(57)【要約】      （修正有）【課題】特定のホウレン草雑種、およびその親系統の種子および植物の提供。【解決手段】ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣおよびその親系統の植物、種子および組織培養物、ならびにかかる植物をそれ自身と、または別のホウレン草植物、例えば別の遺伝子型を有する植物と交雑することにより作成されるホウレン草植物を生産する方法に関する。さらに、かかる交雑によって生産される種子および植物に関する。さらに、かかる植物の葉および配偶子を含む、かかる植物の部分に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
その種子のサンプルがＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１３２４１の下に寄託されているホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣの種子。
【請求項２】
請求項１に記載の種子から生育した植物。
【請求項３】
請求項２に記載の植物の植物体の部分。
【請求項４】
該部分が、果実、胚珠、花粉、葉または細胞からなる群から選択される、請求項３に記載の植物体の部分。
【請求項５】
請求項２に記載のホウレン草植物の全ての生理学的および形態学的特徴を有するホウレン草植物、またはその部分。
【請求項６】
その種子のサンプルがＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１３２４１の下に寄託されている、ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣの再生可能な細胞の組織培養物。
【請求項７】
胚、成長点、子葉、花粉、葉、葯、根、根端、雌ずい、花、種子および柄からなる群より選択される植物体の部分からの細胞またはプロトプラストを含む、請求項６に記載の組織培養物。
【請求項８】
請求項６に記載の組織培養物から再生されるホウレン草植物であって、再生される植物が、その種子のサンプルがＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１３２４１の下に寄託されている、ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣの全ての生理学的および形態学的特徴を有するホウレン草植物。
【請求項９】
請求項２に記載の植物をそれ自身または第二のホウレン草植物と交雑することを含む、ホウレン草種子の作成方法。
【請求項１０】
（ａ）その種子のサンプルがＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１３２４１の下に寄託されている、雑種ＳＶ３５８０ＶＣホウレン草植物を第二のホウレン草植物と交雑する；および
（ｂ）ＳＶ３５８０ＶＣ由来ホウレン草植物に種子を形成させる、
工程を含む、雑種ＳＶ３５８０ＶＣ由来ホウレン草植物の種子を作成する方法。
【請求項１１】
さらに、
（ｃ）該ＳＶ３５８０ＶＣ由来ホウレン草種子から生育した植物を、自植するかまたは第二のホウレン草植物と交雑して、追加のＳＶ３５８０ＶＣ由来ホウレン草種子を得る；
（ｄ）工程（ｃ）の該追加のＳＶ３５８０ＶＣ由来ホウレン草種子を生育させ、追加のＳＶ３５８０ＶＣ由来ホウレン草植物を得る；および
（ｅ）工程（ｃ）および工程（ｄ）を繰り返して、さらなるＳＶ３５８０ＶＣ由来ホウレン草植物を生成する、
工程を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
以下の工程を含む、請求項１の植物を栄養繁殖させる方法:
（ａ）その種子のサンプルがＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１３２４１の下に寄託されている、雑種ＳＶ３５８０ＶＣホウレン草植物から、増殖することができる組織を収集する；
（ｂ）該組織を培養して、増殖したシュートを得る；および
（ｃ）該増殖したシュートを発根させて、発根した小植物体を得る、
工程を含むホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣの植物を、植物的に栄養繁殖させる方法。
【請求項１３】
該発根した小植物体から植物を生育させることをさらに含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
付加された所望の形質を含むホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣ変種植物を作成する方法であって、該所望の形質を付与する導入遺伝子を、ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣに導入し、それによって、所望の付与された形質を含む、その種子のサンプルがＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１３２４１の下に寄託されているホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣ変種を作成する、方法。
【請求項１５】
その種子のサンプルがＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１３２４１の下に寄託されている、所望の形質を付与する導入遺伝子を含む、ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣ変種植物。
【請求項１６】
その種子のサンプルがＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１３２４１の下に寄託されている、ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣの全ての形質を示す、雑種ホウレン草植物。
【請求項１７】
請求項１５に記載の植物を生成する種子。
【請求項１８】
請求項１６に記載の植物を生成する種子。
【請求項１９】
（ａ）成熟まで栽培された請求項１に記載の植物を得る；および
（ｂ）該植物から少なくとも第一の植物部分を収穫する、
工程を含む、ホウレン草植物部分を生産する方法：
【請求項２０】
植物部分が葉を含む、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１２年９月２４日出願の米国仮出願第６１／７０５，０６１号に基づく優先権を主張し、該仮出願の全開示事項は参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、植物育種の分野に関し、より具体的には、ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに親ホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの作出に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
野菜育種の目標は、様々な望ましい形質を単一の品種／雑種の中に結集させることである。かかる望ましい形質としては、より高い収量、昆虫または疫病および有害生物（ｐｅｓｔ）に対する抵抗性、環境ストレスに対する耐性、よりよい農学的な品質、高い栄養価、成長率および果実特性を含む、生産者および／または消費者にとって有益と考えられるあらゆる形質が挙げられる。
【０００４】
育種技術は、植物の受粉方法を利用するものである。２つの一般的な受粉方法がある：ある花の花粉が同じ花または同じ植物もしくは植物品種の別の花に移動する場合、植物は自家受粉する。花粉が異なる植物品種の花からのものである場合、植物は他家受粉する。
【０００５】
自家受粉し、何世代にもわたってタイプについて選択された植物は、ほとんど全ての遺伝子座においてホモ接合性となり、固定された（ｔｒｕｅ  ｂｒｅｅｄｉｎｇ）子孫、すなわちホモ接合性植物の均一な集団を生成する。異なる遺伝子型を有する２つのホモ接合性植物間の交雑は、多くの遺伝子座がヘテロ接合性である雑種植物の均一な集団を生成する。逆に、各々が多数の遺伝子座においてヘテロ接合性である２つの植物の交雑は、遺伝的に異なっており均一でない雑種植物の集団を生成する。こうして得られる非均一性により、能力は予測不可能なものになる。
【０００６】
均一な品種の作出には、ホモ接合性の自殖性植物の作出、これら自殖性植物の交雑、および該交雑の評価が必要である。系統育種および反復選抜は、育種集団から自殖性植物を作出するために用いられている育種方法の例である。これら育種方法は、２以上の植物または他の様々な広範囲の源からの遺伝的背景を集めて育種プールとし、該プールから、自殖および所望の表現型の選択によって新たな系統および雑種が作出される。新たな系統および雑種は、それらのうちいずれが商業的可能性を有しているかを決定するために評価される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の概要
一つの態様において、本発明はＳＶ３５８０ＶＣと命名された雑種ホウレン草植物、ホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９Ｆまたはホウレン草系統ＯＭＢ６６−１１０８Ｄを提供する。かかる植物の全ての生理学的および形態学的特徴を有するホウレン草植物も提供される。例えば花粉、胚珠、接ぎ穂（ｓｃｉｏｎ）、根茎（ｒｏｏｔｓｔｏｃｋ）、果実および植物の細胞を含む、これらホウレン草植物の部分も提供される。
【０００８】
本発明の別の態様において、追加された遺伝形質を含むホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの植物が提供される。該遺伝形質は、例えば優性または劣性アレルである遺伝子座を含み得る。本発明の一つの実施形態において、ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの植物は、単一遺伝子座変換（ｓｉｎｇｌｅ  ｌｏｃｕｓ  ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ）を含むものとして定義される。本発明の特定の実施形態において、追加された遺伝子座は、１以上の形質、例えば除草剤耐性、昆虫抵抗性、病害抵抗性および改変された炭水化物代謝を付与する。さらなる実施形態において、形質は、戻し交雑によって系統のゲノム中に導入される天然の遺伝子、天然のまたは誘導された突然変異、または遺伝子組み換え技術によって植物またはそのいずれかの前の世代の先祖に導入される導入遺伝子によって付与され得る。形質転換によって導入される場合、遺伝子座は、単一の染色体位置に組み込まれる１以上の遺伝子を含み得る。
【０００９】
本発明はまた、ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの種子にも関する。本発明のホウレン草種子は、特定の実施形態において、ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの本質的に均質なホウレン草種子の集団として提供され得る。本質的に均質な種子の集団は、一般的に、実質的な数の他の種子を含まないものである。したがって、雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの種子は、全種子の少なくとも約９８％、９９％またはそれ以上を含む、全種子の少なくとも約９７％を形成するものとなり得る。種子集団は、ＳＶ３５８０ＶＣと命名されたホウレン草植物ならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの本質的に均質な集団を提供するために、別々に生育させ得る。
【００１０】
本発明のさらに別の態様において、雑種ＳＶ３５８０ＶＣのホウレン草植物ならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの再生可能な細胞の組織培養物が提供される。該組織培養物は、好ましくは、出発植物の生理学的および形態学的特徴の全てを発現することができるホウレン草植物を再生することができ、かつ、出発植物と実質的に同じ遺伝子型を有する植物を再生することができるものである。雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの生理学的および形態学的特徴のいくつかの例としては、本明細書内の表に示される形質が挙げられる。かかる組織培養物における再生可能な細胞は、例えば胚、成長点、子葉、花粉、葉、葯、根、根端、雌ずい、花、種子および柄から得られ得る。さらに、本発明は、本発明の組織培養物から再生されるホウレン草植物、すなわち雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの全ての生理学的および形態学的特徴を有する植物を提供する。
【００１１】
本発明のさらに別の態様において、ホウレン草種子、植物および果実を生産する方法であって、第一の親ホウレン草植物を第二の親ホウレン草植物と交雑することを一般的に含み、該第一または第二の親ホウレン草植物の少なくとも一方がホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９Ｆまたはホウレン草系統ＯＭＢ６６−１１０８Ｄの植物である方法が提供される。これらの方法は、雑種ホウレン草種子または植物を調製するための方法であって、第一のホウレン草植物を異なる別個の遺伝子型を有する第二のホウレン草植物と交雑して、その親の一方としてホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９Ｆまたはホウレン草系統ＯＭＢ６６−１１０８Ｄの植物を有する雑種を提供する方法としてさらに例証され得る。これらの方法において、交雑は種子の生産をもたらす。種子生産は、該種子が回収されるか否かに関わらず生じる。
【００１２】
本発明の一つの実施形態において、「交雑」における最初の工程は、例えば媒介昆虫によって媒介される受粉が起こるよう、多くの場合近接させて、第一および第二の親ホウレン草植物の種子を播くことを含む。あるいは、花粉は手作業で移動させてもよい。植物が自家受粉する場合、受粉は、植物の栽培以外に人間の直接的介入を必要とすることなく起こり得る。
【００１３】
第二の工程は、第一および第二の親ホウレン草植物の種子を、花を有する植物となるまで栽培しまたは生育させることを含み得る。第三の工程は、例えば花を除雄すること（即ち、花粉を死滅させるかまたは除去すること）によって、植物の自家受粉を防止することを含み得る。
【００１４】
雑種交雑の第四の工程は、第一および第二の親ホウレン草植物の間の他家受粉を含み得る。さらに別の工程は、親ホウレン草植物の少なくとも一方から種子を回収することを含む。回収された種子は、ホウレン草植物または雑種ホウレン草植物を生産するために生育させることができる。
【００１５】
本発明はまた、第一の親ホウレン草植物を第二の親ホウレン草植物と交雑することを含み、該第一または第二の親ホウレン草植物の少なくとも一方がホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの植物である方法によって生産されるホウレン草種子および植物を提供する。本発明の一つの実施形態において、該方法によって生産されるホウレン草種子および植物は、本発明に従ってある植物を別の異なる植物と交雑することによって生産される一代（Ｆ１）雑種のホウレン草種子および植物である。本発明はさらに、かかるＦ１雑種ホウレン草植物の植物体の部分、およびその使用方法を考慮する。したがって、本発明の特定の例示的実施形態は、Ｆ１雑種ホウレン草植物およびその種子を提供する。
【００１６】
さらに別の態様において、本発明は、雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄに由来する植物を生産する方法であって、以下の工程を含む方法を提供する：（ａ）雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄに由来する子孫植物を作成する工程であって、雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの植物を第二の植物と交雑することを含む工程；および（ｂ）該子孫植物をそれ自身または第二の植物と交雑して後代の子孫植物の種子を生産する工程。さらなる実施形態において、該方法は以下の工程をさらに含み得る：（ｃ）該後代の子孫植物の種子から後代の子孫植物を生育させ、該後代の子孫植物をそれ自身または第二の植物と交雑する工程；および、該工程をさらに３−１０世代の間反復して雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄに由来する植物を生産する工程。雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄに由来する植物は自殖系統であり得、上記反復される交雑工程は、自殖系統を作出するのに十分な自殖を含むものとして定義し得る。該方法において、工程（ｂ）および（ｃ）に従って継続される交雑の間、工程（ｃ）から得られる特定の植物を選択することが望ましい場合もある。１以上の望ましい形質を有する植物を選択することにより、雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄに由来し、該系統／雑種の該望ましい形質のいくつかのみならず潜在的に他の選択された形質をも有する植物が得られる。
【００１７】
特定の実施形態において、本発明は、以下の工程を含む、食品または飼料を生産する方法を提供する：（ａ）成熟まで栽培された、ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの植物を得る工程、および（ｂ）該植物から少なくとも１つのホウレン草を回収する工程。
【００１８】
本発明のさらに別の実施形態において、ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの遺伝的相補体（ｇｅｎｅｔｉｃ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）が提供される。「遺伝的相補体」の語句は、その発現が表現型、本願においてはホウレン草植物または該植物の細胞もしくは組織の表現型を規定する、ヌクレオチド配列の集合体をいうために用いられる。したがって、遺伝的相補体は細胞、組織または植物体の遺伝的構成を表すものであり、雑種の遺伝的相補体は雑種の細胞、組織または植物体の遺伝的構成を表す。したがって、本発明は、本明細書に開示するホウレン草植物の細胞の遺伝的相補体を有するホウレン草植物細胞、ならびにかかる細胞を含む植物、種子および植物体を提供する。
【００１９】
植物の遺伝的相補体は、遺伝マーカーのプロファイルによって、および遺伝的相補体の発現に特徴的な表現型形質の発現、例えばアイソザイム分類プロファイルによって評価し得る。雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄを、多くの周知の技術、例えば単純配列長多型（Ｓｉｍｐｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｌｅｎｇｔｈ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ）（ＳＳＬＰｓ）（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１  ８：６５３１  ６５３５、１９９０）、ランダム増幅多型ＤＮＡ（Ｒａｎｄｏｍｌｙ  Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ  ＤＮＡｓ）（ＲＡＰＤｓ）、ＤＮＡ増幅フィンガープリンティング（ＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ）（ＤＡＦ）、配列特性増幅領域（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ  Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ  Ｒｅｇｉｏｎｓ）（ＳＣＡＲｓ）、任意プライムポリメラーゼ連鎖反応（Ａｒｂｉｔｒａｒｙ  Ｐｒｉｍｅｄ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ）（ＡＰ−ＰＣＲ）、増幅断片長多型（Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ  Ｌｅｎｇｔｈ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ）（ＡＦＬＰｓ）（引用によりその全体が本明細書中に具体的に取り込まれる  ＥＰ  ５３４  ８５８）、および一塩基多型（Ｓｉｎｇｌｅ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ）（ＳＮＰｓ）（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８０：１０７７−１０８２、１９９８）のいずれかによって同定できることが理解される。
【００２０】
さらに別の態様において、本発明は、本発明のホウレン草植物の半数体遺伝的相補体と第二のホウレン草植物、好ましくは別の異なるホウレン草植物の半数体遺伝的相補体との組み合わせによって形成される、ホウレン草植物の細胞、組織、植物体および種子に代表される雑種遺伝的相補体を提供する。別の態様において、本発明は、本発明の雑種遺伝的相補体を含む組織培養物から再生されるホウレン草植物を提供する。
【００２１】
本発明の一つの態様に関して本明細書中に記載したあらゆる実施形態は、特に断りのない限り、本発明の他の態様にも適用される。
【００２２】
「約」の用語は、ある値が、該値を決定するために採用された装置または方法についての平均の標準偏差を含むことを示すために用いられる。特許請求の範囲における「または」の用語の使用は、選択肢のみに言及することが明示されるか、または選択肢が相互に排他的である場合を除き、「および／または」を意味するために用いられる。特許請求の範囲において、「含む」の用語または他の開放型用語（ｏｐｅｎ  ｌａｎｇｕａｇｅ）と共に用いる場合、特に断りのない限り、「ある」および「ひとつの」の用語は「１つ以上」を意味する。「含む」、「有する」および「包含する」の用語は、開放型の連結動詞である。これらの動詞の１以上のあらゆる形態または時制、例えば「含む」、「含んでいる」、「有する」、「有している」、「包含する」および「包含している」もまた開放型である。例えば、１以上の工程を「含む」、「有する」または「包含する」いかなる方法も、それら１以上の工程のみを有するものには限定されず、他の記載されていない工程をもカバーする。同様に、１以上の形質を「含む」、「有する」または「包含する」いかなる植物も、それら１以上の形質のみを有するものには限定されず、他の記載されていない形質をカバーする。
【００２３】
本発明の他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。しかし、本発明の精神および範囲内における様々な変更および改変がかかる詳細な説明から当業者にとって明らかなものとなるため、該詳細な説明および提供されるいかなる具体例も、本発明の特定の実施形態を示すものではあるが、説明のみを目的として提供されているものであることは理解されるべきである。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
発明の詳細な説明
本発明は、ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣ、ホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦまたはＯＭＢ６６−１１０８Ｄの、植物、種子および派生物（ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）に関する方法および組成物（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）を提供する。
【００２５】
ＲＸ  ０６６８３５８０としても知られる、ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣは、とげ無しの種子、非常に濃色の葉、およびなめらかで直立した葉型を有する中晩抽性雑種である。雑種ＳＶ３５８０ＶＣは、べと病菌（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｆａｒｉｎｏｓａ  ｆ．ｓｐ．  ｓｐｉｎａｃｉａｅ）レースＰｆｓ１からＰｆｓ１３までに対して抵抗性を示す。
【００２６】
ホウレン草（Ｓｐｉｎａｃｉａ  ｏｌｅｒａｃｅａ  Ｌ．）系統ＳＳＢ６６−１１２９は、べと病菌レースＰｆｓ１からＰｆｓ１３までへの抵抗性を含む、多数の有益な形質を示す。
【００２７】
該系統の作成は以下に要約できる。
【００２８】
雑種ＳＶ３５８０ＶＣは、オランダ、ワーヘニンゲン（Ｗａｇｅｎｉｎｇｅｎ）のモンサント研究所（Ｍｏｎｓａｎｔｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｓｔａｔｉｏｎ）にて、雌系統ＳＳＢ６６−１１２９Ｆと雄系統ＯＭＢ６６−１１０８Ｄを交雑することによって作出された。
【００２９】
２００９年から２０１１年までの品種選定の間の観察で、ＳＶ３５８０ＶＣが均一で安定であることが確認された。他のホウレン草品種に当てはまることだが、ほとんど全ての特性において、複製の繰り返しの経過の間、わずかな比率の基準から外れた型が生じる。しかしながら、ＳＶ３６８０ＶＣでは変異体は全く観察されなかった。それは均一で、安定である。
【００３０】
系統ＳＳＢ６６−１１２９Ｆは、オランダ、ワーヘニンゲンのモンサント研究所にて、我々が組み合わせたいＦ１品種イモーラ（Ｉｍｏｒａ）からのＰｆｓ１０抵抗性をもつ良好な育種系統との育種交雑からの系統選抜により作出された。ＳＳＢ６６−１１２９の作出につながる起源および選抜は以下に要約できる（Ｓ＝自殖、Ｍ＝集団選抜）：
年  世代                        材料                                主な選抜基準
年1  F1 [OMB66-1012F×OMB66-1018D]*[SVR06894007]*[Imola(PV170)] Pfs10抵抗性付与
年2  F2.                                                        Pfs10抵抗性、色
年2  F2.S1                                                      Pfs10抵抗性
年4  F2.S2.                                                    均一性
年5  F2.S2.M1                                                  均一性
【００３１】
最終的な結果は、濃色およびＰｆｓ１からＰｆｓ１３までのレースに対する抵抗性を組み合わせた系統である。１年間の集団選択および他の数年間の原種生産の間の観察により、ＳＭＢ６６−１１２９Ｆが均一で、安定であることが確認された。他のホウレン草品種に当てはまることだが、ほとんど全ての特性において、複製の繰り返しの経過の間、わずかな比率の基準から外れた型が生じる。しかしながら、均一で、安定であることが観察されたＳＭＢ６６−１１２９Ｆは、３年間変異体が全く観察されなかった。
【００３２】
系統ＯＭＢ６６−１１０８Ｄは、オランダ、ワーヘニンゲンのモンサント研究所にて、我々が組み合わせたいＦ１品種ＳＣ７−４０５（サカタ）からの非常に濃い色をもつ良好な育種系統との育種交雑からの系統選抜により作出された。ＯＭＢ６６−１１０８Ｄの作出につながる起源および選抜は以下に要約できる（Ｔ＝育種交雑、Ｚ＝自殖、Ｍ＝集団）：
年  世代                        材料                              主な選抜基準
年1  F1.T1 育種交雑  [SC7-405*(Ronb)*(Orpa)]  Pfs1-7,9,11,13系統への極濃色付与
年2  F1.T1.Z1                                  Pfs抵抗性および色の選抜
年2  F1.T1.Z2                                  Pfs抵抗性および色の選抜
年4  F1.T.Z2.M1                                均一性
【００３３】
最終的な結果は、非常に濃い色およびＰｆｓ１〜７、９、１１およびＰｆｓ１３のレースに対する抵抗性を組み合わせた系統である。１年間の集団選択および他の数年間の原原種および原種生産の間の観察により、ＯＭＢ６６−１１０８Ｄが均一で、安定であることが確認された。他のホウレン草品種に当てはまることだが、ほとんど全ての特性において、複製の繰り返しの経過の間、わずかな比率の基準から外れた型が生じる。しかしながら、均一で、安定であることが観察されたＯＭＢ６６−１１０８Ｄは、３年間変異体が全く観察されなかった。
【００３４】
親系統は、そこから作出された雑種と同様、均一および安定である。商業的に利用可能な限度の範囲内でほとんど全ての特性において、複製の繰り返しの経過の間、わずかな比率の基準から外れた型が生じてもよい。しかしながら、変異体は全く予期されない。
【００３５】
Ｂ．ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣ、ホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの生理学的および形態学的特徴
本発明の一つの態様において、ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣおよびその親系統の生理学的および形態学的特徴を有する植物が提供される。かかる植物の生理学的および形態学的特徴の説明を、表１〜２に示す。
【表１−１】
2014097053.tif 000002
【表１−２】
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【表２−１】
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【表２−２】
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【００３６】
Ｃ．ホウレン草植物の育種
本発明の一つの態様は、ホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄを交雑することを含む、ホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣの種子を生産する方法に関する。あるいは、本発明の他の実施形態において、雑種ＳＶ３５８０ＶＣ、系統ＳＳＢ６６−１１２９Ｆ、または系統ＯＭＢ６６−１１０８Ｄは、それ自身と、またはあらゆる第二の植物と交雑させ得る。かかる方法は、雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの増殖のために用いることができ、あるいは雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄに由来する植物を生産するために用いることができる。雑種ＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄに由来する植物は、特定の実施形態において、新規ホウレン草品種の作出のために用い得る。
【００３７】
１以上の出発品種を用いる新品種の作出は、当該技術分野において周知である。本発明に従えば、雑種ＳＶ３５８０ＶＣを交雑した後、かかる周知の方法に従って複数世代にわたる育種を行うことによって、新品種を作出し得る。新品種は、あらゆる第二の植物との交雑によって作出し得る。新規系統を作出するために交雑すべき第二の植物を選択する際には、それ自身が１以上の選択された望ましい特徴を示すか又は雑種組合せにおいて望ましい特徴を示す植物を選択することが望ましい場合もある。最初の交雑を行った後、自殖および選択を行って新品種を作出する。均一な系統の作出のためには、５世代以上の自殖および選択を行うことが多い。
【００３８】
新品種の均一な系統は、倍加半数体の方法によっても作出し得る。この技術は、複数世代の自殖および選択を必要とせずに、固定された系統の作出を可能にする。この方法においては、固定された系統をわずか１世代で作出することができる。半数体胚は、小胞子、花粉、葯培養または子房培養から作成し得る。次いで、半数体胚は、自発的に、又は化学処理（例えばｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ処理）によって、倍加し得る。あるいは、半数体胚を半数体植物へと生育させて、染色体倍加を誘導する処理を行っても良い。いずれの場合においても、稔性のホモ接合性植物が得られる。本発明において、ホモ接合性系統を得るために、かかる技術のいずれかを本発明の植物およびその子孫に関して用いることができる。
【００３９】
自殖性植物を改良するために戻し交雑を用いることもできる。戻し交雑は、特定の望ましい形質を、１つの自殖性または非自殖性の源から、該形質を欠いている自殖系統へ移す。これは、例えば、優れた自殖系統（Ａ）（反復親）を、対象とする形質に関する１以上の適切な遺伝子座を有するドナー自殖系統（非反復親）に最初に交雑することによって達成することができる。次いで、かかる交雑の子孫を優れた反復親（Ａ）と戻し交雑し、その後、得られた子孫を非反復親から移すべき所望の形質について選択する。所望の形質についての選択を伴う５世代以上の戻し交雑の後、子孫は移入された特徴を有するが、ほとんどの又はほぼ全ての他の遺伝子座に関して優れた親と同様である。移入された形質に関して純粋な育種子孫を得るため、最後の戻し交雑世代を自殖するのがよい。
【００４０】
本発明の植物は、該植物の遺伝的背景の非常に優れた特性に基づく新規系統の作出に特に適している。新規ホウレン草系統を作出するためにＳＶ３５８０ＶＣならびに／またはホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄと交雑すべき第二の植物を選択する際には、通常、それ自身が１以上の選択された望ましい特徴を示すか又は雑種組合せにおいて望ましい特徴を示す植物を選択することが好ましい。望ましい形質の例としては、特定の実施形態において、高い種子収量、高い種子発芽、実生の生命力、高い果実収量、病原耐性または抵抗性、ならびに土壌および気候条件への適応性が挙げられる。本発明によって作出されるホウレン草植物の新規系統に導入し得る形質の他の例は、消費者志向の形質、例えば果実の形状、色調、食感および食味である。
【００４１】
Ｄ．性能特性
上述のとおり、雑種ＳＶ３５８０ＶＣは、ホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄから与えられた、所望の形質を示す。雑種ＳＶ３５８０ＶＣ、およびホウレン草系統ＳＳＢ６６−１１２９ＦおよびＯＭＢ６６−１１０８Ｄの性能特性は他の品種に対する性能形質の客観解析の対象とした。分析の結果を以下に示す。
【表３】
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【表４】
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【表５】
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【００４２】
Ｅ．本発明のさらなる実施形態
本発明の特定の実施形態において、少なくとも第一の所望の遺伝形質を含むよう改変された本明細書に記載される植物が提供される。かかる植物は、一つの実施形態において、戻し交雑と呼ばれる植物育種技術によって作出し得るものであり、ここで、戻し交雑技術によって植物に移入される遺伝子座に加えて、ある品種の本質的に全ての形態学的および生理学的特徴が回復される。本明細書において用いる一遺伝子座変換植物（ｓｉｎｇｌｅ  ｌｏｃｕｓ  ｃｏｎｖｅｒｔｅｄ  ｐｌａｎｔ）の用語は、戻し交雑と呼ばれる植物育種技術によって作出されるホウレン草植物をいい、ここで、戻し交雑技術によってある品種に移入される単一の遺伝子座に加えて、該品種の本質的に全ての形態学的および生理学的特徴が回復される。本質的に全ての形態学的および生理学的特徴とは、戻し交雑または導入遺伝子の直接導入の間に生じ得る偶然の変異形質以外の、同じ環境において比較した場合に違いを示す（ｏｔｈｅｒｗｉｓｅ  ｐｒｅｓｅｎｔ）植物の特徴が回復されることを意味する。
【００４３】
既存の品種を改良するため、又は既存の品種に特徴を導入するために、戻し交雑法を本発明と共に用いることができる。所望の特徴に関する遺伝子座を提供する親ホウレン草植物は、非反復親またはドナー親と称される。かかる用語は、非反復親が戻し交雑プロトコールにおいて一度だけ用いられ、反復されないことを意味する。非反復親からの１以上の遺伝子座が移入される親ホウレン草植物は、戻し交雑プロトコールにおいて数巡の間用いられるため、反復親として知られる。
【００４４】
通常の戻し交雑プロトコールにおいては、対象とする元の品種（反復親）を、移入すべき対象とする単一の遺伝子座を保有する第二の品種（非反復親）と交雑する。次いで、かかる交雑から得られた子孫を反復親と再度交雑し、非反復親から移入された単一の遺伝子座に加えて変換された植物において反復親の本質的に全ての形態学的および生理学的特徴が回復されたホウレン草植物が得られるまで、該工程を繰り返す。
【００４５】
適切な反復親の選択は、戻し交雑手法の成功のために重要な工程である。戻し交雑プロトコールの目的は、元の品種における単一の形質または特徴を変化させるか又は置換することである。これを達成するため、所望の遺伝子以外の残部の本質的に全てを保持し、それにより元の品種の所望の生理学的および形態学的構成を保持しつつ、反復品種の単一の遺伝子座を、非反復親からの所望の遺伝子座によって改変または置換する。特定の非反復親の選択は、戻し交雑の目的に依存する；主な目的の一つは、何らかの商業的に望ましい形質を植物に付加することである。正確な戻し交雑プロトコールは、変化させる特徴または形質、ならびに反復および非反復親の間の遺伝的距離に依存する。戻し交雑法は、移入される特徴が優性のアレルである場合には単純化されるが、劣性のアレル、または付加的（ａｄｄｉｔｉｖｅ）アレル（劣性および優性の間）も移入することができる。この場合、所望の特徴がうまく移入されたかどうかを決定するため、子孫の検定を導入することが必要となり得る。
【００４６】
一つの実施形態において、本明細書に記載される植物が反復親である戻し交雑の子孫ホウレン草植物は、（ｉ）非反復親からの所望の形質および（ｉｉ）同じ環境条件において生育させた場合に５％の有意性レベルで決定される、反復親の全ての生理学的および形態学的特徴を含む。
【００４７】
新品種は、２種より多くの親から作出することもできる。改変戻し交雑として知られる方法は、戻し交雑の間に異なる反復親を用いる。改変戻し交雑は、元の反復親を特定のより望ましい特徴を有する品種によって置換するために用いることができ、あるいは、複数の親を用いて、各々から異なる望ましい特徴を得ることもできる。
【００４８】
特定の形質に関連する分子マーカーの開発により、さらなる形質を、例えば本明細書に記載される確立された生殖系列に付加することが可能であり、最終的な結果として、新しい１または複数の形質の付加を有する実質的に同じ基礎的遺伝資源（ｇｅｒｍｐｌａｓｍ）が得られる。例えばＭｏｏｓｅ  ａｎｄ  Ｍｕｍｍ、２００８（Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、１４７：９６９−９７７）等に記載される分子育種は、単一または複数の形質またはＱＴＬを精鋭（ｅｌｉｔｅ）系統に組み込むためのメカニズムを提供する。かかる分子育種により促進される、精鋭系統への１または複数の形質の移動は、隣接または関連するマーカーのアッセイを用いる取り込まれたゲノム断片の同定のメカニズムによる、対象とする特定の形質に関連する特定のゲノム断片の精鋭系統への組み込みを含み得る。本明細書に記載される実施形態において、例えば、１つ、２つ、３つまたは４つのゲノム上の座を、かかる方法によって精鋭系統へ組み込み得る。追加の遺伝子座を含むこの精鋭系統を別の親精鋭系統とさらに交雑して雑種子孫を作成する場合、少なくとも８つの別々の追加の遺伝子座を該雑種に組み込むことができる。これらの追加の遺伝子座は、例えば、病害抵抗性等の形質または果実品質の形質を付与し得る。一の実施形態において、各々の遺伝子座は別々の形質を付与し得る。別の実施形態において、雑種において形質を付与するために、遺伝子座は、ホモ接合性であって且つ各親系統に存在する必要がある場合もある。さらに別の実施形態において、所望の形質の単一の頑強な表現型を付与するために、複数の遺伝子座を組み合わせることができる。
【００４９】
新規自殖系統の作出においては通常選択されないが戻し交雑技術によって改良することができる多くの単一遺伝子座形質が同定されている。単一遺伝子座形質は、遺伝子組み換えによるものであっても、そうでなくてもよい；これらの形質の例としては、これらに限定されないが、除草剤抵抗性、細菌性、真菌性またはウイルス性病害に対する抵抗性、昆虫抵抗性、改変された脂肪酸または炭水化物代謝、および変化した栄養価が挙げられる。これらは、通常核を介して遺伝する遺伝子を含む。
【００５０】
単一の遺伝子座が優性形質として働く場合、直接選択を適用し得る。かかる選択工程のため、戻し交雑の前に、最初の交雑の子孫をウイルス抵抗性および／または対応する遺伝子の存在についてアッセイする。選択により、所望の遺伝子および抵抗性形質を有さないあらゆる植物が排除され、該形質を有する植物のみがその後の戻し交雑において用いられる。次いで、かかる工程を、全てのさらなる戻し交雑世代について反復する。
【００５１】
育種のためのホウレン草植物の選択は必ずしも植物の表現型に依存するわけではなく、代わりに遺伝学的調査に基づくものであってもよい。例えば、目的の形質に遺伝的に密接に連鎖する適切な遺伝マーカーを利用することができる。これらのマーカーの１つを、特定の交雑の子孫における形質の有無を同定するために用いることができ、また、継続される育種の間、子孫の選択において用いることができる。この技術は一般に、マーカー利用選抜（ｍａｒｋｅｒ  ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）と称される。植物における目的の形質の相対的有無を同定することができるあらゆる他のタイプの遺伝マーカーまたは他のアッセイも、育種にとって有用である。マーカー利用選抜の手順は、当該技術分野において周知である。かかる方法は、劣性形質および可変性の表現型の場合、あるいは常套のアッセイがより高価であるか、時間を要するか、もしくは他に不利な点を有する場合に、特に有用である。本発明において用い得る遺伝マーカーのタイプとしては、必ずしもこれらに限定されないが、単純配列長多型（ＳＳＬＰ）（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１  ８：６５３１  ６５３５、１９９０）、ランダム増幅多型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）、ＤＮＡ増幅フィンガープリンティング（ＤＡＦ）、配列特性増幅領域（ＳＣＡＲ）、任意プライムポリメラーゼ連鎖反応（ＡＰ−ＰＣＲ）、増幅断片長多型（ＡＦＬＰ）（引用によりその全体が本明細書中に具体的に取り込まれるＥＰ  ５３４  ８５８）、および一塩基多型（ＳＮＰ）（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８０：１０７７−１０８２、１９９８）が挙げられる。
【００５２】
Ｆ．遺伝子工学によって得られる植物
戻し交雑によって、および直接的に植物に導入することができる多くの有用な形質は、遺伝的形質転換技術によって導入されるものである。そのため、遺伝的形質転換は、選択された導入遺伝子を本発明の植物に挿入するために用いることができ、あるいは戻し交雑によって導入し得る導入遺伝子の調製のために用いることができる。当業者に周知であり且つ多くの作物種に適用可能な植物の形質転換方法としては、これらに限定されないが、エレクトロポレーション、微粒子銃、アグロバクテリウム媒介形質転換、およびプロトプラストによる直接ＤＮＡ取り込みが挙げられる。
【００５３】
エレクトロポレーションによる形質転換を行うために、細胞の懸濁培養等の脆弱な組織、または胚形成カルスを用いてもよく、あるいは、未熟な胚または他の組織化された組織を直接形質転換してもよい。この技術においては、選択した細胞の細胞壁を、ペクチン分解酵素（ペクトリアーゼ（ｐｅｃｔｏｌｙａｓｅ））に暴露することによって部分的に分解するか、または制御された方法で組織を機械的に傷つけるのがよい。
【００５４】
形質転換ＤＮＡセグメントを植物細胞へ送達するための効率的な方法は、微粒子銃である。この方法においては、粒子を核酸で被覆し、推進力によって細胞内へ送達する。代表的な粒子としては、タングステン、白金、および好ましくは金によって構成されるものが挙げられる。撃ち込み（ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）のために、懸濁状態の細胞をフィルターまたは固形培地上で濃縮する。あるいは、未熟な胚または他の標的細胞を固形培地上に準備してもよい。撃たれる細胞を、適切な距離でマクロプロジェクタイル（ｍａｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ）停止プレートの下に置く。
【００５５】
加速によって植物細胞にＤＮＡを送達する方法の例示的実施形態は、ＤＮＡまたは細胞で被覆された粒子を、スクリーン、例えばステンレス鋼またはＮｙｔｅｘのスクリーンを通して、標的細胞で被覆された表面上へ推進させるために用い得る遺伝子銃粒子送達システム（Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃｓ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ）である。該スクリーンは、粒子が受け手の細胞に大きな凝集塊として送達されないよう、該粒子を分散させる。微粒子銃の技術は広く適用可能であり、事実上あらゆる植物種を形質転換するために用い得るものである。
【００５６】
アグロバクテリウム媒介移入は、植物細胞へ遺伝子座を導入するために広く適用できる別のシステムである。該方法の利点は、ＤＮＡを植物組織全体に導入することができ、それによりプロトプラストからインタクトな植物を再生させる必要を回避できることである。近代のアグロバクテリウム形質転換ベクターは、大腸菌およびアグロバクテリウムにおいて複製する能力があり、容易な操作を可能にしている（Ｋｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、  ３（７）：６３７−６４２、１９８５）。さらに、アグロバクテリウム媒介遺伝子導入用のベクターにおける近年の技術進歩により、様々なポリペプチドをコードする遺伝子を発現することができるベクターの構築を促進するよう、ベクター中の遺伝子および制限部位の配置が改良されている。記載されるベクターは、挿入されるポリペプチドコード遺伝子の直接発現のためのプロモーターおよびポリアデニル化部位と隣接する便利なマルチリンカー領域を有している。さらに、武装（ａｒｍｅｄ）および非武装（ｄｉｓａｒｍｅｄ）両方のＴｉ遺伝子を含むアグロバクテリウムを、形質転換のために用いることができる。
【００５７】
アグロバクテリウム媒介形質転換が効率的である植物系統においては、遺伝子座移入の容易かつ定義された性質のため、これが最適な方法である。ＤＮＡを植物細胞へ導入するためのアグロバクテリウム媒介植物組込みベクターの使用は、当該技術分野において周知である（Ｆｒａｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、  ３：６２９−６３５、１９８５；米国特許第５，５６３，０５５号）。
【００５８】
リン酸カルシウム沈殿、ポリエチレングリコール処理、エレクトロポレーション、およびこれらの処理の組み合わせに基づく方法を用いて、植物プロトプラストの形質転換を達成することもできる（例えば、Ｐｏｔｒｙｋｕｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌ．  Ｇｅｎ．  Ｇｅｎｅｔ．、１９９：１８３−１８８、１９８５；Ｏｍｉｒｕｌｌｅｈ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２１（３）：４１５−４２８、１９９３；Ｆｒｏｍｍ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ、３１２：７９１−７９３、１９８６；Ｕｃｈｉｍｉｙａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌ．  Ｇｅｎ．  Ｇｅｎｅｔ．、２０４：２０４、１９８６；Ｍａｒｃｏｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ、３３５：４５４、１９８８を参照）。植物の形質転換および外来性遺伝因子の発現は、Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．、１３：  ３４４−３４８、１９９４）およびＥｌｌｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（Ｔｈｅｏｒ．  Ａｐｐｌ．  Ｇｅｎｅｔ．、１０７：４６２−４６９、２００３）に例示されている。
【００５９】
多数のプロモーターが、これらに限定されないが、選択可能なマーカー、点数化可能なマーカー、疫病および有害生物耐性、病害抵抗性、栄養強化のための遺伝子、および農業上興味の対象となるあらゆる他の遺伝子を含むあらゆる目的遺伝子の、植物遺伝子発現のために有用である。植物遺伝子発現に有用な構成的プロモーターの例としては、これらに限定されないが、単子葉植物（例えばＤｅｋｅｙｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、２：５９１、１９９０；Ｔｅｒａｄａ  ａｎｄ  Ｓｈｉｍａｍｏｔｏ、Ｍｏｌ．  Ｇｅｎ．  Ｇｅｎｅｔ．、２２０：３８９、１９９０を参照）を含むほとんどの植物組織において構成的な高レベル発現をもたらすカリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）Ｐ−３５Ｓプロモーター（例えばＯｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ、３１３：８１０、１９８５を参照）；ＣａＭＶ  ３５Ｓプロモーターの直列重複バージョン、増強された３５Ｓプロモーター（Ｐ−ｅ３５Ｓ）、ノパリン合成酵素プロモーター（Ａｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．、８８：５４７、１９８８）、オクトピン合成酵素プロモーター（Ｆｒｏｍｍ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、１：９７７、１９８９）；および米国特許第５，３７８，６１９号に記載のゴマノハグサモザイクウイルス（Ｐ−ＦＭＶ）プロモーターおよびＰ−ＦＭＶのプロモーター配列が直列に重複したＦＭＶプロモーターの増強されたバージョン（Ｐ−ｅＦＭＶ）、カリフラワーモザイクウイルス１９Ｓプロモーター、サトウキビ桿状ウイルスプロモーター、ツユクサ黄斑ウイルスプロモーター、ならびに植物細胞において発現することが知られている他の植物ＤＮＡウイルスプロモーターが挙げられる。
【００６０】
環境、ホルモン、化学および／または発育シグナルに応答して調節される様々な植物遺伝子プロモーターを、植物細胞における作動可能に連結した遺伝子の発現のために用いることもでき、該プロモーターの例としては、（１）熱（Ｃａｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．、８８：９６５、１９８８）、（２）光（例えば、エンドウマメｒｂｃＳ−３Ａプロモーター、Ｋｕｈｌｅｍｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、１：４７１、１９８９；トウモロコシｒｂｃＳプロモーター、Ｓｃｈａｆｆｎｅｒ  ａｎｄ  Ｓｈｅｅｎ、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、３：９９７、１９９１；またはクロロフィルａ／ｂ−結合タンパク質プロモーター、Ｓｉｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、ＥＭＢＯ  Ｊ．、４：２７２３、１９８５）、（３）ホルモン、例えばアブシジン酸（Ｍａｒｃｏｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、１：９６９、１９８９）、（４）傷（例えば、ｗｕｎｌ、Ｓｉｅｂｅｒｔｚ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、１：９６１、１９８９）；または（５）化学物質、例えばジャスモン酸メチル、サリチル酸、またはセーフナー（Ｓａｆｅｎｅｒ）によって調節されるプロモーターが挙げられる。器官特異的プロモーター（例えば、Ｒｏｓｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．、ＥＭＢＯ  Ｊ．、６：１１５５、１９８７；Ｓｃｈｅｒｎｔｈａｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、ＥＭＢＯ  Ｊ．、７：１２４９、１９８８；Ｂｕｓｔｏｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、１：８３９、１９８９）を用いることも有利であり得る。
【００６１】
本発明の植物へ導入し得る代表的な核酸としては、例えば、別の種からのＤＮＡ配列または遺伝子、または同じ種に由来するかもしくは同じ種の中に存在するが、伝統的な繁殖または育種技術ではなく遺伝子操作法によって受容細胞へ取り込まれる遺伝子または配列が挙げられる。しかし、「外来性」の用語は、形質転換される細胞に通常は存在しない遺伝子、またはおそらく単に形質転換するＤＮＡセグメントもしくは遺伝子において見出されるのと同じ形や構造等において存在しない遺伝子、または通常存在し、天然の発現パターンとは異なる様式で発現させること、例えば、過剰発現させることを望む遺伝子をも意味する。したがって、「外来性」遺伝子またはＤＮＡの用語は、同様の遺伝子が受容細胞中に既に存在しているかどうかに関わらず、受容細胞に導入されるあらゆる遺伝子またはＤＮＡセグメントを意味する。外来性ＤＮＡに含まれるＤＮＡの型には、植物細胞に既に存在しているＤＮＡ、別の植物からのＤＮＡ、異なる生物からのＤＮＡ、または外部で生成されたＤＮＡ、例えば遺伝子のアンチセンスメッセージ（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｍｅｓｓａｇｅ）を含むＤＮＡ配列、または遺伝子の合成もしくは改変されたバージョンをコードするＤＮＡ配列が含まれ得る。
【００６２】
数千とは言わないまでも数百の異なる遺伝子が知られており、これらは潜在的に本発明のホウレン草植物へ導入することができるであろう。ホウレン草植物へ導入するために選択し得る特定の遺伝子および対応する表現型の非限定的な例としては、昆虫耐性のための１以上の遺伝子、例えばバチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）（Ｂ．ｔ．）遺伝子、有害生物耐性、例えば真菌性病害制御のための遺伝子、除草剤耐性、例えばグリホサート耐性をもたらす遺伝子、および質の改良、例えば収量、栄養強化、環境またはストレス耐性、または植物の生理、生育、発達、形態または植物の生産物におけるあらゆる望ましい変化のための遺伝子が挙げられる。例えば、構造遺伝子には、これらに限定されないが、引用により全体が本明細書に取り込まれるＷＯ  ９９／３１２４８、引用により全体が本明細書に取り込まれる米国特許第５，６８９，０５２号、引用により全体が本明細書に取り込まれる米国特許第５，５００，３６５号および第５，８８０，２７５号に記載Ｂａｃｉｌｌｕｓ昆虫制御タンパク質遺伝子を含む、昆虫耐性をもたらすあらゆる遺伝子が包含される。別の実施形態において、構造遺伝子は、これらに限定されないが、引用により全体が本明細書に取り込まれる米国特許第５，６３３，４３５号に記載されるアグロバクテリウムＣＰ４株のグリホサート抵抗性ＥＰＳＰＳ遺伝子（ａｒｏＡ：ＣＰ４）、または引用により全体が本明細書に取り込まれる米国特許第５，４６３，１７５号に記載されるグリホサート酸化還元酵素遺伝子（ＧＯＸ）を含む遺伝子によってもたらされる、除草剤グリホサートに対する耐性をもたらすことができる。
【００６３】
あるいは、ＤＮＡをコードする配列は、内在性遺伝子の発現の標的化された抑制を引き起こす非翻訳（ｎｏｎ−ｔｒａｎｓｌａｔａｂｌｅ）ＲＮＡ分子をコードすることによって、例えばアンチセンスまたはコサプレッションに媒介されるメカニズムを介して、これらの表現型に影響を及ぼすことができる（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｇｅｎ．  Ｅｎｇｉｎ．  Ｒｅｖ．、９：２０７、１９９１を参照）。ＲＮＡは、所望の内在性ｍＲＮＡ産物を切断するよう操作された触媒性ＲＮＡ分子（即ち、リボザイム）であってもよい（例えば、Ｇｉｂｓｏｎ  ａｎｄ  Ｓｈｉｌｌｉｔｏ、Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．、７：１２５、１９９７を参照）。したがって、興味のある表現型または形態の変化をもたらすタンパク質またはｍＲＮＡを生産するあらゆる遺伝子が、本発明の実行のために有用である。
【００６４】
Ｇ．定義
本明細書中の説明および表において、多くの用語が用いられる。明細書および特許請求の範囲の明確かつ一貫した理解を提供するために、以下の定義を提供する：
【００６５】
アレル：遺伝子座の１以上の代替形態のいずれかであり、そのアレルのすべてが１つの形質または特徴に関連する。二倍体の細胞または生物においては、所与の遺伝子の２つのアレルが１対の相同染色体上の対応する遺伝子座を占める。
【００６６】
戻し交雑：育種家が、雑種子孫、例えば一代雑種（Ｆ１）を、該雑種子孫の親の一方と繰り返し交雑する過程。戻し交雑は、ある遺伝的背景からの１以上の単一遺伝子座変換を別の遺伝的背景の中へ導入するために用いることができる。
【００６７】
交雑：２つの親植物を交配すること。
【００６８】
他家受粉：異なる植物からの２つの配偶子の結合による受精。
【００６９】
二倍体：２セットの染色体を有する細胞または生物。
【００７０】
除雄（Ｅｍａｓｃｕｌａｔｅ）：植物の雄性器官を除去すること、または細胞質もしくは核の遺伝因子または雄性不稔をもたらす化学物質を用いて該器官を不活化すること。
【００７１】
酵素：生物学的反応において触媒として働く分子。
【００７２】
Ｆ１雑種：２つの非同質遺伝子（ｎｏｎｉｓｏｇｅｎｉｃ）植物の交雑の第一世代子孫。
【００７３】
遺伝子型：細胞または生物の遺伝的構成。
【００７４】
半数体：二倍体における２セットの染色体のうちの１セットを有する細胞または生物。
【００７５】
連鎖：同じ染色体上のアレルが、それらの伝達が独立である場合に偶然によって期待されるよりも頻繁に、一緒に分離する傾向にある現象。
【００７６】
マーカー：環境分散の要素が全く無い、即ち遺伝率が１である、容易に検出できる表現型であり、好ましくは共優性の様式で遺伝する（二倍体ヘテロ接合体における遺伝子座の両方のアレルが容易に検出できる）もの
【００７７】
表現型：遺伝子発現の現れである、細胞または生物の検出可能な特徴。
【００７８】
量的形質遺伝子座（ＱＴＬ）：量的形質遺伝子座（ＱＴＬ）とは、通常連続的に分布する数的に表すことができる形質をある程度制御する遺伝子座をいう。
【００７９】
抵抗性：本明細書において、“抵抗性”および“耐性”の用語は、特定の有害生物、病原体、非生物的影響または環境条件に対して症状を示さない植物を説明するために互換的に用いられる。これらの用語は、いくらか症状を示すが、市場性のある生産物を許容可能な収量で生産することができる植物を説明するためにも用いられる。抵抗性または耐性と称される植物には、単に、該植物の発育が阻止され収量が現象しても、依然として作物を生産し得るという意味でそう称されるものも存在する。
【００８０】
再生：組織培養物からの植物の発生。
【００８１】
王立園芸協会（ＲＨＳ）カラーチャート値：ＲＨＳカラーチャートは、あらゆる色の正確な同定を可能にする標準化された基準である。該チャート上の色の名前は、その色相（ｈｕｅ）、輝度（ｂｒｉｇｈｔｎｅｓｓ）および彩度（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ）を表す。色は、例えばＹｅｌｌｏｗ−Ｏｒａｎｇｅ  Ｇｒｏｕｐ  １９ＡまたはＲｅｄ  Ｇｒｏｕｐ  ４１Ｂのように、グループ名、シートの番号および記号を同定することにより、ＲＨＳカラーチャートによって的確に命名される。
【００８２】
自家受粉：同じ植物の葯から柱頭への花粉の移動。
【００８３】
単一遺伝子座変換植物：戻し交雑と呼ばれる植物育種技術によって作出され、戻し交雑技術を介しておよび／または遺伝的形質転換によって品種へ導入される単一遺伝子座の特徴に加えて、ホウレン草品種の本質的に全ての所望の形態学的および生理学的特徴が回復している植物。
【００８４】
実質的に等価：比較した場合に、平均から統計学的に有意な差異（例えば、ｐ＝０．０５）を示さない特徴。
【００８５】
組織培養物：同一のもしくは異なる型の単離された細胞または植物体の部分へと組織化されたかかる細胞の集合を含む組成物。
【００８６】
導入遺伝子：形質転換によってホウレン草植物のゲノム中へ導入された配列を含む遺伝子座。
【００８７】
Ｈ．寄託情報
上述され、請求の範囲に記載されたホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣの寄託は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＡＴＣＣ）、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ  ２０１１０−２２０９に行われた。寄託を行った日は、２０１２年９月２５日であった。これらの寄託されたホウレン草雑種ＳＶ３５８０ＶＣの種子の受託番号は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１３２４１である。特許の公開の際に、寄託についての全ての制限が解除され、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．セクション１．８０１−１．８０９の要求の全てに適合することが意図される。寄託は寄託機関において、３０年の期間、または最後の請求の後５年間、または特許の有効期間のいずれか長い期間の間維持され、その期間中において必要であれば交換される。
【００８８】
前述の発明は、明確化および理解のため、例証および実施例によってある程度詳細に説明したが、添付の特許請求の範囲によってのみ制限され、本発明の範囲内においていくらかの変更および修正が行われ得ることは自明である。
【００８９】
本明細書において引用した全ての参考文献は、引用によって明確に本明細書に取り込まれる。
【外国語明細書】
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