(57)【要約】【課題】血液及び血液製剤中よりトリパノソーマを除去することのできるトリパノソーマ除去材を提供すること。【解決手段】血液及び血液製剤中からトリパノソーマを除去するトリパノソーマ除去材であって、多孔質構造を有し、かつセルロース又はその誘導体から形成された粒子からなる、トリパノソーマ除去材。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液及び血液製剤中からトリパノソーマを除去するトリパノソーマ除去材であって、
多孔質構造を有し、かつセルロース又はその誘導体から形成された粒子からなる、トリパノソーマ除去材。
【請求項２】
前記粒子の比表面積が５〜２０ｍ２／ｇである、請求項１に記載のトリパノソーマ除去材。
【請求項３】
前記粒子の平均粒子径が２００μｍ以上５００μｍ以下である、請求項１又は２に記載のトリパノソーマ除去材。
【請求項４】
血液の導入口及び導出口を有し、かつ請求項１〜３のいずれか一項に記載のトリパノソーマ除去材を内部に含む容器を備える、トリパノソーマ除去デバイス。
【請求項５】
血液の導入口及び導出口を有し、かつ請求項１〜３のいずれか一項に記載のトリパノソーマ除去材が充填されたカラムを備える、トリパノソーマ除去デバイス。
【請求項６】
血液の導入口及び導出口を有し、かつ請求項１〜３のいずれか一項に記載のトリパノソーマ除去材を含むバッグを備える、トリパノソーマ除去デバイス。
【請求項７】
前記バッグが、抗凝固剤及び血液保存剤の少なくとも一方を更に含む、請求項６に記載のトリパノソーマ除去デバイス。
【請求項８】
血液と、請求項１〜３のいずれか一項に記載のトリパノソーマ除去材とを接触させる工程を備える、血液製剤の製造方法。
【請求項９】
請求項５に記載のトリパノソーマ除去デバイスを用い、血液を前記カラムに通液してトリパノソーマを除去する工程を備える、血液製剤の製造方法。
【請求項１０】
請求項６又は７に記載のトリパノソーマ除去デバイスを用い、血液と請求項１〜３のいずれか一項に記載のトリパノソーマ除去材とを混和した後、一定時間静置することによりトリパノソーマを除去する工程を備える、血液製剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トリパノソーマ除去材並びにトリパノソーマ除去デバイス及びそれを用いた血液製剤の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
トリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ）は、トリパノソーマ科に属する原生生物の鞭毛虫であり、多くの生物を宿主として感染し、トリパノソーマ症を引き起こす。トリパノソーマは二宿主性であり、脊椎動物の血流中と吸血動物の腸管を主な寄生部位とする複雑な生活環を持つ。
【０００３】
哺乳類を宿主とするトリパノソーマは吸血性の節足動物によって媒介されトリパノソーマ症の感染を拡大させる。トリパノソーマは宿主、寄生部位により形態を変え、環境の変化への適応を図ることが特徴であり、特に哺乳類の血液中では錘鞭毛型を有することはトリパノソーマ科の原生生物に共通の特徴であることが知られている。
【０００４】
トリパノソーマ症の中でヒトへ感染し、病原性を示す代表的な感染症として、シャーガス病、アフリカ睡眠病が知られている。何れもクルーズトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、ブルーストリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ）と呼ばれるトリパノソーマにより引き起こされる。
【０００５】
シャーガス病は中南米諸国の風土病であり、クルーズトリパノソーマがサシガメと呼ばれる吸血昆虫の腸管内で増殖し、ヒトへの吸血の際に糞と共にヒト体内へ侵入し感染することが知られている。感染すると、３〜５週間は全く無症状であるが、その後、風邪に似た発熱を伴う症状を呈する急性期をへて、無自覚症状の慢性期へ至る。その後、発症すると、内臓の肥大・破裂や心筋梗塞のような血管障害を引き起こし、死に至る病となる。
【０００６】
シャーガス病は、急性期を除いては無自覚症状の時期が長期間に渡るため、感染者が感染を認識せずにいることが珍しく無い。このため献血等で、トリパノソーマに感染した血液が輸血に使われ、感染の拡大が懸念されている。シャーガス病の蔓延地域は中南米諸国であるが、当該地域は米州、欧州への移民に加え、日本でも多くの日系人が就労しているため、輸血による感染症拡大が非常に危惧されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００４／００６０２８号明細書
【特許文献２】米国特許第０５５９３８２３号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｍｏｒａｅｓ  Ｓｏｕｚａ  Ｈ，  ｅｔ．  ａｌ．，  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｅ  Ｃｈａｇａｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｗｈｉｔｅ−ｃｅｌｌ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｆｉｌｔｅｒｓ  ｉｎ  ｒｅｍｏｖｉｎｇ  Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ  ｆｒｏｍ  ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｂｌｏｏｄ，  Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ３５巻：７２３−７２６頁，１９９５年
【非特許文献２】Ｇｏｏｄｒｉｃｈ  ＲＰ，  Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｐａｔｈｇｅｎｓ  ｉｎ  ｂｌｏｏｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ，  Ｖｏｘ  Ｓａｎｇ  ２０００年：７８巻，Ｓｕｐｐｌ  ２：２１１−２１５頁
【非特許文献３】Ｖａｎ  Ｖｏｏｒｈｉｓ  Ｗ  Ｃ，  ｅｔ．  ａｌ．，  Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｂｙ  ａ  ｐｓｏｒａｌｅｎ  ａｎｄ  ｌｏｎｇ−ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ  ＵＶ，  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，  ２００３年；４７巻：４７５−４７９頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
血液及び血液製剤のＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶを初めとする種々の感染症の病原物質に対する安全性の確保は、これら病原物質の検査を実施し、感染の疑いのある血液及び血液製剤を排除することにより行われてきた。トリパノソーマについても同様な安全性の確保策がとられているが、現在蔓延地域の中南米諸国において実施されている抗体を用いた検査方法では、検査精度が低く、偽陽性、見逃し、すり抜けが多く発生することが問題となっている。加えてシャーガス病蔓延地域においては、陽性率が高く、多くの血液及び血液製剤を廃棄せざるをえないため、深刻な血液不足に陥る国も存在する。米州、欧州、日本においては、献血者の出身地域を問診するのみで検査すら実施していない状況である。
【００１０】
近年、血液及び血液製剤の安全性の確保において、血液及び血液製剤中のウイルス等の病原物質を不活化する技術（不活化技術）が注目されている。不活化技術は、血液及び血液製剤中に適切な薬剤を投与した後、紫外線照射等の適切な処理をすることで、ウイルス等の病原体を不活化させるものである。不活化技術は、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＩＶ、トリパノソーマ等の既知の病原体に加え、未知の病原体の不活化も可能であるため、血液及び血液製剤の安全性確保の観点から非常に可能性を秘めた技術である。
【００１１】
しかしながら、不活化技術では、血液及び血液製剤中への薬剤投与が必須であるため、薬剤の安全性という懸念点がある。加えて、現在の不活化技術では、紫外線照射などの処理により血球成分までも破壊してしまうため、血液製剤の大半を占める血球成分を含む全血及び赤血球製剤等に対しては、適用できないという問題点がある。
【００１２】
このような状況から、安全な血液及び血液製剤を供給するために、血液及び血液製剤から、トリパノソーマを除去する方法が求められている。
【００１３】
本発明は、これらの従来技術の欠点を解消し血液及び血液製剤の安全性を確保するために、これまでの安全確保技術とは全く異なる方法により血液及び血液製剤中よりトリパノソーマを除去することのできるトリパノソーマ除去材及びトリパノソーマ除去デバイスを提供することを目的とする。本発明はまた、トリパノソーマが除去された血液製剤の製造方法を提供することも目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、鋭意検討した結果、トリパノソーマを除去するような特性を有する微粒子を見出した。また、これら微粒子を充填したデバイスへ血液及び血液成分を通液するか、又は血液及び血液成分をこれら微粒子と混和静置することで、血液及び血液成分中のトリパノソーマを除去できることを確認し、本発明へ至った。
【００１５】
すなわち、本発明は下記発明に関する。
［１］
血液及び血液製剤中からトリパノソーマを除去するトリパノソーマ除去材であって、
多孔質構造を有し、かつセルロース又はその誘導体から形成された粒子からなる、トリパノソーマ除去材。
［２］
前記粒子の比表面積が５〜２０ｍ２／ｇである、［１］に記載のトリパノソーマ除去材。
［３］
前記粒子の平均粒子径が２００μｍ以上５００μｍ以下である、［１］又は［２］に記載のトリパノソーマ除去材。
［４］
血液の導入口及び導出口を有し、かつ［１］〜［３］のいずれかに記載のトリパノソーマ除去材を内部に含む容器を備える、トリパノソーマ除去デバイス。
［５］
血液の導入口及び導出口を有し、かつ［１］〜［３］のいずれかに記載のトリパノソーマ除去材が充填されたカラムを備える、トリパノソーマ除去デバイス。
［６］
血液の導入口及び導出口を有し、かつ［１］〜［３］のいずれかに記載のトリパノソーマ除去材を含むバッグを備える、トリパノソーマ除去デバイス。
［７］
前記バッグが、抗凝固剤及び血液保存剤の少なくとも一方を更に含む、［６］に記載のトリパノソーマ除去デバイス。
［８］
血液と、［１］〜［３］のいずれかに記載のトリパノソーマ除去材とを接触させる工程を備える、血液製剤の製造方法。
［９］
［５］に記載のトリパノソーマ除去デバイスを用い、血液を前記カラムに通液してトリパノソーマを除去する工程を備える、血液製剤の製造方法。
［１０］
［６］又は［７］に記載のトリパノソーマ除去デバイスを用い、血液と［１］〜［３］のいずれかに記載のトリパノソーマ除去材とを混和した後、一定時間静置することによりトリパノソーマを除去する工程を備える、血液製剤の製造方法。
【００１６】
本発明はまた、下記発明も包含する。
［１’］
血液及び血液製剤中より、トリパノソーマを除去する方法であって、トリパノソーマを含む血液及び血液製剤を多孔質構造を有する粒子を充填した機器に通液させることにより除去する方法。
［２’］
前記多孔質構造を有する粒子が、セルロース及びその誘導体から形成される、［１’］に記載のトリパノソーマを除去する方法。
［３’］
前記多孔質構造を有する粒子の比表面積が５〜２０ｍ２／ｇである、［１’］又は［２’］に記載のトリパノソーマを除去する方法。
［４’］
前記多孔質構造を有する粒子の平均粒子径が２００μｍ以上５００μｍ以下である、［１’］〜［３’］のいずれかに記載のトリパノソーマを除去する方法。
［５’］
血液及び血液製剤中より、トリパノソーマを除去する方法であって、トリパノソーマを含む血液及び血液製剤と多孔質構造を有する粒子を混和後、一定時間静置することにより除去する方法。
［６’］
前記多孔質構造を有する粒子がセルロース及びその誘導体から形成される、［５’］に記載のトリパノソーマを除去する方法。
［７’］
前記多孔質構造を有する粒子の比表面積が２〜２０ｍ２／ｇである、［５’］又は［６’］に記載のトリパノソーマを除去する方法。
［８’］
前記多孔質構造を有する粒子の平均粒子径が２００μｍ以上５００μｍ以下である、［５’］〜［７’］のいずれかに記載のトリパノソーマを除去する方法。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、シャーガス病やアフリカ睡眠病に代表される感染症のトリパノソーマ症の原因となっている鞭毛虫であるトリパノソーマを血液及び血液成分から所定の多孔質粒子を用いて簡便な方法により除去することが可能となる。特に全血、赤血球製剤からトリパノソーマを除去できる本発明は、輸血血液、血液製剤を介した感染症の拡大を防止するために多大な効果を発揮する。
【００１８】
本発明の微粒子を用いたデバイスへ血液及び血液製剤を通液させる方法によるトリパノソーマ除去方法は、微粒子の材質、表面積、粒子径を適切に組み合わせることにより、血液及び血液製剤中よりトリパノソーマを効果的に除去できる。特に従来の血液及び血液製剤のトリパノソーマに対する安全性確保手段である病原体不活化では安全確保が不可能であった血球成分を含む全血、赤血球製剤に対しても適用可能である事を動物感染血液での実験で確認した。加えて検査による陽性血液及び血液製剤の排除による安全性確保手段とは異なり、検査結果が陽性の血液及び血液製剤からトリパノソーマを除去するため、血液及び血液製剤の有効活用をもたらすものである。
【００１９】
以上のように、本発明による血液及び血液製剤からのトリパノソーマ除去方法は、これまでの血液及び血液製剤のトリパノソーマに対する安全性確保手段とは、全く異なるものであり、これまで適用が不可能であった全血、赤血球製剤に対して安全性向上を提供できると共に、献血された血液を無駄なく、血液製剤として利用できる手段を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】血液通液試験装置を示す模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明を実施するための形態について詳細に説明するが、本発明は以下の実施形態に限定されるものではない。
【００２２】
〔トリパノソーマ除去材〕
本発明のトリパノソーマ除去材は、多孔質構造を有し、かつセルロース又はその誘導体から形成された粒子からなる。本発明のトリパノソーマ除去材は、血球成分を破壊することなく、効率よくトリパノソーマを除去できるため、血液及び血液製剤中からのトリパノソーマの除去に好適に用いられる。すなわち、本発明のトリパノソーマ除去材は、「トリパノソーマ除去剤」ということもできる。
【００２３】
上記粒子はセルロース又はその誘導体で構成される。セルロース誘導体としては、セルロースを構成するβ−グルコースに由来するヒドロキシル基の少なくとも一部が官能基で変性（すなわち、−ＯＨが−ＯＲであることをいう。Ｒは官能基である。）された化合物が挙げられる。
【００２４】
官能基Ｒとしては、例えば、カルボキシメチル基（−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ）、アルキル基（−Ｒ１：分岐又は直鎖であってよい。炭素数は例えば１〜１０であり、１〜５が好ましく、１〜３がより好ましい。）、グリコール基（−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−）ｎ−Ｈ：ｎは１以上の整数であり、１〜１０の整数であることが好ましく、１〜５の整数であることがより好ましく、１であることが更に好ましい）、アセチル基（−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３）、ニトロ基（−ＮＯ２）等が挙げられる。官能基Ｒは、更に官能基Ｒで置換されていてもよい。
【００２５】
セルロース誘導体としては、例えば、セルロースアセテート、ニトロセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースが挙げられる。
【００２６】
上記粒子がセルロース又はその誘導体で構成されることにより、セルロース表面とトリパノソーマが相互作用してセルロース表面上へ捕捉され、除去される。したがって、単位粒子当りのトリパノソーマ除去能を向上させるため、上記粒子の比表面積が大きいことが好ましく、多孔質構造を有していることがより好ましい。これにより必要な粒子量が少なくて済む。
【００２７】
上記粒子の比表面積は、例えば、１〜３０ｍ２／ｇとすることができ、２〜２０ｍ２／ｇであることが好ましく、５〜２０ｍ２／ｇであることがより好ましく、７〜２０ｍ２／ｇであることが更に好ましい。上記粒子の比表面積は、例えば島津製作所  ｍａｉｃｒｏｍｅｒｉｔｉｃｓ  ｔｒｉｓｔｅｒを使用してＢＥＴ法により測定した値である。
【００２８】
上記粒子の平均粒子径は、例えば、５０μｍ〜１０００μｍとすることができ、２００μｍ〜５００μｍであることが好ましく、２５０μｍ〜５００μｍであることがより好ましい。平均粒子径が２００μｍ以上であると、血球成分が流れる流路を確保できるため、除去処理の際の線速度の上昇を抑制でき、血球が破壊され溶血が発生することを抑制できる。したがって、血液及び血液製剤の品質を保つことができ、かつ効率よくトリパノソーマを除去することができる。上記粒子の平均粒子径は、光学顕微鏡にて観察した個々の粒子の粒子径の単純平均である。観察する粒子の数が多いほど正確な平均粒子径を求めることができるが、例えば、観察する粒子の数は、６０個とすることができる。
【００２９】
上記粒子は、例えば、以下の（ｉ）又は（ｉｉ）の方法により製造することができる。
（ｉ）銅アンモニアセルロース溶液を硫酸等の酸性の液体中に押し出し、相分離をさせて多孔質構造を有する中空糸膜を作製した後、中空糸膜を切断することにより粒子を得る。
（ｉｉ）銅アンモニアセルロース溶液を液体窒素等により冷却された低温液体中へ適切な大きさの液滴として滴下した後、低温液体を攪拌する。この攪拌の間に銅アンモニアセルロース液滴中の水分を氷結及び成長させる。その後、硫酸を用いてセルロースを再生させ、温度を上昇させて、氷結した水分を融解させることにより、水分を抜き取ることで多孔質構造を形成させる。
【００３０】
〔トリパノソーマ除去デバイス〕
本発明のトリパノソーマ除去デバイスは、上記トリパノソーマ除去材をその内部に含む容器を少なくとも備えている。上記容器は、血液の導入口及び導出口を有するものであればよく、その形状としては、例えば、カラム、バッグ、白血球除去フィルター用ハウジングが挙げられる。
【００３１】
例えば、上記トリパノソーマ除去材を適切な円筒状のカラムに充填し、血液の導入口及び導出口にチューブ等を接続して適切な回路を形成することにより、カラム形状のトリパノソーマ除去デバイスを得ることができる。また、上記トリパノソーマ除去材を、上記粒子の粒子径よりも細かい孔を有するナイロン等の素材から構成されたメッシュの袋等に封入した後、血液及び血液製剤の出入り口を有したポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）等の可撓性シートの間に、上記メッシュの袋を、高周波や超音波により一体化することにより、バッグ状のトリパノソーマ除去デバイスを得ることができる。
【００３２】
また、上記トリパノソーマ除去材を、抗凝固剤又は血液保存剤と共に、血液貯蔵バッグに封入して、バッグ状のトリパノソーマ除去デバイスを得ることもできる。このデバイスによれば、採取した血液をバッグ内に保存しておく際に、血液及び血液製剤よりトリパノソーマを除去することができる。
【００３３】
〔トリパノソーマを除去する方法〕
本発明のトリパノソーマを除去する方法は、血液又は血液製剤と、上記トリパノソーマ除去材とを接触させる工程を備える。当該接触により、血液又は血液製剤に含まれるトリパノソーマを上記粒子に付着及び捕捉させ、血液及び血液製剤からトリパノソーマを除去することができる。
【００３４】
上記接触の方法は特に限定されるものではない。例えば、カラム状のトリパノソーマ除去デバイスを用いる場合、血液又は血液製剤をカラムに通液してトリパノソーマを除去する工程を実施することにより行うことができる。また、バッグ状のトリパノソーマ除去デバイスを用いる場合、血液又は血液製剤をバッグ中でトリパノソーマ除去材と混和し、一定時間静置する工程を実施することにより行うことができる。静置する時間には特に制限はないが、例えば、２〜８時間とすることができ、４〜８時間とすることが好ましい。
【００３５】
このようにして、本発明のトリパノソーマ除去材を用いたトリパノソーマ除去デバイスへ血液又は血液製剤を通液、もしくは保存させるのみの非常に簡便な操作により、血液及び血液製剤中のトリパノソーマを大幅に低減できる。とりわけ、病原菌、ウイルス不活化技術が確立していない赤血球を含む製剤、全血に対しての安全性を高めるきわめて有用な処理方法となる。また、このようにしてトリパノソーマを除去した血液又は血液製剤は、安全性の高い血液製剤として利用することができる。したがって、本発明はまた、血液製剤の製造方法としても利用することができる。
【実施例】
【００３６】
以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３７】
〔実施例１〕
（粒子の造粒とデバイスの作製方法）
セルロース濃度２％の銅アンモニアセルロース溶液を液体窒素にて冷却したシリコンオイル中へ滴下し、５０分間攪拌した後に４０％硫酸を加えセルロースを再生させ、多孔質構造を固定した。シリコンオイル中から粒子を回収し、４０℃の水中に分散させ５０分攪拌した。目開き２００μｍと５００μｍのステンレスメッシュを用いて粒子を分級し、２００μｍ〜５００μｍの粒子径を有する粒子を得た。その後、エピクロロヒドリンと微粒子を反応させ、多孔質構造を強化し、乾燥させ粒子を得た。得られた粒子の粒子径を、光学顕微鏡にて観察したところ（ｎ＝６０の平均）２５０μｍであった。得られた粒子のＢＥＴ比表面積（島津製作所  ｍａｉｃｒｏｍｅｒｉｔｉｃｓ  ｔｒｉｓｔｅｒを使用して測定）は、８．０ｍ２／ｇであった。
得られた粒子を生理食塩水へ分散させ、円筒形カラム（モビコールカラム１．５ｍｌ：ＭＯＢ１２１０−０２，フィルター：ＭＯＢ１２２１−９０，ＭＯＢ１２２２−９０；Ｍｏ  Ｂｉ  Ｔｅｃ社）に湿潤体積で１ｍｌを充填した後、生理食塩水でカラムを満たし、トリパノソーマ除去カラム（デバイス）を得た。
【００３８】
（感染血液調製方法）
二宿主性寄生虫であるクルーズトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）をサシガメ腸管内より採取し、ラット体内に投与して増殖させた。ラットより採血を行い検鏡にてクルーズトリパノソーマ数を確認しながら、目標のクルーズトリパノソーマ濃度に到達するまでラット体内で増殖させた。
目標のクルーズトリパノソーマ濃度に到達したラット体内より血液を採血し、これを感染血液としてトリパノソーマ除去性能評価試験に用いた。採血に際しては、ラット血液量に対して２０％の抗凝固剤（ＣＰＤ）を添加した。
感染血液中のクルーズトリパノソーマ濃度は、２．６×１０９匹／ｍｌであった。
【００３９】
（血液中クルーズトリパノソーマ濃度の評価方法）
感染血液中のクルーズトリパノソーマ濃度は、以下のようにして算出した。まず、サンプル血液１００μＬを採取し、光学顕微鏡にて菌数をカウントした。５回のカウントの平均値をカウント数とし、１ｍｌあたりのクルーズトリパノソーマ濃度として算出した。
処理後の血液中のクルーズトリパノソーマ濃度についても同様にカウント及び算出した。しかしながら、菌数が少なく、顕微鏡の視野内に菌体が観察できない場合には、ＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ）法によりクルーズトリパノソーマ濃度を測定した。
【００４０】
（血液通液試験方法）
図１に示す装置を用いて、血液通液試験（カラムフロー方式）を行い、クルーズトリパノソーマ（シャーガス病病原虫）除去性能を評価した。
抗凝固剤を添加した上記感染血液８ｍｌを１０ｍｌのディスポーザブルシリンジ１０に採取し、空気を３ｍｌ追加し評価血液を調整した後、シリンジポンプ１（テルモ社製ＴＥ−３３１Ｓ）へセットした。
シリンジポンプ１の流量を０．３ｍｌ／分に設定し、感染血液をチューブ３及びチューブ５を通してカラム１００の直前まで送液し、この時点でチューブ５をカラム１００へ接続した。更にカラム１００の出口側にチューブ６を接続し、図１に示すような回路を得た。
次いで、シリンジポンプ１を作動させ、カラム１００への感染血液の流通を開始し、カラム１００から流出した血液サンプルを１ｍｌずつのフラクションとして回収用チューブ２０に分取し、評価用血液とした。この際、流出初流１ｍｌは、カラム内に充填していた生理食塩水が流出してくるので廃棄し、２〜４ｍｌの３フラクション（それぞれ、第一フラクション、第二フラクション及び第三フラクション）を評価した。
【００４１】
（結果）
各フラクションにおけるクルーズトリパノソーマ濃度を表１に示す。感染血液処理後のカラムを生理食塩水で洗浄した後、パラホルムアルデヒドとグルタルアルデヒドとの混合液を通液させた後、γ線でクルーズトリパノソーマを不活化させた。カラムから粒子を取り出し走査型電子顕微鏡にて粒子表面を観察したところ、クルーズトリパノソーマが付着捕捉されていることが確認できた。
【００４２】
〔実施例２〕
（粒子の造粒とデバイスの作製方法）
実施例１と同様の方法により粒子を造粒し、カラムを得た。
【００４３】
（感染血液調製方法）
感染血液中のクルーズトリパノソーマ濃度を１．０×１０６匹／ｍｌとしたこと以外は実施例１と同様の方法により感染血液を得た。
【００４４】
（血液中クルーズトリパノソーマ濃度の評価方法）
実施例１と同様の方法により血液中のクルーズトリパノソーマ濃度をカウント及び算出した。
【００４５】
（血液通液試験方法）
実施例１と同様の方法により血液通液試験を行った。
【００４６】
（結果）
各フラクションにおけるクルーズトリパノソーマ濃度を表１に示す。実施例２では、処理後の血液中のクルーズトリパノソーマは、顕微鏡で観察できなかったため、ＲＴ−ＰＣＲ法によりクルーズトリパノソーマ濃度を測定した。ＲＴ−ＰＣＲ法により求めた値も表１に示す。感染血液処理後のカラムを生理食塩水で洗浄した後、パラホルムアルデヒドとグルタルアルデヒドとの混合液を通液させた後、γ線でクルーズトリパノソーマを不活化させた。カラムから粒子を取り出し走査型電子顕微鏡にて粒子表面を観察したところ、クルーズトリパノソーマが付着捕捉されていることが確認できた。
【００４７】
〔実施例３〕
（粒子の造粒とデバイスの作製方法）
シリコンオイル中での攪拌時間を１００分としたこと、及び目開き１ｍｍと５００μｍのステンレスメッシュを用いて粒子を分級したこと以外は実施例１と同様の方法により粒子を造粒した。実施例１と同様の方法により得られた粒子の粒子径、及びＢＥＴ比表面積を測定したところ、平均粒子径は８００μｍ、比表面積は２．０ｍ２／ｇであった。この粒子を用い、実施例１と同様の方法により除去カラムを得た。
【００４８】
（感染血液調製方法）
実施例１と同様の方法により感染血液を得た。
【００４９】
（血液中クルーズトリパノソーマ濃度の評価方法）
実施例１と同様の方法により血液中のクルーズトリパノソーマ濃度をカウント及び算出した。
【００５０】
（血液通液試験方法）
実施例１と同様の方法により血液通液試験を行った。
【００５１】
（結果）
各フラクションにおけるクルーズトリパノソーマ濃度を表１に示す。感染血液処理後のカラムを生理食塩水で洗浄した後、パラホルムアルデヒドとグルタルアルデヒドとの混合液を通液させた後、γ線でクルーズトリパノソーマを不活化させた。カラムから粒子を取り出し走査型電子顕微鏡にて粒子表面を観察したところ、クルーズトリパノソーマが確認された。
【００５２】
〔比較例１〕
（粒子の造粒とデバイスの作製方法）
ポリエチレンペレットの過熱溶融液を紡口より押し出した後、冷却させ得られた中空糸を遠心させたのちに裁断し、粒子を作製した。
得られた粒子を実施例１と同様の方法で分級し、実施例１と同様の方法で、粒子径とＢＥＴ比表面積の測定をしたところ、平均粒子径は２００μｍ、比表面積は７．６ｍ２／ｇであった。この粒子を、実施例１と同様の方法により円筒形カラムへ１ｍｌ充填した後、生理食塩水でカラムを満たし、除去カラムを得た。
【００５３】
（感染血液調製方法）
実施例１と同様の方法により感染血液を得た。
【００５４】
（血液中クルーズトリパノソーマ濃度の評価方法）
実施例１と同様の方法により血液中のクルーズトリパノソーマ濃度をカウント及び算出した。
【００５５】
（血液通液試験方法）
実施例１と同様の方法により血液通液試験を行った。
【００５６】
（結果）
各フラクションにおけるクルーズトリパノソーマ濃度を表１に示す。感染血液処理後のカラムを生理食塩水で洗浄した後、パラホルムアルデヒドとグルタルアルデヒドとの混合液を通液させた後、クルーズトリパノソーマをγ線で不活化させた。カラムから粒子を取り出し走査型電子顕微鏡にて粒子表面を観察したところ、クルーズトリパノソーマは全く観察されなかった。
【００５７】
〔実施例４〕
（粒子の造粒とデバイスの作製方法）
実施例１と同様の方法により粒子を造粒した。得られた粒子を生理食塩水中に分散し、湿潤体積０．５ｍｌの粒子をマイクロプレート（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ社製）のウェルへ入れた。
【００５８】
（感染血液調製方法）
実施例１と同様の方法により感染血液を得た。
【００５９】
（血液中クルーズトリパノソーマ濃度の評価方法）
実施例１と同様の方法により血液中のクルーズトリパノソーマ濃度をカウント及び算出した。
【００６０】
（静置試験方法）
静置法により、クルーズトリパノソーマ（シャーガス病病原虫）除去性能を評価した。
１２穴マイクロプレート（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ社製）のウェルへ、湿潤体積０．５ｍｌの粒子を入れ、感染血液１ｍｌを添加し、良く混和した後、１時間後、４時間後、及び８時間後に血液をウェルから回収し、クルーズトリパノソーマ濃度を測定した。
【００６１】
（結果）
１時間後、４時間後、及び８時間後のクルーズトリパノソーマ濃度を表２に示す。静置処理後の粒子を回収し、生理食塩水で洗浄した後に、パラホルムアルデヒドとグルタルアルデヒドとの混合液へ浸漬させた後、γ線でクルーズトリパノソーマを不活化させた。走査型電子顕微鏡にて粒子表面を観察したところ、クルーズトリパノソーマが付着捕捉されていることが確認できた。
【００６２】
〔実施例５〕
（粒子の造粒とデバイスの作製方法）
目開き１００μｍｍのステンレスメッシュを用いて粒子を分級したこと以外は実施例１と同様の方法により粒子を造粒した。実施例１と同様の方法により得られた粒子の粒子径、及びＢＥＴ表面積を測定したところ、平均粒子径は９５μｍ、比表面積は２０．０ｍ２／ｇであった。得られた微粒子を生理食塩水中に分散し、湿潤体積０．５ｍｌの粒子をマイクロプレート（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ社製）のウェルへ入れた。
【００６３】
（感染血液調製方法）
実施例１と同様の方法により感染血液を得た。
【００６４】
（血液中クルーズトリパノソーマ濃度の評価方法）
実施例１と同様の方法により血液中のクルーズトリパノソーマ濃度をカウント及び算出した。
【００６５】
（静置試験方法）
実施例４と同様の方法により静置試験を行った。
【００６６】
（結果）
１時間後、４時間後、及び８時間後のクルーズトリパノソーマ濃度を表２に示す。静置処理後の粒子を回収し、生理食塩水で洗浄した後に、パラホルムアルデヒドとグルタルアルデヒドとの混合液へ浸漬させた後、γ線でクルーズトリパノソーマ不活化させた。走査型電子顕微鏡にて粒子表面を観察したところ、クルーズトリパノソーマが付着捕捉されていることが確認できた。
【００６７】
〔比較例２〕
（粒子の造粒とデバイスの作製方法）
比較例１で得られた微粒子を生理食塩水中に分散し、湿潤体積０．５ｍｌの粒子をマイクロプレート（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ社製）のウェルへ入れた。
【００６８】
（感染血液調製方法）
実施例１と同様の方法により感染血液を得た。
【００６９】
（血液中クルーズトリパノソーマ濃度の評価方法）
実施例１と同様の方法により血液中のクルーズトリパノソーマ濃度をカウント及び算出した。
【００７０】
（静置試験方法）
実施例４と同様の方法により静置試験を行った。
【００７１】
（結果）
１時間後、４時間後、及び８時間後のクルーズトリパノソーマ濃度を表２に示す。静置処理後の粒子を回収し、生理食塩水で洗浄した後に、パラホルムアルデヒドとグルタルアルデヒドとの混合液へ浸漬させた後、γ線でクルーズトリパノソーマを不活化させた。走査型電子顕微鏡にて粒子表面を観察したところ、クルーズトリパノソーマが付着捕捉されていなかった。
【００７２】
【表１】
2014000295.tif 000002
【００７３】
【表２】
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【符号の説明】
【００７４】
１…シリンジポンプ、２…圧力計、３，４，５，６…チューブ、１０…ディスポーザブルシリンジ、２０…回収用チューブ、１００…カラム。
【図１】
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