(57)【要約】【課題】微生物のコロニーを観察する際の十分な視認性を実現することができる培養層を備えた微生物培養具を提供する。【解決手段】微生物培養具１は、基材シート１０と、基材シート１０の上面に設けられ、微生物を培養するよう構成された培養層３０と、培養層３０を覆うことができるカバーフィルム４０と、を備えている。培養層３０は、少なくともゲル化剤および栄養成分を有し、ゲル化剤は、少なくともグアーガムおよびサイリウムシードガムを含んでいる。また、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部は、ゲル化剤におけるサイリウムシードガムの重量部以上となっている。【選択図】図１
2014090701.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
基材シートと、
前記基材シートの上面に設けられ、微生物を培養するよう構成された培養層と、
前記培養層を覆うことができるカバーフィルムと、を備え、
前記培養層は、少なくともゲル化剤および栄養成分を有し、
前記ゲル化剤は、少なくともグアーガムおよびサイリウムシードガムを含み、
前記ゲル化剤における前記グアーガムの重量部は、前記ゲル化剤における前記サイリウムシードガムの重量部以上となっている、微生物培養具。
【請求項２】
前記ゲル化剤における前記グアーガムの重量部と前記サイリウムシードガムの重量部との比が、７：３〜５：５の範囲内である、請求項１に記載の微生物培養具。
【請求項３】
前記培養層は、可塑剤をさらに含み、
前記培養層の固形分の全体に対する前記可塑剤の重量％が、１０〜１５％の範囲内である、請求項１または２に記載の微生物培養具。
【請求項４】
前記可塑剤は、グリセリンである、請求項３に記載の微生物培養具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微生物を培養するための微生物培養具に関する。また本発明は、微生物培養具を用いて微生物を検査する微生物検査方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
微生物の存在を確認し、又は微生物数を測定する方法としては、寒天平板混釈法がある。この寒天平板混釈法では、あらかじめ滅菌したシャーレに形成した寒天培地を使用する。このため、寒天培地を高圧蒸気滅菌するためのオートクレーブや、微生物検査を無菌的に行うための検査室を必要とする。また、微生物のサンプリングから試料液の調製、分注、培地との混釈、培養、計数に至る微生物検査の操作に、熟練を要する。そこで、高度な熟練を必要とせず、簡易に微生物検査を行うことができる培養層を備える微生物培養具が開発されている。
【０００３】
例えば特許文献１において、基材と、基材に装着された台座と、基材に取り付けられたカバーシートと、台座またはカバーシートのいずれかに設けられた培養層と、を備える微生物培養具が開示されている。特許文献１においては、培養層としてグアーガムを用いる例が示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特表２００４−５１５２３６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
培養層において培養されている微生物は一般に、増殖することやガスを生成することによって、周囲の培養層に広がったり影響を与えたりする。一方、そのような広がりの程度が大きくなりすぎると、各微生物の領域が互いに重なってしまうことなどによって、微生物のコロニーの視認性が低下してしまうことが考えられる。従って、培養層は、培養性能だけでなく、微生物のコロニーを観察する際の視認性を考慮して構成されることが好ましい。
【０００６】
本発明は、このような課題を効果的に解決し得る微生物培養具および微生物培養具を用いた微生物検査方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、基材シートと、前記基材シートの上面に設けられ、微生物を培養するよう構成された培養層と、前記培養層を覆うことができるカバーフィルムと、を備え、前記培養層は、少なくともゲル化剤および栄養成分を有し、前記ゲル化剤は、少なくともグアーガムおよびサイリウムシードガムを含み、前記ゲル化剤における前記グアーガムの重量部は、前記ゲル化剤における前記サイリウムシードガムの重量部以上となっている、微生物培養具である。
【０００８】
本発明による微生物培養具において、前記ゲル化剤における前記グアーガムの重量部と前記サイリウムシードガムの重量部との比が、７：３〜５：５の範囲内であってもよい。
【０００９】
本発明による微生物培養具において、前記培養層は、可塑剤をさらに含み、前記培養層の固形分の全体に対する前記可塑剤の重量％が、１０〜１５％の範囲内であってもよい。
【００１０】
本発明による微生物培養具において、前記可塑剤は、グリセリンであってもよい。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の微生物培養具によれば、培養層のゲル化剤は、少なくともグアーガムおよびサイリウムシードガムを含んでいる。また、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部は、ゲル化剤におけるサイリウムシードガムの重量部以上となっている。このため、培養性能とともに微生物を観察する際の視認性を備えた培養層を構成することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、本発明の実施の形態における微生物培養具を示す平面図。
【図２】図２は、図１の微生物培養具を矢印Ａの方向から見た場合を示す側面図。
【図３】図３は、カバーフィルムが持ち上げられた状態の微生物培養具を示す斜視図。
【図４】図４は、図１の微生物培養具をＢ−Ｂ方向から見た場合を示す縦断面図。
【図５】図５（ａ）〜（ｆ）は、微生物培養具を製造する方法の一例を示す図。
【図６】図６（ａ）〜（ｅ）は、微生物培養具を用いた微生物検査方法の一例を示す図。
【図７】図７は、作業台上に並べられた微生物培養具を示す平面図。
【図８】図８は、本発明の実施の形態における微生物培養具の一変形例を示す平面図。
【図９】図９は、図８の微生物培養具を矢印Ｃの方向から見た場合を示す側面図。
【図１０】図１０は、本発明の実施の形態における微生物培養具のカバーフィルムの一変形例を示す側面図。
【図１１】図１１は、本発明の実施の形態における微生物培養具の一変形例を示す縦断面図。
【図１２】図１２は、本発明の実施の形態における微生物培養具の一変形例を示す平面図。
【図１３】図１３は、実施例において、菌の周囲に気泡が形成される様子を示す図。
【図１４】図１４は、実施例において、菌の周囲に滲みが視認される様子を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、図１乃至図６を参照して、本発明の実施の形態による微生物培養具について説明する。なお、本件明細書に添付する図面においては、図示と理解のしやすさの便宜上、適宜縮尺および縦横の寸法比等を、実物のそれらから変更し誇張してある。
【００１４】
はじめに、微生物について説明する。微生物は好気性生物と嫌気性生物に分けられる。
好気性生物は、酸素に基づく代謝機構を備えた生物である。好気生生物には、酸素がないと増殖できない偏性好気性生物や、酸素が存在する場合には好気的呼吸によってATPを生成するが酸素がない場合でも発酵によってエネルギーを得られるように代謝を切り替えることのできる通性好気性生物が含まれる。偏性好気性生物の例としては、カビやNocardia属、Pseudomonas属などが含まれる。通性好気性生物の例としては、Staphylococcus属、Escherichia属 、Citrobacter属、Klebsiella属、Enterobacter属、Proteus属や酵母などが含まれる。
嫌気性生物は、酸素のない状況でのみ生育できる生物であり、偏性嫌気性生物と呼ばれる。偏性嫌気性生物の例としては、Clostridium属、Bifidobacterium属などが挙げられる。
以下に説明する、本実施の形態による微生物培養具は、好気性細菌（好気性生物）の検査に好適に使用することができるものである。また、本実施の形態による微生物培養具は、嫌気性細菌（嫌気性生物）の検査に使用することもできるものである。
【００１５】
微生物培養具
次に図１乃至図３により、本実施の形態における微生物培養具１の構造について説明する。図１は、微生物培養具１を示す平面図であり、図２は、図１の微生物培養具１を矢印Ａの方向から見た場合を示す側面図である。図３は、微生物培養具１を示す斜視図である。なお図１においては、後述するカバーフィルム４０よりも下側にある枠体２０、接合部２５および培養層３０などの微生物培養具１の構成要素が、透視されて点線で示されている。
【００１６】
図１に示すように、微生物培養具１は、平面図で見た場合に略四角形状の輪郭を有している。この微生物培養具１は、図１および図２に示すように、基材シート１０と、基材シート１０の上面に設けられた培養層３０と、培養層３０を囲うよう基材シート１０の上面に設けられた枠体２０と、を備えている。また微生物培養具１は、培養層３０および枠体２０を覆うことができるカバーフィルム４０をさらに備えている。
【００１７】
図１に示すように、基材シート１０およびカバーフィルム４０はいずれも、平面図で見た場合に、すなわち基材シート１０の法線方向から見た場合に、略四角形状の輪郭を有している。具体的には、基材シート１０は、基材シート１０の法線方向から見た場合に、直線状の第１外縁１１と、第１外縁１１に対向する直線状の第２外縁１２と、第１外縁１１および第２外縁１２の間を延び、互いに対向する直線状の第３外縁１３および第４外縁１４と、を含む輪郭を有している。同様に、カバーフィルム４０は、各々が直線状の第１外縁４１，第２外縁４２，第３外縁４３および第４外縁４４を含む輪郭を有している。
【００１８】
図２に示すように、微生物培養具１は、カバーフィルム４０の一部分を基材シート１０の一部分に接合する接合部２５をさらに備えていてもよい。これによって、カバーフィルム４０は、接合部２５を軸として基材シート１０に対して変位することが可能となる。このことにより、カバーフィルム４０の操作や取り扱いを容易にすることができる。また、基材シート１０に対するカバーフィルム４０の位置を確実に定めることができる。図３においては、カバーフィルム４０の一部分が接合部２５によって基材シート１０に対して固定されながら、カバーフィルム４０が基材シート１０に対して持ち上げられた状態にある微生物培養具１が示されている。
【００１９】
接合部２５は、例えば、基材シート１０の第１外縁１１の近傍に配置されている。ここで「近傍」とは、接合部２５が第１外縁１１に接するよう接合部２５が配置されている場合、および、接合部２５が第１外縁１１に接してはいないが、接合部２５と第１外縁１１との間の距離が接合部２５と他の外縁１２，１３，１４との間の距離よりも小さくなっている場合の両方を含む概念である。
【００２０】
枠体２０は、培養層３０上に供給される後述する被検液の吸水範囲を確実に限定するためのものである。図３においては、枠体２０と培養層３０との間には隙間がなく、両者が接触している例が示されている。しかしながら、被検液が枠体２０の外側に洩れることを防ぐことができる限りにおいて、枠体２０と培養層３０との間の位置関係が特に限定されることはない。
【００２１】
図３においては、枠体２０が円形状の輪郭を有する例が示されている。しかしながら、培養層３０上に供給される被検液の吸水範囲が所定の面積にわたって広がることができる限りにおいて、枠体２０の輪郭が特に限定されることはない。例えば枠体２０は、方形、楕円形、多角形、不定形等の輪郭を有していてもよい。
【００２２】
図３に示すように、カバーフィルム４０には枡目線４０ａが形成されていてもよい。枡目線４０ａは、培養層３０によって培養された微生物の数を算出する際の目安となるものである。このような枡目線４０ａは、カバーフィルム４０に含まれる、後述する印刷層４７などによってもたらされ得る。なお、このような枡目線は、カバーフィルム４０ではなく基材シート１０に形成されていてもよい。
【００２３】
微生物培養具の層構成
次に図４を参照して、微生物培養具１の層構成について説明する。図４は、図１の微生物培養具１をＢ−Ｂ方向から見た場合を示す縦断面図である。以下、各構成要素について順に説明する。
【００２４】
（基材シート）
基材シート１０には、培養層３０を形成するために基材シート１０上に塗布される後述する培地液３０Ａによって劣化しない程度の耐溶剤性や培養時に必要な耐水性が求められる。また、培養層３０を形成する際の乾燥処理に耐え得る耐熱性も求められる。また、培養層３０において培養される微生物が好気性細菌である場合、基材シート１０には、酸素透過性が求められる。基材シート１０が酸素透過性を有することにより、好気性細菌に酸素を供給することが可能となる。
【００２５】
基材シート１０を構成する材料としては、耐水性及び耐熱性、および必要に応じて酸素透過性を有している限りにおいて、特に限定されるものではないが、例えば、ポリエステル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリ塩化ビニル等のプラスチックシートを使用することができる。これらのプラスチックシートは、透明性に優れる点において好ましい。後述するように、微生物培養具１は、培養層３０中で発育した微生物のコロニーを観察、計数するものである。基材シート１０の透明性が高いと、微生物培養具１の下側（基材シート１０側）からの投射光や側面側からの入射光によりコロニーの視認性を高めることができ、コロニーの計測が容易となる。ただし、必ずしも透明である必要はなく、微生物の種類、コロニーの着色の有無等によって、基材シート１０の光学特性を適宜選択することができる。例えば、発泡により白色を呈するものや、着色されたものを基材シート１０として使用することもできる。
【００２６】
基材シート１０は、単層であってもよいし、２層以上の積層シートであってもよい。積層シートとしては、上記プラスチックシートの２種以上を積層したものが挙げられる。その他、上記プラスチックシートに紙基材を積層した積層シートや、紙基材に合成樹脂をコーティングした積層シート等も好適に使用することができる。このような積層シートとしては、例えば、ポリエチレンフィルムと紙基材との積層シートが挙げられる。また、基材シート１０に上述の酸素透過性が求められる場合、合成樹脂を主原料とした合成紙を好適に使用することができる。このような合成紙の市販品としては、例えば、ユポ・コーポレーション社製の「ユポ」、東洋紡社製の「クリスパー」等が挙げられる。
【００２７】
基材シート１０の上面には、培養層３０との密着性を向上させるために、あらかじめ表面処理が実施されていてもよい。表面処理としては、例えば、コロナ放電処理、オゾン処理、グロー放電処理、化学薬品等を用いる酸化処理、酸素ガス又は窒素ガス等を用いる低温プラズマ処理等の公知の表面処理を用いることができる。
【００２８】
また、アンカーコート剤を基材シート１０の上面に塗布するという表面処理を行ってもよい。このようなアンカーコート剤としては、イソシアネート系（ウレタン系）、ポリエチレンイミン系、ポリブタジエン系、有機チタン系、その他のアンカーコーティング剤が例示できる。より好ましくは、例えば、トリレンジイソシアナート、ジフェニルメタンジイソシアナート、ポリメチレンポリフェニレンポリイソシアナート等の芳香族ポリイソシアナート、又はヘキサメチレンジイソシアナート、キシリレンジイソシアナート等の脂肪族ポリイソシアナート等の多官能イソシアナートと、ポリエーテル系ポリオール、ポリエステル系ポリオール、ポリアクリレートポリオール、その他のヒドロキシル基含有化合物との反応によって得られるポリエーテルポリウレタン系樹脂、ポリエステル系ポリウレタン系樹脂、ポリアクリレートポリウレタン系樹脂を主成分とするものである。
【００２９】
基材シート１０は、カール等がなく平坦であることが好ましい。基材シート１０の厚さは、特に限定されないが、通常、２５〜１５００μｍの範囲内であり、好ましくは５０〜５００μｍの範囲内である。
【００３０】
（培養層）
培養層３０は、少なくともゲル化剤を含む乾式の培養層であって、微生物を培養するよう構成された層である。ここで、乾式の培養層とは、溶媒を含んだ培地液を乾燥させて溶媒を揮発させることにより得られるものである。例えば培養層３０は、固着剤、ゲル化剤、栄養成分および可塑剤を含んでいる。また培養層３０は、発色指示薬や選択剤等などをさらに含んでいてもよい。培養層３０の各成分は、培養の対象となる微生物に応じて適宜選択される。以下、各成分の役割、および各成分を構成する材料の例について説明する。
【００３１】
〔固着剤〕
固着剤は、ゲル化剤、栄養成分、可塑剤、発色指示薬、選択剤等の他の成分を基材シート１０に固着させる役割を有するものである。固着剤としては、例えば、ポリビニルピロリドン、ポリエチレンオキサイド、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール等が挙げられ、特に、ポリビニルピロリドンが好ましい。ポリビニルピロリドンを用いる場合、アルコール系溶媒に可溶であるので、培地液の粘度を容易に調整することができる。また、ポリビニルピロリドンを用いる場合、アルコール系溶媒を使用することができるので、ゲル化剤を溶解させずに、分散させた培地液を調製することができる。これにより、ゲル化剤に起因する培地液の著しい粘度上昇を抑制することができる。更に、所定のパターンで培地液を基材シート１０上に塗布した後に、高温で加熱することなく培地液から溶媒を除去することができる。またポリビニルピロリドンの皮膜性が高いので、ゲル化剤、栄養成分、可塑剤、発色指示薬、選択剤等の他の成分を取り込んで成膜することができる。また、基材シート１０との密着性に優れている。
【００３２】
〔ゲル化剤〕
ゲル化剤は、被検液３５Ａが供給された培養層３０をゲル化させ、これによって、培養層３０の粘度を、微生物の培養に良好なものとするためのものである。また、培養層３０がゲル化剤を含むことにより、培養層３０がカバーフィルム４０に密着しやすくなるため、培養時の培養層３０からの水分の蒸発を抑制することができる。一般にゲル化剤としては、水吸収性（または水膨潤性）を有し、水を吸収しまたは水により膨潤した際に実質的にその形状を保持し得るものを使用することができる。
【００３３】
本発明において、培養層３０のゲル化剤は、検液の滴下によってゲル化し、菌の発育に適した環境を作ることができるという条件を満たすことができる成分を少なくとも含んでいる。本件発明者らが鋭意研究を重ねたところ、グアーガムは、低濃度で極めて高い粘度を呈することができ、このため、上記の条件を満たすことができることが分かった。従って、本発明による微生物培養具１の培養層３０のゲル化剤においては、グアーガムが必須構成要素となっている。
【００３４】
ところで、本件発明者らが鋭意研究を重ねたところ、ゲル化剤におけるグアーガムの比率が高くなりすぎると、培養層３０の柔軟性が低下し、この結果、培養層３０が脆くなってしまうことがあることが分かった。特に、培養層３０によって好気性細菌が培養される場合、培養時に好気性細菌から生じるガスによって培養層３０が裂けてしまい、コロニーの視認性が低下してしまうことが考えられる。さらに、培養層３０の弾性が低くなるにつれて、コロニーが滲みやすくなってしまい、この結果、コロニーのカウントが困難になってしまうことも考えられる。一方、サイリウムシードガムは、弾力のあるゲルを形成することができるものであり、このため、培養層３０に適度な弾力を与えることができる。このため、培養時に好気性細菌から生じるガスを培養層３０内に閉じ込めることが可能となる。すなわち、ガスによって培養層３０が部分的に破砕してしまうことを抑制することができる。また、コロニーが滲んでしまうことを抑制することができる。従って、本発明による微生物培養具１の培養層３０のゲル化剤においては、グアーガムに加えてサイリウムシードガムが必須構成要素となっている。
【００３５】
なお、培養層３０の弾性が高くなるにつれて菌が成長しにくくなることが考えられる。従って、培養層３０のゲル化剤におけるグアーガムの重量部およびサイリウムシードガムの重量部は、培養層３０における培養性能および弾性のバランスが適切な範囲内になるよう設定される。具体的には、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部は、ゲル化剤におけるサイリウムシードガムの重量部以上となっている。また、グアーガムの比率が高くなり、これによって培養層３０が脆くなることを防ぐため、後述する実施例によって支持されるように、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比が７：３〜５：５の範囲内であることが好ましい。このように培養層３０のゲル化剤を構成することにより、微生物のコロニーの視認性、特に好気性細菌のコロニーの視認性を確保しながら、微生物を適切に培養することができる。
【００３６】
なお、本発明による微生物培養具１の培養層３０には、上述のグアーガムおよびサイリウムシードガム以外のゲル化剤が含まれていてもよい。例えば、グアーガムおよびサイリウムシードガム以外のゲル化剤として、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、変性ＰＶＡ、セルロース誘導体、澱粉およびその誘導体、セルロース誘導体および澱粉以外の多糖類、アクリル酸およびその誘導体、ポリエーテル、およびタンパク質などの水溶性ポリマーの架橋物；澱粉系吸水性ポリマー；セルロース系吸水性ポリマー；アクリル系吸水性ポリマー；無水マレイン酸系コポリマー；ビニルピロリドン系コポリマー；ポリエーテル系吸水性ポリマー；アクリル繊維加水分解物；およびその他の吸水性ポリマー、キサンタンガム、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリアクリルアミド、ローカストビーンガム、アルギン等が挙げられる。
【００３７】
〔栄養成分〕
栄養成分は、微生物の種類に応じて、適宜選択することができる。例えば、一般生菌検査用としては、ソルビトール・ピルビン酸ナトリウム・酵母エキス・ペプトン・ブドウ糖混合物、肉エキス・ペプトン混合物、ペプトン・大豆ペプトン・ブドウ糖混合物等や、これらにリン酸二カリウム及び／又は塩化ナトリウムを加えた混合物が挙げられる。大腸菌・大腸菌群検査用としては、デソキシコール酸ナトリウム・ペプトン・クエン酸鉄アンモニウム・塩化ナトリウム・リン酸二カリウム・乳糖混合物、ペプトン・乳糖・リン酸二カリウム混合物等が挙げられる。ブドウ球菌用としては、肉エキス・ペプトン・塩化ナトリウム・マンニット・卵黄混合物、ペプトン・肉エキス・酵母エキス・ピルビン酸ナトリウム・グリシン・塩化リチウム・亜テルル酸卵黄液混合物等が挙げられる。ビブリオ用としては、酵母エキス・ペプトン・蔗糖・チオ硫酸ナトリウム・クエン酸ナトリウム・コール酸ナトリウム・クエン酸第２鉄・塩化ナトリウム・牛胆汁混合物等が挙げられる。腸球菌用としては、牛脳エキス・ハートエキス・ペプトン・ブドウ糖・リン酸二カリウム・窒化ナトリウム混合物等が挙げられる。真菌用としては、ペプトン・ブドウ糖混合物、酵母エキス・ブドウ糖混合物、ポテトエキス・ブドウ糖混合物等が挙げられる。これらの中から、発育させようとする微生物の種類に応じて、１種類又はそれ以上を選択し、混合して使用することができる。
【００３８】
〔可塑剤〕
可塑剤は、ポリビニルピロリドンなどの固着剤によって構成される培養層３０の被膜が硬く脆い場合に添加されるものである。可塑剤としては、例えば、グリセリンやグリセリン誘導体系可塑剤、ポリエチレングリコール等が挙げられる。このような可塑剤を添加することにより、培養層３０の被膜に柔軟性を与えることができる。このことにより、例えば、基材シート１０の外縁近傍がカールしてしまうことを抑制することができる。なお培養層３０中における可塑剤の含有比率が高くなりすぎると、微生物の培養特性や視認性が低下してしまうことが考えらえる。従って、培養層３０中における可塑剤の含有比率は、培養層３０における所望の柔軟性、培養特性や視認性などの様々な点を考慮して決定される。例えば可塑剤としてグリセリンが用いられる場合、後述する実施例によって支持されているように、好ましくは、培養層３０の固形分（アルコールなどの溶媒を除く成分）の全体に対するグリセリンの重量％が１０〜１５％の範囲内となっている。
【００３９】
〔発色指示薬〕
発色指示薬は、培養過程で発育する微生物の代謝により産出される特異物質との反応、ｐＨ変化の認識、酵素との反応等によって発色してコロニーを着色するものである。発色指示薬を用いることにより、コロニー数の計数を極めて容易にすることができる。発色指示薬としては、例えば、トリフェニルテトラゾリウムクロライド（以下、ＴＴＣとする）、ｐ−トリルテトラゾリウムレッド、テトラゾリウムバイオレット、ペテトリルテトラゾリウムブルー等のテトラゾリム塩や、ニュートラルレッド混合物、フェノールレッド、ブロムチモールブルー、チモールブルー混合物等のｐＨ指示薬が挙げられる。また発色指示薬として、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−Ｂ−Ｄ−グルクロニドシクロヘキシルアンモニウム水和物、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−D−ガラクトピラノシド、５−ブロモ−６−クロロ−３−インドリル−β−D−ガラクトピラノシド、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルフォスフェートなどを用いることもできる。
【００４０】
〔選択剤〕
選択剤は、検出対象ではない微生物の発育を抑えるために培養層３０に添加されるものである。このような選択剤としては、メチシリン、セフタメタゾール、セフィキシム、セフタジジム、セフスロジン、バシトラシン、ポリミキシンＢ、リファンピシン、ノボビオシン、コリスチン、リンコマイシン、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、ストレプトマイシン、アザクタム、アクリフラビン等の抗生物質、サルファ剤、ナリジクス酸、オラキンドックス等の合成抗菌剤、クリスタルバイオレット、ブリリアントグリーン、マラカイトグリーン、メチレンブルー等の静菌又は殺菌作用を有する色素、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ７、ドデシル硫酸塩、ラウリル硫酸塩、コール酸ナトリウム等の界面活性剤、亜セレン酸塩、亜テルル酸塩、亜硫酸塩、窒化ナトリウム、塩化リチウム、シュウ酸塩、アジ化ナトリウム、高濃度の塩化ナトリウム等の無機塩等が挙げられる。
【００４１】
上記の構成成分を含む培養層３０を形成するために基材シート１０上に塗布される培地液３０Ａに使用する溶媒としては、選択した構成成分を溶解又は分散し得るものであれば特に限定されるものではないが、アルコール系溶媒を使用することが好ましい。アルコール系溶媒は、水やトルエン等の高沸点溶媒とは異なり、溶媒除去の際に高温加熱する必要がない。このため、各成分が熱分解するおそれがなく、また、溶媒除去に長時間を要しないので、生産効率に優れる点において好ましい。アルコール系溶媒としては、炭素数１〜５のアルコールが好ましく、例えば、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール等が挙げられる。これらの中でも、沸点が低く、乾燥による溶媒除去が容易であって、且つ、微生物の発育を阻害しないメタノールが最も好ましい。なお、上記溶媒は、単独又は２種以上を混合して使用することができる。溶媒の使用量は、培地液の構成成分や溶媒の種類によって、適宜選択するとよい。
【００４２】
なお図４においては、培養層３０が１層で構成されている例を示したが、これに限られることはなく、培養層３０を２層以上の多層で構成してもよい。例えば、固着剤およびゲル化剤を含む培地液を用いて第１培養層を形成し、その上に、固着剤、ゲル化剤および／または栄養成分を含む培地液を用いて第２培養層を形成してもよい。
【００４３】
（枠体）
枠体２０は、上述のように、培養層３０を囲うよう基材シート１０の上面に設けられるものである。このような枠体２０を設けることにより、被検液３５Ａを培養層３０上に供給するときに、被検液３５Ａが枠体２０を超えて拡がることを防止することができるとともに、被検液３５が広がる領域を一定にすることができる。従って、カバーフィルム４０を被せるたけで被検液３５Ａを拡げることができるため、スプレッダを用いて培養層３０上の被検液３５Ａを拡げる作業を省くことができ、このことにより、検査工程に要する時間を短縮することができる。また、被検液３５Ａが基材シート１０上に洩れてしまうことを防ぐこともできる。
【００４４】
枠体２０は、培養層３０の形成前に形成されてもよく、若しくは培養層３０の形成後に形成されてもよいが、培養層３０の形成後に形成されると、枠体２０と培養層３０との間に隙間が生じやすくなることが考えられる。この場合、微生物を培養した際にその隙間に菌が遊走し、正確なコロニー数の計測が困難となることがある。従って、培養層３０の形成前に枠体２０が形成されることが好ましい。また、培養層３０の形成前に枠体２０を形成することにより、培地液３０Ａが拡がる範囲、すなわち培養層３０が形成される範囲を画定することができるため、高価な微生物培養材料が無駄になることを低減することができる。
【００４５】
枠体２０の幅は、最細部が幅０．５〜５．０ｍｍの範囲内であることが好ましく、より好ましくは１．０〜３．０ｍｍの範囲内である。上記範囲であれば、培養層３０が吸水して膨潤した場合であっても、枠体２０の形状が崩れるおそれが少ない。
【００４６】
被検疫３５Ａを滴下してカバーフィルム４０を被せたときに、被検液３５Ａがカバーフィルム４０に接触するように、枠体２０の高さが設定される。枠体２０は、培養層３０の高さより１００〜１２００μｍ高くなるよう設定され、より好ましくは２００〜１０００μｍ高くなるよう設定され、特に好ましくは３００〜８００μｍ高くなるよう設定される。枠体２０の高さと培養層３０の高さの差を１００μｍより大きくすることにより、被検液の拡がりを十分に抑制することができ、これによって、基材シート１０上への漏れが生じることを防ぐことができる。また、枠体２０の高さと培養層３０の高さの差を１２００μｍよりも小さくすることにより、被検液３５Ａおよび培養層３０とカバーフィルム４０との間の密着性を確保することができる。これによって、被検液３５Ａを培養層３０に給水させながら被検液３５Ａを培養層３０の全域に拡げることができる。
【００４７】
枠体２０の高さｈ１、すなわち基材シート１０から枠体２０の上端までの距離は、３００〜１４００μｍとなっており、好ましくは５００〜９００μｍとなっている。枠体２０の高さｈ１を３００μｍより大きくすることにより、被検液３５Ａを滴下するためにカバーフィルム４０をめくり上げる際に、基材シート１０とカバーフィルム４０との間に指が入りやすくなるため、カバーフィルム４０をめくり上げやすくすることができる。また、枠体２０の高さｈ１を１４００μｍより小さくすることにより、高価である培地液３０Ａを基材シート１０上に塗布する量を減らすことができるため、微生物培養具１のコストを下げることができる。
【００４８】
枠体２０を構成する材料としては、好ましくは、疎水性を有する材料が用いられ、例えば疎水性樹脂が用いられる。疎水性樹脂としては、例えば、ＵＶ硬化樹脂、ホットメルト樹脂、熱発泡インクやＵＶ発泡剤等を好適に使用することができる。これらは着色されていてもよい。
【００４９】
ＵＶ硬化樹脂としては、特に限定されるものではないが、例えば、ラジカル型では、アクリレート系や不飽和ポリエステル系等が挙げられ、カチオン型では、エポキシアクリレート系、オキセタン系やビニルエーテル系等が挙げられる。
【００５０】
ホットメルト樹脂としては、軟化点温度が１２０度以下、より好ましくは１００度以下のものを好適に使用することができる。例えば、ホットメルト樹脂として、ウレタン系、ポリアミド系、ポリオレフィン系、ポリエステル系、エチレン酢酸ビニル系、スチレンブタジエンゴム系やウレタンゴム系等の合成ゴム系等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００５１】
その他にも、枠体２０を構成する疎水性樹脂として、熱発泡インクやＵＶ発泡剤等も好適に使用することができる。例えば、バインダーとしてポリウレタン系樹脂、ポリアミド系樹脂、ポリ塩化ビニル系樹脂、ポリアクリレート系樹脂、ポリエステル系樹脂、そして、塩素化ポリプロピレン等のポリオレフィン系樹脂、また、塩化ゴムや環化ゴム等のゴム類等を用いたインキを使用することができる。これらのインキは、撥水性を有していれば更に好ましく、この点から上記の樹脂にシリコーン類やワックス類を添加したインキが更に好ましい。
【００５２】
枠体２０に用いる疎水性樹脂は、疎水性、撥水性を有すると同時に、その塗膜の厚さが大きくできるものであることが好ましい。この観点からは、上記の樹脂に従来公知の発泡剤等を添加して、発泡インキとして使用することが効果的である。このようなＵＶ発泡インキとして、少なくともアクリレート反応性希釈剤又はメタクリレート反応性希釈等の反応性希釈剤と、ウレタンアクリレート光重合性オリゴマー、ポリエステルアクリレート光重合性オリゴマー、エポキシアクリレート光重合性オリゴマー、アクリル系光重合性オリゴマー、特殊光重合性オリゴマー等の光重合性オリゴマーと、光重合開始剤からなる紫外線硬化型インキに、無機発泡剤、有機発泡剤、液体発泡剤等の発泡剤を含有してなる紫外線硬化型発泡インキを挙げることができる。
【００５３】
なお、上記疎水性樹脂には、添加剤として、消泡剤、重合禁止剤、顔料分散剤等を添加してもよい。また、通常使用される着色顔料を、１５質量％未満の範囲で含有してもよい１５質量％を超えると、発泡を阻害するおそれがあるため好ましくない場合がある。
【００５４】
本実施の形態による微生物培養具１においては、枠体２０の材料として、上記いずれの疎水性樹脂も好適に使用することができるが、ＵＶ硬化樹脂又はホットメルト樹脂が好ましく、ホットメルト樹脂がより好ましい。枠体２０の形成には、一定の高さを有するパターン形成が必要であるが、ＵＶ硬化樹脂やホットメルト樹脂は、非溶媒系の状態でディスペンサー等による塗布により容易に形状加工ができ、加工後も光照射や冷却により硬化させるだけで容易にパターン形成できるからである。ただし、ＵＶ照射に起因して変質する成分が培養層３０に含まれている場合には、ＵＶ照射の際に培養層３０を金属等で覆う必要があり、作業が煩雑となるため、ホットメルト樹脂を使用するとよい。
【００５５】
なお、疎水性材料のくりぬき品を基材シート１０の上面に接着して枠体２０を形成してもよい。もしくは基材シート１０を熱成形、プレス成形、しぼり成形などを用いて枠体状に成形することにより、枠体２０を形成してもよい。
【００５６】
（カバーフィルム）
カバーフィルム４０は、培養中の落下菌等による汚染を防止するとともに、培養層３０の水分蒸発を防止するという作用を有する。またカバーフィルム４０は、培養層３０上に供給された被検液３５Ａの塊を培養層３０の全域にわたって拡げるという作用も有する。カバーフィルム４０は、例えば図４に示すように、基材４６と、基材４６の基材シート１０側に設けられた印刷層４７と、印刷層４７の基材シート１０側に設けられた撥水層４８と、を含んでいる。
【００５７】
カバーフィルム４０は、防水性、水蒸気不透過性を有すると同時に、透明性を有することが好ましい。これによって、微生物の培養後、カバーフィルム４０を通してコロニーを観察したり、計数したりすることができる。例えば、カバーフィルム４０の基材４６を構成する材料として、ポリエチレン、ポリプロピレン等のポリオレフィン、ポリエステル、ポリアミド、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリ塩化ビニル等のプラスチックフィルムを使用することができる。
【００５８】
また、カバーフィルム４０の基材４６には、基材シート１０の項で記載したコロナ放電処理等の表面処理がなされていてもよい。なお、カバーフィルム４０は、培養する微生物の種類により、適した気体透過性、主に酸素透過性、又は酸素非透過性を有することが好ましく、この点も考慮して選定するとよい。
【００５９】
カバーフィルム４０は、被検液３５Ａを培養層３０上に供給するためにカバーフィルム４０を基材シート１０から持ち上げる際に、適度の柔軟性が確保されることが好ましい。したがって、カバーフィルム４０の厚さは、１０〜２００μｍ程度が好ましく、２０〜７０μｍ程度が更に好ましい。
【００６０】
基材シート１０に枡目線が印刷されていない場合、カバーフィルム４０に枡目線４０ａが印刷されていてもよい。なお枡目線４０ａは、コロニーが多数形成された場合に、数ヶ所の枡目内の菌数を計測し、枡目の合計数に比例した数を掛けるだけで、おおよその全体数を求めるために形成されるものである。枡目線４０ａは、基材４６上に印刷されていてもよい。若しくは図４に示すように、水に不溶性であり、かつ微生物の生育に影響を与えないインキを用いて枡目線４０ａが形成された印刷層４７を準備し、この印刷層４７と基材４６とを積層することにより、枡目線４０ａが得られてもよい。枡目の大きさは、１０ｍｍ角程度が適当である。
【００６１】
好ましくは、カバーフィルム４０は、カバーフィルム４０の下面、すなわち培養層３０と対向する面が撥水性を有するよう構成されている。これによって、培養層３０上に供給された被検液３５Ａの塊を培養層３０の全域にわたって拡げるというカバーフィルム４０の作用を強化することができる。カバーフィルム４０の下面に撥水性を与える方法としては、例えば図４に示すように、カバーフィルム４０の下面を、撥水性を有する撥水層４８を用いて構成することが考えられる。
【００６２】
撥水層４８は、好ましくは、ＪＩＳ  Ｒ３２５７に準拠して、水滴に対する接触角が５０〜１０５度となるよう構成される。これによって、培養層３０上における被検液３５Ａを枠体２０の内側に保持するとともに被検液３５Ａを拡散させることができる。また、仮にカバーフィルム４０と枠体２０との間にわずかな隙間が形成されている場合であっても、このような隙間を被検液３５Ａが通り抜けて被検液３５Ａが枠体２０の外側に洩れてしまうことを抑制することができる。撥水層４８を構成する材料としては、例えば、ポリアミド系樹脂、ポリ（メタ）アクリル系樹脂、ポリオレフィン系樹脂、ポリエステル系樹脂などの公知の樹脂を挙げることができる。これらの樹脂は、単独で用いられてもよく、２種以上が組み合わされて用いられてもよい。
【００６３】
カバーフィルム４０のうち培養層３０と対向する領域に、特定成分層が形成されていてもよい。特定成分層としては、例えば、固着剤を溶解、又は分散した液に、ゲル化剤、栄養成分、発色指示薬、選択剤及び基質からなる群から選択される１種以上を配合した特定成分溶液を塗布することにより得られる層が用いられる。なお、カバーフィルム４０に設けられた特定成分層が発色指示薬を含んでいる場合、培養層３０や被検液３５Ａに発色指示薬を添加する手間を省くことができる。
【００６４】
（接合部）
接合部２５は、カバーフィルム４０を基材シート１０に対して接合するためのものである。カバーフィルム４０が接合部２５を軸として基材シート１０に対して変位し、これによって、枠体２０および培養層３０がカバーフィルム４０によって覆われている被覆状態と、枠体２０および培養層３０がカバーフィルム４０によって覆われていない開放状態と、を実現することができる限りにおいて、接合部２５の具体的な構成が特に限られることはない。例えば図２および図４に示すように、接合部２５を、基材シート１０およびカバーフィルム４０とは別個の部材を用いて構成してもよい。この場合、接合部２５として、例えば一般的な両面テープやホットメルト剤を用いることができる。若しくは、図示はしないが、接合部２５を、基材シート１０およびカバーフィルム４０と同一の材料を用いて構成してもよい。例えば、一枚のプラスチックシートや積層シートを準備し、このシートを折り曲げることによって、一連のシート上に基材シート１０およびカバーフィルム４０を画定してもよい。この場合、基材シート１０とカバーフィルム４０との間に位置する折り曲げられた領域が、カバーフィルム４０を基材シート１０に対して接合する接合部２５となる。
【００６５】
次に、このような構成からなる本実施の形態の作用および効果について説明する。ここでは、はじめに、微生物培養具１を製造する方法について説明する。次に、得られた微生物培養具１を用いて微生物を検査する方法について説明する。
【００６６】
微生物培養具の製造方法
はじめに、微生物培養具１を製造する方法について、図５（ａ）〜（ｆ）を参照して説明する。
【００６７】
まず図５（ａ）に示すように、合成紙等の基材シート１０を準備する。次に、単孔ノズルを備えるディスペンサーなどを用いて、ホットメルト樹脂などから構成される円形状の枠体２０を基材シート１０の上面に形成する（図５（ｂ）参照）。
【００６８】
また、アルコール系溶媒に上記固着剤、ゲル化剤、栄養成分、発色指示薬、選択剤等を溶解又は分散させて、培養層３０を形成するための培地液３０Ａを調製する。次に図５（ｃ）に示すように、基材シート１０の上面であって、枠体２０によって囲まれた領域内に、多孔ノズルを有するディスペンサーＮなどを用いて培地液３０Ａを塗布する。その後、塗布した培地液３０Ａに熱をかけて溶媒を除去し、乾燥させる。これによって、図５（ｄ）に示すように、基材シート１０の上面に培養層３０が形成される。
【００６９】
次に図５（ｅ）に示すように、両面テープやホットメルト剤などからなる接合部２５を、基材シート１０の第１外縁１１近傍に配置する。その後、カバーフィルム４０を準備し、図５（ｆ）に示すように、当該カバーフィルム４０の第１外縁４１近傍を接合部２５に接合する。これによって、微生物培養具１が得られる。
【００７０】
ところで、培養層３０にはある程度の厚みが必要である。例えば培養層３０の厚みは、乾燥後において５０〜１０００μｍであることが好ましく、２００〜６００μｍであることがより好ましい。基材シート１０上にこのような厚みを有する培養層３０を形成させるための従来法としては、スクリーン印刷がある。しかしながら、メッシュの版を使用するスクリーン印刷では、培養層３０の形成途中で溶媒が揮発し、培地液３０Ａの粘度が上昇するため、メッシュ部分が目詰まりを起こしやすく、また、培地液３０Ａの版離れも悪いため、培養層３０を連続的に形成させることが困難である。メタルマスクの版を使用するスクリーン印刷を採用する場合も、メッシュの版と同様に培地液３０Ａの版離れが悪く、やはり培養層３０の連続形成は困難である。また、スキージの移動方向に厚みのムラが生じやすく、均一な厚みの培養層３０を形成することも困難である。一方、溶媒の揮発による培地液３０Ａの粘度上昇を考慮して溶媒量を増やすと、培地液３０Ａの粘度が低くなるため、所定領域にのみ培養層３０を形成することが困難になる。これに対して、本実施の形態によれば、枠体２０によって囲まれた領域内に、溶媒量を増やした培地液３０Ａを供給するので、培地液３０Ａの粘度が低い場合であっても、適度な厚みおよび均一な厚さを有する培養層３０を所定領域に形成することができる。
【００７１】
十分な厚みを有する培養層３０は、微生物の発育に必要な量の栄養成分と、コロニーの滲みが生じない量のゲル化剤とを十分に含むことができる。このため、微生物を適正に発育させるとともに、滲みの少ないコロニーを形成することができる。また、均一な厚みを有する培養層３０においては、固着剤、ゲル化剤、栄養成分等の各成分の含有量に偏りが生じにくいため、微生物の発育環境をほぼ一定のものとすることができる。これによって、培養層３０の領域ごとにコロニーの形成速度の差が生じることを抑制することができる。これらのことにより、コロニー数の計測等の微生物検査をより正確に行うことができる。なお、培地液３０Ａの構成成分（溶媒を除く）の少なくとも一種が溶媒中で溶解することなく分散している分散系の培地液３０Ａを用いて形成した培養層３０においては、培養層３０の厚みの均一性が培養層３０中での各構成成分の分布に与える影響が大きい。そのため、上述の方法による培養層３０の形成は、分散系の培地液３０Ａを使用した場合において、特に、効果を発揮する。
【００７２】
微生物検査方法
次に、微生物培養具１を用いて微生物を検査する方法について、図６（ａ）〜（ｅ）および図７を参照して説明する。
【００７３】
はじめに図６（ａ）に示すように、微生物培養具１を作業台５の上に配置する。ここで作業台５は、図７に示すように、微生物培養具１の培養層３０上に被検液を供給する作業を実施するための作業領域５ａと、被検液が供給された後の微生物培養具１を一時的に保管するための保管領域５ｂと、を含んでいる。図６（ａ）に示す工程において、微生物培養具１は、作業台５の作業領域５ａ内に配置される。
【００７４】
（供給工程）
次に、図６（ｂ）に示すように、微生物培養具１の培養層３０上に被検液３５Ａを供給する供給工程を実施する。被検液３５Ａとは、微生物の存在を確認し、または微生物数を測定する対象となる液のことである。被検液３５Ａは例えば、培養層３０の一部分に塊として供給される。供給工程においては、図６（ｂ）に示すように、カバーフィルム４０が基材シート１０から持ち上げられている。
【００７５】
（被覆工程）
次に、微生物培養具１の培養層３０および枠体２０を、微生物培養具１のカバーフィルム４０を用いて覆う被覆工程を実施する。例えば図６（ｃ）に示すように、接合部２５を軸としてカバーフィルム４０を基材シート１０に向けて変位させる。このとき、カバーフィルム４０の下面が被検液３５Ａに接触する。被検液３５Ａは、カバーフィルム４０と接触することによって、培養層３０上で拡がっていく。これによって、図６（ｄ）に示すように、被検液３５Ａを培養層３０の全域に行き渡らせることができる。ここで本実施の形態によれば、培養層３０は、培養層３０よりも大きい厚み（高さ）を有する枠体２０によって囲われている。このため、被検液３５Ａが基材シート１０上に洩れてしまうことを抑制しながら、被検液３５Ａを培養層３０の全域に迅速に行き渡らせることができる。このようにして、培養層３０に被検液３５Ａを接種することができる。なお、以下の説明において、被検液３５Ａが接種された微生物培養具１を符号１Ａで示すこともある。
【００７６】
（搬送工程）
次に、被検液３５Ａが接種された微生物培養具１Ａを作業領域５ａから保管領域５ｂに搬送する搬送工程を実施する。例えば指を用いて作業台５上で微生物培養具１Ａを引きずることによって、図７において矢印で示されているように、微生物培養具１Ａを保管領域５ｂへ搬送する。
【００７７】
保管領域５ｂに搬送された微生物培養具１Ａは、培養層３０がゲル化した後、孵卵器に入れられる。孵卵器において所定の時間にわたって微生物を培養した後、微生物培養具１Ａを孵卵器から取り出し、発生したコロニーの状態を観察する。このようにして、被検液３５Ａに含まれる微生物を検査することができる。微生物培養具１Ａを孵卵器に入れる時間は、被検液３５Ａや培養層３０の種類に応じて適宜設定されるが、例えば３５度で４８時間に設定される。
【００７８】
ここで本発明によれば、培養層３０のゲル化剤は、少なくともグアーガムおよびサイリウムシードガムを含んでおり、また、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部は、ゲル化剤におけるサイリウムシードガムの重量部以上となっている。このため、培養層３０は、十分な培養性能だけでなく、微生物を観察する際の視認性を備えることができる。このことにより、被検液３５Ａに含まれる微生物を正確に検査することができる。
【００７９】
また本実施の形態によれば、培養層３０は、グリセリンなどの可塑剤を含んでおり、また、培養層３０の固形分の全体に対する可塑剤の重量％は、１０〜１５％の範囲内となっている。このため、微生物の培養特性や視認性が低下してしまうことを抑制しながら、基材シート１０がカールしてしまうことを抑制することができる。
【００８０】
なお、上述した実施の形態に対して様々な変更を加えることが可能である。以下、図面を参照しながら、変形の一例について説明する。以下の説明および以下の説明で用いる図面では、上述した実施の形態と同様に構成され得る部分について、上述の実施の形態における対応する部分に対して用いた符号と同一の符号を用いることとし、重複する説明を省略する。
【００８１】
カバーフィルムの変形例
上述の本実施の形態においては、図１に示すように、基材シート１０の法線方向から見た場合に、基材シート１０の各外縁１１，１２，１３，１４とカバーフィルム４０の各外縁４１，４２，４３，４４とがほぼ一致している例を示した。しかしながら、これに限られることはなく、カバーフィルム４０は、基材シート１０が培養層３０および枠体２０を覆う際、基材シート１０の上面の領域が少なくとも部分的に露出されるよう構成されていてもよい。例えば、基材シート１０の第１外縁１１から第２外縁１２に向かう方向を第１方向とするとき、第１方向におけるカバーフィルム４０の寸法は、図８および図９に示すように、第１方向における基材シート１０の寸法よりも小さくなっていてもよい。以下の記載において、基材シート１０の上面の領域のうちカバーフィルム４０によって覆われることなく露出している領域を露出領域１０Ａと称する。
【００８２】
本変形例によれば、被検液３５Ａが接種された微生物培養具１Ａを作業領域５ａから保管領域５ｂに搬送する搬送工程の際、基材シート１０の露出領域１０Ａに上方から力を印加することによって、微生物培養具１Ａを搬送することができる。例えば、指を露出領域１０Ａに当接させ、そして指を用いて作業台５上で微生物培養具１Ａを引きずることによって、微生物培養具１Ａを保管領域５ｂへ搬送する。この場合、指は基材シート１０の露出領域１０Ａにのみ当接し、カバーフィルム４０には接触しない。従って、カバーフィルム４０に対して応力が印加されることを防ぎながら、微生物培養具１Ａを移動させることができる。このため、ゲル化される前の培養層３０に、カバーフィルム４０を介して何らかの応力が印加されることがない。従って、培養層３０がゲル化することを待つことなく、微生物培養具１Ａを保管領域５ｂへ搬送することができる。このことにより、検査に要する時間を短縮することができる。
【００８３】
若しくは、図示はしないが、第１方向におけるカバーフィルム４０の寸法は、第１方向における基材シート１０の寸法よりも大きくなっていてもよい。例えば、カバーフィルム４０の第２外縁４２が基材シート１０の第２外縁１２よりも外方に位置するよう、カバーフィルム４０が基材シート１０の第２外縁１２を超えて延びていてもよい。これによって、上述の供給工程において、カバーフィルム４０をめくり上げる際、カバーフィルム４０の第２外縁１２近傍の領域が掴みやすいものとなる。従って、供給工程を容易化することができる。
【００８４】
また上述の本実施の形態および変形例において、カバーフィルム４０の一部分を基材シート１０の一部分に接合する接合部２５が設けられる例を示した。しかしながら、これに限られることはなく、接合部２５を設けることなく微生物培養具１を構成してもよい。すなわち、カバーフィルム４０が基材シート１０に対して接合されていなくてもよい。例えば図１０に示すように、カバーフィルム４０は、被覆工程の際に準備される独立した部材であってもよい。本変形例においても、カバーフィルム４０が被検液３５Ａに接触することにより、被検液３５Ａを培養層３０の全域に行き渡らせることができる。
【００８５】
また上述の本実施の形態において、カバーフィルム４０の基材シート１０側の面が、撥水性を有する撥水層４８から構成されている例を示した。しかしながら、カバーフィルム４０に含まれる基材４６自体が撥水性を有する場合、図１１に示すように、カバーフィルム４０の基材シート１０側の面が基材４６によって構成されていてもよい。この場合、図１１に示すように、基材４６の面のうち基材シート１０とは反対側に位置する面の上に印刷層４７が設けられていてもよい。例えば、撥水性を有する基材としてはポリプロピレン樹脂、ポリアミド樹脂などが挙げられる。
【００８６】
また、カバーフィルム４０のうち少なくとも第２外縁４２を含む領域の色と、基材シート１０のうち平面図で見た場合に上記第２外縁４２を含む領域に隣接する領域の色と、が異なっていてもよい。例えば図１２に示すように、カバーフィルム４０のうち第２外縁４２を含むよう第２外縁４２に沿って延びる、符号４０Ｃで示される領域を、基材シート１０とは異なる色で着色された着色領域４０Ｃとしてもよい。これによって、カバーフィルム４０をめくり上げる際に基材シート１０とカバーフィルム４０との境界が認識され易くなり、このことにより、カバーフィルム４０を、より掴み易いものとすることができる。
【００８７】
なお、上述した実施の形態に対するいくつかの変形例を説明してきたが、当然に、複数の変形例を適宜組み合わせて適用することも可能である。
【実施例】
【００８８】
以下、実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。
【００８９】
（実施例１）
基材シート１０として、合成樹脂を主原料とした合成紙（ユポ・コーポレーション製、ユポ）を準備した。基材シート１０の厚みは２７０μｍであり、基材シート１０の長さ（第１外縁１１から第２外縁１２までの寸法）は９０ｍｍであり、基材シート１０の幅（第３外縁１３から第４外縁１４までの寸法）は７２ｍｍであった。
【００９０】
基材シート１０の上面に、エチレン酢酸ビニル系のホットメルト樹脂からなる円形状の枠体２０を設けた。枠体２０の幅（枠体２０の外縁と内縁との間の間隔）は１ｍｍであり、枠体２０の内径（内縁によって形成される円の直径）は５０ｍｍであり、枠体２０の高さは７５０μｍであった。
【００９１】
基材シート１０の上面であって、枠体２０によって囲まれた領域内に、培養層３０を形成するための培地液３０Ａを塗布した。培地液３０Ａは、ゲル化剤、栄養成分、固着剤および可塑剤を含む固形分と、溶剤とから構成されていた。各成分の内訳は以下の通りであった。
ゲル化剤：グアーガム：サイリウムシードガムを７：３質量部で混合したもの
栄養成分：たんぱく質、糖類、無機塩類
固着剤：ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）
可塑剤：グリセリン
溶剤：メタノール
また、培地液３０Ａに含まれる固形分の主要な成分の重量は以下の通りであった。
ゲル化剤＋栄養成分＋ＰＶＰ：２８１．２ｇ
グリセリン：３６．０ｇ
グリセリンの、培地液３０Ａの固形分の全体に対する重量％は１１％であった。また、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比は７：３であった。
【００９２】
塗布した培地液３０Ａを乾燥させ、これによって、基材シート１０の上に培養層３０を形成した。得られた培養層３０の厚みは２５０μｍであった。
【００９３】
基材シート１０の上面に、基材シート１０の第１外縁１１に沿って、長さ６ｍｍ、幅７２ｍｍの両面テープからなる接合部２５を設けた。
【００９４】
次に、カバーフィルム４０として、基材４６、印刷層４７および撥水層４８を有するカバーフィルム４０（図４参照）を準備した。基材４６は、厚み４０μｍの透明な配向ポリプロピレンから構成されていた。印刷層４７における枡目線４０ａの間隔は１０ｍｍとした。撥水層４８は、ポリアミドを主成分とした樹脂から構成されていた。カバーフィルム４０の長さ（第１外縁４１から第２外縁４２までの寸法）は９５ｍｍであり、幅（第３外縁４３から第４外縁４４までの寸法）は７２ｍｍであった。次に、カバーフィルム４０の第１外縁４１近傍の部分を、接合部２５を介して基材シート１０に接合した。このようにして、微生物培養具１を作製した。
【００９５】
（実施例２）
ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比を６：４としたこと以外は、実施例１と同様にして、微生物培養具１を作製した。
【００９６】
（実施例３）
ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比を５：５としたこと以外は、実施例１と同様にして、微生物培養具１を作製した。
【００９７】
（実施例４）
ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比を８：２としたこと以外は、実施例１と同様にして、微生物培養具１を作製した。
【００９８】
（比較例１）
ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比を４：６としたこと以外は、実施例１と同様にして、微生物培養具１を作製した。
【００９９】
（実施例５）
培地液３０Ａの固形分の全体に対するグリセリンの重量％を１０％としたこと以外は、実施例２と同様にして、微生物培養具１を作製した。
【０１００】
（実施例６）
培地液３０Ａの固形分の全体に対するグリセリンの重量％を１５％としたこと以外は、実施例２と同様にして、微生物培養具１を作製した。
【０１０１】
（比較例２）
培地液３０Ａの固形分の全体に対するグリセリンの重量％を８％としたこと以外は、実施例２と同様にして、微生物培養具１を作製した。
【０１０２】
（比較例３）
培地液３０Ａの固形分の全体に対するグリセリンの重量％を２０％としたこと以外は、実施例２と同様にして、微生物培養具１を作製した。
【０１０３】
＜＜培養性能評価＞＞
実施例１乃至４および比較例１で得られた微生物培養具１を用いて、各微生物培養具１における、被検液中の菌を培養する性能を評価した。まず、被検液３５Ａとして、好気性細菌であるProteus mirabilisの濃度１００〜１５０ｃｆｕ／ｍｌの菌液を準備した。次に、実施例１乃至４および比較例１で得られた各微生物培養具１の培養層３０の上に１ｍｌの被検液３５Ａを供給した。その後、枠体２０および培養層３０の上にカバーフィルム４０を被せ、これによって、培養層３０の全域に被検液３５Ａを拡げた。培養層３０がゲル化した後、被検液３５Ａが接種された微生物培養具１Ａを孵卵器に入れ、４８時間にわたって３５度で菌を培養した。その後、培養された菌の数を測定し、これによって各微生物培養具１の培養性能を評価した。
【０１０４】
培養性能の評価は、比較のために実施した、寒天平板混釈法を用いて同一の被検液中の菌を培養した場合に観察された菌の数に基づいてなされた。具体的には、寒天平板混釈法の場合の菌数の８０％以上の菌数が観察された場合をレベル１とし、７０％以上の菌数が観察された場合をレベル２とし、７０％未満の菌数が観察された場合をレベル３とした。評価結果を表１に示す。
【０１０５】
＜＜視認性評価＞＞
実施例１乃至６および比較例１乃至３で得られた微生物培養具１を用いて、上述の培養性能評価の場合と同様にして、被検液３５Ａ中の菌を培養した。次に、発色指示薬に反応して発色したコロニーを目視で観察し、各コロニーを視認できるかどうか、すなわち計数できるかどうかを確認した。発色指示薬としては、ＴＴＣを用いた。このＴＴＣは、カバーフィルム４０の下面に設けられていた。確認結果に基づいて、各微生物培養具１の視認性を、レベル１〜３で評価した。評価結果を表１および表２に示す。
【０１０６】
なお、上述のレベル１〜３は、ガス産生菌によって発生したガス５１とコロニー５０とが重なることによって視認性が阻害されている程度、若しくは、培養層３０に発生している滲み５２によって視認性が阻害されている程度に基づいて決定された。図１３に、ガス５１の程度とレベル１〜３との関係についての指標を示す。図１３に示されている３つの画像のうち、左側の画像が、ガス５１に起因する視認性の阻害がほとんど生じていない、レベル１として評価される例であり、中央の画像が、ガス５１に起因する視認性の阻害が若干生じている、レベル２として評価される例であり、右側の画像が、ガス５１に起因する視認性の阻害が著しく生じている、レベル３として評価される例である。また図１４に、滲み５２の程度とレベル１〜３との関係についての指標を示す。図１４に示されている３つの画像のうち、左側の画像が、滲み５２に起因する視認性の阻害がほとんど生じていない、レベル１として評価される例であり、中央の画像が、滲み５２に起因する視認性の阻害が若干生じている、レベル２として評価される例であり、右側の画像が、滲み５２に起因する視認性の阻害が著しく生じている、レベル３として評価される例である。
【０１０７】
＜＜反り評価＞＞
実施例２，５，６および比較例２，３で得られた微生物培養具１について、基材シート１０の反り（カール）の程度を評価した。具体的には、微生物培養具１を作業台５上に載置し、このとき、微生物培養具１の基材シート１０の各外縁１１，１２，１３，１４のうち作業台５から最も浮き上がっている外縁について、作業台５の上面からの距離を測定した。結果を表２に示す。なおカールが生じる原因としては、培養層３０と基材シート１０との熱収縮率の差や、培地液３０Ａや被検液３５Ａ中の溶媒が蒸発することに起因する培養層３０の収縮などが考えられる。
【０１０８】
微生物培養具１Ａを保管領域５ｂへ搬送する方法の１つとして、微生物培養具１Ａの外縁近傍に上方から力を印加しながら作業台５上で微生物培養具１Ａを引きずることが考えられる。また上述の変形例のように基材シート１０に露出領域１０Ａが形成されている場合、露出領域１０Ａに上方から力を印加しながら作業台５上で微生物培養具１Ａを引きずることも考えられる。従って、仮に基材シート１０の外縁におけるカールが大きいと、微生物培養具１Ａを引きずる際に微生物培養具１Ａが浮き上がったり傾いたりしてしまうことが考えられる。従って、カールの量は、一定の限度、例えば３ｍｍを超えないことが好ましい。
【０１０９】
【表１】
2014090701.tif 000003
【０１１０】
【表２】
2014090701.tif 000004
【０１１１】
表１に示されているように、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比を７：３〜５：５の範囲内とした場合、培養性能および視認性の両方をレベル２以上にすることができた。一方、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比を８：２にした場合、視認性がレベル３に低下した。グアーガムの比率が高くなることにより、培養層３０が脆くなり、この結果、菌から生じるガス５１によって培養層３０が部分的に裂けてしまったことが考えられる。また、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比を４：６にした場合、培養性能がレベル３に低下した。サイリウムシードガムの比率が高くなることにより、培養層３０の弾性率が向上したため菌が発育しにくくなったと考えられる。
【０１１２】
表２に示されているように、培地液３０Ａの固形分、すなわち培養層３０の全固形分に対するグリセリンの固形分の比率を１０〜１５重量％とした場合、カールを３ｍｍ以下にするとともに、視認性の両方をレベル２以上にすることができた。一方、培養層３０の全固形分に対するグリセリンの固形分の比率を８重量％にした場合、カールが３．４ｍｍとなった。グリセリンの重量％が低くなることにより、培養層３０の柔軟性が低くなり、この結果、培養層３０が収縮し易くなったことが考えられる。また、培養層３０の全固形分に対するグリセリンの固形分の比率を２０重量％にした場合、認性がレベル３に低下した。グリセリンの比率が高くなることにより、培養層３０に滲み５２が生じ易くなったことが考えられる。
【符号の説明】
【０１１３】
１，１Ａ  微生物培養具
１０    基材シート
２０    枠体
２５    接合部
３０    培養層
３０Ａ  培地液
３５Ａ  被検液
４０    カバーフィルム
４０Ｃ  着色領域
４６    基材
４７    印刷層
４８    撥水層
５０    コロニー
５１    ガス
５２    滲み
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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