(57)【要約】【課題】レスベラトール含有組成物および使用方法の提供。【解決手段】被験体に治療利益（例えば、生物学的活性の調節）を提供し得るか、細胞移植治療を改善し得るか、または黄斑変性もしくはジストロフィーの処置を改善し得るレスベラトロール含有組成物。上記組成物は、トランス−レスベラトロール、金属キレート化剤、および１種以上のさらなる抗酸化剤（例えば、フェノール系抗酸化剤もしくはビタミンＤ）を含む。ヒト被験体における生物学的活性を調節する方法であって、該方法は、生物学的活性の調節が必要なヒト被験体に、以下：該ヒト被験体の１キログラムあたり０．２５〜５ｍｇの量のトランス−レスベラトロール、金属キレート化剤、および１種以上のさらなる抗酸化剤を含む組成物を投与する工程を包含し、ここで該投与は、レスベラトロール単独の投与と比較して該ヒト被験体における生物学的活性を調節するに有効である、方法。【選択図】図１
2014237727.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載された発明。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
高レベルのリスク因子（例えば、コレステロール、糖尿病、高血圧症および飽和脂肪の高い取り込み）にも拘わらず、フランス人男性は、西側先進諸国の中で虚血性心疾患および心血管疾患から最低の死亡率を示す（米国より３６％低く、英国より３９％低い）。いわゆる「フレンチパラドックス」（具体的には、心血管疾患の死亡率が低い）は、日常的にワインを消費していることに主に起因する可能性がある（非特許文献１）。
【０００２】
レスベラトロール（３，４’，５−トリヒドロキシ−トランス−スチルベン）は、例えば、ブドウ果皮に見いだされる、天然に存在するフェノール化合物であり、これは、ヒトの健康状態に関して有益な特性を有することが実証された。特に、レスベラトロールは、心臓の機能におよびヒト細胞の寿命を延ばすことにおいて有益であると考えられる。レスベラトロールは、栄養補助食品において使用される場合、一般に、植物源からのアルコール抽出物として生成される。
【０００３】
カロリー制限食は、生き残り／長寿遺伝子をアップレギュレートするか、もしくは発現が細胞損傷を増強する遺伝子をダウンレギュレートすることによって、生き残りおよび長寿を増大させることが示されてきた。マウスは、ヒトとの遺伝子発現比較のモデルとして広範に使用されてきた。限定なしに、ヒト遺伝子発現に対するマウスモデルの正当性は、ヒトおよびマウスの遺伝子のうちの９８％が相同であり、かつマウスおよびヒトがほぼ同数の遺伝子を有する（例えば、約３０，０００）という事実を反映する。
【０００４】
カロリー制限食の確立された利益にも拘わらず、必要とされる食事レジメンの厳密性は、増大している長寿に対するこのアプローチの採用を制限した。従って、食事制限の必要性を回避しかつ広く行き渡った採用を容易にできる、カロリー制限の利益を得るための代替経路を提供することは望ましい。本実施形態は、この必要性および他の必要性に関する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｒｅｎａｕｄ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｆｏｕｎｄ．  Ｓｙｍｐ．  ２１６：２０８−２２２，  １５２−１５８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本実施形態の実施形態は、トランス−レスベラトロール、金属キレート化剤、および１種以上のさらなる抗酸化剤（例えば、アピゲニン、カフェー酸、ＥＧＣＧ、フェルラ酸、ケルセチン、もしくはビタミンＤ）を含む組成物、ならびに上記組成物を使用する方法を提供する。上記トランス−レスベラトロールは、光もしくは酸素への上記トランス−レスベラトロールの曝露に起因して、上記組成物の生物学的活性が実質的に失われないようにするために封入（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅ）され得る。さらなる実施形態は、幹細胞移植とともに、もしくは幹細胞移植後に、トランス−レスベラトロール、金属キレート化剤、および１種以上のさらなる抗酸化剤（例えば、アピゲニン、カフェー酸、ＥＧＣＧ、フェルラ酸、ケルセチン、もしくはビタミンＤ）を含む組成物を投与することによって、移植された幹細胞を保護する方法を提供する。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
ヒト被験体における生物学的活性を調節する方法であって、該方法は、
生物学的活性の調節が必要なヒト被験体に、以下：
該ヒト被験体の１キログラムあたり０．２５〜５ｍｇの量のトランス−レスベラトロール
金属キレート化剤、および
１種以上のさらなる抗酸化剤、
を含む組成物を投与する工程を包含し、ここで該投与は、レスベラトロール単独の投与と比較して、該ヒト被験体における生物学的活性を調節するに有効である、方法。
（項目２）
前記金属キレート化剤は、フィチン酸を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記金属キレート化剤は、前記ヒト被験体の１キログラムあたり０．２５〜５ｍｇの量で存在する、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記１種以上のさらなる抗酸化剤は、前記ヒト被験体の１キログラムあたり０．０５〜２ｍｇの量で存在する、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記１種以上のさらなる抗酸化剤は、フェノール系抗酸化剤を含む、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記フェノール系抗酸化剤は、アピゲニン、カフェー酸、エピガロカテキン３−ガラート（ＥＧＣＧ）、フェルラ酸、およびケルセチンからなる群より選択される、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記１種以上のさらなる抗酸化剤は、ビタミンＤを含む、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記組成物は、ヒアルロン酸およびコンドロイチン硫酸からなる群より選択される１種以上のグリコサミノグリカンをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記生物学的活性の調節は、心血管疾患、癌、黄斑変性、加齢と関連する疾患、神経変性疾患、および炎症からなる群より選択される疾患もしくは状態を処置もしくは予防することを包含する、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記生物学的活性の調節は、生き残り遺伝子もしくは長寿遺伝子の発現を調節することを含む、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記生き残り遺伝子もしくは長寿遺伝子は、サーチュイン１、サーチュイン３、フォークヘッドＦｏｘｏ１転写因子、脱共役タンパク質３、もしくはピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ４からなる群より選択される、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記生物学的活性の調節は、酸化的リン酸化、アクチンフィラメント長もしくは重合、細胞内輸送、小器官の生物発生、インスリンシグナル伝達、解糖、糖新生および脂肪酸代謝からなる群より選択される生物学的活性を調節することを含む、項目１に記載の方法。
（項目１３）
ヒト被験体における細胞移植治療を改善する方法であって、該方法は、
ヒト被験体に、移植される細胞および以下：
該ヒト被験体の１キログラムあたり０．２５〜５ｍｇの量のトランス−レスベラトロール、
金属キレート化剤、および
１種以上のさらなる抗酸化剤、
を含む組成物を共投与する工程を包含し、ここで該共投与は、該移植される細胞単独の投与と比較して、該ヒト被験体における細胞移植の有効性を改善するに有効である、方法。
（項目１４）
前記共投与は、前記移植される細胞の生存を改善するに有効である、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記共投与は、前記移植される細胞の増殖を改善するに有効である、項目１３に記載の方法。
（項目１６）
前記移植される細胞は、心臓幹細胞、神経幹細胞、および網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞からなる群より選択される、項目１３に記載の方法。
（項目１７）
前記移植される細胞は、心臓幹細胞であり、ここで、前記共投与は、該心臓幹細胞の分化を改善するのに有効である、項目１３に記載の方法。
（項目１８）
ヒト被験体における黄斑変性の処置を改善する方法であって、該方法は、
黄斑変性もしくは黄斑ジストロフィーに罹患しているヒト被験体に、以下：
該ヒト被験体の１キログラムあたり０．２５〜５ｍｇの量のトランス−レスベラトロール、
金属キレート化剤、および
１種以上のさらなる抗酸化剤、
を含む組成物を投与する工程を包含し、ここで該投与は、レスベラトロール単独の投与と比較して、該ヒト被験体における該黄斑変性の処置の有効性を改善するのに有効である、方法。
（項目１９）
前記投与は、改善された視力、視覚欠損の縮小、および眼における低下したドルーゼンからなる群より選択される１種以上の利益を提供するのに有効である、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記ヒト被験体に前記組成物を共投与する工程をさらに包含し、黄斑変性の処置は、抗脈管形成医薬および抗ドルーゼン医薬からなる群より選択される、項目１８に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１は、コントロール動物およびカロリー制限食で維持された動物に対する、レスベラトロールもしくは本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））を投与したマウスの体重変化を示す。
【図２】図２は、コントロール動物およびカロリー制限食で維持された動物に対する、レスベラトロールもしくは本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））を投与したマウスの血清インスリンレベルを示す。
【図３】図３は、コントロール動物およびカロリー制限食で維持された動物（Ｐ＝０．１０）に対する、レスベラトロール（Ｐ＝０．９７）もしくは本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））（Ｐ＝０．０７）を投与したマウスの血清グルコースレベルを示す。
【図４】図４は、本実施形態の組成物の実測された生物学的活性と一致する作用機構の模式図を示す。
【図５】図５は、単離され、灌流したラット心臓における大動脈の流れに対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を示す棒グラフである。
【図６】図６は、単離され、灌流したラット心臓における冠動脈の流れに対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を示す棒グラフである。
【図７】図７は、単離され、灌流したラット心臓における最大左心室圧（ＬＶＤＰ）に対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を示す棒グラフである。
【図８】図８は、単離され、灌流したラット心臓における最大左心室圧の最大一次導関数（ｍａｘｉｍｕｍ  ｆｉｒｓｔ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）（ＬＶ［ｄＰ／ｄｔ］ｍａｘ）に対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を示す棒グラフである。
【図９】図９は、単離され、灌流したラット心臓における心筋梗塞サイズに対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を示す棒グラフである。
【図１０】図１０は、単離され、灌流したラット心臓における心筋細胞アポトーシスに対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を示す棒グラフである。
【図１１】図１１は、レスベラトロールのホルメシス(ｈｏｒｍｅｔｉｃ）作用を示すチャートである。ここでレスベラトロール用量［ｘ−軸］は、心機能、梗塞サイズ、およびアポトーシスの値に対してプロットされる。
【図１２】図１２は、単離されたウサギ心臓における心筋梗塞サイズに対する１００ｍｇ／ｋｇ  レスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を示す棒グラフである。
【図１３Ａ】図１３Ａ〜１３Ｆは、単離され、灌流したラット心臓における大動脈の流れ（図１３Ａ）、単離され、灌流したラット心臓における冠動脈の流れ（図１３Ｂ）、単離され、灌流したラット心臓における最大左心室圧（ＬＶＤＰ）（図１３Ｃ）、単離され、灌流したラット心臓における最大左心室圧の最大一次導関数（ＬＶ［ｄＰ／ｄｔ］ｍａｘ）（図１３Ｄ）、単離され、灌流したラット心臓における心筋梗塞サイズ（図１３Ｅ）、および単離され、灌流したラット心臓における心筋細胞アポトーシス（図１３Ｆ）に対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を比較する棒グラフである。
【図１３Ｂ】図１３Ａ〜１３Ｆは、単離され、灌流したラット心臓における大動脈の流れ（図１３Ａ）、単離され、灌流したラット心臓における冠動脈の流れ（図１３Ｂ）、単離され、灌流したラット心臓における最大左心室圧（ＬＶＤＰ）（図１３Ｃ）、単離され、灌流したラット心臓における最大左心室圧の最大一次導関数（ＬＶ［ｄＰ／ｄｔ］ｍａｘ）（図１３Ｄ）、単離され、灌流したラット心臓における心筋梗塞サイズ（図１３Ｅ）、および単離され、灌流したラット心臓における心筋細胞アポトーシス（図１３Ｆ）に対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を比較する棒グラフである。
【図１３Ｃ】図１３Ａ〜１３Ｆは、単離され、灌流したラット心臓における大動脈の流れ（図１３Ａ）、単離され、灌流したラット心臓における冠動脈の流れ（図１３Ｂ）、単離され、灌流したラット心臓における最大左心室圧（ＬＶＤＰ）（図１３Ｃ）、単離され、灌流したラット心臓における最大左心室圧の最大一次導関数（ＬＶ［ｄＰ／ｄｔ］ｍａｘ）（図１３Ｄ）、単離され、灌流したラット心臓における心筋梗塞サイズ（図１３Ｅ）、および単離され、灌流したラット心臓における心筋細胞アポトーシス（図１３Ｆ）に対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を比較する棒グラフである。
【図１３Ｄ】図１３Ａ〜１３Ｆは、単離され、灌流したラット心臓における大動脈の流れ（図１３Ａ）、単離され、灌流したラット心臓における冠動脈の流れ（図１３Ｂ）、単離され、灌流したラット心臓における最大左心室圧（ＬＶＤＰ）（図１３Ｃ）、単離され、灌流したラット心臓における最大左心室圧の最大一次導関数（ＬＶ［ｄＰ／ｄｔ］ｍａｘ）（図１３Ｄ）、単離され、灌流したラット心臓における心筋梗塞サイズ（図１３Ｅ）、および単離され、灌流したラット心臓における心筋細胞アポトーシス（図１３Ｆ）に対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を比較する棒グラフである。
【図１３Ｅ】図１３Ａ〜１３Ｆは、単離され、灌流したラット心臓における大動脈の流れ（図１３Ａ）、単離され、灌流したラット心臓における冠動脈の流れ（図１３Ｂ）、単離され、灌流したラット心臓における最大左心室圧（ＬＶＤＰ）（図１３Ｃ）、単離され、灌流したラット心臓における最大左心室圧の最大一次導関数（ＬＶ［ｄＰ／ｄｔ］ｍａｘ）（図１３Ｄ）、単離され、灌流したラット心臓における心筋梗塞サイズ（図１３Ｅ）、および単離され、灌流したラット心臓における心筋細胞アポトーシス（図１３Ｆ）に対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を比較する棒グラフである。
【図１３Ｆ】図１３Ａ〜１３Ｆは、単離され、灌流したラット心臓における大動脈の流れ（図１３Ａ）、単離され、灌流したラット心臓における冠動脈の流れ（図１３Ｂ）、単離され、灌流したラット心臓における最大左心室圧（ＬＶＤＰ）（図１３Ｃ）、単離され、灌流したラット心臓における最大左心室圧の最大一次導関数（ＬＶ［ｄＰ／ｄｔ］ｍａｘ）（図１３Ｄ）、単離され、灌流したラット心臓における心筋梗塞サイズ（図１３Ｅ）、および単離され、灌流したラット心臓における心筋細胞アポトーシス（図１３Ｆ）に対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を比較する棒グラフである。
【図１４Ａ】図１４Ａおよび図１４Ｂは、全体的なｍｉＲＮＡ発現に対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を比較する箱ひげ図（図１４Ａ）およびプロフィールプロット（図１４Ｂ）である。
【図１４Ｂ】図１４Ａおよび図１４Ｂは、全体的なｍｉＲＮＡ発現に対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を比較する箱ひげ図（図１４Ａ）およびプロフィールプロット（図１４Ｂ）である。
【図１５Ａ】図１５Ａ〜１５Ｃは、ｍｉＲＮＡ発現パターンに対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を比較する、すべてのサンプルの散布図（図１５Ａ）、ヒートマップ（図１５Ｂ）および主成分分析（図１５Ｃ）である。
【図１５Ｂ】図１５Ａ〜１５Ｃは、ｍｉＲＮＡ発現パターンに対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を比較する、すべてのサンプルの散布図（図１５Ａ）、ヒートマップ（図１５Ｂ）および主成分分析（図１５Ｃ）である。
【図１５Ｃ】図１５Ａ〜１５Ｃは、ｍｉＲＮＡ発現パターンに対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を比較する、すべてのサンプルの散布図（図１５Ａ）、ヒートマップ（図１５Ｂ）および主成分分析（図１５Ｃ）である。
【図１６Ａ】図１６Ａおよび１６Ｂは、ＥＲＫ１／２（図１６Ａ）およびｐ３８  ＭＡＰＫ（図１６Ｂ）のリン酸化に対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を比較する棒グラフである。
【図１６Ｂ】図１６Ａおよび１６Ｂは、ＥＲＫ１／２（図１６Ａ）およびｐ３８  ＭＡＰＫ（図１６Ｂ）のリン酸化に対するレスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））の効果を比較する棒グラフである。
【図１７Ａ】図１７Ａ〜１７Ｃは、ＶＥＧＦに対するｍｉＲ−２０ｂの制御およびＶＥＧＦに対するａｎｔａｇｏｍｉＲ−２０ｂの効果を示すウェスタンブロットの結果（下部）を定量化する棒グラフ（上部）である、ウェスタンブロット分析（図１７Ａ）、ａｎｔａｇｏｍｉＲ−２０ｂで予め処理したサンプルのウェスタンブロット分析（図１７Ｂ）、およびＴａｑｍａｎリアルタイムＰＣＲ定量化（図１７Ｃ）である。
【図１７Ｂ】図１７Ａ〜１７Ｃは、ＶＥＧＦに対するｍｉＲ−２０ｂの制御およびＶＥＧＦに対するａｎｔａｇｏｍｉＲ−２０ｂの効果を示すウェスタンブロットの結果（下部）を定量化する棒グラフ（上部）である、ウェスタンブロット分析（図１７Ａ）、ａｎｔａｇｏｍｉＲ−２０ｂで予め処理したサンプルのウェスタンブロット分析（図１７Ｂ）、およびＴａｑｍａｎリアルタイムＰＣＲ定量化（図１７Ｃ）である。
【図１７Ｃ】図１７Ａ〜１７Ｃは、ＶＥＧＦに対するｍｉＲ−２０ｂの制御およびＶＥＧＦに対するａｎｔａｇｏｍｉＲ−２０ｂの効果を示すウェスタンブロットの結果（下部）を定量化する棒グラフ（上部）である、ウェスタンブロット分析（図１７Ａ）、ａｎｔａｇｏｍｉＲ−２０ｂで予め処理したサンプルのウェスタンブロット分析（図１７Ｂ）、およびＴａｑｍａｎリアルタイムＰＣＲ定量化（図１７Ｃ）である。
【図１８Ａ】図１８Ａおよび図１８Ｂは、ＨＩＦ−１ａ発現に対するｍｉＲ−２０ｂの制御およびＨＩＦ−１ａ発現に対するａｎｔａｇｏｍｉＲ−２０ｂの効果を示すウェスタンブロット（下部）の結果を定量化する棒グラフ（上部）であり、ウェスタンブロット分析（図１８Ａ）およびａｎｔａｇｏｍｉＲ−２０ｂで予め処理した場合のサンプルのウェスタンブロット分析（図１８Ｂ）を含む。
【図１８Ｂ】図１８Ａおよび図１８Ｂは、ＨＩＦ−１ａ発現に対するｍｉＲ−２０ｂの制御およびＨＩＦ−１ａ発現に対するａｎｔａｇｏｍｉＲ−２０ｂの効果を示すウェスタンブロット（下部）の結果を定量化する棒グラフ（上部）であり、ウェスタンブロット分析（図１８Ａ）およびａｎｔａｇｏｍｉＲ−２０ｂで予め処理した場合のサンプルのウェスタンブロット分析（図１８Ｂ）を含む。
【図１９】図１９は、レスベラトロールおよび本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））について反応性酸素種の細胞内定量化を比較する棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
（詳細な説明）
本実施形態は、レスベラトロール含有組成物および特に、レスベラトロール含有食物組成物（ｄｉｅｔａｒｙ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）（すなわち、レシピエントによる経口摂取が容易にできる組成物）、ならびにこのような組成物を利用する処置および／もしくは予防のための方法に関する。
【０００９】
（Ａ．本実施形態の組成物）
好ましい実施形態において、上記組成物は、トランス−レスベラトロール、金属キレート化剤、および１種以上のさらなる抗酸化剤（例えば、アピゲニン、カフェー酸、ＥＧＣＧ、フェルラ酸、ケルセチン、もしくはビタミンＤ）を含む１種以上の植物抽出物を含むか、またはこれらから本質的になる。これら組成物は、純粋なレスベラトロール単独と比較して、多くの利益を示す。好ましい組成物は、レスベラトロール（好ましくは、体重１ｋｇあたり約１ｍｇ〜体重１ｋｇあたり約２ｇ（より好ましくは、体重１ｋｇあたり約１ｍｇ〜体重１ｋｇあたり約５ｍｇ）の組成物投与量）、キレート化剤、および抗酸化剤を含み、また、他の化合物（例えば、乳化剤、グリコサミノグリカンなど）を含んでいてもよい。
【００１０】
好ましい実施形態において、上記組成物は、ヒト用に意図され、体重１ｋｇあたり約１．０〜約５．０ｍｇ、好ましくは、患者１ｋｇあたり約１．５〜約２．５ｍｇもしくは患者１ｋｇあたり約３〜約４．５ｍｇの量のトランス−レスベラトロール、および以下のうちの１種以上を含むか、またはこれらから本質的になる：
（ａ）キレート化剤（例えば、患者１ｋｇあたり約０．５〜１．５ｍｇ、０．７５〜１．２５ｍｇ、もしくは約１ｍｇの量のフィチン酸）；
（ｂ）さらなるフェノール系抗酸化剤（例えば、患者１ｋｇあたり約０．０５〜２ｍｇ、約０．１〜１．５ｍｇ、もしくは約０．１５〜１ｍｇの量のケルセチンもしくはフェルラ酸、または患者１ｋｇあたり約０．１５〜約６ｍｇ、約０．３〜４．５ｍｇ、もしくは約０．４５〜３ｍｇの総量のケルセチンおよびフェルラ酸の両方）；ならびに
（ｃ）さらなる抗酸化剤（例えば、患者１ｋｇあたり約２．５〜２５００μｇもしくは約２５〜１２５０μｇの量のビタミンＤ）。
【００１１】
好ましい実施形態において、上記組成物は、レスベラトロールを含み、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）（Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，  ＬＬＣ，  Ｓａｎ
Ｄｉｍａｓ，  ＣＡ）として市販されている。Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の４種の異なる製剤が販売されており、各々、トランス−レスベラトロールを含む植物抽出物、ケルセチン二水和物、およびフィチン酸を含む米ぬか抽出物から本質的になる。Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の各用量は、平均（例えば、７０ｋｇ）のヒトへの１日１回の投与に適している。第１世代のＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）組成物の各用量（例えば、カプセル剤）は、以下から本質的になる：５ｍｇ  ビタミンＥ（混合トコフェロールとして）、１００ｍｇのトランス−レスベラトロールを一緒に含む、Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ（フランスの赤ワイン用ブドウ）およびＰｏｌｙｇｏｎｕｍ  ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ（大虎杖）抽出物の混合物２１５ｍｇ、２５ｍｇ  ケルセチン二水和物、フィチン酸を含む７５ｍｇ  米ぬか抽出物、フェルラ酸を含む３８０ｍｇ  米ぬか油、および５５ｍｇ  ヒマワリレシチン。第２世代のＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）組成物の各用量（例えば、カプセル剤）は、以下から本質的になる：１００ｍｇのトランス−レスベラトロールを一緒に含む、Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ（フランスの赤ワイン用ブドウ）およびＰｏｌｙｇｏｎｕｍ  ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ（大虎杖）抽出物の混合物２１５ｍｇ、２５ｍｇ  ケルセチン二水和物、フィチン酸を含む７５ｍｇ  米ぬか抽出物、および５０ｍｇ  フェルレート。第３世代のＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の各用量（例えば、２個のカプセル剤）は、１００ｍｇのトランス−レスベラトロールを含むＰｏｌｙｇｏｎｕｍ  ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ抽出物、１０００  ＩＵのコレカルシフェロール(ｃｈｏ
ｌｅｃａｌｉｆｅｒｏｌ）（ビタミンＤ３）、ケルセチン、およびフィチン酸を含む米ぬか抽出物から本質的になる。第４世代のＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の各用量（例えば、２個のカプセル剤）（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ  ＡｄｖａｎｔａｇｅＴＭとして販売）は、１００ｍｇのトランス−レスベラトロールを含むＰｏｌｙｇｏｎｕｍ  ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ抽出物、１０００  ＩＵのコレカルシフェロール（ビタミンＤ３）、ブドウ種子抽出物、ケルセチン、フェルラ酸、カカオ抽出物、ルテイン、緑茶抽出物、フィチン酸を含む米ぬか抽出物、およびヒアルロナンから本質的になる。
【００１２】
（１．レスベラトロール）
心血管疾患を予防もしくは処置すること、癌を予防もしくは処置すること、黄斑変性を予防もしくは処置すること、加齢と関連する疾患を弱めるもしくは予防すること、ならびに他の状態および病気（神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病およびパーキンソン病）の発生もしくは重篤度を含む）を含む）、ならびに抗炎症活性を含む、複数の有益な生物学的効果（例えば、米国特許第７，３４５，１７８号を参照のこと（開示される効果の列挙は、本明細書に参考として援用される））は、レスベラトロールに帰せられる。
【００１３】
レスベラトロール（３，４’，５  トリヒドロキシスチルベンとしても公知）は、天然には、シス立体異性形態およびトランス立体異性形態で存在する。研究から、レスベラトロールが、生物学的に活性であり、癌予防、抗炎症特性、および心血管効果を含むいくつかの健康上の利益を提供することが示された。「長期間」にわたる生物学的活性を維持するために、植物もしくは合成供給源のの低分子は、好ましくは、ある期間にわたって生物学的に活性なままであり、その後、上記分子は、光、熱もしくは酸素への曝露の結果として、分解もしくは分子の異性化に起因して、天然には生物学的に不活性になる。これら破壊的プロセスは、抽出、封入もしくは貯蔵の間に起こる可能性がある。例えば、レスベラトロールは、約１日という半減期を有し；その結果として、代表的には、周囲条件への曝露の２日以内に、および栄養補助食品の加工処理の間に顕著な生物学的活性を喪失する。好ましくは、本組成物において使用される上記レスベラトロールは、完全にもしくは主に（例えば、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超）、トランス立体異性形態（すなわち、トランス−レスベラトロール）にある。
【００１４】
レスベラトロールは、化学合成されてもよいし、より好ましくは、植物供給源から抽出されてもよい。レスベラトロールは、３１属および１２科の中に分布した少なくとも７２種の植物において見いだされる。レスベラトロールを含むことが見いだされた科のすべては、種子植物門：Ｖｉｔａｃｅａｅ、Ｍｙｒｔａｃｅａｅ、Ｄｉｐｔｅｒｏｃａｒｐａｃｅａｅ、Ｃｙｐｅｒａｃｅａｅ、Ｇｎｅｔａｃｅａｅ、Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ、Ｐｉｎａｃｅａｅ、Ｍｏｒａｃｅａｅ、Ｆａｇａｃｅａｅ、Ｌｉｌｉａｃｅａｅに属する。レスベラトロールは、最も頻繁には、非食用植物において報告されてきた：つる植物、ユーカリ、トウヒ、および熱帯性落葉樹Ｂａｕｈｉｎｉａ  ｒａｃｅｍｏｓａ、Ｐｔｅｒｏｌｏｂｉｕｍ  Ｈｅｘａｐｅｔａｌｌｕｍ。レスベラトロールは、葡萄果皮および大虎杖、カカオおよびチョコレートにおいて特に見いだされる。落花生の新芽はまた、レスベラトロールの豊富な供給源である。
【００１５】
好ましい実施形態において、上記レスベラトロールは、天然由来である、すなわち、少なくとも１つの天然供給源、例えば、植物（もしくはその一部（例えば、上記植物由来の塊茎もしくは果実（果肉および果皮を含む）））に由来する。１つの好ましい供給源は、ブドウ（例えば、Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ、Ｖｉｔｉｓ  ｌａｂｒｕｓｃａ、およびＶｉｔｉｓ  ｒｏｔｕｎｄｉｆｏｌｉａ）の種子および／もしくは果皮である。別の好ましい供給源は、Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ（大虎杖）および、特に、Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ  ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ（大虎杖の１種）である。上記天然から得るプロセスは、一般に、当該分野で公知のプロセスを含み、上記プロセスとしては、溶媒を使用して、天然供給源から低分子を抽出するために使用される抽出プロセスが挙げられる。上記溶媒は、水性溶媒、有機溶媒、およびこれらの混合物を含む。上記溶媒としては、アルコール（例えば、エタノール）が挙げられるが、これらに限定されない。具体例によれば、上記抽出された材料は、植物（もしくはその一部）、果汁（例えば、ブドウ果汁）、ならびに植物または果汁から生成される醸造酒（例えば、ワイン）、または上述のうちのいずれかの混合物の水性溶媒抽出物もしくは有機溶媒抽出物を含み得る。上記抽出された材料は、上記抽出プロセスの間に天然には除去される不活性植物材料をさらに含み得る。上記抽出された材料は、上記溶媒を除去し、上記低分子の濃度を高めるために、加工処理され得る（物理的におよび／もしくは化学的に）。例えば、上記溶媒は、上記抽出物から（例えば、乾燥によって）除去され得、乾燥粉末が残る。
【００１６】
好ましい実施形態において、上記組成物は、トランス−レスベラトロールを含む植物抽出物（例えば、Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ、Ｖｉｔｉｓ  ｌａｂｒｕｓｃａ、もしくはＶｉｔｉｓ  ｒｏｔｕｎｄｉｆｏｌｉａからの植物（ブドウ）抽出物、Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ種からの植物抽出物、またはブドウおよび／もしくはＰｏｌｙｇｏｎｕｍ抽出物の組み合わせを含むか、またはこれらから本質的になる。好ましい実施形態において、上記組成物は、ブドウおよびＰｏｌｙｇｏｎｕｍ抽出物（各々は、トランス−レスベラトロールを含む）の混合物を含むかもしくはこれらから本質的になる。本明細書で使用される場合、用語「抽出物」もしくは「植物抽出物」は、活性な構成要素（例えば、トランス−レスベラトロール）を適切な溶媒もしくは溶剤（ｍｅｎｓｔｒｕｕｍ）で除去することによって得られる植物の濃縮された薬学的調製物のその通常の意味を有する。上記溶媒もしくは溶剤は、エバポレートされるか、または植物抽出物の残りの大部分を得るために別の方法で除去される。上記抽出物は、定められた標準品へと調節され得る。従って、例えば、供給源植物、有機塩および無機塩、有機塩基および有機酸、サポニン、ポリフェノール、タンニン、糖、ポリサッカリドなどに依存して、「抽出物」もしくは「植物抽出物」が、単に純粋な１つの活性成分でも複数の活性成分でもないが、代わりに、供給源植物に由来する二次的な材料を含むことは、当業者によって理解される。
【００１７】
好ましい実施形態において、トランス−レスベラトロールは、約１重量％、約２重量％、約３重量％、約４重量％、約５重量％、約６重量％、約７重量％、約８重量％、約９重量％、約１０重量％、約１１重量％、約１２重量％、約１３重量％、約１４重量％、約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％、約１８重量％、約１９重量％、約２０重量％、約２５重量％、約３０重量％、約３５重量％、約４０重量％、約４５重量％、約５０重量％、約５５重量％、約６０重量％、約６５重量％、約７０重量％、約７５重量％、約８０重量％、約８５重量％、約９０重量％もしくは約９５重量％の量で上記組成物中に存在するか、またはこれら量のうちのいずれか２つの間の任意の範囲（例えば、約１０〜３０％の間）において、これら量のうちのいずれか２つより小さいもしくはそれより大きい量において（例えば、１５％より小さいもしくは７５％より大きい）、またはこれら量のうちのいずれか２つ以下かもしくは以上の量において（例えば、１５％以下）存在する。異なる好ましい実施形態において、上記トランス−レスベラトロールは、約５〜５０重量％、７．５〜４５重量％、１０〜４０重量％、１２．５〜３５重量％、１５〜３０重量％、もしくは２０〜２５重量％の量で上記組成物中に存在する。別の好ましい実施形態において、トランス−レスベラトロールは、約５〜３０重量％もしくは１０〜２０重量％の量において上記組成物中に存在する。異なる好ましい実施形態において、トランス−レスベラトロールは、約１０〜３５重量％、１２．５〜３０重量％、もしくは１５〜２５重量％の量で、または約１５〜３５重量％もしくは２０〜３０重量％の量で上記組成物中に存在する。
【００１８】
好ましい実施形態において、トランス−レスベラトロールは、上記患者の１ｋｇあたりｍｇのトランス−レスベラトロールの投与量を提供するように計算された量で上記組成物に存在し、上記投与量は、例えば、患者の１ｋｇあたり約０．２５ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．７５ｍｇ、約１ｍｇ、約１．２５ｍｇ、約１．５ｍｇ、約１．７５ｍｇ、約２ｍｇ、約２．２５ｍｇ、約２．５ｍｇ、約２．７５ｍｇ、約３ｍｇ、約３．２５ｍｇ、約３．５ｍｇ、約３．７５ｍｇ、約４ｍｇ、約４．２５ｍｇ、約４．５ｍｇ、約４．７５ｍｇもしくは約５ｍｇのトランス−レスベラトロールの量で上記患者に投与され、これらは、代表的な７０ｋｇのヒト患者に関しては、約１７．５ｍｇ、約３５ｍｇ、約５２．５ｍｇ、約７０ｍｇ、約８７．５ｍｇ、約１０５ｍｇ、約１２２．５ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５７．５ｍｇ、約１７５ｍｇ、約１９２．５ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２７．５ｍｇ、約２４５ｍｇ、約２６２．５ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９７．５ｍｇ、約３１５ｍｇ、約３３２．５ｍｇ、もしくは約３５０ｍｇのトランス−レスベラトロールの投与量に等しい。別の好ましい実施形態において、トランス−レスベラトロールは、患者の１ｋｇあたり約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ、約６１ｍｇ、約６２ｍｇ、約６３ｍｇ、約６４ｍｇ、約６５ｍｇ、約６６ｍｇ、約６７ｍｇ、約６８ｍｇ、約６９ｍｇ、約７０ｍｇ、約７１ｍｇ、約７２ｍｇ、約７３ｍｇ、約７４ｍｇ、約７５ｍｇ、約７６ｍｇ、約７７ｍｇ、約７８ｍｇ、約７９ｍｇ、約８０ｍｇ、約８１ｍｇ、約８２ｍｇ、約８３ｍｇ、約８４ｍｇ、約８５ｍｇ、約８６ｍｇ、約８７ｍｇ、約８８ｍｇ、約８９ｍｇ、約９０ｍｇ、約９１ｍｇ、約９２ｍｇ、約９３ｍｇ、約９４ｍｇ、約９５ｍｇ、約９６ｍｇ、約９７ｍｇ、約９８ｍｇ、約９９ｍｇもしくは約１００ｍｇのトランス−レスベラトロール、または患者の１ｋｇあたり約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１０５ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１１５ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１３５ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１４５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１５５ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１６５ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１８５ｍｇ、約１９０ｍｇ、約１９５ｍｇもしくは約２００ｍｇのトランス−レスベラトロールの量で、上記組成物中に存在する。上記トランス−レスベラトロールはまた、これら量のうちのいずれか２つの間の任意の範囲（例えば、約０．２５〜４ｍｇ／ｋｇの間、もしくは約２６〜３３ｍｇ／ｋｇの間）で、これら量のうちのいずれかより少ない量で（例えば、約２．５ｍｇ／ｋｇ未満もしくは５０ｍｇ／ｋｇ未満）、これら量のうちのいずれか以下の量で（例えば、約５０ｍｇ／ｋｇ以下）、これら量のうちのいずれかより大きな量で（例えば、約１．２５ｍｇ／ｋｇより大きいもしくは２５ｍｇ／ｋｇより大きい）、またはこれら量のうちのいずれか以上の量で（例えば、約２．５ｍｇ／ｋｇ以上もしくは１００ｍｇ／ｋｇ以上）存在し得る。好ましい実施形態において、トランス−レスベラトロールは、ヒト患者に関して約１．５〜約２．５ｍｇ／ｋｇ、もしくはヒト患者に関して約３〜約４．５ｍｇ／ｋｇの量で上記組成物中に存在する。
【００１９】
（２．キレート化剤）
本明細書で使用される場合、用語「キレート化剤」とは、遊離金属イオンと結合しそして遊離金属イオンを溶液から除去する有機化合物に言及する。適切なキレート化剤の例としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ヒスチジン、テトラサイクリンファミリーの抗生物質薬物、ピリドキサール  ２−クロロベンゾイルヒドラゾン、デスフェリオキサミン、デキスラゾキサン、デフェラシロクス、ピオベルジン、プソイダン（ｐｓｅｕｄａｎ）、シトレート、ＮＤＧＡ（ノルジヒドログアイアレチン酸：１，４−ビス［３，４−ジヒドロキシフェニル］２，３−ジメチルブタン）、フェルラ酸およびフィチン酸が挙げられる。好ましくは、本実施形態の組成物は、約１ｇ〜約１５ｇ、より好ましくは、約２ｇ〜約１２ｇのキレート化剤の組成物投与量を提供する。
【００２０】
フィチン酸は、本実施形態の目的で、特に好ましいキレート化剤である。本明細書で使用される場合、用語「フィチン酸」とは、イノシトールヘキサホスフェート（（２，３，４，５，６−ペンタホスホノオキシシクロヘキシル）二水素ホスフェート；「ＩＰ６」ともいわれる）に言及する。フィチン酸は、穀物全体、穀類、豆類、堅果、および種子において実質的な量で見いだされ、発芽中の植物にとっての主なエネルギー源である。フィチン酸およびその低リン酸化形態（例えば、ＩＰ３）はまた、大部分の哺乳動物細胞において見いだされ、細胞中で、それらは、種々の重要な細胞機能の調節を助ける。フィチン酸は、好ましくは、フィチン酸を含む米ぬか抽出物の形態で提供される。フィチン酸は、二価カチオン（例えば、銅および鉄）をキレート化し、それによって、細胞傷害および発癌を担う反応性酸素種の生成を防止することによって、抗酸化剤として機能することが報告されている。フィチン酸（例えば、抽出物として米ぬかから得られるような）の好ましい組成物の投与量は、１日あたり２００〜１２，０００ｍｇ、より好ましくは、約２５０〜２５００ｍｇの範囲にある。
【００２１】
フィチン酸はまた、腫瘍細胞において増殖因子として、およびカルシウム結晶化のインヒビターとして働く金属ミネラルの利用性を低下させると考えられる。また、好中球のプライミングおよび運動性の因子として働くと考えられる。さらに、フィチン酸は、神経保護的であり、従って、神経変性疾患（特に、パーキンソン病、前屈症、およびアルツハイマー病）と関連する状態の重篤度を弱めることが見いだされた。本組成物の成分は、このような神経保護を増強すると考えられる。
【００２２】
上記キレート化剤は、天然供給源のものであっても合成供給源のものであってもよく、合成キレート化剤（例えば、デスフェリオキサミン、ＥＤＴＡ、およびｄ−ペニシラミン）もしくは天然キレート化剤（例えば、ラクトフェリン、イノシトールヘキサホスフェート（ＩＰ６）、ケルセチン、カテキン、フェルラ酸、クルクミン、エラグ酸、ヒドロキシチロソール、アントシアニジンなど）が挙げられ得るが、これらに限定されない。
【００２３】
好ましい実施形態において、キレート化剤は、約１重量％、約２重量％、約３重量％、約４重量％、約５重量％、約６重量％、約７重量％、約８重量％、約９重量％、約１０重量％、約１１重量％、約１２重量％、約１３重量％、約１４重量％、約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％、約１８重量％、約１９重量％、約２０重量％、約２５重量％、約３０重量％、約３５重量％、約４０重量％、約４５重量％、約５０重量％、約５５重量％、約６０重量％、約６５重量％、約７０重量％、約７５重量％、約８０重量％、約８５重量％、約９０重量％もしくは約９５重量％の量で、または患者の１ｋｇあたり約０．２５ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．７５ｍｇ、約１ｍｇ、約１．２５ｍｇ、約１．５ｍｇ、約１．７５ｍｇ、約２ｍｇ、約２．２５ｍｇ、約２．５ｍｇ、約２．７５ｍｇ、約３ｍｇ、約３．２５ｍｇ、約３．５ｍｇ、約３．７５ｍｇ、約４ｍｇ、約４．２５ｍｇ、約４．５ｍｇ、約４．７５ｍｇもしくは約５ｍｇのキレート化剤の量で、上記組成物中に存在するか、あるいはこれら量のうちのいずれか２つの間の任意の範囲で、これら量のうちのいずれか２つより少ないかもしくは多い量で、またはこれら量のうちのいずれか２つ以下かもしくは以上の量で存在する。好ましい実施形態において、上記キレート化剤は、約１０〜３５％、１５〜３０％、２０〜３０％、もしくは１７．５〜２７．５％の量で、または患者１ｋｇあたり約０．５〜１．５ｍｇ、患者１ｋｇあたり０．７５〜１．２５ｍｇ、もしくは患者１ｋｇあたり約１ｍｇの量で、上記組成物中に存在する。
【００２４】
（３．さらなる抗酸化剤）
さらなる抗酸化剤（例えば、フェノール系抗酸化剤もしくはビタミンＤ）は、上記組成物に添加され得る。さらなる上記フェノール系抗酸化剤は、例えば、ケルセチン、フェルラ酸、ブテイン、フィセチン、ミリセチン、ケンペロール、シス−レスベラトロールもしくはピセアタンノールであり得る。上記抗酸化剤は、レスベラトロールのグルクロン酸抱合を阻害することによって、レスベラトロールの改善されたバイオアベイラビリティーを提供し、また、レスベラトロールと相乗作用で、もしくはレスベラトロールとは無関係に、有益な機能を提供すると考えられる。
【００２５】
さらなる上記フェノール系抗酸化剤は、多くの化学的クラスのフェノール系抗酸化剤化合物（例えば、カルコン（例えば、ブテイン）、フラボノイド、ヒドロキシ桂皮酸、およびスチルベノイド（例えば、シス−レスベラトロール、ピセアタンノール））に属し得る。上記フラボノイドは、フェノール化合物の大きなクラスであり、フラバノール（２−フェニル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメン−３−オール（例えば、カテキンおよびエピカテキン））、フラボン（２−フェニルクロメン−４−オン（例えば、アピゲニン））、およびフラボノール（３−ヒドロキシ−２−フェニルクロメン−４−オン（例えば、ケルセチン））を含む。
【００２６】
一実施形態において、さらなる上記フェノール系抗酸化剤は、抗酸化剤であるカルコン（例えば、ブテイン）を含むかもしくはこれからなる。別の実施形態において、さらなる上記フェノール系抗酸化剤は、カフェー酸、シコリン酸、クロロゲン酸、カフタル酸、クマル酸、クタル酸、ジフェルラ酸、フェルタル酸、およびフェルラ酸、またはこれらの組み合わせからなる群より選択されるヒドロキシ桂皮酸を含むか、またはこれらからなる。好ましい実施形態において、さらなる上記フェノール系抗酸化剤は、カフェー酸およびフェルラ酸の組み合わせを含むか、またはこれからなる。さらにまた別の実施形態において、さらなる上記フェノール系抗酸化剤は、シス−レスベラトロールおよびピセアタンノールからなる群より選択されるスチルベノイドを含むか、またはこれからなる。
【００２７】
さらなる実施形態において、さらなる上記フェノール系抗酸化剤は、カテキン（Ｃ）、カテキン  ３−ガラート（ＣＧ）、エピカテキン（ＥＣ）、エピカテキン  ３−ガラート（ＥＣＧ）、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、エピガロカテキン３−ガラート（ＥＧＣＧ）、ガロカテキン（ＧＣ）、およびガロカテキン  ３−ガラート（ＧＣＧ）、もしくはこれらの組み合わせからなる群より選択されるフラバノールを含むか、またはこれらからなる。好ましい実施形態において、さらなる上記フェノール系抗酸化剤は、エピガロカテキン３−ガラート（ＥＧＣＧ）を含むか、またはこれからなる。別の実施形態において、さらなる上記フェノール系抗酸化剤は、アピゲニン、バイカレイン、クリシン、ジオスミン、ルテオリン、スクテラレイン、タンゲレチン、およびウォゴニン、もしくはこれらの組み合わせからなる群より選択されるフラボンを含むか、もしくはこれらからなる。好ましい実施形態において、さらなる上記フェノール系抗酸化剤は、アピゲニンを含むか、またはこれからなる。さらにまた別の実施形態において、さらなる上記フェノール系抗酸化剤は、ケルセチン、ケンペロール、ミリセチン、フィセチン、イソラムネチン、パキポドール、およびラムナジン、もしくはこれらの組み合わせからなる群より選択されるフラボノールを含むか、またはこれらからなる。好ましい実施形態において、さらなる上記フェノール系抗酸化剤は、ケルセチンを含むか、またはこれからなる。
【００２８】
さらなる上記フェノール系抗酸化剤はまた、フェノール系抗酸化剤の組み合わせ（例えば、１種以上のヒドロキシ桂皮酸と組み合わせた１種以上のフラボノイドなど）を含み得るか、またはこれらからなり得る。一実施形態において、さらなる上記フェノール系抗酸化剤は、アピゲニン、カフェー酸、ＥＧＣＧ、フェルラ酸、およびケルセチンの組み合わせを含むか、またはこれからなる。
【００２９】
好ましい実施形態において、１種以上のさらなるフェノール系抗酸化剤は、約１重量％、約２重量％、約３重量％、約４重量％、約５重量％、約６重量％、約７重量％、約８重量％、約９重量％、約１０重量％、約１１重量％、約１２重量％、約１３重量％、約１４重量％、約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％、約１８重量％、約１９重量％、約２０重量％、約２５重量％、約３０重量％、約３５重量％、約４０重量％、約４５重量％、約５０重量％、約５５重量％、約６０重量％、約６５重量％、約７０重量％、約７５重量％、約８０重量％、約８５重量％、約９０重量％もしくは約９５重量％の量で、または患者の１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．１５ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．２５ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．３５ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．４５ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．５５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．６５ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．７５ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．８５ｍｇ、約０．９ｍｇ、約０．９５ｍｇ、約１ｍｇ、約１．２５ｍｇ、約１．５ｍｇ、約１．７５ｍｇ、約２ｍｇ、約２．２５ｍｇ、約２．５ｍｇ、約２．７５ｍｇ、約３ｍｇ、約３．２５ｍｇ、約３．５ｍｇ、約３．７５ｍｇ、約４ｍｇ、約４．２５ｍｇ、約４．５ｍｇ、約４．７５ｍｇもしくは約５ｍｇのさらなるフェノール系抗酸化剤の量で上記組成物中に存在するか、あるいはこれら量のうちのいずれか２つの間の任意の範囲で、これら量のうちのいずれか２つより少ないかもしくは多い量で、またはこれら量のうちのいずれか２つ以下かもしくは以上の量で存在する。好ましい実施形態において、１種以上のさらなる上記フェノール系抗酸化剤は、約１〜２５％、２．５〜２０％、５〜１５％、もしくは７．５〜１２．５％の量で、または約５〜１０％の量で、または患者１ｋｇあたり約０．０５〜２ｍｇ、約０．１〜１．５ｍｇ、もしくは約０．１５〜１ｍｇの量で、または患者１ｋｇあたり約０．１５〜約６ｍｇ、約０．３〜４．５ｍｇ、もしくは約０．４５〜３ｍｇの量で上記組成物中に存在する。
【００３０】
非フェノール系抗酸化剤（例えば、ビタミンＤ）はまた、上記組成物中に存在し得る。本明細書で使用される場合、用語「ビタミンＤ」とは、脂溶性プロホルモンに言及する。ビタミンＤの２つの主要な形態は、ビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）およびビタミンＤ３（コルカルシフェロール）である（ＤｅＬｕｃａ，  Ｈ．Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）  Ｎｕｔｒ．  Ｒｅｖ．  ５６：Ｓ４−Ｓ１０）。ビタミンＤは、多くの生物学的作用を示す。ビタミンＤは、骨疾患（成長中の小児におけるくる病、高齢の成人における骨粗鬆症）をかろうじて食い止めるその能力について広く公知である一方で、癌との戦いにおいて中心的なプレーヤーになりつつある。免疫および癌におけるビタミンＤの役割に関して、ビタミンＤは、化学走性（親和性がある）好中球の動員および移動を改善する。ビタミンＤ欠乏に起因してくる病を有する患者は、適切に移動できない緩慢な好中球を有することが観察されている。ビタミンＤは、単球からマクロファージへの成熟を刺激する。このことは、腫瘍に打ち勝つように免疫攻撃細胞の増強された軍を生じる。ビタミンＤは、広く商業的に入手可能であり、このような調製物は、本実施形態の目的に適している。
【００３１】
ビタミンＤは、最適な筋肉、骨、脳、免疫および心血管の健康に必須であり、全世界の加齢研究者が再発見をし続けている。最大２０００  ＩＵまでのビタミンＤ補充が、死亡率を顕著に低下させることが示されており、このことから、ビタミンＤを、いまや、真の長寿因子であると考えられている分子のラインナップに加えている（Ａｕｔｉｅｒ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．（２００７）  Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．  １６７（１６）：１７３０−１７３７）。その抗石灰化特性（Ｚｉｔｔｅｒｍａｎｎ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．（２００７）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｌｉｐｉｄｏｌｏｇｙ  １８（１）：４１−４６）は、ビタミンＤを、高齢のヒト身体における進行性過鉱化作用を阻害し、本実施形態の組成物中の他のミネラルキレート化剤の作用と並行する、別の強力な薬剤と評する。上記１２００  ＩＵの用量が、１日あたりの推奨許容量より３倍高い一方で、米国科学アカデミーにより確立された安全上限（２０００  ＩＵ）内に十分あり、ヒト臨床試験において有益であると最近見いだされた補充投与量と一致する（Ｌａｐｐｅ，  Ｊ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．（２００７）  Ａｍｅｒ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｎｕｔｒ．  ８５（６）：１５８６−１５９１）。２，０００  ＩＵの投与量は、南緯においては真昼に、全身が１５〜３０分間、夏の日光に曝露されることによって生成される天然のビタミンＤ３にほぼ等しい。それについては、副作用は報告されていない。好ましくは、本実施形態の組成物は、約１００  ＩＵ〜約１００，０００  ＩＵ、より好ましくは、約１，０００  ＩＵ〜約５０，０００  ＩＵのビタミンＤの組成物投与量を提供する。
【００３２】
ビタミンＤ３は、生物学的ストレッサーである日射への応答を摸倣する因子として働く。特に、ビタミンＤ３は、免疫系、特に、好中球数および運動性の活性化に関与する防御遺伝子をアップレギュレートし、皮膚の肥厚化（これは、ビタミンＤの日光／皮膚生成を低下させる）に起因する、高齢に伴う内因性のビタミンＤ３生成の低下を克服する助けをする。さらに、ビタミンＤ３は、ＩＰ６をＩＰ３（主要な活性分子であると考えられる）へと分解するように相乗作用で働く。レスベラトロールはまた、細胞をビタミンＤ３に対して感受性にする（細胞表面のビタミンＤレセプターを感受性にする）ように相乗作用で働く。ビタミンＤは、ＩＰ６をＩＰ３（これは、その主な活性形態である）へ分解するように働く。ビタミンＤはまた、ヒトにおける先天性免疫をブーストする免疫系増強因子として作用すると考えられる。この能力において、ビタミンＤは、重要な癌予防特性および癌治癒特性を有することが実験的に示された。レスベラトロールは、細胞の表面上のビタミンＤレセプターの感受性を増大させ、従って、ビタミンＤの増強剤としておよび抗癌剤として作用すると考えられる。レスベラトロールは、健康な細胞および癌細胞の表面のビタミンＤレセプターをアップレギュレートし、癌細胞をビタミンＤに感受性にする。レスベラトロールはまた、モノアミンオキシダーゼインヒビター（ＭＡＯインヒビター）であると考えられる。
【００３３】
好ましい実施形態において、ビタミンＤは、約１重量％、約２重量％、約３重量％、約４重量％、約５重量％、約６重量％、約７重量％、約８重量％、約９重量％、約１０重量％、約１１重量％、約１２重量％、約１３重量％、約１４重量％、約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％、約１８重量％、約１９重量％、約２０重量％、約２５重量％、約３０重量％、約３５重量％、約４０重量％、約４５重量％、約５０重量％、約５５重量％、約６０重量％、約６５重量％、約７０重量％、約７５重量％、約８０重量％、約８５重量％、約９０重量％もしくは約９５重量％の量で、または患者の１ｋｇあたり約０．２５μｇ、約０．５μｇ、約０．７５μｇ、約１μｇ、約１．２５μｇ、約１．５μｇ、約１．７５μｇ、約２μｇ、約２．２５μｇ、約２．５μｇ、約２．７５μｇ、約３μｇ、約３．２５μｇ、約３．５μｇ、約３．７５μｇ、約４μｇ、約４．２５μｇ、約４．５μｇ、約４．７５μｇもしくは約５μｇのビタミンＤの量で、または患者の１ｋｇあたり約５μｇ、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、約２５μｇ、約３０μｇ、約３５μｇ、約４０μｇ、約４５μｇ、約５０μｇ、約５５μｇ、約６０μｇ、約６５μｇ、約７０μｇ、約７５μｇ、約８０μｇ、約８５μｇ、約９０μｇ、約９５μｇ、約１００μｇ、約１０５μｇ、約１１０μｇ、約１１５μｇ、約１２０μｇ、約１２５μｇ、約１３０μｇ、約１３５μｇ、約１４０μｇ、約１４５μｇ、約１５０μｇ、約１５５μｇ、約１６０μｇ、約１６５μｇ、約１７０μｇ、約１７５μｇ、約１８０μｇ、約１８５μｇ、約１９０μｇ、約１９５μｇ、約２００μｇ、約２２５μｇ、約２５０μｇ、約２７５μｇ、約３００μｇ、約３２５μｇ、約３５０μｇ、約３７５μｇ、約４００μｇ、約４２５μｇ、約４５０μｇ、約４７５μｇ、約５００μｇ、約５２５μｇ、約５５０μｇ、約５７５μｇ、約６００μｇ、約６２５μｇ、約６５０μｇ、約６７５μｇ、約７００μｇ、約７２５μｇ、約７５０μｇ、約７７５μｇ、約８００μｇ、約８２５μｇ、約８５０μｇ、約８７５μｇ、約９００μｇ、約９２５μｇ、約９５０μｇ、約９７５μｇ、約１０００μｇ、約１１００μｇ、約１２００μｇ、約１３００μｇ、約１４００μｇ、約１５００μｇ、約１６００μｇ、約１７００μｇ、約１８００μｇ、約１９００μｇ、約２０００μｇ、約２１００μｇ、約２２００μｇ、約２３００μｇ、約２４００μｇ、約２５００μｇ、約２６００μｇ、約２７００μｇ、約２８００μｇ、約２９００μｇもしくは約３０００μｇのビタミンＤの量で、上記組成物中に存在する。ビタミンＤはまた、約５０〜１５０，０００  ＩＵ、約１００−１００，０００  ＩＵ、もしくは約１０００〜５０，０００  ＩＵの量で存在し得、ここで１μｇのビタミンＤは、４０  ＩＵに等しい。ビタミンＤはまた、これら量のうちのいずれか２つの間の任意の範囲で、これら量のうちのいずれか２つより少ないかもしくは多い量で、またはこれら量のうちのいずれか２つ以下かもしくは以上の量で存在し得る。好ましい実施形態において、ビタミンＤは、患者の１ｋｇあたり約２．５〜２５００μｇ、もしくは患者の１ｋｇあたり約２５〜１２５０μｇの量で、上記組成物中に存在する。
【００３４】
（４．グリコサミノグリカン）
上記組成物は、コラーゲン構築栄養素（例えば、ビタミンＣ−アスコルベート、リジン、プロリンなど）、および／もしくはグリコサミノグリカン（例えば、短くした（低分子量）鎖のヒアルロン酸（ＨＡ）もしくはその稀な成分（グルコサミン、グルクロネート）またはコンドロイチン硫酸を含み得、これらは、軟骨の構造成分として働くが、この組み合わせにおいては、生細胞を取り囲む非細胞（結合）組織において相乗作用の共治癒因子（ｃｏ−ｈｅａｌｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）として働く線状のジサッカリド（糖様の分子）である。上記コラーゲン構築栄養素は、コラーゲンおよび細胞内ベースで機能する低分子の生成を促進する。
【００３５】
本明細書で使用される場合、用語「ヒアルロン酸」（ヒアルロナンとしても公知）は、交互になっているβ−１，４グリコシド結合およびβ−１，３グリコシド結合を介して一緒に連結されたＤ−グルクロン酸およびＤ−Ｎ−アセチルグルコサミンのジサッカリドの反復から構成される直鎖状のポリマー（［−b（１，４）−ＧｌｃＵＡ−b（１，３）−ＧｌｃＮＡｃ−］ｎ）に言及する。ヒアルロン酸は、長さが２５，０００ジサッカリド反復（ｎ）であり得る。ヒアルロン酸は、ヒト身体において天然に生成されるが、身体が年齢を経るにつれて量が減少する、水を保持する分子である。ヒアルロン酸は、細胞の細胞周辺マトリクスの基礎を形成する多機能性グリコサミノグリカンである。ヒアルロン酸は、３種の、異なるが関連する酵素によって合成される。米国特許出願公開第２００４／０２３４４９７号は、癌薬物送達のためのヒアルロン酸の使用を開示する。その公報の開示全体は、本明細書に参考として援用される。ヒアルロン酸は、雄鶏の鶏冠から、ウシもしくは魚類の硝子体液から、微生物による生成物から、または他の供給源から伝統的に抽出されてきた。最も好ましくは、本実施形態のヒアルロン酸は、雄鶏の鶏冠から得られる。ヒアルロン酸は、広く市販されており、このような調製物は、本実施形態の目的に適している。好ましくは、本実施形態の組成物は、約１ｍｇ〜約４００ｍｇ、より好ましくは、約５０ｍｇ〜約２００ｍｇのヒアルロン酸の組成物投与量を提供する。
【００３６】
ヒアルロン酸は、足場および水和の因子として働くヒト身体の水でゲル化する分子である。年齢が進むにつれて、ヒアルロン酸の生成は少なくなり、皺のいった皮膚、薄毛、関節の潤滑性の低下を生じる。本組成物のキレート化剤はまた、身体におけるヒアルロン酸を保持する助けをする。ヒアルロン酸成分およびミネラルキレート化成分（例えば、レスベラトロール、ケルセチン、フィチン酸  ＩＰ６、フェルレート）は、細胞および結合組織の中の若々しい機能を保持する完全な老化防止ストラテジーとして働く。ヒアルロン酸は、癌細胞への親和性を有すると考えられる。それは、血液循環中での送達および標的化（薬物送達剤）分子として働き、結合組織の加齢に対処すると考えられる。細胞間の結合組織の完全性の崩壊および喪失は、加齢のサインを提供する（例えば、皮膚の皺、薄毛、関節のこわばり、身長が低くなることなど）。本組成物へのヒアルロン酸の添加は、ヒト身体において線維芽細胞を活性化して、さらなるヒアルロン酸を生成し、従って、結合組織（コラーゲン）を若い状態に保持するように働くと考えられる。
【００３７】
好ましい実施形態において、１種以上のグリコサミノグリカンは、約１重量％、約２重量％、約３重量％、約４重量％、約５重量％、約６重量％、約７重量％、約８重量％、約９重量％、約１０重量％、約１１重量％、約１２重量％、約１３重量％、約１４重量％、約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％、約１８重量％、約１９重量％、約２０重量％、約２５重量％、約３０重量％、約３５重量％、約４０重量％、約４５重量％、約５０重量％、約５５重量％、約６０重量％、約６５重量％、約７０重量％、約７５重量％、約８０重量％、約８５重量％、約９０重量％もしくは約９５重量％の量で、または患者の１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．１５ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．２５ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．３５ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．４５ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．５５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．６５ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．７５ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．８５ｍｇ、約０．９ｍｇ、約０．９５ｍｇ、約１ｍｇ、約１．２５ｍｇ、約１．５ｍｇ、約１．７５ｍｇ、約２ｍｇ、約２．２５ｍｇ、約２．５ｍｇ、約２．７５ｍｇ、約３ｍｇ、約３．２５ｍｇ、約３．５ｍｇ、約３．７５ｍｇ、約４ｍｇ、約４．２５ｍｇ、約４．５ｍｇ、約４．７５ｍｇ、約５ｍｇ、約５．２５ｍｇ、約５．５ｍｇ、約５．７５ｍｇ、約６ｍｇ、約６．２５ｍｇ、約６．５ｍｇ、約６．７５ｍｇ、約７ｍｇ、約７．２５ｍｇ、約７．５ｍｇ、約７．７５ｍｇ、約８ｍｇ、約８．２５ｍｇ、約８．５ｍｇ、約８．７５ｍｇ、約９ｍｇ、約９．２５ｍｇ、約９．５ｍｇ、約９．７５ｍｇもしくは約１０ｍｇのグリコサミノグリカンの量で上記組成物中に存在するか、あるいはこれら量のうちのいずれか２つの間の任意の範囲で、これら量のうちのいずれか２つより少ないかもしくは多い量で、またはこれら量のうちのいずれか２つ以下かもしくは以上の量で存在する。好ましい実施形態において、１種以上の上記グリコサミノグリカンは、患者の１ｋｇあたり約０．２５〜４、０．５〜３．７、もしくは０．７５〜３．５ｍｇの量で上記組成物に存在する。
【００３８】
（５．他の成分）
本実施形態の組成物は、さらなる成分（レスベラトロールの生物学的活性を増強するように作用するさらなる活性成分、および不活性化合物（例えば、香味剤、甘味剤、色素、ビタミン、アミノ酸（例えば、リジン、プロリンなど）、ミネラル、栄養素など）を含む）を含み得る。例えば、トコフェロール（例えば、ビタミンＥ）、ヒマワリレシチン、ブドウ種子抽出物、カカオ抽出物、ルテイン、および緑茶抽出物は、特定の実施形態において好ましいさらなる成分である。乳化剤、充填剤、結合剤などはまた、本実施形態の組成物中に含まれ得る。
【００３９】
本実施形態の組み合わせは、栄養補助食品としてのヒトもしくは動物の経口摂取のために意図される。例えば、このような組成物は、いくつかの癌を含む種々の病気を治癒するように働く栄養補助食品においてレスベラトロールおよびヒアルロナンの組み合わせを含み得る。レスベラトロールは、抗癌分子であり、他の治癒および長寿増強特性を有することが公知である。ヒアルロナン（ヒアルロン酸、ＨＡ）は、経口用サプリメントとして摂取されるか、または癌細胞を標的化するために静脈内に与えられ得る。他の分子と合わせられるかもしくは他の分子に結合される場合、ヒアルロナンは、他の抗癌剤および治癒剤（例えば、レスベラトロール）を腫瘍部位に送達する。上記組み合わせは、キレート化剤、抗酸化剤および／もしくは乳化剤を含んでいても、含んでいなくてもよい。それら添加剤ありもしくはなしで封入されるかもしくは別の方法で一緒に適用される場合、レスベラトロールおよびＨＡは、動物およびヒトにとって強力な治癒特性を有する。
【００４０】
最も好ましくは、本実施形態の組成物は、レスベラトロールの比活性を安定化し、その結果、上記組成物のレスベラトロールは、酸素ガスの存在下で維持されたか、もしくはキレート化剤、ヒアルロン酸、もしくはビタミンＤの非存在下で維持されたレスベラトロールの比活性より大きい比活性を有する。好ましくは、上記組成物の非レスベラトロール構成要素の量は、上記組成物のレスベラトロールを安定化し、その結果、そのレスベラトールは、酸素ガスの存在下で維持されたか、またはキレート化剤、ヒアルロン酸、もしくはビタミンＤの非存在下で維持されたレスベラトロールの活性より少なくとも１０％高い活性、少なくとも２０％高い活性、少なくとも５０％高い活性、少なくとも２倍高い活性、少なくとも５倍高い活性、もしくは少なくとも１０倍高い活性を示し、かつ長期間（例えば、１ヶ月、２ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、１０ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、もしくは３６ヶ月以上）にわたって、周囲条件の温度および湿度において（すなわち、温度もしくは湿度に関して特別の用心の必要性なしに）、このような比活性を示す能力を維持する。
【００４１】
好ましい実施形態において、上記組成物は、トランス−レスベラトロールおよび以下のうちの１種以上を含む１種以上の植物抽出物を含むか、またはこれらから本質的になる：キレート化剤（例えば、フィチン酸）；１種以上のさらなるフェノール系抗酸化剤（例えば、ケルセチンもしくはフェルラ酸（フェルレート））；およびビタミンＤ。これら組成物は、純粋なレスベラトロール単独と比較して、多くの利益を示す。以下の実施例６において詳細に説明される特定の利益は、本組成物が、レスベラトロールに特徴的なホルメシス作用（低用量において刺激性であるが、より高用量においては有害であり、Ｊ字型もしくは逆Ｕ字型の用量反応曲線を生じる用量反応相関）を示さないことである。代わりに、本組成物は、Ｌ字型用量反応曲線を有する。このことは、本組成物が高用量においてすら安全（非毒性）であることを意味する。
【００４２】
好ましい組成物は、レスベラトロール（好ましくは、約１０ｍｇ〜約２ｇ、より好ましくは、約１００ｍｇ〜約５００ｍｇの組成物投与量）、ならびにキレート化剤、グリコサミノグリカン（例えば、ヒアルロン酸）、およびビタミンＤからなる群より選択される少なくとも１種の化合物を含み、そしてまた、他の化合物（例えば、抗酸化剤、乳化剤など）を含み得る。
【００４３】
（Ｂ．処置方法）
本発明の組成物の投与は、「予防」目的もしくは「治療」目的のためであり得る。本発明の組成物は、投与される量が、上記疾患の実際の発現に対して治療を提供するために生理学的に重要である場合に、「治療」目的のために投与されるといわれる。治療的に提供される場合、上記組成物は、好ましくは、実際の疾患の症状の同定のときに（もしくはその直後に）提供される。上記化合物の治療的投与は、このような疾患の重篤度を弱めるか、もしくはその進行を逆転するように働く。本発明の組成物は、投与される量が、潜在的な疾患もしくは状態に対して治療を提供する（例えば、心臓発作のリスクを低下させるために、健康を維持するために、若々しい外見を維持するために、機能を維持する（例えば、視力の特定のレベルを維持するために）など）のために生理学的に重要である場合、「予防」目的のために投与されるといわれる。予防的に提供される場合、上記組成物は、好ましくは、その任意の症状に先だって提供される。上記組成物の予防的投与は、上記疾患の任意のその後の進行を防止もしくは弱めるように働く。
【００４４】
治療もしくは「処置」を提供することは、任意の客観的もしくは主観的パラメーター（例えば、症状の軽減、寛解、少なくすること、上記傷害、病変もしくは状態を上記患者にとってより許容できるようにすること、変性もしくは衰微の速度を遅らせること、変性の最終点をより消耗性の低いものにすること、または患者の肉体的もしくは精神的健康状態を改善すること）を含む傷害、病変もしくは状態の処置もしくは改善における成功の任意の徴候に言及する。症状の処置もしくは改善は、客観的もしくは主観的パラメーター（身体検査、神経精神病学的検査、および／もしくは実験室法の結果を含む）に基づき得る。
【００４５】
処置の好ましい被験体としては、疾患および他の病的状態にかかりやすい動物、最も好ましくは、哺乳動物種（例えば、ヒトおよび飼い慣らされた動物（例えば、イヌ、ネコなど））が挙げられる。「患者」とは、被験体（好ましくは、哺乳動物（ヒトを含む））に言及する。好ましい実施形態において、上記被験体もしくは患者は、ヒトであり、およびより好ましい実施形態において、上記被験体もしくは患者は、心血管疾患、癌、黄斑変性、加齢、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病など）および炎症のうちの１種以上を有するかもしくはこれらを発症するリスクにあるヒトである。
【００４６】
本発明の組成物のための種々の投与経路が、利用可能である。選択される特定の様式は、当然のことながら、選択される特定の治療剤、投与が、疾患の予防のためであるか、診断のためであるか、もしくは処置のためであるかどうか、処置されている医学的障害の重篤度および治療効力に必要とされる投与量に依存する。本実施形態の方法は、医学的に受容可能であり、臨床的に受容不能な有害作用を引き起こさずに上記活性化合物の有効なレベルを生じる任意の投与様式を使用して実施され得る。このような投与様式としては、経口、口内、舌下、吸入、粘膜、直腸、鼻内、局所、眼、眼周囲、眼内、経皮、皮下、動脈内、静脈内、筋肉内、非経口、もしくは注入の方法論が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、投与は経口である。
【００４７】
治療的使用および予防的使用に有効な投与スケジュールおよび量（すなわち、上記「投与レジメン」）は、種々の要因（上記疾患もしくは状態の段階、上記疾患もしくは状態の重篤度、上記患者の健康の全般的状態、上記患者の身体的状態、年齢などが挙げられる）に依存する。患者のための投与レジメンを計算することにおいて、上記投与様式はまた、考慮される。上記投与レジメンはまた、当該分野で周知の薬物動態パラメーター（すなわち、吸収速度、バイオアベイラビリティー、代謝、クリアランスなど）を考慮に入れる（例えば、Ｈｉｄａｌｇｏ−Ａｒａｇｏｎｅｓ（１９９６）  Ｊ．  Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ５８：６１１−６１７；  Ｇｒｏｎｉｎｇ（１９９６）  Ｐｈａｒｍａｚｉｅ  ５１：３３７−３４１；  Ｆｏｔｈｅｒｂｙ（１９９６）  Ｃｏｎｔｒａｃｅｐｔｉｏｎ  ５４：５９−６９；  Ｊｏｈｎｓｏｎ（１９９５）  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ８４：１１４４−１１４６；  Ｒｏｈａｔａｇｉ（１９９５）  Ｐｈａｒｍａｚｉｅ  ５０：６１０−６１３；  Ｂｒｏｐｈｙ（１９８３）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２４：１０３−１０８を参照のこと）。技術水準は、臨床医が各個々の患者のための投与レジメン、治療剤、および処置される疾患もしくは状態を決定することを可能にする。本発明の組成物の単一のもしくは複数の投与は、上記患者によって必要とされかつ許容されるような投与量および頻度に依存して、投与され得る。予防的処置および治療的処置の持続時間は、処置されている特定の疾患もしくは状態に依存して、変動する。いくつかの疾患は、急性の処置に向いているのに対して、他の疾患は、長期間の治療を必要とする。
【００４８】
本実施形態の組成物は、被験体にのみ、または別の医薬もしくは医学的治療を受けているもしくは受ける予定である被験体に、投与され得る。例えば、好ましい実施形態において、本実施形態の組成物は、黄斑変性もしくは黄斑ジストロフィーに対する幹細胞治療もしくは処置とともに、被験体に共投与される。共投与は、同時に、連続して、同時発生的に、もしくは任意の他の適した様式で行われ得る。
【００４９】
好ましい実施形態において、上記投与もしくは共投与は、レスベラトロール単独、カロリー制限単独、または他の医薬もしくは医学的治療（例えば、黄斑変性もしくは黄斑ジストロフィーの幹細胞治療もしくは処置）単独によって達成される治療的利益もしくは予防的利益の少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、もしくは７倍より高い、上記被験体への治療的利益もしくは予防的利益を提供する。別の好ましい実施形態において、上記共投与は、レスベラトロール単独、カロリー制限単独、黄斑変性もしくは黄斑ジストロフィーの幹細胞治療もしくは処置単独によって達成される治療的利益もしくは予防的利益の少なくとも１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、もしくは５００％より高い、上記被験体への治療的利益もしくは予防的利益を提供する。
【００５０】
これら実施形態の組成物は、レスベラトロールの比活性を増強する。本実施形態の組成物は、従って、疾患（例えば、心血管疾患、癌、黄斑変性、加齢、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病など）および炎症）の処置もしくは予防において（または疾患の症状の改善において）有用性を見いだす。ここで「生き残り／長寿」遺伝子および／もしくは「損傷誘導」遺伝子の発現の調節が望ましい。経時的に、ミネラル（例えば、カルシウムおよび鉄）がヒト身体において蓄積するにつれて、遺伝子は、有害な方式で応答する。Ｌｉｕ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．（２００５）  Ａｎｎ．  Ｃｌｉｎ．  Ｌａｂ．  Ｓｃｉ．  ３５（３）：２３０−２３９；  Ｔｅｍｐｌｅｔｏｎ，  Ｄ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ．  １６１９（２）：１１３−１２４；  Ｉｋｅｄａ，  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  １５（２）：２８２−２８７。本実施形態は、黄斑変性、癌および加齢の状態の処置において特に有用性を有する。
【００５１】
さらなる実施形態は、個体の既にある疾患と関連する症状を改善するか、または個体における疾患の発生前に、上記個体における症状の開始を予防するための方法を提供し、上記方法は、上記個体に、レスベラトロール単独もしくはカロリー制限と比較して、生き残り／長寿遺伝子の生成物または発現が細胞損傷を増強する遺伝子の生成物の濃度もしくは活性を調節するレスベラトロール含有組成物を投与する工程を包含し、ここで上記レスベラトロールは、上記疾患の症状を改善する遺伝子の濃度もしくは活性の調節を引き起こすに有効な量で提供され、上記疾患は、心血管疾患、癌、黄斑変性、加齢と関連する疾患、および炎症からなる群より選択される。上記実施形態は、このような方法をさらに提供し、ここで上記疾患は、癌、もしくは加齢と関連する疾患（特に、神経変性疾患）である。
【００５２】
（１．幹細胞関連方法）
１つの好ましい実施形態において、本実施形態の組成物は、細胞移植または移植片治療（例えば、幹細胞移植もしくは注射）とともに、被験体に共投与される。上記細胞は、幹細胞もしくは幹細胞に由来する細胞（例えば、ヒト胚性幹細胞）、もしくは成体幹細胞（例えば、骨髄幹細胞、心臓幹細胞、内皮幹細胞、造血幹細胞、乳腺幹細胞、間葉幹細胞、神経堤幹細胞、神経幹細胞、成体嗅覚幹細胞（ｏｌｆａｃｔｏｒｙ  ａｄｕｌｔ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ）、精巣幹細胞、および非常に小さな胚様「ＶＳＥＬ」幹細胞、もしくはこれらの組み合わせ、または前述のうちのいずれかに由来する細胞であり得る。好ましい実施形態において、移植される細胞は、心臓幹細胞、神経幹細胞、および網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞からなる群より選択される。
【００５３】
このような細胞移植関連実施形態において示され得る治療利益としては、改善された幹細胞分化、改善された細胞接着、改善された細胞生存、改善された細胞増殖、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される１つ以上の利益が挙げられる。
【００５４】
幹細胞は、人体におけるすべての新しくされる細胞の起源として認識される。幹細胞移植は、損傷した組織の再生において、特に、梗塞もしくは外傷によって損傷を受けた脳組織もしくは心臓組織、または迅速な細胞更新およびターンオーバーを通常は示さない組織のために、有益であると考えられる。Ｃｈａｃｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２００９  ３９６（５）：Ｈ１２６３−７３；  Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  Ｒｅｓ．  ２０１０  ８８（５）：１０１７−２５。
【００５５】
幹細胞移植が、損傷を受けた組織の再生（例えば、心臓発作後）において、ごく制限されたもしくはわずかな利益を示したに過ぎず、幹細胞を注入して処置した動物が、しばしば、幹細胞移植の数週間以内に心不全へと進行することは公知である。Ａｓｓｍｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ２００６  ３５５（１２）：１２２２−３２；  Ｓｈａｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ．  Ｔｈｏｒａｃ．  Ｓｕｒｇ．  ２００２  ７３（６）：１９１９−２５。しかし、短期間の死亡率の低下は、酸素に乏しい（虚血性）心臓組織における幹細胞の注射によって示されたようであった。Ａｓｓｍｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｉｒｃ．  Ｒｅｓ．  ２００７  １００（８）：１２３４−４１。
【００５６】
移植された幹細胞が、組織再生を促進するために、既存の細胞マトリクスに接着しなければならず、フリーラジカルが、幹細胞組織接着を損なうことはまた、公知である。Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  ２０１０  ２８（３）：５５５−６３。さらに、フリーラジカルは、所望の細胞（例えば、心筋、脳ニューロンなど）への幹細胞の分化を阻害し、抗酸化剤は、幹細胞の分化を増強することが実証された（同上文献）。
【００５７】
抗酸化剤は、フリーラジカルを減少させ、移植の間および移植後に幹細胞接着および幹細胞生存を改善することが実証された。Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  ２０１０  ２８（３）：５５５−６３；  Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｐｏｒｃｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｂｉｏｌ．  ２０１０  １２（３）：３２５−３４；  Ｋａｓｈｉｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇ．  Ｐａｒｔ  Ａ．  ２０１０  １６（１）：９１−１００。レスベラトロール（低分子）は、内因性抗酸化剤（例えば、グルタチオン、スーパーオキシド・ジスムターゼ（特に、マンガンＳＯＤ）、およびカタラーゼ）の活性を増強し、幹細胞自体の合成をアップレギュレートすることもまた、公知である。Ｋａｏ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  Ｄｅｖ．  ２０１０  １９（２）：２４７−５８。
【００５８】
経口投与されるレスベラトロールは、改善された幹細胞生存および増強した心機能（駆出率など）を生じる比較的低用量濃度（体重１ｋｇあたり２．５ｍｇ、１７５ｍｇ／１６０−ｌｂのヒト）で低下した細胞環境（低いフリーラジカル活性）を維持するのを助けことは、動物において実証された。Ｇｕｒｕｓａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ．
ａｎｄ  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １４（９）：２２３５−３９（２０１０）。特に、Ｇｕｒｕｓａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．は、心筋層への心臓幹細胞の注射の前に、低用量レスベラトロールでの２週間にわたるラットへの前処置が、左心室駆出率および内径短縮率のような心機能パラメーターを顕著に改善したことを報告した。前処置はまた、上記心筋層の再生に向かう幹細胞の分化によって実証されるように、幹細胞生存および増殖を増強した。
【００５９】
本発明の好ましい実施形態によれば、低分子抗酸化剤のマトリクスは、他の低分子およびビタミンＤ３と組み合わされ、経口的に投与されて、移植後の幹細胞を保存する。具体的には、低分子経口抗酸化剤のマトリクスとしては、レスベラトロールが挙げられるが、これに限定されない。このマトリクスは、上記ビタミン／ホルモン  ビタミンＤ３との組み合わせにおいて、他の低分子（例えば、ケルセチン、ＩＰ６  フィテート（イノシトールヘキサホスフェート）、フェルラ酸、ＥＧＣＧ（緑茶）、カフェー酸、アピゲニン）と組み合わされる。この組み合わせは、個々の構成要素の予測される相加的特性を上回る、予測外の相乗作用の能力を発揮して、移植後の幹細胞を維持する。
【００６０】
上記投与濃度は、先行技術の実験から必要であると考えられるより低く、それによって、上記組み合わされた構成要素から生じる相乗作用を立証する。例えば、上記組み合わせにおけるレスベラトロールの投与量範囲は、体重１ｋｇあたり約１．０ｍｇ〜約５．０ｍｇであり、すべての分子の総投与濃度は、体重１ｋｇあたり約１．０ｍｇ〜約５．０ｍｇである。この混合物の投与の結果は、より大きなゲノム応答、および以前の実験において示されてきたもの以上の改善された組織機能（すなわち、心筋活性−駆出率）を含む。上記構成要素の混合物は、好ましくは、カプセルで提供されるが、丸剤、錠剤、もしくは液体形態であってよい。
【００６１】
（２．黄斑変性）
米国で過去数十年間にわたって人間の寿命が延びたことから、黄斑変性（加齢に関連する眼の疾患）の増大が生じた。完全な視力喪失は生じないものの、上記疾患は、色覚と同様に、読書に使用される彼らの中心視力をより高齢の成人から奪う。黄斑変性は、眼の視覚中心（黄斑といわれる）に影響を及ぼす。黄斑は、色覚細胞（錐体）が位置する網膜の一部である。
【００６２】
好ましい実施形態において、本実施形態の組成物は、以下からなる群より選択される、１種以上の黄斑変性もしくは黄斑ジストロフィーの処置とともに被験体に共投与される：抗脈管形成医薬（例えば、酢酸アネコルタブ、ベバシズマブ、ベバシラニブ、ペガプタニブナトリウム、ラニビズマブなど）、抗ドルーゼン医薬（例えば、ＡＲＣ１９０５、コパキソン、エクリズマブ、フェンレチニド、ＲＮ６Ｇなど）、眼への小型望遠鏡の埋め込み、レーザー光凝固、光線力学的治療、もしくは別の治療の投与（例えば、アルプロスタジル、ＡＲＥＤＳ２、皮質インプラント（ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｉｍｐｌａｎｔ）、黄斑移動術（ｍａｃｕｌａｒ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）、微小電気刺激、ＮＴ−５０１、光生体調節（ｐｈｏｔｏｂｉｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）、放射線療法、網膜インプラントもしくは移植片（ｒｅｔｉｎａｌ  ｉｍｐｌａｎｔｓ  ｏｒ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓ）、レオフェレシス、細胞移植（例えば、ＲＰＥ細胞移植、幹細胞移植など）、黄斑下手術（ｓｕｂｍａｃｕｌａｒ  ｓｕｒｇｅｒｙ）、またはこれらの組み合わせ。
【００６３】
このような黄斑関連実施形態において示され得る治療利益としては、保存されたかもしくは改善された視覚（例えば、視力）、視覚欠損の拡大の収縮もしくは停止、中心黄斑における細胞の温存、黄斑を囲むかもしくは隣接する組織が正常に機能することを可能にすること、眼におけるドルーゼンもしくはアミロイドβの量の低下もしくは増大の防止、眼（および特に、黄斑および網膜）への血流を改善するかもしくは増大すること、血管成長および漏出（例えば、新脈管形成）の阻害、瘢痕化の阻害、網膜機能の改善、黄斑変性の予防もしくは遅延、細胞死（特に、網膜細胞）の予防もしくは遅延、眼の病変（例えば、地図状萎縮病変）の低減もしくは除去、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される１種以上の利益が挙げられる。
【００６４】
黄斑変性は、４つのステージに分類され得る進行性の、加齢に関連する疾患である。第１ステージにおいて、約２０歳代（ｔｈｅ  ｔｈｉｒｄ  ｄｅｃａｄｅ  ｏｆ  ｌｉｆｅ）において始まって、「ゴミ掃除」細胞（網膜色素上皮（ＲＰＥ）といわれる）が、眼の後ろから細胞砕片を包み込んで除去できなくなることから、リポフスチンといわれる小さな顕微的堆積物の形成を生じる。リポフスチンは、細胞砕片の鉄および銅誘導性の酸化によって形成され、その蓄積は、早発の加齢および生物の寿命の短縮と相関する。黄斑変性の罹患率は、濃い色素を有する皮膚を有するひとより白色人種においてより多く、白色人種は、彼らの網膜により多くのリポフスチンを有する。網膜におけるこの細胞砕片のうちのいくらかは、ヒトの眼において毎朝暗視（杆体）細胞から剥がれる使い古しのビタミンＡから構成される。上記ＲＰＥ内の鉄およびカルシウムの蓄積から、上記ＲＰＥ細胞は機能しなくなる。第２ステージにおいて、約４０歳代において、上記ＲＰＥと血液供給層（脈絡膜）との間に位置する、下にあるセロハンのように薄い網膜層（ブルーフ膜といわれる）の石灰化が進行する。上記網膜内で形成するドルーゼンは、コレステロールから部分的に構成される一方で、この脂質は、血液循環や大部分のコレステロールが生成される肝臓に由来しない。ブルーフ膜内での石灰化は、脂質（脂肪）、タンパク質、および細胞砕片が光レセプター層から出ていくことがさらに損なわれ、このことは、上記網膜上でドルーゼンといわれる黄色い点の形成を生じる。ドルーゼンは、検眼鏡を使用する眼の検査の間に観察され得る。現在のところ、ドルーゼンを除去する方法は存在しない。
【００６５】
上記ＲＰＥ細胞の死滅は、この進行性疾患の第３ステージである。これは、ときおり、ＲＰＥドロップアウトといわれる。上記ＲＰＥ細胞が、損なわれているかもしくは死んでしまい、ブルーフ膜がカルシウムで詰まっている場合、上記光レセプターは、その後、滋養物を得ることができなくなり、また、死に絶え始める。黄斑変性のステージ１〜３に対する処置は、現在のところ存在しない。ステージ１〜３は、黄斑変性の「ドライ」型といわれる。なぜなら、それは、出血も浮腫も新たな血管形成も生じていないからである。黄斑変性患者のうちの約８５％は、この疾患の「ドライ」型を有する。第４ステージにおいては、ブルーフ膜における破壊が起こるか、またはブルーフ膜が全体として石灰化するので、上記光レセプター層は、酸素が奪われ、新たな血管が形成し（新生血管形成といわれる）、これは、黄斑の光レセプター層に侵入し得、視覚を損ない得る；あるいは血清の漏出もしくは赤血球の明らかな放出が存在し得、これは、浮腫もしくは出血を生じる。これは、より進行した、かつ黄斑変性の視覚を脅かす形態であり、上記光レセプター層への血清もしくは赤血球の漏出の存在が原因で、しばしば「ウェット」型黄斑変性といわれる。上記疾患のこのステージは、早期にとらえられれば、レーザービームで処置され得、漏れやすい血管を閉じ得る。しかし、この処置は、上記疾患の進行を遅らせるにあたって有効であるに過ぎず、治癒させるのではない。
【００６６】
リソソームによって促進される細胞のクリーニングプロセスは、寿命にわたって代謝性老廃物の蓄積に対処することができない。杆体細胞密度が最も高く、従って円板状の消耗しきったビタミンＡが脱落する傍中心窩リング（ｐａｒａｆｏｖｅａｌ  ｒｉｎｇ）は、黄斑変性が始まり、かつリポフスチンの最大濃度が網膜に観察される場所である。最終的には、上記ＲＰＥ細胞は、高齢になると死に絶え、このことから、健康な網膜を維持するために残っているＲＰＥ細胞の負担が増える。
【００６７】
過去には、リポフスチンは、細胞代謝の無害な消耗性の副生成物と考えられてきた。本実施形態の一局面は、リポフスチン（これは、鉄および銅誘導性の酸化から形成し、網膜色素上皮細胞内のリソソーム体内で硬くなる）は、上記網膜を、少量の放射線および酸化による損傷に対して感受性にするという認識に関連する。上記網膜は、高齢になると、青色光損傷に対してますます感受性になる。上記網膜内のドルーゼン形成は、ＲＰＥ細胞がスーパーオキシド・ジスムターゼ（内因性の抗酸化酵素）を生成できなくなることと関連する。スーパーオキシド・ジスムターゼが欠損したマウスは、ヒトにおける加齢黄斑変性に代表的な特徴を発生させる。スーパーオキシド・ジスムターゼは、非結合（遊離）鉄から網膜細胞を保護する。高鉄分の食事および細胞環境は、スーパーオキシド・ジスムターゼ活性を低下させることが示された。
【００６８】
網膜光レセプターおよび網膜色素上皮細胞は、鉄の低分子量錯体による損傷に特に弱いと考えられる。血液循環における抗酸化剤は、常に血液網膜関門を横断できるわけではない可能性があるので、上記網膜は、鉄を結合するそれ自体の保護的抗酸化物質を生成する。鉄キレート化剤は、非結合（遊離）鉄（タンパク質に結合していない）の有害な作用を阻害する。ヘムオキシゲナーゼはまた、鉄キレート化剤に類似の様式で働いて、遊離した鉄によって誘導される網膜損傷を予防する。
【００６９】
多くの薬剤が、リポフスチンおよびドルーゼンを一掃するために実験的に使用されてきた。スタチン薬物（一般には、血清コレステロールレベルを低下させるために使用される）はまた、動物においてリポフスチン堆積物を防止するために試験されてきた。スタチン薬物は、リポフスチン形成を低下させたが、肝臓に対して毒性であり、これら動物の早期の死をもたらした。ピラセタム（神経伝達物質であるＧＡＢＡの誘導体であり、今や栄養補助食品として入手可能である）は、脳組織におけるリポフスチン形成を低下させるために首尾よく使用されてきた。ソルビニルは、糖尿病と関連する網膜の問題を予防するために、１９９０年代に不成功に終わったヒト治験を経た酵素阻害薬物（アルドース（ａｋｌｏｓｅ）レダクターゼインヒビター）である。ソルビニルは、齧歯類の網膜色素上皮細胞においてリポフスチン堆積物を部分的に減少させることが示された。ヒデルギンは、老年認知症を処置するために使用される薬物である。齧歯類研究において、ヒデルギンは、脳リポフスチンレベルを低下させることが報告されたが、動物の早い死亡をももたらした。東インドのスパイスであるウコンは、クルクミンといわれる抗酸化分子を含む。クルクミンは、脳中のリポフスチンを減少させるために、実験的マウス研究において使用されてきた。スベリヒユは、マグネシウム、ベータカロチンおよびω−３オイルが豊富な顕花植物である。マウスにスベリヒユを与えたところ、マウスの脳においてリポフスチン堆積の低下が示された。実験食研究において、スルホラファン（芽キャベツおよびブロッコリーにおいて１９９２年に見いだされた抗酸化分子）は、青色光に曝露されたＲＰＥ細胞においてリポフスチン堆積物を低下させるために首尾よく使用されてきた。
【００７０】
加齢ラットへのリポ酸の腹腔内投与は、脳の皮質、小脳、線条体、海馬、および視床下部において、リポフスチンおよび酵素活性のそれぞれ、低下および上昇をもたらす。これら結果は、リポ酸（天然の代謝性抗酸化物質）は、老齢の個体における神経障害を予防することにおいて治療的ツールとして有用であるはずであることを示唆する。リポ酸（生きている組織内に生成される天然の抗酸化物質であり、栄養補助食品としても入手可能である）は、ＲＰＥ細胞を、実験食研究において酸化的損傷から保護することが示された。
【００７１】
リポフスチン形成は、アルコール消費後に脳組織中で劇的に増大する。高用量ブドウ種子フラボノールの補給は、リポフスチン形成の増大を妨げる。リポフスチンは、エタノール消費後に劇的に増大する脂質過酸化の最終生成物である。ウーロン茶および緑茶の飲料は、マウスにおける認知機能障害およびリポフスチン形成を逆転する。エピガロカテキン−３−ガラート（ＥＧＣＧ）（緑茶の主要構成要素）は、実験食研究において、ヘムオキシゲナーゼの活性をアップレギュレートする。ヘムオキシゲナーゼは、鉄誘導性酸化に対する保護酵素であり、これは、網膜に存在する。補助的にエストロゲンを提供すると、脳組織中のリポフスチン堆積が減少することが示された。実験食研究において、ＲＰＥ細胞にルテインおよびゼアキサンチンを提供すると、リポフスチン形成が低下した。補助的なアセチル−Ｌ−カルニチンを与えた齧歯類において、リポフスチン堆積物の低下が、脳細胞において測定された。
【００７２】
米国特許第５，７４７，５３６号は、心血管障害、末梢血管疾患および末梢性糖尿病性ニューロパチーの予防および処置のための医薬を生成するために、Ｌ−カルニチン、低級アルカノイルＬ−カルニチンもしくは薬理学的に受容可能なその塩と、レスベラトロール、レスベラトロール誘導体もしくはレスベラトロール含有天然生成物との組み合わされた治療的使用を記載する。メラニンは、網膜における鉄結合抗酸化物質である。高齢で網膜中のメラニンレベルが低下すると、リポフスチンの蓄積がより多くなる。
【００７３】
一実施形態において、本実施形態は、（ａ）（１種または複数の）金属（例えば、鉄、銅、重金属）に対するキレート化剤（例えば、イノシトールヘキサホスフェート（ＩＰ６）、トランス−レスベラトロール、ケルセチン、または任意のポリフェノールもしくはバイオフラボノイド；（ｂ）カルシウムキレート化剤（例えば、イノシトールヘキサホスフェート（ＩＰ６））；（ｃ）ヘムオキシゲナーゼアクチベーター（例えば、トランス−レスベラトロール、ピセアタンノール、もしくはレスベラトロールの天然のアナログのうちのいずれか、もしくは類似の低分子（例えば、フィセチン、ミリセチン、ケルセチンもしくは他のバイオフラボノイド）；（ｄ）赤血球に対する酸素の親和性を低下させる作用物質（例えば、イノシトールヘキサホスフェート（ＩＰ６））；ならびに必要に応じて、（ｅ）他の抗酸化剤（例えば、ビタミンＥ、ルテイン／ゼアキサンチン、α−リポ酸）の組み合わせを含む組成物に関する。上記製剤は、（１）網膜組織（光レセプター、網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）、脈絡膜、具体的には、ＲＰＥ細胞におけるミトコンドリアおよびリソソーム）における酸化を制限する；（２）リポフスチン堆積物の蓄積を阻害する；（３）ドルーゼンの形成を阻害する；ならびに（４）網膜組織（特に、ブルーフ膜）への石灰化を制限するように、機能する。
【００７４】
（３．癌）
癌治療における主要な難題は、細胞傷害性薬剤を腫瘍細胞に選択的に標的化することである（Ｌｕｏ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．（２０００）  Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  １（２）：２０８−２１８）。低分子抗癌剤の望ましくない副作用を低下させるために、多くの標的化アプローチが、試験されてきた。最も有望な方法のうちの１つは、細胞毒素と、高分子キャリア、および特に、ヒアルロン酸とを組み合わせるかもしくは共有結合させることを包含する（Ｌｕｏ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．  Ｃｈｅｍ．  １０（５）：７５５−７６３；  Ｌｕｏ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．  Ｃｈｅｍ．  １２（６）：１０８５−１０８８；  Ｌｕｏ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  １９（４）：３９６−４０２）。
【００７５】
一実施形態において、本実施形態は、癌の処置のためのレスベラトロール含有組成物およびヒアルロン酸含有組成物に関し、上記組成物は、レスベラトロール、ヒアルロナン、ならびに必要に応じて、ビタミンＤおよび／もしくはＩＰ６を含む。これら成分は、互いに相乗作用で働いて、ヒトにおける癌を治癒および／もしくは予防することにおいて、ならびに／または腫瘍に脅かされた患者における免疫（例えば、免疫系応答）を改善することにおける効果を媒介すると考えられる。本実施形態のこの局面は、おそらく、癌に耐性のあるマウス（ｃａｎｃｅｒ−ｐｒｏｏｆ  ｍｉｃｅ）において観察されたものに類似の様式で、天然の分子が癌免疫をブーストし得るという認識に基づく。
【００７６】
このような組成物を与えると、先天性免疫系の番人である樹状細胞は、変化し得、好中球、マクロファージおよびナチュラル・キラー細胞活性は、顕著に増強され得る。レスベラトロールを介するビタミンＤレセプターの増強は、癌を処置もしくは予防するための組み合わせアプローチのさらにまた別の大きな利点である。このアプローチは、高齢の成人（癌の最も高いリスク群であり、しばしば、不十分な栄養もしくは栄養吸収の欠如に起因して、免疫が損なわれている）により適切なようである。この治療は、今や、非侵襲性の癌細胞計数技術によって有効性について直ぐに測定され得るという事実は、動物に対する高価なかつ多義的な試験は、効力を立証するために必要とされるわけではないことを意味する。
【００７７】
ビタミンＤは、多くの生物学的作用を示す。ビタミンＤは、骨疾患（成長中の小児におけるくる病、高齢の成人における骨粗鬆症）を避けるその能力について広く公知である一方で、それは、癌との戦いにおいて中心的なプレーヤーになりつつある。ごく最近、それはまた、抗生物質としてもますます注目されている。ビタミンＤ欠乏マウスは、感染もしくは炎症に直面して、食細胞からの不完全な応答を示す。ビタミンＤ欠乏は、再発性の感染と頻繁に関連している。マクロファージ細胞の約半分のみが、ビタミンＤレベルが適切な動物と比較して、ビタミンＤ欠乏動物の炎症部位において蓄積する。
【００７８】
免疫および癌におけるビタミンＤの役割をより深く掘り下げると、ビタミンＤは、化学走性（親和性）好中球が移動性をもちかつ移動するように改善する。ビタミンＤ欠乏に起因するくる病を有する患者は、適切に移動できない動きの鈍い好中球を有することが観察されている。ビタミンＤは、単球からマクロファージへの成熟を刺激する。このことは、腫瘍に打ち勝つように免疫攻撃細胞の増強された軍を生じる。補助的なビタミンＤが、癌のすべてのタイプに関するリスクを劇的に低下させることを示す研究が原因で、抗癌の武器としてのビタミンＤに対してより大きな注意が今や払われている。１１００  ＩＵのビタミンＤ３を使用した研究から、ちょうど４年間の期間において、ネブラスカ州の女性の間で癌のリスクの６０〜７７％低下が生じた。
【００７９】
ビタミンＤレベルが太陽に曝された集団においてより高い日当たりのよい地域および地理的には赤道領域において、癌リスクが最も低いとしても、癌に対するビタミンＤの保護的効果は、繰り返し退けられているか、または軽視されている。ビタミンＤの経口での消費は、フィルタにかかっていない太陽光線への過剰曝露から広まる皮膚癌の懸念を排除する。最新の分析のうちの１つは、結腸癌のリスクが、２０００  ＩＵ／日のビタミンＤを摂取することによって半減し得、かつ乳癌のリスクが、３５００  ＩＵ／日のビタミンＤを摂取することによって半減し得ることを示す。ビタミンＤの食事による取り込みの中央値は、約２３０  ＩＵ／日に過ぎないので、癌を予防もしくは処置するために、食事の強化もしくは補充の見通しは、いまや現実となっている。
【００８０】
組織がビタミンＤを利用し、それからの利益を得るために、上記組織は、それらの外側の被膜（細胞膜）に、ビタミンＤを受容しかつ結合するように設計されたタンパク質を有さねばならない。例えば、ヒト乳房腫瘍のうちの約８０％が、ビタミンＤの細胞レセプターを生成するが、ビタミンＤレセプターの遺伝子発現（生成）は、低レベルにある。癌を阻害するビタミンＤの能力は、ビタミンＤが、食事における弱いエストロゲン様分子によって補助される得場合に、高められ得る。レスベラトロール（赤ワイン中に一般に見いだされるエストロゲン様分子）は、癌の成長を増大させることなく、乳癌細胞におけるビタミンＤレセプターをアップレギュレートする。レスベラトロールは、実質的に、乳癌細胞を、ビタミンＤの抗癌特性に対して感受性にし得る。
【００８１】
実験室での実験から、低用量ビタミンＤ３は、乳房腫瘍細胞の成長を低下させないが、レスベラトロールと組み合わせた場合に、腫瘍細胞数は、４０％減少することが示される。より高濃度においては、ビタミンＤ３は、実験食において乳癌細胞数を約２５％低下させ、この低下は、レスベラトロールと組み合わせた場合に、５０％へと改善する。エストロゲンは、ビタミンＤレセプター遺伝子発現を増大させるのに対して、エストロゲンはまた、乳房腫瘍の成長を刺激する。レスベラトロールは、この欠点を有さない。レスベラトロールは、上記ビタミンＤの癌阻害効果を強化するかもしくは「武器」として使う。さらに、レスベラトロール自体は、微生物のような外来侵入者および腫瘍細胞への食細胞の応答を鎮めることが示されている。レスベラトロールは、反応性酸素種（フリーラジカル）の生成を低下させ、マクロファージ細胞における粒子の取り込みを正常にする。従って、レスベラトロールは、自己免疫を生じることができる免疫細胞の過剰応用を防止する。
【００８２】
レスベラトロールは、非常に多くの方法で癌をブロックするので、レスベラトロールによって妨げられない癌の経路を見いだすのが困難である。レスベラトロールは、腫瘍細胞において細胞エネルギー区画（いわゆる、ミトコンドリア）を誘導して、プログラムされた細胞死（いわゆる、アポトーシス）を誘導する他の酵素のカスケードを通常もたらすシトクロームＣオキシダーゼといわれる酵素を放出する。しかし、最近の実験から、レスベラトロールはまた、卵巣腫様細胞からシトクロームＣを放出し、シトクロームＣは、自食作用といわれるプロセス（腫瘍細胞内で生成される酵素がその内部を実際に消化するプロセス（ある種の細胞内カニバリズムの形態））を介して迅速な細胞死をもたらすことが示される。これは、レスベラトロールが腫瘍細胞において活性化するが、健康な細胞においては活性化しないという細胞自殺の形態である。
【００８３】
腫瘍の監視における先天性免疫の寄与は、癌生物学において比較的軽視されている。貪食作用、もしくは「細胞摂食（ｃｅｌｌ  ｅａｔｉｎｇ）」は、先天性免疫応答の隅石である。上記先天性免疫応答の番人であると考えられる樹状細胞に、焦点が向けられてきた。限られた数の免疫ブースト因子が調査されてきた。
【００８４】
癌処置への先天性免疫アプローチにおける関心は、懐疑によって取り囲まれている。例えば、免疫抑制を行っている患者は、必ずしも、より頻繁に癌を発症させるわけではない。しかし、これには、誤解があり得る。過剰応答性の免疫系は、癌患者に致死的であり得るより多くの組織および器官の損傷をもたらし得る。乳癌治療のために使用される薬物の大部分は、免疫抑制を誘導する。  
【００８５】
天然の最も強力な鉄キレート化剤は、イノシトールヘキサホスフェート（ＩＰ６）である。これは、種子および全穀粒のふすま画分に見いだされる。ＩＰ６の低い投与量は、横紋筋肉腫細胞の成長を５０％抑制することが見いだされた。ＩＰ６の除去は、これら細胞が回復し、再び成長することを可能にする。腫瘍を注射したＩＰ６処置マウスは、非処置マウスより５０倍小さい腫瘍を示す。ＩＰ６はまた、マウスに注射した線維肉腫細胞の成長を低下させ、マウスの生存を延ばすことが示された。ＩＰ６の免疫増強特性を試験するにあたって、ＩＰ６は、フリーラジカル（スーパーオキシド）の生成および細菌の存在下での好中球の細胞消化活動をブーストすることが示された。ＩＰ６は、インターロイキン−８の放出を増大させる。ナチュラル・キラー細胞（これは、腫瘍細胞破壊に関与する）の作用は、ＩＰ６によって増強される。
【００８６】
一実施形態において、そのような組成物のヒアルロン酸は、化学療法剤に結合体化される。上記実施形態は、特に、化学療法剤がタキソールであるそのような組成物に関する。上記実施形態は、特に、さらに、および好ましくは、キレート化剤、および／もしくはビタミンＤを含むそのような組成物に関する。大部分の悪性固形腫瘍は、上昇したレベルのヒアルロン酸を含み（Ｒｏｏｎｅｙ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ６０（５）：６３２−６３６）、これら高レベルのＨＡ生成は、侵襲を促進するマトリクスを提供する（Ｈｕａ，  Ｑ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ．  Ｓｃｉ．  １０６（Ｐｔ  １）：３６５−３７５；  Ｌｕｏ，  Ｙ．  ｅｔ
ａｌ．（２０００）  Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  １（２）：２０８−２１８）。従って、ヒアルロン酸に結合体化される化学療法剤は、腫瘍細胞を標的とし、全体的により低い濃度において有効な抗腫瘍投与量を提供し得る。
【００８７】
簡潔には、好ましい結合体化の方法は、上記化学療法剤のＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド）誘導体を形成することを包含する。このような誘導体は、モル濃度過剰の乾燥ピリジンを、室温においてＣＨ２Ｃｌ２中のタキソールおよびコハク酸無水物の撹拌溶液に添加することによって作製され得る。次いで、その反応混合物は、数日間にわたって室温において撹拌され、次いで、真空中で濃縮される。その残渣は、５ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中に溶解され、生成されたタキソール−２’−ヘミスクシネートが、シリカゲルで精製され（ヘキサンで洗浄；酢酸エチルで溶出）て、所望の生成物が得られる（Ｌｕｏ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．  Ｃｈｅｍ．  １０（５）：７５５−７６３）。
【００８８】
上記化学療法剤のＮ−ヒドロキシ−スクシンイミド誘導体は、次いで、アジピン酸ジヒドラジド官能化ヒアルロン酸に結合体化される。アジピン酸ジヒドラジド官能化ヒアルロン酸を、好ましくは、以下によって記載されるように調製する：Ｐｏｕｙａｎｉ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  ５：３３９−３４７）；  Ｐｏｕｙａｎｉ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）（Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １１６：７５１５−７５２２）；  Ｖｅｒｃｒｕｙｓｓｅ，  Ｋ．Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  ８：６８６−６９４）。従って、ヒアルロン酸は、好ましくは、水および過剰のアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）の中で溶解される。その反応混合物のｐＨを、酸を添加することによって４．７５へと調節する。次に、１当量の１−エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）−プロピル］カルボジイミド（ＥＤＣＩ）を、固体形態で添加する。その反応混合物のｐＨを、酸を添加することによって４．７５で維持する。反応を、０．１Ｎ  ＮａＯＨを添加することによってクエンチして、上記反応混合物のｐＨを７．０へと調節する。その反応混合物を、次いで、前処理した透析チューブ（Ｍｗカットオフ  ３，５００）に移し、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、次いで、２５％  ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ、および最後に水に対して徹底的に透析する。次いで、その溶液を、０．２ｍセルロースアセテート膜を通して濾過し、直ぐに凍結し、凍結乾燥させる（Ｌｕｏ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．  Ｃｈｅｍ．  １０（５）：７５５−７６３）。
【００８９】
（４．加齢）
細胞の石灰化および鈍化（ｒｕｓｔｉｎｇ）は、リソソームによって生成される酵素による細胞からの細胞砕片（リポフスチン）のクリーニングを損ない、上記細胞内のミトコンドリアによって生成される細胞エネルギー（ＡＴＰ）の減損を生じる。本実施形態の組成物は、細胞の加齢および／もしくは結合組織の加齢を阻害および／もしくは逆転し、そして特に、主要なミネラル（例えば、鉄、カルシウムなど）の蓄積によって引き起こされる細胞の加齢および／もしくは結合組織の加齢を阻害および／もしくは逆転する。結論として、本実施形態の組成物のレシピエントは、増大された長寿、ならびに増強された細胞および結合組織の健康および構造を示す。
【００９０】
ヒトの身体は、リポフスチンといわれる細胞砕片のゆっくりとした蓄積によって細胞レベルで加齢し、これは、リソソームおよびミトコンドリア内での鉄およびカルシウムの進行性の蓄積によって促進される。自食作用といわれる細胞クリーニングおよび再生プロセスは、若い成長の年数の間にはリポフスチンの蓄積を防止するが、このリソソーム機構は、いったん十分な成長が達成されると、細胞内の鉄およびカルシウムの蓄積に起因して、衰える。細胞砕片を除去することが徐々にできなくなってくると、細胞機能の衰えが生じ、次いで、上記細胞の早発の死が生じる。若い細胞は、中から砕片を効率的に除去する。古い細胞は、砕片を効率的に除去できず、リポフスチンを蓄積させる。ミトコンドリアは、リソソーム体のための細胞エネルギーを提供して、それらの細胞クリーニング活動を発揮させ、また、いったん小児期の成長が終わると、徐々に石灰化し、鉄分が混ざってくる。ミトコンドリアの約５％が、８０歳まで機能するに過ぎない。鉄およびカルシウムのキレート化剤は、細胞機能（例えば、リソソーム酵素活性）に影響を及ぼすミトコンドリアの加齢を改善することが提唱されている。
【００９１】
上記ヒトの身体は、線維芽細胞といわれる細胞がコラーゲンおよびヒアルロン酸を生成しなくなることによって、結合組織内で加齢する。ヒアルロン酸は、空間を埋め、水を保持する分子である。コラーゲン形成は、食事におけるビタミンおよびアミノ酸（ビタミンＣ、リジン、プロリン）によって促進される。線維芽細胞は、身体において天然に作られるエストロゲンによって、および食事において提供される植物に見いだされるエストロゲン様分子（いわゆる、フィトエストロゲン）によって、もしくはヒアルロン酸自体によって、ヒアルロン酸を生成するように刺激され得る。若い女性は、エストロゲンを生成する能力によって、ヒアルロン酸の豊富さに起因して、より太い髪、より滑らかな皮膚およびより可撓性の関節を示す。これらのすべては若さに原因がある。
【００９２】
ヒアルロン酸を再生できなくなると、ヒアルロン酸の空間を埋める特性がなくなることによって、組織が、物理的完全性を失うという結果となる。適切なヒアルロン酸がなければ、脱水状態が生じ、組織は収縮し、しぼむ。例えば、ヒアルロン酸が不足している皮膚は、しわになり、乾燥しているように見える。関節腔は、クッション性、および骨と骨がこすれないようにするために必要とされる空間の充填をを欠く。眼は、大きさが収縮し始める。毛髪は、水和の欠如に起因して細くなる。これらは、最も顕著な視覚的もしくは美容的な加齢の徴候である。
【００９３】
一実施形態において、本実施形態は、細胞のおよび細胞外の（結合組織の）加齢に対処し、従って、（ａ）過剰なミネラル（主に、カルシウムおよび鉄）を細胞から除去することによって、生細胞の若々しい機能を保持し、このことは、自食作用（リソソーム酵素を介する細胞砕片（例えば、リポフスチン）の一掃）を促進し、（ｂ）金属キレート化剤（例えば、フィチン酸、フェルレート、ケルセチン、レスベラトロールなど）の提供によるＨＡの分解の阻害に応じ、ＨＡ、フィトエストロゲン（レスベラトロール、ケルセチン、ゲニステインは、わずかである）による線維芽細胞の刺激によってヒアルロナンの生成を盛んにし、保つ。
【００９４】
一実施形態において、上記栄養補助食品は、細胞内リソソーム体による細胞砕片の酵素分解を介して、中からの生細胞の再生を刺激する能力によって、細胞のおよび細胞外の加齢の両方に対処する。これは、上記処方内に金属（鉄、銅、重金属）およびカルシウムのキレート化分子を含めることによって促進される。リソソームは、鉄、銅および他の金属の進行性の蓄積、ならびにカルシウムの結晶化によって、細胞砕片を酵素で消化する能力を失う。別の実施形態において、上記栄養補助食品は、再び若いレベルでの、ヒアルロン酸を生成するように線維芽細胞を刺激する。これは、線維芽細胞がヒアルロン酸を生成するように刺激する経口的に消費される分子を提供することによって達成される。別の実施形態において、上記栄養補助食品は、若いリソソーム機能を維持することを助ける金属キレート化分子を含み、これは、ビタミンＥもしくはビタミンＣ、リポ酸のような抗酸化剤、ＩＰ６  フィテート、ケルセチン、バイオフラボノイドもしくはポリフェノール、レスベラトロールのような金属キレート化剤として同定される。レスベラトロールは、ヘムオキシゲナーゼ（鉄を制御することを助ける酵素）の生成を刺激するその能力によって機能する。上記栄養補助食品はまた、カルシウムの結晶化を阻害する分子を含み得、これは、マグネシウムおよびＩＰ６  フィテートであり、ヒアルロン酸を生成するように線維芽細胞を刺激する経口消費される分子は、ヒアルロン酸、グルコサミン、コンドロイチン、もしくはエストロゲン様分子（例えば、ゲニステイン、リグナン、ヒドロキシチロサール、もしくはエストロゲンの様に構成された他の分子）である。経口消費されるＨＡは、より多くのＨＡおよびコンドロイチンの合成を刺激する。同様に、グルコサミンは、線維芽細胞がＨＡを生成するように刺激する。代わりに、もしくはさらに、グルコサミンは、滑液の潤滑特性および衝撃吸収特性を主に担うヒアルロン酸の滑液生成を刺激する（ＭｃＣａｒｔｙ，  Ｍ．Ｆ．（１９９８）  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ  ５０：５０７−５１０，  １９９８）。さらにまた別の実施形態において、上記栄養補助食品は、コラーゲンの生成を刺激する経口消費される分子を含み得、これは、ビタミンＣ、プロリンおよびリジンである。
【００９５】
このような実施形態において、本実施形態は、ヒト細胞および組織に若々しい機能および外見を回復させる、レスベラトロールおよびヒアルロン酸含有栄養補助食品に関する。上記実施形態は、キレート化剤、および／もしくはビタミンＤをさらに含むこのような組成物に特に関する。最も好ましくは、上記組成物は、上記キレート化剤であるフィチン酸（イノシトールヘキサホスフェート；ＩＰ６）を含む。本実施形態の組成物は、上記レスベラトロールおよび／もしくはヒアルロン酸の比活性を相乗作用で増強し、従って、本実施形態の組成物は、個々に投与される成分で得られるものを上回る活性の増強を提供する。このような実施形態において、上記実施形態は、ヒト細胞および組織に若々しい機能および外見を回復させるための方法に関し、上記方法は、以下の工程を包含する：（ａ）細胞内のリソソーム体による（好ましくは、若いリソソーム機能を維持することを助ける金属キレート化分子（このような分子は、抗酸化剤（例えば、ビタミンＥもしくはビタミンＣ）、リポ酸、金属キレート化剤（ＩＰ６  フィテート、ケルセチン、バイオフラボノイドもしくはポリフェノール、および／もしくはレスベラトロールのような）を含む）を提供することによって）細胞砕片の酵素分解を介して、内部からの生細胞の再生を刺激する工程；ならびに（ｂ）線維芽細胞がヒアルロン酸を生成する様に刺激する工程（線維芽細胞がヒアルロン酸を生成するように刺激する経口消費される分子を提供する工程を含み、このような経口消費される分子は、例えば、ヒアルロン酸、グルコサミン、コンドロイチン、および／もしくはエストロゲン様分子（例えば、ゲニステイン、リグナン、ヒドロキシチロソール、もしくはエストロゲンのように構成される他の分子）を含む）。好ましくは、このような刺激は、上記示された化合物を、より好ましくは、コラーゲンの生成を刺激する経口消費され得る分子（このような分子は、例えば、ビタミンＣ、プロリンおよび／もしくはリジンを含む）と組み合わせて含む組成物の食事による投与によって達成される。
【００９６】
上記組成物の個々の成分は、例えば、レスベラトロールの効果を増強するために相乗作用で働くと考えられる。それによって制限されるとは解釈されることなく、十分な成長が達成された後に、身体のコントロールまたは鉄およびカルシウムのキレート化が加齢の速度を調節するということが提唱されている。小児期の成長の間に、鉄およびカルシウムはすべて、新たな骨および新たな赤血球（ヘモグロビン）の生成に向けられる。小児期の成長の停止は、過剰な鉄、銅およびカルシウムを生じ、次いで、このことは、徐々に（ａ）石灰化し、そして（ｂ）組織を鈍化させる（ｒｕｓｔ）。リソソームは、鉄およびカルシウムを蓄積し始め、これにより、リソソームの機能不全を生じる。ミトコンドリアは、これらがまた進行性に鈍化しそして石灰化するにつれて、機能不全に陥り始める。本実施形態の組成物は、上記細胞および細胞小器官の進行性の鈍化および石灰化を制限するかもしくは遅らせて、それによって加齢プロセスの遅延もしくは逆転を促進し得ると考えられる。上記キレート化は、遺伝子を制御するものである。次いで、遺伝子は、好都合にアップレギュレートもしくはダウンレギュレートされる。レスベラトロールおよび銅キレート化剤は、（１）オステオカルシン（骨にカルシウムを保持することを助けるホルモン）のアップレギュレーションを介して、カルシウム濃度の制御因子として、および（２）ヘムオキシゲナーゼ（抗酸化酵素）を介して、鉄濃度の制御因子として、作用すると考えられる。
【００９７】
ＭＡＯインヒビターおよび鉄キレート化剤は、パーキンソン病のための処置剤として提唱されてきた（Ｙｏｕｄｉｍ，  Ｍ．Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．（２００４）  Ｊ．  Ｎｅｕｒａｌ．  Ｔｒａｎｓｍ．  １１１（１０−１１）：１４５５−１４７１；  Ｙａｎｅｚ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．（２００６）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ５４２（１−３）：５４−６０；  Ｂｕｒｅａｕ，  Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．（２００８）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  Ｒｅｓ．  ８６（２）：４０３−４１０；  Ｓｉｎｇｈ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ６８（２）：８１−８８；  Ｇａｏ，
Ｘ．  ｅｔ  ａｌ．（２００７）  Ａｍ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｎｕｔｒ．  ８６（５）：１４８６−１４９４；  Ｊｏｈｎｓｏｎ，  Ｓ．（２００１）  Ｍｅｄ．  Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ  ５６（２）：１７１−１７３）。上記ＭＡＯインヒビターおよび銅キレート化剤、レスベラトロール、上記鉄キレート化剤およびＭＡＯインヒビター、ケルセチン、ならびに上記広い金属キレート化剤、フィチン酸を含む本実施形態の組成物は、神経変性疾患（特に、パーキンソン病、前屈症、およびアルツハイマー病）の処置のために、またはこのような疾患の症状の改善において、特に好ましい。
【００９８】
（Ｃ．遺伝子生成物濃度もしくは活性の調節）
例示的実施形態において、上記組成物は、レスベラトロール単独で、もしくはカロリー制限で実測されたものより大きい程度まで、遺伝子発現を調節し得る。好ましい実施形態において、レスベラトロール含有組成物中のレスベラトロールの比活性は、安定化されているかもしくは増強されている。本明細書で使用される場合、用語「比活性」とは、投与されるレスベラトロールの量（質量）あたりの、遺伝子調節（コントロールに対して）の程度の比に言及する。別の好ましい実施形態において、上記組成物は、レシピエントへ投与すると、生き残り／長寿遺伝子をアップレギュレートするか、または遺伝子の発現が細胞損傷を増強する、その遺伝子をダウンレギュレートする。
【００９９】
上記実施形態は、レシピエントへの投与の際に、生き残り／長寿遺伝子生成物の濃度もしくは活性を増大させ、そして／または細胞損傷を誘導するかもしくは引き起こす遺伝子生成物の濃度もしくは活性を低下させる組成物に関する。本明細書で使用される場合、濃度もしくは活性におけるこのような増大（もしくは低下）は、任意の機構によって達成され得る。例えば、このような増大（もしくは低下）は、上記生き残り／長寿遺伝子生成物をコードする遺伝子、またはこのような発現もしくは活性を調節する（例えば、誘導するかもしくは抑制する）遺伝子、または遺伝子の生成物がこのような発現もしくは活性を調節するその遺伝子の増大した（もしくは低下した）発現のいずれかをもたらす、遺伝子発現の調節を反映し得る。代わりに、もしくは繋がって、濃度もしくは活性におけるこのような増大（もしくは低下）は、任意のこのような遺伝子生成物を分解もしくは安定化させるレシピエントの能力の調節を反映し得る。代わりに、もしくは繋がって、濃度もしくは活性におけるこのような増大（もしくは低下）は、任意のこのような遺伝子生成物の活性を増強、促進、抑制もしくは遅らせる上記レシピエントの能力の調節を反映し得る。
【０１００】
上記で考察される濃度もしくは活性の調節は、このような生き残り／長寿遺伝子生成物、または細胞損傷を誘導するかもしくは引き起こすこのような遺伝子生成物の細胞内、細胞間、および／もしくは組織の濃度もしくは活性の調節であり得る。このような調節は、細胞、組織などの１つ以上のタイプで行われる、ＤＮＡ発現のアッセイ、遺伝子生成物活性のアッセイ、遺伝子生成物のレベルのアッセイ、遺伝子生成物ターンオーバーの速度のアッセイなどによって同定され得る。
【０１０１】
生き残り／長寿遺伝子生成物の濃度における増大は、例えば、上記生き残り／長寿遺伝子生成物をコードする遺伝子の増大した転写、上記生き残り／長寿遺伝子生成物をコードする遺伝子の発現を誘導する遺伝子の増大した転写、上記生き残り／長寿遺伝子生成物をコードする遺伝子の発現を抑制する遺伝子の低下した転写、上記生き残り／長寿遺伝子生成物の発現された分子の低下した分解もしくは増大した安定化（上記生き残り／長寿遺伝子生成物の増強された蓄積をもたらす）から生じ得る。同様に、生き残り／長寿遺伝子生成物の濃度における低下は、例えば、上記生き残り／長寿遺伝子生成物をコードする遺伝子の低下した転写、上記生き残り／長寿遺伝子生成物をコードする遺伝子の発現を誘導する遺伝子の低下した転写、上記生き残り／長寿遺伝子生成物をコードする遺伝子の発現を抑制する遺伝子の増加した転写、上記生き残り／長寿遺伝子生成物の発現された分子の増大した分解もしくは低下した安定化（上記生き残り／長寿遺伝子生成物の増強した消失をもたらす）から生じ得る。
【０１０２】
従って、本実施形態の一局面は、遺伝子発現を調節するための、および特に、「生き残り／長寿」遺伝子および／もしくは「損傷誘導」遺伝子の発現を調節するための、レスベラトロールおよびレスベラトロール含有組成物の使用に関する。本明細書で使用される場合、化合物は、この投与が、少なくとも１０％のこのような遺伝子の発現の変化（コントロールに対する）を生じる場合、遺伝子発現を「調節する」といわれる。調節は、発現の増大（「アップレギュレーション」）を包含し得るか、または発現の低下（「ダウンレギュレーション」）を包含し得る。用語、アップレギュレートするとは、従って、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、もしくは最も好ましくは、少なくとも１０倍（コントロールに対して）の発現の増大を示す。用語、ダウンレギュレートするとは、逆に、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、もしくは最も好ましくは、少なくとも１０倍（コントロールに対して）の発現の低下を示す。
【０１０３】
本実施形態の第２の局面は、「生き残り／長寿」遺伝子および／もしくは「損傷誘導」遺伝子の発現生成物の濃度もしくは活性を調節するための、レスベラトロールおよびレスベラトロール含有組成物の使用に関する。本明細書で使用される場合、化合物は、この投与が、少なくとも１０％のこのような遺伝子生成物の細胞内、細胞間、もしくは組織の濃度もしくは活性（コントロールに対する）における変化を生じる場合、そのような発現生成物の濃度もしくは活性を「調節する」といわれる。調節は、例えば、「増強された蓄積」もしくは「増強された活性」を包含し得るか、または例えば、それは「低下した蓄積」もしくは「低下した活性」を包含し得る。用語「増強された蓄積」（もしくは「増強された活性」）は、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、もしくは最も好ましくは、少なくとも１０倍（コントロールに対して）の濃度（もしくは活性）における増大を示す。用語「低下した蓄積」もしくは「低下した活性」とは、逆に、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、もしくは最も好ましくは、少なくとも１０倍（コントロールに対して）の濃度（もしくは活性）における低下を示す。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、「生き残り／長寿」遺伝子は、その発現が、このような遺伝子を発現する被験体（例えば、哺乳動物、および特に、ヒト）の生き残りもしくは長寿の増大に寄与する遺伝子である。逆に、「損傷誘導」遺伝子は、その発現がこのような被験体におけるＤＮＡの、細胞の、もしくは組織の損傷に寄与する遺伝子である。このような遺伝子は、生物学的ストレッサーへのレスポンダーであり、それらは、ストレッサー（例えば、放射線（例えば、日光、γ線、ＵＶ光など）、放射線類似因子（例えば、ビタミンＤ）、熱、飢餓に近いもの（カロリー制限、もしくはその摸倣物、レスベラトロール）に応じた作用を、それらの発現を調節することによって開始する。
【０１０５】
好ましい実施形態において、上記生き残り／長寿遺伝子は、サーチュイン（ｓｉｒｔｕｉｎ）遺伝子である。上記サーチュインは、デアセチラーゼおよびモノ−ＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼの保存されたファミリーであり、細胞の生き残りおよび生物の長寿の重要な調節因子として明らかになってきた。哺乳動物は、少なくとも７つのサーチュイン（サーチュイン１〜７を含む）を有する。サーチュイン１は、グルコースホメオスタシス、脂肪代謝および細胞生き残りを含む機能を調節する核デアセチラーゼである。上記サーチュイン１遺伝子は、ＤＮＡ修復酵素を生成するその能力によって、生きている生物の加齢の速度を制御することが公知であり、それはカロリー制限の有益な効果を摸倣する。レスベラトロールのトランス形態（しかしｃｉｓ−レスベラトロールではない）は、上記サーチュイン１遺伝子を活性化する。上記サーチュイン３遺伝子は、アセチル−ＣｏＡシンテターゼ２を調節するミトコンドリアサーチュインであり、従って、その調節は、ミトコンドリアの生物発生もしくは代謝の増大、脂肪酸酸化の増大、および反応性酸素種の低下を含む生理学的適用を有する。遺伝毒性ストレスの間の細胞生き残りを促進することにおけるサーチュイン３の役割は、米国特許出願公開第２０１１／００８２１８９号において実証された。好ましい実施形態は、レスベラトロール単独が上記遺伝子生成物を調節する能力と比較して、サーチュイン１もしくはサーチュイン３  生き残り／長寿遺伝子生成物の濃度を調節する（増大もしくは低下させる）組成物に特に関する。
【０１０６】
特に、本実施形態の商業的製剤（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）として販売される）は、レスベラトロール単独より最大で２．９５倍大きな速度でサーチュイン３をアップレギュレートすることが示された。Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍｏｌ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２０１０  Ｎｏｖ；８８（１１）：１０１７−２５。サーチュイン３タンパク質は、ミトコンドリア内でマンガンスーパーオキシド・ジスムターゼ（Ｍｎ  ＳＯＤ）を調節し、これは、加齢、加齢が進んでいるおよび疾患状態にあるミトコンドリアの機能および生き残りに対して、直接的に影響を有し得る。データはまた、上記商業的Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）製剤がＣ反応性タンパク質（炎症のマーカー）を低下させ、インスリンを低下させ、ＨＤＬコレステロールを上昇させ、流れ媒介性動脈拡張の障害（アテローム硬化疾患の最初の徴候）を排除したことを示唆する。
【０１０７】
生き残り／長寿遺伝子およびその発現が細胞損傷を増強する遺伝子の例としては、例えば、それぞれ、表１および表２に開示される遺伝子が挙げられる。最も好ましくは、このような遺伝子は、ヒト遺伝子である。
【０１０８】
【表１−１】
2014237727.tif 000003
【０１０９】
【表１−２】
2014237727.tif 000004
【０１１０】
【表１−３】
2014237727.tif 000005
【０１１１】
【表２−１】
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【０１１２】
【表２−２】
2014237727.tif 000007
【０１１３】
【表２−３】
2014237727.tif 000008
【０１１４】
いくつかの実施形態は、トランス−レスベラトロールおよび金属キレート化剤を含む組成物を提供し、ケルセチン、１種以上のグリコサミノグリカン、および／もしくはビタミンＤをさらに含み得る。上記トランス−レスベラトロールは、上記組成物の生物学的活性を、光もしくは酸素への上記トランス−レスベラトロールの曝露に起因する喪失から実質的に保護するように、封入され得る。レスベラトロール、キレート化剤、ヒアルロン酸、および／もしくはビタミンＤを含む組成物、ならびに上記キレート化剤であるフィチン酸（イノシトールヘキサホスフェート；ＩＰ６）、上記グリコサミノグリカンであるヒアルロン酸、およびビタミンＤを含む組成物が、特に提供される。
【０１１５】
他の実施形態は、レスベラトロール単独でもしくはカロリー制限で実測されたものより大きな程度まで、遺伝子発現を調節し得るレスベラトロール含有組成物を提供する。上記組成物は、レシピエントに投与されると、生き残り／長寿遺伝子をアップレギュレートするか、または遺伝子の発現が細胞損傷を増強するその遺伝子をダウンレギュレートするために使用され得、そしてまた、癌、心血管疾患、加齢と関連する疾患、ならびに他の状態および病気の処置もしくは予防において使用され得る。特定の実施形態は、レシピエントへ投与すると、レスベラトロール単独もしくはカロリー制限と比べ、生き残り／長寿遺伝子の生成物の濃度もしくは活性、または遺伝子の発現が細胞損傷を増強するその遺伝子の生成物の濃度もしくは活性を調節するレスベラトロール含有組成物を提供する。投与は、好ましくは、経口摂取によるものである。
【０１１６】
上記実施形態はさらに、フォークヘッド  Ｆｏｘｏ１（ｄａｆ−１６，  ｄＦｏｘＯ）転写因子、生き残り／長寿遺伝子生成物の濃度を増大させる組成物に特に関する。
【０１１７】
特定の実施形態は、上記調節が、（Ａ）酸化的リン酸化；（Ｂ）アクチンフィラメント長もしくは重合；（Ｃ）細胞内輸送；（Ｄ）小器官の生物発生；（Ｅ）インスリンシグナル伝達；（Ｆ）解糖；（Ｇ）糖新生；または（Ｈ）脂肪酸代謝を変化させる組成物および方法を提供する。上記遺伝子生成物は、生き残り／長寿遺伝子生成物、特に、サーチュイン１、サーチュイン３、もしくはフォークヘッド  Ｆｏｘｏ１  転写因子であり得る。上記遺伝子生成物は、細胞損傷を増強し得、特に、脱供役タンパク質３、Ｐｇｃ−１、もしくはピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ４遺伝子によってコードされ得る。
【０１１８】
（Ｄ．上記組成物の包装）
レスベラトロールは、代表的には、光および酸化に対して不安定である（Ｓｈａａｎｘｉ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｘｉａｎｙａｎｇ  Ｃｈｉｎａ（２００７）  Ｚｈｏｎｇ  Ｙａｏ  Ｃａｉ．  ３０（７）：８０５−８０）。本実施形態のレスベラトロールは、好ましくは、その比活性を最大化する方式において調製され、パッケージされ、そして／または貯蔵される。光誘導性分解（例えば、光異性化）もしくは酸素誘導性分解を最小限にするように、弱い光において（もしくは遮光において）および／もしくは低酸素において、レスベラトロールを調製し、パッケージし、そして／または貯蔵することは好ましい。本実施形態の好ましい組成物は、丸剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ剤などの形態での経口摂取のための、栄養補助食品として処方される。投与の他のモダリティーが、代わりに使用され得る（例えば、鼻内、非経口、静脈内、動脈内、局所など）。
【０１１９】
上記レスベラトロールもしくはレスベラトロールを含む植物抽出物は、好ましくは、実質的に無酸素環境において封入される。本明細書で使用される場合、語句「実質的に無酸素」とは、約１００ｐｐｍ未満の酸素を有する環境を含むと解釈される。理想的には、上記封入プロセスは、上記低分子の抽出もしくは形成の直後に起こり、光、熱、および酸素への曝露から保護される。あるいは、上記低分子を含む材料は、封入されるまで、実質的に無酸素の環境に貯蔵され得る。上記封入プロセスは、（１）頭の部分および体の部分を含むカプセルを提供する工程；（２）上記体の部分を生物学的に活性な低分子を含む上記材料で少なくとも部分的に充填する工程；（３）上記頭の部分を上記体の部分の上に、上記部分が、少なくとも部分的に重なるように、軸上に位置決めする工程；ならびに（４）上記重なっている部分に沿って流体が通らない（空気および液体を透過させない）シールを形成する工程を包含する。
【０１２０】
上記カプセルの部分を含む材料は、特には限定されない。好ましくは、上記カプセルの部分は、低酸素透過率を有する材料を含む。例えば、上記カプセルの部分は、１００μｍに対して約１６５ｃｍ３／ｍ２／日未満、より好ましくは、１００μｍに対して約４ｃｍ３／ｍ２／日未満、および最も好ましくは、１００μｍに対して約１ｃｍ３／ｍ２／日未満の酸素透過率（ＡＳＴＭ  Ｄ３９８５によって測定されるとおり）を有する材料を含むことは、好ましい。上記カプセルの部分を構成する例示的な材料としては、摂取可能な材料（例えば、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、もしくはデンプン）が挙げられるが、これらに限定されない。具体例によって、上記材料としては、１００μｍに対して酸素透過率約３．５ｃｍ３／ｍ２／日を有するゼラチンが挙げられ得る。得られたカプセルは、酸素透過率が最大約０．０４ｃｍ３／カプセル／日（２７℃および相対湿度５０％においてＡＳＴＭ  Ｄ３９８５）を有する硬質ゼラチンカプセルもしくは軟質ゼラチンカプセルを含み得る。さらに、不透明なカプセルが、非常に好ましい。これは、色素（例えば、二酸化チタン）を上記カプセル材料製剤に添加することによって達成され得る。二酸化チタンは、不活性であり、摂取された場合に、血液循環に吸収されないようにする高分子量を有する。不透明なカプセルは、光分解プロセス（例えば、光酸化）による上記レスベラトロール含有組成物の分解を妨げるように機能する。低酸素透過性を有する市販の不透明なカプセルは、Ｃａｐｓｕｇｅｌ（Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ，  ＳＣ−−ｗｗｗ．ｃａｐｓｕｇｅｌ．ｃｏｍ）から入手可能であり、商品名Ｌｉｃａｐｓ（登録商標）の下で販売される。
【０１２１】
生物学的に活性な低分子材料を含む上記組成物を封入するために使用されるシステムは、カプセルの部分の周りに流体が通らない（空気および液体を透過させない）シールを作らなければならない。特に好ましい封入システムおよびプロセスは、ＷＯ  ０１／０８６３１Ａ１（その全体において本明細書に参考として援用される）に開示される。このシステムおよび関連プロセスにおいて、カプセルの頭の部分およびカプセルの体の部分は、充填チャンバの中に置かれる。上記カプセルの体の部分は、所望の投与量の材料で満たされ、次いで、上記カプセルの部分は、上記頭の部分が上記体の部分に部分的に重なるように、入れ子式に連結される。溶媒を含む液体をシールする工程は、重なっている区域の間に形成される間隙に適用され、上記カプセル剤は、上記溶媒を除去し、流体が通らないシールを形成するために乾燥される。
【０１２２】
上記封入プロセスは、実質的に無酸素の環境において起こることが重要である。さらに、上記封入プロセスは、遮光した（実質的に光がない）環境で起こることが好ましい。上記で説明されるように、低分子（例えば、レスベラトロール）は、光および／もしくは酸素への曝露により、（例えば、酸化プロセスに起因して）その生物学的活性を失う。結論として、低分子を含む上記組成物は、実質的に無酸素の環境を有する、気密かつ遮光した混合および充填チャンバを含むシステムで混合および／もしくは封入されるべきである。これは、酸素が除去される閉鎖したシステムを使用することによって達成され得る。酸素は、真空を使用して、上記システム内の酸素を、不活性ガスのフラッシュで置き換えて、またはこれらの組み合わせで、除去され得る。例えば、上記システムは、制御された窒素ブランケットを使用して酸素が除去され得る。さらに、上記システムは、封入プロセスの間の窒素フラッシュの使用を介して実質的に酸素がない状態を維持する。窒素パージはまた、各個々のカプセルから酸素を除去するために使用され得る。具体的には、シールする前に、陽圧を各カプセルにかけて、上記カプセル内に存在するいかなる酸素をも窒素で置き換え得る。シールする際には、窒素の気泡が上記カプセルの中に残る。実質的に無酸素かつ遮光環境においてカプセルを充填し得る市販の封入システムは、Ｃａｐｓｕｇｅｌ（Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ，  ＳＣ−−ｗｗｗ．ｃａｐｓｕｇｅｌ．ｃｏｍ）から入手可能であり、商品名ＣＰＳ  １０００  Ｃａｐｓｕｌｅ  Ｆｉｌｌｉｎｇ  Ｍａｃｈｉｎｅの下で販売されている。
【０１２３】
好ましい実施形態において、本実施形態の組成物は、酸素への曝露を防止もしくは最小限にするように封入が行われる気密カプセル剤として処方される。一実施形態において、このような封入は、無酸素環境において行われる。例えば、本実施形態の組成物の成分は、不活性ガス（例えば、窒素、アルゴンなど）環境においてカプセルへと挿入され得る。好ましくは、窒素気泡（例えば、カプセル体積のうちの５〜２０％）が、上記カプセルの中へと導入されて、上記成分を酸素に対してさらに安定化させかつ保護し得る（ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ０１／０８６３１（本明細書に参考として援用される）を参照のこと）。その国際出願は、対応する米国特許出願を有する。レスベラトロールおよび栄養補助食品の他の酸化しやすい成分の封入において有用な、適したカプセルとしては、Ｌｉｃａｐｓ（登録商標）（Ｃａｐｓｕｇｅｌ）（気密ゼラチンカプセル）が挙げられる。フィチン酸（これは、金属誘導性酸化から上記成分を保護する能力を有する）の存在は、このような抗酸化の予防措置を増大させる。このようなレスベラトロール含有組成物の特に好ましい例は、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）（Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，  ＬＬＣ，  Ｓａｎ  Ｄｉｍａｓ，  ＣＡ）であり、これは、レスベラトロールおよびフィチン酸を含む。Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は、活性成分として（１カプセルあたり）以下を含む：  ５ｍｇ  ビタミンＥ（混合トコフェロールとして）、２１５ｍｇ  総レスベラトロール（フランス産赤ワインおよび大虎杖（Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ  ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ）から得られ、１００ｍｇのトランス−レスベラトロールを提供する）、２５ｍｇ  ケルセチン二水和物、７５ｍｇ  フィチン酸（米ぬか抽出物）、３８０ｍｇ  米ぬか油、５５ｍｇ  ヒマワリレシチン。
【０１２４】
いったん組成物が気密カプセルの中にシールされたら、上記シールされたカプセル剤に割れもしくは漏れをおこす酸化から上記組成物を保護するために、上記カプセル剤を取り囲む包装において低酸素もしくは無酸素環境を維持することは重要である。従って、酸素吸収パケットは、好ましくは、遊離酸素の存在を低下させるために使用される。気密材料において真空もしくは窒素がフラッシュされた包装（ボトル、ピルケースなど）が望ましい。
【０１２５】
代替の実施形態において、本実施形態の成分および組成物は、微小封入プロセスとして調製され得る（一般に、Ｒｕｂｉａｎａ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．（２００４）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ，  ５（５）：４４９−４５５を参照のこと）。微小封入は、ごく小さな粒子もしくは液滴（数ナノメートルから１マイクロメートルまでのサイズ範囲に及ぶ）が、保護層で被覆されて、制御された特性を有する小さなカプセル剤を作り出すプロセスである。適切なミクロンサイズの封入された調製物は、Ｍａｘｘ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｉｎｃ．（Ｃｈｅｓｔｅｒ，  ＮＹ）、Ｂｌｕｅ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ（Ｒａｎｃｈｏ  Ｓａｎｔａ  Ｍａｒｇａｒｉｔａ，  ＣＡ）、Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ，  ＴＸ）、Ｃｏａｔｉｎｇ  Ｐｌａｃｅ，  Ｉｎｃ．（Ｖｅｒｏｎａ，  ＷＩ）、Ｍｉｃｒｏｔｅｋ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｄａｙｔｏｎ，  ＯＨ）、Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｉｎｃ．（Ｂｅｔｈｌｅｈｅｍ，  ＰＡ）などの上記微小封入プロセスを使用して得られ得る。第３世代のＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）（「Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ−３（登録商標）」）（Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，  ＬＬＣ）は、ビタミンＤ３、ビタミンＥ、レスベラトロール、ケルセチン、およびフィチン酸を含み、本実施形態の組成物の特に好ましい微小封入形態である。本実施形態は、酸化する金属と接触した状態になり得る、ケルセチンおよび他の容易に酸化される栄養補助食品成分を安定化するための実践的な方法をさらに包含する。
【０１２６】
今や一般に、上記実施形態に記載されるように、上記実施形態は、以下の実施例への言及を介してより容易に理解される。実施例は、例示によって提供されるのであって、明記されない限り、本実施形態を制限するとは解釈されない。
【実施例】
【０１２７】
（実施例１：レスベラトロールおよび本実施形態の組成物の効果の比較）
本実施形態の組成物が、レスベラトロールの生物学的活性を媒介することにおいてレスベラトロール単独より有効であるかどうかを決定するために、遺伝子発現の分析を、カロリー制限によって達成された遺伝子発現の調節と、本実施形態の組成物によって達成された遺伝子発現の調節とを比較して、行った。
【０１２８】
よって、レスベラトロール単独および本実施形態のレスベラトロール含有組成物が、生き残り／長寿遺伝子をアップレギュレートする能力または遺伝子の発現が細胞損傷を増強する、その遺伝子をダウンレギュレートする能力を、陽性コントロールとしてカロリー制限（「ＣＲ」）動物の発現プロフィールを、および陰性コントロールとして通常どおりに給餌した動物の発現プロフィールを使用して、比較した。雄性Ｂ６ＣＨＦ１マウス（２ヶ月齢）を、従って、４０％  カロリー制限食、提供された市販で得られるトランス−レスベラトロール（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ；１．２５ｍｇ／ｋｇ／日）、提供された本実施形態のレスベラトロール含有組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）；Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，  ＬＬＣ；１００ｍｇ  トランス−レスベラトロール含有カプセル／８０ｋｇ  ヒト／日（すなわち、２．５ｍｇ／ｋｇ／日のレスベラトロール（１．２５ｍｇ／ｋｇ／日  トランス−レスベラトロール）  ０．３１ｍｇ／ｋｇ／日  ケルセチン二水和物、０．９４ｍｇ／ｋｇ／日  米ぬか抽出物、４．７５ｍｇ／ｋｇ／日  米ぬか油および０．７０ｍｇ／ｋｇ／日  ヒマワリレシチン）のいずれかに置いた。上記マウスを、彼らが５ヶ月齢に達するまでモニターした。
【０１２９】
体重、血清グルコースレベル、血清インスリンレベルならびに脳および筋組織の脂質過酸化を測定した。結果から、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は、コントロール動物から区別可能な体重増加を生じないことが示された（図１）。血清インスリンレベルは、上記カロリー制限動物において見いだされるものとほぼ同じであることがわかった（図２）。血清グルコースレベルは、上記カロリー制限動物において見いだされるものより低いことがわかった（図３）。
【０１３０】
（実施例２：心臓組織における遺伝子発現に対するレスベラトロールおよび本組成物の効果の比較）
レスベラトロールもしくは本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））を受けているマウスの心臓組織において発現した遺伝子のプロフィールを、カロリー制限食に置いたマウスおよびコントロールマウスのものと比較した。遺伝子発現を、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ＭＧ４３０  ２．０  Ａｒｒａｙ（４５，１０１プローブセット／アレイを含む）を使用してモニターした。上記アレイが複数のプローブで同じ遺伝子を表した場合、最高のシグナル強度を有する上記プローブセットを使用した。未知の遺伝子（未だ特徴付けされていないＥＳＴおよびｃＤＮＡ配列を含む）は、分析しなかった。従って、上記アレイは、単一のＥｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ  ＩＤを有する２０，３４１の遺伝子を分析するための手段を提供した。分析を、実質的に、Ｌｅｅ，  Ｃ．−Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）  ９９：１４９８８−１４９９３（本明細書に参考として援用される）によって記載されるように行った。ある群におけるすべてのアレイの平均値を計算した。処置された群の平均値を、上記コントロール群の平均値と比較し、任意の差異の統計的有意性を、両側ｔ検定（Ｐ＜０．０１）を使用して決定した。上記分析の結果を、表３に示す。表３において、以下の略語を使用する：ＣＯ，コントロール；ＣＲ，カロリー制限；ＲＥＳ，レスベラトロール；ＬＧＸ，Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）；ＦＣ，倍数変化。ＦＣを、上記処置群の平均値を、上記コントロール群の平均値で除算して計算し、次に、この値を、統計目的のために対数変換する（底が２）。例として、上記コントロールにおいて１００および処置群において２００で発現される遺伝子は、Ｆｃが２（すなわち、発現において２倍増）を有する；上記コントロールにおいて１００および上記処置群において５０で発現される遺伝子は、Ｆｃが−２（すなわち、発現において２倍減少）を有する。
【０１３１】
【表３−１】
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【０１３２】
【表３−２】
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【０１３３】
【表３−３】
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【０１３４】
【表３−４】
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【０１３５】
【表３−５】
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【０１３６】
【表３−６】
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【０１３７】
【表３−７】
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【０１３８】
【表３−８】
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【０１３９】
【表３−９】
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【０１４０】
【表３−１０】
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【０１４１】
【表３−１１】
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【０１４２】
【表３−１２】
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【０１４３】
【表３−１３】
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【０１４４】
【表３−１４】
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【０１４５】
【表３−１５】
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【０１４６】
【表３−１６】
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【０１４７】
【表３−１７】
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【０１４８】
【表３−１８】
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【０１４９】
【表３−１９】
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【０１５０】
【表３−２０】
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【０１５１】
【表３−２１】
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【０１５２】
【表３−２２】
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【０１５３】
【表３−２３】
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【０１５４】
【表３−２４】
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【０１５５】
【表３−２５】
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【０１５６】
【表３−２６】
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【０１５７】
【表３−２７】
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【０１５８】
【表３−２８】
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【０１５９】
【表３−２９】
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【０１６０】
【表３−３０】
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【０１６１】
【表３−３１】
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【０１６２】
【表３−３２】
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【０１６３】
【表３−３３】
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【０１６４】
【表３−３４】
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【０１６５】
【表３−３５】
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【０１６６】
【表３−３６】
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【０１６７】
【表３−３７】
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【０１６８】
【表３−３８】
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【０１６９】
【表３−３９】
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【０１７０】
【表３−４０】
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【０１７１】
【表３−４１】
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【０１７２】
【表３−４２】
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【０１７３】
【表３−４３】
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【０１７４】
【表３−４４】
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【０１７５】
【表３−４５】
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【０１７６】
【表３−４６】
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【０１７７】
【表３−４７】
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【０１７８】
【表３−４８】
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【０１７９】
【表３−４９】
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【０１８０】
【表３−５０】
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【０１８１】
【表３−５１】
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【０１８２】
【表３−５２】
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【０１８３】
【表３−５３】
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【０１８４】
【表３−５４】
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【０１８５】
【表３−５５】
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【０１８６】
【表３−５６】
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【０１８７】
【表３−５７】
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【０１８８】
【表３−５８】
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【０１８９】
【表３−５９】
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【０１９０】
【表３−６０】
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【０１９１】
ヒト臍帯静脈上皮細胞の、フェルラ酸、ケルセチンもしくはレスベラトロールでの処置から、プローブされた１０，０００の遺伝子のうちの３６３の遺伝子の２倍を超えるダウンレギュレーションおよび２３３の遺伝子の２倍を超えるアップレギュレーションという遺伝子発現の変化を生じることが報告された（Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ，  Ｓ．Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．（２００８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎｕｔｒ．  Ｓｏｃ．  ６７（１）：４２−４７）。対照的に、表３は、２，８２９の遺伝子が、処置マウス  対  コントロールマウスにおける発現の統計的に有意な変化を示すことが見いだされたことを示す。これらの遺伝子のうち、７％は、カロリー制限のみに供されたマウスにおいて変化した発現を示すことが見いだされた；８％は、レスベラトロールにのみ供されたマウスにおいて変化した発現を示すことが見いだされた。カロリー制限とレスベラトロール投与とを組み合わせると、いかなるさらなる遺伝子の発現をも変化させなかった。対照的に、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の投与から、上記２，８２９の遺伝子のうちの６１％において発現が変化することが見いだされた。カロリー制限マウスへのＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の投与から、上記遺伝子のうちのさらに２％の発現が変化することが見いだされた。レスベラトロールを受けたマウスへのＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の投与から、上記遺伝子のうちのさらに２１％において発現が変化することが見いだされた。従って、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）単独もしくは他のレジメンと組み合わせたＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は、変化した発現を示すすべての遺伝子のうちの８５％（２，４０６）に影響を与えることが見いだされた。
【０１９２】
特別の目的のいくつかの遺伝子は、本実施形態の組成物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））が生き残り／長寿遺伝子をアップレギュレートするか、またはその発現がレスベラトロールより大きな程度まで細胞損傷を増強する遺伝子（サーチュインファミリーの遺伝子（Ｐｇｃ−１α、脱共役タンパク質−３、およびピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ４）を含む）をダウンレギュレートすることを示す発現パターンを示した。
【０１９３】
上記サーチュインファミリーの遺伝子、および特に、サーチュイン１は、延びた寿命の重要なメディエーターであると考えられる（Ｂｏｉｌｙ，  Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．（２００８）  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ３（３）：ｅ１７５９；  Ｈｕａｎｇ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．（２００８）  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ３（３）：ｅ１７１０）。レスベラトロールを受けているマウスは、発現において１．２２倍の減少を示したに過ぎず、カロリー制限食に供されたマウスは、サーチュイン１発現において１．１２倍の低下を示したに過ぎないのに対して、サーチュイン１の発現は、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）を受けているマウスにおいて１．７１倍低下することが見いだされた。Ｐｇｃ−１α（ペルオキシソーム増殖活性化レセプター，γ，コアクチベーター１α；ｐｐａｒｇｃ１ａ）は、エネルギー代謝およびミトコンドリアの生物発生を制御する転写補因子である；その発現は、長期のカロリー制限の際に、骨格筋組織において増大する（Ｃｏｎｌｅｙ，  Ｋ．Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．（２００７）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｃｌｉｎ．  Ｎｕｔｒ．  Ｍｅｔａｂ．  Ｃａｒｅ．  １０（６）：６８８−６９２；  Ｗｕ，  Ｚ．  ｅｔ  ａｌ．（２００７）  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｔｈｅｒ．  Ｔａｒｇｅｔｓ  １１（１０）：１３２９−１３３８）。レスベラトロールを受けているマウスは、発現において１．６倍の増大を示したに過ぎず、カロリー制限食に供されたマウスは、Ｐｇｃ−１α発現において増大を示さなかったのに対して、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）を受けているマウスは、Ｐｇｃ−１α発現において１．９４倍の増大を示した。
【０１９４】
脱共役タンパク質−３は、Ｐｇｃ−１αの標的でありかつ脂肪酸代謝において役割を果たすと考えられる；その発現は、長期のカロリー制限の際に、心臓組織において増大する（Ｂｅｚａｉｒｅ，  Ｖ．  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｐｕｂ  ２００７  Ｊａｎ  ３）  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．  ２１（２）：３１２−３２４；  Ｃｈａｎ，  Ｃ．Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．（２００６）  Ｃｕｒｒ．  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｖ．  ２（３）：２７１−２８３）。レスベラトロールを受けているマウスは、発現において２．０２倍の増大を示したに過ぎず、カロリー制限食に供されたマウスは、脱共役タンパク質−３発現において１．８倍の増大を示したに過ぎないのに対して、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）を受けているマウスは、脱共役タンパク質−３発現において２．７９倍の増大を示した。ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ４は、脂肪酸代謝を促進するために絶食している間に、燃料選択を調整する（Ｓｕｇｄｅｎ，  Ｍ．Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．（２００６）  Ａｒｃｈ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １１２（３）：１３９−１４９；  Ｐｉｌｅｇａａｒｄ，
Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．（２００４）  Ｐｒｏｃ．  Ｎｕｔｒ．  Ｓｏｃ．  ６３（２）：２２１−２２６；  Ｓｕｇｄｅｎ，  Ｍ．Ｃ．（２００３）  Ｏｂｅｓ．  Ｒｅｓ．  １１（２）：１６７−１６９）。ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ４は、Ｐｇｃ−１αの標的であり、長期間のカロリー制限によって複数の組織において誘導される。レスベラトロールを受けているマウスは、発現において２．７８倍の増大を示したに過ぎず、カロリー制限食に供されたマウスは、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ４発現において１．４８倍の増大を示したに過ぎないのに対して、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）を受けているマウスは、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ４発現において３．２５倍の増大を示した。
【０１９５】
本実施形態の化合物（Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））によってアップレギュレートされるかもしくはダウンレギュレートされる遺伝子の分析から、酸化的リン酸化遺伝子（これらは、ミトコンドリアのＡＴＰ生成に関与する）が、表４に示されるように、顕著にアップレギュレートされることが明らかになった。
【０１９６】
【表４】
2014237727.tif 000069
【０１９７】
（実施例３：本実施形態の組成物によって影響を受ける生化学的経路）
近年の研究から、複合形質（ｃｏｍｐｌｅｘ  ｔｒａｉｔ）は、複合遺伝子座（ｃｏｍｐｌｅｘ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｌｏｃｕｓ）および環境因子によって調節される分子ネットワークの創発的特性であることが示唆された。Ｃｈｅｎ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｍａｒ  １６）  Ｎａｔｕｒｅ  ４５２（７１８６）：４２９−４３５）。実際には、最近１０年間内の研究から、大部分の慢性の病気（例えば、癌、心血管疾患および肺疾患、神経疾患、糖尿病、ならびに自己免疫疾患）は、複数の細胞シグナル伝達経路の調節異常を示すことが明らかになった（Ｈａｒｉｋｕｍａｒ，  Ｋ．Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｐｕｂ  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  １５，  ２００８）  Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ．  ２００８：７（８））。従って、本実施形態の化合物は、表５に示されるように、生化学的経路の発現に対するこれらの効果に対して評価し、２２０の生物学的プロセスに関与する遺伝子の発現に影響を及ぼすことが見いだされた（Ｐ＜０．０５）。
【０１９８】
【表５−１】
2014237727.tif 000070
【０１９９】
【表５−２】
2014237727.tif 000071
【０２００】
【表５−３】
2014237727.tif 000072
【０２０１】
【表５−４】
2014237727.tif 000073
【０２０２】
【表５−５】
2014237727.tif 000074
【０２０３】
【表５−６】
2014237727.tif 000075
【０２０４】
【表５−７】
2014237727.tif 000076
【０２０５】
カロリー制限は、これらプロセスのうちの５％と関連した遺伝子に影響を及ぼし、レスベラトロールの投与は、これらプロセスのうちの１０％と関連した遺伝子に影響を及ぼした。本実施形態の化合物（例えば、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））は、これらプロセスのうちの８５％に影響を及ぼすことが見いだされた。カロリー制限マウスに対するレスベラトロールの投与は、これらプロセスのうちのいずれにおけるいずれの遺伝子にも影響を及ぼさなかった。カロリー制限マウスへのＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の投与は、これらプロセスのうちの８％と関連した遺伝子に影響を及ぼすことが見いだされた。レスベラトロールおよびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の両方の投与は、これらプロセスのうちの１２％と関連する遺伝子に影響を及ぼすことが見いだされた。表６は、カロリー制限（ＣＲ）、レスベラトロール単独（Ｒｅｓ）、もしくはＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）（ＬＧＸ）によって引き起こされる酸化的リン酸化経路（ＧＯ：０００６１１９）の遺伝子の調節を示す。
【０２０６】
【表６】
2014237727.tif 000077
【０２０７】
表７は、カロリー制限（ＣＲ）、レスベラトロール単独（Ｒｅｓ）、もしくは本実施形態の組成物（ＬＧＸ）によって引き起こされるグルコース代謝経路（ＧＯ：０００６００６）の遺伝子の調節を示す。
【０２０８】
【表７−１】
2014237727.tif 000078
【０２０９】
【表７−２】
2014237727.tif 000079
【０２１０】
表８は、カロリー制限（ＣＲ）、レスベラトロール単独（Ｒｅｓ）、もしくは本実施形態の組成物（ＬＧＸ）によって引き起こされるトリカルボン酸代謝経路（ＧＯ：０００６０９９）の遺伝子の調節を示す。
【０２１１】
【表８】
2014237727.tif 000080
【０２１２】
表９は、カロリー制限（ＣＲ）、レスベラトロール単独（Ｒｅｓ）、もしくは本実施形態の組成物（ＬＧＸ）によって引き起こされる脂肪酸代謝経路（ＧＯ：０００６６３１）の遺伝子の調節を示す。
【０２１３】
【表９−１】
2014237727.tif 000081
【０２１４】
【表９−２】
2014237727.tif 000082
【０２１５】
【表９−３】
2014237727.tif 000083
【０２１６】
心臓組織における２０，３４１の遺伝子の発現の研究から、２，８２９の遺伝子が、発現において統計的有意差を示す（Ｐ＜０．０１）ことが明らかになった。これらのうち、７％（約１８９の遺伝子）は、カロリーを減らした食事にのみ供した動物において変化した発現を示した；８％（約２２６の遺伝子）は、レスベラトロールのみを与えた動物において変化した発現を示した；レスベラトロールを与え、かつカロリーを減らした食事に供した動物においては、変化した発現を示すさらなる遺伝子はなかった。対照的に、上記２０，３４１の遺伝子のうちの６１％（約１，７２９の遺伝子）は、本実施形態の化合物（例えば、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））のみを与えた動物において変化した発現を示した；上記遺伝子のうちのさらに２％（約５６の遺伝子）は、本実施形態の化合物（例えば、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））を受け、かつカロリーを減らした食事に供された動物において変化した発現を示した；上記遺伝子のうちのさらに２１％（約５９４の遺伝子）は、本実施形態の化合物（例えば、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））およびレスベラトロールを受けた動物において変化した発現を示した；上記遺伝子のうちのさらに１％（約２８の遺伝子）は、本実施形態の化合物（例えば、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））、レスベラトロールを与えかつカロリーを減らした食事に供した動物において変化した発現を示した。
【０２１７】
上記のデータは、本実施形態の化合物（例えば、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））が、カロリー制限のものを遙かにしのぐ程度まで、心臓組織における遺伝子発現を調節することにおいて有効であったことを実証する。同様の効果が、非心臓組織において観察された。脳組織における２０，３４１の遺伝子の発現の研究から、３，５７２の遺伝子は、発現において統計的有意差を示す（Ｐ＜０．０１）ことが明らかにされた。これらのうち、１２４の遺伝子は、カロリーを減らした食事にのみ供した動物において変化した発現を示した；４２４の遺伝子は、レスベラトロールのみを与えた動物において変化した発現を示した；１０の遺伝子は、レスベラトロールを与え、かつカロリーを減らした食事に供された動物において変化した発現を示した。対照的に、２，５６０の遺伝子は、本実施形態の化合物（例えば、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））のみを与えた動物において変化した発現を示した；１９のさらなる遺伝子は、本実施形態の化合物（例えば、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））を与え、かつカロリーを減らした食事に供された動物において変化した発現を示した；４３０のさらなる遺伝子は、本実施形態の化合物（例えば、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））およびレスベラトロールを与えた動物において変化した発現を示した；５つのさらなる遺伝子は、本実施形態の化合物（例えば、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標））、レスベラトロールを与え、かつカロリーを減らした食事に供された動物において変化した発現を示した。
【０２１８】
（実施例４：本実施形態の組成物のモデルの作用機構）
本実施形態の化合物は、従って、カロリー制限の際に実測される遺伝子発現の調節を大きく超え、かつ脂質代謝、グルコース代謝、酸化的リン酸化、クレブス回路、ＡＴＰ合成および脂肪酸β酸化の重要な経路における遺伝子の発現を変化させることが見いだされた。まとめると、本実施形態の化合物は、遺伝子の数および変化した異なる生化学経路の数の両方の観点において、レスベラトロール単独より大きな比活性を有することが見いだされた。カロリー制限（ＣＲ）は、すべての生命形態において寿命を延ばす明白な方法と考えられるので、上記結果は重要である。一般に、カロリー摂取のうちの５０％を減らすと、任意の生物の寿命が倍増する。上記の実験は、本実施形態の組成物が、レスベラトロールもしくはＣＲよりゲノム発現に対してより強力な影響を発揮することを実証し、任意の技術が、ＣＲの効果を超えることを示したことを初めて記録する。さらに、本実施形態の組成物は、ＣＲ（遺伝子を区別するために、ＣＲ食事の一生の厳守を必要とする）よりも寿命のより早い段階でゲノム発現に影響を及ぼすことが見いだされた。
【０２１９】
いかなる作用機構によっても拘束されることを意図しないが、上記の結果は、本実施形態の化合物が、上記フォークヘッド  Ｆｏｘｏ１（ｄａｆ−１６、ｄＦｏｘＯ）転写因子の活性を増強することによって作用することを示唆する（図４）。モデル生物における研究から、Ｆｏｘｏ１が、遺伝子発現を増強することによって寿命の発現を媒介する（ｍｅｄｉａｔｅ  ｌｉｆｅｓｐａｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）ことが示された。インスリン／ＩＧＦ−１シグナル伝達は、Ｆｏｘｏ１をリン酸化し、それによって、上記核からそれが排除されるようにし、その作用をダウンレギュレートする。本実施形態の化合物は、インスリンおよびＩＧＦ−１シグナル伝達を低下させ、それによって、Ｆｏｘｏ１のリン酸化を低下させる。インスリンレセプターのシグナル伝達経路（例えば、ＧＯ：００８２８６；遺伝子  Ｉｄｅ、Ｉｇｆｂｐ４、およびＩｇｆｂｐ６）が、本実施形態の化合物によって影響を受けるという観察は、このモデルと一致する。Ｆｏｘｏ１の発現は、１．７５倍増大する。本実施形態の化合物は、低下した解糖および増大した糖新生（例えば、ＧＯ：０００６００６）、増強したＰｇｃ−１α発現（それによって、Ｐｄｋ４発現の刺激がもたらされる（例えば、Ｐｐａｒｇｃ１αにおいて１．９４倍の増大およびＰｄｋ４において３．２５倍の増大）、脂質代謝遺伝子の増大した発現（例えば、Ｕｃｐ３において２．７９倍の増大、Ｃｐｔ１ａにおいて１．４９倍の増大、およびＣｐｔ１ｂにおいて１．４５倍の増大）を媒介する。脂質および脂肪酸代謝遺伝子であるＧＯ：０００６６２９およびＧＯ：０００６６３５は、本実施形態の化合物によって特有に影響を受ける。本実施形態の化合物は、従って、カロリー制限およびレスベラトロールによって影響を受ける重要なプロセス（例えば、クロマチンリモデリング、ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターからの転写、およびユビキチンサイクル）に対してより顕著な都合の良い効果を発揮する。遺伝子ＧＯ：０００６３３３およびＧＯ：０００６３６７は、本実施形態の化合物によって特有に影響を受ける；遺伝子ＧＯ：０００６５１２は、レスベラトロールおよびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）によって影響を受ける。従って、要するに、提唱された作用機構は、本実施形態の組成物がレスベラトロールを細胞に送達し、そこでレスベラトロールは細胞壁を通過して、細胞質に入ってＦｏｘｏ１遺伝子の細胞核への移行を促進し、長寿効果を生じるというものである。
【０２２０】
（実施例５：本実施形態の組成物の製造および封入）
レスベラトロールの形態にある低分子を、ヴィニフェラ種ブドウおよび虎杖からのエタノール抽出物を介して得た。上記エタノールを除去したところ、得られた抽出物は、約２５％  ヴィニフェラ種ブドウ果皮レスベラトロールおよび２５％  虎杖レスベラトロールを含み、残りは、非レスベラトロールである不活性植物材料を含んでいた。上記抽出物中の上記レスベラトロールの生物学的活性を、ＳＩＲＴ１蛍光活性アッセイ／創薬キットＡＫ−５５５（Ｂｉｏｍｏｌ（登録商標）  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．；  Ｐｌｙｍｏｕｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，  ＰＡから入手可能；  ｗｗｗ．ｂｉｏｍｏｌ．ｃｏｍ）を使用して確認した。上記抽出物を、窒素環境中に保持し、約２５重量％  ケルセチン；３３重量％  レシチン；および９％  フィチン酸（米ぬか抽出物の形態にある）を含む混合物に添加した。上記組成物の残りは、約３３重量％  レスベラトロール抽出物を含んでいた。
【０２２１】
得られたスラリーを、カプセル充填機に入れた。個々の投与量を、酸化チタンで着色したゼラチンカプセル（Ｃａｐｓｕｇｅｌ；  Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ，  ＳＣ；  ｗｗｗ．ｃａｐｓｕｇｅｌ．ｃｏｍから入手可能なＬｉｃａｐｓ（登録商標）カプセル）中に封入した。上記投与量を、実質的に無酸素の環境において、窒素を連続フラッシュしたカプセル充填機（ｔｈｅ  Ｃａｐｓｕｇｅｌ  ＣＦＳ  １０００  Ｃａｐｓｕｌｅ  Ｆｉｌｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ｓｅａｌｉｎｇ  Ｍａｃｈｉｎｅ（Ｃａｐｓｕｇｅｌ；  Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ，  ＳＣ；  ｗｗｗ．ｃａｐｓｕｇｅｌ．ｃｏｍから入手可能））を使用して封入した。各得られたカプセル剤は、少なくとも１５ｍｇ  レスベラトロール、１００ｍｇ  レシチン、７５ｍｇ  ケルセチン、および２５ｍｇ  フィチン酸を含んでいた。これらカプセル剤サンプルを、約８ヶ月間にわたって周囲条件下で貯蔵した。上記サンプルを、各サンプルがサーチュイン酵素を活性化し得るかどうか、および特に、上記サンプルがＳＩＲＴ１触媒活性を刺激するかどうかを決定することによって、生物学的活性について試験した。上記サンプルを、封入後の４ヶ月および８ヶ月試験した。試験を、ＳＩＲＴ１蛍光活性アッセイ／創薬キットＡＫ−５５５（Ｂｉｏｍｏｌ（登録商標）  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．；  Ｐｌｙｍｏｕｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，  ＰＡ；
ｗｗｗ．ｂｉｏｍｏｌ．ｃｏｍから入手可能）を使用して行った。試験したところ、上記サンプル内に含まれる上記レスベラトロールが、生物学的に活性であり、ＳＩＲＴ１活性を刺激し、レスベラトロールが存在しない場合と比較して、酵素活性において最大約８倍の刺激を生じることを決定した。同様に、上記ケルセチンの生物学的活性を試験したところ、封入された上記ケルセチンが、生物学的活性を維持した（すなわち、ケルセチンが存在しない場合と比較して、ＳＩＲＴ１活性を刺激する能力）ことを決定した。
【０２２２】
（実施例６：レスベラトロールおよび本組成物のホルメシス作用の評価の比較）
多くの研究から、レスベラトロールの心臓保護効果が結論として実証されたが、１つの重要な事実、レスベラトロールのホルメシス作用は、しばしば無視されている。レスベラトロールは、フィトアレキシンであり、多くの植物由来生成物が、ホルメシスを示す。Ｃａｌａｂｒｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  ２２：１５−３３。ホルメシスは、低用量において刺激性であるが、より高用量においては有害であり、Ｊ字型もしくは逆Ｕ字型の用量反応曲線を生じる、用量反応相関として定義される。アルコールもしくはワイン摂取の心臓保護効果が、Ｊ字型曲線をたどることは、実際のところは公知であった。Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｊ（１９９７）  Ｃｌｉｎ
Ｃａｒｄｉｏｌ  ２０：４２０−４２４。広範囲な文献検索は、赤ワインに存在するレスベラトロールがまた、類似の健康上の利益を示すこと、より低用量において非常に有効であり、より高用量においては有害であることを包含した。本調査は、レスベラトロール媒介性心臓保護の用量反応曲線を決定し、この用量反応曲線と、別の市販のレスベラトロールサプリメントであるＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）（Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，  ＬＬＣ，  ＵＳＡ）とを比較することを行った。上記研究の結果から、レスベラトロールがホルメシス作用を示す一方で、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は示さないことが明らかにされた。
【０２２３】
動物。  この研究において使用されるすべての動物に、動物および動物が関わる実験に関連する規則に従い、そして、実験動物の管理および使用に関するガイド（ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，  １９９６年版）に述べられた方針を厳守する、動物愛護にかなったケアを与えた。そして、プロトコルすべては、コネチカット大学健康センターの施設動物管理委員会（Ｆａｒｍｉｎｇｔｏｎ，ＣＴ，ＵＳＡ）によって承認を受けた。体重２５０〜３００ｇの間の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに、実験手順の開始まで、水へのアクセスとともに通例のラット飼料を自由に与えた。動物を、３つの群に無作為にさらに分け、そのうち、コントロール群に、５％  クオーターリング（ｑｕａｒｔｅｒｉｎｇ）および５％  水和物を含む１ｍｌの水を胃管栄養法で与え、他の２つの群には、レスベラトロールもしくはＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）のいずれかを胃管栄養法で与えた。
【０２２４】
単離された働いている心臓調製物（ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｗｏｒｋｉｎｇ  ｈｅａｒｔ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）。給餌プロトコルを完了した後、上記動物に、ペントバルビタールナトリウム（８０ｍｇ／ｋｇ，腹腔内）（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｎｏｒｔｈ  Ｃｈｉｃａｇｏ，  ＩＬ，  ＵＳＡ）で麻酔をかけ、ヘパリンナトリウム（５００  Ｕ／ｋｇ，静脈内）（Ｅｌｋｉｎｓ−Ｓｉｎｎ  Ｉｎｃ．，  Ｃｈｅｒｒｙ
Ｈｉｌｌ，  ＮＪ，  ＵＳＡ）を、抗凝固剤として使用した。深麻酔の後、心臓を摘出し、大動脈にカニューレを挿入し、上記心臓を、以前記載されたとおり、一定（１００ｃｍの水）灌流圧において３７℃で、クレブス−ヘンゼライト重炭酸塩を用いて５分間の洗浄期間にわたって、ランゲンドルフモードにおいて大動脈を介して灌流した。Ｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｆｒｅｅ  Ｒａｄ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ  ２７：１６０−９。その灌流媒体は、改変クレブス−ヘンゼライト重炭酸塩緩衝液（ミリモル濃度：塩化ナトリウム１１８、塩化カリウム４．７、塩化カルシウム１．７、炭酸水素ナトリウム２５、リン酸二水素カリウム０．３６、硫酸マグネシウム１．２およびグルコース１０）からなり、その酸素化後、ｐＨは、３７℃において７．４であった。
【０２２５】
上記洗浄期間の間に、左心房にカニューレを挿入し、上記ランゲンドルフ調製物を、１０分間にわたる１７ｃｍ  Ｈ２Ｏの左心房充填圧を伴う作動モードに切り替えた；大動脈後負荷圧（ａｏｒｔｉｃ  ａｆｔｅｒｌｏａｄ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ）を、１００ｃｍの水に設定した。１０分間の最後に、ベースライン心機能（例えば、心拍数（ＨＲ，心拍／分）、大動脈流（ＡＦ，ｍｌ／分）、冠動脈流（ＣＦ，ｍｌ／分）、最大左心室圧（ＬＶＤＰ，ｍｍＨｇ）および最大圧の一次導関数（ＬＶｄｐ／ｄｔ，ｍｍＨｇ／秒）を記録した。後に、３０分間の全虚血を、それらの基部（ｏｒｉｇｉｎ）に近い点で、左心房流入ラインおよび大動脈流出ラインをクランプ止めすることによって開始した。３０分後、心房流入ラインおよび大動脈流出ラインのクランプを外すことによって、１２０分間にわたって再灌流を開始した。再灌流の最初の１０分間を、ランゲンドルフモードにて行って、心室細動を回避し、次いで、心臓を順行性作業モードに切り替えた。Ｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｆｒｅｅ  Ｒａｄ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ  ２７：１６０−９。
【０２２６】
心機能評価。  上記作業モードの１０分後、ベースラインパラメーターを記録した。上記心臓の回復をモニターするために、左心室心機能を、再灌流の６０分後および１２０分後に記録した。６匹のラットが、各群に存在した。較正した流量計（Ｇｉｌｍｏｎｔ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｉｎｃ．，  Ｂａｒｒｉｎｇｔｏｎ，  ＩＬ，  ＵＳＡ）を使用して、大動脈流を測定した。冠動脈流を、上記心臓からしたたる冠動脈流出物の設定時間に行われる収集によって測定した。実験全体の間に、大動脈圧を、上記大動脈カニューレのサイドアームに接続したＧｏｕｌｄ  Ｐ２３ＸＬ圧力変換器（Ｇｏｕｌｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．，  Ｖａｌｌｅｙ  Ｖｉｅｗ，  ＯＨ，  ＵＳＡ）を使用してモニターした；シグナルを、Ｇｏｕｌｄ  ６６００シリーズシグナル調整器（Ｇｏｕｌｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．）を用いて増幅した。ＣＯＲＤＡＴ  ＩＩリアルタイムデータ獲得および分析システム（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）。Ｄｕｄｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２０：４４３−５２。心拍数、最大左心室圧、および最大圧の一次導関数を、連続生成した圧力シグナルからすべて計算した。
【０２２７】
梗塞サイズ概算。  梗塞サイズを、トリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ）染色法を使用して測定した。Ｍａｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）  Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  Ｒｅｄｏｘ  Ｓｉｇｎａｌ  ８：２１０１−９。再灌流の２時間後、リン酸緩衝液中のＴＴＣの１％（ｗ／ｖ）溶液４０ｍｌを、大動脈カニューレに注入し、上記心臓サンプルを、−７０℃において次の分析のために保存した。凍結した心臓の切片（０．８ｍｍ）を、２％  パラホルムアルデヒドで固定し、２枚のカバースリップの間に置き、Ｍｉｃｒｏｔｅｋ  ＳｃａｎＭａｋｅｒ  ６００ｚ（Ｍｉｃｒｏｔｅｋ，  ＵＳＡ）を使用してデジタルで画像化した。ピクセル単位で梗塞領域を定量するために、標準のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ画像プログラムを使用した。上記梗塞サイズを、定量化し、ピクセル単位で表した。
【０２２８】
心筋アポトーシス。  アポトーシス細胞の免疫化学検出を、終端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ媒介性ｄＵＴＰニック末端標識（ＴＵＮＥＬ）法を使用して行った。Ｍａｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）  Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  Ｒｅｄｏｘ  Ｓｉｇｎａｌ  ８：２１０１−９。上記切片を、心臓ミオシン重鎖を認識するマウスモノクローナル抗体とともにインキュベートして、アポトーシス心筋細胞を特異的に検出した。その蛍光染色を、共焦点レーザー顕微鏡で調べた。アポトーシス細胞の数をカウントし、全心筋集団のうちの％として表した。
【０２２９】
統計分析。心筋機能パラメーターの値、梗塞サイズおよびアポトーシスを、平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表した。一元配置分散分析を行って、群間の平均値における差異を検定した。差異が確立された場合、上記薬物処置群の値を、改変スチューデントｔ検定によって、薬物なし群のものと比較した。その結果を、ｐ＜０．０５であれば有意とみなした。
【０２３０】
心筋保護に対するレスベラトロールの異なる用量の効果。  第１に、上記動物を、２１日間にわたって毎日胃管栄養法を行うことによって、異なる用量のレスベラトロール（２．５ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇ）で処置した。上記２１日間の最後に、上記動物を屠殺し、それらの心臓を摘出して単離し、虚血を、冠動脈流を終わらせることによって３０分間にわたって誘導した（方法の節において記載されるとおり）。次いで、これの次に、上記作業モードにおいて２時間の灌流を行った；上記灌流の間に、左心室機能をモニターした。図５〜８に示されるように、２．５ｍｇ／ｋｇおよび２５ｍｇ／ｋｇの用量でのレスベラトロールは、改善された大動脈流、最大左心室圧および最大圧の最大一次導関数によって実証されるように心臓保護を付与した。２５ｍｇ／ｋｇより高い場合、心室機能は、大動脈流、ＬＶＤＰおよび最大ＬＶｄＰ／ｄｔの有意な低下によって実証されるように、悪化した。５０ｍｇ／ｋｇ（データは示さず）より高い、特に、１００ｍｇ／ｋｇでは、大動脈流も最大圧も認められず、このことは、上記心臓が機能を停止したことを示した。
【０２３１】
各実験の最後に、上記心臓を、ＴＴＣ染色に供して、梗塞サイズを決定するか、またはＴＵＮＥＬ染色に供して、アポトーシスを検出するかのいずれかを行った。その結果を、図９および図１０に示す。レスベラトロールは、２．５ｍｇ／ｋｇおよび２５ｍｇ／ｋｇの用量において心筋梗塞サイズおよび心筋アポトーシスを有意に低下させた。しかし、５０ｍｇ／ｋｇを上回る場合［５０ｍｇ／ｋｇでのデータは示さず］、心筋梗塞サイズおよびアポトーシス心筋の数は、有意に増大し、このことから、細胞傷害が示された。
【０２３２】
心臓保護に対する異なる用量のＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の効果。  並行実験を、最大１ヶ月間にわたって、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）を用い、３種の異なる用量のＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）（２．５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇ）をラットに胃管栄養法で与えることによって行った。その結果が、図５〜１０に示される。レスベラトロールとは異なり（レスベラトロールはホルメシスを示した）、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は、最大１００ｍｇ／ｋｇの用量まで、同じ程度の心臓保護を示した。２５ｍｇ／ｋｇ程度の低用量ですら、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は、左心室機能、ＬＶＤＰ、最大ＬＶｄＰ／ｄｔ、ならびに梗塞サイズおよび心筋アポトーシスの結果に示されるように、同程度の心臓保護を提供し得ることを、書き留めることは重要である。レスベラトロールの用量反応曲線（Ｊ字型）およびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の用量反応曲線（図９）は、純粋なレスベラトロールのみがホルメシスを示し、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）がホルメシスを示さななかったことを実証している。
【０２３３】
Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は、広い範囲の濃度にわたって心臓を保護することが判明したので、これを、別の動物種に対してさらに試験した。Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ白色家兎の群に、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）（１００ｍｇ／ｋｇ）を６ヶ月にわたって胃管栄養法にて与えた一方で、コントロール群には、プラセボを与えた。給餌プロトコルの完了後、単離した働いているウサギ心臓を、３０分間の虚血、続いて、２時間の灌流に供した。梗塞サイズの結果を、図１２に示す。心機能は、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）給餌の最長６ヶ月間にわたって改善したままであった（以下の表１０）。そして梗塞サイズおよびアポトーシスは、同じ期間にわたって低下したままであった。
【０２３４】
【表１０】
2014237727.tif 000084
【０２３５】
本研究の結果から、レスベラトロールが、低用量においてのみ上記心臓に対して有益であり、より高用量において有害であることが明らかに実証されている。また、レスベラトロールの作用は、１４日〜３０日以内において、大部分の場合に迅速に実現され；長期のレスベラトロールの使用は、いかなるさらなる利益をも付加しない。しかし、本発明者らは、レスベラトロールの長期の使用が、任意の有害な作用を引き起こし得るかどうかを研究しなかった。このようなホルメシス効果は、１００年超にわたって公知であり、毒素の間で頻繁に観察されてきた。レスベラトロールは、フィトアレキシンであり、その増大は、環境ストレス（例えば、真菌感染、ＵＶ照射および水分欠乏）によって刺激される。Ａｄｒｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ｊ  Ａｇｒｉ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ  ４４：１９７９−８１。
【０２３６】
レスベラトロールの心臓保護効果は、心臓を前準備するその能力を介して発揮され、これは、細胞内ストレスの発生を引き起こし、細胞内防御システム（例えば、抗酸化物質および熱ショックタンパク質）のアップレギュレーションをもたらす。Ｗａｌｌｅｒａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０６：１６５２−１６５８。前準備は、ホルメシスの別の例であり、これは、器官（例えば、心臓）を、虚血の短い持続期間の周期的なエピソード、各々続いて、別の短い再灌流の持続時間に供することによって強化される。Ｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ４２０：３０５−３１１。このような少量であるが治療的な量のストレスは、上記心臓を、その後の致死的な虚血傷害に対し抵抗性にする。このような適応応答は、加齢で一般に観察される。この考えと一致して、レスベラトロールは、長寿遺伝子を刺激すること、および少なくとも原核生物種において寿命を延ばすことが見いだされた。Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ｆｒｅｅ  Ｒａｄ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ  ４６：５７３−５７８；  Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）  Ｎａｔｕｒｅ  ７：６３−７８。この点において、レスベラトロールは、ホルメチン（ｈｏｒｍｅｔｉｎ）の定義を満たし得る。Ｒａｔｔａｎ（２００８）  Ａｇｉｎｇ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ  ７：６３−７８。
【０２３７】
アルコール、ワイン、およびワイン由来のレスベラトロールが、すべてホルメシスを示すことは疑いがない。アルコールもしくはワイン摂取の心臓保護効果が、Ｊ字型曲線をたどることは公知であり（Ｃａｌａｂｒｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  ２２：１５−３３およびＣｏｎｓｔａｎｔ  Ｊ（１９９７）  Ｃｌｉｎ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ２０：４２０−４２４）、本研究は、この知見を繰り返した（図１１）。より低用量において、レスベラトロールは、抗アポトーシス剤として作用し、コントロールと比較して、安定なレドックス環境を維持することによって、細胞生き残りタンパク質における増大した発現、改善された虚血後心室回復、ならびに心筋梗塞サイズおよび心筋アポトーシスの低下によって証明されるように、心臓保護を提供する。しかし、より高い用量において、レスベラトロールは、心機能を抑制し、アポトーシスタンパク質発現のレベルを上昇させ、不安定なレドックス環境を生じ、そして心筋梗塞サイズおよびアポトーシス細胞の数を増大させる。かなりの数の報告が文献において利用可能であり、これらは、高用量において、レスベラトロールは、腫瘍成長を妨げるのみならず、ＲＮＡ、ＤＮＡおよびタンパク質の合成をも阻害し；構造的染色体異常、クロマチン破壊、クロマチン交換（ｃｈｒｏｍａｔｉｎ  ｅｘｃｈａｎｇｅ）、弱い異数性、より高いＳ期停止を引き起こし；細胞増殖をブロックし；線維芽細胞増殖因子−２（ＦＧＦ−２）および血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）による創傷治癒、内皮細胞成長を低下させ；そして健康な組織細胞における新脈管形成を阻害し、細胞死をもたらすことを示す。Ｄｕｄｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２０：４４３−５２。
【０２３８】
Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）を、上記純粋なレスベラトロールに並べて試験した。Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は、用量１００ｍｇ／ｋｇまでいかなるホルメシス作用（細胞傷害性）をも示さなかった。５０ｍｇ／１００ｇを超える純粋なレスベラトロールのいかなる用量も、心臓を止めることに注意すべきである。Ｄｕｄｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２０：４４３−５２。本発明者らはまた、異なる動物種（例えば、ウサギ）に対するＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の長期の効果を決定し、６ヶ月の処置後ですら、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は心臓保護を提供することを見いだした。本研究において見いだされた結果は、科学者、臨床医および非医療系社会にとって重要である。なぜなら、それは、より低い用量においてのみレスベラトロール単独を使用する重要性を強調し、より高用量では有害なもしくは毒性の作用が起こり得、健康に対して有害な作用を生じ得るからである。しかし、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は、低用量でも高用量でも有毒な副作用も毒性の副作用も示さなかった。疫学調査および臨床試験は、レスベラトロールの有益なホルメシス効果の明らかな理解に基づく必要がある。
【０２３９】
（実施例７：本実施形態の組成物での、虚血心臓における変化したマイクロＲＮＡ発現の修復）
Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ  Ｐ，  Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ  Ｓ，  Ａｈｓａｎ  Ｋ，  Ｂａｇｃｈｉ  Ａ，  Ｐａｃｈｅｒ  Ｐ，  および  Ｄａｓ  Ｄによって報告されたように、虚血／再灌流［Ｉ／Ｒ］ラットモデルにおけるレスベラトロールおよびその誘導体による心臓保護を、ｍｉＲＮＡ発現プロフィールで試験した。Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）  Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｌｔｅｒｅｄ  ＭｉｃｒｏＲＮＡ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｉｓｃｈｅｍｉｃ  Ｈｅａｒｔ  ｗｉｔｈ  Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ．  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５（１２）：  ｅ１５７０５．  ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００１５７０５。特有の発現パターンを、特に、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）（Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，  ＬＬＣ，  ＵＳＡから入手可能な、市販されている本実施形態のレスベラトロールサプリメント）で各サンプルについて見いだした。Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）およびレスベラトロールでの前処置は、ＰＣＡ分析に基づいて、コントロールレベルに近いｍｉＲＮＡの発現パターンを調節した。差次的発現を、５０を超えるｍｉＲＮＡにおいて観察した。そのうちのいくつか（例えば、ｍｉｒ２１）は、心臓リモデリングに以前影響を与えた。上記差次的に発現されるｍｉＲＮＡに関する標的遺伝子は、種々の分子機能の遺伝子（金属イオン結合、ナトリウム−カリウムイオン、転写因子などであり、心臓における損傷を制限するにことおいて重要な役割を果たし得る）を含む。
【０２４０】
以下でより詳細に考察されるように、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の方が、普通のレスベラトロールより、マイクロＲＮＡであるｍｉＲ−５３９およびｍｉＲ−２０ｂに遙かにより大きな影響を特に及ぼした。これら２つのマイクロＲＮＡは、新生血管形成に関与するＶＥＧＦ遺伝子およびＨＩＦ−１遺伝子を制御し、このことは、ウェット型黄斑変性、任意の新生血管の眼の疾患（緑内障）、糖尿病性網膜症、および特に、癌に関しては、治療的適用を示唆する。
【０２４１】
結果および考察：  レスベラトロールおよびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は、上記ＩＲラット心臓において、心機能を改善し、心筋梗塞サイズおよび心筋アポトーシスを低下させる。以前の研究によれば、レスベラトロールおよびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）はともに、２時間の再灌流期間で大動脈流、冠動脈流、最大左心室圧（ＬＶＤＰ）およびその一次導関数ＬＶｍａｘ  ｄｐ／ｄｔを含む心拍出機能を改善した（図１３）。Ｇｕｒｕｓａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．  Ｒｅｓ．  ８６：１０３−１１２（２０１０）。図１３は、レスベラトロールおよびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘの、大動脈血流に対する効果（図１３Ａ）、冠動脈流に対する効果（図１３Ｂ）、ＬＶＤＰに対す効果（図１３Ｃ）、ｄｐ／ｄｔｍａｘに対する効果（図１３Ｄ）、梗塞サイズに対するそれらの効果（図１３Ｅ）、およびアポトーシスに対するそれらの効果（図１３Ｆ）を示す。冠動脈流、大動脈流およびＬＶＤＰを、ベースラインの時点および示された再灌流時間において概算した。梗塞サイズおよびアポトーシスを、２時間の再灌流の最後に測定した。結果を、６匹の動物／群の平均値±ＳＥＭとして表す。＊ｐ＜０．０５  対  ビヒクル（ＶＥＨ）。＃  ｐ＜０．０５  対  対応するＩ／Ｒ。ＢＬ：ベースライン；Ｉ／Ｒ１ｈ：３０分間にわたる虚血および１時間の再灌流；Ｉ／Ｒ２ｈ：３０分間にわたる虚血および２時間の再灌流；ＲＥＳＶ：レスベラトロール；ＬＯＮＧ：Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）。
【０２４２】
これらの化合物はまた、予測されるように、心筋アポトーシスに起因して、梗塞サイズおよび死亡を低下させた。レスベラトロールの心臓保護の役割を示すかなり多くの研究が文献に存在する。近年の研究からも、市販のレスベラトロール製剤であるＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）が、等しく心臓を保護することが示された。本発明者らは、レスベラトロールの効果と、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の効果とを比較した。なぜなら、近年の研究から、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は、レスベラトロールのホルメシス作用を示すことなく、等しく心臓を保護することが決定され、レスベラトロールおよびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の心臓保護効果は、Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ（印刷中）によって以前に発表された報告と一致することが見いだされた。
【０２４３】
虚血−再灌流したラット心臓における全体的なｍｉＲＮＡ発現プロファイリング。  マイクロＲＮＡプロフィールを、５８６のｍｉＲＮＡに対して特異的なＴＬＤＡアレイおよびラットについての５つの内因性コントロールによって分析した。アレイを、６つの異なる群において行った。すなわち、基底レベル（ＢＬ）：（１）コントロールビヒクル、（２）レスベラトロール、（３）Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）、および虚血再灌流（ＩＲ）：（４）コントロールビヒクル  Ｉ／Ｒ、（５）レスベラトロールでの前処置（２１日間）  Ｉ／Ｒおよび（６）Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）で前処置（２１日間）
Ｉ／Ｒ。ＲＮＡを、心臓の３０分間の虚血および２時間の再灌流後に、ＩＲサンプルからもしくは虚血および再灌流なしで同じ方法で処理したベースライン（ＢＬ）サンプルから単離した。
【０２４４】
図１４Ａは、すべてのサンプルの総ｍｉＲＮＡ発現の特有の分布を示す箱ひげ図である。上記箱ひげ図は、上記箱の中央において中央値、第２５百分位数（第１の四分位数）および第７５百分位数（第３の四分位数）を示す。上記ひげは、上記箱から延びている線であり、四分位数間から１．５倍以内の点で切れている。上記ひげの外側の点は、それらが外れ値とみなされる場合にプロットされ、分析から排除される。上記データ（Ｃｔ値）を、内因性遺伝子に基づいて正規化した。いくつかのｍｉＲＮＡは、外れ値であると実測され、５８６のｍｉＲＮＡのうちの３８５は、上記６つの条件のうちの１つにおいて少なくとも発現されることが実測された。図１４Ｂは、各サンプルに関して内因性コントロールに対する正規化後に、３８５のｍｉＲＮＡの発現を示すプロフィールプロットである。ｍｉＲＮＡ発現を、基底レベルのコントロールサンプルと比較して、「倍数変化」に変換することによってさらに分析した。ＢＬ：ベースライン；Ｉ／Ｒ２ｈ：３０分間の虚血および２時間の再灌流；ＶＥＨ：ビヒクル，ＲＥＳＶ：レスベラトロール；ＬＯＮＧ：Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）。
【０２４５】
２１３のｍｉＲＮＡの発現を、６つの条件のうちの１つのもとで少なくとも２倍以上高く発現した。上記リストを、ＩＲサンプルにおいて２倍高いもしくは２倍低いかのいずれかであったｍｉＲＮＡを調べた後にさらにフィルタにかけた。上位２５のｍｉＲＮＡを列挙した。これらは、ＩＲ条件においてアップレギュレートしたかもしくはダウンレギュレートしたかのいずれかであり（表１１）、大部分の調節は、レスベラトロールおよびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）での前処置によって逆転した。レスベラトロールおよびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）で前処置されたＩＲサンプルはともに、表１１において列挙された２５のｍＲＮＡのうちの１１では、ＩＲコントロールにおけるアップレギュレーションもしくはダウンレギュレーションを反対方向に逆転した。レスベラトロールもしくはＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）のいずれか（しかし両方ではない）は、５例においてＩＲコントロールと比較して、アップレギュレーションもしくはダウンレギュレーションを逆転した。残りの９つのｍｉＲＮＡ発現は、いずれかもしくは両方によって弱められた。
【０２４６】
【表１１】
2014237727.tif 000085
Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は、上記２５のｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ−１０ａ、ｍｉＲ−２０ｂ、ｍｉＲ−２１を含む）のうちの１５においてレスベラトロールの効果を上回った。しかし、いくつかのｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−２９ｃ）において、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は、レスベラトロールとは逆の効果を有し、その差異は、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）における他の成分の存在、レスベラトロールのバイオアベイラビリティーなどを含む多くの可能性に起因し得る。レスベラトロール（アップ３９１．４）およびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）（７６０．９）での基底レベルコントロールにおいてｍｉＲ−２１発現の甚だしいアップレギュレーションがあったが、ＩＲにおいてはかなり低かった（アップ６１．５および５９．３）。ｍｉＲ−５３９は、ＩＲサンプルにおいて高レベル（２１４倍）にアップレギュレートされ、レスベラトロール前処置サンプルにおいてさらにアップレギュレートされた。類似の観察はまた、ｍｉＲ−２７ａ、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−９、ｍｉＲ−６６７において見いだされた。類似であるがそれほど顕著ではない変化はまた、多くの他のｍｉＲＮＡにおいて見いだされた。
【０２４７】
図１５は、ｍｉＲＮＡ発現パターンに対するレスベラトロールおよびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の効果を示す。図１５Ａは、散乱プロットを使用して、基底レベルとＩＲコントロール心臓との間のｍｉＲＮＡ発現の相関を示す。いくつかのｍｉＲＮＡ発現を、表１１に示されるように、ディスプレイのために選択した。二重線は、２の倍数変化として示す。図１５Ｂは、サンプルの間で、差次的に発現されるｍｉＲＮＡのクラスタ分析のヒートマップを示す：各ｍｉＲＮＡを、それらのＣｔ値を基礎として単一の棒として表し、色コードは、青（負のおよび最低のＣｔ値）から赤（正のおよび最高のＣｔ値）までの勾配とともに以下に示した。検出されないｍｉＲＮＡを、黒い棒として示した。各列は、先頭に示したサンプルを表した。コントロールサンプルにおけるレスベラトロールもしくはＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）のいずれかでの処置は、ｍｉＲＮＡ発現レベルを顕著に変化させ、そのうちのいくつかは、心臓保護において顕著に重要な役割を果たし得ることは、上記ヒートマップから明らかである。図１５Ｃは、すべてのサンプルの主な成分分析を図示する。この多変量分析は、上記コントロール（ビヒクル）サンプルに、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）およびレスベラトロール処置したＩＲサンプルが近接していることを実証した。上記６つのサンプルの主な成分分析は、上記サンプル、ＩＲ  Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）およびＩＲ  レスベラトロールが、遺伝子発現の観点からＢＬビヒクルサンプルに顕著に類似していることを明らかにした。大部分の場合において、それらはまた、各群から容易に区別可能であった。これらの結果は、実際には、最も重要である、なぜなら、これらの結果は、レスベラトロールおよびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）はともに、遺伝子発現のＩＲ誘導性のアップレギュレーションもしくはダウンレギュレーションを修復することによって、虚血心臓を保護し得ることを証明するからである。ＢＬ：ベースライン；ＩＲ：３０分間の虚血および２時間の再灌流；ＶＥＨ：ビヒクル、ＲＥＳＶ：レスベラトロール；ＬＯＮＧ：Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ。
【０２４８】
ｍｉＲ−５３９（最高にアップレギュレートされたｍｉＲＮＡ）は、２７１の保存された遺伝子標的を有するが、その機能的標的は、文献中には報告されていなかった。コンピューター分析によって得られたｍｉＲ−５３９の標的としては、マトリクスメタロペプチダーゼ２０、線維芽細胞増殖因子１４、クラスリン、ライトポリペプチド（ｌｉｇｈｔ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）、オステオプロテゲリンおよび転写因子様フォークヘッドボックスＢ１（これらは、心臓リモデリングにおいて役割を有し得る）が挙げられる。ｍｉＲ−２１は、心臓線維芽細胞においてＥＲＫ−ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路を調節することが示された。上記伝達経路は、全体的な心臓の構造および機能に対して役割を有する。Ｔｈｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ４５６：９８０−９８６（２００８）。レスベラトロールが、心臓における前準備機構としてＭＡＰＫシグナル伝達経路を作動させることは、以前にも示された。Ｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｔｈｅｒ．  ３１７：９８０−９８８（２００６）。本発明者らはまた、上記ＥＲＫ−ＭＡＰＫ経路においてサンプルを調べた。図１６Ａに示されるように、ＥＲＫリン酸化は、レスベラトロール処置ベースラインサンプルおよびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）処置ベースラインサンプルの両方において増大され、対応するＩＲサンプルにおいて低下されることが観察された。図１６Ａにおいて、総ＥＲＫ１／２に対するＥＲＫ１／２  リン酸化の比を、示される様に、サンプルにおいてプロットした。類似であるが反対の効果が、ｐ３８  リン酸化において観察され、ここで、有意に少ないリン酸化が、図１６Ｂに示されるように、レスベラトロールもしくはＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）処置したＢＬサンプルにおいて起こった。増大したｐ３８  ＭＡＰＫリン酸化は、Ｉ／Ｒ２ｈサンプルにおいて起こり、前準備に起因して、レスベラトロール処置Ｉ／Ｒ２ｈサンプルおよびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）処置Ｉ／Ｒ２ｈサンプルの両方において減少した。図１６Ｂにおいて、総ｐ３８  ＭＡＰＫに対するｐ３８  ＭＡＰＫリン酸化の比を、記載されるようにサンプルにおいてプロットした。結果を、６匹の動物／群の平均値±ＳＥＭとして表す。＊ｐ＜０．０５  対  ビヒクル（ＶＥＨ）。＃  ｐ＜０．０５  対  対応するＩ／Ｒ。ＢＬ：ベースライン；Ｉ／Ｒ２ｈ：３０分間の虚血および２時間の再灌流；ＲＥＳＶ：レスベラトロール；ＬＯＮＧ：Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）。
【０２４９】
ＶＥＧＦは、心筋においてＨＩＦ１ａを介してｍｉＲ−２０ｂによって調節されるのに対して、ＦＯＸＯ１は、癌細胞においてｍｉＲ−２７ａによって調節される。Ｃａｓｃｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２２４：２４２−２４９（２０１０）；  Ｇｕｔｔｉｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ  ２８４：２３２０４−２３２１６（２００９）；  Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ（２００８）  １５：６６７−６７１。ＳＩＲＴ１は、幹細胞においてｍｉＲ−９によって調節されることが観察された。Ｓａｕｎｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｇｉｎｇ（２０１０）。最近の研究から、冠状動脈疾患（ＣＡＤ）におけるｍｉＲ−１の増大、およびそしてｍｉＲ−１は、心筋梗塞のラットモデルにおいてβ遮断薬プロプラノロールによってダウンレギュレートされることが実証された。Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．  Ｒｅｓ．  ８４：４３４−４４１（２００９）。レスベラトロールによるマイクロＲＮＡの特異的調節は、いかなるインビボモデルにおいても示されなかった。近年では、レスベラトロールの効果のマイクロアレイ分析は、ヒト急性単球性白血病細胞系（ＴＨＰ−１）およびヒト結腸腺癌細胞系（ＳＷ４８０）において実証された。Ｔｉｌｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ８０：２０５７−２０６５（２０１０）；  Ｔｉｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ３１：１５６１−１５６６（２０１０）。レスベラトロールは、ＴＨＰ−１におけるｍｉＲ−１５５のレベル、ならびにＪｕｎＢおよびＪｕｎＤ（発癌において重要な調節因子）の調節を低下させる。レスベラトロールはまた、ＴＧＦβ経路のマイクロＲＮＡ標的化エフェクターを調節する（同上文献）。癌細胞系ＳＷ４８０におけるレスベラトロールでの処理は、ｍｉＲ−２１およびｍｉＲ２９ｃの低下したレベルを生じるのに対して、レスベラトロールで処理した場合、健康な心臓においてそのレベルは増大した（同上文献）。この異常は、心筋細胞がまれにしか分裂しない細胞であるという事実に起因し得るのに対して、ＳＷ４８０細胞は、迅速に増殖し、このことは、細胞内で完全に異なる微小環境をもたらす。レスベラトロールに関する用量が、癌細胞において遙かに高く（５０μＭ）、類似の用量が、培養物中のヒト心筋細胞および内皮細胞に対して部分的に有害である（データは示さず）ことを指摘することもまた、重要である。
【０２５０】
標的遺伝子および経路分析のためのｍｉＲＮＡの統合分析。  差次的に発現されるｍｉＲＮＡを、ＴａｒｇｅｔＳｃａｎを使用して、それらの推定標的遺伝子についてさらに分析し、表１２に列挙した。
【０２５１】
【表１２】
2014237727.tif 000086
【０２５２】
上記標的遺伝子の大部分（＞１４００の遺伝子）は、金属イオン結合、カルシウム−カリウム−クロリドイオン結合の分子機能を有し、ＩＲ損傷後の再構成している心臓に関連した。重要なことには、ｍｉＲＮＡ標的遺伝子は、配列特異的ＤＮＡ因子（例えば、ＦＯＸＯ１、ＴＲＡＦ３など）を調節した。ＳｉｒＴ１は、いくつかの転写因子（ＦｏｘＯ１を含む）を調節し、これは、Ａｋｔを介してリン酸化によって不活性化される。Ｂｒｕｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０３：２０１１−２０１５（２００４）。最近の刊行物から、ＦｏｘＯ１のリン酸化は、ＳｉｒＴ１、ＳｉｒＴ３およびＳｉｒＴ４の活性化とともに、それらが加齢およびエネルギー代謝を調節するところであるミトコンドリアに局在することが示された。Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ．  Ｂｉｏｌ．  Ｍｅｄ．  ４６：５７３−５７８（２００９）。数年にわたって、ＳＩＲＴ１は、レスベラトロールによって活性化されることが公知であった。Ｂａｘｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｏｓｍｅｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  ７：２−７。しかし、レスベラトロールは、ＳＩＲＴ１を活性化することにおいて直接的な役割はないと可能性がある。Ｐａｃｈｏｌｅｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２８５：８３４０−８３５１（２０１０）。ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−２１）の調節障害は、虚血性心疾患のような心疾患と直接的に関連しかつレスベラトロールは、いくつかのｍｉＲＮＡの調節を介して、心筋の虚血再灌流傷害を改善し得るので、本研究の結果は、心臓保護におけるｍｉＲＮＡを介したレスベラトロールによって媒介される複雑な調節ネットワークの機構を説明する。
【０２５３】
まとめると、マイクロＲＮＡは、大部分は翻訳抑制によって、およびときおり翻訳活性化を介して、標的遺伝子を調節する。ここで、本発明者らは、レスベラトロールもしくはＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）が、健康な心臓および虚血−再灌流心臓においてｍｉＲＮＡ発現を調節することを実証した。これら分析に基づく将来の詳細な研究は、急性Ｉ／Ｒ傷害における心臓保護に関する新規な治療介入の開発への道を開く。
【０２５４】
方法。  動物。  この研究において使用されるすべての動物には、動物および動物が関わる実験に関連する規則に従い、そして実験動物の管理および使用に関するガイド（ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，  １９９６年版）に述べられた方針を厳守する、動物愛護にかなったケアを与えた。そして、プロトコルすべて（計画  ＃２００８−４８４）は、コネチカット大学健康センターの施設動物管理委員会（Ｆａｒｍｉｎｇｔｏｎ，ＣＴ，ＵＳＡ）によって承認を受けた。体重２５０〜３００ｇの間の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに、実験手順の開始まで、水へのアクセスとともに通例のラット飼料を自由に与えた。動物に、レスベラトロール（５ｍｇ／ｋｇ／日）［Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ］もしくはＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）（１００ｍｇ／ｋｇ／日）のいずれかを２１日間にわたって胃管栄養法で与えた。本発明者らの実験室での以前の研究は、この実験において使用される各化合物の適切な用量および期間を確立した。Ｈａｔｔｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｈｅａｒｔ．  Ｃｉｒｃ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２８２：Ｈ１９８８−１９９５（２００２）；  Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍｏｌ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２０１０  Ｎｏｖ；８８（１１）：１０１７−２５。
【０２５５】
単離された働いている心臓調製物および心機能の評価。  給餌プロトコルを完了した後、上記動物を、ペントバルビタールナトリウム（８０ｍｇ／ｋｇ，腹腔内）（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｎｏｒｔｈ  Ｃｈｉｃａｇｏ，  ＩＬ，  ＵＳＡ）で麻酔をかけ、腹腔内ヘパリンナトリウム（５００  Ｕ／ｋｇ，静脈内）（Ｅｌｋｉｎｓ−Ｓｉｎｎ  Ｉｎｃ．，  Ｃｈｅｒｒｙ  Ｈｉｌｌ，  ＮＪ，  ＵＳＡ）を、抗凝固剤として使用した。深麻酔を確認した後、心臓を摘出し、大動脈にカニューレを挿入し、上記心臓を、以前に記載されたとおり、一定（１００ｃｍの水）灌流圧において３７℃で、ＫＨＢを用いて５分間の洗浄期間にわたって、ランゲンドルフモードにおいて大動脈を介して灌流した。その灌流媒体は、改変クレブス−ヘンゼライト重炭酸塩緩衝液（ミリモル濃度：塩化ナトリウム１１８、塩化カリウム４．７、塩化カルシウム１．７、炭酸水素ナトリウム２５、リン酸二水素カリウム０．３６、硫酸マグネシウム１．２およびグルコース１０）からなり、その酸素化後、ｐＨは、３７℃において７．４であった。上記洗浄期間の間に、左心房にカニューレを挿入し、上記ランゲンドルフ調製物を、１０分間にわたる１７ｃｍ  Ｈ２Ｏの左心房６充填圧を伴う作動モードに切り替えた。大動脈後負荷圧を、１００ｃｍの水に設定した。１０分間の最後に、心拍数（ＨＲ，心拍／分）、大動脈流（ＡＦ，ｍｌ／分）、冠動脈流（ＣＦ，ｍｌ／分）、最大左心室圧（ＬＶＤＰ，ｍｍＨｇ）および最大圧の一次導関数（ＬＶｄｐ／ｄｔ，ｍｍＨｇ／秒）のようなベースライン心機能を記録した。３０分間の全虚血を、それらの基部に近い点で、左心房流入ラインおよび大動脈流出ラインをクランプ止めすることによって開始した。３０分間の虚血の最後に、心房流入ラインおよび大動脈流出ラインのクランプを外すことによって、６０分間もしくは１２０分間にわたって再灌流を開始した。再灌流の最初の１０分間を、ランゲンドルフモードにて行って、心室細動を回避し、その後、心臓を順行性作業モードに切り替えた。Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ．  Ｂｉｏｌ．  Ｍｅｄ．  ４６：５７３−５７８（２００９）。
【０２５６】
梗塞サイズ概算。  梗塞サイズを、ＴＴＣ法に従って測定した。Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ．  Ｂｉｏｌ．  Ｍｅｄ．  ４６：５７３−５７８（２００９）；  Ｉｍａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２８２：Ｈ１９９６−２００３（２００２）。２時間の再灌流の後、リン酸緩衝液中のトリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ）１％（ｗ／ｖ）溶液４０ｍｌを、大動脈カニューレに注入し、上記心臓サンプルを、−７０℃において次の分析のために保存した。凍結した心臓の切片（０．８ｍｍ）を、２％  パラホルムアルデヒドで固定し、２枚のカバースリップの間に置き、Ｍｉｃｒｏｔｅｋ  ＳｃａｎＭａｋｅｒ  ６００ｚを使用してデジタルで画像化した。ピクセル単位で梗塞領域を定量するために、標準のＮＩＨ画像プログラムを使用した。上記梗塞サイズを、定量化し、ピクセル単位で表した。Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ．  Ｂｉｏｌ．  Ｍｅｄ．  ４６：５７３−５７８（２００９）；  Ｉｍａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２８２：Ｈ１９９６−２００３（２００２）。
【０２５７】
アポトーシス細胞死の評価。  アポトーシス細胞の免疫組織化学的検出を、ＴＵＮＥＬ法（Ｐｒｏｍｅｇａ，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  ＷＩ）を使用して行った。Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ．  Ｂｉｏｌ．  Ｍｅｄ．  ４６：５７３−５７８（２００９）；  Ｉｍａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２８２：Ｈ１９９６−２００３（２００２）。簡潔には、上記単離心臓の実験の後、心臓組織を、１０％  ホルマリン中に直ぐに入れ、自動組織固定器中で固定した。上記ＴＵＮＥＬ染色を、製造業者の指示に従って行った。蛍光染色を、蛍光顕微鏡（ＡＸＩＯＰＬＡＮ２  ＩＭＡＧＩＮＧ，  Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｍｉｃｒｏｉｍａｇｉｎｇ  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）で、フルオレセインの緑色蛍光については５２０６２０ｎｍにおいておよびヨウ化プロピジウムの赤色蛍光については６２０ｎｍにおいて調べた。アポトーシス細胞の数をカウントし、総筋細胞集団に対する％として表した。
【０２５８】
マイクロＲＮＡ単離およびｃＤＮＡ調製。  ラット心臓サンプルからの総ＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して単離し、ｍｉｒＶＡＮＡ  ｍｉＲＮＡ単離キット（Ａｍｂｉｏｎ）を使用してさらに精製した。Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２９６：Ｈ１４６６−１４８３（２００９）。ｃＤＮＡを、Ｔａｑｍａｎ  ｍｉＲＮＡ逆転写キットおよびＭｅｇａｐｌｅｘ  Ｒｏｄｅｎｔ  Ｐｏｏｌ  ＡおよびＢプライマーセットを使用して調製した。
【０２５９】
ｍｉＲＮＡ発現のプロファイリング。  ｍｉＲＮＡ発現プロファイリングを、７９００ＨＴリアルタイムＰＣＲ機械装置（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ，  Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ）において、製造業者の推奨に従って、３８４ウェル微小流体カード上のＴａｑＭａｎＨ  Ｇｅｎｅ  Ｓｉｇｎａｔｕｒｅ  Ｒｏｄｅｎｔ  Ａｒｒａｙｓによって定量的リアルタイムＰＣＲ法を使用して行った。各ｍｉＲＮＡを、２つの特異的アンプリコンプライマーおよび１つの特異的プローブによって定量化した。Ｓａｎｇｅｒ  ｍｉＲＢａｓｅ  ｖ１０の包括的適用範囲を、ラットｍｉＲＮＡにそれぞれ特異的な合計５１８のアッセイおよび３０３の特有のアッセイに関して、ＴａｑＭａｎＨ  ＭｉｃｒｏＲＮＡ  Ｌｏｗ  Ｄｅｎｓｉｔｙ  Ａｒｒａｙｓ（ＴＬＤＡ  Ａｒｒａｙ  ＡおよびＢ）の２カードセットにわたって可能にした。さらに、各アレイは、６つのコントロールアッセイ（５つは、注意深く選択された候補の内因性コントロールアッセイ、および１つは、陰性コントロールアッセイ）を含む。アレイによるｍｉＲＮＡのプロファイリングは、以前に使用されている。Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ＢＭＣ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １０：４０７（２００９）。
【０２６０】
ｍｉＲＮＡ遺伝子発現データの分析。  アレイＡおよびＢからＣｔ値として表したリアルタイムＰＣＲデータを、Ｒスクリプト（ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｔｅａｍによって提供）を使用して組み合わせ、ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇＧＸ  １１．０．２ソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ）を使用して処理した。分析後、５９１の実体を、アレイＡおよびＢから検出した。内因性コントロールに対する正規化、品質コントロール、フィルタリング、相関分析および主な成分分析を含むすべての統計分析を、ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ  ＧＸソフトウェアによって行った。
【０２６１】
ｍｉＲＮＡ標的の推定。  ｍｉＲＮＡ標的を、ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ  ＧＸソフトウェアの中に組み込まれかつ接続されたＴａｒｇｅｔＳｃａｎを使用して推定した。
【０２６２】
ウェスタンブロット分析。  心臓を、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、２５ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  オルソバナデート、１０ｍＭ  ＮａＦ、１０ｍＭ  ピロリン酸塩、１０ｍＭ  オカダ酸、０．５ｍＭ  ＥＤＴＡ、および１ｍＭ  フェニルメチルスルホニルフルオリドを含む緩衝液中でホモジナイズした。各心臓ホモジネートの１００μｇ  タンパク質を、ＳＤＳ−ポリアクリルアミド・ゲル電気泳動によって分離し、ポリビニリデンジフルオリド膜に固定した。上記膜を、ＥＲＫ１／２、ホスホ−ＥＲＫ１／２、ｐ３８  ＭＡＰＫおよびホスホ−ｐ３８  ＭＡＰＫ（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ＭＡ）で免疫ブロットして、上記化合物のリン酸化を評価した。得られたブロットをデジタル化し、標準的ＮＩＨ画像プログラムを使用して、デンシトメトリー走査（ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｒｉｃ  ｓｃａｎｎｉｎｇ）に供した。
【０２６３】
統計分析。  心筋機能パラメーター、梗塞サイズおよびアポトーシスについての値を、平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表した。一元配置分散分析を最初に行って、群間の平均値の任意の差異について検定した。差異が確立された場合、上記レスベラトロール処置群の値を、改変ｔ検定によってコントロール群のものと比較した。その結果を、ｐ＞０．０５であれば有意とみなした。
【０２６４】
（実施例８：本実施形態の組成物での虚血心筋における抗脈管形成作用）
Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ  Ｐ，  Ｄａｓ  Ｓ，  Ｇｏｒｂｕｎｏｖ  Ｎ，  Ｏｔａｎｉ  Ｈ，  Ｐａｃｈｅｒ  Ｐ，およびＤａｓ  Ｄによって報告されたように、研究は、血流動態機能ならびに脈管形成因子ＶＥＧＦおよびＨＩＦ−１αに対して虚血心筋におけるγ-トコトリエノールありもしくはなしで、レスベラトロールおよびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の効果を試験するように設計された。Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭｉｃｒｏＲＮＡ  ２０ｂ  ｗｉｔｈ  Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ  ｉｓ  Ｌｉｎｋｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ａｎｔｉ−Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  Ａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｉｓｃｈｅｍｉｃ  Ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ：  Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｇａｍｍａ−Ｔｏｃｏｔｒｉｅｎｏｌ（印刷中）。結果から、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は実際に、心臓に対して強力な抗脈管形成作用を有し、このことは、ＶＥＧＦおよびＨＩＦ−１αをダウンレギュレートするその能力と関連する（ｃｏｒｒｏｂｏｒａｔｅｄ  ｗｉｔｈ）ことが実証された。ｍｉＲＮＡ  ２０ｂに特異的なａｎｔａｇｏｍｉｒは、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）の抗脈管形成作用を逆転した。
【０２６５】
ＨＩＦ−１αおよびＶＥＧＦのレスベラトロール、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）およびγ−トコトリエノール誘導性の発現に対するａｎｔａｇｏｍｉｒ−２０ｂの効果。ＨＩＦ−１αおよびＶＥＧＦの発現の結果を、図１７および図１８に示す。
【０２６６】
図１７Ａ〜１７Ｃは、ＶＥＧＦに対するｍｉＲ−２０ｂの調節およびＶＥＧＦに対するａｎｔａｇｏｍｉＲ−２０ｂの効果を示すウェスタンブロット（下部）の結果を定量化する棒グラフ（上部）である。図１７Ａは、実験群についてのＶＥＧＦウェスタンブロット分析およびその定量化を示し、その実験群は、（１）ＩＲ偽（ビヒクル）、（２）ＩＲ＋γ−トコトリエノール、（３）ＩＲ＋レスベラトロール、（４）ＩＲ＋γ−トコトリエノール＋レスベラトロール、および（５）ＩＲ＋Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）である。＊ｐ＜０．０５  対  ＩＲ偽（ここでｎ＝４／群）。図１７Ｂは、ａｎｔａｇｏｍｉＲ−２０ｂで前処理した場合の同じ群のサンプルについてのＶＥＧＦウェスタンブロット分析およびその定量化を示す。＊ｐ＜０．０５  対  ＩＲ偽（ここでｎ＝４／群）。図１７Ｃは、同じサンプルについてのＴａｑｍａｎリアルタイムＰＣＲ定量化を示す。
【０２６７】
図１８Ａおよび１８Ｂは、ｍｉＲ−２０ｂの調節およびＨＩＦ−１ａ発現に対するａｎｔａｇｏｍｉＲ−２０ｂの効果を示すウェスタンブロット（下部）の結果を定量化する棒グラフ（上部）である。図１８Ａは、実験群についてのＨＩＦ−１ａウェスタンブロット分析およびその定量化を示し、その実験群は、（１）ＩＲ偽（ビヒクル）、（２）ＩＲ＋γ−トコトリエノール、（３）ＩＲ＋レスベラトロール、（４）ＩＲ＋γ−トコトリエノール＋レスベラトロール、および（５）ＩＲ＋Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）である。図１８Ｂは、ａｎｔａｇｏｍｉＲ−２０ｂで前処理した場合の同じ群のサンプルについてのＨＩＦ−１ａウェスタンブロット分析およびその定量化を示す。＊ｐ＜０．０５  対
ＩＲ偽（ここでｎ＝４／群）。
【０２６８】
動物。  この研究において使用されるすべての動物に、動物および動物が関わる実験に関連する規則に従い、そして、実験動物の管理および使用に関するガイド（ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，  １９９６年版）に述べられた方針を厳守する、動物愛護にかなったケアを与えた。そして、プロトコルすべて（計画  ＃  ２００８−４８４）は、コネチカット大学健康センターの施設動物管理委員会（Ｆａｒｍｉｎｇｔｏｎ，ＣＴ，ＵＳＡ）によって承認を受けた。体重２５０〜３００ｇの間の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに、実験手順の開始まで、水へのアクセスとともに通例のラット飼料を自由に与えた。動物に、２１日間にわたって、レスベラトロール（５ｍｇ／ｋｇ／日）［Ｓｉｇｍａ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ］もしくはＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）（１００ｍｇ／ｋｇ／日）、またはγ−トコトリエノール［５ｍｇ／ｋｇ／日］を、単独で、もしくはレスベラトロール［５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ］と組み合わせて、のいずれかを胃管栄養法で与えた。我々の実験室での以前の研究は、この実験において使用される各化合物についての適切な用量および期間を確立した。Ｈａｔｔｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｈｅａｒｔ．  Ｃｉｒｃ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２８２：Ｈ１９８８−１９９５（２００２）；  Ｍｕｋｈｅｒｊｉ
ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍｏｌ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．（印刷中）。
【０２６９】
心臓保護ならびにＨＩＦ−１αおよびＶＥＧＦの発現に対するＡｎｔａｇｏｍｉｒ  ｍｉＲ−２０ｂの効果。  レスベラトロール、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）およびγ−トコトリエノールでの処置を含む介入が、ｍｉＲＮＡ  ２０ｂの数倍のアップレギュレーションを示したので、ａｎｔａｇｏｍｉｒ  ｍｉｒＲＮＡ２０ｂを使用して、これら化合物の心臓保護効果に対するｍｉＲＮＡ  ２０ｂの役割を具体的に試験した。動物を、実験の７２時間前にａｎｔａｇｏｍｉｒ  ｍｉＲＮＡ２０ｂ［ｉ．ｖ．］で処置した。７２時間後に、すべての動物を屠殺し、心筋機能を決定し、ウェスタンブロット分析を行った。ＨＩＦ−１αおよびＶＥＧＦについてのウェスタンブロット分析：  ＨＩＦ−１αおよびＶＥＧＦの発現に対するレスベラトロール、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）およびγ−トコトリエノールの効果を、ＶＥＧＦおよびＨＩＦ−１αに対する抗体を使用して、ウェスタンブロット分析によって予測した。
【０２７０】
図１７および図１８に示される結果は、ＨＩＦ−１αおよびＶＥＧＦの両方の発現が、上記処置後に有意にダウンレギュレートされることを示す。ＶＥＧＦに関しては、γ−トコトリエノールをレスベラトロールとともに使用した場合、ＶＥＧＦ発現のさらなる低下が認められた。このことは、相乗作用の働きを示唆しているる。Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は、レスベラトロールおよびγ−トコトリエノールより遙かに大きく、ＶＥＧＦ発現の非常に有意な低下を生じた。ＨＩＦ−１α発現はまた、上記処置で低下した；しかし、レスベラトロール（ｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ）およびγ−トコトリエノールに関しては、群間の差異はなかった。繰り返すと、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）は、［レスベラトロールおよびγ−トコトリエノールと比較して］ＨＩＦ−  １αのより大きな低下を示し、Ａｎｔａｇｏｍｉｒ  ｍｉＲＮＡ２０ｂは、すべての処置に関してＶＥＧＦおよびＨＩＦ−１αの両方の発現を修復した。このことは、ＶＥＧＦおよびＨＩＦ−１αの発現が、ｍｉＲＮＡ  ２０ｂに依存性であることを示唆しているる。
【０２７１】
虚血心臓における、ならびにレスベラトロールおよびγ−トコトリエノールで逆転されるｍｉＲ−２０ｂの調節。  ウェスタンブロットの結果と一致して、ｍｉＲ−２０ｂは、虚血−再灌流ラット心臓において劇的に調節されることが示された。ｍｉＲ−２０ｂは、ＴａｑｍａｎリアルタイムＰＣＲで定量化した場合、Ｉ／Ｒ心臓において有意にダウンレギュレートされた（図１７Ｃ）。ｍｉｒ−２０ｂのダウンレギュレーション（９．８倍）は、γ−トコトリエノール、レスベラトロール、レスベラトロール＋γ−トコトリエノールおよびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）で前処置したＩ／Ｒ心臓において、それぞれ、９．４倍、８．２倍、１５．２倍および２７．５倍逆転した。ｍｉＲ−２０ｂは、ＨＩＦ１αを標的とし、ＶＥＧＦα発現を調節する。
【０２７２】
細胞内反応性酸素種（ＲＯＳ）活性に対するレスベラトロール、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）およびγ−トコトリエノールの効果。  サイトゾルにおいて蛍光性酸化生成物ＣＭ−ＤＣＦを測定することによる蛍光のレベルをモニターすることによって決定した細胞内ＲＯＳ活性を、図１９に示す。図１９は、以下の実験群におけるＤＣＦＤＡによる反応性酸素種の細胞内定量化を示す棒グラフである：（１）ＩＲ偽（ビヒクル）、（２）ＩＲ＋γ−トコトリエノール、（３）ＩＲ＋レスベラトロール、（４）ＩＲ＋γ−トコトリエノール＋レスベラトロール、および（５）ＩＲ＋Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）。＊ｐ＜０．０５  対  ＩＲ偽（ここでｎ＝４／群）。γ−トコトリエノール、レスベラトロールおよびＬｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）を含むすべての化合物は、コントロールと比較して、細胞内ＲＯＳ濃度を低下させた。しかし、群間で差異はなかった。
【０２７３】
レスベラトロールは、虚血／再灌流媒介性の有害な酸化環境を、還元された環境に変化させることによって機能するので、細胞内ＲＯＳ濃度を、ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡ［５−（および−６）−クロロメチル−２’，７’−ジクロロジヒドロフルオレセイン  ジアセテート、アセチルエステル］［１０μＭ；  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，  Ｅｕｇｅｎｅ，  ＯＲ］（上記化合物が細胞内成分に結合する能力を増強し、それによって、上記色素の細胞保持を長期化する、さらなるチオール反応性クロロメチル基を有する、ＤＣＦ−ＤＡの誘導体）で決定した。上記色素を、虚血／再灌流の誘導前に静脈内注射し、実験の最後に、サイトゾルにおいて、励起波長４８０ｎｍおよび発光波長５２０ｎｍにおいて蛍光性酸化生成物ＣＭ−ＤＣＦを測定することによって、ＲＯＳの生成について蛍光レベルを決定した。
【０２７４】
十分に重要なことに、上記Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）組成物は、ＶＥＧＦおよびＨＩＦ−１αのダウンレギュレーションによって明示されるように、心臓に対してより強力な心臓保護作用およびより強力な抗脈管形成効果を示した。レスベラトロールの結果を、上記Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）組成物と比較したところ、Ｌｏｎｇｅｖｉｎｅｘ（登録商標）がＶＥＧＦおよびＨＩＦ−１αのダウンレギュレーションを示し、レスベラトロールのものと比較した場合、マイクロＲＮＡ  ２０−ｂ（強力な抗脈管形成因子）の大きな倍数誘導もまた示したことが決定された。
【０２７５】
本明細書において言及されるすべての刊行物および特許は、各個々の刊行物もしくは特許出願が、具体的にかつ個々にその全体において参考として援用されることを示されるかのように同程度まで本明細書に参考として援用される。上記実施形態は、その具体的実施形態と関連して記載されてきたが、それはさらなる改変が可能であることが理解され、本願は、上記実施形態の任意のバリエーション、使用、もしくは適合を網羅すると解釈される。上記バリエーション、使用、もしくは適合は、一般に、上記実施形態の原理に追随し、上記実施形態が属する分野の中で公知もしくは通例の慣行内にありかつ本明細書上記に示される本質的な特徴に当てはめられ得る場合の本開示から離れたものを含む。
【図１１】
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【図１２】
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【図１４Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１３Ｆ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９】
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【外国語明細書】
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