(57)【要約】      （修正有）【課題】ＳＡＭＥとピロロキノリンキノンを含む安定な組成物の提供及びその分解を抑制する組成物及びその製造方法を提供する。【解決手段】［１］Ｓーアデノシルメチオニン含有酵母とピロロキノリンキノンを含む組成物。［２］Ｓーアデノシルメチオニン含有酵母とピロロキノリンキノンの比が重量比で１：０．０１から１００である［１］記載の組成物。［３］酵母中のＳーアデノシルメチオニンの含有量が１−３０重量％である［１］又は［２］記載の組成物。［４］Ｓーアデノシルメチオニン含有酵母がシクロデキストリン類をさらに含むことを特徴とする［１］から［３］いずれか記載の組成物。［５］ピロロキノリンキノンがフリー体、アルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩のいずれかである［１］から［３］いずれか記載の組成物。［６］コエンザイムＱ１０をさらに含むことを特徴とする［２］から［５］いずれかの組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｓーアデノシルメチオニン含有酵母とピロロキノリンキノンを含む組成物。
【請求項２】
Ｓーアデノシルメチオニン含有酵母とピロロキノリンキノンの比が重量比で１：０．０１から１００である請求項１記載の組成物。
【請求項３】
酵母中のＳーアデノシルメチオニンの含有量が１−３０重量％である請求項１又は２記載の組成物。
【請求項４】
Ｓーアデノシルメチオニン含有酵母がシクロデキストリン類をさらに含むことを特徴とする請求項１から３いずれか記載の組成物。
【請求項５】
ピロロキノリンキノンがフリー体、アルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩のいずれかである請求項１から３いずれか記載の組成物。
【請求項６】
コエンザイムＱ１０をさらに含むことを特徴とする請求項２から５いずれか記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｓ-アデノシルメチオニン（以下、ＳＡＭＥと記すことがある）生産能を有する酵母を用いた安定性に優れたＳＡＭＥ含有酵母とピロロキノリンキノン組成物およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＳＡＭＥは、生体内における種々のトランスメチラーゼによるメチル化反応のメチル基供与体として重要な役割を演じている水溶性の生理活性物質であり、人体の殆ど全ての細胞に見られ、様々な生化学反応における共同因子として働き、例えば、軟骨の維持や脳内物質の生合成に欠かすことの出来ない物質である。近年のＳＡＭＥの機能研究より脂肪肝、高脂血症、動脈硬化症、不眠症、肝炎、高脂血症、動脈硬化症などに対する治療効果があることが知られている。また、神経伝達物質の生成にも関与し、近年ではうつ病、老人性痴呆症、関節炎の治療薬やサプリメントとしても使われている。
【０００３】
ピロロキノリンキノン（以下、ＰＱＱと記すことがある）は新しいビタミンの可能性があることが提案され、健康補助食品、化粧品などに有用な物質として注目を集めている。さらには細菌に限らず、真核生物のカビ、酵母に存在し、補酵素として重要な働きを行っている。また、ＰＱＱについて近年までに細胞の増殖促進作用、抗白内障作用、肝臓疾患予防治療作用、創傷治癒作用、抗アレルギ−作用、逆転写酵素阻害作用およびグリオキサラ−ゼＩ阻害作用−制癌作用など多くの生理活性が明らかにされている。
【０００４】
ＳＡＭＥとピロロキノリンキノンは有用な効能を有しているためにそれらを混合した組成物が求められている。これまでに特許文献１，２にそれら２つをふくむ組成物が報告されている。しかし、実際に混合した例は知られていない。また、その時の安定性については知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００７／１１９５７８号公報
【特許文献２】国際公開第２００８／０６２５５９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明者らは、ＳＡＭＥは塩として提供されるが、吸湿性が高く混合し難い一方、ＳＡＭＥとピロロキノリンキノンを混合すると分解が生じてしまうことを見出し、本発明は、ＳＡＭＥとピロロキノリンキノンを含む安定な組成物の提供及びその分解を抑制する組成物及びその製造方法を提供することを課題とした。また、ＳＡＭＥとピロロキノリンキノンを直接混合すると粒子が大きくなりすぎて、流動性が低下する。そこで流動性の確保も本発明の目的とした。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等は、上記課題を解決するべく、鋭意検討した結果、以下の［１］〜［６］に示す項目によって課題を解決することを見出し、本発明を完成するに至った。
［１］Ｓーアデノシルメチオニン含有酵母とピロロキノリンキノンを含む組成物。
［２］Ｓーアデノシルメチオニン含有酵母とピロロキノリンキノンの比が重量比で１：
０．０１から１００である［１］記載の組成物。
［３］酵母中のＳーアデノシルメチオニンの含有量が１−３０重量％である［１］又は
［２］記載の組成物。
［４］Ｓーアデノシルメチオニン含有酵母がシクロデキストリン類をさらに含むことを特徴とする［１］から［３］いずれか記載の組成物。
［５］ピロロキノリンキノンがフリー体、アルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩のいずれかである［１］から［３］いずれか記載の組成物。
［６］コエンザイムＱ１０をさらに含むことを特徴とする［２］から［５］いずれか記載の組成物。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によってＳＡＭＥ含有酵母とピロロキノリンキノンの安定な組成物を提供することを可能とした。また、粉体流動性も改善され、脂溶性物質を添加しても流動性を保ち、生理活性物質として取り扱いやすい組成物を提供することを可能とした。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明はＳＡＭＥ含有酵母とピロロキノリンキノンを含む組成物である。
ＳＡＭＥ含有酵母とピロロキノリンキノンの混合比は、重量比で１：０．０１から１００であることが好ましい。この範囲内とすることによりそれぞれが推奨される量の投与に適した比率となり好ましい。またこの範囲とすることにより、どちらかの反応によりどちらかの成分の消失を抑制することが出来好ましい。
【００１０】
酵母はＳＡＭＥを酵母中に１−３０重量％含有した粉末として使用される。ＳＡＭＥの含有量を上記の範囲とすることにより摂取する量が好ましい範囲となり、また製造しやすい。また、本発明のピロロキノリンキノンとの安定性についても好ましい範囲となる。
【００１１】
本発明で使用されるピロロキノリンキノンはアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩又はフリー体が好ましい。アルカリ金属塩としてはナトリウム、カリウム又はリチウム塩が好ましい。より好ましくはジナトリウム塩、トリナトリウム塩、モノナトリウム塩、ジカリウム塩、トリカリウム塩又はモノカリウム塩である。
ピロロキノリンキノンは培養又は有機合成法で作ることができ、どちらの製造方法でも構わない。
【００１２】
酵母の種類は、ＳＡＭＥ生産能を有し且つ経口摂取可能なものであればよく、例えばサッカロマイセス属に属する酵母が挙げられる。このうち、サッカロマイセス・セレビジエがより好適である。
なお、 酵母には、５'−ヌクレオチド、遊離アミノ酸、抗酸化作用を有し肝機能改善に役立つグルタチオン、免疫力の増進作用や整腸作用を有するβ−グルカンや食物繊維などの有用成分が多く含まれており、健康食品等として広く利用されている。
【００１３】
酵母の培養は一般的な条件で培養でき、ＳＡＭＥの骨格構成にあずかるメチオニン、アデニン、アデノシルリボヌクレオシドを添加し培養することもできる。
目標量のＳＡＭＥが酵母菌体中に蓄積された段階で培養液を抜き出し酵母菌体を分離する。分離方法としては、菌体の分離と洗浄が効率的に行える方法であれば特に制限はないが、向流型のイーストセパレーターや分離膜を用いた限外濾過装置が好適な例として挙げられる。
【００１４】
組成物に安定化剤としてシクロデキストリン類を添加することが好ましい。シクロデキストリン類としては、α-、β-又はγ-シクロデキストリン若しくはその誘導体が挙げられ、γ−シクロデキストリンが特に有効であり好ましい。
添加するシクロデキストリン類の量としては、酵母菌体に含まれるＳＡＭＥに対して添加するシクロデキストリン類のモル比が０．０５〜６倍モルの範囲になるようにすることが好ましく、０．１〜４倍モルの範囲になるようにすることがより好ましく、０．５〜４倍モルの範囲になるようにすることがさらに好ましい。
【００１５】
シクロデキストリン類は例えば室温にて粉末又は水溶液の形で添加し、一定時間攪拌混合した後に乾燥する。これによって、 酵母中のＳＡＭＥの保存安定性が増すとともに、保存に伴うイオウ臭様の異臭の発生を抑制することができる。また、酵母乾燥工程でのＳＡＭＥの歩留まりも向上し、 酵母独特の臭気もマスキングされる。ピロロキノリンキノンに対しても変質抑制の効果等が期待できる。
【００１６】
本発明の組成物は、保存安定性の観点から、水分含量が５．０質量％以下になるようにすることが望ましい。
ＳＡＭＥ含有酵母とピロロキノリンキノンの混合は機械式、手動式どちらでも問題ない。粉末同士で混合することも可能であるが、油脂や有機溶剤に分散して混合することもできる。
ＳＡＭＥを酵母に含有せず、直接ピロロキノリンキノンと混合するとすぐに反応して消失してしまうが、本発明の組成物を使用することで口腔内や水と接触した状態でも安定になる。
【００１７】
本発明の組成物は添加物として脂溶性物質を安定に粉末として取り扱うことができる。脂溶性物質の具体例としてコエンザイムＱ１０やビタミンＥ（トコフェロール）、ＤＨＡ、 ＥＰＡ又は食用油脂が挙げられる。
特にコエンザイムＱ１０は室温で粉末であるが、低い融点であるために取り扱いが困難であるために好ましい。添加量はＳＡＭＥ含有酵母1に対してコエンザイムＱ１００．００１から２の重量比で添加するのがよい。粉末として流動性は本発明の組成物は室温での状態はもちろん、高温で脂溶性物質が溶融した際に、特に効果が顕著になる。
【００１８】
酵母を破砕して粉末状にし、粉末状の酵母に他の生理活性成分や賦形剤等の添加剤を加えることもできる。
本発明の組成物はこれらの原料を使用し、圧縮打錠し錠剤状の組成物となし、さらに、その表面を被覆したりすることもできる。また、粉体を顆粒状に造粒することや、粉体や造粒した顆粒を詰めてカプセル化することもできる。
【００１９】
本発明の組成物は錠剤、粉末の食品として使用できる。また、他の食品に栄養強化の目的で添加でき、または調味料として使用することもできる。
【実施例】
【００２０】
以下、本発明を実施例及び比較例を以てさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの例にのみ限定されるものではない。
【００２１】
原料合成
培養法（Schlenk F.,DePalma R.E.,J.Biol.Chem.,229,1037-1050(1957)，Shiozaki S.,et all,Agric.Biol.Chem.,53,3269-3274(1989)）に従って、Ｌ−メチオニン含有培地（Shiozaki S.,et all,J.Biotechnology,4,345-354(1986)）にサッカロマイセス属に属する酵母サッカロマイセス・セレビジエＩＦＯ２３４６を接種し、培養温度２７〜２９℃で好気的に通気攪拌通気拌しながら６日間培養した。その結果、菌体濃度３．５質量％，ＳＡＭＥ含量２０５ｍｇ／ｇ− 酵母の酵母菌体培養液１８Ｌを得た。これを連続ロータリー型遠心分離器（日立ＨＩＭＡＣ ＣＥＮＴＲＩＦＵＧＥ ＣＲ１０Ｂ２）で処理し、菌濃度が乾物換算で１８質量％に相当する液状の酵母菌体濃縮物３．４ｋｇを得た。ここにγ-シクロデキストリンを加えた。これを凍結乾燥器（日本真空技術株式会社製）の凍結乾燥用ステンレストレーに流し込み−５０℃で凍結した後、最終棚段温度２５℃の条件で３６時間凍結乾燥した。ＳＡＭＥ含有量１０％、シクロデキストリン含有量３０％の 酵母を得た。これをＳＡＭＥ含有酵母とする。
ＳＡＭＥは過塩素酸抽出し、液体クロマトグラフィーを用い定量した。
用いられた分析条件：
カラム：ナカライ（nacalai tesque） ＣＯＳＭＯＳＩＬ ４．６φ×１００ｍｍ
溶離液：０．２Ｍ ＫＨ2ＰＯ4水溶液／メタノール＝９５／５
流速：０．７ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ（２６０ｎｍ）、ＳＡＭＥ保持時間：約１５０秒
実験に使用するピロロキノリンキノンは三菱ガス化学株式会社製ピロロキノリンキノンジナトリウム（商品名：バイオＰＱＱ）を使用した。以下ＰＱＱジナトリウムと表記する。ＰＱＱの分析は以下の方法で行った。
装置： 島津製作所、高速液体クロマトグラフィーＬＣ-２０Ａ
カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−ＴＭＳ(５μｍ)、１５０Ｘ４．６ｍｍ Ｉ．Ｄ．
測定温度：４０℃
検出：２６０ｎｍにおける吸光度
溶離液：１００ｍＭ ＣＨ３ＣＯＯＨ／１００ｍＭ ＣＨ３ＣＯＯＮＨ４(３０／７０, pH５．１)
溶出速度：１．５ｍＬ／ｍｉｎ
【００２２】
安定性試験
表１に示す割合でプリプロピレン製容器に入れ、手で振って混合した組成物を作製した。これを５０℃で６日保存安定性試験を行った。ＰＱＱの存在量は液体クロマトグラフィーで分析した。比較例として、ＳＡＭＥ硫酸パラトルエンスルホン酸塩を使用した。重量基準での回収率を以下の表１に示す。
【表１】
2014084302.tif 000002
本発明の組成物は高温の過酷な条件においてＰＱＱジナトリウム塩とＳＡＭＥどちらについても、ＳＡＭＥ硫酸パラトルエンスルホン酸塩を使用した場合より、保存安定性が高いことが分かった。
【００２３】
水中での安定性（組成物に水を加えた際の安定性）
表２に示す組成物に水を２０ｍｌ加えて、室温で３０分置いた。この溶液を遠心分離して上澄み中のＰＱＱの存在量を液体クロマトグラフィーで分析した。また、この時のＳＡＭＥ残存量も測定した。さらに１日置いたときのＰＱＱ量も分析した。
初期の値を１００とした時の値を以下に示す。一般酵母として、原料合成の際にメチオニンを入れず培養し乾燥して得たＳＡＭＥを含まない酵母を酵母として使用した。
【表２】
2014084302.tif 000003
本発明の組成物はＰＱＱジナトリウム塩、ＳＡＭＥ両方の水に触れた際、安定性が高いことが分かった。ＳＡＭＥ硫酸パラトルエンスルホン酸塩とＰＱＱジナトリウム塩の混合物はすぐに反応してしまうため、口腔内、胃で失われ、それぞれの機能を発揮できない。また、ＰＱＱジナトリウムは一般の酵母に置いても濃度が低下する。これは酵母に吸着、または、酵母の成分と反応して失われている。本発明の組成物は反応しやすいＳＡＭＥを含んでいるにも関わらず、ＰＱＱ存在量が高い。本発明の組成物が非常に安定化した組成物であることを示している。
【００２４】
実施例３  流動性試験
ＰＱＱジナトリウム２０ｍｇとＳＡＭＥ含有酵母５００ｍｇを混合して、ふたを開けたポリエチレン容器に入れた。これを室温で３日放置して様子を目視で観察した。混合物の粉末は流動性を有しており、３日間おいても変化していなかった。
【００２５】
比較例５
ＰＱＱジナトリウム２０ｍｇとＳＡＭＥ硫酸パラトルエンスルホン酸塩５０ｍｇを混合して、ふたを開けたポリエチレン容器に入れた。これを室温で３日放置して様子を観察した。混合物の粉末は粒子が集まって塊を作っていた。流動性が失われていた。３日間おくと変質していた。
【００２６】
比較例６
上記のコエンザイムＱ１０を０．１ｇとＳＡＭＥ硫酸パラトルエンスルホン酸塩０．０４ｇとＰＱＱジナトリウム０．０４ｇをポリエチレン容器に入れ、手で振って混合した。この混合物を７０℃に入れ、０．５時間置いた。粉末はすべてが一つの塊になっていた。流動性を失っていた。
このように本発明の組成物はコエンザイムＱ１０を混合した際に、粉体として維持するのに有応な方法である。
【００２７】
実施例４  トコフェロール混合実験
トコフェロールは和光純薬製を使用した。ＳＡＭＥ含有酵母０．４ｇとＰＱＱジナトリウム０．０４ｇをポリエチレン容器に入れ、手で振って混合した。ここにトコフェロール１０μL混合した。スパーテルを使って混合して均一にした。粉体は流動性を維持していた。
【００２８】
比較例７
ＳＡＭＥ硫酸パラトルエンスルホン酸塩０．０４ｇとＰＱＱジナトリウム０．０４ｇをポリエチレン容器に入れ、手で振って混合した。ここにトコフェロール１０μＬ混合した。スパーテルを使って混合して均一にした。粉体はひっついて流動性をなくしていた。
【００２９】
実施例５  臭気試験
ＳＡＭＥ含有酵母０．４ｇとＰＱＱジナトリウム０．０４ｇをポリエチレン容器に入れ、手で振って混合した。この時の臭気は薄い酵母臭であった。これを５０℃で２０時間おいた。臭気は薄い酵母臭で変化していなかった。
【００３０】
比較例８
ＳＡＭＥ含有酵母０．４ｇは薄い酵母臭である。５０℃で２０時間おいた。やや強い硫黄臭であった。
本発明の組成物はＳＡＭＥが分解時に出す硫黄臭を抑制する効果があった。
本発明の組成物は安定で流動性や水と接触時の安定性で優れているだけでなく、臭気の面でも優れていた。
【００３１】
実施例６  カプセル
ＳＡＭＥ含有酵母０．２ｇとＰＱＱジナトリウム０．０２ｇを松屋製ゼラチン製カプセル０号に詰めた。
【産業上の利用可能性】
【００３２】
本発明の組成物は医薬品、機能性食品、健康食品等の分野で有効である。