(57)【要約】      （修正有）【課題】中鎖脂肪酸を高度に含有する脂質を効率よく生産することができる、脂質の製造方法の提供。【解決手段】下記（１）及び（２）の工程を含む、脂質の製造方法。（１）渦鞭毛藻綱のギムノディニウム目藻類、特にSymbiodinium microadriaticumの藻類を、グリセリンを含有する培地中で光照射下で培養して培養物を得る工程（２）得られた培養物から油脂中の全構成脂肪酸に占める中鎖脂肪酸の含有割合が１５質量％以上である脂質を採取する工程。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（１）及び（２）の工程を含む、脂質の製造方法。
（１）渦鞭毛藻綱の藻類を、グリセリンを含有する培地中で培養して培養物を得る工程
（２）得られた培養物から脂質を採取する工程
【請求項２】
前記脂質が油脂である、請求項１記載の脂質の製造方法。
【請求項３】
前記油脂中の全構成脂肪酸に占める中鎖脂肪酸の含有割合が１５質量％以上である、請求項２記載の脂質の製造方法。
【請求項４】
前記油脂中の全構成脂肪酸に占めるラウリン酸の含有割合が６質量％以上である、請求項２記載の脂質の製造方法。
【請求項５】
渦鞭毛藻綱の藻類が、ギムノディニウム目藻類である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の脂質の製造方法。
【請求項６】
ギムノディニウム目藻類が、Symbiodinium に属する藻類である、請求項５に記載の脂質の製造方法。
【請求項７】
Symbiodinium に属する藻類が、Symbiodinium microadriaticumである、請求項６に記載の脂質の製造方法。
【請求項８】
培地中のグリセリンの含有量が、０．０１〜１０質量％である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の脂質の製造方法。
【請求項９】
前記培地が窒素源を含有し、培地中における窒素源の含有量が、窒素原子当量で１０〜５００ｍｇ／Ｌである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の脂質の製造方法。
【請求項１０】
前記培地がリン源を含有し、培地中におけるリン源の含有量が、リン原子当量で１〜５０ｍｇ／Ｌである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の脂質の製造方法。
【請求項１１】
工程（１）の培養を光照射下で行う、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の脂質の製造方法。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項記載の製造方法により得られた脂質をアルコールでエステル交換反応する工程を有する、中鎖脂肪酸エステルの製造方法。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか１項記載の製造方法により得られた脂質を加水分解する工程を含む、中鎖脂肪酸の製造方法。
【請求項１４】
渦鞭毛藻綱の藻類を、グリセリンを含有する培地中で培養する、当該藻類の中鎖脂肪酸の生産性向上方法。
【請求項１５】
中鎖脂肪酸がラウリン酸である請求項１４に記載の生産性向上方法。
【請求項１６】
渦鞭毛藻綱の藻類を、グリセリンを含有する培地中で培養する、中鎖脂肪酸の生産性が向上された藻類の製造方法。
【請求項１７】
中鎖脂肪酸がラウリン酸である請求項１６に記載の藻類の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、渦鞭毛藻綱の藻類を用いた脂質の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ラウリン酸に代表される中鎖脂肪酸は、ヤシ油やパーム核油に多く含まれる主な脂肪酸で、各種界面活性剤の原料や食品などに使用される。中鎖脂肪酸の中でもラウリン酸は、その供給源がヤシやパーム核に限定されており、そのため栽培地域が限定される。さらに、中鎖脂肪酸の原料として耕地を利用することは、今後バイオディーゼルや、食料用途と競合することも懸念される。また、熱帯雨林の破壊という問題も付随する。従って、ヤシやパーム核に頼らない、中鎖脂肪酸の供給技術の開発が望まれていた。
【０００３】
一方、ラウリン酸の供給生物として、渦鞭毛藻であるCrypthecodinium cohnii が、ラウリン酸を高含有することが知られている（非特許文献１参照）。
【０００４】
また、本出願人は、Symbiodinium属の藻類を培地中で培養することにより脂肪酸組成におけるラウリン酸の含有割合が３質量％以上である油脂を製造できることを見出し、特許出願している（特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第2011/108755号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Phytochemistry,(1988)27,1679-1683
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、今後バイオディーゼルや、食料用途への需要の拡大が予想されることから、さらに、中鎖脂肪酸を高度に含有する脂質の製造方法の開発が望まれている。
【０００８】
本発明は、中鎖脂肪酸を高度に含有する脂質、好ましくは油脂を効率よく生産することができる、脂質の製造方法を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、渦鞭毛藻綱の藻類を用いた脂質の製造についてさらに検討したところ、通常細胞を増殖するための栄養源として培地に添加される種々の炭素源のうち、グリセリンを用いて培養した場合に、意外なことに、細胞増殖に影響を与えずに脂肪酸量が顕著に増大し、且つ得られた脂質中の全構成脂肪酸に占める中鎖脂肪酸の含有割合（以下、「中鎖脂肪酸の生産性」とも称する）が有意に向上して、中鎖脂肪酸を高度に含有する脂質を効率良く製造できることを見出した。
【００１０】
すなわち、本発明は、下記（１）及び（２）の工程を含む、脂質の製造方法(以下、「本発明の製造方法」ということがある)に関する。
（１）渦鞭毛藻綱の藻類を、グリセリンを含有する培地中で培養して培養物を得る工程（以下、「工程１」ということがある）
（２）得られた培養物から脂質を採取する工程（以下、「工程２」ということがある）
【００１１】
また、本発明は、前記本発明の製造方法により得られる脂質をアルコールでエステル交換反応する工程を含む、中鎖脂肪酸エステルの製造方法(以下、「本発明のエステル製造方法」ということがある)に関する。
【００１２】
さらに、本発明は、前記本発明の製造方法により得られる脂質を加水分解する工程を含む、中鎖脂肪酸の製造方法(以下、「本発明の脂肪酸製造方法」ということがある)に関する。
【００１３】
さらに、本発明は、渦鞭毛藻綱の藻類を、グリセリンを含有する培地中で培養する、当該藻類の中鎖脂肪酸の生産性向上方法に関する。
【００１４】
さらに、本発明は、渦鞭毛藻綱の藻類を、グリセリンを含有する培地中で培養する、中鎖脂肪酸の生産性が向上された藻類の製造方法に関する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の製造方法によれば、中鎖脂肪酸を高度に含有する脂質を効率よく製造することができる。また、本発明のエステル製造方法によれば、中鎖脂肪酸のエステル体を効率よく製造することができる。さらに、本発明の中鎖脂肪酸の製造方法によれば、中鎖脂肪酸を効率よく製造することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
＜脂質の製造方法＞
（脂質）
本発明の製造方法において、脂質としては、脂肪酸及び脂肪酸と各種アルコールとのエステルである単純脂質（油脂・蝋など）、脂肪酸・アルコール・リン酸・糖などから成る複合脂質（リン脂質・糖脂質など）、および以上二者の加水分解生成物で水に不溶の物質（脂肪酸・高級アルコール・ステロールなど）やテルペン・脂溶性ビタミンなどの誘導脂質が挙げられる。このうち、脂質としては、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、単純脂質、複合脂質であることが好ましく、単純脂質がより好ましく、油脂がさらに好ましい。
（油脂）
本発明の製造方法において、油脂とは、脂肪酸とグリセリンとのエステルを意味し、具体的には、モノグリセリド、ジグリセリド、及びトリグリセリドのような中性脂質をいう。また、中鎖脂肪酸とは、炭素数１０〜１４の炭化水素基を有する１価のカルボン酸をいい、具体的には、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸が挙げられる。このうち、ミリスチン酸、ラウリン酸が好ましく、ラウリン酸がより好ましい。また、脂肪酸エステルとは、前記トリグリセリド以外の、脂肪酸と低級又は高級アルコールとのエステルをいい、中鎖脂肪酸エステルとは、前記中鎖脂肪酸と低級又は高級アルコールとのエステルをいう。
【００１７】
（工程１）
本発明の製造方法は、渦鞭毛藻綱の藻類を、グリセリンを含有する培地中で培養する工程を含む。
【００１８】
（渦鞭毛藻綱の藻類）
本発明に用いられる渦鞭毛藻綱の藻類とは、分類学上、光合成を行い鞭毛を持つ単細胞藻類の一群であり、細胞の表面に縦横の溝を持ち、進化の過程で紅藻の二次共生のほか、複数の共生を経た特徴的な形態を有す藻類をいう。渦鞭毛藻綱の藻類の具体例としては、ヤコウチュウ目 (Noctilucales) 、プロロケントルム目 (Prorocentrales) 、ディノフィシス目 (Dinophysales)、ギムノディニウム目 (Gymnodiniales)、ペリディニウム目 (Peridiniales)、ゴニオラクス目 (Gonyaulacales)、ブラストディニウム目 (Blastodiniales)、有柄鞭毛藻目 (Phytodiniales)等の藻類を挙げることができる。このうち、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、ギムノディニウム目 (Gymnodiniales)の藻類が好ましい。
【００１９】
前記ギムノディニウム目 (Gymnodiniales) の藻類としては、例えば、Amphidinium、Cochlodinium、Gymnodinium、Gyrodinium、Erythropsodinium、Hemidinium、Katodinium、Nematodinium、Oxyrrhis、Polykrikos、Torodinium、Symbiodinium、Warnowia、Woloszynskia、Zooxanthella等の藻類を挙げることができる。このうち、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、Symbiodiniumに属する藻類が好ましい。
【００２０】
前記Symbiodiniumに属する藻類としては、例えば、Symbiodinium microadriaticum、Symbiodinium goreaui、Symbiodinium linucheae、Symbiodinium bermudense、Symbiodinium meandrinae、Symbiodinium californium、Symbiodinium kawagutii、Symbiodinium corculorum、Symbiodinium consortia、Symbiodinium muscatinei、Symbiodinium freudenthal、Symbiodinium pulchrorum、Symbiodinium pilosum等を挙げることができる。このうち、中鎖脂肪酸含有脂質の生産性向上の観点から、Symbiodinium microadriaticumが好ましく、Symbiodinium microadriaticum LB2281株、Symbiodinium sp. NIES-2638株がさらに好ましい。
なお、前記渦鞭毛藻綱の藻類は、The culture collection of algae at University of Texas at Austin (UTEX)、独立行政法人国立環境研究所(NIES)、National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA：旧CCMP)、Culture Collection of Algae and Protozoa (CCAP)等の公的機関から入手することができる。
【００２１】
（培地）
工程１において藻類を培養するために用いられる培地には、従来公知のものを使用することができ、天然海水又は人工海水をベースにしたものを使用してもよいし、市販の培養培地を使用してもよい。好ましい培地としては、例えば、ダイゴＩＭＫ培地、ｆ／２培地、ＥＳＭ培地、Ｌ１培地、ＭＮＫ培地等を挙げることができる。このうち、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点、栄養成分濃度の観点から、ｆ／２培地、ＥＳＭ培地、ダイゴＩＭＫ培地が好ましく、ＥＳＭ培地、ダイゴＩＭＫ培地がより好ましく、ダイゴＩＭＫ培地がさらに好ましい。
【００２２】
工程１に用いられる培地は、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、グリセリンを含有する。ここでグリセリンには、グリセリンが縮重合したポリグリセリンが含まれうる。培地中におけるグリセリンの含有量は、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．０２質量％以上、さらに好ましくは０．０５質量％以上、さらに好ましくは０．０７質量％以上、さらに好ましくは０．０８質量％以上、さらに好ましくは０．０９質量％以上、さらに好ましくは０．１質量％以上である。また、同様の観点から、前記含有量は、好ましくは１０質量％以下、より好ましくは５質量％以下、さらに好ましくは４質量％以下、さらに好ましくは３質量％以下、さらに好ましくは２質量％以下、さらに好ましくは１質量％以下、さらに好ましくは０．５質量％以下である。また、培地中におけるグリセリンの含有量は、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、０．０１〜１０質量％、好ましくは０．０２〜５質量％、より好ましくは０．０５〜４質量％、さらに好ましくは０．０７〜３質量％、さらに好ましくは０．０８〜２質量％さらに好ましくは０．０９〜２．０質量％、さらに好ましくは０．１〜２．０質量％、さらに好ましくは０．１〜１質量％、さらに好ましくは０．１〜０．５質量％である。
【００２３】
工程１に用いられる培地には、藻類の生育促進、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、窒素源、リン源、金属塩、ビタミン類、前記グリセリン以外の炭素源、微量金属等を適宜添加することができる。
前記窒素源としては、例えば、ＮａＮＯ3、ＫＮＯ3、Ｃａ（ＮＯ3）2、ＮＨ4ＮＯ3、（ＮＨ4）2ＳＯ4等が挙げられる。前記リン源としては、例えば、Ｋ2ＨＰＯ4、ＫＨ2ＰＯ4、Ｎａ2ＨＰＯ4、ＮａＨ2ＰＯ4、グリセロリン酸ナトリウム等が挙げられる。前記金属塩としては、例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＣａＣｌ2、ＭｇＣｌ2、Ｎａ2ＳＯ4、Ｋ2ＳＯ4、ＭｇＳＯ4、Ｎａ2ＣＯ3、ＮａＨＣＯ3、Ｎａ2ＳｉＯ3、Ｈ3ＢＯ3、ＭｎＣｌ2、ＭｎＳＯ4、ＦｅＣｌ3、ＦｅＳＯ4、ＣｏＣｌ2、ＺｎＳＯ4、ＣｕＳＯ4、Ｎａ2ＭｏＯ4等が挙げられる。前記ビタミン類としては、例えば、ビオチン、ビタミンＢ１２、Ｔｈｉａｍｉｎｅ−ＨＣｌ、ニコチン酸、イノシトール、葉酸、チミン等が挙げられる。
【００２４】
培地中における前記窒素源の含有量は、脂質及び中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、好ましくは窒素原子当量で２ｍｇ／Ｌ以上、より好ましくは５ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは１０ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは１５ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは２０ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは５０ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは１００ｍｇ／Ｌ以上であり、同様の観点から、前記含有量は、好ましくは窒素原子当量で７００ｍｇ／Ｌ以下、より好ましくは６００ｍｇ／Ｌ以下、さらに好ましくは５００ｍｇ／Ｌ以下、さらに好ましくは４００ｍｇ／Ｌ以下、さらに好ましくは３００ｍｇ／Ｌ以下、さらに好ましくは２５０ｍｇ／Ｌ以下である。また、脂質及び中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、培地中における前記窒素源の含有量は、窒素原子当量で２〜７００ｍｇ／Ｌ、好ましくは５〜６００ｍｇ／Ｌ、より好ましくは１０〜５００ｍｇ／Ｌ、さらに好ましくは１５〜４００ｍｇ／Ｌ、さらに好ましくは２０〜３００ｍｇ／Ｌ、さらに好ましくは５０〜２５０ｍｇ／Ｌ、さらに好ましくは１００〜２５０ｍｇ／Ｌである。
また、培地中における前記リン源の含有量は、脂質及び中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、好ましくはリン原子当量で０．５ｍｇ／Ｌ以上、より好ましくは１ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは２ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは４ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは８ｍｇ／Ｌ以上であり、同様の観点から、前記含有量は、リン原子当量で１００ｍｇ／Ｌ以下、より好ましくは５０ｍｇ／Ｌ以下、さらに好ましくは２５ｍｇ／Ｌ以下、さらに好ましくは２０ｍｇ／Ｌ以下である。また、脂質及び中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、培地中における前記リン源の含有量は、リン原子当量で０．５〜１００ｍｇ／Ｌ、より好ましくは１〜５０ｍｇ／Ｌ、さらに好ましくは２〜２５ｍｇ／Ｌ、さらに好ましくは４〜２０ｍｇ／Ｌ、さらに好ましくは８〜２０ｍｇ／Ｌである。
【００２５】
前記グリセリン以外の炭素源としては、二酸化炭素、酢酸、酢酸ナトリウム、グルコース、スクロース、フルクトース、デンプン、脂肪酸等を挙げることができる。培地中のグリセリン以外の炭素源がグルコースの場合、培地中のグルコースの含有量は、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、５質量％以下であることが好ましく、より好ましくは２質量％以下、さらに好ましくは１質量％以下、よりさらに好ましくは０．５質量％以下、よりさらに好ましくは０．１質量％以下である。
【００２６】
工程１に用いる培地のｐＨは、使用する藻類の種類により適宜選択することが望ましく、雑菌の繁殖抑制、藻類の生育促進、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、好ましくは５〜１０の範囲であり、より好ましくは６〜９の範囲、さらに好ましくは７〜８の範囲である。また、培養時の培地のｐＨは、同様の観点から、好ましくは６〜９、より好ましくはｐＨ７〜８である。前記ｐＨは、培地に酸又は塩基を添加することにより所望の範囲に適宜調整することができる。なお、使用する培地は、雑菌の繁殖抑制、藻類の生育促進、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、オートクレーブ、フィルターろ過等により殺菌して使用することが好ましい。
【００２７】
（培養条件）
培地に接種する藻類の量は、特に限定されないが、生育の観点から、培地当り１〜１０％（vol/vol）が好ましく、１〜５％（vol/vol）がより好ましい。
【００２８】
工程１における培養温度は、使用する藻類の増殖に悪影響を与えない範囲であれば特に制限されないが、通常、５〜４０℃の範囲であり、藻類の生育促進、中鎖脂肪酸の生産性向上、及び生産コストの低減の観点から、より好ましくは１０〜３０℃、さらに好ましくは１５〜２５℃である。
【００２９】
本発明の製造方法において、藻類の生育促進、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、藻類の培養は、光照射下に行うことが好ましい。光照射は、光合成が可能な条件であればよく、人工光でも太陽光でもよい。光照射時の照度としては、藻類の生育促進、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、好ましくは１００〜５００００ルクスの範囲、より好ましくは３００〜１００００ルクスの範囲、さらに好ましくは１０００〜６０００ルクスの範囲である。また、光照射の間隔は、特に制限されないが、藻類の生育促進、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、明暗周期で行うことが好ましく、その周期は、前記と同様の観点から、好ましくは８時間〜２４時間、より好ましくは１０〜１８時間、さらに好ましくは１２時間である。
【００３０】
工程１における培養は、脂質を高濃度に蓄積する藻体が高い濃度で増殖するよう行えば、培養時間は特に限定されず、例えば１５０日程度の長期間行なってもよい。藻類の生育促進、中鎖脂肪酸の生産性向上、及び生産コストの低減の観点から、グリセリン添加後の培養期間は、好ましくは３日以上、より好ましくは７日以上であり、そして好ましくは９０日以下、より好ましくは５６日以下、さらに好ましくは４９日以下、さらに好ましくは３５日以下、さらに好ましくは３０日以下である。例えば、３〜９０日間、好ましくは３〜３０日間、より好ましくは７〜３０日間が挙げられる。なお、培養は、通気攪拌培養、振とう培養又は静置培養の何れでも構わないが、通気性の向上の観点から、振とう培養が好ましい。
【００３１】
（培養物）
工程１において培養物とは、藻類を培養した後の藻体及び培地を意味する。中鎖脂肪酸の生産性向上、及び生産コストの低減の観点から、培養物は藻類を培養した後の藻体であることが好ましい。
【００３２】
（工程２）
本発明の製造方法は、前述の工程１により得られた培養物から脂質を採取する工程を含む。
培養物から脂質を採取する方法は特に限定されない。例えば、培養終了後、培地と藻体を分離し、得られた藻体を破砕した後に、有機溶剤により溶剤抽出して脂質を採取することができる。
【００３３】
培地と藻体を分離する方法としては、例えば、ろ過や遠心分離が挙げられるが、生産コスト低減の観点から、ろ過が好ましい。藻体を破砕する方法としては、例えば圧搾、超音波破砕、酵素処理、化学処理が挙げられるが、生産コスト低減の観点から、圧搾が好ましい。
【００３４】
前記溶剤抽出に用いる有機溶剤としては、例えば、クロロホルム、ヘキサン、ブタノール、メタノール、酢酸エチル等を挙げることができる。このうち、脂質の抽出効率向上、生産コスト低減の観点から、クロロホルム、メタノール、酢酸エチル、及びヘキサンからなる群から選ばれる１種又は２種以上が好ましく、より好ましくは酢酸エチル、及びヘキサンからなる群から選ばれる１種又は２種以上であり、さらに好ましくはヘキサンである。
抽出時の培養物と有機溶剤の重量比（培養物／有機溶剤）は、脂質の抽出効率向上、生産コスト低減の観点から、１／１〜１／２０が好ましく、より好ましくは１／１〜１／１０、より好ましくは１／１〜１／５である。
【００３５】
本発明の製造方法により得られる脂質は、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、得られる脂質中の全構成脂肪酸に占める中鎖脂肪酸の含有割合が、１５質量％以上であることが好ましく、より好ましくは２０質量％以上、さらに好ましくは３０質量％以上、さらに好ましくは４０質量％以上、さらに好ましくは５０質量％以上であり、例えば１５〜１００質量％、３０〜８５質量％、５０〜７５質量％等が挙げられる。また、得られる脂質中の全構成脂肪酸に占めるラウリン酸の含有割合は、ラウリン酸の生産性向上の観点から、６質量％以上であることが好ましく、より好ましくは１０質量％以上、さらに好ましくは１５質量％以上、さらに好ましくは２０質量％以上、さらに好ましくは３０質量％以上、さらに好ましくは４０質量％以上であり、例えば６〜８５質量％、１０〜８０質量％、１５〜７５質量％等が挙げられる。
また、本発明の製造方法により得られる脂質は、中鎖脂肪酸の生産性向上の観点から、脂質中の全構成脂肪酸に占める炭素数１６〜２２の脂肪酸の含有割合が、好ましくは９０％以下、より好ましくは８０質量％以下、さらに好ましくは７０質量％以下、よりさらに好ましくは６０質量％以下、よりさらに好ましくは５０質量％以下、よりさらに好ましくは４０質量％以下、よりさらに好ましくは３０質量％以下、よりさらに好ましくは２０質量％以下、よりさらに好ましくは１０質量％以下である。
【００３６】
斯くして、渦鞭毛藻綱の藻類をグリセリン含有培地中で培養することにより、グリセリン無添加では１０質量％程度である脂質中の全構成脂肪酸に占める中鎖脂肪酸の含有割合（中鎖脂肪酸の生産性）を、１５〜１００質量％に向上させることができる。すなわち、本発明によれば、グリセリン添加により、中鎖脂肪酸の生産性を１５〜１００質量％、好ましくは３０〜８５質量％、より好ましくは５０〜７５質量％に向上させる方法を提供することができる。
また、グリセリン無添加では５質量％程度である脂質中の全構成脂肪酸に占めるラウリン酸の含有割合（ラウリン酸の生産性）を、６〜８５質量％に向上させることができる。すなわち、本発明によれば、グリセリン添加により、ラウリン酸の生産性を６〜８５質量％、好ましくは１０〜８０質量％、より好ましくは１５〜７５質量％に向上させる方法も提供することができる。
【００３７】
したがって、本発明の製造方法は、脂質中の全構成脂肪酸に占める中鎖脂肪酸の含有割合が１５質量％以上であることが好ましく、或いは脂質中の全構成脂肪酸に占めるラウリン酸の含有割合が６質量％以上であることがより好ましい。
【００３８】
また、渦鞭毛藻綱の藻類をグリセリン含有培地中で培養する方法は、当該藻類の中鎖脂肪酸の含有割合および／または生産量の向上に伴う生産性向上方法、或いはラウリン酸の含有割合および／または生産量の向上に伴う生産性向上方法として有用である。
【００３９】
さらに、渦鞭毛藻綱の藻類をグリセリン含有培地中で培養する方法は、中鎖脂肪酸の含有割合および／または生産量の向上に伴う生産性が向上された藻類の製造方法、或いはラウリン酸の含有割合および／または生産量の向上に伴う生産性が向上された藻類の製造方法として有用である。
【００４０】
＜中鎖脂肪酸エステルの製造方法＞
本発明のエステル製造方法は、前述の本発明の製造方法により得られた脂質をアルコールでエステル交換反応する工程を含む（以下、「工程３」ということがある）。本発明のエステル製造方法によれば、中鎖脂肪酸エステルを効率よく製造することができる。
【００４１】
エステル交換反応は公知の方法で実施することができる。反応形式は、バッチ式及び連続式のいずれでもよいが、生産性向上、及び生産コストの低減の観点から、連続式が好ましい。また、攪拌機を有する槽型反応器及び触媒を充填した固定床反応器のいずれでもよいが、精製負荷を低減する観点から、触媒分離を必要としない固定床反応器を用いることが好ましい。
【００４２】
工程３に用いられるアルコールとしては、生産性向上、及び生産コストの低減の観点から、炭素数１〜５の低級アルコールを用いることが好ましく、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等が挙げられる。工業的には、低コスト並びに回収の容易さの観点から、メタノールが好ましい。
【００４３】
エステル交換反応における、脂質に対する前記アルコールのモル比（脂質を全てトリグリセリドとして換算）は、良好な反応速度を得る観点から、化学量論的必要量の１．５倍モル以上が好ましく、より好ましくは２倍モル以上、さらに好ましくは５倍モル以上である。また、原料アルコールの回収量を抑えて経済的に反応を行う観点から、好ましくは５０倍モル以下、より好ましくは３０倍モル以下、さらに好ましくは１５倍モル以下である。また、良好な反応速度を得る観点、原料アルコールの回収量を抑えて経済的に反応を行う観点から、脂質に対する原料アルコールのモル比は、好ましくは１．５〜５０倍モル、より好ましくは２〜３０倍モル、さらに好ましくは５〜１５倍モルである。
【００４４】
工程３は、生産性向上の観点から、触媒の存在下で行うことが好ましい。触媒としては、水酸化ナトリウムや水酸化カリウム、ナトリウムアルコラート等の均一系アルカリ触媒が一般に使用されるが、イオン交換樹脂や含水酸化ジルコニウム、リン酸アルミニウム、硫酸担持ジルコニア、チタノシリケート等の固体触媒も使用することが可能である。
【００４５】
エステル交換反応における触媒の使用量は、反応効率向上の観点から、脂質に対して１質量％以上が好ましく、より好ましくは３質量％以上、さらに好ましくは５質量%以上である。また、攪拌により十分な懸濁状態を保持させる観点から、脂質に対して２０質量％以下が好ましく、より好ましくは１７質量％以下、さらに好ましくは１５質量％以下である。よって、前記の観点から、触媒の使用量は、好ましくは１〜２０質量％、より好ましくは３〜１７質量％、さらに好ましくは５〜１５質量％である。
【００４６】
エステル交換反応における反応温度は、反応効率の向上、及び副生成物の抑制の観点から、好ましくは５０〜２２０℃、より好ましくは６０〜２００℃、さらに好ましくは８０〜２００℃、さらに好ましくは１３０〜２００℃である。また、反応圧力は、反応効率の向上の観点から、好ましくは０．１〜１０ＭＰａ、より好ましくは０．５〜８ＭＰａ、さらに好ましくは２〜６ＭＰａである。
【００４７】
＜中鎖脂肪酸の製造方法＞
本発明の中鎖脂肪酸の製造方法は、前述の本発明の製造方法により得られた脂質を加水分解する工程を含む。
脂質の加水分解方法は、特に限定されず、従来公知の方法を使用することができる（例えば、「新版 脂肪酸化学」（幸書房）参照）。工業的に好ましい加水分解方法としては、高温高圧分解法（例えば、特開２００３−１１３３９５号公報参照）や、酵素分解法（例えば、特開２０００−１６０１８８号公報参照）が挙げられる。
【００４８】
なお、得られた混合脂肪酸エステル又は混合脂肪酸から、中鎖脂肪酸又は中鎖脂肪酸エステルの分離精製は、常法により、例えばカラムクロマトグラフィー法、蒸留等を用いることにより行うことができる。
【００４９】
上述した実施形態に関し、本発明においては以下の態様が開示される。
＜１＞下記（１）及び（２）の工程を含む、脂質の製造方法。
（１）渦鞭毛藻綱の藻類を、グリセリンを含有する培地中で培養して培養物を得る工程
（２）得られた培養物から脂質を採取する工程
＜２＞前記脂質が、単純脂質、複合脂質又は誘導脂質であり、好ましくは単純脂質又は複合脂質であり、さらに好ましくは単純脂質であり、さらに好ましくは油脂である、＜１＞記載の脂質の製造方法。
＜３＞前記脂質中の全構成脂肪酸に占める中鎖脂肪酸の含有割合が１５質量％以上であり、好ましくは２０質量％以上、より好ましくは３０質量％以上、さらに好ましくは４０質量％以上、さらに好ましくは５０質量％以上である、＜１＞又は＜２＞の脂質の製造方法。
＜４＞前記脂質中の全構成脂肪酸に占めるラウリン酸の含有割合が６質量％以上であり、好ましくは１０質量％以上、より好ましくは１５質量％以上、さらに好ましくは２０質量％以上、さらに好ましくは３０質量％以上、さらに好ましくは４０質量％以上である、＜１＞〜＜３＞のいずれかの脂質の製造方法。
＜５＞前記脂質中の全構成脂肪酸に占める炭素数１６〜２２の脂肪酸の含有割合が９０％以下であり、好ましくは８０質量％以下、より好ましくは７０質量％以下、さらに好ましくは６０質量％以下、さらに好ましくは５０質量％以下、さらに好ましくは４０質量％以下、さらに好ましくは３０質量％以下、さらに好ましくは２０質量％以下、さらに好ましくは１０質量％以下である、＜１＞の脂質の製造方法。
＜６＞渦鞭毛藻綱の藻類が、ヤコウチュウ目 (Noctilucales) 、プロロケントルム目 (Prorocentrales) 、ディノフィシス目 (Dinophysales)、ギムノディニウム目 (Gymnodiniales)、ペリディニウム目 (Peridiniales)、ゴニオラクス目 (Gonyaulacales)、ブラストディニウム目 (Blastodiniales)、又は有柄鞭毛藻目 (Phytodiniales)藻類であり、好ましくはギムノディニウム目藻類である、＜１＞〜＜５＞のいずれかの脂質の製造方法。
＜７＞ギムノディニウム目藻類が、Amphidinium、Cochlodinium、Gymnodinium、Gyrodinium、Erythropsodinium、Hemidinium、Katodinium、Nematodinium、Oxyrrhis、Polykrikos、Torodinium、Symbiodinium、Warnowia、Woloszynskia、又はZooxanthellaに属する藻類であり、好ましくはSymbiodiniumに属する藻類である、＜６＞の脂質の製造方法。
＜８＞Symbiodiniumに属する藻類が、Symbiodinium microadriaticum、Symbiodinium goreaui、Symbiodinium linucheae、Symbiodinium bermudense、Symbiodinium meandrinae、Symbiodinium californium、Symbiodinium kawagutii、Symbiodinium corculorum、Symbiodinium consortia、Symbiodinium muscatinei、Symbiodinium freudenthal、Symbiodinium pulchrorum、Symbiodinium pilosumであり、好ましくはSymbiodinium microadriaticumでありさらに好ましくはSymbiodinium microadriaticum LB2281株、Symbiodinium sp. NIES-2638株である、＜７＞の脂質の製造方法。
＜９＞工程１において藻類を培養するために用いられる培地が、ダイゴＩＭＫ培地、ｆ／２培地、ＥＳＭ培地、Ｌ１培地、又はＭＮＫ培地であり、好ましくはｆ／２培地、ＥＳＭ培地、又はダイゴＩＭＫ培地であり、より好ましくは、ＥＳＭ培地、又はダイゴＩＭＫ培地であり、さらに好ましくはダイゴＩＭＫ培地である＜１＞〜＜８＞のいずれかの脂質の製造方法。
＜１０＞工程１に用いられる培地中のグリセリンの含有量が、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．０２質量％以上、さらに好ましくは０．０５質量％以上、さらに好ましくは０．０７質量％以上、さらに好ましくは０．０８質量％以上、さらに好ましくは０．０９質量％以上、さらに好ましくは０．１質量％以上であり、好ましくは１０質量％以下、より好ましくは５質量％以下、さらに好ましくは４質量％以下、さらに好ましくは３質量％以下、さらに好ましくは２質量％以下、さらに好ましくは１質量％以下、さらに好ましくは０．５質量％以下であり、０．０１〜１０質量％、好ましくは０．０２〜５質量％、より好ましくは０．０５〜４質量％、さらに好ましくは０．０７〜３質量％、さらに好ましくは０．０８〜２質量％、さらに好ましくは０．０９〜２．０質量％、さらに好ましくは０．１〜２．０質量％、さらに好ましくは０．１〜１質量％、さらに好ましくは０．１〜０．５質量％である、＜１＞〜＜９＞のいずれかの脂質の製造方法。
＜１１＞工程１に用いられる培地中の窒素源の含有量が、窒素原子当量で好ましくは２ｍｇ／Ｌ以上、より好ましくは５ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは１０ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは１５ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは２０ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは５０ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは１００ｍｇ／Ｌ以上であり、窒素原子当量で好ましくは７００ｍｇ／Ｌ以下、より好ましくは６００ｍｇ／Ｌ以下、さらに好ましくは５００ｍｇ／Ｌ以下、さらに好ましくは４００ｍｇ／Ｌ以下、さらに好ましくは３００ｍｇ／Ｌ以下、さらに好ましくは２５０ｍｇ／Ｌ以下であり、窒素原子当量で２〜７００ｍｇ／Ｌ、好ましくは５〜６００ｍｇ／Ｌ、より好ましくは１０〜５００ｍｇ／Ｌ、さらに好ましくは１５〜４００ｍｇ／Ｌ、さらに好ましくは２０〜３００ｍｇ／Ｌ、さらに好ましくは５０〜２５０ｍｇ／Ｌ、さらに好ましくは１００〜２５０ｍｇ／Ｌである＜１＞〜＜１０＞のいずれかの脂質の製造方法。
＜１２＞工程１に用いられる培地中のリン源の含有量が、リン原子当量で好ましくは０．５ｍｇ／Ｌ以上、より好ましくは１ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは２ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは４ｍｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは８ｍｇ／Ｌ以上であり、リン原子当量で好ましくは１００ｍｇ／Ｌ以下、より好ましくは５０ｍｇ／Ｌ以下、さらに好ましくは２５ｍｇ／Ｌ以下、さらに好ましくは２０ｍｇ／Ｌ以下であり、リン原子当量で０．５〜１００ｍｇ／Ｌ、より好ましくは１〜５０ｍｇ／Ｌ、さらに好ましくは２〜２５ｍｇ／Ｌ、さらに好ましくは４〜２０ｍｇ／Ｌ、さらに好ましくは８〜２０ｍｇ／Ｌである＜１＞〜＜１１＞のいずれかの脂質の製造方法。
＜１３＞工程１に用いられる培地中のグルコースの含有量が、５質量％以下であり、好ましくは２質量％以下、より好ましくは１質量％以下、さらに好ましくは０．５質量％以下、さらに好ましくは０．１質量％以下である、＜１＞〜＜１２＞のいずれかの脂質の製造方法。
＜１４＞工程１に用いる培地のｐＨが、５〜１０の範囲であり、好ましくは６〜９の範囲、さらに好ましくは７〜８の範囲である、＜１＞〜＜１３＞のいずれかの脂質の製造方法。
＜１５＞培地に接種する藻類の量が、培地当り１〜１０％（vol/vol）であり、好ましくは１〜５％（vol/vol）である、＜１＞〜＜１４＞のいずれかの脂質の製造方法。
＜１６＞工程１における培養温度が、５〜４０℃の範囲であり、好ましくは１０〜３０℃、より好ましくは１５〜２５℃である、＜１＞〜＜１５＞のいずれかの脂質の製造方法。
＜１７＞工程（１）の培養を光照射下で行う、＜１＞〜＜１６＞のいずれかの脂質の製造方法。
＜１８＞光照射時の照度が、１００〜５００００ルクスの範囲であり、好ましくは３００〜１００００ルクスの範囲、より好ましくは１０００〜６０００ルクスの範囲である、＜１７＞の脂質の製造方法。
＜１９＞光照射を明暗周期で行い、その周期が、８時間〜２４時間であり、好ましくは１０〜１８時間、より好ましくは１２時間である、＜１７＞又は＜１８＞の脂質の製造方法。
＜２０＞グリセリン添加後の培養期間が、３〜９０日間、好ましくは３〜３０日間、より好ましくは７〜３０日間である、＜１＞〜＜１７＞のいずれかの脂質の製造方法  。
＜２１＞＜１＞〜＜２０＞のいずれかの製造方法により得られた脂質をアルコールでエステル交換反応する工程を有する、中鎖脂肪酸エステルの製造方法。
＜２２＞エステル交換反応に用いられるアルコールが、炭素数１〜５の低級アルコールであり、好ましくはメタノールである、＜２１＞の中鎖脂肪酸エステルの製造方法。
<２３>エステル交換反応における、脂質に対する前記アルコールのモル比（脂質を全てトリグリセリドとして換算）は、１．５〜５０倍モルであり、好ましくは２〜３０倍モル、より好ましくは５〜１５倍モルである、＜２１＞又は＜２２＞の中鎖脂肪酸エステルの製造方法。
＜２４＞＜１＞〜＜２０＞のいずれかの製造方法により得られた脂質を加水分解する工程を含む、中鎖脂肪酸の製造方法。
＜２５＞渦鞭毛藻綱の藻類を、グリセリンを含有する培地中で培養する、当該藻類の中鎖脂肪酸の生産性向上方法。
＜２６＞脂質中の全構成脂肪酸に占める中鎖脂肪酸の含有割合（中鎖脂肪酸の生産性）を、１５〜１００質量％、好ましくは３０〜８５質量％、より好ましくは５０〜７５質量％に向上させる、＜２４＞の藻類の中鎖脂肪酸の生産性向上方法。
＜２７＞中鎖脂肪酸がラウリン酸である＜２５＞又は＜２６＞の生産性向上方法。
＜２８＞渦鞭毛藻綱の藻類を、グリセリンを含有する培地中で培養する、中鎖脂肪酸の生産性が向上された藻類の製造方法。
＜２９＞中鎖脂肪酸がラウリン酸である＜２８＞の藻類の製造方法。
【実施例】
【００５０】
以下の実施例及び比較例において、「％」は「質量％」を意味する。なお、各種測定は、以下の方法により行った。
【００５１】
（１）藻類の培養条件
藻類の培養には、ダイゴＩＭＫ培地（日本製薬製）を用いた。培地組成の詳細を下記表１に示す。培養容器に滅菌した１００ｍＬ容三角フラスコ（ＰＹＲＥＸ（登録商標）製）と綿栓（アズワン製ＣＳ−２８）を使用し、フィルターユニット（ナルジェヌンク製）を用いろ過滅菌した培地を５０ｍＬ分注した。予め同液体培地により継代培養していた藻類の培養液１ｍＬを新しい培地に接種し、２０℃、蛍光灯下、照度約３０００ルクス、１２時間明暗条件下で静置培養した。
【００５２】
【表１】
2014132892.tif 000002
【００５３】
（２）培養物の回収方法
培養により得られた培養物４ｍＬを、３０００ｒｐｍ、３０分の条件で遠心分離して、沈殿画分を得た。得られた沈殿画分を８０℃にて約３時間から１６時間乾燥させ、乾燥藻体とした。
【００５４】
（３）脂質の回収方法
得られた乾燥藻体の重量を測定後、０．５ｍＬの１％食塩水にて懸濁し、内部標準として１ｍｇ／ｍＬの７−ペンタデカノンを５０μＬ添加後、０．５ｍＬのクロロホルムおよび１ｍＬのメタノールを培養液に添加して激しく攪拌後３０分間放置し、その後さらに０．５ｍＬのクロロホルムおよび０．５ｍＬの１．５％ＫＣｌを添加して攪拌後、３０００ｒｐｍ、１５分遠心分離を行い、パスツールピペットにてクロロホルム層（下層）を回収した。
【００５５】
（４）エステル交換反応（脂肪酸エステルの製造）
得られたクロロホルム層約０．５ｍＬに窒素ガスを吹き付けて乾固し、０．５Ｎ水酸化カリウム／メタノール溶液７００μＬを添加し、８０℃で３０分恒温した。続いて１ｍＬの１４％三フッ化ホウ素溶液（ＳＩＧＭＡ社製）を添加し、８０℃にて２０分恒温し、その後ヘキサン、飽和食塩水を各１ｍＬ添加し室温にて３０分放置後、上層であるヘキサン層を回収し、乾固して脂肪酸エステルを得た。
【００５６】
（５）脂肪酸エステルの同定、総脂肪酸量、脂肪酸含有量の測定方法
脂肪酸エステルの同定、総脂肪酸量、脂肪酸含有量は、ガスクロマトグラフィー(ＧＣ)分析により、下記の条件で行った。
脂肪酸エステルの同定は、後述の標準物質とのリテンションタイムと同一かどうかにより判断した。またＧＣ分析にて検出した脂肪酸エステル量を、内部標準を基準に算出し、その総量を総脂肪酸量とした。また総脂肪酸量を乾燥藻体量で除し１００を乗じた値を脂肪酸含量（％）とした。
【００５７】
装置：６８９０Ａ（Ａｇｉｌｅｎｔ製）
カラム：ＤＢ−１  ＭＳ  ３０ｍ×２００μｍ×０．２５μｍ（Ｊ＆Ｗ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製）
移動相：高純度ヘリウム（流量１ｍＬ／分）
昇温プログラム：１５０℃（０．５分）、４０℃／分、３２０℃（４分）
注入口検出器温度：３００℃
注入法：スプリットモード （スプリット比=７５:１）
サンプル注入量：５ μl
カラム流速：０．３ ｍＬ/分（コンスタント）
検出器：ＦＩＤ
キャリアガス：水素
メイクアップガス：ヘリウム
標準物質：ＳＩＧＭＡ社製の下記脂肪酸エステルを用いた。
ラウリン酸メチル（Ｃ１２）、ミリスチン酸メチル（Ｃ１４）、パルミチン酸メチル（Ｃ１６）、ステアリン酸メチル（Ｃ１８）を、不飽和脂肪酸はパルミトレイン酸メチル（Ｃ１６：１）、オレイン酸メチル（Ｃ１８：１）、リノール酸メチル（Ｃ１８：２）、リノレン酸メチル（Ｃ１８：３）、エイコサペンタエン酸メチル（Ｃ２０：５）、ドコサヘキサエン酸メチル（Ｃ２２：６）
【００５８】
（６）細胞数の計測
細胞数測定は、カウンティング・チャンバー（アズワン社：トーマ血球計算盤スタンダード）を用い、適度に希釈した試料に対して１／５０容のルゴール液(５０ｍｇ/ｍＬヨウ素、１００ｍｇ/ｍＬ  ヨウ化カリウム)を添加し細胞を固定した後に、実体顕微鏡（ＣＫＸ３１、オリンパス社製）または生物顕微鏡（ＥＣＬＩＰＳＥ  ８０ｉ、ニコン社製）を用いて計測した。
【００５９】
＜実施例１＞
渦鞭毛藻綱の藻類として、ＵＴＥＸ（The culture collection of algae at University of Texas at Austin）より入手した、Zooxanthella microadriatica LB2281株（Symbiodinium microadriaticum LB2281株）を用いた。
【００６０】
培養開始後３週間が経過した培地に、終濃度が０．５％となるようにグリセリンを添加し、さらに１週間培養した後、ＧＣ分析により脂肪酸量および脂肪酸種を測定した。分析結果を表２に示す。
【００６１】
＜比較例１、２＞
グリセリンを添加しなかった、又はグリセリンに代えてグルコースを終濃度０．５％となるように添加した以外は実施例１と同様の条件で培養した。分析結果を表２に示す。
【００６２】
【表２】
2014132892.tif 000003
【００６３】
表２に示すように、グリセリンを培地に添加した実施例１では、顕著な脂肪酸量の増大と、全脂肪酸に占める中鎖脂肪酸の比率向上が認められた。
【００６４】
＜実施例２〜５＞
グリセリンを終濃度０．１％、０．５％、１．０％、２．０％となるように添加し、さらに２週間培養した以外は実施例１と同様の条件で培養した。分析結果を表３に示す。
【００６５】
＜比較例３、４＞
グリセリンを添加しなかった、又はグリセリンに代えてグルコースを終濃度０．５％となるように添加した以外は実施例２と同様の条件で培養した。分析結果を表３に示す。
【００６６】
【表３】
2014132892.tif 000004
【００６７】
表３に示すように、培地中のグリセリン濃度０．１〜２．０質量％の範囲で、中鎖脂肪酸の比率向上が認められた。
【００６８】
＜実施例６＞
マイクロピペット法により無菌化した前記ＬＢ２２８１株を用い、培養開始段階から、終濃度が１．０％となるようにグリセリンを添加して４週間培養した以外は実施例１と同様の条件で培養した。分析結果を表４に示す。
【００６９】
＜比較例５〜１１＞
グリセリンを添加しなかった（比較例５）、又は、グリセリンに代えてグルコース（比較例６）、フルクトース（比較例７）、スクロース（比較例８）、キシロース（比較例９）、ソルビトール（比較例１０）、又はマンニトール（比較例１１）を添加した以外は実施例６と同様の条件で培養した。分析結果を表４に示す。
【００７０】
【表４】
2014132892.tif 000005
【００７１】
表４が示すように、グリセリン以外を添加した場合には、細胞数の増大効果は認められなかった。また、グリセリンを添加した場合では顕著な脂肪酸量の増大と、中鎖脂肪酸比率の向上が認められた。
【００７２】
＜実施例７＞
グリセリン添加後の培養の期間を、４週間、５週間、７週間、８週間、又は１２週間とした以外は実施例４と同様の条件で培養した。培養４週間目、５週間目、７週間目、８週間目、又は１２週間目に培養液（４ｍＬ）を採取してＧＣ分析を行った。分析結果を表５に示す。
【００７３】
【表５】
2014132892.tif 000006
【００７４】
表５が示すように、培養４週目〜１２週目のいずれにおいてもグリセリン添加系において、顕著な脂肪酸量の増大と、全脂肪酸に占める中鎖脂肪酸比率の向上が認められた。
【００７５】
＜実施例８＞
６週間培養した以外は実施例６と同様の条件で培養した。分析結果を表６に示す。
【００７６】
＜実施例９＞
ＩＭＫ培地（表１）中の硝酸ナトリウム（ＮａＮＯ3）を１０００ｍｇ/Ｌ、リン酸２ナトリウム（Ｎａ2ＨＰＯ4）を１４ｍｇ／Ｌ、リン酸２カリウム（Ｋ2ＨＰＯ4）を５０ｍｇ／Ｌに変更し（培地中の窒素源の含有量は、窒素原子当量で１６５ｍｇ／Ｌ、リン源の含有量は、リン原子当量で１２ｍｇ／Ｌである。）、６週間培養した以外は実施例６と同様の条件で培養した。分析結果を表６に示す。
【００７７】
＜比較例１２＞
グリセリンを添加しなかった以外は実施例８と同様の条件で培養した。分析結果を表６に示す。
【００７８】
＜比較例１３＞
グリセリンを添加しなかった以外は実施例９と同様の条件で培養した。分析結果を表６に示す。
【００７９】
【表６】
2014132892.tif 000007
【００８０】
表６が示すように、窒素およびリンを増強した培地にグリセリンを共存させると、顕著な脂肪酸量の増大と、全脂肪酸に占める中鎖脂肪酸比率の顕著な向上が認められた。
【００８１】
＜実施例１０＞
渦鞭毛藻綱の藻類として、ＮＩＥＳ（国立環境研究所）より入手したSymbiodinium sp. NIES-2638株を用い、実施例１と同様に培養開始後４週間が経過した培地に、終濃度が０．５％となるようにグリセリンを添加した。更に１７日間培養した後、ＧＣ分析により脂肪酸量および脂肪酸種を測定した。分析結果を表７に示す。
【００８２】
＜比較例１４＞
グリセリンを添加しなかった以外は実施例１０と同様の条件で培養した。分析結果を表７に示す。
【００８３】
【表７】
2014132892.tif 000008
【００８４】
表７が示すように、Symbiodinium sp. NIES-2638株においてもグリセリン添加により、顕著な脂肪酸量の増大と、全脂肪酸に占める中鎖脂肪酸比率の顕著な向上が認められた。
【００８５】
＜実施例１１＞
渦鞭毛藻綱の藻類として、ＮＩＥＳ（国立環境研究所）より入手したペリディニウム目 (Peridiniales)に属するHeterocapsa niei NIES-420株を用いグリセリン添加後７日間培養した以外は、実施例１０と同条件で培養した。分析結果を表８に示す。
【００８６】
＜比較例１５＞
グリセリンを添加しなかった以外は実施例１１と同様の条件で培養した。分析結果を表８に示す。
【００８７】
【表８】
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【００８８】
表８が示すように、渦鞭毛藻Heterocapsa niei NIES-420株においてもグリセリン添加により、脂肪酸量の増大と、全脂肪酸に占める中鎖脂肪酸比率の顕著な向上が認められた。