(57)【要約】【課題】  本発明は表皮での新陳代謝を安定化し、真皮の細胞の活動を正常状態に保持することにより、皮膚を構成する細胞自体に働きかける成分をバランス良く配合した化粧品を提供することを目的とする。化粧品として皮膚に塗布後にべたつきなどの不快感がなく、皮膚に対して刺激の少なく、かつ美白とアンチエージング効果を持つ。【解決手段】  プタプラセンタの細胞内液と細胞外液とを他の液体を用いて希釈することなく、また加熱処理や化学処理での細菌の不活化処理をすることなく孔拡散法膜分離で精製処理し、ガラス容器に充填して保存する。膜としては再生セルロース製の平膜を利用する。【効果】  プラセンタ体液を希釈することなく加熱することなく利用するため、サイトカイン含有率を高く維持し、成分が変性されることなく利用される。そのため皮膚に刺激なく、美白効果とアンチエージング効果を示す化粧品を提供できる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＰＦブタあるいはＳＱＦＨ1000ブタの凍結胎盤を材料とするプラセンタエキスの調製において、該胎盤の凍結・溶解を複数回繰り返して滲出する体液を水などで希釈されることなく採取された液体のブタプラセンタエキスが再生セルロース製の平膜を用いた孔拡散法膜分離の精製処理による除菌処理を受け、65℃以上での加熱滅菌処理を受けることなくガラス容器に充填された状態にあることを特徴とするブタプラセンタエキス化粧品。
【請求項２】
請求項１においてガラス容器に充填されたプラセンタエキスの含有量が50%以上であり充填後凍結された状態で保存・輸送されることを特徴とするブタプラセンタエキス化粧品。
【請求項３】
請求項１あるいは請求項２のプラセンタエキスの含有率が90%以上であり、かつガラス容器中に充填された該エキスの液体時での体積充填率が87%以下65%以上であることを特徴とするブタプラセンタエキス化粧品。
【請求項４】
請求項１あるいは請求項２あるいは請求項３において該エキス以外の成分として0.5重量％以下のパラベンでありガラス容器として遮光用の着色ガラス製であり、該容器の容積は500ミリリットル以下であることを特徴とするブタプラセンタエキス化粧品。
【請求項５】
請求項４において該容器の容積が2ミリリットル以下で1ミリリットル以上であり、該容器の入口の内径が7ｍｍ以下3ｍｍ以上であることを特徴とするブタプラセンタエキス化粧品。
【請求項６】
請求項１または２または３または４あるいは５項において材料とする凍結胎盤を水洗しつつ解凍後に該胎盤中に残存する血液を水洗除去した後、トレミングし、２回以上４回以下凍結解凍を繰り返して細胞を破壊後に採取された液体のブタプラセンタエキスを孔拡散法膜分離の精製処理を行うことで作製されたことを特徴とするプタプラセンタエキス化粧品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はブタの胎盤（プラセンタ）を原料とする化粧品に関する。さらに詳しくは衛生管理の行き届いた環境下で生育した健康な母豚より同様の環境下で出産後採取したブタの胎盤を急速に冷凍凍結することによって新鮮さを維持した胎盤から採取したブタのプラセンタエキスを主原料とした化粧品に関する。該エキスは室温で液体状態にあり、該化粧品も使用時には液体状態にある。本発明では、エキスという内容を水や他の溶媒での抽出物という意味での従来の内容の他に体液すなわち細胞内液と細胞外液との混合液体の内容で用いている。両者の区別が必要な場合はその都度両者を明確に明示する。
【背景技術】
【０００２】
化粧品の原料として多くの合成品や天然由来の材料が利用されてきた。いずれも単品の原料のみで化粧品としての要求機能を満足出来ないためにこれらの原料を混合して化粧品として利用される。皮膚を対象とする化粧品への要求機能は、（１）水分／ＮＭＦ（自然保湿因子）／脂質のバランスのとれたみずみずしい肌の保持，（２）紫外線（光）防御、乾燥防止、酸化防止、（３）皮膚の老化防止、（４）美白、（５）殺菌やpH緩衝作用、（６）皮膚の軟化などが挙げられる。これらの要求性能のうち、保湿を目的にして開発された合成品としては、尿素、多価アルコール（グリセリン、ポリエチレングリコールなど）、さらに皮膚軟化物質として合成エステル、ポリアルキールシロキサンなどが提案されている（特許文献１）。    
【０００３】
紫外線防御の作用を期待して提案された化粧品の材料物質としては安息香酸系紫外線吸収剤、と類似の作用としてのアントラニル酸系やケイ皮酸系やトリアジン系紫外線吸収剤（特許文献２）などが例示される。酸化防止剤としてアスコルビン酸およびその誘導体やクエン酸およびその誘導体などが知られているがその作用の結果の一つとして美白効果が挙げられる。
【０００４】
美白効果を示す原料としてハイドロキノンや還元型あるいは酸化型補酵素Ｑが提案されている（特許文献２）。補酵素Ｑの生理的作用は、ミトコンドリア賦活作用によるエネルギ生産の活性化、心機能の活性化、細胞膜の安定化効果、抗酸化作用による細胞の保護効果が挙げられ、ハイドロキノンの副作用がない材料として提案された。
【０００５】
美白、皮膚の老化防止、皮膚の軟化などは化粧品としての機能面での効果であるため、化粧品としての化学的作用では表現できない。そのため美白剤として提案された多くの薬剤は乳化剤と混合使用されてたとえば角質溶解剤や皮膚軟化作用が付与される。その典型例が高機能性付与化粧品組成物としてフラーレンあるいはフラーレン誘導体とプラセンタエキスを含む組成物である。この組成物は老化防止、紫外線防御、美白、養毛・育毛効果を与える（特許文献３）
【０００６】
化粧品に要求される性能を一種の原料で満足させることは合成品では不可能であった。多くの合成品を混合させることによって多くの性能を実現してきた。天然由来の原料においても同様である。例えばプラセンタエキスを利用する化粧品において合成保存料を加えたり可溶性固形を加えて保存性を上昇させる（特許文献４）。美容効果を促すためにコラーゲンやコンドロイチン硫酸などを添加し、主成分として水などで希釈されていないプラセンタ体液を想定した化粧品も結果的にはその体液の含有量は20％以下となっている。
【０００７】
天然由来の原料は通常は主成分ではなく美白効果を高めるための副原料となっている（特許文献１，２，３，５）。また天然由来の原料の調製法として大部分は水やアルコールを使用した抽出法である。抽出法で得られた液体をエキスと命名している。そのため天然由来の原料を出発物質としたエキスは、そのエキス成分はたとえ同一原料から出発しても抽出条件によって変動する。天然由来の原料を用いた化粧品の作用効果は該原料の種類を固定しても常にあいまいさを残し、そのため原料単独での製品は開発されていない。
【０００８】
【特許文献１】特開平10-45526
【特許文献２】特開2006-70016
【特許文献３】特開2006-321781
【特許文献４】特開平11-221047
【特許文献５】特開平11-228379
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
皮膚は表皮と真皮と皮下組織で構成され、表皮は角層、顆粒層，有棘層、基底層で構成される。角層での水分を保持したり表皮での新陳代謝を安定化し、真皮の細胞の活動を正常状態に保持することにより、皮膚を構成する細胞自体に働きかける成分をバランス良く配合した化粧品を提供することを目的とする。すなわち、化粧品として塗布後にべたつくなどの不快感がなく、皮膚に対して刺激の少ないかつ、美白とアンチエージング効果を持ち、これらの効果が紫外線や空気の影響を受けにくい化粧品の提供にある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の最大の特徴はブタの胎盤を凍結・溶解を複数回繰り返して滲出する体液を水などで希釈することなく採取された液体を原料にした化粧品である点にある。従来から提案のあるプラセンタエキスとは異なり、胎盤の組織の細胞外液と細胞内液とを用いる点にある。すなわち本発明でのプラセンタエキスとは胎盤を構成する細胞の外液と内液とで構成される体液を意味する。該体液を水などで２倍以上に薄めたりするとその液体の紫外吸収スペクトルが大幅に変化すること（特に吸収極大の波長が変化すること）より体液中のタンパクやアミノ酸成分の変性が起こることを発見して本発明に至った。該エキスを採取するには凍結・溶解を繰り返すことで細胞を破壊して、滲出する液体を回収する方法が最も優れる。他の方法として細胞を力学的に破壊して産出する液体を採取する方法もある。力学的に破壊する方法では細胞内液の高分子量成分の変性の可能性がある。
【００１１】
胎盤の体液として細胞内液の占める比率が50%以上、すなわち細胞内液の体積≧細胞外液の体積であることが皮膚細胞の活性化に望ましい。体液成分には多くのサイトカインが生理活性を失わない状態で含まれている。サイトカインの活性を失わないエキスの製造方法を発見して本発明に至った。この発見がなければ本発明を完成することは不可能であった。該体液には本質的に水やアルコールなどの外部から加わった成分は含まれない。もちろん該体液を薄めて利用することは可能であるが、化粧品として塗布後の肌への浸透感が低下する。
【００１２】
該体液が化粧品中に占める体積比率が50%以上でありかつ化粧品として保存・運送下では凍結されていることが望ましい。該体液の生理活性を失わずに保存するには凍結状態が望ましいし、該体液としては細胞内液の比率を高めることにより皮膚細胞への負荷が減少する。凍結下での保存と輸送では該体液の化学反応による変性と液流動によるタンパク分子の会合状態の変動を防止できる。該体液の体積比率が90%以上になると化粧品としての皮膚への浸透度が飛躍的に上昇し塗布後の爽快感が増す。
【００１３】
胎盤の体液に加える添加剤としては微生物の混入による変性を防止するために0.5重量％以下のパラベンを添加すると良い。この添加により保存時での凍結の必要性は緩和され、化粧品としての取り扱いが容易となる。
【００１４】
本発明で利用する胎盤は母豚が出産した後、直ちに冷却水で洗浄し、大小便や胎盤表面に付着した異物を除去しつつ胎盤中の血液も除去後に急速に凍結させる。急速に凍結させる方法としては-60度以下に冷却された金属製のパイプの上で冷却させる方法がある。凍結した胎盤を水洗しつつ解凍後に該胎盤中に残存する血液成分を冷水で除去した後、トレミングし、２回以上４回以下凍結解凍を繰り返して細胞を破壊後に採取された液体（体液）のブタプラセンタ体液（エキス）を孔拡散法膜分離工程で精製する。
【００１５】
本発明の第二の特徴は、液体のブタプラセンタエキスに対して再生セルロース製平膜を用いて孔拡散法膜分離の精製処理を行う点にある。ここで再生セルロース製平膜とは、セルロース誘導体の平膜を鹸化反応によってセルロースに再生された平膜を意味する。再生セルロースであるためにタンパクやサイトカインの膜による吸着がほとんど起こらない。
孔拡散法膜分離とは平均孔径が10
nm以上で10μm以下の空孔率５０％以上で90%以下の多孔膜を用いて膜間差圧が0.15気圧以下の条件で、物質の分離の駆動力が濃度勾配（すなわち拡散）であり、処理対象液体が膜面に平行に流れその際の流れによるひずみ速度が２/sec以上である条件で起こる膜分離である。該孔拡散法膜分離では膜中の孔を通過する物質は粒子径が小さい成分が選択され、そのため膜中の孔を目詰まりさせることはほとんど起こらない。
【００１６】
孔拡散法膜処理による除去対象があらゆる細菌である点も本発明の機能面での第二の特徴である。この特徴の表現としてはすべての細菌についての対数除去係数（ＬＲＶ）が６以上であるとの内容を意味する。この機能を発揮させるには（１）膜の平均孔径と膜厚で代表される孔特性と（２）処理対象液の膜面上での流れ速度と膜の孔を通過する液体の速度の比、（３）平膜の空間的配置と寸法とが最適設定されていることが必要である。あらゆる細菌に対してＬＲＶを６以上にするのに最重要なのは上記（１）の膜の孔特性において膜厚を60μm以上で１ｍｍ以下とし、平均孔径を500 nm以下に設定することが重要である。処理速度と膜の効率的な利用の点から上記（２）の速度の比は5~20に設定される。上記（３）の膜分離装置としての設計上、外部からの電気的あるいは機械的エネルギの必要な供給量を少なくし、かつ処理対象液の変性を少なくするために特に重要な点は平膜間の距離と処理対象液の流れの回路である。平膜間の距離としては２mm以上10ｍｍ以下に設定する。
【００１７】
本発明の第二の特徴のために孔拡散法膜処理を受けたブタプラセンタエキスに対しては細菌の不活化を目的とした65℃以上での加熱滅菌処理を必要としない。むしろ該処理を避けるべきである。加熱滅菌処理によりサイトカインも不活化する。不活化と違い細菌の除去では細菌自体の個体が存在しない。除菌を目的とした孔拡散法膜処理では細菌より大きな成分、例えば細胞の破壊によって生じる細胞の断片も除去される。本膜処理による処理後の液体の透明度は大幅に上昇する。
【００１８】
本発明の第三の特徴は孔拡散法膜処理後の液体がガラス容器に充填された状態で保存される点にある。充填前には該ガラス容器は洗浄と滅菌処理を受けて清潔な状態にある。容器の内装がプラスチック加工された紙製であれば容器としての耐衝撃性は良いが凍結保存の確実性（容器内の温度分布とガスバリア性）と容器としての熱水による滅菌処理時の溶質物質の問題がある。一般の合成高分子を利用した容器の場合には容器表面へのサイトカインの吸着対策が必要である。たとえばポリエチレン製やポリプロピレン製の容器の場合には瓶の内壁部をあらかじめ親水性処理を行うことが必要である。他のプラスチック容器ではない壁面からの低分子やオリゴマーあるいは安定剤や可塑剤の溶出が起こり望ましくない。
【００１９】
ガラス容器に充填されたブタプラセンタエキスを主成分とする液体の体積充填率が87%以下で65%以上でなくてはならない。その理由は87%を超える体積充填率の場合には
凍結時においてガラス容器の破損の可能性がある。65％未満の充填率の場合には化粧品として現場での使用時に解凍した際の液漏れなどのトラブルの発見がむつかしい。またガラス容器への該エキスの充填時に容器に残存する空気の量が多くなるので空気より生じる酸化や微生物汚染の可能性が増加する。これらの可能性を極小化するには容器内の空気を精製した窒素ガスで置換しつつ容器を密閉する。
【００２０】
ガラス容器のガラスの材質として遮光用の着色ガラスが望ましい。着色としては褐色系が望ましい。ガラス容器の光学的特性より、通常のガラスでは300nm以下の波長の紫外線を吸収する。褐色に着色したガラスでは400 nm以下の紫外線を吸収し、また大部分の可視光も吸収することが出来る。紫外線や可視光は液体のプラセンタエキスの紫外線吸収特性（波長が215nmおよび260~310nmの紫外線を強く吸収）と可視光吸収特性（波長400~420nmの可視光を吸収）のためにこれらの光の照射によりプラセンタエキスの紫外線防御機能が落ちる。そのため褐色系のガラス容器に保存するのが良い。
【００２１】
ガラス容器の容積を２ミリリットル以下で１ミリリットル以上にすることにより、化粧品としての使用後の保管の問題が解決する。すなわち使い切りを前提としてあらかじめ小分けして充填することにより使用後の保管の問題が解消する。該容器の入口の内径が7mm以下で3mm以上であることにより化粧品としての使用時の容器の転倒によるこぼれが防止でき、容器内への液体の充填が容易となる。
【００２２】
本発明の第四の特徴は、ＳＰＦブタあるいはＳＱＦＨ1000ブタの胎盤を利用している点にある。これらのブタの出産後直ちに冷水で洗浄し、尿や糞さらに飼育時に使用される材料の付着物を水洗除去後直ちに急速凍結する。これらの一連の操作により胎盤に付着する異物や感染性物質を可能な限り除去しておく。この除去により孔拡散法膜分離に期待する除菌や精製あるいはＥ型肝炎ウイルスの感染防止効果もでる。
【発明の効果】
【００２３】
本発明の化粧品ではブタプラセンタを構成する細胞の細胞外液と細胞内液を加熱による変性なしに事実上100％の濃度で利用している。該体液では生理活性物質の一種であるサイトカインがその生理活性を失うことなく含有している。動物細胞の体液の浸透圧は人間の皮膚細胞の浸透圧に近いため本発明の化粧品は直接皮膚を構成する細胞に働きかけることが可能となった。さらに化粧品としての内容成分が完全に特定され（すなわちブタプラセンタの細胞の体液）品質の安定と効果の再現性が確保された。
【００２４】
本発明の化粧品は皮膚を構成する細胞に直接働きかけることにより皮膚の秩序と調和の取れた状態は継続させる。具体的には以下の効果が期待できる。
（１） 
塗布後のべたつき感がない。
（２） 
皮膚の不快感や刺激がない。
（３） 
美白効果
（４） 
アンチエージング効果（皮膚の軟化、つやの維持、瑞々しい皮膚の維持）。この効果は酸化防止や皮膚の乾燥防止効果の継続性を示す。
（５） 
紫外線防御効果
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
北海道プラセンタ製剤株式会社製のブタ胎盤エキスの製造の処方箋に従って調製する。すなわちＳＱＦの認証を受けた農場、インタファーム株式会社知床事業所での分娩房で胎盤を採取後、直ちに洗浄と非加熱殺菌を実施し、その後−６０℃に凍結し、該会社の加工工場に輸送し-20℃以下で保管する。−20度以下で保存された胎盤を15℃のクリーンルーム内で該胎盤を解凍しトレミングにより有効部分を切り出し、再びー20℃以下に凍結する。該凍結胎盤を自然解凍し、さらに凍結させ、次いで解凍し、細胞内液を滲みださせる。この体液と胎盤繊毛膜や繊毛などの不溶物を遠心機を用いて除去する。体液中に分散した不溶物をさらにガーゼあるいは木綿製の衛生布あるいは再生セルロース不織布でろ過除去する。得られた液は不透明でややピンク色を呈する。
【００２６】
平均孔径500 nm、空孔率90 %、膜厚80μmの再生セルロース平膜を装填した孔拡散法膜分離装置（株式会社セパシグマ社製、有効膜面積0.25平方メートル）を用いて、15℃のクリーンルーム内で膜間差圧を0.1気圧以下で孔拡散法膜分離処理を行う。平均孔径は除去対象物質ごとに設定される。細菌除去を目的にする場合は平均孔径は500nmが最適である。ウイルス除去を目的にすれば平均孔径は50nmに設定する。プラセンタエキス（本発明では体液で胎盤の細胞外液と細胞内液で構成される）の化粧品が最終製品であるので除菌目的が適合するので通常は平均孔径が500nmの膜を装填する。処理対象液の膜平面方向での流れ速度と処理後の液部の回収速度の比を10に設定する。得られた処理後の回収液は透明であり、該液中には細菌は観察されない程度まで除去できる（対数除去係数（ＬＲＶ）で６以上）。回収液中のタンパク質の濃度は0.5重量％〜2.0重量％である。この濃度は上記の回収速度の比、膜の平均孔径、および体液中のタンパク濃度によって変動する。該比を大きくするほどタンパク濃度は低下し、細菌の除去率ＬＲＶは増加する。
【００２７】
回収液中のサイトカイン濃度は、例えばＴＧＦβ１（Transforming Growth Factor beta 1:上皮細胞や血管内皮細胞の増殖や新生を促進する）については260 pg/mg ~ 500 pg/mgであり、胎盤中の濃度（平均250 pg/mg）より大きい。またＥＦＧ（Epidermal
Growth Factor:上皮細胞増殖因子で上皮細胞を再生させる因子）の濃度については13 pg/mg ~ 15 pg/mgであり胎盤中の濃度5 pg/mgに比べて高い。すなわち孔拡散法膜分離によりサイトカインが選択的に回収される。サイトカインの生理活性は液の凍結・解凍を繰り返すたびに減少する。
【００２８】
孔拡散法膜分離によって回収された液体を-20℃以下に急速に凍結し、該凍結物を解凍後褐色のガラス瓶中に小分け分注する現場まで凍結状態で輸送する。該凍結物を20 ℃の水浴で融解し、融解物を洗浄／滅菌後の褐色ガラス瓶中にクリーンベンチ下で充填し、直ちに-20℃以下に凍結させる。凍結状態で１週間保存し、解凍後の液体の紫外ー可視スペクトルより経時変化を評価した。褐色のガラス瓶に充填する前の液と保存後解凍した液とでは、波長254nmの吸収のピーク値（Ａｂｓで表示）が約２割上昇し、波長200nmの吸収のピーク値は約５％上昇していた。おそらく凍結ー解凍の繰り返しによって上昇したもので１週間での保存期間での変化ではないことが保存することなく凍結ー解凍の実験より確認できる。
【実施例１】
【００２９】
北海道プラセンタ製剤株式会社が保存するブタ胎盤を10℃のクリーンルーム内で解凍しベテランの職員によって該解凍後の胎盤をすばやく冷水で洗浄し、トレミングし有効部分のみを切り出した（同社の処方箋での加工プロセス）。不用な部分としてあらかじめ胎児の臍の緒の静脈と動脈部、羊膜である。トレミング後の胎盤を冷水で洗浄後再び-20℃以下に凍結し、20℃の水浴で解凍し、さらに-20℃に凍結後再融解させた。再融解後に滲出する水溶液成分と不溶成分とを遠心分離機で分離する。分離後の液部を再生セルロース製不織布（目付け100 g/平方メートル、旭化成せんい株式会社製）を用いて二回ろ過してろ液を得た。該ろ液を孔拡散法膜分離装置（株式会社セパシグマ社製、平均孔径500 nmの再生セルロース膜を装填）を用いて液部を回収した。これらの操作は15℃のクリーンルーム内で実施された。
【００３０】
孔拡散法膜分離装置で回収された液体はブタ胎盤を構成する細胞内液と細胞外液とで構成される。そのため該液を人間の皮膚に塗布すると皮膚への浸透速度が速く、べとつき感はほとんど無かった。このような効果は該液の浸透圧と人間の皮膚細胞の浸透圧とがほぼ等しいため、体液中の水分の拡散が容易なためと思われる。該駅中のサイトカイン濃度は以下のようになった。
タンパク質；１．５ｍｇ/ｍｌ、ＥＧＦ；11.03 pg/mg、ＩＧＦ；80.13 pg/mg，ＩＬ-1；20.2 pg/mg，ＦＣＦ１；18.5 pg/mg，ＴＮＦ；18.6 pg/mg，ＦＧＦ2；18.5 pg/mg，ＴＧＦ；467 pg/mg。
【００３１】
該液を褐色の着色瓶に分注した。該着色瓶はホウケイ酸ガラスで構成され、寸法としては内容積1.9 ml、入口首部内径4.5 mm、入口外径6.3 mm、筒部の内径9.9 mm、筒部の外径11.7 mm、筒部の高さ26 mm、首部長さ6 mmであった。該瓶中に水を充填した状態で波長200 nm ~ 350 nmの紫外線の吸光度はAbs表示で４以上であった。ビンとしての紫外線遮光能は高い。波長400 nmの光にたいする吸光度は2.5、500 nm ~ 900nmの光に対しての吸光度は0.5以上であった。したがって該瓶の可視光の遮光特性としては紫外部での遮光が特に優れている。上記の褐色瓶に該体液1 mlをクリーンベンチ内で充填し、凍結保存した。１週間の保存後、解凍した液のサイトカイン濃度は凍結前の値よりやや減少傾向にあったが、減少幅は2 割以内であった。
【産業上の利用可能性】
【００３２】
プタ胎盤の体液をほぼ生の状態で精製回収された化粧品として優れた化粧品であるが該化粧品は食品分野での製品の原料としても利用できる。さらに本化粧品はそのままでも細胞培養液中へ添加して組織培養用の試薬としても利用できる。例えば再生医療用の細胞組織の形成のための栄養剤として利用可能である。