(57)【要約】【課題】これまでにない高い安全性を有するヒートショックプロテイン70産生誘導剤を得、医薬品、化粧品に応用することを課題とする。【解決手段】亜鉛化合物を今までに無い高濃度に含有する培地で順化させた酵母の培養方法。および亜鉛化合物を高濃度に菌体内に蓄積した酵母菌体抽出液を利用することにより、細胞毒性が低く、且つ十分なヒートショックプロテイン７０産生誘導効果を有する組成物を利用することで、胃潰瘍・胃粘膜の修復、予防に有効な組成物として利用できる。さらに、化粧品組成物として利用することで紫外線や環境からのストレスに対して、肌の炎症防止、皮膚バリア機能の保持などの効果が期待できる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
亜鉛化合物を１０mM以上含有する培地で培養した酵母の菌体抽出物を有効成分とするヒートショックプロテイン７０産生誘導剤。
【請求項２】
亜鉛化合物を１０mM以上含有する培地で培養した酵母の菌体抽出物を有効成分とする紫外線傷害抑制剤。
【請求項３】
ヒートショックプロテイン７０産生誘導剤又は紫外線傷害抑制剤の製造方法であって、（１）亜鉛化合物を１０mM以上含有する培地にて酵母を培養する工程と、
（２）（１）の工程で得られた酵母培養物の抽出物を作製し、
（３）（２）でえられた抽出物を含有させる工程を有する製造方法。
【請求項４】
亜鉛化合物を１０mM以上含有する培地で酵母を培養する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒートショックプロテイン７０の産生誘導剤に関する。さらに詳しくは、亜鉛化合物を含有した酵母菌体抽出物の、ヒートショックプロテイン７０産生誘導剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒートショックプロテイン（HSP）の発現は、細菌感染や炎症、エタノール、活性酸素、重金属、紫外線、低酸素状態、および細胞が高温にさらされた場合など、細胞に対する様々なストレスにより誘導されることが知られている。生成した新生タンパク質は不安定な状態にあり、フォールディングと呼ばれる過程を経て安定化する。HSPはこの新生タンパク質に結合することによりタンパク質のフォールディングを制御する分子シャペロンとしての機能を持ち、分子シャペロンの多くはHSPである。高温条件化において変性したタンパク質、あるいは新生タンパク質のうちフォールディングの段階に問題があり、機能できないものにはHSPが結合してその処理を行うことが知られている。HSPはこのような高次構造の破壊されたタンパク質の修復およびタンパク質変性の抑制機能を有し、修復が不可能であると判断されたタンパク質はユビキチン化を受け、プロテアソームと呼ばれる酵素複合体へ運搬されて分解を受ける。
【０００３】
HSP70 は消化管や皮膚など多くの臓器において恒常的に発現していること及び、種々のストレスによってその発現量が増加することが報告されている。近年、HSP70 は抗細胞死作用や抗炎症作用を持ち、アルコールや紫外線など種々のストレスに対し、細胞を保護することが報告されている。そのため、HSP７０誘導剤を医薬品（胃粘膜保護薬など）や化粧品へ応用する研究が行われている。
【０００４】
すでに、胃潰瘍や胃粘膜傷害の治療薬にはHSP７０誘導効果を持つものが多く知られており、ゲラニルゲラニルアセトンはセルベックス(エーザイ株式会社)という名称で医薬品として市販されている（非特許文献１）。また、亜鉛化合物がHSP７０を誘導することも良く知られており、亜鉛とL-カルノシンの錯化合物であるポラプレジンク（ゼリア新薬）が抗潰瘍薬として使用されている（非特許文献２）。
さらに、芍薬の根から抽出されたペオニフロリンがHela細胞に対してHSP７０を誘導することが報告されている（非特許文献３）。
グリチルレチン酸の誘導体であるカルベノキソロンもHela細胞に対してHSP７０を誘導することが知られている（非特許文献４）。
【０００５】
亜鉛化合物を含有する酵母菌の培養に関しては、特開平８−３３２０８２（特許文献１）に亜鉛を５０ｐｐｍ以上含有する溶液中で、酵母を非増殖的に攪拌することにより亜鉛化合物を菌体内に高含有させる方法が記載されている。これは、亜鉛化合物を高含有する培地で酵母を培養すると、酵母の増殖が阻害され増殖しなくなるため、上記のように、増殖した酵母菌体を非増殖的に亜鉛含有培地で攪拌することにより、菌体内に亜鉛化合物を取り込ませる方法である。しかし、上記方法では酵母菌の増殖と亜鉛化合物の酵母菌体内への取り込みを2段階に分けて行うこととなり、製造方法が非常に煩雑になる。さらに、特開平２−２９５４８０（特許文献３）には酵母菌をディフコ製バクトYM寒天培地に亜鉛イオンとして２０〜１００ｐｐｍ含んだ培地で２６〜３０℃、2日間培養し、生育した酵母菌を分離する。この分離菌を次に０．２〜１０ｐｐｍの亜鉛イオンを添加した培地で培養することにより、酵母菌の増殖性の良い培養方法が記載されている。
【０００６】
さらに、特開平９−１２４４３８（特許文献２）には、亜鉛化合物を含有した培地で培養したサッカロミセス属(Saccharomyces)酵母の水性溶媒抽出物を含有する化粧料、および食品に関する記載がある。化粧料としては、メラニン生成抑制作用、メラニン色素分解作用、光加齢抑制作用（皮膚の老化防止作用）、ニキビ菌生育阻害作用、保湿作用，肌荒れ改善作用などを有し、食用組成物には、滋養強壮，栄養補強といった効果が記載されている。しかし、上記特許に記載されている酵母菌の培養培地には、亜鉛化合物の添加量が、総量として１０−１，０００ppm程度の範囲で培養する旨、記載されている。しかし、亜鉛濃度が１０−１，０００ppmでは菌体内に蓄積される亜鉛濃度が低いため、十分なヒートショックプロテイン７０の産生誘導が期待できず、記載されている効果は単に酵母抽出液の効果の延長に過ぎない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Biochem.Biophys.Res.Commun.  353：399-404  2007  Otaka,M., et al
【非特許文献２】Dig.Dis.Sci.  47：2799-2804、2002  Odashima,M., et al
【非特許文献３】Cell  Stress  Chaperones  9：378-389、2004   Yan,D., et al
【非特許文献４】Life.Sci.  69：2867-2873、2001  Nagayama,S.,  et al
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開平８−３３２０８２
【特許文献２】特開平９−１２４４３８
【特許文献３】特開平２−２９５４８０
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上述の技術文献のように、ヒートショックプロテイン７０の産生誘導剤は、ゲラニルゲラニルアセトンを始めとして、亜鉛化合物、亜鉛とL-カルノシンの錯化合物、ペオニフロリン、グリチルレチンの誘導体が知られ、胃潰瘍や胃粘膜傷害の治療薬としてすでに利用されている。しかし、亜鉛化合物を上皮細胞に直接添加すると細胞毒性が強く現れるため、摂取するうえでも問題となる。このため、亜鉛化合物を酵母菌体に高濃度取り込ませることにより、細胞毒性が低く、ヒートショックプロテイン７０の産生誘導効果の高い、亜鉛含有酵母菌体組成物を提供することを課題とする。
【００１０】
また、亜鉛化合物を培地に添加して培養した酵母菌体を食品、化粧料に利用する記載も多々認められるが、ヒートショックプロテイン７０の産生誘導に関する記載はこれまで記載されていない。また、酵母菌の増殖に阻害の掛からない亜鉛濃度で培養した酵母菌体では、ヒートショックプロテイン７０の産生誘導効果が無い。このため、高濃度の亜鉛化合物を含有する酵母菌体の作成を、煩雑な培養方法によらずに提供できることを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
通常、硫酸亜鉛を培地に添加すると、５mM（４０４ｐｐｍ）程度までは酵母菌の増殖に阻害が認められないが、それ以上の濃度になると増殖阻害が掛かり始め、１０mM（８０８ｐｐｍ）ではほぼ増殖が認められなくなる。しかし、亜鉛化合物の濃度を段階的に高めた培地で繰り返し培養することにより順化させた酵母菌を用いることにより、１０mM濃度以上の亜鉛化合物を含有した培地においても酵母菌の増殖が可能となる。
【００１２】
さらに、１０mM以上の亜鉛化合物が含有された培地で培養した酵母菌体抽出物が、上皮細胞にヒートショックプロテイン７０の産生誘導に十分な効果を有することが明らかになった。
【発明の効果】
【００１３】
本発明による高濃度の亜鉛化合物を含有した培地で順化培養した酵母菌は、高濃度の亜鉛化合物を含有する培地中においても増殖阻害が掛かることが無く、菌体中に高濃度の亜鉛化合物を含有する。このため、菌体抽出物を上皮細胞に作用させた場合、上皮細胞にヒートショックプロテイン７０の産生を誘導することが可能である。  しかも、細胞に亜鉛化合物を作用させた場合のような細胞毒性がかからないため、安全性の高い産生誘導剤の開発が可能となる。
亜鉛化合物を高濃度で含有する酵母菌体をそのまま、あるいは酵母菌体抽出物を飲用することにより、上皮細胞でのヒートショックプロテイン７０の産生誘導が可能となり、胃潰瘍、胃粘膜傷害を防止する医薬品に利用が可能である。
【００１４】
さらに、菌体抽出物を化粧料として利用することにより、上皮細胞である表皮細胞にヒートショックプロテイン７０の産生を誘導させ、紫外線などによるストレスによる表皮細胞傷害を防御し、その結果、表皮を炎症から守ることが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ウエスタン・ブロッティングで得られたバンド強度
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明で用いる酵母は市販されているパン酵母、または分譲されているＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
に属する酵母であれば使用できる。また、酵母は糖類が存在する自然界からも容易に分離することができるため、植物や土などから分離した酵母でＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属に属する酵母であればいずれも使用できるが、特にＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ に属する酵母が望ましい。
【００１７】
亜鉛化合物は、水溶性亜鉛化合物であれば使用でき、無機亜鉛化合物として塩化亜鉛、硝酸亜鉛、硫酸亜鉛、クエン酸亜鉛、酢酸亜鉛、酒石酸亜鉛、乳酸亜鉛を使用することが出来る。これら亜鉛化合物を酵母培養培地に添加し、酵母菌を培養する。亜鉛化合物濃度が5mM程度までは、酵母菌の増殖阻害が掛かりにくいが、１０mM濃度になると酵母菌がほとんど増殖しなくなる。しかし、長期間培養を続けることにより、亜鉛化合物に順化した酵母がわずかに生育してくる。この生育してきた酵母を同濃度の亜鉛添加培地で繰り返し培養することにより、増殖速度が速い亜鉛順化菌が得られる。この操作を、順次亜鉛濃度の高い培地で繰り返すことにより、高濃度の亜鉛化合物を添加した培地においても、高い増殖性を示す順化菌が得られる。培地に添加する亜鉛化合物の濃度は１０−６０mMが添加可能であるが、酵母菌の増殖性を加味すると望ましくは２０−３０mMの濃度が望ましい。
【００１８】
酵母菌を培養する培地は、一般的にグルコースに代表される炭素源と、ペプトンに代表されるペプチド類からなる窒素源、酵母エキスに代表される微量ビタミン類、ミネラル類などの栄養素を含有する物質が含まれていれば培養が可能である。一般的には天然物からなるＹＭ（Yeast-Malt）培地、ＹＰＤ（Yeast-Polypeptone-Dextrose）培地などが用いられている。また、天然物を配合しない合成培地を使用することも可能である。培地組成としては、最低限の炭素源と窒素源とリン源を含んでいれば良く、炭素源としては、リボース、アラビノース、キシロース、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、ラムノース、等の単糖類、シュクロース、マルトース、ラクトース、トレハロース、セロビオース、等の二糖類、またラフィノース、マルトトリオース等の三糖類を用いることができる。これらから1種以上含有していれば良い。窒素源としては、尿素、硝酸塩として硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、アンモニウム塩として硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、また、アミノ酸として、トリプトファン、
リシン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、ヒスチジン、アラニン、アルギニン、アスパラギン、セリン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、プロリン、チロシン等の窒素含有化合物を用いることができ、これらから1種以上含有していれば良い。リン源としては、リン酸塩を用いることが出来、リン酸１水素カリウム、リン酸２水素カリウム、リン酸アンモニウムを用いることができ、これらから1種以上含有していれば良い。
【００１９】
合成培地の基本培地としては、前記炭素源と窒素源とリン源を含んでいれば十分であるが、その他にビタミン源、ミネラル源を追加することにより、酵母菌の増殖性を高めることが可能である。ビタミン源としては、例えばビオチン、チアミン（ビタミンＢ１）、リボフラビン、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、パントテン酸、アスコルビン酸、ヨウ酸、シアノコバラミン、イノシトール、ニコチン酸、コリン、カルニチン、パラアミノ安息香酸、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド等を用いることができる。ミネラル源としては、カリウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、銅、モリブデン、ナトリウム、ヨウ素、コバルト等が挙げられ、これらを供給できる具体的な成分としては、例えば、硝酸カルシウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸ナトリウム、三酸化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバルト等の化合物を用いることができる。また、ミネラル類を豊富に含有する黒砂糖のような天然成分を用いることも出来る。
【００２０】
また、天然成分を含まない合成培地であるCzapek培地、Burkholder培地、YNB（Yeast  Nitrogen  Base）培地に上記物質を適宜加えることにより、より高い増殖性を示す基本培地とすることも可能である。
【００２１】
亜鉛化合物含有培地で培養処理した酵母菌体から有効成分を抽出するにあたっては、培養後の菌体を回収し精製水等を用いて十分洗浄した後、例えば、超音波やフレンチプレスで菌体を破壊し、これに、水，エタノール，ブチレングリコール，プロピレングリコール，グリセリンなどの水性溶媒の単独もしくはそれらの混液を菌体湿重量に対して１０〜１００倍量程度添加し、遠心分離等の操作を行った後に濾過すれば良い。また、洗浄後の菌体湿重量に対して１０〜１００倍量程度の精製水を加え、４５〜５５℃で、２４〜７２時間ほど自己消化させた後、遠心分離等の操作を行い、上清を得る。さらに酵素分解法を利用する場合は、洗浄後の菌体湿重量に対して１０〜１００倍量程度の精製水を加えプロテアーゼを添加し、酵素活性温度で一昼夜反応させた後、遠心分離等の操作を行い上清を得る。酸分解法を利用する場合は、洗浄後の菌体湿重量に対して約１０倍量の１〜５％塩酸を加え、４５〜６０℃にて３〜７時間、時々攪拌しながら加水分解する。その後、アルカリを用いて中和した後、遠心分離等の操作を行い、上清を得る。
【００２２】
上記のようにして調製した酵母菌体抽出物を、化粧品製剤および／または医薬製剤として使用する。酵母菌体抽出物は、製剤全体に対して乾燥物量として、好ましくは０．００１〜１０質量％、より好ましくは０．０１〜５質量％、最も好ましくは０．１〜５質量％の量で使用する。また医薬製剤の場合は、酵母菌体そのままを経口で使用することも出来る。通常１０〜１００質量％、好ましくは２５〜７０質量％、より好ましくは４０-６０質量％である。
【００２３】
医薬製剤としての投与のための剤型としては、病態やその進行状況、その他の条件によって異なるが、本発明に係るヒートショックプロテイン産生誘導剤をそのまま投与してもよく、あるいは通常用いられる製剤添加剤を加えて固体又は液体の剤型とし、公知の方法により、経口剤（錠剤、顆粒剤、散剤、細粒剤、カプセル剤、被覆錠剤、丸剤、シロップ剤、トローチ剤等）、経皮吸収製剤、吸入剤（エアゾール剤、粉末状吸入剤、液状吸入剤等）、外用剤（軟膏剤、クリーム剤、液剤等）、乳剤、懸濁剤、パップ剤、ローション剤等とすることができる。また、食品や飼料、飲水等に混合することもできる。
【００２４】
製剤は、公知の製剤手法により行い、例えば、混合、顆粒化、糖衣化、溶解、乳濁等の工程によって行う。経口投与のための製薬的処方としては、有効成分を賦型剤と混合し、必要に応じてグラインディングした後、顆粒化し、必要な補助剤を添加した後に、錠剤を得てもよい。
【００２５】
錠剤等の製剤の場合は、製剤分野において常用される賦型剤を用いて製造でき、注射剤等の製剤の場合は、大豆レシチン等の天然界面活性剤、又はポリソルベート、ポリオキシエチン硬化ヒマシ油等の合成界面活性剤等を用いて乳化又は可溶化して製造することができる。
【００２６】
賦型剤としては、特に限定されないが、例えば、デンプン、コーンスターチ、デキストリン、ブドウ糖、乳糖、白糖、糖アルコール（マンニトール、エリスリトール、キシリトール等）、硬化油、結晶セルロース、無水珪酸、珪酸カルシウム、第二リン酸水素カルシウム等が挙げられる。
【００２７】
本発明のヒートショックプロテイン産生誘導剤は、さらに必要な酸化防止剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、溶解補助剤、安定化剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、その他の補助剤等を含有した医薬組成物として投与してもよい。
【００２８】
酸化防止剤としては、特に限定されないが、例えば、アスコルビン酸、α−トコフェロール、エトキシキン、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール等が挙げられる。
【００２９】
結合剤としては、特に限定されないが、例えば、ポリビニルピロリドン、エチルセルロース、メチルセルロース、α化デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、プロピレングリコール等が挙げられる。
【００３０】
崩壊剤としては、特に限定されないが、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、炭酸カルシウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム等が挙げられる。
【００３１】
滑沢剤としては、特に限定されないが、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸カルシウム、フマル酸ステアリルナトリウム、ポリエチレングリコール６０００等が挙げられる。
【００３２】
溶解補助剤としては、特に限定されないが、例えば、生理食塩水、リン酸緩衝生理的食塩水、乳酸化リンゲル溶液、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート８０、ニコチン酸アミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、マクロゴール、ヒマシ油脂肪酸エチルエステル等が挙げられる。
【００３３】
ｐＨ調整剤や緩衝剤としては、特に限定されないが、例えば、有機酸又は無機酸及びその塩や、水酸化ナトリウム等が挙げられる。
【００３４】
懸濁化剤としては、特に限定されないが、例えば、メチルセルロース、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート等が挙げられる。
【００３５】
保存剤としては、特に限定されないが、例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、ソルビン酸等が挙げられる。
【００３６】
錠剤、顆粒剤、散剤の場合には必要に応じてヒドロキシプロピルメチルセルロース等の皮膜コーティングを施しても良い。
【００３７】
経口液剤を製造する場合には、必要に応じて、着色剤、矯味矯臭剤、抗酸化剤、溶解補助剤、安定化剤などを添加してもよい。
【００３８】
化粧料製剤としての投与のための剤型としては、例えば乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、洗顔料などの基礎化粧料、ファンデーション、リキッドファンデーションなどのメイクアップ化粧料、洗顔料、ボディーシャンプー、石けんなどの清浄用化粧料、さらには浴剤等が挙げられるが、勿論これらに限定されるものではない。
【００３９】
本発明の化粧料製剤には、上記の亜鉛高含有酵母抽出物からなる必須成分の他に、通常化粧料に用いられる配合成分、例えば油性成分、界面活性剤、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、色素、香料等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００４０】
ここで、油性成分としては、例えばオリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米胚芽油、ヤシ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、植物由来スクワランなどの植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油などの動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリンなどのロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワランなどの炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、ｃｉｓ−１１−エイコセン酸などの脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコールなどの高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）などの合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。
【００４１】
界面活性剤としては，例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどの非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪酸アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩などのアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪酸アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩などのカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタインなどの両性界面活性剤等を使用することができる。
【００４２】
保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコールなどのグリコール類、マルチトール、ソルビトール、キシリトール、トレハロース、グルコース等の糖類、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸菌発酵米、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体など）、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、加水分解シルク蛋白質、ＮＭＦ関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、フィトステロール、大豆リン脂質、イソステアリン酸コレステリル、海藻抽出物、各種アミノ酸及びそれらの誘導体等が挙げられる。
【００４３】
増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン、ファーセララン等の褐藻、緑藻或いは紅藻由来成分、ビャッキュウ抽出物、ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体等の多糖類、キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム等のガム類、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体、ポリグルタミン酸及びその誘導体、グルコシルトレハロースと加水分解水添デンプンを主体とする糖化合物等が挙げられる。
【００４４】
防腐・殺菌剤としては、例えばパラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチルなどのパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャーマル（イミダゾデイニールウレア）、１，２−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物、プロポリスエキス等がある。
【００４５】
粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、６−又は１２−ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー等がある。
【００４６】
紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。
【００４７】
抗酸化剤としては、例えばスーパーオキシドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ  ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）、カタラーゼなどの生体内活性酸素分解酵素、ビタミンＥ、ビタミンＤなどのビタミン類及びその誘導体、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ユビデカキノン（ユビキノン）、ルチン、ルチングルコシド、γ−オリザノール等がある。
【００４８】
さらに必要ならば、本発明で用いる発酵物の作用効果及び特長を損なわない範囲で、他の活性成分（美白剤、皮膚老化防止・肌荒れ改善剤、抗炎症剤等）を配合してもよく、かかるものとしては、例えば美白剤であれば、トラネキサム酸及びその誘導体、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン誘導体、エラグ酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、胎盤抽出物、システイン、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、ハマメリス抽出物、イタドリ抽出物、甘草抽出物、ゲンノショウコ抽出物、ナツメ抽出物、シャクヤク抽出物、トウキ抽出物、モモ抽出物、緑藻類、紅藻類又は褐藻類の海藻の抽出物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリノール酸メントールエステルなど）、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体等が、皮膚老化防止・肌荒れ改善成分であれば、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、セラミドなどの細胞間脂質、胎盤抽出物、ニコチン酸及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ前駆体、ビタミンＡ及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、アラントイン、α−ヒドロキシ酸類、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、コエンザイムＱ−１０、アデノシン、α−リポ酸、ピコリン、カルニチン及びその誘導体、ゲンチアナエキス、甘草エキス、ハトムギエキス、カミツレエキス、ニンジンエキス、アロエエキスなどの生薬抽出エキス、米発酵エキス、緑藻類、紅藻類又は褐藻類の海藻の抽出物、ソウハクヒエキス、ブナ抽出物、キダチアロエ抽出物、マンネンロウ抽出物、イチョウ抽出物、スギナ抽出物、ベニバナ抽出物、オタネニンジン抽出物、セイヨウニワトコ抽出物、ハゴロモグサ抽出物、レンゲ抽出物、マンゴー抽出物、卵殻膜抽出タンパク質、デオキシリボ核酸カリウム塩、紫蘭根抽出物、ムラサキシキブ抽出物、イネ抽出物等が、又抗炎症成分であれば、例えばグアイアズレンスルホン酸ナトリウム、グアイアズレンスルホン酸エチルなどのアズレン誘導体、グリチルリチン酸ジカリウム、グリチルレチン酸ステアリルなどのグリチルリチン酸誘導体、アラントイン、カンゾウ抽出物、クジン抽出物、シャクヤク抽出物、ボタンピ抽出物、レンギョウ抽出物、リュウタン抽出物、トウキンセンカ抽出物、パセリ抽出物、オトギリソウ抽出物等が挙げられる。
【００４９】
以下、本発明における酵母菌体抽出液の効果試験の実施例を示す。さらに、その酵母菌体抽出液を用いた組成物への応用処方例等について述べるが、ここに記載された実施例に限定されるものではない。なお、以下に於いて、部はすべて質量部を、又％はすべて質量％を意味する。
【００５０】
また、本発明の医薬製剤は、亜鉛化合物を高配合した酵母菌体および、その抽出物を有効成分とし、胃潰瘍および、胃粘膜組織傷害の治療剤及び予防薬として特に有用である。また、化粧料製剤として使用することにより、紫外線や環境からの酸化ストレスによる表皮細胞傷害（皮膚保湿成分の産生量の低下、表皮細胞の分化異常による角化の異常、それに伴う表皮バリアの破綻などが原因となり、皮膚水分蒸散量の増加による肌荒れ、表皮組織の炎症を生じる。）をヒートショックプロテイン７０産生誘導剤が修復、予防することが可能である。
【００５１】
[実験１]    
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ 酵母の採取方法
市販されているパン酵母（日清スパーカメリア・ドライイースト：日清フーズ（株））を購入し、１２０℃で１５分間滅菌したＹＭ培地１００ｍｌを添加した三角フラスコに０．１ｇ懸濁し、２８℃、１５０ｒｐｍで３日間回転培養を行った。懸濁液を１白金耳取り、ＹＭ寒天培地上で引き伸ばして単独コロニーを得、これを以下の実験に使用した。
以下、培地組成においてｇ/Ｌ等とあるのは、各成分を該当ｇ計量し、精製水で１Ｌにしたという意味である。
＜YM培地＞
ペプトン５g/L、酵母エキス３g/L、麦芽エキス３g/L、グルコース１０g/L
＜YM寒天培地＞
YM培地に寒天２０g/Lを添加し、加熱溶解して作成。
【００５２】
[実験２]
高濃度亜鉛化合物含有培地での酵母菌の順化培養
培地はＹＮＢ（Ｙｅａｓｔ  Ｎｉｔｒｏｇｅｎ  Ｂａｓｅ）  ｗｉｔｈ  Ａｍｍｏｎｉｕｍ  Ｓｕｌｆａｔｅ  合成培地にグルコースを２．０％添加した（以下、本明細書中では、YNB-SG培地と称す）。
YNB-SG培地５０ｍｌを三角フラスコに加え、１２０℃、１５分間オートクレーブで滅菌処理を行った。本培地を冷却後、別に滅菌しておいた１M硫酸亜鉛７水和物の水溶液を１０mM濃度になるように本培地に添加した（１０ｍM硫酸亜鉛含有YNB-SG培地と称す）。この１０ｍM硫酸亜鉛含有YNB-SG培地に、実験1で得た酵母菌を１白金耳植え付け、２４℃、１５０ｒｐｍ、で１４日間培養を行った。始めの３−４日間程度は、酵母菌の増殖はほとんど認められないが、徐々に増殖が確認できるようになる。この培養物５００μlを新しい１０ｍM硫酸亜鉛含有YNB-SG培地50mｌに添加し、さらに培養を続ける。これを5継代程繰り返すことにより、順化株が得られる。この順化株を用いて、１５mM硫酸亜鉛含有YNB-SG培地、２０mM、３０mM、４０ｍM、５０ｍM、６０ｍMと硫酸亜鉛濃度を高めたYNB-SG培地に順次移行して培養することにより、高硫酸亜鉛含有YNB-SG培地に順化した亜鉛耐性酵母菌株を得た。以下、最終培養状態における亜鉛の添加量に合わせて、２０mＭ亜鉛耐性酵母菌株等と称す。具体的には、培地中の亜鉛濃度を順次高めて順化させていき、亜鉛を６０ｍM添加した培地での培養を最終として採取した菌株を６０ｍM亜鉛耐性酵母菌株と称す。
尚、本願においては、基本培地としてYNB-SG培地を用いたが、酵母菌に亜鉛を含有させることが出来れば所望の効果を奏するので、他の公知の培地を基本培地としても差し支えない。
＜YNB-SG培地組成＞
硫酸アンモニウム５，０００、リン酸二水素カリウム１，０００、硫酸マグネシウム５００、塩化ナトリウム１００、塩化カルシウム１００、ビオチン０．００２、パントテン酸カルシウム０．４、葉酸０．００２、イノシトール２．０、ナイアシン０．４、パラアミノ安息香酸０．２、塩酸ピリドキシン０．４、リボフラビン０．２、塩酸チアミン０．４、ホウ酸０．５、硫酸銅０．０４、ヨウ化カリウム０．１、塩化第二鉄０．２、硫酸マンガン０．４、モリブデン酸ナトリウム０．２、硫酸亜鉛０．４、グルコース２０，０００（単位は全てｍｇ/L）。
【００５３】
[表１]に、硫酸亜鉛を各種濃度で添加したYNB-SG培地で培養した場合の酵母菌の増殖性を示した。
培養初期の３日間では、１０mM硫酸亜鉛を添加したYNB-SG培地では酵母菌の増殖はほとんど認められなかった。
しかし、[実験２]に記載した方法で継代培養を繰り返すことにより、[表２]に示したように、硫酸亜鉛１０mM添加YNB-SG培地においても、高い増殖性を示すようになった。
【００５４】
【表１】
2014108945.tif 000002
【００５５】
【表２】
2014108945.tif 000003
【００５６】
[実施例１]
酵母菌体抽出液の作成１
1Lの培養ボトルに３０mM硫酸亜鉛含有YNB-SG培地８００ｍｌを用意し、種菌として６０ｍM亜鉛耐性酵母菌株の分散液８ｍｌを添加し、２４℃、通気量1L/min.で、5日間培養を行った。培養後、３５００rpmで１０分間遠心分離を行い、得られた酵母菌体（湿重量）１０ｇに、精製水５０ｇを加え、菌体を分散させた。この懸濁液を５０℃にて２４時間放置させ、自己消化させた。この懸濁液を、３５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を取り酵母菌体抽出液とした。この抽出液の固形分は２．０w/v％であった。
【００５７】
[実施例２]      
酵母菌体抽出液の作成２
1Lの培養ボトルに３０mM硫酸亜鉛含有YNB-SG培地８００ｍｌを用意し、種菌として５０ｍM亜鉛耐性酵母菌株の分散液８ｍｌを添加し、２４℃、通気量1L/min.で、5日間培養を行った。培養後、３５００rpmで１０分間遠心分離を行い、得られた酵母菌体（湿重量）１０ｇに、精製水５０ｇを加え、菌体を分散させる。この懸濁液を２N-塩酸溶液でPH２．０に調製した後、６０℃にて２４時間放置させ、酸加水分解させる。この懸濁液を、３５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を取り酵母菌体抽出液とした。この抽出液の固形分は２．５w/v％であった。
【００５８】
[実施例３]
酵母菌体抽出液の作成３
1Lの培養ボトルに３０mM硫酸亜鉛含有YNB-SG培地８００ｍｌを用意し、種菌として４０ｍM亜鉛耐性酵母菌株の分散液８ｍｌを添加し、２４℃、通気量1L/min.で、5日間培養を行った。培養後、培養後、３５００rpmで１０分間遠心分離を行い、得られた酵母菌体（湿重量）１０ｇに、精製水５０ｇを加え菌体を分散させる。この懸濁液を２N-水酸化ナトリウム溶液でPH７．０に調製した後、プロテアーゼであるYL-NL「アマノ」（天野エンザイム株式会社）を１．２%（乾燥菌体量当り）、およびペプチダーゼであるプロテアックス（天野エンザイム株式会社）を２％（乾燥菌体量当り）添加し、５０℃で２４hr放置し、酵素加水分解を行う。この懸濁液を、３５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を取り酵母菌体抽出液とした。この抽出液の固形分は３．５w/v％であった。
【００５９】
[実施例４]   
酵母菌体抽出液の作成４
1Lの培養ボトルに４０mM硫酸亜鉛含有YNB-SG培地８００ｍｌを用意し、種菌として５０ｍM亜鉛耐性酵母菌株の分散液８ｍｌを添加し、２４℃、通気量1L/min.で、5日間培養を行った。培養後、３５００rpmで１０分間遠心分離を行い、得られた酵母菌体（湿重量）１０ｇに、精製水５０ｇを加え、菌体を分散させる。この懸濁液を２N-塩酸溶液でPH２．０に調製した後、６０℃にて２４時間放置させ、酸加水分解させる。この懸濁液を、３５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を取り酵母菌体抽出液とした。この抽出液の固形分は２．２w/v％であった。  
【００６０】
[実施例５]
＜YNB-SBS培地組成＞
ＹＮＢ（Ｙｅａｓｔ  Ｎｉｔｒｏｇｅｎ  Ｂａｓｅ）  ｗｉｔｈ  Ａｍｍｏｎｉｕｍ  Ｓｕｌｆａｔｅ  合成培地に黒砂糖を添加した培地を、YNB-SBS培地と称す。組成は、以下の通り。
硫酸アンモニウム５，０００、リン酸二水素カリウム１，０００、硫酸マグネシウム５００、塩化ナトリウム１００、塩化カルシウム１００、ビオチン０．００２、パントテン酸カルシウム０．４、葉酸０．００２、イノシトール２．０、ナイアシン０．４、パラアミノ安息香酸０．２、塩酸ピリドキシン０．４、リボフラビン０．２、塩酸チアミン０．４、ホウ酸０．５、黒砂糖２０，０００（単位は全てｍｇ/L）。
酵母菌体抽出液の作成４
６０ｍM亜鉛耐性酵母菌株を種菌として、３０mM硫酸亜鉛含有YNB-SBS培地で培養した。1Lの培養ボトルに３０mM硫酸亜鉛含有YNB-SBS培地８００ｍｌを用意し、種菌として６０ｍM亜鉛耐性酵母菌株の分散液８ｍｌを添加し、２４℃、通気量1L/min.で、5日間培養を行った。培養後、３５００rpmで１０分間遠心分離を行い、得られた酵母菌体（湿重量）１０ｇに、精製水５０ｇを加え、菌体を分散させた。この懸濁液を５０℃にて２４時間放置させ、自己消化させた。この懸濁液を、３５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を取り酵母菌体抽出液とした。この抽出液の固形分は２．３w/v％であった。
【００６１】
[実験３]
硫酸亜鉛の定量
[実施例１]にて調製した酵母菌体抽出液１０ｍｌに、蒸留水１００ｍｌおよびPH１０．７のアンモニア・塩化アンモニウム緩衝液2mlを添加する。これに、指示薬としてエリオクロムブラックT・塩化Na ５０mgを加え、０．０１mol/Lエデト酸二Na液で滴定した。
滴定により測定した酵母菌体抽出液中の硫酸亜鉛濃度を[表３]に示した。
YNB-SG培地中に硫酸亜鉛を３０ｍM添加して培養した酵母菌体抽出物中には３．５mMの硫酸亜鉛が、YNB-SG培地中に２０mM添加して培養した酵母菌体抽出物中には、２．８mMの硫酸亜鉛が含有されていることが確認された。
【００６２】
【表３】
2014108945.tif 000004
【００６３】
[実施例６]
酵母菌体抽出液の上皮細胞に対する細胞毒性
A）細胞の培養
B)細胞：NHEK-Neo-Epidermal  Kera（CAMBREX）
C)培地：EpiLife  KG2  （Ca濃度：０．０６mM）
D）添加試料：硫酸亜鉛・７水和物（和光純薬工業）、[実施例１]に記載した酵母菌体抽出物
上皮細胞としては、正常ヒト表皮細胞であるNHEK-Neo-Epidermal Kera（CAMBREX）を用い、EpiLife  KG2（クラボウ）培地で培養した。細胞を２４ well plateに５０％コンフルーエント程度に植え付けた。翌日上記の試料を添加し、４８時間後に細胞を回収して細胞数を計測した。
【００６４】
[表４]に示したように、試薬の硫酸亜鉛を細胞に添加した場合は２００μMで、７４％、２５０μMの添加濃度で、細胞数が５１％となった。しかし、酵母菌体抽出液を添加した場合は、培地中の硫酸亜鉛濃度２５０μMにおいても、９７％であり細胞毒性が全く掛からなかった。この結果からも明らかなように、硫酸亜鉛を直接細胞に添加した場合は、細胞毒性が強くなるが、酵母菌体中に硫酸亜鉛を取り込ませることにより、上皮細胞に対する毒性が著しく緩和されることが明らかとなった。
【００６５】
【表４】
2014108945.tif 000005
【００６６】
[実施例７]
ヒートショックプロテイン７０の産生誘導の確認
１．細胞の培養
正常ヒト表皮細胞であるNHEK-Neo-Epidermal  Kera（CAMBREX）を、Epilife KG2  （Ca濃度：０．０６mM）
培地にて50cm2 plate で培養する。
２．試料の調製
コンフルーエントになったヒト正常表皮細胞に[実施例１]にて調製した酵母菌体抽出物をそれぞれの濃度になるように培地に添加した。添加後、３７℃にて４時間インキュベートした後、細胞を回収しRIPA bufferにて細胞タンパクを抽出した。
RIPA buffer：Tris-塩酸緩衝液（PH８．０） ５０mM、塩化ナトリウム １５０mM、EDTA（PH８．０）1mM、Triton X-１００ １％、SDS  ０．１％、デオキシコール酸ナトリウム０．１％
３．ウエスタン・ブロッティング
１２％のアクリルアミドのゲルを作成し、上記で抽出した細胞タンパク質３０μgをゲルLaneに添加して電気泳動を行った。PVDF膜に転写後、一次抗体Hsp７０（Mouse  monoclonal：Stress  gene社）、二次抗体としてECLTM  Anti-Mouse  IgG、Horseradish
Peroxidase linked whole antibody（from sheep）NA931（Amersham Bioscience UK Limited）を用いてウェスタン・ブロッティングを行い、分子量７０KDaのヒートショックプロテイン７０を確認した。
４．ヒートショックプロテイン７０タンパク量の確認
ウエスタン・ブロッティングで得られたバンド強度を[図１]に示した。試薬の硫酸亜鉛・７水和物、および実施例１で得られた[実施例１]で得られた酵母菌体抽出液を添加した細胞において、培地に添加した硫酸亜鉛濃度が１００μMでは産生誘導が確認できなかったが、培地に添加した硫酸亜鉛濃度が２００μMにおいてはいずれも強いヒートショックプロテイン７０の産生誘導が確認できた。
【００６７】
[実施例８]
紫外線傷害抑制効果の確認
１．細胞の培養
正常ヒト線維芽細胞であるNB1-RGBを、１０％FBS含有D-MEM 培地にて２４ well plate で培養する。
２．試料の調製
５０％程度コンフルーエントになった細胞に[実施例１]にて調製した酵母菌体抽出物をそれぞれの濃度になるように添加した。添加後、３７℃にて４時間インキュベートした後、培地を捨て、紫外線UV-Bを２０ｍJ/ｃｍ２照射した。照射後、無血清D-MEMを添加し、３７℃にて２４時間培養し、細胞数をCELL  Counting  Kit（同仁化学研究所）
による415nmにおける吸光度値で測定した。
３．紫外線傷害抑制効果
[表５]に示したように、酵母抽出液中の硫酸亜鉛濃度が、０μM、１００μM、１５０μM、２００μMと高まるにつれ、細胞数が０．７０６、０．７６９、０．７７５、０．８２８と増加し、紫外線照射を行う前に、あらかじめ酵母抽出液を細胞に添加することにより、紫外線傷害を抑制できることが明らかになった。また、硫酸亜鉛濃度０μM、と ２００μMの細胞数を統計処理すると、５％の危険率で有意差があることがわかった。
【００６８】
【表５】
2014108945.tif 000006
【００６９】
上記、効果確認試験では、実施例１で作製した酵母菌体抽出液を用いた結果のみを示したが、実施例１〜５で作製した酵母菌体抽出液を用いた場合でも同様の効果が確認された。
【００７０】
次に、本発明の酵母菌体培養物を配合した化粧品製剤および／または医薬製剤の処方例を示すが、本発明はこれに限定されるものでない。
【００７１】
化粧品製剤の処方例
下記に示した酵母菌体抽出物の配合料は、抽出液としての量である。カッコ内に蒸発残分としての量を併記した。
（処方例１）化粧用クリーム（質量％）
ａ）ミツロウ・・・２．０
ｂ）ステアリルアルコール・・・５．０
ｃ）ステアリン酸・・・８．０
ｄ）スクワラン・・・１０．０
ｅ）自己乳化型グリセリルモノステアレート・・・３．０
ｆ）ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．０
ｇ）[実施例１]で調製した酵母菌体抽出物・・・１０．０（０．２）
ｈ）１，３−ブチレングリコール・・・５．０
ｉ）水酸化カリウム・・・０．３
ｊ）防腐剤・酸化防止剤・・・適量
ｋ）精製水・・・残部
製法
ａ）〜ｆ）までを加熱溶解し、８０℃に保つ。ｈ）〜ｋ）までを加熱溶解し、８０℃に保ち、ａ）〜ｆ）に加えて乳化し、４０℃まで撹拌しながら冷却する。その後、ｇ）を加え、攪拌し均一に溶解する。
【００７２】
（処方例２）乳液（質量％）
ａ）ミツロウ・・・０．５
ｂ）ワセリン・・・２．０
ｃ）スクワラン・・・８．０
ｄ）ソルビタンセスキオレエート・・・０．８
ｅ）ポリオキシエチレンオレイルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．２
ｆ）[実施例１]で調製した酵母菌体抽出物・・・０．１（０．００２）
ｇ）１，３−ブチレングリコール・・・７．０
ｈ）カルボキシビニルポリマー・・・０．２
ｉ）水酸化カリウム・・・０．１
ｊ）精製水・・・残部
ｋ）防腐剤・酸化防止剤・・・適量
ｌ）エタノール・・・７．０
製法
ａ）〜ｅ）までを加熱溶解し、８０℃に保つ。ｇ）〜ｋ）までを加熱溶解し、８０℃に保ち、ａ）〜ｅ）に加えて乳化し、５０℃まで撹拌しながら冷却する。５０℃でｆ）、ｌ）を添加し、４０℃まで攪拌、冷却する。
【００７３】
（処方例３）化粧水（質量％）
ａ）[実施例２]で調製した酵母菌体抽出物・・・５．０（０．１２５）
ｂ）グリセリン・・・５．０
ｃ）ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．０
ｄ）エタノール・・・６．０
ｅ）香料・・・適量
ｆ）防腐剤・酸化防止剤・・・適量
ｇ）精製水・・・残部
製法
ａ）〜ｇ）までを混合し、均一に溶解する。
【００７４】
（処方例４）洗顔料（質量％）
ａ）ステアリン酸・・・１２．０
ｂ）ミリスチン酸・・・１４．０
ｃ）ラウリン酸・・・５．０
ｄ）ホホバ油・・・３．０
ｅ）グリセリン・・・１０．０
ｆ）ソルビトール・・・１５．０
ｇ）１，３−ブチレングリコール・・・１０．０
ｈ）ＰＯＥ（２０）グリセロールモノステアリン酸・・・２．０
ｉ）水酸化カリウム・・・５．０
ｊ）水・・・残部
ｋ）キレート剤・・・適量
ｌ）香料・・・適量
ｍ）[実施例１]で調製した酵母菌体抽出物・・・１．０（０．０２）
製法
ａ）〜ｈ）までを加熱溶解し７０℃に保つ。ｊ）にｉ）を溶解後ａ）〜ｈ）に加えケン化する。その後ｋ）、ｌ）を入れ攪拌しながら冷却する。５０℃でｍ）を添加し、４０℃まで攪拌、冷却する。
【００７５】
（処方例５）化粧水（質量％）
ａ）[実施例３]で調製した酵母菌体抽出物・・・５．０（０．１７５）
ｂ）グリセリン・・・５．０
ｃ）ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．０
ｄ）エタノール・・・６．０
ｅ）香料・・・適量
ｆ）防腐剤・酸化防止剤・・・適量
ｇ）精製水・・・残部
製法
ａ）〜ｇ）までを混合し、均一に溶解する。
【００７６】
次に、得られた酵母菌体を凍結乾燥し、そのまま錠剤として利用した処方例を示す。
（処方例５）錠剤（質量％）
１．３０mＭ硫酸亜鉛を含有するYNB-SG培地で培養して得られた乾燥酵母菌体・・・３０．０
２．乳糖・・・３０．０
３．トウモロコシデンプン・・・３２．０
４．ヒドロキシプロピルセルロース・・・６．０
５．ステアリン酸マグネシウム・・・２．０
【産業上の利用可能性】
【００７７】
以上詳述したごとく、本発明によれば、細胞毒性の低減されたヒートショックプロテイン７０産生誘導剤を得ることが可能となる。本産生誘導剤を配合した医薬品では、胃粘膜上皮細胞や、皮膚上皮細胞に対する毒性が低いヒートショックプロテイン産生誘導剤となり、胃潰瘍・胃粘膜の修復、予防に有効な組成物として利用できる。
さらに、化粧品組成物としては紫外線などによるストレスによる表皮細胞障害を防御し、その結果、皮膚を炎症から守ることが可能となる。
【図１】
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