(57)【要約】      （修正有）【課題】Ｃ型肝炎ウイルス感染等の予防及び／又は治療方法の提供。【解決手段】約１００ｍｇないし約１５００ｍｇのＶＸ−９５０を患者に投与することを含む、Ｃ型肝炎ウイルス感染の処置または予防方法。前記方法において、前記量のＶＸ−９５０を１日１〜３回投与することが好ましい。また、前記方法において、ペグ化インターフェロン等の免疫調節剤、リバビリン等の抗ウイルス剤等から選択される１ないし２以上の薬剤を更に投与することが好ましい。前記方法は、肝臓障害、肝炎、脂肪症、脂肪肝、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、アルコール性脂肪症、ライ症候群等の疾患の処置方法として用いることもできる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
約１００mgないし約１５００mgのＶＸ−９５０を、１日当たり１回、２回または３回投与することを含む、治療レジメン。
【請求項２】
ＶＸ−９５０が、約３００mgないし約１５００mgである、請求項１記載の治療レジメン。
【請求項３】
ＶＸ−９５０が、約３００mgないし約１２５０mgである、請求項１記載の治療レジメン。
【請求項４】
ＶＸ−９５０が約４５０mgである、請求項１記載の治療レジメン。
【請求項５】
ＶＸ−９５０が約７５０mgである、請求項１記載の治療レジメン。
【請求項６】
ＶＸ−９５０が約１２５０mgである、請求項１記載の治療レジメン。
【請求項７】
患者におけるＣ型肝炎ウイルス感染の処置または予防方法であって、約１００mgないし約１５００mgの量のＶＸ−９５０を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項８】
ＶＸ−９５０が、約３００mgないし約１５００mgである、請求項７記載の方法。
【請求項９】
ＶＸ−９５０が、約３００mgないし約１２５０mgである、請求項７記載の方法。
【請求項１０】
ＶＸ−９５０が約４５０mgである、請求項７記載の方法。
【請求項１１】
ＶＸ−９５０が約７５０mgである、請求項７記載の方法。
【請求項１２】
ＶＸ−９５０が約１２５０mgである、請求項７記載の方法。
【請求項１３】
ＶＸ−９５０の該量を１日１回投与する、請求項７−１２のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
ＶＸ−９５０の該量を１日２回投与する、請求項７−１２のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
ＶＸ−９５０の該量を１日３回投与する、請求項７−１２のいずれか一項記載の方法。
【請求項１６】
該患者に、免疫調節剤、抗ウイルス剤、ＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼの別の阻害剤、ＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ以外のＨＣＶ生活環における標的の阻害剤、内部リボソーム侵入の阻害剤、広域ウイルス阻害剤、別のシトクロムＰ−４５０阻害剤、ウイルスの細胞侵入の阻害剤またはそれらの組み合わせを投与することをさらに含む、請求項７−１２のいずれか一項記載の方法。
【請求項１７】
該免疫調節剤が、α−、β−、もしくはγ−インターフェロンまたはチモシンであり；該抗ウイルス剤が、リバビリン、アマンタジンまたはテルビブジンであり；そして、該ＨＣＶ生活環における別の標的の阻害剤が、ＨＣＶヘリカーゼ、ポリメラーゼまたはメタロプロテアーゼの阻害剤である、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
Ｃ型肝炎ウイルスに感染した患者の処置方法であって、約７５０mgのＶＸ−９５０を１日３回、８時間毎に、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項１９】
Ｃ型肝炎ウイルスに感染した患者の処置方法であって、血漿中のＣ型肝炎ウイルスＲＮＡの少なくとも約２ｌｏｇ１０の減少が達成されるのに有効量のＶＸ−９５０を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項２０】
ＶＸ−９５０の該量が、血漿中のＣ型肝炎ウイルスＲＮＡの少なくとも約４ｌｏｇ１０の減少が達成されるのに有効である、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
ＶＸ−９５０の該量が、血漿中のＣ型肝炎ウイルスＲＮＡを検出不可能なレベルまで減少するのに有効である、請求項１９記載の方法。
【請求項２２】
Ｃ型肝炎ウイルスに感染した患者の処置方法であって、持続的ウイルス応答を達成するのに有効量のＶＸ−９５０を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項２３】
患者が、遺伝子型１型のＣ型肝炎ウイルスに感染している、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
患者における肝臓障害、肝炎、脂肪症、脂肪肝、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、アルコール性脂肪症、またはライ症候群の処置方法であって、１日約１３５０mg、１日約２２５０mg、または１日約２５００mgのＶＸ−９５０を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項２５】
ＶＸ−９５０を、１日当たり、約４５０mgを８時間毎、約７５０mgを８時間毎、または約１２５０mgを１２時間毎に投与する、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
患者における肝保護方法であって、１日約１３５０mg、１日約２２５０mg、または１日約２５００mgのＶＸ−９５０を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項２７】
ＶＸ−９５０を、１日当たり、約４５０mgを８時間毎、約７５０mgを８時間毎、または約１２５０mgを１２時間毎に投与する、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
患者のＡＬＴレベルを減少させる方法であって、治療的有効量のＶＸ−９５０を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項２９】
１日約１３５０mg、１日約２２５０mg、または１日約２５００mgのＶＸ−９５０を患者に投与する、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
ＶＸ−９５０を、１日当たり、約４５０mgを８時間毎、約７５０mgを８時間毎、または約１２５０mgを１２時間毎に投与する、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
患者がＨＣＶに感染している、請求項２８−３０のいずれか一項記載の方法。
【請求項３２】
患者がＨＣＶに感染していない、請求項２８−３０のいずれか一項記載の方法。
【請求項３３】
ＶＸ−９５０を、それを必要とする患者に提供する方法であって、ＶＸ−９５０を含む投与形態を該患者に投与することを含み、ここで該投与形態が、投与後、少なくとも約７５０ng／mLのＶＸ−９５０の平均血漿濃度を該患者に提供する、方法。
【請求項３４】
ＶＸ−９５０の平均血漿濃度が、投与後、約７５０ng／mLから約１２５０ng／mLである、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
ＶＸ−９５０の平均血漿濃度が、投与後、約１０００ng／mLである、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
ＶＸ−９５０の平均血漿濃度が、投与後３時間以内に得られるか、または達成される、請求項３３−３５のいずれか一項記載の方法。
【請求項３７】
ＶＸ−９５０の平均血漿濃度が、投与後２時間以内に得られるか、または達成される、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
ＶＸ−９５０の平均血漿濃度が、投与後１時間以内に得られるか、または達成される、請求項３７記載の方法。
【請求項３９】
ＶＸ−９５０の血漿中トラフ濃度を、２４時間の間、約７５０ng／mLないし約１５００ng／mLに維持することをさらに含む、請求項３３−３８のいずれか一項記載の方法。
【請求項４０】
２４時間の間に、ＶＸ−９５０を含む少なくとも１個の投与形態を、それを必要とする患者に投与することを含む、ＨＣＶ感染を有する患者の処置方法であって、ここで、該投与形態を、ＶＸ−９５０の血漿中トラフ濃度を２４時間の間、約７５０ng／mLないし約１５００ng／mLに維持するために投与する、方法。
【請求項４１】
投与形態を、ＶＸ−９５０の血漿中トラフ濃度を２４時間の間、約１０００ng／mLないし約１５００ng／mLに維持するために投与する、請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
投与形態が、約７５０mgのＶＸ−９５０を含む、請求項４０−４１のいずれか一項記載の方法。
【請求項４３】
投与形態を１日３回投与する、請求項４０記載の方法。
【請求項４４】
ＶＸ−９５０の平均血漿濃度またはトラフ濃度を、約１２週間維持する、請求項３３−４３のいずれか一項記載の方法。
【請求項４５】
インターフェロンまたはリバビリンを投与する工程をさらに含む、請求項７−４４のいずれか一項記載の方法。
【請求項４６】
インターフェロンが、ペグ化インターフェロンである、請求項４５記載の方法。
【請求項４７】
インターフェロンを、約１８０μｇ／ｍｌの量で投与する、請求項４５または４６記載の方法。
【請求項４８】
ＶＸ−９５０、ポリビニルピロリドン、およびラウリル硫酸ナトリウムを含む、製剤。
【請求項４９】
ポリビニルピロリドンがポビドン K29／32である、請求項４８記載の製剤。
【請求項５０】
ＶＸ−９５０を約１２週間未満の第一段階中に投与することを含む、治療レジメン。
【請求項５１】
第二段階中にペグ化インターフェロンを投与することをさらに含み、ここで、該第二段階が、第一段階後、３６週未満の期間である、請求項５０記載の治療レジメン。
【請求項５２】
第一段階でペグ化インターフェロンをＶＸ−９５０と共に投与することをさらに含む、請求項５０記載の治療レジメン。
【請求項５３】
第一段階でリバビリンをＶＸ−９５０およびペグ化インターフェロンと共に投与することをさらに含む、請求項５０記載の治療レジメン。
【請求項５４】
第二段階でリバビリンをペグ化インターフェロンと共に投与することをさらに含む、請求項５０記載の治療レジメン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本発明は、２００７年５月２１日出願の米国特許出願第６０／９３１，１０８号、および２００７年９月１９日出願の米国特許出願第６０／９９４，４３０号（その内容は、参照によりその全体を本明細書中に包含される）に優先権の利益を主張する。
【０００２】
発明の技術分野
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス感染の処置方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
Ｃ型肝炎ウイルス（“ＨＣＶ”）による感染は、切実なヒトの医学的問題である。ＨＣＶは、非Ａ非Ｂ型肝炎のほとんどの症例の原因因子として認識されており、全世界で、概算で３％のヒト血清陽性率である（例えば、A. Alberti et al., “Natural History of Hepatitis C,” J. Hepatology, 31 (Suppl. 1), pp. 17−24 (1999）参照）。米国だけでも４００万名近くが、感染している可能性がある（例えば、M.J. Alter et al., “The Epidemiology of Viral Hepatitis in the United States”, Gastroenterol. Clin. North Am., 23, pp. 437−455 (1994)； M. J. Alter “Hepatitis C Virus Infection in the United States,” J. Hepatology, 31., (Suppl. 1), pp. 88−91 (1999)参照）。
【０００４】
ＨＣＶに感染したヒトのうち２０−２５％は、急性感染後にウイルスを排除し得るが、７５−８０％は、慢性Ｃ型肝炎感染を発症し得る（例えば、preface, Frontiers in Viral Hepatitis. Ed. RF Schinazi, J−P Sommadossi, and CM Rice. p. xi. Elsevier (2003)参照）。これは、通常、肝硬変および肝細胞癌のようなより重度の疾患状態をしばしばもたらす、肝炎の再発および漸進的悪化をもたらす（例えば、M.C. Kew, “Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma”, FEMS Microbiology Reviews, 14, pp. 211−220 (1994)；I. Saito et. al., “Hepatitis C Virus Infection is Associated with the Development of Hepatocellular Carcinoma,” Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, pp. 6547−6549 (1990)参照）。残念なことに、慢性ＨＣＶの進行を遅らせるのに広く有効な処置は存在しない。
【０００５】
ＨＣＶゲノムは、アミノ酸３０１０−３０３３のポリタンパク質をコードする（例えば、Q.L. Choo, et al., “Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus.” Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, pp. 2451−2455 (1991)； N. Kato et al., “Molecular Cloning of the Human Hepatitis C Virus Genome From Japanese Patiants with Non−A, Non−B Hepatitis,” Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, pp. 9524−9528 (1990)； A. Takamizawa et al., “Structure and Organization of the Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Carriers,” J. Virol., 65, pp. 1105−1113 (1991)参照）。ＨＣＶ非構造（ＮＳ）タンパク質は、ウイルス複製に必須の触媒機構を提供すると考えられている。ＮＳタンパク質は、ポリタンパク質のタンパク質分解的切断によって得られる（例えば、R. Bartenschlager et al., “Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes a Serine−Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3／4 and NS4／5 Junctions,” J. Virol., 67, pp. 3835−3844 (1993)； A. Grakoui et al., “Characterization of the Hepatitis C Virus −Encoded Serine Proteinase：  Determination of Proteinase−Dependent Polyprotein Cleavage Sites,” J. Virol., 67, pp. 2832−2843 (1993)； A. Grakoui et al., “Expression and Identification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products,” J. Virol., 67, pp. 1385−1395 (1993)； L. Tomei et al., “NS3 is a serine protease required for processing of Hepatitis C Virus polyprotein”, J. Virol., 67, pp. 4017−4026 (1993)参照）。
【０００６】
ＨＣＶ ＮＳタンパク質３（ＮＳ３）には、大部分のウイルス酵素の合成を補助するセリンプロテアーゼ活性が含まれ、故に、ウイルス複製および感染力に必須であると見なされる。黄熱病ウイルスＮＳ３プロテアーゼにおける変異は、ウイルス感染力を減少することが知られている（例えば、Chambers, T.J. et al., “Evidence that the N−terminal Domain of Nonstructural Protein NS3 From yellow Fever Virus is a Serine Protease Responsible for Site−Specific Cleavages in the Viral Polyprotein”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, pp. 8898−8902 (1990)参照）。ＮＳ３の最初の１８１アミノ酸（ウイルスポリタンパク質の残基１０２７−１２０７）は、ＨＣＶポリタンパク質の４つ全ての下流部位を処理するＮＳ３のセリンプロテアーゼドメインを含むことが示されている（例えば、C. Lin et al., “Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase： Trans−Cleavage Requirements and Processing Kinetics”, J. Virol., 68, pp. 8147−8157 (1994)を参照）。
【０００７】
ＨＣＶ ＮＳ３ セリンプロテアーゼおよびそれと関係する補因子ＮＳ４Ａは、全てのウイルス酵素プロセシングを補助し、故に、ウイルス複製に必須であると見なされる。このプロセシングは、ウイルス酵素プロセシングにも関与する、ヒト免疫不全ウイルス アスパルチルプロテアーゼにより行われるのと同様のようである。ウイルスタンパク質プロセシングを阻害するＨＩＶプロテアーゼ阻害剤は、ヒトにおける強力な抗ウイルス剤であり、ウイルス生活環のこの段階を中断することは、結果として治療的活性剤であることを示す。結果として、それは、創薬の魅力的な標的である。
【０００８】
現在のところ、満足のいく抗ＨＣＶ剤または処置法は存在しない。最近まで、ＨＣＶ疾患の確立された治療は、インターフェロン処置のみであった。ＨＣＶ感染のための最初に認可された治療は、標準（非ペグ化）インターフェロンαを用いる処置であった。しかしながら、インターフェロンは、重大な副作用を有し（例えば、M. A. Wlaker et al., “Hepatitis C Virus: An Overview of Current Approaches and Progress,” DDT, 4, pp. 518−29 (1999)；D. Moradpour et al., “Current and Evolving Therapies for Hepatitis C,” Eur. J. Gastroenterol. Hepatol., 11, pp. 1199−1202 (1999)；H. L. A. Janssen et al. “Suicide Associated with Alfa−Interferon Therapy for Chronic Viral Hepatitis,” J. Hepatol., 21, pp. 241−243 (1994)；P.F. Renault et al., “Side Effects of Alpha Interferon,” Seminars in Liver Disease, 9, pp. 273−277. (1989)参照）、長期寛解は症例の一部のみ(〜２５％)である（例えば、O. Weiland, “Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection”, FEMS Microbiol. Rev., 14, pp. 279−288 (1994)参照）。該処置レジメンへのリバビリンの追加は、応答率をわずかに増加させる。リバビリンと併用されている、最近のペグ化インターフェロン（ＰＥＧ−イントロン（登録商標）およびＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標））の導入は、寛解率のごく限られた改善および副作用の一部分のみの減少という結果となっている。現在の標準的な治療は、ＨＣＶ遺伝子型のような予後因子、および治療への初期応答の現れに依存して、２４−４８週間継続する処置レジメンである。さらに、有効な抗ＨＣＶワクチンの見込みは、不明確なままである。
【０００９】
故に、抗ＨＣＶ治療および抗ＨＣＶ化合物に適当な用量レジメンが必要である。
【００１０】
ＨＣＶならびに他の疾患および障害は、肝臓障害と関係がある。治療法および肝臓障害を処置するのに適当な用量レジメンも必要である。
【発明の概要】
【００１１】
発明の概要
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス感染の処置法を提供する。故に、本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス感染の臨床的続発症の予防法を提供する。
【００１２】
本発明はまた、肝臓障害および肝炎の処置法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１Ａおよび図１Ｂは、用量レベルによる平均濃度時間プロフィールを示す（実施例３）。
【図２】図２Ａ−２Ｄは、誘導された薬物動態パラメーターを示す。棒グラフ内の線は中央値を示し、棒グラフは、データの中央半分の範囲を示す（実施例３）。
【図３】図３は、１４日間の試験期間中のＨＣＶ ＲＮＡの血漿濃度(IU／mL)を示す（実施例５）。
【図４】図４は、１４日間の試験期間中のベースラインと比べたＨＣＶ ＲＮＡの血漿濃度(IU／mL)の変化を示す（実施例５）。
【図５】図５は、７５０mg、８時間毎の投与群における、個々の対象についての１４日間の試験期間中のベースラインと比べたＨＣＶ ＲＮＡの血漿濃度(IU／mL)の変化を示す（実施例５）。
【図６】図６は、全ての投与群におけるネオプテリン、ＡＬＴ（アラニンアミノ転移酵素）、およびＨＣＶ ＲＮＡの平均値±ＳＥＭを示す。以下の記号を図６において用いる：平均ＡＬＴレベル±ＳＥＭ（上、白抜き記号の４本線）、ネオプテリン平均血漿濃度±ＳＥＭ（中、白抜き記号の４本線）、および平均血漿ＨＣＶ ＲＮＡ負荷±ＳＥＭ（下、黒塗り記号の４本線）におけるベースラインからの変化を、３つ全ての投与群およびプラセボについて示す。患者を、ＶＸ−９５０で１４日間処置した。＊４５０mg、８時間毎の群における１２日目の平均ＡＬＴレベルの一過性増加は、アーチファクトである（１０症例中５症例には見られなかった、中央値３８U／l、範囲２５−１２５U／l）（実施例５）。
【図７】図７は、全ての群における平均ネオプテリン値±ＳＥＭを示す。３つ全ての投与群およびプラセボについての、処置前、７日目および１４日目のネオプテリン平均血漿濃度±ＳＥＭ。平均ネオプテリンの減少は、処置前に最高値であり、１４日目に最低の平均値を示す、７５０mg、８時間毎の投与群で最大であることに留意すべきである。７５０mg、８時間毎の投与群において、ベースラインおよびプラセボと比較したネオプテリンの減少は、１４日目に最大となった（＊対応のない両側ｔ検定、＊＊Mann Whitney検定）。Ｙ＝７．７nmol／lの横破線は、ＵＬＮを示す（実施例５）。
【００１４】
図８、９および１０は、ＨＣＶ ＮＳ３／４ＡプロテアーゼによるＴＲＩＦ（ＴＬＲ３アダプタータンパク質）のインビトロ切断が、ＶＸ−９５０により阻害されることを示す。
【図８】図８（ＩＦＮ−β、ＴＲＩＦまたはＴＩＣＡＭ−１を誘導するアダプターを含むtoll−IL1受容体ドメイン）は、種々のタンパク質結合ドメインを示すＴＲＩＦの略図を示す。Ｃｙｓ３７２でのＨＣＶ ＮＳ３ プロテアーゼによるＴＲＩＦ切断により、２つの断片：ΔＣ３４０およびΔＮ３７２が生じる（Li et al 2005, PNAS, 102, p2992−2997の改訂版）。
【図９】図９は、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼによるＴＲＩＦ切断の速度（kinetics）を示す。３５Ｓメチオニン標識結合ＴＲＩＦタンパク質インビトロ転写／翻訳産物（基質として）を、０−２４０分の範囲の種々の時間、６μＭのｔＮＳ３ プロテアーゼと共にインキュベートし、次いでＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。ゲルを、切断産物を定量するために、phosphorimagerに暴露した。ΔＮ３７２切断産物の定量を、時間関数として図中に示す。
【図１０】図１０は、ＮＳ３ プロテアーゼ依存的ＴＲＩＦ切断およびＶＸ−９５０によるＴＲＩＦ切断の阻害を示す。３５Ｓメチオニン標識結合ＴＲＩＦタンパク質インビトロ転写／翻訳産物（基質として）を、１０μＭ ＶＸ−９５０の存在下（○）または不存在下（□）のどちらかで、０−４μＭの範囲のｔＮＳ３ プロテアーゼ酵素の増加濃度下でインキュベートし、次いでＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、phosphorimagerに暴露した。ΔＮ３７２切断産物の定量を、図に示す。
【図１１】図１１は、ＶＸ−９５０耐性変異体のインビトロでの表現型の特徴を示す。野生型プロテアーゼと比較してＶＸ−９５０に対する増加した耐性が、インビトロ酵素反応（Ｋｉ）または２日間のレプリコンアッセイ（ＩＣ５０）において、Ａ１５６Ｖ／Ｔ変異により得られた。野生型酵素と比較した変異体のＫｃａｔ／Ｋｍ比を、表に示す(Lin et al 2005, JBC, 280, p36784−36791の改訂版)。
【図１２】図１２は、野生型（ＷＴ）ＮＳ３プロテアーゼと比較したＡ１５６Ｖ／Ｔ変異体によるＨＣＶ ４Ａ／Ｂ基質の切断を示す：３５Ｓメチオニン標識結合した、４Ａ／Ｂ結合点を間に有するＳＥＡＰタンパク質と融合した不活性化ＨＣＶ変異プロテアーゼのインビトロ転写／翻訳産物（基質として）を、０．００８μＭないし６μＭの範囲の野生型（ＷＴ）（□）またはＡ１５６Ｖ／Ｔ（△および○）ｔＮＳ３ プロテアーゼのどちらかの変化量と共にインキュベートし、次いでＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、phosphorimagerに暴露した。ΔＮ３７２切断産物の定量を、図に示す。
【図１３】図１３は、野生型（ＷＴ）ＮＳ３プロテアーゼと比較したＡ１５６Ｖ／Ｔ変異体によるＴＲＩＦ基質の切断を示す。３５Ｓメチオニン標識結合ＴＲＩＦのインビトロ転写／翻訳産物（基質として）を、０．００８μＭないし６μＭの範囲の野生型（ＷＴ）（□）またはＡ１５６Ｖ／Ｔ（△および○）ｔＮＳ３プロテアーゼのどちらかの変化量と共にインキュベートし、次いでＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、phosphorimagerに暴露した。ΔＮ３７２切断産物の定量を、図に示す。
【００１５】
【図１４】図１４は、ベースライン、７日目、および１４日目における平均ＨＣＶ ＲＮＡ、ネオプテリンおよびＡＬＴを示す（実施例５）。
【図１５】図１５は、センダイウイルスで刺激したＨｕｈ７細胞におけるＨＣＶプロテアーゼによるＩＦＮ−βプロモーター活性の抑制を示す。Ｈｕｈ７細胞を、野生型（ＷＴ）または不活性変異体（ＭＴ）プロテアーゼのどちらかと、ＩＦＮ−βプロモーター制御下でルシフェラーゼ遺伝子を発現するプラスミドで共トランスフェクトし、次いでセンダイウイルス（ＳｅＶ）で刺激した。センダイウイルス非誘導性対照と比較したルシフェラーゼ遺伝子の活性化倍数を、この図に示す。
【図１６】図１６は、ＶＸ−９５０を用いる処理が、センダイウイルス刺激ＩＦＮ−βプロモーター活性に対するＨＣＶプロテアーゼの抑制効果を克服し得ることを示す。Ｈｕｈ７細胞を、野生型（ＷＴ）または不活性化変異体（ＭＴ）プロテアーゼのどちらかと、ＩＦＮ−βプロモーターの制御下でルシフェラーゼ遺伝子を発現するプラスミドで共トランスフェクトした。これらの細胞を、ＤＭＳＯ（対照）または１０μＭ ＶＸ−９５０のどちらかで処理した。細胞をセンダイウイルス（ＳｅＶ）で刺激し、ルシフェラーゼ活性を感染の１６時間後に測定した。センダイウイルス非誘導性対照と比較したルシフェラーゼ遺伝子の活性化倍数を、この図に示す。
【図１７】図１７は、ＶＸ−９５０処置が、ＨＣＶ治療に以前非応答性であった患者（図１７Ａ）および未処置患者（図１７Ｂ）においてＨＣＶ ＲＮＡの減少をもたらすということを示す。各処置レジメンにおける患者の平均ＨＣＶ ＲＮＡレベルを示す。血漿ＨＣＶ ＲＮＡ濃度を、Roche COBAS TaqMan HCV／HPS分析を用いて決定した。
【図１８】図１８は、本明細書に記載の種々の治療レジメンに対するＶＸ−９５０耐性変異体の表現型の特徴を示す。
【図１９】図１９は、処置期間中の図９０の野生型および耐性変異体の存在の概算を示す。
【図２０】図２０は、推定処置期間中の仮定したPeg−IFN／RBVの高い有効性プロットを示す。
【図２１】図２１は、推定処置期間中の仮定したPeg−IFN／RBVの低い有効性プロットを示す。
【図２２】図２２は、処置の８ないし１２週間後のウイルス再発生を示す。
【図２３】図２３は、ＳＶＲの推定処置期間を示す。
【図２４】図２４は、プラセボおよびPeg−IFN；ＶＸ−９５０；または、ＶＸ−９５０およびPeg−IFNの１４日間の投与期間；その後の、Peg−IFNおよびRBVが投与された期間と判断される４８週間のフォローアップ期間を含む実験の時間軸を示す。
【図２５】図２５は、１４日間の投与期間中、ＶＸ−９５０で処置した対象における迅速な抗ウイルス応答を示す。一般的に、用量レジメンの完了時、これらの処置した対象におけるＨＣＶ ＲＮＡレベルは、少なくとも２ｌｏｇ１０減少し、いくつかの場合には少なくとも４ｌｏｇ１０減少する。
【図２６】図２６は、１４日間の投与期間中、ＨＣＶ／Ｐｅｇ−ＩＦＮ−２αで処置した対象における個々のＨＣＶ ＲＮＡレベルを示す。一般的に、用量レジメンの完了時、これらの処置した対象におけるＨＣＶ ＲＮＡレベルは、少なくとも３ｌｏｇ１０減少し、いくつかの場合には少なくとも４ｌｏｇ１０減少する。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
発明の詳細な説明
本発明は、ＶＸ−９５０を投与するための特定の用量および投与量レジメンに関する。ＶＸ−９５０（テラプレビルとしても公知）は、７ｎＭの定常結合定数（ｋｉ＊）を有する競合性、可逆性ペプチド模倣性ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ阻害剤である。例えば、ＷＯ０２／０１８３６９参照。
【化１】
2014132015.tif 000002
【００１７】
本発明の目的のために、本明細書に記載の化合物“ＶＸ−９５０”は、その薬学的に許容される塩、プロドラッグおよび溶媒和物を包含する。
【００１８】
本明細書中で用いる語句、ＶＸ−９５０の“薬学的に許容される塩（塩類）”は、ＨＣＶ感染の処置に安全かつ有効なＶＸ−９５０の塩類を意味する。薬学的に許容される塩類には、ＶＸ−９５０中に存在する酸性基および塩基性基の塩類が含まれる。薬学的に許容される酸付加塩類には、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、過リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチアニン酸塩（gentisinate）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩（glucaronate）、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩が含まれるが、これらに限定されない。ＶＸ−９５０はまた、種々のアミノ酸と薬学的に許容される塩類を形成してもよく、これらのアミノ酸塩類の使用はまた、本発明の範囲内である。適当な塩基性塩類には、アルミニウム塩、カルシウム塩、リチウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、亜鉛塩、およびジエタノールアミン塩類が含まれるが、これらに限定されない。薬学的に許容される塩のレビューに関しては、Berge et al., J. Pharm. Sci., 66, 1−19 (1977)（その内容は、参照により本明細書中に包含される）を参照のこと。
【００１９】
本明細書で用いる語句、ＶＸ−９５０の“薬学的に許容されるプロドラッグ”は、ＨＣＶ感染の処置においてその薬理学的効果を示す前に、生理的条件下で、または加溶媒分解によりＶＸ−９５０に、またはＶＸ−９５０の薬学的に許容される塩に変換され得る化合物を意味する。典型的には、プロドラッグは、改善された化学安定性、改善された患者の許容性およびコンプライアンス、改善されたバイオアベイラビリティ、作用持続時間の延長、改善された臓器選択性、改善された製剤(例えば、増大した溶解性)、または減少した副作用(例えば、毒性)の目的で製剤される。薬学的に許容されるプロドラッグは、Burger's Medicinal Chemistry and Drug Chemistry, Vol. 1, 172−178および949−982, John Wiley ＆ Sons (1995)に記載の方法のような、当技術分野で公知の方法を用いてＶＸ−９５０から容易に製造され得る。Bertolini et al., J. Med. Chem., 40, 2011−2016 (1997); Shan et al., J. Pharm. Sci., 86(7), 765−767 (1997); Bagshawe, Drug Dev. Res., 34, 220−230 (1995); Bodor, Advances in Drug Res., 13, 224−331 (1984); Bundgaard, Design of prodrugs, Elsevier Press (1985); および、Larsen, Design and Application of prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen et al., eds.), Harwood Academic Publishers (1991)も参照。
【００２０】
本明細書で用いる語句、ＶＸ−９５０の“薬学的に許容される溶媒和物”は、溶媒分子(複数可)を含み、ＶＸ−９５０の生物学的有効性を保持する、ＶＸ−９５０の薬学的に許容される溶媒和物形態を意味する。溶媒和物例には、ＶＸ−９５０と、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、DMSO、酢酸エチル、酢酸またはエタノールアミンの組み合わせが含まれる。
【００２１】
固体であるＶＸ−９５０の塩類、プロドラッグ類または溶媒和物類の場合、これらの塩類、プロドラッグ類および溶媒和物類は、異なる結晶形またはアモルファス形態で存在していてよいことは当業者に理解され、それら全ての使用もまた、本発明の範囲内である。
【００２２】
ＶＸ−９５０は、１個以上の不斉炭素原子を含んでいてよく、故に、ラセミ体およびラセミ混合物、単一エナンチオマー、ジアステレオマー混合物および個々のジアステレオマーとして存在し得る。これらの化合物の全てのそのような異性体形態は、本発明に明示的に包含される。各立体中心の炭素は、ＲまたはＳ配置であり得る。ＶＸ−９５０のＮ−プロピル側鎖におけるＤ−およびＬ−異性体は、本発明の範囲内に明示的に包含される。
【００２３】
ＶＸ−９５０は、ヒトにおいて単回用量で試験され、良好な耐容性であることが見出された(実施例３)。有害事象の発生または程度は、ＶＸ−９５０用量と共に増加しなかった。重症（グレード３またはグレード４）であると見なされた有害事象はなかった。より一般的かつ重度の有害事象は、皮膚の有害事象(例えば、吹き出物、および掻痒)、その後の消化管事象および貧血であった。血液学または臨床化学パラメーターについては、ベースライン実験値から臨床的に顕著な変化はなかった。試験した対象は全て、身体検査、バイタルサイン、または心電図に臨床的に顕著な変化はなかった。
【００２４】
本発明者らは、野生型ＨＣＶが、ＶＸ−９５０により１０週間以内に根絶され得ることを発見した。ＨＣＶのＶＸ−９５０耐性変異体(ＩＣ50の７−２０倍の増大を有する)に関して、それらは、１０−２４週間のPeg−IFN／RBV用量レジメンのフォローアップにより根絶され得る。
【００２５】
分析を、ＶＸ−９５０の薬物動態学的プロフィールを決定するために行った。データを図１および図２に示す。
【００２６】
ＶＸ−９５０への肝臓暴露を、統合した前臨床および臨床データを基に、予測した。予測したヒト肝臓暴露を、良好な耐容性見込まれ、治療上有用性が生じる用量を決定するために、ＶＸ−９５０レプリコンアッセイおよび感染性ウイルスアッセイの結果と合わせた。予測した平均肝臓濃度値は、試験した用量範囲で、レプリコンアッセイＩＣ９０の５７倍まで、レプリコンアッセイＩＣ５０の１１３倍までであった。
【００２７】
これらの結果は、本発明の用量レジメンが、非臨床試験で決定したＩＣ５０およびＩＣ９０を大幅に超過してＶＸ−９５０の肝臓濃度を達成し得ることを示す。
【００２８】
従って、本発明の一態様は、ＶＸ−９５０および薬学的に許容される担体をそれぞれ含む医薬組成物を提供する。これらの医薬組成物中のＶＸ−９５０の量は、約１００mgないし約１５００mg、約３００mgないし約１５００mg、約３００mgないし約１２５０mg、約４５０mg、約７５０mg、または約１２５０mgであり得る。これらの医薬組成物はそれぞれ、例えば１日１回、２回または３回投与され得る。これらの組成物はそれぞれ、１種以上の投与形態(例えば、アンプル、カプセル、クリーム、エマルジョン、液体、粒子、液滴、注入液、懸濁液、錠剤、粉末)であり得る。これらの医薬組成物はそれぞれ、当業者に適当と見なされ、かつ投与形態によって変わる１種以上の経路(例えば、経口、注入、注射、局所的または非経腸的)により投与され得る。
【００２９】
本発明の別の局面は、患者のＨＣＶ感染を処置または予防する方法であって、患者にＶＸ−９５０を投与することを含む方法を提供する。
【００３０】
いくつかの態様において、ＶＸ−９５０の量は、少なくとも約３００mg(例えば、少なくとも約４５０mg、少なくとも約５００mg、少なくとも約７５０mg、少なくとも約１２５０mg、または少なくとも約１５００mg)である。いくつかの態様において、ＶＸ−９５０の量は、約１５００mgを超えない(例えば、約１２５０mgを超えない、約７５０mgを超えない、約４５０mgを超えない、約５００mgを超えない、または約３００mgを超えない)。
【００３１】
上記の下限量および上限量は、ＶＸ−９５０の投与のための用量範囲を提供するために組み合わせ得ると理解されるはずである。例えば、ある態様において、ＶＸ−９５０は、約３００mgないし約１２５０mgまたは約３００mgないし約１５００mgの量で投与される。
【００３２】
いくつかの態様において、ＶＸ−９５０は、約４５０mg、約５００mg、約６００mg、約７５０mg、約１０００mg、または約１２５０mgの量で投与される。
【００３３】
本発明の方法において、一定量のＶＸ−９５０は、例えば１日１回、１日２回(例えば、BID；１２時間毎)、または１日３回(例えば、TID；８時間毎)投与され得る。さらに、ＶＸ−９５０を食事と共にまたは別に投与し得る。
【００３４】
ＶＸ−９５０は、ヒトにおいて試験され、ＨＣＶ複製を阻害すること、ＨＣＶ ＲＮＡレベルを十分減少すること、およびウイルスＲＮＡが検出不可能になるようにウイルスを阻害することに有効であることを見出された。
【００３５】
７５０mgのＶＸ−９５０を８時間毎(q8h)に受容する８名の対象の内、４名は、定量限界未満（ＬＬＱ ３０IU／mL）のＨＣＶ ＲＮＡレベルを有し、４名のうち２名の対象は、検出限度未満（ＬＬＤ １０IU／mL）のＨＣＶ ＲＮＡレベルを有した。
【００３６】
ＨＣＶ ＲＮＡ検出を、例えば、Roche molecular Diagnosticsにより市販されるRoche COBAS TaqMan HCV／HPS アッセイを用いることにより行い得る。７５０mgのＶＸ−９５０を８時間毎に１４日間受容する対象（または、患者）は、ＨＣＶ−ＲＮＡの４ｌｏｇ１０より大きな平均減少（すなわち、１０，０００倍の低下）を処置後に達成した。ＨＣＶ−ＲＮＡの２ｌｏｇ１０より大きな平均減少が、１４日間の処置後に、他の２つのＶＸ−９５０用量群のそれぞれで見られた。ＶＸ−９５０を受容する各対象は、ＨＣＶ−ＲＮＡの２ｌｏｇ１０より大きな減少を処置の最初の３日以内に達成し、ＶＸ−９５０を受容する２８名の対象のうち２６名が、処置の最初の３日以内に、ＨＣＶ−ＲＮＡを３ｌｏｇ１０減少した。実施例５および図３−５を参照のこと。
【００３７】
血漿ウイルス量が、ＶＸ−９５０で処置された患者において迅速に減少すること、および、投与終了後、ＨＣＶ ＲＮＡのベースラインレベルにゆっくりと戻ることが証明された。特に、処置終了後にＨＣＶ ＲＮＡベースラインレベルに戻る速度は、処置によるＨＣＶ ＲＮＡの減少速度よりゆっくりであった。検出不可能なＨＣＶ ＲＮＡレベルに達することと合わせてこれらの結果は、単剤療法としてのＶＸ−９５０の有効性を示す。
【００３８】
従って、本発明は、ＶＸ−９５０を、（ａ）約４５０mg、１日３回、８時間毎；（ｂ）約７５０mg、１日３回、８時間毎；（ｃ）約１２５０mg、１日２回、１２時間毎；または、（ｄ）約１２５０mg、１日３回、８時間毎の量で、患者に投与することを含む、ＨＣＶに感染した患者の処置方法を提供する。
【００３９】
本発明の別の局面は、患者のＨＣＶ ＲＮＡレベルが、処置前より処置後のほうが、少なくとも約２ｌｏｇ１０（好ましくは、少なくとも約４ｌｏｇ１０）低くなるように、ＶＸ−９５０を投与することによりＨＣＶに感染した患者を処置する方法を提供する。
【００４０】
本発明のさらに別の局面は、患者のウイルスＲＮＡレベルが検出不可能なレベルに減少し、“持続的ウイルス応答（ＳＶＲ：ウイルス排除）”が達成されるまで検出不可能なレベルのままであるように、ＶＸ−９５０を投与することによりＨＣＶに感染した患者を処置する方法を提供する。本明細書で用いる用語“持続的ウイルス応答”は、投与完了後（または、ＶＸ−９５０投与の終了後）２４週間、ウイルスＲＮＡレベルが検出不可能なままであることを意味する。
【００４１】
７５０mgのＶＸ−９５０を８時間毎に用いる本発明の方法は、より高いトラフ濃度を効果的にもたらす。本明細書で用いる用語“トラフ濃度”は、次回投与直前の血漿中の薬剤濃度、または２用量間の最低薬剤濃度を意味する。特にウイルス性疾患において、ウイルス複製を阻害するのに適する濃度に維持するために上記の任意の濃度に薬剤レベルを維持することは、重要である。有利には、本発明者らは、７５０mgのＶＸ−９５０を、１日３回、８時間毎に投与する用量レジメンが、ＶＸ−９５０の最高トラフ濃度をもたらすことを発見した。
【００４２】
従って、好ましい態様において、本発明は、ＶＸ−９５０を、それを必要とする患者に約７５０mgを１日３回、８時間毎に投与することを含む方法を提供する。
【００４３】
フレキシブルな投与スケジュールが都合よいことは、認められるであろう。従って、本発明の別の態様において、該投与は１日３回であるが、８時間毎ではなく、要すれば食事と共に投与する。ある態様において、ＶＸ−９５０は、食事と共に投与される。
【００４４】
本発明はまた、ＶＸ−９５０を、それを必要とする患者に提供する方法であって、ＶＸ−９５０を含む組成物の経口用量を該患者に投与することを含む（ここで、該用量は、該患者に対して、投与後に少なくとも約７５０ng／mLのＶＸ−９５０の平均血漿濃度（Ｃａｖｇ）を供する。）、それを必要とするヒトにＶＸ−９５０を供するための方法を提供する。ある態様において、ＶＸ−９５０のＣａｖｇは、約１０００ng／mLまたは約１２５０ng／mLである。ある態様において、該用量は本質的に、７５０mgのＶＸ−９５０を含む。ある態様において、該Ｃａｖｇは、ＶＸ−９５０の投与後３時間以内（例えば、２時間または１時間以内）に得られるか、または達せられる。ある態様において、ＶＸ−９５０のＣａｖｇは、約２４時間以上（例えば、５週間または１２週以上）維持される。
【００４５】
別の局面において、本発明は、２４時間の間、血漿ＶＸ−９５０を約７５０ng／mLの最低トラフ濃度に維持するために、ＶＸ−９５０を含む少なくとも１個の投与形態を２４時間かけて投与すること（ここで、該投与形態は、投与される。）により患者におけるＨＣＶ感染を処置する方法を提供する。
【００４６】
ある態様において、該投与形態を、２４時間の間、血漿ＶＸ−９５０を、約８００ng／mL（例えば、約９００ng／mLまたは約１０００ng／mL）の最低トラフ濃度に維持するために投与する。
【００４７】
ある好ましい態様において、治療的有効血漿濃度が得られ、あるトラフ濃度が維持される。これらの方法は、特に、ＶＸ−９５０製剤を投与することによりＨＣＶ感染を有するヒトを処置するのに有用であり、ここで、該ＶＸ−９５０の血漿中トラフ濃度は、２４時間の間、約７５０ng／mL、８００ng／mL、９００ng／mLまたは１０００ng／mLの最低レベルに維持される。理論はともかく、約１５００ng／mLより大きいトラフ濃度は、本発明に必要とされないと考えられる。従って、約７５０、８００、９００、１０００ng／mLないし約１５００ng／mL（特に、１０００ないし約１５００）のトラフ濃度は、本発明の範囲内である。
【００４８】
また、ＶＸ−９５０をヒトに送達するためのＶＸ−９５０を含む投与形態であって、該投与形態が２４時間の間に少なくとも１回投与されるとき、ＶＸ−９５０の血漿中トラフ濃度が、２４時間の間、少なくとも約７５０ng／mL、８００ng／mL、９００ng／mL、または１０００ng／mLないし、２４時間の間、約１５００ng／mL（特に、１０００ng／mLないし約１５００ng／mL）に維持される投与形態も提供する。
【００４９】
理想的には、本発明の方法が、ＨＣＶに感染した患者を処置することを包含するとき、本方法は、ＶＸ−９５０の治療的に有効な血漿濃度を比較的迅速に達成し、その後、効果的な治療応答を達成するようにトラフ濃度を維持することを含む。効果的な治療応答とは、好ましくは、ａ）持続的ウイルス応答を達成すること；そして、ｂ）少なくとも１２週間（１２週間またはそれ以上）、検出不可能な血漿中ＨＣＶ ＲＮＡを達成すること、の一方または両方である。本明細書中で用いる、ＨＣＶ ＲＮＡについての“検出不可能”とは、ＨＣＶ ＲＮＡが、現在商業的に利用可能なアッセイにより決定される、好ましくは、Roche COBAS TaqMan（商標） HCV／HPSアッセイにより決定される、１０IU／mL未満であることを意味する。
【００５０】
血漿濃度の比較的迅速な低下は、患者に負荷用量を投与することにより得られ得る。一態様において、負荷用量は、約１２５０mgのＶＸ−９５０である。
【００５１】
本発明のある投与形態において、（負荷用量を投与するために用いられる投与形態以外の）投与形態には、約７５０mgのＶＸ−９５０が含まれ、該投与形態は、８時間毎に１回(すなわち、q8h)投与される。
【００５２】
ある態様において、ＶＸ−９５０投与形態は、８時間毎に１回投与される。
【００５３】
ある態様において、ＶＸ−９５０を用いる処置期間は、現在の標準的な治療よりも短い。
【００５４】
ある態様において、ＶＸ−９５０は、約１２週間未満(または、１２週間未満)の間投与される。
【００５５】
ある態様において、ＶＸ−９５０は、約８−１２週間(または、８−１２週間)の間投与される。
【００５６】
ある態様において、ＶＸ−９５０は、約１０週間(または、１０週間)の間投与される。
【００５７】
図９０−９３に示す通り、データモデルは、ＶＸ−９５０の投与が、野生型ウイルスを１０週間以内に根絶し得ることを示す。
【００５８】
ある態様において、ＶＸ−９５０は、約１０週間未満の間投与される。
ある態様において、ＶＸ−９５０は、約２週間投与される。
【００５９】
本発明者らは、ＳＶＲが、２週間のＶＸ−９５０処置を受容する患者において達成されることを証明した。
【００６０】
他の態様において、ＶＸ−９５０は、約８週間未満(または、約８週間もしくは８週間)、約６週間未満(または、約６週間もしくは６週間)、または約４週間未満(または、約４週間もしくは４週間)の間投与される。
【００６１】
ある態様において、本発明の方法は、遺伝子型１型のＣ型肝炎ウイルスに感染した患者の処置を含む。遺伝子型１型のＨＣＶ感染は、治療するＨＣＶの最も困難な株および米国で最も蔓延している株である。
【００６２】
本発明者らはまた、ＶＸ−９５０の投与が、ネオプテリンおよびＡＬＴ（血清アラニンアミノ基転移酵素）レベルをインビボで減少させることを証明した（図６、図７および図１４）。ＡＳＴ（アルパラギン酸アミノ基転移酵素）レベルもまた、ＶＸ−９５０の投与により減少した。ＡＬＴは、肝臓細胞に存在する酵素であり；肝臓細胞が、損傷を受けるかまたは炎症を起こすとき、ＡＬＴが細胞から血中へ流れ出す。血中ＡＬＴレベルは、肝炎または肝臓損傷のマーカーとして有用である。Tatyana Yashina ＆ J. Sanders Sevall, “Hepatitis C Virus” in Use and Interpretation of Laboratory Tests in Gastroenterology, James B. Peter, ed., p. 127, (1998)；および、Andres T. Blei, “Liver and Biliary Tract” in Laboratory Medicine, D. A. Noe and Robert C. Rock, eds., ch. 19, p. 363 (1994)を参照のこと。
【００６３】
ネオプテリン（６−ｄ−エリスロ−トリヒドロキシプロピルプテリジン）は、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）の代謝中に産生されるプテリジン誘導体である。ネオプテリンは、インターフェロンγまたはインターフェロンαによる活性化により単球およびマクロファージによって最初に産生され、炎症のマーカーである。ネオプテリンレベルは、しばしば、慢性的ＨＣＶ感染において上昇する（Quiroga, et al. Dig Dis Sci 1994;39(11): 2485−96)。健康な個体において予期されるネオプテリンの血漿レベルは、３．１ないし７．７nmol／lである。
【００６４】
従って、本発明者らは、単球／マクロファージ活性のマーカーとして、（ＨＣＶ）ＮＳ３・４Ａプロテアーゼの阻害剤の投与期間中の血清ネオプテリン濃度の変化を決定した。本明細書で記載の通り、ＶＸ−９５０を、遺伝子型１型のＨＣＶに感染した３４名の患者における、無作為化、二重盲検、プラセボ対照、多数回投与試験において１４日間投与した（表１）。患者は、ＶＸ−９５０を、４５０mg、８時間毎（ｎ＝１０）、７５０mg、８時間毎（ｎ＝８）、１２５０mg、１２時間毎（ｎ＝１０）、またはプラセボ（ｎ＝６）を受容した。血清ネオプテリン濃度を、定量的競合ＥＬＩＳＡ（ELItest（登録商標） Neopterin, Brahms, Hennigsdorf, Germany)により、処置前、処置７日目、１４日目、および処置後１０日目に測定し得る。検出の下限値（ＬＬＤ）は、２nmol／lであった。ＨＣＶ ＲＮＡを、リアルタイムＰＣＲ (COBAS（登録商標） TaqMan ＨＣＶ検定；３．０×１０１から２．０×１０８ ＨＣＶ ＲＮＡ IU／mlの線形ダイナミックレンジ；１０ ＨＣＶ ＲＮＡ IU／mlのＬＬＤ；Roche Diagnostics, Branchburg, NJ)により、試験中頻繁に評価した。
【００６５】
ＶＸ−９５０の投与期間中、各患者は、全ての用量群においてウイルス量が少なくとも２ｌｏｇ１０低下することを証明した。７５０mg、８時間毎の用量群において、平均ＨＣＶ ＲＮＡは、３日目に３．６ｌｏｇ１０低下し、１４日目に４．３ｌｏｇ１０低下した。４５０mg、８時間毎、および１２５０mg、１２時間毎の用量群において、最大効果は、３日目から７日目に見られ、その後、７日目から１４日目の間に平均ウイルス量が増加した。平均ウイルス量は、全ての用量群において、フォローアップ中に増加した。有利なことに、ＨＣＶ未処置患者および以前処置した患者の両方において、本発明の方法が有効である。図１７Ａおよび図１７Ｂに示す通り、以前処置した患者および未処置患者の両方が、ＶＸ−９５０に応答した。疑いを避けるために、本発明の方法で処置され得る患者には、ＨＣＶ処置が、試されなかった患者か、または、非応答、リバウンド、再発および進行した患者を含む、処置に失敗した患者が含まれる。
【００６６】
ネオプテリンベースラインは、２３／３４名の患者で上昇した（平均９．３３nmol／l；正常上限（ＵＬＮ）７．７nmol／l）。７５０mgの用量群において、ベースラインおよびプラセボと比較したネオプテリンの減少は、１４日目に顕著となった（７５０mg、８時間毎の用量群のベースライン 対 １４日目が、１０．４８±０．８４nmol／L 対 ７．３２±０．４８nmol／L、Ｐ＝０．０１０４、マンホイットニー検定；７５０mg、８時間毎の用量群 ｖ プラセボ、１４日目 ７．３２±０．４８nmol／l ｖ ９．８１±１．３６nmol／l Ｐ＝０．００３６、対応のない両側ｔ検定）。平均ネオプテリンレベルは、７５０mg、８時間毎の用量群においてのみ、１４日目にて正常値内であった（図７および図１４）。４５０mg、８時間毎の用量群、および１２５０mg、１２時間毎の用量群において、平均ネオプテリンレベルの減少は、より小さかった（図６、７、および１４）。平均ネオプテリンレベルは、プラセボ群で変化しなかった（図６および図７）。平均ネオプテリンレベルは、フォローアップ中に全ての用量群で増加した。
【００６７】
血清アラニンアミノ基転移酵素(ＡＬＴ)レベルは、市販されている方法を用いて測定可能である。平均ＡＬＴレベルは、ベースライン時に高く、全ての群にて投与中に減少した（図６）。平均ＡＬＴレベルは、フォローアップ中に全ての用量群で増加し、ベースラインに戻った。
【００６８】
ＨＣＶ ＲＮＡは、４５０mgの用量群、および１２５０mgの用量群で７日後に増加するが、ネオプテリンおよびとりわけＡＬＴは、減少し続ける。平均ネオプテリン濃度の変化は、ＶＸ−９５０の投与中のＨＣＶ ＲＮＡおよびＡＬＴレベルの減少と関係があった。平均ネオプテリン濃度は、７５０mg、８時間毎の用量群において１４日目に最大に減少した。これはまた、１４日目に、ＨＣＶ ＲＮＡの最大の減少を有する用量群でもあった。４５０mg、８時間毎、および１２５０mg、１２時間毎の用量群において７日目の後、ＡＬＴおよびネオプテリンレベルは減少したが、ＨＣＶ ＲＮＡレベルは増加した。これらのデータは、ＶＸ−９５０によるＨＣＶ複製の阻害が、結果としてウイルス感染と関係のある全身性炎症性活性の著しい減少となることを示唆する。
【００６９】
ＶＸ−９５０はまた、動物モデルにおいて高ＡＬＴレベルを改善する（ＷＯ２００５／０２５５１７を参照）。特に、ＳＣＩＤマウスにおけるＷＴ−ＨＣＶプロテアーゼ−ＳＥＡＰの発現は、ＶＸ−９５０で処置することにより改善される高ＡＬＴレベルをもたらす。ＳＣＩＤマウスにおけるＷＴ−ＨＣＶプロテアーゼのみの発現は、ＡＬＴレベルの時間および用量依存的上昇ももたらす。
【００７０】
従って、本発明は、患者においてＡＬＴレベルを低下する（正常化することを含む）方法を提供する。該方法は、治療的有効量のＶＸ−９５０ (例えば、１日当たり約１３５０mg、約２２５０mg、または約２５００mg)を、それを必要とする患者に投与することを含む。患者は、ＨＣＶに感染していても、ＨＣＶに感染していなくてもよい。
【００７１】
ある態様において、ＶＸ−９５０は、１日当たり、約４５０mgもしくは約７５０mgを８時間毎、または約１２５０mgを１２時間毎投与される。
【００７２】
本発明の別の局面は、ＨＣＶ陽性またはＨＣＶ陰性のどちらかである患者において、肝臓障害、肝炎、脂肪症、脂肪肝、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、アルコール性脂肪症、およびライ症候群の１種以上を処置または予防するための方法を提供する。
【００７３】
本発明はまた、ＨＣＶ陽性または陰性のどちらかである患者における、肝臓保護（hepatoprotection）のための方法も、本発明の範囲内である。
【００７４】
本発明者らはまた、ＶＸ−９５０が、インビトロで免疫回避を阻止することを証明した。
【００７５】
ＶＸ−９５０は、センダイウイルス感染Ｈｕｈ７細胞におけるＩＦＮβ依存的遺伝子発現を元に戻す。ＩＦＮβプロモーター活性は、ＷＴ ＨＣＶｐｒｏの存在下で、センダイウイルス刺激に応答して減少する。ＶＸ−９５０は、ＷＴ ＨＣＶｐｒｏが仲介するＩＦＮβプロモーター活性化の抑制を克服する。図１５および図１６参照。
【００７６】
さらに、ＮＳ３／４Ａは、例えば、ＴＲＩＦ依存的機序（ならびに、ウイルスポリタンパク質プロセシング）により、先天的防御の回避を伴うことが知られている。この免疫回避は、ウイルスの存続をもたらす。従って、ウイルスポリタンパク質プロセシングおよび先天的防御の回避の両方を阻害する化合物が望ましい。有利には、ＶＸ−９５０は、該その両方を行うことが示されている。特に、ＶＸ−９５０は、インビトロで、ＴＬＲ３アダプタータンパク質であるＴＲＩＦの切断を阻害する。図８−１０。
【００７７】
理論はともかく、モデル化は、ＶＸ−９５０が、ＮＳ３プロテアーゼによるＴＲＩＦ切断を阻害することを示唆する。ＴＲＩＦは、ＮＳ３プロテアーゼ活性部位の非プライム（non−prime）側に結合する。ＶＸ−９５０は、ＴＲＩＦと、同じ活性部位の非プライム側に結合し、ＴＲＩＦ切断を阻止する。
【００７８】
２種のＶＸ−９５０ウイルス変種、Ａ１５６ＴおよびＡ１５６Ｖが、ＴＲＩＦまたは４Ａ／４Ｂのどちらかを切断する能力の低下を示すことが示されている（C. Lin et al. “In Vitro Studies of Cross−resistance Mutations Against two Hepatitis C Virus Serine Protease Inhibitors VX−950 and BILN 2061”, J. Biol. Chem., (August 8, 2005)）。これらのウイルス変種は適合性が小さいため、それらはウイルスポリタンパク質プロセシングおよびウイルスの存続の両方に影響しない。理論は別にして、これは、４Ａ／４ＢおよびＴＲＩＦ基質に結合して影響を与えるＡ１５６Ｖの立体障害と関係する。図１１−１３参照。
【００７９】
これは、ＶＸ−９５０が、直接的抗ウイルス剤および免疫回避の阻害剤の両方として作用することを示す。従って、本発明はまた、ＨＣＶプロテアーゼが仲介する宿主の防御の回避を阻害する方法を提供する。
【００８０】
本明細書中で開示されるインビボデータと共にこれらの結果は、単剤療法としてのＶＸ−９５０の有効性を示す。
【００８１】
本発明のＶＸ−９５０の量は、単一投与形態または２つ以上の投与形態で投与される。分割投与形態であるとき、各投与形態は、ほぼ同時に投与される。疑いを避けるために、１日２回以上の投与を求める投与レジメンについては、１個以上の丸剤または用量が、１日当たり各回で投与され得る（例えば、１個の丸剤を１日３回、または３個の丸剤を１日３回）。本発明の最も好ましい態様は、１回の投与につき少なくとも２個の丸剤を用い得る。
【００８２】
当業者に実施可能なように、本発明の方法が患者の予防的処置に用いられ、その患者がＣ型肝炎ウイルスに感染するとき、該方法は、その後感染を処置し得る。故に、本発明の一態様は、患者におけるＣ型肝炎感染の処置または予防方法を提供する。
【００８３】
Ｃ型肝炎に感染した患者の処置に加えて、本発明の方法は、Ｃ型肝炎の感染から患者を予防するために用いられ得る。従って、本発明の一態様は、本発明の組成物または投与形態を患者に投与することを含む、患者におけるＣ型肝炎ウイルス感染の予防方法を提供する。
【００８４】
本発明の方法はまた、免疫調節剤；抗ウイルス剤；ＨＣＶプロテアーゼの阻害剤（ＶＸ−９５０以外）；ＨＣＶ生活環の別の標的の阻害剤（ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ以外）；内部リボソーム侵入の阻害剤、広域的ウイルス阻害剤；または、シトクロムＰ−４５０阻害剤；または、それらの組み合わせ、から選択されるさらなる薬剤を含む別の成分の投与を含み得る。さらなる薬剤はまた、ウイルスの細胞侵入の阻害剤からも選択される。
【００８５】
従って、別の態様において、本発明は、ＶＸ−９５０および別の抗ウイルス剤、好ましくは抗ＨＣＶ剤を投与することを含む方法を提供する。そのような抗ウイルス剤には、α−、β−、およびγ−インターフェロンまたはチモシン、ＰＥＧ化誘導体化インターフェロン−α化合物、およびチモシンのような免疫調節剤；リバビリン、アマンタジン、およびテルビブジンのような別の抗ウイルス剤；Ｃ型肝炎プロテアーゼの他の阻害剤（ＮＳ２−ＮＳ３阻害剤およびＮＳ３−ＮＳ４Ａ阻害剤）；ヘリカーゼ、ポリメラーゼ、およびメタロプロテアーゼ阻害剤を含む、ＨＣＶ生活環における他の標的の阻害剤；内部リポソーム侵入の阻害剤；ＩＭＰＤＨ阻害剤のような広域的ウイルス阻害剤（例えば、ＶＸ−４９７、ＶＸ−１４８、および／またはＶＸ−９４４を含むが、それらに限定されない、米国特許第５，８０７，８７６号、同第６，４９８，１７８号、同第６，３４４，４６５号および同第６，０５４，４７２号ならびにＰＣＴ公報ＷＯ９７／４００２８、ＷＯ９８／４０３８１およびＷＯ００／５６３３１に記載の化合物；ならびにミコフェノール酸およびその誘導体）；または、上記のいずれかの組み合わせが含まれるが、それらに限定されない。
【００８６】
本発明の化合物と併用され得る他の薬剤（例えば、非免疫調節または免疫調節化合物）には、参照により本明細書中に包含されるＷＯ０２／１８３６９（例えば、２７３頁、９−２２行目、および２７４頁、４行目から２７６頁、１１行目、本開示は、参照により明確に本明細書中に包含される）に記載されるものが含まれるが、それらに限定されない。
【００８７】
種々の公開された米国特許出願に記載されるさらに他の薬剤が包含される。これらの刊行物は、本発明の方法、特に肝炎の処置方法においてＶＸ−９５０と併用し得る化合物および方法のさらなる教示を提供する。そのような方法および組成物は全て、本発明の方法および組成物と併用し得ると考えられる。簡単には、それらの刊行物の開示内容は、公開番号を参照することにより参照されるが、化合物の開示が、特に、参照により本明細書中に明確に包含されることは、注意されるべきである。そのような刊行物の例には、米国特許公開番号：ＵＳ２００４００５８９８２、ＵＳ２００５０１９２２１２、ＵＳ２００５００８０００５、ＵＳ２００５００６２５２２、ＵＳ２００５００２０５０３、ＵＳ２００４０２２９８１８、ＵＳ２００４０２２９８１７、ＵＳ２００４０２２４９００、ＵＳ２００４０１８６１２５、ＵＳ２００４０１７１６２６、ＵＳ２００４０１１０７４７、ＵＳ２００４００７２７８８、ＵＳ２００４００６７９０１、ＵＳ２００３０１９１０６７、ＵＳ２００３０１８７０１８、ＵＳ２００３０１８６８９５、ＵＳ２００３０１８１３６３、ＵＳ２００２０１４７１６０、ＵＳ２００４００８２５７４、ＵＳ２００５０１９２２１２、ＵＳ２００５０１８７１９２、ＵＳ２００５０１８７１６５、ＵＳ２００５００４９２２０、およびＵＳ２００５０２２２２３６が含まれる。
【００８８】
さらなる他の薬剤には、Human Genome Sciencesから市販されるアルブフェロン（商標）（アルブミン−インターフェロンα）；ＰＥＧ−イントロン（登録商標）(ペグ化インターフェロンα−２ｂ、Schering Corporation, Kenilworth, NJから市販される）；イントロン−Ａ（登録商標）（ＶＩＲＡＦＥＲＯＮ（登録商標）、インターフェロンα−２ｂ、Schering Corporation, Kenilworth, NJから市販されている）；リバビリン（1−β−D−リボフラノシル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド、ＩＣN Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, CAから市販される；the Merck Index, entry 8365, Twelfth Editionに記載される）；ＲＥＢＥＴＲＯＬ（登録商標）（Schering Corporation, Kenilworth, NJ）；コーペガス（登録商標）（Hoffmann−La Roche, Nutley, NJ）；ペガシス（登録商標）（ペグ化インターフェロンα−２ａ、Hoffmann−La Roche, Nutley, NJから市販される）；ロフェロン（登録商標）（組換えインターフェロンα−２ａ、Hoffmann−La Roche, Nutley, NJから市販される）；ＢＥＲＥＦＯＲ（登録商標）（インターフェロンα２、Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc., Ridgefield, CTから市販される）；スミフェロン（登録商標）（スミフェロンのような、精製物と天然のαインターフェロンの混合物、住友製薬、日本から市販される）；ウェルフェロン（登録商標）（インターフェロン α ｎ１、Glaxo Wellcome Ltd., Great Britainから市販される）；アルフェロン（登録商標）（Interferon Sciencesにより製造される天然αインターフェロンの混合物、およびPurdue Frederick Co., CTから市販される）；α−インターフェロン；天然αインターフェロン ２ａ；天然αインターフェロン ２ｂ；ペグ化αインターフェロン ２ａまたは２ｂ；コンセンサスαインターフェロン（Amgen, Inc., Newbury Park, CA）；レベトロン（登録商標）（Schering Plough、インターフェロン−α ２Ｂ＋リバビリン）；ペグ化インターフェロンα（Reddy, K.R. et al. “Efficacy and Safety of Pegylated (40−kd) Interferon alpha−2a Compared with Interferon alpha−2a in Noncirrhotic Patients with Chronic Hepatitis C”(Hepatology, 33, pp. 433−438 (2001)；コンセンサスインターフェロン（インファゲン（登録商標））（Kao, J.H., et al., “Efficacy of Consensus Interferon in the Treatment of Chronic Hepatitis” J. Gastroenterol. Hepatol. 15, pp. 1418−1423 (2000)；リンパ芽球様または“天然”インターフェロン；インターフェロン ｔａｕ（Clayette, P. et al., “IFN−tau, A New Interferon Type I with Antiretroviral activity” Pathol. Biol. (Paris) 47, pp. 553−559 (1999)；インターロイキン−２（Davis, G.L. et al., “Future Options for the Management of Hepatitis C.” Seminars in Liver Disease, 19, pp. 103−112 (1999)；インターロイキン−６（Davis et al. “Future Options for the Management of Hepatitis C.” Seminars in Liver Disease 19, pp. 103−112 (1999)；インターロイキン−１２（Davis, G.L. et al., "Future Options for the Management of Hepatitis C." Seminars in Liver Disease, 19, pp. 103−112 (1999)；および、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を増強する化合物（Davis et al., “Future Options for the Management of Hepatitis C.” Seminars in Liver Disease, 19, pp. 103−112 (1999))、が含まれるが、それらに限定されない。また、二本鎖ＲＮＡ単独、またはトブラマイシンおよびイミキモドとの組み合わせを含むが、これらに限定されない（3M Pharmaceuticals；Sauder, D.N. “Immunomodulatory and Pharmacologic Properties of Imiquimod” J. Am. Acad. Dermatol., 43 pp. S6−11 (2000)）、細胞におけるインターフェロンの��成を刺激する化合物（Tazulakhova, E.B. et al., “Russian Experience in Screening, analysis, and Clinical Application of Novel Interferon Inducers” J. Interferon Cytokine Res., 21 pp. 65−73）も含まれる。また、ＷＯ０２／１８３６９、特に２７２頁、１５行目から２７３頁、８行目を参照のこと（この開示内容は、参照により本明細書中に明確に包含される）。
【００８９】
当業者に認められる通り、ＶＸ−９５０は、好ましくは経口投与される。インターフェロンは、通常、経口投与されないが、経口投与剤形が開発されている。それにもかかわらず、本明細書中、本発明の方法または組み合わせを、何らかの特定の投与形態またはレジメンに限定すべきではない。よって、本発明の組み合わせの各構成成分は、個別に、共に、またはその何らかの組み合わせで投与され得る。当業者に認められる通り、インターフェロンの投与量は、一般的に、ＩＵで測定される（例えば、約４００万ＩＵから約１２００万ＩＵ）。インターフェロンはまた、マイクログラム単位で投与され得る。例えば、ペグ化イントロンの標準的用量は、１．０−１．５μｇ／ｋｇ／週であり、ペガシスのそれは、１８０μｇ／週である。
【００９０】
ある局面において、該方法は、第一段階および第二段階の２つの期間の薬剤投与を含む。例えば、第一段階は、約１２週間または２４週間未満の期間であり、第二段階は、約１２週間より長いか、または約１２週間であってよく、例えば第二段階は、約１２−３６週間であり得る。ある態様において、第二段階は、１２週間である。さらに他の態様において、第二段階は、３６週間である。ある態様において、第一および第二段階の期間の和は、約２４週間ないし４８週間(例えば、２４，３６または４８週間)である。いくつかの態様において、第一段階および第二段階は、同一期間であり得る。
【００９１】
ＶＸ−９５０は、第一段階、第二段階、または両段階のいずれかで投与され得る。いくつかの態様において、ＶＸ−９５０は、第一段階でのみ投与される。ＶＸ−９５０が、第一段階でのみ投与されるとき、ＶＸ−９５０は、単独で、または他の薬剤と組み合わせて投与されてよく、１個以上の薬剤は、第二段階で投与される。他の薬剤は、１個以上の抗ウイルス剤、１個以上の本明細書に記載の他の薬剤、またはそれらの組み合わせであり得る。いくつかの態様において、第一段階および第二段階で投与される特定の薬剤は、同一である。
【００９２】
いくつかの態様において、該方法は、２週間のＶＸ−９５０の投与(第一段階)、その後の２２週間のペグ化インターフェロンα−２ａ(Peg−IFN)およびリバビリン(RBV)の併用投与(第二段階)を含む。他の態様において、該方法は、２週間のＶＸ−９５０の投与(第一段階)、その後の４６週間のPeg−IFNおよびRBVの併用投与(第二段階)を含む。
【００９３】
さらに他の態様において、該方法は、２週間の、ＶＸ−９５０とPeg−IFNの併用投与(第一段階)、その後の２２週間のPeg−IFNおよびRBVの併用投与(第二段階)を含む。他の態様において、該方法は、２週間のＶＸ−９５０とPeg−IFNの併用投与(第一段階)、その後の４６週間のPeg−IFNおよびRBVの併用投与(第二段階)を含む。
【００９４】
さらに他の態様において、該方法は、２週間のＶＸ−９５０とPeg−IFNおよびRBVの併用投与(第一段階)、その後の２２週間のPeg−IFNおよびRBVの併用投与(第二段階)を含む。他の態様において、該方法は、２週間のＶＸ−９５０とPeg−IFNおよびRBVの併用投与(第一段階)、その後の４６週間のPeg−IFNおよびRBVの併用投与(第二段階)を含む。
【００９５】
いくつかの態様において、該方法は、４週間のＶＸ−９５０の投与(第一段階)、その後の２０週間のPeg−IFNおよびRBVの併用投与(第二段階)を含む。他の態様において、該方法は、４週間のＶＸ−９５０の投与(第一段階)、その後の４４週間のPeg−IFNおよびRBVの併用投与(第二段階)を含む。
【００９６】
さらなる態様において、該方法は、４週間のＶＸ−９５０とPeg−IFNの併用投与(第一段階)、その後の２０週間のPeg−IFNおよびRBVの併用投与(第二段階)を含む。他の態様において、該方法は、４週間のＶＸ−９５０とPeg−IFNの併用投与(第一段階)、その後の４４週間のPeg−IFNおよびRBVの併用投与(第二段階)を含む。
【００９７】
さらに他の態様において、該方法は、４週間のＶＸ−９５０とPeg−IFNおよびRBVの併用投与(第一段階)、その後の２０週間のPeg−IFNおよびRBVの併用投与(第二段階)を含む。他の態様において、該方法は、４週間のＶＸ−９５０とPeg−IFNおよびRBVの併用投与(第一段階)、その後の４４週間のPeg−IFNおよびRBVの併用投与(第二段階)を含む。
【００９８】
いくつかの態様において、上記のいずれかの第一段階は約１２週間行われ、第二段階は約１２週間行われ得る。あるいは、第一段階は約１２週間行われ、第二段階は約２４週間行われ得る。さらに他の局面において、第一段階は約１２週間行われ、第二段階は約３６週間行われ得る。
【００９９】
いくつかの態様において、上記のいずれかの第一段階は約８週間行われ、第二段階は約１６週間行われ得る。あるいは、第一段階は約８週間行われ、第二段階早く２８週間行われ得る。さらに他の局面において、第一段階早く８週間行われ、第二段階は約４０週間行われ得る。
【０１００】
いくつかの態様において、該方法は、４８週間未満のＶＸ−９５０とPeg−IFNの併用投与を含む。例えば、該方法は、２４週間未満のＶＸ−９５０とPeg−IFNの併用投与を含む。
【０１０１】
いくつかの態様において、該方法は、４８週間未満のＶＸ−９５０とPeg−IFNおよびRBVの併用投与を含む。例えば、該方法は、２４週間未満のＶＸ−９５０とPeg−IFNおよびRBVの併用投与を含む。
【０１０２】
一態様において、本発明の方法は、約２週間(または、２週間)のＶＸ−９５０の投与、その後の、約２２週間(もしくは、２２週間)または約４６週間(もしくは、４６週間)のPeg−IFNおよびリバビリンの投与を含む。
【０１０３】
モデル化データはまた、V36A／M、T54A、R155K／T、A156S A156V／T、V36A／M−R155K／T、およびV36A／M−A156V／TのようなＶＸ−９５０耐性変異体は、主に、ＶＸ−９５０処置後の、約１０−２４週間(または、８−２６週間)のPEG−IFNおよびリバビリンの投与により根絶し得ることを示す(図１８−２１参照)。任意のこれらのレジメンは、２４−４８週間続く現在の標準的ケア処置レジメンにおいて、処置期間の減少を意味する。
【０１０４】
いくつかの態様において、本発明の方法は、４週間のRVRおよび１２週間の検出不可能な状態を達成し得る。
【０１０５】
図２２に示す通り、ＶＸ−９５０の処置の８−１２週間後のウイルス再発生は、ＶＸ−９５０耐性変異体と関係があり、処置の２４−４８週での再発生率は、特に処置に対して良好な初期応答を示す対象において、基本的に同じであった。
【０１０６】
図２３に示す通り、ＶＸ−９５０、PEG−IFNおよびRBVでの１２週間の処置、可能であればわずか８週間の処置は、野生型ウイルスを排除するのに十分であることが明らかである。
【０１０７】
従って、本発明はまた、ＶＸ−９５０とインターフェロンの併用投与法を提供する。ある態様において、インターフェロンを、約１０週間(もしくは、１０週間)、約１２週間(もしくは、１２週間)、約１４週間(もしくは、１４週間)投与する。リバビリンも、レジメン全体を含むが、それに限定されない該レジメンの全部または一部で所望により投与されてよい。
【０１０８】
一態様において、本発明の方法は、約１２週間(または、１２週間)のＶＸ−９５０およびPeg−IFNの併用投与を含む。
【０１０９】
一態様において、本発明は、約１２±４週間(例えば、８、１２または１６週間)のＶＸ−９５０およびPeg−IFNの併用投与を含む。
【０１１０】
一態様において、本発明の方法は、約２４週間(または、２４週間)のＶＸ−９５０およびPeg−IFNの併用投与を含む。
【０１１１】
一態様において、本発明は、約２４±４週間(例えば、２０、２４または２８週間)のＶＸ−９５０およびPeg−IFNの併用投与を含む。
【０１１２】
疑いを避けるために、本発明は、約８週間(または、８週間)のＶＸ−９５０およびインターフェロンの投与、その後の、約１６週間(または、１６週間)のインターフェロンの投与を伴う合計約２４週間(または、２４週間)の処置レジメンを含むが、これに限定されないことが理解されるべきである。また、約１２週間(または、１２週間)のＶＸ−９５０およびインターフェロンの投与、その後の、約１２週間(または、１２週間)のインターフェロンの投与を含む合計約２４週間(または、２４週間)の処置レジメンも提供する。かかるレジメンは、所望により、約２４週間(または、２４週間)のレジメン全体を含むが、これに限定されないレジメンの全部または一部でのリバビリンの投与を提供する。
【０１１３】
一態様において、本発明の方法は、約１２週間(または、１２週間)のＶＸ−９５０、Peg−IFNおよびリバビリンの併用投与を含む。
【０１１４】
一態様において、本発明の方法は、約１２週間(または、１２週間)のＶＸ−９５０、Peg−IFNおよびリバビリンの併用投与、その後の、約１２週間(または、１２週間)のPeg−IFNおよびリバビリンの併用投与を含む。
【０１１５】
一態様において、本発明の方法は、約１２週間(または、１２週間)のＶＸ−９５０、Peg−IFNおよびリバビリンの併用投与、その後の、約３６週間(または、３６週間)のPeg−IFNおよびリバビリンの併用投与を含む。
【０１１６】
一態様において、本発明の方法は、約２４週間(または、２４週間)のＶＸ−９５０、Peg−IFNおよびリバビリンの併用投与、その後の、約２４週間(または、２４週間)のPEGIFNおよびリバビリンの併用投与を含む。
【０１１７】
いくつかの態様において、該方法は、ＶＸ−９５０(１２５０mg)の負荷用量、その後の７５０mg、８時間毎のＶＸ−９５０とPeg−IFNおよびRBVの組み合わせを提供することを含む。
【０１１８】
本発明に関連して用いられるシトクロムＰ４５０モノオキシゲナーゼ（“ＣＹＰ”）阻害剤は、ＶＸ−９５０の代謝を阻害すると予期される。それ故に、シトクロムＰ４５０モノオキシゲナーゼ阻害剤は、ＶＸ−９５０の代謝を阻害するのに有効量であり得る。従って、ＣＹＰ阻害剤は、ＶＸ−９５０のバイオアベイラビリティまたはＶＸ−９５０への暴露が、ＣＹＰ阻害剤の不存在下でのＶＸ−９５０と比較して増加するような量で投与される。ＣＹＰ阻害剤には、リトナビル（ＷＯ９４／１４４３６）、ケトコナゾール、トロレアンドマイシン、４−メチルピラゾール、シクロスポリン、クロメチアゾール、シメチジン、イトラコナゾール、フルコナゾール、ミコナゾール、フルボキサミン、フルオキセチン、ネファゾドン、セルトラリン、インジナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、ホスアンプレナビル、サキナビル、ロピナビル、デラビルジン、エリスロマイシン、ＶＸ−９４４およびＶＸ−４９７が含まれるが、これらに限定されない。好ましいＣＹＰ阻害剤には、リトナビル、ケトコナゾール、トロレアンドマイシン、４−メチルピラゾール、シクロスポリンおよびクロメチアゾールが含まれる。
【０１１９】
シトクロムＰ４５０モノオキシゲナーゼ活性を阻害する化合物の能力を測定するための方法は、公知である（米国特許番号第６，０３７，１５７号、およびYun, et al. Drug Metabolism ＆ Disposition, vol. 21, pp. 403−407 (1993)を参照)。ＶＸ−９５０およびＣＹＰ阻害剤の対象への併用投与の影響を評価するための方法もまた、公知である（ＵＳ２００４／００２８７５５）。かかる方法は全て、組み合わせの薬物動態への影響を決定するために本発明に関連して用いられ得る。
【０１２０】
本発明の一態様は、ＣＹＰ３Ａ４およびＶＸ−９５０の阻害剤の投与方法を提供する。
【０１２１】
本明細書に記載の方法は、ａ）ＶＸ−９５０および別の薬剤の組み合わせ；または、ｂ）２個以上の投与形態のＶＸ−９５０、を投与または併用投与することを含み得る。併用投与は、同一の投与形態または異なる投与形態で各阻害剤を投与することを包含する。異なる投与形態で投与されるとき、該阻害剤は、ほぼ同時または他の投与形態の投与中のいずれかの時間を含む、異なる時間に投与され得る。分割投与形態は、任意の順序で投与され得る。すなわち、全ての投与形態は、他の投与形態の前に、共に、またはその後に投与され得る。
【０１２２】
ＶＸ−９５０、および何れかのさらなる薬剤を、分割投与形態で製剤することができる。あるいは、患者に投与すべき投与形態の数を減らすために、ＶＸ−９５０、および何れかのさらなる薬剤を、何れかの組み合わせで製剤できる。全ての分割投与形態は、同時に、または異なる時間に投与され得る。投与形態は、その生物学的効果が有利になるように時間内に投与されるべきであることが理解されるべきである。
【０１２３】
本発明のレジメンおよび投与形態によれば、ＶＸ−９５０は、試料または患者のウイルス量（該ウイルスは、ウイルス生活環に必須のＮＳ３／４Ａセリンプロテアーゼをコードする）を減少するのに有効な量（または、本発明の方法を実行するのに有効な量）で、薬学的に許容される担体と共に存在する。あるいは、本発明の組成物には、本明細書中に記載のさらなる薬剤が包含される。各成分は、個々の組成物、組合せ組成物、または単一組成物中に存在し得る。
【０１２４】
化合物の薬学的に許容される塩を、これらの組成物に用いるとき、それらの塩類は、好ましくは、無機または有機の酸および塩基から誘導される。そのような酸性塩類には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩（camphorate）、カンファースルホン酸塩（camphor sulfonate）、シクロペンタン−プロピオン酸塩、二グルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩（pectinate）、過硫酸塩、３−フェニル−プロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩およびウンデカン酸塩が含まれる。塩基性塩類には、アンモニウム塩、ナトリウムおよびカリウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウムおよびマグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミンのような有機塩基との塩、ならびにアルギニン、リジンのようなアミノ酸との塩などが含まれる。
【０１２５】
また、塩基性窒素含有基は、塩化、臭化およびヨウ化、メチル、エチル、プロピルおよびブチルのような低級ハロゲン化アルキル；硫化ジメチル、硫化ジエチル、硫化ジブチルおよび硫化ジアミルのような硫化ジアルキル；塩化、臭化およびヨウ化、デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルのような長鎖ハロゲン化物；ベンジルおよびフェネチル臭化物のようなハロゲン化アラルキルなどのような物質によって四級化され得る。それにより、水または油に可溶性または分散性の生成物が得られる。
【０１２６】
本発明の組成物および方法に利用される化合物はまた、選択的な生物学的特性を高めるのに適当な機能性を付加することにより修飾され得る。そのような修飾は、当技術分野で公知であり、所定の生物系（例えば、血液系、リンパ系、中枢神経系）への生物学的浸透を増加し、経口アベイラビリティーを増加し、注射による投与を可能にするための溶解性を増加し、代謝を変化させ、排泄速度を変化させることが含まれる。
【０１２７】
これらの組成物に用いられ得る薬学的に許容される担体には、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンのような血清タンパク質、リン酸塩のような緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸のような部分的グリセリド混合物、水、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリル酸塩、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂のような塩または電解質が含まれるが、これらに限定されない。
【０１２８】
好ましい態様によれば、本発明の組成物を、哺乳動物、特にヒトに薬剤投与するために製剤する。
【０１２９】
かかる本発明の医薬組成物（ならびに、本発明の方法において使用するための組成物、組み合わせ、キットおよびパッケージ）を、経口、非経腸、舌下、吸入スプレーにより、局所、経直腸、経鼻、口腔、経膣、または埋め込みリザーバー（implanted reservoir）により投与することができる。本明細書で用いる用語“非経腸”には、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、病変内および頭蓋内注射または注入技術が含まれる。好ましくは、該組成物を、経口または静脈内投与する。より好ましくは、該組成物を経口投与する。
【０１３０】
本発明の組成物の滅菌注射剤は、水性または油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて、当技術分野で公知の技術により製造され得る。該滅菌注射製剤はまた、非毒性の非経腸的に許容される希釈剤または溶媒中滅菌注射溶液または懸濁液、例えば１，３−ブタンジオール溶液であり得る。用い得る許容されるビヒクルおよび溶媒は、水、リンゲル溶液および生理食塩水である。さらに、滅菌した不揮発性油が、溶媒または懸濁化媒体として都合よく用いられる。この目的に関して、合成モノまたはジグリセリドを含む、何れかの無菌性の不揮発性油を用い得る。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体のような脂肪酸が、注射剤の製造において、オリーブ油またはヒマシ油のような、とりわけそれらのポリオキシエチル化型の天然の薬学的に許容される油として有用である。これらの油溶液または油懸濁液にはまた、エマルジョンおよび懸濁液を含む薬学的に許容される投与形態の剤形において通常用いられる、カルボキシメチルセルロースまたは類似の分散剤のような、長鎖アルコール希釈剤または分散剤が含まれ得る。他の通常用いられる、トゥイーン系、スパン系（Span）および他の乳化剤のような界面活性剤、または薬学的に許容される固体、液体または他の投与形態の剤形に通常用いられるバイオアベイラビリティの増強剤はまた、製剤目的にも使用され得る。
【０１３１】
ＶＸ−９５０およびさらなる薬剤を含む本発明の組成物において、ＶＸ−９５０および該さらなる薬剤は、約１０ないし１００％の投与量レベルで存在すべきであり、より好ましくは、単剤療法レジメンにおいて通常投与される投与量の約１０ないし８０％で存在すべきである。
【０１３２】
本発明の医薬組成物は、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉剤、粒剤、水性懸濁液または溶液を含むが、これらに限定されない何らかの経口的に許容される投与形態で経口投与され得る。経口用錠剤の場合において、通常用いられる担体には、ラクトースおよびコーンスターチが含まれる。ステアリン酸マグネシウムのような滑剤もまた、一般的に添加される。カプセル形態での経口投与に関して、有用な希釈剤には、ラクトースおよび乾燥コーンスターチが含まれる。水性懸濁液が経口使用に必要とされるとき、活性成分を、乳化剤および懸濁化剤と併用する。要すれば、任意の甘味剤、香味剤または着色剤を添加することもできる。許容される液体投与形態には、エマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシル剤が含まれる。
【０１３３】
あるいは、本発明の医薬組成物は、直腸投与用に坐剤の形態で投与され得る。これらは、該薬剤と、室温では固体であるが、直腸温では液体であり、故に直腸で薬剤を放出し得る、適当な無刺激性賦形剤を混合することにより製造できる。そのような物質には、カカオバター、蜜蝋およびポリエチレングリコールが含まれる。
【０１３４】
本発明の医薬組成物はまた、とりわけ処置の標的が、眼、皮膚、または下部消化管の疾患を含む、局所適用により到達しやすい領域または臓器を含むとき、局所投与され得る。適当な局所製剤は、これらの領域または臓器のそれぞれのために容易に製造される。
【０１３５】
当技術分野で認識される通り、医薬組成物はまた、リポソームの形態で投与され得る。
【０１３６】
本発明者らは、ＶＸ−９５０が、経口投与可能であることを証明した。従って、本発明の好ましい医薬組成物は、経口投与用に製剤される。
【０１３７】
ＣＹＰ阻害剤に関して、１日当たり、体重１ｋｇ当たり約０．００１ないし約２００mgの投与量レベルが典型的であり得る。より典型的には、１日当たり約０．１ないし約５０mg／kg、または約１．１ないし約２５mg／kgの間の投与量レベルであり得る。
【０１３８】
リトナビルの好ましい投与形態に関しては、米国特許第６，０３７，１５７号、およびそこに引用される文献：米国特許第５，４８４，８０１号、米国特許出願第０８／４０２，６９０号、および国際特許出願ＷＯ９５／０７６９６およびＷＯ９５／０９６１４を参照のこと。
【０１３９】
本発明に関係する投与を、長期または短期療法として用い得る。単一投与形態を製造するために担体物質と併用され得る活性成分の量は、処置される宿主および特定の投与方法によって変化し得る。典型的な製剤は、約５％ないし約９５％の活性化合物（ｗ／ｗ）を含み得る。好ましくは、かかる製剤は、約２０％ないし約８０％の活性化合物を含む。
【０１４０】
患者の状態の改善により、必要ならば、本発明の化合物、組成物または組み合わせの維持量が投与され得る。次いで、投与の投与量あるいは頻度、または両方を、その症状の関数として、改善された状態が、症状が所望のレベルに軽減され、処置を終えるべきときに維持されるレベルに減らし得る。しかしながら、患者は、何らかの疾患症状の再発により長期的に断続的な処置を必要とし得る。
【０１４１】
何れかの特定の患者に対する特定の投与量および処置レジメンが、用いる特定の化合物の活性、年齢、体重、一般的健康状態、性別、食事、投与時間、排泄速度、混合薬、担当医の判断、および処置すべき特定の疾患の重症度、これまでの治療歴、共存疾患または併用薬、ベースラインのウイルス量、種、疾患の期間、肝機能の状態および肝線維症／肝硬変の程度、ならびに治療目標（移植によるウイルス循環の排除またはウイルスの根絶)を含む、様々な因子によって変わり得ることも理解されるべきである。活性成分の量は、特定の記載した化合物、ならびに組成物中のさらなる抗ウイルス剤の存在または不存在、および性質によっても変わり得る。
【０１４２】
他の態様によれば、本発明は、本発明の薬学的に許容される組成物を該患者に投与することにより、ウイルスの生活環に必要なＮＳ３／４Ａセリンプロテアーゼをコードするウイルスにより特徴付けられるウイルスに感染した患者の処置方法を提供する。好ましくは、本発明の方法は、ＨＣＶ感染を有する患者の処置に用いられる。かかる処置は、ウイルス感染を完全に根絶するか、またはその重症度を低減し得る。好ましくは、該患者は哺乳動物である。より好ましくは、該患者はヒトである。
【０１４３】
本明細書に記載の投与量は、好ましくはインビボでの使用用である。それにもかかわらず、これは目的に応じてこれらの量のＶＸ−９５０の使用に限定されるものと意図されない。さらに別の態様において、本発明は、生物学的物質と、本発明の化合物を含む薬学的に許容される組成物を合わせる工程を含む、患者に投与することを目的として該生物学的物質を前処理する方法を提供する。かかる生物学的物質には、血液および血漿、血小板、血液細胞の亜集団などのその成分；腎臓、肝臓、心臓、肺などの臓器；精子および卵子；骨髄およびその成分、ならびに食塩水、デキストロースなどの患者に注入される他の液体が含まれるが、それらに限定されない。
【０１４４】
本発明はまた、ＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルを組み合わせる工程を含む、ＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルを含む組成物を製造するための方法を提供する（ここで、組成物中のＶＸ−９５０の投与量は、本発明のいずれかの態様に従う。）。本発明の別の態様は、該組成物が、本明細書に記載の１個以上のさらなる薬剤を含む方法を提供する。
【０１４５】
本発明はまた、ＶＸ−９５０、またはその薬学的に許容される塩を、本明細書中に記載の投与量で含む治療レジメンを提供する。本発明の別の態様において、治療レジメンはさらに、本明細書に記載の１個以上のさらなる薬剤を含む。
【０１４６】
医薬組成物はまた、単一パッケージ、通常ブリスターパッケージに一連の処置全体を含む“患者パック（patient pack）”で患者に処方され得る。患者パックは、患者が、従来の処方において通常紛失する患者パックに含まれる添付文書をいつでも利用できる点で、薬剤師が、大量供給物（bulk supply）から患者への薬剤分配を行なう従来の処方よりも有利である。添付文書の包含は、患者に医者の指示の順守を改善させることが明らかにされている。
【０１４７】
患者が本発明の正しい使用をするように指示する添付文書を包含する単一の患者パック、または各製剤の患者パックを用いる本発明の併用投与は、本発明の望ましいさらなる特徴であることが理解され得る。
【０１４８】
さらなる局面によれば、本発明は、ＶＸ−９５０（本発明の投与量）および本発明の併用使用の指示書を含む添付情報を含むパッケージである。全ての組成物、投与形態、治療レジメンまたは本発明の他の態様は、医薬パッケージ中に存在し得る。本発明の別の態様において、該医薬パッケージは、本明細書に記載の１個以上のさらなる薬剤をさらに含む。さらなる薬剤または複数の薬剤は、同一のパッケージまたは異なるパッケージで提供され得る。
【０１４９】
本発明の他の局面は、各医薬成分の単一または複数の製剤；貯蔵中および投与前に製剤（複数可）を保存する容器；および、ＨＣＶ感染の処置または予防のための有効な方法で薬剤投与を行うための指示書を含む、ＨＣＶ感染の処置またはＨＣＶ感染の予防における使用のための（または、本発明の他の方法における使用のための）患者用のパッケージ化されたキットを含む。
【０１５０】
従って、本発明は、ＶＸ−９５０（および、所望によりさらなる薬剤）の用量の同時または連続投与のためのキットを提供する。典型的に、そのようなキットは、例えば、薬学的に許容される担体中（および、単一または複数の製剤中）、各化合物の組成物および任意のさらなる薬剤（複数可）、ならびに同時または連続投与のための指示書を含み得る。
【０１５１】
別の態様において、パッケージキットは、自己投与のための１個以上の投与形態；貯蔵中および使用前に該投与形態を保存するための、好ましくは密閉された容器；および、薬剤投与を行うための指示書を包含して提供される。該指示書は、一般的に、添付文書、ラベル、および／またはキットの他の成分の指示書であり、投与形態または複数の投与形態が、本明細書中に記載されている。各投与形態は、一枚の金属箔−プラスチック薄板で形成される個々の空間（cell）または半球形（bubble）中に、他から分離されたそれぞれの投与形態を包含させるか、または投与形態は、プラスチック容器のような単一の容器中に包含され得る。本発明のキットはまた、典型的には、個々のキット成分をパッケージングするための手段、すなわち、投与形態、容器手段、および使用のための指示書を含み得る。そのようなパッケージング手段は、段ボール箱または紙箱、プラスチック容器または金属箔容器などの形態であり得る。
【０１５２】
本発明のキットは、何れかの組成物、投与形態、治療レジメンまたは医薬パッケージのような、本発明のいずれかの局面を具現化し得る。
【０１５３】
本発明のパッケージおよびキットは、所望により、複数の組成物または投与形態を含む。従って、１個の組成物または２個以上の組成物を含むパッケージおよびキットは、本発明の範囲内に包含され得る。
【０１５４】
ある例示的態様は、以下に描写および記載されているが、本発明の化合物を、当業者に一般的に利用可能な適当な出発物質を用いて、概して上記の方法に従い製造することができることは、当然のことである。
【０１５５】
全ての引用文献は、参照により本明細書中に包含される。
【０１５６】
本発明をより十分に理解するために、以下の製造例および実験例を記載する。これらの実施例は、説明のみを目的とし、いかなる点でも本発明の範囲を制限するものと解釈してはならない。
【実施例】
【０１５７】
実施例１：ＨＣＶレプリコン細胞アッセイプロトコール
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）レプリコンを含む細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、０．２５mg／mLのＧ４１８、適当な添加剤を含むＤＭＥＭ（媒体Ａ）中で維持した。
【０１５８】
１日目に、レプリコン細胞単層を、トリプシン：ＥＤＴＡ混合物で処理し、除去し、その後、媒体Ａを最終濃度１００，０００細胞／mLまで希釈した。１０，０００細胞／１００μLを、９６ウェル組織培養プレートの各ウェル中に播種し、３７℃にて、組織培養インキュベーター中で一晩培養した。
【０１５９】
２日目、１００％ＤＭＳＯ中、化合物ＶＸ−９５０を、２％ＦＢＳ、０．５％ＤＭＳＯ、適当な添加剤を含むＤＭＥＭ（媒体Ｂ）中に連続的に希釈し、異なる濃度でＶＸ−９５０を含む溶液を得た。ＤＭＳＯの最終濃度を、一連の希釈を通して０．５％に維持した。
【０１６０】
レプリコン細胞単層上の媒体Ａを除去し、その後、様々な濃度の化合物を含む媒体Ｂを添加した。化合物を含まない媒体Ｂを、対照として他のウェルに添加した。
【０１６１】
細胞を、３７℃の組織培養インキュベーター中、媒体Ｂ中ＶＸ−９５０溶液または対照を、４８時間インキュベートした。４８時間のインキュベーションの最後に、媒体Ｂを除去し、レプリコン細胞単層をＰＢＳで一度洗浄し、ＲＮＡ抽出前に−８０℃で貯蔵した。
【０１６２】
処理したレプリコン細胞単層を含む培養プレートを解凍し、一定量のウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）のような別のＲＮＡウイルスを、各ウェルにて細胞に添加した。ＲＮＡ抽出試薬（ＲＮｅａｓｙキットの試薬のような）を、ＲＮＡ分解を避けるために細胞に直ちに添加した。全ＲＮＡを、抽出効率および一貫性を改善するための改良を伴う、製造業者の指示書に従って抽出した。最後に、ＨＣＶレプリコンＲＮＡを含む全細胞ＲＮＡを溶出させ、さらなる処理まで−８０℃で貯蔵した。
【０１６３】
TaqmanリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ定量化アッセイを、特定のプライマーおよびプローブの２個のセットを用いて行った。１つは、ＨＣＶについて、もう１つは、ＢＶＤＶについて行った。処理したＨＣＶレプリコン細胞由来の全ＲＮＡ抽出物を、同じＰＣＲウェル中に、ＨＣＶおよびＢＶＤＶ ＲＮＡの両方の定量のために、ＰＣＲ反応に追加した。実験的失敗に印をつけ、各ウェル中のＢＶＤＶ ＲＮＡレベルを基に却下した。各ウェル中のＨＣＶ ＲＮＡレベルを、同じＰＣＲプレートで実行する標準曲線に従い計算した。ＶＸ−９５０処理によるＨＣＶ ＲＮＡレベルの阻害または減少の割合を、ＤＭＳＯを用いて計算し、ＶＸ−９５０不含有対照を０％阻害とした。ＩＣ５０（ＨＣＶ ＲＮＡレベルの５０％阻害が見られる濃度）を、いずれかのＶＸ−９５０濃度の滴定曲線から計算した。
【０１６４】
ＶＸ−９５０は、２４０ng／mLのＩＣ５０および４７６ng／mLのＩＣ９０を有し、レプリコンアッセイにおいて顕著な活性を有することが示される。
【０１６５】
実施例２：ＨＣＶ Ｋｉアッセイプロトコール
５ＡＢ基質および産物の単離のためのＨＰＬＣマイクロボア法
この実験で使用した基質は、以下である：
ＮＨ２−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−（α）Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−ＣＯＯＨ（配列番号１）
【０１６６】
２０ｍＭ ５ＡＢの原液を、ＤＭＳＯおよび０．２Ｍ ＤＴＴで作製し、−２０℃にてアリコートで貯蔵した。ｐＨ７．８の緩衝液：５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ ＮａＣｌおよび２０％グリセロールを含んで製造した。
【０１６７】
１００μlのアッセイ溶液を以下の表に従い製造した：
【表１】
2014132015.tif 000003
【０１６８】
緩衝液、ＫＫ４Ａ、ＤＴＴ、およびｔＮＳ３を合わせ；９６ウェルプレートの各ウェルに各７８μＬずつ分配した。これを、３０℃で５分ないし１０分間インキュベートした。
【０１６９】
２．５μＬの適当な濃度のＶＸ−９５０を、ＤＭＳＯ中に溶解し（ＤＭＳＯのみを対照とする）、各ウェルに添加し、次いで、室温で１５分間インキュベートした。
【０１７０】
２０μＬの２５０μＭ ５ＡＢ基質の添加により反応を開始させた（２５μＭ濃度は、５ＡＢのＫｍ値と等しいかわずかに低い）。得られた混合物を３０℃で２０分間インキュベートし、その後、２５μＬの１０％ＴＦＡを添加して反応を終了させ、そして分析のために混合物をＨＰＬＣバイアルに移した（１２０μＬアリコート）。
【０１７１】
ＳＭＳＹ産物を、以下の方法により、基質およびＫＫ４Ａから単離した：
装置：
Ａｇｉｌｅｎｔ １１００
Ｄｅｇａｓｓｅｒ Ｇ１３２２Ａ
Ｂｉｎａｒｙ ｐｕｍｐ Ｇ１３１２Ａ
Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ Ｇ１３１３Ａ
Ｃｏｌｕｍｎ ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔｅｄ ｃｈａｍｂｅｒ Ｇ１３１６Ａ
Ｄｉｏｄｅ ａｒｒａｙ ｄｅｔｅｃｔｏｒ Ｇ１３１５Ａ
カラム：
Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｊｕｐｉｔｅｒ；５マイクロン Ｃ１８；３００オングストローム；１５０×２ｍｍ；Ｐ／Ｏ ００Ｆ−４０５３−Ｂ０
カラムサーモスタット：４０℃
注入量：１００μＬ
溶媒Ａ＝ＨＰＬＣ等級純水＋０．１％ＴＦＡ
溶媒Ｂ＝ＨＰＬＣ等級アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ
【０１７２】
【表２】
2014132015.tif 000004
停止時間：１７分
実行後：１０分。
【０１７３】
実施例３：耐容性および薬物動態学実験
ＶＸ−９５０を、無作為化、二重盲検、プラセボ−対照の単回用量漸増試験において試験した。２５名の健康な男性ボランティアが登録され、各対象は、ＶＸ−９５０の複数の単回用量（少なくとも７日間、３種の用量のＶＸ−９５０を増加用量レベルで）、および１種の用量のプラセボを個別に受容した。
【０１７４】
２５mgないし１２５０mgの用量を評価した。２倍ずつ増量しながら、より低用量範囲で攻撃的であり、より高用量範囲で保守的になるようにフィボナッチ数を改変した、用量漸増スキームを用いた。
【０１７５】
ＶＸ−９５０は、全ての用量レベルで良好な耐容性であったという結果を示した。重大な有害事象は試験中には報告されなかった。そして、用量レベルの増加により有害事象が増大することはなかった。
【０１７６】
薬物動態分析を、統計学的モーメント手法を用いて行った。図１Ａおよび図１Ｂは、平均濃度−時間プロフィールを説明する。選択した導き出された薬物動態パラメーターを、図２Ａ−２Ｄに示す。薬物動態分析は、ＶＸ−９５０が、３時間の平均ｔｍａｘで吸収されたことを示した。２％未満のＶＸ−９５０は尿中で変化なく除かれ、薬剤が、主に代謝経路から排泄されることを示した。
【０１７７】
実施例４：感染ウイルスアッセイ
ＶＸ−９５０は、感染ウイルスアッセイにおいて、１９６ng／mLのＩＣ５０を証明した。
【０１７８】
実施例５：ＶＸ−９５０処置の効果
ＶＸ−９５０を、２４名の健康な対象および３４名のＣ型肝炎陽性対象において、無作為化、プラセボ−対照、反復投与、盲検、用量漸増試験で試験した。
【０１７９】
２４名の健康な対象を、３つのパネルにそれぞれ８名の対象に分けた。各パネルにおいて、６名の対象がＶＸ−９５０を受容し、２名の対象がプラセボを受容した。健康な対象に、５日間連続して、４５０mg、７５０mg、または１２５０mgのＶＸ−９５０を８時間毎に投与した。該健康な対象は、１８歳から６５歳までであり（１８歳と６５歳を含む）、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、およびＨＩＶ陰性であった。男性は、１８．５−２９．０ｋｇ／ｍ２（１８．５ｋｇ／ｍ２と２９．０ｋｇ／ｍ２を含む）の肥満度指数を有していた。女性は、１８．５−３２．５ｋｇ／ｍ２（１８．５ｋｇ／ｍ２と３２．５ｋｇ／ｍ２を含む）の肥満度指数を有していた。
【０１８０】
Ｃ型肝炎（遺伝子型１型）陽性の対象を、３つのパネルにそれぞれ１２名の対象に分け、それぞれ１４日間連続して、４５０mgまたは７５０mgのＶＸ−９５０を８時間毎、または１２５０mgのＶＸ−９５０を１２時間毎に受容した。各パネルにおいて、１０名の対象がＶＸ−９５０を受容し、２名の対象がプラセボを受容した；７５０mgを８時間毎の群において、２名の対象が投与前に中止した。他の３４名は全て、試験を完了した。
【０１８１】
ＶＸ−９５０は、全ての用量レベルで良好な耐容性を示し、重大な有害事象は、試験中には報告されなかった；軽度および中程度の有害事象が報告された。プラセボ、４５０mgを８時間毎、７５０mgを８時間毎、および１２５０mgを１２時間毎受容した群のＨＣＶ陽性対象のうち、それぞれ３３．２％、１０％、１２．５％、そして３０％は、未処置患者であった。
【０１８２】
ＨＣＶ陽性対象を、処置後、ＨＣＶ ＲＮＡレベルがベースラインに戻るまで測定するために試験した。
【０１８３】
【表３】
2014132015.tif 000005
【０１８４】
＊４名の患者由来のサンプルを、それが、遺伝子型１ａ型または１ｂ型であるかどうかを決定することができないアッセイのため、遺伝子型１型として分類した。
略語：ＢＭＩ（肥満度指数）；ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）；ｑ８ｈ（８時間毎）；ｑ１２ｈ（１２時間毎）；ＳＤ（標準偏差）。
ベースラインからのＨＣＶ ＲＮＡの変化を、ＶＸ０４−９５０−１０１で試験した。
【０１８５】
【表４】
2014132015.tif 000006
値は、ｎ（％）であり、ｑ８ｈは、８時間毎；ｑ１２ｈは、１２時間毎である。
【０１８６】
実施例６：ＶＸ−９５０剤形
経口投与量剤形を、以下の通りに製造した。ＶＸ−９５０およびポビドンＫ２９／３２を塩化メチレン中に溶解し、その後、ラウリル硫酸ナトリウムを添加し、均一な懸濁液を形成するためにＶＸ−９５０溶液を分散させた。この懸濁液を、９０℃の入り口温度および５６℃の出口温度を用いてスプレー乾燥させ、生成物をサイクロンから集めた。スプレー乾燥した分散物を、７５℃で８時間、流動層乾燥させた。得られた粉末を、ガラスバイアル中で予め測定し、投与直前に、対象への投与のために水（３０ｍＬ）に懸濁した。投与に関して、各バイアルを、全量が９０ｍＬである水の３分割量で洗浄した。
【０１８７】
【表５】
2014132015.tif 000007
【０１８８】
実施例７：ヒト血漿中、ＶＸ−９５０の確認方法
ヒト血漿中のＶＸ−９５０濃度を決定するためのアッセイは、当技術分野で公知の方法により行った。例えば, Wasley, A. et al., Semin. Liver Dis., 20：1−16, 2000；Alter, H.J. et al., Semin. Liver Dis., 20: 17−35, 2000；Brown, R.S. Jr. et al., Liver Transpl., 9：S10−S13, 2003;；DeFrancesco, R. et al., Nature, 436(7053)：953−960, 2005；Bowen, D.G. et al., J. Hepatol., 42: 408−417, 2005；Hoofnagle, J.H., Hepatology, 36：S21−S29, 2002, Brown, R.S. Jr. et al., Nature, 436 (7053)：973−978, 2005；および、Chisari, F.V., Nature, 436(7053)：930−932, 2005を参照のこと。
【０１８９】
具体的には、以下のＶＸ−９５０溶液を製造し、ふた付きホウケイ酸チューブ(１１．５mL)中−２０℃で貯蔵した：
原液：２−プロパノール中、９６１μg／ｍｌのＶＸ−９５０（１０．０ml）
希釈した原液１：２−プロパノール中、９６．１μｇ／ｍｌのＶＸ−９５０（５．００ml）
希釈した原液２：２−プロパノール中、９．６１μｇ／ｍｌのＶＸ−９５０（１０．０ml）
希釈した原液３：２−プロパノール中、０．９６１μｇ／ｍｌのＶＸ−９５０（１０．０ml）。
【０１９０】
内部標準原液を、２−プロパノール５．００ｍｌ中、１．００mg／ｍｌの化合物１（ＶＸ−９５０の閉環構造類似体）を含んで製造し、ふた付きホウケイ酸チューブ（１１．５ml）中、−２０℃で貯蔵した。同様の化合物１を含む希釈溶液を、アセトニトリル１００mL中、３００ng／mLの化合物を含んで製造し、ふた付きホウケイ酸ボトル（１００ml）中、−２０℃で貯蔵した。
【０１９１】
サンプル調整：血漿１００μｌおよび内部標準希釈溶液１００μｌ（または、ブランク試料用のアセトニトリル）を、抽出チューブに添加した。３０秒間ボルテックス混合後、５００μｌのトルエンを添加し、抽出を３０秒間のボルテックス混合により行った。４℃で５分間、３０００ｒｐｍでの遠心後、水層をアセトン混合物およびドライアイス中で凍結させ、有機層を別の抽出チューブに移した。５０μｌの２，２−ジメトキシプロパンを添加し、サンプルを、窒素下、約３０℃で、乾燥するまで蒸発させた。残渣を、３００μｌのヘプタン：アセトン（９０：１０、ｖ／ｖ）［または、ヘプタン：ＴＨＦ（８０：２０、ｖ／ｖ）］中に、６０秒間のボルテックス混合により再溶解した。サンプルを注入バイアルに移し、サンプルの６０μLのアリコートを以下のクロマトグラフ条件の分析のためにクロマトグラフ系に注入した。
移動相：（定組成溶出）ヘプタン／アセトン／メタノール（８０：１９：１、ｖ／ｖ／ｖ）
作製（Make−up）溶媒：アセトニトリル／アセトン／メタノール／ギ酸（４０：６０：１：１、ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）
カラム温度：−１℃
流速：１．００ｍｌ／分（その内：０．７５０mL／分が移動相および０．２５０mL／分が、作製溶媒、検出器に完全に移す）
注入量：６０μｌ
オートサンプラー温度：３℃。
【０１９２】
実施例８：ＶＸ−９５０を用いる併用療法
ＶＸ−９５０併用療法を、ＶＸ−９５０の安全性およびその抗ウイルス応答を決定するために行った。具体的には、この実験は、遺伝子型１型ＨＣＶに感染した未処置患者１２名を含んだ。全ての患者は、ＶＸ−９５０(７５０mg、８時間毎)、Peg−IFNα−２ａ(“PEG−IFN”、１８０μg／週)、およびＲＢＶ(１０００または１２００mg／日)を２８日間受容した。２８日間の完了後、患者は、担当医の臨床ケア下で、試験外の、Peg−IFNα−２ａおよびＲＢＶでのフォローアップ処置を開始した。さらなるＨＣＶ ＲＮＡ評価を、Peg−IFN−２ａ／ＲＢＶ治療期間中、処置医の判断で行った。これらには、実験後の処置およびその後の時点の４、８、１４週での評価が含まれた。
【０１９３】
結果は、ＶＸ−９５０／Peg−IFN／ＲＢＶ併用が、２８日間の実験中、重大な有害事象なしに、良好な耐容性であったことを示す。観察した有害事象プロフィールは、Peg−IFN／RBV併用療法で通常見られるプロフィールと一致した。全ての患者は、レジメン,ＶＸ−９５０の迅速かつ実質的な抗ウイルス効果を示す、薬剤レジメンの実験に対する応答性を証明された。具体的には、２名の患者は、投与開始から８日間以内に血漿ＨＣＶ ＲＮＡの検出不可能(＜１０IU／mL、Roche Taqman（登録商標）アッセイ)レベルに達し、全ての患者は、２８日間の実験投与期間の終了時に検出不可能なＨＣＶ ＲＮＡを有した。２８日間の実験投与の完了後、１２週間の(Peg−IFN／RBVでの)後続治療で、ＨＣＶ ＲＮＡレベルは、１１名の患者で検出不可能なままであった。全ての患者は、Peg−IFN／RBV治療を継続し、標準的方法に従い応答を調査した。７名の患者は、全４８週間の処置を受け、持続的ウイルス応答(ＳＶＲ)を達成した。１名の患者は、中断前に１８週間のみ(全２２週間の処置)Peg−IFN／RBVを受容し、ＳＶＲを達成した。２名の患者は、処置の１２週および２４週でウイルス突破現象（viral breakthrough）を有し、２名の患者は、フォローアップを行わなかった。合計で、１０名の患者のうち８名の患者の結果が利用可能であり、ＳＶＲを達成した。実験後投与期間中に観察された副作用プロフィールは、Peg−IFN／RBV処置の予期プロフィールと一致した。
【０１９４】
ＳＶＲが、２２週間の処置のみで完了した１名を含む８名の患者で達成されたという観察は、ＶＸ−９５０に基づくレジメンが、現在の治療法と比較してＳＶＲ率を増大し得ることを示す。
【０１９５】
現在の治療法との比較
遺伝子型１型の慢性ＨＣＶを有する患者の現在の治療は、通常、４８週間の、ペグ化インターフェロン−α−２ａ／２ｂ(Peg−IFN−２ａ)およびＲＢＶのみの治療から構成され、遺伝子型１型ＨＣＶを有する患者の約５０％のみがＳＶＲを達成し、患者は一般的に、乏しい処置の耐容性を示す。
【０１９６】
実施例９：フェーズ１ｂ試験
ＶＸ−９５０は、単剤またはPeg−IFN−２ａとの併用で迅速かつ広範囲の抗ウイルス活性を有し、１４日間の間良好な耐容性であった。この実験は、ＶＸ−９５０およびPeg−IFN−２ａの１４日間の投与処置後のＨＣＶの動力学的情報を提供するように設計された。
【０１９７】
この実験は、慢性の遺伝子型１型Ｃ型肝炎感染を有する２０名の未処置患者を３種の投与別に無作為化した(表１)。１４日間の実験の完了時、２０名の患者のうち１９名は、１４日間の投与期間の完了の５日以内からPeg−IFN−２ａ／ＲＢＶの投与開始を選択した；他のものは、Peg−IRN−２ａおよびＲＢＶの併用投与を拒否したため。診療所訪問が、１週間および１２週間の実験によって義務づけられたフォローアップ訪問の完了後に、調査者の裁量で行われた。１９名の患者が、実験投与の完了後の２４週間を通して継続していた。処置医との検討後、１０名(ＶＸ−９５０の４名およびＶＸ−９５０／Peg−IFN−２ａの６名)の患者は、２４週でPeg−IFN−２ａ／ＲＢＶ処置を中止した。現在の患者の病状を以下の表１に示す。
【０１９８】
【表６】
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【０１９９】
実験外のフォローアップの最終日(実験中、フォローアップの最後の後、１２週間)に、ＨＣＶ ＲＮＡレベルは、初め、ＶＸ−９５０のみ、およびＶＸ−９５０／Peg−IFN−２ａ群に無作為化された、Peg−IFN−２ａ／ＲＢＶを継続した患者全てで検出不可能であった。データを以下の表２に提供する。
【０２００】
【表７】
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a  COBAS Taqman HCV RNA アッセイ。Roche Molecular Diagnostics。
b  Taqman HCV RNA アッセイ (15IU／mL)および(5IU／mL):実験以外。
【０２０１】
以下の表３に示す通り、２４週間の全処置後、実験後のPeg−IFN−２ａ／ＲＢＶ処置を中止した１０名の患者のうち、ＶＸ−９５０のみを元々受容した４名の患者のうちの２名が、検出不可能な血漿ＨＣＶ ＲＮＡレベルを、Peg−IFN−2aを中止後１２週間のフォローアップで実証され；ＶＸ−９５０／Peg−IFN−２ａを元々受容した６名の患者のうち５名が、検出不可能な血漿ＨＣＶ ＲＮＡレベルを、Peg−IFN−２ａを中止後１２週間のフォローアップで実証された。
【０２０２】
【表８】
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*  １名の患者は、Peg−IFN−２ａ／ＲＢＶを拒否した。
【０２０３】
２４週間の実験外のフォローアップにて、初め、ＶＸ−９５０のグループに無作為化され、Peg−IFN−2a／RBVを継続した患者の全てで、検出不可能なＨＣＶ ＲＮＡが維持された。初期(１２週間)の処置後(Peg−IFN−2a／RBV)フォローアップのウイルス量データは、モデルと一致しており、ＳＶＲを達成するのに必要な期間が早期のウイルス排除の動力学に関連したことが示唆される。ＳＶＲは、ＶＸ−９５０の処置、要すればPeg−INFとの併用処置を１４日間、その後のPeg−INF／RBVのさらに２２または４６週間の処置を受けた１５名の患者のうち１０名で達成された。
【０２０４】
１２週において、初めにＶＸ−９５０とPEG−IFNの併用処置を受けた８名の患者全て、ならびにＶＸ−９５０のみを受容した７名の患者のうち５名が、検出不可能なＨＣＶ ＲＮＡを有した。２４週において、ＶＸ−９５０を受容した１５名の患者全てが、検出不可能なＨＣＶ ＲＮＡを有した。１０名の患者(ＶＸ−９５０とPEG−IFNの８名のうち６名、およびＶＸ−９５０のみの７名のうち４名)が、２４週でPEG−IFN／RBVの停止を決定し、５名の患者が、全４８週間のPEG−IFN／RBV処置を継続した。全てのグループは、さらに２４週間実験した。PEG−IFNとRBVを開始する前に、少なくとも１４日間の(単独で、またはPEG−IFNとの併用で)ＶＸ−９５０を受容した患者において、１０名の患者のうち７名は、２４週間処置し、５名の患者のうち３名は、４８週間の処置でＳＶＲを達成した。
【０２０５】
本明細書中に引用される全ての文献は、参照により本明細書中に包含される。
【０２０６】
本明細書中、本発明の多数の態様および実施例を記載しているが、これらの態様および実施例は、本発明の製剤および薬剤レジメンを利用するさらなる態様および実施例を提供するために改変されてもよいことは明白である。故に、本発明の範囲は、上記の実施例として示されている特定の態様というよりむしろ、添付の特許請求の範囲により定義されるべきであることは、理解され得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【配列表】
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