(57)【要約】      （修正有）【課題】安定化されたアントシアニン抽出組成物の提供。【解決手段】アントシアニンおよび少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む組成物であって、該安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む、安
定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項２】
前記安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイ
ン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ
、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有
するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれ
らの混合物である、請求項１に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項３】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリ
ー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２
つもしくはそれ以上の混合物である、請求項１に記載の安定化されたアントシアニン抽出
物組成物。
【請求項４】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリ
ー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２
つもしくはそれ以上の混合物である、請求項２に記載の安定化されたアントシアニン抽出
物組成物。
【請求項５】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項
１に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項６】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項
４に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項７】
組成物が、約２と約１２の間のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安定
である、請求項１に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項８】
アントシアニン抽出物組成物を安定化する方法であって、アントシアニンが安定化される
ように、アントシアニン抽出物を十分な量の少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化
合物と併用する工程を含む、方法。
【請求項９】
前記安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイ
ン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ
、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有
するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれ
らの混合物である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリ
ー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２
つもしくはそれ以上の混合物である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリ
ー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２
つもしくはそれ以上の混合物である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項
８に記載の方法。
【請求項１３】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項
１１に記載の方法。
【請求項１４】
安定化されたアントシアニン抽出物組成物が、周囲条件で少なくとも約１日間安定である
、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む、ｐ
Ｈ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項１６】
前記安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイ
ン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ
、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有
するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれ
らの混合物である、請求項１５記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項１７】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリ
ー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２
つもしくはそれ以上の混合物である、請求項１５記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物
組成物。
【請求項１８】
アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽
出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つも
しくはそれ以上の混合物である、請求項１６記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成
物。
【請求項１９】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項
１５に記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項２０】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項
１８に記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【請求項２１】
アントシアニンおよび少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物を含むアントシアニン組
成物を対象に与える工程を含む、アントシアニンの生物学的利用能を増加させる方法であ
って、アントシアニンの量が、対象中で、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物を有
しないアントシアニン組成物の試料と比較して少なくとも２倍量に増加する、方法。
【請求項２２】
安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システイン、
システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、Ｓ
Ｈ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有する
ペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの
混合物である、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽
出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つも
しくはそれ以上の混合物である、請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽
出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つも
しくはそれ以上の混合物である、請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項
２１に記載の方法。
【請求項２６】
安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、請求項
２４に記載の方法。
【請求項２７】
少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物の存在下における投与の４時間後のアントシア
ニンの血漿濃度が、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物の非存在下におけるアント
シアニンの血漿濃度の少なくとも２倍量である、請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連する出願への相互参照
本願は、２００８年３月１３日に出願された米国特許出願第１２／０４７，９９３号、２
００７年３月１５日に出願された同第６０／８９５，０３４号、２００７年７月２６日に
出願された同第６０／９５２，１１３号、および２００７年１１月５日に出願された同第
６０／９８５，６０３号の利益を主張する。米国特許出願第１２／０４７，９９３号、同
第６０／８９５，０３４号、同第６０／９５２，１１３号、および同第６０／９８５，６
０３号のそれぞれの内容は、その全てが、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、概して、アントシアニンおよびアントシアニジンを安定化するのに有用な方
法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
アントシアニンは、多くの花、果実および葉の魅力的な色に関与する水溶性色素である
。一般に、それらは、酸性化アルコール性溶媒により植物から抽出され得、多くのものは
食物着色料として市販で入手可能である。それらは、しばしば、飲料またはシリアルなど
の他の食物に配合するのに適切な濃度の希釈液としてマルトデキストリンと共に供給され
る。
【０００４】
アントシアニンのアグリコン成分であるアントシアニジンは、式Ｉに示す基本構造を有
する。
【０００５】
【化１】
2014040466.tif 000002
代表的な例は、シアニジン（３、５、７、３’、４’位でヒドロキシル化されている）
、デルフィニジン（３、５、７、４’、５’位でヒドロキシル化されている）およびペラ
ルゴニジン（３、５、７、３’位でヒドロキシル化されている）である。ヒドロキシル基
は、通常、グリコシル化（例えば、アントシアニン）および／またはメトキシル化されて
いる（例えば、マルビジンは、３’および５’ヒドロキシル基で置換され、ペオニジンお
よびペツニジンは、３’ヒドロキシル基で置換される）。
【０００６】
アントシアニンは、２−フェニルベンゾピリウムまたはフラビリウム塩のポリヒドロキ
シルおよびポリメトキシル誘導体の水溶性グリコシドである。個々のアントシアニンは、
分子中に存在するヒドロキシル基の数、これらのヒドロキシル基のメチル化の程度、分子
に結合した糖の性質、数および位置、ならびに分子中の糖に結合した脂肪族または芳香族
酸の数および性質が異なる。数百のアントシアニンが単離され、かつ分光測定手段により
化学的に特徴づけられてきた。シアニジンおよびそれらの誘導体は、野菜、果実および花
中に存在する最も一般的なアントシアニンである。
【０００７】
アントシアニンは、上記したように水素、水酸基またはメトキシル基が６つの異なる位
置に見出され得る基本炭素骨格を共有する。果実および野菜では、炭素環に存在するヒド
ロキシル基の数およびこれらのヒドロキシル基のメチル化度の両方が異なる６つの基本的
なアントシアニン化合物が主流である。炭素骨格に結合した糖の同一性、数および位置も
また可変性であり、炭素−３、炭素−５および時々炭素−７に結合し得る最も一般的な糖
は、グルコース、アラビノース、ラムノースまたはガラクトースである。この基本に基づ
き、モノシド、ビオシドおよびトリオシドを区別することが可能である。
【０００８】
アントシアニンの化学構造に寄与する別の重要な可変物は、糖鎖上に存在し得るアシル
化酸である。最も頻繁に用いられるアシル化剤は、カフェイン酸、フェルラ酸、シナピン
酸およびｐ−クマル酸であるが、酢酸、リンゴ酸、マロン酸、シュウ酸およびコハク酸な
どの脂肪酸もまた存在し得る。３つまでのアシル化酸が同時に存在し得る。
【０００９】
それらの特定の化学構造のために、アントシアニンおよびアントシアニジンは、電子欠
乏により特徴づけられ、このことにより、それらはフリーラジカルとしても知られる活性
酸素種（ＲＯＳ）に対して非常に反応性になり、その結果、それらは強力な天然の抗酸化
剤であると考えられる。
【００１０】
アントシアニンは、それらの化学構造の性質に部分的に起因して、不安定でありかつ分
解しやすい傾向を有する。さらに、アントシアニンの安定性は、ｐＨ、数ヶ月の期間にわ
たる貯蔵、貯蔵温度、酵素の存在、光、酸素、ならびにタンパク質、フラボノイドおよび
無機質の存在により影響を受ける。
【００１１】
より詳細には、アントシアニンの生物学的利用能は、ｐＨの変化に対するそれらの感受
性に起因して低い。アントシアニンは、一般に、３．５以下のｐＨ値で安定であるので、
胃条件下で安定である。しかしながら、それらは、より高いｐＨ値、より詳細には腸管な
どにより代表的なｐＨ値（ｐＨ７）で分解するので、有利な吸収および栄養価が非常に減
少する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
従って、安定化されたアントシアニンを提供する組成物および／または方法が必要とさ
れている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、驚くべきことに、安定なアントシアニン組成物、当該組成物を調製する方法
および多様な苦痛を治療するための当該組成物の使用方法を提供する。本発明は、アント
シアニンおよび安定化化合物の独特の組成物であって、２つの成分の組み合わせが、アン
トシアニンが分解を容易に受けないことを提供する組成物を記載する。本発明時まで、ア
ントシアニンは、空気、光、タンパク質または酵素などの環境ストレスへの曝露により分
解するであろうことが知られていた。より厄介なのは、中性または塩基性のｐＨを有する
溶液中でのアントシアニンの不安定性であった。
【００１４】
驚くべきことに、本発明は、システインのアントシアニン組成物（アントシアニジンま
たはアントシアノシドのいずれかである）との併用が、アントシアニンを必要とする対象
への送達を、システインの非存在下でアントシアニン組成物を経口摂取した対象に対して
、少なくとも２倍量に増加させる助けとなることを提供する。驚くべきことに、４時間後
のアントシアニンがシステインの存在下で送達される場合のアントシアニンの血漿濃度が
、システインの非存在下で送達されたアントシアニンの血漿濃度の少なくとも２倍量であ
ることが見出された。従って、本発明は、対象に有効量のアントシアニンおよびシステイ
ンを投与することにより、対象において生物が利用可能なアントシアニンの量を増加させ
る方法を提供する。投与はいかなる手段によっても可能であるが、経口送達が一般に好ま
しい。１つの実施態様では、アントシアニンのシステインに対する比は、重量基準で約１
０〜約１である。
【００１５】
１つの局面では、本発明は、アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を
有する安定化化合物を含む安定化されたアントシアニン抽出物組成物を提供する。安定化
化合物の例には、（還元）グルタチオン、ジヒドロリポ酸、システイン、酵母抽出物およ
びそれらの混合物が挙げられる。
【００１６】
事実上数千のアントシアニン抽出物が存在するが、その全てが本明細書の範囲内に含ま
れると考えるべきであり、特に重要なアントシアニン抽出物の適切な例には、ビルベリー
抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー
抽出物、ブルーベリー抽出物およびそれらの２つまたはそれ以上の混合物が挙げられる。
【００１７】
１つの局面では、安定化化合物のアントシアニン抽出物に対する比は、約０．１〜約１
０、より詳細には約０．５〜約５、およびより詳細には約１〜約１である。
【００１８】
別の局面では、安定化されたアントシアニン抽出物組成物は、約２以上のｐＨ、例えば
、約３のｐＨ、約４のｐＨ、約５のｐＨ、約６のｐＨ、約７のｐＨ、約８のｐＨ、約９の
ｐＨ、約１０のｐＨ、または約１１のｐＨ、約１２もしくはそれ以上の、例えば１４のｐ
Ｈを有する水性環境に曝露したときに、分解に対して安定である。
【００１９】
別のさらなる局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、アントシアノシドであ
る。
【００２０】
別のなおさらなる局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、アントシアニジン
である。
【００２１】
本発明の別のさらなる局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、ペラルゴニジ
ン（ｐｅｒｌａｒｇｉｎｉｄｉｎ）、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン
、デルフィニジンのグリコシド（ｇｌｙｃｏｓｉｄｓｅ）である１つまたはそれ以上のア
ントシアノシドが挙げられる。
【００２２】
本発明はまた、本明細書に記載された安定化されたアントシアニン組成物を調製する方
法に関する。
【００２３】
本発明はさらに、治療上の有効量の本明細書に記載された安定化されたアントシアニン
組成物を投与することにより、多様な病気を治療する方法に関する。
【００２４】
従って、本発明はさらに、生物が利用可能な安定化されたアントシアニン組成物を提供
する。
【００２５】
複数の実施態様が開示されているが、本発明のさらに他の実施態様は、以下の詳細な説
明から、当業者に明らかになるであろう。明らかに、本発明は、全てが本発明の趣旨およ
び範囲から逸脱することなく、種々の明らかの局面において改変することが可能である。
従って、詳細な説明は、事実上例示であり、限定するものではないと考えるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、グルタチオンまたはＤＨＬＡの１ミリモル濃度溶液中のｃｙ−３−Ｏ−グルコシドについての深色移動が欠如していることの証拠を提供する。
【図２】図２は、グルタチオンまたはＤＨＬＡの１ミリモル濃度溶液中のｃｙ−３−Ｏ−グルコシドについての濃色移動が欠如していることの証拠を提供する。
【図３】図３は、ビルベリー抽出物（未保護）の残留アントシアノシドの％を提供する。
【図４】図４は、図３に見られる無保護に対するＤＨＬＡ保護されたビルベリー抽出物の残留アントシアノシドの％を提供する。
【図５】図５は、図３に見られる無保護に対するＧＳＨ保護されたビルベリー抽出物の残留アントシアノシドの％を提供する。
【図６−１】図６Ａは、ＤＨＬＡ保護されたビルベリー抽出物の比較の分解動態学を提供する。図６Ｂは、ＤＨＬＡ保護されたビルベリー抽出物の比較の分解動態学を提供する。
【図６−２】図６Ｃは、ＤＨＬＡ保護されたビルベリー抽出物の比較の分解動態学を提供する。図６Ｄは、ＤＨＬＡ保護されたビルベリー抽出物の比較の分解動態学を提供する。
【図７】図７は、未保護のまたはグルタチオンで保護されたデルフィニジン−３−Ｏ−ガラクトシドの比較分解動態学を提供する。
【図８】図８は、未保護のまたはグルタチオンで保護されたペツニジン−３−Ｏ−ガラクトシドの比較分解動態学を提供する。
【図９】図９は、未保護のまたはグルタチオンで保護されたデルフィニジン−３−Ｏ−ガラクトシドの比較分解動態学を提供する。
【図１０】図１０は、グルタチオンで保護されたまたは未保護のシアニジン−３−Ｏ−ガラクトシドの２つのｐＨ値における比較分解動態学を提供する。
【図１１】図１１は、ＤＨＬＡ保護された１５のビルベリーアントシアノシドの比較分解を提供する。
【図１２】図１２は、グルタチオン（ＧＳＨ）保護された１５のビルベリーアントシアノシドの比較の分解を提供する。
【図１３】図１３は、グルタチオンの存在下、ｐＨ７、３７℃にて緩衝溶液中でのリードアントシアノシド（ブラックカレント（Ｂｌａｃｋ  ｃｕｒｒｅｎｔ））の安定性を経時的に実証する。
【図１４】図１４は、ＣａＣｏ−２細胞を有するグルタチオンの存在下、ｐＨ７、３７℃にて、インキュベーション培地中でのリードアントシアノシド（ブラックカレント（Ｂｌａｃｋ  ｃｕｒｒｅｎｔ））の安定性を経時的に実証する。
【図１５】図１５は、リードアントシアノシドのＣａＣｏ−２細胞への細胞取り込みを実証する。
【図１６】図１６は、グルタチオンの有無でのビルベリーアントシアノシドの分解（３７℃、ｐＨ＝７．０で１時間）を提供する。
【図１７】図１７は、グルタチオンの有無でのＣａＣｏ−２細胞へのビルベリーアントシアノシドの細胞取り込みを実証する。
【図１８】図１８は、ＣａＣｏ−２実験のＨＰＬＣ解析についての勾配特性を提供する。
【図１９】図１９は、ＧＳＨで処理したビルベリー抽出物の安定性について、ｐＨ範囲３〜１１にわたって残留率およびｐＨ値を、および（同じｐＨ値における）ＧＳＨで処理しなかったビルベリー抽出の不安定性を、図で表現したものである。
【図２０】図２０は、特定のｐＨ範囲にわたるＧＳＨの保護効果を図で表現したものである。
【図２１】図２１は、０時間における２００７０６０１の未使用溶液のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２２】図２２は、４時間後、３７℃での２００７０６０１のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２３】図２３は、０時間における２００７０６０２の未使用溶液のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２４】図２４は、４時間後、３７℃での２００７０６０２のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２５】図２５は、３７℃で０時間および４時間後における２００７０６０１のＨＰＬＣピークの比較を提供する。
【図２６】図２６は、３７℃で０時間および４時間後における２００７０６０２のＨＰＬＣピークの比較を提供する。
【図２７】図２７は、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察されたアントシアニジンの比較を提供する。
【図２８】図２８ａは、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察された全シアンジン（ｃｙａｎｄｉｎ）のそれぞれの比較を提供する。上部の点線は、ビルベリー／システインの組み合わせであり、下側の破線は、ビルベリー抽出物のみである。図２８ｂは、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察された全デルフィニジンのそれぞれの比較を提供する。上部の点線は、ビルベリー／システインの組み合わせであり、下側の破線は、ビルベリー抽出物のみである。
【図２９】図２９は、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察された全ペツニジンの比較を提供する。上部の点線は、ビルベリー／システインの組み合わせであり、下側の破線は、ビルベリー抽出物のみである。
【図３０】図３０は、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察された全ペオニジンの比較を提供する。上部の点線は、ビルベリー／システインの組み合わせであり、下側の破線は、ビルベリー抽出物のみである。
【図３１】図３１は、ビルベリー抽出物または本発明のビルベリー／システインの組み合わせで処理したヒト血漿中で観察された全マルビジンの比較を提供する。上部の点線は、ビルベリー／システインの組み合わせであり、下側の破線は、ビルベリー抽出物のみである。
【図３２】図３２は、ビルベリー抽出物対ビルベリー抽出物／システインの組み合わせについて、シアンジン（ｃｙａｎｄｉｎ）、デルフィニジン、ペツニジン、ペオニジンおよびマルビジンについて第１日に観察された比較のＣｍａｘを提供する。
【図３３】図３３は、ビルベリー抽出物対ビルベリー抽出物／システインの組み合わせについて、シアンジン（ｃｙａｎｄｉｎ）、デルフィニジン、ペツニジン、ペオニジンおよびマルビジンについて第７日に観察された比較のＣｍａｘを提供する。
【図３４】図３４は、ビルベリー抽出物対ビルベリー抽出物／システインの組み合わせについて、シアンジン（ｃｙａｎｄｉｎ）、デルフィニジン、ペツニジン、ペオニジンおよびマルビジンについて第１日に観察された比較のＡＵＣ０−ｉｎｆを提供する。
【図３５】図３５は、ビルベリー抽出物対ビルベリー抽出物／システインの組み合わせについて、シアンジン（ｃｙａｎｄｉｎ）、デルフィニジン、ペツニジン、ペオニジンおよびマルビジンについて第７日に観察された比較のＡＵＣ０−ｉｎｆを提供する。
【図３６】図３６Ａは、システインを有しないビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全シアニジン血漿レベルを提供する。図３６Ｂは、システインを有するビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全シアニジン血漿レベルを提供する。
【図３７】図３７Ａは、システインを有しないビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全デルフィニジン血漿レベルを提供する。図３７Ｂは、システインを有するビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全デルフィニジン血漿レベルを提供する。
【図３８】図３８Ａは、システインを有しないビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全ペツニジン血漿レベルを提供する。図３８Ｂは、システインを有するビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全ペツニジン血漿レベルを提供する。
【図３９】図３９Ａは、システインを有しないビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全ペオニジン血漿レベルを提供する。図３９Ｂは、システインを有するビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全ペオニジン血漿レベルを提供する。
【図４０】図４０Ａは、システインを有しないビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全マルビジン血漿レベルを提供する。図４０Ｂは、システインを有するビルベリー抽出物について、４時間、１日、７日、および第４日（２つの点は０および０．５時間をそれぞれ表す）における血漿中の全マルビジン血漿レベルを提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、１つまたはそれ以上のアントシアニンおよび１つまたはそれ以上の安定化化
合物を含む組成物に関する。従って、組成物は、アントシアニンが所定の期間にわたって
容易に分解しないという点で「安定」である。
【００２８】
明細書および特許請求の範囲において、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「
含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、オープン・エンドな用語であり、「含むが、・・・
に限定されない」ことを意味するものと解釈すべきである。これらの用語は、より限定的
な用語「から実質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」
および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」を包含する。
【００２９】
本明細書中で、および添付の特許請求の範囲で用いられる単数形「１つの（ａ）」、「
１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに異なるように述べていな
い限り、複数の参照も含むことに留意すべきである。同様に、用語「１つの（ａ）」（ま
たは１つの（ａｎ））、「１つまたはそれ以上」および「少なくとも１つ」は、本明細書
中で互換可能に用いられ得る。また、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（
ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「により特徴付けられる」および「有する」が互換可能に用い
られ得ることにも留意すべきである。
【００３０】
他に定義しない限り、本明細書中で用いられる全ての技術的および科学的用語は、本発
明が属する分野の当業者により一般的に理解されるのと同様の意味を有する。本明細書中
で特に言及される刊行物および特許は、本発明と関連付けて用いられ得たであろう刊行物
に報告された化学物質、装置、統計学的解析および方法論を記載および開示することを含
む全ての目的のために、それらの全体が参照として援用される。本明細書中で引用された
全ての参考文献は、当業者の水準を示すものである。本明細書中のいかなるものも、先行
発明のために本発明がそのような開示に先行する権利を与えられないことを自認するもの
と解釈されるべきではない。
【００３１】
１つの局面では、本発明は、アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を
有する安定化化合物を含む、安定化されたアントシアニン組成物を提供する。
【００３２】
本明細書中で用いられる用語「アントシアニン」は、グリコシル化アントシアニン（ア
ントシアノシド）およびアントシアノシドのアグリコン（アントシアニジン）の両方を包
含することが意図される。本明細書の全体にわたって、アグリコンアントシアニジンがし
ばしば参照されるが、他に断りのない限り、限定的であると解釈すべきではない。いずれ
の用語が用いられる場合でも、他に断りのない限り、用語は互換的に用いられ、かつ、グ
リコシル化物質およびアグリコン物質を含むことが意図される。
【００３３】
アントシアニンのアグリコン成分であるアントシアニジンは、式ＩＩに示す基本構造を
有する。
【００３４】
【化２】
2014040466.tif 000003
【００３５】
【表１】
2014040466.tif 000004
式中、Ｒ１〜Ｒ７は、アントシアニジンの代表的な例を提供する。
【００３６】
アントシアニンのグリコシル化型は、アントシアニジンよりも水可溶性でありかつ安定
である。アントシアノシドは、それらが含むグリコシル単位の数により分類される。モノ
グリコシドは、アグリコンの３−ヒドロキシル基に主に結合した１つの糖部分を含む。ジ
グリコシドは、一般に、３および５ヒドロキシ位、ならびにたまに３および７水酸化位に
、２つの単糖を含む。トリグリコシドは、一般に、３位およびＣ−５またはＣ−７位の１
つに２つの単位が存在する場合、結合を有する。３’、４’および／または５’位での糖
鎖付加もまた可能である。
【００３７】
アントシアニンの最も一般的な糖には、単糖であるグルコース、ラムノース、ガラクト
ース、アラビノースおよびキシロースが挙げられる。アントシアニン中で最も頻繁に見出
される二糖および三糖は、ルチノース、ソホロース、サンブビオースおよびグルコルチノ
ースである。
【００３８】
アントシアニンは、カルボン酸での１つまたはそれ以上の水酸基によりアシル化され得
る。酸は、最も一般的には、単糖の６位に連結するが、単糖の２、３および４位もまた可
能である。一般的な脂肪酸には、マロン酸、酢酸、リンゴ酸、コハク酸およびシュウ酸が
挙げられる。一般的な芳香族フェノール酸および脂肪族ジカルボン酸には、クマリン酸、
カフェイン酸（ａｃｆｆｅｉｃ）、シナピン酸、フェルラ酸、シュウ酸、マロン酸、リン
ゴ酸、コハク酸および没食子酸が挙げられる。
【００３９】
用語「抽出物」は、葉、小枝、樹皮、根、幹、種子、花、液果、果実などの植物源から
、例えば、適切な上記植物源から常套的な単離方法により得られたアントシアニン物質を
意味することを意図するが、本明細書中に記載したものに限定されない。当業者に公知の
種々のアントシアニンの抽出方法が存在する。これらの方法のいくつかは、例えば、米国
特許第５，８１７，３５４号、米国特許第５，２００，１８６号、米国特許第５，９１２
，３６３号、米国特許第４，２１１，５７７号、米国特許第４，３０２，２００号（それ
ぞれ、参照として本明細書中で援用される）に記載されている。
【００４０】
適切なアントシアニン含有植物の例には、以下からなる群から選択される果実、野菜、
花および他の植物が挙げられるが、これらに限定されない：ヒロハカエデ（Ａｃｅｒ  ｍ
ａｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ）、ノルウエーカエデ（Ａｃｅｒ  ｐｌａｔａｎｏｉｄｅｓ）、
アセロラ、セイヨウジュウニヒトエ（Ａｊｕｇａ  ｒｅｐｔａｎｓ）、リンゴ、アンズ、
チシマイチゴ、アボカド、バナナ、メギ、オオムギ、Ｂｅｇｏｎｉａ  ｓｅｍｐｅｒｆｒ
ｏｒｅｎｓ、ヒナギク（Ｂｅｌｌｉｓ  ｐｅｒｅｎｎｉｓ）、シラン（Ｂｌｅｔｉｌｌａ
ｓｔｒｉａｔａ）、ビルベリー、クロマメ、クロダイズ、ブラックポテト、ブルーポテ
トおよびパープルポテト、ブラックベリー、ブルーベリー、クロマメノキ、ボイセンベリ
ー、ソバ、カカオ、チャノキ、カナリーグラス、Ｃａｕｃａｓｉａｎ  ｂｌｕｅｂｅｒｒ
ｙ、ロウバイ（Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ  ｐｒａｅｃｏｘ）、セロリ、セイヨウミザク
ラ（Ｃｅｒａｓｕｓ  ａｖｉｕｍ）、サクラ、セイヨウバクチノキ、チコリー、チャイブ
、チョコベリー、セイヨウサンシュユ、コーンフラワー、コトネアスター、カウベリー、
クランベリー、ガンコウラン、キク、サヨウオシャクジタケ（Ｃｙｎｏｍｏｒｉｕｍ  ｃ
ｏｃｃｉｎｅｕｍ）、Ｄａｈｌｉａ  ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ、セイヨウニワトコ、アメリ
カスノキ、デンドロビューム、ゴゼンタチバナ、Ｅｃｈｉｎａｃｅａ  ｐｕｒｐｅａ、ナ
ス、エルダーベリー、ソラマメ、ヤツデ、フェイジョア、イチジク、ニンニク、ガーベラ
、オタネニンジン、アーティーチョーク、スグリ、ブドウ、グアバ、サンザシ、ハイビス
カスまたはローゼル、Ｈｉｂｉｓｃｕｓ  Ｓａｂｄａｉｆｆａ、ハイブッシュブルーベリ
ー、タチアオイ、スイカズラ、マルバアサガオ（Ｉｐｏｍｏｅａ  ｐｕｒｐｕｒｅａ）、
Ｉｒｉｓ  ｅｎｓａｔａ、ジャンボラン、キクイモ、インドマンゴスチン、レリオカトレ
ア、レンズマメ、ローガンベリー、ルーピン、ライチ、トウモロコシ、マンゴー、マンゴ
スチン、マクイ、アラセイトウ（Ｍａｔｔｈｉｏｌａ  ｉｎｃａｎａ）、メコノプシス、
Ｍｅｔｒｏｓｉｄｅｒｏｓ  ｅｘｃｅｌｓａ、アワ、ナナカマドベリー、マルベリー、マ
ートルベリー、オリーブ、タマネギ、オレンジ、ソメイヨシノ、パッションフルーツ、エ
ンドウマメ、モモ、ピーナッツ、ナシ、エゴマ、ペチュニア、コチョウラン、ウオトリギ
、アサガオ、パイナップル、ピスタチオ、セイヨウスモモ、ザクロ、Ｐｈｒａｇｍｉｔｅ
ｓ  ａｕｓｔｒａｌｉｓ、パープルキャロット、マルメロ、ラビットアイ・ブルーベリー
、ダイコン、レッドカラントおよびブラックカラント、レッドラズベリーおよびブラック
ラズベリー、レッドキャベツ、コメ、ダイオウ、ローズヒップ、ライムギ、サフラン、サ
ラセニア、シープベリー、Ｓｏｐｈｏｒｏｎｉｔｉｓ  ｃｏｃｃｉｎｅａ、ソルガム、ス
パークルベリー、イチゴ、Ｆｒａｇａｄａ  Ｖｅｓｃａ、サトウキビ、ヒマワリ、スイー
トチェリー、サツマイモ、タマリロ、タマリンド、タロイモ、タルトチェリー、Ｔｕｌｉ
ｐ  ｇｒｅｉｇｉｉ、カブ、スイレン、タニウツギ、コムギ、ワイルドライス、Ｖｅｒｂ
ｅｎａ  ｈｙｂｒｉｄａ、ヤムイモおよびそれらの混合物。
【００４１】
事実上数千のアントシアニン抽出物が存在するが、その全てが本明細書の範囲内に含ま
れると考えるべきであり、特に重要なアントシアニン抽出物の適切な例には、ビルベリー
抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー
抽出物、ブルーベリー抽出物およびそれらの２つまたはそれ以上の混合物が挙げられる。
【００４２】
代表的には、抽出物は種々の方法で濃縮されて、アントシアニンが濃縮された溶液を提
供する。例えば、限外濾過を用いて、分子量カットオフによる所望されない成分を除去す
ることができる。濾過からの残留物は、液体として貯蔵され得るか、または例えば噴霧乾
燥、凍結乾燥、フラッシュ乾燥、流動床乾燥、リング乾燥、トレー乾燥、真空乾燥、高周
波乾燥またはマイクロ波乾燥によりさらに濃縮して粉末にすることができる。最終的に、
抽出物は、少なくとも１０重量％のアントシアニン含有量を含むべきである。市販のアン
トシアニンは、Ａｒｔｅｍｉｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｆｏｒｔ  Ｗａｙｎｅ，
Ｉｎｄｉａｎａなどの供給源から得られ得る。市販のアントシアニン抽出物は、少なくと
も１０重量％のアントシアニン含有量を含むべきである。従って、抽出物は、アントシア
ニン、および他のフラビノイド、糖などの他の植物性物質を含む。
【００４３】
アントシアニン抽出物は、さらに、クロマトグラフィ、ゲルクロマトグラフィ、高速液
体クロマトグラフィ、結晶化、アフィニティクロマトグラフィ、分配クロマトグラフィな
どの当該分野で公知の１つまたはそれ以上の方法で精製され得る。特定のアントシアニン
の同定には、当業者に公知の方法で達成され得る１Ｈ  ＮＭＲ、化学分解、クロマトグラ
フィおよび分光法、特に、単離されたアントシアニン化合物の特徴づけのためのホモ−お
よびヘテロ核の二次元ＮＭＲ技術などが挙げられる。
【００４４】
用語「精製された」および「単離された」は、上記アントシアニン抽出物からの１つま
たはそれ以上のアントシアニンの精製および／または単離を参照するために用いられる。
ここでも当該分野で公知の定法を用いて、アントシアニン抽出物の多様な成分を分離して
精製物質とし得る。本発明の１つの局面では、抽出物のアントシアニンは、当該分野で公
知の技術により実質的に精製および単離される。精製された化合物の純度は、通常、少な
くとも約９０％、好ましくは少なくとも約９５％、ならびに最も好ましくは少なくとも約
９９％、およびさらにより好ましくは少なくとも約９９．９重量％（例えば、約１００％
）である。
【００４５】
本発明に従って、アントシアニン抽出物は、ペオニジン、シアニジン、ペラルゴニジン
、デルフィニジン（ｄｅｌｐｈｉｎｌｄｉｎ）、ペツニジン、マルビジン、アピゲニニジ
ン（ａｐｉｇｅｎｉｎｄｉｎ）、アウラチニジン（ａｕｒａｔｉｎｉｄｉｎ）、カペンシ
ニジン、ユーロピニジン、ヒルスチジン、６−ヒドロキシシアニジン、ルテオリニジン、
５−メチルシアニジン、プルチェリジン（ｐｕｌｃｈｅｌｌｉｄｉｎ）、ロシニジン、ト
リセトニジン（ｔｒｉｃｅｔｎｉｄｉｎ）、それらの誘導体および混合物からなる群から
選択される１つまたはそれ以上のアントシアニンおよび／またはアントシアニジンを含む
。１つの実施態様では、アントシアニンおよびアントシアニジンは、シアニジン、ペオニ
ジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジン、それらのグリコシド誘導体およびそれ
らの混合物からなる群から選択される。さらに別の実施態様では、抽出物は、少なくとも
１つのシアニジン塩基のアントシアニンを含む。
【００４６】
本明細書に記載される本発明において有用であり得るアントシアニンには、シアニジン
−３−グルコシド；シアニジン  ３−グルコシルルチノシド；シアニジン−３−ゲンチビ
オシド；シアニジン−３−ルチノシド、シアニジン−３−サンブニグリン、シアニジン−
３−サンブ−５−グルコシド、シアニジン−３−ガラクトシド、ペオニジン−３−ルチノ
シド、ペオニジン−３−グルコシド、ペオニジン−３−ガラクトシド、ペオニジン、シア
ニジン、シアニジン−３ソフォロシド、ペラルゴニジン、デルフィニジン、デルフィニジ
ン−３−グルコシド、デルフィニジン−３−ガラクトシド、ペツニジン、ペツニジン−３
−グルコシド、ペツニジン−３−ガラクトシド、マルビジン、マルビジン−３−アラビノ
シド、マルビジン−３−グルコシド、マルビジン−３−ガラクトシド、ケンフェロール、
ヘスペリジン、ゲンチオデルフィン、プラチコニン、シネラリンなどが挙げられるが、こ
れらに限定されない：。
【００４７】
種々の植物由来のアントシアニンの適切な例には、以下のものが挙げられるが、これら
に限定されない：ヒロハカエデ（Ａｃｅｒ  ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌｉｕｍ）、シアニジン
誘導体、ノルウエーカエデ（Ａｃｅｒ  ｐｌａｔａｎｏｉｄｅｓ）、シアニジン  ３−（
２”，３”−ジガロイル−β−グルコピラノース（３％）、シアニジン  ３−（２”−ガ
ロイル−β−グルコピラノース（３７％）、シアニジン  ３−β−グルコピラノシド（６
０％）、アセロラ、Ｍａｌｐｉｇｈｉａ  ｍａｒｇｉｎａｔａ、シアニジン−３−グルコ
シド、シアニジン−３−グルコシド、セイヨウジュウニヒトエ、シアニジン  ３−（ジ−
ｐ−クマロイル）ソフォロシド−５−グルコシド、リンゴ、Ｍａｌｕｓ  ｓｐｐ、シアニ
ジン  ３−ガラクトシド、シアニジン  ３−ガラクトシド、シアニジン  ３−アラビノシ
ド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３アラビノシド、シアニジン  ３−キシ
ロシド、シアニジン  ３グルコシド、シアニジン  ３−キシロシド、アンズ、Ｐｒｕｎｕ
ｓ  ａｒｍｅｎｉａｃａ、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３グルコシド、チ
シマイチゴ、Ｒｅｂｕｓ  ｓｐｐ、アボカド、Ｐｅｒｓｅａ  ｓｐｐ、アシル化シアニジ
ン  ３，５−ジグルコシド、シアニジン  ３−ガラクトシド、シアニジン  ３−ガラクト
シド、バナナ、Ｍｕｓａ  ａｃｕｍｉｎａｔａ、Ｍ．ｂａｌｂｉｓｉａｎａ、イチジク、
Ｂｅｒｂｅｒｉｓ  ｓｐｐ．、シアニジン−グルコシド、シアニジン−グルコシド、オオ
ムギ、Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ、シアニジンおよびシアン化物グリコシド、マメ
、インゲンマメ（Ｐｈｅｓｅｏｌｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）（いくつかの栽培品種）、シ
アニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３，５−ジグル
コシド、Ｂｅｇｏｎｉａ  ｓｅｍｐｅｒｆｌｏｒｅｎｓ  ｃｖｓ、シアニジン誘導体、ベ
ニバナチャ、Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、シアニジン  ３−Ｏ−β−Ｄ  ガラ
クトシド、シアニジン  ３−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトシド、ヒナギク（Ｂｅｌｌｉｓ  ｐｅ
ｒｅｎｎｉｓ）、３  シアニジン  ３−誘導体、Ｂｌｅｔｉｌｌａ  ｓｔｒｉａｔａ、ア
シル化シアニジン  ３，７，３’−トリグルコシド誘導体、ビルベリー、Ｖａｃｃｉｎｉ
ｕｍ  ｍｙｒｔｉｌｌｉｓ、Ａｒｔｅｍｉｓ／Ｉｐｒｏｎａ；Ｉｎｄｅｎａ、シアニジン
−３−ガラクトシド（２２％）；シアニジン−３−ガラクトシド、シアニジン−３−グル
コシド（９％）、シアニジン−３グルコシド、クロマメ、インゲンマメ、シアニジン−３
−グルコシド（９６％）、シアニジン−３グルコシド、ブラックベリー（ヨーロッパ産お
よびアメリカ産）、Ｍｏｒｉｆｅｒｉ  ｖｅｒｉ、Ｒｕｂｕｓ  ｃａｅｓｉｕｓ、Ｒ．Ａ
ｌｌｅｇｈｎｉｅｎｓｉｓ、Ｒ．ａｒｇｕｆｕｓ、Ｒ．ｃｕｎｅｉｆｏｌｉｕｓ、Ｒ．ｓ
ｅｔｏｓｕｓ、Ｒ．ｔｒｉｖｉａｌｓ、シアニジン−グルコシド（７０−１００％）、シ
アニジン−グルコシド、シアニジン−ルチノシド、ブラックグレープ、多種多様、ブラッ
クポテト、Ｓｏｌａｎｕｍｔｕｂｅｒｏｓｕｍ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ、シアニジン−グリ
コシド、ブラックラズベリー、Ｒｕｂｕｓ  ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ、シアニジン−サ
ンブビオシド（ｓａｍｂｕｂｌｏｓｉｄｅ）（２０％）；シアニジン−サンブビオシド（
ｓａｍｂｕｂｌｏｓｉｄｅ）、シアニジン−キシロシルルチノシド（４０％）；シアニジ
ン−グルコシド、シアニジン−グルコシド、（１７％）、シアニジン−ルチノシド（２３
％）、クロダイズ、ダイズ、シアニジン−３−グルコシド（９６％）、シアニジン−３−
グルコシド、ブルーベリー（５つの共通のＶａｃｃｉｎｉｕｍ  ｓｐｐ）、シアニジン−
グルコシド（３％）；シアニジン−グルコシド、シアニジン−ガラクトシド（３％）、シ
アニジンガラクトシド、シアニジン−アラビノシド（３％）、シアニジン−３−アラビノ
シド、クロマメノキ、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｕｌｉｇｉｎｏｓｕｍ、シアニジン−３−グ
ルコシド（１４％）、シアニジン  ３  グルコシド（１４％）、シアニジン＃アラビノシ
ド（１０％）、シアニジン−３−アラビノシド（１０％）、シアニジン  ３−ガラクトシ
ド（６．５％）、シアニジン−３−ガラクトシド（６．５％）、ボイセンベリー（ニュー
ジーランド）、シアニジン−３−ソフォロシド（４４．５％）、シアニジン−３−グルコ
シド、シアニジン−３−グルコシド（２６．４％）、シアニジン−３  グリコシルルチノ
シド（２５．８％）、シアニジン−ルチノシド（３．３％）、ソバ、Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ
ｓｐｐ．、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン  
３−ガラクトシド、シアニジン−３−ガラクトシド、カカオ、Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ  ｃａ
ｃａｏ、シアニジン  ３−グルコシド（疑い）、シアニジン−３−グルコシド（疑い）、
セロリ、Ａｐｉｕｍ  ｓｐｐ．、セイヨウバクチノキ、Ｐｒｕｎｕｓ  ｌａｕｒｏｃｅｒ
ａｓｕｓ、シアニジン−３−アラビノシド、シアニジン−３−アラビノシド、チコリー、
Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ  ｉｎｔｙｂｕｓ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−
グルコシド、チャイブ、Ａｌｌｉｕｍ  ｓｃｈｏｅｎｏｐｒａｓｕｍ、シアニジン−３−
グルコシド、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−アセチルグルコシド、シア
ニジン  ３−（６マロニルグルコシド）、シアニジン  ３−（３，６ジマロニルグルコシ
ド）、チョークベリー、Ａｒｏｎｉａ  ｍｅｌａｎｏｃａｒｐａ、Ａｒｔｅｍｉｓ／ｌｐ
ｒｏｎａ、シアニジン−３−ガラクトシド（６４．５％）、シアニジン−３−ガラクトシ
ド、シアニジン−３−アラビノシド（２８．９％）、シアニジン−３  アラビノシド、シ
アニジン−３−グルコシド（２．４％）、シアニジン−３  グルコシド、シアニジン−３
−キシロシド（４．２％）、シアニジン−３−キシロシド、コーヒー、Ｃｏｆｆｅａ  Ａ
ｒａｂｉｃａ  ｃｖ．Ｂｏｕｒｂｏｎ  Ｖｅｒｍｅｌｈｏ、シアナジン−３−グリコシド
、シアナジン  ３，５−ｄｉｇｌｙｅｏｓｉｄｅ、シアナジン  ３−グリコシド、コトネ
アスター、Ｃｏｔｏｎｅａｓｔｅｒ  Ｍｅｄｉｃ．Ｓｐｐ、シアニジン  ３−グルコシド
、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−ガラクトシド、シアニジン  ３−ルチ
ノシド、シアニジン  ３  ガラクトシド、カウベリーまたはリンゴンベリー、Ｖ．ｖｉｔ
ｉｓ−ｉｄａｅａ、シアニジン  ３−ガラクトシド  シアニジン  ３−アラビノシド、シ
アニジン  ３−ガラクトシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３  アラビノ
シド、シアニジン  ３  グルコシド、Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ  ｐｒａｅｃｏｘ、シア
ニジン  ３−Ｏ−グルコシド、シアニジン−３−Ｏ−グルコシド、アシル化シアニジン  
３−０−グルコシド、シアニジングリコシド、クランベリー（アメリカ産およびヨーロッ
パ産）、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｍａｃｒｏｃｏｒｐｏｎ、Ｏｃｅａｎ  Ｓｐｒａｙ、シア
ニジン−ガラクトシド（１６〜２４％）、シアニジン−ガラクトシド、Ｖ．ｏｘｙｃｏｃ
ｃｕｓ、シアニジン−アラビノシド（１３〜２５％）、シアニジンアラビノシド、クロウ
ベリー（ＣｒＯｗｂｅｒｒｙ）、Ｅｍｐｅｔｒｕｍ  ｎｉｇｒｕｍ、シアニジン  ３−グ
ルコシド  シアニジン  ３，５−ジグルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジ
ン  ３−ルチノシド、シアニジン  ３−ソフォロシド、キク、Ｄｅｎｄｒａｎｔｈｅｍａ
Ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ、シアニジン  ３−オルト（６’−Ｏ−マロニル−β−グル
コピラノシド、カラント（レッドおよびブラック）、Ｒｉｂｅｓ  ｒｕｂｒｕｍ、Ｒ．ｎ
ｉｇｒｕｍ、シアニジン−グルコシド（２〜１０％）、シアニジン−グルコシド、シアニ
ジンサンブビオシド、シアニジン−ルチノシド（８〜１７％）、シアニジン−サンブビオ
シド（９−３１％）、シアニジン−ソフォロシド（４〜９％）、シアニジンキシロシルル
チノシド（２８−７３％）、シアニジングルコシルルチノシド（１４〜２８％）、Ｃｙｎ
ｅｉｎｏｎｕｒｎ  ｃｏｃｃｉｎｅｕｍ、シアニジン  ３−Ｏ−グルコシド（９２％）、
シアニジン  ３−Ｏ−グルコシド（９２％）、シアナジン  ３−オルト（６−Ｏ  ラムノ
シルグルコシド（８％）、セイヨウニワトコ、Ｓａｍｂｕｃｕｓ  ｅｂｕｌｕｓ、シアニ
ジン  ３−キシロシルグルコシド、シアニジン  ３−サンブビオシド、シアニジン  ３サ
ンブビオシド（ｓａｍｂｕｂｌｏｓｉｄｅ）、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン
３−サンブビオシド−５−グルコシド、シアニジン  ３，５  ジグルコシド、シアニジ
ン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−アラビノグルコシド、デンドロビューム、Ｐｈａ
ｌａｅｎａｐｓｉｓ  ｓｐｐ．、シアニジン誘導体、ゴゼンタチバナ、Ｃｏｍｕｓ  ｓｕ
ｅｃｉｃａ、シアニジン  ３−グルコシド（４％）、シアニジン  ３−グルコシド（４％
）、シアニジン  ３−ガラクトシド（１６％）、２シアニジン誘導体（８０％）、エキネ
シア、Ｅｃｈｉｎａｃｅａ  ｓｐｐ．、エルデンベリー（Ｅｌｄｅｎｂｅｒｒｙ）、Ｓａ
ｍｂｕｃｕｓ  ｎｉｇｒａ、Ａｒｔｅｍｉｓ／Ｉｐｒｏｎａ、シアニジン−３−グルコシ
ド（４２％）、シアニジン−３−グルコシド、シアニジン−３−サンブビオシド（４３％
）  シアニジン−３，５−ジグルコシド（２％）、シアニジン−３  サンブビオシド（ｓ
ａｍｂｕｂｌｏｓｉｄｅ）−５グルコシド（９％）、Ｇｅｎｔｉａｎｓ  ｓｐｐ．、シア
ニジン  ３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドおよび３つの他の誘導体、シアニジン  ３−Ｏ−β
−Ｄ−グルコシド、Ｆａｔｓｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ、シアニジン  ３−ラチロシド、フ
ェイジョア、Ｆｅｉｊｏａ  ｓｅｌｌｏｗｉａｎａ、シアニジン  ３−グルコシド、シア
ニジン  ３−グルコシド、イチジク、Ｆｉｃｕｓ  ｃａｒｉｃａ  ｓｐｐ、シアニジン  
３−ラムノグルコシド、シアニジン  ３，５−ジグルコシド、シアニジン  ３−グルコシ
ド、Ｆｏｒｓｙｔｈｉａ  Ｘ、ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ  ｃｖ、Ｓｐｒｉｎｇ  Ｇｌｏｒｙ
、シアニジン誘導体、ニンニク、Ａｌｌｉｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ、シアニジン  ３−グル
コシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−
グルコシド（モノアシル化）、シアニジン  ３−グルコシド（トリアシル化）、オタネニ
ンジン、Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ  ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ、シア
ニジン  ３−Ｏ−β−Ｄ−キシロピラニル−（１  ２）−β−Ｄ−グルコピラノシド、ア
ーティチョーク、Ｃｙｎａｒａ  ｓｃｏｌｙｍｕｓ、シアニジン  ３−カフェイルグルコ
シド、シアニジン  ３−カフェイルソフォロシド、シアニジン  ３−ジカフェイルソフォ
ロシド、スグリ、Ｒｉｂｅｓ  ｓｐｐ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−
グルコシド、シアニジン  ３−ルチノシド、ブドウ、Ｖｉｎｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ、シ
アニジン  ３−モノグルコシド、シアニジン  ３−モノグルコシド、シアニジン  ３−モ
ノグルコシド酢酸塩、シアニジン  ３−モノグルコシド−ｐ−クマラート、グアバ、Ｐｓ
ｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖｉｃａ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グル
コシド、サンザシ、Ｃｒａｔａｅｇｕｓ  ｓｐｐ、シアニジン  ３−ガラクトシド、シア
ニジン  ３−ガラクトシド、シアニジン  ３−アラビノシド、シアニジン  ３−グルコシ
ド、シアニジン  ３  グルコシド、ハイビスカスまたはローゼル、Ｈｉｂｉｓｃｕｓ  ｓ
ａｂｄａｒｉｆｆａ、シアニジン−サンブビオシド（３０％）、タチアオイ、Ａｌｔｈａ
ｅａ  ｒｏｓｅａ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−ルチノシド、シアニ
ジン  ３−グルコシド、他のシアニジングルコシド、スイカズラ、Ｌｏｎｉｃｅｒａ  ｎ
ｉｔｉｄａ、シアニジン  ３−ルチノシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  
３−グルコシド、ハナショウブ、Ｉｒｉｓ  ｅｎｓａｔａ、シアニジン  ３ＲＧ、シアニ
ジン  ３ＲＧ５Ｇ、シアニジン  ３Ｒｇａｃ５Ｇ、アサガオ、Ｉｐｏｒｎｏｅａ  ｐｕｒ
ｐｕｒｅａ、６つのアシル化シアニジン  ３−ソフォロシド−５  グルコシド、ジャンボ
ラン、
Ｍｙｔｃｉａｎａ  ｊａｂｏｔｉｃａｂａ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、キクイモ、Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｓ、インドマ
ンゴスチン、Ｇａｒｃｉｎｉａ  ｉｎｄｉｃａ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジ
ン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−サンブビオシド、シアニジン  ３−サンブビオシ
ド、レリオカトレア、アシル化シアン化物誘導体、レンズマメ、シアニジン  ３−オルト
（６”−マロニルグルコシド）、ローガンベリー、Ｒｕｂｕｓ  ｌｏｇａｎｂａｃｃｕｓ
、シアニジン−ソフォロシド（４８．１  ％）、シアニジングルコシド、シアニジン−グ
ルコシド（２１．６％）、シアニジン−ルチノシド（６．２％）、ルーピン、Ｌｕｐｉｎ
ｕｓ  ｓｐｐ、シアニジングリコシド（存在を確認した）、ライチ、Ｌｉｔｃｈｉ  ｃｈ
ｉｎｅｎｓｉｓ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジ
ン  ３−ガラクトシド、シアニジン  ３−ルチノシド、シアニジン  ３  ガラクトシド、
トウモロコシ、Ｚｅａ  ｍａｙｓ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グル
コシド、シアニジン  ３−（６”−マロニルグルコシド）  シアニジン  ３（３”，６”
ジマロニル−グルコシド）マンゴー、Ｍａｎｇｉｆｅｒａ  ｉｎｄｉｃａ（シアニジング
リコシド、マンゴスチン、Ｇａｒｃｉｎａ  ｍａｎｇｏｓｔａｎａ、シアニジン  ３−ソ
フォロシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、マクイ、Ａｒ
ｉｓｔｏｔｅｌｌａ  ｃｈｉｌｅｎｓｉｓ、シアニジン  ３−，５−ジグルコシド、アラ
セイトウ、４つのアシル化シアニジン  ３−サンブビオシド（ｓａｍｂｕｂｌｏｓｉｄｅ
）−５  グルコシド、アワ、Ｐｅｒｎｎｉｓｅｔｕｍ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｍ、シアニジ
ン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、ナナカマドベリー、Ｓｏｒｂｕｓ  
ｓｐｐ、シアニジン  ３−ガラクトシド、シアニジン  ３，５−ジグルコシド  シアニジ
ン  ３−β−Ｄグルコピラノシド、マルベリ、Ｍｏｒｕｓ  ｎｉｇｒａ、シアニジン  ３
−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３，５−ジグルコシド、シア
ニジン  ３−ルチノシド、シアニジン  ３−ソフォロシド、マートルベリー、Ｍｙｒｔｕ
ｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、シ
アニジン  ３−ジグルコシド、オリーブ、Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａｅａ、シアニジン  ３
−ルチノシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン
誘導体、タマネギ、Ａｌｌｉｕｍ  ｓｅｐａ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン
３−グルコシド、シアニジン  ３−ジグルコシド、シアニジン  ３−ラミナリオシド（
ｌａｍｉｎａｒｉｏｓｉｄｅ）、オレンジ、Ｃｉｔｒｕｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、シアニジ
ン  ３−グルコシド（９５％）、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３，５−ジ
グルコシド、パッションフルーツ、Ｐａｓｉｆｌｏｒａ  ｅｄｕｌｉｓ、シアニジン  ３
−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、エンドウマメ、Ｐｏｓｕｍ  ｓａｔｉｖｕ
ｒｎ、シアニジン  ３−ソフォロシド  グルコシド、シアニジン  ３−サンブビオシド−
５−グルコシド、モモ、Ｐｒｕｎｕｓ  ｐｅｒｓｉｃａ、シアニジン  ３−グルコシド、
シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−ルチノシド、シアニジン誘導体、ピーナ
ッツ、Ａｒａｃｈｉｓ  ｈｙｐｏｇａｅａ、シアニジングルコシド、ナシ、Ｐｙｒｕｓ  
ｃｏｍｍｕｎｉｓ、シアニジン  ３−ガラクトシド、シアニジン  ３−ガラクトシド、シ
アニジン  ３−アラビノシド、シアニジン  ３−アラビノシド、エゴマ、Ｐｅｒｉｌｌａ
ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ、シアニジン  ３，５−ジグルコシド、シアニジン  ３，５−誘
導体、Ｐｅｔｕｎｉａ  ｓｐｐ．、シアニジン  ３−ルチノシド、ウオトリギ、Ｇｒｅｗ
ｉａ  ｓｐｐ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、パイナップ
ル、Ａｎａｎｓ  ｃｏｍｏｓｕｓ、シアニジン  ３−ガラクトシド、シアニジン  ３−ガ
ラクトシド、ピスタチオ、Ｐｉｓｔａｃｉａ  ｖｅｒａ、Ｐｒａｇｍｉｔｅｓ  ａｕｓｔ
ｒａｌｉｓ、シアニジン−３誘導体、セイヨウスモモ、２０００品種、１５種、シアニジ
ン−グルコシド（３７％）、シアニジングルコシド、シアニジン−ルチノシド（４５％）
、ザクロ、Ｐｕｎｉｃａ  ｇｒａｎａｔａｍ、シアニジン−グルコシド（３０％）、シア
ニジン−グルコシド、シアニジン−ジグルコシド（１７％）、パープルキャロット、Ｄａ
ｕｃｕｓ  ｃａｒｏｔａ、シアニジン−グルコシド、シアニジン−グルコシド、シアニジ
ン−グルコシルガラクトシド、シアニジン−ガラクトシド、シアニジン−ジガラクトシド
、シアニジン−ガラクトシド、マルメロ、Ｃｙｄｏｎｉａ  ｏｂｌｏｎｇａ、シアニジン
−３  グルコシド、シアニジン  ３，５−ジグルコシド、シアニジン誘導体、ダイコン、
Ｒａｐｈａｎｕｓ  ｓａｔｉｖｕｓ、アシル化シアニジン  ３−ソフォロシド−５−グル
コシド、アシル化シアニジン  ３  ジグルコシド−５−グルコシド、レッドキャベツ、Ｂ
ｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａ  ｖａｒ  ｃａｐｉｔａｔａ、シアニジングリコシド
、ヨシ、Ｐｈａｌａｒｉｓ  ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ、シアニジン  ３−グルコシド、シ
アニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−（６’’−，マロニルグルコシド）、シア
ニジン  ３（３’’，６’’ジマロニル−グルコシド）、レッドオニオン、Ａｌｌｉｕｍ
ｃｅｐａ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、アシル化シア
ニジン  ３−グルコシド誘導体、レッドペチュニア、Ｐｅｔｕｎｉａ  ｓｐｐ、シアニジ
ン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−ソフォロシド、レ
ッドラズベリー、Ｒｕｂｕｓ  ｉｄａｅｕｓ、シアニジングルコシド（１７％）、シアニ
ジン−グルコシド、シアニジン−ルチノシド（７％）、シアニジン−ソフォロシド（５０
％）、シアニジングリコシルルチノシド（２６％）、シアニジン−ジグルコシド、ダイオ
ウ、Ｒｎｅｕｍ  ｓｐｐ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、
シアニジン  ３−ルチノシド、コメ、Ｏｒｙｚａ  ｓｐｐ、シアニジン  ３−グルコシド
、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−ラムノシド、シアニジン  ３，５−ジ
グルコシド、ローズヒップ、Ｒｏｓａ  ｃａｎｉｎａ、シアニジン  ３−ルチノシド、シ
アニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３，５−ジグル
コシド、ライムギ、Ｓｅｃａｒｅ  ｃｅｒｅａｌｅ、シアニジン  ３−グルコシド、シア
ニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−ラムノシルグルコシド、シアニジン  ３−ラ
ムノシルジグルコシド、シアニジン  ３−ルチノシド、シアニジン  ３−ルチノシド誘導
体、シアニジン  ３−ゲンチオビオシド、シープベリー、Ｖｉｂｕｍｕｍ  ｓｐｐ、シア
ニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−アラビノシル
サンブビオシド、モロコシ、Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｂｉｃｏｌｏｒ、シアニジン、シアニジン
グリコシド、スパークルベリー、Ｖ  ａｒｂｏｒｅｕｍ、シアニジン  ３−グルコシド、
シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−アラビノシド、シアニジン  ３−ガラク
トシド、イチゴ、Ｆｒａｇａｃｉａ  ａｎａｎａｓｓａ、シアニジン−グルコシド（微量
）、シアニジン−グルコシド、ヒマワリ、Ｈｅｌｌａｎｔｈｕｓ  ａｎｎｕｕｓ、シアニ
ジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、アシル化シアニジン  ３−グルコ
シド、シアニジン  ３−キシロシド、シアニジン  ３−キシロシド、アシル化シアニジン
３−キシロシド、シアニジン  ３−バニリル  サンブビオシド、スイートチェリー、Ｐ
ｒｕｎｕｓ  ａｖｉｎｔｎ、シアニジン−グルコシド、シアニジン−グルコシド、シアニ
ジン−ルチノシド；シアニジン  ３−スホロシド、サツマイモ、Ｉｐｏｒｎｏｅａ  ｂａ
ｔａｔａｓ  Ｓｏｐｈｒｏｎｉｔｉｓ  ｃｏｃｃｉｎｅａ、シアニジン誘導体、５つのア
シル化シアニジン  ３，３’，７−トリグルコシド、タマリロまたはツリートマト、Ｃｙ
ｐｈｏｍａｎｄｒｅａ  ｂｅｔａｃｅａ、シアニジン  ３−ルチノシド、シアニジン  ３
−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、タマリンド、Ｔａｍａｒｉｎｄｕｓ  ｉｎ
ｄｉｃａ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、タロイモ、Ｃｏ
ｌｏｃａｓｉａ  ｅｓｕｃｕｌｅｎｔａ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３
−グルコシド、シアニジン  ３−ルチノシド、タルトチェリー（ｂａｌａｔｏｎ）、Ｐｒ
ｕｎｕｓ  ｃｅｒａｓｕｓ  ｃｖ．、Ｂａｌａｔｏｎ，Ｎｕｔｒｉｌｉｔｅ、シアニジン
−３−ルチノシド−ヘキソース（７５％）、シアニジン−３−ルチノシド−ペントース（
３％）、シアニジン−３−ルチノシド（１８％）、タルトチェリー（ｍｏｎｔｍｏｒｅｎ
ｃｙ）、Ｐｒｕｎｕｓ  ｃｅｒａｓｕｓ  ｃｖ．（Ｍｏｎｔｍｏｒｅｎｃｙ，Ｎｕｔｒｉ
ｌｉｔｅ）、シアニジン−３−ソフォロシド（８０％）、シアニジン−３−グルコシド（
２０％）、シアニジン−３−グルコシド（２０％）、チューリップ、Ｔｕｌｉｐａ  ｓｐ
ｐ、シアニジン  ３−Ｏ−（６”−ラムノシルグルコシド）、シアニジン  ３−Ｏ−誘導
体、カブ、ｂｒｉｓｓｉｃａ  ｒａｐａ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３
−グルコシド、シアニジン  ３−ジグルコシド−５−グルコシド、スイレン、Ｎｙｍｐｈ
ａｓａ  ａｌｂａ、シアニジン  ３−０−（６’’アセチル−β−ガラクトピロシナーゼ
（２３％）、シアニジン  ３−０−ガラクトシド（２％）、シアニジン  ３−Ｏ−ガラク
トシド（２％）、Ｗｅｉｇｅｌａ  ｓｐｐ．、シアニジン  ３−Ｏ−グルコシド、シアニ
ジン  ３−Ｏ−グルコシド、シアニジン  ３−Ｏ−グルコシドキシロース、コムギ、Ｔｒ
ｉｔｉｃｕｍ  ｓｐｐ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、ア
シル化シアニジングルコシド、シアニジン  ３−ルチノシド、アシル化シアニジン  ３−
ルチノシド、シアニジン  ３−ゲンチオビオシド、ワイルドライス、Ｚｉｚａｎｉａ  ａ
ｑｕａｔｉｃａ、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジ
ン  ３−ラムノグルコシド、およびヤムイモ、Ｄｉｏｓｃｏｒａｃｅａ  ｓｐｐ、シアニ
ジン  ３，５−ジグルコシド、シアニジン  ３−グルコシド、シアニジン  ３−グルコシ
ド、シアニジン  ３−ラムノグルコシド、シアニジン  ３−ゲンチオビオシド、アシル化
シアニジングルコシド。
【００４８】
本明細書中で用いられる用語「アントシアニン」は、単量体のアントシアニンだけでな
く、二量体および重合体（すなわち、３〜２０個のアントシアニジン単量体残基を含む）
型のアントシアニンおよびロイコアントシアニジン（フラバン−３，４−ジオールとして
も知られる）もまた意味することを意図する。アントシアニンは、置換（例えば、アルキ
ル基、アルコキシ基など）を含み、特に上記のようにＯ−グリコシル化され得る。
【００４９】
組成物中のアントシアニンは、単独のアントシアニンであり得るか、またはアントシア
ニンの混合物を含み得る。特に、アントシアニンは、マルビジン、シアニジン、デルフィ
ニジン、ペオニジン、ペラルゴニジンおよびペツニジン、ならびにそれらのグリコシドか
らなる群から選択される。代表的な例は、精製された形態で市販されている塩化マルビン
（マルビジンジグルコシド）である。あるいは、アントシアニンは、上記のブドウ、ブラ
ックキャロット、レッドキャベツ、ブラックベリー、ブラックカラント、クランベリーな
どのアントシアニン含有植物を抽出することにより得られ得る。
【００５０】
本明細書中で用いられる句「安定化されたアントシアニン組成物」は、グリコシド（ア
ントシアノシド）としてまたはアグリコン（アントシアニジン）としてのアントシアニン
が、例えば、約３７℃、ｐＨ＝約７．０で、少なくとも約３．５時間にわたって、アント
シアニンの最初の割合から少なくとも約５０％が未分解であることを意味する。同様に、
この句は、同様の安定性を有する約４、約５、約６および約８のｐＨ値を含む。
【００５１】
本明細書中で用いられる用語「安定化化合物」は、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する
化合物を包含することを意図する。理論によって限定されるべきではないが、チオール基
とアントシアニンとの間で相互作用が起こり、その結果、チオール含有基が（しばしば、
ジスルフィド−Ｓ−Ｓ−に）酸化され、かつ、アントシアニンが、後に遊離する水素原子
を受け取ると考えられる。
【００５２】
安定化化合物の適切な例には、酵母抽出物（例えば、ビール酵母）、ジヒドロリポ酸、
アミノ酸塩などのジヒドロリポ酸の塩、システイン、Ｎ−アセチルシステインなどのシス
テインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの塩、パパインなどのＳＨ−プロテイナー
ゼ、ブロメライン、フィチン、エヒモパパイン（ｅｈｙｍｏｐａｐａｉｎ）およびそれら
の混合物、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システイン含有ペプチド類、グルタチオン含有
ペプチド類、発酵カキ抽出物、発酵マメ凝乳、チオール化キトサン、チオール化ゼラチン
またはそれらの混合物が挙げられる。
【００５３】
１つの局面では、安定化化合物のアントシアニンに対するモル比は、約０．１〜約１０
であり、より詳細には約０．５〜約５、およびさらにより詳細には約１〜約１である。
【００５４】
理論により限定されるべきではないが、以下は、本発明に関する驚くべき独特の知見の
説明である。アントシアノシドは、無色の誘導体を形成することにより、ｐＨ移動を受け
やすい。フラビリウムカチオンおよびキノノイダル塩基は着色され、平衡は、ｐＨ依存性
［ｐＨ値＜２］の両方の種の存在によって通常影響されない。（スキーム１参照）この平
衡は、非常に急速に確立され、かつ、この反応は可逆的であると考えられる。適切な条件
下での水の「攻撃」は、一連の無色の誘導体（カルビノール塩基、カルコン）を生じる。
反応のこの部分は緩徐に進行し、通常は可逆的ではない。脱色プロセスは、約３．５を超
えるｐＨ値で開始する。分子の保護による水の攻撃の予防により、本明細書を通して記載
したアントシアノシドの安定化が提供される。
【００５５】
【化３】
2014040466.tif 000005
理論に基づけば、共色素沈着の公知の現象（「共色素」の存在下でアントシアノシドの
増加した安定性を記載する）により、深色（λｍａｘが、より高い波長に向かってシフト
する）効果および濃色（同じ濃度でのλｍａｘでの吸収が増加する）効果が得られる。従
って、チオール化合物が共色素として作用し得たかどうかの解明を行った。
【００５６】
理論に基づけば、アントシアノシドは、自己会合により、それらの安定性を増加するこ
とができる。濃度がより高くなると、自己会合の影響の可能性が高い。自己会合は、約０
．０００１モル溶液濃度を超える濃度で起こる。自己会合は、チオール化合物の保護効果
を隠蔽することを助け得るので、保護効果は多様な濃度で試験した。
【００５７】
理論に基づけば、共色素沈着は、深色性（λｍａｘが、より高い波長に向かってシフト
する）および濃色（同じ濃度でのλｍａｘでの吸収が増加する）効果をもたらすはずであ
る。
【００５８】
紫外分光法に基づく本調査により、図１および２に示すように、ＤＨＬＡ（ジヒドロリ
ポ酸）またはＧＳＨ（グルタチオン）のいずれも、深色または濃色効果を生じなかった。
従って、安定性の増加は、別のメカニズムに関連している可能性が最も高い。
【００５９】
異なるｐＨ値についての新たに溶解させたシアニジン−３−Ｏ−グルコシド（保護およ
び無保護）のλｍａｘシフトの観点からのスペクトル特性は、図１および２に示すように
、同一であった。
【００６０】
ビルベリー抽出物（種々の濃度、モル濃度をシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表
す）の安定性を、ＧＳＨまたはＤＨＬＡの存在／非存在下で、ｐＨ依存性のλｍａｘでの
吸収を紫外分光光度法により測定することにより調べた。
【００６１】
図３、４および５に示すように、本調査は、アントシアノシドが、全ての試験された濃
度において、ＧＳＨ（０．６５ｍｍｏｌ濃度）およびＤＨＬＡ（１．４４ｍｍｏｌ濃度）
による分解に対して、特に５〜６を超えるｐＨ値で保護されていることを示した。種々の
ｐＨ試験におけるλｍａｘは、未保護のおよび保護された溶液の間で異ならなかった。シ
アニジン−グルコシドでは濃色効果が起こらないことが観察されたので、チオール含有保
護剤の安定化された効果は、共色素沈着とは異なると考えられる。
【００６２】
０．０００１モル濃度（シアニジン−３−Ｏ−グルコシドと表す）でのビルベリー抽出
物の安定性を、ＵＶ分光法により、異なるｐＨ値で、経時的に、ＤＨＬＡ（１．４４ｍｍ
ｏｌ濃度溶液）の非存在／存在下で調べた。
【００６３】
図６Ａ〜６Ｄに示すこれらの実験は、ＤＨＬＡが、未保護のアントシアノシドが急速に
分解するｐＨ値（ｐＨ＞５〜６）でアントシアノシドを保護することを実証する。最も興
味深いことに、データを統計モデル（回帰分析）にフィッティングすると、未保護の分解
動態学は、直線回帰にフィットするが、一方、ＤＨＬＡ保護の分解動態学は、指数関数的
回帰分析にフィットする。このことは、経時的に構成される保護機構を示す。
【００６４】
ビルベリー抽出物から選択したアントシアノシド（０．４８ｍｍｏｌ濃度溶液）の分解
動態学を、ｐＨ＝７および２５℃で、ＧＳＨ（０．６５ｍｍｏｌ濃度溶液）の存在／非存
在下でインキュベーションした後、ＨＰＬＣにより経時的に調べた。
【００６５】
選択した時点にて、デルフィニジン−３−Ｏ−ガラクトシド（非常に分解しやすい）、
ペツリジン−３−Ｏ−ガラクトシド（中程度の感受性）およびシアニジン−３−Ｏ−ガラ
クトシド（やや安定）のピークエリアを、ＨＰＬＣによりチェックした（図７、８および
９を参照）。安定化特性を、グルタチオンの存在下で観察し、これらもまた指数関数的回
帰分析に良好にフィットした。従って、保護機構が共色素沈着とは異なり、保護効果が経
時的に構成される機構を含むと結論づけることは合理的である。
【００６６】
シアニジン−３−Ｏ−ガラクトシド（０．００１モル濃度溶液）を、ｐＨ＝  ３．１ま
たはｐＨ＝７．０で、それぞれ、ＤＨＬＡ（１．４４ミリモル濃度溶液）の存在／非存在
下で溶解した。反復のインキュベーションを、２５℃にて３日間、ＨＰＬＣにより行った
。
【００６７】
図１０に見られるように、ＤＨＬＡの効果は、驚くべきことに、長期持続性である。ｐ
Ｈ＝７．０にて２５℃で３日間後、約４７％のシアニジン−３−Ｏ−ガラクトシドがＤＨ
ＬＡの存在下で回収されたが、一方、未保護の試料は、ほぼ０％のシアニジン−３−Ｏ−
ガラクトシドを生じた。ｐＨ＝３．１についての比較値は、それぞれ９５％および６１％
であった。
【００６８】
ビルベリー抽出物由来のアントシアノシド（０．４８ｍｍｏｌ濃度溶液）の分解動態学
を、保護ＤＨＬＡ（図１１）（１．４４ｍｍｏｌ濃度溶液）およびグルタチオン（０．６
５ｍｍｏｌ濃度溶液）の存在／非存在下で、ＨＰＬＣ（図１２）により調査した。
【００６９】
評価の焦点は、基本的なアントシアニジン骨格が、ある程度保護効果に関与しているの
かどうかであった。得られた結果を見ると、チオール化合物の保護効果が、未保護の分解
の受けやすさと逆に相関していたことは妥当であると思われた。アントシアニジン骨格が
感受性であるほど、ＧＳＨまたはＤＨＬＡの保護効果はより良好であった。ＧＳＨについ
てのやや良好な明白な効果が観察された。
【００７０】
ビルベリー抽出物中に存在するアントシアニジンの置換パターンを、以下の表に示す：
【００７１】
【表２】
2014040466.tif 000006
上記表に示すように、（ａ）分解のおよび（ｂ）保護機構についての構造が関係する効
果の証拠が存在する。第１に、アントシアニンに関する置換の数が特定の役割を担い、第
２に、同じ数の置換の数の範囲内で、メトキシ基の存在が安定性に影響する。
【００７２】
最も感受性が高いアントシアニジンは、３個のヒドロキシル基をＢ−環に有するデルフ
ィニジンである。最も安定なのはペオニジンであり、１個のヒドロキシル基および１個の
メトキシ基（シアニジンにおけるような２個のヒドロキシル基よりも優れる）を有する。
【００７３】
提案された新しく発見された機構は、ｐＨ＝７．０においてフラビリウムカチオンの安
定化に関係があると考えられている。試験された全ての化合物は、確かに、カルボン酸基
およびフリーのチオール基を有する。
【００７４】
システインは、アントシアノシドとの２つの結合点を有する。第１に、チオール部分（
おそらく、アントシアニジンと４位で、または糖部分とさえも強固に会合する）の強い相
互作用が存在し、第２に、カルボン酸官能基が、陽イオン部分を保護する。
【００７５】
【化４】
2014040466.tif 000007
同様の機構は、ＤＨＬＡについても提案されている。チオール基の存在は、ＤＨＬＡを
アントシアニジンに結合させ、その結果、カルボン酸官能基が分子の保護を補助し得ると
考えられる。おそらく、ＤＨＬＡのシステインと比べて増加した効果は、システイン中に
見出される単一のチオールと比較して２つのチオール基の「会合」より安定に割り当てら
れ得るであろう。
【００７６】
【化５】
2014040466.tif 000008
同様に、還元型グルタチオンとの反応を描くことが可能である。この場合、１つの代わ
りに２つのカルボン酸官能基により、優れた活性が得られる。
【００７７】
【化６】
2014040466.tif 000009
この機構は、ラジカルスカベンジャーとして作用するが、フラビリウムカチオンの反応
カスケードに関連すると考えられる。
【００７８】
試験された２Ｒ−ＳＨ／Ｒ−ＳＳ−Ｒ化合物の酸化還元電位は、アントシアノシドのそ
れより低い。例えば、２ＧＳＨ／ＧＳＳＧ＝約−０．２２  Ｖであるが、酸化還元電位Ａ
−ＯＨ／Ａ＝Ｏ  ＝約０．２０−０．７５Ｖである（以下を参照）。
【００７９】
アントシアノシドのラジカル除去特性は、以下の反応により説明され得る：
【００８０】
【化７】
2014040466.tif 000010
キノン構造は４’置換を必要とするので、これらの（セミ）キニンの安定性は、置換パ
ターンに関連すると考えられる。一旦キノンが形成されると、反応のフラビリウム構造へ
の逆転は、より可能性が低い。一方、５’位の任意の置換は、セミキノンの形成を妨害す
る。
【００８１】
このことは、３’−ＯＨおよび４’メトキシ置換構造が最も安定である理由を説明し得
る。これは、無色の生成物を形成する、水に攻撃され得ないセミキノンを形成する。この
ようなセミキノンは、フラビリウムカチオンにより容易に再転換し得るか、または容易に
再転換し得ない。
【００８２】
アントシアニジン／アントシアノシド（Ａ−ＯＨ）は、以下の反応により、セミキノン
／キノン（Ａ＝Ｏ）に転換する：
Ａ−ＯＨ−＞Ａ＝Ｏ＋Ｈ＋＋ｅ−
Ｒ−ＳＨ化合物は、以下の反応を受ける：
全プロセス：２ＲＳＨ−＞Ｒ−ＳＳ−Ｒ＋２Ｈ＋＋２ｅ−
詳細には：Ｒ−ＳＨ−＞Ｒ−Ｓ−＋Ｈ＋−＞Ｒ−Ｓ°＋ｅ−＋Ｈ＋
２Ｒ−Ｓ°−＞Ｒ−ＳＳ−Ｒ（Ｒ−Ｓ°・・・ラジカル）
このような機構は、２分子のアントシアノシドが２分子のＲ−ＳＨから１分子のＲ−Ｓ
Ｓ−Ｒを形成し得、かつセミキノンとして残される様式で、１：１の消費を示すであろう
。あるいは、１つのアントシアノシド分子は、キノンに転換されることにより、１つのＲ
−ＳＳ−Ｒを形成し得る。
【００８３】
代わりの反応が起こらない場合、以下の反応カスケードが合理的である：
中性ｐＨでのＲ−ＳＨおよびアントシアノシドの組み合わせにおいて、主にＲ−ＳＨが
Ｒ−Ｓ°に転換する。
【００８４】
Ｒ−Ｓ°の部分が、アントシアノシド（Ａ−ＯＨ）（これらは、それによってＡ＝Ｏセ
ミキノンに転換する）によって除去される場合、再びＲ−ＳＨを生じる。
【００８５】
ｐＨ＝７では、Ａ＝ＯはＲ−ＳＨの消費によりＡ−ＯＨに再転換され、次いで、公知の
ように最終的に次第に分解する。
【００８６】
安定化化合物の適切な例には、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、アミノ酸塩などのジヒド
ロリポ酸の塩、システイン、Ｎ−アセチルシステインなどのシステインの誘導体、グルタ
チオン、グルタチオンの塩、パパインなどのＳＨ−プロテイナーゼ、ブロメライン、フィ
チン、エヒモパパインおよびそれらの混合物、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システイン
含有ペプチド類、グルタチオン含有ペプチド類、発酵カキ抽出物、発酵マメ凝乳、チオー
ル化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物が挙げられる。
【００８７】
１つの局面では、安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比は、約０．１〜
約１０であり、より詳細には約０．５〜約５、およびさらにより詳細には約１〜約１であ
る。
【００８８】
別の局面では、安定化されたアントシアニン抽出物組成物は、約２、約３、約４、約５
などから約１４まで、例えば、７以上のｐＨを有する水性環境に曝露した場合に、分解に
対して安定である。
【００８９】
さらに他の局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、アントシアノシドである
。
【００９０】
なおさらに他の局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、アントシアニジンで
ある。
【００９１】
本発明のさらに他の局面では、安定化されたアントシアニン抽出物は、ペラルゴニジン
、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペツニジン、デルフィニジンのグリコシダーゼ
（ｇｌｙｃｏｓｉｄｓｅ）である１つまたはそれ以上のアントシアノシドを含む。
【００９２】
本発明はまた、本明細書に記載の安定化されたアントシアニン組成物を製造する方法に
関する。
【００９３】
本発明は、安定化化合物が、抽出および／または製造プロセスの間にアントシアニン含
有植物物質と混合されて、それにより、一般に加工の際および貯蔵の際にさえも起こるア
ントシアニンの酸化的破壊を減少または除去し得ることを提供する。例えば、米国特許出
願公開第２００２／００１８８２１号、（Ｃｈｒｙｓｔｅｌｅ  Ｓｏｕｌｉｅｒら、２０
０２年２月１４日公開、その内容はその全体が本明細書に参考として援用される）に開示
された抽出プロセスの間に、１つまたはそれ以上の安定化化合物を本明細書に記載の比で
抽出媒体（溶媒）に加え得る。
【００９４】
代表的には、アントシアニン抽出物を安定化化合物と直接的に混合する。これは、２つ
の物質を、固体として単純に混合する、粉砕する、併用することなどにより、または水な
どの溶媒中に溶解することにより、達成され得る。本明細書の以下に記載の担体、ビタミ
ン、抗酸化剤などの追加の添加剤を、定法により混合物に加えることができる。
【００９５】
１つの実施態様では、アントシアノシドを含む赤色果実抽出物を水溶液に入れ、必要に
応じて、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理する。水抽出物を、それが１５℃未
満の均一な温度に到達するまで冷却する。水抽出物を濾過し、必要に応じて、本明細書に
記載の−ＳＨ安定化化合物で処理し、得られた濾過物を回収し、マクロ架橋ポリマー樹脂
上に装填する。次いで、樹脂を鉱質除去水ですすぎ、必要に応じて、本明細書に記載の−
ＳＨ安定化化合物で処理し、次いで、得られた樹脂をアルコール溶出溶液で溶出させ、こ
れは必要に応じて、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理され得る。得られた溶出
物を濃縮し、必要に応じて、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理し、次いで乾燥
する。
【００９６】
別の実施態様では、安定化のプロセスを、以下のプロセスに従って、アルコール性赤色
果実抽出物で行う。まず、パルプを全赤色果実から分離し、パルプを、必要に応じて本明
細書に記載の−ＳＨ安定化化合物を含み得るアルコール抽出溶液と接触させる。固相を液
相から分離し、次いで、液相を必要に応じて本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物で処理
する。液相に含まれる残留アルコールの大部分を、減圧下で蒸発させて、アルコール性濃
縮物を得る。
【００９７】
有利には、アルコール抽出に用いられる溶媒は、メタノール、エタノール、ブタノール
およびアセトンを含む群から選択される。
【００９８】
実際には、アルコール抽出は、室温で、それぞれ２０分で完結する少なくとも２つの連
続的な工程で行われる。次いで、溶媒を留去する。さらに、パルプ単独からだけではなく
、全果実からのアントシアノシドの抽出を行うことが可能である。
【００９９】
本発明によれば、安定化の工程は、それぞれ液体または粉末の形態で提供される、市販
のまたは予め精製されたアントシアノシド抽出物である果実の抽出物を用いて開始するこ
とにより行うことができる。この場合、果実の抽出物または予め精製された抽出物を、次
いで、精製工程の前に、アルコール、特にメタノール、または水のいずれかを用いて取り
出し、本明細書に記載の−ＳＨ安定化化合物を用いて処理し得る。
【０１００】
本発明の精製の工程において、赤色果実抽出物の冷却は、抽出物の温度が均一かつ１０
℃未満、特に５℃未満になるまで、温度を少なくとも約１２時間維持しながら、有利に行
う。
【０１０１】
水性抽出物またはアルコール抽出物の濾過の工程に関して、これは、セルロースフィル
タまたはステンレス鋼ガーゼ上で、０〜１００μｍまたは等価のカットオフで行われ得る
。
【０１０２】
最終抽出物中の安定化されたアントシアノシドの力価および濃度をさらに増加させるた
め、樹脂から安定化されたアントシアノシドを溶出するアルコール溶液は、エタノール濃
度が１０〜９０％、有利には４０％付近であるエタノール水溶液である。
【０１０３】
得られた安定化された溶出液を、３０℃の領域で、制御された温度で濃縮し、次いで、
安定化された粉末を得るため、凍結乾燥または噴霧乾燥する。
【０１０４】
１つの実施態様では、例えば、ビルベリー抽出物の濃縮物およびＬ−システイン塩酸塩
を併用し（９：１、ｗ／ｗ）、噴霧乾燥して、安定化されたビルベリー抽出物を粉末とし
て得る。通常、ビルベリー抽出物のフリーのシステインに対する比は、約１０：１（ｗ／
ｗ）である。
【０１０５】
本発明はさらに、治療上有効量の本明細書に記載の安定化されたアントシアニン組成物
を投与することにより、種々の病気を治療する方法に関する。病気には、増加した抗酸化
能の必要性、関節硬化、疼痛の減少、炎症が挙げられる。疼痛の減少または除去には、関
節炎、月経困難症、頭痛、関節痛、筋肉痛、骨関節炎、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、白内障
、網膜症、およびそれらの組み合わせなどの種々の形態の疼痛が挙げられる。
【０１０６】
従って、本発明はさらに、本明細書中で述べる種々の苦痛を治療するのに有用な、生物
が利用可能な安定化されたアントシアニン組成物を提供する。安定化されたアントシアニ
ン組成物は、以下で考察するいくつかの方法により投与され得る。
【０１０７】
驚くべきことに、本発明は、システインのアントシアニン組成物（アントシアニジンま
たはアントシアノシドのいずれかである）との併用が、アントシアニンのそれを必要とす
る対象への送達を、システインの非存在下でアントシアニン組成物を経口摂取した対象に
対して少なくとも２倍量に増加させる助けとなることを提供する。驚くべきことに、アン
トシアニンがシステインの存在下で送達される場合、アントシアニンの血漿濃度が、投与
の４時間後に、システインの非存在下で送達されたアントシアニンの血漿濃度の少なくと
も２倍量であることが見出された。従って、本発明は、対象に有効量のアントシアニンお
よびシステインを投与することにより、対象における生物が利用可能なアントシアニンの
量を増加させる方法を提供する。投与はいかなる手段によっても可能であるが、経口送達
が一般に好ましい。
【０１０８】
１つの実施態様では、アントシアニンのシステインに対する比は、重量基準で約１０〜
約０．１、より詳細には約１０〜約０．５、そしてさらにより詳細には約１０〜約１であ
る。本明細書中に記載の実施例で述べたように、システインを用いない場合、アントシア
ニンの生物学的利用能が劇的に減少することに留意することが重要である。
【０１０９】
システインの存在下でのアントシアニンの生物学的利用能の増加は、一般に、アントシ
アニンを単独で投与した後の生物学的利用能の少なくとも２倍である。理想的には、生物
学的利用能は、生物学的利用能がシステインを配合しない同等のアントシアニンの３、４
、５、１０および２０倍に増加するようにシステインを配合することにより、増加させら
れる。このことは驚くべき知見である。
【０１１０】
本発明の組成物は、種々の食物、飲料、スナックなどに配合され得る。１つの局面では
、組成物は、消費の前に、食品の上に振り掛けられ得る。食品の上に振り掛けられる場合
、デンプン、ショ糖またはラクトースなどの適切な担体を用いて、安定化されたアントシ
アニン組成物の濃度を分散させて食品への適用をより容易にし得る。
【０１１１】
本発明の組成物はまた、種々の調理済食品におけるサプリメントとして提供され得る。
この応用の目的で、調理済食品とは、任意の本発明の組成物が添加された天然食品、加工
食品、ダイエットまたは非ダイエット食品を意味する。本発明の組成物は、多くの調理済
ダイエット食品（ダイエット飲料、ダイエットバーおよび調理済冷凍食品が挙げられるが
、これらに限定されない）に直接配合され得る。さらに、本発明の組成物は、多くの調理
済非ダイエット製品（キャンディ、チップスなどのスナック、調理済肉製品、ミルク、チ
ーズ、ヨーグルト、スポーツバー、スポーツ飲料、マヨネーズ、サラダドレッシング、パ
ンおよび任意の他の油脂含有食物などが挙げられるが、これらに限定されない）に配合さ
れ得る。本明細書中で用いられる用語「食品」は、ヒトまたは動物の消費に適した任意の
物質を意味する。
【０１１２】
本発明の組成物は、フルーツジュース、ミルクセーキ、ミルクなどの種々の飲料に添加
され得る。
【０１１３】
投与の好ましい方法は、経口である。本発明の組成物は、デンプン、ショ糖またはラク
トースなどの適切な担体を用いて、錠剤、カプセル、溶液、シロップおよび乳濁液に処方
され得る。本発明の錠剤またはカプセルは、約６．０〜７．０のｐＨで溶解する腸溶コー
ティングで被覆することができる。小腸で溶解するが胃で溶解しない適切な腸溶コーティ
ングは、酢酸フタル酸セルロースである。
【０１１４】
本発明の組成物のソフトゲルカプセルへの製剤は、当該分野で公知の多くの方法で達成
され得る。しばしば、製剤は、オイル、または他の懸濁剤もしくは乳化剤などの許容され
得る担体を含むであろう。
【０１１５】
適切な任意の担体には、例えば、任意の供給源（例えば、天然または合成油、脂肪、ワ
ックスまたはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない）から誘導体化
され得る脂肪酸、エステルおよびそれらの塩が挙げられる。さらに、脂肪酸は、非硬化油
、部分硬化油、全硬化油またはそれらの組み合わせから、限定されることなく誘導体化さ
れ得る。脂肪酸（それらのエステルおよび塩）の非限定的な供給源の例には、種子油、魚
油または水産油、キャノーラ油、植物油、ベニバナ油、ヒマワリ油、キンレンカ種子油、
マスタード種子油、オリーブ油、ゴマ油、ダイズ油、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿
実油、米糠油、ババスナッツ油、パーム油、低エルカ酸ナタネ油、パーム核油、ルピナス
油、ヤシ油、亜麻仁油、月見草油、ホホバ、コムギ胚芽油、獣脂、牛脂、バター、鶏脂、
ラード、乳脂肪、シアバターまたはこれらの組み合わせが挙げられる。
【０１１６】
特定の非限定的な魚油または水産油の供給源には、甲殻類油、マグロ油、サバ油、サケ
油、メンハーデン、アンチョビー、ニシン、マス、イワシまたはこれらの組み合わせが挙
げられる。特に、脂肪酸の供給源は、魚油または水産油（ドコサヘキサエン酸またはエイ
コサペンタエン酸）、ダイズ油または亜麻仁油である。あるいは、または上記で特定した
担体と組み合わせて、蜜ロウ、ならびにシリカ（二酸化ケイ素）などの懸濁剤を、適切な
担体として用いることができる。
【０１１７】
本発明の製剤はまた、栄養補助食品であるとも考えられる。用語「栄養補助食品」は、
当該分野で認識されており、疾患を予防し得るかまたは望ましくない症状を緩和し得る食
物において見出され得る特定の化学物質を説明することを意図する。
【０１１８】
本発明の製剤はさらに、有益な本発明の組成物の成分の安定化することを補助するか、
または生物学的利用能を促進することを補助するか、もしくは個人の食事の追加の栄養素
として働くための種々の成分を含み得る。適切な添加剤には、ビタミンおよび生物学的に
許容され得るミネラルが挙げられ得る。ビタミンの非限定的な例には、ビタミンＡ、ビタ
ミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫおよび葉酸が挙げられる。
ミネラルの非限定的な例には、鉄、カルシウム、マグネシウム、カリウム、銅、クロム、
亜鉛、モリブデン、ヨード、ホウ素、セレン、マンガン、それらの誘導体、またはそれら
の組み合わせが挙げられる。これらのビタミンおよび無機質は、限定されず、任意の供給
源または供給源の組み合わせに由来し得る。ビタミンＢ群の非限定的な例には、チアミン
、ナイアシンアミド、ピリドキシン、リボフラビン、シアノコバラミン、ビオチン、パン
トテン酸またはこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１９】
種々の添加物が、本組成物に配合され得る。本組成物の任意の添加物には、ヒアルロン
酸、リン脂質、デンプン、糖、脂肪、抗酸化剤、アミノ酸、タンパク質、香料、着色料、
加水分解デンプンおよびそれらの誘導体またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これ
らに限定されない。
【０１２０】
本明細書中で用いられる用語「抗酸化剤」は、当該分野で認識されており、化合物の酸
化的劣化を防ぐかまたは遅延する合成物質または天然物質を意味する。抗酸化剤の例には
、トコフェロール、フラボノイド、カテキン、スーパーオキシドジスムターゼ、レシチン
、ガンマオリザノール；ビタミンＡ、Ｃ（アスコルビン酸）およびＥおよびβカロチンな
どのビタミン；ローズマリーおよびサンザシ抽出物中に見出されるカモソール（ｃａｍｏ
ｓｏｌ）、カモシン酸（ｃａｍｏｓｉｃ  ａｃｉｄ）およびロスマノール、ブドウ種子ま
たはマツ樹皮抽出物、ならびに緑茶抽出物中に見出されるプロアントシアニジンなどの天
然成分が挙げられる。
【０１２１】
本発明の安定化されたアントシアニン組成物を含む組成物は、通常の混合、溶解、顆粒
化、糖衣製造の粉末化、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥プロセスにより製造され
得る。組成物は、１つまたはそれ以上の生理学的に許容され得る担体、希釈液、賦形剤ま
たは安定化されたアントシアニン組成物を使用され得る製剤に加工することを容易にする
１つまたはそれ以上の生理学的に許容され得る担体、希釈液、賦形剤または助剤を用いて
、通常の様式で製剤され得る。
【０１２２】
本発明の組成物は、投与の実質的に任意の様式（例えば、経口、経頬、全身、注射、経
皮、直腸、経腟など）に適した形態、または吸入またはガス注入による投与に適した形態
をとり得る。
【０１２３】
全身用製剤には、注射（例えば、皮下、静脈内、筋肉内、くも膜下腔内または腹腔内注
射）による投与のために設計されたもの、および経皮、経粘膜、経口または経肺投与のた
めに設計されたものが挙げられる。
【０１２４】
有用な注射用製剤には、安定化されたアントシアニン組成物の水性または油性媒体中の
無菌の懸濁液、溶液または乳濁液が挙げられる。組成物はまた、懸濁、安定化および／ま
たは分散された薬剤などの製剤を含み得る。注射用製剤は、例えば、アンプルまたは複数
回投与容器中の単位投与形態で存在し得、かつ添加された保存料を含み得る。
【０１２５】
あるいは、注射用製剤は、使用の前に、適切なビヒクル（例えば、無菌の発熱物質非含
有水、緩衝液、ブドウ糖溶液などが挙げられるが、これらに限定されない）で再構成する
ための粉末形態で提供され得る。この目的のために、安定化されたアントシアニン組成物
は、凍結乾燥などの任意の公知の技術で乾燥され、使用の前に再構成され得る。
【０１２６】
経粘膜投与のために、通過すべきバリアに適した浸透剤が製剤に用いられる。このよう
な浸透剤は、当該分野で公知である。
【０１２７】
経口投与のために、本発明の組成物は、例えば、結合剤（例えば、α化トウモロコシデ
ンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；賦形剤（
例えば、ラクトース、微結晶セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えば
、ステアリン酸マグネシウム、滑石またはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプ
ンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナト
リウム）などの薬学的に許容され得る賦形剤を用いて通常の手段で製剤される、ロゼンジ
、錠剤またはカプセルの形態をとり得る。錠剤は、例えば、糖、フィルムまたは腸溶コー
ティングを用いて、当該分野で周知の方法によりコーティングされ得る。
【０１２８】
経口投与用の液体製剤は、例えば、エリキシル剤、溶液、シロップまたは懸濁液の形態
をとり得るか、あるいは、使用の前に水または他の適切な媒体で構成するための乾燥製品
として存在し得る。このような液体製剤は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セ
ルロース誘導体または水素添加食用油脂）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）
；非水性媒体（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコールまたは分留植物
油）；および保存料（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピル、または
ソルビン酸メチルもしくはプロピル）などの医薬上許容され得る添加物を用いて、通常の
手段により製造され得る。製剤はまた、必要に応じて、緩衝塩、保存料、香料、着色料お
よび甘味料を含み得る。
【０１２９】
経口投与用製剤は、適切に製剤されて、安定化されたアントシアニン組成物の周知され
ているような徐放を提供し得る。
【０１３０】
経頬投与用には、組成物は、通常の様式で製剤される錠剤またはロゼンジの形態をとり
得る。
【０１３１】
経直腸および経腟の投与経路のために、安定化されたアントシアニン組成物は、カカオ
バターまたは他のグリセリドなどの通常の坐薬基剤を含む溶液（停留浣腸）、坐薬または
軟膏として製剤され得る。
【０１３２】
経鼻投与または吸入またはガス注入による投与のために、安定化されたアントシアニン
組成物は、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテ
トラフルオロエタン、フルオロカーボン、二酸化炭素または他の適切なガスを用いる加圧
パックまたは噴霧器からのエアロゾル噴霧の形態により、簡便に送達され得る。加圧エア
ロゾルの場合、投与単位は、計量された量を送達するための弁を提供することにより決定
され得る。インヘラーまたはインサフレーター（例えば、ゼラチンから構成されるカプセ
ルおよびカートリッジ）に用いるためのカプセルおよびカートリッジは、化合物およびラ
クトースまたはデンプンなどの適切な粉末基剤を含んで製剤され得る。
【０１３３】
持続性送達のために、安定化されたアントシアニン組成物は、移植または筋肉内注射に
よる投与のためのデポー製剤として処方され得る。安定化されたアントシアニン組成物は
、適切なポリマーもしくは疎水性物質（例えば、許容され得る油中の乳濁液として）また
はイオン交換樹脂を用いて、あるいは難溶性塩などの難溶性誘導体として、製剤され得る
。あるいは、経皮吸収のために安定化されたアントシアニン組成物を徐々に遊離させる粘
着ディスクまたはパッチとして製造された経皮送達システムが用いられ得る。この目的の
ために、浸透促進剤を用いて、安定化されたアントシアニン組成物の経皮浸透を促進する
ことができる。適切な経皮パッチは、例えば、米国特許第５，４０７，７１３号；米国特
許第５，３５２，４５６号；米国特許第５，３３２，２１３号；米国特許第５，３３６，
１６８号；米国特許第５，２９０，５６１号；米国特許第５，２５４，３４６号；米国特
許第５，１６４，１８９号；米国特許第５，１６３，８９９号；米国特許第５，０８８，
９７７号；米国特許第５，０８７，２４０号；米国特許第５，００８，１１０号；および
米国特許第４，９２１，４７５号に記載されている。
【０１３４】
あるいは、他の送達システムが用いられ得る。リポソームおよび乳濁液は、安定化され
たアントシアニン組成物を送達するのに用いられ得る送達媒体の周知例である。ジメチル
スルホキシド（ＤＭＳＯ）などの特定の有機溶媒もまた用いられ得るが、通常はより高い
毒性の犠牲がある。
【０１３５】
所望であれば、組成物は、安定化されたアントシアニン組成物を含む１つまたはそれ以
上の単位投与形態を含み得るパックまたはディスペンサー装置中に存在し得る。パックは
、例えば、ブリスター包装などの金属またはプラスチックの箔を含み得る。パックまたは
ディスペンサー装置には、投与のための指示書が添付され得る。
【０１３６】
軟質ゲルまたは軟質ゼラチンカプセルは、例えば、製剤を適切な媒体（例えば、米糠油
および／または蜜ロウ）に分散させて高粘度混合物を形成することにより製剤され得るが
、これに限定されない。次いで、この混合物を、軟質ゲル産業の当業者に公知の技術およ
び機械を用いて、ゼラチンベースのフィルム中にカプセル化する。次いで、このように形
成されたカプセルを、恒量まで乾燥させる。代表的には、カプセルの重量は、約１００〜
約２５００ミリグラム、特に約１５００〜約１９００ミリグラムの重量であり、より詳細
には、約１５００〜約２０００ミリグラムの重量である。
【０１３７】
例えば、軟質ゼラチンシェルを調製する場合、シェルは、約２０〜７０％のゼラチン、
一般に、可塑剤および約５〜約６０重量％のソルビトールを含み得る。軟質ゼラチンカプ
セルの充填物は、液体（主に、米糠油もしくはコムギ胚芽油、および／または所望であれ
ば蜜ロウ）などの担体であり、かつ、安定化されたアントシアニン組成物とは別に、親水
性マトリックスを含み得る。親水性マトリックスは、存在する場合、約２００〜１０００
の平均分子量を有するポリエチレングリコールである。さらなる成分は、必要に応じて、
濃厚化剤および／または乳化剤である。１つの実施態様では、親水性マトリックスは、約
２００〜１０００の平均分子量を有するポリエチレングリコール、５〜１５％のグリセロ
ール、および５〜１５重量％の水を含む。ポリエチレングリコールはまた、プロピレング
リコールおよび／または炭酸プロピレンと混合され得る。
【０１３８】
別の実施態様では、軟質ゲルカプセルは、ゼラチン、グリセリン、水および種々の添加
物から調製される。代表的には、ゼラチンの割合（重量基準）は、約３０〜約５０重量％
、特に約３５〜約重量％、およびより詳細には約４２重量％である。製剤は、約１５〜約
２５重量％のグリセリン、より詳細には約１７〜約２３重量％、より詳細には約２０重量
％のグリセリンを含む。
【０１３９】
カプセルの残りの部分は、代表的には水である。量は、約２５重量％〜約４０重量％で
変動し、より詳細には約３０〜約３５重量％、およびより詳細には約３５重量％である。
カプセルの残りは、一般に、香料、糖、着色料など、またはそれらの組み合わせから構成
される約２〜約１０重量％で変動し得る。カプセルを加工した後、最終的なカプセルの含
水量は、しばしば約５〜約１０重量％、より詳細には７〜約１２重量％、およびより詳細
には約９〜約１０重量％である。
【０１４０】
製造については、標準的な軟質シェルゼラチンカプセルの製造技術を用いて、軟質シェ
ル製品を調製し得ると考えられる。有用な製造技術の例は、プレートプロセス、Ｒ．Ｐ．
Ｓｃｈｅｒｅｒによって開発されたロータリー・ダイ・プロセス、Ｎｏｒｔｏｎカプセル
マシンを用いるプロセスならびにＬｅｄｅｒｌｅによって開発されたＡｃｃｏｇｅｌマシ
ンおよびプロセスである。これらのプロセスのいずれも、成熟した技術であり、いずれも
、軟質ゼラチンカプセルを調製することを望む者は誰でも広く利用可能である。
【０１４１】
乳化剤は、軟質ゼラチンカプセル内の成分の可溶化を補助するのに用いられ得る。界面
活性物質、乳化剤または発泡剤の特定の例には、Ｄ−ソルビトール、エタノール、カラゲ
ナン、カルボキシビニルポリマー、カルメロースナトリウム、グアーガム、グリセロール
、グリセロール脂肪酸エステル、コレステロール、白色蜜ロウ、ジオクチルソジウムスル
ホサクシネート、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ポリオ
キシル４０ステアリン酸、ソルビタンセスキオレアート、セタノール、ゼラチン、ソルビ
タン脂肪酸エステル、滑石、ソルビタントリオレアート、パラフィン、ジャガイモデンプ
ン、ヒドロキシプロピルセルロース、プロピレングリコール、プロピレングリコール脂肪
酸エステル、ペクチン、ポリオキシエチレン（１０５）ポリオキシプロピレン（５）グリ
コール、ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール、ポリ
オキシエチレン水素添加ヒマシ油、ポリオキシエチレン水素添加ヒマシ油  ４０、ポリオ
キシエチレン水素添加ヒマシ油  ６０、ポリオキシル３５  ヒマシ油、ポリソルベート２
０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、マクロゴール  ４００、オクチルドデシ
ルミリスチン酸、メチルセルロース、ソルビタンモノオレアート、グリセロールモノステ
アラート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノラウレート、ラウリルジメチル
アミンオキシド溶液、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウロマクロゴール、乾燥炭酸ナトリウ
ム、酒石酸、水酸化ナトリウム、精製ダイズレシチン、ダイズレシチン、炭酸カリウム、
炭酸水素ナトリウム、中鎖トリグリセリド、無水クエン酸、綿実油−ダイズ油混合物およ
び流動パラフィンが挙げられる。
【０１４２】
本発明はまた、本発明の組成物および適切な症状への使用についての指示書のパッケー
ジ製剤を提供する。代表的には、いずれの形態のパッケージ製剤も、それを必要とする個
体に投与される。代表的には、必要用量は、１日当たり約１〜約４用量である。
【０１４３】
本発明は、種々の症状の治療のための軟質ゼラチンカプセル中の本発明の組成物の製剤
、使用、製造およびパッケージングを記載しているが、軟質ゼラチンカプセルのみに限定
されると考えるべきではない。摂取可能な本発明の組成物は、上記のように、従来の錠剤
、丸薬、ロゼンジ、エリキシル剤、乳濁液、硬質カプセル、液体、懸濁液などで送達され
得る。
【０１４４】
本発明の安定化されたアントシアニン組成物、またはその組成物は、一般に、意図する
結果を達成するのに有効な量、例えば、治療される特定の炎症性に関連する症状を治療ま
たは予防するのに有効な量で用いられるであろう。組成物は、治療的に投与されて治療効
果を達成し得るか、または予防的に投与されて予防的利益を達成し得る。治療効果とは、
根本的な障害を根絶または緩和する、および／または根底にある障害に付随する１つまた
はそれ以上の症状を根絶または緩和する結果、患者が気分または症状の改善を報告する（
患者がまだ根本的な障害に罹患している可能性に関係なく）ことを意味する。例えば、本
発明の組成物を、疼痛に罹患した患者に投与することにより、根底にある症状が根絶また
は緩和される場合のみではなく、患者が疼痛に付随する身体的不快感の重症度または持続
時間の減少を報告する場合においても、治療効果が提供される。
【０１４５】
予防的投与のために、組成物は、上記症状の１つを発症するリスクを有する患者に投与
され得る。
【０１４６】
投与される組成物の量は、例えば、治療される特定の症候、投与の様式、望まれる利点
が予防上または治療上のいずれであるか、治療される症候の重症度、ならびに患者の年齢
および重量などの種々の因子に依存するであろう。有効用量の決定は、当業者の能力の範
囲内である。
【０１４７】
安定化されたアントシアニン組成物の全投与量は、代表的には、約０．０００１または
０．００１または０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内にあるであ
ろうが、他の因子のなかでも、成分の活性、その生物学的利用能、投与様式および上記で
考察した種々の因子に依存してより高くまたはより低くあり得る。投与の量および間隔は
、個別に調整されて、治療上または予防上の効果を維持するのに十分な化合物の血漿レベ
ルを提供し得る。例えば、化合物は、他の事項のなかでも、投与様式、治療すべき特定の
症候および処方医の判断に依存して、週に１回、週に数回（例えば、隔日）、１日あたり
１回または１日あたり複数回投与され得る。当業者は、過度の実験を行うことなく、有効
な局所用量を最適化することができるであろう。
【０１４８】
１〜９１に連続的に列挙した以下の段落は、本発明の種々の局面を提供する。１つの実
施態様では、第１段落（１）において、本発明は、アントシアニン抽出物および少なくと
も１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物（但し、安定化化合物はグルタチオンではない）
を含む安定化されたアントシアニン抽出物組成物を提供する。
【０１４９】
２．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、システ
イン、システインの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、シス
テインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チ
オール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落１の安定化さ
れたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５０】
３．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベ
リー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの
２つもしくはそれ以上の混合物である、段落１または２のいずれかの安定化されたアント
シアニン抽出物組成物。
【０１５１】
４．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である、
段落１〜３のいずれかに記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５２】
５．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して安
定である、段落１〜４のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５３】
６．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落１〜５のいずれかの安定化
されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５４】
７．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落１の安定化されたアントシ
アニン抽出物。
【０１５５】
８．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、ペ
ツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシドで
ある、段落７の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０１５６】
９．アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含
む、安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５７】
１０．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、シス
テイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナ
ーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを
含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたは
それらの混合物である、段落９の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１５８】
１１．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クラン
ベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれら
の２つもしくはそれ以上の混合物である、段落９または１０のいずれかの安定化されたア
ントシアニン抽出物組成物。
【０１５９】
１２．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である
、段落９〜１１のいずれかに記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１６０】
１３．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して
安定である、段落９〜１２のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【０１６１】
１４．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落９〜１３のいずれかの安
定化されたアントシアニン抽出物。
【０１６２】
１５．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落９の安定化されたアント
シアニン抽出物。
【０１６３】
１６．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、
ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシド
である、段落１５の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０１６４】
１７．アントシアニン抽出物組成物を安定化させる方法であって、アントシアニン抽出
物が安定化するように、アントシアニン抽出物を、十分な量の少なくとも１つの−ＳＨ基
を有する安定化化合物（但し、安定化化合物は還元型グルタチオンではない）と組み合わ
せる工程を含む、方法。
【０１６５】
１８．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、シス
テイン、システインの誘導体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、シ
ステインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、
チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落１７の方法
。
【０１６６】
１９．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クラン
ベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれら
の２つもしくはそれ以上の混合物である、段落１７または１８のいずれかの方法。
【０１６７】
２０．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である
、段落１７〜１９のいずれかの方法。
【０１６８】
２１．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して
安定である、段落１７〜２０のいずれかの方法。
【０１６９】
２２．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落１７〜２１のいずれかの
方法。
【０１７０】
２３．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落１７の方法。
【０１７１】
２４．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、
ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシド
である、段落２３の方法。
【０１７２】
２５．安定化されたアントシアニン抽出物組成物が、周囲条件で少なくとも約１日間安
定である、段落１７の方法。
【０１７３】
２６．安定化されたアントシアノシドが、ｐＨ７で少なくとも約６時間安定である、段
落２２の方法。
【０１７４】
２７．ｐＨ７で維持された安定化されたアントシアノシドが、約４時間にわたって、少
なくとも５０％のアントシアニンをグリコシドとして保持する、段落２６の方法。
【０１７５】
２８．アントシアニン抽出物組成物を安定化させる方法であって、アントシアニン抽出
物が安定化するように、アントシアニン抽出物を、十分な量の少なくとも１つの−ＳＨ基
を有する安定化化合物と組み合わせる工程を含む、方法。
【０１７６】
２９．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、シス
テイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナ
ーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを
含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたは
それらの混合物である、段落２８の方法。
【０１７７】
３０．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クラン
ベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれら
の２つもしくはそれ以上の混合物である、段落２８または２９のいずれかの方法。
【０１７８】
３１．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である
、段落２８〜３０のいずれかの方法。
【０１７９】
３２．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して
安定である、段落２８〜３１のいずれかの方法。
【０１８０】
３３．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落２８〜３２のいずれかの
方法。
【０１８１】
３４．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落２８の方法。
【０１８２】
３５．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、
ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシド
である、段落３４の方法。
【０１８３】
３６．安定化されたアントシアニン抽出物組成物が、周囲条件で少なくとも約１日間安
定である、段落２８の方法。
【０１８４】
３７．安定化されたアントシアノシドが、ｐＨ７で少なくとも約６時間安定である、段
落３３の方法。
【０１８５】
３８．ｐＨ７で維持された安定化されたアントシアノシドが、約４時間にわたって、少
なくとも５０％のアントシアニンをグリコシドとして保持する、段落３７の方法。
【０１８６】
３９．アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を
含む、ｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１８７】
４０．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、シス
テイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナ
ーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを
含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたは
それらの混合物である、段落３９のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１８８】
４１．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クラン
ベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれら
の２つもしくはそれ以上の混合物である、段落３９または４０のｐＨ安定化アントシアニ
ン抽出物組成物。
【０１８９】
４２．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である
、段落３９〜４１のいずれかに記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９０】
４３．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して
安定である、段落３９〜４２のいずれかに記載のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物
。
【０１９１】
４４．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落３９〜４３のいずれかの
ｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９２】
４５．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落３９のｐＨ安定化アント
シアニン抽出物組成物。
【０１９３】
４６．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、
ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシド
である、段落４５のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９４】
４７．安定化されたアントシアニン抽出物組成物が、周囲条件で少なくとも約１日間安
定である、段落３９のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９５】
４８．安定化されたアントシアノシドが、ｐＨ７で少なくとも約６時間安定である、段
落４４のｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物。
【０１９６】
４９．ｐＨ７で維持された安定化されたアントシアノシドが、約４時間にわたって、少
なくとも５０％のアントシアニンをグリコシドとして保持する、段落４８のｐＨ安定化ア
ントシアニン抽出物組成物。
【０１９７】
５０．ｐＨ安定化アントシアニン抽出物組成物を製造する方法であって、組成物がｐＨ
安定化するように、アントシアニン抽出物と少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化
合物とを組み合わせる工程を含む、方法。
【０１９８】
５１．安定化化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、ジヒドロリポ酸の誘導体、シス
テイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導体、ＳＨ−プロテイナ
ーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを
含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたは
それらの混合物である、段落５０の方法。
【０１９９】
５２．アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クラン
ベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれら
の２つもしくはそれ以上の混合物である、段落５０または５１のいずれかの方法。
【０２００】
５３．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．１〜約１０である
、段落５０〜５２のいずれかの方法。
【０２０１】
５４．組成物が、約２〜約１２のｐＨを有する水性環境に曝露したときに分解に対して
安定である、段落５０〜５３のいずれかの方法。
【０２０２】
５５．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落５０〜５４のいずれかの
方法。
【０２０３】
５６．アントシアニン抽出物がアントシアノシドを含む、段落５０の方法。
【０２０４】
５７．アントシアノシドが、ペラルゴニジン、ペオニジン、シアニジン、マルビジン、
ペツニジン、デルフィニジンまたはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物のグリコシド
である、段落５６の方法。
【０２０５】
５８．安定化されたアントシアニン抽出物が、周囲条件で少なくとも約１日間安定であ
る、段落５０の方法。
【０２０６】
５９．安定化されたアントシアノシドが、ｐＨ７で少なくとも約６時間安定である、段
落５５の方法。
【０２０７】
６０．ｐＨ７で維持された安定化されたアントシアノシドが、約４時間にわたって、少
なくとも５０％のアントシアニンをグリコシドとして保持する、段落５９の方法。
【０２０８】
６１．治療上有益な量の安定化されたアントシアニン組成物を対象に提供する方法であ
って、治療上有益な量の段落１〜１６または段落３９〜４９のいずれかの安定化されたア
ントシアニン組成物を対象に投与する工程を含む、方法。  
【０２０９】
６２．関節硬化を治療する方法であって、治療上有効量の段落１〜１６または段落３９
〜４９のいずれかの安定化されたアントシアニン組成物を、対象に投与する工程を含む、
方法。
【０２１０】
６３．アントシアニンの細胞内抗酸化濃度を増加または維持する方法であって、治療上
有効量の段落１〜１６または段落３９〜４９のいずれかに記載の安定化されたアントシア
ニン組成物を、対象に投与する工程を含む、方法。
【０２１１】
６４．対象において疼痛を軽減または減少させる方法であって、治療上有効量の段落１
〜１６または段落３９〜４９のいずれかに記載の安定化されたアントシアニン組成物を、
対象に投与する工程を含む、方法。
【０２１２】
６５．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．５対約５である、
段落４、１２または４２のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２１３】
６６．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約１対約１である、段落
４、１２または４２のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２１４】
６７．上記安定化されたアントシアニン抽出物が、丸薬、錠剤、粉末、顆粒、薄皮、軟
膏、クリーム、ペースト、溶液、混合物、シロップ、粘液、乳濁液、チンキ、スピリット
、ペイント、液滴または浸出液の形態である、段落１〜１６または３９〜４９のいずれか
の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２１５】
６８．生理学的に許容され得るアジュバントをさらに含む、段落１〜１６または３９〜
４９のいずれかの安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２１６】
６９．アジュバントが、希釈液、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、基剤、香味料、甘味料、着
色料、保存料、抗酸化剤、コーティング材料、膜形成物質、溶媒、可溶化剤、湿潤剤、吸
収剤、濾過助剤、乳化剤、界面活性剤、懸濁剤、増粘剤、可塑剤、キレート剤、エアロゾ
ル噴霧剤、発泡剤、酸化剤、アルカリ化剤、緩衝剤またはそれらの混合物である、段落６
８の安定化されたアントシアニン抽出物。
【０２１７】
７０．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約０．５対約５である、
段落２０、３１または５３のいずれかの方法。
【０２１８】
７１．安定化化合物のアントシアニン抽出物に対するモル比が約１対約１である、段落
２０、３１または５３のいずれかの方法。
【０２１９】
７２．システインの誘導体が、Ｎ−アセチルシステインであり、かつＳＨ−プロテイナ
ーゼが、パパイン、ブロメライン、フィチン、エヒモパパイン（ｅｈｙｍｏｐａｐａｉｎ
）またはそれらの混合物である、段落６５または６６の安定化されたアントシアニン抽出
物。
【０２２０】
７３．アントシアニン富化抽出物を安定化させる方法であって、
アントシアニン富化抽出物を、少なくとも１つの−ＳＨ基を有する少なくとも１つの安
定化化合物と接触させることを含み、安定化化合物が、抽出プロセスの間の任意の時にア
ントシアニンと接触され得る、方法。
【０２２１】
７４．少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物が、酵母抽出物、ジヒドロリポ酸、シ
ステイン、グルタチオンまたはそれらの混合物である、段落７３記載の方法。
【０２２２】
７５．少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物のアントシアニン化合物に対す
るモル比が約０．１〜約１０である、段落７３の方法。
【０２２３】
７６．モル比が約０．５〜約５である、段落７５の方法。
【０２２４】
７７．モル比が約１である、段落７５の方法。
【０２２５】
７８．少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物が、アントシアニン富化抽出物と接触
させられる前に抽出溶媒に加えられる、段落７３〜７７のいずれかの方法。
【０２２６】
７９．少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物が、アントシアニン富化抽出物を抽出
溶媒と併用した後に抽出溶媒に加えられる、段落７３〜７７のいずれかの方法。
【０２２７】
８０．加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、白内障または網膜症を治療する方法であって、段落１
〜１６または３９〜４９のいずれかに記載の治療上有効量の安定化されたアントシアニン
組成物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法。
【０２２８】
８１．ビルベリー抽出物およびシステインを含む、安定化されたビルベリー組成物。
【０２２９】
８２．ビルベリー抽出物のシステインに対する比が、重量基準で約１０〜約１である、
段落８１の安定化されたビルベリー組成物。
【０２３０】
８３．組成物が噴霧乾燥される、段落８１または８２に記載の安定化されたビルベリー
組成物。
【０２３１】
８４．安定化された組成物が、ＨＰＬＣ解析により決定されるように、少なくとも約６
ヶ月にわたって、少なくとも約８０％の初期のアントシアノシドを保持する、段落８１〜
８３のいずれかの安定化されたビルベリー組成物。
【０２３２】
８５．アントシアニンおよび少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物を含むアントシ
アニン組成物を対象に投与する工程を含む、アントシアニン組成物の生物学的利用能を増
加させる方法であって、アントシアニンの量が、対象中で、少なくとも１つの−ＳＨ基を
有する化合物を欠くアントシアニン組成物の試料と比較して少なくとも２倍量に増加する
、方法。
【０２３３】
８６．アントシアニン物質が抽出物である、段落８５の方法。
【０２３４】
８７．抽出物がビルベリー抽出物である、段落８６の方法。
【０２３５】
８８．アントシアニン物質の少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物に対する比が、
重量基準に基づき約１０：０．１〜約１：１である、段落８５の方法。
【０２３６】
８９．ビルベリー抽出物の少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物に対するアントシ
アニンの比が、約１０〜約１である、段落８７の方法。
【０２３７】
９０．システインの存在下におけるアントシアニンの投与の４時間後の血漿濃度が、少
なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物の存在がないアントシアニンの血漿濃度の少なく
とも２倍量である、段落８５の方法。
【０２３８】
９１．少なくとも１つの−ＳＨ基を有する化合物が、酵母、ジヒドロリポ酸、ジヒドロ
リポ酸の誘導体、システイン、システインの誘導体、グルタチオン、グルタチオンの誘導
体、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチ
ド類、グルタチオンを含有するペプチド類、発酵カキ抽出物、チオール化キトサン、チオ
ール化ゼラチンまたはそれらの混合物である、段落８５〜９０のいずれかの方法。
【０２３９】
以下の実施例は、限定的なものであることを意味しないが、本発明のさらなる情報およ
びサポートを提供するために示される。
【０２４０】
本例示の章は、以下の表に示すように、ビルベリー抽出物およびブラックカラント抽出
物に関する。
【０２４１】
【表３】
2014040466.tif 000011
【実施例】
【０２４２】
実施例１
試料ａ）６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏ
ｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌフ
ラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満
たし、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料を即時に取り、ギ酸でｐＨ＝１．０ま
で酸性化し、アントシアノシド（未使用試料）の含有量までＨＰＬＣで分析した。残存す
る溶液を３７℃（水浴）で４時間、攪拌しながら保持した。その後、未保護の分解を表す
別の試料（ブランク試料）を取り、酸性化した。
【０２４３】
試料ｂ）２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．０６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン
酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え
、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシ
アノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアン
トシアノシド）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７
．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃で４時間保持した。
【０２４４】
試料ｃ）３０ｍｇのジヒドロリポ酸（０．１４４ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナト
リウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解
が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシ
ド］（シアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表される０．０４８ｍｍｏｌ）を加え、フ
ラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、
攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０２４５】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの
含有量をＨＰＬＣにより分析した。分解を、個々のピーク（４時間置いた後の％として計
算した）のピークエリアの減少として表した。
【０２４６】
以下の表から、アントシアノシドは、ｐＨ＝７．０、３７℃で、ＤＨＬＡまたはＧＳＨ
のいずれかの存在下で、ブランクの（未保護の）試料と比較して実質的により安定である
と結論付けられた。４時間後、ブランクの試料は、約２５％の残留アントシアノシドが観
察されたことを示したが、一方、保護された試料は、６０％を超える残留アントシアノシ
ドを生じた。３０ｍｇのＤＨＬＡの保護効率は、２０ｍｇのＧＳＨに匹敵する。保護効率
は、シアニジングリコシドと比較して一層保護が少ないデルフィニジングリコシドにより
例示される基礎のアントシアニン骨格に関連するように思われる。各個別の試験されたア
ントシアノシドについて、保護効果、例えば、ブランク試料と比較してより多く残留する
アントシアノシドを観察した。
【０２４７】
【表４】
2014040466.tif 000012
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸
性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射し
た。
【０２４８】
実施例２
試料ａ）６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏ
ｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌに
加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、溶
解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料を即時に取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化
し、アントシアノシドの含有量までＨＰＬＣで分析した。残存する溶液を３７℃（水浴）
で攪拌しながら保持し、未保護の分解を表す追加の１ｍｌの試料（ブランク試料）を１５
分毎にサンプリングした。選択したアントシアノシドについて、試料をＨＰＬＣにより分
析した。
【０２４９】
試料ｂ）２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．０６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン
酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え
、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシ
アノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアン
トシアノシド）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７
．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃で保持した。１５分毎に、１ｍｌの試料を
取り、選択したアントシアノシドについてＨＰＬＣで分析した。
【０２５０】
以下の表より、アントシアノシドは、ｐＨ＝７．０および３７℃で、ＧＳＨの存在下で
、ブランク試料と比較して実質的により安定であることが結論付けられた。保護活性は、
選択したアントシアノシドについて経時の比較的減衰により示すように、溶解後即時に開
始し、かつ少なくとも４時間持続する。ここでも、保護効果は、４時間３０分のインキュ
ベーション後の６５％の残留デルフィニジン−３−Ｏ−ガラクトース、６７％の残留ペツ
ニジン−３−Ｏ−ガラクトースおよび７７％の残留シアニジン−３−Ｏ−ガラクトースに
より例証されるアントシアニン骨格に関連すると考えられる。試験された各個別のアント
シアノシドについて、保護効果、例えば、ブランク試料と比較してより多い残留アントシ
アノシドを観察した。
【０２５１】
【表５】
2014040466.tif 000013
【０２５２】
【表６】
2014040466.tif 000014
【０２５３】
【表７】
2014040466.tif 000015
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸
性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射し
た。
【０２５４】
実施例３
試料ａ）６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７
ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を１００
ｍｌフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積
まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料をすぐに取り、ギ酸でｐＨ＝１
．０まで酸性化し、アントシアノシド（未使用試料）の含有量までＨＰＬＣで分析した。
残存する溶液を３７℃（水浴）で攪拌しながら４時間保持した。その後、未保護の分解を
表す試料（ブランク試料）を取り、酸性化した。
【０２５５】
試料ｂ）２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．０６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン
酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え
、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％ア
ントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表され
るアントシアノシド）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐ
Ｈ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０２５６】
試料ｃ）２０ｍｇのジヒドロリポ酸（０．０９６ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナト
リウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解
が完了するまで攪拌した。６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド
］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノ
シド）をフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で
容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０２５７】
試料ｄ）２０ｍｇのＬ−システイン酸（０．１６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナ
トリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶
解が完了するまで攪拌した。６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシ
ド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシア
ノシド）をフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）
で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０２５８】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの
含有量をＨＰＬＣにより分析した。分解を、個々のピーク（４時間置いた後の％として計
算した）のピークエリアの減少として表した。
【０２５９】
以下の表から、アントシアノシドは、ｐＨ＝７．０、３７℃で、ＤＨＬＡ、ＧＳＨまた
はＬ−システインのいずれかの存在下で、ブランクの（未保護の）試料と比較して実質的
により安定であると結論付けられた。４時間後、ブランクの試料では、９．５〜３３．４
％の残留アントシアノシドが観察されたが、一方、ＧＳＨ保護された試料は、５０．４〜
６５．０％の残留アントシアノシドを生じた。ＤＨＬＡについての比較の数値は３６．７
〜３８．９％であった。各個別の試験されたアントシアノシドについて、保護効果、例え
ば、ブランク試料と比較してより多い残留アントシアノシドを観察した。
【０２６０】
【表８】
2014040466.tif 000016
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸
性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射し
た。
【０２６１】
実施例４
試料ａ）６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７
ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を１００
ｍｌフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積
まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。溶液を攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間
保持した。その後、未保護の分解を表す試料（ブランク試料）を取り、酸性化した。
【０２６２】
試料ｂ〜ｅ）５、１０、２０または６０ｍｇのジヒドロリポ酸（０．０２４〜０．２８
８ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）
と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。各フラスコに、６０ｍ
ｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニ
ジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を加えた。フラスコをリン
酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら
３７℃で４時間保持した（水浴）。
【０２６３】
試料ｆ〜ｉ）５、１０、２０または６０ｍｇのＧＳＨ（０．０１６〜０．１９２ｍｍｏ
ｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１
００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。各フラスコに、６０ｍｇのブラ
ックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３
−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を加えた。フラスコをリン酸ナトリ
ウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃で
４時間保持した（水浴）。
【０２６４】
試料ｊ〜ｍ）５、１０、２０または６０ｍｇのＬ−システイン（０．０４１〜０．４９
２ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）
と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。各フラスコに、６０ｍ
ｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニ
ジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を加えた。フラスコをリン
酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら
３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０２６５】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの
含有量をＨＰＬＣにより分析した。分解を、４つのリードアントシアノシド（Ｄｐ−３−
Ｏ−Ｇｌｕ、Ｄｐ−３−Ｏ−Ｒｕｔ、Ｃｎ−３−Ｏ−Ｇｌｕ、Ｃｎ−３−Ｏ−Ｒｕｔ）に
ついて４時間後の％残留として計算した合計のピークエリアの減少として表した。
【０２６６】
以下の表から、アントシアノシドが、用量依存的様式でＤＨＬＡ、ＧＳＨまたはＬ−シ
ステインにより実質的に保護されていたことが決定された。
【０２６７】
【表９】
2014040466.tif 000017
【０２６８】
【表１０】
2014040466.tif 000018
【０２６９】
【表１１】
2014040466.tif 000019
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸
性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射し
た。
【０２７０】
実施例５
試料ａ）６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％アントシアノシド］（０．０３７
ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表されるアントシアノシド）を１００
ｍｌフラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積
まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料をすぐに取り、ギ酸でｐＨ＝１
．０まで酸性化し、アントシアノシドの含有量までＨＰＬＣで分析した。残存溶液を３７
℃（水浴）で攪拌しながら保持し、未保護の分解を表す試料（ブランク試料）を１５分毎
に取った。選択したアントシアノシドについて、試料をＨＰＬＣにより分析した。
【０２７１】
試料ｂ）２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．０６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン
酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え
、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのブラックカラント抽出物［３５％ア
ントシアノシド］（０．０３７ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−ルチノシドとして表され
るアントシアノシド）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐ
Ｈ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃（水浴）で保持した。１５分毎に、
１ｍｌの試料を取り、選択したアントシアノシドについてＨＰＬＣで分析した。
【０２７２】
以下の表より、アントシアノシドは、ｐＨ＝７．０および３７℃で、ＧＳＨの存在下で
、ブランク試料と比較して実質的により安定であることが結論付けられ得た。保護活性は
、アントシアノシドについて経時の比較減少により示すように、溶解直後に開始し、かつ
少なくとも４時間持続する。保護の有効性は、シアニジングリコシドの保護がデルフィニ
ジングリコシドと比較して改善されたことにより例証されるように、アントシアニン骨格
に依存的であり得る。しかしながら、ブランクを保護された試料と比較した場合、デルフ
ィニジングリコシドは、シアン化物グリコシドよりも実質的により良く保護されていた。
【０２７３】
各個別の試験されたアントシアノシドについて、保護効果、例えば、ブランク試料と比
較してより多く残留するアントシアノシドを観察した。
【０２７４】
【表１２】
2014040466.tif 000020
【０２７５】
【表１３】
2014040466.tif 000021
【０２７６】
【表１４】
2014040466.tif 000022
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸
性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射し
た。
【０２７７】
実施例６
試料ａ）５ｍｇの塩化デルフィニン（０．０１５ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのフラスコに
移し、１ｍｌのメタノールに溶解し、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝
７．０）で容積まで満たした。試料を攪拌しながら３７℃で保持した。溶解後、即時に試
料を取り、１５分後、１、２および３時間のインキュベーションを行った。試料をギ酸で
ｐＨ＝１．０に酸性化し、ＨＰＬＣで分析した。
【０２７８】
試料ｂ）５ｍｇの塩化マルビジン（０．０１４ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのフラスコに移
し、１ｍｌのメタノールに溶解し、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７
．０）で容積まで満たした。試料を攪拌しながら３７℃で保持した。溶解後、試料を即時
に取り、１、２および３時間のインキュベーションを行った。試料をギ酸でｐＨ＝１．０
に酸性化し、ＨＰＬＣで分析した。
【０２７９】
試料ｃ）５ｍｇの塩化デルフィニジン（０．０１５ｍｍｏｌ）および１０ｍｇのＧＳＨ
（０．０３２ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのフラスコに移し、１ｍｌのメタノールに溶解し、
リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たした。試料を
攪拌しながら３７℃で保持した。試料を、溶解の１５分後、ならびに１、２および３時間
のインキュベーション後、すぐに取った。試料をギ酸でｐＨ＝１．０に酸性化し、ＨＰＬ
Ｃで分析した。
【０２８０】
試料ｄ）５ｍｇの塩化マルビジン（０．０１４ｍｍｏｌ）および１０ｍｇのＧＳＨ（０
．０３２ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのフラスコに移し、１ｍｌのメタノールに溶解し、リン
酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たした。試料を攪拌
しながら３７℃で保持した。試料を、溶解の１５分後、１、２および３時間のインキュベ
ーション後、すぐに取った。試料をギ酸でｐＨ＝１．０に酸性化し、ＨＰＬＣで分析した
。
【０２８１】
以下の表から、ＧＳＨはフリーのアントシアニン骨格をあまり保護しなかったことが決
定された。ＧＳＨとデルフィニジンまたはマルビジンとのモル比は２：１より高いが、こ
のことは、活性がないことはＧＳＨの低濃度に無関係であることを示す。フリーのアント
シアニンの減衰は、ＧＳＨの存在によりほとんど影響を受けないが、これは、同じ骨格を
有するアントシアニングリコシドを用いる知見とは対照的である。
【０２８２】
【表１５】
2014040466.tif 000023
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸
性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射し
た。
【０２８３】
実施例７
試料ａ）６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏ
ｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌフ
ラスコに加え、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨを以下に示す値まで調整
した）で容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。溶液を３７℃（水浴）で４時間
、攪拌しながら保持した。その後、未保護の分解を表す別の試料（ブランク試料）を取り
、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化した。
【０２８４】
試料ｂ）２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．０６５ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン
酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨを以下に示す値まで調整した）と共に１００
ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出
物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシド
として表されるアントシアノシド）を加え、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［
ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たし、攪拌しながら３７℃で４時間保持した。
【０２８５】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの
含有量をＨＰＬＣにより分析した。分解を、４つのアントシアノシドについて４時間後の
％残留として計算した合計のピークエリアの減少として表す。
【０２８６】
以下の表から、ＧＳＨは、特にアントシアノシドが分解を受けやすいｐＨ範囲（ｐＨ＞
５）においてグルタチオンを保護することが決定された。驚くべきことではないが、アン
トシアノシドがそれ自身で安定なより低いｐＨ値では、保護効果は減少する。
【０２８７】
【表１６】
2014040466.tif 000024
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸
性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射し
た。
【０２８８】
保護効果は、保護された試料の残留比を、ブランク試料（選択されたｐＨ値でビルベリ
ー抽出物を含むが、還元型グルタチオンは含まない）の残留比で割ることにより計算され
るパラメータである。従って、この差は、ビルベリー抽出物のアントシアニンの安定性の
約３〜約１１のｐＨ範囲にわたる還元Ｌ−グルタチオン（ＧＳＨ）の効果を実証する。
【０２８９】
ｐＨ値が増加すると、抽出物の分解が増加することが認められた。試験されたｐＨ値の
全てにおいて、Ｌ−グルタチオン（ＧＳＨ）はアントシアニンを保護した。さらに、保護
効果は、ｐＨ値と共に増加した。アルカリ性の環境では、グルタチオンは、上記表ならび
に図１９および２０に示されるように、より高い安定化効果を有した。
【０２９０】
実施例８
試料ａ）６０ｍｇのＧＳＨ（０．１９２ｍｍｏｌ）を１００ｍｌフラスコに入れ、溶解
し、リン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満たした。試
料を攪拌しながら３７℃で保持した。溶解後、ならびにインキュベーションの１、２、３
および４時間後、試料を即時に取った。試料を、ＧＳＨおよびＧＳＳＧ（ＧＳＨの酸化型
を表す）についてＨＰＬＣで分析した。
【０２９１】
試料ｂ）６０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオン（０．１９２ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン
酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え
、溶解が完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシ
アノシド］（シアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表される０．０４８ｍｏｌ）を加え
、フラスコをリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で容積まで満た
し、攪拌しながら３７℃（水浴）で保持した。溶解後、ならびにインキュベーションの１
、２、３および４時間後、試料を即時に取った。試料を、ＧＳＨおよびＧＳＳＧ（ＧＳＨ
の酸化型を表す）についてＨＰＬＣで分析した。
【０２９２】
以下の表より、ＧＳＨは、水性緩衝液（ｐＨ＝７．０）中、３７℃でＧＳＳＧに酸化さ
れたことが決定された。ビルベリー抽出物の添加は、ＧＳＨのＧＳＳＧへの酸化を約２〜
約３ファクター促進するが、このことは、ビルベリー抽出物が、酸化還元反応のパートナ
ーとして作用することを示唆する。この結果に基づき、ＧＳＨ／ＧＳＳＧの対が、酸化さ
れたＧＳＳＧおよび還元されたアントシアノシドを生じるかなり低い酸化還元電位を有す
ることが明らかであった。
【０２９３】
【表１７】
2014040466.tif 000025
【０２９４】
【表１８】
2014040466.tif 000026
試料を、ＨＰＬＣ分析法で以下に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸
性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注射し
た。
【０２９５】
ブラックカラント抽出物の安定性
１２０ｍｇのブラックカラント抽出物／１００ｍｌの溶液を、ＣａＣｏ−２吸収試験に
用いられるインキュベーション培地としての３０ｍｇのグルタチオン（ＧＳＨ）／緩衝化
溶液中１００ｍｌ（ｐＨ＝７．０）と共にインキュベートした。
【０２９６】
これらの調査は、分析用溶液中およびグルタチオンの存在下でのＣａＣｏ−２試験に用
いられるインキュベーション培地中での選択されたブラックカラントリードアントシアノ
シドの安定性／分解の情報を提供する。
【０２９７】
デルフィンジン−３−Ｏ−グルコシド、（Ｄｐ−Ｇｌｕ）、デルフィニジン−３−Ｏ−
ルチノシド（Ｄｐ−Ｒｕｔ）およびシアニジン−３−Ｏ−ルチノシド（Ｃｎ−Ｒｕｔ）を
、分析用に選択した。
【０２９８】
これらの調査は、調査した両方のデルフィニジングリコシドが、シアニジンルチノシド
よりも分解しやすいことを示した。調査したＤｐ−ｇｌｃは、所定の条件下で、Ｄｐ−ｒ
ｕｔよりも感受性であった。調査した全てのアントシアノシドは、回腸液を模したインキ
ュベーション培地中で、緩衝溶液よりもわずかにより安定であった（図１３および１４を
参照のこと）。安定性の増加は、複合培地（最終的にグルタチオンを再利用する）におけ
る推定上の安定化成分の存在によって引き起こされる可能性が最も高い。
【０２９９】
ＣａＣｏ−２細胞を、３７℃で２時間まで、１２０ｍｇのブラックカラント抽出物およ
び３０ｍｇのグルタチオン／１００ｍｌ培地でインキュベートした。３０、６０および１
２０分で、３つのウェルを、インキュベーション培地の回収および細胞に吸収されたアン
トシアノシドの抽出により、分析用に加工した。
【０３００】
図１５に見られるように、調査した３つのアントシアノシドの全てが、ＣａＣｏ−２細
胞に吸収された。６０分のインキュベーション後、最も高い吸収が、Ｃｎ−Ｒｕｔについ
て観察された。この時点で、ＣａＣｏ−２細胞中でのアントシアノシドの回収は、上清イ
ンキュベーション培地中で決定された濃度の２．５％の量であった。最も興味深いことに
、％取り込みは、緩衝液培地およびインキュベーション培地（細胞非含有）中でのアント
シアノシドの安定性に類似する。さらに、全てのアントシアノシドについて、６０分のイ
ンキュベーション後に最大吸収が見られることが観察された。
【０３０１】
６０ｍｇのビルベリー抽出物±３０ｍｇのグルタチオン／１００ｍｌの無細胞インキュ
ベーション培地を、３７℃で１時間保持した。試料を、ビルベリー抽出物中に存在する１
５のアントシアノシドについて、インキュベーション時間の前後で分析した。
【０３０２】
本調査は、ＣａＣｏ−２試験の間に適用された条件で、インキュベーション培地（ｐＨ
＝７．０）中でのアントシアノシドの安定性に基づく情報を提供する。次に、グルタチオ
ンが安定性に及ぼす影響を解明する。
【０３０３】
図１６中で見られるように、全てのアントシアノシドが、グルタチオンにより安定化さ
れた。最も明白な安定化は、Ｄｐ−グリコシドについて観察された。このことは、Ｄｐ−
グリコシドがｐＨ＝７．０で最も分解されやすいビルベリーグルコシドであるので、重要
である。この分析調査より、グルタチオンは、ｐＨ＝７．０でアントシアノシドを分解か
ら保護することが決定された。さらに、グルタチオンは、ビルベリー中に存在する全ての
アントシアニジン構造を保護することが認められる。
【０３０４】
保護の詳細な分析により、保護の強度とアントシアニジンの化学構造との間に傾向が存
在することが明らかになる。最も感受性である構造Ｄｐは、最も高い程度で安定化される
が、一方、最も安定な構造（Ｃｎ）に対する保護効果は、比較的低い。まとめると、調査
した全てのアントシアノシドは、ｐＨ＝７．０で、１時間の間、３７℃で、グルタチオン
の存在下で、２５％未満が分解した。
【０３０５】
ＣａＣｏ−２細胞を、６０ｍｇのビルベリー抽出物／３０ｍｇのグルタチオン含有また
は非含有／１００ｍ培地で、３７℃で１時間インキュベートした。その後、３つのウェル
を、インキュベーション培地の回収および細胞に吸収されたアントシアノシドの抽出によ
り、分析用に加工した。
【０３０６】
図１７中で見られるように、調査した全てのビルベリーアントシアノシドは、グルタチ
オンの存在下でより良好に吸収された。このことは、増加した吸収と、アントシアノシド
のグルタチオンでの安定化との相関を示す。最も可能性の高い説明は、アントシアノシド
の吸収の程度は、インキュベーション培地中の無傷のアントシアノシドの濃度に依存する
ということである。換言すれば、アントシアノシドの吸収は、細胞の外側と内側との間で
の濃度勾配に依存し得るということである（外側の濃度がより高いと、吸収がより高い）
。グルタチオンが細胞の外側でアントシアノシドの安定性を増加することが示されたので
、細胞内への吸収は、提唱された理論に従う。
【０３０７】
実施例９
試料ａ）６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏ
ｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）をリン酸ナトリ
ウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が
完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料を即時に取り、ギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、
ＨＰＬＣにより、アントシアノシド（未使用試料）の含有量を分析した。残った溶液を３
７℃（水浴）で４時間、攪拌しながら保持した。その後、未保護の分解を表す別の試料（
ブランク試料）を取り、酸性化した。
【０３０８】
試料ｂ）２０ｍｇのＬ−システイン（０．０６５ｍｍｏｌ）を６０ｍｌのリン酸ナトリ
ウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が
完了するまで攪拌した。次いで、６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド
］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノ
シド）をフラスコに加え、十分に溶解するまで撹拌し、次いで、３７℃（水浴）で４時間
、攪拌しながら保持した。
【０３０９】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、ＨＰＬＣにより、ア
ントシアノシドの含有量を分析した。分解を、個々のピークのピークエリアにおける減少
として表す（４時間後の％残留として計算された）。
【０３１０】
以下の表から、アントシアノシドは、ブランク（無保護の）試料と比較すると、ｐＨ＝
７．０、３７℃で、Ｌ−システインの存在下、実質的により安定であると結論付けられた
。４時間後、ブランク試料は、約２５％の残留アントシアノシドが観察されたことを示し
たが、一方、保護された試料は、６５％を超える残留アントシアノシドを生じた。
【０３１１】
【表１９】
2014040466.tif 000027
試料を、ＨＰＬＣ分析法で上記に説明したように調製した。試験安定性試料を即時に酸
性化し（分解を防止するため）、以下に提供する詳細な説明に従って、希釈せずに注入し
た。
【０３１２】
実施例１０
試料ａ）６０ｍｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏ
ｌのシアニジン−３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を１００ｍｌフ
ラスコに加え、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）で
容積まで満たし、溶解が完了するまで攪拌した。１ｍｌの試料を即時に取り、ギ酸でｐＨ
＝１．０まで酸性化し、ＨＰＬＣにより、アントシアノシド（未使用試料）の含有量を分
析した。残存溶液を３７℃（水浴）で４時間、攪拌しながら保持した。その後、未保護の
分解を表す別の試料（ブランク試料）を取り、酸性化した。
【０３１３】
試料ｂ〜ｅ）５、１０、２０または６０ｍｇのＬ−システイン（０．０４１〜０．４９
２ｍｍｏｌ）を、６０ｍｌのリン酸ナトリウム緩衝液（５％［ｗ／ｗ］、ｐＨ＝７．０）
と共に１００ｍｌフラスコに加え、溶解が完了するまで攪拌した。各フラスコに、６０ｍ
ｇのビルベリー抽出物［３７％アントシアノシド］（０．０４８ｍｍｏｌのシアニジン−
３−Ｏ−グルコシドとして表されるアントシアノシド）を加えた。次いで、撹拌してビル
ベリー抽出物を溶解し、攪拌しながら３７℃（水浴）で４時間保持した。
【０３１４】
４時間後、試料を取り、即時にギ酸でｐＨ＝１．０まで酸性化し、アントシアノシドの
含有量をＨＰＬＣにより分析した。分解を、全てのアントシアノシドについて４時間後の
残留％として計算した合計のピークエリアの減少として表した。
【０３１５】
以下の表から、アントシアノシドが、用量依存的様式でＬ−システインにより実質的に
保護されていたことが決定された。
【０３１６】
【表２０】
2014040466.tif 000028
実施例１１
物質
Ｏｍｎｉｃａ  ＧｍｂＨにより提供されたビルベリーカプセル、試料番号：２００７０
６０１および２００７０６０２。
【０３１７】
ビルベリー抽出物のみを含む試料番号２００７０６０１、ブランク試料として
ビルベリー抽出物および１０％システインを含む試料番号２００７０６０２
５％リン酸ナトリウム緩衝液
分析方法
Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣ、５３０ｎｍでの紫外可視検出器
実験
１００ｍｌのフラスコに、５％リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝７．０）および６０．
０ｍｇのビルベリー抽出物の粉末を、カプセルから加えた。溶液を、全ての固体が十分に
溶解するまで超音波処理した。試料を即時に取り、次いで、フラスコを３７℃の水浴に入
れて４時間維持し、アントシアニンの残留率を決定した。
【０３１８】
結果および結論
ＨＰＬＣデータ
ＨＰＬＣエリアを、化合物の含有量の尺度として用いた。
【０３１９】
含有量は、未置換アントシアニジン塩基を含まなかった。
【０３２０】
２つのカプセル（２００７０６０１および２００７０６０２）の比較
以下の表および図２１〜２６は、システインの使用がビルベリー抽出物を安定化させる
のに役立つ証拠を提供する。
【０３２１】
【表２１】
2014040466.tif 000029
【０３２２】
【表２２】
2014040466.tif 000030
【０３２３】
【表２３】
2014040466.tif 000031
方法
ＣａＣｏ−２細胞の培養
ＣａＣｏ−２細胞を、２０％のウシ胎仔血清、１，２％の非必須アミノ酸、０．８３  
ｍＭのＬ−グルタミン、１，２％のペニシリン−ストレプトマイシンおよび０，１％のメ
ルカプトエタノールを含むダルベッコ修飾イーグル培地中、５％ＣＯ２および９５％空気
雰囲気下、３７℃で培養した。
【０３２４】
細胞を、７５ｃｍ２の培養フラスコ（Ｔ７５）中で生育させ、１週間後に継代した（Ｐ
ＢＳ緩衝液で隔日洗浄し、トリプシンで除去し、新しい培養フラスコに移した）。
【０３２５】
ＣａＣｏ−２試験
実験のため、細胞を１ウェル当たり３×１０５個の細胞の密度で６ウェルプレートに播
種し、５％ＣＯ２および９５％空気雰囲気下、３７℃で７〜８日間、コンフルエンシーに
達するまで生育させた。細胞をＰＢＳ緩衝液で洗浄し、ビルベリー（３０〜６０ｍｇ／１
００ｍｌ培地）またはブラックカラント抽出物（３０〜６０ｍｇ／１００ｍｌ培地）を含
む４ｍｌの培地で３０、６０または１２０分インキュベートした。安定化実験のために、
１００ｍｌに３０ｍｇのグルタチオンを含む培地を用いた。
【０３２６】
対応するインキュベーション時間後、用いたインキュベーション培地の９００μｌを各
ウェルから取り、１００μｌのギ酸と混合した。細胞をＰＢＳ緩衝液で洗浄し、１ｍｌの
１０％ギ酸を用いて取り出した。細胞を３０秒にわたって３回超音波処理し、１０分間遠
心分離し、ペレットを捨てた。上清をＨＰＬＣ用の試料として用いた。
【０３２７】
比較のため、アントシアノシドの安定性を、細胞非含有のインキュベーション培地中、
３７℃にて、０〜１２０分試験した。インキュベーション培地を、上記のようにギ酸で安
定化させた。
【０３２８】
ＨＰＬＣ分析方法（物質、機器および方法）：
アセトニトリル、メタノール（ＨＰＬＣグレード）、ギ酸（ＡＲ）、蒸留水。参照標準
：シアニジン−３−Ｏ−グルコシド（Ｃｌ塩、項目１２０１、Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ  
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ＡＳ、ノルウェー）
ポンプ：Ｍｅｒｃｋ  Ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ  Ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｐｕｍｐ  ６２００
オートサンプラー：Ｍｅｒｃｋ  ＡＳ  ２０００、
検出器：ＨＰ−ＭＶＤ  １０５０、５２０  ｎｍに設定
カラム：Ｂｉｓｃｈｏｆｆ、Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  ＯＤＳ、２５０×４．６ｍｍ
移動相：Ａ：ギ酸／水＝１０／９０
Ｂ：メタノール／アセトニトリル／ギ酸／水＝２０／２０／１０／５０
勾配特性：（図１８を参照のこと）
流速：１．５ｍｌ／分
注入容積：２０μｌ
温度：４５℃
検出：５２０ｎｍ
較正  シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎｇ）−３−Ｏ−グルコシドを用いる５点較正
定量：直線回帰解析に基づく外部標準化。分離した全てのアントシアノシドの応答因子
を、シアニジン−３−Ｏ−グルコシドに対して定量する。
【０３２９】
標準試料（シアニジン−３−Ｏ−グルコシド）
適切な量の標準を１０ｍｌフラスコに移し、１ｍｌのＭｅＯＨに溶解する。フラスコを
、容積まで１０％リン酸で満たす。希釈物を、１０％リン酸中で調製した。
【０３３０】
試料の調製
アントシアノシドをギ酸で安定化した後、インキュベーション実験（細胞含有／非含有
および安定化剤含有／非含有）からの試験溶液を、分析に用いた。試料を、ＨＰＬＣシス
テムに注入する前に、濾過により浄化した。
【０３３１】
例えば、０．５００ｇのビルベリー抽出物を、２％ＨＣｌを含む１０ｍｌのメタノール
中に溶解し、２分間超音波処理した。１ｍｌの溶液を１０ｍｌフラスコに移し、１０％リ
ン酸を用いて容積まで希釈した。試料をＨＰＬＣシステムに注入した。
【０３３２】
データ評価
％分解を、得られた初期値の％で表す。
【０３３３】
細胞への％取り込みとは、細胞中で見出された量に対する、対応する時間におけるイン
キュベーション培地中で得られた量の比を意味する。
【０３３４】
種々のｐＨ値における安定化されたアントシアニン
原料物質
ビルベリー抽出物、２００７０６０２、Ｏｍｎｉｃａ  ＧｍｂＨ
還元Ｌ−グルタチオン、Ｂｉｏ−Ｃｈｅｍｉｃａｌの試薬
リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ値３．０〜１１．０
２０ｍｇの還元Ｌ−グルタチオンを、６０ｍｌの５％リン酸ナトリウム緩衝液（適切な
ｐＨのため）と共に１００ｍｌフラスコに加えた。固体が完全に溶解した後、６０ｍｇの
ビルベリー抽出物を撹拌しながら加え、３７℃で水浴に入れた。種々のｐＨ緩衝液溶液か
らの試料を取り、上記方法により、ＨＰＬＣにより分析した。
【０３３５】
実施例１２
製品（ビルベリー抽出物、Ｏｍｎｉｃａ  ＧｍｂＨ（Ｈａｍｂｕｒｇ）を、３７％（ｍ
／ｍ）アントシアノシドに調整した。未使用ビルベリー中のアントシアノシドの０．３〜
０．４％（ｍ／ｍ）の平均含有量に基づき、手元の抽出物は、１００：１濃縮を表した。
抽出物の残りの６３％は、大部分が未使用液果中に存在するタンパク質および炭水化物で
表される。５００ｍｇのビルベリー抽出物および５０ｍｇのＬ−システインを含む５００
ｍｇのビルベリー抽出物を併用して、以下で利用されるビルベリー／システインの組み合
わせを製造した。以下に示すビルベリー抽出物は、システインを添加しない上記の生成物
である。
【０３３６】
１２名のボランティアは、連続した７日にわたってビルベリー抽出物を摂取した。１週
間の休薬期間後、同じボランティアは、連続した７日にわたってビルベリー／システイン
の組み合わせを摂取した。
【０３３７】
設計は、ランダム化したクロスオーバー観察であった。
【０３３８】
血漿試料を、対応する処置の第１日（処置前、ならびに処置の０．５、１．５、２．５
および４時間後）、第４日（処置前、ならびに処置の０．５時間後）および第７日（処置
前、ならびに処置の０．５、１．５、２．５および４時間後）の各期間の間に採取した。
【０３３９】
調査の主な目的は、両製剤中に存在するアントシアニンの血漿レベルを決定することで
ある。
【０３４０】
分析の最初の実行において、血漿中に存在する全てのアントシアニンを固相抽出により
抽出し、収集後、加水分解して、アントシアニジンを得た。この手順は、両方の製剤から
のビルベリーアントシアニンの実際の吸収についての情報を提供し、かつ吸収された化合
物の代謝による誤った結論を回避するために選択された。効力はアントシアニジン骨格に
存在し、特定のグリコシド化パターンには存在しないが、各代謝産物（すなわち、グルク
ロニド）が製剤から吸収されたとは考えられないであろう。
【０３４１】
分析は、５４０ｎｍでの紫外検出によるＨＰＬＣを含んだ。定量は、信頼できるアント
シアニジン標準での外部標準化に基づいた。方法の回収率は、デルフィニジン−３−Ｏ−
グルコシドおよびシアニジン−３−Ｏ−グルコシドを用いて評価した。これらの２つのビ
ルベリーアントシアニンを、ブランク血漿に混合し、抽出し、調査試料と同じ方法で加水
分解した。回収率は９５％を超えることが示された。調査試料の安定性は、処理されたブ
ランク血漿試料に混合し、調査試料と正確に同じ方法で貯蔵することにより確認した。
【０３４２】
薬物動態学的パラメータは、標準的な非区画法（ｎｏｎ−ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ
ｍｅｔｈｏｄｓ）を用いて計算された。
【０３４３】
略号一覧
ＡＮＯＶＡ・・・・・・分散分析
Ａｒａ・・・アラビノース
ＡＵＣ・・・曲線下面積
ＡＵＣ（０−ｉｎｆ）  ・・・０時点から無限大までのＡＵＣ。
ＡＵＣ（０−ｔ）  ・・・０時点から最後に測定した時点までのＡＵＣ。
ＡＵ（０−４ｈ）  ・・・０時点から８時間までの曲線下面積。
β・・・排出速度定数
Ｃｍａｘ・・・得られた最大血漿濃度
Ｃｎ・・・シアニジン
ＣＶ・・・変動係数
Ｄｐ・・・デルフィニジン
Ｇａｌ・・・ガラクトース
Ｇｌｃ・・・グルコース
ＨＰＬＣ・・・高速液体クロマトグラフィ
ＭＳ・・・質量分析
Ｍｖ・・・マルビジン
Ｐｅ・・・ペオニジン
Ｐｔ・・・ペツニジン
ｔ１／２  ・・・最終血漿半減期
Ｔｍａｘ・・・最大血漿濃度までの時間（Ｃｍａｘ）
ＵＶ・・・紫外線
調査結果：
図２７〜４０は、ビルベリー／システインの組み合わせのアントシアニジン濃度が、シ
ステインを添加しなかったビルベリー由来の試料と比較した場合、血漿中のアントシアニ
ジン濃度の少なくとも２倍量増加することを実証する。このことは、全アントシアニジン
含有量および個別のアントシアニジンで観察され得る。
【０３４４】
以下の表は、ビルベリー中に存在する５つのアントシアニジン（すなわちシアニジン［
Ｃｎ］、デルフィンジン［Ｄｐ］、ペツニジン［Ｐｔ］、ペオニジン［Ｐｅ］およびマル
ビジン［Ｍｖ］）について決定された血漿レベルの平均値±標準偏差（ｓ．ｄ．）を提供
する。
【０３４５】
【表２４】
2014040466.tif 000032
【０３４６】
【表２５】
2014040466.tif 000033
【０３４７】
【表２６】
2014040466.tif 000034
【０３４８】
【表２７】
2014040466.tif 000035
【０３４９】
【表２８】
2014040466.tif 000036
以下の表は、観察された平均血漿レベルから計算された薬物動態学的パラメータを提供
する。
【０３５０】
【表２９】
2014040466.tif 000037
【０３５１】
【表３０】
2014040466.tif 000038
【０３５２】
【表３１】
2014040466.tif 000039
【０３５３】
【表３２】
2014040466.tif 000040
【０３５４】
【表３３】
2014040466.tif 000041
実施例１３
試料の調製：
試料Ａは、実施例１のブランク試料と同じであった。
【０３５５】
試料Ｂ：４８ｍｇ（９．５重量％の還元型グルタチオン）のビール酵母抽出物を、６０
．０ｍｌの５％リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝７．０）を有する１００ｍｌフラスコに
加えた。溶液を均質になるまで攪拌し、次いで、６０ｍｇ（０．０４９ｍｏｌのアントシ
アニン）のビルベリー抽出物を均質になるまで攪拌しながら加えた。試料を、撹拌しなが
ら、３７℃の水浴中に４時間入れた。分解速度の分析をＨＰＬＣにより監視した。
【０３５６】
試料Ｃ：調製は、ビール酵母抽出物の量が１２０ｍｇであったという条件で、実施例Ｂ
と同じであった。
結果：
【０３５７】
【表３４】
2014040466.tif 000042
ＨＰＬＣ試験パラメータは、上記実施例と同じであった。
【０３５８】
本実施例は、ビール酵母抽出物が試料のアントシアニン（ａｎｙｔｈｏｃｙａｎｉｎ）
内容物の分解を減少させる強力な保護効果を示す。
【０３５９】
本発明を、好ましい実施態様を参照して記載してきたが、当業者は、本発明の趣旨およ
び範囲から逸脱することなく形式および詳細において改変がなされ得ることを理解するで
あろう。明細書全体を通して引用された、全ての参考文献（背景におけるものを含む）は
、その全体が本明細書中に援用される。
【０３６０】
当業者は、常套的な実験を用いるだけで、本明細書に特別に記載した発明の特定の実施
態様の多くの均等物を理解するか、または確認することができるであろう。このような均
等物は、以下の特許請求の範囲の範囲内に包含されることが意図される。
【図１】
2014040466.tif 000043
【図２】
2014040466.tif 000044
【図３】
2014040466.tif 000045
【図４】
2014040466.tif 000046
【図５】
2014040466.tif 000047
【図６−１】
2014040466.tif 000048
【図６−２】
2014040466.tif 000049
【図７】
2014040466.tif 000050
【図８】
2014040466.tif 000051
【図９】
2014040466.tif 000052
【図１０】
2014040466.tif 000053
【図１１】
2014040466.tif 000054
【図１２】
2014040466.tif 000055
【図１３】
2014040466.tif 000056
【図１４】
2014040466.tif 000057
【図１５】
2014040466.tif 000058
【図１６】
2014040466.tif 000059
【図１７】
2014040466.tif 000060
【図１８】
2014040466.tif 000061
【図１９】
2014040466.tif 000062
【図２０】
2014040466.tif 000063
【図２１】
2014040466.tif 000064
【図２２】
2014040466.tif 000065
【図２３】
2014040466.tif 000066
【図２４】
2014040466.tif 000067
【図２５】
2014040466.tif 000068
【図２６】
2014040466.tif 000069
【図２７】
2014040466.tif 000070
【図２８】
2014040466.tif 000071
【図２９】
2014040466.tif 000072
【図３０】
2014040466.tif 000073
【図３１】
2014040466.tif 000074
【図３２】
2014040466.tif 000075
【図３３】
2014040466.tif 000076
【図３４】
2014040466.tif 000077
【図３５】
2014040466.tif 000078
【図３６】
2014040466.tif 000079
【図３７】
2014040466.tif 000080
【図３８】
2014040466.tif 000081
【図３９】
2014040466.tif 000082
【図４０】
2014040466.tif 000083
【手続補正書】
【提出日】平成25年11月15日(2013.11.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アントシアニン抽出物および少なくとも１つの−ＳＨ基を有する安定化化合物を含む、安定化されたアントシアニン抽出物組成物であって、前記安定化化合物が、ジヒドロリポ酸、システイン、グルタチオン、ＳＨ−プロテイナーゼ、ＳＨ−メタロプロテイナーゼ、システインを含有するペプチド類、グルタチオンを含有するペプチド類、チオール化キトサン、チオール化ゼラチンまたはそれらの混合物であり、組成物が約２と約１２の間のｐＨを有する水性環境に曝露したときにアントシアニンの分解に対して安定である、アントシアニン抽出物組成物。
【請求項２】
前記アントシアニン抽出物が、ビルベリー抽出物、ブラックカラント抽出物、クランベリー抽出物、クロダイズ抽出物、カウベリー抽出物、ブルーベリー抽出物またはそれらの２つもしくはそれ以上の混合物である、請求項１に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。
【請求項３】
組成物が、約７と約９の間のｐＨを有する水性環境に曝露したときにアントシアニンの分解に対して安定である、請求項１または２に記載の安定化されたアントシアニン抽出物組成物。