、クリプトスポリジウム属種、ジアルジア属種、赤痢アメーバ、シクロスポラ属種が挙げられる。ウイルス生物の例としては、以下に限定されないが、ロタウイルス、サイトメガロウイルス、腸管アデノウイルス、アストロウイルス、アデノウイルスタイプ４０またはタイプ４１、ノーウォークおよび他のノロウイルス、並びにサポロウイルスが挙げられる。新生児敗血症の臨床的兆候は非特異的であり、原因微生物の特徴および侵襲に対する生体応答の特徴と関連している。新生児敗血症は、早期発症または後期発症に分類されうる。新生児の早期発症感染症の８５％は２４時間以内に発症し、５％が２４〜４８時間で発症し、より少ない数の患者では４８時間から６日間の間に発症する。発症は、未熟児で最も速い。これらの乳幼児では、顔面蒼白、毛細血管灌流の低下、および浮腫を伴う明らかなショックを呈する。これらのショックの兆候は、重篤な危険の指標であり、死亡率と大きく関係している。敗血症の兆候としては、心兆候（例えば、早期肺高血圧症、心拍出量の減少、低酸素血症、徐脈を伴う心拍出量の段階的減少、および全身性低血圧症）、代謝性兆候（低血糖、高血糖、代謝性アシドーシス、および黄疸）、神経学的兆候（髄膜炎、脳室炎、くも膜炎、血管炎、静脈炎、血栓症、脳浮腫、梗塞、昏迷、および過敏性）、意識障害（すなわち、過敏性を伴う／伴わない昏迷）、昏睡、発作、大泉門膨隆、伸筋硬直、局所性脳兆候、脳神経兆候、項部硬直、脳脊髄液（ＣＳＦ）の変化（例えば、白血球数の上昇、タンパク質レベルの上昇、ＣＳＦグルコース濃度の低下、および陽性の培養結果）のいずれかまたはすべてが挙げられる。新生児敗血症および髄膜炎では温度調節障害が観察されるが、これは細菌性生物により分泌される発熱物質に応答したものであるか、または交感神経系の不安定性によるものである。新生児は、最も低体温となりやすい。乳幼児はまた、緊張の低下、倦怠感、および食欲不振を有する可能性もある。神経過敏の兆候は、後期発症髄膜炎が発症した際に最も発生しやすい。新生児敗血症の他の兆候としては、血液学的兆候（例えば、血小板減少症、異常白血球数（ＷＢＣ）、異常好中球数（ＰＭＮおよび未成熟型）、好中球数の未成熟対全数の比率の異常、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、プロトロンビン時間（ＰＴ）、部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）並びにフィブリノゲンレベルおよびＤ二量体レベルの異常）、並びに、消化管兆候（例えば、壊死性腸炎）が挙げられる。
【００６０】
後期発症敗血症に関与している生物としては、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌、黄色ブドウ球菌、大腸菌、クレブシエラ属菌種、シュードモナス属菌種、エンテロバクター属菌種、Ｂ群連鎖球菌、セラチア属菌種、アシネトバクター属菌種、およびカンジダ属菌種が挙げられる。乳幼児の皮膚、気管、結膜、消化管、およびへそは、環境からコロニー化されて、侵襲してきた微生物由来の後期発症敗血症を引き起こす可能性がある。かようなコロニー化をもたらす媒介物としては、血管カテーテルもしくは尿路カテーテル、他の留置ライン、または細菌がコロニー化した介護者からの接触が挙げられる。
【００６１】
自身のグリカン表現型（分泌抗原、ルイス抗原、またはシアル化抗原の発現）に基づいて感染性障害および炎症性障害（例えば、ＮＥＣ、胃腸感染症、および敗血症）のリスクがあると同定された乳幼児は、１つ以上の保護剤を含む治療法によって治療されうる。文脈上そうでないとされる場合を除き、「剤」との語は、消化器系の標的分子または標的領域に対して臨床的に好ましい形で影響を及ぼす（例えば、発熱物質が宿主の表面グリカン類に結合するのを阻害する）任意の物質を広く意味するものとする。有用な保護剤としては、例えば、ヒトの授乳、プロバイオティック有機体、プレバイオティック剤、またはα１，２フコシルグリカン類が挙げられる。
【００６２】
α１，２フコシルグリカン類は、α１，２結合でのフコース末端を含む糖であり、これ自体は分泌抗原の相同体である。すなわち、α１，２フコシルグリカン類は、α１，２配置でフコース残基に共有結合した、最小二糖前駆体またはコア配列を含む。コア配列は、ラクトタイプＩ構造であるガラクトース（β１−３）Ｎ−アセチルグルコサミン−Ｒ（ここでは｛Ｇａｌ（β１−３）ＧｌｃＮＡｃ｝−Ｒと略する）、またはラクトタイプＩＩ構造であるガラクトース（β１−４）Ｎ−アセチルグルコサミン−Ｒ（ここでは｛Ｇａｌ（β１−４）ＧｌｃＮＡｃ｝−Ｒと略する）のいずれかである可能性があり、この際、Ｒは、Ｈ、小ラジカル、または他の単糖、二糖もしくは多糖、または糖タンパク質もしくは糖脂質である。これらの糖は、遊離のオリゴ糖であってもよいし、糖タンパク質、糖脂質または他の構造として共役して発現していてもよい。共役／非共役の形態のオリゴ糖は、いずれもグリカン類として分類される。そして、α１，２フコシルグリカン類は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２４、２８、３２、３６、またはより多くの糖を含むことができ、この糖の１つ以上がα１，２配置でフコース残基に共有結合しており、これによって当該グリカン類は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、またはより多くのフコース残基を含みうる。適当なα１，２フコシルグリカン類の例としては、以下に限定されないが、２’−フコシルラクトース（２’−ＦＬ）、ラクト−Ｎ−フコペンタオース−Ｉ（ＬＮＦ−Ｉ）、ラクト−Ｎ−ジフコヘキサオース Ｉ（ＬＤＦＨ Ｉ）、ラクトジフコテトラオース（ＬＤＦＴ）、または、可溶型でもしくはプロバイオティック有機体の一部として糖脂質、糖ペプチド、糖タンパク質、ムチンもしくは他の骨格に結合したフコシルグリカンエピトープが挙げられる。α１，２フコシルグリカン類は、本技術分野の当業者に公知の手法を用いて天然の源（例えば、乳、乳製品または植物製品）から精製されうる。あるいは、またはこれに加えて、グリカン類は、本技術分野において公知の手法に従って天然の前駆体または合成されたテンプレートから化学的に合成されうる。また、グリカン類は、本技術分野において周知の生合成酵素を用い、細菌または酵母などの特別に改変された微生物を用いて、インビトロまたはインビボで酵素的に合成されてもよい。
【００６３】
保護剤はまた、プロバイオティック有機体（すなわち、宿主によって摂取された際に、当該宿主を利するように腸内細菌叢を変化させる生きた微生物）であってもよい。プロバイオティック有機体は、細菌および細菌産物の粘膜を介した移動に対するバリアを提供したり、潜在的な発熱物質を競合的に除去したり、微生物産物に対する宿主の応答を変化させたり、肺炎桿菌、大腸菌、およびカンジダ・アルビカンスなどの発熱物質の増殖を阻害するように経腸栄養を促進したりすることができる。
【００６４】
プロバイオティック有機体は一般に、細菌および酵母を含む。プロバイオティック有機体の種は種々存在しうるが、乳幼児に適切な種としては、乳酸菌（例えば、ラクトバチルス・ラムノーザスＧＧ、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・ロイテリ）およびビフィズス菌（例えば、ビフィドバクテリウム・インファンティス、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・ブレーヴェ、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス、ビフィドバクテリウム・ロンガム）、並びにサーモフィルス菌が挙げられる。有用な酵母種としては、サッカロマイセス・ブラウディおよびクリベロマイセス・ラクティスが挙げられる。プロバイオティック有機体は、天然由来のものであってもよいし、改変されたものであってもよい。すなわち、当該有機体は、以下に限定されないが、分泌抗原を発現する能力などの所望の特性を獲得できるように遺伝子を導入されたものであってもよい。プロバイオティック有機体は、単独で、または組み合わせて投与されうる。市販されているプロバイオティック製剤としては、例えば、ラクトバチルス・アシドフィルス／ビフィドバクテリウム・インファンティスを含有するインフロラン（登録商標）（Istituto Sieroterapico Berna, Como, Italy）、ビフィドバクテリウム・インファンティス、ビフィドバクテリウム・ビフィダムおよびサーモフィルス菌を含有するＡＢＣドフィルス（Solgar, Isreal）、並びに、ラクトバチルス・ラムノーザスＧＧを含有するディコフロー（Vitis Pharma, Warsaw, Poland）が挙げられる。保護剤はまた、プレバイオティック剤（すなわち、大腸内の１つまたは限られた数の細菌の増殖および／または活性を選択的に刺激することにより宿主を利する、非消化性の食餌成分）であってもよい。大腸の微生物叢中に外因性の細菌を導入するプロバイオティックとは逆に、プレバイオティック剤は、潜在的に健康を促進している常在微生物（例えば、ビフィズス菌または乳酸菌）の１つまたは限られた数の増殖を活性化させる。プレバイオティック剤の例としては、フラクトオリゴ糖類（例えば、イヌリン）、キシロオリゴ糖、およびガラクトオリゴ糖が挙げられる。プレバイオティック剤は、天然の源（例えば、チコリの根、大豆、キクイモ、豆類、タマネギ、ニンニク、オート、コムギおよびオオムギ）から単離されうる。
【００６５】
有用なプレバイオティック剤の１つに、フルクタン（フルクトースのポリマー）の１種であるイヌリンがある。イヌリンタイプのフルクタン類は、β２，１結合により連結されたβ−Ｄ−フルクトフラノースから構成される。鎖の最初のモノマーはβ−Ｄ−グルコピラノシル残基またはβ−Ｄ−フルクトピラノシル残基である。イヌリンおよびイヌリン断片の種々の形態が市販されている；例えば、重合度（ＤＰ）２〜６０のイヌリンはチコリの根から抽出される（Raftiline; Orafti, Tienen, Belgium）；イヌリンの部分酵素的加水分解により製造されるオリゴフルクトースは１０未満のＤＰを有し（Raftiline; Orafti）、低分子量オリゴマーが除去されてなるイヌリンは高性能イヌリンと称される（Raftiline; Orafti）。フルクトシルトランスフェラーゼ触媒性の反応においてショ糖（基質）および１，２−βフルクタンを用いると、４未満のＤＰを有する合成低分子量フルクタンが製造される（Neosugar or Actilight; Beghin-Meji Industries, Paris）。
【００６６】
保護剤は、単独でまたは組み合わせて、患者に直接投与されうる。一般に、保護剤は、自身の送達を促進する目的で、製薬上許容されうる担体（例えば、生理食塩水または緩衝食塩水溶液）中に懸濁されうる。保護剤を適当な送達ベヒクル（例えば、高分子マイクロカプセルまたは移植可能な装置）中に封入すると、送達効率が向上しうる。本明細書に記載の任意の保護剤を製薬上許容されうる担体と組み合わせることにより、組成物が得られる。かような担体としては、以下に限定されないが、滅菌された水性または非水性の溶液、懸濁液、およびエマルションが挙げられる。非水性溶媒の例としては、鉱油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、および注入可能な有機エステルが挙げられる。水性の担体としては、以下に限定されないが、水、アルコール、食塩水、および緩衝液が挙げられる。保存料、香料、および、例えば抗微生物剤、抗酸化剤（例えば、プロピルガレート）、キレート剤、不活性ガスなどの他の添加剤もまた存在してもよい。哺乳動物への投与が予定されている本明細書に記載の材料はいずれも、１つ以上の製薬上許容されうる担体を含有しうるものである。
【００６７】
これに代えて、またはこれに加えて、保護剤は、乳幼児の食料源（例えば、圧搾母乳または市販の乳幼児用食品）と組み合わされうる。本明細書に記載の任意の組成物が、宿主の体の任意の部位に投与されることができ、その後、消化管へと送達される。組成物は、例えば、哺乳動物の口、鼻粘膜、血液、肺、小腸、筋組織、皮膚、または腹腔に送達されうる。送達の経路について、組成物は、静脈内に、頭蓋内に、腹腔内に、筋肉内に、皮下に、筋肉内に、直腸内に、膣内に、気管内に、皮内に、もしくは経皮注入で、経口投与もしくは経鼻投与によって、または長時間の漸次灌流（gradual perfusion）によって投与されうる。さらに他の例では、組成物のエアロゾル製剤が吸入によって宿主に投与されうる。
【００６８】
必要とされる保護剤の用量は、剤の性質、投与経路、製剤の性質、患者の病状の性質、患者の身長、体重、表面積、年齢、および性別、他の投与薬剤、並びに担当医師の判断に依存するものである。保護剤の多様性や種々の投与経路で効率が異なることに鑑みると、必要とされる用量は広く変動することが予想される。これらの用量レベルにおける変動は、本技術分野において周知のように、最適化のための経験に基づく常法を用いて調整されうる。投与は単回であっても複数回（例えば、２回もしくは３回、４回、６回、８回、またはそれ以上）であってもよい。保護剤を適切な送達ベヒクル（例えば、高分子マイクロカプセル）中に封入すると、送達効率が向上しうる。
【００６９】
本明細書に記載の任意の組成物を用いた治療の期間は、１日から、上昇したリスクが臨床的に疑わしい限りその期間中（例えば、新生児集中治療室での滞在期間または乳幼児の期間）までの任意の期間でありうる。例えば、保護剤は、１日に複数回、１日１回、１週間に１回（例えば４週間から数ヶ月間）投与されうる。治療の頻度も変動しうることに留意すべきである。例えば、保護剤は、単回（もしくは２回、３回など）、毎日、毎週、または毎月投与されうる。
【００７０】
本明細書に記載の任意の組成物の有効量は、疾患のリスクがある、または治療を必要とする個体に投与されうる。本明細書で用いられる場合、「有効」との語は、患者において所望の応答を誘導する一方で有意な毒性を誘導しない任意の量を意味する。かような量は、特定の組成物の既知の量を投与した後の患者の応答を評価することによって、決定されうる。また、毒性（もしあれば）のレベルは、特定の組成物の既知の量を投与する前と後での患者の臨床症状を評価宇することによって、決定されうる。患者に投与される特定の組成物の有効量は、所望の結果並びに患者の応答および毒性のレベルに応じて調整されうることに留意すべきである。有意な毒性は、特定の患者ごとに変動しうるし、以下に限定されないが、患者の疾患状態、年齢、および副作用に対する耐性などの複数の因子に依存する。
【００７１】
本明細書に記載の保護剤は、感染性障害または炎症性障害（例えば、ＮＥＣ、胃腸感染症または敗血症）のリスクがある個体に対する他の予防手段または治療手段と組み合わせて投与されうる。保護剤は、他の薬剤または治療手段を用いた治療の前に、これと同時に、またはこの後に、投与されうる。他の治療方法としては、抗生物質（バンコマイシン、カナマイシン、ゲンタマイシン、セフォタキシム、クリンダマイシンまたはメトロニダゾール）の投与、ＩｇＧおよびＩｇＡの腸内への共投与、アミノ酸補給、血小板活性化因子（ＰＡＦ）アンタゴニストの使用またはＰＡＦ−アセチルヒドロラーゼの投与、多価不飽和脂肪酸の投与、上皮成長因子の投与、および出生前のコルチコステロイド類の投与が挙げられる。保護剤はまた、他の食事療法（母乳給餌、乳幼児用食品、非経口的液体、遅延されたまたは緩徐な給餌の慎重な管理）とともに、またはこれに加えて、投与されうる。
【００７２】
分泌者としての状態に基づき、ＮＥＣまたは胃腸感染症のリスクがあると同定された乳幼児の治療経過の判定方法もまた、提供される。乳幼児の食餌源中の分泌抗原（例えば、α１，２フコシルグリカン類）のレベルが、参照サンプル中における同一の分泌抗原のレベル比較されうる；食餌源中の分泌抗原のレベルは、参照サンプル中の分泌抗原のレベルと比較して減少しているかまたは上昇しているものとして分類されうる。分泌状態によってＮＥＣおよび胃腸感染症のリスクがあることが示されており、その食餌源中の分泌抗原のレベルが低下している乳幼児は、α１，２フコシルグリカン類、プロバイオティック有機体またはプレバイオティック剤の１つ以上を用いて治療されうる。
【００７３】
乳幼児の食餌源は、乳幼児自身の母親もしくはドナー源のいずれか由来の乳汁、または市販の乳幼児用食品でありうる。母乳および製剤中の１つ以上の分泌抗原のレベルが、例えばＥＬＩＳＡ、クロマトグラフィまたは他の手法によって、上述した参照サンプル中のレベルと比較して、評価されうる。
【００７４】
母乳のオリゴ糖は通常、還元末端にラクトース部位を含み、非還元末端にフコース部位を含む。オリゴ糖中へのフコースのα１，２結合による付加は、主として分泌遺伝子（Ｓｅ（ＦＵＴ２））によって生成されるフコシルトランスフェラーゼによって触媒される；α１，３またはα１，４結合によるフコースの付加は、ルイス遺伝子（Ｌｅ（ＦＵＴ３））またはこのファミリーの他のα１，３トランスフェラーゼ遺伝子群（ＦＵＴ４、５、６、７、および９）によって触媒される。２−および３／４−フコシルトランスフェラーゼの活性の変動は、不活性な、または部分的に活性な遺伝子多型に基づくものである可能性がある。かような変動により、特定のフコシルオリゴ糖類の相対量が異なる乳汁の表現型が発現しうる。非分泌者である女性は、測定可能な量の２−結合フコシルオリゴ糖類を乳汁または他の体液中に発現していない。しかし、乳汁のフコシルオリゴ糖類の発現は分泌者間でも変動する可能性があり、１，３−および１，４−結合フコースのみを含有するフコシルオリゴ糖に対する１，２−結合フコシルオリゴ糖類の比率は、授乳の最初の１年間にわたって、指数関数的に減少する。
【００７５】
適当なα１，２フコシルグリカン類の例としては、以下に限定されないが、Ｈ−２の類似体である２’−フコシルラクトース（２’−ＦＬ）、Ｈ−１の類似体であるラクト−Ｎ−フコペンタオース−Ｉ（ＬＮＦ−Ｉ）、ルイスｂの類似体であるラクト−Ｎ−ジフコヘキサオースＩ（ＬＤＦＨ Ｉ）、ルイスｙの類似体であるラクトジフコテトラオース（ＬＤＦＴ）、並びに、ルイスａの類似体であるラクト−Ｎ−ジフコヘキサオースＩＩ（ＬＮＦ−ＩＩ）、およびルイスｘの類似体であるラクト−Ｎ−ジフコヘキサオースＩＩＩ（ＬＮＦ−ＩＩＩ）が挙げられる。コアタイプ１構造であるラクト−Ｎ−テトラオース（ＬＮＴ）は、ラクトース上の末端Ｇａｌβ１，３ＧｌｃＮＡｃである。ラクトースは、乳汁中の最も豊富なタイプ２構造のコアである（２’−ＦＬ、３−ＦＬ、およびＬＤＦＴ）が、ＬＮＦ−ＩＩＩのコアは、ラクトース末端上のＧａｌβ１，４ＧｌｃＮＡｃであるラクト−Ｎ−ネオテトラオースである。他の組織において、ルイス構造部位はラクトサミン骨格（Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ）に基づく；しかし、乳汁中で最も一般的なタイプ２フコシルオリゴ糖類は、ラクトース（Ｇａｌ−Ｇｌｃ）から合成され、このためタイプ２ルイス構造に対するグルコース類似体として定義される。これらの構造のエピトープは、乳汁の種々の複合糖質に発現が見られ、これらの複合糖質もまた、予防および／または治療の目的で用いられうる。
【００７６】
食餌源における分泌抗原のレベルが低下している乳幼児には、上述したα１，２フコシルグリカン類、プロバイオティック有機体またはプレバイオティック剤を供給することによって経腸的に補給してもよい。
【実施例】
【００７７】
実施例１．細菌のコロニー化は腸管でのグリコシル化を誘導する
消化管におけるフコシル化グリカン類およびシアル化グリカン類の発現は発達中に変動し、これは授乳期間中の乳汁で見られる変化に類似したものである。マウス小腸では、Ｆｕｔ２ｍＲＮＡおよびα１，２／３−フコシルトランスフェラーゼ活性が離乳時に急に上昇するのに対し、シアリルトランスフェラーゼ活性の発現は低下する。これらの２つの酵素活性の反転は、離乳時の粘膜でのグリカン発現の急激な変化および腸内微生物叢の組成の変化に一致するものである。これらの変化の誘導が固有の遺伝的プログラムによるものであるか、食餌もしくは成人の微生物叢による外因性の制御によるものであるかは、以下のように判定した。
【００７８】
通常は離乳時に発現するフコシルトランスフェラーゼのアップレギュレーションは、無菌マウスでは起こらない。しかし、離乳後の無菌マウスをコロニー化すると、フコシルトランスフェラーゼおよびフコシル化が誘導される。これにより、細菌のコロニー化が粘膜表面のフコシル化を誘導していることが示唆された。このことは、抗生物質の混合物を摂取することによって細菌を欠乏させた（ＢＤ）成熟マウスで確認された。２週間後、Ｆｕｔ２ｍＲＮＡおよびフコシルトランスフェラーゼ活性は無菌マウスで見られるレベルまで低下し、フコシルグリカン類（ハリエニシダ アグルチニン１［ＵＥＡ−１］染色）はもはや大腸中に発現していなかった。抗生物質による治療を中止して正常な微生物叢を補充すると、正常にコロニー化された成熟消化管のレベルにまでＦｕｔ２ ｍＲＮＡおよびフコシルトランスフェラーゼ活性が回復し、粘膜表面上にフコシルグリカン類が完全に発現した。このことから、消化管のフコシル化はそのコロニー化によって制御されていることが確認された。
【００７９】
細胞外のコロニー化が細胞内でのＥＲＫ経路およびＪＮＫ経路の活性化をもたらすメカニズムには、未知の膜貫通受容体が関与しているものと仮説を立てた。膜貫通受容体のファミリーであるトール様受容体（ＴＬＲ）は、微生物に特有のパターン認識分子の細胞外における存在を感知し、細胞間のシグナル伝達経路を介して核へとシグナルを伝達することが既に知られていた。そこで、大腸粘膜におけるＦｕｔ２ｍＲＮＡおよびフコシルトランスフェラーゼ活性の細菌による誘導をもたらす細菌と大腸粘膜との間での情報伝達に、ＴＬＲファミリーの１種が関与しているか否かを調べた。ＴＬＲ２に変異があるマウスは、野生型マウスと同様に、コロニー化の喪失によって失われてしまう正常なフコシル化を示すことができる（図１２、次頁）。これに対し、ＴＬＲ４またはその下流メディエータであるＭｙＤ８８の変異体は、完全なレベルのフコシル化を示さない。このフコシル化は、コロニー化の喪失の影響を受けないものである。このことは、細菌誘導性の粘膜フコシル化に必要なＴＬＲ４のシグナル伝達経路と一致する。細菌欠乏マウスにおけるＴＬＲ４自体の活性化が、Ｆｕｔ２発現を促進する伝達経路を活性化するのに十分であるか否かを調べる目的で、細菌欠乏マウスへの飲水中に、ＴＬＲ４に特異的なリガンドであるＬＰＳを投与した。ＢＤマウス大腸のフコシルトランスフェラーゼ活性およびＦｕｔ２ｍＲＮＡは、超高純度ＬＰＳで処理すると正常な成体のレベルまで回復する。これに対し、ＴＬＲ２のリガンドであるペプチドグリカン（ＰＧ）で処理したＢＤマウスでは、フコシルトランスフェラーゼ活性およびＦｕｔ２ ｍＲＮＡのレベルはＢＤマウスの低レベルにとどまった。これらの結果から、細菌欠乏マウスでのＴＬＲ４の結合および促進が、消化管のフコシル化をもたらす上皮核イベントへの成体の消化管微生物叢によるシグナル伝達に必要かつ十分な重要なシグナルであることが強く示唆される。フコシル化ＴＬＲ４への結合がコロニー化誘導性の粘膜フコシル化に必須のシグナルであるならば、フコースに結合する微生物叢のサブセットがこの現象を反復することが予想される。混合微生物叢のフコース利用種を用いて、この仮説を検証した。バクテロイデス・フラジリスは、一般的な成熟哺乳動物の微生物叢において見られる特異的なフコース利用細菌である。細菌欠乏マウスをバクテロイデス・フラジリスで単一コロニー化すると、誘導Ｆｕｔ２ ｍＲＮＡにより媒介される、混合微生物叢を用いた再コロニー化と同程度のフコシル化が誘導され、フコース発現の誘導に関与している混合微生物叢のフコース利用細菌と一致していた。仮にそうであるならば、右パネルに示されるように、フコースを利用できなくされたバクテロイデス・フラジリスの変異体は粘膜におけるフコシル化の誘導へのシグナル伝達能を喪失するはずである。そして、フコース利用細菌による細菌欠乏マウスでのフコシル化エピトープ（一見するとフコシル化ＴＬＲ４である）の１セットへの結合は、小腸粘膜上でのフコシル化表現型の誘導に十分であるように見える。
【００８０】
実施例２：入院乳幼児の唾液中の組織血液型抗原（グリカン類）
シンシナティ地域新生児集中治療室に入院している在胎期間（ＧＡ）２４〜４２週の３６人の乳幼児を、２００５年５〜１２月の間に登録した。在胎期間によって１群あたり１２人ずつの患者の３つの群（出生時で２４〜２８週、２９〜３２週、および３３週以上）に階層化した。主要な先天異常と診断された乳幼児は除外した。シンシナティチルドレンズホスピタルメディカルセンター、グッドサマリタンホスピタルおよびユニバーシティホスピタルの施設内治験審査委員会により、本研究は承認されている。患者からは、書面によるインフォームドコンセントを得た。収集された母体の人口学的情報には、母体の年齢、人種、産科歴、現在の妊娠において生じた合併症、および妊娠中の母体への薬物治療が含まれていた。被験者登録に記録された臨床データおよび人口学的データには、人種、ジェンダー、在胎期間、出生体重、身長および頭囲が含まれていた。入院期間中の被験乳幼児について記録された臨床データには、呼吸補助の必要性およびその期間、経腸栄養の開始およびタイプ（母乳または製剤）、培養により判明した敗血症のエピソード、壊死性腸炎の発生（ベルの段階で２以上）、および抗生物質の使用の履歴が含まれていた。
【００８１】
検体収集
唾液検体を、登録時および、入院している被験者については２週間毎に採取した。各被験者からは、最大で５サンプルを採取した。唾液検体については、食餌の１〜２時間後に、ソフトガーゼを用いて口中から残留している母乳または製剤を除去し、滅菌した綿棒を挿入することによって回収した。見た目上、綿棒が唾液で湿ったら、これを検体回収容器中に移した。検体を簡単に４℃に保持した後、−８０℃に移した。全部で１０７の唾液サンプルを回収した。唾液で湿った綿棒を、１ｍＬのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で５分間溶かした。次いで、検体を１００００×ｇで１０分間遠心分離し、上清を回収した。各検体を１００℃にて１０分間煮沸し、４℃にて一晩静置した。サンプルを再度、１００００×ｇで１０分間遠心分離し、上清を回収し、１００ｍＬのアリコートに分割して、−８０℃にて静置した。
【００８２】
抗原検出アッセイのそれぞれについて、唾液サンプルの最適な希釈度を決定した。Ｌｅａ、Ｌｅｘ、Ｈ−１、Ｈ−２、シアル化Ｌｅａおよびシアル化Ｌｅｘ抗原の検出には、１：５０に希釈した唾液検体を用いた。Ｌｅｙ抗原の検出には１：１２５に希釈した唾液検体を用い、Ｌｅｂ抗原の検出には１：２５０に希釈したものを用いた。個々の被験者からの唾液サンプルの定量分析には、すべての抗原について１：５０に希釈したものを用いた。サンプルを４℃にて一晩、マイクロタイタープレート（Dynex Immunlon）上にコーティングした。５％ブロットを用いてブロッキングした後、ルイス抗原およびＡＢＨ抗原に特異的なモノクローナル抗体（ＭＡｂ）を１：１００希釈で用いた。組織血液型表現型の決定には、ヒト組織血液型抗原タイプに特異的な以下のＭＡｂを用いた。ＭＡｂ ＢＧ−４抗−Ｈタイプ１、ＢＧ−５抗Ｌｅａ、ＢＧ−６抗Ｌｅｂ、ＢＧ−７抗Ｌｅｘ、およびＢＧ−８抗Ｌｅｙについては、Signet Laboratoriesより購入した。ＭＡｂ ＢＣＲ９０３１抗Ｈタイプ２
、ＢＣＲ９０１０抗ＡおよびＢＣＲＭ１１００７抗Ｂについては、Accurate Chemical and Scientific Corporationより購入した。シアル化Ｌｅａおよびシアル化Ｌｅｘに対するＭＡｂはＥＭＤの製品であり、カタログ番号はそれぞれ５６５９４２および５６５９５３である。３７℃にて１時間インキュベートした後、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）に共役したヤギ抗マウスＩｇＧ、ＩｇＧ３またはＩｇＭ抗体を添加した。各工程の後、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ溶液を用いてプレートを５回洗浄した。ＴＭＢキット（Kirkegard & Perry Laboratories）を用いて比色反応を検出し、ＥＩＡスペクトルリーダー（Tecan）を用いて４５０ｎｍの波長で読み取った。
【００８３】
唾液サンプル中に検出可能なレベルの抗原の存在が確認されたすべての乳幼児について、試験第１週および退院前にＥＬＩＳＡによって得た平均光学密度の値（±標準誤差）を表１に示す。各抗原については、分けて検討した。本解析によって、未熟児では出生時からほとんどの分泌抗原（ルイスｂ、ルイスｙ、およびＨ−２）が存在すること、および、分泌抗原の発現は分娩後に増加することが示された。表１に示すように、分泌抗原のレベルは、その後の時点に回収されたサンプル（すなわち、退院後に乳幼児から採取されたサンプル）におけるレベルよりも高かった。ルイスｂ、ルイスｙおよびルイスｂおよびルイスｙは、経時的に有意な増加を示した；他の分泌抗原（Ｈ−１およびＨ−２）のレベルもまた増加したが、増加の割合は統計的な有意性にまでは至らなかった。
【００８４】
【表１】
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【００８５】
実施例３：
一般化推定方程式（ＧＥＥ）を用いて、分泌抗原の発現、分娩後の年齢、在胎期間、および抗生物質の使用の関係を分析した。分娩後第１週および「退院前」の２４人の乳幼児から唾液サンプルを回収した。実施例１に記載の手法に従ったＥＬＩＳＡにより、組織血液型抗原であるルイスａ、ルイスｘ、ルイスｂ、ルイスｙ、Ｈ−１、Ｈ−２、シアル化ルイスａ（ＳＬｅａ）およびシアル化ルイスｘ（ＳＬｅｘ）のレベルを測定した。出生時の在胎期間に従って、乳幼児を２２〜２８週、２９〜３４週、および３５〜４０週の群に分類した。ＧＥＥ分析には、従属変数として組織血液型抗原のＯＤ値を用い（表２の第１カラムでは「モデル」と称されている）、独立変数としては分娩後の週齢、在胎期間の群、および抗生物質の使用日数を含めた。ＧＥＥ分析について得られたβ係数を表２に示す。ＧＥＥ分析により、経過（抗生物質による乳幼児の治療（１〜５日）として定義される）は、分娩後の分泌抗原の発現の低下と有意に関連していることが示された。
【００８６】
【表２】
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【００８７】
実施例４：超低出生体重児（ＥＬＢＷ）の転帰の研究
シンシナティの新生児集中治療室で見られた１９２人の超低出生体重（＜１０００ｇ）児のコホートで、出生後第１週（第１〜７日）および第２週（第８〜１４日）に回収した唾液サンプルを用い、分泌抗原の発現、臨床転帰および壊死性腸炎（ＮＥＣ）の関係を分析した。この分析はレベルＩＩＩ新生児集中治療室を備えたシンシナティ地域の３つの病因で行なわれた前向き研究であり、乳幼児は２００２〜２００４年の間に登録された。除外基準には、主要な染色体異常または先天異常、嚢胞性線維症の診断、または担当の新生児生理学者によって生命の第１週の生存に不適合であると判断される医学的状態が含まれていた。登録後、唾液サンプルを人口学的データおよび臨床データと併せて採取した。その後、乳幼児からは週１回、唾液サンプルを回収した。食餌前の午前５時から午前１０時の間に、看護師または研究スタッフが滅菌綿棒を乳幼児の口中に静置し、唾液で浸すことにより唾液を回収した。サンプルを−８０℃にて凍結した。綿棒の綿部分を除去し、それを１ｍＬシリンジ中に静置し、２５０ｍＬの通常食塩水を用いて付着物を溶出することによって、綿棒から唾液を抽出した。図６は結果の散布図である。
【００８８】
研究対象集団におけるＮＥＣの割合は７．８％（ｎ＝１５）であった；後期発症敗血症の割合は３４．９％（ｎ＝６７）であった；死亡した割合は９．３％（ｎ＝１８）であった。ＮＥＣの１５症例のうち、６０％の症例で死亡が確認され、１９２人の被験乳幼児におけるＮＥＣによる死亡率は４．７％（ｎ＝９）であった。
【００８９】
各乳幼児から採取され、まとめて保存された唾液サンプル中の組織血液型抗原であるルイスａ、ルイスｘ、ルイスｂ、ルイスｙ、Ｈ１、Ｈ２、シアル化ルイスａ（ＳＬｅａ）、およびシアル化ルイスｘ（ＳＬｅｘ）のレベルを、実施例１に記載の手法に従ったＥＬＩＳＡによって測定した。α１，２結合フコースを含有する１つ以上の抗原を発現している個体を、分泌者と判定した。２０％（すなわち、３９人の乳幼児）が非分泌者（分泌抗原が検出されない）として分類された；１５３人の乳幼児（８０％）が分泌者として分類された。
【００９０】
各個体のグリカン（分泌抗原である、ルイスおよびシアル化抗原）値を用いて、分類・回帰ツリー（ＣＡＲＴ）解析により、ＮＥＣまたは死亡についての高リスク亜群を同定した。ＣＡＲＴ解析は、本研究のような臨床研究におけるリスクの診断マーカーまたは予測マーカーのためのアルゴリズムを同定するためのツリーベースの分割を利用する、確立された統計的手法である。再帰分割解析に基づく経験的な統計技術として、この手法はパラメータの仮定を必要とせず、プログレッシブ二値分割からなる決定木を介した連続的データまたはカテゴリデータの異なる値のセグメンテーションを伴うものである。予想値変数のそれぞれの値は潜在的分割とされ、最適な分割は、「不純物基準」を用いた症例と非症例との誤判別の最小化に基づいて選択される。この「不純物基準」は、当該ノードでのデータの二値分割に伴って生じる残差平方和の換算である。７つのすべての抗原について、ＣＡＲＴを用いて一度に解析して、各変数に対する最適なカットポイントを設定した。この工程（図１に部分的に示す）により得られたカテゴリー変数を次いで第２のＣＡＲＴモデルに再度代入した。この工程では、Ｈ−２が第１の分割（図２を参照）として生じ、７３人の乳幼児を、最低３８パーセンタイル値以下で高リスク群であると判定した（ＯＤ値＜０．６２７）。Ｈ−２低リスク群に分類された１１９人の乳幼児における６例のＮＥＣまたは死亡例（発生率５．０％、Ｐ＜０．０００１）と比較して、この群には１８例のＮＥＣまたは死亡例（発生率２４．７％）が含まれていた。唾液のＨ−２により高リスク群に分類された７３人の乳幼児（「低分泌者」および非分泌者）の中で、ＣＡＲＴモデルにより第２の分割を行なった：１９人が低リスクと分類され（ＮＥＣまたは死亡例は１例、発生率５．２％）、５４人が高リスクと分類された（ＮＥＣまたは死亡例は１７例、発生率３１．５％）。このモデルにより、１つの高リスク群（低分泌者および非分泌者、３１．５％リスク）および、５％に迫るほとんど同一のリスクを有する２つの低リスク群（高分泌者である１１９人、並びに、非分泌者および低分泌者であるが低ｓＬｅａである１９人）が同定された。最後に、これらの３つのノードを最終ＣＡＲＴモデルに再度代入した：その結果は、高リスク群対他のすべてを同定する二値分割であった（図２および図３）。この単一の分割（Ｈ−２およびｓＬｅａの組み合わせにより予測される高リスクカットポイント）は、曲線下面積による解析を実施する受信者によって発見されたものであり、全体の的中率は７７であった。ＣＡＲＴ解析については図５および図６にまとめた。
【００９１】
本発明の多くの実施形態について記載してきた。しかし、本発明の思想および範囲から逸脱しない限り、種々の変更がなされてもよいことは理解されうるであろう。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年3月5日(2014.3.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つ以上のα１，２フコシルグリカン類を含み、個体における胃腸の感染性疾患または胃腸の炎症性疾患の治療に用いられる組成物。
【請求項２】
前記α１，２フコシルグリカン類は、α１，２結合でコア配列に結合したフコース末端を含み、前記コア配列はガラクトース（β１−３）Ｎ−アセチルグルコサミン−Ｒ1またはガラクトース（β１−４）Ｎ−アセチルグルコサミン−Ｒ2（Ｒ1およびＲ2はそれぞれ独立してＨ、小ラジカル、単糖、二糖または多糖である）である、請求項１に記載の治療用組成物。
【請求項３】
前記α１，２フコシルグリカン類は、２'−フコシルラクトース（２'−ＦＬ）、ラクト−Ｎ−フコペンタオース−Ｉ（ＬＮＦ−Ｉ）、ラクト−Ｎ−ジフコヘキサオース Ｉ（ＬＤＦＨ Ｉ）、およびラクトジフコテトラオース（ＬＤＦＴ）からなる群から選択される、請求項１または２に記載の治療用組成物。
【請求項４】
前記α１，２フコシルグリカン類は他の骨格に結合している、請求項１〜３のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項５】
前記骨格は、糖タンパク質、糖ペプチド、糖脂質またはムチンである、請求項４に記載の治療用組成物。
【請求項６】
１つ以上のプロバイオティック有機体をさらに含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項７】
前記プロバイオティック有機体は、ラクトバチルス・ラムノーザスＧＧ、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・ロイテリ、ビフィドバクテリウム・インファンティス、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・ブレーヴェ、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス、ビフィドバクテリウム・ロンガム、サーモフィルス菌、サッカロマイセス・ブラウディおよびクリベロマイセス・ラクティスからなる群から選択される、請求項６に記載の治療用組成物。
【請求項８】
１つ以上のプレバイオティック剤をさらに含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項９】
前記プレバイオティック剤はフラクトオリゴ糖類である、請求項８に記載の治療用組成物。
【請求項１０】
前記プレバイオティック剤は、イヌリン、キシロオリゴ糖、またはガラクトオリゴ糖である、請求項８に記載の治療用組成物。
【請求項１１】
前記個体が乳幼児である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項１２】
前記胃腸の感染性疾患または胃腸の炎症性疾患が、壊死性腸炎、胃腸感染症、胃腸の炎症または敗血症である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【請求項１３】
製薬上許容されうる担体をさらに含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の治療用組成物。
【外国語明細書】
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