(57)【要約】      （修正有）【課題】簡易な構成で正確な検体分布情報を入手可能な検査キットを提供する。【解決手段】検体中の標的と反応性物質との反応を進行させて呈色，発光または蛍光現象を生じさせることによって検体の状態を検査する検出部であって、平坦面３１ａを有する下地部３１と、前記平坦面３１ａを覆うように固定化された複数の坦持体３２と、該複数の坦持体３２のそれぞれに固定化された、前記標的と前記反応性物質との反応に起因して呈色，発光または蛍光を生じる視認物質の前駆体３３とを含む。【選択図】図２
2014145728.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
検体中の標的と反応性物質との反応を進行させて呈色，発光または蛍光現象を生じさせることによって検体の状態を検査する検出部であって、
平坦面を有する下地部と、
前記平坦面を覆うように固定化された複数の坦持体と、
該複数の坦持体のそれぞれに固定化された、前記標的と前記反応性物質との反応に起因して呈色，発光または蛍光を生じる視認物質の前駆体とを含む、検出部。
【請求項２】
前記複数の坦持体のそれぞれに固定化された前記反応性物質をさらに含む、請求項１に記載の検出部。
【請求項３】
前記複数の坦持体は、千鳥状に規則的に配列されている、請求項１または２に記載の検出部。
【請求項４】
前記標的は、天然保湿因子（ＮＭＦ）であり、
前記前駆体は、ニコチンアミドアデニンジヌクロオチド酸化体（ＮＡＤ＋）である、請求項１乃至３のいずれかに記載の検出部。
【請求項５】
前記複数の坦持体は、自己集積単分子膜を構成するフェリチンである、請求項１乃至４のいずれかに記載の検出部。
【請求項６】
請求項１に記載の検出部と、
前記検出部を保持する台座部と、
標的が２次元に分布した検体を付着させることが可能な粘着部を有するテープと、
前記粘着部を露出させた状態で前記テープを保持するテープ保持部と、
前記反応性物質および該反応性物質と前記検体中の標的との反応を進行させるための反応液を前記検出部から分離した状態で保持する反応液保持部と、
該反応液保持部から前記検出部に前記反応液を導く反応液供給手段とを有し、
前記テープ保持部と前記台座部とは、前記テープの前記粘着部と前記検出部との間に前記反応液を保持可能な近接状態に互いの距離を変化させることが可能であり、
前記近接状態において前記テープの前記粘着部と前記検出部との間に前記反応液を保持することによって前記反応を進行させる、検査キット。
【請求項７】
請求項２に記載の検出部と、
前記検出部を保持する台座部と、
標的が２次元に分布した検体を付着させることが可能な粘着部を有するテープと、
前記粘着部を露出させた状態で前記テープを保持するテープ保持部と、
前記反応性物質と前記検体中の標的との反応を進行させるための反応液を前記検出部から分離した状態で保持する反応液保持部と、
該反応液保持部から前記検出部に前記反応液を導く反応液供給手段とを有し、
前記テープ保持部と前記台座部とは、前記テープの前記粘着部と前記検出部との間に前記反応液を保持可能な近接状態に互いの距離を変化させることが可能であり、
前記近接状態において前記テープの前記粘着部と前記検出部との間に前記反応液を保持することによって前記反応を進行させる、検査キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、検体中の標的の二次元分布を確認するための検出部及びこの検出部を備えた検査キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、皮膚に小型カメラを接触させて、皮膚組織を拡大観察したり、皮膚に電極を接触させて、電気抵抗等を測定したりすることにより、間接的に皮膚の状態を判断する技術がある。
【０００３】
また、皮膚組織を採取して、検査溶液に溶解した上で特定の蛋白質等を検出することで、皮膚疾患を判定したり、天然保湿因子（ＮＭＦ）等の機能を判定したりする技術がある（例えば、特許文献１，２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開２００９／１４２２６８号
【特許文献２】特開２００９−３６５５５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、前者の技術では、皮膚の状況を間接的な情報から推定することとなり、正確な皮膚（肌）情報を得ることはできなかった。
【０００６】
一方、特許文献１，２に開示された技術では、特定の物質を正確に測定することはできるが、検査にかかる工程が複雑かつ煩雑であるという問題点があった。また、特定の物質の二次元的な分布状態を正確に求めることが困難であった。
【０００７】
このため、簡易に正確な肌情報を得る技術が求められている。
【０００８】
本発明は、上述の事情のもとで考え出されたものであって、簡易な構成で正確な肌情報等の検体中の標的の情報を得ることのできる検査キットを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の実施形態の検査部は、検体中の標的と反応性物質との反応を進行させて呈色，発光または蛍光現象を生じさせることによって検体の状態を検査する検出部であって、平坦面を有する下地部と、前記平坦面を覆うように固定化された複数の坦持体と、該複数の坦持体のそれぞれに固定化された、前記標的と前記反応性物質との反応に起因して呈色，発光または蛍光を生じる視認物質の前駆体とを含むものである。
【００１０】
本発明の実施形態の検査キットは、上述の検出部と、前記検出部を保持する台座部と、標的が２次元に分布した検体を付着させることが可能な粘着部を有するテープと、前記粘着部を露出させた状態で前記テープを保持するテープ保持部と、前記反応性物質および該反応性物質と前記検体中の標的との反応を進行させるための反応液を前記検出部から分離した状態で保持する反応液保持部と、該反応液保持部から前記検出部に前記反応液を導く反応液供給手段とを有し、前記テープ保持部と前記台座部とは、前記テープの前記粘着部と前記検出部との間に前記反応液を保持可能な近接状態に互いの距離を変化させることが可能であり、前記近接状態において前記テープの前記粘着部と前記検出部との間に前記反
応液を保持することによって前記反応を進行させる、ものである。
【００１１】
また、本発明の他の実施形態の検査キットは、上述の検出部と、前記検出部を保持する台座部と、標的が２次元に分布した検体を付着させることが可能な粘着部を有するテープと、前記粘着部を露出させた状態で前記テープを保持するテープ保持部と、前記反応性物質と前記検体中の標的との反応を進行させるための反応液を前記検出部から分離した状態で保持する反応液保持部と、該反応液保持部から前記検出部に前記反応液を導く反応液供給手段とを有し、前記テープ保持部と前記台座部とは、前記テープの前記粘着部と前記検出部との間に前記反応液を保持可能な近接状態に互いの距離を変化させることが可能であり、前記近接状態において前記テープの前記粘着部と前記検出部との間に前記反応液を保持することによって前記反応を進行させる、ものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、簡易な構成で正確な検体中の標的の情報を得ることのできる検査部及び検査キットを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明の１つの実施形態に係る検査キットを示す斜視図である。
【図２】（ａ），（ｂ）はそれぞれ、本発明の検査部を示す要部を拡大した斜視図及び上面図である。
【図３】本発明の他の実施形態に係る検査キットを示す斜視図である。
【図４】本発明の他の実施形態に係る検査キットを示す斜視図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明の検査部及びこの検査部を備えた検査キットの実施形態について、図面を参照しつつ、説明する。
【００１５】
（実施形態１）
本実施形態に係る検査キット１００は、テープ保持部１０と、反応液保持部２０と、検出部３０と、反応液供給手段４０と、を有する。
【００１６】
なお、この例では、検査キット１００を用いて肌情報を検査する場合を説明する。すなわち、検体は皮膚組織となる。
【００１７】
テープ保持部１０は、粘着テープ片１（以下、テープ１という）を保持するためのものであり、平面部１１と留め具１２とを有する。ここで、テープ１は、一方面に粘着性を有する粘着部１ａを含む。言い換えると、テープ基体上に粘着部１ａが形成されてなる。理由は後述するが、テープ１は、平面視でこの粘着部１ａが位置する領域において透光性を有することが好ましい。このことから、テープ１のテープ基体の材質として光透過性等を考慮したシリコーン樹脂，シリコンアクリル樹脂，アクリル樹脂のいずれかが好ましいが、その他の樹脂であってもよい。なお、ここで「透光性」とは可視光に対するものに限定されず、後述の検体の標的が関与する反応により生じる呈色、発光または蛍光を観察可能とする条件とする。このようなテープ１の形状及びサイズは、特に限定はされないが、皮膚に接触させて角質等の皮膚組織を採取するという目的から、数ｃｍ角内に収まるサイズであることが好ましく、鋭角を有さない形状、即ち矩形状や円形状，楕円形状等が好ましい。皮膚に粘着部１ａ全体を平均的に接触させることができるからである。また、矩形状や円形状，楕円形状等の場合には、検出する物質の面内における分布状態を評価するために適している。
【００１８】
このようなテープ１としては市販のセロハンテープや角質採取テープを用いればよい。
この例では、テープ１は直径２．２ｃｍの円形の角質採取テープとし、弦で区切られる２つの領域のうち大きい領域に粘着部１ａを形成したものであり、テープ１に対する粘着部１ａが占める面積の割合を８０％以上としている。
【００１９】
このようなテープ１の粘着部１ａを皮膚に貼付した後に剥離することで、皮膚の平面情報を粘着部１ａに転写することができる。具体的には皮脂・角質等を採取することができる。なお、このテープ１の貼付・剥離に先立ち、皮膚の汚れを取ることが望ましい。
【００２０】
テープ１は、他方の面を平面部１１に向かい合わせて留め具１２によりテープ保持部１０に保持される。言い換えると、テープ１は粘着部１ａが上側に向くようにテープ保持部１０に保持される。保持方法は、平面視で粘着部１ａの位置する領域以外に位置する留め具１２を用いて、粘着部１ａが露出するように保持できれば特に限定されない。例えば、平面視で平面部１１の粘着部１ａの位置する領域以外に、平面部１１から延び、平面部１１とテープ１の厚み以上の間隔を開けて平行に延びるフック状の留め具１２を設けてもよいし、粘着テープからなる留め具１２を設けてもよい。この例では、平面視で平面部１１の粘着部１ａの位置する領域を挟んだ両側に粘着テープからなる留め具１２を設けている。具体的には留め具１２は両面テープで、一方面が平面部１１に貼付された状態であり、他方の面は、剥離可能な保護テープで保護されている。テープ１を保持する際にこの保護テープを取り除き粘着テープ部を露出させて貼りあわせて保持する。留め具１２をこのように構成することにより、平面部１１とテープ１とを隙間なく保持することができるので好ましい。
【００２１】
平面部１１はテープ１を保持でき、テープ１が保持される側の面に水を透過させないような撥水性を有し、後述の反応液２１に対して化学的に安定であれば、その材料、形状等は適宜自由に選択できる。例えば、厚紙やプラスチック等を用い、粘着部１ａは配置される領域が透光性を有する材料で形成されるようにすればよい。平面部１１のサイズは特に限定されないが、簡易検査キットという性質上から片手で保持、取り扱いができることが好ましく、厚み０．０１ｍｍから１ｍｍ程度、平面視におけるサイズを数ｃｍ角内に収まる大きさとすることが望ましい。平面部１１の材質は、反応液２１に難溶で、指での押圧に対して強度が保持できることが望ましい。光透過性を考えるとアクリル樹脂が適当であるが、他の樹脂材料等でもよく、特段限定されるものではない。この例では短辺が５ｃｍ、長辺が９ｃｍの矩形状であり、厚さ０．４ｍｍのアクリル樹脂板を用いて説明している。
【００２２】
このようなテープ保持部１０は台座部５０とその主面同士を対向配置可能に保持される。具体的には、テープ保持部１０の平面部１１の一端が台座部５０の一端で開閉自在に接続されている。この接続された部分を支点としてテープ保持部１０のテープ１の粘着部１ａが台座部５０に対向するように折り畳めるように変位可能となっている。言い換えると、テープ保持部１０に保持されたテープ１の粘着部１ａと、台座部５０に配置された後述の検出部３０との距離を変えることができる。
【００２３】
台座部５０は、その上面に検出部３０と封止部５１とを有する。検出部３０は、粘着部１ａと接触して、粘着部１ａに転写された皮膚から採取された物質との反応により生じる呈色、発光、蛍光等の現象を生じる視認物質の前駆体をその表面に保持するものである。この検出部３０の詳細については後述する。
【００２４】
反応液供給部２０は、台座部５０の上面のうち、検出部３０よりもテープ保持部１０との接続部側に配置される。反応液保持部２０は、反応液２１と反応液２１を保持するフィルムからなる小胞部２２とを有する。フィルムからなる小胞部２２は台座部５０に固定化されている。反応液２１は、標的と検出部３０との組み合わせにより適宜決定する。
【００２５】
すなわち、検査キット１００は、標的と、標的との反応により前駆体を前記視認物質へと変化させる物質を生じさせるような反応性物質と、標的と反応性物質との反応により呈色，発光および蛍光のいずれかの現象を生じる視認物質へと変化する視認物質の前駆体が存在すればよい。
【００２６】
例えば、検出部３０に、標的と反応する反応性物質、触媒が固定化されている場合には、反応液２１は反応を促進するための溶媒を含み、検出部３０に標的と反応する反応性物質、触媒が固定化されていない場合には、反応液２１は標的と反応する反応性物質、触媒と反応を促進するための溶媒を含む。すなわち、反応を進行させるために必要な物質が、反応液２１、検出部３０、テープ１で採取した検体の接触により揃えばよい。
【００２７】
小胞部２２は、検出部３０に均一に溶液を供給できるサイズにすることが望ましい。小胞部２２は、円筒状のビニール袋に溶液を包含させた後に封止し、その一部の側面を台座部５０に接着固定してもよい。また、予め半円筒状の空袋に反応液を注射針等で注入した後に袋を封止してもよい。反応液の液量は、検出部３０が均一に濡れる程度が適当であり、多すぎると反応液が漏れ、少なすぎると十分な反応が生じなくなる恐れがある。
【００２８】
このように、小胞部２２により、反応液２１と検出部３０とを分離して保持することができる。両者が分離しているため、反応の進行に必要な物質をそれぞれの物質に応じた望ましい状態で準備することができる。すなわち、反応に必要な物質のうち、乾燥状態で保存することが好ましものや、反応液２１中では不安定な物質は検出部３０に固定化し、溶液中で安定して存在しうるものを反応液２１中に溶解させた状態とすることができる。このように反応が進まない状態で準備可能であるため、必要なときに即座に反応をスタートさせることができる。
【００２９】
台座部５０は上述のような各構成要素を保持し、かつ、少なくともその上面は、反応液２１に対して透過性及び反応性の少ない材料で構成されている。本発明の皮膚検査キットは、簡便にその場で即時に診断できることを目指しているから、台座部５０のサイズは、片手に載せることのできるサイズであることが望ましい。また、基体材質に特段の制限はなく、有機高分子樹脂、金属、セラミック、陶器、ガラス、その他の剛性を有するものであればよいが、簡便さの理由から有機高分子材料、たとえば、アクリル樹脂、シリコーン樹脂、塩化ビニール樹脂、エポキシ樹脂、ポリイミド樹脂等々が好ましい。この例では短辺が５ｃｍ、長辺が９ｃｍの矩形状であり、厚さ０．４ｍｍのアクリル樹脂板を用いて説明している。
【００３０】
そして、台座部５０の上面には、封止部５１を有する。封止部５１は、封止部５１と、台座部５０の上面と、テープ保持部１０の一方主面とで、反応液保持部２０，検出部３０が配置された領域を囲うように形成される。言い換えると、テープ１の粘着部１ａと検出部３０の周囲を囲繞して、粘着部１ａと検出部３０と反応液２１を内部に収容するような収容空間を形成するために、台座部５０とテープ保持部１０とを近接状態としたときに生じる隙間を塞ぐように封止部５１が配置される。この例では、テープ保持部１０の外周部に沿うように形成されている。より具体的には、テープ保持部１０と台座部５０との一端が接続されているためその接続部を除くようなコの字状（Ｕ字状）に配置されている。封止部５１により、反応液２１の漏洩を防ぐとともに、検出部３０がおかれた環境を一定とすることができる。
【００３１】
なお、この例では封止部５１は台座部５０の上面に配置されているが、テープ保持部１０側に配置してもよいし、テープ保持部１０と台座部５０との双方に設けてもよい。
【００３２】
このような封止部５１としては、両面テープが最も簡便であるが、弾性ゲル材を用いて封止してもよい。また周囲の一部に突起上の構造を形成してグリース等の封止材を用いることができる。
【００３３】
そして、テープ保持部１０の平面部１１のうち、テープ保持部１０を台座部５０と対向するように変位させたときに、小胞部２２と当接する位置に反応液供給手段４０を設ける。反応液供給手段４０は突起構造４１からなる。突起構造４１は、小胞部２２に当接させても変形しない強度を有する材料であれば特に材料は限定されず、例えばプラスチック等で形成される。
【００３４】
（操作方法）
このような検査キット１００の動作について説明する。まずテープ１を用いてテープストリッピング操作を行い、皮膚組織の一部を粘着部１ａに転写する。このテープ１を粘着部１ａが露出するようにして、留め具１２によりテープ保持部１０に保持する。この工程においては、突起構造４１は不図示の保護テープにより保護されていてもよい。
【００３５】
次に、突起構造４１を露出させた状態で、テープ保持部１０を台座部５０側に折り重ねるように変位させる。言い換えると、テープ保持部１０と台座部５０とが互いに向き合う角度を変える。変位により、粘着部１ａと検出部３０とが近接状態で対向配置される。
【００３６】
ここで、近接状態とは、粘着部１ａと検出部３０との間に反応液２１を保持可能な状態である。そして、この近接状態において粘着部１ａと検出部３０との間に反応液２１を保持することで反応が進行する。具体的にこの近接状態とは、１ｎｍ〜１００μｍ程度であり、反応液２１が検出部３０上に表面張力で保持可能な状態をいうものとする。
【００３７】
変位後に封止部５１により収容空間内に検出部３０、テープ１の粘着部１ａを収容する。
【００３８】
そして、変位後に突起構造４１を小胞部２２に当接させ押圧することにより、小胞部２２に孔を形成し、反応液２１を自由に流動させる。反応液２１は小胞部２２から移動し検出部３０と粘着部１ａとの間隙に供給され充填される。これにより、粘着部１ａに付着した皮膚採取物と、反応液２１と、検出部３０により、所定の反応が開始する。所定の時間が経過した後に反応の結果生じる、呈色、蛍光発光等の確認を行う。
【００３９】
ここで、テープ１が粘着部１ａ、基体のうち粘着部１ａが形成されている領域（テープ１の粘着部１ａの反対側の面）、テープ保持部１０の粘着部１ａが配置される領域は透光性を有している。このため、反応液２１を封止した状態で反応を確認することができる。
【００４０】
このような構成・動作をする検査キット１００を用いることにより、以下の顕著な効果を有する。
【００４１】
まず、粘着部１ａに皮膚組織を転写してそのままの状態で反応を進行させることができる。これにより、皮膚における検出希望物質（標的）の分布状態を二次元的に把握することができる。すなわち、単なる皮膚における検出希望物質の数値・平均値を得るのではなく、特異点の有無等まで把握することができる。
【００４２】
特に、検出部３０に呈色、発光、蛍光反応を生じる物質の前駆体が固定されていることから、反応が生じた場所で呈色、発光、および蛍光現象のいずれかが生じるため、例え標的が反応液２１との接触によりその位置を変更したとしても、最初に接触した位置に呈色、発光および蛍光現象を留めることができる。これにより、標的が反応液２１に対して溶
解する特性を有する場合であってもテープ１に転写された検体中の標的の二次元的な分布状態を再現することができる。
【００４３】
本実施形態の検査キット１００は、このような優れた効果を有するものを簡易な構成で実現したものである。
【００４４】
（検査部３０）
ここで、検査部３０について詳述する。検査部３０は、図２に示すように、下地部３１と、坦持体３２と前駆体３３とを含む。図２（ａ），（ｂ）はいずれも検査部３０の構成例を示す要部拡大斜視図及び平面図である。
【００４５】
下地部３１は平坦面３１ａを有し、平坦面３１ａに坦持体３２を保持する。下地部３１は平坦面３１ａを有すれば、特にその形状に制限はない。この例では、テープ１よりも大きい矩形状としているがテープ１の形状に合わせた形状としてもよい。また、平坦面３１ａは、数ｎｍの算術平均粗さを許さないものではなく、その上に固定する坦持体３２を面内でばらつきなく保持できる程度の平坦性を有していればよい。例えば、坦持体３２の大きさよりも小さい算術平均粗さを有していればよい。下地部３１を構成する材料は、その上部に固定すべき物質により適宜決定される。組み合わせ例については後述する。
【００４６】
下地部３１の平坦面３１ａには複数の坦持体３２が平坦面３１ａを覆うように形成されている。ここで、「覆う」とは、隙間なく覆うことに限定されない。複数の坦持体３２間の間隔にばらつきがない状態をいう。坦持体３２は後述の前駆体３３を固定化できる材料であれば特に限定されない。また、平面視で、平坦面３１ａの面積に対して、坦持体３３から露出する平坦面３１ａの面積の比率が１０％以下であることが好ましい。
【００４７】
前駆体３３は一般的に色素であるため低分子化合物であり、坦持体３２に比べ小さい。これにより、前駆体３３の配置は坦持体３２の配置にならうこととなる。このため、坦持体３２の配置密度を高めるように、坦持体３２を最密充填させることが好ましい。
【００４８】
前駆体３３は、標的との反応に伴い呈色，発光または蛍光を生じる物質の前駆体である。この前駆体３３は坦持体３２のそれぞれに固定化されている。前駆体３３は標的との反応を阻害しないよう反応に関与する官能基を除く官能基で坦持体３２に固定化する。固定化の方法は、化学的・物理的手法が挙げられるが、反応液２１の存在下においても坦持体３２との接合が変化しない方法が好ましい。
【００４９】
このような下地部３１，坦持体３２，前駆体３３は、下地部３１から順に積層されるように、検査部３０の厚み方向に高さ位置を変えて配列してもよいし（図２（ａ）参照）、下地部３１に配置される坦持体３２と坦持体３２との間に前駆体３３を配置し、検査部３０の厚み方向に高さ位置を坦持体３２と前駆体３３とで揃えるようにして配列してもよい（図２（ｂ）参照）。
【００５０】
このように構成することにより、前駆体３３の位置は標的との呈色，発光，蛍光を伴う反応が生じても固定化されており、呈色，発光および蛍光のいずれかの現象を引き起こす反応が生じた位置においてその現象を固定化することができる。
【００５１】
上述の下地部３１，坦持体３２，前駆体３３の組み合わせ例について説明する。ここで、前駆体３３としては、低分子量の呈色，発光及び蛍光現象を生じる物質の前駆体３３を想定している。低分子量の具体的な範囲としては分子量が１０００以下程度を指し、例えば、ＮＡＤ＋（ニコチンアミドアデニンジヌクロオチド酸化体）を挙げられる。前駆体３３として低分子量のものを用いることにより、例えば坦持体３２のサイズによらず固定化
することができるので好ましい。
【００５２】
第１の例として、下地部３１としてガラスを用い、坦持体３２としてシリカゲルを用いる場合について説明する。この場合には、まず、坦持体３２にアミノ基を修飾をする。同様に、前駆体３３にカルボキシル基を修飾する。そして、坦持体３２のアミノ基と前駆体３３のカルボキシル基とを共有結合させる。この共有結合反応を進める際に、前駆体３３に呈色，発光及び蛍光を生じるための反応に寄与する官能基を有する場合には、その官能基を保護した状態で行う必要がある。例えば、ＮＡＤ＋の場合にはアミノ基を保護する。
【００５３】
そして、このような予め結合させた坦持体３２と前駆体３３とを溶媒と混合させ、この混合液を下地部３１に塗布した後に乾燥させる。これにより、下地部３１上にシリカゲルからなる坦持体３２を配列させることができる。そして、この配列された坦持体３２のそれぞれに予め前駆体３３が結合している。これにより検出部３０を得ることができる。
【００５４】
第２の例として、下地部３１に金（Ａｕ）を用いて、坦持体３２により単分子膜（ＳＡＭ膜）を構成する場合について説明する。この場合には、まず、ビオチン，ストレプトアジビン（ＳＡ）を用いた一般的な手法でＳＡＭ膜を形成する。そして、前駆体３３にビオチンを修飾させ、このビオチンとＳＡＭ膜を構成する坦持体３２のそれぞれのＳＡとを結合させる。これにより、下地部３１から前駆体３３までが化学結合により結合しているため、安定した測定を行なうことができる。また、ＳＡＭ膜を構成する坦持体３２のそれぞれに前駆体３３が固定化されるため、二次元に均一に分布させることができるとともに、各前駆体３３の配置位置に厚み方向における高低差が生じることを抑制することができる。これにより、前駆体３３の立体障害をなくして、反応に寄与できる前駆体３３の割合を増やすことができ、感度の高い検出部３０を提供することができる。なお、下地部３１の平坦面３１ａが、ＳＡＭ膜を形成しやすいようにＡｕであることが好ましいが、下地部３１全体がＡｕである必要はない。すなわち、基板上にＡｕ膜を形成させたものを下地部３１としてもよい。
【００５５】
第３の例として、下地部３１として任意の物質を、坦持体３２としてウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を用いる場合を例に説明する。下地部３１は特に限定されないが、例えばポリスチレンを用いることができる。この場合には、まず、坦持体３２に前駆体３３を有機合成により導入させる。クロスリンカーを用いてもよい。次に、この前駆体３３が結合した坦持体３２を静電相互作用で下地部３１に吸着させる。この場合には、ＢＳＡにより、検体の非特異吸着を抑制することができる。
【００５６】
第４の例として、下地部３１として任意の物質を用い、坦持体３２としてアガロースゲルを用いる場合を例に説明する。このような場合には、アガロースゲルを固化する際に前駆体３３を事前に混合させておけばよい。アガロースゲルのうち、前駆体３３と接しているゲルを坦持体３２として、一体固化しているゲルを下地部３１としてもよい。
【００５７】
第５の例として、下地部３１としてガラス等任意の物質を用い、坦持体３２としてＳＡ修飾させたＡｕ等のナノ粒子を用いてもよい。この場合には、前駆体３３をビオチン修飾させ、坦持体３２と結合させてもよい。
【００５８】
第６の例として、下地部３１として任意の物質を用い、坦持体３２としてフェリチンを用いてもよい。複数の坦持体３２としてフェリチンを用いる場合には、フェリチンが自己組織化可能な下地部３１とすることが好ましい。例えば、下地部３１を金属層で構成し電位をかけ正に帯電させることにより、負に帯電するフェリチンを配列させてもよい。また、下地部３１を無機材料で構成し、フェリチンにこの無機材料と選択的に結合する機能性ペプチドを修飾させてもよいし、下地部３１にカルボキシル基等のアミノ酸と結合可能な
反応基を修飾させてもよい。また、下地部３１のエッジに沿ってフェリチンを吸着させてもよい。坦持体３２としてフェリチンを用いる場合には、下地部３１にフェリチンを含む溶液を滴下して形成してもよいし、別体の基体に配列させた坦持体３２としてのフェリチンからなる自己集積単分子膜を下地部３１に転写させてもよい。なお前駆体３３にはカルボキシル基を修飾し、フェリチンのアミノ基とアミド結合させることで両者を結合することができる。
【００５９】
このように坦持体３２としてフェリチンを用いる場合には、フェリチンの自己組織化特性を用いることで、フェリチンを隙間なく、最密充填することができる。この例では坦持体３２としてのフェリチンの各列毎に互い違いに千鳥状に配列させている。このように構成することで下地部３１を被覆することができる。なお、ここで、「千鳥」とは、複数列に配置されたものにおいて、ある列を構成する坦持体３３のそれぞれを、隣の列を構成するそれぞれの坦持体の中心位置からずらした位置に配置させた構成のことである。
【００６０】
上述の各例に示すような組み合わせを採用することで検出部３０を得ることができる。ここで、例えば、第１の例のように坦持体３２が球体の場合には、坦持体３２を密度高く配置させることができる。これにより、前駆体３３も密度高く均一に分布させることができるので、反応の二次元分布を確認する上で好ましい。
【００６１】
また、第２の例及び第６の例のように、坦持体３２でＳＡＭ膜や自己集積単分子膜を形成する場合には、前駆体３３を二次元的に立体障害なしに均一に分布させることができる。これにより、標的の二次元分布に応じた呈色，発光及び蛍光現象のいずれかの反応が生じた位置を、解像度よく（重なることなく）正確に再現することができる。
【００６２】
前駆体３３の例は、反応の種類によって異なる。例えば標的が天然保湿因子（ＮＭＦ）であり、脱水素酵素を用いることにより標的を酸化させる反応を用いる場合には、還元されて蛍光反応を生じるＮＡＤ＋（ニコチンアミドアデニンジヌクロオチド酸化体）を前駆体３３として採用する。言い換えると、標的を脱水素反応により特異的に酸化反応させる場合には、補酵素であり還元反応により蛍光基質となるＮＡＤ＋を前駆体３３として採用する。
【００６３】
（検出部３０の変形例）
上述の検出部３０は、坦持体３２に前駆体３３のみを固定化した例を説明したが、前駆体３３に加え反応性物質３４も固定化した検出部３０Ｃとしてもよい。
【００６４】
反応性物質３４は、標的と呈色，発光及び蛍光のいずれかの現象を伴う反応を生じるものである。反応性物質３４としては、酵素，触媒等が挙げられる。
【００６５】
特に、検体として皮膚組織を用いるなど生体由来の成分を検出する場合には、反応性物質３４として酵素を用いることが好ましい。酵素は生体内で様々な化学反応を触媒し、生体の代謝維持に欠かすことができない。一方で、通常の状態では進行しない化学反応が、特定の酵素の存在によって、特異的に進行する場合が多々存在する。皮膚組織中の様々な物質は、皮膚中に存在する酵素が触媒として機能し、生化学的な反応が進行することで代謝が維持されている。逆に、皮膚組織中に存在する酵素と同一の酵素、あるいは同様の作用を有する特定の酵素を利用すれば、皮膚組織中の特定の物質（バイオマーカ）の存在を高精度で、定性的、あるいは定量的情報として得ることが可能となる。
【００６６】
ただし、これは酵素に限定した事柄ではなく、特定のバイオマーカに特異的に反応する皮膚組織と反応するその他の物質でもかまわない。特定のバイオマーカと特異的に化学反応し、かつその化学反応が検出可能な物質であればよく、たとえば、呈色、蛍光、発色試
薬等の検出試薬であってもよい。
【００６７】
ここで、坦持体３２としてフェリチンを用いた場合には、タンパク質であるフェリチンに前駆体３３や酵素等の反応性物質３４を固定化することは容易であり、かつフェリチンは直径が２１ｎｍであり、そのそれぞれに１対１以上の比率で前駆体３３及び反応性物質３４を固定化することも可能である。すなわち、二次元的に整列したフェリチンに前駆体３３，反応性物質３４のそれぞれを固定化することで、これらの物質も二次元的に均等に分布することとなる。さらに、前駆体３３及び反応性物質３４共に、立体障害のない坦持体３２に被覆された上面に位置するため、標的との接触確率を高めることができる。
【００６８】
なお、坦持体３２と前駆体３３及び反応性物質３４との間には、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）やオリゴチレングリコールを介在させてもよい。用いている。ＰＥＧ等の存在が分子スペーサーとして機能し、前駆体３３周辺における蛋白質や細胞等の生体分子の凝集を抑制することができる。これにより、反応により生じる呈色，発光および蛍光反応のいずれかが生じたときに光学特性の視認を阻害するものがなくなるので好ましい。
【００６９】
上述のように、検出部３０に反応性物質３４を固定化するとともに、小胞部２２により、反応液２１と検出部３０とを分離して保持している。これにより、反応性物質３４を乾燥した状態で保存することができる。これにより、検査キット１００を品質を維持した状態で長期保存が可能となる。また、反応液２１を準備する際に、事前に反応性物質３４を混合して調整する必要がないので取扱いが容易なものとなる。
【００７０】
（評価対象物）
上述の検査キット１００で具体的に行われる反応の例について詳述する。
【００７１】
＜ＮＭＦ（天然保湿因子）バランス評価＞
検出部３０に、前駆体３３として、ＮＡＤ＋を固定化する。アミノ酸、乳酸の脱水酵素であるアミノ酸デヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼは検出部３０の坦持体３２に固定化してもよいし、後述の反応液２１に混合させてもよい。
【００７２】
反応液２１として、トリスーＨＣｌバッファ液、リン酸バッファ液、ホウ酸バッファ液のいずれか、または２種以上の混合液にトリトンＸ−１００等の界面活性剤を添加したものを例示できる。アミノ酸を測定対象とする場合には、グリシンと塩酸緩衝液との混合液を用いることもできる。なお、検出部３０にアミノ酸デヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼが固定化されていない場合には、これらを反応液２１に混合する。
【００７３】
このような検出部３０と反応液２１との組み合わせにより、粘着部１ａに付着した皮膚からの採取した角質のＮＭＦ中のアミノ酸と乳酸とを検出することができる。具体的には、反応液２１中のトリトンＸ−１００等により角質の細胞膜を破壊する。そして、角質中の乳酸およびアミノ酸の脱水反応により、ＮＡＤ＋が還元され還元体であるＮＡＤＨが生成する。このＮＡＤＨが発生する蛍光により、乳酸およびアミノ酸量、粘着部１ａにおける分布状況等を確認できる。
【００７４】
また、このＮＡＤＨに起因する蛍光反応を呈色反応に変換してもよい。具体的には、検出部３０または反応液２１のいずれか一方に、触媒であるジアホラーゼ，テトラゾリウムを存在させる。そして、乳酸またはアミノ酸の存在により生成したＮＡＤＨとジアホラーゼ，テトラゾリウムとの存在下において、赤色を呈色するホルマゾン色素が生成される。このように呈色反応で乳酸またはアミノ酸の二次元分布を確認することで、蛍光反応をみる装置等を必要とせずに、顕微鏡等で目視可能となる。
【００７５】
（他の実施形態）
本発明の検査キット１００は上述の例に限定されない。例えば、図３に示す検査キット１００Ａのように、反応液保持部２０Ａとしてゲルシート等内部に水分を蓄えた材料を用いて反応液保持部２０Ａが台座部５０とは別体してもよい。さらに、テープ保持部１０Ａと台座部５０Ａとが別体となっていてもよい。
【００７６】
また、図４に示すように、スポイト状となっている反応液保持部２０Ｂを台座部５０と別体としてもよい。この場合には、テープ保持部１０Ｂ、台座部５０Ｂの一部に反応液保持部２０Ｂのスポイトの出口形状に応じた変形部１３Ｂ、５２Ｂが形成されている。テープ保持部１０Ｂを台座部５０Ｂ側に変位させ、変形部１３Ｂ、５２Ｂが合わさることで、反応液保持部２０Ｂのスポイトの出口形状と略同一の形状となる挿入口を形成する。そして、この挿入口が反応液供給手段４０Ｂである流路を形成する。
【００７７】
また、反応液保持部２０はテープ保持部１０側に固定されていてもよい。
【００７８】
さらに、上述の実施形態によれば、検出部３０が１つの例を用いて説明したが、２以上設けてもよい。その場合には、標準試料と実検体資料との比較を行うことが可能となる。また、複数の皮膚採取箇所の測定を同時に行い、皮膚位置における比較を行うことができる。
【符号の説明】
【００７９】
１・・・テープ
１ａ・・・粘着部
１０・・・テープ保持部
２０・・・反応液保持部部
３０・・・検出部
３１・・・下地部
３２・・・坦持体
３３・・・前駆体
３４・・・反応性物質
４０・・・反応液供給手段
５０・・・台座部
１００・・・検査キット
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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