(57)【要約】      （修正有）【課題】天然臓器に類似する構造を有し、十分な期間にわたり機能不全を伴わずに類似機能を果たすことのできる、生体組織工学的に作製された臓器を提供する。【解決手段】流体血管網を含有している足場を作製する方法であって、（ａ）チャンバを取り囲み、流体を細胞へ提供するための第１血管層（この第１血管層は流体のためのチャネル網を有している）を作成、（ｂ）当該第１血管層を流体力学分析のためのモデルに変換、（ｃ）チャネル網内の剪断応力及び速度を確認するために特定流体の特性、流入圧、流出圧、全流量及びそれらの組み合わせからなる群より選択される所望のパラメータに基づいて第１血管層を分析、（ｄ）剪断応力及び速度を測定して、得られた値を所定値と比較、（ｅ）剪断応力又は速度のどちらかが所定値より高いか、又は低いかどうかを確認、（ｆ）随意的に第１血管層を改変して、（ｂ）〜（ｅ）の工程を繰り返す。【選択図】図１
2014237003.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１本の流入チャネル及び少なくとも１本の流出チャネル、並びに当該少なくとも１本の流入チャネルと当該少なくとも１本の流出チャネルとを少なくとも部分的に結び付けている少なくとも２本の仲介チャネルを有するチャネル網を規定している基板であって、それぞれのチャネルは高さ及び幅を有し、このとき当該仲介チャネルはＭｕｒｒａｙの法則にしたがって、当該流入及び流出チャネルの隣接部分に関して高さ及び幅を変化させることによって形成される基板を含有してなる、人工血管層。
【請求項２】
当該血管網を通過する血液をさらに含有してなる、請求項１に記載の人工血管層。
【請求項３】
当該チャネル網が、当該チャネル内の血栓形成を減少させるために関連する剪断応力及び速度を調節することによって改変される、請求項１に記載の人工血管層。
【請求項４】
改変が、当該チャネルにフィレットを形成することを含有している、請求項３に記載の人工血管層。
【請求項５】
血管層が、少なくとも１本の流入チャネル及び少なくとも１本の流出チャネル、並びに当該少なくとも１本の流入チャネルと当該少なくとも１本の流出チャネルとを少なくとも部分的に結び付けている少なくとも２本の仲介チャネルを有するチャネル網を規定している基板であって、それぞれのチャネルが高さ及び幅を有し、このとき当該仲介チャネルはＭｕｒｒａｙの法則にしたがって、当該流入及び流出チャネルの隣接部分に関して高さ及び幅を変化させることによって形成される基板を含有している、組織薄膜において使用するための血管層を含有してなる組成物。
【請求項６】
当該少なくとも２本の仲介チャネルのアスペクト比が１：１である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
当該仲介チャネルの直径が、約２４１μｍである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
当該少なくとも２本の仲介チャネルが、底隅部を形成するために対向する側壁間に伸びており、当該底隅部内にフィレットをさらに含有している底部を有している、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
当該少なくとも２本の仲介チャネルの周囲に移行領域をさらに含み、当該移行領域は底部への傾斜路及び当該側壁への先細になっている区間を規定している、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
当該少なくとも２本の仲介チャネルの前で当該少なくとも１本の流入チャネル内に分岐部及び三分岐部をさらに含有していて、当該分岐部及び三分岐部はＭｕｒｒａｙの法則にしたがって形成されている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
当該少なくとも２本の仲介チャネルの後で当該少なくとも１本の流出チャネル内に分岐部及び三分岐部をさらに含有していて、当該分岐部及び三分岐部はＭｕｒｒａｙの法則にしたがって形成されている、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
当該少なくとも１本の流入チャネル、当該少なくとも１本の流出チャネル、及び当該仲介チャネル全部が長さを有し、当該仲介チャネルの長さが当該少なくとも１本の流入及び流出チャネルのそれぞれの長さより短い、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
当該基板がシリコンである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
当該シリコンをコーティングしているコラーゲン膜をさらに含有してなる、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
当該シリコン上にヘパリンコーティングをさらに含有してなる、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
当該基板がコラーゲンである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
当該コラーゲン基板内にエラスチンをさらに含有してなる、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
当該コラーゲン基板内にフィブロネクチンをさらに含有してなる、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１９】
実質細胞を保持するためのチャンバを規定している基板及び半透過膜を有する第２層をさらに含有してなり、当該半透過膜が当該血管層と当該第２層との間に配置されている、請求項５に記載の組成物。
【請求項２０】
当該半透過膜が、当該血管層中の流体又は気体と当該チャンバ内の実質細胞との間での少なくとも１つの小化合物の交換を可能にするように構成されている、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
当該流体が、血液、血漿又は媒体である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
当該少なくとも１つの小化合物が、酸素、栄養素、二酸化炭素及び老廃物からなる群より選択される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
当該実質細胞が、幹細胞に由来する、又は心臓、肝臓、膵臓、腸、脳、腎臓、生殖組織、肺、筋肉及び骨髄からなる群より選択される臓器に由来する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２４】
血管へ接続するためのノズルを有し、当該ノズルと流体連絡している分配網を規定しているヘッダー層と、
当該分配網と流体連絡している血管チャネル網を規定している基板を有する第１血管層であって、当該血管網が、複数部分に繰り返し分岐して、流出チャネルを形成するために再統合する少なくとも１本の流入チャネルを含有していて、当該流入及び流出ャネルは高さ及び幅を有し、このとき当該分岐した部分がＭｕｒｒａｙの法則にしたがって、当該流入及び流出チャネルの隣接部分に関して高さ及び幅を変化させることによって形成される第１血管層と、
当該血管層内の流体から酸素と栄養素を受け取るように構成されている、実質細胞を保持するためのチャンバを規定している層と、を含有してなるデバイス。
【請求項２５】
当該デバイスが、臓器を補助するか、又は臓器を置換するための医療デバイスを含有してなる、請求項２４に記載のデバイス。
【請求項２６】
当該デバイスが、薬物の見出し、開発、及び／又は評価のための手法を含有してなる、請求項２４に記載のデバイス。
【請求項２７】
当該デバイスが、インビトロ（試験管内）又はエクスビボでの研究及び試験のためのプラットフォームを含有してなる、請求項２４に記載のデバイス。
【請求項２８】
静脈と接続するために流出チャネルと流体連絡しているノズルを有する第２ヘッダー層をさらに含有してなる、請求項２４に記載のデバイス。
【請求項２９】
当該分配網と流体連絡しているチャネルの第２血管網を規定している基板を有する第２血管層をさらに含有していて、当該第２血管網が、複数部分に繰り返し分岐して、流出チャネルを形成するために再統合する少なくとも１本の流入チャネルを含有していて、当該流入及び流出ャネルが高さ及び幅を有し、このとき当該分岐した部分はＭｕｒｒａｙの法則にしたがって、当該流入及び流出チャネルの隣接部分に関して高さ及び幅を変化させることによって形成される、請求項２４に記載のデバイス。
【請求項３０】
当該第１血管層が、その中に流体からの栄養素を実質細胞へ濾過するための孔を規定している、請求項２４に記載のデバイス。
【請求項３１】
当該第１血管層と実質細胞を保持するためのチャンバを規定している当該層との間に配置された半透過膜をさらに含有してなる、請求項２４に記載のデバイス。
【請求項３２】
当該少なくとも１本の流入チャネルが少なくとも１回は三分岐する、請求項２４に記載のデバイス。
【請求項３３】
当該血管網を通過する血液をさらに含有してなる、請求項２４に記載のデバイス。
【請求項３４】
当該チャネル網が、当該チャネル内の血栓形成を減少させるために関連する剪断応力及び速度を調節することによって改変される、請求項２４に記載のデバイス。
【請求項３５】
流体網を含有してなる足場を作製する方法であって、
（ａ）チャンバを取り囲み、流体を当該チャンバ内の細胞へ提供するための第１血管層（この第１血管層は流体のためのチャネル網を有している）を作成すること；
（ｂ）当該第１血管層を流体力学分析のためのモデルに変換すること；
（ｃ）チャネル網内の剪断応力及び速度を確認するために特定流体の特性、流入圧、流出圧、全流量及びそれらの組み合わせからなる群より選択される所望のパラメータに基づいて当該第１血管層を分析すること；
（ｄ）剪断応力及び速度を測定して、得られた値を所定値と比較すること；及び
（ｅ）当該剪断応力又は当該速度のどちらかが当該所定値より高いか、又は低いかどうかを確認すること；の工程を包含している方法。
【請求項３６】
（ｆ）当該第１血管層を随意的に改変して、（ｂ）〜（ｅ）の工程を繰り返すことをさらに包含している、請求項３５に記載の作製の方法。
【請求項３７】
当該チャネル内の血栓形成を減少させるために関連する剪断応力及び速度を調節することによって当該チャネルを改変することをさらに包含している、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
当該方法が、細胞を保持するためのチャンバを規定している細胞層を作製すること、当該細胞層及び当該第１血管層を結合すること、細胞を当該チャンバ内に播種すること、及び当該第１血管層に血液を通過させることによって当該細胞に栄養素を供給することの工程をさらに包含している、請求項３５に記載の作製の方法。
【請求項３９】
当該方法が、当該第１血管層と当該細胞層の間に半透過性層を提供することをさらに包含している、請求項３５に記載の作製の方法。
【請求項４０】
当該半透過性層が、約０．０１μｍ〜約２０μｍの孔を有する、請求項３９に記載の作製の方法。
【請求項４１】
当該半透過性層が、セルロース、ポリジメチルシロキサン、ポリメチルメタクリレート、ポリエーテルスルホン、ポリスルホン、ポリカーボネート、ポリラクチド−ｃｏ−グリコリド、ポリカプロラクトン及びバイオラバーからなる群より選択される材料から作製される、請求項３９に記載の作製の方法。
【請求項４２】
当該細胞が実質細胞である、請求項３８に記載の作製の方法。
【請求項４３】
第２血管層及びそれぞれの細胞層を当該第１血管層に結合する工程をさらに包含していて、当該第１血管層及び当該第２血管層が血液供給源を共有している、請求項３５に記載の方法。
【請求項４４】
当該所定値が、特定臓器についての対応するパラメータとほぼ等価である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４５】
当該特定の臓器が、肝臓、肺及び腎臓からなる群より選択される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
当該改変の工程（ｆ）が、構造体を、速度が所定値より下方である領域内に埋め戻すことを包含している、請求項３６に記載の方法。
【請求項４７】
当該足場を患者の血液供給源へ結合する工程をさらに包含している、請求項３５に記載の方法。
【請求項４８】
インビボで当該足場を使用する工程をさらに包含している、請求項３５に記載の方法。
【請求項４９】
エクスビボで当該足場を使用する工程をさらに包含している、請求項３５に記載の方法。
【請求項５０】
臓器を補助するために当該足場を使用する工程をさらに包含している、請求項３５に記載の方法。
【請求項５１】
臓器を置換するために当該足場を使用する工程をさらに包含している、請求項３５に記載の方法。
【請求項５２】
健常な臓器の約３０％の機能を実施させるために当該足場を使用する工程をさらに包含している、請求項３５に記載の方法。
【請求項５３】
約１５〜７０ダイン／ｃｍ２である動脈剪断応力を使用する工程をさらに包含している、請求項３５に記載の方法。
【請求項５４】
約１〜６ダイン／ｃｍ２である静脈剪断応力を使用する工程をさらに包含している、請求項３５に記載の方法。
【請求項５５】
約８ｍＬ／分である流量を使用する工程をさらに包含している、請求項３５に記載の方法。
【請求項５６】
当該足場にヒト細胞を播種すること、及び薬物の毒性、安全性及び／又は有効性を評価するために当該足場を使用することの工程をさらに包含している、請求項３５に記載の方法。
【請求項５７】
コラーゲンから血管層を作製するためにＥＤＭを用いて鋳型をマイクロフライス盤加工する工程をさらに包含している、請求項３５に記載の方法。
【請求項５８】
流出チャネルを形成するために再統合するチャネル網を形成するように分岐する流入チャネルを規定している基板であって、ここで当該チャネル網が、親チャネルの直径の三乗がそれぞれの娘チャネルの三乗の合計にほぼ等しくなるように、当該娘チャネルの高さ及び／又は幅を変化させることによって形成されている基板を含有してなる、組織薄膜において使用するための血管層。
【請求項５９】
当該直径が、チャネル周径で割ったそれぞれのチャネルの断面積の４倍に等しい水力直径として規定される、請求項５８に記載の血管層。
【請求項６０】
当該血管網を通過する血液をさらに含有してなる、請求項５８に記載の血管層。
【請求項６１】
当該チャネル網が、当該チャネル内の血栓形成を減少させるために関連する剪断応力及び速度を調節することによって改変される、請求項５８に記載の血管層。
【請求項６２】
少なくとも１本の流入チャネル及び少なくとも１本の流出チャネル、並びに当該少なくとも１本の流入チャネルと少なくとも１本の流出チャネルとを少なくとも部分的に結び付けている少なくとも２本の仲介チャネルを有するチャネル網を規定している基板であって、それぞれのチャネルは高さ及び幅を有し、ここで当該仲介チャネルがＭｕｒｒａｙの法則にしたがって、当該流入及び流出チャネルの隣接部分に関して高さ及び幅を変化させることによって形成される基板を含有していて、
当該人工血管網が、
（ａ）チャネルが細胞に流体を提供している、チャネル網を規定する基板を作製すること；
（ｂ）当該チャネル網を流体力学分析のためのモデルに変換すること；
（ｃ）チャネル網内の剪断応力及び速度を確認するために特定流体の特性、流入圧、流出圧、全流量及びそれらの組み合わせからなる群より選択される所望のパラメータに基づいて当該チャネル網を分析すること；
（ｄ）剪断応力及び速度を測定して、当該得られた値を所定値と比較すること；及び
（ｅ）剪断応力又は速度のどちらかが所定値より高いか、又は低いかどうかを確認すること：
の工程を包含している方法によって作製されている人工血管網。
【請求項６３】
当該方法が、（ｆ）当該第１血管層を随意的に改変して、（ｂ）〜（ｅ）の工程を繰り返すことをさらに包含している、請求項６２に記載の人工血管網。
【請求項６４】
当該方法が、細胞を保持するためのチャンバを規定している細胞層を作製すること、当該細胞層及び当該第１血管層を結合すること、細胞を当該チャンバ内に播種すること、当該第１血管層に血液を通過させることによって当該細胞に栄養素を供給することの工程をさらに包含している、請求項６２に記載の人工血管網。
【請求項６５】
当該方法が、当該足場内に内皮細胞を播種すること、及び当該血管網に血液を通過させることの工程をさらに包含している、請求項６２に記載の人工血管網。
【請求項６６】
少なくとも１本の流入チャネル及び少なくとも１本の流出チャネル、並びに当該少なくとも１本の流入チャネルと少なくとも１本の流出チャネルとを少なくとも部分的に結び付けている少なくとも２本の仲介チャネルを有するチャネル網を規定している基板であって、それぞれのチャネルは高さ及び幅を有し、ここで当該仲介チャネルがＭｕｒｒａｙの法則にしたがって、当該流入及び流出チャネルの隣接部分に関して高さ及び幅を変化させることによって形成される基板を含有してなる、薬物を評価するためのプラットフォーム。
【請求項６７】
当該チャネル網が、当該チャネル内の血栓形成を減少させるために関連する剪断応力及び速度を調節することによって改変される、請求項６６に記載のプラットフォーム。
【請求項６８】
請求項６６に記載のプラットフォーム及び取扱説明書を含有してなるキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本出願は、２００７年４月１２日に出願された米国特許仮出願第６０／９２３，３１２号、及び２００７年４月１２日に出願された米国特許仮出願第６０／９２３，４７４号に対する優先権を主張し、そのそれぞれの全内容は参照により本明細書に組み込まれている。
【０００２】
（政府の支援に関する陳述）
本明細書に記載した研究の一部は、米国国立衛生研究所の助成金番号第１Ｆ３２ＤＫ０７６３４９−０１号及び同第Ｔ３２ＤＫ０７７５４-０９号により支援された。米国連邦政府は、本発明におけるある特定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
臓器移植は、末期の臓器疾患を有する患者のための有望な治療法として浮上してきたが、米国内においても世界的に見ても一様に臓器不足の状態にある。肝臓、肺及び心臓の移植を待ち望んでいる患者が、移植待機期間が長期に及ぶことにより臓器を受け入れる前に死亡するケースが頻繁に見受けられる。人工臓器は、臓器を補助するために、又は臓器不足の解決策として臓器を置換するためにさえも使用できる。
【０００４】
肝臓又は腎臓などの生体組織工学的に作製された固形臓器の開発は、典型的には２つの主要な構成要素、即ち、実質細胞、及び実質細胞へ酸素と栄養素を供給するための血管網に左右される。酸素と栄養素が血管から組織を通過して拡散する距離は極めて短い（例えば、数百ミクロン）。肝細胞などの細胞を三次元容器内で増殖して、身体内の血管近くに配置させても、血管に極めて近い細胞しか生存しないであろう。新生血管は、長期間後には移植細胞中へと成育できるが、現存する血管から遠い細胞の多くは直ちに血液が供給されなければ死滅するであろう。
【０００５】
本発明のデザインは、生体組織工学的に作製された固形臓器のための足場の中心部分として血管網を提供する。血管網は、臓器にその機能を与えるために同様に足場に配置される他の細胞（例えば、生体組織工学的に作製された肝臓のための肝細胞）へ酸素と栄養素を送達するための血液供給源として機能する。この取り組みは、特定の臓器のために天然の循環へ吻合されている流入血管から、実質細胞へ灌流させる最小血管に至る血管網をデザインすることを可能にする。生体組織工学的に作製された臓器は、実質細胞の近位に既に適切に配置されている血管とともに移植される。これは、肝臓、肺、心臓、腎臓などの肉厚の固形臓器又は他の臓器若しくは組織を作製して移植することを可能にする。
【０００６】
身体において、臓器に血液供給する血管は、典型的には臓器へ１本の単一血管（典型的には動脈）として進入し、次いでそれらが毛細血管として公知の最小血管を形成するまで径を減少させながら表面積を大きく増加させるパターンで枝分かれしていく。毛細血管は、臓器の細胞に酸素と栄養素を供給し、老廃物を除去する。血管は、毛細血管から類似の枝分かれパターンで合流していき、その臓器から単一血管（典型的には静脈）として出ていくことが多い。当該技術分野においては、移植後の持続性機能を提供するために、そのような生理学的血管網を有する生体組織工学的に作製された臓器に対する必要性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の技術の目的の１つは、天然臓器に類似する構造を有し、十分な期間にわたり機能不全を伴わずに類似機能を果たすことのできる、生体組織工学的に作製された臓器を提供することである。好ましくは、生体組織工学的に作製された臓器は、低い血栓形成性及び高い充填効率を有する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の技術が、インビボ（生体内）又はエクスビボ（生体外）において臓器を置換する、臓器を補助する、臓器を一時的に置換する、そしてヒト細胞における薬物の有効性及び安全性を確認するために使用できるということを、本発明は意図している。
【０００９】
本発明の技術の１つの態様では、流体網を含有している足場を作製する方法を提供する。当該方法は、（ａ）チャンバを取り囲み、流体を細胞へ提供するための第１血管層（この第１血管層は流体のためのチャネル網を有している）を作成すること、（ｂ）前記第１血管層を流体力学分析のためのモデルに変換すること、（ｃ）チャネル網内の剪断応力及び速度を確認するために特定流体の特性、流入圧、流出圧、全流量及びそれらの組み合わせからなる群より選択される所望のパラメータに基づいて前記第１血管層を分析すること、（ｄ）剪断応力及び速度を測定して、得られた値を所定値と比較すること、（ｅ）剪断応力又は速度のどちらかが所定値より高いか、又は低いかどうかを確認すること、及び（ｆ）随意に前記第１血管層を改変して、（ｂ）〜（ｅ）の工程を繰り返すことを包含している。前記第１血管層は、コラーゲンから作製することができる。
【００１０】
本発明の技術の別の態様では、組織薄膜において使用するための血管層を含有している組成物を指向している。血管層は、少なくとも１本の流入チャネル及び少なくとも１本の流出チャネル、並びに少なくとも１本の流入チャネル及び少なくとも１本の流出チャネルを少なくとも部分的に結び付けている少なくとも２本の仲介チャネルとを有するチャネル網を規定している基板を含有していて、それぞれのチャネルが高さ及び幅を有していて、ここで仲介チャネルはＭｕｒｒａｙの法則に従って、流入及び流出チャネルの隣接部位についての前記高さ及び幅を変化させることによって形成される。
【００１１】
本発明の技術は、少なくとも１本の流入チャネル及び少なくとも１本の流出チャネル、並びに少なくとも１本の流入チャネル及び少なくとも１本の流出チャネルを少なくとも部分的に結び付けている少なくとも２本の仲介チャネルとを有するチャネル網を規定する基板を含有している人工血管網も提供する。それぞれのチャネルは、高さ及び幅を有していて、ここで仲介チャネルはＭｕｒｒａｙの法則に従って、前記流入及び流出チャネルの隣接部分についての前記高さ及び幅を変化させることによって形成される。人工血管網は、（ａ）チャネルが細胞に流体を提供している、チャネル網を規定する基板を作製すること、（ｂ）チャネル網を流体力学分析のためのモデルに変換すること、（ｃ）チャネル網内の剪断応力及び速度を確認するために特定の流体の特性、流入圧、流出圧、全流量及びそれらの組み合わせからなる群より選択される所望のパラメータに基づいてチャネル網を分析すること、（ｄ）剪断応力及び速度を測定し、得られた値を所定値と比較すること、及び（ｅ）剪断応力又は速度のどちらかが所定値より高いか、又は低いかどうかを確認することの工程を包含している方法によって作製される。
【００１２】
別の態様は、血管へ接続するためのノズルを有していて、ノズルと流体連絡している分配網を規定しているヘッダー層と、及び分配網と流体連絡している血管チャネル網を規定している基板を有する第１血管層を含有している、臓器を補助するか
又は置換するための医療デバイスであって、血管網は、再結合して流出チャネルを形成する複数の部分に繰り返し分岐する少なくとも１本の流入チャネルを含有していて、流入及び流出ャネルは高さ及び幅を有し、ここで分岐した部分はＭｕｒｒａｙの法則に従って流入及び流出チャネルの隣接部分位についての前記高さ及び幅を変化させることによって形成される。別の層は、血管層の流体から酸素と栄養素を受け取るように構成されている実質細胞を保持するためのチャンバを規定する。
【００１３】
膜は、血管層を実質チャンバから分離する。好ましくは、膜は半透過性であり、膜の細孔径は細胞直径より小さいので、細胞は通過できないが（すなわち、動物細胞にとっては低透過性）、低分子量の栄養分、気体及び流体は通過できるので（すなわち、低分子量化合物にとっては高透過性）、それにより適正な細胞間シグナル伝達を提供する。細胞サイズは様々であるが、一般には、細胞サイズはミクロンサイズの範囲内にある。例えば、赤血球は、約８μｍの直径を有する。好ましくは、平均膜細孔径は、細胞の効果的なスクリーニングを保証するためにサブミクロンスケールにある。肺への適用等のためには、膜は、二酸化炭素、酸素及びそれを通過する同様の気体の通過もまた許容できなければならない。
【００１４】
本発明の技術により生体組織工学的に臓器を作製するための血管網は、天然臓器内の血管についてと同一の取り組みに従う。血管網における生理学的デザイン原理の複製を本明細書では語句「バイオミメティック血管網」と示す。
【００１５】
本明細書に記述する本発明の技術は、バイオミメティック血管網の理論、概念、デザイン、製造、試験及び適用を包含する。これらの血管網は主として、臓器又は他の哺乳動物組織などの生体組織工学的に作製された構造体を産生するための足場の中心部分として適用される。この技術は、例えば手法として、例えば薬物の発見、開発及び／又は評価（具体的には、毒性、安全性及び／又は有効性）するためのプラットフォームとして、並びにインビトロ（試験管内）又はインビボ研究及び試験のためのプラットフォームとして更に適用される。
【００１６】
本発明は、限定されることなく、方法、装置、システム、デバイス、キット（例えば、本明細書に記述するプラットフォームの１つ及び使用説明書を含有しているキット）、既に公知又は今後開発される適用のための方法又はコンピュータ可読媒体を含有している極めて多数の方法で実施及び利用できることを理解されたい。本明細書に開示したシステムのそれら及びその他の固有の特性は、以下の説明及び添付の図面からより容易に明白になるであろう。
【００１７】
本発明のその他の態様及び付随する多くの利点は、添付の図面と組み合わせて下記の詳細な説明を参照することによってより明確になり、容易に理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の技術による血管網の分岐部分の斜視図を示す。
【図２】本発明の技術による血管網の三分岐部分の斜視図を示す。
【図３】本発明の技術による血管網のデザインの上面図である。
【図４】図３の血管網のデザインの一部分のより詳細な上面図である。
【図５】本発明の技術による図３の血管網のデザインを用いるインプラント構成要素の分解図である。
【図６】図５のインプラントの組み立て斜視図である。
【図７】本発明の技術による単純な血管網のデザインを用いるインプラントの組み立て断面図である。
【図８】本発明の技術による多重血管層を備える別のインプラントの断面図である。
【図９】インビトロ血液検査及び図６のインプラントを通る血流の分析の結果のグラフである。
【図１０】本発明の技術による別の血管網のデザインの斜視図である。
【図１１】図１０の血管層の詳細図である。
【図１２】インビトロ血液検査及び図１０の血管層を用いるインプラントを通る血流の分析の結果のグラフである。
【図１３】本発明の技術による繰り返し多角形パターンを利用する血管網のデザインである。
【図１４】本発明の技術によるコラーゲン膜を用いて作製された血管網の一部分である。
【図１５】肝臓補助デバイスとして配置された、本発明の技術によるインプラントである。
【図１６】肺補助デバイスとして配置された、本発明の技術によるインプラントである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明は、生体組織工学的に作製された血管網及び人工固形臓器に関連する先行技術の多くの挑戦課題を克服するものである。本明細書に開示した本発明の技術の利点及び、その他の特徴は、本発明の代表的な実施態様を表示しており、同様の参照符号が同様の構成要素を特定する図面と組み合わせて説明されている特定の態様についての以下の詳細な説明から、当業者にはより明白になるであろう。
【００２０】
本発明の技術は、当業者であれば、本開示を読んだ後に自明な変法を用いて、包含される概念を拡張することができるので、本明細書に記述される実施態様に記載される特定の構築物及び方法に限定されることを意図していないことを理解されたい。本明細書に記述される方法及び材料と類似の又は等価である何れの方法及び材料も、本発明の技術の実施において有用であり得るが、ある特定の組成物、膜、方法及び材料について以下に記述する。例えば、上部、底部、左、右、上、及び下などの本明細書での全ての相対的説明は、図面を参照するものであり、意味を限定することを意図していない。
【００２１】
十分に機能する最適な血管網のデザインを作製する工程は、身体内の血管の基本的構造を識別して学習することによって支援される。動脈、毛細管及び静脈の血管網は、複雑である。しかし、基本的構造原理は、現在入手可能な製造方法の制限内で利用することができる。血管については数種の基本原理が存在しており、これらは本発明の技術に利用され、本明細書に記述するバイオミメティック血管網のデザイン内に組み込まれている。概念及び得られたデザインは、計算流体力学（ＣＦＤ）分析を用いてさらに有利に精緻化される。
【００２２】
身体内の血管は、Ｍｕｒｒａｙ法則として公知である、親血管の直径と得られる娘血管の直径との間に特定の関係を有する。一般に、Ｍｕｒｒａｙ法則は、親血管の直径の三乗は全娘血管の直径の三乗の合計と等価であると提示している。分岐チャネルについては、Ｍｕｒｒａｙの法則は、ｄ０３＝ｄ１３＋ｄ２３（式中、ｄ０は、親血管の直径であり、ｄ１及びｄ２は娘血管の直径である）として示される。矩形チャネルに関する（して）直径について（の言及）は、水力直径＝４＊（チャネルの断面積）／（チャネルの周長）として規定されたチャネルの水力直径を示している。
【００２３】
Ｍｕｒｒａｙの法則の原理は１９３０年代に記載され、それ以降に多数の試験において確証されてきた。Ｍｕｒｒａｙの法則の原理は、血液の大量輸送の効率を最適化し、血管又はチャネル内の剪断応力を制御することにある。身体の血管内の剪断応力は、生理的範囲内で厳密に制御されている。動脈についての剪断応力は、典型的には１５〜７０ダイン／ｃｍ２の範囲内にあり、静脈についての剪断応力は、典型的に１〜５ダイン／ｃｍ２の範囲内にある。血管分岐部は、全血管網にわたって極めて一様な剪断応力を有する。
【００２４】
剪断応力を制御することは、血管網内での血栓の形成を最小限に抑え、正常な生理的パラメータ内で酸素と栄養素の交換をもたらすことを保証するために極めて重要である。本明細書に記述する血管網のデザインでは、血管網に伴う血栓症を減少する又は排除するために、適切な剪断応力のためのバイオミメティックのデザイン原理を用いた。
【００２５】
血管網のデザイン
図１を参照すると、代表的な単純な血管網の分岐部分１０が斜視図で示されている。血管網部分１０は、その中に形成されたチャネルを有する基板１１を含有する。親血管又はチャネル１２は、２本の娘血管１４に分岐する。Ｍｕｒｒａｙの法則によると、娘血管１４が同等であれば、Ｍｕｒｒａｙの法則はｄ０３＝２（ｄ１３）と単純化される。例えば、親血管１２の直径が１，０００μｍである場合は、それぞれの娘血管１４の直径は７９４μｍになる。娘血管１４は、さらに小さな血管１６へ分岐する。この例については、Ｍｕｒｒａｙの法則によると、得られる小さな血管１８及び２０の直径は６３０μｍになる。
【００２６】
小さな血管１６は再統合して大きな血管１８を形成し、これは次いで結合して血管２０を形成する。１つの態様では、より小さな血管１６は、身体内で見いだされる毛細血管の最も代表的な血管である。しかし、親チャネル１２、１４は、最小チャネル１６と同様の様式で栄養素、気体、及び老廃物交換に関与することができる。さらに、最小血管１６から形成されるチャネル１８、２０は、身体内の毛細血管又は小静脈又は静脈と幾分類似している。同様に、チャネル１８、２０も、最小チャネル１６のように栄養素、気体、及び老廃物交換に関与することができる。
【００２７】
血管１２、１４、１６、１８、２０は、線形構造から形成され、実質的に長方形である。別の態様では、血管１２、１４、１６、１８、２０は、円形又は楕円形の形状であってもよい。血管１２、１４、１６、１８、２０が長方形である場合は、血管１２、１４、１６、１８、２０は１：１のアスペクト比、例えば幅及び深さが等しい、を有してもよい。別の態様では、血管１２、１４、１６、１８、２０は、１：２、２：１などのアスペクト比を有していてもよい。さらに、例えば１００：１又は１：１００の範囲などの何れのアスペクト比も、血管網の特定の適用に応じて考慮することができる。
【００２８】
図２を参照すると、血管網の三分岐部分３０の斜視図が示されている。三分岐部分３０は、身体内で一般に生じるように、２本の等しい娘血管３４及びより大きな娘血管３６に分岐する、親血管３２を形成する基板３１を含有している。この事象では、Ｍｕｒｒａｙの法則は、ｄ０３＝ｄ１３＋ｄ２３＋ｄ３３である。好ましくは、Ｍｕｒｒａｙの法則は、チャネル３２、３４、３６間の最大間隔が酸素と栄養素の最大拡散距離を超えないような適正な毛細管チャネル密度を達成するように適用される。
【００２９】
１つの態様では、チャネル間の最大距離は４０μｍを超えない。別の態様では、この最大距離は５００μｍを超えない。別の態様では、この最大距離は、２００μｍ〜３００μｍの範囲内にある。別の態様では、チャネルの大多数は最大距離内に含まれ、小数のチャネルはそれらの間に好ましい最大値より長い距離を有する。血管網は、Ｍｕｒｒａｙの法則及び本明細書に記述する他のデザイン原理にしたがうか、又は近似すること、そしてチャネル間の所望の最大距離の達成をもたらす分岐戦略を達成することの両方を必要とする。
【００３０】
一般に、身体内の親血管と娘血管との間の分岐角度は、娘血管の相対径に関連している。これらの関係は、文献に記載されている。原理上は、図１に示したような直径が等しい２本の娘血管が存在する場合、親血管１２の軸２４と娘血管との間の好ましい角度２２は、ほぼ４５度である。
【００３１】
さらに図２を参照すると、１又は２本の娘血管３４は別の娘血管３６より小さく、親血管３２の軸４０と娘血管３４との間の好ましい角度３８は４５度より大きくなって９０度に近づくが、これは娘血管３４が親血管３２及び他の娘血管３６よりはるかに小さくなるからである。これらの分岐角度についてのバイオミメティック原理にしたがうと、最小限の剪断崩壊を伴う一様な血流量、そして即ち血小板活性化を達成するのに役立つ。
【００３２】
図２の態様では、より小さい娘チャネル３４は、チャネル３４の底部４２が親チャネル３２の底部４４に対して同一平面上にはないが、チャネル３２、３４のそれぞれの上部は同一平面上にあるように方向付けられる。結果として、チャネル３２、３４間の移行部には縁４６が作り出される。さらに、垂直縁４８が同一移行部に作り出される。縁４６、４８は、デバイス内の剪断応力集中、流れの分離、停止又は乱流に対する潜在的領域である。
【００３３】
さらに図２を参照すると、親チャネル３２の底部４４は、それぞれの側に曲率半径又はフィレット５０を含有している。曲率半径５０の存在しない場合、隅部領域では血流速度がチャネル３２の他の部分より遅くなる。フィレット５０の追加により、チャネル３２内のより一様な速度がもたらされる。
【００３４】
フィレット５０のサイズ、形状及び位置は、規定モデル内の流体の挙動を予測するために流体の流れを分析することに使用される手法である計算機流体力学（ＣＦＤ）を用いて選択される。ＣＦＤ手法の１つのバージョンは、ＳｏｌｉｄＷｏｒｋｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社（Concord, Massachusetts）から入手できるＳＯＬＩＤＷＯＲＫＳ（登録商標）３Ｄ  ＣＡＤソフトウエア中のＦＬＯＷＯＲＫＳ（登録商標）モジュールである。血管網のデザインは、三次元でモデル化（リング）されて、次いで選択されたパラメータに関して機能の性能を繰返し適用させて評価するためにＣＦＤ分析を用いて分析される。
【００３５】
公知のバイオミメティック原理から血管網のデザイン構成要素の改変を行うことができるが、ガイドライン又は境界条件として確立されて使用されている、血管網を通る流体流の目標又は基準が存在する。例えば、標的剪断応力、流入圧、流出圧及び得られる流量が、デザインの主要な目標となり得る。デザインの別の目標には、流れの分離を最小限に抑えること、低流速及び／又は停滞の領域を最小限に抑えることを含むことができる。
【００３６】
１つの態様では、血管網のＣＦＤ分析のために規定された境界条件は、流入圧、流出圧及び流量の組み合わせである。この分析は、血管網を通って流動する流体として非ニュートンモデルにおける血液に焦点を当てる。ＣＦＤモジュールが分析を完了した後、結果が、詳細には血管網を横断する圧低下、血管網内の流量、血管網の全壁上の剪断応力、及び速度の一様性を含むチャネル内の速度が精査される。いずれかのパラメータが目標範囲外に含まれていると、デザインは改変され、分析が繰り返される。
【００３７】
例えば、特定の領域内の剪断応力が高すぎると、そのデザイン領域は改変され、分析が再び実行される。デザインの多数の機能を最適化するために、最適ではないデザインの領域を確認して、デザインを変更して、そして分析を再び実行するという分析の精査の反復順序が繰り返される。例えば、最適な流動のためにＣＦＤ分析に応じて、それぞれの縁のフィレット又は規定曲率を変動させることができる。再び図２を参照して、チャネル３２の寸法と相対的なフィレット５０の寸法を、ＣＦＤ分析を用いて最適化した。
【００３８】
さらに、チャネル３２とチャネル３４との間の移行部におけるフィレット４６、４８及び４９は、各々相違するパラメータである。デザイン変更、ＣＦＤ分析及び結果の精査を連続的に反復することは、チャネル３２、３４及び３６の集合部での流動が剪断応力変化を最小限に抑えて、よって血餅形成のリスクを最小限に抑えて一様であるように、１つのユニットとしてそれぞれのフィレットだけではなく分岐部も最適化することができる。反復工程の結果として、最小限の流動障害を伴う分岐チャネルデザインを形成することができる。
【００３９】
図３及び４を参照すると、血管網のデザイン６０の上面図が示されている。血管網のデザイン６０は、放射状六角形パターンに配列されている、肝臓の血管系の基本構造を複製している。血管網のデザイン６０は、チャネル６２を仲介する六角形領域又は肝葉６４（図４において最適に見ることができる）を備えるチャネル６２を形成している基板６１を含有する。肝臓のそれぞれの六角形領域は、中心静脈に向かって枝分かれしている肝葉の周辺に数本（通常は６本）の血管を有する。血管網のデザイン６０についての基本デザインは、肝葉と同様に組織化した。血管網のデザイン６０は、中心排出静脈６８に向かって複数に枝分かれしている６本の放射状に間隔をあけた流入チャネル６６を有する。
【００４０】
血管及び細胞が緊密に詰まった構造である肝葉とは相違して、血管網のデザイン６０の特定の点では、隣接チャネル間に顕著な間隔があることを明白に観察できる。血管網のデザイン６０の目標は、肝葉の基本的構造を指向して進めるが、バイオミメティックデザインの原理の有用性を理解するために血管網分岐パターンを単純なものに維持することであった。その他のデザインでは、酸素と栄養素の効果的送達を達成するためにはるかに密なパターンを追求することができる。
【００４１】
したがって、図３の平面的な血管網のデザイン６０では、流入チャネル６６及び流出中心静脈６８は、分岐チャネル６２に対して直角に方向付けられている。チャネル６２は、Ｍｕｒｒａｙの法則に従って計算された１：１のアスペクト比及び水力直径を備えた長方形である。チャネル６２は、流入チャネル６６と流体連絡している最初のチャネル７０から始まる。最初のチャネル７０は、分岐様式で、連続的により小さいチャネル７２、７４、７６、７８へ連続的に枝分かれする。直径の最も小さなチャネル７８は、好ましくは直径が２００μｍであるが、流入チャネルからの最初のチャネル７０は直径が６０８μｍである。チャネル６２は単純に分岐しているので、分岐角度は各々４５度である。同様に、チャネル６２は再統合して連続的により大きなチャネル８０、８２、８４、８６を形成するが、これらもまた流出中心静脈６８と流体連絡している最大の再統合チャネル８６との４５度の分岐角度を有する。
【００４２】
一般に、身体内では、血管直径が小さくなるほど、血管の長さは短くなり、毛細血管が最短の血管である。より詳細には、文献には、４ｍｍ径の動脈から８μｍ径の毛細血管まで血管径による数種の血管の長さが列挙されている。表計算プログラムにおいてこのデータを用いて、血管網のデザイン６０における異なる径のチャネルについてのバイオミメティックの長さを導き出すために、ベストフィット分析法を用いて三次多項方程式を決定した。直径がｘの血管については、長さｙを、方程式ｙ＝−１Ｅ−０９ｘ３＋８Ｅ−０６ｘ２＋０．０２５９ｘ＋０．１２２６によって決定した。
【００４３】
血管網のデザイン６０については、最小チャネル７８は直径が２００μｍであり、既述の方程式から導き出されたバイオミメティックの長さ使用して６．７９ｍｍのバイオミメティック長を決定した。最小チャネル７８に先行する分岐チャネル７０、７２、７４及び７６並びにその後に続く分岐チャネル８０、８２、８４、及び８６は、鋳型のサイズ制約に起因して、それらのバイオミメティック長を備えて構築することはできなかった。このため、最小チャネル７８のバイオミメティック長を使用し、他のチャネル（７０、７２、７４、７６、８０、８２及び８４）の長さは、全血管網を直径が６インチの規定鋳型サイズ内に適合させることができるように、それらのバイオミメティック長の３９．２％に縮小した。よって、血管網のデザイン６０は、相違する径のチャネル間の長さ関係を保持しながら、均等に短くなる長さを使用している。別の態様では、全チャネルのバイオミメティック長を同等の様式で拡大縮小することができる。
【００４４】
動脈内の剪断応力は、１５〜７０ダイン／ｃｍ２である。チャネル６２は、剪断応力の集中を最小限に抑える湾曲を形成するために、ＣＦＤ分析による血流に応じてデザインされる。繰り返しのＣＦＤ分析の結果を使用する反復デザイン工程を通して、血管網のデザイン６０の曲率は、剪断応力の集中を最小限に抑えるように改良された。血管網のデザイン６０は、さらに流入チャネル７０、７２、７４、７６、７８の少なくともいくつかを動脈についての生理的剪断応力の範囲内に維持する。さらに、上述したように、チャネル６２は、特別には分岐点で、流動特性を改善するための曲率半径又はフィレットを有することができる。端的には、チャネル６２の全部は、剪断応力の変動を最小限に抑えるために、繰り返しＣＦＤ分析からの結果を用いて評価してかつ精密化することができる。
【００４５】
身体内の静脈系は、動脈系に比較して相当に大きな直径及び低い剪断応力を有している。したがって、静脈系内の剪断応力は、典型的には１〜５ダイン／ｃｍ２であり、これは動脈系内の剪断応力より低い。血管網のデザイン６０は、抵抗を最小限に抑え、静脈の剪断応力値を模倣するために、流出チャネル８０、８２、８４、８６内では低い剪断応力を有する。ヒトの静脈を複製するために低い剪断応力値を達成することと血栓形成が開始されうるほど過度に緩徐な血流を有することの間で均衡が図られる。よって、流出チャネル８０、８２、８４、８６は、流入チャネル７０、７２、７４、７６、７８に比較して、概して６〜１０ダイン／ｃｍ２の剪断応力値を達成するように直径が拡張されている。
【００４６】
他の態様では、血管網の流入部分についての剪断応力値は、正常な動脈の剪断応力値に対応させることができ、血管網の流出部分は正常な静脈の剪断応力値に対応させることができる。静脈系の直径の拡張の程度は、対応する流入血管径の１％〜５０％の範囲内にあってもよい。別の態様では、静脈の拡張の程度は、対応する静脈径の５％〜１５％の範囲内にあってもよい。血管網のデザイン６０は、流出部分において、流入部分における分岐パターンを綿密に複製する分岐パターンを有するが、他の態様では、流入及び流出部分の分岐パターンは類似していなくてもよい。さらに、血管網の流入領域の部分間の分岐パターンが流入網の他の領域よりも相違していてもよい。同様に他の態様では、血管網の流出領域の部分間の分岐パターンが、流出網の他の領域よりも相違していてもよい。
【００４７】
血管網のデザインを作製するための工程
生体組織工学的に作製される臓器を開発するための以前の血管網は、フォトリソグラフィ処理法を用いて作製された鋳型、並びに２００２年６月２８日に出願された米国特許出願第１０／１８７，２４７号及び２００４年１１月５日に出願された米国特許出願第１０／９８３，２１３号に記載されるシリコンを用いた複製鋳造法（replica casting）を利用して製造された。だがフォトリソグラフィ法では、チャネルの単一の深さ又は垂直段階的移行を伴う複数の深さしか作製できない。対照的に、血管網のデザイン６０は、多数の径が相違するチャネルを有し、これらのチャネルは、チャネルが１：１ではないアスペクト比を有する場合に最も一様な血流を達成することができる。さらに、チャネル間の一様な深さへの移行は、剪断応力変化を最小限に抑えることができる。剪断応力の変化及び関連する流動障害を最小限に抑えることによって、得られるデバイス内での血液凝固を最小限に抑えられるであろう。これに関連して、このデバイスは、低い血栓形成性を有すると特徴付けることができる。
【００４８】
血管網のデザイン６０を製造するための鋳型を作製するためにフォトリソグラフィを使用することは可能ではあるが、相違する製造工程、つまり放電加工（ＥＤＭ）装置又は（Microlution, Inc.(Chicago, Illinois）から入手できるマイクロマシンツール装置を使用した。ＥＤＭ処理法では、血管網のデザイン６０の反転画像又は鏡像の形状にある電極が、従来のフライス盤加工処理法を使用してグラファイトから作製される。次いでこの電極を使用して所望のパターンに金属を噴霧して、金属の又は血管の鋳型（図示していない）を作製する。鋳型は、好ましくはポジ型鋳型であり、よってチャネルの形態はベースから突き出る突起型である。血管網のデザイン６０を作製するためには、材料が突き出た血管網パターンの形状を取るように、材料を鋳型の上方に配置する。次いで材料内に血管網のデザイン６０のインプリントを残した状態で、鋳型を材料又は基板６１から取り除く。
【００４９】
血管網のデザインを使用して組み立てられたインプラント
図５を参照すると、血管網のデザイン６０を使用したインプラント１００の分解図が示されている。インプラント１００は、穿孔層１１０及びヘッダー層１２０を含み、これらは図６に示したようにチャネル６２を実質的に取り囲むために血管網のデザイン６０の上部に取り付けられる。血管網のデザイン６０は、血管網のデザイン６０内のチャネル６２の分岐パターンに対して直交する方向で流入を受け入れる流入口６６を有する。血流を血管から血管網のデザイン６０の流入口６６内へ方向付けるために、ヘッダー層１２０は単一中心流入口１２２から放射状チャネル１２４によって血液を分配する。
【００５０】
放射状外側端部では、放射状チャネル１２４は、穿孔層１１０内のそれぞれの貫通孔１１２と整列している開口部１２６を形成する。貫通孔１１２は順に、血液が単一中心流入口１２２から流入口６６へ流れるように血管網のデザイン６０の流入口６６と整列している。血液は、ヘッダー層の中心流入口１２２、ヘッダー層の放射状チャネル１２４、穿孔層１１０内の貫通孔１１２を通過して、血管網のデザイン６０の流入口６６内へ、そしてチャネル６２の分岐パターンを通過して血管網のデザイン６０の中心開口部６８の外へ流れる。
【００５１】
図７を参照すると、単純化した血管網のデザイン６０を使用したインプラント又は足場１００の組み立て断面図が示されている。血液は、流入ノズル１３０を通って足場１００に進入する。血液の流路は、矢印「ａ」によって指示されている。血液は、血液を分離してチャネル１２４を通して放射状外側へ方向付けているヘッダー層１２０を通過する。血液は次いで、穿孔層１１０内の貫通孔１１２を通って血管層６０の流入口６６内へ流れる。血液は次いで血管網のデザイン６０のチャネル６２を通過するように方向付けられ、そして血液は中心流出口６８内に集まる。血液は次いで、流出ノズル１３２を通って進行する。
【００５２】
生成される組織のタイプに特定な細胞（例えば、肝臓のための肝細胞）は、細胞層１７０によって規定された少なくとも１つの実質チャンバ１７２内に配置される。実質チャンバ１７２は、半透過膜層１１０ａによって血管網チャネル６２から分離されている（図７を参照されたい）。この膜は、生理学的起源（例えば、生体組織に由来する）から、又は生物学的に適合した、例えばセルロース、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリスルホン（ＰＳ）、ポリカーボネート（ＰＣ）などの非分解性材料から、又は例えばＰＬＧＡ、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）若しくはバイオラバーなどの分解性材料から形成できるが、本発明はそれらに限定されない。「実質細胞」には、フレームワーク又は間質から識別されるような、臓器の機能的構成要素が含まれる。実質細胞は、平滑筋又は骨格筋細胞、筋細胞、線維芽細胞、軟骨細胞、含脂肪細胞、線維筋細胞、小管及び皮膚細胞を含む外胚葉細胞、肝細胞、腎細胞、肝細胞、心細胞、膵島細胞、腸内に存在する細胞、及びその他の実質細胞、脂肪又は骨由来間葉系幹細胞を含む幹細胞、胚幹細胞及び誘導性多能性細胞、骨細胞及び骨又は軟骨を形成するその他の細胞、並びに造血細胞を含むことができるが、それらに限定されない。細胞は、実質細胞には限定されず、多数の他の種類の細胞（幹細胞又は前駆細胞）であってもよい。
【００５３】
血液が血管網層６０を通って流れるにつれて、酸素と栄養素は膜層１１０ａを横断して拡散し、チャンバ１７２内の細胞に栄養分を与える。チャンバ１７２内で細胞によって生成された老廃物は、膜層１１０ａを横断して拡散し、血管網層６０のチャネル６２内へ戻すことができる。チャンバ１７２は、１つ又はそれ以上の流入口１７４を有してもよく、そこでは細胞をインプラント１００のチャンバ１７２内へ注入する、注射する、或いは挿入することができる。細胞の流路は、矢印「ｂ」によって指示されている。
【００５４】
図５〜７の態様では、血管網のデザイン６６の６つの流入口６６と整列しているヘッダー層１２０上の６本の放射状に間隔をあけたチャネル１２４が存在する。単一の中心流入口１２２及び流出口６８はノズル１３２、１３４と整列しているが、例えば２つの流入口及び２つの流出口などの他の構成もまた利用できる。別の態様では、４つの流入口及び１つの流出口が存在してもよい。別の態様では、流入口の数は、１〜１２０の範囲内にあってもよい。別の態様では、流出口の数は、１〜１２０の範囲内にあってもよい。
【００５５】
インプラント１００は、身体の血管と相互連結するためのノズル１３０、１３２を有する。流入ノズル１３０は、好ましくはヘッダー層１２０の中心流入口１２２に恒久的に取り付けられており、流出ノズル１３２は血管網のデザイン６０の流出口６８に恒久的に取り付けられている。ノズル１３０、１３２は、例えばＰＴＦＥグラフトなどの標準的な人工血管グラフトを利用することができる。血管グラフトは、例えば、１つ又はそれ以上の縫合糸、クランプ、接着剤、固定装置又はそれらの組み合わせの何れかによってのように、それぞれのノズル１３０、１３２の周囲でのグラフトの内在的圧縮によって、コネクタ又はノズル１３０、１３２に固定化することができる。別の態様では、グラフトは、ノズルへ取り付けずに足場材料内に直接的に組み込むことができる。グラフトは、１つ又はそれ以上の縫合糸、クランプ、接着剤、固定装置又はそれらの組み合わせの何れかによって、例えばヘッダー層１２０などの足場の構成成分に直接的に固定化することができる。
【００５６】
別の組み立てられたインプラント
図８を参照すると、別の組み立てられたインプラント２００が断面図で示されている。当該技術分野の当業者には理解されるように、インプラント２００は、上述したインプラント１００と類似する原理を利用する。したがって、可能な限り、類似する構成要素を指示するために、数字「１」の代わりに数字「２」を先頭に付した類似の参照符号を使用している。インプラント１００と比較してインプラント２００の主要な相違点は、単一ヘッダー層２２０に結合された複数の血管層又は血管網のデザイン２６０ａ、２６０ｂを有する点である。それぞれの血管網のデザイン２６０ａ、２６０ｂは、それぞれ、半透過膜層２１０ａ、２１０ｂ及び細胞層２７０ａ、２７０ｂに結合する。
【００５７】
血管層の数は、例えば、２〜１，０００又はそれ以上の範囲内で変動してもよい。特定のインプラントのための層の数及びサイズは、特定の組織、及び必要とされる組織の量、並びに患者のサイズに依存する。足場の数もまた患者の必要性に適応するために増加させることができる。
【００５８】
複数の血管層２６０ａ、２６０ｂについて、流入口２６６ａ、２６６ｂは、血管層２６０ａ、２６０ｂ間の流れを平衡させるために再デザインされている。例えば、流入口２６６ａ、２６６ｂは、先細（テーパー）になっていてもよい。若しくは、それぞれの血管層２６０ａ、２６０ｂには、ヘッダー層２２０の放射状チャネル２２４の半分によってのみ血液供給されてもよい。図８に示したように、血管層２６０ａは、それを通って先細の様式で伸びる流入口２６６ａを有する。よって血液は、部分的には血管層２６０ａを通って下方の血管層２６２ｂへ入ることによって、血管層２６０ａ、２６０ｂの両方のチャネル２６２ａ、２６２ｂの両方に進入する。
【００５９】
使用時には、患者からの血液はインプラント２００へ流入ノズル２３０を通って進入し、ヘッダー層２２０内へ進行し、そこで血液は分配チャネル２２４を介して放射状に方向付けられる。血液は、穿孔層２１０内の貫通孔１１２を通って血管層２６０ａ、２６０ｂの流入口２６６ａ、２６６ｂ内へ進行する。
【００６０】
１つより多い血管層２６０ａ、２６０ｂを用いると、血流の一部分は、上方血管層２６０ａを過ぎ、隣接する半透過膜層２１０ａ及び実質層２７０ａ内のそれぞれの開口部２１２ａを通り、下方血管層２６０ｂの流入口２６６ｂ内へ下向きに垂直に進行し続ける。上述したように、血管層２６０ａ、２６０ｂ間の血液の均一な分配を促進するために、それぞれの流入口２６０ａ、２６０ｂ及び開口部２１２ａは先細（テーパー）になっていてもよい。或いは、選択的放射状チャネル２２４は、相違する血管層２６０ａ、２６０ｂに血液供給してもよい。
【００６１】
血管層２６０ａ、２６０ｂ内で、血液は、分岐チャネル２６２ａ、２６２ｂを通って中心収集流出口２６８ａ、２６８ｂ内へと方向付けられる。中心収集流出口２６８ａ、２６８ｂは、流出ノズル２３２を通って血液を放出するために、下部の半透過膜層２１０ａ、２１０ｂ及び細胞層２７０ａ、２７０ｂを通って伸びている。流出ノズル２３２は、血液を、患者の血管内へ戻すように、又は再進入の前にさらに処理するために別のデバイスへと方向付けることができる。半透過膜２１０ａ、２１０ｂは、血管網層２６０ａ、２６０ｂを隣接する実質層２７０ａ、２７０ｂと分離するが、それでもなお酸素と栄養素の通過を許容できるように、血管網層２６０ａ、２６０ｂに隣接している。実質層２７０ａ、２７０ｂは、インプラント２００が補助するか又は置換している組織に対応する細胞を含有するチャンバ２７２ａ、２７２ｂを形成する。
【００６２】
作動時には、複数の血管層及びその他の層を備える１つより多いインプラント又は足場が存在してもよい。インプラント又は足場の数は、１〜５０の範囲にあってもよい。別の態様では、インプラント又は足場の数は、２〜８の範囲にあってもよい。インプラントは、複数の流入口及び流出口を有してもよい。例えば、５つの血管層へ血液を供給するためには、一連の流入口を利用することができる。インプラントは、送血血管及び返血血管の間で並列及び／又は直列配置で接続することができる。必要に応じて、分岐した血管グラフトを使用することができる。足場及びよって細胞成分の数は、それぞれの患者について相違してもよい、したがってそれぞれの患者に対して相違するサイズ又は構成のデバイスを使用することができる。チャンバ２７２ａ、２７２ｂは、２つの流入口２７４ａ、２７４ｂを有し、そこでは細胞をインプラント２００のチャンバ２７２ａ、２７２ｂ内へ、矢印ｂによって指示された流路に沿って注入する、注射する、若しくは挿入することができる。
【００６３】
インプラントの性能
図６によるインプラント１００を構築して、試験した。血管層６０のための鋳型は、既述のようにＥＤＭ処理法を用いて構築した。ヘッダー層１２０のための鋳型は、従来のフライス盤処理法を用いて構築した。穿孔層１１０は、鋳型として標準的なペトリ（Petri）皿を用いて、孔１１２を作製するために穿孔処理法を用いて形成した。ノズル１３２は、従来の機械加工法を用いて作製した。インプラント１００は、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、ヘッダー層１２０のための材料としてのシリコン様材料、血管層６０及び穿孔層１１０から作製した。ノズル１３２は、ポリカーボネート又はナイロンを用いて作製できる。組み立てのためには、ヘッダー層１２０、血管層６０及び穿孔層１１０は、酸素プラズマ接合法を用いて相互に接着させた。
【００６４】
インプラント１００は、様々な流速で流動する抗凝固処理したヒツジ血を用いて試験し、デバイスの流入圧を測定した。結果を、ＣＦＤ分析により流入圧の期待結果値と比較した。図９は、インビトロ血液検査及び計算流体力学を用いたインプラント１００を通る血流の分析の結果のグラフである。インビトロ流動試験の結果及びＣＦＤ分析結果は、特にインプラント１００を横断する６ｍｍＨｇの圧低下のデザイン点では、良好に相関していた。インビトロ性能とＣＦＤデータの期待値間の変動率は５％未満であった。
【００６５】
別の血管層
図１０及び１１を参照すると、別の血管層を作製するための鋳型３６０が斜視図で示されている。鋳型３６０は、血管層がチャネルで構成される隆起した機構からなる。当該技術分野の当業者には理解されるように、鋳型３６０から作製された血管層は、上述した血管層６０、１６０、２６０と同様の原理を利用している。鋳型３６０から作製された血管層を血管層６０、１６０、２６０と比較した主要な相違点は、チャネル３６２の密度が増加した点である。
【００６６】
鋳型３６０から作製された血管層内のチャネル３６２の分岐チャネル網は、２つの流入口３６４及び２つの流出口３６６を有する。主要チャネル３６８は、それぞれの流入口３６４から娘チャネル３７０内に伸びて、一連の三分岐部を通り最終的には分岐部で終了する。娘チャネル３７０は、次いで循環する毛細血管様サブユニット３７２内に枝分かれする。
【００６７】
それぞれのサブユニット３７２は類似しているが、特定の適用に対して適切に有意に変動させることができる。それぞれのサブユニット３７２は、一連の連続的により小さくなるチャネル３８４、３８２、３８０を形成するために一連の３つの分岐部に続く第一の流入口３８６を有する（図１１において最適に見られる）。１つの態様では、最小チャネル３８０は、直径が１００μｍ、深さ１００μｍであり、チャネル３８６、３８４、３８２、３８０のチャネル全部が１：１のアスペクト比を有する。
【００６８】
最小チャネル３８０の後に、サブユニット３７２は連続的に大きくなるチャネル３７８、３７６、３７４、３８８内に合流し、この流れは２つの流出口３６６内に集合する。血管層３６０は、複数の層を組み立てることができるように流入口及び流出口の領域で垂直に方向付けられたチャネルを有することもできる。得られるインプラント（図示していない）はヘッダー層、穿孔層、ノズル、及び／又は血管グラフト若しくは血管グラフトなどに通じるチュービング等を有することも想定される。血管グラフトはさらに、身体内の血管と吻合させることができる。
【００６９】
追加のインプラントの性能
図１０及び１１の鋳型３６０から作製された血管デザイン層はプロトタイプであった。作製した鋳型３６０は、ポジ型形態の鋳型であった。鋳型３６０は、マイクロフライス盤技術を使用してデルリン(delrin)に作製した。鋳型３６０を用いて、血管層はＰＤＭＳを用いて作製し、鋳型３６０の上方に注入し、硬化させ、取り出した。第２層（図示していない）は、閉鎖型血管網を作製するために開いた毛細管網の上部へ接合した。２つの層は、酸素プラズマ接合法を使用して結合した。シリコン管は、流入口３６４及び流出口３６６と互いに接合させた。流入を２つの流入口領域内へ一様に方向付け、そして２つの出口領域からの流出を収集するために、外部有刺コネクタ及びＴコネクタを使用した。
【００７０】
抗凝固処理したヒツジ血を用いて、血管網についてインビトロ試験を実施した。血液はシリンジポンプを用いて血管網を通してポンプ送血し、鋳型３６０から作製された血管層への流入圧をある範囲の流動にわたって記録した。図１２は、ＣＦＤ分析からのデータ点と比較した、血液のインビトロ試験のグラフである。６．３５ｍｍＨｇでの流速で生じた１６ｍｍＨｇの圧力差におけるＣＦＤ分析結果が、グラフに示されている。
【００７１】
このインビトロ試験は、同様の流量を達成するために、ほぼ２０％より高い流入圧を必要とした。ＣＦＤ分析は、合理的精度で、所定の流量が鋳型３６０から作製された血管網を通るための流入圧を予測するために有用である。６．３５ｍｍＨｇの流量では、血管網内の剪断応力は、生理的範囲内で制御される。流動障害は、デザインの分岐角度及びフィレット（fillet）を精緻化することの結果として最小限に抑えられる。
【００７２】
本明細書に開示した血管網は、生体組織工学に関する豊富な足場を生産するために有用であり得る基礎デザイン原理を示している。肝葉のための一般デザインに関連するデザインは、他の臓器足場へも同様に適用することができる。血管網は、酸素と栄養素を細胞へ供給するために足場内に適正な血流が存在するように、足場にかかる圧力が足場のデザインと適合するように調整することができる。
【００７３】
肝臓への適用
図１３を参照すると、肝臓のそれに類似する繰り返しの多角形パターンを利用する血管網のデザイン４００が略図で示されている。別の態様では、血管網のデザインは、図３〜８に類似する繰り返しの放射状パターンに配置することができる。
【００７４】
肝臓では、多角形（例えば、六角形）の肝葉は、高密度の構成を達成するために繰り返しパターンで配置されている。血管網のデザイン４００は、複数の多角形構造体４０２を含んでいて、それぞれの多角形構造体４０２は中心血管流出口４０６の周囲に放射状パターンで配置された複数の血管流入口４０４を有する。血管網のデザイン４００はさらに、血管流入口４０４と中心血管流出口４０６との間にチャネルの分岐網４０８を含んでいる。分岐している血管網のデザイン４００は、他の態様では図３〜８に図示したデザインに類似していてもよい。
【００７５】
別の態様では、分岐している血管網のデザインは、上記で略述したデザイン原理に従いつつ、なおも高密度の血管チャネルを達成することができる。例えば、多角形構造体４０２は、血管流入口４０４が複数の多角形構造体のためのチャネル網の一部である複数のチャネルに分岐するように、相互に隣接して配置することができる。これらの血管流入口の直径は、単一の多角形構造体に寄与するチャネルにのみ分岐する可能性があるデザインの縁部に配置された血管流入口とは相違していてもよい。多角形構造体は、９つの多角形構造体が結合して単一血管層を作製する方法で複製することができる。別の態様では、血管層を作製する隣接多角形構造体の数は、１〜１００の範囲にあってもよい。
【００７６】
上述したように、患者からの流れは、例えば流入ノズルなどの単一の機構を通って足場に進入することができる。血管網のデザイン４００は、単一の機構から血管流入口４０４の全部へ流入量を均一に分配するヘッダー系（図示していない）を有してもよい。ヘッダー系は、均一な流動分配を達成し、血栓形成を最小限に抑えるための機構を組み込むために１つ又はそれ以上のヘッダー層を組み込むことができる。類似する様式では、血管流出口４０６から流れを収集し、例えばノズルなどの単一流出口機構へ迂回させるヘッダー系が存在してもよい。
【００７７】
図１５を参照すると、肝臓補助デバイスとして配置された、本発明の技術によるインプラント６００が示されている。生体組織工学的に作製されたインプラント６００は、肝臓６０６の門静脈６０２と下大静脈６０４との間に接続されている。肝不全を有する患者では、彼らの門静脈圧は、通常は１０ｍｍＨｇ以上であり、下大静脈圧はしばしば０〜２ｍｍＨｇである。よって差圧（例えば、流入圧と流出圧の差）は、８ｍｍＨｇとなることがある。従って、生体組織工学的に作製された肝臓のための足場を通る流れは、ほぼ低圧に適正化されなければならない。
【００７８】
別の態様では、生体組織工学的に作製された肝臓のための血管新生化足場は足場内への門静脈血液流入及び動脈血液流入を組み込むことができ、共通する静脈流出を有することができる。足場は、門静脈流入口及び肝動脈流入口の両方を有するヒト肝臓に類似してもよい。肝動脈は、主として肝臓内の胆管細胞及び肝葉の外側部分にある肝細胞を支持する。門静脈流入口と同一領域内には、血管層内に動脈流入口が存在してもよい。動脈流入口から得られる分岐網は、中心流出口には伸びず、中心流出口と直接的に接続していなくてもよい。動脈網は、門静脈からの分岐網と直接的に接続していてもよい。
【００７９】
さらに別の態様では、動脈血管網は、十分な分岐を通過し、そこに接続した場合に門静脈チャネル内の圧力を顕著には変化させないために十分な圧低下を有する。分岐している血管網は、分岐している門静脈網とは相違する層、又は相違する平面であってもよく、或いは分岐している門静脈網から離れていてもよい。分岐している動脈網もまた、同様に門静脈網からの流出口を含んでいてもよい中心排出流出口と直接的に接続していてもよい。
【００８０】
別の態様では、血管新生化足場が生体組織工学的に作製された肺のために作製される場合は、血管新生化足場は、肺動脈と左心室との間に配置することができる。末期肺疾患を有する患者の肺動脈性高血圧の程度に依存して、肺動脈と左心室との間の平均差圧は、１２〜２０ｍｍＨｇ超となることがある。血管新生化足場は、この範囲の差圧に対する十分な血流を有する必要がある。別の態様では、血管新生化足場は、生体組織工学的に作製された腎臓、膵臓、骨格筋、心臓、腸、膀胱、舌又は軟組織の少なくとも一部分を作製するために調整することができる。
【００８１】
肺への適用
図１６を参照すると、本発明の技術によるインプラント７００が肺補助デバイスとして配置されて示されている。生体組織工学的に作製されたインプラント７００は、肺動脈７０２と心臓の左心室７０４との間を接続している。この位置で、生体組織工学的に作製された肺インプラント７００は、肺７０６の機能を強化する。外部パック７０８は、インプラント７００へ酸素、空気又は他の気体若しくは混合気を提供する。使用時は、血液は、図６に記載したように血管層(複数でも)を含んでいるインプラント７００を通って流れる。酸素又は他の気体は、気体透過膜によって血管層から分離された実質層を通って流れる。酸素は、膜を横断して実質層から血液中へ拡散する。同様に、二酸化炭素は血液から膜を横断して実質層内へ拡散する。実質層を通過する気体の流れは、実質層から二酸化炭素を洗い流す。この血液と実質層との間の酸素と二酸化炭素の交換は、血液の酸素化及び血液からの二酸化炭素の除去である肺の基本的機能を実施する。生体組織工学的に作製された肺への適用のためには、図７の半透過膜１１０ａは、酸素及び二酸化炭素に対して透過性である。膜は、多孔性、非多孔性又は多孔性部分と非多孔性部分の組み合わせであってもよい。例えば、膜は、シリコンなどの極めて薄い非多孔性であるが気体透過性材料で被覆されたポリカーボネートなどの多孔性材料であってもよい。別の態様では、膜はコラーゲンなどの吸収性材料であってもよい。
【００８２】
さらに、膜は細胞で被覆することができる。１つの態様では、血管層に隣接する膜の部分を内皮細胞で被覆することができる。別の態様では、これらの内皮細胞は、それらの膜上で炭酸脱水酵素を発現する肺内皮細胞又は非肺内皮細胞であってもよい。炭酸脱水酵素は、重炭酸塩を二酸化炭素に変換する酵素である。血液中では、二酸化炭素の大部分は重炭酸塩の形態で発生する。肺では、重炭酸塩は炭酸脱水酵素によって二酸化炭素へ迅速に変換され、次いで肺の空域である肺胞内へ拡散することができる。別の態様では、膜は血管層に隣接する側では上述したように内皮細胞で被覆することができ、膜の実質側では肺上皮細胞（Ｉ型、ＩＩ型又は両方）で被覆することができる。生体組織工学的に作製された肺への適用のためには、血管層及び実質層の界面の総表面積は、患者の肺機能を強化するために酸素、二酸化炭素又は両方を交換するために十分なものでなければならない。
【００８３】
１つの態様では、足場は、既述のように身体内に配置することができる。別の態様では、足場は、皮膚又は身体の別の開口部を通して突き出ることによって足場と結合している血管又は他の連結部（例えば、胆管、呼吸器管など）を用いて身体の外側に配置することができる。体外に配置された足場は、肝臓又は肺などの臓器を一時的に補助するために有用であり得る。別の態様では、足場を通る血液の流れを強化するために患者と外部足場との間の回路内にポンプを配置することができる。ポンプのタイプには、ローラポンプ、遠心ポンプ又はピストンポンプを含むことができる。例えば、一時的肺支援デバイスは、２本の別個の静脈カテーテルが足場に血液を供給し、足場から血液を返送するような方法で患者と連結することができる。２本の静脈間の不十分な圧低下に起因して、外部ポンプを、足場を通る血液の効果的流れを達成するために追加してもよい。
【００８４】
血管網のための材料は、細胞の付着を許容する材料から構成されてもよい。別の態様では、材料は、例えば内皮細胞、平滑筋細胞、及び線維芽細胞などの血管細胞の付着を許容するものであってよい。別の態様では、材料は、非吸収性材料、吸収性材料、又は非吸収性材料と吸収性材料の組み合わせであってもよい。別の態様では、材料は、吸収性材料の組み合わせ又は非吸収性材料の組み合わせであってもよい。血管足場を構築するための、代表的であるが排他的ではない、吸収性材料又は生分解性ポリマーのリストを表１に示す。
【００８５】
（表１）
脂肪族ポリエステル
バイオガラス
カルボキシメチルセルロース
セルロース
キチン
クエン酸塩
コラーゲン
グリコリドの共重合体
ラクチドの共重合体
エラスチン
フィブリン
ヒドロゲル
変性タンパク質
ナイロン−２
ＰＬＡ／ポリエチレンオキシド共重合体
ＰＬＡ−ポリエチレンオキシド（ＰＥＬＡ）
ポリ（アミノ酸）
ポリ（トリメチレンカーボネート）
ポリ（アルキレンオキサレート）
ポリ（ブチレンジグリコレート）
ポリ（ヒドロキシブチレート）（ＰＨＢ）
ポリ（ｎ−ビニルピロリドン）
ポリ（オルトエステル）
ポリアルキル−２−シアノアクリレート
ポリ無水物
ポリシアノアクリレート
ポリデプシペプチド
ポリジヒドロピラン
ポリ−ｄｌ−ラクチド（ＰＤＬＬＡ）
ポリエステルアミド
シュウ酸のポリエステル
ポリエチレングリコール
ポリエチレンオキシド
ポリグリカンエステル
ポリ（セバシン酸グリセロール）
ポリグリコリド（ＰＧＡ）
ポリイミノカーボネート
ポリラクチド（ＰＬＡ）
ポリ−ｌ−ラクチド（ＰＬＬＡ）
ポリオルトエステル
ポリ−ｐ−ジオキサノン（ＰＤＯ）
ポリペプチド
ポリホスファゼン
多糖類
ポリウレタン（ＰＵ）
ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）
ポリ−β−アルカン酸
ポリ−β−リンゴ酸（ＰＭＬＡ）
ポリ−ε−カプロラクトン（ＰＣＬ）
シュード−ポリ（アミノ酸）
デンプン
トリメチレンカーボネート（ＴＭＣ）
チロシンベースポリマー
グリコリド／ｌ−ラクチド共重合体ＰＧＡ／ＰＬＬＡ）
グリコリド／トリメチレンカーボネート共重合体（ＰＧＡ／ＴＭＣ）
ラクチド／テトラメチルグリコリド共重合体
ラクチド／テトラメチレンカーボネート共重合体
ラクチド／ε−カプロラクトン共重合体
ラクチド／σ−バレロラクトン共重合体
Ｌ−ラクチド／ｄｌ−ラクチド共重合体
メチルメタクリレート−Ｎ−ビニルピロリドン共重合体
ＰＨＢＡ／γ−ヒドロキシバレレートコ共重合体（ＰＨＢＡ／ＨＶＡ）
ポリヒドロキシアルカノエートポリマー（ＰＨＡ）
ポリ−β−ヒドロキシプロピオネート（ＰＨＰＡ）
ポリ−β−ヒドロキシブチレート（ＰＢＡ）
ポリ−σ−バレロラクトン
【００８６】
別の態様では、足場材料の厚さは、極めて薄くてもよい。パターン化した血管層を作製するために使用される足場材料の厚さは、０．１μｍ〜１，０００μｍの範囲の厚さであってよい。別の態様では、足場材料の厚さは、１μｍ〜１０μｍの範囲の厚さであってもよい。臓器の足場又は支持組織は、豊富な成分としてコラーゲンを含有していることが多い。
【００８７】
コラーゲン層
この構築物の１つの態様は、主要足場材料としてコラーゲン膜を含有することができる。コラーゲンは、固形臓器及び血管を含有するその他の組織における細胞外マトリックスの主要な構成成分である。コラーゲンの強度は、ヒト組織の耐久性によって明らかにされる。例えば、ヒト静脈は一般に、部分的には透明であるほど薄いにもかかわらず、数千ｍｍＨｇの破裂圧を有している。薄いコラーゲン膜の強度は、足場の特定容積中に存在する機能的組織の量を最大化するために、最小の足場構成成分の質量を備えた血管新生化足場を作製することを可能にする。細胞はコラーゲンに容易に接着して、移植術の前又は後に足場を最適化するためにコラーゲンを吸収して及びリモデリングすることができる。
【００８８】
コラーゲンを、薄膜、シート、又は他の多孔性若しくは非多孔性構築物に構築することもできる。１つの態様では、コラーゲンの薄膜、シート又は他の構築物は、ある程度の多孔性を有するであろう。この多孔性は、サイズ及び間隔が一様であってもよい。細孔径は、１〜５００キロダルトンの範囲の低分子しか許容できなくてもよい。別の態様では、細孔は１ミクロン〜１００ミクロンの範囲であってもよい。コラーゲン網の多孔性は、酸素、二酸化炭素、タンパク質、炭水化物、脂肪、薬物又はコラーゲン網を横断する他の何れもの生物活性物質の拡散を許容するのに十分であってよい。コラーゲンの多孔性は、例えば心臓、肝臓又は肺などの特定標的組織のために必要とされる拡散を達成できるように調整することができる。
【００８９】
コラーゲンの多孔性を考慮すると、血管チャネルと組織又は臓器の細胞との間の更なる膜を必要としないことが可能である。標的組織の細胞、例えば、心筋細胞は、血管網上に直接的に配置できる。血管網の第２層を細胞の上部に追加することができて、それにより標的組織の細胞を備えるそれぞれの領域が２つ以上の血管網層と接触できる。連続する血管網は、血管網パターンが相互にぴったりとは重ならないような方法で積み重ねることができる。整列配置から外れることにより、組織の細胞が血管網相間で、層が正確に整列した場合よりも、それぞれのチャネルにより近づくことを可能にする。コラーゲン膜は、極めて薄くすることができ、そして所望の分岐パターン及びチャンバを形成するためにパターン化することができる。
【００９０】
多数の方法で、コラーゲンから血管網パターンを製造することができる。コラーゲン膜、シート又はその他の薄い構造体は、例えば上記に示した血管網などの血管網パターンと一致するパターンに形成することができる。パターン化した血管網がコラーゲンで作製されると、パターン化されていない第２コラーゲン膜、シート又はその他の薄い構造体をパターン化したコラーゲン網に接合することができ、それにより所望の血管網のデザインと一致するチャネル網を有する密封した又は閉鎖されたコラーゲン血管網を作製できる。コラーゲンで作製したパターン化した血管網は、最終的チャネルの所望の深さのチャネルを有することができる。
【００９１】
別の態様では、コラーゲンで作製してパターン化した血管網は、最終的チャネルの所望の半分の深さを有していてもよい。パターン化した血管網は、同様にパターン化した血管網に接合することができ、その結果、最終的チャネルの所望の深さを備える閉鎖型コラーゲン血管網が得られる。閉鎖型コラーゲン血管網はチャネルの断面が作製時のある時点には長方形であるような様式に作製されてもよいが、血管網に流体が充填されると、得られるチャネルの断面は円形、長円形、楕円形であってもよく、又は長方形を保持していてもよい。
【００９２】
図１４を参照すると、コラーゲン膜、シート又はその他の薄い構造体を用いて作製した血管網５００の一部分５０２が示されている。この部分５０２は、単一分岐デザインを備える血管チャネル５０４を示している。コラーゲン材料５０２は、チャネル５０４の内径５０６より薄くてもよい全厚を有する。例えば、コラーゲン材料又は部分５０２の厚さは、１０μｍであってもよく、血管チャネル５０４の内径５０６は１００μｍであってもよい。血管網５００は、パターン化したコラーゲン膜又はシートを作製して、パターン化していないコラーゲン膜又はシートをそれに接合することによって製造できる。血管網５００は、上述したように２枚のパターン化したコラーゲン膜を一緒に接合することによっても製造できる。
【００９３】
パターン化したコラーゲン膜の製造は、所望の血管網のポジ型の鋳型を用いて始められてもよい。そのような鋳型は、血管網の所望のチャネルに対応する突起部を有する。その鋳型は所望の構造のネガ型のものである。コラーゲンを含有する溶液、懸濁液、コロイド又はその他の混合物を鋳型に注入するか、若しくは覆うように配置してもよい。次いで、コラーゲン混合物を空気乾燥又は真空乾燥してもよい。乾燥を室温でまたはそれ以上で行うことができる。
【００９４】
乾燥後、次いでコラーゲン膜を鋳型から分離してパターン化したコラーゲン膜を得ることができる。別の態様では、コラーゲン混合物は、次いでインキュベーションによってゲル化することができる。得られるゲルを空気乾燥又は真空乾燥することができる。得られるコラーゲン膜を鋳型から取り外すことができて、鋳型のパターン及び形態を保持したままである。パターン化したコラーゲン膜は、接着剤、脱水熱架橋隣接コラーゲンシート、化学架橋隣接コラーゲンシート又は光感受性色素を備える光化学架橋コラーゲンを用いて、平らな、又は他のパターン化したコラーゲン膜と接合することができる。パターン化した膜を、パターン化していない又はフラットなコラーゲン膜に隣接させて配置している態様では、パターン化した膜又はパターン化していない膜は、乾燥している、部分的に乾燥している、又は水和していてもよい。１つ又はそれ以上の膜の水和度は、対応する平らな膜とのパターン化した膜の非チャネル化部分の所望の接合度をもたらす
ことができる。
【００９５】
パターン化した、又はパターン化していない薄膜（例えば、１０μｍ未満の厚さを有する）は、取り扱いにおいて補助するために周辺支持構成要素を有してもよい。これらの構成要素は、製造工程において他の成分のパターン化、接合、接着、積み重ね及び付着化中の薄膜の取り扱いを支援できる。周辺支持構成要素は、メッシュ材料、１本のフィラメント、複数のフィラメント、実質的に固体の材料又は固体材料を含むことができる。支持構成要素は、一時的なものであってもよく、生物の身体内へ足場を移植する前に取り除かれてもよい。支持構成要素は、吸収性又は非吸収性であってもよく、足場内で生物の身体への移植を行うことができる。流入チューブ及びヘッダー成分もまた、コラーゲンチューブを含むコラーゲン材料から構成されてもよい。
【００９６】
コラーゲン成分は、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヒト又はその他の哺乳動物供給源由来のコラーゲンから形成することができる。何れのコラーゲンタイプ又はコラーゲンタイプの何れの組み合わせも使用できる。別の態様では、パターン化した、又はパターン化していない膜は、コラーゲン及び非コラーゲン成分の混合物から構成されてもよい。別の態様)では、膜は、コラーゲンタイプ（例えば、Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶＩＩ型）の混合物であってもよい。別の態様では、非コラーゲン成分は、天然の膜、若しくは１つ又はそれ以上の細胞外マトリクスタンパク質、又は生物の細胞外組織の他の何れかの天然の部分若しくは成分に由来する材料であってもよい。これらの細胞外マトリクスタンパク質又は成分は、以下のうちの１つ又はそれ以上であってもよい：フィブリン、エラスチン、フィブロネクチン、ラミニン、ヒアルロン酸、ヘパリン硫酸又はコンドロイチン硫酸(chondrotian  sulfate)。１つの態様では、パターン化していないシートと接合しているパターン化したシートは、パターン化していないシートとは相違する材料組成のシートであってもよい。別の態様では、パターン化した及び平らな膜のための材料は、コラーゲンＩ型、コラーゲンＩＶ型、フィブリン及びフィブロネクチンの組み合わせである。
【００９７】
別の態様では、上述した説明による足場は、ヒト細胞における薬物の有効性を保証するために使用してもよい。例えば、足場を、ある特定の種類の組織中の試験薬剤の代謝を確認するために作製してもよい。足場は、試験薬剤及び酵素をインキュベートして、酵素と試験薬剤の間に酵素−基板複合体を形成することができる。結果として、試験薬剤の１つ又はそれ以上の代謝産物を検出することができる。さらなる具体例については、例えば、２００２年８月９日に出願された米国特許出願第１０／２１５，６００号及び２００５年７月１５日に出願された同第１１／１８３，１１５号を参照されたい。
【００９８】
参照による組み込み
本明細書に開示した全ての特許、特許出願公開及びその他の参考文献は、参照によりその全体が明示的に組み込まれている。上記の本発明の開示及び記述は、それらの例示的及び説明的なものであり、添付の特許請求の範囲に規定される本発明の範囲を逸脱することなく、本発明の態様におけるサイズ、形状及び材料組成、更には本発明の記述における様々な変更を加えることができることを理解されたい。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年8月18日(2014.8.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１本の中心流出チャネル及び複数の放射状外側流入チャネル、並びに当該流入チャネルと当該少なくとも１本の流出チャネルとを結び付けている複数の仲介チャネルを有する放射状パターンで配置されたチャネル網を規定している基板であって、それぞれのチャネルは高さ、長さ、幅及び直径を有し、このとき当該仲介チャネルは複数に枝分かれして当該仲介チャネルに仲介する六角形領域を再統合し、隣接するチャネルの部分に関して高さ及び幅を変化させることによって形成され、最も小さな当該仲介チャネルの長さはそれぞれの直径に基づくことで、当該最も小さな仲介チャネルがバイオミメティック長を有するように形成される基板を含有してなる、人工血管層。
【請求項２】
当該チャネルが、アスペクト比が１：１の長方形である、請求項１に記載の人工血管層。
【請求項３】
当該仲介チャネルが、分岐様式で、連続的により小さくなる部分及びより大きくなる部分にそれぞれ４５度の分岐角度で連続的に枝分かれし再統合する、請求項１又は２に記載の人工血管層。
【請求項４】
直径の最も小さな仲介チャネルの直径が好ましくは２００μｍであり、流入チャネルからの最初の最も大きな仲介チャネルの直径が６０８μｍである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の人工血管層。
【請求項５】
全チャネルのバイオミメティック長が同等の様式で拡大縮小される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の人工血管層。
【請求項６】
当該仲介チャネルが流動特性を改善するための曲率半径を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の人工血管層。
【請求項７】
当該基板がコラーゲンである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の人工血管層。
【請求項８】
当該コラーゲン基板内にエラスチンをさらに含有してなる、請求項７に記載の人工血管層。
【請求項９】
当該コラーゲン基板内にフィブロネクチンをさらに含有してなる、請求項７又は８に記載の人工血管層。
【請求項１０】
当該チャネルが流体を運び、当該流体が、血液、血漿又は媒体である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の人工血管層。
【請求項１１】
当該層が、臓器を補助するか、又は臓器を置換するための医療デバイスを含有してなる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の人工血管層。
【請求項１２】
当該層が、薬物の見出し、開発、及び／又は評価のための手法を含有してなる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の人工血管層。
【請求項１３】
当該層が、インビトロ又はエクスビボでの研究及び試験のためのプラットフォームを含有してなる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の人工血管層。
【請求項１４】
静脈と接続するために少なくとも１本の流出チャネルと流体連絡しているノズルを有する第２ヘッダー層をさらに含有してなる、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の人工血管層。
【請求項１５】
当該仲介チャネルが少なくとも１回は三分岐する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の人工血管層。
【請求項１６】
少なくとも１本の中心流出チャネル及び複数の放射状外側流入チャネル、並びに当該流入チャネルと当該少なくとも１本の流出チャネルとを結び付けている複数の仲介チャネルを有する放射状パターンで配置されたチャネル網を規定している基板であって、それぞれのチャネルは高さ、長さ、幅及び直径を有し、このとき当該仲介チャネルは複数に枝分かれして当該仲介チャネルに仲介する六角形領域を再統合し、隣接するチャネルの部分に関して高さ及び幅を変化させることによって形成され、当該仲介チャネルの最も小さな直径の長さはそれぞれの直径に基づくことで、当該直径の最も小さなチャネルがバイオミメティック長を有するように形成される基板を含有してなる、人工血管層。
【請求項１７】
少なくとも１本の中心流出チャネル及び複数の放射状外側流入チャネル、並びに当該流入チャネルと当該少なくとも１本の流出チャネルとを結び付けている複数の仲介チャネルを有する放射状パターンで配置されたチャネル網を規定している基板であって、それぞれのチャネルは高さ、長さ、幅及び直径を有し、このとき当該仲介チャネルは複数に枝分かれして当該仲介チャネルに仲介する六角形領域を再統合し、隣接するチャネルの部分に関して高さ及び幅を変化させることによって形成され、最も小さな当該仲介チャネルの長さはそれぞれの直径に基づくことで、当該最も小さなチャネルがバイオミメティック長を有するように形成される基板を含有してなる、人工血管層。
【請求項１８】
少なくとも１本の流入チャネル及び少なくとも１本の流出チャネル、並びに当該少なくとも１本の流入チャネルと当該少なくとも１本の流出チャネルとを結び付けている複数の仲介チャネルを有するパターンで配置されたチャネル網を規定している基板であって、それぞれのチャネルは高さ、長さ、幅及び直径を有し、このとき当該仲介チャネルは複数に枝分かれして当該仲介チャネルに仲介する六角形領域を再統合し、隣接するチャネルの部分に関して高さ及び幅を変化させることによって形成され、最も小さな当該仲介チャネルの長さはそれぞれの直径に基づくことで、当該仲介チャネルがバイオミメティック長を有するように形成される基板を含有してなる、人工血管層。