(57)【要約】      （修正有）【課題】より正確なＡＤの診断及び発症予測を可能とする方法を提供する。【解決手段】ｐ３−Ａｌｃ（特には、ｐ３−Ａｌｃβ３７及びｐ３−Ａｌｃ４０）の数値の変化がＣＤＲの進展と相関を有することを見出したことに基づき、認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することを含む、γ−セクレターゼの異常を早期に検出する方法。また、ｐ３−Ａｌｃが患者の定量的診断及び予後の予測に有用であることから、薬物投与や治療停止の効果の判定にも有用であることが見出された。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することを含む、γ−セクレターゼの異常を早期に検出する方法。
【請求項２】
認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することを含む、認知症又はアルツハイマー病の進展、発症、又は進行度を早期に予測又は判定する方法。
【請求項３】
認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
測定された検体中のｐ３−Ａｌｃレベルから当該患者の認知症又はアルツハイマー病の進展、発症、又は進行度を判定又は予測すること
を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃを所望の期間をおいて複数回測定すること、
測定された検体中のｐ３−Ａｌｃレベルの変化から当該患者の認知症又はアルツハイマー病の進展、発症、又は進行度を予測すること
を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
測定されたｐ３−Ａｌｃレベル又は値の変化から認知症又はアルツハイマー病の進展、発症、又は進行度を定量化することを含む、請求項２〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
認知症の発症を早期に予測する方法である、請求項２〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
アルツハイマー病の発症を早期に予測する方法である、請求項２〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
アルツハイマー病への進展発症を早期に予測する方法である、請求項２〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
アルツハイマー病の病態進行度を判定する方法である、請求項２〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
治療を受けている認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することを含む、当該治療の認知症又はアルツハイマー病の治療又は予防効果を早期に予測又は判定する方法。
【請求項１１】
治療を施された認知症又はアルツハイマー病患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
測定されたｐ３−Ａｌｃレベルから当該患者に対する認知症又はアルツハイマー病に対する治療効果を予測すること
を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
治療開始前における認知症又はアルツハイマー病患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、
治療開始後における当該患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
測定された治療開始前及び治療開始後のｐ３−Ａｌｃレベルの変化から当該患者に対する認知症又はアルツハイマー病の治療効果を判定すること
を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
治療開始後における当該患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃを期間をおいて複数回測定することによりモニタリングすること、
測定された治療開始後の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルの変化から当該患者に対する認知症又はアルツハイマー病の治療効果を判定すること
を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
測定されたｐ３−Ａｌｃレベル又は値の変化から認知症又はアルツハイマー病の治療効果を定量化することを含む、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
治療を中止したアルツハイマー病患者を含む認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することを含む、治療休止後の認知症又はアルツハイマー病の症状の変化を早期に予測又は判定する方法。
【請求項１６】
治療を中止した認知症又はアルツハイマー病患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
測定されたｐ３−Ａｌｃレベルから当該患者における治療休止後の認知症又はアルツハイマー病の症状の変化を予測すること
を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
治療中における認知症又はアルツハイマー病患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、
治療中止後における当該患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
測定された治療中及び治療中止後のｐ３−Ａｌｃレベルの変化から当該患者における治療休止による認知症又はアルツハイマー病に対する効果を判定すること
を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
治療中止後における当該患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃを期間をおいて複数回測定することによりモニタリングすること、及び、
測定された治療中止後のｐ３−Ａｌｃレベルの変化から当該患者における治療休止による認知症又はアルツハイマー病に対する効果を判定すること
を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
測定されたｐ３−Ａｌｃレベル又は値の変化から認知症又はアルツハイマー病患者における治療休止による認知症又はアルツハイマー病に対する効果を定量化することを含む、請求項１５〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
治療がγ−セクレターゼ阻害剤、γ−セクレターゼワクチン、高脂血症治療剤、脂質代謝改善剤、又は、脳神経細胞傷害予防効果を持つ薬剤による治療である、請求項１０〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
高脂血症治療剤がスタチンである請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
更に、検体中のｐ３−Ａｌｃと共に、ｐ３−Ａｌｃとは異なる認知症又はアルツハイマー病の進展、発症、又は進行度の指標を測定することを含む、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
検体が認知症疑い患者ないしは認知症患者、特にアルツハイマー病患者の体液、ヒト脳組織から採取した生体試料又はその処理物である請求項１〜２２に記載の方法。
【請求項２４】
被験薬をアルツハイマー病モデル動物に投与すること、及び
当該モデル動物由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することを含む、
γ−セクレターゼの阻害剤および活性修飾剤のスクリーニング方法。
【請求項２５】
ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化した、固相、ハプテン、磁気ビーズ及び不溶性担体からなる群より選択される担体を含むことを特徴とする、請求項１〜２４の方法に用いるための免疫化学測定のキット。
【請求項２６】
ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する標識化された第二抗体、又は該第二抗体が固定化したハプテンもしくは不溶性担体、をさらに含むことを特徴とする請求項２５に記載の免疫化学測定のキット。
【請求項２７】
（１）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化した固相、及び
（２）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する標識化された第二抗体、
を含むことを特徴とする請求項２６に記載の免疫化学測定のキット。
【請求項２８】
（１）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化したハプテン、及び
（２）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する標識化された第二抗体、
を含むことを特徴とする請求項２６に記載の免疫化学測定のキット。
【請求項２９】
前記ハプテンと特異的に結合する物質が固定化した固相をさらに含むことを特徴とする請求項２６に記載の免疫化学測定のキット。
【請求項３０】
（１）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化した固相、及び
（２）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第二抗体が固定化したハプテン、
を含むことを特徴とする請求項２６に記載の免疫化学測定のキット。
【請求項３１】
前記ハプテンと特異的に結合する、標識された物質をさらに含むことを特徴とする請求項３０に記載の免疫化学測定のキット。
【請求項３２】
（１）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化した磁気ビーズ、及び
（２）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する標識化された第二抗体、
を含むことを特徴とする請求項２６に記載の免疫化学測定のキット。
【請求項３３】
（１）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化した不溶性担体、及び
（２）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第二抗体が固定化した不溶性担体、
を含むことを特徴とする請求項２６に記載の免疫化学測定のキット。
【請求項３４】
標識と反応する基質をさらに含む請求項２５〜３３のいずれか１項に記載の免疫化学測定のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、認知症又はアルツハイマー病の診断又は予後予測の分野に関する。より具体的には、本発明は体液中のアルカデインペプチド切断物の量又は量的変化を検出することによる認知症又はアルツハイマー病の診断方法に関する。また、本発明は、認知症又はアルツハイマー病の診断又は予後予測に用いる、体液中のアルカデインペプチド切断物の量又は量的変化を検出するためのキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ：以下、「ＡＤ」という）は、種々の認知機能が進行しながら障害を受ける神経変性疾患である。ＡＤの病態解明及び病因メカニズムの解明が進むにつれて根本的治療（ｄｉｓｅａｓｅ−ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｙ）の開発が進展している。このような治療方法の開発が進むにつれて、ＡＤの早期診断・発見が求められるようになってきた。
【０００３】
アルカデイン（Ａｌｃａｄｅｉｎ：以下、「Ａｌｃ」という）は、主に神経細胞に発現している、進化的に保存されたタイプＩ膜タンパク質のファミリーから構成される。Ａｌｃは、神経特異的アダプタータンパク質Ｘ１１Ｌ結合タンパク質（非特許文献１参照）、及び、シナプス後のＣａ２＋結合タンパク質（カルシンテニン（ｃａｌｓｙｎｔｅｎｉｎ）とも呼ばれている）（非特許文献２参照）の両方として個別に同定されてきた。哺乳類では、Ａｌｃには次の４つの分子種が報告されている：Ａｌｃα１（ヒトでは９７１アミノ酸）、Ａｌｃα２（ヒトでは９８１アミノ酸）、Ａｌｃβ（ヒトでは９５６アミノ酸）、及び、Ａｌｃγ（ヒトでは９５５アミノ酸）（非特許文献１参照）。Ａｌｃα、Ａｌｃβ、及び、Ａｌｃγは、独立した遺伝子によりコードされる一方、Ａｌｃα１及びＡｌｃα２はＡｌｃα遺伝子のスプライスバリアントである。Ａｌｃは、Ｘ１１Ｌとの相互作用を介して、安定化され、かつ、非直接的にアミロイドβタンパク質前駆体（ａｍｙｌｏｉｄ  β  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ：以下、「ＡＰＰ」という）と複合体を形成する。Ａｌｃは、ＡＰＰ及びＸ１１Ｌと三量体を形成している場合、いずれもタンパク質分解代謝に抵抗性を示す（非特許文献１）。Ａｌｃ−Ｘ１１Ｌ−ＡＰＰ複合体中のＡｌｃはタンパク質分解に抵抗性を示すが、複合体を形成しないＡｌｃは連続したタンパク質分解により切断されて短鎖ペプチドを生成することが報告されている（非特許文献３参照）。また、Ａｌｃの一次切断が細胞外膜近傍領域で起こり、Ａｌｃの細胞外ドメイン（可溶性Ａｌｃ（ｓｏｌｕｂｌｅ  Ａｌｃ）：ｓＡｌｃ）を放出すること、切断後のＡｌｃの細胞結合型Ｃ末端断片（ａｌｃａｄｅｉｎ  ｃａｒｂｏｘｙｌ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ、以下「ＣＴＦ」という）は、膜間部切断プロテアーゼにより切断されること、及び、Ａｌｃ切断の両方がＡＰＰにおいて対応する反応と協調していることが報告されている。（非特許文献３参照）。また、Ａｌｃの二次切断（Ａｌｃ  ＣＴＦの切断）には、プレセニン（以下、「ＰＳ」という）依存性γセクレターゼが関与することが報告されている。
【０００４】
本発明者らは、既にＡＰＰのｐ３ドメインに該当する、Ａｌｃ由来の短鎖ペプチド（以下、「ｐ３−Ａｌｃ」という）は、Ａｌｃ  ＣＴＦがγセクレターゼにより切断されることにより分泌されることを報告している（特許文献１及び特許文献２参照）。また、本発明者らは、家族性ＡＤにおけるＰＳの変異がｐ３−Ａｌｃの切断部位を変化させることを報告している（特許文献１及び特許文献２; 非特許文献４参照）。ｐ３−Ａｌｃの切断部位の変化は家族性ＡＤの一つの指標とはなりうるものの、散発性ＡＤを含むＡＤのより確実な診断又は進展予測を可能とする診断方法が求められていた。また、これまで、ＡＤの進行について予後を予測するマーカは知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開公報ＷＯ２００５／０４４８４７
【特許文献２】国際公開公報ＷＯ２００９／０７５０８４
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ａｒａｋｉ，ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８，４９４４８−４９４５８．
【非特許文献２】Ｖｏｇｔ，ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１７，１５１−１６６．
【非特許文献３】Ａｒａｋｉ，ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９，２４３４３−２４３５４．
【非特許文献４】Ｈａｔａ，ｅｔ  ａｌ．，（２００9）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２8４，３６０２４−３６０３３．
【発明の概要】
【０００７】
本発明者らは、より正確なＡＤの診断及び発症予測を可能とすべく、患者における認知障害の進行度（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ  Ｒａｔｉｎｇ：ＣＤＲ）の判定を厳密に行うと共に、当該患者由来の髄液中のｐ３−Ａｌｃレベルの測定及び分析を行った結果、ｐ３−Ａｌｃ（特には、ｐ３−Ａｌｃβ３７及びｐ３−Ａｌｃβ４０）の数値の変化がＣＤＲの進展と相関を有することを見出した。具体的には、ＣＤＲ  ０．５およびＣＤＲ１でｐ３−Ａｌｃレベルは最大値を示した後、認知障害が悪化（ＣＤＲ値が増加）するにつれてｐ３−Ａｌｃが劇的に減少することを見出した。この傾向は、従来ＡＤ診断の指標として用いられてきたｐ−ｔａｕがＣＤＲ０.５を境に変化がなくなるのとは大きく異なり、特にＣＤＲ０．５以上の対象の定量的診断において有用であることが見出された。また、本発明者らは、患者のＣＤＲとｐ３−Ａｌｃについて、継続的に観察を続けた結果、ｐ３−Ａｌｃレベルが、現在の患者の状態の指標となるのみならず、患者の予後を予測するマーカとしても有用であることを見出した。これまで、ＡＤの進行について予後を予測するマーカは知られておらず、ｐ３−Ａｌｃにより予後が予測できることによって、予後に応じた患者の治療方針の選択等を可能とすることができた。また、ｐ３−Ａｌｃが患者の定量的診断及び予後の予測に有用であることから、薬物投与や治療停止の効果の判定にも有用であることが見出した。
【０００８】
本発明は、ｐ３−Ａｌｃレベルを測定することによる認知症又はＡＤの早期診断方法又は予後予測方法等を提供するものである。具体的には、本発明は、以下の（１）〜（３４）に記載の発明に関する。また、本発明は、以下の（１）〜（２３）の方法に使用するための診断薬に関する。更に、本発明は、以下の（１）〜（２３）の方法のための情報を提供する方法に関する。
（１）  認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することを含む、γ−セクレターゼの異常を早期に検出する方法。
（２）  認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することを含む、認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度を早期に予測又は診断／判定する方法。
（３）  認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
測定された検体中のｐ３−Ａｌｃレベルから当該患者の認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度を診断／判定又は予測すること
を含む、（２）に記載の方法。
（４）  認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃを所望の期間をおいて複数回測定すること、
測定された検体中のｐ３−Ａｌｃレベルの変化から当該患者の認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度を診断／判定又は予測すること
を含む、（２）に記載の方法。
（５）  測定されたｐ３−Ａｌｃレベル又は値の変化から認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度を定量化することを含む、（２）〜（４）のいずれか１項に記載の方法。
（６）  認知症の発症を早期に予測する方法である、（２）〜（５）のいずれか１項に記載の方法。
（７）  ＡＤの発症を早期に予測する方法である、（２）〜（５）のいずれか１項に記載の方法。
（８）  ＡＤへの進展発症を早期に予測する方法である、（２）〜（５）のいずれか１項に記載の方法。
（９）  ＡＤの病態進行度を判定する方法である、（２）〜（５）のいずれか１項に記載の方法。
（１０）  治療を受けている認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することを含む、当該治療の認知症又はＡＤの治療又は予防効果を早期に予測又は判定する方法。
（１１）  治療を施された認知症又はＡＤ患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
測定されたｐ３−Ａｌｃレベルから当該患者に対する認知症又はＡＤに対する治療効果を予測すること
を含む、（１０）に記載の方法。
（１２）  治療開始前における認知症又はＡＤ患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、
治療開始後における当該患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
測定された治療開始前及び治療開始後のｐ３−Ａｌｃレベルの変化から当該患者に対する認知症又はＡＤの治療効果を判定すること
を含む、（１０）に記載の方法。
（１３）  治療開始後における当該患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃを期間をおいて複数回測定することによりモニタリングすること、
測定された治療開始後の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルの変化から当該患者に対する認知症又はＡＤの治療効果を判定すること
を含む、（１０）に記載の方法。
（１４）  測定されたｐ３−Ａｌｃレベル又は値の変化から認知症又はＡＤの治療効果を定量化することを含む、（１０）〜（１３）のいずれか１項に記載の方法。
（１５）  治療を中止したＡＤ患者を含む認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することを含む、治療休止後の認知症又はＡＤの症状の変化を早期に予測又は判定する方法。
（１６）  治療を中止した認知症又はＡＤ患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
測定されたｐ３−Ａｌｃレベルから当該患者における治療休止後の認知症又はＡＤの症状の変化を予測すること
を含む、（１５）に記載の方法。
（１７）  治療中における認知症又はＡＤ患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、
治療中止後における当該患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
測定された治療中及び治療中止後のｐ３−Ａｌｃレベルの変化から当該患者における治療休止による認知症又はＡＤに対する効果を判定すること
を含む、（１５）に記載の方法。
（１８）  治療中止後における当該患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃを期間をおいて複数回測定することによりモニタリングすること、及び、
測定された治療中止後のｐ３−Ａｌｃレベルの変化から当該患者における治療休止による認知症又はＡＤに対する効果を判定すること
を含む、（１５）に記載の方法。
（１９）  測定されたｐ３−Ａｌｃレベル又は値の変化から認知症又はＡＤ患者における治療休止による認知症又はＡＤに対する効果を定量化することを含む、（１５）〜（１９）のいずれか１項に記載の方法。
（２０）  治療がγ−セクレターゼ阻害剤、γ−セクレターゼワクチン、高脂血症治療剤、脂質代謝改善剤、又は、脳神経細胞傷害予防効果を持つ薬剤による治療である、（１０）〜（１９）のいずれか１項に記載の方法。
（２１）  高脂血症治療剤がスタチンである（２０）に記載の方法。
（２２）  更に、検体中のｐ３−Ａｌｃと共に、ｐ３−Ａｌｃとは異なる認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の指標を測定することを含む、（２）〜（２２）のいずれか１項に記載の方法。
（２３）  検体が認知症疑い患者ないしは認知症患者、特にＡＤ患者の体液、ヒト脳組織から採取した生体試料又はその処理物である（１）〜（２３）に記載の方法。
（２４）  被験薬をＡＤモデル動物に投与すること、及び
当該モデル動物由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することを含む、
γ−セクレターゼの阻害剤および活性修飾剤のスクリーニング方法。
（２５）  ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化した、固相、ハプテン、磁気ビーズ及び不溶性担体からなる群より選択される担体を含むことを特徴とする、（１）〜（２４）の方法に用いるための免疫化学測定のキット。
（２６）  ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する標識化された第二抗体、又は該第二抗体が固定化したハプテンもしくは不溶性担体、をさらに含むことを特徴とする（２５）に記載の免疫化学測定のキット。
（２７）  （ｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化した固相、及び
（ｉｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する標識化された第二抗体、
を含むことを特徴とする（２６）に記載の免疫化学測定のキット。
（２８）  （ｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化したハプテン、及び、（ｉｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する標識化された第二抗体、
を含むことを特徴とする（２６）に記載の免疫化学測定のキット。
（２９）  前記ハプテンと特異的に結合する物質が固定化した固相をさらに含むことを特徴とする（２６）に記載の免疫化学測定のキット。
（３０）  （ｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化した固相、及び、（ｉｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第二抗体が固定化したハプテン、
を含むことを特徴とする（２６）に記載の免疫化学測定のキット。
（３１）  前記ハプテンと特異的に結合する、標識された物質をさらに含むことを特徴とする（３０）に記載の免疫化学測定のキット。
（３２）  （ｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化した磁気ビーズ、及び、（ｉｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する標識化された第二抗体、
を含むことを特徴とする請求項２６に記載の免疫化学測定のキット。
（３３）  （ｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化した不溶性担体、及び、（ｉｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第二抗体が固定化した不溶性担体、
を含むことを特徴とする請求項２６に記載の免疫化学測定のキット。
（３４）  標識と反応する基質をさらに含む（２５）〜（３３）のいずれか１項に記載の免疫化学測定のキット。
【０００９】
本発明において、「アルカデイン又はＡｌｃ」は、好ましくはヒトアルカデインであり、Ａｌｃα（配列番号１）、Ａｌｃβ（配列番号２）、及び、Ａｌｃγ（配列番号３）を含む。「ｐ３−アルカデイン又はｐ３−Ａｌｃ」とは、Ａｌｃがα−セクレターゼにより一次切断を受けて生じたＡｌｃの細胞結合型Ｃ末端断片（ａｌｃａｄｅｉｎ  ｃａｒｂｏｘｙｌ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ、以下「ＣＴＦ」という）が、更に膜間部切断プロテアーゼ（γ−セクレターゼ）により二次切断されて生じたＣＴＦのＮ末端側のペプチド断片である。アルカデインのαセクレターゼ切断部位及びγセクレターゼ切断部位として複数の部位が存在する（国際公開公報ＷＯ２００５／０４４８４７及び国際公開公報ＷＯ２００９／０７５０８４参照）ことから、ｐ３−Ａｌｃとしては複数種類が存在するが、本明細書において使用される「ｐ３−Ａｌｃ」は、これらのｐ３−Ａｌｃ種（各ｐ３−Ａｌｃを指す）の全てを包含する。本発明の方法において検出するｐ３−Ａｌｃは、使用する抗体を適宜選択することにより決定することができる。本発明の方法において検出するｐ３−Ａｌｃは、ｐ３−Ａｌｃ種の全て、２以上のｐ３−Ａｌｃ種、又は特定の１種類のｐ３−Ａｌｃであってもよい。
【００１０】
ｐ３−Ａｌｃαは、ｐ３−Ａｌｃα３４（配列番号４）、ｐ３−Ａｌｃα３５（配列番号５）、ｐ３−Ａｌｃα３６（配列番号６）、ｐ３−Ａｌｃα３７（配列番号７）、ｐ３−Ａｌｃα３８（配列番号８）、ｐ３−Ａｌｃα３９（配列番号９）、ｐ３−Ａｌｃα２Ｎ＋３５（配列番号１０）、ｐ３−Ａｌｃα２Ｎ＋３８（配列番号１１）、ｐ３−Ａｌｃα２Ｎ＋３９（配列番号１２）、及びｐ３−Ａｌｃα２Ｎ＋４０（配列番号１３）が知られている（国際公開公報ＷＯ２００９／０７５０８４参照）。ここで、「ｐ３−ＡｌｃαＸ」とは、Ａｌｃα１の８１７番目のアラニン（Ａ）から（８１６＋Ｘ）番目のアミノ酸までのアミノ酸配列を有するＸ個のアミノ酸からなるペプチドを意味する。また、「ｐ３−Ａｌｃα２Ｎ＋Ｙ」とは、Ａｌｃα１の８１５番目のメチオニン（Ｍ）から（８１４＋Ｙ）番目のアミノ酸までのアミノ酸配列を有するＹ個のアミノ酸からなるペプチドを意味する。本明細書においてｐ３−Ａｌｃαとは、これらの全てのｐ３−Ａｌｃα種を包含する。本発明の方法において検出するｐ３−Ａｌｃαは、使用する抗体を適宜選択することにより決定することができる。本発明の方法において検出するｐ３−Ａｌｃαは、ｐ３−Ａｌｃα種の全て、２以上のｐ３−Ａｌｃα種、又は特定の１種類のｐ３−Ａｌｃαであってもよい。好ましくは、本発明の方法で使用するｐ３−Ａｌｃαはｐ３−Ａｌｃα３５である。
【００１１】
ｐ３−Ａｌｃβは、ｐ３−Ａｌｃβ３７（配列番号１４）、及びｐ３−Ａｌｃβ４０（配列番号１５）が知られている（国際公開公報ＷＯ２００９／０７５０８４参照）。ここで、「ｐ３−ＡｌｃβＸ」とは、Ａｌｃβの８１３番目のバリン（Ｖ）から（８１２＋Ｘ）番目のアミノ酸までのアミノ酸配列を有するＸ個のアミノ酸からなるペプチドを意味する。本明細書においてｐ３−Ａｌｃβとは、これらの全てのｐ３−Ａｌｃβ種を包含する。本発明の方法において検出するｐ３−Ａｌｃβは、使用する抗体を適宜選択することにより決定することができる。本発明の方法において検出するｐ３−Ａｌｃβは、ｐ３−Ａｌｃβ種の全て、２以上のｐ３−Ａｌｃβ種、又は特定の１種類のｐ３−Ａｌｃβであってもよい。好ましくは、本発明の方法で使用するｐ３−Ａｌｃβはｐ３−Ａｌｃβ３７及びｐ３−Ａｌｃβ４０である。
【００１２】
ｐ３−Ａｌｃγは、ｐ３−Ａｌｃγ３１（配列番号１６）、及びｐ３−Ａｌｃγ３４（配列番号１７）が知られている（国際公開公報ＷＯ２００９／０７５０８４参照）。ここで、「ｐ３−ＡｌｃγＸ」とは、Ａｌｃγの８０４番目のロイシン（Ｌ）から（８０３＋Ｘ）番目のアミノ酸までのアミノ酸配列を有するＸ個のアミノ酸からなるペプチドを意味する。本明細書においてｐ３−Ａｌｃγとは、これらの全てのｐ３−Ａｌｃγ種を包含する。本発明の方法において検出するｐ３−Ａｌｃγは、使用する抗体を適宜選択することにより決定することができる。本発明の方法において検出するｐ３−Ａｌｃγは、ｐ３−Ａｌｃγ種の全て、２以上のｐ３−Ａｌｃγ種、又は特定の１種類のｐ３−Ａｌｃγであってもよい。好ましくは、本発明の方法で使用するｐ３−Ａｌｃγはｐ３−Ａｌｃγ３１及びｐ３−Ａｌｃγ３４である。
【００１３】
「認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体」は、ｐ３−Ａｌｃが検出できる検体であれば特に限定されないが、好ましくは脳脊髄液中のｐ３−Ａｌｃレベルを反映する検体である。使用できる検体としては、例えば、血液（血漿、血清）、脳脊髄液、リンパ液、尿、漿液、関節液、眼房水、涙液、唾液等の体液またはそれらの分画物若しくは処理物、あるいはヒト脳組織から採取した生体試料又はその処理物を挙げることができる。検出用検体は、患者から採取した検体の種類及び検出方法に応じて適宜調製することができる。例えば脳脊髄液のようにそのまま検出に使用できる場合、適宜遠心分離、希釈等により検出用検体を調整してもよい。また、血液のように患者から採取した検体中に検出を阻害する物質が含まれる場合には、前処理（例えば、プロテインＧカラムによるイムノグロブリン除去）によって阻害物質を除去／不活化して検出用検体を調整してもよい。また、血液検体の場合、低極性有機溶媒及び親水性有機溶媒（双極子モーメント１．１０〜１．２０の有機溶媒及び双極子モーメント１．６５〜１．７５の有機溶媒であり、最も好ましくは、クロロホルム：メタノール）により脱脂処理された検体であってもよい。
【００１４】
本明細書において、「ｐ３−Ａｌｃレベル」とは、ｐ３−Ａｌｃの量のほか、ｐ３−Ａｌｃ種の比をも含む。例えば、ｐ３−Ａｌｃレベルは、全ｐ３−Ａｌｃα量に対するｐ３−Ａｌｃα３５レベルの割合、ｐ３−Ａｌｃβ３７レベルに対するｐ３−Ａｌｃβ４０レベルの割合等を含む。
【００１５】
また、本発明は、ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化した、固相、ハプテン、及び不溶性担体からなる群より選択される担体を含むことを特徴とする免疫化学測定のキットに関する。本発明のキットは、更に、ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する標識化された第二抗体、又は該第二抗体が固定化したハプテンもしくは不溶性担体を含んでいてもよい。本発明の測定キットは、抗体分子を用いた公知の方法に基づくことができる。このような方法としては、例えば、酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）、簡易ＥＩＡ法、酵素結合イムノソルベントアッセイ法（ＥＬＩＳＡ法）、ラジオイムノアッセイ法（ＲＩＡ法）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ法）等の標識化免疫測定法；ウェスタンブロッティング法等のイムノブロッティング法；金コロイド凝集法等のイムノクロマト法；イオン交換クロマトグラフィ法、アフィニティクロマトグラフィ法等のクロマトグラフィ法；比濁法（ＴＩＡ法）；比ろう法（ＮＩＡ法）；比色法；ラテックス凝集法（ＬＩＡ法）；粒子計数法（ＣＩＡ法）；化学発光測定法（ＣＬＩＡ法、ＣＬＥＩＡ法）；沈降反応法；表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ法）；レゾナントミラーディテクター法（ＲＭＤ法）；比較干渉法等を挙げることができる。
【００１６】
本発明のキットは、定性的、定量的又は半定量的分析用とすることができるが、好ましくは定量的分析用である。また、本発明のキットが含有する抗体は抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、一本鎖Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ若しくはこれらの重合体、二量体化Ｖ領域）であってもよい。
【００１７】
例えば、本発明のキットは、（ｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化した固相又はハプテン、及び（ｉｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する標識化された第二抗体を含む免疫化学測定のキットとすることができる。また、本発明のキットがハプテンを含む場合、更にハプテンと特異的に結合する物質が固定化した固相をさらに含んでいてもよい。
【００１８】
または、本発明のキットは、（ｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化した固相、及び、（ｉｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第二抗体が固定化したハプテンを含む免疫化学測定のキットとすることができる。また、当該キットは更に、ハプテンと特異的に結合する、標識された物質を含んでいてもよい。
【００１９】
あるいは、本発明のキットは、（ｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化した不溶性担体、及び、（ｉｉ）ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第二抗体が固定化した不溶性担体を含む免疫化学測定のキットとすることができる。
【００２０】
本発明のキットにおいて、固相は免疫化学測定に使用できる固相であれば特に限定されないが、例えば、ニトロセルロース、セファロース、ナイロン、ビニロン、ポリエステル、アクリル、ポリオレフィン、ポリウレタン、レーヨン、ポリノジック、キュプラ、リヨセル、アセテート、ポリビニリデンジフルオリド、シリコンラバー、ラテックス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリスチレン、ポリ酢酸ビニル、フッ素加工樹脂、ＡＢＳ樹脂、ＡＳ樹脂、アクリル樹脂、ポリマーアロイ、ガラス繊維、炭素繊維、ガラス、ゼラチン、ポリアミノ酸及び／又は磁気感応性素材等を含有する、プレート、チューブ、チップ（例えば、プロテインチップ、ラボチップ等）、ビーズ、膜、吸収体及び／又は粒子等を挙げることができ、好ましくは、プレート及び磁気ビーズである。本明細書において不溶性担体とは、ビーズ等の懸濁可能な不溶性の固相を意味し、例えば、ラテックスビーズや磁気ビーズを挙げることができる。
【００２１】
本発明のキットが標識化された抗体を含む場合、当該標識としては、放射能標識、酵素、蛍光標識、生物発光標識、化学発光標識金属等の検出可能な標識を用いることができる。このような標識としては、これに限定されるものではないが例として、３２Ｐ、３Ｈ、１２５Ｉ、１４Ｃ等の放射能標識；βガラクトシダーゼ、ペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、グルコースオキシダーゼ、乳酸オキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、モノアミンオキシダーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ等の酵素；ＦＡＤ、ＦＭＮ、ＡＴＰ、ビオチン、ヘム等の補酵素又は補欠分子族；フルオレセイン誘導体（フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フルオレセインチオフルバミル等）、ローダミン誘導体（テトラメチルローダミン、トリメチルローダミン（ＲＩＴＣ）、テキサスレッド、ローダミン１１０等）、Ｃｙ色素（Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７）、Ｃｙ−クロム、スペクトラムグリーン、スペクトラムオレンジ、プロピジウムイオダイド、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、Ｒ−フィコエリスリン（Ｒ−ＰＥ）等の蛍光標識；ルシフェラーゼ等の生物発光標識；あるいは、ルミノール、イソルミノール、Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−エチルイソルミノースエステル等のルミノール誘導体、Ｎ−メチルアクリジニウムエステル、Ｎ−メチルアクリジニウムアシルスルホンアミドエステル等のアクリジニウム誘導体、ルシゲニン、アダマンチルジオキセタン、インドキシル誘導体、ルテニウム錯体等の化学発光標識；金コロイド等の金属等の検出可能な標識を挙げることができる。
【００２２】
本発明のキットは、必要に応じて、発色試薬、反応停止用試薬、標準抗原試薬、サンプル前処理用試薬、ブロッキング試薬等を含んでいてもよい。また、本発明のキットが標識化された抗体を含む場合、更に標識と反応する基質を含んでいてもよい。
【発明の効果】
【００２３】
本発明の方法によれば、より正確なＡＤ又は認知症の診断及び発症予測、ＡＤ又は認知症患者の予後予測、並びに薬物投与や治療停止の効果の判定又は予測を行うことができる。また、本発明のキットを本発明の方法に使用することにより、より正確なＡＤ又は認知症の診断及び発症予測、ＡＤ又は認知症患者の予後予測、並びに薬物投与や治療停止の効果の判定又は予測を簡便又は正確に行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】ＣＤＲとｐ３−Ａｌｃβ３７レベルとの相関を箱ひげ図で示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はｐ３−Ａｌｃβ３７レベルを示す。
【図２】ＣＤＲとｐ３−Ａｌｃβ４０レベルとの相関を箱ひげ図で示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はｐ３−Ａｌｃβ４０レベルを示す。
【図３】ＣＤＲとｐ３−Ａｌｃαレベルとの相関を箱ひげ図で示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はｐ３−Ａｌｃαレベルを示す。
【図４】ＣＤＲとＡβ４２レベルとの相関を箱ひげ図で示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はＡβ４２レベルを示す。
【図５】ＣＤＲと年齢との相関を示すグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸は年齢を示す。
【図６】ＣＤＲとｐ３−Ａｌｃβ３７レベルとの相関を箱ひげ図で示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はｐ３−Ａｌｃβ３７レベルを示す。
【図７】ＣＤＲとｐ３−Ａｌｃβ４０レベルとの相関を箱ひげ図で示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はｐ３−Ａｌｃβ４０レベルを示す。
【図８】ＣＤＲとｐ３−Ａｌｃαレベルとの相関を箱ひげ図で示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はｐ３−Ａｌｃαレベルを示す。
【図９】ＣＤＲとＡβ４２レベルとの相関を箱ひげ図で示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はＡβ４２レベルを示す。
【図１０】ＣＤＲと年齢との相関を示すグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸は年齢を示す。
【図１１】ｐ３−Ａｌｃβ３７、ｐ３−Ａｌｃβ４０Ａβ４２及びｐ３−Ａｌｃαの測定値を用い、ＲＯＣを分析した結果を示す図である。図中、縦軸は感度を、横軸は１−特異度を示す。
【図１２】ＣＤＲとｐ３−Ａｌｃβ３７レベルの関係について軽度認知障害（ＣＤＲ０．５）および軽度認症（ＣＤＲ１）と中等度認知症（ＣＤＲ２）および重度認知症（ＣＤＲ３））の比較を箱ひげ図で示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はｐ３−Ａｌｃβ３７レベルを示す。
【図１３】ＣＤＲとｐ３−Ａｌｃβ４０レベルの関係について軽度認知障害（ＣＤＲ０．５）および軽度認症（ＣＤＲ１）と中等度認知症（ＣＤＲ２）および重度認知症（ＣＤＲ３））の比較を箱ひげ図で示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はｐ３−Ａｌｃβ４０レベルを示す。
【図１４】ＣＤＲとｐ３−Ａｌｃαレベルの関係について軽度認知障害（ＣＤＲ０．５）および軽度認症（ＣＤＲ１）と中等度認知症（ＣＤＲ２）および重度認知症（ＣＤＲ３））の比較を箱ひげ図で示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はｐ３−Ａｌｃαレベルを示す。
【図１５】ＣＤＲとＡβ４２レベルの関係について軽度認知障害（ＣＤＲ０．５）および軽度認症（ＣＤＲ１）と中等度認知症（ＣＤＲ２）および重度認知症（ＣＤＲ３））の比較を箱ひげ図で示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はＡβ４２レベルを示す。
【図１６】ＣＤＲと年齢の関係について軽度認知障害（ＣＤＲ０．５）および軽度認症（ＣＤＲ１）と中等度認知症（ＣＤＲ２）および重度認知症（ＣＤＲ３））の比較を箱ひげ図で示したグラフである。。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸は年齢を示す。
【図１７】ｐ３−Ａｌｃβ３７、ｐ３−Ａｌｃβ４０、Ａβ４２及びｐ３−Ａｌｃαの測定値を用い、ＲＯＣを分析した結果を示す図である。図中、縦軸は感度を、横軸は１−特異度を示す。
【図１８】ＣＤＲとｐ３−Ａｌｃβ３７レベルの関係についてコントロール（ＣＤＲ０）と中等度認知症（ＣＤＲ２）、重度認知症（ＣＤＲ３））の比較を箱ひげ図で示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はｐ３−Ａｌｃβ３７レベルを示す。
【図１９】ＣＤＲとｐ３−Ａｌｃβ４０レベルの関係についてコントロール（ＣＤＲ０）と中等度認知症（ＣＤＲ２）、重度認知症（ＣＤＲ３））の比較を箱ひげ図で示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はｐ３−Ａｌｃβ４０レベルを示す。
【図２０】ＣＤＲとｐ３−Ａｌｃαレベルの関係についてコントロール（ＣＤＲ０）と中等度認知症（ＣＤＲ２）、重度認知症（ＣＤＲ３））の比較を示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はｐ３−Ａｌｃαレベルを示す。
【図２１】ＣＤＲとＡβ４２レベルの関係についてコントロール（ＣＤＲ０）と中等度認知症（ＣＤＲ２）、重度認知症（ＣＤＲ３））の比較を箱ひげ図で示したグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸はＡβ４２レベルを示す。
【図２２】ＣＤＲと年齢との相関関係についてコントロール（ＣＤＲ０）と中等度認知症（ＣＤＲ２）、重度認知症（ＣＤＲ３））の比較を示すグラフである。図中、縦軸は被験者のＣＤＲを横軸は年齢を示す。
【図２３】ｐ３−Ａｌｃβ３７、ｐ３−Ａｌｃβ４０、Ａβ４２及びｐ３−Ａｌｃαの測定値を用い、ＲＯＣを分析した結果を示す図である。図中、縦軸は感度を、横軸は１−特異度を示す。
【図２４】認知症が悪化した患者のｐ３−Ａｌｃβ３７及びｐ３−Ａｌｃβ４０のレベルの変化を表すグラフである。縦軸は、各ｐ３−Ａｌｃβの濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示し、横軸は初回測定から二回目の測定までの経過期間を示す。
【図２５】認知症が悪化しなかった患者のｐ３−Ａｌｃβ３７及びｐ３−Ａｌｃβ４０のレベルの変化を表すグラフである。縦軸は、各ｐ３−Ａｌｃβの濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示し、横軸は初回測定から二回目の測定までの経過期間を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
１．疾患の診断／判定方法
家族性ＡＤにおいてγ−セクレターゼの活性本体であるＰＳの変異がＡＰＰ及びＡｌｃの切断部位を変化させ、ＡＤの発症、進行に関与することが報告されている。このように、γ−セクレターゼの機能異常は、ＡＰＰ及びＡｌｃの切断に異常をもたらし、患者の体液中の切断物の量を変化させていると考えられる。本発明者が見出した知見によれば、患者の体液におけるｐ３−Ａｌｃレベルは、健常人と比較して軽度認知症（ＣＤＲ１）患者及び軽度認知障害（ＣＤＲ０．５）で高値を示す。従って、認知症患者又は軽度認知障害（特には健常人との区別の困難な認知症疑い患者）由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定し、健常人のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して高値を示す場合には認知症（特には、ＡＤ）が発症している、又はγ−セクレターゼに異常があると診断することができる。特に、従来の方法によれば認知症の初期の患者が認知症を発症しているか否かの診断が難しかったが、本発明のｐ３−Ａｌｃレベルを測定する方法を採用することにより、早期に診断することが可能となる。
【００２６】
また、本発明者らは、重症の認知症患者（ＣＤＲ≧２）は、軽症認知症患者（ＣＤＲ０．５）と比較して、体液中のｐ３−Ａｌｃレベルが減少することが見出した。よって、認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定し、軽度認知症（ＣＤＲ１）患者及び軽度認知障害の患者（ＣＤＲ０．５）のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して低値を示す場合には認知症（特には、ＡＤ）の進行度が高い、又はγ−セクレターゼに重篤な異常があると判定することができる。また、認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定し、（当該患者が認知症を発症後にｐ３−Ａｌｃレベルを測定した記録がある場合には）当該過去に測定したｐ３−Ａｌｃレベルと比較して低値を示す場合には認知症（特には、ＡＤ）が進行していると判定することができる。特に、本発明者らの実験により、認知症が進行して重度認知症（ＣＤＲ３）となると、患者の体液におけるｐ３−Ａｌｃレベルが、健常人と比較しても低い値を示すことが観察された。よって、認知症である被験者のｐ３−Ａｌｃレベルが、健常人のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して低値を示す場合には重度認知症（特には、ＡＤ）である、認知症がかなり進行している、又は深刻なγ−セクレターゼの異常があると診断／判定することができる。
【００２７】
よって、本発明によれば、認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することにより、γ−セクレターゼの異常を早期に検出し、あるいは、軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度を早期に診断／判定する方法を提供する。好ましくは、本発明は、ＡＤの病態進行度を判定する方法を提供する。
【００２８】
具体的には、本発明のγ−セクレターゼの異常の早期検出方法、並びに、軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の早期判定方法は、
（ａ）認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
（ｂ）測定された検体中のｐ３−Ａｌｃレベルから当該患者の軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度を診断／判定することを含む。
【００２９】
また、本発明はｐ３−Ａｌｃレベルの変化から認知症疑いの対象又は認知症の患者のｐ３−Ａｌｃレベルを継時的にモニタリングすることにより、軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度を早期に診断／判定することができる。具体的には、本発明の軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度を診断／判定する方法は、
（ａ）認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃを所望の期間をおいて複数回測定すること、
（ｂ）測定された検体中のｐ３−Ａｌｃレベルの変化から当該患者の軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度を診断／判定することを含む。
【００３０】
軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の診断／判定は、次の方法を含むことができる。認知症疑いの被験者等が対象であり、認知症（ＡＤを含む、以下本段落において同じ）の発症又は軽度認知症の診断を行う場合、健常人と比較して検体中のｐ３−Ａｌｃレベルが高い被験者を軽度認知症又はＡＤに罹患している又は罹患の程度が高い患者として判定することを含むことができる。また、認知症の発症又は軽度認知症の診断においては、ｐ３−Ａｌｃのレベルの代わりにｐ３−Ａｌｃ種レベルの比を指標として診断してもよい。例えば、全ｐ３−Ａｌｃα量に対するｐ３−Ａｌｃα３５レベルの割合、ｐ３−Ａｌｃβ３７レベルに対するｐ３−Ａｌｃβ４０レベルの割合等を利用することができる。この場合、健常人と比較して、ＡＤにおいて存在量が増加するｐ３−Ａｌｃ種（ｐ３−Ａｌｃα３５、ｐ３−Ａｌｃβ４０）の割合が高い患者を、認知症の発症又は軽度認知症に罹患している又は罹患の程度が高い患者として判定することを含むことができる。
【００３１】
また、既に認知症が確認されている患者等が対象であり、認知症（ＡＤを含む、以下本段落において同じ）の進展、又は進行度を判定する場合、軽度認知障害（ＣＤＲ０．５）又は軽度認知症の患者（ＣＤＲ１）と比較して検体中のｐ３−Ａｌｃレベルが低い被験者を認知症が進展している、又は進行度が高い患者として判定することを含むことができる。また、認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定し、（当該患者が認知症を発症後にｐ３−Ａｌｃレベルを測定した記録がある場合には）当該過去に測定したｐ３−Ａｌｃレベルと比較して低値を示す場合には認知症（特には、ＡＤ）が進行していると判定することを含むことができる。また、認知症の進展、又は進行度の判定においては、ｐ３−Ａｌｃのレベルの代わりにｐ３−Ａｌｃ種レベルの比を指標として診断／判定してもよい。例えば、全ｐ３−Ａｌｃα量に対するｐ３−Ａｌｃα３５レベルの割合、ｐ３−Ａｌｃβ３７レベルに対するｐ３−Ａｌｃβ４０レベルの割合等を利用することができる。この場合、軽度認知障害（ＣＤＲ０．５）又は軽度認知症の患者（ＣＤＲ１）と比較して、ＡＤにおいて存在量が増加するｐ３−Ａｌｃ種（ｐ３−Ａｌｃα３５、ｐ３−Ａｌｃβ４０）の割合が低い患者を認知症が進展している、又は進行度が高い患者として判定することを含むことができる。
【００３２】
例えば、本発明のγ−セクレターゼの異常の早期検出方法、並びに、軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の早期判定方法は、
（ａ）認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
（ｂ）健常人と比較して検体中のｐ３−Ａｌｃレベルが高い被験者をγ−セクレターゼに異常がある患者、又は軽度認知症若しくはＡＤに罹患している若しくは罹患の程度が高い患者として判定する方法であってもよい。
また、本発明のγ−セクレターゼの異常の早期検出方法、並びに、軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の早期判定方法は、
（ａ）認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
（ｂ）軽度認知障害（ＣＤＲ０．５）又は軽度認知症の患者（ＣＤＲ１）と比較して検体中のｐ３−Ａｌｃレベルが低い被験者をγ−セクレターゼに異常がある患者、又は重度認知症（例えば、ＣＤＲ３）として判定する方法であってもよい。
別の態様において、本発明のγ−セクレターゼの異常の早期検出方法、並びに、軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の早期判定方法は、
（ａ）認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
（ｂ）健常人と比較して検体中のｐ３−Ａｌｃレベルが低い被験者をγ−セクレターゼに異常がある患者、又は重度認知症（例えば、ＣＤＲ３）として判定する方法であってもよい。
更に、本発明の軽度認知症又はＡＤの進展、又は進行度を判定する方法は、
（ａ）認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃを所望の期間をおいて複数回測定すること、
（ｂ）測定された検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを過去に測定したｐ３−Ａｌｃレベルと比較して低値を示す場合には認知症（特には、ＡＤ）が進行していると判定する方法であってもよい。
【００３３】
また、軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の診断／判定は、測定されたｐ３−Ａｌｃレベル又はｐ３−Ａｌｃレベルの変化から軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度（特には進行度）を定量化（数値化）することにより行ってもよい。定量化は、例えば、予め数値化された進行度が確認された軽度認知症又はＡＤ患者におけるｐ３−Ａｌｃレベルの情報から、進行度とｐ３−Ａｌｃレベルに関する標準曲線を作成して、被験者から得られたｐ３−Ａｌｃレベルを基に進行度を数値化することにより行うことができる。よって、本発明の方法は、更に、測定されたｐ３−Ａｌｃレベル又はｐ３−Ａｌｃレベルの変化から軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度（特には進行度）を定量化（数値化）することを含んでいてもよい。
【００３４】
更に、本発明のγ−セクレターゼの異常の早期検出方法、並びに、軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の早期判定方法は、検体中のｐ３−Ａｌｃと共に、ｐ３−Ａｌｃとは異なる軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の指標を測定することを含んでいてもよい。このような指標としては、記憶力、判断力、見当識力、問題解決能力、社会適応能力、介護状況、ｐ−ｔａｕ、Ａβ（Ａβ４０及びＡβ４２等）、ＰＥＴ等の画像診断を挙げることができる。
例えば、本発明の方法は、
（ａ）認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、
（ｂ）認知症患者又は認知症疑い患者のｐ３−Ａｌｃとは異なる軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の指標を測定すること、及び、
（ｃ）測定された検体中のｐ３−Ａｌｃ及びｐ３−Ａｌｃとは異なる軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の指標の値から当該患者の軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度を診断／判定することを含む方法であってもよい。
また、本発明の方法は、
（ａ）認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、
（ｂ）認知症患者又は認知症疑い患者のｐ３−Ａｌｃとは異なる軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の指標を測定すること、
（ｃ）測定されたｐ３−Ａｌｃとは異なる軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の指標の値から当該患者の認知症の程度を決定すること、及び、
（ｄ−１）認知症の程度が低い場合、健常人と比較して検体中のｐ３−Ａｌｃレベルが高い被験者をγ−セクレターゼに異常がある患者、又は軽度認知症又はＡＤに罹患している患者として診断／判定し、
（ｄ−２）認知症の程度が高い場合、健常人又は軽度認知症の患者と比較して検体中のｐ３−Ａｌｃレベルが低い被験者をγ−セクレターゼに異常がある患者、又はＡＤに罹患している（特には、重度認知症、ＣＤＲ３）として診断／判定することを含む方法であってもよい。
【００３５】
例えば、Ａβ４２はＡＤの進行に伴って低下することが本発明者らの実験で確認されていることから、具体的には、本発明のγ−セクレターゼの異常の早期検出方法、並びに、軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の早期判定方法は、
（ａ）認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃ及びＡβを測定すること、及び、
（ｂ）測定された検体中のｐ３−Ａｌｃ及びＡβの値から当該患者の軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度を診断／判定することを含む方法であってもよい。
また、本発明の方法は、
（ａ）認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃ及びＡβを測定すること、及び、
（ｂ）測定された検体中のＡβの値が健常人と比較して十分に低い患者を認知症の程度が重いと判定し、健常人と比較して差が無いか少し低い患者を認知症の程度が軽いと判定すること
（ｃ−１）認知症の程度が低い場合、健常人と比較して検体中のｐ３−Ａｌｃレベルが高い被験者をγ−セクレターゼに異常がある患者、又は軽度認知症又はＡＤに罹患している患者として診断／判定し、
（ｄ−２）認知症の程度が高い場合、健常人又は軽度認知症の患者と比較して検体中のｐ３−Ａｌｃレベルが低い被験者をγ−セクレターゼに異常がある患者、又はＡＤに罹患している（特には、重度認知症、ＣＤＲ３）として診断／判定することを含む方法であってもよい。
【００３６】
本発明の方法がｐ３−Ａｌｃとは異なる軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の指標を測定することを含む場合、当該指標による認知症の診断／判定はその程度まで含む必要は無い。例えば、当該指標により、認知症であるか否かを判別できれば、ｐ３−Ａｌｃレベルが（健常人と比較して）高い患者は軽症であり、ｐ３−Ａｌｃレベルが健常人と同等か低い患者は重症であると判別することができる。
【００３７】
例えば、ｐ−ｔａｕはＡＤの初期は進行に伴って上昇するが軽度認知症から重度認知症にかけては数値が変化しないことが本発明者らの実験で確認されていることから、具体的には、本発明のγ−セクレターゼの異常の早期検出方法、並びに、軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の早期判定方法は、
（ａ）認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃ及びｐ−ｔａｕを測定すること、及び、
（ｂ）測定された検体中のｐ３−Ａｌｃ及びｐ−ｔａｕの値から当該患者の軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度を診断／判定することを含む方法であってもよい。
また、本発明の方法は、
（ａ）認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃ及びｐ−ｔａｕを測定すること、及び、
（ｂ）測定された検体中のｐ−ｔａｕの値が健常人と比較して高い患者を認知症と判定すること、及び、
（ｃ）認知症と判定した患者について、健常人と比較して検体中のｐ３−Ａｌｃレベルが高い被験者を軽度認知症と判定し、健常人（又は軽度認知症の患者）と比較して検体中のｐ３−Ａｌｃレベルが同程度であるか低い被験者を重度認知症と判定することを含む方法であってもよい。
【００３８】
２．疾患の予測方法
また、本発明者が見出した知見によれば、患者の体液におけるｐ３−Ａｌｃレベルが健常人と比較して高い被験者は、軽度認知症（ＣＤＲ１）患者及び軽度認知障害の患者（ＣＤＲ０．５）へ進展しやすい傾向を示すと考えられる。従って、認知症患者又は認知症疑い患者（特には健常人との区別の困難な認知症疑い患者）由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定し、健常人（特には、認知症又はＡＤに罹患しなかった健常人又は認知症又はＡＤに罹患しないと信じられている健常人）のｐ３−Ａｌｃレベル又は当該患者の過去のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して高値を示す場合には認知症（特には、ＡＤ）へ進展しやすいと予測することができる。特に、従来の方法によれば認知症の初期の患者が認知症を発症するか否かの予測が難しかったが、本発明のｐ３−Ａｌｃレベルを測定する方法を採用することにより、早期に予測することが可能となる。
【００３９】
また、本発明者らは、軽症認知症患者（ＣＤＲ０．５）の体液中のｐ３−Ａｌｃレベルが減少すると重症の認知症患者（ＣＤＲ≧２）に進展しやすい傾向を示すことを見出した。よって、認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定し、軽度認知症（ＣＤＲ１）患者及び軽度認知障害の患者（ＣＤＲ０．５）（特には、重度認知症又はＡＤに進展しなかった患者又は重度認知症又はＡＤに進展しないと信じられている患者）のｐ３−Ａｌｃレベル又は当該患者の過去のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して低値を示す場合には認知症（特には、ＡＤ）が進行しやすいと予測することができる。特に、本発明者らの実験により、患者の体液におけるｐ３−Ａｌｃレベルが、健常人と比較しても低い値を示すと、認知症が進行して重度認知症（ＣＤＲ３）となりやすいとか考えられる。よって、認知症である被験者で由来のｐ３−Ａｌｃレベルが、健常人のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して低値を示す場合には重度認知症（特には、ＡＤ）へと進行しやすいと予測することができる。
【００４０】
よって、本発明によれば、認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することにより、認知症又はＡＤの発症又は進展を早期に予測する方法を提供する。好ましくは、本発明は、ＡＤの発症又は病態進行を予測する方法を提供する。
【００４１】
具体的には、本発明の認知症又はＡＤの進展又は発症の予測方法は、
（ａ）認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
（ｂ）測定された検体中のｐ３−Ａｌｃレベルから当該患者の認知症又はＡＤの進展又は発症を予測することを含む。
【００４２】
また、本発明はｐ３−Ａｌｃレベルの変化から認知症疑いの対象又は認知症の患者のｐ３−Ａｌｃレベルを継時的にモニタリングすることにより、軽度認知症又はＡＤの進展又は発症を予測することができる。具体的には、本発明の方法は、
（ａ）認知症患者又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃを所望の期間をおいて複数回測定すること、
（ｂ）測定された検体中のｐ３−Ａｌｃレベルの変化から当該患者の軽度認知症又はＡＤの進展又は発症を予測することを含む。
【００４３】
好ましくは、本発明の予測方法は、軽度認知症の発症を早期に予測する方法、ＡＤの発症を早期に予測する方法、ＡＤへの進展発症を早期に予測する方法である。
【００４４】
例えば、本発明の認知症又はＡＤの進展又は発症の早期予測方法は、
（ａ）健常人又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
（ｂ）健常人（特には、認知症又はＡＤに罹患しなかった健常人又は認知症又はＡＤに罹患しないと信じられている健常人）と比較して検体中のｐ３−Ａｌｃレベルが高い被験者を軽度認知症又はＡＤに罹患する可能性が高いと予測する方法であってもよい。
また、本発明の認知症又はＡＤの進展又は発症の早期予測方法は、
（ａ）認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
（ｂ）軽度認知障害（ＣＤＲ０．５）又は軽度認知症の患者（ＣＤＲ１）（特には、重度認知症又はＡＤに進展しなかった患者又は重度認知症又はＡＤに進展しないと信じられている患者）と比較して検体中のｐ３−Ａｌｃレベルが低い被験者を重度認知症（例えば、ＣＤＲ３）に進展する可能性が高いと予測する方法であってもよい。
別の態様において、本発明の認知症又はＡＤの進展又は発症の早期予測方法は、
（ａ）認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、
（ｂ）健常人と比較して検体中のｐ３−Ａｌｃレベルが低い被験者を重度認知症（例えば、ＣＤＲ３）に進展する可能性が高いと予測する方法であってもよい。
【００４５】
更に、本発明の認知症又はＡＤの進展又は発症を早期に予測する方法は、
（ａ）健常人又は認知症疑い患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃを所望の期間をおいて複数回測定すること、
（ｂ）測定された検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを過去に測定したｐ３−Ａｌｃレベルと比較して高値を示す場合には認知症（特には、ＡＤ）が進行する可能性が高いと予測する方法であってもよい。
また、本発明の認知症又はＡＤの進展又は発症を早期に予測する方法は、
（ａ）認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃを所望の期間をおいて複数回測定すること、
（ｂ）測定された検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを過去に測定したｐ３−Ａｌｃレベルと比較して低値を示す場合には認知症（特には、ＡＤ）が進行する可能性が高いと予測する方法であってもよい。
【００４６】
また、本発明の、認知症又はＡＤの発症又は進展を早期に予測する方法は、ｐ３−Ａｌｃのレベルの代わりにｐ３−Ａｌｃ種レベルの比を指標として予測してもよい。例えば、全ｐ３−Ａｌｃα量に対するｐ３−Ａｌｃα３５レベルの割合、ｐ３−Ａｌｃβ３７レベルに対するｐ３−Ａｌｃβ４０レベルの割合等を利用することができる。この場合、健常人と比較してＡＤにおいて存在量が増加するｐ３−Ａｌｃ種（ｐ３−Ａｌｃα３５、ｐ３−Ａｌｃβ４０）の割合が低い患者を認知症が進展する可能性が高いと予測することを含むことができる。
【００４７】
また、本発明の認知症又はＡＤの発症又は進展を早期に予測する方法は、検体中のｐ３−Ａｌｃと共に、ｐ３−Ａｌｃとは異なる軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の指標を測定することを含んでいてもよい。このような指標としては、記憶力、判断力、見当識力、問題解決能力、社会適応能力、介護状況、ｐ−ｔａｕ、Ａβ（Ａβ４０及びＡβ４２等）、ＰＥＴ等の画像診断を挙げることができる。
【００４８】
ｐ３−Ａｌｃレベルから認知症又はＡＤの進展又は発症を予測する方法は、統計的分析により行うことができる。統計学的有意性は、２以上の集団を比較し、信頼区間及び／又はｐ値を決定することにより決定される（Ｄｏｗｄｙ  ａｎｄ  Ｗｅａｒｄｅｎ，  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｅｌｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  ＮｅｗＹｏｒｄ，  １９８３）。本発明の信頼区間は、例えば、９０％、９５％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％又は９９．９９％であってもよい。また、本発明のｐ値は、例えば、０．１、０．０５、０．０２５、０．０２、０．０１、０．００５、０．００１、０．０００５、０．０００２又は０．０００１であってもよい。
【００４９】
また、本発明の認知症又はＡＤの進展又は発症を予測する方法は、それにより患者の状態の経過又は転機を予測する方法を意味し、状態の経過又は転機を１００％の正確さで予測可能であることを意味するものではない。認知症又はＡＤの進展又は発症の予測は、ある経過又は転機が起こる可能性が増大しているか否かを意味するものであり、当該経過又は転機が起こらない場合を基準として起こりやすいことを意味するものではない。即ち、認知症又はＡＤの進展又は発症の予測結果は、本発明の方法によって認知症又はＡＤを発症し又は進展すると予測された患者において、そのように予測されない患者と比較して、認知症又はＡＤの発症又は進展がより生じやすいということを意味する。
【００５０】
３．治療効果の判定方法
また、本発明者が見出した知見によれば、治療を受けている認知症患者の体液におけるｐ３−Ａｌｃレベルが当該患者の治療前のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して低値を示す場合には、治療にもかかわらず認知症が進行しており、治療効果が低いことを示すと考えられる。よって、本発明は、治療を受けている認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することを含む、当該治療の認知症又はＡＤの治療又は予防効果を早期に判定する方法に関する。例えば、治療前と治療後を比較することにより治療効果を判定する場合、本発明の方法は、治療開始前における軽度認知症又はＡＤ患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、治療開始後における当該患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、測定された治療開始前及び治療開始後のｐ３−Ａｌｃレベルの変化から当該患者に対する軽度認知症又はＡＤの治療効果を判定することを含む、当該治療の認知症又はＡＤの治療又は予防効果を早期に判定する方法に関する。また、治療開始後に、治療効果をモニタリングする場合、治療開始後における当該患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃを期間をおいて複数回測定することによりモニタリングすること、測定された治療開始後の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルの変化から当該患者に対する軽度認知症又はＡＤの治療効果を判定することにより、当該治療の認知症又はＡＤの治療又は予防効果を早期に判定することができる。
【００５１】
より具体的には、治療を受けている認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定し、治療前のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して低値を示す場合には治療効果が無く、治療前のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して数値が変化しない場合には治療効果があると判定することができる。特に、従来の方法によれば認知症の治療効果の判定が難しかったが、本発明のｐ３−Ａｌｃレベルを測定する方法を採用することにより、治療効果を判定することができる。また、治療を受けている認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃを期間をおいて複数回測定し、過去のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して低値を示す場合には治療効果が無いか低下しており、過去のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して数値が変化しない場合には治療効果が継続して有効であると判定することができる。特に、従来の方法によれば認知症の治療効果のモニタリングが難しかったが、本発明のｐ３−Ａｌｃレベルを測定する方法を採用することにより、治療効果をモニタリングすることができる。
【００５２】
また、治療の中止の患者への影響を判定する場合には、治療を中止したＡＤ患者又は認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することを含む、治療休止後の軽度認知症又はＡＤの症状の変化を早期に予測又は判定することができる。具体的には、治療を中止した軽度認知症又はＡＤ患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、測定されたｐ３−Ａｌｃレベルから当該患者における治療休止後の軽度認知症又はＡＤの症状の変化を予測することにより、治療休止後の軽度認知症又はＡＤの症状の変化を早期に予測又は判定することができる。また、治療中止後に、治療休止の影響をモニタリングする場合、治療休止後における当該患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃを期間をおいて複数回測定することによりモニタリングすること、測定された治療休止後の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルの変化から当該患者に対する軽度認知症又はＡＤの治療休止の効果を判定することにより、当該治療休止の認知症又はＡＤの治療又は予防効果を早期に判定することができる。
【００５３】
より具体的には、治療中及び治療中止後における軽度認知症又はＡＤ患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定し、治療中止後のｐ３−Ａｌｃレベルが治療中止前のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して低値を示す場合には治療休止により疾患が進行すると判定し、治療中止前のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して数値が変化しない場合には疾患が小康状態にあると判定することができる。特に、従来の方法によれば認知症の治療休止の効果の判定が難しかったが、本発明のｐ３−Ａｌｃレベルを測定する方法を採用することにより、治療休止の効果を判定することができる。また、治療を休止した認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃを期間をおいて複数回測定し、過去のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して低値を示す場合には治療休止により疾患が進行しており、過去のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して数値が変化しない場合には治療を休止しても小康状態を維持していると判定することができる。特に、従来の方法によれば認知症の治療休止効果のモニタリングが難しかったが、本発明のｐ３−Ａｌｃレベルを測定する方法を採用することにより、治療休止の効果をモニタリングすることができる。
【００５４】
また、疾患の進展よりも前にｐ３−Ａｌｃレベルが変化する場合には、治療後のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することにより治療効果を予測することができる。よって、本発明は、治療を施された軽度認知症又はＡＤ患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定すること、及び、測定されたｐ３−Ａｌｃレベルから当該患者に対する認知症又はＡＤに対する治療効果を予測することを含む、当該治療の認知症又はＡＤの治療又は予防効果を早期に予測する方法に関する。具体的には、治療を受けている認知症患者由来の検体中のｐ３−Ａｌｃレベルを測定し、治療前のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して低値を示す場合には治療効果が無い可能性が高く、治療前のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して数値が変化しない場合には治療効果がある可能性が高いと予測することができる。特に、従来の方法によれば認知症の治療効果の予測が難しかったが、本発明のｐ３−Ａｌｃレベルを測定する方法を採用することにより、治療効果を予測することができる。
【００５５】
また、本発明の、認知症又はＡＤに対する治療効果又は治療休止の効果を早期に判定又は予測する方法は、ｐ３−Ａｌｃのレベルの代わりにｐ３−Ａｌｃ種レベルの比を指標として予測してもよい。例えば、全ｐ３−Ａｌｃα量に対するｐ３−Ａｌｃα３５レベルの割合、ｐ３−Ａｌｃβ３７レベルに対するｐ３−Ａｌｃβ４０レベルの割合等を利用することができる。この場合、健常人と比較してＡＤにおいて存在量が増加するｐ３−Ａｌｃ種（ｐ３−Ａｌｃα３５、ｐ３−Ａｌｃβ４０）の割合が低い患者を治療効果が低いと判定し、又は治療効果が低い可能性が高いと予測することを含むことができる。
【００５６】
また、本発明の認知症又はＡＤに対する治療効果又は治療休止の効果を早期に判定又は予測する方法は、検体中のｐ３−Ａｌｃと共に、ｐ３−Ａｌｃとは異なる軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の指標を測定することを含んでいてもよい。このような指標としては、記憶力、判断力、見当識力、問題解決能力、社会適応能力、介護状況、ｐ−ｔａｕ、Ａβ（Ａβ４０及びＡβ４２等）、ＰＥＴ等の画像診断を挙げることができる。
【００５７】
また、本発明の認知症又はＡＤに対する治療効果又は治療休止の効果を早期に判定又は予測する方法は、測定されたｐ３−Ａｌｃレベル又はｐ３−Ａｌｃレベルの変化から治療効果を定量化（数値化）することにより行ってもよい。定量化は、例えば、予め数値化された治療効果が確認された軽度認知症又はＡＤ患者におけるｐ３−Ａｌｃレベルの情報から、治療効果とｐ３−Ａｌｃレベルに関する標準曲線を作成して、被験者から得れれたｐ３−Ａｌｃレベルを基に治療効果を数値化することにより行うことができる。よって、本発明の方法は、更に、測定されたｐ３−Ａｌｃレベル又はｐ３−Ａｌｃレベルの変化から治療効果を定量化（数値化）することを含んでいてもよい。
【００５８】
本発明の認知症又はＡＤに対する治療効果又は治療休止の効果を早期に判定又は予測する方法において採用される治療は、認知症又はＡＤの治療であれば特に限定されないが、例えば治療薬の投与を挙げることができる。このような治療薬としては、γ−セクレターゼ阻害剤、γ−セクレターゼワクチン、高脂血症治療剤（例えば、スタチン）、脂質代謝改善剤、又は、脳神経細胞傷害予防効果を持つ薬剤を挙げることができる。
【００５９】
また、本発明の認知症又はＡＤに対する治療効果又は治療休止の効果を早期に判定又は予測する方法は、検体中のｐ３−Ａｌｃと共に、ｐ３−Ａｌｃとは異なる軽度認知症又はＡＤの進展、発症、又は進行度の指標を測定することを含んでいてもよい。このような指標としては、記憶力、判断力、見当識力、問題解決能力、社会適応能力、介護状況、ｐ−ｔａｕ、Ａβ（Ａβ４０及びＡβ４２等）、ＰＥＴ等の画像診断を挙げることができる。
【００６０】
４．スクリーニング方法
また、本発明のバイオマーカは、認知症又はＡＤの発症及び進展の指標となることから、γ−セクレターゼの阻害剤若しくは活性修飾剤又は認知症又はＡＤの治療薬のスクリーニングに用いることができる。例えば、ＡＤ患者又はＡＤモデル動物に被験薬を投与し、一定時間後のｐ３−Ａｌｃレベルを測定することにより、当該治療薬が認知症又はＡＤの治療効果を有するものであるか否かを判定することができる。本発明のスクリーニング方法は、検体中のｐ３−Ａｌｃを検出するステップを備え、ｐ３−Ａｌｃレベルの変化を指標として判定を行うことができる。
【００６１】
具体的には、本発明のγ−セクレターゼの阻害剤若しくは活性修飾剤又は認知症又はＡＤの治療薬のスクリーニング方法は、以下のステップ：
ａ）γセクレターゼ異常を有するモデル動物若しくはヒト（又は認知症若しくはＡＤ患者又は認知症若しくはＡＤモデル動物）に被験薬を投与するステップ、
ｂ）投与された対象の体液を試料として調整するステップ、
ｃ）ｐ３−Ａｌｃのレベルを測定するステップ、並びに、
ｄ）ｐ３−Ａｌｃのレベルと被験薬のγセクレターゼ異常に基づく疾患（又は認知症若しくはＡＤ）の治療又は予防効果の有無又は程度との関連付けを行うステップにより行うことができる。
【００６２】
より具体的には、本発明のγ−セクレターゼの阻害剤若しくは活性修飾剤又は認知症又はＡＤの治療薬のスクリーニング方法は、以下のステップ：
ａ）γセクレターゼ異常を有するモデル動物若しくはヒト（又は認知症若しくはＡＤ患者又は認知症若しくはＡＤモデル動物）の体液を検体として調整するステップ、
ｂ）γセクレターゼ異常を有するモデル動物若しくはヒト（又は認知症若しくはＡＤ患者又は認知症若しくはＡＤモデル動物）に被験薬を投与するステップ、
ｃ）投与後の対象の体液を検体として調整するステップ、
ｄ）投与前及び投与後の検体中のｐ３−Ａｌｃのレベルを測定するステップ、並びに、
ｅ）治療後のの検体中のｐ３−Ａｌｃレベルが、治療前のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して低値を示す場合には被験薬には治療効果が無く、治療前のｐ３−Ａｌｃレベルと比較して数値が変化しない場合には被験薬に治療効果があると判定することにより行うことができる。
【００６３】
５．ｐ３−Ａｌｃの測定
ｐ３−Ａｌｃの測定は、ｐ３−Ａｌｃレベルを測定可能な方法であって、当業者周知の方法により行うことができる。ｐ３−Ａｌｃの測定は、ｐ３−Ａｌｃの同定及び定量を含むことができる。例えば、ｐ３−Ａｌｃは、ｐ３−Ａｌｃに特異的な抗体を用いることにより、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、免疫組織化学的方法、又は、ウエスタンブロット等を用いて測定することもできる。また、ｐ３−Ａｌｃは、検体から所望のｐ３−Ａｌｃを分離した後、分離されたｐ３−Ａｌｃを検出することにより行うこともできる。検体からのｐ３−Ａｌｃの分離は、ペプチドの分離に使用される方法であって、当業者周知の方法により行うことができ、例えば、免疫沈降、ウエスタンブロット、又は、アフィニティクロマトグラフィ等により行うことができる。分離されたｐ３−Ａｌｃを検出する方法は、ペプチドのアミノ酸配列、分子量、物理的性質、又は、化学的性質に関する情報であって、ｐ３−Ａｌｃを特定可能な情報が得られる方法であれば限定されず、当業者周知の方法により行うことができ、例えば、マススペクトル、プロテインシーケンサー、ウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ等を挙げることができる。
【００６４】
例えば、ｐ３−ＡｌｃレベルをｓＥＬＩＳＡにより測定する場合、国際公開公報ＷＯ２００９／０７５０８４及び本明細書記載の方法に準じて適宜ｓＥＬＩＳＡ系を構築して測定することができる。
【００６５】
６．キット
また、本発明は、ヒトｐ３−Ａｌｃと特異的に結合する第一抗体が固定化した、固相、ハプテン、磁気ビーズ及び不溶性担体からなる群より選択される担体を含むことを特徴とする免疫化学測定のキットに関する。
【００６６】
（１）抗体の取得
抗体は、所望のｐ３−Ａｌｃのアミノ酸配列を有するアミノ酸配列からなるペプチドを抗原として、必要に応じて免疫賦活剤（例えば、鉱油若しくはアルミニウム沈殿物と加熱死菌若しくはリポ多糖体、フロインドの完全アジュバント、又は、フロインドの不完全アジュバント等）とともに、非ヒトの免疫動物に免疫することにより作製することができる。免疫動物としては、マウス、ラット、ハムスター、ラビット、ニワトリ、アヒル等ハイブリドーマを作製することが可能な動物であれば特に限定はないが、好ましくは、マウス、ラット又はウサギである。
【００６７】
動物への免疫原の投与は、例えば、皮下注射、腹腔内注射、静脈内注射、皮内注射、筋肉内注射又は足蹠注射により行うことができるが、好ましくは、皮下注射又は腹腔内注射である。使用する免疫原の量は、抗体を産生できる量であれば特に限定は無いが、好ましくは、０．１〜１０００μｇであり、より好ましくは、１〜５００μｇであり、より更に好ましくは、１０〜１００μｇである。免疫は、１回又は適当な間隔をあけて数回行うことができる。好ましくは、１〜５週間に１回の免疫を合計２〜５回行い、より好ましくは、３週間に１回の免疫を合計３回行う。最後の免疫から１〜２週間後に、免疫した動物の眼窩又は尾静脈から採血を行い、その血清を用いて抗体価の測定を行う。抗体価の測定は、当業者周知の方法で行うことができる。例えば、放射性同位元素免疫定量法（ＲＩＡ法）、固相酵素免疫定量法（ＥＬＩＳＡ法）、蛍光抗体法、受身血球凝集反応法を挙げることができ、好ましくは、ＥＬＩＳＡ法である。本発明の抗体は、十分な抗体価を示す動物の血清から精製することにより得ることができる。
【００６８】
抗体としてモノクローナル抗体を使用する場合、上記方法により免疫した免疫感作動物から得た抗体産生細胞と、骨髄腫系細胞（ミエローマ細胞）を融合することにより得られるハイブリドーマを培養することにより得ることができる。当該融合方法としては、例えば、ミルステインらの方法（Ｇａｌｆｒｅ，  Ｇ．  ＆  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．７３：３−４６，１９８１）を挙げることができる。使用する抗体産生細胞は、上記方法により免疫し血清が十分な抗体価を示した免疫動物の脾臓、膵臓、リンパ節、末梢血より採取することができ、好ましくは、脾臓より採取する。使用する骨髄腫系細胞は、例えば、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ラビット又はヒト等の哺乳動物に由来する細胞であって、in vitro で増殖可能な細胞であれば特に限定はない。このような細胞としては、例えば、Ｐ３−Ｘ６３Ａｇ８（Ｘ６３）（Ｎａｔｕｒｅ,２５６,４９５,１９７５）、Ｐ３／ＮＳ１／１−Ａｇ４−１（ＮＳ１）（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，６，２９２，１９７６）、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８Ｕ１（Ｐ３Ｕ１）（Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８１，１，１９７８）、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３（６５３）（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２３，１５４８，１９７９）、Ｓｐ２／０−Ａｇ１４（Ｓｐ２／Ｏ）（Ｎａｔｕｒｅ，２７６,２６９,１９７８）、Ｓｐ２／Ｏ／ＦＯ−２（ＦＯ−２）（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，３５，１，１９８０）等を挙げることができる。
【００６９】
上述の方法に従って得られた抗体産生細胞及び骨髄腫細胞は、培地、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ)等で洗浄後、ポリエチレングリコール（以下、「ＰＥＧ」という）等の細胞凝集性媒体を加え、細胞を融合させる。融合させる際の抗体産生細胞及び骨髄腫細胞の比率は、例えば、２：１〜１：２である。細胞融合を行った後、ＨＡＴ（ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン）培地等の培地で培養することにより、ハイブリドーマを選択的に増殖させる。培養後、培養上清を採取し、ＥＬＩＳＡ等により、抗原タンパク質に結合し、非抗原タンパク質に結合しないサンプルを選択する。当該サンプルを限界希釈法により単一細胞化を行い、安定して高い抗体価を示す細胞を選択する。
【００７０】
モノクローナル抗体は、上述の方法により得られたハイブリドーマをｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養し、培養液を精製することによって得ることができる。また、モノクローナル抗体は、予めプリスタンを腹腔内に投与した同系動物又は免疫不全動物にハイブリドーマを移植した後、腹水化させ、採取した腹水を精製することによっても得ることができる。精製は、遠心分離後、プロテインＡカラム、プロテインＧカラム等を用いてＩｇＧ画分を回収することにより得ることができる。
【００７１】
（２）標識
抗体の標識の結合は当分野において一般的な方法により行うことができる。例えば、タンパク質又はペプチドを蛍光標識する場合、タンパク質又はペプチドをリン酸緩衝液で洗浄した後、ＤＭＳＯ、緩衝液等で調整した色素を加え、混合した後室温で１０分間静置することにより結合させることができる。また、市販の標識キットとして、ビオチン標識キット（Ｂｉｏｔｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２、Ｂｉｏｔｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＳＨ：株式会社同仁化学研究所）、アルカリフォスファターゼ標識用キット（Ａｌｋａｌｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２、Ａｌｋａｌｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＳＨ：株式会社同仁化学研究所）、ペルオキシダーゼ標識キット（Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｌａｂｅｒｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２、Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｌａｂｅｒｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２：株式会社同仁化学研究所）、フィコビリプロテイン標識キット（Ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２、Ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＳＨ、Ｂ−Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２、Ｂ−Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＳＨ、Ｒ−Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２、Ｒ−Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＳＨ：株式会社同仁化学研究所）、蛍光標識キット（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２、ＨｉＬｙｔｅ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  ５５５  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２、ＨｉＬｙｔｅ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  ６４７  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２：株式会社同仁化学研究所）、ＤｙＬｉｇｈｔ５４７、ＤｙＬｉｇｈｔ６４７（テクノケミカル株式会社）、Ｚｅｎｏｎ（登録商標）Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）抗体標識キット、Ｑｄｏｔ（登録商標）抗体標識キット（インビトロゲン社）、ＥＺ−Ｌａｂｅｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ（フナコシ株式会社）等を用いて標識することもできる。
【００７２】
（３）キット
本発明のキットは、上述の方法に従って作製した抗体（又は標識化した抗体）を用いて、酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）、簡易ＥＩＡ法、酵素結合イムノソルベントアッセイ法（ＥＬＩＳＡ法）、ラジオイムノアッセイ法（ＲＩＡ法）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ法）等の標識化免疫測定法；ウェスタンブロッティング法等のイムノブロッティング法；金コロイド凝集法等のイムノクロマト法；イオン交換クロマトグラフィ法、アフィニティクロマトグラフィ法等のクロマトグラフィ法；比濁法（ＴＩＡ法）；比ろう法（ＮＩＡ法）；比色法；ラテックス凝集法（ＬＩＡ法）；粒子計数法（ＣＩＡ法）；化学発光測定法（ＣＬＩＡ法、ＣＬＥＩＡ法）；沈降反応法；表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ法）；レゾナントミラーディテクター法（ＲＭＤ法）；比較干渉法用のキットとして当業者に慣用の技術を用いて製造することができる。
【００７３】
例えば、本発明のキットは、例えば、抗ｐ３−Ａｌｃモノクローナル抗体固相化プレート、ビオチン標識抗ｐ３−Ａｌｃポリクローナル抗体溶液、ストレプトアビジンＰＯＤ溶液、洗浄液、ＴＭＢ試薬、２Ｍ  ＨＣｌ、標準物質（ｐ３−Ａｌｃペプチド）を備えるキットとして製造することができる。また、別の例として、本発明のキットは、抗ｐ３−Ａｌｃモノクローナル抗体、抗ｐ３−Ａｌｃモノクローナル抗体結合金コロイド、ウサギ免疫グロブリン結合金コロイド、及び、テストプレートを備えるキットとして製造することができる。当該キットにおいて、テストプレートは、検体を挿入する検体採取部、抗ｐ３−Ａｌｃモノクローナル抗体結合金コロイドを含む感作金コロイド塗布部、抗ｐ３−Ａｌｃモノクローナル抗体を含む判定部（テストライン）、抗ウサギ免疫グロブリンポリクローナル抗体を含む判定部（リファレンスライン）、吸収剤、及び、メンブレンフィルターを備えていてもよい。
【００７４】
以下、本発明をより詳細に説明するため実施例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。なお、本願全体を通して引用される全文献は参照によりそのまま本願に組み込まれる。また、本実施例の全てについて、全ての人の脳脊髄液、血漿及び血清の本試験での使用についてのインフォームドコンセントを患者及び／又はその家族から得た。また、全てのサンプルの採取及び使用について各施設の適切な倫理委員会で承認を得た。
【００７５】
（実施例１）ｐ３−ＡｌｃのＥＬＩＳＡ測定系の構築
ｐ３−Ａｌｃαを測定するためのｓＥＬＩＳＡキットは、国際公開ＷＯ２００９／０７５０８４の記載に準じて作製した。具体的には、ヒトＡｌｃα１の８１７〜８２２番目の間の配列を含むペプチドを抗原として使用してポリクローナルウサギ抗体８１７を作製し、抗原結合樹脂でアフィニティ精製した。ポリクローナルウサギ抗体８３９は、ヒトＡｌｃα１の８３９〜８５２番目の間の配列を含むペプチドを抗原として使用し、抗原結合樹脂でアフィニティ精製した。８３９抗体は、ｐ３−Ａｌｃαを捕捉する抗体として使用し、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ｐａｎ  ｐ３−Ａｌｃα抗体８１７及びテトラメチルベンジジンは補足したｐ３−ＡｌｃαをＯＤ４５０で比色分析により検出するために使用した。合成ｐ３−Ａｌｃα３５ペプチド（Ｈａｔａ  Ｓ．ら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．（２００９）２８４：３６０２４−３６０３３）を標準タンパク質として使用した。作製したｓＥＬＩＳＡ系がｐ３−Ａｌｃαに特異性であることについて、ｐ３−Ａｌｃα３５ペプチド及びｐ３−Ａｌｃβ３７ペプチドを用いて確認した（非図示）。ｐａｎ  ｐ３−Ａｌｃαマウスモノクローナル抗体３Ｂ５及びポリクローナルウサギ抗体ＵＴ１３５  は記述の方法により作製した（Ｈａｔａ  Ｓ．ら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．（２００９）２８４：３６０２４−３６０３３）。構築したｓＥＬＩＳＡ系は標準物質を３９〜６２５ｐｇ／ｍＬの範囲で標準曲線として検出可能であった。
【００７６】
抗ｐ３−Ａｌｃβ４０抗体（２Ａ１抗体）は、抗原ペプチドとしてｐ３−Ａｌｃβの３２番目から４０番目のアミノ酸配列を有するペプチド（ＣＩＰＳＡＡＴＬＩＩ；配列番号１８）を抗原として用いて国際公開ＷＯ２００９／０７５０８４の記載に準じて作製した。ｐ３−Ａｌｃβ４０抗体が容量依存的にｐ３−Ａｌｃβ４０と反応することを確認した（非図示）。また、ｐ３−Ａｌｃβ４０抗体のｐ３−Ａｌｃβ３７に対する交差反応性を測定し、交差反応しないことを確認した（非図示）。
抗ｐ３−Ａｌｃβ３７抗体は、抗原ペプチドとして、ｐ３−Ａｌｃβの２９番目から３７番目のアミノ酸配列を有するペプチド（ＣＮＳＭＩＰＳＡＡＴ）を抗原として用いて国際公開ＷＯ２００９／０７５０８４の記載に準じて作製した。得られた抗体についてｐ３−Ａｌｃβ３７、ｐ３−Ａｌｃβ４０、及びＢＳＡとの反応性を測定し、ｐ３−Ａｌｃβ３７を特異的に認識する抗体として１４Ａ１抗体及び１５Ａ１抗体を得た。得られた抗体を使用してサンドイッチＥＬＩＳＡ系を構築し、検出感度を確認した（非図示）。検出感度のより高かった１４Ａ１抗体についてｐ３−Ａｌｃβ４０と交差反応しないことを確認た（非図示）。以下の実験におけるｐ３−Ａｌｃβ３７の測定は１４Ａ１を用いて作製したサンドイッチＥＬＩＳＡ系を使用した。
【００７７】
Ａβ４０及びＡβ４２を測定するためのｓＥＬＩＳＡは、市販のキット（Ｈｕｍａｎ  Ａｍｙｌｏｉｄβ（１−４０）（Ｎ）Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ−ＩＢＬ（＃２７７１４）、Ｈｕｍａｎ  Ａｍｙｌｏｉｄβ（１−４２）（Ｎ）Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ−ＩＢＬ（＃２７７１２）、免疫生物研究所、日本）を使用した。
【００７８】
（実施例２）被験者由来のＣＳＦサンプルの各マーカレベルの測定（軽度認知障害、ＡＤ患者及びコントロール、ＣＤＲ判定あり）
（１）測定及び分析の対象
軽度認知障害およびＡＤを発症している患者６５名、及び当該患者と年齢の合う認知症でない高齢者１９名（コントロール）について測定及び分析を行った。
（２）被験者のＣＤＲ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ  Ｒａｔｉｎｇ）の決定
痴呆の重症度を、ＣＤＲにより評価した。具体的には、本人の面接及び家族の情報をもとに、記憶；見当識；判断力と問題解決；地域社会活動、家庭生活及び趣味・関心；並びに介護状況の６項目を評価し、総合的に判定した。
それぞれの評価方法、総合評価方法など
評価の結果、痴呆のない被験者をＣＤＲ０（健康・非疾患）とし、痴呆の症状の進行に従ってＣＤＲ０．５（軽度認知障害）、ＣＤＲ１（軽度認知症）、ＣＤＲ２（中等度認知症）、ＣＤＲ３（重度認知症）とした。
【００７９】
（３）マーカ測定
被験者をベッドに寝かせ、側臥位｛そくがい｝で腰椎穿刺（ＬＰ）を行った。ＣＳＦの最初の１ｍＬを廃棄後、ＣＳＦをポリプロピレンチューブに回収し、４℃、１，０００ｇで１０分間遠心して混入物（ｄｅｂｒｉｓ）を除去し、ポリプロピレンチューブに少量ずつ分注して−８０℃で保管した。マーカ（ｐ３−Ａｌｃα、ｐ３−Ａｌｃβ３７、ｐ３−Ａｌｃβ４０、Ａβ４２、ｐ−ｔａｕ）のレベルは次のように測定した。｛ようつい  せんし｝得られた脳脊髄液（ＣＳＦ）（２５μＬ）１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び０．５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０含有ＰＢＳで１０倍に希釈し、得られたサンプル２５０μＬを１５，０００ｇで１０分間遠心して不溶物（ｄｅｂｒｉｓ）を除去し、１００μＬの上清をアッセイサンプルとして、ｓＥＬＩＳＡによりデュプリケートで測定した。ｐ３−Ａｌｃα及びｐ３−Ａｌｃβは実施例１で作製したｓＥＬＩＳＡを用いて測定した。
【００８０】
（４）結果
軽度認知障害およびＡＤを発症している被験者６５名及び痴呆のない被験者１９名について、ＣＤＲとマーカレベルの分布との相関を分析した。被験者の背景及び測定結果のまとめを表１に示す。ｐ３−Ａｌｃαのレベルは、認知症でないコントロール（ＣＤＲ０）（７１１７．４±１９４４．７ｐｇ／ｍＬ）と比較して、軽度認知障害の患者（ＣＤＲ０．５）（８５４７．５±２３７３．１ｐｇ／ｍＬ）軽度認知症（ＣＤＲ１）（９５９３．４±２３９８．３ｐｇ／ｍＬ）において有意に高かった（Ｐ＝０．０２８４１、Ｐ＝０．０１１６２）。また、Ａβ４２のレベルには両者で有意差は確認されなかった。
【００８１】
８４人の被験者の測定値をＣＤＲで分類した結果を表１に、ＣＤＲと各マーカ測定値の関係は図１〜図４に、ＣＤＲと年齢の関係は図５に示す。
【００８２】
【表１】
2014122788.tif 000002
【００８３】
ＡＰＰとＡｌｃは細胞内において協調して代謝されることから、非凝集性のｐ３−Ａｌｃ種は脳内でのＡβの産生量を反映していると予測される。
認知症でないコントロールにおいては、ｐ３−Ａｌｃαレベルおよびｐ３−Ａｌｃβ４０とＡβ４２レベルも強い有意な相関関係を示した（Ｒ２＝０．７０９、Ｒ２＝０．６８５）。一方で、ＡＤ又は軽度認知障害の患者（ＣＤＲ≧０．５）におけるｐ３−Ａｌｃαレベルおよびｐ３−Ａｌｃβ４０とＡβ４２レベルの相関関係は弱かった（Ｒ２＝０．３８６、Ｒ２＝０．２６５）。この相関関係の低下は、Ａβの凝集能によるものと考えられる。
【００８４】
（実施例３）被験者由来のＣＳＦサンプルの各マーカレベルの測定（コントロール、軽度認知障害（ＣＤＲ０．５）、軽度認症（ＣＤＲ１））
（１）マーカ測定結果解析
実施例２の測定結果において、コントロールと軽度認知障害のマーカ濃度に差があったことより、マーカの測定結果をコントロールと比較した。
【００８５】
（２）結果
ＣＤＲとマーカレベルの関係を表２および図６〜図９、ＣＤＲと年齢についての関係図１０に示す。
【００８６】
【表２】
2014122788.tif 000003
【００８７】
軽度認知障害（ＣＤＲ０．５）と軽度認知症（ＣＤＲ１）の患者は、コントロールと比較して、ｐ３−Ａｌｃα、ｐ３−Ａｌｃβ３７、ｐ３−Ａｌｃβ４０で有意に高い値を示していた（ｐ＝０．０２８、ｐ＝０．００１、ｐ＝０．００６、ｐ＝０．００１）。
【００８８】
これらのマーカの測定値を用い、軽度認知障害・軽度認知症の診断に用いるためにＲＯＣ(Ｒｅｃｅｉｖｅｒ   Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ)曲線を用いて、それぞれのマーカーの曲線下面積（ＡＵＣ）を確認した（図１１）。曲線下面積（ＡＵＣ）は、ｐ３−Ａｌｃβ３７が０．６８７７２、ｐ３−Ａｌｃβ４０が０．７７１９３、Ａβ４２が０．５７６３２、ｐ３−Ａｌｃαが０．７３３３３であり、ｐ３−Ａｌｃβ４０が最も大きかった。
【００８９】
（実施例４）被験者由来のＣＳＦサンプルの各マーカレベルの測定（コントロール、軽度認知障害（ＣＤＲ０．５）、軽度認症（ＣＤＲ１）、中等度認知症（ＣＤＲ２）、重度認知症（ＣＤＲ３））
（１）マーカ測定結果解析
実施例２の測定結果において、軽度認知障害および軽度認知症をピークとして中等度認知症（ＣＤＲ２）、重度認知症（ＣＤＲ３）で低値を示していることより、中等度以上の認知症の測定結果を軽度認知障害・軽度認知症またはコントロールと比較した。
【００９０】
（２）−１  軽度認知障害・軽度認知症との比較結果
ＣＤＲとマーカレベルの関係について軽度認知障害（ＣＤＲ０．５）および軽度認症（ＣＤＲ１）と中等度認知症（ＣＤＲ２）および重度認知症（ＣＤＲ３））の比較を図１２〜図１５、ＣＤＲと年齢との関係を図１６に示す。
【００９１】
ｐ３−Ａｌｃα、ｐ３−Ａｌｃβ３７、ｐ３−Ａｌｃβ４０、Ａβ４２全てにおいて、ＣＤＲ０．５および１から痴呆が進行することで有意に低値を示した（ｐ＜０．０００１）。
【００９２】
これらのマーカの測定値を用い、中等度認知症・重度度認知症の診断に用いるためにＲＯＣ(Ｒｅｃｅｉｖｅｒ   Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ)曲線を用いて、それぞれのマーカーの曲線下面積（ＡＵＣ）を確認した（図１７）。曲線下面積（ＡＵＣ）は、ｐ３−Ａｌｃβ３７（０．９４８）、ｐ３−Ａｌｃ４０（０．９５２）、ｐ３−Ａｌｃα（０．９５２）において高い値を示した。Ａβ４２では０．９９であった。
【００９３】
（２）−２  コントロールとの比較結果
ＣＤＲとマーカレベルの関係についてコントロール（ＣＤＲ０）と中等度認知症（ＣＤＲ２）、重度認知症（ＣＤＲ３））の比較を図１８〜図２１、ＣＤＲと年齢との関係を図２２に示す。
【００９４】
ｐ３−Ａｌｃα、ｐ３−Ａｌｃβ３７、ｐ３−Ａｌｃβ４０、Ａβ４２全てにおいて、ＣＤＲ２および３はコントロールと比較して有意に低値を示した（ｐ＜０．０００１）。
【００９５】
これらのマーカの測定値を用い、コントロールと比較して中等度認知症・重度認知症の診断するためにＲＯＣ(Ｒｅｃｅｉｖｅｒ   Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ)曲線を用いて、それぞれのマーカーの曲線下面積（ＡＵＣ）を確認した（図２３）。曲線下面積（ＡＵＣ）は、ｐ３−Ａｌｃβ３７（０．８８３）、ｐ３−Ａｌｃ４０（０．８８０）、ｐ３−Ａｌｃα（０．８９１）において高い値を示した。
【００９６】
興味深いことに、ｐ３−Ａｌｃのレベルは軽度認知障害（ＣＤＲ０．５）および軽度認知症（ＣＤＲ１）の患者は、コントロールより有意に高く（ｐ＜０．０００１）、中等度認知症（ＣＤＲ２）および重度認知症（ＣＤＲ３）の患者はコントロールより有意に低かった（ｐ＜０．０００１）。
【００９７】
同様の傾向はＡβ４２では確認されなかった。Ａβ４２については統計的な差は観察されなかった。これは、Ａβ４２の凝集性のためと考えられる。ＡＤ患者（ＣＤＲ２）におけるｐ３−Ａｌｃα及びＡβ４０の減少は、ニューロンの数の減少及び／又は神経活動の低下に伴いＡｌｃ及びＡＰＰの発現が弱まる神経変性が進行したためと考えられる。
【００９８】
（実施例５）認知症の推移とｐ３−Ａｌｃレベルの関係
認知症の推移とｐ３−Ａｌｃレベルの関係について調べるため、ＣＤＲ０およびＣＤＲ１であったヒトの認知症の程度とｐ３−Ａｌｃレベルの変化を継時的に測定した。具体的には、ＣＤＲ１の８３歳の女性（患者Ａ）、ＣＤＲ０の８３歳の女性（患者Ｂ）、ＣＤＲ１の８８歳の女性（患者Ｃ）、ＣＤＲ０．５の５５歳の男性（患者Ｄ）、ＣＤＲ０．５の６３歳の女性（患者Ｅ）、ＣＤＲ１の７６歳の女性（患者Ｆ）から採取したＣＳＦ中のｐ３−Ａｌｃβ３７及びｐ３−Ａｌｃβ４０レベルを測定した。ＣＳＦの調製とｐ３−Ａｌｃβ３７及びｐ３−Ａｌｃβ４０レベルの測定、及び患者のＣＤＲの決定は実施例２に記載の方法に準じて行った。初回測定後、患者Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ，Ｅ、及びＦについて、それぞれ、３年３か月後（８６歳）、２年９か月後（８５歳）、１年後（８９歳）、３年３か月後（５８歳）、４年１１か月後（６８歳）、及び２年後（７７歳）に再びＣＳＦ中のｐ３−Ａｌｃβ３７及びｐ３−Ａｌｃβ４０のレベルを測定し、またＣＤＲを決定した（カッコ内は二度目の測定時の各患者の年齢を示す）。
【００９９】
患者Ａ〜Ｃについて二回目に決定したＣＤＲは、ＣＤＲ２でありいずれも認知症が悪化していた。また、患者Ｄ及びＥについて二回目に決定したＣＤＲは、ＣＤＲ０．５であり、患者Ｆについて二回目に決定したＣＤＲはＣＤＲ１であり、いずれも認知症の程度に変化は見られなかった。ｐ３−Ａｌｃβ３７及びｐ３−Ａｌｃβ４０を、認知症が悪化した患者Ａ〜Ｃについて測定した結果を図２４に、認知症が悪化しなかった患者Ｄ〜Ｆについて測定した結果を２５に示す。図中、縦軸は、各ｐ３−Ａｌｃβの濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示し、横軸は初回の測定からの経過期間を示す。本実験の結果、認知症が悪化する（ＣＤＲの数値が高くなる）とＣＳＦ中のｐ３−Ａｌｃβ３７のレベルが低下することが示された。同様に、認知症が悪化する（ＣＤＲの数値が高くなる）とＣＳＦ中のｐ３−Ａｌｃβ４０のレベルも低下した。一方で、認知症が悪化しない患者においては、ｐ３−Ａｌｃβ３７及びｐ３−Ａｌｃβ４０共にほとんど変化しないか増加することが観察された。
【産業上の利用可能性】
【０１００】
本発明のＡＤ又は認知症の診断及び発症予測、ＡＤ又は認知症患者の予後予測、並びに薬物投与や治療停止の効果の判定又は予測方法は、早期に認知症又はアルツハイマー病の進展、発症、又は進行度を診断／判定又は予測することができることから、ＡＤや認知症の診断の分野において利用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【配列表】
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