(57)【要約】【課題】新規な化学物質を資源として提供すること。【解決手段】下記式で示されるエルモニンとする。2014189529.tif 000011【選択図】図１
2014189529.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式で示されるエルモニン。
【化１】
2014189529.tif 000009
【請求項２】
下記式で示されるエルモニン及びその誘導体及びこれらの塩の少なくともいずれかを有効成分として含有する薬剤。
【化２】
2014189529.tif 000010
【請求項３】
癌の治療薬である請求項２記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物であるエルモニンに関し、更には、これらを用いた薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在の我々の生活において、天然の動植物、微生物等の体内に含まれる化学物質（以下「天然物」という。）として見出されたもののうち人体に有用な効果をもたらすものは生薬、医薬品の有効成分として使用されている。また、このようなものは更に有用な医薬品を開発するための研究材料としても様々な役割を有しており、非常に重要なものとなっている。
【０００３】
このように、人体に有益な効果をもたらす天然物の探索に関する報告としては、例えば下記非特許文献１に、変形菌からビスインドール化合物、ナフトキノン化合物、グリセリド化合物等を抽出した報告がある。
【０００４】
【非特許文献１】石橋正己、“未利用菌類の資源化：変形菌からの天然物探索”、有機合成化学協会誌、２００３年、第６１巻、第２号、１５２〜１６３頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら一方で、天然物の探索が多数の者によって行なわれているにもかかわらず、探索の材料として検討、調査されたものは、地球上の全生物種の中で１０％にも満たないといわれている。
【０００６】
本発明は、新規な化学物質を資源として提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の一観点に係るエルモニンは、下記式で示される。
【化１】
2014189529.tif 000003
【０００８】
また、本発明の他の一観点に係る薬剤は、下記式で示されるエルモニン、その誘導体及びこれらの塩の少なくともいずれかを有効成分として含有する。
【化２】
2014189529.tif 000004
【０００９】
なお、上記の薬剤は、癌の治療薬として有用であることが期待される。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、新規な化学物質を資源として提供することができる。特に、本発明に係る化学物質は、癌細胞に対し細胞増殖抑制作用を発揮するため、例えば癌の治療薬として利用が期待される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】エルモニンの単離についてのスキームの概略を示す図である。
【図２】エルモニンの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図３】エルモニンの１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図４】エルモニンのＣＯＳＹスペクトルを示す図である。
【図５】エルモニンのＨＭＱＣスペクトルを示す図である。
【図６】エルモニンのＨＭＢＣスペクトルを示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、本発明の実施形態について説明するが、本発明は多くの異なる形態による実施が可能であり、以下に示す実施形態についての記載にのみ狭く解釈されるものではない。
【００１３】
本発明の一形態に係るエルモニンは、下記式にて示される。
【化３】
2014189529.tif 000005
【００１４】
本実施形態に係るエルモニンは、後述の実施例から明らかなように、放線菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．ＩＦＭ１１４９０より抽出することができるが、これに限定されず、合成することも可能である。
【００１５】
本実施形態に係るエルモニンは、癌細胞に対し細胞増殖抑制作用を発揮するため、薬剤、例えば癌の治療薬として利用が期待される。なおエルモニンを癌の治療薬として利用する場合、エルモニン、この誘導体、及びこの塩のうち少なくともいずれかを有効成分として含有しておくことが好ましい。
【００１６】
ここで本実施形態に係るエルモニンの誘導体とは、上記化合物と同等の活性を備え、上記化合物の置換基の一部をアルキル化、アリール化、複素環化、エステル化、エーテル化、ハロゲン化、アミド化、ヒドロキシル化、アミノ化等置換反応によって適切な置換基が修飾された化合物を意味する。
【００１７】
また本実施形態に係るエルモニン、その誘導体の塩とは、上記エルモニン又はエルモニンの誘導体と、無機酸若しくは有機酸との中和反応によって生じかつ薬学的観点から許容される化合物をいう。無機塩としては限定されるわけではないが、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸等を例示することができ、有機塩としては限定されるわけではないがスルホン酸、カルボン酸等を例示することができる。
【００１８】
また、本実施形態に係る癌の治療薬は、上記エルモニン及びこの塩のうち少なくともいずれかの他、薬学的に許容しうる通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤（例えば蒸留水）、ｐＨ緩衝剤（例えばリン酸緩衝生理食塩水）、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤等の各種調剤用配合成分を含有させることができる。
【００１９】
またこの癌の治療薬は、患者の性別、体重、症状に見合った適切な投与量を経口的又は非経口的に投与することができる。経口的な投与としては、通常用いられる投与形態、例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁液、油剤、乳化剤等の投与形態を採用することができる。また、非経口的な投与としては、通常用いられる投与形態、例えば上記の液剤、懸濁液等にしたものを直接患部に投与する方法、注射等により投与する形態を採用することができる。
【実施例】
【００２０】
本実施例では、放線菌から上記エルモニンを抽出しその効果を確認した。図１に、エルモニンの単離についてのスキームの概略を示しておく。
【００２１】
まず、北海道札幌市の土壌より分離された放線菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  ＩＦＭ  １１４９０をワックスマン寒天培地（グルコース２％、ペプトン０．５％、肉エキス０．５％、酵母エキス０．３％、塩化ナトリウム０．５％、炭酸カルシウム０．３％、寒天１．５％）へ播種し、２８度で３日間培養した。コロニー及び胞子の形成を確認した後、これらをかきとり坂口フラスコ中のワックスマン液体培地に播種し、２８度で４日間振盪培養した。その後、菌株を大量に培養するため、新たに調製したワックスマン液体培地（グルコース２％、ペプトン０．５％、肉エキス０．５％、酵母エキス０．３％、塩化ナトリウム０．５％、炭酸カルシウム０．３％）に上記の前培養した培養液を播種し、カブ型フラスコを用い２８度で６日間振盪培養した。培養後、得られた培養液１２Ｌを遠心分離し、菌体と上清とに分離した。そして、上清を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル抽出物３．６ｇを得た。得られた酢酸エチル抽出物をＳｉｌｉｃａｇｅｌ  ＰＳＱ１００Ｂを担体とするカラム（φ４０×２３０ｍｍ）に付し、クロロホルム−メタノールを用いて溶出し、溶出順に１Ａ〜１Ｙを得た。１Ｍ（９３５ｍｇ）の一部（３３４ｍｇ）をＳｉｌｉｃａｇｅｌ  ６０Ｎを担体とするカラム（φ２５×２００ｍｍ）に付し、ヘキサン−酢酸エチルを用いて溶出し、溶出順に３Ａ〜３Ｚ、３ＡＡを得た。さらに３Ｆ（１１．４ｍｇ）をＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０を担体とするカラム（φ１３×２００ｍｍ）に付し、メタノールを用いて溶出し、エルモニン（１．０ｍｇ）を得た。
【００２２】
（エルモニンの構造）
エルモニンは、非結晶固体として得られた。ＥＳＩ−ＭＳにてｍ／ｚ  ３１９．０９６６［Ｍ−Ｈ］−が観測された。この結果について表１に示しておく。また、１Ｈ、１３Ｃ  ＮＭＲ、ＨＭＱＣの解析により、分子式がＣ２０Ｈ１６Ｏ４であることが判明した。なお、１Ｈ  ＮＭＲデータ、１３Ｃ  ＮＭＲデータについては表２に示しておく。また、１Ｈ  ＮＭＲスペクトルについては図２、１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルについては図３、ＣＯＳＹスペクトルについては図４、ＨＭＱＣスペクトルについては図５、ＨＭＢＣスペクトルについては図６、にそれぞれ示しておく。
【表１】
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【表２】
2014189529.tif 000007
【００２３】
また、エルモニンに対して紫外吸収測定（以下「ＵＶ測定」という。）を行い、紫外吸収スペクトル（以下「ＵＶスペクトル」という。）を得た。この結果については表１に示してある。
【００２４】
また、エルモニンに対し、比旋光度［α］Ｄの測定を行った。エルモニンの濃度はメタノール溶媒において０．２７ｇ／ｄｌとした。この結果、［α］Ｄは−１０．２であり、光学活性を有することが確認できた。この結果についても表１に示してある。
【００２５】
また、エルモニンに対し、赤外吸収分光測定を行った。この結果、３３３０ｃｍ−１に幅広い吸収ピークが確認でき、ヒドロキシ基の存在が確認できた。この結果も表１に示してある。
【００２６】
更に、既に示した通り、ａｃｅｔｏｎｅ−ｄ６中における１Ｈ  ＮＭＲの解析から、７個の芳香族水素原子（δＨ７．６６−６．４５）、１個のオキシメチレン（δＨ５．３２−５．２１）、１個のメトキシ基（δＨ３．９４）、１個のメチル基（δＨ２．４３）のピークが観測された。また、１３Ｃ  ＮＭＲの解析により２０個のピークが観測され、１Ｈ  ＮＭＲ、ＨＭＱＣスペクトルにより７個の芳香族メチン炭素、１０個の四級炭素、１個のメチレン炭素、１個のメトキシ基炭素、１個のメチル炭素に分類した。１２３．９ｐｐｍに観測された炭素原子のシグナルは、ＨＭＢＣの解析、推定分子式、化学シフト値を考慮した結果ケタール炭素由来であると推測し、本化合物はスピロケタール構造を有すると考えられた。またＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣスペクトルの詳細な解析により各プロトンシグナル及び各炭素シグナルを帰属し、本化合物は下記の式で示すように５，５スピロケタール構造を有する新規化合物であると判明した。
【化４】
2014189529.tif 000008
【００２７】
（細胞増殖阻害活性）
上記単離したエルモニンについて、ヒト胃がん細胞株（ＡＧＳ）に対する細胞増殖阻害活性を検討した。
【００２８】
まず、各細胞株をそれぞれ黒色９６穴プレート（Ｎｕｎｃ）に６×１０３細胞／穴の濃度で播種し一晩培養した後、各細胞株に対してエルモニンを細胞に暴露し、２４時間培養した。培養後、培地を除去し、フルオロセインジアセテート（和光）が１０μｇ／ｍＬ
となるようにＰＢＳに溶解させた溶液を各穴に２００μＬ添加し、１時間後に蛍光を測定することで各試料濃度での細胞生存率を算出し、５０％細胞増殖阻害濃度（ＩＣ５０値）を計算した。この結果を下記表に示す。なお、上記細胞生存率の算出は、“Ｌｉｎｄｈａｇｅｎ，Ｅ．；Ｎｙｇｒｅｎ，Ｐ；Ｌａｒｓｓｏｎ，Ｒ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２００８，３，１３６４−１３６９．”に記載の算出方法を用いて行った。
【００２９】
この結果，エルモニンは当該ヒト胃がん細胞株に対してＩＣ５０約５０μＭで細胞増殖阻害活性をもつことが判明した。
【産業上の利用可能性】
【００３０】
本発明は新規化合物を有効成分とし、薬剤として産業上の利用可能性を有する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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