(57)【要約】      （修正有）【課題】ＩＬ−１３結合タンパク質を包含する、キメラ、ＣＤＲグラフト及びヒト化抗体の提供。【解決手段】抗体は、完全長抗体又はその抗原結合性部分であり得る。抗体を製造する方法、及び抗体を使用する方法。好ましい抗体は、ｈＩＬ−１３に対して高い親和性を有し、ｈＩＬ−１３活性をインビトロ及び生体内で中和する。抗体又は抗体部分は、例えばｈＴＬ−１３活性が有害である障害に罹患したヒト対象における、ｈＩＬ−１３の検出、及びｈＩＬ−１３活性を阻害し、ｈＩＬ−１３活性を低下させ、ＩＬ−１３活性が有害である疾患又は障害について対象を治療する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
結合タンパク質がＩＬ−１３に結合可能であり、抗原結合ドメインが、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１個のＣＤＲを含む、抗原結合ドメインを含む結合タンパク質。
ＣＤＲ−Ｈ１．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（配列番号６４）（式中、
Ｘ１は、Ｔ、Ｄ、Ｇ又はＳであり、
Ｘ２はＳであり、
Ｘ３はＤであり、
Ｘ４は、Ｍ、Ｓ、Ｙ、Ｌ又はＨであり、
Ｘ５は、Ｇ、Ｗ、Ｙ、Ａ、Ｓ又はＮであり、
Ｘ６は、Ｖ、Ｉ又はＭであり、
Ｘ７は、Ｄ、Ｈ、Ｓ、Ｙ、Ｎ又はＧである。）、
ＣＤＲ−Ｈ２．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７（配列番号６５）（式中、
Ｘ１は、Ｍ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、Ｓ、Ｇ又はＬであり、
Ｘ２は、Ｉであり、又は存在せず、
Ｘ３は、Ｈ、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｓ又はＷであり、
Ｘ４は、Ｐ、Ｓ、Ｗ又はＧであり、
Ｘ５は、Ｓ、Ｇ、Ｅ又はＤであり、
Ｘ６は、Ｄ、Ｇ、Ｓ、Ｅ又はＮであり、
Ｘ７は、Ｓ、Ｙ又はＧであり、
Ｘ８は、Ｅ、Ｎ、Ｙ、Ｖ又はＲであり、
Ｘ９は、Ｔ、Ｉ又はＫであり、
Ｘ１０は、Ｒ、Ｙ、Ｉ、Ｄ又はＡであり、
Ｘ１１は、Ｌ、Ｙ、Ｄ又はＦであり、
Ｘ１２は、Ｎ、Ｐ、Ｓ又はＤであり、
Ｘ１３は、Ｑ、Ｅ、Ｄ、Ｐ又はＳであり、
Ｘ１４は、Ｋ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ａ又はＶであり、
Ｘ１５は、Ｆ、Ｌ、Ｖ又はＭであり、
Ｘ１６は、Ｋ、Ｒ又はＱであり、
Ｘ１７は、Ｄ、Ｇ又はＳである。）、
ＣＤＲ−Ｈ３．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４（配列番号６６）（式中、
Ｘ１は、Ｗ、Ｔ、Ｇ、Ｙ、Ｄ又はＩであり、
Ｘ２は、Ｒ、Ａ、Ｓ、Ｇ又はＶであり、
Ｘ３は、Ｔ、Ｆ、Ｙ又はＳであり、
Ｘ４は、Ｓ、Ｔ又はＹであり、
Ｘ５は、Ｙ、Ｆ又はＧであり、
Ｘ６は、Ｆ又はＹであり、
Ｘ７は、Ｓ、Ｙ、Ｉ又はＦであり、
Ｘ８は、Ｄ、Ｌ、Ｙ又はＰであり、
Ｘ９はＹであり、
Ｘ１０はＧであり、
Ｘ１１は、Ｙ、Ａ、Ｐ又はＥであり、
Ｘ１２は、Ｆ、Ｍ、Ｓ、Ｌ又はＩであり、
Ｘ１３は、Ｄ、Ｖ、Ｎ又はＫであり、
Ｘ１４は、Ｙ又はＦである。）、
ＣＤＲ−Ｌ１．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５  Ｘ１６−Ｘ１７（配列番号６７）（式中、
Ｘ１は、Ｋ又はＲであり、
Ｘ２は、Ｓ又はＡであり、
Ｘ３は、Ｓ又はＴであり、
Ｘ４は、Ｑ、Ｋ又はＩであり、
Ｘ５は、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｇ又はＥであり、
Ｘ６は、Ｌ、Ｔ又はＳであり、
Ｘ７は、Ｌ、Ｑ又はＶであり、
Ｘ８は、Ｙ、Ｎ、Ｈ、Ｄ又はＴであり、
Ｘ９は、Ｓ、Ｉ又はＴであり、
Ｘ１０は、Ｓ、Ｄ、Ｎ、Ｈ又はＹであり、
Ｘ１１は、Ｎ又はＧであり、
Ｘ１２はＱであり、
Ｘ１３は、Ｋ、Ｆ、Ｎ、Ｅ又はＳであり、
Ｘ１４は、Ｎ、Ｔ又はＳであり、
Ｘ１５は、Ｙ又はＦであり、
Ｘ１６は、Ｌ、Ａ又はＭであり、
Ｘ１７は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｈ又はＮである。）、
ＣＤＲ−Ｌ２．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（配列番号６８）（式中、
Ｘ１は、Ｌ、Ｓ、Ｋ、Ｔ、Ｗ又はＹであり、
Ｘ２は、Ｖ、Ｔ又はＡであり、
Ｘ３は、Ｓ又はＮであり、
Ｘ４は、Ｎ、Ｋ、Ｔ、Ｍ又はＲであり、
Ｘ５は、Ｒ、Ｋ又はＬであり、
Ｘ６は、Ｆ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ又はＡであり、
Ｘ７は、Ｓ、Ｒ又はＰである。）、及び
ＣＤＲ−Ｌ３．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９（配列番号６９）（式中、
Ｘ１は、Ｆ、Ｗ、Ｑ又はＡであり、
Ｘ２は、Ｑ又はＬであり、
Ｘ３は、Ｈ、Ｇ、Ｙ、Ｗ又はＮであり、
Ｘ４は、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｌ又はＹであり、
Ｘ５は、Ｙ、Ｔ、Ｓ、Ｅ又はＨであり、
Ｘ６は、Ｌ、Ｖ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｇ、Ｐ又はＤであり、
Ｘ７は、Ｐ又はＨであり、
Ｘ８は、Ｌ、Ｆ、Ｙ、Ｗ又はＲであり、
Ｘ９は、Ｔ又はＶである。）
【請求項２】
前記少なくとも１個のＣＤＲが、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の結合タンパク質。
配列番号３２の残基３１−３５、
配列番号３２の残基５０−６６、
配列番号３２の残基９９−１０５、
配列番号３３の残基２４−３９、
配列番号３３の残基５５−６１、
配列番号３３の残基９４−１０２、
配列番号３４の残基３１−３５、
配列番号３４の残基５０−６６、
配列番号３４の残基９９−１０５、
配列番号３５の残基２４−３９、
配列番号３５の残基５５−６１、
配列番号３５の残基９４−１０２、
配列番号３６の残基３１−３５、
配列番号３６の残基５０−６６、
配列番号３６の残基９９−１０９、
配列番号３７の残基２４−３９、
配列番号３７の残基５５−６１、
配列番号３７の残基９４−１０２、
配列番号３８の残基３１−３５、
配列番号３８の残基５０−６６、
配列番号３８の残基９９−１０９、
配列番号３９の残基３１−３５、
配列番号３９の残基５０−６６、
配列番号３９の残基９９−１１２、
配列番号４０の残基２４−３９、
配列番号４０の残基５５−６１、
配列番号４０の残基９４−１０２、
配列番号４１の残基３１−３５、
配列番号４１の残基５０−６６、
配列番号４１の残基９９−１１２、
配列番号４２の残基３１−３５、
配列番号４２の残基５０−６６、
配列番号４２の残基９９−１００、
配列番号４３の残基２４−３９、
配列番号４３の残基５５−６１、
配列番号４３の残基９４−１０２、
配列番号４４の残基３１−３５、
配列番号４４の残基５０−６５、
配列番号４４の残基９８−１０６、
配列番号４５の残基２４−４０、
配列番号４５の残基５６−６２、
配列番号４５の残基９５−１０３、
配列番号４６の残基３２−３８、
配列番号４６の残基５２−６７、
配列番号４６の残基１００−１１２、
配列番号４７の残基２４−３４、
配列番号４７の残基５０−５６、
配列番号４７の残基８９−９７、
配列番号４８の残基３１−３７、
配列番号４８の残基５２−６７、
配列番号４８の残基１００−１１２、
配列番号４９の残基２４−３４、
配列番号４９の残基５０−５６、
配列番号４９の残基８９−９７、
配列番号５０の残基３１−３７、
配列番号５０の残基５２−６７、
配列番号５０の残基１００−１１２、
配列番号５１の残基２４−３４、
配列番号５１の残基６０−６６、
配列番号５１の残基８９−９７、
配列番号５２の残基３１−３５、
配列番号５２の残基５０−６６、
配列番号５２の残基９９−１０７、
配列番号５３の残基２３−３６、
配列番号５３の残基５２−５８、
配列番号５３の残基９１−９９、
配列番号５４の残基３１−３５、
配列番号５４の残基５０−６５、
配列番号５４の残基９８−１０７、
配列番号５５の残基２４−３８、
配列番号５５の残基５４−６０、
配列番号５５の残基９３−１０１、
配列番号５６の残基３１−３５、
配列番号５６の残基５０−６５、
配列番号５６の残基９８−１０７、
配列番号５７の残基２４−３８、
配列番号５７の残基５４−６０、
配列番号５７の残基９３−１０１、
配列番号５８の残基３１−３５、
配列番号５８の残基５０−６５、
配列番号５８の残基９８−１０７、
配列番号５９の残基２４−３８、
配列番号５９の残基５４−６０、
配列番号５９の残基９３−１０１、
配列番号６０の残基３１−３５、
配列番号６０の残基５０−６５、
配列番号６０の残基９８−１０７、
配列番号６１の残基２４−３８、
配列番号６１の残基５４−６０、
配列番号６１の残基９３−１０１、
配列番号６２の残基３１−３５、
配列番号６２の残基５０−６５、
配列番号６２の残基９８−１０７、
配列番号６３の残基２４−３８、
配列番号６３の残基５４−６０、及び
配列番号６３の残基９３−１０１
【請求項３】
前記結合タンパク質が、少なくとも３個のＣＤＲを含む、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項４】
前記少なくとも３個のＣＤＲが、以下からなる可変ドメインＣＤＲセットから選択される、請求項３に記載の結合タンパク質。
【表２５】
2014237671.tif 000041
2014237671.tif 000042
2014237671.tif 000043
2014237671.tif 000044
【請求項５】
少なくとも２個の可変ドメインＣＤＲセットを含む、請求項４に記載の結合タンパク質。
【請求項６】
前記少なくとも２個の可変ドメインＣＤＲセットが、以下からなる群から選択される、請求項５に記載の結合タンパク質。
ＶＨ  ２５Ｃ８  ＣＤＲセットとＶＬ  ２５Ｃ８  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ９Ｃ１１  ＣＤＲセットとＶＬ  ９Ｃ１１  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ２１Ｄ９  ＣＤＲセットとＶＬ  ２１Ｄ９  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ２２Ｄ１０  ＣＤＲセットとＶＬ  ２２Ｄ１０  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ５Ｆ１  ＣＤＲセットとＶＬ  ５Ｆ１  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ５Ｇ１  ＣＤＲセットとＶＬ  ５Ｇ１  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ３Ｈ７  ＣＤＲセットとＶＬ  ３Ｈ７  ＣＤＲセット、
ＶＨ  １４Ｂ２  ＣＤＲセットとＶＬ  １４Ｂ２  ＣＤＲセット、
ＶＨ  １３Ｃ５  ＣＤＲセットとＶＬ  １３Ｃ５  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ２９Ｇ５  ＣＤＲセットとＶＬ  ２９Ｇ５  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ３３Ｃ３  ＣＤＲセットとＶＬ  ３３Ｃ３  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ４Ａ８  ＣＤＲセットとＶＬ  ４Ａ８  ＣＤＲセット、
ＶＨ  １Ｂ６  ＣＤＲセットとＶＬ  １Ｂ６  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ３Ｅ５  ＣＤＲセットとＶＬ  ３Ｅ５  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ６Ｃ８  ＣＤＲセットとＶＬ  ６Ｃ８  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ５Ｄ３  ＣＤＲセットとＶＬ  ５Ｄ３  ＣＤＲセット、及び
ＶＨ  ８Ｂ６  ＣＤＲセットとＶＬ  ８Ｂ６  ＣＤＲセット
【請求項７】
ヒト受容体フレームワークを更に含む、請求項６に記載の結合タンパク質。
【請求項８】
前記ヒト受容体フレームワークが、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の結合タンパク質。
配列番号６
配列番号７
配列番号８
配列番号９
配列番号１０
配列番号１１
配列番号１２
配列番号１３
配列番号１４
配列番号１５
配列番号１６
配列番号１７
配列番号１８
配列番号１９
配列番号２０
配列番号２１
配列番号２２
配列番号２３
配列番号２４
配列番号２５
配列番号２６
配列番号２７
配列番号２８
配列番号２９
配列番号３０及び
配列番号３１
【請求項９】
前記ヒト受容体フレームワークが、少なくとも１個のフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、前記フレームワークのアミノ酸配列が、前記ヒト受容体フレームワークの配列と少なくとも６５％同一であり、前記ヒト受容体フレームワークと同一である少なくとも７０個のアミノ酸残基を含む、請求項７（又は９）に記載の結合タンパク質。
【請求項１０】
前記ヒト受容体フレームワークが、重要な残基における少なくとも１個のフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、前記重要な残基が、
ＣＤＲに隣接する残基、
グリコシル化部位残基、
希少残基、
ヒトＩＬ−１３と相互作用可能な残基、
ＣＤＲと相互作用可能な残基、
正準（ｃａｎｏｎｉｃａｌ）残基、
重鎖可変領域と軽鎖可変領域の接触残基、
バーニア（Ｖｅｒｎｉｅｒ）ゾーン内の残基、及び
Ｃｈｏｔｈｉａによって定義された可変重鎖ＣＤＲ１とＫａｂａｔによって定義された第１の重鎖フレームワークとの重複領域中の残基
からなる群から選択される、請求項８に記載の結合タンパク質。
【請求項１１】
重要な残基が、２Ｌ、１５Ｌ、２２Ｌ、４１Ｌ、４２Ｌ、４４Ｌ、４９Ｌ、５０Ｌ、５１Ｌ、６２Ｌ、７１Ｌ、７３Ｌ、１０Ｈ、４４Ｈ、４６Ｈ、４８Ｈ、６７Ｈ、６８Ｈ、７０Ｈ、７２Ｈ、７４Ｈ、７６Ｈ、８３Ｈ、８４Ｈ、８６Ｈ、８７Ｈ及び９７Ｈからなる群から選択される、請求項９に記載の結合タンパク質。
【請求項１２】
前記結合タンパク質が、コンセンサスヒト可変ドメインである、請求項１１に記載の結合タンパク質。
【請求項１３】
前記結合タンパク質が、
配列番号７０
配列番号７１
配列番号７２
配列番号７３
配列番号７４
配列番号７５
配列番号７６
配列番号７７
配列番号７８
配列番号７９
配列番号８０
配列番号８１
配列番号８２
配列番号８３
配列番号８４
配列番号８５
配列番号９２
配列番号９３及び
配列番号９４
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１個の可変ドメインを含む、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項１４】
前記結合タンパク質が２個の可変ドメインを含み、前記２個の可変ドメインが、
配列番号７０と配列番号７１、
配列番号７２と配列番号７３、
配列番号７４と配列番号７５、
配列番号７６と配列番号７７、
配列番号７８と配列番号７９、
配列番号８０と配列番号８１、
配列番号８２と配列番号８３、
配列番号８４と配列番号８５
配列番号８０と配列番号９２、
配列番号８０と配列番号９３及び
配列番号８０と配列番号９４
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１３に記載の結合タンパク質。
【請求項１５】
前記結合タンパク質が、
配列番号７０
配列番号７１
配列番号７２
配列番号７３
配列番号７４
配列番号７５
配列番号７６
配列番号７７
配列番号７８
配列番号７９
配列番号８０
配列番号８１
配列番号８２
配列番号８３
配列番号８４
配列番号８５
配列番号９２
配列番号９３及び
配列番号９４
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１個の可変ドメインを含む、請求項１１に記載の結合タンパク質。
【請求項１６】
前記結合タンパク質がＩＬ−１３に結合する、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項１７】
前記結合タンパク質がＩＬ−１３に結合する、請求項１４に記載の結合タンパク質。
【請求項１８】
前記結合タンパク質がＩＬ−１３の生物学的機能を調節可能である、請求項１７に記載の結合タンパク質。
【請求項１９】
前記結合タンパク質がＩＬ−１３を中和可能である、請求項１７に記載の結合タンパク質。
【請求項２０】
前記結合タンパク質が、表面プラズモン共鳴によって測定して、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１、及び少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択される、前記標的に対するオン速度定数（Ｋｏｎ）を有する、請求項１７に記載の結合タンパク質。
【請求項２１】
前記結合タンパク質が、表面プラズモン共鳴によって測定して、約１０−３ｓ−１以下、約１０−４ｓ−１以下、約１０−５ｓ−１以下及び約１０−６ｓ−１以下からなる群から選択される、前記標的に対するオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する、請求項１７に記載の結合タンパク質。
【請求項２２】
前記結合タンパク質が、約１０−７Ｍ以下、約１０−８Ｍ以下、約１０−９Ｍ以下、約１０−１０Ｍ以下、約１０−１１Ｍ以下、約１０−１２Ｍ以下及び１０−１３Ｍ以下からなる群から選択される、前記標的に対する解離定数（ＫＤ）を有する、請求項１７に記載の結合タンパク質。
【請求項２３】
抗体構築物が、リンカーポリペプチド又は免疫グロブリン定常ドメインを更に含む、請求項１に記載の結合タンパク質を含む抗体構築物。
【請求項２４】
前記結合タンパク質が、
免疫グロブリン分子、
モノクローナル抗体、
キメラ抗体、
ＣＤＲグラフト抗体、
ヒト化抗体、
Ｆａｂ、
Ｆａｂ’、
Ｆ（ａｂ’）２、
Ｆｖ、
ジスルフィド結合Ｆｖ、
ｓｃＦｖ、
単一ドメイン抗体、
二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、
多重特異性抗体、
二重特異性（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体及び
二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体
からなる群から選択される、請求項２３に記載の抗体構築物。
【請求項２５】
前記結合タンパク質が、
ヒトＩｇＭ定常ドメイン、
ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、
ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、
ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、
ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、
ヒトＩｇＥ定常ドメイン及び
ヒトＩｇＡ定常ドメイン
からなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む、請求項２３に記載の抗体構築物。
【請求項２６】
配列番号２
配列番号３
配列番号４及び
配列番号５
からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン定常ドメインを含む、請求項２３に記載の抗体構築物。
【請求項２７】
抗体複合体が、免疫接着（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｎｓｉｏｎ）分子、造影剤、治療薬及び細胞毒性薬からなる群から選択される薬剤を更に含む、請求項２４に記載の抗体構築物を含む抗体複合体。
【請求項２８】
前記薬剤が、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁性標識及びビオチンからなる群から選択される造影剤である、請求項２７に記載の抗体複合体。
【請求項２９】
前記造影剤が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ及び１５３Ｓｍからなる群から選択される放射性標識である、請求項２７に記載の抗体複合体。
【請求項３０】
前記薬剤が、代謝拮抗物質、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、血管新生阻害剤、有糸分裂阻害剤、アントラサイクリン、毒素及びアポトーシス剤からなる群から選択される治療薬又は細胞毒性薬である、請求項２７に記載の抗体複合体。
【請求項３１】
前記結合タンパク質がヒトグリコシル化パターンを有する、請求項２４に記載の抗体構築物。
【請求項３２】
前記結合タンパク質が、結晶化結合タンパク質である、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項３３】
前記抗体構築物が、結晶化抗体構築物である、請求項２３に記載の抗体構築物。
【請求項３４】
前記結晶化抗体構築物が、担体を含まない医薬制御放出結晶化抗体構築物である、請求項３３に記載の抗体構築物。
【請求項３５】
前記抗体構築物が、前記抗体構築物の可溶性対応物よりも長い生体内半減期を有する、請求項３４に記載の抗体構築物。
【請求項３６】
前記抗体構築物が生物活性を保持する、請求項３４に記載の抗体構築物。
【請求項３７】
請求項１に記載の結合タンパク質アミノ酸配列をコードする、単離核酸。
【請求項３８】
請求項２３に記載の抗体構築物アミノ酸配列をコードする、単離核酸。
【請求項３９】
請求項３８に記載の単離核酸を含む、ベクター。
【請求項４０】
前記ベクターが、ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶ及びｐＢＪからなる群から選択される、請求項３９に記載のベクター。
【請求項４１】
請求項３９に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項４２】
前記宿主細胞が原核細胞である、請求項４１に記載の宿主細胞。
【請求項４３】
前記宿主細胞がＥ．コリ（Ｅ．  ｃｏｌｉ）である、請求項４２に記載の宿主細胞。
【請求項４４】
前記宿主細胞が真核細胞である、請求項４１に記載の宿主細胞。
【請求項４５】
前記真核細胞が、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及び真菌細胞からなる群から選択される、請求項４４に記載の宿主細胞。
【請求項４６】
前記真核細胞が、ほ乳動物細胞、トリ細胞及び昆虫細胞からなる群から選択される動物細胞である、請求項４４に記載の宿主細胞。
【請求項４７】
前記宿主細胞がＣＨＯ細胞である、請求項４４に記載の宿主細胞。
【請求項４８】
前記宿主細胞がＣＯＳである、請求項４４に記載の宿主細胞。
【請求項４９】
前記宿主細胞が酵母細胞である、請求項４４に記載の宿主細胞。
【請求項５０】
前記酵母細胞がサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）である、請求項４９に記載の宿主細胞。
【請求項５１】
前記宿主細胞が昆虫Ｓｆ９細胞である、請求項４４に記載の宿主細胞。
【請求項５２】
請求項４１に記載の宿主細胞を、ＩＬ−１３に結合可能な結合タンパク質の製造に十分な条件下で、培地中で培養することを含む、ＩＬ−１３に結合可能なタンパク質を製造する方法。
【請求項５３】
請求項５２に記載の方法によって製造されるタンパク質。
【請求項５４】
（ａ）請求項３３に記載の結晶化結合タンパク質と成分とを含む製剤、及び
（ｂ）少なくとも１種類の重合体担体
を含む、結合タンパク質の放出用組成物。
【請求項５５】
前記重合体担体が、ポリアクリル酸、ポリシアノアクリラート、ポリアミノ酸、ポリ無水物、ポリデプシペプチド、ポリエステル、ポリ乳酸、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）又はＰＬＧＡ、ポリｂ−ヒドロキシブチラート、ポリカプロラクトン、ポリジオキサノン；ポリエチレングリコール、ポリ（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ（オルガノ）ホスファゼン、ポリオルトエステル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテルコポリマー、Ｐｌｕｒｏｎｉｃポリオール、アルブミン、アルギナート、セルロース及びセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリコサミノグリカン（ｇｌｙｃａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ）、硫酸化多糖（ｐｏｌｙｅａｃｃｈａｒｉｄｅ）、これらの混合物及びコポリマーからなる群の１種類以上から選択されるポリマーである、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
前記成分が、アルブミン、スクロース、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコール及びポリエチレングリコールからなる群から選択される、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５７】
請求項５４に記載の組成物の有効量をほ乳動物に投与する段階を含む、ほ乳動物を治療する方法。
【請求項５８】
請求項１に記載の結合タンパク質と薬学的に許容される担体とを含む、薬剤組成物。
【請求項５９】
前記薬学的に許容される担体が、前記結合タンパク質の吸収又は分散の増大に有用であるアジュバントとして機能する、請求項５８に記載の薬剤組成物。
【請求項６０】
前記アジュバントがヒアルロニダーゼである、請求項５９に記載の薬剤組成物。
【請求項６１】
ＩＬ−１３活性が有害である障害を治療するための少なくとも１種類の追加の治療薬を更に含む、請求項５８に記載の薬剤組成物。
【請求項６２】
前記追加の薬剤が、治療薬、造影剤、細胞毒性薬、血管新生阻害剤；キナーゼ阻害剤；同時刺激分子遮断薬；接着分子遮断薬；抗サイトカイン抗体又はその機能的断片；メトトレキサート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能な標識又はレポーター；ＴＮＦ拮抗物質；抗リウマチ薬；筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌剤、乾せん治療薬、コルチコステロイド、タンパク質同化ステロイド、エリスロポイエチン、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、刺激薬、ぜん息治療薬、ベータ作動物質、吸入ステロイド、経口ステロイド、エピネフリン又は類似体、サイトカイン及びサイトカイン拮抗物質からなる群から選択される、請求項６１に記載の薬剤組成物。
【請求項６３】
ヒトＩＬ−１３活性が低下するように、ヒトＩＬ−１３を請求項１に記載の結合タンパク質と接触させることを含む、ヒトＩＬ−１３活性を低下させる方法。
【請求項６４】
ＩＬ−１３活性が有害である障害に罹患したヒト対象におけるヒトＩＬ−１３活性が低下するように、請求項１に記載の結合タンパク質をヒト対象に投与することを含む、ヒト対象におけるヒトＩＬ−１３活性を低下させる方法。
【請求項６５】
治療が達成されるように、請求項１に記載の結合タンパク質を対象に投与することによって、ＩＬ−１３活性が有害である疾患又は障害について対象を治療する方法。
【請求項６６】
前記障害が、呼吸器障害；ぜん息；アレルギー性及び非アレルギー性ぜん息；感染によるぜん息；呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染によるぜん息；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；気道炎症を伴う他の症状；好酸球増加症；線維症及び過剰粘液産生；嚢胞性線維症；肺線維症；アトピー性障害；アトピー性皮膚炎；じんま疹；湿疹；アレルギー性鼻炎；及びアレルギー性胃腸炎；皮膚の炎症性及び／又は自己免疫性症状；胃腸器官の炎症性及び／又は自己免疫性症状；炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；潰よう性大腸炎；クローン病；肝臓の炎症性及び／又は自己免疫性症状；肝硬変；肝線維症；Ｂ及び／又はＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる肝線維症；強皮症；腫よう又は癌；肝細胞癌；グリア芽細胞腫；リンパ腫；ホジキンリンパ腫；ウイルス感染；（例えば、ＨＴＬＶ−１による）ＨＴＬＶ−１感染；１型防御免疫応答（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｔｙｐｅ  １  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）の発現抑制並びにワクチン接種中の１型防御免疫応答の発現抑制からなる群から選択される、請求項６５に記載の方法。
【請求項６６】
前記障害が、リウマチ様関節炎、骨関節炎、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾せん性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰よう性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、ぜん息、アレルギー疾患、乾せん、皮膚炎  強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に付随する急性又は慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ  シェーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫よう、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性多内分泌腺機能低下Ｉ型及び多内分泌腺機能低下ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清陰性関節症、関節症、ライター病、乾せん性関節症、潰よう性結腸炎性関節症、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラに関連した関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水ほう症、尋常性天ぽうそう、落葉状天ほうそう、類天ほうそう、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、原因不明性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症症候群、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、線維性肺疾患、原因不明性線維化肺胞炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合性結合組織病関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、リウマチ様関節炎関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、薬剤性間質性肺疾患、線維症、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ性浸潤性肺疾患、感染後の間質性肺疾患、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫又はルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫に付随するＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に付随する急性免疫疾患、臓器移植に付随する慢性免疫疾患、骨関節症、原発性硬化性胆管炎、乾せん１型、乾せん２型、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、ＮＯＳ腎疾患、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性又はＮＯＳ男性不妊症、精子自己免疫、多発性硬化症（全サブタイプ）、交感性眼炎、結合組織病に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱��リウマチ様脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体原性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑  急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬剤性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギー及びぜん息、Ｂ群レンサ球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害（例えば、うつ病及び統合失調症）、Ｔｈ２型及びＴｈ１型媒介性疾患、急性及び慢性痛（とう痛の異なる形態）、肺癌、乳癌、胃癌、ぼうこう癌、結腸癌、すい臓癌、卵巣癌、前立腺癌、直腸癌、造血器悪性腫よう（白血病及びリンパ腫）などの癌、無ベータリポタンパク質血症（ａｂｅｔａｌｉｐｏｐｒｏｔｅｍｉａ）、先端チアノーゼ、急性及び慢性寄生性又は感染性過程、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性又は慢性細菌感染、急性すい炎、急性腎不全、腺癌、空気異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶、アルファ−１−抗トリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３療法、抗リン脂質抗体症候群、抗受容体過敏反応、大動脈（ａｏｒｄｉｃ）及び末梢動脈りゅう、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈ろう、運動失調、（持続性又は発作性）心房細動、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心臓不整脈、心臓不全（ｓｔｕｎ）症候群、心臓腫よう、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性症、小脳疾患、無秩序型又は多源性心房頻拍、化学療法関連障害、クロム（ｃｈｒｏｍｉｃ）骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール依存症、慢性炎症性症状、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト  ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連障害、ボクサー認知症、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化症、びまん性レヴィー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の障害、中年のダウン症候群、ＣＮＳドパミン受容体を遮断する薬物によって誘発される薬剤性運動障害、薬剤感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタインバーウイルス感染症、紅痛症、錐体外路障害及び小脳疾患、家族性食血細胞リンパ組織球増多症、胎児胸腺移植片拒絶、フリードライヒ失調症、末梢動脈機能障害、真菌性敗血症、ガス壊そ、胃潰よう、糸球体腎炎、任意の器官又は組織の移植片拒絶、グラム陰性菌敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物体による肉芽腫、有毛細胞白血病、Ｈａｌｌｅｒｒｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透���、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解性血小板減少性紫斑病、出血、肝炎（Ａ）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰症、過敏（ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｔｙ）反応、過敏性肺炎、高血圧症、運動低下症（ｈｙｐｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｍｏｖｅｍｅｎｔ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介性細胞傷害性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再潅流障害、虚血性脳卒中、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ライ病、皮質脊髄系の病変、脂肪性浮腫、肝移植拒絶、リンパ浮腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症、代謝性／特発性片頭痛、ミトコンドリア多系統障害、混合性結合組織病、モノクローナル免疫グロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性症（Ｍｅｎｃｅｌ  Ｄｅｊｅｒｉｎｅ−Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｈｉ−Ｄｒａｇｅｒ  ａｎｄ  Ｍａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ）、重症筋無力症、トリ型マイコバクテリウム  イントラセルラーレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム  テュバキュローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血性障害、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈及びその枝の閉塞、閉塞性動脈障害、ｏｋｔ３療法、睾丸炎／精巣上体炎、睾丸炎／精管復元術、臓器肥大、骨粗しょう症、すい臓移植拒絶、すい癌、腫よう随伴症候群／悪性腫ようの高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢動脈硬化性疾患、末梢血管障害、腹膜炎、悪性貧血、カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、臓器肥大、内分泌疾患、モノクローナル免疫グロブリン血症及び皮膚変化症候群）、体外潅流後（ｐｏｓｔ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）症候群、体外循環後（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ）症候群、心筋梗塞後の開心術症候群、子かん前症、進行性核上性麻ひ、原発性肺高血圧症、放射線療法、レイノー現象及び疾患、Ｒａｙｎｏｕｄ病、レフスム病、規則正しい幅の狭いＱＲＳ頻拍、腎血管性高血圧、再潅流傷害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老人性舞踏病、レヴィー小体型老年認知症、血清反応陰性関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、皮膚同種移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫よう、特異的不整脈、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性症、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血管系の梅毒、全身アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症型若年性関節リウマチ、Ｔ細胞又はＦＡＢ  ＡＬＬ、末梢血管拡張、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植片、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんま疹、心臓弁膜症、静脈りゅう、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルス及び真菌感染、致命的な脳炎／無菌性髄膜炎、生命に関連する血球貪食症候群、ウェルニッケ  コルサコフ症候群、ウィルソン病、任意の器官又は組織の異種移植片拒絶、急性冠動脈症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根筋障害、急性虚血、成人スティル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）感染に付随する自己免疫異常、自己免疫性腸疾患、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ球増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣機能不全、眼けん炎、気管支拡張症、水ほう性類天ほうそう、循環器疾患、破局的な抗リン脂質抗体症候群、セリアック病、頚椎症、慢性虚血、はん痕性類天ほうそう、多発性硬化症のリスクがある、最初のエピソードからなる症候群（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）（ＣＩＳ）、結膜炎、小児期発症型精神障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物性免疫溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症多形性紅斑、妊娠性類天ほうそう、ギラン  バレー症候群（ＧＢＳ）、枯草熱、Ｈｕｇｈｅｓ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介性アレルギー、免疫溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼球炎症性疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎（Ｋｅｒａｔｏｊｕｎｔｉｖｉｔｉｓ  ｓｉｃｃａ）、クスマウル病又はＫｕｓｓｍａｕｌ−Ｍｅｉｅｒ病、ランドリー麻ひ、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、網状皮斑、黄斑変性症、顕微鏡的多発性血管炎、Ｂｅｃｈｔｅｒｅｖ病、運動ニューロン障害、粘膜類天ほうそう、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ型非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解、少関節性ＪＲＡ、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発性動脈炎（又は結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、リウマチ性多発筋痛、白毛症、多関節性ＪＲＡ、多内分泌腺機能低下症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発筋痛（ＰＭＲ）、体外循環後症候群、原発性パーキンソン症、前立腺炎、赤芽球ろう、原発性副腎
不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、アクネ、膿ほう症、骨過形成及び骨髄炎）、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経症、続発性副腎不全、シリコーン関連結合組織病、スネドン−ウィルキンソン皮膚疾患、強直性脊椎炎（ｓｐｏｎｄｉｌｉｔｉｓ  ａｎｋｙｌｏｓａｎｓ）、スティーブンス  ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラズマ性網膜炎、中毒性表皮壊死症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫よう壊死因子受容体、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、じんま疹、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季カタル、ウイルス性網膜炎、フォークト−小柳−原田症候群（ＶＫＨ症候群）、しん出型黄斑変性症並びに創傷治癒からなる群から選択される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６８】
第２の薬剤の投与前、投与と同時、又は投与後に、請求項１に記載の結合タンパク質を投与する段階を含み、第２の薬剤が、吸入ステロイド；ベータ作動物質；短時間作用性又は長時間作用性ベータ作動物質；ロイコトリエン又はロイコトリエン受容体の拮抗物質；ＡＤＶＡＩＲ；ＩｇＥ阻害剤；抗ＩｇＥ抗体；ＸＯＬＡＩＲ；ホスホジエステラーゼ阻害薬；ＰＤＥ４阻害剤；キサンチン；抗コリン作用薬；肥満細胞安定剤；クロモリン；ＩＬ−４阻害剤；ＩＬ−５阻害剤；エオタキシン／ＣＣＲ３阻害剤；ヒスタミン又はＨ１、Ｈ２、Ｈ３及びＨ４を含めたその受容体の拮抗物質；プロスタグランジンＤ又はその受容体ＤＰ１及びＣＲＴＨ２の拮抗物質；ＴＮＦ拮抗物質；ＴＮＦ受容体の可溶性断片；ＥＮＢＲＥＬ；ＴＮＦ酵素拮抗物質；ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ムスカリン受容体拮抗物質；ＴＧＦベータ拮抗物質；インターフェロンガンマ；ピルフェニドン；化学療法剤、メトトレキサート；レフルノミド；シロリムス（ラパマイシン）又はその類似体、ＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２又はｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；免疫調節物質；ｐ３８阻害剤；ＴＰＬ−２、ＭＫ−２及びＮＦｋＢ阻害剤；ブデノシド（ｂｕｄｅｎｏｓｉｄｅ）；上皮成長因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチル酸；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体拮抗物質；抗ＩＬ−１β抗体；抗ＩＬ−６抗体；成長因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ又はＰＤＧＦの抗体又は作動物質；ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０又はこれらのリガンドの抗体；ＦＫ５０６；ラパマイシン；ミコフェノール酸モフェチル；イブプロフェン；プレドニゾロン；ホスホジエステラーゼ阻害薬；アデノシン作動物質；抗血栓薬；補体阻害剤；アドレナリン作動薬；ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤；ＩＬ−１β変換酵素阻害剤；ＴＮＦα変換酵素阻害剤；Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤；メタロプロテイナーゼ阻害剤；６−メルカプトプリン；アンジオテンシン変換酵素阻害薬；可溶性サイトカイン受容体；可溶性ｐ５５  ＴＮＦ受容体；可溶性ｐ７５  ＴＮＦ受容体；ｓＩＬ−１ＲＩ；ｓＩＬ−１ＲＩＩ；ｓＩＬ−６Ｒ；抗炎症性サイトカイン；ＩＬ−４；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１並びにＴＧＦβからなる群から選択される、ＩＬ−１３が有害である障害に罹患した患者を治療する方法。
【請求項６９】
対象に投与することが、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内（ｉｎｔｒａａｂｄｏｍｉｎａｌ）、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頚管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ）、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液嚢内、胸腔内、子宮内、ぼうこう内、ボーラス、膣、直腸、頬、舌下、鼻腔内及び経皮から選択される少なくとも１つの様式による、請求項６５に記載の方法。
【請求項７０】
ヒトＩＬ−１３に結合し、細胞表面に基づく受容体結合アッセイにおいて、約１．５×１０−８から１×１０−８Ｍ、１×１０−８から１×１０−９Ｍ、１０−９から１０−１０Ｍ、及び１０−１０から１０−１１Ｍからなる群から選択されるＩＣ５０で、又はＥＬＩＳＡに基づく受容体結合アッセイにおいて、約１．８×１０−８から１×１０−８Ｍ、１×１０−８から１×１０−９Ｍ、１０−９から１０−１０Ｍ、及び１０−１０から１０−１１Ｍからなる群から選択されるＩＣ５０で、ＩＬ−１３α２受容体に対する前記ＩＬ−１３の結合を阻止する、単離抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項７１】
ヒトＩＬ−１３に結合し、ヒトＩＬ−１３誘発性ぜん息モデルにおいてＡＨＲを約５０％抑制する、単離抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項７２】
前記抗体がヒトＩＬ−１３誘発性ぜん息モデルにおいてＡＨＲを約８０％抑制する、請求項７０に記載の抗体。
【請求項７３】
前記抗体が１３Ｃ５．５である、請求項７２に記載の抗体。
【請求項７４】
ヒトＩＬ−１３に結合し、ヒトＩＬ−１３誘発性ぜん息モデルにおいて、ＡＨＲを約５０％抑制し、粘液産生を約４０％抑制する、単離抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項７５】
前記抗体が１３Ｃ５．５である、請求項７４に記載の抗体。
【請求項７６】
ヒトＩＬ−１３に結合し、細胞表面に基づく受容体結合アッセイにおいて、又はＥＬＩＳＡに基づく受容体結合アッセイにおいて、ＩＬ−１３α２受容体に対する前記ＩＬ−１３の結合を１００ｎＭの濃度で約７０−１００％阻害する、単離抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項７７】
前記抗体がＢＡＫ５０２Ｇ９でも、ｍＡｂ１３．２でも、ＭＪ２−７でもない、請求項７０に記載の抗体。
【請求項７８】
前記抗体が１３Ｃ５．５である、請求項７０に記載の抗体。
【請求項７９】
前記抗体が１３Ｃ５．５である、請求項７６に記載の抗体。
【請求項８０】
ａ）約１０５Ｍ−１ｓ−１から１０６Ｍ−１ｓ−１、又は約１０６Ｍ−１ｓ−１から１０７Ｍ−１ｓ−１のオン速度定数（ｋｏｎ）、
ｂ）表面プラズモン共鳴によって測定して、約１０−４ｓ−１から１０−５ｓ−１、又は約１０−５ｓ−１から１０−６ｓ−１のオフ速度定数（ｋｏｆｆ）、及び
ｃ）約１．５×１０−１０から１×１０−１０Ｍ、又は約１０−１０から１０−１１Ｍの解離定数（ＫＤ）
からなる群から選択される結合特性でＩＬ−１３に結合する、単離抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項８１】
前記抗体又はその抗原結合性フラグメントが、６．６８×１０５Ｍ−１ｓ−１、７．８６×１０５Ｍ−１ｓ−１、８．３５×１０５Ｍ−１ｓ−１、８．６９×１０５Ｍ−１ｓ−１、９．１５×１０５Ｍ−１ｓ−１、１．２６×１０６Ｍ−１ｓ−１、１．７×１０６Ｍ−１ｓ−１及び２．５１×１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択されるＩＬ−１３に対するオン速度定数（ｋｏｎ）を有する、請求項８０に記載の抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項８２】
前記抗体又はその抗原結合性フラグメントが、表面プラズモン共鳴によって測定して、１．２３×１０−４ｓ−１、１．７６×１０−４ｓ−１、４．７４×１０−４ｓ−１、１．９１×１０−５ｓ−１、２．１４×１０−５ｓ−１、３．８２×１０−５ｓ−１、８．８１×１０−５ｓ−１及び９．６５×１０−５ｓ−１からなる群から選択されるＩＬ−１３に対するオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する、請求項８０に記載の抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項８３】
前記抗体又はその抗原結合性フラグメントが、１．０５×１０−１０Ｍ、７．１０×１０−１０Ｍ、１×１０−１１Ｍ、２．２０×１０−１１Ｍ、２．７２×１０−１１Ｍ、４．１７×１０−１１Ｍ、５．６８×１０−１１Ｍ、７．０１ｘ１０−１１Ｍ、７．１０×１０−１１Ｍ及び９．７９×１０−１１Ｍからなる群から選択されるＩＬ−１３に対する解離定数（ＫＤ）を有する、請求項８０に記載の抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項８４】
前記抗体又はその抗原結合性フラグメントがＩＬ−１３の生物学的機能を調節可能である、請求項８０に記載の抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項８５】
前記抗体又はその抗原結合性フラグメントがＩＬ−１３を中和可能である、請求項８０に記載の抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項８６】
前記抗体又はその抗原結合性フラグメントが、免疫グロブリン分子、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、多重特異性抗体、二重特異性（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体及び二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体からなる群から選択される、請求項８０に記載の抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項８７】
前記抗体又はその抗原結合性フラグメントがヒト化抗体である、請求項８０に記載の抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項８８】
前記抗体又はその抗原結合性フラグメントが１３Ｃ５．５抗体である、請求項８０に記載の抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項８９】
請求項８０に記載の抗体又はその抗原結合性フラグメントと薬学的に許容される担体とを含む、薬剤組成物。
【請求項９０】
ＩＬ−１３活性が有害である障害を治療するための少なくとも１種類の追加の治療薬を更に含む、請求項８９に記載の薬剤組成物。
【請求項９１】
配列番号１の局所領域Ｓｅｒ２６−Ｔｈｒ２７−Ａｌａ２８−Ｌｅｕ２９−Ａｒｇ３０−Ｇｌｕ３１−Ｌｅｕ３２−Ｉｌｅ３３−Ｇｌｕ３４−Ｇｌｕ３５−Ｌｅｕ３６−Ｖａｌ３７−Ａｓｎ３８及びＬｙｓ１２３−Ｌｙｓ１２４−Ｌｅｕ１２５−Ｐｈｅ１２６−Ａｒｇ１２７−Ｇｌｕ−１２８−Ｇｌｙ１２９−Ａｒｇ１３０によって定義されたエピトープに結合した抗体又はその抗原結合性フラグメントを有するＩＬ−１３がＩＬ−１３受容体との結合を阻止されるように、ヒトＩＬ−１３に結合する、単離抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項９２】
前記抗体又はその抗原結合性フラグメントが、配列番号１の局所領域Ａｒｇ３０−Ｇｌｕ３１−Ｌｅｕ３２−Ｉｌｅ３３−Ｇｌｕ３４−Ｇｌｕ３５−Ｌｅｕ３６−Ｖａｌ３７−Ａｓｎ３８及びＬｙｓ１２３−Ｌｙｓ１２４−Ｌｅｕ１２５−Ｐｈｅ１２６−Ａｒｇ１２７によって定義されたエピトープに結合した前記抗体又はその抗原結合性フラグメントを有するＩＬ−１３がＩＬ−１３受容体との結合を阻止されるように、ヒトＩＬ−１３に結合する、請求項９１に記載の単離抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項９３】
前記抗体又はその抗原結合性フラグメントが、配列番号１の局所領域Ｓｅｒ２６−Ｔｈｒ２７−Ａｌａ２８−Ｌｅｕ２９−Ａｒｇ３０−Ｇｌｕ３１−Ｌｅｕ３２−Ｉｌｅ３３−Ｇｌｕ３４−Ｇｌｕ３５−Ｌｅｕ３６−Ｖａｌ３７−Ａｓｎ３８及びＬｙｓ１２３−Ｌｙｓ１２４−Ｌｅｕ１２５−Ｐｈｅ１２６−Ａｒｇ１２７−Ｇｌｕ−１２８−Ｇｌｙ１２９−Ａｒｇ１３０によって定義されたエピトープに結合した前記抗体又はその抗原結合性フラグメントを有するＩＬ−１３がＩＬ−１３α２受容体との結合を阻止されるように、ヒトＩＬ−１３に結合する、請求項９１に記載の単離抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項９４】
前記抗体又はその抗原結合性フラグメントが、配列番号１の局所領域Ｓｅｒ２６−Ｔｈｒ２７−Ａｌａ２８−Ｌｅｕ２９−Ａｒｇ３０−Ｇｌｕ３１−Ｌｅｕ３２−Ｉｌｅ３３−Ｇｌｕ３４−Ｇｌｕ３５−Ｌｅｕ３６−Ｖａｌ３７−Ａｓｎ３８及びＬｙｓ１２３−Ｌｙｓ１２４−Ｌｅｕ１２５−Ｐｈｅ１２６−Ａｒｇ１２７−Ｇｌｕ−１２８−Ｇｌｙ１２９−Ａｒｇ１３０によって定義されたエピトープに結合した前記抗体又はその抗原結合性フラグメントを有するＩＬ−１３がＩＬ−１３α２受容体との結合を阻止されるように、ヒトＩＬ−１３に結合し、ただし前記抗体がＢＡＫ５０２Ｇ９でもＭＪ２−７でもない、請求項９１に記載の単離抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項９５】
前記抗体が１３Ｃ５．５である、請求項９１に記載の抗体。
【請求項９６】
配列番号１のアミノ酸１０４−１３０に結合する、単離抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項９７】
前記抗体が１３Ｃ５．５である、請求項９６に記載の抗体。
【請求項９８】
ａ．ヘリックスＡ及びＤを含めて、ＩＬ−１３上のエピトープとの結合、
ｂ．約１０５Ｍ−１ｓ−１から１０６Ｍ−１ｓ−１、又は約１０６Ｍ−１ｓ−１から１０７Ｍ−１ｓ−１のオン速度定数（ｋｏｎ）、
ｃ．表面プラズモン共鳴によって測定して、約１０−４ｓ−１から１０−５ｓ−１、又は約１０−５ｓ−１から１０−６ｓ−１のオフ速度定数（ｋｏｆｆ）、及び
ｄ．約１．５×１０−１０から１×１０−１０Ｍ、又は約１０−１０から１０−１１Ｍの解離定数（ＫＤ）
からなる群から選択される結合特性で、ＩＬ−１３に結合しおよびＩＬ−１３α２受容体に対するＩＬ−１３の結合を阻止する、単離抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項９９】
ａ．ヘリックスＡ及びＤを含めて、ＩＬ−１３上のエピトープとの結合、
ｂ．約１０５Ｍ−１ｓ−１から１０６Ｍ−１ｓ−１、又は約１０６Ｍ−１ｓ−１から１０７Ｍ−１ｓ−１のオン速度定数（ｋｏｎ）、
ｃ．表面プラズモン共鳴によって測定して、約１０−４ｓ−１から１０−５ｓ−１、又は約１０−５ｓ−１から１０−６ｓ−１のオフ速度定数（ｋｏｆｆ）、及び
ｄ．約１．５×１０−１０から１×１０−１０Ｍ、又は約１０−１０から１０−１１Ｍの解離定数（ＫＤ）
からなる群から選択される結合特性で変種ＩＬ−１３に結合する、単離抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項１００】
ａ．ヘリックスＡ及びＤを含めて、ＩＬ−１３上のエピトープとの結合、
ｂ．約１０５Ｍ−１ｓ−１から１０６Ｍ−１ｓ−１、又は約１０６Ｍ−１ｓ−１から１０７Ｍ−１ｓ−１のオン速度定数（ｋｏｎ）、
ｃ．表面プラズモン共鳴によって測定して、約１０−４ｓ−１から１０−５ｓ−１、又は約１０−５ｓ−１から１０−６ｓ−１のオフ速度定数（ｋｏｆｆ）、及び
ｄ．約１．５×１０−１０から１×１０−１０Ｍ、又は約１０−１０から１０−１１Ｍの解離定数（ＫＤ）
からなる群から選択される結合特性で野生型ＩＬ−１３及び変種ＩＬ−１３に結合する、単離抗体又はその抗原結合性フラグメント。
【請求項１０１】
前記抗体がヒトＩＬ−１３誘発性ぜん息モデルにおいてＡＨＲを約５０％抑制する、請求項９４に記載の単離抗体。
【請求項１０２】
前記抗体がヒトＩＬ−１３誘発性ぜん息モデルにおいて粘液産生を約５０％抑制する、請求項９４に記載の単離抗体。
【請求項１０３】
前記抗体がヒトＩＬ−１３誘発性ぜん息モデルにおいてＴＡＲＣを約５０％抑制する、請求項９４に記載の単離抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２００６年９月８日に出願された米国仮特許出願第６０／８４３，２４９号の優先権の利益を主張するものである。
【０００２】
本発明は、ＩＬ−１３結合タンパク質に関し、詳細には、ぜん息、アレルギー、ＣＯＰＤ、線維症及び癌を含めた種々の疾患の予防及び／又は治療におけるその使用に関する。
【０００３】
共同研究契約の参照
本願の内容は、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ，  Ｉｎｃ．とＡｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって、また、両者間で２００５年１２月１４日に締結された共同研究契約に属し、ＩＬ−１３に対する組換え操作された抗体を対象とする。
【背景技術】
【０００４】
ヒトＩＬ−１３は、活性化Ｔ細胞からクローン化された１７ｋＤａの糖タンパク質であり（Ｚｕｒａｗｓｋｉ  ａｎｄ  ｄｅ  Ｖｒｉｅｓ  １９９４  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １５  １９−２６）、Ｔｈ２系列の活性化Ｔ細胞によって産生されるが、Ｔｈ０及びＴｈ１  ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、並びに肥満細胞などの幾つかの非Ｔ細胞集団もＩＬ−１３を産生する（Ｚｕｒａｗｓｋｉ  ａｎｄ  ｄｅ  Ｖｒｉｅｓ  １９９４  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １５  １９−２６）。ＩＬ−１３の機能としては、ヒトＢ細胞におけるＩｇＥへの免疫グロブリンアイソタイプスイッチング（Ｐｕｎｎｏｎｅｎ，  Ａｖｅｒｓａ  ｅｔ  ａｌ．  １９９３  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０  ３７３０−４）、ヒトとマウスの両方における炎症性サイトカイン産生の抑制（ｄｅ  Ｗａａｌ  Ｍａｌｅｆｙｔ，  Ｆｉｇｄｏｒ  ｅｔ  ａｌ．  １９９３  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５１  ６３７０−８１；  Ｄｏｈｅｒｔｙ，  Ｋａｓｔｅｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  １９９３  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５１  ７１５１−６０）などが挙げられる。ＩＬ−１３は、その細胞表面受容体、ＩＬ−１３Ｒアルファ１及びＩＬ−１３Ｒアルファ２に結合する。ＩＬ−１３Ｒアルファ１は、ＩＬ−１３と低親和性（ＫＤ約１０ｎＭ）で相互作用し、続いてＩＬ−４Ｒａを動員して、高親和性（ＫＤ約０．４ｎＭ）シグナル伝達ヘテロ２量体受容体複合体を形成する（Ａｍａｎ，  Ｔａｙｅｂｉ  ｅｔ  ａｌ．  １９９６  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７１  ２９２６５−７０；  Ｈｉｌｔｏｎ，  Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  １９９６  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９３  ４９７−５０１）。ＩＬ−４Ｒ／ＩＬ−１３Ｒアルファ１複合体は、Ｂ細胞、単球／マクロファージ、樹状細胞、好酸球、好塩基球、線維芽細胞、内皮細胞、気道上皮細胞、気道平滑筋細胞などの多数の細胞タイプ上で発現される（Ｇｒａｂｅｒ，  Ｇｒｅｔｅｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  １９９８  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２８  ４２８６−９８；  Ｍｕｒａｔａ，  Ｈｕｓａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  １９９８  Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０  １１０３−１０；  Ａｋａｉｗａ，  Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．  ２００１  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  １３  ７５−８４）。ＩＬ−１３Ｒアルファ１／ＩＬ−４Ｒ受容体複合体の連結は、シグナル伝達性転写因子（ＳＴＡＴ６）及びインスリン受容体基質２（ＩＲＳ−２）経路を含めた種々のシグナル伝達経路を活性化する（Ｗａｎｇ，  Ｍｉｃｈｉｅｌｉ  ｅｔ  ａｌ．  １９９５  Ｂｌｏｏｄ  ８６  ４２１８−２７；  Ｔａｋｅｄａ，  Ｋａｍａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．  １９９６  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５７  ３２２０−２）。ＩＬ−１３Ｒアルファ２鎖は単独でＩＬ−１３に対して高親和性（ＫＤ約０．２５−０．４ｎＭ）を有し、ＩＬ−１３結合の負の調整をするおとり受容体として（Ｄｏｎａｌｄｓｏｎ，  Ｗｈｉｔｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．  １９９８  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６１  ２３１７−２４）、また、マクロファージ及び場合によっては他の細胞タイプにおいてＡＰ−１経路を介してＴＧＦ−ｂ合成及び線維症を誘発するシグナル伝達受容体として（Ｆｉｃｈｔｎｅｒ−Ｆｅｉｇｌ，  Ｓｔｒｏｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  ２００６  Ｎａｔ  Ｍｅｄ  １２  ９９−１０６）、機能する。
【０００５】
ぜん息の前臨床動物モデルにおいて実施された幾つかの研究によれば、ＩＬ−１３はぜん息において重要な役割を果たす。これらのデータとしては、ＩＬ−１３ノックアウトマウスにおけるぜん息に対する抵抗性、種々のマウスモデルにおけるＩＬ−１３拮抗物質（可溶性ＩＬ−１３受容体、抗ＩＬ−１３  ｍＡｂなど）を用いたぜん息表現型の阻害などが挙げられる（Ｓｅｌａ  １９９９  Ｈａｒｅｆｕａｈ  １３７  ３１７−９；  Ｗｉｌｌｓ−Ｋａｒｐ  ａｎｄ  Ｃｈｉａｒａｍｏｎｔｅ  ２００３  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｕｌｍ  Ｍｅｄ  ９  ２１−７；  Ｗｉｌｌｓ−Ｋａｒｐ  ２００４  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ  ２０２  １７５−９０）。複数の研究によれば、マウス及びモルモットの肺に組換えＩＬ−１３を薬理学的に投与すると、気道粘液の分泌過多、好酸球増加症及びＡＨＲが誘発される（Ｇｒｕｎｉｇ，  Ｗａｒｎｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．  １９９８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８２  ２２６１−３；  Ｗｉｌｌｓ−Ｋａｒｐ，  Ｌｕｙｉｍｂａｚｉ  ｅｔ  ａｌ．  １９９８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８２  ２２５８−６１；  Ｋｉｂｅ，  Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２００３  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １６７  ５０−６；  Ｖａｒｇａｆｔｉｇ  ａｎｄ  Ｓｉｎｇｅｒ  ２００３  Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８４  Ｌ２６０−９；  Ｖａｒｇａｆｔｉｇ  ａｎｄ  Ｓｉｎｇｅｒ  ２００３  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２８  ４１０−９）。ＩＬ−１３のこれらの効果は、ＩＬ−１３の恒常的又は誘導性発現を有するトランスジェニックマウス系において再現される（Ｚｈｕ，  Ｈｏｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  １９９９  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １０３  ７７９−８８；  Ｚｈｕ，  Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２００１  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １６４  Ｓ６７−７０；  Ｌａｎｏｎｅ，  Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  ２００２  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１０  ４６３−７４）。遺伝子導入によるＩＬ−１３の慢性的過剰発現は、上皮下の線維症及び気腫も誘発する。ＩＬ−１３（及びＩＬ−４）シグナル伝達分子ＳＴＡＴ６を欠くマウスは、アレルゲンによって誘発されるＡＨＲ及び粘液過剰産生を示さない（Ｋｕｐｅｒｍａｎ，  Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  ２００２  Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ８  ８８５−９）。可溶性ＩＬ−１３受容体融合タンパク質（ｓＩＬ−１３Ｒアルファ２Ｆｃ）を用いた研究は、アレルゲン卵白アルブミン（ＯＶＡ）によって誘発される実験的気道疾患におけるこのサイトカインの枢要な役割を実証した（Ｇｒｕｎｉｇ，  Ｗａｒｎｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．  １９９８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８２  ２２６１−３；  Ｗｉｌｌｓ−Ｋａｒｐ，  Ｌｕｙｉｍｂａｚｉ  ｅｔ  ａｌ．  １９９８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８２  ２２５８−６１；  Ｔａｕｂｅ，  Ｄｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．  ２００２  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６９  ６４８２−９）。抗ＩＬ−１３治療の効力は、ネズミぜん息の慢性モデルでも実証された。粘液の分泌過多及びＡＨＲの特徴を示すことに加えて、この慢性ぜん息モデルは、それよりも急性的なモデルにおいては欠けている、ヒト疾患の幾つかの顕著な特徴を示す。これらの特徴としては、上皮間に位置する肺組織の好酸球増加、コラーゲン沈着の増加によって判断される平滑筋線維症などが挙げられる。慢性ぜん息モデルは、ＯＶＡによって感作されたマウスにおいて、週１回合計４週間のＯＶＡのエアロゾル投与を繰り返すことによって誘導される。（３６日目から）ＯＶＡ投与の最後の２週間に投与された抗ＩＬ−１３抗体は（有効性の読み出しは、試験の５３日目に評価された。）、ＡＨＲ、肺炎症、杯細胞過形成、粘液分泌過多及び気道線維症をかなり抑制する（Ｙａｎｇ，  Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．  ２００５  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ）。さらに、ＩＬ−１３拮抗物質の治療効果は、ぜん息の霊長類モデルにおいてＡＨＲを抑制することも実証された［Ａｂｓｔｒａｃｔ，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｈｏｒａｃｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ２００５］。
【０００６】
疾患の重症度と相関する高レベルのＩＬ−１３  ｍＲＮＡ及びタンパク質がぜん息患者の肺において検出され、ＩＬ−１３は、ヒトぜん息の病原に関係している（Ｈｕａｎｇ，  Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．  １９９５  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５５  ２６８８−９４）。また、高いＩＬ−１３レベルをもたらすヒトＩＬ−１３遺伝的多型が確認され、ぜん息及びアトピーと関連する（Ｈｅｉｎｚｍａｎｎ，  Ｍａｏ  ｅｔ  ａｌ．  ２０００  Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  ９  ５４９−５９；  Ｈｏｅｒａｕｆ，  Ｋｒｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２００２  Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  Ｉｎｆｅｃｔ  ４  ３７−４２；  Ｖｅｒｃｅｌｌｉ  ２００２  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２  ３８９−９３；  Ｈｅｉｎｚｍａｎｎ，  Ｊｅｒｋｉｃ  ｅｔ  ａｌ．  ２００３  Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１２  ７３５−９；  Ｃｈｅｎ，  Ｅｒｉｃｋｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  ２００４  Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１４  ５５３−６０；  Ｖｌａｄｉｃｈ，  Ｂｒａｚｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２００５  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ）。高いＩＬ−１３レベルは、ぜん息患者の肺において検出された（Ｈｕａｎｇ，  Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．  １９９５  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５５  ２６８８−９４；  Ａｒｉｍａ，  Ｕｍｅｓｈｉｔａ−Ｓｕｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．  ２００２  Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０９  ９８０−７；  Ｂｅｒｒｙ，  Ｐａｒｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  ２００４  Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１４  １１０６−９）。より高い血しょうＩＬ−１３レベルを生じるＩＬ−１３遺伝子の多形を有する個体は、アトピー及びぜん息のリスクが高く、ＩＬ−１３とぜん息の遺伝的関連性（ｇｅｎｅｔｉｃ  ｌｉｎｋａｇｅ）も実証された（Ｗｉｌｌｓ−Ｋａｒｐ  ２０００  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｒｅｓ  １  １９−２３）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｚｕｒａｗｓｋｉ  ａｎｄ  ｄｅ  Ｖｒｉｅｓ、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １５、１９９４年、ｐ．１９−２６
【非特許文献２】Ｐｕｎｎｏｎｅｎ，Ａｖｅｒｓａ他、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０、１９９３年、ｐ．３７３０−４
【非特許文献３】ｄｅ  Ｗａａｌ  Ｍａｌｅｆｙｔ，Ｆｉｇｄｏｒ他、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５１、１９９３年、ｐ．６３７０−８１
【非特許文献４】Ｄｏｈｅｒｔｙ，Ｋａｓｔｅｌｅｉｎ他、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５１、１９９３年、ｐ．７１５１−６０
【非特許文献５】Ａｍａｎ，Ｔａｙｅｂｉ他、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７１、１９９６年、ｐ．２９２６５−７０
【非特許文献６】Ｈｉｌｔｏｎ，Ｚｈａｎｇ他、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９３、１９９６年、ｐ．４９７−５０１
【非特許文献７】Ｇｒａｂｅｒ，Ｇｒｅｔｅｎｅｒ他、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２８、１９９８年、ｐ．４２８６−９８
【非特許文献８】Ｍｕｒａｔａ，Ｈｕｓａｉｎ他、Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０、１９９８年、ｐ．１１０３−１０
【非特許文献９】Ａｋａｉｗａ，Ｙｕ他、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  １３、２００１年、ｐ．７５−８４
【非特許文献１０】Ｗａｎｇ，Ｍｉｃｈｉｅｌｉ他、Ｂｌｏｏｄ  ８６、１９９５年、ｐ．４２１８−２７
【非特許文献１１】Ｔａｋｅｄａ，Ｋａｍａｎａｋａ他、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５７、１９９６年、ｐ．３２２０−２
【非特許文献１２】Ｄｏｎａｌｄｓｏｎ，Ｗｈｉｔｔｅｒｓ他、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６１、１９９８年、ｐ．２３１７−２４
【非特許文献１３】Ｆｉｃｈｔｎｅｒ−Ｆｅｉｇｌ，Ｓｔｒｏｂｅｒ他、Ｎａｔ  Ｍｅｄ  １２、２００６年、ｐ．９９−１０６
【非特許文献１４】Ｓｅｌａ、Ｈａｒｅｆｕａｈ  １３７、１９９９年、ｐ．３１７−９
【非特許文献１５】Ｗｉｌｌｓ−Ｋａｒｐ  ａｎｄ  Ｃｈｉａｒａｍｏｎｔｅ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｕｌｍ  Ｍｅｄ  ９、２００３年、ｐ．２１−７
【非特許文献１６】Ｗｉｌｌｓ−Ｋａｒｐ、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ  ２０２、２００４年、ｐ．１７５−９０
【非特許文献１７】Ｇｒｕｎｉｇ，Ｗａｒｎｏｃｋ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８２、１９９８年、ｐ．２２６１−３
【非特許文献１８】Ｗｉｌｌｓ−Ｋａｒｐ，Ｌｕｙｉｍｂａｚｉ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８２、１９９８年、ｐ．２２５８−６１
【非特許文献１９】Ｋｉｂｅ，Ｉｎｏｕｅ他、Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １６７、２００３年、ｐ．５０−６
【非特許文献２０】Ｖａｒｇａｆｔｉｇ  ａｎｄ  Ｓｉｎｇｅｒ、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８４、２００３年、ｐ．２６０−９
【非特許文献２１】Ｖａｒｇａｆｔｉｇ  ａｎｄ  Ｓｉｎｇｅｒ、Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２８、２００３年、ｐ．４１０−９
【非特許文献２２】Ｚｈｕ，Ｈｏｍｅｒ他、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １０３、１９９９年、ｐ．７７９−８８
【非特許文献２３】Ｚｈｕ，Ｌｅｅ他、Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １６４、２００１年、ｐ．６７−７０
【非特許文献２４】Ｌａｎｏｎｅ，Ｚｈｅｎｇ他、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１０、２００２年、ｐ．４６３−７４
【非特許文献２５】Ｋｕｐｅｒｍａｎ，Ｈｕａｎｇ他、Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ８、２００２年、ｐ．８８５−９
【非特許文献２６】Ｔａｕｂｅ，Ｄｕｅｚ他、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６９、２００２年、ｐ．６４８２−９
【非特許文献２７】Ｙａｎｇ，Ｌｉ他、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ、２００５年
【非特許文献２８】Ａｂｓｔｒａｃｔ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｈｏｒａｃｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、２００５年
【非特許文献２９】Ｈｕａｎｇ，Ｘｉａｏ他、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５５、１９９５年、ｐ．２６８８−９４
【非特許文献３０】Ｈｅｉｎｚｍａｎｎ，Ｍａｏ他、Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  ９、２０００年、ｐ．５４９−５９
【非特許文献３１】Ｈｏｅｒａｕｆ，Ｋｒｕｓｅ他、Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  Ｉｎｆｅｃｔ  ４、２００２年、ｐ．３７−４２
【非特許文献３２】Ｖｅｒｃｅｌｌｉ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２、２００２年、ｐ．３８９−９３
【非特許文献３３】Ｈｅｉｎｚｍａｎｎ，Ｊｅｒｋｉｃ他、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１２、２００３年、ｐ．７３５−９
【非特許文献３４】Ｃｈｅｎ，Ｅｒｉｃｋｓｅｎ他、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１４、２００４年、ｐ．５５３−６０
【非特許文献３５】Ｖｌａｄｉｃｈ，Ｂｒａｚｉｌｌｅ他、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ、２００５年
【非特許文献３６】Ａｒｉｍａ，Ｕｍｅｓｈｉｔａ−Ｓｕｙａｍａ他、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０９、２００２年、ｐ．９８０−７
【非特許文献３７】Ｂｅｒｒｙ，Ｐａｒｋｅｒ他、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１４、２００４年、ｐ．１１０６−９
【非特許文献３８】Ｗｉｌｌｓ−Ｋａｒｐ、Ｒｅｓｐｉｒ  Ｒｅｓ  １、２０００、ｐ．１９−２３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ヒトＩＬ−１３が多様なヒト障害において役割を果たすために、治療方針はＩＬ−１３活性を阻害又は相殺するように設計される。特に、ＩＬ−１３に結合し、中和する抗体は、ＩＬ−１３活性を阻害する手段として求められている。しかし、ＩＬ−１３に結合可能な改善された抗体が当分野では必要とされる。好ましくは、抗体はヒトＩＬ−１３に結合する。好ましくは、抗体は、ヒトＩＬ−１３を中和可能である。本発明は、ヒトＩＬ−１３に結合可能であり、高親和性で結合可能であり、ヒトＩＬ−１３に結合して中和可能である、結合タンパク質、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体及びこれらの断片の新規ファミリーを提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明の要旨
本発明は、ＩＬ−１３結合タンパク質に関する。本発明の結合タンパク質としては、ヒトＩＬ−１３に結合可能な抗体、抗原結合性部分、及び他の抗原結合タンパク質が挙げられるが、これらだけに限定されない。さらに、本発明は、ＩＬ−１３結合タンパク質を製造及び使用する方法を提供する。
【００１０】
本発明の一態様は、ＩＬ−１３に結合可能な結合タンパク質に関する。好ましい一実施形態においては、結合タンパク質はヒトＩＬ−１３に結合する。好ましくは、結合タンパク質は、ＩＬ−１３の生物学的機能を調節可能である。より好ましくは、結合タンパク質はＩＬ−１３を中和可能である。
【００１１】
本発明の一態様においては、結合タンパク質は、ＩＬ−１３に結合可能であり、ＩＬ−１３α１受容体に対するＩＬ−１３の結合を阻止可能である。本発明の別の一態様においては、結合タンパク質は、ＩＬ−１３に結合可能であり、ＩＬ−１３α２受容体に対するＩＬ−１３の結合を阻止可能である。好ましい一実施形態においては、結合タンパク質はＩＬ−１３に結合可能であり、ＩＬ−１３α１受容体とＩＬ−１３α２の両方に対するＩＬ−１３の結合を阻止可能である。
【００１２】
本発明の一実施形態は、ヒトＩＬ−１３に結合し、細胞表面に基づく受容体結合アッセイにおいて、約１．５×１０−８から１×１０−８Ｍ、１×１０−８から１×１０−９Ｍ、１０−９から１０−１０Ｍ、及び１０−１０から１０−１１Ｍからなる群から選択されるＩＣ５０で、又はＥＬＩＳＡに基づく受容体結合アッセイにおいて、約１．８×１０−８から１×１０−８Ｍ、１×１０−８から１×１０−９Ｍ、１０−９から１０−１０Ｍ、及び１０−１０から１０−１１Ｍからなる群から選択されるＩＣ５０で、ＩＬ−１３α２受容体に対する前記ＩＬ−１３の結合を阻止する、単離抗体又はその抗原結合性フラグメントを提供する。好ましくは、抗体は、ヒトＩＬ−１３に結合し、細胞表面に基づく受容体結合アッセイにおいて２．７×１０−９ＭのＩＣ５０で、また、ＥＬＩＳＡに基づく受容体結合アッセイにおいて１．１×１０−９ＭのＩＣ５０で、ＩＬ−１３α２受容体に対する前記ＩＬ−１３の結合を阻止する。好ましくは、単離抗体又はその抗原結合性フラグメントは、ヒトＩＬ−１３に結合し、細胞表面に基づく受容体結合アッセイにおいて、又はＥＬＩＳＡに基づく受容体結合アッセイにおいて、ＩＬ−１３α２受容体に対する前記ＩＬ−１３の結合を１００ｎＭの濃度で約７０−１００％阻害する。好ましくは、抗体は１３Ｃ５．５である。より好ましくは、抗体は、ＢＡＫ５０２Ｇ９でも、ｍＡｂ１３．２でも、ＭＪ２−７でもない。
【００１３】
別の一態様においては、本発明は、ヒトＩＬ−１３に結合し、ヒトＩＬ−１３誘発性ぜん息モデルにおいてＡＨＲを約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％抑制する、単離抗体又はその抗原結合性フラグメントを提供する。好ましくは、抗体は、ヒトＩＬ−１３誘発性ぜん息モデルにおいてＡＨＲを８６％を超えて抑制する。別の一実施形態においては、単離抗体又はその抗原結合性フラグメントは、ヒトＩＬ−１３に結合し、ヒトＩＬ−１３誘発性ぜん息モデルにおいて、ＡＨＲを約５０％、６０％、７０％、８０％  ９０％又は１００％抑制し、粘液産生を約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％  ９０％又は１００％抑制する。好ましくは、抗体は１３Ｃ５．５である。より好ましくは、抗体は、ＢＡＫ５０２Ｇ９でも、ｍＡｂ１３．２でも、ＭＪ２−７でもない。
【００１４】
一実施形態においては、本発明の結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定して、少なくとも約１０２Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０４Ｍ−１ｓ−１、少なくとも約１０５Ｍ−１ｓ−１又は少なくとも約１０６Ｍ−１ｓ−１のＩＬ−１３に対するオン速度定数（ｋｏｎ）を有する。好ましくは、本発明の結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定して、１０２Ｍ−１ｓ−１から１０３Ｍ−１ｓ−１、１０３Ｍ−１ｓ−１から１０４Ｍ−１ｓ−１、１０４Ｍ−１ｓ−１から１０５Ｍ−１ｓ−１、又は１０５Ｍ−１ｓ−１から１０６Ｍ−１ｓ−１のＩＬ−１３に対するオン速度定数（ｋｏｎ）を有する。
【００１５】
別の一実施形態においては、本発明の結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定して、約１０−３ｓ−１以下、約１０−４ｓ−１以下、約１０−５ｓ−１以下又は約１０−６ｓ−１以下のＩＬ−１３に対するオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。好ましくは、本発明の結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定して、１０−３ｓ−１から１０−４ｓ−１、１０−４ｓ−１から１０−５ｓ−１、又は１０−５ｓ−１から１０−６ｓ−１のＩＬ−１３に対するオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。
【００１６】
別の一実施形態においては、本発明の結合タンパク質は、約１０−７Ｍ以下、約１０−８Ｍ以下、約１０−９Ｍ以下、約１０−１０Ｍ以下、約１０−１１Ｍ以下、約１０−１２Ｍ以下又は１０−１３Ｍ以下のＩＬ−１３に対する解離定数（ＫＤ）を有する。好ましくは、本発明の結合タンパク質は、１０−７Ｍから１０−８Ｍ、１０−８Ｍから１０−９Ｍ、１０−９Ｍから１０−１０Ｍ、１０−１０から１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍから１０−１２Ｍ、又は１０−１２Ｍから１０−１３ＭのＩＬ−１３に対する解離定数（ＫＤ）を有する。
【００１７】
好ましくは、抗体又はその抗原結合性フラグメントは、ａ）約１０５Ｍ−１ｓ−１から１０６Ｍ−１ｓ−１、若しくは約１０６Ｍ−１ｓ−１から１０７Ｍ−１ｓ−１のオン速度定数（ｋｏｎ）、ｂ）表面プラズモン共鳴によって測定して、約１０−４ｓ−１から１０−５ｓ−１、若しくは約１０−５ｓ−１から１０−６ｓ−１のオフ速度定数（ｋｏｆｆ）、又はｃ）約１．５×１０−１０から１×１０−１０Ｍ、若しくは約１０−１０から１０−１１Ｍの解離定数（ＫＤ）からなる群から選択される結合特性でＩＬ−１３に結合する。好ましくは、抗体又はその抗原結合性フラグメントは、６．６８×１０５Ｍ−１ｓ−１、７．８６×１０５Ｍ−１ｓ−１、８．３５×１０５Ｍ−１ｓ−１、８．６９×１０５Ｍ−１ｓ−１、９．１５×１０５Ｍ−１ｓ−１、１．２６×１０６Ｍ−１ｓ−１、１．７×１０６Ｍ−１ｓ−１及び２．５１×１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択されるＩＬ−１３に対するオン速度定数（ｋｏｎ）を有する。好ましくは、抗体又はその抗原結合性フラグメントは、表面プラズモン共鳴によって測定して、１．２３×１０−４ｓ−１、１．７６×１０−４ｓ−１、４．７４×１０−４ｓ−１、１．９１×１０−５ｓ−１、２．１４×１０−５ｓ−１、３．８２×１０−５ｓ−１、８．８１×１０−５ｓ−１及び９．６５×１０−５ｓ−１からなる群から選択されるＩＬ−１３に対するオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。好ましくは、抗体又はその抗原結合性フラグメントは、１．０５×１０−１０Ｍ、７．１０×１０−１０Ｍ、１×１０−１１Ｍ、２．２０×１０−１１Ｍ、２．７２×１０−１１Ｍ、４．１７×１０−１１Ｍ、５．６８×１０−１１Ｍ、７．０１×１０−１１Ｍ、７．１０×１０−１１Ｍ及び９．７９×１０−１１Ｍからなる群から選択されるＩＬ−１３に対する解離定数（ＫＤ）を有する。
【００１８】
本発明の一態様は、ＩＬ−１３上の特異的エピトープに結合可能な結合タンパク質に関する。好ましくは、特異的エピトープは、ヒトＩＬ−１３のＣ末端ヘリックスＤ領域を含む。より好ましくは、特異的エピトープは、配列番号１のアミノ酸１０４−１３０に対応するアミノ酸配列ＶＲＤＴＫ  ＩＥＶＡＱ  ＦＶＫＤＬ  ＬＬ  ＨＬＫ  ＫＬＦＲＥ  ＧＲを含む。別の一態様においては、この抗体又は抗原結合性部分は、ヒトＩＬ−１３のＣ末端ヘリックスＤ領域及びＮ末端ヘリックスＡ領域を含むエピトープに結合する。好ましくは、この抗体又はその抗原結合性フラグメントは、配列番号１の局所領域Ｓｅｒ２６−Ｔｈｒ２７−Ａｌａ２８−Ｌｅｕ２９−Ａｒｇ３０−Ｇｌｕ３１−Ｌｅｕ３２−Ｉｌｅ３３−Ｇｌｕ３４−Ｇｌｕ３５−Ｌｅｕ３６−Ｖａｌ３７−Ａｓｎ３８及びＬｙｓ１２３−Ｌｙｓ１２４−Ｌｅｕ１２５−Ｐｈｅ１２６−Ａｒｇ１２７−Ｇｌｕ−１２８−Ｇｌｙ１２９−Ａｒｇ１３０によって定義されたエピトープに結合した前記抗体又はその抗原結合性フラグメントを有するＩＬ−１３がＩＬ−１３受容体との結合を阻止されるように、ヒトＩＬ−１３に結合する。好ましくは、この抗体又はその抗原結合性フラグメントは、配列番号１の局所領域Ａｒｇ３０−Ｇｌｕ３１−Ｌｅｕ３２−Ｉｌｅ３３−Ｇｌｕ３４−Ｇｌｕ３５−Ｌｅｕ３６−Ｖａｌ３７−Ａｓｎ３８及びＬｙｓ１２３−Ｌｙｓ１２４−Ｌｅｕ１２５−Ｐｈｅ１２６−Ａｒｇ１２７によって定義されたエピトープに結合した前記抗体又はその抗原結合性フラグメントを有するＩＬ−１３がＩＬ−１３受容体との結合を阻止されるように、ヒトＩＬ−１３に結合する。好ましくは、この抗体又はその抗原結合性フラグメントは、配列番号１の局所領域Ｓｅｒ２６−Ｔｈｒ２７−Ａｌａ２８−Ｌｅｕ２９−Ａｒｇ３０−Ｇｌｕ３１−Ｌｅｕ３２−Ｉｌｅ３３−Ｇｌｕ３４−Ｇｌｕ３５−Ｌｅｕ３６−Ｖａｌ３７−Ａｓｎ３８及びＬｙｓ１２３−Ｌｙｓ１２４−Ｌｅｕ１２５−Ｐｈｅ１２６−Ａｒｇ１２７−Ｇｌｕ−１２８−Ｇｌｙ１２９−Ａｒｇ１３０によって定義されたエピトープに結合した前記抗体又はその抗原結合性フラグメントを有するＩＬ−１３がＩＬ−１３α２受容体との結合を阻止されるように、ヒトＩＬ−１３に結合する。より好ましくは、この抗体又はその抗原結合性フラグメントは、配列番号１の局所領域Ｓｅｒ２６−Ｔｈｒ２７−Ａｌａ２８−Ｌｅｕ２９−Ａｒｇ３０−Ｇｌｕ３１−Ｌｅｕ３２−Ｉｌｅ３３−Ｇｌｕ３４−Ｇｌｕ３５−Ｌｅｕ３６−Ｖａｌ３７−Ａｓｎ３８及びＬｙｓ１２３−Ｌｙｓ１２４−Ｌｅｕ１２５−Ｐｈｅ１２６−Ａｒｇ１２７−Ｇｌｕ−１２８−Ｇｌｙ１２９−Ａｒｇ１３０によって定義されたエピトープに結合した前記抗体又はその抗原結合性フラグメントを有するＩＬ−１３がＩＬ−１３α２受容体との結合を阻止されるように、ヒトＩＬ−１３に結合し、ただし、前記抗体は、ＢＡＫ５０２Ｇ９でもＭＪ２−７でもない。最も好ましくは、抗体は１３Ｃ５．５である。
【００１９】
一態様においては、単離抗体又はその抗原結合性フラグメントは、ＩＬ−１３に結合し、ヘリックスＡ及びＤを含めて、ＩＬ−１３上のエピトープとの結合、約１０５Ｍ−１ｓ−１から１０６Ｍ−１ｓ−１、又は約１０６Ｍ−１ｓ−１から１０７Ｍ−１ｓ−１のオン速度定数（ｋｏｎ）、表面プラズモン共鳴によって測定して、約１０−４ｓ−１から１０−５ｓ−１、又は約１０−５ｓ−１から１０−６ｓ−１のオフ速度定数（ｋｏｆｆ）、及び約１．５×１０−１０から１×１０−１０Ｍ、又は約１０−１０から１０−１１Ｍの解離定数（ＫＤ）からなる群から選択される結合特性でＩＬ−１３α２受容体に対するＩＬ−１３の結合を阻止する。別の一態様においては、この単離抗体又はその抗原結合性フラグメントは、変種ＩＬ−１３に結合し、ヘリックスＡ及びＤを含めて、ＩＬ−１３上のエピトープとの結合、約１０５Ｍ−１ｓ−１から１０６Ｍ−１ｓ−１、又は約１０６Ｍ−１ｓ−１から１０７Ｍ−１ｓ−１のオン速度定数（ｋｏｎ）、表面プラズモン共鳴によって測定して、約１０−４ｓ−１から１０−５ｓ−１、又は約１０−５ｓ−１から１０−６ｓ−１のオフ速度定数（ｋｏｆｆ）、及び約１．５×１０−１０から１×１０−１０Ｍ、又は約１０−１０から１０−１１Ｍの解離定数（ＫＤ）からなる群から選択される結合特性でＩＬ−１３α２受容体に対する変種ＩＬ−１３の結合を阻止する。
【００２０】
本発明の一態様においては、ＩＬ−１３に結合可能な結合タンパク質、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１個のＣＤＲを含む前記抗原結合ドメイン。
【００２１】
ＣＤＲ−Ｈ１．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（配列番号６４）（式中、
Ｘ１は、Ｔ、Ｄ、Ｇ又はＳであり、
Ｘ２はＳであり、
Ｘ３はＤであり、
Ｘ４は、Ｍ、Ｓ、Ｙ、Ｌ又はＨであり、
Ｘ５は、Ｇ、Ｗ、Ｙ、Ａ、Ｓ又はＮであり、
Ｘ６は、Ｖ、Ｉ又はＭであり、
Ｘ７は、Ｄ、Ｈ、Ｓ、Ｙ、Ｎ又はＧである。）、
ＣＤＲ−Ｈ２．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７（配列番号６５）（式中、
Ｘ１は、Ｍ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、Ｓ、Ｇ又はＬであり、
Ｘ２は、Ｉであり、又は存在せず、
Ｘ３は、Ｈ、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｓ又はＷであり、
Ｘ４は、Ｐ、Ｓ、Ｗ又はＧであり、
Ｘ５は、Ｓ、Ｇ、Ｅ又はＤであり、
Ｘ６は、Ｄ、Ｇ、Ｓ、Ｅ又はＮであり、
Ｘ７は、Ｓ、Ｙ又はＧであり、
Ｘ８は、Ｅ、Ｎ、Ｙ、Ｖ又はＲであり、
Ｘ９は、Ｔ、Ｉ又はＫであり、
Ｘ１０は、Ｒ、Ｙ、Ｉ、Ｄ又はＡであり、
Ｘ１１は、Ｌ、Ｙ、Ｄ又はＦであり、
Ｘ１２は、Ｎ、Ｐ、Ｓ又はＤであり、
Ｘ１３は、Ｑ、Ｅ、Ｄ、Ｐ又はＳであり、
Ｘ１４は、Ｋ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ａ又はＶであり、
Ｘ１５は、Ｆ、Ｌ、Ｖ又はＭであり、
Ｘ１６は、Ｋ、Ｒ又はＱであり、
Ｘ１７は、Ｄ、Ｇ又はＳである。）、
ＣＤＲ−Ｈ３．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４（配列番号６６）（式中、
Ｘ１は、Ｗ、Ｔ、Ｇ、Ｙ、Ｄ又はＩであり、
Ｘ２は、Ｒ、Ａ、Ｓ、Ｇ又はＶであり、
Ｘ３は、Ｔ、Ｆ、Ｙ又はＳであり、
Ｘ４は、Ｓ、Ｔ又はＹであり、
Ｘ５は、Ｙ、Ｆ又はＧであり、
Ｘ６は、Ｆ又はＹであり、
Ｘ７は、Ｓ、Ｙ、Ｉ又はＦであり、
Ｘ８は、Ｄ、Ｌ、Ｙ又はＰであり、
Ｘ９はＹであり、
Ｘ１０はＧであり、
Ｘ１１は、Ｙ、Ａ、Ｐ又はＥであり、
Ｘ１２は、Ｆ、Ｍ、Ｓ、Ｌ又はＩであり、
Ｘ１３は、Ｄ、Ｖ、Ｎ又はＫであり、
Ｘ１４は、Ｙ又はＦである。）、
ＣＤＲ−Ｌ１．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５  Ｘ１６−Ｘ１７（配列番号６７）（式中、
Ｘ１は、Ｋ又はＲであり、
Ｘ２は、Ｓ又はＡであり、
Ｘ３は、Ｓ又はＴであり、
Ｘ４は、Ｑ、Ｋ又はＩであり、
Ｘ５は、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｇ又はＥであり、
Ｘ６は、Ｌ、Ｔ又はＳであり、
Ｘ７は、Ｌ、Ｑ又はＶであり、
Ｘ８は、Ｙ、Ｎ、Ｈ、Ｄ又はＴであり、
Ｘ９は、Ｓ、Ｉ又はＴであり、
Ｘ１０は、Ｓ、Ｄ、Ｎ、Ｈ又はＹであり、
Ｘ１１は、Ｎ又はＧであり、
Ｘ１２はＱであり、
Ｘ１３は、Ｋ、Ｆ、Ｎ、Ｅ又はＳであり、
Ｘ１４は、Ｎ、Ｔ又はＳであり、
Ｘ１５は、Ｙ又はＦであり、
Ｘ１６は、Ｌ、Ａ又はＭであり、
Ｘ１７は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｈ又はＮである。）、
ＣＤＲ−Ｌ２．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（配列番号６８）（式中、
Ｘ１は、Ｌ、Ｓ、Ｋ、Ｔ、Ｗ又はＹであり、
Ｘ２は、Ｖ、Ｔ又はＡであり、
Ｘ３は、Ｓ又はＮであり、
Ｘ４は、Ｎ、Ｋ、Ｔ、Ｍ又はＲであり、
Ｘ５は、Ｒ、Ｋ又はＬであり、
Ｘ６は、Ｆ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ又はＡであり、
Ｘ７は、Ｓ、Ｒ又はＰである。）、及び
ＣＤＲ−Ｌ３．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９（配列番号６９）（式中、
Ｘ１は、Ｆ、Ｗ、Ｑ又はＡであり、
Ｘ２は、Ｑ又はＬであり、
Ｘ３は、Ｈ、Ｇ、Ｙ、Ｗ又はＮであり、
Ｘ４は、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｌ又はＹであり、
Ｘ５は、Ｙ、Ｔ、Ｓ、Ｅ又はＨであり、
Ｘ６は、Ｌ、Ｖ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｇ、Ｐ又はＤであり、
Ｘ７は、Ｐ又はＨであり、
Ｘ８は、Ｌ、Ｆ、Ｙ、Ｗ又はＲであり、
Ｘ９は、Ｔ又はＶである。）
【００２２】
好ましくは、抗原結合ドメインは、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１個のＣＤＲを含む。
【００２３】
配列番号３２の残基３１−３５、
配列番号３２の残基５０−６６、
配列番号３２の残基９９−１０５、
配列番号３３の残基２４−３９、
配列番号３３の残基５５−６１、
配列番号３３の残基９４−１０２、
配列番号３４の残基３１−３５、
配列番号３４の残基５０−６６、
配列番号３４の残基９９−１０５、
配列番号３５の残基２４−３９、
配列番号３５の残基５５−６１、
配列番号３５の残基９４−１０２、
配列番号３６の残基３１−３５、
配列番号３６の残基５０−６６、
配列番号３６の残基９９−１０９、
配列番号３７の残基２４−３９、
配列番号３７の残基５５−６１、
配列番号３７の残基９４−１０２、
配列番号３８の残基３１−３５、
配列番号３８の残基５０−６６、
配列番号３８の残基９９−１０９、
配列番号３９の残基３１−３５、
配列番号３９の残基５０−６６、
配列番号３９の残基９９−１１２、
配列番号４０の残基２４−３９、
配列番号４０の残基５５−６１、
配列番号４０の残基９４−１０２、
配列番号４１の残基３１−３５、
配列番号４１の残基５０−６６、
配列番号４１の残基９９−１１２、
配列番号４２の残基３１−３５、
配列番号４２の残基５０−６６、
配列番号４２の残基９９−１００、
配列番号４３の残基２４−３９、
配列番号４３の残基５５−６１、
配列番号４３の残基９４−１０２、
配列番号４４の残基３１−３５、
配列番号４４の残基５０−６５、
配列番号４４の残基９８−１０６、
配列番号４５の残基２４−４０、
配列番号４５の残基５６−６２、
配列番号４５の残基９５−１０３、
配列番号４６の残基３２−３８、
配列番号４６の残基５２−６７、
配列番号４６の残基１００−１１２、
配列番号４７の残基２４−３４、
配列番号４７の残基５０−５６、
配列番号４７の残基８９−９７、
配列番号４８の残基３１−３７、
配列番号４８の残基５２−６７、
配列番号４８の残基１００−１１２、
配列番号４９の残基２４−３４、
配列番号４９の残基５０−５６、
配列番号４９の残基８９−９７、
配列番号５０の残基３１−３７、
配列番号５０の残基５２−６７、
配列番号５０の残基１００−１１２、
配列番号５１の残基２４−３４、
配列番号５１の残基６０−６６、
配列番号５１の残基８９−９７、
配列番号５２の残基３１−３５、
配列番号５２の残基５０−６６、
配列番号５２の残基９９−１０７、
配列番号５３の残基２３−３６、
配列番号５３の残基５２−５８、
配列番号５３の残基９１−９９、
配列番号５４の残基３１−３５、
配列番号５４の残基５０−６５、
配列番号５４の残基９８−１０７、
配列番号５５の残基２４−３８、
配列番号５５の残基５４−６０、
配列番号５５の残基９３−１０１、
配列番号５６の残基３１−３５、
配列番号５６の残基５０−６５、
配列番号５６の残基９８−１０７、
配列番号５７の残基２４−３８、
配列番号５７の残基５４−６０、
配列番号５７の残基９３−１０１、
配列番号５８の残基３１−３５、
配列番号５８の残基５０−６５、
配列番号５８の残基９８−１０７、
配列番号５９の残基２４−３８、
配列番号５９の残基５４−６０、
配列番号５９の残基９３−１０１、
配列番号６０の残基３１−３５、
配列番号６０の残基５０−６５、
配列番号６０の残基９８−１０７、
配列番号６１の残基２４−３８、
配列番号６１の残基５４−６０、
配列番号６１の残基９３−１０１、
配列番号６２の残基３１−３５、
配列番号６２の残基５０−６５、
配列番号６２の残基９８−１０７、
配列番号６３の残基２４−３８、
配列番号６３の残基５４−６０、及び
配列番号６３の残基９３−１０１
【００２４】
好ましい一実施形態においては、結合タンパク質は、以下からなる可変ドメインＣＤＲセットから選択される少なくとも３個のＣＤＲを含む。
【００２５】
【表１】
2014237671.tif 000002
2014237671.tif 000003
2014237671.tif 000004
2014237671.tif 000005
【００２６】
好ましくは、少なくとも２個の可変ドメインＣＤＲセットを含む、結合タンパク質。好ましくは、少なくとも２個の可変ドメインＣＤＲセットは、以下からなる群から選択される。
【００２７】
ＶＨ  ２５Ｃ８  ＣＤＲセットとＶＬ  ２５Ｃ８  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ９Ｃ１１  ＣＤＲセットとＶＬ  ９Ｃ１１  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ２１Ｄ９  ＣＤＲセットとＶＬ  ２１Ｄ９  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ２２Ｄ１０  ＣＤＲセットとＶＬ  ２２Ｄ１０  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ５Ｆ１  ＣＤＲセットとＶＬ  ５Ｆ１  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ５Ｇ１  ＣＤＲセットとＶＬ  ５Ｇ１  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ３Ｈ７  ＣＤＲセットとＶＬ  ３Ｈ７  ＣＤＲセット、
ＶＨ  １４Ｂ２  ＣＤＲセットとＶＬ  １４Ｂ２  ＣＤＲセット、
ＶＨ  １３Ｃ５  ＣＤＲセットとＶＬ  １３Ｃ５  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ２９Ｇ５  ＣＤＲセットとＶＬ  ２９Ｇ５  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ３３Ｃ３  ＣＤＲセットとＶＬ  ３３Ｃ３  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ４Ａ８  ＣＤＲセットとＶＬ  ４Ａ８  ＣＤＲセット、
ＶＨ  １Ｂ６  ＣＤＲセットとＶＬ  １Ｂ６  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ３Ｅ５  ＣＤＲセットとＶＬ  ３Ｅ５  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ６Ｃ８  ＣＤＲセットとＶＬ  ６Ｃ８  ＣＤＲセット、
ＶＨ  ５Ｄ３  ＣＤＲセットとＶＬ  ５Ｄ３  ＣＤＲセット、及び
ＶＨ  ８Ｂ６  ＣＤＲセットとＶＬ  ８Ｂ６  ＣＤＲセット
【００２８】
別の一実施形態においては、上で開示した結合タンパク質は、ヒト受容体フレームワークを更に含む。好ましくは、ヒト受容体フレームワークは、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００２９】
配列番号６
配列番号７
配列番号８
配列番号９
配列番号１０
配列番号１１
配列番号１２
配列番号１３
配列番号１４
配列番号１５
配列番号１６
配列番号１７
配列番号１８
配列番号１９
配列番号２０
配列番号２１
配列番号２２
配列番号２３
配列番号２４
配列番号２５
配列番号２６
配列番号２７
配列番号２８
配列番号２９
配列番号３０及び
配列番号３１
【００３０】
好ましい一実施形態においては、結合タンパク質は、ＩＬ−１３に結合可能なＣＤＲグラフト抗体又はその抗原結合性部分である。好ましくは、ＣＤＲグラフト抗体又はその抗原結合性部分は、上で開示した１個以上のＣＤＲを含む。好ましくは、ＣＤＲグラフト抗体又はその抗原結合性部分は、ヒト受容体フレームワークを含む。より好ましくは、ヒト受容体フレームワークは、上で開示したヒト受容体フレームワークのいずれか１つである。
【００３１】
好ましい一実施形態においては、結合タンパク質は、ＩＬ−１３に結合可能なヒト化抗体又はその抗原結合性部分である。好ましくは、ヒト化抗体又はその抗原結合性部分は、ヒト受容体フレームワークのヒト抗体可変ドメインに組み込まれた、上で開示した１個以上のＣＤＲを含む。好ましくは、ヒト抗体可変ドメインはコンセンサスヒト可変ドメインである。より好ましくは、ヒト受容体フレームワークは、重要な残基における少なくとも１個のフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、重要な残基は、ＣＤＲに隣接する残基、グリコシル化部位残基、希少残基、ヒトＩＬ−１３と相互作用可能な残基、ＣＤＲと相互作用可能な残基、正準（ｃａｎｏｎｉｃａｌ）残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域の接触残基、バーニア（Ｖｅｒｎｉｅｒ）ゾーン内の残基、及びＣｈｏｔｈｉａによって定義された可変重鎖ＣＤＲ１とＫａｂａｔによって定義された第１の重鎖フレームワークとの重複領域中の残基からなる群から選択される。好ましくは、ヒト受容体フレームワークヒト受容体フレームワークは、少なくとも１個のフレームワーク領域アミノ酸置換を含み、フレームワークのアミノ酸配列は、前記ヒト受容体フレームワークの配列と少なくとも６５％同一であり、前記ヒト受容体フレームワークと同一である少なくとも７０個のアミノ酸残基を含む。好ましくは、重要な残基におけるフレームワーク領域アミノ酸置換は、２Ｌ、１５Ｌ、２２Ｌ、４１Ｌ、４２Ｌ、４４Ｌ、４９Ｌ、５０Ｌ、５１Ｌ、６２Ｌ、７１Ｌ、７３Ｌ、１０Ｈ、４４Ｈ、４６Ｈ、４８Ｈ、６７Ｈ、６８Ｈ、７０Ｈ、７２Ｈ、７４Ｈ、７６Ｈ、８３Ｈ、８４Ｈ、８６Ｈ、８７Ｈ及び９７Ｈからなる群から選択される。
【００３２】
好ましい一実施形態においては、結合タンパク質は、ＩＬ−１３に結合可能なヒト化抗体又はその抗原結合性部分である。好ましくは、ヒト化抗体又はその抗原結合性部分は、上で開示した１個以上のＣＤＲを含む。より好ましくは、ヒト化抗体又はその抗原結合性部分は、上で開示した３個以上のＣＤＲを含む。最も好ましくは、ヒト化抗体又はその抗原結合性部分は、上で開示した６個のＣＤＲを含む。
【００３３】
本発明の別の一実施形態においては、ヒト化抗体又はその抗原結合性部分は、以下からなる群から選択される群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１個の可変ドメインを含む。
【００３４】
配列番号７０
配列番号７１
配列番号７２
配列番号７３
配列番号７４
配列番号７５
配列番号７６
配列番号７７
配列番号７８
配列番号７９
配列番号８０
配列番号８１
配列番号８２
配列番号８３
配列番号８４
配列番号８５
配列番号９２
配列番号９３及び
配列番号９４
【００３５】
より好ましくは、ヒト化抗体又はその抗原結合性部分は、上で開示した群から選択される２個の可変ドメインを含む。より好ましくは、結合タンパク質は、２個の可変ドメインを含み、前記２個の可変ドメインは、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００３６】
配列番号７０と配列番号７１、
配列番号７２と配列番号７３、
配列番号７４と配列番号７５、
配列番号７６と配列番号７７、
配列番号７８と配列番号７９、
配列番号８０と配列番号８１、
配列番号８２と配列番号８３、
配列番号８４と配列番号８５
配列番号８０と配列番号９２、
配列番号８０と配列番号９３及び
配列番号８０と配列番号９４
【００３７】
本発明の一実施形態は、上で開示した結合タンパク質のいずれか１つとリンカーポリペプチド又は免疫グロブリンとを含む抗体構築物を提供する。好ましい一実施形態においては、抗体構築物は、免疫グロブリン分子、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、多重特異性抗体、二重特異性（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体、及び二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体からなる群から選択される。好ましい一実施形態においては、抗体構築物は、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン及びヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。より好ましくは、抗体構築物は、配列番号２、配列番号３、配列番号４及び配列番号５を含む。別の一実施形態においては、本発明は、上で開示した抗体構築物と、免疫接着分子、造影剤、治療薬及び細胞毒性薬からなる群から選択される薬剤薬剤とを含む抗体複合体を提供する。好ましい一実施形態においては、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁性標識及びビオチンからなる群から選択される造影剤。より好ましくは、造影剤は、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ及び１５３Ｓｍからなる群から選択される放射性標識である。好ましい一実施形態においては、治療薬又は細胞毒性薬は、代謝拮抗物質、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、血管新生阻害剤、有糸分裂阻害剤、アントラサイクリン、毒素及びアポトーシス剤からなる群から選択される。
【００３８】
別の一実施形態においては、抗体構築物はグリコシル化されている。好ましくは、グリコシル化はヒトグリコシル化パターンである。
【００３９】
別の一実施形態においては、上で開示した結合タンパク質、抗体構築物又は抗体複合体は、結晶として存在する。好ましくは、結晶は、担体を含まない医薬制御放出結晶である。好ましい一実施形態においては、結晶化結合タンパク質、結晶化抗体構築物、又は結晶化抗体複合体は、その可溶性対応物よりも長い生体内半減期を有する。別の好ましい一実施形態においては、結晶化結合タンパク質、結晶化抗体構築物、又は結晶化抗体複合体は、結晶化後も生物活性を保持する。
【００４０】
本発明の一態様は、ＩＬ−１３に結合可能な結合タンパク質を含むＤＶＤ結合タンパク質に関する。好ましくは、ＤＶＤ結合タンパク質は、ＩＬ−１３及び第２の標的に結合可能である。第２の標的は、ＣＳＦ１（ＭＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）、ＦＧＦ２、ＩＦＮα１、ＩＦＮβ１、ＩＦＮγ、ヒスタミン及びヒスタミン受容体、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２α、ＩＬ−１２β、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＫＩＴＬＧ、ＰＤＧＦＢ、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−５Ｒα、ＩＬ−８Ｒα、ＩＬ−８Ｒβ、ＩＬ−１２Ｒβ１、ＩＬ−１２Ｒβ２、ＩＬ−１３Ｒα１、ＩＬ−１３Ｒα２、ＩＬ−１８Ｒ１、ＴＳＬＰ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＸＣＬ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＸ３ＣＲ１、ＧＰＲ２、ＸＣＲ１、ＦＯＳ、ＧＡＴＡ３、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＳＴＡＴ６、ＴＢＸ２１、ＴＧＦＢ１、ＴＮＦＳＦ６、ＹＹ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ並びにキチナーゼからなる群から選択される。より好ましくは、ＤＶＤタンパク質は、ＩＬ−１３及びＩＬ−１β、ＩＬ−１３及びＩＬ−９；ＩＬ−１３及びＩＬ−４；ＩＬ−１３及びＩＬ−５；ＩＬ−１３及びＩＬ−２５；ＩＬ−１３及びＴＡＲＣ；ＩＬ−１３及びＭＤＣ；ＩＬ−１３及びＭＩＦ；ＩＬ−１３及びＴＧＦ−β；ＩＬ−１３及びＬＨＲ作動物質；ＩＬ−１３及びＣＬ２５；ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ａ；ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ｂ又はＩＬ−１３及びＡＤＡＭ８を認識可能である。最も好ましくは、ＤＶＤタンパク質は、ＩＬ−１３及びＴＮＦαに結合可能である。
【００４１】
本発明の一態様は、上で開示した結合タンパク質、抗体構築物又は抗体複合体のいずれか１つをコードする単離核酸に関する。更なる一実施形態は、上で開示した単離核酸を含むベクターを提供する。前記ベクターは、ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００２，  Ｖｏｌ  ３０，  Ｎｏ．２）、ｐＴＴ３（追加のマルチクローニング部位を有するｐＴＴ、ｐＥＦＢＯＳ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ，  Ｓ．  ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ，  Ｓ．，  （１９９０）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ  １８，  Ｎｏ．１７）、ｐＢＶ、ｐＪＶ及びｐＢＪからなる群から選択される。
【００４２】
別の一態様においては、宿主細胞は、上で開示したベクターで形質転換される。好ましくは、宿主細胞は原核細胞である。より好ましくは、宿主細胞はＥ．コリ（Ｅ．  ｃｏｌｉ）である。関連した一実施形態においては、宿主細胞は真核細胞である。好ましくは、真核細胞は、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及び真菌細胞からなる群から選択される。より好ましくは、宿主細胞は、ＣＨＯ及びＣＯＳを含めて、ただしこれらだけに限定されないほ乳動物細胞、サッカロミセス  セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などの真菌細胞、又はＳｆ９などの昆虫細胞である。
【００４３】
本発明の別の一態様は、ＩＬ−１３に結合する結合タンパク質の製造に十分な条件下で、上で開示した宿主細胞のいずれか１つを培地中で培養することを含む、ＩＬ−１３に結合する結合タンパク質を製造する方法を提供する。別の一実施形態は、上で開示した方法によって製造された結合タンパク質を提供する。
【００４４】
一実施形態は、結合タンパク質の放出用組成物を提供する。該組成物は、上で開示した結晶化結合タンパク質、結晶化抗体構築物又は結晶化抗体複合体及び成分を含む製剤と、少なくとも１種類の重合体担体とを含む。好ましくは、重合体担体は、ポリアクリル酸、ポリシアノアクリラート、ポリアミノ酸、ポリ無水物、ポリデプシペプチド、ポリエステル、ポリ乳酸、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）又はＰＬＧＡ、ポリｂ−ヒドロキシブチラート、ポリカプロラクトン、ポリジオキサノン；ポリエチレングリコール、ポリ（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ（オルガノ）ホスファゼン、ポリオルトエステル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテルコポリマー、Ｐｌｕｒｏｎｉｃポリオール、アルブミン、アルギナート、セルロース及びセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリコサミノグリカン（ｇｌｙｃａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ）、硫酸化多糖（ｐｏｌｙｅａｃｃｈａｒｉｄｅ）、これらの混合物及びコポリマーからなる群の１つ以上から選択されるポリマーである。好ましくは、成分は、アルブミン、スクロース、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコール及びポリエチレングリコールからなる群から選択される。別の一実施形態は、上で開示した組成物の有効量をほ乳動物に投与する段階を含む、ほ乳動物を治療する方法を提供する。
【００４５】
本発明は、上で開示した結合タンパク質、抗体構築物又は抗体複合体と薬学的に許容される担体とを含む薬剤組成物も提供する。更なる一実施形態においては、薬剤組成物は、ＩＬ−１３活性が有害である障害を治療する少なくとも１種類の追加の治療薬を含む。好ましくは、追加の薬剤は、治療薬、造影剤、細胞毒性薬、（抗ＶＥＧＦ抗体又はＶＥＧＦ捕捉剤（ＶＥＧＦ−ｔｒａｐ）を含めて、ただしこれらだけに限定されない）血管新生阻害剤；（ＫＤＲ及びＴＩＥ−２阻害剤を含めて、ただしこれらだけに限定されない）キナーゼ阻害剤；（抗Ｂ７．１、抗Ｂ７．２、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、抗ＣＤ２０を含めて、ただしこれらだけに限定されない）同時刺激分子遮断薬；（抗ＬＦＡ−１  Ａｂ、抗Ｅ／ＬセレクチンＡｂ、小分子阻害剤を含めて、ただしこれらだけに限定されない）接着分子遮断薬；（抗ＩＬ−１８、抗ＴＮＦ、抗ＩＬ−６／サイトカイン受容体抗体を含めて、ただしこれらだけに限定されない）抗サイトカイン抗体又はその機能的断片；メトトレキサート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能な標識又はレポーター；ＴＮＦ拮抗物質；抗リウマチ薬；筋弛緩薬、麻薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌剤、乾せん治療薬、コルチコステロイド、タンパク質同化ステロイド、エリスロポイエチン、免疫化、免疫グロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、刺激薬、ぜん息治療薬、ベータ作動物質、吸入ステロイド、エピネフリン又は類似体、サイトカイン、及びサイトカイン拮抗物質からなる群から選択される。
【００４６】
別の一態様においては、本発明は、ヒトＩＬ−１３活性が阻害されるようにヒトＩＬ−１３を上で開示した結合タンパク質と接触させることを含む、ヒトＩＬ−１３活性を阻害する方法を提供する。関係する一態様においては、本発明は、ヒト対象におけるヒトＩＬ−１３活性が阻害され、治療が達成されるように、上で開示した結合タンパク質をヒト対象に投与することを含む、ＩＬ−１３活性が有害である障害に罹患したヒト対象において、ヒトＩＬ−１３活性を阻害する方法を提供する。
【００４７】
別の一態様においては、本発明は、対象におけるＩＬ−１３関連障害を治療（例えば、治癒、抑制、改善、発症の遅延若しくは防止、又は回帰（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）若しくは再発（ｒｅｌａｐｓｅ）の防止）又は予防する方法を提供する。この方法は、ＩＬ−１３関連障害の治療又は予防に十分な量のＩＬ−１３結合剤（特に、拮抗物質）、例えば、本明細書に記載の抗ＩＬ−１３抗体又はその断片を対象に投与することを含む。ＩＬ−１３拮抗物質、例えば、抗ＩＬ−１３抗体又はその断片は、単独で、又は本明細書に記載の他の治療様式と組み合わせて、対象に投与することができる。
【００４８】
一実施形態においては、対象は、１種類以上のＩＬ−１３関連障害（本明細書に記載の、例えば、呼吸器障害（例えば、ぜん息（例えば、アレルギー性及び非アレルギー性ぜん息）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気道炎症を伴う他の症状、好酸球増加症、線維症及び過剰粘液産生；アトピー性障害（例えば、アトピー性皮膚炎及びアレルギー性鼻炎）；皮膚、胃腸器官（例えば、潰よう性大腸炎及び／又はクローン病などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ））及び肝臓（例えば、硬変、線維症）の炎症性及び／又は自己免疫性症状；強皮症；腫よう又は癌、例えば、ホジキンリンパ腫）に罹患したほ乳動物、例えばヒトである。したがって、開示は、本明細書に記載の治療のためのＩＬ−１３結合剤（本明細書に記載の抗ＩＬ−１３抗体又はその断片など）の使用、及び本明細書に記載の治療用医薬品を調製するためのＩＬ−１３結合剤（本明細書に記載の抗ＩＬ−１３抗体又はその断片など）の使用を含む。ＩＬ−１３関連障害の例としては、本明細書に記載の、呼吸器障害、例えば、ぜん息（例えば、アレルギー性及び非アレルギー性ぜん息（例えば低年齢小児における、例えば呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）による、感染に起因するぜん息など））、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気道炎症を伴う他の症状、好酸球増加症、線維症及び過剰粘液産生、例えば、嚢胞性線維症及び肺線維症；例えばＩＬ−１３に対する感受性の増加に起因する、アトピー性障害（例えば、アトピー性皮膚炎、じんま疹、湿疹、アレルギー性鼻炎及びアレルギー性胃腸炎）；皮膚（例えば、アトピー性皮膚炎）、胃腸器官（例えば、潰よう性大腸炎及び／又はクローン病などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ））、肝臓（例えば、硬変、肝細胞癌）の炎症性及び／又は自己免疫性症状、及び強皮症；白血病、グリア芽細胞腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫）などの腫よう又は癌（例えば、軟部組織又は固形腫よう）；（例えば、ＨＴＬＶ−１による）ウイルス感染；他の器官の線維症、例えば、肝臓の線維症（例えば、Ｂ及び／又はＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる線維症）並びに（例えば、ワクチン接種中の）１型防御免疫応答の発現抑制のうちの１つ以上から選択される障害が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【００４９】
別の実施形態においては、本願は、呼吸器障害に関連する１つ以上の症候、例えば、ぜん息（例えば、アレルギー性及び非アレルギー性ぜん息）；アレルギー；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；気道炎症を伴う症状、好酸球増加症、線維症及び過剰粘液産生、例えば、嚢胞性線維症及び肺線維症を治療（例えば、低減、改善）又は予防する方法を提供する。例えば、ぜん息の症候としては、喘鳴音、呼吸促迫、気管支収縮、気道過敏、肺気量減少、線維症、気道炎症及び粘液産生が挙げられるが、これらだけに限定されない。この方法は、１つ以上の症候の治療（例えば、低減、改善）又は予防に十分な量のＩＬ−１３拮抗物質、例えば、ＩＬ−１３抗体又はその断片を対象に投与することを含む。ＩＬ−１３抗体は、治療的に、若しくは予防的に、又は治療と予防の両方で投与することができる。ＩＬ−１３拮抗物質、例えば、抗ＩＬ−１３抗体又はその断片は、単独で、又は本明細書に記載の他の治療様式と組み合わせて、対象に投与することができる。好ましくは、対象は、本明細書に記載のＩＬ−１３関連障害に罹患したほ乳動物、例えばヒトである。
【００５０】
別の一態様においては、本願は、試料（例えば、血清、血しょう、組織、生検などの生物試料）中のＩＬ−１３の存在をインビトロで検出する方法を提供する。この方法は、障害、例えば、免疫細胞関連障害の診断に使用することができる。この方法は、（ｉ）試料又は対照試料を本明細書に記載の抗ＩＬ−１３抗体又はその断片と接触させること、及び（ｉｉ）抗ＩＬ−１３抗体又はその断片と試料又は対照試料との複合体の形成を検出することを含み、対照試料と比較して、試料中の複合体形成の統計的に有意な変化によって、試料中のＩＬ−１３の存在が示される。
【００５１】
更に別の一態様においては、本願は、ＩＬ−１３の存在を生体内で検出する方法（例えば、対象における生体内（ｉｎ  ｖｉｖａ）イメージング）を提供する。この方法は、障害、例えば、ＩＬ−１３関連障害の診断に使用することができる。この方法は、（ｉ）本明細書に記載の抗ＩＬ−１３抗体又はその断片を、抗体又は断片とＩＬ−１３の結合を可能にする条件下で、対象又は対照対象に投与すること、及び（ｉｉ）抗体又は断片とＩＬ−１３の複合体の形成を検出することを含み、対照対象と比較して、対象における複合体形成の統計的に有意な変化によって、ＩＬ−１３の存在が示される。
【００５２】
別の一態様においては、本発明の結合タンパク質は、関節炎、骨関節炎、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾せん性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰よう性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、ぜん息、アレルギー疾患、乾せん、皮膚炎  強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に付随する急性又は慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ  シェーンライン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫よう、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性多内分泌腺機能低下Ｉ型及び多内分泌腺機能低下ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清陰性関節症、関節症、ライター病、乾せん性関節症、潰よう性結腸炎性関節症、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラに関連した関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水ほう症、尋常性天ぽうそう、落葉状天ほうそう、類天ほうそう、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、原因不明性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症症候群、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、線維性肺疾患、原因不明性線維化肺胞炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合性結合組織病関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、リウマチ様関節炎関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデリン沈着症関連肺疾患、薬剤性間質性肺疾患、線維症、放射線線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ性浸潤性肺疾患、感染後の間質性肺疾患、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫又はルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫に付随するＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に付随する急性免疫疾患、臓器移植に付随する慢性免疫疾患、骨関節症、原発性硬化性胆管炎、乾せん１型、乾せん２型、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、ＮＯＳ腎疾患、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性又はＮＯＳ男性不妊症、精子自己免疫、多発性硬化症（全サブタイプ）、交感性眼炎、結合組織病に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発性動脈��の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ様脊椎炎、スティル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫性自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体原性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑  急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬剤性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギー及びぜん息、Ｂ群レンサ球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害（例えば、うつ病及び統合失調症）、Ｔｈ２型及びＴｈ１型媒介性疾患、急性及び慢性痛（とう痛の異なる形態）、肺癌、乳癌、胃癌、ぼうこう癌、結腸癌、すい臓癌、卵巣癌、前立腺癌、直腸癌、造血器悪性腫よう（白血病及びリンパ腫）などの癌、無ベータリポタンパク質血症（ａｂｅｔａｌｉｐｏｐｒｏｔｅｍｉａ）、先端チアノーゼ、急性及び慢性寄生性又は感染性過程、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性又は慢性細菌感染、急性すい炎、急性腎不全、腺癌、空気異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶、アルファ−１−抗トリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３療法、抗リン脂質抗体症候群、抗受容体過敏反応、大動脈（ａｏｒｄｉｃ）及び末梢動脈りゅう、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈ろう、運動失調、（持続性又は発作性）心房細動、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心臓不整脈、心臓不全（ｓｔｕｎ）症候群、心臓腫よう、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性症、小脳疾患、無秩序型又は多源性心房頻拍、化学療法関連障害、クロム（ｃｈｒｏｍｉｃ）骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール依存症、慢性炎症性症状、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト  ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連障害、ボクサー認知症、脱髄疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化症、びまん性レヴィー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の障害、中年のダウン症候群、ＣＮＳドパミン受容体を遮断する薬物によって誘発される薬剤性運動障害、薬剤感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタインバーウイルス感染症、紅痛症、錐体外路障害及び小脳疾患、家族性食血細胞リンパ組織球増多症、胎児胸腺移植片拒絶、フリードライヒ失調症、末梢動脈機能障害、真菌性敗血症、ガス壊そ、胃潰よう、糸球体腎炎、任意の器官又は組織の移植片拒絶、グラム陰性菌敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物体による肉芽腫、有毛細胞白血病、Ｈａｌｌｅｒｒｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓���植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解性血小板減少性紫斑病、出血、肝炎（Ａ）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰症、過敏（ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｔｙ）反応、過敏性肺炎、高血圧症、運動低下症（ｈｙｐｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｍｏｖｅｍｅｎｔ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介性細胞傷害性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再潅流障害、虚血性脳卒中、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ライ病、皮質脊髄系の病変、脂肪性浮腫、肝移植拒絶、リンパ浮腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症、代謝性／特発性片頭痛、ミトコンドリア多系統障害、混合性結合組織病、モノクローナル免疫グロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性症（Ｍｅｎｃｅｌ  Ｄｅｊｅｒｉｎｅ−Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｈｉ−Ｄｒａｇｅｒ  ａｎｄ  Ｍａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ）、重症筋無力症、トリ型マイコバクテリウム  イントラセルラーレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム  テュバキュローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血性障害、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈及びその枝の閉塞、閉塞性動脈障害、ｏｋｔ３療法、睾丸炎／精巣上体炎、睾丸炎／精管復元術、臓器肥大、骨粗しょう症、すい臓移植拒絶、すい癌、腫よう随伴症候群／悪性腫ようの高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢動脈硬化性疾患、末梢血管障害、腹膜炎、悪性貧血、カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、臓器肥大、内分泌疾患、モノクローナル免疫グロブリン血症及び皮膚変化症候群）、体外潅流後（ｐｏｓｔ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）症候群、体外循環後（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ）症候群、心筋梗塞後の開心術症候群、子かん前症、進行性核上性麻ひ、原発性肺高血圧症、放射線療法、レイノー現象及び疾患、Ｒａｙｎｏｕｄ病、レフスム病、規則正しい幅の狭いＱＲＳ頻拍、腎血管性高血圧、再潅流傷害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老人性舞踏病、レヴィー小体型老年認知症、血清反応陰性関節症、ショック、鎌状赤血球貧血、皮膚同種移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫よう、特異的不整脈、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性症、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血管系の梅毒、全身アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症型若年性関節リウマチ、Ｔ細胞又はＦＡＢ  ＡＬＬ、末梢血管拡張、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植片、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんま疹、心臓弁膜症、静脈りゅう、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルス及び真菌感染、致命的な脳炎／無菌性髄膜炎、生命に関連する血球貪食症候群、ウェルニッケ  コルサコフ症候群、ウィルソン病、任意の器官又は組織の異種移植片拒絶、急性冠動脈症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根筋障害、急性虚血、成人スティル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）感染に付随する自己免疫異常、自己免疫性腸疾患、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ球増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣機能不全、眼けん炎、気管支拡張症、水ほう性類天ほうそう、循環器疾患、破局的な抗リン脂質抗体症候群、セリアック病、頚椎症、慢性虚血、はん痕性類天ほうそう、多発性硬化症のリスクがある、最初のエピソードからなる症候群（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）（ＣＩＳ）、結膜炎、小児期発症型精神障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物性免疫溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症多形性紅斑、妊娠性類天ほうそう、ギラン  バレー症候群（ＧＢＳ）、枯草熱、Ｈｕｇｈｅｓ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介性アレルギー、免疫溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼球炎症性疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎（Ｋｅｒａｔｏｊｕｎｔｉｖｉｔｉｓ  ｓｉｃｃａ）、クスマウル病又はＫｕｓｓｍａｕｌ−Ｍｅｉｅｒ病、ランドリー麻ひ、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、網状皮斑、黄斑変性症、顕微鏡的多発性血管炎、Ｂｅｃｈｔｅｒｅｖ病、運動ニューロン障害、粘膜類天ほうそう、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ型非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解、少関節性ＪＲＡ、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発性動脈炎（又は結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、リウマチ性多発筋痛、白毛症、多関節性ＪＲＡ、多内分泌腺機能低下症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発筋痛（ＰＭＲ）、体外循環後症候群、原発性パーキンソン症、前立腺
炎、赤芽球ろう、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、アクネ、膿ほう症、骨過形成及び骨髄炎）、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経症、続発性副腎不全、シリコーン関連結合組織病、スネドン−ウィルキンソン皮膚疾患、強直性脊椎炎（ｓｐｏｎｄｉｌｉｔｉｓ  ａｎｋｙｌｏｓａｎｓ）、スティーブンス  ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラズマ性網膜炎、中毒性表皮壊死症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫よう壊死因子受容体、１型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、じんま疹、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季カタル、ウイルス性網膜炎、フォークト−小柳−原田症候群（ＶＫＨ症候群）、しん出型黄斑変性症、並びに創傷治癒からなる群から選択される障害の治療に有用である。
【００５３】
別の一態様においては、本発明の結合タンパク質は、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、小脳星細胞腫、大脳星細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、肝臓外（ｅｘｔｒａｈｅｐａｔｉｃ）、ぼうこう癌、骨癌、骨肉腫／悪性線維性組織球腫  脳幹神経こう腫、脳腫よう、脳幹神経こう腫、大脳星細胞腫（ｓｔｒｏｃｙｔｏｍａ）／悪性神経こう腫、上衣細胞腫、髄芽腫、テント上未分化神経外胚葉性腫よう、視覚路及び視床下部神経こう腫、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫よう、カルチノイド腫よう、原発不明胃腸癌、中枢神経系リンパ腫、原発性小脳星細胞腫、子宮頚癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病  慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮体癌、上衣細胞腫、食道癌、ユーイング腫よう（Ｅｗｉｎｇ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｔｕｍｏｕｒ）、頭蓋外胚細胞腫よう、性腺外胚細胞腫よう、肝外胆管癌、眼癌、眼球内黒色腫  網膜芽細胞腫、胆嚢癌、胃（胃部）癌、消化管カルチノイド腫よう、消化管間質腫よう（ＧＩＳＴ）、頭蓋外胚細胞腫よう、性腺外胚細胞腫よう、卵巣胚細胞腫よう、妊娠性じゅう毛性腫よう、神経こう腫、脳幹神経こう腫、大脳星細胞腫  神経こう腫、小児視覚路及び視床下部神経こう腫、有毛細胞白血病、頭頚部癌、肝細胞性（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、眼球内黒色腫、すい島細胞癌（すい内分泌部）、カポジ肉腫、腎臓（腎細胞）癌、喉頭癌、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、有毛細胞白血病、口唇癌と口腔癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫、髄芽腫、黒色腫、眼内（眼）黒色腫、メルケル細胞癌、悪性中皮腫、原発不明の転移性へん平上皮性頚部癌、口腔癌、多発性内分泌腫よう症候群、多発性骨髄腫／形質細胞腫よう、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、鼻腔及び副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔癌、口腔の癌、口唇癌と中咽頭癌、骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫、卵巣癌、卵巣上皮癌、卵巣胚細胞腫よう、境界悪性卵巣腫よう、すい癌、島細胞すい癌、副鼻腔及び鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、クロム親和細胞腫、松果体芽腫及びテント上未分化神経外胚葉性腫よう、下垂体腫よう、形質細胞腫よう／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞（腎臓）癌、腎う及び尿管移行上皮癌、網膜芽細胞腫、唾液腺癌、肉腫、ユーイング腫よう、カポジ肉腫、軟部組織肉腫、子宮肉腫、セザリー症候群、（非黒色腫性）皮膚癌、皮膚癌（黒色腫）、メルケル細胞皮膚癌、小腸癌、へん平上皮癌、原発不明の転移性へん平上皮性頚部癌、胃（胃部）癌、テント上未分化神経外胚葉性腫よう、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、咽頭癌、胸腺腫、胸腺腫及び胸腺癌、甲状腺癌、腎う及び尿管の移行上皮癌、妊娠性じゅう毛性腫よう、尿管及び腎う移行上皮癌、尿道癌、子宮癌、子宮内膜肉���、膣癌、視覚路及び視床下部神経こう腫、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫ようからなる群から選択される障害の治療に有用である。
【００５４】
別の一態様においては、本発明は、上述したように、第２の薬剤の投与前、投与と同時、又は投与後に、上で開示した結合タンパク質のいずれか１つを投与する段階を含む、ヒトＩＬ−１３が有害である障害に罹患した患者を治療する方法を提供する。好ましい一実施形態においては、１種類以上のＩＬ−１３拮抗物質（例えば、抗ＩＬ−１３抗体又はその断片）と同時投与及び／又は同時処方することができる追加の治療薬としては、吸入ステロイド；経口ステロイド；ベータ作動物質、例えば、短時間作用性又は長時間作用性ベータ作動物質；ロイコトリエン又はロイコトリエン受容体の拮抗物質；ＡＤＶＡＩＲなどの複合薬；ＩｇＥ阻害剤、例えば、抗ＩｇＥ抗体（例えば、ＸＯＬＡＩＲ）；ホスホジエステラーゼ阻害薬（例えば、ＰＤＥ４阻害剤）；キサンチン；抗コリン作用薬；クロモリンなどの肥満細胞安定剤；ＩＬ−４阻害剤；ＩＬ−５阻害剤；エオタキシン／ＣＣＲ３阻害剤；ヒスタミン又はＨ１、Ｈ２、Ｈ３及びＨ４を含めたその受容体の拮抗物質、並びにプロスタグランジンＤ又はその受容体（ＤＰ１及びＣＲＴＨ２）の拮抗物質のうちの１種類以上が挙げられるが、これらだけに限定されない。かかる組合せは、ぜん息及び他の呼吸器障害の治療に使用することができる。１種類以上の抗ＩＬ−１３抗体又はその断片と同時投与及び／又は同時処方することができる治療薬の追加の例としては、とりわけ、ＴＮＦ拮抗物質（例えば、ＴＮＦ受容体（例えば、ｐ５５若しくはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体又はその誘導体）の可溶性断片、例えば、７５ｋＤ  ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ））；ＴＮＦ酵素拮抗物質、例えば、ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ムスカリン受容体拮抗物質；ＴＧＦベータ拮抗物質；インターフェロンガンマ；ピルフェニドン；化学療法剤、例えば、メトトレキサート、レフルノミド若しくはシロリムス（ラパマイシン）又はその類似体、例えば、ＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２及びｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；免疫調節物質；ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２、ＭＫ−２及びＮＦｋＢ阻害剤のうちの１種類以上が挙げられる。追加の第２の薬剤は、ブデノシド（ｂｕｄｅｎｏｓｉｄｅ）、上皮成長因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチル酸、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤、ＩＬ−１受容体拮抗物質、抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体、抗ＩＬ−６モノクローナル抗体、成長因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニル−イミダゾール化合物、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦの抗体又は作動物質、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０又はこれらのリガンドの抗体、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、イブプロフェン、コルチコステロイド、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害薬、アデノシン作動物質、抗血栓薬、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、可溶性サイトカイン受容体、可溶性ｐ５５  ＴＮＦ受容体、可溶性ｐ７５  ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１並びにＴＧＦβからなる群から選択される。
【００５５】
好ましい一実施形態においては、上で開示した薬剤組成物を、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内（ｉｎｔｒａａｂｄｏｍｉｎａｌ）、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頚管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ）、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液嚢内、胸腔内、子宮内、ぼうこう内、ボーラス、膣、直腸、頬、舌下、鼻腔内及び経皮から選択される少なくとも１つの様式によって、対象に投与する。
【００５６】
本発明の一態様は、本発明の少なくとも１種類のＩＬ−１３結合タンパク質に対する少なくとも１種類のＩＬ−１３抗イディオタイプ抗体を提供する。抗イディオタイプ抗体としては、本発明の結合タンパク質に組み入れることができる、重鎖若しくは軽鎖の少なくとも１個の相補性決定領域（ＣＤＲ）又はそのリガンド結合部分、重鎖若しくは軽鎖可変領域、重鎖若しくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、又はその任意の部分など、ただしこれらだけに限定されない、免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む分子を含む任意のタンパク質又はペプチドが挙げられる。
【発明を実施するための形態】
【００５７】
発明の詳細な説明
本発明は、ＩＬ−１３に結合するヒトＩＬ−１３結合タンパク質、特に抗ＩＬ−１３抗体又はその抗原結合性部分に関する。本発明の種々の態様は、抗体及び抗体断片、その薬剤組成物、並びにかかる抗体及び断片を製造するための核酸、組換え発現ベクター及び宿主細胞に関する。本発明の抗体を使用して、ヒトＩＬ−１３を検出し、インビトロ又は生体内でヒトＩＬ−１３活性を阻害し、また、遺伝子発現を調整する各方法も本発明に包含される。
【００５８】
別段の記載がない限り、本発明に関連して用いられる科学及び技術用語は、当業者によって一般に理解されている意味を有するものとする。これらの用語の意味及び範囲は明確であるはずであるが、潜在的な多義性が万一発生した場合には、本明細書の定義が辞書又は外部からの定義よりも先行する。また、状況が必要としない限り、単数の用語は複数を含み、複数の用語は単数を含むものとする。本願では、特段の記載がない限り、「又は」を使用するときには「及び／又は」を意味する。また、「含めて」という用語、及び「含む」、「含まれる」などの他の形態の使用は、限定的なものではない。また、「要素」、「成分」などの用語は、特段の記載がない限り、１個の単位を含む要素及び成分と、１個を超える亜単位を含む要素及び成分の両方を包含する。
【００５９】
一般に、本明細書に記載の細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、タンパク質・核酸化学並びにハイブリダイゼーションに関連して用いられる命名法及びその技術は、当分野で周知であり、一般に用いられるものである。本発明の方法及び技術は、別段の記載がない限り、当分野で周知の従来法によって一般に実施され、本明細書を通して引用及び考察される種々の一般的参考文献及びより具体的な参考文献に記載のように実施される。酵素反応及び精製技術は、製造者の仕様書に従って実施され、当分野で一般に実施されるとおりに実施され、又は本明細書に記載のとおりに実施される。本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、医薬品化学及び製薬化学に関連して使用される命名法並びにその実験手順及び技術は、当分野で一般に使用される周知のものである。化学合成、化学分析、調剤、処方、送達、及び患者の治療には標準技術を使用する。
【００６０】
本発明をより容易に理解することができる。選択された用語を以下に定義する。
【００６１】
本明細書では「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸の任意の重合体鎖を指す。「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、ポリペプチドという用語と区別なく使用され、アミノ酸の重合体鎖も指す。「ポリペプチド」という用語は、未変性又は人工タンパク質、タンパク質断片、及びタンパク質配列のポリペプチド類似体を包含する。ポリペプチドは、単量体でも重合体でもよい。
【００６２】
「単離タンパク質」又は「単離ポリペプチド」という用語は、その由来の起源若しくは出所のために、その天然状態でそれに伴う天然に付随する成分が付随しないタンパク質若しくはポリペプチド、同じ種由来の他のタンパク質を実質的に含まないタンパク質若しくはポリペプチド、異なる種由来の細胞によって発現されるタンパク質若しくはポリペプチド、又は天然に存在しないタンパク質若しくはポリペプチドである。したがって、ポリペプチドが天然に生ずる細胞とは異なる細胞系中で化学合成又は合成されたポリペプチドは、その天然に付随する成分から「単離」されていることになる。タンパク質は、当分野で周知のタンパク質精製技術を用いて、単離によって、天然に付随する成分を実質的に含まなくすることもできる。
【００６３】
本明細書では「回収」という用語は、ポリペプチドなどの化学種を、例えば、当分野で周知のタンパク質精製技術を用いて、単離によって、天然に付随する成分を実質的に含まなくするプロセスを指す。
【００６４】
本明細書では「ヒトＩＬ−１３」及び「ヒトＩＬ−１３野生型」（本明細書ではｈＩＬ−１３、ｈＩＬ−１３ｗｔと略記する。）という用語は、Ｔヘルパー２細胞によって主に分泌されるヒトサイトカインを含む。この用語は、１３ｋＤａポリペプチドの単量体タンパク質を含む。ヒトＩＬ−１３の構造は、例えば、（Ｍｏｙ，  Ｄｉｂｌａｓｉｏ  ｅｔ  ａｌ．  ２００１  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３１０  ２１９−３０）に更に記載されている。ヒトＩＬ−１３という用語は、標準組換え発現方法によって調製することができる組換えヒトＩＬ−１３（ｒｈＩＬ−１３）を含むものとする。表１に、当分野で公知であるヒトＩＬ−１３のアミノ酸配列（配列番号１）を示す。
【００６５】
【表２】
2014237671.tif 000006
【００６６】
本明細書では「ヒトＩＬ−１３変種」（本明細書ではｈＩＬ−１３ｖと略記する。）という用語は、配列番号１のアミノ酸残基１３０がアルギニンからグルタミンに変化したヒトＩＬ−１３の変種（Ｒ１３０Ｑ）を含む。
【００６７】
本明細書では「生物活性」は、サイトカインの固有の全生物学的特性を指す。ＩＬ−１３の生物学的特性としては、結合ＩＬ−１３受容体が挙げられるが、これだけに限定されない（他の例としては、ヒトＢ細胞におけるＩｇＥへの免疫グロブリンアイソタイプスイッチング、及び抑制性の炎症性サイトカイン産生が挙げられる。）。
【００６８】
抗体、タンパク質又はペプチドと第２の化学種との相互作用に関連して、本明細書では「特異的結合」又は「特異的に結合」という用語は、相互作用が、化学種上の特別な構造（例えば、抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存すること、例えば、抗体が、タンパク質一般ではなく特定のタンパク質構造を認識し、それに結合することを意味する。抗体がエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識された「Ａ」と抗体を含む反応物中に、エピトープＡを含む分子（又は遊離の標識されていないＡ）が存在すると、抗体に結合した標識Ａの量が減少する。
【００６９】
本明細書では「抗体」という用語は、４本のポリペプチド鎖、すなわち２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖で構成される任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、又はＩｇ分子のエピトープ結合の本質的特徴を保持するその任意の機能的断片、変異体、変種若しくは誘導体（ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ）を広く指す。かかる変異体、変種又は誘導抗体の形式は当分野で公知である。その非限定的実施形態を以下に考察する。
【００７０】
完全長抗体においては、各重鎖は、ＨＣＶＲ又はＶＨと略記する重鎖可変領域と重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３個のドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３で構成される。各軽鎖は、ＬＣＶＲ又はＶＬと略記する軽鎖可変領域と軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、１個のドメインＣＬで構成される。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存的である領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変領域に更に細分することができる。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順序、すなわちＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で整列する３個のＣＤＲと４個のＦＲで構成される。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスであり得る。
【００７１】
本明細書では、抗体の「抗原結合性部分」（又は単に「抗体部分」）という用語は、抗原（例えば、ｈＩＬ−１３）に特異的に結合する能力を保持する１個以上の抗体断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって発揮され得ることが示された。かかる抗体の実施形態は、２個以上の異なる抗原に特異的に結合する、二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）、二重特異性（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）、又は多重特異性形式でもあり得る。抗体の「抗原結合性部分」という用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、すなわちＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価の断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、すなわちヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２個のＦａｂ断片を含む二価の断片、（ｉｉｉ）ＶＨとＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一の腕のＶＬとＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一の可変ドメインを含むｄＡｂ断片（参照により本明細書に組み入れる、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６、Ｗｉｎｔｅｒ他、国際公開第９０／０５１４４号Ａ１）、及び（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。また、Ｆｖ断片の２個のドメインＶＬとＶＨは別々の遺伝子によってコードされるが、ＶＬとＶＨは、ＶＬ領域とＶＨ領域が一対になって一価の分子を形成する単一タンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる。例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照されたい。）として生成させることができる合成リンカーを用いて組換え方法によって連結することができる。かかる単鎖抗体も、抗体の「抗原結合性部分」という用語に包含されるものとする。二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）などの単鎖抗体の他の形態も包含される。二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）は、ＶＨドメインとＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上で発現されるが、短かすぎて同じ鎖上の２個のドメインの対形成が不可能であるリンカーを用いることによって、これらのドメインを別の鎖の相補的ドメインと対形成させ、２個の抗原結合部位を生成させた、二価の二重特異的な抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；  Ｐｏｌｊａｋ  Ｒ．Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３参照）。かかる抗体結合部分は当分野で公知である（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  （２００１）  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．  ７９０  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５）。
【００７２】
本明細書では「抗体構築物」という用語は、リンカーポリペプチド又は免疫グロブリン定常ドメインに結合した本発明の１個以上の抗原結合性部分を含むポリペプチドを指す。リンカーポリペプチドは、ペプチド結合によって連結された２個以上のアミノ酸残基を含み、１個以上の抗原結合性部分を連結するのに使用される。かかるリンカーポリペプチドは当分野で周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；  Ｐｏｌｊａｋ，  Ｒ．Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３参照）。免疫グロブリン定常ドメインとは、重鎖又は軽鎖定常ドメインを指す。ヒトＩｇＧ重鎖及び軽鎖定常ドメインのアミノ酸配列は、当分野で公知であり、表２に示す。
【００７３】
【表３】
2014237671.tif 000007
【００７４】
さらに、抗体又はその抗原結合性部分は、抗体又は抗体部分と１種類以上の他のタンパク質又はペプチドとの共有結合性又は非共有結合性会合によって形成される、より大きい免疫接着分子の一部であり得る。かかる免疫接着分子の例としては、４量体ｓｃＦｖ分子を生成するためのストレプトアビジンコア領域の使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，  Ｓ．Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ６：９３−１０１）、並びに二価のビオチン化ｓｃＦｖ分子を生成するためのシステイン残基、マーカーペプチド及びＣ末端ポリヒスチジンタグの使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，  Ｓ．Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３１，  １０４７−１０５８）が挙げられる。Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片などの抗体部分は、抗体全体のそれぞれパパイン消化、ペプシン消化などの従来技術を用いて、抗体全体から調製することができる。さらに、抗体、抗体部分及び免疫接着分子は、本明細書に記載の標準組換えＤＮＡ技術によって得ることができる。
【００７５】
本明細書では「単離抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すものとする（例えば、ｈＩＬ−１３に特異的に結合する単離抗体は、ｈＩＬ−１３以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。）。しかし、ｈＩＬ−１３に特異的に結合する単離抗体は、他の種由来のＩＬ−１３分子などの他の抗原に対して交差反応性を有し得る。さらに、単離抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まない場合もある。
【００７６】
本明細書では「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域及び定常領域を有する抗体を含むものとする。本発明のヒト抗体は、例えばＣＤＲ中、特にＣＤＲ３中に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでの無作為若しくは部位特異的変異誘発によって、又は生体内での体細胞変異によって、導入される変異）を含み得る。しかし、本明細書では「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別のほ乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上にグラフトされた抗体を含まないものとする。
【００７７】
本明細書では「組換えヒト抗体」という用語は、（下記セクションＩＩＣで更に記述する）宿主細胞に移入された組換え発現ベクターを用いて発現された抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．Ｒ．，  （１９９７）  ＴＩＢ  Ｔｅｃｈ．  １５：６２−７０；  Ａｚｚａｚｙ  Ｈ．，  ａｎｄ  Ｈｉｇｈｓｍｉｔｈ  Ｗ．Ｅ．，  （２００２）  Ｃｌｉｎ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ３５：４２５−４４５；  Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ  Ｊ．Ｖ．，  ａｎｄ  Ｌａｒｒｉｃｋ  Ｊ．Ｗ．  （２００２）  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２９：１２８−１４５；  Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．，  ａｎｄ  Ｃｈａｍｅｓ  Ｐ．  （２０００）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−３７８）、ヒト免疫グロブリン遺伝子を導入した動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，  Ｌ．Ｄ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２０：６２８７−６２９５；  Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ  Ｓ−Ａ．，  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎ  Ｌ．Ｌ．  （２００２）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：５９３−５９７；  Ｌｉｔｔｌｅ  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ  （２０００）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３６４−３７０参照）など、組換え手段によって調製、発現、作製若しくは単離されたすべてのヒト抗体、又は他のＤＮＡ配列へのヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを含む任意の他の手段によって調製、発現、作製若しくは単離された抗体を含むものとする。かかる組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変及び定常領域を有する。しかし、ある実施形態においては、かかる組換えヒト抗体は、インビトロでの変異誘発（又はヒトＩｇ配列を導入した動物を使用するときには、生体内での体細胞変異誘発）を受け、したがって組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、関係するものの、生体内でのヒト抗体生殖系列レパートリーに天然には存在し得ない配列である。一実施形態は、Ｊｅｒｍｕｔｕｓ他、国際公開第２００５／００７６９９号Ａ２に開示されたライブラリーなどのヒトＩｇファージライブラリーの使用など、ただしこれだけに限定されない当分野で周知の技術によって生成することができる、ヒトＩＬ−１３に結合可能な完全ヒト抗体を提供する。
【００７８】
「キメラ抗体」という用語は、ヒト定常領域に結合したネズミ重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗体など、ある種由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列と、別の種由来の定常領域配列とを含む抗体を指す。
【００７９】
「ＣＤＲグラフト抗体」という用語は、ネズミＣＤＲの１個以上（例えば、ＣＤＲ３）がヒトＣＤＲ配列で置換されたネズミ重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗体など、ある種由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨ及び／又はＶＬのＣＤＲ領域の１個以上の配列が別の種のＣＤＲ配列で置換された抗体を指す。
【００８０】
「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト種（例えば、マウス）由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨ及び／又はＶＬ配列の少なくとも一部がより「ヒト様」に変化した、すなわち、ヒト生殖系列可変配列により類似した、抗体を指す。ヒト化抗体の１タイプは、ヒトＣＤＲ配列が非ヒトＶＨ及びＶＬ配列に導入されて、対応する非ヒトＣＤＲ配列を置換した、ＣＤＲグラフト抗体である。一実施形態においては、ヒト化抗ヒトＩＬ−１３抗体及び抗原結合性部分を提供する。かかる抗体は、伝統的ハイブリドーマ技術を用いてネズミ抗ｈＩＬ−１３モノクローナル抗体を得、続いてＫａｓａｉａｎ他、国際公開第２００５／１２３１２６号Ａ２に開示されたものなどのインビトロでの遺伝子操作によってヒト化することによって作製された。
【００８１】
「Ｋａｂａｔ付番」、「Ｋａｂａｔ定義及び「Ｋａｂａｔ標識化」という用語は、本明細書では区別なく使用される。当分野で認識されるこれらの用語は、抗体又はその抗原結合性部分の重鎖及び軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基よりも可変（すなわち超可変）であるアミノ酸残基に付番するシステムを指す（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７１）  Ａｎｎ．  ＮＹ  Ａｃａｄ，  Ｓｃｉ．  １９０：３８２−３９１、及びＫａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ９１−３２４２）。重鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１ではアミノ酸位置３１から３５、ＣＤＲ２ではアミノ酸位置５０から６５、ＣＤＲ３ではアミノ酸位置９５から１０２の範囲である。軽鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１ではアミノ酸位置２４から３４、ＣＤＲ２ではアミノ酸位置５０から５６、ＣＤＲ３ではアミノ酸位置８９から９７の範囲である。
【００８２】
本明細書では「受容体」及び「受容体抗体」という用語は、１個以上のフレームワーク領域のアミノ酸配列の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は１００％を与える、又はコードする、抗体又は核酸配列を指す。一部の実施形態においては、「受容体」という用語は、定常領域を与える、又はコードする、抗体アミノ酸又は核酸配列を指す。更に別の一実施形態においては、「受容体」という用語は、フレームワーク領域及び定常領域の１個以上を与える、又はコードする、抗体アミノ酸又は核酸配列を指す。特定の一実施形態においては、「受容体」という用語は、１個以上のフレームワーク領域のアミノ酸配列の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は１００％を与える、又はコードする、ヒト抗体アミノ酸又は核酸配列を指す。この実施形態に従って、受容体は、ヒト抗体の１個以上の特定の位置に存在しない、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、又は少なくとも１０個のアミノ酸残基を含み得る。受容体フレームワーク領域及び／又は受容体定常領域は、例えば、生殖系列抗体遺伝子、成熟抗体遺伝子、機能的抗体（例えば、当分野で周知の抗体、開発中の抗体、又は市販の抗体）に由来し、又はこれらから得ることができる。
【００８３】
本明細書では「ＣＤＲ」という用語は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖及び軽鎖の可変領域の各々には、可変領域の各々に対して、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と命名される３個のＣＤＲがある。本明細書では「ＣＤＲセット」という用語は、抗原に結合可能な単一の可変領域中に存在する３個のＣＤＲの一群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムごとに異なって定義される。Ｋａｂａｔによって記述されたシステム（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  （Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．  （１９８７）  ａｎｄ  （１９９１））は、抗体の任意の可変領域に適用可能である明確な残基付番システムを提供するだけでなく、３個のＣＤＲを規定する正確な残基境界も提供する。これらのＣＤＲはＫａｂａｔ  ＣＤＲとも称される。Ｃｈｏｔｈｉａ及び共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７（１９８７）、並びにＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９））は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ内のある下位部分（ｓｕｂ−ｐｏｒｔｉｏｎ）が、アミノ酸配列レベルでの多様性が大きいにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格高次構造をとることを見いだした。これらの下位部分は、Ｌ１、Ｌ２及びＬ３、又はＨ１、Ｈ２及びＨ３と命名された。ここで、「Ｌ」及び「Ｈ」は、それぞれ軽鎖及び重鎖領域を示す。これらの領域は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複する境界を有するＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲとも称される。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複するＣＤＲを規定する別の境界は、Ｐａｄｌａｎ（ＦＡＳＥＢ  Ｊ．  ９：  １３３−１３９（１９９５））及びＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｊ  ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２６２（５）：７３２−４５（１９９６））によって記述された。更に別のＣＤＲ境界規定は、上記システムの１つに厳密に従わなくてもよいが、それでもＫａｂａｔ  ＣＤＲと重複する。ただし、それらの境界規定は、特定の残基又は残基群、さらにはＣＤＲ全体が抗原結合にさほど影響を及ぼさないという予測又は実験上の知見に照らして、短縮され、又は延長され得る。本明細書において使用する方法は、これらのシステムのいずれかによって規定されたＣＤＲを利用することができるが、好ましい実施形態は、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによって定義されたＣＤＲを使用する。
【００８４】
本明細書では「正準」残基という用語は、Ｃｈｏｔｈｉａ等によって定義された特別な正準ＣＤＲ構造を規定する、ＣＤＲ又はフレームワーク中の残基を指す（参照により本明細書に組み入れる、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９０７（１９８７）；  Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２７：７９９（１９９２））。Ｃｈｏｔｈｉａ等によれば、多数の抗体のＣＤＲの重要な部分は、アミノ酸配列レベルでの多様性が大きいにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格確認を有する。各正準構造は、第一に、ループを形成するアミノ酸残基の隣接セグメントに対して、一組みのペプチド骨格ねじれ角を規定する。
【００８５】
本明細書では「ドナー」及び「ドナー抗体」という用語は、１個以上のＣＤＲを与える抗体を指す。好ましい一実施形態においては、ドナー抗体は、フレームワーク領域が得られる、又は由来する抗体とは異なる種からの抗体である。ヒト化抗体に関連して、「ドナー抗体」という用語は、１個以上のＣＤＲを与える非ヒト抗体を指す。
【００８６】
本明細書では「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」という用語は、可変領域からＣＤＲを除いた残りの配列を指す。ＣＤＲ配列の正確な定義は、様々なシステムによって決定され得るので、フレームワーク配列の意味は、それに応じて解釈が異なる。６個のＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３、並びに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３）も、軽鎖及び重鎖上のフレームワーク領域を各鎖上の４個の小領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）に分割し、ＣＤＲ１は、ＦＲ１とＦＲ２の間に位置し、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３の間に位置し、ＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４の間に位置する。ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３又はＦＲ４として特別な小領域を指定せずに、他のフレームワーク領域によって参照される１フレームワーク領域は、単一の天然免疫グロブリン鎖の可変領域内の混合ＦＲである。本明細書では、１個のＦＲは、４個の小領域の１個を表し、複数のＦＲは、フレームワーク領域を構成する４個の小領域の２個以上を表す。
【００８７】
ヒト重鎖及び軽鎖受容体配列は当分野で公知である。本発明の一実施形態においては、ヒト重鎖及び軽鎖受容体配列は、表３及び表４に記載の配列から選択される。
【００８８】
【表４】
2014237671.tif 000008
2014237671.tif 000009
【００８９】
【表５】
2014237671.tif 000010
【００９０】
本明細書では「生殖系列抗体遺伝子」又は「遺伝子断片」という用語は、特別な免疫グロブリンを発現するための遺伝子再構成及び変異をもたらす成熟プロセスを受けなかった非リンパ球によってコードされた免疫グロブリン配列を指す。（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２２（３）：  １８３−２００  （２００２）；  Ｍａｒｃｈａｌｏｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｄｖ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ．  ４８４：  １３−３０（２００１）参照）。本発明の種々の実施形態によって提供される利点の一つは、生殖系列抗体遺伝子は、種の個体に特有である必須アミノ酸配列構造を保存する可能性が成熟抗体遺伝子よりも高く、したがって該種における治療に使用したときに、外来源由来と認識される可能性が低いという認識から生じる。
【００９１】
本明細書では「重要な」残基という用語は、抗体、特にヒト化抗体の結合特異性及び／又は親和性により大きな影響を及ぼす、可変領域内のある種の残基を指す。重要な残基としては、ＣＤＲに隣接する残基、（Ｎ−又はＯ−グリコシル化部位であり得る）潜在的グリコシル化部位、希少残基、抗原と相互作用可能な残基、ＣＤＲと相互作用可能な残基、正準残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域の接触残基、バーニアゾーン内の残基、及び可変重鎖ＣＤＲ１のＣｈｏｔｈｉａ定義と第１の重鎖フレームワークのＫａｂａｔ定義との重複領域中の残基のうちの１種類以上が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【００９２】
本明細書では「ヒト化抗体」という用語は、目的抗原に免疫特異的に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域と、非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含む、抗体又はその変種、誘導体、類似体若しくは断片である。ＣＤＲに関連して、本明細書では「実質的に」という用語は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全部又は実質的に全部が非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のＣＤＲ領域に対応し、フレームワーク領域の全部又は実質的に全部がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である、少なくとも１個、典型的には２個の可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全部を含む。好ましくは、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部も含む。一部の実施形態においては、ヒト化抗体は、軽鎖と、重鎖の少なくとも可変ドメインとを含む。抗体は、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４領域も含み得る。一部の実施形態においては、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含む。一部の実施形態においては、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含む。特定の実施形態においては、ヒト化抗体は、軽鎖及び／又はヒト化重鎖のヒト化可変ドメインのみを含む。
【００９３】
ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含めた免疫グロブリンの任意のクラス、並びにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含めて、ただしこれらだけに限定されない任意のアイソタイプから選択することができる。ヒト化抗体は、１を超えるクラス又はアイソタイプに由来する配列を含み得、特別な定常ドメインを選択し、当分野で周知の技術を用いて、所望のエフェクター機能を最適化することができる。
【００９４】
ヒト化抗体のフレームワーク及びＣＤＲ領域は、親配列に正確に対応する必要はなく、例えば、ドナー抗体ＣＤＲ又はコンセンサスフレームワークは、少なくとも１個のアミノ酸残基の置換、挿入及び／又は欠失によって変異誘発され、その部位のＣＤＲ又はフレームワーク残基がドナー抗体にもコンセンサスフレームワークにも対応しない場合がある。しかし、好ましい一実施形態においては、かかる変異は大規模ではない。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％は、親のＦＲ及びＣＤＲ配列の残基に対応する。本明細書では「コンセンサスフレームワーク」という用語は、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を指す。本明細書では「コンセンサス免疫グロブリン配列」という用語は、関連する免疫グロブリン配列のファミリーにおいて最も頻繁に出現するアミノ酸（又はヌクレオチド）で形成された配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ，  Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ  （Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ，  Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，  Ｇｅｒｍａｎｙ  １９８７）参照。免疫グロブリンのファミリーにおいては、コンセンサス配列中の各位置は、ファミリー中の該位置において最も頻繁に出現するアミノ酸によって占有される。２個のアミノ酸が同じ頻度で出現する場合、どちらをコンセンサス配列に含めてもよい。
【００９５】
本明細書では「バーニア」ゾーンとは、ＣＤＲ構造を調節することができ、Ｆｏｏｔｅ及びＷｉｎｔｅｒ（参照により本明細書に組み入れる１９９２，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２４：４８７−４９９）によって記述された抗原に一致するように微調整することができる、フレームワーク残基の１サブセットを指す。バーニアゾーン残基は、ＣＤＲの下層を形成し、ＣＤＲの構造、及び抗体の親和性に影響を及ぼし得る。
【００９６】
「多価結合タンパク質」という用語は、本明細書では、２個以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質を示すのに用いられる。多価結合タンパク質は、好ましくは、３個以上の抗原結合部位を有するように操作され、一般に天然の抗体ではない。「多重特異性結合タンパク質」という用語は、２個以上の関係する標的、又は無関係の標的に結合可能である結合タンパク質を指す。本明細書では二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、２個以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質であり、四価又は多価の結合タンパク質である。かかるＤＶＤは、単一特異的、すなわち１個の抗原に結合可能であっても、多重特異的、すなわち２個以上の抗原に結合可能であってもよい。２種類の重鎖ＤＶＤポリペプチドと２種類の軽鎖ＤＶＤポリペプチドとを含むＤＶＤ結合タンパク質をＤＶＤ  Ｉｇと称する。ＤＶＤ  Ｉｇの各半分は、重鎖ＤＶＤポリペプチド、軽鎖ＤＶＤポリペプチド、及び２個の抗原結合部位を含む。各結合部位は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、抗原結合部位１個あたり抗原結合に関与する合計６個のＣＤＲを有する。
【００９７】
本明細書では「中和」という用語は、結合タンパク質がサイトカインに特異的に結合するときのサイトカインの生物活性の中和を指す。好ましくは、中和結合タンパク質は、ｈＩＬ−１３及び／又はｈＩＬ−１３に結合して、ｈＩＬ−１３及び／又はｈＩＬ−１３の生物活性を阻害する中和抗体である。好ましくは、中和結合タンパク質は、ｈＩＬ−１３及び／又はｈＩＬ−１３に結合し、ＩＬ−１３及び／又はｈＩＬ−１３の生物学的活性を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％又はそれ以上低下させる。中和結合タンパク質によるｈＩＬ−１３及び／又はｈＩＬ−１３の生物活性の阻害は、当分野で周知であるｈＩＬ−１３及び／又はｈＩＬ−１３生物活性の１種類以上の指標を測定することによって評価することができる。例えば、Ａ−５４９細胞によるＴＡＲＣ（ＣＣＬ−１７）のヒトＩＬ−１３誘導性産生の抑制（実施例１．１．Ｃ参照）。
【００９８】
「活性」という用語は、抗原に対する抗体の結合特異性／親和性、例えば、ＩＬ−１３抗原に結合する抗ｈＩＬ−１３抗体、及び／又は抗体の中和効力、例えば、ｈＩＬ−１３と結合してｈＩＬ−１３の生物活性を阻害する抗ｈＩＬ−１３抗体、例えば、Ａ−５４９細胞によるＴＡＲＣ（ＣＣＬ−１７）のヒトＩＬ−１３誘導性産生の抑制（実施例１．１．Ｃ参照）などの活性を含む。
【００９９】
「エピトープ」という用語は、免疫グロブリン又はＴ細胞受容体に特異的に結合可能な任意のポリペプチド決定因子を含む。ある実施形態においては、エピトープ決定因子は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、スルホニルなどの分子の化学的に活性な表面グループ化（ｇｒｏｕｐｉｎｇ）を含み、ある実施形態においては、特定の３次元構造特性及び／又は特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、抗体が結合する、抗原の領域である。ある実施形態においては、抗体は、タンパク質及び／又は巨大分子の複雑な混合物中のその標的抗原を優先的に認識するときに、抗原に特異的に結合するとされる。
【０１００】
本明細書では「表面プラズモン共鳴」という用語は、例えばＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ，  Ｕｐｐｓａｌａ，  Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，  ＮＪ）を用いて、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変動を検出することによって、実時間での生体分子特異的相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。更に詳細な説明は、Ｊｏｎｓｓｏｎ，  Ｕ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ａｎｎ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｌｉｎ．  ５１．：１９−２６；  Ｊｏｎｓｓｏｎ，  Ｕ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７；  Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，  Ｂ．，  ｅｔ  ａｌ  （１９９５）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．  ８：１２５−１３１、及びＪｏｈｎｎｓｏｎ，  Ｂ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １９８：２６８−２７７を参照されたい。
【０１０１】
本明細書では「ｋｏｎ」という用語は、抗体と抗原が会合して、当分野で公知の抗体／抗原複合体を形成するオン速度定数を指すものとする。
【０１０２】
本明細書では「Ｋｏｆｆ」という用語は、当分野で公知の抗体／抗原複合体からの抗体の解離のオフ速度定数を指すものとする。
【０１０３】
本明細書では「ＫＤ」という用語は、当分野で公知の特定の抗体−抗原相互作用の解離定数を指すものとする。
【０１０４】
本明細書では「標識結合タンパク質」という用語は、結合タンパク質を特定する標識が組み込まれたタンパク質を指す。好ましくは、標識は、検出可能なマーカーであり、例えば、放射性標識アミノ酸の組み入れ、又は標識アビジン（例えば、光学的方法又は比色定量法によって検出することができる蛍光性マーカー又は酵素活性を含むストレプトアビジン）によって検出することができるビオチン部分のポリペプチドへの付加である。ポリペプチドに対する標識の例としては、放射性同位体又は放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ又は１５３Ｓｍ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドリン光体）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光マーカー、ビオチン基、二次レポーター（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体用結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）によって認識される所定のポリペプチドエピトープ、及びガドリニウムキレートなどの磁性剤（ｍａｇｎｅｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０１０５】
「抗体複合体」という用語は、治療薬、細胞毒性薬などの第２の化学部分に化学的に結合した、抗体などの結合タンパク質を指す。「薬剤」という用語は、化学物質、化学物質の混合物、生物学的巨大分子、又は生体材料から製造される抽出物を表すのに本明細書では使用される。好ましくは、治療薬又は細胞毒性薬としては、百日咳毒素、Ｔａｘｏｌ、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール及びピューロマイシン並びにこれらの類似体又は同族体が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０１０６】
本明細書では「結晶」及び「結晶化」という用語は、結晶の形で存在する抗体又はその抗原結合性部分を指す。結晶は、アモルファス固体状態、液晶状態などの他の形態とは異なる、物質の固体状態の一形態である。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体などのタンパク質）又は分子集合体（例えば、抗原／抗体複合体）の規則的な繰り返しの３次元配列で構成される。これらの３次元配列は、当分野でよく理解されている特定の数学的関係に従って配置される。結晶中で繰り返される基本単位又は構成要素を非対称単位と称する。所与の明確な結晶学的対称性に従う配置で非対称単位が繰り返されて、結晶の「単位格子」を与える。全３次元の規則的並進によって単位格子が繰り返されて、結晶を与える。Ｇｉｅｇｅ，  Ｒ．  ａｎｄ  Ｄｕｃｒｕｉｘ，  Ａ．  Ｂａｒｒｅｔｔ，  Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  ２ｎｄ  ｅａ．，  ｐｐ．２０  １−１６，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  （１９９９）を参照されたい。
【０１０７】
本明細書では「ポリヌクレオチド」という用語は、２個以上のヌクレオチド（リボヌクレオチド若しくはデオキシヌクレオチド、又はヌクレオチドのどちらかのタイプの改変形態）の重合体を意味する。この用語は、ＤＮＡの一本鎖及び二本鎖体を含むが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【０１０８】
本明細書では「単離ポリヌクレオチド」という用語は、（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡ若しくは合成由来、又はこれらの組合せの）ポリヌクレオチドを意味するものとする。その起源によって、「単離ポリヌクレオチド」は、「単離ポリヌクレオチド」と一緒に天然に存在するポリヌクレオチドの全部若しくは一部を伴わず、自然には結合していないポリヌクレオチドに作動可能に結合し、又はより大きい配列の一部として天然に存在しない。
【０１０９】
本明細書では「ベクター」という用語は、それに結合した別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すものとする。ベクターの１タイプは「プラスミド」である。プラスミドは、追加のＤＮＡセグメントを連結することができる環状二重鎖ＤＮＡループである。ベクターの別のタイプはウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムに連結することができる。ある種のベクターは、ベクターが導入された宿主細胞中で自己複製することができる（例えば、細菌の複製開始点を有する細菌ベクター、及びエピソームほ乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソームほ乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入すると宿主細胞のゲノム中に組み込むことができ、それによって宿主ゲノムと一緒に複製される。さらに、ある種のベクターは、それが作用可能に連結された遺伝子の発現を誘導することができる。かかるベクターを本明細書では「組換え発現ベクター」（又は単に「発現ベクター」）と称する。一般に、組換えＤＮＡ技術に有用な発現ベクターはプラスミドの形態であることが多い。本明細書においては、プラスミドが最も一般的に使用されるベクター形態であるので、「プラスミド」と「ベクター」を区別なく使用することができる。しかし、本発明は、ウイルスベクター（例えば、複製欠損のレトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）など、等価な機能を果たす発現ベクターの他の形態も含むものとする。
【０１１０】
「作動可能に結合し」という用語は、記述する成分が意図した様式で機能し得る関係にある近位を指す。コード配列に「作動可能に結合し」た制御配列は、制御配列に適合した条件下でコード配列が発現されるように連結される。「作動可能に結合した」配列は、目的遺伝子に隣接する発現制御配列と、トランスで、又は目的遺伝子を制御する距離で作用する発現制御配列との両方を含む。本明細書では「発現制御配列」という用語は、連結したコード配列の発現及びプロセシングを起こすのに必要であるポリヌクレオチド配列を指す。発現制御配列は、適切な転写開始、終結、プロモーター及びエンハンサー配列；スプライシングシグナル、ポリアデニル化シグナルなどの効率的ＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列；翻訳効率を向上させる配列（例えば、コザックコンセンサス配列）；タンパク質の安定性を向上させる配列、並びに所望のときには、タンパク質分泌を増大させる配列を含む。かかる制御配列の性質は、宿主生物によって異なる。原核生物では、かかる制御配列は、一般に、プロモーター、リボソーム結合部位及び転写終結配列を含む。真核生物では、一般に、かかる制御配列はプロモーター及び転写終結配列を含む。「制御配列」という用語は、その存在が発現及びプロセシングに必須である成分を含むものとし、その存在が有利である追加の成分、例えば、リーダー配列及び融合パートナー配列も含むことができる。本発明のタンパク質構築物は、発現カセット、ベクター、組換え宿主細胞を含めて、当分野で公知の発現ベクター及び宿主細胞を用いて発現させ、精製することができ、また、単一オープンリーディングフレームからの組換えポリタンパク質及び前タンパク質の組換え発現及びタンパク質分解プロセシングのための方法を用いて発現させ、精製することができる（例えば、参照により本明細書に組み入れる国際公開第２００７／０１４１６２号）。
【０１１１】
本明細書では「形質転換」とは、外来ＤＮＡが宿主細胞に入る任意のプロセスを指す。形質転換は、当分野で周知の種々の方法によって、自然又は人工条件下で起こり得る。形質転換は、外来核酸配列を原核又は真核宿主細胞に挿入する任意の公知の方法に依拠し得る。この方法は、形質転換される宿主細胞に基づいて選択され、ウイルス感染、電気穿孔法、リポフェクション及び微粒子銃が挙げられるが、これらだけに限定されない。かかる「形質転換された」細胞としては、挿入されたＤＮＡが、自己複製プラスミドとして、又は宿主染色体の一部として、複製可能である、安定に形質転換された細胞などが挙げられる。「形質転換された」細胞としては、挿入されたＤＮＡ又はＲＮＡを有限の時間一過性に発現する細胞も挙げられる。
【０１１２】
本明細書では「組換え宿主細胞」（又は単に「宿主細胞」）という用語は、外来ＤＮＡを導入した細胞を指すものとする。かかる用語は、特定の対象細胞だけでなく、かかる細胞の子孫も指すものであることを理解すべきである。変異又は環境の影響のためにある種の改変が後継世代に起こり得るので、かかる子孫は、親細胞と実際には同一でないこともあるが、それでも本明細書の「宿主細胞」という用語の範囲内に含まれる。好ましくは、宿主細胞としては、生物界のいずれかから選択される原核及び真核細胞などが挙げられる。好ましい真核細胞としては、原生生物、真菌、植物、動物細胞などが挙げられる。最も好ましくは、宿主細胞としては、原核細胞系Ｅ．コリ、ほ乳動物細胞系ＣＨＯ、ＨＥＫ  ２９３及びＣＯＳ、昆虫細胞系Ｓｆ９、並びに真菌細胞サッカロミセス・セレビシエが挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０１１３】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、並びに組織培養及び形質転換（例えば、電気穿孔法、リポフェクション）には、標準技術を使用することができる。酵素反応及び精製技術は、製造者の仕様書に従って、又は当分野で一般に実施されるとおりに、又は本明細書に記載のとおりに、実施することができる。上記技術及び手順は、一般に、当分野で周知の従来法によって実施することができ、また、本明細書を通して引用及び考察する種々の一般的参考文献及びより具体的な参考文献に記載のように実施することができる。例えば、参照により本明細書に組み入れる、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  ｅｄ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。
【０１１４】
当分野で公知であり、本明細書で用いる「トランスジェニック生物体」とは、導入遺伝子を含む細胞を有する生物体を指し、生物体（又は生物体の祖先）に導入された導入遺伝子は、生物体中で自然には発現されないポリペプチドを発現する。「導入遺伝子」は、トランスジェニック生物体を生成する細胞のゲノムに安定に作動可能に組み込まれたＤＮＡ構築物であり、トランスジェニック生物体の１つ以上の細胞タイプ又は組織中のコードされた遺伝子産物の発現を誘導する。
【０１１５】
「調整する」と「調節する」という用語は、区別なく使用され、本明細書では、目的分子の活性（例えば、ｈＩＬ−１３の生物活性）の変化又は変動を指す。調節は、目的分子のある活性又は機能の程度の増加又は減少であり得る。分子の例示的活性及び機能としては、結合特性、酵素活性、細胞受容体活性化及びシグナル伝達が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０１１６】
同様に、本明細書では「調節物質」という用語は、目的分子の活性又は機能（例えば、ｈＩＬ−１３の生物活性）を変化又は変動させ得る化合物である。例えば、調節物質は、分子のある活性又は機能の程度を、調節物質の非存在下で認められる活性又は機能の程度よりも増加又は減少させ得る。ある実施形態においては、調節物質は、分子の少なくとも１つの活性又は機能の程度を減少させる阻害剤である。例示的阻害剤としては、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｉｅｓ）、炭水化物又は低分子有機分子が挙げられるが、これらだけに限定されない。ペプチボディは、例えば、国際公開第０１／８３５２５号に記載されている。
【０１１７】
本明細書では「作動物質」という用語は、目的分子と接触すると、分子のある活性又は機能の程度を、作動物質の非存在下で認められる活性又は機能の程度よりも増加させる調節物質を指す。対象となる特別な作動物質としては、ＩＬ−１３ポリペプチド若しくはポリペプチド、核酸、炭水化物、又はｈＩＬ−１３に結合する任意の他の分子が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０１１８】
本明細書では「拮抗物質」又は「阻害剤」という用語は、目的分子と接触すると、分子のある活性又は機能の程度を、拮抗物質の非存在下で認められる活性又は機能の程度よりも低下させる調節物質を指す。対象となる特定の拮抗物質としては、ｈＩＬ−１３及び／又はｈＩＬ−１３の生物学的又は免疫学的活性を遮断又は調節する拮抗物質などが挙げられる。ｈＩＬ−１３及び／又はｈＩＬ−１３の拮抗物質及び阻害剤としては、ｈＩＬ−１３及び／又はｈＩＬ−１３に結合するタンパク質、核酸、炭水化物又は任意の他の分子が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０１１９】
「受容体との結合を阻止する」という用語は、ＩＬ−１３とその受容体の１個以上との結合を防止する結合タンパク質の能力を指す。受容体との結合のかかる阻止によって、ＩＬ−１３とその一受容体又は複数の受容体との結合によって媒介される生物活性が低下又は消滅する。
【０１２０】
本明細書では「有効量」という用語は、障害若しくはその１つ以上の症候の重症度及び／又は期間の減少若しくは改善、障害の進行の防止、障害の後退、障害に付随する１つ以上の症候の再発、発生、発症若しくは進行、障害の検出、又は別の療法（例えば、予防薬又は治療薬）の予防若しくは治療効果の増大若しくは改善に十分な治療の量を指す。
【０１２１】
本明細書では「試料」という用語は、その最も広い意味で使用される。本明細書では「生物試料」としては、生物から、又はかつては生きていたものから得られる任意の量の物質が挙げられるが、これらだけに限定されない。かかる生物としては、ヒト、マウス、ラット、サル、イヌ、ウサギ及び他の動物が挙げられるが、これらだけに限定されない。かかる物質としては、血液、血清、尿、滑液、細胞、器官、組織、骨髄、リンパ節及びひ臓が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０１２２】
Ｉ．  ヒトＩＬ−１３に結合する抗体
本発明の一態様は、高親和性、低オフ速度及び高中和能でＩＬ−１３に結合する単離ネズミモノクローナル抗体又はその抗原結合性部分を提供する。本発明の第２の態様は、ＩＬ−１３に結合するキメラ抗体を提供する。本発明の第３の態様は、ＩＬ−１３に結合するヒト化抗体又はその抗原結合性部分を提供する。好ましくは、抗体又はその一部は単離抗体である。好ましくは、本発明の抗体は、１種類及び／又は複数種類のヒト抗ＩＬ−１３抗体を中和している。
【０１２３】
Ａ．  抗ＩＬ−１３抗体の作製方法
本発明の抗体は、当分野で公知の幾つかの技術のいずれかによって作製することができる。
【０１２４】
１．  ハイブリドーマ技術を用いた抗ＩＬ−１３モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え及びファージディスプレイ技術又はこれらの組合せの使用を含めて、当分野で公知の多種多様な技術を用いて調製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、当分野で公知の技術、及び、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  （Ｇｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．  １９８８）；  Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｎ：  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１  （Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，  Ｎ．Ｙ．，  １９８１）に教示された技術を含めたハイブリドーマ技術を用いて製造することができる（前記参考文献を参照によりその全体を本明細書に組み入れる。）。本明細書では「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術によって製造された抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」という用語は、任意の真核生物、原核生物又はファージクローンを含めて、単一クローンに由来する抗体を指し、モノクローナル抗体が製造される方法ではない。
【０１２５】
ハイブリドーマ技術を用いて特異抗体を製造及びスクリーニングする方法は、定常的なものであり、当分野で周知である。一実施形態においては、本発明は、モノクローナル抗体の作製方法、及び本発明の抗体を分泌するハイブリドーマ細胞の培養を含む方法によって製造された抗体を提供する。好ましくは、ハイブリドーマは、本発明の抗原で免疫されたマウスから単離されたひ細胞を骨髄腫細胞と融合させ、次いで融合から生じるハイブリドーマを、本発明のポリペプチドに結合可能な抗体を分泌するハイブリドーマクローンについてスクリーニングすることによって作製される（実施例１．２参照）。手短に述べると、マウスをＩＬ−１３抗原で免疫することができる。好ましい一実施形態においては、ＩＬ−１３抗原をアジュバントと一緒に投与して、免疫応答を刺激する。かかるアジュバントとしては、完全又は不完全フロイントアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド）、ＩＳＣＯＭ（免疫賦活複合体）などが挙げられる。かかるアジュバントは、ポリペプチドを局所的堆積物中に隔離することによってポリペプチドを急速な分散から保護することができ、又は宿主を刺激してマクロファージ及び免疫系の他の成分に対して走化性である因子を分泌させる物質を含み得る。好ましくは、ポリペプチドが投与されている場合、免疫化スケジュールは、数週間にわたるポリペプチドの２回以上の投与を含む。
【０１２６】
動物をＩＬ−１３抗原で免疫化した後、抗体及び／又は抗体産生細胞を動物から得ることができる。抗ＩＬ−１３抗体含有血清を動物から採血して、又は動物を屠殺して、動物から得る。血清を動物から得られたままで使用することができ、免疫グロブリン画分を血清から得ることができ、又は抗ＩＬ−１３抗体を血清から精製することができる。このようにして得られた血清又は免疫グロブリンはポリクローナルであり、したがって不均一な諸性質を有する。
【０１２７】
免疫応答を検出した後、例えば、抗原ＩＬ−１３に特異的な抗体をマウス血清中に検出した後、マウスひ臓を収集し、ひ細胞を単離する。次いで、ひ細胞を周知の技術によって任意の適切な骨髄腫細胞、例えば、ＡＴＣＣから入手可能な細胞系ＳＰ２０由来の細胞と融合させる。ハイブリドーマを選択し、限界希釈（ｌｉｍｉｔｅｄ  ｄｉｌｕｔｉｏｎ）によってクローン化する。次いで、ハイブリドーマクローンを、当分野で公知の方法によって、ＩＬ−１３に結合可能な抗体を分泌する細胞について評価する。高レベルの抗体を一般に含む腹水は、陽性ハイブリドーマクローンでマウスを免疫することによって生成させることができる。
【０１２８】
別の一実施形態においては、抗体産生不死化ハイブリドーマを免疫動物から調製することができる。免疫化後、動物を屠殺し、当分野で周知のように、ひ臓Ｂ細胞を不死化骨髄腫細胞と融合させる。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（上掲）を参照されたい。好ましい一実施形態においては、骨髄腫細胞は、免疫グロブリンポリペプチドを分泌しない（非分泌性細胞系）。融合及び抗生物質選択後、ＩＬ−１３若しくはその一部、又はＩＬ−１３を発現する細胞を用いて、ハイブリドーマをスクリーニングする。好ましい一実施形態においては、初期スクリーニングを酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）又は放射性免疫測定法（ＲＩＡ）、好ましくはＥＬＩＳＡによって実施する。ＥＬＩＳＡスクリーニングの例は、参照により本明細書に組み入れる国際公開第００／３７５０４号に記載されている。
【０１２９】
抗ＩＬ−１３抗体産生ハイブリドーマを選択し、クローン化し、以下に更に考察する、堅牢なハイブリドーマ成長、高抗体産生、及び望ましい抗体特性を含めて、望ましい特性について更にスクリーニングする。ハイブリドーマは、同一遺伝子型動物、免疫系を欠く動物（例えば、ヌードマウス）において生体内で、又はインビトロでの細胞培養において、培養し、拡大させることができる。ハイブリドーマを選択し、クローン化し、拡大させる方法は、当業者に周知である。
【０１３０】
好ましい一実施形態においては、ハイブリドーマは、上述したようにマウスハイブリドーマである。別の好ましい一実施形態においては、ハイブリドーマは、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマなどの非ヒト非マウス種において製造される。別の一実施形態においては、ハイブリドーマは、ヒト非分泌性骨髄腫が、抗ＩＬ−１３抗体を発現するヒト細胞と融合した、ヒトハイブリドーマである。
【０１３１】
特異的エピトープを認識する抗体断片は、公知技術によって生成させることができる。例えば、本発明のＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片は、（Ｆａｂ断片を生成させるための）パパイン、（Ｆ（ａｂ’）２断片を生成させるための）ペプシンなどの酵素を用いた免疫グロブリン分子のタンパク質切断によって、生成させることができる。Ｆ（ａｂ’）２断片は、可変領域、軽鎖定常領域、及び重鎖のＣＨＩドメインを含む。
【０１３２】
２．  ＳＬＡＭを用いた抗ＩＬ−１３モノクローナル抗体
本発明の別の一態様においては、組換え抗体は、米国特許第５，６２７，０５２号、国際公開第９２／０２５５１号及びＢａｂｃｏｃｋ，  Ｊ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９３：７８４３−７８４８に記載のように、選択リンパ球抗体（ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）方法（ＳＬＡＭ）と当分野で称される手順によって、単一の単離リンパ球から生成される。この方法においては、目的抗体を分泌する単細胞、例えば、セクション１に記載の免疫動物のいずれか１種類に由来するリンパ球を、抗原特異的溶血斑形成法によってスクリーニングする。抗原特異的溶血斑形成法では、抗原ＩＬ−１３、ＩＬ−１３のサブユニット、又はその断片を、ビオチンなどのリンカーを用いてヒツジ赤血球に連結し、それを使用して、ＩＬ−１３に対して特異性を有する抗体を分泌する単細胞を特定する。目的とする抗体分泌細胞を特定した後、重鎖及び軽鎖可変領域ｃＤＮＡを逆転写酵素ＰＣＲによって細胞から取り戻し、次いで、これらの可変領域を、適切な免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒト定常領域）に関連して、ＣＯＳ、ＣＨＯ細胞などのほ乳動物宿主細胞中で発現させることができる。次いで、生体内で選択されたリンパ球に由来する、増幅された免疫グロブリン配列を移入した宿主細胞を、更なる分析にかけ、例えば、移入細胞をパニングしてＩＬ−１３に対する抗体を発現する細胞を単離することによって、インビトロで選択することができる。増幅された免疫グロブリン配列は、国際公開第９７／２９１３１号及び国際公開第００／５６７７２号に記載の方法などのインビトロ親和性成熟方法などによって、インビトロで更に操作することができる。
【０１３３】
３．  トランスジェニック動物を用いた抗ＩＬ−１３モノクローナル抗体
本発明の別の一実施形態においては、抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部又は全部を含む非ヒト動物をＩＬ−１３抗原で免疫することによって製造される。好ましい一実施形態においては、非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の大きい断片を含むマウス系統であって、マウス抗体産生が欠乏している操作されたマウス系統である、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスである。例えば、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：  １３−２１（１９９４）並びに米国特許第５，９１６，７７１号、同５，９３９，５９８号、同５，９８５，６１５号、同５，９９８，２０９号、同６，０７５，１８１号、同６，０９１，００１号、同６，１１４，５９８号及び同６，１３０，３６４号を参照されたい。１９９１年７月２５日に公開された国際公開第９１／１０７４１号、１９９４年２月３日に公開された国際公開第９４／０２６０２号、共に１９９６年１０月３１日に公開された国際公開第９６／３４０９６号及び同９６／３３７３５号、１９９８年４月２３日に公開された国際公開第９８／１６６５４号、１９９８年６月１１日に公開された国際公開第９８／２４８９３号、１９９８年１１月１２日に公開された国際公開第９８／５０４３３号、１９９９年９月１０日に公開された国際公開第９９／４５０３１号、１９９９年１０月２１日に公開された国際公開第９９／５３０４９号、２０００年２月２４日に公開された国際公開第００  ０９５６０号、及び２０００年６月２９日に公開された国際公開第００／０３７５０４号も参照されたい。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスは、完全ヒト抗体の成体様ヒトレパートリーを産生し、抗原特異的ヒトＭａｂを生成する。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスは、ヒト重鎖遺伝子座及びｘ軽鎖遺伝子座のメガベースサイズの生殖系列構造（ｇｅｒｍｌｉｎｅ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ）ＹＡＣ断片の導入によって、ヒト抗体レパートリーの約８０％を含む。その開示を参照により本明細書に組み入れる、Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６（１９９７）、Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １８８：４８３−４９５（１９９８）を参照されたい。
【０１３４】
４．  組換え抗体ライブラリーを用いた抗ＩＬ−１３モノクローナル抗体
抗体ライブラリーをスクリーニングして、所望の結合特異性を有する抗体を特定するインビトロ方法によって、本発明の抗体を作製することもできる。組換え抗体ライブラリーのかかるスクリーニング方法は、当分野で周知であり、例えば、その各々の内容を参照により本明細書に組み入れる、Ｌａｄｎｅｒ他、米国特許第５，２２３，４０９号；Ｋａｎｇ他、国際公開第９２／１８６１９号；Ｄｏｗｅｒ他、国際公開第９１／１７２７１号；Ｗｉｎｔｅｒ他、国際公開第９２／２０７９１号；Ｍａｒｋｌａｎｄ他、国際公開第９２／１５６７９号；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ他、国際公開第９３／０１２８８号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ他、国際公開第９２／０１０４７号；Ｇａｒｒａｒｄ他、国際公開第９２／０９６９０号；Ｆｕｃｈｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０−１３７２；  Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５；  Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１；  ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  （１９９０）  ３４８：５５２−５５４；  Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−７３４；  Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２６：８８９−８９６；  Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；  Ｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  ＰＮＡＳ  ８９：３５７６−３５８０；  Ｇａｒｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７；  Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：４１３３−４１３７、並びにＢａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  ＰＮＡＳ  ８８：７９７８−７９８２、米国特許出願公開第２００３０１８６３７４号及び国際公開第９７／２９１３１号記載の方法が挙げられる。
【０１３５】
組換え抗体ライブラリーは、ＩＬ−１３若しくはＩＬ−１３、又はＩＬ−１３若しくはＩＬ−１３の一部で免疫された対象からのものであり得る。或いは、組換え抗体ライブラリーは、未処置の対象、すなわち、ヒトＩＬ−１３で免疫されていないヒト対象由来のヒト抗体ライブラリーなど、ＩＬ−１３で免疫されていない対象からのものであり得る。本発明の抗体は、ヒトＩＬ−１３を含むペプチドを用いて組換え抗体ライブラリーをスクリーニングし、それによってＩＬ−１３を認識する抗体を選択することによって、選択される。かかるスクリーニング及び選択を実施する方法は、前段落の参考文献に記載のものなど、当分野で周知である。ヒトＩＬ−１３から特定のｋｏｆｆ速度定数で解離する抗体など、ｈＩＬ−１３に対して特定の結合親和性を有する本発明の抗体を選択するために、当分野で公知の表面プラズモン共鳴方法を使用して、所望のｋｏｆｆ速度定数を有する抗体を選択することができる。特定のＩＣ５０を有する抗体など、ｈＩＬ−１３に対して特定の中和活性を有する本発明の抗体を選択するために、ｈＩＬ−１３活性の阻害を評価する当分野で公知の標準方法を使用することができる。
【０１３６】
一態様においては、本発明は、ヒトＩＬ−１３に結合する単離抗体又はその抗原結合性部分に関する。好ましくは、抗体は中和抗体である。種々の実施形態においては、抗体は、組換え抗体又はモノクローナル抗体である。
【０１３７】
例えば、本発明の抗体は、当分野で公知である種々のファージディスプレイ法を用いて生成させることもできる。ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインは、該ドメインをコードするポリヌクレオチド配列を有するファージ粒子表面に提示される。特に、かかるファージを利用して、レパートリー又はコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒト又はネズミ）から発現される抗原結合ドメインを表示することができる。目的抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原（例えば、標識抗原、又は固体表面若しくはビーズに結合した、若しくは捕捉された抗原）を用いて、選択又は特定することができる。これらの方法に用いられるファージは、典型的には、ファージ遺伝子ＩＩＩ又は遺伝子ＶＩＩＩタンパク質に組換え融合されたＦａｂ、Ｆｖ又はジスルフィド安定化Ｆｖ抗体ドメインを有するファージから発現されるｆｄ及びＭ１３結合ドメインを含む繊維状ファージである。本発明の抗体の作製に使用することができるファージディスプレイ法の例としては、その各々を参照によりその全体を本明細書に組み入れる、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８２：４１−５０（１９９５）、Ａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：１７７−１８６（１９９５）、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２４：９５２−９５８（１９９４）、Ｐｅｒｓｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅ  １８７  ９−１８（１９９７）、Ｂｕｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５７：１９１−２８０（１９９４）、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４号、国際公開第９０／０２８０９号、同９１／１０７３７号、同９２／０１０４７号、同９２／１８６１９号、同９３／１１２３６号、同９５／１５９８２号、同９５／２０４０１号、並びに米国特許第５，６９８，４２６号、同５，２２３，４０９号、同５，４０３，４８４号、同５，５８０，７１７号、同５，４２７，９０８号、同５，７５０，７５３号、同５，８２１，０４７号、同５，５７１，６９８号、同５，４２７，９０８号、同５，５１６，６３７号、同５，７８０，２２５号、同５，６５８，７２７号、同５，７３３，７４３号及び同５，９６９，１０８号に開示されたファージディスプレイ法が挙げられる。
【０１３８】
上記参考文献に記載のように、ファージ選択後、ファージからの抗体コード領域を単離し、それを用いてヒト抗体を含めた抗体全体、又は任意の他の所望の抗原結合性フラグメントを生成させ、例えば、以下に詳述するように、ほ乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母及び細菌を含めて、任意の所望の宿主中で発現させることができる。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２断片を組換え製造する技術は、国際公開第９２／２２３２４号、Ｍｕｌｌｉｎａｘ  ｅｔ  ａｌ．，  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １２（６）：８６４−８６９（１９９２）、Ｓａｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ＡＪＲＩ  ３４：２６−３４（１９９５）、及びＢｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３（１９８８）に開示された方法などの当分野で公知の方法を用いて、使用することもできる（前記参考文献を参照によりその全体を本明細書に組み入れる）。単鎖Ｆｖ及び抗体の製造に使用することができる技術の例としては、米国特許第４，９４６，７７８号及び同５，２５８，４９８号、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２０３：４６−８８（１９９１）、Ｓｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＮＡＳ  ９０：７９９５−７９９９（１９９３）、並びにＳｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０３８−１０４０（１９８８）に記載の技術が挙げられる。
【０１３９】
ファージディスプレイによる組換え抗体ライブラリーのスクリーニングの代替法、大きいコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングする当分野で公知の他の方法を、本発明の二重特異性（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）抗体の特定に適用することができる。代替発現系の１タイプは、Ｓｚｏｓｔａｋ及びＲｏｂｅｒｔｓ、国際公開第９８／３１７００号、並びにＲｏｂｅｒｔｓ，  Ｒ．Ｗ．  ａｎｄ  Ｓｚｏｓｔａｋ，  Ｊ．Ｗ．  （１９９７）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９４：１２２９７−１２３０２に記載のように、組換え抗体ライブラリーがＲＮＡ−タンパク質融合物として発現されるタイプである。この系では、共有結合性融合物は、ペプチジル受容体抗生物質であるピューロマイシンを３’末端に有する合成ｍＲＮＡのインビトロでの翻訳によってコードする、ｍＲＮＡとペプチド又はタンパク質との間で形成される。したがって、特定のｍＲＮＡは、コードされたペプチド又はタンパク質（例えば、抗体又はその一部）の諸性質（二重特異性（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）抗原に対する抗体又はその一部の結合性など）に基づいて、ｍＲＮＡの複雑な混合物（例えば、コンビナトリアルライブラリー）から濃縮することができる。かかるライブラリーのスクリーニングから回収される、抗体又はその一部をコードする核酸配列は、（例えば、ほ乳動物宿主細胞において）上述した組換え手段によって発現させることができ、さらに、上述したように、最初に選択した配列に変異を導入したｍＲＮＡ−ペプチド融合物の追加のラウンドのスクリーニングによって、又は組換え抗体のインビトロでの他の親和性成熟方法によって、更なる親和性成熟に供することができる。
【０１４０】
別の手法では、本発明の抗体を、当分野で公知である酵母ディスプレイ法を用いて生成させることもできる。酵母ディスプレイ法では、遺伝学的方法を使用して、抗体ドメインを酵母の細胞壁につなぎ、酵母表面で抗体ドメインを提示させる。特に、かかる酵母を利用して、レパートリー又はコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒト又はネズミ）から発現される抗原結合性ドメインを提示することができる。本発明の抗体の作製に使用することができる酵母ディスプレイ法の例としては、参照により本明細書に組み入れる、Ｗｉｔｔｒｕｐ他、米国特許第６，６９９，６５８号に開示された方法が挙げられる。
【０１４１】
Ｂ．  組換えＩＬ−１３抗体の製造
本発明の抗体は、当分野で公知の幾つかの技術のいずれかによって製造することができる。例えば、重鎖及び軽鎖をコードする発現ベクターを宿主細胞に標準技術によって移入した、宿主細胞からの発現。「移入」という用語の様々な形態は、外来ＤＮＡを原核生物又は真核生物宿主細胞に導入するのに一般に使用される多種多様な技術、例えば、電気穿孔法、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラン移入などを包含するものとする。原核生物宿主細胞でも真核生物宿主細胞でも本発明の抗体を発現することは可能であるが、真核細胞における抗体の発現が好ましく、ほ乳動物宿主細胞における抗体の発現が最も好ましい。というのは、かかる真核細胞（特にほ乳動物細胞）は、適切に折りたたまれた免疫学的に活性な抗体を組み立て、分泌する可能性が原核細胞よりも高いからである。
【０１４２】
本発明の組換え抗体を発現するのに好ましいほ乳動物宿主細胞としては、（例えばＲ．Ｊ．  Ｋａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｐ．Ａ．  Ｓｈａｒｐ  （１９８２）  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １５９：６０１−６２１に記載の、ＤＨＦＲ選択マーカーと一緒に使用される、Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，  （１９８０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載のｄｈｆｒ−  ＣＨＯ細胞を含めた）チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞、ＳＰ２細胞などが挙げられる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターをほ乳動物宿主細胞に導入するときには、抗体は、宿主細胞中での抗体の発現に十分な期間、より好ましくは宿主細胞が成長する培地中に抗体を分泌するのに十分な期間、宿主細胞を培養することによって製造される。抗体は、標準タンパク質精製法によって培地から回収することができる。
【０１４３】
宿主細胞を使用して、Ｆａｂ断片、ｓｃＦｖ分子などの機能的抗体断片を製造することもできる。上記手順の変形も本発明の範囲内であることを理解されたい。例えば、本発明の抗体の軽鎖及び／又は重鎖の機能的断片をコードするＤＮＡを宿主細胞に移入することが望ましい場合もある。組換えＤＮＡ技術を使用して、目的抗原との結合に不要である、軽鎖及び重鎖の一方又は両方をコードするＤＮＡの一部又は全部を除去することもできる。かかる切断型ＤＮＡ分子から発現される分子も本発明の抗体に包含される。また、一方の重鎖と一方の軽鎖が本発明の抗体であり、他方の重鎖と軽鎖が目的抗原以外の抗原に特異的である二官能性抗体を、本発明の抗体を第２の抗体に標準化学架橋法によって架橋することによって製造することができる。
【０１４４】
本発明の抗体又はその抗原結合性部分の組換え発現の好ましい系においては、抗体重鎖と抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを、リン酸カルシウムを用いた移入によってｄｈｆｒ−  ＣＨＯ細胞に導入する。組換え発現ベクター内では、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子は、高レベルの遺伝子転写をもたらすＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントに各々作用可能に連結される。組換え発現ベクターは、ベクターが移入されたＣＨＯ細胞をメトトレキセート選択／増幅によって選択することができるＤＨＦＲ遺伝子も含む。選択した形質転換宿主細胞を培養して、抗体重鎖及び軽鎖を発現させ、完全抗体を培地から回収する。標準分子生物学技術を使用して、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞に移入し、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、抗体を培地から回収する。さらに、本発明は、本発明の宿主細胞を適切な培地中で本発明の組換え抗体が合成されるまで培養することによる、本発明の組換え抗体を合成する方法を提供する。方法は、組換え抗体を培地から単離することを更に含み得る。
【０１４５】
１．  抗ＩＬ−１３抗体
表５は、本発明の好ましい抗ｈＩＬ−１３抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列リストである。
【０１４６】
【表６】
2014237671.tif 000011
2014237671.tif 000012
2014237671.tif 000013
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2014237671.tif 000019
【０１４７】
上記単離抗ＩＬ−１３抗体ＣＤＲ配列は、本発明に従って単離される新規ＩＬ−１３結合タンパク質ファミリーであって、下記表６に記載のＣＤＲ配列を含むポリペプチドを含む新規ＩＬ−１３結合タンパク質ファミリーを樹立する。ｈＩＬ−１３及び又はｈＩＬ−１３に対して好ましいＩＬ−１３結合及び／又は中和活性を有する本発明のＣＤＲを生成させ、選択するために、本明細書に具体的に記載する方法を含めて、ただしそれだけに限定されない、本発明の結合タンパク質を生成させ、結合タンパク質のＩＬ−１３及び又はＩＬ−１３結合及び／又は中和特性を評価する当分野で公知の標準方法を使用することができる。
【０１４８】
【表７】
2014237671.tif 000020
2014237671.tif 000021
【０１４９】
２．  抗ＩＬ−１３キメラ抗体
キメラ抗体は、ネズミモノクローナル抗体に由来する可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域とを有する抗体など、抗体の異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。キメラ抗体を製造する方法は、当分野で公知であり、実施例２．１で詳細に考察する。例えば、参照によりその全体を本明細書に組み入れる、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２（１９８５）；  Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４（１９８６）；  Ｇｉｌｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８９）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２、米国特許第５，８０７，７１５号、同４，８１６，５６７号及び同４，８１６，３９７号を参照されたい。また、適切な抗原特異性のマウス抗体分子由来の遺伝子を適切な生物活性のヒト抗体分子由来の遺伝子と一緒にスプライシングすることによって「キメラ抗体」を製造するために開発された技術（参照によりその全体を本明細書に組み入れる、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８４，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ８１：８５１−８５５；  Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８４，  Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８；  Ｔａｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８５，  Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４５２−４５４）を使用することができる。
【０１５０】
一実施形態においては、本発明のキメラ抗体は、セクション１に記載のネズミモノクローナル抗ヒトＩＬ−１３抗体の重鎖定常領域をヒトＩｇＧ１定常領域で置換することによって製造される。特定の一実施形態においては、本発明のキメラ抗体は、配列番号３４、配列番号３６、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号３５、配列番号３７、配列番号４０、配列番号４３又は配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。
【０１５１】
３．  抗ＩＬ−１３ヒト化抗体
ヒト化抗体は、非ヒト種由来の１個以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）とヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域とを有する所望の抗原に結合する、非ヒト種抗体由来の抗体分子である。公知のヒトＩｇ配列は、例えば、参照によりその全体を本明細書に組み入れる、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ−／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ；  ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ／；  ｗｗｗ．ａｂｃａｍ．ｃｏｍ／；  ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｐｕｂｌｉｃ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｐｅｄｒｏ／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｍｇｅｎ．ｕｎｉｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ／ＳＤ／ＩＴ／ＩＴ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｗｈｆｒｅｅｍａｎ．ｃｏｍ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ／ＣＨ−０５／ｋｕｂｙ０５．ｈｔｍ；  ｗｗｗ．ｌｉｂｒａｒｙ．ｔｈｉｎｋｑｕｅｓｔ．ｏｒｇ／１２４２９／Ｉｍｍｕｎｅ／Ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｈｈｍｉ．ｏｒｇ／ｇｒａｎｔｓ／ｌｅｃｔｕｒｅｓ／１９９６／ｖｌａｂ／；  ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｍ−ｉｋｅｉｍａｇｅｓ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／；  ｍｃｂ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＢｉｏＬｉｎｋｓ／Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．ｈｔｍｌ．ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｌｉｎｋ．ｃｏｍ／；  ｐａｔｈｂｏｘ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｅｎｔｅｒ／ｉｎｄｅｘ．−ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｌ／；  ｗｗｗ．ｐｅｂｉｏ．ｃｏｍ／ｐａ／３４０９１３／３４０９１３．ｈｔｍｌ−；  ｗｗｗ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ａｗｉｃ／ｐｕｂｓ／ａｎｔｉｂｏｄｙ／；  ｗｗｗ．ｍ．ｅｈｉｍｅ−ｕ．ａｃｊｐ／．ａｂｏｕｔ．ｙａｓｕｈｉｔｏ−／Ｅｌｉｓａ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ．ｃｏｍ／ｔａｂｌｅ．ａｓｐ；  ｗｗｗ．ｉｃｎｅｔ．ｕｋ／ａｘｐ／ｆａｃｓ／ｄａｖｉｅｓ／ｌｉｎ−ｋｓ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｆｃｃｌ／ｐｒｏｔｏｃｏｌ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｉｓａｃ−ｎｅｔ．ｏｒｇ／ｓｉｔｅｓ＿ｇｅｏ．ｈｔｍｌ；  ａｘｉｍｔｌ．ｉｍｔ．ｕｎｉｍａｒｂｕｒｇ．ｄｅ／．ａｂｏｕｔ．ｒｅｋ／ＡＥＰ−Ｓｔａｒｔ．ｈｔｍｌ；  ｂａｓｅｒｖ．ｕｃｉ．ｋｕｎ．ｎｌ／．ａｂｏｕｔ．ｊｒａａｔｓ／ｌｉｎｋｓｌ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｒｅｃａｂ．ｕｎｉ−ｈｄ．ｄｅ／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ／；  ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｉｍｔ−ｄｏｃ／ｐｕｂｌｉｃ／ＩＮＴＲＯ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／Ｖ＿ｍｉｃｅ．ｈｔｍｌ；  ｉｍｇｔ．ｃｎｕｓｃ．ｆｒ：８１０４／；  ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕｃｌ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍａｒｔｉｎ／ａｂｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；  ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｂａｔｈ．ａｃ．ｕｋ／；  ａｂｇｅｎ．ｃｖｍ．ｔａｍｕ．ｅｄｕ／ｌａｂ／ｗｗｗａｂｇｅｎ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｕｎｉｚｈ．ｃｈ／．���ｂｏｕｔ．ｈｏｎｅｇｇｅｒ／ＡＨＯｓｅｍｉｎａｒ／Ｓｌｉｄｅ０１．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｂｋ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｕｂｃｇ０７ｓ／；  ｗｗｗ．ｎｉｍｒ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＣＣ／ｃｃａｅｗｇ／ｃｃａｅｗｇ．ｈｔｍ；  ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ＴＡＨＨＰ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｓｔａｔ＿ａｉｍ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｂｉｏｓｃｉ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ／ｓｍｉｔｈｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｉｏｃ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏ−ｕｔ．ｆｍｏｌｉｎａ／Ｗｅｂ−ｐａｇｅｓ／Ｐｅｐｔ／ｓｐｏｔｔｅｃｈ．ｈｔｍｌ；  ｗｗｗ．ｊｅｒｉｎｉ．ｄｅ／ｆｒ  ｒｏｄｕｃｔｓ．ｈｔｍ；  ｗｗｗ．ｐａｔｅｎｔｓ．ｉｂｍ．ｃｏｍ／ｉｂｍ．ｈｔｍｌ．Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐｔ．  Ｈｅａｌｔｈ（１９８３）に開示されている。かかる移入された配列を使用して、当分野で公知のように、免疫原性を低下させることができ、又は結合、親和性、オン速度、オフ速度、結合活性、特異性、半減期、若しくは任意の他の適切な特性を低減、増強若しくは改変することができる。
【０１５２】
ヒトフレームワーク領域中のフレームワーク残基を、ＣＤＲドナー抗体由来の対応する残基で置換して、抗原結合性を変化させることができ、好ましくは改善することができる。これらのフレームワーク置換は、当分野で周知の方法、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を特定する、ＣＤＲとフレームワーク残基の相互作用のモデリング、及び特別な位置における異常なフレームワーク残基を特定する配列比較によって、特定される。（例えば、参照によりその全体を本明細書に組み入れる、Ｑｕｅｅｎ他、米国特許第５，５８５，０８９号、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３（１９８８）を参照されたい。）３次元免疫グロブリンモデルは、一般に利用可能であり、当業者によく知られている。選択した免疫グロブリン配列候補の有望な３次元高次構造を図示し、表示するコンピュータープログラムを利用することができる。これらの表示を詳しく調べることによって、免疫グロブリン配列候補の機能における残基の可能な役割を分析することができ、すなわち、免疫グロブリン候補がその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基を分析することができる。このようにして、ＦＲ残基をコンセンサスから選択し、組み合わせ、標的抗原に対する親和性の増大などの所望の抗体特性が得られるように配列を移入することができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合への作用に直接的かつ最も実質的に関与する。抗体は、その中で引用されている参考文献を含めて、参照によりその全体を本明細書に組み入れる、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２（１９８６）；  Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４（１９８８））、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５１：  ２２９６（１９９３）；  Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１（１９８７）、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８９：４２８５（１９９２）；  Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５１：２６２３（１９９３）、Ｐａｄｌａｎ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）；  Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４（１９９４）；  Ｒｏｇｕｓｋａ．  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＮＡＳ  ９１：９６９−９７３（１９９４）、国際公開第９１／０９９６７号、ＰＣＴ／：ＵＳ９８／１６２８０、ＵＳ９６／１８９７８、ＵＳ９１／０９６３０、ＵＳ９１／０５９３９、ＵＳ９４／０１２３４、ＧＢ８９／０１３３４、ＧＢ９１／０１１３４、ＧＢ９２／０１７５５；国際公開第９０／１４４４３号、同９０／１４４２４号、同９０／１４４３０号、欧州特許第２２９２４６号、同５９２，１０６号、同５１９，５９６号、同２３９，４００号、米国特許第５，５６５，３３２号、同５，７２３，３２３号、同５，９７６，８６２号、同５，８２４，５１４号、同５，８１７，４８３号、同５８１４４７６号、同５７６３１９２号、同５７２３３２３号、同５，７６６８８６号、同５，７１４，３５２号、同６，２０４，０２３号、同６，１８０，３７０号、同５，６９３，７６２号、同５，５３０，１０１号、同５，５８５，０８９号、同５，２２５，５３９号、同４，８１６，５６７号に記載の技術など、ただしこれらだけに限定されない当分野で公知の種々の技術によってヒト化することができる。
【０１５３】
Ｃ．  抗体及び抗体産生細胞系の製造
好ましくは、本発明の抗ＩＬ−１３抗体は、例えば、当分野で公知の幾つかのインビトロ及び生体内アッセイのいずれか一つによって評価して、ＩＬ−１３活性を低下させる、又は中和する、高い能力を示す（例えば、実施例１．１．Ｃ参照）。例えば、これらの抗体は、Ａ−５４９細胞によるＴＡＲＣのＩＬ−１３誘導性産生を、少なくとも約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ又は約１０−１０Ｍの範囲のＩＣ５０値で中和する。
【０１５４】
好ましい実施形態においては、単離抗体又はその抗原結合性部分は、ヒトＩＬ−１３に結合し、抗体又はその抗原結合性部分は、表面プラズモン共鳴によって測定して、ヒトＩＬ−１３から約０．１ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離し、又はヒトＩＬ−１３及び／又はヒトＩＬ−１３活性を約１×１０−６Ｍ以下のＩＣ５０で阻害する。或いは、抗体又はその抗原結合性部分は、表面プラズモン共鳴によって測定して、ヒトＩＬ−１３から約１×１０−２ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離し得、又はヒトＩＬ−１３及び／又はヒトＩＬ−１３活性を約１×１０−７Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し得る。或いは、抗体又はその抗原結合性部分は、表面プラズモン共鳴によって測定して、ヒトＩＬ−１３から約１×１０−３ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離し得、又はヒトＩＬ−１３及び／又はヒトＩＬ−１３を約１×１０−８Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し得る。或いは、抗体又はその抗原結合性部分は、表面プラズモン共鳴によって測定して、ヒトＩＬ−１３から約１×１０−４ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離し得、又はＩＬ−１３及び／又はヒトＩＬ−１３活性を約１×１０−９Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し得る。或いは、抗体又はその抗原結合性部分は、表面プラズモン共鳴によって測定して、ヒトＩＬ−１３から約１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離し得、又はＩＬ−１３及び／又はヒトＩＬ−１３活性を約１×１０−１０Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し得る。或いは、抗体又はその抗原結合性部分は、表面プラズモン共鳴によって測定して、ヒトＩＬ−１３から約１×１０−５ｓ−１以下のｋｏｆｆ速度定数で解離し得、又はＩＬ−１３及び／又はヒトＩＬ−１３活性を約１×１０−１１Ｍ以下のＩＣ５０で阻害し得る。
【０１５５】
ＩＬ−１３は、細胞表面のＩＬ−１３受容体（ＩＬ−１３Ｒ）に結合することによってその作用を発揮する。ヘテロ２量体は、ＩＬ−１３Ｒα１鎖（ＩＬ−１３Ｒα１）とＩＬ−４Ｒ鎖（ＩＬ−４Ｒ）で構成される。ＩＬ−１３は、ＩＬ−１３Ｒα１にまず低親和性（ＫＤ＝２−１０ｎＭ）で結合し、次いでＩＬ−４Ｒを複合体に動員して、高親和性受容体（ＫＤ＝０．０３−０．４ｎＭ）を生成する（Ａｍａｎ，  Ｍ．Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  １９９６  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７１，  ２９２６５−２９２７０；  Ｍｉｌｏｕｘ，  ｅｔ  ａｌ．  １９９７  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ４０１，  １６３−１６６；  Ａｎｄｒｅｗｓ，  ｅｔ  ａｌ  ２００２  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７７，  ４６０７３−４６０７８）。ＩＬ−１３Ｒのヘテロ２量体化は、それぞれＩＬ−１３Ｒα１及びＩＬ−４Ｒに恒常的に付随するヤヌスキナーゼＴＹＫ２及びＪＡＫ１を活性化し、続いて活性化シグナル伝達性転写因子６（ＳＴＡＴ６）を活性化する（Ｉｚｕｈａｒａ，  Ｋ．，  ａｎｄ  Ａｒｉｍａ，  Ｋ．  ２００４  Ｄｒｕｇ  Ｎｅｗｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．  １７，  ９１−９８）。ＩＬ−１３に高親和性（０．２５−１．２ｎＭ）で結合する別のＩＬ−１３結合単位であるＩＬ−１３Ｒα２鎖（ＩＬ−１３Ｒα２）がある（Ｃａｐｕｔ，  ｅｔ  ａｌ  １９９６  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７１，  １６９２１−１６９２６；  Ｄｏｎａｌｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ  １９９８  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６１，  ２３１７−２３２４）。ＩＬ−１３・ＩＬ−１３Ｒ２複合体に関与する他の受容体分子は知られていない。ＩＬ−１３Ｒ２は、非シグナル伝達「おとり」受容体として作用すると当初は考えられた。しかし、ＩＬ−１３Ｒ２は、ＩＬ−１３に結合し得、ＡＰ−１経路を介してシグナル伝達し、マクロファージを含めたある細胞タイプにおいてＴＮＦベータ産生をもたらし、ＴＮＦベータ産生は肺線維症をもたらすことがその後に発見された（Ｆｉｃｈｔｎｅｒ−Ｆｅｉｇｌ，  ２００６  Ｎａｔ  Ｍｅｄ  １２：９９−１０６）。したがって、ＩＬ−１３Ｒα１／ＩＬ−４ＲαとＩＬ−１３Ｒα２の両方の経路は、ぜん息及び他の肺炎症性症状の病態生理全般の一因になる。したがって、両方の受容体に対するＩＬ−１３の結合を阻止する治療用抗ＩＬ−１３抗体は、一方の受容体のみを阻止する抗ＩＬ−１３抗体よりも有効である。
【０１５６】
本発明者らは、ＩＬ−１３Ｒα１とＩＬ−１３Ｒα２の両方に対するＩＬ−１３の結合を阻止する単離モノクローナル抗体を有する。ＥＬＩＳＡに基づく受容体結合アッセイと細胞表面の１２５Ｉ標識ＩＬ−１３結合アッセイの両方によって、ネズミバージョンとヒト化バージョン（すなわち１３Ｃ５．５）の両方の１３Ｃ５は、両方の受容体に対するＩＬ−１３の結合を有効に阻止できることが実証された。２５Ｃ８及び３３Ｃ３を含めて、１３Ｃ５と同じ系列の抗体も、両方の受容体に対するＩＬ−１３の結合を阻止することができた。１３Ｃ５のエピトープマッピングによれば、その結合部位は、ヒトＩＬ−１３のＣ末端ヘリックスＤ領域（配列番号１のアミノ酸１０４−１３０に対応する残基ＶＲＤＴＫ  ＩＥＶＡＱ  ＦＶＫＤＬ  ＬＬＨＬＫ  ＫＬＦＲＥ  ＧＲ）を含んだ。Ｃ末端ヘリックスＤ領域は、ＩＬ−１３受容体との相互作用に関与すると提唱された（Ｚｕｅｇｇ  ｅｔ  ａｌ  ２００１  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ７９：３３２−９）。１３Ｃ５．５抗体のＦａｂ部分と複合化されたヒトＩＬ−１３の結晶構造によれば、１３Ｃ５．５は、ヒトＩＬ−１３のＣ末端ヘリックスＤ領域及びＮ末端ヘリックスＡ領域に結合する。好ましくは、抗体又はその抗原結合性フラグメントは、配列番号１の局所領域Ｓｅｒ２６−Ｔｈｒ２７−Ａｌａ２８−Ｌｅｕ２９−Ａｒｇ３０−Ｇｌｕ３１−Ｌｅｕ３２−Ｉｌｅ３３−Ｇｌｕ３４−Ｇｌｕ３５−Ｌｅｕ３６−Ｖａｌ３７−Ａｓｎ３８及びＬｙｓ１２３−Ｌｙｓ１２４−Ｌｅｕ１２５−Ｐｈｅ１２６−Ａｒｇ１２７−Ｇｌｕ−１２８−Ｇｌｙ１２９−Ａｒｇ１３０によって定義されたエピトープに結合した前記抗体又はその抗原結合性フラグメントを有するＩＬ−１３がＩＬ−１３受容体との結合を阻止されるように、ヒトＩＬ−１３に結合する。好ましくは、抗体又はその抗原結合性フラグメントは、配列番号１の局所領域Ａｒｇ３０−Ｇｌｕ３１−Ｌｅｕ３２−Ｉｌｅ３３−Ｇｌｕ３４−Ｇｌｕ３５−Ｌｅｕ３６−Ｖａｌ３７−Ａｓｎ３８及びＬｙｓ１２３−Ｌｙｓ１２４−Ｌｅｕ１２５−Ｐｈｅ１２６−Ａｒｇ１２７によって定義されたエピトープに結合した前記抗体又はその抗原結合性フラグメントを有するＩＬ−１３がＩＬ−１３α２受容体との結合を阻止されるように、ヒトＩＬ−１３に結合する。
【０１５７】
ある実施形態においては、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ定常領域などの重鎖定常領域を含む。好ましくは、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域又はＩｇＧ４重鎖定常領域である。また、抗体は、カッパ軽鎖定常領域又はラムダ軽鎖定常領域のどちらかの軽鎖定常領域を含み得る。好ましくは、抗体はカッパ軽鎖定常領域を含む。或いは、抗体部分は、例えば、Ｆａｂ断片又は単鎖Ｆｖ断片であり得る。
【０１５８】
Ｆｃ部分のアミノ酸残基を置換して抗体のエフェクター機能を変化させることは、当分野で公知である（Ｗｉｎｔｅｒ他、米国特許第５，６４８，２６０号、同５６２４８２１号）。抗体のＦｃ部分は、幾つかの重要なエフェクター機能、例えば、抗体及び抗原−抗体複合体のサイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び半減期／クリアランス速度を媒介する。これらのエフェクター機能は、治療抗体に望ましい場合もあるが、治療目的によっては不必要であり、さらには有害な場合もある。ある種のヒトＩｇＧアイソタイプ、特にＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、それぞれＦｃγＲｓ及び補体Ｃ１ｑとの結合を介して、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを媒介する。新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、抗体の循環半減期を決定する重要な成分である。更に別の一実施形態においては、少なくとも１個のアミノ酸残基は、抗体のエフェクター機能が変化するように、抗体の定常領域、例えば抗体のＦｃ領域において置換される。
【０１５９】
一実施形態は、本発明の抗体又は抗体部分が誘導体化された又は別の機能分子（例えば、別のペプチド又はタンパク質）と結合した、標識結合タンパク質を提供する。例えば、本発明の標識結合タンパク質を、本発明の抗体又は抗体部分を１種類以上の他の分子実体（別の抗体（例えば、二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体又は二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ））、検出可能薬剤、細胞毒性薬、薬剤及び／又は抗体若しくは抗体部分と（ストレプトアビジンコア領域、ポリヒスチジンタグなどの）別の分子との会合（ａｓｓｏｃｉａｔｅ）を媒介し得るタンパク質若しくはペプチドなど）と化学カップリング、遺伝子融合、非共有結合性会合などによって機能的に連結することによって誘導することができる。
【０１６０】
本発明の抗体又は抗体部分を誘導体化し得る有用な検出可能な薬剤としては、蛍光性化合物などが挙げられる。例示的な蛍光性検出可能薬剤としては、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、塩化５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニル、フィコエリトリンなどが挙げられる。抗体は、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼなどの検出可能な酵素を用いて誘導体化することもできる。検出可能な酵素で抗体を誘導体化したときは、検出可能な反応生成物を生成するために、酵素が使用する追加の試薬を添加することによって抗体を検出する。例えば、検出可能な薬剤の西洋ワサビペルオキシダーゼが存在するときは、過酸化水素及びジアミノベンジジンを添加することによって、検出可能な着色反応生成物がもたらされる。抗体は、ビオチンを用いて誘導体化し、アビジン又はストレプトアビジン結合を間接的に測定することによって検出することもできる。
【０１６１】
本発明の別の一実施形態は、結晶化結合タンパク質を提供する。好ましくは、本発明は、本明細書に開示する抗ＩＬ−１３抗体全体及びその断片の結晶並びにかかる結晶を含む製剤及び組成物に関する。一実施形態においては、結晶化結合タンパク質は、結合タンパク質の可溶性対応物よりも長い生体内半減期を有する。別の一実施形態においては、結合タンパク質は、結晶化後も生物活性を保持する。
【０１６２】
本発明の結晶化結合タンパク質は、当分野で公知の方法、及び参照により本明細書に組み入れる国際公開第０２０７２６３６号に開示されている方法によって製造することができる。
【０１６３】
本発明の別の一実施形態は、抗体又はその抗原結合性部分が１種類以上の炭水化物残基を含む、グリコシル化結合タンパク質を提供する。新生生体内タンパク質の生成は、翻訳後修飾として知られる更なるプロセシングを受け得る。特に、糖（グリコシル）残基が酵素的に付加され得る（グリコシル化として知られるプロセス）。共有結合したオリゴ糖側鎖を有する生成タンパク質は、グリコシル化タンパク質又は糖タンパク質として知られる。抗体は、Ｆｃドメイン中の１種類以上の炭水化物残基と可変ドメインとを有する糖タンパク質である。Ｆｃドメイン中の炭水化物残基は、Ｆｃドメインのエフェクター機能に対して重要な効果を有し、抗体の抗原結合又は半減期に対しては最低限の効果しか持たない（Ｒ．  Ｊｅｆｆｅｒｉｓ，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｐｒｏｇ．  ２１  （２００５），  ｐｐ．１１−１６）。これに対し、可変ドメインのグリコシル化は、抗体の抗原結合活性に対して効果を有し得る。可変ドメインにおけるグリコシル化は、恐らくは立体障害のために、抗体結合親和性に対して負の効果を有し得る（Ｃｏ，  Ｍ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  （１９９３）  ３０：１３６１−１３６７）、又は抗原に対する親和性を増大させ得る（Ｗａｌｌｉｃｋ，  Ｓ．Ｃ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  （１９８８）  １６８：１０９９−１１０９；  Ｗｒｉｇｈｔ，  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｊ．  （１９９１）  １０：２７１７  ２７２３）。
【０１６４】
本発明の一態様は、結合タンパク質のＯ又はＮ結合グリコシル化部位が変異したグリコシル化部位変異体の生成を対象とする。当業者は、かかる変異体を周知の標準技術によって生成させることができる。生物活性を保持するが、結合活性が増大又は低下したグリコシル化部位変異体は、本発明の別の目的である。
【０１６５】
更に別の一実施形態においては、本発明の抗体又は抗原結合性部分のグリコシル化を改変する。例えば、非グリコシル化抗体を作製することができる（すなわち、グリコシル化されていない抗体）。グリコシル化は、例えば抗原に対する抗体の親和性を増大させるように、変化させることができる。かかる炭水化物修飾は、例えば抗体配列内の１個以上のグリコシル化部位を変化させることによって、実施することができる。例えば、１個以上の可変領域グリコシル化部位を除去し、それによって該部位におけるグリコシル化を除去する、１つ以上のアミノ酸置換を実施することができる。かかる非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）は、抗原に対する抗体の親和性を増大させ得る。かかる手法は、その各々を参照によりその全体を本明細書に組み入れる、国際公開第２００３０１６４６６号Ａ２並びに米国特許第５，７１４，３５０号及び同６，３５０，８６１号に更に詳細に記載されている。
【０１６６】
それに加えて、又はその代わりに、フコシル残基の量が減少した低フコシル化（ｈｙｐｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体、バイセクトＧｌｃＮＡｃ構造の増加した抗体など、変化したグリコシル化タイプを有する本発明の修飾抗体を作製することができる。かかる変化したグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増大させることが実証された。かかる炭水化物修飾は、例えば、変化したグリコシル化機構を有する宿主細胞中で抗体を発現させることによって、実施することができる。変化したグリコシル化機構を有する細胞は、当分野で記述されており、本発明の組換え抗体を発現し、それによって変化したグリコシル化を含む抗体を生成する宿主細胞として使用することができる。例えば、その各々を参照によりその全体を本明細書に組み入れる、Ｓｈｉｅｌｄｓ，  Ｒ．Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７７：２６７３３−２６７４０；  Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  １７：  １７６−１、並びに欧州特許第１，１７６，１９５号、国際公開第０３／０３５８３５号、同９９／５４３４２８０号を参照されたい。
【０１６７】
タンパク質のグリコシル化は、対象のタンパク質のアミノ酸配列、及びタンパク質が発現される宿主細胞に依存する。異なる生物体は、異なるグリコシル化酵素（例えば、糖転移酵素及びグリコシダーゼ）を産生し得、利用可能な異なる基質（ヌクレオチド糖）を有し得る。かかる要因のために、タンパク質のグリコシル化パターン及びグリコシル残基の組成は、特定のタンパク質が発現される宿主系に応じて異なり得る。本発明に有用であるグリコシル残基としては、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、ｎ−アセチルグルコサミン及びシアル酸が挙げられるが、これらだけに限定されない。好ましくは、グリコシル化結合タンパク質は、グリコシル化パターンがヒトであるようなグリコシル残基を含む。
【０１６８】
タンパク質のグリコシル化が異なるとタンパク質特性が異なり得ることは当業者に知られている。例えば、酵母などの微生物宿主中で産生され、酵母の内在性経路を利用してグリコシル化された治療用タンパク質の有効性は、ＣＨＯ細胞系などのほ乳動物細胞中で発現される同じタンパク質の有効性よりも低下し得る。かかる糖タンパク質は、ヒトにおいて免疫原性でもあり得、投与後に生体内半減期が短縮し得る。ヒト及び他の動物における特異的受容体は、特定のグリコシル残基を認識し、血流からのタンパク質の急速なクリアランスを促進し得る。別の有害作用としては、タンパク質折りたたみ、溶解性、プロテアーゼに対する感受性、細胞内輸送、輸送、区画化、分泌、他のタンパク質若しくは因子による認識、抗原性、アレルゲン性などの変化が挙げられる。したがって、実務家は、グリコシル化の特定の組成及びパターン（例えば、ヒト細胞において、又は意図する対象動物の種特異的細胞において、産生されるものと同一又は少なくとも類似したグリコシル化組成及びパターン）を有する治療用タンパク質を好み得る。
【０１６９】
宿主細胞のグリコシル化タンパク質とは異なるグリコシル化タンパク質の発現は、宿主細胞を遺伝子改変して、異種グリコシル化酵素を発現させることによって、実施することができる。当分野で公知の技術を用いて、実務家は、ヒトタンパク質グリコシル化を示す抗体又はその抗原結合性部分を生成させることができる。例えば、酵母系統は、これらの酵母系統において産生されるグリコシル化タンパク質（糖タンパク質）が、動物細胞、特にヒト細胞のタンパク質グリコシル化と同一のタンパク質グリコシル化を示すように、遺伝子改変されて、非天然グリコシル化酵素を発現する（米国特許出願公開第２００４００１８５９０号及び同２００２０１３７１３４号並びに国際公開第２００５１００５８４号Ａ２）。
【０１７０】
結合タンパク質に加えて、本発明は、本発明のかかる結合タンパク質に特異的である抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体も対象とする。抗Ｉｄ抗体は、別の抗体の抗原結合領域に一般に関連する独特の決定因子を認識する抗体である。抗Ｉｄは、動物を結合タンパク質又はそのＣＤＲ含有領域で免疫することによって調製することができる。免疫された動物は、免疫抗体のイディオタイプ決定基を認識し、それに応答して、抗Ｉｄ抗体を産生する。抗Ｉｄ抗体は、更に別の動物における免疫応答を誘導する「免疫原」としても使用することができ、いわゆる抗抗Ｉｄ抗体を産生する。
【０１７１】
また、当業者は、ライブラリーのメンバー宿主細胞が、異なるグリコシル化パターンを有する目的タンパク質を産生するように、種々のグリコシル化酵素を発現するように遺伝子操作された宿主細胞のライブラリーを用いて目的タンパク質を発現させ得ることを理解されたい。次いで、実務家は、特定の新規グリコシル化パターンを有する目的タンパク質を選択し、単離することができる。好ましくは、特に選択された新規グリコシル化パターンを有するタンパク質は、改善された又は変化した、生物学的性質を示す。
【０１７２】
Ｄ．  抗ＩＬ−１３抗体の使用
ヒトＩＬ−１３に結合するその能力を考慮に入れると、本発明の抗ヒトＩＬ−１３抗体又はその一部は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、放射性免疫測定法（ＲＩＡ）、組織免疫組織化学などの従来の免疫測定法を用いて、（例えば、血清、血しょうなどの生物試料中の）ヒトＩＬ−１３を検出するのに使用することができる。本発明は、生物試料を本発明の抗体又は抗体部分と接触させること、及びヒトＩＬ−１３に結合した抗体（又は抗体部分）又は結合していない抗体（又は抗体部分）を検出し、それによって生物試料中のヒトＩＬ−１３を検出することを含む、生物試料中のヒトＩＬ−１３を検出する方法を提供する。検出可能な物質で抗体を直接的又は間接的に標識して、結合した又は結合していない抗体の検出を容易にする。適切な検出可能物質としては、種々の酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、放射性材料などが挙げられる。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼが挙げられる。適切な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが挙げられる。適切な蛍光材料の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド又はフィコエリトリンが挙げられる。発光材料の例としてはルミノールが挙げられる。適切な放射性材料の例としては、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ又は１５３Ｓｍが挙げられる。
【０１７３】
抗体の標識化の代わりに、検出可能物質で標識されたｒｈＩＬ−１３標準及び非標識抗ヒトＩＬ−１３抗体を利用した競合免疫測定法によって、体液中のヒトＩＬ−１３を評価することができる。このアッセイでは、生物試料、標識ｒｈＩＬ−１３標準及び抗ヒトＩＬ−１３抗体を組み合わせ、非標識抗体に結合した標識ｒｈＩＬ−１３標準の量を測定する。生物試料中のヒトＩＬ−１３の量は、抗ＩＬ−１３抗体に結合した標識ｒｈＩＬ−１３標準の量に逆比例する。同様に、検出可能物質で標識されたｒｈＩＬ−１３標準及び非標識抗ヒトＩＬ−１３抗体を利用した競合免疫測定法によって、体液中のヒトＩＬ−１３を評価することもできる。
【０１７４】
本発明の抗体及び抗体部分は、好ましくは、インビトロと生体内の両方でヒトＩＬ−１３活性を中和可能である。したがって、本発明のかかる抗体及び抗体部分を使用して、例えば、ｈＩＬ−１３を含む細胞培養物において、本発明の抗体が交差反応するＩＬ−１３を有するヒト対象において又は他のほ乳動物対象において、ｈＩＬ−１３活性を阻害することができる。一実施形態においては、本発明は、ｈＩＬ−１３活性が阻害されるように、ｈＩＬ−１３を本発明の抗体又は抗体部分と接触させることを含む、ｈＩＬ−１３活性を阻害する方法を提供する。例えば、ｈＩＬ−１３を含む又は含む疑いがある、細胞培養物において、本発明の抗体又は抗体部分を培地に添加して、培養物中のｈＩＬ−１３活性を阻害することができる。
【０１７５】
別の一実施形態においては、本発明は、対象における、有利にはＩＬ−１３活性が有害である疾患又は障害に罹患した対象から、ｈＩＬ−１３活性を低下させる方法を提供する。本発明は、対象におけるＩＬ−１３活性が低下するように本発明の抗体又は抗体部分を対象に投与することを含む、かかる疾患又は障害に罹患した対象におけるＩＬ−１３活性を低下させる方法を提供する。好ましくは、ＩＬ−１３はヒトＩＬ−１３であり、対象はヒト対象である。或いは、対象は、本発明の抗体が結合可能であるＩＬ−１３を発現するほ乳動物であり得る。さらに、対象は、（例えば、ＩＬ−１３の投与又はＩＬ−１３導入遺伝子の発現によって）ＩＬ−１３が導入されたほ乳動物であり得る。本発明の抗体は、ヒト対象に治療目的で投与することができる。さらに、本発明の抗体は、抗体が結合可能であるＩＬ−１３を発現する非ヒトほ乳動物に、獣医学目的で、又はヒト疾患の動物モデルとして、投与することができる。後者に関して、かかる動物モデルは、本発明の抗体の治療効果を評価するのに有用であり得る（例えば、投与量及び投与の時間的経過の試験）。
【０１７６】
本明細書では「ＩＬ−１３活性が有害である障害」という用語は、障害に罹患した対象におけるＩＬ−１３の存在が、障害の病態生理の原因又は障害の悪化に寄与する要因であることが判明した又はその疑いがある、疾患及び他の障害を含むものとする。したがって、ＩＬ−１３活性が有害である障害は、ＩＬ−１３活性の低下によって障害の症候及び／又は進行が軽減されると予想される障害である。かかる障害は、例えば、障害に罹患した対象の体液のＩＬ−１３濃度の上昇（例えば、対象の血清、血しょう、滑液などのＩＬ−１３濃度の上昇）によって明らかになり得る。ＩＬ−１３濃度の上昇は、例えば、上述した抗ＩＬ−１３抗体を用いて検出することができる。本発明の抗体を用いて治療することができる障害の非限定的例としては、本発明の抗体の薬剤組成物に関して下記セクションで考察する障害が挙げられる。
【０１７７】
ＩＬ−１３は、ぜん息に付随する病理学的反応を引き起こす枢要な役割を有するとされてきた。しかし、免疫学的経路の異なる他の媒介物質もぜん息の原因に関与し、ＩＬ−１３に加えて、これらの媒介物質を遮断することは、更なる治療効果を与え得る。したがって、本発明の結合タンパク質をＤＶＤ−Ｉｇタンパク質に組み込むことができる。ＤＶＤは、ＩＬ−１３と炎症誘発性サイトカイン（腫よう壊死因子α（ＴＮＦα）など）を含めて、ただしこれだけに限定されない標的対に結合可能である。ＴＮＦαは、ぜん息における炎症反応を増幅し得、疾患の重症度と関連づけることができる（ＭｃＤｏｎｎｅｌｌ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （２００１），  ３１（Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  Ａｓｔｈｍａ，  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  ＣＯＰＤ），  ２４７−２５０）。これは、ＩＬ−１３とＴＮＦαの両方を遮断することが、特に重度の気道疾患において、有益な効果を有し得ることを示唆している。好ましい一実施形態においては、本発明のＤＶＤ−Ｉｇは、標的ＩＬ−１３とＴＮＦαに結合し、ぜん息治療に使用される。
【０１７８】
別の一実施形態においては、本発明の結合タンパク質を使用して、ＩＬ−１３及びＩＬ−１ベータ、ＩＬ−１３及びＩＬ−９；ＩＬ−１３及びＩＬ−４；ＩＬ−１３及びＩＬ−５；ＩＬ−１３及びＩＬ−２５；ＩＬ−１３及びＴＡＲＣ；ＩＬ−１３及びＭＤＣ；ＩＬ−１３及びＭＩＦ；ＩＬ−１３及びＴＧＦ−β；ＩＬ−１３及びＬＨＲ作動物質；ＩＬ−１３及びＣＬ２５；ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ａ；ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ｂ；並びにＩＬ−１３及びＡＤＡＭ８に結合するＤＶＤ−Ｉｇ分子を生成させることができる。本発明は、ＩＬ−１３と、ＣＳＦ１（ＭＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）、ＦＧＦ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ヒスタミン及びヒスタミン受容体、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１，ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＫＩＴＬＧ、ＰＤＧＦＢ、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１８Ｒ１、ＴＳＬＰ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＸＣＬ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＸ３ＣＲ１、ＧＰＲ２、ＸＣＲ１、ＦＯＳ、ＧＡＴＡ３、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＳＴＡＴ６、ＴＢＸ２１、ＴＧＦＢ１、ＴＮＦＳＦ６、ＹＹ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ及びキチナーゼからなる群から選択される、ぜん息に関与する１種類以上の標的とに結合可能なＤＶＤ−Ｉｇも提供する。
【０１７９】
Ｄ．  薬剤組成物
本発明は、本発明の抗体又はその抗原結合性部分と薬学的に許容される担体とを含む薬剤組成物も提供する。本発明の抗体を含む薬剤組成物は、これらだけに限定されないが、障害の診断、検出若しくは監視、障害若しくはその１つ以上の症候の予防、治療、管理若しくは改善及び／又は研究に使用される。特定の一実施形態においては、これらの組成物は、本発明の１種類以上の抗体を含む。別の一実施形態においては、この薬剤組成物は、本発明の１種類以上の抗体と、ＩＬ−１３活性が有害である障害を治療するための本発明の抗体以外の１種類以上の予防薬又は治療薬とを含む。好ましくは、障害又はその１つ以上の症候の予防、治療、管理又は改善に有用であることが知られている又は使用されてきた又は現在使用されている、予防薬又は治療薬。これらの実施形態によれば、組成物は、担体、希釈剤又は賦形剤を更に含み得る。
【０１８０】
本発明の抗体及び抗体部分は、対象への投与に適切な薬剤組成物に組み込むことができる。典型的には、薬剤組成物は、本発明の抗体又は抗体部分と薬学的に許容される担体とを含む。本明細書では「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合する、任意及びすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張化剤、吸収遅延剤などを含む。薬学的に許容される担体の例としては、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセリン、エタノールなどの１つ以上、及びこれらの組合せが挙げられる。組成物中に等張化剤（例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、又は塩化ナトリウム）を含むことが好ましい場合が多い。薬学的に許容される担体は、抗体又は抗体部分の品質保持期間又は有効性を向上させる、湿潤剤、乳化剤、防腐剤、緩衝剤などの補助物質の少量を更に含み得る。
【０１８１】
種々の送達系が公知であり、これらを使用して、障害又はその１つ以上の症候の予防、管理、治療又は改善に有用である、本発明の１種類以上の抗体、又は本発明の１種類以上の抗体と予防薬若しくは治療薬との組合せを投与することができる（例えば、リポソーム封入、微粒子、マイクロカプセル、抗体又は抗体断片を発現可能な組換え細胞、受容体によって媒介されるエンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６２：４４２９−４４３２（１９８７）参照）、レトロウイルス又は他のベクターの一部としての核酸の構築など）。本発明の予防薬又は治療薬を投与する方法としては、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内及び皮下）、硬膜外投与、腫よう内投与及び粘膜投与（例えば、鼻腔内及び経口経路）が挙げられるが、これらだけに限定されない。また、例えば、吸入器又はネブライザーの使用、及びエアロゾル化剤を用いた処方によって、肺投与することもできる。例えば、その各々を参照によりその全体を本明細書に組み入れる、米国特許第６，０１９，９６８号、同５，９８５，３２０号、同５，９８５，３０９号、同５，９３４，２７２号、同５，８７４，０６４号、同５，８５５，９１３号、同５，２９０，５４０号及び同４，８８０，０７８号、並びに国際公開第９２／１９２４４号、同９７／３２５７２号、同９７／４４０１３号、同９８／３１３４６号及び同９９／６６９０３号参照されたい。一実施形態においては、本発明の抗体、併用療法、又は本発明の組成物をＡｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（登録商標）肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  Ｍａｓｓ．）によって投与する。特定の一実施形態においては、本発明の予防薬又は治療薬を筋肉内、静脈内、腫よう内、経口的、鼻腔内、肺又は皮下投与する。予防薬又は治療薬は、任意の好都合な経路によって、例えば、注入又は大量瞬時投与によって、上皮又は粘膜皮膚内膜（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜、腸管粘膜など）を介した吸収によって、投与することができ、他の生物活性薬剤と一緒に投与することができる。投与は、全身的でも局所的でもよい。
【０１８２】
特定の一実施形態においては、本発明の予防薬又は治療薬を治療を必要とする部分に局所的に投与することが望ましい場合がある。投与は、これらだけに限定されないが、例えば、局所注入、注射又は移植片によって実施することができる。前記移植片は、ｓｉａｌａｓｔｉｃ膜、ポリマー、繊維マトリックス（例えば、Ｔｉｓｓｕｅｌ（登録商標））、コラーゲンマトリックスなどの膜及びマトリックスを含めた、多孔質又は非多孔質材料である。一実施形態においては、本発明の１種類以上の抗体の有効量拮抗物質を対象の患部に局所的に投与して、障害又はその症候を予防、治療、管理及び／又は改善する。別の一実施形態においては、本発明の１種類以上の抗体の有効量を、本発明の抗体以外の１種類以上の療法（例えば、１種類以上の予防薬又は治療薬）の有効量と組み合わせて、対象の患部に局所的に投与して、障害又はその１つ以上の症候を予防、治療、管理及び／又は改善する。
【０１８３】
別の一実施形態においては、本発明の予防薬又は治療薬を制御放出系又は徐放系で送達することができる。一実施形態においては、ポンプを使用して、制御放出又は徐放性を実現することができる（Ｌａｎｇｅｒ、上掲；  Ｓｅｆｔｏｎ，  １９８７，  ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｆ．  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｅｎｇ．  １４：２０；  Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８０，  Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７；  Ｓａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３２１：５７４）。別の一実施形態においては、ポリマー材料を使用して、本発明の療法の制御放出又は徐放性を実現することができる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ  （ｅｄｓ．），  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  Ｆｌａ．  （１９７４）；  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，  Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ  （ｅｄｓ．），  Ｗｉｌｅｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８４）；  Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，  １９８３，  Ｊ．，  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．  Ｓｃｉ．  Ｒｅｖ．  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２３：６１参照。Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８５，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：  １９０；  Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ２５：３５１；  Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  ７  １：１０５）、米国特許第５，６７９，３７７号、同５，９１６，５９７号、同５，９１２，０１５号、同５，９８９，４６３号、同５，１２８，３２６号、国際公開第９９／１５１５４号及び同９９／２０２５３号も参照されたい。徐放性製剤に用いられるポリマーの例としては、ポリメタクリル酸２−ヒドロキシエチル、ポリメタクリル酸メチル、ポリアクリル酸、ポリ（エチレン−ｃｏ−酢酸ビニル）、ポリメタクリル酸、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ酸無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）及びポリオルトエステルが挙げられるが、これらだけに限定されない。好ましい一実施形態においては、徐放性製剤に用いられるポリマーは、不活性であり、ろ過可能な不純物を含まず、貯蔵時に安定であり、無菌であり、生分解性である。更に別の一実施形態においては、制御放出系又は徐放系は、予防又は治療標的の近くに配置することができ、したがって全身的投与量の一部分のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  （上掲）  ｖｏｌ．２，  ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）参照）。
【０１８４】
制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒによる総説で考察されている（１９９０，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：  １５２７−１５３３）。当業者に公知の任意の技術を使用して、本発明の１種類以上の治療薬を含む徐放性製剤を製造することができる。例えば、その各々を参照によりその全体を本明細書に組み入れる、米国特許第４，５２６，９３８号、国際公開第９１／０５５４８号、国際公開第９６／２０６９８号、Ｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６，  ”Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ  ｏｆ  ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｇｅｌ，”  Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３９：  １７９−１８９、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  ”Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｌｕｎｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｏｎｇ−Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，”  ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５０：３７２−３９７、Ｃｌｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  ”Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  ａ  ｂＦＧＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，”  Ｐｒｏ．  Ｉｎｔ’ｌ．  Ｓｙｍｐ．  Ｃｏｎｔｒｏｌ．  Ｒｅｌ．  Ｂｉｏａｃｔ．  Ｍａｔｅｒ．  ２４：８５３−８５４、及びＬａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  ”Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｌｏｃａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”  Ｐｒｏｃ．  Ｉｎｔ’ｌ．  Ｓｙｍｐ．  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．  Ｂｉｏａｃｔ．  Ｍａｔｅｒ．  ２４：７５９−７６０を参照されたい。
【０１８５】
特定の一実施形態においては、本発明の組成物が予防薬又は治療薬をコードする核酸である場合、核酸を適切な核酸発現ベクターの一部として構築し、核酸が細胞内になるように核酸を投与することによって（例えば、レトロウイルスベクターの使用によって（米国特許第４，９８０，２８６号参照）、又は直接注射によって、又は微粒子銃（例えば、遺伝子銃、Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）の使用によって、又は脂質、細胞表面受容体若しくは移入剤を含むコーティング、又は核に入ることが知られているホメオボックス様ペプチドに結合した核酸を投与することによって（例えば、Ｊｏｌｉｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８８：  １８６４−１８６８参照））、核酸を生体内投与して、そのコードされた予防薬又は治療薬の発現を促進することができる。或いは、核酸を細胞内に導入することができ、相同組換えによる発現のために宿主細胞ＤＮＡ内に組み込むことができる。
【０１８６】
本発明の薬剤組成物は、その意図された投与経路に適合するように処方される。投与経路の例としては、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口、鼻腔内（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所）、経粘膜及び直腸投与が挙げられるが、これらだけに限定されない。特定の一実施形態においては、この組成物を、ヒトへの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内又は局所投与に適した薬剤組成物として、定常的手順に従って処方する。典型的には、静脈内投与用組成物は、無菌等張性緩衝水溶液である。必要に応じて、この組成物は、可溶化剤、及び注射部位のとう痛を緩和するリグノカイン（ｌｉｇｎｏｃａｍｎｅ）などの局所麻酔薬を含むこともできる。
【０１８７】
本発明の組成物を局所投与する場合、組成物を軟膏剤、クリーム剤、皮膚貼付剤、ローション剤、ゲル剤、シャンプー剤、噴霧剤、エアロゾル剤、溶液剤、乳濁液剤、又は当業者に周知の他の剤形で処方することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，  １９ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．  （１９９５）を参照されたい。噴霧不可能な局所剤形の場合、局所適用に適合した担体又は１種類以上の賦形剤であって、好ましくは水よりも高い動粘性係数を有する担体又は１種類以上の賦形剤を含む、粘ちゅう性から半固体又は固体の剤形が典型的に使用される。適切な剤形としては、溶液剤、懸濁液剤、乳濁液剤、クリーム剤、軟膏剤（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、散剤、リニメント剤、軟膏剤（ｓａｌｖｅ）などが挙げられるが、これらだけに限定されない。これらは、必要に応じて、滅菌され、又は例えば浸透圧などの諸性質に影響を及ぼす助剤（例えば、防腐剤、安定剤、湿潤剤、緩衝剤又は塩）と混合される。他の適切な局所剤形としては、活性成分が、好ましくは固体又は液体不活性担体と組み合わせて、加圧された揮発性物質（例えば、フレオンなどのガス状噴霧剤）との混合物中に、又は中身を絞り出すことができる容器に、充填された、噴霧可能なエアロゾル製剤が挙げられる。必要に応じて、保湿剤又は湿潤剤を薬剤組成物及び剤形に添加することもできる。かかる追加の成分の例は当分野で周知である。
【０１８８】
本発明の方法が組成物の鼻腔内投与を含む場合、組成物をエアロゾル剤、噴霧剤、ミスト剤又はドロップ剤として処方することができる。特に、本発明に従って使用される予防薬又は治療薬は、適切な噴霧剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適切なガス）を使用して、加圧容器又はネブライザーからエアロゾル噴霧の形で好都合には送達することができる。加圧エアロゾルの場合には、単位用量は、計量された量を送達する弁を備えることによって、決定することができる。化合物とラクトース、デンプンなどの適切な粉末基剤との混合粉末を含む、吸入器又は散布器用の（例えばゼラチンで構成された）カプセル剤及びカートリッジ剤を処方することができる。
【０１８９】
［０２５７］本発明の方法が経口投与を含む場合、組成物を錠剤、カプセル剤、カシェ剤、ジェルキャップ剤、溶液剤、懸濁液剤などの経口用に処方することができる。錠剤又はカプセル剤は、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）、充填剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロース又はリン酸水素カルシウム）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ）、崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプン又はデンプングリコール酸ナトリウム）又は湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容される賦形剤を用いて、従来の手段によって調製することができる。錠剤は、当分野で周知の方法によって被覆することができる。経口投与用液体調製物は、溶液剤、シロップ剤、懸濁液剤など、ただしこれらだけに限定されない剤形をとり得、又は使用前に水若しくは他の適切なビヒクルで構成するための乾燥製品として提供することができる。かかる液体調製物は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体又は水素化食用脂）、乳化剤（例えば、レシチン又はアラビアゴム）、非水系ビヒクル（例えば、アーモンド油、油状エステル、エチルアルコール、又は分留された植物油）、防腐剤（例えば、メチル若しくはプロピル−ｐ−ヒドロキシ安息香酸又はソルビン酸）などの薬学的に許容される添加剤を用いて、従来の手段によって調製することができる。調製物は、緩衝剤塩、香味剤、着色剤及び甘味剤を適宜含むこともできる。経口投与用調製物は、予防薬又は治療薬の緩効性放出、制御放出又は徐放用に適切に処方することができる。
【０１９０】
［０２５８］本発明の方法は、エアロゾル化剤を用いて処方された組成物の、例えば吸入器又はネブライザーを用いた、肺投与を含み得る。例えば、その各々を参照によりその全体を本明細書に組み入れる、米国特許第６，０１９，９６８号、同５，９８５，３２０号、同５，９８５，３０９号、同５，９３４，２７２号、同５，８７４，０６４号、同５，８５５，９１３号、同５，２９０，５４０号及び同４，８８０，０７８号、並びに国際公開第９２／１９２４４号、同９７／３２５７２号、同９７／４４０１３号、同９８／３１３４６号及び同９９／６６９０３号を参照されたい。特定の一実施形態においては、本発明の抗体、併用療法、及び／又は本発明の組成物をＡｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（登録商標）肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  Ｍａｓｓ．）によって投与する。
【０１９１】
本発明の方法は、非経口投与用に処方された組成物の注射（例えば、大量瞬時投与又は連続注入）による投与を含み得る。注射用製剤は、添加された防腐剤と一緒に、単位剤形（例えば、アンプル又は複数回投与容器）中に存在し得る。組成物は、油性又は水性ビヒクル中の懸濁液剤、溶液剤又は乳濁液剤のような剤形をとり得、懸濁剤、安定化剤及び／又は分散剤などの調合（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ）剤を含み得る。或いは、活性成分は、使用前に適切なビヒクル（例えば、発熱物質を含まない滅菌水）で構成するための粉末の形であり得る。
【０１９２】
［０２６０］本発明の方法は、デポ製剤として処方された組成物の投与を更に含み得る。かかる長時間作用性製剤は、移植（例えば、皮下又は筋肉内）又は筋肉内注射によって投与することができる。したがって、例えば、組成物は、適切な高分子若しくは疎水性材料（例えば、許容される油中の乳濁液として）又はイオン交換樹脂を用いて、又はやや難溶性の誘導体（例えば、やや難溶性の塩）として、処方することができる。
【０１９３】
本発明の方法は、中性又は塩の形として処方された組成物の投与を包含する。薬学的に許容される塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などから誘導される陰イオンなどの陰イオンと一緒に形成された塩、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、水酸化鉄（ＩＩＩ）、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから誘導される陽イオンなどの陽イオンと一緒に形成された塩などが挙げられる。
【０１９４】
［０２６２］一般に、組成物の成分は、例えば、活性薬剤量を示すアンプル、サシェなどの密閉容器中の凍結乾燥粉末又は無水濃縮物として、別々に、又は単位剤形に一緒に混合して、供給される。投与方法が注入である場合、組成物は、無菌医薬品等級の水又は食塩水を含む注入瓶を用いて調合することができる。投与方法が注射による場合、投与前に成分を混合することができるように、無菌注射用水又は食塩水のアンプルを提供することができる。
【０１９５】
特に、本発明は、本発明の予防薬、治療薬又は薬剤組成物の１種類以上が、薬剤量を示すアンプル、サシェなどの密閉容器に充填されることも提供する。一実施形態においては、本発明の予防薬、治療薬又は薬剤組成物の１種類以上は、密閉容器中の無菌凍結乾燥粉末又は無水濃縮物として供給され、対象への投与に適切な濃度に（例えば、水又は食塩水を用いて）戻すことができる。好ましくは、本発明の予防薬、治療薬又は薬剤組成物の１種類以上は、密閉容器中の無菌凍結乾燥粉末として、少なくとも５ｍｇ、より好ましくは少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、又は少なくとも１００ｍｇの単位投与量で供給される。本発明の凍結乾燥予防薬、治療薬又は薬剤組成物は、その最初の容器中で２℃から８℃で貯蔵すべきである。本発明の予防薬、治療薬又は薬剤組成物は、戻した後、１週間以内、好ましくは５日以内、７２時間以内、４８時間以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、５時間以内、３時間以内又は１時間以内に投与すべきである。別の一実施形態においては、本発明の予防薬、治療薬又は薬剤組成物の１種類以上は、薬剤の量及び濃度を示す密閉容器中の液剤として供給される。好ましくは、投与される組成物の液剤は、密閉容器中で少なくとも０．２５ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも１００ｍｇ／ｍｌで供給される。液剤は、その最初の容器中で２℃から８℃で貯蔵すべきである。
【０１９６】
本発明の抗体及び抗体部分は、非経口投与に適切な薬剤組成物に組み入れることができる。好ましくは、抗体又は抗体部分は、０．１−２５０ｍｇ／ｍｌ抗体を含む注射液として調製される。注射液は、フリント又はこはく色のバイアル、アンプル又は前もって充填されたシリンジ中の液体又は凍結乾燥剤形で構成され得る。緩衝剤は、ｐＨ５．０から７．０（最適にはｐＨ６．０）のＬ−ヒスチジン（１−５０ｍＭ）、最適には５−１０ｍＭであり得る。他の適切な緩衝剤としては、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム又はリン酸カリウムが挙げられるが、これらだけに限定されない。塩化ナトリウムを０−３００ｍＭ（液体剤形の場合、最適には１５０ｍＭ）の濃度で使用して、溶液の毒性を変化させることができる。凍結保護物質、主に０−１０％スクロース（最適には０．５−１．０％）を凍結乾燥剤形のために含めることができる。他の適切な凍結保護物質としては、トレハロース及びラクトースが挙げられる。充填剤、主に１−１０％マンニトール（最適には２−４％）を凍結乾燥剤形のために含めることができる。安定剤、主に１−５０ｍＭ  Ｌ−メチオニン（最適には５−１０ｍＭ）を液剤と凍結乾燥剤形の両方に使用することができる。他の適切な充填剤としてはグリシン、アルギニンが挙げられ、０−０．０５％ポリソルベート−８０（最適には０．００５−０．０１％）として含めることができる。別の界面活性剤としては、ポリソルベート２０、ＢＲＩＪ界面活性剤などが挙げられるが、これらだけに限定されない。非経口投与用注射液として調製される本発明の抗体及び抗体部分を含む薬剤組成物は、治療用タンパク質（例えば、抗体）の吸収又は分散を増大させるのに使用される薬剤など、アジュバントとして有用である薬剤を更に含み得る。特に有用であるアジュバントは、Ｈｙｌｅｎｅｘ（登録商標）（組換えヒトヒアルロニダーゼ）などのヒアルロニダーゼである。注射液にヒアルロニダーゼを添加すると、非経口投与、特に皮下投与後のヒト生物学的利用能が向上する。ヒアルロニダーゼは、少ないとう痛及び不快感で、かつ最小限の注射部位反応発生率で、より大きい（すなわち、１ｍｌを超える）注射部位体積も可能にする（参照により本明細書に組み入れる、国際公開第２００４０７８１４０号、米国特許出願公開第２００６１０４９６８号参照）。
【０１９７】
本発明の組成物は、種々の剤形であり得る。剤形としては、例えば、溶液剤（例えば、注射液及び注入液）、分散液剤又は懸濁液剤、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム剤、坐剤などの液体、半固体及び固体剤形が挙げられる。好ましい剤形は、意図する投与方法及び治療用途に応じて決まる。典型的な好ましい組成物は、他の抗体と一緒にヒトの受動免疫に使用される組成物に類似した組成物など、注射液又は注入液の剤形である。好ましい投与方法は非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。好ましい一実施形態においては、抗体を静脈内注入又は注射によって投与する。別の好ましい一実施形態においては、抗体を筋肉内又は皮下注射によって投与する。治療用組成物は、典型的には、製造及び貯蔵条件下で無菌かつ安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散物、リポソーム、又は高薬物濃度に適切な他の秩序構造（ｏｒｄｅｒｅｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）として処方することができる。無菌注射液は、必要量の活性化合物（すなわち、抗体又は抗体部分）を適切な溶媒中で上記成分の１種類又は組合せと混合し、必要に応じて、続いてろ過滅菌して調製することができる。一般に、分散物は、基本分散媒と上記成分から選択される他の必要成分とを含む無菌ビヒクル中に活性化合物を混合することによって調製される。無菌注射液を調製するための無菌凍結乾燥粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分と任意の所望の追加成分との粉末を、あらかじめ無菌ろ過したその溶液から生成する、真空乾燥及び噴霧乾燥である。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散物の場合には必要な粒径を維持することによって、また、界面活性剤を使用することによって、維持することができる。注射用組成物の吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸塩及びゼラチンを組成物に含めることによって延長することができる。
【０１９８】
本発明の抗体及び抗体部分は、当分野で公知である種々の方法によって投与することができるが、多くの治療用途では、好ましい経路／投与方法は皮下注射、静脈内注射又は注入である。当業者には明らかなように、投与の経路及び／又は方法は所望の結果に応じて変わる。ある実施形態においては、活性化合物は、移植片、皮膚貼付剤及びマイクロカプセル送達系を含めて、制御放出製剤などの急速放出に対して化合物を保護する担体と一緒に調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸などの生分解性生体適合性ポリマーを使用することができる。かかる製剤を調製する多数の方法が特許化され、又は当業者に一般に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｊ．Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９７８を参照されたい。
【０１９９】
ある実施形態においては、本発明の抗体又は抗体部分を、例えば、不活性希釈剤、又は同化可能な食用担体と一緒に、経口投与することができる。化合物（及び必要に応じて他の成分）は、硬又は軟ゼラチンカプセルに封入することもでき、圧縮して錠剤とすることもでき、又は対象の食事に直接混合することもできる。経口治療投与の場合、化合物は、賦形剤と一緒に混合することができ、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液剤、シロップ剤、ウェーハ剤などの剤形で使用することができる。本発明の化合物を非経口投与以外で投与するために、その不活性化を防止する材料で化合物を被覆することが必要な場合もあり、又はその不活性化を防止する材料と化合物を同時投与することが必要な場合もある。
【０２００】
補充の活性化合物を組成物に混合することもできる。ある実施形態においては、本発明の抗体又は抗体部分を、ＩＬ−１３活性が有害である障害の治療に有用である１種類以上の追加の治療薬と同時処方及び／又は同時投与する。例えば、本発明の抗ｈＩＬ−１３抗体又は抗体部分を、他の標的に結合する１種類以上の追加の抗体（例えば、他のサイトカインに結合する抗体、又は細胞表面分子に結合する抗体）と同時処方及び／又は同時投与することができる。また、本発明の１種類以上の抗体を上記治療薬の２種類以上と併用することもできる。かかる併用療法は、投与治療薬のより少ない投与量を有利に利用することができ、したがって種々の単独療法に付随して起こり得る毒性又は合併症を回避することができる。
【０２０１】
ある実施形態においては、ＩＬ−１３又はその断片に対する抗体は、当分野で公知の半減期延長ビヒクルと結合している。かかるビヒクルとしては、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコール及びデキストランが挙げられるが、これらだけに限定されない。かかるビヒクルは、例えば、参照により本明細書に組み入れる、米国特許出願第０９／４２８，０８２号及び国際公開第９９／２５０４４号に記載されている。
【０２０２】
特定の一実施形態においては、本発明の抗体又は発明の別の予防薬若しくは治療薬をコードするヌクレオチド配列を含む核酸配列を投与して、遺伝子療法として、障害又はその１つ以上の症候を治療、予防、管理又は改善する。遺伝子療法とは、発現される、又は発現可能な核酸を対象に投与することによって実施される療法を指す。本発明のこの実施形態においては、核酸は、核酸がコードする、予防又は治療効果を媒介する本発明の抗体、予防薬又は治療薬を生成する。
【０２０３】
当分野で利用可能な遺伝子療法のいずれでも、本発明に従って使用することができる。遺伝子療法の一般的総説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  １２：４８８−５０５；  Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，  １９９１，  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５；  Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，  １９９３，  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｏｘｉｃｏｌ．  ３２：５７３−５９６；  Ｍｕｌｌｉｇａｎ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２  （１９９３）、及びＭｏｒｇａｎ  ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，  １９９３，  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ６２：  １９１−２１７；  Ｍａｙ，  １９９３，  ＴＩＢＴＥＣＨ  １１（５）：  １５５−２１５を参照されたい。使用することができる組換えＤＮＡ技術の当分野で一般に公知の方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．），  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆Ｓｏｎｓ，  ＮＹ  （１９９３）、及びＫｒｉｅｇｌｅｒ，  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ  （１９９０）に記載されている。種々の遺伝子療法の詳細な説明は、参照により本明細書に組み入れる米国特許出願公開第２００５００４２６６４号Ａ１に開示されている。
【０２０４】
別の一態様においては、本願は、対象におけるＩＬ−１３関連障害を治療（例えば、治癒、抑制、改善、発症の遅延若しくは防止、又は回帰若しくは再発の防止）又は予防する方法を特徴とする。この方法は、ＩＬ−１３関連障害の治療又は予防に十分な量のＩＬ−１３結合剤（特に、拮抗物質）、例えば、本明細書に記載の抗ＩＬ−１３抗体又はその断片を対象に投与することを含む。ＩＬ−１３拮抗物質、例えば、抗ＩＬ−１３抗体又はその断片は、単独で、又は本明細書に記載の他の治療様式と組み合わせて、対象に投与することができる。
【０２０５】
一実施形態においては、対象は、１種類以上のＩＬ−１３関連障害（本明細書に記載の、例えば、呼吸器障害（例えば、ぜん息（例えば、アレルギー性及び非アレルギー性ぜん息）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気道炎症を伴う他の症状、好酸球増加症、線維症及び過剰粘液産生；アトピー性障害（例えば、アトピー性皮膚炎及びアレルギー性鼻炎）；皮膚、胃腸器官（例えば、潰よう性大腸炎及び／又はクローン病などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ））及び肝臓（例えば、硬変、線維症）の炎症性及び／又は自己免疫性症状；強皮症；腫よう又は癌、例えば、ホジキンリンパ腫）に罹患したほ乳動物、例えばヒトである。したがって、開示は、本明細書に記載の治療のためのＩＬ−１３結合剤（本明細書に記載の抗ＩＬ−１３抗体又はその断片など）の使用、及び本明細書に記載の治療用医薬品を調製するためのＩＬ−１３結合剤（本明細書に記載の抗ＩＬ−１３抗体又はその断片など）の使用を含む。
【０２０６】
ＩＬ−１３関連障害の例としては、本明細書に記載の、呼吸器障害、例えば、ぜん息（例えば、アレルギー性及び非アレルギー性ぜん息（例えば低年齢小児における、例えば呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）による、感染に起因するぜん息など））、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気道炎症を伴う他の症状、好酸球増加症、線維症及び過剰粘液産生、例えば、嚢胞性線維症及び肺線維症；例えばＩＬ−１３に対する感受性の増加に起因する、アトピー性障害（例えば、アトピー性皮膚炎、じんま疹、湿疹、アレルギー性鼻炎及びアレルギー性胃腸炎）；皮膚（例えば、アトピー性皮膚炎）、胃腸器官（例えば、潰よう性大腸炎及び／又はクローン病などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ））、肝臓（例えば、硬変、肝細胞癌）の炎症性及び／又は自己免疫性症状、及び強皮症；白血病、グリア芽細胞腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫）などの腫よう又は癌（例えば、軟部組織又は固形腫よう）；（例えば、ＨＴＬＶ−１による）ウイルス感染；他の器官の線維症、例えば、肝臓の線維症（例えば、Ｂ及び／又はＣ型肝炎ウイルスによって引き起こされる線維症）並びに（例えば、ワクチン接種中の）１型防御免疫応答の発現抑制のうちの１つ以上から選択される障害が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０２０７】
別の実施形態においては、本願は、呼吸器障害に関連する１つ以上の症候、例えば、ぜん息（例えば、アレルギー性及び非アレルギー性ぜん息）；アレルギー；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；気道炎症を伴う症状、好酸球増加症、線維症及び過剰粘液産生、例えば、嚢胞性線維症及び肺線維症を治療（例えば、低減、改善）又は予防する方法を提供する。例えば、ぜん息の症候としては、喘鳴音、呼吸促迫、気管支収縮、気道過敏、肺気量の減少、線維症、気道炎症、及び粘液産生が挙げられるが、これらだけに限定されない。この方法は、１つ以上の症候の治療（例えば、低減、改善）又は予防に十分な量のＩＬ−１３拮抗物質、例えば、ＩＬ−１３抗体又はその断片を対象に投与することを含む。ＩＬ−１３抗体は、治療的に、若しくは予防的に、又は治療と予防の両方で投与することができる。ＩＬ−１３拮抗物質、例えば、抗ＩＬ−１３抗体又はその断片は、単独で、又は本明細書に記載の他の治療様式と組み合わせて、対象に投与することができる。好ましくは、対象は、本明細書に記載のＩＬ−１３関連障害に罹患したほ乳動物、例えばヒトである。
【０２０８】
別の一態様においては、本願は、試料（例えば、血清、血しょう、組織、生検などの生物試料）中のＩＬ−１３の存在をインビトロで検出する方法を提供する。この方法は、障害、例えば、免疫細胞関連障害の診断に使用することができる。この方法は、（ｉ）試料又は対照試料を本明細書に記載の抗ＩＬ−１３抗体又はその断片と接触させること、及び（ｉｉ）抗ＩＬ−１３抗体又はその断片と試料又は対照試料との複合体の形成を検出することを含み、対照試料と比較して、試料中の複合体形成の統計的に有意な変化によって、試料中のＩＬ−１３の存在が示される。
【０２０９】
更に別の一態様においては、本願は、ＩＬ−１３の存在を生体内で検出する方法（例えば、対象における生体内イメージング）を提供する。この方法は、障害、例えば、ＩＬ−１３関連障害の診断に使用することができる。この方法は、（ｉ）本明細書に記載の抗ＩＬ−１３抗体又はその断片を、抗体又は断片とＩＬ−１３の結合を可能にする条件下で、対象又は対照対象に投与すること、及び（ｉｉ）抗体又は断片とＩＬ−１３の複合体の形成を検出することを含み、対照対象と比較して、対象における複合体形成の統計的に有意な変化によって、ＩＬ−１３の存在が示される。
【０２１０】
本発明の抗体又はその抗原結合性部分は、かかる疾患の治療に単独で、又は組み合わせて使用することができる。本発明の抗体又はその抗原結合性部分は、単独で、又は追加の薬剤（例えば、治療薬）と組み合わせて、使用できることを理解すべきである。追加の薬剤は、その意図する目的に合わせて、当業者によって選択される。例えば、追加の薬剤は、本発明の抗体によって治療される疾患又は症状の治療に有用であると当分野で認識されている治療薬であり得る。追加の薬剤は、治療用組成物に有益な特質を付与する薬剤、例えば、組成物に粘性をもたらす薬剤でもあり得る。
【０２１１】
さらに、本発明に包含される組合せは、その意図する目的に有用である組合せであることを理解すべきである。以下の薬剤は、説明のためのものであって、限定的なものではない。本発明の一部である組合せは、本発明の抗体と、下表から選択される少なくとも１種類の追加の薬剤であり得る。組合せは、形成される組成物がその意図した機能を果たすことができるような組合せである場合、１種類を超える追加の薬剤、例えば、２又は３種類の追加の薬剤も含み得る。
【０２１２】
併用療法は、本明細書に更に記載するように、１種類以上の追加の治療薬、例えば、１種類以上のサイトカイン及び成長因子阻害剤、免疫抑制薬、抗炎症薬（例えば、全身的抗炎症薬）、抗線維薬、代謝阻害剤、酵素阻害剤、及び／又は細胞傷害剤若しくは細胞分裂阻害剤と同時処方及び／又は同時投与される、１種類以上のＩＬ−１３拮抗物質、例えば抗ＩＬ−１３抗体又はその断片を含み得る。
【０２１３】
１種類以上のＩＬ−１３拮抗物質、例えば抗ＩＬ−１３抗体又はその断片と同時投与及び／又は同時処方することができる好ましい追加の治療薬の例としては、吸入ステロイド；ベータ作動物質、例えば、短時間作用性又は長時間作用性ベータ作動物質；ロイコトリエン又はロイコトリエン受容体の拮抗物質；ＡＤＶＡＩＲなどの複合薬；ＩｇＥ阻害剤、例えば、抗ＩｇＥ抗体（例えば、ＸＯＬＡＩＲ）；ホスホジエステラーゼ阻害薬（例えば、ＰＤＥ４阻害剤）；キサンチン；抗コリン作用薬；クロモリンなどの肥満細胞安定剤；ＩＬ−４阻害剤；ＩＬ−５阻害剤；エオタキシン／ＣＣＲ３阻害剤；ヒスタミン又はＨ１、Ｈ２、Ｈ３及びＨ４を含めたその受容体の拮抗物質、並びにプロスタグランジンＤ又はその受容体（ＤＰ１及びＣＲＴＨ２）の拮抗物質、の１つ以上が挙げられるが、これらだけに限定されない。かかる組合せは、ぜん息及び他の呼吸器障害の治療に使用することができる。１種類以上の抗ＩＬ−１３抗体又はその断片と同時投与及び／又は同時処方することができる治療薬の追加の例としては、とりわけ、ＴＮＦ拮抗物質（例えば、ＴＮＦ受容体（例えば、ｐ５５若しくはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体又はその誘導体）の可溶性断片、例えば、７５ｋＤ  ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ））；ＴＮＦ酵素拮抗物質、例えば、ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤；ムスカリン受容体拮抗物質；ＴＧＦベータ拮抗物質；インターフェロンガンマ；ピルフェニドン；化学療法剤、例えば、メトトレキサート、レフルノミド若しくはシロリムス（ラパマイシン）又はその類似体、例えば、ＣＣＩ−７７９；ＣＯＸ２及びｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；免疫調節物質；ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２、ＭＫ−２及びＮＦｋＢ阻害剤、の１つ以上が挙げられる。
【０２１４】
他の好ましい組合せは、サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）、他のヒトサイトカイン又は成長因子（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−３１、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ及びエンドセリン（ｅｄｏｔｈｅｌｉｎ）−１）、並びにこれらのサイトカイン及び成長因子の受容体に対する抗体又は拮抗物質である。本発明の抗体又はその抗原結合性部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡ、又はＣＤ１５４（ｇｐ３９又はＣＤ４０Ｌ）を含めたこれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることができる。
【０２１５】
治療薬の好ましい組合せは、炎症カスケードの異なるポイントにおいて干渉し得る。好ましい例としては、キメラ、ヒト化又はヒトＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（国際公開第９７／２９１３１号）、ＣＡ２（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））、ＣＤＰ  ５７１、及び可溶性ｐ５５又はｐ７５  ＴＮＦ受容体、その誘導体（ｐ７５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））又はｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）のようなＴＮＦ拮抗物質、並びにＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤が挙げられる。同様に、ＩＬ−１阻害剤（インターロイキン１変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡなど）も同じ理由で有効であり得る。他の好ましい組合せとしては、インターロイキン４が挙げられる。更に別の好ましい組合せは、ＩＬ−１３機能と並行して、ＩＬ−１３機能に依存して、又はＩＬ−１３機能と協調して作用し得る、ぜん息反応の別の重要なプレーヤーである。ＩＬ−９抗体を含むＩＬ−９拮抗物質は特に好ましい。ＩＬ−１３とＩＬ−９は、重複するが、別個の機能を有し、ＩＬ−１３とＩＬ−９の両方に対する拮抗物質の組合せが最も有効であり得ることが判明した。更に別の好ましい組合せは、抗ＩＬ−５抗体である。更に別の好ましい組合せとしては、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−４、エオタキシン、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＤＣ、ＣＣＬ−１２及びＣＣＬ−１７（ＴＡＲＣ）を含めたケモカインの拮抗物質、並びにＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４及びＣＸＣＲ４を含めたケモカイン受容体の拮抗物質が挙げられる。更に別の組合せとしては、ほ乳類酸性キチナーゼ、ＣＲＨＴ２、キマーゼ、Ｓ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ２、Ｔｙｋ２、ＲＯＣＫＩＩ、Ｓｔａｔ６、ｐ３８、ＮＦｋＢ、ホスホジエステラーゼ４（ＰＤＥ−４）、肥満細胞トリプターゼ（ｔｒｙｔａｓｅ）、ＮＯ、アデノシン、ＩＫＫ２、ＧＡＴＡ３、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１及びＩＣＯＳを含めたぜん息媒介物質に対する拮抗物質が挙げられる。
【０２１６】
本発明の薬剤組成物は、本発明の抗体又は抗体部分の「治療有効量」又は「予防有効量」を含み得る。「治療有効量」とは、必要な投与量及び期間で、所望の治療成果を得るのに有効な量を指す。抗体又は抗体部分の治療有効量は、当業者が決定することができ、個体の病態、年齢、性別及び体重、抗体又は抗体部分が個体において所望の応答を誘発する能力などの要因に応じて変わり得る。治療有効量は、抗体又は抗体部分の任意の毒性効果又は有害効果よりも治療上有益な効果がまさる量でもある。「予防有効量」とは、必要な投与量及び期間で、所望の予防成果を得るのに有効な量を指す。典型的には、予防投与量は疾患前又は初期に対象に使用されるので、予防有効量は治療有効量よりも少ない。
【０２１７】
投与計画は、所望の最適応答（例えば、治療反応又は予防反応）が得られるように調節することができる。例えば、単一ボーラスを投与することができ、幾つかの分割用量をある期間にわたって投与することができ、又は投与量を治療状況の緊急性に比例して増減することができる。投与を容易にし、投与量を均一にするために、非経口組成物を単位用量形態で処方することが特に有利である。本明細書では単位用量形態とは、治療すべきほ乳動物対象に対する単位投与量として適切な物理的に分離した単位を指す。各単位は、必要な薬剤担体と伴に、所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物を含む。本発明の単位用量形態の仕様は、（ａ）活性化合物特有の特性、及び達成すべき特定の治療又は予防効果と、（ｂ）個体における感受性の処置のためにかかる活性化合物を配合する技術に固有の制約とに従い、かつ直接左右される。
【０２１８】
本発明の抗体又は抗体部分の治療又は予防有効量の例示的な非限定的範囲は、０．１−２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１−１０ｍｇ／ｋｇである。投与量は、軽減すべき症状のタイプ及び重症度とともに変わり得ることに留意されたい。さらに、任意特定の対象に対して、具体的投与計画は、個々の必要性、及び組成物の投与者又は投与管理者の専門的判断に従って、経時的に調節すべきであり、本明細書に記載する投与量範囲は単なる例示にすぎず、特許請求の範囲に記載の組成物の範囲又は実施を限定するものではないことを理解されたい。
【０２１９】
本明細書に記載する本発明の方法の他の適切な改変及び手直しは、自明であり、本発明の範囲、又は本明細書に開示する実施形態から逸脱することなく、適切な均等物を用いて実施できることは、当業者に容易に理解できるはずである。本発明を詳細に記述したが、本発明は、以下の実施例を参照することによってより明確に理解されるはずである。以下の実施例は、単なる説明のためのものにすぎず、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０２２０】
（実施例１）
抗ヒトＩＬ−１３モノクローナル抗体の生成及び単離
（実施例１．１）
抗ヒトＩＬ−１３抗体を特定するアッセイ
別段の記載がない限り、実施例１を通して、以下のアッセイによって、抗ヒトＩＬ−１３抗体を特定し、特徴づけた。
【０２２１】
（実施例１．１．Ａ）
ＥＬＩＳＡ
ヒトＩＬ−１３に結合する抗体をスクリーニングする酵素結合免疫吸着検定法を以下のように実施した。
【０２２２】
ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ、Ａｃｔｏｎ、ＭＡ）を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の５μｇ／ｍｌヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ特異的（Ｐｉｅｒｃｅ＃  ３１１７０、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ．）５０μＬ／ウェルで終夜４℃で被覆した。０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳでプレートを１回洗浄した。ＰＢＳで２％に希釈されたブロッキング溶液（ＢｉｏＲａｄ  ＃１７０−６４０４、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ．）２００μＬ／ウェルを室温で１時間添加して、プレートをブロックした。ブロッキング後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳでプレートを１回洗浄した。
【０２２３】
０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＰＢＳで希釈されたマウス血清又はハイブリドーマ上清（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ．）５０マイクロリットル／ウェルを、上述したように調製したＥＬＩＳＡプレートに添加し、室温で１時間温置した。０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳでウェルを３回洗浄した。０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳで１００ｎｇ／ｍＬに希釈されたビオチン化組換え精製ヒトＩＬ−１３変種（Ｒ１１０Ｑ）５０マイクロリットルを各ウェルに添加し、室温で１時間温置した。０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳでプレートを３回洗浄した。ストレプトアビジンＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃  ２１１２６、Ｒｏｃｋｌａｎｄ、ＩＬ．）を０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳで１：２００００希釈した。５０μＬ／ウェルを添加し、プレートを室温で１時間温置した。０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳでプレートを３回洗浄した。ＴＭＢ溶液（Ｓｉｇｍａ  ＃  Ｔ０４４０、Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ．）５０マイクロリットルを各ウェルに添加し、室温で１０分間温置した。１Ｎ硫酸を添加して反応を停止した。プレートを波長４５０ｎｍで分光光度的に読み取った。
【０２２４】
（実施例１．１．Ｂ）
ＢＩＡＣＯＲＥ技術による親和性測定
ＢＩＡＣＯＲＥアッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅ，  Ｉｎｃ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）は、オン、オフ速度定数の動力学的測定によって抗体の親和性を測定する。抗体と組換え精製ヒトＩＬ−１３又は組換え精製ヒトＩＬ−１３変種（Ｒ１１０Ｑ）との結合を、ランニングＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ［ｐＨ７．４］、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ及び０．００５％界面活性剤Ｐ２０）を用いたＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）３０００装置（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて、表面プラズモン共鳴測定によって２５℃で求めた。すべての化学物質をＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）又は本明細書に記載の別の供給源から得た。１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）で希釈されたヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃγ）断片特異的ポリクローナル抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）約５０００ＲＵを、標準アミンカップリングキットを製造者の指示及び手順に従って用いて、２５μｇ／ｍｌでＣＭ５研究等級バイオセンサーチップ全体に直接固定した。バイオセンサー表面の未反応部分をエタノールアミンでブロックした。フローセル２及び４における改変カルボキシメチルデキストラン表面を反応表面として用いた。フローセル１及び３におけるヤギ抗マウスＩｇＧを含まない非改変カルボキシメチルデキストランを基準表面として用いた。動力学的分析のために、１：１ラングミュア結合モデルから誘導された速度式を、Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ４．０．１ソフトウェアを用いて（全体的一致（ｇｌｏｂａｌ  ｆｉｔ）分析によって）全８回の注射の会合及び解離段階に同時にあてはめた。ヤギ抗マウスＩｇＧ特異的反応表面全体で捕捉するために、精製抗体をＨＥＰＥＳ緩衝食塩水で希釈した。リガンドとして捕捉するマウス抗体（２５μｇ／ｍｌ）を反応基質の上に流量５μｌ／ｍｉｎで注入した。会合及び解離速度定数Ｋｏｎ（単位Ｍ−１ｓ−１）及びＫｏｆｆ（単位ｓ−１）を連続流量２５μｌ／ｍｉｎで求めた。速度定数は、１０−２００ｎＭの範囲の１０個の異なる抗原濃度で動力学的結合測定によって導出された。次いで、マウス抗体と組換え精製ヒトＩＬ−１３又は組換え精製ヒトＩＬ−１３との反応の平衡解離定数（単位Ｍ）を、動力学的速度定数から式ＫＤ＝Ｋｏｆｆ／ｋｏｎによって計算した。結合を時間の関数として記録し、動力学的速度定数を計算する。このアッセイでは、１０６Ｍ−１ｓ−１と高いオン速度及び１０−６ｓ−１と低いオン速度を測定することができる。
【０２２５】
（実施例１．１．Ｃ）
抗ヒトＩＬ−１３抗体の機能活性
本発明の抗ヒトＩＬ−１３抗体の機能活性を調べるために、抗体のＩＬ−１３活性阻害能力を測定する以下のアッセイに抗体を使用した。
【０２２６】
（実施例１．１．Ｃ１）
Ａ−５４９バイオアッセイ
Ａ−５４９細胞によるＴＡＲＣ（ＣＣＬ−１７）のヒトＩＬ−１３誘導性産生を抑制する抗ヒトＩＬ−１３抗体の能力を以下のように分析した。１日目にＡ−５４９細胞を９６ウェルプレート（２Ｅ５細胞／ウェル）の（１０％ＦＢＳを含む）ＲＰＭＩ増殖培地に蒔いた。２日目に、４００ｎｇ／ｍｌ  ｒｈＴＮＦ（１００μｌ／ウェル）を含む新しいＲＰＭＩ増殖培地で培地を置換した。一方、種々の濃度の免疫マウス血清、ネズミハイブリドーマ上清又は精製抗ヒトＩＬ−１３抗体を、１０ｎｇ／ｍｌ組換え精製ヒトＩＬ−１３又はＩＬ−１３変種と一緒に、マイクロタイタープレート（Ｕ底、９６ウェル、Ｃｏｓｔａｒ）中のＲＰＭＩ完全培地１００μＬ中で３７℃で１時間前温置した。次いで、抗体と組換え精製ヒトＩＬ−１３の混合物を、ＴＮＦで処理したＡ−５４９細胞に添加し（１００μｌ／ウェル）、最終体積を２００μｌ／ウェルとし（最終ＩＬ−１３及びＴＮＦ濃度は、それぞれ５ｎｇ／ｍｌ及び２００ｎｇ／ｍｌであった。）、３７℃で１８時間温置した。温置後、無細胞上清１５０μＬを各ウェルから抜き取り、産生されたヒトＴＡＲＣのレベルをヒトＴＡＲＣ  ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃａｔ＃ＤＤＮ００）によって測定した。
【０２２７】
Ａ−５４９細胞は、カニクイザル、マウス、ラット及びヒツジを含めた他の種のＩＬ−１３にも、ヒトＩＬ−１３のＥＤ５０値と類似したＥＤ５０値で応答する。したがって、Ａ−５４９細胞を、同じ実験手順によって、他の種のＩＬ−１３に対する抗ｈＩＬ−１３  ｍＡｂの交差反応性分析に使用した。
【０２２８】
（実施例１．２）
抗ヒトＩＬ−１３モノクローナル抗体の生成
抗ヒトＩＬ−１３マウスモノクローナル抗体を以下のように得た。
【０２２９】
（実施例１．２．Ａ）
ヒトＩＬ−１３抗原によるマウスの免疫化
１日目に、完全フロイントアジュバント又はＩｍｍｕｎｏｅａｓｙアジュバント（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）と混合された組換え精製ヒトＩＬ−１３変種（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）２０マイクログラムを５匹の６−８週齢Ｂａｌｂ／Ｃ、５匹のＣ５７Ｂ／６マウス、及び５匹のＡＪマウスに皮下注射した。２４、３８及び４９日目に、不完全フロイントアジュバント又はＩｍｍｕｎｏｅａｓｙアジュバントと混合された組換え精製ヒトＩＬ−１３変種２０マイクログラムを同じマウスに皮下注射した。８４、１１２又は１４４日目に、マウスに組換え精製ヒトＩＬ−１３変種１ｕｇを静脈内注射した。
【０２３０】
（実施例１．２．Ｂ）
ハイブリドーマの作製
実施例１．２．Ａに記載の免疫マウスから得られたひ細胞を、Ｋｏｈｌｅｒ，  Ｇ．  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  １９７５，  Ｎａｔｕｒｅ，  ２５６：４９５に記載の確立された方法に従ってＳＰ２／Ｏ−Ａｇ−１４細胞と５：１の比で融合して、ハイブリドーマを作製した。融合生成物を、９６ウェルプレート中のアザセリン及びヒポキサンチンを含む選択培地に２．５×１０６ひ臓細胞／ウェルの密度で蒔いた。融合から７から１０日後、巨視的なハイブリドーマコロニーが観察された。ハイブリドーマコロニーを含む各ウェルの上清を、（実施例１．１．Ａに記載のように）ＩＬ−１３変種に対する抗体の存在についてＥＬＩＳＡによって試験した。次いで、ＩＬ−１３変種特異的活性を示す上清を、（実施例１．１．Ｃに記載のように）ＩＬ−１３変種及びＩＬ−１３野生型を中和する能力についてＴＡＲＣのＡ−５４９バイオアッセイによって試験した。
【０２３１】
（実施例１．２．Ｃ）
抗ヒトＩＬ−１３モノクローナル抗体の特定及び特性分析
実施例１．２．Ｂ及び１．２．Ｃに従って作製した、ＩＬ−１３変種に結合する抗体を産生するハイブリドーマ、及びＩＬ−１３変種に特異的に結合可能な抗体を産生するハイブリドーマ、特にＡ−５４９バイオアッセイにおいて５ｎＭ又は５ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する抗体を産生するハイブリドーマを限界希釈によってスケールアップし、クローン化した。
【０２３２】
ハイブリドーマ細胞を１０％低ＩｇＧウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ  ＃ＳＨ３０１５１、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ．）を含む培地に拡大した。Ｈａｒｌｏｗ，  Ｅ．  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，  Ｄ．  １９８８  ”Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”に記載のように、平均して、（クローン集団から得られる）各ハイブリドーマ上清２５０ｍＬを収集し、濃縮し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。精製ｍＡｂのＩＬ−１３活性阻害能力を、実施例１．１．Ｃに記載のようにＡ−５４９バイオアッセイによって求めた。表７に、Ａ−５４９バイオアッセイから得られた、１７種類のモノクローナル抗体のＩＣ５０値を示す。
【０２３３】
【表８】
2014237671.tif 000022
【０２３４】
組換え精製ヒトＩＬ−１３変種及び野生型に対するモノクローナル抗体の結合親和性を、実施例１．１．Ｂに記載のように、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））測定によって求めた。表８に、ヒトＩＬ−１３に対する１８種類の上記モノクローナル抗体の親和性を示す。
【０２３５】
【表９】
2014237671.tif 000023
【０２３６】
（実施例１．２．Ｃ．１）
ネズミモノクローナル抗ヒトＩＬ−１３抗体の種特異性
１７種類の上記モノクローナル抗体がネズミＩＬ−１３を認識するかどうかを判定するために、ＥＬＩＳＡプレートを５ｕｇ／ｍｌヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｆｃ断片特異抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃  ３１１７０、Ｒｏｃｋｌａｎｄ、ＩＬ）で被覆することによって間接的ＥＬＩＳＡを準備した。ネズミ抗ヒトＩＬ−１３  ｍＡｂを、０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳ中で０．１から１００ｎｇ／ｍｌの範囲の種々の濃度で調製した。各抗体希釈物５０ｕｌを被覆ＥＬＩＳＡプレートに添加し、室温で１時間温置した。０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳでウェルを３回洗浄した。組換えビオチン化マウスＩＬ−１３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳで０．１ｕｇ／ｍｌに希釈した。５０ｕＬ／ウェルを添加し、プレートを室温で１時間温置した。０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳでウェルを３回洗浄した。ストレプトアビジンＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃  ２１１２６、Ｒｏｃｋｌａｎｄ、ＩＬ．）を０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳで１：２００００希釈した。５０ｍＬ／ウェルを添加し、プレートを室温で１時間温置した。０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳでプレートを３回洗浄した。ＴＭＢ溶液（Ｓｉｇｍａ  ＃  Ｔ０４４０、Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ．）５０マイクロリットルを各ウェルに添加し、室温で１０分間温置した。１Ｎ硫酸を添加して反応を停止した。プレートを波長４５０ｎｍで分光光度的に読み取った。間接的ＥＬＩＳＡの結果によれば、ｍＡｂ  ３Ｈ７はｍＩＬ−１３に結合することができた。その後のバイオアッセイにおいて、３Ｈ７は、ｍＩＬ−１３によって刺激されるＴＡＲＣ産生を２．４ｎＭのＩＣ５０で用量依存的に阻害できることが判明した。Ｂｉａｃｏｒｅ分析によっても、ｍＩＬ−１３に対して３Ｈ７が１２ｎＭのＫＤで陽性結合することが実証された。表８の他のｍＡｂはすべて、マウスＩＬ−１３に対して陽性結合を示さなかった。
【０２３７】
非ヒト霊長類（カニクイザル）ＩＬ−１３及びヒツジＩＬ−１３に対する抗ｈＩＬ−１３  ｍＡｂの中和効力もＡ−５４８バイオアッセイにおいて測定した。カニクイザル及びヒツジＩＬ−１３を作製するために、各タンパク質のｃＤＮＡを、ヒトＩＬ−１３配列に基づく縮重プライマーを用いてゲノムＤＮＡ鋳型上でＰＣＲによって得た。続いて、組換えカニクイザル及びヒツジＩＬ−１３タンパク質を、一過性導入されたＣＯＳ細胞中で発現させた。すべての機能試験において、野生型ヒトＩＬ−１３も対照として並行して作製した。Ａ−５４９細胞は、カニクイザルとヒツジの両方のＩＬ−１３に対して、ヒトＩＬ−１３に類似したＥＤ５０で応答した。ｍＡｂの大部分は、カニクイザルＩＬ−１３の活性を中和し、カニクイザルＩＬ−１３に対して交差反応性を示した（表７）。しかし、どの抗体もヒツジＩＬ−１３を有意には中和しなかった。
【０２３８】
（実施例１．２．Ｃ．２）
ネズミモノクローナル抗ヒトＩＬ−１３抗体は、ＩＬ−１３受容体（ＩＬ−１３Ｒα１及びＩＬ−１３Ｒα２）に対するＩＬ−１３の結合を阻止する。
【０２３９】
ＩＬ−１３活性は、ＩＬ−１３Ｒα１鎖とＩＬ−４Ｒα鎖とからなる受容体複合体によって媒介される。サイトカインは、まず、細胞表面でＩＬ−１３Ｒα１と比較的低親和性の相互作用をする。次いで、ＩＬ−１３／ＩＬ−１３Ｒα１複合体は、ＩＬ−４Ｒαを動員して、完全ＩＬ−１３受容体を形成する。完全ＩＬ−１３受容体は、そのリガンド（ＩＬ−１３）と高親和性で結合する（Ｚｕｒａｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １２：２６６３；  Ｚｕｒａｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０：２３８６９）。次いで、ＩＬ−１３と高親和性受容体の結合は、ヤヌスキナーゼ−シグナル伝達性転写因子（ＪＡＫ−ＳＴＡＴ）経路を含むＩＬ−４Ｒα鎖を介して、例えば、ＩＬ−１３に対する最も早い細胞応答の１つとしてモニターすることができるＳＴＡＴ６のリン酸化によって、下流にシグナルを送る（Ｍｕｒａｔａ  ｅｔ  ａｌ．、上掲）。
【０２４０】
ＩＬ−１３に高親和性（０．２５−１．２ｎＭ）で結合する別のＩＬ−１３結合受容体であるＩＬ−１３Ｒα２鎖（ＩＬ−１３Ｒａ２）がある（Ｃａｐｕｔ，  ｅｔ  ａｌ  １９９６  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７１，  １６９２１−１６９２６；  Ｄｏｎａｌｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ  １９９８  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６１，  ２３１７−２３２４）。ＩＬ−１３／ＩＬ−１３Ｒα２複合体に関与する他の受容体分子は知られていない。ＩＬ−１３Ｒα２は、非シグナル伝達「おとり」受容体として作用すると当初は考えられた。しかし、ＩＬ−１３Ｒα２は、ＩＬ−１３に結合し得、ＡＰ−１経路を介してシグナル伝達し、マクロファージを含めたある細胞タイプにおいてＴＧＦベータ産生をもたらし、ＴＧＦベータ産生は肺線維症をもたらすことがその後に発見された（Ｆｉｃｈｔｎｅｒ−Ｆｅｉｇｌ，  ２００６  Ｎａｔ  Ｍｅｄ  １２：９９−１０６）。したがって、ＩＬ−１３Ｒα１／ＩＬ−４Ｒ複合体とＩＬ−１３Ｒα２の両方の経路は、ぜん息及び他のＩＬ−１３媒介性疾患の病態生理全般の一因になる。エピトープマッピング、受容体結合アッセイ、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、更にＢＩＡＣＯＲＥ分析などの幾つかの手法を用いて、本発明の抗ＩＬ−１３抗体とヒトＩＬ−１３の相互作用を解明した。
【０２４１】
上記モノクローナル抗体が、ＩＬ−１３受容体（ＩＬ−１３Ｒα１及びＩＬ−１３Ｒα２）に対するＩＬ−１３の結合を阻止することができるかどうかを判定するために、受容体結合ＥＬＩＳＡを以下のように開発した。高結合性９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、コーティング緩衝剤（炭酸塩−炭酸水素塩緩衝剤、Ｐｉｅｒｃｅ）１００ｕｌ／ウェル中の４ｕｇ／ｍｌ組換えＩＬ−１３Ｒα１／Ｆｃ又はＩＬ−１３Ｒα２／Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で４℃で被覆した。１６時間後、プレート内容物を流しにはじき落とすことによってコーティング溶液を除去し、プレートを洗浄し、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（２４０ｕｌ／ウェル）（Ｐｉｅｒｃｅ）で４回ブロックした。抗ＩＬ１３  ｍＡｂ（４０ｕｇ／ｍｌから１：４段階希釈、５０ｕｌ／ウェル）及びビオチン−ＩＬ−１３（５０ｕｌ／ウェル、ｈＩＬ−１３Ｒα１／Ｆｃの最終濃度５ｎＭ、及びｈＩＬ−１３Ｒα２／Ｆｃの最終濃度０．５ｎＭ）を添加し、室温（ＲＴ）で２時間温置した。プレートを０．１％ＰＢＳＴ  ３００ｕｌで５回洗浄し、次いで１：５０００希釈されたマウス抗ビオチンＭＡｂ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）１００ｕｌを添加し、室温で４５分間温置した。プレートを０．１％ＰＢＳＴ  ３００ｕｌで再度５回洗浄し、続いてＴＭＢ基質試薬（１００ｕｌ／ウェル、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を添加し、５分間発色させ、２Ｍ  Ｈ２ＳＯ４（ＶＷＲ）５０ｕｌを添加して停止した。４５０ｎｍのＯＤを分光測光法によって測定した。
【０２４２】
さらに、ｍＡｂの受容体遮断性も、ＩＬ−１３Ｒα２を移入したＣＯＳ細胞を用いた受容体結合アッセイによって評価した。以前に記述された（Ｏｂｉｒｉ  ＮＩ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９５）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２７０：８７９７−８８０４）ＩＯＤＯ−ＧＥＮ試薬（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を用いて、組換えヒトＩＬ−１３を１２５Ｉ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ  Ｈｅｉｇｈｔｓ、ＩＬ）で標識した。放射性標識ＩＬ−１３の比活性は、１５８μＣｉ／μｇタンパク質と推定された。標識ＩＬ−１３は、Ａ−５４９バイオアッセイで評価して、非標識ＩＬ−１３と類似した生理活性を示した。結合実験では、ＣＯＳ細胞にＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によってヒトＩＬ−１３Ｒα２を一過性導入し、４８時間温置した。形質移入されたＣＯＳ細胞（結合緩衝剤１００μＬ中５×１０５細胞：０．２％ヒト血清アルブミン及び１０ｍｍｏｌ  ＨＥＰＥＳを含むＲＰＭＩ  １６４０）を、１ｕＭ非標識ＩＬ−１３を含む、又は含まない、１．０ｎＭ  １２５Ｉ−ＩＬ−１３と一緒に４℃で２時間温置した。細胞に結合した１２５Ｉ−ＩＬ−１３を、フタル酸エステル油勾配の遠心分離によって、結合していない１２５Ｉ−ＩＬ−１３から分離し、放射能をガンマ線計数器（Ｗａｌｌａｃ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）によって測定した。抗体置換（ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ）アッセイでは、形質移入されたＣＯＳ細胞を、上述したように、漸増濃度（最高５０ｕｇ／ｍｌ）の抗ＩＬ−１３抗体を含む、又は含まない、１２５Ｉ−ＩＬ−１３（１．０ｎＭ）と一緒に温置した。両方の形態の受容体結合アッセイによって以下のことが実証された。第１に、１３Ｃ５及び９Ｃ１１はＩＬ−１３Ｒα１に対するＩＬ−１３の結合を阻止した。第２に、１３Ｃ５は、ＩＬ−１３Ｒα２に対するＩＬ−１３の結合を強く阻止したが（細胞表面ＲＢＡとＲＢ  ＥＬＩＳＡの両方においてＩＣ５０約１−３ｎＭ）、９Ｃ１１はＩＬ−１３Ｒα２のＩＬ−１３結合をより低い効力（ＩＣ５０＞１０ｎＭ）で阻止した。第３に、５Ｇ１及び３Ｅ５は、ＩＬ−１３Ｒα１とＩＬ−１３Ｒα２のどちらに対してもＩＬ−１３の結合を阻止しなかった。３種類の他の抗ＩＬ−１３抗体、ＢＡＫ５０２Ｇ９（ＣＡＴ  国際公開第２００５／００７６９９号）、ｍＡｂ１３．２（Ｗｙｅｔｈ  国際公開第２００５／１２３１２６号Ａ２）及びＭＪ２−７（Ｗｙｅｔｈ国際公開第２００６／００７３１４８号Ａ１）についても、受容体結合ＥＬＩＳＡと細胞表面ＲＢＡの両方で、ヒトＩＬ−１３Ｒα２に対するヒトＩＬ−１３の結合を阻止する能力を分析した。抗体ｍＡｂ１３．２は、ＩＬ−１３Ｒα１とＩＬ−１３Ｒα２のどちらに対してもＩＬ−１３の結合を阻止しなかった。ＢＡＫ５０２Ｇ９及びＭＪ２−７は、ＩＬ−１３Ｒα１に対するＩＬ−１３の結合を阻止することができた。しかし、ＢＡＫ５０２Ｇ９及びＭＪ２−７は、ＩＬ−１３Ｒα２に対するＩＬ−１３の結合を阻止する効力が低く、抗体濃度は最高５０μｇ／ｍｌ（３３０ｎＭ）であった。
【０２４３】
抗ＩＬ−１３  ｍＡｂの存在下でＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１／α２の相互作用もＢＩＡＣＯＲＥによって分析した。この分析を幾つかの形式で行った。第１に、ＩＬ−１３Ｒα１／ＦｃをＢｉａｃｏｒｅチップに結合させ、抗ＩＬ−１３  ｍＡｂの存在下及び非存在下で、ＩＬ−１３をチップ上に流した。とりわけ、ＭＡｂ  １３Ｃ５及び９Ｃ１１は、ＩＬ−１３Ｒα１に対するＩＬ−１３の結合を阻止することができたが、５Ｇ１及び３Ｅ５は、ＩＬ−１３Ｒα１に対するＩＬ−１３結合を阻止せず、受容体結合アッセイと一致した。第２に、ＩＬ−４ＲをＢＩＡＣＯＲＥチップに結合させ、ＩＬ−１３Ｒα１に前もって結合したＩＬ−１３の複合体をチップ上に流した。抗ＩＬ−１３  ｍＡｂの非存在下で、３分子複合体の形成が実証された。しかし、ＩＬ−１３Ｒα１に前もって結合したＩＬ−１３の混合物に抗ＩＬ−１３抗体５Ｇ１を添加すると、チップ上のＩＬ−４Ｒに対する結合が阻止された。これは、５Ｇ１が、ＩＬ−１３Ｒα１に対してはＩＬ−１３の結合を阻止することができなかったが、ＩＬ−４Ｒに対してはＩＬ−１３の結合を阻止することができたことを示しており、そのＩＬ−１３中和活性機構の根拠を与えるものである。これらの知見をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって更に確認した。すなわち、５Ｇ１ではヘテロ３量体複合体（ｍＡｂ−ＩＬ−１３−ＩＬ−１３Ｒα１／Ｆｃ）が観察されたが、１３Ｃ５では観察されなかった。ｍＡｂ−ＩＬ−１３複合体のプロテイナーゼプロセシングを利用したその後のエピトープマッピング研究と、それに続く質量分析によって以下のことが示された。第１に、５Ｇ１は、Ｎ末端１１−ａａペプチド（ＧＰＶＰＰＳＴＡＬＲＥ）を含むＩＬ−１３残基に結合して、ＩＬ−４Ｒと相互作用することが判明したヘリックスＡ領域の一部を覆う（Ｍｏｙ  ｅｔ  ａｌ  ２００１Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ３１０：２１９及びＨｏｒｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００１）  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ３１０：２３１）。第２に、抗体９Ｃ１１は、ヘリックスＣとヘリックスＤの間の領域（ＶＳＡＧＱＦＳＳＬＨＶＲ）と相互作用する。第３に、抗体１３Ｃ５は、ヘリックスＤを覆う領域を含むＩＬ−１３残基と相互作用する（配列番号１のアミノ酸１０４−１３０に対応するＶＲＤＴＫ  ＩＥＶＡＱ  ＦＶＫＤＬ  ＬＬＨＬＫ  ＫＬＦＲＥ  ＧＲ）。ヘリックスＤは、ＩＬ−１３受容体と相互作用することが判明した（Ｍｏｙ  ｅｔ  ａｌ  ２００１Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ３１０：２１９、Ｈｏｒｉｔａ  ｅｔ  ａｌ  ２００１  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ３１０：２３１、及びＭａｄｈａｎｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ  ２００２  ＪＢＣ  ２７７：４３１９４）。１３Ｃ５は、カニクイザルＩＬ−１３（ＫＤ＝１８００ｐＭ）よりもはるかに強くヒトＩＬ−１３変種（ＫＤ＝５０ｐＭ）に結合するので、また、この潜在的１３Ｃ５エピトープ領域内のヒトＩＬ−１３変種とカニクイザルＩＬ−１３の配列差は、１２０位がヒトではＬであるが、カニクイザルＩＬ−１３ではＶであるにすぎないので、本発明者らはＶ１２０Ｌ変異カニクイザルＩＬ−１３を作製し、この変異体が１３Ｃ５に対して野生型カニクイザルＩＬ−１３よりも高い結合親和性を有するかどうか試験した。Ｂ���ａｃｏｒｅ及びバイオアッセイ結果に基づいて、Ｖ１２０Ｌ変異カニクイザルＩＬ−１３の場合の１３Ｃ５の結合親和性及び中和効力は、野生型カニクイザルＩＬ−１３の場合と同等であり、Ｃ末端領域内の１２０位のこのＶ／Ｌ差がヒトＩＬ−１３変種とカニクイザルＩＬ−１３の１３Ｃ５親和性の差の一因ではなく、ヒトとカニクイザルＩＬ−１３に対する１３Ｃ５の結合親和性の差の一因となる他の残基がＣ末端領域外にあるにちがいないことを示している。これは、１３Ｃ５がウエスタンブロット分析によって変性ヒトＩＬ−１３を認識しないという知見と一致し、ヒトＩＬ−１３上の１３Ｃ５の結合エピトープが高度に立体配置的（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ）であることを示している。
【０２４４】
結合及びエピトープマッピング研究によれば、５Ｇ１は、ＩＬ−１３とＩＬ−１３Ｒα１の相互作用を阻害しなかったが、ＩＬ−１３／ＩＬ−１３Ｒα１とＩＬ−４Ｒαの相互作用を妨害した。この妨害は、機能的ＩＬ−１３シグナル伝達複合体の形成を妨げると考えられる。これらの知見は、Ａ−５４９細胞など、ＩＬ−１３Ｒα１／ＩＬ−４Ｒによって媒介される系において、この抗体の中和活性に対する理論的モデルを与える。これに対し、１３Ｃ５は、ＩＬ−１３Ｒα１とＩＬ−１３Ｒα２の両方に対するＩＬ−１３の結合を阻止した。興味深いことに、９Ｃ１１は、ＩＬ−１３Ｒα１に対するＩＬ−１３の結合を阻止することができたが、ＩＬ−１３Ｒα２に対するＩＬ−１３の結合を部分的に（又は低効力で）しか阻止しなかった。ＩＬ−１３Ｒα１とＲα２は、類似した３次元折りたたみ及びＩＬ−１３結合配向をとるが、配列相同性が低く、したがってＩＬ−１３結合の原因である特異的残基が異なり得る（Ａｒｉｍａ  ２００５  ＪＢＣ  ２８０：２４９１５、及びＭａｄｈａｎｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ  ２００２  ＪＢＣ  ２７７：４３１９４）。その結果、ＩＬ−１３Ｒα１とＩＬ−１３Ｒα２に結合するＩＬ−１３上の特異的残基が異なり得る。これは、９Ｃ１１の差異のある受容体遮断性を説明し得るものである。
【０２４５】
上記受容体結合アッセイ、エピトープマッピング、Ｂｉａｃｏｒｅ及びバイオアッセイは総合して、中和抗ＩＬ−１３抗体がＩＬ−１３関連活性を以下の機序によって阻害し得ることを示している。
【０２４６】
１）ＩＬ−１３Ｒα１とＩＬ−１３Ｒα２の両方に対する受容体結合に関与する領域においてＩＬ−１３と相互作用することによって、ＩＬ−１３Ｒα１とＩＬ−１３Ｒα２の両方に対するＩＬ−１３の結合を阻止する。かかる抗体の例は１３Ｃ５である。かかる抗体は、ＩＬ−１３Ｒα１／ＩＬ−４Ｒ複合体とＩＬ−１３Ｒα２の両方を介したＩＬ−１３シグナル伝達を阻害する。
【０２４７】
２）ＩＬ−１３Ｒα１とＩＬ−１３Ｒα２のどちらに対してもＩＬ−１３の結合を阻止しない。しかし、抗体は、ＩＬ−４受容体との相互作用を阻害し、したがって、ＩＬ−１３Ｒα１／ＩＬ−４Ｒ複合体を介したＩＬ−１３シグナル伝達を阻害する。かかる抗体は、ＩＬ−１３Ｒα２シグナル伝達を阻害しない可能性がある。かかる抗体の例は５Ｇ１及びｍＡｂ１３．２（Ｗｙｅｔｈ  国際公開第２００５／１２３１２６号）である。
【０２４８】
３）ＩＬ−１３Ｒα１に対するＩＬ−１３の結合を阻止するが、ＩＬ−１３Ｒα２に対するＩＬ−１３の結合を効果的に阻止しない。これは以下の理由によって生じ得る。ａ）エピトープ：ＩＬ−１３Ｒα１結合に関与するが、ＩＬ−１３Ｒａ２結合に関与しない、又はＩＬ−１３Ｒα２結合に強くは関与しない、領域。例は９Ｃ１１である。ｂ）親和性：ＩＬ−１３Ｒα２は、ＩＬ−１３に対してＩＬ−１３Ｒα１よりもはるかに高い親和性を有するので、低親和性抗体は、治療抗体の生理的濃度で、ＩＬ−１３α１に対するＩＬ−１３の結合を阻止し得るが、ＩＬ−１３Ｒα２に対しては阻止し得ない。例はＢＡＫ５０２Ｇ９である。ＢＡＫ５０２Ｇ９は、Ｂｉａｃｏｒｅによって評価して、組換え野生型ヒトＩＬ−１３に対して２．１１ｎＭの親和性を示した（ＣＡＴ  国際公開第２００５／００７６９９号）。別の例はＭＪ２−７である。ＭＪ２−７は、Ｂｉａｃｏｒｅによって評価して、組換え野生型ヒトＩＬ−１３に対して１．４ｎＭの親和性を示し、サルＩＬ−１３に対してより高い親和性（４３ｐＭ）を示した（Ｗｙｅｔｈ  国際公開第２００６／００７３１４８号Ａ１）。この親和性の相違のために、このｍＡｂは、ＩＬ−１３Ｒα２に対するサルＩＬ−１３の結合を有効に阻止し得るが、同じ受容体に対するヒトＩＬ−１３の結合を、はるかに低い効力でしか阻止しない。
【０２４９】
ｍＡｂ  ＢＡＫ５０２Ｇ９とＭＪ２−７は、類似したエピトープ（ＣＡＴ  国際公開第２００５／００７６９９号及びＷｙｅｔｈ  国際公開第２００６／００７３１４８号Ａ１）を有し、競合ＥＬＩＳＡによって評価して、ＩＬ−１３に対する結合を競合する。手短に述べると、ＢＡＫ５０２Ｇ９をＥＬＩＳＡプレートに固定し、続いて洗浄し、ブロックした。次いで、ビオチン化ヒトＩＬ−１３（１０ｎｇ／ｍｌ）を、種々の濃度のＭＪ２−７（０．２ｎｇ／ｍｌから２０ｕｇ／ｍｌ）の存在下でプレートに添加し、続いて洗浄し、ＨＲＰ複合化抗ビオチン抗体を用いて検出した。この試験によれば、ＭＪ２−７は、ヒトＩＬ−１３に対する結合をＢＡＫ５０２Ｇ９と用量依存的に競合した。負の対照ＩｇＧは、ＢＡＫ５０２Ｇ９と競合しなかった。
【０２５０】
（実施例１．２．Ｄ）
各ネズミ抗ヒトＩＬ−１３  ｍＡｂの可変領域のアミノ酸配列の決定
各アミノ酸配列を決定するために、約１０×１０６個のハイブリドーマ細胞を遠心分離によって単離し、処理して、Ｔｒｉｚｏｌ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ．）を製造者の指示に従って用いて全ＲＮＡを単離した。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を製造者の指示に従って用いて、全ＲＮＡを第１鎖ＤＮＡ合成に供した。オリゴ（ｄＴ）を用いて、第１鎖合成を準備して（ｐｒｉｍｅ）、ポリ（Ａ）＋ＲＮＡを選択した。次いで、ネズミ免疫グロブリン可変領域の増幅用に設計されたプライマー（Ｉｇ−Ｐｒｉｍｅｒ  Ｓｅｔｓ、Ｎｏｖａｇｅｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を用いたＰＣＲによって、第１鎖ｃＤＮＡ産物を増幅した。ＰＣＲ産物をアガロースゲル上で分離し、切り出し、精製し、次いでＴＯＰＯ  Ｃｌｏｎｉｎｇキットを用いてｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）にサブクローニングし、ＴＯＰ１０  ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ  Ｅ．  ｃｏｌｉ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）に転換した。形質転換体のコロニーＰＣＲを実施して、挿入断片を含むクローンを特定した。ＱＩＡｐｒｅｐ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を用いて、挿入断片を含むクローンからプラスミドＤＮＡを単離した。プラスミド中の挿入断片を、Ｍ１３フォワードプライマー及びＭ１３リバースプライマー（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｈａｎｏｖｅｒ  ＭＤ）を用いて、両方の鎖上で配列決定して、可変重鎖又は可変軽鎖ＤＮＡ配列を決定した。実施例１．２．Ｃに記載した１７種類のモノクローナル抗体の可変重鎖及び可変軽鎖配列を表５に示す。
【０２５１】
（実施例２）
組換え抗ヒトＩＬ−１３抗体
（実施例２．１）
組換えキメラ抗ヒトＩＬ−１３抗体の構築及び発現
ネズミ抗ヒトＩＬ−１３モノクローナル抗体５Ｇ１、１３Ｃ５、９Ｃ１１、２１Ｄ９及び３Ｈ７の重鎖定常領域をコードするＤＮＡを、細菌中で相同組換えによって、２つのヒンジ領域アミノ酸変異を含むヒトＩｇＧ１定常領域をコードするｃＤＮＡ断片で置換した。これらの変異は、２３４位（ＥＵ付番）におけるロイシンからアラニンへの変化、及び２３５位におけるロイシンからアラニンへの変化である（Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １４７：２６５７）。これらの抗体の各々の軽鎖定常領域をヒトカッパ定常領域で置換した。ｐＢＯＳ発現プラスミドに連結されたキメラ重鎖及び軽鎖ｃＤＮＡの同時形質移入によって、完全長キメラ抗体をＣＯＳ細胞中で一過性に発現させた（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ  ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９９０，  Ｖｏｌ  １８，  ｐｇ  ５３２２）。組換えキメラ抗体を含む細胞上清を、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅクロマトグラフィーによって精製し、結合した抗体を、酸緩衝剤を添加して溶出させた。抗体を中和し、ＰＢＳで透析した。
【０２５２】
次いで、精製キメラ抗ヒトＩＬ−１３モノクローナル抗体を、実施例１．１．Ｃ２及び１．１．Ｃ３に記載のように、Ａ−５４９細胞によるＴＡＲＣのＩＬ−１３誘導性産生を抑制する能力について試験した。表１２に、Ａ−５４９バイオアッセイから得られた、３種類のキメラ抗体のＩＣ５０値を示す。
【０２５３】
【表１０】
2014237671.tif 000024
【０２５４】
（実施例２．２）
ヒト化抗ヒトＩＬ−１３抗体の構築及び発現
（実施例２．２．１）
ヒト抗体フレームワークの選択
（表３に記載の）各ネズミ可変重鎖及び可変軽鎖遺伝子配列を、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩソフトウェアを用いて、（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｇｂｌａｓｔ／ｒｅｔｒｉｅｖｅｉｇ．ｈｔｍｌのＮＣＢＩ  Ｉｇ  Ｂｌａｓｔウェブサイトから得られた）４４個のヒト免疫グロブリン生殖系列可変重鎖、又は４６個の生殖系列可変軽鎖配列に対して別々に整列させた。
【０２５５】
ヒト化は、アミノ酸配列相同性、ＣＤＲクラスター分析、発現されるヒト抗体間の使用頻度、及びヒト抗体の結晶構造に関する利用可能な情報に基づいた。抗体結合、ＶＨ−ＶＬ対形成、及び他の要因に対する可能な効果を考慮して、ネズミ残基をヒト残基に変異させた。ネズミとヒトのフレームワーク残基は、少数の例外を除いて、異なる。別のヒト化戦略を、ネズミ抗体可変領域の実際のアミノ酸配列に高度の相同性、すなわち、配列類似性を有するヒト生殖系列抗体配列又はそのサブグループの分析に基づいて設計した。
【０２５６】
相同性モデリングを用いて、抗体結合部位（ＣＤＲ）の構造に重要であると予測される、ネズミ抗体配列に特有の残基を特定した。相同性モデリングは、近似の三次元座標がタンパク質に対して生成される計算方法である。最初の座標、及びその更なる改良のためのガイダンスの出所は、三次元座標が既知であり、その配列が第１のタンパク質の配列に関連する、基準タンパク質の第２のタンパク質である。２種類のタンパク質の配列間の関係を使用して、基準タンパク質と、座標が所望とされるタンパク質、すなわち標的タンパク質とを対応させる。基準及び標的タンパク質の各一次配列を、基準タンパク質から標的タンパク質に直接転移される、２種類のタンパク質の同一部分の座標と整列させる。例えば、残基の変異、挿入又は欠失に起因する、２種類のタンパク質のミスマッチ部分の座標を、既に移行されたモデル座標との一貫性を確保するために改良された一般構造テンプレート及びエネルギーから構築する。この計算によるタンパク質構造は、更に改良することができ、又はモデリング研究に直接使用することができる。モデル構造の品質が、基準及び標的タンパク質が関連する競合（ｃｏｎｔｅｎｔｉｏｎ）の確度、並びに配列アラインメントが構築される精度によって決まることは、この記述から明白であるはずである。
【０２５７】
ネズミ配列５Ｇ１、１３Ｃ５及び９Ｃ１１の場合、ＢＬＡＳＴ検索と目視検査の組合せを用いて、適切な基準構造を特定した。基準と標的アミノ酸配列の２５％の配列相同性は、相同性モデリング演習を試みるのに最低限必要であると考えられる。配列アラインメントを手作業で構築し、モデル座標をプログラムＪａｃｋａｌを用いて生成した（Ｐｅｔｒｅｙ，  Ｄ．，  Ｘｉａｎｇ，  Ｚ．，  Ｔａｎｇ，  Ｃ．Ｌ．，  Ｘｉｅ，  Ｌ．，  Ｇｉｍｐｅｌｅｖ，  Ｍ．，  Ｍｉｔｒｏｓ，  Ｔ．，  Ｓｏｔｏ，  Ｃ．Ｓ．，  Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ−Ｆｉｓｃｈｍａｎ，  Ｓ．，  Ｋｅｒｎｙｔｓｋｙ，  Ａ．，  Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ，  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２００３．  Ｕｓｉｎｇ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ，  ｆａｓｔ  ｍｏｄｅｌ  ｂｕｉｌｄｉｎｇ，  ａｎｄ  ｅｎｅｒｇｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｆｏｌｄ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ．  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ５３  （Ｓｕｐｐｌ．  ６）：４３０−４３５参照）。
【０２５８】
選択された抗体のネズミとヒトフレームワーク領域の一次配列は、かなりの同一性を共有する。異なる残基位置は、ネズミ抗体の観察された結合効力を保持するために、ヒト化配列にネズミ残基を含めるための候補である。ヒトとネズミ配列で異なるフレームワーク残基のリストを手作業で作成した。
【０２５９】
所与のフレームワーク残基が抗体の結合性に影響を及ぼす可能性は、ＣＤＲ残基に対するその近接によって決まる。したがって、モデル構造を用いて、ネズミとヒト配列で異なる残基を、ＣＤＲ中の任意の原子からの距離に応じて順位付けした。任意のＣＤＲ原子の４．５Å以内にある残基は、最も重要とみなされ、ヒト化抗体においてネズミ残基を保持するための候補であることが推奨された（すなわち復帰変異）。
【０２６０】
５Ｇ１可変領域のヒト化の場合、本発明で提供する一般的手法に従った。まず、５Ｇ１可変領域の分子モデルを、コンピュータープログラムＡＢＭＯＤ及びＥＮＣＡＤを用いて構築した（Ｌｅｖｉｔｔ，  Ｍ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １６８：５９５−６２０（１９８３））。次に、ヒトＶ及びＪセグメント配列に対する相同性検索に基づいて、ＶＨセグメント２１／２８（Ｄｅｒｓｉｍｏｎｉａｎ，  Ｈ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３９：  ２４９６−２５０１（１９８７））及びＪセグメントＪＨ４（Ｒａｖｅｔｃｈ，  Ｊ．Ｖ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ  ２７：  ５８３−５９１（１９８１））を選択して、Ｈｕ５Ｇ１重鎖可変領域にフレームワークを設けた。５Ｇ１軽鎖可変領域の場合、ＶＬセグメントＨＦ−２１／２８（Ｃｈａｓｔａｇｎｅｒ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅ  １０１：  ３０５−３０６（１９９１））及びＪセグメントＪＫ４（Ｈｉｅｔｅｒ，  Ｐ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２５７：  １５１６−１５２２（１９８２））を使用した。５Ｇ１  ＶＨと受容体ヒト２１／２８及びＪＨ４セグメントとのフレームワークアミノ酸の同一性は７２％であり、５Ｇ１  ＶＬと受容体ヒトＨＦ２１／２８及びＪＫ４セグメントとの同一性は８３％であった。ＣＤＲとの有意な接触をコンピューターモデルが示唆したフレームワーク位置において、最初のヒトフレームワークアミノ酸をマウスＶ領域由来のアミノ酸で置換した。これは重鎖の残基４８、６７、６８、７０、７２、７４及び９７でなされた。軽鎖の場合、置換は残基５０でなされた。対応するヒトＶ領域サブグループ中のそれぞれの位置においてまれにしか存在しないフレームワーク残基を、該位置においてヒトコンセンサスアミノ酸で置換した。これは、重鎖の残基４４及び７６、並びに軽鎖の残基２、１５、４１、４２、４４及び５１においてなされた。
【０２６１】
１３Ｃ５可変領域のヒト化のために、本発明で提供する一般的手法に従った。まず、１３Ｃ５可変領域の分子モデルを、コンピュータープログラムＡＢＭＯＤ及びＥＮＣＡＤを用いて構築した（Ｌｅｖｉｔｔ，  Ｍ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １６８：５９５−６２０（１９８３））。次に、ヒトＶ及びＪセグメント配列に対する相同性検索に基づいて、ＶＨセグメントＭ６０（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ，  Ｊｒ．，  Ｈ．Ｗ．  ａｎｄ  Ｗａｎｇ，  Ｊ．  Ｙ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８７：  ６１４６−６１５０  （１９９０））及びＪセグメントＪＨ４（Ｒａｖｅｔｃｈ，  Ｊ．Ｖ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ  ２７：  ５８３−５９１（１９９０））を選択して、Ｈｕ１３Ｃ５重鎖可変領域にフレームワークを設けた。Ｈｕ１３Ｃ５軽鎖可変領域の場合、ＶＬセグメントＩＩＩ−３Ｒ（Ｍａｎｈｅｉｍｅｒ−Ｌｏｒｙ，  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １７４：  １６３９−１６５２（１９９１））及びＪセグメントＪＫ４（Ｈｉｅｔｅｒ，  Ｐ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２５７：  １５１６−１５２２（１９８２））を使用した。１３Ｃ５  ＶＨと受容体ヒトＭ６０及びＪＨ４セグメントとのフレームワークアミノ酸の同一性は７４％であり、１３Ｃ５  ＶＬと受容体ヒトＩＩＩ−３Ｒ及びＪＫ４セグメントとの同一性は７５％であった。
【０２６２】
ＣＤＲとの有意な接触をコンピューターモデルが示唆したフレームワーク位置において、最初のヒトフレームワークアミノ酸をマウスＶ領域由来のアミノ酸で置換した。これは、軽鎖の残基２２、４９及び７１においてなされた。対応するヒトＶ領域サブグループ中のそれぞれの位置においてまれにしか存在しないフレームワーク残基を、該位置においてヒトコンセンサスアミノ酸で置換した。これは、重鎖の残基１０、４６、８３、８４、８６及び８７、並びに軽鎖の残基６２及び７３においてなされた。
【０２６３】
ヒト化ｍＡｂのＶＬ及びＶＨのアミノ酸配列を表１０に示す。
【０２６４】
【表１１】
2014237671.tif 000025
2014237671.tif 000026
2014237671.tif 000027
【０２６５】
（実施例２．２．２）
ヒト化抗体の構築
コンピューターで構築された上記ヒト化抗体を、オリゴヌクレオチドを用いて新規に構築した。各可変領域ｃＤＮＡの場合、各６０−８０ヌクレオチドの６個のオリゴヌクレオチドを、各オリゴヌクレオチドの５’及び／又は３’末端において互いに２０ヌクレオチド重複するように設計した。アニーリング反応においては、全６個のオリゴを組み合わせ、沸騰させ、ｄＮＴＰの存在下でアニールした。次いで、ＤＮＡポリメラーゼＩ、Ｌａｒｇｅ（クレノー）断片（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ  ＃Ｍ０２１０、Ｂｅｖｅｒｌｅｙ、ＭＡ．）を添加して、重複オリゴヌクレオチド間の約４０ｂｐの間隙を埋めた。次いで、改変ｐＢＯＳベクター中のマルチクローニング部位に相補的である突出配列を含む２個の最外側プライマーを用いてＰＣＲを実施して、可変領域遺伝子全体を増幅した（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ，  Ｓ．  ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ，  Ｓ．，  （１９９０）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ  １８，  Ｎｏ．１７））。各ｃＤＮＡの組立てから誘導されるＰＣＲ産物をアガロースゲル上で分離し、予測される可変領域ｃＤＮＡサイズに対応するバンドを切り出し、精製した。細菌中で相同組換えによって、２つのヒンジ領域アミノ酸変異を含むヒトＩｇＧ１定常領域をコードするｃＤＮＡ断片に、可変重鎖領域をインフレームで挿入した。これらの変異は、２３４位（ＥＵ付番）におけるロイシンからアラニンへの変化、及び２３５位におけるロイシンからアラニンへの変化である（Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １４７：２６５７）。可変軽鎖領域を、相同組換えによって、ヒトカッパ定常領域と一緒にインフレームで挿入した。細菌コロニーを単離し、プラスミドＤＮＡを抽出し、ｃＤＮＡ挿入断片全体の配列を決定した。各抗体に対応する正確なヒト化重鎖及び軽鎖をＣＯＳ細胞に同時移入して、完全長ヒト化抗ヒトＩＬ−１３抗体を一過性に産生した。１３Ｃ５の場合、１３Ｃ５重鎖にグラフトしたｃＤＮＡ及び１３Ｃ５軽鎖にグラフトしたｃＤＮＡを含むｐＢＯＳベクターをＣＯＳ細胞に同時移入した。組換えキメラ抗体を含む細胞上清を、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅクロマトグラフィーによって精製し、結合した抗体を、酸緩衝剤を添加して溶出させた。抗体を中和し、ＰＢＳで透析した。幾つかのヒト化抗体を表１０に示す。
【０２６６】
精製ヒト化抗体のＩＬ−１３活性阻害能力を、実施例１．１．Ｃに記載のようにＡ−５４９バイオアッセイによって求めた。組換えヒトＩＬ−１３に対するヒト化抗体の結合親和性を、実施例１．１．Ｂに記載のように、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））測定によって求めた。表１１にＡ−５４９バイオアッセイから得られたＩＣ５０値、並びに表１０に記載した最初の６種類のヒト化抗体のヒトＩＬ−１３ｗｔ及び変種に対する親和性を示す。
【０２６７】
【表１２】
2014237671.tif 000028
【０２６８】
ヒト化抗体１３Ｃ５．５のＣＤＲ配列を当分野で公知の技術によって更に変異させ、３種類の追加のヒト化抗体を作製した。これらの追加のヒト化抗体がヒト、カニクイザル及びアカゲザルＩＬ−１３活性を阻害する能力を、実施例１．１．Ｃに記載のようにＡ−５４９バイオアッセイによって求めた。組換えヒト、カニクイザル及びアカゲザルＩＬ−１３に対する追加のヒト化抗体の結合親和性を、実施例１．１．Ｂに記載のように、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））測定によって求めた。ヒトＩＬ−１３の結合及び阻害に加えて、これら３種類の追加の抗体は、カニクイザル及びアカゲザルＩＬ−１３に対して高い親和性を示した。表１２に、Ａ−５４９バイオアッセイから得られたＩＣ５０値を示す。表１３に、ヒト、カニクイザル及びアカゲザルＩＬ−１３に対する追加のヒト化抗体の親和性を示す。
【０２６９】
【表１３】
2014237671.tif 000029
【０２７０】
【表１４】
2014237671.tif 000030
【０２７１】
（実施例２．２．３）
ヒト化抗ＩＬ−１３抗体の特性分析
本発明者らは、ＩＬ−１３Ｒα１とＩＬ−１３Ｒα２の両方に対するＩＬ−１３の結合を阻止する単離モノクローナル抗体を有する。ＥＬＩＳＡに基づく受容体結合アッセイと細胞表面の１２５Ｉ標識ＩＬ−１３結合アッセイの両方によって、ネズミバージョンとヒト化バージョン（すなわち１３Ｃ５．５）の両方の１３Ｃ５は、両方の受容体に対するＩＬ−１３の結合を有効に阻止できることが実証された。２５Ｃ８及び３３Ｃ３を含めて、１３Ｃ５と同じ系列の抗体も、両方の受容体に対するＩＬ−１３の結合を阻止することができた。
【０２７２】
（実施例２．２．３．ａ）
ヒト化抗ＩＬ−１３抗体は、ＩＬ−１３受容体に対するＩＬ−１３の結合を阻止する。
【０２７３】
ヒト化抗体１３Ｃ５．５がＩＬ−１３受容体（ＩＬ−１３Ｒα１及びＩＬ−１３Ｒα２）に対するＩＬ−１３の結合を阻止する能力を求めるために、ＥＬＩＳＡに基づく受容体結合アッセイを使用した。高結合性９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、コーティング緩衝剤（炭酸塩−炭酸水素塩緩衝剤、Ｐｉｅｒｃｅ）１００ｕｌ／ウェル中の４ｕｇ／ｍｌ組換えヒトＩＬ−１３Ｒａ１／Ｆｃ又はＩＬ−１３Ｒａ２／Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で４℃で被覆した。１６時間後、プレート内容物を流しにはじき落とすことによってコーティング溶液を除去し、プレートを洗浄し、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（２４０ｕｌ／ウェル）（Ｐｉｅｒｃｅ）で４回ブロックした。ヒト化抗ＩＬ−１３  ｍＡｂ  １３ｃ５．５、対照ｍＡｂ（４０ｕｇ／ｍｌから１：４段階希釈、５０ｕｌ／ウェル）及びビオチン−ＩＬ−１３（５０ｕｌ／ウェル、ｈＩＬ−１３Ｒａ１／Ｆｃの最終濃度５ｎＭ、及びｈＩＬ−１３Ｒａ２／Ｆｃの最終濃度０．５ｎＭ）を添加し、室温（ＲＴ）で２時間温置した。プレートを０．１％ＰＢＳＴ  ３００ｕｌで５回洗浄し、次いで１：５０００希釈されたマウス抗ビオチンＭＡｂ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）１００ｕｌを添加し、室温で４５分間温置した。プレートを０．１％ＰＢＳＴ  ３００ｕｌで再度５回洗浄し、続いてＴＭＢ基質試薬（１００ｕｌ／ウェル、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を添加し、５分間発色させ、２Ｍ  Ｈ２ＳＯ４（ＶＷＲ）５０ｕｌを添加して停止した。４５０ｎｍのＯＤを分光測光法によって測定した。結果を表１４に示す。
【０２７４】
さらに、ヒト化ｍＡｂの受容体遮断性も、ＩＬ−１３Ｒα２を移入したＣＯＳ細胞を用いた、細胞表面に基づく受容体結合アッセイによって評価した。以前に記述された（Ｏｂｉｒｉ  ＮＩ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９５）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２７０：８７９７−８８０４）ＩＯＤＯ−ＧＥＮ試薬（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を用いて、組換えヒトＩＬ−１３を１２５Ｉ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ  Ｈｅｉｇｈｔｓ、ＩＬ）で標識した。放射性標識ＩＬ−１３の比活性は、１５８μＣｉ／μｇタンパク質と推定された。標識ＩＬ−１３は、Ａ−５４９バイオアッセイで評価して、非標識ＩＬ−１３と類似した生理活性を示した。結合実験では、ＣＯＳ細胞にＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によってヒトＩＬ−１３Ｒａ２を一過性導入し、４８時間温置した。移入されたＣＯＳ細胞（結合緩衝剤１００μＬ中５×１０５細胞：０．２％ヒト血清アルブミン及び１０ｍｍｏｌ  ＨＥＰＥＳを含むＲＰＭＩ  １６４０）を、１ｕＭ非標識ＩＬ−１３を含む、又は含まない、１．０ｎＭ  １２５Ｉ−ＩＬ−１３と一緒に４℃で２時間温置した。細胞に結合した１２５Ｉ−ＩＬ−１３を、フタル酸エステル油勾配の遠心分離によって、結合していない１２５Ｉ−ＩＬ−１３から分離し、放射能をガンマ線計数器（Ｗａｌｌａｃ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）によって測定した。抗体置換アッセイでは、形質移入されたＣＯＳ細胞を、上述したように、漸増濃度（最高５０ｕｇ／ｍｌ）のヒト化抗ＩＬ−１３抗体１３Ｃ５．５を含む、又は含まない、１２５Ｉ−ＩＬ−１３（１．０ｎＭ）と一緒に温置した。結果を表１４に示す。
【０２７５】
【表１５】
2014237671.tif 000031
Ｐ．Ｂ．  ５０％阻害に達しない部分的遮断
【０２７６】
表１５に、ヒト化１３Ｃ５．５抗体及び他の抗ＩＬ−１３抗体の結合親和性を示す。
【０２７７】
【表１６】
2014237671.tif 000032
【０２７８】
細胞表面に基づく受容体結合アッセイとＥＬＩＳＡに基づく受容体結合アッセイの両方において、１３Ｃ５．５は、ヒトＩＬ−１３Ｒα２に対するヒトＩＬ−１３の結合を阻止する高い効力を示し、ＩＣ５０は１から３ｎＭであった。ＢＡＫ５０２Ｇ９とＭＪ２−７のどちらも結合シグナルを低下させることができたが、少なくとも部分的にはヒトｗｔ  ＩＬ−１３（表１５参照）に対する低親和性のために、その効力は１３Ｃ５．５よりもはるかに低かった（表１４参照）。ＭＡｂ１３．２は、ＩＬ−１３Ｒａ２に対するＩＬ−１３の結合を阻止することができ、そのエピトープと一致した。また、１３Ｃ５．５は、両方のアッセイにおいて１００ｎＭ（又は１５ｕｇ／ｍｌ）の濃度で１００％阻害を達成することができた。同じ濃度において、ＢＡＫ５０２Ｇ９及びＭＪ２−７は、細胞表面に基づく受容体結合アッセイにおいて、それぞれわずか４０％及び７０％の阻害しか示さず、ＥＬＩＳＡに基づく受容体結合アッセイにおいて、どちらもわずか６０％の阻害しか示さなかった。
【０２７９】
ヒトにおいて１０から２０日の血清中半減期を有する治療用ｍＡｂの場合、血清中濃度は、通常は５−１５ｕｇ／ｍｌであり、毎週又は隔週のＩＶ又はＳＣ  ３ｍｐｋ以下の投与計画である。この計算に基づくと、１３Ｃ５．５は、従来のモノクローナル抗体投与計画下で、血清中濃度１００ｎＭ（又は１５ｕｇ／ｍｌ）で、治療用ｍＡｂとして生体内でＩＬ−１３Ｒα２に対するヒトＩＬ−１３の結合を完全に（１００％）阻止する可能性がある現在唯一の抗ＩＬ−１３  ｍＡｂである。
【０２８０】
（実施例２．２．３．ｂ）
ＩＬ−１３上の特異的エピトープへの抗ＩＬ−１３抗体の結合
抗ＩＬ−１３  ｍＡｂ  １３Ｃ５、１３Ｃ５．５、９Ｃ１１及び５Ｇ１が結合するヒトＩＬ−１３上のエピトープの地図を、エピトープ切除技術、続いて質量分析法（ＭＳ）によるペプチド分析を用いて作成した。エピトープ切除においては、タンパク質をまず固定化ｍＡｂに結合させ、次いでタンパク質分解酵素で消化した。タンパク質上のエピトープ領域をＭＳ及びＭＳ／ＭＳを用いて決定して、エピトープ含有ペプチドを特定した。ＣＮＢｒ活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、１０ｍｇ／反応）を０．１Ｍ  ＨＣｌ  ５００ｕＬに懸濁させ、１５分間平衡にした。ビーズを小型反応カラム（ＵＳＢ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に移し、０．１Ｍ  ＨＣｌ、続いて０．１Ｍ  ＮａＨＣＯ３カップリング緩衝剤で洗浄した。ｍＡｂ（１００ｕｇ）を懸濁液に添加し、ゆっくり回転させながら室温で２時間温置した。共有結合したｍＡｂを有するビーズをｐＨ約８．０の０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝剤で洗浄した。ｐＨ約８．０の０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝剤と一緒に２時間温置することによって、ＣＮＢｒ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅビーズ上の未反応基をブロックした。ｐＨの異なる２種類の緩衝剤、すなわち、１）ｐＨ約４．０の０．１Ｍ酢酸Ｎａ、０．５Ｍ  ＮａＣｌ緩衝剤、及び２）ｐＨ約８．０の０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．５Ｍ  ＮａＣｌ緩衝剤で連続洗浄して、脱離したｍＡｂを除去した。ビーズをＰＢＳ  約０．１４Ｍ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、４．３ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１．５ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．２中で平衡にし、ＩＬ−１３と一緒に、又はＩＬ−１３なしで、室温で２時間温置した。ビーズをｐＨ約７．２のＰＢＳで洗浄後、一定分量の懸濁液をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析用に取り出した。
【０２８１】
親和性結合したタンパク質を異なるプロテアーゼ（１：１００−１：２０の酵素：基質比）で１２時間消化した。使用したプロテアーゼは、トリプシン、ＧｌｕＣ、キモトリプシン、カルボキシペプチダーゼＹ、アミノペプチダーゼＭなどであった。タンパク質分解後、ビーズを消化緩衝剤５００ｕＬで洗浄した。最後の洗浄液１００ｕＬを対照として保存した。２％ＴＦＡ約１００ｕＬをビーズに添加し、収集した。対照と酸洗浄液の両方をまず約２０ｕＬに減圧濃縮した。次いで、Ｃ１８  ｚｉｐｔｉｐを用いてペプチドを脱塩した。Ｖｏｙａｇｅｒ  ＤＥ又はＶｏｙａｇｅｒ  ＤＥ−Ｐｒｏシステムを用いて、ＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ  ＭＳによって試料を分析した。Ｓｃｉｅｘ  Ｑ−Ｓｔａｒ  Ｐｕｌｓａｒ  ｉ  ＭＳシステムに接続されたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ＨＰＬＣシステムを用いて、ｎａｎｏ−ＥＳＩ−ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる分析を実施した。
【０２８２】
１３Ｃ５のエピトープの試験においては、連続して使用した２種類のプロテアーゼが最良の結果を与えた。キモトリプシンを用いて、配列番号１のアミノ酸残基１００−１３０からなる主要なペプチドが検出され、このペプチドがエピトープを含み得ることが示された。配列番号１のアミノ酸残基１０３−１３０及び１０４−１３０の少量のペプチドも検出された。キモトリプシン消化後に、アミノペプチダーゼＭを使用した。検出された主要なペプチドは、配列番号１のアミノ酸残基１０４−１３０であり、４個のＮ末端アミノ酸残基（８０−８３）がエピトープの一部ではないことが示唆された。カルボキシペプチダーゼＹで更に消化すると、親和性が低下した。消化及び洗浄後に、ペプチドは観察されなかった。すべてのペプチド配列をｎａｎｏ−ＥＳＩ−ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって確認した。
【０２８３】
１３Ｃ５及び１３Ｃ５．５のエピトープマッピングによれば、その結合部位は、ヒトＩＬ−１３のＣ末端ヘリックスＤ領域（配列番号１のアミノ酸１０４−１３０に対応する残基ＶＲＤＴＫ  ＩＥＶＡＱ  ＦＶＫＤＬ  ＬＬ  ＨＬＫ  ＫＬＦＲＥ  ＧＲ）を含んだ。Ｃ末端ヘリックスＤ領域は、ＩＬ−１３受容体との相互作用に関与すると提唱された（Ｚｕｅｇｇ  ｅｔ  ａｌ  ２００１  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ７９：３３２−９）。
【０２８４】
（実施例２．３）
ＩＬ−１３と複合化された抗ＩＬ−１３の結晶化
１３Ｃ５．５のＦａｂ部分は、ヒトＩＬ−１３と複合体を形成し、複合体の結晶は、以下のように生成した。
【０２８５】
（実施例２．３．１）
１３Ｃ５．５  Ｆａｂ断片の調製及び精製
１３Ｃ５．５  Ｆａｂ断片を調製するために、Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−１５  Ｂｉｏｍａｘ  １０ｋＤａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）遠心ろ過装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて、０．１５Ｍ  ＰＢＳ緩衝剤中の１３Ｃ５．５  ＩｇＧを２ｍｇ／ｍｌにまず濃縮した。パパインゲルスラリー（Ｐｉｅｒｃｅ）を予洗し、緩衝剤Ａ（２０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、２０ｍＭシステイン）を体積比１：１で用いて、２−３Ｘで充填した。次いで、濃縮抗体を５０％パパインゲルスラリーと混合し、激しく振とうしながら３７℃で２４時間温置した。抗体／スラリー混合物を遠心分離し（Ｂｅｃｋｍａｎ  ６ＫＲ）、ＰＢＳであらかじめ平衡にしたＳｕｐｅｒｄｅｘ  ７５に上清を充填した。主要なピークが溶出し、タンパク質をプールした。２５ｍＬ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗアフィニティーカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ）をＰＢＳ  １００ｍＬで洗浄して準備した。プールした抗体断片をアフィニティーカラム（流量２ｍＬ／ｍｉｎ）にかけた。（２８０ｎｍのＵＶ吸光度によってモニターされた）１３Ｃ５．５  Ｆａｂ断片を含む画分をフロースルー（ｆｌｏｗ−ｔｈｒｕ）に収集した。（２８０ｎｍのＵＶ吸光度によって測定して）０．３ｍｇ／ｍＬよりも高い１３Ｃ５．５  Ｆａｂ断片濃度を含む画分をプールし、−８０℃で凍結させた。試料純度をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって評価した。
【０２８６】
（実施例２．３．２）
ＩＬ−１３／１３Ｃ５．５  Ｆａｂ複合体の調製
組換えヒトＩＬ−１３をほ乳動物発現系で発現させ、続いて当分野で周知の技術を用いて精製した。組換えヒトＩＬ−１３と１３Ｃ５．５  Ｆａｂタンパク質をモル比１：１で混合し、４℃で１時間温置した。複合体試料を、あらかじめ平衡にした（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００カラムに０．５ｍｌ／ｍｉｎで充填した。複合体をプールし、Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−１５  Ｂｉｏｍａｘ  １０ｋＤａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）遠心ろ過装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて２４ｍｇ／ｍＬに濃縮し、−８０℃で凍結させた。試料純度をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって評価した。
【０２８７】
（実施例２．３．３）
ＩＬ−１３／１３Ｃ５．５  Ｆａｂ複合体の結晶化
凍結したＩＬ−１３／１３Ｃ５．５複合体貯蔵物（約２４ｍｇ／ｍＬ）を氷上で解凍した。複合体（１．０μＬ）を貯蔵溶液（１．７５Ｍ硫酸アンモニウム、１００ｍＭ  ＭＥＳ  ｐＨ６．５、１０ｍＭ  ＣａＣｌ２）１．０μＬと混合した。生成した液滴を貯蔵器上のシッティングドロップウェル（ＣｒｙｓＣｈｅｍシッティングドロッププレート）中で約１８℃で混合した。ダイアモンド状結晶が１週間以内に出現した。
【０２８８】
（実施例２．３．４）
ＩＬ−１３／１３Ｃ５．５  Ｆａｂ複合体結晶の凍結保護及び急速冷却
ＩＬ−１３／１３Ｃ５．５  Ｆａｂ複合体の結晶を母液＋２０％グリセリン中で繊維ループを用いて収集した。続いて、結晶を液体窒素に投げ込むことによって急速冷却した。
【０２８９】
（実施例２．３．５）
ＩＬ−１３／１３Ｃ５．５  Ｆａｂ複合体のＸ線回折データ収集
ＩＬ−１３／１３Ｃ５．５  Ｆａｂ結晶からのＸ線回折データを、米国イリノイ州アルゴンヌのＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｈｏｔｏｎ  ＳｏｕｒｃｅにおけるＩＭＣＡビームラインにおいて収集した。データ収集中、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｃｒｙｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｒｙｏｓｔｒｅａｍ冷却器を用いて、結晶を温度１００Ｋに維持した。合計１８０フレームを１．０°の振動範囲で収集した。データをＨＫＬ２０００プログラムスイート（Ｏｔｗｉｎｏｗｓｋｉ  ａｎｄ  Ｍｉｎｏｒ，  １９９７）によって処理した。結晶方位を決定した後、データをＤＥＮＺＯによって積分し、ＳＣＡＬＥＰＡＣＫによってスケーリング及びマージングを行い、絶対目盛り上に配置し、ＴＲＵＮＣＡＴＥによって構造因子振幅に換算した（Ｆｒｅｎｃｈ  ａｎｄ  Ｗｉｌｓｏｎ，  １９７８）。フリーＲ因子（Ｒｆｒｅｅ）を計算するために、特有反射（ｕｎｉｑｕｅ  ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎ）の５パーセントを「フリー」セットに無作為に割り当てた（Ｂｒｕｎｇｅｒ，  １９９２）。反射の残りの９５％は、Ｒ因子（Ｒ）を計算するための「作用（ｗｏｒｋｉｎｇ）」セットを構成した。Ｘ線回折データを表１６に要約する。以下は、結晶形の指標付け（ｉｎｄｅｘｉｎｇ）である：（１）ＩＬ−１３／１３Ｃ５．５  Ｆａｂ：空間群Ｐ２（１）２（１）２（１）、ａ＝１６３．５７８Å、ｂ＝１６３．３１８Å、ｃ＝２２８．６２７Å、α＝９０．０°、β＝９０．０°、γ＝９０．０°。表１７に、データセットのＸ線回折統計を示す。
【０２９０】
【表１７】
2014237671.tif 000033
【０２９１】
【表１８】
2014237671.tif 000034
＊括弧内はＨｉｇｈｅｓｔ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｓｈｅｌｌ
【０２９２】
（実施例２．３．６）
ＩＬ−１３／１３Ｃ５．５  Ｆａｂ複合体結晶構造の分子置換解析及び精密化
最尤分子置換解析をプログラムＰＨＡＳＥＲによって求めた（Ｒｅａｄ，  ２００１）。合計６種類の１３Ｃ５．５モノマーを空間群Ｐ２（１）２（１）２（１）において分解能３．０Åで解析した。検索モデルは、既報のＦａｂの結晶構造であった（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ登録１ＢＪ１；  Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  １９９８）。座標を分子置換解析に基づいて作成した。
【０２９３】
ＩＬ−１３／１３Ｃ５．５  Ｆａｂ複合体結晶構造の精密化を、空間群Ｐ２（１）２（１）２（１）において、上記分子置換解析座標で開始した。ＣＣＰ４プログラムスイート（Ｍｕｒｓｈｕｄｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｊｅｃｔ，  １９９４）において利用可能なプログラムＲＥＦＭＡＣによって、剛体精密化（ｒｉｇｉｄ−ｂｏｄｙ  ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ）を用いて、精密化を開始し、２．６Åにおいて以下の統計結果、すなわち４０．００％のＲ（Ｒｆｒｅｅ  ３９．００％）を得た。新規ＩＬ−１３電子密度を観察した。６種類のＩＬ−１３モノマーの手作業による構築は、分子グラフィックスプログラムＯ（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１）を用い、２Ｆｏ−Ｆｃ及びＦｏ−Ｆｃ電子密度図を検討して、公開ＩＬ−１３  ＮＭＲ構造１ＩＪＺ（Ｍｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）によって誘導された。精密化プログラムＲＥＦＭＡＣ（Ｍｕｒｓｈｕｄｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７）を繰り返しの拘束精密化（ｒｅｓｔｒａｉｎｅｄ  ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ）に用いて、以下の統計結果、すなわち２５．８％のＲ（Ｒｆｒｅｅ  ３０．５％）を得た。結果を表１８に示す。
【０２９４】
【表１９】
2014237671.tif 000035
【０２９５】
（実施例２．３．６）
ＩＬ−１３／１３Ｃ５．５  Ｆａｂ複合体構造
ヒトＩＬ−１３と複数の１３Ｃ５．５  ＣＤＲの間で、広範な接触が認められる。抗体−抗原界面において埋められた表面積は１４１５．５０Å２である。接触は、重要な水素結合、及び界面を安定化する疎水的相互作用で構成される。界面接触の大部分を構成する２個の最小配列セグメントは、ＩＬ−１３らせんＡ及びＤ上にある（ＩＬ−１３の構造については、参照により本明細書に組み入れる米国特許出願公開第２００３−００１３８５１号Ａ１を参照されたい。）。これらの接触は、ＣＤＲのＬ１とＬ３及びＨ２とＨ３を連結する。上記に基づいて、エピトープ１３Ｃ５．５結合範囲は、配列番号１のＳｅｒ２６−Ａｓｎ３８、Ｌｙｓ１２３−Ａｒｇ１３０によって規定される局所（ｔｏｐｏｇｒａｐｈｉｃａｌ）領域を含む。より好ましくは、エピトープ１３Ｃ５．５結合範囲は、配列番号１のＡｒｇ３０−Ａｓｎ３８、Ｌｙｓ１２３−Ａｒｇ１２７によって規定される局所領域を含む。
【０２９６】
（実施例２．４）
ヒト化ＩＬ−１３抗体の生体内での有効性
抗ｈＩＬ−１３抗体の生体内での有効性を以下のように評価した。
【０２９７】
（実施例２．４．１）
ヒトＩＬ−１３誘発性ぜん息モデルにおけるヒト化ＩＬ−１３抗体の生体内での有効性
抗ｈＩＬ−１３抗体５Ｇ１、１３Ｃ５及び１３Ｃ５．５の有効性を、マウスのヒトＩＬ−１３誘発性ぜん息モデルにおいて試験した。マウスに組換えヒトＩＬ−１３を無菌ＰＢＳ  ５０μｌ中１μｇの用量で、微小噴霧器を用い、気管の開口を可視化するげっ歯類用喉頭鏡を用いて、気管に送達して、投与した。合計２回のＩＬ−１３を試験１及び２日目に投与し、気道過敏性（ＡＨＲ；  Ｈｏｙｍａｎｎ，  Ｈ．Ｇ．；  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．  ２００７  Ｊａｎ−Ｆｅｂ；５５（１）：１６−２６）、粘液、酸性ほ乳動物キチナーゼ（ＡＭＣａｓｅ，  Ｄｏｎｎｅｌｌｙ  ＬＥ，  Ｂａｒｎｅｓ  ＰＪ．，  １：  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ．  ２００４  Ｏｃｔ；２５（１０）：５０９−１１）、並びに胸腺及び活性化調整ケモカイン（ｔｈｙｍｕｓ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ）（ＴＡＲＣ；  Ｂｉｓｓｅｔ  ＬＲ，  Ｓｃｈｍｉｄ−Ｇｒｅｎｄｅｌｍｅｉｅｒ  Ｐ．，  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｕｌｍ  Ｍｅｄ．  ２００５  Ｊａｎ；１１（１）：３５−４２）を気管支肺胞洗浄液中で最終投与から２４時間後に測定した。抗体用量１００、３００及び１０００μｇを、最初のＩＬ−１３投与の１日前に腹腔内注射によって投与した。結果を表１９に要約する。ＩＬ−１３Ｒα１とＩＬ−１３Ｒα２のどちらに対してもＩＬ−１３の結合を阻止しない５Ｇ１抗体は、このインビボモデルにおいてＩＬ−１３生理活性を中和することができず、５Ｇ１で処理した動物において検出されたＡＨＲ、ＡＭＣａｓｅ及びＭｕｃ５ａｃのレベルは、ＰＢＳで処理した対照動物と類似した。これに対し、α１とα２の両方の受容体に対する結合を阻止する１３Ｃ５抗体は、すべてのパラメータを軽減するのに有効であった。ＩＬ−１３で処理すると、気道抵抗が３．６ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃから５．７ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃに増加した。１３Ｃ５（１０００μｇ）で処理すると、気道抵抗は４．３ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃに低下した。ｍｕｃ５ａｃレベルによって測定される粘液分泌過多は、３５６．５単位から最大２１１Ｕに低下し、４０％の低下に相当する抗体処理であった。同様に、ＡＭＣａｓｅレベルは、２０２Ｕから６８Ｕに低下し、６６％の低下に相当し、ＴＡＲＣレベルで見られる低下と類似していた（ｎ＝１０、ｐ＜．０５、すべての用量）。組換えヒト化抗体１３Ｃ５．５は、このモデルにおいて類似の結果を示した。ＩＬ−１３は、３０μｇ／ｍｌメタコリン投与後の気道抵抗を３．９から５．５ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃに増加させた。抗体１３Ｃ５．５は、用量１００、３００及び１０００μｇにおいて気道抵抗をそれぞれ４．１、４．４５及び４．３ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃに抑制した。ｍｕｃ５ａｃレベルによって測定される粘液分泌過多は、ＩＬ−１３処理によって抗体処理用量１００、３００及び１０００μｇにおいて２４７Ｕからそれぞれ１５４、３０．２及び１１．１Ｕに低下した。これは、この抗体による粘液産生の３８、８８及び９６％抑制を表す。ＩＬ−１３処理は、抗体処理（用量１００、３００及び１０００μｇ）によって、１４、２４及び６８％抑制を示す１１３、９８及び５５Ｕに低下��た１３０Ｕ  ＡＭＣａｓｅ活性を誘導した。これらのデータによれば、ＩＬ−１３Ｒα１とα２の両方に対するＩＬ−１３の結合を阻止する１３Ｃ５及び組換えヒト化抗体１３Ｃ５．５は、ＡＨＲ、粘液、及び肺におけるＡＭＣａｓｅ産生のＩＬ−１３誘導性反応を中和することができるのに対して、α１及びα２受容体に対するＩＬ−１３の結合を阻止しない抗体は、これらの生物学的反応のいずれを阻止するのにも有効ではない。
【０２９８】
【表２０】
2014237671.tif 000036
＊ｐ＜０．０５、スチューデントのｔ検定
＊＊ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ、ボンフェローニ
＊＊＊ｐ＜０．０１、ＡＮＯＶＡ、ボンフェローニ
別の試験では、抗ｈＩＬ−１３抗体ＢＡＫ５０２Ｇ９、ＭＪ２−７及び１３Ｃ５．５の有効性を、マウスのヒトＩＬ−１３誘発性ぜん息モデルにおいて比較した。マウスに組換えヒトＩＬ−１３を無菌ＰＢＳ  ５０μｌ中１μｇの用量で、軽い鎮静状態で鼻腔内送達して、投与した。合計２回のＩＬ−１３を試験１及び２日目に投与し、気道過敏性、粘液、及びＡＭＣａｓｅを気管支肺胞洗浄液中で最終投与から２４時間後に測定した。抗体用量１０００μｇを、最初のＩＬ−１３投与の１日前に腹腔内注射によって投与した。試験結果を表２０に要約する。ＩＬ−１３α１とα２受容体の両方に対するＩＬ−１３の結合を阻止する１３Ｃ５．５抗体は、すべてのパラメータを有意に低下させるのに有効であった。ＩＬ−１３処理は、３０ｍｇ／ｍｌメタコリン投与後の気道抵抗を４．２ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃから７．２ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃに増加させた。１３Ｃ５．５（１０００μｇ）で処理すると、気道抵抗は４．６ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃに８６．８％低下した。ｍｕｃ５ａｃレベルによって測定される粘液分泌過多は、７６８．２単位から４１２．９Ｕに低下し、５８．８％の低下に相当する抗体処理であった。同様に、ＡＭＣａｓｅレベルは３１６．５Ｕから１４７Ｕに低下し、５２％の低下に相当した（ｎ＝１０、ｐ＜．００１）。ＩＬ−１３Ｒα１に対するＩＬ−１３の結合を阻止するが、ＩＬ−１３Ｒα２に対するＩＬ−１３の結合を有効に阻止しない、ＢＡＫ５０２Ｇ９とＭＪ２−７の両方の抗体は、このモデルにおいて類似したＩＬ−１３誘導性ＡＨＲ中和能力を示した。抗体ＢＡＫ５０２Ｇ９及びＭＪ２−７は、気道抵抗を７．２からそれぞれ５．９６ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃ及び５．９３ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃに抑制し、ＡＨＲの４２％及び４１．５％の低下しか示さなかった。ｍｕｃ５ａｃレベルによって測定される粘液分泌過多は、ＩＬ−１３処理によって抗体用量１０００μｇにおいて、ＢＡＫ５０２Ｇ９又はＭＪ２−７抗体それぞれ７６８．２Ｕから６２７．８及び３８０Ｕに低下し、２３％及び６４％の抑制に相当した。ＢＡＫ５０２Ｇ９抗体は、ＡＭＣａｓｅを抑制する効果が１３Ｃ５．５又はＭＪ２−７抗体よりも低かった。ＩＬ−１３処理は、ＢＡＫ５０２Ｇ９又はＭＪ２−７抗体処理（用量１０００μｇ）によって、それぞれ８％及び４５％抑制を示す２７９及び１６９Ｕに低下する３１６．５Ｕ  ＡＭＣａｓｅ活性を誘導した。これらのデータによれば、ＩＬ−１３Ｒα１とα２の両方に対するＩＬ−１３の結合を阻止する組換えヒト化抗体１３Ｃ５．５は、ＡＨＲ、粘液、及び肺におけるＡＭＣａｓｅ産生のＩＬ−１３誘導性反応を中和するのに極めて有効であるのに対して、ＩＬ−１３  α２受容体に対するＩＬ−１３の結合をより低親和性でしか阻止しない抗体は、ぜん息の一因になるこれらの生物学的反応を阻止するのにさほど有効ではない。
【０２９９】
【表２１】
2014237671.tif 000037
【０３００】
（実施例２．４．２）
ＯＶＡ誘発性ぜん息マウスモデルにおけるＩＬ−１３抗体の生体内での有効性
（特に、ＩＬ−１３Ｒα２に関する）受容体遮断性がｍＡｂの生体内での有効性に影響を及ぼすかどうかをぜん息マウスモデルにおいて判定するために、ｍＩＬ−１３Ｒα１／Ｆｃ及びｍＩＬ−１３Ｒα２／Ｆｃタンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた受容体結合ＥＬＩＳＡによって測定して異なる受容体遮断性を示すラット抗マウスＩＬ−１３抗体のパネルを作製した（表２１参照）。抗ｈＩＬ−１３  ｍＡｂ  ３Ｈ７は、マウスＩＬ−１３と交差反応するので、その抗ｍＩＬ−１３特性も表２１に示した。マウスＩＬ−１３に対する抗体の結合親和性を組換えマウスＩＬ−１３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）に対するＢＩＡＣＯＲＥアッセイによって測定し、マウスＩＬ−１３に対する抗体の効力（ＩＣ５０）を組換えマウスＩＬ−１３に対するＡ−５４９バイオアッセイによって求めた。５１Ｄ９及び４８Ｄ３の可変ドメイン配列を表２２に示す。
【０３０１】
【表２２】
2014237671.tif 000038
【０３０２】
【表２３】
2014237671.tif 000039
【０３０３】
ネズミぜん息モデルにおける生体内での有効性の試験では、動物（雌性Ｂａｌｂ／ｃマウス）をＴａｃｏｎｉｃから購入し、Ａｂｂｏｔｔ  Ｂｉｏｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒで飼育し、８−１２週齢で利用した。プロトコルはすべてＩＡＣＵＣによって認可された。ミョウバン（Ｐｉｅｒｃｅ）２ｍｇ中のＯＶＡ（Ｓｉｇｍａ、ＤｅｔｏｘｉＧｅｌ（Ｐｉｅｒｃｅ）を製造者の手順に従って用いて内毒素を卵白アルブミンから除去し、最終材料中のタンパク質は０．１ＥＵ／ｍｇ未満であった。）８ｕｇの腹腔内注射によって、マウスを０及び７日目にＯＶＡに対して感作させた。１４及び１６日目に、無菌ＰＢＳ  ５０ｍｌ中のＯＶＡ  ０．３ｍｇを動物に鼻腔内投与した。（標準手順に従ってハイブリドーマクローン５１Ｄ９及び４８Ｄ３の上清から精製し、タンパク質含量が０．１ＥＵ／ｍｇ未満であり、ＰＣＲ試験によってげっ歯類病原体に対して陰性であった）抗体５１Ｄ９及び４８Ｄ３を、無菌ＰＢＳ中の単一腹腔内注射として１３日目に投与した。デキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ）を１３−１７日目に用量３ｍｇ／ｋｇで１日１回経口投与した。全エンドポイントを１７日目に、２回目のＯＶＡ投与から２４時間後に分析した。気道過敏性（ＡＨＲ）を全身プレスチモグラフィーによって評価した。手短に述べると、外科的麻酔レベル（ｓｕｒｇｉｃａｌ  ｐｌａｎｅ  ｏｆ  ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ）をケタミン及びキシラジンの腹腔内注射によって誘導した。気管カニューレを第３気管輪と第４気管輪の間に外科的に挿入した。臭化パンクロニウムの頚静脈注射によって自発呼吸を停止させ、動物を全身プレチスモグラフ（Ｂｕｘｃｏ）中に配置し、従量式人工呼吸器（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ）を用いて室内気０．２ｍｌを１５０呼吸／分で人工呼吸した。肺の圧力、及びプレチスモグラフ内の流れを変換器によって測定し、Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ  Ｘａソフトウェアを用いて圧力／流れとして肺抵抗を計算した。ベースライン抵抗、及びインライン超音波ネブライザーによって送達されたメタコリン（３、１０及び３０ｍｇ／ｍｌ）投与後の抵抗を測定した。肺機能試験終了後、肺を無菌ＰＢＳ  ０．５ｍｌで４回洗浄した。洗浄液をＴＡＲＣ、ＡＭＣａｓｅ及び細胞浸潤物について分析した。試験の終局において抗体レベルの定量化のために血清を収集した。
【０３０４】
ネズミＴＡＲＣレベルをＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ）によって製造者の手順に従って測定した。ＡＭＣａｓｅ活性を、８０ｕＭ  ４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−Ｎ，Ｎ’−ジアセチルキトビオシドの存在下で、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液（０．０１％ＢＳＡで１から１０希釈、３０ｍＭクエン酸ナトリウム、６０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ５．２中で測定した。反応物を室温で１５分間温置し、１Ｍグリシン／ＮａＯＨ  ｐＨ１０．６  １００  ｕＬを添加してクエンチした。Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ  Ａｓｃｅｎｔ蛍光光度計を用いて、３８５ｎｍで励起し、４６０ｎｍにおける蛍光発光によって、生成物の形成を測定した。杯細胞過形成を評価するために、肺を１０％中性緩衝ホルマリンで高さ２２ｃｍに１５分間膨張させて、肺表面の面積を一定にした。切片をパラフィンに包埋し、薄片にし、過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）で染色した。左肺の主気管支に沿ったＰＡＳ陽性細胞の面積を、ＩｍａｇｅＰｒｏ  Ｐｌｕｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて定量した。Ｍｕｃ５ａｃレベルをＥＬＩＳＡによって測定した。９６ウェルプレートをＢＡＬ液で被覆し、終夜乾燥させ、次いでビオチン化抗Ｍｕｃ５ａｃ抗体を添加し、ＨＲＰ複合ストレプトアビジンを用いて検出し、続いて比色基質ＴＭＢを開裂させた。
【０３０５】
ぜん息の病原に対するＩＬ−１３Ｒα１とα２の相対寄与度を、マウスにおける卵白アルブミン誘発性ぜん息の標準モデルで試験した。α１とα２の両方の受容体に対するＩＬ−１３の結合を阻止した抗体（それぞれ３４０、２４及び２４３０ｐＭの効力を有する５１Ｄ９、５４Ｄ１及び３Ｈ７）、及びα１受容体のみに対するＩＬ−１３の結合を阻止した抗体（４８Ｄ３、５０ｐＭの効力）を、卵白アルブミンの局所投与の１日前に動物を抗体で処理することによって試験した。結果を表２３に示す。ＯＶＡ投与は、メタコリン投与後の肺抵抗、ＢＡＬ液中のＭｕｃ５ａｃレベルの増加によって測定される粘液分泌過多の増加を誘導し、組織学的評価による上皮細胞のＰＡＳ陽性染色の増加、肺の好酸球及びＴ細胞浸潤、並びにぜん息関連タンパク質ＡＭＣａｓｅ及びＴＡＲＣの産生を誘導した。
【０３０６】
ＩＬ−１３Ｒα１とα２の両方に対するＩＬ−１３の結合を阻止した抗体はすべて、試薬の有効性及び生体内での効力が、測定されたインビトロでの効力に従って変化することが実証された。５１Ｄ９を１００、３００及び１０００ｕｇ／マウスの用量で試験した。ＯＶＡ処理によって、３０ｍｇ／ｍｌメタコリン投与後の気道抵抗は、非ぜん息性動物における３．６ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃと比較して、６．２ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃに増加した。マウスを５１Ｄ９で処理すると、肺抵抗の増加は、非ぜん息性対照動物において認められた値である用量１００、３００及び１０００μｇに対してそれぞれ４．１、４．０及び３．５ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃ（ｎ＝８−１０／群、ｐ＜．０５）に類似した値で完全に防止された。５１Ｄ９を用いて認められた抑制量は、ステロイド処置で得られた抑制量に匹敵した（３．３ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃ）。５１Ｄ９処理は、５１Ｄ９  １０００μｇで処理した動物において、粘液分泌過多も４０４単位Ｍｕｃ５ａｃから５５Ｕに用量依存的に抑制した。粘液分泌過多の抑制は、ＰＡＳ反応性上皮細胞の組織学的評価によっても認められた。陽性細胞率の面積は、５１Ｄ９抗体の用量３００及び１０００ｕｇで１．０％からそれぞれ０．６％及び０．５％に減少し、４７−６５％の減少を示した（ｎ＝８、ｐ＜．０１）。５１Ｄ９処理は、ＴＡＲＣ及びＡＭＣａｓｅも抑制した。ＯＶＡ投与は、１０００ｕｇの５１Ｄ９処理によって７．８ｐｇ／ｍｌに減少するＴＡＲＣ  ６１ｐｇ／ｍｌを誘導した（ｎ＝１０、ｐ＜．０５）。ＯＶＡ投与は、５１Ｄ９を用いて抗体１００、３００及び１０００μｇでそれぞれ５２、４５及び２１Ｕに用量依存的に減少したＡＭＣａｓｅ活性９６（任意の単位）を誘導した（ｎ＝９−１０、ｐ＜．０１）。１０倍のインビトロ効力（２４ｐＭ）を有する５４Ｄ１は、用量３０ｕｇでＡＨＲを抑制し、気道抵抗は６．５８ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃから４．４ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃに減少し、最大抑制は、抗体３００ｕｇの処理で認められ、気道抵抗は３．６５ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃの値に減少した。類似の効力は、粘液、ＡＭＣａｓｅ及びＴＡＲＣ産生の抑制においても認められた。２．５ｎＭの効力を有する第３の抗体３Ｈ７も、ＡＨＲ、粘液及びＡＭＣａｓｅレベルを抑制したが、用量１０００μｇの抗体処理においてのみであり、インビトロバイオアッセイにおいて記述した効力の１０倍の変化と一致した。
【０３０７】
ＩＬ−１３Ｒα１のみに対するＩＬ−１３の結合を阻止する抗体の有効性を、抗体４８Ｄ３を用いて試験した。動物を３０、１００、３００及び１０００μｇ／マウスで処理した。ＯＶＡ投与によって、気道抵抗は、ＰＢＳで処理した非ぜん息性動物における４．１ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃに比較して、５．６９ｃｍ  Ｈ２０／ｍｌ／ｓｅｃに上昇した。４８Ｄ３  ３０μｇによる処理は、ＯＶＡによって誘発される肺抵抗に効果がなかったが、４８Ｄ３  １００、３００及び１０００ｕｇによる処理は、ＯＶＡによって誘発される肺抵抗の変化を、最大４．４ｃｍ  Ｈ２Ｏ／ｍｌ／ｓｅｃに、又はＯＶＡ対照レベルの約８０％に抑制した（ｎ＝１０、ｐ＜．０５）。５１Ｄ９で認められた効果とは対照的に、４８Ｄ３は、Ｍｕｃ５ａｃ  ＥＬＩＳＡ又はＰＡＳ反応性上皮細胞によって測定して、ＯＶＡによって誘発される粘液分泌過多を抑制しなかった。わずかではあるが統計学的に有意な粘液の減少（３０％）が３０μｇ用量の４８Ｄ３処理で認められたのに対して、他の用量はすべて、ＯＶＡを投与した動物と同等であった。ＰＡＳ陽性染色の組織学的定量化は、ＯＶＡを投与した動物において０．６％であり、ＯＶＡを投与し、４８Ｄ３  １０００ｕｇで処理した動物において０．８％であった。これらの試験においては、４８Ｄ３は、ＯＶＡによって誘発されるＡＭＣａｓｅの発現を、ＯＶＡで処理した動物において検出された１９６Ｕから用量３０、１００、３００及び１０００ｕｇにおいてそれぞれ６３、９０、８７及び９６Ｕに抑制した。抗体レベルの分析によれば、類似レベルの４８Ｄ３と５１Ｄ９が、抗体で処理したマウスの血清とＢＡＬ液の両方で検出可能であった。４８Ｄ３抗体の効力が５１Ｄ９抗体の７倍であり、これら２種類の抗体の曝露が同等であるにもかかわらず、４８Ｄ３抗体は、ＩＬ−１３Ｒα１及びα２に対するＩＬ−１３の結合を阻止した抗体と同程度にはＡＨＲ又はＡＭＣａｓｅを抑制することができず、粘液産生を低下させることができなかった。まとめると、これらのデータは、ＩＬ−１３Ｒα２が、ＯＶＡによって誘発される粘液分泌過多の媒介に中心的役割を果たし、ＩＬ−１３Ｒα２がぜん息性表現型の生体内での調整に寄与することを示唆している。
【０３０８】
【表２４】
2014237671.tif 000040
＊は、ｐ＜．０５、ＡＮＯＶＡを示す。
【配列表】
2014237671000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成26年8月15日(2014.8.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
結合タンパク質がＩＬ−１３に結合可能であり、抗原結合ドメインが、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１個のＣＤＲを含む、抗原結合ドメインを含む結合タンパク質。
ＣＤＲ−Ｈ１．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（配列番号６４）（式中、
Ｘ１は、Ｔ、Ｄ、Ｇ又はＳであり、
Ｘ２はＳであり、
Ｘ３はＤであり、
Ｘ４は、Ｍ、Ｓ、Ｙ、Ｌ又はＨであり、
Ｘ５は、Ｇ、Ｗ、Ｙ、Ａ、Ｓ又はＮであり、
Ｘ６は、Ｖ、Ｉ又はＭであり、
Ｘ７は、Ｄ、Ｈ、Ｓ、Ｙ、Ｎ又はＧである。）、
ＣＤＲ−Ｈ２．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７（配列番号６５）（式中、
Ｘ１は、Ｍ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、Ｓ、Ｇ又はＬであり、
Ｘ２は、Ｉであり、又は存在せず、
Ｘ３は、Ｈ、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｓ又はＷであり、
Ｘ４は、Ｐ、Ｓ、Ｗ又はＧであり、
Ｘ５は、Ｓ、Ｇ、Ｅ又はＤであり、
Ｘ６は、Ｄ、Ｇ、Ｓ、Ｅ又はＮであり、
Ｘ７は、Ｓ、Ｙ又はＧであり、
Ｘ８は、Ｅ、Ｎ、Ｙ、Ｖ又はＲであり、
Ｘ９は、Ｔ、Ｉ又はＫであり、
Ｘ１０は、Ｒ、Ｙ、Ｉ、Ｄ又はＡであり、
Ｘ１１は、Ｌ、Ｙ、Ｄ又はＦであり、
Ｘ１２は、Ｎ、Ｐ、Ｓ又はＤであり、
Ｘ１３は、Ｑ、Ｅ、Ｄ、Ｐ又はＳであり、
Ｘ１４は、Ｋ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ａ又はＶであり、
Ｘ１５は、Ｆ、Ｌ、Ｖ又はＭであり、
Ｘ１６は、Ｋ、Ｒ又はＱであり、
Ｘ１７は、Ｄ、Ｇ又はＳである。）、
ＣＤＲ−Ｈ３．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４（配列番号６６）（式中、
Ｘ１は、Ｗ、Ｔ、Ｇ、Ｙ、Ｄ又はＩであり、
Ｘ２は、Ｒ、Ａ、Ｓ、Ｇ又はＶであり、
Ｘ３は、Ｔ、Ｆ、Ｙ又はＳであり、
Ｘ４は、Ｓ、Ｔ又はＹであり、
Ｘ５は、Ｙ、Ｆ又はＧであり、
Ｘ６は、Ｆ又はＹであり、
Ｘ７は、Ｓ、Ｙ、Ｉ又はＦであり、
Ｘ８は、Ｄ、Ｌ、Ｙ又はＰであり、
Ｘ９はＹであり、
Ｘ１０はＧであり、
Ｘ１１は、Ｙ、Ａ、Ｐ又はＥであり、
Ｘ１２は、Ｆ、Ｍ、Ｓ、Ｌ又はＩであり、
Ｘ１３は、Ｄ、Ｖ、Ｎ又はＫであり、
Ｘ１４は、Ｙ又はＦである。）、
ＣＤＲ−Ｌ１．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５  Ｘ１６−Ｘ１７（配列番号６７）（式中、
Ｘ１は、Ｋ又はＲであり、
Ｘ２は、Ｓ又はＡであり、
Ｘ３は、Ｓ又はＴであり、
Ｘ４は、Ｑ、Ｋ又はＩであり、
Ｘ５は、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｇ又はＥであり、
Ｘ６は、Ｌ、Ｔ又はＳであり、
Ｘ７は、Ｌ、Ｑ又はＶであり、
Ｘ８は、Ｙ、Ｎ、Ｈ、Ｄ又はＴであり、
Ｘ９は、Ｓ、Ｉ又はＴであり、
Ｘ１０は、Ｓ、Ｄ、Ｎ、Ｈ又はＹであり、
Ｘ１１は、Ｎ又はＧであり、
Ｘ１２はＱであり、
Ｘ１３は、Ｋ、Ｆ、Ｎ、Ｅ又はＳであり、
Ｘ１４は、Ｎ、Ｔ又はＳであり、
Ｘ１５は、Ｙ又はＦであり、
Ｘ１６は、Ｌ、Ａ又はＭであり、
Ｘ１７は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｈ又はＮである。）、
ＣＤＲ−Ｌ２．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（配列番号６８）（式中、
Ｘ１は、Ｌ、Ｓ、Ｋ、Ｔ、Ｗ又はＹであり、
Ｘ２は、Ｖ、Ｔ又はＡであり、
Ｘ３は、Ｓ又はＮであり、
Ｘ４は、Ｎ、Ｋ、Ｔ、Ｍ又はＲであり、
Ｘ５は、Ｒ、Ｋ又はＬであり、
Ｘ６は、Ｆ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｐ又はＡであり、
Ｘ７は、Ｓ、Ｒ又はＰである。）、及び
ＣＤＲ−Ｌ３．  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９（配列番号６９）（式中、
Ｘ１は、Ｆ、Ｗ、Ｑ又はＡであり、
Ｘ２は、Ｑ又はＬであり、
Ｘ３は、Ｈ、Ｇ、Ｙ、Ｗ又はＮであり、
Ｘ４は、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｌ又はＹであり、
Ｘ５は、Ｙ、Ｔ、Ｓ、Ｅ又はＨであり、
Ｘ６は、Ｌ、Ｖ、Ｆ、Ｙ、Ｎ、Ｇ、Ｐ又はＤであり、
Ｘ７は、Ｐ又はＨであり、
Ｘ８は、Ｌ、Ｆ、Ｙ、Ｗ又はＲであり、
Ｘ９は、Ｔ又はＶである。）
【外国語明細書】
2014237671000001.pdf