(57)【要約】【課題】紫外線により皮膚に生じるしわの形成を防止・改善させる効果を有する皮膚のしわ形成防止・改善剤を提供する。【解決手段】温度範囲１５〜１５０℃、圧力範囲１〜８０ＭＰａの状態にある二酸化炭素により抽出された、赤霊芝抽出物及び／又は黒霊芝抽出物を含有することを特徴とする皮膚のしわ形成防止・改善剤である。二酸化炭素により抽出された赤霊芝抽出物及び黒霊芝抽出物を用いることにより、真皮線維芽細胞における紫外線によるコラーゲン産生の低下を抑制して、紫外線に起因する皮膚のしわ形成を防止・改善することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
温度範囲１５〜１５０℃、圧力範囲１〜８０ＭＰａの状態にある二酸化炭素により抽出された抽出物である、赤霊芝抽出物及び／又は黒霊芝抽出物を含有することを特徴とする皮膚のしわ形成防止・改善剤。
【請求項２】
皮膚のしわが、紫外線照射に起因するしわである請求項１記載の皮膚のしわ形成防止・改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紫外線により生じる皮膚のしわ形成防止・改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、紫外線、乾燥、寒冷、熱、薬物等のさまざまな物理的及び化学的ストレスに日々さらされている。その結果、皮膚の機能低下が引き起こされ、さまざまな皮膚の老化現象が顕在化する。皮膚の老化現象の一つに、しわがある。しわには、表皮性のしわと、真皮性のしわの二種類が存在することが知られている。表皮性のしわは小じわと呼ばれ、皮膚の乾燥により、表皮角質層中の水分量が低下することによって一時的に生じるしわである。小じわの改善方法としては、保湿効果を有する化粧品の使用が一般的である。保湿効果を有する化粧品を皮膚に塗布することにより、角質層の保湿機能が改善され、小じわが減少する。一方、真皮性のしわは、主に太陽光線に含まれる紫外線によって形成されるしわである。その形成メカニズムとしては、紫外線による真皮線維芽細胞におけるコラーゲン合成能の低下や、マトリックスメタロプロテアーゼの増加によるコラーゲンの分解促進があげられる（非特許文献１、２）。
【０００３】
乾燥に起因する表皮性のしわ（小じわ）と紫外線に起因する真皮性のしわでは、組織学的形態、発症メカニズム、治療方法が異なり、紫外線により生じる真皮性のしわは、保湿剤では改善させることはできないので、真皮性のしわに対する形成防止方法や改善方法が求められている。化粧品業界では、抗しわ製品の効能評価のガイドラインが設けられ、表皮性のしわと真皮性のしわが明確に区別されている（非特許文献３）。
【０００４】
これまでに、紫外線照射によって生じるしわを改善することを目的として、加水分解アーモンドを有効成分とする皮膚のしわ形成防止・改善剤（特許文献１）、ジョチョウケイ、テンキシ及びキセンウの抽出物を有効成分とする紫外線照射に起因するしわの改善剤（特許文献２）が報告されている。
【０００５】
一方、霊芝の外用剤への利用については、霊芝の水抽出物に抗アレルギー、保湿、育毛、抗菌、抗炎症効果があることが知られている（非特許文献４）。また、超臨界二酸化炭素により抽出されたマンネンタケを含有する皮膚外用剤（特許文献３）が報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０００−１１９１２５
【特許文献２】特開２００６−１９９６１１
【特許文献３】特開２００５−１０４８７３
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｎｉｓｈｉｍｏｒｉ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ，１１７：１４５８−１４６３，２００１．
【非特許文献２】Ｔａｎａｋａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ，Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｒｅｓ，３００：Ｓ５７−６４，２００８．
【非特許文献３】抗老化機能評価専門委員会，日本香粧品学会誌，３０（４），３１６−３３２，２００６．
【非特許文献４】化粧品ハンドブック，日光ケミカルズ株式会社，ｐ３５５，１９９６．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、紫外線により皮膚に生じるしわの形成を防止・改善させる効果を有する皮膚のしわ形成防止・改善剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、この課題を解決すべく、鋭意研究を重ねた結果、温度範囲１５〜１５０℃、圧力範囲１〜８０ＭＰａの状態にある二酸化炭素により抽出された赤霊芝抽出物及び黒霊芝抽出物が、紫外線による真皮線維芽細胞におけるコラーゲン産生の減少を抑制し、優れたしわ形成防止・改善効果を発揮することを発見し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
すなわち、本発明は、温度範囲１５〜１５０℃、圧力範囲１〜８０ＭＰａの状態にある二酸化炭素により抽出された赤霊芝抽出物及び／又は黒霊芝抽出物を含有することを特徴とする紫外線による皮膚のしわ形成防止・改善剤である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の温度範囲１５〜１５０℃、圧力範囲１〜８０ＭＰａの状態にある二酸化炭素により抽出された赤霊芝抽出物及び／又は黒霊芝抽出物を用いることにより、紫外線による真皮線維芽細胞におけるコラーゲン産生の減少を抑制し、皮膚のしわ形成を防止・改善することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明で用いる赤霊芝及び黒霊芝は、生薬「霊芝」に用いられる担子菌であり、マンネンタケ科（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｔａｃｅａｅ）、マンネンタケ属（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ）に属する。また、マンネンタケ属のキノコについては、中国の薬学古書である「本草綱目」や「神農本草経」に記載されている。本発明で用いる赤霊芝の学名は、（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ）であり、鹿角霊芝も含まれる。また、黒霊芝の学名は、（Ｇ．ａｔｒｕｍ、Ｇ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｇ．ｓｉｎｅｎｓｅ、Ｇ．ｄｕｒｏｐｏｒａ）であり、紫霊芝（紫芝）も含まれる。これらは広く中国や日本市場等で流通しているものを用いることができるし、自生品や栽培品を用いても良い。また、菌糸体の培養物も用いることができる。これらは乾燥や粉砕したものを用いることができる。
【００１３】
本発明における赤霊芝及び黒霊芝抽出物の抽出は、超臨界状態又はその近傍の状態にある二酸化炭素により、既知の抽出方法に従って実施することができる。
【００１４】
本発明における抽出条件は、温度約１５〜１５０℃及び圧力約１〜８０ＭＰａ、好ましくは温度約３０〜６０℃及び圧力約１０〜５０ＭＰａの範囲内で、目的に応じた温度及び圧力を採用することができる。抽出時間や二酸化炭素の供給量は、目的に応じて適宜選択できる。
【００１５】
さらに、本発明において共溶媒（エントレーナー）として有機溶媒を用いることもできる。共溶媒としては、エタノール、アセトン等があげられる。中でも、安全性の面からエタノールが好ましい。
【００１６】
抽出は、例えば、上記抽出条件の二酸化炭素を連続的に吹き込むことによって行うことができる。次いで、赤霊芝及び黒霊芝の抽出物を含有する二酸化炭素流体を分離槽に導き、常用されている方法、例えば、圧力を下げる方法、温度を変化させる方法等で分離する。この際、分離槽には抽出された溶質を吸着できる吸着剤や、溶解や分散させることができる媒体（溶剤、基剤）等を充填しておくこともでき、抽出条件に応じた適当な分離手段を採用できる。分離された二酸化炭素は液化槽に輸送して再利用することができる。
【００１７】
上記抽出物は、抽出物のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、濾過、脱臭、乾燥等の処理をして用いても良い。更には、カラム精製等を行って有効成分を濃縮や単離しても良い。
【００１８】
本発明の抽出法によれば、赤霊芝等に含有されるガノデリン酸などのトリテルペン類も効果的に抽出できる。特に、エントレーナーを用いればこの効果は顕著である。
【００１９】
本発明は、温度範囲１５〜１５０℃、圧力範囲１〜８０ＭＰａの状態にある二酸化炭素により抽出された赤霊芝抽出物及び／又は黒霊芝抽出物を含有することを特徴とする。紫外線により生じる皮膚のしわ形成防止・改善剤は、化粧品、医薬部外品及び医薬品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、クリーム、ローション、ゲル剤、軟膏、ペースト剤等皮膚に適用されるものがあげられる。二酸化炭素により抽出された赤霊芝抽出物及び黒霊芝抽出物をそのまま使用しても良く、抽出物の効果を損なわない範囲内で、外用剤に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、キレート剤等の成分を配合することができる。
【００２０】
本発明で用いる温度範囲１５〜１５０℃、圧力範囲１〜８０ＭＰａの状態にある二酸化炭素により抽出された赤霊芝抽出物及び黒霊芝抽出物の配合量は、それぞれ固形物（乾固後の状態）に換算して０．０００１重量％以上、好ましくは０．００１〜５重量％の配合が良い。添加の方法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。配合する赤霊芝及び黒霊芝抽出物はいずれか一方でもよいが、赤霊芝及び黒霊芝抽出物両方配合した場合は、更なる効果の増強が認められるので、より好ましい。
【００２１】
本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、処方例及び実験例をあげるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例１】
【００２２】
製造例１  赤霊芝の超臨界抽出物
内容積５Ｌの抽出槽に霊芝（赤霊芝）の粉砕物１ｋｇを仕込み、これに超臨界二酸化炭素（圧力２５ＭＰａ、温度６０℃、二酸化炭素供給量１５ｍ３）を約４．５時間供給し、抽出槽に接続した分離槽（温度４０℃、圧力４ＭＰａ）に導いて炭酸ガスと抽出物を分離し、抽出物を１０．１ｇ得た。
【００２３】
製造例２  黒霊芝の超臨界抽出物
製造例１において赤霊芝を黒霊芝に変え、製造例１と同様に処理して抽出物を１１．０ｇ得た。
【００２４】
比較製造例１  赤霊芝の熱水抽出物
製造例１で使用したものと同じ赤霊芝の粉砕物２０ｇに蒸留水１Ｌを加えて、１００℃で１時間抽出し、得られた抽出液を濾過し、その濾液を凍結乾燥して赤霊芝の熱水抽出物を１．４ｇ得た。
【００２５】
比較製造例２  黒霊芝の熱水抽出物
製造例２で使用したものと同じ黒霊芝の粉砕物２０ｇに蒸留水１Ｌを加えて、１００℃で１時間抽出し、得られた抽出液を濾過し、その濾液を凍結乾燥して黒霊芝の熱水抽出物を１．６ｇ得た。
【実施例２】
【００２６】
処方例１  クリーム１
成分                                                          配合量（重量％）
１．赤霊芝の超臨界抽出物（製造例１）                            ０．１
２．スクワラン                                                  ５．５
３．オリーブ油                                                  ３．０
４．ステアリン酸                                                ２．０
５．ミツロウ                                                    ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル                                ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）            ３．０
８．ベヘニルアルコール                                          １．５
９．モノステアリン酸グリセリン                                  ２．５
１０．香料                                                        ０．１
１１．１，３−ブチレングリコール                                  ８．５
１２．パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．２５
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１１〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却してクリームを得た。
【００２７】
処方例２  クリーム２
処方例１において、赤霊芝の超臨界抽出物を黒霊芝の超臨界抽出物（製造例２）に置き換えたものをクリーム２とした。
【００２８】
比較例１  従来のクリーム
処方例１において、赤霊芝の超臨界抽出物をスクワランに置き換えたものを従来のクリームとした。
【００２９】
処方例３  クリーム３
成分                                                        配合量（重量％）
１．赤霊芝の超臨界抽出物（製造例１）                            ０．０５
２．黒霊芝の超臨界抽出物（製造例２）                            ０．０５
３．スクワラン                                                  ５．５
４．オリーブ油                                                  ３．０
５．ステアリン酸                                                ２．０
６．ミツロウ                                                    ２．０
７．ミリスチン酸オクチルドデシル                                ３．５
８．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）            ３．０
９．ベヘニルアルコール                                          １．５
１０．モノステアリン酸グリセリン                                  ２．５
１１．香料                                                        ０．１
１２．１，３−ブチレングリコール                                  ８．５
１３．パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．２５
１４．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１０を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１２〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１１を加え、更に３０℃まで冷却してクリームを得た。
【００３０】
処方例４  軟膏
成分                                                        配合量（重量％）
１．赤霊芝の超臨界抽出物（製造例１）                            ０．０１
２．黒霊芝の超臨界抽出物（製造例２）                            ０．０１
３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）            ２．０
４．モノステアリン酸グリセリン                                １０．０
５．流動パラフィン                                              ５．０
６．セタノール                                                  ６．０
７．パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．１
８．プロピレングリコール                                      １０．０
９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とした。成分７〜９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とした。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して軟膏を得た。
【００３１】
処方例５  ゲル剤
成分                                                          配合量（重量％）
１．赤霊芝の超臨界抽出物（製造例１）                              １．０
２．エタノール                                                    ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）                ０．１
５．１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
６．グリセリン                                                    ５．０
７．キサンタンガム                                                ０．１
８．カルボキシビニルポリマー                                      ０．２
９．水酸化カリウム                                                ０．２
１０．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜４と、成分５〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【実施例３】
【００３２】
実験例１  紫外線によるコラーゲン産生低下の抑制試験
正常ヒト真皮線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を６０ｍｍディッシュに播種し、コンフルエントになるまで培養した。その後、最終濃度が０．１及び１μｇ／ｍｌになるように赤霊芝の超臨界抽出物（製造例１）又は黒霊芝の超臨界抽出物（製造例２）を加え、２４時間培養した。比較用の試料は、赤霊芝の熱水抽出物（比較製造例１）及び黒霊芝の熱水抽出物（比較製造例２）を用いた。培地を除き、細胞をＰＢＳで２回洗浄した後、ＵＶＢ領域の紫外線３０ｍＪ／ｃｍ２（東芝ＦＬ−２０Ｓ・Ｅランプ）を照射した。通常の培地に戻し、さらに２４時間培養後、ＴＲＩｚｏｌ  Ｒｅａｇｅｎｔ（インビトロジェン）にて細胞から総ＲＮＡを抽出し、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ  Ｐｌａｔｉｎｕｍ  Ｔｗｏ−Ｓｔｅｐ  ｑＲＴ−ＰＣＲ  Ｋｉｔ  ｗｉｔｈ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ（インビトロジェン）を用い、ＲＴ−ＰＣＲ法にてタイプＩコラーゲン  ｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ＰＣＲ反応は、９５℃にて２分間初期変性を行った後、９５℃：１５秒、６０℃：３１秒を１サイクルとして４０サイクル行った。内部標準としては、β−アクチンを用いた。タイプＩコラーゲン  ｍＲＮＡ発現量は、β−アクチン  ｍＲＮＡ発現量に対する割合として求めた。なお、タイプＩコラーゲン及びβ−アクチン  ｍＲＮＡ発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。
【００３３】
タイプＩコラーゲン用のプライマーセット
ＡＧＧＡＣＡＡＧＡＧＧＣＡＴＧＴＣＴＧＧＴＴ（配列番号１）
ＴＴＧＣＡＧＴＧＧＴＡＧＧＴＧＡＴＧＴＴＣＴＧ（配列番号２）
β−アクチン用のプライマーセット
ＣＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号３）
ＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧ（配列番号４）
【００３４】
実験結果を表１に示した。紫外線照射により線維芽細胞におけるタイプＩコラーゲン  ｍＲＮＡ発現は低下した。この低下は、赤霊芝の超臨界抽出物（製造例１）又は黒霊芝の超臨界抽出物（製造例２）の添加により顕著に抑制された。赤霊芝の熱水抽出物（比較製造例１）又は黒霊芝の熱水抽出物（比較製造例２）も紫外線照射による線維芽細胞におけるタイプＩコラーゲン  ｍＲＮＡ発現低下を抑制したが、その効果は、赤霊芝の超臨界抽出物及び黒霊芝の超臨界抽出物よりも顕著に低かった。これらの結果は、赤霊芝及び黒霊芝の超臨界抽出物が、紫外線による真皮線維芽細胞におけるコラーゲン産生の低下を抑制することにより、従来技術では認められないような優れた紫外線による皮膚のしわの形成防止・改善効果を有することを示している。
【００３５】
【表１】
2014043413.tif 000002
【００３６】
実験例２  使用試験
処方例１〜３及び比較例１のクリームを調製し、顔面に真皮性しわ（小じわではない）を有する女性被験者（４０−５０代）を対象に１ヶ月間の使用試験を実施した。処方例１〜３又は比較例１のクリームをそれぞれ１０名の被験者の頬部に朝晩１日２回使用させた。試験終了後のしわの改善度を、以下に示す判定基準にて視覚評価することにより、「しわに対する改善効果」を判定した。
（判定基準）
有効    ：真皮性しわ（小じわではない）がかなり目立たなくなった
やや有効：真皮性しわ（小じわではない）が以前より目立たなくなった
効果なし：変化なし
【００３７】
使用試験の結果を表２に示した。赤霊芝の超臨界抽出物を配合した処方例１、黒霊芝の超臨界抽出物を配合した処方例２、赤霊芝及び黒霊芝の超臨界抽出物を配合した処方例３のクリームを使用した群では、比較例１のクリームを使用した群と比べて、明らかに真皮性しわの改善効果が認められた。特に、赤霊芝及び黒霊芝の超臨界抽出物を併用した処方例３のクリームを使用した群では、効果の増強が認められた。なお、試験期間中、皮膚のトラブルは無く、安全性についても問題はなかった。処方例４の軟膏及び処方例５のゲル剤も同様の試験を行い、顕著な真皮性しわの改善効果が認められた。
【００３８】
【表２】
2014043413.tif 000003
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明によれば、紫外線による皮膚のしわ形成防止・改善剤を提供でき、化粧品、医薬部外品、医薬品産業等に好適に利用できる。
【配列表】
2014043413000001.app