(57)【要約】【課題】種々の生活習慣病の要因物質と考えられている終末糖化産物の生成を抑制することができる物質を含み、生活習慣病、特に糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療に有用であり且つ副作用の少ない終末糖化産物生成抑制剤を提供すること。【解決手段】ムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を有効成分として含有する終末糖化産物生成抑制剤を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を有効成分として含有する終末糖化産物生成抑制剤。
【請求項２】
ムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を有効成分として含有する、糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための医薬組成物。
【請求項３】
終末糖化産物生成抑制有効量のムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を含有するものである、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
糖尿病合併症が、糖尿病網膜症、糖尿病腎症、糖尿病神経障害、糖尿病血管合併症および動脈硬化症からなる群より選ばれる１種以上の疾患である、請求項２または３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
糖類含有量が５ｇ以上であり、且つアミノ酸含有量および／または蛋白質含有量が２０ｇ以上である食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与されるものである、請求項２〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、経口液剤、シロップ剤、経口ゼリー剤、口腔用錠剤、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤、含嗽剤、注射剤および吸入剤からなる群より選ばれる剤形のものである、請求項２〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための、ムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を有効成分として含有する非ヒト動物用医薬組成物。
【請求項８】
請求項１に記載の終末糖化産物生成抑制剤または請求項７に記載の医薬組成物を非ヒト動物に投与することを含む、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症を予防および／または治療する方法。
【請求項９】
請求項１に記載の終末糖化産物生成抑制剤を飲食品に配合または添加することを特徴とする、機能性飲食品の製造方法。
【請求項１０】
サプリメントの製造のための、請求項１に記載の終末糖化産物生成抑制剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を有効成分として含有する終末糖化産物生成抑制剤に関する。また、本発明はムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を有効成分として含む、糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミノ酸と還元糖の混合物を加熱すると褐変する現象は、一般にメイラード反応と呼ばれ、食品分野では、食品の加熱処理や貯蔵中に生じる現象として知られている。メイラード反応は、生体内においても発生しており、１９６８年にはグリコシルヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）が生体内で同定されたことにより、糖尿病や老化の進行に伴い蛋白質の糖化反応が進行することが明らかにされた。そして、近年では、蛋白質の糖化反応における終末糖化産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ、以下「ＡＧＥｓ」とも称する）が糖尿病合併症や動脈硬化といった生活習慣病の発症や老化の進行に関与することが報告されている（非特許文献１〜３）。
【０００３】
生体内における蛋白質糖化反応の詳細は明らかとなっていないが、蛋白質に存在するアミノ基と還元糖に存在するアルデヒド基が反応し、シッフ塩基を形成した後、安定なアマドリ化合物を経由し、さらに長期の反応を経て、ＡＧＥｓに移行すると考えられている。
【０００４】
ＡＧＥｓは特定の物質を指すものではなく、その全容は未だ解明されていないが、蛍光性や架橋構造の有無によって、ペントシジン、ピロピリジン、ピラリン等、様々な物質の存在が確認されている。ＡＧＥｓの物理化学的な特徴としては、黄褐色で蛍光性（主に、Ｅｘ:３７０ｎｍ、Ｅｍ:４４０ｎｍ）を持ち、タンパク質間に架橋を形成することがある。しかし、ピラリンのように蛍光性を示さず、架橋構造を有しないＡＧＥｓも確認されている。
【０００５】
これらＡＧＥｓの体内蓄積は、皮膚老化、腎糸球体組織硬化部や腎動脈硬化症などの糖尿病合併症だけでなく、アルツハイマー病などの神経変性疾患、皮膚老化、骨の老化、眼球の老化、アルブミン蛋白の老化に深く関与することが報告されている（非特許文献４）。
【０００６】
したがって、生体内の糖化反応を阻止することは、糖尿病合併症や加齢に伴う動脈硬化、心筋異常などの発症・進展を防ぐ効果が期待される。このため、さまざまな糖化反応阻害剤やＡＧＥｓ生成阻害剤が開発検討されてきている。
【０００７】
特許文献１には、アミノグアニジン等の化合物を含むメイラード反応阻害剤が開示されている。アミノグアニジンは当該技術分野における医薬品の開発において最も研究されている、抗糖化作用を示す物質であるが、肝障害等の副作用を有することが確認されており、実用化には至っていない。
【０００８】
その他にも、特許文献２に記載のガンビールノキやシラカバ等の植物抽出物によるメイラード反応阻害剤などが知られているが、有効性や安全性の点に課題を残すものであった。
【０００９】
そこで、種々の疾患の発症、悪化に関与するＡＧＥｓの生成抑制において、重篤な副作用を有さない安全性の高い薬剤が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特公平６−６７８２７号公報
【特許文献２】特開２００５−０３５９１１号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】The Journal of Clinical Investigation, 1993, vol.91, pp.2470-2478
【非特許文献２】The New England Journal of Medicine, 1991, vol.325, pp.836-842
【非特許文献３】The Biochemical Journal, 2000, vol.350, pp.381-387
【非特許文献４】New Food Industry, 2011, vol.53, No.6
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、種々の生活習慣病の要因物質と考えられているＡＧＥｓの生成を抑制することができる物質を含み、生活習慣病、特に糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療に有用であり且つ副作用の少ないＡＧＥｓ生成抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、抗糖化作用に優れ、且つ副作用が無い物質について、天然物であり、食経験のある植物からのスクリーニングを試み、植物抽出物とその成分について検討した結果、ムラサキタデおよびアオタデの抽出物に強いＡＧＥｓ生成抑制効果を見出し、本発明を完成させた。
【００１４】
すなわち本発明は、ムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を有効成分として含有する終末糖化産物生成抑制剤（以下、「本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤」とも称する）を提供する。
【００１５】
本発明はまた、ムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を有効成分として含有する、糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための医薬組成物（以下、「本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物」とも称する）を提供する。
【００１６】
本発明はさらに、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための、ムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を含む非ヒト動物用医薬組成物、該医薬組成物または本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤を非ヒト動物に投与することを含む、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症を予防および／または治療する方法、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤を飲食品に配合または添加することを特徴とする機能性飲食品の製造方法、ならびにサプリメントの製造のための本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤の使用を提供する。
【発明の効果】
【００１７】
ＡＧＥｓは、種々の生活習慣病との関連が示唆されている物質であり、特に、糖尿病およびその合併症の発症および／または進行に深く関与するものである。したがって、本発明者らによりＡＧＥｓの生成を抑制する作用が見出されたムラサキタデ抽出物およびアオタデ抽出物は、糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための、副作用の少ない医薬組成物の有効成分として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、アミノグアニジン塩酸塩、ムラサキタデ抽出物およびアオタデ抽出物の糖化反応阻害率を示す。
【図２】図２は、ムラサキタデのエタノール抽出物から分配抽出を行うことにより得られた複数の画分の糖化反応阻害率を示す。
【図３】図３は、ムラサキタデの水抽出物から分配抽出を行うことにより得られた複数の画分の糖化反応阻害率を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤はムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を有効成分として含有するものである。
【００２０】
ムラサキタデ（Persicaria hydropiper (Polygonum hydropiper) f. purpurascens）は、別名「ベニタデ」や「アカタデ」とも称され、生ものの臭みや毒を消す働きがあることから、若芽を刺身のツマに用いるなどして食されている。一方、別名「アイタデ」とも称されるアオタデ（Persicaria hydropiper (Polygonum hydropiper) var. laetevirens）も、葉を蓼酢の材料として用い、鮎の塩焼き等とともに食されており、どちらも古くから食経験のある植物である。一般に、ムラサキタデの若芽は「紅蓼」の名称、アオタデの本葉は「鮎蓼」の名称でそれぞれ食材として流通している。
【００２１】
抽出物の原料として用いるムラサキタデおよび／またはアオタデの植物体は、開花期のものであっても栄養生長期のものであってもよく、生の状態であっても乾燥させたものであってもよい。また、抽出効率を高めるため、植物体を適宜細断ないし粉砕等したもの、例えば粉末状のものを抽出原料として用いてもよい。原料として用いる植物体の部位に関しては、花、葉、茎、根、またはこれらを含む全草のいずれを抽出原料として用いてもよいが、ムラサキタデであれば子葉が展開した段階の若芽、アオタデであれば本葉がそれぞれ入手し易いため、かかる部位を用いることが便宜である。
【００２２】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤および糖尿病予防／治療用医薬組成物の有効成分であるムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物は、一般的な植物成分抽出方法を用いて得ることができる。かかる抽出方法としては、例えば、熱水抽出法、煮沸抽出法、浸漬抽出法、振とう抽出法、ソックスレー抽出法、水蒸気蒸留法などが挙げられる。
【００２３】
抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール等の低級アルコール類、プロピレングリコール、１，３‐ブチレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン等のケトン類、ジエチルエーテル、アセトニトリル、酢酸エチル等のエステル類等を用いることができ、これらの中から対象とする植物の種類、後に行う加工処理、抽出物の使用目的などを考慮した上で選択すれば良い。抽出物を食品用途等へ使用するため有機溶媒の含有が好ましくない場合においては、水のみを使用すれば良く、抽出後に除去しやすいエタノールを単独で、又は水との任意の割合の混液として使用しても良い。一つの態様において、好ましい抽出溶媒は、水またはエタノールである。
【００２４】
抽出溶媒の使用量は、重量比で、１：２〜１：３０（植物原料：抽出溶媒）が好ましく、１：３〜１：２０がより好ましく、１：４〜１：１０がさらに好ましい。
【００２５】
抽出温度は各溶媒によって適宜決定すれば良いが、水抽出の場合は４〜１３０℃が好ましく、２５〜１１０℃がより好ましく、４０〜１００℃がさらに好ましい。抽出温度が４℃未満の場合、有効成分が抽出されにくい傾向があり、１３０℃を越える場合、有効成分が分解されやすい傾向がある。エタノール抽出の場合は４〜１００℃が好ましく、１０〜８０℃がより好ましく、２０〜６０℃がさらに好ましい。抽出温度が４℃未満の場合、有効成分が抽出されにくい傾向があり、１００℃を越える場合、有効成分が分解されやすい傾向がある。
【００２６】
また、抽出時間は、水抽出の場合は１分〜１５日間が好ましく、３分〜１日間がより好ましく、５分〜１時間がさらに好ましい。抽出時間が１分間未満の場合、有効成分が抽出されにくい傾向があり、１５日間を越える場合、有効成分が分解されやすい傾向がある。エタノール抽出の場合は１時間〜１５日間が好ましく、１２時間〜１０日間がより好ましく、１〜８日間がさらに好ましい。抽出時間が１時間未満の場合、有効成分が抽出されにくい傾向があり、１５日間を越える場合、有効成分が分解されやすい傾向がある。
【００２７】
本明細書において、「抽出物」の用語には、溶媒を用いる各種抽出方法によって得られる抽出液、該抽出液を濃縮した濃縮液、該抽出液を適当な溶媒で希釈した希釈液、該抽出液またはその濃縮液もしくは希釈液から加熱乾燥、減圧乾燥、凍結乾燥などの種々の方法によって溶媒を除くことにより得られる固形の抽出物（粉末状や粒状のもの等）、ならびに固形化剤やゲル化剤の添加等によって得られる固形もしくは半固形の抽出物が含まれるものとする。一つの好ましい態様において、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤および糖尿病予防／治療用医薬組成物の有効成分として用いるムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物は、抽出液から溶媒を除去した固形抽出物の形態である。
【００２８】
ムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物の抽出方法の例としては、原料の植物体１重量部に対して２〜３０重量部、好ましくは３〜１０重量部の水を加え、４０〜９０℃で１０〜１２０分間静置、あるいは１００℃で５〜１５分間煮沸する方法や、原料の植物体１重量部に対して２〜３０重量部、好ましくは３〜１０重量部のエタノールを加え、１０〜８０℃で１２時間〜１０日間静置、好ましくは２０〜６０℃で１〜８日間静置する方法等が挙げられる。
【００２９】
ムラサキタデおよび／またはアオタデから得られた抽出物は、そのまま使用してもよく、さらに精製処理に供してもよい。精製処理としては、例えば、クロマトグラフ法、イオン交換樹脂を使用する溶離法、溶媒による分配抽出等を単独でまたは組み合わせて採用することができる。クロマトグラフ法としては、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、薄相クロマトグラフィー、遠心液体クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を挙げることができ、これらのいずれか、またはそれらを組み合わせて行う方法が挙げられる。分配抽出に用い得る溶媒としては、酢酸エチル、ヘキサン、１−ブタノール等が挙げられる。一つの態様において、ムラサキタデおよび／またはアオタデの粗抽出物から分配抽出によって酢酸エチル層に抽出されて回収される精製抽出物は、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤または糖尿病予防／治療用医薬組成物の有効成分として優れた効果を発揮し得る。
【００３０】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、有効成分としてムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を含有するものであればよく、ムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物によるＡＧＥｓ生成抑制効果を妨げない限り、さらに賦形剤等を含むものであってもよい。したがって、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤中のムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物の割合は特に限定されない。例えば、固形抽出物を用いる場合、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、ムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を４０重量％以上、４５重量％以上、５０重量％以上、６０重量％以上、７０重量％以上、８０重量％以上、８５重量％以上、９０重量％以上、９５重量％以上または９８重量％以上含むものであり得る。あるいは、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、ムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物のみからなるものであってもよい。
【００３１】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、ペントシジン、クロスリン、ピロピリジン等の蛍光性ＡＧＥｓおよびピラリン、カルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）、３−デオキシグルコソン由来リジンダイマー（ＤＯＬＤ）、グリオキサール由来リジンダイマー（ＧＯＬＤ）、メチルグリオキサール由来リジンダイマー（ＭＯＬＤ）、イミダゾロン化合物等の非蛍光性ＡＧＥｓを含む種々のＡＧＥｓの生成を抑制することができる。一つの態様において、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、蛍光性ＡＧＥｓの生成抑制のために用いられるものである。
【００３２】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤と同様、有効成分としてムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を含有するものである。
【００３３】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物中に有効成分として含有させるムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物の量は、目的とする剤形等に応じて適宜設定することができるが、固形抽出物を用いる場合、通常、１〜９８重量％程度であればよく、２〜９５重量％程度であることが好ましく、３〜９０重量％程度であることがより好ましい。
【００３４】
本明細書において、糖尿病もしくは糖尿病合併症の「治療」には、既に糖尿病もしくは糖尿病合併症に罹患している患者における症状の進行を阻止することも含まれる。
【００３５】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物の投与方法は、経口投与または非経口投与のいずれであってもよい。また、投与時期は特に限定されず、食前、食中、食後、食間のいずれであってもよいが、例えば、糖類含有量が５ｇ以上である食事、またはアミノ酸および／または蛋白質含有量が２０ｇ以上である食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与するのが好ましく、糖類ならびにアミノ酸および／または蛋白質を前記含有量以上含有する食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与するのがより好ましい。前記アミノ酸としては、リジン、アルギニン等が挙げられ、その中でもＡＧＥｓ化し易いリジンおよび／またはアルギニンを前記含有量以上含有する食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与するのが好ましい。また、前記蛋白質としては、卵白アルブミン、乳アルブミン、グリアジン、乳カゼイン、大豆カゼイン等が挙げられ、その中でもＡＧＥｓ化し易い卵白アルブミン、乳アルブミンおよび乳カゼインから選ばれる１種以上を前記含有量以上含有する食事の食前、食中、食後および食間のいずれかに投与するのが好ましい。ここで、一般的に「食事」とは、生存に必要な栄養分をとるために毎日の習慣として物を食べること（飲食行為）あるいはその飲食物を意味するが、本明細書において用いる「食事」の用語は、一回の飲食行為において摂取する一まとまりの飲食物を意味するものとする。
【００３６】
本明細書において用いる場合、「糖類」とは、単糖および／または二糖を意味するものとする。これに対し「糖質」とは、炭水化物のうち食物繊維以外のものをいい、糖類の他に、オリゴ糖、多糖、糖アルコール等が含まれる。
【００３７】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物の投与量は、糖尿病またはその合併症の程度、その他の疾病の程度、年齢、性別等の条件に応じて適宜選択されるが、ＡＧＥｓの生成を抑制することができる量（以下、「ＡＧＥｓ生成抑制有効量」とも称する）を投与すればよい。ＡＧＥｓ生成抑制有効量は、当業者に周知の方法（各種の非臨床および／または臨床試験を含む）を用いて適宜決定することができる。
【００３８】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、ＡＧＥｓ生成抑制有効量のムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を一度に投与するものであっても良く、間隔を置いて複数回に分けて投与するものであっても良い。複数回に分けて投与する場合は、一日に投与されるムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物の合計量がＡＧＥｓ生成抑制有効量となればよく、食事の回数に合わせて投与するのが好ましい。
【００３９】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、糖尿病もしくは糖尿病合併症に罹患した者、または健常者のいずれに対しても投与することができるが、ＡＧＥｓとの関連性が高い糖尿病に罹患した者に対して投与するのが好ましい。糖尿病に罹患した者とは、ヘモグロビンＡ１ｃが６．１％（ＪＤＳ値）以上で、且つ、以下の（１）〜（３）のいずれかに該当する者を指す：（１）空腹時血糖値が１２６ｍｇ／ｄＬ以上、（２）随時血糖値（空腹か食後かにかかわらず）が２００ｍｇ／ｄＬ以上、および（３）ブドウ糖負荷後２時間値が２００ｍｇ／ｄＬ以上。糖尿病診断基準の詳細は、日本糖尿病学会による「糖尿病の分類と診断基準に関する委員会報告」（同学会のホームページ等から入手可能）に記載されている。
【００４０】
また、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、糖尿病に伴って発症する糖尿病網膜症、糖尿病腎症、糖尿病神経障害、糖尿病血管合併症、動脈硬化症、腎不全、アルツハイマー病、神経変性疾患、がん等の糖尿病合併症の予防および／または治療のために用いることができる。これらの糖尿病合併症の中でも、発症率の高い糖尿病網膜症、糖尿病腎症および／または糖尿病神経障害の予防および／または治療のために用いることが好ましい。
【００４１】
さらに、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、健常者に投与することにより、糖尿病およびその合併症を効果的に予防することができる。
【００４２】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、ムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物による糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療効果を妨げない範囲であれば、ムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物の他にさらに賦形剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、矯味剤、懸濁化剤、乳化剤、着香剤、溶解補助剤、着色剤、粘稠剤等の成分を添加して各種の剤形とすることができる。
【００４３】
本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物の剤形としては、錠剤（口腔内崩壊錠、チュアブル錠、発泡錠、分散錠、溶解錠）、カプセル剤、顆粒剤（発泡顆粒剤）、散剤、経口液剤（エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、リモナーデ剤）、シロップ剤（シロップ用剤）、経口ゼリー剤、口腔用錠剤（トローチ剤、舌下錠、バッカル錠、付着錠、ガム剤）、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤、含嗽剤、注射剤（輸液剤、埋め込み注射剤、持続性注射剤）、透析用剤（腹膜透析用剤、血液透析用剤）、吸入剤（吸入粉末剤、吸入液剤、吸入エアゾール剤）、坐剤、直腸用半固形剤、注腸剤、点眼剤、眼軟膏剤、点耳剤、点鼻剤（点鼻粉末剤、点鼻液剤）、膣錠、膣用坐剤、外用固形剤（外用散剤）、外用液剤（リニメント剤、ローション剤）、スプレー剤（外用エアゾール剤、ポンプスプレー剤）、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤（テープ剤、パップ剤）等が挙げられる。これらの中でも経口投与のし易さの点で、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、経口液剤、シロップ剤、経口ゼリー剤、口腔用錠剤、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤および含嗽剤が好ましく、生体内に吸収され易い点で、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤がより好ましい。
【００４４】
また、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、エキス剤、丸剤、酒精剤、浸剤・煎剤、茶剤、チンキ剤、芳香水剤、流エキス剤等の生薬関連製剤に本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤を添加した剤形で使用することもできる。これら剤形は、糖尿病またはその合併症の程度、その他の疾病の程度、年齢、性別等の条件に応じて適宜選択される。
【００４５】
更に、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、ＡＧＥｓ生成抑制効果を有する他の薬剤をさらに含むものとすることができる。これらの薬剤としては、例えば、インスリン抵抗性改善薬、脂質異常症治療薬、アンジオテンシンII１型受容体拮抗薬、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、メトホルミン等が例示される。
【００４６】
また、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物は、ＡＧＥｓ生成抑制効果を有する天然物または天然由来物質をさらに含むものとすることもできる。これらの天然物または天然由来物質としては、例えば、ドクダミ、セイヨウサンザシ、カモミール、ブドウ葉等のハーブ類、桜の花、トウモロコシの花柱および柱頭、セイヨウオオバコ種子、マロニエ、シャクヤク、バラの花、梅果実、山ぶどう、紫菊花、小麦胚芽、小麦胚芽由来のポリアミン、マンゴスチン等が例示される。
【００４７】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤またはその有効成分であるムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物は、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症を予防および／または治療するために用いることもできる。したがって、本発明の一態様において、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症の予防および／または治療のための、ムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物を含む非ヒト動物用医薬組成物（以下、本発明の非ヒト動物用医薬組成物とも称する）が提供される。また、該非ヒト動物用医薬組成物または本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤を非ヒト動物に投与することを含む、非ヒト動物における糖尿病もしくは糖尿病合併症を予防および／または治療する方法も提供される。非ヒト動物としては、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ等の家畜類や、イヌ、ネコ等のペットとして飼育される動物等が例示される。
【００４８】
本発明の非ヒト動物用医薬組成物に含有させるムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物の量、該医薬組成物の投与方法、投与時期、投与量および剤形、該医薬組成物においてムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物と併用可能な他の薬剤、天然物および天然由来物質、ならびに本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤を非ヒト動物に投与する場合における投与方法、投与時期、投与量等については、「本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物」について上述した内容と同様である。
【００４９】
さらに、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤は、食品添加剤として用いることもできる。したがって、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤を飲食品に配合または添加することにより、ＡＧＥｓの生成を抑制する機能性飲食品を提供することができる。また、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤を成分として使用することにより、ＡＧＥｓ生成を抑制するサプリメントを製造することもできる。この場合、製造するサプリメントの剤形に応じて適宜、賦形剤等を配合することができる。
【００５０】
以下、実施例を挙げて、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれら記載に限定されるものではない。
【実施例】
【００５１】
実施例１
ムラサキタデの抽出（エタノールによる抽出）
ムラサキタデの若芽（子葉）（４００ｇ）をエタノール（２．０Ｌ）に浸漬し、２５℃で７日間静置して抽出を行い、濾過にて抽出液と残渣に分け、抽出液を得た（素材と抽出溶媒の重量比は１：５）。抽出液を減圧乾燥にて乾燥させ、抽出物（１１．０３ｇ）を得た。以下、かかるエタノール抽出物をムラサキタデ抽出物（Ｅ）と表記する。
【００５２】
ムラサキタデの抽出（水による抽出）
ムラサキタデの若芽（子葉）（３００ｇ）に水（１．２Ｌ）を加え、１００℃で５分間煮沸して抽出を行い、濾過にて抽出液と残渣に分け、抽出液を得た（素材と抽出溶媒の重量比は１：４）。抽出液を凍結乾燥にて乾燥させ、抽出物（１１．３０g）を得た。以下、かかる熱水抽出物をムラサキタデ抽出物（Ｗ）と表記する。
【００５３】
アオタデの抽出（エタノールによる抽出）
２〜１０ｍｍ四方の大きさに細断したアオタデの本葉および葉柄（３３４ｇ）をエタノール（１．６７Ｌ）に浸漬し、２５℃で７日間静置して抽出を行い、濾過にて抽出液と残渣に分け、抽出液を得た（素材と抽出溶媒の重量比は１：５）。抽出液を減圧乾燥にて乾燥させ、抽出物（１１．７５ｇ）を得た。以下、かかるエタノール抽出物をアオタデ抽出物（Ｅ）と表記する。
【００５４】
アオタデの抽出（水による抽出）
２〜１０ｍｍ四方の大きさに細断したアオタデの本葉および葉柄（１５０ｇ）に水（０．６Ｌ）を加え、１００℃で５分間煮沸して抽出を行い、濾過にて抽出液と残渣に分け、抽出液を得た（素材と抽出溶媒の重量比は１：４）。抽出液を凍結乾燥にて乾燥させ、抽出物（９．２５ｇ）を得た。以下、かかる熱水抽出物をアオタデ抽出物（Ｗ）と表記する。
【００５５】
糖化反応阻害率の測定
ムラサキタデ抽出物およびアオタデ抽出物を用いて、ＡＧＥｓ形成に及ぼす作用について下記の方法で試験を行った。１０重量％Ｄ−グルコース（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）と１重量％ウシ血清アルブミン（ｆｒａｃｔｉｏｎＶ、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）を含有する６７ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）０．９ｍＬに、表１に示す組成のサンプル溶液０．１ｍＬを添加し、６０℃で２日間静置した。反応液の蛍光強度（励起波長３７０ｎｍ，蛍光波長４４０ｎｍ）をＶａｒｉｏｓｋａｎ Ｆｌａｓｈ（Ｔｈｅｒｍｏ社製）を用いて測定し、この値を以下に示す糖化反応阻害率計算式中のａ１とした。該計算式中のｂ１〜ｄ１についても同様の条件で反応させて蛍光強度を測定し、糖化反応阻害率を算出した。
糖化反応阻害率（％）＝１００−｛（ａ１−ｂ１）／（ｃ１−ｄ１）｝×１００
ａ１：各試験区のサンプル溶液０．１ｍＬ＋（１０重量％Ｄ−グルコース＋１重量％ウシ血清アルブミン＋６７ｍＭリン酸緩衝液）０．９ｍＬ
ｂ１：各試験区のサンプル溶液０．１ｍＬ＋６７ｍＭリン酸緩衝液０．９ｍＬ
ｃ１：各試験区の溶媒０．１ｍＬ＋（１０重量％Ｄ−グルコース＋１重量％ウシ血清アルブミン＋６７ｍＭリン酸緩衝液）０．９ｍＬ
ｄ１：各試験区の溶媒０．１ｍＬ＋６７ｍＭリン酸緩衝液０．９ｍＬ
【００５６】
【表１】
2014108931.tif 000002
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
【００５７】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤の有効成分であるムラサキタデ抽出物および／またはアオタデ抽出物は、アミノグアニジン塩酸塩と比較して同等もしくはそれ以上の優れた糖化反応阻害率を示した。結果を表２および図１に示す。
【００５８】
【表２】
2014108931.tif 000003
【００５９】
実施例２
ムラサキタデ抽出物(Ｅ)の分配抽出
実施例１と同様の方法で作製したムラサキタデ抽出物(Ｅ)について、極性の異なる３種類の溶媒にて、極性の低い溶媒から順に抽出を行った。
ムラサキタデ抽出物(Ｅ)（乾燥固形状）１．７１ｇを水１００ｍＬに溶解し、ヘキサン１００ｍＬを用いて、１０分間攪拌後、分配を行い、水可溶部を更にヘキサンにより合計３回抽出を行い、ヘキサン移行部と水可溶部に分けた。得られたヘキサン移行部を減圧下溶媒留去し、ヘキサン可溶部(Ｅ)０．５４ｇを得た。次に、得られた水可溶部を、水可溶部と同量の酢酸エチルを用いて３回抽出（攪拌１０分間／回）を行い、酢酸エチル移行部と水可溶部に分けた。得られた酢酸エチル移行部を減圧下溶媒留去し、酢酸エチル可溶部(Ｅ)５０．９８ｍｇを得た。更に得られた水可溶部を水可溶部と同量の１−ブタノールを用いて３回抽出（攪拌１０分間／回）を行い、１−ブタノール移行部と水可溶部に分けた。得られた１−ブタノール移行部を減圧下溶媒留去し、１−ブタノール可溶部(Ｅ)０．２５ｇを得た。この分配抽出の操作で最終的に得られた水可溶部を凍結乾燥させ、水可溶部(Ｅ)０．７４ｇを得た。
【００６０】
糖化反応阻害率の測定
ムラサキタデ抽出物（Ｅ）および、分配抽出で得られたヘキサン可溶部（Ｅ）、酢酸エチル可溶部（Ｅ）、１−ブタノール可溶部（Ｅ）、水可溶部（Ｅ）を用いて、ＡＧＥｓ形成に及ぼす作用について下記の方法で試験を行った。
０．１ＭＤＬ−グリセルアルデヒド（半井社製）と各５ｍｇ/ｍＬのＢｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨ（渡辺化学工業社製）、Ｂｏｃ−Ａｒｇ−ＯＨ（渡辺化学工業社製）を含有する０．５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）１．２５ｍＬに、表３に示す組成のサンプル溶液０．２５ｍＬを添加し、３７℃で７日間静置した。反応液の蛍光強度（励起波長３８０ｎｍ，測定範囲３９０−９００ｎｍ）をＶａｒｉｏｓｋａｎ Ｆｌａｓｈ（Ｔｈｅｒｍｏ社製）を用いて測定し、この値を以下に示す糖化反応阻害率計算式中のａ２とした。該計算式中のｂ２〜ｄ２についても同様の条件で反応させて蛍光強度を測定した。ｅ２、ｆ２については、混合後すぐに蛍光強度を測定し、糖化反応阻害率を算出した。
糖化反応阻害率（％）＝１００−｛（ａ２−ｂ２）−（ｅ２＋ｆ２）／（ｃ２−ｄ２）−（ｅ２＋ｆ２）｝×１００
ａ２：各試験区のサンプル溶液０．２５ｍＬ＋（０．１ＭＤＬ-グリセルアルデヒド＋５ｍｇ/ｍＬＢｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨ＋５ｍｇ/ｍＬＢｏｃ−Ａｒｇ−ＯＨ＋０．５Ｍリン酸緩衝液）１．２５ｍＬ
ｂ２：各試験区のサンプル溶液０．２５ｍＬ＋０．５Ｍリン酸緩衝液１．２５ｍＬ
ｃ２：各試験区の溶媒０．２５ｍＬ＋（０．１ＭＤＬ-グリセルアルデヒド＋５ｍｇ/ｍＬＢｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨ＋５ｍｇ/ｍＬＢｏｃ−Ａｒｇ−ＯＨ＋０．５Ｍリン酸緩衝液）１．２５ｍＬ
ｄ２：各試験区の溶媒０．２５ｍＬ＋０．５Ｍリン酸緩衝液１．２５ｍＬ
ｅ２：５ｍｇ/ｍＬＢｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨ＋５ｍｇ/ｍＬＢｏｃ-Ａｒｇ-ＯＨ＋０．５Ｍリン酸緩衝液
ｆ２：０．１ＭＤＬ-グリセルアルデヒド＋０．５Ｍリン酸緩衝液
【００６１】
【表３】
2014108931.tif 000004
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
【００６２】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤の有効成分であるムラサキタデ抽出物（Ｅ）を、分配抽出を行うことにより得られた酢酸エチル可溶部（Ｅ）は、他の画分と比較して優れた糖化反応阻害率を示した。結果を表４および図２に示す。
【００６３】
【表４】
2014108931.tif 000005
【００６４】
実施例３
ムラサキタデ抽出物(Ｗ)の分配抽出
実施例１と同様の方法で作製したムラサキタデ抽出物(Ｗ)について、極性の異なる３種類の溶媒にて、極性の低い溶媒から順に抽出を行った。
ムラサキタデ抽出物(Ｗ)（乾燥固形状）３．１８ｇを水１００ｍＬに溶解し、ヘキサン１００ｍＬを用いて、１０分間攪拌後、分配を行い、水可溶部を更にヘキサンにより合計３回抽出を行い、ヘキサン移行部と水可溶部に分けた。得られたヘキサン移行部を減圧下溶媒留去し、ヘキサン可溶部(Ｗ)７．３０ｍｇを得た。次に、得られた水可溶部を、水可溶部と同量の酢酸エチルを用いて３回抽出（攪拌１０分間／回）を行い、酢酸エチル移行部と水可溶部に分けた。得られた酢酸エチル移行部を減圧下溶媒留去し、酢酸エチル可溶部(Ｗ)１．０４ｇを得た。更に得られた水可溶部を水可溶部と同量の１−ブタノールを用いて３回抽出（攪拌１０分間／回）を行い、１−ブタノール移行部と水可溶部に分けた。得られた１−ブタノール移行部を減圧下溶媒留去し、１−ブタノール可溶部(Ｗ)０．６８ｇを得た。この分配抽出の操作で最終的に得られた水可溶部を凍結乾燥させ、水可溶部(Ｗ)１．３８ｇを得た。
【００６５】
糖化反応阻害率の測定
ムラサキタデ抽出物（Ｗ）および、分配抽出で得られたヘキサン可溶部（Ｗ）、酢酸エチル可溶部（Ｗ）、１−ブタノール可溶部（Ｗ）、水可溶部（Ｗ）を用いて、ＡＧＥｓ形成に及ぼす作用について、表５に示す組成のサンプル溶液を用いて、前記ムラサキタデ抽出物（Ｅ）の糖化反応阻害率の測定と同様の方法で試験を行った。
【００６６】
【表５】
2014108931.tif 000006
【００６７】
本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤の有効成分であるムラサキタデ抽出物（Ｗ）を、分配抽出を行うことにより得られた酢酸エチル可溶部（Ｗ）は、他の画分と比較して優れた糖化反応阻害率を示した。結果を表６および図３に示す。
【００６８】
【表６】
2014108931.tif 000007
【００６９】
散剤の製造
表７に示す原材料を混合し、散剤を製造した。該散剤は、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤、または本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物の一形態である。
【００７０】
【表７】
2014108931.tif 000008
【００７１】
錠剤の製造
表８に示す原材料を混合した後、連続式打錠機（Ｐｉｃｃｏｌａ Ｂ−１０／ＲＩＶＡ社製）を用い、杵金型（φ８ｍｍ、Ｒ１２ｍｍ）、１錠あたりの重量１５０〜２００ｍｇ、回転盤の回転数１２ｒｐｍ、打錠圧４ｋＮの打錠条件で直接打錠し、錠剤を製造した。該錠剤は、本発明のＡＧＥｓ生成抑制剤、または本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物の一形態である。
【００７２】
【表８】
2014108931.tif 000009
【００７３】
経口液剤の製造
表９に示す原材料を蒸留水に溶解し全量を５００ｍＬとし、経口液剤を製造した。該経口液剤は、本発明の糖尿病予防／治療用医薬組成物の一形態である。
【００７４】
【表９】
2014108931.tif 000010
【図１】
2014108931.tif 000011
【図２】
2014108931.tif 000012
【図３】
2014108931.tif 000013