(57)【要約】【課題】アピオスに含まれるイソフラボン配糖体の化学構造及び生理活性作用を明らかにし、該生理活性作用を利用するアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物を提供すること。【解決手段】アピオスから収穫したイモから6種類のイソフラボン配糖体を単離・精製し、同定した。次に、これら6化合物について、AR結合活性、ER結合活性及びARアゴニスト作用を検討した結果、いずれもARのアゴニストとして働くことを見出した。この知見を基にして、イソフラボン配糖体を含むアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物を提供した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）のイソフラボン配糖体、その塩、それらの溶媒和物、又は、それらの水和物を有効成分として含むアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物。
【化１】
2014118367.tif 000010
（式中、R1、R2、R3及びR4は、各々独立して、ヒドロキシル基、水素原子、メトキシ基、エトキシ基、プロキシ基、メチル基、エチル基又はプロピル基であり、R5は、下記式ＩＩで表され、
【化２】
2014118367.tif 000011
式中R6、R7及びR8は、各々独立して、ヒドロキシル基、水素原子、メチル基、エチル基又はプロピル基であり、R9はヒドロキシル基又は下記式ＩＩＩで表され、
【化３】
2014118367.tif 000012
式中R10、R11、R12及びR13は、各々独立して、ヒドロキシル基、水素原子、メチル基、エチル基又はプロピル基である。）
【請求項２】
前記イソフラボン配糖体は、以下のいずれか1以上である請求項１に記載のアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物。
（１）3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
（２）3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-ヒドロキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-((((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)メチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
（３）3-(4-ヒドロキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
（４）3-(4-ヒドロキシ-3-メトキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
（５）3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-ヒドロキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
（６）5-ヒドロキシ-3-(4-ヒドロキシフェニル)-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-((((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)メチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
【請求項３】
請求項１又は２に記載のアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物を含む、前立腺がん、前立腺肥大、ニキビ、禿げ、及び／又は薄毛の予防・治療のための治療剤又は食品。
【請求項４】
以下のイソフラボン配糖体。
（１）3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
（２）3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-ヒドロキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-((((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)メチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
（３）3-(4-ヒドロキシ-3-メトキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アピオス（ホドイモ）から抽出したイソフラボン配糖体、該イソフラボン配糖体を含むアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
（アピオス）
アピオス（Apios americana Medik）は、マメ科アピオス属の多年草で、ホドイモ（塊芋）又はアメリカホドイモ（英語ではgroundnut）とも呼ばれており、北アメリカの東部から中部に分布している。湿り気のある薮に生え、つる性で3 mほどまで伸びて、3〜5 cmほどの塊茎を数珠状につける。アメリカンインディアン（ネイティブアメリカン）は、伝統的に、該塊茎を滋養性の高い食品として利用してきた。日本には、明治時代の中頃に、アメリカから輸入されたリンゴの苗木とともに種が混入する形で入ってきたと言われている。りんごの産地青森県では、昔から、嫁ぐ娘に「産後の肥立ち」にとアピオスを数粒持って行かせたと伝えられている。アピオスは、ジャガイモと比べて、カルシウムが30倍、鉄分が4倍、タンパク質が3倍及び食物繊維が5倍であり、さらに、リン、ナトリウム、カリウムといったミネラルも多く含んでいる（参照：http://gte.serio.jp/apios.html）。100 g総エネルギーは、従来のイモ類の中では最高であり（サツマイモの1.6倍、ジャガイモの2.6倍）、他のイモ類には含まれないビタミンEが含まれている。
加えて、アピオス塊茎（食用）は「にんにくの里」（http://gte.serio.jp/）等から購入することができる。
【０００３】
アピオスは栄養価が高いため、1日3〜4粒摂取することで十分に栄養を摂取できると言われており、健康に有益な食用農作物として注目を集めている。
しかし、アピオスは食用イモとしては認知度が低いこともあり、アピオスに薬理活性を有する低分子化合物が含有されているという報告はなかった。しかし、最近、アピオスから2種類のイソフラボン（isoflavone）配糖体が同定された（参照：非特許文献1）。
該非特許文献１は、「主要成分として、ゲニステイン（genistein）の7位の水酸基にグルコースが２つ付いたイソフラボン配糖体」を開示している。しかしながら、該非特許文献１は、これらイソフラボン配糖体の薬理活性を評価するための試験結果は開示しておらず、わずかに、DPPH（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl）ラジカルの補足作用があることのみが開示されている。
【０００４】
（イソフラボン）
イソフラボンを始めとするフラボノイドが抗酸化物質として、ラジカルの補足作用を持つことはよく知られている。これらイソフラボン配糖体のアグリコンであるゲニステインは、ダイゼイン（daidzein）と共にダイズに含まれるイソフラボンとして有名な化合物である。ゲニステインとダイゼインは女性ホルモンの1つであるエステロゲン（estrogen）と構造が類似していることから、エストロゲン受容体（Estrogen Receptor : ER）に結合することにより、アゴニストとして作用することが知られている。さらに、これらの物質は、すでに、骨粗鬆症、更年期障害といった女性の疾病の予防・治療に薬理作用のある生理活性物質として利用されている。なお、ゲニステインが、前立腺がん（癌）（prostate cancer）も含めて幾つかのがんの増殖を、関連経路の調節を通して阻害することを示唆する報告も存在している。
【０００５】
（前立腺がん）
近年、罹患率が急上昇しているがんの1つに前立腺がんがある。様々ながんで加齢がリスク要因であるが、前立腺がんは、この傾向はとりわけ顕著であり、日本において全患者の8割以上が65歳を超える患者となっている。前立腺がんは、他のがんと比べて、進行が比較的遅く、さらに初期にはほとんど症状が現れないため、年齢を重ねるごとに発見率が上昇していくことが起因している。前立腺がんが急増傾向にあるもう1つの原因として食生活の欧米化が挙げられる。前立腺がんの国内男性での発症率は胃がん、大腸がん、肺がんに続いて第4位であるが、欧米人男性の中では前立腺がんが圧倒的に1位である。この発症率の違いに関与する環境因子について、これまで数多くの疫学的研究が行われた結果、欧米の食事の特徴である高カロリー・高脂肪が前立腺がんの発症リスクを高めることがわかってきた。このことから、近年の国内食生活の欧米化が前立腺がんの発症率を高めていると考えられており、2020年には国内の罹患率が肺がんに続いて2位になると予想されている。このように、高齢化社会化・食生活の欧米化が加速するにつれて、今後ますます前立腺がんの患者数の増加が予想されており、有効な治療方法の確立が現在急務となっている。
【０００６】
前立腺がんの悪性化には男性ホルモンの受容体であるアンドロゲン受容体（Androgen Receptor: AR）が深く関与している。ARはステロイドホルモン受容体の一つで核内受容体スーパーファミリーに属する転写因子であり、ARによって発現誘導される様々な下流遺伝子によって前立腺の成長（または肥大）や前立腺がんの悪性化が引き起こされる。ARタンパク質は主に4つの機能ドメインからなっている。ARのN末端は可変領域（Activate Function1 : AF1）を含むN末端ドメイン（N-TerminalDomain : NTD）であり，AF1の構造によってARの転写活性が制御されている（非特許文献2）。ARの中央にはDNA結合ドメイン（DNA-Binding Domain:DBD）があり、ARが転写を活性化する際の二量体化（非特許文献3）や、DNA上のアンドロゲン応答配列（AndrogenResponseElements: AREs）に結合する役割を担っている。C末端はリガンド結合部位（Ligand-BindingDomain: LBD）であり、ここにアンドロゲンが結合することでARは構造変化を起こす。また、LBDには2つ目の可変領域（AF2）が含まれ、ARのリガンド依存的な転写活性・転写抑制に深く関与している（非特許文献4）。DBDとLBDの間にはhingeregionと呼ばれる領域があり、核内移行配列（Nuclear Localization Signal: NLS）を含む重要な領域である。このようなARタンパク質の構造は種を超えて保存されており、さらには他のステロイドホルモン受容体であるエストロゲン受容体（ER）やプロゲステロン受容体（Progesteron Receptor: PR）。糖質コルチコイド受容体（Glucocorticoid Receptor: GR）とも類似性を示すことがわかっている（非特許文献5）。
通常、ARは分子シャペロンである熱ショックタンパク質70（Heat ShockProtein 70: HSP70）やHSP90と結合した状態で細胞質に局在している。ここにリガンドであるアンドロゲンが結合するとARはリン酸化を受け（非特許文献6）、可変領域AF2に構造変化を起こしてHSPから離れ、核内に移行する（非特許文献7）。核内移行したARは二量体化してDNA上のAREsに結合し、SRC-1やCBP、ARAs等のコアクチベーターと相互作用することで下流遺伝子の転写を活性化している（非特許文献3）。多くの遺伝子がARの標的として同定されており、前立腺がんマーカーとして検査に用いられている前立腺特異抗原（Prostate SpecificAntigen: PSA）や増殖因子であるInsulin-likeGrowth Factor I（IGF-1）の発現が確認されている（非特許文献8）。また、ARタンパク質自身もpositive feedbackの結果として発現上昇することがわかっている（非特許文献9）。
【０００７】
ARのリガンドである体内循環型アンドロゲンとして、テストステロン（testosterone）がある。通常、テストステロンはアルブミンや性ホルモン結合グロブリン（Sex-Hormone-Binding Globulin: SHBG）と結合して血中に含まれているが、前立腺細胞に入るとその90%が5α還元酵素（5α-reductase）によってdihydrotestosterone（DHT）へと変換される（非特許文献10）。DHTはARとの結合親和性が非常に高く、前立腺の成長を担っているが、同時に前立腺がんの無秩序な細胞増殖もDHTがARに結合することによって引き起されている。
【０００８】
現在、前立腺がんの治療には4つの方法が採択されている。すなわち、外科治療、放射線治療、内分泌療法（ホルモン療法）、化学療法の中から進行度によって適切な治療法が選択されている。この中で、最も基本的で多くの前立腺がん患者において有効とされているのが内分泌療法である。上述した通り、前立腺がんは男性ホルモンであるDHTがARに結合することによって進行する。そこで、DHTの代わりにARに結合し、その機能を阻害する抗アンドロゲン剤（アンドロゲン受容体結合組成物、アンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物）が内分泌療法に用いられるようになった。抗アンドロゲン剤はAR（またはアンドロゲン）のアンタゴニストとも呼ばれており、他の3つの治療法とも併用しやすいことから前立腺がん治療の中心を担っている。しかし、内分泌療法は治療を開始して2〜4年経つと、患者の半数以上で治療効果がなくなり、再びがん細胞が増殖するようになるという問題がある。これが再燃性前立腺がんである（非特許文献11、12）。再燃性前立腺がんの耐性獲得機構には、ARの過剰発現（非特許文献11）、転写制御因子の変化（非特許文献13、14）、キナーゼ経路の変化（非特許文献15、16）が報告されており、より複雑なシグナル伝達経路により薬剤耐性を獲得している。そこで、このような再燃性前立腺がんが発症した患者に対して、当初使っていた抗アンドロゲン剤を別の抗アンドロゲン剤に変更するホルモン交替療法（hormone replacement therapy）が処置されるようになった（非特許文献17）。再燃性を示した前立腺がん患者の約半数は、この治療によりPSA値が再び下がり、QOLの改善や良好な期間の延長が得られると言われている。しかし、既存のアンドロゲンアンタゴニスト製剤には、bicalutamide（Casodex；AstraZeneca）、flutamide（odyne；日本化薬）、chlormadinone acetateprostarl（Prostal；あすか製薬）の3種類しかなく、薬剤の選択肢が限られてしまっている。さらに、これらの薬剤の骨格に注目すると、どの化合物もフルタミド骨格やステロイド骨格を有している。ARによる転写の活性化は結合するリガンドの構造に依存するという報告があることから（非特許文献18）、既存薬が有するフルタミド骨格やステロイド骨格を持たないARアンタゴニストが取得できれば、再燃性前立腺がんの治療効果を高めることができると期待されている。
【０００９】
（先行技術文献）
特表2005-510503（特許文献１）は、｛イソフラボン誘導体（参照：段落００６０）が、「男性又は女性における異常なエストロゲン／アンドロゲンバランスあるいは前記の異常なバランスに起因するコンディションを治療、改善、防御、予防、及び／又は防止するための使用（参照：請求項９）」｝を開示している。
しかし、特許文献１に開示されているイソフラボン誘導体の構造は、イソフラボンの6位に水酸基が付いた構造であり、さらに、糖が付加されていない構造である。これは、本発明に関するイソフラボン配糖体の構造とはまったく異なる。さらに、特許文献１は、イソフラボン誘導体がアンドロゲンバランスの効果があることを示す実施例がまったく存在しない。
【００１０】
以上により、ゲニステインまたはその配糖体だけでなく、イソフラボンに属する化合物（配糖体も含む）が男性ホルモンのアンドロゲンの受容体に作用するという報告はこれまで存在していない。
さらに、上記で記載したように、既存薬が有するフルタミド骨格やステロイド骨格を持たないARアンタゴニストによる再燃性前立腺がんの治療剤の開発が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特表2005-510503
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Nara,K, Nihei, K, Ogasawara, Y, Koga, H, KatoY. Novel isoflavonediglycoside ingroundnut (Apios americana Medik).Food Chem 124:703-710(2011)
【非特許文献２】Alen, P, Claessens,F, Verhoeven, G, Rombauts,W, Peeters, B. Theandrogen receptor amino-terminaldomain plays a key role in p160coactivator-stimulatedgene transcription. Mol Cell Biol19:6085-6097 (1999)
【非特許文献３】Claessens, F, Verrijdt,G, Schoenmakers, E, Haelens,A, Peeters, B,Verhoeven,G, Rombauts, W. Selective DNA binding by the androgenreceptor as amechanism for hormone-specific gene regulation. J Steroid Biochem MolBiol76(1):23-30 (2001)
【非特許文献４】Dehm, SM, Tindall, DJ. Ligand-independentandrogen receptor activityis activation function-2-independent and resistantto antiandrogens in androgenrefractory prostatecancer cells. J Biol Chem 281:27882-27893 (2006).
【非特許文献５】Chang, C,Saltzman, A, Yeh, S, Young, W, Keller, E, Lee, HJ,Wang, C,Mizokami, A. Androgen receptor: an overview.Crit Rev Eukaryot Gene Expr5:97-125(1995)
【非特許文献６】Gioeli, D, Ficarro, SB, Kwiek, JJ, Aaronson, D, Hancock, M,Catling,AD, White, FM, Christian, RE, Settlage, RE, Shabanowitz, J, Hunt, DF,Weber, MJ. Androgen receptorphosphorylation. Regulation and identification ofthe phosphorylation sites. J Biol Chem 277(32):29304-29314 (2002)
【非特許文献７】Marcelli, M, Stenoien, DL, Szafran, AT, Simeoni, S, Agoulnik, IU,Weigel, NL, Moran,T, Mikic, I, Price, JH, Mancini, MA. Quantifyingeffects ofligands on androgen receptor nuclear translocation, intranuclear dynamics, andsolubility. J Cell Biochem 98(4):770-788(2006)
【非特許文献８】Pandini, G, Mineo, R, Frasca, F, Roberts, Marcelli, M, Vigneri, R,Belfiore, A.Androgens up-regulate the insulin-like growth factor-I receptor inprostatecancer cells. Cancer Res 65:1849-57(2005).
【非特許文献９】Niu, Y, Altuwaijri, S, Lai, KP,Wu, CT, Ricke, WA, Messing, EM, Yao,J, Yeh, S, Chang, C. Androgen receptor is a tumor suppressorand proliferator inprostate cancer. Proc Natl Acad SciUSA 105(34):12182-12187 (2008).
【非特許文献１０】Wright, AS,Douglas, RC, Thomas, LN, Lazier, CB, Rittmaster, RS. Androgen-induced regrowth in thecastrated rat ventral prostate: role of5α-reductase.Endocrinology 140:4509-4515 (1999)
【非特許文献１１】Chen, CD, Welsbie, DS, Tran, C, Baek, SH,Chen, R, Vessella, R,Rosenfeld, MG, Sawyers, CL.Molecular determinants of resistance toantiandrogentherapy. Nat Med 10(1):33-39 (2004)
【非特許文献１２】Shi, XB,Ma, AH, Xia, L, Kung, HJ, de Vere White, RW.Functionalanalysis of 44 mutant androgen receptors from human prostate cancer.Cancer Res62(5):1496-1502 (2002)
【非特許文献１３】Zhu, P, Baek, SH, Bourk, EM, Ohgi, KA, Garcia-Bassets, I, Sanjo,H,Akira, S, Kotol, PF, Glass, CK, Rosenfeld, MG,Rose, DW. Macrophage/cancer cellinteractions mediate hormone resistance by anuclear receptor derepressionpathway. Cell 124(3):615-629 (2006)
【非特許文献１４】Hodgson,MC, Astapova, I, Hollenberg,AN, Balk, SP. Activity ofandrogen receptor antagonist bicalutamidein prostate cancer cells isindependent of NCoR andSMRT corepressors. Cancer Res 67(17):8388-8395 (2007)
【非特許文献１５】Feldman,BJ, Feldman, D. The development of androgen-independentprostate cancer. NatRev Cancer 1(1):34-45 (2001)
【非特許文献１６】Ueda, T, Bruchovsky, N, Sadar, MD.Activation of the androgenreceptor N-terminal domain by interleukin-6 via MAPKand STAT3 signaltransduction pathways. J Biol Chem 277(9):7076-7085(2002)
【非特許文献１７】Lam, JS, Leppert, JT, Vemulapalli, SN, Shvarts, O, Belldegrun,AS.Secondary hormonal therapy for advanced prostate cancer. J Urol175(1):27-34(2006)
【非特許文献１８】Chang, CY, McDonnell, DP. Evaluation of ligand-dependentchanges inAR structure using peptide probes. Mol Endocrinol 16:647-660(2002)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、アピオスに含まれるイソフラボン配糖体の化学構造及び生理活性作用を明らかにし、該生理活性作用を利用するアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、上記課題を解決するために、鋭意研究を行った。
まず、アピオスを栽培し、収穫したイモから、6種類のイソフラボン配糖体を単離・精製し、同定した。
次に、これら6化合物について、AR結合活性及びER結合活性を検討した結果、驚くべきことに、これらはいずれもARに特異的に結合することを見出した。さらに、これら6種類のイソフラボン配糖体がARのアゴニスト（agonist）として働くことを見出した。
これにより、ARのアンタゴニストには、前述したように、前立腺肥大や前立腺がんの予防・治療効果があるため、単離・同定したイソフラボン配糖体を有効成分として含むアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物を完成した。
【００１５】
本発明は以下の通りである。
１．下記式（Ｉ）のイソフラボン配糖体、その塩、それらの溶媒和物、又は、それらの水和物を有効成分として含むアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物。
【化１】
2014118367.tif 000002
（式中、R1、R2、R3及びR4は、各々独立して、ヒドロキシル基、水素原子、メトキシ基、エトキシ基、プロキシ基、メチル基、エチル基又はプロピル基であり、R5は、下記式ＩＩで表され、
【化２】
2014118367.tif 000003
式中R6、R7及びR8は、各々独立して、ヒドロキシル基、水素原子、メチル基、エチル基又はプロピル基であり、R9はヒドロキシル基又は下記式ＩＩＩで表され、
【化３】
2014118367.tif 000004
式中R10、R11、R12及びR13は、各々独立して、ヒドロキシル基、水素原子、メチル基、エチル基又はプロピル基である。）
２．前記イソフラボン配糖体は、以下のいずれか1以上である前項１に記載のアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物。
（１）3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
（２）3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-ヒドロキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-((((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)メチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
（３）3-(4-ヒドロキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
（４）3-(4-ヒドロキシ-3-メトキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
（５）3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-ヒドロキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
（６）5-ヒドロキシ-3-(4-ヒドロキシフェニル)-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-((((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)メチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
３．前項１又は２に記載のアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物を含む、前立腺がん、前立腺肥大、ニキビ、禿げ、及び／又は薄毛の予防・治療のための治療剤又は食品。
４．以下のイソフラボン配糖体。
（１）3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
（２）3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-ヒドロキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-((((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)メチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
（３）3-(4-ヒドロキシ-3-メトキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
【発明の効果】
【００１６】
アピオスに含まれる6種類のイソフラボン配糖体の化学構造を明らかにし、それらをアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物として提供することができた。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】フラボン（flavone）とイソフラボン（isoflavone）の化学構造を表す図。
【図２】アピオスのイモ（塊茎）から抽出、単離、同定された6種類のイソフラボン配糖体を表す図。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下に、本発明を詳細に説明する。
【００１９】
（フラボノイドとイソフラボン）
フラボノイド（flavonoid）は、フェニルクロマン（phenylchroman；C6-C3-C6）骨格を基本構造に持つ芳香族化合物である。フラボノイドは、カロテノイドと並んで、植物色素の重要な一群である。フラボノイドの中で代表的な骨格構造としてフラボン（flavone）がある（参照：図１）。
一方、同様の代表骨格構造としてB環のフェニル基がC環の3位に結合したものが、イソフラボン（isoflavone）である（参照：図１）。ゲニステイン（genistein：図１におけるisoflavoneの5,7,4’位に水酸基）、ダイゼイン（daidzein：図１におけるisoflavoneの7,4’位に水酸基）、及びフォルモノネチン（formononetin：図１におけるisoflavoneの7位に水酸基, 4’位にメトキシ基）は、マメ科植物のダイズに含まれるイソフラボンである。
これらのイソフラボンは、女性ホルモンのエストロゲン作用を示すこと、すなわち、エストロゲン受容体のアゴニストであることが知られている。大豆消費量の多い都道府県ほど、大腸がん、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん等による死亡率が低いことから、ゲニステイン、ダイゼインまたはフォルモノネチンのがん予防効果が期待されている。また、これらのイソフラボンの摂取量と骨密度は正の相関が認められ、骨粗鬆症の予防が期待されている。このように、イソフラボンが女性ホルモンのエストロゲン受容体に作用することはよく知られていたが、イソフラボン、特にイソフラボン配糖体が男性ホルモンのアンドロゲン受容体に作用するという報告は全くなかった。
【００２０】
（本発明のイソフラボン配糖体）
本発明のイソフラボン配糖体の構造は下記式（Ｉ）で表される。
【化４】
2014118367.tif 000005
上記、式中、R1 、R2 、R3 及びR4は、各々独立して、ヒドロキシル基、水素原子、メトキシ基、エトキシ基、プロキシ基、メチル基、エチル基又はプロピル基であり、R5は、下記式ＩＩで表され、
【化５】
2014118367.tif 000006
上記式中R6、R7及びR8は、各々独立して、ヒドロキシル基、水素原子、メチル基、エチル基又はプロピル基であり、R9はヒドロキシル基又は下記式ＩＩＩで表され、
【化６】
2014118367.tif 000007
上記式中R10、R11、R12及びR13は、各々独立して、ヒドロキシル基、水素原子、メチル基、エチル基又はプロピル基である。
また、上記式（Ｉ）の化合物又はその塩において、異性体（例えば、光学異性体、幾何異性体及び互変異性体等）が存在する場合、本発明は、それらの異性体を包含し、また、溶媒和物、水和物及び種々の形状の結晶を包含するものである。
【００２１】
なお、好ましい、本発明のイソフラボン配糖体の例示は、以下の通りである（参照：図１）。
5-メトキシ-2'-ヒドロキシ-ダイゼイン-7-O-グルコシド（１）｛IUPAC名称：3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン｝
2'-ヒドロキシ-ゲニステイン-7-O-ゲンチビオシド（２）｛IUPAC名称：3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-ヒドロキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-((((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)メチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン｝
5-メトキシ-ダイゼイン-7-O-グルコシド（３）｛IUPAC名称：3-(4-ヒドロキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン｝
5,3'-ジメトキシ-ダイゼイン-7-O-グルコシド（４）｛IUPAC名称：3-(4-ヒドロキシ-3-メトキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン｝
2'-ヒドロキシ-ゲニステイン-7-O-グルコシド（５）｛IUPAC名称：3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-ヒドロキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン｝
ゲニステイン-7-O-ゲンチビオシド（６）｛IUPAC名称：5-ヒドロキシ-3-(4-ヒドロキシフェニル)-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-((((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)メチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン｝
【００２２】
（本発明のイソフラボン配糖体の塩）
本発明のイソフラボン配糖体の塩としては、通常知られているアミノ基等の部分が塩酸、硫酸、硝酸及び燐酸等の無機酸の塩、トリフルオロ酢酸等の有機カルボン酸の塩、ベンゼンスルボン酸及びメタンスルホン酸等の有機スルホン酸の塩となったもの、並びにカルボン酸部分がナトリウム、カリウム、カルシウム等の金属塩、アンモニア、トリエチルアミン等の有機塩基の塩となった化合物が挙げられるが特に限定されない。
【００２３】
（本発明のイソフラボン配糖体の溶媒和物、水和物）
本発明のイソフラボン配糖体の溶媒和物としては、メタノール、エタノール、プロパノール、アセトン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ベンゼン等が付加した有機溶媒和物が挙げられるが特に限定されない。
また、本発明のイソフラボン配糖体の水和物としては、空気中の水分を吸収して生成したものも含む。
【００２４】
（本発明のアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物）
本発明のアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物は、少なくとも本発明のイソフラボン配糖体を有効成分として含む。また、該組成物は、単独又は自体公知の担体と共に治療剤、食品となし、動物及びヒトに投与することができる。
医薬組成物の剤形としては特に制限されるものではなく必要に応じて適宜選択すればよいが、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤、注射剤、坐剤等の非経口剤が挙げられ、好適には非経口剤を挙げることができる。
【００２５】
非経口剤の場合には、患者の年齢、体重、疾患の程度により異なるが、通常、成人で本発明のイソフラボン配糖体の重量として１日あたり0.1 mg〜1000 mgの静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射が適当である。この非経口投与剤は常法に従って製造され、希釈剤として一般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油、ゴマ油、ラッカセイ油、大豆油、トウモロコシ油、プロピレングリコール等を用いることができる。
経口投与の場合には、通常、成人で本発明のイソフラボン配糖体の重量として１日あたり0.1mg〜1000mgを摂取できるようなカプセル、サッシェ（sachets）、ロゼンジ（lozenges）又は錠剤等の個別の単位で、提供され、各々が、粉末又は顆粒として、水性又は非水性液体中の溶液又は懸濁液として、あるいは水中油型又は油中水型エマルションとして所定量の本発明のイソフラボン配糖体を含有し得る。
【００２６】
（本発明の前立腺がん、前立腺肥大、ニキビ、禿げ、及び／又は薄毛の予防・治療のための治療剤）
本発明のイソフラボン配糖体は、ARに特異的に結合し、さらにARアンタゴニストとしての作用を有すことを下記の実施例で確認している。
これにより、本発明のイソフラボン配糖体を含むアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物を含む薬剤は、下記の疾患に対して予防、治療効果を有する。
（１）前立腺がん
（２）前立腺肥大
（３）ニキビ（特に、大人ニキビ）
（４）禿げ（特に、男性型脱毛症）
（５）薄毛
【００２７】
（本発明の前立腺がん、前立腺肥大、及び／又はニキビの予防・治療のための食品）
本発明のイソフラボン配糖体は、食用のアピオスから抽出したことにより、医薬品への利用以外に、食品への利用が可能である。例えば、本発明のイソフラボン配糖体を含むアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物を飲食品へ添加・配合することにより前立腺がん、前立腺肥大、ニキビ、禿げ、薄毛の予防、治療効果をもった食品として利用することも可能である。
【００２８】
（本発明のイソフラボン配糖体の単離・精製）
図１に記載のイソフラボン配糖体は、アピオスのイモを裁断後、凍結乾燥し、さらに凍結乾燥品を粉末にして、有機溶媒で抽出することによって得られる。
抽出溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール等のグリコール類、酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類、エチルエーテル、プロピルエーテル、イソプロピルエーテル，テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類、塩化メチレン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素等の極性有機溶媒、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の無極性有機溶媒等を用いることができる。また、これらの溶媒を単独で又は２種以上の混合溶媒として用いることもできる。
上記方法によって抽出物を得た後、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、クロロホルム、酢酸エチル、トルエン、ヘキサン、ベンゼン等の有機溶媒を１種又は２種以上用いた溶媒分画操作によって、得られた抽出液から活性画分を分取することができる。
更に、アルミナカラムクロマトグラフィーやシリカゲルクロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等の適当な分離精製手段を１種若しくは２種以上組み合わせて精製することもできる。
【００２９】
（アンドロゲン受容体結合又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト作用をする化合物のスクリーニング方法）
本発明のイソフラボン配糖体は、AR結作用及びARアンタゴニスト作用をすることを見出した。よって、本発明のイソフラボン配糖体を出発原料又はコントロール化合物とすれば、新規のアンドロゲン受容体結合作用又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト作用をする化合物のスクリーニングを行うことができる。
【００３０】
以下に具体例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの例に限定されない。
【実施例１】
【００３１】
（アピオスから6種類のイソフラボン配糖体の単離・同定）
アピオス（ホドイモ；Apios americana Medik）の苗を日本薬草研究所（イー薬草・ドット・コム: http://www.e-yakusou.com/nae/apos.html）から購入し、石川県立大学の農場で栽培し、イモ（塊茎）1 kg以上を収穫した。
該イモの523.8 gを裁断後、凍結乾燥して、261.9 gの凍結乾燥品を得た。該凍結乾燥品をミキサーで粉末にし、2 Lのメタノール（MeOH）中、室温で30分間撹拌することにより、2回抽出した。次に、抽出液を減圧下濃縮乾固して、1.02 gの抽出液が得られた。該抽出液に、100 mLのヘキサン（hexane）を加えて5分間超音波にて洗浄し、不溶性画分を回収したところ、0.64 gの画分を得た。該画分を混合溶媒20 mL｛ジクロロメタン(CH2Cl2): MeOH : H2O = 3 : 1 : 0.1 ｝に溶解し、その可溶性画分を同溶媒で作製したシリカゲルカラムクロマトグラフィー｛（silicagel 60,Merck）(直径3 cm X 長さ20 cm)｝に供し、同溶媒で展開して10mLずつ分画したところ、フラクション（fr.）15- 70にイソフラボン（isoflavone）配糖体が溶出された。
本フラクション（0.26 g）及び混合溶媒（CH2Cl2:MeOH : H2O = 3 : 1: 0.1）の不溶画分（0.30 g）を分取し、ODSHPLCカラム（Developsil C30,直径20mm x 長さ300 mm）、展開溶媒17%アセトニトリル（CH3CN）、流速7.0 mL/minで展開したところ、保持時間18.3minに化合物1（5-メトキシ-2’-ヒドロキシ-ダイゼイン-7-O-グルコシド；5-OCH3, 2’-OH daidzein-7-O-glucoside;7.9 mg）、19.7minに化合物2（2’-ヒドロキシ-ゲニステイン-7-O-ゲンチビオシド；2’-OHgenistein-7-O-gentibioside; 5.4 mg）、28.1minに化合物3（5-メトキシ-ダイゼイン-7-O-グルコシド；5-OCH3 daidzein-7-O-glucoside;8.5 mg）、32.9minに化合物4（5,3’-ジメトキシ-ダイゼイン-7-O-グルコシド；5-OCH3,3’-OCH3 daidzein-7-O-glucoside;3.2 mg）、34.4minに化合物5（2’-ヒドロキシ-ゲニステイン-7-O-グルコシド；2’-OHgenistein-7-O-glucoside; 3.1 mg）が、40.3minに化合物6（ゲニステイン-7-O-ゲンチビオシド；genistein-7-O-gentibioside;24.4 mg）が純品として溶出された。
純品となった各化合物は、HRESI-MS(JEOL T100LP)にて分子式を決定後,400 MHz NMR（BRUKER AVANCE400）を用い、各種重溶媒中にて1次元NMRスペクトル（1H-,13C-NMR）、2次元NMRスペクトル（1H-1HDQF COSY, HMQC, HMBC, NOESY）を測定・解析することによりその構造を明らかにした。化合物1〜6の化学構造を図２に示した。
【００３２】
（アピオスから単離された6種類のイソフラボン配糖体の機器分析データ）
アピオスから単離された6種類のイソフラボン配糖体（化合物１〜６）のMS及びNMRのデータ並びにIUPAC名を以下に示す。
【００３３】
（化合物１の名称及び特性）
IUPAC名称：3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
IUPAC英語名称：3-(2,4-dihydroxyphenyl)-5-methoxy-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-4H-chromen-4-one
HR-MS(ESI) calculated for C22H21O11 (M-H)-,461.10839; found 461.10949. 
1H-NMR (DMSO-d6)d: 3.16 (m, 1H, H-4''), 3.30 (m,1H, H-2''), 3.36 (m, 1H, H-3''), 3.45 (m, 1H, H-5''), 3.45 (m, 1H, H-6''b),3.72 (m, 1H, H-6''a), 3.83 (s, 3H, H-5OCH3), 5.08 (d, J=7.2 Hz, 1H, H-1''), 6.25 (dd, J=2.0, 8.2Hz, 1H, H-5'), 6.34 (d, J=2.0 Hz, H-3'),6.60 (d, J=2.0 Hz, H-6), 6.72 (d, J=2.0 Hz, H-8), 6.91 (d, J=8.2 Hz, H-6'), 8.01 (s, 1H, H-2) . 
13C-NMR(DMSO-d6) d:56.1 (C-5OCH3), 60.7 (C-6''), 69.8 (C-4''), 73.1 (C-3''), 76.6 (C-2''),77.3 (C-5''), 95.6 (C-8), 97.1 (C-6), 99.1 (C-1''), 102.8 (C-3'), 106.2 (C-5'),109.5 (C-4a), 110.3 (C-1'), 123.3 (C-3), 132.1 (C-6'), 152.1 (C-2), 156.4 (C-2'),158.3 (C-4'), 158.8 (C-8a), 160.6 (C-5), 161.3 (C-7), 174.4 (C-4).
【００３４】
（化合物２の名称及び特性）
IUPAC名称：3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-ヒドロキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-((((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)メチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
IUPAC英語名称：3-(2,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxy-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-((((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)methyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-4H-chromen-4-one
HR-MS(ESI) calculated for C27H29O16 (M-H)-,609.14556; found 609.14469.
1H-NMR (CD3OD) d:3.23 (m, 1H, H-2'''), 3.23 (m, 1H, H-5'''), 3.27 (m, 1H, H-3'''), 3.33 (m, 1H,H-4''), 3.47 (m, 1H, H-3''), 3.49 (m, 1H, H-2''), 3.67 (dd,J=6.2, 11.8 Hz, 1H, H-6'''b), 3.84(m, 1H, H-6''b), 3.85 (m, 1H, H-5''), 3.89 (d, J=11.8 Hz, 1H, H-6'''a), 4.16 (d, J=9.0 Hz, 1H, H-6''a), 4.37 (d, J=7.2 Hz, 1H, H-1'''), 5.05 (d, J=7.2 Hz, 1H, H-1''), 6.37 (dd, J=2.0, 8.1Hz, 1H, H-5'), 6.57 (d, J=2.0 Hz, 1H,H-6), 6.57 (d, J=2.0 Hz, 1H, H-3'),6.87 (d, J=2.0 Hz, H-8), 7.05 (d, J=8.1 Hz, 1H, H-5'), 8.11 (s, 1H, H-2). 
13C-NMR(CD3OD) d: 62.8 (C-6'''), 70.5 (C-6''), 71.6 (C-4''),71.7 (C-4'''), 74.7 (C-3''), 75.2 (C-3'''), 77.3 (C-5''), 77.8 (C-2''), 78.0(C-5'''), 78.1 (C-2'''), 96.0 (C-8), 101.3 (C-6), 101.5 (C-1''), 104.2 (C-3'),105.2 (C-1'''), 108.1 (C-4a), 108.1 (C-5'), 110.6 (C-1'), 122.9 (C-3), 133.3(C-6'), 157.3 (C-2), 157.8 (C-2'), 159.4 (C-8a), 160.3 (C-4'),163.3 (C-5),164.7 (C-7), 182.9 (C-4).
【００３５】
（化合物３の名称及び特性）
IUPAC名称：3-(4-ヒドロキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
IUPAC英語名称：3-(4-hydroxyphenyl)-5-methoxy-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-4H-chromen-4-one
HR-MS(ESI) calculated for C22H21O10 (M-H)-,445.11347; found 445.11528. 
1H-NMR (DMSO-d6)d: 3.16 (m, 1H, H-4''), 3.30 (m,1H, H-2''), 3.32 (m, 1H, H-3''), 3.45 (m, 1H, H-5''), 3.45 (m, 1H, H-6''b),3.74 (m, 1H, H-6''a), 3.84 (s, 3H, C-5OCH3), 5.08 (d, J=7.1 Hz, 1H, H-1''), 6.60 (d, J=2.0 Hz, 1H, H-6), 6.73 (d, J=2.0 Hz, 1H, H-8), 6.79 (d, J=8.4 Hz, 2H, H-3' and H-5'), 7.31 (d, J=8.4 Hz, 2H, H-2' and H-6'), 8.16 (s,1H, H-2).
13C-NMR (DMSO-d6) d:56.1 (C-5OCH3), 60.7 (C-6''), 69.8 (C-4''), 73.1 (C-2''), 76.6 (C-3''),77.3 (C-5''), 95.6 (C-8), 97.1 (C-6), 99.9 (C-1''), 109.5 (C-4a), 114.8 (C-3'and C-5'), 122.6 (C-1'), 124.9 (C-3), 131.5 (C-2' and C-6'), 150.8 (C-2), 157.2(C-4'), 158.8 (C-8a), 160.8 (C-5), 161.3 (C-7), 173.9 (C-4).
【００３６】
（化合物４の名称及び特性）
IUPAC名称：3-(4-ヒドロキシ-3-メトキシフェニル)-5-メトキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
IUPAC英語名称：3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-5-methoxy-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-4H-chromen-4-one
HR-MS(ESI) calculated for C23H23O11 (M-H)-,475.12404; found 475.12547. 
1H-NMR (DMSO-d6)d: 3.16 (m, 1H, H-4''), 3.30 (m,1H, H-2''), 3.30 (m, 1H, H-3''), 3.45 (m, 1H, H-5''), 3.45 (m, 1H, H-6''b),3.72 (m, 1H, H-6''a), 3.78 (s, 3H, C-3''OCH3), 3.84 (s, 3H, C-5OCH3),5.08 (d, J=7.2 Hz, 1H, H-1''), 6.60(s, 1H, H-6), 6.73 (s, 1H, H-8), 6.79 (d, J=8.2Hz, 1H, H-5'), 6.90 (d, J=8.2 Hz, 1H,H-6'), 7.11 (s, 1H, H-2'), 8.19 (s, 1H, H-2). 
13C-NMR(DMSO-d6) d:55.6 (C-3'OCH3), 56.1 (C-5OCH3), 60.7 (C-6''), 69.7 (C-4''),73.1 (C-3''), 76.6 (C-2''), 77.3 (C-5''), 95.6 (C-8), 97.1 (C-6), 99.8 (C-1''),109.5 (C-4a), 113.4 (C-2'), 115.1 (C-5'), 121.6 (C-6'), 123.0 (C-1'), 124.9(C-3), 146.4 (C-4'), 147.0 (C-3'), 151.1 (C-2), 160.8 (C-5), 161.3 (C-7), 173.8(C-4).
【００３７】
（化合物５の名称及び特性）
IUPAC名称：3-(2,4-ジヒドロキシフェニル)-5-ヒドロキシ-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
IUPAC英語名称：3-(2,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxy-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-4H-chromen-4-one
HR-MS (ESI) calculated for C21H19O11 (M-H)-, 447.09274;found 447.09314. 
1H-NMR (DMSO-d6) d:3.16 (m, 1H, H-4''), 3.29 (m, 1H, H-2''), 3.30 (m, 1H, H-3''), 3.44 (m, 1H, H-5''),3.46 (m, 1H, H-6''b), 3.70 (m, 1H, H-6''a), 5.06 (d, J=7.4 Hz, 1H, H-1''), 6.27 (d, J=8.1Hz, 1H, H-5'), 6.38 (s, 1H, H-3'), 6.46 (s, 1H, H-6), 6.70 (s, 1H, H-8), 6.99(d, J=8.1 Hz, 1H, H-6'), 8.26 (s, 1H,H-2). 
13C-NMR (DMSO-d6) d: 60.6(C-6''), 69.6 (C-4''), 73.1 (C-3''), 76.4 (C-2''), 77.2 (C-5''), 94.4 (C-8),99.5 (C-6), 99.9 (C-1''), 102.6 (C-3'), 106.1 (C-4a), 106.2 (C-5'), 108.3 (C-1'),120.8 (C-3), 132.2 (C-6'), 155.9 (C-2), 156.5 (C-2'), 157.2 (C-8a), 158.7 (C-4'),161.6 (C-5), 162.9 (C-7), 180.7 (C-4).
【００３８】
（化合物６の名称及び特性）
IUPAC名称：5-ヒドロキシ-3-(4-ヒドロキシフェニル)-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-((((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-トリヒドロキシ-6-(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)メチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2-イル)オキシ)-4H-クロメン-4-オン
IUPAC英語名称：5-hydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)-7-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-((((2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)methyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-4H-chromen-4-one
HR-MS (ESI) calculated for C27H29O15 (M-H)-, 593.15064;found 593.15152.
1H-NMR (Pridine-d5) d:3.92 (m, 1H, H-5'''), 4.22 (m, 1H, H-4'''), 4.25 (m, 1H, H-2'''), 4.25 (m, 1H,H-3'''), 4.27 (m, 1H, H-2''), 4.27 (m, 1H, H-4''), 4.35 (m, 1H, H-3''), 4.36(m, 1H, H-6'''b), 4.38 (m, 1H, H-6''b), 4.44 (m, 1H, H-5''), 4.56 (m, 1H, H-6'''a),4.81 (m, 1H, H-6''a), 5.08 (d, J=7.8 Hz, 1H, H-1'''), 1H, 5.75 (d, J=7.3 Hz,1H, H-1''), 6.87 (d, J=1.9 Hz, 1H,H-6), 7.09 (d, J=1.9 Hz, 1H, H-8), 7.26 (d, J=8.4 Hz, 2H, H-3' and H-H-5'),7.63 (d, J= 8.4 Hz, 2H, H-2' and H-6'),8.08 (s, 1H, H-2),. 
13C-NMR (Pridine-d5) d:62.1 (C-6'''), 69.6 (C-6''), 70.5 (C-4''), 71.2 (C-4'''), 74.1 (C-2''), 74.7(C-2'''), 76.9 (C-5''), 77.7 (C-3''), 77.8 (C-3'''), 77.9 (C-5'''), 94.7 (C-8),101.1 (C-6), 101.3 (C-1''), 105.1 (C-1'''), 106.8 (C-4a), 115.6 (C-3' and C-5'),121.4 (C-1'), 123.4 (C-3), 130.4 (C-2' and C-6'), 153.2 (C-2), 157.5 (C-4'),158.6 (C-8a), 162.4 (C-5), 163.4 (C-7), 180.7 (C-4)
【実施例２】
【００３９】
（化合物１〜６のイソフラボン配糖体のER結合試験）
実施例１で単離・同定した6種類のイソフラボン配糖体がERに結合するかどうかを確認するために、in vitro ER結合試験（binding assay）を以下の通り行った。
【００４０】
（化合物１〜６のイソフラボン配糖体のER結合試験方法）
組換えERCタンパク質 0.5  μg/ml、[3H]-Estradiol 1 nM及び試験化合物（化合物１〜６のイソフラボン配糖体）を混合し、さらにbinding buffer（10 mM Tris-HCl pH7.6, 1.5 mM EDTA, 10% glycerol，3 mg/ml BSA，2 mM DTT）を加えて、総量を100 μlにした。この混合液を4℃で15分インキュベートした。インキュベート後、バイオゲルHT（Bio-Rad）を200 μl 添加し、氷上で15 分間インキュベートしながら5 分おきにボルテックスした。15分経過後、氷上で冷やしておいたwash buffer（40 mM Tris-HCl pH 7.6，100mM KCl，1 mM EDTA，1 mM EGTA）を1 mlずつ加えてボルテックスした後、5000 rpm で1.5分遠心して上清を除いた。この操作を3回繰り返した。その後、沈殿物をアクアゾル（New England nuclear research company）3 mlに懸濁して、シンチレーションバイアル（Perkin Elmer）に移し、放射活性を液体シンチレーションカウンターで測定した。
【００４１】
（化合物１〜６のイソフラボン配糖体のER結合試験の結果）
液体シンチレーションカウンターで測定した結果は、化合物１〜６のイソフラボン配糖体は、100 μg/mlの濃度でもERに結合しなかった。
なお、ポジティブコントロールとして用いたゲニステイン及びダイゼインはERに結合し、IC50値は各々、2.0 μg/ml及び6.6 μg/mlであった。
以上により、化合物１〜６のイソフラボン配糖体はERに結合しないことを確認した。
【実施例３】
【００４２】
（化合物１〜６のイソフラボン配糖体のAR結合試験）
実施例１で単離・同定した6種類のイソフラボン配糖体がARに結合するかどうかを確認するために、invitro AR結合試験（binding assay）を以下の通り行った。
【００４３】
（化合物１〜６のイソフラボン配糖体のAR結合試験方法）
組換えARCタンパク質50 μg/ml、[3H]-DHT 2nM及び試験化合物（化合物１〜６のイソフラボン配糖体）を混合し、さらにbinding buffer（50 mM Tris-HCl pH7.4，800 mM NaCl，10% glycerol，1 mg/ml BSA，2 mM DTT）を加えて、総量を100 μlにした。この混合液を4℃で3時間インキュベートした。インキュベート後の方法は実施例２と同様に行った。
【００４４】
（化合物１〜６のイソフラボン配糖体のAR結合試験の結果）
液体シンチレーションカウンターで測定した結果、化合物１〜６のイソフラボン配糖体は、濃度依存的にARと結合することを確認した。化合物１〜６のイソフラボン配糖体のIC50値を下記表１に示す。
ポジティブコントロールとして用いた既存薬のFlutamideのIC50は10.8 μg/ml（39 μM）であったが、フラボノイド、特にイソフラボン配糖体がARと結合するという知見は今回、初めて見出したものである。
【００４５】
【表１】
2014118367.tif 000008
【実施例４】
【００４６】
（化合物１〜６のイソフラボン配糖体のARアンタゴニスト活性試験）
実施例１で単離・同定した6種類のイソフラボン配糖体がARのアゴニスト（agonist）として働くのか、アンタゴニスト（antagonist）として働くのかをヒト前立腺癌細胞LNCapのPCA mRNA発現量の増減により評価した。詳細は、以下の通りである。
【００４７】
（化合物１〜６のイソフラボン配糖体のARアンタゴニスト活性試験方法）
ヒト前立腺癌細胞LNCaP細胞を24穴プレートに5.0×104cells/well（500 μl系）で蒔いた。培地は、RPMI medium 1640にcFBSを2%含んだものを用いた。翌日、DHT 0.1 nMと試験化合物（化合物１〜６のイソフラボン配糖体）を添加した。添加してから12時間後、培地を除去したところにTRIzol（Invitrogen）を500 μl加えてtotal RNAを抽出した。ここにクロロホルム100 μlを入れてボルテックスし、4℃の条件下、13,000 rpmで遠心した。RNAが含まれている上清を200  μl回収し、2-プロパノールを等量加えてよく混合し、再び4℃、13,000 rpmで遠心した。上清を除去し、75%エタノールで洗浄してから15 μl の滅菌水で溶出した。溶出液に含まれるtotal RNAの濃度を測るために、溶出液を50倍希釈し、260nmでの吸光度を分光光度計で測定した。測定値からtotal RNA 2μgに、100 μMのOligo (dT) primer（Invitrogen）1 μlを加えて滅菌水で15 μlに合わせ、サンプル溶液とした。このサンプル溶液を80℃で5分処理した後、5×M-MLV Reaction Buffer 4 μlと2.5 mMのdNTP mixture（Invitrogen）を5 μl、逆転写酵素M-MLV RT（Promega）100 unitsを加えて、42℃、1時間でcDNAを合成した。逆転写後、各サンプルを10倍希釈した。希釈サンプル溶液2  μl、2×SYBR pre-Mix(Takara) 5 μl、及び1 pmolのsense primer、anti-sense primerを混合し、Real time PCR（Bio-rad社）を行った。
【００４８】
（化合物１〜６のイソフラボン配糖体のARアンタゴニスト活性試験結果）
化合物１〜６のイソフラボン配糖体は、濃度依存的にARのアンタゴニストとして作用することを確認した。化合物１〜６のイソフラボン配糖体のIC50値を下記表２に示す。
ポジティブコントロールとして用いた既存薬のFlutamideのIC50は0.63  μg/ml（2.3 μM）であったが、フラボノイド、特にイソフラボン配糖体がARのアンタゴニストとして作用するという知見は今回、初めて見出したものである。
【００４９】
【表２】
2014118367.tif 000009
【産業上の利用可能性】
【００５０】
イソフラボン配糖体を含むアンドロゲン受容体結合組成物又はアンドロゲン受容体アンタゴニスト組成物を提供することができた。
【図１】
2014118367.tif 000013
【図２】
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