(57)【要約】【課題】非アルコール性肝炎予防および治療薬の提供。【解決手段】αリポ酸Ｓ体ないしはαリポ酸Ｓ体シクロデキストリン複合体を摂取することにより、肝臓における酸化ストレスマーカーを低下させ、肝障害が改善され非アルコール肝炎発症の予防および治療が期待できる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
αリポ酸Ｓ体ないしはシクロデキストリン若しくはその誘導体を含む素材を配合したヒトあるいは愛玩動物（例えば犬）の非アルコール性脂肪性肝疾患治療薬および予防薬。
【請求項２】
αリポ酸Ｓ体アルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩ないしはαリポ酸Ｓ体のアルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩のシクロデキストリンもしくはその誘導体を含む素材を配合したヒトあるいは愛玩動物（例えば犬）の非アルコール性脂肪性肝疾患治療薬および予防薬。
【請求項３】
シクロデキストリン若しくはその誘導体がαシクロデキストリン、βシクロデキストリン、γシクロデキストリン、６−０−α−マルトシル−αシクロデキストリン、６−０−α−マルトシル−βシクロデキストリン、６−０−α−マルトシル−γシクロデキストリン、ヒドロキシ−βシクロデキストリンから選ばれる少なくとも１種の（１）および（２）に記載の非アルコール性脂肪性肝疾患治療薬および予防薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、αリポ酸Ｓ体を含有する非アルコール性肝疾患治療薬および予防薬に関する。αリポ酸Ｓ体はアルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩およびαリポ酸Ｓ体アルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩のシクロデキストリン誘導体による複合体に関する。また当該方法により得られる薬剤は経口治療薬に関する。
【背景技術】
【０００２】  従来、非アルコール性脂肪性肝疾患は良性疾患であるとされてきたが、酒類を飲まないにも関わらず、アルコール性肝炎に類似した炎症及び肝線維化の組織像を示し、癌化したり予後不良の疾患であることが知られている。近年、肥満、糖尿病などを背景とするメタボリック症候群が注目を浴び、非アルコール性肝炎（ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓｋｏｒ  ｏｎ  ＮＡＳＨ）はその症候群の一つであるとの考えが広がってきたが、効果的な治療法が確立されてなく、治療薬剤は開発されていない。【０００３】  また、ＮＡＳＨはアルコール非摂取者に見られる肝障害に関する疾患であって、肥満、糖尿病、高トリグリセリド血症、長期経静脈栄養などによる過剰栄養摂取、内分泌障害、低βリポ蛋白血症、飢餓・再補充症候群などが原因と考えられる疾患である。近年、ＮＡＳＨ患者が増加しているため、注目を集めている。ＮＡＳＨは一般診療においても比較的頻繁に遭遇すると考えられる疾患で、アルコール性肝障害、ウイルス性肝炎、薬物性肝障害を否定できる肝炎の多くがこの病態であると推定される。アルコール性脂肪性肝炎とＮＡＳＨとの間に組織学的類似性があるということにより両者に肝障害の発生機序における類似機構が存在することが示唆されるが、詳細は判っていない。【０００４】  αリポ酸（チオクト酸）は、生体のエネルギー産生系において、ミトコンドリア酵素の補酵素として機能する物質である。１，２−ジチオラン環のＣ３位炭素原子にキラル中心があり、光学活性炭素を有する。天然物および生体内ではＲ体のみが存在し、動物性食肉では、特に肝臓、腎臓、心臓中に多く存在している。また、低濃度であるがホウレンソウ、トマトまたはブロッコリー等の野菜類においても存在している。【０００５】  αリポ酸は、近年、医薬品や健康食品等の有効成分として利用されており、ヨーロッパでは欧州薬局方に収載されている。糖尿病治療薬もしくは糖尿病性ニューロパシーに関連した合併症の治療薬として使用されている。
しかし、これらに利用されているαリポ酸は、工業的に容易かつ安価に製造できる、Ｒ体とＳ体を等量ずつ含むαリポ酸ラセミ体が主として使用されている。【０００６】  特許文献１ではαリポ酸Ｒ体やαリポ酸Ｓ体等を使用してシクロデキストリンやその誘導体による複合体が製造できることを示している。
非アルコール性肝障害の治療効果は先行技術（特許文献２）によるスクリーニングにより、確認できることが示されている。
非特許文献１ではαリポ酸ラセミ体はＮＡＳＨを改善し、肝臓内の酸化ストレスマーカーを低下させることが報告されている。【０００７】  天然に存在するαリポ酸Ｒ体および非天然型αリポ酸Ｓ体およびそのシクロデキストリン複合体を用いた研究によりαリポ酸Ｓ体およびαリポ酸Ｓ体のシクロデキストリン複合体が肝臓内のストレスマーカーを明確に低下させることを見出した。従ってαリポ酸Ｓ体およびαリポ酸Ｓ体のシクロデキストリン複合体摂取により肝障害が改善され非アルコール肝炎発症の予防および治療が期待できる。
【先行技術文献】
【０００８】
【特許文献１】ＷＯ２０１２／０１４７４６Ａ１公報
【特許文献２】特開２００９−１７８１４３号
【非特許文献１】Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ９０（２０１２）２００−２０５
【非特許文献２】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １１５  Ｓｕｐｐｌ．  １（２０１１）２６６Ｐ  Ｐ３Ｊ１３−７
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】  従来、非アルコール性脂肪性肝疾患は良性疾患であるとされてきたが、非飲酒家であるにも関わらず、アルコール性肝炎に類似した炎症及び肝線維化の組織像を示し、予後不良の疾患であることが知られている。近年、肥満、糖尿病などを背景とするメタボリック症候群が注目を浴び、ＮＡＳＨはその症候群の一つであるとの考えが広がっているが、効果的な治療法・治療薬剤が確率されていない。
【００１０】  また、非アルコール性脂肪性肝疾患に対しては、ＡＢＲ（アンジオテンシン受容体拮抗薬）抗高血圧薬のテルミサルタンが有効であると報告（非特許文献２）されているが、副作用として血圧が下がるため、投与には問題があった。
【００１１】  そこで本発明では、抗高血圧薬の投与ではなく、サプリメントで使用されているαリポ酸のＳ体ないしはそのシクロデキストリンによる複合体を配合させた非アルコール性脂肪性肝疾患治療薬および予防薬を提供する事を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】  ＮＡＳＨの原因は酸化ストレスと脂質の過酸化が最も主要なメカニズムとされている。マウスにメチオニンコリン欠乏（ＭＣＤ）食を摂取させるとプラズマ中のアラニンオキソグルタミン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸オキソグルタミン酸トランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が上昇し、組織中のＴＢＲＳ（チオバルビツール酸反応物質）レベルが上昇して、ヒトのＮＡＳＨと同様の症状を示す。ＭＣＤ食を摂取したマウスにαリポ酸（ラセミ体）を投与すると、上昇していたプラズマ中のＡＬＴとＡＳＴが低下し、組織中のＴＢＲＳレベルが低下して、ＮＡＳＨの改善、予防に効果が認められている。（非特許文献１）
【００１３】  本発明は次の（１）〜（３）に記載のαリポ酸のＳ体ないしはシクロデキストリンによる複合体を配合した非アルコール性脂肪性肝疾患治療薬および予防薬に関する。
（１）  αリポ酸Ｓ体ないしはそのシクロデキストリン若しくはその誘導体を含む素材を配合した、ヒトあるいは愛玩動物（例えば犬）の非アルコール性脂肪性肝疾患治療薬および予防薬。
（２）  αリポ酸Ｓ体アルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩ないしはαリポ酸Ｓ体のアルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩のシクロデキストリンもしくはその誘導体を含む素材を配合したヒトあるいは愛玩動物（例えば犬）の非アルコール性脂肪性肝疾患治療薬および予防薬。
（３）  シクロデキストリン若しくはその誘導体がαシクロデキストリン、βシクロデキストリン、γシクロデキストリン、６−０−α−マルトシル−αシクロデキストリン、６−０−α−マルトシル−βシクロデキストリン、６−０−α−マルトシル−γシクロデキストリン、ヒドロキシ−βシクロデキストリンから選ばれる少なくとも１種の（１）および（２）に記載の治療薬および予防薬
【発明の効果】
【００１４】  本発明により、αリポ酸Ｓ体ないしはシクロデキストリン複合体は、例えば、ヒトおよび愛玩動物（例えば犬）の、非アルコール性脂肪性肝疾患治療にあるいは予防に効果的に発揮させることが可能である。
スクリーニングに用いる実験用動物にＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダーゼ阻害剤（例えばストレプトゾイシン）を投与しインスリン抵抗性を惹起させ、さらに高脂肪食を用いて飼育することにより脂肪肝を誘発させた当該動物について、脂肪性肝炎を発症させた。該動物は、ヒトのＮＡＳＨと類似した病理所見を示す。該モデル動物を使用することにより、疾患の治療もしくは予防用の物質のスクリーニング、および、薬物の薬効評価を効果的に実施した。
【００１５】  αリポ酸Ｓ体はフリー体としてそのまま用いても良いが、ナトリウム、カリウムないしはリチウムのアルカリ金属塩、あるいはカルシウムないしはマグネシウム等のアルカリ土類金属塩のいずれか１種以上の塩として使用しても良い。
シクロデキストリン複合体に用いるシクロデキストリンとしては、αシクロデキストリン、βシクロデキストリン、γシクロデキストリン、ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン、スルフォブチルエーテルβシクロデキストリンまたは分岐型シクロデキストリンのいずれか一種以上であるαリポ酸複合体が使用される。当該αリポ酸Ｓ体のシクロデキストリン複合体はフリー体としてそのまま用いても良いが、ナトリウム、カリウムないしはリチウムのアルカリ金属塩、あるいはカルシウムないしはマグネシウムのアルカリ土類金属塩のいずれか１種以上の塩として使用しても良い。
【００１６】  αリポ酸Ｓ体およびαリポ酸Ｓ体のシクロデキストリン複合体が肝臓内のストレスマーカーを明確に低下させることを見出した。
従ってαリポ酸Ｓ体およびαリポ酸Ｓ体のシクロデキストリン複合体摂取により肝障害が改善され非アルコール肝炎発症の予防および治療が期待できる。
【発明を実施するための形態】
【００１７】  ＮＡＳＨの原因は酸化ストレスと脂質の過酸化が最も主要なメカニズムとされている。マウスにメチオニンコリン欠乏（ＭＣＤ）食を摂取させるとプラズマ中のＡＬＴとＡＳＴが上昇し、組織中のＴＢＲＳレベルが上昇しヒトのＮＡＳＨと同様の症状を示している。ＭＣＤ食を摂取したマウスにαリポ酸（ラセミ体）を投与すると、上昇していたプラズマ中のＡＬＴとＡＳＴが低下し、組織中のＴＢＲＳレベルが低下して、ＮＡＳＨの改善、予防に効果が認められている。（非特許文献１）しかしながら、ＭＣＤ食によるＮＡＳＨモデルマウスは、コントロールマウスに比べて体重増加抑制が著しく認められることから、ＮＡＳＨモデルマウスとしての限界がある。
【００１８】天然に存在するαリポ酸Ｒ体および非天然型αリポ酸Ｓ体およびそのシクロデキストリン複合体を用いた研究により、αリポ酸Ｓ体およびαリポ酸Ｓ体のシクロデキストリン複合体が肝臓内のストレスマーカーを明確に低下させる事を見出し、αリポ酸Ｓ体およびαリポ酸Ｓ体のシクロデキストリン複合体をヒトあるいは愛玩動物（例えば犬）への摂取により、肝障害が改善され非アルコール肝炎発症の予防および治療が期待できる。
【００１９】  本発明の「αリポ酸Ｓ体シクロデキストリン複合体」とは、フリー体、またはこれらのアルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩をシクロデキストリンで複合化したもののことをいう。本発明の「αリポ酸Ｓ体シクロデキストリン複合体」は、従来のαリポ酸をシクロデキストリンで複合化したものと比べて、αリポ酸Ｓ体、またはこれらのアルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩を高純度で含有するものであることが好ましい。
【００２０】  例えば、１０％以上のαリポ酸Ｓ体を含有するαリポ酸複合体であることが好ましく、さらに好ましくは１３％以上、特に好ましくは１６％以上のαリポ酸Ｓ体を含有するαリポ酸複合体であることが好ましい。αリポ酸Ｓ体のアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩には、αリポ酸Ｓ体のアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩であればいずれのものも含まれる。例えば、αリポ酸Ｓ体ナトリウム塩、αリポ酸Ｓ体カリウム塩、αリポ酸Ｓ体カルシウム塩、αリポ酸Ｓ体マグネシウム塩が挙げられる。これらのαリポ酸Ｓ体のアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩は、水溶液中に先にアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩を加えたものに、αリポ酸Ｓ体を追加して対応する塩を調整しても良く、市販されているものを使用しても良い。
【００２１】  本発明の「シクロデキストリン」には、ジャガイモ、トウモロコシ等の原料から従来知られている方法で製造されたαシクロデキストリン、βシクロデキストリンまたはγシクロデキストリン等が含まれ、さらに、ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン、スルフォブチルエーテルβシクロデキストリン、分岐型シクロデキストリン等も含まれる。
【００２２】  ここで、分岐シクロデキストリンとは、公知のシクロデキストリンにグルコース、マルトース、セロビオーズ、ラクトース、ショ糖、ガラクトース、グルコサミン等の単糖類や２糖類等の水溶性物質を分岐付加ないし結合させたものをいい、好ましくはシクロデキストリンにマルトースを結合させたマルトシルシクロデキストリン（マルトースの結合分子数は１分子、２分子、３分子等いずれでもよい）やシクロデキストリンにグルコースを結合させたグルコシルシクロデキストリン（グルコースの結合分子数は１分子、２分子、３分子等いずれでもよい）等が挙げられる。
【００２３】  これらは市販されているものであっても良く、例えば、スルフォブチルエーテルβシクロデキストリンとして、サイデックス社のＣａｐｉｓｏｌ等が挙げられる。
【００２４】  複合化に当たり、これらのシクロデキストリンは、単一でも良いが、複数種混合して用いても良い。特にαシクロデキストリンまたはγシクロデキストリンを複合化に用いることが好ましく、γシクロデキストリンを用いることが特に好ましい。
【００２５】  本発明によって得られたαリポ酸Ｓ体ないしはαリポ酸Ｓ体シクロデキストリン複合体は「医薬品」や「食品」に含むことができる。このような「医薬品」や健康食品等の「食品」は、例えばヒトだけではなく愛玩動物（例えば犬）の非アルコール性肝疾患の疾病や症状の治療、改善緩和、予防等に利用できる。
【００２６】  αリポ酸Ｓ体の摂取量はヒトでは１回につき１０ｍｇから１０００ｍｇ迄が可能であり、３０ｍｇから６００ｍｇの範囲が好適であり、３０ｍｇから１００ｍｇの範囲が最も好適である。αリポ酸Ｓ体のシクロデキストリン複合体若しくはその誘導体を用いる時には、複合体中に含まれるαリポ酸Ｓ体の含量にもよるが、αリポ酸Ｓ体換算で、１０ｍｇから１０００ｍｇ迄が可能であり、３０ｍｇから６００ｍｇの範囲が好適であり、３０ｍｇから１００ｍｇの範囲が最も好適である。投与回数は１日１回から３回まで症状に合わせて適宜摂取することができる。
【００２７】  内服剤の形態には、サプリメント、健康食品、栄養機能食品や特定保健用食品などの保健機能食、特別用途食品、一般食品、医薬部外品さらには医薬品として用いることができ、錠剤、口腔内速崩壊錠、カプセル、顆粒、細粒などの固形投与形態、液剤、ドリンク、シロップ及び懸濁液のような液体投与形態で摂取することができる。
【００２８】  本発明の内服剤にはその他の成分として、ビタミン類、ミネラル類、アミノ酸又はその塩類、生薬、生薬抽出物、カフェイン、ローヤルゼリーなどを本発明の効果を損なわない範囲で適宜に配合することができる。
【００２９】  本発明の内服液剤は、例えばシロップ剤、ドリンク剤などの医薬品や医薬部外品などに適用することができる。
従来充分に確立された公知の製剤製法を用いることにより製造される。添加剤としては、例えば賦形剤、ｐＨ調整剤、清涼化剤、懸濁化剤、希釈剤、消泡剤、粘稠剤、溶解補助剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤又は香料などが挙げられる。
【００３０】  以下に実施例、比較例及び試験例を挙げ、本発明をさらに詳しく説明するが、当該特許は、これらに限定されるわけではない。
【００３１】（製造例）
１．材料：以下に示した市販の物を使用した。
１）αリポ酸Ｓ体ナトリウム塩（Ｃｈａｎｇｓｈｕ  Ｆｕｓｈｉｌａｉ）
２）αリポ酸Ｒ体ナトリウム塩（Ｃｈａｎｇｓｈｕ  Ｆｕｓｈｉｌａｉ）
３）αリポ酸Ｓ体（ＳＡＬＡ：Ｃｈａｎｇｓｈｕ  Ｆｕｓｈｉｌａｉ）
４）αリポ酸Ｒ体（ＲＡＬＡ：Ｃｈａｎｇｓｈｕ  Ｆｕｓｈｉｌａｉ）
５）γＣＤ：ＣＡＶＡＭＡＸ  Ｗ８  Ｆｏｏｄ  （株式会社シクロケム）
２．製造法
（参考例１）
水２４０ｇをにαリポ酸Ｓ体ナトリウム塩１０ｇを加え撹拌溶解し、５℃に冷却した後、γシクロデキストリン５８ｇを加えて、αリポ酸Ｓ体ナトリウム塩のシクロデキストリン複合体の溶解液または懸濁液を得た。この溶解液または懸濁液に塩酸（１Ｎ）４８ｍＬを滴下し、ｐＨを３．０に調整し、攪拌して懸濁液を得た。濃縮乾燥して目的とするαリポ酸Ｓ体複合体（ＳＡＬＡＣＤ）を製造した。
（参考例２）
参考例１と同様にαリポ酸Ｒ体ナトリウム塩からαリポ酸Ｒ体シクロデキストリン複合体（ＲＡＬＡＣＤ）を製造した。
【００３２】（試験例）ＮＡＳＨモデル動物による試験
（ａ）ＮＡＳＨモデル動物
妊娠１４日目のＣ５７ＢＬ６Ｊ／ＪｃＬマウス（日本クレア社製）を飼育、出産させた。出生後２日齢の５０匹のＣ５７ＢＬ６Ｊ／ＪｃＬマウス雄（日本クレア社製）にｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ  １０  ｍｇ・ｍＬ（ＳＩＧＭＡ社製）を２０μＬ／マウスを皮下注射した。マウスはポリカーボネート飼育ケージに４匹ずつ飼育した。各マウスの耳に番号を記入して識別した。
飼育には高脂肪食（ＨＦＤ３２、日本クレア社製）の飼料、滅菌水を与え飼育した。マウスはＳＰＦ飼育により温度（２３±２℃）と湿度（４５±１０％）および光を当てて明るくした時間と暗くした時間を１２時間とし、少し気圧が高い状態にコントロールされた部屋に設定した。
【００３３】（ｂ）投与と試験サンプル
コントロール群とテスト群とは実施例化合物および比較例化合物を容量２００μＬとし経口により各マウスに投与した。ＲＡＬＡおよびＳＡＬＡは初日に１日１回５ｍｇ／マウスを、更に４ｍｇ／マウスを２７日間にわたり１日１回投与した。ＳＡＬＡＣＤとＲＡＬＡＣＤは含量が１０％である事から、初回は５０ｍｇ／マウスを、更に４０ｍｇ／マウスを２７日間にわたり１日１回投与した。
２８日間投与終了後、エーテル麻酔下でマウスを安楽死し血液を採取した。
また肝臓を取出し冷凍保存した。
（ｃ）血清生化学的測定
血液は抗凝固剤を含んだポリプロピレンチューブ（持田製薬）に採取し、４℃で遠心分離１０００ｘｇを１５分間おこなった。プラズマは測定使用時まで−８０℃で保存した。プラズマ中のＡＬＴおよびＡＳＴの値はＦＵＪＩ  ＤＲＩ−ＣＨＥＭ７０００（富士フィルム）にて測定した。
（ｄ）肝臓中のＭＤＡ測定
冷蔵保管した肝臓５０ｍｇにＰＢＳバッファー（ブチル化ヒドロキシトルエン含有）５００μＬを加えてホモジナイズした。１００００ｘｇにて５分間遠心分離して、上清をＯｘｉＳｅｌｅｃｔ  ＴＢＡＲＳ  Ａｓｓｅｙ  Ｋｉｔ（Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌａｂｓ，  ＵＳＡ）によりＭＤＡを測定した。
【００３４】（ｅ）試験結果
実施例１：ＳＡＬＡ、実施例２：ＳＡＬＡＣＤ、比較例１：ＲＡＬＡ
比較例２：ＲＡＬＡＣＤ
１）血液プラズマ中のＡＬＴ、ＡＳＴ
表１に示したように、比較例と比べて実施例はＡＬＴ、ＡＳＴの低下作用が認められた。
【表１】
2014076980.tif 000002
２）肝臓中のＭＤＡ
表２に示したように実施例は比較例と比べてＭＤＡの減少が著しく、酸化ストレスマーカーの低下効果が認められた。
【表２】
2014076980.tif 000003