(57)【要約】【課題】簡易な工程で高精度に、血液検体中の血球から白血球を弁別することが可能な血球分析装置および血球分析方法を提供する。【解決手段】血球分析装置１は、血球を含む測定試料を流すためのフローセルＤ１と、６１０〜７５０ｎｍの波長を有するレーザ光を出射する半導体レーザ１０１と、４００〜４３５ｎｍの波長を有するレーザ光を出射する半導体レーザ１０３と、フローセルＤ１を通過する血球に半導体レーザ１０１、１０３からのレーザ光を照射することにより得られる前方散乱光をそれぞれ受光する受光面２０５ｂ、２０５ａと、を備える。受光面２０５ａ、２０５ｂからそれぞれ出力される検出信号に基づいて、測定試料に含まれる血球から、少なくとも、白血球が弁別される。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
血球を含む測定試料を流すためのフローセルと、
第１の波長を有する光を出射する第１光源と、
前記第１の波長とは異なる第２の波長を有する光を出射する第２光源と、
前記フローセルを通過する血球に前記第１光源からの光を照射することにより得られる第１散乱光を受光する第１受光部と、
前記フローセルを通過する血球に前記第２光源からの光を照射することにより得られる第２散乱光を受光する第２受光部と、を備え、
前記第１受光部および前記第２受光部からそれぞれ出力される検出信号に基づいて、測定試料に含まれる血球から、少なくとも、白血球を弁別する、
ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項２】
請求項１に記載の血球分析装置において、
血球を含む血液検体から、赤血球を溶血せずに測定試料を調製する試料調製部を備える、
ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項３】
請求項２に記載の血球分析装置において、
前記試料調製部は、白血球を染色せずに測定試料を調製する、
ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項４】
請求項２に記載の血球分析装置において、
前記試料調製部は、前記血液検体と、特定の細胞表面抗原と特異的に反応する蛍光標識抗体とを混合し、
前記フローセルを通過する血球に光を照射することにより得られる蛍光を受光する第３受光部を備え、
前記第３受光部から出力される検出信号に基づいて、前記測定試料に含まれる白血球をさらに分類する、
ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項５】
請求項１ないし４の何れか一項に記載の血球分析装置において、
ヘモグロビンの吸収係数が、前記第１の波長と前記第２の波長で異なる、
ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項６】
請求項１ないし５の何れか一項に記載の血球分析装置において、
前記第１光源は、前記第１の波長として、４００ｎｍ以上４３５ｎｍ以下の波長を有する光を照射する半導体レーザ光源である、
ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項７】
請求項１ないし６の何れか一項に記載の血球分析装置において、
前記第２光源は、前記第２の波長として、６１０ｎｍ以上７５０ｎｍ以下の波長を有する光を照射する半導体レーザ光源である、
ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項８】
請求項１ないし７の何れか一項に記載の血球分析装置において、
前記第１散乱光は、前記第１の波長の光を血球に照射することにより生じる前方散乱光であり、前記第２散乱光は、前記第２の波長の光を血球に照射することにより生じる前方散乱光である、
ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項９】
請求項１ないし８の何れか一項に記載の血球分析装置において、
前記フローセルを流れる血球毎に、前記第１散乱光の強度と前記第２散乱光の強度とを取得し、各血球の前記第１散乱光の強度および記第２散乱光の強度と、所定の強度範囲とを比較することにより、測定試料に含まれる血球から、少なくとも、白血球を弁別する、ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項１０】
請求項９に記載の血球分析装置において、
画像を表示可能な表示部を備え、
前記フローセルを流れる血球毎に取得した前記第１散乱光の強度に関する情報と前記第２散乱光の強度に関する情報に基づいて、前記第１散乱光の強度および前記第２散乱光の強度を２軸とするスキャッタグラムを作成し、作成した前記スキャッタグラムを前記表示部に表示する、
ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項１１】
請求項１ないし１０の何れか一項に記載の血球分析装置において、
前記測定試料中の白血球を、さらに複数の種類に分類する、
ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項１２】
請求項１ないし１１の何れか一項に記載の血球分析装置において、
前記第１受光部および前記第２受光部からそれぞれ出力される各血球の検出信号のうち、白血球の弁別のための第１条件を満たさない検出信号を、解析対象から除外する、
ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項１３】
請求項１２に記載の血球分析装置において、
前記第１条件を満たさない検出信号を、解析データの取得対象から除外する、
ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項１４】
請求項１ないし１３の何れか一項に記載の血球分析装置において、
同一の測定試料を用いて、白血球の弁別と白血球以外の他の血球の弁別とを行う、
ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項１５】
請求項１４に記載の血球分析装置において、
白血球を弁別する際には、白血球の弁別のための第１条件に基づいて、前記検出信号から解析データを取得し、白血球以外の他の血球を弁別する場合には、前記第１条件とは異なる第２条件に基づいて、前記検出信号から解析データを取得する、
ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項１６】
請求項１５に記載の血球分析装置において、
測定試料に対する一連の測定の途中で、解析データの取得条件を、前記第１条件と前記第２条件との間で切り替える、
ことを特徴とする血球分析装置。
【請求項１７】
血球を含む測定試料をフローセルに流し、
前記フローセルを通過する血球に第１の波長の光を照射することにより得られる第１散乱光を検出して第１検出信号を取得し、
前記フローセルを通過する血球に第２の波長の光を照射することにより得られる第２散乱光を検出して第２検出信号を取得し、
前記第１検出信号および前記第２検出信号に基づいて、測定試料に含まれる血球から、少なくとも、白血球を弁別する、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の血球分析方法において、
血球を含む血液検体から、赤血球を溶血せずに測定試料を調製する、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の血球分析方法において、
血球を含む血液検体から、白血球を染色せずに測定試料を調製する、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項２０】
請求項１８に記載の血球分析方法において、
前記血液検体と、特定の細胞表面抗原と特異的に反応する蛍光標識抗体とを混合し、
前記フローセルを通過する血球に光を照射することにより得られる蛍光信号に基づいて、前記測定試料に含まれる白血球をさらに分類する、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項２１】
請求項１７ないし２０の何れか一項に記載の血球分析方法において、
ヘモグロビンの吸収係数が、前記第１の波長と前記第２の波長で異なる、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項２２】
請求項１７ないし２１の何れか一項に記載の血球分析方法において、
前記第１の波長は、４００ｎｍ以上４３５ｎｍ以下である、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項２３】
請求項１７ないし２２の何れか一項に記載の血球分析方法において、
前記第２の波長は、６１０ｎｍ以上７５０ｎｍ以下である、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項２４】
請求項１７ないし２３の何れか一項に記載の血球分析方法において、
前記第１散乱光は、前記第１の波長の光を血球に照射することにより生じる前方散乱光であり、前記第２散乱光は、前記第２の波長の光を血球に照射することにより生じる前方散乱光である、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項２５】
請求項１７ないし２４の何れか一項に記載の血球分析方法において、
前記フローセルを流れる血球毎に、前記第１散乱光の強度と前記第２散乱光の強度とを取得し、各血球の前記第１散乱光の強度および記第２散乱光の強度と、所定の強度範囲とを比較することにより、測定試料に含まれる血球から、少なくとも、白血球を弁別する、ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項２６】
請求項２５に記載の血球分析方法において、
前記フローセルを流れる血球毎に取得した前記第１散乱光の強度に関する情報と前記第２散乱光の強度に関する情報に基づいて、前記第１散乱光の強度および前記第２散乱光の強度を２軸とするスキャッタグラムを作成し、作成した前記スキャッタグラムを表示する、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項２７】
請求項１７ないし２６の何れか一項に記載の血球分析方法において、
前記測定試料中の白血球を、さらに複数の種類に分類する、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項２８】
請求項１７ないし２７の何れか一項に記載の血球分析方法において、
各血球の前記第１検出信号および前記第２検出信号のうち、白血球の弁別のための第１条件を満たさない前記第１検出信号および前記第２検出信号を、解析対象から除外する、ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項２９】
請求項２８に記載の血球分析方法において、
前記第１条件を満たさない前記第１検出信号および前記第２検出信号を、解析データの取得対象から除外する、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項３０】
請求項１７ないし２９の何れか一項に記載の血球分析方法において、
同一の測定試料を用いて、白血球の弁別と白血球以外の他の血球の弁別とを行う、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項３１】
請求項３０に記載の血球分析方法において、
白血球を弁別する際には、前記第１条件に基づいて、前記第１検出信号および前記第２検出信号から解析データを取得し、白血球以外の他の血球を弁別する場合には、前記第１条件とは異なる第２条件に基づいて、前記第１検出信号および前記第２検出信号から解析データを取得する、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項３２】
請求項３１に記載の血球分析方法において、
測定試料に対する一連の測定の途中で、解析データの取得条件を、前記第１条件と前記第２条件との間で切り替える、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項３３】
血球を含む試料と、細胞表面抗原と特異的に反応する蛍光標識抗体とを混合し、赤血球を除去する処理を行うことなく測定試料を調製し、
調製した測定試料をフローセルに流し、
前記フローセルを通過する血球に第１の波長の光を照射することにより得られる第１散乱光を検出して第１検出信号を取得し、
前記フローセルを通過する血球に第２の波長の光を照射することにより得られる第２散乱光を検出して第２検出信号を取得し、
前記フローセルを通過する血球に所定波長の光を照射することにより得られる蛍光を検出して第３検出信号を取得し、
前記第１検出信号、前記第２検出信号および前記第３検出信号に基づいて、測定試料に含まれる白血球を細胞表面抗原について分類する、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項３４】
請求項３３に記載の血球分析方法において、
前記所定波長の光は、前記第１の波長の光または前記第２の波長の光である、
ことを特徴とする血球分析方法。
【請求項３５】
請求項３３または３４に記載の血球分析方法において、
複数種類の細胞表面抗原とそれぞれ特異的に反応し、互いに異なる波長の蛍光が励起される複数種類の蛍光標識抗体を前記試料に混合して前記測定試料を調製し、
各蛍光標識抗体に基づく蛍光をそれぞれ検出して複数種類の前記第３検出信号を取得し、
前記第１検出信号、前記第２検出信号および複数種類の前記第３検出信号に基づいて、
測定試料に含まれる白血球を細胞表面抗原について分類する、
ことを特徴とする血球分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血球を含む試料の流れに光を照射して、血球の分析を行う血球分析装置および血球分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
特許文献１には、予め赤血球を溶血させた血液検体中の血球に対しレーザ光を照射し、低角前方散乱光と高角前方散乱光という散乱角が異なる２つの前方散乱光を取得することで、白血球の分類および計数を行う手法が記載されている。この手法によれば、染色剤を用いることなく、白血球の分類を行うことが可能となる。
【０００３】
また、特許文献２には、血液検体中の赤血球を溶血させ、白血球を染色することにより白血球をリンパ球、単球、好中球＋好塩基球、好酸球の４つの集団に分類し計数する技術が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平８−５００８９号公報
【特許文献２】特開２００３−１０６９８４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、上記特許文献１および特許文献２に記載の手法を用いて血液検体中の血球の分類を行った場合、染色剤または溶血剤等の試薬が用いられているため、測定試料の調製のために複数の分注工程が必要となる。このため、より少ない工程で簡易に、血球を分類および計数できる手法が求められている。
【０００６】
このような課題に鑑み、本発明は、簡易な工程で高精度に、血液検体中の血球から白血球を弁別することが可能な血球分析装置および血球分析方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の第１の態様は、血球分析装置に関する。この態様に係る血球分析装置は、血球を含む測定試料を流すためのフローセルと、第１の波長を有する光を出射する第１光源と、前記第１の波長とは異なる第２の波長を有する光を出射する第２光源と、前記フローセルを通過する血球に前記第１光源からの光を照射することにより得られる第１散乱光を受光する第１受光部と、前記フローセルを通過する血球に前記第２光源からの光を照射することにより得られる第２散乱光を受光する第２受光部と、を備える。そして、血球分析装置は、前記第１受光部および前記第２受光部からそれぞれ出力される検出信号に基づいて、測定試料に含まれる血球から、少なくとも、白血球を弁別する。
【０００８】
本態様に係る血球分析装置によれば、第１の波長の光をフローセルに照射することにより生じる散乱光と、第２の波長の光をフローセルに照射することにより生じる散乱光が、それぞれ、第１受光部と第２受光部によって受光される。ここで、各波長の光により生じる散乱光の特性は、粒子の種類毎に異なる。すなわち、同じ大きさの粒子であっても、粒子の種類が異なれば、各波長の光により生じる散乱光の特性が互いに異なる。特に、赤血球は、ヘモグロビンを含むため、波長に応じて光の吸収が大きく変化するため、赤血球により生じる散乱光も、波長に応じて大きく変化する。このため、第１受光部および第２受
光部からそれぞれ出力される検出信号は、赤血球と白血球とで、信号の状態に差が生じ易い。よって、これらの検出信号に基づいて、赤血球と白血球が明確に区分可能となり、測定試料中の血球から白血球を良好に弁別可能となる。このように、本態様に係る血球分析装置によれば、第１受光部と第２受光部からの検出信号に基づいて、簡易な工程で高精度に、測定試料中の血球から、少なくとも、白血球を弁別することができる。
【０００９】
本態様に係る血球分析装置は、血球を含む血液検体から、赤血球を溶血せずに測定試料を調製する試料調製部を備える構成とされ得る。こうすると、赤血球を溶血するための試薬が必要ないため、コストの削減を図ることができる。さらに、試薬の消費を削減でき、且つ、試薬を含む測定試料が廃棄されることを抑制できるため、環境に配慮した分析手法を実現することができる。
【００１０】
さらに、前記試料調製部は、白血球を染色せずに測定試料を調製するよう構成され得る。こうすると、白血球を染色するための試薬が必要ないため、コストの削減を図ることができる。さらに、試薬の消費を削減でき、且つ、試薬を含む測定試料が廃棄されることを抑制できるため、環境に配慮した分析手法を実現することができる。
【００１１】
また、前記試料調製部は、前記血液検体と、特定の細胞表面抗原と特異的に反応する蛍光標識抗体とを混合し、血球分析装置は、前記フローセルを通過する血球に光を照射することにより得られる蛍光を受光する第３受光部を備え、前記第３受光部から出力される検出信号に基づいて、前記測定試料に含まれる白血球をさらに分類するよう構成され得る。こうすると、白血球の分類とともに、白血球に対する表面抗原分析をさらに行うことができる。
【００１２】
また、本態様に係る血球分析装置において、ヘモグロビンの吸収係数が、前記第１の波長と前記第２の波長で異なるよう構成され得る。こうすると、ヘモグロビンを含む赤血球の散乱光と、ヘモグロビンを含まない他の血球の散乱光とが、互いに異なるものとなるため、赤血球と他の血球とで、信号の状態に差が生じ易くなる。
【００１３】
また、本態様に係る血球分析装置において、前記第１光源は、前記第１の波長として、４００ｎｍ以上４３５ｎｍ以下の波長を有する光を照射する半導体レーザ光源とされ得る。酸素化ヘモグロビンの吸収係数は、４００〜４３５ｎｍの辺りがピークとなる。また、一般に、静脈血のヘモグロビン酸化飽和度は、７５％程度と考えられる。よって、第１の波長を４００ｎｍ以上４３５ｎｍ以下に設定することで、第１の波長の光を赤血球とその他の血球に照射したときにそれぞれ生じる散乱光の差が大きくなり、この差が、第１受光部からの検出信号に反映される。よって、第１の波長を４００ｎｍ以上４３５ｎｍ以下とすることにより、測定試料中の血球を、赤血球とその他の血球に、より良好に区分することができ、白血球をより良好に弁別することができる。
【００１４】
また、本態様に係る血球分析装置において、前記第２光源は、前記第２の波長として、６１０ｎｍ以上７５０ｎｍ以下の波長を有する光を照射する半導体レーザ光源とされ得る。酸素化ヘモグロビンの吸収係数は、６１０〜７５０ｎｍの辺りがボトムとなる。よって、第２の波長を６１０ｎｍ以上７５０ｎｍ以下に設定することで、第１の波長の光を赤血球に照射したときに生じる散乱光と、第２の波長の光を赤血球に照射したときとに生じる散乱光の差異が大きくなる。他方、赤血球以外の血球では、ヘモグロビンによる吸収が起こらないため、各波長の光により生じる散乱光の差異は小さい。よって、第２の波長を６１０ｎｍ以上７５０ｎｍ以下とすることにより、赤血球に対する各波長の散乱光の差異が他の血球の場合に比べて大きくなり、結果、赤血球を他の血球から、より良好に区分することができ、白血球をより良好に弁別することができる。
【００１５】
本態様に係る血球分析装置において、前記第１散乱光は、前記第１の波長の光を血球に照射することにより生じる前方散乱光とすることができ、また、前記第２散乱光は、前記第２の波長の光を血球に照射することにより生じる前方散乱光とすることができる。
【００１６】
また、本態様に係る血球分析装置は、前記フローセルを流れる血球毎に、前記第１散乱光の強度と前記第２散乱光の強度とを取得し、各血球の前記第１散乱光の強度および記第２散乱光の強度と、所定の強度範囲とを比較することにより、測定試料に含まれる血球から、少なくとも、白血球を弁別するよう構成され得る。
【００１７】
この場合、血球分析装置は、画像を表示可能な表示部を備え、前記フローセルを流れる血球毎に取得した前記第１散乱光の強度に関する情報と前記第２散乱光の強度に関する情報に基づいて、前記第１散乱光の強度および前記第２散乱光の強度を２軸とするスキャッタグラムを作成し、作成した前記スキャッタグラムを前記表示部に表示するよう構成され得る。こうすると、ユーザは、各血球の分布状態を把握することができる。
【００１８】
本態様に係る血球分析装置は、前記測定試料中の白血球を、さらに複数の種類に分類するよう構成され得る。白血球は、種類に応じて粒径が異なる。このため、白血球の種類に応じて、第１散乱光と第２散乱光が異なる。よって、第１散乱光と第２散乱光の検出信号に基づいて、測定試料中の白血球を、さらに複数の種類に分類することができる。
【００１９】
また、本態様に係る血球分析装置は、前記第１受光部および前記第２受光部からそれぞれ出力される各血球の検出信号のうち、白血球の弁別のための第１条件を満たさない検出信号を、解析対象から除外するよう構成され得る。こうすると、解析処理の負荷軽減を図りながら、効率的に、白血球の弁別を行うことができる。
【００２０】
この場合、血球分析装置は、前記第１条件を満たさない検出信号を、解析データの取得対象から除外するよう構成され得る。こうすると、不要な解析データの取得が抑制されるため、解析データを格納するためのメモリ容量が削減され、より効率的に、白血球の弁別を行うことができる。
【００２１】
また、本態様に係る血球分析装置は、同一の測定試料を用いて、白血球の弁別と白血球以外の他の血球の弁別とを行うよう構成され得る。こうすると、白血球の弁別と、白血球以外の他の血球の弁別とを行うために、個別に測定試料の調製を行う必要がなくなる。
【００２２】
この場合、血球分析装置は、白血球を弁別する際には、白血球の弁別のための第１条件に基づいて、前記検出信号から解析データを取得し、白血球以外の他の血球を弁別する場合には、前記第１条件とは異なる第２条件に基づいて、前記検出信号から解析データを取得するよう構成され得る。こうすると、設定される条件を第１条件と第２条件との間で適宜変更することにより、白血球の弁別と、他の血球の弁別を選択的に行うことができる。
【００２３】
この場合、血球分析装置は、測定試料に対する一連の測定の途中で、解析データの取得条件を、前記第１条件と前記第２条件との間で切り替えるよう、構成され得る。こうすると、１回の測定工程において、白血球の弁別に必要な解析データと、他の血球の弁別に必要な解析データの両方を取得することができる。
【００２４】
本発明の第２の態様は、血球分析方法に関する。この態様に係る血球分析方法は、血球を含む測定試料をフローセルに流し、前記フローセルを通過する血球に第１の波長の光を照射することにより得られる第１散乱光を検出して第１検出信号を取得し、前記フローセルを通過する血球に第２の波長の光を照射することにより得られる第２散乱光を検出して第２検出信号を取得し、前記第１検出信号および前記第２検出信号に基づいて、測定試料
に含まれる血球から、少なくとも、白血球を弁別する。
【００２５】
本態様に係る血球分析方法によれば、第１の態様と同様の効果が奏され得る。すなわち、第１検出信号と第２検出信号に基づいて、簡易な工程で高精度に、測定試料中の血球から、少なくとも、白血球を弁別することができる。
【００２６】
本発明の第３の態様は、血球分析方法に関する。この態様に係る血球分析方法は、血球を含む試料と、細胞表面抗原と特異的に反応する蛍光標識抗体とを混合し、赤血球を除去する処理を行うことなく測定試料を調製し、調製した測定試料をフローセルに流し、前記フローセルを通過する血球に第１の波長の光を照射することにより得られる第１散乱光を検出して第１検出信号を取得し、前記フローセルを通過する血球に第２の波長の光を照射することにより得られる第２散乱光を検出して第２検出信号を取得し、前記フローセルを通過する血球に所定波長の光を照射することにより得られる蛍光を検出して第３検出信号を取得し、前記第１検出信号、前記第２検出信号および前記第３検出信号に基づいて、測定試料に含まれる白血球を細胞表面抗原について分類する。
【００２７】
本態様に係る血球分析方法によれば、溶血剤を用いた赤血球の除去処理を行うことなく、白血球をより詳細に分類することができる。
【００２８】
本態様に係る血球分析方法において、前記所定波長の光は、前記第１の波長の光または前記第２の波長の光とされ得る。こうすると、別途、蛍光励起用の光をフローセルに照射する必要がないため、装置構成の簡素化を図ることができる。
【００２９】
また、血球分析方法は、複数種類の細胞表面抗原とそれぞれ特異的に反応し、互いに異なる波長の蛍光が励起される複数種類の蛍光標識抗体を前記試料に混合して前記測定試料を調製し、各蛍光標識抗体に基づく蛍光をそれぞれ検出して複数種類の前記第３検出信号を取得し、前記第１検出信号、前記第２検出信号および複数種類の前記第３検出信号に基づいて、測定試料に含まれる白血球を細胞表面抗原について分類するよう構成され得る。こうすると、一つの処理プロセスにより、複数種類の細胞表面抗原について、白血球を分類することができる。
【発明の効果】
【００３０】
以上のとおり、本発明によれば、簡易な工程で高精度に、血液検体中の血球から白血球を弁別することが可能な血球分析装置および血球分析方法を提供することができる。
【００３１】
本発明の効果ないし意義は、以下に示す実施の形態の説明により更に明らかとなろう。ただし、以下に示す実施の形態は、あくまでも、本発明を実施化する際の一つの例示であって、本発明は、以下の実施の形態により何ら制限されるものではない。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】実施の形態に係る血球分析装置の外観を示す斜視図である。
【図２】実施の形態に係る測定ユニットの構成を模式的に示す図である。
【図３】実施の形態に係る光学検出器の構成を模式的に示す図である。
【図４】実施の形態に係るフローセル、ビームストッパ、ピンホールおよびフォトダイオードの構成を示す図である。
【図５】実施の形態に係る測定ユニットの構成を示す図である。
【図６】実施の形態に係る情報処理ユニットの構成を示す図である。
【図７】解析例１に係る同一血球から取得された各波長のデータを対応付ける方法を説明する図である。
【図８】解析例１に係る赤血球に含まれるヘモグロビンの吸収特性を示す図、解析例１と比較例における粒子分析のシミュレーション結果を示す図、および、前方散乱光に基づくスキャッタグラムを示す図である。
【図９】解析例１に係る血球分析装置による解析処理を示すフローチャートである。
【図１０】解析例２に係る被検者から採取された血液検体に基づいて作成されたスキャッタグラムを示す図、および、被検者から採取された血液検体に基づいて行われた白血球の分類結果を示す図である。
【図１１】解析例２に係る血球分析装置による解析処理を示すフローチャートである。
【図１２】解析例３に係る血球分析装置による解析処理を示すフローチャートである。
【図１３】解析例４に係る白血球の分布状態を示すスキャッタグラム、解析例４に係るリンパ球の分布状態を示すスキャッタグラム、および、解析例４に係るリンパ球の分布状態を示すヒストグラムである。
【図１４】解析例４に係る血球分析装置による解析処理を示すフローチャートである。
【図１５】解析例４の変更例に係る血球分析装置による解析処理を示すフローチャート、当該変更例に係る白血球の分布状態を示すスキャッタグラム、および、当該変更例に係るリンパ球、単球、顆粒球の分布状態を示すスキャッタグラムである。
【図１６】解析例５に係る光学検出器の構成を示す図である。
【図１７】解析例５に係る血球分析装置による解析処理を示すフローチャート、および、解析例５に係るリンパ球の分布状態を示すスキャッタグラムである。
【図１８】解析例５の変更例に係る光学検出器の構成を示す図である。
【図１９】変更例に係る血球分析装置による解析処理の選択を示すフローチャートおよび解析対象から除くための領域の設定を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
本実施の形態は、血液に関する検査および分析を行うための血球分析装置とその光照射光学系に本発明を適用したものである。以下、本実施の形態に係る血球分析装置について、図面を参照して説明する。
【００３４】
図１は、本実施の形態に係る血球分析装置１の外観を示す斜視図である。
【００３５】
血球分析装置１は、血液検体に含まれる白血球、赤血球、血小板等を検出し、各血球を計数する多項目血球分析装置である。血球分析装置１は、測定ユニット２と、測定ユニット２の前面側に配置された搬送ユニット３と、情報処理ユニット４とを備えている。患者から採取された末梢血である血液検体は、検体容器（採血管）Ｔに収容される。複数の検体容器ＴがサンプルラックＬに支持され、このサンプルラックＬが搬送ユニット３により搬送されて、血液検体が測定ユニット２へ供給される。
【００３６】
情報処理ユニット４は、表示部４１と入力部４２を備えており、測定ユニット２と、搬送ユニット３と、ホストコンピュータ５（図２参照）に対して、通信可能に接続されている。情報処理ユニット４は、測定ユニット２と搬送ユニット３の動作を制御し、測定ユニット２で行われた測定結果に基づいて解析を行い、解析結果をホストコンピュータ５（図２参照）に送信する。情報処理ユニット４は、パーソナルコンピュータからなっている。
【００３７】
図２は、測定ユニット２の構成を模式的に示す図である。
【００３８】
測定ユニット２は、ハンド部２１と、検体容器セット部２２と、バーコードユニット２３と、検体吸引部２４と、試料調製部２５と、検出部２６とを備えている。検体吸引部２４は、ピアサ２４ａを備えており、検体容器Ｔから検体を吸引する。試料調製部２５は、
混合チャンバＭＣとヒータＨを備えており、検体に試薬または希釈液を混和することにより測定に用いられる測定試料を調製する。検出部２６は、光学検出器Ｄを備えており、測定試料から血球を検出する。測定ユニット２の各部は、情報処理ユニット４からの指示に基づいて制御される。
【００３９】
搬送ユニット３により位置Ｐ１に位置付けられた検体容器Ｔは、ハンド部２１により把持され、サンプルラックＬから上方向に抜き出される。そして、ハンド部２１が揺動されることにより、検体容器Ｔ内の検体が撹拌される。攪拌が終了した検体容器Ｔは、ハンド部２１により、位置Ｐ１に位置付けられた検体容器セット部２２にセットされる。しかる後、この検体容器Ｔは、検体容器セット部２２により位置Ｐ２まで搬送される。
【００４０】
検体容器Ｔが位置Ｐ２に位置付けられると、位置Ｐ２の近傍に設置されたバーコードユニット２３により、検体容器Ｔに貼付されたバーコードラベルから検体番号が読み取られる。しかる後、この検体容器Ｔは、検体容器セット部２２により位置Ｐ３まで搬送される。検体容器Ｔが位置Ｐ３に位置付けられると、検体吸引部２４によりピアサ２４ａを介して検体容器Ｔから所定量の検体が吸引される。検体の吸引が終了すると、この検体容器Ｔは、検体容器セット部２２により前方に搬送され、ハンド部２１により元のサンプルラックＬの支持位置に戻される。ピアサ２４ａを介して吸引された検体は、ピアサ２４ａが混合チャンバＭＣの位置へ移送された後、検体吸引部２４により混合チャンバＭＣに所定量だけ吐出される。
【００４１】
試料調製部２５は、第１試薬を収容する容器２５１と、第２試薬を収容する容器２５２と、希釈液を収容する容器２５３に、チューブを介して接続されている。また、試料調製部２５はコンプレッサ（図示せず）に接続されており、このコンプレッサにより発生される圧力により容器２５１〜２５３から、それぞれ、第１試薬と、第２試薬と、希釈液を分取することが可能となっている。第１試薬と第２試薬を用いる場合、試料調製部２５は、混合チャンバＭＣ内で、血液検体と試薬とを混合し、この混合液を所定時間だけヒータＨにより加温して、測定試料を調製する。第１試薬と第２試薬を用いない場合、試料調製部２５は、混合チャンバＭＣ内で、血液検体と希釈液とを混合して、測定試料を調製する。なお、第１試薬と第２試薬を用いない場合でも、適宜、混合液を加温しても良い。試料調製部２５で調製された測定試料は、検出部２６の光学検出器Ｄに供給される。
【００４２】
なお、第１試薬は、核酸を染色可能な蛍光色素を含有し、第２試薬で処理された血液試料中の有核細胞の核酸を蛍光染色するための試薬である。第２試薬は、赤血球を溶血させ、白血球の細胞膜に上記の蛍光色素が透過できる程度の損傷を与えるための試薬である。
【００４３】
検出部２６は、シース液を収容する容器２６１に、チューブを介して接続されている。また、検出部２６はコンプレッサ（図示せず）に接続されており、このコンプレッサにより発生される圧力により容器２６１からシース液を分取することが可能となっている。
【００４４】
図３（ａ）、（ｂ）は、光学検出器Ｄの光学系の構成を模式的に示す図である。便宜上、図３（ａ）には、互いに直交するＸＹＺ座標軸が示されている。Ｘ軸方向は、紙面上下方向、Ｚ軸方向は紙面左右方向である。図３（ａ）は、光学検出器Ｄの光学系をＹ軸負方向に見た図、図３（ｂ）は、光学検出器Ｄの光学系をＸ軸正方向に見た図である。
【００４５】
また、図４（ａ）は、フローセルＤ１の構成を模式的に示す図、図４（ｂ）は、ビームストッパ２０３の構成を模式的に示す図、図４（ｃ）は、ピンホール２０４の構成を模式的に示す図、図４（ｄ）は、フォトダイオード２０５の構成を模式的に示す図である。
【００４６】
図３（ａ）を参照して、光学検出器Ｄは、フローセルＤ１と、シースフロー系Ｄ２と、
光照射光学系Ｄ３と、前方散乱光受光光学系Ｄ４と、側方散乱光受光光学系Ｄ５と、蛍光受光光学系Ｄ６を有している。
【００４７】
シースフロー系Ｄ２は、フローセルＤ１内に測定試料をシース液に包まれた状態で送り込み、フローセルＤ１中に液流を発生させるように構成されている。図３（ｂ）に示すように、フローセルＤ１は、測定試料を細孔部Ｄ１３に向かって上方へ噴射する試料ノズルＤ１１と、シース液供給口Ｄ１２と、廃液口Ｄ１４を備える。細孔部Ｄ１３内に、測定試料が流れる流路Ｄ１５が形成される。
【００４８】
光照射光学系Ｄ３は、半導体レーザ１０１、１０３と、コリメータレンズ１０２、１０４と、ダイクロイックミラー１０５と、シリンドリカルレンズ１０６と、コンデンサレンズ１０７を備えている。
【００４９】
半導体レーザ１０１は、発光部（図示せず）の半導体層の積層方向がＸ軸方向に一致するよう配置される。したがって、半導体レーザ１０１から出射されるレーザ光の広がり角は、Ｘ軸方向において最大となり、Ｙ軸方向において最小となる。半導体レーザ１０１は、所定波長のレーザ光（以下、「赤レーザ光ＲＬ」という）をＺ軸正方向に出射する。半導体レーザ１０１の出射波長は、６１０〜７５０ｎｍの範囲に含まれるよう設定される。半導体レーザ１０１の出射光軸は、光照射光学系Ｄ３の光軸Ｏに一致している。
【００５０】
コリメータレンズ１０２は、半導体レーザ１０１から出射された赤レーザ光ＲＬを平行光に変換する。
【００５１】
半導体レーザ１０３は、発光部（図示せず）の半導体層の積層方向がＺ軸方向に一致するよう配置される。したがって、半導体レーザ１０３から出射されるレーザ光の広がり角は、Ｚ軸方向において最大となり、Ｙ軸方向において最小となる。半導体レーザ１０３は、所定波長のレーザ光（以下、「青レーザ光ＢＬ」という）をＸ軸負方向に出射する。半導体レーザ１０３の出射波長は、４００〜４３５ｎｍの範囲に含まれるよう設定される。半導体レーザ１０３の出射光軸は、光照射光学系Ｄ３の光軸Ｏに交差する。
【００５２】
コリメータレンズ１０４は、半導体レーザ１０３から出射された青レーザ光ＢＬを平行光に変換する。
【００５３】
ダイクロイックミラー１０５は、コリメータレンズ１０２を透過した赤レーザ光ＲＬを透過し、コリメータレンズ１０４を透過した青レーザ光ＢＬを反射する。ダイクロイックミラー１０５は、ダイクロイックミラー１０５によって反射された青レーザ光ＢＬの進行方向が、図３（ｂ）に示すように、Ｚ軸方向からややＹ軸方向に傾くように、配置されている。
【００５４】
シリンドリカルレンズ１０６は、ダイクロイックミラー１０５を経由した赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬをＸ軸方向にのみ収束させる。コンデンサレンズ１０７は、シリンドリカルレンズ１０６を透過した赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬを集光する。コンデンサレンズ１０７は、赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬをＹ軸方向に収束させてフローセルＤ１の流路Ｄ１５（図４（ａ）参照）の位置に合焦させ、また、赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬをＸ軸方向に収束させて流路Ｄ１５の手前（Ｚ軸負側）の位置に合焦させる。したがって、コンデンサレンズ１０７によってＸ軸方向に収束された光は、合焦位置から流路Ｄ１５の位置に達するまでに、やや広がる。よって、流路Ｄ１５には、図４（ａ）に示すように、Ｘ軸方向に細長いビーム形状で、赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬが照射される。
【００５５】
図３（ｂ）に示すように、ダイクロイックミラー１０５によって反射された青レーザ光ＢＬは、Ｚ軸方向からＹ方向にやや傾いた方向に進むため、流路Ｄ１５に対する青レーザ光ＢＬの照射位置ＥＰ１は、赤レーザ光ＲＬの照射位置ＥＰ２よりもＹ軸正方向にずれている。赤レーザ光ＲＬの照射位置ＥＰ２は、光軸Ｏ上にある。
【００５６】
前方散乱光受光光学系Ｄ４は、前方集光レンズ２０１と、絞り２０２と、ビームストッパ２０３と、ピンホール２０４と、フォトダイオード２０５を備える。フローセルＤ１から前方（Ｚ軸正方向）へと向かう赤レーザ光ＲＬおよび青レーザ光ＢＬの散乱光（前方散乱光）は、それぞれ、前方集光レンズ２０１によってピンホール２０４の位置に集光され、その後、ピンホール２０４を通って、フォトダイオード２０５により受光される。フォトダイオード２０５は、受光した前方散乱光のピーク値に基づいて前方散乱光信号を出力する。
【００５７】
前方集光レンズ２０１は、その光軸が、光照射光学系Ｄ３の光軸ＯからＹ軸正方向にずれるように配置されている。したがって、赤レーザ光ＲＬの前方散乱光（以下、「赤散乱光ＲＳ」という）の中心を通る光線は、前方集光レンズ２０１を透過した後、Ｚ軸正方向からややＹ軸負方向に傾く方向に進む。また、青レーザ光ＢＬの前方散乱光（以下、「青散乱光ＢＳ」という）の中心を通る光線は、前方集光レンズ２０１を透過した後、Ｚ軸正方向からややＹ軸正方向に傾く方向に進む。
【００５８】
図４（ｃ）に示すように、ピンホール２０４には、Ｙ軸方向に並ぶ２つの孔２０４ａ、２０４ｂが形成されている。孔２０４ａ、２０４ｂの径Ｗ２は、それぞれ、青散乱光ＢＳ、赤散乱光ＲＳの収束スポットの径よりもやや大きく設定されている。赤散乱光ＲＳは、Ｙ軸正側の孔２０４ｂの位置に集光され、孔２０４ｂを通り抜ける。また、青散乱光ＢＳは、Ｙ軸負側の孔２０４ａの位置に集光され、孔２０４ｂを通り抜ける。
【００５９】
図４（ｄ）に示すように、フォトダイオード２０５には、Ｙ軸方向に並ぶ２つの受光面２０５ａ、２０５ｂが配置されている。受光面２０５ａ、２０５ｂは、Ｚ軸方向において同じ位置にあり、それぞれ、Ｘ−Ｙ平面に平行である。フォトダイオード２０５上において、受光面２０５ａ、２０５ｂは、同一平面上に配置されている。ピンホール２０４の孔２０４ａを通り抜けた青散乱光ＢＳは、受光面２０５ａに照射され、孔２０４ｂを通り抜けた赤散乱光ＲＳは、受光面２０５ｂに照射される。
【００６０】
なお、前方散乱光受光光学系Ｄ４の倍率は、受光面２０５ａ、２０５ｂに照射される際の青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳの間隔が、受光面２０５ａの中心と受光面２０５ｂの中心との間隔に一致するように設定される。これにより、青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳは、図４（ｄ）に示すように、それぞれ、受光面２０５ａ、２０５ｂの中央に照射される。
【００６１】
図３（ａ）、（ｂ）に戻り、フローセルＤ１に照射された赤レーザ光ＲＬ、青レーザ光ＢＬのうち、粒子（血球、等）に照射されずにフローセルＤ１を透過したレーザ光（以下、「直接光」という）は、前方集光レンズ２０１によってビームストッパ２０３上に集光される。ビームストッパ２０３は、光を透過しない薄板状の部材によって構成されている。図４（ｂ）に示すように、ビームストッパ２０３は、半円状の開口２０３ａ、２０３ｂと、これら開口２０３ａ、２０３ｂ間に形成された遮光部２０３ｃとを備える。遮光部２０３ｃのＸ軸方向の幅Ｗ１は一定である。この遮光部２０３ｃ上に、直接光が集光される。上記のように、コンデンサレンズ１０７は、Ｘ軸方向におけるレーザ光の焦点位置がＹ軸方向におけるレーザ光の焦点位置よりも手前（Ｚ軸負側）となるようにレーザ光を収束させる。このため、直接光は、Ｘ軸方向の焦点位置がＹ軸方向の焦点位置よりも手前（Ｚ軸負側）となるように、前方集光レンズ２０１によって集光される。ビームストッパ２０３は、入射面が、直接光のＸ軸方向の焦点位置に位置付けられるように配置される。した
がって、直接光は、図４（ｂ）に示すように、Ｙ軸方向に長いビーム形状で、遮光部２０３ｃ上に照射される。
【００６２】
フローセルＤ１からの赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳは、大部分が、ビームストッパ２０３の開口２０３ａ、２０３ｂを通過し、一部が、遮光部２０３ｃによって遮光される。遮光部２０３ｃによる前方散乱光の遮光量は、遮光部２０３ｃの幅Ｗ１によって決まる。このため、遮光部２０３ｃの幅Ｗ１は、なるべく小さいことが望ましい。しかしながら、遮光部２０３ｃの幅Ｗ１は、直接光を確実に遮光できるよう、直接光のＸ軸方向の幅の１０倍程度に設定される。
【００６３】
側方散乱光受光光学系Ｄ５は、コリメータレンズＤ５１と、ダイクロイックミラーＤ５２と、側方集光レンズＤ５３と、フォトダイオードＤ５４を備える。フローセルＤ１から側方（Ｘ軸正方向）へと向かう散乱光（側方散乱光）は、コリメータレンズＤ５１にて平行光に変換される。上記のように、フローセルＤ１には、赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬが照射されるため、各レーザ光に基づく２つの側方散乱光が生じる。コリメータレンズＤ５１は、これら２つの側方散乱光をそれぞれ平行光に変換する。平行光に変換された２つの側方散乱光は、ダイクロイックミラーＤ５２で反射され、さらに、側方集光レンズＤ５３により集光されて、フォトダイオードＤ５４により受光される。
【００６４】
フォトダイオードＤ５４は、フォトダイオード２０５と同様、各波長の側方散乱光をそれぞれ受光する２つの受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂを有する。受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂはＹ軸方向に並び、Ｚ軸方向において同じ位置にある。フォトダイオードＤ５４上において、受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂは、同一平面上に配置されている。フォトダイオードＤ５４は、受光した各波長の側方散乱光のピーク値に基づいて側方散乱光信号を出力する。
【００６５】
なお、側方散乱光受光光学系Ｄ５の倍率は、受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂに照射される際の青レーザ光ＢＬの散乱光と赤レーザ光ＲＬの散乱光との間隔が、受光面Ｄ５４ａの中心と受光面Ｄ５４ｂの中心との間隔に一致するように設定される。これにより、これら散乱光は、それぞれ、受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂの中央に照射される。
【００６６】
蛍光受光光学系Ｄ６は、分光フィルタＤ６１と、蛍光集光レンズＤ６２と、アバランシェフォトダイオードＤ６３と、コリメータレンズＤ６４と、ミラーＤ６５を備える。フローセルＤ１からＸ軸正方向へと向かう蛍光は、コリメータレンズＤ５１にて平行光に変換され、ダイクロイックミラーＤ５２を透過し、さらに分光フィルタＤ６１に通されて、蛍光集光レンズＤ６２により集光される。また、フローセルＤ１からＸ軸負方向へと向かう蛍光は、コリメータレンズＤ６４にて平行光に変換され、ミラーＤ６５によって反射される。ミラーＤ６５によって反射された蛍光は、再び、コリメータレンズＤ６４とフローセルＤ１を通ってコリメータレンズＤ５１に入射する。その後、この蛍光は、ダイクロイックミラーＤ５２を透過し、さらに分光フィルタＤ６１に通されて、蛍光集光レンズＤ６２により集光される。こうして、蛍光集光レンズＤ６２により集光された蛍光は、アバランシェフォトダイオードＤ６３に受光される。アバランシェフォトダイオードＤ６３は、受光した蛍光のピーク値に基づいて蛍光信号（ＳＦＬ）を出力する。蛍光信号の取得の際には、通常、半導体レーザ１０１、１０３の何れか一方が駆動される。
【００６７】
なお、図３（ａ）、（ｂ）に示す光学系において、前方集光レンズ２０１は、アクロマティックレンズからなっており、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの２つの波長に対して色収差を補正する機能を備えている。このため、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳは、同一平面上に配置された受光面２０５ａ、２０５ｂ上に適正に照射される。同様に、側方集光レンズＤ５３も、アクロマティックレンズからなっており、赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬに基づく２つの側方散乱光の波長に対して色収差を補正する機能を備えている。このため、
これら２つの側方散乱光は、同一平面上に配置された受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂ上に適正に照射される。
【００６８】
図２に戻り、光学検出器Ｄにより取得された前方散乱光信号と、側方散乱光信号と、蛍光信号は、情報処理ユニット４に送信される。情報処理ユニット４は、受信したこれら信号に基づいて解析を実行する。
【００６９】
図５は、測定ユニット２の構成を示す図である。
【００７０】
測定ユニット２は、図２に示す検体吸引部２４、試料調製部２５および検出部２６の他、センサ部２７と、駆動部２８と、制御部２９を備える。センサ部２７は、検体容器ＴおよびサンプルラックＬの位置を検出するためのセンサ等を含み、駆動部２８は、検体の測定を行うための機構を含む。図２に示すバーコードユニット２３は、センサ部２７に含まれる。
【００７１】
制御部２９は、ＣＰＵ２９１と、メモリ２９２と、通信インターフェース２９３と、Ｉ／Ｏインターフェース２９４を含んでいる。
【００７２】
ＣＰＵ２９１は、メモリ２９２に記憶されているコンピュータプログラムを実行する。メモリ２９２は、ＲＯＭ、ＲＡＭ、ハードディスク等からなる。また、ＣＰＵ２９１は、通信インターフェース２９３を介して、情報処理ユニット４との間でデータの送受信を行う。また、ＣＰＵ２９１は、Ｉ／Ｏインターフェース２９４を介して、測定ユニット２内の各部を制御すると共に、各部から出力された信号を受信して処理する。検出部２６により得られた血液検体の測定データは、ＣＰＵ２９１により処理され、メモリ２９２に格納される。血液検体に対する測定が終了すると、メモリ２９２に格納された測定データが、通信インターフェース２９３を介して、情報処理ユニット４に送信され、情報処理ユニット４において解析処理が行われる。
【００７３】
図６は、情報処理ユニット４の構成を示す図である。
【００７４】
情報処理ユニット４は、パーソナルコンピュータからなり、本体４０と、表示部４１と、入力部４２から構成されている。本体４０は、ＣＰＵ４０１と、ＲＯＭ４０２と、ＲＡＭ４０３と、ハードディスク４０４と、読出装置４０５と、画像出力インターフェース４０６と、入出力インターフェース４０７と、通信インターフェース４０８を有する。
【００７５】
ＣＰＵ４０１は、ＲＯＭ４０２に記憶されているコンピュータプログラムおよびＲＡＭ４０３にロードされたコンピュータプログラムを実行する。ＲＡＭ４０３は、ＲＯＭ４０２およびハードディスク４０４に記録されているコンピュータプログラムの読み出しに用いられる。また、ＲＡＭ４０３は、これらのコンピュータプログラムを実行するときに、ＣＰＵ４０１の作業領域としても利用される。
【００７６】
ハードディスク４０４には、オペレーティングシステム、ＣＰＵ４０１に実行させるためのコンピュータプログラム、およびコンピュータプログラムの実行に用いるデータが記憶されている。また、ハードディスク４０４には、後述の解析処理を実行させるためのプログラム４０４ａが記憶されている。読出装置４０５は、ＣＤドライブまたはＤＶＤドライブ等によって構成されており、記録媒体４０５ａに記録されたコンピュータプログラムおよびデータを読み出すことができる。なお、上記プログラム４０４ａが記録媒体４０５ａに記録されている場合には、読出装置４０５により記録媒体４０５ａから読み出されたプログラム４０４ａが、ハードディスク４０４に記憶される。
【００７７】
画像出力インターフェース４０６は、画像データに応じた映像信号を表示部４１に出力し、表示部４１は、画像出力インターフェース４０６から出力された映像信号に基づいて画像を表示する。ユーザは入力部４２を介して指示を入力し、入出力インターフェース４０７は、入力部４２を介して入力された信号を受け付ける。通信インターフェース４０８は、測定ユニット２と、搬送ユニット３と、ホストコンピュータ５に接続されており、ＣＰＵ４０１は、通信インターフェース４０８を介して、これら装置との間で指示信号およびデータの送受信を行う。
【００７８】
ところで、図３（ａ）、（ｂ）に示す光学検出器Ｄは、血液検体に試薬が混和された測定試料がフローセルＤ１に流される場合の他、試薬が混和されない測定試料がフローセルＤ１に流される場合にも、血球分析のための信号を取得するために用いられる。試薬が混和されない測定試料がフローセルＤ１に流される場合、半導体レーザ１０１、１０３が駆動され、青レーザ光ＢＬと赤レーザ光ＲＬが、それぞれ、照射位置ＥＰ１、ＥＰ２に照射される。そして、照射位置ＥＰ１、ＥＰ２から生じた青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳが、それぞれ、フォトダイオード２０５の受光面２０５ａ、２０５ｂにより受光され、フォトダイオード２０５から、青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳに基づく前方散乱光信号が出力される。こうして取得された２種類の前方散乱光信号に基づいて、血球の分類と計数が行われる。
【００７９】
以下、これら２種類の前方散乱光信号に基づく血球の分類および計数の処理について説明する。なお、以下の解析処理では、青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳに基づく前方散乱光信号が用いられているが、青レーザ光ＢＬと赤レーザ光ＲＬからそれぞれ生じる２種類の側方散乱光に基づく側方散乱光信号を、同様の解析に用いることも可能である。
【００８０】
＜解析例１＞
本解析例は、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳを用いて、赤血球と他の血球とを分類する処理に関するものである。なお、本解析例では、測定試料の調製において、検体容器Ｔから吸引された検体には希釈液のみが混和され、染色剤や溶血剤等の試薬は混和されない。
【００８１】
図３（ｂ）に示すように、青レーザ光ＢＬの照射位置ＥＰ１と赤レーザ光ＲＬの照射位置ＥＰ２は、互いに、Ｙ軸方向にずれている。また、測定試料は、流路Ｄ１５をＹ軸正方向に流れる。したがって、流路Ｄ１５を流れる血球に赤レーザ光ＲＬが照射されてから、この血球に青レーザ光ＢＬが照射されるまでには、所定のタイムラグがある。このため、青レーザ光ＢＬと赤レーザ光ＲＬからそれぞれ生じる２種類の前方散乱光に基づく前方散乱光信号を解析に用いる場合には、同一の血球から生じた２種類の前方散乱光信号から取得された２種類のデータ（以下、「前方散乱光データ」という）を互いに対応付ける必要がある。
【００８２】
図７（ａ）、（ｂ）は、２種類の前方散乱光データを対応付ける方法を説明する図である。図７（ａ）は、粒子濃度が低い場合に赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳが検出されるタイミングを示すタイミングチャート、図７（ｂ）は、粒子濃度が高い場合（通常濃度の血液試料を用いた場合）に赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳが検出されるタイミングを示すタイミングチャートである。
【００８３】
図７（ａ）を参照して、測定試料の濃度が低い場合、赤散乱光ＲＳの検出タイミングと青散乱光ＢＳの検出タイミングは離散的になる。この場合、通常、一つの血球に対する赤散乱光ＲＳの検出タイミングと青散乱光ＢＳの検出タイミングとの間の期間に、次の血球に対する赤散乱光ＲＳの検出タイミングが入ることはない。したがって、赤散乱光ＲＳの検出タイミングの次に到来する青散乱光ＢＳの検出タイミングが、同一血球に対する検出タイミングとして対応づけられる。図７（ａ）の例では、検出タイミングＴ２１〜Ｔ２５
が、それぞれ、検出タイミングＴ１１〜Ｔ１５に対応づけられる。同一血球に対する検出タイミングの時間差は、何れの血球の場合も略同じである。したがって、たとえば、互いに対応付けられた２つの検出タイミングの時間差の平均値Δｔを、各血球に対する赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの検出タイミングの時間差として用いることができる。
【００８４】
図７（ｂ）を参照して、粒子濃度が高い場合（通常濃度の血液試料を用いる場合）には、赤散乱光ＲＳの検出タイミングと青散乱光ＢＳの検出タイミングが混在し合うことになる。この場合、同一の血球に対する赤散乱光ＲＳの検出タイミングと青散乱光ＢＳの検出タイミングとを対応付けることが難しい。しかしながら、フローセルＤ１を流れる測定試料の速度は、粒子濃度が高い場合と粒子濃度が低い場合とで殆ど変わらない。よって、粒子濃度が低い場合に取得された時間差Δｔを、粒子濃度が高い場合の同一血球に対する赤散乱光ＲＳの検出タイミングと青散乱光ＢＳの検出タイミングの時間差として用いることができる。図７（ｂ）の例では、時間差Δｔを用いることにより、検出タイミングＴ２ｎ、Ｔ２ｍが、それぞれ、検出タイミングＴ１ｎ、Ｔ１ｍに対応づけられる。
【００８５】
本解析例では、青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳを用いた血球分析が行われる前に、粒子濃度の低い試料がフローセルＤ１に流され、時間差Δｔが取得される。そして、こうして取得された時間差Δｔが、青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳを用いた血球分析が行われる場合に用いられ、青散乱光ＢＳに基づいて取得された前方散乱光データと赤散乱光ＲＳに基づいて取得された前方散乱光データが互いに対応づけられる。この対応付けは、図５に示す測定ユニット２の制御部２９において行われる。制御部２９のＣＰＵ２９１は、検出部２６（光学検出器Ｄ）から受信した赤散乱光ＲＳおよび青散乱光ＢＳに基づく２種類の前方散乱光データを、順次、時間差Δｔを用いて対応づけて、メモリ２９２に格納する。
【００８６】
なお、時間差Δｔの取得方法は、上述の方法に限られるものではない。たとえば、フローセルＤ１を流れる測定試料の速度は、測定試料の温度によって変化する。したがって、フローセルＤ１を流れる測定試料の温度を測るための検出器をフローセルＤ１中に配置しておき、検出された温度に基づいて時間差Δｔのデフォルト値を調整して、時間差Δｔを取得するようにしても良い。
【００８７】
次に、赤血球により生じる前方散乱光と、赤血球以外の血球（血小板や白血球）により生じる前方散乱光との違いについて説明する。
【００８８】
光が照射されることにより粒子から生じる散乱光は、その粒子の粒径と屈折率とにより定まる（Ｍｉｅ散乱理論）。ここで、屈折率は、実数部と虚数部とからなる複素数により表すことができる。すなわち、複素屈折率をｍ、屈折率をｎｒ、吸収をｎｉとすると、複素屈折率ｍは、以下の式により算出することができる。
【００８９】
ｍ＝ｎｒ＋ｉｎｉ
【００９０】
上記式によれば、複素屈折率ｍは吸収ｎｉに応じて変化するため、光に対する粒子の吸収度合いが異なれば、屈折率も異なることになる。よって、異なる種類の粒子が互いに異なる吸収度合いを有する場合、これら粒子に対して光を照射すると、生じる散乱光も互いに異なったものとなる。
【００９１】
図８（ａ）は、赤血球に含まれるヘモグロビンの吸収特性を示す図である。横軸は、ヘモグロビンに照射される光の波長を示し、縦軸は、吸収係数（任意単位）を示している。
【００９２】
図８（ａ）には、酸素化ヘモグロビン（ＨｂＯ２）と脱酸素化ヘモグロビン（Ｈｂ）の吸収係数がそれぞれ示されている。赤血球中のヘモグロビンは、酸素化ヘモグロビンと、
脱酸素化ヘモグロビンとが混在した状態にあり、一般的には、静脈血のヘモグロビン酸素飽和度は約７５％、すなわち、酸素化ヘモグロビンと脱酸素化ヘモグロビンの存在比率が３対１となっている。このため、血液検体に含まれる赤血球では、酸素化ヘモグロビンの性質が支配的となる。
【００９３】
図８（ａ）に示すように、波長が４００〜４３５ｎｍの範囲では、酸素化ヘモグロビン（ＨｂＯ２）の吸収係数は、他の波長帯に比べて数段大きくなっている。一方、波長が６１０〜７５０ｎｍの範囲では、酸素化ヘモグロビン（ＨｂＯ２）の吸収係数は、他の波長帯に比べて数段小さくなっている。すなわち、青レーザ光ＢＬに対する赤血球の吸収度合いと、赤レーザ光ＲＬに対する赤血球の吸収度合いとの差は、大きいものとなる。他方、赤血球以外の血球（血小板や白血球）はヘモグロビンを含んでいないため、青レーザ光ＢＬに対する赤血球以外の血球の吸収度合いと、赤レーザ光ＲＬに対する赤血球以外の血球の吸収度合いとの差は、小さいものとなる。
【００９４】
以上のことから、赤血球と、赤血球以外の血球（血小板や白血球）とでは、青レーザ光ＢＬに対する吸収度合いと、赤レーザ光ＲＬに対する吸収度合いとの差が顕著に異なるため、青レーザ光ＢＬが照射される場合に生じる青散乱光ＢＳの強度と、赤レーザ光ＲＬが照射される場合に生じる赤散乱光ＲＳの強度との差も異なるものとなる。具体的には、赤血球では、青散乱光ＢＳの強度は、赤散乱光ＲＳの強度よりも小さくなり易く、赤血球以外の他の血球では、青散乱光ＢＳの強度と赤散乱光ＲＳの強度は、同程度になり易い。
【００９５】
図８（ｂ）、（ｃ）は、それぞれ、本解析例と比較例における粒子分析のシミュレーション結果を示す図である。
【００９６】
本シミュレーションは、上記光学検出器Ｄにおいて、前方散乱光受光光学系Ｄ４のＮＡを０．２２に、ビームストッパ２０３の遮光部２０３ｃの幅Ｗ１を０．３ｍｍに、フローセルＤ１とビームストッパ２０３との間を６ｍｍに、フローセルＤ１に照射されるビームのＹ軸方向の幅を１０μｍとして行われた。また、本シミュレーションでは、赤血球と同様の性質を有する粒子と、血小板と同様の性質を有する粒子とが設定され、これら粒子に対して所定波長のレーザ光を照射することにより生じる前方散乱光の強度がシミュレーションにより算出された。
【００９７】
本解析例のシミュレーションでは、赤血球と血小板に相当する粒子に、波長６４０ｎｍの赤レーザ光ＲＬと波長４０５ｎｍの青レーザ光ＢＬを照射し、各粒子により生じる６４０ｎｍと４０５ｎｍの前方散乱光信号が、図８（ｂ）に示すようにスキャッタグラム上にプロットされている。比較例のシミュレーションでは、赤血球と血小板に相当する粒子に、約６３２ｎｍの波長のレーザ光を照射し、各粒子により生じる低角（２〜３度）と高角（８〜２０度）の前方散乱光信号が、図８（ｃ）に示すようにスキャッタグラム上にプロットされている。
【００９８】
図８（ｂ）、（ｃ）に示すスキャッタグラムには、それぞれ、赤血球に相当する粒子が分布するマップＭ１、Ｍ２が示されている。マップＭ１、Ｍ２は、体積の値がＶ３０〜Ｖ１５０であり、ヘモグロビン濃度の値がＨＣ２２〜ＨＣ４６である８１個の粒子に基づいて作成されており、各粒子は、マップＭ１、Ｍ２の格子の交点にプロットされている。なお、健常者の赤血球では、概ね、体積がＶ６０〜Ｖ１２０であり、ヘモグロビン濃度がＨＣ３１〜ＨＣ３７である。また、図８（ｂ）、（ｃ）に示すスキャッタグラムには、それぞれ、血小板に相当する粒子が分布する分布線Ｃ１１、Ｃ１２が示されている。分布線Ｃ１１、Ｃ１２は、体積の値がＶ０．５〜Ｖ３３である４つの粒子に基づいて作成されている。
【００９９】
図８（ｂ）、（ｃ）に示すように、赤血球と血小板に相当する粒子に対して行ったシミュレーション結果から、被検者から採取される赤血球も、マップＭ１、Ｍ２内に分布すると考えられ、被検者から採取される血小板も、分布線Ｃ１１、Ｃ１２上に分布すると考えられる。
【０１００】
本解析例において、赤血球の分布を示すマップＭ１は、血小板の分布を示す分布線Ｃ１１よりも、左上に位置しており、マップＭ１と分布線Ｃ１１とが重なり合わない。これは、図８（ａ）を参照して説明したように、赤血球に含まれるヘモグロビンにより青レーザ光ＢＬが吸収され、青散乱光ＢＳの強度が赤散乱光ＲＳに比べて小さくなっているためと考えられる。一方、比較例において、赤血球の分布を示すマップＭ２は、血小板の分布を示す分布線Ｃ１２と、左右方向において同様の位置にあり、マップＭ２に分布線Ｃ１２が重なっている。
【０１０１】
本解析例の場合、被検者から採取される血小板の体積が大きいと、この血小板は、分布線Ｃ１１の延長線Ｃ１１ａに位置付けられることになる。しかしながら、延長線Ｃ１１ａはマップＭ１と交わらないため、この血小板はマップＭ１と重なることはない。このため、本解析例では、血小板の体積が大きい場合でも、赤血球と血小板を弁別する精度が高められる。一方、比較例の場合、被検者から採取される血小板の体積が大きいと、この血小板は、分布線Ｃ１２の延長線Ｃ１２ａに位置付けられることになる。この場合、延長線Ｃ１２ａはマップＭ２と交わるため、この血小板はマップＭ２と重なる惧れがある。このため、比較例では、血小板の体積が大きい場合、赤血球と血小板を弁別する精度が悪くなる惧れがある。
【０１０２】
なお、血小板と白血球は、概ね同様の屈折率を有していると考えられ、ヘモグロビンを有しないという点でも同様の性質を有している。このため、白血球から生じる前方散乱光信号も、概ね分布線Ｃ１１、Ｃ１２上に位置すると考えられる。なお、白血球は血小板に比べて大きいため、白血球は血小板よりも、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの値が大きい領域に位置付けられる。本解析例では、白血球がマップＭ１と重なりにくいため、赤血球と白血球を弁別する精度が高められる。一方、比較例では、白血球がマップＭ２と重なりやすいため、赤血球と白血球を弁別する精度が悪くなる惧れがある。
【０１０３】
よって、本解析例のように青レーザ光ＢＬと赤レーザ光ＲＬを用いると、図８（ｂ）に示すように、赤血球と、赤血球以外の血球（血小板や白血球）とを精度良く弁別することが可能になる。
【０１０４】
図８（ｄ）は、本解析例において、実際の測定試料から得られる赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳに基づくスキャッタグラムを示す図である。縦軸と横軸は、それぞれ、フォトダイオード２０５から出力される赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの信号を示しており、各血球から得られた赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの信号をパラメータとして、各血球がスキャッタグラム上にプロットされている。
【０１０５】
この場合、赤血球を示す点は領域Ａ１近傍に分布しており、血小板を示す点は、領域Ａ２近傍に分布しており、白血球を示す点は領域Ａ３近傍に分布している。また、赤血球が分布する領域Ａ１は、分布曲線Ｃ１上に位置しており、血小板が分布する領域Ａ２と白血球が分布する領域Ａ３は、分布曲線Ｃ２上に位置している。また、分布曲線Ｃ２は、図８（ｂ）に示す分布線Ｃ１１と延長線Ｃ１１ａに対応するものであり、分布曲線Ｃ１と分布曲線Ｃ２とは、互いに異なる角度で伸びているため、交わることがない。図８（ｄ）のように分布曲線Ｃ１と分布曲線Ｃ２とが互いに離れるのは、上記のように、赤血球がヘモグロビンを有しており、ヘモグロビンの吸収係数が波長によって大きく変わるためであると考えられる。
【０１０６】
このように、実測値において、分布曲線Ｃ１上に位置する赤血球が分布する領域Ａ１と、分布曲線Ｃ２上に位置する赤血球以外の血球が分布する領域Ａ２、Ａ３が重なりにくいことが分かる。なお、赤散乱光ＲＳの信号を示す閾値Ｖ１は、後述するようにノイズを含む信号を除くために用いられる。
【０１０７】
図９は、本解析例の血球分析装置１による解析処理を示すフローチャートである。
【０１０８】
血球分析装置１が起動されると、まず、図７（ａ）、（ｂ）を参照して説明したように、赤散乱光ＲＳの検出タイミングと青散乱光ＢＳの検出タイミングの時間差に基づいて、時間差Δｔが取得される（Ｓ１１）。そして、取得された時間差Δｔは、測定ユニット２のメモリ２９２に記憶される。なお、時間差Δｔは、たとえば、フローセルＤ１に粒子濃度が低い精度管理用試料を流すことにより取得されても良く、あるいは、フローセルＤ１中に配置された温度を測るための検出器が検出する温度に基づいてデフォルト値を修正することにより取得されても良い。
【０１０９】
解析処理が開始されると、上述したように検体容器Ｔが測定ユニット２に取り込まれ、位置Ｐ３に位置付けられる。そして、測定ユニット２のＣＰＵ２９１は、ピアサ２４ａにより検体容器Ｔから検体を吸引し、試料調製部２５により吸引した検体から測定試料を調製する（Ｓ１２）。この場合の測定試料の調製は、赤血球を溶血する試薬や、白血球を染色する試薬等が混和されることなく行われる。
【０１１０】
次に、ＣＰＵ２９１は、赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬをフローセルＤ１に照射し、測定試料をフローセルＤ１に流す（Ｓ１３）。これにより、同一の血球から生じた２種類の前方散乱光（赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳ）が生じ、これら前方散乱光がフォトダイオード２０５により受光される。ＣＰＵ２９１は、フォトダイオード２０５から出力される２種類の前方散乱光信号に基づく前方散乱光データを取得する。そして、ＣＰＵ２９１は、経過時間のカウントを開始する（Ｓ１４）。
【０１１１】
続いて、ＣＰＵ２９１は、赤散乱光ＲＳの信号が図８（ｄ）に示す閾値Ｖ１以下であるかを判定する（Ｓ１５）。なお、閾値Ｖ１は微小な値に設定されており、ノイズを含む信号を除くために用いられる。赤散乱光ＲＳの信号が閾値Ｖ１より大きいと（Ｓ１５：ＮＯ）、ＣＰＵ２９１は、上記時間差Δｔに基づいて、同一の血球から生じた２種類の前方散乱光データを互いに対応付けて、メモリ２９２に記憶する（Ｓ１６）。他方、赤散乱光ＲＳの信号が閾値Ｖ１以下であると（Ｓ１５：ＹＥＳ）、ＣＰＵ２９１は、この場合の血球についての２種類の前方散乱光データを記憶せず、処理をＳ１７に進める。
【０１１２】
こうして、所定時間が経過するまで、血球ごとにＳ１５、Ｓ１６の処理が繰り返し行われる（Ｓ１７）。所定時間が経過することにより測定が終了すると（Ｓ１７：ＹＥＳ）、ＣＰＵ２９１は、メモリ２９２に記憶した前方散乱光データを、情報処理ユニット４に送信する（Ｓ１８）。
【０１１３】
一方、情報処理ユニット４のＣＰＵ４０１は、測定ユニット２から前方散乱光データを受信すると（Ｓ２１：ＹＥＳ）、図８（ｄ）に示すようなスキャッタグラムを作成し、表示部４１に表示する（Ｓ２２）。続いて、ＣＰＵ４０１は、作成したスキャッタグラム上に領域Ａ１を設定する（Ｓ２３）。こうして、ＣＰＵ４０１は、スキャッタグラム上の領域Ａ１に含まれる点を測定試料に含まれる赤血球として区分し、領域Ａ１に含まれる点に基づいて赤血球の解析処理を行い（Ｓ２４）、解析結果を表示部４１に表示する（Ｓ２５）。
【０１１４】
なお、Ｓ２３で設定される領域Ａ１は、あらかじめ決められた固定領域であっても良く、固定領域に基づいて微調整された領域であっても良い。ここで、領域Ａ１の境界は、たとえば、直線や曲線の数式により定義される。
【０１１５】
また、ここでは、説明の便宜上、作成したスキャッタグラム上に領域Ａ１が設定され、このスキャッタグラム上の領域Ａ１に含まれる点が赤血球に対応する点として区分されたが、スキャッタグラムは、必ずしも図形またはグラフとして作成される必要はなく、領域Ａ１の設定と領域Ａ１に含まれる点の区分は、データ処理によって行われるようにしても良い。
【０１１６】
以上、本解析例によれば、染色剤や溶血剤等の試薬を用いることなく、血球を、赤血球とその他の血球に良好に分類することができる。上記のように、赤血球は、波長により吸収係数が大きく変化するヘモグロビンを含むため、赤血球と他の血球では、赤散乱光ＲＳの強度と青散乱光ＢＳの強度が、大きく異なる。このため、図８（ｄ）のスキャッタグラムに示すように、赤血球が分布する領域Ａ１と、血小板および白血球が分布する領域Ａ２、Ａ３とが大きく離れるようになる。赤血球は、図８（ｄ）のスキャッタグラム上に模式的に示した分布曲線Ｃ１に沿うように分布し、血小板と白血球は、分布曲線Ｃ２に沿うように分布する。上記のように、分布曲線Ｃ１と分布曲線Ｃ２との間には、大きな開きが生じ、且つ、分布曲線Ｃ１と分布曲線Ｃ２とが交差することもない。よって、横軸を青散乱光ＢＳの強度とし、縦軸を赤散乱光ＲＳの強度とするスキャッタグラムでは、図８（ｄ）に示すように、赤血球が分布する領域Ａ１と、血小板および白血球が分布する領域Ａ２、Ａ３とが大きく離れるようになる。したがって、本解析例によれば、染色剤や溶血剤等の試薬を用いることなく、血球を、赤血球とその他の血球に、良好に分類することができる。
【０１１７】
このように、本解析例によれば、実施の形態に記載の血球分析装置１を用いることにより、染色剤や溶血剤等の試薬を用いることなく、簡易な工程により、良好に、測定試料に含まれる血球から、赤血球を弁別し計数することができる。また、測定試料に含まれる血球から、赤血球と血小板を分類することができる。さらに、測定試料に含まれる血球から、血小板を弁別し計数することもできる。
【０１１８】
なお、本解析例によれば、図８（ｄ）に示すように、赤血球の他、血小板と白血球を弁別することが可能である。しかしながら、白血球の血球数は、赤血球と血小板の血球数に比べてかなり少ないため、本解析例により白血球を弁別して精度の高い解析結果を得ようとする場合には、測定時間を長くして、測定結果に含まれる白血球の数を高める必要がある。しかし、測定時間を長くすると、赤血球と血小板の血球数が多くなり過ぎ、赤血球と血小板の弁別が非効率となる。よって、本解析例は、測定時間を制限しながら、赤血球と血小板を効率的に弁別・分類する際に用いて好適なものである。白血球については、追って示す解析例２を用いることにより、効率的に、弁別・分類することが可能である。
【０１１９】
また、本解析例によれば、染色剤や溶血剤等の試薬を用いる必要がないため、血液検体に試薬を混和する工程を省略することができる。よって、簡易な工程で良好に、血球を区分することができる。
【０１２０】
また、本解析例によれば、染色剤や溶血剤等の試薬を用いる必要がないため、コストの削減を図ることができる。さらに、試薬の消費を削減でき、且つ、試薬を含む測定試料が廃棄されることを抑制できるため、環境に配慮した分析手法を実現することができる。
【０１２１】
また、本解析例によれば、図７（ａ）、（ｂ）を参照して説明したように、同一血球から取得された赤散乱光ＲＳおよび青散乱光ＢＳに基づくデータが互いに対応づけられるた
め、血球の濃度が高く、各散乱光に基づくデータが混在する場合にも、解析処理を適正に行うことができる。
【０１２２】
また、本実施の形態に係る光学検出器Ｄでは、図３（ｂ）に示すように、青レーザ光ＢＬの照射位置ＥＰ１と赤レーザ光ＲＬの照射位置ＥＰ２が流路Ｄ１５に平行な方向にずれているため、別途、青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳとを分離する素子を配さなくとも、前方散乱光受光光学系Ｄ４の倍率を調整することにより、青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳを、それぞれ、フォトダイオード２０５の受光面２０５ａ、２０５ｂに集光させることができる。同様に、側方散乱光受光光学系Ｄ５の倍率を調整することにより、青レーザ光ＢＬに基づく散乱光と赤レーザ光ＲＬに基づく散乱光を、それぞれ、フォトダイオードＤ５４の受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂに集光させることができる。
【０１２３】
また、本実施の形態に係る光学検出器Ｄによれば、一つのフォトダイオード２０５に受光面２０５ａ、２０５ｂが配置されているため、光学検出器Ｄの構成を簡素にすることができる。同様に、一つのフォトダイオードＤ５４に受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂが配置されているため、光学検出器Ｄの構成を簡素にすることができる。
【０１２４】
また、本実施の形態に係る光学検出器Ｄによれば、受光面２０５ａ、２０５ｂが同一平面上に配置されるため、フォトダイオード２０５の構成を簡素にすることができる。同様に、受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂが同一平面上に配置されるため、フォトダイオードＤ５４の構成を簡素にすることができる。
【０１２５】
また、本実施の形態に係る光学検出器Ｄによれば、前方集光レンズ２０１が、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの２つの波長に対して色収差を補正する機能を備えているため、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳを、受光面２０５ａ、２０５ｂ上に適正に照射することができる。同様に、側方集光レンズＤ５３も、赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬに基づく２つの側方散乱光の波長に対して色収差を補正する機能を備えているため、これら２つの側方散乱光を、受光面Ｄ５４ａ、Ｄ５４ｂ上に適正に照射することができる。
【０１２６】
＜解析例２＞
上記解析例１では、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳを用いて、測定試料に含まれる血球から赤血球を弁別する処理について説明した。本解析例では、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳを用いて、測定試料に含まれる血球から白血球を弁別し、白血球を３つの分類に区分する処理について説明する。なお、本解析例でも、上記解析例１と同様、測定試料の調製において、検体容器Ｔから吸引された検体には希釈液のみが混和され、染色剤や溶血剤等の試薬は混和されない。
【０１２７】
上記のように、白血球はヘモグロビンを持たないため、白血球に対する赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの強度変化に寄与するパラメータは、粒径が支配的となる。すなわち、粒径が異なれば、図８（ｄ）のスキャッタグラムに模式的に示された分布曲線Ｃ２上における血球の分布位置が異なることとなる。本解析例では、かかる分布位置の差異に基づいて、白血球が、リンパ球、単球および顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）に区分される。
【０１２８】
また、上記解析例１において説明したとおり、赤血球が分布する領域Ａ１（分布曲線Ｃ１）は、白血球を含む他の血球が分布する領域Ａ２、Ａ３（分布曲線Ｃ２）から大きく離れている。このため、白血球を分類および計数する際に、赤血球が分布する領域Ａ１に含まれるデータを処理対象から除外することが可能である。本解析例では、フォトダイオード２０５から出力される前方散乱光信号のうち、赤血球が分布する領域Ａ１に対応する前方散乱光信号については、前方散乱光データの取得が禁止され、これにより、処理負荷の軽減が図られる。
【０１２９】
図１０（ａ）〜（ｃ）は、本解析例において、異なる被検者から採取された３つの血液検体に基づいて作成されたスキャッタグラムを示す図である。縦軸と横軸は、それぞれ、フォトダイオード２０５から出力される赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳの信号を示している。なお、この場合の測定試料の調製では、赤血球の解析と同様の希釈液による希釈が行われ、この場合の測定試料の測定では、赤血球の解析を行う場合と同様の測定時間で測定が行われている。
【０１３０】
本解析例では、青散乱光ＢＳの信号が所定の閾値Ｖ２以下である血球は、解析処理に用いられない。具体的には、フォトダイオード２０５から出力される青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下であると、この血球から取得された２種類の前方散乱光信号はメモリ２９２には記憶されない。これにより、図１０（ａ）〜（ｃ）に示すように、各検体に基づいて作成されるスキャッタグラムには、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下である領域Ａ１０に、血球がプロットされなくなる。なお、閾値Ｖ２は、領域Ａ１０に、大部分の赤血球が含まれる値に設定される。これにより、領域Ａ１０以外の領域に、大部分の白血球が含まれることになる。こうして、図１０（ａ）〜（ｃ）に示すように、領域Ａ１０に含まれる血球が除かれることにより、赤血球が分布する領域Ａ１も大きく除かれることになる。
【０１３１】
図１０（ｄ）〜（ｆ）は、異なる被検者から採取された８つの血液検体に基づいて行われた白血球の分類結果を示す図である。図１０（ｄ）〜（ｆ）の縦軸と横軸は、ぞれぞれ、本解析例に基づく処理によって得られた結果と、染色剤や溶血剤等の試薬を用いて測定試料を調製する解析手法（比較手法）によって得られた結果を示している。
【０１３２】
本解析例では、図１０（ａ）〜（ｃ）と同様に、閾値Ｖ２以下の血球が解析の対象から除外される。そして、領域Ａ３１〜Ａ３３内の血球数を、それぞれ、３つの分類（リンパ球、単球および顆粒球）の血球数として取得し、全体の血球数に占める各分類の血球数の比率を求める。図１０（ｄ）〜（ｆ）の縦軸には、それぞれ、本解析例におけるリンパ球と、単球と、顆粒球とが全体の血球数に占める比率（％）が示されている。一方、比較手法においても、この手法に従って白血球を３つの種類に分類し、全体の血球数に占める各分類の血球数の比率を求める。図１０（ｄ）〜（ｆ）の横軸には、それぞれ、この装置におけるリンパ球と、単球と、顆粒球とが全体の血球数に占める比率（％）が示されている。こうして、図１０（ｄ）〜（ｆ）には、本解析例による比率と比較手法による比率とをパラメータとして、それぞれ、８つの検体に対応する比率を示す点がプロットされる。
【０１３３】
また、図１０（ｄ）〜（ｆ）には、それぞれ、８つの検体の比率を示す点の近似直線Ｌ１〜Ｌ３と、ｘ（横軸の値）とｙ（縦軸の値）からなる近似直線Ｌ１〜Ｌ３の式が示されている。また、図１０（ｄ）〜（ｆ）には、本解析例による結果と、比較手法による結果との相関係数Ｒ２の値が示されている。近似直線の傾きと相関係数の値は、何れも１に近づくほど、本解析例による結果と比較手法による結果との相関性が高くなる。
【０１３４】
図１０（ｄ）〜（ｆ）に示すように、近似直線Ｌ１〜Ｌ３の傾きは、それぞれ、１．１７３５、０．９４３６、１．１８３であり、相関係数Ｒ２の値は、それぞれ、０．９３９７、０．４９４８、０．９１４９であるため、リンパ球と顆粒球では、本解析例の結果と比較手法の結果との相関性は、比較的高いことが分かる。このことから、本解析例によれば、リンパ球と顆粒球の結果は、染色剤や溶血剤等の試薬を用いて測定試料を調製する比較手法と、同程度の精度を有することが分かる。
【０１３５】
なお、単球では、近似直線Ｌ２に対する各点の収束度合いがやや低いため、本解析例の結果と比較手法の結果との相関性は、やや低いことが分かる。しかしながら、本解析例の解析処理は、赤血球の解析手法（赤血球用の希釈と測定時間）に基づいて行われているた
め、本解析例の解析処理が、白血球の解析手法（白血球用の希釈と測定時間）に基づいて行われれば、本解析例と比較手法との相関性は高められる可能性がある。
【０１３６】
図１１は、本解析例の血球分析装置１による解析処理を示すフローチャートである。図１１に示すフローチャートは、図９に示す上記解析例１のフローチャートにおいて、Ｓ１５の替わりにＳ１０１が追加され、Ｓ２３の替わりにＳ２０１が追加されている。
【０１３７】
測定ユニット２のＣＰＵ２９１は、上記解析例１と同様にして、Ｓ１１〜Ｓ１４の処理を行う。続いて、ＣＰＵ２９１は、青散乱光ＢＳの信号が図１０（ａ）〜（ｃ）に示す閾値Ｖ２以下であるかを判定する（Ｓ１０１）。青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２より大きいと（Ｓ１０１：ＮＯ）、ＣＰＵ２９１は、上記時間差Δｔに基づいて、同一の血球から生じた２種類の前方散乱光データを互いに対応付けて、メモリ２９２に記憶する（Ｓ１６）。他方、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下であると（Ｓ１０１：ＹＥＳ）、ＣＰＵ２９１は、この血球についての２種類の前方散乱光データを記憶せず、処理をＳ１７に進める。
【０１３８】
こうして、所定時間が経過するまで、血球ごとにＳ１０１、Ｓ１６の処理が繰り返し行われる（Ｓ１７）。なお、この場合の所定時間は、赤血球よりも数段個数の少ない白血球をより多く検出するために、上記解析例１のＳ１７（図９参照）で設定される所定時間よりも長く設定される。所定時間が経過することにより測定が終了すると（Ｓ１７：ＹＥＳ）、ＣＰＵ２９１は、メモリ２９２に記憶した前方散乱光データを、情報処理ユニット４に送信する（Ｓ１８）。
【０１３９】
一方、情報処理ユニット４のＣＰＵ４０１は、測定ユニット２から前方散乱光データを受信すると（Ｓ２１：ＹＥＳ）、図１０（ａ）〜（ｃ）に示すようなスキャッタグラムを作成し、表示部４１に表示する（Ｓ２２）。続いて、ＣＰＵ４０１は、作成したスキャッタグラム上に領域Ａ３１〜Ａ３３（領域Ａ３）を設定する（Ｓ２０１）。こうして、ＣＰＵ４０１は、領域Ａ３１〜Ａ３３に含まれる点を測定試料に含まれるリンパ球、単球および顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）として区分し、領域Ａ３１〜Ａ３３に含まれる点に基づいて白血球の解析処理を行い（Ｓ２４）、解析結果を表示部４１に表示する（Ｓ２５）。
【０１４０】
なお、Ｓ２０１で設定される領域Ａ３１〜Ａ３３は、あらかじめ決められた固定領域であっても良く、固定領域に基づいて微調整された領域であっても良い。ここで、領域Ａ３１〜Ａ３３の境界は、たとえば、直線や曲線の数式により定義される。領域Ａ３１〜Ａ３３は、特許請求の範囲の「所定の強度範囲」に相当する。
【０１４１】
また、ここでは、説明の便宜上、作成したスキャッタグラム上に領域Ａ３１〜Ａ３３が設定され、このスキャッタグラム上の領域Ａ３１〜Ａ３３に含まれる点が、それぞれ、リンパ球、単球および顆粒球に対応する点として区分されたが、スキャッタグラムは、必ずしも図形またはグラフとして作成される必要はなく、領域Ａ３１〜Ａ３３の設定と領域Ａ３１〜Ａ３３に含まれる点の区分は、データ処理によって行われるようにしても良い。
【０１４２】
以上、本解析例によれば、染色剤や溶血剤等の試薬を用いることなく、白血球を、リンパ球、単球および顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）に区分し計数することができる。また、図３（ａ）、（ｂ）に示す構成の光学検出器Ｄを用いることにより、染色剤や溶血剤等の試薬を用いることなく、簡易な工程により、良好に、測定試料に含まれる血球から、白血球を弁別し、白血球を３つの分類に区分し計数することができる。
【０１４３】
また、本解析例によれば、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下であると、この血球の前
方散乱光データはメモリ２９２に記憶されない。これにより、白血球の解析処理に不要な前方散乱光データが記憶されないため、解析処理の負荷軽減を図りながら、効率的に、測定試料に含まれる血球から、白血球を弁別し計数することができる。
【０１４４】
なお、本解析例２では、図１０（ａ）〜（ｃ）のように領域Ａ３１〜Ａ３３を設定することにより、白血球が、リンパ球と、単球と、顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）に分類されたが、さらに、好酸球から生じる自家蛍光を蛍光受光光学系Ｄ６のアバランシェフォトダイオードＤ６３（図３（ａ）、（ｂ）参照）で検出することにより、顆粒球から好酸球を分類することができる。好酸球は、好中球や好塩基球と異なり、短波長のレーザ光が照射されると、自家蛍光が生じる。すなわち、好酸球からは、測定試料の調製において検体に染色剤（試薬）を混和せずとも、短波長のレーザ光を照射することにより、所定波長の蛍光が生じる。好中球や好塩基球には、このような自家蛍光の現象は略生じない。
【０１４５】
したがって、上記のように領域Ａ３３に基づいて分類された顆粒球に対し、さらに、自家蛍光のパラメータを適用することにより、顆粒球から好酸球を分類することができる。
【０１４６】
この場合、自家蛍光の検出には、短波長の青レーザ光ＢＬが用いられる。青レーザ光ＢＬが好酸球に照射されると、５００〜５５０ｎｍ程度の自家蛍光が生じる。したがって、図３（ａ）、（ｂ）に示すダイクロイックミラーＤ５２と分光フィルタＤ６１は、当該自家蛍光の波長帯の光を透過可能なように、透過波長帯域が設定される。また、図１１のＳ１６においては、前方散乱光データとともに、蛍光信号（ＳＦＬ）に基づく蛍光データがメモリ２９２に記憶され、Ｓ１８においては、前方散乱光データとともに蛍光データが、情報処理ユニット４に送信される。
【０１４７】
さらに、Ｓ２４においては、上記解析例２における処理とともに、蛍光強度（ＳＦＬ）のパラメータを用いて、顆粒球から好酸球を分類し計数する解析処理が行われる。ここでは、たとえば、領域Ａ３３に基づいて分類された顆粒球に対し、青散乱光ＢＳの強度（ＢＦＳＣ）と蛍光強度（ＳＦＬ）を２軸とするスキャッタグラムが生成される。そして、生成されたスキャッタグラムに対して、好酸球に対応する領域が設定され、この領域に含まれる点が、測定試料に含まれる好酸球として区分される。
【０１４８】
なお、この場合も、スキャッタグラムは、必ずしも図形またはグラフとして作成される必要はなく、好酸球に対応する領域の設定と当該領域に含まれる点の区分は、データ処理によって行われるようにしても良い。
【０１４９】
このように、蛍光データをさらに取得することにより、染色剤や溶血剤等の試薬を用いることなく、さらに、好酸球の分類および解析を行うことができる。
【０１５０】
＜解析例３＞
上記解析例２では、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳを用いて、測定試料に含まれる血球から白血球を弁別し、白血球を３つの分類に区分する処理について説明した。本解析例では、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳを用いて測定試料に含まれる血球から、赤血球を弁別する処理と、白血球を弁別し、白血球を３つの分類に区分する処理を、一つの測定試料を用いて同時に行う処理について説明する。なお、本解析例でも、上記解析例１、２と同様、測定試料の調製において、検体容器Ｔから吸引された検体には希釈液のみが混和され、染色剤や溶血剤等の試薬は混和されない。
【０１５１】
図１２は、本解析例の血球分析装置１による解析処理を示すフローチャートである。図１２に示すフローチャートは、図１１に示す上記解析例２のフローチャートにおいて、Ｓ１４、Ｓ１０１の間にＳ１１１〜Ｓ１１３が追加され、Ｓ２２、Ｓ２０１の替わりにＳ２
１１〜Ｓ２１４が追加されている。
【０１５２】
測定ユニット２のＣＰＵ２９１は、上記解析例１、２と同様にして、Ｓ１１〜Ｓ１４の処理を行う。続いて、ＣＰＵ２９１は、図９のＳ１５と同様、赤散乱光ＲＳの信号が図８（ｄ）に示す閾値Ｖ１以下であるかを判定する（Ｓ１１１）。赤散乱光ＲＳの信号が閾値Ｖ１より大きいと（Ｓ１１１：ＮＯ）、ＣＰＵ２９１は、図９のＳ１６と同様、上記時間差Δｔに基づいて、同一の血球から生じた２種類の前方散乱光データを互いに対応付けて、メモリ２９２に記憶する（Ｓ１１２）。他方、赤散乱光ＲＳの信号が閾値Ｖ１以下であると（Ｓ１１１：ＹＥＳ）、ＣＰＵ２９１は、この場合の血球についての２種類の前方散乱光データを記憶せず、処理をＳ１０４に進める。
【０１５３】
こうして、所定時間が経過するまで、血球ごとにＳ１１１、Ｓ１１２の処理が繰り返し行われる（Ｓ１１３）。所定の時間が経過すると（Ｓ１１３：ＹＥＳ）、処理がＳ１０１へ進められる。なお、フローセルＤ１への測定試料の供給は継続される。
【０１５４】
次に、ＣＰＵ２９１は、上記解析例２と同様、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下であるかを判定する（Ｓ１０１）。青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２より大きいと（Ｓ１０１：ＮＯ）、前方散乱光データをメモリ２９２に記憶し（Ｓ１６）、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下であると（Ｓ１０１：ＹＥＳ）、この血球についての２種類の前方散乱光データを記憶しない。所定時間が経過することにより測定が終了すると（Ｓ１７：ＹＥＳ）、ＣＰＵ２９１は、Ｓ１１２においてメモリ２９２に記憶した前方散乱光データと、Ｓ１６においてメモリ２９２に記憶した前方散乱光データとを、情報処理ユニット４に送信する（Ｓ１８）。
【０１５５】
一方、情報処理ユニット４のＣＰＵ４０１は、測定ユニット２から前方散乱光データを受信すると（Ｓ２１：ＹＥＳ）、Ｓ１１２で取得された前方散乱光データに基づいて、図８（ｄ）に示すようなスキャッタグラムを作成し、表示部４１に表示する（Ｓ２１１）。そして、ＣＰＵ４０１は、Ｓ２１１で作成したスキャッタグラム上に領域Ａ１を設定する（Ｓ２１２）。続いて、ＣＰＵ４０１は、Ｓ１６で取得された前方散乱光データに基づいて、図１０（ａ）〜（ｃ）に示すようなスキャッタグラムを作成し、表示部４１に表示する（Ｓ２１３）。そして、ＣＰＵ４０１は、Ｓ２１３で作成したスキャッタグラム上に領域Ａ３１〜Ａ３３（領域Ａ３）を設定する（Ｓ２１４）。
【０１５６】
次に、ＣＰＵ４０１は、Ｓ２１１で作成したスキャッタグラムとＳ２１２で設定した領域Ａ１に基づいて、上記解析例１と同様にして、赤血球の解析処理を行い、Ｓ２１３で作成したスキャッタグラムとＳ２１４で設定した領域Ａ３１〜Ａ３３に基づいて、上記解析例２と同様にして、白血球の解析処理を行う（Ｓ２４）。そして、ＣＰＵ４０１は、解析結果を表示部４１に表示する（Ｓ２５）。
【０１５７】
以上、本解析例によれば、染色剤や溶血剤等の試薬を用いることなく、測定試料に含まれる血球から、赤血球を弁別することができ、且つ、白血球を弁別し、白血球を、リンパ球、単球および顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）に区分し計数することができる。
【０１５８】
また、本解析例によれば、１回の測定工程において、白血球の弁別に必要な前方散乱光データと、赤血球の弁別に必要な前方散乱光データの両方を取得することができる。これにより、同一の測定試料を用いて、白血球の弁別と、白血球以外の他の血球（赤血球）の弁別とを行うことができるため、白血球の弁別と、白血球以外の他の血球の弁別とを行うために、個別に測定試料の調製を行う必要がなくなる。
【０１５９】
＜解析例４＞
上記解析例２では、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳを用いて、測定試料に含まれる血球から白血球を弁別し、さらに、白血球をリンパ球、単球および顆粒球に区分する処理について説明した。本解析例では、赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳとともに蛍光信号を用いて、白血球の細胞表面抗原（以下、「表面抗原」という）に対する分析が行われる。
【０１６０】
本解析例では、上記解析例２と異なり、測定試料の調製において、検体容器Ｔから吸引された検体に、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体を含む試薬が混和される。ただし、本解析例においても、上記解析例１と同様、赤血球を溶血するための試薬（溶血剤）は検体に混和されず、赤血球を溶血する処理工程は実行されない。本解析例では、図２の試料調製部２５に、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体を含む試薬を収容する容器がさらに接続される。
【０１６１】
本解析例では、蛍光標識抗体により励起される蛍光が、図３（ａ）のアバランシェフォトダイオードＤ６３によって受光される。したがって、ダイクロイックミラーＤ５２と分光フィルタＤ６１は、当該蛍光の波長帯の光を透過可能なように、透過波長帯域が設定される。上記のように、本解析例では、蛍光標識抗体として、表面抗原ＣＤ４（ヘルパーＴ細胞）と特異的に結合し、赤色の光によって蛍光が励起されるＡＰＣが用いられる。励起されたＡＰＣの蛍光放射極大波長（Em Max）は、６６０ｎｍである。本解析例では、赤色の光によって蛍光が励起される蛍光標識抗体が用いられるため、蛍光の検出のために、赤レーザ光ＲＬが用いられる。なお、青色の光によって蛍光が励起される蛍光標識抗体が用いられる場合には、蛍光の検出のために、青レーザ光ＢＬが用いられる。また、赤レーザ光ＲＬおよび青レーザ光ＢＬとは別の波長のレーザ光（たとえば、赤外のレーザ光）をフローセルＤ１に照射する構成が光学検出器Ｄにさらに設けられる場合には、当該別の波長のレーザ光によって蛍光が励起される蛍光標識抗体を含む試薬が検体に混和されても良い。
【０１６２】
本解析例では、上記のように蛍光標識抗体が混和され調製された測定試料に対して、上記解析例２と同様、図１３（ａ）に示す赤散乱光ＲＳと青散乱光ＢＳを２軸とするスキャッタグラムが生成され、このスキャッタグラムに領域Ａ３１が設定される。これにより、白血球からリンパ球が区分される。そして、区分されたリンパ球に対して、図１３（ｂ）に示すスキャッタグラムが生成され、このスキャッタグラムに領域Ａ４１、Ａ４２が設定される。
【０１６３】
図１３（ｂ）のスキャッタグラムは、横軸が、図３（ａ）のアバランシェフォトダイオードＤ６３によって検出される蛍光信号の強度（ピーク値）であり、縦軸は、赤散乱光ＲＳの強度である。
【０１６４】
表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球は、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体と結合するため、赤レーザ光ＲＬによって蛍光が励起される。このため、表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球は、図１３（ｂ）のスキャッタグラムにおいて、蛍光強度が高い領域に分布する。これに対し、表面抗原ＣＤ４を有さないリンパ球は、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体と結合しないため、赤レーザ光ＲＬによって蛍光が励起されない。このため、表面抗原ＣＤ４を有さないリンパ球は、図１３（ｂ）のスキャッタグラムにおいて、蛍光強度が弱い領域に分布する。
【０１６５】
したがって、図１３（ｂ）のスキャッタグラムに、表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球が分布する領域Ａ４１と、表面抗原ＣＤ４を有さないリンパ球が分布する領域Ａ４２とを設定することにより、これら２種類のリンパ球を区分することができる。こうして、リンパ球を区分することにより、ＣＤ４の分類について、白血球の表面抗原分析を行うことができる。なお、表面抗原ＣＤ４を有さないリンパ球は、蛍光が略励起されないため、本来的には、アバランシェフォトダイオードＤ６３から出力される蛍光信号は、略ゼロとなる。しかしながら、アバランシェフォトダイオードＤ６３およびこれを含む検出回路系のバッ
クグラウンドノイズによって、表面抗原ＣＤ４を有さないリンパ球についても、所定の値の蛍光信号が取得される。領域Ａ４２は、このようなバックグランドノイズの影響を考慮して設定される。
【０１６６】
本解析例では、蛍光標識抗体が検体に混和されるため、蛍光標識抗体が図１３（ａ）のスキャッタグラムに影響を及ぼすことが懸念される。しかしながら、蛍光標識抗体は、白血球に対して微小であり、また、ヘモグロビンのような特異な光吸収特性を有さないため、蛍光標識抗体が、図８（ａ）〜（ｄ）で説明した検出原理に影響を及ぼすことはない。したがって、蛍光標識抗体が検体に混和された場合にも、上記解析例２と同様、図１３（ａ）に示すスキャッタグラム上において、白血球の分布領域（領域Ａ３）が他の種類の血球から分離され、さらに、白血球の分布領域が、リンパ球、単球および顆粒球の分布領域（領域Ａ３１〜Ａ３３）に分離され得る。よって、上記解析例２と同様の手法により、白血球と、リンパ球、単球および顆粒球の解析を行うことができる。
【０１６７】
なお、図１３（ａ）、（ｂ）は、患者から採取した検体に対して、上記手法により実際に測定を行ったときの測定結果を示している。この測定では、測定試料が以下の方法により調製された。
（１）血液サンプル１００μＬとＡＰＣ標識ＣＤ４抗体を含む規定量の試薬とを反応容器に加え、反応容器内の反応液を攪拌する。
（２）反応液を遮光し、室温にて１０分静置して抗原抗体反応を進行させる。
（３）再び反応液を攪拌した後、反応液を５μＬ分取し、分取した反応液を希釈液９９５μＬとともに測定容器に分注し測定試料を作製する。
【０１６８】
図１３（ａ）を参照して分かるとおり、当該測定例においても、領域Ａ３により、白血球を他の血球から区分することができ、また、領域Ａ３１〜Ａ３３により、白血球を、リンパ球、単球および顆粒球に区分することができている。領域Ａ４１、Ａ４２に含まれる血球の計数値と割合は、下表のとおりである。下表において、“＋”は、領域Ａ４１に対する血球の計数結果（表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球の計数結果）を示し、“−”は、領域Ａ４２に対する血球の計数結果（表面抗原ＣＤ４を有さないリンパ球の計数結果）を示している。
【０１６９】
【表１】
2014209081.tif 000003
【０１７０】
同一検体に対して、従来の解析手法により、リンパ球の細分類および計数を行ったと
ころ、ＣＤ４＋の比率は６３．１％、ＣＤ４−の比率は３７．２％であった。ここで、従来の解析手法では、ＣＤ４の蛍光標識抗体とともに白血球を検出するためのＣＤ４５の蛍光標識抗体が検体に混和され、さらに溶血剤により赤血球を溶血して、測定試料が調製されている。また、白血球の分類は、蛍光標識ＣＤ４５抗体により発せられる蛍光に基づいて行われ、ＣＤ４＋の分類は、蛍光標識ＣＤ４抗体により発せられた蛍光に基づいて行われている。表１の解析結果は、従来の解析手法による解析結果に略一致している。したがって、本解析例４における解析手法によっても、ＣＤ４＋の表面抗原に対する解析を精度良く行うこができることが検証され得る。
【０１７１】
図１４は、本解析例の血球分析装置１による解析処理を示すフローチャートである。図
１４に示すフローチャートは、図１１に示す上記解析例２のフローチャートにおいて、Ｓ１２、Ｓ１６、Ｓ１８、Ｓ２４が、それぞれ、Ｓ１２１、Ｓ１２２、Ｓ１２３、Ｓ２２１に置き換えられている。
【０１７２】
測定ユニット２のＣＰＵ２９１は、上記解析例２と同様にして、Ｓ１１、Ｓ１３、Ｓ１４の処理を行う。ただし、Ｓ１２１では、規定量のＡＰＣ標識ＣＤ４抗体を含む試薬が検体に混和される。続いて、ＣＰＵ２９１は、青散乱光ＢＳの信号が図１０（ａ）〜（ｃ）に示す閾値Ｖ２以下であるか否かを判定する（Ｓ１０１）。青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２より大きいと（Ｓ１０１：ＮＯ）、ＣＰＵ２９１は、同一の血球から生じた２種類の前方散乱光データとともに、当該血球から生じた蛍光データを互いに対応付けて、メモリ２９２に記憶する（Ｓ１２２）。他方、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下であると（Ｓ１０１：ＹＥＳ）、ＣＰＵ２９１は、この血球についてデータを記憶せず、処理をＳ１７に進める。
【０１７３】
こうして、所定時間が経過するまで、血球ごとにＳ１０１、Ｓ１２２の処理が繰り返し行われる（Ｓ１７）。所定時間が経過することにより測定が終了すると（Ｓ１７：ＹＥＳ）、ＣＰＵ２９１は、メモリ２９２に記憶した前方散乱光データおよび蛍光データを、情報処理ユニット４に送信する（Ｓ１２３）。
【０１７４】
一方、情報処理ユニット４のＣＰＵ４０１は、測定ユニット２から前方散乱光データと蛍光データを受信すると（Ｓ２１：ＹＥＳ）、図１３（ａ）に示すようなスキャッタグラムを作成し、表示部４１に表示する（Ｓ２２）。続いて、ＣＰＵ４０１は、作成したスキャッタグラム上に領域Ａ３１〜Ａ３３を設定する（Ｓ２０１）。こうして、ＣＰＵ４０１は、領域Ａ３１〜Ａ３３に含まれる点を、測定試料に含まれるリンパ球、単球および顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）として区分し、領域Ａ３１〜Ａ３３に含まれる点に基づいて白血球の解析処理を行う（Ｓ２２１）。
【０１７５】
Ｓ２２１の解析処理には、上述の表面抗原ＣＤ４に対する解析が含まれる。すなわち、図１３（ａ）に示すスキャッタグラムにおいて、領域Ａ３１により区分されたリンパ球に対し、図１３（ｂ）に示すスキャッタグラムが生成される。そして、このスキャッタグラムに領域Ａ４１、Ａ４２が設定され、表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球と、表面抗原ＣＤ４を有さないリンパ球とが区分される。領域Ａ４１、Ａ４２に含まれる点の数が計数され、上記表１に示すように、計数値と比率が取得される。こうして解析処理を行った後、ＣＰＵ４０１は、解析結果を表示部４１に表示する（Ｓ２５）。ここでは、表示される解析結果に、たとえば、上記表１に示すような情報が含まれる。
【０１７６】
なお、Ｓ２２１で設定される領域Ａ４１、Ａ４２は、あらかじめ決められた固定領域であっても良く、固定領域に基づいて微調整された領域であっても良い。また、ここでは、説明の便宜上、作成したスキャッタグラム上に領域Ａ４１、Ａ４２が設定され、このスキャッタグラム上の領域Ａ４１、Ａ４２に含まれる点が、それぞれ、表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球および表面抗原ＣＤ４を有さないリンパ球に対応する点として区分されたが、スキャッタグラムは、必ずしも図形またはグラフとして作成される必要はなく、領域Ａ４１、Ａ４２の設定と領域Ａ４１、Ａ４２に含まれる点の区分は、データ処理によって行われるようにしても良い。
【０１７７】
本解析例によれば、上記解析例２と同様、染色剤や溶血剤等の試薬を用いることなく、白血球を、リンパ球、単球および顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）に区分し計数することができる。また、赤血球を溶血することなく、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体を用いることにより、表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球と表面抗原ＣＤ４を有さないリンパ球をさらに区分することができる。
【０１７８】
なお、本解析例では、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体（染料）が用いられるが、これは、表面抗原解析のために用いられるものであって、白血球の区分や、リンパ球、単球および顆粒球の区分のために用いられるものではない。白血球の区分、およびリンパ球、単球、顆粒球の区分は、上記解析例２と同様、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体（染料）により発せられた蛍光を用いることなく行われる。また、本解析例では、赤血球を溶血する工程が省略されるため、測定開始から解析終了までの時間を、顕著に短縮することができる。
【０１７９】
また、本解析例では、白血球の区分のために用いられる赤レーザ光ＲＬが、蛍光標識抗体の励起用に共用されるため、赤レーザ光ＲＬと青レーザ光ＢＬ以外の波長のレーザ光（たとえば、赤外のレーザ光）を蛍光標識抗体の励起用に用いる場合に比べて、光学検出器Ｄ１の構成を簡素にすることができる。
【０１８０】
なお、本解析例においても、上記解析例２と同様、好酸球において生じる自家蛍光を利用して、好酸球をさらに区分するようにしても良い。この場合、たとえば、図３（ａ）の光学系において、フローセルＤ１からＸ軸負方向に向かう自家蛍光を検出するために、ミラーＤ６５が省略され、代わりに、自家蛍光を検出するための分光フィルタと、蛍光集光レンズと、アバランシェフォトダイオードが配置される。
【０１８１】
また、本解析例では、図１３（ｂ）に示すスキャッタグラムに領域Ａ４１、Ａ４２を設定することによって、表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球と表面抗原ＣＤ４を有さないリンパ球をさらに区分するようにしたが、図１３（ａ）に示す領域Ａ３１に含まれる血球について、図１３（ｃ）に示すヒストグラムを生成し、このヒストグラムに、範囲Ｒ１、Ｒ２を設定して、表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球と表面抗原ＣＤ４を有さないリンパ球をさらに区分するようにしても良い。図１３（ｃ）において、横軸は、図３（ａ）のアバランシェフォトダイオードＤ６３によって検出される蛍光信号の強度（ピーク値）であり、縦軸は、血球数である。また、範囲Ｒ１は、表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球の分布範囲であり、範囲Ｒ２は、表面抗原ＣＤ４を有さないリンパ球の分布範囲である。
【０１８２】
また、本解析例では、上記解析例２と同様、図１３（ａ）に示すスキャッタグラムに領域Ａ３１〜Ａ３３を設定してリンパ球、単球および顆粒球を区分するようにしたが、これに代えて、たとえば、図１５（ｂ）に示すように、青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳを２軸とするスキャッタグラムに領域Ａ５を設定して白血球を区分し、さらに、区分された白血球を、図１５（ｃ）に示すスキャッタグラムに展開して、リンパ球、単球および顆粒球を区分するようにすることもできる。
【０１８３】
図１５（ｃ）において、横軸は、赤レーザ光ＲＬの側方散乱光の強度（ログ表示）であり、縦軸は、赤散乱光ＲＳ（赤レーザ光ＲＬの前方散乱光）の強度である。また、領域Ａ５１〜Ａ５３は、それぞれ、リンパ球、単球および顆粒球の分布領域である。
【０１８４】
図１５（ａ）は、図１５（ｂ）、（ｃ）の処理を用いる場合の解析処理を示すフローチャートである。図１５（ａ）に示すフローチャートでは、図１４に示すフローチャートにおいて、Ｓ１２２、Ｓ１２３、Ｓ２０１、Ｓ２２１が、それぞれ、Ｓ１３１、Ｓ１３２、Ｓ２３１、Ｓ２３２に置き換えられている。また、図１７（ａ）のフローチャートでは、図１４に示すフローチャートのＳ１１〜Ｓ１４のステップの図示が省略されている。
【０１８５】
図１５（ａ）のフローチャートにおいて、Ｓ１３１では、同一の血球から生じた上記２種類の前方散乱光データと、蛍光標識抗体によって励起された蛍光に基づく蛍光データとともに、赤レーザ光ＲＬに基づく側方散乱光の強度（ピーク値）を示す赤側方散乱光データが、互いに対応付けられて、メモリ２９２に記憶される。また、Ｓ１３２では、メモリ
２９２に記憶された前方散乱光データ、蛍光データおよび赤側方散乱光データが、情報処理ユニット４に送信される。
【０１８６】
一方、情報処理ユニット４側では、Ｓ２３１において、図１５（ｂ）に示すスキャッタグラム上に領域Ａ５が設定され、白血球が区分される。また、Ｓ２３２では、区分された白血球が、図１５（ｃ）に示すスキャッタグラムに展開され、領域Ａ５１〜Ａ５３に含まれる点が、測定試料に含まれるリンパ球、単球および顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）として区分される。こうして、領域Ａ５１〜Ａ５３に含まれる点に基づいて白血球の解析処理が行われる。
【０１８７】
図１５（ａ）のＳ２３２の解析処理には、図１４のＳ２２１と同様、上述の表面抗原ＣＤ４に対する解析が含まれる。すなわち、図１５（ｃ）のスキャッタグラムにおいて、領域Ａ５１により区分されたリンパ球に対し、図１３（ｂ）に示すスキャッタグラムが生成される。そして、このスキャッタグラムに領域Ａ４１、Ａ４２が設定され、表面抗原ＣＤ４を有する血球と、表面抗原ＣＤ４を有さない血球とが区分される。
【０１８８】
なお、図１５（ｂ）のスキャッタグラムに設定される領域Ａ５と、図１５（ｃ）のスキャッタグラム上に設定される領域Ａ５１〜Ａ５３は、あらかじめ決められた固定領域であっても良く、固定領域に基づいて微調整された領域であっても良い。また、ここでは、説明の便宜上、作成したスキャッタグラム上に領域Ａ５または領域Ａ５１〜Ａ５３が設定されるとしたが、スキャッタグラムは、必ずしも図形またはグラフとして作成される必要はなく、領域Ａ５および領域Ａ５１〜Ａ５３の設定とこれら領域に含まれる点の区分は、データ処理によって行われるようにしても良い。
【０１８９】
＜解析例５＞
上記解析例４では、１種類の表面抗原を解析するために１種類の蛍光標識抗体が検体に混和された。しかしながら、解析対象とされる表面抗原は１種類に限らず、複数種類の表面抗原が解析対象とされても良い。この場合、解析対象とされる表面抗原の種類と数に応じて、検体に混和される蛍光標識抗体が調整される。本解析例では、表面抗原ＣＤ４に加えて、表面抗原ＣＤ８（キラーＴ細胞）が解析対象とされる。したがって、検体には、蛍光標識抗体として、ＡＰＣに加えて、キラーＴ細胞表面抗原ＣＤ８と特異的に結合するＡＰＣ−Ｃｙ７標識ＣＤ８抗体が混和される。ＡＰＣ−Ｃｙ７は、赤色の光によって、蛍光放射極大波長（Em Max）が７８５ｎｍの蛍光が励起される。周知のとおり、同一のリンパ球に対して、ＡＰＣとＡＰＣ−Ｃｙ７が同時に結合することはない。本解析例では、図２の試料調製部２５に、ＡＰＣ−Ｃｙ７標識ＣＤ８抗体を含む試薬を収容する容器がさらに接続される。
【０１９０】
図１６は、本解析例において用いられる光学検出器Ｄの光学系の構成を示す図である。この光学系には、図３（ａ）の光学系に対し、ダイクロイックミラーＤ６６と、分光フィルタＤ６７と、蛍光集光レンズＤ６８と、アバランシェフォトダイオードＤ６９が追加されている。
【０１９１】
ダイクロイックミラーＤ５２は、コリメータレンズＤ５１側から入射する光のうち、赤レーザ光ＲＬの側方散乱光のみを反射し、その他の光を透過する。したがって、フォトダイオードＤ５４は、赤レーザ光ＲＬの側方散乱光のみを受光する。ダイクロイックミラーＤ６６は、ＡＰＣ−Ｃｙ７標識ＣＤ８抗体によって励起される蛍光（Ｅｍ  Ｍａｘ：７８５ｎｍ）を透過し、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体によって励起される蛍光（Ｅｍ  Ｍａｘ：６６０ｎｍ）を反射する。分光フィルタＤ６１は、ＡＰＣ−Ｃｙ７標識ＣＤ８抗体によって励起される蛍光の波長帯域以外の波長の光をカットする。また、分光フィルタＤ６７は、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体によって励起される蛍光の波長帯域以外の波長の光をカットする。し
たがって、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体にて励起される蛍光は、アバランシェフォトダイオードＤ６９によって受光され、ＡＰＣ−Ｃｙ７標識ＣＤ８抗体にて励起される蛍光は、アバランシェフォトダイオードＤ６３によって受光される。
【０１９２】
図１７（ｂ）は、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体とＡＰＣ−Ｃｙ７標識ＣＤ８抗体を検体に混和して調製された測定試料からリンパ球を区分し、さらに区分したリンパ球を、２つの蛍光強度を２軸とするスキャッタグラムに展開した場合の測定結果を示す図である。図１７（ｂ）において、横軸は、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体にて励起される蛍光を受光するアバランシェフォトダイオードの検出信号（横軸：ログ表示）であり、縦軸は、ＡＰＣ−Ｃｙ７標識ＣＤ８抗体にて励起される蛍光を受光するアバランシェフォトダイオードの検出信号（縦軸：ログ表示）である。
【０１９３】
なお、図１７（ｂ）の測定結果は、赤血球の溶血処理を含む従来の解析手法による汎用装置により測定を行って得られたものである。ただし、上記解析例４で検証したとおり、赤血球の溶血を行わずに、青散乱光ＢＳの強度と赤散乱光の強度とに基づいて、白血球（リンパ球、単球、顆粒球）の区分が行われた場合にも、従来の解析手法に略一致する表面抗原の解析結果が得られている（表１参照）。したがって、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体とＡＰＣ−Ｃｙ７標識ＣＤ８抗体を検体に混和して調製された測定試料に対して、青散乱光ＢＳの強度と赤散乱光の強度とに基づく白血球（リンパ球、単球、顆粒球）の区分が行われた場合にも、図１７（ｂ）と同様の分布のスキャッタグラムが得られることが想定され得る。
【０１９４】
表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球は、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体と結合するため、赤レーザ光ＲＬによって、６６０ｎｍ（Em Max）の蛍光が励起される。このため、表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球は、図１７（ｂ）のスキャッタグラムにおいて、横軸の蛍光強度が高い領域に分布する。また、ＣＤ８の表面抗原を有するリンパ球は、ＡＰＣ−Ｃｙ７標識ＣＤ８抗体と結合するため、赤レーザ光ＲＬによって、７８５ｎｍ（Em Max）の蛍光が励起される。このため、ＣＤ８の表面抗原を有するリンパ球は、図１７（ｂ）のスキャッタグラムにおいて、縦軸の蛍光強度が高い領域に分布する。これに対し、表面抗原ＣＤ４およびＣＤ８の表面抗原の何れをも有さないリンパ球は、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体、ＡＰＣ−Ｃｙ７の何れとも結合しないため、赤レーザ光ＲＬによって蛍光が励起されない。このため、ＣＤ４、ＣＤ８の何れの表面抗原も有さないリンパ球は、図１７（ｂ）のスキャッタグラムにおいて、縦軸、横軸の両方において蛍光強度が低い領域に分布する。
【０１９５】
したがって、図１７（ｂ）のスキャッタグラムに、表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球が分布する領域Ａ６１と、ＣＤ８の表面抗原を有するリンパ球が分布する領域Ａ６２と、ＣＤ４、ＣＤ８の何れの表面抗原をも有さないリンパ球が分布する領域Ａ６３とを設定することにより、これら３種類のリンパ球を区分することができる。こうして、リンパ球を区分することにより、ＣＤ４およびＣＤ８の分類について、白血球の表面抗原分析を行うことができる。
【０１９６】
図１７（ａ）は、本解析例の解析処理を示すフローチャートである。図１７（ａ）に示すフローチャートでは、図１４に示すフローチャートにおいて、Ｓ１２１、Ｓ１２２、Ｓ１２３、Ｓ２２１が、それぞれ、Ｓ１４１、Ｓ１４２、Ｓ１４３、Ｓ２４１に置き換えられている。また、図１７（ａ）のフローチャートでは、図１４に示すフローチャートのＳ１１のステップの図示が省略されている。
【０１９７】
図１７（ａ）のフローチャートにおいて、Ｓ１４１では、規定量のＡＰＣ標識ＣＤ４抗体を含む試薬と、規定量のＡＰＣ−Ｃｙ７標識ＣＤ８抗体を含む試薬が検体に混和される。Ｓ１４２では、同一の血球から生じた上記２種類の前方散乱光データと、ＡＰＣ標識Ｃ
Ｄ４抗体およびＡＰＣ−Ｃｙ７標識ＣＤ８抗体にてそれぞれ励起された蛍光に基づく２種類の蛍光データが、互いに対応付けられて、メモリ２９２に記憶される。また、Ｓ１４３では、メモリ２９２に記憶された前方散乱光データ、蛍光データが、情報処理ユニット４に送信される。
【０１９８】
一方、情報処理ユニット４側では、Ｓ２４１において、上記解析例４と同様、青散乱光ＢＳの強度と赤散乱光ＲＳの強度に基づき、白血球が区分され、さらに、リンパ球、単球、顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）が区分される。さらに、区分されたリンパ球が、図１７（ｂ）に示すスキャッタグラムに展開され、ＣＤ４およびＣＤ８の分類について、白血球の表面抗原分析が行われる。すなわち、図１７（ｂ）に示すスキャッタグラムに領域Ａ６１〜Ａ６３が設定され、表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球と、ＣＤ８の表面抗原を有するリンパ球と、ＣＤ４、ＣＤ８の何れの表面抗原も有さないリンパ球とが区分される。その後、Ｓ２５において、解析結果が表示される。ここでは、上記表１と同様の計数値および比率を示す情報が、ＣＤ４とＣＤ８について、それぞれ表示される。
【０１９９】
なお、図１７（ｂ）のスキャッタグラムに設定される領域Ａ６１〜Ａ６３は、あらかじめ決められた固定領域であっても良く、固定領域に基づいて微調整された領域であっても良い。また、ここでは、説明の便宜上、作成したスキャッタグラム上に領域Ａ６１〜Ａ６３が設定されるとしたが、スキャッタグラムは、必ずしも図形またはグラフとして作成される必要はなく、領域Ａ６１〜Ａ６３の設定とこれら領域に含まれる点の区分は、データ処理によって行われるようにしても良い。
【０２００】
本解析例によれば、上記解析例４と同様、染色剤や溶血剤等の試薬を用いることなく、白血球を、リンパ球、単球および顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）に区分し計数することができる。また、赤血球を溶血することなく、ＡＰＣ標識ＣＤ４抗体、ＡＰＣ−Ｃｙ７標識ＣＤ８抗体を用いることにより、表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球と、ＣＤ８の表面抗原を有するリンパ球と、ＣＤ４、ＣＤ８の何れの表面抗原も有さないリンパ球とをさらに区分することができる。
【０２０１】
なお、図１７（ａ）のフローチャートでは、Ｓ２２において作成されたスキャッタグラムに領域Ａ３１〜Ａ３３を設定して、リンパ球、単球および顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）を区分したが、これに代えて、図１５（ａ）のように、Ｓ２２において作成されたスキャッタグラムに領域Ａ５を設定して白血球を区分し、区分した白血球を図１５（ｃ）のスキャッタグラムに展開して、リンパ球、単球および顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）を区分しても良い。
【０２０２】
また、本解析例においても、上記解析例２、４と同様、好酸球において生じる自家蛍光を利用して、好酸球をさらに区分するようにしても良い。
【０２０３】
図１８は、この場合の光学検出器Ｄの光学系の構成例を示す図である。この構成例では、図１６に示す光学系において、ミラーＤ６５が省略され、代わりに、自家蛍光を検出するための分光フィルタＤ７０と、蛍光集光レンズＤ７１と、アバランシェフォトダイオードＤ７２が配置される。このように、好酸球から励起される自家蛍光の受光系を、ＣＤ４およびＣＤ８のリンパ球から励起される蛍光の受光系から分離することにより、各蛍光を適正に且つ効率良く検出することができる。
【０２０４】
なお、図１８の光学系では、図１６の光学系と同様、赤レーザ光ＲＬに基づく側方散乱光のみがフォトダイオードＤ５４によって受光され、青レーザ光ＢＬに基づく側方散乱光を検出するための系が設けられていない。さらに青レーザ光ＢＬに基づく側方散乱光を検出する場合には、図１８の光学系において、たとえば、コリメータレンズＤ６４と分光フ
ィルタＤ７０との間に、好酸球において生じる自家蛍光を透過し、青レーザ光ＢＬに基づく側方散乱光を反射するダイクロイックミラーを配置し、ダイクロイックミラーによって反射された側方散乱光を、側方集光レンズによって、フォトダイオードに集光するようにすれば良い。
【０２０５】
また、本解析例では、解析対象とされる表面抗原の種類が２つであったが、３種類以上の表面抗原が解析対象とされても良い。この場合、解析対象とされる表面抗原の種類数に応じて、検体に混和される蛍光標識抗体が調整される。たとえば、解析対象とされる表面抗原の種類数が３つであれば、３種類の蛍光標識抗体が検体に混和される。また、解析対象とされる表面抗原の種類数に応じて、光学検出器Ｄの光学系が調整される。たとえば、解析対象とされる表面抗原の種類数が３つであれば、３種類の蛍光標識抗体により励起される蛍光を検出可能なように、光学系が調整される。この場合、たとえば、図１８の光学系において、コリメータレンズＤ６４と分光フィルタＤ７０との間に、好酸球において生じる自家蛍光を透過し、追加された３番目の蛍光標識抗体により励起される蛍光を反射するダイクロイックミラーを配置し、ダイクロイックミラーによって反射された蛍光を、分光フィルタ、蛍光集光レンズおよびアバランシェフォトダイオードにより構成される受光系によって受光するようにすれば良い。このように、適宜、ダイクロイックミラーによって蛍光を分岐させることにより、３種類以上の蛍光標識抗体により励起される蛍光を検出可能な光学系を構成することができる。
【０２０６】
また、赤レーザ光ＲＬによって蛍光が励起される蛍光標識抗体と青レーザ光ＢＬによって蛍光が励起される蛍光標識抗体が、それぞれ、検体に混和されて測定試料が調製されても良い。この場合、それぞれの蛍光を受光可能なように、適宜、光学検出器Ｄの光学系が変更される。
【０２０７】
＜変更例＞
以上、本発明の実施の形態および解析例について説明したが、本発明の実施形態はこれらに限定されるものではない。
【０２０８】
たとえば、上記解析例２では、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下である場合、この血球は解析の対象から除外された。しかしながら、上記解析例２において、上記解析例１と同様にして、全ての血球の前方散乱光データに基づいて、図８（ｄ）に示すようなスキャッタグラムを表示し、このスキャッタグラム上に、図１０（ａ）〜（ｃ）に示す領域Ａ３１〜Ａ３３を設定することにより、白血球（リンパ球、単球および顆粒球）が３つに分類されるようにしても良い。この場合、全ての血球の前方散乱光データをメモリ２９２に記憶し、全ての血球をスキャッタグラム上に表示するため、ＣＰＵ２９１、４０１の処理に負荷がかかることになるものの、上記解析例２と同様、白血球の分類を行うことができる。
【０２０９】
なお、この場合、図８（ｄ）に示すスキャッタグラム上に、領域Ａ３１〜Ａ３３だけでなく、領域Ａ２、Ａ３を設定することにより、それぞれ、血小板と白血球を分類しても良い。
【０２１０】
また、上記解析例２では、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下である場合、この血球についての２種類の前方散乱光データは記憶されないが、これに替えて、上記解析例１と同様、全ての血球についての２種類の前方散乱光データが記憶されるようにしても良い。この場合、ＣＰＵ２９１は、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下であると判定すると、この血球についての２種類の前方散乱光データを記憶する際に、たとえば、このデータにフラグを付与しておく。そして、情報処理ユニット４のＣＰＵ４０１は、受信した前方散乱光データを参照して、血球のデータにフラグが付与されている場合、この血球のデータをス
キャッタグラムに表示せず、解析しないようにする。
【０２１１】
また、上記解析例２では、白血球を３分類に区分する場合について説明したが、図１１に示すように白血球を３分類に区分して白血球の解析を行う処理と、図９に示すように赤血球を他の血球と区分して赤血球の解析を行う処理とが、ユーザの選択により行われるようにしても良い。たとえば、表示部４１に、白血球の解析を開始させるための測定開始ボタンと、赤血球の解析を開始させるための測定開始ボタンが表示され、ユーザは、所望する解析処理に応じて、これら測定開始ボタンを押下するようにしても良い。
【０２１２】
図１９（ａ）は、この場合の血球分析装置１による解析処理の選択を示すフローチャートである。情報処理ユニット４１のＣＰＵ４０１は、白血球の測定開始ボタンが押下されると（Ｓ３１：ＹＥＳ）、図１１に示す白血球の解析処理を開始させ（Ｓ３２）。他方、ＣＰＵ４０１は、赤血球の測定開始ボタンが押下されると（Ｓ３３：ＹＥＳ）、図９に示す赤血球の解析処理を開始させる（Ｓ３４）。このように、図１３（ａ）に示す変更例によれば、白血球の弁別と、赤血球の弁別を選択的に行うことができる。
【０２１３】
また、上記解析例２では、図１０（ａ）〜（ｃ）に示すスキャッタグラムにおいて、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下となるよう領域Ａ１０が設定されたが、これに限らず、領域Ａ１０は、図１３（ｂ）に示すように、斜め方向に伸びる直線Ｌ４によっても設定されるようにしても良い。この場合、領域Ａ１０は、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下であり、または、直線Ｌ４よりも左側に位置する領域として設定される。この場合も、領域Ａ１０が解析対象から除かれるため、赤血球が分布する領域Ａ１を考慮することなく、白血球の分類を容易に行うことができる。なお、領域Ａ１０は、さらに曲線によって区画されるように設定されても良い。
【０２１４】
また、上記解析例２において、領域Ａ１０は、図１３（ｃ）に示すように、青散乱光ＢＳの信号が閾値Ｖ２以下であり、且つ、赤散乱光ＲＳの信号が閾値Ｖ３以上となるよう設定されても良い。この場合、解析対象となる範囲に、血小板が分布する領域Ａ２を設定することができ、領域Ａ２基づいて血小板の弁別を行うことができる。
【０２１５】
また、上記解析例３において、赤血球の弁別に用いる前方散乱光データを取得する期間（Ｓ１１１〜Ｓ１１３）と、白血球の弁別に用いる前方散乱光データを取得する期間（Ｓ１０１、Ｓ１６、Ｓ１７）とは、経過時間によって区分された。しかしながら、これに限らず、Ｓ１１２において記憶した前方散乱光データの数（血球の数）が所定値に達すると、Ｓ１１３の判定がＹＥＳとなり、処理がＳ１０１に進められるようにしても良い。
【０２１６】
また、測定に用いる光学系も、図３（ａ）、（ｂ）に記載された構成に限らず、異なる波長の光をフローセルＤ１に照射でき、各波長の光の散乱光をそれぞれ受光できる構成であれば、他の構成であってもよい。たとえば、図３（ａ）、（ｂ）の光学系では、一つのフォトダイオード２０５に２つの受光面２０５ａ、２０５ｂが配置されたが、前方散乱光受光光学系Ｄ４に青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳの光路を分離させる手段を配置し、光路が分離された青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳをそれぞれ個別に受光する２つのフォトダイオードが配置されても良い。
【０２１７】
また、フローセルＤ１に照射される２つの光の波長も上記に記載された波長に限られず、ヘモグロビンの吸収係数がそれぞれ異なるように波長を適宜選択してもよい。たとえば、青レーザ光ＢＬと同様に赤血球の吸収度合いの高い黄レーザ光（出射波長５５０〜６００ｎｍ）を青レーザ光ＢＬに替えて用いてもよい。さらに、散乱光の特性が血球毎に異なるのであれば、他の波長が用いられても良い。ただし、青レーザ光ＢＬの波長を上記実施の形態に示された波長に設定することにより、上記のように、各血球の分布をより明確に
区分し、各血球を計数することができる。
【０２１８】
また、解析例１では、赤散乱光ＲＳの強度に対してのみ閾値Ｖ１が設定され、前方散乱光データの取得が制限されたが、さらに青散乱光ＢＳの強度に対しても閾値を設定して前方散乱光データの取得が制限されても良い。また、解析例２では、青散乱光ＢＳの強度に対してのみ閾値Ｖ２が設定され、前方散乱光データの取得が制限されたが、さらに赤散乱光ＲＳの強度に対しても閾値を設定して前方散乱光データの取得が制限されても良い。
【０２１９】
また、上記解析例１〜５では、表示部４１にスキャッタグラムが表示されたが、スキャッタグラムは必ずしも表示されなくても良い。ただし、スキャッタグラムが表示された方が、各血球の分離具合を視覚により確認できるため、解析結果の評価を円滑に行うことができる。
【０２２０】
また、上記解析例３では、測定試料をフローセルＤ１に連続的に流しながら、解析例１のための測定と解析例２のための測定とを時間を区切って行うようにしたが、解析例１のための測定と解析例４のための測定とを時間を区切って行うようにしてもよく、あるいは、解析例１のための測定と解析例５のための測定とを時間を区切って行うようにしても良い。この場合、図１２のＳ１２では、蛍光標識抗体を含む試薬が検体に混和されて測定試料が調製され、Ｓ２４では、前方散乱光データとともに蛍光データをも用いた解析処理が行われる。
【０２２１】
また、上記実施の形態では、第１試薬と第２試薬が混和されない測定試料だけでなく、これら試薬が混和された測定試料に対しても測定可能なように、血球分析装置１が構成された。しかしながら、血球分析装置１は、必ずしも、第１試薬と第２試薬が混和された測定試料を処理するための構成を備えずとも良く、たとえば、上記解析例１〜３に従って、第１試薬と第２試薬が混和されない測定試料のみを測定可能なように、血球分析装置１が構成されても良い。この場合、図２に示す測定ユニット２から、第１試薬を収容する容器２５１と、第２試薬を収容する容器２５２が省略される。また、図３（ａ）に示す光学検出器Ｄから、蛍光受光光学系Ｄ６が省略され、ダイクロイックミラーＤ５２が全反射ミラーに変更される。こうすると、血球分析装置１の構成を簡素にすることができる。また、容器２５１、２５２が省略されるため、試料調製部２５に容器２５１、２５２を接続する手間が省略されると共に、コストの削減を図ることができる。ただし、上記解析例４、５では、蛍光標識抗体を含む試薬が検体に混和されるため、図２に示す測定ユニット２から、試薬を収容する容器を省略することはできず、また、図３（ａ）に示す光学検出器Ｄから、蛍光受光光学系Ｄ６を省略することもできない。
【０２２２】
なお、上記解析例１〜５では、対応するフローチャートにおいて、スキャッタグラムの作成と、領域の設定および各血球の区分、解析が、それぞれ、別のステップで示された。しかしながら、各血球の区分および解析は、必ずしも、一連のステップを順番に実行して行われる必要はなく、たとえば、各血球に対応づけられた複数のデータが所定の条件を満たすか否かによって、各血球に対する分類が決定されても良い。たとえば、解析例２では、各血球に対応づけられた青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳに基づく前方散乱光データが、それぞれ、図１０（ａ）〜（ｃ）に示す領域Ａ３１に対応する青散乱光の強度範囲と、当該領域Ａ３１に対応する赤散乱光の強度範囲に含まれる場合に、当該血球をリンパ球と判定するようにしても良い。また、解析例４では、各血球に対応づけられた青散乱光ＢＳと赤散乱光ＲＳに基づく前方散乱光データが、それぞれ、図１３（ａ）に示す領域Ａ３１に対応する青散乱光の強度範囲と、当該領域Ａ３１に対応する赤散乱光の強度範囲に含まれ、且つ、当該血球に対応づけられた蛍光強度と赤散乱光ＲＳの強度が、それぞれ、図１３（ｂ）に示す領域Ａ４１に対応する蛍光の強度範囲と、当該領域Ａ４１に対応する赤散乱光の強度範囲に含まれる場合に、当該血球を、表面抗原ＣＤ４を有するリンパ球と判定する
ようにしても良い。この場合、各血球は、当該血球に対応づけられた各データが、所定の条件式に適用され、当該条件式に規定された条件節を満たす場合に、当該血球が、当該条件式に結果として規定された分類に割り当てられる。
【０２２３】
この他、本発明の実施の形態は、特許請求の範囲に示された技術的思想の範囲内において、適宜、種々の変更が可能である。
【符号の説明】
【０２２４】
１  …  血球分析装置
２  …  測定ユニット
４  …  情報処理ユニット
４１  …  表示部
２５  …  試料調製部
２６  …  検出部
Ｄ  …  光学検出器
Ｄ１  …  フローセル
Ｄ１５  …  流路
Ｄ６１、Ｄ６７  …  分光フィルタ
Ｄ６２、Ｄ６８  …  蛍光集光レンズ
Ｄ６３、Ｄ６９  …  アバランシェフォトダイオード
１０１、１０３  …  半導体レーザ
２０５  …  フォトダイオード
２０５ａ、２０５ｂ  …  受光面
【図１】
2014209081.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図９】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１４】
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【図１６】
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【図１８】
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【図１９】
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【図８】
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【図１０】
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【図１３】
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【図１５】
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【図１７】
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