(57)【要約】【課題】人工的に増殖が容易でＭＧＤＧ、ＤＧＤＧ等を多量に含む微生物及びその抽出エキスを用いた組成物の提供。【解決手段】Chlamydomonas sp.（クラミドモナス属） A13株（受領番号 FERM AP-22240）、Chlamydomonas sp.（クラミドモナス属） A14株（受領番号 FERM AP-22241）、Chlorella sp.（クロレラ属）A03株（受領番号 FERM AP-22242）、Chlorophyta（緑藻植物門）A07株（受領番号 FERM AP-22243）の何れか一又はこれらの組み合わせの藻類体から抽出したエキスを含有する組成物である。ＭＧＤＧ、ＤＧＤＧ等を多量含み、また化粧料、炎症性疾患治療・予防薬の原料としても使用できる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Chlorophyta（緑藻植物門）A07株（受託番号 FERM P-22243）、Chlorella sp.（クロレラ属）A03株（受託番号 FERM P-22242）、Chlamydomonas sp.（クラミドモナス属） A13株（受託番号 FERM P-22240）、Chlamydomonas sp.（クラミドモナス属） A14株（受託番号 FERM P-22241）の何れか一又はこれらの組み合わせの藻類体から抽出したエキスを含有する組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物と、ファンゴ（温泉泥），ベントナイト，カオリン，タルク，陶石又はこれらの混合物とが含有されていることを特徴とする化粧用組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の組成物を含有する炎症性疾患の治療・予防薬。
【請求項４】
請求項１記載の組成物に含まれるエキスを生産する、Chlorophyta（緑藻植物門）A07株（受託番号 FERM P-22243）の新規微生物。
【請求項５】
請求項１記載の組成物に含まれるエキスを生産する、Chlorella sp.（クロレラ属）A03株（受託番号 FERM P-22242）の新規微生物。
【請求項６】
請求項１記載の組成物に含まれるエキスを生産する、Chlamydomonas sp.（クラミドモナス属） A13株（受託番号 FERM P-22240）の新規微生物。
【請求項７】
請求項１記載の組成物に含まれるエキスを生産する、Chlamydomonas sp.（クラミドモナス属） A14株（受託番号 FERM P-22241）の新規微生物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、藻類体から抽出したエキスを利用した組成物、及び該組成物を使用したファンゴ（温泉泥）、美容液、ジェル、クリーム、温熱シート等に利用される化粧用組成物並びにニキビ治療・予防薬、並びにその原料となる新規微生物に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然の鉱石から得られるケイ酸Ａｌ（ケイ酸アルミニウム）等のミネラルを豊富に含んだ物質を、温泉水や水を混ぜて泥状や粘土状にした物を「ファンゴ（fango）」という。「ファンゴパック（泥パック）」とは、本来、ファンゴを顔や体に塗布することをいうが、ファンゴが天然でなくても、温泉成分やミネラルを含んだ泥でパックすることは、広く「ファンゴパック」と呼ばれている。ファンゴパックは、イタリアでは古くからファンゴセラピー(温泉泥療法)として行われている（非特許文献１，２）。イタリアの伝統的なファンゴ(FANGO)は、堆積泥を約５０℃〜７０℃の温泉に数カ月浸し、温泉の成分と泥に含まれる様々なミネラル(ナトリウム、マグネシウム、カリウム、カルシウム、鉄、リン等の微量元素)が特定のラン藻類などの微生物と合わされて、温泉泥の中にクラスター状に閉じ込めるまで養生・熟成させて作られている（非特許文献３）。
【０００３】
このようなファンゴパックに使用される化粧用組成物としては、例えば特許文献１に記載のものが公知である。特許文献１には、スクメタイト族粘土鉱物を含む粘土成分と、藍藻類由来の代謝産物と、水を含有し、前記スクメタイト族粘土鉱物の層間に前記藍藻類由来の代謝産物が取り込まれ除放性が付与された粘土組成物が記載され、この粘土組成物の作用として、抗炎症作用・抗酸化作用があることが記載されている。ここで、「藍藻類由来の代謝産物」として糖脂質や脂肪酸、フィコビリタンパク質等が記載され、「藍藻類由来の糖脂質」としては、飽和あるいは不飽和の脂肪酸を有するモノガラクトシルジグリセリド（ＭＧＤＧ：monogalactosyl diacylglycerols）やジガラクトシルジグリセリド（ＤＧＤＧ：digalactosyl diacylglycerols）等が記載されている。「藍藻類」は、糖脂質や脂肪酸、フィコビリタンパク質等を代謝産生するものであれば任意のものを選択することが可能とされ、好適な例として、フォルミジウム属の藍藻類、スイゼンジノリが記載されている。
【０００４】
上記特許文献１記載の粘土組成物の製造方法は、スクメタイト族粘土鉱物とカオリナイト族粘土鉱物とからなるクレイナノ粒子に、藍藻類から抽出した代謝産物を含有する水溶液を加え、これを分散混合後、一定条件で乾燥攪拌処理を行うことで、前記代謝産物を高濃度に含有する有機・無機ハイブリッドペーストを作成し、これを熟成することでカオリナイトのナノ構造をベントナイト構造に変換させてその際に代謝産物をベントナイト構造の層間に取り込ませるというものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１０−２０２６１９
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】"Fango", Wikipedia, ［平成24年7月25日検索］，インターネット＜URL：http://de.wikipedia.org/wiki/Fango＞
【非特許文献２】杉森賢司，大和田瑞乃，LALLI Alberto，「イタリアにおけるＦａｎｇｏ療法の実際」，温泉科学，日本温泉科学会，2008年9月，５８巻，３号，pp.182-183．
【非特許文献３】「ビオファンゴ（温泉泥）とは」，株式会社アセンダントＨＰ，［平成24年7月25日検索］，インターネット＜URL：http://ascdt.jp/biofango/index.html＞
【非特許文献４】Barfield RC, Otto M, Houston J, et al. "One-step large-scale method for T- and B-cell depletion of mobilized PBSC for allogeneic transplantation." Cytotherapy 2004; 6: 1-6.
【非特許文献５】Hoffmann R, Eicheler W, Huth A, et al. "Cytokines and growth factors influence hair growth in vitro. Possible implications for the pathogenesis and treatment of alopecia areata." Arch Dermatol Res 1996; 288: 153-156.
【非特許文献６】Hoffmann R., "The potential role of cytokines and T cells in alopecia areata." J Investig Dermatol Symp Proc. 1999 Dec;4(3):235-8.
【非特許文献７】D. Wasserman, D. A. Guzman-Sanchez, K. Scott, and A. Mcmichael, "Alopecia areata," International Journal of Dermatology, vol. 46, no. 2, pp. 121-131, 2007.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ところで、上記従来の伝統的なファンゴにおいては、天然に採取される温泉泥を自然環境下で養生し、藍藻類を繁殖させていた。この場合、様々な種の藍藻類が競合・共生しながら増殖し代謝物生成を行うことから、優れた効用を得られる程度まで代謝物を十分に生産させるためには半年から１年間の長期に亘って養生する必要があった。従って、ファンゴの生産に時間がかかり、工業的な大量生産には適しないという問題があった。また、培養に費用がかかるとともに、培養条件などの調整に経験と熟練を要し、容易に生産できないという問題もあった。また、水温・日照量などの自然環境的な要因によって、培養条件に適した藍藻群が変化し、同じ製品を生産することが困難であり、製品の効用にバラツキが生じるという問題があった。
【０００８】
また、一般に藻類は、人工の増殖・培養が難しいという問題もあった。
【０００９】
また、伝統的なファンゴにおいては、熟成の間に、有用物質を生産するいくつかの種の藍藻類が同時に繁殖することになるが、適した培養条件は微生物によってそれぞれ相違する。しかしながら、熟成は一つの培養条件によって行われるため、結果として有用物質の生産効率が低下するという問題があった。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
そこで、本発明者は、ファンゴの工業的生産手法を確立するために、ファンゴに含まれる薬効成分を生産する微生物で、人工培養と工業的生産に適した微生物を日本各地で探索した結果、大分県別府市の温泉泥中において採取されたある種の藻類群に、治療・美容効果を有する成分のＭＧＤＧ、ＤＧＤＧが含有されていることを発見した。そこで、これらの藻類群の単離・培養を繰り返し行い、大量培養が可能で且つ薬効成分を代謝・生産するいくつかの微生物を究明し、さらにこれら微生物が生産する代謝物の成分・効用の研究を行い、本発明を完成するに至った。
【００１１】
すなわち、本発明は、Chlorophyta（緑藻植物門）A07株（受託番号 FERM P-22243）、Chlorella sp.（クロレラ属）A03株（受託番号 FERM P-22242）、Chlamydomonas sp.（クラミドモナス属） A13株（受託番号 FERM P-22240）、Chlamydomonas sp.（クラミドモナス属） A14株（受託番号 FERM P-22241）、の何れか一又はこれらの組み合わせの藻類体から抽出したエキスを含有する組成物である。また、本発明は、該エキスを生産する新規微生物であるChlorella sp.（クロレラ属）A03株、Chlorophyta（緑藻植物門）A07株、Chlamydomonas sp.（クラミドモナス属） A13株、及びChlamydomonas sp.（クラミドモナス属） A14株である。
【００１２】
これら新規微生物 Chlamydomonas sp.（クラミドモナス属） A13株、Chlamydomonas sp.（クラミドモナス属） A14株、Chlorella sp.（クロレラ属）A03株、Chlorophyta（緑藻植物門）A07株は、人工培養によって短期間で大量生産が可能であると共に、糖脂質類であるＭＧＤＧ、ＤＧＤＧを多量に代謝生産することが確認された。従って、本発明の組成物の組成物を上記微生物を人工培養することによって大量生産し、該微生物から抽出されるエキスをファンゴ（温泉泥），ベントナイト，カオリン，タルク，陶石又はこれらの混合物と混合することにより、工業的に化粧用等の組成物を生産することが可能となる。
【００１３】
また、本発明者が調査した結果、これらの藻類体から抽出したエキスは、ニキビ、円形脱毛症、湿疹、関節炎などの炎症性疾患の治療効果を有することも確認され、この組成物は、化粧料以外にも炎症性疾患の治療薬としての用途もあることが判明した。従って、上記組成物を炎症性疾患の治療・予防薬として使用することも可能である。
【００１４】
特に、Chlorella sp.（クロレラ属）A03株（受託番号 FERM P-22242）は、これまで知られている同属種（クロレラ・ブルガリス：Chlorella sp.）と比べ、化粧料に含まれる脂質であるレシチン（肌のバリア機能を高める成分）を極めて多量に含むと共に、増殖速度が早いことが実験で確認された。
【００１５】
また、一般的なクロレラ属の培養温度条件は２０〜３０℃であるが、Chlorophyta（緑藻植物門）A07株は、４２℃以上の高温条件でも培養可能であり温泉水で増殖できることが確認された。従って、Chlorophyta（緑藻植物門）A07株を温泉水で培養することにより、他の菌類の繁殖を抑え効率的に増殖させることが可能である。
【発明の効果】
【００１６】
以上のように、本発明によれば、化粧用組成物やニキビ治療・予防薬として使用することが可能な原料組成物を、Chlamydomonas sp.（クラミドモナス属） A13株（受託番号 FERM P-22240）、Chlamydomonas sp.（クラミドモナス属） A14株（受託番号 FERM P-22241）、Chlorella sp.（クロレラ属）A03株（受託番号 FERM P-22242）、又はChlorophyta（緑藻植物門）A07株（受託番号 FERM P-22243）の人工培養を用いることによって短期間で安定的且つ大量に生産が可能となる。
【００１７】
また、これにより、従来、熟成に長期間要したファンゴパック用の化粧用組成物を短期に工業的に生産することが可能となる。また、従来のようにファンゴ熟成のための熟練を必要とせず、生産コストも低廉化することができる。
【００１８】
更に、本発明に係る組成物をファンゴパック等の化粧料に混合することにより、美容効果が得られると共にニキビの治療・予防効果も同時に得ることができる。このような商品は、わが国ではこれまで上市されておらず、国民の健康・美容の増進に貢献できる見込みが大きい。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】Chlamydomonas sp. A13株の顕微鏡写真及び１８Ｓ ｒＲＮＡの塩基配列の解析結果である。
【図２】Chlamydomonas sp. A14株の顕微鏡写真及び１８Ｓ ｒＲＮＡの塩基配列の解析結果である。
【図３】Chlorella sp. A03株の顕微鏡写真及び１８Ｓ ｒＲＮＡの塩基配列の解析結果である。
【図４】Chlorophyta A07株の顕微鏡写真及び１８Ｓ ｒＲＮＡの塩基配列の解析結果である。
【図５】通常のChlorella sp.及びChlorella sp. A03株から抽出した藻体エキスを薄層クロマトグラフィーにより分離した結果である。
【図６】Chlorophyta A07株から抽出された糖脂質ＭＧＤＧ及びＤＧＤＧを薄層クロマトグラフィーにより分離した結果である。
【図７】Chlamydomonas sp. A13株から抽出された糖脂質ＭＧＤＧ及びＤＧＤＧを薄層クロマトグラフィーにより分離した結果である。
【図８】Chlamydomonas sp. A14株から抽出された糖脂質ＭＧＤＧ及びＤＧＤＧを薄層クロマトグラフィーにより分離した結果である。
【図９】Chlorella sp. A03株から抽出された糖脂質ＭＧＤＧ及びＤＧＤＧを薄層クロマトグラフィーにより分離した結果である。
【図１０】ヒトの頭髪毛乳頭細胞に藻類エキスを添加することによる炎症性サイトカイン（円形脱毛症誘導因子）の抑制効果を表す図である。
【図１１】藻類エキスの効果検証のためのモニター試験結果の写真である。（ａ）顔面のニキビ、赤みに対する効果検証、（ｂ）手・指の炎症に対する効果検証。
【図１２】藻類エキスの効果検証のためのモニター試験結果の写真である。（ａ）円形脱毛症に対する効果検証、（ｂ）育毛に関する効果検証。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
以下、本発明を実施するための形態について、図面を参照しながら説明する。
【実施例１】
【００２１】
（１）微生物の採取
本発明に係る微生物Chlamydomonas sp. A13株，A14株，Chlorella sp. A03株，Chlorophyta A07株は、何れも大分県別府市内に湧出する温泉水から採取した。（表１）に、各種微生物の採取地及び採取地の生育条件（泉質・泉温）を示す。
【００２２】
【表１】
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【００２３】
（２）単離及び培養
採取した温泉藻類を、抗生物質であるアンピシリン及びカナマイシンを添加した寒天培地で培養し、２週間後に形成された藻類のコロニーを、ニードルを用いて新たな寒天培地に移す。この操作を繰り返して行うことにより、単一種の藻類株を得た。ここで使用した寒天培地の組成は、（表２）の通りである。
【００２４】
【表２】
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【００２５】
得られた藻類株をオートクレーブ減菌し、その後、（表３）の４成分が１００ｍＬ当たりに含有されるように作成したβグリセロリン酸・ビタミン混合溶液（最終濃度より１，０００倍濃い溶液）（フィルター減菌済）を無菌的に１０００分の１の体積量で添加した。
【００２６】
【表３】
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【００２７】
以上のようにして得られた単一種の藻類株のうち、有用と考えられる藻類株を培養液とともに専用の培地を用いて、照射波長、照射時間、光量等の光学的条件や、送気量等の環境条件を制御しながら、最適条件（実験により求めた）において高速大量培養を行うことにより、本発明に係る微生物Chlamydomonas sp. A13株，A14株，Chlorella sp. A03株，及びChlorophyta A07株の藻体を大量に得た。
【００２８】
（３）特定
単離した微生物のうち、有用物質であるモノガラクトシルジグリセロール（ＭＧＤＧ）及びジガラクトシルジグリセロール（ＤＧＤＧ）を多く産出する微生物を選別し、選別した微生物の中から、特に人工培養により増殖速度が早いものを４種（A13株，A14株，A03株，A07株）選出し、ＤＮＡシーケンサによりこれらの微生物の塩基配列解析を行い属の同定を行った。図１〜図４は、それぞれ、A13株，A14株，A03株，A07株の顕微鏡写真及び１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列の解析結果である。
【００２９】
（４）相同性・新種判定
上記（３）で得られた１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に基づき、ＢＬＡＳＴ（Basic Local Alignment Search Tool）により相同性の解析を行った。前記（表１）及び図１〜図４（下部）に、各種微生物の相同性解析結果を示す。A13株，A14株については、最近縁種であるChlamydomonas reinhardtiiと比較し、類似する結果が得られた。A03株については、最近縁種であるChlorella sp.と比較し、類似する結果が得られた。A07株については、ＤＮＡ相同性解析から属の特定が不可能であったため、緑藻植物門と表記した。
【００３０】
一般に、リボソーム小サブユニットｒＲＮＡ配列（１６Ｓ ｒＲＮＡ または１８Ｓ ｒＲＮＡ）を基にした塩基配列比較では、その相同性が９８．０％未満であれば、ＤＮＡ−ＤＮＡ相同性は７０％以上を示さないとされており、別種であると考えてもよい。従って、Chlamydomonas sp. A13株，A14株及びChlorophyta A07株は、上記ＤＮＡ相同性解析の結果から新規な微生物であると考えられる。
【００３１】
一方、Chlorella sp. A03株は、１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の相同性は１００％であった。しかしながら、このA03株は、（６）で述べるように、通常のChlorella sp.と比較して、レシチン（lecithin）を極めて多量に生産するため（図５参照）、通常のChlorella sp.とは異なる新種であると判定した。
【００３２】
（５）藻類エキスの抽出
上述のようにして大量培養した本発明の各種微生物の藻体を、培養液と共に遠心分離装置によって濃縮し、これにより回収された藻類ペレットをエタノール（99.5 v/v％）に懸濁させ、充分振盪した後、２−８℃で２４時間低温抽出し、上澄み液を採取する。これを藻類エキスの原液とする。
【００３３】
（６）藻類エキスに含有される有効成分の確認及び分析
上記（５）で説明した藻体ペレットをクロロホルム：メタノール：水＝１００：５０：７（体積比）の溶液に浸し、溶解液を抽出する。次に、この抽出液をロータリー・エバポレータにかけて溶媒を除去するとともに蒸発乾固する。これをさらにｎ−ヘキサン９０v/v％メタノール溶液（水(10v/v%)を含むメタノール (90v/v%)とｎ−ヘキサンとの混合溶液）に溶解し、溶解液（水とメタノールの混合層）を抽出し、この抽出液をロータリー・エバポレータにかけて溶媒を除去するとともに蒸発乾固する。こうして分析試験用の藻体エキスを抽出する。
【００３４】
図５は、通常のChlorella sp.及びChlorella sp. A03株から抽出した藻体エキスを薄層クロマトグラムにより分離した結果である。測定資料である藻体エキスを、クロロホルム：メタノール：水＝４０：１２：１（体積比）の混合液からなる溶媒に溶解し、この溶液を支持体上の薄層上にチャージし、展開させた。これにより、有効成分の糖脂質が薄層上にスポットになって分離する。その後、アニスアルデヒド試薬（p-アニスアルデヒド(10v/v%)、濃硫酸(5v/v%)、及びメタノール(85v/v%)）を添加して糖脂質を呈色させた（図５）。そして、これらのスポットを削り取り、ＧＣ−ＭＳ（ガスクロマトグラフ質量分析装置）分析により各スポットの糖脂質を同定した。
【００３５】
図５においては、４種の微生物から抽出された藻体エキスについて薄層上に並べてチャージし展開している。比較のため、各微生物は同一条件により培養している。最も右側が、通常のChlorella sp.から抽出された藻体エキスによるものであり、左から２番目がChlorella sp. A03株から抽出した藻体エキスによるものである。薄層上において矢示されたスポットをＧＣ−ＭＳ（ガスクロマトグラフ質量分析装置）で分析した結果、レシチンが分離したスポットであることが確認された。図５から、Chlorella sp. A03株は、通常のChlorella sp.と比較して格段に多くのレシチンを生産することが明らかである。従って、Chlorella sp. A03株は、通常のChlorella sp.とは異なる新種であると判定した。
【００３６】
次に、４種の各微生物から抽出された藻体エキスについて、上記と同様の方法により、藻体エキスを薄層上にチャージし、展開させた後、アニスアルデヒド試薬で糖脂質を呈色することによりＭＧＤＧ，ＤＧＤＧの存在確認を行った。図６は、Chlorophyta A07株から抽出された糖脂質ＭＧＤＧ及びＤＧＤＧを薄層クロマトグラフィーによる泳動パターンである。図６では６つのスポットが現れているが、上から２番目の濃いスポットがＭＧＤＧ、上から５番目の濃いスポットがＤＧＤＧであることがＧＣ−ＭＳ分析により同定された。他の菌株（A13株，A14株，A03株）についても、図７、図８及び図９に示すとおり略類似の泳動パターンを示すことが確認された。従って、これら４種の藻類種は何れもＭＧＤＧ及びＤＧＤＧを多量に代謝生産することが実験により確認された。
【００３７】
（７）使用法
上記（５）で説明した方法により抽出される藻類エキスの原液を、ファンゴ、美容液、クリーム、ジェル等の剤型に応じて、液性や配合等の成分の調整を行い、それぞれに必要量添加することにより化粧用組成物として使用することができる。
【００３８】
また、後述するように（（８）を参照）、上記藻類エキスに含有される有効成分は、抗炎症作用、鎮痛作用、ニキビ改善、むくみ改善（痩身）、肌質改善、日焼け痛防止、血行促進、結膜炎治療などの効果を有する特定の糖脂質類を含有していることが、本願発明者の分析により明らかになった。従って、上記藻類エキスをファンゴ、美容液、クリーム、ジェル等に添加することによって、ニキビ、円形脱毛症、湿疹、関節炎などの炎症性疾患の治療・予防薬としても使用することが可能である。
【００３９】
（８）効用試験
（８．１）炎症性疾患に対する効用試験
有効成分となる特定の糖脂質を、（ａ）原液を希釈し調整した製剤として、（ｂ）ファンゴ等の剤型に添加した状態で、効能・効果の被検調査に供した。調査方法は、一般のモニター要員等を対象に、アンケート用紙に記入させる方法及び施術者への聴き取りによる方法によって実施した。（表４）にその集計結果を示す。
【００４０】
【表４】
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【００４１】
アンケート結果から、特にChlorella sp. A03株及びChlorophyta A07株の藻体エキスが顕著に薬効を有することが分かる。中でも、A07株では、抗炎症作用、鎮痛作用、ニキビ改善、むくみ改善（痩身）、肌質改善、日焼け痛、血行促進、結膜炎を改善する効果が顕著に見られた。
【００４２】
（８．２）円形脱毛症の細胞モデルを用いた試験結果
円形脱毛症においては、炎症性サイトカインの増加が引き金となり、毛包器官における免疫の乱れ・脱毛が引き起こされる（非特許文献４，５，６）。従って、炎症性サイトカインを抑制することは、円形脱毛症の治療・予防に有効であると考えられている（非特許文献７）。そこで、毛包器官において血中から炎症起因物質を直接受け取る毛乳頭細胞を用いて、本実施例の藻類エキスの円形脱毛症に対する効果の検証試験を行った。
【００４３】
〔試験条件及び試験方法〕
ヒトの頭髪毛乳頭細胞に、本実施例の藻類エキス（A07株を使用）を添加したものと、無添加のものとを用意し、１時間後に、両細胞に、円形脱毛症の重要な誘導因子であるインターロイキン−Iβ（ＩＬ−Iβ）を添加することにより刺激した。その後、両細胞を２４時間培養し、ｍＲＮＡを抽出し、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって炎症性サイトカイン（ＩＬ−Iβ，ＩＬ−６）のｍＲＮＡを定量解析した。
【００４４】
〔試験結果〕
図１０に解析結果を示す。図１０において「無添加」は藻類エキスを添加していない細胞、「添加」は藻類エキスを添加した細胞を表す。実験の結果、藻類エキスを添加することによって、ＩＬ−Iβの遺伝子量は約４０％、ＩＬ−６の遺伝子量は約４５％に抑制された。即ち、本実施例の藻類エキスが毛乳頭細胞において円形脱毛症に関わる誘導因子を抑制することが実証された。従って、本実施例の藻類エキスは、円形脱毛症疾患の治療及び予防の効果があることが分かる。
【００４５】
尚、炎症性サイトカインは、円形脱毛症以外にも多くの炎症性疾患の誘導因子であることから、本実施例の藻類エキスは、炎症性サイトカイン（ＩＬ−Iβ，ＩＬ−６）を誘導因子とする炎症性疾患全般（ニキビ、円形脱毛症、湿疹、関節炎、アトピー性皮膚炎など）に対して、治療及び予防の効果を有することになる。
【００４６】
（８．３）モニター試験
上記の試験結果を踏まえ、円形脱毛症、ニキビ、肌荒れ、及び育毛に対して、本実施例の藻類エキスがどの程度の効果を有するのかを知るため、モニターによる試験を実施したので、以下その結果を説明する。
【００４７】
図１１（ａ）は、顔面のニキビ、赤みに対するモニター試験の例を表す写真である。顔全体にニキビ・赤みのあるモニターに対して、本実施例の藻類エキスを患部に数日間塗布したところ、全体的にクスミ、角質がとれて表面がなめらかとなり、赤みが引いて白くなった。
【００４８】
図１１（ｂ）は、手・指の炎症に対するモニター試験の例を表す写真である。モニターは美容関係の職業に就いている者であり、薬剤によって手荒れを発症した状態にあった。本実施例の藻類エキスを患部に数日間塗布したところ、７日後には赤みが引き、１６日後には炎症が少し緩和した。また、別のモニターとして、写真現像の薬剤により指が爛れたモニターに対して試験を行った。本実施例の藻類エキスを患部に塗布したところ、何回か皮むけした後、半年後には皮膚がきれいに回復した。
【００４９】
以上のモニター試験から、本実施例の藻類エキスは、炎症性疾患に対して炎症を抑える効果があることが分かる。
【００５０】
図１２（ａ）は、円形脱毛症に対するモニター試験の例を表す写真である。モニターは前頭部と側頭部に円形脱毛症を発症していた。本実施例の藻類エキスを患部に塗布したところ、２週間後には脱毛部に発毛が見られ、脱毛箇所が目立ちにくくなった。
【００５１】
図１２（ｂ）は、育毛に関するモニター試験の例を表す写真である。頭髪が薄毛となったモニターに対して、本実施例の藻類エキスを頭部に塗布して試験を行ったところ、図１２（ｂ）に示すように、発毛して薄毛が目立たなくなった。
【００５２】
以上のモニター試験から、本実施例の藻類エキスは、円形脱毛症や薄毛症に対して、発毛効果があることが分かる。
【実施例２】
【００５３】
本実施例では、実施例１（５）で説明した藻類エキスの原液を用いた化粧用組成物について例を示す。ここでは、一例として、ファンゴパック用化粧用組成物について説明する。
【００５４】
まず、基材の原料として天然鉱泥（温泉泥）を使用する場合、まず天然鉱泥を乾燥させた後、ボールミルにより粉砕し、分級機により分級して最大粒子径１００μｍ以下に粒度を揃える。その後、雑菌やゴミなどの不純物を取り除くため精製し、精製された天然鉱泥粉に、実施例１（５）で説明した藻類エキスの原液を水で希釈したものを添加し混練する。ここで、添加量は、状況に応じて調整される。藻類エキスを添加した天然鉱泥粉は、容器に充填され、ファンゴパック用化粧用組成物として出荷される。
【００５５】
このように、本実施例の化粧用組成物は、藻類エキスを別途に製造し天然鉱泥粉に添加するため、従来の天然ファンゴのように長期間の熟成が必要なく、短期間で大量に生産することが可能となる。また、藻類の培養条件を人工的に調整すれば藻類エキスの品質も安定し、常に一定の品質の化粧用組成物を提供することが可能となる。
【００５６】
更に、基材として天然鉱泥粉に代えて高品位の工業用粘土鉱物粉を使用することも可能である。工業用粘土鉱物としては、ベントナイト，カオリン，タルク，陶石又はこれらの混合物を使用することができる。この場合、予め粒度や品質が安定しているため、基材の乾燥・粉砕・分級・精製の工程は省略することができる。
【００５７】
更に、基材（天然鉱泥粉又は工業用粘土鉱物粉）と藻類エキスを混合せず別々に出荷して、使用時に、基材に藻類エキスを添加してファンゴパック用化粧用組成物として使用することも可能である。
【００５８】
尚、実施例１で述べた通り、本発明の藻類エキスは、抗炎症作用、鎮痛作用、ニキビ改善、むくみ改善（痩身）、肌質改善、日焼け痛、血行促進、結膜炎を改善する効果が確認されている。従って、基材に実施例１の藻類エキスを添加してファンゴパック用化粧用組成物として使用することにより美容効果と共に、ニキビ治療・予防効果等も得ることができる。
【００５９】
また、本実施例ではファンゴパック用化粧用組成物を例として説明したが、本発明はこれに限られず、実施例１の藻類エキスを美容液、クリーム、ジェル等に添加して、化粧用組成物又はニキビ治療・予防薬として使用することも可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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