(57)【要約】【課題】本発明は、カチオンとインスリン化合物複合体を含む錯体を提供する。【解決手段】本インスリン化合物複合体は、ポリエチレングリコール部分といったような修飾部分に対して複合された、ヒトインスリン又はその類似体といったようなインスリン化合物を含んでいる。本発明は同様に、かかる錯体を含む固体及び薬学組成物、かかる錯体を製造する方法及びインスリン化合物欠乏症及びその他の病気の治療におけるかかる錯体の使用方法をも含んでいる。さらに、本発明は、新規のインスリン化合物複合体及びインスリン化合物複合体を製造する上で使用するための修飾部分を含む。本発明は、本発明のカチオン−インスリン化合物複合体錯体及び／又は新規インスリン化合物複合体などの薬学作用物質の投与のための脂肪酸組成物をも含んでいる。【選択図】図１
2014043470.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）  修飾部分に複合されたインスリン化合物を含むインスリン化合物複合体と、
（ｂ）  カチオンと
を含む錯体において、
前記インスリン化合物複合体が、前記カチオンと錯化されている錯体。
【請求項２】
前記インスリン化合物複合体が、ヒトインスリンを含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項３】
前記インスリン化合物複合体が、インスリン化合物類似体を含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項４】
前記インスリン化合物類似体が、Ｌｙｓ２８及びＰｒｏ２９を伴うヒトインスリンである、請求項３に記載の錯体。
【請求項５】
前記インスリン化合物類似体が、未変性プロインスリン化合物である、請求項３に記載の錯体。
【請求項６】
前記インスリン化合物類似体が、人工的プロインスリン化合物である、請求項３に記載の錯体。
【請求項７】
前記インスリン化合物類似体が、５個以下のアミノ酸を有するＣ−ペプチドを含むミニプロインスリン化合物である、請求項３に記載の錯体。
【請求項８】
前記インスリン化合物類似体が、切断可能又は切断不可能であるリーダーペプチドを有する未変性プロインスリン化合物である、請求項３に記載の錯体。
【請求項９】
前記インスリン化合物類似体が、切断可能又は切断不可能であるリーダーペプチドを有する人工的プロインスリン化合物である、請求項３に記載の錯体。
【請求項１０】
前記インスリン化合物類似体が、
（ａ）  ５個以下のアミノ酸を有するＣ−ペプチドと、
（ｂ）  切断可能な又は切断不可能であるリーダーペプチドと、
を含むミニプロインスリン化合物である、請求項３に記載の錯体。
【請求項１１】
前記インスリン化合物類似体が、プロインスリン化合物及び該プロインスリン化合物のＣ末端又はＮ末端で連結されたリーダーペプチド又は担体タンパク質を含むプレプロインスリン化合物である、請求項３に記載の錯体。
【請求項１２】
前記インスリン化合物類似体が、インスリン化合物Ａ鎖Ｂ鎖を含む１本鎖インスリン化合物であり、前記Ａ鎖及び／又はＢ鎖が他方に対する付着点で１、２又は３アミノ酸だけ切断されている可能性がある、請求項３に記載の錯体。
【請求項１３】
前記インスリン化合物類似体が、リーダーペプチド又は担体タンパク質を含むインスリン化合物である、請求項３に記載の錯体。
【請求項１４】
前記修飾部分が、前記インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物よりもさらに水溶性の高いものにするように選択されている、請求項１に記載の錯体。
【請求項１５】
前記修飾部分が、前記インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上の親水性をもつものにするように選択されている、請求項１に記載の錯体。
【請求項１６】
前記修飾部分が、前記インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物よりも高い両親媒性をもつものにするように選択されている、請求項１に記載の錯体。
【請求項１７】
前記修飾部分が、前記インスリン化合物複合体を約７．４のｐＨで水溶液中で対応する未複合インスリン化合物よりも少なくとも１．０５、１．２５、１．５、１．７５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５又は１５倍高い溶解度を示すものにするように選択されている、請求項１４に記載の錯体。
【請求項１８】
前記修飾部分が、約４〜約８の範囲のｐＨで約１ｇ／Ｌ、２ｇ／Ｌ、３ｇ／Ｌ、４ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ、１５ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ、２５ｇ／Ｌ、５０ｇ／Ｌ、７５ｇ／Ｌ、１００ｇ／Ｌ、１２５ｇ／Ｌ又は１５０ｇ／Ｌを超える溶解度をもつインスリン化合物複合体を提供するように選択されている、請求項１４に記載の錯体。
【請求項１９】
前記インスリン化合物複合体の水溶性が亜鉛添加により低減されている、請求項１に記載の錯体。
【請求項２０】
（ａ）  前記修飾部分が、前記インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上の溶解度をもつものにするように選択されており；
（ｂ）  前記インスリン化合物複合体の水溶性が亜鉛添加により低減されている、
請求項１に記載の錯体。
【請求項２１】
（ａ）  前記修飾部分が、前記インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上の溶解度をもつものにするように選択されており、
（ｂ）  前記インスリン化合物複合体の水溶性が亜鉛添加により低減されており、
（ｃ）  前記錯体の水溶性がインスリン化合物の前記水溶性よりも大きい、
請求項１に記載の錯体。
【請求項２２】
（ａ）  前記インスリン化合物複合体がアシル化インスリン化合物であり；
（ｂ）  前記カチオンが亜鉛であり；かつ
（ｃ）  前記インスリン化合物複合体の前記水溶性が亜鉛添加により低減される、
請求項１に記載の錯体。
【請求項２３】
（ａ）  前記インスリン化合物複合体が、対応する未複合インスリン化合物以上の水溶性をもつアシル化インスリン化合物であり；
（ｂ）  前記カチオンが亜鉛であり、かつ
（ｃ）  前記インスリン化合物複合体の前記水溶性が亜鉛添加により低減される、
請求項１に記載の錯体。
【請求項２４】
対応する親インスリン化合物に対して前記インスリン化合物複合体の相対的親油性が１以下である、請求項１に記載の錯体。
【請求項２５】
対応する親インスリン化合物（ｋｒｅｌ）に比べた前記インスリン化合物複合体の前記相対的親油性が１以下であり、
（ａ）  ｋｒｅｌ＝（ｔｃｏｎｊｕｇａｔｅ−ｔ０）／（ｔｈｕｍａｎ−ｔ０）であり；
（ｂ）  相対的親和性が、４０℃での定組成溶離によりＬｉＣｈｒｏＳｏｒｂ  ＲＰ１８（５μｍ、２５０×４ｍｍ）高性能液体クロマトグラフィカラム上で測定され、
（ｃ）  溶離剤としては、
（ｉ）  １０％のアセトニトリルを含有するｐＨ７．３の０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液、及び
（ｉｉ）  水中の５０％アセトニトリル、
といった混合物が使用され；
（ｄ）  ０．１ｍＭの硝酸ナトリウムを注入することにより空隙時間（ｔ０）が識別され、
（ｅ）  （ｃ）（ｉ）及び（ｃ）（ｉｉ）の混合物間の比率を変動させることにより、ヒトインスリンについての保持時間が少なくとも２ｔ０に調整される、
請求項１に記載の錯体。
【請求項２６】
前記相対的親油性が約１以下である、請求項２５に記載の錯体。
【請求項２７】
（ａ）  前記インスリン化合物がヒトインスリンであり、
（ｂ）  前記相対的親油性が１未満である、
請求項２５に記載の錯体。
【請求項２８】
前記相対的親油性が０．９９、０．９８、０．９７、０．９６、０．９５、０．９４、０．９３、０．９２、０．９１又は０．９０未満である、請求項２５に記載の錯体。
【請求項２９】
前記修飾部分がアルキル部分でない、請求項２５に記載の錯体。
【請求項３０】
前記修飾部分が、中に挿入されたオキシ基を含む炭素鎖である、請求項２５に記載の錯体。
【請求項３１】
前記修飾部分が５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７又は１８個の炭素をもつ炭素鎖であり、前記炭素鎖が、中に挿入された２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のオキシ基を含む、請求項２５に記載の錯体。
【請求項３２】
前記修飾部分が、５、６、７、８、９又は１０個の炭素をもつ炭素鎖であり、前記炭素鎖が、中に挿入された２、３又は４個のオキシ基を含む、請求項２５に記載の錯体。
【請求項３３】
前記修飾部分が２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のポリアルカレングリコール単位を含む、請求項２５に記載の錯体。
【請求項３４】
前記修飾部分が、１、２又は３個のポリエチレングリコール単位及び１、２又は３個のポリプロピレングリコール単位を含む、請求項２５に記載の錯体。
【請求項３５】
（ａ）  前記カチオンが亜鉛であり、
（ｂ）  前記インスリン化合物複合体の水溶解度が亜鉛添加により低減される、
請求項２５に記載の錯体。
【請求項３６】
約７．４のｐＨでの前記カチオン−インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、前記インスリン化合物複合体の溶解度以下である、請求項１に記載の錯体。
【請求項３７】
約７．４のｐＨでの前記カチオン−インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、前記インスリン化合物複合体の溶解度より大きい、請求項１に記載の錯体。
【請求項３８】
約７．４のｐＨでの前記カチオン−インスリン化合物複合体錯体の溶解度が前記インスリン化合物複合体の溶解度の５倍超である、請求項１に記載の錯体。
【請求項３９】
約７．４のｐＨでの前記カチオン−インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、前記インスリン化合物複合体の溶解度の約１／１５〜５倍である、請求項１に記載の錯体。
【請求項４０】
約７．４のｐＨでの前記カチオン−インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、前記インスリン化合物複合体の溶解度の約１／１０〜約２倍である、請求項１に記載の錯体。
【請求項４１】
約７．４のｐＨでの前記カチオン−インスリン化合物複合体錯体の溶解度が前記インスリン化合物複合体の溶解度の約１／１０から０倍未満である、請求項１に記載の錯体。
【請求項４２】
約７．４のｐＨでの前記カチオン−インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約７．４のｐＨでの前記インスリン化合物複合体の溶解度の約１／１０超から約７．４のｐＨでの前記インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に小さい溶解度までである、請求項１に記載の錯体。
【請求項４３】
約７．４のｐＨでの前記カチオン−インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約７．４のｐＨでの前記インスリン化合物複合体の溶解度の約１／１０超から約７．４のｐＨでの前記インスリン化合物複合体の溶解度以下の溶解度までである、請求項１に記載の錯体。
【請求項４４】
約７．４のｐＨでの前記カチオン−インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約７．４のｐＨでの溶液中の前記インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に大きい、請求項１に記載の錯体。
【請求項４５】
約７．４のｐＨでの前記カチオン−インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約７．４のｐＨでの溶液中の前記インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に小さい、請求項１に記載の錯体。
【請求項４６】
（ａ）  約７．４のｐＨでの前記カチオン−インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約７．４のｐＨでの溶液中の前記インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に小さく、かつ
（ｂ）  前記カチオン−インスリン化合物複合体が、約５〜約８．５のｐＨ範囲にわたり水溶液中で約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０又は１３０ｇ／Ｌより大きい割合で可溶である状態にとどまる、
請求項１に記載の錯体。
【請求項４７】
（ａ）  約７．４のｐＨでの前記カチオン−インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約７．４のｐＨでの溶液中の前記インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に小さく、かつ
（ｂ）  前記カチオン−インスリン化合物複合体が、５．８〜約８．５のｐＨ範囲にわたり水溶液中で約１ｇ／Ｌより大きい割合で可溶である状態にとどまる、
請求項１に記載の錯体。
【請求項４８】
（ａ）  約７．４のｐＨでの前記カチオン−インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約７．４のｐＨでの溶液中の前記インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に小さく、かつ
（ｂ）  前記カチオン−インスリン化合物複合体が、６．５〜約８のｐＨ範囲にわたり水溶液中で約１、５、１０又は２０ｇ／Ｌより大きい割合で可溶である状態にとどまる、
請求項１に記載の錯体。
【請求項４９】
（ａ）  約７．４のｐＨでの前記カチオン−インスリン化合物複合体錯体の溶解度が、約７．４のｐＨでの溶液中の前記インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に小さく、かつ
（ｂ）  前記カチオン−インスリン化合物複合体が、６．９〜約７．８のｐＨ範囲にわたり水溶液中で約１、５、１０又は２０ｇ／Ｌより大きい割合で可溶である状態にとどまる、
請求項１に記載の錯体。
【請求項５０】
（ａ）  前記錯体がＲ型錯体であり、かつ
（ｂ）  約７．４のｐＨで、前記錯体の前記水溶解度が約１０〜約１５０ｇ／Ｌ、約２０〜約１３０ｇ／Ｌ、約３０〜約１１０ｇ／Ｌ又は約３５〜約６０ｇ／Ｌである、
請求項１に記載の錯体。
【請求項５１】
（ａ）  前記錯体がＮＰＨ型錯体であり、かつ
（ｂ）  約７．４のｐＨで、前記錯体の前記水溶解度が約１〜約１５０ｇ／Ｌ、約５〜約１２０ｇ／Ｌ、又は約１０〜約９０ｇ／Ｌである、
請求項１に記載の錯体。
【請求項５２】
（ａ）  前記錯体がＴ型錯体であり、かつ
（ｂ）  約７．４のｐＨで、前記錯体の前記水溶解度が約３０〜約１７５ｇ／Ｌ、約５０〜約１６０ｇ／Ｌ又は約７０〜約１５０ｇ／Ｌである、
請求項１に記載の錯体。
【請求項５３】
（ａ）  前記錯体がプロタミンを含むＲ型Ｚｎ錯体であり、かつ
（ｂ）  約７．４のｐＨで、前記錯体の前記水溶解度が約１０〜約１１０ｇ／Ｌ、約２０〜約８５ｇ／Ｌ又は約３０〜約７０ｇ／Ｌである、
請求項１に記載の錯体。
【請求項５４】
（ａ）  前記錯体がプロタミンを含むＴ型Ｚｎ錯体であり、かつ
（ｂ）  約７．４のｐＨで、前記錯体の前記水溶解度が約１０〜約１５０ｇ／Ｌ、約２０〜約１３０ｇ／Ｌ、約３０〜約１１０ｇ／Ｌ又は約３５〜約６０ｇ／Ｌである、
請求項１に記載の錯体。
【請求項５５】
（ａ）  前記インスリン化合物複合体がモノ複合体であり、かつ
（ｂ）  前記錯体が、約４〜６．５未満のｐＨ、約４〜５．８未満のｐＨ、約４．２〜約５．５のｐＨで水溶液中で結晶を生成する
請求項１に記載の錯体。
【請求項５６】
（ａ）  前記インスリン化合物複合体がモノ複合体であり、
（ｂ）  前記カチオンが亜鉛であり、かつ
（ｃ）  錯体が約４．４〜約５．２で水溶液中で結晶を生成する、
請求項１に記載の錯体。
【請求項５７】
前記インスリン化合物複合体が、ｐＩ±２．５に等しいｐＨで水溶液中で結晶を生成する、請求項１に記載の錯体。
【請求項５８】
（ａ）  前記修飾部分が、親油性構成要素にカップリングされたＰＡＧ構成要素及び／又はＰＡＧを含み、前記親油性構成要素がアルキル、脂肪酸及び直鎖又は分枝脂質からなる群から選択され、かつ
（ｂ）  ＰＡＧ構成要素又は親油性構成要素のいずれかがインスリン化合物にカップリングされている、
請求項１に記載の錯体。
【請求項５９】
前記修飾部分が、インスリン化合物上の１つ以上のアミノ基にカップリングされている、請求項５８に記載の錯体。
【請求項６０】
修飾部分が前記Ａ鎖の前記カルボキシ末端でカップリングされかつ／又は、修飾部分が前記インスリン化合物の前記Ｂ鎖の前記カルボキシ末端でカップリングされている、請求項５８に記載の錯体。
【請求項６１】
修飾部分が前記インスリン化合物の前記Ｂ鎖にカップリングされているリーダーペプチドのＮ末端においてカップリングされている、請求項５８に記載の錯体。
【請求項６２】
修飾部分がアミノ酸側鎖官能基においてカップリングされている、請求項５８に記載の錯体。
【請求項６３】
（ａ）  前記インスリン化合物がＡ１、Ｂ１及び／又はＢ２９においてアミノ基を含み；かつ
（ｂ）  Ａ１、Ｂ１及びＢ２９からなる群から選択された位置でインスリン化合物上の単一のアミノ基に単一の修飾部分がカップリングされている、
請求項５８に記載の錯体。
【請求項６４】
（ａ）  前記インスリン化合物がＢ１及び／又はＢ２９においてアミノ基を含み、
（ｂ）  第１の修飾部分がＢ１においてアミノ基にカップリングされ、かつ
（ｃ）  第２の修飾部分がＢ２９においてアミノ基にカップリングされている、
請求項５８に記載の錯体。
【請求項６５】
（ａ）  前記インスリン化合物がＢ２９においてアミノ基を含み、かつ
（ｂ）  単一の修飾部分がＢ２９においてアミノ基にカップリングされている、
請求項５８に記載の錯体。
【請求項６６】
修飾部分が、前記インスリン化合物内の遊離アミノ基においてカップリングされてカルバメート結合を形成する、請求項５８に記載の錯体。
【請求項６７】
（ａ）  前記インスリン化合物が遊離ヒドロキシル基を含み、かつ
（ｂ）  前記遊離ヒドロキシル基に修飾部分がカップリングされてカルボキシル、エーテル又はカルボナート結合を形成する、
請求項５８に記載の錯体。
【請求項６８】
（ａ）  前記インスリン化合物が遊離ＳＨ基を含み、かつ
（ｂ）  前記−ＳＨ基に修飾部分がカップリングされて、チオエステル、チオエーテル又はスルホナート結合を形成する、
請求項５８に記載の錯体。
【請求項６９】
（ａ）  前記複合されたインスリン化合物分子が前記修飾部分にアシル化されており、かつ
（ｂ）  前記修飾部分が、脂肪酸、３個以上の炭素を有するアルキル又はアミノ酸で構成されていない、
請求項１に記載の錯体。
【請求項７０】
（ａ）  前記複合されたインスリン化合物分子が前記修飾部分にアシル化されており、かつ
（ｂ）  前記修飾部分が脂肪酸、３個以上の炭素をもつアルキル、又はアミノ酸を含まない、請求項１に記載の錯体。
【請求項７１】
前記カチオン構成要素が一価又は多価の金属カチオンを含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項７２】
前記カチオン構成要素がＮａ＋、Ｌｉ＋及びＫ＋から選択された一価の金属カチオンを含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項７３】
前記カチオン構成要素がＺｎ＋＋、Ｍｎ＋＋、Ｃａ＋＋、Ｆｅ＋＋、Ｎｉ＋＋、Ｃｕ＋＋、Ｃｏ＋＋及びＭｇ＋＋からなる群から選択された２価の金属カチオンを含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項７４】
前記カチオン構成要素がＺｎ＋＋を含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項７５】
前記カチオン構成要素が約９０、９５、９９又は９９．９％超のＺｎ＋＋である、請求項１に記載の錯体。
【請求項７６】
インスリン化合物複合体対カチオン構成要素のモル比が、約１：１〜約１：１００、約１：２〜約１：１２又は約１：２〜約１：７の間にある、請求項１に記載の錯体。
【請求項７７】
キモトリプシン分解に対する前記錯化インスリン化合物複合体の耐性が対応する未錯化インスリン化合物複合体の前記キモトリプシン分解よりも大きい、請求項１に記載の錯体。
【請求項７８】
キモトリプシン分解に対する前記錯化インスリン化合物複合体の耐性が、前記対応する錯化され、ただし未複合のインスリン化合物のキモトリプシン分解よりも大きい、請求項１に記載の錯体。
【請求項７９】
前記インスリン化合物複合体が、
【化１】
2014043470.tif 000096
という構造を有する修飾部分に対しＡ１、Ｂ１及び／又はＢ２９においてカップリングされたヒトインスリンからなる、請求項１に記載の錯体。
【請求項８０】
前記インスリン化合物複合体が、
【化２】
2014043470.tif 000097
という構造を有する修飾部分に対しＢ２９においてカップリングされたヒトインスリンからなる、請求項１に記載の錯体。
【請求項８１】
前記インスリン化合物複合体が、
【化３】
2014043470.tif 000098
という構造を有する修飾部分に対しＡ１及びＢ２９においてカップリングされたヒトインスリンからなる、請求項１に記載の錯体。
【請求項８２】
前記インスリン化合物複合体が、
【化４】
2014043470.tif 000099
という構造を有する修飾部分に対してＡ１、Ｂ１及び／又はＢ２９においてカップリングされたヒトインスリンからなる、請求項１に記載の錯体。
【請求項８３】
前記修飾部分が
【化５】
2014043470.tif 000100
という式を有し、式中ｍは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０でありｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０である、請求項１に記載の錯体。
【請求項８４】
前記修飾部分が
【化６】
2014043470.tif 000101
という式を有し、式中ＰＡＧは、ｍ個のサブユニットを有するＰＡＧ部分であり、ｍは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０であり、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０である、請求項１に記載の錯体。
【請求項８５】
前記修飾部分が、
【化７】
2014043470.tif 000102
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項８６】
前記修飾部分が、
【化８】
2014043470.tif 000103
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項８７】
前記修飾部分が、
【化９】
2014043470.tif 000104
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項８８】
前記修飾部分が、
【化１０】
2014043470.tif 000105
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項８９】
前記修飾部分が、
【化１１】
2014043470.tif 000106
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項９０】
前記修飾部分が、
【化１２】
2014043470.tif 000107
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項９１】
前記修飾部分が、
【化１３】
2014043470.tif 000108
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項９２】
前記修飾部分が、
【化１４】
2014043470.tif 000109
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項９３】
前記修飾部分が、
【化１５】
2014043470.tif 000110
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項９４】
前記修飾部分が、
【化１６】
2014043470.tif 000111
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項９５】
前記修飾部分が、
【化１７】
2014043470.tif 000112
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項９６】
前記修飾部分が、
【化１８】
2014043470.tif 000113
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項９７】
前記修飾部分が、
【化１９】
2014043470.tif 000114
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項９８】
前記修飾部分が、
【化２０】
2014043470.tif 000115
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項９９】
前記修飾部分が、
【化２１】
2014043470.tif 000116
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項１００】
前記修飾部分が、
【化２２】
2014043470.tif 000117
という構造を有する、請求項１に記載の錯体。
【請求項１０１】
前記インスリン化合物複合体が、Ａ１、Ｂ１及び／又はＢ２９において、２〜２０個のＰＥＧサブユニット、２〜１５個のＰＥＧサブユニット又は２〜１０個のＰＥＧサブユニットを有する直鎖又は分枝ＰＥＧ部分にカップリングされている、請求項１に記載の錯体。
【請求項１０２】
請求項１に記載の錯体を含む、錯体混合物。
【請求項１０３】
請求項１に記載の錯体を含む、固体混合物。
【請求項１０４】
請求項１に記載の錯体を含む、ハイブリッド錯体。
【請求項１０５】
請求項１に記載の錯体を含む、共結晶。
【請求項１０６】
前記組成物が凍結乾燥された粉末として提供される、請求項１に記載の錯体を含む組成物。
【請求項１０７】
薬学的に許容可能な純度レベルを有する混合物内の請求項１に記載の錯体。
【請求項１０８】
（ａ）  請求項１に記載の錯体と、
（ｂ）  第２のインスリン化合物複合体又は未複合インスリン化合物と、
を含む組成物。
【請求項１０９】
請求項１０８（ａ）及び／又は１０８（ｂ）の前記錯体が固体として提供されている、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１１０】
（ａ）  １０８（ａ）及び１０８（ｂ）の前記錯体のうちの１つが結晶性固体として提供され、かつ
（ｂ）  もう１つが非晶質固体として提供されている、
請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１１１】
１０８（ａ）及び／又は１０８（ｂ）の前記錯体が結晶性固体として提供されている、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１１２】
（ａ）  第３の修飾部分にカップリングされたインスリン化合物を含むインスリン化合物複合体及び
（ｂ）  カチオン構成要素
を含み、前記インスリン化合物複合体が前記カチオンと錯化されている第３の錯体をさらに含む、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１１３】
１０８（ａ）及び１０８（ｂ）の前記錯体の前記インスリン化合物複合体が異なるインスリン化合物を含む、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１１４】
１０８（ａ）及び１０８（ｂ）の前記錯体が異なるインスリン化合物複合体を含む、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１１５】
（ａ）  １０８（ａ）及び１０８（ｂ）の前記錯体が異なるインスリン化合物複合体を含み、かつ
（ｂ）  前記異なるインスリン化合物複合体が異なる溶解度を有する、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１１６】
（ａ）  １０８（ａ）及び１０８（ｂ）が異なるインスリン化合物複合体を含み、かつ
（ｂ）  前記錯体のうちの１つが親油性インスリン化合物複合体を含み、もう１つが親水性インスリン化合物複合体を含む、
請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１１７】
（ａ）  １０８（ａ）及び１０８（ｂ）の前記錯体が異なるインスリン化合物複合体を含み、かつ
（ｂ）  前記錯体のうちの１つが約１〜約４時間の循環半減期を有し、かつ
（ｃ）  前記錯体のうちのもう１つが、前記第１の錯体の循環半減期よりも大きい循環半減期を有する、
請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１１８】
（ａ）  １０８（ａ）及び１０８（ｂ）の前記錯体が異なるインスリン化合物複合体を含み、かつ
（ｂ）  前記錯体のうちの１つが急速作用型プロファイルを有し、かつ
（ｃ）  前記錯体のうちのもう１つが中〜長時間作用型プロファイルを有する、
請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１１９】
（ａ）  １０８（ａ）及び１０８（ｂ）の前記錯体が異なるインスリン化合物複合体を含み、かつ
（ｂ）  前記錯体のうちの１つが基礎インスリン化合物制御に適したプロファイルを有し、かつ
（ｃ）  前記錯体のうちのもう１つが食後グルコース制御に適したプロファイルを有する、
請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１２０】
実質的に均質な溶解、単一のインビボ溶解曲線及び／又は単一のピーク薬力学プロファイルという特性のうちの１つ以上のものを示す結晶である、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１２１】
ＨＩＭ２とインスリン化合物の共結晶である、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１２２】
ＨＩＭ２とＩＮ１０５の共結晶である、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１２３】
ＩＮ１０５とインスリン化合物の共結晶である、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１２４】
第２の活性成分がインスリン化合物であり、インスリン化合物との共結晶化が、前記インスリン化合物複合体の結晶の前記溶解度との関係において前記結晶の前記溶解度を低減させる、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１２５】
前記第２の活性成分がインスリン化合物であり、インスリン化合物との共結晶化が、前記インスリン化合物複合体の結晶の前記溶解度との関係において前記結晶の前記溶解度を増大させる、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１２６】
前記インスリン化合物複合体と前記第２の活性成分の共結晶化が、所望の治療活性をもつ共結晶を達成するように選択される、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１２７】
（ａ）  急速作用型、急速排泄型又は高効能インスリン化合物複合体と、
（ｂ）  長時間作用型、緩慢排泄型又は低効能インスリン化合物複合体と
を含む共結晶である、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１２８】
食後グルコース制御に適したＰＫ／ＰＤプロファイルを有する共結晶である、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１２９】
基礎インスリン化合物オーバーナイト制御に適したＰＫ／ＰＤプロファイルを有する共結晶である、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１３０】
（ａ）  請求項１に記載の錯体と、
（ｂ）  未複合インスリン化合物と、
を含む組成物。
【請求項１３１】
前記インスリン化合物がヒトインスリン又はｌｙｓ−ｐｒｏインスリン化合物である、請求項１３０に記載の組成物。
【請求項１３２】
２つの異なるインスリン化合物複合体を含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項１３３】
インスリン化合物複合体及び未複合インスリン化合物を含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項１３４】
２つの異なるインスリン化合物を含む２つの異なるインスリン化合物複合体を含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項１３５】
２つの異なるインスリン化合物複合体を含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項１３６】
インスリン化合物複合体及び未複合インスリン化合物を含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項１３７】
２つの異なるインスリン化合物複合体のハイブリッド共結晶の構成要素として提供される、請求項１に記載の錯体。
【請求項１３８】
３つの異なるインスリン化合物複合体のハイブリッド共結晶の構成要素として提供される、請求項１に記載の錯体。
【請求項１３９】
異なるインスリン化合物複合体のハイブリッド共結晶の構成要素として提供される、請求項１に記載の錯体。
【請求項１４０】
少なくとも２つの異なるインスリン化合物複合体を含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項１４１】
少なくとも２つの異なるインスリン化合物複合体の共結晶を含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項１４２】
１つのインスリン化合物複合体を含み、さらに未複合インスリン化合物を含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項１４３】
未複合インスリン化合物と共に錯体の形で前記インスリン化合物複合体を含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項１４４】
２つの異なる親水性インスリン化合物複合体を含む共結晶の構成要素として提供される、請求項１に記載の錯体。
【請求項１４５】
親水性インスリン化合物複合体及び親油性インスリン化合物複合体を含む共結晶の構成要素として提供される、請求項１に記載の錯体。
【請求項１４６】
親水性インスリン化合物複合体及び未複合インスリン化合物を含む共結晶の構成要素として提供される、請求項１に記載の錯体。
【請求項１４７】
未複合インスリン化合物と共に結晶化されるＨＩＭ２を含む共結晶の構成要素として提供される、請求項１に記載の錯体。
【請求項１４８】
未複合インスリン化合物と共に結晶化されるＩＮ１０５を含む共結晶の構成要素として提供される、請求項１に記載の錯体。
【請求項１４９】
ＩＮ１０５と共に結晶化されるＨＩＭ２を含む共結晶の構成要素として提供される、請求項１に記載の錯体。
【請求項１５０】
インスリン化合物及びＩＮ１０５と共に結晶化されるＨＩＭ２を含む共結晶の構成要素として提供される、請求項１に記載の錯体。
【請求項１５１】
長時間プロファイルを有し、請求項１に記載の錯体を含む共結晶。
【請求項１５２】
錯化剤をさらに含む、請求項１に記載の錯体。
【請求項１５３】
前記錯化剤が、プロタミン、サルフェン（ｓｕｒｆｅｎ）、グロビンタンパク質、スペルミン、スパーミジンアルブミン、アミノ酸、カルボン酸、ポリカチオン重合体化合物、カチオンポリペプチド、ポリリシン、アニオンポリペプチド、ヌクレオチド及びアンチセンスからなる群から選択される、請求項１５２に記載の錯体。
【請求項１５４】
プロタミンが実質的にない、請求項１に記載の錯体。
【請求項１５５】
固体の形をした、請求項１に記載の錯体。
【請求項１５６】
結晶性固体の形をした、請求項１５５に記載の錯体を含む組成物。
【請求項１５７】
棒状結晶の形をした、請求項１５５に記載の錯体を含む組成物。
【請求項１５８】
不規則形態を有する結晶の形をした、請求項１５５に記載の錯体を含む組成物。
【請求項１５９】
約０．５〜約４０μｍの範囲の平均直径を有する結晶の形をした、請求項１５５に記載の錯体を含む組成物。
【請求項１６０】
図１、２、３、４又は５に示されている通りの形態を有する結晶の形をした、請求項１５５に記載の錯体を含む組成物。
【請求項１６１】
乾燥固体の形をした、請求項１５５に記載の錯体を含む組成物。
【請求項１６２】
非晶質固体及び結晶性固体の混合物の形をした、請求項１５５に記載の錯体を含む組成物。
【請求項１６３】
実質的に純粋な粉末の形をした、請求項１５５に記載の錯体を含む組成物。
【請求項１６４】
カチオン−インスリン化合物複合体固体及び１つ以上の付加的な薬学的に許容可能な構成要素を含む粉末の形をした、請求項１５５に記載の錯体を含む組成物。
【請求項１６５】
液体の未溶解構成要素として請求項１５５に記載の錯体を含む組成物。
【請求項１６６】
液体中の沈殿物として請求項１５５に記載の錯体を含む組成物。
【請求項１６７】
懸濁液、エマルジョン又はマイクロエマルジョンの構成要素として請求項１５５に記載の錯体を含む組成物。
【請求項１６８】
乾燥状態で前記固体が、
（ａ）  約９６％ｗ／ｗ超のインスリン化合物複合体と、
（ｂ）  約０．０５〜約４％ｗ／ｗのＺｎ＋＋と、
を含む、請求項１５５に記載の錯体。
【請求項１６９】
乾燥状態で前記固体が、
（ａ）  約９１％ｗ／ｗ超のインスリン化合物複合体と、
（ｂ）  約０．３〜約４％ｗ／ｗのＺｎ＋＋と、
（ｃ）  約０．２〜約５％ｗ／ｗのフェノールと、
を含む、請求項１５５に記載の錯体。
【請求項１７０】
乾燥状態で前記固体が、
（ａ）  約８２％ｗ／ｗ超のインスリン化合物複合体と、
（ｂ）  約０．５〜約４％ｗ／ｗのＺｎ＋＋と、
（ｃ）  約０．２〜約１４％ｗ／ｗのプロタミンと、
を含む、請求項１５５に記載の錯体。
【請求項１７１】
乾燥状態で前記固体が、
（ａ）  約７１％ｗ／ｗ超のインスリン化合物複合体と、
（ｂ）  約０．５〜約４％ｗ／ｗのＺｎ＋＋と、
（ｃ）  約０．２〜約１４％ｗ／ｗのプロタミンと、
（ｄ）  約０．２〜約１５％ｗ／ｗのフェノールと、
を含む、請求項１５５に記載の錯体。
【請求項１７２】
乾燥状態で前記固体が、
（ａ）  約０．１〜約２％ｗ／ｗのＺｎ＋＋と、
（ｂ）  約０．０８〜約１％ｗ／ｗのフェノールと、
を含む、請求項１５５に記載の錯体。
【請求項１７３】
乾燥状態で前記固体が、
（ａ）  約０．５〜約１．３％ｗ／ｗのＺｎ＋＋と、
（ｂ）  約０．１〜約０．７％ｗ／ｗのフェノールと、
を含む、請求項１５５に記載の錯体。
【請求項１７４】
乾燥状態で前記固体が、
（ａ）  １％ｗ／ｗ以上から約３．５％ｗ／ｗまでのＺｎ＋＋と、
（ｂ）  約０．１〜約３％ｗ／ｗのフェノールと、
を含む、請求項１５５に記載の錯体。
【請求項１７５】
乾燥状態で前記固体が、
（ａ）  １．３％ｗ／ｗ以上から約２．２％ｗ／ｗまでのＺｎ＋＋と、
（ｂ）  約０．４〜約２％ｗ／ｗのフェノールと、
を含む、請求項１５５に記載の錯体。
【請求項１７６】
前記固体が、約９０、９５又は９９％超、結晶性である、請求項１５５に記載の錯体。
【請求項１７７】
前記固体が、約９０、９５又は９９％超、非晶質である、請求項１５５に記載の錯体。
【請求項１７８】
前記固体が、非晶質固体と結晶性固体の混合物を含む、請求項１５５に記載の錯体。
【請求項１７９】
前記固体が、複合及び未複合インスリン化合物を含む、請求項１５５に記載の錯体。
【請求項１８０】
請求項１５５に記載の錯体を含む薬学組成物。
【請求項１８１】
前記錯体が、液体中に存在する固体を含む、請求項１８０に記載の薬学組成物。
【請求項１８２】
前記固体が緩衝液中に存在する、請求項１８１に記載の薬学組成物。
【請求項１８３】
安定剤をさらに含む、請求項１８０に記載の薬学組成物。
【請求項１８４】
前記安定剤がフェノール化合物である、請求項１８３に記載の薬学組成物。
【請求項１８５】
前記安定剤がフェノール、ｍ−クレゾール及びパラベンからなる群から選択される、請求項１８３に記載の薬学組成物。
【請求項１８６】
カチオン−インスリン化合物複合体錯体を製造する方法において、水溶液中でインスリン化合物複合体とカチオンを組合わせるステップを含む方法。
【請求項１８７】
前記水溶液が、中に溶解した有機溶媒を含む、請求項１８６に記載の方法。
【請求項１８８】
それを必要としている対象に対して、請求項１に記載の錯体を薬学的に許容可能な量だけ投与するステップを含む、治療方法。
【請求項１８９】
前記対象が糖尿病患者である、請求項１８８に記載の方法。
【請求項１９０】
前記組成物が、経口、経口摂取、非経口、口腔、舌下、経鼻、吸入及び経皮からなる群から選択された経路により投与される、請求項１８８に記載の方法。
【請求項１９１】
前記組成物が、経口、経口摂取、非経口、口腔、舌下、経鼻、吸入及び経皮からなる群から選択された経路による投与のために処方された薬学組成物の構成要素として投与される、請求項１８８に記載の方法。
【請求項１９２】
請求項１に記載の構成要素及び担体を含む薬学組成物。
【請求項１９３】
経口、経口摂取、非経口、口腔、舌下、経鼻、吸入及び経皮からなる群から選択された経路による投与のために処方された請求項１９２に記載の薬学組成物。
【請求項１９４】
固体剤形、懸濁液及びフイルムからなる群から選択された形態で処方された、請求項１９２に記載の薬学組成物。
【請求項１９５】
【化２３】
2014043470.tif 000118
という式を有する修飾部分に対しカップリングされたインスリン化合物において、式中、
−  Ｘ、Ｙ、及びＺが、独立して選択された連結基であり、各々が任意に存在し、Ｘが存在する場合それは共有結合によりインスリン化合物にカップリングされており、
−  Ｒ１又はＲ２のいずれかが、任意には、カルボニル基を内含する低級アルキルであり、Ｒ１が低級アルキルである場合Ｒ２がキャッピング基であり、
−  ＰＡＧが、１つ以上のアルカレングリコール部分を取込み、任意には−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｎ−、及び−Ｃ（Ｏ）−からなる群から選択された１つ以上の付加的部分を取込む直鎖又は分枝炭素鎖であり、
−  前記修飾部分が、最大３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５個の重原子を有する、
インスリン化合物。
【請求項１９６】
−Ｃ、−Ｃ−、−Ｏ−、＝Ｏ、−Ｓ−、−Ｎ−、−Ｓｉ−からなる群から選択された３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１９、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５個の原子の主鎖を有する直鎖又は分枝の置換炭素鎖部分にカップリングされたポリペプチド化合物を含むポリペプチド複合体。
【請求項１９７】
−Ｃ、−Ｃ−、−Ｏ−、＝Ｏ、−Ｓ−、−Ｎ−、−Ｓｉ−からなる群から選択された３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１９、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５個の原子の主鎖を有する直鎖又は分枝の置換炭素鎖部分にカップリングされたインスリン化合物を含む、インスリン化合物複合体。
【請求項１９８】
前記主鎖が１つ以上の炭素原子及び、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ−、及び＝Ｏからなる群から選択された１つ以上の非炭素重原子を含む、請求項１９７に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項１９９】
前記炭素鎖部分がいかなる環構造も含んでいない、請求項１９７に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２００】
前記炭素鎖部分が単一分岐を含んでいない、請求項１９７に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２０１】
前記炭素鎖部分がアルキルでない、請求項１９７に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２０２】
前記主鎖が１つ以上の炭素原子及び−Ｏ−、−Ｎ−、及び＝Ｏからなる群から選択された１つ以上の非炭素重原子を含む、請求項１９７に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２０３】
前記主鎖が３、４、５、６、７、８、９又は１０個の炭素原子と炭素原子間にカップリングされた２、３、４又は５個の−Ｏ−部分を含む、請求項１９７に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２０４】
前記主鎖が３、４、５、６、７、８、９又は１０個の炭素原子と−Ｏ−及び＝Ｏからなる群から選択される１つ以上の非炭素重原子を含む、請求項１９７に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２０５】
前記炭素原子及び非炭素重原子が、各非炭素重原子あたり少なくとも1個の炭素原子の比率で存在している、請求項１９８に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２０６】
前記炭素原子及び非炭素原子重原子が、各非炭素重原子あたり少なくとも２個の炭素原子の比率で存在している、請求項１９８に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２０７】
前記炭素原子及び非炭素原子重原子が、各非炭素重原子あたり少なくとも３個の炭素原子の比率で存在している、請求項１９８に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２０８】
各酸素原子あたり少なくとも1個の炭素原子の比率で炭素原子と酸素原子を含む、請求項１９８に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２０９】
各酸素原子あたり少なくとも２個の炭素原子の比率で炭素原子と酸素原子を含む、請求項１９８に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２１０】
各酸素原子あたり少なくとも３個の炭素原子の比率で炭素原子と酸素原子を含む、請求項１９８に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２１１】
Ｏ−が前記インスリン化合物にカップリングされ、−Ｃが、３、４、５、６、７、８又は９個の炭素原子及びオキシ基の形をした２、３又は４個の酸素原子を有する直鎖炭素鎖にカップリングされている、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−を含む、請求項１９８に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２１２】
修飾部分が１つ以上のキャッピング基を含む、請求項１９７に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２１３】
修飾部分が、分枝又は直鎖Ｃ１−６及びカルボニルからなる群から選択される1つ以上のキャッピング基を含む、請求項１９７に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２１４】
前記修飾部分が１、２又は３個のポリエチレングリコール単位及び１、２又は３個のポリプロピレン単位を含む、請求項１９７に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２１５】
前記修飾部分が、前記インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上に可溶性あるものにするように選択されている、請求項１９７に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２１６】
前記インスリン化合物複合体の前記水溶性が亜鉛添加により低減される、請求項１９７に記載のインスリン化合物複合体。
【請求項２１７】
【化２４】
2014043470.tif 000119
という式を有する修飾部分にカップリングされたインスリン化合物において、式中、ｎが１、２、３又は４であり、ｍが１、２、３、４又は５であるインスリン化合物。
【請求項２１８】
前記修飾部分が、
【化２５】
2014043470.tif 000120
である、請求項２１７に記載のインスリン化合物。
【請求項２１９】
前記修飾部分が、
【化２６】
2014043470.tif 000121
である、請求項２１７に記載のインスリン化合物。
【請求項２２０】
前記修飾部分が、
【化２７】
2014043470.tif 000122
である、請求項２１７に記載のインスリン化合物。
【請求項２２１】
前記修飾部分が、
【化２８】
2014043470.tif 000123
である、請求項２１７に記載のインスリン化合物。
【請求項２２２】
前記修飾部分が
（ａ）  ヒトインスリンのＢ２９と、
（ｂ）  ヒトインスリンのＢ１又は
（ｃ）  ヒトインスリンのＢ１及びＢ２９と、
においてカップリングされている、請求項２１７に記載のインスリン化合物。
【請求項２２３】
【化２９】
2014043470.tif 000124
という式を有する修飾部分にカップリングされたインスリン化合物において、式中、ｎが１、２、３、４又は５であり、ｍが１、２、３、又は４であるインスリン化合物。
【請求項２２４】
前記修飾部分が、
【化３０】
2014043470.tif 000125
である、請求項２２３に記載のインスリン化合物。
【請求項２２５】
前記修飾部分が
【化３１】
2014043470.tif 000126
である、請求項２２３に記載のインスリン化合物。
【請求項２２６】
前記修飾部分がヒトインスリンのＢ２９においてカップリングされている、請求項２２３に記載のインスリン化合物。
【請求項２２７】
前記修飾部分が、
（ａ）  ヒトインスリンのＢ１５又は
（ｂ）  ヒトインスリンのＢ１及びＢ２９
においてカップリングされている、請求項２２３に記載のインスリン化合物。
【請求項２２８】
それを必要としている対象におけるインスリン欠乏を治療する方法において、請求項１９５に記載のインスリン化合物を治療上有効な量だけ前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２２９】
前記インスリン欠乏の原因として、
（ａ）  糖尿病と、
（ｂ）  前糖尿病又は
（ｃ）  代謝症候群と、
が含まれる、請求項２２８に記載の方法。
【請求項２３０】
前記インスリン化合物複合体が食後グルコース制御をもたらすように投与されている、請求項２２８に記載の方法。
【請求項２３１】
前記インスリン化合物が食前１時間以内に投与される、請求項２２８に記載の方法。
【請求項２３２】
前記インスリン化合物複合体がオーバーナイトグルコース制御をもたらすように投与される、請求項２２８に記載の方法。
【請求項２３３】
【化３２】
2014043470.tif 000127
という式を有する修飾部分において、式中、ｎが１、２、３又は４であり、ｍが１、２、３、４又は５である修飾部分。
【請求項２３４】
【化３３】
2014043470.tif 000128
という式を有する、請求項２３３に記載の修飾部分。
【請求項２３５】
【化３４】
2014043470.tif 000129
という式を有する、請求項２３３に記載の修飾部分。
【請求項２３６】
【化３５】
2014043470.tif 000130
という式を有する、請求項２３３に記載の修飾部分。
【請求項２３７】
【化３６】
2014043470.tif 000131
という式を有する、請求項２３３に記載の修飾部分。
【請求項２３８】
【化３７】
2014043470.tif 000132
という式を有する修飾部分において、式中、ｎが１、２、３、４又は５であり、ｍが１、２、３、又は４である修飾部分。
【請求項２３９】
【化３８】
2014043470.tif 000133
という式を有する、請求項２３８に記載の修飾部分。
【請求項２４０】
【化３９】
2014043470.tif 000134
という式を有する、請求項２３８に記載の修飾部分。
【請求項２４１】
請求項２３３に記載の前記修飾部分の活性化形態。
【請求項２４２】
インスリン化合物を複合する方法において、請求項２３３に記載の修飾部分を活性化させるステップ及び前記インスリン化合物に対して前記活性化修飾部分をカップリングさせるステップを含む方法。
【請求項２４３】
摂取による経口投与のために処方された固体薬学組成物において、
（ａ）  約０．１〜約７５％ｗ／ｗの脂肪酸構成要素であって、前記脂肪酸構成要素が飽和又は不飽和Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１又はＣ１２脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩を含む構成要素と、
（ｂ）  治療薬と、
を含む固体薬学組成物。
【請求項２４４】
約５〜約６５％ｗ／ｗの脂肪酸構成要素を含む、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２４５】
約４０〜約６０％ｗ／ｗの脂肪酸構成要素を含む、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２４６】
前記治療薬がタンパク質又はペプチドである、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２４７】
前記治療薬が、２〜２００個のアミノ酸、１０〜６５個のアミノ酸又は２５〜５５個のアミノ酸を有するタンパク質又はペプチドである、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２４８】
前記治療薬がインスリン化合物、カルシトニン、インターフェロン、成長ホルモン、成長因子、ＧＬＰ−１、ＰＴＨ、ソマトスタチン、ＬＣＲＦ、ナトリウム利尿ペプチド、ＢＮＰ、ＡＮＰ、２００個未満のアミノ酸を有するエリスロポエチン、抗体フラグメント、ワクチン及び以上のもののいずれかの類似体からなる群から選択されている、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２４９】
前記治療薬が、複合タンパク質又はペプチド、アシル化タンパク質又はペプチド又はＰＥＧ化タンパク質又はペプチドである、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２５０】
前記治療薬が、複合インスリン化合物、カルシトニン、インターフェロン、成長ホルモン、成長因子、ＧＬＰ−１、ＰＴＨ、ソマトスタチン、ＬＣＲＦ、ナトリウム利尿ペプチド、ＢＮＰ、ＡＮＰ、エキセナチド、２００個未満のアミノ酸を有するエリスロポエチン、抗体フラグメント、ワクチン及び以上のもののいずれかの類似体である、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２５１】
前記治療薬が、インスリン化合物である、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２５２】
前記治療薬が、錯化タンパク質又はペプチド又は錯化複合タンパク質又はペプチドである、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２５３】
前記治療薬が、錯化インスリン化合物又は錯化複合インスリン化合物である、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２５４】
前記組成物の前記イオン化又は非イオン化脂肪酸含有量が、約９０％ｗ／ｗ超、約９５％ｗ／ｗ超又は約９９％ｗ／ｗ超の単一脂肪酸である、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２５５】
前記治療薬の実質的な喪失なく胃の中を通過し、かつ前記治療薬の送達のために腸内で実質的に完全に溶解するように調製された、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２５６】
前記治療薬の実質的な喪失なく胃の中を通過し、かつ前記活性成分の送達のために腸内で実質的に完全に溶解するように調製され、前記組成物が実質的に腸溶コーティングを有していない、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２５７】
腸溶コーティングをさらに含む、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２５８】
腸溶コーティングが欠如しているか又は実質的にない、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２５９】
結合剤、崩壊剤、充てん剤、希釈剤、滑沢剤、流動促進剤、流量増強剤、圧縮助剤、染料、甘味剤、防腐剤、懸濁剤、分散剤、塗膜形成剤、コーティング、着香剤、印刷用インク、セルロース、糖、マンニトール、ラクトース、溶解増強剤及びクロスカルマロースからなる群から選択された希釈剤を含む、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２６０】
錠剤、ミニタブ、粉末、硬質ゼラチンカプセル又は軟質ゼラチンカプセルからなる群から選択された形状で調製される、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２６１】
前記脂肪酸構成要素が、カプリン酸及び／又はラウリン酸及び／又はカプリン酸及び／又はラウリン酸の塩である、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２６２】
リン酸緩衝液、リン酸ナトリウム、トリス緩衝液、クエン酸緩衝液、及びエタノールアミン緩衝液からなる群から選択された緩衝塩を含む、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２６３】
約４．８〜約９．５又は約５〜約８の局所的ｐＨを維持するべく吸収部位において緩衝能力を達成するように選択された緩衝塩を含む、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２６４】
半固体充てん材を含むカプセルとして提供される、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２６５】
修飾部分に対しカップリングされたインスリン化合物を含むインスリン化合物複合体を含む、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２６６】
【化４０】
2014043470.tif 000135
という式を有する修飾部分に対しカップリングされ、式中、
−  Ｘ、Ｙ、及びＺが、独立して選択された連結基であり、各々が任意に存在し、Ｘが存在する場合それは共有結合によりインスリン化合物にカップリングされており、
−  Ｒ１又はＲ２のいずれかが、任意には、カルボニル基を内含する低級アルキルであり、Ｒ１が低級アルキルである場合Ｒ２がキャッピング基であり、
−  ＰＡＧが、２つ以上のアルカレングリコール部分を取込み、任意には−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｎ−、及び−Ｃ（Ｏ）−からなる群から選択された１つ以上の付加的部分を取込む直鎖又は分枝炭素鎖であり、
−  前記修飾部分が、最大３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５個の重原子を有する、
インスリン化合物を含む、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２６７】
−Ｃ、−Ｃ−、−Ｏ−、＝Ｏ、−Ｓ−、−Ｎ−、−Ｓｉ−からなる群から選択された３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１９、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５個の原子の主鎖を有する直鎖又は分枝の置換炭素原子鎖部分にカップリングされたポリペプチド化合物を含むポリペプチド複合体を含む、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２６８】
−Ｃ、−Ｃ−、−Ｏ−、＝Ｏ、−Ｓ−、−Ｎ−、−Ｓｉ−からなる群から選択された３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１９、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５個の原子の主鎖を有する直鎖又は分枝の置換炭素鎖部分にカップリングされたインスリン化合物を含むインスリン化合物複合体を含む、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２６９】
前記主鎖が１つ以上の炭素原子及び、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ−、及び＝Ｏからなる群から選択された１つ以上の非炭素重原子を含む、請求項２６８に記載の薬学組成物。
【請求項２７０】
前記炭素鎖部分がいかなる環構造も含んでいない、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２７１】
前記炭素鎖部分が分岐していない、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２７２】
前記炭素鎖部分がアルキルでない、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２７３】
前記主鎖が１つ以上の炭素原子及び−Ｏ−、−Ｎ−、及び＝Ｏからなる群から選択された１つ以上の非炭素重原子を含む、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２７４】
前記主鎖が３、４、５、６、７、８、９又は１０個の炭素原子と炭素原子間にカップリングされた２、３、４又は５個の−Ｏ−部分を含む、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２７５】
前記主鎖が３、４、５、６、７、８、９又は１０個の炭素原子と−Ｏ−及び＝Ｏからなる群から選択される１つ以上の非炭素重原子を含む、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２７６】
前記炭素原子及び非炭素重原子が、各非炭素重原子あたり少なくとも１、２、３又は４個の炭素原子の比率で存在している、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２７７】
各酸素原子あたり少なくとも１、２、３又は４個の炭素原子の比率で炭素原子と酸素原子を含む、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２７８】
前記Ｏ−が前記インスリン化合物にカップリングされ、前記−Ｃが、３、４、５、６、７、８又は９個の炭素原子及びオキシ基の形をした２、３又は４個の酸素原子を有する直鎖炭素鎖にカップリングされている、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−基を含む、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２７９】
修飾部分が１つ以上のキャッピング基を含む、請求項２６５に記載の薬学組成物。
【請求項２８０】
修飾部分が、分枝又は直鎖Ｃ１−６及びカルボニルからなる群から選択される１つ以上のキャッピング基を含む、請求項２６５に記載の薬学組成物。
【請求項２８１】
前記修飾部分が１、２又は３個のポリエチレングリコール単位及び１、２又は３個のポリプロピレン単位を含む、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２８２】
前記修飾部分が、前記インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上に可溶性あるものにするように選択されている請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２８３】
前記インスリン化合物複合体の前記水溶性が亜鉛添加により低減される、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２８４】
前記インスリン化合物複合体が、
【化４１】
2014043470.tif 000136
という構造をもつ修飾部分に対しＡ１、Ｂ１及び／又はＢ２９においてカップリングされたヒトインスリンからなる請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２８５】
前記インスリン化合物複合体が、
【化４２】
2014043470.tif 000137
という構造をもつ修飾部分に対しＢ２９においてカップリングされたヒトインスリンからなる、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２８６】
前記インスリン化合物複合体が、
【化４３】
2014043470.tif 000138
という構造をもつ修飾部分に対しＡ１、Ｂ１及び／又はＢ２９においてカップリングされたヒトインスリンからなる、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２８７】
前記修飾部分が、
【化４４】
2014043470.tif 000139
という式を有し、式中ＰＡＧがｍ個のサブユニットを有するＰＡＧ部分であり、ｍが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０であり、ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０である、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２８８】
前記修飾部分が、
【化４５】
2014043470.tif 000140
という構造を有する、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２８９】
前記修飾部分が、
【化４６】
2014043470.tif 000141
という構造を有する、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２９０】
前記修飾部分が、
【化４７】
2014043470.tif 000142
という構造を有する、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２９１】
前記修飾部分が、
【化４８】
2014043470.tif 000143
という構造を有する、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２９２】
前記修飾部分が、
【化４９】
2014043470.tif 000144
という構造を有する、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２９３】
前記修飾部分が、
【化５０】
2014043470.tif 000145
という構造を有する、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項２９４】
前記インスリン化合物複合体が、２〜１５個のＰＥＧ又は２〜１０個のＰＥＧサブユニットを有する直鎖又は分枝ＰＥＧ部分に対してＡ１、Ｂ１及び／又はＢ２９でカップリングされている、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２９５】
薬学的に許容可能な純度レベルを有する、請求項２４３に記載の薬学組成物。
【請求項２９６】
摂取による経口投与のために処方された液体薬学組成物において、
（ａ）  約０．１〜約１０％ｗ／ｖの脂肪酸構成要素であって、前記脂肪酸構成要素が飽和又は不飽和Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１又はＣ１２脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩を含む構成要素と、
（ｂ）  治療薬と、
を含む液体薬学組成物。
【請求項２９７】
約０．２５〜約６％ｗ／ｖの脂肪酸構成要素又は約１．５〜約３．５％ｗ／ｖの脂肪酸構成要素を含む、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項２９８】
前記治療薬が、タンパク質又はペプチドである、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項２９９】
前記治療薬が、２〜２００個のアミノ酸、１０〜６５個のアミノ酸又は２５〜５５個のアミノ酸を有するタンパク質又はペプチドである、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３００】
前記治療薬が、インスリン化合物、カルシトニン、インターフェロン、成長ホルモン、成長因子、ＧＬＰ−１、ＰＴＨ、ソマトスタチン、ＬＣＲＦ、ナトリウム利尿ペプチド、ＢＮＰ、ＡＮＰ、エキセナチド、２００個未満のアミノ酸を有するエリスロポエチン、抗体フラグメント、ワクチン及び以上のもののいずれかの類似体からなる群から選択されている、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３０１】
前記治療薬が、複合タンパク質又はペプチド、アシル化タンパク質又はペプチド又はＰＥＧ化タンパク質又はペプチドである、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３０２】
前記治療薬が、複合インスリン化合物、カルシトニン、インターフェロン、成長ホルモン、成長因子、ＧＬＰ−１、ＰＴＨ、ソマトスタチン、ＬＣＲＦ、ナトリウム利尿ペプチド、ＢＮＰ、ＡＮＰ、エキセナチド、２００個未満のアミノ酸を有するエリスロポエチン、抗体フラグメント、ワクチン及び以上のもののいずれかの類似体である、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３０３】
前記治療薬が、インスリン化合物である、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３０４】
前記治療薬が、錯化タンパク質又はペプチド又は錯化複合タンパク質又はペプチドである、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３０５】
前記治療薬が錯化インスリン化合物又は錯化複合インスリン化合物である、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３０６】
前記組成物の前記イオン化又は非イオン化脂肪酸含有量が、約９０％ｗ／ｗ超、約９５％ｗ／ｗ超又は約９９％ｗ／ｗ超の単一脂肪酸である、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３０７】
半固体、懸濁液、マイクロエマルジョン及びエマルジョンからなる群から選択された形状で調製される、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３０８】
前記脂肪酸構成要素が、カプリン酸及び／又はラウリン酸及び／又はカプリン酸及び／又はラウリン酸の塩である、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３０９】
リン酸緩衝液、リン酸ナトリウム、トリス緩衝液、クエン酸緩衝液、エタノールアミン緩衝液及びトリエチルアミン緩衝液からなる群から選択された緩衝塩を含む、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３１０】
約４．８〜約９．５又は約５〜約８の局所的ｐＨを維持するべく吸収部位において緩衝能力を達成するように計算された量で緩衝塩を含む、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３１１】
修飾部分に対しカップリングされたインスリン化合物を含む、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３１２】
前記修飾部分が、
【化５１】
2014043470.tif 000146
という式を有し、式中、
−  Ｘ、Ｙ、及びＺが、独立して選択された連結基であり、各々が任意に存在し、Ｘが存在する場合それは共有結合によりインスリン化合物にカップリングされており、
−  Ｒ１又はＲ２のいずれかが、任意には、カルボニル基を内含する低級アルキルであり、Ｒ１が低級アルキルである場合Ｒ２がキャッピング基であり、
−  ＰＡＧが、１つ以上のアルカレングリコール部分を取込み、任意には−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｎ−、及び−Ｃ（Ｏ）−からなる群から選択された１つ以上の付加的部分を取込む直鎖又は分枝炭素鎖であり、
−  前記修飾部分が、最大３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５個の重原子を有する、
請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３１３】
前記治療薬が、−Ｃ、−Ｃ−、−Ｏ−、＝Ｏ、−Ｓ−、−Ｎ−、−Ｓｉ−からなる群から選択された３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１９、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５個の原子の主鎖を有する直鎖又は分枝の置換炭素原子鎖部分にカップリングされたポリペプチド化合物を含むポリペプチド複合体を含む、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３１４】
前記治療薬が、−Ｃ、−Ｃ−、−Ｏ−、＝Ｏ、−Ｓ−、−Ｎ−、−Ｓｉ−からなる群から選択された３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１９、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５個の原子の主鎖を有する直鎖又は分枝の置換炭素鎖部分にカップリングされたインスリン化合物を含むインスリン化合物複合体を含む請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３１５】
前記主鎖が１つ以上の炭素原子及び、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ−、及び＝Ｏからなる群から選択された１つ以上の非炭素重原子を含む、請求項３１４に記載の薬学組成物。
【請求項３１６】
前記炭素鎖部分がいかなる環構造も含んでいない、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３１７】
前記炭素鎖部分が分岐していない、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３１８】
前記炭素鎖部分がアルキルでない、請求項２９６に記載の薬学組成物。
【請求項３１９】
前記主鎖が１つ以上の炭素原子及び−Ｏ−、−Ｎ−、及び＝Ｏからなる群から選択された１つ以上の非炭素重原子を含む、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項３２０】
前記主鎖が３、４、５、６、７、８、９又は１０個の炭素原子と炭素原子間にカップリングされた２、３、４又は５個の−Ｏ−部分を含む、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項３２１】
前記主鎖が３、４、５、６、７、８、９又は１０個の炭素原子と−Ｏ−及び＝Ｏからなる群から選択される１つ以上の非炭素重原子を含む、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項３２２】
前記炭素原子及び非炭素原子重原子が、各非炭素重原子あたり少なくとも１、２、３又は４個の炭素原子の比率で存在している、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項３２３】
各酸素原子あたり少なくとも１、２、３又は４個の炭素原子の比率で炭素原子と酸素原子を含む、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項３２４】
前記Ｏ−が前記インスリン化合物にカップリングされ、前記−Ｃが、３、４、５、６、７、８又は９個の炭素原子及びオキシ基の形をした２、３又は４個の酸素原子を有する直鎖炭素鎖にカップリングされている、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−基を含む、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項３２５】
修飾部分が２つ以上のキャッピング基を含む、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項３２６】
修飾部分が、分枝又は直鎖Ｃ１−６及びカルボニルからなる群から選択される１つ以上のキャッピング基を含む、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項３２７】
前記修飾部分が１、２又は３個のポリエチレングリコール単位及び１、２又は３個のポリプロピレン単位を含む、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項３２８】
前記修飾部分が、前記インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上に可溶性あるものにするように選択されている、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項３２９】
前記インスリン化合物複合体の前記水溶性が亜鉛添加により低減される、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項３３０】
前記インスリン化合物複合体が、
【化５２】
2014043470.tif 000147
という構造をもつ修飾部分に対しＡ１、Ｂ１及び／又はＢ２９においてカップリングされたヒトインスリンからなる、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３３１】
前記インスリン化合物複合体が、
【化５３】
2014043470.tif 000148
という構造をもつ修飾部分に対しＢ２９においてカップリングされたヒトインスリンからなる、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３３２】
前記インスリン化合物複合体が、
【化５４】
2014043470.tif 000149
という構造をもつ修飾部分に対しＡ１、Ｂ１及び／又はＢ２９においてカップリングされたヒトインスリンからなる、請求項２３４に記載の薬学組成物。
【請求項３３３】
前記インスリン化合物複合体が、
【化５５】
2014043470.tif 000150
という式を有し、式中、ｍが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０であり、ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０である、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３３４】
前記インスリン化合物複合体が、
【化５６】
2014043470.tif 000151
という式を有し、式中ＰＡＧがｍ個のサブユニットを有するＰＡＧ部分であり、ｍが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０であり、ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０である、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３３５】
前記修飾部分が、
【化５７】
2014043470.tif 000152
という構造を有する、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３３６】
前記修飾部分が、
【化５８】
2014043470.tif 000153
という構造を有する、請求項３１１に記載の複合体。
【請求項３３７】
前記修飾部分が、
【化５９】
2014043470.tif 000154
という構造を有する、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３３８】
前記修飾部分が、
【化６０】
2014043470.tif 000155
という構造を有する、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３３９】
前記修飾部分が、
【化６１】
2014043470.tif 000156
という構造を有する、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３４０】
前記修飾部分が、
【化６２】
2014043470.tif 000157
という構造を有する、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３４１】
前記修飾部分が、
【化６３】
2014043470.tif 000158
という構造を有する、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３４２】
前記修飾部分が、
【化６４】
2014043470.tif 000159
という構造を有する、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３４３】
前記修飾部分が、
【化６５】
2014043470.tif 000160
という構造を有する、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３４４】
前記修飾部分が、
【化６６】
2014043470.tif 000161
という構造を有する、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３４５】
前記修飾部分が、
【化６７】
2014043470.tif 000162
という構造を有する、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３４６】
前記修飾部分が、
【化６８】
2014043470.tif 000163
という構造を有する、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３４７】
前記修飾部分が、
【化６９】
2014043470.tif 000164
という構造を有する、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３４８】
前記修飾部分が、
【化７０】
2014043470.tif 000165
という構造を有する、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３４９】
前記修飾部分が、
【化７１】
2014043470.tif 000166
という構造を有する、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３５０】
前記修飾部分が、
【化７２】
2014043470.tif 000167
という構造を有する、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３５１】
前記インスリン化合物複合体が、２〜２０個のＰＥＧサブユニットを有する直鎖又は分枝ＰＥＧ部分に対してＡ１、Ｂ１及び／又はＢ２９でカップリングされている、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３５２】
前記インスリン化合物複合体が、２〜１５個のＰＥＧサブユニットを有する直鎖又は分枝ＰＥＧ部分に対してＡ１、Ｂ１及び／又はＢ２９でカップリングされている、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【請求項３５３】
前記インスリン化合物複合体が、２〜１０個のＰＥＧサブユニットを有する直鎖又は分枝ＰＥＧ部分に対してＡ１、Ｂ１及び／又はＢ２９でカップリングされている、請求項３１１に記載の薬学組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１  関連出願
本出願は、２００４年７月１９日付け米国仮特許出願第６０／５８９，０５８号明細書、２００４年１０月１５日付け同第６０／６１９，１５３号明細書、２００４年１２月２日付け同第６０／６３２，５７８号明細書、及び２００５年２月２４日付け同第６０／６５５，８３８号明細書及び２００５年２月２４日付け同第６０／６５５，８０３号明細書に対する優先権を請求するものであり、それらの開示全体を参照により援用する。本出願は同様に、ラトカクリシュナン（Ｒａｄｈａｋｒｉｓｈｎａｎ）らによる０５年７月１９日付けの本書と共に出願された以下の出願すなわち、「インスリン化合物複合体のカチオン錯体、その処方物及び使用」という題の米国特許出願第１１／１８４，６６８号明細書；「インスリンオリゴマー化合物複合体、その処方物及び使用」という題の米国特許出願第１１／１８４，５９４号明細書；「タンパク質及びペプチドの経口送達用脂肪酸処方物、及びその使用」という題の米国特許第１１／１８４，５２８号明細書をも参照により援用する。
【０００２】
２  技術分野
本発明は、インスリン又はインスリン類似体が修飾部分にカップリングされている新規のインスリン化合物に関する。また、本発明は、かかるインスリン化合物複合体のカチオン錯体及びかかるインスリン化合物複合体及び／又は修飾部分を含む薬学的処方物にも関する。
【背景技術】
【０００３】
３  背景技術
例えば、ＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）及びＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）という商標名で、亜鉛錯化インスリン化合物が市販されている。亜鉛錯化インスリンは標準的に六量体形態で存在する。
【０００４】
アシル化インスリンの結晶化における亜鉛の使用のためのさまざまな方法が記述されてきた。例えば２００１年１１月１５日付けで公開された、マークＬ．ブラダー（Ｍａｒｋ  Ｌ．Ｂｒａｄｅｒ）らによる「安定化されたアシル化インスリン処方物」という題の米国特許出願公開報第２００１００４１７８６号明細書は、脂肪酸アシル化インスリン又は脂肪酸アシル化インスリン類似体を含有し亜鉛及び好ましくはフェノール化合物を用いて安定化された、ｐＨ７．１〜７．６の特に注射可能な処方物としての非経口送達用水溶液を伴う処方物について記述している。「ペプチド誘導体」という題で、ノボ・ノルディスク（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）Ａ／Ｓに譲渡された、シャファー（Ｓｃｈａｆｆｅｒ）らに対し２００２年９月１７日付けで発行された米国特許第６，４５１，９７０号明細書は、Ｂ２８、Ｂ２９又はＢ３０位にあるＬｙｓのｅ−アミノ基及び／又はＢ−鎖のＮ末端アミノ基が１２〜２２個の炭素原子及びその亜鉛錯体をもつ長鎖炭化水素基を用いて、アシル化されているインスリン類似体及びインスリン化合物の誘導体について記述している。
【０００５】
アシル化インスリンの結晶化において使用するためのプロタミン及びフェノール化合物が、記述されてきた。両方共「不溶性インスリン組成物」という発明の名称の、ブラダーに対する米国特許第６，２６８，３３５号明細書（０１年７月３１日）及び６，４６５，４２６号明細書（０２年１０月１０日）は、アシル化インスリン、プロタミン錯化化合物、六量体安定化フェノール化合物及び２価の金属カチオンから成る不溶性組成物について記述している。
【０００６】
既存のアプローチは、特に未変性インスリン化合物又はインスリン化合物類似体の結晶化又は非アシル化インスリン化合物に比べて増大した親油性をもつアシル化インスリン化合物のために調整されたものである。当該技術分野においては、親水性及び／又は両親媒性インスリン化合物誘導体といったようなアシル化インスリン化合物以外の誘導体化されたインスリン化合物を含む薬学的に許容可能な錯体に対するニーズ、及び非アシル化親油性インスリン化合物類似体を安定化させるニーズが存在している。同様に、当該技術分野においては、既存の複合体に比べ増大した生物学的利用能又はその他の薬学的属性を有する新しいタンパク質複合体に対するニーズも存在している。又当該技術分野においては、タンパク質及びタンパク質複合体の経口送達を容易にする新しい処方物に対するニーズが存在している。最後に、タンパク質の経口送達のための利点を最大限にするべく改善された処方で固体として提供される改良型経口タンパク質複合体を取込む、インスリン化合物といったようなタンパク質の経口生物学的利用能を改善するための組合せ型アプローチに対するニーズも存在している。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
４  発明の要約
一般に、本発明は、修飾部分に複合されたインスリン化合物を伴うインスリン化合物複合体及びカチオンを含む錯体において、インスリン化合物複合体がカチオンと錯化されている錯体を提供する。該インスリン化合物は例えば未変性インスリン又はインスリン類似体であってよい。インスリン化合物の例としてはヒトインスリン、リスプロインスリン、ｄｅｓ３０インスリン、未変性プロインスリン、人工プロインスリンなどが含まれる。カチオン構成要素は、例えばＺｎ＋＋、Ｍｎ＋＋、Ｃａ＋＋、Ｆｅ＋＋、Ｎｉ＋＋、Ｃｕ＋＋、Ｃｏ＋＋及びＭｇ＋＋から成る群から選択された２価の金属カチオンであり得る。
【０００８】
修飾部分は、インスリン化合物複合体を、対応する未複合インスリン化合物に比べて溶解度が大きい、小さい又は同等のものにするように選択され得る。該修飾部分は好ましくは、インスリン化合物複合体を、約７．４のｐＨで、水溶液中で対応する未複合インスリン化合物に比べ少なくとも１．０５、１．２５、１．５、１．７５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５又は１５倍の溶解度を有するものにするように選択されている。好ましくは、該修飾部分は、約７．４のｐＨで約１ｇ／Ｌ、２ｇ／Ｌ、３ｇ／Ｌ、４ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ、１５ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ、２５ｇ／Ｌ、５０ｇ／Ｌ、７５ｇ／Ｌ、１００ｇ／Ｌ、１２５ｇ／Ｌ又は１５０ｇ／Ｌを超える水溶解度をもつインスリン化合物複合体を提供するように選択されている。さらに修飾部分は、インスリン化合物複合体を、対応する未複合インスリン化合物以上の溶解度をもつものにするように選択されており、該インスリン化合物複合体の水溶性は、亜鉛添加により低減される。もう１つの実施形態においては、該修飾部分は、インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上の溶解度をもつものにするように選択されており、インスリン化合物複合体の水溶性は亜鉛添加により低減され、錯体の水溶性はインスリン化合物の水溶性よりも大きい。さらにもう１つの実施形態においては、対応する親インスリン化合物に比べたインスリン化合物複合体の相対的親油性（ｋｒｅｌ）は１以下である。
【０００９】
本発明は同様に、修飾部分に複合されたインスリン化合物をもつ新規インスリン化合物複合体をも提供している。例えば、本発明は、
【化１】
2014043470.tif 000003
という式を有する修飾部分に対しカップリングされたインスリン化合物において、式中、
−  Ｘ、Ｙ、及びＺが、独立して選択された連結基であり、各々が任意に存在し、Ｘが存在する場合それは共有結合によりインスリン化合物にカップリングされており、
−  Ｒ１及びＲ２のうちの少なくとも１つが存在し、それが低級アルキルであり、任意にはカルボニル基を含み、
−  Ｒ２が−ＣＨ３、−Ｈ、トシレーートといったようなキャッピング基であり、そうでなければ活性化基であり、
−  ＰＡＧが、２つ以上のアルカレングリコール部分を取込み（すなわちオキシアルカレン部分）、任意には−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｎ−、及び−Ｃ（Ｏ）−から成る群から選択された２つ以上の付加的部分を取込む直鎖又は分枝炭素鎖であり、
−  前記修飾部分が、最大３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５個の重原子を有する、
インスリン化合物を提供している。
【００１０】
本発明の実施形態においては、Ｘ、Ｙ及びＺのうちのいずれか１つ又は複数のものが不在であってよい。さらに、Ｘ、Ｙ及び／又はＺが存在する場合、それらは独立して−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ−及び−Ｎ−の中から選択され得る。一実施形態では、Ｚは−Ｃ（Ｏ）−である。もう１つの実施形態では、Ｚは存在しない。
【００１１】
一部の実施形態において、Ｒ１は低級アルキルであり、Ｒ２は存在しない。その他の実施形態においては、Ｒ２は低級アルキルであり、Ｒ１は存在しない。
【００１２】
もう１つの実施形態においては、該修飾部分は、−Ｃ、−Ｃ−、−Ｏ−、＝Ｏ、−Ｓ−、−Ｎ−、−Ｓｉ−から成る群から選択された３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５個の原子の主鎖をもつ直鎖又は分枝の置換炭素鎖部分を含み得る。重原子は標準的には２つ以上の炭素原子及び、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ−及び＝Ｏから成る群から選択された２つ以上の非炭素重原子を含むことになる。炭素原子及び非炭素重原子は標準的には、各非炭素重原子あたり少なくとも１個の炭素原子、好ましくは各非炭素重原子あたり少なくとも２個の炭素原子、より好ましくは各非炭素重原子あたり少なくとも３個の炭素原子という比率で存在する。炭素原子及び酸素原子は標準的には各酸素原子あたり少なくとも１個の炭素原子、好ましくは各酸素原子あたり少なくとも２個の炭素原子、より好ましくは各酸素原子あたり少なくとも３個の炭素原子という比率で存在する。修飾部分は、分枝又は直鎖Ｃ１−６、分枝又は直鎖、又はカルボニルといった２つ以上のキャッピング基を含み得る。修飾部分は標準的には水素を含み、水素のうちの２つ以上のものは、（重原子であるものの上記式中では重原子として計数すべきでない）フッ素で置換され得る。修飾部分は、一部のケースでは特定的に未置換アルキル部分を除外し得る。修飾部分は例えば、アミノ酸上の利用可能な基、例えばアミノ基、ヒドロキシル基又は遊離カルボン酸基ポリペプチドに対して、例えばカルバメート、カルボナート、エーテル、エステル、アミドといったような連結基、又は第２級アミン基又はジスルフィド結合によってカップリングされ得る。連結基内の分子は修飾部分の一部として計数される。好ましい実施形態においては、修飾部分の分子量はＨＩＭ２修飾部分の分子量より小さい。
【００１３】
本発明は、
【化２】
2014043470.tif 000004
（なお式中、ｎは、１、２、３又は４でありｍは１、２、３、４又は５である）及び／又は
【化３】
2014043470.tif 000005
（なお式中、ｎは、１、２、３、４又は５でありｍは１、２、３又は４である）
という式をもつ修飾部分を有するインスリン化合物複合体を含む。
【００１４】
新規の修飾部分ならびにインスリンを修飾するためのかかる部分の使用があれば重宝であると思われ、その他のポリペプチドがそれ自体本発明の態様である。
【００１５】
また、本発明は、本発明のインスリン化合物複合体及び／又はカチオン−インスリン化合物複合体を含む新規の処方をも提供している。発明者らは、驚くべきことに、ある種の脂肪酸組成物が特にポリペプチド及びポリペプチド複合体例えばインスリン及びインスリン化合物複合体の経口送達のため及び／又は本発明のカチオン−インスリン化合物複合体錯体の経口送達のために特に有用であることを発見した。１態様では、本発明は、２つ以上の飽和又は不飽和Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９又はＣ１０脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩を伴う脂肪酸組成物を提供している。好ましい脂肪酸はカプリル、カプリン、ミリスチン及びラウリン酸である。好ましい脂肪酸塩は、カプリル、カプリン、ミリスチン及びラウリン酸のナトリウム塩である。組成物の脂肪酸含有量は標準的には、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、又は３．０％ｗ／ｗを下限とし、約３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１０．１、１０．２、１０．３、１０．４、１０．５、１０．６、１０．７、１０．８、１０．９、１１．０、１１．１、１１．２、１１．３、１１．４、１１．５、１１．６、１１．７、１１．８、１１．９、又は１２．０％ｗ／ｗを上限とする範囲にある。さらにもう１つの実施形態においては、組成物の脂肪酸含有量は約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、又は３．０％ｗ／ｗを下限とし、約３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１０．１、１０．２、１０．３、１０．４、１０．５、１０．６、１０．７、１０．８、１０．９、１１．０、１１．１、１１．２、１１．３、１１．４、１１．５、１１．６、１１．７、１１．８、１１．９、又は１２．０％ｗ／ｗを上限とする範囲内にあり、組成物の脂肪酸含有量は、典型的に単一脂肪酸、好ましくはカプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸又はラウリン酸又はその塩１個あたり９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５、９９．６、９９．７、９９．８、又は９９．９％ｗ／ｗより大きい。
【００１６】
また、本発明は、本発明のインスリン化合物複合体、カチオン−インスリン化合物複合体錯体及び／又は処方物を用いてインスリン欠乏症を治療する又は対象の体内のインスリンを補足する方法をも提供している。該方法は一般に、それを必要としている対象に対して、本発明のインスリン化合物複合体、カチオン−インスリン化合物複合体錯体及び／又は処方物のうちの２つ以上のものを治療上有効な量だけ投与するステップを含んでいる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
５  図面の簡単な説明
【図１】本発明のさまざまな結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、これらの図のいずれかに示された形態を有する結晶が含まれる。２４時間成長させた結晶である３０ｇ／Ｌ濃度のＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体を示すＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ顕微鏡を用いて撮影した顕微鏡写真である。
【図２】本発明のさまざまな結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、これらの図のいずれかに示された形態を有する結晶が含まれる。２４時間成長させた結晶である３０ｇ／Ｌ濃度のＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体を示すＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ顕微鏡を用いて撮影した顕微鏡写真である。
【図３】本発明の結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、この図に示された形態を有する結晶が含まれる。５日間成長させた結晶である、３０ｇ／Ｌ濃度のＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体を示すＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ顕微鏡を用いて撮影した顕微鏡写真である。
【図４】本発明の結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、この図に示された形態を有する結晶が含まれる。４日間成長させた結晶である、３０ｇ／ＬでのＨＩＭ２のＲ型Ｚｎ錯体を示すＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ顕微鏡を用いて撮影した顕微鏡写真である。
【図５】本発明の結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、この図に示された形態を有する結晶が含まれる。３０％の有機物を含有するＩＮ１０５のＲ型結晶性Ｚｎ錯体の顕微鏡写真を示す。
【図６Ａ−１０Ｂ】本発明のさまざまな結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、これらの図のいずれかに示された形態を有する結晶が含まれる。有機溶媒を用いて作られたＭＩＭ２のさまざまなＲ型Ｚｎ錯体の顕微鏡写真を示す。
【図１１Ａ−１４Ｂ】本発明のさまざまな結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、これらの図のいずれかに示された形態を有する結晶が含まれる。ＨＩＭ２及びＩＮ１０５のさまざまなＲ型共結晶化Ｚｎ錯体の結晶の顕微鏡写真を示す。
【図１５Ａ−１５Ｂ】本発明のさまざまな結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、これらの図のいずれかに示された形態を有する結晶が含まれる。ヒトインスリン及びＨＩＭ２のさまざまなＲ型共結晶化Ｚｎ錯体の結晶の顕微鏡写真を示す。
【図１６】ＨＩＭ２及びＺｎ−ＨＩＭ２についてのマウス血液グルコース検定の結果を示す。ＨＩＭ２についてのＭＢＧＡバイオポテンシープロファイルを示す。
【図１７】ＨＩＭ２及びＺｎ−ＨＩＭ２についてのマウス血液グルコース検定の結果を示す。ＺｎＨＩＭ２インスリン化合物生成物Ｒ型についてのＭＢＧＡバイオポテンシープロファイルを示す。
【図１８】ＨＩＭ２及びＺｎ−ＨＩＭ２についてのマウス血液グルコース検定の結果を示す。ＺｎＨＩＭ２インスリン化合物生成物Ｔ型についてのＭＢＧＡバイオポテンシープロファイルを示す。
【図１９】ＨＩＭ２及びＺｎ−ＨＩＭ２についてのマウス血液グルコース検定の結果を示す。プロタミンを伴うＺｎＨＩＭ２インスリン化合物生成物についてのＭＢＧＡバイオポテンシープロファイルを示す。
【図２０】ＨＩＭ２及びＺｎ−ＨＩＭ２についてのマウス血液グルコース検定の結果を示す。投薬後３０分及び９０分後のＲ型プロタミン錯体のグルコース低下効果を示す。
【図２１−２４】ＩＮ−１８６、ＩＮ−１９２、ＩＮ−１９０、ＩＮ−１９１、ＩＮ−１８９、ＩＮ−１７８、ＩＮ−１９３、ＩＮ−１９４、ＩＮ−１８５、ＩＮ−１９６及びＩＮ−１９７についてのＭＢＧＡバイオポテンシープロファイルを示す。
【図２５−２６】本発明のＺｎ−ＨＩＭ２錯体についてのイヌクランプ研究の結果を示す。
【図２７−２８】本発明のＺｎ−ＩＮ１０５錯体についてのイヌクランプ研究の結果を示す。
【図２９−３０】付加的な賦形剤を含まないリン酸緩衝液中の３％ｗ／ｖのカプリン酸ナトリウム塩中のＩＮ１０５を投薬したイヌについてのイヌクランプ研究の結果を示す。
【図３１−３３】１４３ｍｇのラウリン酸塩を伴う又は伴わない、１４３ｍｇのカプリン酸塩を伴う３０ｍｇのＥｘｌｏｔａｂ、６ｍｇのＩＮ１０５及び１５０ｍｇのマンニトールを含む錠剤を投薬したイヌについての、イヌクランプ研究の結果を示す。
【図３４−３７】プロトタイプ錠剤、１５０ｍｇ及び２８０ｍｇのカプリン酸塩錠剤及び１４０ｍｇ／１４０ｍｇのカプリン酸塩／ラウリン酸塩錠剤を投薬したイヌについてのイヌクランプ研究の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
６  定義
以下に示すのは、本明細書及びクレーム全体を通して使用されている用語の定義である。提供されている定義は、別に指定のない限り本明細書全体を通して適用される。本書で定義されていない用語は、その用語が関係する技術分野において一般的に理解されている意味を有する。
【００１９】
「付加」は、アミノ酸配列に関して使用される場合、その配列のいずれかの端部又は両方の端部における１個以上のアミノ酸の延長、ならびにその配列内の挿入を含む。
【００２０】
「錯体」というのは、１つ以上のインスリン化合物又はインスリン化合物複合体が１つ以上の金属原子又はイオンと配位結合を形成する分子会合を意味する。錯体は溶液中でも、又結晶、微結晶又は非晶質固体といった固体としても存在し得る。「錯体混合物」というのは、溶液又は固体のいずれの形態であろうと、２つ以上の異なる錯体を有する混合物を意味する。錯体混合物は、例えば、異なるインスリン化合物、異なるインスリン化合物複合体、異なるハイブリッド錯体、異なるカチオン、これらの組合せとの錯体を含み得る。「ハイブリッド錯体」というのは、２つ以上の異なるインスリン化合物及び／又はインスリン化合物複合体を有するカチオン−インスリン化合物複合体錯体を意味する。
【００２１】
「錯化剤」というのは、多数の電荷を有し、インスリン化合物複合体に結合するか又はインスリン化合物複合体と錯化する分子を意味する。本発明で使用するのに適した錯化剤の例としては、プロタミン、スルフェン、グロビンタンパク質、スペルミン、スペルミジンアルブミン、アミノ酸、カルボン酸、ポリカチオン重合体化合物、カチオンポリペプチド、アニオンポリペプチド、ヌクレオチド及びアンチセンスが含まれる。その開示全体が本発明に参照として援用されているブランジェ（Ｂｒａｎｇｅ）、Ｊ．、「Ｇａｌｅｎｉｃｓ  ｏｆ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ-Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ（１９８７年）、を参照のこと。
【００２２】
アミノ酸の付加、欠失又は置換に関連して使用される「保存的」という用語は、インスリン化合物の治療的効力を完全に低減させないアミノ酸鎖内の付加、欠失又は置換を意味する。すなわち、該効力は、対応する未変性インスリン化合物といったような科学的に許容可能な対照の治療的効力に比べて低いか、同じであるか又は高い可能性がある。
【００２３】
「親水性の」というのは、水溶性特性を示すことを意味し、「親水性部分」という用語は、親水性であり、及び／又はもう１つの化学物質に付着した場合にかかる化学物質の親水性を増大させる部分を意味する。例としては、ポリエチレングリコールといったようなポリアルキレン部分及び糖が含まれるが、これらに制限されるわけではない。「親油性」は、脂肪及び脂肪組織内での蓄積といったような脂肪溶解度特性、脂質中で溶解する能力及び／又は生体膜に侵入し、それと相互作用し、及び／又はそれを横断する能力を意味し、「親油性部分」という用語は、親油性であり、及び／又はもう１つの化学物質に付着した時点でかかる化学物質の親油性を増大させる部分を意味する。「両親媒性」というのは、親水性と親油性の特性を示すことを意味し、「両親媒性部分」という用語は、ポリペプチド又は非ポリペプチド薬物に付着した時点で、結果として得られる複合体の両親媒性を増大させる（すなわち親水性及び両親媒性の両方を増大させる部分、例えば一部のＰＥＧ−脂肪酸修飾部分、及び糖−脂肪酸修飾部分を意味する。
【００２４】
「低級アルキル」というのは、１〜６個の炭素原子すなわちＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５又はＣ６を有する置換又は未置換、直鎖又は分枝アルキル部分を意味する。「高級アルキル」というのは、６個以上の炭素原子、例えばＣ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９、Ｃ２０などを有する、置換又は未置換、直鎖又は分枝アルキル部分を意味する。
【００２５】
「単分散型」というのは、混合物中の化合物の約１００パーセントが同じ分子量をもつ化合物混合物を表わしている。「実質的に単分散型」というのは、その混合物中の化合物の少なくとも約９５パーセントが同じ分子量を有する化合物混合物を表わしている。「純粋に単分散型」というのは、その混合物中の化合物の約１００パーセントが同じ分子量を有しかつ同じ分子構造を有する化合物混合物を表わしている。かくして、純粋に単分散型の混合物は単分散混合物であるものの、単分散型混合物は、必ずしも純粋に単分散型の混合物であるわけではない。「実質的に純粋に単分散型」というのは、その混合物内の化合物の少なくとも約９５パーセントが同じ分子量及び同じ分子構造をもつ化合物混合物を表わしている。かくして、実質的に純粋に単分散型の混合物は、実質的に単分散型の混合物であるが、実質的に単分散型の混合物は必ずしも実質的に純粋に単分散型の混合物ではない。カチオン−インスリン化合物複合体組成物のインスリン化合物複合体構成要素は好ましくは単分散型、実質的に単分散型、純粋に単分散型又は実質的に純粋に単分散型であるが、多分散型でもあり得る。「多分散型」というのは、単分散型、実質的に単分散型、純粋に単分散型又は実質的に純粋に単分散型でない分散性を有することを意味する。
【００２６】
本書で特定的に使用されているとおりの「未変性インスリン化合物」は、天然、合成又は遺伝子工学処理された供給源によって提供される哺乳動物インスリン化合物（例えば、ヒトインスリン、ウシインスリン化合物、ブタインスリン化合物又は鯨インスリン化合物）を意味する。ヒトインスリンは、ジスルフィド結合により架橋される２１アミノ酸Ａ鎖及び３０アミノ酸Ｂ鎖から成る。適切に架橋されたヒトインスリンはＡ７とＢ７の間に１つ、Ａ２０とＢ１９の間に２つ目、そしてＡ６とＡ１１の間に３つ目のジスルフィド架橋を含んでいる。ヒトインスリンは３つの遊離アミノ基すなわちＢ１−フェニルアラニン、Ａ１−グリシン及びＢ２９−リジンを有する。Ａ１位及びＢ１位の遊離アミノ基はαアミノ基である。Ｂ２９位の遊離アミノ基はｅ−アミノ基である。「インスリン類似体」は、対応する未変性インスリンに比べて一部の、全ての又は増強された活性を示すか又は対応する未変性インスリンに比べて一部の、全ての又は増強された活性を示すポリペプチドへとインビボ又はインビトロで転換されるポリペプチド、例えば２つ以上の保存的アミノ酸付加、欠失及び／又は置換を伴うヒトインスリンの構造をもつポリペプチドを意味する。インスリン類似体は、ダヒヤット（Ｄａｈｉｙａｔ）ら、の名前で０２年３月１８日付けで出願された米国特許出願公開第２００３００４９６５４号明細書「タンパク質ライブラリ用タンパク質設計自動化」で記述されているもののような既知の技術を用いて同定可能である。ヒト及び非ヒト動物のプロインスリン、プレプロインスリン、インスリン前駆体、１本鎖インスリン前駆体及びそれらの類似体は、本書では同様に、非哺乳動物インスリンがそうであるようにインスリン類似体とも呼ばれている。当該技術分野では数多くのインスリン類似体が知られている（以下の論述参照）。前後関係から特定的に別途指示がなされているのでないかぎり（例えば「ヒトインスリン」などといったような特定のインスリンに言及されている場合）、「インスリン化合物」という用語は、未変性インスリン及びインスリン類似体を含むように広く使用される。
【００２７】
「ポリアルキレングリコール」又はＰＡＧというのは、置換又は未置換の、直鎖又は分枝ポリアルキレングリコール重合体、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）及びポリブチレングリコール（ＰＢＧ）及びそれらの組合せ（例えばＰＥＧ、ＰＰＧ、ＰＰＧ及びＰＢＧサブユニットから選択された２つ以上の異なるＰＡＧ単位といったような２つ以上の異なるＰＡＧサブユニットの組合せを含む直鎖及び分枝重合体）を意味し、ポリアルキレングリコールのモノアルキルエーテルを含む。ＰＡＧサブユニットという用語は、単一のＰＡＧ単位を意味し、例えば「ＰＥＧサブユニット」は単一のポリエチレングリコール単位、例えば−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−を意味し、「ＰＰＧサブユニット」は単一ポリプロピレングリコール単位、例えば−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−を意味し、「ＰＢＧサブユニット」は、例えば−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−といった単一のプロピレングリコール単位を意味する。ＰＡＧ及び／又はＰＡＧサブユニットは同様に、置換されたＰＡＧ又はＰＡＧサブユニット、例えばメチル、エチル又はプロピル側鎖といったアルキル側鎖を含むＰＡＧ又はイソ−ＰＰＧ又はイソ−ＰＢＧといった２つ以上の分枝ＰＡＧサブユニットを含むＰＡＧをも含んでいる。
【００２８】
「プロインスリン化合物」というのは、Ｂ鎖のＣ末端が５個以上のアミノ酸を有する天然の又は人工のＣペプチドを介してＡ鎖のＮ末端にカップリングされているインスリン化合物を意味する。「プレプロインスリン化合物」は、可溶性タンパク質として排泄を促進するように選択された配列、又はＮ末端の複合を防止するように選択された配列、又は精製を増強させるように選択された配列（例えば精製カラムに対する結合親和性をもつ配列）といったような、Ｂ鎖のＮ末端にカップリングされたリーダー配列をさらに含むプロインスリン化合物を意味する。「１本鎖インスリン化合物前駆体」又は「ミニプロインスリン化合物」というのは、Ｂ鎖のＣ末端（又はＣ末端から除去された１、２、３又は４個のアミノ酸を有する切断型Ｂ鎖）が、介入するＣ−ペプチド無しで、又は１、２、３、又は４個のアミノ酸を有する短縮Ｃ−ペプチドを介して、Ａ鎖又はＮ末端で１、２、３又は４個のアミノ酸だけ短縮された切断型Ａ鎖のＮ末端にカップリングされているインスリン化合物を意味している。
【００２９】
「プロタミン」というのは、天然（例えば魚の精巣）又は組換え型供給源から得られる強塩基性タンパク質の混合物を意味する。ホフマン（Ｈｏｆｆｍａｎｎ）、Ｊ．Ａ．ら、「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」、第１号：１２７〜１３３頁（１９９０年）を参照のこと。プロタミン組成物は、往々にしてプロタミン塩基」と呼ばれるタンパク質の塩を比較的含まない調製物又はタンパク質の塩を含む調製物の中に入って供給され得る。
【００３０】
「タンパク質」、「ペプチド」及び「ポリペプチド」は、本書では、少なくとも２個、そして最大では任意の長さのアミノ酸配列をもつ化合物を意味するべく互換的に用いられる。
【００３１】
「Ｒ型」というのは、フェノールといったような安定化化合物、カチオン、インスリン化合物複合体の存在下で形成される錯体立体構造を意味する。「Ｔ型」というのは、フェノールといったような安定化化合物無しでカチオン及びインスリン化合物複合体の存在下で形成される錯体立体構造を意味する。Ａ型又はＲ型錯体はプロタミンを含んでいても、又除去してもよい。
【００３２】
「科学的に許容可能な対照」というのは、実験主題の当業者にとって許容可能である実験的対照を意味する。
【００３３】
「固体」というのは、本書では構造の３次元規則性が存在する物質の状態を意味する。この用語は、結晶性固体、非晶質固体の両方そして結晶性固体と非晶質固体の組合せを意味するように、広く使用されている。「カチオン−インスリン化合物複合体固体」というのは、好ましくは１価又は多価のカチオンと配位された、カチオン−インスリン化合物複合体を含む固体を意味している。「結晶」は、規則的多面体形状をもつ固体を意味する。「結晶性」というのは、結晶の特性をもつ固体を意味する。「微結晶」というのは、標準的に１ミクロン〜１００ミクロンの範囲内の最長寸法の顕微鏡的大きさの結晶性状態にある物質で主として構成される固体を意味する。一部のケースでは、微結晶性組成物の個々の結晶は、大部分が単結晶組成のものである。一部の実施形態においては、本発明の結晶は微結晶ではない。「微晶質」という用語は、微結晶である状態を意味する。「非晶質」という用語は、形が結晶でない固体材料を意味する。当業者であれば、例えばＸ線結晶学技術、走査電子顕微鏡検査又は光学顕微鏡を用いて、標準的技術を利用して非晶質材料と結晶を区別することが可能である。「固体混合物」は、２つの異なる固体の混合物を意味する。「結晶混合物」は、２つの異なる結晶の混合物を意味する。「共結晶」は、２つ以上の異なるインスリン化合物及び／又はインスリン化合物複合体をもつ結晶を意味する。本発明のカチオン−インスリン化合物複合体錯体は、以上の形態のいずれかで、又はかかる形態のうちの２つ以上のものの混合物の形で提供され得る。
【００３４】
「置換」というのは、インスリン化合物配列内部の２つ以上のアミノ酸残基をもう１つのアミノ酸で交換することを意味する。一部のケースでは、置換されたアミノ酸は、機能的等価物として作用し、サイレント改変を結果としてもたらす。置換は、保存的であり得、例えば、置換されたアミノ酸が属するクラスの他の成員から保存的置換を選択することができる。非極性（疎水性）アミノ酸の例としては、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン及びメチオニンが含まれる。極性中性アミノ酸の例としては、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン及びグルタミンが含まれる。正荷電（塩基性）アミノ酸には、アルギニン、リジン及びヒスチジンが含まれる。負荷電（酸性）アミノ酸としては、アスパラギン酸及びグルタミン酸が含まれる。
【００３５】
「水溶性」又は「水溶解度」は、別に指定のない限り、７．４のｐＨでの水性緩衝溶液中で決定される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
７  発明の詳細な説明
本発明は、カチオン−インスリン化合物複合体錯体及びかかる錯体を含むさまざまな組成物ならびにかかる錯体及び組成物の製造及び使用方法を提供する。該錯体は、インスリン化合物欠乏を特徴とする身体条件といったようなさまざまな医学的身体条件の治療のためにインスリン化合物を投与する上で有用である。錯体は一般にカチオン構成要素とインスリン化合物複合体構成要素を含む。インスリン化合物複合体構成要素は一般に、修飾部分にカップリングされたインスリン化合物を含んでいる。錯体及び／又は組成物のその他の適切な構成要素の例としては、安定化剤、錯化剤及びカチオン−タンパク質錯体を調製する上で使用するための当該技術分野において既知のその他の構成要素が含まれる。本発明は同様に、新規のインスリン化合物複合体及びかかるインスリン化合物複合体及び／又はカチオン−インスリン化合物複合体錯体を含む脂肪酸処方物をも提供する。
【００３７】
７．１  インスリン化合物
該カチオン−インスリン化合物複合体は、インスリン化合物構成要素を含んでいる。該インスリン化合物は、例えばヒトインスリンといったような哺乳動物のインスリン化合物又はインスリン化合物類似体であり得る。
【００３８】
広範なインスリン化合物類似体が当該技術分野において既知である。好ましいインスリン化合物類似体は、リジンを含む、例えばＢ２６、Ｂ２７、Ｂ２８、Ｂ２９及び／又はＢ３０位でＢ鎖のＣ末端から５アミノ酸以内にリジンを含むものである。Ｂ２８位にあるアミノ酸残基がＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ又はＡｌａであり；Ｂ２９位にあるアミノ酸残基がＬｙｓ又はＰｒｏであり；Ｂ１０位にあるアミノ酸残基がＨｉｓ又はＡｓｐであり；Ｂ１位にあるアミノ酸残基がＰｈｅ、Ａｓｐであるか又は単独で欠失させられているか又はＢ２位の残基の欠失と組合わせて欠失されており；Ｂ３０位のアミノ酸残基がＴｈｒＡｌａであるか又は欠失されており；かつＢ９位のアミノ酸残基がＳｅｒ又はＡｓｐである（ただしＢ２８位かＢ２９位がＬｙｓであることを条件とする）点を除いて、インスリン化合物の配列を有する適切な一組の類似体が、欧州特許出願公開第１２２７０００１０７号明細書（その開示全体が本発明に参照として援用されている。）の中で記されている。
【００３９】
適切なインスリン化合物類似体のその他の例としては、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン、ＬｙｓＢ２８ヒトインスリン、ＬｅｕＢ２８ヒトインスリン、ＶａｌＢ２８ヒトインスリン、ＡｌａＢ２８ヒトインスリン、ＡｓｐＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン、ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン、ＬｅｕＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン、ＶａｌＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン、ＡｌａＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンならびに上述の置換指針を用いて提供される類似体が含まれる。インスリン化合物フラグメントには、Ｂ２２-Ｂ３０ヒトインスリン、Ｂ２３-Ｂ３０ヒトインスリン、Ｂ２５-Ｂ３０ヒトインスリン、Ｂ２６-Ｂ３０ヒトインスリン、Ｂ２７-Ｂ３０ヒトインスリン、Ｂ２９-Ｂ３０ヒトインスリン、Ｂ１-Ｂ２ヒトインスリン、Ｂ１-Ｂ３ヒトインスリン、Ｂ１-Ｂ４ヒトインスリン、Ｂ１-Ｂ５ヒトインスリン、ヒトインスリンのＡ鎖、及びヒトインスリンのＢ鎖が含まれるがこれらに制限されるわけではない。
【００４０】
適切なインスリン化合物のさらにその他の例は、「血液グルコースを制御するための不溶性組成物」という題の米国特許出願公開第２００３０１４４１８１Ａ１号明細書、０３年７月３１日；「安定なインスリン処方物」という題の米国特許出願公開第２００３０１０４９８３Ａ１号明細書、０３年６月５日；「インスリン前駆体及びインスリン類似体前駆体を作製するための方法」という題の米国特許出願公開第２００３００４０６０１Ａ１号明細書、０３年２月２７日；「改良された安定性を有する無亜鉛及び低亜鉛インスリン調製物」という題の米国特許出願公開第２００３０００４０９６Ａ１号明細書、０３年１月２日；「安定なインスリン処方物」という題の米国特許第６，５５１，９９２Ｂ１号明細書、０３年４月２２日；「インスリン及びインスリン類似体の改良型調製のためのＣペプチド」という題の米国特許第６，５３４，２８８Ｂ１号明細書、０３年３月１８日；「血液グルコースを制御するための不溶性組成物」という題の米国特許第６，５３１，４４８Ｂ１号明細書、０３年３月１１日；イプシロンアミノ基の選択的アシル化」という題の米国特許第ＲＥ３７，９７１Ｅ号明細書、０３年１月２８日；「肺インスリン結晶」という題の米国特許出願公開第２００２０１９８１４０Ａ１号明細書、０２年１２月２６日；「不溶性インスリン組成物」という題の米国特許第６，４６５，４２６Ｂ２号明細書、０２年１０月１５日；「脂肪酸アシル化インスリン類似体」という題の米国特許第６，４４４，６４１Ｂ号明細書、０２年９月３日；「イースト中での改良された発酵収量を有するインスリン前駆体及びインスリン前駆体類似体を作製するための方法」という題の米国特許出願公開第２００２０１３７１４４Ａ１号明細書、０２年９月２６日；「安定化されたインスリン処方物」という題の米国特許出願公開第２００２０１３２７６０Ａ１号明細書、０２年９月１９日；「不溶性インスリン組成物」という題の米国特許出願公開第２００２００８２１９９Ａ１号明細書、０２年６月２７日；「アシル化インスリンの投与方法」という題の米国特許第６，３３５，３１６Ｂ１号明細書、０２年１月１日；「不溶性インスリン組成物」という題の米国特許第６，２６８，３３５Ｂ１号明細書、０１年７月３１日；「イースト中での改良された発酵収量を有するインスリン前駆体及びインスリン前駆体類似体を作製するための方法」という題の米国特許出願公開第２００１００４１７８７Ａ１号明細書、０１年１１月１５日；「安定化されたアシル化インスリン処方物」という題の米国特許出願公開第２００１００４１７８６Ａ１号明細書、０１年１１月１５日；「肺インスリン結晶」という題の米国特許出願公開第２００１００３９２６０Ａ１号明細書、０１年１１月８日；「不溶性インスリン組成物」という題の米国特許出願公開第２００１００３６９１６Ａ１号明細書、０１年１１月１日；「単量体インスリン類似体の投与方法」という題の米国特許出願公開第２００１０００７８５３Ａ１号明細書、０１年７月１２日；「アシル化インスリンの投与方法」という題の米国特許第６，０５１，５５１Ａ号明細書、００年４月１８日；「安定なインスリン処方物」という題の米国特許第６，０３４，０５４Ａ号明細書、００年３月７日；「インスリンリスプロ送達方法」という題の米国特許第５，９７０，９７３Ａ号明細書、９９年１０月２６日；「単量体インスリン類似体処方物」という題の米国特許第５，９５２，２９７Ａ号明細書、９９年９月１４日；「アシル化インスリン類似体」という題の米国特許第５，９２２，６７５Ａ、９９年７月１３日；「吸入されたインスリンの生物学的利用能の改良手段としての単量体インスリンの使用」という題の米国特許第５，８８８，４７７Ａ号明細書、９９年３月３０日；「糖尿病患者の血液グルコースレベルを所望の範囲内に維持するための方法」という題の米国特許第５，８７３，３５８Ａ号明細書、９９年２月２３日；「単量体インスリン類似体処方物」という題の米国特許第５，７４７，６４２Ａ号明細書、９８年５月５日；「アシル化インスリン化合物類似体」という題の米国特許第５，６９３，６０９Ａ号明細書、９７年１２月２日；「単量体インスリン類似体処方物」という題の米国特許第５，６５０，４８６Ａ号明細書、９７年７月２２日；「イプシロンアミノ基の選択的アシル化」という題の米国特許第５，６４６，２４２Ａ号明細書、９７年７月８日；「安定なインスリン類似体結晶の調製」という題の米国特許第５，５９７，８９３Ａ号明細書、９７年１月２８日；「インスリン類似体処方物」という題の米国特許第５，５４７，９２９Ａ号明細書、９６年８月２０日；「安定な亜鉛インスリン化合物類似体結晶の調製」という題の米国第５，５０４，１８８Ａ号明細書、９６年４月２日；「インスリン類似体処方物」という題の米国第５，４７４，９７８Ａ号明細書、９５年１２月１２日；「単量体インスリン類似体処方物」という題の米国特許第５，４６１，０３１Ａ号明細書、９５年１０月２４日；「インスリンを製造するためのプロセス」という題の米国特許第４，４２１，６８５Ａ号明細書、８３年１２月２０日；「増大した亜鉛結合を伴うインスリン誘導体」という題の米国特許第６，２２１，８３７号明細書、０１年４月２４日；「真性糖尿病の治療のための薬学処方物」という題の米国特許第５，１７７，０５８号明細書、９３年１月５日（これは、インスリン化合物−Ｂ３１−Ａｒｇ−ＯＨ及びヒトインスリン−Ｂ３１−Ａｒｇ−Ｂ３２−Ａｒｇ−ＯＨを含む、Ｂ３１で１つの塩基で修飾され５．８〜８．５の間の等電点を有するインスリン化合物誘導体及び／又は薬学的に許容可能な賦形剤の中のその生理学的に寛容された塩のうちの少なくとも１つ、そして１μｇ〜約２００μｇの亜鉛／ＩＵの範囲の比較的高い亜鉛イオン含有量を含む薬学処方物について記述している）。上述の特許文書の各々の開示全体が、特にさまざまなインスリン化合物類似体の製造、使用及び組成について教示する目的で、本発明に参照として援用されている。
【００４１】
カチオン−インスリン化合物複合体を調製するために使用されるインスリン化合物は、さまざまな認識されたペプチド合成技術、例えば従来の（溶液）方法、固相方法、半合成方法及び組換え型ＤＮＡ方法のいずれかにより調製され得る。例えば、チャンス（Ｃｈａｎｃｅ）ら、米国特許出願第０７／３８８，２０１号明細書、欧州特許第３８３４７２号明細書、ブランジェら、欧州特許第２１４８２６号明細書、及びベラガヤ（Ｂｅｌａｇａｊｅ）ら、米国特許第５，３０４，４７３号明細書は、さまざまなプロインスリン化合物及びインスリン化合物類似体を開示し、本発明に参照として援用されている。インスリン化合物類似体のＡ及びＢ鎖は同様に、プロインスリン化合物様の前駆体分子又は１本鎖インスリン化合物前駆体分子を介して、組換え型ＤＮＡ技術を用いて調製可能である。例えば、その開示全体がペプチド合成、組換え体産生及び製造に関するそれらの教示について本発明で参照として援用されている、フランク（Ｆｒａｎｋ）ら、「Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ-Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ-Ｆｕｎｃｔｉｏｎ」、Ｐｒｏｃ．Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ａｍ．Ｐｅｐｔ．Ｓｙｍｐ．、Ｅｄｓ．Ｄ．Ｒｉｃｈ及びＥ．グロス（Ｇｒｏｓｓ）（１９８１年）；Ｂｅｒｎｄ  Ｇｕｔｔｅ、「Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ、ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９９５年１０月１９日）；チャン（Ｃｈａｎ）、ウェン（Ｗｅｎｇ）及びホワイト（Ｗｈｉｔｅ）、Ｐｅｔｅｒ（編）、「Ｆｍｏｃ  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（２０００年３月）を参照のこと。
【００４２】
７．２  修飾部分
カチオン−インスリン化合物複合体錯体は、インスリン化合物複合体を提供するべくインスリン化合物に（例えば共有結合又はイオンにより）カップリングされた修飾部分を含む。修飾部分は、本書に記述されているような所望の特性をもつインスリン化合物を提供する、インスリン化合物にカップリングされる部分である。例えば修飾部分は、さまざまな環境（例えば消化管及び／又は血流）内で該インスリン化合物の分解速度を低下させることができ、かくしてこのような環境内で修飾部分の不在下であれば分解させられると思われるよりも少ないインスリン化合物が修飾された形状で分解されることになる。好ましい修飾部分は、インスリン化合物複合体が親インスリン化合物の生物活性を治療上有意な百分率だけ保持できるようにするものである。さらに好ましい修飾部分は、両親媒性又は親水性であり、及び／又はこのインスリン化合物複合体を両親媒性又は親水性にするか又は、対応するインスリン化合物又は対応する未複合インスリン化合物といったような科学的に許容可能な対照よりも低い親油性を与えるものである。
【００４３】
カチオン−インスリン化合物複合体組成物中で有用である適切な修飾部分及びインスリン化合物複合体の例は、その開示全体が本発明に参照として援用されている以下の特許の中に見い出すことができる；「アミノ含有生物活性剤のトリアルキルロック促進性重合体プロドラッグ」という題の米国特許第６，３０３，５６９号明細書、０１年１０月１６日；米国特許第６，２１４，３３０号明細書「クマリン及び関連芳香族系重合体プロドラッグ」、０１年４月１０日；「生物学的活性物質に対してリンク可能な水溶性非抗原性重合体」という題の米国特許第６，１１３，９０６号明細書、００年９月５日；「実質的に純粋なヒスチジンリンクされたタンパク質重合体複合体」という題の米国特許第５，９８５，２６３号明細書、９９年１１月１６日；「酸素運搬タンパク質の投与に付随する副作用の削減方法」という題の米国特許第５，９００，４０２号明細書、９９年５月４日；「複合安定化された治療薬組成物、それを含む送達及び診断処方物、並びにそれを作製及び使用するための方法」という題の米国特許第５，６８１，８１１号明細書、９７年１０月２８日；「アリールイミデートで活性化されたポリアルキレンオキシド」という題の米国特許第５，６３７，７４９号明細書、９７年６月１０日；「ポリペプチド修飾用のポリアルキレンオキシドの活性カルボン酸塩」という題の米国特許第５，６１２，４６０号明細書、９７年３月１８日；「生物学的に活性な求核試薬に複合されたアズラクトン活性化型ポリアルキレンオキシド」という題の米国特許第５，５６７，４２２号、９６年１０月２２日；「環式イミドチオンで活性化されたポリアルキレンオキシド」という題の米国特許第５，４０５，８７７号明細書、９５年４月１１日；及び「複合安定化されたポリペプチド組成物、それを含む治療用送達及び診断処方物、並びにそれを作製及び使用するための方法」という題の米国特許第５，３５９，０３０号明細書、９４年１０月２５日。本発明の処方物において有用である複合ポリペプチドのさらなる例は、その明細書全体が本書に参照として援用されている以下の米国特許出願の中に見い出すことができる；米国特許出願第０９／１３４，８０３号明細書、９８年８月１４日出願；第１０／０１８，８７９号明細書、０１年１２月１９日出願；第１０／２３５，３８１号明細書、０２年９月５日出願；第１０／２３５，２８４号明細書、０２年９月５日出願；及び第０９／８７３，７９７号明細書、０１年６月４日出願。以下の特許及び特許出願の各々の開示全体は、ポリペプチドを修飾するために用いられる部分に関するそれらの教示のため、本発明に参照として援用されている。
【００４４】
修飾部分は、その主鎖の中に弱い又は分解可能な連結を含み得る。例えば、ＰＡＧは、加水分解の可能性あるラクチド、グリコリド、カーボネート、エステル、カルバメートなどといったような加水分解不安定連結を含むことができる。このアプローチは、重合体を、より低分子量のフラグメントへと切断させることができるようにする。かかる重合体の例は、例えばその開示全体が本発明に参照として援用されている、ハッベル（Ｈｕｂｂｅｌｌ）らに対する米国特許第６，１５３，２１１号明細書の中に記述されている。同様に、その開示全体が本発明に参照として援用されているエクウライブ（Ｅｋｗｕｒｉｂｅ）らに対する米国特許第６，３０９，６３３号明細書も参照のこと。
【００４５】
修飾部分は、任意の親水性部分、親油性部分、両親媒性部分、塩形成部分及びその組合せを含むことができる。代表的な親水性、両親媒性及び親油性重合体及び修飾部分が、以下でより詳細に記述されている。
【００４６】
７．２．１  親水性部分
適切な親水性部分の例としては、ＰＡＧ部分、その他の親水性重合体、糖部分、ポリソルベート部分及びそれらの組合せが含まれる。
【００４７】
７．２．２  ポリアルキレングリコール部分
ＰＡＧは反復アルキレングリコール単位を伴う化合物である。一部の実施形態においては、該単位は全て同一である（例えば、ＰＥＧ又はＰＰＧ）。その他の実施形態においては、アルキレン単位は異なっている（例えばポリエチレン−コ−プロピレングリコール又はＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標））。重合体は、無作為共重合体（例えば酸化エチレン及び酸化プロピレンが共重合されている）又は分枝若しくはグラフト共重合体であり得る。
【００４８】
ＰＥＧは、好ましいＰＡＧであり、きわめて望ましい特性を有し、食品医薬品局により一般に安全なものとみなされている（ＧＲＡＳ）ことから、生物学的利用分野において有用である。ＰＥＧは一般にＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｈという式を有し、ここでｎは約２〜約４０００以上の範囲にあり得るが、キャッピング部分は、例えばモノ−メトキシ又はジ−ヒドロキシと変動しうる。ＰＥＧは標準的に無色無臭、水溶性又は水混和性（分子量に応じて）、熱安定性、化学的不活性、加水分解安定性を有し、一般に無毒性である。ＰＥＧは同様に、生体適合性があり、標準的に体内で免疫応答を生成しない。好ましいＰＥＧ部分は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０個以上のＰＥＧサブユニットを含む。
【００４９】
ＰＥＧは、単分散型、実質的に単分散型、純粋に単分散型又は実質的に純粋に単分散型（例えば、その開示全体が本発明に参照として援用されている、共に０１年６月４日付けの米国特許出願第０９／８７３，７３１号明細書及び米国特許出願第０９／８７３，７９７号明細書において当該出願人らにより以前に記述されているようなもの）、又は多分散型であり得る。比較的低分子量の単分散型重合体を使用することの１つの利点は、それらが容易に明確な複合体分子を形成し、このことが再現可能合成及びＦＤＡ承認の両方を容易にし得るという点にある。
【００５０】
ＰＥＧは、（インスリン化合物の残りの部分に複合される前に）各末端でヒドロキシル基と直鎖になり得る。ＰＥＧは、もう一方の末端が（インスリン化合物にカップリングされる）ヒドロキシル基であるのに対し一方の末端が比較的不活性のアルコキシ基（例えば直鎖又は分枝ＯＣ１−６）である、メトキシ−ＰＥＧ（又はｍＰＥＧ）といったようなアルコキシＰＥＧであってもよい。
【００５１】
ＰＥＧは、１つの実施形態においてＲ（−ＰＥＧ−ｎＯＨ）ｍとして表わされ得る分枝のものであり得、ここで式中Ｒはペンタエリスリトール、糖、リジン又はグリセロールといったような中心（標準的には多水酸基の）コア作用物質を表わし、ｎはＰＥＧサブユニットの数を表わし、各腕について変動する可能性があり標準的には１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０であり、ｍは腕の数を表わし、２からコア作用物質上の付着部位の最大数Ｚの範囲内にある。各分岐は同じか又は異なるものであり得、例えばエーテル及び／又はエステルで終結され得る。腕の数ｍは、３〜１００以上の範囲であり得、末端ヒドロキシル基のうちの１つ以上のものがインスリン化合物の残りにカップリングされ得、そうでなければ化学的修飾に付され得る。
【００５２】
その他の分枝ＰＥＧは、式（ＣＨ３Ｏ−ＰＥＧ−）ｐＲ−Ｚによって表わされるものを含み、ここでＰは２又は３に等しく、Ｒはリジン又はグリセロールといったような中心コアを表わし、Ｚは容易な化学的活性化に付されるカルボキシルといったような基を表わす。さらにもう１つの分枝形態であるペンダントＰＥＧは、ＰＥＧ鎖の端部ではなく、又はそれに加えてＰＥＧ主鎖に沿ってカルボキシルといった反応基を有する。分岐したＰＥＧは、Ｌが連結基でありＸが活性化された末端基である式ＰＥＧ（−ＬＣＨＸ２）ｎにより表わされ得る。
【００５３】
７．２．３  糖部分
本書に記述されている修飾部分は、糖部分を含むことができる。一般に、該糖部分は、少なくとも１つのサッカロース基の炭水化物産物である。代表的な糖部分としては、グリセロール部分、単糖、２糖、３糖及びオリゴ糖そして多糖類例えばでんぷん、グリコーゲン、セルロース及び多糖類樹脂が含まれるが、これらに制限されるわけではない。特定的な単糖類には、Ｃ６以上の（好ましくはＣ６〜Ｃ８）糖例えばグルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、リボース及びセドヘプツロースが含まれ、２糖及び３糖類には、スクロース、セロビオース、マルトース、ラクトース及びラフィノースといったような２つ又は３つの単糖類単位（好ましくはＣ５〜Ｃ８）を有する部分が含まれる。糖部分を用いた複合は、その開示全体が本発明に参照として援用されている米国特許出願第第５，６８１，８１１号明細書、５，４３８，０４０号明細書及び５，３５９，０３０号明細書の中で記述されている。
【００５４】
７．２．４  ポリソルべート部分
修飾部分は１つ以上のポリソルベート部分を含み得る。例としては、ソルビタンエステル及び、ポリオキシエチレンで誘導体化されたポリソルベートが含まれる。ポリソルべート部分を用いた複合は、その開示全体が本発明に参照として援用されている米国特許出願第５，６８１，８１１号明細書、５，４３８，０４０号明細書及び５，３５９，０３０号明細書の中で記述されている。
【００５５】
７．２．５．  生体適合性ある水溶性ポリカチオン部分
一部の実施形態においては、生体適合性ある水溶性ポリカチオン重合体を使用することができる。生体適合性ある水溶性ポリカチオン重合体としては、例えば、ペンダント基として付着したプロトン化複素環を有するあらゆる修飾部分が含まれる。この文脈において「水溶性」というのは、修飾部分全体が、２０〜３７℃の温度で、緩衝生理食塩水又は共溶媒としての少量の添加有機溶媒を伴う緩衝生理食塩水といったような水溶液中で可溶であることを意味している。一部の実施形態では、修飾部分自体は、水溶液自体の中では充分に可溶ではないが、ＰＥＧ鎖といったような水溶性重合体とのグラフト化により溶解状態になる。例としては、ポリ（Ｄ−Ｌｙｓ）、ポリ（オルニチン）、ポリ（Ａｒｇ）又はポリ（ヒスチジン）を含む天然又は合成アミノ酸又はアミノ酸混合物のその他の正荷電ポリアミノ酸及びポリ−Ｌ−Ｌｙｓなどの修飾部分側鎖又はＭＭＤ主鎖のいずれかの上にアミン基を有するポリアミン、及び非ペプチドポリアミン例えばポリ（アミノスチレン）、ポリ（アミノアクリラート）、ポリ（Ｎ−メチルアミノアクリラート）、ポリ（Ｎ−エチルアミノアクリラート）、ポリ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノアクリラート）、ポリ（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノアクリラート）、ポリ（アミノメタクリラート）、ポリ（Ｎ−メチルアミノメタクリラート）、ポリ（Ｎ−エチルアミノメタクリラート）、ポリ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメタクリラート）、ポリ（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノメタクリラート）、ポリ（エチレンイミン）、第４級アミンの重合体例えばポリ（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアミノアクリラートクロリド）、ポリ（メタクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウムクロリド）及びキトサンといった天然又は合成多糖類が含まれる。
【００５６】
７．２．６  その他の親水性部分
修飾部分は同様に、その他の親水性重合体も含み得る。例としてはポリ（オキシエチル化ポリオール）例えばポリ（オキシエチル化グリセロール）、ポリ（オキシエチル化ソルビトール）、及びポリ（オキシエチル化グルコース）；ポリ（ビニルアルコール）（「ＰＶＡ」）；デキストラン；炭水化物ベースの重合体などが含まれる。重合体は、直鎖又は分岐鎖の上述の重合体の単量体に基づく単独重合体、又はランダム若しくはブロック共重合体及び三元重合体であり得る。
【００５７】
適切な付加的な重合体の特定的な例としては、ポリ（オキサゾリン）、二官能性ポリ（アクリロイルモルホリン）（「ＰＡｃＭ」）及びポリ（ビニルピロリドン）（「ＰＶＰ」）が含まれるが、これらに制限されるわけではない。ＰＶＰ及びポリ（オキサゾリン）は当該技術分野において周知の重合体であり、その調製は当業者には容易に明らかとなる。ＰＡｃＭ及びその合成及び使用は、その開示全体が本発明に参照として援用されている米国特許第５，６２９，３８４号明細書及び米国特許第５，６３１，３２２号明細書において記述されている。
【００５８】
７．２．７  生体接着性ポリアニオン部分
ある種の親水性重合体は、潜在的に有用な生体接着性特性を有すると思われる。かかる重合体の例は、マチオヴィツ（Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ）らに対する米国特許第６，１９７，３４６号明細書中などで見い出される。カルボキシル基を含むこれらの重合体（例えば、ポリ（アクリル酸））は生体接着性を示し、本書で記述されているインスリン化合物とも容易に複合される。ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ無水物、及びポリオルトエステルといったような、分解時点でカルボン酸基を曝露する急速生体内崩壊性重合体が、同様に、生体接着性重合体でもある。これらの重合体は、インスリン化合物を消化管に送達するのに使用可能である。重合体が分解するにつれて、それらはカルボン酸基を曝露してそれらが消化管に強く接着できるようにすることができ、又インスリン化合物複合体の送達を助けることができる。
【００５９】
７．２．８  親油性部分
一部の実施形態においては、修飾部分は１つ以上の親油性部分を含んでいる。親油性部分は、アルキル部分、アルケニル部分、アルキニル部分、アリール部分、アリールアルキル部分、アルキルアリール部分、脂肪酸部分、アダマンタンチル、及びコレステリルならびに親油性重合体及び／又はオリゴマを含めた（ただしこれらに制限されるわけではない）当業者であれば理解できるようなさまざまな親油性部分であり得る。
【００６０】
アルキル部分は、飽和又は不飽和、直鎖、分枝又は環状炭化水素鎖であり得る。一部の実施形態においては、該アルキル部分は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０個以上の炭素原子を有する。例としては、飽和、直鎖アルキル部分、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、オクタデシル、ノナデシル及びエイコシル；飽和、分枝アルキル部分例えば、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、２−メチルブチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、２−メチル−ペンチル、３−メチルペンチル、２−エチルヘキシル、２−プロピルペンチル及び、ビニル、アリル、１−ブテニル、２−ブテニル、エチニル、１−プロピニル及び２−プロピニルを含む（ただしこれらに制限されるわけではない。）上述の飽和アルキル部分から誘導された不飽和アルキル部分が含まれる。その他の実施形態では、アルキル部分は低級アルキル部分である。さらにその他の実施形態においては、アルキル部分は、Ｃ１〜Ｃ３の低級アルキル部分である。一部の実施形態においては、修飾部分は特定的にアルキル部分で構成されておらず、又は特定的に低級アルキル部分で構成されておらず、又は特定的にアルカン部分で構成されておらず、又は特定的に低級アルカンで構成されていない。
【００６１】
アルキル基は、未置換であるか又は１つ以上の置換基で置換されるかのいずれかであり得、かかる置換基は好ましくは、複合体の合成方法と干渉もせず、又複合体の生物活性を除去しもしない。潜在的に干渉する官能基は、その官能基を非干渉性にするべく保護基で適切に遮断され得る。各置換基は任意には、付加的な非干渉性置換基と置換され得る。「非干渉性」という用語は、いずれかの反応を本発明のプロセスに従って実施する実現可能性を無くさないものとして置換基を特徴づけする。
【００６２】
親油性部分は、天然又は合成の飽和又は不飽和の、直鎖又は分枝の脂肪酸部分といったような脂肪酸部分であり得る。一部の実施形態においては、脂肪酸部分は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４個以上の炭素原子を有する。一部の実施形態では、修飾部分は特定的に脂肪酸部分で構成されず、又は特定的に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４個以上の炭素原子を有する脂肪酸部分で構成されない。
【００６３】
修飾部分がアリール環を含む場合、この環は、分子内でカルバメート部分と反応しその加水分解を助けることができるような形で位置づけされる求核官能基（例えばＯＨ又はＳＨ）で官能化され得る。一部の実施形態においては、該求核基は、インビボで加水分解されるか又はその他の形で分解される能力をもつ保護基で保護され、その結果該保護基が脱保護された時点で、複合体の加水分解及び結果としての親インスリン化合物の放出が容易になる。
【００６４】
適切な修飾部分のその他の例としては、−Ｃ（ＣＨ２ＯＨ）３；−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２；−Ｃ（ＣＨ３）３；−ＣＨ（ＣＨ３）２が含まれる。
【００６５】
７．２．９．  両親媒性部分
一部の実施形態においては、修飾部分は両親媒性部分を含んでいる。数多くの重合体及びオリゴマが両親媒性である。これらは往々にして、直鎖、分岐又はグラフト重合体又は共重合体といったような重合体及び／又はオリゴマの形をしている可能性のある、親水性及び親油性部分を含むブロック共重合体、分岐共重合体又はグラフト共重合体である。
【００６６】
両親媒性修飾部分は、本書で記述されている親油性及び親水性部分のいずれかの組合せを含み得る。かかる修飾部分は標準的に、往々にしてこの修飾部分の末端端部にある例えばハロ、ヒドロキシ、アミン、チオール、スルホン酸、カルボン酸、イソシアナート、エポキシ、エステルなどといった少なくとも１つの反応性官能基を含んでいる。これらの反応性官能基は、親油性直鎖又は分岐鎖アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル又はアルキルアリール基、又は親油性重合体又はオリゴマを付着するために使用され得、かくして修飾部分の親油性を増大させる（そして、これらを一般的に両親媒性にする）。
【００６７】
親油基は、例えば、モノ又はジカルボン酸から誘導され得、又該当する場合には、無水物又は酸塩化物といったようなカルボン酸の反応性等価物から誘導され得る。親油基のための適切な前駆体の例としては、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、イソ酪酸、トリメチル酢酸、カプロン酸、カプリル酸、ヘプタン酸、カプリン酸、ペラルゴン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、セラト酸（ｃｅｒａｔｉｃ  ａｃｉｄ）、モンタン酸、イソステアリン酸、イソノナン酸、２−エチルヘキサン酸、オレイン酸、リシノール酸、リノール酸、リノレン酸、エルカ酸、大豆脂肪酸、亜麻仁脂肪酸、脱水ヒマシ油脂肪酸、トール油脂肪酸、油桐脂肪酸、ヒマワリ脂肪酸、紅花脂肪酸、アクリル酸、メタクリル酸、無水マレイン酸、無水オルトフタル酸、テレフタル酸、イソフタル酸、アジピン酸、アゼライン酸、セバシン酸、無水テトラヒドロフタル酸、無水ヘキサヒドロフタル酸、コハク酸及びポリオレフェインカルボン酸がある。
【００６８】
末端親油基は等価である必要はない。すなわち、結果としての共重合体は、同じ又は異なるものである末端親油基を含み得る。親油基は、以上で定義されているように２つ以上のモノ又はジ官能性アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリールアルキル又はアルキルアリール基から誘導され得る。
【００６９】
７．２．１０  ＰＡＧ−アルキル修飾部分
修飾部分は、１つ以上の直鎖又は分枝ＰＡＧ部分及び／又は２つ以上の直鎖又は分枝、置換又は未置換アルキル部分を有する直鎖又は分枝重合体部分であり得る。あるケースでは、かかる分子は両親媒性とみなされる。しかしながらＰＡＧ及びアルキル部分は、かかる部分をさらに親油性の又はさらに親水性のものにするべく変動し得る。一部の実施形態では、修飾部分は特定的にアルキル部分で構成されておらず、又その他の実施形態では修飾部分は特定的にアルカン部分で構成されていない。
【００７０】
一部の実施形態におけるＰＡＧ部分は、直鎖又は分枝形状に配置された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５個のＰＡＧサブユニットを含む。一部の実施形態におけるＰＡＧ部分はＰＥＧ、ＰＰＧ及び／又はＰＢＧサブユニットを含む。一部の実施形態におけるアルキル部分は、好ましくは２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個の炭素原子を有する。アルキル部分は、好ましくはアルカン部分である。修飾部分は−ＯＣＨ３といったようなキャッピング部分を含み得る。さらに、修飾部分はピバロイル基といったような疎水基を含み得る。
【００７１】
一の実施形態において、修飾部分は、
【化４】
2014043470.tif 000006
という式を有し、式中、ｏ、ｐ及びｑは独立して０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０であり、ｏ、ｐ及びｑのうち少なくとも１つは少なくとも２である。Ｘ、Ｙ及びＺは独立して−Ｃ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、の中から選択され、ＲはＨ又はアルキル、好ましくは低級アルキル、より好ましくはメチルである。変数ｏ、ｐ及びｑは好ましくは、親水性又は両親媒性の修飾部分を生成するように選択され、好ましくは、親水性又は両親媒性のインスリン化合物複合体、好ましくはモノ複合体、ジ複合体又はトリ複合体を生成するべくインスリン化合物との関係において選択される。基礎インスリン化合物維持のために使用されるべきインスリン化合物複合体のための１つの好ましい実施形態においては、該インスリン化合物に近位のＰＡＧ及びインスリン化合物に遠位のアルキル部分を生成するようにｏ、ｐ及びｑが選択されている。代替的には、Ｏ、Ｐ及びＱは、インスリン化合物に遠位のＰＡＧ及びインスリンに近位のアルキルを生成するべく選択可能である。一の変形実施形態においては、Ｒはピバロイル基又はアルキル−ピバロイル基である。
【００７２】
関係する実施形態においては、修飾部分は
【化５】
2014043470.tif 000007
という式を有し、ここで式中ｍは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５であり、ｎは２〜１００、好ましくは２〜５０、より好ましくは２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５であり、Ｘは−Ｃ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−又は−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、Ｙは低級アルキル又は−Ｈである。Ｘは好ましくはＯであり、Ｙは好ましくは−ＣＨ３である。一部のケースでは、カルボニル基（−Ｃ（Ｏ）−）は不在であってよく、−（ＣＨ２）−部分は、ヒドロキシ基又は遊離カルボン酸基といったようなアミノ酸上の利用可能な基にカップリングされ得る。
【００７３】
好ましい実施形態においては、修飾部分は
【化６】
2014043470.tif 000008
（直前の修飾部分がＢ２９にあるヒトインスリンにカップリングされている場合、結果としてのモノ複合体はＩＮ１０５と呼ばれる）、及び
【化７】
2014043470.tif 000009
（直前の修飾部分がＢ２９でヒトインスリンにカップリングされている場合、結果としてのモノ複合体はＨＩＭ２と呼ばれる）、
から選択された構造を有する。以上の部分のいずれかを、例えばＡ１、Ｂ１又はＢ２９などの求核残基においてヒトインスリンにカップリングさせることができる。一部のケースでは、カルボニル基（−Ｃ（Ｏ）−）は不在であるか又はアルキル部分、好ましくは低級アルキル部分と交換してもよく、−（ＣＨ２）−部分は、ヒドロキシル基又は遊離カルボン酸基といったようなアミノ酸上の利用可能な基にカップリングされ得る。
【００７４】
もう１つの実施形態においては、修飾部分は、
【化８】
2014043470.tif 000010
という式を有し、各々のＣは独立して選択され、ｍ個の炭素をもつアルキル部分であり、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０であり；各ＰＡＧは独立して選択され、ｎ個のサブユニットを有するＰＡＧ部分であり、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５であり；各々のＸは、独立して選択され、ＰＡＧをＣにカップリングさせる連結基であり、好ましくは−Ｃ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−又は−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−である。一部の実施形態においては、Ｃｍ−Ｘ部分は不在であり、ＰＡＧｎ部分は−ＯＨ部分又は−ＯＣＨ３部分で終結される。例えば、ＰＡＧは、ＰＥＧ、ＰＰＧ及び／又はＰＢＧサブユニットを含む１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のＰＡＧサブユニットを有するメトキシ終端ＰＡＧ又はヒドロキシ終端ＰＡＧであり得る。一部のケースでは、カルボニル基（−Ｃ（Ｏ）−）を、ヒドロキシ基又は遊離カルボン酸基といったようなアミノ酸上の利用可能な基にカップリングされ得るアルキル部分、好ましくは低級アルキル部分で交換することができる。
【００７５】
修飾部分は、例えば
【化９】
2014043470.tif 000011
という式を有することができ、ここで各々のＣは独立して選択され、ｍ個の炭素をもつアルキル部分であり、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０であり；各ＰＡＧは独立して選択され、ｎ個のサブユニットを有するＰＡＧ部分であり、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５であり；Ｘは、−Ｏ−又は−ＮＨ−であり；各々のＯは、独立して選択され１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５である。例えば、ＰＡＧは、ＰＥＧ、ＰＰＧ及び／又はＰＢＧサブユニットを含む１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のＰＡＧサブユニットを有し得る。一部のケースでは、付着点に近位のカルボニル基（−Ｃ（Ｏ）−）は不在であるか、そうでなければ、アルキル部分、好ましくは低級アルキル部分と交換してもよく、−（ＣＨ２）−部分は、ヒドロキシ基又は遊離カルボン酸基といったようなアミノ酸上の利用可能な基にカップリングされ得る。
【００７６】
修飾部分は、例えば、
【化１０】
2014043470.tif 000012
という式を有することができ、各々のＣは独立して選択され、ｍ個の炭素をもつアルキル部分であり、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０であり；各ＰＡＧは独立して選択され、ｎ個のサブユニットを有するＰＡＧ部分であり、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５であり；各々のＸは、独立して選択され、ＰＡＧをＣにカップリングさせる連結基であり、好ましくは−Ｃ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、又は−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−であり、各々のＯは独立して選択され、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５である。一部の実施形態においては、Ｃｍ−Ｘ部分は不在であり、ＰＡＧｎ部分は−ＯＨ部分又は−ＯＣＨ３部分で終結される。例えば、ＰＡＧは、ＰＥＧ、ＰＰＧ及び／又はＰＢＧサブユニットを含む１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のＰＡＧサブユニットを有するメトキシ終端ＰＡＧ又はヒドロキシ終端ＰＡＧであり得る。一部のケースでは、付着点に近位のカルボニル基（−Ｃ（Ｏ）−）は不在であり得、−（ＣＨ２）−部分は、ヒドロキシ基又は遊離カルボン酸基といったようなアミノ酸上の利用可能な基にカップリングされ得る。
【００７７】
もう１つの実施形態においては、修飾部分は、
【化１１】
2014043470.tif 000013
という式を有していてよく、式中、
−  Ｘ、Ｙ、及びＺは、独立して選択された連結基であり、各々は任意に存在し、Ｘが存在する場合それは共有結合によりインスリン化合物にカップリングされており、
−  Ｒ１及びＲ２のうちの少なくとも１つが存在し、それは低級アルキルであり、任意にはカルボニル基を含み、
−  Ｒ２は−ＣＨ３、−Ｈ、トシレートといったようなキャッピング基であり、そうでなければ活性化基であり、
−  ＰＡＧは、１つ以上のアルカレングリコール部分を取込み（すなわちオキシアルカレン部分）、任意には−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｎ−、及び−Ｃ（Ｏ）−からなる群から選択された１つ以上の付加的部分を取込む直鎖又は分枝炭素鎖であり、
−  修飾部分は、最大３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５個の重原子を有する。
【００７８】
本発明の実施形態においては、Ｘ、Ｙ及びＺのうちのいずれか１つ又は複数のものが不在であってよい。さらに、Ｘ、Ｙ及び／又はＺが存在する場合、それらは独立して−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ−及び−Ｎ−の中から選択され得る。一実施形態では、Ｚは−Ｃ（Ｏ）−である。もう１つの実施形態では、Ｚは存在しない。
【００７９】
一部の実施形態において、Ｒ１は低級アルキルであり、Ｒ２は存在しない。その他の実施形態においては、Ｒ２は低級アルキルであり、Ｒ１は存在しない。
【００８０】
もう１つの実施形態においては、該修飾部分は、−Ｃ、−Ｃ−、−Ｏ−、＝Ｏ、−Ｓ−、−Ｎ−、−Ｓｉ−からなる群から選択された３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５個の原子の主鎖をもつ直鎖又は分枝の置換炭素鎖部分を含み得る。重原子は標準的には１つ以上の炭素原子及び、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ−及び＝Ｏからなる群から選択された１つ以上の非炭素重原子を含むことになる。炭素原子及び非炭素重原子は標準的には、各非炭素重原子あたり少なくとも１個の炭素原子、好ましくは各非炭素重原子あたり少なくとも２個の炭素原子、より好ましくは各非炭素重原子あたり少なくとも３個の炭素原子という比率で存在する。炭素原子及び酸素原子は標準的には各酸素原子あたり少なくとも１個の炭素原子、好ましくは各酸素原子あたり少なくとも２個の炭素原子、より好ましくは各酸素原子あたり少なくとも３個の炭素原子という比率で存在する。修飾部分は、分枝又は直鎖Ｃ１−６、分枝又は直鎖、又はカルボニルといった１つ以上のキャッピング基を含み得る。修飾部分は標準的には水素を含み、水素のうちの１つ以上のものは、（重原子であるものの上記式中では重原子として計数すべきでない）フッ素で置換され得る。修飾部分は、一部のケースでは特定的に未置換アルキル部分を除外し得る。修飾部分は例えば、アミノ酸上の利用可能な基、例えばアミノ基、ヒドロキシル基又はカルボン酸基ポリペプチドに対して、例えばカルバメート、カルボナート、エーテル、エステル、アミドといったような連結基、又は第２級アミン基又はジスルフィド結合によってカップリングされ得る。連結基内の分子は修飾部分の一部として計数される。好ましい実施形態においては、修飾部分の分子量はＨＩＭ２修飾部分の分子量より小さい。
【００８１】
本発明は、
【化１２】
2014043470.tif 000014
（なお式中、ｎは、１、２、３又は４でありｍは１、２、３、４又は５である）
という式をもつ修飾部分を含む。
【００８２】
本発明は、
【化１３】
2014043470.tif 000015
（なお式中、ｎは、１、２、３、４又は５でありｍは１、２、３又は４である）
という式をもつ修飾部分を含む。
【００８３】
本発明は、
【化１４】
2014043470.tif 000016
という式を有し、式中、ｍが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０であり、ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０である、修飾部分を含む。
【００８４】
本発明は、
【化１５】
2014043470.tif 000017
という式を有し、式中ＰＡＧがｍ個のサブユニットを有するＰＡＧ部分であり、ｍが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０であり、ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０である、修飾部分をも含んでいる。
【００８５】
その他の好ましい修飾部分は、
【化１６】
2014043470.tif 000018
【化１７】
2014043470.tif 000019
を含む
【００８６】
以下の修飾部分は、基礎インスリン化合物交換投薬計画において使用するために特に好ましいものであり得る。
【化１８】
2014043470.tif 000020
【化１９】
2014043470.tif 000021
【化２０】
2014043470.tif 000022
【００８７】
さらにその他の修飾部分には以下のものが含まれる； 
【化２１】
2014043470.tif 000023
【化２２】
2014043470.tif 000024
【化２３】
2014043470.tif 000025
【化２４】
2014043470.tif 000026
【化２５】
2014043470.tif 000027
【化２６】
2014043470.tif 000028
【化２７】
2014043470.tif 000029
なお式中、Ｒは−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＨ又は活性化部分例えばカルボジイミド、混合無水物又はＮ−ヒドロキシスクシンイミド、又はキャッピング基である。本発明は同様に、タンパク質又はペプチド、好ましくはインスリン化合物に付着したこのような部分をも含む。以下では、特定の複合戦略についてより詳細に論述する。これらの修飾部分のうち、好ましい部分は、インスリン化合物を対応する未複合インスリン化合物よりも低い親油性及び／又は高い親水性を有するものにするものである。本発明はさらに１つ以上のカルボニル基、好ましくは１、２、３、４又は５個のカルボニル基を含むこのような修飾部分を含んでおり、このカルボニル基は、該修飾部分内に挿入されてもよいし又はカルボニルで−Ｏ−又は−ＣＨ２−を交換することもできる。さらに、−ＣＨ２−又は−ＣＨ３部分のうちのいずれかを例えば、同じ又は異なるものであり得る１、２、３、４又は５個のＰＡＧサブユニットを有するＰＡＧ鎖又は−ＯＨ又は低級アルキルで置換することもできる。好ましくはＲは、各−Ｏ−が最も近い−Ｏ−から少なくとも２個の炭素だけ分離されるような形で選択される。本発明は同様に、２つ以上の部分がリジンといったような分岐部分に付着している分枝修飾部分をも含む。
【００８８】
本発明の実施形態に従った複合体の親水性／親油性といったような薬学的特性は例えば、ＰＡＧ単量体の数、アルキル鎖のタイプ及び長さ、ＰＡＧ−ペプチド連結の性質及び複合部位の数を増減させることによって、修飾部分の親油性及び親水性部分を調整することによって変動させることができる。修飾部分−ペプチド連結の正確な性質は、それが生理学的ｐＨで又は血漿中での加水分解に対し敏感でかつ／又は安定しているような形で変動可能である。本発明は同様に、ポリペプチド、好ましくはインスリン化合物に対してカップリングされた上述の修飾部分のいずれかをも含む。好ましくは、修飾部分は、ポリペプチドを例えば少なくとも１．０５、１．２５、１．５、１．７５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、又は１５という乗数だけ対応する未複合ポリペプチドより大きい溶解度をもつものにする。本発明の修飾部分は、例えば、利用可能なあらゆる付着点においてヒトインスリンといったようなインスリン化合物にカップリングされ得る。好ましい付着点は、求核残基例えばＡ１、Ｂ１及び／又はＢ２９である。
【００８９】
さらには、本発明の１つの態様が、カルボン酸形態での、式ＶＩＩ及びＶＩＩＩの部分といったような（ただしこれらに制限されるわけではない）新規の修飾部分を含むことがわかるだろう。さらに、修飾部分がカルボキシル基を含む場合、それを混合無水物に転換させ、アミド結合を含有する複合体を作り上げるべくペプチドのアミノ基と反応させることができる。もう１つの手順においては、カルボキシル基を水溶性カルボジイミドで処理し、ペプチドと反応させて、アミド結合を含有する複合体を生成することができる。その結果、本発明は、式ＶＩＩ及びＶＩＩＩの修飾部分の活性化された形態及びカルボジイミド、混合無水物又はＮ−ヒドロキシスクシンイミドといったような本発明のその他の新規のオリゴマといったような、本書で提示された新規の部分の活性化された形態を含んでいる。
【００９０】
一部のケースでは、修飾部分は、アミノ酸又はＣ末端にカップリングされた２つ以上の一連のアミノ酸、又はポリペプチドの側鎖を介してポリペプチドに対してカップリングされ得る。例えば、１つの実施形態においては、修飾部分は、Ｔｈｒの−ＯＨ又は−Ｃ（Ｏ）ＯＨでカップリングされ、ｍｍ修飾されたＴｈｒは、カルボキシ末端でポリペプチドにカップリングされる。例えば、一実施形態においては、修飾部分は、Ｔｈｒの−ＯＨ又は−Ｃ（Ｏ）ＯＨでカップリングされ、修飾されたＴｈｒはｄｅｓ−Ｔｈｒインスリン化合物のＢ２９アミノ酸（例えばヒトインスリンのためのＢ２９Ｌｙｓ）にカップリングされる。もう１つの例では、ｍｍは、インスリン化合物Ｂ鎖から末端オクタペプチドのＴｈｒの−ＯＨ又は−Ｃ（Ｏ）ＯＨでカップリングされ、ｍｍ修飾されたオクタペプチドは、ｄｅｓ−オクタインスリン化合物のＢ２２アミノ酸にカップリングされる。その他の変形形態は、本明細書に照らして当業者には明白となるであろう。
【００９１】
７．２．１１  塩形成部分
一部の実施形態においては、修飾部分は塩形成部分を含む。塩形成部分は、カルボキシラート及びアンモニウムを含め（ただし、これらに制限されるわけではない。）当業者であれば理解できる通り、さまざまな適切な塩形成部分であり得る。修飾部分が塩形成部分を含んでいる一部の実施形態においては、インスリン化合物複合体は塩形態で提供される。これらの実施形態では、インスリン化合物複合体は、例えばクロロ、ブロモ、ヨード、ホスファート、アセタート、カルボナート、スルファート、トシレート及びメシレートといった陰イオン、又はナトリウム、カリウム、カルシウム、リチウム及びアンモニウムといった陽イオンを含めて（ただし、これらに制限されるわけではない。）、当業者であれば理解できる通りの適切な薬学的に許容可能な対イオンと会合させられる。
【００９２】
修飾部分の以上の例は、例示を目的とするものであり、いかなる形であれ制限的なものとしてみなされるべきではない。当業者であれば、本書に開示され請求されている化学的複合機序の限界内で、特定の機能性を達成するのに適した複合用部分が可能であるということを認識することだろう。従って、本書で開示されている原理に従って、付加的な部分を選択し使用することができる。
【００９３】
７．３  複合戦略、
例えばインビボ分解を受ける可能性が低く従って血漿半減期が増大している複合体を生成するために、修飾部分との複合度、分子上の複合部位の選択及び修飾部分の選択といったような因子を変動させることができる。例えば、修飾部分の会合を容易にするのに適した適切な付着（すなわち修飾部分複合）部位においてインスリン化合物構造上の１、２、３、４、５個以上の部位に修飾部分を含むようにインスリン化合物を修飾させることが可能である。一例を挙げると、かかる適切な複合部位は、リジンアミノ酸残基といったようなアミノ酸残基を含み得る。
【００９４】
一部の実施形態においては、インスリン化合物複合体はモノ複合体である。その他の実施形態においては、インスリン化合物複合体は、ジ複合体、トリ複合体、テトラ複合体、ペンタ複合体などといったようなマルチ複合体である。インスリン化合物上の修飾部分の数は、インスリン化合物上の複合部位の数によってのみ制限される。さらにその他の実施形態においては、インスリン化合物複合体はモノ複合体、ジ複合体、トリ複合体、テトラ複合体及び／又はペンタ複合体の混合物である。
【００９５】
好ましい複合戦略は、親インスリン化合物の生物活性の一部分又は全てを関連づける複合体を生み出すような戦略である。
【００９６】
好ましい付着部位には、Ａ１Ｎ末端、Ｂ１Ｎ末端、及びＢ２９リジン側鎖が含まれる。Ｂ２９モノ複合体及びＢ１、Ｂ２９ジ複合体がきわめて好ましい。もう１つの好ましい付着点は、インスリン化合物のＣペプチド構成要素又はリーダーペプチド構成要素上のアミノ官能基である。
【００９７】
インスリン化合物に対し１つ以上の修飾部分（すなわち単一の又は複数の修飾部分構造）をカップリングすることができる。複数の中の修飾部分は好ましくは同じものである。ただし、複数の中の修飾部分が互いに異なるものであり得る、又は代替的には、複数の中の修飾部分の一部分が同じであり、一部分が異なるものであり得る、ということも理解すべきである。複数の修飾部分がインスリン化合物にカップリングされている場合、加水分解型結合でインスリン化合物に対し１つ以上の修飾部分をカップリングさせ、非加水分解型結合でインスリン化合物に対し１つ以上の修飾部分をカップリングさせることが好ましい可能性がある。代替的には、インスリン化合物に対し該複数の修飾部分をカップリングする結合は全て、加水分解型であり得るものの、例えば１つ以上の修飾部分が体内で加水分解によりインスリン化合物から比較的急速に除去され得かつ１つ以上の該修飾部分が体内で加水分解によりインスリン化合物からより低速で除去されるような形でさまざまな度合の加水分解性を有する可能性もある。
【００９８】
７．３．１  インスリン化合物に対する修飾部分のカップリング
修飾部分は、好ましくはインスリン化合物に共有結合によりカップリングされる。修飾部分上の２つ以上の部分が、インスリン化合物に対し共有結合によってカップリングされ得る。カップリングは、加水分解型又は非加水分解型結合又はこれら２つの混合（すなわち異なる複合部位での異なる結合）を利用し得る。
【００９９】
一部の実施形態では、インスリン化合物は、加水分解型結合（例えばエステル、カーボネート又は加水分解型カルバメート結合）を用いて修飾部分にカップリングされる。加水分解型カップリングの使用により、プロドラッグとして作用するインスリン化合物複合体が提供されることになる。プロドラッグアプローチは、修飾部分複合部位がインスリン化合物の結合領域内にある場合といったような、インスリン化合物−修飾部分複合体が不活性である（すなわち、複合体にインスリン化合物の一次的作用機序を通して体に影響を及ぼす能力が欠如している）場合に、望ましい可能性がある。加水分解型カップリングの使用は同様に、活性薬物を提供するために１つ以上の修飾部分がそのそれぞれのインスリン化合物−修飾部分複合体から分割されるにつれて一定の与えられた時限全体にわたりインスリン化合物を投与する、時間放出又は制御放出効果を提供することもできる。
【０１００】
その他の実施形態においては、インスリン化合物は、非加水分解型結合（例えば非加水分解型カルバメート、アミド又はエーテル結合）を利用して修飾部分にカップリングされる。非加水分解型結合の使用は、例えば投与後少なくとも２時間という長い時間血流内を治療上有意な量のインスリン化合物複合体が循環できるようにすることが望まれる場合に、好ましい可能性がある。インスリン化合物を非加水分解式に修飾部分に共有結合によりカップリングするのに使用される結合は、標準的に共有結合、エステル部分、カーボナート部分、カルバメート部分、アミド部分及び第２級アミン部分からなる群から選択される。
【０１０１】
修飾部分は、求核ヒドロキシル官能基及び／又はアミノ官能基を含めた（ただし、これらに制限されるわけではない。）さまざまな求核残基においてインスリン化合物にカップリングされ得る。求核ヒドロキシル官能基は、例えば、セリン及び／又はチロシン残基において見い出され、求核アミノ官能基は例えばヒスチジン及び／又はＬｙｓ残基において及び／又はインスリン化合物のＡ又はＢ鎖の２つ以上のＮ末端において見い出され得る。修飾部分がナトリウム利尿ペプチドのＮ末端にカップリングされる場合、カップリングは好ましくは第２級アミンを形成する。
【０１０２】
修飾部分は、例えば、チオエステル、チオエーテル又はスルホナート結合を形成することにより、遊離−ＳＨ基においてインスリン化合物にカップリングされ得る。
【０１０３】
修飾部分は、２つ以上のアミノ基を介してインスリン化合物にカップリングされ得る。ヒトインスリンにおける例は、Ａ１、Ｂ１及びＢ２９にアミノ基を含んでいる。一の実施形態においては、インスリン化合物上の単一のアミノ基に対し単一の修飾部分がカップリングされる。もう１つの実施形態においては、インスリン化合物上の異なるアミノ基に対し２つの修飾部分が各々結びつけられる。２つのアミノ基にカップリングされた２つの修飾部分が存在する場合、好ましい配置はＢ１及びＢ２９におけるカップリングである。多数の重合体が存在する場合、重合体は全て同じであってよく、そうでなければ、重合体のうちの１つ以上のものがその他のものと異なっていてよい。インスリン化合物に対する重合体のカップリングのさまざまな方法及びタイプが、その開示全体が本発明に参照として援用されている０１年６月０４日付けの「ポリアルキレングリコールを含むインスリン化合物複合体の混合物、その使用及びその製造方法」という題の米国特許出願第０９／８７３，８９９号明細書の中で記述されている。
【０１０４】
さらにもう１つの実施形態においては、修飾部分の一部分が加水分解される部分的プロドラッグアプローチを使用することができる。例えば、親油性構成要素がインビボで加水分解してマイクロペグ化複合体を生成する親水性及び親油性構成要素をもつ修飾部分について記述している、（その開示全体が本発明に参照として援用されている）エクウライブらに対する米国特許第６，３０９，６３３号明細書を参照のこと。
【０１０５】
７．３．２  修飾部分の選択及びインスリン化合物複合体及びその錯体の特性
修飾部分は、インスリン化合物複合体及びその錯体に対し所望の属性を提供するように選択され得る。好ましい修飾部分は、該インスリン化合物を、この修飾部分の不在下でのインスリン化合物の水溶解度に比べ水溶液中でより可溶なものにする、好ましくは水溶液中で親インスリン化合物（すなわち対応する未複合インスリン化合物）よりも少なくとも１．０５、１．２５、１．５、１．７５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５又は１５倍の溶解度を有するものにするように選択される。例えば未錯化未変性ヒトインスリンは、約７．４のｐＨで最高１８ｍｇ／ｍｌの溶解度を有する。発明者らは、驚くべきことに、少なくとも１．０５、１．２５、１．５、１．７５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、又は１５の乗数だけヒトインスリンよりも大きい溶解度を有するヒトインスリン複合体を錯化する方法を発見した。
【０１０６】
ある種の実施形態においては、修飾部分は、約４〜約８の範囲内のｐＨ、好ましくは約５〜約７．５の範囲内のｐＨ、理想的には約７．４のｐＨで１ｇ／Ｌ、２ｇ／Ｌ、３ｇ／Ｌ、４ｇ／Ｌ、５ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ、５０ｇ／Ｌ、１００ｇ／Ｌさらには１５０ｇ／Ｌを上回る水溶解度を有するインスリン化合物複合体を提供するように選択される。
【０１０７】
当該技術分野は、対応する未複合インスリン化合物といったような科学的に許容可能な対照よりも哺乳動物においてより高い経口生物学的利用能を有するものであり得る。その他の実施形態においては、インスリン化合物複合体は、対応する未複合インスリン化合物といったような科学的に許容可能な対照よりもヒトにおいてより高い経口生物学的利用能を有する。一部の実施形態では、例えば複合体の血漿レベルにより測定されるようなインスリン化合物複合体の吸収は、未複合インスリン化合物対照の吸収よりも少なくとも１．５、２、２．５、３、３．５又は４倍高い。
【０１０８】
本発明の一部の態様では、修飾部分は、インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物よりも高い溶解度を有するものにするように選択されるものの、その他の態様では、修飾部分は同様に又は代替的に、インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上の親水性をもつものにするように選択され得る、ということがわかるだろう。さらに、修飾部分は、インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物よりも両親媒性の高いものにするように選択され得る。
【０１０９】
一部の実施形態では、カチオン−インスリン化合物複合体錯体は、（ａ）対応する未錯化インスリン化合物複合体、（ｂ）対応する未錯化かつ未複合インスリン化合物、及び／又は（ｃ）対応する錯化され、かつ、未複合のインスリン化合物以上の水溶性を有している。
【０１１０】
好ましい実施形態においては、インスリン化合物複合体の水溶性は、Ｚｎ＋＋を添加することによって低減される。一部の実施形態では、修飾部分は、インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上の溶解度を有するものにするように選択されており、インスリン化合物複合体の水溶性は亜鉛の添加によって低減される。その他の実施形態においては、修飾部分は、インスリン化合物複合体を対応する未複合インスリン化合物以上の溶解度を有するものにするように選択されており、インスリン化合物複合体の水溶性は亜鉛添加により低減され、カチオン錯体の水溶性は、インスリン化合物の水溶性よりも大きい。もう１つの態様においては、インスリン化合物複合体は、脂肪酸アシル化インスリン化合物であり、カチオンは亜鉛であり、インスリン化合物複合体の水溶性は亜鉛添加により低減される。さらにもう１つの実施形態においては、インスリン化合物複合体は、対応する未複合インスリン化合物以上の水溶性をもつ脂肪酸アシル化インスリン化合物であり、カチオンは亜鉛であり、インスリン化合物複合体の水溶性は亜鉛の添加により低減される。
【０１１１】
ある好ましい実施形態においては、対応する親インスリン化合物と比べたインスリン化合物複合体の親油性は１以下である。対応する親インスリン化合物に比べたインスリン化合物複合体の相対的親和性（ｋｒｅｌ）は、例えば、４０℃での定組成溶離によるＬｉＣｈｒｏＳｏｒｂ  ＲＰ１８（５μｍ、２５０×４ｍｍ）高性能液体クロマトグラフィカラム上で相対的親油性が測定される場合、ｋｒｅｌ＝（ｔｃｏｎｊｕｇａｔｅ−ｔ０）／（ｔｈｕｍａｎ−ｔ０）の通りに決定され得る。以下の混合物を溶離剤として使用できる；すなわち、１０％アセトニトリルを含むｐＨ７．３の０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液、及び水中の５０％アセトニトリル。空隙時間（ｔ０）は、０．１ｍＭの硝酸ナトリウムを注入することにより識別される。ヒトインスリンについての保持時間は、（ｃ）（ｉ）及び（ｃ）（ｉｉ）の混合物間の割当てを変動させることにより少なくとも２ｔ０に調整される。好ましくは、これらの実施形態において、相対的親油性は１に等しいが１未満か又は実質的に１より小さい。好ましい実施形態においては、インスリン化合物はヒトインスリンであり、相対的親油性は１未満である。好ましくは、相対的親和性は、０．９９、０．９８、０．９７、０．９６、０．９５、０．９４、０．９３、０．９２、０．９１又は０．９０未満である。インスリン及びインスリン複合体の溶解度及び／又は親油性を決定するための技術についての論述は、その開示全体が本発明に参照として援用されている１９９８年５月１２日付けのハレラント（Ｈａｒｅｌｕｎｄ）らに対して発行された、「アシル化インスリン」という題の米国特許第５，７５０，４９９号明細書の中に記されている。
【０１１２】
一実施形態においては、相対的親油性は上述の通りであり、修飾部分は５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７又は１８個の炭素を有する炭素鎖であり、ここで炭素鎖は、中に挿入された２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のオキシ基を含む。もう１つの実施形態においては、相対的親油性は上述の通りであり、修飾部分は５、６、７、８、９又は１０個の炭素を有する炭素鎖であり、ここで炭素鎖は中に挿入された２、３又は４個のオキシ基を含む。関連する実施形態においては、相対的親油性は上述の通りであり、修飾部分は２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のポリアルカレングリコール単位を含む。もう１つの関連実施形態においては、相対的親和性は上述の通りであり、修飾部分は、１、２又は３個のポリエチレングリコール単位及び１、２又は３個のポリプロピレングリコール単位を含む。
【０１１３】
７．４．  金属カチオン構成要素及び錯体の特性
カチオン−インスリン化合物複合体錯体は金属カチオンを含む。カチオン構成要素として使用するための適切な金属カチオンとしては、インスリン化合物複合体と錯化、凝集又は結晶化する能力をもつあらゆる金属カチオンが含まれる。金属カチオンは、インスリン化合物複合体に対し錯化されることが好ましい。単一の又は多数のカチオンを使用することができる。カチオンは好ましくはインスリン化合物複合体に対する有意な酸化性をもたない。すなわち錯体がその意図された目的のために役に立たなくなるまでの酸化性をもたない。
【０１１４】
一部の実施形態においては、金属カチオンは生体適合性をもつ。金属カチオンは、注入部位における有意な免疫反応といったような、レシピエントの体に対する過度に有意な有害効果を示さない場合に、生体適合性を有する。しかしながら、一部の状況においては、毒性及びその他の有害な効果の危険性よりもカチオン−インスリン化合物複合体組成物の利点の方が勝っている可能性があり、従ってかかる状況下ではこれらの危険性を受諾できるかもしれない。
【０１１５】
生物学的に活性な作用物質を安定化させるための金属カチオンの妥当性及び必要とされる生物学的に活性な作用物質に対する金属カチオンの比率は、粒度削減及び／又はカプセル封入の前及び後に金属カチオンで安定化された生物学的に活性な作用物質の粒子に対しポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動法、逆相クロマトグラフィ及びＨＰＬＣ分析といったようなさまざまな安定性試験を実施することによって、当業者により決定され得る。
【０１１６】
金属カチオン構成要素は適切には、１つ以上の１価、２価又は３価の金属カチオン又はその組合せを含む。好ましい実施形態においては、金属カチオンは、ＩＩ群又は遷移金属カチオンである。適切な２価のカチオンの例としては、Ｚｎ＋＋、Ｍｎ＋＋、Ｃａ＋＋、Ｆｅ＋＋、Ｎｉ＋＋、Ｃｕ＋＋、Ｃｏ＋＋及び／又はＭｇ＋＋を含む。１価のカチオンが含まれている場合、それは好ましくはＮａ＋、Ｌｉ＋又はＫ＋である。カチオンは好ましくは、塩化物又は酢酸塩といったような塩として添加され、最も好ましくはＺｎＣｌ２及びＺｎＡｃである。
【０１１７】
インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は、標準的には約１：１〜約１：１００の間、好ましくは約１：２〜約１：１２の間、より好ましくは約１：２〜約１：７の間、又は約１：２、１：３、１：４、１：５、１：６又は１：７の間である。特定の実施形態においては、Ｚｎ＋＋はカチオン構成要素として用いられ、それは、約１：１〜約１：１００、好ましくは約１：２〜約１：１２、そしてより好ましくは約１：２〜約１：７又は約１：２、１：３、１：４、１：５、１：６又は１：７の亜鉛カチオン構成要素対インスリン化合物複合体モル比で提供される。
【０１１８】
カチオン構成要素は、好ましくは約９０％超が単一カチオン、例えばＺｎ＋＋である。好ましくは、カチオンは約９５％、９９％又は９９．９％超がＺｎ＋＋である。
【０１１９】
好ましくは、キモトリプシン分解に対する錯化インスリン化合物複合体の耐性は、対応する未錯化インスリン化合物複合体のキモトリプシン分解よりも大きい。好ましくは、キモトリプシン分解に対する錯化インスリン化合物複合体の耐性は、対応する錯化された、ただし未複合のインスリン化合物のキモトリプシン分解よりも大きい。
【０１２０】
錯化インスリン化合物複合体は対応する未複合インスリン化合物複合体といったような科学的に許容可能な対照よりも哺乳動物においてより高い経口生物学的利用能を有し得る。その他の実施形態では、錯化インスリン化合物複合体は、対応する未錯化インスリン化合物複合体といったような科学的に許容可能な対照よりもヒトにおいてより高い経口生物学的利用能を有する。一部の実施形態では、例えば複合体の血漿レベルにより測定されるような錯化インスリン化合物複合体の吸収は、未錯化インスリン化合物複合体の吸収よりも少なくとも１．５、２、２．５、３、３．５、又は４倍高い。
【０１２１】
錯化インスリン化合物複合体は、錯化された未複合のインスリン化合物といったような科学的に許容可能な対照よりも哺乳動物においてより高い経口生物学的利用能を有し得る。その他の実施形態では、錯化インスリン化合物複合体は、対応する錯化されたただし未複合のインスリン化合物といったような科学的に許容可能な対照よりもヒトにおいてより高い経口生物学的利用能を有する。一部の実施形態では、例えば複合体の血漿レベルにより測定されるような錯化インスリン化合物複合体の吸収は、錯化された、ただし未複合のインスリン化合物の吸収よりも少なくとも１．５、２、２．５、３、３．５、又は４倍高い。
【０１２２】
７．５  錯化剤
一部の実施形態では、カチオン−インスリン化合物複合体組成物は、１つ以上の錯化剤を含む。本発明において使用するのに適した錯化剤の例としては、プロタミン、スルフェン、グロビンタンパク質、スペルミン、スペルミジン、アルブミン、アミノ酸、カルボン酸、プロカチオン重合体化合物、カチオンポリペプチド、アニオンポリペプチド、ヌクレオチド及びアンチセンスが含まれる。その開示全体が本発明に参照として援用されているブランジェ、Ｊ．、「Ｇａｌｅｎｉｃｓ  ｏｆ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ（１９８７年）を参照のこと。組成物を安定化するため錯化剤の妥当性は、本開示に照らして当業者により決定され得る。一部の実施形態においては、カチオン−インスリン化合物複合体組成物は、特異的に錯化剤を排除しているか又は実質的にこれを含んでいない。
【０１２３】
好ましい錯化剤はプロタミンである。固体形態では、プロタミンは好ましくは約３：１〜約１：３のインスリン化合物対プロタミンモル比、より好ましくは約２：１〜約１：２のモル比、理想的には約１：１のモル比で存在することになる。一部の実施形態では、カチオン−インスリン化合物複合体組成物は、特定的にプロタミンを排除しているか又はこれを実質的に全く含んでいない。
【０１２４】
例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリントレオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、アスパラギン、グルタミン酸及びヒスチジン、並びにジグリシンといったオリゴペプチドといったアミノ酸を錯化剤として使用することもできる。
【０１２５】
カルボン酸も同様に、錯化剤として使用するのに適している。例としては、酢酸、及びヒドロキシカカルボン酸、例えば、クエン酸、３−ヒドロキシブチル酸及び乳酸が含まれる。
【０１２６】
７．６．  安定化剤
一部の実施形態では、カチオン−インスリン化合物複合体組成物は１つ以上の安定化剤を含んでいる。好ましい安定化剤としてはフェノール化合物及び芳香族化合物が含まれる。好ましいフェノール化合物は、フェノール、ｍ−クレゾール及びｍ−パラベン又はその混合物である。安定化剤は、安定化剤の不在である対応するカチオン−インスリン化合物複合体組成物といったような科学的に許容可能な対照と比べてカチオン−インスリン化合物複合体組成物の安定性を改善するあらゆる量で提供することができる。
【０１２７】
７．７．  錯体の態様
錯体は、カチオン−インスリン化合物複合体の実質的に純粋な粉末、又はその他の薬学的に許容可能な構成要素と共にカチオン−インスリン化合物複合体固体を含む粉末といった乾燥固体として提供され得る。錯体は同様に、水性又は有機媒質中に溶解した状態でかつ／又はかかる媒質中の未溶解固体として、提供されてもよい。
【０１２８】
７．７．１．  固体組成物
カチオン−インスリン化合物複合体錯体は固体として提供され得る。該固体は、例えば乾燥状態にあってもよく、又水溶液、有機溶媒、エマルジョン、マイクロエマルジョン又はその他の非乾燥形態で未溶解の状態にあってもよい。
【０１２９】
一の実施形態においては、カチオン−インスリン化合物複合体錯体は純粋な加工済み固体組成物として提供される。純粋な加工された固体組成物の中で、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は標準的に約３：４〜約３：０．５（インスリン化合物複合体：カチオン）、約３：３．５〜約３：１、又理想的には約３：１である。
【０１３０】
加工済み純粋固体Ｔ型組成物（カチオン、インスリン化合物複合体を伴い、プロタミンは伴わない）の中で、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は、標準的に約３：４〜約３：０．５（インスリン化合物複合体：カチオン）、約３：３．５〜約３：１、又は理想的には約３：１である。加工済み純粋な固体Ｔ型プロタミン組成物（カチオン、インスリン化合物複合体及びプロタミンを伴う）の中では、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は、標準的に約３：６〜約３：０．５（インスリン化合物複合体：カチオン）、約３：５〜約３：１又理想的には約３：２である。
【０１３１】
加工済み純粋固体Ｒ型（ｌｅｎｔｅ）組成物（カチオン、インスリン化合物及び安定化化合物（例えばフェノール化合物）を伴い、プロタミンは伴わない）の中で、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は、標準的に約３：４．５〜約３：０．９、好ましくは約３：３．９〜約３：２．４である。加工済み純粋な固体Ｒ型（ｕｌｔｒａｌｅｎｔｅ）組成物（カチオン、インスリン化合物及び安定化化合物（例えばフェノール化合物）を伴い、プロタミンは伴わない）の中では、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は、標準的に約３：１２〜約３：４．５超、好ましくは約３：９〜約３：４．８、より好ましくは約３：６〜約３：５．４の範囲内にあり得る。加工済み純粋固体Ｒ型プロタミン組成物（カチオン、インスリン化合物及び安定化化合物（例えばフェノール化合物）及びプロタミンを伴う）の中では、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は標準的に約３：１２〜約３：３、好ましくは約３：９〜約３：４．５、より好ましくは約３：６．９〜約３：５．４の範囲内であり得る。
【０１３２】
１価のカチオン、例えばＮａ＋については、固体は約３：６〜約３：３のインスリン化合物複合体対カチオン比を有するものと予想されることになる。
【０１３３】
本発明の固体組成物は、例えば、本発明のインスリン化合物複合体及び／又はカチオン−インスリン化合物複合体錯体を含む粉末といったような組成物を含み得る。好ましくは、固体組成物は、薬学的に許容可能なレベルの純度、すなわちヒトの体内で使用するための該組成物の妥当性を受容し難いほどに低減させることになるような汚染物質が無いレベルで提供される。
【０１３４】
一部の実施形態においては、カチオン−インスリン化合物複合体構成要素が約９０％超、好ましくは約９５％超、より好ましくは約９９％超結晶性である組成物が提供される。その他の実施形態においては、カチオン−インスリン化合物複合体構成要素が約９０％超、好ましくは約９５％超、より好ましくは約９９％超の非晶質固体である組成物が提供されている。
【０１３５】
さらにその他の実施形態では、カチオン−インスリン化合物複合体構成要素が、非晶質固体と結晶性固体の混合物中に存在する組成物が提供されている。例えば、非晶質固体対結晶性固体の比率は約１：１０〜約１０：１又は約１：９〜約９：１、又は約１：８〜約８：１、又は約１：７〜約７：１、又は約１：６〜約６：１、又は約１：５〜約５：１、又は約１：４〜約４：１、又は約１：３〜約３：１、又は約１：２〜約２：１又は約１：１であり得る。
【０１３６】
さらに、未変性インスリン化合物を含む固体とインスリン化合物複合体を含む固体、又は１つのインスリン化合物複合体を含む固体と異なるインスリン化合物複合体を含む固体といったように異なるインスリン化合物を有するカチオン−インスリン化合物固体の混合物を用いて、組成物を提供することができる。
【０１３７】
さらに、固体のタイプ及びインスリン化合物／インスリン化合物複合体構成要素は全て変動し得る。例えば、非晶質インスリン化合物複合体及び未変性インスリン化合物を用いてＺｎ−インスリン化合物結晶を含む組成物を提供することができ、そうでなければ結晶性Ｚｎ−インスリン化合物複合体及び未変性インスリン化合物を用いた非晶質Ｚｎ−インスリン化合物固体を含む組成物を提供することができる。溶解プロファイル及び／又は薬物動態プロファイルの変動といったような物理的特性の変動を達成するためにかかる混合物を使用することができる。
【０１３８】
固体の平均粒度は好ましくは、約０．１〜約１００ミクロン、より好ましくは１〜５０ミクロン、なお一層好ましくは１〜２５ミクロン、理想的には１〜１５ミクロンの範囲内である。微結晶化条件、噴霧乾燥、摩砕、真空乾燥、凍結乾燥などにより小さな粒度を得ることが可能である。
【０１３９】
１つの実施形態においては、組成物は、乾燥された時点で、約９６％ｗ／ｗ超のインスリン化合物複合体及び約０．０５、０．１、０．１５又は０．２〜約４％ｗ／ｗの亜鉛を含有する。もう１つの実施形態では、該組成物は、乾燥された時点で約９１％ｗ／ｗのインスリン化合物複合体、約０．０５、０．１、０．１５、又は０．２〜約４％ｗ／ｗの亜鉛及び約０．２〜約５％ｗ／ｗのフェノールを含有する。さらにもう１つの実施形態においては、該組成物は、乾燥された時点で、約８２％ｗ／ｗ超のインスリン化合物複合体、約０．０５、０．１、０．１５又は０．２〜約４％ｗ／ｗの亜鉛、約０．２〜約１４％ｗ／ｗのプロタミンを含有する。さらにもう１つの実施形態においては、組成物は、乾燥された時点で約７１％ｗ／ｗのインスリン化合物複合体、約０．０５、０．１、０．１５又は０．２〜約４％ｗ／ｗの亜鉛、約０．２〜約１４％ｗ／ｗのプロタミン、及び約０．２〜約１５％ｗ／ｗのフェノールを含有する。
【０１４０】
もう１つの実施形態においては、該組成物は、乾燥された時点で約０．１〜約２％ｗ／ｗのＺｎ＋＋、及び約０．０８〜約１％ｗ／ｗのフェノール、好ましくは約０．５〜約１．３％ｗ／ｗのＺｎ＋＋及び約０．１〜約０．７％ｗ／ｗのフェノール、より好ましくは１以上から約３．５％ｗ／ｗまでのＺｎ＋＋、約０．１〜約３％ｗ／ｗのフェノール、さらに一層好ましくは１．３以上から約２．２％ｗ／ｗまでのＺｎ＋＋、そして約０．４〜約２％ｗ／ｗのフェノールを含む。
【０１４１】
錯体は、ｌｅｎｔｅ型の調製物の形で提供可能である。例えば、好ましい乾燥ｌｅｎｔｅ型調製物中では、Ｚｎは約０．１〜約２％ｗ／ｗの範囲の量で提供され、フェノールは約０．０８〜約１％ｗ／ｗの範囲の量で存在し、残りの％ｗ／ｗはインスリン化合物複合体である。理想的には、乾燥したｌｅｎｔｅ型調製物のためには、Ｚｎは約０．５〜約１．３％ｗ／ｗの範囲の量で提供され、フェノールは、約０．１〜約０．７％ｗ／ｗの範囲内の量で存在し、残りの％ｗ／ｗはインスリン化合物複合体である。
【０１４２】
Ｕｌｔｒａｌｅｎｔｅ型の調製物の形で錯体を提供することが可能である。例えば、好ましい乾燥されたｕｌｔｒａｌｅｎｔｅ型の調製物中では、Ｚｎは、１以上から約３．５％ｗ／ｗの範囲の量で提供され、フェノールは約０．１〜約３％ｗ／ｗの範囲の量で存在し、残りの％ｗ／ｗはインスリン化合物複合体である。理想的には乾燥されたｕｌｔｒａｌｅｎｔｅ型調製物のためには、Ｚｎは１．３以上から約２．２％ｗ／ｗまでの範囲の量で提供され、フェノールは、約０．４〜約２％ｗ／ｗの範囲の量で存在し、残りの％ｗ／ｗはインスリン化合物複合体である。
【０１４３】
７．７．２  液体組成物
カチオン−インスリン化合物複合体錯体は、液体の未溶解構成要素として提供され得る。例えば、液体は、沈殿物としてのカチオン−インスリン化合物複合体を含む水溶液であってよく、そうでなければカチオン−インスリン化合物複合体を、懸濁液、エマルジョン又はマイクロエマルジョンの構成要素として提供することもできる。液体は、同様に未溶解構成要素と共に、溶解した構成要素又は錯体を含むこともできる。
【０１４４】
７．７．３  混合物及び共結晶
本発明の組成物は、例えば、錯体混合物、固体混合物、ハイブリッド錯体及び共結晶を含み得る。
【０１４５】
かくして、例えば、本発明は、２つ以上のインスリン化合物複合体及び／又は未複合インスリン化合物を含む組成物を提供する。さらに、組成物が固体を含む場合、固体は異なる形態を有し得る。かくして、例えば、１つの固体は結晶性であり得、もう１つの固体は非晶質固体であり得る。他の場所で指摘されているとおり、該固体は、乾燥された形状で提供されてもよいし、又は液体混合物の固体構成要素として提供されてもよい。好ましい実施形態においては、本発明の混合物は２つ以上の異なるインスリン化合物複合体を含み、異なるインスリン化合物複合体は異なる溶解度を有する。１つの実施形態においては、錯体のうちの一方は親油性インスリン化合物複合体を含み、もう１つの錯体は親水性のインスリン化合物複合体を含む。さらにもう１つの実施形態においては、錯体は、１つ以上の錯体が約１〜約４時間の循環半減期を有し、２つ以上の錯体が第１の錯体循環半減期よりも著しく長い循環半減期をもつ異なるインスリン化合物複合体を含み得る。関連する実施形態においては、１つの錯体は急速作用型プロファイルを有し、もう１つの錯体は中〜長時間作用型プロファイルを有する。さらに、１つの錯体は基礎インスリン化合物制御に適したプロファイルを有することができ、もう１つの錯体は食後グルコース制御に適したプロファイルを有する。好ましい混合物は、ＨＩＭ２とインスリンの混合物、ＨＩＭ２とＩＮ１０５の混合物、ＩＮ１０５とインスリン化合物の混合物、ＩＮ１０５及び脂肪酸アシル化インスリンの混合物、ＨＩＭ２と脂肪酸アシル化インスリンの混合物である。適切な脂肪酸アシル化インスリンについては、その開示全体が本発明に参照として援用されている以下の米国特許の中で記述されている；「血液グルコース制御のための不溶性組成物」という題の米国特許第６，５３１，４４８号明細書、０３年３月１１日発行；「イプシロンアミノ基の選択的アシル化」という題の米国特許第ＲＥ３７，９７１号明細書、０３年１月２８日発行；「不溶性インスリン組成物」という題の米国特許第６，４６５，４２６号明細書、０２年１０月１５日発行；「脂肪酸アシル化インスリン類似体」という題の米国特許第６，４４４，６４１号明細書、０２年９月３日発行；「アシル化インスリンの投与方法」という題の米国特許第６，３３５，３１６号明細書、０２年１月１日発行；「不溶性インスリン組成物」という題の米国特許第６，２６８，３３５号明細書、０１年７月３１日発行；「アシル化インスリンの投与方法」という題の米国特許第６，０５１，５５１号明細書、００年４月１８日発行；「アシル化インスリン類似体」という題の米国特許第５，９２２，６７５号明細書、９９年７月１３日発行；「アシル化タンパク質粉末の調製」という題の米国特許第５，７００，９０４号明細書、９７年１２月２３日発行；「付与されたアシル化インスリン類似体」という題の米国特許第５，６９３，６０９号明細書、９７年１２月２日発行；「イプシロンアミノ基の選択的アシル化」、という題の米国特許第５，６４６，２４２号明細書、９７年７月８日；「脂肪酸アシル化タンパク質のゲル化削減」という題の米国特許第５，６３１，３４７号明細書、９７年５月２０日発行；「ぺプチドのアシル化方法及び新規のアシル化剤」という題の米国特許第６，４５１，９７４号明細書、０２年９月１７日発行；「アシル化インスリン」という題の米国特許第６，０１１，００７号明細書、００年１月４日発行；９８年５月１２日に付与された「アシル化インスリンという題の米国特許第５，７５０，４９７号明細書；「選択的アシル化方法」という題の米国特許第５，９０５，１４０号明細書、１９９９年５月１８日発行；「インスリン誘導体」という題の米国特許第６，６２０，７８０号明細書、２００３年９月１６日発行；「インスリン誘導体」という題の米国特許第６，２５１，８５６号明細書、２００１年１月２６日発行；「肺送達用の安定な濃縮インスリン調製物」という題の米国特許第６，２１１，１４４号明細書、２００１年４月３日発行；「肺インスリン結晶」という題の米国特許第６，３１０，０３８号明細書、２００１年１０月３０日発行；及び、「安定化されたインスリン組成物」という題の米国特許第６，１７４，８５６号明細書、２００１年１月１６日発行。特に好ましいのは、ヒトインスリンのＬｙｓ（Ｂ２９）に共有結合した１２、１３、１４、１５又は１６炭素脂肪酸を有するモノ脂肪酸アシル化インスリンである。
【０１４６】
１つの実施形態においては、本発明は２つの異なるインスリン化合物及び／又はインスリン化合物複合体を有する共結晶を提供する。好ましくは、共結晶は、実質的に均質な溶解、単一のインビボ溶解曲線及び／又は単一ピークの薬力学プロファイルといった特徴のうちの１つ以上のものを示す。好ましい共結晶は、ＨＩＭ２とインスリンの共結晶、ＨＩＭ２とＩＮ１０５の共結晶、ＩＮ１０５とインスリン化合物の共結晶である。
【０１４７】
１つの実施形態においては、共結晶はヒトインスリンを含み、ヒトインスリンとの共結晶化は、インスリン化合物複合体の対応する結晶の溶解度に比べて結晶の溶解度を低減させる。もう１つの実施形態においては、共結晶はヒトインスリンを含み、ヒトインスリンとの共結晶化は、インスリン化合物複合体の対応する結晶の溶解度に比べて該結晶の溶解度を低減させる。
【０１４８】
１つの実施形態においては、共結晶は急速作用型、急速排泄型及び／又は高効能インスリン化合物複合体及び長時間作用型、低速排泄型及び／又は低効能インスリン化合物複合体を含む。好ましくは共結晶は、食後グルコース制御又は基礎インスリン化合物オーバーナイト制御に適したＰＫ／ＰＤプロファイルを有する。
【０１４９】
もう１つの実施形態においては、本発明は、ヒトインスリン又はリスプロインスリンと共にインスリン化合物複合体が含まれている混合物又は共結晶を提供する。本発明の混合物は２つの異なるインスリン化合物複合体を含み得る。混合物はインスリン化合物複合体及び未複合インスリン化合物を含み得る。混合物は異なるインスリン化合物を伴う異なるインスリン化合物複合体を含み得る。
【０１５０】
さらに、本発明は２つの異なるインスリン化合物複合体及び／又はインスリン化合物複合体と未複合インスリン化合物を有する錯体を提供する。本発明は、２個、３個又はそれ以上の異なるインスリン化合物複合体のハイブリッド共結晶を提供する。本発明は、未複合インスリン化合物を伴うインスリン化合物複合体を有する錯体を提供する。本発明は、２つ以上の異なる親水性インスリン化合物複合体；２つ以上の異なる疎水性インスリン化合物複合体；２つ以上の異なる両親媒性インスリン化合物複合体；親水性インスリン化合物複合体及び親油性インスリン化合物複合体；親水性インスリン化合物複合体及び未複合インスリン化合物；ＨＩＭ２と未複合インスリン化合物；ＩＮ１０５と未複合インスリン化合物；ＨＩＭ２とＩＮ１０５；ＨＩＭとインスリン化合物及びＩＮ１０５；及び以上の要素のその他の組合せを伴う共結晶を提供する。その他の場所で言及されているように、錯体は乾燥した固体として、溶液中の溶解した錯体及び／又は溶液中の未溶解錯体として提供され得る。例えば長時間プロファイルを有する錯体又は共結晶を提供するべく、さまざまな組合せを利用することができる。
【０１５１】
７．８．  発明の錯体の溶解度
好ましくは、約７．４のｐＨでのカチオン−インスリン化合物複合体錯体の水溶解度は、未錯化インスリン化合物複合体の水溶解度の約１／１５、１／１４、１／１３、１／１２、１／１１、１／１０、１／９、１／８、１／７、１／６、１／５倍から約０、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０倍未満までである。上述の上限及び下限のあらゆる組合せが本発明の範囲内に入る。ただし、好ましい範囲は約１／１５倍から５倍未満まで、より好ましくは約１／１０倍〜約２倍であり、理想は約１／１０倍から０倍未満までである。本発明の特に驚くべき態様においては、約７．４のｐＨでの溶液中のカチオンインスリン化合物複合体の水溶解度は、往々にして約７．４のｐＨでの溶液中のインスリン化合物複合体の水溶解度より実質的に低い。しかしながら、一部の実施形態においては、約７．４のｐＨでのカチオン−インスリン化合物複合体の水溶解度は約７．４のｐＨでの溶液中のインスリン化合物複合体の水溶解度と同じであるか、それより大きいか又はそれより実質的に大きいかであり得る。
【０１５２】
１つの驚くべき実施形態においては、約７．４のｐＨでのカチオン−インスリン化合物複合体錯体の水溶解度は、約７．４のｐＨでの対応する未錯化インスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に低く、カチオン−インスリン化合物複合体錯体は、約５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．１、又は６．９に始まり約７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８又は８．９で終るｐＨ範囲全体を通して水溶液中で約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０又は１３０ｇ／Ｌ超で可溶状態にとどまる。さらにもう１つの実施形態では約７．４のｐＨでのカチオン−インスリン化合物複合体錯体の水溶解度は、約７．４のｐＨでの溶液中の対応するインスリン化合物複合体の溶解度よりも実質的に低く、カチオン−インスリン化合物複合体錯体は、約５．８〜約８．５のｐＨ範囲、好ましくは約６．５〜約８のｐＨ範囲、より好ましくは約６．９〜約７．８のｐＨ範囲全体を通して水溶液中で約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０又は１３０ｇ／Ｌ超で可溶状態にとどまる。［質問：ｇ／Ｌ  溶解度は、錯体の重量又はインスリン化合物複合体の重量を用いて測定されるのか？］
【０１５３】
好ましくは、本発明のインスリン化合物複合体は、インスリン化合物複合体の濃度が約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約１５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌである場合、ＰＩ＋／−約２．５に等しいｐＨで水溶液中で結晶を生成するように選択され、結晶は、カチオンが、好ましいＺ＋＋である場合、インスリン化合物複合体に対するカチオン約３、４又は５％ｗ／ｗで発生し始める。好ましい結晶は約４、４．１、４．２、４．３又は４．４〜約５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７又は５．８の範囲のｐＨ、好ましくは約４から６．５未満までのｐＨ、好ましくは約４から５．８未満まで、好ましくは約４．２から約５．５まで、より好ましくは約４．４から約５．２までのｐＨで水溶液中でプロタミン無しのモノ複合体について存在する。好ましくは、結晶は約３．５から５．８未満まで、好ましくは約３．８から約５．５まで、より好ましくは約４．０から約５．２までのｐＨでプロタミン無しのジ複合体について存在する。好ましくは、結晶は約３から５．５未満まで、好ましくは約３．３から約５まで、より好ましくは約３．８〜約４．８のｐＨでプロタミン無しのトリ複合体について存在する。
【０１５４】
７．８．１  Ｒ型の錯体
好ましくは、約７．４のｐＨにおけるインスリン化合物複合体のＲ型Ｚｎ錯体の水溶解度は、約１０〜約１５０ｇ／Ｌ、より好ましくは約２０〜約１３０ｇ／Ｌ、より好ましくは約３０〜約１１０ｇ／Ｌ、より好ましくは約３５〜約６０ｇ／Ｌの範囲をもつ。
【０１５５】
好ましくは、約７．４のｐＨでのプロタミンを伴うインスリン化合物複合体のＲ型Ｚｎ錯体の水溶解度は、約１０〜約１１０ｇ／Ｌ、好ましくは約２０〜約８５ｇ／Ｌ、より好ましくは約３０〜約７０ｇ／Ｌの範囲を有する。
【０１５６】
７．８．２．  Ｔ型錯体
好ましくは、約７．４のｐＨでのインスリン化合物複合体のＴ型Ｚｎ錯体の水溶解度は、約３０〜約１７５ｇ／Ｌ、より好ましくは約５０〜約１６０ｇ／Ｌ、より好ましくは約７０〜約１５０ｇ／Ｌの範囲を有する。
【０１５７】
好ましくは、約７．４のｐＨでのプロタミンを伴うインスリン化合物複合体のＴ型Ｚｎ錯体の水溶解度は、約１０〜約１５０ｇ／Ｌ、より好ましくは約２０〜約１３０ｇ／Ｌ、より好ましくは約３０〜約１１０ｇ／Ｌ、より好ましくは約３５〜約６０ｇ／Ｌの範囲を有する。
【０１５８】
７．８．３．  ＮＰＨ型錯体
好ましくは約７．４のｐＨでのインスリン化合物複合体のＮＰＨ型錯体の水溶解度は、約１〜約１５０ｇ／Ｌ、より好ましくは約５〜約１２０ｇ／Ｌ、さらに一層好ましくは約１０〜約９０ｇ／Ｌの範囲を有する。
【０１５９】
７．９  薬学的特性
カチオンとのインスリン化合物複合体の錯化は、一般に、対応する未錯化インスリン化合物複合体といったような科学的に許容可能な対照に比べて改善されたインスリン化合物複合体の薬学的特性を結果としてもたらす。
【０１６０】
一部のケースでは、錯化されたインスリン化合物複合体は、対応する未錯化インスリン化合物複合体といったような科学的に許容可能な対照と比べて長時間の又はその他の形で改変されたｐＫプロファイルを示すことになる。あるケースでは、ｐＫプロファイルはリスプロ様のプロファイルを示すことになる。ｐＫプロファイルは、例えばマウス、ラット、イヌ又はヒトにおける標準的インビボ実験を用いて査定することができる。カチオン−インスリン化合物複合体錯体の属性を査定するための本書で記述されている検定は、本発明の１つの態様である。
【０１６１】
錯体は、改善された化学的安定性を示し得る。血漿の存在、プロテアーゼの存在、肝臓ホモジネートの存在、酸性条件の存在及び塩基性条件の存在といったようなさまざまな検定条件に錯体を曝露することによって、さまざまな安定性属性を査定することが可能である。これらの検定条件のうちのいずれか２つ以上のものにおける錯化インスリン化合物複合体の安定性が同じ条件での未錯化インスリン化合物複合体の安定性よりも大きい場合に、未錯化インスリン化合物複合体に比べた安定性が改善されている。酸性環境において安定性を決定するための好ましい検定には、少なくとも２時間ｐＨ２の溶液に対し錯化インスリン化合物複合体を曝露することを含み、ここで対応する未錯化インスリン化合物複合体といったような科学的に許容可能な対照に比べた錯化インスリン化合物複合体の分解の減少が安定性改善の指標である。安定性をテストするには、インビボ検定も使用することができる。例えば、対照の消化管に対する曝露及び適切な対照との比較により、錯化インスリン化合物複合体の安定性をテストすることができる。
【０１６２】
７．１０  製造方法
本発明は同様に、本書で記述されているカチオン−インスリン化合物複合体組成物の製造方法をも提供している。該方法には一般に、固体を形成するべく本書に記述されているような１つ以上のカチオンと本書に記述されているような１つ以上のインスリン化合物複合体を接触させるステップを含んでいる。
【０１６３】
Ｚｎ＋＋といったような２価のカチオンについては、約２ｍｇ／ｍｌから約５０ｍｇ／ｍｌの範囲のインスリン化合物濃度をもつ水溶液中の組成物を作るのに用いられるインスリン化合物複合体対カチオンのモル比は、標準的に約１：１５（インスリン化合物複合体：カチオン）〜約１：０．４、好ましくは約１：９〜約１：２の範囲であり得る。
【０１６４】
上述の水溶液条件下でＴ型固体（カチオン及びインスリン化合物複合体を伴いプロタミンを伴わない）を作るためには、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は好ましくは約１：１．５〜１：３、理想的には約１：２である。上述の水溶液条件下でＲ型固体（カチオン、インスリン化合物及び安定化化合物（例えばフェノール化合物）を伴いプロタミンを伴わない）を作るためには、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は、好ましくは約１：４〜１：９、好ましくは約１：７〜約１：９、理想的には約１：８である。
【０１６５】
上述の水溶液条件でＴ型プロタミン固体（カチオン及びインスリン化合物複合体及びプロタミンを伴う）を作るためには、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は好ましくは約１：１．５〜１：９、理想的には約１：２である。上述の水溶液条件下でＲ型プロタミン固体（カチオン、インスリン化合物及び安定化化合物（例えばフェノール化合物）及びプロタミン）を作るためには、インスリン化合物複合体対カチオンのモル比は約１：２〜１：１５、好ましくは約１：７〜約１：９、理想的には約１：８である。
【０１６６】
インスリン化合物複合体は、好ましくは、２超から約１００ｇ／Ｌまで、好ましくは約３、４、５、６、７、８、９又は１０から約４０ｇ／Ｌまで、より好ましくは、約１０から約３０ｇ／Ｌまでの範囲内の濃度を達成するように計算される量で、緩衝液に添加される。
【０１６７】
カチオンが２価（例えばＺｎ＋＋、Ｃａ＋＋）である場合、それは、好ましくは約０．０４〜約１０ｇ／Ｌ、好ましくは約０．１〜約５ｇ／Ｌ、より好ましくは約０．２〜約４ｇ／Ｌの範囲内の濃度を達成するように計算された量で添加される。Ｔ型結晶又はＴ型プロタミン結晶については、カチオン濃度は好ましくは約０．０４〜約１ｇ／Ｌ、より好ましくは約０．１〜約０．３ｇ／Ｌの範囲内にある。Ｒ型結晶又はＲ型プロタミン結晶については、カチオン濃度は好ましくは約１〜約５ｇ／Ｌ、より好ましくは約１．５〜約４ｇ／Ｌの範囲内にある。
【０１６８】
カチオンが一価である場合、それは好ましくは、約０．０８〜約４０ｇ／Ｌ、好ましくは約０．４〜約２０ｇ／Ｌ、より好ましくは約０．８〜約１６ｇ／Ｌの範囲内の濃度を達成するように計算された量で添加される。
【０１６９】
該方法はさらに、カチオン及びインスリン化合物複合体と安定化剤を組合わせるステップを含み得る。好ましい安定化剤については以上で記述されている。使用される場合、該安定化剤は、この安定化剤の不在下で同じ試薬及び反応条件を用いて達成されるよりも高い固体形成度を提供するのに充分な量で添加される。安定化剤がフェノール化合物（例えばフェノール、ｍ−クレゾール、ｍ−パラベン）である場合、それは、約１０〜約５０％ｗ／ｗ、より好ましくは約２０〜約４０％ｗ／ｗ、さらに一層好ましくは約２５〜約３５％ｗ／ｗの範囲の量で添加され得る。より好ましい実施形態においては、安定化剤はフェノール化合物（例えばフェノール、ｍ−クレゾール、ｍ−パラベン）であり、約０．０１〜約１０％ｗ／ｗ、より好ましくは０．０１〜約５％ｗ／ｗ、さらに一層好ましくは０．０１〜約１％ｗ／ｗの範囲の量で添加され得る。かくして、一実施形態においては、該方法には、カチオン−インスリン化合物複合体組成物を生み出すために水溶液中でインスリン化合物複合体、カチオン及び安定化剤を組合せることを含み、ここで該組合せは可溶化された錯体及び／又は結晶性又は非晶質固体を生み出すことができる。
【０１７０】
該方法はさらに、カチオン及びインスリン化合物複合体と組合せられるプロタミンといった錯化剤の使用をも含んでいてよく、又任意には安定化剤をも含む。
【０１７１】
約５〜約８の範囲内のｐＨを有する水溶液中で固体を調製するためには、プロタミンは、インスリン化合物複合体との関係において約４〜約４５％ｗ／ｗ（プロタミン／インスリン化合物）、好ましくは約８〜約２５％ｗ／ｗ、より好ましくは約９〜約２０％ｗ／ｗ、理想的には約１０〜約１２％ｗ／ｗの量で提供される。Ｔ型固体のためには、好ましいｐＨ範囲は約５〜約６、より好ましくは約５〜約５．５、より一層好ましくは約５．１〜約５．３、理想的には約５．２である。Ｒ型固体については、好ましいｐＨ範囲は、約６〜約７、より好ましくは約６．２〜約６．８、さらに一層好ましくは約６．４〜約６．６、理想的には約６．５である。
【０１７２】
発明者らは、驚くべきことに、フェノールといったような安定化剤の不在下でＴ型錯体をプロタミンＴ型錯体に転換できるということを発見した。Ｔ型錯体は、フェノールの不在下で水溶液中のインスリン化合物分子とＺｎを錯化することによって作られる。次にＴ型錯体をプロタミンＴ型錯体に転換させるためにプロタミンが添加される。量及びｐＨ範囲は上述の通りである。
【０１７３】
かくして、１つの実施形態においては、該方法には、カチオン−インスリン化合物複合体組成物を生み出すべく水溶液中でインスリン化合物複合体、カチオン及び錯化剤を組合わせることを含み、ここで該組合せは、可溶化された錯体及び／又は結晶性又は非晶質固体を生み出し得る。もう１つの実施形態では、該方法には、カチオン−インスリン化合物複合体組成物を生み出すべく水溶液中でインスリン化合物複合体、カチオン、錯化剤及び安定化剤を組合わせることを含み、ここで該組合せは、可溶化された錯体及び／又は結晶性又は非晶質固体を生み出し得る。
【０１７４】
一部の実施形態では、組成物は防腐剤を含むことができる。適切な防腐剤の例としては、ベンジルアルコール、Ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル、グリセロールが含まれる。フェノール、ｍ−クレゾール及びｍ−パラベンといったような安定化剤を防腐剤として使用することもできる。抗菌有効性を増強させるために、グリセロール及びフェノールが合わせて添加される。
【０１７５】
固体を調製する上で有用なその他の構成要素には、ＮａＣｌ、グリセロール及び単糖類といったような等張作用物質が含まれる。
【０１７６】
カチオンインスリン化合物複合体固体は標準的に比較的迅速に形成可能である。例えば、固体形成は３日以内、往々にして２４時間以内で完了する。結晶形成を改善させるため反応を減速させることが一部のケースで望まれる。
【０１７７】
本発明の一実施形態においては、固体は、固体の沈殿を誘発するための温度の低下を必要とすることなく、室温（２５℃）で形成される。例えば、Ｒ型及びＴ型結晶については室温が有効である。固体形成のための温度は約０°〜約４０℃、好ましくは約１７〜約３０℃、より好ましくは約２２〜約２７℃、理想的には約２５℃である。
【０１７８】
一実施形態においては、該方法には、結晶性又は非晶質固体を提供するためインスリン化合物複合体及び金属カチオンを水溶液中で組合せるステップが含まれている。カチオンが添加されることになるインスリン化合物複合体を含有する水溶液は、好ましくはインスリン化合物複合体のｐＩ＋／−約１．５、好ましくはｐＩ＋／−約１、より好ましくはｐＩ＋／−約０．７５の範囲内のｐＨをもつ緩衝溶液である。これらの範囲は同様にＴ型、Ｒ型及びプロタミン錯体にもあてはまる。しかしながら、中性プロタミン錯体（ＮＰＨ−型）については、好ましいｐＨは約７〜約８．５であり、より好ましくは約７．５〜約８である。ひとたび金属カチオンが添加された時点で、ｐＨはわずかに変化する可能性があり、上述のｐＨ範囲を目安としてｐＨを調製することができる。フェノール化合物を用いると、軽微なｐＨ変化があり得、酸又は塩基を用いて好ましい範囲に調整することができる。
【０１７９】
インスリン化合物複合体のｐＩ値は標準的に、約７未満、好ましくは約６未満、より好ましくは約５．５未満のｐＨを必要とする。中性修飾部分を伴うヒトインスリンモノ複合体は標準的に約４．７５＋／−０．２５のｐＩ範囲を有する。ヒトインスリンジ複合体についてはｐＩ範囲は標準的に４．２５＋／−０．２５である。ヒトインスリントリ複合体については、ｐＩ範囲は標準的に３．５＋／−０．２５である。
【０１８０】
適切な緩衝液系の例としては、酢酸アンモニウム緩衝液、リン酸ナトリウム緩衝液、トリス緩衝液、リン酸ナトリウムと酢酸アンモニウムの混合物、酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸ナトリウムと酢酸アンモニウムの混合物及びクエン酸緩衝液及び同じくエタノール及び／又はアセトニトリル［Ｂ］（例えば、約１：１〜約１０：１のＡ：Ｂの百分率比で）をも含む上述の緩衝液系［Ａ］のいずれかが含まれる。カチオン−インスリン化合物複合体固体が、エタノール又はアセトニトリルといったような有機溶媒を含有する水性混合物の中で形成され得るということは、本発明の驚くべき態様である。
【０１８１】
本発明の１つの独自の特長は、有用なカチオン−インスリン化合物複合体錯体を提供することに加えて、本発明は同様に、製造プロセス中の未複合インスリン化合物からカチオン−インスリン化合物複合体を分離する方法をも提供している。このプロセスでは、カチオン−インスリン化合物複合体を溶液から沈殿させることができ、可溶化された未複合インスリン化合物を例えばろ過により除去することができる。この特長により、インスリン化合物複合体の製造における２つのステップ、すなわち濃縮ステップと凍結乾燥ステップが削除される。
【０１８２】
遠心分離及び／又はろ過とそれに続く洗浄（例えばエタノール／水での）及び凍結乾燥又は真空乾燥といったような標準的な技術を用いて、加工済み純粋固体組成物を形成させ得る。フェノール及び／又はカチオン含有量を調整するために多数回の洗浄を使用することができる。
【０１８３】
７．１１  処方
既知の技術に従って薬学的担体に入った形で投与するために錯体を処方し得る。例えば、薬学的剤形の選択、製作及び使用に関するその教示についてその開示全体が本発明に参照として援用されている、アルフォンソ（Ａｌｆｏｎｓｏ）Ｒ．ジェナーロ（Ｇｅｎｎａｒｏ）、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（２００３年６月）、及びハワード（Ｈｏｗａｒｄ）Ｃ．アンセル（Ａｎｓｅｌ）、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、第７版（１９９９年１０月）を参照のこと。
【０１８４】
標準的には非晶質固体又は結晶性固体の形をした錯体を薬学的に許容可能な担体と組合わせることができる。担体は、薬学組成物中のその他のあらゆる成分と適合性があるという意味で許容可能でなくてはならず、活性成分により提供される利点に関して、対象にとって過度に有害であってはならない。担体は固体又は液体、又は両方であり得る。それは好ましくは、例えば錠剤といったような一回服用量処方物として処方される。単位剤形は、例えば約０．０１又は０．５重量％〜約９５重量％又は９９重量％のカチオン−インスリン化合物錯体を含有し得る。薬学組成物は、任意には１つ以上の副成分を内含する構成要素を含めた（ただしこれに制限されるわけではない）周知の薬学的技術のいずれかによって調製可能である。
【０１８５】
適切な薬学組成物の例としては、経口、直腸、吸入（例えばエアゾルを介した）、口腔（例えば舌下）、膣内、非経口（例えば皮下、筋内、皮内、関節内、胸腔内、腹腔内、大脳内、動脈内又は静脈内）、局所、粘膜表面（気道表面を含む）、鼻腔表面及び経皮投与用に作られたものが含まれる。任意の与えられた例における最も適切な経路は、治療されている身体条件の性質及び重症度及び使用されている特定のカチオン−インスリン化合物錯体の性質により左右されることになる。好ましい経口組成物は、対象による摂取用に調製された組成物である。理想的には、経口組成物は、胃の中の通過を切り抜ける又は実質的に切抜けるようにそして活性成分の送達のため腸内で完全に又は実質的に完全に溶解するように調製される。適切な経皮系の例としては、超音波、イオン導入及びパッチ送達系が含まれる。
【０１８６】
１つの態様においては、本発明は、１つ以上の飽和又は不飽和Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９又はＣ１０脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩を含む脂肪酸組成物を提供する。好ましい脂肪酸は、カプリル、カプリン、ミリスチン及びラウリン酸である。好ましい脂肪酸塩は、カプリル、カプリン、ミリスチン及びラウリン酸のナトリウム塩である。
【０１８７】
好ましい脂肪酸組成物は、単一の脂肪酸又は単一の脂肪酸塩を含み、その他の脂肪酸又は脂肪酸塩を実質的な量を含んでいない。本発明の１つの態様においては、組成物の脂肪酸含有量は、約９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５、９９．６、９９．７、９９．８又は９９．９％ｗ／ｗ超の単一脂肪酸である。もう１つの実施形態においては、組成物の脂肪酸含有量は、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、又は３．０％ｗ／ｗを下限とし約３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１０．１、１０．２、１０．３、１０．４、１０．５、１０．６、１０．７、１０．８、１０．９、１１．０、１１．１、１１．２、１１．３、１１．４、１１．５、１１．６、１１．７、１１．８、１１．９又は１２．０％ｗ／ｗを上限とする範囲内にある。さらにもう１つの実施形態においては、組成物の脂肪酸含有量は、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、又は３．０％ｗ／ｗを下限とし３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１０．１、１０．２、１０．３、１０．４、１０．５、１０．６、１０．７、１０．８、１０．９、１１．０、１１．１、１１．２、１１．３、１１．４、１１．５、１１．６、１１．７、１１．８、１１．９又は１２．０％ｗ／ｗを上限とする範囲内にあり、組成物の脂肪酸含有量は約９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５、９９．６、９９．７、９９．８又は９９．９％ｗ／ｗ超の単一脂肪酸である。
【０１８８】
これらの処方物の活性構成要素は、複合又は未複合、錯化又は未錯化タンパク質及び／又はペプチドを内含し得る。好ましいタンパク質及び／又はペプチドは、本書に記述されているものである。好ましい複合体は、本書で記述されているものである。好ましい錯体は、本書で記述されているものである。好ましい経口組成物は、対象による摂取用に調製された組成物である。理想的には、経口組成物は、胃の中の通過を切り抜ける又は実質的に切り抜けるように、かつ活性成分の送達のため腸内で完全に又は実質的に完全に溶解するように調製される。一部のケースでは、処方は腸溶コーティングを含み、一部のケースでは、処方は特定的に腸溶コーティングを排除することになる。組成物は好ましくは、錠剤、硬カプセル又は軟カプセルとして提供されるが、本書に記述されるその他の形態も適切である。
【０１８９】
本発明の脂肪酸組成物は、脂肪酸アシル化インスリンを含み得る。適切な脂肪酸アシル化インスリンの例は、その開示全体が本発明に参照として援用されている以下の米国特許の中で記述されている；すなわち「血液グルコースを制御するための不溶性組成物」という題の米国特許第６，５３１，４４８号明細書、０３年３月１１日発行；「イプシロンアミノ基の選択的アシル化」という題の再発行米国特許第ＲＥ３７，９７１号明細書、０３年１月２８日発行；「不溶性インスリン組成物」という題の米国特許第６，４６５，４２６号明細書、０２年１０月１５日発行；「脂肪酸アシル化インスリン類似体」という題の米国特許第６，４４４，６４１号明細書、０２年９月３日発行；「アシル化インスリンの投与方法」という題の米国特許第６，３３５，３１６号明細書、０２年１月１日発行；「不溶性インスリン組成物」という題の米国特許第６，２６８，３３５号明細書、０１年１月３１日発行；「アシル化インスリンの投与方法」という題の米国特許第６，０５１，５５１号明細書、００年４月１８日発行；「アシル化インスリン類似体」という題の米国特許第５，９２２，６７５号明細書、９９年７月１３日発行；「アシル化タンパク質粉末の調製」という題の米国特許第５，７００，９０４号明細書、９７年１２月２３日発行；「アシル化インスリン類似体、付与された」という題の米国特許第５，６９３，６０９号明細書、９７年１２月２日発行；「イプシロンアミノ基の選択的アシル化」という題の米国特許第５，６４６，２４２明細書、９７年７月８日発行；「脂肪酸アシル化タンパク質のゲル化低減」という題の米国特許第５，６３１，３４７号明細書、９７年５月２０日発行；「ペプチドのアシル化方法及び新規のアシル化剤」という題の米国特許第６，４５１，９７４号明細書、０２年９月１７日発行；「アシル化インスリン」という題の米国特許第６，０１１，００７号明細書、００年１月４日発行；９８年５月１２日に付与された「アシル化インスリン」という題の米国特許第５，７５０，４９７号明細書；「選択的アシル化方法」という題の米国特許第５，９０５，１４０号明細書、１９９９年５月１８日発行；「インスリン誘導体」という題の米国特許第６，６２０，７８０号明細書、２００３年９月１６日発行；「インスリン誘導体」という題の米国特許第６，２５１，８５６号明細書、２００１年１月２６日発行；「肺送達のための安定な濃縮インスリン調製物」という題の米国特許第６，２１１，１４４号明細書、２００１年４月３日発行；「肺インスリン結晶」という題の米国特許第６，３１０，０３８号明細書、２００１年１０月３０日発行；及び「安定化されたインスリン組成物」という題の米国特許第６，１７４，８５６号明細書、２００１年１月１６日発行。特に好ましいのはヒトインスリンのＬｙｓ（Ｂ２９）に共有結合した１２、１３、１４、１５又は１６炭素脂肪酸を有するモノ脂肪酸アシル化インスリンである。
【０１９０】
経口投与に適した薬学組成物は、各々、粉末又は顆粒として；水性、又は非水性液体中の溶液又は懸濁液として；又は水中油又は油中水型エマルジョンとして、インスリン化合物複合体の混合物を予め定められた量だけ含有しているカプセル、カシェ剤、口中錠又は錠剤といったような個別単位の形で提示され得る。かかる処方物は、インスリン化合物複合体の混合物と適切な担体（上述の通りの１つ以上の副成分を含有し得るもの）を会合させるステップを含む任意の適切な薬学的方法によって調製可能である。処方物は、固体の懸濁液、錯化されたカチオン−インスリン化合物複合体、未錯化活性成分（例えば未変性インスリン化合物、インスリン化合物複合体）及びそれらの混合物を含み得る。
【０１９１】
一般に、本発明の薬学組成物は、液体又は固体担体又はその両方と錯体を均質かつ密に混和させ次に必要とあらば結果として得られた混合物を整形するステップにより調製される。例えば、任意には、１つ以上の副成分と共にインスリン化合物複合体の混合物を含有する粉末又は顆粒を圧縮又は成形することにより錠剤を調製することができる。適切な機械の中で、任意には結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤及び／又は表面活性剤／分散剤と混合した粉末又は顆粒といったような自由に流動する形の混合物を適切な機械の中で圧縮することにより、圧縮錠剤を調製することが可能である。不活性液体結合剤で加湿した粉末化組成物を適切な機械の中で成形することにより、湿式錠剤を作ることができる。
【０１９２】
口腔（舌下）投与に適した薬学組成物には、通常スクロース及びアカシア又はトラガカントである着香された基剤内にインスリン化合物複合体の混合物を含む口中錠；及びゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシアといったような活性基剤中のインスリン化合物複合体の混合物を含むトローチが含まれる。適切な処方物の例は、米国特許出願公開第２００３０２２９０２２号明細書（「薬学処方物」）；同第２００３０２３６１９２号明細書（「持続放出型組成物の放出プロファイルの修正方法」）；同第２００３００９６０１１号明細書（「不安定な作用物質のサブミクロン粒子の生成方法及びその使用」）；同第２００２００３７３０９号明細書（「重合体系持続放出型組成物の調製プロセス」）；同第２００３０１１８６６０号明細書（「残留溶媒抽出方法及びそれにより生成される微小粒子）；並びに米国特許第６，１８０，１４１号明細書（「活性主成分担体としての複合ゲル微小粒子」）；同第６，７３７，０４５号明細書（「肺送達インスリン化合物のための方法及び組成物」）；同第６，７３０，３３４号明細書（「薬物送達ビヒクルとしての多腕ブロック共重合体」）；同第６，６８５，９６７号（「インスリン化合物の肺送達のための方法及び組成物」）；同第６，６３０，１６９号明細書（「微粒子送達システム及び使用方法」）；同第６，５８９，５６０号明細書（「安定なガラス状態粉末処方物；同第６，５９２，９０４号明細書（「分散性巨大分子組成物及びその調製及び使用方法」）；同第６，５８２，７２８号明細書（「吸入可能な乾燥粉末を生成するための巨大分子の噴霧乾燥」）；同第６，５６５，８８５号明細書（「薬学組成物スプレー乾燥方法」）；同第６，５４６，９２９号明細書（「乾燥粉末分散器具及びその使用方法」）；同第６，５４３，４４８号明細書（「乾燥粉末医薬品を分散させるための器具及び方法」）；同第６，５１８，２３９号明細書（「改良された分散性を有する乾燥粉末組成物」）；同第６，５１４，４９６号明細書（「分散性抗体組成物及びその調製並びに使用方法」）；同第６，５０９，００６号明細書（「エアゾル化された医薬品の肺送達のための装置、組成物及び方法」）；同第６，４３３，０４０号明細書（「安定化された生物活性調製物及び使用方法」）；同第６，４２３，３４４号明細書（「分散性巨大分子組成物及びその調製及び使用方法」）；同第６，３７２，２５８号明細書（「薬物及び疎水性アミノ酸のスプレー乾燥方法」）；同第６，３０９，６７１号明細書（「安定なガラス状態粉末処方物」）；同第６，３０９，６２３号明細書（「用量計測式吸入器で使用するための安定化された調製物」）；同第６，２９４，２０４号明細書（「形態学的に均一なマイクロカプセルを生成する方法及び当該方法によって生成されたマイクロカプセル」）；同第６，２６７，１５５号明細書（「粉末充填システム、器具及び方法」）；同第６，２５８，３４１号明細書（「安定なガラス状態粉末処方物」）；同第６，１８２，７１２号明細書（「動力充填器具及びその使用方法」）；同第６，１６５，４６３号明細書（「分散性抗体組成物及びその調製及び使用方法」）；同第６，１３８，６６８号明細書（「エアゾル化された医薬品を送達するための方法及び装置」）；同第６，１０３，２７０号明細書（「分散性微細粒子を処理するための方法及びシステム」）；同第６，０８９，２２８号明細書（「乾燥粉末医薬品を分散させるための器具及び方法」）；同第６，０８０，７２１号明細書（「副甲状腺ホルモンの活性フラグメントの肺送達」）；同第６，０５１，２５６号明細書（「分散性巨大分子組成物及びその調製及び使用方法」）；同第６，０１９，９６８号明細書（「分散性抗体組成物及びその調製及び使用方法」）；同第５，９９７，８４８号明細書（「インスリン化合物の肺送達のための方法及び組成物」）；同第５，９９３，７８３号明細書（「乾燥粉末アルファ１-抗トリプシンの肺投与のための方法及び器具」）；同第５，９２２，３５４号明細書（「分散性微細粉末を加工するための方法及びシステム」）；同第５，８２６，６３３号明細書（「粉末充填システム、器具及び方法」）；同第５，８１４，６０７号明細書（「副甲状腺ホルモンの活性フラグメントの肺送達」）；同第５，７８５，０４９号明細書（「乾燥粉末医薬品の分散のための方法及び器具」）；同第５，７８０，０１４号明細書（「乾燥粉末アルファ１抗トリプシンの肺投与のための方法及び器具」）；同第５，７７５，３２０号明細書（「エアゾル化された医薬品を送達するための方法及び装置」）；同第５，７４０，７９４号明細書（「乾燥粉末医薬品の分散のための器具及び方法」）；同第５，６５４，００７号明細書（「分散性微細粉末を加工するための方法及びシステム」）；同第５，６０７，９１５号明細書（「副甲状腺ホルモンの活性フラグメントの肺送達」）；同第５，４５８，１３５号明細書（「エアゾル化された医薬品を送達するための方法及び装置」）；同第６，６０２，９５２号明細書（「キトサン及びポリ（エチレングリコール）又は関連重合体から誘導されたヒドロゲル」）；及び同第５，９３２，４６２号明細書（「分子及び表面にカップリングするための多腕、単官能性重合体」）の中に見出すことができる。さらに、適切な持続放出処方物は、その開示全体が本発明に参照として援用されている、９９年１０月１９日に発行された「持続放出型薬学調製物」という題の、カーディナル・ヘルス（Ｃａｒｄｉｎａｌ  Ｈｅａｌｔｈ）の米国特許第５，９６８，５５４号明細書中に記述されている。適切な微小粒子処方物は、０３年１０月３０日に公開された「微小粒子の形成及び単離に有用な方法及び製品」という題の、スフェリック社（Ｓｐｈｅｒｉｃｓ、Ｉｎｃ）の国際特許出願公開第２００３-０４９，７０１号パンフレット中に記述されている。適切な生物接着性処方物は、０４年５月６日に公開された「強化された胃内保持を伴う生物接着性薬物送達システム」という題の、スフェリック社の国際特許出願公開第２００３-０５１，３０４号パンフレット中に記述されている。
【０１９３】
非経口投与に適した本発明の実施形態に従った薬学組成物は、錯体の無菌水性及び非水性注射溶液を含み、かかる調製物は、好ましくは、意図されたレシピエントの血液と等張である。これらの調製物は、該組成物を意図されたレシピエントの血液と等張にする溶質、酸化防止剤、緩衝液及び静菌剤を含有し得る。水性及び非水性無菌懸濁液は、懸濁剤及び増粘剤を含み得る。組成物は、例えば密封されたアンプル及びバイアルびんといった一回服用量又は多数回服用量容器に入った体裁をとり、使用直前に例えば生理食塩水又は注射用蒸留水といった無菌液体担体を添加するだけでよいフリーズドライ（凍結乾燥）条件で保管され得る。前述した種類の無菌粉末、顆粒及び錠剤から即席注射容器及び懸濁液を調製することができる。例えば、密封された容器内の単位剤形の形での錯体混合物を伴う注射可能な安定した無菌組成物を提供することができる。錯体混合物は、対象の体内への注射のために適した液体組成物を形成するべく適切な薬学的に許容可能な担体で戻すことのできる凍結乾燥物の形で提供可能である。非経口単位剤形は標準的に約１マイクログラム〜約１０ｍｇの錯体混合物を含む。錯体が実質的に不水溶性である場合、生理学的に許容可能なものである充分な量の乳化剤を、水性担体内で錯体を乳化させるのに充分な量で利用することができる。このような１つの有用な乳化剤が、ホスファチジルコリンである。
【０１９４】
経口投与のための固体剤形には標準的に約２ｍｇ〜約５００ｍｇ、好ましくは約１０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、理想的には約２０ｍｇ〜約１１０ｍｇの錯体が含まれている。
【０１９５】
直腸投与に適した薬学組成物は、好ましくは一回服用量座薬としての体裁をとる。これらは、例えばカカオバターといった１つ以上の従来の固体担体と錯体を混和すること、そして次に結果としての混合物を整形することによって調製可能である。
【０１９６】
皮膚に対する局所施用に適した薬学組成物は、軟こう、クリーム、ローション、ペースト、ジェル、スプレー、エアゾル又はオイルの形をとる。使用可能な担体としては、ワセリン、ラノリン、ＰＥＧ、アルコール、経皮浸透増強剤、及びそれらの２つ以上の組合せが含まれる。
【０１９７】
経皮投与に適した薬学組成物は、長時間にわたりレシピエントの表皮と密に接触した状態にとどまるように適合された個別パッチとしての体裁をとり得る。経皮投与に適した組成物は同様にイオン導入（例えばＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３（６）：  ３１８（１９８６年）参照）により送達することもでき、標準的にインスリン化合物複合体の混合物の任意に緩衝させた水溶液の形をとることもできる。適切な処方物は、クエン酸塩又はビス／トリス緩衝液（ｐＨ６）又はエタノール／水を含み、０．１〜０．２Ｍの活性成分を含有する。
【０１９８】
好ましい実施形態においては、錯体は、その開示全体が本発明に参照として援用される、オパウェール（Ｏｐａｗａｌｅ）らにより０３年８月１３日に出願された米国仮特許出願第６０／４９４，８２１号明細書に記述されている通りの固体脂肪酸処方物の構成要素として投与される。
【０１９９】
ある実施形態においては、インスリン化合物複合体は、固体を形成するのに必要とされるカチオン及び／又はその他の構成要素とは別に提供可能である。例えば、インスリン化合物複合体は乾燥した固体として提供し、カチオン、安定化剤、防腐剤及び／又はその他の構成要素を含む緩衝溶液を別に提供し、かくしてユーザーがカチオン−インスリン化合物複合体錯体を生成すべく別々の構成要素を組合せることができるようにすることが可能である。
【０２００】
７．１２  治療方法
カチオン−インスリン化合物複合体組成物及びその処方物は、（外来源からのインスリン化合物の投与が無い状態で対象が提供する量と比べて）循環するインスリン化合物の量を増大させることで所望の治療的又は生理学的効果が生み出される身体条件の治療において有用である。例えば、治療対象身体条件はＩ型又はＩＩ型糖尿病、前糖尿病及び／又は代謝症候群であり得る。１つの実施形態においては、組成物は糖尿病の症候を軽減させるために投与される。もう１つの実施形態においては、組成物は、糖尿病の発症を防止又は遅延させるために前糖尿病の対象に対して投与される。
【０２０１】
本発明の方法による投与のためのカチオン−インスリン化合物複合体組成物の有効量は、混合物によって及び対象によって幾分か変動することになり、対象の年令及び身体条件、送達経路及び治療される身体条件といった要因により左右されることとなる。かかる投薬量は当業者にとって既知の日常的な薬理学的手順に従って決定され得る。
【０２０２】
一般的提案として、全ての重量がインスリン化合物複合体混合物の重量に基づいて計算されているものとして、約０．０２５〜約１０ｍｇ／ｋｇの活性成分（すなわち複合体）の経口投薬量が治療的効力を有することになる。より好ましい範囲は約０．０６〜約１ｍｇ／ｋｇであり、さらに一層好ましい範囲は約０．１２５〜約０．５ｍｇ／ｋｇである。
【０２０３】
非経口投薬量は標準的に約０．５μｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇの範囲であり、ここで全ての重量はインスリン化合物複合体混合物の重量に基づいて計算されている。より好ましい範囲は約１μｇ／ｋｇ〜約１００μｇ／ｋｇである。
【０２０４】
投与の頻度は、通常一日１回、２回又は３回又は該身体条件を制御するのに必要なだけの回数である。代替的には、カチオン−インスリン化合物複合体組成物を連続輸液により投与することができる。治療持続時間は、治療されているインスリン化合物欠乏症のタイプによって異なり、対象の寿命の続く限りであり得る。錯体は例えば食前０〜３０分以内に投与され得る。例えば錯体は就寝前０〜２時間以内に投与され得る。
【０２０５】
８．  合成実施例
以下の実施例は、本発明を例示し、かつ説明する目的で提示されている。
【０２０６】
８．１  保護されたＭＰＥＧ６Ｃ３オリゴマ（３−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル）の合成
【化２８】
2014043470.tif 000030
乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中でメチルヘキサエチレングリコール（１．０ｇ、３．３７ｍｍｏｌ）及びアクリル酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．２１６ｇ、１．６９ｍｍｏｌ）を溶解させた。溶液に対しナトリウム金属（０．４ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）を添加した。室温で４時間攪拌した後、反応混合物を１ＭのＨＣｌ（１５ｍＬ）の添加により急冷した。急冷した反応混合物を次にＣＨ２Ｃｌ２（１×５０ｍＬ、１×２５ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（溶離剤は酢酸エチル）での精製の後、油として生成物を得た（０．８３２ｇ、５８％）。
【０２０７】
８．２  ＭＰＥＧ６Ｃ３オリゴマ酸（３−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオン酸）の合成
【化２９】
2014043470.tif 000031
ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．１６５ｇ、０．０３８９ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（２．０ｍＬ）中で、室温で攪拌することによって脱保護させた。次に一定重量（０．１２５ｇ、８７％）になるまで含有量を濃縮させた。
【０２０８】
８．３  ＭＰＥＧ６Ｃ３オリゴマ（３−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロピオン酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステル）の合成
【化３０】
2014043470.tif 000032
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中で酸（０．６６０ｇ、１．７９ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシニミド（０．２２７８ｇ、１．９７ｍｍｏｌ）を溶解させた。エチルジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ、０．３４３ｇ、１．７９ｍｍｏｌ）を添加した。一晩室温で攪拌した後、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、水（２×４５ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、一定の重量まで濃縮した。生成物は油であった（０．４４１ｇ、５３％）。
【０２０９】
８．４  保護されたＭＰＥＧ４Ｃ３オリゴマ（３−（２−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル）の合成
【化３１】
2014043470.tif 000033
乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中でメチルテトラエチレングリコール（１．０ｇ、４．８０ｍｍｏｌ）及びアクリル酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．３０８ｇ、２．４０ｍｍｏｌ）を溶解させた。溶液に対しナトリウム金属（０．６ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を添加した。室温で４時間攪拌した後、反応混合物を１ＭのＨＣｌ（１５ｍＬ）の添加により急冷した。急冷した反応混合物を次にＣＨ２Ｃｌ２（１×５０ｍＬ、１×２５ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（溶離剤は酢酸エチル）での精製の後、油として生成物を得た（１．２８ｇ、７９％）。
【０２１０】
８．５  ＭＰＥＧ６Ｃ３オリゴマー酸（３−（２−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸）の合成
【化３２】
2014043470.tif 000034
ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１ｇ、３．４２ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（６．０ｍＬ）中で室温で攪拌することによって脱保護させた。次に一定重量（０．８７ｇ、９１％）になるまで含有量を濃縮させた。
【０２１１】
８．６  ＭＰＥＧ４Ｃ３オリゴマ（３−（２−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオン酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステル）の合成
【化３３】
2014043470.tif 000035
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中で酸（０．６ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシニミド（０．２７１ｇ、２．３５ｍｍｏｌ）を溶解させた。エチルジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ、０．４０９ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）を添加した。一晩室温で攪拌した後、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、水（２×４５ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、一定の重量まで濃縮した。生成物は油であった（０．５６３ｇ、６９％）。
【０２１２】
８．７  保護されたＭＰＥＧ４Ｃ３オリゴマ（３−（２−メトキシ−エトキシ）−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル）の合成
【化３４】
2014043470.tif 000036
乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）中でメチルテトラエチレングリコール（５．０ｇ、４１．６ｍｍｏｌ）及びアクリル酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．６６ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）を溶解させた。溶液に対しナトリウム金属（０．４７ｍｇ、２０．８ｍｍｏｌ）を添加した。室温で４時間攪拌した後、反応混合物を１ＭのＨＣｌ（３０ｍＬ）の添加により急冷した。急冷した反応混合物を次にＣＨ２Ｃｌ２（１×１００ｍＬ、１×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィ（溶離剤は酢酸エチル）での精製の後、油として生成物を得た（７．５ｇ、８９％）。
【０２１３】
８．８  ＭＰＥＧ６Ｃ３オリゴマ酸（３−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−プロピオン酸）の合成
【化３５】
2014043470.tif 000037
ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１ｇ、４．９０ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（６．０ｍＬ）中で、室温で攪拌することによって脱保護させた。次に一定重量（０．６５２ｇ、８９％）になるまで含有量を濃縮させた。
【０２１４】
８．９  ２−［２−（２−プロポキシ−エトキシ）−エトキシ］−エタノール（１）の合成
【化３６】
2014043470.tif 000038
トリエチレングリコール（１９．５ｇ、０．１３ｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１５０ｍＬ）中で溶解させ、水素化ナトリウム（２．６０ｇ、０．０６５ｍｏｌ）を０．５時間にわたり分量添加し、反応をさらに１時間攪拌した。その後、テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中に溶解させた１−ブロモプロパノール（８．０ｇ、０．０６５ｍｏｌ）を添加用漏斗を介した滴下により添加し、反応を室温で一晩攪拌した。粗反応混合物をセライトを通してろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、蒸発乾固させた。結果としての油をＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍＬ）中で溶解させ、飽和ＮａＣｌ（２５０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させた。カラムクロマトグラフィ（シリカ、酢酸エチル）により、黄色がかった油である１を得た（２．２４ｇ、１８％収量）。
【０２１５】
８．１０  炭酸４−ニトロ−フェニルエステル２−［２−（２−プロポキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステルの合成
【化３７】
2014043470.tif 000039
ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中に４−ニトロクロロホルマート（３．４５ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）及び１（２．２ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）を溶解させた。１０分間攪拌した後、ＴＥＡ（２．１ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）を添加し反応を室温で一晩攪拌した。粗反応を、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、１ＭのＨＣｌ（５０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させた。カラムクロマトグラフィ（シリカ、酢酸エチル／ヘキサン、３：２）により、黄色がかった油である２を得た（２．５７ｇ、６３％収量）。
【０２１６】
８．１１  炭酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステル２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エチルエステルの合成
【化３８】
2014043470.tif 000040
トリエチレングリコールモノメチルエーテル（１．０ｇ、６．１ｍｍｏｌ）及びＮ、Ｎ’−ジスクシニミジルカルボナート（１．８７ｇ、７．３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１０ｍＬ）中に溶解させた。次にトリエチルアミン（１．３ｍＬ、９．１５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で反応を一晩攪拌した。粗反応を蒸発乾固させ、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）中に溶解させ、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させた。カラムクロマトグラフィ（シリカ、酢酸エチル）により、透明油である１を得た（０．３６７ｇ、２０％収量）。
【０２１７】
８．１２  炭酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステル２−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチルエステル（１）の合成
【化３９】
2014043470.tif 000041
トリエチレングリコールモノメチルエーテル（１．０ｇ、４．８ｍｍｏｌ）及びＮ、Ｎ’−ジスクシニミジルカルボナート（１．４８ｇ、５．８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１０ｍＬ）中に溶解させた。次にトリエチルアミン（１．０ｍＬ、７．２ｍｍｏｌ）を添加し、室温で反応を一晩攪拌した。粗反応を蒸発乾固させ、飽和ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）中に溶解させ、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させた。カラムクロマトグラフィ（シリカ、酢酸エチル／ＭｅＯＨ、２０：１）により、透明油である１を得た（０．４６２ｇ、２８％収量）。
【０２１８】
８．１３  ブト−３−エン酸エチルエステルの合成
【化４０】
2014043470.tif 000042
ビニル酢酸（１０．０ｇ、０．１２ｍｏｌ）をエタノール（２００ｍＬ）中に溶解させ、濃硫酸（０．７５ｍＬ、０．０１４ｍｏｌ）を添加した。反応を４時間加熱還流した。粗反応を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させ、透明な油である１を得た（３．１７ｇ、２３％）。
【０２１９】
８．１４  ４−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−酪酸エチルエステルの合成
【化４１】
2014043470.tif 000043
トリエチレングリコールモノメチルエーテル（４．２７ｇ、０．０２６ｍｏｌ）及びブト−３−エン酸エステル（１．５ｇ、０．０１３ｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中で溶解させた。次に塊のＮａ°（０．０３０ｇ、０．０１３ｍｏｌ）を添加し、反応を４時間攪拌した。粗反応を１ＭのＨＣｌ（２０ｍＬ）で急冷し、酢酸エチルで洗浄した（３×２０ｍＬ）。有機層を組合せ、Ｈ２Ｏ（２×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させて黄色がかった油として２を得た（１．０７ｇ、３０％収量）。
【０２２０】
８．１５  ４−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−酪酸の合成
【化４２】
2014043470.tif 000044
４−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］エトキシ｝−酪酸エチルエステル（１．０７ｇ、４．０ｍｍｏｌ）を１ＭのＭａＯＨ（１０ｍＬ）中に溶解させ、反応を２時間攪拌した。粗反応をインスリン化合物複合体（４０ｍＬ）で希釈し、濃ＨＣｌで最高ｐＨ２まで酸性化させ、ＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させて透明な油である３を得た（０．９４５ｇ、９４％収量）。
【０２２１】
８．１６  ４−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−酪酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステルの合成
【化４３】
2014043470.tif 000045
Ｎ−ヒドロキシスクシニミド（０．５５ｇ、４．８ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ（１．１５ｇ、６．０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）中に溶解させた。次に、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中に溶解させた４−｛２−［２−（２−メトキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−酪酸（０．９４０ｇ、３．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応を室温で一晩攪拌した。粗反応をＣＨ２Ｃｌ２（２１ｍＬ）で希釈し、１ＭのＨＣｌ（３０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させた。カラムクロマトグラフィ（シリカ、酢酸エチル）により、透明油である４を得た（０．５５６ｇ、４３％収量）。
【０２２２】
９  錯体の調製
インスリン化合物複合体の亜鉛錯体の調製のための方法が調査された。インスリン化合物及びインスリン化合物類似体の錯化／結晶化に使用される公表済みの方法にとって例外的なものである新しい方法が、ＨＩＭ２の亜鉛錯体を作るために開発された。ＨＩＭ２は、
【化４４】
2014043470.tif 000046
.
という構造を有しＢ２９にカップリングされた修飾部分を伴うヒトインスリンモノ複合体である。
【化４５】
2014043470.tif 000047
.
という構造を有しＢ２９にカップリングされた修飾部分を伴うヒトインスリンモノ複合体であるＩＮ１０５を用いて、さらなる錯体が調製された。
【０２２３】
該方法は、インスリン化合物複合体固体の「Ｔ型」及び「Ｒ型」そして「プロタミン」カチオン錯体という３つの主要なタイプを提供した。
【０２２４】
９．１  Ｔ型固体の調製と分析
９．１．１  ＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体（２ｇ／Ｌ）の調製試行
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨを有する、約２ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。以上の溶液の１０ｍＬのアリコート（２０ｍｇのタンパク質）に対し、０．２５Ｍという最終濃度に至るまで氷酢酸を添加した。２％ｗ／ｗのＺｎＣｌ２溶液２０（又は４０）μＬを試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを５．１（又は５．５）に調整した。室温（又は＋５℃）で１５分間溶液を攪拌し、その後一日室温（又は＋５℃）に放置して固体を形成させた。反応を室温（又は＋５℃）に一日放置させた後、結晶又は沈殿は全く形成しなかった。「安定な亜鉛インスリン化合物類似体結晶の調製」という題の米国特許第５，５０４，１８８号明細書の実施例２を参照のこと。
【０２２５】
９．１．２  ＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体（濃度１０ｇ／Ｌ）
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨを有する約１０ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。以上の溶液の１０ｍＬ（１００ｍｇのタンパク質）アリコートに対し、０．２５Ｍという最終濃度に至るまで氷酢酸を添加した。１０％ｗ／ｗのＺｎＣｌ２溶液４０μＬを試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを５．２０に調整した。＋５℃で１５分間溶液を攪拌し、その後５日間＋５℃に放置して固体を形成させた。
【０２２６】
反応混合物を遠心分離管に移し、１０分間２０００ＲＰＭで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を５ｍＬの低温ＤＩ（脱イオン）水で洗浄した。この溶液を１０分間２０００ＲＰＭで遠心分離してから水を傾瀉し、さらなる５ｍＬの低温ＤＩ水で固体を洗浄した。ここでも又、試料を約２０００ＲＰＭで約１０分間遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉した。試料を５ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、１０分間２０００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。試料を凍結乾燥機の中で乾燥させて白色固体を得た。
【０２２７】
９．１．３  ＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体（濃度２０ｇ／Ｌ）
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨを有する約２０ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。以上の溶液の１０ｍＬ（２００ｍｇのタンパク質）アリコートに対し、０．２５Ｍという最終濃度に至るまで氷酢酸を添加した。１０％ｗ／ｗのＺｎＣｌ２溶液８０μＬを試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを５．３７に調整した。＋５℃で１５分間溶液を攪拌し、その後４日間＋５℃に放置して固体を形成させた。
【０２２８】
反応混合物を遠心分離管に移し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を５ｍＬの低温ＤＩ（脱イオン）水で洗浄した。この溶液を２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してから水を傾瀉し、さらなる５ｍＬの低温ＤＩ水で固体を洗浄した。ここでも又、試料を約２６００ＲＰＭで約２０分間遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉した。試料を５ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。試料を凍結乾燥機の中で乾燥させて白色固体を得た。
【０２２９】
９．１．４  ＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体（濃度３０ｇ／Ｌ）
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨを有する約３０ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。以上の溶液の５０ｍＬ（１．５ｇのタンパク質）アリコートに対し、０．２５Ｍという最終濃度に至るまで氷酢酸を添加した。１０％ｗ／ｗのＺｎＣｌ２溶液６００μＬを試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを５．３４に調整した。溶液を５日間＋５℃に放置して固体を形成させた。
【０２３０】
反応混合物を遠心分離管に移し、１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を１０ｍＬの低温ＤＩ（脱イオン）水で洗浄し、各洗浄毎に遠心分離し、水を傾瀉した。次に、試料を１０ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで３回洗浄した。それを１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離し、各洗浄後に傾瀉した。試料を凍結乾燥機の中で乾燥させて白色固体を得た。
【０２３１】
図１及び２は、２４時間成長させた結晶を示すＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ顕微鏡を用いて撮影した顕微鏡写真である。図１では、結晶サイズは長さが約１１．３μＭであり、直径約５．３μＭである。図２では、左側の結晶のサイズは、長さが約１５．１μＭであり、直径約５．９μＭであり、右側の結晶のサイズは長さ約９．１μＭであり、直径約５．３μＭである。図３は、５日間成長させた結晶を示すＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ顕微鏡を用いて撮影した顕微鏡写真である。１つの態様では、本発明は、図１、２又は３に示されている形態を有する結晶を含んでいる。
【０２３２】
９．１．５  ＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体（濃度５０ｇ／Ｌ）
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるように約５０ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。以上の溶液の１０ｍＬアリコートに対し、０．２５Ｍという最終濃度に至るまで氷酢酸を添加した。１０％ＺｎＣｌ２溶液２００μＬを試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを５．２３に調整した。＋５℃で１５分間溶液を攪拌し、４日間＋５℃に放置して固体形成を発生させた。
【０２３３】
反応混合物を遠心分離管に移し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を５ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。この溶液を２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉し、さらなる５ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで固体を洗浄した。ここでも又、試料を約２６００ＲＰＭで約２０分間遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉した。試料を５ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。試料を凍結乾燥機の中で３日間乾燥させた。
【０２３４】
９．１．６  ＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体（１ｇスケール）
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるまで約１０ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。以上の溶液の５０ｍＬ（５００ｍｇのタンパク質）アリコートに対し、０．２５Ｍという最終濃度に至るまで氷酢酸を添加した。１０％のＺｎＣｌ２溶液２００μＬを試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを５．４９に調整した。＋５℃で１５分間溶液を攪拌し、その後７日間＋５℃に放置して固体形成を発生させた。
【０２３５】
反応混合物を遠心分離管に移し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を１０ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。この溶液を２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉した。さらに２回水洗浄を繰り返した。次に、試料を１０ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。さらに２回ＥｔＯＨでの洗浄を同じ要領で実施してから、試料を凍結乾燥機上に置いて４日間乾燥させた。
【０２３６】
９．１．７  中性ｐＨでのＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体（５ｇスケール）
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるまで約１０ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。試料に２ミリリットルの１０％ＺｎＣｌ２溶液を添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを７．０５に調整した。溶液を一晩室温で攪拌して固体形成を発生させた。
【０２３７】
３５０ｍＬ入りの微細フリット（４．５〜５μｍ）ディスク型漏斗（Ｃｈｅｍ  Ｇｌａｓｓ  ＣＧｌ４０２−２８、直径９０ｍｍ）に対し、複数の部分に分けて乳状のＺｎ−ＨＩＭ２反応混合物（５００ｍＬ）を添加した。約４〜６時間真空を適用しながら、枝付きフラスコ内にろ液を収集した。１つの選択肢として、ろ塊を１００ｍＬの低温１％ＺｎＣｌ２で洗浄し、別々にろ液を収集することができる。ろ塊を１００ｍＬの氷冷水で洗浄し、ろ液を再度収集した。ろ過を同様にさらに１００ｍＬの氷冷１００％エタノールで洗浄し、ろ液を再度収集した。ろ塊の最終洗浄液は１００ｍＬの新鮮氷冷水であり、最終ろ液を収集した。ろ塊を真空下で乾燥させかつ／又は１２〜１８時間空気乾燥させた。乾燥の後、ろ塊を漏斗からこそげ取り、秤量し、ＨＰＬＣを介して氷分／タンパク質含有量を測定した。さまざまな洗浄ステップから収集されたろ液を同様に、プロセス中の喪失Ｚｎ−ＨＩＭ２の濃度を判定する目的でＨＰＬＣを用いて分析した。ろ過により２．５％ｗ／ｗのＺｎ含有量が生み出され、全体的収量は９８％であった。
【０２３８】
９．１．８  中性ｐＨでのＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体（５００ｍｇスケール）
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるまで約１０ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。試料に２００μＬの１０％ＺｎＣｌ２溶液を添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを７．０６に調整した。溶液を１５分間＋５で、その後２日間＋５℃に放置して固体形成を発生させた。
【０２３９】
反応混合物を遠心分離管に移し、１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を１０ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。この溶液を１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉した。さらに２回水洗浄を繰り返した。その後、試料を１０ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。さらに２回のＥｔＯＨ洗浄を同じ要領で行なってから、凍結乾燥機上に試料を置いて２日間乾燥させた。
【０２４０】
【表１】
2014043470.tif 000048
【０２４１】
９．２  Ｒ型固体の調製及び分析
９．２．１  ２ｇ／Ｌのフェノールを用いたＨＩＭ２のＲ型Ｚｎ錯体
氷酢酸を用いて最高３の最終ｐＨとなるまで約２ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。上述の溶液の１０ｍＬアリコートに対して３３マイクロリットルの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを５．８９に調整した。１６０μＬの１０％ｗ／ｗのＺｎＣｌ２溶液を試料に添加した。１５分間室温で溶液を攪拌し、次に室温に３日間放置してさらに多くの沈殿物を形成させた。
【０２４２】
反応混合物を遠心分離管に移し、１５分間３４００ＲＰＭで遠心分離させた。上清を傾瀉し、固体を５ｍＬの低温ＤＩ水で洗浄した。この溶液を１５分間３２００ＲＰＭで遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉した。次に、試料を５ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、１５分間３２００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。再び試料を５ｍＬの低温ＥｔＯＨで洗浄したが、遠心分離はしなかった。固体を管の底面に沈降させ、次にこれを高速真空内に入れて乾燥させた。
【０２４３】
９．２．２  ２０ｇ／ＬでのＨＩＭ２のＲ型Ｚｎ錯体の調製
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるまで約２０ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。上述の溶液の１０ｍＬアリコートに対して６６マイクロリットルの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを６．４３に調整した。３２０μＬの１０％ｗ／ｗのＺｎＣｌ２溶液を試料に添加した。１５分間室温で溶液を攪拌し、次に室温に４日間放置してさらに多くの沈殿物を形成させた。
【０２４４】
反応混合物を遠心分離管に移し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を５ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。この溶液を２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉し、固体をさらに５ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。ここでも又、試料を２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してから、Ｈ２Ｏを傾瀉した。試料を５ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。試料を３日間凍結乾燥させた。
【０２４５】
９．２．３  ３０ｇ／ＬでのＨＩＭ２のＲ型Ｚｎ錯体の調製
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるまで約３０ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。上述の溶液の１０ｍＬアリコートに対して９９マイクロリットルの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを６．４７に調整した。次に４８０μＬの１０％ｗ／ｗのＺｎＣｌ２溶液を試料に添加した。１５分間室温で溶液を攪拌し、次に室温に４日間放置してさらに多くの沈殿物を形成させた。
【０２４６】
反応混合物を遠心分離管に移し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を５ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。この溶液を２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉し、固体をさらに５ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。ここでも又、試料を２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してから、Ｈ２Ｏを傾瀉した。試料を５ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。試料を３日間凍結乾燥させた。
【０２４７】
図４は、４日間成長させた固体を示す。写真はＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ顕微鏡を用いて撮影したものである。結晶の平均長は約９．７μＭである。
【０２４８】
９．２．４  ５０ｇ／ＬでのＨＩＭ２のＲ型Ｚｎ錯体の調製
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるまで約５０ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。上述の溶液の１０ｍＬアリコートに対して１６５マイクロリットルの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを６．８２に調整した。８００μＬの１０％のＺｎＣｌ２溶液を試料に添加した。１５分間室温で溶液を攪拌し、次に室温に４日間放置してさらに多くの沈殿物を形成させた。
【０２４９】
反応混合物を遠心分離管に移し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を５ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。この溶液を２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉し、固体をさらに５ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。ここでも又、試料を２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してから、Ｈ２Ｏを傾瀉した。試料を５ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。試料を３日間凍結乾燥させた。
【０２５０】
９．２．５  １ｇスケールでのＨＩＭ２のＲ型Ｚｎ錯体の調製
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるまで約１０ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。上述の溶液の５０ｍＬアリコートに対して１６５マイクロリットルの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを６．４２に調整した。８００μＬの１０％のＺｎＣｌ２溶液を試料に添加した。１５分間室温で溶液を攪拌し、次に室温に７日間放置してさらに多くの沈殿物を形成させた。
【０２５１】
反応混合物を遠心分離管に移し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を１０ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。この溶液を２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉した。さらに２回の水洗浄を同じ要領で行った。試料を１０ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。さらに２回のＥｔＯＨ洗浄を同じ要領で実施してから試料を凍結乾燥機上に４日間置いた。
【０２５２】
９．２．６  ５ｇスケールでのＨＩＭ２のＲ型Ｚｎ錯体
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるまで約１０ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。上述の溶液４５０ｍＬに対して５００マイクロリットルの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを７．１に調整した。８００μＬの１０％のＺｎＣｌ２溶液を試料に添加した。１５分間室温で溶液を攪拌し、次に室温に一晩放置してさらに多くの沈殿物を形成させた。
【０２５３】
以上で実施した反応を３回のろ過試行に分割した。試行１では、反応混合物を、微細フリット漏斗を通してろ過し、その後１％のＺｎＣｌ２溶液で洗浄した。材料を真空ろ過を介して一晩乾燥させた。第２の試行は、同様にろ紙も含んでいる中度フリットフィルター上でろ過した。次に物質をエタノールと水で洗浄し、一晩真空ろ過を介して乾燥させた。最終的に第３の試行を微細フリット漏斗を通してろ過し、１％のＺｎＣｌ２溶液で洗浄し、同じくエタノールと水でも洗浄した。この材料を一晩、真空ろ過下でも乾燥させた。
【０２５４】
【表２】
2014043470.tif 000049
【０２５５】
９．２．７．  中性ｐＨでのＨＩＭ２のＲ型Ｚｎ錯体
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるまで約１０ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。上述の溶液５０ｍＬに対して１６５マイクロリットルの液化フェノールを添加した。次に２００マイクロリットルの１０％のＺｎＣｌ２溶液を試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを７．１８に調製した。溶液を２日間室温に放置して沈殿物を形成させた。
【０２５６】
反応混合物を遠心分離管に移し、２０分間２８００ＲＰＭで遠心分離した。しかしながら、材料は最初管の底面に沈降しなかったため、約２時間遠心分離した。溶液を傾瀉し、固体を５ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。この溶液を６０分間２８００ＲＰＭで遠心分離してから、Ｈ２Ｏを傾瀉した。さらに２回水洗浄を繰り返した。その後、試料を５ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、６０分間２８００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。さらに２回ＥｔＯＨ洗浄を同じ要領で実施した。材料は、３回目のＥｔＯＨ洗浄の後濁っており一晩冷蔵庫内に置いて反応をさらに沈降させた。溶媒を傾瀉し、材料を２日間凍結乾燥機上に置いた。
【０２５７】
【表３】
2014043470.tif 000050
【０２５８】
９．３．  プロタミン固体の調製及び分析
９．３．１．  酸性ｐＨでのプロタミンを用いたＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体の調製
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨを有していたＨＩＭ２の１０ｇ／Ｌの原液に対してプロタミンを添加した。以上の溶液の１０ｍＬアリコート（１００ｍｇのタンパク質）に対し０．２５Ｍという最終濃度に至るまで氷酢酸を添加した。１０％のＺｎＣｌ２溶液２００マイクロリットルを試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを最高５に調整した。＋５℃で１５分間溶液を攪拌し、その後２日間＋５℃で放置して固体形成を発生させた。
【０２５９】
反応混合物を遠心分離管に移し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を１０ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。この溶液を２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉した。さらに２回のＨ２Ｏ洗浄を同じ要領で行なった。その後、試料を１０ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。同じ要領でさらに２回ＥｔＯＨ洗浄を実施してから、試料を２日間凍結乾燥機上に置いた。
【０２６０】
９．３．２  中性ｐＨでのプロタミンを用いたＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体の調製
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨになるまで約３０ｇ／ＬのＨＩＭ溶液を調製した。以上の溶液の５０ｍＬアリコート（１．５ｇのタンパク質）に対し、１ミリリットルの氷酢酸を添加した。６００マイクロリットルの１０％ＺｎＣｌ２溶液を反応に添加し、その後２２５ミリグラムのプロタミンを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを６．９５に調整し反応を２日間＋５℃に放置して固体形成を発生させた。
【０２６１】
反応混合物を遠心分離管に移し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離した。溶液を傾瀉し、固体を１０ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。この溶液を２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉した。さらに２回のＨ２Ｏ洗浄を同じ要領で行なった。次に試料を１０ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。同じ要領でさらに２回ＥｔＯＨ洗浄を実施してから試料を３日間凍結乾燥機上に置いた。
【０２６２】
９．３．３  酸性ｐＨでのプロタミンを用いたＨＩＭ２のＲ型Ｚｎ錯体の調製
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨになるまで約１０ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。以上の溶液の１５０ｍＬアリコート（１．５ｇのタンパク質）に対し、液化フェノール（２．４８ｍＬ）を添加した。反応のｐＨを濃水酸化アンモニウムを用いて最高６．５７に調整した。１２マイクロリットルの１０％ＺｎＣｌ２溶液を反応に添加し、その後２２５ミリグラムのプロタミンを添加した。反応混合物を１５分間室温で攪拌してから、室温に２日間放置して固体形成を発生させた。
【０２６３】
反応混合物を遠心分離管に移し、１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離した。溶液を傾瀉し、固体を５０ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。この溶液を１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉した。さらに２回のＨ２Ｏ洗浄を同じ要領で行なった。次に試料を１０ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。同じ要領でさらに２回ＥｔＯＨ洗浄を実施してから試料を２日間凍結乾燥機上に置いた。
【０２６４】
９．３．４  中性ｐＨでのプロタミンを用いたＨＩＭ２のＲ型Ｚｎ錯体の調製
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるまで、約１０ｇ／ＬのＨＩＭ２溶液を調製した。１５０ｍＬの反応に対し液化フェノール（４９５ｍＬ）を添加した。次に６００ミリリットルの１０％ＺｎＣｌ２溶液を反応に添加し、その後７５ｍｇのプロタミンを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを７．０１に調整した。反応を室温に３日間放置して固体を形成させた。
【０２６５】
反応混合物を遠心分離管に移し、１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離させた。溶液を傾瀉し、固体を５０ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。この溶液を１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉した。さらに２回のＨ２Ｏ洗浄を同じ要領で行なった。その後、試料を５０ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。同じ要領でさらに２回ＥｔＯＨ洗浄を実施してから、試料を２日間凍結乾燥機上に置いた。
【０２６６】
【表４】
2014043470.tif 000051
【０２６７】
９．４  インスリン化合物ジ複合体錯体の調製及び分析
９．４．１  Ａ１及びＢ２９インスリン化合物ジ複合体でのＴ型Ｚｎ錯体
ヒトインスリン（ＤＩＣＯＮ−１）のＢ２９及びＡ１にカップリングされた修飾部分−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）５（ＯＣＨ２ＣＨ２）７ＯＣＨ３を有するインスリン化合物ジ複合体を、約１０ｇ／Ｌで溶液に添加し、１０％のＨＣｌを用いて最終ｐＨ３．１５になるように調製した。以上の溶液の３．７５ｍＬアリコートに対し、０．２５Ｍという最終濃度まで氷酢酸を添加した。その後１５μＬの１０％ＺｎＣｌ２溶液を試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを４．９０に調整した。＋５℃で１５分間溶液を攪拌し、次に＋５℃に６日間放置して、固体を形成させた（白色固体を生成した）。
【０２６８】
９．４．２  Ａ１及びＢ２９インスリン化合物ジ複合体でのＲ型Ｚｎ錯体
ＤＩＣＯＮ−１を約１０ｇ／Ｌで溶液に添加し、１０％ＨＣｌを用いて最終ｐＨ３．１５になるように調製した。以上の溶液の３．７５ｍＬアリコートに対して約１２μＬの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを５．７５に調整した。６０μＬの１０％ＺｎＣｌ２溶液を試料に添加した。溶液を室温で１５分間攪拌し、次に６日間室温に放置して、より多くの沈殿物を形成させた（白色固体を生成した）。
【０２６９】
反応混合物を遠心分離管に移し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離した。溶液を傾瀉し、固体を５ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。この溶液を２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉し、さらに５ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで固体を洗浄した。再び試料を２６００ＲＰＭで２０分間遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉した。試料を５ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、２０分間２６００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。試料を６日間凍結乾燥させた。
【０２７０】
９．４．３  ジ複合体Ｂ１、Ｂ２９（１０ｍｇ／ｍＬ）
ＤＩＣＯＮ−１を約１０ｇ／Ｌで溶液に添加し、３３μＬの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを５．３４に調整した。その後１６０μＬの１０％ＺｎＣｌ２溶液を試料に添加した。溶液を２週間室温に放置して固体形成を発生させた（白色固体を生成した）。
【０２７１】
反応混合物を遠心分離管に移し、１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離した。溶液を傾瀉し、固体を５ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで３回洗浄した。溶液を１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離し、各洗浄後に傾瀉した。その後、試料を５ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで３回洗浄した。再び試料を１５分間２６００ＲＰＭで遠心分離し、各洗浄後に傾瀉した。試料を２日間凍結乾燥させた。
【０２７２】
９．４．４  ジ複合体Ｂ１、Ｂ２９（２０ｍｇ／ｍＬ）
ＤＩＣＯＮ−１を約２０ｇ／Ｌで溶液に添加し、６６μＬの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを７．６５に調整した。その後３２０μＬの１０％ＺｎＣｌ２溶液を試料に添加した。溶液を２週間室温に放置して固体形成を発生させた（白色固体を生成した）。
【０２７３】
反応混合物を遠心分離管に移し、１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離した。溶液を傾瀉し、固体を５ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで３回洗浄した。溶液を１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離し、各洗浄後に傾瀉した。その後、試料を５ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで３回洗浄した。再び試料を１５分間２６００ＲＰＭで遠心分離し、各洗浄後に傾瀉した。試料を２日間凍結乾燥させた。
【０２７４】
９．５  Ｔ型ＩＮ１０５固体の調製及び分析
９．５．１  ＩＮ１０５モノ複合体のＴ型Ｚｎ錯体（濃度１０ｇ／Ｌ）
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨをもつＩＮ１０５溶液を約１０ｇ／Ｌ（１００ｍｇ）で調製した。５０μＬの１０％ｗ／ｗＺｎＣｌ２溶液を試料に添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを７．５２に調整した。濁った溶液を攪拌し、次に５日間室温に放置して固体を形成させた。
【０２７５】
反応混合物を遠心分離管に移し、１５分間２９００ＲＰＭで遠心分離した。溶液を傾瀉し、固体を１０ｍＬの低温ＤＩ水で３回洗浄した。この溶液を１０分間２９００ＲＰＭで遠心分離してから、水を傾瀉し、固体を低温ＤＩ水のもう１つの分量で洗浄した。その後試料を１０ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで３回洗浄し、１０分間２９００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。試料を真空乾燥させて白色固体（９０ｍｇ）を得た。
【０２７６】
９．５．２  ＩＮ１０５モノ複合体のＴ型Ｚｎ錯体（１ｇスケール）
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるように、約１０ｇ／Ｌ（１ｇ）のＩＮ１０５溶液を調製した。試料に対し５００μＬの１０％ＺｎＣｌ２溶液を添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを最高７．４に調整した。濁った溶液を１５分間攪拌し、次に室温に最高２日間放置してからろ過した。
【０２７７】
反応混合物を、ハウスバキューム下で焼結ガラス漏斗（微細）を通してろ過した。ろ過した材料の入った焼結ガラス漏斗を一晩ガラス乾燥機内で真空下に置き、結果として白色微細粉末（９００ｍｇ）を得た。
【０２７８】
９．５．３  中性ｐＨでのＩＮ１０５モノ複合体のＴ型Ｚｎ錯体（５ｇスケール）
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるように、約１０ｇ／ＬのＩＮ１０５溶液（５ｇ、ロット＃Ｎｏｂｅｘ  ０４０７０６Ｌ）を調製した。試料に対し２ｍＬの１０％ＺｎＣｌ２溶液を添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを最高７．４に調整した。次に、濁った溶液を一晩室温に放置して、ろ過の前に固体を形成させた。
【０２７９】
以上で実施された反応を、５０ｍＬの遠心分離管４本に分割し、最初に３２００ＲＰＭで合計２時間遠心分離した。次に材料を２０分間９０００ＲＰＭで遠心分離に付し、一晩５℃で保管した。上清を傾瀉し、固体を各管から１０ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。管を逆さにし最高１時間３２００ＲＰＭで遠心分離してから、Ｈ２Ｏを傾瀉し、固体をさらに１０ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。再び、試料を最高一時間３２００ＲＰＭで遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉した。試料を１０ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで２回洗浄し、１時間３２００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。２日間試料を真空乾燥させて、白色粉末１．６４ｇ（ロット＃Ｎｏｂｅｘ０４０７３０Ｌ−Ａ）を得た。
【０２８０】
【表５】
2014043470.tif 000052
【０２８１】
９．６  Ｒ型ＩＮ１０５固体の調製及び分析
９．６．１  中性ｐＨでのフェノールを用いたＩＮ１０５複合体でのＲ型Ｚｎ錯体
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるように、約１０ｇ／Ｌ（５００ｍｇ）のＩＮ１０５溶液を調製した。以上の溶液に対し２００μＬの１０％ＺｎＣｌ２溶液及び１６５μＬの液化フェノールを添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを７．３７に調整した。濁った溶液を室温に最高２日間放置して固体を形成させてからろ過した。
【０２８２】
反応混合物を、ハウスバキューム下で焼結ガラス漏斗（微細）を通してろ過した。ろ過した材料の入った焼結ガラス漏斗を一晩ガラスデシケータ内で真空下に置き、結果として白色微細粉末（４４０ｍｇ）を得た。
【０２８３】
９．６．２  スケール５ｇでのＩＮ１０５複合体のＲ型Ｚｎ錯体
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるように、約１０ｇ／ＬのＩＮ１０５溶液（４．２ｇ、ロット＃Ｎｏｂｅｘ  ０４０７０６Ｌ）を調製した。以上の溶液に対し１．５ｍＬの液化フェノール及び１．８ｍＬの１０％ＺｎＣｌ２溶液を添加した。濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを最高７．４に調整した。強く濁った溶液を一晩室温に放置して、より多くの沈殿物を形成させた。
【０２８４】
以上で実施された反応を、５０ｍＬの遠心分離管４本に分割し、最初に３２００ＲＰＭで２時間遠心分離した。次に材料を２０分間９０００ＲＰＭで遠心分離に付し、朝まで５℃で保管した。上清を傾瀉し、固体を各管から１０ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。管を逆さにし最高１時間３２００ＲＰＭで遠心分離してから、Ｈ２Ｏを傾瀉し、固体をさらに１０ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。再び、試料を最高一時間３２００ＲＰＭで遠心分離してからＨ２Ｏを傾瀉した。試料を１０ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで２回洗浄し、１時間３２００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉した。２日間試料を真空乾燥させて、白色粉末２．３４ｇを得た。
【０２８５】
【表６】
2014043470.tif 000053
【０２８６】
９．７  プロタミンＩＮ１０５固体の調製及び分析
９．７．１  酸性ｐＨでのプロタミンを用いたＩＮ１０５モノ複合体のＲ型Ｚｎ錯体の調製
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるように、約１０ｇ／ＬのＩＮ１０５溶液を調製する。以上の溶液の１５ｍＬアリコート（１５０ｍｇのタンパク質）に対し、液化フェノール（２４８μＬ）を添加する。反応のｐＨを最高６．５０まで、濃水酸化アンモニウムで調整する。１マイクロリットルの１０％ＺｎＣｌ２溶液を反応に添加し、その後２２．５ミリグラムのプロタミンを添加する。反応混合物を１５分間室温で攪拌してから、２日間室温に放置して固体形成を発生させる。
【０２８７】
反応混合物を遠心分離管に移し、１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離する。溶液を傾瀉し、固体を５ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄する。この溶液を、１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離してから、Ｈ２Ｏを傾瀉する。同じ要領でさらに２回Ｈ２Ｏ洗浄を行なう。その後試料を１０ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉する。さらに同じ要領で２回ＥｔＯＨ洗浄を実施してから、試料を２日にわたり真空乾燥させる。
【０２８８】
９．７．２  中性ｐＨでのプロタミンを用いたＩＮ１０５複合体のＲ型Ｚｎ錯体の調製
１０％のＨＣｌを用いて最高３の最終ｐＨとなるように、約１０ｇ／ＬのＩＮ１０５溶液を調製する。１５ｍＬの溶液に対し、液化フェノール（４９．５μＬ）を添加する。その後、６０マイクロリットルの１０％ＺｎＣｌ２溶液を反応に添加し、その後７．５ｍｇのプロタミンを添加する。ｐＨを７．００まで、濃水酸化アンモニウムで調整する。反応を３日間室温に放置して固体を形成させる。
【０２８９】
反応混合物を遠心分離管に移し、１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離する。溶液を傾瀉し、固体を５．０ｍＬの低温ＤＩＨ２Ｏで洗浄した。この溶液を、１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離してから、Ｈ２Ｏを傾瀉する。同じ要領でさらに２回Ｈ２Ｏ洗浄を行なう。その後試料を５０ｍＬの２００プルーフの低温ＥｔＯＨで洗浄し、１５分間２８００ＲＰＭで遠心分離してからＥｔＯＨを傾瀉する。さらに同じ要領で２回ＥｔＯＨ洗浄を実施してから、試料を２日にわたり真空乾燥させる。
【０２９０】
９．７．３  ＩＮ１０５のＲ型結晶性Ｚｎ錯体の調製
２５％の有機物質を含有する粗製の１５ｍｇ／ｍＬのＩＮ１０５溶液のｐＨを、１ＭのＨＣｌを用いて３．４７に調整した。４０〜６０℃の水浴中で固体フェノールを融解させ、０．２１８ｍＬを反応フラスコに加えた。その後、反応に対し０．４ｍＬの４％酸性化ＺｎＣｌ２水溶液を添加した。溶液のｐＨを、６．６という最終ｐＨに１ＭのＮａＯＨを用いて調整した。ｐＨを調整しながら、１０ｍＬのアリコートを次のｐＨ値で引き抜いた：４．８、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８、６．０、６．２、６．４及び６．６。攪拌することなく試料を２４時間放置した。顕微鏡で針状結晶が観察された。
【０２９１】
９．７．４  ３０％の有機物を含有するＩＮ１０５のＲ型結晶性Ｚｎ錯体の調製
ＭＰＥＧ３プロピオニルインスリン化合物の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を、２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中で調製し、１ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．８１に調整した。溶液に対して液化フェノール０．０４０ｍＬと９５％のＥｔＯＨ４．２５ｍＬを添加した。その後０．４００ｍＬの４％酸性化ＺｎＣｌ２溶液を反応混合物に添加した。５０％のＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で１ｍＬのアリコートを引抜きながら、３．７〜５．４まで溶液のｐＨを調整した：４．０、４．２、４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４。試料を２４時間攪拌無しで放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、４．０〜５．２のｐＨ範囲から針状結晶を示した（図５参照）。
【０２９２】
９．７．５  １００ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中のＩＮ１０５のＲ型結晶性Ｚｎ錯体の調製（ＥｔＯＨ３０、２０及び１０％）
１００ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＭＰＥＧ３プロピオニルインスリン化合物の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌでｐＨを２．８に調整した。溶液に対して液化フェノール、０．０４０ｍＬ及び９５％のＥｔＯＨ、４．２５ｍＬを添加した。その後、０．４００ｍＬの４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液を反応混合物に添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で０．５ｍＬのアリコートを引抜きながら、２．９〜５．６まで溶液のｐＨを調整した：４．２、４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６。試料を２４時間攪拌無しで放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、４．４〜４．８のｐＨ範囲から針状結晶を示した。
【０２９３】
１００ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＭＰＥＧ３プロピオニルインスリン化合物の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌでｐＨを２．８に調整した。溶液に対して液化フェノール、０．０４０ｍＬ及び９５％のＥｔＯＨ、２．２５ｍＬを添加した。その後、０．４００ｍＬの４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液を反応混合物に添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で０．５ｍＬのアリコートを引抜きながら、２．９〜５．６まで溶液のｐＨを調整した：４．２、４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６。試料を２４時間攪拌無しで放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、４．８〜５．４のｐＨ範囲から円状結晶を示した。
【０２９４】
１００ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＭＰＥＧ３プロピオニルインスリン化合物の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌでｐＨを２．８に調整した。溶液に対して液化フェノール、０．０４０ｍＬ及び９５％のＥｔＯＨ、１．１５ｍＬを添加した。その後、０．４００ｍＬの４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液を反応混合物に添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で０．５ｍＬのアリコートを引抜きながら、２．８〜５．６まで溶液のｐＨを調整した：４．２、４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６。試料を２４時間攪拌無しで放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、５．０〜５．６のｐＨ範囲から針状結晶を示した。
【０２９５】
９．７．６  ０．１及び０．２％のフェノールを用いた２０％の有機物質中のＩＮ１０５のＲ型結晶性Ｚｎ錯体の調製
１００ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＭＰＥＧ３プロピオニルインスリン化合物の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌでｐＨを３．０に調整した。溶液に対して液化フェノール、０．０１０ｍＬ及び９５％のＥｔＯＨ、２．５ｍＬを添加した。その後、０．４００ｍＬの４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液を反応混合物に添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で０．５ｍＬのアリコートを引抜きながら、３．２〜５．６まで溶液のｐＨを調整した：４．２、４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６。試料を２４時間攪拌無しで放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、４．４〜５．４のｐＨ範囲から円状結晶を示した。
【０２９６】
１００ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＭＰＥＧ３プロピオニルインスリン化合物の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌでｐＨを３．０に調整した。溶液に対して液化フェノール、０．０２０ｍＬ及び９５％のＥｔＯＨ、２．５ｍＬを添加した。その後、０．４００ｍＬの４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液を反応混合物に添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で０．５ｍＬのアリコートを引抜きながら、３．３〜５．６まで溶液のｐＨを調整した：４．２、４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６。試料を２４時間攪拌無しで放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、４．４〜５．２のｐＨ範囲から円状結晶を示した。
【０２９７】
９．７．７  ８．０グラムスケール、ｐＨ４．８及び室温でのＩＮ１０５のＲ型結晶型Ｚｎ錯体の調製
２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液内でＭＰＥＧ３プロピオニルインスリン化合物の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．０に調整した。溶液に対して液化フェノール２．１３ｍＬ及び９５％のＥｔＯＨ２２５ｍＬを添加した。その後、４％の酸性化されたＺｎＣｌ２溶液２１．３ｍＬを反応混合物に添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用いて、溶液のｐＨを４．８に調整した。溶液を２４時間攪拌無しで放置してから、結晶を収獲した。Ｔ＝０顕微鏡写真で針状結晶を観察した。
【０２９８】
２５０ｍＬ入り遠心分離管６本に反応混合物を分割することによって、結晶を収獲した。管を１０℃で８分間１０，０００ＲＰＭで回転させてから、上清を傾瀉した。その後、各管に対して１０ｍＬの低温Ｈ２Ｏを添加してから、６本を２本に統合した。遠心分離プロセスを冷水でもう１度そして低温ＥｔＯＨでさらに２度繰り返した。その後、結晶を２日間卓上型凍結乾燥機で乾燥させた。この手順により、出発材料との関係において９３％の収量（ｗ／ｗ）が生成された。
【０２９９】
９．７．８  １．５グラムスケール、ｐＨ４．８及び室温でのＩＮ１０５のＲ型結晶性Ｚｎ錯体の調製
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム１００ｍＬ中に１．５２ｇの固体ＩＮ１０５を溶解させることにより、ＭＰＥＧ３プロピオニルインスリン化合物（ＩＮ１０５）の新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌ／５ＭのＮＨ４ＯＨを用いて溶液をｐＨ２．８に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに対して、４００μＬの融解フェノール及び４２．５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。次に４ｍＬの４％酸性化水性ＺｎＣｌ２を反応フラスコに添加した。その後、結果としての溶液を、５ＭのＮＨ４ＯＨを用いてｐＨ４．８に調整した。その後、結晶が収獲される前に４８時間攪拌せずに反応を放置した。顕微鏡を介し、２１時間後に針状結晶形成が観察された。
【０３００】
反応スラリーを５０ｍＬ入り遠心分離管４本に分割することにより、結晶を収獲した。最初管を８分間１０００ＲＰＭで回転させた。その後、上清を傾瀉した。各管内の結晶を、氷冷Ｈ２Ｏの５ｍＬアリコートで１回洗浄し、次に８分間３０００ＲＰＭで回転させた。その後、上清を傾瀉した。まず氷冷Ｈ２Ｏの５ｍＬアリコートで１回そして次に氷冷ＥｔＯＨの５ｍＬアリコートで１回、洗浄／回転手順を繰り返した。その後結晶を一晩真空デシケータ内で乾燥させた。この手順により、出発材料との関係において７３％の収量（ｗ／ｗ）が生成された。
【０３０１】
９．７．９  スケール１．５グラム、ｐＨ４．４及び室温でのＩＮ１０５のＲ型結晶性Ｚｎ錯体の調製
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム１００ｍＬ中に１．５０ｇの固体ＩＮ１０５を溶解させることにより、ＭＰＥＧ３プロピオニルインスリン化合物（ＩＮ１０５）の新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌを用いて溶液をｐＨ２．６に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに対して、４００μＬの融解フェノール及び４２．５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。次に４ｍＬの４％酸性化水性ＺｎＣｌ２を反応フラスコに添加した。その後、結果としての溶液を、５ＭのＮＨ４ＯＨを用いてｐＨ４．４に調整した。その後、結晶が収獲される前に２２時間攪拌せずに反応を放置した。顕微鏡を介し、２時間後に針状結晶形成及び沈殿物の混合物が観察された。反応混合物は２１時間後顕微鏡を介して完全に結晶性であるように思われた。
【０３０２】
反応スラリーを２５０ｍＬ入り遠心分離管１本に移すことにより、結晶を収獲した。最初管を８分間１０，０００ＲＰＭで回転させた。その後、上清を傾瀉した。結晶を、氷冷Ｈ２Ｏの２０ｍＬアリコートで１回洗浄し、次に８分間１０，０００ＲＰＭで回転させた。その後、上清を傾瀉した。まず氷冷Ｈ２Ｏの２０ｍＬアリコートで１回、次に氷冷ＥｔＯＨの２０ｍＬアリコートで２回、そして最後に氷冷Ｈ２Ｏの２０ｍＬアリコートで１回洗浄／回転手順を繰り返した。その後結晶を一晩真空デシケータ内で乾燥させた。この手順により、出発材料との関係において６７％の収量（ｗ／ｗ）が生成された。
【０３０３】
９．７．１０  スケール８．０グラム、ｐＨ４．８及び室温でのＩＮ１０５のＲ型結晶性Ｚｎ錯体の調製
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム５３３ｍＬ中に７．９８ｇの固体ＩＮ１０５を溶解させることにより、ＭＰＥＧ３プロピオニルインスリン化合物（ＩＮ１０５）の新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌを用いて溶液をｐＨ２．４に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに対して、２．１３ｍＬの融解フェノール及び２２５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。次に２１．３ｍＬの４％酸性化水性ＺｎＣｌ２を反応フラスコに添加した。その後、結果としての溶液を、５ＭのＮＨ４ＯＨを用いてｐＨ４．８に調整した。その後、結晶が収獲される前に２１時間攪拌せずに反応を放置した。反応混合物は、顕微鏡を介し２時間後に完全に結晶性であるように思われた。
【０３０４】
反応スラリーを２５０ｍＬ入り遠心分離管６本に分割することにより、結晶を収獲した。最初管を８分間１０，０００ＲＰＭで回転させた。その後、上清を傾瀉した。各管内の結晶を、氷冷Ｈ２Ｏの１０ｍＬアリコートで１回洗浄し、次に８分間１０，０００ＲＰＭで回転させた。その後、上清を傾瀉した。まず氷冷Ｈ２Ｏの１０ｍＬアリコートで１回、次に氷冷ＥｔＯＨの１０ｍＬアリコートで２回、そして最後に氷冷Ｈ２Ｏの１０ｍＬアリコートで１回洗浄／回転手順を繰り返した。その後結晶を２日間真空デシケータ内で乾燥させた。この手順により、出発材料との関係において８７％の収量（ｗ／ｗ）が生成された。
【０３０５】
９．７．１１  １０．０グラムスケール、ｐＨ４．８及び室温でのＩＮ１０５のＲ型結晶性Ｚｎ錯体の調製
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム６７０ｍＬ中に１０．０６ｇの固体ＩＮ１０５を溶解させることにより、ＭＰＥＧ３プロピオニルインスリン化合物（ＩＮ１０５）の新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌを用いて溶液をｐＨ２．６に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに対して、２．７ｍＬの融解フェノール及び２８５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。次に２７ｍＬの４％酸性化水性ＺｎＣｌ２を反応フラスコに添加した。その後、結果としての溶液を、５ＭのＮＨ４ＯＨを用いてｐＨ４．８に調整した。その後、結晶が収獲される前に２１時間攪拌せずに反応を放置した。反応混合物は、顕微鏡を介し２０５時間後に完全に結晶性であるように思われた。
【０３０６】
反応スラリーを２５０ｍＬ入り遠心分離管６本に分割することにより、結晶を収獲した。最初管を１０℃で８分間１０，０００ＲＰＭで回転させた。その後、上清を傾瀉した。各管内の結晶を、氷冷Ｈ２Ｏの１０ｍＬアリコートで１回洗浄し、２５０ｍＬ入りの遠心分離管２本に統合し、次に１０℃で８分間１０，０００ＲＰＭで回転させた。その後、上清を傾瀉した。まず氷冷Ｈ２Ｏの３０ｍＬアリコートで１回、次に氷冷ＥｔＯＨの３０ｍＬアリコートで２回、そして最後に氷冷Ｈ２Ｏの３０ｍＬアリコートで１回洗浄／回転手順を繰り返した。その後結晶を３日間ベンチトップ凍結乾燥機内で乾燥させた。この手順により、出発材料との関係において８９％の収量（ｗ／ｗ）が生成された。
【０３０７】
９．８  有機溶媒を用いたＨＩＭ２の結晶性Ｚｎ錯体の調製と分析
９．８．１  ＨＩＭ２のＲ型Ｚｎ錯体の調製
２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＨＩＭ２の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．９５に調整した。溶液に対して液化フェノール４０μＬ、及び９５％のＥｔＯＨ３．５ｍＬを添加した。その後、反応混合物に対して４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液６００μＬを添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で５００μＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．１４から６．０に調整した：４．２、４．４（図６Ａ参照）、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４（図６Ｂ参照）、５．６、５．８、６．０。２４時間攪拌せずに試料を放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、ｐＨ４．４で針状結晶を示した。４．６〜６．０のｐＨ範囲は、さまざまな形状及びサイズの大きい結晶性様の固体を示している。
【０３０８】
２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＨＩＭ２の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．９５に調整した。溶液に対して液化フェノール４０μＬ、及び９５％のＥｔＯＨ３．５ｍＬを添加した。その後、反応混合物に対して４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液４００μＬを添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で５００μＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．２２から６．０に調整した：４．２、４．４、４．６、４．８、５．０、５．２（図７Ａ参照）、５．４、５．６、５．８、６．０。２４時間攪拌せずに試料を放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、ｐＨ４．２〜６．０でさまざまな形状及びサイズの結晶性様の固体を示している。
【０３０９】
２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＨＩＭ２の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．９５に調整した。溶液に対して液化フェノール４０μＬ、及び９５％のＥｔＯＨ３．５ｍＬを添加した。その後、反応混合物に対して４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液２００μＬを添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で５００μＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．１９から６．０に調整した：４．２、４．４、４．６、４．８、５．０（図７B参照）、５．２、５．４、５．６、５．８、６．０。２４時間攪拌せずに試料を放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、ｐＨ４．４〜４．６でさまざまな形状及びサイズの結晶性様の固体を示した。４．８〜５．８のｐＨ範囲は、より均質な針状結晶を示している。
【０３１０】
２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＨＩＭ２の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．９５に調整した。溶液に対して液化フェノール４０μＬ、及び９５％のＥｔＯＨ２．６ｍＬを添加した。その後、反応混合物に対して４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液６００μＬを添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で５００μＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．０４から６．０に調整した：４．２、４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４（図８Ａ参照）、５．６、５．８、６．０。２４時間攪拌せずに試料を放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、ｐＨ４．６〜５．４で平坦な雪片様の結晶を示した。
【０３１１】
２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＨＩＭ２の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．９５に調整した。溶液に対して液化フェノール４０μＬ、及び９５％のＥｔＯＨ２．６ｍＬを添加した。その後、反応混合物に対して４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液４００μＬを添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で５００μＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．０５から６．０に調整した：４．２、４．４、４．６、４．８、５．０（図８Ｂ参照）、５．２、５．４、５．６、５．８、６．０。２４時間攪拌せずに試料を放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、ｐＨ５．０で針状結晶を、ｐＨ５．２で結晶様固体を、そしてｐＨ５．４で平坦な雪片様の結晶を示した。
【０３１２】
Ｒｘｎ６  ２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＨＩＭ２の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．９５に調整した。溶液に対して液化フェノール４０μＬ、及び９５％のＥｔＯＨ２．６ｍＬを添加した。その後、反応混合物に対して４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液２００μＬを添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で５００μＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．０９から６．０に調整した：４．２、４．４、４．６、４．８（図９Ａ参照）、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８、６．０。２４時間攪拌せずに試料を放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、ｐＨ４．８〜５．６で針状結晶及び結晶様固体を示した。
【０３１３】
２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＨＩＭ２の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．７６に調整した。溶液に対して液化フェノール４０μＬ、及び９５％のＥｔＯＨ４．２５ｍＬを添加した。その後、反応混合物に対して４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液２５０μＬを添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で５００μＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを２．９７から５．８に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８。２４時間攪拌せずに試料を放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、ｐＨ４．６〜５．８で結晶様沈殿を示した。
【０３１４】
２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＨＩＭ２の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．７６に調整した。溶液に対して液化フェノール４０μＬ、及び９５％のＥｔＯＨ４．２５ｍＬを添加した。その後、反応混合物に対して４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液２００μＬを添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で５００μＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．０６から５．８に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４（図９Ｂ参照）、５．６、５．８。２４時間攪拌せずに試料を放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、ｐＨ４．６〜５．６で結晶様沈殿を示した。
【０３１５】
２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＨＩＭ２の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．７６に調整した。溶液に対して液化フェノール４０μＬ、及び９５％のＥｔＯＨ４．２５ｍＬを添加した。その後、反応混合物に対して４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液１５０μＬを添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で５００μＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．０９から５．８に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８。２４時間攪拌せずに試料を放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、ｐＨ５．０〜５．２で、さまざまな形状及びサイズの結晶を示した。
【０３１６】
２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＨＩＭ２の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．７６に調整した。溶液に対して液化フェノール４０μＬ、及び９５％のＥｔＯＨ４．２５ｍＬを添加した。その後、反応混合物に対して４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液１００μＬを添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で５００μＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．０９から５．８に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０（図１０Ａ参照）、５．２、５．４（図１０Ｂ参照）、５．６、５．８。２４時間攪拌せずに試料を放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、ｐＨ５．０で針状結晶を示し、５．２〜５．６でさまざまな形状及びサイズの大きい結晶性材料を示した。
【０３１７】
２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＨＩＭ２の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．７６に調整した。溶液に対して液化フェノール２０μＬ、及び９５％のＥｔＯＨ４．２５ｍＬを添加した。その後、反応混合物に対して４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液２５０μＬを添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で５００μＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．０８から５．８に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８。２４時間攪拌せずに試料を放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、ｐＨ４．８〜５．８で結晶様沈殿を示した。
【０３１８】
２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＨＩＭ２の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．７６に調整した。溶液に対して液化フェノール２０μＬ、及び９５％のＥｔＯＨ４．２５ｍＬを添加した。その後、反応混合物に対して４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液２００μＬを添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で５００μＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．０５から５．８に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８。２４時間攪拌せずに試料を放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、非常に小さい結晶様固体を示した。
【０３１９】
２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＨＩＭ２の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．７６に調整した。溶液に対して液化フェノール２０μＬ、及び９５％のＥｔＯＨ４．２５ｍＬを添加した。その後、反応混合物に対して４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液２００μＬを添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で５００μＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．０５から５．８に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８。２４時間攪拌せずに試料を放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、非常に小さい結晶様固体を示した。
【０３２０】
２５０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液中でＨＩＭ２の新鮮な１５ｍｇ／ｍＬ溶液を調製し、５ＭのＨＣｌを用いてｐＨを２．７６に調整した。溶液に対して液化フェノール２０μＬ、及び９５％のＥｔＯＨ４．２５ｍＬを添加した。その後、反応混合物に対して４％の酸性化ＺｎＣｌ２溶液１００μＬを添加した。５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々で５００μＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．０６から５．８に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４、５．６、５．８。２４時間攪拌せずに試料を放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真は、非常に小さい結晶様固体を示した。
【０３２１】
９．９  亜鉛を用いたＨＩＭ２及びＩＮ１０５の共結晶
９．９．１  ＨＩＭ２及びＩＮ１０５のＲ型共結晶化Ｚｎ錯体の調製
９．９．２  ５０：５０（ＨＩＭ２：ＩＮ１０５）
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム４ｍＬ中に３７．３ｍｇのＨＩＭ２と３６．４ｍｇのＩＮ１０５を溶解させることにより、ＨＩＭ２及びＩＮ１０５の新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌを用いて、溶液をｐＨ２．８４に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに１６μＬの融解フェノールと１．７５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。その後、反応フラスコに対し、４％の酸性化水性ＺｎＣｌ２８０μＬを加えた。次に、５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々において０．５００ｍＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．１９〜５．６０に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４及び５．６。試料を４時間攪拌せずに放置した。４時間後に撮影した顕微鏡写真は４．４〜５．６のｐＨ範囲でさまざまなサイズ及び形状の結晶を示している。
【０３２２】
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム４ｍＬ中に３７．１ｍｇのＨＩＭ２と３５．９ｍｇのＩＮ１０５を溶解させることにより、ＨＩＭ２及びＩＮ１０５の新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌを用いて、溶液をｐＨ３．０３に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに１６μＬの融解フェノールと１．７５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。その後、反応フラスコに対し、４％の酸性化水性ＺｎＣｌ２４０μＬを加えた。次に、５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々において０．５００ｍＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．３８〜５．６０に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０（図１１Ａ参照）、５．２（図１１Ｂ参照）、５．４及び５．６（図１２Ａ参照）。試料を４時間攪拌せずに放置した。４時間後に撮影した顕微鏡写真は４．６〜５．６のｐＨ範囲でほとんどが短い針状結晶を示している。
【０３２３】
９．９．３  ７０：３０（ＨＩＭ２：ＩＮ１０５）
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム４ｍＬ中に５３．４ｍｇのＨＩＭ２と２３．２ｍｇのＩＮ１０５を溶解させることにより、ＨＩＭ２及びＩＮ１０５の新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌを用いて、溶液をｐＨ２．６２に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに１６μＬの融解フェノールと１．７５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。その後、反応フラスコに対し、４％の酸性化水性ＺｎＣｌ２８０μＬを加えた。次に、５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々において０．５００ｍＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．０２〜５．６０に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２（図１２Ｂ参照）、５．４及び５．６。試料を１時間攪拌せずに放置した。１時間後に撮影した顕微鏡写真は４．４〜５．６のｐＨ範囲でさまざまなサイズ及び形状の結晶様沈殿を示している。
【０３２４】
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム４ｍＬ中に５３．６ｍｇのＨＩＭ２と２４．５ｍｇのＩＮ１０５を溶解させることにより、ＨＩＭ２及びＩＮ１０５の新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌを用いて、溶液をｐＨ２．８９に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに１６μＬの融解フェノールと１．７５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。その後、反応フラスコに対し、４％の酸性化水性ＺｎＣｌ２４０μＬを加えた。次に、５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々において０．５００ｍＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．２８〜５．６０に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２（図１３Ａ参照）、５．４及び５．６。試料を１時間攪拌せずに放置した。１時間後に撮影した顕微鏡写真はほとんどが４．６〜４．８のｐＨ範囲からさまざまなサイズ及び形状の結晶様沈殿を、そして５．０〜５．４のｐＨ範囲で数多くの短い針状結晶を示している。
【０３２５】
９．９．４  ３０：７０（ＨＩＭ２：ＩＮ１０５）
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム４ｍＬ中に２３．３ｍｇのＨＩＭ２と５４．７ｍｇのＩＮ１０５を溶解させることにより、ＨＩＭ２及びＩＮ１０５の新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌを用いて、溶液をｐＨ２．８４に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに１６μＬの融解フェノールと１．７５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。その後、反応フラスコに対し、４％の酸性化水性ＺｎＣｌ２８０μＬを加えた。次に、５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々において０．５００ｍＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．２７〜５．６０に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４及び５．６。試料を１時間攪拌せずに放置した。１時間後に撮影した顕微鏡写真は４．４〜５．０のｐＨ範囲でさまざまなサイズ及び形状の結晶様沈殿を、そして５．２〜５．６のｐＨ範囲で僅かな針状結晶を示している。
【０３２６】
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム４ｍＬ中に２４．８ｍｇのＨＩＭ２と５４．９ｍｇのＩＮ１０５を溶解させることにより、ＨＩＭ２及びＩＮ１０５の新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌを用いて、溶液をｐＨ３．０９に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに１６μＬの融解フェノールと１．７５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。その後、反応フラスコに対し、４％の酸性化水性ＺｎＣｌ２４０μＬを加えた。次に、５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々において０．５００ｍＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを３．４７〜５．６０に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４及び５．６（図１３Ｂ参照）。試料を１時間攪拌せずに放置した。１時間後に撮影した顕微鏡写真はほとんどが４．４〜５．０のｐＨ範囲からさまざまな円形サイズの結晶様沈殿をそして５．２〜５．６のｐＨ範囲でさまざまな形状及びサイズの結晶を示している。
【０３２７】
９．９．５  ＨＩＭ２及びＩＮ１０５のＲ型共結晶化Ｚｎ錯体の調製
９．９．６  ５０：５０（ＨＩＭ２：ＩＮ１０５）
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム４ｍＬ中に３７．４ｍｇのＨＩＭ２と３５．９ｍｇのＩＮ１０５を溶解させることにより、ＨＩＭ２及びＩＮ１０５の新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌを用いて、溶液をｐＨ２．６０に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに１６μＬの融解フェノールと１．７５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。その後、反応フラスコに対し、４％の酸性化水性ＺｎＣｌ２４０μＬを加えた。次に、５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々において０．５００ｍＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを２．１５〜５．６０に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４及び５．６。試料を２４時間攪拌せずに放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真はｐＨ＝４．６〜５．６でさまざまな形状及びサイズの結晶固体を示した。
【０３２８】
９．９．７  ７０：３０（ＨＩＭ２：ＩＮ１０５）
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム４ｍＬ中に５７．０ｍｇのＨＩＭ２と２４．５ｍｇのＩＮ１０５を溶解させることにより、ＨＩＭ２及びＩＮ１０５の新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌを用いて、溶液をｐＨ２．４３に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに１６μＬの融解フェノールと１．７５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。その後、反応フラスコに対し、４％の酸性化水性ＺｎＣｌ２４０μＬを加えた。次に、５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々において０．５００ｍＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを２．９２〜５．６０に調整した：４．４、４．６（図１４Ａ参照）、４．８、５．０、５．２、５．４及び５．６。試料を２４時間攪拌せずに放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真はｐＨ５．０〜５．２のｐＨ範囲で針状結晶を示した。
【０３２９】
９．９．８  ３０：７０（ＨＩＭ２：ＩＮ１０５）
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム４ｍＬ中に２４．１ｍｇのＨＩＭ２と５３．８ｍｇのＩＮ１０５を溶解させることにより、ＨＩＭ２及びＩＮ１０５の新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌを用いて、溶液をｐＨ２．３５に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに１６μＬの融解フェノールと１．７５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。その後、反応フラスコに対し、４％の酸性化水性ＺｎＣｌ２４０μＬを加えた。次に、５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々において０．５００ｍＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを２．６０〜５．６０に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０（図１４Ｂ参照）、５．２、５．４及び５．６。試料を２４時間攪拌せずに放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真はｐＨ５．０〜５．２のｐＨ範囲で針状結晶を示した。
【０３３０】
９．９．９  ＨＩＭ２及びヒトインスリンのＲ型共結晶化Ｚｎ錯体の調製
９．９．１０  ５０：５０（ＨＩＭ２：インスリン）
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム４ｍＬ中に３９．２ｍｇのＨＩＭ２と３６．７ｍｇのインスリンを溶解させることにより、ＨＩＭ２及びインスリンの新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌを用いて、溶液をｐＨ２．５３に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに１６μＬの融解フェノールと１．７５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。その後、反応フラスコに対し、４％の酸性化水性ＺｎＣｌ２４０μＬを加えた。次に、５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々において０．５００ｍＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを２．８２〜５．６０に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２（図１５Ａ参照）、５．４及び５．６。試料を２４時間攪拌せずに放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真はｐＨ５．２及び５．４でさまざまな形状及びサイズの結晶様の固体を示した。数多くの小さい針状結晶がｐＨ５．６で観察された。
【０３３１】
９．９．１１  ７０：３０（ＨＩＭ２：インスリン）
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム４ｍＬ中に５６．５ｍｇのＨＩＭ２と２０．２ｍｇのインスリンを溶解させることにより、ＨＩＭ２及びインスリンの新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌを用いて、溶液をｐＨ３．２３に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに１６μＬの融解フェノールと１．７５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。その後、反応フラスコに対し、４％の酸性化水性ＺｎＣｌ２４０μＬを加えた。次に、５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々において０．５００ｍＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを２．８２〜５．６０に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４及び５．６。試料を２４時間攪拌せずに放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真はｐＨ５．２及び５．６でさまざまな形状及びサイズの結晶様の固体を示した。
【０３３２】
９．９．１２  ３０：７０（ＨＩＭ２：インスリン）
ｐＨ７．５の２５０ｍＭの酢酸アンモニウム４ｍＬ中に２１．８ｍｇのＨＩＭ２と４９．２ｍｇのインスリンを溶解させることにより、ＨＩＭ２及びインスリンの新鮮な溶液を調製した。５ＭのＨＣｌを用いて、溶液をｐＨ３．２３に調整した。４０〜６０℃の温水浴中で固体フェノールを融解させた。反応フラスコに１６μＬの融解フェノールと１．７５ｍＬの９５％ＥｔＯＨを添加した。その後、反応フラスコに対し、４％の酸性化水性ＺｎＣｌ２４０μＬを加えた。次に、５ＭのＮＨ４ＯＨを用い、以下の所望のｐＨの各々において０．５００ｍＬのアリコートを引き抜きながら、溶液のｐＨを２．９３〜５．６０に調整した：４．４、４．６、４．８、５．０、５．２、５．４（図１５Ｂ参照）及び５．６。試料を２４時間攪拌せずに放置した。２４時間後に撮影した顕微鏡写真はｐＨ４．８で平坦な雪片様の結晶を示した。ｐＨ５．０では、針状及び雪片様の結晶の混合が存在した。ｐＨ５．２〜５．６では数多くの小さい針状結晶が観察された。
【０３３３】
１０  Ｚｎ錯体の水溶解度
１ｍＬ入りの円錐形反応バイアルびんに、０．１Ｍのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ろ過済み、ｐＨ＝７．４）２００マイクロリットルを添加した。このバイアルびんに対して、飽和が観察されるまでゆっくりと少量の試料を添加した。定期的に溶液をボルテックス処理した。飽和時点で、バイアルびんを小さい遠心分離管の中に置き、室温で３分間２０００ＲＰＭで遠心分離した。遠心分離の後、上清から１０μＬの試料を取り出し、４９０μＬの緩衝液（０．１ＭのＰＢＳ）中で希釈した。ＨＰＬＣを介してこの希釈試料を分析してその濃度を判定した。
【０３３４】
【表７】
2014043470.tif 000054
【０３３５】
１１  Ｚｎ  ＩＮ１０５錯体のためのインビトロ酵素耐性例
インスリン化合物複合体（ＩＮ１０５）を１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ約７．４）内に供給し、その濃度をＨＰＬＣにより判定した（最高０．６ｍｇ／ｍＬで親と複合体間の等モル比較を行なうことができるように溶液を緩衝液で希釈する）。最高７．５３Ｕ／ｍＬの濃度まで１ｍＭのＨＣｌ中で、凍結乾燥されたキモトリプシン酵素を再懸濁させた。試料管に、各試料の１．５３ｍＬアリコートを加え、対照管内に０．８５０ｍＬを加えた。試料は、１試料につき４本の対照管と共にデュプリケートにてテストした。アリコートを３７℃で１５分間サーモミキサー内でインキュベートした。その後、１７μＬのキモトリプシン酵素を各々の試料管に加えた。各々の対照管に１ｍＭのＨＣｌ５μＬを加えた。添加直後に、試料及び対照管から２００μＬを取り出し、先に遠心分離管内にアリコートとして引き抜いた１％のＴＦＡ５０μＬの中に入れた。この試料をＴ＝０として用いた。
【０３３６】
以下の間隔でインスリン化合物（Ｚｎ無し）、ＩＮ１０５（Ｚｎ無し）及びインスリン化合物（速効型インスリン化合物）についてのサンプリング手順を反復した：０、２、５、８、１２、１５及び３０分。対照手順は以下の間隔で反復した：０、８、１５、３０分。Ｔ型及びＲ型の試料については、手順を以下の間隔で反復した：０、１２、４０及び６０分。ＨＰＬＣを介して分析を行なうことができるまで、−２０℃で試料を保管した。各消化物についてそれぞれのＴ＝０分に対して分解百分率を判定するためにＨＰＬＣを実施した。残留百分率の自然対数と時間の関係をプロットし、各消化物について線形回帰を実施した。ｔ１／２：−０．６９３／勾配という等式を用いて半減期を計算した。
【０３３７】
【表８】
2014043470.tif 000055
【０３３８】
１２．  処方物例
１２．１  液体処方物例
１２．１．１  Ｒ６型Ｚｎ−ＨＩＭ２緩衝液研究のための緩衝溶液
【０３３９】
【表９】
2014043470.tif 000056
【０３４０】
１２．１．２  カプリン酸／ラウリン酸処方物経口液体希釈剤の調製
所要滅菌水体積の約６０％を適切な容器内に移した。容器にトロメタミン、トロラミン、無水クエン酸及び水酸化ナトリウムペレットを容器に加え、溶解するまで充分に混合した。温度を２１〜２５℃（又は室温）に調整し、液体のｐＨを測定した。１Ｎの水酸化ナトリウム又は１Ｎの塩酸を用いて必要に応じてｐＨを７．７〜７．９に調整した。その後、ホットプレート上で温めることにより温度を４５〜５０℃に調整し、この温度を維持した。次に温溶液にカプリン酸を添加し、カプリン酸が溶解するまで混合した。温度を２１〜２５℃（又は室温）に調整し、液体のｐＨを測定した。必要に応じて、ＩＮの水酸化ナトリウム又は１Ｎの塩酸を用いてｐＨを７．７〜７．９に調整した。次に５分間溶液を混合した。所要体積の１００％に等しくなるよう滅菌水を適当な量だけ添加し、充分に混合した。
【０３４１】
【表１０】
2014043470.tif 000057
【０３４２】
投薬研究用に適切な濃度を達成するのに必要な量で、ＩＮ１０５、ＨＩＭ２又はＺｎＨＩＭ２を検量し、例えば（タンパク質の）１ｍｇのＩＮ１０５を検量し、１ｍＬの処方物と組合わせて、処方物中１ｍｇ／ｍＬのＩＮ１０５を生成した。
【０３４３】
１２．１．３  オレイン酸／カプリン酸／ラウリン酸／コール酸塩処方物経口液体希釈剤の調製
下表に示した構成要素を有するＲ型ＺｎＨＩＭ２の経口液体処方物を調製した：
【０３４４】
【表１１】
2014043470.tif 000058
【０３４５】
１ｍｇ／ｍＬタンパク質当量のＲ型ＺｎＨＩＭ２（ＺｎＨＩＭ２−Ｒ）を含有するように、経口液体試料を調製した。冷凍庫（−２０℃）からＺｎＨＩＭ２−Ｒを取り出し、デシケータ内に置き、室温に戻した。ＺｎＨＩＭ２−Ｒの１ｍｇ／ｍＬのタンパク質当量を以下の通り経口液体希釈溶液中で調製した。６．４ｍｇのＺｎＨＩＭ２−Ｒを秤量した。その後、容器に５．０ｍＬの経口液体希釈物を移し、穏やかに旋回させて混合した。溶液が溶解するのに約４５分かかった。結果として得た溶液は懸濁液（濁った外観）であった。投薬の前に、溶液を穏やかに６０秒間旋回させて、溶液が均質な溶液であることを確認した。ＺｎＨＩＭ２−Ｒについては、タンパク質含有量は７８．６％、１ｍｇ／ｍＬタンパク質当量、数量＝５ｍＬであった。ＺｎＨＩＭ２−Ｒの量＝（１ｍｇ／ｍＬ）／（０．７８６）｝×（５．０ｍＬ）＝６．４ｍｇ。ＺｎＨＩＭ２−Ｒ濃度＝（６．４ｍｇ）／（５．０ｍＬ）＝１．２８ｍｇ／ｍＬ（タンパク質含有量について調整された１ｍｇ／ｍＬ当量）。
【０３４６】
１２．１．４  カプリン酸液体処方物の調製
所要滅菌水体積の約６０％を適切な容器内に移した。容器にトロメタミン、トロラミン、無水クエン酸及び水酸化ナトリウムペレットを容器に加え、溶解するまで充分に混合した。温度を２１〜２５℃（又は室温）に調整し、液体のｐＨを測定した。１Ｎの水酸化ナトリウム又は１Ｎの塩酸を用いて必要に応じてｐＨを７．７〜７．９に調整し、この温度を維持した。その後、ホットプレート上で温めることにより温度を４５〜５０℃に調整した。次に温溶液にカプリン酸を添加し、カプリン酸が溶解するまで混合した。温度を２１〜２５℃（又は室温）に調整し、液体のｐＨを測定した。必要に応じて、ＩＮの水酸化ナトリウム又は１Ｎの塩酸を用いてｐＨを７．７〜７．９に調整した。次に５分間溶液を混合した。所要体積の１００％に等しくなるよう滅菌水を適当な量だけ添加し、充分に混合した。
【０３４７】
【表１２】
2014043470.tif 000059
【０３４８】
投薬研究用に適切な濃度を達成するのに必要な量で、ＩＮ１０５を検量し、例えば（タンパク質の）１ｍｇのＩＮ１０５を検量し、１ｍＬの処方物と組合わせて、処方物中１ｍｇ／ｍＬのＩＮ１０５を生成した。
【０３４９】
１２．１．５  リン酸緩衝液液体処方物中のカプリン酸塩及び／又はラウリン酸塩
ｐＨ７．８又は８．２の１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液の調製。１Ｌ入りフラスコに１．１７グラムのモノナトリウムリン酸塩一水和物１．１７グラムを移した。約５００ｍＬの滅菌水を添加し、溶解するまで充分に混合した。次に２４．５８グラムの第２リン酸ナトリウム七水化物２４．５８グラムを添加し、溶解するまで充分混合した。滅菌水で、体積まで希釈し、充分に混合した。０．２２μｍのフィルターを通してろ過した。１ＮのＨＣｌ又は１ＮのＮａＯＨで７．８又は８．２にｐＨを調整した。
【０３５０】
ＩＮ１０５のためには、ｐＨ７．８又は８．２の適切な体積のリン酸緩衝液の６０％を適当な容器に移した。次に、最終溶液の３％ｗ／ｖを生成するように計算した量のカプリン酸を添加し、溶解するまで充分混合した。その後１ＮのＨＣｌ又は１ＮのＮａＯＨでｐＨを７．８又は８．２に調整した。ｐＨ７．８又は８．２のリン酸緩衝液で適切な体積（例えば１００ｍＬ）まで希釈した。
【０３５１】
【表１３】
2014043470.tif 000060
【０３５２】
ＢＮ−０５４については、適当な容器内でｐＨ７．８の１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液４００グラムを計量した。９．７グラムのカプリン酸ナトリウムと１１．１グラムのラウリン酸ナトリウムを添加し、溶解するまで充分に混合した。５００グラムの正味重量に等しくなるように適切な量のｐＨ７．８の１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液を添加した。
【０３５３】
【表１４】
2014043470.tif 000061
【０３５４】
１２．１．６  アルギニン又はトロラミンを用いた液体処方物
ｐＨ７．８の１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液の調製。１Ｌ入りフラスコに１．１７グラムのモノナトリウムリン酸塩一水和物１．１７グラムを移した。約５００ｍＬの滅菌水を添加し、溶解するまで充分に混合した。次に２４．５８グラムの第２リン酸ナトリウム七水化物２４．５８グラムを添加し、溶解するまで充分混合した。滅菌水で、容積まで希釈し、充分に混合した。０．２２μｍのフィルターを通してろ過した。１ＮのＨＣｌ又は１ＮのＮａＯＨで７．８にｐＨを調整した。
【０３５５】
適当な容器内に適切な体積のｐＨ７．８のリン酸緩衝液の６０％を移した。容器に（下表に記されている通りの）適切な量のアルギニン又はトロラミンを加え、溶解するまで充分混合した。その後最終溶液の３％ｗ／ｖを生成するように計算した量のカプリン酸塩を加えて、溶解するまで充分混合した。次に、１ＮのＨＣｌ又は１ＮのＮａＯＨを用いてｐＨを７．８に調整した。ｐＨ７．８のリン酸緩衝液で適切な体積（例えば１００ｍＬ）まで希釈した。
【０３５６】
【表１５】
2014043470.tif 000062
【０３５７】
投薬研究用に適切な濃度を達成するのに必要な量で、ＩＮ１０５を検量し、例えば（タンパク質の）１ｍｇのＩＮ１０５を検量し、１ｍＬの処方物と組合わせて、処方物中１ｍｇ／ｍＬのＩＮ１０５を生成した。
【０３５８】
１２．１．７  カプリル酸を用いた液体処方物
所要滅菌水体積の約６０％を適切な容器内に移した。容器にトロメタミン、トロラミン、無水クエン酸及び水酸化ナトリウムペレットを容器に加え、溶解するまで充分に混合した。温度を２１〜２５℃（又は室温）に調整し、液体のｐＨを測定した。１Ｎの水酸化ナトリウム又は１Ｎの塩酸を用いて必要に応じてｐＨを７．７〜７．９に調整した。その後、ホットプレート上で温めることにより温度を４５〜５０℃に調整し、この温度を維持した。次に温溶液にカプリル酸を添加し、カプリル酸が溶解するまで混合した。温度を２１〜２５℃（又は室温）に調整し、液体のｐＨを測定した。必要に応じて、ＩＮの水酸化ナトリウム又は１Ｎの塩酸を用いてｐＨを７．７〜７．９に調整した。次に５分間溶液を混合した。所要体積の１００％に等しくなるよう滅菌水を適当な量だけ添加し、充分に混合した。
【０３５９】
【表１６】
2014043470.tif 000063
【０３６０】
投薬研究用に適切な濃度を達成するのに必要な量で、ＩＮ１０５を検量し、例えば（タンパク質の）１ｍｇのＩＮ１０５を検量し、１ｍＬの処方物と組合わせて、処方物中１ｍｇ／ｍＬのＩＮ１０５を生成した。
【０３６１】
１２．１．８  リノール酸を用いた液体処方物
ｐＨ７．８の１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液の調製。１Ｌ入りフラスコに１．１７グラムのモノナトリウムリン酸塩一水和物１．１７グラムを移した。約５００ｍＬの滅菌水を添加し、溶解するまで充分に混合した。次に２４．５８グラムの第２リン酸ナトリウム七水化物２４．５８グラムを添加し、溶解するまで充分混合した。滅菌水で、容積まで希釈し、充分に混合した。０．２２μｍのフィルターを通してろ過した。１ＮのＨＣｌ又は１ＮのＮａＯＨで７．８にｐＨを調整した。
【０３６２】
適当な容器内に適切な体積のｐＨ７．８のリン酸緩衝液の６０％を移した。その後最終溶液の３％ｗ／ｖを生成するように計算した量のリノール酸ナトリウムを加えて、溶解するまで充分混合した。次に、１ＮのＨＣｌ又は１ＮのＮａＯＨを用いてｐＨを７．８に調整した。ｐＨ７．８のリン酸緩衝液で適切な体積（例えば１００ｍＬ）まで希釈した。
【０３６３】
【表１７】
2014043470.tif 000064
【０３６４】
１２．１．９  カプリン酸／ラウリン酸液体処方物の調製
所要滅菌水体積の約６０％を適切な容器内に移した。容器にトロメタミン、トロラミン、無水クエン酸及び水酸化ナトリウムペレットを容器に加え、溶解するまで充分に混合した。温度を２１〜２５℃（又は室温）に調整し、液体のｐＨを測定した。１Ｎの水酸化ナトリウム又は１Ｎの塩酸を用いて必要に応じてｐＨを７．７〜７．９に調整し。その後、ホットプレート上で温めることにより温度を４５〜５０℃に調整し、この温度を維持した。次に温溶液にカプリン酸及び／又はラウリル酸を添加し、カプリン酸及び／又はラウリン酸が溶解するまで混合した。温度を２１〜２５℃（又は室温）に調整し、液体のｐＨを測定した。必要に応じて、ＩＮの水酸化ナトリウム又は１Ｎの塩酸を用いてｐＨを７．７〜７．９に調整した。次に５分間溶液を混合した。所要体積の１００％に等しくなるよう滅菌水を適当な量だけ添加し、充分に混合した。
【０３６５】
【表１８】
2014043470.tif 000065
【０３６６】
投薬研究用に適切な濃度を達成するのに必要な量で、ＩＮ１０５を検量し、例えば（タンパク質の）１ｍｇのＩＮ１０５を検量し、１ｍＬの処方物と組合わせて、処方物中１ｍｇ／ｍＬのＩＮ１０５を生成した。
【０３６７】
１２．２．  固体投薬処方物例
１２．２．１  Ｎｏｂｅｘ−ＩＮ１０５−［８５４］−を用いたカプリン酸塩／ラウリン酸塩固体投薬処方物の調製及び溶解プロファイル
計量紙片（ｗｅｉｇｈ  ｐａｐｅｒ）上に約５８ｍｇのカプリン酸ナトリウム、５７ｍｇのラウリン酸ナトリウム、２８６ｍｇのマンニトール、３０ｍｇのでんぷんグリコール酸ナトリウム及び６ｍｇ（タンパク質）のＮｏｂｅｘ−ＩＮ１０５を移し、撤底的に配合する。配合物をプレスに移し、約３５０ｐｓｉで圧縮して錠剤を形成する。
【０３６８】
【表１９】
2014043470.tif 000066
【０３６９】
ＵＳＰ器具２溶解ユニットを用いて、溶解テストを実施した。媒質は水で、パドル速度は５０ｒｐｍ、媒質体積は５００ｍＬであった。勾配系を用いてＨＰＬＣにより溶解試料を分析した。移動相は、０．１％のＴＦＡを伴う水（移動相Ａ）及び０．１％のＴＦＡを伴うアセトニトリル（移動相Ｂ）であった。利用された勾配は以下の通りであった：０分、１００％移動相Ａ；１１分、６５％移動相Ａ；１５分、２０％移動相Ａ；１６分、２０％移動相Ａ；１７分、１００％移動相Ａ。波長は２１４ｎｍであり、カラムはＣ１８（１５０×２ｍｍ）であった。以下の表及びグラフは、６ｍｇのＺｎ−ＩＮ１０５（タンパク質）、２８６ｍｇのマンニトール、５８ｍｇのカプリン酸ナトリウム、５７ｍｇのラウリン酸ナトリウム及び３０ｍｇのでんぷんグリコール酸ナトリウム（Ｅｘｐｌｏｔａｂ）を含有するＮｏｂｅｘ−Ｚｎ−ＩＮ１０５錠剤処方物［８５４］の溶解テストのために得た溶解データについて要約している。
【０３７０】
【表２０】
2014043470.tif 000067
【０３７１】
【表２１】
2014043470.tif 000068
【０３７２】
【表２２】
2014043470.tif 000069
【０３７３】
１２．２．２  錠剤１個あたり１４３ｍｇのカプリン酸塩及び１４０ｍｇのラウリン酸塩の固体剤形（錠剤）処方物調製
処方物Ｎｏｂｅｘ−ＩＮ１０５−［８５６］の調製
計量紙片上に約１４３ｍｇのカプリン酸ナトリウム、１４０ｍｇのラウリン酸ナトリウム、１５０ｍｇのマンニトール、３０ｍｇのでんぷんグリコール酸ナトリウム及び６ｍｇ（タンパク質）のＮｏｂｅｘ−ＩＮ１０５を移し、撤底的に配合する。配合物をプレスに移し、約３５０ｐｓｉで圧縮して錠剤を形成する。
【０３７４】
【表２３】
2014043470.tif 000070
【０３７５】
ＵＳＰ器具２溶解ユニットを用いて、溶解テストを実施した。媒質は水で、パドル速度は５０ｒｐｍ、媒質体積は５００ｍＬであった。勾配系を用いてＨＰＬＣにより溶解試料を分析した。移動相は、０．１％のＴＦＡを伴う水（移動相Ａ）及び０．１％のＴＦＡを伴うアセトニトリル（移動相Ｂ）であった。利用された勾配は以下の通りであった：０分、１００％移動相Ａ；１１分、６５％移動相Ａ；１５分、２０％移動相Ａ；１６分、２０％移動相Ａ；１７分、１００％移動相Ａ。波長は２１４ｎｍであり、カラムはＣ１８（１５０×２ｍｍ）であった。以下の表及びグラフは、６ｍｇのＺｎ−ＩＮ１０５（タンパク質）、１５０ｍｇのマンニトール、１４３ｍｇのカプリン酸ナトリウム、１４０ｍｇのラウリン酸ナトリウム及び３０ｍｇのでんぷんグリコール酸ナトリウム（Ｅｘｐｌｏｔａｂ）を含有するＮｏｂｅｘ−Ｚｎ−ＩＮ１０５錠剤の溶解テストのために得た溶解データについて要約している。
【０３７６】
【表２４】
2014043470.tif 000071
【０３７７】
【表２５】
2014043470.tif 000072
【０３７８】
【表２６】
2014043470.tif 000073
【０３７９】
１２．２．３  錠剤１個あたり１４３ｍｇのカプリン酸塩の固体剤形（錠剤）処方物調製
処方物Ｎｏｂｅｘ−ＩＮ１０５−［８５６］の調製
計量紙片上に約１４３ｍｇのカプリン酸ナトリウム、１５０ｍｇのマンニトール、３０ｍｇのでんぷんグリコール酸ナトリウム及び６ｍｇ（タンパク質）のＮｏｂｅｘ−ＩＮ１０５を移し、撤底的に配合する。配合物をプレスに移し、約３５０ｐｓｉで圧縮して錠剤を形成する。
【０３８０】
【表２７】
2014043470.tif 000074
【０３８１】
ＵＳＰ器具２溶解ユニットを用いて、溶解テストを実施した。媒質は水で、パドル速度は５０ｒｐｍ、媒質体積は５００ｍＬであった。勾配系を用いてＨＰＬＣにより溶解試料を分析した。移動相は、０．１％のＴＦＡを伴う水（移動相Ａ）及び０．１％のＴＦＡを伴うアセトニトリル（移動相Ｂ）であった。利用された勾配は以下の通りであった：０分、１００％移動相Ａ；１１分、６５％移動相Ａ；１５分、２０％移動相Ａ；１６分、２０％移動相Ａ；１７分、１００％移動相Ａ。波長は２１４ｎｍであり、カラムはＣ１８（１５０×２ｍｍ）であった。以下の表及びグラフは、６ｍｇのＺｎ−ＩＮ１０５（タンパク質）、１５０ｍｇのマンニトール、１４３ｍｇのカプリン酸ナトリウム、及び３０ｍｇのでんぷんグリコール酸ナトリウム（Ｅｘｐｌｏｔａｂ）を含有するＮｏｂｅｘ−Ｚｎ−ＩＮ１０５錠剤の溶解テストのために得た溶解データについて要約している。
【０３８２】
【表２８】
2014043470.tif 000075
【０３８３】
【表２９】
2014043470.tif 000076
【０３８４】
１２．２．４  錠剤１個あたり２８６ｍｇのカプリン酸塩の固体剤形（錠剤）処方物調製
処方物Ｎｏｂｅｘ−ＩＮ１０５−［８６０］の調製
計量紙片上に約２８６ｍｇのカプリン酸ナトリウム、１５０ｍｇのマンニトール、３０ｍｇのでんぷんグリコール酸ナトリウム及び６ｍｇ（タンパク質）のＮｏｂｅｘ−ＩＮ１０５を移し、撤底的に配合する。配合物をプレスに移し、約３５０ｐｓｉで圧縮して錠剤を形成する。
【０３８５】
【表３０】
2014043470.tif 000077
【０３８６】
ＵＳＰ器具２溶解ユニットを用いて、溶解テストを実施した。媒質は水で、パドル速度は５０ｒｐｍ、媒質体積は５００ｍＬであった。勾配系を用いてＨＰＬＣにより溶解試料を分析した。移動相は、０．１％のＴＦＡを伴う水（移動相Ａ）及び０．１％のＴＦＡを伴うアセトニトリル（移動相Ｂ）であった。利用された勾配は以下の通りであった：０分、１００％移動相Ａ；１１分、６５％移動相Ａ；１５分、２０％移動相Ａ；１６分、２０％移動相Ａ；１７分、１００％移動相Ａ。波長は２１４ｎｍであり、カラムはＣ１８（１５０×２ｍｍ）であった。以下の表及びグラフは、６ｍｇのＺｎ−ＩＮ１０５（タンパク質）、１５０ｍｇのマンニトール、２８６ｍｇのカプリン酸ナトリウム、及び３０ｍｇのでんぷんグリコール酸ナトリウム（Ｅｘｐｌｏｔａｂ）を含有するＮｏｂｅｘ−Ｚｎ−ＩＮ１０５錠剤の溶解テストのために得た溶解データについて要約している。
【０３８７】
【表３１】
2014043470.tif 000078
【０３８８】
【表３２】
2014043470.tif 000079
【０３８９】
１２．２．５  錠剤１個あたり１００ｍｇのカプリン酸塩の固体剤形（錠剤）処方物調製
処方物Ｎｏｂｅｘ−ＩＮ１０５−［８６１］の調製
計量紙片上に約１００ｍｇのカプリン酸ナトリウム、１５０ｍｇのマンニトール、２５ｍｇのでんぷんグリコール酸ナトリウム及び６ｍｇ（タンパク質）のＮｏｂｅｘ−ＩＮ１０５を移し、撤底的に配合する。配合物をプレスに移し、約３５０ｐｓｉで圧縮して錠剤を形成する。
【０３９０】
【表３３】
2014043470.tif 000080
【０３９１】
ＵＳＰ器具２溶解ユニットを用いて、溶解テストを実施した。媒質は水で、パドル速度は５０ｒｐｍ、媒質体積は５００ｍＬであった。勾配系を用いてＨＰＬＣにより溶解試料を分析した。移動相は、０．１％のＴＦＡを伴う水（移動相Ａ）及び０．１％のＴＦＡを伴うアセトニトリル（移動相Ｂ）であった。利用された勾配は以下の通りであった：０分、１００％移動相Ａ；１１分、６５％移動相Ａ；１５分、２０％移動相Ａ；１６分、２０％移動相Ａ；１７分、１００％移動相Ａ。波長は２１４ｎｍであり、カラムはＣ１８（１５０×２ｍｍ）であった。以下の表及びグラフは、６ｍｇのＺｎ−ＩＮ１０５（タンパク質）、１５０ｍｇのマンニトール、１００ｍｇのカプリン酸ナトリウム及び２５ｍｇのでんぷんグリコール酸ナトリウム（Ｅｘｐｌｏｔａｂ）を含有するＮｏｂｅｘ−Ｚｎ−ＩＮ１０５錠剤の溶解テストのために得た溶解データについて要約している。
【０３９２】
【表３４】
2014043470.tif 000081
【０３９３】
【表３５】
2014043470.tif 000082
【０３９４】
１２．２．６  錠剤１個あたり１５０ｍｇのカプリン酸塩の固体剤形（錠剤）処方物調製
処方物Ｎｏｂｅｘ−ＩＮ１０５−［８６２］の調製
計量紙片上に約１５０ｍｇのカプリン酸ナトリウム、１５０ｍｇのマンニトール、２５ｍｇのクロスカルメロースナトリウム及び６ｍｇ（タンパク質）のＮｏｂｅｘ−ＩＮ１０５を移し、撤底的に配合する。配合物をプレスに移し、約３５０ｐｓｉで圧縮して錠剤を形成する。
【０３９５】
【表３６】
2014043470.tif 000083
【０３９６】
ＵＳＰ器具２溶解ユニットを用いて、溶解テストを実施した。媒質は水で、パドル速度は５０ｒｐｍ、媒質体積は５００ｍＬであった。勾配系を用いてＨＰＬＣにより溶解試料を分析した。移動相は、０．１％のＴＦＡを伴う水（移動相Ａ）及び０．１％のＴＦＡを伴うアセトニトリル（移動相Ｂ）であった。利用された勾配は以下の通りであった：０分、１００％移動相Ａ；１１分、６５％移動相Ａ；１５分、２０％移動相Ａ；１６分、２０％移動相Ａ；１７分、１００％移動相Ａ。波長は２１４ｎｍであり、カラムはＣ１８（１５０×２ｍｍ）であった。以下の表及びグラフは、６ｍｇのＺｎ−ＩＮ１０５（タンパク質）、１５０ｍｇのマンニトール、１５０ｍｇのカプリン酸ナトリウム、及び２５ｍｇのクロスカルメロースナトリウム（Ｅｘｐｌｏｔａｂ）を含有するＮｏｂｅｘ−Ｚｎ−ＩＮ１０５錠剤の溶解テストのために得た溶解データについて要約している。
【０３９７】
【表３７】
2014043470.tif 000084
【０３９８】
【表３８】
2014043470.tif 000085
【０３９９】
１３  インビトロ酵素耐性例
インスリン化合物複合体（ＨＩＭ２）を１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ約７．４）内に供給し、その濃度をＨＰＬＣにより判定する（最高０．６ｍｇ／ｍＬで親と複合体間の等モル比較を行なうことができるように溶液を緩衝液で希釈する）。７．５３Ｕ／ｍＬの濃度まで１ｍＭのＨＣｌ中で、凍結乾燥されたキモトリプシン酵素を再懸濁させた。試料管に、各試料の１．５３ｍＬアリコートを加え、対照管内に０．８５０ｍＬを加えた。試料は、１試料につき４本の対照管と共にデュプリケートにてテストした。アリコートを３７℃で１５分間サーモミキサー内でインキュベートした。その後、１７μＬのキモトリプシン酵素を各々の試料管に加えた。各々の対照管に１ｍＭのＨＣｌ５μＬを加えた。添加直後に、試料及び対照管から２００μＬを取り出し、先に遠心分離管内にアリコートとして引き抜いた１％のＴＦＡ５０μＬの中に入れた。この試料をＴ＝Ｏとして用いた。
【０４００】
以下の間隔でインスリン化合物（Ｚｎ無し）、ＨＩＭ（Ｚｎ無し）及びインスリン（速効型インスリン化合物）についてのサンプリング手順を反復した：０、２、５、８、１２、１５及び３０分。対照手順は以下の間隔で反復した：０、８、１５、３０分。Ｔ型及びＲ型の試料については、手順を以下の間隔で反復した：０、１２、４０及び６０分。ＨＰＬＣを介して分析を行なうことができるまで、−２０℃で試料を保管した。各消化物についてそれぞれのＴ＝０分に対して分解百分率を判定するためにＨＰＬＣを実施した。残留百分率の自然対数と時間の関係をプロットし、各消化物について線形回帰を実施した。ｔ１／２：−０．６９３／勾配という等式を用いて半減期を計算した。
【０４０１】
【表３９】
2014043470.tif 000086
【０４０２】
【表４０】
2014043470.tif 000087
【０４０３】
１４．  インビトロ例
１４．１  長時間型マウス血液グルコース糖検定（ＭＢＧＡ）
５匹の雄のＣＦ−１マウス（チャールズリバーラボラトリー（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ：  ２５〜３０ｇ）の６組の用量グループは、インスリン化合物複合体（テスト品）又は組換え型ヒトインスリンのいずれかの皮下注射を受けた。テスト品を、０．１％ｗ／ｗのウシ血清アルブミンを含有するリン酸緩衝液（０．０１Ｍ、ｐＨ約７．４）で戻し１００、６６．６、４３．３、３０、２０及び１３．３μｇ／ｋｇで投薬した。インスリンを、０．１％ｗ／ｗのウシ血清アルブミンを含有するリン酸緩衝液（０．０１Ｍ、ｐＨ約７．４）で戻し、５０、３３．３、２１．７、１５、１０及び６．７μｇ／ｋｇで投薬した。大腿部及びそけい部が形成する嚢状腔の中に皮下用量を受けた後、動物を室温で３０分間かごに戻し、次に急速に麻酔し、終末的に出血させた。グルコース検定のために、血液試料をヘパリン管内に収集した。グルコース検定が遅延した場合、管を氷水中に保管し、検定前に室温まで暖め直した。
【０４０４】
メーカーの指示事項に従って各使用日の開始時点で較正するグルコース計（例えばＯｎｅ  Ｔｏｕｃｈ（登録商標）  Ｂａｓｉｃ；ライフスキャン（Ｌｉｆｅｓｃａｎ）を用いて、血漿グルコースを測定した。次に、組換え型ヒトインスリン応答について生成される標準曲線との関係においてインスリン化合物複合体の効能を計算した。計算は、組換え型ヒトインスリンが２７．４ＩＵ／ｍｇの効能をもつという仮定に基づいていた。
【０４０５】
図１６−２０に結果を示している。図１６は、ＨＩＭ２についてのＭＢＧＡバイオポテンシープロファイルを示す。図１７は、Ｚｎ−ＨＩＭインスリン化合物製品Ｒ型についてのＭＢＧＡバイオポテンシープロファイルを示す。図１８は、Ｚｎ−ＨＩＭ２インスリン化合物製品Ｔ型についてのＭＢＧＡバイオポテンシープロファイルを示す。図１９は、プロタミンを伴うＺｎ−ＨＩＭ２インスリン化合物製品についてのＭＢＧＡバイオポテンシープロファイルを示す。図２０は、投薬から３０分後及び９０分後におけるＲ型プロタミン錯体のグルコース低下効果を示す。これらの結果は、ＨＩＭ２のバイオポテンシーがＺｎ＋＋の錯化によって著しく低減されないことを示している。Ｒ型プロタミン錯体（図１７［７］を参照）は、９０分後よりも３０分後において大きいグルコース低減を示している。
【０４０６】
さらに、図２１〜２４は、以下のような構造を有するＩＮ−１８６、ＩＮ−１９２、ＩＮ−１９０、ＩＮ−１９１、ＩＮ−１８９、ＩＮ−１７８、ＩＮ−１９３、ＩＮ−１９４、ＩＮ−１８５、ＩＮ−１９６及びＩＮ−１９７についてのＭＢＧＡバイオポテンシープロファイルを示している：
Ｂ１モノ複合体、ＩＮ−１８６：
【化４６】
2014043470.tif 000088
Ｂ２９モノ複合体、ＩＮ−１９７；
【化４７】
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Ｂ２９モノ複合体、ＩＮ−１８７：
【化４８】
2014043470.tif 000090
Ｂ２９モノ複合体、ＩＮ−１７８：
【化４９】
2014043470.tif 000091
Ｂ２９モノ複合体、ＩＮ−１９０：
【化５０】
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Ｂ２９モノ複合体、ＩＮ−１９６：
【化５１】
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Ｂ２９モノ複合体、ＩＮ−１９１：
【化５２】
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Ｂ２９モノ複合体、ＩＮ−１８９：
【化５３】
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【０４０７】
１４．２  イヌクランプ研究
１４．２．１  初期ＨＩＭ２研究
大腿動脈内にカテーテルを設置することによって、イヌ（ｎ＝３又は６）を外科的に準備した（イソフルラン麻酔）。動物を１６〜１７日間回復させ、その後一晩断食させ、意識ある状態で研究した。６０分の平衡期間後に、２０分の統制期間があり、その後口から薬物を与えた。実施例に示されている通りに調製した緩衝溶液中でＺｎ＋＋−ＨＩＭ２Ｒ型インスリン化合物をテストした。「誤り！出典不明」。さらに、実施例に示されている通りに調製したカプリン酸及びラウリン酸を含有する経口液体処方物中のＲ型及びＮＰＨ型錯体をテストした。「誤り！出典不明」。
【０４０８】
３つのテスト試料全てを１用量レベルのみでテストした（用量レベルを以前の実験結果に基づいて同定した）。血漿グルコースレベルを次に、４時間脚の静脈を通してＤ−２０の輸液により正常血糖値でクランプした。グルコース、インスリン化合物及びＣ−ペプチドの測定のため−２０、０、５、１０、２０、３０、４５、９０、１２０、１８０及び２４０分で血液試料（４ｍｌ）を採取した。血漿グルコースレベルをクランプするために必要なだけ、動脈血試料を得た。各実験において合計７２ｍｌの血液を採取した。
【０４０９】
次の測定を実施した：グルコース輸液速度、インスリン化合物濃度、Ｃ−ペプチド濃度、及び血漿Ｃペプチドレベル（内生的インスリン化合物放出の推定を可能にするため）。正常血糖を維持するのに必要なグルコース輸液速度は、インスリン化合物作用指数を提供する。
【０４１０】
実験に従って、カテーテルの自由端部を皮下に埋め、２週間イヌを回復させてから、異なるテスト品を使用するもう１つの研究を行なった。投薬する上で動物を無作為化し、合計３回使用した。イヌの合計数は６であった。
【０４１１】
図２５及び２６は結果を示している。
【０４１２】
１４．２．２  初期ＩＮ１０５研究
乾燥重量に基づいて３４％のタンパク質、４６％の炭水化物、１４．５％の脂肪及び５．５％の繊維という規定食での給餌を受けていた一晩断食済みの意識ある雑種犬６頭について研究を行なった。各動物には、実験のおよそ３週間前に、別途記述されている通り（１）、大腿動脈内にサイラスティックカテーテルを挿入した。実験当日にカテーテルを局所麻酔下でその皮下嚢状腔から除去した。テスト品；Ｎｏｂｅｘ−ＩＮ１０５（ロット＃ＫＪ−１７３−０９５＆ＫＪ−１７３−１１６）は１．０ｍｇ／ｍｌの濃度で経口脂肪酸処方物（Ｎｏｂｅｘ−ＩＮ−［７５３］−０４０４２２）の形で提供された。各々のイヌは、０．２５ｍｇ／ｋｇの経口用量のＮｏｂｅｘ−ＩＮ１０５（１．０ｍｇ／ｍｌ、０．２５ｍｌ／ｋｇ投薬体積）を受けた。ｔ＝０でＮｏｂｅｘ−ＩＮ１０５を与え、正常血糖値を維持するべく橈側皮静脈を通してグルコース（Ｄ−２０）を輸液した。前述の通り（１）インスリン及びグルコースを測定するため動脈血液試料を抜き取った。実験を完了した後、初期外科処置の間そうであったように、動脈カテーテルを皮下に埋めた。
【０４１３】
実験中、１匹のイヌが投薬後直ぐに嘔吐し、用量のうちの一部分しか投与されなかった。従って、この実験からの結果は、このイヌから得たデータを伴ったものと伴わないもので報告された。
【０４１４】
動脈血漿インスリンレベルは、Ｎｏｂｅｘ−ＩＮ１０５の経口投与後、異常値を（経口−２ｉ）を含めて、６匹のイヌ全てにおいて上昇した。平均動脈インスリンは、６．０±１．４μＵ／ｍｌ（６．３±１．７μＵ／ｍｌ、ｎ＝５）から投与から１０分後の１０９．４±３１．４μＵ／ｍｌ（１２７．８±３０．１μＵ／ｍｌ、ｎ＝５）のピークまで上昇し、その後降下して、１５０分後までに全てのイヌは基線インスリンレベルまで戻った（図２７及び２８）。
【０４１５】
正常血糖値はグリコース輸液により維持された。正常血糖値を維持するために必要とされるグルコース輸液速度は、動脈インスリンの上昇がより大きいものである動物において最大であった（図２７及び２８）。グルコース輸注速度曲線下平均面積（ＡＵＣ０−２４０）は、５７８．５±１４４．５ｍｇ／ｋｇ／分（６６９．４±１３７．７ｍｇ／ｋｇ／分、ｎ＝５）であった。
【０４１６】
１４．２．３  固体処方物
グルコース−クランプモデルを用いた処方物スクリーニング研究を、乾燥重量に基づいて３４％のタンパク質、４６％の炭水化物、１４．５％の脂肪及び５．５％の繊維という規定食での給餌を受けていた一晩断食済みの意識ある雑種犬について実施した。各動物には、実験のおよそ３週間前に別途記述されている通り（参考文献１）、大腿動脈内にサイラスティックカテーテルを挿入した。実験当日にカテーテルを局所麻酔下でその皮下嚢状腔から除去した。テスト品は、異なる液体処方物の形での１．０ｍｇ／ｍＬのＺｎ  ＩＮ１０５又はカプセル又は錠剤１個あたり５〜６ｍｇのＩＮ１０５を含有していた。全ての実験における各々のイヌは、ｔ＝０で一回目そしてｔ＝１２０分で２回目という連続２回、約０．２５ｍｇ／ｋｇの異なる経口液体用量又は５又は６ｍｇのＩＮ１０５を含有するカプセル又は錠剤を受けた。正常血糖値を維持するべく橈側皮静脈を通してグルコース（Ｄ−２０）を輸注した。一部のケースでは、効果が１２０分を超えて持続した場合、投薬後研究時間を延長した。前述の通り（参考文献１）、インスリン、グルコース及びＣ−ペプチドの測定のために、動脈血液試料を抜き取った。実験完了後、動脈カテーテルを皮下組織内に置き直した。
【０４１７】
溶液及び固体剤形の両方の処方物は、異なるレベルの脂肪酸、緩衝液、希釈剤及び崩壊剤を用いて調製された。変数を最小限におさえるため、液体及び固体処方物は、一貫したレベルのＩＮ１０５及び各々の賦形剤（カプリン、ラウリン、カプリル、ミリスチン、リノール酸）を含有し、かくして脂肪酸含有量、緩衝液、希釈剤（マンニトール又は微晶質セルロース及び／又は崩壊剤（Ｅｘｐｌｏｔａｂ）の相対量のみを変動させた。グルコース輸注速度及びＩＮ１０５吸収（血漿インスリン免疫反応性）データを評価し、各々の投薬された処方物と比較した。
【０４１８】
最初に、より容易に固体剤形に転換されると思われる液体処方物へと最適化済み液体処方物（参考文献２）を単純化し洗練するために、実験を行なった。これは、遊離脂肪酸を対応するナトリウム塩で置換すること（例えばカプリン酸ナトリウムにより置換されたカプリン酸）、ならびに必要でなくなったとみなされた緩衝液構成要素（クエン酸、トロラミン、トロメタミン、水酸化ナトリウム）を除去することにより、実施された。さらに、リノール酸、カプリル酸及びミリスチン酸といったその他の脂肪酸及びアミノ酸、アルギニンの効果を、ＩＮ１０５の吸収に対するその効果について検討した。
【０４１９】
実験毎に１〜２匹のイヌを用いた初期プロトタイプスクリーンの後、処方物と個々の動物の間の可変性及び一貫性をより良く判定するべく、わずかなプロトタイプ処方物を選択し、付加的なイヌにおいてテストした。
【０４２０】
ＩＮ１０５の溶解プロファイル及び脂肪酸含有量を評価するため、１つの溶解方法を開発し、さまざまな候補処方物について、溶解研究を実施した。
【０４２１】
結果
初期実験では、付加的な賦形剤無くリン酸緩衝液中の３％ｗ／ｖのカプリン酸ナトリウム塩が投与されたイヌは、トロラミン／クエン酸／トロメタミン／水酸化ナトリウム緩衝液中の３％ｗ／ｖのカプリン酸を含有する最適化された液体処方物と比べ類似の応答を示した（図２９−３０）。このことは、脂肪酸形態のナトリウム塩が酸形態に匹敵する形の挙動を示すこと、そして付加的な緩衝液構成要素が該処方に寄与しなかったことを実証した。
【０４２２】
３％のカプリン酸塩を３％のカプリル酸又は３％のリノール酸で置換する代替的脂肪酸を評価する別の研究においては、いずれの代替案も有意な効果を示さなかった。カプリル酸を使用すると低〜中レベルのグルコースが必要となるが、一方リノール酸を使用しても、いかなるグルコース輸注の必要性も結果としてもたらされず、効果の欠如を示唆した。両方の処方物共、比較的低レベルの動脈インスリンを示した。アルギニンを含有する液体処方物は、相対的にＧＩＲ又はＩＮ１０５レベルに対する利点を全く示さなかった。
【０４２３】
一次研究では、Ｃａｒｖｅｒプレスを用いて手で圧縮された錠剤及び硬カプセル内に充てんされた粉末配合物の両方として、固体処方物を評価した。５７ｍｇのカプリン酸塩／５７ｍｇのラウリン酸塩と６ｍｇのＩＮ１０５（インスリン当量、０．２５ｍｇ／ｋｇ）の粉末配合物であるカプセルは、最高１２０分の第１回投薬においては有意な効果を全く示さず、第２回投薬では、ＩＮ１０５吸収と同時にＧＩＲで有意な効果が見られ、ここで０から１２０分までレベルが基線よりもはるかに高かった。これらのデータは、カプセル剤形においてＩＮ１０５の応答が可変的にではあるものの潜在的に遅延されるということを示唆している。溶解は錠剤に比べカプセルでわずかだけ遅延されたが、インビトロ／インビボの相関関係はほとんど又は全く存在しない可能性がある。
【０４２４】
初期プロトタイプ錠剤スクリーニング研究では１４３ｍｇのラウリン酸塩を伴って又は伴わずに１４３ｍｇのカプリン酸塩と共に６ｍｇのＩＮ１０５及び１５０ｍｇのマンニトール、３０ｍｇのでんぷんグリコール酸ナトリウムを含有する錠剤は、５４ｍｇのカプリン酸塩又は／又は５４ｍｇのラウリン酸塩を伴う同じ錠剤に比べ著しく高いＧＩＲ及びＩＮ１０５吸収を示した（図３１、３２及び３３）。このことは、カプリン酸塩及びラウリン酸塩のレベル増大に対してより高いＧＩＲ及びＩＮ１０５レベルの適正な用量応答を示唆している。表は、ＩＮ１０５充てんカプセルに対する早期の一貫性あるＧＩＲ応答を示した。さらに、ＩＮ１０５錠剤は、投薬を受けた全てのイヌにおいてインスリンの動脈血漿上昇を示した。
【０４２５】
一連の最終的研究においては、３つのプロトタイプ錠剤処方物（処方物［８５６］は１４３ｍｇのカプリン酸塩及び１４０ｍｇのラウリン酸塩を含有し、［８６０］は２８６ｍｇのカプリン酸塩を含有し、［８６２］は１５０ｍｇのカプリン酸塩を含有していた）を５匹のイヌ（各処方物について３匹の異なるイヌ）における評価のために選択して、効能の一貫性を査定した（図３４〜３７）。動脈血漿インスリンレベルは、１５０ｍｇ又は２８０ｍｇのカプリン酸塩又は１４３ｍｇ／１４０ｍｇのカプリン酸塩／ラウリン酸塩のいずれかを含む錠剤の形で処方された６ｍｇ（インスリン当量）のＩＮ１０５の投与の後に対応するＧＩＲ応答を伴って、３匹全てのイヌにおいて１８種全ての用量で（各々イヌ３匹×３錠剤×３用量）上昇した（図３１−３２及び３８−４２）。Ｃ−ペプチドレベル（ｎｇ／ｍｌ）は、１５０ｍｇ及び２８０ｍｇのカプリン酸塩錠剤（平均（ｎ＝２））で、第１回投薬中０．３０±０．０５〜０．２２±０．０２そして第２回投薬で０．１±０．０５〜０．０２±０．０の初期レベルからの低下を示し、１４０ｍｇ／１４０ｍｇのカプリン酸塩／ラウリン酸塩錠剤では、第１回投薬中０．２１±０．０５〜０．０５±０．０２そして０．１８±０．０５〜０．１８±０．０１の低下を示した。これは、外因性ＩＮ１０５インスリンの結果としての膵臓からのＣペプチド分泌の抑制を表わしている。
【０４２６】
ＩＮ１０５の３つのプロトタイプ錠剤処方物全てが、日数の違いを含めイヌ内及びイヌ間毎にかつ用量間で一貫性あるＩＮ１０５吸収レベル及び結果としてのグルコース輸注速度を示した。
【０４２７】
６匹のイヌから成るセットを用いた最終的研究の間に、１匹のイヌ（イヌ＃３）は、全ての液体及び固体投薬量でより低い応答を経験した。より精確に結果を代表するように、イヌ＃３からの結果を伴って及び伴わずにデータを提示した。完全な用量を受けなかった（強制飼養不良、嘔吐など）又は内因性インスリンを有していたイヌからのデータは削除した。
【０４２８】
溶解研究：錠剤及びカプセルの代表的試料を溶解テスト（上述）に付した。
【０４２９】
論述
これらの研究は、経口送達された６ｍｇのＩＮ１０５（約０．２５ｍｇ／ｋｇを含有しかつ崩壊剤でんぷんグリコール酸ナトリウム及びマンニトールを伴うラウリン酸ナトリウム塩又はカプリン酸塩を含有するプロトタイプＩＮ１０５錠剤が、正常血糖を保つのにグルコース輸注を必要とする動脈血漿インスリンの有意でかつ一貫性ある上昇を結果としてもたらしたということを実証している。
【０４３０】
これらのプロトタイプ錠剤は、カプリン酸塩又はラウリン酸塩を匹敵するレベルで含む液体処方物と少なくとも同じ位良好でかつそれよりも優れている可能性のあるＩＮ１０５レベル及びＧＩＲ速度を結果としてもたらした。プロトタイプ錠剤形態は、経口液体処方物の吸収プロファイルを維持する。選択されたプロトタイプ錠剤処方物の相対的経口バイオポテンシー（例えば２８０ｍｇ及び１５０ｍｇのカプリン酸塩を含む錠剤、ｎ＝６、ＧＩＲについてのＡＵＣ＝４９６±１１７及び５００±２７５）は、液体処方物（例えば３％ｗ／ｖのカプリン酸の液体処方物、ｎ＝５、ＧＩＲについてのＡＵＣ＝１８２±９２及び１９８±１１９）よりも優れていると思われる。
【０４３１】
データは、マンニトール及び崩壊剤、でんぷんグリコール酸ナトリウムと共に唯一の脂肪酸としてカプリン酸ナトリウムを含む錠剤が、臨床研究で使用するための固体剤形のさらなる開発において有用であると思われるということを示唆している。データは又、選択されたプロトタイプのカプリン酸塩錠剤形態（１５０ｍｇ又は２８６ｍｇのいずれかでのカプリン酸ナトリウム）の形でのＩＮ１０５の経口投与の後のインスリンレベルが、両方の用量で、投薬後約２０分前後での標準的Ｔｍａｘ及び約５９．０±２０．１及び６２．９±２５．４μＵｎｉｔｓ／ｍｌのＣｍａｘを伴って定常的にピークに達したことをも示唆している。血漿インスリンレベルは、各用量の後、１０〜１５分間Ｃｍａｘレベル近くまで上昇した状態にとどまり、１２０分間全体を通して基底レベルより高くとどまった。これらの錠剤を用いて正常血糖を維持するのに必要とされるＧＩＲは、両方の用量で３０〜４０分又はその前後でＴｍａｘに達し、ＧＩＲＣｍａｘは、８．４±１．９９及び７．４１±２．１８ｍｇ／ｋｇ／分の平均に達した。錠剤剤形は、最適化された液体処方物に比べ正常血糖を維持するのにより高いＧＩＲＣｍａｘ（７．４〜８．４対４．５〜５．４）を要し、より長い時間（１００〜１２０分対６０〜９０分）グルコース輸注を要した。
【０４３２】
履歴的ＳＱ及び吸入インスリンの動脈血漿インスリンレベルと比べ、これらのプロトタイプ錠剤は、ＳＱ及び吸入送達に類似した最大インスリンレベルを提供し、吸入インスリンのものに匹敵するインスリンプロファイルと似ているように思われる（図３４〜３７）。
【０４３３】
プロトタイプ錠剤実験は、選択されたプロトタイプ錠剤が、錠剤プレスを用いて生産できる臨床処方物の生産に重点的に取組むための将来の開発を含めてＩＮ１０５をさらに評価するための固体投薬量処方物として適しているということを示唆している。
【０４３４】
本明細書は、参照を容易にすることのみを目的とした主題を伴う節に分割されている。節及び主題見出しは、本発明の範囲を制限するように意図されたものではない。本書で記述されている実施形態は、本発明の数多くの態様及び属性を例示する目的をもつものであり、本発明の範囲を制限するように意図されたものではない。
【図１】
2014043470.tif 000168
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
2014043470.tif 000188
【図２２】
2014043470.tif 000189
【図２３】
2014043470.tif 000190
【図２４】
2014043470.tif 000191
【図２５】
2014043470.tif 000192
【図２６】
2014043470.tif 000193
【図２７】
2014043470.tif 000194
【図２８】
2014043470.tif 000195
【図２９】
2014043470.tif 000196
【図３０】
2014043470.tif 000197
【図３１】
2014043470.tif 000198
【図３２】
2014043470.tif 000199
【図３３】
2014043470.tif 000200
【図３４】
2014043470.tif 000201
【図３５】
2014043470.tif 000202
【図３６】
2014043470.tif 000203
【図３７】
2014043470.tif 000204
【図３８】
2014043470.tif 000205
【図３９】
2014043470.tif 000206
【図４０】
2014043470.tif 000207
【図４１】
2014043470.tif 000208
【図４２】
2014043470.tif 000209
【手続補正書】
【提出日】平成25年12月10日(2013.12.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
摂取による経口投与のために処方された固体又は液体薬学組成物であって：
約４０〜約６０％ｗ／ｗの脂肪酸構成要素であって、前記脂肪酸構成要素が飽和又は不飽和Ｃ４−１２脂肪酸及び／又はそのような脂肪酸の塩を含む構成要素、および
治療薬；
を含む、固体又は液体薬学組成物。
【請求項２】
前記治療薬が、インスリン化合物、カルシトニン、インターフェロン、成長ホルモン、成長因子、ＧＬＰ−１、ＰＴＨ、ソマトスタチン、ＬＣＲＦ、ナトリウム利尿ペプチド、ＢＮＰ、ＡＮＰ、エキセナチド、２００個未満のアミノ酸を有するエリスロポエチン、抗体フラグメント、ワクチン及び以上のもののいずれかの類似体からなる群から選択される、複合タンパク質又はペプチド、アシル化タンパク質又はペプチド、又は、ＰＥＧ化タンパク質又はペプチドである、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項３】
結合剤、崩壊剤、充てん剤、希釈剤、滑沢剤、流動促進剤、流量増強剤、圧縮助剤、染料、甘味剤、防腐剤、懸濁剤、分散剤、塗膜形成剤、コーティング、着香剤、印刷用インク、セルロース、糖、マンニトール、ラクトース、溶解増強剤及びクロスカルマロースからなる群から選択される希釈剤を含む、請求項２に記載の薬学組成物。
【請求項４】
錠剤、ミニタブ、粉末、硬質ゼラチンカプセル又は軟質ゼラチンカプセルからなる群から選択される形状で調製される、請求項３に記載の薬学組成物。
【請求項５】
前記脂肪酸構成要素が、カプリン酸及び／又はラウリン酸及び／又はカプリン酸及び／又はラウリン酸の塩である、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項６】
リン酸緩衝液、リン酸ナトリウム、トリス緩衝液、クエン酸緩衝液、及びエタノールアミン緩衝液からなる群から選択される緩衝塩を含む、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項７】
約４．８〜約９．５又は約５〜約８の局所的ｐＨを維持するべく吸収部位において緩衝能力を達成するように選択された緩衝塩を含む、請求項６に記載の薬学組成物。
【請求項８】
前記インスリン化合物複合体の前記水溶性が亜鉛添加により低減される、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項９】
前記インスリン化合物複合体が、
【化１】
2014043470.tif 000210
と、
【化２】
2014043470.tif 000211
と、
【化３】
2014043470.tif 000212
（式中ＰＡＧがｍ個のサブユニットを有するＰＡＧ部分であり、ｍが１〜２０であり、ｎが１〜２０である）と、
【化４】
2014043470.tif 000213
と、
【化５】
2014043470.tif 000214
と、
【化６】
2014043470.tif 000215
と、
【化７】
2014043470.tif 000216
と、
【化８】
2014043470.tif 000217
と、
【化９】
2014043470.tif 000218
と、
からなる群から選択される構造を持つ修飾部分に対してＡ１、Ｂ１及び／又はＢ２９においてカップリングされたヒトインスリンからなる、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項１０】
前記インスリン化合物複合体が、２〜１５個のＰＥＧ又は２〜１０個のＰＥＧサブユニットを有する直鎖又は分枝ＰＥＧ部分に対して、Ａ１、Ｂ１及び／又はＢ２９においてカップリングされている、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項１１】
半固体、懸濁液、マイクロエマルジョン及びエマルジョンからなる群から選択される形状で調製される、請求項１０に記載の薬学組成物。
【請求項１２】
前記脂肪酸構成要素が、カプリン酸及び／又はラウリン酸及び／又はカプリン酸及び／又はラウリン酸の塩である、請求項１１に記載の薬学組成物。
【請求項１３】
リン酸緩衝液、リン酸ナトリウム、トリス緩衝液、クエン酸緩衝液、エタノールアミン緩衝液及びトリエチルアミン緩衝液からなる群から選択される緩衝塩を含む、請求項１０に記載の薬学組成物。
【手続補正書】
【提出日】平成26年1月6日(2014.1.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
５  図面の簡単な説明
【図１】本発明のさまざまな結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、これらの図のいずれかに示された形態を有する結晶が含まれる。２４時間成長させた結晶である３０ｇ／Ｌ濃度のＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体を示すＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ顕微鏡を用いて撮影した顕微鏡写真である。
【図２】本発明のさまざまな結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、これらの図のいずれかに示された形態を有する結晶が含まれる。２４時間成長させた結晶である３０ｇ／Ｌ濃度のＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体を示すＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ顕微鏡を用いて撮影した顕微鏡写真である。
【図３】本発明の結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、この図に示された形態を有する結晶が含まれる。５日間成長させた結晶である、３０ｇ／Ｌ濃度のＨＩＭ２のＴ型Ｚｎ錯体を示すＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ顕微鏡を用いて撮影した顕微鏡写真である。
【図４】本発明の結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、この図に示された形態を有する結晶が含まれる。４日間成長させた結晶である、３０ｇ／ＬでのＨＩＭ２のＲ型Ｚｎ錯体を示すＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ顕微鏡を用いて撮影した顕微鏡写真である。
【図５】本発明の結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、この図に示された形態を有する結晶が含まれる。３０％の有機物を含有するＩＮ１０５のＲ型結晶性Ｚｎ錯体の顕微鏡写真を示す。
【図６Ａ−１０Ｂ】本発明のさまざまな結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、これらの図のいずれかに示された形態を有する結晶が含まれる。有機溶媒を用いて作られたＭＩＭ２のさまざまなＲ型Ｚｎ錯体の顕微鏡写真を示す。
【図１１Ａ−１４Ｂ】本発明のさまざまな結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、これらの図のいずれかに示された形態を有する結晶が含まれる。ＨＩＭ２及びＩＮ１０５のさまざまなＲ型共結晶化Ｚｎ錯体の結晶の顕微鏡写真を示す。
【図１５Ａ−１５Ｂ】本発明のさまざまな結晶性固体の顕微鏡写真を示す。本発明には、これらの図のいずれかに示された形態を有する結晶が含まれる。ヒトインスリン及びＨＩＭ２のさまざまなＲ型共結晶化Ｚｎ錯体の結晶の顕微鏡写真を示す。
【図１６】ＨＩＭ２及びＺｎ−ＨＩＭ２についてのマウス血液グルコース検定の結果を示す。ＨＩＭ２についてのＭＢＧＡバイオポテンシープロファイルを示す。
【図１７】ＨＩＭ２及びＺｎ−ＨＩＭ２についてのマウス血液グルコース検定の結果を示す。ＺｎＨＩＭ２インスリン化合物生成物Ｒ型についてのＭＢＧＡバイオポテンシープロファイルを示す。
【図１８】ＨＩＭ２及びＺｎ−ＨＩＭ２についてのマウス血液グルコース検定の結果を示す。ＺｎＨＩＭ２インスリン化合物生成物Ｔ型についてのＭＢＧＡバイオポテンシープロファイルを示す。
【図１９】ＨＩＭ２及びＺｎ−ＨＩＭ２についてのマウス血液グルコース検定の結果を示す。プロタミンを伴うＺｎＨＩＭ２インスリン化合物生成物についてのＭＢＧＡバイオポテンシープロファイルを示す。
【図２０】ＨＩＭ２及びＺｎ−ＨＩＭ２についてのマウス血液グルコース検定の結果を示す。投薬後３０分及び９０分後のＲ型プロタミン錯体のグルコース低下効果を示す。
【図２１−２４】ＩＮ−１８６、ＩＮ−１９２、ＩＮ−１９０、ＩＮ−１９１、ＩＮ−１８９、ＩＮ−１７８、ＩＮ−１９３、ＩＮ−１９４、ＩＮ−１８５、ＩＮ−１９６及びＩＮ−１９７についてのＭＢＧＡバイオポテンシープロファイルを示す。
【図２５−２６】本発明のＺｎ−ＨＩＭ２錯体についてのイヌクランプ研究の結果を示す。
【図２７−２８】本発明のＺｎ−ＩＮ１０５錯体についてのイヌクランプ研究の結果を示す。
【図２９−３０】付加的な賦形剤を含まないリン酸緩衝液中の３％ｗ／ｖのカプリン酸ナトリウム塩中のＩＮ１０５を投薬したイヌについてのイヌクランプ研究の結果を示す。
【図３１−３３】１４３ｍｇのラウリン酸塩を伴う又は伴わない、１４３ｍｇのカプリン酸塩を伴う３０ｍｇのＥｘｌｏｔａｂ、６ｍｇのＩＮ１０５及び１５０ｍｇのマンニトールを含む錠剤を投薬したイヌについての、イヌクランプ研究の結果を示す。
【図３４−３７】プロトタイプ錠剤、１５０ｍｇ及び２８０ｍｇのカプリン酸塩錠剤及び１４０ｍｇ／１４０ｍｇのカプリン酸塩／ラウリン酸塩錠剤を投薬したイヌについてのイヌクランプ研究の結果を示す。
【図３８−４２】様々な錠剤処方物を投薬したイヌについてのイヌクランプ研究の結果を示す。
【外国語明細書】
2014043470000001.pdf