(57)【要約】【課題】冷凍保存が可能な微量検体を用いて正確に診断することができ、かつ同時に多種類の検体または抗原の組み合わせによる刺激応答を効率的に診断することができる、Ｉ型アレルギーの診断装置およびＩ型アレルギーの診断方法を提供する。【解決手段】Ｉ型アレルギーの診断装置１は、光源２とコリメーターレンズ３と偏光板４とプリズム５と金属薄膜コート６とガラス基板７とマルチウェルチャンバー８とアレルゲン投与用マルチチャンバー９と対物レンズ１０と撮像部１１とＣＰＵ１２とを備えている。画像データ１３は反射光強度像である。マルチウェルチャンバー８は多数のサンプル投与区画を有し、ヒトＩｇＥ受容体発現細胞株培養液および検体が投与後培養され、抗原標準物質が、いずれかのサンプル投与区画に投与される検体と抗原標準物質との組み合わせが、他のサンプル投与区画に投与される検体と抗原標準物質との組み合わせと異なるよう投与される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
表面プラズモン共鳴現象を利用するアレルギーの診断装置であって、
投与される溶液がそれぞれの区画で隔離されるよう構成されている、少なくとも２つ以上のサンプル投与区画を有するマルチウェルと、
一方の面で前記マルチウェルの前記サンプル投与区画において接している金属薄膜と、
前記金属薄膜の他方の面に実質的に接する界面を有している屈折光学素子と、
Ｐ偏光の平行光を、前記屈折光学素子に入射させ、前記少なくとも２つ以上のサンプル投与区画を含有する範囲において表面プラズモン共鳴現象を発生させる所定の入射角で前記界面に入射させる入射手段と、
前記界面に入射した前記平行光の反射光の２次元強度分布に相当する強度像を所定の倍率に拡大または縮小する光学系と、
前記光学系で拡大または縮小された前記強度像を撮像する撮像手段と、
前記撮像手段で撮像された前記強度像の画像データを取得し表示する画像取得表示手段とを備え、
前記サンプル投与区画には、ヒトＩｇＥ受容体発現細胞株の培養液および検体が投与後培養され、抗原標準物質が投与され、かついずれか１つの前記サンプル投与区画に投与される前記検体と前記抗原標準物質との組み合わせは、他のいずれか１つの前記サンプル投与区画に投与される前記検体と前記抗原標準物質との組み合わせと異なることを特徴とする、Ｉ型アレルギーの診断装置。
【請求項２】
前記サンプル投与区画には、それぞれ、１種類の前記抗原標準物質と、それぞれ異なる前記検体との組み合わせで投与されることを特徴とする、請求項１に記載のＩ型アレルギー診断装置。
【請求項３】
前記サンプル投与区画には、それぞれ、１種類の前記検体と、それぞれ異なる前記抗原標準物質との組み合わせで投与されることを特徴とする、請求項１に記載のＩ型アレルギー診断装置。
【請求項４】
さらに、前記ヒトＩｇＥ受容体発現細胞株の培養液、前記検体、および／または、前記抗原標準物質が投与される投与手段を備えることを特徴とする、請求項１ないし３のいずれか１項に記載のＩ型アレルギーの診断装置。
【請求項５】
前記検体は、血清または精製ＩｇＥ抗体であることを特徴とする、請求項１ないし４のいずれか１項に記載のＩ型アレルギーの診断装置。
【請求項６】
前記血清の前記サンプル投与区画毎における量は、０．１μｌから１．０μｌであることを特徴とする、請求項５に記載のＩ型アレルギーの診断装置。
【請求項７】
前記ヒトＩｇＥ受容体発現細胞株は、ＲＢＬ−３Ｄ４細胞株またはＲＢＬ−４８細胞株であることを特徴とする、請求項１ないし６のいずれか１項に記載のＩ型アレルギーの診断装置。
【請求項８】
投与される前記抗原標準物質は、花粉、ハウスダスト、動物上皮、植物、ダニ、食物および汗からなる群のいずれかから選択される１つ以上のものであることを特徴とする、請求項１ないし７のいずれか１項に記載のＩ型アレルギーの診断装置。
【請求項９】
表面プラズモン共鳴現象を利用するアレルギーの診断方法であって、
投与される溶液がそれぞれの区画で隔離されるよう構成されている、少なくとも２つ以上のサンプル投与区画を有するマルチウェルに、ヒトＩｇＥ受容体発現細胞株の培養液および検体を投与後培養する工程と、
抗原標準物質を、いずれか１つの前記サンプル投与区画に投与される前記検体と前記抗原標準物質との組み合わせが、他のいずれか１つの前記サンプル投与区画に投与される前記検体と前記抗原標準物質との組み合わせと異なるよう投与する工程と、
一方の面で前記マルチウェルの前記サンプル投与区画において接している金属薄膜の他方の面に実質的に接する界面を有している屈折光学素子に、Ｐ偏光の平行光を、前記少なくとも２つ以上のサンプル投与区画を含有する範囲において表面プラズモン共鳴現象を発生させる所定の入射角で前記界面に入射させる工程と、
前記界面に入射した前記平行光の反射光の２次元強度分布に相当する強度像を所定の倍率に拡大または縮小する工程と、
前記強度像を撮像する工程と、
撮像された前記強度像の画像データを取得し表示する工程とを備えることを特徴とする、Ｉ型アレルギーの診断方法。
【請求項１０】
前記サンプル投与区画には、それぞれ、１種類の前記抗原標準物質と、それぞれ異なる前記検体との組み合わせで投与することを特徴とする、請求項９に記載のＩ型アレルギーの診断方法。
【請求項１１】
前記サンプル投与区画には、それぞれ、１種類の前記検体と、それぞれ異なる前記抗原標準物質との組み合わせで投与することを特徴とする、請求項９に記載のＩ型アレルギーの診断方法。
【請求項１２】
前記検体は、血清または精製ＩｇＥ抗体であることを特徴とする、請求項９ないし１１のいずれか１項に記載のＩ型アレルギーの診断方法。
【請求項１３】
前記血清の前記サンプル投与区画毎における量は、０．１μｌから１．０μｌであることを特徴とする、請求項１２に記載のＩ型アレルギーの診断方法。
【請求項１４】
前記ヒトＩｇＥ受容体発現細胞株は、ＲＢＬ−３Ｄ４細胞株またはＲＢＬ−４８細胞株であることを特徴とする、請求項９ないし１３のいずれか１項に記載のＩ型アレルギーの診断方法。
【請求項１５】
投与される前記抗原標準物質は、花粉、ハウスダスト、動物上皮、植物、ダニ、食物および汗からなる群のいずれかから選択される１つ以上のものであることを特徴とする、請求項９ないし１４のいずれか１項に記載のＩ型アレルギーの診断方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、各種抗原に対する好塩基球または肥満細胞の刺激応答に関連する、Ｉ型アレルギーの診断装置およびＩ型アレルギーの診断方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
即時型アレルギー（Ｉ型アレルギー）は、好塩基球または肥満細胞上の高親和性ＩｇＥ  Ｆｃ受容体に結合したＩｇＥ抗体が特定の抗原と反応し、それらの細胞よりヒスタミンをはじめとする化学伝達物質が組織内に放出されることにより惹起される生体の反応である。このようなＩ型アレルギーの症状には、例えば、アナフィラキシーショック、食物アレルギー、気管支喘息、花粉症、蓴麻疹またはアトピー性皮膚炎等が挙げられる。
【０００３】
Ｉ型アレルギー疾患は、年々増加傾向にあり、原因細胞を活性化する抗原の種類を正確に特定できれば、抗原から隔離することでアレルギー症状の発症を予防でき、減感作治療も選択することができる。従って、その原因となる抗原を低侵襲、正確かつ迅速に特定するための技術が求められている。
【０００４】
現行でのＩ型アレルギーの診断（責任抗原特定）法では、例えば、血清を用いた検査（血清中の特異的ＩｇＥ抗体を測定する検査）、血液を用いた検査（抗原刺激による好塩基球からのヒスタミン遊離測定、ＣＤ２０３ｃやＣＤ６９等の活性化表面マーカーの検出等）、皮膚を用いた検査（皮膚反応、例えば皮内テストもしくはブリックテスト等）、または個体を用いた検査（臨床反応、例えば経口、経皮もしくは経粘膜等における誘発試験）等を挙げることができる。
【０００５】
一方、近年、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ（surface plasmon resonance））法の原理が様々な研究および検査等で利用されている。表面プラズモン共鳴とは、全反射条件で光が金属薄膜に入射するときに発生するエバネッセント光と、金属薄膜と測定対象との境界面を伝搬している自由電子の粗密波である表面プラズモンとが共鳴する現象である。表面プラズモン共鳴が発生すると、入射した光のエネルギーの少なくとも一部が表面プラズモン共鳴に移行し全反射した光の強度が低下する。光の強度が最も低下する入射角を共鳴角という。この共鳴角は、測定対象の誘電率の変化に応じて変化する。実際の研究および検査等では、このような共鳴角変化をリアルタイムでとらえ、様々な解析に利用する表面プラズモン共鳴装置を用いて実験が行われている。
【０００６】
表面プラズモン共鳴法の原理を用いて測定される対象物には細胞も含まれており、例えば特許文献１および特許文献２には、表面プラズモン共鳴装置を用いた生細胞の外部刺激に対する活性を評価する方法に関する事項が記載されている。特に、特許文献２には、個々の、またはより細部における生細胞の外部刺激に対する活性を、リアルタイムかつ高感度に分析することができる細胞活性分析装置等について記載されている。当該外部刺激については、生細胞表面の受容体に対するリガンド、温度もしくはｐＨ等の環境変化、または、機械的もしくは電気的刺激等が挙げられている。
【０００７】
本発明者らは、このような表面プラズモン共鳴法の原理を利用し、ヒト末梢血から分離した好塩基球の各種抗原に対する刺激応答における、１細胞単位での検出の成功について報告した。しかし、このような方法では、採血後１から２日内での血液での検出は可能であるものの、長期保存または血清を使用しての検出が不可能であった。そこで、最近において、ヒト−マウスキメラＩｇＥ受容体のαサブユニットを発現させた肥満細胞株（ＲＢＬ−３Ｄ４）を樹立し、患者血清に含まれるＩｇＥ抗体を感作させた後の各種抗原に対する刺激応答における、１細胞単位での検出法を開発した。この技術によると、冷凍保存した患者血清があれば検出が可能である。具体的には、当該検出は、１細胞単位毎において拡大された表面プラズモン共鳴現象による画像の解析、および輝度解析により行われた（非特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許第３７９５３１２号公報
【特許文献２】特開２０１１−１９３７５２号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】第７２回秋季応用物理学会学術講演会講演予稿集、２０１１年８月１６日発行
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかし、前述したような現行でのＩ型アレルギーの診断法、および、本発明者らが開発したＩｇＥ受容体発現細胞株と患者血清とを用いる表面プラズモン共鳴現象を利用した１細胞単位毎におけるＩ型アレルギーの検出法は、各々、問題を抱えている。
【００１１】
現行でのＩ型アレルギーの診断法である、血清または血液を用いた検査は、同時に多種類の抗原について検査できるキット等が使用されているが、それぞれの検査では、血清中の特異的ＩｇＥ抗体の量、または好塩基球からのヒスタミン遊離量を測定する。このような測定では、Ｉ型アレルギーの診断法としては正確性に欠けてしまう。
【００１２】
これは、血清を用いた検査の場合では、実際に肥満細胞および好塩基球を活性化し得るＩｇＥ抗体の量を測定しているわけではなく、また、好塩基球の活性化を利用した検査では、個体レベルではアレルゲンに対して過敏性を有していても、ヒスタミン遊離・活性化マーカーの発現を起こさない場合（non-responder）が挙げられる。
【００１３】
また、このような血清または血液を用いた検査は、一般的に、ある程度の血清または血液量を必要とし、多種類の抗原に対する検査の場合は尚更である。例えば、日立化成工業株式会社製、商品名：マストイムノシステムズアレルゲンの場合では、３３項目に対し血清２００から５００μｌが必要となる。さらに、好塩基球からのヒスタミン遊離量や表面マーカーを利用した検査では、患者自身の血液等の保存期間には限界があり、採取後数日以上経過した血液による診断は不可能である。一方、皮膚または個体を用いた検査については、前述したような診断の正確性および保存期間に関する問題は無いが、ショックの危険性を有し、患者への負担が大きい。
【００１４】
本発明者らが開発した、ＩｇＥ受容体発現細胞株と患者血清とを用いる表面プラズモン共鳴現象を利用した１細胞単位毎におけるＩ型アレルギーの検出法は、前述したとおり、冷凍保存した患者血清があれば検出が可能である。また、実際に刺激応答された１細胞単位毎におけるリアルタイムかつ高感度の解析での検出によるため、正確性も有する。しかし、検出は１細胞単位毎において取得され拡大された表面プラズモン共鳴画像の解析、および輝度解析により行われるものであり、多くの検体（多くの患者血清）に対する様々な抗原での刺激応答を診断する方法としては、非効率的であり、時間もかかってしまう。
【００１５】
本発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、冷凍保存が可能な微量検体を用いて正確に診断することができ、かつ同時に多種類の検体または抗原の組み合わせによる刺激応答を効率的に診断することができる、Ｉ型アレルギーの診断装置およびＩ型アレルギーの診断方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
上記目的を達成するため、本発明者らが鋭意研究を重ねた結果、患者の超微量血清とＩｇＥ受容体発現細胞株（ＲＢＬ−４８細胞）とをマルチウェルチップのそれぞれのウェル区画上において培養し、それぞれのウェル区画において各種抗原にて抗原刺激を行い、表面プラズモン共鳴画像を利用してそれぞれの応答を同時に解析するというＩ型アレルギーの診断方法を開発した。この方法によると、前述した検出法とは異なり、１細胞単位毎の画像および輝度解析が不要であり、マルチウェル区画単位（例えば、９ウェル区画単位）の反射光強度で以て、様々な抗原に対する刺激応答を観察・解析することが可能となる（後述の実施例および比較例参照）。これは、特異抗原のハイスループットスクリーニングに繋がる。また、同様の原理を用い、特定の抗原に対する多数の患者での同時診断も可能となる。
【００１７】
そこで、本発明の第１の態様に係るＩ型アレルギーの診断装置は、表面プラズモン共鳴現象を利用するアレルギーの診断装置であって、
投与される溶液がそれぞれの区画で隔離されるよう構成されている、少なくとも２つ以上のサンプル投与区画を有するマルチウェルと、
一方の面で前記マルチウェルの前記サンプル投与区画において接している金属薄膜と、
前記金属薄膜の他方の面に実質的に接する界面を有している屈折光学素子と、
Ｐ偏光の平行光を、前記屈折光学素子に入射させ、前記少なくとも２つ以上のサンプル投与区画を含有する範囲において表面プラズモン共鳴現象を発生させる所定の入射角で前記界面に入射させる入射手段と、
前記界面に入射した前記平行光の反射光の２次元強度分布に相当する強度像を所定の倍率に拡大または縮小する光学系と、
前記光学系で拡大または縮小された前記強度像を撮像する撮像手段と、
前記撮像手段で撮像された前記強度像の画像データを取得し表示する画像取得表示手段とを備え、
前記サンプル投与区画には、ヒトＩｇＥ受容体発現細胞株の培養液および検体が投与後培養され、抗原標準物質が投与され、かついずれか１つの前記サンプル投与区画に投与される前記検体と前記抗原標準物質との組み合わせは、他のいずれか１つの前記サンプル投与区画に投与される前記検体と前記抗原標準物質との組み合わせと異なることを特徴とする。
【００１８】
好ましくは、前記サンプル投与区画には、それぞれ、１種類の前記抗原標準物質と、それぞれ異なる前記検体との組み合わせで投与されることを特徴とする。
【００１９】
また、好ましくは、前記サンプル投与区画には、それぞれ、１種類の前記検体と、それぞれ異なる前記抗原標準物質との組み合わせで投与されることを特徴とする。
【００２０】
好ましくは、さらに、前記ヒトＩｇＥ受容体発現細胞株の培養液、前記検体、および／または、前記抗原標準物質が投与される投与手段を備えることを特徴とする。
【００２１】
より好ましくは、前記検体は、血清または精製ＩｇＥ抗体であることを特徴とする。
【００２２】
さらに好ましくは、前記血清の前記サンプル投与区画毎における量は、０．１μｌから１．０μｌであることを特徴とする。
【００２３】
好ましくは、前記ヒトＩｇＥ受容体発現細胞株は、ＲＢＬ−３Ｄ４細胞株またはＲＢＬ−４８細胞株であることを特徴とする。
【００２４】
より好ましくは、投与される前記抗原標準物質は、花粉、ハウスダスト、動物上皮、植物、ダニ、食物および汗からなる群のいずれかから選択される１つ以上のものであることを特徴とする。
【００２５】
本発明の第２の態様に係るＩ型アレルギーの診断方法は、表面プラズモン共鳴現象を利用するアレルギーの診断方法であって、
投与される溶液がそれぞれの区画で隔離されるよう構成されている、少なくとも２つ以上のサンプル投与区画を有するマルチウェルに、ヒトＩｇＥ受容体発現細胞株の培養液および検体を投与後培養する工程と、
抗原標準物質を、いずれか１つの前記サンプル投与区画に投与される前記検体と前記抗原標準物質との組み合わせが、他のいずれか１つの前記サンプル投与区画に投与される前記検体と前記抗原標準物質との組み合わせと異なるよう投与する工程と、
一方の面で前記マルチウェルの前記サンプル投与区画において接している金属薄膜の他方の面に実質的に接する界面を有している屈折光学素子に、Ｐ偏光の平行光を、前記少なくとも２つ以上のサンプル投与区画を含有する範囲において表面プラズモン共鳴現象を発生させる所定の入射角で前記界面に入射させる工程と、
前記界面に入射した前記平行光の反射光の２次元強度分布に相当する強度像を所定の倍率に拡大または縮小する工程と、
前記強度像を撮像する工程と、
撮像された前記強度像の画像データを取得し表示する工程とを備えることを特徴とする。
【００２６】
好ましくは、前記サンプル投与区画には、それぞれ、１種類の前記抗原標準物質と、それぞれ異なる前記検体との組み合わせで投与することを特徴とする。
【００２７】
また、好ましくは、前記サンプル投与区画には、それぞれ、１種類の前記検体と、それぞれ異なる前記抗原標準物質との組み合わせで投与することを特徴とする。
【００２８】
好ましくは、前記検体は、血清または精製ＩｇＥ抗体であることを特徴とする。
【００２９】
より好ましくは、前記血清の前記サンプル投与区画毎における量は、０．１μｌから１．０μｌであることを特徴とする。
【００３０】
さらに好ましくは、前記ヒトＩｇＥ受容体発現細胞株は、ＲＢＬ−３Ｄ４細胞株またはＲＢＬ−４８細胞株であることを特徴とする。
【００３１】
好ましくは、投与される前記抗原標準物質は、花粉、ハウスダスト、動物上皮、植物、ダニ、食物および汗からなる群のいずれかから選択される１つ以上のものであることを特徴とする。
【発明の効果】
【００３２】
本発明によれば、冷凍保存が可能な微量検体を用いて正確に診断することができ、かつ同時に多種類の検体または抗原の組み合わせによる刺激応答を効率的に診断することができる、Ｉ型アレルギーの診断装置およびＩ型アレルギーの診断方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】実施の形態に係るＩ型アレルギーの診断装置の構成を示す図である。
【図２】実施の形態に係るＩ型アレルギーの診断装置のマルチウェルチャンバー内の様子を示す図である。
【図３】実施例に係るマルチウェルチップの状態を示す図である。
【図４】実施例に係るスギ花粉刺激でのマルチウェルチップの反射光強度の状態を示す図である。
【図５】実施例に係る汗抗原刺激でのマルチウェルチップの反射光強度の状態を示す図である。
【図６】実施例に係る汗抗原刺激でのマルチウェルチップの反射光強度の経時的変化を示す図である。
【図７】比較例に係るダニ抗原刺激でのチップの反射光強度のイメージ画像を示す図である。
【図８】比較例に係る汗抗原刺激でのチップの反射光強度のイメージ画像を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。なお、本明細書において「有する」、「備える」、「含む」または「含有する」といった表現は、「からなる」または「から構成される」という意も含むものとする。
【００３５】
本発明の実施の形態は、表面プラズモン共鳴現象を利用する、Ｉ型アレルギーの診断装置、およびその診断方法である。図１は、実施の形態に係るＩ型アレルギーの診断装置の構成を示す図である。また、図２は、実施の形態に係るＩ型アレルギーの診断装置のマルチウェルチャンバー内の様子を示す図である。Ｉ型アレルギーの診断装置１内の空間の温度は、サーモスタット（図示せず）により、好ましくは３７℃に調節されているが、限定はされない。
【００３６】
図１に示すように、Ｉ型アレルギーの診断装置１は、光源２と、コリメーターレンズ３と、偏光板４と、プリズム５と、金属薄膜コート６と、ガラス基板７と、マルチウェルチャンバー８と、アレルゲン投与用マルチチャンバー９と、対物レンズ１０と、撮像部１１と、ＣＰＵ１２とを備えている。画像データ１３は、撮像部１１により撮像・出力され、ＣＰＵ１２にて画像を取得・表示されたマルチウェルチャンバー８全体の反射光強度像である。また、図２に示すように、マルチウェルチャンバー８は、投与される溶液等がそれぞれの区画で隔離されるよう構成されている、多数のサンプル投与区画１４を有する。以下、それぞれについて詳細に説明する。
【００３７】
光源２は、赤色から白色等のＬＥＤ光源または半導体光源等から、例えば波長が６３５〜６４０ｎｍの光を発振出力する。光源２から出力された光は、コリメーターレンズ３（またはアクロマートレンズでもよい）により平行光に変換されて、偏光板４に入射する。偏光板４は、入射した光を直線偏光の平行光に変換して出射する。この直線偏光は、後述する金属薄膜コート６とガラス基板７との間の界面Ｆに対してＰ偏光となる。この光源２とコリメーターレンズ３と偏光板４とが、入射手段に対応する。
【００３８】
プリズム５としては、例えばＳ−ＬＡＬ−１０ガラスが採用される。このガラスの屈折率は１．７２である。プリズム５は、偏光板４によりＰ偏光となった平行光を入射する。ガラス基板７についても、例えばＳ−ＬＡＬ−１０ガラスが採用される。すなわち、ガラス基板７とプリズム５とは、屈折率が同じである。例えば、両者は、屈折率１．７２のマッチングオイルによって接着される。これにより、プリズム５に入射した光は、ガラス基板７に入射し、そのまま直進する。このプリズム５とガラス基板７とが、屈折光学素子に対応する。
【００３９】
ガラス基板７上には金属薄膜コート６が成膜されている。金属薄膜コート６は、例えば金薄膜である。その他、Ａｇ、Ｃｕ、Ｚｎ、ＡｌまたはＫ等の薄膜でも、金属薄膜コート６として使用することができる。金属薄膜コート６の厚みは、例えば５０ｎｍ程度である。金属薄膜コート６は、ガラス基板７上に、例えば蒸着により成膜されている。ガラス基板７に入射した光は、ガラス基板７と金属薄膜コート６との間の界面Ｆに、全反射条件を満たし、マルチウェルチャンバー８全体の範囲（少なくとも、全てのサンプル投与区画１４を含む範囲）において、表面プラズモン共鳴現象を発生させるよう、入射する。仮に、金属薄膜コート６が設置されていない状態であれば、この光は、界面Ｆで全反射する。
【００４０】
マルチウェルチャンバー８は、前述したように、多数、例えば少なくとも２つ以上のサンプル投与区画１４を有する。図２に示すように、Ｉ型アレルギー診断時には、それぞれのサンプル投与区画１４に、予め、検体とＩｇＥ受容体発現細胞株の培養液とが混合した細胞液が滴下されており、後述するアレルゲン投与前に、これらを例えば一晩インキュベートしておく。
【００４１】
本明細書において「検体」とは、ヒト（対象患者）のＩｇＥ抗体を含む生体試料を意味し、例えば、患者の超微量血清または精製ＩｇＥ抗体である。超微量血清の場合、Ｉ型アレルギー診断の際、１サンプル投与区画１４毎に使用する血清の量は、好ましくは０．１μｌから１．０μｌ、より好ましくは０．１μｌから０．５μｌ、さらに好ましくは０．１μｌから０．３μｌである。本明細書において「ＩｇＥ受容体発現細胞株」とは、高親和性ＩｇＥ受容体のＩｇＥ結合部位を発現する細胞株を意味する。例えば、ＲＢＬ−２Ｈ３肥満細胞にヒトＩｇＥ受容体α鎖を（恒常的に）発現させたＲＢＬ−４８細胞株やＲＢＬ−３Ｄ４細胞株を挙げることができる。しかし、ホスト細胞は肥満細胞に限定されない。Ｉ型アレルギー診断の際、１サンプル投与区画１４毎に使用するヒトＩｇＥ受容体発現細胞浮遊液の量は、好ましくは１μｌから２０μｌ、より好ましくは１μｌから１０μｌ、さらに好ましくは１μｌから３μｌである。
【００４２】
図２に示すように、マルチウェルチャンバー８におけるそれぞれのサンプル投与区画１４の底部は、ガラス基板７上に蒸着された金属薄膜コート６と直接接するように構成されている。そこで、前述したように、マルチウェルチャンバー８における全てのサンプル投与区画１４を含む範囲において、表面プラズモン共鳴現象を同時に発生させるためには、前述した入射手段における光を所定の入射角で界面Ｆに入射させる必要があるが、このような入射手段に係る調整は、当業者であれば容易に実施可能であろう（特許文献２参照）。例えば、本実施の形態では、細胞が存在していない場所は暗くなり、細胞が存在している場所は少し明るくなり、存在している細胞が活性化している場合はさらに明るくなるよう、界面Ｆへの光の入射角度を共鳴角である５６°としている（特許文献２参照）。
【００４３】
アレルゲン投与用マルチチャンバー９は、マルチウェルチャンバー８におけるそれぞれのサンプル投与区画１４に対応するように、突出したノズル状のアレルゲン投与部分（滴下部分）を有している。Ｉ型アレルギー診断時には、それぞれのアレルゲン投与部分から、例えば異なる抗原標準物質が投与され、診断される。抗原標準物質には、例えば、花粉（スギ等）、ハウスダスト（ハウスダストＩＩ）、動物上皮（ネコまたはイヌ上皮等）、植物（ヨモギ等）、ダニ（コナヒョウダニ等）、食物（小麦、大豆、米、マグロ、サケ、エビ、カニ、チェダーチーズ、ミルク、牛肉、鶏肉または卵白等）および汗等を挙げることができる。なお、本明細書において「チャンバー」とは、溶液が投与されるサンプルまたはウェルの区画が隔離できるものであれば限定されず、例えばチップのようなものを使用しても構わない（実施例参照）。
【００４４】
抗原標準物質は、マルチウェルチャンバー８において検体とＩｇＥ受容体発現細胞株培養液との細胞液が滴下・培養された後、光を入射させ表面プラズモン共鳴現象を発生させる前に、投与される。なお、アレルゲン投与用マルチチャンバー９は必須要素ではない。例えば、代替として、使用者自身の手でピペットまたは注入器等を用いることにより、それぞれ異なる抗原標準物質を投与しても構わない。
【００４５】
このように、本実施の形態に係る、表面プラズモン共鳴現象の発生を利用するＩ型アレルギー診断時には、マルチウェルチャンバー８におけるそれぞれのサンプル投与区画１４に、それぞれ異なる抗原標準物質が投与されることになる。
【００４６】
界面Ｆで反射した光は、ガラス基板７およびプリズム５から出射して、対物レンズ１０に入射する。対物レンズ１０は、例えばテレセントリック対物レンズが挙げられ、必要であれば物体像を所定の倍率に拡大または縮小して像面上に結像させる。本実施の形態では、低倍率対物レンズの使用が好ましい。これは、Ｉ型アレルギーの診断装置１での解析は、本発明者らが最近において報告した前述の表現プラズモン共鳴現象を利用した１細胞単位毎における画像解析とは異なり、基本的に、検出視野を広くし、マルチウェルチャンバー８の全体の範囲毎に解析するためである。対物レンズ１０から出射された光は、撮像部１１の撮像面に到達する。
【００４７】
撮像部１１は、例えばＣＣＤイメージセンサまたはＣＭＯＳイメージセンサである。撮像部１１は、界面Ｆで反射された光を受光する。撮像部１１の撮像面と界面Ｆとは共役の関係にある。従って、撮像部１１の撮像面に、プリズム５の界面Ｆに入射した平行光の反射光の２次元強度分布に相当する強度像、すなわち反射強度像が結像する。この反射強度像は、対物レンズ１０の倍率に応じ、適宜、拡大または縮小されている。撮像部１１は、当該反射強度像を撮像し、ＣＰＵ１２にその反射強度像に相当する画像信号等を出力し、ＣＰＵ１２内のプログラムを実行することにより、画像を取得し、取得された画像データ１３を表示する。
【００４８】
このような、対物レンズ１０、撮像部１１およびＣＰＵ１２の構成は、それぞれ、拡大・縮小光学系、撮像手段および画像取得表示手段に対応する。しかし、他の変形例に係るＩ型アレルギーの診断装置１の構成としては、例えば、これらの要素の機能を全て包含しているＣＣＤカメラまたはＣＭＯＳカメラのみを代替として対応させてもよい。
【００４９】
最終的にＣＰＵ１２により表示される画像データ１３は、図１に示すように、サンプル投与区画１４が、例えば、明るい色または暗い色に識別されるマルチウェルチャンバー８の反射強度像の様子を示している。図１に示すように、基本的には、明るい色と識別される色のサンプル投与区画１４での投与された抗原標準物質は、当該検体（の患者）にとっての陽性アレルゲンであり、暗い色と識別される色のサンプル投与区画１４での投与された抗原標準物質は、当該検体（の患者）にとっての陰性アレルゲンである。
【００５０】
これは、抗原抗体反応において刺激された細胞の表面プラズモン共鳴現象の原理に基づく。具体的に説明すると、本実施の形態は、ＩｇＥ受容体発現細胞株の培養液とＩｇＥ抗体を含む検体（患者血清）との培養により、その後の様々な抗原標準物質との抗原抗体反応が、特定の検体（アレルギー患者血清）を含む場合には著しく感作され、刺激応答の識別が、１細胞毎のみではなく、それぞれのサンプル投与区画１４毎においても識別することが可能となっているためである。
【００５１】
また、そもそもサンプル投与区画１４毎に判別できることから、同時に異なる種類での抗原標準物質に対する迅速かつ効率的なＩ型アレルギー診断、すなわち特異抗原のハイスループットスクリーニングが可能となる。その上、当該表面プラズモン共鳴現象を利用する方法は、実際にアレルギーを惹起し得るＩｇＥ抗体を識別しているため、正確性も有する。さらには、前述したＩｇＥ受容体発現細胞株の存在により、サンプル投与区画１４毎に滴下する検体（例えば血清）が超微量であっても解析が可能で、かつ冷凍保存した患者血清があれば実施可能である。
【００５２】
変形例として、ＣＰＵ１２内のさらなるプログラムを実行することにより、取得したマルチウェルチャンバー８の反射強度像の画像データを一定時間間隔でサンプリングし、それぞれのサンプル投与区画１４における例えば平均輝度値を抽出し、抽出された当該サンプル投与区画１４毎の輝度値の時間変化に関する情報をグラフ化し、そのグラフの画像データについても表示できるようにしてもよい。当該グラフも用いることにより、さらに正確な刺激応答反応の差異を識別し、診断することが可能となる。
【００５３】
また、前述までの実施の形態では、それぞれのサンプル投与区画１４における、特定の検体（例えば特定の患者の超微量血清）に対する異なる抗原標準物質での同時Ｉ型アレルギー診断について述べているが、変形例として、異なる検体（例えば複数の患者の超微量血清）に対する特定の抗原標準物質での同時Ｉ型アレルギー診断としてもよい。
【００５４】
当該変形例を、前述の実施の形態を元に順を追って説明すると、まず、図２に示すマルチウェルチャンバー８のそれぞれのサンプル投与区画１４に、予め、それぞれ異なる検体（例えば複数の患者の超微量血清）とＩｇＥ受容体発現細胞株の培養液とが混合した細胞液を滴下し、アレルゲン投与前に、これらを例えば一晩インキュベートしておく。次いで、図１に示すアレルゲン投与用マルチチャンバー９のそれぞれのアレルゲン投与部分から、または、使用者自身の手でピペットまたは注入器等を用いることにより、１種類の特定の抗原標準物質をそれぞれのサンプル投与区画１４に投与する。その後、表面プラズモン共鳴現象を発生させ、それぞれの異なる検体（例えば複数の患者の超微量血清）に対する当該特定の抗原標準物質のＩ型アレルギーの同時診断を行う。
【００５５】
このような変形例におけるＩ型アレルギーの同時診断では、最終的に図１に示すＣＰＵ１２により表示される画像データ１３において、明るい色と識別される色のサンプル投与区画１４に投与・培養された検体（例えばある患者の超微量血清）は、当該特定の抗原標準物質に対して陽性であり、暗い色と識別される色のサンプル投与区画１４に投与・培養された検体（例えば別の患者の超微量血清）は、当該特定の抗原標準物質に対して陰性であることを示している。
【００５６】
さらなる変形例として、マルチウェルチャンバー８のそれぞれのサンプル投与区画１４において、それぞれ異なる検体（例えば複数の患者の超微量血清）に対するそれぞれ異なる抗原標準物質での同時Ｉ型アレルギー診断となっても構わない。また、マルチウェルチャンバー８の複数のサンプル投与区画１４において、同一の組み合わせとなる特定の検体（例えば特定の患者の超微量血清）と特定の抗原標準物質とが投与され、同時にアレルギー診断されてもよい。これは、診断の正確性をより高める目的としても有効である。
【００５７】
すなわち、本発明は、表面プラズモン共鳴現象を利用した同時Ｉ型アレルギー診断にあたり、１つのマルチウェル（マルチウェルチャンバー８）が有するいずれか１つの（ある１つの）サンプル投与区画１４に投与される検体と抗原標準物質との組み合わせが、他のいずれか１つの（残りの区画のうちのある１つの）サンプル投与区画１４に投与される検体と抗原標準物質との組み合わせと異なっていればよい。より具体的には、前述のいずれか１つのサンプル投与区画１４（以下、サンプル投与区画Ａとも言う）と他のいずれか１つのサンプル投与区画１４（以下、サンプル投与区画Ｂとも言う）以外の残りのサンプル投与区画１４での検体と抗原標準物質との組み合わせは、どのような組み合わせであってもよい。例えば、全てサンプル投与区画Ａと同様の組み合わせであっても、全てサンプル投与区画Ｂと同様の組み合わせであっても、サンプル投与区画Ａの組み合わせとサンプル投与区画Ｂの組み合わせとが混合していても、またはそれらの組み合わせとは異なる検体と抗原標準物質との組み合わせであってもよい。
【００５８】
次に、検体と抗原標準物質との組み合わせについて詳細に説明する。例えば、検体Ａ、検体Ｂ、抗原標準物質Ａおよび抗原標準物質Ｂを投与に使用する場合、検体Ａ×抗原標準物質Ａ、検体Ａ×抗原標準物質Ｂ、検体Ｂ×抗原標準物質Ａ、および、検体Ｂ×抗原標準物質Ｂの４種類の組み合わせが存在する。この場合、これらの４種類の組み合わせにおいて、前述のサンプル投与区画Ａとサンプル投与区画Ｂとが異なる組み合わせを選択していればよい。残りのサンプル投与区画１４は、それぞれどの組み合わせを選択しても構わない。また、例えば、検体Ａ、抗原標準物質Ａおよび抗原標準物質Ｂを投与に使用する場合、検体Ａ×抗原標準物質Ａ、および、検体Ａ×抗原標準物質Ｂの２種類の組み合わせが存在する。この場合、前述のサンプル投与区画Ａとサンプル投与区画Ｂは互いに異なるよう、どちらかの組み合わせを選択する。残りのサンプル投与区画１４は、どちらの組み合わせを選択してもよい。また、検体Ａ、検体Ｂおよび抗原標準物質Ａを投与に使用する場合においても同様に、検体Ａ×抗原標準物質Ａ、および、検体Ｂ×抗原標準物質Ａの２種類の組み合わせが存在し、前述のサンプル投与区画Ａとサンプル投与区画Ｂは互いに異なるようどちらかの組み合わせを選択する。同様に、残りのサンプル投与区画１４は、どちらの組み合わせを選択してもよい。
【実施例】
【００５９】
以下、実施例および比較例を用いて本発明をより詳細に説明するが、実施例および比較例は本発明を限定するものではない。
【００６０】
（実施例）
実施例では、マルチウェルチップを使用する表面プラズモン共鳴現象を利用したＩ型アレルギーの診断装置およびその方法に係る例について、詳細に説明する。
【００６１】
実施例では、サーモスタットと、６４０ｎｍ波長のＬＥＤ光源の光源２と、コリメーターレンズ３と、偏光板４と、プリズム５（Ｓ−ＬＡＬ−１０、屈折率１．７２）と、金属薄膜コート６（５０ｎｍ）を蒸着したガラス基板７（Ｓ−ＬＡＬ−１０、屈折率１．７２）と、０．６倍テレセントリックレンズの対物レンズ１０と、ＣＭＯＳカメラ（撮像部１１およびＣＰＵ１２）とにより光学的に構成される装置を使用した。このような光学仕様とすることにより、直径１０ｍｍ以上の平行光を入射することができ、１０ｍｍ以上の視野をそのまま観察することができる。
【００６２】
マルチウェルチャンバー８には、９ウェル区画（サンプル投与区画１４）を有するマルチウェルチップを使用した。図３は、実施例に係るマルチウェルチップの状態を示す図である。図３に示すように、マルチウェルチップは、金属薄膜コート６（金薄膜コート、５ｎｍＣｒ＋４５ｎｍＡｕ）が蒸着したガラス基板７を２０×２０×１ｍｍの大きさとしたＳ−ＬＡＬ−１０ガラススライド上に、９ウェル区画分の穴が開いている１０×１０ｍｍの撥水膜を一体化し作製したものである（大阪真空工業作製）。以下、このように、金属薄膜コート６とガラス基板７と撥水膜とが一体化し作製されたものについても、マルチウェルチップとして言及する。
【００６３】
ＩｇＥ受容体発現細胞株は、ＲＢＬ−４８細胞株を使用した。ＲＢＬ−４８細胞は、ＲＢＬ−２Ｈ３（Rat basophilic leukemia）細胞に、ヒトＦｃεＲＩ（ＩｇＥ受容体）α鎖を発現させた細胞であり、Dr. Joko Kochan（Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ, USA）から提供頂いたものを使用した（CONSERVATION OF SIGNAL TRANSDUCTION MECHANISMS VIA THE HUMAN FceRIα AFTER TRANSFECTION INTO A RAT MAST CELL LINE, RBL 2H3、ALASDAIR M., et. al.、THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY、Vol. 149. 2445-2451. No. 7、October 1, 1992参照）。
【００６４】
検体には後述する様々な患者等のヒト血清を使用した。ヒト血清は、ヒト抹消血から血清分離封入採血管（テルモ株式会社製）を使用して分離した。
【００６５】
まず、ＲＢＬ−４８細胞を、１０％のウシ胎児血清（ＦＣＳ）、ペニシリン、ストレプトマイシンおよびＧ４１８を含むＩＭＤＭ培地でフラスコ内において培養しておいた。その後、培養したＲＢＬ−４８細胞を回収するためトリプシン処理を行い、ＲＢＬ−４８細胞をＩＭＤＭ中で１０５cell／ｍｌとなるよう調整した。
【００６６】
次いで、調整した細胞液３μｌ当たり、０．１μｌのヒト血清を加えた。当該ヒト血清は、実施例では対比血清を含め４種類のヒト血清を使用した。使用したヒト血清は、花粉症（スギ陽性）患者血清および非アレルギー患者血清、ならびに健常人血清およびアトピー性皮膚炎（汗抗原陽性）患者血清である。それぞれの血清を加え、血清が加えられた４種類の細胞液を調製した。
【００６７】
花粉症（スギ陽性）患者血清もしくは非アレルギー患者血清を加えた細胞液を、作製したマルチウェルチップの上下３ウェル区画に、それぞれ３μｌずつスポットした。また、健常人血清もしくはアトピー性皮膚炎（汗抗原陽性）患者血清を加えた細胞液も、作製した別のマルチウェルチップの上下３ウェル区画にそれぞれ３μｌずつスポットした。その後、それぞれのマルチウェルチップについて、ＣＯ２インキュベータ内におけるオーバーナイトインキュベーションを行った（４から１２時間程度）。
【００６８】
インキュベート後、それぞれのマルチウェルチップを、前述したような光学的構成の装置に配置し、ランニングバッファー（ＰＩＰＥＳ buffer）を流し培養液を置換した。次いで、それぞれのマルチウェルチップにおいて、スギ花粉または汗抗原を投与し、抗原刺激を行った。その後、ＣＭＯＳカメラによって得られた画像によって反射光強度を観察し、また、経時的な画像の輝度解析も行った。
【００６９】
図４は、実施例に係るスギ花粉刺激でのマルチウェルチップの反射光強度の状態を示す図であり、スギ花粉刺激前と刺激後（３０分後）の反射光強度の状態が示されている。図４に示すように、上３ウェル区画は花粉症（スギ陽性）患者血清を加えたものであり、刺激後（３０分後）には、当該血清中のＩｇＥ抗体により感作された多数の刺激応答細胞のため、表面プラズモン共鳴現象での反射光強度が強くなり、明るくなっている様子が見てとれる。一方、下３ウェル区画は非アレルギー患者血清を加えたものであるため、刺激後（３０分後）であってもあまり変化は見られない。なお、中３ウェル区画は、細胞を培養せずに実施したものである。
【００７０】
図５は、実施例に係る汗抗原刺激でのマルチウェルチップの反射光強度の状態を示す図であり、汗抗原刺激前と刺激後（３０分後）の反射光強度の状態が示されている。図５に示すように、下３ウェル区画はアトピー性皮膚炎（汗抗原陽性）患者血清を加えたものであり、刺激後（３０分後）には、当該血清中のＩｇＥ抗体により感作された多数の刺激応答細胞のため、表面プラズモン共鳴現象での反射光強度がより強くなり、明るくなっている様子が見てとれる。一方、上３ウェル区画は健常人血清を加えたものであるため、刺激後（３０分後）であってもあまり変化は見られない。なお、中３ウェル区画は、細胞を培養せずに実施したものである。
【００７１】
また、図６は、実施例に係る汗抗原刺激でのマルチウェルチップの反射光強度の経時的変化を示す図である。図６において、アトピー患者血清入りのグラフは、図５に示す下３ウェル区画での反射光強度の平均値における時間変化を示し、非アトピー患者血清入りのグラフは、図５に示す上３ウェル区画毎での反射光強度の平均値における時間変化を示している。ＱＲは汗抗原刺激時を示す。このように、各ウェル区画の反射光強度変化をプロットしたグラフを作成すると、より正確な反応がわかり、変化の程度において過敏性の強弱もわかり得る。
【００７２】
（比較例）
比較例では、１細胞単位毎での表面プラズモン共鳴現象を利用したＩ型アレルギーの診断方法に係る例について、詳細に説明する。
【００７３】
比較例では、サーモスタットと、６３０ｎｍ波長のダイオードレーザー光源（光源２）と、偏光板４と、プリズム５（Ｓ−ＬＡＬ−１０、屈折率１．７２）と、金属薄膜コート６（５０ｎｍ）を蒸着したガラス基板７（Ｓ−ＬＡＬ−１０、屈折率１．７２）と、４倍の対物レンズ１０と、ＣＭＯＳカメラ（撮像部１１およびＣＰＵ１２）とにより光学的に構成される装置を使用した。
【００７４】
比較例における装置では、前述の実施例における装置と比べ、光源２の波長、コリメーターレンズ３の有無、および対物レンズ１０の倍率について、差異を有する。このうち、コリメーターレンズ３の有無および対物レンズ１０の倍率に係る差異は、光照射対象の範囲および検出視野に係る差異によるものである。すなわち、前述の実施例では光照射範囲を広く、かつ検出視野も広くする必要があったが、１細胞単位毎の画像解析である比較例では、逆に、光照射範囲および検出視野を狭め、かつ反射強度像をある程度拡大する必要がある。
【００７５】
さらに比較例では、マルチウェルチップではなく、一般的な表面プラズモン共鳴装置において使用されるチップ（１種類の細胞液を滴下（スポット）するもの）を使用した。なお、ＩｇＥ受容体発現細胞株であるＲＢＬ−４８細胞株の使用、および検体としての患者血清の使用については実施例と同様である。
【００７６】
まず、実施例と同様に、ＲＢＬ−４８細胞を、１０％のウシ胎児血清（ＦＣＳ）、ペニシリン、ストレプトマイシンおよびＧ４１８を含む、ＩＭＤＭ培地で培養フラスコ内で培養しておいた。その後、培養したＲＢＬ−４８細胞を回収するためトリプシン処理を行い、ＲＢＬ−４８細胞をＩＭＤＭ中で１０５cell／ｍｌとなるよう調整した。
【００７７】
次いで、調整した細胞液３００μｌ当たり、１０μｌのヒト血清を加えた。比較例では、アトピー性皮膚炎（ダニ陽性）患者血清と、アトピー性皮膚炎（汗抗原陽性）患者血清の、２種類のヒト血清を使用し、それぞれについて抗原刺激における表面プラズモン共鳴現象での画像解析の実験を行った。それぞれの血清を加えた細胞液を、前述したチップ上に１００μｌスポットし、その後、それぞれのチップについて、ＣＯ２インキュベータ内におけるオーバーナイトインキュベーションを行った（４から１２時間程度）。
【００７８】
インキュベート後、それぞれのチップを、前述したような比較例に係る光学的構成の装置に配置し、ランニングバッファー（ＰＩＰＥＳ buffer）を流し培養液を置換した。次いで、それぞれのチップについて、ダニ抗原または汗抗原を投与し、抗原刺激を行った。その後、ＣＭＯＳカメラによって得られた反射光強度のイメージ画像を観察した。
【００７９】
図７は、比較例に係るダニ抗原刺激でのチップの反射光強度のイメージ画像を示す図であり、ダニ抗原刺激前と刺激後（３０分後）の反射光強度のイメージ画像が示されている。図７に示すように、刺激前と刺激後（３０分後）とを比較すると、１細胞レベルでそれぞれの細胞の反射光強度が強くなっている様子、すなわち、１細胞レベルでのアトピー性皮膚炎（ダニ陽性）患者血清感作ＲＢＬ−４８細胞の様子を観察することができた。なお、図示していないが、アトピー性皮膚炎（ダニ陽性）患者血清を加えていない場合で同実験を行うと、刺激後（３０分後）においても刺激前とあまり変化は見られなかった。
【００８０】
図８は、比較例に係る汗抗原刺激でのチップの反射光強度のイメージ画像を示す図であり、汗抗原刺激前と刺激後（３０分後）の反射光強度のイメージ画像が示されている。図８では図７と同様に、刺激前と刺激後（３０分後）とを比較すると、１細胞レベルでそれぞれの細胞の反射光強度が強くなっている様子、すなわち、１細胞レベルでのアトピー性皮膚炎（汗抗原陽性）患者血清感作ＲＢＬ−４８細胞の様子を観察することができた。なお、図示していないが、アトピー性皮膚炎（汗抗原陽性）患者血清を加えていない場合で同実験を行うと、刺激後（３０分後）においても刺激前とあまり変化は見られなかった。
【００８１】
しかし、このような比較例による１細胞レベルでの観察は、１細胞毎の変化を細部に至り解析することには適しているが、複数の患者血清における反応、または異なる抗原刺激に対する反応の差異を同時に観察することは困難である。また、必要血清量もチップの大きさに依存してくるため、一般的に１０μｌ程度は必要と考えられる。特に、Ｉ型アレルギー診断の医療分野においては、同時に複数の患者または多種類の抗原による刺激応答を検出できる効率的な診断が求められるため、このような方法では非効率と考えられる。
【００８２】
従って、Ｉ型アレルギー診断においては、前述の実施例にて述べたような、冷凍保存が可能な超微量患者血清（検体）を用いて正確に診断することができ、かつ同時に多種類の患者血清（検体）または各種抗原の組み合わせによる刺激応答を効率的に診断することができる装置での解析が、最も有益であることがわかる。
【００８３】
他に定義しない限り、本明細書中で用いるすべての技術用語等は、本発明が属する分野の当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書中に記載されるものと同様のまたは等しい方法および材料を本発明の実施または試験に用いることができる。本明細書中に言及するすべての公開物、特許出願、特許および他の参考文献は、参照として全体が組み入れられる。相反の場合、定義を含む本明細書が優先する。さらに、材料、方法および具体例は単に例示的なものであり、限定することを意図していない。
【００８４】
本発明は、上記発明の実施の形態および実施例の説明に何ら限定されるものではない。特許請求の範囲の記載を逸脱せず、当業者が容易に想到できる範囲で種々の変形態様もこの発明に含まれる。
【産業上の利用可能性】
【００８５】
本発明に係るＩ型アレルギーの診断装置および方法によれば、冷凍保存が可能な微量検体（超微量患者血清）を用いて正確にＩ型アレルギー診断を行うことができ、かつ同時に多種類の検体または抗原の組み合わせによる刺激応答を効率的に診断することができるため、対象患者の特異抗原のハイスループットスクリーニング、さらには特定の抗原に対する多数の患者での同時アレルギー診断にも繋がる。
【符号の説明】
【００８６】
１  Ｉ型アレルギーの診断装置
２  光源
３  コリメーターレンズ
４  偏光板
５  プリズム
６  金属薄膜コート
７  ガラス基板
８  マルチウェルチャンバー
９  アレルゲン投与用マルチチャンバー
１０  対物レンズ
１１  撮像部
１２  ＣＰＵ
１３  画像データ
１４  サンプル投与区画
【図１】
2014169880.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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