(57)【要約】【課題】ヨーグルトなどが含有するプロバイオティクス菌などの乳酸菌株の生残性を向上させる。【解決手段】プロピオン酸菌発酵物を含んでなる乳酸菌の生残性を向上させる乳酸菌の生残性向上剤。前記プロピオン酸菌がプロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌である。前記プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌がプロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）である。前記プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）が、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＥＴ−３ （ＦＥＲＭ ＢＰ−８１１５） である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロピオン酸菌発酵物を含んでなる乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項２】
プロピオン酸菌が、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌である請求項１に記載の乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項３】
プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌が、プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）である請求項２に記載の乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項４】
プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）が、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＥＴ−３（ＦＥＲＭ ＢＰ−８１１５）である請求項３に記載の乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項５】
乳酸菌がラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）株、ラクトバシルス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）株、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）株のうち少なくとも１つであることを特徴とする請求項１乃至４のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項６】
請求項１乃至５のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤を乳酸菌含有組成物に添加することを特徴とする乳酸菌の生残性向上方法。
【請求項７】
前記乳酸菌含有組成物の発酵前に前記乳酸菌の生残性向上剤を前記乳酸菌含有組成物に添加することを特徴とする請求項６記載の乳酸菌の生残性向上方法。
【請求項８】
請求項１記載の乳酸菌の生残性向上剤と乳酸菌とを含有する食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヨーグルトなどに含有されている乳酸菌株、例えば、プロバイオティクス菌などの生残性向上に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、プロバイオティクス機能を有する菌株に注目が集められており、これらの菌の摂取による消化管内の改善・健常化とそれに伴う免疫調整作用による予防医学が盛んになってきている。その中でも特に乳酸菌はプロバイオティクス菌とも称され、古来より様々な食品として摂取されている。最近では、さらに以前よりもその機能開発が盛んになり、新規な機能性を盛り込んだ商品としての開発も進んでいる。その様な菌種としてラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）株等が挙げられる。
【０００３】
乳酸菌の摂取方法としては各種食品が存在するが、発酵乳等を代表とする発酵食品においては低ｐＨ環境となっており乳酸菌の生存には適さない。
【０００４】
乳酸菌の食品中での生残性を向上させること、さらに摂取後の乳酸菌の生残性を向上させることは、乳酸菌が前記のようなプロバイオティクス機能を有するものであることから、予防医学にとって絶大な貢献をすることとなる。
【０００５】
乳酸菌の食品中での生残性を向上させること、摂取後の乳酸菌の生残性を向上させることに関しては、いくつかの方法が提案されている。
【０００６】
非特許文献１には、システイン、ホエイ粉末、ＷＰＣ、カゼイン水和物、またはトリプトンを添加することで、ビフィズス菌やアシドフィラス菌を含むヨーグルトで、保存中における菌数維持が改善されたことが報告されている。
【０００７】
また、非特許文献２には、活性酸素除去剤としてのアスコルビン酸を添加することで、プロバイオティクス菌（アシドフィラス菌）の菌数消長が改善されたことが報告されている。
【０００８】
一方、特許文献１には「乳酸菌生残性向上剤」として乳または乳素材（例えば、バターセーラム、バターミルク）に特定の処理を施すことによって得られる特定量の脂質を含有する向上剤が開示されている。特に、この向上剤を乳酸菌の培地に添加して用いている。
【０００９】
また、特許文献２にはプロピオン酸菌及び／又はナフトキノン環を有する化合物産生菌の培養物、溶媒抽出物、及び／又は、その処理物を使用することを特徴とするビフィズス菌の生残性改善方法が開示されている。特にプロピオン酸菌はビフィズス菌の増殖促進物質を産生することが開示されている。
【００１０】
従来の技術においては乳タンパク質や活性酸素除去剤などを添加することで生残性を改良しようとしていた。これらの物質はヨーグルトの風味や物性への影響が大きく、その使用には限界があった。また特に、抗酸化剤である活性酸素除去剤では自己酸化によりその効果を発揮することから、所定量の活性酸素除去剤ではその効果の持続性が期待できない。
【００１１】
また、乳または乳素材を用いる場合には、特定の処理が必要となり、その調整に手間がかかり、ひいてはコストアップにもつながる。
【００１２】
また、プロピオン酸菌等を使用する場合には、ビフィズス菌の増殖促進効果を有する物質が産生することはすでに分かっているが、それ以外の作用機構については未だ解明されておらず、また乳酸菌についての効果についても不明である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】特開２００７−０９７４４７号公報
【特許文献２】特開平７−２２７２０７号公報
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｒ．Ｉ．デイブ等（Ｒ．Ｉ．Ｄａｖｅ ａｎｄ Ｎ．Ｐ．Ｓｈａｈ），“Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ Ｙｏｇｕｒｔ”，Ｊ． Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ ８１， ２８０４−２８１６ （１９９８）
【非特許文献２】Ｒ．Ｉ．デイブ等（Ｒａｊｉｖ Ｉ．Ｄａｖｅ ａｎｄ Ｎｅｇｅｎｄｒａ Ｐ．Ｓｈａｈ），“Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ Ａｓｃｏｒｂｉｃ Ａｃｉｄ ａｓ ａｎ Ｏｘｙｇｅｎ Ｓｃａｖｅｎｇｅｒ ｉｎ Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ Ｙｏｇｈｕｒｔｓ Ｍａｄｅ ｗｉｔｈ Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ Ｓｔａｒｔｅｒ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ”，Ｉｎｔ． Ｄａｉｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ ７， ４３５−４４３ （１９９７）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、乳酸菌株の生残性を向上させることにある。
【００１６】
特に、本発明の目的は、発酵乳等を代表とする食品での乳酸菌の生残性を向上させること、さらに摂取後の乳酸菌の生残性を向上させることにある。
【００１７】
更に、本発明は、乳酸菌株を含有している食品組成物の風味や物性に影響を与えることなく、当該食品組成物に含有されている乳酸菌株の生残性を向上させることを目的にしている。
【００１８】
ここで、本発明における乳酸菌としては、ラクトバシルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物が例示できるが、特に近年、その優れた効能が解明されつつあるラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）株を例示することができる。
【００１９】
なお、本発明において定義される「乳酸菌」は、資化した乳糖に対し、乳酸の産生量が５０％以上となるものをいい、本発明における「乳酸菌」にはビフィズス菌は含まれない。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本願発明者等は、乳酸菌株を含有している食品組成物の風味や物性に影響を与えずに、当該食品組成物に含有されている乳酸菌株の生残性を向上させることを目的とし、従来技術にある抗酸化剤などの添加による乳酸菌の生残性や活力の向上方法とは全く異なる方法を検討した。
【００２１】
その結果、プロピオン酸菌の発酵物（培養物）を使用することで、乳酸菌株を含有している食品組成物の風味や物性へ影響せず、含有される乳酸菌の持続性を高くし、保存中の品質を維持できることを見出し、本発明を完成した。
【００２２】
請求項１記載の発明は、プロピオン酸菌発酵物を含んでなる乳酸菌の生残性向上剤である。
【００２３】
請求項２記載の発明は、プロピオン酸菌が、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌である請求項１に記載の乳酸菌の生残性向上剤である。
【００２４】
請求項３記載の発明は、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌が、プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）である請求項２に記載の乳酸菌の生残性向上剤である。
【００２５】
請求項４記載の発明は、プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）が、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＥＴ−３（ＦＥＲＭ ＢＰ−８１１５）である請求項３に記載の乳酸菌の生残性向上剤である。
【００２６】
請求項５記載の発明は、乳酸菌がラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）株、ラクトバシルス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）株、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）株のうち少なくとも１つであることを特徴とする請求項１乃至４のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤である。
【００２７】
請求項６記載の発明は、請求項１乃至５のいずれか一項記載の乳酸菌の生残性向上剤を乳酸菌含有組成物に添加することを特徴とする乳酸菌の生残性向上方法である。
【００２８】
請求項７記載の発明は、前記乳酸菌含有組成物の発酵前に前記乳酸菌の生残性向上剤を前記乳酸菌含有組成物に添加することを特徴とする請求項６記載の乳酸菌の生残性向上方法である。
【００２９】
請求項８記載の発明は、請求項１記載の乳酸菌の生残性向上剤と乳酸菌とを含有する食品組成物である。
【発明の効果】
【００３０】
本発明によれば、乳酸菌株の生残性を向上させることができる。また、本発明によれば、発酵乳等を代表とする発酵食品での乳酸菌の生残性を向上させること、さらに摂取後の乳酸菌の生残性を向上させることができる。
【００３１】
更に、本発明によれば、乳酸菌株を含有している食品組成物の風味や物性に影響を与えることなく、当該食品組成物に含有されている乳酸菌株の生残性を向上させることができる。
【００３２】
本発明によれば、乳酸菌株を含有している食品組成物の風味や物性に影響を与えることなく、ラクトバシルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属等の乳酸菌、特に近年、その優れた効能が解明されつつあるラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）株の生残性を向上させることが出来る。
【００３３】
従って、対象となる食品の本来有する風味や物性を損なうことなく、長期保存後にも高いプロバイオティクス機能を付与しうる食品等を提供することが出来る。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本発明が提案する乳酸菌の生残性向上剤はプロピオン酸菌発酵物を含んでなるものである。
【００３５】
即ち、本発明は、プロピオン酸菌の発酵物を使用することで、ヨーグルトなどに含有されるプロバイオティクス菌などの乳酸菌株の生残性を向上させるものである。プロピオン酸菌発酵物を含んでなる乳酸菌の生残性向上剤を提供することで、前記目的を達成できたものである。
【００３６】
プロピオン酸菌は、古くからエメンタールチーズ等のスターターとして利用されており、その安全性は確認されている。
【００３７】
本発明が提案する乳酸菌の生残性向上剤に使用されるプロピオン酸菌発酵物は、以下に説明するようにプロピオン酸菌を常法によって培養することによって得られる。
【００３８】
本明細書において「プロピオン酸菌発酵物」は、プロピオン酸菌による発酵によって得られた培養物自体をいう。
【００３９】
本発明のプロピオン酸菌発酵物を含んでなる乳酸菌の生残性向上剤には、プロピオン酸菌発酵物及びその処理物、例えば、前記培養物（プロピオン酸菌発酵物）をろ過・遠心分離もしくは膜分離等で除菌して得られた培養濾液や培養上清液、前記培養濾液・培養上清液やプロピオン酸菌発酵物等をエバポレーター等により濃縮した濃縮物、ペースト化物、希釈物又は（凍結、加熱、減圧など）乾燥物が含まれる。
【００４０】
本発明において、処理物の作成においては、ろ過、遠心分離、膜分離等の除菌処理、沈殿、濃縮、ペースト化、希釈、乾燥などの前述の処理工程の１つ又は複数を組み合わせて用いることができる。
【００４１】
なお、本発明において、上記発酵物及びその処理物は加熱滅菌処理を施していないものをいう。
【００４２】
プロピオン酸菌発酵物の製造に使用される培地は、通常微生物が増殖しうる栄養源を含有する。栄養源として、ホエイ、カゼイン、脱脂粉乳、ホエイタンパク濃縮物（ＷＰＣ）、ホエイタンパク分離物（ＷＰＩ）、酵母エキス、大豆エキス、トリプチケース等のペプトン、ブドウ糖、乳糖等の糖類、乳清ミネラル等のミネラル類など、またはこれらを多く含有する食品を添加することができる。あるいはこれらの酵素処理物を添加してもよい。とりわけ、ホエイまたはこれの酵素分解物を使用するのが好ましいが、この例に制限されるものではない。本明細書において、ホエイ、ＷＰＣ又はＷＰＩ等、ホエイに由来するものを栄養源に用いたプロピオン酸菌発酵物を、以降、プロピオン酸菌乳清発酵物という。
【００４３】
前記栄養源を酵素分解する場合に用いる酵素として、プロテアーゼまたはペプチダーゼのうち１つあるいは複数の組み合わせを挙げることができる。使用するプロテアーゼまたはペプチダーゼは特に限定されないが、例えば、食品グレードプロテアーゼは、エンド型プロテアーゼ、エキソ型プロテアーゼ、エキソ型ペプチダーゼ／エンド型プロテアーゼ複合酵素、プロテアーゼ／ペプチダーゼ複合酵素を含む。エンド型プロテアーゼは、例えば、キモシン（ＥＣ ３．４．２３．４、Ｍａｘｉｒｅｎ、ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｙｅａｓｔ Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ 由来、ＧＩＳＴ−ＢＲＯＣＡＤＥＳ Ｎ．Ｖ．）、ＡｌｃａｌａｓｅＲ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ 由来、ノボ社）、エスペラーゼ（Ｂ． ｌｅｎｔｕｓ 由来、ノボ社）、ＮｅｕｔｒａｓｅＲ （Ｂ． ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来、ノボ社）、プロタメックス（バクテリア由来、ノボ社）、ＰＴＮ６．０Ｓ（ブタ膵臓トリプシン、ノボ社）など、エキソ型ペプチダーゼ／エンド型プロテアーゼ複合酵素としては、例えばフレーバーザイム（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ 由来、ノボ社）などが挙げあげられる。他に、エンド型プロテアーゼとして、例えば、トリプシン（ＣＡＳ Ｎｏ．９００２−０７−７、ＥＣ ３．４．２１．４、ウシ膵臓由来、Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｎｏ．Ｔ８８０２、ＳＩＧＭＡ）、ペプシン（ＣＡＳ Ｎｏ．９００１−７５−６、ＥＣ ３．４．４．１、ブタ胃粘膜由来、ＳＩＧＭＡ）、キモトリプシン（ノボ社、ベーリンガー社）、プロテアーゼＮ「アマノ」Ｇ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ 由来；天野エンザイム）、ビオプラーゼ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ 由来；ナガセ産業）、パパインＷ−４０ （天野エンザイム）、エキソ型プロテアーゼとして、膵カルボキシペプチダーゼ、小腸刷子縁のアミノペプチダーゼなどが挙げられる。また、プロテアーゼ／ペプチダーゼ複合酵素としては、例えばプロテアーゼＡ「アマノ」Ｇ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ 由来；天野エンザイム）、ウマミザイムＧ（ペプチダーゼ及びプロテアーゼ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ由来；天野エンザイム）を用いることができる。酵素の由来は上記の記載に限定されず、動物、植物、微生物のいずれに由来するものであってもよいが、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ 由来のものが好適である。これらの酵素は商品名・由来・製造元など限定的なものを意味しない。本発明の実施において、酵素は１種もしくは２種以上を組み合わせてもよい。好適な例として、プロテアーゼＡ「アマノ」Ｇ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ由来；天野エンザイム）を挙げることができるが、この例に限定されない。また、前述の酵素を組み合わせて用いる場合には、それぞれの酵素反応は、同時でもよく、別々に行ってもよい。
【００４４】
前記栄養源を酵素によって分解する場合は、原料とする栄養源を水又は温湯に分散、溶解し、酵素を添加して行う。酵素分解開始時のｐＨ、酵素分解時間、酵素反応温度は本発明品が得られるのであれば特に限定しないが、あえて挙げるなら、酵素分解開始時のｐＨは３．０〜７．５、好ましくは４．５〜７．０より好ましくは６．０〜７．０で行うことができる。酵素分解時間は０．５〜３００時間、好ましくは１〜２０時間で、さらに好ましくは１〜５時間とするのがよい。酵素反応温度は２０〜５７℃、好ましくは３０〜５２℃、さらに好ましくは４０〜５０℃で行うことができる。
【００４５】
プロピオン酸菌発酵物を製造するための培地を作成するに当たって好適な例として、ホエイ粉（１０ｗ／ｗ％）及びプロテアーゼアマノＡ「アマノ」Ｇ（０．０７ｗ／ｗ％、天野エンザイム社製）を水に溶解し、４７℃（ｐＨ６．６）で２時間酵素分解を行い、その後、８５℃、１０分間加熱することにより酵素を失活させ、次に、ビール酵母エキス（０．１０ｗ／ｗ％、アサヒビール社製）及び硫酸アンモニウム（０．２７ｗ／ｗ％）を添加し、ｐＨを６．７に調整後、１２１℃で７分間滅菌する方法を挙げることができるが、この例に限定されない。
【００４６】
プロピオン酸菌発酵物の製造に使用されるプロピオン酸菌としては、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、プロピオニシモナス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉｍｏｎａｓ）属、プロピオニフェラックス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｆｅｒａｘ）属、プロピオニミクロビウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｍｉｃｒｏｂｉｕｍ）属、プロピオニビブリオ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｖｉｂｒｉｏ）属等があり、特に制限されないが、プロピオニバクテリウム属に属する菌が好ましい。
【００４７】
プロピオニバクテリウム属の菌としては、例えば、プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）、プロピオニバクテリウム・トエニー（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｏｅｎｉｉ）、プロピオニバクテリウム・アシディプロピオニシ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）、プロピオニバクテリウム・ジェンセニー（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｊｅｎｓｅｎｉｉ）等のチーズ用の菌、プロピオニバクテリウム・アビダム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｄｕｍ）、プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）、プロピオニバクテリウム・リンホフィラム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｙｍｐｈｏｐｈｉｌｕｍ）、プロピオニバクテリウム・グラニュロサム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｒａｎｕｌｏｓａｍ）、プロピオニバクテリウム・アラビノサム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｒａｂｉｎｏｓｕｍ）、プロピオニバクテリウム・シクロヘキサニカム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｉｃｕｍ）、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｎｏｃｕｕｍ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｍ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｅｔｅｒｓｓｏｎｉｉ、 Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｒｏｐｉｏｎｉｃｕｍ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｚｅａｅ、等が挙げられ、これらのうちで、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ（以降、Ｐ． ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉともいう）が好ましく、より好ましくはＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＩＦＯ １２４２４又はＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＡＴＣＣ ６２０７、特にＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＥＴ−３（ＦＥＲＭ ＢＰ−８１１５）が好ましい。
【００４８】
本発明者らは、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＥＴ−３株を独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託した。以下に、寄託を特定する内容を記載する。
【００４９】
（１）寄託機関名：独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター
（２）連絡先：〒３０５−８５６６ 茨城県つくば市東１丁目１番１ 中央第６
（３）受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−８１１５
（４）識別のための表示： ＥＴ−３
（５）原寄託日：平成１３年８月９日
（６）ブタペスト条約に基づく寄託への移管日：平成１４年７月１１日
【００５０】
上記Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＥＴ−３は、エメンタールチーズより分離された。グラム陽性短桿菌であり、硝酸還元能は陰性、インドール生産能は陰性、硫化水素生産能は陰性、ラクトース発酵能は陽性を示す。さらに、１，４−ジヒドロキシ−２−ナフトエ酸(ＤＨＮＡ)の生産能も有する。
【００５１】
また、菌株名にＡＴＣＣと記載された菌株はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した基準株を示し、菌株名にＩＦＯと記載された菌株は財団法人発酵研究所から入手した基準株を示す。
【００５２】
次いで、このプロピオン酸菌を前記培地によって培養する。培養方法は公知の嫌気的または好気的培養法を用いることができるが、液体培地による嫌気的または好気的培養法を用いるのが好ましい。発酵開始時のｐＨ、発酵時間、発酵温度は本発明の乳酸菌の生残性向上剤が得られるのであれば特に限定しないが、発酵開始時のｐＨは３．０〜７．５、好ましくは５．０〜７．５、より好ましくはｐＨ５．５〜７．０で行うことができる。発酵時間は０．５〜２００時間、好ましくは５０〜１００時間、より好ましくは６０〜９９時間で、発酵温度は２０〜５０℃、好ましくは２５〜４５℃、より好ましくは３０〜４０℃で行うことができる。こうして得られた培養液は、培養後直ちに使用してもよいが、培養液を冷却（３〜２０℃、好ましくは約１０℃）し、２〜４週間程度保存してから使用するのが望ましい。好適な例として、ｐＨ６．８に調製後に１２１℃で７分間滅菌した培地にＰ．ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＥＴ−３（ＦＥＲＭ ＢＰ−８１１５株）の賦活培養液を０．０１〜２．５％接種し、窒素雰囲気下、３２〜３７℃で７２〜９９時間嫌気培養し、この培養液をプロピオン酸菌発酵物として得る方法を挙げることができるが、この例に限定されない。
【００５３】
例えば、約１０ｗ／ｗ％のホエイ水溶液をプロテアーゼＡ「アマノ」Ｇにて分解し（４０〜５２℃、ｐＨ６．０〜７．０で１〜５時間）、ビール酵母エキスおよび硫酸アンモニウムを添加した作成した培地に上記Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＥＴ−３の賦活培養液を０．０１〜２．５％接種し、窒素雰囲気下、３２〜３７℃で７２〜９９時間嫌気培養してプロピオン酸菌乳清発酵物を製造した場合、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＥＴ−３の菌濃度は約０．５〜５０×ｃｆｕ／ｍＬ、ＤＨＮＡ含量は約５〜５００μｇ／ｍＬ、固形分は約５〜１５ｗ／ｗ％となる。
【００５４】
本発明の乳酸菌の生残性向上剤は上記プロピオン酸菌発酵物またはその処理物をそのまま、あるいは溶媒で希釈した可溶画分または不溶画分として得ることもできる。溶媒としては、水や通常用いられる溶媒、例えば、アルコール類、炭化水素類、有機酸、有機塩基、無機酸、無機塩基、超臨界流体等を単独あるいは複数を組み合わせて用いることができる。
【００５５】
また、前述したプロピオン酸菌の発酵物それ自体及び／又はその処理物に、水、タンパク質、糖質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、有機酸、有機塩基、果汁、フレーバー類等の食品組成物を組み合わせたものとすることもできる。
【００５６】
本願の発明者等が検討したところによれば、本発明による乳酸菌の生残性向上剤は低ｐＨ環境において乳酸菌の生残性を向上する機能を発揮できるものであった。発酵乳などを代表とする乳酸菌を含有する食品は一般に低ｐＨ環境となっており、本来、乳酸菌の生存には適さない。本発明の生残性向上剤は低ｐＨ環境において乳酸菌の生残性を向上する機能を発揮できるので、発酵乳などを代表とする乳酸菌を含有する食品における乳酸菌の生残性を向上する上で有用である。乳酸菌を含有する食品のｐＨなどを考慮した上で、本発明による乳酸菌の生残性向上剤の機能をより効果的に発揮できる低ｐＨ環境は、好ましくはｐＨ２．５〜 ６．５、より好ましくはｐＨ３．５〜５．５、更に好ましくはｐＨ３．８〜４．８である。
【００５７】
本発明が提案する乳酸菌の生残性向上剤によって生残性向上を確認できた乳酸菌株、特に、プロバイオティクス菌としてはラクトバシルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物を例示できる。
【００５８】
例えば、ラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）株、ラクトバシルス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）株、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）株、特に、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ ＪＣＭ １００２Ｔ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ ＯＬＬ１２５５（ＮＩＴＥ Ｐ−７６）株、とＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＡＴＣＣ １９２５８Ｔ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＯＬＳ３２９４（ＮＩＴＥ Ｐ−７７）株）、ラクトバシルス・ガセリＯＬＬ２７１６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＯＬＬ２７１６：ＦＥＲＭ ＢＰ−６９９９）株について、本発明の乳酸菌生残性向上剤によって生残性向上を確認できた。
【００５９】
これらの菌株については、単独あるいは２以上が組み合わされている場合であっても、本発明の乳酸菌生残性向上剤によって生残性向上を確認できた。
【００６０】
なお、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ ＯＬＬ１２５５（ＮＩＴＥ Ｐ−７６）株、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＯＬＳ３２９４（ＮＩＴＥ Ｐ−７７）株）、ラクトバシルス・ガセリＯＬＬ２７１６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＯＬＬ２７１６：ＦＥＲＭ ＢＰ−６９９９）株の寄託に関する情報は以下の通りである。
【００６１】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ ＯＬＬ１２５５（ＮＩＴＥ Ｐ−７6）株
（１）寄託機関名：独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター
（２）連絡先：〒２９２−０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８
（３）受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−７６
（４）識別のための表示：Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ ＯＬＬ１２５５（ＮＩＴＥ Ｐ−７６）
（５）原寄託日：２００５年２月１０日
【００６２】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＯＬＳ３２９４（ＮＩＴＥ Ｐ−７７）株
（１）寄託機関名：独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター
（２）連絡先：〒２９２−０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８
（３）受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ−７７
（４）識別のための表示：Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＯＬＳ３２９４
（５）原寄託日：２００５年２月１０日
【００６３】
ラクトバシルス・ガセリＯＬＬ２７１６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＯＬＬ２７１６：ＦＥＲＭ ＢＰ−６９９９）株
（１）寄託機関名：独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター
（２）連絡先：〒３０５−８５６６ 茨城県つくば市東１丁目１番１ 中央第６
（３）受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−６９９９
（４）識別のための表示：Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＯＬＬ２７１６
（５）原寄託日：平成１１年５月２４日
（６）ブタペスト条約に基づく寄託への移管日：平成１２年１月１４日
【００６４】
本発明による乳酸菌の生残性向上方法は、前記のプロピオン酸菌発酵物を含んでなる乳酸菌の生残性向上剤を、乳酸菌含有組成物に添加することで行われる。添加時期としては、乳酸菌含有組成物の発酵前、発酵中、発酵後のいずれでも構わないが、好ましくは発酵前である。
【００６５】
本発明によれば、さらに、食品組成物に本発明の生残性向上剤を用いることも可能である。すなわち、前記生残性向上剤と前記乳酸菌とを含有する食品組成物である。
【００６６】
食品組成物としては各種飲食品（清涼飲料、発酵乳、ヨーグルト等）が挙げられる。
【００６７】
前記生残性向上剤と前記乳酸菌とを含有する本発明の食品組成物は、そのまま使用したり、他の食品ないし食品成分と混合するなど、通常の食品組成物における常法にしたがって使用することできる。また、その性状についても、通常用いられる飲食品の状態、例えば、固体状（粉末、顆粒状その他）、ペースト状、液状ないし懸濁状のいずれでもよい。
【００６８】
その他の成分についても特に限定されないが、前記食品組成物には、水、タンパク質、糖質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、有機酸、有機塩基、果汁、フレーバー類等を成分として使用することができる。これらの成分は、２種以上を組み合わせて使用することができ、合成品及び／又はこれらを多く含む食品を用いてもよい。
【００６９】
以下、本発明を実施例を挙げて説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。
【実施例】
【００７０】
ＬＧ２１ヨーグルト（明治乳業株式会社製）のプロバイオティクス菌株であるラクトバシルス・ガセリＯＬＬ２７１６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＯＬＬ２７１６）株の生残性とその低ｐＨの増殖活性に対する本発明の乳酸菌生残性向上剤の影響を検討した。
【００７１】
牛乳、脱脂粉乳、甘味料からなるヨーグルト原料を加熱殺菌し、スターター（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ ＯＬＬ１２５５株とＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＯＬＳ３２９４を２重量％、ラクトバシルス・ガセリＯＬＬ２７１６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＯＬＬ２７１６）株の濃縮菌を０．０５重量％、プロピオン酸菌の発酵物を１，４−ジヒドロキシ−２−ナフトエ酸ＤＨＮＡ濃度１００μｇ／ｍｌとなるまで濃縮したものを０．５重量％、同時に添加・混合して、乳酸酸度が０．７５％となるまで４３℃にて発酵を行いヨーグルトを調製した。
【００７２】
またプロピオン酸菌発酵物を添加しなかったものを比較のヨーグルトとして調製した。
【００７３】
前記におけるプロピオン酸菌の発酵物は次のようにして調製した。
【００７４】
脱脂粉乳（明治乳業（株）製）１８０ｇを水１０００ｇに溶解し、温度を４７℃に調整した。これにプロテアーゼを３．７５ｇ添加して４７℃で３時間タンパク質の分解を行った。タンパク質分解中のｐＨは６．６〜６．８に炭酸カリウム水溶液を用いて調整した。
【００７５】
タンパク質分解後に８０℃まで加温し１０分保持することでプロテアーゼを失活させ、ビール酵母エキス７．５ｇ、乳糖１５ｇを添加し、炭酸カリウム水溶液を用いてｐＨを６．９５に調整した。
【００７６】
水で溶液の容量を１５００ｍＬに調整し、２Ｌ容量のファーメンターに入れ、培地滅菌を行った（乳糖濃度質量約６．１％）。滅菌条件は１２１℃、７分とした。
【００７７】
滅菌後、ファーメンター中に窒素ガスを通気し、培地温度を３３℃で安定させて、凍結濃縮スターター（Ｐ．ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＥＴ−３）を０．７５ｍＬ添加し、培養を開始した。培養中の温度は３３℃、ｐＨは６．５に調整し、窒素ガスを通気した。ｐＨの調整には４０％（ｗｔ／ｗｔ）の炭酸カリウム水溶液を使用した。
【００７８】
培養開始７２時間後に窒素ガスの通気からエアレーションに切替え、培養開始１６８時間後に培養を終了した。エアレーション時の空気流量は、２Ｌ／分、撹拌速度は、１５０ｒｐｍとした。
【００７９】
この結果、ＤＨＮＡの濃度が５２μｇ／ｍＬとなる培養物（プロピオン酸菌発酵物）を得た。７２時間後の乳糖濃度は約１．９質量％、プロピオン酸菌数は３．５×１０１０ｃｆｕ／ｍＬであった。
【００８０】
なお、培養物（プロピオン酸菌発酵物）中のＤＨＮＡの量は、培養液１０ｍｌに０．１％（ｗ／ｖ）のアスコルビン酸ナトリウムを添加後、ｐＨ７．０に調整し、水で全量を２０ｍｌにした後、そのうち３ｍｌを等量のメタノールと混合して、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、その上清液を０．４５μｍのフィルターでろ過したＨＰＬＣのピーク面積とＤＨＮＡ濃度との関係（検量線）及び、予め求めた市販のＤＨＮＡ（和光純薬（株）製）標品の保持時間（１３分付近）をもとに算出した。
【００８１】
これらヨーグルトを１０℃にて、通常の商品の賞味期限である１６日間保存して、各乳酸菌株の菌数の変化とＯＬＬ２７１６株の低ｐＨの増殖性の推移を調べた。
【００８２】
なお、ヨーグルトの容器には、ポリスチレン製カップとアルミリッドを使用した。ヨーグルトでのプロピオン酸菌数は、ＹＥＬ（Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ Ｌａｃｔａｔｅ）寒天培地を使用し、３０℃にて嫌気培養することで測定した。菌数は、新鮮物から１６日間保存した後まで１×１０８ｃｆｕ／ｇ程度を維持した。
【００８３】
１６日間保存した後のＯＬＬ２７１６株の生残率は新鮮物を基準として、比較例の場合には７．８％、本実施例の場合には５０．８％であった。
【００８４】
１６日間保存した後のＯＬＳ３２９４株の生残率は新鮮物を基準として、比較例の場合には７．５％、本実施例の場合には７３．６％であった。
【００８５】
１６日間保存した後のＯＬＬ１２５５株の生残率は新鮮物を基準として、比較例の場合には５０％、本実施例の場合には９８％であった。
【００８６】
低ｐＨの増殖活性は、各試料を１０倍に希釈してから、その希釈液の１００μｌをＭＲＳ−ｂｒｏｔｈ（ｐＨ＝４．５）の５ｍｌに接種して、３７℃の好気下にて６時間培養した後に、ＯＬＬ２７１６株の増殖倍率を求めて表現した。
【００８７】
このとき、低ｐＨの増殖活性は１日経過した時点で、比較例の場合には２．６倍、本実施例の場合には３．５倍、１６日経過した時点で、比較例の場合には０．９倍、本実施例の場合には１．８倍であった。
【００８８】
なお、ヨーグルトの風味と物性へのプロピオン酸発酵物の添加の影響は、新鮮物、１６日間保存した後ともに認められなかった。
【００８９】
前記の実施例において、前述したようにして調製したプロピオン酸菌の発酵物をＤＨＮＡ濃度１００μｇ／ｍｌとなるまで濃縮したものを０．５重量％添加することに替えて、添加量を変動させて同様の検討を行った。
【００９０】
この結果、プロバイオティクス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）の冷蔵保存中での生残性と活力（活性）向上という観点からは、乳酸菌含有組成物に対して０．１〜１０重量％、好ましくは０．３〜５重量％の添加量が望ましいことを確認できた。
【００９１】
以上の結果から、プロピオン酸菌の発酵物をヨーグルトに添加することで、プロバイオティクス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）の冷蔵保存中での生残性と活力（活性）が大幅に向上された。また、基本スターターとして使用した、サーモフィラス菌の生残性も同様に向上された。
【００９２】
また、プロピオン酸菌はヨーグルトでの生残性が高いことから、本発明の効果はヨーグルトの賞味期限内（２５日程度）で十分永続的に維持されることが推測される。
【産業上の利用可能性】
【００９３】
本発明による乳酸菌生残性向上剤を用いることにより、各種乳酸菌、特にラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）株等のラクトバシルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属等の乳酸菌の生残性を向上させることが出来る。また、食品本来の風味や物性を損なうことなく、長期保存後においても高いプロバイオティクス機能を付与しうる食品等を提供することができる。
【手続補正書】
【提出日】平成26年3月11日(2014.3.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロピオン酸菌発酵物を有効成分として含んでなる、ｐＨが３．５〜５．５の飲食品における、乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項２】
乳酸菌が、ラクトバチルス属に属する乳酸菌である、請求項１に記載の、乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項３】
ラクトバチルス属に属する乳酸菌が、ラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）菌である、請求項２に記載の、乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項４】
ラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）菌が、ラクトバシルス・ガセリＯＬＬ２７１６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ  ＯＬＬ２７１６）株であることを特徴とする、請求項３に記載の乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項５】
プロピオン酸菌が、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌であることを特徴とする、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項６】
プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌が、プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）であることを特徴とする、請求項５に記載の乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項７】
プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）が、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＥＴ−３（ＦＥＲＭ ＢＰ−８１１５）であることを特徴とする、請求項６に記載の乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項８】
ｐＨ４．５の環境における乳酸菌の増殖倍率が、１日が経過した時点で３．５倍以上であることを特徴とする、請求項１乃至７のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項９】
ｐＨ４．５の環境における乳酸菌の増殖倍率が、１６日が経過した時点で１．８倍以上であることを特徴とする、請求項１乃至８のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項１０】
乳酸菌の生残性向上剤を含有する飲食品を、１０℃にて、１６日間で保存した後の前記乳酸菌の生残率が、新鮮物を基準として５０％以上であることを特徴とする、請求項１乃至９のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項１１】
飲食品が発酵乳、ヨーグルトである、請求項１乃至１０のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤。
【請求項１２】
請求項１乃至１１のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤を、乳酸菌を含有する食品に配合することを特徴とする、乳酸菌の生残性向上方法。
【請求項１３】
飲食品が発酵乳、ヨーグルトである、請求項１２に記載の乳酸菌の生残性向上方法。
【請求項１４】
乳酸菌を含有する原料乳の発酵前に、請求項１乃至１１のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤を、乳酸菌を含有する飲食品に配合することを特徴とする、請求項１３記載の乳酸菌の生残性向上方法。
【請求項１５】
プロピオン酸菌発酵物と、ラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）菌を含有する、ｐＨが３．５〜５．５の飲食品。
【請求項１６】
ラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）菌の生残性を向上させた、請求項１５に記載の飲食品。
【請求項１７】
ラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）菌が、ラクトバシルス・ガセリＯＬＬ２７１６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ  ＯＬＬ２７１６）株であることを特徴とする、請求項１５又は１６に記載の飲食品。
【請求項１８】
プロピオン酸菌発酵物が、生菌を含むものである、請求項１５乃至１７のいずれか一項に記載の飲食品。
【請求項１９】
飲食品が発酵乳、ヨーグルトである、請求項１５乃至１８のいずれか一項に記載の飲食品。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
請求項１記載の発明は、プロピオン酸菌発酵物を有効成分として含んでなる、ｐＨが３．５〜５．５の飲食品における、乳酸菌の生残性向上剤である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
請求項２記載の発明は、乳酸菌が、ラクトバチルス属に属する乳酸菌である、請求項１に記載の、乳酸菌の生残性向上剤である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
請求項３記載の発明は、ラクトバチルス属に属する乳酸菌が、ラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）菌である、請求項２に記載の、乳酸菌の生残性向上剤である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
請求項４記載の発明は、ラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）菌が、ラクトバシルス・ガセリＯＬＬ２７１６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ  ＯＬＬ２７１６）株であることを特徴とする、請求項３に記載の乳酸菌の生残性向上剤である。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
請求項５記載の発明は、プロピオン酸菌が、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌であることを特徴とする、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤である。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
請求項６記載の発明は、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌が、プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）であることを特徴とする、請求項５に記載の乳酸菌の生残性向上剤である。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
請求項７記載の発明は、プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）が、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＥＴ−３（ＦＥＲＭ ＢＰ−８１１５）であることを特徴とする、請求項６に記載の乳酸菌の生残性向上剤である。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
請求項８記載の発明は、ｐＨ４．５の環境における乳酸菌の増殖倍率が、１日が経過した時点で３．５倍以上であることを特徴とする、請求項１乃至７のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤である。
請求項９記載の発明は、ｐＨ４．５の環境における乳酸菌の増殖倍率が、１６日が経過した時点で１．８倍以上であることを特徴とする、請求項１乃至８のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤である。
請求項１０記載の発明は、乳酸菌の生残性向上剤を含有する飲食品を、１０℃にて、１６日間で保存した後の前記乳酸菌の生残率が、新鮮物を基準として５０％以上であることを特徴とする、請求項１乃至９のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤である。
請求項１１記載の発明は、飲食品が発酵乳、ヨーグルトである、請求項１乃至１０のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤である。
請求項１２記載の発明は、請求項１乃至１１のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤を、乳酸菌を含有する食品に配合することを特徴とする、乳酸菌の生残性向上方法である。
請求項１３記載の発明は、飲食品が発酵乳、ヨーグルトである、請求項１２に記載の乳酸菌の生残性向上方法である。
請求項１４記載の発明は、乳酸菌を含有する原料乳の発酵前に、請求項１乃至１１のいずれか一項に記載の乳酸菌の生残性向上剤を、乳酸菌を含有する飲食品に配合することを特徴とする、請求項１３記載の乳酸菌の生残性向上方法である。
請求項１５記載の発明は、プロピオン酸菌発酵物と、ラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）菌を含有する、ｐＨが３．５〜５．５の飲食品である。
請求項１６記載の発明は、ラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）菌の生残性を向上させた、請求項１５に記載の飲食品である。
請求項１７記載の発明は、ラクトバシルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）菌が、ラクトバシルス・ガセリＯＬＬ２７１６（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＯＬＬ２７１６）株であることを特徴とする、請求項１５又は１６に記載の飲食品である。
請求項１８記載の発明は、プロピオン酸菌発酵物が、生菌を含むものである、請求項１５乃至１７のいずれか一項に記載の飲食品である。
請求項１９記載の発明は、飲食品が発酵乳、ヨーグルトである、請求項１５乃至１８のいずれか一項に記載の飲食品である。