(57)【要約】【課題】補体タンパク質Ｂ因子に結合し、副補体経路を選択的に阻害するモノクローナル抗体およびその抗原結合断片の新規設計型を提供する。【解決手段】本発明は、３番目のショートコンセンサスリピート（「ＳＣＲ」）領域内のＢ因子に選択的に結合すると共にＣ３ｂＢｂ複合体の形成を防止するマウスモノクローナル抗体１３７９（「ｍＡｂ１３７９」）に由来する人工ヒト抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片である。【選択図】図６
2014133753.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片であって、３番目のショートコンセンサスリピート（「ＳＣＲ」）領域でＢ因子に選択的に結合すると共にＣ３ｂＢｂ複合体の形成を防止するマウスモノクローナル抗体１３７９（「ｍＡｂ１３７９」）に由来し、かつ約１．０×１０−８Ｍから約１．０×１０−１０Ｍの間の平衡解離定数（「ＫＤ」）を有するヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
ＫＤが約１．０×１０−９Ｍから約９．０×１０−９Ｍの間である請求項１に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
ＫＤが約３．０×１０−９Ｍから約７．０×１０−９Ｍの間である請求項１に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
ＫＤが約３．７×１０−９Ｍ以下である請求項１に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
ＫＤが約４．５×１０−９Ｍ以下である請求項１に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６】
ＫＤが約５．４×１０−９Ｍ以下である請求項１に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
ＫＤが約６．５×１０−９Ｍ以下である請求項１に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８】
配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、および配列番号２０から成るグループから選択されたＶκ領域ポリペプチドと、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、および配列番号２１から成るグループから選択されたＶＨ領域ポリペプチドとを有する請求項１に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９】
配列番号１４のＶκ領域ポリペプチドと配列番号１５のＶＨ領域ポリペプチドとを有する請求項８に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
配列番号１６のＶκ領域ポリペプチドと配列番号１７のＶＨ領域ポリペプチドとを有する請求項８に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１１】
配列番号１８のＶκ領域ポリペプチドと配列番号１９のＶＨ領域ポリペプチドとを有する請求項８に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２】
配列番号２０のＶκ領域ポリペプチドと配列番号２１のＶＨ領域ポリペプチドとを有する請求項８に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１３】
抗原結合断片がＦａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および二重特異性抗体から成るグループから選択される請求項１に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
前記断片がＦａｂ’である請求項１３に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１５】
ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片のＶκ領域は、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、および配列番号２８から成るグループから選択されたＣＤＲ３−ＦＲ４領域に由来する結合特異性決定基（「ＢＳＤ」）を有し、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片のＶＨ領域は、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、および配列番号２９から成るグループから選択されたＣＤＲ３−ＦＲ４領域に由来するＢＳＤを有する請求項１に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１６】
配列番号２２のＶκ領域ＢＳＤポリペプチドと配列番号２３のＶＨ領域ＢＳＤポリペプチドとを有する請求項１５に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１７】
配列番号２４のＶκ領域ＢＳＤポリペプチドと配列番号２５のＶＨ領域ＢＳＤポリペプチドとを有する請求項１５に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１８】
配列番号２６のＶκ領域ＢＳＤポリペプチドと配列番号２７のＶＨ領域ＢＳＤポリペプチドとを有する請求項１５に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１９】
配列番号２８のＶκ領域ＢＳＤポリペプチドと配列番号２９のＶＨ領域ＢＳＤポリペプチドとを有する請求項１５に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２０】
抗原結合断片がＦａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および二重特異性抗体から成るグループから選択される請求項１５に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２１】
前記断片がＦａｂ’である請求項２０に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２２】
副補体経路の活性化が役割を果たす疾病または障害を治療する方法であって、請求項１に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片を、該疾病または該障害に罹患しているかまたは該疾病または該障害を起こす危険性のある個体へ投与することからなる方法。
【請求項２３】
前記疾病または前記障害が気道過敏症（「ＡＨＲ」）または気道炎症である請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片が、該抗体またはその抗原結合断片の投与前と比較して前記個体においてＡＨＲまたは気道炎症を低減するのに有効な量で前記個体に投与される請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＡＨＲまたは前記気道炎症が、喘息、慢性閉塞性肺疾患（「ＣＯＰＤ」）、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺炎、好酸球性肺炎、気腫、気管支炎、アレルギー性気管支炎気管支拡張症、嚢胞線維症、結核、過敏性肺炎、職業性喘息、類肉腫、気道過敏症症候群、間質性肺疾患、好酸球増加症、鼻炎、副鼻腔炎、運動誘発性喘息、汚染誘発性喘息、咳喘息、寄生性肺疾患、呼吸器合胞体ウイルス（「ＲＳＶ」）感染、パラインフルエンザウイルス（「ＰＩＶ」）感染、ライノウイルス（「ＲＶ」）感染およびアデノウイルス感染から成るグループから選択された疾病に関連する請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＡＨＲまたは前記気道炎症がアレルギー性炎に関連する請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＡＨＲまたは前記気道炎症が喘息に関連する請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＡＨＲまたは前記気道炎症がＣＯＰＤに関連する請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
副補体経路の活性化が寄与する疾病もしくは障害、副補体経路の活性化が該疾病もしくは該障害の少なくとも１つの徴候を悪化させる該疾病もしくは該障害、または副補体経路の活性化が引き起こす該疾病もしくは該障害に罹患しているかまたは該疾病もしくは該障害を起こす危険性のある個体において該副補体経路の活性化を選択的に阻害する方法であって、請求項１に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片を、該副補体経路の活性化の阻害を必要とする個体へ投与することからなる方法。
【請求項３０】
有効量の請求項１に記載のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片と、医薬として許容される担体とを含有する医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、補体タンパク質Ｂ因子に結合し、副補体経路を選択的に阻害するモノクローナル抗体およびその抗原結合断片の新規設計型に関する。また、本発明は包括的には、副補体経路が役割を果たす疾病を治療するためのそのような抗体および抗原結合断片の使用に関する。詳細には、本発明は、副補体経路の活性化を阻害し、かつ副補体経路の活性化が関与する疾病を治療するためのそのような抗体および抗原結合断片の使用に関する。そのような障害には、気道過敏症および気道炎症、虚血再潅流傷害、およびヒトを含む動物における関連する障害が含まれるが、これらに限定されるわけではない。
【背景技術】
【０００２】
免疫系の特定の細胞は、その体内における異種タンパク質の存在に応じて細菌タンパク質またはウイルスタンパク質のような抗体または免疫グロブリン（「Ｉｇ」）と呼ばれるタンパク質を生産する。抗体は、体内で異種タンパク質に結合し、中和する。
【０００３】
抗体は一般に、その標的タンパク質抗原にしっかりかつ特異的に結合するため、タンパク質発現の変更により特徴付けられる広範囲の疾病を治療するための潜在的に有用な治療薬となっている。非ヒト抗体分子を使用して、抗体媒介性疾病の治療に適した多くのタンパク質標的が同定されてきた。しかしながら、多くの治療的用途には、非ヒトＩｇ分子自体が免疫原性であるため（すなわち免疫反応を引き起こす可能性がある）、非ヒト抗体の効能および安全性は損なわれている。したがって、抗体が治療的用途に承認可能となる前に、その免疫原性を減少または除去すべく通常抗体は改変しなければならない。抗体ヒューマニアリング（Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｈｕｍａｎｎｅｒｉｎｇ，米国商標）は、自身の標的抗原に結合する能力を保持しつつ免疫原性を減少させるよう改変された抗体を生産する。
【０００４】
本願は、Ｂ因子に結合し、かつ副補体経路を選択的にブロックするマウスモノクローナル抗体の「ヒューマニアリング」について説明する。ＩｇＡ抗体および特定のＩｇ軽鎖も副補体経路を活性化することが報告されてはいるが、副補体経路は、通常、細菌、寄生動物、ウイルスまたは菌類により活性化される。循環しているＢ因子が活性化Ｃ３（Ｃ３ｂまたはＣ３Ｈ２Ｏのいずれか）に結合した場合に、副補体経路の活性化が開始する。この複合体はその後循環しているＤ因子により開裂され、酵素として活性な断片であるＣ３ｂＢｂまたはＣ３（Ｈ２Ｏ）Ｂｂのいずれかを生成する。これらの２つの酵素は循環Ｃ３を開裂させてＣ３ｂを生成することが可能であり、これは炎症を起こさせ、さらには活性化プロセスを増幅し、正のフィードバックループを生成する。Ｂ因子は副経路の活性化を可能にするために必要とされる。
【０００５】
最近の研究で示されたのは、補体の副経路がいくつかの動物疾病モデルの病因に重要な役割を果たしているということである。虚血／再潅流傷害後の腎臓内の補体の活性化は副経路によってほぼ排他的に媒介されており、副経路は関節炎の発症に重大な役割を果たす。恐らく最も驚くべきことは、副経路を欠損しているマウスは、古典的補体経路によって媒介されると従来仮定されていた疾病モデルである狼瘡腎炎のＭＲＬ／ｌｐｒモデルにおける腎炎からおよび抗リン脂質媒介性胎児消失から保護されることを実証されたことである。
【０００６】
本明細書で説明するヒューマニア化バリアントの元になっているマウス抗Ｂ因子抗体は、Ｂ因子欠損マウス（「ｆＢ−／−」）に免疫グロブリンに融合されたＢ因子の第２および第３のショートコンセンサスリピート（「ＳＣＲ」）領域を含む融合タンパク質を注射
することにより作製された。その後、マウスをＢ因子に対する抗体についてスクリーニングした。抗Ｂ因子抗体を生産する注射されたマウス由来の脾臓細胞を、当該技術分野で周知の標準的手順に従って骨髄腫細胞（ミエローマ）に融合した。得られたハイブリドーマ細胞の一つ（１３７９番）は、インビトロおよびインビボにおける副補体経路の活性化を完全に阻害するＩｇＧ１抗体（「ｍＡｂ１３７９」）を生産したｍＡｂ１３７９の抗原結合Ｆａｂ’断片も、副補体経路の活性化を完全に阻害する。このｍＡｂ１３７９を生産するハイブリドーマ細胞株を、寄託番号ＰＴＡ−６２３０の下、米国培養細胞株保存機関（「ＡＴＣＣ」）に寄託した。
【０００７】
エピトープマッピングにより、ｍＡｂ１３７９が３番目のＳＣＲ領域内のＢ因子に結合することが示された。さらなる実験により、ｍＡｂ１３７９はＣ３ｂＢｂ複合体の形成を防止することにより副補体の活性化を阻害することが実証された。最後に、ｍＡＢ  １３７９は、マウス、ラット、ヒト、ヒヒ、アカゲザル、カニクイザル、ブタ、ウサギおよびウマを含む多くの異なる種由来の血清において副補体活性化を阻害するその能力によって示されているように、多数の哺乳類にわたって保存されたエピトープに結合する。抗Ｂ因子抗体ｍＡｂ１３７９の生産および特徴付けは、本明細書に援用する特許文献１により詳細に説明されている。
【０００８】
特許出願および刊行物を含む本明細書で引用する参考文献はすべて、その全体を本明細書に組み込むものとする。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許出願出願公開第２００５／０２６０１９８Ａ１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
補体タンパク質Ｂ因子に結合し、副補体経路を選択的に阻害するモノクローナル抗体およびその抗原結合断片の新規設計型を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
１態様では、本発明は、３番目のショートコンセンサスリピート（「ＳＣＲ」）領域でＢ因子に選択的に結合すると共にＣ３ｂＢｂ複合体の形成を防止するマウスモノクローナル抗体１３７９（「ｍＡｂ１３７９」）に由来するヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片であって、約１．０×１０−８Ｍから約１．０×１０−１０Ｍの間の平衡解離定数（「ＫＤ」）を有するヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片を提供する。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、約１．０×１０−９Ｍから約９．０×１０−９Ｍ間の、または約３．０×１０−９Ｍから約７．０×１０−９Ｍの間のＫＤを有する。特定の実施形態、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、約３．７×１０−９Ｍ以下、約４．５×１０−９Ｍ以下、約５．４×１０−９Ｍ以下、または約６．５×１０−９Ｍ以下のＫＤを有する。
【００１２】
関連する態様では、本発明は、３番目のショートコンセンサスリピート（「ＳＣＲ」）領域内のＢ因子に選択的に結合すると共にＣ３ｂＢｂ複合体の形成を防止するマウスモノクローナル抗体１３７９（「ｍＡｂ１３７９」）に由来するヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片であって、約１．０×１０−８Ｍから約１．０×１０−１０Ｍの間の平衡解離定数（「ＫＤ」）を有するヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片を提供する。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号１６（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）、配列番号１８（ＴＡ１０２−４  Ｆａｂ’）、および配列番号２０（ＴＡ１０３−２
Ｆａｂ’）から成るグループから選択されたＶκ領域ポリペプチドと、配列番号１５（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号１７（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）、配列番号１９（ＴＡ１０２−４  Ｆａｂ’）、および配列番号２１（ＴＡ１０３−２  Ｆａｂ’）から成るグループから選択されたＶＨ領域ポリペプチドとを有する。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４（ＴＡ１０参照抗体）を有するＶκ領域ポリペプチドと配列番号１５（ＴＡ１０参照抗体）を有するＶＨ領域ポリペプチドとを備え、６．５５×１０−９Ｍ以下のＫＤを有する。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６を有するＶκ領域ポリペプチド（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）と配列番号１７（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）を有するＶＨ領域ポリペプチドとを備え、４．５３×１０−９Ｍ以下のＫＤを有する。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１８（ＴＡ１０２−４  Ｆａｂ’）を有するＶκ領域ポリペプチドと配列番号１９（ＴＡ１０２−４  Ｆａｂ’）を有するＶＨ領域ポリペプチドとを備え、５．４０×１０−９Ｍ以下のＫＤを有する。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０（ＴＡ１０３−２  Ｆａｂ’）を有するＶκ領域ポリペプチドと配列番号２１（ＴＡ１０３−２  Ｆａｂ’）を有するＶＨ領域ポリペプチドとを備え、３．７３−９Ｍ以下のＫＤを有する。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および二重特異性抗体から成るグループから選択される。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体の抗原結合断片はＦａｂ’である。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、約３．７×１０−９Ｍ以下、約４．５×１０−９Ｍ以下、約５．４×１０−９Ｍ以下、または約６．５×１０−９Ｍ以下のＫＤを有する。
【００１３】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）、配列番号１８（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）、および配列番号２０（ＴＡ１０３−２、Ｆａｂ’）から成るグループから選択されたＶκ領域ポリペプチドと、配列番号３５（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）、配列番号３６（ＴＡ１０２−４  Ｆａｂ’）、および配列番号３７（ＴＡ１０３−２  Ｆａｂ’）から成るグループから選択されたＶＨ領域ポリペプチドとを備える。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）を有するＶκ領域ポリペプチドと、配列番号３５（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）を有するＶＨ領域ポリペプチドとを備える。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１８（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）を有するＶκ領域ポリペプチドと、配列番号３６（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）を有するＶＨ領域ポリペプチドとを備える。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０（ＴＡ１０３−２、Ｆａｂ’）を有するＶκ領域ポリペプチドと、配列番号３７（ＴＡ１０３−２、Ｆａｂ’）を有するＶＨ領域ポリペプチドとを備える。
【００１４】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体または抗原結合断片は、配列番号１４（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号１６（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）、配列番号１８（ＴＡ１０２−４  Ｆａｂ’）、および配列番号２０（ＴＡ１０３−２  Ｆａｂ’）から成るグループから選択されたＶκ領域ポリペプチドを有し、Ｖκ領域ポリペプチドのアミノ酸配列は、最も近いヒト生殖細胞系列Ｖκ領域ポリペプチドと約８０％同一であり、最も近いヒト生殖細胞系列Ｖκ領域ポリペプチドと約８５％同一であり、最も近いヒト生殖細胞系列Ｖκ領域ポリペプチドと約９０％同一であり、または最も近いヒト生殖細胞系列Ｖκ領域ポリペプチドと約９５％同一である。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１５（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号１７（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）、配列番号１９（ＴＡ１０２−４  Ｆａｂ’）、および配列番号２１（ＴＡ１０３−２  Ｆａｂ’）から成るグループから選択されたＶＨ領域ポリペ
プチドを有し、ＶＨ領域ポリペプチドのアミノ酸配列は、最も近いヒト生殖細胞系列ＶＨ領域ポリペプチドと約８０％同一であり、最も近いヒト生殖細胞系列ＶＨ領域ポリペプチドと約８５％同一であり、最も近いヒト生殖細胞系列ＶＨ領域ポリペプチドと約９０％同一であり、または最も近いヒト生殖細胞系列ＶＨ領域ポリペプチドと約９５％同一である。
【００１５】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号１６（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）、配列番号１８（ＴＡ１０２−４  Ｆａｂ’）、および配列番号２０（ＴＡ１０３−２  Ｆａｂ’）から成るグループから選択されたＶκ領域ポリペプチドと、配列番号１５（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号１７（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）、配列番号１９（ＴＡ１０２−４  Ｆａｂ’）、および配列番号２１（ＴＡ１０３−２  Ｆａｂ’）から成るグループから選択されたＶＨ領域ポリペプチドとを有し、Ｖκ領域ポリペプチドのアミノ酸配列およびＶＨ領域ポリペプチドのアミノ酸配列は、最も近いヒト生殖細胞系列Ｖκ領域ポリペプチドおよび最も近いヒト生殖細胞系列ＶＨ領域ポリペプチドと約８０％同一であり、最も近いヒト生殖細胞系列Ｖκ領域ポリペプチドおよび最も近いヒト生殖細胞系列ＶＨ領域ポリペプチドと約８５％同一であり、最も近いヒト生殖細胞系列Ｖκ領域ポリペプチドおよび最も近いヒト生殖細胞系列ＶＨ領域ポリペプチドと約９０％同一であり、または最も近いヒト生殖細胞系列Ｖκ領域ポリペプチドおよび最も近いヒト生殖細胞系列ＶＨ領域ポリペプチドと約９５％同一である。
【００１６】
関連する態様において、本発明は、３番目のショートコンセンサスリピート（「ＳＣＲ」）領域でＢ因子に選択的に結合すると共にＣ３ｂＢｂ複合体の形成を防止するマウスモノクローナル抗体１３７９（「ｍＡｂ１３７９」）に由来するヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片であって、約１．０×１０−８Ｍから約１．０×１０−１０Ｍの間の平衡解離定数（「ＫＤ」）を有するヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１７】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２２（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号２４（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）２６（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）、および配列番号２８（ＴＡ１０３−２  Ｆａｂ’）から成るグループから選択された、３番目の相補性決定領域（「ＣＤＲ３」）および４番目のフレームワーク領域（「ＦＲ４」）に由来する結合特異性決定基（「ＢＳＤ」）を有するＶκ領域を備え、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片のＶＨ領域は、配列番号２３（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号２５（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）、配列番号２７（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）、および配列番号２９（ＴＡ１０３−２、Ｆａｂ’）から成るグループから選択された、ＣＤＲ３−ＦＲ４領域に由来するＢＳＤを有する。
【００１８】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２２（ＴＡ１０参照抗体）を有するＶκ領域ＢＳＤポリペプチドと配列番号２３（ＴＡ１０参照抗体）を有するＶＨ領域ＢＳＤポリペプチドを備え、６．５５×１０−９ＭのＫＤを有する。
【００１９】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２４（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）を有するＶκ領域ＢＳＤポリペプチドと配列番号２５（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）を有するＶＨ領域ＢＳＤポリペプチドを備え、４．５３×１０−９ＭのＫＤを有する。
【００２０】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２６（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）を有するＶκ領域ＢＳＤポリペプチドと配列番号２
７（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）を有するＶＨ領域ＢＳＤポリペプチドを備え、５．４０×１０−９ＭのＫＤを有する。
【００２１】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８（ＴＡ１０３−２、Ｆａｂ’）を有するＶκ領域ＢＳＤポリペプチドと配列番号２９（ＴＡ１０３−２、Ｆａｂ’）を有するＶＨ領域ＢＳＤポリペプチドを備え、３．７３×１０−９ＭのＫＤを有する。
【００２２】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および二重特異性抗体から成るグループから選択される抗原結合断片を有する。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体の抗原結合断片はＦａｂ’である。
【００２３】
別の態様では、本発明は、３番目のショートコンセンサスリピート（「ＳＣＲ」）領域でＢ因子に選択的に結合すると共にＣ３ｂＢｂ複合体の形成を防止するマウスモノクローナル抗体１３７９（「ｍＡｂ１３７９」）に由来するヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号１４（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号１６（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）、配列番号１８（ＴＡ１０２−４  Ｆａｂ’）、および配列番号２０（ＴＡ１０３−２  Ｆａｂ’）から成るグループから選択されたＶκ領域ポリペプチドと、配列番号１５（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号１７（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）、配列番号１９（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）、および配列番号２１（ＴＡ１０３−２  Ｆａｂ’）から成るグループから選択されたＶＨ領域ポリペプチドとを備えたヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００２４】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４（ＴＡ１０参照抗体）を有するＶκ領域ポリペプチドと、配列番号１５（ＴＡ１０参照抗体）を有するＶＨ領域ポリペプチドとを備える。
【００２５】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）を有するＶκ領域ポリペプチドと、配列番号１７（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）を有するＶＨ領域ポリペプチドとを備える。
【００２６】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１８（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）を有するＶκ領域ポリペプチドと、配列番号１９（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）を有するＶＨ領域ポリペプチドとを備える。
【００２７】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０（ＴＡ１０３−２、Ｆａｂ’）を有するＶκ領域ポリペプチドと、配列番号２１（ＴＡ１０３−２  Ｆａｂ’）を含むＶＨ領域ポリペプチドとを備える。
【００２８】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号１６（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）、配列番号１８（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）、および配列番号２０（ＴＡ１０３−２、Ｆａｂ’）から成るグループから選択されたＶκ領域ポリペプチドを備える。
【００２９】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１５（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号１７（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）、配列番号１９（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）、および配列番号２１（ＴＡ１０３−２、Ｆａｂ’）から成るグループから選択されたＶＨ領域ポリペプチドを備える。
【００３０】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および二重特異性抗体から成るグループから選択された抗原結合断片を含む。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体の抗原結合断片はＦａｂ’である。
【００３１】
別の態様では、本発明は、３番目のショートコンセンサスリピート（「ＳＣＲ」）領域でＢ因子に選択的に結合すると共にＣ３ｂＢｂ複合体の形成を防止するマウスモノクローナル抗体１３７９（「ｍＡｂ１３７９」）に由来するヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片であって、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片のＶκ領域は、配列番号２２（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号２４（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）２６（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）、および配列番号２８（ＴＡ１０３−２  Ｆａｂ’）から成るグループから選択された、３番目の相補性決定領域（「ＣＤＲ３」）および４番目のフレームワーク領域（「ＦＲ４」）に由来する結合特異性決定基（「ＢＳＤ」）を有し、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片のＶＨ領域は、配列番号２３（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号２５（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）、配列番号２７（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）、および配列番号２９（ＴＡ１０３−２、Ｆａｂ’）から成るグループから選択された、ＣＤＲ３−ＦＲ４領域に由来するＢＳＤを有する、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００３２】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２２（ＴＡ１０参照抗体）を有するＶκ領域ＢＳＤポリペプチドと配列番号２３（ＴＡ１０参照抗体）を有するＶＨ領域ＢＳＤポリペプチドを備える。
【００３３】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２４（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）を有するＶκ領域ＢＳＤポリペプチドと配列番号２５（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）を有するＶＨ領域ＢＳＤポリペプチドを備える。
【００３４】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２６（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）を有するＶκ領域ＢＳＤポリペプチドと配列番号２７（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）を有するＶＨ領域ＢＳＤポリペプチドを備える。
【００３５】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２８（ＴＡ１０３−２、Ｆａｂ’）を有するＶκ領域ＢＳＤポリペプチドと配列番号２９（ＴＡ１０３−２、Ｆａｂ’）を有するＶＨ領域ＢＳＤポリペプチドを備える。
【００３６】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２２（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号２４（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）２６（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）、および配列番号２８（ＴＡ１０３−２  Ｆａｂ’）から成るグループから選択された、３番目の相補性決定領域（「ＣＤＲ３」）および４番目のフレームワーク領域（「ＦＲ４」）に由来する結合特異性決定基（「ＢＳＤ」）を有する。
【００３７】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片のＶＨ領域は、配列番号２３（ＴＡ１０参照抗体）、配列番号２５（ＴＡ１０１−１  Ｆａｂ’）、配列番号２７（ＴＡ１０２−４、Ｆａｂ’）、および配列番号２９（ＴＡ１０３−２、Ｆａｂ’）から成るグループから選択された、ＣＤＲ３−ＦＲ４領域に由来するＢＳＤを有する。
【００３８】
特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片は、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および二重特異性抗体から成るグループから選択される抗原結合断片を有する。特定の実施形態では、ヒューマニア化抗Ｂ因子抗体の抗原
結合断片はＦａｂ’である。
【００３９】
別の態様では、本発明は、副補体経路の活性化が役割を果たす疾病または障害を治療する方法であって、３番目のショートコンセンサスリピート（「ＳＣＲ」）領域でＢ因子に選択的に結合すると共にＣ３ｂＢｂ複合体の形成を防止するマウスモノクローナル抗体１３７９（「ｍＡｂ１３７９」）に由来し、かつ約１．０×１０−８Ｍから約１．０×１０−１０Ｍの間の平衡解離定数（「ＫＤ」）を有するヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片を、該疾病または該障害に罹患しているかまたは該疾病または該障害を起こす危険性のある個体へ投与することからなる方法を提供する。
【００４０】
特定の実施形態では、疾病または障害が気道過敏症（「ＡＨＲ」）である。
特定の実施形態では、任意のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片が、該抗体またはその抗原結合断片の投与前と比較して前記個体においてＡＨＲまたは気道炎症を低減するのに有効な量で前記個体に投与される。
【００４１】
特定の実施形態では、ＡＨＲまたは気道炎症が、喘息、慢性閉塞性肺疾患（「ＣＯＰＤ」）、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺炎、好酸球性肺炎、気腫、気管支炎、アレルギー性気管支炎気管支拡張症、嚢胞性繊維症、結核、過敏性肺炎、職業性喘息、類肉腫、気道過敏症症候群、間質性肺疾患、好酸球増加症、鼻炎、副鼻腔炎、運動誘発性喘息、汚染誘発性喘息、咳変形喘息、寄生性肺疾患、呼吸器合胞体ウイルス（「ＲＳＶ」）感染、パラインフルエンザウイルス（「ＰＩＶ」）感染、ライノウイルス（「ＲＶ」）感染およびアデノウイルス感染から成るグループから選択された疾病に関連する。特定の実施形態では、ＡＨＲまたは前記気道炎症がアレルギー性炎、喘息、またはＣＯＰＤに関連する。
【００４２】
別の態様では、本発明は、副補体経路の活性化が寄与する疾病もしくは障害、副補体経路の活性化が該疾病もしくは該障害の少なくとも１つの徴候を悪化させる該疾病もしくは該障害、または副補体経路の活性化が引き起こす該疾病もしくは該障害に罹患しているかまたは該疾病もしくは該障害を起こす危険性のある個体において該副補体経路の活性化を選択的に阻害する方法であって、本明細書に開示のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片を、該副補体経路の活性化の阻害を必要とする個体へ投与することからなる方法を提供する。
【００４３】
別の態様では、本発明は、有効量の本明細書に開示のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片と、医薬として許容される担体とを含有する医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、医薬として許容される担体は、乾燥分散粉末；無水エタノール；小型カプセル；リポソーム；霧状スプレー；および注射可能な賦形剤；から成るグループから選択される。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】ｍＡｂ１３７９を生産するハイブリドーマから単離したｍＲＮＡから調製した第１鎖ｃＤＮＡの鋳型を使用した縮重Ｖ領域特異的プライマーにより生成した二本鎖ｃＤＮＡ生成物を示すアガロースゲル。
【図２】ｍＡｂ１３７９を生産するハイブリドーマ細胞株からクローニングされたＶＨおよびＶκｃＤＮＡ配列に由来するアミノ酸配列の比較。
【図３】ｍＡｂ１３７９から決定されたクローニングされたアミノ酸配列に対するクローニングされたＶＨおよびＶκｃＤＮＡ配列から得られたクローニングしたアミノ酸配列の比較。
【図４】パパイン消化による、クローニングされたＦａｂ’ＴＡ００３と、ｍＡｂ１３７９由来のＦａｂ’との間のＢ因子結合の比較。
【図５】バイオレイヤー（ｂｉｏ−ｌａｙｅｒ）干渉法によるＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔシステムで分析した組み換えヒトＢ因子に対するＦａｂ’断片結合の動力学。
【図６】ヒューマニア化抗体単離物ＴＡ１０１−１、ＴＡ１０２−４およびＴＡ１０３−２の配列に由来するアミノ酸配列の、参照抗体ＴＡ１０からのおよび最も近いヒト生殖細胞系の軽鎖および重鎖可変ドメイン遺伝子（「ＶＬ」および「ＶＨ」遺伝子）および連結セグメント（「Ｊ−セグメント」）からの対応する配列に対する比較。（ヒトＶＨ１−０２／ＪＨ４およびＶκＩＶ−Ｂ３／Ｊκ２）。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
補体Ｂ因子に選択的に結合すると共に副補体経路の活性化を選択的に阻害するヒューマニア化抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片が、ヒトを含む動物の副補体経路に関与する任意の疾病または障害を治療するために使用され得る。詳細には、そのような抗体またはその抗原結合断片は、副補体経路の活性化が役割を果たすヒトを含む動物の任意の疾病または障害を治療するために使用され得る。そのような疾病または障害には、例えば、アレルギー性喘息およびそれに伴う気道炎症および気道過敏症（「ＡＨＲ」）、慢性閉塞性肺疾患（「ＣＯＰＤ」）、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺炎、好酸球性肺炎、気腫、気管支炎、アレルギー性気管支炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、結核、過敏性肺炎、職業性喘息、類肉腫、気道過敏症症候群、間質性肺疾患、好酸球増加症、鼻炎、副鼻腔炎、運動誘発性喘息、汚染誘発性喘息、咳喘息、寄生性肺疾患、呼吸器合胞体ウイルス（「ＲＳＶ」）感染、パラインフルエンザウイルス（「ＰＩＶ」）感染、ライノウイルス（「ＲＶ」）感染、およびアデノウイルス感染、ならびに虚血再潅流傷害が含まれる。例えば、本明細書に援用する特許文献１を参照されたい。
【００４６】
アレルギー性喘息は気道炎症およびＡＨＲに関連する共通の徴候である。アレルギー性喘息の患者では、吸入したアレルゲンへの接触により、ＡＨＲおよび気道炎症の増加につながる。研究により、気管支肺胞洗浄（「ＢＡＬ」）液中のタンパク質に、タンパク質の補体Ｃ３、Ｃ４およびＣ５ファミリー、特にＣ３ａおよびＣ５ａに由来する生物活性断片のレベルが上昇することが示された。これは、このような患者では、アレルゲンにより誘発される機構による補体経路の活性化がアレルゲンへの曝露の後に肺で起こることを示唆している。動物モデルは、アレルギー性気道疾病の進展に対する補体の役割のさらなる洞察を与えた。Ｃ３またはＣ３ａ受容体欠損動物は、アレルゲン誘発性気道疾病の進展から保護されているように思われる。例えば、本明細書に援用する特許文献１を参照されたい。
【００４７】
定義
本明細書に使用する場合、用語「抗体」または「免疫グロブリン」は、タンパク質の免疫グロブリン（「Ｉｇ」）スーパーファミリーの糖タンパク質のことを指す。抗体または免疫グロブリン（「Ｉｇ」）分子は四量体であり、２つの同一の軽鎖ポリペプチドと２つの同一の重鎖ポリペプチド（用語「軽鎖ポリペプチド」および「軽鎖」または「重鎖ポリペプチド」および「重鎖」は、Ｉｇ分子のポリペプチドを説明するために本明細書では互換的に使用する）を有する。２つの重鎖はジスルフィド結合により連結され、各重鎖がジスルフィド結合により軽鎖に連結される。各全長Ｉｇ分子は、特異的標的または抗原に対する少なくとも２つの結合部位を有する。
【００４８】
免疫系は、いくつかの異なるクラスのＩｇ分子（「アイソタイプ」）を生産し、それにはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが含まれるが、各々は存在する重鎖ポリペプチドの特定のクラスによって同定される。つまり、アルファ（「α」）がＩｇＡに見出され、デルタ（「δ」）がＩｇＤに見出され、イプシロン（「ε」）がＩｇＥに見出され、ガンマ（「γ」）がＩｇＧに見出され、ミュー（「μ」）がＩｇＭに見出される。ＩｇＧでは少なくとも５つの異なるγ重鎖ポリペプチド（「アイソタイプ」）が見出される
。対照的に、軽鎖ポリペプチドのアイソタイプはカッパー（「κ」）およびラムダ（「λ」）だけである。抗体アイソタイプの異なる特性は、重鎖の定常領域の配列により定義される。
【００４９】
ＩｇＧ分子は、ジスルフィド結合により共に結合された２つの軽鎖（κまたはλ型）と２つの重鎖（γ型）とを有する。ＩｇＧ軽鎖のκ型とλ型はいずれも、可変領域（「ＶＬ−」、「Ｖκ−」、または「Ｖλ−領域」等と様々に呼ばれる）と呼ばれる比較的可変なアミノ酸配列の領域と、定常領域（「ＣＬ−領域」）と呼ばれる比較的保存されたアミノ酸配列の領域とを備えている。同様に、各ＩｇＧ重鎖は、可変領域（「ＶＨ領域」）と１つまたは複数の保存領域とを備える。すなわち、完全なＩｇＧ重鎖は３つの定常領域（「ＣＨ１（−）」、「ＣＨ２（−）」および「ＣＨ３（−）領域」）と、ヒンジ領域とを備えている。各ＶＬ領域またはＶＨ領域内には、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）としても知られる超可変領域が、比較的保存されたフレームワーク領域（「ＦＲ」）の間に散在する。一般に、軽鎖または重鎖のポリペプチドの可変領域は、ポリペプチドに沿って以下の順に配置された４つのＦＲと３つのＣＤＲを含む：ＮＨ２−ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４−ＣＯＯＨ。ＣＤＲとＦＲは共に、ＩｇＧ結合部位の三次元構造を決定し、従って、ＩｇＧ分子が結合する特定の標的タンパク質または抗原を決定する。各ＩｇＧ分子は二量体であり、２つの抗原分子に結合することが可能である。プロテアーゼパパインによる備えた二量体ＩｇＧの開分裂により、２つの同一の抗原結合断片（「Ｆａｂ’」）と、「Ｆｃ」断片とが生じる（Ｆｃがこのように命名されているのは容易に結晶化するためである）。
【００５０】
本明細書に使用する場合、用語「抗原結合断片」は、特にその同族抗原に結合する能力を保持する抗体または免疫グロブリン分子の断片を指す。抗原結合断片は、一般に、補体を固定する能力を与えると共に抗体依存的細胞媒介性細胞毒性（「ＡＤＣＣ」）を刺激する完全長抗体またはＩｇ分子中に存在する１つまたは複数の機能的領域（ドメイン）の一部または全部を欠いている。抗原結合断片は、完全長抗体の単離物から調製することが可能である。分離する、パパイン（これは可変、抗体軽鎖の可変領域および定常領域と抗体重鎖の可変領域および第１の定常領域とを含む２つの同一の１価抗原結合断片（「Ｆａｂ’」）を生成する）またはペプシン（これはそれらのカルボキシル末端付近で共有結合された一対のＦａｂ’断片を備えた一つの二価の抗原結合断片（「Ｆａｂ’）２」を生成する）を含むプロテアーゼによる消化により、調製可能である。
【００５１】
「Ｆｖ」断片、一本鎖Ｆｖ抗体（「ｓｃＦｖ」）、二特異性抗体（ｂｉ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、ヒト化抗体またはヒューマニア化抗体もしくはその等価物等の他の抗原結合断片は、標準的組換えＤＮＡ法を用いて生産可能である。「Ｆｖ」断片は、完全な抗原認識および結合部位を有し、１つのＶＨ領域と１つのＶＬ領域からなる二量体を含む抗体断片である。「ｓｃＦｖ」抗体断片は、一本のポリペプチド鎖にＶＨと１つのＶＬ領域を含む。「二重特異性抗体」は、同じポリペプチド中で重鎖可変領域が軽鎖可変領域に接続された２つの抗原結合部位を備えた小さな抗体断片である。同じポリペプチドのＶＨ領域とＶＬ領域がペアを形成できないように非常に短いリンカーを使用することによって、領域は、第２のポリペプチドの相補的領域と対を形成し、２つの抗原結合部位を形成するようにされる。
【００５２】
本明細書に使用する場合、用語「結合特異性決定基」すなわち「ＢＳＤ」は、特定のＩｇ分子の抗原結合特異性を媒介する、ＩｇＧ  ＶＬまたはＶＨポリペプチドの３番目の相補性決定領域（「ＣＤＲ３」）と４番目のフレームワーク領域（「ＦＲ４」）ののアミノ酸配列の全部または一部を指す。ＢＳＤは、特定のＢＳＤが同族のＶＨ由来のＣＤＲ３−ＦＲ４のアミノ酸配列と対を形成するＶＬ領域由来のＣＤＲ３−ＦＲ４のアミノ酸配列を含むように、重鎖および軽鎖対において機能する。
【００５３】
本明細書に使用する場合、用語「エピトープ」は、抗体、免疫グロブリンまたは抗原結合断片が結合する所与のタンパク質、ポリペプチドまたは抗原（すなわちＢ因子）等の巨大分子上の部位であって、それに対する抗体が生産される部位を指す。用語「エピトープ」は、用語「抗原決定基」、「抗体結合部位」または所与のタンパク質、ポリペプチドまたは抗原の「保存された結合表面」と互換的に使用することが可能である。より詳細には、エピトープは、抗体結合に関与するアミノ酸残基により、および三次元空間でのそのコンホメーション（例えばコンホメーショナル（立体配置的）エピトープまたは保存された結合表面）により、定義することが可能である。エピトープは、たった約４−６個のアミノ酸残基の小さなペプチドに含まれる場合もあるし、タンパク質のより大きなセグメントに含まれる場合もあり、エピトープの三次元構造を参照する場合には、特に抗体結合エピトープに関しては、連続するアミノ酸残基で構成される必要はない。抗体結合エピトープは、連続的または直線エピトープというよりもしばしばコンホメーショナルエピトープであり、あるいは言い換えれば、抗体が結合するタンパク質またはポリペプチドの表面上に３次元に配置されたアミノ酸残基により定義されるエピトープである。上述したように、コンホメーショナルエピトープは、連続するアミノ酸残基の配列では構成されず、代わりに、残基は恐らく一次タンパク質配列では広く分離されており、タンパク質がその天然のコンホメーションに３次元に折り畳まれる方法によって結合表面を形成するために共に集合される。
【００５４】
ｍＡｂ１３７９により認識され、本明細書に記載するヒューマニア化バリアントにより共有されるエピトープは、Ｂ因子の３番目のＳＣＲ領域の一部分の三次元構造内に位置する直線エピトープではないコンホメーショナルエピトープである。例えば本明細書に援用する特許文献１を参照されたい。
【００５５】
ヒトＢ因子は、その端末アミノ酸１−２５にわたる２５個のアミノ酸シグナルペプチドを含む７６４個のアミノ酸プレプロタンパク質として発現される。ヒトＢ因子プレプロタンパク質のアミノ酸配列は、ＮＣＢＩデータベース悪セッション番号第Ｐ００７５１でも見出される。成熟ヒトＢ因子は、２５個のアミノ酸シグナルペプチドがないアクセッション番号第Ｐ００７５１のアミノ酸配列（つまり配列番号３０）を含む。成熟ヒトＢ因子の３番目のＳＣＲ領域はＰ００７５１の位置１３７から位置１９５まで延びている。エピトープを含む部分は配列番号３０のアミノ酸位置Ａｌａ１３７−Ｓｅｒ１９２のほぼ全部（例えば少なくとも約９０％）により定義されるＢ因子の三次元構造であるか、または天然完全長Ｂ因子配列で起こるようにコンホメーショナルに配置された非ヒトＢ因子配列の等価な位置である。
【００５６】
マウスｍＡｂ１３７９、および本明細書に記載のヒューマニア化バリアントは、成熟ヒトＢ因子タンパク質（配列番号３０）のＴｙｒ１３９位置からＳｅｒ１８５位置までを含む配列の少なくとも一部を含むヒトＢ因子のエピトープを含む３番目のＳＣＲ領域の一部内にあるか少なくとも該配列を含むエピトープまたは保存された結合領域、成熟ヒトＢ因子タンパク質（配列番号３０）のＴｙｒ１３９位置からＳｅｒ１４１位置までを含む配列の少なくとも一部を含むヒトＢ因子のエピトープ、成熟ヒトＢ因子タンパク質（配列番号３０）のＧｌｕ１８２位置からＳｅｒ１８５位置までを含む配列の少なくとも一部を含むヒトＢ因子のエピトープ、非ヒトＢ配列における以下の１つまたは複数の位置またはその等価な位置を含むヒトＢ因子（配列番号３０）の少なくとも一部を含むＢ因子のエピトープ：Ａｌａ１３７、Ｔｙｒ１３９、Ｃｙｓ１４０、Ｓｅｒ１４１、Ｇｌｕ１８２、Ｇｌｙ１８４、またはＳｅｒ１８５、もしくは非ヒト動物種の等価な位置の少なくとも一部分を含むエピトープに結合する。別の態様では、エピトープは、配列番号３０の以下のアミノ酸位置または非ヒトＢ因子配列における該位置に等価な位置のうちの全部またはほぼ全部を含むＢ因子の３番目のＳＣＲ領域部分の一部内にあるか、該部分を含む：Ａｌａ１３７
、Ｔｙｒ１３９、Ｓｅｒ１４１、Ｇｌｕ１８２、Ｓｅｒ１８５、Ｔｈｒ１８９、Ｇｌｕ１９０およびＳｅｒ１９２。
【００５７】
当業者は、容易にヒトＢ因子の配列を別の動物種由来のＢ因子の配列と配列させ、ＳＣＲ領域の位置と上記のアミノ酸位置に対応する３番目のＳＣＲ領域の特異的部分とを決定することが可能である。例えば、２つの特定の配列は、本明細書に援用するＴａｔｕｓｏｖａ  ａｎｄ  Ｍａｄｄｅｎ，  （１９９９），  “Ｂｌａｓｔ  ２  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ−−ａ  ｎｅｗ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｃｏｍｐａｒｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ”，  ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ．  Ｌｅｔｔ．１７４：２４７−２５０に記載されているようにＢＬＡＳＴ  ２を使用して互いに配列させることが可能である。
【００５８】
本明細書に使用する場合、用語「選択的に結合する」とは、その結合レベルが任意の標準的測定法（例えば免疫測定法）で測定されるように測定のバックグラウンド対照より統計的に有意に高い、あるタンパク質の別のタンパク質（例えば抗体、その抗原結合断片、または抗原に対する結合パートナー）への特異的結合のことを指す。例えば、免疫測定法を行なう場合、対照は通常、抗体またはその抗原結合断片のみを含む（すなわち抗原がない）反応ウェルまたはチューブを備え、抗原がない状態での抗体または抗原結合断片による反応性の量（例えばウェルまたはチューブへの非特異的結合）がバックグラウンドシグナルであると考えられる。結合は当該技術分野における種々の方法を使用して測定することができ、それにはウェスタンブロット、イムノブロット、酵素結合免疫アッセイ（「ＥＬＩＳＡ」）、ラジオイムノアッセイ（「ＲＩＡ」）、免疫沈降法、表面プラスモン共鳴、化学発光法、蛍光偏光、燐光、免疫組織化学分析法、飛行時間型マトリックス支援レーザー脱離イオン化法（「ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ」）質量分析法、マイクロサイトメトリー、マイクロアレイ、顕微鏡法、蛍光活性化細胞選別法（「ＦＡＣＳ」）およびフローサイトメトリーが含まれるがこれらに限定されるわけではない。
【００５９】
本明細書に使用する場合、疾病を「処理する」とは、ＴＡ１０１−１、ＴＡ１０２−４およびＴＡ１０３−２のような上述のｍＡｂ１３７９ヒューマニア化バリアントまたはその抗原結合断片を、他の治療薬を併用するか併用せずに、疾病または疾病の兆候を一時的に抑えるか、改善するか、安定化するか、逆転させるか、減速させるか、防止するか、軽減するか、または除去するために、もしくは疾病または疾病の徴候の進行を遅延させるかまたは停止するために、投与することとして定義される。組成物の「有効量」とは、疾病を治療するのに十分な量である。
【００６０】
本明細書に使用する場合、個人における副補体経路を「阻害する」とは、副補体経路の一部である少なくとも１つのタンパク質の発現および／または生物活性を阻害することを指す。そのようなタンパク質には、Ｂ因子、Ｄ因子、またはプロパージンが含まれるがそれらに限定されるわけではない。副補体経路を「選択的に」阻害するとは、本発明に記載の方法が副補体経路を優先的にまたは専ら排他的に阻害するが、古典的補体経路またはレクチン経路を含む他の補体活性化の経路は阻害しないか少なくとも本質的に阻害しないことを意味する。例えば、本発明のヒューマニア化Ｂ因子抗体およびその抗原結合断片は、選択的に副補体経路を阻害する試薬の１例である。この定義は副補体経路が選択的に阻害される他の方法にも適用される。
【００６１】
「個体」とは、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。哺乳動物には家畜、娯楽動物、ペット、霊長類、マウスおよびラットが含まれるが、これらに限定されるわけではない。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。いくつかの実施形態では、個体はヒト以外の個体である。いくつかの実施形態では、個体は、副補体経路が関与する疾病に関する研究用の動物モデルである。治療を受ける個体は、現在は無症候であ
るが、副補体経路が役割を果たすか副補体経路の活性化が役割を果たす徴候的な障害を進展させる危険性のある固体を含む。
【００６２】
「組成物」の包括的参照は、本発明の組成物を包含し、本発明の組成物に適用される。
本明細書に使用する場合、単数や数詞を特に複数に特定しない名詞は、他に明記されていない場合、複数も含む。例えば、用語「ＶＨ領域」は、１つまたは複数のＶＨ領域を含む。
【００６３】
値やパラメータについている「約」は、その値またはパラメータ自身に関する実施形態を含み、かつ説明している。例えば、「約Ｘ」という記載は、「Ｘ」の記載を含む。
本明細書で説明する本発明の態様および実施形態は、態様および実施形態「から成る」および／または「から本質的に成る」ことを含む。
【００６４】
１．導入
抗体ヒューマニリング（米国商標）は、参照抗体の結合特異性および親和性を保持しつつヒト生殖細胞系列配列に近い可変領域（「Ｖ領域」）配列を備えた人為設計されたヒト抗体を生成する。例えば米国特許出願出願公開第２００５／０２５５５５２Ａ１号または米国特許出願出願公開第米国２００６／０１３４０９８Ａ１号を参照されたい。プロセスは、参照抗体のＶ領域から、抗原に結合特異性を決定するのに必要な最小の配列情報を同定し、その情報を、ヒト抗体Ｖ領域のエピトープに焦点を当てたライブラリを生成するために部分的ヒトＶ領域遺伝子配列のライブラリに移す。ライブラリのメンバーは微生物に基づく分泌システムを使用して抗体Ｆａｂ’断片として発現される。次にライブラリはコロニーリフト結合アッセイを使用して抗原結合Ｆａｂ’についてスクリーニングされる。標的抗原に対して最も高い結合親和性を有するものを同定するために、陽性クローンをさらに特徴付ける。得られた人為設計Ｆａｂ’ヒト断片は親のマウス抗体の結合特異性を保持しており、好ましくは親抗体と等しいかそれよりも高い抗原へ結合親和性を有している。好ましくは、人為設計Ｆａｂ’断片は、最も近いヒト生殖細胞系列の抗体遺伝子と比較して、アミノ酸配列が高度に同一な重鎖および軽鎖Ｖ領域を有している。
【００６５】
エピトープに焦点を当てたライブラリを生成するのに必要な最小の結合特異性決定基（「ＢＳＤ」）は、通常、抗体重鎖のＣＤＲ３（「ＣＤＲＨ３」）内の配列および抗体軽鎖のＣＤＲ３（「ＣＤＲＬ３」）内の配列により表わされる。ある場合には、エピトープに焦点を当てたライブラリが、ＢＳＤを含むＣＤＲ３とＦＲ４の交点で固有領域に連結されたヒトＶセグメント配列（「Ｖセグメント」（「Ｖセグメント」はＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３を含む）と、ヒト生殖細胞系列連結セグメント（「Ｊ−セグメント」）配列とから構築される。米国特許出願出願公開第２００５／０２５５５５２Ａ１を参照されたい。代わりに、ヒトＶセグメントライブラリを、マウスＶセグメントの一部のみを初めにヒト配列のライブラリにより置き換えることにより逐次カセット置換法により生成することも可能である。その後、残りのマウス配列のないようにおける抗原結合をサポートする同定されたヒト「カセット」が、完全なヒトＶセグメントを生成するために第２のライブラリスクリーンに組み込まれる。米国特許出願出願公開第２００６／０１３４０９８Ａ１を参照されたい。どの場合でも、参照抗体からの特異性決定基を含む対になっている重鎖および軽鎖ＣＤＲ３−ＦＲ４を使用して結合特異性をもたせ、ライブラリから得られた抗原結合Ｆａｂ’断片が開始抗体（つまりｍＡｂ１３７９）のエピトープ特異性を保持するようにする。
【００６６】
最適な結合動力学を有する抗体を同定するために、ライブラリの構築中に、各鎖のＣＤＲ３領域に追加の成熟的変化を導入してもよい。
得られたヒューマニア化抗体はヒト配列ライブラリに由来するＶセグメント配列を有し、ＶＬおよびＶＨ鎖ＣＤＲ３領域内からのショートＢＳＤ配列を保持し、ヒト生殖細胞系
列ＦＲ４領域を有する。
【００６７】
ｍＡｂ１３７９のヒューマニア化のために、カセット置換がうまく使用された。Ｂ因子に対して高い親和性を有する多くのＦａｂ’断片が、このアプローチにより同定された。基準マウス抗体（すなわちｍＡｂ１３７９）よりもＢ因子に対して高い親和性を有する３つのヒューマニア化Ｆａｂ’断片が同定された。
【００６８】
２．方法
２．１  ｍＡｂ１３７９を生産するハイブリドーマからのマウスＶ領域のクローニング
マウスのＶ領域を、以下のようにｍＡｂ１３７９を生産するハイブリドーマからクローニングした。最初に、ハイブリドーマ細胞を確立されている手順により培養した。その後、細胞を収集し、伝令ＲＮＡ（「ｍＲＮＡ」）を当業者に周知の標準的手順により細胞ペレットから抽出した。第１鎖の相補的ＤＮＡ（「ｃＤＮＡ」）を、精製ｍＲＮＡから、当業者に周知の標準的方法に従って逆転写酵素を用いてポリ−デオキシチミジン（「ｐｏｌｙ−ｄＴ」）によるプライマー伸張により生成した。その後、第１鎖ｃＤＮＡを、本願に援用するＣｈａｒｄｅｓ，  Ｔ．，  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｉｒｅｃｔ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｏｆ  ｍｏｕｎｓｅ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ａｎｙ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅ  ｇｉｎｅ  ｆａｍｉｌｙ，  “ＦＥＢＳ  ｌｅｔｔ．  ４５２（３）：  ３８４−３９４（１９９９）”に詳細に説明されている標準的手順に従って縮重プライマーを使用した抗体Ｖ領域配列の増幅用の鋳型として使用した。重鎖可変領域（「ＶＨ」）および軽鎖可変領域Ｖκ（「Ｖκ」）領域からのｃＤＮＡを配列決定し、Ｔａｌｉｇｅｎにより生成されたアミノ末端ペプチド配列データに対して同一性を有するかチェックした。Ｖ領域をＶ−Ｆａｂ’断片としてクローニングし、ＫａｌｏＢｉｏｓ社専有の発現ベクターから大腸菌（「Ｅ．ｃｏｌｉ」）で発現させた。精製Ｆａｂ’タンパク質は、標準的方法に従って実施した酵素結合免疫アッセイ（「ＥＬＩＳＡ」）において、精製Ｂ因子タンパク質に結合することが示された。
【００６９】
２．２  Ｆａｂ’の精製  
Ｆａｂ’断片はＫａｌｏＢｉｏｓ社専有のタンパク質発現ベクターを使用して、Ｅ．ｃｏｌｉで発現させた。細菌を、６００ｎｍの波長で測定した光学濃度が０．６吸光度単位となるように、２×ＹＴ培地（蒸留した脱イオン化水（「ｄｄＨ２Ｏ」）１リットル当たり１６ｇ  Ｂａｃｔｏ−トリプトン、１０ｇ  Ｂａｃｔｏ酵母エキスおよび５ｇのＮａＣｌ）中で３７℃にて培養した。タンパク質発現は、イソプロピルβ−チオガラクトピラノシド（「ＩＰＴＧ」）を使用して、３３℃で３時間誘導した。所望のタンパク質の最適な発現を得るのに適したＩＰＴＧ濃度は当業者に周知の方法を使用して経験的に決定されるが、通常は０．０１ｍＭから５．０ｍＭの間で変化する。組み立てられたＦａｂ’断片は原形質膜分画から得られ、当業者に既知の標準的方法に従って連鎖球菌タンパク質Ｇカラム（ＨｉＴｒａｐＴＭ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇ  ＨＰカラム；ニュージャージー州ピスカタウェイ所在のＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社から購入）でのアフィニティクロマトグラフィーにより精製した。Ｆａｂ’断片を、以下すべて製造業者の説明書に従って、２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ＝７．０）でカラムに結合させ、ｐＨ＝約２．０で０．１Ｍグリシン中で溶出し、直ちに適量の１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ＝９．０）で中性のｐＨ（約７．０）に調整した。精製されたＦａｂ’断片っをその後リン酸干渉溶液（「ＰＢＳ」）でｐＨ＝７．４にて（１×ＰＢＳ＝１３７  ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４および２ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４；ＰＢＳにはＣａ２＋およびＭｇ２＋が含まれていない）に対して透析した。
【００７０】
２．３  酵素結合免疫測定法（「ＥＬＩＳＡ」）
Ｔａｌｉｇｅｎは、３ｍｇの精製組換えヒトＢ因子を提供した。一般に、５０ｎｇの精
製組換えＢ因子を４℃で一晩９６ウェルのマイクロタイタープレートに吸着された。プレートを５％（ｗ／ｖ）粉末無脂肪ミルクのＰＢＳＴ溶液（１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、２ｍＭ    ＫＨ２ＰＯ４および０．１％（ｖ／ｖ）トゥイーン２０ＴＭ）でブロックした。精製したヒューマニア化Ｆａｂ’断片または参照Ｆａｂ’（「ＴＡ１０」）を１×ＰＢＳに希釈した。５０ｍｌの抗体断片をマイクロタイタープレートの各クウェルに追加した。３３℃で１時間後、マイクロタイタープレートのウェルをＰＢＳＴで３回リンスした。０．１ｎｇ／ｍｌＰＢＳＴに希釈したワサビペルオキシダーゼ（「ＨＲＰ」）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス所在）と共役させた５０ｎｌの抗ヒトκ鎖抗体を各ウェルに添加し、プレートを３３℃で４０分インキュベートした。その後、マイクロタイタープレートのウェルを、ＰＢＳＴで３回、１×ＰＢＳで１回洗浄した。その後、１００μｌ    ＴＭＢ（３、３’、５、５’−テトラメチルベンジデン）基質（Ｓｉｇｍａ社）を各ウェルに添加し、プレートを約５分間室温（約２５℃）でインキュベートした。最後に、１００μｌ  ０．２Ｎ硫酸（Ｈ２ＳＯ４）を各ウェルに添加して反応をを停止した。プレートを４５０ｎｍの波長で分光光度計で読み取った。
【００７１】
２．４  コロニーリフト結合アッセイ
ヒューマニア化Ｆａｂ’断片ライブラリを、本願に援用する米国特許出願出願公開第２００５／０２５５５５２Ａ１の実施例５に実質的に記載しているように組換えヒトＢ因子でコーティングしたニトロセルロースフィルタを用いてスクリーニングした。米国特許出願出願公開第２００６／０１３４０９８Ａ１号も参照されたい。
【００７２】
簡単に説明すると、抗体ライブラリを、大腸菌ＴＯＰ１０等の適切な細菌宿主に形質転換した。形質転換細菌細胞を、２×ＹＴ寒天（１リットル中、１６ｇ  カゼインの膵消化物、１０ｇ  酵母エキス、５ｇ  ＮａＣｌおよび１５ｇ  寒天）（ＤｉｆｃｏＴＭ、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニュージャージー州フランクリンレーク）および適切な選択剤（すなわちライブラリを構築するように使用された特定のタンパク質発現ベクターに基づいて選択された抗生物質）を含むプレート上にプレーティングした。１枚のプレート当たりのコロニー数を最大限にしつつ個別の細菌コロニーを生産するよう、プレーティング効率を調節することが可能である。最適の密度では、１０ｃｍの直径プレートは約４０００個のコロニーを含み、１５ｃｍの直径プレートは約１０，０００個のコロニーを含み、２５ｃｍの直径プレートは約５０，０００のコロニーを含むだろう。
【００７３】
８．２ｃｍ直径、１３．２ｃｍ直径または２０ｃｍ直径のニトロセルロースフィルター（Ｗａｔｍａｎ（米国登録商標）Ｓｃｈｉｌｅｉｃｈｅｒ  ＆  Ｓｃｈｕｅｌｌ（米国登録商標）Ｐｒｏｔｒａｎ（米国登録商標（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社、ミズーリ州セントルイス所在）を、経験的決定した濃度（通常０．５μｇ／ｍｌから２０μｇ／ｍｌの間）で、抗原（すなわちヒトＢ因子）のＰＢＳ溶液でプレコーティングした。コーティング溶液の量はフィルタサイズによって異なり、８．２ｃｍ径フィルタには４ｍｌを使用し、１３．２ｃｍ径フィルタには８ｍｌを使用し、２０ｃｍ径フィルタには２０ｍｌを使用した。フィルタは、３３℃で２−３時間抗原ＰＢＳ溶液中に面を下にして配置し、時々振動させた。その後、フィルタを過剰量のＰＢＳでリンスし、２５０℃２時間５％（ｗ／ｖ）無脂肪乾燥ミルクのＰＢＳ溶液で振動させながらブロックした。その後、フィルタを排水し、ＰＢＳ＋０．１％のトゥイーン２０（米国商標）で一回リンスし、選択剤（すなわち適当な抗生物質）および転写誘導剤（すなわちＩＰＴＧ）を補給した２×ＹＴ液体培地で２回リンスした。次に、フィルタを排水し、適切な抗生物質およびＩＰＴＧを補給した２×ＹＴ寒天プレート（「発現プレート」）上に配置した。
【００７４】
適切なサイズのコーティングしていない乾燥ニトロセルロースフィルターを所望の抗体断片数を発現しているＥ．ｃｏｌｉライブラリを含むプレート上に面を下にして配置した
。一旦フィルタが濡れたことが眼で観察されたら（約２０−３０秒）、フィルタを素早く持ち上げて発現プレート上のコーティングされたフィルタ上にコロニー側を上にして配置した。フィルタを後の同定が容易となるように適切なプレートと方向を示すようにマークする。
【００７５】
ニトロセルロースフィルターの「サンドイッチ」で覆われていた発現プレートを３３℃で１２−１６時間置いた。その時間の間に、細菌コロニーは抗体断片を発現し分泌した。その後、抗体断片を、コロニーリフトを含む第１のニトロセルロースフィルターによって、下にある抗原コーティングフィルタ上に拡散した。標的抗原結合可能な抗体断片（すなわちヒトＢ因子）を、抗原フィルタ上に保持した。
【００７６】
抗原に結合した抗体断片を、免疫法により検出した。簡単に説明すると、抗原に結合した抗体断片を含むフィルタを、発現プレートから除去し、５分間、３回各々ＰＢＳＴで洗浄し、５％（ｗ／ｖ）無脂肪粉ミルクＰＢＳＴ溶液に１．５時間２５℃ブロックした。その後、フィルタ上に保持された抗原抗体断片複合体を、適切な一次抗体（例えばＨＲＰに共役したヤギ抗κ抗体およびその同等物）でインキュベートし、その後必要ならば適切な二次抗体でインキュベートした。ビオチン／ストレプトアビジンを含む他の標準免疫検出法や、種々の蛍光標識を含む他の検出方法をして使用してもよい。その後、フィルタを１０分間、４回各々ＰＢＳＴで洗浄し、ペルオキシダーゼ基質溶液でインキュベートし、感光性写真フィルムに露出させた。代わりに、陽性コロニーを視覚化するためにＴｙｐｈｏｏｎ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、ニュージャージー州ピスカタウェイ所在）やＦＸ−Ｐｒｏ  ＰｈｏｓｐｈｏｒＩｍａｇｅｒ（Ｂｉｏｒａｄ社、カリフォルニア州ヘラクレス）のような種々のイメージングシステムを使用してもよい。その後、フィルム上のイメージをその後適切なプレートに配置し、陽性コロニー（すなわち所望の抗原（例えばヒトＢ因子）に結合可能な抗体断片を生産しているコロニー）は採取し、２×ＹＴ培地に選択剤を加えたものに接種し、実質的に同じ手順を使用してＣＬＢＡの後続の回でさらに分析した。
【００７７】
２．５  親和性の測定
Ｆａｂ’断片の結合動力学をＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔバイオセンサ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，  Ｉｎｃ．社、カリフォルニア州メンローパーク）を使用して分析した。組換えヒトＢ因子を、製造業者の説明書に従って、ＥＺ結合ビオチン化システム（Ｐｉｅｒｃｅ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、イリノイ州ロックフォード所在）でビオチン化した。その後、抗原を、製造業者の説明書に従って、ニュートラアビジンでコーティングしたセンサ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，  Ｉｎｃ．  、カリフォルニア州メンローパーク）に結合させた。次に、Ｆａｂ’結合を、製造業者により提供されたＢｉｏ−ｌａｙｅｒ干渉系分析およびソフトウェアを使用してリアルタイムでモニタした。抗原結合親和性を測定された会合（「Ｋａｓｓｏｃ」）定数および解離（「Ｋｄｉｓｓｏｃ」）定数に基づいて試験したＦａｂ’断片について計算した。好ましくは、ヒューマニア化抗体または抗体断片は、参照抗体（すなわちｍＡｂ１３７９）または抗体断片（すなわちＴＡ１０）と同じかそれより高い平衡解離定数を備えていた。
【００７８】
３．  結果
３．１  ｍＡｂ１３７９を生産するハイブリドーマからＶ領域のクローニングおよび発現
３．１．１．  第１鎖ｃＤＮＡからのＶＨおよびＶκ鎖の増幅
抗体軽鎖（κアイソフォーム）および重鎖からの可変領域を、１５番目のＶＨと１８番目のＶκのプライマーセットを使用して、第１鎖ｃＤＮＡから増幅した。各ＶＨプライマープライマーは、γ重鎖（すなわちマウスγ１アイソフォーム）の４つの共通のマウスアイソフォームの１つの定常領域に特異的な適切な逆方向プライマーと対になった、既知の
マウス重鎖ファミリーに特異的な１５番目の縮重順方向プライマーの一つを含んでいた。例えばＣｈａｒｄｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ４５２（３）：３８６−３９４（１９９９）を参照されたい。各Ｖκプライマーセットは、マウス軽鎖のκアイソフォーム定常領域に特異的な逆方向プライマーと対になった、既知のマウスκファミリーに特異的な１８番目の縮重順方向プライマーの１つを含んでいた。例えばＣｈａｒｄｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ４５２（３）：３８６−３９４（１９９９）を参照されたい。
【００７９】
２つのプライマーセットが重鎖に対するＰＣＲ産物を生産し、２つのプライマーセットが軽鎖に対するＰＣＲ産物を生産した。縮重順方向プライマーを個々のマウスの重鎖ファミリーと軽鎖ファミリーの比較的保存されたシグナル配列にハイブリダイズするように設計したが、生殖細胞系列シグナル配列は変わるため、すべてのプライマー対が期待された産物を増幅するわけではない。さらに、免疫グロブリンの座は、Ｖκ１０プライマー対（次の段落参照）によって生じ産物の場合のように、予想されたサイズの産物を生産する可能性があるが予想されたオープンリーディングフレームをコードしない偽遺伝子をしばしば含む。図１は、ｍＡｂ１３７９を生産するハイブリドーマから単離したｍＲＮＡから調製した第１鎖ｃＤＮＡから増幅した二本鎖ｃＤＮＡ産物を示すために、エチジウムブロマイドで染色したアガロースゲルである。プライマー対Ｖκ４（配列番号１（順方向プライマー）と配列番号２（逆方向プライマー）およびＶκ１０（配列番号３（順方向プライマー）と配列番号４（逆方向プライマー））は、抗体軽鎖から予期されたサイズの産物を生成した。プライマー対ＶＨ６（配列番号５（順方向プライマー）と配列番号６（逆方向プライマー））およびＶＨ７（配列番号７（順方向プライマー）と配列番号８（逆方向プライマー）は、抗体重鎖から予期されたサイズの産物を生成した。
【００８０】
３．１．２．  マウスのＶ領域アミノ酸配列
上２つのパラグラフに記載したようにして得られたＶＨおよびＶκｃＤＮＡクローンを、正確な産物が得られたかどうかを確認するために標準的方法によりシーケンスした。得られたＶ領域配列を図２に示す。ＣＤＲ配列を強調してある。オリジナルのｍＡｂ１３７９抗体に対応するマウスの生殖細胞系列配列と異なる２つのグルタミン残基を影付きの灰色で示している。ＶＨ６（配列番号１０）およびＶＨ７（配列番号１１）のプライマーで得られた産物は、アミノ酸配列が同一であった。Ｖκ１０産物をタンパク質のオープンリーティングフレームを乱した再配置すなわちフレームシフトを含むｃＤＮＡから増幅したが、図示しない。Ｖκ４（配列番号９）産物は予期されたオープンリーディングフレームを含んでいた。その後、選択したマウスＶＨクローンのうちの１つをヒトＩｇＧｌ  ＣＨ１領域に取り付け、マウスＶκ４クローンをヒトＩｇＣκ領域に取り付け、基準Ｆａｂ’（すなわちＴＡ１０）を形成した。ヒューマニア化Ｆａｂ’バリアントはヒト定常領域配列も含んでいた。
【００８１】
３．１．３．  Ｔａｌｉｇｅｎによって提供される、クローニングされたＶ領域およびアミノ末端基アミノ酸配列の比較
その後、ｍＡｂ１３７９のアミノ末端基アミノ酸配列は、クローニングされたＶＨおよびＶκ配列の同じ部分と比較された。図３は、ＶＨ鎖（トップ、「１３７９Ｈ」（配列番号３１）を「ＴＡ−ＶＨ６」（配列番号３３）と比較する）から、その後ＶＨとＶκの鎖（底、「１３７９ポンド」（配列番号３２）を「ＴＡ−Ｖκ４−」（配列番号３４）と比較する）から第１で、配列の提携した部分を示す。ｍＡｂ１３７９のアミノ末端基配列およびクローニングされた配列は、４つの残基（示された暗くなった灰色）とは別に同一だった。それらの違いは、アミノを得るために使用されるＥｄｍａｎ低下反応の間に導入された誤差に起因した−ｍＡｂ１３７９のターミナルのペプチド配列。
【００８２】
３．１．４．  ＥＬＩＳＡによる、クローニングされたＶ領域のＢ因子結合活性の確認
次に、クローニングされたＶＨκ配列およびＶκ配列のＢ因子に対する結合能を分析した。クローニングされたＶＨ領域およびＶκ領域を細菌中でＦａｂ’断片として発現し、精製し、および稀釈ＥＬＩＳＡでＢ因子への結合について試験した。図４は、ｍＡｂ１３７９に由来するＦａｂ’に対する、クローニングされたＦａｂ’ＴＡ００３のＢ因子結合を比較している。予想通り、クローニングされたＦａｂ’とマウスＦａｂ’はいずれも抗体および抗原濃度の両方に依存する結合曲線を生成した。
【００８３】
３．２  ｍＡｂ１３７９  Ｖ領域のヒューマニア化
３．２．１．ライブラリ構築およびＶ領域カセット
エピトープに焦点を当てたライブラリを、ＢＳＤおよびヒト生殖細胞系列Ｊ−セグメント配列を含む固有のＣＤＲ３−ＦＲ４領域にヒトＶセグメントライブラリ配列（脾臓から分離）を連結させることにより構築した。
【００８４】
これらの「完全長」ライブラリは、マウスのＶセグメントの一部のみがヒト配列のライブラリと最初に置換された「カセット」ライブラリの構築のための基礎として使用した。ＶＨおよびＶκ鎖の両方のためのカセットを、ＦＲ２領域内の重複する共通配列を用いてブリッジＰＣＲにより作製した。このように、「フロントエンドの」および「中間の」ヒトカセットライブラリを、ヒトＶＨ１、ＶＨ３およびＶκＩＶアイソタイプに対して構築した。通常、約１０，０００個の固有のＦａｂ’クローンを「フロントエンドの」および「中間の」ヒトカセットライブラリ間でスクリーニングし、参照抗体または抗体断片（すなわちｍＡｂ１３７９またはＴＡ１０）の結合親和性と少なくとも等しいかそれより大きい結合親和性で所望の抗原（すなわちヒトＢ因子）と結合する候補抗体断片のプールを同定する。
【００８５】
Ｂ因子への結合をサポートした「フロントエンドの」および「中間の」カセットを、コロニーリフト結合アッセイにより同定し、ＥＬＩＳＡおよびＦｏｒｔｅＢｉｏ分析での親和性によって格付けした。本願に援用する米国特許出願出願公開第番号２００５／０２５５５５２  Ａ１の実施例５に本質的に記載されているように、コロニーリフト結合アッセイを上述のように行った。その後、最も高い親和性を有する「カセット」プール（好ましくはＴＡ１０のｍＡｂ１３７９由来のＦａｂ’に等しいかそれより大きい抗原結合親和性）を、第２ライブラリスクリーニングで共通のＦＲ２配列により組み合わせ、完全なヒトＶセグメントを生成した。
【００８６】
高い親和性を有するプールの同定後、完全にヒューマニア化されたＦａｂ’断片と、親和性成熟ライブラリを構築した。ヒューマニア化Ｆａｂ’クローンのパネルの共通ＢＳＤ配列を、縮重ＰＣＲプライマーを使用してランダムに変異させ、ライブラリを生成した。これらの変異ライブラリをコロニーリフト結合アッセイによりスクリーニングした。選択されたＦａｂ’断片をＥＬＩＳＡおよびＦｏｒｔｅＢｉｏ分析での親和性によって格付けした。ＴＡ１０のＦａｂ’断片に比べて等しいかそれより改良された抗原に対する結合親和性をサポートする変異型を同定した。
【００８７】
ある場合には、ヒューマニア化プロセスによって、標的抗原に対して同じか非常に似た結合親和性を有する完全にプールに完全にヒューマニア化されたＦａｂ’断片のプールが単離された。そのような場合では、Ｆａｂ’断片のプールをシーケンスし、最も近いヒト生殖細胞系列ＶＨおよびＶＬ（すなわちＶκ−）領域配列と比較し、ヒト生殖細胞系列に対して最も高いアミノ酸配列同一性を有するヒューマニア化抗体断片をさらなる分析のために選択する。ヒト生殖細胞系列配列に対するアミノ酸配列同一性の程度が高いほど、ヒューマニア化抗体または抗体断片が免疫原性が低くなる。従って、免疫または炎症反応を刺激したり、既存の免疫または炎症反応を増大させたりする可能性が低い。ｍＡｂ１３７９のヒューマニア化バリアントは、免疫または炎症反応が既に生じている状態（すなわち
気道過敏症等のように副補体経路の活性化が役割を果たす状態）を治療するために使用され得るため、ヒューマニア化バリアントの免疫原性はできるだけ低減される必要がある。さらに、肺への（すなわち、本明細書で想定される場合吸入により）タンパク質の投与は、他の投与経路よりも免疫反応を引き起こす可能性が高いため、ヒューマニア化抗Ｂ因子バリアントの免疫原性が最小であることはさらに重要である。
【００８８】
したがって、最も近いヒト生殖細胞系列配列に対してできるだけ高いアミノ酸配列同一性を有するヒューマニア化バリアント（ｍＡｂ１３７９に由来したバリアントの場合、最も近いヒト生殖細胞系列配列はＶκＩＶ−Ｂ３／Ｊκ２（配列番号１２）およびＶＨ１−０２／ＪＨ４（配列番号１３）である）を単離することが望ましい。好ましくは、ヒューマニア化バリアントは最も近いヒト生殖細胞系列ＶＨおよびＶκ領域アミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有し、より好ましくは最も近いヒト生殖細胞系列ＶＨおよびＶκ領域アミノ酸配列に対して少なくとも８５％と同一、さらにより好ましくは最も近いヒト生殖細胞系列ＶＨおよびＶκ領域アミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一、もっと好ましくは最も近いヒト生殖細胞系列ＶＨおよびＶκ領域アミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する。
【００８９】
好ましくは、ヒューマニア化抗体バリアントは、参照抗体または抗体断片と等しいかそれより大きな結合親和性を有し、最も近いヒト生殖細胞系列配列に対して８０％同一、最も近いヒト生殖細胞系列配列に対して８５％同一、最も近いヒト生殖細胞系列配列に対して９０％同一、または最も近いヒト生殖細胞系列配列に対して９５％同一のアミノ酸配列を有するＶＨおよびＶκ領域をさらに備えるだろう。いずれの特性も備えたヒューマニア化抗体または抗体断片バリアントが必ずしも可能であるとは限らない。
【００９０】
３．２．２．ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ分析を用いたヒトＢ因子に対するＦａｂ’断片の結合親和性
完全ヒューマニア化Ｆａｂ’断片を、コロニーリフトにより分離し、ＥＬＩＳＡによりＢ因子結合材として確認した。ＥＬＩＳＡによる強い陽性シグナルを示すヒューマニア化Ｆａｂ’断片を精製し、ｍＡｂ１３７９由来のマウスのＶ領域配列を有する参照Ｆａｂ’断片ＴＡ１０と比較してさらに特徴付けた。組換えヒトＢ因子に結合するＦａｂ’断片の動力学を、Ｂｉｏ−ｌａｙｅｒ干渉法によりＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔを用いて分析し、タンパク質同士のリアルタイムな非標識のモニタリングを提供した。代表的な動力学分析は図５に示す通りである。測定された会合（Ｋａｓｓｏｃ）定数と解離（Ｋｄｉｓｓｏｃ）定数と、計算した平衡解離定数（ＫＤ＝Ｋｄｉｓｓｏｃ／Ｋａｓｓｏｃ）（すなわち結合親和性）を表１に示す。
【００９１】
【表１】
2014133753.tif 000003
３つすべてのヒューマニア化抗体断片が、ＴＡ１０参照抗体断片と等しいかそれより良好な平衡解離定数を有していることは明らかである。
【００９２】
３．３  ヒューマニア化Ｆａｂ’断片の配列分析
３．３．１．参照Ｆａｂ’とヒューマニア化Ｆａｂ’のアミノ酸配列のアラインメント
動力学の特徴付けの後、上記３つのヒューマニア化抗体単離物をシーケンスした。抗体単離物ＴＡ１０１−１（配列番号１６および１７）、ＴＡ１０２−４（配列番号１８および１９）、およびＴＡ１０３−２（配列番号２０と２１）のＶκおよびＶＨ領域配列由来のアミノ酸配列を、参照抗体ＴＡ１０（配列番号１４および１５）由来の対応配列および最も近いヒト生殖細胞系列軽鎖および重鎖可変領域遺伝子（「Ｖκ」および「ＶＨ」」）および連結セグメント（「Ｊ−セグメント」）（ヒトＶκＩＶ−Ｂ３／Ｊκ２（配列番号１２）およびＶＨ１−０２／ＪＨ４（配列番号１３）と比較した。アラインメントした配列を図６に示す。配列ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３をボックスで囲み標識した。対応する生殖細胞系列位置（ＣＤＲ３  ＢＳＤ配列以外）と異なるアミノ酸残基を影付きの灰色で示している。ヒューマニア化バリアントＴＡ１０１−１、ＴＡ１０２−４およびＴＡ１０３−２のＣＤＲ３アミノ酸配列に対する親和性成熟変化を影付き灰色、太字で示す。
【００９３】
特定の実施形態では、ＴＡ１０１−１（配列番号３５）、ＴＡ１０２−４（配列番号３６）およびＴＡ１０３−２（配列番号３７）のＶＨ領域配列を、ヒューマニア化抗Ｂ因子バリアントのアミノ末端グルタミン（Ｑ）残基を、参照抗体（ＴＡ１０）およびオリジナルｍＡｂ１３７９に見出されるグルタミン酸（Ｅ）残基に置換するように修飾する。この変更は、グルタミン（Ｑ）残基の環化を防ぎ、ヒューマニア化バリアントを製造する場合のより均質な最終産物を促進する。最も近いヒト生殖細胞系列遺伝子（ＶＨ１／ＪＨ４（配列番号１３）−０２）もそのアミノ末端にグルタミン（Ｑ）残基を有するが、この保守的なアミノ酸置換はバリアントの免疫原性に最小の影響しか及ぼさないものと思われる。
【００９４】
３．３．２．  ヒト生殖細胞系列配列に対する同一性パーセント
最後に、ＴＡ１０１−１、ＴＡ１０２−４およびＴＡ１０３−２単離物に由来するＶＨ領域およびＶκ領域アミノ酸配列およびＴＡ１０参照抗体を、ＣＤＲ３  ＢＳＤ配列を除くＶ領域にわたる単一のヒト生殖細胞系列抗体配列と比較した。表は生殖細胞系列配列ごとに対するアミノ酸同一性パーセントを示す。
【００９５】
【表２】
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３つすべてのヒューマニア化Ｆａｂ’断片のＶκ領域とＶＨ領域は、参照Ｆａｂ’断片ＴＡ１０の約７８％に比較して約９６％パーセント同一性というヒト生殖細胞系列配列に対する高いアミノ酸配列同一性を共有していることは明らかである。
【００９６】
４．議論
ｍＡＢ  １３７９のヒューマニア化に、カセット置換をうまく使用した。ヒトライブラリから単離された部分Ｖ領域カセットを、重鎖および軽鎖の各々の最終人為設計ヒトＶ領域を形成するために再結合した。
【００９７】
Ｆａｂ’断片クローン由来のＶ領域のアミノ酸配列を、上記のように提供する。Ｖセグメント配列を、各Ｆａｂ’断片に対する２つのＶＨカセットおよび２つのＶκカセット（各ＶＨおよびＶκポリペプチドに対して「フロントエンド」および「中間」カセット）の組換えにより単離した。ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔバイオセンサを使用した動力学的分析により、参照Ｆａｂ’より高い結合親和性を有する３つのＦａｂ’断片（ＴＡ１０１−１、ＴＡ１０２−４およびＴＡ１０３−２）が同定された。この結合親和性の増加は、参照分子と比較した場合の３つのヒューマニア化バリアント（すなわちＴＡ１０１−１、ＴＡ１０２−４およびＴＡ１０３−２）における改善されたオフ割合に起因した。したがって、それはまた、ヒューマニア化ＶＨおよびＶκポリペプチドと最も近いヒト生殖細胞系列ＶＨおよびＶκ配列との間の％アミノ酸配列同一性と同様に、オフ割合（Ｋｄｉｓｓｏｃ）の増加および／または結合親和性の増加に基づいてバリアントのスクリーニングを行うことも望ましい場合がある。
【００９８】
Ｆａｂ’断片クローンの３つの各々は、ヒトＶＨ１−０２生殖細胞系列遺伝子に対して高度のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を有している。ＦＲＨ４セグメントはヒト生殖細胞系列ＪＨ４配列により提供される。
【００９９】
軽鎖ＶセグメントはＶκＩＶ−Ｂ３生殖細胞系列遺伝子に最も近い。ＦＲＬ４は同じものがヒト生殖細胞系列ＪＫ２セグメントにより提供される。ヒューマニア化Ｆａｂ’断片ＶＨおよびＶＬ領域は、固有ＣＤＲ３領域の外側の最も近い対応するヒト生殖細胞系列配列カセットに対して９６％より高いアミノ酸配列同一性を示す。
【０１００】
５．本発明の特定の実施形態に関連する製剤、組成物、および方法
本発明の１態様は、一般に、副補体経路の活性化が寄与する疾病もしくは障害、副補体経路の活性化が該疾病もしくは該障害の少なくとも１つの徴候を悪化させる該疾病もしくは該障害、または副補体経路の活性化が引き起こす該疾病もしくは該障害に罹患しているかまたは該疾病もしくは該障害を起こす危険性のある動物において該副補体経路の活性化を選択的に阻害する組成物および方法に関連する。
【０１０１】
５．１  本発明の特定の実施形態に関連する方法
本発明の特定の実施形態は、副補体経路の活性化が役割を果たす疾病または障害を治療する方法に関する。そのような方法は、ＴＡ１０１−１、ＴＡ１０２−４およびＴＡ１０３−２等の上述のｍＡＢ１３７９のヒューマニア化バリアントまたはその抗原結合断片を、副補体経路の活性化が役割を果たす疾病に罹患しているかまたは該疾病を起こす危険性のある個体に投与する工程を含む。１態様では、ヒューマニア化抗体バリアントおよびその抗原結合断片は、経口、経鼻、局所、吸入、気管内、経皮、直腸、および非経口経路から成るグループから選択された経路を通じて投与される。別の態様では、ヒューマニア化抗体バリアントおよびその抗原結合断片は、乾燥分散粉末；無水エタノール；小型カプセル；リポソーム；霧状スプレー；および注射可能な賦形剤から成るグループから選択された医薬として許容される担体を用いて投与される。別の態様では、ヒューマニア化抗体バリアントおよびその抗原結合断片は、無水エタノール、乾燥粉末吸入システム；超音波吸入システム；圧力測定用量吸入器；および定量溶液装置から成るグループから選択された担体または装置にて投与される。別の態様では、ヒューマニア化抗体バリアントおよびその抗原結合断片は、副補体経路の活性化が役割を果たす疾病または障害を治療するのに有効な量で投与される。さらに別の態様では、ヒューマニア化抗体バリアントおよびその抗原結合断片は、単独でまたはコルチコステロイド、β−作動薬（作用は長くても短くてもよい）、ロイコトリエン改変剤、抗ヒスタミン剤、ホスホジエステラーゼ阻害剤、クロモグリク酸ナトリウム、ネドクロミル、テオフィリン、サイトカイン拮抗薬、サイトカイン受容体拮抗薬、抗ＩｇＥおよびＴ細胞機能阻害剤から成るグループから選択された別の薬剤と組み合わせて投与される。
【０１０２】
本発明のさらに別の実施形態は、個人において気道過敏症（ＡＨＲ）または気道炎症を低減または予防する方法に関する。方法は、ＴＡ１０１−１、ＴＡ１０２−４およびＴＡ１０３−２等の上述のヒューマニア化ｍＡｂ１３７９またはその抗原結合断片を、炎症に関連する気道過敏症または気道炎症に離間しているか該炎症に関連する気道過敏症または気道炎症を起こす危険性のある個体に投与する工程を含む。１態様では、ｍＡｂ１３７９のヒューマニア化バリアントまたはその抗原結合断片は、経口、経鼻、局所、吸入、気管内、経皮、直腸、および非経口経路から成るグループから選択された経路を通じて投与される。別の態様では、ｍＡｂ１３７９またはその抗原結合断片のヒューマニア化バリアントは、抗体または抗原結合断片の投与前に比べて個体における気道過敏症を低減するのに有効な量で動物に投与される。別の態様では、ｍＡｂ１３７９ヒューマニア化バリアントまたはその抗原結合断片は、抗体または抗原結合断片が投与されなかった炎症を有する個体集団の気道過敏症のレベルと比較して、個体における気道過敏症を低減するのに有効な量で個体に投与される。別の態様では、ｍＡｂ１３７９のヒューマニア化バリアントまたは抗原結合断片は、乾燥分散粉末；無水エタノール；小型カプセル；リポソーム；霧状スプレー；および注射可能な賦形剤から成るグループから選択された医薬として許容される担体を用いて投与される。別の態様では、ｍＡｂ１３７９のヒューマニア化バリアントまたはその抗原結合断片は、無水エタノール、乾燥粉末吸入システム；超音波吸入システム；気圧測定用量吸入器；および定量溶液装置から成るグループから選択された担体または装置にて投与される。
【０１０３】
さらに別の実施形態では、ｍＡｂ１３７９のヒューマニア化バリアントまたは、コルチコステロイド、β−作動薬（作用は長くても短くてもよい）、ロイコトリエン改変剤、抗ヒスタミン剤、ホスホジエステラーゼ阻害剤、クロモグリク酸ナトリウム、ネドクロミル、テオフィリン、サイトカイン拮抗薬、サイトカイン受容体拮抗薬、抗ＩｇＥおよびＴ細胞機能阻害剤から成るグループから選択された薬剤と共に個体に投与される。さらに別の実施形態では、気道過敏症または気道炎症は、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺炎、好酸球性肺炎、気腫、気管支炎、ア
レルギー性気管支炎気管支拡張症、嚢胞性線維症、結核、過敏性肺炎、職業性喘息、類肉腫、気道過敏症症候群、間質性肺疾患、好酸球増加症、鼻炎、副鼻腔炎、運動誘発性喘息、汚染誘発性喘息、咳変形喘息、寄生性肺疾患、呼吸器合胞体ウイルス（「ＲＳＶ」）感染、パラインフルエンザウイルス（「ＰＩＶ」）感染、ライノウイルス（「ＲＶ」）感染およびアデノウイルス感染から成るグループから選択された疾病に関連する。１態様では、気道過敏症はアレルギー性炎症に関連する。本発明の方法は、好ましい実施形態では哺乳動物に、より好ましくはヒトに投与することができる。
【０１０４】
本発明の別の実施形態は、個体における気道過敏症（ＡＨＲ）または気道炎症を低減または予防する方法に関する。方法は、副補体経路を選択的に阻害する薬剤を、炎症に関連する気道過敏症または気道炎症に離間しているかまたは該疾患を起こす危険性のある個体に投与する工程を含む。ある態様では、試薬は、ＴＡ１０１−１、ＴＡ１０２−４およびＴＡ１０３−２等のｍＡｂ１３７９のヒューマニア化バリアントまたはその抗原結合断片である。
【０１０５】
５．２  本発明の特定の実施形態に関連する製剤または組成物
本発明のヒューマニア化抗Ｂ因子抗体バリアントの特定の実施形態は、副補体経路の阻害剤、特に本明細書に記載した副補体経路の選択的阻害剤を含有する製剤または組成物を包含する。製剤または組成物は、本明細書に記載した任意の方法で、本明細書に記載した任意の試薬（例えば本明細書に記載のヒューマニア化Ｂ因子抗体バリアントＴＡ１０１−１、ＴＡ１０２−４、およびＴＡ１０３−２またはその抗原結合断片）を用いて使用可能である。１実施形態では、組成物は、動物における気道過敏症を低減または予防するのに有用である。別の実施形態では、組成物は、動物における虚血再潅流傷害を低減または予防するのに有用である。さらに別の実施形態では、組成物は、副補体経路の選択的阻害によって状態または疾病を治療または予防するのに有用である。製剤は（ａ）本明細書に記載した副補体経路の阻害剤および（ｂ）医薬として許容される担体を含む。
【０１０６】
１実施形態では、製剤または組成物は、気道過敏症、特に炎症に関連する気道過敏症に離間しているかまたは該気道過敏症を起こす危険性のある動物における炎症を低減するのに適した抗炎症剤等の１つまたは複数の追加の薬剤を含んでもよい。抗炎症剤は、気道過敏症に関連する炎症状態を有する患者での炎症を低減するために使用するのに適した任意の抗炎症剤であってよく、それにはコルチコステロイド（経口、吸入、注入）、β−作動薬（作用は長くても短くてもよい）、ロイコトリエン改変剤（阻害剤または受容体拮抗薬）、サイトカインまたはサイトカイン受容体拮抗薬、抗ＩｇＥ抗体、ホスホジエステラーゼ阻害剤、クロモグリク酸ナトリウム、ネドクロミル、テオフィリンおよびＴ細胞機能阻害剤が含まれるがそれらに限定されるわけではない。本製剤に使用される特に好ましい抗炎症剤には、コルチコステロイド、ロイコトリエン改変剤およびサイトカインまたはサイトカイン受容体拮抗薬が含まれる。
【０１０７】
別の実施形態では、製剤または組成物は、動物における虚血再潅流傷害を予防または低減するのに適した追加の薬剤等の１つまたは複数の追加の薬剤を含んでもよい。そのような薬剤には、抗炎症剤または酸化およびフリーラジカル損傷の阻害剤が含まれるがそれらに限定されるわけではない。
【０１０８】
別の実施形態では、製剤または組成物は、副補体経路の活性化に関連する別の疾病または状態を治療するのに適した追加の薬剤等の１つまたは複数の追加の薬剤を含んでもよい。
【０１０９】
本発明によれば、「医薬として許容される担体」には、適切な生体内部位への製剤または組成物の投与に使用するのに適した医薬として許容される賦形剤および／または医薬と
して許容される送達ベヒクルが含まれる。適切な生体内部位は、好ましくは、副補体経路を阻害可能な部位であればいかなる部位でもよい。１つの好ましい実施形態では、患者が気道過敏症および／または気道炎症に離間しているかまたは該疾患を起こす危険性を有する場合、適切な生体内部位は好ましくは肺組織または気道である。他の好ましい生体内部位には、副補体経路に関連する状態が集中する他の組織または器官が含まれる。別の好ましい実施形態では、適切な生体内部位は、虚血再潅流傷害が生じる任意の部位であってよく、例えば、心臓系または肺系、中枢神経系、手指または足指、内臓（例えば肺、肝臓または腸）、もしくは任意の移植器官または組織である。好ましい医薬として許容される担体は、本発明の製剤において使用されている薬剤を、患者での標的部位に薬剤が到達すると、薬剤が標的（例えば副補体経路の成分であるタンパク質）に作用することが可能であるように、そして好ましくは患者に治療の利益をもたらすような形式に維持することが可能である。
【０１１０】
本発明で使用される適切な賦形剤には、輸送を行うか輸送を支援するが、組成物を細胞または組織へ特異的に向けない賦形剤または製剤（本明細書では非標的性担体とも呼ぶ）が含まれる。医薬として許容される賦形剤には、水、リン酸塩緩衝塩類溶液（「ＰＢＳ」）、リンゲル溶液、ブドウ糖溶液、含血清溶液、Ｈａｎｋの平衡塩類溶液（「ＨＢＳＳ」）および他の水溶性生理平衡溶液、油、エステルおよびエチレングリコールが含まれる。水性担体は、例えば化学的安定性および等浸透圧を高めることにより、レシピエントの生理条件に近づけるのに必要な適切な補助物質を含んでもよい。適切な補助物質には、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化カリウム、および、リン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液、ならびに重炭酸塩緩衝液を生成するのに使用される他の物質が含まれる。補助物質はさらに、チメロサール、ｍ−クレゾールもしくはｏ−クレゾール、ホルマリンおよびベンジルアルコール等の防腐剤を含んでもよい。本発明の製剤は、従来の方法により滅菌および／または凍結乾燥することが可能である。
【０１１１】
医薬として許容される担体の１つの種類は、動物へ本発明の組成物をゆっくり放出させることが可能な制御放出製剤を含む。本明細書に使用する場合、制御放出製剤には、制御放出ビヒクルに入れた本発明の薬剤が含まれる。適切な制御放出ビヒクルには生体適合ポリマー、他の重合体マトリックス、カプセル、マイクロカプセル、マイクロパーティクル（微粒子）、ボーラス製剤、浸透圧ポンプ、拡散装置、リポソーム、リポスフェア、および経皮送達系が含まれるが、これらに限定されるわけではない。他の適切な担体には、送達される薬剤の半減期を延長させる、薬剤に結合可能であるか薬剤と共に組み込まれる任意の担体が含まれる。そのような担体には、生体内で送達された時にタンパク質の半減期を延長させる任意の適切なタンパク質担体または融合セグメントさえも含まれる。適切な送達ベヒクルについては先に記載したが、リポソーム、ウイルスベクター、またはリボザイムを含む他の送達ベヒクルが含まれるが、これらに限定されるわけではない。天然脂質を含む送達ベヒクルには、細胞および細胞膜が含まれる。人工脂質を含んでいる送達ベヒクルには、リポソームおよびミセルが含まれる。上述したように、本発明の送達ベヒクルは、患者における特定の部位を標的とし、それによりその部位で阻害剤を標的とし利用できるように改変することが可能である。適切な改変には、送達ベヒクルの脂質部分の化学式を操作することおよび／または送達ベヒクルを好ましい部位（例えば好ましい細胞種）へと特異的に目標付ける標的剤をビヒクルに導入することが含まれる。他の適切な送達ベヒクルには、金粒子、ポリ−Ｌ−リジン／ＤＮＡ分子共役体、および人工染色体が含まれる。
【０１１２】
１実施形態では、本方法に有用な薬剤、肺または鼻を介した送達、特にエーロゾル送達に適した製剤の形（本明細書ではエーロゾル製剤とも称する）で投与される。そのような送達経路は、患者におけるＡＨＲおよび／または気道炎症を阻害する方法に特に有用であるが、肺または気道への送達が望まれる他の状態で使用することも可能である。さらに、
これらの製剤は抗体の送達に特に有用であり、そのような製剤は一般に担体を、好ましくは医薬として許容される担体を含む。本発明によるエーロゾル送達に特に有用な担体には、無水エタノール、乾燥分散粉末、小型カプセル（例えばマイクロカプセルまたはマイクロパーティクル）、リポソーム、注射可能な賦形剤、および霧状スプレーが含まれるがこれらに限定されるわけではない。タンパク質およびペプチドの送達用の無水エタノールについては、例えばＣｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９８（２０）：１１１０３−１１１０７（２００１）に記載されている。薬剤のエーロゾル送達に適した乾燥分散粉末については、例えばその全体を本願に援用する米国特許第６，１６５，４６３号に詳述されている（Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ．つまり現在のＮｅｋｔａｒ，  ａｎｄ  Ｑｕａｄｒａｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社の製品も参照されたい）。エーロゾルで使用するのに適したリポソームはいかなるリポソームも含まれるが、特には本発明の方法でエーロゾルにより送達される程度に十分に小さい任意のリポソームである。  
【０１１３】
マイクロカプセルおよびマイクロパーティクルについては当該技術分野では周知である。例えば、Ａｌｌｉａｎｃｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社は、マイクロパーティクルが同社独占技術の噴霧乾燥プロセスにより製造され中空かつ多孔性に設計されるＰｕｌｍｏＳｈｅｒｅと呼ばれる粒子エンジニアリング（設計）技術を有している。Ｖｅｎｔｏｌｉｎ社の製品は、ＣＦＣベースの推進薬の混合物に懸濁された微粒子化アルブテロール（遊離塩基）粒子から成る。Ｐｒｏｖｅｎｔｉｌ  ＨＦＡは、微粒子化硫酸アルブテロールと、安定化オレイン酸を可溶化するための低い割合のエタノール共溶媒とを含む。リポソーム中への薬剤の組み込みは、エーロゾル送達のためのいくつかの利点を有する。リポソームは比較的不溶であるため、肺におけるいくつかの薬剤の保持時間は、効能を増大させるよう延長することが可能である。リポソームは食細胞によっても主として吸収され、このことはリポソームを特定の薬剤の送達に特に適したものとしている。エーロゾル製剤の送達のための装置には、圧力測定用量吸入器（「ＭＤＩ」）、乾燥粉末吸入器（「ＤＰＩ」）、定量溶液装置（「ＭＳＩ」）および超音波吸入器が含まれるがこれらに限定されず、噴霧器および吸入器である装置を含む。かかる装置により送達される製剤において、タンパク質（例えばオリゴ乳酸、アシルアミド酸およびモノ官能化Ｍ−ＰＥＧＳ）の送達に特に有用な懸濁補助剤および安定化剤としての種々の薬剤を使用可能である。例えばＭｃＫｅｎｚｉｅ  ａｎｄ  Ｏｌｉｖｅｒ；２０００，  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｎｇ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｅｓｓｕｒｉｚｅｄ  Ｍｅｔｅｒｅｄ  Ｄｏｓｅ  Ｉｎｈａｌｅｒｓ  Ｆｏｒ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，  ＃Ｍ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃａｒｅ  Ｌｔｄ．，  Ｍｏｒｌｅｙ  Ｓｔｒｅｅｔ，  Ｌｏｕｇｈｂｏｒｏｕｇｈ，  Ｌｅｉｃｅｓｔｅｓｈｉｒｅ  ＬＥ１１  １ＥＰ，  ＵＳ参照。
【０１１４】
標的化できる医薬として許容される担体を、本明細書では「標的化送達ベヒクル」と呼ぶ。本発明の標的化送達ベヒクルは、患者内の標的部位に、阻害剤を含む製剤を送達することができる。「標的部位」は、治療製剤を送達したい患者内の部位のことを指す。例えば、標的部位は、本発明の抗体によって、またはリポソーム、ウイルスベクター、またはリボザイムを含む他の送達ベヒクルを使用した直接の注入または送達によって標的化される、任意の細胞または組織であってよい。本発明の送達ベヒクルまたは抗体は動物の特定部位を標的とするように改変されてよく、それによりかかる部位で特定の化合物、抗体、タンパク質または核酸分子を標的化および利用することが可能である。適切な改変には、送達ベヒクルの脂質部分の化学式を操作することおよび／または送達ベヒクルを好ましい部位（例えば好ましい細胞種）へと特異的に目標付ける標的剤をビヒクルに導入することが含まれる。特に、標的化とは、細胞表面上の分子へのビヒクル中の化合物を相互作用により特定の細胞へ送達ベヒクルを結合させることを指す。適切な標的化化合物には、特定の部位で別の分子に選択的に（すなわち特異的に）結合できるリガンドが含まれる。その
ようなリガンドの例には抗体、抗原、受容体および受容体リガンドが含まれる。特に有用な例には、補体経路（例えばＣＲ２、Ｃ３、Ｃ３ｄ、Ｃ３ｄｇ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｂ）に関連する任意のリガンドまたは細胞の種類、組織の種類、または処理される動物における部位に関連する任意のリガンドが含まれる。送達ベヒクルの脂質部分の化学式の操作は、送達ベヒクルの細胞外または細胞内標的化を調整できる。例えば、リポソームの脂質二分子膜の電荷を変更する化学物質をリポソームの脂質の式に加え、リポソームが特定の電荷特性を有する細胞と融合するようにさせることが可能である。
【０１１５】
様々な投与経路および薬剤に有用な１つの送達ベヒクルは、リポソームである。リポソームは、核酸分子や、本発明で述べたタンパク質または抗体さえも動物の好ましい部位へ送達するのに十分な時間の間だけ、動物中で安定であることが可能である。本発明によれば、リポソームは、動物における特定のすなわち選択された部位に本発明で述べた核酸分子、タンパク質、または抗体を送達することができる脂質組成物を含む。本発明のリポソームは、細胞へその内容を送達することができるよう標的細胞の原形質膜に融合することができる脂質組成物を含む。本発明で使用するのに適したリポソームには、いかなるリポソームも含まれる。本発明の好ましいリポソームは、例えば当業者に周知の遺伝子送達方法に一般に使用されるリポソームを含む。より好ましいリポソームは、ポリカチオン脂質組成物および／またはポリエチレングリコールに共役されたコレステロール骨格を有するリポソームを含む。本発明の核酸分子、タンパク質または抗体とのリポソームの複合体形成は、当該技術分野の標準的方法を使用して達成することができる。
【０１１６】
本発明によれば、当業者は、投与経路や動物に投与される薬剤の有効量を含む薬剤、組成物または製剤を投与するのに許容されるプロトコルの決定を遂行することができる。本発明の薬剤はインビボ（生体内）で投与されてもエキソビボ（生体外）で投与されてもよい。適切な生体内投与経路には、含むことができる、しかし制限されない、経口、経鼻、吸入、局所、気管内、経皮、直腸、および非経口経路が含まれる。好ましい非経口経路には、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、および腹腔内経路が含まれるがこれらに限定されるわけではない。好ましい局所経路には、エーロゾルによる吸入｛すなわち噴霧｝または動物の皮膚への局所表面投与）が含まれる。好ましくは、薬剤は経鼻、気管内、局所、または全身性経路（例えば腹腔内、静脈内）により投与される。用語「エキソビボ」とは、患者の外部で投与工程の一部を行なうことを指す。抗体のための好ましい投与経路には、非経口経路およびエーロゾル／経鼻／吸入経路が含まれる。
【０１１７】
静脈内投与、腹腔内投与および筋肉内投与は当該技術分野の標準的方法を使用して行なうことができる。エーロゾル（吸入）送達は当該技術分野の標準的方法を使用して行うことができる（例えばその全体を本明細書に援用するＳｔｒｉｂｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，
Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １８９：１１２７７−１１２８１（１９９２）参照。）エーロゾル送達に適した担体については上述している。エーロゾル製剤の送達のための装置には、圧力測定用量吸入器（「ＭＤＩ」）、乾燥粉末吸入器（「ＤＰＩ」）、定量溶液装置（「ＭＳＩ」）ならびに噴霧器および吸入器である装置が含まれるが、これらに限定されるわけではない。経口送達は、動物の消化管の消化酵素による分解に抵抗できる担体に対して本発明の治療用組成物を複合体形成することにより行うことが可能である。そのような担体の例には、当該技術分野で周知のプラスチックカプセルまたは錠剤が含まれる。直接的注入技術は、外科手術によってアクセス可能な細胞または組織、特には身体表面の上かその付近に組換え核酸分子を投与するのに有用である。標的細胞の領域への組成物の局所投与とは、好ましくは標的細胞または組織から数センチメートル、好ましくは数ミリメートル、組成物を注入することを指す。
【０１１８】
本明細書で説明した任意の方法に使用される、薬剤（タンパク質、小分子および抗体を含む）の好ましい一回量は、動物の体重１ｋｇ当たり約０．０１μｇから約１０ｍｇの間
（すなわち約０．０１μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ）を含む。より好ましい薬剤の一回量は、動物の体重１ｋｇ当たり約１μｇから約１０ｍｇの間を含む。さらにより好ましい薬剤の一回量は、動物体重１ｋｇ当たり約５μｇから約７ｍｇの間を含む。もっとさらにこのまし薬剤の一回量は、動物の体重１ｋｇ当たり約１０μｇから約５ｍｇの間を含む。薬剤がエーロゾルで送達される場合、特に好ましい薬剤の一回量は、動物の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇから約１ｍｇの間を含む。薬剤が非経口的で送達される場合、薬剤の特に好ましい一回量は、動物の体重１ｇ当たり約１ｍｇから約１０ｍｇの間を含む。
【０１１９】
１実施形態では、本明細書で説明した任意の方法で使用するための本発明の薬剤の適切な用量は、薬剤の投与がない場合に比較して、本明細書で説明したような副補体経路の少なくとも１つのタンパク質（例えばＢ因子、Ｄ因子またはプロパージン）の発現または活性を阻害するのに有効な用量である、タンパク質の発現または生物活性の測定方法は当該技術分野で周知であり、例えば）ノーザンブロッティング、ウェスタンブロット、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲおよびその同等物が含まれる。別の実施形態では、本発明の薬剤の適切な用量は、本発明の副補体経路を測定可能な程度に阻害する用量である。副補体経路の活性化およびその阻害は当該技術分野に周知の技術／アッセイを使用して測定することができる。例えば、同時係属の米国特許出願出願公開第２００５／０２６０１９８Ａ１の実施例に記載されているように、ザイモサンＡ粒子上のＣ３堆積物のインビトロ分析を行なうことができる。また、ヒト血清によって未感作赤血球溶解の薬剤による阻害能を試験することもできる。これらのアッセイに基づきインビトロの結果をインビボに外挿することは、当業者の能力の範囲内にある。
【０１２０】
ヒトでは、エーロゾル送達のために従来法を使用すると、吸入器を使用しても約１０％の送達溶液しか気道深くに進入しないことが当該技術分野で知られている。エーロゾル化送達が直接吸入による場合、噴霧化方法により投与された量の約１０％の用量が仮定され得る。最後に、当業者は相対成長のスケーリングを使用して、マウスの用量をヒトの用量に容易に変換することができるだろう。本質的に、マウスからヒトへの用量のスケーリングは化合物とマウス体表のクリアランス比に基づく。ｍｇ／ｋｇの変換は、ヒト用量の濃度を得るべく「有害事象が観察されないレベル」（「ＮＯＥＬ」）の１２分の１である。この計算は、マウスとヒト間の除去が同じ（抗体の場合当てはまると考えられる）であると仮定している。
【０１２１】
従って、抗体の好ましい一回量は、動物の体重１ｋｇ当たり約１ｎｇから約１ｍｇ未満の間を含む。より好ましい抗体の一回量は、動物の体重１ｋｇ当たり約２０ｎｇから約６００μｇの間を含む。特に抗体製剤が噴霧によって送達される場合、さらに好ましい抗体の一回量は、動物の体重１ｋｇ当たり約２０ｎｇからと約６００μｇの間を含み、より好ましくは約２０ｎｇから約５００μｇの間、より好ましくは約２０ｎｇから約４００μｇの間、より好ましくは約２０ｎｇから３００μｇの間、より好ましくは約２０ｎｇから２００μｇの間、より好ましくは約２０ｎｇから約１００μｇの間、より好ましくは約２０ｎｇから５０μｇの間を含む。
【０１２２】
抗体の別の好ましい一回量は、特に抗体製剤が噴霧によって送達される場合、動物の体重１ｋｇ当たり約２００ｎｇから約６００μｇの間、より好ましくは約２００ｎｇから約５００μｇの間、より好ましくは約２００ｎｇから約４００μｇの間、より好ましくは約２００ｎｇから約３００μｇの間、より好ましくは約２００ｎｇから約２００μｇの間、より好ましくは約２００ｎｇから約１００μｇの間、より好ましくは約２００ｎｇから５０μｇの間を含む。
【０１２３】
抗体の別の好ましい一回量は、特に抗体製剤が吸入器からの直接吸入により送達される場合、動物の体重１ｋｇ当たり約２ｎｇから約１００μｇの間、より好ましくは約２ｎｇ
から約５０μｇの間、より好ましくは約２ｎｇから約１０μｇの間、より好ましくは約２ｎｇから約５μｇの間、より好ましくは約２ｎｇから約１μｇの間、より好ましくは約２ｎｇから約０．５μｇの間、より好ましくは約２ｎｇから約０．２５μｇの間、より好ましくは約２ｎｇから約０．１μｇの間を含む。
【０１２４】
別の実施形態では、抗体は、製剤１ｍｌ当たり約５００μｇ未満の抗体の用量で投与され、製剤１ｍｌ当たり２５０μｇ未満の抗体、より好ましくは製剤１ｍｌ当たり約１００μｇ未満の抗体、より好ましくは製剤１ｍｌ当たり約５０μｇ未満の抗体、より好ましくは製剤１ｍｌ当たり約４０μｇ未満の抗体、より好ましくは製剤１ｍｌ当たり約３０μｇ未満の抗体、より好ましくは製剤１ｍｌ当たり約２０μｇ未満の抗体、より好ましくは製剤１ｍｌ当たり約１０μｇ未満の抗体、さらにより好ましくは製剤１ｍｌ当たり約５μｇの抗体から焼く１０μｇの抗体の間で投与される。
【０１２５】
気道過敏症および／または気道炎症もしくはそれらの疾患に関連する状態または疾患を低減または予防する方法に特に関連して、動物に投与するのに適した阻害剤の一回量は、適切な期間にわたって１回または複数回投与された動物において、気道過敏症および／または気道炎症を低減または予防することができる、または治療される疾病（例えば喘息）の少なくとも１つの他の症状を低減することができる用量である。患者がＡＨＲに離間しているかＡＨＲを起こす危険性を有する場合、薬剤の適切な一回量は、刺激剤の倍量によりＡＨＲを改善するかまたは動物の静止呼吸機能を改善する用量を含む。
【０１２６】
本発明の方法によれば、動物に投与するＡＨＲ阻害薬剤の有効量は、動物にとって有毒ではない状態で気道過敏症（ＡＨＲ）または気道炎症を低減することができる量を含む。動物に有毒な量は、動物の構造または機能に損害を引き起こす（すなわち有毒な）すべての量を含む。
【０１２７】
本発明の１実施形態では、ＡＨＲを有する動物において、動物に投与する薬剤の有効量は、薬剤を投与する前に比べて動物におけるＡＨＲを測定可能な程度に低減する量である、別の実施形態では、動物に投与する薬剤の有効量は、薬剤投与しなかったＡＨＲに関連する炎症を有する動物集団における気道ＡＨＲレベルと比較して、動物のＡＨＲを測定可能な程度に低減する量である。薬剤は、該薬剤がＡＨＲの物理的徴候の開始後に（すなわち急性発症ＡＨＲ後に）投与された場合でも、動物中のＡＨＲを好ましくは低減することができる。好ましくは、薬剤の有効量は、ＡＨＲが患者で検出されない点までＡＨＲの徴候を低減する量である。別の実施形態では、薬剤の有効量は、薬剤が無い場合にはＡＨＲを誘導するのに十分な様式でアレルゲン等のＡＨＲ誘発刺激に患者を露出させる前に薬剤を投与した場合に、ＡＨＲの発症を予防または実質的に阻害する量である。
【０１２８】
当業者は、動物に投与される薬剤の用量が、気道過敏症の程度、ＡＨＲが徴候となっている基本的症状の程度、および処理に対する個々の患者の反応に依存することを決定できるだろう。さらに、医師は、動物におけるＡＨＲを低減するのに有効な様式で薬剤送達のための適切なタイミングを決定することができるだろう。
【０１２９】
好ましくは、薬剤は、ＡＨＲを引き起こすのに有効な量のＡＨＲ誘導刺激に患者を露出させる前４８時間以内に送達され、好ましくは３６時間以内、より好ましくは２４時間以内、より好ましくは１２時間以内、より好ましくはＡＨＲを引き起こすのに有効な量のＡＨＲ誘導刺激に患者を露出させる前６時間、５時間、４時間、３時間、２時間、または１時間以内に送達される。１実施形態では、患者がＡＨＲ誘導刺激、特に患者が感作されるＡＨＲ誘発刺激（すなわちアレルゲン）に露出されたか、ＡＨＲ誘導刺激に露出されようとしていることを患者または医師が認識したらすぐに（すなわち即座に）、薬剤は投与される。別の実施形態では、薬剤は、ＡＨＲの発達の最初の兆候（すなわち急性発症ＡＨＲ
）の時に投与される、好ましくはＡＨＲの徴候の発達の少なくとも２時間以内、より好ましくは少なくとも１時間以内、より好ましくは少なくとも３０分以内、より好ましくは少なくとも１０分以内、より好ましくはＡＨＲ徴候の発達の少なくとも５分間以内に薬剤は投与される。ＡＨＲの徴候およびかかる徴候を測定または検出するための方法については、上記に詳述した。好ましくは、ＡＨＲの低減の徴候が現われるまで、そして必要ならばＡＨＲの徴候がなくなるまで、そのような投与がなされる。
【０１３０】
虚血再潅流傷害を阻害または予防する方法に特に関連して、動物に投与する有効量の薬剤、特に抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片（すなわち抗原結合ポリペプチド）は、薬剤の投与がない場合に比較して、動物における酸化的損傷または細胞死を含めた組織学的損傷を測定可能な程度に阻害する量である。腎虚血再潅流傷害の場合、動物に投与する薬剤の有効量は、薬剤の投与がない場合に比較して、血清尿素窒素の増大を測定可能な程度に阻害する量または動物の腎組織への組織学的損傷を測定可能な程度に減少させる量である。
【０１３１】
動物へ投与する阻害剤の適切な一回量は、適切な期間にわたって１回または複数回投与された動物において、虚血再潅流傷害由来の少なくとも１つの徴候傷害の種類、または生じた損害を低減または予防することができる用量である。様々な投与経路に対するものを含む抗体の適切な用量は上記に詳述した。１態様では、動物への投与する虚血再潅流傷害を阻害する薬剤の有効量は、動物に有毒ではない状態で虚血再潅流傷害により引き起こされた少なくとも１つの徴候または損害を阻害することができる量を含む。
【０１３２】
本発明の任意の方法は、任意の動物、特には、霊長類、齧歯類、家畜および家庭の愛玩動物を含むがこれらに限定されない脊椎動物クラスの哺乳類（すなわち哺乳動物）の任意の動物に使用することができる。本発明の方法で処理するのに好ましい哺乳動物はヒトである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年4月10日(2014.4.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
人工ヒト抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片であって、３番目のショートコンセンサスリピート（「ＳＣＲ」）領域でＢ因子に選択的に結合すると共にＣ３ｂＢｂ複合体の形成を防止するマウスモノクローナル抗体１３７９（「ｍＡｂ１３７９」）に由来し、かつ約１．０×１０−８Ｍから約１．０×１０−１０Ｍの間の平衡解離定数（「ＫＤ」）を有する人工ヒト抗Ｂ因子抗体またはその抗原結合断片。