(57)【要約】【課題】優れたＧＬＰ−１分泌促進作用を有し、且つ安全性が高い医薬品、医薬部外品、食品、飼料及びそれらに配合可能な素材を提供する。【解決手段】サンキライ又はその抽出物を有効成分とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンキライ、又はその抽出物を有効成分とするＧＬＰ−１分泌促進剤。
【請求項２】
サンキライ、又はその抽出物を有効成分とする血圧降下剤。
【請求項３】
サンキライ、又はその抽出物を有効成分とする血管保護強化剤。
【請求項４】
サンキライ、又はその抽出物を有効成分として摂取する、非治療的ＧＬＰ−１分泌促進方法、非治療的血圧降下方法、又は非治療的血管保護強化方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＧＬＰ−１（Glucagon-like peptide-1）分泌促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、高血圧症等の生活習慣病が大きな問題となっている。生活習慣病においては、遺伝因子の他、食生活等の生活習慣が発症に寄与すると考えられている。生活習慣病を予防、改善するには生活習慣の改善が有効と考えられているが、生理系統を調節して生活習慣病の発症や予防に有用な素材、特に日常的に接種できる飲食品として利用可能な素材への期待が高まっている。
【０００３】
ＧＬＰ−１は、内分泌ホルモンであるグルカゴンと共通の遺伝子及び前駆体から産生されるホルモンである。グルカゴンが膵島のα細胞で産生されるのに対し、ＧＬＰ−１は消化管粘膜上皮の内分泌細胞（Ｌ細胞）で産生され、その前駆体からグルカゴンとは異なったプロセシングを経て産生される。
【０００４】
ＧＬＰ−１は、心筋細胞、心内膜、冠動脈の血管内皮細胞や平滑筋に存在するＧＬＰ−１の受容体を介したシグナル伝達により、心筋細胞内のｃＡＭＰを高め心筋収縮力を増強させたり、ＮＯ産生を促して、ＧＬＵＴ１を介した糖取込みを増加させて心機能改善作用を示すことが報告されている。ＧＬＰ−１は、血管内皮細胞上に存在するＧＬＰ−１Ｒを介したシグナル伝達により血管内皮細胞からのＮＯ産生を増加させることにより血管弛緩反応を改善させることが報告されている。（非特許文献１）
また、Ｄａｈｌ食塩感受性ラットにＧＬＰ−１、エキセナチド（ＧＬＰ−１受容体作動薬）アナログを投与（４週間、皮下投与）することにより、収縮期血圧が有意に低下することが報告されている（非特許文献２）。
従って、ＧＬＰ−１の効果を高めることは、高血圧等の生活習慣病の改善に有用である。
【０００５】
しかしながら、ＧＬＰ−１の活性本体はポリペプチドであり、ＧＬＰ−１を経口摂取すると、消化管内で消化酵素により消化・分解され易く、生体内での半減期は非常に短い。そのため、体外からＧＬＰ−１を投与しても、その血中濃度を一定に保つのは非常に困難である。従って、生体内でのＧＬＰ−１濃度を長時間にわたって高めるためには、体外からのＧＬＰ−１の投与よりも内因性ＧＬＰ−１の分泌を促進することが望ましい。
【０００６】
ここで培養系での研究から、ＧＬＰ−１の分泌を促進する物質として、パルミチン酸、オレイン酸、肉加水分解物（ＭＨ）、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）、カルバコール、フォルスコリン、イオノマイシン、酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ）、必須アミノ酸（ＥＡＡ）、ロイシン、イソロイシン、スキムミルク、カゼイン、レプチン、ムスカリン性受容体Ｍ１、Ｍ２、キラヤ又はその抽出物、リゾホスファチジルイノシトール又はその塩が、これまでに報告されている（非特許文献３〜７、特許文献１〜２）。
【０００７】
一方、サンキライはサルトリイバラ科の植物であり、当該植物は、吹出物、肌あれ、はれもの、できもの、にきびなどや、むくみのときの利尿などの治療効果や、解毒作用、α―アミラーゼ活性阻害作用を有することが知られている（非特許文献８）。
しかしながら、サンキライと、ＧＬＰ−１分泌促進との関係については知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０１２−１３１７４２号公報
【特許文献２】国際公開第２０１２／０８６４０６号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】医学のあゆみ, 2012, 241(7):507-516
【非特許文献２】Cardiovascular Diabetology 2010, 9:32
【非特許文献３】Endocrinology, 2001, 142(10):4522-4528
【非特許文献４】Journal of Endocrinology, 2006, 191,159-170
【非特許文献５】Nutrition, 2009, 25(3):340-349
【非特許文献６】Endocrinology, 2003, 144(7):3244-3250
【非特許文献７】Diabetes, 2006, 52(2):252-259
【非特許文献８】Chinese Journal of Natural Medicines 8 (5), pp. 349-352 2010
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、優れたＧＬＰ−１分泌促進作用を有し、且つ安全性が高い医薬品、医薬部外品、食品、飼料及びそれらに配合可能な素材を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、ＧＬＰ−１分泌促進において有効な成分の探索を行った結果、サンキライにＧＬＰ−１分泌促進作用を有し、これが血圧降下、血管保護強化等の効果を発揮し得る医薬品、医薬部外品、食品及び飼料等として有用であることを見出した。
【００１２】
すなわち、本発明は、下記（１）〜（４）に係るものである。
（１）サンキライ、又はその抽出物を有効成分とするＧＬＰ−１分泌促進剤。
（２）サンキライ、又はその抽出物を有効成分とする血圧降下剤。
（３）サンキライ、又はその抽出物を有効成分とする血管保護強化剤。
（４）サンキライ、又はその抽出物を有効成分として摂取する、非治療的ＧＬＰ−１分泌促進方法、非治療的血圧降下方法、又は非治療的血管保護強化方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明は、優れたＧＬＰ−１分泌促進作用を有し、かつ長期間摂取しても安全性も高いことから、血圧降下、血管保護強化効果を発揮し得る医薬品、医薬部外品、化粧料及び食品、或いはこれらへ配合するための素材又は製剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】サンキライの抽出物による、ＮＣＩ−Ｈ７１６のＧＬＰ−１分泌を測定した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本明細書において、「ＧＬＰ−１分泌促進」とは、食事、特に糖質又は脂質を多く含む食事を摂取することで引き起こされる生体内でのＧＬＰ−１分泌を促進することをいう。あるいは、主として食後に生じる生体内でのＧＬＰ−１分泌に伴う血中ＧＬＰ−１濃度上昇を強化するか、上昇したＧＬＰ−１濃度を維持するか、又は上昇したＧＬＰ−１濃度の低下を抑制することをいう。
【００１６】
本明細書において、「血管保護強化」とは、糖・脂質代謝、血圧や体重などの動脈硬化促進因子を改善させる作用と、血管構成細胞である血管内皮細胞、マクロファージや血管平滑筋細胞への作用による抗動脈硬化的効果をいう。後者には、血管内皮細胞における一酸化窒素の産生増加、PAI-1やVCAM-1の発現抑制などがある。
【００１７】
本明細書において、「非治療的」とは、医療行為を含まない、すなわちヒトを手術、治療又は診断する方法を含まない概念である。
【００１８】
本明細書において、サンキライはサルトリイバラ科シオデ属のSmilax Chinaをいう。
【００１９】
斯かるサンキライは、いずれの任意の部位、例えば全草、葉、茎、芽、花、蕾、根、根茎、仮球茎、球茎、塊茎、種子等、又はそれらの組み合わせを使用することができるが、サンキライは根茎を用いるのが好ましい。
上記部位は、そのまま抽出工程に付されてもよく、又は粉砕、切断若しくは乾燥された後に抽出工程に付されて抽出物を得てもよい。該抽出物は天然成分由来であり安全性も高い。
【００２０】
上記抽出物としては、市販されているものを利用してもよく、又は常法により得られる各種溶剤抽出物、又はその希釈液、その濃縮液、その乾燥末、ペースト若しくはその活性炭処理したものであってもよい。一例として、抽出物は、上記サンキライを室温（例えば、４〜５０℃）若しくは加温（室温〜溶媒沸点）下にて抽出するか、又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得ることができる。
【００２１】
上記抽出物を得る抽出手段は、具体的には、固液抽出、液液抽出、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌等の手段を用いることができる。抽出時間を短縮する場合には、攪拌を伴う固液抽出が望ましい。この固液抽出の好適な条件の一例としては、１０〜１００℃下、１００〜４００ｒｐｍ／ｍｉｎで１〜３０分間の攪拌が挙げられる。浸漬の好適な一例として、１０〜５０℃で、１時間〜１４日間の浸漬が挙げられる。また、抽出時間を短縮する場合には、攪拌を伴う固液抽出が望ましい。
上記抽出物の酸化を防止するため、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する手段を併用してもよい。
【００２２】
抽出のための溶剤には、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができる。溶剤の具体例としては、例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；スクワラン、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；トルエン等の芳香族炭化水素類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；及び超臨界二酸化炭素；ピリジン類；油脂、ワックス等その他オイル類等の有機溶剤；ならびにこれらの混合物が挙げられる。好適には、水、アルコール類、アルコール−水混合液、炭化水素類が挙げられ、アルコール−水混合液、炭化水素類がより好ましい。アルコール類としては炭素数１〜５のアルコール類が好ましく、エタノールがより好ましい。炭化水素類としてはヘキサンが好ましい。
【００２３】
抽出のための溶剤としてアルコール−水混合液を使用する場合には、アルコール類と水との配合割合（容量比）としては、０．００１〜１００：９９．９９９〜０が好ましく、５〜９５：９５〜５がより好ましく、２０〜８０：８０〜２０が更に好ましい。エタノール水溶液の場合、エタノール濃度が、好ましくは４０容量％以上、より好ましくは４５容量％以上である。また好ましくは４０〜１００容量％、より好ましくは７０〜９５容量％である。
【００２４】
溶剤の使用量としては、それぞれの植物（乾燥質量換算）１ｇに対して好ましくは１ｍＬ以上、より好ましくは５ｍＬ以上、好ましくは１００ｍＬ以下、より好ましくは５０ｍＬ以下である。また、好ましくは１〜１００ｍＬ、より好ましくは８〜５０ｍＬである。抽出時間としては、好ましくは１分間以上、より好ましくは１０分間以上、好ましくは３０日間以下、より好ましく１０日間以下である。また好ましくは１分間〜３０日間、より好ましくは１０分間〜１０日間である。このときの抽出温度は、好ましくは０℃以上、より好ましくは１０℃以上、更に好ましくは２０℃以上、好ましくは溶媒沸点以下、より好ましくは１００℃以下、更に好ましくは９０℃以下である。また、好ましくは０℃〜溶媒沸点、より好ましくは１０〜１００℃、更に好ましくは２０〜９０℃である。
【００２５】
斯くして得られる抽出物は、抽出液や画分をそのまま用いてもよく、適宜な溶媒で希釈した希釈液として用いてもよく、或いは濃縮エキスや乾燥粉末としたり、ペースト状に調製したものでもよい。また、凍結乾燥し、用時に、通常抽出に用いられる溶剤、例えば水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、水・エタノール混液、水・プロピレングリコール混液、水・ブチレングリコール混液等の溶剤で希釈して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００２６】
上記抽出物は、食品上・医薬品上許容し得る規格に適合し本発明の効果を発揮するものであれば粗精製物であってもよく、更に得られた粗精製物を既知の分離精製方法を適宜組み合わせてこれらの純度を高めてもよい。精製手段としては、有機溶剤沈殿、遠心分離、限界濾過膜、高速液体クロマトグラフやカラムクロマトグラフ等が挙げられる。
【００２７】
本発明の有効成分としてのサンキライには、下記の化学式で示すステロイドサポニンを含有する。
【００２８】
【化１】
2014091700.tif 000002
【００２９】
上記抽出物は、上記サポニンを多く含むものが好ましい。上記サポニンは、一般的には低級アルコールにて抽出した抽出液から、非サポニン性成分を含まない粗サポニンを分画し、粗サポニンを精製することで得ることができる。例えば「天然有機化合物実験法  生理活性物質の抽出と分離，１９７８，講談社，名取信策他，２３章トリテルペノイドサポニンの分離」に記載の方法等を用いることができる。
【００３０】
抽出には、エタノール若しくはメタノール、又はこれら低級アルコールと水の混液を用いることができる。種子や果実など特に油脂の含量が高い部位の場合には、適当な溶剤で脱脂や圧搾法により、油分を除去して用いることができる。葉類の場合にはクロロフィルが存在するので、シクロヘキサン又は四塩化炭素などで抽出して、クロロフィルを除去して用いることができる。また、サポニン類が熱に安定な場合には、直接水で加熱して抽出することができる。
【００３１】
得られた抽出物は、減圧下濃縮し溶媒を留去後、水に懸濁し、水飽和ブタノールで抽出を行うことで、大部分のサポニンをブタノール相に移行させることができる。
【００３２】
粗サポニン分画から非サポニン成分を除く方法としては、アルコール溶液中にコレステロール複合体を形成させる分画法、少量のメタノールに溶解し多量のエーテル又はアセトンに注入して沈殿させる方法（無極性物質の除去）、少量のアルミナで濾過する方法（フェノール性物質、色素類の除去）などがある。その後再結晶あるいは再沈殿により、単離精製を行うことで、所望のサポニンを得ることができる。更に、カラムクロマトグラフィー、調製用ＴＬＣ、液滴向流クロマトグラフィーで単離精製することができる。
【００３３】
後記実施例に示すように、サンキライ又はその抽出物、好ましくはそれらに含まれるサポニンは、消化管細胞からのＧＬＰ−１分泌を促進する作用を有する。従って、上記サンキライ又はその抽出物は、ＧＬＰ−１分泌促進に有用であり、これらには、血圧降下、血管保護強化効果が期待できる（上記非特許文献１、２）。
【００３４】
従って、上記サンキライ又はその抽出物は、ＧＬＰ−１分泌促進剤、血圧降下剤、血管保護強化剤（以下、「ＧＬＰ−１分泌促進剤等」とする）として、使用することができ、更にこれらの剤を製造するために使用することができる。
【００３５】
当該ＧＬＰ−１分泌促進剤等は、それ自体、ヒトを含む動物に摂取又は投与した場合にＧＬＰ−１分泌促進、血圧降下、血管保護強化の各効果を発揮する、ヒト若しくは動物用の医薬品、医薬部外品、食品、又は飼料であってもよく、或いは当該医薬品、医薬部外品、食品又は飼料に配合して使用される素材又は製剤であってもよい。
【００３６】
また、当該食品には、運動不足者や中高年者等におけるＧＬＰ−１分泌促進、血圧降下、血管保護強化をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した食品、機能性食品、病者用食品、特定保健用食品が包含される。これらの食品は機能表示が許可された食品であり、一般の食品と区別できるものである。
【００３７】
上記サンキライ又はその抽出物を含有する上記医薬品（医薬部外品も含む）の剤型は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、静脈内注射剤、筋肉注射剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤、湿布剤、バップ剤、軟膏、ローション、クリーム、口腔用製剤（歯磨剤、液状歯磨剤、洗口液、歯肉マッサージクリーム、口腔用軟膏、うがい用錠剤、トローチ、のど飴等）等のいずれかでもよい。投与形態も経口投与（内用）、非経口投与（外用、注射）のいずれであってもよい。
【００３８】
また、このような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、上記サンキライ又はその抽出物を其々単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤、本発明以外の薬効成分等を適宜組み合わせて調製することができる。また、これらの投与形態のうち、好ましい形態は経口投与であり、経口用液体製剤は、嬌味剤、緩衝剤、安定化剤等を加えて常法により調製することができる。
【００３９】
経口投与用製剤中の、上記植物又はその抽出物の含有量は、一般的に固形分濃度として好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、好ましくは２０質量％以下、より好ましくは１０質量％以下である。また、好ましくは０．０１〜１０質量％、より好ましくは０．０５〜５質量％である。
【００４０】
上記サンキライ又はその抽出物を含有する上記食品の形態としては、清涼飲料水、茶系飲料、コーヒー飲料、果汁飲料、炭酸飲料、ジュース、ゼリー、ウエハース、ビスケット、パン、麺、ソーセージ等の飲食品や栄養食等の各種食品の他、更には、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）の栄養補給用組成物が挙げられる。
【００４１】
種々の形態の食品は、上記サンキライ又はその抽出物を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤、本発明以外の有効成分等を適宜組み合わせて調製することができる。
【００４２】
当該食品飼料中の、上記植物又はその抽出物の含有量は、一般的に固形分濃度として好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、好ましくは１０質量％以下、より好ましくは５質量％以下である。また、好ましくは０．０１〜１０質量％、より好ましくは０．０５〜５質量％である。
【００４３】
また、飼料としては、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、犬、猫等に用いるペットフード等の飼料等が挙げられ、上記食品と同様の形態に調製できる。
【００４４】
本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤等の摂取量は、対象の種、体重、性別、年齢、状態又はその他の要因に従って変動し得る。投与の用量、経路、間隔、及び摂取の量や間隔は、当業者によって適宜決定され得るが、成人に対して１日あたり、上記植物又はその抽出物（乾燥物換算）として、一般的に好ましくは２０μｇ／６０ｋｇ体重以上、より好ましくは２００μｇ／６０ｋｇ体重以上、更に好ましくは２ｍｇ／６０ｋｇ体重以上、好ましくは１０００ｍｇ／６０ｋｇ体重以下、より好ましくは５００ｍｇ／６０ｋｇ体重以下、更に好ましくは２００ｍｇ／６０ｋｇ体重以下である。また、好ましくは２０μｇ〜２０００ｍｇ／６０ｋｇ体重、より好ましくは２００μｇ〜１０００ｍｇ／６０ｋｇ体重、更に好ましくは２〜５０００ｍｇ／６０ｋｇ体重である。
【００４５】
投与又は摂取対象者としては、それを必要としている人であれば特に限定されないが、運動不足者や中高年者が好ましい。また、本発明のＧＬＰ−１分泌促進剤等の対象者は、疾患若しくは症状の改善において血圧降下、又は血管保護強化が必要とされる人が好ましいが、健常者であっても血圧降下、又は血管保護強化を望む人に適用することができる。
【００４６】
上述した実施形態に関し、本発明においては以下の態様が開示される。
＜１＞サンキライ、又はその抽出物を有効成分とするＧＬＰ−１分泌促進剤。
＜２＞サンキライ、又はその抽出物を有効成分とする血圧降下剤。
＜３＞サンキライ、又はその抽出物を有効成分とする血管保護強化剤。
＜４＞ＧＬＰ−１分泌促進剤を製造するための、サンキライ、又はその抽出物の使用。
＜５＞血圧降下剤を製造するための、サンキライ、又はその抽出物の使用。
＜６＞血管保護強化剤を製造するための、サンキライ、又はその抽出物の使用。
＜７＞ＧＬＰ−１分泌促進に使用するための、サンキライ、又はその抽出物。
＜８＞血圧降下に使用するための、サンキライ、又はその抽出物。
＜９＞血管保護強化に使用するための、サンキライ、又はその抽出物。
＜１０＞サンキライ、又はその抽出物を、ヒト若しくは動物に投与又は摂取するＧＬＰ−１分泌促進方法。
＜１１＞サンキライ、又はその抽出物を、ヒト若しくは動物に投与又は摂取する血圧降下方法。
＜１２＞サンキライ、又はその抽出物を、ヒト若しくは動物に投与又は摂取する血管保護強化方法。
＜１３＞非治療的方法である、＜１０＞〜＜１２＞に記載の方法。
＜１４＞ＧＬＰ−１分泌促進のための、サンキライ、又はその抽出物の非治療的使用。
＜１５＞血圧降下のための、サンキライ、又はその抽出物の非治療的使用。
＜１６＞血管保護強化のための、サンキライ、又はその抽出物の非治療的使用。
＜１７＞ＧＬＰ−１分泌促進のための、機能性食品におけるサンキライ、又はその抽出物の使用。
＜１８＞血圧降下のための、機能性食品におけるサンキライ、又はその抽出物の使用。
＜１９＞血管保護強化のための、機能性食品におけるサンキライ、又はその抽出物の使用。
【実施例】
【００４７】
製造例：サンキライ抽出物の調製
サンキライ（サルトリイバラ科シオデ属  和名：山帰来  Ｓｍｉｌａｘ  ｃｈｉｎａ、新和物産株式会社より購入）根の細断物１００ｇに、８０ｖｏｌ％エタノール１Ｌを加え、２５℃にて１０日間抽出を行った後ろ過した。減圧下、溶媒を留去し、２５℃で乾燥させて抽出固形物を得た。得られた抽出固形物に水５００ｍＬ及び水飽和ｎ−ブタノール５００ｍＬを加え、分液ロートで振り混ぜた後静置し、分層させた。このうち上層（ｎ−ブタノール層）を採取し、減圧下、溶媒を留去してサポニンを含む抽出物を得た。得られた抽出物に対し、固形分量１ｇあたり１００ｍＬのアセトンを加え、２５℃にて３０分間撹拌してろ過した。ろ紙に残った固形物を乾燥させサンキライ抽出物１．３ｇを得た。
【００４８】
上記製造例で得られた抽出物を、５０％エタノール水により抽出物濃度１％（ｗ／ｖ）となるように希釈し、試験サンプルとした。コントロールとしては、５０％エタノール水を用いた。
ＮＣＩ−Ｈ７１６細胞（ヒト結腸由来細胞；ＡＴＣＣ社）は３７℃、５％  ＣＯ2存在下で培養した。培養液は、ＲＰＭＩ１６４０（１０％ウシ胎児血清含有、高グルコース；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いた。上記細胞を、マトリゲル（１００μＬ／ｗｅｌｌ；ＢＤ社）をコーティングした２４ウエルプレートに５×１０5ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌ（コントロールはＮ＝１２、サンプルはＮ＝８）となるように播種し、ＤＭＥＭ（１０％ウシ胎児血清含有、高グルコース；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）培地で培養した。３日後に培地を、上記製造例で得られた抽出物を０．００１％の濃度で含むＫＲＢ・０．２％ＢＳＡに交換し、２時間培養した後、培地を回収した。培地はｄｉｐｒｏｔｉｎ−Ａ（ＤＰＰ４阻害剤、Ｓｉｇｍａ社）及びアプロチニン（セリンプロテアーゼ阻害剤、和光純薬工業社）を加えた微量遠心管に回収し、浮遊した細胞を除去した後、ＧＬＰ−１定量まで−８０℃で保存した。培地中ＧＬＰ−１はＧＬＵＣＡＧＯＮ−ＬＩＫＥ  ＰＥＰＴＩＤＥ−１（ＡＣＴＩＶＥ）  ＥＬＩＳＡ  ＫＩＴを用いたＥＬＩＳＡ（ＬＩＮＣＯ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）により定量した。その結果を表１及び図１に示す。
【００４９】
【表１】
2014091700.tif 000003
【００５０】
表１及び図１より、サンキライ由来抽出物は０．００１％の濃度で有意にＧＬＰ−１分泌を促進した（＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【図１】
2014091700.tif 000004