(57)【要約】      （修正有）【課題】ＶＬＡ−４結合抗体を含有する多発性硬化症（ＭＳ）等の中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性疾患のための治療剤の提供。【解決手段】ＶＬＡ−４結合抗体は、例えば、ナタリズマブであることが可能であり、抗体濃度を約１２０ｍｇ／ｍＬから約１９０ｍｇ／ｍＬの範囲で含む水性医薬組成物であって、グリセロールと約ｐＨ５から約ｐＨ７を有するリン酸緩衝液とをさらに含み、その上、Ｌアルギニン塩酸塩や、塩化ナトリウムと、ポリソルベート８０で含むことが可能な水性医薬組成物である。該製剤は、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患のための治療効果を提供する。例えば、該製剤は、多発性硬化症（ＭＳ）等の中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性疾患のための治療効果を有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
約１２０から約１９０ｍｇ／ｍＬの濃度のＶＬＡ−４結合抗体を含む水性医薬組成物で
あって、グリセロールと、約ｐＨ５から約ｐＨ７を有するリン酸緩衝液とをさらに含む、
水性医薬組成物。
【請求項２】
約１２０から約１９０ｍｇ／ｍＬの濃度のＶＬＡ−４結合抗体を含む水性医薬組成物で
あって、Ｌアルギニン塩酸塩と、約ｐＨ５から約ｐＨ７を有するリン酸緩衝液とをさらに
含む、水性医薬組成物。
【請求項３】
約１２０から約１９０ｍｇ／ｍＬの濃度のＶＬＡ−４結合抗体を含む水性医薬組成物で
あって、塩化ナトリウムと、ポリソルベート８０と、約ｐＨ５から約ｐＨ７を有するリン
酸緩衝液と、をさらに含む、水性医薬組成物。
【請求項４】
前記ＶＬＡ−４結合抗体はナタリズマブである、請求項１、２または３に記載の組成物
。
【請求項５】
前記ＶＬＡ−４結合抗体は、約１３０ｍｇ／ｍＬから約１８０ｍｇ／ｍＬの濃度範囲で
ある、請求項１、２または３に記載の組成物。
【請求項６】
前記ＶＬＡ−４結合抗体は、約１４０ｍｇ／ｍＬから約１６０ｍｇ／ｍＬの濃度範囲で
ある、請求項１、２または３に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＶＬＡ−４結合抗体は、約１５０ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１、２または３
に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物のｐＨは約６±０．５である、請求項１、２または３に記載の組成物。
【請求項９】
前記リン酸緩衝液は、約５ｍＭから約３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液である、請求
項１、２または３に記載の組成物。
【請求項１０】
前記リン酸緩衝液は、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液である、請求項１、２また
は３に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物は、塩化ナトリウムを実質的に含まない、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物は、６０ｍＭ未満のナトリウム含有量を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項１３】
界面活性物質をさらに含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記界面活性物質は、ポリソルベート８０、モノステアリン酸グリセリン、ステアリン
酸ポリオキシル、ラウロマクロゴール、およびオレイン酸ソルビタンからなる群より選択
される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記界面活性物質はポリソルベート８０である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
前記界面活性物質は、約０．００１％から約２．０％（ｗ／ｖ）の量で存在する、請求
項１３に記載の組成物。
【請求項１７】
前記界面活性物質は、約０．０４％（ｗ／ｖ）の量で存在する、請求項１３に記載の組
成物。
【請求項１８】
前記組成物は、皮下もしくは筋肉内投与に好適である、請求項１、２または３に記載の
組成物。
【請求項１９】
前記組成物は、約２℃から約８℃の温度で少なくとも１２ヶ月間安定している、請求項
１、２、または３に記載の組成物。
【請求項２０】
１４０ｍＭの塩化ナトリウムを含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項２１】
０．０４％のポリソルベート８０（ｗ／ｖ）を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項２２】
皮下もしくは筋肉内投与のために設計された、またはそれに好適な送達装置であって、
請求項１、２または３に記載の組成物の単位用量とともにパッケージ化されるか、それを
含む、送達装置。
【請求項２３】
前記単位用量のヒトへの投与は、前記ヒトの体重１ｋｇあたり約１．４ｍｇ／ｋｇから
約３．０ｍｇ／ｋｇのＶＬＡ−４結合抗体もしくはそのフラグメントを送達する、請求項
２２に記載の送達装置。
【請求項２４】
前記単位用量は約０．２５から１．５ｍＬである、請求項２２に記載の送達装置。
【請求項２５】
前記単位用量は約１ｍＬである、請求項２２に記載の送達装置。
【請求項２６】
前記単位用量は約１２０ｍｇから約３５０ｍｇである、請求項２２に記載の送達装置。
【請求項２７】
前記単位用量は約１５０ｍｇである、請求項２２に記載の送達装置。
【請求項２８】
前記単位用量は約３００ｍｇである、請求項２２に記載の送達装置。
【請求項２９】
前記単位用量は、フラクションに分割される、請求項２２に記載の送達装置。
【請求項３０】
前記単位用量は２つに分割され、分割されたそれぞれは約１５０ｍｇのＶＬＡ−４結合
抗体を含有する、請求項２２に記載の送達装置。
【請求項３１】
患者を治療するためにＶＬＡ−４結合抗体治療を必要とする前記患者を指導する方法で
あって、（ｉ）前記患者に、請求項１、２、または３に記載の組成物の少なくとも１つの
単位用量を提供するステップと、（ｉｉ）前記患者に前記少なくとも１つの単位用量を皮
下に自己投与するように指導するステップと、を含む方法。
【請求項３２】
患者を治療するためにＶＬＡ−４結合抗体治療を必要とする前記患者を指導する方法で
あって、（ｉ）前記患者に、請求項１、２、または３に記載の組成物の少なくとも１つの
単位用量を提供するステップと、（ｉｉ）前記患者に１用量を一度に、前記単位用量を皮
下に自己投与するように指導するステップと、を含む方法。
【請求項３３】
前記患者は炎症性疾患を有する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記患者は、多発性硬化症、喘息、関節炎、糖尿病、線維症、および炎症性腸疾患から
なる群より選択される疾患を有する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
請求項１、２、または３に記載の組成物の単位用量であって、約０．２５ｍＬから１．
５ｍＬである、単位用量。
【請求項３６】
前記単位用量は約１ｍＬである、請求項３５に記載の単位用量。
【請求項３７】
請求項１、２、または３に記載の組成物の単位用量であって、前記単位用量のヒトへの
投与は、前記ヒトの体重１ｋｇあたり約１．４ｍｇから約３．０ｍｇのＶＬＡ−４結合抗
体もしくはそのフラグメントを送達する、単位用量。
【請求項３８】
患者を治療する方法であって、前記患者に、請求項１、２、または３に記載の組成物を
投与するステップを含む、方法。
【請求項３９】
前記患者は炎症性疾患を有する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記患者は、多発性硬化症、喘息、関節リウマチ、糖尿病、またはクローン病からなる
群より選択される疾患を有する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記組成物は、レジメンとして投与される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
前記組成物による治療に好適な患者を選択するステップをさらに含む、請求項３８に記
載の方法。
【請求項４３】
前記患者は多発性硬化症を有し、治療に好適な前記患者は、多発性硬化症のための先の
代替治療に対して不十分な反応を示している、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記患者に、第２の治療薬剤、例えば、血栓溶解剤、神経保護剤、抗炎症剤、ステロイ
ド、サイトカイン、または成長因子を投与するステップをさらに含む、請求項３８に記載
の方法。
【請求項４５】
患者を評価する方法であって、（ｉ）前記患者が予め選択された基準を満たすかどうか
を判断するステップと、（ｉｉ）前記患者が前記予め選択された基準を満たす場合、請求
項１、２、または３に記載の組成物を前記患者に承認、提供、処方、または投与するステ
ップを含む、方法。
【請求項４６】
前記患者は多発性硬化症を有し、前記患者は多発性硬化症のための先の代替治療に対し
て不十分な反応を有した、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
ｐＨ６±０．５で、１３５ｍｇ／ｍＬから１６５ｍｇ／ｍＬのナタリズマブ、５ｍＭか
ら１５ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、１３０ｍＭから１５０ｍＭの塩化ナトリウム、お
よび０．０２％から０．０８％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含む、水性医薬組成物
。
【請求項４８】
ｐＨ６±０．５で、１３５ｍｇ／ｍＬから１６５ｍｇ／ｍＬのナタリズマブ、５ｍＭか
ら１５ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、２５０ｍＭから３００ｍＭのグリセロール、およ
び０．０２％から０．０８％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含む、水性医薬組成物。
【請求項４９】
ｐＨ６±０．５で、１３５ｍｇ／ｍＬから１６５ｍｇ／ｍＬのナタリズマブ、５ｍＭか
ら１５ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、１５０ｍＭから１７０ｍＭのＬアルギニン塩酸塩
、および０．０２％から０．０８％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含む、水性医薬組
成物。
【請求項５０】
リン酸緩衝液中の１２０から１９０ｍｇ／ｍＬのＶＬＡ−４結合抗体と、ポリソルベー
トとを含む水性組成物を調製する方法であって、
（i）前記抗体を細胞培養で発現させるステップと、
（ii）前記抗体に少なくとも１回のクロマトグラフィー精製ステップを行うステップと、
（iii）前記抗体に少なくとも２回のリン酸緩衝液中での限外濾過／ダイアフィルトレー
ションステップを行うステップと、
（iv）前記抗体に少なくとも１回のリン酸緩衝液中での限外濾過ステップを行うステップ
と、
（v）ポリソルベートおよびリン酸緩衝液を添加することによって、前記抗体の濃度を１
２０ｍｇ／ｍＬから１９０ｍｇ／ｍＬに調整するステップと、を含む方法。
【請求項５１】
前記ＶＬＡ−４結合抗体はナタリズマブである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５２】
前記ポリソルベートはポリソルベート８０である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
請求項１、２、または３に記載の組成物の品質を評価する方法であって、前記組成物の
溶液パラメータを評価するステップと、前記溶液パラメータが予め選択された基準を満た
すかどうかを判断するステップと、前記溶液パラメータが前記予め選択された基準を満た
す場合、前記組成物の品質は使用に好適であることを判断するステップと、を含む方法。
【請求項５４】
前記溶液パラメータは色である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記溶液パラメータは透明度である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記溶液パラメータは粘度である、請求項５５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
(関連出願の相互参照)
本出願は、２００７年６月１４日出願の米国出願第６０／９４４，０７６号の優先権を
主張するものであり、参照によりその内容全体が本明細書に組み込まれるものとする。
【背景技術】
【０００２】
多発性硬化症（ＭＳ）は、中枢神経系の最も一般的な疾病のうちの１つである。今日、
世界中で２，５００，０００人以上が多発性硬化症を有する。
【発明の開示】
【０００３】
本発明は、一部において、高度に濃縮されたＶＬＡ−４結合抗体を含有する製剤の開発
に基づく。一部の実施形態は、皮下（ＳＣ）または筋肉内（ＩＭ）送達による、例えば、
ヒト患者といったヒト等の被験体への送達に好適である。該製剤はまた、例えば、許容さ
れる点滴マトリクス（生理食塩水等）に希釈した場合、静脈内（ＩＶ）投与に好適である
。ＶＬＡ−４結合抗体は、例えば、ナタリズマブであることが可能であり、抗体濃度は約
１２０ｍｇ／ｍＬから約１９０ｍｇ／ｍＬの範囲である。該製剤は、炎症性疾患、免疫疾
患、または自己免疫疾患のための治療効果を提供する。例えば、該製剤は、多発性硬化症
（ＭＳ）等の中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性疾患のための治療効果を提供することが可能で
ある。
【０００４】
一態様において、本発明は、約１２０から約１９０ｍｇ／ｍＬの濃度（例えば、約１３
５ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、または
約１６５ｍｇ／ｍＬの濃度）のＶＬＡ−４結合抗体と、約ｐＨ５．５から約ｐＨ６．５を
有するリン酸緩衝液とを含む、安定した水性医薬組成物等の水性医薬組成物を特徴とする
。一部の実施形態において、ＶＬＡ−４抗体濃度は、約１３０ｍｇ／ｍＬから約１８０ｍ
ｇ／ｍＬ、または約１４０ｍｇ／ｍＬから約１６０ｍｇ／ｍＬである。一実施形態におい
て、ＶＬＡ−４抗体濃度は、約１５０ｍｇ／ｍＬを上回り、例えば、約１５０ｍｇ／ｍＬ
から約１９０ｍｇ／ｍＬを上回る範囲である。一実施形態において、ＶＬＡ−４抗体濃度
は約１５０ｍｇ／ｍＬである。
【０００５】
一実施形態において、ＶＬＡ−４結合抗体は、ナタリズマブ等のヒト化モノクローナル
抗体である。別の実施形態において、ＶＬＡ−４結合抗体は、ナタリズマブの変異体であ
る。例えば、一部の実施形態において、該抗体の軽鎖可変領域は、ナタリズマブの軽鎖可
変領域の１つ以上のアミノ酸残基（しかしながら、２、３、４、５、もしくは６アミノ酸
残基を上回らない）の異なるアミノ酸配列を有する、ならびに／または重鎖可変領域は、
ナタリズマブの重鎖可変領域の１つ以上のアミノ酸残基（しかしながら、２、３、４、５
、もしくは６アミノ酸残基を上回らない）の異なるアミノ酸配列を有する。一部の実施形
態において、一部またはすべての差異は、保存的変化である。
【０００６】
別の実施形態において、ＶＬＡ−４結合抗体は、参照により本明細書に組み込まれる、
米国特許第５，８４０，２９９号の配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、お
よび米国特許第５，８４０，２９９号の配列番号１１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領
域のうちの１つまたは両方を有する。他の実施形態において、ＶＬＡ−４抗体は、これら
の抗体のうちの１つの変異体である。例えば、一部の実施形態において、軽鎖可変領域は
、米国特許第５，８４０，２９９号の配列番号７の配列と１つ以上のアミノ酸残基（しか
しながら、２、３、４、５、もしくは６アミノ酸残基を上回らない）の異なるアミノ酸配
列を有する、および／または重鎖可変領域は、米国特許第５，８４０，２９９号の配列番
号１１によって定義される、１つ以上のアミノ酸残基（しかしながら、２、３、４、５、
もしくは６アミノ酸残基を上回らない）の異なるアミノ酸配列を有する。
【０００７】
さらに別の実施形態において、ＶＬＡ−４結合抗体は、表１−１の配列番号１の軽鎖ア
ミノ酸配列、および表１−２の配列番号２の重鎖アミノ酸配列のうちの１つまたは両方を
有する。他の実施形態において、ＶＬＡ−４抗体は、これらの抗体のうちの１つの変異体
である。例えば、一部の実施形態において、該抗体の軽鎖は、配列番号１の配列と１つ以
上のアミノ酸残基（しかしながら、２、３、４、５、もしくは６アミノ酸残基を上回らな
い）の異なるアミノ酸配列、および／または該抗体の重鎖は、配列番号２の配列と１つ以
上のアミノ酸残基（しかしながら、２、３、４、５、もしくは６アミノ酸残基を上回らな
い）の異なるアミノ酸配列を有する。
【０００８】
本文脈で用いるアミノ酸配列における「差異」とは、アミノ酸の同一性の差異（例えば
、上で言及される配列番号７または１１のアミノ酸に対する異なるアミノ酸の置換）、ま
たは失欠もしくは挿入を意味する。差異は、例えば、フレームワーク領域、ＣＤＲ、ヒン
ジ、または定常領域内であり得る。差異は、タンパク質の配列の内部または末端であり得
る。一部の実施形態において、一部またはすべての差異は、参照された配列と比較して、
保存的変化である。
【０００９】
ある実施形態において、該組成物のｐＨは、約６．０±０．５（例えば、約５．０±０
．５、約６．０±０．５、約７．０±０．５）であり、リン酸緩衝液の組成は、約５ｍＭ
から約３０ｍＭ（例えば、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ）である。
別の実施形態において、該組成物は、約１００ｍＭから約２００ｍＭ（例えば、約１２０
ｍＭ、１４０ｍＭ、１６０ｍＭ、１８０ｍＭ）の濃度の、塩化ナトリウム等の塩をさらに
含む。別の実施形態において、該組成物は、Ｌアルギニン塩酸塩、またはグリセロールを
含む。別の実施形態において、該組成物は、約２００ｍＭから約３００ｍＭ（例えば、約
２２０ｍＭ、２４０ｍＭ、２６０ｍＭ、２８０ｍＭ）の濃度の、グリシン等のアミノ酸を
含有する。別の実施形態において、該組成物は、約０．００１％から約２．０％、約０．
００４％から約０．４％、約０．００８から約０．２％、約０．０２％から約０．０８％
（ｗ／ｖ）（例えば、約０．０１％、約０．０２％、約０．０３％、約０．０４％、約０
．０５％、約０．０６％、約０．０７％、約１％、約１．５％）の量のポリソルベート８
０等の界面活性物質等の薬剤として許容される賦形剤を含有する。
【００１０】
ある実施形態において、該組成物は、グリセロールを含み、Ｌアルギニン塩酸塩、また
は塩化ナトリウムを実質的に含有しない。他の実施形態において、該組成物は、Ｌアルギ
ニン塩酸塩を含むが、グリセロールまたは塩化ナトリウム（リン酸緩衝液およびＬアルギ
ニン塩酸塩由来のもの以外）を実質的に含まない。他の実施形態において、該組成物は、
塩化ナトリウムを含むが、グリセロールまたはＬアルギニン塩酸塩を実質的に含まない。
【００１１】
一部の実施形態において、該抗体製剤は、例えば、リン酸緩衝液の代わりに、ヒスチジ
ン緩衝剤を含み、該ヒスチジン緩衝剤は、約ｐＨ５から約ｐＨ７（例えば、約ｐＨ５．５
±０．５、ｐＨ６±０．５、またはｐＨ６．５±０．５）である。該ヒスチジン緩衝剤組
成物は、約１０ｍＭから約３０ｍＭ（例えば、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ）で
ある。該ヒスチジン緩衝剤製剤はまた、約２００ｍＭから約３００ｍＭのグリセロール（
例えば、約２４０ｍＭ、約２５０ｍＭ、約２６０ｍＭ、約２７０ｍＭ、約２８０ｍＭのグ
リセロール）、およびポリソルベート８０を約０．００１％から約２．０％（ｗ／ｖ）（
例えば、約０．０２％、約０．０３％、約０．０４％、約０．０５％、約０．０６％、約
０．０７％、約１％、約１．５％）を含む。該ヒスチジン製剤は、任意選択で、約５ｍＭ
から約１５ｍＭのＬメチオニン（例えば、約１０ｍＭのＬメチオニン）を含む。
【００１２】
一実施形態において、本明細書で扱う組成物は、ｐＨ６±０．５の１４０ｍｇ／ｍＬか
ら１６０ｍｇ／ｍＬのナタリズマブ、５ｍＭから１５ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、１
３０ｍＭから１５０ｍＭの塩化ナトリウム、および０．０１％から０．１％（ｗ／ｖ）の
ポリソルベート８０を含有する。別の実施形態において、該組成物は、ｐＨ６±０．５の
、１４０ｍｇ／ｍＬから１６０ｍｇ／ｍＬのナタリズマブ、５ｍＭから１５ｍＭのリン酸
ナトリウム緩衝液、２５０ｍＭから３００ｍＭのグリセロール、および０．０１％から０
．１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含有する。さらに別の実施形態において、該組
成物は、ｐＨ６±０．５の、１４０ｍｇ／ｍＬから１６０ｍｇ／ｍＬのナタリズマブ、５
ｍＭから１５ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、１５０ｍＭから１７０ｍＭのＬアルギニン
塩酸塩、および０．０１％から０．１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含有する。
【００１３】
一実施形態において、本明細書で扱う組成物は液体である。
別の実施形態において、該組成物は、約２℃から約８℃（例えば、約５℃）の温度で、
少なくとも１２ヶ月（例えば、少なくとも２４、３０、３６ヶ月）間安定している。別の
実施形態において、該組成物は、周囲温度（約２０〜３０℃、例えば約２５℃）で、少な
くとも２、３、４、５、６、または７日（例えば、少なくとも１週間または１２日もしく
は１４日）間安定している。
さらに別の実施形態において、該組成物は、皮下または筋肉内投与に好適である。さら
に別の実施形態において、該組成物は、静脈内投与に好適である。
【００１４】
別の態様において、本発明は、リン酸緩衝液中に約１２０から約１９０ｍｇ／ｍＬのＶ
ＬＡ−４結合抗体およびポリソルベートを含む、安定した水性組成物等の水性組成物を調
製する方法を特徴とする。該方法は、細胞培養において抗体を発現させるステップと、抗
体に少なくとも１回のクロマトグラフィー精製ステップを行うステップと、抗体に少なく
とも２回のリン酸緩衝液中における限外濾過／ダイアフィルトレーションステップを行う
ステップと、抗体に少なくとも１回のリン酸緩衝液中における限外濾過ステップを行うス
テップと、ポリソルベートおよび／またはリン酸緩衝液を添加することによって、抗体の
濃度を、例えば、下方に、約１２０ｍｇ／ｍＬから約１９０ｍｇ／ｍＬへ調整するステッ
プと、を含む。一実施形態において、ＶＬＡ−４結合抗体は、ナタリズマブであり、別の
実施形態において、ポリソルベートは、ポリソルベート８０である。抗体の濃度は、例え
ば、約１３５ｍｇ／ｍＬから約１６５ｍｇ／ｍＬ、例えば、約１５０ｍｇ／ｍＬであり得
る。一部の実施形態において、リン酸緩衝液は、グリセロール、Ｌアルギニン塩酸塩、ま
たは塩化ナトリウム等の他の賦形剤を含む。最終製剤は、約５から約７、例えば、約５．
５から約６．５のｐＨを有する。
【００１５】
別の態様において、本発明は、皮下または筋肉内投与のために設計された、またはそれ
に好適な送達装置を特徴とし、該送達装置は、例えば、皮下または筋肉内投与に好適なナ
タリズマブの濃縮された製剤を含有する組成物といった、本明細書に記載の組成物の単位
用量とともにパッケージ化されるか、それを含む。一実施形態において、該単位用量は、
約１００ｍｇから約４５０ｍｇ（例えば、約１２０ｍｇから約３５０ｍｇ；約１５０ｍｇ
、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ）である。一実施形態において、該単位用
量は、約１００ｍｇから約４５０ｍｇを上回る範囲である。別の実施形態において、該単
位用量は、ヒトの体重１ｋｇ当り、約１．４ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇのＶＬＡ
−４結合抗体もしくはそのフラグメントを送達する。別の実施形態において、該単位用量
は、約０．２５ｍＬから約１．５ｍＬ（例えば、約０．５ｍＬ、約０．７５ｍＬ、約１．
０ｍＬ）である。
【００１６】
一実施形態において、単位用量は、約３００ｍｇのナタリズマブであり、別の実施形態
において、該単位用量は、フラクションに分割され、例えば、２つに分割され、分割され
たそれぞれは、約１５０ｍｇのＶＬＡ−４結合抗体を含有する。さらに別の実施形態にお
いて、患者は、レジメンとしてナタリズマブを投与される。一実施形態において、患者は
、例えば、１５０ｍｇのナタリズマブの２回の連続投与によって、月に１回、約３００ｍ
ｇのナタリズマブを投与される。代替の実施形態において、患者は、１５０ｍｇのナタリ
ズマブの初回投与、次いで約２週間後の１５０ｍｇのナタリズマブの２回目の投与によっ
て、一月あたり約３００ｍｇのナタリズマブを投与される。
【００１７】
本発明は、例えば、ナタリズマブといった、ＶＬＡ−４結合抗体の高度に濃縮された液
体製剤の、患者への提供を最適化する方法を特徴とする。
一実施形態において、該方法は、提供される抗体の濃度の漸増を可能にする。これは、
抗体濃度の上昇を可能にし、濃度の増加に伴い、患者の耐性、反応等を監視することを可
能にすることができる。例えば、該方法は、１つ以上の初期濃度または比較的低い濃度で
ナタリズマブを患者に提供し、その後、最終のより高い濃度でナタリズマブを患者に提供
することによって開始することができる。初期濃度に関する例示的な製剤は、典型的に、
最終のより高い濃度の８０％、７０％、５０％、３０％、２０％または１０％未満の抗体
濃度を有する。典型的な初期濃度は、例えば、２０ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、または
４０ｍｇ／ｍＬであることが可能である。典型的な最終濃度は、例えば、約１２０ｍｇ／
ｍＬから約１９０ｍｇ／ｍＬ（例えば、約１３５ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１
５０ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、または約１６５ｍｇ／ｍＬ）である。一部の実施
形態において、患者は、１つまたは複数の初期濃度で１回または複数回の投与を受ける。
例えば、一実施形態において、患者は、複数の投与にわたり、濃度を増加させたものを受
ける。一部の実施形態において、患者は、最終濃度に到達する前に、１つ以上の初期濃度
で２、３、４、５、６、７、または８回の投与を受ける。例えば、患者は、最初の初期濃
度で１回以上の投与、および２回目のより高い濃度で１回以上の投与を受ける。一部の実
施形態において、患者には、１回以上の投与の後、有害な症状（拒絶反応）を含む、諸症
状がないか診断される。一部の実施形態において、患者は、患者が前回の投与に対して許
容されない副作用を呈していないとの診断後にのみ、ナタリズマブの濃度を増加させた製
剤を投与される。
【００１８】
一実施形態において、該方法は、提供される抗体の用量（本明細書で用いる用量とは、
例えば、２回といった、規定の少数の投与のうちの１回、または各々で提供される抗体の
量を指す）の漸増を可能にする。これは、用量の上昇を可能にし、用量が増加するにつれ
て、患者の耐性、有害な反応等を監視することを可能にすることができる。例えば、該方
法は、ナタリズマブを１つ以上の初期用量または比較的低い用量で患者に提供し、その後
、ナタリズマブを最終の、より高い用量で患者に提供することによって開始することがで
きる。典型的な初期用量は、例えば、最終のより高い用量の８０％、７０％、５０％、３
０％、２０％または１０％以下であり得る。典型的な最終用量は、一旦、定常状態投与が
達成されると、投与の頻度に基づいて変化する。例えば、一部の実施形態は、７５ｍｇか
ら５００ｍｇ（例えば、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ
、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ）（これらの用量は、およそ月に１回の投与の典
型であり得る）の最終用量を含む。他の実施形態は、５０ｍｇから２５０ｍｇ（例えば、
７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ）（これらの用量は、２週間毎の投与の
典型である）の最終用量を含む。他の実施形態は、２５ｍｇから１５０ｍｇ（例えば、５
０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ）（これらの用量は、週１回の投与の典型で
ある）の最終用量を含む。一部の実施形態において、患者は、１つまたは複数の初期濃度
で１回または複数回の投与を受ける。例えば、一実施形態において、患者は、複数の投与
にわたり、増加する用量を受ける。一部の実施形態において、患者は、最終用量に到達す
る前に、１つ以上の初期用量で２、３、４、５、６、７、または８回の投与を受ける。例
えば、患者は、最初の初期用量で１回以上の投与、および２回目のより高い初期用量で１
回以上の投与を受ける。一部の実施形態において、患者には、１回以上の投与の後、有害
な症状を含む、諸症状がないか診断される。一部の実施形態において、患者は、患者が前
回の用量に対して許容されない副作用を呈していないとの診断後にのみ、増加させた用量
のナタリズマブを投与される。
【００１９】
本発明はまた、濃度または用量の上昇を実現するための、例えば、スターターパックと
いった、キットも含む。一実施形態において、患者または医療提供者は、増加濃度または
用量のナタリズマブのパッケージを含む、ナタリズマブ製剤のキットまたは「スターター
パック」が提供される。スターターパックが提供された患者または医療提供者は、まず、
例えば、低用量、もしくは最低用量または濃度のナタリズマブを自己投与または投与し、
指定期間待つように指導される。患者が有害な症状を経験しないか、または軽度の副作用
を経験する場合、患者または医療提供者は、第２の製剤、例えば、より高い、例えば、２
番目に高い濃度または用量を自己投与または投与するように指導される。患者または医療
提供者は、所望の用量または濃度が達成されるまで、用量または濃度の段階的な増加を継
続するように指導される。患者または医療提供者は、指定された期間、一定の間隔で、最
終製剤の自己投与または投与を維持するように指導され得る。
【００２０】
一実施形態において、シリンジ等の好適な送達装置に予めパッケージ化された、ＶＬＡ
−４結合抗体の高度に濃縮された製剤が患者に提供される。
別の態様において、本発明は、例えば、ＶＬＡ−４結合抗体治療を必要とする患者に、
本明細書に記載の製剤をどのように投与するかを指導する方法といった、方法を特徴とす
る。該方法は、（ｉ）患者に、本明細書に記載のＶＬＡ−４結合抗体の高度に濃縮された
製剤の少なくとも１つの単位用量を提供するステップと、（ｉｉ）少なくとも１つの単位
用量を筋肉内または皮下に自己投与するように患者を指導するステップと、を含む。別の
方法、例えば、治療の方法は、（ｉ）患者に、ＶＬＡ−４結合抗体の高度に濃縮された製
剤の少なくとも２つの単位用量を提供するステップと、（ｉｉ）単位用量を皮下または筋
肉内に、例えば、１回で１用量を自己投与するように患者を指導するステップと、を含む
。
【００２１】
一実施形態において、患者は、多発性硬化症等の炎症性疾患を有する。他の実施形態に
おいて、患者は、例えば、喘息（例えば、アレルギー性喘息）、関節疾患（例えば、関節
リウマチ、乾癬性関節炎）、糖尿病（例えば、Ｉ型糖尿病）、線維性疾患（例えば、肺線
維症、骨髄線維症、肝硬変、メサンギウム増殖性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、
糖尿病性腎症、腎間質性線維症）、または炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大
腸炎）を有する。
【００２２】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載のＶＬＡ−４結合抗体の濃縮された製剤
の単位用量を特徴とし、該単位用量は、約０．２５ｍＬから約１．５ｍＬ（例えば、約０
．５ｍＬ、約０．７５ｍＬ、または約１．０ｍＬ）である。一実施形態において、単位用
量は、約１００ｍｇから約４５０ｍｇ（例えば、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１８０
ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、または約３５０ｍｇ）である。
【００２３】
別の態様において、本発明は、ＶＬＡ−４結合抗体の水性製剤の単位用量を特徴とし、
該単位用量のヒトへの投与は、ヒトの体重１ｋｇあたり約１．４ｍｇから約３．０ｍｇの
ＶＬＡ−４結合抗体もしくはそのフラグメントを送達する。
【００２４】
別の態様において、本発明は、患者に、皮下または筋肉内投与に好適な製剤にＶＬＡ−
４結合抗体を含有する組成物を投与することによって、患者を治療する方法を特徴とする
。一実施形態において、患者は、多発性硬化症、喘息、関節リウマチ、糖尿病、またはク
ローン病等の炎症性疾患を有する。別の実施形態において、該組成物は、レジメンとして
投与される。別の実施形態において、該方法は、該組成物による治療に好適な患者を選択
するステップをさらに含む。治療に好適な患者は、例えば、多発性硬化症を示す兆候もし
くは症状等の、疾病の発症を示す兆候もしくは症状を呈している。さらに別の実施形態に
おいて、該方法は、患者に、血栓溶解剤、神経保護剤、抗炎症剤、ステロイド、サイトカ
イン、または成長因子等の第２の治療薬剤を投与するステップをさらに含む。
【００２５】
別の態様において、本発明は、患者が予め選択された基準を満たすかどうかを判断し、
かつ患者が予め選択された基準を満たす場合、本明細書に記載のＶＬＡ−４結合抗体製剤
を患者に承認、提供、処方、または投与することによって、患者を評価する方法を特徴と
する。一実施形態において、予め選択された基準とは、患者が先の代替の治療法またはレ
ジメン、例えば、多発性硬化症の治療に十分に反応しないことである。別の実施形態にお
いて、予め選択された基準とは、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）のいずれの兆候もしく
は症状の非存在、または進行性多巣性白質脳症のいずれの診断の非存在である。別の実施
形態において、該基準は、参照により本明細書に組み込まれる、薬物分配の方法およびシ
ステムを説明する、２００６年８月９日出願の米国特許第６０／８３６，５３０号に記載
されるとおりである。
【００２６】
別の態様において、本発明は、ナタリズマブの高度に濃縮された製剤の投与について、
受容者を指導する方法を特徴とする。該方法は、受容者（例えば、最終使用者、患者、医
師、小売もしくは卸売薬局、配給業者、または病院の薬剤部、介護施設クリニックまたは
保健維持機構）に、該薬物は患者の皮下または筋肉内投与にするべきであることを指導す
るステップを含む。
【００２７】
別の態様において、本明細書に記載の組成物を分配する方法を提供する。該組成物は、
ナタリズマブの高度に濃縮された製剤を含有し、皮下または筋肉内または静脈内投与に好
適である。該方法は、受容者（例えば、最終使用者、患者、医師、小売もしくは卸売薬局
、配給業者、または病院の薬剤部、介護施設クリニックまたは保健維持機構）に、少なく
とも６、１２、２４、もしくは３６ヶ月間、患者を治療するのに十分な単位用量の薬物を
含むパッケージを提供するステップを含む。
【００２８】
別の態様において、本発明は、（例えば、期限切れであるかどうかを判断するために）
高度に濃縮された量のＶＬＡ−４結合抗体を含有する本明細書に記載の組成物の１つのパ
ッケージまたは多くのパッケージの品質を評価する方法を特徴とする。該方法は、パッケ
ージが期限切れであるかどうかを評価するステップを含む。使用期限は、製造、アッセイ
、パッケージ化等の予め選択された事象から、少なくとも６、１２、２４、３６、もしく
は４８ヶ月であり、例えば、２４または３６ヶ月を上回る。一部の実施形態において、決
定またはステップは、分析の結果行われ、例えば、製品が期限切れであるかどうかによっ
て、パッケージ内の抗体を使用、廃棄、分類、選択、発売もしくは保留、出荷、新たな場
所へ移動、市販開始、販売、もしくは特売、回収または販売中止する。
【００２９】
別の態様において、本発明は、高度に濃縮された量のＶＬＡ−４結合抗体を含有する水
性組成物の少なくとも２単位用量を含むパッケージを特徴とする。一実施形態において、
該単位用量のすべては、同一の量の抗体を含有し、他の実施形態において、２つ以上の濃
度、または２つ以上の異なる製剤（例えば、異なる濃度または放出特性を有する）単位用
量が存在する。一実施形態において、少なくとも１用量は、約１００ｍｇから約４５０ｍ
ｇのＶＬＡ−４結合抗体、例えば、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３０
０ｍｇ、約３５０ｍｇ、または約４００ｍｇのＶＬＡ−４結合抗体を含有する。
【００３０】
別の態様において、本発明は、受容者にＶＬＡ−４結合抗体を含有する水性製剤の投与
について指導する方法を含む。該方法は、受容者（例えば、最終使用者、患者、医師、小
売もしくは卸売薬局、配給業者、または病院の薬剤部、介護施設クリニックまたは保健維
持機構）に、該抗体は使用期限前に患者に投与すべきであることを指導するステップを含
む。使用期限は、製造、アッセイ、パッケージ化等の予め選択された事象から、少なくと
も６、１２、１８、２４、３６、もしくは４８ヶ月であり、例えば、１８、２４または３
６ヶ月を上回る。一実施形態において、受容者はまた、抗体の供給、例えば、単位用量の
供給を受ける。
【００３１】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の製剤と、第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０
７５５７７号（国際公開第ＷＯ／２００８／０２１９５４号として公開）に記載の方法ま
たはシステムの使用を特徴とする。実施形態には、本明細書に記載の製剤を分配する方法
、本明細書に記載の製剤の、薬局、点滴センター、もしくは患者への提供を監視または追
跡する方法、１人以上の患者を監視する方法、患者を選択する方法、または本明細書に記
載の製剤の使用に関するデータを収集もしくは報告する方法を含む。第ＰＣＴ／ＵＳ２０
０７／０７５５７７号（国際公開ＷＯ／２００８／０２１９５４号として公開）は参照に
より本明細書に組み込まれる。
【００３２】
別の態様において、本発明は、例えば、多発性硬化症といった、本明細書に記載の疾患
のための、本明細書に記載の製剤による治療に対して、患者を選択する方法を特徴とする
。該方法は、
例えば、ナタリズマブといった、ＶＬＡ−４結合抗体の静脈内送達によって治療さ
れている患者を選択または提供するステップと、
本明細書に記載の製剤を該患者に提供または投与するステップと、
これによって、該患者を治療するステップと、を含む。
【００３３】
別の態様において、本発明は、製品またはプロセス、例えば、製造プロセスを分析する
方法を特徴とする。該方法は、高度に濃縮されたＶＬＡ−４結合抗体組成物の水性製剤、
例えば、本明細書に記載のプロセスによって作製されたものを提供するステップと、色（
例えば、無色からわずかに黄色、もしくは無色から黄色）、透明度（例えば、透明からわ
ずかに乳白色、もしくは透明から乳白色）、または粘度（２０℃〜３０℃、例えば、２５
℃等の周囲温度で測定した際、例えば、約５ｃＰから３０ｃＰ（例えば、１０ｃＰ、２０
ｃＰ））等の溶液パラメータを評価することによって製剤の評価を提供するステップと、
を含む。該評価には、１つ以上の溶液パラメータの評価を含むことができる。任意選択で
、溶液パラメータが予め選択された基準を満たすかどうかの判断を行い、例えば、予め選
択された基準が存在するか、または予め選択された範囲内に存在するかどうかを判断する
ことによって、プロセスを分析する。
【００３４】
一実施形態において、プロセスの評価には、抗ＶＬＡ−４抗体製剤の安定性の測定が含
まれる。抗体製剤の安定性は、例えば、凝集体の形成によって測定することができ、これ
は、例えば本明細書に記載のように、サイズ排除高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ
）によって、色、透明度、もしくは粘度別に、分析される。予め設定された期間にわたり
、および任意選択により、所与の温度で、アッセイパラメータの変化が約１０％、５％、
３％、２％、１％、０．５％、０．０５％、または０．００５％以下である場合、製剤は
安定していると判断することができ、したがって、さらなる処理または分配に許容される
。一実施形態において、高度に濃縮された液体抗ＶＬＡ−４抗体製剤は、室温（例えば、
約１８℃、１９℃、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、もしくは２５℃）で、１
、２、３、４、もしくは５日間以上安定している。
【００３５】
一実施形態において、該方法は、測定された値を参照値と比較し、それによって製造プ
ロセスを分析するステップをさらに含む。
一実施形態において、該方法は、少なくとも一部において、分析に基づき、製造プロセ
スを維持するステップをさらに含む。一実施形態において、該方法は、分析に基づき、製
造プロセスを変更するステップをさらに含む。
【００３６】
別の実施形態において、該方法は、選択されたプロセスによって作製された、高度に濃
縮されたＶＬＡ−４結合抗体の水性製剤の、例えば、製造プロセスといった、プロセスを
評価するステップを含み、これには、本明細書に記載の方法もしくは分析に基づいて、該
プロセスに関する判断を行うステップを含む。
一実施形態において、該方法は、少なくとも一部において、該方法もしくは分析に基づ
いて、製造プロセスを維持または変更するステップをさらに含む。したがって、別の実施
形態において、評価を行う者は、本明細書に記載の方法もしくは分析を実践しないが、本
明細書に記載の方法もしくは分析によって得られる結果に単に依存するわけではない。
【００３７】
別の実施形態において、該方法は、バッチ間の変動を監視または制御する方法において
、２つ以上の調製物を比較するか、または調製物を参照標準と比較するステップを含む。
さらに別の実施形態において、該方法は、少なくとも一部において判断に基づき、例え
ば、分類、選択、容認もしくは破棄、発売もしくは回収、薬物製品への処理、出荷、異な
る場所へ発送、移動、製剤化、ラベル添付、パッケージ化、市販、該調製物の販売もしく
は特売を行うための該判断を行うステップをさらに含むことができる。
【００３８】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の、例えば、ナタリズマブ製剤といった
、ＶＬＡ−４結合抗体製剤を保存、分配、または使用する方法を特徴とする。該方法は、
第１の低い温度、例えば、１８℃未満、例えば、凝固点より高いが、１５℃、１０
℃、もしくは４℃またはそれ以下で、第１の期間、該製剤を保存するステップと、
第２のより高い温度、例えば、冷蔵することなく、または室温、例えば、１８℃か
ら２５℃で、第２の期間、該製剤を保存するステップを含み、該第２の期間は、２４、４
８、７２、もしくは９６時間を上回らず、一部の実施形態において、第２の期間は、該製
剤の患者への投与後または破棄後に終了する。
【００３９】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の例えば、ナタリズマブ製剤といった、
ＶＬＡ−４結合抗体製剤を保存、分配、または使用する方法を特徴とする。該方法は、
第１の低い温度、例えば、１８℃未満、例えば、凝固点より高いが、１５℃、１０
℃、もしくは４℃またはそれ以下で、第１の期間、該製剤を保存するステップと、
該製剤を、受容者、例えば、最終使用者、例えば、患者もしくは医療提供者に提供
するステップと、
任意選択で、最終使用者に、該製剤が第２のより高い温度、例えば、冷蔵すること
なく、または室温で、例えば、１８℃から２５℃で、保存することができることを指導す
るステップと、
受容者による受容後、該製剤を第２の温度で、最大２４、４８、７２、もしくは９
６時間保存するステップと、を含む。
【００４０】
別の態様において、本発明は、実在者、例えば、薬局、配給業者、または最終使用者、
例えば、患者もしくは医療提供者に、本明細書に記載の、例えば、ナタリズマブ製剤とい
った、ＶＬＡ−４結合抗体製剤をどのように保存、分配、または使用するかを指導する方
法を特徴とする。該方法は、
実在者に、第１の低い温度、例えば、１８℃未満、例えば、凝固点より高いが、１
５℃、１０℃、もしくは４℃またはそれ以下で、第１の期間、該製剤を保存するべきであ
ることを指導するステップであって、該第１の期間は、該製剤が最終使用者に提供される
まで、または患者への投与前２４、４８、７２、もしくは９６時間以内まで、延長される
、ステップと、
実在者に、第２のより高い温度、例えば、冷蔵することなく、または室温、例えば
、１８℃から２５℃で、第２の期間、該製剤を保存することができることを指導するステ
ップであって、該第２の期間は、２４、４８、７２、もしくは９６時間を超過しない、ス
テップと、
これによって、実在者を指導するステップと、を含む。
【００４１】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載の例えば、ナタリズマブ製剤といった、
ＶＬＡ−４結合抗体製剤を保存、分配、または使用する方法を特徴とする。該方法は、
第１の低い温度、例えば、１８℃未満、例えば、凝固点より高いが、１５℃、１０
℃、もしくは４℃またはそれ以下で、第１の期間、該製剤を保存するステップと、
該製剤を第２のより高い温度、例えば、冷蔵することなく、または室温、例えば、
１８℃から２５℃で、２４、４８、７２、もしくは９６時間未満保存するステップと、を
含む。
【００４２】
別の態様において、本発明は、例えば、品質管理または出荷規格分析において、高度に
濃縮されたＶＬＡ−４結合抗体の水性製剤の品質を評価するといった、評価方法を特徴と
する。該方法は、色（例えば、無色からわずかに黄色、もしくは無色から黄色）、透明度
（例えば、透明からわずかに乳白色、もしくは透明から乳白色）、または粘度（例えば、
２０℃〜３０℃、例えば、２５℃等の周囲温度で測定した際、約５ｃＰから３０ｃＰ）等
の溶液パラメータに関する、抗体製剤の評価を提供するステップを含む。該評価には、上
記パラメータのうち、１つ以上の評価を含むことができる。該方法はまた、任意選択で、
溶液パラメータが予め選択された基準を満たすかどうか、例えば、予め選択された基準が
存在するか、または予め選択された範囲内に存在するかどうかを判断するステップを含む
。観察された溶液パラメータが予め選択された値の範囲内であるか、または予め選択され
た標準基準を満たす場合、パッケージ化、使用、販売、販売開始、廃棄等のために、調製
物を選択する。
【００４３】
別の態様において、本発明は、規制要件、例えば、食品医薬品局といった規制機関の、
例えば、事後承認要件に適合させる方法を特徴とする。該方法は、色（例えば、無色から
わずかに黄色、もしくは無色から黄色）、透明度（例えば、透明からわずかに乳白色、も
しくは透明から乳白色）、または粘度（例えば、２０℃〜３０℃等の周囲温度で測定した
際、約５ｃＰから３０ｃＰ）等の溶液パラメータに関する、抗体製剤の評価を提供するス
テップを含む。事後承認要件には、上記のパラメータのうちの１つ以上の測定を含むこと
ができる。該方法はまた、任意選択で、観察された溶液パラメータが予め選択された基準
を満たすかどうか、またはパラメータが予め選択された範囲内であるかどうかを判断する
ステップ、任意選択で、分析の値もしくは結果の請願書を提出するステップ、または例え
ば、規制機関に該値もしくは結果を伝送することによって、機関と連絡を取り合うステッ
プと、を含む。
【００４４】
別の態様において、本発明は、例えば、出荷規格、ラベル要件、または簡易検査要件（
例えば、本明細書に記載の特性といった）を満たす、予め選択された特性を有する、ＶＬ
Ａ−４結合抗体の１組の水性製剤を作製する方法を特徴とする。該方法は、試験抗体調製
物を提供するステップと、本明細書に記載の方法に従って試験抗体調製物を分析するステ
ップと、試験抗体調製物が予め選択された基準を満たすかどうかを判断するステップ（例
えば、参照値（例えば、本明細書に開示する１つ以上の参照値）との予め選択された関係
を有する）と、１組の製品を作製するように試験抗体調製物を選択するステップと、を含
む。
【００４５】
別の態様において、本発明は、ＶＬＡ−４結合抗体の複数の組の水性製剤を特徴とし、
各組の１つ以上の溶液パラメータ（例えば、本明細書に記載の方法によって判断された値
もしくは溶液パラメータ）は、例えば、本明細書に記載の範囲もしくは基準といった、予
め選択された所望の参照値もしくは基準から、予め選択された範囲未満で変動する。一部
の実施形態において、１つ以上の組の抗体製剤の１つ以上のパラメータを判断し、該判断
の結果として、１組もしくは複数の組を選択する。一部の実施形態は、判断の結果を、例
えば、参照標準といった予め選択された値もしくは基準と比較するステップを含む。他の
実施形態は、例えば、値もしくはパラメータの判断の結果に基づいて、投与する組の用量
を調整するステップを含む。
【００４６】
別の態様において、本発明は、報告書受領者への報告書の提供、参照標準（例えば、食
品医薬品局要件）との適合に関する、ＶＬＡ−４結合抗体の水性製剤の試料の評価、他者
から、ＶＬＡ−４結合抗体の調製物が一部の規定の要件を満たすという指標の要求、また
はＶＬＡ−４結合抗体の調製物に関する情報の他者への提出、のうちの１つ以上の方法を
特徴とする。例示的な受領者もしくは他者としては、政府、例えば、米国連邦政府（例え
ば、政府機関（例えば、食品医薬品局））が挙げられる。該方法は、第１の国（例えば、
米国）において、ＶＬＡ−４結合抗体の水性製剤を作製および／または試験するための以
下のステップのうちの１つ以上（もしくはすべて）を含む。第１の国の外部に少なくとも
試料のアリコートを送付する（例えば、米国外部、第２の国へ送付する）ステップ、ＶＬ
Ａ−４結合抗体の調製物の構造に関するデータ（例えば、本明細書に記載の構造および／
もしくは鎖に関連するデータ、例えば、本明細書に記載の方法のうちの１つ以上によって
生成されたデータ）を含む、報告書を作成または受領するステップ、ならびに該報告書を
報告書受領者に提供するステップ。
【００４７】
一実施形態において、報告書受領者は、既定の要件もしくは参照値がデータによって満
たされるかどうかを判断することができ、任意選択で、報告書受領者からの返答は、例え
ば、ＶＬＡ−４結合抗体の水性製剤の製造業者、配給業者もしくは販売業者によって、受
領される。一実施形態において、報告書受領者からの承認を受領すると、ＶＬＡ−４結合
抗体の調製物は、選択、パッケージ化、または販売される。
【００４８】
別の態様において、本発明は、ＶＬＡ−４結合抗体の水性製剤を評価する方法を特徴と
する。該方法は、ＶＬＡ−４結合抗体の存在もしくはレベルに関するデータを受領するス
テップであって、例えば、該データは本明細書に記載の１つ以上の方法によって作成され
る、ステップと、該データ、および任意選択で１組のＶＬＡ−４結合抗体の識別子を含む
報告書を提供するステップと、該報告書を意思決定者（例えば、政府機関（例えば、食品
医薬品局））に提出するステップと、任意選択で該意思決定者からの連絡を受領するステ
ップと、任意選択で意思決定者からの連絡に基づき、該１組のＶＬＡ−４結合抗体を発売
または市場に出すかどうかを決定するステップと、を含む。一実施形態において、該方法
は、試料を発売するステップをさらに含む。
【００４９】
例示的な製剤としては、以下のものが挙げられる。
１．ナタリズマブ、１２５〜１７５ｍｇ／ｍＬ、もしくは１４０〜１６０ｍｇ／ｍ
Ｌ、例えば、１５０ｍｇ／ｍＬ、
リン酸ナトリウム緩衝液、１〜１００ｍＭ、５〜２０ｍＭ、もしくは５〜５０ｍＭ
、例えば、１０ｍＭ、
塩化ナトリウム、５０〜２００ｍＭ、１００〜１８０ｍＭ、もしくは１２０〜１６
０ｍＭ、例えば、１４０ｍＭ、
ポリソルベート８０、０．０１〜０．１２％、０．０２〜０．０８％、もしくは０
．０２〜０．０６％、例えば、０．０４％（ｗ／ｖ）、および
ｐＨ６．０±１．０、例えば、６．０±０．５、
２．ナタリズマブ、１２５〜１７５ｍｇ／ｍＬもしくは１４０〜１６０ｍｇ／ｍＬ
、例えば、１５０ｍｇ／ｍＬ、
１０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液、
１４０ｍＭ  塩化ナトリウム、
０．０４％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、および
ｐＨ６．０±０．５、
３．１５０ｍｇ／ｍＬ  ナタリズマブ、
リン酸ナトリウム緩衝液、１〜１００ｍＭ、５〜２０ｍＭ、もしくは５〜５０、例
えば、１０ｍＭ、
１４０ｍＭ  塩化ナトリウム、
０．０４％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、および
ｐＨ６．０±０．５、
４．１５０ｍｇ／ｍＬ  ナタリズマブ、
１０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液、
塩化ナトリウム  ５０〜２００ｍＭ、１００〜１８０ｍＭ、または１２０〜１６０
ｍＭ、例えば、１４０ｍＭ、
０．０４％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、および
ｐＨ６．０±０．５、
５．１５０ｍｇ／ｍＬ  ナタリズマブ、
１０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液、
１４０ｍＭ  塩化ナトリウム、
ポリソルベート８０、０．０１〜０．１２％、０．０２〜０．０８％、もしくは０
．０２〜０．０６％、例えば、０．０４％（ｗ／ｖ）、および
ｐＨ６．０±０．５、
６．１５０ｍｇ／ｍＬ  ナタリズマブ、
１０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液、
１４０ｍＭ  塩化ナトリウム、
０．０４％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、および
ｐＨ６．０±１．０、例えば、ｐＨ６．０±０．５、
ならびに
７．１５０ｍｇ／ｍＬ  ナタリズマブ、
１０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液、
１４０ｍＭ  塩化ナトリウム、
０．０４％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、および
ｐＨ６．０±０．５。
【００５０】
一部の実施形態において、上記の製剤１〜７のうちのいずれも、アミノ酸、例えば、ア
ルギニンもしくはグリシン、またはグリセロールを本質的に含まない可能性がある。
本明細書に開示する方法および組成物は、混合物内の１つ以上の構造の存在、分布、ま
たは量が、生物学的活性を有するか、またはそれに影響を及ぼす場合、使用することがで
きる。該方法はまた、生物学的同等性を評価または確証するために、構造活性の観点から
有用である。本明細書において使用する「高度に濃縮されたＶＬＡ−４結合抗体製剤」と
は、約１２０ｍｇ／ｍＬから約１９０ｍｇ／ｍＬ（例えば、約１２０ｍｇ／ｍＬ、１３０
ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１６０ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍ
Ｌ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬ）の、ナタリズマブ等のＶＬＡ−４結合抗体を
含有する安定した水性製剤を指す。
【００５１】
「皮下または筋肉内投与に好適」とは、組成物のヒト等の被験体への投与が、被験体に
おいて１つ以上の症状を改善させる等の治療効果を有することを意味する。「治療する」
という用語は、統計的に有意な程度または当業者が検出可能な程度のいずれかまで、疾患
に関連する状態、症状、もしくはパラメータを改善する、または疾患の進行を予防するの
に有効な量、様態、および／または形態での治療薬の投与を指す。有効量、様態、または
形態は、被験体に応じて変動し得、被験体に合わせて調製され得る。
【００５２】
ＶＬＡ−４結合抗体の「安定した」製剤は、例えば、１２ヶ月、２４ヶ月、３６ヶ月以
上といった長期間にわたり、凝集、フラグメント化、脱アミド化、酸化、もしくは生物学
的活性の変化のうちの、いずれか１つ以上の兆候をほとんど呈しないかまったく呈しない
。例えば、一実施形態において、該組成物の１０％未満が、凝集、フラグメント化、また
は酸化する。凝集、沈殿、および／もしくは変性は、色および／もしくは透明度の外観検
査等の既知の方法によって、または紫外光散乱もしくはサイズ排除クロマトグラフィーに
よって評価することができる。タンパク質がその生物学的活性を保持する能力は、抗体の
化学変化した形態を検出および定量化することによって評価することができる。サイズ改
変（例えば、クリッピング）は、例えば、エンドプロテアーゼで処理した抗体のサイズ排
除クロマトグラフィー、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび／またはマトリクス支援レーザー脱離イ
オン化質量分析法（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ  ＭＳ）、またはペプチドマッピングを用いて評
価することができる。他のタイプの化学変化としては、荷電変化（例えば、脱アミド化の
結果として生じる）が挙げられ、これは、例えば、イオン交換クロマトグラフィーによっ
て評価することができる。所与の時間における抗体の生物学的活性が、例えば、抗原結合
アッセイにおいて判断される、医薬製剤が調製された時間に呈された生物学的活性の約１
０％以内である場合、抗体は、該医薬製剤において「その生物学的活性を保持する」。
【００５３】
「ＶＬＡ−４結合抗体」とは、ＶＬＡ−４インテグリンのα４サブユニット等のＶＬＡ
−４インテグリンに結合し、かつ少なくとも部分的にＶＬＡ−４の活性、特にＶＬＡ−４
インテグリンの結合活性またはシグナル伝達活性、例えば、ＶＬＡ−４媒介シグナルを変
換する能力を抑制する、抗体を指す。例えば、ＶＬＡ−４結合抗体は、ＶＬＡ−４の、Ｖ
ＬＡ−４の同族リガンド、例えば、ＶＣＡＭ−１等の細胞表面タンパク質への結合、また
はフィブロネクチンもしくはオステオポンチン等の細胞外基質成分への結合を抑制し得る
。ＶＬＡ−４結合抗体は、α４サブユニットもしくはβ１サブユニットのいずれか、また
は両方に結合し得る。一実施形態において、該抗体は、α４のＢ１エピトープに結合する
。ＶＬＡ−４結合抗体は、約１０−６、１０−７、１０−８、１０−９、もしくは１０−
１０Ｍ未満のＫｄを有するＶＬＡ−４に結合し得る。ＶＬＡ−４はまた、アルファ４／ベ
ータ１およびＣＤ２９／ＣＤ４９ｂとしても知られる。
【００５４】
本明細書において使用する、「抗体」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン
可変領域を含むタンパク質、例えば、免疫グロブリン可変ドメインもしくは免疫グロブリ
ン可変ドメイン配列を提供するアミノ酸配列を指す。例えば、抗体は、重（Ｈ）鎖可変領
域（本明細書においてはＶＨと省略）、および軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書においては
ＶＬと省略）を含み得る。別の実施例において、抗体は、２つの重（Ｈ）鎖可変領域およ
び２つの軽（Ｌ）鎖可変領域を含む。「抗体」という用語は、抗体の抗原結合フラグメン
ト（例えば、一本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ'）２フラグメント、Ｆｄフラ
グメント、Ｆｖフラグメント、およびｄＡｂフラグメント）、ならびに完全抗体、例えば
、タイプＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（ならびにそのサブタイプ）の無傷免
疫グロブリンを包含する。免疫グロブリンの軽鎖は、カッパもしくはラムダタイプであり
得る。一実施形態において、該抗体はグリコシル化される。抗体は、抗体依存性細胞毒性
および／もしくは補体仲介性細胞毒性に対して機能的であることが可能であるか、または
これらの活性のうちの１つもしくは両方に対して非機能的であり得る。
【００５５】
ＶＨおよびＶＬ領域は、さらに、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と称される超可変
性の領域に細分され、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と称される、より保存された領域
に散在され得る。ＦＲおよびＣＤＲの範囲は、正確に定義されている（Ｋａｂａｔ，  Ｅ
．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第五版、米国保健社会福祉省
、ＮＩＨ公開第９１−３２４２号、およびＣｈｏｔｈｉａ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  （１
９８７）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７を参照）。Ｋａｂａｔ
の定義を本明細書において使用する。各ＶＨおよびＶＬは、通常、３つのＣＤＲおよび４
つのＦＲからなり、以下の順でアミノ末端からカルボキシル末端に位置する。ＦＲ１、Ｃ
ＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
【００５６】
「免疫グロブリンドメイン」とは、免疫グロブリン分子の可変もしくは定常ドメイン由
来のドメインを指す。免疫グロブリンドメインは、通常、約７つのβ鎖から形成される２
つのβシート、および保存されたジスルフィド結合を含有する（例えば、  Ａ．  Ｆ．  
Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ａ．  Ｎ．  Ｂａｒｃｌａｙ  １９８８  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ
Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ６：３８１−４０５を参照）。
【００５７】
本明細書において使用する「免疫グロブリン可変ドメイン配列」とは、免疫グロブリン
可変ドメインの構造を形成することができるアミノ酸配列を指す。例えば、該配列は、自
然発生の可変ドメインのアミノ酸配列のすべてもしくは一部を含み得る。例えば、該配列
は、１つ、２つ、もしくはそれ以上のＮもしくはＣ末端アミノ酸、内部アミノ酸を省略し
ている場合があるか、１つ以上の挿入もしくは追加の末端アミノ酸を含んでいる場合があ
るか、または他の変化を含んでいる場合がある。一実施形態において、免疫グロブリン可
変ドメイン配列を含むポリペプチドは、標的結合構造（すなわち「抗原結合部位」）、例
えば、ＶＬＡ−４と相互作用する構造を形成するように、別の免疫グロブリン可変ドメイ
ン配列に会合することができる。
【００５８】
抗体のＶＨもしくは鎖はさらに、重鎖もしくは軽鎖定常領域のすべてまたは一部を含み
得、それによって、それぞれ、免疫グロブリン重鎖または軽鎖を形成する。一実施形態に
おいて、抗体は、２つの免疫グロブリン重鎖および２つの免疫グロブリン軽鎖の四量体で
ある。免疫グロブリン重鎖および軽鎖は、ジスルフィド結合によって結合させることがで
きる。重鎖定常領域は、通常、３つの定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含
む。軽鎖定常領域は、通常、ＣＬドメインを含む。重鎖および軽鎖の可変領域には、抗原
と相互作用する結合ドメインが含まれる。抗体の定常領域によって、通常は、宿主組織ま
たは因子（免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクタ細胞）、および古典的な補体系の第
１の成分（Ｃｌｑ）を含む）への抗体の結合を媒介する。
【００５９】
抗体の１つ以上の領域は、ヒトのものであり得るか、有効にヒトのものであり得るか、
またはヒト化されたものであり得る。例えば、可変領域の１つ以上が、ヒトのものであり
得るか、または有効にヒトのものであり得る。例えば、ＣＤＲの１つ以上の（例えば、Ｈ
Ｃ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、お
よびＬＣ  ＣＤＲ３）がヒトのものであり得る（ＨＣ（重鎖）、ＬＣ（軽鎖））。軽鎖Ｃ
ＤＲのそれぞれはヒトのものであり得る。ＨＣ  ＣＤＲ３はヒトのものであり得る。フレ
ームワーク領域の１つ以上は、ヒトのものであり得、例えば、ＨＣもしくはＬＣのＦＲ１
、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４であり得る。一実施形態において、フレームワーク領域
のすべてが、ヒトのものであり、例えば、ヒト体細胞（例えば、免疫グロブリンを生成す
る造血細胞、または非造血細胞）に由来するものである。一実施形態において、ヒト配列
は、生殖系列配列（例えば、生殖系列核酸によってコードされる）である。定常領域の１
つ以上は、ヒトのものであり得るか、有効にヒトのものであり得るか、またはヒト化され
たものであり得る。別の実施形態において、フレームワーク領域（例えば、ＦＲ１、ＦＲ
２、およびＦＲ３（合計で）、もしくはＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４（合計で
））、または抗体全体の少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９２、９５、もしく
は９８％が、ヒトのものであり得るか、有効にヒトのものであり得るか、またはヒト化さ
れたものであり得る。例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３は、合計で、ヒト生殖系列
セグメントによってコードされるヒト配列に対して、少なくとも７０、７５、８０、８５
、９０、９２、９５、９８、もしくは９９％同一である可能性がある。
【００６０】
「有効にヒト」の免疫グロブリン可変領域は、免疫グロブリン可変領域が正常なヒトに
おいて免疫原生反応を惹起しないように、十分な数のヒトフレームワークアミノ酸位置を
含む、免疫グロブリン可変領域である。「有効にヒト」の抗体は、抗体が正常なヒトにお
いて免疫原生反応を惹起しないように、十分な数のヒトアミノ酸位置を含む、抗体である
。
【００６１】
「ヒト化」免疫グロブリン可変領域は、修飾された形態が、修飾されていない形態より
も少ない免疫反応をヒトにおいて惹起するように修飾される（例えば、免疫グロブリン可
変領域が正常なヒトにおいて免疫原生反応を惹起しないように、十分な数のヒトフレーム
ワークアミノ酸位置を含むように修飾される）、免疫グロブリン可変領域である。「ヒト
化」免疫グロブリンの説明としては、例えば、米国特許第６，４０７，２１３号および米
国特許第５，６９３，７６２号が挙げられる。一部の場合、ヒト化免疫グロブリンは、１
つ以上のフレームワークアミノ酸位置に非ヒトアミノ酸を含み得る。
【００６２】
抗体のすべてもしくは一部は、免疫グロブリン遺伝子またはそのセグメントによってコ
ードされ得る。例示的なヒト免疫グロブリン遺伝子としては、カッパ、ラムダ、アルファ
（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、ガンマ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、デ
ルタ、エプシロン、ならびにミュー定常領域遺伝子、さらには種々の免疫グロブリン可変
領域遺伝子が挙げられる。全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５Ｋｄまたは２１４アミノ
酸）は、ＮＨ２末端で可変領域遺伝子によって（約１１０アミノ酸）、およびＣＯＯＨ末
端でカッパもしくはラムダ定常領域遺伝子によってコードされる。全長免疫グロブリン「
重鎖」（約５０Ｋｄまたは４４６アミノ酸）は同様に、可変領域遺伝子（約１１６アミノ
酸）、および他の前述の定常領域遺伝子（例えば、ガンマ（約３３０アミノ酸をコード）
のうちの１つによってコードされる。
【００６３】
全長抗体の「抗原結合フラグメント」という用語は、関心対象の標的（例えば、ＶＬＡ
−４）に特異的に結合する能力を保持する全長抗体の１つ以上のフラグメントを指す。全
長抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例として
は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメントである、Ｆ
ａｂフラグメント、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結される２つのＦ
ａｂフラグメントを含む二価フラグメントである、Ｆ（ａｂ'）２フラグメント、（ｉｉ
ｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、（ｉｖ）抗体の単一アームの
ＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ
フラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４
−５４６）、および（ｖｉ）機能性を保持する、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が
挙げられる。さらに、ＦｖフラグメントであるＶＬおよびＶＨの２つのドメインは別の遺
伝子によってコードされるが、ＶＬおよびＶＨ領域が対になって一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）
として知られる一価分子を形成する、単一のタンパク質鎖として作製することを可能にす
る合成リンカーによって、組み換え方法を使用して結合することができる。例えば、Ｂｉ
ｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６、およびＨ
ｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照されたい。
【００６４】
本明細書において使用する「約」とは、所与の値の０．１％から５％以内（例えば、所
与の値のプラスマイナス５％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％以内）を指す。量
および他の指定された値が本明細書に提供される場合、許容偏差は、薬剤として許容され
る標準内である。
【００６５】
本発明の実施形態によってある種の利点を提供する。一部の例において、医薬組成物に
おける使用を目的とするタンパク質の高濃度製剤（例えば、抗体）を作製することは困難
である。かかる製剤を調製する方法を本明細書に提示する。高濃度のタンパク質（例えば
、抗ＶＬＡ−４抗体の）を含有する医薬組成物は、短期間にわたる投与に有用であり得る
。高濃度製剤（例えば、抗ＶＬＡ−４抗体の）はまた、簡略化した方法によって投与（例
えば、皮下に）することもできる。
本発明の１つ以上の実施形態の詳細を、添付の図面および以下の説明に記載する。本発
明の他の特徴、目的、および利点は、説明および図面、ならびに請求項から明らかとなる
であろう。
【図面の簡単な説明】
【００６６】
【図１】種々の製剤において１５０ｍｇ／ｍＬの濃度におけるナタリズマブの撹拌前および撹拌後の可溶性凝集体のレベルを示す。ＨＣＮ＝２０ｍＭ  ヒスチジン、２４０ｍＭ  グリシン、０．０４％（ｗ／ｖ）  ポリソルベート８０、ｐＨ６。ＨＯＬ＝２０ｍＭ  ヒスチジン、２４０ｍＭ  グリセロール、０．０４％（ｗ／ｖ）  ポリソルベート８０、ｐＨ６。ＰＣＮ＝２０ｍＭ  リン酸、２４０ｍＭ  グリシン、０．０２％（ｗ／ｖ）  ポリソルベート８０、ｐＨ６。ＰＳＴ＝２０ｍＭ  リン酸、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０２％（ｗ／ｖ）  ポリソルベート８０、ｐＨ６。
【図２】図１に記載の製剤における１５０ｍｇ／ｍＬの濃度におけるナタリズマブの撹拌前および撹拌後の３４０ｎｍでの溶液の紫外吸光度を示す。
【図３】凝集と、ＨＯＬ製剤（ＨＯＬ＝２０ｍＭ  ヒスチジン、２４０ｍＭ  グリセロール、ｐＨ６、ポリソルベート８０は実験の変数）におけるナタリズマブ（１５０ｍｇ／ｍＬ）に対する種々のレベルのポリソルベート８０との関係を示す。
【図４】図１に記載の種々の製剤における、４０℃で保存したナタリズマブ（１５０ｍｇ／ｍＬ）の経時的な凝集の割合（％）を示す。
【図５】図１に記載の種々の製剤における２〜８℃のもと、バイアル内で保存したナタリズマブ（１５０ｍｇ／ｍＬ）の経時的な凝集の割合（％）を示す。
【図６】図１に記載の種々の製剤における２〜８℃および４０℃で保存したナタリズマブ（１５０ｍｇ／ｍＬ）の経時的なメチオニン酸化の割合（％）を示す。
【図７】６ヶ月にわたるナタリズマブ（１５０ｍｇ／ｍＬ）の補足剤を含まない賦形剤の関数としてのメチオニン酸化の割合（％）を示す。
【図８】時間（８週間）に対する、種々の濃度および種々の製剤におけるナタリズマブのフラグメント化の割合を示す。
【発明を実施するための形態】
【００６７】
高度に濃縮されたＶＬＡ−４結合抗体の安定した製剤は、皮下（ＳＣ）、筋肉内（ＩＭ
）、または静脈内（ＩＶ）投与に有用である。本発明で扱う製剤は、約１２０ｍｇ／ｍＬ
から約１９０ｍｇ／ｍＬのＶＬＡ−４結合抗体、例えば、ナタリズマブを含有する。
【００６８】
（医薬組成物）
本明細書に記載の組成物は、医薬組成物として製剤化される。ＶＬＡ−４結合抗体（例
えば、ナタリズマブ）は、例えば、緩衝液中、約１２０ｍｇ／ｍＬから１９０ｍｇ／ｍＬ
の濃度（例えば、約１２０ｍｇ／ｍＬから約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬから
約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１３５ｍｇ／ｍＬから約１６５ｍｇ／ｍＬ；例えば、約１２０ｍ
ｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ、１３５ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ
、１６０ｍｇ／ｍＬ、１６５ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０
ｍｇ／ｍＬ）で提供され得る。一実施形態において、ＶＬＡ−４結合抗体（例えば、ナタ
リズマブ）は、緩衝液中、１５０ｍｇ／ｍＬを上回り、約１９０ｍｇ／ｍＬ未満の濃度で
提供される。別の実施形態において、該製剤は、より高い濃度（例えば、１７０ｍｇ／ｍ
Ｌから１９０ｍｇ／ｍＬ）で調製され、次いで、希釈して所望の濃度（例えば、１３５ｍ
ｇ／ｍＬから１６５ｍｇ／ｍＬ）に戻される。例えば、該製剤は、例えば、１７５ｍｇ／
ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬまたは１８５ｍｇ／ｍＬの抗体濃度で調製し、次いで、希釈して
投与に所望される濃度、例えば、１４０ｍｇ／ｍＬ、１４５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍ
Ｌ、１５５ｍｇ／ｍＬ、または１６０ｍｇ／ｍＬに戻すことができる。組成物は、２〜８
℃（例えば、４℃、５℃、６℃、７℃）で保存することができる。
【００６９】
一実施形態において、ＶＬＡ−４結合抗体は、賦形剤材料、例えば、１６０ｍＭ  Ｌア
ルギニン塩酸塩（±１０％）、リン酸緩衝液（例えば、リン酸二ナトリウム七水和物およ
びリン酸一ナトリウム）、およびポリソルベート８０で製剤化され得、総ナトリウム含有
量は、６０ｍＭを上回らない。別の実施形態において、ＶＬＡ−４結合抗体は、２７５ｍ
Ｍグリセロール（±１０％）、リン酸緩衝液（例えば、リン酸二ナトリウム七水和物およ
びリン酸一ナトリウムまたは他のリン酸塩）、およびポリソルベート８０で製剤化され得
、実質的に塩化ナトリウムを含まない。別の実施形態において、ＶＬＡ−４結合抗体は、
１４０ｍＭ塩化ナトリウム（±１０％）、リン酸緩衝液、およびポリソルベート８０で製
剤化され得る。リン酸緩衝液を含む例示的な製剤は、以下、例えば、実施例８、９、１０
、１１、および１２において提供される。
【００７０】
一実施形態において、ＶＬＡ−４結合抗体は、賦形剤材料、例えば、２４０ｍＭグリセ
ロール（±１０％）、ヒスチジン緩衝剤、ポリソルベート８０、および任意選択でＬ−メ
チオニンで製剤化され得る。ヒスチジン緩衝剤を含む例示的な製剤は、以下、例えば、実
施例１３および１４において提供される。
リン酸緩衝液は、当該技術分野において知られ、例えば、適切なｐＨに調整されたリン
酸二ナトリウム（無水物）、リン酸二ナトリウム七水和物、リン酸二ナトリウム二水和物
、リン酸一ナトリウム無水物、リン酸一ナトリウム一水和物、リン酸一ナトリウム二水和
物、リン酸三ナトリウム無水物、またはリン酸三ナトリウム十二水塩の水溶液を含む。リ
ン酸緩衝液は、例えば、適切なｐＨに調整されたリン酸一カリウム、リン酸二カリウム無
水物、またはリン酸三カリウムも含む。
【００７１】
ヒスチジン緩衝剤は、当該技術分野において知られ、例えば、塩酸もしくは水酸化ナト
リウムのいずれかを用いて適切なｐＨに調整されたＤ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン一塩
化一水和物、ＤＬ−ヒスチジン、ＤＬ−ヒスチジン一塩化一水和物、Ｌ−ヒスチジン、ま
たはＬ−ヒスチジン一塩化一水和物の水溶液、または当該技術分野において知られる他の
酸もしくは塩基を含む。
通常、医薬組成物は、薬剤として許容される担体を含む。本明細書において使用する「
薬剤として許容される担体」は、生理学的に適合する任意およびすべての溶媒、分散媒、
コーティング、抗菌薬および抗真菌薬、等張剤および吸収遅延剤等を含む。
【００７２】
「薬剤として許容される塩」は、抗体の所望の生物学的活性を保持し、任意の所望され
ない毒性効果を与えない塩を意味する（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（
１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照）。かかる塩の例としては、
酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、非毒性無機酸、例えば、塩
酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸等、ならびに非毒性有機酸、例えば
、脂肪族モノカルボン酸および脂肪族二カルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキ
シアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸、遊離アミノ酸等に由来のもの
が挙げられる。塩基付加塩としては、アルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、カリウム
、マグネシウム、カルシウム等、ならびに非毒性有機アミン、例えば、Ｎ，Ｎ′−ジベン
ジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノー
ルアミン、エチレンジアミン、プロカイン等に由来のものが挙げられる。
【００７３】
通常、生理学的に適合する薬剤、例えば、遊離アミノ酸、遊離アミノ酸の塩酸塩、ナト
リウム塩、またはカリウム塩は、抗体の安定性を促進するために、医薬製剤において賦形
剤として使用される。本明細書における製剤は、安定性を促進するために、添加剤、例え
ば、グリセロール、マンニトール、ソルビトール、および他のポリオール、ならびに糖（
例えば、スクロース）を含み得る。
【００７４】
本明細書で扱う製剤は、薬剤として許容される賦形剤、例えば、界面活性物質、例えば
、ポリソルベート８０、モノステアリン酸グリセリン、ステアリン酸ポリオキシル、ラウ
ロマクロゴール、またはオレイン酸ソルビタンを含み得る。一実施形態において、本明細
書で扱う製剤は、約０．０１％（ｗ／ｖ）から約０．１％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０
、例えば、約０．２％または０．０４％ポリソルベート８０を含む。
【００７５】
高度に濃縮されたＶＬＡ−４結合抗体を含有する医薬組成物は、液体溶液（例えば、注
射剤および注入できる溶液）の形態である。かかる組成物は、非経口形態（例えば、皮下
、腹腔内、または筋肉内注射）により投与され得る。本明細書において使用する「非経口
投与」および「非経口投与された」という用語は、通常は注射による内部および局所投与
以外の投与形態を意味し、皮下もしくは筋肉内投与、ならびに静脈内、関節内、眼窩内、
心臓内、皮内、腹腔内、経気管、表皮下、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外、および胸
骨内注射および注入を含む。一実施形態において、本明細書に記載の製剤は、皮下に投与
される。
【００７６】
医薬組成物は、製造および保存の状態下で無菌であり安定している。医薬組成物を試験
して、投与に関する規制および産業基準を満たすことを保証することもできる。
高度に濃縮された量のＶＬＡ−４結合抗体を含有する医薬組成物は、溶液、マイクロエ
マルジョン、分散剤、リポソーム、または高い抗体濃度に好適な他の秩序構造として製剤
化され得る。滅菌注射剤は、必要量の本明細書に記載の薬剤を、上に列挙される材料の１
つまたは組み合わせとともに適切な溶媒に組み込むことによって、必要に応じて、濾過滅
菌に続いて調製することができる。一般に、分散剤は、本明細書に記載の薬剤を、塩基性
分散媒体および上に列挙されるものから必要とされる他の材料を含有する滅菌媒体に組み
込むことによって調製される。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティン
グの使用によって、分散剤の場合は必要な粒径の維持によって、および界面活性物質の使
用によって維持することができる。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤
、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを該組成物に含めることによってもたらさ
れ得る。
【００７７】
一部の実施形態において、製剤を説明するパラメータ、例えば、製品ラベルに表示され
得るパラメータを特徴とする。かかるパラメータは、例えば、色（通常、無色からわずか
に黄色、または無色から黄色）、透明度（通常、透明からわずかに乳白色、または透明か
ら乳白色）、および粘度（周囲温度、例えば、２０℃から３０℃で測定した場合、通常、
約５ｃＰから３０ｃＰの間）を含む。かかるパラメータは、当該技術分野において知られ
る方法によって測定することができる。例えば、透明度は、市販のオパールエッセンスス
タンダード（例えば、ＨｕｎｔｅｒＬａｂ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｒｅｓｔ
ｏｎ，ＶＡ）から入手可能）を使用して測定することができる。
【００７８】
一部の実施形態において、抗体製剤の安定性が分析される。例示的な方法は、例えば、
凝集研究、酸化研究、フラグメント化研究、シアリル化研究、等電点研究、半抗体研究、
重鎖および軽鎖パリティ研究、および二次構造（例えば、円偏光二色性分析による）、熱
変性（例えば、示差走査熱量測定の円偏光二色性分析による）、トリプトファン環境（例
えば、蛍光分析による）、ＩｇＧの折り畳み（例えば、遠紫外線円偏光二色性分析による
）、および芳香族残基環境（例えば、紫外線可視分光光度法による）の分析を含む。
【００７９】
（抗体製剤を作製する方法）
ＶＬＡ−４結合抗体製剤を含有する製剤は、米国公開出願第２００５／００５３５９８
号に記載されるように作製し、高濃度の抗体（例えば、約７５ｍｇ／ｍＬから約１９０ｍ
ｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬから約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬから約１７０
ｍｇ／ｍＬ、１３５ｍｇ／ｍＬから約１６５ｍｇ／ｍＬの濃度）に対応するように修正す
ることができる。該プロセスは、熟練者に既知のとおり変更できるが、一般に、例えば、
以下の手順に従う。関心対象の抗体またはタンパク質を作製する細胞を含有する機能して
いる細胞バンクからアンプルを取得する。接種材料を調製する。必要に応じて追加供給し
ながら、接種材料の細胞を培養または発酵する。遠心分離および／または濾過によって細
胞を採取／浄化する。これは、例えば、らせん状にねじれた濾過によって、細胞を１０倍
濃縮することにより行うことができる。例えば、０．２μｍフィルターを通す中間濾過の
後に、例えば、タンパク質Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ（登録商標）に
よる親和性クロマトグラフィー、および次いで逆溶出を行う。組成物を含有する抗体は、
次いで、低ｐＨ、例えば、ｐＨ３．６〜３．７で処理を受ける。次いで、混合物は、ウイ
ルス濾過に続いて濃度／ダイアフィルトレーションステップを経る。さらに、組成物は、
例えば、アニオン交換クロマトグラフィー、例えば、ＤＥＡＥ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｆ
ａｓｔ  Ｆｌｏｗ（登録商標）によって精製される。このステップは、複数回行うことが
できる。この点から、該組成物は、次いで、さらに濃縮された後、例えば、ゲル濾過クロ
マトグラフィー、例えば、Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ３００ＨＲ（登録商標）システムによ
って精製される。組成物を含有する抗体は、所望される場合、さらに濃縮することができ
る。最終製剤は、緩衝液およびポリソルベートを添加し、限外濾過プロセスによって抗体
を再度濃縮することにより作製される。結果として生じる抗体製剤は、品質管理試験され
、品質保証（ＱＡ）が出され得る。抗体製剤は、以下の表１に例示される方法のいずれか
に従って作製することができる。例えば、ＶＬＡ−４結合抗体を含有する製剤、例えば、
ナタリズマブは、以下のプロセスによって作製することができる。当該技術分野において
知られるように、大量の細胞培養、例えば、５，０００から２０，０００リットル（例え
ば、５，０００、１０，０００、１５，０００、２０，０００リットル）を接種、培養、
供給、採取、および浄化する。浄化した材料は、例えば、クロマトグラフィー、ウイルス
不活性化、およびウイルス濾過によって精製する。浄化した材料の限外濾過／ダイアフィ
ルトレーション（ＵＦ／ＤＦ）は、リン酸プロセス中間体を生じる。リン酸プロセス中間
体は、例えば、タンパク質をさらに濃縮するための方法によるさらなる処理のために、２
〜８℃で保存してもよい。最終製剤を作製するために、ポリソルベートおよび緩衝液（本
明細書に記載のとおり）をリン酸プロセス中間体に添加し、最終の所望抗体濃度を得る。
一代替例において、最終製剤は、リン酸プロセス中間体を緩衝液で希釈して最終の所望濃
度、例えば、２０ｍｇ／ｍＬ等の低濃度に戻すことによって作製される。ポリソルベート
は、通常、最終希釈ステップ中に添加される。
【００８０】
一実施形態において、ＶＬＡ−４結合抗体製剤は、リン酸プロセス中間体が、少なくと
も第２のＵＦ／ＤＦプロセス、および任意選択で、少なくとも１つの追加ＵＦプロセスを
経て、本明細書に記載のヒスチジン製剤となり、最終の所望濃度が、例えば、約７５ｍｇ
／ｍＬから１９０ｍｇ／ｍＬの間、例えば、約７５ｍｇ／ｍＬから約１９０ｍｇ／ｍＬの
間、例えば、７５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１３５ｍｇ／ｍＬ
、１５０ｍｇ／ｍＬ、１６５ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬとなるこ
とを除いて、上に説明するとおりに、ヒスチジン製剤で作製される。一代替例において、
ヒスチジン緩衝剤中の抗体製剤は、所望の濃度を上回る最終濃度になる。次いで、最終製
剤は、希釈によりヒスチジン製剤緩衝剤を所望のタンパク質濃度に戻すことによって作製
される。ポリソルベートは、通常、最終希釈ステップ中に添加される。
【００８１】
別の実施形態において、抗体製剤は、リン酸プロセス中間体が、少なくとも第２のＵＦ
／ＤＦプロセス、および任意選択で、少なくとも１つの追加ＵＦプロセスを経て、本明細
書に記載のリン酸製剤緩衝液となり、最終の所望濃度が、例えば、約７５ｍｇ／ｍＬから
１９０ｍｇ／ｍＬの間、例えば、約７５ｍｇ／ｍＬから約１９０ｍｇ／ｍＬの間、例えば
、７５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１３５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍ
ｇ／ｍＬ、１６５ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬとなることを除いて
、上に説明するとおりに、リン酸製剤で作製される。一代替案において、リン酸緩衝液中
の抗体製剤は、最終濃度が所望の濃度を上回り、最終製剤は、リン酸製剤緩衝材に希釈し
て所望のタンパク質濃度に戻すことによって作製される。ポリソルベートは、通常、最終
希釈ステップ中に添加される。
【００８２】
別の実施形態において、ＶＬＡ−４結合抗体製剤は、リン酸製剤用の商業ＵＦ／ＤＦプ
ロセスが続き、ポリソルベートを添加して、ＶＬＡ−４結合抗体製剤を所望の最終濃度、
例えば、約７５ｍｇ／ｍＬから１９０ｍｇ／ｍＬの間、例えば、約７５ｍｇ／ｍＬから約
１９０ｍｇ／ｍＬの間、例えば、７５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ
、１３５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１６５ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０
ｍｇ／ｍＬで作製することを除いて、上に説明するとおりに、リン酸製剤で作製される。
一代替例において、リン酸緩衝液中の抗体製剤は、最終濃度が所望の濃度を上回り、次い
で、最終製剤は、リン酸製剤緩衝剤に希釈して所望のタンパク質濃度に戻すことによって
作製される。ポリソルベートは、通常、最終希釈ステップ中に添加される。
【表１】
2014040424.tif 000002
【００８３】
表１のＵＦ／ＤＦプロセス（例えば、ＵＦ／ＤＦ＃１、ＵＦ／ＤＦ＃２）は、通常、例
えば、平板またはらせん状にねじれた限外濾過カセット（例えば、１０ｋＤまたは３０ｋ
Ｄ細孔径）を使用して、抗体を濃縮および透析する接線流プロセスである。かかるプロセ
スは、生成物を０から１００ｇ／Ｌ、例えば、３０ｇ／Ｌ、５０ｇ／Ｌ、８０ｇ／Ｌに濃
縮するために好適である。表１のＵＦプロセス（例えば、ＵＦ＃３）は、通常、生成物を
例えば、０から３００ｇ／Ｌまたはそれ以上、例えば、１５０ｇ／Ｌ、２００ｇ／Ｌ、２
１０ｇ／Ｌ、２２０ｇ／Ｌ、２３０ｇ／Ｌ、または２４０ｇ／Ｌに濃縮するために好適な
オープンチャンネル平板カセットを使用する。
【００８４】
表１の商業ＵＦ／ＤＦプロセスは、通常、第１のＵＦ／ＤＦ操作を使用して、生成物を
製剤緩衝液に透析し、生成物を約５ｇ／Ｌから４０ｇ／Ｌ（例えば、約１０ｇ／Ｌ、約２
０ｇ／Ｌ、約３０ｇ／Ｌ）に濃縮する。第２のＵＦ操作は、通常、生成物を約１３５ｇ／
Ｌから約１８５ｇ／Ｌ（例えば、約１４０ｇ／Ｌ、１５０ｇ／Ｌ、１６５ｇ／Ｌ）にさら
に濃縮するために行う。
【００８５】
本明細書に記載のＶＬＡ−４結合抗体製剤のいずれかは、例えば、参照により本明細書
に組み込まれる、米国公開出願第２００５／００５３５９８号に記載のように、滅菌バイ
アルにパッケージ化することができる。例えば、該製剤は、例えば、３．０、５．０また
は２０ｍＬ充填バイアルにパッケージ化することができる。充填された製剤は、約２〜８
℃の冷却下で保存される。
【００８６】
一実施形態において、最終製剤は、抽出可能な最小量が１ｍＬである、３．０ｍＬ充填
バイアルに液体としてパッケージ化される。例えば、充填バイアルは、約１．１ｍＬから
約１．５ｍＬ（例えば、約１．１ｍＬ、約１．２ｍＬ、約１．３ｍＬ、約１．４ｍＬ）の
抗体製剤を含み得る。別の実施形態において、抗体製剤は、使用時に１ｍＬの溶液が患者
に注射される量でプレフィルシリンジにパッケージ化され、１ｍＬの溶液は、所望の量の
抗体、例えば、１３５ｍｇから１６５ｍｇのナタリズマブ、例えば、１５０ｍｇのナタリ
ズマブを送達する。
【００８７】
（ナタリズマブおよび他のＶＬＡ−４結合抗体）
本明細書に記載の高度に濃縮されたＶＬＡ−４結合抗体に好適な製剤抗体は、ナタリズ
マブ、アルファ４インテグリン結合抗体を含む。ナタリズマブ（ＵＳＡＮ名）は、抗体コ
ード番号ＡＮ１００２２６を有し、「ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）．」とも称される。任
意の生体内修正（例えば、アミノ酸のクリッピング）前のナタリズマブの軽鎖および重鎖
のアミノ酸配列は、表１−１および表１−２に示される。
【表２】
2014040424.tif 000003
【表３】
2014040424.tif 000004
【００８８】
ナタリズマブは、血液から中枢神経系への白血球の移動を阻害する。ナタリズマブは、
活性Ｔ細胞および他の単核白血球の表面上でＶＬＡ−４（アルファ４ベータ１とも称され
る）に結合する。Ｔ細胞と内皮細胞との間の接着を分断する場合があり、したがって、内
皮全体および実質組織への単核白血球の移動を阻止する。結果として、炎症性サイトカイ
ンのレベルも低減できる。
ナタリズマブは、再発寛解型多発性硬化症および再発二次進行型多発性硬化症の患者に
おける脳病変および臨床的再発の数を削減できる。
【００８９】
ナタリズマブおよび関連ＶＬＡ−４結合抗体は、例えば、米国特許第５，８４０，２９
９において説明される。モノクローナル抗体２１．６およびＨＰ１／２は、ＶＬＡ−４を
結合する例示的なマウスモノクローナル抗体である。ナタリズマブは、ヒト化型のマウス
モノクローナル抗体２１．６（例えば、米国特許第５，８４０，２９９号を参照）。ヒト
化型のＨＰ１／２も説明されている（例えば、米国特許第６，６０２，５０３号を参照）
。いくつかの追加ＶＬＡ−４結合モノクローナル抗体、例えば、ＨＰ２／１、ＨＰ２／４
、Ｌ２５およびＰ４Ｃ２は、例えば、米国特許第６，６０２，５０３、Ｓａｎｃｈｅｚ−
Ｍａｄｒｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６：１３４
３−１３４９、Ｈｅｍｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２：
１１４７８−１１４８５、Ｉｓｓｅｋｕｔｚ  ａｎｄ  Ｗｙｋｒｅｔｏｗｉｃｚ，１９９
１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：１０９（ＴＡ−２マブ）、Ｐｕｌｉｄｏ  ｅｔ  ａ
ｌ．，１９９１  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６：１０２４１−１０２４５、および
米国特許第５，８８８，５０７に記載されている。
【００９０】
一部のＶＬＡ−４結合抗体は、同族リガンド、例えば、ＶＣＡＭ−１またはフィブロネ
クチンへの結合に関与するアルファ４サブユニットのエピトープを認識する。多くのかか
る抗体は、同族リガンド（例えば、ＶＣＡＭ−１およびフィブロネクチン）に対するＶＬ
Ａ−４の結合を阻害する。
【００９１】
一部の有用なＶＬＡ−４結合抗体は、細胞、例えば、リンパ球上のＶＬＡ−４と相互作
用し得るが、細胞凝集は生じない。しかしながら、他のＶＬＡ−４結合抗体は、かかる凝
集を生じることが観察されている。ＨＰ１／２は、細胞凝集を生じない。ＨＰ１／２モノ
クローナル抗体（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６）は、極めて
高い効力を有し、ＶＣＡＭ１およびフィブロネクチンの両方とのＶＬＡ−４相互作用を阻
止し、ＶＬＡ−４上のエピトープＢに対する特異性を有する。この抗体および他のＢエピ
トープ特異抗体（例えば、Ｂ１またはＢ２エピトープ結合抗体、Ｐｕｌｉｄｏ  ｅｔ  ａ
ｌ．，１９９１，上記）は、本明細書に記載の製剤および方法において使用できる１つの
クラスのＶＬＡ−４結合抗体を表す。
【００９２】
例示的なＶＬＡ−４結合抗体は、１つ以上のＣＤＲ、例えば、本明細書で開示される特
定の抗体の３つのＨＣ  ＣＤＲすべておよび／または３つのＬＣ  ＣＤＲすべて、または
、つまりかかる抗体と少なくとも８０、８５、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９
８、９９％一致するＣＤＲ、例えば、ナタリズマブを有する。一実施形態において、Ｈ１
およびＨ２超可変ループは、本明細書に記載の抗体のものと同様の標準構造を有する。一
実施形態において、Ｌ１およびＬ２超可変ループは、本明細書に記載のものと同様の標準
構造を有する。
【００９３】
一実施形態において、ＨＣおよび／またはＬＣ可変ドメイン配列のアミノ酸配列は、本
明細書に記載の抗体、例えば、ナタリズマブのＨＣおよび／またはＬＣ可変ドメインのア
ミノ酸配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９２、９５、９７、９８、９９、また
は１００％一致する。ＨＣおよび／またはＬＣ可変ドメイン配列のアミノ酸配列は、本明
細書に記載の抗体、例えば、ナタリズマブの対応する配列とは少なくとも１つのアミノ酸
が異なり得るが、１０、８、６、５、４、３、または２つのアミノ酸が異なるにすぎない
。例えば、差異は、主として、または全体がフレームワーク領域内であり得る。
【００９４】
ＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列のアミノ酸配列は、本明細書に記載の核酸配列に対し
て極めて厳重な条件下でハイブリダイズ（雑種核酸を生成）する核酸配列、または本明細
書に記載の可変ドメインもしくはアミノ酸配列をコード化する核酸配列によってコード化
することができる。一実施形態において、ＨＣおよび／またはＬＣ可変ドメインの１つ以
上のフレームワーク領域（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４）の
アミノ酸配列は、本明細書に記載の抗体のＨＣおよびＬＣ可変ドメインの対応するフレー
ムワーク領域と、少なくとも７０、８０、８５、９０、９２、９５、９７、９８、９９、
または１００％一致する。一実施形態において、１つ以上の重鎖または軽鎖フレームワー
ク領域（例えば、ＨＣ  ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３）は、ヒト生殖細胞抗体から対応
するフレームワーク領域の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７
、９８、または１００％一致する。
【００９５】
２つの配列間の「相同性」または「配列同一性」（該用語は、本明細書において同義的
に使用される）の計算は、次のように行われる。配列を、最適な比較目的で整列させる（
例えば、最適アラインメントのための第１および第２のアミノ酸または核酸配列の１つま
たは両方にギャップを導入することができ、非相同配列は、比較目的で無視され得る）。
最適アラインメントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを使用し、Ｂ
ｌｏｓｓｕｍ  ６２得点マトリクスを用いて、最高スコアとして決定され、ギャップペナ
ルティは１２、ギャップ拡張ペナルティ４、およびフレームシフトギャップペナルティ５
である。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置におけるアミノ酸残基を
比較する。第１の配列における位置が、第２の配列において対応する位置と同一のアミノ
酸残基またはヌクレオチドによって占められている場合は、したがって、分子はその位置
において同一である（本明細書において使用するアミノ酸または核酸「同一性」は、アミ
ノ酸または核酸「相同性」に相当する）。２つの配列間の同一性の割合（％）は、該配列
によって共有される同一位置の数の関数である。
【００９６】
本明細書において使用する「極めて厳重な条件下でハイブリダイズする」という用語は
、ハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件を説明する。ハイブリダイゼーション反応を
行うためのガイダンスは、参照により組み込まれる、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ
ｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ
，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１−６．３．６において見出され得る。水性および非
水性方法は、該参照文献に記載されており、いずれをも使用することができる。極めて厳
重なハイブリダイゼーション条件は、６Ｘ  ＳＳＣ中、約４５度でのハイブリダイゼーシ
ョンを含み、その後、０．２Ｘ  ＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳ中、６５度、または実質的に
類似する条件での１回以上の洗浄を行う。
【００９７】
（投与）
本明細書に記載の高度に濃縮されたＶＬＡ−４結合抗体製剤は、皮下、筋肉内、および
静脈内投与を含む様々な方法によって、被験体、例えば、ヒト被験体に投与することがで
きる。通常、投与は、皮下または筋肉内注射による。
【００９８】
製剤は、固定用量またはｍｇ／ｋｇ用量として投与され得る。通常、投与は固定用量で
ある。例えば、製剤は、４週間毎に（例えば、月１回）７５ｍｇから５００ｍｇ（例えば
、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００
ｍｇ、４５０ｍｇ）、または２週間毎に５０ｍｇから２５０ｍｇ（例えば、７５ｍｇ、１
００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ）、または週１回２５ｍｇから１５０ｍｇ（例えば、
５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ）の固定単位用量で投与される。製剤は、
１から８ｍｇ／ｋｇ、例えば、約６．０、４．０、３．０、２．０、１．０ｍｇ／ｋｇの
用量でボーラス投与することもできる。修正される用量範囲は、通常、４週間毎または月
１回の投与の場合、５００、４００、３００、２５０、２００、１５０、または１００ｍ
ｇ／被験体未満の用量を含む。ＶＬＡ−４結合抗体は、例えば、３週間から５週間毎、例
えば、４週間毎または月１回投与することができる。
【００９９】
用量レジメンは、所望の反応、例えば、治療反応をもたらすように調整することができ
る。用量は、ＶＬＡ−４結合抗体に対する抗体の産生を低減または回避するように選択し
て、アルファ４サブユニットの４０、５０、７０、７５、または８０％を上回る飽和を達
成するか、アルファ４サブユニットの８０％、７０％、６０％、５０％、または４０％未
満の飽和を達成するか、または循環白血球値の増加を防ぐこともできる。
【０１００】
ある実施形態では、急速放出に対して抗体を保護する担体、例えば、インプラントおよ
びマイクロカプセル化送達システムを含む、制御放出製剤を用いて、活性薬剤を調製する
ことができる。生分解性、生体適合性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニール、ポリ無
水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸を使用する
ことができる。かかる製剤を調製するための多くの方法は、特許権を有するかまたは一般
に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌ
ｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、編者：Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓ
ｏｎ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照され
たい。
【０１０１】
用量レジメンは、所望の反応、例えば、治療反応をもたらすように調整することができ
る。「治療反応」は、疾患に関連する状態、症状、またはパラメータが、統計的に有意な
程度または当業者に検出可能な程度のいずれかで改善することを意味する。
本明細書において使用する用量単位形または「固定用量」は、治療対象の被験体に対す
る単位用量として好適な物理的に不連続な単位を意味し、各単位は、必要な医薬担体と関
連する、および任意選択で他の薬剤と関連する所望の治療効果をもたらすように計算され
た既定量の活性抗体を含有する。
【０１０２】
医薬組成物は、本明細書に記載の「治療上有効量」のＶＬＡ−４結合抗体、例えば、ナ
タリズマブを含み得る。かかる有効量は、投与薬剤の効果、または１つ以上の薬剤が使用
される場合は、薬剤および二次薬剤の組み合わせ効果に基づいて決定することができる。
治療上有効量の薬剤は、個人の疾患状態、年齢、性別、体重、および抗体が個人において
所望の反応を引き出す能力、例えば、少なくとも１つの疾患パラメータ、例えば、多発性
硬化症パラメータの改善、または疾患、例えば、多発性硬化症の少なくとも１つの症状の
改善等の要素によっても異なり得る。治療上の有効量は、組成物の治療上有益な効果が、
任意の毒性または有害効果を上回る量でもある。
【０１０３】
（装置およびキット）
高濃度のＶＬＡ−４結合抗体（例えば、ナタリズマブ）を有する製剤は、医療装置を用
いて投与することができる。該装置は、可搬性、室温保存、および使いやすさを考慮して
設計され得るか、またはかかる特徴を有し得、例えば、訓練を受けていない被験体または
現場の救急隊員によって、緊急事態に使用でき、医療施設および他の医療機器に移動させ
ることができるようにする。装置は、例えば、ＶＬＡ−４結合抗体（例えば、ナタリズマ
ブ）を含む医薬調製物を保存するための１つ以上の筐体を含み得、１つ以上の単位用量の
薬剤を送達するように構成することができる。
【０１０４】
例えば、医薬組成物は、経皮送達装置、例えば、皮下注射または多室型シリンジを含む
シリンジを用いて投与することができる。一実施形態において、装置は、針が取り付けら
れた、または一体化されたプレフィルシリンジである。他の実施形態において、装置は、
針が取り付けられていないプレフィルシリンジである。針は、プレフィルシリンジととも
にパッケージ化することができる。一実施形態において、装置は、自動注入装置、例えば
、自動注入シリンジである。別の実施形態において、注入装置は、ペン型注入装置である
。さらに別の実施形態において、シリンジは、ステークニードルシリンジ、ルアーロック
シリンジ、またはルアースリップシリンジである。他の好適な送達装置は、ステント、カ
テーテル、マイクロニードル、および埋め込み型制御放出装置を含む。組成物は、インラ
インフィルターの有無にかかわらず、例えば、ＩＶチューブを含む標準ＩＶ機器を用いて
経静脈的に投与することができる。ある実施形態において、装置は、皮下または筋肉内投
与において使用するためのシリンジである。
【０１０５】
医薬組成物は、医療装置を用いて投与することができる。例えば、医薬組成物は、無針
皮下注射装置、例えば米国特許第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５
，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０
，８２４号、または第４，５９６，５５６号に開示される装置を用いて投与することがで
きる。よく知られているインプラントおよびモジュールの実施例は、制御した速度で薬剤
を分注する埋め込み型微量注入ポンプを開示する米国特許第４，４８７，６０３、皮膚を
通して薬剤を投与するための治療装置を開示する米国特許第４，４８６，１９４号、精密
な注入速度で薬物を送達するための薬剤注入ポンプを開示する米国特許第４，４４７，２
３３号、連続的な薬物送達のための変流量埋め込み型注入装置を開示する米国特許第４，
４４７，２２４号、多室型容器を有する浸透圧薬物送達システムを開示する米国特許第４
，４３９，１９６号、および浸透圧薬物送達システムを開示する米国特許第４，４７５，
１９６号を含む。治療組成物は、皮下もしくは筋肉内投与のための生分解性または非生分
解性持続放出製剤の形態でもあり得る。例えば、米国特許第３，７７３，９１９号および
第４，７６７，６２８号、および国際ＰＣＴ出願第ＷＯ９４／１５５８７号を参照された
い。連続投与は、埋め込み型または外部ポンプを使用して達成することもできる。投与は
、例えば、１日１回の注射で断続的に行うか、または例えば、持続放出製剤を低用量で継
続的に行うこともできる。送達装置は、ＶＬＡ−４結合抗体の投与に最適となるように修
正することができる。例えば、シリンジは、ＶＬＡ−４結合抗体の保存および送達に最適
な程度にシリコン化することができる。当然のことながら、多くの他のかかるインプラン
ト、送達システム、およびモジュールも知られている。
【０１０６】
本発明は、第１および第２の薬剤を投与するための装置も特徴とする。装置は、例えば
、医薬調製物を保存するための１つ以上の筐体を含み得、単位用量の第１および第２の薬
剤を送達するように構成することができる。第１および第２の薬剤は、同一または個別の
容器に保存することができる。例えば、装置は、投与前に薬剤を混合することができる。
異なる装置を使用して、第１および第２の薬剤を投与することも可能である。
【０１０７】
ＶＬＡ−４結合抗体（例えば、ナタリズマブ）は、キットで提供することができる。一
実施形態において、キットは、（ａ）高濃度のＶＬＡ−４結合抗体を含む組成物を含有す
る容器、および任意選択で（ｂ）第２の薬剤を含む組成物を含有する容器、および任意選
択で（ｃ）情報資料を含み得る。情報資料は、本明細書に記載の方法および／または治療
上の利益を得るための薬剤の使用に関する記述的、指示的、宣伝用、または他の資料であ
り得る。一実施形態において、該キットは、第２の薬剤も含む。例えば、該キットは、Ｖ
ＬＡ−４結合抗体を含む組成物を含有する第１の容器と、第２の薬剤を含む第２の容器と
、を含む。一実施形態において、該キットは、本明細書に記載の高濃度液体抗体製剤を事
前充填した１つ以上の単回使用シリンジを含む。
【０１０８】
キットの情報資料は、その形態に限定されない。一実施形態において、情報資料は、抗
体の産生、濃度、有効期限、バッチまたは製造地情報等に関する情報を含み得る。一実施
形態において、情報資料は、例えば、好適な用量、投薬形態、または投与形態（例えば、
本明細書に記載の用量、投薬形態、または投与形態）で、ＶＬＡ−４結合抗体（例えば、
ナタリズマブ）を投与し、炎症性疾患（例えば、ＭＳ）を有する、または炎症性疾患に関
連するエピソードを経験する危険性のある被験体を治療する方法に関する。情報は、印刷
物、コンピュータで読取可能な資料、録画、もしくは録音、または実質的な資料へのリン
クまたはアドレスを提供する情報を含む様々な形式で提供され得る。
【０１０９】
薬剤に加えて、キット中の組成物は、他の材料、例えば、溶媒もしくは緩衝液、安定剤
、または保存剤を含み得る。薬剤は、任意の形態、例えば、液体、乾燥または凍結乾燥形
態、および実質的に純粋および／または滅菌形態で提供され得る。薬剤が液体溶液で提供
される場合、該液体溶液は、例えば、水溶液である。薬剤が乾燥形態で提供される場合、
再構成は、一般に、好適な溶媒の添加による。溶媒は、例えば、滅菌水または緩衝液は、
任意選択でキットに提供することができる。
【０１１０】
キットは、薬剤を含有する１つまたは複数の組成物のための１つ以上の容器を含み得る
。一部の実施形態において、キットは、組成物および情報資料のための個別の容器、分割
器、または区画を含む。例えば、組成物は、ボトル、バイアル、またはシリンジに含まれ
得、情報資料は、プラスチックスリーブまたはパケットに含まれ得る。他の実施形態にお
いて、キットの個別の要素は、単一の分割されていない容器に含まれる。例えば、組成物
は、ボトル、バイアル、またはシリンジに含まれ、そこに情報資料がラベル形式で添付さ
れる。一部の実施形態において、キットは、複数の（例えば、パック）個別容器を含み、
それぞれ１つ以上の単位用量形態（例えば、本明細書に記載の用量形態）の薬剤を含有す
る。容器は、単位用量の組み合わせ、例えば、ＶＬＡ−４−結合抗体（例えば、ナタリズ
マブ）および第２の薬剤の両方を、例えば、所望の割合で含む単位用量を含み得る。例え
ば、キットは、複数のシリンジ、アンプル、ホイルパケット、ブリスターパック、医療装
置を含み、例えば、それぞれ単一の組み合わせ単位用量を含有する。キットの容器は、気
密、防水（例えば、湿度または蒸発の変化に対して不透過）、および／または光密閉であ
り得る。
キットは、任意選択で、組成物の投与に好適な装置、例えば、シリンジまたは他の好適
な送達装置を含む。該装置は、１つまたは両方の薬剤を事前に充填した状態で、または空
の状態であり得るが、充填に好適であるという状態で提供され得る。
【０１１１】
（多発性硬化症）
皮下または筋肉内投与に好適な高度に濃縮されたＶＬＡ−４結合抗体を有する製剤は、
炎症性疾患、例えば、多発性硬化症（ＭＳ）の治療に有用である。多発性硬化症は、炎症
および髄鞘の喪失を特徴とする中枢神経系疾患である。
【０１１２】
ＭＳを有する患者は、「ＭＳの診断に関するワークショップ」で定義されるように、臨
床的に明確なＭＳの診断を確立する基準によって同定され得る（Ｐｏｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ
．，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．１３：２２７，１９８３）。簡潔に述べると、臨床的に明確
なＭＳを有する個人は、２度の発病、および２つの病変の臨床的証拠または１つの病変の
臨床的証拠のいずれか、および別の個別病変の副次臨床的証拠を有している。明確なＭＳ
は、２度の発病および脳脊髄液中のIｇGオリゴクローナルバンドの証拠によるか、または
発病、２つの病変、および脳脊髄液中のIｇGオリゴクローナルバンドの臨床的証拠の組み
合わせによっても診断され得る。ＭｃＤｏｎａｌｄ基準を使用して、ＭＳを診断すること
もできる（ＭｃＤｏｎａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ  ｄｉ
ａｇｎｏｓｔｉｃ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ
：ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐａｎｅｌ
ｏｎ  ｔｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，
Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ  ５０：１２１−１２７）。ＭｃＤｏｎａｌｄ基準は、複数の臨床
的発病がない場合に、ＭＳの診断に使用されるＣＮＳ不全の経時的なＭＲＩ証拠の使用を
含む。多発性硬化症の有効な治療は、いくつかの異なる方法で評価され得る。以下のパラ
メータを使用して、治療の有効性を計測することができる。２つの例示的な基準は、ＥＤ
ＳＳ（総合障害度評価尺度）およびＭＲＩ（磁気共鳴映像法）上の悪化の出現を含む。Ｅ
ＤＳＳは、ＭＳによる臨床的障害を等級分けする手段である（Ｋｕｒｔｚｋｅ，Ｎｅｕｒ
ｏｌｏｇｙ  ３３：１４４４，１９８３）。神経障害の種類および重度に関して、８つの
機能系が評価される。簡潔に述べると、治療に先立って、患者は、以下の系：錐体、小脳
、脳幹、感覚器、腸および膀胱、視覚、脳および他における障害について評価される。フ
ォローアップは、規定の間隔で行われる。スケールは、０（正常）から１０（ＭＳによる
死）の範囲である。１段階の降下は、有効な治療を示す（Ｋｕｒｔｚｋｅ，Ａｎｎ．Ｎｅ
ｕｒｏｌ．３６：５７３−７９，１９９４）。
【０１１３】
悪化は、ＭＳに起因し、適切な新しい神経的異常を伴う新たな症状の出現として定義さ
れる（ＩＦＮＢ  ＭＳ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ，上記）。さらに、悪化は、少なくとも
２４時間継続し、少なくとも３０日は安定性または改善が先立っていなければならない。
簡潔に述べると、患者は、臨床医による標準神経学的診察を受ける。悪化は、神経学的格
付けスケールに従って、軽度、中度、または重度のいずれかである（Ｓｉｐｅ  ｅｔ  ａ
ｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ３４：１３６８，１９８４）。年間の悪化率および悪化がみ
られない患者の比率が決定される。
【０１１４】
治療は、これらの測定値のいずれかに関して、治療群とプラセボ群との間に、悪化のな
い患者または再発のない患者の割合または比率において、統計学的に有意な差異がある場
合に有効であるとみなされ得る。さらに、最初の悪化までの時間、および悪化の期間と重
度も測定され得る。この点において、治療としての測定の有効性は、対照群と比較した治
療群において、最初の悪化までの時間または期間および重度における統計学的に有意な差
異である。悪化がみられない、または再発がない期間が１年、１８ヶ月または２０ヶ月を
上回ることは、特に注目に値する。
【０１１５】
第１の薬剤、および任意選択で第２の薬剤を投与する有効性は、以下の基準のうちの１
つ以上に基づいて評価することもできる：限界希釈法により決定されるＭＢＰ反応性Ｔ細
胞の頻度、ＭＢＰ反応性Ｔ細胞株およびクローンの増殖反応、患者から確立されたＭＢＰ
に対するＴ細胞株およびクローンのサイトカインプロファイル。有効性は、反応細胞の頻
度の減少、天然ペプチドとの比較で改変ペプチドと合併されるチミジンの減少、およびＴ
ＮＦとＩＦＮ−アルファの減少によって示される。
【０１１６】
臨床的測定は、１年および２年間隔での再発率、および６ヶ月間持続するＥＤＳＳのベ
ースライン１．０単位からの進行までの時間を含むＥＤＳＳの変化を含む。Ｋａｐｌａｎ
−Ｍｅｉｅｒ曲線上で、障害の持続的進行の遅延は有効性を示す。他の基準は、ＭＲＩ上
のＴ２画像の領域および量の変化、およびガドリニウム増強画像によって決定される病変
の数および量を含む。
【０１１７】
ＭＲＩを使用し、ガドリニウム−ＤＴＰＡ増強結像によって活性病変を測定する（Ｍｃ
Ｄｏｎａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３６：１４，１９９４）か、または
Ｔ２加重法を使用して、病変の位置および程度を測定することができる。簡潔に述べると
、ベースラインＭＲＩが得られる。それぞれの後次研究に対し、同一の結像面および患部
位置が使用される。位置付けおよび結像配列は、病変の検出を最大にし、病変の追跡を促
進するように選択することができる。後次研究において、同一の位置付けおよび結像配列
使用することができる。ＭＳ病変の存在、位置、および程度は、放射線技師によって決定
され得る。病変の領域は、総病変領域のスライス毎に概説および要約され得る。新しい病
変の証拠、活性病変の出現率、病変領域の変化率の３つの分析を行ってもよい（Ｐａｔｙ
ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ４３：６６５，１９９３）。治療による改善は、
ベースラインとの比較または治療群対プラセボ群で、個別の患者における統計学的に有意
な改善によって確立され得る。
【０１１８】
本明細書に記載の方法で治療され得る多発性硬化症に関連する例示的な症状は、視神経
炎、二重視、眼振、眼ディスメトリア、核間性眼筋麻痺、運動および音眼内閃光、求心性
瞳孔障害、不全麻痺、単不全麻痺、不全対麻痺、片側不全麻痺、四肢不全麻痺、麻痺、対
麻痺、片麻痺、四肢麻痺（ｔｅｔｒａｐｌｅｇｉａ、ｑｕａｄｒａｐｌｅｇｉａ）、痙縮
、構音障害、筋萎縮、痙攣（ｓｐａｓｍｓ、ｃｒａｍｐｓ）、緊張低下、間代性痙攣、間
代性筋痙攣、筋波動、下肢静止不能症候群、下垂足、機能不全反射、知覚障害、知覚麻痺
、神経痛、神経障害痛および神経原性疼痛、レルミット兆候、固有感覚不全、三叉神経痛
、運動失調、企図振戦、測定障害、前庭性運動失調、目まい、言語失調、筋失調症、拮抗
運動反復不全、頻尿、膀胱痙縮、弛緩性膀胱、排尿筋−括約筋筋失調、勃起障害、性感過
剰症、不感症、便秘、便意切迫、便失禁、うつ病、認知機能障害、認知症、気分変動、情
緒不安定、陶酔感、双極性障害、不安神経症、失語、不全失語症、疲労、ウートホフ症状
、胃食道逆流、および睡眠障害を含む。
【０１１９】
ＭＳの各症例は、いくつかの提示および後次経過パターンの１つを示す。最も一般的に
、ＭＳは、最初に一連の発病として現れた後に完全または部分的寛解が生じ、症状が不思
議に軽減して、安定期間の後に再発する。これは、再発寛解型（ＲＲ）ＭＳと称される。
一次進行型（ＰＰ）ＭＳは、明確な寛解のない段階的な臨床的減退を特徴とするが、一時
的なプラトーまたは症状のわずかな軽減があり得る。二次進行型（ＳＰ）ＭＳは、再発寛
解型の経過で始まり、後で一次進行型の経過が続く。稀に、患者は、進行再発型（ＰＲ）
の経過を有する場合があり、疾患は、急性の発病により中断される進行性の経路を辿る。
ＰＰ、ＳＰ、およびＰＲは、一括して慢性進行性ＭＳと称される場合がある。
【０１２０】
数人の患者は、即座の過酷な減退として定義される悪性ＭＳを経験し、結果として著し
い障害をもたらすか、または疾患の発症後すぐに死に至り得る。この減退は、本明細書に
記載の治療を組み合わせて投与することによって、停止または減速され得る。
ヒト研究に加えて、または先行して、動物モデルを使用して、２つの薬剤を使用する有
効性を評価することができる。多発性硬化症の例示的な動物モデルは、例えば、Ｔｕｏｈ
ｙ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８８）１４１：１１２６−１１３０）、
Ｓｏｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８４）１３２：２３９３−２４
０１）、およびＴｒａｕｇｏｔｔ（Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８９）１１９：１
１４−１２９）に記載される実験的自己免疫性脳炎（ＥＡＥ）マウスモデルである。ＥＡ
Ｅ誘導に先行して、本明細書に記載の第１および第２の薬剤をマウスに投与することがで
きる。ついで、特徴的な基準についてマウスを評価し、モデルにおいて２つの薬剤を使用
する有効性を決定する。
【０１２１】
（他の疾患）
本明細書に記載の製剤および方法を使用して、他の炎症性、免疫性、または自己免疫性
疾患、例えば、中枢神経系の炎症（例えば、多発性硬化症に加えて、髄膜炎、視神経脊髄
炎、神経サルコイドーシス、ＣＮＳ血管炎、脳炎、および横断性脊髄炎）、組織または臓
器移植の拒絶反応または移植片対宿主病、急性ＣＮＳ損傷、例えば、脳卒中または脊髄損
傷、慢性腎疾患、アレルギー、例えば、アレルギー性喘息、１型糖尿病、炎症性腸疾患、
例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、重症筋無力症、線維筋痛、関節疾患、例えば、関節
リウマチ、乾癬性関節炎、炎症性／免疫性皮膚病、例えば、乾癬、白斑、皮膚炎、扁平苔
癬、全身性紅斑性狼瘡、シェーグレン症候群、血液癌、例えば、多発性骨髄腫、白血病、
リンパ腫、固形癌、例えば、肺、乳房、前立腺、脳の例えば、肉腫または癌腫、および線
維性疾患、例えば、肺線維症、骨髄線維症、肝硬変、メサンギウム増殖性糸球体腎炎、半
月体形成性糸球体腎炎、糖尿病性腎症、および腎間質性線維症を治療することもできる。
【０１２２】
例えば、高濃度のＶＬＡ−４結合抗体（例えば、ナタリズマブ）を含有する製剤を皮下
または筋肉内に投与して、これらおよび他の炎症性、免疫性、または自己免疫性疾患を治
療することができる。
【０１２３】
（抗体生成）
ＶＬＡ−４に結合する抗体は、例えば、動物を使用する免疫付与、またはファージ提示
法等の生体外方法によって生成することができる。ＶＬＡ−４のすべてまたは一部は、免
疫原として使用することができる。例えば、アルファ４サブユニットの細胞外領域は、免
疫原として使用することができる。一実施形態において、免疫動物は、天然の、ヒトまた
は一部ヒト免疫グロブリン部位を持つ免疫グロブリン産生細胞を含有する。一実施形態に
おいて、非ヒト動物は、少なくともヒト免疫グロブリン遺伝子の一部を含む。例えば、ヒ
トＩｇ部位の大フラグメントを持つマウス抗体産生に欠けるマウス株を操作することが可
能である。ハイブリドーマ技術を使用して、所望の特異性を持つ遺伝子に由来の抗原特異
的モノクローナル抗体を産生および選択することができる。例えば、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ
（登録商標）、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３−
２１（１９９４）、米国特許第２００３−００７０１８５号、米国特許第５，７８９，６
５０号、および国際出願第ＷＯ９６／３４０９６号を参照されたい。
【０１２４】
ＶＬＡ−４に対する非ヒト抗体は、例えば、齧歯類において産生することもできる。非
ヒト抗体は、例えば、米国特許第６，６０２，５０３号、欧州特許第ＥＰ２３９４００号
、米国特許第５，６９３，７６１号、および米国特許第６，４０７，２１３号に記載のよ
うに、ヒト化することができる。
【０１２５】
欧州特許第ＥＰ２３９４００号（Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）は、ある種の相補性決
定領域（ＣＤＲ）を別種のそれらと（所定の可変領域内で）置換することによる抗体の改
変について記載する。ＣＤＲ置換抗体が含有する非ヒト成分は著しく少ないため、ＣＤＲ
置換抗体が、真のキメラ抗体と比較して、ヒトにおける免疫反応を誘発する可能性が低い
（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２，３２３−３２
７、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９，１５３４
−１５３６）。通常、組み換え核酸技術を使用することによって、マウス抗体のＣＤＲは
、ヒト抗体において対応する領域に置換され、所望の置換抗体をコード化する配列を産生
する。所望のアイソタイプ（通常、ＣＨの場合ガンマＩおよびＣＬの場合カッパ）のヒト
定常領域遺伝子セグメントを追加することができ、ヒト化重鎖および軽鎖遺伝子は、哺乳
類細胞において共発現し、溶解可能なヒト化抗体を産生し得る。
【０１２６】
Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９および国際出願第ＷＯ９０／０７８６１号は、オ
リジナルマウス抗体のＶフレームワーク領域に対する最適なタンパク質配列相同性につい
て、コンピュータ分析によりヒトＶフレームワーク領域を選択するステップと、マウスＶ
領域の第三の構造をモデリングして、マウスＣＤＲと相互作用する可能性のあるフレーム
ワークアミノ酸残基を可視化するステップと、を含むプロセスについて記載している。こ
れらのマウスアミノ酸残基は、次いで、相同ヒトフレームワーク上に重畳される。米国特
許第５，６９３，７６２号、第５，６９３，７６１号、第５，５８５，０８９号、および
第５，５３０，１０１号も参照されたい。Ｔｅｍｐｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂ
ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９，２６６−２７１は、基準として、ＮＥＷＭおよびＲＥＩ
重鎖および軽鎖それぞれに由来のＶ領域フレームワークを、マウス残基のラジカル導入の
ないＣＤＲ移植に利用している。Ｔｅｍｐｅｓｔらのアプローチを使用してＮＥＷＭおよ
びＲＥＩベースのヒト化抗体を構成する利点は、ＮＥＷＭおよびＲＥＩ可変領域の三次元
構造がＸ線結晶学から分かり、したがって、ＣＤＲとＶ領域フレームワーク残基との間の
特異的相互作用をモデル化することができることである。
【０１２７】
非ヒト抗体を修飾して、ヒト免疫グロブリン配列、例えば、コンセンサスヒトアミノ酸
残基を、特定の位置、例えば、以下の位置（軽鎖の可変ドメインのＦＲにおいて）４Ｌ、
３５Ｌ、３６Ｌ、３８Ｌ、４３Ｌ、４４Ｌ、５８Ｌ、４６Ｌ、６２Ｌ、６３Ｌ、６４Ｌ、
６５Ｌ、６６Ｌ、６７Ｌ、６８Ｌ、６９Ｌ、７０Ｌ、７１Ｌ、７３Ｌ、８５Ｌ、８７Ｌ、
９８Ｌ、および／または（重鎖の可変ドメインのＦＲにおいて）２Ｈ、４Ｈ、２４Ｈ、３
６Ｈ、３７Ｈ、３９Ｈ、４３Ｈ、４５Ｈ、４９Ｈ、５８Ｈ、６０Ｈ、６７Ｈ、６８Ｈ、６
９Ｈ、７０Ｈ、７３Ｈ、７４Ｈ、７５Ｈ、７８Ｈ、９１Ｈ、９２Ｈ、９３Ｈ、および／ま
たは１０３Ｈ（Ｋａｂａｔ付番に従う）のうちの１つ以上（例えば、少なくとも５、１０
、１２、またはすべて）に挿入する置換を含めることができる。例えば、米国特許第６，
４０７，２１３号を参照されたい。
【０１２８】
例えば、生体外で初回抗原刺激を受けたヒト脾細胞を使用して、Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ
ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７，８６−９５に記載されるように、
ＶＬＡ−４に結合する完全ヒトモノクローナル抗体を産生することができる。それらは、
Ｐｅｒｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，８８：２４３２−２４３６またはＨｕａｎｇ  ａｎｄ  Ｓｔｏｌｌａｒ，１９９１，
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １４１，２２７−２３６、および米国特許第５，
７９８，２３０によって記載されるように、レパートリークローニングによって調製され
得る。大型の非免疫ヒトファージ提示法ライブラリを使用して、高親和性抗体を単離して
もよく、標準ファージ技術を使用してヒト治療薬として開発され得る（例えば、Ｖａｕｇ
ｈａｎ  ｅｔ  ａｌ，１９９６、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｉｍ
ｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ４：１−２０、およびＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａ
ｌ．（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  ２：３７１−８、米国特許第２００３−
０２３２３３３号を参照）。
【０１２９】
（抗体産生）
抗体は、原核および真核細胞において産生することができる。一実施形態において、抗
体（例えば、ｓｃＦｖｓ）は、イースト細胞、例えば、Ｐｉｃｈｉａ（例えば、Ｐｏｗｅ
ｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２５１：１２３
−３５を参照）、ＨａｎｓｅｕｌａまたはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓにおいて発現する
。
【０１３０】
一実施形態において、抗体、特に全長抗体、例えば、ＩｇＧは、哺乳類細胞において産
生される。組み換え発現のための例示的な哺乳類宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵
巣（ＣＨＯ細胞）（Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載のｄｈｆｒ−ＣＨＯ細
胞を含み、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ
．１５９：６０１−６２１に記載のように、ＤＨＦＲ選択可能マーカーとともに使用され
る）、リンパ球細胞株、例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞およびＳＰ２細胞、ＣＯＳ細胞、Ｋ５
６２、および形質転換動物、例えば、形質転換哺乳類から得た細胞を含む。例えば、細胞
は、哺乳類上皮細胞である。
【０１３１】
免疫グロブリンドメインをコード化する核酸配列に加えて、組み換え発現ベクターは、
追加の核酸配列、例えば、宿主細胞（例えば、複製の起源）においてベクターの複製を規
制する配列および選択可能なマーカー遺伝子を担持し得る。選択可能なマーカー遺伝子は
、ベクターが導入された宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，
２１６号、第４，６３４，６６５号、および第５，１７９，０１７号を参照）。例示的な
選択可能マーカー遺伝子は、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（ｄｈｆｒ−宿主
細胞において、メトトレキサート選択／増幅に使用するため）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４
１８選択用）を含む。
【０１３２】
抗体（例えば、全長抗体またはその抗原結合部分）の組み換え発現のための例示的なシ
ステムにおいて、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコード化する組み換え発現ベクターは
、リン酸カルシウム媒介の形質転換によってｄｈｆｒ−  ＣＨＯ細胞に導入される。組み
換え発現ベクター内で、抗体重鎖および軽鎖遺伝子は、エンハンサ／プロモータ規制要素
（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルス等に由来、例えば、ＣＭＶエンハンサ／Ａ
ｄＭＬＰプロモータ規制要素またはＳＶ４０エンハンサ／ＡｄＭＬＰプロモータ規制要素
）にそれぞれ操作可能に連結され、高レベルの遺伝子転写を駆動する。組み換え発現ベク
ターは、ＤＨＦＲ遺伝子も担持し、これによってメトトレキサート選択／増幅を使用して
、ベクターで形質転換されたＣＨＯ細胞の選択が可能になる。選択された形質転換宿主細
胞を培養して、抗体重鎖および軽鎖の発現を可能にし、無傷抗体は、培養培地から回復さ
れる。標準分子生物学技術を使用して、組み換え発現ベクターを調製して、宿主細胞を形
質転換し、形質転換細胞を選択して、宿主細胞を培養し、培養培地から抗体を回復する。
例えば、一部の抗体は、タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇを用いる親和性クロマトグラフ
ィーによって単離され得る。例えば、精製されたＶＬＡ−４−結合抗体、例えば、ナタリ
ズマブは、標準タンパク質濃度技術を使用して、約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／
ｍＬに濃縮することができる。
【０１３３】
抗体は、修飾、例えば、Ｆｃ機能を改変して、例えば、Ｆｃ受容体またはＣ１ｑもしく
は両方との相互作用を削減または除去する修飾を含んでもよい。例えば、ヒトＩｇＧ１定
常領域は、例えば、米国特許第５，６４８，２６０号に従って、例えば、１つ以上の残基
２３４および２３７において突然変異し得る。他の例示的な修飾は、米国特許第５，６４
８，２６０号に記載のものを含む。
【０１３４】
Ｆｃドメインを含む一部の抗体の場合、抗体産生システムは、抗体を合成するように設
計され得、Ｆｃ領域は、グリコシル化される。例えば、ＩｇＧ分子のＦｃドメインは、Ｃ
Ｈ２ドメインにおけるアスパラギン２９７においてグリコシル化される。このアスパラギ
ンは、二分岐型オリゴ糖を用いる修飾のための部位である。このグリコシル化は、Ｆｃγ
受容体および相補Ｃ１ｑにより媒介されるエフェクタ機能に関与する（Ｂｕｒｔｏｎ  ａ
ｎｄ  Ｗｏｏｆ（１９９２）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５１：１−８４、Ｊｅｆｆｅｒｉ
ｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１６３：５９−７６）。Ｆｃド
メインは、アスパラギン２９７に対応する残基を適切にグリコシル化する哺乳類発現系に
おいて産生され得る。Ｆｃドメインは、他の真核翻訳後修飾を含み得る。
【０１３５】
抗体は、形質転換動物によっても産生され得る。例えば、米国特許第５，８４９，９９
２は、形質転換哺乳類の乳腺において抗体を発現するための方法を記載する。トランス遺
伝子は、乳汁特異的プロモータおよび関心対象の抗体、例えば、本明細書に記載の抗体を
コード化する核酸配列、および分泌のシグナル配列を含んで構成される。かかる形質転換
哺乳類の雌によって産生される乳汁は、そこで分泌される関心対象の抗体、例えば、本明
細書に記載の抗体を含む。抗体は、乳汁から精製され得るか、または一部の適用では、直
接使用され得る。
【０１３６】
抗体は、例えば、循環における、例えば、血液、血清、リンパ、気管支肺胞洗浄、また
は他の組織におけるその安定性および／または保持を、例えば、少なくとも１．５、２、
５、１０、または５０倍改善する部分で修飾され得る。
例えば、ＶＬＡ−４結合抗体は、ポリマー、例えば、実質的に非抗原性ポリマー、例え
ば、ポリアルキレンオキシドまたはポリエチレンオキシドと関連し得る。好適なポリマー
は、実質的に重量が異なる。約２００から約３５，０００ダルトン（または約１，０００
から約１５，０００、および２，０００から約１２，５００）の範囲の分子数平均重量を
有するポリマーを使用することができる。
【０１３７】
例えば、ＶＬＡ−４結合抗体は、水溶性ポリマー、例えば、親水性ポリビニルポリマー
、例えば、ポリビニルアルコールまたはポリビニルピロリドンと共役され得る。かかるポ
リマーの非限定リストは、ブロック共重合体の水溶性が維持されるという条件下で、ポリ
アルキレンオキシドホモポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポ
リプロピレングリコール、ポリオキシエチレン化ポリオール、その共重合体およびそのブ
ロック共重合体を含む。追加の有用なポリマーは、ポリオキシアルキレン、例えば、ポリ
オキシエチレン、ポリオキシプロピレン、およびポリオキシエチレンおよびポリオキシプ
ロピレンのブロック共重合体（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）、ポリメタクリレート、カルボマー
、サッカリド単量体から成る分岐または非分岐多糖、Ｄ−マンノース、Ｄ−およびＬ−ガ
ラクトース、フコース、フラクトース、Ｄ−キシロース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−グルク
ロン酸、シアル酸、Ｄ−ガラクツロン酸、Ｄ−マンヌロン酸（例えば、ポリマンヌロン酸
、またはアルギニン酸）、Ｄ−グルコサミン、Ｄ−ガラクトサミン、Ｄ−グルコースおよ
びホモ多糖およびヘテロ多糖を含むノイラミン酸、例えば、ラクトース、アミロペクチン
、スターチ、ヒドロキシエチルスターチ、アミロース、硫酸デキストラン、デキストラン
、デキストリン、グリコーゲン、または酸ムコ多糖の糖サブユニット、例えば、ヒアルロ
ン酸、糖アルコールのポリマー、例えば、ポリソルビトールおよびポリマンニトール、ヘ
パリンまたはヘパロンを含む。
【０１３８】
（例示的な第２の薬剤）
一部の場合において、本明細書に記載の製剤、例えば、皮下または筋肉内投与に好適な
高濃度のＶＬＡ−４結合抗体を含有する製剤は、第２の薬剤を含むか、または第２の薬剤
を含有する製剤と組み合わせて投与される。
一実施例において、ＶＬＡ−４結合抗体および第２の薬剤は、共製剤として提供され、
共製剤は、被験体に投与される。例えば、共製剤を投与する少なくとも２４時間前または
後に、１用量の高度に濃縮された抗体製剤、および次いで第２の薬剤を含有する１用量の
製剤を個別に投与することもさらに可能である。別の実施例において、抗体および第２の
薬剤は、個別の製剤として提供され、投与ステップは、抗体および第２の薬剤を連続的に
投与するステップを含む。連続投与は、同日（例えば、互いに１時間以内、または少なく
とも３、６、または１２時間間隔）または異なる日に提供することができる。
【０１３９】
一般に、抗体および第２の薬剤は、それぞれ複数の用量として、個別の時間に投与され
る。抗体および第２の薬剤は、一般に、レジメンに従ってそれぞれ投与される。一方また
は両方のレジメンは、規則的な周期性を有し得る。抗体のレジメンは、第２の薬剤のレジ
メンとは異なる周期性を有し得、例えば、一方を他方よりも頻繁に投与することができる
。一実施例において、抗体および第２の薬剤のうちの一方は週に１回投与され、他方は月
に１回投与される。別の実施例において、抗体および第２の薬剤のうちの一方は連続的に
、例えば、３０分を上回るが１、２、４、または１２時間未満の期間にわたって投与され
、他方はボーラスとして投与される。抗体および第２の薬剤は、任意の適切な方法によっ
て、例えば、皮下に、筋肉内に、または静脈内に投与され得る。
【０１４０】
一部の実施形態において、抗体および第２の薬剤のそれぞれは、それぞれ単回治療用に
処方されるものと同一用量で投与される。他の実施形態において、抗体は、単独投与され
た場合に、有効性に必要な量以下の用量で投与される。同様に、第２の薬剤は、単独投与
された場合に、有効性に必要な量以下の用量で投与され得る。
【０１４１】
ＶＬＡ−４結合抗体と組み合わせて多発性硬化症を治療するための第２の薬剤の非限定
例は、以下を含む。
・インターフェロン、例えば、ヒトインターフェロンベータ−１ａ（例えば、ＡＶＯＮ
ＥＸ（登録商標）またはＲｅｂｉｆ（登録商標））およびインターフェロンベータ−１ｂ
（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標）、１７位で置換されたヒトインターフェロンベータ、
Ｂｅｒｌｅｘ／Ｃｈｉｒｏｎ）、
・酢酸ガラティラメル（Ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ  １、Ｃｏｐ−１、ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登
録商標）Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．と
も称される）、
・Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）または例えば、リツキシマブとの重複
エピトープと競合する、または結合する別の抗ＣＤ２０抗体、
・ミクストキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標）Ｌｅｄｅｒｌｅ）、
・化学療法薬、例えば、クラブリビン（ＬＥＵＳＴＡＴＩＮ（登録商標））、アザチオ
プリン（ＩＭＵＲＡＮ（登録商標））、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標
））、シクロスポリン−Ａ、メトトレキサート、４−アミノピリジン、およびチザニジン
、
・コルチコステロイド、例えば、メチルプレドニゾロン（ＭＥＤＲＯＮＥ（登録商標）
Ｐｆｉｚｅｒ）、プレドニゾン、
・免疫グロブリン、例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）、ＣＴＬＡ
４  Ｉｇ、アレムツズマブ（ＭａｂＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））またはダクリズマブ（
ＣＤ２５を結合する抗体）、
・スタチン、
・ＴＮＦアンタゴニスト、
酢酸ガラティラメルは、アミノ酸−グルタミン酸、リシン、アラニン、およびチロシン
のランダム鎖で形成されたタンパク質である（故にＧＬＡＴｉｒａｍｅｒ）。溶液中にお
いて、これらのアミノ酸から、Ｎ−カルボキシアミノ酸無水物を使用して、約５パーツの
アラニンに対して３リシン、１．５グルタミン酸および１チロシンの割合で合成すること
ができる。
【０１４２】
追加の第２の薬剤は、他のヒトサイトカインまたは成長因子の抗体またはアンタゴニス
ト、例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ
−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−１１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ
、およびＰＤＧＦを含む。さらに他の例示的な第２の薬剤は、細胞表面分子に対する抗体
、例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０
、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０またはそれらのリガンドを含む。
例えば、ダクリズブマブは、多発性硬化症を改善し得る抗ＣＤ２５抗体である。
【０１４３】
さらに他の例示的な抗体は、本明細書に記載の薬剤の活性を提供する抗体、例えば、イ
ンターフェロン受容体、例えば、インターフェロンベータ受容体を係合する抗体を含む。
通常、第２の薬剤が抗体を含む実施例において、ＶＬＡ−４以外またはアルファ４インテ
グリン以外の標的タンパク質、または少なくとも第１の薬剤によって認識されるもの以外
のＶＬＡ−４上のエピトープに結合する。
【０１４４】
さらに他の追加の例示的な第２の薬剤は、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノレー
トモフェチル、レフルノミド、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えば、ホスホジ
エステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動
薬、本明細書に記載のように、前炎症性サイトカインによるシグナル伝達を干渉する薬剤
、ＩＬ−Ｉベータ変換酵素阻害剤（例えば、Ｖｘ７４０）、抗Ｐ７、ＰＳＧＬ、ＴＡＣＥ
阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、キナーゼ阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻
害剤、スルファサラジン、アザスロプリン、６−メルカトプリン、アンジオテンシン変換
酵素阻害剤、本明細書に記載の溶解性サイトカイン受容体およびその誘導体、抗炎症性サ
イトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＴＧＦ）を含む。
【０１４５】
一部の実施形態において、第２の薬剤を使用して、ＭＳの１つ以上の症状または副作用
を治療することができる。かかる薬剤は、例えば、アマンタジン、バクロフェン、パパべ
リン、メクリジン、ヒドロキシジン、スルファメトキサゾール、シプロフロキサシン、ド
キュセート、ペモリン、ダントロレン、デスモプレッシン、デキサメタゾン、トルテロジ
ン、フェニトイン、オキシブチニン、ビサコジル、ベンラファクシン、アミトリプチン、
メテナミン、クロナゼパム、イソニアジド、バルデナフィル、ニトロフラントイン、シー
リアム（オオバコ）親水性粘漿薬、アルプロスタジル、ガバペンチン、ノルトリプチン、
パロキセチン、臭化プロパンテリン、モダフィニル、フルオキセチン、フェナゾピリジン
、メチルプレドニゾロン、カルバマゼピン、イミプラミン、ジアゼパム、シルデナフィル
、ブプロピオン、およびセルトラリンを含む。小分子である多くの第２の薬剤は、１５０
から５０００ダルトンの間の分子量を有する。
【０１４６】
ＴＮＦアンタゴニストの実施例は、ＴＮＦ（例えば、ヒトＴＮＦアルファ）に対するキ
メラ、ヒト化、ヒトまたは生体外で生成された抗体（またはその抗原結合フラグメント）
、例えば、Ｄ２Ｅ７（ヒトＴＮＦアルファ抗体、米国特許第６，２５８，５６２号、ＢＡ
ＳＦ）、ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦア
ルファ抗体、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦアルフ
ァ抗体、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、抗ＴＮＦ抗体フラグメン
ト（例えば、ＣＰＤ８７０）、ＴＮＦ受容体の溶解性フラグメント、例えば、ｐ５５また
はｐ７５ヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体、例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５
ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）、Ｉｍｍｕｎｅ
ｘ、例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４）Ｖｏｌ．３７
，Ｓ２９５、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６）Ｖｏｌ．４４，２３５Ａ）、ｐ５
５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質（ＬＥＮＥＲ
ＣＥＰＴ（登録商標））、酵素アンタゴニスト、例えば、ＴＮＦアルファ変換酵素（ＴＡ
ＣＥ）阻害剤（例えば、アルファ−スルホニルヒドロキサム酸誘導体、第ＷＯ０１／５５
１１２号、およびＮ−ヒドロキシホルムアミドＴＡＣＥ阻害剤ＧＷ３３３３、−００５、
または−０２２）、およびＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（溶解性ＴＮＦ結合タンパク質、
例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎ
ｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ），Ｓ２８４、Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．−Ｈｅａ
ｒｔ  ａｎｄ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（１９９５）Ｖｏｌ．２
６８，ｐｐ．３７−４２）を含む。
【０１４７】
第２の薬剤に加えて、さらに他の薬剤を被験体に送達することも可能である。しかしな
がら、一部の実施形態において、ＶＬＡ−４結合抗体および第２の薬剤以外のタンパク質
または生物製剤は、医薬組成物として被験体に投与されない。ＶＬＡ−４結合抗体および
第２の薬剤は、注射によって送達される唯一の薬剤であり得る。ＶＬＡ−４結合抗体およ
び第２の薬剤が組み換えタンパク質である実施形態において、ＶＬＡ−４結合抗体および
第２の薬剤は、被験体に投与される唯一の組み換え薬剤であるか、または免疫または炎症
反応を調整する唯一の組み換え薬剤であり得る。さらに他の実施形態において、ＶＬＡ−
４結合抗体単体は、被験体に投与される唯一の組み換え薬剤または唯一の生物製剤であり
得る。
【０１４８】
本明細書に含まれるすべての参照文献および発行物は、参照により組み込まれる。以下
の実施例は、限定を意図しない。
【実施例】
【０１４９】
実施例１．静脈内製剤の開発の概要：保存および構造的安定性。ｐＨ６の、１０ｍＭの
リン酸中２０ｍｇ／ｍＬのナタリズマブ、１４０ｍＭの塩化ナトリウム、０．０２％のポ
リソルベート８０を含有するナタリズマブの製剤の保存安定性を判断するために実験を実
施した。製剤の保存中の安定性の変化の割合は、異なる保存条件データセット（２〜８℃
で２４ヶ月、２５℃で１２ヶ月、４０℃で３ヶ月）に対して算出した。以下のパラメータ
を使用して、初期ポイントと比較した安定性変化の割合の評価を行った。凝集の割合（％
）、アミノ酸残基メチオニン２５５の酸化の割合（％）、存在する半抗体の割合（％）、
Ｈ＋Ｌの割合（％）、フラグメント化の割合（％）、シアリル化の割合（％）、および低
等電点（ｐＩ）を有するアイソフォームの割合（％）。保存安定性製剤開発試験の結果を
表２に示す。これらの結果は、より高い抗体濃度を含有する製剤の安定性試験に対するベ
ースラインも提供する。
【表４】
2014040424.tif 000005
【０１５０】
種々の生理物理学的技術を使用して、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によるタンパク質二
次構造の監視、蛍光分光光度計を用いたトリプトファン蛍光によるトリプトファン残基の
環境の監視、遠紫外線における円偏光二色性を介したＩｇＧの折り畳みの三次構造の監視
、ならびに紫外線および可視分光光度法を介した芳香族残基の環境の監視を含む、２０ｍ
ｇ／ｍＬのナタリズマブ製剤の構造的安定性の評価を行った。
【０１５１】
２０ｍｇ／ｍＬ製剤の構造的安定性は、示差走査熱量計（Ｍｉｃｒｏｃａｌ、Ａｍｈｅ
ｒｓｔ，  ＭＡ）における熱融解実験中のＴｍ（熱融解曲線の中間点）を監視することに
よって、一部において最適化された。緩衝液対照と比較して、タンパク質を融解するのに
必要とされる過剰エンタルピーを監視し、データをコンピュータで分析した。構造的安定
性に対して感受性があるとして知られるトリプトファン蛍光を、製剤条件を最適化するよ
うに、温度を上昇させて、紫外分光光度法によって監視した。再度、紫外分光光度法を遠
紫外領域において使用し、ＩｇＧの折り畳みを測定した。６つのピークが監視され、種々
の製剤における構造的安定性の尺度として芳香族残基の環境に従うために、紫外可視スペ
クトル２３０〜３２０ｎｍの二次導関数を算出した。
【０１５２】
２０ｍｇ／ｍＬでのナタリズマブの安定性のアセスメントを行うために実施した構造的
試験の結果を表３に示す。追加の試験は、ナタリズマブが、ピストンポンプによるポンピ
ングの間、不均一核形成を生じることを示している。複数の凍結／解凍サイクル後、抗体
品質に変化は認められず、バイアル中での長期にわたる２〜３日の撹拌後、抗体は安定し
ていた（データは実施例２に示す）。ナタリズマブは、強い光のストレスの存在下で凝集
、酸化、および脱アミド化を生じ、かつ長期間、ステンレススチールと接触させて保存し
た際、金属触媒酸化にも感受性を有する。
【表５】
2014040424.tif 000006
【０１５３】
実施例２．１５０ｍｇ／ｍＬ製剤の加速安定性実験。特に皮下もしくは筋肉内投与に有
用とみられる、より高い濃度のナタリズマブに好適な製剤を判定するために、加速安定性
実験を、種々の製剤において１５０ｍｇ／ｍＬのナタリズマブを用いて実施した。試験製
剤を、周囲温度（約２５℃）で数日間、Ｔｙｐｅ  Ｉ  ＵＳＰ／ＥＰガラスバイアル中で
の撹拌に供した。凝集試験に使用する製剤は以下のとおりであった。ＨＣＮ＝２０ｍＭ  
ヒスチジン、２４０ｍＭ  グリシン、ｐＨ６。ＨＯＬ＝２０ｍＭ  ヒスチジン、２４０ｍ
Ｍ  グリセロール、ｐＨ６。ＰＣＮ＝２０ｍＭ  リン酸、２４０ｍＭ  グリシン、ｐＨ６
。ＰＳＴ＝２０ｍＭ  リン酸、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６。ＨＯＬおよびＨＣＮ製剤
は、追加の０．０４％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ｗ／ｖ）を有する。ＰＣＮおよ
びＰＳＴ製剤は、安定性に対する変数として試験する際を除き（以下の実験３）、追加の
０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を有する。サイズ排除クロマトグラフィー（
ＳＥＣ）を使用して、撹拌前および撹拌後の凝集率（％）を測定した。
【０１５４】
撹拌前および撹拌後の可溶性凝集体のレベルを図１に示す。可溶性凝集体の割合（％）
は、ＳＥＣによって測定し、可溶性凝集体の割合（％）の最も小さな変化は、ＨＯＬ製剤
（２０ｍＭ  ヒスチジン、２４０ｍＭ  グリセロール、０．０４％（ｗ／ｖ）  ポリソル
ベート８０、ｐＨ６）において認められた。
【０１５５】
上に説明するとおりに実施した加速安定性試験はまた、凝集体を検出するために紫外吸
光度によって監視した。紫外分光光度計を使用して、１ｃｍの経路長の紫外可視分光光度
計において、上に記載するＨＣＮ、ＨＯＬ、ＰＣＮ、およびＰＳＴ緩衝液中１５０ｍｇ／
ｍＬの濃度のナタリズマブの溶液に対して、３４０ｎｍでの吸光度を測定することによっ
て、撹拌前および撹拌後の凝集体の存在を監視した。
【０１５６】
撹拌前および撹拌後の種々の製剤におけるナタリズマブ（１５０ｍｇ／ｍＬ）の凝集の
紫外吸光度試験の結果は、図２に見ることができる。３４０ｎｍのより低い吸光度から明
らかなように、ヒスチジン製剤（ＨＯＬおよびＨＣＮ）は、これらの条件下で、最も安定
しており、より少ない凝集を示した。４０℃で１ヶ月間保存した後、不溶性の沈殿物がリ
ン酸製剤に認められたが、ヒスチジン製剤には認められなかった。
【０１５７】
表４は、２０ｍｇ／ｍＬおよび１５０ｍｇ／ｍＬ製剤の安定性属性を比較するものであ
る。この結果は、２０ｍｇ／ｍＬおよび１５０ｍｇ／ｍＬ製剤が同様に安定していること
を示す。
【表６】
2014040424.tif 000007
【０１５８】
実施例３．ポリソルベート８０は、ナタリズマブに対して可溶化効果を有する。２０ｍ
ｇ／ｍＬおよび１５０ｍｇ／ｍＬのナタリズマブにおけるポリソルベート８０レベルの可
溶化効果を調査した。ポリソルベート８０を種々の濃度（ｗ／ｖ）で、ＨＯＬ緩衝液中２
０ｍｇ／ｍＬおよび１５０ｍｇ／ｍＬのナタリズマブに添加した。上に説明するとおり４
０℃で８週間材料を撹拌することによって、加速安定性試験を実施した。凝集率（％）を
、上の実施例に説明するとおり、ＳＥＣによって測定した。
【０１５９】
撹拌中のナタリズマブの安定性におけるポリソルベート８０レベルの効果を図３に示す
が、これは、１３５〜１６５ｍｇ／ｍＬのナタリズマブに関するデータを示している。撹
拌実験中の安定性に対する最小ポリソルベート８０レベルは、１５０ｍｇ／ｍＬのナタリ
ズマブに関しては約０．０３％（ｗ／ｖ）であり、２０ｍｇ／ｍＬのナタリズマブに関し
ては０．０２％（ｗ／ｖ）である。したがって、好ましいポリソルベート８０の濃度は、
抗体濃度に従って変化する。
【０１６０】
実施例４．異なる温度でのナタリズマブの長期保存。種々の製剤、および２〜８℃およ
び４０℃における１５０ｍｇ／ｍＬのナタリズマブの安定性を、上の実施例２に説明する
とおり、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、凝集の割合（％）を測定することに
よって評価を行った。ナタリズマブ（１５０ｍｇ／ｍＬ）は、上の実施例２に説明すると
おり、ＨＣＮ、ＨＯＬ、ＰＣＮ、またはＰＳＴ緩衝液内のいずれかであった。４０℃で保
存したナタリズマブに関するデータを５ヶ月にわたり収集し、２〜８℃で保存したナタリ
ズマブのデータを２４ヶ月にわたって収集した。
【０１６１】
４０℃での保存に対するナタリズマブ（１５０ｍｇ／ｍＬ）の種々の製剤の安定性効果
の結果は図４に示し、２〜８℃での保存に対する結果は図５に示す。１５０ｍｇ／ｍＬの
濃度では、ＰＳＴ製剤（２０ｍＭ  リン酸、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０２％（ｗ／ｖ
）  ポリソルベート８０、ｐＨ６）中のナタリズマブは、４０℃で凝集が最も少なかった
。抗体を２〜８℃で２４ヶ月間保存した際、凝集における有意な差異は認められなかった
。これらのデータは、ＰＳＴ製剤中の高濃度のナタリズマブが特に安定していることを示
した。
【０１６２】
実施例５．リン酸製剤において還元されるナタリズマブのメチオニン酸化  メチオニン
残基がナタリズマブ（１５０ｍｇ／ｍｌ）の種々の製剤において酸化する傾向、および遊
離メチオニン（１０ｍＭ）の保護効果を、ｅｎｄｏＬｙｓＣペプチドマップのＵＶ−ＨＰ
ＬＣ特性化によって試験した。ナタリズマブ（１５０ｍｇ／ｍＬ）を、２〜８℃および４
０℃で最長２４ヶ月間、ヒスチジンおよびリン酸製剤（実施例２に記載のＨＯＬ、ＨＣＮ
、ＰＳＴ、およびＰＣＮ）内で保存した。酸化メチオニンの割合（％）で表される結果を
、図６に示す。リン酸製剤に関しては、１５０ｍｇ／ｍＬでのナタリズマブにおけるメチ
オニンの酸化は、ヒスチジン製剤と比較して、両温度範囲において低速度で有意に還元お
よび発生した。
【０１６３】
４０℃で６ヶ月にわたって保存したナタリズマブ（１５０ｍｇ／ｍＬ）に対し、メチオ
ニンを含まない製剤と比較して、ＨＯＬ等のヒスチジン製剤における過剰遊離メチオニン
（Ｌ−ｍｅｔ）の抗酸化効果が見られた（図７）。メチオニン酸化の割合（％）は、上に
説明するとおりに定量化した。したがって、リン酸緩衝液中の１５０ｍｇ／ｍＬのナタリ
ズマブを製剤化することがメチオニン酸化に対してより保護的であり、１５０ｍｇ／ｍＬ
での安定性に必要な賦形剤の数を低減させた。
【０１６４】
実施例６．リン酸緩衝液を上回る、ヒスチジン緩衝剤中のフラグメント化の速度。種々
の製剤（ＨＯＬ：２０ｍＭ  ヒスチジン、２４０ｍＭ  グリセロール、０．０４％（ｗ／
ｖ）  ポリソルベート８０、ｐＨ６、およびＰＳＴ：２０ｍＭ  リン酸、１４０ｍＭ  Ｎ
ａＣｌ、０．０２％（ｗ／ｖ）  ポリソルベート８０、ｐＨ６）中のナタリズマブ（２０
ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、および１５０ｍｇ／ｍＬ）のフラグメン
ト化の速度を８週間経時的に比較した。フラグメント化は、非還元ＧｅｌＣｈｉｐキャピ
ラリー電気泳動によって、半抗体の割合（％）を測定することにより定量化した。
【０１６５】
４つの異なる濃度（２０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、および１５０
ｍｇ／ｍＬ）、ならびに２つの異なる製剤（ＨＯＬ：２０ｍＭ  ヒスチジン、２４０ｍＭ
グリセロール、０．０４％（ｗ／ｖ）  ポリソルベート８０、ｐＨ６、およびＰＳＴ：
２０ｍＭ  リン酸、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０２％（ｗ／ｖ）  ポリソルベート８０
、ｐＨ６）において、ナタリズマブに関して経時的に半抗体の割合（％）を測定した、フ
ラグメント化試験の結果を、図８に示す。ヒンジ開裂速度は、ヒスチジン製剤よりもリン
酸で低い。ヒスチジン製剤環境は、リン酸製剤環境よりも還元する（酸化還元電位に基づ
く）。
【０１６６】
実施例７．皮下もしくは筋肉内投与に好適なナタリズマブの例示的な製剤。
上の実験を踏まえて、リン酸ベースの製剤は、皮下または筋肉内投与に好適な高度に濃
縮されたナタリズマブ組成物に最適であることが判定された。該組成物はまた、静脈内投
与のために希釈および使用することができる。上の実験は、ナタリズマブが、ＰＳＴおよ
びＰＣＮ等のリン酸製剤中で保存され、次いでヒスチジン製剤、ＨＯＬおよびＨＣＮ中で
保存された際、酸化しにくいことを示した。したがって、遊離メチオニンは、通常、ナタ
リズマブの酸化の防止には、リン酸製剤中で必要ではない（実施例５を参照）。リン酸製
剤ＰＳＴ中でのナタリズマブのフラグメント化の速度もまた、ヒスチジン製剤ＨＯＬ中よ
りも低いことが認められた（実施例６を参照）。長期安定性は、ヒスチジン製剤ＨＯＬお
よびＨＣＮよりも、リン酸製剤ＰＳＴおよびＰＣＮの方が良好であった。
【０１６７】
一部の実施形態において、以下に提供する製剤の成分のそれぞれは、１０％変動し得る
。
【０１６８】
実施例８．
例示的な製剤
１５０ｍｇ／ｍＬ  ナタリズマブ
１０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液
１４０ｍＭ  塩化ナトリウム
０．０４％（ｗ／ｖ）  ポリソルベート８０
ｐＨ６．０±０．５に調整されたｐＨ
【０１６９】
実施例９．
例示的な製剤
１５０ｍｇ／ｍＬ  ナタリズマブ
１０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液
２７５ｍＭ  グリセロール
０．０４％（ｗ／ｖ）  ポリソルベート８０
ｐＨ６．０±０．５に調整されたｐＨ
【０１７０】
実施例１０．
例示的な製剤
１５０ｍｇ／ｍＬ  ナタリズマブ
１０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液
１６０ｍＭ  Ｌ−アルギニン塩酸塩
０．０４％（ｗ／ｖ）  ポリソルベート８０
ｐＨ６．０±０．５に調整されたｐＨ
【０１７１】
実施例１１．
例示的な製剤
１５０ｍｇ／ｍＬ  ナタリズマブ
１０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液
９％（ｗ／ｖ）  スクロース
０．０４％（ｗ／ｖ）  ポリソルベート８０
ｐＨ６．０±０．５に調整されたｐＨ
【０１７２】
実施例１２．
例示的な製剤
１５０ｍｇ／ｍＬ  ナタリズマブ
１０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液
９％（ｗ／ｖ）  ソルビトール
０．０４％（ｗ／ｖ）  ポリソルベート８０
ｐＨ６．０±０．５に調整されたｐＨ 
【０１７３】
実施例１３．
例示的な製剤
１５０ｍｇ／ｍＬ  ナタリズマブ
２０ｍＭ  Ｌヒスチジン
２４０ｍＭ  グリセロール
１０ｍＭ  Ｌメチオニン
０．０４％（ｗ／ｖ）  ポリソルベート８０
ｐＨ６．０±０．５に調整されたｐＨ 
【０１７４】
実施例１４．
例示的な製剤
１５０ｍｇ／ｍＬ  ナタリズマブ
２０ｍＭ  Ｌヒスチジン
２４０ｍＭ  グリセロール
０．０４％（ｗ／ｖ）  ポリソルベート８０
ｐＨ６．０±０．５に調整されたｐＨ 
【０１７５】
実施例１５．安定性データ。
実施例８として上に提供する製剤を、固定針シリンジで保存し、安定性データを種
々の時点で測定した。これらのデータは、以下の表に要約されており、製剤が、５℃でシ
リンジに保存した際、少なくとも１８から２４ヶ月安定していることを示す。
【０１７６】
製剤
１５０ｍｇ／ｍＬ  ナタリズマブ
１０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液
１４０ｍＭ  塩化ナトリウム
０．０４％（ｗ／ｖ）  ポリソルベート８０
ｐＨ６．０±０．５に調整されたｐＨ 
【０１７７】
【表７】
2014040424.tif 000008
【０１７８】
【表８】
2014040424.tif 000009
【０１７９】
【表９】
2014040424.tif 000010
【０１８０】
【表１０】
2014040424.tif 000011
【０１８１】
本発明の多くの実施形態を説明した。それでもなお、本発明の精神および範囲から逸脱
することなく、種々の修正を行うことができることを理解されよう。したがって、他の実
施形態も以下の請求項の範囲内である。
【図１】
2014040424.tif 000012
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2014040424.tif 000016
【図６】
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【図７】
2014040424.tif 000018
【図８】
2014040424.tif 000019
【配列表】
2014040424000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成25年9月4日(2013.9.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
約１２０から約１９０ｍｇ／ｍＬの濃度のＶＬＡ−４結合抗体を含む水性医薬組成物であって、グリセロールと、約ｐＨ５から約ｐＨ７を有するリン酸緩衝液とをさらに含む、水性医薬組成物。
【手続補正書】
【提出日】平成25年12月20日(2013.12.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１２０ｍｇ／ｍＬ〜１９０ｍｇ／ｍＬの濃度のＶＬＡ−４結合抗体を含む、医薬組成物。
【請求項２】
前記ＶＬＡ−４結合抗体が、ナタリズマブ又はナタリズマブの変異体であり、ここで、該変異体が、軽鎖可変領域の配列及び重鎖可変領域の配列を有し、該変異体の軽鎖可変領域の配列又は重鎖可変領域の配列のいずれか或いは軽鎖可変領域の配列と重鎖可変領域の配列との両方が、ナタリズマブの対応する配列とは少なくとも１つのアミノ酸が異なり、該変異体の軽鎖可変領域の配列が、ナタリズマブの軽鎖可変領域とは６つ以下のアミノ酸残基が異なり、該変異体の重鎖可変領域の配列が、ナタリズマブの重鎖可変領域とは６つ以下のアミノ酸残基が異なる、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
１４０ｍｇ／ｍＬ〜１６０ｍｇ／ｍＬの前記抗体を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
５ｍＭ〜３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液を含み、ｐＨが約６±０．５である、請求項1記載の組成物。
【請求項５】
リン酸一ナトリウム一水和物又はリン酸二ナトリウム七水和物、或いは両方を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項６】
約０．０１％（Ｗ／Ｖ）〜約０．１％（Ｗ／Ｖ）のポリソルベート８０を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項７】
周囲温度において５ｃＰ〜３０ｃＰの動的粘度を有する、請求項１記載の組成物。
【請求項８】
１００ｍＭ〜２００ｍＭの濃度の塩を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項９】
約２℃〜約８℃の温度で、少なくとも１２ヶ月間安定である、請求項１記載の組成物。
【請求項１０】
皮下又は筋肉内投与に好適である、請求項１記載の組成物。
【請求項１１】
炎症性疾患、免疫疾患、又は自己免疫疾患の治療に使用するための、請求項１記載の組成物。
【請求項１２】
前記炎症性疾患が、多発性硬化症、喘息、関節疾患、糖尿病、線維性疾患、又は炎症性腸疾患である、請求項１１記載の組成物。
【請求項１３】
皮下送達のための１３５ｍｇ〜１６５ｍｇのナタリズマブを含む約１ｍＬの水性組成物の単位用量を含む、プレフィルシリンジ。
【請求項１４】
リン酸緩衝液中の約１２０ｍｇ／ｍＬ〜１９０ｍｇ／ｍＬのナタリズマブとポリソルベートとを含む水性組成物を調製する方法であって、
（i）該ナタリズマブを細胞培養で発現させるステップと、
（ii）該ナタリズマブに少なくとも１回のクロマトグラフィー精製ステップを行うステップと、
（iii）該抗体に少なくとも２回のリン酸緩衝液中での限外濾過／ダイアフィルトレーションステップを行うステップと、
（iv）該ナタリズマブに少なくとも１回のリン酸緩衝液中での限外濾過ステップを行うステップと、
（v）該ナタリズマブの濃度を約１２０ｍｇ／ｍＬ〜１９０ｍｇ／ｍＬに調整するステップと、
を含む、前記方法。
【請求項１５】
１５０ｍｇ／ｍＬの濃度におけるナタリズマブ、１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、１４０ｍＭの塩化ナトリウム、及び０．０４％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含む医薬組成物であって、ここで、該組成物が６±０．５のｐＨを有する、前記組成物。
【外国語明細書】
2014040424000001.pdf