(57)【要約】【課題】粘膜投与で高い細胞性免疫誘導効果を発揮するワクチン組成物を提供すること。【解決手段】本発明は、（ｉ）抗原；ならびに（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤を含む、細胞性免疫誘導のための粘膜投与用ワクチン組成物を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）抗原；ならびに
（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤
を含む、細胞性免疫誘導のための粘膜投与用ワクチン組成物。
【請求項２】
細胞性免疫誘導促進剤が、ヘルパーペプチドである、請求項１のワクチン組成物。
【請求項３】
細胞性免疫誘導促進剤が、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上と、ヘルパーペプチドとの組み合わせである、請求項１のワクチン組成物。
【請求項４】
抗原が、サバイビン２Ｂペプチドおよび／または改変サバイビン２Ｂペプチド、ＧＰＣ３ペプチドおよび／または改変ＧＰＣ３ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＩＰＥＰ８７ペプチドおよび／または改変ＩＰＥＰ８７ペプチド、ＰＲ１ペプチドおよび／または改変ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、ＨＢＶｅｎｖペプチドおよび／または改変ＨＢＶｅｎｖペプチド、ならびにＭＵＣ１ペプチドおよび／または改変ＭＵＣ１ペプチドからなる群より選択されるペプチドである請求項１〜３のいずれかのワクチン組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬組成物、より具体的にはワクチン組成物に関する。さらに具体的には、本発明は、粘膜投与用ワクチン組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に広く使用されているワクチンは、免疫を誘導するために、微生物もしくはウイルス等の病原体またはその一部を投与するものである。この他にも、癌細胞特異的抗原を細胞性免疫機構に認識させ、免疫系による癌細胞への特異的な攻撃を誘導することを目的とした癌ワクチンがあり、癌治療手段の一つとして用いられている。
【０００３】
通常、微生物やウイルスはそのサイズの為に皮膚によって侵入が阻止されるため、ワクチンは、侵襲的に体内に投与される必要がある。したがって、免疫には注射が一般的に利用される。しかし、注射には、痛み、恐怖心、注射痕およびそれに続く瘢痕化、医療従事者にしか許されていないこと、免疫効果の高い皮内注射は投与手技が難しいこと、医療従事者の針刺し感染事故のリスクがあること、繰返し投与を行う場合は通院が患者の生活の負担となること、注射針など特殊廃棄の必要な医療廃棄物が生じること等の問題があるため、それは必ずしも最適な投与経路とはいえない。
【０００４】
ワクチンの投与経路としては皮下または皮内注射が最も一般的であるが、これ以外にも様々な投与経路、例えば経皮投与（特許文献１および非特許文献１）、頬側投与、経鼻投与、舌下投与等（非特許文献２、特許文献２および特許文献３）による免疫誘導が試みられている。
【０００５】
注射による免疫において一般的に使用されるアジュバントとしては、水酸化アルミニウムやリン酸アルミニウム、塩化アルミニウムのようなアルミニウム塩、ＭＦ５９やＡＳ０３といったスクワレンを含むエマルション等が実用化されており、これら以外にも鞭毛成分や核酸、サイトカイン、カチオンポリマー、ポリペプチド等が広く検討されている。注射以外の経路、例えば経皮投与や経粘膜投与による免疫において検討されているアジュバントとしては、水酸化アルミニウムやリン酸アルミニウム、塩化アルミニウムのようなアルミニウム塩、コレラトキシンや大腸菌易熱性毒素のような毒素類等が挙げられるが、実用化には至っていない。これらはそのほとんどがウイルス、細菌等からの感染症予防の為に抗体を産生させる液性免疫を誘導させるアジュバントとして用いられている。一方、細胞性免疫誘導に限れば、注射においては、フロイントアジュバント、モンタナイド、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γが検討されているが、実用化には至っておらず、経皮投与や粘膜投与においてもコレラトキシンや大腸菌易熱性毒素のような毒素類、核酸類でわずかな報告がある程度である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許出願公開ＵＳ２００８／０１９３４８７号
【特許文献２】特表２００２−５３１４１５号公報
【特許文献３】米国特許出願公開ＵＳ２００８／０１１２９７４号
【特許文献４】特表平７−５０５８８３号公報
【特許文献５】特表２００７−５２９５３１号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｈｏｓｏｉ  Ａｋｉｈｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ６８，  ３９４１−３９４９  （２００８）
【非特許文献２】Ｚｈｅｎｇｒｏｎｇ  Ｃｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  Ｖｏｌ．１９，  Ｎｏ．７，  ９４７−９５３  （２００２）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
注射に関する種々の問題点を解決する一つの手段として粘膜投与が考えられた。しかし、抗原の粘膜投与による細胞性免疫誘導において用い得る有効な細胞性免疫誘導促進剤はほとんど報告されておらず、特に抗原がペプチドの場合には、粘膜投与による細胞性免疫誘導自体が報告されていない。粘膜投与では注射と比較して十分な細胞性免疫誘導効果が得られない場合もある。
【０００９】
そこで、本発明は、粘膜投与で高い細胞性免疫誘導効果を発揮するワクチン組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、抗原の粘膜投与による免疫誘導において様々な抗原に対して普遍的に使用可能な細胞性免疫誘導促進剤を含み、粘膜投与で高い細胞性免疫誘導効果を発揮するワクチン組成物を提供する。
本発明の一つの態様において、抗原の粘膜投与による細胞性免疫誘導は、抗原と共に特定の細胞性免疫誘導促進剤を用いることによって増強される。具体的には、粘膜投与用ワクチン組成物において、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチド、免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤を用いることにより、粘膜投与において高い細胞性免疫誘導効果が得られる。
【００１１】
したがって本発明は、以下に列挙する態様を提供する：
（１）（ｉ）抗原；ならびに（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤を含む、細胞性免疫誘導のための粘膜投与用ワクチン組成物；
（２）細胞性免疫誘導促進剤がＴＬＲリガンドである、（１）のワクチン組成物；
（３）細胞性免疫誘導促進剤が環状ジヌクレオチドである、（１）のワクチン組成物；
（４）細胞性免疫誘導促進剤が免疫調節低分子薬物である、（１）のワクチン組成物；
（５）細胞性免疫誘導促進剤がヘルパーペプチドである、（１）のワクチン組成物；
（６）細胞性免疫誘導促進剤がＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上と、ヘルパーペプチドとの組み合わせである、（１）のワクチン組成物；および
（７）抗原が、サバイビン２Ｂペプチドおよび／または改変サバイビン２Ｂペプチド、ＧＰＣ３ペプチドおよび／または改変ＧＰＣ３ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＩＰＥＰ８７ペプチドおよび／または改変ＩＰＥＰ８７ペプチド、ＰＲ１ペプチドおよび／または改変ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、ＨＢＶｅｎｖペプチドおよび／または改変ＨＢＶｅｎｖペプチド、ならびにＭＵＣ１ペプチドおよび／または改変ＭＵＣ１ペプチドからなる群より選択されるペプチドである、（１）〜（６）のワクチン組成物。
【００１２】
別の態様において、本発明のワクチン組成物は、疾患の処置または予防のために使用することができる。したがって本発明は、次に列挙する態様も提供する：
（８）治療上有効量の（ｉ）癌抗原、ならびに（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤を対象に粘膜投与することを含む、癌の処置または予防方法；
（９）癌抗原が、サバイビン２Ｂペプチドおよび／または改変サバイビン２Ｂペプチド、ＧＰＣ３ペプチドおよび／または改変ＧＰＣ３ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＰＲ１ペプチドおよび／または改変ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、ならびにＭＵＣ１ペプチドおよび／または改変ＭＵＣ１ペプチドからなる群より選択される癌抗原ペプチドである、（８）の方法；
（１０）治療上有効量の（ｉ）ウイルス抗原、ならびに（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤を対象に粘膜投与することを含む、ウイルス性疾患の処置または予防方法；および
（１１）ウイルス抗原が、ＩＰＥＰ８７ペプチドおよび／または改変ＩＰＥＰ８７ペプチドならびにＨＢＶｅｎｖペプチドおよび／または改変ＨＢＶｅｎｖペプチドからなる群より選択されるペプチドである、（１０）の方法。
【００１３】
別の態様において、本発明は、抗原の粘膜投与用細胞性免疫誘導促進剤として使用するための、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチド、免疫調節低分子薬物、またはそれらの２種以上の組合せも提供する。したがって、本発明は、次の態様も提供する：
（１２）抗原の粘膜投与による細胞性免疫誘導において細胞性免疫誘導促進剤として使用するための、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチド、免疫調節低分子薬物、またはそれらの２種以上の組合せ。
【００１４】
また、本発明は、以下に記載する態様も提供する：
（１３）（ｉ）抗原、ならびに（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤を粘膜投与することを含む、細胞性免疫誘導方法；
（１４）抗原の粘膜投与による細胞性免疫誘導の促進のために使用するための、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチド、免疫調節低分子薬物、またはそれらの２種以上の組合せ；
（１５）抗原の粘膜投与による細胞性免疫誘導のために使用するための、（ｉ）抗原と（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤との組合せ；
（１６）癌の処置または予防に用いるための、（ｉ）癌抗原と（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤との組合せであって、粘膜投与されるものである組合せ；
（１７）ウイルス性疾患の処置または予防に用いるための、（ｉ）ウイルス抗原と（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤との組合せであって、粘膜投与されるものである組合せ；
（１８）細胞性免疫誘導のための粘膜投与用ワクチン組成物の製造における、（ｉ）抗原、ならびに（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤の使用；
（１９）癌の処置または予防のための粘膜投与用ワクチン組成物の製造における、（ｉ）癌抗原、ならびに（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤の使用； および
（２０）ウイルス性疾患の処置または予防のための粘膜投与用ワクチン組成物の製造における、（ｉ）ウイルス抗原、ならびに（ｉｉ）ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤の使用。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のワクチン組成物は、粘膜投与（特に経鼻投与、舌下粘膜を含む口腔粘膜投与）が可能であるため、優れたコンプライアンス、例えば非侵襲的投与、無痛、注射の恐怖からの解放、投与が簡便なため患者が自ら投与可能であり、医療従事者の針刺し感染事故のリスクも回避でき、繰返し投与を行う場合の通院頻度の低減が可能となり患者の生活の質の向上に貢献でき、注射針のような特殊廃棄の必要な医療廃棄物が生じないという利点を有する。さらに、本発明のワクチン組成物の効能が、抗原の単独投与と比較して、顕著に向上するという利点も有する。更に、注射投与と比較して本発明のワクチン組成物の粘膜投与は、強い免疫を誘導可能であるという利点も有する。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明がより容易に理解されるように、本明細書で用いる用語を以下に定義する。定義のない用語は、特に文脈が異なることを示唆しない限り、当業者、特に医学、薬学、免疫学、細胞生物学、生化学、高分子化学等の分野における当業者が通常理解する意味を有する。
【００１７】
Ｉ．定義
本明細書において使用するとき、用語「抗原」は、免疫応答を誘導し得るあらゆる物質を意味し、例えばタンパク質、ペプチド等が挙げられる。抗原の粘膜透過性が求められる粘膜投与においては、分子量の小さい抗原を用いることが好ましく、例えば約８〜約１２個のアミノ酸からなるペプチドを用いることができる。本発明においては、例えば、以下に記載するサバイビン２Ｂペプチド、ＧＰＣ３ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＩＰＥＰ８７ペプチド、ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、ＨＢＶｅｎｖペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ  Ｅ７５ペプチド、ＭＵＣ１ペプチド等を抗原として用いることができる。一実施態様では、本発明のワクチン組成物において用いる抗原は、癌ワクチン用途のＨＥＲ２／ｎｅｕ  Ｅ７５ペプチド、癌ワクチン用途の改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ  Ｅ７５ペプチド、癌ワクチン用途のＷＴ１ペプチド、および癌ワクチン用途の改変ＷＴ１ペプチドからなる群より選択される１種以上のペプチドを除くものである。一実施態様では、本発明のワクチン組成物において用いる抗原は、癌ワクチン用途のＨＥＲ２／ｎｅｕ  Ｅ７５ペプチドおよび／または癌ワクチン用途の改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ  Ｅ７５ペプチドからなる群より選択される１種以上のペプチドを除くものである。
【００１８】
本明細書において使用するとき、用語「サバイビン２Ｂペプチド」は、配列Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ａｌａ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｔｈｒ  Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ（配列番号１）からなる、癌遺伝子産物サバイビン由来のペプチドを意味する。
【００１９】
本明細書において使用するとき、用語「ＧＰＣ３ペプチド」は、配列Ｇｌｕ  Ｔｙｒ  Ｉｌｅ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ（配列番号２）からなる、癌遺伝子産物ＧＰＣ３由来のペプチドを意味する。
【００２０】
本明細書において使用するとき、用語「ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド」は、配列Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ  Ｐｒｏ  Ｔｈｒ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ（配列番号３）からなる、癌遺伝子産物ＨＥＲ２／ｎｅｕ由来のＨＬＡ−Ａ２４拘束性ペプチドを意味する。
【００２１】
本明細書において使用するとき、用語「ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド」は、配列Ｉｌｅ  Ｍｅｔ  Ｐｒｏ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｉｌｅ（配列番号４）からなる、癌遺伝子産物ＭＡＧＥ３由来のＨＬＡ−Ａ２４拘束性ペプチドを意味する。
【００２２】
本明細書において使用するとき、用語「ＩＰＥＰ８７ペプチド」は、配列Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ｍｅｔ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｉｌｅ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ｖａｌ（配列番号５）からなる、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）タンパク質由来のペプチドを意味する。
【００２３】
本明細書において使用するとき、用語「ＰＲ１ペプチド」は、配列Ｖａｌ  Ｌｅｕ  Ｇｌｎ  Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ａｓｎ  Ｖａｌ  Ｔｈｒ  Ｖａｌ（配列番号６）からなる、癌遺伝子産物プロテイナーゼ‐３由来のペプチドを意味する。
【００２４】
本明細書において使用するとき、用語「ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド」は、配列Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｖａｌ（配列番号７）からなる、癌遺伝子産物ＨＥＲ２／ｎｅｕ由来のＨＬＡ−Ａ０２拘束性ペプチドを意味する。
【００２５】
本明細書において使用するとき、用語「ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド」は、配列Ｌｙｓ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ｇｌｕ  Ｉｌｅ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ｐｈｅ  Ｌｅｕ（配列番号８）からなる、癌遺伝子産物ＭＡＧＥ３由来のＨＬＡ−Ａ０２拘束性ペプチドを意味する。
【００２６】
本明細書において使用するとき、用語「ＨＢＶｅｎｖペプチド」は、配列Ｔｒｐ  Ｌｅｕ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｖａｌ  Ｐｒｏ  Ｐｈｅ  Ｖａｌ（配列番号９）からなる、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）のタンパク質由来のペプチドを意味する。
【００２７】
本明細書において使用するとき、用語「ＨＥＲ２／ｎｅｕ  Ｅ７５ペプチド」は、配列Ｌｙｓ  Ｉｌｅ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｌｅｕ（配列番号１０）からなる、癌遺伝子ＨＥＲ２／ｎｅｕの産物（ＨＥＲ２タンパク質）に由来するペプチドを意味する。
【００２８】
本明細書において使用するとき、用語「ＭＵＣ１ペプチド」は、配列Ｓｅｒ  Ｔｈｒ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ａｓｎ  Ｖａｌ（配列番号１１）からなり、多くの癌細胞上に高発現する糖タンパクであるＭＵＣ１タンパクに由来するペプチドを意味する。  
【００２９】
本明細書において使用するとき、用語「ＷＴ１ペプチド」は、癌遺伝子ＷＴ１（Ｗｉｌｍ’ｓ腫瘍）の産物であるＷＴ１蛋白が断片化された、約８〜約１５個、好ましくは約８〜約１２個のアミノ酸からなる部分ペプチドを意味し、Ｄｂ１２６ペプチドやＤｂ２３５ペプチド（いずれも特許第４４２２９０３号公報に記載）等がこれに含まれる。また、ＷＯ２０００／０６６０２にて開示されているＷＴ１産物の部分ペプチド、ＷＯ２００５／０９５５９８に記載のＷＴ１由来ＨＬＡ−Ａ２６結合性癌抗原ペプチド、ＷＯ２００７／０９７３５８に記載のＨＬＡ−Ａ＊３３０３拘束性ＷＴ１ペプチド、およびＷＯ２００８／０８１７０１に記載のＨＬＡ−Ａ＊１１０１拘束性ＷＴ１ペプチドも本明細書にいう「ＷＴ１ペプチド」に含まれる。
【００３０】
本明細書において使用するとき、用語「改変ＸＸペプチド」（ＸＸは任意のペプチドの名称）とは、ＸＸペプチドの全部または一部のアミノ酸が置換や修飾等により改変されたペプチドを意味する。
改変ＸＸペプチドには、例えば、
（ａ）ＸＸペプチドのアミノ酸配列において、１個から数個、例えば１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸が置換、欠失または付加されたアミノ酸配列からなるペプチド；および
（ｂ）ＸＸペプチドのアミノ酸配列において、全部または一部のアミノ酸、例えば１個または複数個、例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個のアミノ酸が修飾されたアミノ酸配列からなるペプチド
が含まれる。
改変ＸＸペプチドが有し得るアミノ酸の「修飾」としては、これらに限定されないが、例えば、アセチル化、メチル化などのアルキル化、グリコシル化、ヒドロキシル化、カルボキシル化、アルデヒド化、リン酸化、スルホニル化、ホルミル化、ミリストイル化やパルミトイル化やステアロイル化のような脂肪鎖付加修飾、オクタノイル化、エステル化、アミド化、脱アミド化、シスチン修飾やグルタチオン修飾やチオグリコール酸修飾のようなジスルフィド結合形成修飾、糖化、ユビキチン化、スクシンイミド形成、グルタミル化、プレニル化等が挙げられる。改変ＸＸペプチドは、１個以上のアミノ酸の置換、欠失または付加と、１個以上のアミノ酸の修飾を組み合わせて含むものであってもよい。
【００３１】
好ましい態様において、本発明の粘膜投与用ワクチン組成物が含有する抗原は、サバイビン２Ｂペプチドおよび／または改変サバイビン２Ｂペプチド、ＧＰＣ３ペプチドおよび／または改変ＧＰＣ３ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＩＰＥＰ８７ペプチドおよび／または改変ＩＰＥＰ８７ペプチド、ＰＲ１ペプチドおよび／または改変ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、ＨＢＶｅｎｖペプチドおよび／または改変ＨＢＶｅｎｖペプチド、ならびにＭＵＣ１ペプチドおよび／または改変ＭＵＣ１ペプチドからなる群より選択されるペプチドである。あるいは、抗原としてＨＥＲ２／ｎｅｕ  Ｅ７５ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ  Ｅ７５ペプチドを用いてもよい。
【００３２】
上に列挙したペプチドは、遊離形または薬理学的に許容される任意の塩形、例えば酸塩（酢酸塩、ＴＦＡ塩、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、シュウ酸塩、臭化水素酸塩、コハク酸塩、硝酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、プロピオン酸塩、蟻酸塩、安息香酸塩、ピクリン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ドデシル硫酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、グルタル酸塩、種々のアミノ酸塩など）、金属塩（アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩）、アルミニウム塩など）、アミン塩（トリエチルアミン塩、ベンジルアミン塩、ジエタノールアミン塩、ｔ−ブチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、アルギニン塩、ジメチルアンモニウム塩、アンモニウム塩など）の形態でありうる。好ましい薬理学的に許容される塩は、酢酸塩またはＴＦＡ塩である。本発明において抗原として用い得る上記のペプチドは、周知の方法で合成または産生し、単離および精製したものを用いることができる。
【００３３】
本明細書において使用するとき、用語「細胞性免疫誘導促進剤」は、共に投与された抗原の細胞性免疫を誘導する効率を、それなしでの効率と比較して、改善しうるあらゆる物質を意味するものであり、細胞性免疫誘導を促進する作用機構によって限定されないが、本願明細書で特定されたものを意味する。
【００３４】
本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲリガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のリガンドを意味し、例えばＴＬＲ１〜９のリガンドを含む。ＴＬＲリガンドとしては、ＴＬＲ１およびＴＬＲ２のヘテロダイマーのリガンド（ＴＬＲ１／２リガンド）、ＴＬＲ２およびＴＬＲ６のヘテロダイマーのリガンド（ＴＬＲ２／６リガンド）、ＴＬＲ２およびＤｅｃｔｉｎ１のリガンド、ＴＬＲ３のリガンド、ＴＬＲ４のリガンド、ＴＬＲ５のリガンド、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８のリガンド、ＴＬＲ９のリガンドなどが挙げられ、いずれも本発明において細胞性免疫誘導促進剤として用いることができる。本発明の好ましい態様において、ＴＬＲリガンドは、ＴＬＲ１／２リガンド、ＴＬＲ３リガンド、ＴＬＲ４リガンド、ならびにＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンドからなる群より選択されるものである。
【００３５】
本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ１／２リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）１及びＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）２のヘテロダイマーのリガンドを意味し、例えば細菌の細胞壁由来のトリアシル化リポタンパク及びその塩が含まれるが、これらは抽出物、生成物または合成品であってもよく、またこれらに限定されない。
【００３６】
本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ１／２リガンドは、Ｐａｍ３ＣＳＫ４である。Ｐａｍ３ＣＳＫ４は、式
【化１】
2014169275.tif 000002
を有する。
【００３７】
本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ２リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）１及びＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）２のヘテロダイマー中のＴＬＲ２、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）６及びＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）２のヘテロダイマー中のＴＬＲ２、これら双方に作用するリガンドを意味する。ＴＬＲ２リガンドには例えば細菌の細胞壁由来のリポタイコ酸、ペプチドグリカン及びその塩が含まれるが、これらは抽出物、生成物または合成品であってもよく、またこれらに限定されない。本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ２リガンドは、ペプチドグリカン（ＰＧＮ）である。
【００３８】
本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ２およびＤｅｃｔｉｎ１リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）２及びβ１，３−グルカン受容体（Ｄｅｃｔｉｎ１）のリガンドを意味し、例えば真菌の細胞壁由来のβ１，３−グルカン及びその塩が含まれるが、これらは抽出物、生成物または合成品であってもよく、またこれらに限定されない。本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ２およびＤｅｃｔｉｎ１リガンドは、酵母細胞壁由来のＺｙｍｏｓａｎである。
【００３９】
本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ３リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）３のリガンドを意味し、例えばウイルス由来の二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）及びその塩が含まれるが、これらは抽出物、生成物または合成品であってもよく、またこれらに限定されない。本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ３リガンドは、合成品であるポリイノシンポリシチジン酸（Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ））及び／またはその塩である。
【００４０】
本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ４リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）４のリガンドを意味し、例えば細菌もしくは植物由来のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）、特にリピドＡ誘導体、例えばモノホスホリルリピドＡ、３脱アシル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ−ＭＰＬ）、ＯＭ１７４、ＯＭ  ２９４  ＤＰもしくはＯＭ  １９７  ＭＰ−Ａｃ  ＤＰ等、アルキルグルコサミニドホスフェート（ＡＧＰ）、例えばＷＯ  ９８５０３９９もしくはＵＳ  ６３０３３４７に開示されるＡＧＰまたはＵＳ  ６７６４８４０に開示されるようなＡＧＰの塩を含み、また、パントエア菌由来リポポリサッカライド、グルコピラノシルリピッド、ヒアルロン酸ナトリウムを含むがこれらに限定されない。
【００４１】
本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ４リガンドは、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ属（例えばＡｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ａｃｅｔｉ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｉｎｕｍ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ等）、Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ属（例えばＺｙｍｏｍｏｎａｓ  ｍｏｂｉｌｉｓ等）、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ属（例えばＸａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ等）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ属（例えばＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ等）、Ｐａｎｔｏｅａ属（例えばＰａｎｔｏｅａ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ等）由来のリポポリサッカライドが好ましい。これらのリポポリサッカライド由来の抽出物または精製したリポポリサッカライドをそのまま用いる事も可能である。また、例えばＰａｎｔｏｅａ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ由来のリポポリサッカライド（ＩＰ−ＰＡ１）はフナコシから購入できる。また、本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ４リガンドは、パントエア菌由来リポポリサッカライド、グルコピラノシルリピッド、および／またはヒアルロン酸ナトリウムである。
【００４２】
本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）７および／またはＴＬＲ８のリガンドを意味し、例えば一本鎖ＲＮＡ、イミキモド、レシキモド（Ｒ８４８）、ＴＬＲ７−ＩＩおよび他の化合物、例えばロキソリビンおよびブロピリミンを含むがこれらに限定されない。
【００４３】
本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンドは、イミキモドである。イミキモドは式
【化２】
2014169275.tif 000003
の１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンであり、例えば特表平７−５０５８８３号公報（特許文献４）にその特徴および製造法が記載されている。
【００４４】
別の好ましい態様において、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンドは、レシキモドである。レシキモドは式
【化３】
2014169275.tif 000004
の４−アミノ−２−（エトキシメチル）−α，α−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノールである。
【００４５】
別の好ましい態様において、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンドはＴＬＲ７−ＩＩである。ＴＬＲ７−ＩＩは式、
【化４】
2014169275.tif 000005
で表される。
【００４６】
別の好ましい態様において、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンドはブロピリミンである。ブロピリミンは式、
【化５】
2014169275.tif 000006
で表される。
【００４７】
本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ９リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）９のリガンドを意味し、例えば、ＯＤＮ１８２６等が含まれる。本発明において用いるＴＬＲ９リガンドは抽出物、生成物または合成品であってもよく、またこれらに限定されない。本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ９リガンドは、ＯＤＮ１８２６である。
【００４８】
ＯＤＮ１８２６は、以下の配列（配列番号１２）からなるオリゴデオキシヌクレオチドである。
【化６】
2014169275.tif 000007
【００４９】
本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ２／６リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）２及びＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）６のヘテロダイマーのリガンドを意味し、例えばマイコプラズマの細胞壁由来のジアシル化リポタンパク及びその塩が含まれるが、これらは抽出物、生成物または合成品であってもよく、またこれらに限定されない。本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ２／６リガンドは、Ｐａｍ２ＣＳＫ４、ＭＡＬＰ−２及び／またはＦＳＬ−１である。
【００５０】
Ｐａｍ２ＣＳＫ４は、次の式で表される。
【化７】
2014169275.tif 000008
【００５１】
ＦＳＬ−１は、次の式で表される。
【化８】
2014169275.tif 000009
【００５２】
本明細書において使用するとき、用語「ＴＬＲ５リガンド」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）５のリガンドを意味し、例えば、フラジェリン等が含まれる。本発明において用いるＴＬＲ５リガンドは抽出物、生成物または合成品であってもよく、またこれらに限定されない。本発明の好ましい態様において、ＴＬＲ５リガンドは、フラジェリンである。
【００５３】
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、そのｉｎ  ｖｉｖｏ活性化によって特異的サイトカイン、ケモカインおよび成長因子が関与する先天性免疫応答を開始させる、Ｉ型膜貫通タンパク質のファミリーである。全てのＴＬＲが一定の細胞内シグナル伝達分子、例えば核性因子κＢ（ＮＦ−κＢ）およびマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰキナーゼ）などを活性化することができる一方で、放出されるサイトカインおよびケモカインの特異的集合物は各ＴＬＲに固有なようである。ＴＬＲ３、７、８、および９は、免疫細胞（樹状細胞および単球など）のエンドソーム区画またはリソソーム区画中に存在するＴＬＲのサブファミリーを含む。具体的には、ＴＬＲ３は、樹状細胞や繊維芽細胞など広範囲な細胞によって発現され、ＴＬＲ７は、形質細胞様樹状細胞によって発現され、且つより少ない程度で単球によって発現され、ＴＬＲ８は、単球ならびに単球由来樹状細胞および骨髄性樹状細胞によって発現され、ＴＬＲ９は、形質細胞様樹状細胞によって発現される。このサブファミリーは、微生物核酸（一本鎖ＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＤＮＡなど）の認識を媒介する。ＴＬＲ３、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８、ＴＬＲ９のアゴニストは、種々の炎症性サイトカイン（例えばインターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＴＮＦ−α、およびインターフェロン−γが含まれる）の産生を刺激する。かかるアゴニストはまた、共刺激分子（例えばＣＤ４０、ＣＤ８０、およびＣＤ８６など）、主要組織適合性複合体分子、およびケモカイン受容体の発現の増加を促進する。Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮαおよびＩＦＮβ）はまた、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８アゴニストでの活性化の際に細胞によって産生される。
【００５４】
本明細書において使用するとき、用語「環状ジヌクレオチド」は、２個のヌクレオチドの糖部分のＯＨ基２個が、各々同一のリン酸分子に対してエステルを生成し、環状化した分子およびその類似体を意味し、例えば環状ジＡＭＰ（ｃ−ｄｉ−ＡＭＰ）、環状ジＧＭＰ（ｃ−ｄｉ−ＧＭＰ）、ｃ−ｄＧｐＧｐ、ｃ−ｄＧｐｄＧｐ、ｃ−ＧｐＡｐ、ｃ−ＧｐＣｐ、ｃ−ＧｐＵｐ等を含むが、これらに限定されない。環状ジヌクレオチドは、樹状細胞またはＴ細胞を活性化する。環状ジヌクレオチドのさらなる例、それらをアジュバントとして使用できること、およびそれらの製造方法は、特表２００７−５２９５３１号公報（特許文献５）に記載されている。本発明の好ましい態様において、環状ジヌクレオチドは、環状ジＧＭＰ及び／又は環状ジＡＭＰである。環状ジＧＭＰは式
【化９】
2014169275.tif 000010
を有し、Ｋａｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｕｐｐｌ．３：１０３−４にその合成方法が記載されている。
【００５５】
本明細書において使用するとき、用語「ヘルパーペプチド」は、ヘルパーＴ細胞を活性化するあらゆるペプチドを意味し、例えば結核菌由来ヘルパーペプチド、麻疹ウイルス由来ヘルパーペプチド、Ｂ型肝炎ウイルス由来ヘルパーペプチド、Ｃ型肝炎ウイルス由来ヘルパーペプチド、トラコーマクラミジア由来ヘルパーペプチド、熱帯性マラリア原虫スポロゾイド由来ヘルパーペプチド、ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈａｅｍｏｃｙａｎｉｎ由来ヘルパーペプチド、破傷風毒素由来ヘルパーペプチド、百日咳毒素由来ヘルパーペプチド、ジフテリア毒素由来ヘルパーペプチド、癌細胞由来ヘルパーペプチド（例えばＩＭＡ−ＭＭＰ−００１ヘルパーペプチド、ＣＥＡ−００６ヘルパーペプチド、ＭＭＰ−００１ヘルパーペプチド、ＴＧＦＢＩ−００４ヘルパーペプチド、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ（ａａ７７６−７９０）ヘルパーペプチド、ＡＥ３６ヘルパーペプチド、ＡＥ３７ヘルパーペプチド、ＭＥＴ−００５ヘルパーペプチド、ＢＩＲ−００２ヘルパーペプチドなど）、ユニバーサルヘルパーアナログ（例えばＰＡＤＲＥ）を含む。
【００５６】
また、本発明においては、上記のようなヘルパーペプチドに代えて、またはこれと組み合わせて、該ヘルパーペプチドの全部または一部のアミノ酸が置換や修飾等により改変されたペプチド（以下、「改変ヘルパーペプチド」と称する）も使用することができる。
改変ヘルパーペプチドには、例えば、
（ａ）元のヘルパーペプチドのアミノ酸配列において、１個から数個、例えば１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸が置換、欠失または付加されたアミノ酸配列からなるペプチド；および
（ｂ）元のヘルパーペプチドのアミノ酸配列において、全部または一部のアミノ酸、例えば１個または複数個、例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個または１５個のアミノ酸が修飾されたアミノ酸配列からなるペプチド
が含まれる。
改変ヘルパーペプチドが有し得るアミノ酸の「修飾」としては、これらに限定されないが、例えば、アセチル化、メチル化などのアルキル化、グリコシル化、ヒドロキシル化、カルボキシル化、アルデヒド化、リン酸化、スルホニル化、ホルミル化、ミリストイル化やパルミトイル化やステアロイル化のような脂肪鎖付加修飾、オクタノイル化、エステル化、アミド化、脱アミド化、シスチン修飾やグルタチオン修飾やチオグリコール酸修飾のようなジスルフィド結合形成修飾、糖化、ユビキチン化、スクシンイミド形、グルタミル化、プレニル化等が挙げられる。また、改変ヘルパーペプチドは、１個以上のアミノ酸の置換、欠失または付加と、１個以上のアミノ酸の修飾を組み合わせて含むものであってもよい。
【００５７】
本発明の好ましい態様において、ヘルパーペプチドは、１０〜１８個のアミノ酸、好ましくは１２〜１６個のアミノ酸、より好ましくは１３〜１５個のアミノ酸からなるものである。本発明の好ましい態様において、ヘルパーペプチドはＰｅｐｔｉｄｅ−２５または改変Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５またはＰＡＤＲＥである。改変Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５の一例はＰｅｐｔｉｄｅ−２５Ｂである。Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５は、ヒト型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）によって分泌される主要タンパク質の一つであるＡｇ８５Ｂのアミノ酸残基２４０〜２５４に対応する、配列Ｐｈｅ  Ｇｌｎ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｈｉｓ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ（配列番号１３）からなる１５アミノ酸のペプチドである。Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５Ｂは、免疫賦活効果を高めるためにＰｅｐｔｉｄｅ−２５の一部アミノ酸を改変した、改変Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５の一例であり、配列Ｐｈｅ  Ｇｌｎ  Ａｓｐ  Ａｌａ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｈｉｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｈｉｓ  Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｐｈｅ（配列番号１４）からなる１５アミノ酸のペプチドである。ＰＡＤＲＥは、配列Ｄ−Ａｌａ  Ｌｙｓ  ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ−Ａｌａ  Ｖａｌ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｔｒｐ  Ｔｈｒ  Ｌｅｕ  Ｌｙｓ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ｄ−Ａｌａからなる１３アミノ酸のペプチドである（本願において、配列番号１５として示す）。
【００５８】
本明細書において使用するとき、用語「免疫調節低分子薬物」は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ等の免疫細胞を活性化または抑制する物質のうち、上述したＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチドおよびヘルパーペプチドのいずれにも該当しないものを意味する。免疫調節低分子薬物としては、例えば、ベスタチン、ピドチモド、レバミゾール、ゴロチモド、ホルフェニシノール、およびそれらの誘導体、ならびにそれらの薬理学的に許容される塩などが挙げられる。例えば、レバミゾールの薬理学的に許容される塩としては、レバミゾール塩酸塩などが挙げられる。
【００５９】
ベスタチンは式
【化１０】
2014169275.tif 000011
で表される。
【００６０】
ピドチモドは式
【化１１】
2014169275.tif 000012
で表される。
【００６１】
レバミゾール塩酸塩は式
【化１２】
2014169275.tif 000013
で表される。
【００６２】
本発明において、免疫調節低分子薬物は、通常、分子量１０００未満、好ましくは５００未満の化合物である。本発明の好ましい態様において、免疫調節低分子薬物は、ベスタチン、ピドチモドおよびレバミゾール塩酸塩からなる群より選択される１種以上の化合物である。
【００６３】
一つの態様において、本発明は、所望の抗原を粘膜投与する場合に、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチド、免疫調節低分子薬物が細胞性免疫誘導に好適であることを見出したものである。したがって、一つの態様において、本願発明の細胞性免疫誘導促進剤は、それらから選択される１種以上の物質である。本願発明の特に好ましい態様において、細胞性免疫誘導促進剤はＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチドおよび免疫調節低分子薬物から選択される１種以上とヘルパーペプチドとの組合せである。細胞性免疫の誘導を定量的に測定する方法としては様々なものが開発されており、そのいずれか１つまたはそれ以上、例えば実施例に記載のＥＬＩＳＰＯＴ法を用いてよい。
【００６４】
好ましい態様において、本発明の粘膜投与用ワクチン組成物が含有する細胞性免疫誘導促進剤は、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上であり、より好ましくは、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上とヘルパーペプチドとの組合せである。特に好ましい態様において、細胞性免疫誘導促進剤は、ＴＬＲ１／２リガンド、ＴＬＲ３リガンド、ＴＬＲ４リガンド、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンド、環状ジＧＭＰならびにレバミゾール塩酸塩からなる群より選択される１種以上と、ヘルパーペプチドとの組合せである。
【００６５】
本明細書において使用するとき、非侵襲的投与とは、物理的刺激および／または化学的刺激、好ましくは物理刺激（例えば粘膜剥離処理、粘膜損傷処理、粘膜穿孔処理）を積極的に粘膜に与えることなく、投与することを意味する。
【００６６】
本明細書において使用するとき、用語「癌」は、癌遺伝子の異常な発現、例えば過剰発現を伴う癌、例えば造血器腫瘍や固形癌を意味する。癌遺伝子としては、例えば、サバイビン遺伝子、ＧＰＣ３遺伝子、ＨＥＲ２／ｎｅｕ遺伝子、ＭＡＧＥ３遺伝子、ＭＡＧＥ  Ａ１遺伝子、ＭＡＧＥ  Ａ３／Ａ６遺伝子、ＭＡＧＥ  Ａ４遺伝子、ＭＡＧＥ１２遺伝子、プロテイナーゼ−３遺伝子、ＡＦＰ遺伝子、ＣＡ−１２５遺伝子、ＣＤ４４遺伝子、ＣＥＡ遺伝子、ｃ−Ｋｉｔ遺伝子、ｃ−ｍｅｔ遺伝子、ｃ−ｍｙｃ遺伝子、Ｌ−ｍｙｃ遺伝子、ＣＯＸ２遺伝子、ＣｙｃｌｉｎＤ１遺伝子、Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ−７遺伝子、Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ−１９遺伝子、Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ−２０遺伝子、Ｅ２Ｆ１遺伝子、Ｅ２Ｆ３遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、Ｇｌｉ１遺伝子、ｈＣＧβ遺伝子、ＨＩＦ−１α遺伝子、ＨｎＲＮＰ  Ａ２／Ｂ１遺伝子、ｈＴＥＲＴ遺伝子、ＭＤＭ遺伝子、ＭＤＲ−１遺伝子、ＭＭＰ−２遺伝子、ＭＭＰ−９遺伝子、Ｍｕｃ−１遺伝子、Ｍｕｃ−４遺伝子、Ｍｕｃ−７遺伝子、ＮＳＥ遺伝子、ＰｒｏＧＲＰ遺伝子、ＰＳＡ遺伝子、ＲＣＡＳ１遺伝子、ＳＣＣ遺伝子、サイモグロブリン遺伝子、ＶＥＧＦ−Ａ遺伝子、ＶＥＧＦ−Ａ遺伝子等が挙げられる。サバイビン遺伝子の異常な発現を伴う癌には、悪性リンパ腫、膀胱癌、肺癌、大腸癌等が含まれるが、これらに限定されない。ＧＰＣ３遺伝子の異常な発現を伴う癌には、肝癌、胆管癌、胃癌等が含まれるが、これらに限定されない。ＨＥＲ２／ｎｅｕ遺伝子の異常な発現を伴う癌には、乳癌、胃癌、卵巣癌、子宮癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、前立腺癌等が含まれるが、これらに限定されない。ＭＡＧＥ３遺伝子の異常な発現を伴う癌には、メラノーマ、肺癌、頭頚部癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、肝臓癌が含まれるが、これらに限定されない。プロテイナーゼ−３遺伝子の異常な発現を伴う癌には、急性骨髄性白血病、膵臓癌が含まれるが、これらに限定されない。
【００６７】
本明細書において使用するとき、用語「遺伝子の異常な発現」は、ある細胞におけるその遺伝子の発現レベルが、同じ組織の他の細胞と比較して、顕著に、例えば２倍以上、例えば４倍以上、上昇または低下していることを意味する。用語「過剰発現」は、異常な発現が発現レベルの上昇であることを意味する。遺伝子の発現レベルは、当該技術分野で周知のいずれかの方法を用いて、容易に測定できる。
【００６８】
本明細書において使用するとき、用語「対象」は、実用段階において粘膜投与用ワクチン組成物を投与して免疫応答を誘導し得るいずれかの動物、典型的にはヒトを含む哺乳類、例えばマウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、サル、チンパンジー等を意味する。特に好ましい対象は、ヒトである。
【００６９】
本明細書において使用するとき、用語「免疫評価用モデル動物」は、粘膜投与用癌ワクチン組成物の免疫誘導特性を評価するためのモデル動物を意味し、具体的には細胞性免疫誘導レベルを評価するためのモデル動物を意味する。免疫評価用モデル動物としては、ワクチン組成物中の抗原と、動物のＭＨＣクラス１分子との適合性を考慮し、ワクチン組成物中の抗原による細胞性免疫誘導が評価可能な動物を用いる。例えばＨＬＡ−Ａ＊２４型ＭＨＣ拘束性クラス１ペプチドを含むワクチン組成物の場合は、ＢＡＬＢ／ｃマウスで評価する。ＨＬＡ−Ａ＊０２型ＭＨＣ拘束性ペプチドを含むワクチン組成物の場合は、ＨＬＡ−Ａ＊０２型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウスで評価する。他のＨＬＡ型のＭＨＣ拘束性ペプチドを含むワクチン組成物の場合は、そのＨＬＡ型のＭＨＣ拘束性ペプチドによる免疫誘導を評価可能な動物で評価する。蛋白抗原を含むワクチン組成物の場合は、蛋白抗原のアミノ酸配列中に含まれるクラス１エピトープのうち、免疫誘導したいクラス1エピトープと適合性のあるＭＨＣを有する動物で評価する。
【００７０】
本明細書において使用するとき、用語「癌抗原」は、腫瘍細胞ないし癌細胞特異的に発現し、免疫応答を誘導し得るタンパク質、ペプチド等の物質を意味する。
【００７１】
本明細書において使用するとき、用語「癌抗原ペプチド」は、癌抗原タンパク質に由来する部分ペプチドであって、免疫応答を誘導し得るものをいう。通常、癌抗原ペプチドは、癌遺伝子の産物である癌抗原タンパク質が癌細胞内で分解されることによって生じ、ＭＨＣクラスＩ分子によって癌細胞の表面に提示される。癌ワクチン製剤において用いる癌抗原ペプチドは、癌細胞から単離・精製された内因性の癌抗原ペプチドであってもよく、内因性の癌抗原ペプチドと同じアミノ酸配列を有する合成ペプチドであってもよい。本発明の好ましい態様においては、例えば、サバイビン２Ｂペプチドおよび／または改変サバイビン２Ｂペプチド、ＧＰＣ３ペプチドおよび／または改変ＧＰＣ３ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＰＲ１ペプチドおよび／または改変ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチドおよび／または改変ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、ならびにＭＵＣ１ペプチドおよび／または改変ＭＵＣ１ペプチドからなる群より選択される、内因性または合成の癌抗原ペプチドを免疫誘導のために使用できる。
【００７２】
本明細書において使用するとき、用語「ウイルス抗原」は、ウイルスもしくはその構成成分またはそれらに由来する物質であって、免疫応答を誘導し得るものを意味する。したがって、ウイルス抗原を、好ましくは細胞性免疫誘導促進剤と共に、対象に粘膜投与することによってウイルス性疾患を処置または予防することができる。本発明の好ましい態様においては、例えば、ＩＰＥＰ８７ペプチドおよび／または改変ＩＰＥＰ８７ペプチドならびにＨＢＶｅｎｖペプチドおよび／または改変ＨＢＶｅｎｖペプチドからなる群より選択されるペプチドを、ウイルス抗原として用いることができる。
【００７３】
本明細書において使用するとき、用語「ウイルス性疾患」は、ウイルスの感染、増殖等により引き起こされる疾患を意味し、例えば、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、子宮頸がん、尖圭コンジローマ、ＨＩＶ感染症、性器クラミジア感染症、単純疱疹等が挙げられる。
【００７４】
ＩＩ．粘膜投与用ワクチン組成物
本発明の粘膜投与用ワクチン組成物は、対象における種々の抗原の粘膜投与において高い細胞性免疫誘導効果を発揮するものである。
【００７５】
本明細書において使用するとき、用語「粘膜投与用」組成物は、粘膜投与、例えば舌下、経鼻、頬側、直腸または膣投与に通常使用されるいずれかの製剤、例えばゲル剤（ゼリー剤）、クリーム剤、軟膏剤、硬膏剤などの半固形剤、液剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、フィルム剤や錠剤、口腔内崩壊錠等の固形製剤、エアゾール剤のような粘膜用スプレー剤、吸引剤等であってよい。これらの組成物の区分、定義、性質、製法等は、当該技術分野において周知であり、例えば日本薬局方第１６版を参照されたい。
【００７６】
例えば液剤用溶媒としては、適量の水又はエタノール、グリセリン、プロピレングリコール等の溶媒を用いることができ、当該溶媒に成分を分散または溶解させて液剤を調製する事ができる。
【００７７】
例えばゲル剤（ゼリー剤）用基剤としては、ヒドロゲル基剤としてのカルボキシビニルポリマー、ゲルベース、無脂肪性軟膏、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デンプン、キサンタンガム、カラヤガム、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、カルボキシメチルエチルセルロース（ＣＭＥＣ）、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、トラガント、アラビアゴム、タラガム、タマリンドシードガム、サイリウムシードガム、寒天、ジェランガム、グルコマンナン、ローカストビーンガム、グアーガム、カラギーナン、デキストリン、デキストラン、アミロース、カルボキシメチルセルロースカリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、プルラン、キトサン、カルボキシメチルスターチナトリウム、プランタゴ種皮、ガラクトマンナン、オイドラギット、カゼイン、アルギン酸アルキルエステル、ゼラチン、ポリエチレングリコール等を用いることができる。これらの基材を溶媒に溶解し流動性のあるゲル剤や成形性があるゲル剤を調製する事ができる。溶媒としては、好ましくは水であるが、グリセリンやプロピレングリコールも用いる事ができる。
【００７８】
例えばクリーム剤用基剤としては、親水軟膏、バニシングクリーム等の水／油型基剤；親水ワセリン、精製ラノリン、アクアホール、オイセリン、ネオセリン、加水ラノリン、コールドクリーム、親水プラスチベース等の油／水型基剤が挙げられる。これらの基材を油脂系溶媒または水に入れ、ホモジナイザー等で高速攪拌させる事によりクリーム剤を調製する事ができる。
【００７９】
例えばフィルム剤用基剤としては、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デンプン、キサンタンガム、カラヤガム、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、カンテン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、カルボキシメチルエチルセルロース（ＣＭＥＣ）、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、トラガント、アラビアゴム、ローカストビーンガム、グアーガム、カラギーナン、デキストリン、デキストラン、アミロース、カルボキシメチルセルロースカリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、プルラン、キトサン、カルボキシメチルスターチナトリウム、プランタゴ種皮、ガラクトマンナン、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＲＳ、メタクリル酸コポリマーＬ、メタクリル酸コポリマーＬＤ、メタクリル酸コポリマーＳ、メチルアクリレート・メタクリル酸・メチルメタアクリレートコポリマー、アクリル酸エチル・メタクリル酸メチルコポリマー、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、カゼイン、アルギン酸アルキルエステル等が挙げられる。これらの基材を水又はエタノール等の極性有機溶媒に溶解し、薄膜塗工後、乾燥させる事によりフィルム剤を調製する事ができる。一つの好ましい態様において、本発明の粘膜投与用ワクチン組成物は、フィルム状製剤の形態である。
【００８０】
例えば散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤用添加剤としては、乳糖やコーンスターチ、結晶セルロースといった賦形剤、ヒドロキシプロピルセルロース、アラビアゴム等の結合剤、さらに適量の水又はエタノール等の溶媒を用い、混合攪拌した後、造粒、乾燥、打錠といった工程を組み合わせて調製する事ができる。必要であればステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、ヒドロキシプロピルセルロース、ショ糖等のコーティング剤を添加してもよい。
【００８１】
例えば口腔内崩壊錠（凍結乾燥型）用基材としては、ゼラチンやプルラン等の多糖類が挙げられる。また成形剤としてマンニトール、トレハロース、ソルビトール、グリシン等を用いても良い。これら添加剤を水に溶解し、分注後凍結乾燥させる事により口腔内崩壊錠（凍結乾燥型）を調製する事ができる。一つの好ましい態様において、本発明の粘膜投与用ワクチン組成物は、口腔内崩壊錠の形態である。
【００８２】
例えばエアゾール剤としては、内容物として液剤や流動性が高いゲル剤、クリーム剤、散剤等の微粉末が挙げられる。これらを、噴霧デバイスを用いて気体中に固体または液体の微粒子を分散させる事により、効率良く口腔粘膜、経鼻粘膜といった投与部位に投与する事が可能である。
【００８３】
本発明の組成物中における抗原および細胞性免疫誘導促進剤の割合は、特に限定されない。一つの態様において、本発明の組成物は、所望の抗原を、組成物の総重量に基づき、好ましくは０．０１〜４０重量％、より好ましくは０．１〜３０重量％含む。一つの態様において、本発明の組成物は、細胞性免疫誘導促進剤を、組成物の総重量に基づき、好ましくは０．００１〜３０重量％、より好ましくは０．０１〜２０重量％含む。
【００８４】
また、本発明の組成物は、必要に応じて、添加剤を含んでいてもよい。添加剤は、基剤の主成分、抗原および細胞性免疫誘導促進剤との適合性、意図する投与レジメン等に応じて、例えば、等張化剤、防腐・殺菌剤、酸化防止剤、溶解剤、溶解補助剤、懸濁化剤、充填剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、吸収促進剤、放出速度制御剤、着色剤、可塑剤、粘着剤等、あるいはそれらの２種以上の組合せから選択され得る。
【００８５】
また、本発明の組成物は、第二の細胞性免疫誘導促進剤としての薬理学的に許容される酸もしくはその薬理学的に許容される塩をさらに含有させることにより、免疫誘導促進効果を向上させることができる。
【００８６】
本明細書において使用するとき、本発明の組成物に含有させ得る「薬理学的に許容される酸」とは、投与対象に有害な作用を及ぼさず、かつ、該組成物中の成分の薬理活性を消失させない酸を意味する。本発明の好ましい態様において、薬理学的に許容される酸は有機酸であり、より好ましくはカルボキシル基を含む有機化合物またはスルホン酸基を含む有機化合物であり、より好ましくは飽和直鎖部分の炭素数が８〜２０である飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪酸または乳酸またはリンゴ酸またはサリチル酸またはマレイン酸またはクエン酸、またはスルホン酸基を含む有機化合物であり、より好ましくは飽和直鎖部分の炭素数が８〜１６である飽和または不飽和の直鎖または分岐脂肪酸または乳酸またはリンゴ酸またはサリチル酸またはマレイン酸またはクエン酸、またはスルホン酸基を含む有機化合物であり、さらに好ましくはデカン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、イソステアリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸およびオレイン酸からなる群より選択される脂肪酸、または乳酸またはサリチル酸またはクエン酸またはメタンスルホン酸である。
【００８７】
本明細書において使用するとき、本発明の組成物に含有させ得る「薬理学的に許容される塩」とは、投与対象に有害な作用を及ぼさず、かつ、該組成物中の成分の薬理活性を消失させない塩を意味し、無機酸塩（例えば塩酸塩やリン酸塩）、有機酸塩（例えば酢酸塩やフタル酸塩、ＴＦＡ塩）、金属塩（アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩）、アルミニウム塩など）、アミン塩（トリエチルアミン塩、ベンジルアミン塩、ジエタノールアミン塩、ｔ−ブチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、アルギニン塩、ジメチルアンモニウム塩、アンモニウム塩など）を含むが、これらに限定されない。
【００８８】
抗原の治療上有効量は、疾患の重症度、対象の年齢および相対的な健康ならびに他の既知の要因に依存して広範に変化し得るが、一般に、１日用量約０．１μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重で満足のいく結果が得られる。細胞性免疫誘導促進剤は、抗原と同時または逐次的に、好ましくは同時に投与される。細胞性免疫誘導促進剤の有効量は、用いる具体的な細胞性免疫誘導促進剤、他の細胞性免疫誘導促進剤の有無などに依存して広範に変化し得るが、１日用量０．０１μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重で満足のいく結果が得られる。１日用量は、１回で投与してもよいが、２回以上、例えば２回、３回、４回または５回などの複数回に分けて投与してもよい。投与間隔は任意であるが例えば１日１回、３日に１回、１週間に１回、２週間に１回、１月に１回、３月に１回、６月に１回、１年に１回またはそれ以上から、患者の状態、疾患の重症度、治療目的か予防目的か等に応じて、適宜選択される。一般に、重度の疾患を現実に有する患者の治療目的では、より高頻度、高用量で抗原を投与し、疾患を有さない患者の予防目的では、より低頻度、低用量で抗原を投与する。
【００８９】
以下に実施例を示して本発明をさらに詳細かつ具体的に説明するが、本発明は実施例の範囲に限定されるものではない。
【実施例】
【００９０】
舌下投与液剤
下記表１〜９の組成を有する液剤を製造し、マウス免疫試験の投与サンプルとした。具体的には、表１〜９に記載される配合量の抗原ペプチドおよび細胞性免疫誘導促進剤ならびに所望により薬理学的に許容される酸に、２０重量部の添加剤（ＤＭＳＯ）および基剤としての生理食塩水を添加して合計１００重量部とし、混和して舌下投与液剤を調製した。
ＧＰＣ３ペプチド、サバイビン２Ｂペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＩＰＥＰ８７ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ  Ｅ７５ペプチド、ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、ＨＢＶｅｎｖペプチド、およびＰｅｐｔｉｄｅ−２５はいずれも化学合成し、ＨＰＬＣ精製したものを用いた。ＯＶＡタンパクはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入した。。
イミキモドは東京化成工業から購入した。環状ジＧＭＰ（ｃ−ｄｉ−ＧＭＰ）および環状ジＡＭＰ（ｃ−ｄｉ−ＡＭＰ）はＢｉｏｌｏｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ社から購入した。Ｐａｍ３ＣＳＫ４はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ製のもの、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ製のもの、パントエア菌由来リポポリサッカライドは自然免疫応用技研製のもの、グルコピラノシルリピッドはＩｎｖｉｖｏＧｅｎ製のもの（ＭＰＬＡｓ）、レシキモド（Ｒ８４８）はＩｎｖｉｖｏＧｅｎ製のもの、レバミゾール塩酸塩はＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ製のものをそれぞれ用いた。
【００９１】
フィルム剤
Ｄ−マンニトール（ロケット製）４６重量部及びポリエチレングリコール４００（和光純薬製）２．６重量部に精製水１５０重量部を添加し、超音波攪拌した。ここにヒドロキシプロピルセルロース(日本曹達製、ＨＰＣ−ＳＳＬ)４６重量部、抗原ペプチド（化学合成・ＨＰＬＣ精製品）５重量部、Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５（化学合成・ＨＰＬＣ精製品）０．３重量部、およびヘルパーペプチド以外の細胞性免疫誘導促進剤０．１重量部を添加し、十分に攪拌混合した。当該溶液の１／１００量（２．５重量部）をポリエチレンテレフタレート製剥離フィルム上に滴下し、風乾及び減圧乾燥し、１重量部のフィルム状製剤を得た。
【００９２】
口腔内崩壊錠
ゼラチン（水溶性ゼラチンＣＳＦ、ニッピ製）２０重量部及びＤ-マンニトール７４．６重量部に精製水５００重量部を添加し、攪拌溶解した。ここに抗原ペプチド（化学合成・ＨＰＬＣ精製品）５重量部、Ｐｅｐｔｉｄｅ−２５（化学合成・ＨＰＬＣ精製品）０．３重量部、およびヘルパーペプチド以外の細胞性免疫誘導促進剤０．１重量部を添加し、溶解させた。当該溶液を成形されたアルミ容器に分注し、一昼夜、凍結乾燥処理を行い、口腔内崩壊錠を得た。マウス免疫試験の際には、当該口腔内崩壊錠を粉砕し、１０ｍｇを秤量し用いた。
【００９３】
マウス免疫試験１（舌下投与）
上記舌下投与液剤、フィルム剤および口腔内崩壊錠について、マウス免疫試験を行った。試験は、ＥＬＩＳＰＯＴ法によって行った。具体的には、１回投与の場合には、マウスに麻酔をした後に、舌下部に液剤、フィルム剤または口腔内崩壊錠を投与し、２分間そのまま維持させた後、６日間飼育した。２回投与の場合には１回目の投与から６日後に同様に上記操作を繰り返した。最後に投与した日から６日後に脾臓を摘出し、以下に記載するＥＬＩＳＰＯＴ法で抗原特異的な細胞性免疫誘導レベルを評価した。
【００９４】
（ＥＬＩＳＰＯＴ法）
摘出した脾臓から、脾細胞懸濁液を調製した。抗マウスＩＦＮ-γ抗体を固定化したＥＬＩＳＰＯＴプレートのウェルに、脾細胞(３×１０６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ)と抗原（抗原ペプチドの場合１００μＭ、抗原蛋白の場合１００μｇ／ｍＬ)とを培養液とともに入れ、３７℃、５％ＣＯ２の培養条件にて２０時間、共培養し、ＩＦＮ−γ産生細胞スポット数（スポット数／３×１０６ｃｅｌｌｓ）を評価した。
【００９５】
免疫試験の結果を、使用したマウス、投与量、投与回数と共に下記表１〜９に示す。表中の遺伝子改変マウスは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウスである。また、比較のため、後述の注射剤を用いた免疫の結果（比較例２〜４、６〜８）を各表の最後に記載する。
【００９６】
【表１−１】
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【表１−２】
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【００９７】
【表２】
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【００９８】
【表３】
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【００９９】
【表４】
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【０１００】
【表５】
2014169275.tif 000019
【０１０１】
【表６】
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【０１０２】
【表７】
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【０１０３】
【表８−１】
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【表８−２】
2014169275.tif 000023
【表８−３】
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【０１０４】
【表９−１】
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【表９−２】
2014169275.tif 000026
【０１０５】
経鼻投与液剤
下記表１０〜１９の組成を有する液剤を製造し、マウス免疫試験の投与サンプルとした。具体的には、表１０〜１９に記載される配合量の抗原ペプチドおよび細胞性免疫誘導促進剤に、２０重量部の添加剤（ＤＭＳＯ）および基剤としての生理食塩水を添加して合計１００重量部とし、混和して経鼻投与液剤を調製した。抗原ペプチドおよび細胞性免疫誘導促進剤の入手元は上記舌下投与液剤の場合と同様である。
【０１０６】
マウス免疫試験２（経鼻投与）
上記経鼻投与液剤について、マウス免疫試験を行った。試験は、ＥＬＩＳＰＯＴ法によって行った。具体的には、１回投与の場合には、マウスに麻酔をした後に、鼻腔から液剤を吸引させ、６日間飼育した。２回投与の場合には１回目の投与から６日後に同様に上記操作を繰り返した。最後に投与した日から６日後に脾臓を摘出し、ＥＬＩＳＰＯＴ法で抗原特異的な細胞性免疫誘導レベルを評価した。ＥＬＩＳＰＯＴ法は上記マウス免疫試験１と同様の方法で行った。
【０１０７】
免疫試験の結果を、使用したマウス、投与量、投与回数と共に下記表１０〜１９に示す。表中の遺伝子改変マウスは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウスである。また、比較のため、後述の注射剤を用いた免疫の結果（比較例２〜４、６〜８）を各表の最後に記載する。
【０１０８】
【表１０】
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【０１０９】
【表１１】
2014169275.tif 000028
【０１１０】
【表１２】
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【０１１１】
【表１３】
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【０１１２】
【表１４】
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【０１１３】
【表１５】
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【０１１４】
【表１６】
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【０１１５】
【表１７】
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【０１１６】
【表１８】
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【０１１７】
【表１９−１】
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【表１９−２】
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【０１１８】
皮下注射剤
下記表２０の組成を有する皮下注射剤を調製し、免疫実験の投与サンプルとした。具体的には、表２０に記載される配合量の抗原ペプチドおよびアジュバントとしてのＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ５１ＶＧ（フロイント産業）に、０．５重量部の添加剤（ＤＭＳＯ）および基剤としての生理食塩水を添加して合計１００重量部とし、混和して注射剤を調製した。抗原ペプチドの入手元は上記舌下投与液剤の場合と同様である。
【０１１９】
マウス免疫試験３（皮下注射）
上記皮下注射剤について、マウス免疫試験を行った。試験は、ＥＬＩＳＰＯＴ法によって行った。具体的には、マウス背部皮下に２００μＬを注射投与した後、６日間飼育した。投与日から６日後に脾臓を摘出し、ＥＬＩＳＰＯＴ法で抗原特異的な細胞性免疫誘導レベルを評価した。投与回数はいずれも１回とした。ＥＬＩＳＰＯＴ法は上記マウス免疫試験１と同様の方法で行った。
【０１２０】
免疫試験の結果を、使用したマウスと共に下記表２０に示す。表中の遺伝子改変マウスは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウスである。
【０１２１】
【表２０】
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【０１２２】
表１〜９において、抗原ならびに細胞性免疫誘導促進剤を含む粘膜投与用ワクチン組成物の舌下投与において、有効な細胞性免疫誘導促進剤を評価した。
その結果、ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤が適していた。
好ましくは、ＴＬＲ４リガンド、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物、およびそれらの２種以上の組合せから選択される細胞性免疫誘導促進剤が有効であった。
さらに好ましくは、ＴＬＲ４リガンド、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンド、環状ジヌクレオチド、およびそれらとヘルパーペプチドとの組合せが特に有効であった。
また、安全性の観点で鼻よりも舌下投与の方が好ましいが、投与簡便性や保存安定性の観点で好ましい剤型である、フィルム剤や口腔内崩壊錠でも強い免疫誘導を確認した。
【０１２３】
表１０〜１９において、抗原ならびに細胞性免疫誘導促進剤を含む粘膜投与用ワクチン組成物の経鼻投与において、有効な細胞性免疫誘導促進剤を評価した。
ＴＬＲリガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物からなる群より選択される１種以上の細胞性免疫誘導促進剤が適していた。
好ましくは、ＴＬＲ１／２リガンド、ＴＬＲ３リガンド、ＴＬＲ４リガンド、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンド、環状ジヌクレオチド、ヘルパーペプチドおよび免疫調節低分子薬物、およびそれらの２種以上の組合せから選択される細胞性免疫誘導促進剤が有効であった。
【配列表】
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