(57)【要約】【課題】食用に適する素材由来のＡＣＥ阻害剤及び血圧降下剤として有用な医薬又は飲食品組成物の提供。【解決手段】Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏで示されるトリペプチドと、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｌｅｕ−Ｔｒｐ及びＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏから選ばれるペプチドの少なくとも１種以上とを含有する医薬又は飲食品組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏで示されるトリペプチドと、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｌｅｕ−Ｔｒｐ及びＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏから選ばれるペプチドの少なくとも１種以上とを含有する医薬又は飲食品組成物。
【請求項２】
Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏで示されるトリペプチドと、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｌｅｕ−Ｔｒｐ及びＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏから選ばれるペプチドの少なくとも２種以上とを含有するものである請求項１記載の医薬又は飲食品組成物。
【請求項３】
Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏで示されるトリペプチドと、Ｉｌｅ−Ｔｒｐで示されるジペプチドと、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｌｅｕ−Ｔｒｐ及びＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏから選ばれるペプチドの少なくとも１種以上とを含有するものである請求項１又は２記載の医薬又は飲食品組成物。
【請求項４】
Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｌｅｕ−Ｔｒｐ及びＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏで示されるペプチドを含有するものである請求項１〜３のいずれか１項記載の医薬又は飲食品組成物。
【請求項５】
ブタ肝臓をアスペルギルス・ニガー由来のプロテアーゼで加水分解して得られるものである請求項１〜４のいずれか１項記載の医薬又は飲食品組成物。
【請求項６】
ブタ肝臓をアスペルギスル・ニガー由来のプロテアーゼでpH１．５〜５．０の条件で加水分解して得られるものである請求項１〜５のいずれか１項記載の医薬又は飲食品組成物。
【請求項７】
アンジオテンシン変換酵素阻害剤である請求項１〜６のいずれか１項記載の医薬又は飲食品組成物。
【請求項８】
血圧降下剤である請求項１〜６のいずれか１項記載の医薬又は飲食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害作用を有し、血圧降下剤として有用なペプチド含有医薬又は飲食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、日本人の食生活の欧米化、すなわち高カロリー化、高脂肪化が、いわゆる生活習慣病の増加の大きな原因の１つと考えられている。生活習慣病の一つとして高血圧症が挙げられる。高血圧症は、他の器官等の病変など血圧上昇の原因が明らかなもの（病侯性高血圧）と、不明なもの（本態性高血圧）とに分けられている。本態性高血圧の原因としては、レニン−アンジオテンシン系が血圧上昇の重要な役目を担っていると考えられているが、その詳しい発症メカニズムは確定されてはいない。
【０００３】
高血圧症の治療薬としては、レニン−アンジオテンシン系の働きを阻害するものが主流となっており、ＡＣＥ阻害薬やアンジオテンシンIIの受容体ブロッカーが使われている。そのうち、ＡＣＥ阻害薬である合成化合物には副作用としての空咳等が知られており、軽度高血圧患者や正常高値血圧者では特定保健用食品などの摂取も行われている。
【０００４】
ＡＣＥ阻害作用によって血圧降下を示すものとしては、カツオ節、イワシ肉、乳、胡麻、海苔、ワカメ、ローヤルゼリーなどのタンパク質を酵素分解して得られるペプチドが知られている（特許文献１、２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平６−８７８８６号公報
【特許文献１】特開平７−１８８２８３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、従来のプロテアーゼ分解物のＡＣＥ阻害作用は、未だ十分なものではなかった。
従って、本発明の課題は、食用に適する素材由来のＡＣＥ阻害剤及び血圧降下剤として有用な医薬又は飲食品組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そこで本発明者は、食用素材であるにもかかわらず、十分に利用されていないブタ肝臓に着目し、種々のプロテアーゼを用いて加水分解し、その加水分解物のペプチド組成及びＡＣＥ阻害作用を検討してきたところ、ブタ肝臓のアスペルギルス・ニガー由来のプロテアーゼによる加水分解物が、ジペプチド及びトリペプチドを主成分とする特異な組成を有する組成物であり、前記従来のプロテアーゼ分解物よりも顕著に優れたＡＣＥ阻害活性を有することを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、次の［１］〜［８］を提供するものである。
［１］Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏで示されるトリペプチドと、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｌｅｕ−Ｔｒｐ及びＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏから選ばれるペプチドの少なくとも１種以上とを含有する医薬又は飲食品組成物。
［２］Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏで示されるトリペプチドと、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｌｅｕ−Ｔｒｐ及びＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏから選ばれるペプチドの少なくとも２種以上とを含有するものである［１］記載の医薬又は飲食品組成物。
［３］Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏで示されるトリペプチドと、Ｉｌｅ−Ｔｒｐで示されるジペプチドと、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｌｅｕ−Ｔｒｐ及びＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏから選ばれるペプチドの少なくとも１種以上とを含有するものである［１］又は［２］記載の医薬又は飲食品組成物。
［４］Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｌｅｕ−Ｔｒｐ及びＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏで示されるペプチドを含有するものである［１］〜［３］のいずれかに記載の医薬又は飲食品組成物。
［５］ブタ肝臓をアスペルギルス・ニガー由来のプロテアーゼで加水分解して得られるものである［１］〜［４］のいずれかに記載の医薬又は飲食品組成物。
［６］ブタ肝臓をアスペルギスル・ニガー由来のプロテアーゼでpH１．５〜５．０の条件で加水分解して得られるものである［１］〜［５］のいずれかに記載の医薬又は飲食品組成物。
［７］アンジオテンシン変換酵素阻害剤である［１］〜［６］のいずれかに記載の医薬又は飲食品組成物。
［８］血圧降下剤である［１］〜［６］のいずれかに記載の医薬又は飲食品組成物。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の組成物は、ブタ肝臓由来のジペプチド及びトリペプチドを主成分とする組成物であり、優れたＡＣＥ阻害活性を有することから、血圧降下剤として有用であり、医薬又は飲食品用の組成物として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ＳＨＲ（自然発症高血圧ラット）の血圧に対する本発明組成物の作用を示す。
【図２】ＷＫＹ（正常血圧）ラットの血圧に対する本発明組成物の作用を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の医薬又は飲食品組成物は、Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏで示されるトリペプチドと、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｌｅｕ−Ｔｒｐ及びＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏから選ばれるペプチドの少なくとも１種以上とを含有する。
【００１２】
本発明の組成物中の８種のペプチドのうち、Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏは、ＡＣＥ阻害活性が強く、かつ組成物中のＡＣＥ阻害活性の寄与率が高く、重要である。
【００１３】
残余の７種のペプチドについては、それらのいずれか１種以上を含有すればよいが、２種以上を含むのが好ましい。またＩｌｅ−ＴｒｐがＡＣＥ阻害活性が強く、かつ組成物中のＡＣＥ阻害活性の寄与率も高い。
従って、本発明の組成物においては、Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏで示されるトリペプチドと、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｌｅｕ−Ｔｒｐ及びＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏから選ばれるペプチドの少なくとも２種以上とを含有する組成物が好ましい。
また、Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏで示されるトリペプチドと、Ｉｌｅ−Ｔｒｐで示されるジペプチドと、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｌｅｕ−Ｔｒｐ及びＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏから選ばれるペプチドの少なくとも１種以上とを含有する組成物がより好ましい。
また、Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｌｅｕ−Ｔｒｐ及びＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏで示されるペプチドを含有する組成物がさらに好ましい。
【００１４】
本発明組成物中のＩｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏの含有量は、ＡＣＥ阻害活性の点から１〜９μＭ／タンパク質mgが好ましく、１〜７μＭ／タンパク質mgがより好ましく、２〜７μＭ／タンパク質mgがさらに好ましい。同様にＩｌｅ−Ｔｒｐの含有量は０．５〜７μＭ／タンパク質mgが好ましく、０．５〜５μＭ／タンパク質mgがより好ましく、１〜５μＭ／タンパク質mgがさらに好ましい。同様にＩｌｅ−Ｔｙｒの含有量は、０．５〜５μＭ／タンパク質mgが好ましく、０．５〜４μＭ／タンパク質mgがより好ましく、０．５〜３μＭ／タンパク質mgがさらに好ましい。同様にＶａｌ−Ｔｙｒの含有量は、０．５〜５μＭ／タンパク質mgが好ましく、０．５〜４μＭ／タンパク質mgがより好ましく、０．５〜３μＭ／タンパク質mgがさらに好ましい。同様にＭｅｔ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの含有量は、０．１〜１．５μＭ／タンパク質mgが好ましく、０．１〜１．２μＭ／タンパク質mgがより好ましく、０．１〜１．０μＭ／タンパク質mgがさらに好ましい。同様にＴｈｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの含有量は、０．２〜５μＭ／タンパク質mgが好ましく、０．２〜４μＭ／タンパク質mgがより好ましく、０．４〜４μＭ／タンパク質mgがさらに好ましい。同様にＬｅｕ−Ｔｒｐの含有量は、０．５〜５μＭ／タンパク質mgが好ましく、０．５〜４μＭ／タンパク質mgがより好ましく、０．５〜３μＭ／タンパク質mgがさらに好ましい。同様にＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの含有量は、０．０２〜３μＭ／タンパク質mgが好ましく、０．０２〜２μＭ／タンパク質mgがより好ましく、０．０４〜２μＭ／タンパク質mgがさらに好ましい。
【００１５】
また、本発明の組成物中には、ペプチドの他に、タンパク質、脂肪類、炭水化物、核酸類、ビタミン類、ミネラル類など肝臓由来成分が含まれていてもよい。
【００１６】
本発明の組成物は、ブタ肝臓をアスペルギルス・ニガー由来のプロテアーゼで加水分解することにより製造することができる。ブタ肝臓としては、食用のブタ肝臓であれば、その品種を問わず、交配種でもよい。ブタの肝臓は、生の状態のものでも冷凍保存したものを解凍したものでも良い。加水分解するための前処理としては、細切からミンチ状にすることが望ましいが、必ずしも必要ではない。
【００１７】
加水分解に用いるプロテアーゼは、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）由来のものであればよいが、至適pHが１．５〜５．０の範囲にあるものが好ましい。好適なアスペルギルス・ニガー由来のプロテアーゼとしては、スミチームＡＰ（新日本化学工業（株）製、商品名）、オリエンターゼＡＹ（エイチビィアイ（株）製、商品名）、バリダーゼＡＦＰ（ディー・エス・エム  ジャパン社製、商品名）、プロテアーゼＹＰ−ＳＳ（ヤクルト薬品工業（株）製、商品名）などが挙げられる。プロテアーゼはブタ肝臓１ｋｇあたり好ましくは２〜５０ｇ、より好ましくは２〜３０ｇ、さらに好ましくは４〜３０ｇ使用する。
【００１８】
加水分解時には、ブタ肝臓の他に水を加えることができる。その他、加水分解に影響のないものの添加は制限されない。プロテアーゼを添加する前に内因性のプロテアーゼを失活させるために加熱しておいてもよい。
【００１９】
加水分解条件は、pH１．５〜５．０、より好ましくはpH２．５〜４．０、さらに好ましくはpH２．５〜３．５にて、また、反応温度４０〜６０℃、より好ましくは４５〜５５℃にて、さらに、分解時間として４〜３６時間、より好ましくは１２〜２４時間とするのが好ましい。
なお、pH調整のための酸及びアルカリは、食品又は医薬品に用いることができるものであれば特に制限されないが、塩酸、水酸化ナトリウム等が使用可能である。
【００２０】
分解終了後には、添加したプロテアーゼを失活させるために加熱することができる。一般的には８０℃以上を３０分保つことで失活と共に殺菌を行うが、その温度と時間は目的を達することができる条件であれば特に規定されない。
加熱後に、加水分解物を含む水層と残渣の分離をしても良く、その方法としては、静置による固液分離、遠心分離、ろ過などの方法があるが特に制限されない。
加水分解物を含む水層あるいは加水分解物を含む水層と残渣の混合物は、そのまま利用しても良く、凍結乾燥法や噴霧乾燥法など特に制限されない方法で乾燥物として用いることができる。また、クロマトグラフィー法などによりさらに精製して利用することもできる。
【００２１】
得られたペプチド含有組成物は、優れたＡＣＥ阻害活性を有し、血圧降下剤として、あるいは血圧が高めの方に等と表示された機能性食品、特定保健用食品として有用である。特に、本発明の組成物のＡＣＥ阻害活性はＩＣ50値として２０〜３０mg／mlであり、強力である。
【００２２】
本発明の組成物は、経口投与又は非経口投与のいずれでも使用できるが、経口投与が望ましい。投与に関しては、有効成分であるペプチド含有組成物の投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬品製剤の形態で投与することができる。
【００２３】
本発明の組成物を使用する際の投与量に厳格な制限はない。対象者や症状等の様々な使用態様によって得られる効果が異なるため、適宜投与量を設定することが望ましいが、その好適な投与量はペプチド組成物の乾燥重量で１日当たり１ｍｇ〜１０ｇ、より好ましくは１０ｍｇ〜１ｇである。
【００２４】
このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の固体剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、凍結乾燥剤等が挙げられる。これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、澱粉、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水等が挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤、賦形剤等の慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
【００２５】
また、本発明の組成物は、上記のような医薬品として用いるだけでなく、飲食品等として用いることもできる。この場合には、ペプチド組成物をそのまま、または種々の栄養成分を加えて、飲食品中に含有せしめればよい。この飲食品は、高血圧症に有用な保健用食品又は食品素材として利用でき、これらの飲食品又はその容器には、前記の効果を有する旨の表示を付してもよい。具体的にペプチド組成物を飲食品に配合する場合は、飲食品として使用可能な添加剤を適宜使用し、慣用の手段を用いて食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペースト等に成形してもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージ等の食肉加工品、かまぼこ、ちくわ等の水産加工品、パン、菓子、バター、粉乳、発酵飲食品に添加して使用したり、水、果汁、牛乳、清涼飲料、茶飲料等の飲料に添加して使用してもよい。なお、飲食品には動物用の飼料も含まれる。
【実施例】
【００２６】
以下、実施例を挙げて本発明の内容をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらにより何ら制約されるものではない。実施例中、Ｉｌｅ−Ａｒｇ−ＰｒｏはＩＲＰ、Ｉｌｅ−ＴｒｐはＩＷ、Ｉｌｅ−ＴｙｒはＩＹ、Ｖａｌ−ＴｙｒはＶＹ、Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−ＰｒｏはＭＰＰ、Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＰｒｏはＴＰＰ、Ｌｅｕ−ＴｒｐはＬＷ、Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＰｒｏはＩＰＰと記載した。
【００２７】
実施例１
ブタの肝臓４００ｇをミンチし、精製水３００mlを加えて懸濁した。食品添加物塩酸を用いてpH３．０に調整し、水浴上で撹拌しながら８０℃３０分加熱後冷却し、５０℃に保温し、オリエンターゼＡＹ６．５ｇを精製水１０mlに懸濁して加えた。その２時間後にpHを３．０に再調整し、さらに２１時間加水分解を行った。食品添加物水酸化ナトリウムを用いてpH７．０に調整し、精製ラード１０ｇを加えた後にガスコンロにて、９０℃以上１時間加熱し、酵素の失活ならびに殺菌を行った。それを分液ロートに入れて６０℃の恒温層に２２時間放置して、水層と残渣を分離させて得た水層をラジオライトをろ過助剤として用いてろ過し、得られたろ液を凍結乾燥して肝臓加水分解物８４ｇを得た。
【００２８】
肝臓加水分解物の分析は下記の方法にて行った。
水分は、常温加熱乾燥法にて測定した。
タンパク質は、ケルダール法にて測定した。
脂質は、ソックスレー抽出法にて測定した。
灰分は、直接灰化法にて測定した。
炭水化物は、計算にて求めた。
ＡＣＥ阻害活性は、ＡＣＥｋｉｔ（同仁化学社製）を用いて測定し、ＩＣ５０値を求めた。
ペプチドの定量は、４０００  ＱＴＲＡＰTM  ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ  システム（ＡＢ  ＳＣＩＥＸ社製）を用いて行った。
カラム：Sepax Bio-C18
移動相：「水−アセトニトリル（９７：３）  ０．１％ギ酸含有」から
「水−アセトニトリル（２０：８０）  ０．１％ギ酸含有」へ直線勾配（６０分）
流  速：０．２ml／min
また、肝臓加水分解物のＡＣＥ阻害活性に占める各ペプチドの寄与率は、下記の式にて求めた。
【００２９】
（数１）
寄与率（％）＝ブタ肝臓加水分解物ＩＣ５０（μｇ／ml）×ペプチド定量値（μＭ／ｍｇ）／１０００／ペプチドＩＣ５０（μＭ／ml）×１００
【００３０】
これら結果は、表１および表４に記す。
【００３１】
実施例２
ブタの肝臓４００ｇをミンチし、精製水３００mlを加えて懸濁した。食品添加物塩酸を用いてpH３．０に調整し、水浴上で撹拌しながら５０℃に加温し、プロテアーゼＹＰ−ＳＳ６．５ｇを精製水１０mlに懸濁して加えた。その２時間後にｐＨを３．０に再調整し、さらに２１時間加水分解を行った。食品添加物水酸化ナトリウムを用いてpH７．０に調整し、精製ラード１０ｇを加えた後にガスコンロにて、９０℃以上１時間加熱し、酵素の失活ならびに殺菌を行った。それを分液ロートに入れて６０℃の恒温層に２２時間放置して、水層と残渣を分離させて得た水層をラジオライトをろ過助剤として用いてろ過し、得られたろ液を凍結乾燥して肝臓加水分解物８９ｇを得た。
【００３２】
分析は、実施例１と同様に行った。
これら結果は、表１および表４に記す。
【００３３】
実施例３
ブタの肝臓８０００ｇをミンチし、精製水６０００mlを加えて懸濁した。食品添加物塩酸を用いてpH３．０に調整し、二重釜で撹拌しながら蒸気により６０℃で３０分間加温し、５０℃に冷却した後、プロテアーゼＹＰ−ＳＳ１３０ｇを精製水１００mlに懸濁して加えた。その２時間後にｐＨを３．０に再調整し、さらに２１時間加水分解を行った。食品添加物水酸化ナトリウムを用いてpH７．０に調整し、精製ラード２００ｇを加えた後に蒸気により加熱し、９０℃以上１時間加熱し、酵素の失活ならびに殺菌を行った。それを２２時間放置して、水層と残渣を分離させて得た水層をラジオライトをろ過助剤として用いてろ過し、得られたろ液を噴霧乾燥して肝臓加水分解物１６８０ｇを得た。
【００３４】
分析は、実施例１と同様に行った。
これら結果は、表１および表４に記す。
【００３５】
比較例１〜８
ブタの肝臓４００ｇをミンチし、精製水３００mlを加えて懸濁した。pHと分解温度は表２の通りに設定した。ｐＨ調整は食品添加物塩酸、または、食品添加物水酸化ナトリウムを用いて行い、水浴上で撹拌しながらそれぞれの温度に加温し、各酵素６．５ｇを精製水１０mlに懸濁して加えた。その２時間後にpHを再調整し、さらに２１時間加水分解を行った。精製ラード１０ｇを加えた後にガスコンロにて、９０℃以上１時間加熱し、酵素の失活ならびに殺菌を行った。それを分液ロートに入れて６０℃の恒温層に２２時間放置して、水層と残渣を分離させて得た水層をラジオライトをろ過助剤として用いてろ過し、得られたろ液のを凍結乾燥した。
【００３６】
ＡＣＥ阻害活性は実施例１と同様に測定し、結果を表２に記す。
【００３７】
参考例１
合成したペプチドのＡＣＥ阻害活性は実施例１と同様に測定し、結果を表３に記す。
【００３８】
実施例４
実施例２で得たブタ肝臓加水分解物を、自然発症高血圧ラット（以下、ＳＨＲ）に投与して血圧降下作用を試験した。
１５週齢のＳＨＲ５匹にオリエンタル酵母製特注飼料ＡＩＮ−９３Ｇに実施例２で得たブタ肝臓加水分解物を０．１２％添加したものを４週間給餌し、血圧の変化を観察した。対照として、１５週齢のＳＨＲ５匹にオリエンタル酵母製特注飼料ＡＩＮ−９３Ｇを４週間給餌し、血圧の変化を観察した。
血圧測定は、米国ＩＩＴＣ社製ＡＰＯＬＬＯ１７９型を用い、３３±１℃のチャンバー内で尾部にて測定した。結果を図１に示す。
【００３９】
実施例５
実施例２で得たブタ肝臓加水分解物を、ＷＫＹラット（正常血圧）に投与して血圧降下作用を試験した。
１５週齢のＷＫＹラット５匹にオリエンタル酵母製特注飼料ＡＩＮ−９３Ｇに実施例２で得たブタ肝臓加水分解物を０．１２％添加したものを４週間給餌し、血圧の変化を観察した。対照として、１５週齢のＷＫＹラット５匹にオリエンタル酵母製特注飼料ＡＩＮ−９３Ｇを４週間給餌し、血圧の変化を観察した。
血圧測定は、米国ＩＩＴＣ社製ＡＰＯＬＬＯ１７９型を用い、３３±１℃のチャンバー内で尾部にて測定した。結果を図２に示す。
【００４０】
【表１】
2014118347.tif 000002
【００４１】
【表２】
2014118347.tif 000003
【００４２】
【表３】
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【００４３】
【表４】
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【００４４】
ブタ肝臓加水分解物（実施例１および実施例２）は、表１および表２から明らかなように、他の酵素を用いて作成したブタ肝臓加水分解物（比較例１〜８）よりも高いＡＣＥ阻害活性を示した。
ブタ肝臓加水分解物（実施例１および実施例２）の高いＡＣＥ阻害活性は、表３および表４から明らかなように、ＩＲＰ、ＩＷ、ＩＹ、ＶＹ、ＭＰＰ、ＴＰＰ、ＬＷ、ＩＰＰのペプチドを含むことによって得られることを示している。また、その中でも、ＩＲＰ、ＩＷの２種が高い寄与をしていることが分かる。
【００４５】
ブタ肝臓加水分解物（実施例２）は図１から明らかなように、４週間投与においてＳＨＲの血圧上昇を抑制した。
ブタ肝臓加水分解物（実施例２）は図２から明らかなように、４週間投与においても高血圧ではないＷＫＹラットの血圧には影響しなかった。
【図１】
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【図２】
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