(57)【要約】【課題】肝細胞がん患者の生存期間の予後予測を客観的に行うことができる手法を確立する。【解決手段】肝細胞がん患者の血清検査成分に基づいて、ｋ１×ＡＬＢ＋ｋ２×ＣＲＰ＋ｋ３×γ-ＧＴＰ＋ｋ４×ＬＡＰ＋ｋ５×ＣＲＰ＋ｋ６×ヒアルロン酸＋ｋ７×Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）により算出される肝がんによる死亡率リスクに相関するＲＯＭスコアを、生存期間の予後予測を行う指標として提案する。ここで、ｋ１＝０.６５４、ｋ２＝−０.８０４、ｋ３＝０.００４３１、ｋ４＝−０.０１０２、ｋ５＝０.３１７、ｋ６＝０.００１３５、ｋ７＝０.８６８とすることができる。また、生存期間は、Ｌｏｇ（生存日数）＝α−β×ＲＯＭスコアで求めることができる。ここで、α＝６.３１１、β＝０.５２９とすることができる。【選択図】  図１
2014119312.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
肝細胞がん患者の血清検査成分に基づいて、下式により算出される肝細胞がんによる死亡リスクに相関するＲＯＭスコア。
ＲＯＭスコアＩ＝ｋ１×（男：１、女：０）＋ｋ２×ＡＬＢ＋ｋ３×γ-ＧＴＰ＋ｋ４×ＬＡＰ＋ｋ５×ＣＲＰ＋ｋ６×ヒアルロン酸＋ｋ７×Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）
ここで、
ｋ１＝（０．２７６〜１．０９）、好ましくは０.６５４
ｋ２＝（−１．２９〜−０．２９２）、好ましくは−０.８０４
ｋ３＝（０．００１４８〜０．００７０１）、好ましくは０.００４３
ｋ４＝（−０．０１９７〜−０．００２６）、好ましくは−０.０１０２
ｋ５＝（０．１４２〜０．４４８）、好ましくは０.３１７
ｋ６＝（０．０００７５７〜０．００１８８）、好ましくは０.００１３５
ｋ７＝（０．５５２〜１．１８）、好ましくは０.８６８
【請求項２】
肝細胞がん患者の血清検査成分に基づいて、下式により算出される肝細胞がんによる死亡リスクに相関するＲＯＭスコア。
ＲＯＭスコアII＝ｋ１×（男：１、女：０）＋ｋ２×ＡＬＢ＋ｋ５×ＣＲＰ＋ｋ６×ヒアルロン酸＋ｋ７×Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）
ここで、
ｋ１＝（０．３１８〜１．０７）、好ましくは０.６６４
ｋ２＝（−１．４５〜−０．３３４）、好ましくは−０.８０４
ｋ５＝（０．１１９〜０．４０９）、好ましくは０.２８６
ｋ６＝（０．０００６９６〜０．００１７２）、好ましくは０.００１２４
ｋ７＝（０．４４３〜０．９７６）、好ましくは０.７１６
【請求項３】
肝細胞がん患者の血清検査成分に基づいて、下式により算出される肝細胞がんによる死亡リスクに相関するＲＯＭスコア。
ＲＯＭスコアIII＝ｋ２×ＡＬＢ＋ｋ５×ＣＲＰ＋ｋ６×ヒアルロン酸＋ｋ７×Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）
ここで、
ｋ２＝（−０．２７１〜−１．２１９）、好ましくは−０.７５８
ｋ５＝（０．１４３〜０．４２２）、好ましくは０.３０３
ｋ６＝（０．０００４３〜０．００１４７）、好ましくは０.０００９８０
ｋ７＝（０．４５５〜０．９９０）、好ましくは０.７２９
【請求項４】
肝細胞がん患者の血清検査成分に基づいて、下式により算出される肝細胞がんによる死亡リスクに相関するＲＯＭスコア。
ＲＯＭスコアIＶ＝ｋ１×（男：１、女：０）＋ｋ２×ＡＬＢ＋ｋ６×ヒアルロン酸＋ｋ７×Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）
ここで、
ｋ１＝（０．３０３〜１．０４８）、好ましくは０.６５０
ｋ２＝（−１．２７４〜−０．４０８）、好ましくは−０.８５３
ｋ６＝（０．０００４３〜０．００１４４）、好ましくは０.０００９６２
ｋ７＝（０．５１２〜１．０４２）、好ましくは０.７８３
【請求項５】
肝細胞がん患者の血清検査成分に基づいて、下式により算出される肝細胞がんによる死亡リスクに相関するＲＯＭスコア。
ＲＯＭスコアＶ＝ｋ１×（男：１、女：０）＋ｋ２×ＡＬＢ＋ｋ５×ＣＲＰ
＋ｋ７×Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）
ここで、
ｋ１＝（０．１８３〜０．８６９）、好ましくは０.５００
ｋ２＝（−１．４７５〜−０．６９０）、好ましくは−１．０９３
ｋ５＝（０．０８４〜０．３５４）、好ましくは０.２４１
ｋ７＝（０．４８５〜０．９８６）、好ましくは０.７４１
【請求項６】
請求項１に記載のＲＯＭスコアＩを用いて、下式により肝細胞がん患者の生存期間を求める客観的な予後予測方法。
Ｌｏｇ（生存日数）＝α−β×ＲＯＭスコアＩ
ここで、α＝（６.０２３〜６.５９９）、好ましくは６.３１１  
β＝（０.３６５〜０.６９３）、好ましくは０.５２９  
【請求項７】
請求項２に記載のＲＯＭスコアIIを用いて、下式により肝細胞がん患者の生存期間を求める客観的な予後予測方法。
Ｌｏｇ（生存日数）＝α−β×ＲＯＭスコアII
ここで、α＝（６.００４〜６.５７１）、好ましくは６.２８８
β＝（０.３８１〜０.７５８）、好ましくは０.５７０
【請求項８】
請求項３に記載のＲＯＭスコアIIIを用いて、下式により肝細胞がん患者の生存期間を求める客観的な予後予測方法。
Ｌｏｇ（生存日数）＝α−β×ＲＯＭスコアIII
ここで、α＝（５，７２４〜６．２６１）、好ましくは５．９９３
β＝（０.４２５〜０.８１６）、好ましくは０.６２０
【請求項９】
請求項４に記載のＲＯＭスコアIＶを用いて、下式により肝細胞がん患者の生存期間を求める客観的な予後予測方法。
Ｌｏｇ（生存日数）＝α−β×ＲＯＭスコアIＶ
ここで、α＝（５．７７０〜６.３４１）、好ましくは６.０５６
β＝（０.３９２〜０.８６８）、好ましくは０.６３０
【請求項１０】
請求項５に記載のＲＯＭスコアＶを用いて、下式により肝細胞がん患者の生存期間を求める客観的な予後予測方法。
Ｌｏｇ（生存日数）＝α−β×ＲＯＭスコアＶ
ここで、α＝（４．８４９〜５．６０５）、好ましくは５．２２７
β＝（０.４２９〜０.８３５）、好ましくは０.６３２
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝細胞がんによる死亡リスクに相関するＲＯＭ（Risk Of Mortality from
hepatocellular carcinoma）スコア及び肝細胞がん患者の客観的な予後予測方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
予後の推定又は予測とは、病気の経過の結末を推察することである。肝細胞がん患者の予後予測方法では、血清検査値と共に肝細胞がんの腫瘍径等を用いて相対的な予後を予測する分類法を用いて、治療後の生存率（生存期間）を予測することが行われている（例えば、非特許文献１）。
【０００３】
非特許文献１によれば、肝細胞がんの診断は、腫瘍マーカーとして例えばＡＦＰ（アルファ型胎児性タンパク）やＰＩＶＫＡ-IIなどのマーカー値、及び画像診断を組み合わせて行われている。画像診断は、造影ＣＴ検査あるいはＭＲＩ検査により肝細胞がんの腫瘍の個数、腫瘍の大きさ（径）及び腫瘍の肝内の脈管への浸潤の有無の３項目について導出する。そして、それらの項目に基づいて、肝細胞がんの進行度分類（病期：ステージＩ〜IＶ（Ａ、Ｂ））、肝臓自体の働き「肝予備能」（肝障害度分類、Ｃｈｉｌｄ-ｐｕｇｈ分類）を評価し、治療法を選択する。予後は、上記の３項目の分類に基づいた症例によって統計的に生存率（生存期間）を予測するようにしている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】「肝がん」http://www.gan-pro.com/public/cancer/liver.html、２０１０年１１月２４日一部改稿
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
非特許文献１に記載されているような従来法による肝細胞がん患者の予後である生存期間の予測法（予後予測方法）は、腫瘍径等を導出するために精度の高い画像診断装置が必要となり、また、腫瘍径等に基づいて分類された各群間の相対的な予後を予測するのみであり、背景や治療などの臨床因子の影響を加味した治療後の生存期間を客観的に予測するまでには至っていない。つまり、従来の肝細胞がん治療後の予後予測は、精度の高い画像診断装置を持つ施設での検査所見、及び経験豊富で熟練度の高い専門医の直感に依存していることから、客観性を有する予後予測法の確立が望まれている。
【０００６】
本発明が解決しようとする課題は、精度の高い画像診断装置を用いることなく、肝細胞がん患者の予後（生存期間）予測を客観的に行うことができる臨床上の有用性が高い手法を確立することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記の課題を解決するため、本発明は、肝細胞がん患者の血清検査成分に基づいて、次式（１）に示すＲＯＭスコアを、肝細胞がんによる死亡リスクに相関するスコアとして求め、生存期間の予後予測を行う指標として提案する。
ＲＯＭスコア＝
ｋ１×（男：１、女：０）＋ｋ２×ＡＬＢ＋ｋ３×γ-ＧＴＰ＋ｋ４×ＬＡＰ＋
ｋ５×ＣＲＰ＋ｋ６×ヒアルロン酸＋ｋ７×Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）  ・・・（１）
ここで、ｋ１＝０.６５４      （０．２７６  〜  １．０９０）
ｋ２＝−０.８０４    （−１．２９  〜  −０．２９２）
ｋ３＝０.００４３１  （０．００１４９  〜  ０．００７０１）
ｋ４＝−０.０１０２  （−０．０１９７  〜  −０．００２６１）
ｋ５＝０.３１７      （０．１４２  〜０．４４８）
ｋ６＝０.００１３５  （０．０００７５７〜  ０．００１８８）
ｋ７＝０.８６８      （０．５５２  〜  １．１８０）
である。なお、括弧内は各係数の許容範囲を示している。
【０００８】
式（１）における血清検査成分の記号等の日本語名、単位及びＲＯＭスコアの構成因子として採用する臨床的な意味を図３に示す。ＮＸ-ＰＶＫＡは、ＰＩＶＫＡ-II測定系でＰ-１１抗体とＰ-１６抗体を用いて求めた腫瘍マーカーである。式（１）の係数ｋ１〜ｋ７は、図４のとおりである。同図で、係数の９５％信頼区間は統計学的な信頼区間であり、式（１）の各係数の許容幅に相当する。
【０００９】
すなわち、本発明の発明者らは、各腫瘍マーカーの対比研究を行った結果、ＮＸ-ＰＶＫＡは腫瘍径などの腫瘍因子を強く反映していることから、精度の高い画像診断をしなくても、ＮＸ-ＰＶＫＡを用いれば血清検査データのみで予後予測することが可能であるという知見を得た。図５に、重回帰分析により得られた各腫瘍マーカーと関連する腫瘍因子及び臨床因子を示す。同図に示すように、ＮＸ-ＰＶＫＡは、性別、ＣＲＰ、血小板数、ＰＴ（ＩＮＲ）、最大腫瘍径、腫瘍個数、及び腫瘍の門脈への浸潤の各因子と有意に関連していることが分かる。関連が有意と判断する基準は、統計学的には、一般にＰ値が０．０５以下である。
【００１０】
ＲＯＭスコアは、図５の性別、ＣＲＰ、ＮＸ-ＰＶＫＡの他に、図２（ａ）に示すように、ＡＬＢ（アルブミン）、γ-ＧＴＰ、ＬＡＰ、ヒアルロン酸と関連している。そこで、生存期間に対し統計学的に有意に関連するＰ値が相対的に小さい、つまり相関が強い血清成分及びＮＸ-ＰＶＫＡを、図２（ａ）に示すよう同定して、これらの臨床因子で構成される式（１）のＲＯＭスコアを導出した。ＲＯＭスコアにおける各臨床因子の係数ｋ１〜ｋ７は、図２（ａ）に示した回帰係数に対応し、同図の９５％信頼区間は各係数の許容幅の（下限〜上限）に対応している。図２（ａ）におけるハザード比及び回帰係数の意味を図２（ｂ）に示す。図２（ａ）に同定した臨床因子で構成されるＲＯＭスコアは、肝細胞がん患者の全生存期間と有意に相関することから、肝細胞がんによる死亡リスクに相関する予後予測の指標となり得ることが分かる。
【００１１】
ここで、式（１）のＲＯＭスコアは、血清成分の臨床因子を増やすほど予測精度が改善され、減らすと予測精度が低下する。そこで、ＲＯＭスコアの独立変数である血清成分を増減させた場合のＲＯＭスコアの適応度と生存期間の相関係数について検討した。その検討結果、図６に示した例のように、式（１）のＲＯＭスコアの場合は、相関係数が最も高く精度が高いが、γ-ＧＴＰとＬＡＰを省略すると若干の精度低下がみられ、性別（１：男、０：女）を省略しても若干の精度低下がみられる。
【００１２】
これらのことから、式（１）のＲＯＭスコアにおいて、性別、γ-ＧＴＰ、ＬＡＰの１つあるいは複数の成分を適宜省いても、一定の予測精度を得ることができることが分かる。したがって、ＲＯＭスコアを構成する血清成分として、少なくともＡＬＢ（アルブミン）、ＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク）、ヒアルロン酸、Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）の４つを含むことが好ましい。これに加えて、性別、γ-ＧＴＰ、ＬＡＰの１つあるいは複数の成分を加えることにより、予後予測の精度を向上することができることが分かる。
【００１３】
図７（ａ）に、式（１）のＲＯＭスコアIに対応して、血清成分の一部の臨床因子を省略した他のＲＯＭスコアII〜Ｖを示す。同図中、係数ｋ＝０の臨床因子が省略された臨床因子である。同図から明らかなように、省略される一部の臨床因子に応じて、ＲＯＭスコアを構成する各因子の最適係数が変わってくる。なお、図６及び図７（ａ）で、ｃ‐ｉｎｄｅｘは、ＲＯＭスコアの値が小さい方が生存期間が長いということを、実際の症例でどれくらいの確率で正しいかを示す値である。
【００１４】
さらに、本発明は、生存期間の予測の指標としてＲＯＭスコアを用い、次式（２）により、肝細胞がん患者の生存期間を客観的に予測する手法を提案する。
Ｌｏｇ（生存日数）＝α−β×ＲＯＭスコア      ・・・（２）
ここで、α＝６.３１１  （６.０２３〜６.５９９）
β＝０.５２９  （０.３６５〜０.６９３）
である。なお、括弧内は各係数の許容範囲を示している。
【００１５】
すなわち、後述する肝細胞がん患者１９７名の臨床例について得られた式（１）のＲＯＭスコア（ＲＯＭ ｓｃｏｒｅ）と生存期間（Ｓｕｒｖｉｖａｌ ｔｉｍｅ（ｄａｙｓ））の関係をプロットしたところ、図１（ａ）のようになった。図１（ａ）中の複数の点は臨床データであり、それらのデータは図中の直線で近似できる。そして、式（２）の係数α、βは、図１（ｂ）に示すように、α＝６.３１１、β＝０.５２９として推定できる。ここで、標準誤差（ＳＥＭ）を考慮した係数の信頼区間は同図に示すように一定の許容範囲、つまりα＝６．０２３〜６．５９９、β＝０．３６５〜０．６９３の範囲内で選択して設定できる。ここで、図１（ａ）中の「ｒ」は実際の生存期間とＲＯＭスコアとの間の相関係数であり、両者が一致する場合は１、全く相関がない場合は０となる。また、「ｐ」は統計学的解析（検定）を行う際の有意確率である。なお、「ｒ」と「Ｒ」、及び「ｐ」と「Ｐ」は、本明細書においては使い分けているわけではなく、いずれも同一の意味を有する（図２（ｂ）参照）。また、図５中のＲ２は、寄与率あるいは決定係数と称され、モデルの適合度の主観的尺度になる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、精度の高い画像診断装置を用いることなく、肝細胞がん患者の予後（生存期間）予測を客観的に行うことができる臨床上の有用性が高い手法を確立することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】（ａ）は本発明の一実施形態のＲＯＭスコアと生存期間との関係を示す線図、（ｂ）は予後予測式（近似直線）の係数である。
【図２】（ａ）は本発明のＲＯＭスコアを構成する肝細胞がん患者の全生存期間に関連する抽出因子を示す図、（ｂ）は（ａ）の記号等の意味を説明する図である。
【図３】血清検査成分の記号等の日本語名、単位及びＲＯＭスコアの構成因子として採用する臨床的な意味を説明する図である。
【図４】ＲＯＭスコアの係数ｋ１〜ｋ７の最適係数及び許容範囲を示す図である。
【図５】重回帰分析により得られた各腫瘍マーカーと関連する臨床因子の比較を示す図である。
【図６】ＲＯＭスコアの血清成分の臨床因子を増減させた場合のＲＯＭスコアの適応度と生存期間の相関係数を示す図である。
【図７（ａ）】血清成分の臨床因子を増減させた場合のＲＯＭスコアＩ〜Ｖとその許容範囲の例を示す図である。
【図７（ｂ）】ＲＯＭスコアＩ〜Ｖを用いた予後予測式の係数α、βの許容範囲の例を示す図である。
【図８】ＰＩＶＫＡ-IIとＮＸ-ＰＶＫＡの測定原理を示す図である。
【図９】ＰＩＶＫＡ-IIとＮＸ-ＰＶＫＡが認識するＰＩＶＫＡ-II変異体のＧｌｕ（グルタミン酸残基）数の違いを示す図である。
【図１０】肝細胞がん患者１９７名の臨床背景を示す図である。
【図１１】図１１の臨床因子の意味を説明する図である。
【図１２】各腫瘍マーカーと全生存時間の関係を示す図である。
【図１３】ＮＸ-ＰＶＫＡ値と全生存率の関係を示す図である。
【図１４】肝予備能別のＮＸ-ＰＶＫＡと全生存率の関係を示す線図である。
【図１５】病期別のＮＸ-ＰＶＫＡと全生存率の関係を示す線図である。
【図１６】各腫瘍マーカーと肝細胞がんの腫瘍因子との関係を示す線図である。
【図１７】各腫瘍マーカーと背景肝の臨床因子との関係を示す線図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明の実施形態について説明する。本発明の発明者らは、本発明の課題を解決するため、肝細胞がんの腫瘍マーカーとして確立されているＰＩＶＫＡ-II（ＤＣＰ）を用いた測定系と、新たに開発されたＮＸ-ＰＶＫＡ測定系について、生存率との関連及び測定値に寄与する臨床因子を明らかにする対比研究を行った。まず、ＰＩＶＫＡ-II測定系は、図８の左側に示すように、抗ＰＩＶＫＡ-IIモノクローナル抗体を結合したビーズを固相とし、電気化学的変化で発光するルテニウム（Ｒｕ）錯体を標識した抗プロトロンビンポリクローナル抗体を用いたサンドイッチ法による電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ：Electro-chemiluminescence immunoassay）を原理としている。すなわち、検体を抗ＰＩＶＫＡ-IIモノクローナル抗体結合ビーズと反応させると、検体中のＰＩＶＫＡ-IIがビーズの抗ＰＩＶＫＡ-IIモノクローナル抗体（ＭＵ-３抗体）と結合する。流れないように磁石で固定した上でビーズを洗浄後、ビーズに結合したＰＩＶＫＡ-IIにルテニウム標識抗プロトロンビンポリクローナル抗体を反応させると、サンドイッチ状に結合する。ビーズを再洗浄後、電極上で電気エネルギーを加えると、ＰＩＶＫＡ-IIを介してビーズに結合したルテニウム標識抗プロトロンビンポリクローナル抗体量に応じて、ルテニウム錯体が発光する。この発光量を計測することにより、検体中のＰＩＶＫＡ-II量を測定することができる。一方、ＮＸ-ＰＶＫＡ測定系では、２つの抗ＰＩＶＫＡ-IIモノクローナル抗体（Ｐ-１３抗体，Ｐ-１６抗体）を用いて同様の方法によって測定する。
【００１９】
また、ＰＩＶＫＡ-IIにはＧｌｕ（グルタミン酸残基）数により様々な変異体が存在する。図９に示すように、抗ＭＵ-３抗体を使用したＰＩＶＫＡ-II測定系では、Ｇｌｕ残基の数が０〜５個のＰＩＶＫＡ-IIとは反応せず、６〜８個とは弱い反応性、９〜１０個のＰＩＶＫＡ-IIとは強い反応性を示すことが知られている。一方，抗Ｐ-１１抗体及び抗Ｐ-１６抗体を用いたＮＸ-ＰＶＫＡ測定系では，よりＧｌｕ数の少ない変異体と反応する。
【００２０】
ここで、具体的な各腫瘍マーカーの対比方法について説明する。
（１）対象：初発肝細胞がん  １９７症例  
図１１に、肝細胞がん患者１９７名の臨床背景を示す。
（２）初回治療開始前に採取した保存血清を用いて、下記の腫瘍マーカーについて測定及び算出した。
（ｉ）ＰＩＶＫＡ-II及びＮＸ-ＰＶＫＡをそれぞれ測定し、ＮＸ-ＰＶＫＡ-Ｒ＝ＰＩＶＫＡ-II／ＮＸ-ＰＶＫＡを算出
（ii）ＡＦＰ，ＡＦＰ-Ｌ３，その他の臨床因子と生存率との関連について比較、解析
（３）生存分析等（ＪＭＰ  Ｖｅｒ.9.0.0）
（ｉ）Ｋａｐｌａｎ‐Ｍｅｉｅｒ法（ログラン検定）
（ii）Ｃｏｘ比例ハザード回帰モデル
（iii）重回帰分析（ＡＩＣを最小化するＳｔｅｐｗｉｓｅ法）
【００２１】
上述の測定により得られた各腫瘍マーカーと全生存時間の関連を図１２に示す。全生存率とは、研究の参加者や治療を受けた集団のうち、診断又は治療から一定の期間が経過した後に生存している割合のこと。例えば５年生存率などと表現される。同図の最左欄に腫瘍マーカーとして、ＰＩＶＫＡ-II（ｍＡＵ／ｍＬ）、ＮＸ-ＰＶＫＡ（ｍＡＵ／ｍＬ）、ＮＸ-ＰＶＫＡ-Ｒ、ＡＦＰ（ｎｇ／ｍＬ），ＡＦＰ-Ｌ３（％）を示している。また、横欄には、全生存時間を単変量解析と多変量解析に分けて、ハザード比（９５％信頼区間）とＰ値を示している。同図に示すように、単変量解析ではいずれの腫瘍マーカーも全生存時間と有意に関連があることがわかる。一方、多変量解析より、これらの腫瘍マーカーのうちＮＸ-ＰＶＫＡが、肝細胞がん患者の全生存時間を最も有意に反映していることがわかる。
【００２２】
図１３〜図１５に、それぞれ、初回治療後経過時間（日）に対するＮＸ-ＰＶＫＡ値と全生存率との関係と、肝予備能別のＮＸ-ＰＶＫＡ値と全生存率との関係、病期別のＮＸ-ＰＶＫＡ値と全生存率との関係を示す。図１３から明らかなように、ＮＸ-ＰＶＫＡ値の高値群は、低値群に比して全生存率が有意に低いことが分かる。この傾向は，同じ肝予備能（同じＣｈｉｌｄ‐Ｐｕｇｈ分類）の群（図１４）においても、また、同じ病期の群（図１５）においても見られる。したがって、ＮＸ-ＰＶＫＡと肝細胞がん患者の全生存率との関係は，肝予備能（Ｃｈｉｌｄ-Ｐｕｇｈ分類）や病期に依らないことがわかる。
【００２３】
図１６と図１７に、それぞれ、各腫瘍マーカーと肝細胞がんの腫瘍因子及び背景肝の臨床因子との間の相関を示す。これらの図１６、図１７及び図５よりＮＸ-ＰＶＫＡは、腫瘍径、腫瘍個数、及び門脈浸潤の有無という本来ならば画像検査により求めなければならない腫瘍因子を強く反映していることがわかる。このことから，ＮＸ-ＰＶＫＡは各腫瘍因子の情報を内包しており、画像検査を行なわなくても血清検査データのみで予後予測が可能になると考えられる。ＭＵ-３抗体を使用したＰＩＶＫＡ-IIもＮＸ-ＰＶＫＡと同様の特徴を有しているものの、ＮＸ-ＰＶＫＡの方がより強く全生存時間と関連していることから、予後予測にはＰＩＶＫＡ-IIよりＮＸ-ＰＶＫＡの方が有用と考えられる。
【００２４】
上述した実施形態の各腫瘍マーカーとＮＸ-ＰＶＫＡとの対比研究の結果から、次の知見を得ることができる。
（１）初発肝細胞がん患者の全生存率を最も反映する腫瘍マーカーとしてＮＸ-ＰＶＫＡが同定される。
（２）ＮＸ-ＰＶＫＡは、他の腫瘍マーカーに比して、アルブミン、血小板数、腫瘍径をより多く反映している。
（３）ＮＸ-ＰＶＫＡは、腫瘍因子と共に背景肝の肝硬変の肝予備能を反映し、最も強く生存率を評価する腫瘍マーカーになり得る。
【００２５】
以上説明した各腫瘍マーカーの比較結果に基づき、ＮＸ-ＰＶＫＡが肝細胞がん患者の全生存率を最も強く反映していることから、ＮＸ-ＰＶＫＡを含んだ多変量解析により得られた肝細胞がん患者の全生存率に関連する抽出因子の実施例を図２（ａ）に示す。本実施例の抽出因子は、男女別、アルブミン、γ-ＧＴＰ、ＬＡＰ、ＣＲＰ，ヒアルロン酸、ＬｏｇＮＸ-ＰＶＫＡである。
【００２６】
図２（ａ）から、肝細胞がん患者の血清検査成分に基づいて、肝細胞がんによる死亡率リスクに相関する次式(１)に示すＲＯＭスコアを生存期間の予後予測を行う指標として導出できる。
ＲＯＭスコア＝
ｋ１×（１：男、０：女）＋ｋ２×ＡＬＢ＋ｋ３×γ-ＧＴＰ＋ｋ４×ＬＡＰ＋
ｋ５×ＣＲＰ＋ｋ６×ヒアルロン酸＋ｋ７×Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）  ・・・（１）
ここで、各係数ｋ１〜ｋ７の最適値は、ｋ１＝０.６５４、ｋ２＝−０.８０４、ｋ３＝０.００４３１、ｋ４＝−０.０１０２、ｋ５＝０.３１７、ｋ６＝０.００１３５、ｋ７＝０.８６８である。しかし、これに限定されるものではなく、図４に示す信頼区間の範囲内の係数を適宜選択してＲＯＭスコアを算出することができる。
【００２７】
また、ＲＯＭスコアは、血清成分を増やすほど予測精度が改善され、減らすと予測精度が低下する。実際、図７（ａ）に示したように、血清成分の組合せに依存して生存期間の相関係数が変化することが分かった。したがって、式（１）では、生存期間に対し統計学的に有意な成分として同定されたものを全て含んでいるので、精度の高いＲＯＭスコアを同定することができる。しかし、図７（ａ）に示したように、γ-ＧＴＰとＬＡＰを除くと若干の精度低下がみられ、性別（１：男、０：女）を除いても若干の精度低下がみられるが、これらの性別、γ-ＧＴＰ、ＬＡＰの１つあるいは複数の成分を適宜省いても、一定の予測精度を得ることができることが分かる。このことから、ＲＯＭスコアを構成する血清成分として、少なくともＡＬＢ（アルブミン）、ＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク）、ヒアルロン酸、Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）の４つを含むことが好ましいといえる。そして、性別、γ-ＧＴＰ、ＬＡＰの１つあるいは複数の成分を適宜加えることにより、予後予測の精度を向上することができる。
【００２８】
ここで、図７（ａ）のＲＯＭスコアII〜Ｖの式及び係数を下記に示す。
ＲＯＭスコアII＝ｋ１×（男：１、女：０）＋ｋ２×ＡＬＢ＋ｋ５×ＣＲＰ＋ｋ６×ヒアルロン酸＋ｋ７×Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）
ここで、ｋ１＝（０．３１８〜１．０７）、好ましくは０.６６４
ｋ２＝（−１．４５〜−０．３３４）、好ましくは−０.８０４
ｋ５＝（０．１１９〜０．４０９）、好ましくは０.２８６
ｋ６＝（０．０００６９６〜０．００１７２）、好ましくは０.００１２４
ｋ７＝（０．４４３〜０．９７６）、好ましくは０.７１６
【００２９】
ＲＯＭスコアIII＝ｋ２×ＡＬＢ＋ｋ５×ＣＲＰ＋ｋ６×ヒアルロン酸＋ｋ７×Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）
ここで、ｋ２＝（−０．２７１〜−１．２１９）、好ましくは−０.７５８
ｋ５＝（０．１４３〜０．４２２）、好ましくは０.３０３
ｋ６＝（０．０００４３〜０．００１４７）、好ましくは０.０００９８０
ｋ７＝（０．４５５〜０．９９０）、好ましくは０.７２９
【００３０】
ＲＯＭスコアIＶ＝ｋ１×（男：１、女：０）＋ｋ２×ＡＬＢ＋ｋ６×ヒアルロン酸＋ｋ７×Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）
ここで、ｋ１＝（０．３０３〜１．０４８）、好ましくは０.６５０
ｋ２＝（−１．２７４〜−０．４０８）、好ましくは−０.８５３
ｋ６＝（０．０００４３〜０．００１４４）、好ましくは０.０００９６２
ｋ７＝（０．５１２〜１．０４２）、好ましくは０.７８３２２７７２
【００３１】
ＲＯＭスコアＶ＝ｋ１×（男：１、女：０）＋ｋ２×ＡＬＢ＋ｋ５×ＣＲＰ
＋ｋ７×Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）
ここで、ｋ１＝（０．１８３〜０．８６９）、好ましくは０.５００
ｋ２＝（−１．４７５〜−０．６９０）、好ましくは−１．０９３
ｋ５＝（０．０８４〜０．３５４）、好ましくは０.２４１
ｋ７＝（０．４８５〜０．９８６）、好ましくは０.７４１
【００３２】
以上説明したように、本実施形態のＲＯＭスコアの構成因子であるＮＸ-ＰＶＫＡは、腫瘍径などの腫瘍因子を強く反映していること、ＲＯＭスコアは肝細胞がんによる死亡率リスクに相関する予後予測の指標となることを知見した。また、ＲＯＭスコアは肝細胞がん患者の全生存期間と有意に相関することを知見した。その結果、生存期間の予測の基準としてＲＯＭスコアを用いることにより、精度の高い画像診断をしなくても、血清検査データのみで、肝細胞がんの客観的な予後予測を確立できた。
【００３３】
すなわち、図１（ａ）に示したように、横軸にＲＯＭスコア、縦軸に生存期間（survival time [日数]）をとり、図１０の臨床例について得られたＲＯＭスコアと生存日数との関係データは図１の分布となる。同分布データを直線で近似することにより、次式（２）に示す肝細胞がん患者の生存期間を求める算出式が得られた。
Ｌｏｇ（生存日数）＝α−β×ＲＯＭスコアＩ          （２）
ここで、係数α、βの最適な推定値は、α＝６.３１１、β＝０.５２９である。しかし、これに限定されるものではなく、図１（ｂ）に示す信頼区間の範囲内の係数を適宜選択してＲＯＭスコアを算出することができる。
【００３４】
また、式（２）の係数α、βは、適用するＲＯＭスコアＩ〜Ｖに応じて、図７（ｂ）に示すように異なってくる。つまり、ＲＯＭスコアＩ〜Ｖごとに最適なα、βと、その許容範囲を定めることができる。
【００３５】
以上説明したように、本発明によれば、精度の高い画像診断装置を用いることなく、肝細胞がん患者の生存期間の予後予測を客観的に行うことができる臨床上の有用性が高い手法を確立できる。
【００３６】
なお、図１２に示した各腫瘍マーカーと全生存時間の関係において、ＮＸ-ＰＶＫＡとＮＸ-ＰＶＫＡ-Ｒとの間には、
ＮＸ-ＰＶＫＡ  =（ＰＩＶＫＡ-II)／（ＮＸ-ＰＶＫＡ-Ｒ）の関係、すなわち
Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）=Ｌｏｇ（ＰＩＶＫＡ-II) ―Ｌｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ-Ｒ）
・・・（３）
の関係がある。
したがって、同一の臨床例において、（ＰＩＶＫＡ-II)と（ＮＸ-ＰＶＫＡ-Ｒ）のデータが予め得られている場合は、改めて（ＮＸ-ＰＶＫＡ）を測定することなく、式（１）におけるＬｏｇ（ＮＸ-ＰＶＫＡ）を式（３）に基づいて算出することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７（ａ）】
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【図７（ｂ）】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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