(57)【要約】【課題】本発明は、リボース環の酸素原子が−Ｓ−Ｓ−基で置換された核酸誘導体を製造するための方法と、当該方法で製造された核酸誘導体を提供することを目的とする。【解決手段】本発明に係る核酸誘導体の製造方法は、ジチアン環を有する核酸誘導体を製造するための方法であって、Ｐｕｍｍｅｒｅｒ転位反応によりチオールスルフィナート化合物をカルボキシレート化合物した後に、Ｖｏｒｂｒｕｇｇｅｎ反応により核酸塩基基を導入することを特徴とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）で表される核酸誘導体を製造するための方法であって、
【化１】
2014169239.tif 000015
［式中、
Ｒ1およびＲ2は独立に水素原子または水酸基の保護基を示し；
Ｒ3は水素原子、水酸基、保護水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、２−（Ｃ1-6アルコキシ）エトキシ基またはハロゲン原子を示し；
Ｂは、下記式で表される何れかの核酸塩基基：
【化２】
2014169239.tif 000016
［式中、Ｒ4は水素原子またはアミノ基の保護基を示す］を示す］
下記式（ＩＩ）で表されるチオールスルフィナート化合物にカルボン酸無水物を作用させることにより、下記式（ＩＩＩ）で表されるカルボキシレート化合物を得る工程：
【化３】
2014169239.tif 000017
［式中、Ｒ1〜Ｒ3は上記と同義を示し；Ｒ5はＣ1-6アルキル基またはＣ1-6ハロゲン化アルキル基を示す］；および
シリル化剤とルイス酸の存在下、カルボキシレート化合物（ＩＩＩ）と核酸塩基を反応させることにより核酸誘導体（Ｉ）を得る工程を含むことを特徴とする製造方法。
【請求項２】
ルイス酸としてトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルを用いる請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
シリル化剤としてＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミドを用いる請求項１または２に記載の製造方法。
【請求項４】
さらに、ジチアン化合物（ＩＶ）を酸化してチオールスルフィナート化合物（ＩＩ）を得る工程：
【化４】
2014169239.tif 000018
［式中、Ｒ1〜Ｒ3は上記と同義を示す］
を含む請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。
【請求項５】
下記式（Ｉ）で表される核酸誘導体。
【化５】
2014169239.tif 000019
［式中、
Ｒ1およびＲ2は独立に水素原子または水酸基の保護基を示し；
Ｒ3は水素原子、水酸基、保護水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、２−（Ｃ1-6アルコキシ）エトキシ基またはハロゲン原子を示し；
Ｂは、下記式で表される何れかの核酸塩基基：
【化６】
2014169239.tif 000020
［式中、Ｒ4は水素原子またはアミノ基の保護基を示す］を示す］
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核酸誘導体と、その効率的な製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
核酸誘導体は、対象特異性や様々な活性を有する医薬や農薬としての開発が期待されている。しかし、例えばオリゴＲＮＡには、安定性が低い、自然免疫応答の抗原になる、対象へのドラッグデリバリーシステムが確立していないといった問題があり、医薬としては未だ実用段階にないのが実情である。
【０００３】
本発明者は、核酸分解酵素による攻撃を回避して核酸誘導体またはそのオリゴマーの安定性を向上すべく、ヌクレオシドの糖部酸素原子を硫黄原子に置換した４’−チオ核酸を開発している（非特許文献１〜３）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Nucleic Acids Res．，2012，40，5787
【非特許文献２】ChemBioChem，2007，8，2133
【非特許文献３】FEBS Lett．，2005，579，3115
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上述したように、核酸誘導体やそのオリゴマーを工夫することにより、従来の核酸医薬の欠点を改善できたり、或いは、新たな又はより優れた薬効が得られる可能性がある。
【０００６】
本発明者は、新たな核酸誘導体として、核酸のリボース環の酸素原子を−Ｓ−Ｓ−基とした１，２−ジチアン誘導体を考案して合成に着手した。しかし、従来方法を適用しても目的化合物を得ることはできなかった。
【０００７】
そこで本発明は、リボース環の酸素原子が−Ｓ−Ｓ−基で置換された核酸誘導体を製造するための方法と、当該方法で製造された核酸誘導体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた。先ず、核酸のリボース環の酸素原子を−Ｓ−Ｓ−基で直接置換することはできない。そこで、１，２−ジチアン化合物をスルフィナート化した上で、Ｐｕｍｍｅｒｅｒ転位反応の変法により核酸塩基基を直接導入すべく試みたが、収率が低く目的化合物は僅かしか得られなかった。そこで、Ｐｕｍｍｅｒｅｒ転位反応を利用して無水酢酸を反応させることにより上記チオールスルフィナート化合物へアセトキシ基をいったん導入し、さらにＶｏｒｂｒｕｇｇｅｎ反応で核酸塩基基を導入することにより目的の核酸誘導体が得られることを見出して、本発明を完成した。
【０００９】
本発明に係る核酸誘導体の製造方法は、下記式（Ｉ）で表される核酸誘導体を製造するための方法であって、
【００１０】
【化１】
2014169239.tif 000002
【００１１】
［式中、
Ｒ1およびＲ2は独立に水素原子または水酸基の保護基を示し；
Ｒ3は水素原子、水酸基、保護水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、２−（Ｃ1-6アルコキシ）エトキシ基またはハロゲン原子を示し；
Ｂは、下記式で表される何れかの核酸塩基基：
【００１２】
【化２】
2014169239.tif 000003
【００１３】
［式中、Ｒ4は水素原子またはアミノ基の保護基を示す］を示す］
下記式（ＩＩ）で表されるチオールスルフィナート化合物にカルボン酸無水物を作用させることにより、下記式（ＩＩＩ）で表されるカルボキシレート化合物を得る工程：
【００１４】
【化３】
2014169239.tif 000004
【００１５】
［式中、Ｒ1〜Ｒ3は上記と同義を示し；Ｒ5はＣ1-6アルキル基またはＣ1-6ハロゲン化アルキル基を示す］；および
シリル化剤とルイス酸の存在下、カルボキシレート化合物（ＩＩＩ）と核酸塩基を反応させることにより核酸誘導体（Ｉ）を得る工程を含むことを特徴とする。
【００１６】
上記本発明方法において、ルイス酸としてはトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルを、シリル化剤としてはＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミドを好適に用いることができる。
【００１７】
上記本発明方法において、チオールスルフィナート化合物（ＩＩ）を得る工程として、さらに、ジチアン化合物（ＩＶ）を酸化してチオールスルフィナート化合物（ＩＩ）を得る工程：
【００１８】
【化４】
2014169239.tif 000005
【００１９】
［式中、Ｒ1〜Ｒ3は上記と同義を示す］
を含むことが好ましい。
【００２０】
本発明に係る核酸誘導体は、下記式（Ｉ）で表されることを特徴とする。
【００２１】
【化５】
2014169239.tif 000006
【００２２】
［式中、
Ｒ1およびＲ2は独立に水素原子または水酸基の保護基を示し；
Ｒ3は水素原子、水酸基、保護水酸基、Ｃ1-6アルコキシ基、２−（Ｃ1-6アルコキシ）エトキシ基またはハロゲン原子を示し；
Ｂは、下記式で表される何れかの核酸塩基基：
【００２３】
【化６】
2014169239.tif 000007
【００２４】
［式中、Ｒ4は水素原子またはアミノ基の保護基を示す］を示す］
【００２５】
本発明において、「水酸基の保護基」は、水酸基の保護基として当業界で一般に用いられるものであれば特に制限されないが、例えば、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、３，４−ジメトキシベンジル基、ｏ−またはｐ−ニトロベンジル基、ｐ−ハロベンジル基、２，６−ジクロロベンジル基などのベンジル系保護基；トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、トリフェニルシリル基などのシリル系保護基；アセチル基やベンゾイル基などのアシル系保護基；メトキシメチル基、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル基、ｔ−ブトキシメチル基、２−メトキシエトキシメチル基、１−メトキシエチル基、１−エトキシエチル基などのアルコキシメチル系保護基などを挙げることができる。また、チオールスルフィナート環の４位と５位の水酸基を同時に保護できる保護基として、メチレンアセタール基、エチレンアセタール基、アセトニド基などの環状アセタール系保護基などを用いてもよい。
【００２６】
「保護水酸基」とは、上記保護基で保護された水酸基を意味する。例えば、ベンジルオキシ基、ｐ−メトキシベンジルオキシ基、トリメチルシリルオキシ基、トリイソプロピルシリルオキシ基、１−メトキシエトキシ基などを挙げることができる。
【００２７】
「Ｃ1-6アルコキシ基」は、炭素数１以上、６以下の直鎖状または分岐鎖状の一価脂肪族飽和炭化水素オキシ基をいう。例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基などを挙げることができる。これらのうち、Ｃ1-4アルコキシ基が好ましく、Ｃ1-2アルコキシ基がより好ましく、メトキシ基が特に好ましい。
【００２８】
「２−（Ｃ1-6アルコキシ）エトキシ基」は、エトキシ基の２位に上記Ｃ1-6アルコキシ基が置換した基をいう。例えば２−メトキシエトキシ基は、ＣＨ3ＯＣＨ2ＣＨ2Ｏ−の構造を有する。
【００２９】
「ハロゲン原子」としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を挙げることができる。Ｒ3のハロゲン原子としては、フッ素原子が好適である。
【００３０】
なお、Ｒ3がＣ1-6アルコキシ基、２−（Ｃ1-6アルコキシ）エトキシ基またはハロゲン原子である場合、生体内で分解され難くなり、本発明に係る核酸誘導体またはそれを含むオリゴマーの安定性が向上する。
【００３１】
「アミノ基の保護基」は、アミノ基の保護基として当業界で一般に用いられるものであれば特に制限されないが、例えば、メチルカルバメート基、エチルカルバメート基、９−フルオレニルメチルカルバメート基、ｔ−ブチルカルバメート基などのカルバメート系保護基；アセチル基やベンゾイル基などのアシル系保護基などを挙げることができる。なお、−ＮＨＲ4基においては、保護基であるＲ4は、例えば、ジメチルアミノメチレン基、ベンジリデン基、ジフェニルメチレン基などのイミン系保護基や、環状保護基など、−Ｎ＝Ｒ4の形でアミノ基を保護するものであってもよいものとする。
【００３２】
「カルボン酸無水物」とは、炭素数２以上、６以下の、ハロゲン原子で置換されていてもよい直鎖状または分岐鎖状のカルボン酸の無水物をいう。例えば、無水酢酸、プロピオン酸無水物、トリフルオロ酢酸無水物などを挙げることができる。
【００３３】
「Ｃ1-6アルキル基」とは、炭素数１以上、６以下の直鎖状または分岐鎖状の一価脂肪族飽和炭化水素基をいう。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基等を挙げることができる。これらのうち、Ｃ1-4アルキル基が好ましく、Ｃ1-2アルキル基がより好ましく、メチル基が特に好ましい。
【００３４】
「Ｃ1-6ハロゲン化アルキル基」は、少なくとも一つのハロゲン原子で置換されているＣ1-6アルキル基を意味する。例えば、トリフルオロメチル基、トリフルオロエチル基、ペンタフルオロエチル基、クロロメチル基、ブロモメチル基などが挙げられる。
【発明の効果】
【００３５】
本発明方法によれば、リボース環の酸素原子が−Ｓ−Ｓ−基に置換された新規な核酸誘導体を製造することが可能である。当該核酸誘導体は、それ自体が、或いはそれが少なくとも一部に含まれる核酸オリゴマーが、従来の核酸医薬の欠点を克服したり、また、新たな又はより優れた薬効を示す可能性がある。従って本発明方法は、新たな核酸医薬の提供の一助になるものとして、産業上有用である。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
以下、本発明方法を実施の順番に従って説明する。なお、下記の何れの工程においても、適時、各保護基を各反応に適したものに変更してもよいものとする。適切な保護基と保護反応および脱保護反応は、当業者であれば公知方法から適宜選択することができる。例えば、T．W．Green，P．G．M．Wuts，"PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS"，JOHN WILEY & SONS，Inc．を参照すればよい。
【００３７】
また、化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）等における絶対構造は制限されないが、以下では、天然の核酸の成分であるＤ−リボースを出発原料とした例をもって説明する。他の立体配置を有する化合物も、以下の方法を適用して合成可能である。但し、化合物（Ｉ）〜（ＩＶ）等としては、Ｄ−リボースと同様の立体構造を有するものが好適である。
【００３８】
（１）  Ｄ−リビトール化合物の製造工程
上述したとおり、核酸のリボース環の酸素原子を−Ｓ−Ｓ−基で直接置換することはできないため、原料中間体としてジチアン化合物を得る必要がある。本工程では、ジチアン化合物を得るための合成中間体であるＤ−リビトール化合物をＤ−リボースから製造する。
【００３９】
【化７】
2014169239.tif 000008
【００４０】
本工程におけるＲ1とＲ2は、求核置換反応や塩基性条件に耐える保護基とし、また、Ｒ3も求核置換反応や塩基性条件に耐える保護基で保護された水酸基とすることが好ましい。なお、以降において、これらＲ1〜Ｒ3は、所望のものに適宜官能基変換すればよい。
【００４１】
求核置換反応や塩基性条件に耐える保護基は、適宜選択すればよいが、例えば、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、３，４−ジメトキシベンジル基、ｏ−またはｐ−ニトロベンジル基、ｐ−ハロベンジル基、２，６−ジクロロベンジル基などのベンジル系保護基などを挙げることができる。
【００４２】
例えば、Ｒ1とＲ2がｐ−メトキシベンジル基であり、Ｒ3がｐ−メトキシベンジルオキシ基であるリビトール化合物は、Ｄ−リボースから製造されている公知化合物である。よって、本工程は、例えば、Tetrahedronn，2003，59，pp．1699-1702を参照して実施することができる。
【００４３】
（２）  ジチアン化合物の製造工程
次に、二段階の求核置換反応を利用して水酸基を−ＳＡｃ基に変換した後、閉環することによりジチアン化合物（ＩＶ）を得る。
【００４４】
【化８】
2014169239.tif 000009
【００４５】
［上記スキーム中、Ｈａｌは、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子など脱離基となるハロゲン原子を示す］
【００４６】
本工程の第一段階では、水酸基をメタンスルホニル基などの脱離基とした後、求核置換反応により、上記リビトール化合物の二級アルコール基の立体配置を反転させつつ、脱離基であるハロゲン原子に変換する。
【００４７】
本工程の第二段階では、チオ酢酸塩を用いてハロゲン原子を−ＳＡｃ基で求核置換する。この際、立体配置は反転するので、４位の立体配置はＤ−リビトールと同じになる。
【００４８】
本工程の第三段階では、酸素雰囲気で加水分解することにより閉環し、ジチアン化合物（ＩＶ）とする。加水分解の条件は、Ａｃ基を除去できれば特に制限されないが、例えば、水酸化カリウムや水酸化ナトリウムの水溶液中で攪拌すればよい。この際、化合物が溶解し難い場合には、アルコール系溶媒などの水混和性有機溶媒を加えてもよい。また、酸素雰囲気は、反応を大気中開放系で行えば特に問題はないが、その他、空気など酸素を含む気体や酸素自体を反応液中にバブリングしてもよい。
【００４９】
（３）  チオールスルフィナート化合物の製造工程
次に、ジチアン化合物（ＩＶ）を酸化することにより、チオールスルフィナート化合物（ＩＩ）を得る。
【００５０】
【化９】
2014169239.tif 000010
【００５１】
本工程では、溶媒中、ジチアン化合物（ＩＶ）に酸化剤を作用させる。
【００５２】
使用できる溶媒としては、各化合物を適度に溶解することができ且つ反応を阻害しないものであれば特に制限されず、適宜選択すればよいが、例えば、ジクロロメタンやジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素系溶媒；アセトニトリルなどのニトリル系溶媒；メタノールやエタノールなどのアルコール系溶媒；ジエチルエーテルやテトラヒドロフランなどのエーテル系溶媒；これら２以上の混合溶媒を挙げることができる。
【００５３】
酸化剤は適宜選択すればよいが、チオールスルフォナート体まで酸化し難くチオールスルフィナート体が効率的に得られるものが好ましい。例えば、メタクロロ過安息香酸、過ヨウ素酸ナトリウムなどのメタ過ヨウ素酸塩、過酸化水素、過酢酸、オゾン、ハロゲン、Ｎ−ハロゲン化合物などを挙げることができる。
【００５４】
反応液中におけるジチアン化合物（ＩＶ）の濃度は適宜調整すればよいが、例えば、０．０１ｇ／ｍＬ以上、０．５ｇ／ｍＬ以下程度とすればよい。
【００５５】
酸化剤の使用量に関しては、ジチアン化合物（ＩＶ）を十分に酸化する必要がある一方でスルホン化を抑制する必要があるので、ジチアン化合物（ＩＶ）に対して０．９倍モル以上、１．５倍モル以下とすることが好ましく、０．９５倍モル以上、１．２倍モル以下とすることがより好ましい。
【００５６】
反応温度も適宜調整すればよいが、酸化反応を制御するために、例えば、１０℃以下とすることができ、０℃以下とすることが好ましく、−５０℃以下とすることがより好ましい。具体的には、ドライアイスの昇華点が−７９℃、液体窒素の温度が−１９６℃であるから、これらを利用すればよい。また、反応時間も適宜調整すればよく、原料化合物であるジチアン化合物（ＩＶ）が実質的に検出できなくなるまでや、予備実験などで決定すればよいが、通常、５分間以上、１時間以下程度とすることができる。
【００５７】
反応終了後は、一般的な後処理を行えばよい。例えば、過剰の酸化剤を分解するために飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、有機溶媒で抽出し、乾燥・濃縮した後に、クロマトグラフィなどで精製すればよい。
【００５８】
なお、チオールスルフィナート化合物（ＩＩ）のスルホキシド基の硫黄原子は非共有電子対を有し、キラリティを示すので、チオールスルフィナート化合物（ＩＩ）はジアステレオマーが存在する。本発明では、何れの異性体も利用可能である。
【００５９】
（４）  アセテート化工程
次に、チオールスルフィナート化合物（ＩＩ）にカルボン酸無水物を作用させることにより、アセテート化合物（ＩＩＩ）を得る。
【００６０】
【化１０】
2014169239.tif 000011
【００６１】
本工程では、Ｐｕｍｍｅｒｅｒ転位反応を利用して無水酢酸を反応させることでチオールスルフィナート化合物（ＩＩ）にアセトキシ基を導入する。
【００６２】
本工程では、無水酢酸を溶媒として用い、加熱するのみで容易にアセテート化合物（ＩＩＩ）が得られる。当該反応液におけるチオールスルフィナート化合物（ＩＩ）の濃度は適宜調整すればよいが、例えば、０．０１ｇ／ｍＬ以上、１．０ｇ／ｍＬ以下程度とすればよい。
【００６３】
反応温度は適宜調整すればよいが、例えば、８０℃以上、１８０℃以下程度とすることができ、加熱還流するのが簡便である。反応時間も適宜調整すればよく、原料化合物であるチオールスルフィナート化合物（ＩＩ）が実質的に検出できなくなるまでや、予備実験などで決定すればよいが、通常、１時間以上、５０時間以下程度とすることができる。
【００６４】
反応終了後は、一般的な後処理を行えばよい。例えば、過剰の無水酢酸を処理するために、冷却しつつ飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、有機溶媒で抽出し、乾燥・濃縮した後に、クロマトグラフィなどで精製すればよい。
【００６５】
なお、Ｐｕｍｍｅｒｅｒ転位反応では、スルホニウムイオンを経由するため、通常、生成物の立体構造を制御することはできず、アセテート化合物（ＩＩＩ）はジアステレオマー混合物として得られる。本発明では、何れの異性体も利用可能である。
【００６６】
（５）  Ｖｏｒｂｒｕｇｇｅｎ反応工程
次に、シリル化剤とルイス酸の存在下、アセテート化合物（ＩＩＩ）と核酸塩基を反応させることにより、目的化合物である核酸誘導体（Ｉ）を得る。
【００６７】
【化１１】
2014169239.tif 000012
【００６８】
本工程では、溶媒中、アセテート化合物（ＩＩＩ）と核酸塩基を混合し、さらにシリル化剤を加えた後、冷却しつつルイス酸を添加して反応させればよい。
【００６９】
使用できる溶媒としては、各化合物を適度に溶解することができ且つ反応を阻害しないものであれば特に制限されず、適宜選択すればよいが、例えば、アセトニトリルなどのニトリル系溶媒；ジクロロメタンやジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素系溶媒；ベンゼンやトルエンなどの芳香族炭化水素系溶媒；これら２以上の混合溶媒を挙げることができる。
【００７０】
核酸塩基としては、以下のものを用いる。なお、これら核酸塩基は、市販されていればそれを用いることができ、或いは、市販化合物からアミノ基を選択的に保護することにより容易に合成することができる。
【００７１】
【化１２】
2014169239.tif 000013
【００７２】
［式中、Ｒ4は上記と同義を示す］
【００７３】
シリル化剤としては、例えば、Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド、１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザンなどを挙げることができる。
【００７４】
ルイス酸としては、例えば、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル、ヨウ化トリメチルシラン、塩化スズ、塩化亜鉛、塩化水銀、四塩化チタンなどを挙げることができる。但し、本発明に係る核酸誘導体を医薬などに用いる場合には、重金属の残留は好ましくないため、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルやヨウ化トリメチルシランなど重金属を含まないものを用いることが望ましい。なお、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルは、ルイス酸としてのみでなくシリル化剤としても作用する。
【００７５】
アセテート化合物（ＩＩＩ）と核酸塩基は、理論上は等モル用いればよいが、市販されているか、或いは市販のものを保護するのみで簡便に合成できる核酸塩基を過剰に用いることが好ましい。例えば、アセテート化合物（ＩＩＩ）に対して、核酸塩基を１．０倍モル以上、３倍モル以下用いることができ、２．５倍モル以下がより好ましく、２．０倍モル以下がさらに好ましい。シリル化剤とルイス酸の使用量は適宜調整すればよいが、同様の理由で、シリル化剤は、アセテート化合物（ＩＩＩ）に対して２．０倍モル以上、６倍モル以下用いることが好ましく、ルイス酸は、アセテート化合物（ＩＩＩ）に対して２．０倍モル以上、５倍モル以下用いることが好ましい。
【００７６】
溶媒の使用量は適宜調整すればよいが、例えば、アセテート化合物（ＩＩＩ）と核酸塩基の合計の濃度が１０ｍｇ／ｍＬ以上、３００ｍｇ／ｍＬ以下となるようにすればよい。
【００７７】
本工程では、通常、アセテート化合物（ＩＩＩ）、核酸塩基およびシリル化剤を含む溶液にルイス酸を加える。この際、急激な反応の進行を抑制するために、冷却すればよい。冷却温度は特に制限されないが、例えば、反応器を氷冷すればよい。
【００７８】
ルイス酸を添加した後は、反応温度を上げ、反応を十分に進行させることが好ましい。反応温度は適宜調整すればよいが、例えば、４０℃以上、１２０℃以下程度とすることができ、加熱還流するのが簡便である。反応時間も適宜調整すればよく、原料化合物であるアセテート化合物（ＩＩＩ）が実質的に検出できなくなるまでや、予備実験などで決定すればよいが、通常、１時間以上、２０時間以下程度とすることができる。
【００７９】
反応終了後は、一般的な後処理を行えばよい。例えば、過剰のルイス酸などを処理するために、冷却しつつ飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、有機溶媒で抽出し、乾燥・濃縮した後に、クロマトグラフィなどで精製すればよい。
【００８０】
その後、さらに、得られた化合物を脱保護反応に付したり、また、Ｒ3の水酸基をアルコキシ基やハロゲン原子に官能基変換してもよい。
【００８１】
以上で説明した本発明方法によれば、リボース部分が１，２−ジチアン環に変更された核酸誘導体を製造することができる。当該核酸誘導体およびそれを含む核酸オリゴマーは、医薬や農薬などとしての利用が期待できる。
【実施例】
【００８２】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はもとより下記実施例によって制限を受けるものではなく、前・後記の趣旨に適合し得る範囲で適当に変更を加えて実施することも勿論可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。
【００８３】
なお、ＮＭＲはＢｒｕｋｅｒ社製のＦＴ−ＮＭＲ  ＡＶ５００およびＡＶ４００を用いて測定した。1Ｈ  ＮＭＲおよび13Ｃ  ＮＭＲの化学シフトはテトラメチルシラン０．００ｐｐｍ（1Ｈ）、ＣＨＣｌ3７．２６ｐｐｍ（1Ｈ）および７７．０ｐｐｍ（13Ｃ）、またはＤＭＳＯ２．５０ｐｐｍ（1Ｈ）および３９．５ｐｐｍ（13Ｃ）を内部標準とした。値をｐｐｍで示し、結合定数はＪ値（Ｈｚ）で表示した。シグナルの多重度は、ｓ：ｓｉｎｇｌｅｔ，ｄ：ｄｏｕｂｌｅｔ，ｔ：ｔｒｉｐｌｅｔ，ｑ：ｑｕａｒｔｅｔ，ｍ：ｍｕｌｔｉｐｌｅｔ，ｂｒ：ｂｒｏａｄの略号を用いて示した。シグナルの帰属は１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ  スペクトルに基づいて行った。
【００８４】
質量分析（ＭＳ）は、Ｗａｔｅｒｓ社製のＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ＬＣＴ  ＰＲＥＭＩＥＲを用いて実施した。
【００８５】
反応は、特に記載しない限り、アルゴン雰囲気下、市販の無水溶媒を用いて行った。溶媒として、アセトニトリルとジクロロメタンは五酸化二リンを用いて、ピリジンは水酸化カリウムを用いて蒸留したものを用いた。
【００８６】
ＴＬＣにはＭｅｒｃｋ社製のｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０Ｆ２５４を使用した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにはＭｅｒｃｋ社製のｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０（０．０６３−０．２００ｍｅｓｈ）を使用した。フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーには、Ｍｅｒｃｋ社製のｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０（２３０−６００ｍｅｓｈ  ＡＳＴＭ）を使用した。セライト濾過には、Ｎａｃａｌａｉ社製のｔｅｓｑｕｅ  Ｃｅｌｉｔｅ  ５４５を使用した。
【００８７】
実施例１
【００８８】
【化１３】
2014169239.tif 000014
【００８９】
（１）２，３，５−トリ−Ｏ−ｐ−メトキシベンジル−Ｄ−リビトール（化合物１）
Ｄ−リボース（１２．０ｇ，７９．９ｍｍｏｌ）をアリルアルコール（２５０ｍＬ）に懸濁し、濃硫酸（１．３０ｍＬ，２４．４ｍｍｏｌ）を加えて室温にて２２時間撹拌した。反応混合液に固体の炭酸水素ナトリウムを加えて中和し、析出した塩をセライトパッドに通して濾去し、メタノールで洗浄した。濾液を減圧濃縮し、メタノールで共沸した後、トルエン共沸を３回行い、粗アリルグリコシド体を黄色油状物質として得た。水素化ナトリウム（６０％ミネラルオイル懸濁液，１４．４ｇ，３６０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１４０ｍＬ）に溶解し、そこに上記アリルグリコシド体とＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７０ｍＬ）の混合溶液を氷冷下１５分かけて滴下した後、室温にて１時間３０分撹拌した。反応混合液にパラメトキシベンジルクロライド（４３．４ｍＬ，３２０ｍｍｏｌ）の三分の一量を氷冷下、１５分かけて滴下した後、氷浴を取り除き室温に戻しながら残りのパラメトキシベンジルクロライドを滴下した。滴下後、室温にて１４時間撹拌し、反応混合液中に氷を加えた。反応混合液を酢酸エチルと水で分配し、得られた有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶液を濾過後、濾液を減圧濃縮し、粗パラメトキシベンジル保護体を白黄色油状物質として得た。得られた当該物質をクロロホルム（２４０ｍＬ）に溶解し、水（１６０ｍＬ）と塩化パラジウム（ＩＩ価，２．１２ｇ，１２．０ｍｍｏｌ）を加え、酸素雰囲気下、５０℃にて２０時間激しく撹拌した。氷冷下において沈殿した固体をセライトパッドで濾去し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を減圧濃縮した後、得られた残渣を酢酸エチルと水で分配し、有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶液を濾過後、濾液を減圧濃縮し、粗生成物を茶褐色油状物質として得た。得られた当該物質をメタノール（４００ｍＬ）に溶解し、氷冷下において水素化ホウ素ナトリウムを加え、室温に戻し１０分間撹拌した。反応混合液を減圧濃縮し、メタノール共沸を２回行い、得られた残渣を酢酸エチルと水で分配した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶液を濾過後、濾液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝３／１〜２／１〜１／１）で精製し、化合物１（２９．３ｇ，５７．２ｍｍｏｌ，４工程の総収率：７２％）を淡黄色油状物質として得た。
1H NMR（CDCl3）;δ7.21（m，6H，Ar），6.85（m，6H，Ar），4.52（m，6H，-OCH2- × 3），3.95（m，2H，H-2），3.80（s，9H，-OMe × 3），3.71（m，4H，H-3 and H-4 and H-5），3.52（m，2H，H-1），2.70，2.36（each br s，each 1H，1-OH and 5-OH）
【００９０】
（２）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２，５−ジブロモ−１，３，４−トリス−ｐ−メトキシベンジルオキシペンタン（化合物２）
上記化合物１（２７．９ｇ，５４．５ｍｍｏｌ）をピリジン（４５ｍＬ）に溶解し、氷冷下にてメタンスルホニルクロライド（１４．８ｍＬ，０．１９ｍｏｌ）を加え３０分間撹拌した。反応混合液に氷を加え、酢酸エチルと水で分配した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶液を濾過後、濾液を減圧濃縮し、トルエン共沸を４回行い、ジメシル体を黄色油状の粗生成物として得た。得られたジメシル体をメチルエチルケトン（１３０ｍＬ）に溶解し、リチウムブロマイド（４５．５ｇ，０．５２ｍｏｌ）を加え、５時間加熱還流した。反応混合液を酢酸エチルと水で分配し、有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶液を濾過後、濾液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝７／１〜３／１）で精製し、化合物２（２０．９ｇ，３２．７ｍｍｏｌ，２工程の総収率：６２％）を黄色油状物質として得た。
1H NMR（CDCl3）;δ7.32-7.21（m，6H，Ar），6.86（m，6H，Ar），4.68-4.46（m，6H，-O-CH2-×3），4.40（m，1H），3.79（s，9H，-OCH3×3），3.89（m，1H），3.76-3.69（m，4H），3.64（m，1H）
【００９１】
（３）（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，５−ジチオアセチル−１，３，４−トリス−ｐ−メトキシベンジルオキシペンタン（化合物３）
上記化合物２（２０．８ｇ，３２．７ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３２．０ｍＬ）に溶解し、チオ酢酸カリウム（２６．０ｇ，０．２ｍｏｌ）を加え、１００℃にて７時間撹拌した。反応混合液を酢酸エチルと水で分配し、有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶液を濾過後、濾液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝６／１〜３／１）で精製し、化合物３（７．６０ｇ，１２．１ｍｍｏｌ，収率：３７％）を赤褐色油状物質として得た。
1H NMR（CDCl3）；δ7.22（m，6H，Ar），6.84（m，6H，Ar），4.53-4.39（m，6H，-O-CH2- × 3），3.90（m，1H，H-2），3.84（dd，1H，H-3，J3,2 = 4.8，J3,5 = 5.5），3.79（s，9H，-OCH3×3），3.63（m，2H，H-5），3.43（dd，1H，H-4，J4,3 = 5.5，J4,5 = 6.5），3.33（dd，1H，H-1a J1a,2 = 4.3，J1a,1b = 14.1），3.18（dd，1H，H-1b J1b,2 = 5.3，J1b,1a = 14.1），2.35（s，3H，SC(O)CH3），2.30（s，3H，SC(O)CH3）
13C NMR（CDCl3）；δ196.07，195.01，159.64，159.58，130.39，130.20，129.99，129.68，114.09，114.04，78.66，78.44，73.43，72.96，71.83，70.07，55.63，45.02，31.07，30.99，30.01
ESIMS-LR m/z = 651（MNa+）
【００９２】
（４）（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４，５−ビス−ｐ−メトキシベンジルオキシ−３−ｐ−メトキシベンジルオキシメチル−１，２−ジチアン（化合物４）
上記化合物３（７．６０ｇ，１２．１ｍｍｏｌ）を１０％水酸化カリウム水溶液：メタノール（１：５）混合溶液（８４ｍＬ）に溶解させ、酸素雰囲気下、８時間撹拌した。氷冷下、反応混合液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて、酢酸エチルと水で分配し、有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶液を濾過後、濾液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝６／１〜３／１）で精製し、化合物４（４．７９ｇ，８．８３ｍｍｏｌ，収率：７３％）を赤褐色油状物質として得た。
1H NMR（CDCl3）;δ7.23（m，6H，Ar），6.86（m，6H，Ar），4.56-4.41（m，6H，-O-CH2- × 3 ），3.89-3.75（m，4H），3.80（s，9H，-OCH3×3 ），3.50（m，1H），3.22（m，1H），2.78（m，1H）
13C NMR（CDCl3）;δ159.05，129.48，129.43，129.18，113.65，113.62，80.18，78.94，72.55，71.27，71.16，68.19，55.13，46.99，30.59
ESIMS-LR m/z = 565（MNa+）
【００９３】
（５）（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４，５−ジヒドロキシ−３−ヒドロキシメチル−１，２−ジチアン（化合物５）
上記化合物４（４．７９ｇ，８．８３ｍｍｏｌ）を２０％トリフルオロ酢酸−ジクロロメタン混合溶液（２０ｍＬ）に溶解させ、４時間３０分撹拌した。反応液を減圧濃縮し、メタノールで３回共沸した。残渣にメタノールを加え不溶物を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：クロロホルム／メタノール＝１９／１〜１７／３）にて精製し、化合物５（１．３５ｇ，７．４２ｍｍｏｌ，収率：８４％）を無色透明油状物質として得た。
1H NMR（DMSO-d6）;δ4.85（br s，3H，4-OH，5-OH，7-OH exchangable with D2O），3.86（m，1H），3.75-3.55（m，3H），3.16（m，1H），2.97（m，1H），2.75（m，1H）
13C NMR（DMSO-d6）;δ75.56，73.89，64.34，52.18，32.36
ESIMS-LR m/z = 205（MNa+）
【００９４】
（６）（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４，５−ジヒドロキシ−３−トリイソプロピルシロキシメチル−１，２−ジチアン（化合物６）
上記化合物５（１．２０ｇ，６．５８ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１６．０ｍＬ）に溶解し、氷冷下にてイミダゾール（０．９９ｇ，１４．５ｍｍｏｌ）とトリイソプロピルシリルクロリド（１．５０ｍＬ，７．２４ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で５時間撹拌した。反応液に氷を加えて反応を停止させ、酢酸エチルと水で分配し、有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶液を濾過後、濾液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝５／１〜１／１）にて精製し、化合物６（２．０ｇ，５．９０ｍｍｏｌ，収率：９１％）を赤褐色油状物質として得た。
1H NMR（DMSO-d6）;δ4.85（br s，2H，4-OH，5-OH，exchangable with D2O），4.12（m，1H），3.92（m，1H），3.80（m，1H），3.61（m，1H），3.31（m，1H），2.98（m，1H），2.79（m，1H）
13C NMR（CDCl3）;δ74.74，67.07，60.30，48.19，33.52，17.78，11.63
ESIMS-LR m/z = 361（MNa+）
【００９５】
（７）（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４，５−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−３−トリイソプロピルシロキシメチル−１，２−ジチアン（化合物７）
上記化合物６（２．０ｇ，５．９０ｍｍｏｌ）をアセトン（２０ｍＬ）に溶解し、２，２−ジメトキシプロパン（５．３０ｍＬ，４１．０ｍｍｏｌ）とｐ−トルエンスルホン酸水和物（０．２２ｇ，１．２０ｍｍｏｌ）を順次加え、室温にて１０分撹拌した。反応液に、氷冷下、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルと水で分配し、有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶液を濾過後、濾液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝４９／１〜２４／１）にて精製し、化合物７（１．９８ｇ，５．２３ｍｍｏｌ，収率：９８％）を赤褐色油状物質として得た。
1H NMR（CDCl3）;δ4.33（m，1H，H-4），4.22（dd，1H，H-5，J5,4 = 4.6，J5,6 = 8.7 Hz），4.11（dd，1H，H-7a，J7,6 = 4.5，J7a,7b = 10.4 Hz），3.98（dd，1H，H-7b，J7b,6 = 5.0，J7b,7a = 10.4 Hz ），3.31（dd，1H，H-3a，J3a,4 = 3.7，J3a,3b = 14.6 Hz），3.26（m，1H，H-6），3.18（dd，1H,H-3b，J3b,4 = 4.5，J3b,3a = 14.6 Hz），1.52，1.38（each s，each 3H，isopropylidene），1.07（m，21H，TIPS）
13C NMR（CDCl3）;δ108.14，72.73，71.14，62.96，51.89，36.58，28.60，26.86，18.12，12.04
ESIMS-LR m/z = 401（MNa+）
【００９６】
（８）（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−４，５−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−１−オキソ−３−トリイソプロピルシロキシメチル−１，２−ジチアン（化合物８）
上記化合物７（１．９８ｇ，５．２３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２６ｍＬ）に溶解し、−７８℃にてメタクロロ過安息香酸（１．４２ｇ，５．７５ｍｍｏｌ）を少しずつ加えて、１０分撹拌した。−７８℃下、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、その後反応混合液を室温に戻し、酢酸エチルと水で分配した。有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶液を濾過後、濾液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝７／１〜４／１）にて精製し、化合物８（１．７８ｇ，４．５０ｍｍｏｌ，収率：８６％）を白色固体物質のジアステレオマー混合物として得た。分析用サンプルとして二つのジアステレオマーを分離した。
【００９７】
ジアステレオマーＡの1H NMR
1H NMR（CDCl3）；δ4.58（ddd，1H，H-4，J4,3a = 3.5，J4,5 = 5.5，J4,3b = 7.8 Hz），4.30（dd，1H，H-7a，J7a,6 = 4.3，J7a,7b = 10.5 Hz），4.26（dd，1H，H-5，J5,4 = 5.5，J5,6 = 9.5 Hz ），4.13（t，1H，H-7，J7b,6 = J7b,7a = 10.5），3.55（dd，1H，H-3a，J3a,4 = 3.5，J3a,3b = 13.6 Hz），3.16（dd，1H，H-3b，J3b,4 = 7.8，J3b,3a = 13.6 Hz），3.06（ddd，1H，H-6，J6,7a = 4.3，J6,5 = 9.5，J6,7b = 10.5 Hz），1.50，1.37（each s，each 3H，isopropylidene），1.07（m，21H，TIPS）
ジアステレオマーＢの1H NMR
δ4.71（dd，1H，H-5，J5,4 = 6.0，J5,6 = 10.3 Hz ），4.38（dd，1H，H-7a，J7a,6 = 2.3，J7a,7b = 10.5 Hz），4.20(ddd，1H，H-4，J4,3a = 4.0，J4,5 = 6.0，J4,3b = 10.3 Hz） ，4.09（dd，1H，H-7，J7b,6 = 2.8，J7b,7a = 10.5），3.84（dd，1H，H-3a，J3a,4 = 4.0，J3a,3b = 13.3 Hz），3.80（m，1H，H-6），2.98（dd，1H，H-3b，J3b,4 = 10.3，J3b,3a = 13.3 Hz），1.49，1.36（each s，each 3H，isopropylidene），1.07（m，21H，TIPS）.
ジアステレオマーＡの13C NMR
13C NMR（500 MHz，CDCl3）δ109.25，71.24，70.18，67.02，61.64，28.30，27.83，26.20，18.30，12.23
ジアステレオマーＢの13C NMR
13C NMR（500 MHz，CDCl3）δ109.76，72.85，71.66，62.25，55.31，43.29，27.87，25.32，17.79，11.73
ESIMS-LR m/z = 395（MH+）
【００９８】
（９）（４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−３−アセトキシ−４，５−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−６−トリイソプロピルシロキシメチル−１，２−ジチアン（化合物９）
上記化合物８（１．７５ｇ，４．４０ｍｍｏｌ）を無水酢酸（２２ｍＬ）に溶解し、３３時間加熱還流した。氷冷下、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液へ室温に戻した反応液を少しずつ加え、発泡がなくなるまで撹拌した。その後、反応混合液を酢酸エチルと水で分配し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶液を濾過後、濾液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝９７／３〜２３／２）にて精製し、化合物９（３７１．０ｍｇ，０．８５ｍｍｏｌ，収率：１９％）を橙色油状物質のジアステレオマー混合物として得た。
【００９９】
ジアステレオマーＡの1H NMR
1H NMR（CDCl3）;δ6.01（d，1H，H-3，J3,4 = 4.8 Hz），4.48（dd，1H，H-5，J5,4 = 4.8，J5,6 = 7.5 Hz），4.16（t，1H，H-4，J4,3 = J4,5 = 4.8），4.14（dd，1H，H-7a，J7a,6 = 5.5，J7a,7b = 10.5 Hz），4.00（dd，1H，H-7b，J7b,6 = 5.5，J7b,7a = 10.5 Hz），3.26（dt，1H，H-6，J6,7 = 5.5，J6,5 = 7.5 Hz），2.16（s，3H，-OC(O)CH3），1.52，1.36(each s，each 3H，isopropylidene），1.07（m，21H，TIPS）
ジアステレオマーＢの1H NMR
1H NMR（CDCl3）;δ6.16（d，1H，H-3，J3,4 = 3.0 Hz），4.46（dd，1H，H-5，J5,4 = 5.0，J5,6 = 9.0 Hz），4.41（dd，1H，H-4，J4,3 = 3.0，J4,5 = 5.0），4.12（dd，1H，H-7a，J7a,6 = 4.3，J7a,7b = 10.5 Hz），4.01（dd，1H，H-7b，J7b,6 = 4.3，J7b,7a = 10.5 Hz），3.25（dt，1H，H-6，J6,7 = 4.3，J6,5 = 9.0 Hz），2.16（s，3H，-OC(O)CH3），1.54，1.39(each s，each 3H，isopropylidene），1.07（m，21H，TIPS）
ジアステレオマーＡの13C NMR
13C NMR（CDCl3）;δ169.15，108.50，74.60，74.45，73.56，62.88，50.27，28.38，26.73，21.15，18.08，12.01
ジアステレオマーＢの13C NMR
δ169.34，109.86，74.60，74.45，73.56，62.41，51.78，27.93，26.56，21.19，18.08，12.01
ESIMS-LR m/z = 459（MNa+）
【０１００】
（１０）１−［（３’Ｒ，４’Ｒ，５’Ｓ，６’Ｒ）−１’，２’−ジチアン−４’，５’−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−６’−トリイソプロピルシロキシメチル−３’−イル］ウラシル（化合物１０）
上記化合物９（２２３ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）とウラシル（１２０ｍｇ，１．０７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２．６０ｍＬ）に懸濁させ、Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（０．５２ｍＬ，２．１４ｍｍｏｌ）を加え、透明な溶液とした。そこに、氷冷下、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（０．２４ｍＬ，１．３０ｍｍｏｌ）を加え、５時間加熱還流した。氷冷下、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液へ室温に戻した反応液を少しずつ加えた。その後、反応混合液を酢酸エチルと水で分配し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶液を濾過後、濾液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝９／１〜３／２）にて精製し、化合物１０（９４．８ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ，収率：３７％）を茶色油状物質として得た。
1H NMR（CDCl3）;δ8.18（br s，1H，NH，exchangable with D2O ），7.39（d，1H，H-6，J6,5 = 8.2 Hz），5.78（d，1H，H-3'，J3',4' = 7.6 Hz），5.75（d，1H，H-5，J5,6 = 8.2 Hz），4.80（t，1H，H-5’，J5,4' = J5,6' = 4.7 Hz），4.38（dd，1H，H-4’，J4',5' = 4.7，J4',3' = 7.6 Hz），4.17（dd，1H，H-7’a，J7a',6' = 6.9，J7'a,7'b = 10.4 Hz），4.14（dd，1H，H-7'b，J7b,6' = 5.4，J7'b,7'a = 10.4 Hz），3.33（ddd，1H，H-6'，J6',5' = 4.7，J6',7'b = 5.4 J6',7'a = 6.9 Hz），1.57，1.37（each s，each 3H，isopropylidene），1.07（m，21H，TIPS）
ESIMS-LR m/z = 511（MNa+）
【０１０１】
（１１）１−［（３’Ｒ，４’Ｒ，５’Ｓ，６’Ｒ）−４’，５’−ジヒドロキシ−１’，２’−ジチアン−６’ −ヒドロキシメチル−３’−イル］ウラシル（化合物１１）
上記化合物１０（７３.０ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）に、別途調製した５０％トリフルオロ酢酸−ジクロロメタン混合溶液（１．５ｍＬ）を加え、２５時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、メタノールで３回共沸後、トルエン共沸を３回行った。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：クロロホルム／メタノール＝１７／３〜３／１）にて精製し、化合物１１（４０ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ，収率：９１％）を茶色固体物質として得た。
1H NMR（500 MHz，DMSO-d6，70℃）δ7.63（dd，1H，H-6，J = 4.0，J = 8.2 Hz），5.72（d，1H，H-3’，J3’,4’ = 9.8 Hz），5.62（dd，1H，H-5，J = 1.6 J = 8.2 Hz），5.34（br s，2H，4’-OH，5’-OH，exchangable with D2O），5.06（br s，1H，7’-OH，exchangable with D2O），4.28（dd，1H，H-5'，J5',4' = 2.2，J5',6' = 3.5 Hz），4.09（dd，1H，H-4'，J4',5' = 2.2，J4',3' = 9.8 Hz），3.92（dd，1H，H-7'a，J7'a,6' = 3.8，J7'a,7'b = 11.3 Hz），3.91（dd，1H，H-7 'b，J7'b,6' = 6.9，J7'b,7'a = 11.3 Hz），3.10（ddd，1H，H-6'，J6',5' = 3.5 J6',7'a = 3.8，J6',7'b = 6.9 Hz）