(57)【要約】【課題】ホスホロチオエート型アナログであってもよい合成オリゴヌクレオチドやリン酸化されたヌクレオシドに含まれるリン酸基のＯＨ基又はＳＨ基に対して、細胞内で脱離可能な保護基が付与された新しいプロドラッグ化合物、そのようなプロドラッグ化合物の合成用試薬、及びそのような合成用試薬を用いたオリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の製造方法を提供すること。【解決手段】下記一般式（１）又は（２）に示すように、ヌクレオチド又はヌクレオチドのホスホロチオエートにおけるリン酸基に対し特定構造を備えた保護基を導入する。下記一般式（１）又は（２）中、Ｅは酸素原子又は硫黄原子であり、Ｚは酸素原子又は硫黄原子である。2014084313.tif 000050【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヌクレオチドとヌクレオチドとを結合させるリン酸基の一部又は全部が下記一般式（１）又は（２）に示すリン酸トリエステル構造であるオリゴヌクレオチド、
【化１】
2014084313.tif 000046
（上記一般式（１）中、Ｒ１は一価の有機基であり、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に炭素数５以下のアルキル基であり各Ｒ５はそれぞれ独立に一価の有機基であり、Ｅは酸素原子又は硫黄原子であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−であり、Ｚは酸素原子又は硫黄原子であり、ｎは０から３の整数である。上記一般式（２）中、Ｒ６は一価の有機基であり、各Ｒ７はそれぞれ独立に一価の有機基であり、Ｅは酸素原子又は硫黄原子であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−であり、Ｚは酸素原子又は硫黄原子であり、ｍは０から４の整数である。）
５’−位に結合されたモノ又はポリリン酸基のＯＨ基の少なくとも一部が下記一般式（３）又は（４）に示す基で保護されたリボヌクレオチド若しくはデオキシリボヌクレオチド、又は、
５’−位に結合されたモノ又はポリリン酸基のＯＨ基の少なくとも一部がＳＨ基に置換され、かつ前記ＯＨ基及び前記ＳＨ基の少なくとも一部が下記一般式（３）又は（４）に示す基で保護された、リボヌクレオチドのホスホロチオエート型アナログ若しくはデオキシリボヌクレオチドのホスホロチオエート型アナログ、からなるプロドラッグ化合物。
【化２】
2014084313.tif 000047
（上記一般式（３）中、Ｒ１は一価の有機基であり、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に炭素数５以下のアルキル基であり、各Ｒ５はそれぞれ独立に一価の有機基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、ｎは０から３の整数である。上記一般式（４）中、Ｒ６は一価の有機基であり、各Ｒ７はそれぞれ独立に一価の有機基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、ｍは０から４の整数である。）
【請求項２】
前記一般式（１）又は（３）におけるＲ２、Ｒ３及びＲ４がそれぞれメチル基である請求項１記載のプロドラッグ化合物。
【請求項３】
下記一般式（５）又は（６）で表す構造を備えた化合物からなる、ホスホロチオエート型アナログであってもよいオリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の合成用試薬。
【化３】
2014084313.tif 000048
（上記一般式（５）中、Ｒ１は一価の有機基であり、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に炭素数５以下のアルキル基であり、各Ｒ５はそれぞれ独立に一価の有機基であり、ｎは０から３の整数であり、Ｒｂａｓｅはプリン骨格又はピリミジン骨格を備えた一価の有機基であり、Ｒｐは一価の有機基であり、Ｘは水素原子又は水酸基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、Ｚは酸素原子または硫黄原子であり、Ｒａ及びＲｂはそれぞれ独立にアルキル基であって、Ｒａ及びＲｂは互いに結合して環を形成してもよく、テトラヒドロフラン環は環内のＣ−Ｃ結合において不飽和結合を備えてもよい。上記一般式（６）中、Ｒ６は一価の有機基であり、各Ｒ７はそれぞれ独立に一価の有機基であり、ｍは０から４の整数であり、Ｒｂａｓｅはプリン骨格又はピリミジン骨格を備えた一価の有機基であり、Ｒｐは一価の有機基であり、Ｘは水素原子又は水酸基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、Ｚは酸素原子または硫黄原子であり、Ｒａ及びＲｂはそれぞれ独立にアルキル基であって、Ｒａ及びＲｂは互いに結合して環を形成してもよく、テトラヒドロフラン環は環内のＣ−Ｃ結合において不飽和結合を備えてもよい。）
【請求項４】
下記一般式（５）又は（６）で示す構造を備えた化合物を用いてホスホアミダイド法によるオリゴヌクレオチドの伸長を行う工程を含む、ホスホチオエート型アナログであってもよいオリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の製造方法。
【化４】
2014084313.tif 000049
（上記一般式（５）中、Ｒ１は一価の有機基であり、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に炭素数５以下のアルキル基であり、各Ｒ５はそれぞれ独立に一価の有機基であり、ｎは０から３の整数であり、Ｒｂａｓｅはプリン骨格又はピリミジン骨格を備えた一価の有機基であり、Ｒｐは一価の有機基であり、Ｘは水素原子又は水酸基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、Ｚは酸素原子または硫黄原子であり、Ｒａ及びＲｂはそれぞれ独立にアルキル基であって、Ｒａ及びＲｂは互いに結合して環を形成してもよく、テトラヒドロフラン環は環内のＣ−Ｃ結合において不飽和結合を備えてもよい。上記一般式（６）中、Ｒ６は一価の有機基であり、各Ｒ７はそれぞれ独立に一価の有機基であり、ｍは０から４の整数であり、Ｒｂａｓｅはプリン骨格又はピリミジン骨格を備えた一価の有機基であり、Ｒｐは一価の有機基であり、Ｘは水素原子又は水酸基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、Ｚは酸素原子または硫黄原子であり、Ｒａ及びＲｂはそれぞれ独立にアルキル基であって、Ｒａ及びＲｂは互いに結合して環を形成してもよく、テトラヒドロフラン環は環内のＣ−Ｃ結合において不飽和結合を備えてもよい。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロドラッグ化合物、オリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の合成試薬、及びオリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
今日、ＤＮＡ（デオキシリボ核酸）やＲＮＡ（リボ核酸）といった核酸の合成法は確立されており、短鎖の核酸であるオリゴヌクレオチドの自動合成機を用いた合成も行われている。こうして得られた合成オリゴヌクレオチドは、生命化学研究や医療診断等のために日常的に用いられている。合成オリゴヌクレオチドの有用な用途の一つに、核酸医薬がある。合成オリゴヌクレオチドは、例えば、疾患の原因となるタンパク質をコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡと相補的な塩基配列を持つオリゴヌクレオチドを細胞内に導入することにより、このタンパク質の合成を阻害するアンチセンス法（非特許文献１を参照。）で用いられる。
【０００３】
また、上記のようなオリゴヌクレオチドの他に、天然のヌクレオシドに化学修飾を施した合成ヌクレオシドも核酸医薬として有用である。合成ヌクレオシドは、細胞内に導入されると、ヌクレオシドモノリン酸（ヌクレオチド）、ヌクレオシドジリン酸、そしてヌクレオシドトリリン酸となるように５’−位においてリン酸化を次々に受け、このヌクレオシドトリリン酸が天然のヌクレオシドトリリン酸に競合することで細胞内でのＤＮＡやＲＮＡの合成を阻害する。合成ヌクレオシドからなる核酸医薬は、このような作用を持つので、例えば、ウイルスのＤＮＡ合成を阻害しウイルスの増殖抑制に寄与する抗ウイルス剤として期待されている。ところで、合成ヌクレオシドは、細胞内でＤＮＡ等の合成を阻害するに際して、ヌクレオシドトリリン酸となるまで３回のリン酸化を受けなくてはならないが、細胞内では、最初のリン酸化を受けてヌクレオシドモノリン酸となるのに多くの時間を要する一方で、一度リン酸化を受けてヌクレオシドモノリン酸となった後では、速やかに２回目及び３回目のリン酸化を受けてヌクレオシドトリリン酸となる。このため、予めヌクレオシドに一回目のリン酸化を施したヌクレオシドモノリン酸を核酸医薬として用いることが望ましい。また、上記のような合成ヌクレオシドに加えて、オリゴヌクレオチドやリン酸化されたヌクレオシド（ヌクレオチド）におけるリン酸基に含まれるＯＨ基がＳＨ基に置換された、オリゴヌクレオチドやヌクレオチドのホスホロチオエートアナログもまた核酸医薬として有用であることが知られている。
【０００４】
こうした合成オリゴヌクレオチドやヌクレオシドモノリン酸は１ないし複数のリン酸基を持っており、これらのリン酸基は、それぞれ、解離してアニオンとなることのできるＯＨ基を１又は２個有する。そのため、合成オリゴヌクレオチドやヌクレオシドモノリン酸は、脂溶性に乏しく、脂質膜である細胞膜を通過することができない。そこで、これらの化合物におけるリン酸基に含まれるＯＨ基を細胞内の酵素で脱離可能な置換基で保護し、脂溶性を向上させる手法が用いられることがある。このような置換基で修飾された化合物は、細胞膜を通過した後に、細胞内の酵素により脱保護を受けることにより、核酸医薬としての活性を発現するプロドラッグとなる（例えば、非特許文献２を参照）。なお、このことは、ＯＨ基の一部又は全部がＳＨ基で置換されたホスホロチオエートアナログでも同様である。
【０００５】
また、特許文献１には、細胞膜透過性を有するキャリア粒子の内部にオリゴヌクレオチドを取り込ませ、当該キャリアごとオリゴヌクレオチドを細胞内に送り込む方法が提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００７−１０６７４０号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ａ．Ｍ．Ｂｅｌｉｋｏｖａ，Ｖ．Ｆ．Ｚａｒｙｔｏｖａ，Ｎ．Ｉ．Ｇｒｉｎｒｖａ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９６７，３５５７−３５６２
【非特許文献２】Ｐ．Ｐ．Ｖｉｒｔａ，Ｈ．Ｌｏｎｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００６，１３，３４４１−３４６５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
オリゴヌクレオチドを細胞内に導入する場合、上記のように適切なキャリアを用いる方法もあるが、そのようなキャリアを用いずにオリゴヌクレオチド自体に細胞膜透過性を付与することができれば、複雑なキャリアを設計する必要がなくなるので理想的である。この点で、下記式において（Ａ１）→（Ｂ１）、及び（Ａ２）→（Ｂ２）で示すように合成オリゴヌクレオチドやヌクレオシドモノリン酸のリン酸基に含まれるＯＨ基に適切な保護基を結合させてこれらの化合物の脂溶性を高め、次いでこの高い脂溶性を利用してこれらの化合物を細胞内に送り込んでから保護基を脱離させて活性を発現させるという手法を用いることが望ましい。このような手法で用いられる保護基としては、非特許文献２等の文献においていくつかの例が知られているところではあるが、プロドラッグのデザインにおける自由度を高めるという観点からは、多数の有効な保護基の中から望ましい保護基を適宜選択できることが望ましい。そして、このことは、ＯＨ基の一部又は全部がＳＨ基で置換されたホスホロチオエートアナログでも同様に当てはまる。
【化１】
2014084313.tif 000002
【０００９】
本発明は、以上の状況に鑑みてなされたものであり、合成オリゴヌクレオチドやリン酸化されたヌクレオシドに含まれるリン酸基のＯＨ基や、これらのホスホロチオエートアナログのＳＨ基に対して、細胞内で脱離可能な保護基が付与された新しいプロドラッグ化合物、そのようなプロドラッグ化合物の合成用試薬、及びそのような合成用試薬を用いたオリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、下記化学反応式のように、リン酸基のＯＨ酸素から３個の炭素原子を介してベンゼン環を配置し、そのベンゼン環のオルト位にアシルオキシ基（−Ｏ−Ａｃｙｌ）を配置した化合物では、細胞内にてアシルオキシ基のエステル結合がエステラーゼ等の酵素により加水分解されてフェノール性水酸基が発現したときに、意外にも、このフェノール性水酸基の酸素原子が、リン酸基のＯＨ酸素に結合している炭素原子と求核置換反応により結合を形成することで、この炭素原子とリン酸基のＯＨ酸素との間の結合を切断し、リン酸基のＯＨ基を再生させることを見出した。この反応は、ＳＮ２反応であり、分子内環化反応が進行することでリン酸基が脱離する。自由に動くことのできるアルキル鎖末端の脱離基に対する求核反応の進行は通常ならば遅いと予想されるが、本発明者らは、リン酸基を脱離基とし、さらにアルキル基に修飾（アルキル化や二重結合の導入）を施すことで、実用的な速度で脱離反応が進む構造を見出した。本発明は、以上のような知見に基づいてなされたものであり、以下のものを提供する。なお、下記化学反応式は本発明の一態様に基づくものであり、下記化学反応式におけるＲ１〜Ｒ５及びｎについては後述する。また、下記化学反応式と同様の化学反応はリン酸基のＯＨ基がＳＨ基で置換されたホスホロチオエートアナログでも生じるが、ここではリン酸基がＯＨ基である場合を例として説明している。
【化２】
2014084313.tif 000003
【００１１】
（１）本発明は、ヌクレオチドとヌクレオチドとを結合させるリン酸基の一部又は全部が下記一般式（１）又は（２）に示すリン酸トリエステル構造であるオリゴヌクレオチド、
【化３】
2014084313.tif 000004
（上記一般式（１）中、Ｒ１は一価の有機基であり、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に炭素数５以下のアルキル基であり、各Ｒ５はそれぞれ独立に一価の有機基であり、Ｅは酸素原子又は硫黄原子であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−であり、Ｚは酸素原子又は硫黄原子であり、ｎは０から３の整数である。上記一般式（２）中、Ｒ６は一価の有機基であり、各Ｒ７はそれぞれ独立に一価の有機基であり、Ｅは酸素原子又は硫黄原子であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−であり、Ｚは酸素原子又は硫黄原子であり、ｍは０から４の整数である。）
５’−位に結合されたモノ又はポリリン酸基のＯＨ基の少なくとも一部が下記一般式（３）又は（４）に示す基で保護されたリボヌクレオチド若しくはデオキシリボヌクレオチド、又は、
５’−位に結合されたモノ又はポリリン酸基のＯＨ基の少なくとも一部がＳＨ基に置換され、かつ上記ＯＨ基及び上記ＳＨ基の少なくとも一部が下記一般式（３）又は（４）に示す基で保護された、リボヌクレオチドのホスホロチオエート型アナログ若しくはデオキシリボヌクレオチドのホスホロチオエート型アナログ、からなるプロドラッグ化合物である。
【化４】
2014084313.tif 000005
（上記一般式（３）中、Ｒ１は一価の有機基であり、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に炭素数５以下のアルキル基であり、各Ｒ５はそれぞれ独立に一価の有機基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、ｎは０から３の整数である。上記一般式（４）中、Ｒ６は一価の有機基であり、各Ｒ７はそれぞれ独立に一価の有機基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、ｍは０から４の整数である。）
【００１２】
（２）上記一般式（１）又は（３）におけるＲ２、Ｒ３及びＲ４がそれぞれメチル基であることが好ましい。
【００１３】
（３）また本発明は、下記一般式（５）又は（６）で表す構造を備えた化合物からなる、ホスホロチオエート型アナログであってもよいオリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の合成用試薬でもある。
【化５】
2014084313.tif 000006
（上記一般式（５）中、Ｒ１は一価の有機基であり、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に炭素数５以下のアルキル基であり、各Ｒ５はそれぞれ独立に一価の有機基であり、ｎは０から３の整数であり、Ｒｂａｓｅはプリン骨格又はピリミジン骨格を備えた一価の有機基であり、Ｒｐは一価の有機基であり、Ｘは水素原子又は水酸基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、Ｚは酸素原子または硫黄原子であり、Ｒａ及びＲｂはそれぞれ独立にアルキル基であって、Ｒａ及びＲｂは互いに結合して環を形成してもよく、テトラヒドロフラン環は環内のＣ−Ｃ結合において不飽和結合を備えてもよい。上記一般式（６）中、Ｒ６は一価の有機基であり、各Ｒ７はそれぞれ独立に一価の有機基であり、ｍは０から４の整数であり、Ｒｂａｓｅはプリン骨格又はピリミジン骨格を備えた一価の有機基であり、Ｒｐは一価の有機基であり、Ｘは水素原子又は水酸基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、Ｚは酸素原子または硫黄原子であり、Ｒａ及びＲｂはそれぞれ独立にアルキル基であって、Ｒａ及びＲｂは互いに結合して環を形成してもよく、テトラヒドロフラン環は環内のＣ−Ｃ結合において不飽和結合を備えてもよい。）
【００１４】
（４）また本発明は、下記一般式（５）又は（６）で示す構造を備えた化合物を用いてホスホアミダイド法によるオリゴヌクレオチドの伸長を行う工程を含む、ホスホチオエート型アナログであってもよいオリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の製造方法でもある。
【化６】
2014084313.tif 000007
（上記一般式（５）中、Ｒ１は一価の有機基であり、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に炭素数５以下のアルキル基であり、各Ｒ５はそれぞれ独立に一価の有機基であり、ｎは０から３の整数であり、Ｒｂａｓｅはプリン骨格又はピリミジン骨格を備えた一価の有機基であり、Ｒｐは一価の有機基であり、Ｘは水素原子又は水酸基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、Ｚは酸素原子または硫黄原子であり、Ｒａ及びＲｂはそれぞれ独立にアルキル基であって、Ｒａ及びＲｂは互いに結合して環を形成してもよく、テトラヒドロフラン環は環内のＣ−Ｃ結合において不飽和結合を備えてもよい。上記一般式（６）中、Ｒ６は一価の有機基であり、各Ｒ７はそれぞれ独立に一価の有機基であり、ｍは０から４の整数であり、Ｒｂａｓｅはプリン骨格又はピリミジン骨格を備えた一価の有機基であり、Ｒｐは一価の有機基であり、Ｘは水素原子又は水酸基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、Ｚは酸素原子または硫黄原子であり、Ｒａ及びＲｂはそれぞれ独立にアルキル基であって、Ｒａ及びＲｂは互いに結合して環を形成してもよく、テトラヒドロフラン環は環内のＣ−Ｃ結合において不飽和結合を備えてもよい。）
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、合成オリゴヌクレオチドやリン酸化されたヌクレオシドに含まれるリン酸基のＯＨ基や、これらのホスホロチオエートアナログのＳＨ基に対して、細胞内で脱離可能な保護基が付与された新しいプロドラッグ化合物、そのようなプロドラッグ化合物の合成用試薬、及びそのような合成用試薬を用いたオリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の製造方法が提供される。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明のプロドラッグ化合物の一実施形態、オリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の合成用試薬の一実施形態、及びオリゴヌクレオチド型プロドラッグの製造方法の一実施態様のそれぞれについて説明する。なお、本発明は、以下の実施形態又は実施態様に限定されるものではなく、本発明の範囲において適宜変更を加えて実施することができる。また、下記の説明では、説明を簡略化して理解を容易にするために、主としてオリゴヌクレオチドやヌクレオチドを中心に述べるが、これらのリン酸基のＯＨ基がＳＨ基に置換されたホスホロチオエート型アナログについても同様に本発明が適用される。さらに、本発明は、上記一般式（１）及び（２）に示すように、リン酸基のＰ＝Ｏにおける酸素原子がＰ＝Ｓのように硫黄に置換されてチオリン酸基となったオリゴヌクレオチドやヌクレオチドのアナログも包含するが、下記の説明では、説明を簡略化して理解を容易にするために、主としてリン酸基を有するオリゴヌクレオチドやヌクレオチドを中心に述べる。
【００１７】
＜プロドラッグ化合物＞
本発明のプロドラッグ化合物は、所定の保護基でリン酸基のＯＨ基が保護されたオリゴヌクレオチド又はリボヌクレオチド若しくはデオキシリボヌクレオチド、及びこれらのホスホロチオエートアナログにあっては上記の保護基でＳＨ基が保護されたものであり、細胞内でエステラーゼ等の酵素の作用を受けることにより保護基が脱離し、ＤＮＡ又はＲＮＡの合成を阻害する、ｍＲＮＡと結合してタンパク質合成を阻害する、等の作用を発現する。なお、リボ（又はデオキシリボ）ヌクレオシドの５’−位にモノリン酸基が結合したものをリボ（又はデオキシリボ）ヌクレオチドと呼ぶのが一般的だが、本発明では、便宜上、リボ（又はデオキシリボ）ヌクレオシドの５’−位にポリリン酸が結合したものも含めてリボ（又はデオキシリボ）ヌクレオチドと呼ぶ。また、本明細書では、特に断りのない限り、リボヌクレオシド及びデオキシヌクレオシドをまとめてヌクレオシドとも呼び、リボヌクレオチド及びデオキシリボヌクレオチドをまとめてヌクレオチドとも呼ぶ。さらに、ヌクレオシド及びヌクレオチドは、天然のものであってもよいし、リボース環若しくはデオキシリボース環及び／又は核酸塩基に化学修飾を受けたものであってもよい。化学修飾を受けたヌクレオシド及びヌクレオチド並びにこれらからなるオリゴヌクレオチドを用いることにより、上記の阻害作用をより増大させることもできる。
【００１８】
［オリゴヌクレオチド］
本発明のプロドラッグ化合物として、まずは、オリゴヌクレオチドを説明する。このオリゴヌクレオチドは、ヌクレオチドとヌクレオチドとを結合させるリン酸基の一部又は全部が下記一般式（１）又は（２）に示すリン酸トリエステル構造になっていることを特徴とする。下記一般式（１）又は（２）に示す部分構造は、Ｚが酸素原子であればオリゴヌクレオチドを由来とするものであり、Ｚが硫黄原子であればオリゴヌクレオチドのホスホロチオエートアナログを由来とするものである。なお、Ｚが硫黄原子である場合には、正確にはリン酸エステルでなくリン酸チオエステルとなるが、本明細書ではそのようなリン酸チオエステルも含めてリン酸エステルと呼ぶ。オリゴヌクレオチドはリン酸ジエステル結合により複数のヌクレオチドがオリゴマーを形成してなるものであり、リン酸ジエステル結合を形成しているリン酸基にはフリー（エステル結合をしていない）のＯＨ基（Ｐ−ＯＨ基）が存在する。そのため、オリゴヌクレオチドは、複数のＰ−ＯＨ基を持ち、特に生体内ではこのＰ−ＯＨ基がＰ−Ｏ−に解離することにより高い極性を備えており、脂質である細胞膜を通過して細胞内に入ることができない。そこで、本発明では、オリゴヌクレオチドに含まれるリン酸基の一部又は全部について、Ｐ−ＯＨ基に保護基を導入して、下記（１）又は（２）で表されるリン酸トリエステル構造とすることによりオリゴヌクレオチドの脂溶性を高めている。なお、上記のように、Ｐ−ＯＨ基は生体内で解離してＰ−Ｏ−となるが、解離前及び解離後の化学種は互いに平衡関係にあるものであり、本発明の作用を考える上で両者を別の化学種として区別して扱うことに意味は無い。そこで、本明細書では、リン酸基の解離前及び解離後の化学種を含む概念としてＰ−ＯＨ基の用語を用いる。なお、Ｚが硫黄原子であるホスホロチオエートアナログについては、Ｐ−ＯＨ基に代えてＰ−ＳＨ基が存在する点を除いて、上記と同様に説明できる。
【００１９】
【化７】
2014084313.tif 000008
【００２０】
上記一般式（１）中、Ｒ１は一価の有機基であり、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に炭素数５以下のアルキル基であり、各Ｒ５はそれぞれ独立に一価の有機基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−であり、Ｚは酸素原子又は硫黄原子であり、ｎは０から３の整数である。上記一般式（２）中、Ｒ６は一価の有機基であり、各Ｒ７はそれぞれ独立に一価の有機基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−であり、Ｚは酸素原子又は硫黄原子であり、ｍは０から４の整数である。
【００２１】
上記一般式（１）又は（２）で表されるリン酸トリエステル構造は、一のヌクレオチドの５’−側と他のヌクレオチドの３’−側とを結合させるリン酸基部分の構造であり、一般式（１）又は（２）において波線を付して表された単結合が、上記一のヌクレオチドの５’−側又は他のヌクレオチドの３’−側に結合する。つまり、上記一般式（１）又は（２）で表されるリン酸トリエステル構造は、本発明のオリゴヌクレオチドの部分構造となる。本発明のオリゴヌクレオチドは、リン酸ジエステル構造の少なくとも一部が上記一般式（１）又は（２）で表されるリン酸トリエステル構造に変換されていればよく、他のリン酸ジエステル構造が、メトキシ基等の構造を備えたその他のリン酸トリエステル構造を持っていてもよいし、リン酸ジエステル構造のままであってもよい。
【００２２】
既に述べたように、上記一般式（１）で表されるリン酸トリエステル構造部分は、細胞内に導入された後、細胞内に存在するエステラーゼ等といった酵素の作用を受けて、下記化学反応式で示すように、リン酸ジエステル構造に変換される。なお、下記説明では、例としてＱが酸素原子でありＺが酸素原子である場合を説明するが、Ｑが硫黄原子や−ＮＨ−であったり、Ｚが硫黄原子であったりした場合にも同様の化学反応が生じる。
【化８】
2014084313.tif 000009
【００２３】
既に述べたように、酵素によりアシル基が脱離した後の反応は、分子内ＳＮ２反応であり、通常であれば、酸素原子の非共有電子対に攻撃される炭素原子の隣にハロゲン等の強力な電子吸引基が存在しなければ生じない。しかしながら、本発明者らは、Ｐ−ＯＨ基の酸素原子とフェノール水酸基との間の炭素原子を５個とすることで保護基がジヒドロベンゾピラン環を形成して脱離しやすくするとともに、上記一般式（１）におけるＲ２、Ｒ３及びＲ４という３つのアルキル基を設けることで炭素鎖の自由回転を規制して分子内ＳＮ２反応を生じさせるのに適した環境となるようにすることで、収率良く上記の化学反応が生じるように工夫した。脱離基が外れた後のオリゴヌクレオチドは、リン酸ジエステル結合が回復するので、核酸医薬としての高い活性を備えるようになる。
【００２４】
炭素数５以下のアルキル基であるＲ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立にメチル基であることが好ましく、Ｒ５及びｎは、それぞれメチル基及び１であることが好ましい。また、Ｒ１としては、特に限定されないが、メチル基、エチル基、プロピル基等を例示することができる。より具体的には、一般式（１）の好ましい一例として、下記一般式（１Ａ）を挙げることができる。
【化９】
2014084313.tif 000010
（上記一般式（１Ａ）中、Ｒ１は炭素数１〜３のアルキル基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−であり、Ｚは酸素原子又は硫黄原子である。）
【００２５】
また、上記一般式（２）で表されるリン酸トリエステル構造部分は、細胞内に導入された後、上記と同様に細胞内に存在するエステラーゼ等といった酵素の作用を受けて、下記化学反応式で示すように、リン酸ジエステル構造に変換される。なお、下記説明では、例としてＱが酸素原子でありＺが酸素原子である場合を説明するが、Ｑが硫黄原子や−ＮＨ−であったり、Ｚが硫黄原子であったりした場合にも同様の化学反応が生じる。
【化１０】
2014084313.tif 000011
【００２６】
上記一般式（１）における場合と同様、上記一般式（２）における場合も、酵素によりアシル基が脱離した後の反応は分子内ＳＮ２反応である。上記一般式（２）に含まれる保護基において、本発明者らは、Ｐ−ＯＨ基の酸素原子とフェノール水酸基との間の炭素原子を５個とすることで保護基がベンゾピラン環を形成して脱離しやすくするとともに、ベンゼン環とＰ−ＯＨ基との間の炭素鎖の内部に不飽和結合を設けて、酸素原子の非共有電子対の攻撃を受ける炭素原子を当該酸素原子の近傍に配置することで、収率良く上記の化学反応が生じるように工夫した。この不飽和結合は、上記のような立体的配置を調節する役割を持つので、ｃｉｓ型であることが必要である。脱離基が外れた後のオリゴヌクレオチドは、リン酸ジエステル結合が回復するので、核酸医薬としての高い活性を備えるようになる。
【００２７】
上記一般式（２）中、ｍは０であってもよい。より具体的には、一般式（２）の好ましい一例として、下記一般式（２Ａ）を挙げることができる。
【化１１】
2014084313.tif 000012
（上記一般式（２Ａ）中、Ｒ６は炭素数１〜３のアルキル基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−であり、Ｚは酸素原子又は硫黄原子である。）
【００２８】
次に、本発明のオリゴヌクレオチドの製造方法について述べる。本発明のオリゴヌクレオチドの製造方法としては、上記一般式（１）又は（２）で採用された保護基を持つヌクレオシドのアミダイドを合成し、このヌクレオシドのアミダイドを用いて、ＤＮＡ（ＲＮＡ）自動合成機を用いたアミダイド法により合成することを好ましく挙げることができる。ＤＮＡ（ＲＮＡ）自動合成機を用いたアミダイド法によるオリゴヌクレオチドの合成方法は広く用いられている定法であるので、ここでの説明を省略する。
【００２９】
上記一般式（１）又は（２）で採用された保護基を持つヌクレオシドのアミダイド（９）を合成する方法としては、下記化学反応式に示した有機合成手順を挙げることができる。なお、下記化学反応式では、合成されるアミダイド（９）としてチミジンのホスホアミダイドを例示したが、天然の又は合成により修飾された他のヌクレオシドのホスホアミダイドでも同様の合成手順により合成できる。また、下記化学反応式では、上記一般式（１）で採用された保護基を持つアミダイド（９）の合成手順を示したが、上記一般式（２）で採用された保護基を持つアミダイドについても、下記化学反応式と同様の有機化学的手法により合成することができる。なお、Ｚを硫黄原子とする場合には、下記化合物（８）における末端ＯＨ基をＳＨ基とした化合物（８’）を用いればよい。また、下記の例では、上記一般式（１）におけるＱが酸素原子である場合を説明するが、Ｑが硫黄原子や−ＮＨ−である場合でも同様となる。
【００３０】
【化１２】
2014084313.tif 000013
（上記化学反応式中、Ｒ１は、上記一般式（１）におけるものと同様である。）
【００３１】
化合物（７）は、市販の５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）チミジンと、市販のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）及びビス（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）クロロホスファンと、を無水ジクロロメタン中で作用させることで得られる。また、一般式（８）で表される化合物は、例えばＲ１をメチル基とすれば、末端ＯＨ基の化合物及び末端ＳＨ基の化合物が下記の合成経路により合成される。なお、下記の合成経路において、ＴＢＳはｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基であり、ＤＭＡＰはＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジンであり、ＴＥＡはトリエチルアミンであり、Ｍｓはメシル基である。１Ｈ−テトラゾール中にて、化合物（７）と化合物（８）とをジクロロメタン中で反応させることにより、アミダイド（９）が得られる。
【００３２】
【化１３】
2014084313.tif 000014
【００３３】
上記のアミダイド（９）は、５’−位がＤＭＴｒ［ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル］基で保護され、３’−位にホスホアミダイド基を持つ。このアミダイド（９）を用いると、３’−位を伸長点として、下記化学式のように、オリゴヌクレオチドが合成されることになる。そのようにして合成されたオリゴヌクレオチドは、ヌクレオチドとヌクレオチドとが上記一般式（１）で示す構造により結合され、上述の保護基が結合されたホスホトリエステル構造を備えることになる。なお、下記化学式では、例示のためにチミジンのホスホアミダイドを用いたオリゴヌクレオチド合成の例を示したが、各種ヌクレオシドのホスホアミダイドを用意し、それらを所望の順序で反応させることにより任意の塩基配列を備えたオリゴヌクレオチドを合成できる。また、ホスホロチオエートアナログについても同様に合成できる。
【００３４】
【化１４】
2014084313.tif 000015
（上記化学式中、Ｒ１は、上記一般式（１）におけるものと同様である。）
【００３５】
上記と同様の手法により、下記化学式のオリゴヌクレオチド、及びホスホロチオエートアナログ型であるオリゴヌクレオチドが合成できる。
【化１５】
2014084313.tif 000016
（上記化学式中、Ｒ１は、上記一般式（１）におけるものと同様である。）
【００３６】
なお、アミダイド法によるオリゴヌクレオチドの合成では、公知のように、亜リン酸基をリン酸基に変換する際に酸化剤が用いられる。このときに用いられる酸化剤の代わりにＢｅａｕｃａｇｅ試薬（３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン−１，１−ジオキシド）を用いると、下記化学反応式で示すように、リン酸基のＰ＝Ｏにおける酸素原子がＰ＝Ｓのように硫黄に置換されてチオリン酸基となった、保護基を有するオリゴヌクレオチドのアナログが得られる。このようなアナログも本発明に含まれる。下記化学反応式では一般式（９）のアミダイドを用いてオリゴヌクレオチドを合成する経路を示したが、一般式（９’）のアミダイドを用いてオリゴヌクレオチドを合成する経路も当然に採用されうる。
【００３７】
【化１６】
2014084313.tif 000017
（上記化学反応式中、Ｒ１は、上記一般式（１）におけるものと同様である。）
【００３８】
上記に示すようなチオリン酸タイプのアナログでは、細胞内で保護基が脱離する際に、下記のようにホスホロチオエートやジチオヌクレオチドといったオリゴヌクレオチドのアナログに変換される。このようなアナログは、細胞内のヌクレアーゼによる分解が抑制されるので、アンチセンス核酸として有用である。
【００３９】
【化１７】
2014084313.tif 000018
【００４０】
［ヌクレオチド］
本発明のプロドラッグ化合物として、次に、ヌクレオチドを説明する。このヌクレオチドは、５’−位に結合されたモノ又はポリリン酸基のＯＨ基の少なくとも一部が下記一般式（３）又は（４）に示す基で保護されていることを特徴とする。モノ又はポリリン酸基のＯＨ基（Ｐ−ＯＨ基）は、生体内ではＰ−Ｏ−に解離することにより高い極性を備えた化合物となっており、脂質である細胞膜を通過して細胞内に入ることができない。そこで、本発明では、ヌクレオチドに含まれるＰ−ＯＨ基の一部又は全部に下記一般式（３）又は（４）で示す保護基を導入し、リン酸エステルとすることでヌクレオチドの脂溶性を高めている。
【００４１】
【化１８】
2014084313.tif 000019
【００４２】
上記一般式（３）中、Ｒ１は一価の有機基であり、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に炭素数５以下のアルキル基であり、各Ｒ５はそれぞれ独立に一価の有機基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、ｎは０から３の整数である。上記一般式（４）中、Ｒ６は一価の有機基であり、各Ｒ７はそれぞれ独立に一価の有機基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、ｍは０から４の整数である。
【００４３】
理解を助けるために、チミンを例にとって本発明のヌクレオチドの一般式の一例を示すと下記一般式（３Ａ）又は（４Ａ）となる。下記一般式（３Ａ）又は（４Ａ）はあくまでも例示であり、当然のことながら、チミジル基が結合している部分は、他の核酸塩基であってもよい。このような核酸塩基としては、天然の核酸塩基に限らず、ピリミジン骨格やプリン骨格を備えた核酸塩基の類縁体であってもよい。下記一般式（３Ａ）又は（４Ａ）において、Ｒ１〜Ｒ７、Ｑ、Ｚ及びｍは、上記一般式（３）又は（４）についてのものと同様であり、Ｐｒｏで示す置換基は、３’−水酸基の保護基である。このような保護基としては、アセチル基を好ましく例示できる。なお、Ｐｒｏで示す置換基に代えて水素原子を結合させてもよい。
【化１９】
2014084313.tif 000020
【００４４】
なお、上記一般式（３Ａ）及び（４Ａ）では、一つのリン酸基に存在する二つのＯＨ基の両方に保護基が結合されているが、いずれか片方のみに保護基が結合されてもよい。この場合、残りのＰ−ＯＨ基は、修飾を受けずにフリーのままでもよいし、生化学的な親和性を高めるためにＰ−ＯＲの形で各種の置換基（Ｒ）を導入されてもよい。このような置換基（Ｒ）としては、アミノ基、アミド基（−ＣＯＮＨ２）、脂肪酸由来のアシル基（脂肪酸からＯＨを除いた残基）、アリール基等が例示される。また、上記一般式（３Ａ）及び（４Ａ）では、５’−水酸基にモノリン酸が結合しているが、５’−水酸基にポリリン酸が結合していてもよい。その場合、少なくとも一つのＰ−ＯＨ基に保護基が結合していればよい。
【００４５】
上記一般式（３Ａ）及び（４Ａ）で表されるヌクレオチドの好ましい例として、下記一般式（３Ｂ）〜（３Ｇ）、及び（４Ｂ）〜（４Ｇ）を挙げることができる。下記一般式（３Ｂ）〜（３Ｇ）において、Ｒ１及びＰｒｏは、上記一般式（３Ａ）におけるものと同様であり、下記一般式（４Ｂ）〜（４Ｇ）において、Ｒ６及びＰｒｏは、上記一般式（４Ａ）におけるものと同様である。
【化２０】
2014084313.tif 000021
【化２１】
2014084313.tif 000022
【００４６】
細胞内に導入されたヌクレオチドは、上記オリゴヌクレオチドの場合と同様に、細胞内にあるエステラーゼ等の酵素の作用により保護基に含まれるアシル基が脱離され、次いで、新たに生じたフェノール水酸基の酸素原子により分子内ＳＮ２反応を生じて、保護基全体が脱離する。このメカニズムについては、既に説明した通りであるので、ここでの説明を省略する。脱保護されたヌクレオチドは、リン酸基に含まれるＯＨ基が回復し、生化学的な活性を発現する。具体的には、脱保護されたヌクレオチドは、例えば、ＴＴＰ（チミジン三リン酸）等のようなトリリン酸に変換され、ＤＮＡ又はＲＮＡ合成を阻害する。このようなＤＮＡ又はＲＮＡ合成の阻害能力を付与するために、本発明のヌクレオチドは、リボース環若しくはデオキシリボース環及び／又は核酸塩基に化学修飾を受けたものであることが好ましい。
【００４７】
また、本発明のヌクレオチドは、５’−位に結合されたモノ又はポリリン酸基のＯＨ基の少なくとも一部がＳＨ基に置換され、かつ上記ＯＨ基及び上記ＳＨ基の少なくとも一部が下記一般式（３）又は（４）に示す基で保護されたものであってもよい。この場合、本発明のプロドラッグ化合物は、リボヌクレオチドのホスホロチオエート型アナログ若しくはデオキシリボヌクレオチドのホスホロチオエート型アナログとなる。この場合であっても、上記と同様のメカニズムにより細胞内で保護基全体が脱離してＳＨ基やＯＨ基が回復し、生化学的な活性を発現する。その他のことについても上記と同様であるので、ここでの説明を省略する。
【００４８】
次に、本発明のヌクレオチドの製造方法について、上記ヌクレオチド（３Ｂ）を例にとって説明する。本発明のヌクレオチドの製造方法としては、下記化学反応式で示すように、所望する核酸塩基に対応したヌクレオシドの５’−位をホスホアミダイド化してアミダイドを合成し、次いでこのヌクレオシドのアミダイドに化合物（８）を作用させて保護基を導入し、最後に亜リン酸エステルを酸化してリン酸エステルに変換することを例示できる。なお、下記化学反応式では、チミジンのホスホアミダイドを用いる合成方法を例示したが、天然の又は合成により修飾された他のヌクレオシドでも同様の合成手順により合成できるし、ホスホロチオエートアナログについても、末端ＯＨ基である化合物（８）の代わりに末端ＳＨ基の化合物を用いることで合成される。また、下記化学反応式では、上記一般式（３Ｂ）のヌクレオチドの合成手順を示したが、上記一般式（４Ｂ）のヌクレオチドについても、下記化学反応式と同様の有機化学的手法により合成することができる。
【００４９】
【化２２】
2014084313.tif 000023
（上記化学式中、Ｒ１は、それぞれ独立に、上記一般式（３）におけるものと同様であり、Ａｃは、アセチル基を示す。）
【００５０】
化合物（１０）は、市販の３’−Ｏ−アセチルチミジンと、市販のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）及びビス（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）クロロホスファンと、を無水ジクロロメタン中で作用させることで得られる。また、一般式（８）で表される化合物については、既に述べた方法で得られる。１Ｈ−テトラゾール中にて、化合物（１０）と化合物（１１）とをジクロロメタン中で反応させ、さらにヨウ素で酸化することにより一般式（３Ｂ）のヌクレオチドが得られる。なお、一般式（３Ｂ）のヌクレオチドにおいて、二つのＲ１は、互いに同じでもよいし、異なってもよい。
【００５１】
また、本発明のヌクレオチドの合成方法として、上記の他に下記の合成ルートを挙げることができる。下記の合成ルートでは、得られたヌクレオチドにおけるリン酸トリエステルの一つがフェニル基となっている。このように、リン酸基にフェニル基が導入されたアナログは、プロドラッグ候補としてよく用いられるものである。このことは、ホスホロチオエートアナログの場合であっても同様である。なお、下記化学反応式では３’−位の水酸基に保護基（アセチル基）が結合されているが、３’−位の水酸基の反応性よりも５’−位の水酸基の反応性のほうが高いのが一般的なので、３’−位の水酸基における保護基は必ずしも必要でない。
【００５２】
【化２３】
2014084313.tif 000024
（上記化学反応式中、Ｒ１は、それぞれ独立に、上記一般式（３）におけるものと同様であり、Ａｃは、アセチル基である。）
【００５３】
上記のようにリン酸基にフェニル基が導入されたアナログとして、さらに下記の化合物を挙げることができる。
【化２４】
2014084313.tif 000025
【００５４】
さらに、本発明のヌクレオチドの合成方法として、下記の合成ルートを挙げることができる。
【００５５】
【化２５】
2014084313.tif 000026
（上記化学式中、Ｒ１は、それぞれ独立に、上記一般式（３）におけるものと同様であり、Ａｃは、アセチル基である。）
【００５６】
なお、ヌクレオチド型のプロドラッグ化合物においても、既に述べたオリゴヌクレオチド型のプロドラッグ化合物と同様に、リン酸基のＰ＝Ｏにおける酸素原子をＰ＝Ｓのように硫黄に置換してチオリン酸基としてもよい。このようなアナログは、上記一般式（３Ｂ）の合成手順で示したようにアミダイドに保護基を導入して亜リン酸エステルを得た後の酸化工程にて、既に述べたオリゴヌクレオチド型のアナログと同様に、酸化剤に代えてＢｅａｕｃａｇｅ試薬を用いればよい。
【００５７】
＜オリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の合成用試薬＞
オリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の合成試薬（以下、「本発明の合成試薬」又は「合成試薬」とも呼ぶ。）も本発明の一つである。本発明の合成試薬は、上述のオリゴヌクレオチドからなるプロドラッグ化合物の製造に用いられ、下記一般式（５）又は（６）で表す構造を備えた化合物である。
【００５８】
【化２６】
2014084313.tif 000027
【００５９】
上記一般式（５）中、Ｒ１は一価の有機基であり、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に炭素数５以下のアルキル基であり、各Ｒ５はそれぞれ独立に一価の有機基であり、ｎは０から３の整数であり、Ｒｂａｓｅはプリン骨格又はピリミジン骨格を備えた一価の有機基であり、Ｒｐは一価の有機基であり、Ｘは水素原子又は水酸基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、Ｚは酸素原子または硫黄原子であり、Ｒａ及びＲｂはそれぞれ独立にアルキル基であって、Ｒａ及びＲｂは互いに結合して環を形成してもよく、テトラヒドロフラン環は環内のＣ−Ｃ結合において不飽和結合を備えてもよい。上記一般式（６）中、Ｒ６は一価の有機基であり、各Ｒ７はそれぞれ独立に一価の有機基であり、ｍは０から４の整数であり、Ｒｂａｓｅはプリン骨格又はピリミジン骨格を備えた一価の有機基であり、Ｒｐは一価の有機基であり、Ｘは水素原子又は水酸基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、Ｚは酸素原子または硫黄原子であり、Ｒａ及びＲｂはそれぞれ独立にアルキル基であって、Ｒａ及びＲｂは互いに結合して環を形成してもよく、テトラヒドロフラン環は環内のＣ−Ｃ結合において不飽和結合を備えてもよい。
【００６０】
上記一般式（５）又は（６）に示す本発明の合成試薬は、既に述べた、一般式（１）又は（２）で採用された保護基を持つヌクレオシドのアミダイドである。これらの合成試薬は、ＤＮＡ（ＲＮＡ）自動合成機を用いたアミダイド法によりオリゴヌクレオチドを合成する際に用いられ、所望とするオリゴヌクレオチドの塩基配列に基づいて核酸塩基（上記一般式（５）又は（６）におけるＲｂａｓｅ）の異なるものを順次使い分けながら用いられる。このようにして合成されたオリゴヌクレオチドが本発明のプロドラッグとして有用であることは既に述べた通りであるので、ここでの説明を省略する。なお、上記一般式（５）に示す合成試薬を用いた場合には、上記一般式（１）に示す部分構造を備えたオリゴヌクレオチドが得られ、上記一般式（６）に示す合成試薬を用いた場合には、上記一般式（２）に示す部分構造を備えたオリゴヌクレオチドが得られる。また、上記一般式（５）又は（６）において、Ｚが酸素原子であれば、オリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の合成用試薬となり、Ｚが硫黄原子であれば、ホスホロチオエート型アナログであるオリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の合成用試薬となる。
【００６１】
上記一般式（５）中、Ｒ１としては炭素数１〜３のアルキル基が好ましく例示され、Ｒ２〜Ｒ３としてはメチル基が好ましく例示され、Ｒａ及びＲｂとしてはイソプロピル基が好ましく例示され、Ｒｐとしては、ＤＭＴｒ［ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル；別名４，４’−ジメトキシトリチル］基が好ましく例示される。Ｘが水素原子であれば、デオキシリボ核酸タイプであるオリゴヌクレオチドの合成試薬となり、Ｘが水酸基であればリボ核酸タイプのオリゴヌクレオチドの合成試薬となる。Ｒｂａｓｅとしては、天然の核酸塩基、又は合成により得られた、核酸塩基の類縁体が好ましく例示される。合成により得られた、核酸塩基の類縁体としては、核酸医薬の分野で種々のものが提案されているので、ここでは詳細に述べない。上記一般式（５）で示す合成試薬として、核酸塩基がチミジル基である場合を例にとり具体例を示せば、下記一般式（９）や（９’）の化合物を挙げることができる。
【００６２】
【化２７】
2014084313.tif 000028
（上記一般式（９）及び（９’）中、Ｒ１及びＱは上記一般式（５）と同様であり、ＤＭＴｒは４，４’−ジメトキシトリチル基を表す。）
【００６３】
上記一般式（６）中、Ｒ６としては炭素数１〜３のアルキル基が好ましく例示され、Ｒａ及びＲｂとしてはイソプロピル基が好ましく例示され、Ｒｐとしては、ＤＭＴｒ［ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル；別名４，４’−ジメトキシトリチル］基が好ましく例示される。Ｘが水素原子であれば、デオキシリボ核酸タイプであるオリゴヌクレオチドの合成試薬となり、Ｘが水酸基であればリボ核酸タイプのオリゴヌクレオチドの合成試薬となる。Ｒｂａｓｅとしては、天然の核酸塩基、又は合成により得られた、核酸塩基の類縁体が好ましく例示される。合成により得られた、核酸塩基の類縁体としては、核酸医薬の分野で種々のものが提案されているので、ここでは詳細に述べない。上記一般式（６）で示す合成試薬として、核酸塩基がチミジル基である場合を例にとり具体例を示せば、下記一般式（１０）や（１０’）の化合物を挙げることができる。
【００６４】
【化２８】
2014084313.tif 000029
（上記一般式（１０）及び（１０’）中、Ｒ６及びＱは上記一般式（６）と同様であり、ＤＮＴｒは４，４’−ジメトキシトリチル基を表す。）
【００６５】
＜オリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の製造方法＞
オリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の製造方法（以下、「本発明の製造方法」とも呼ぶ。）も本発明の一つである。本発明の製造方法は、上述の合成用試薬を用いてプロドラッグ化合物であるオリゴヌクレオチドを製造するものであり、下記一般式（５）又は（６）で示す構造を備えた化合物を用いてホスホアミダイド法によるオリゴヌクレオチドの伸長を行う工程を含む、ホスホチオエート型アナログであってもよいオリゴヌクレオチド型プロドラッグ化合物の製造方法である。
【化２９】
2014084313.tif 000030
【００６６】
上記一般式（５）中、Ｒ１は一価の有機基であり、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に炭素数５以下のアルキル基であり、各Ｒ５はそれぞれ独立に一価の有機基であり、ｎは０から３の整数であり、Ｒｂａｓｅはプリン骨格又はピリミジン骨格を備えた一価の有機基であり、Ｒｐは一価の有機基であり、Ｘは水素原子又は水酸基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、Ｚは酸素原子または硫黄原子であり、Ｒａ及びＲｂはそれぞれ独立にアルキル基であって、Ｒａ及びＲｂは互いに結合して環を形成してもよく、テトラヒドロフラン環は環内のＣ−Ｃ結合において不飽和結合を備えてもよい。上記一般式（６）中、Ｒ６は一価の有機基であり、各Ｒ７はそれぞれ独立に一価の有機基であり、ｍは０から４の整数であり、Ｒｂａｓｅはプリン骨格又はピリミジン骨格を備えた一価の有機基であり、Ｒｐは一価の有機基であり、Ｘは水素原子又は水酸基であり、Ｑは酸素原子、硫黄原子又は−ＮＨ−基であり、Ｚは酸素原子または硫黄原子であり、Ｒａ及びＲｂはそれぞれ独立にアルキル基であって、Ｒａ及びＲｂは互いに結合して環を形成してもよく、テトラヒドロフラン環は環内のＣ−Ｃ結合において不飽和結合を備えてもよい。
【００６７】
上記一般式（５）又は（６）で示す構造を備えた化合物は、上述の合成用試薬そのものであるのでここでの説明を省略する。また、本発明の製造方法は、オリゴヌクレオチドの製造方法で述べたものと同じ手順で実行できる。そのため、ここでの説明を省略する。
【実施例】
【００６８】
以下、実施例を示すことにより本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に何ら限定されるものではない。
【００６９】
［合成例１］オリゴヌクレオチドの合成
・３’−Ｏ−｛ビス（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−ジイソプロピルアミノ）ホスフィニル｝−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）チミジン（７）の合成
【化３０】
2014084313.tif 000031
【００７０】
市販の５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）チミジン（２０）（１．７５ｇ、３．２１ｍｍｏｌ）を無水ピリジンで共沸脱水させ、さらに無水トルエンでピリジンを共沸除去した。次に、残渣を３５ｍＬの無水ジクロロメタンに溶解させ、次いでこの溶液に市販のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、１．４０ｍＬ、８．０３ｍｍｏｌ）及びビス（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）クロロホスファン（１．３７ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）を順次加え、Ａｒ雰囲気下、室温で２０分間撹拌した。反応終了後、綿栓濾過を行い、ジクロロメタンで分液ロートに洗い入れた。溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で２回、飽和食塩水で１回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、濾過し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（７）を白色泡状化合物（１．４４ｇ、１．８６ｍｍｏｌ、収率５８％）として得た。
化合物（７）の各物性値は、以下の通りである。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．０８−１．２４（ｍ，２４Ｈ，イソプロピル基のＣＨ３），１．４４（ｓ，３Ｈ，５−ＣＨ３），２．２５−２．５９（ｍ，２Ｈ，２’，２’’−Ｈ），３．３７−３．５５（ｍ，６Ｈ，５’，５’’−Ｈ，イソプロピル基のＣＨ），３．７７（ｓ，６Ｈ，Ａｒ−ＯＣＨ３），４．０７（ｓ，１Ｈ，４−Ｈ），４．４９−４．６６（ｍ，１Ｈ，３’−Ｈ），６．４８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．７５Ｈｚ，１’−Ｈ），６．８２−６．８４（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝４．５０Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），７．２１−７．６８（ｍ，９Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ，６−Ｈ）
３１Ｐ  ＮＭＲ（２０２ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１１６．５
【００７１】
・化合物（９Ａ）の合成
【化３１】
2014084313.tif 000032
【００７２】
化合物（７）（３０５ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を無水ピリジンで共沸脱水させ、さらに無水トルエンでピリジンを共沸除去した。残渣を１０ｍＬの無水ジクロロメタンに溶解させ、これに化合物（８Ａ）（１５７３μＬ、０．３９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（５ｍＬ）及び１Ｈ−テトラゾール（１４ｍｇ、０．１９５ｍｍｏｌ）を順次加え、Ａｒ雰囲気下、室温で４時間撹拌した。化合物（８Ａ）の合成については、後述する。反応終了後、反応溶液をジクロロメタンで分液ロートに洗い入れ、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で１回、飽和塩化ナトリウム水溶液で１回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、濾過し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した後、ＧＰＣで精製し、化合物（９Ａ）を白色泡状化合物（２０．５ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、収率５５％）として得た。
化合物（９Ａ）の各物性値は、以下の通りである。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．９９−１．１３（ｍ，１５Ｈ，イソプロピル基のＣＨ３，アシルγＣＨ２），１．３６−１．３７（ｄ，６Ｈ，ＣＨ３×２，Ｊ＝１．１Ｈｚ），１．７６−１．７８（ｍ，２Ｈ，アシルβＣＨ２），１．９９−２．０２（ｄ，３Ｈ，Ａｒ−ＣＨ３，Ｊ＝１０．３Ｈｚ），２．４６−２．５２（ｍ，７Ｈ，２’−Ｈ，２”−Ｈ，Ａｒ−ＣＨ３，アシルαＣＨ２），３．２８−３．５３（ｍ，４Ｈ，５’−Ｈ，５”−Ｈ，−ＣＨ２−），３．７９（ｓ，６Ｈ，Ａｒ−ＯＣＨ３），４．１２−４．１６（ｓ，１Ｈ，４’−Ｈ），４．６０（ｓ，１Ｈ，３’−Ｈ），６．３９−６．４２（ｔ，１Ｈ，１’−Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），６．８０−７．２３（ｍ，１５Ｈ，ＤＭＴｒ，Ａｒ−Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．６０−７．６４（ｄ，１Ｈ，６−Ｈ，Ｊ＝１８．３Ｈｚ），７．９９（ｓ，１Ｈ，３−ＮＨ）
【００７３】
・オリゴヌクレオチドの合成（１）
【化３２】
2014084313.tif 000033
【００７４】
市販の３’−Ｏ−アセチルチミジン（１２）（６８．２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）及び１Ｈ−テトラゾール（４３ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を無水ピリジンで共沸脱水させ、さらに無水トルエンでピリジンを共沸除去した。次に、残渣を１０ｍＬの無水アセトニトリルに溶解させ、この溶液に化合物（９Ａ）（１９５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（５ｍＬ）を加え、Ａｒ雰囲気下、室温で３０分間撹拌した。その後、反応溶液にｔ−ＢｕＯＯＨ（９５．９μＬ、１．０ｍｍｏｌ；アルドリッチ社製、ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｙｌ  ｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｉｄｅ，５．０〜６．０Ｍ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｉｎ  ｄｅｃａｎｅ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチルに溶解させて、溶液を分液ロートに移した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で２回、飽和食塩水で１回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、濾過し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（１３）を白色泡状化合物（１７５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、収率７６％）として得た。
化合物（１３）の各物性値は、以下の通りである。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．９９−１．０３（ｍ，３Ｈ，アシルγＣＨ２），１．２５−１．３６（ｍ，６Ｈ，５−ＣＨ３×２），１．３３−１．４７（ｍ，６Ｈ，ＣＨ３×２），１．７４（ｍ，２Ｈ，アシルβＣＨ２），１．８６−２．１３（ｍ，８Ｈ，ＯＡｃ，−ＣＨ２−，Ａｒ−ＣＨ３），２．３０−２．３９（ｍ，２Ｈ，２’−Ｈ，２”−Ｈ），２．４６−２．５４（ｍ，５Ｈ，アシルαＣＨ２，Ａｒ−ＣＨ３），３．３３−３．５０（ｍ，２Ｈ，５’−Ｈ，５”−Ｈ）３．７９（ｓ，６Ｈ，Ａｒ−ＯＣＨ３），３．８４−３．９０（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２−），４．１０−４．１４（ｑ，２Ｈ，４’−Ｈ×２，Ｊ＝７．２Ｈｚ），４．１９−４．２４（ｍ，２Ｈ，３’−Ｈ×２），６．２８−６．３２（ｍ，１Ｈ，１’−Ｈ），６．３９−６．４５（ｍ，１Ｈ，１’−Ｈ），６．８６−６．８８（ｍ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．９１−６．９３（ｍ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６，８２−６．８４，７．２４−７．４０（ｍ，１３Ｈ，ＤＭＴｒ），７．５３−７．５５（ｄ，１Ｈ，６−Ｈ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ），８．７０（ｓ，１Ｈ，３−ＮＨ），８．６０−８．８２（ｓ，１Ｈ，３−ＮＨ）
【００７５】
・オリゴヌクレオチドの合成（２）
【化３３】
2014084313.tif 000034
【００７６】
化合物（１３）（１６ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）に８０％酢酸水溶液（３ｍＬ）を添加し、２０分間静置した。その後、クロロホルム（５０ｍＬ）を加え、溶液を分液ロートに移して有機層を水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、濾過し、溶媒を減圧留去することで化合物（１４）を白色固体（１１ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、収率１００％）として得た。この化合物（１４）は、リン酸基に本発明所定の保護基が結合されたチミンの２量体であり、本発明に係るオリゴヌクレオチドに相当する。
【００７７】
［実施例１］
【化３４】
2014084313.tif 000035
【００７８】
６００μＬのマイクロテストチューブに、化合物（１４）の０．１ｍＭ水溶液（２００μＬ）を入れた後、ＳｐｅｅｄＶａｃ（商品名）遠心濃縮装置により濃縮し、次いで、このマイクロテストチューブ内に１９５μＬの２００ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ［トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液］及びブタ肝臓エステラーゼ（ＰＬＥ）（５μＬ、１４．６ｕｎｉｔｓ）を加え、室温で１２０時間静置した。反応溶液をＨＰＬＣ分析したところ、出発物質である化合物（１４）のピーク（流出時間；２３．１３分）が消失し、代わりに、化合物（１５）のピーク（流出時間；９．９２分）及び化合物（１６）のピーク（流出時間；５．４２分）が観察された。このことから、本発明に係るオリゴヌクレオチドは、細胞内のエステラーゼにより脱保護されて、ホスホトリエステル構造からホスホジエステル構造に変換されることがわかった。
なお、ＨＰＬＣ分析の条件は、逆相シリカゲル（ジーエルサイエンス株式会社製、Ｉｎｔｅｒｓｉｌ  ＯＤＳ−３）を担体とし、下記の展開溶媒Ａ及び展開溶媒Ｂの割合を変えながら混合することで、アセトニトリルの濃度を下記のように変化させた。
展開溶媒Ａ：１００ｍＭトリエチルアンモニウムアセテート緩衝液中に５質量％のアセトニトリルを混合
展開溶媒Ｂ：アセトニトリル１００％
アセトニトリル濃度の変化パターン：１０％→３８％（１０分）→７５％（１０分）
【００７９】
［合成例２］本発明に係る保護基を備えたリン酸基が３’−位に結合されたヌクレオチドの合成
・化合物（９Ｂ）の合成
【化３５】
2014084313.tif 000036
【００８０】
化合物（７）（６００ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を無水ピリジンで共沸脱水させ、さらに無水トルエンでピリジンを共沸除去した。残渣を８ｍＬの無水ジクロロメタンに溶解させ、これに化合物（８Ｂ）（８５０μＬ、０．８５ｍｍｏｌ）及び１Ｈ−テトラゾール（２６ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を順次加え、Ａｒ雰囲気下、室温で１時間撹拌した。反応終了後、反応溶液をジクロロメタンで分液ロートに洗い入れ、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で２回、飽和塩化ナトリウム水溶液で１回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、濾過し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した後、ＧＰＣで精製し、化合物（９Ｂ）を白色泡状化合物（２６７ｍｇ、収率３８％）として得た。構造確認は、１Ｈ−ＮＭＲにより行った。
【００８１】
・化合物（１８）の合成
【化３６】
2014084313.tif 000037
【００８２】
化合物（８Ｂ）（３００μＬ、０．３３ｍｍｏｌ）及び１Ｈ−テトラゾール（１０６ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を無水ピリジンで共沸脱水させ、さらに無水トルエンでピリジンを共沸除去した。化合物（８Ｂ）の合成については、後述する。次に、残渣を３ｍＬの無水ジクロロメタンに溶解させ、この溶液に化合物（９Ｂ）（２５３ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を加え、Ａｒ雰囲気下、室温で１時間撹拌した。その後、反応溶液にｔ−ＢｕＯＯＨの５Ｍデカン溶液（２７０μＬ、１．３７ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分間撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチルに溶解させて、溶液を分液ロートに移した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で２回、飽和食塩水で１回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、濾過し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（１８）を白色泡状化合物（１３２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、収率４４％）として得た。構造確認は、１Ｈ−ＮＭＲにより行った。
【００８３】
・化合物（１９）の合成
【化３７】
2014084313.tif 000038
【００８４】
化合物（１８）（１３０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）にメタノール（３．５ｍＬ）及び３％トリクロロ酢酸ジクロロメタン溶液（１．５ｍＬ）を添加し、室温で１時間撹拌した。その後、クロロホルム（１０ｍＬ）を加え、溶液を分液ロートに移して有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で３回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、濾過し、溶媒を減圧留去することで化合物（１９）を白色固体（５３ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ、収率５６％）として得た。化合物（１９）は、保護基を備えたリン酸基が３’−位に結合しており、細胞内でのＤＮＡ合成に供されるものではないが、これと同様の手段により、保護基を備えたリン酸基が５’−位に結合した本発明のヌクレオチドを合成することが可能である。そのような化合物もまたプロドラッグとして有用なものである。
【００８５】
［合成例３］化合物（８Ａ）の合成
・４，４，５，８−テトラメチル−３，４−ジヒドロクマリン（２１）の合成
【化３８】
2014084313.tif 000039
【００８６】
２，５−ジメチルフェノール（２０）をメタンスルホン酸（１０ｍＬ）に溶解し、３，３−ジメチルアクリル酸メチル（７．６ｍＬ、６３ｍｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気下、７０℃で２４時間撹拌した。反応溶液に水（２００ｍＬ）を加え、室温で３０分間撹拌した。酢酸エチルを用いて反応溶液を分液ロートに洗い入れ、５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回、飽和食塩水で１回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、濾過し、溶媒を減圧留去した。残渣にヘキサンを適量加えて減圧下で濃縮し、真空乾燥した。これを１日静置し、析出した結晶をヘキサンで流しながら吸引濾過し、化合物（２１）を淡黄色粉末状化合物（５．０３ｇ、２４．６ｍｍｏｌ、収率４３％）として得た。
化合物（２１）の各物性値は、以下の通りである。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．３４（ｓ，６Ｈ，β−（ＣＨ３）２），２．１５（ｓ，３Ｈ，５−ＣＨ３），２．４１（ｓ，３Ｈ，２−ＣＨ３），２．６６（ｓ，２Ｈ，α−ＣＨ２），６．８２−６．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ−３），７．００−７．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ−４）
【００８７】
・３−（２’−ヒドロキシ−３’，６’−ジメチルフェニル）−３，３−ジメチルプロパノール（２２）の合成
【化３９】
2014084313.tif 000040
【００８８】
ＬｉＡｌＨ４（１．７７ｇ、４６．７ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、１０ｍＬ）に溶解し、０℃で撹拌した。この溶液に、０℃下で、化合物（２１）（５．０３ｇ、２４．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（２５ｍＬ）を滴下ロートで滴下して全て加えた後、反応溶液を室温へ戻し、４７時間撹拌した。反応終了後、反応溶液にＴＨＦ（２０ｍＬ）を加えてから飽和塩化アンモニウム水溶液（２０ｍＬ）を加え、０℃で１５分間撹拌した。反応溶液を濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタンに溶解させてから分液ロートに洗い入れ、有機層を水で２回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、濾過し、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０）で精製し、化合物（２２）を白色粉末状化合物（３．３１ｇ、１５．９ｍｍｏｌ、収率６５％）として得た。
化合物（２２）の各物性値は、以下の通りである。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．４８（ｓ，６Ｈ，−Ｃ（ＣＨ３）２），２．０７−２．０９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，―ＣＨ２−），２．０１（ｓ，３Ｈ，５−ＣＨ３），２．３８（ｓ，３Ｈ，２−ＣＨ３），３．２０−３．２２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，−ＣＨ２−），４．１４（ｓ，１Ｈ，ＯＨ），６．４３−６．４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−４），６．７４−６．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−３），７．８１（ｓ，１Ｈ，１−ＯＨ）
【００８９】
・１−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−３−（２’−ヒドロキシ−３’，６’−ジメチルフェニル）−３，３’−ジメチルプロパノール（２３）の合成
【化４０】
2014084313.tif 000041
【００９０】
化合物（２２）（３．３１ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）にｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（２．８９ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）を加え、これらをジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解した。この溶液を０℃にて撹拌し、トリエチルアミン（８．５ｍＬ、６３．２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（８．５ｍＬ）を滴下ロートで滴下して全て加えた後、室温で２時間撹拌した。その後、反応液を減圧下で濃縮し、残渣をジクロロメタンに溶解させてから有機層を水で３回洗浄した。有機層を無水硫化マグネシウムで乾燥させた後、濾過し、溶媒を減圧留去して、化合物（２３）を赤褐色液状化合物（５．０２ｇ、１５．６ｍｍｏｌ、収率９８％）として得た。
化合物（２３）の各物性値は、以下の通りである。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．００（ｓ，６Ｈ，Ｓｉ（ＣＨ３）２），０．８８（ｓ，９Ｈ，ｔ−Ｂｕ），１．５７（ｓ，６Ｈ，−Ｃ（ＣＨ３）２），２．１８（ｓ，３Ｈ，５−ＣＨ３），２．２１−２．２４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，−ＣＨ２−），２．４７（ｓ，３Ｈ，２−ＣＨ３），３．４６−３．４９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，−ＣＨ２−），６．５１−６．５３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ−４），６．８２−６．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−３），７．９１（ｓ，１Ｈ，１−ＯＨ）
【００９１】
・１−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−３−（２’−ブチル−３’，６’−ジメチルフェニル）−３，３−ジメチルプロパノール（２４）の合成
【化４１】
2014084313.tif 000042
【００９２】
化合物（２３）（５．０２ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３２ｍＬ）に溶解し、この溶液に、ｎ−ブタン酸（２．８６ｍＬ、３１．２ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ；４．８９ｍＬ、３１．２ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ；５．７２ｇ、４６．７ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で２時間３０分間撹拌した。反応終了後、反応溶液をセライトで濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０）で精製し、化合物（２４）を無色液状化合物（５．８３ｇ、１４．８ｍｍｏｌ、収率９５％）として得た。
化合物（２４）の各物性値は、以下の通りである。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．００（ｓ，６Ｈ，Ｓｉ（ＣＨ３）２），０．８７（ｓ，９Ｈ，ｔ−Ｂｕ），１．０４−１．０５（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，γ−ＣＨ３），１．４６−１．５２（ｓ，６Ｈ，−Ｃ（ＣＨ３）２），１．６９−１．７７（ｍ，２Ｈ，β−ＣＨ２），２．０２（ｓ，３Ｈ，５−ＣＨ３），１．８９−２．１７（ｍ，２Ｈ，α−ＣＨ２），２．１６（ｓ，３Ｈ，２−ＣＨ３），２．５４−２．６８（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２Ｏ−），３．４６−３．４７（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２−），６．９７−６．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−４），７．０４−７．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−３）
【００９３】
・３−（２’−ブチリル−３’，６’−ジメチルフェニル）−３，３−ジメチルプロパノール（８Ａ）の合成
【化４２】
2014084313.tif 000043
【００９４】
化合物（２４）をＴＨＦ（４５ｍＬ）に溶解し、この溶液にＴＥＡ（トリエチルアミン）／３ＨＦ（２．６５ｍＬ、１６．３ｍｍｏｌ）を加え、室温で２５時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０）で精製し、化合物（８Ａ）を無色液体化合物（３．６６ｇ、１３．１ｍｍｏｌ、収率８９％）として得た。
化合物（８Ａ）の各物性値は、以下の通りである。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．９７−０．９９（ｍ，３Ｈ，γ−ＣＨ３），１．３９−１．４４（ｓ，６Ｈ，−Ｃ（ＣＨ３）２），１．６４−１．６９（ｍ，２Ｈ，β−ＣＨ２），１．８０−１．９６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｏ），１．９９（ｓ，３Ｈ，５−ＣＨ３），２．４９（ｓ，３Ｈ，２−ＣＨ３），２．５０−２．６４（ｍ，２Ｈ，α−ＣＨ２），３．２１−３．３４（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２−），４．２４−４．２６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，ＯＨ），６．９１−６．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ−４），６．９８−７．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ−３）
【００９５】
［合成例４］化合物（８Ｂ）の合成
・１−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−３−（２’−アセチル−３’，６’−ジメチルフェニル）−３，３−ジメチルプロパノール（２５）の合成
【化４３】
2014084313.tif 000044
【００９６】
化合物（２３）（２．１３ｇ、６．６１ｍｍｏｌ）をピリジン（２０ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（７００μＬ、７．２７ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ；４３０ｍｇ、３．３１ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で２４時間撹拌した。反応の終了を確認した後、反応溶液を減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解して、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で１回、飽和食塩水で２回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、濾過し、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５）で精製し、化合物（２５）を淡黄色液状化合物（２．２３ｇ、６．１２ｍｍｏｌ、収率９３％）として得た。
化合物（２５）の各物性値は、以下の通りである。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．００（ｓ，６Ｈ，Ｓｉ（ＣＨ３）２），０．８７（ｓ、９Ｈ，ｔ−Ｂｕ），１．４２−１．５７（ｓ，６Ｈ，−Ｃ（ＣＨ３）２），１．９２−２．１５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｏ），２．０３（ｓ，３Ｈ，５−ＣＨ３），２．３４（ｓ，３Ｈ，ＡｃＯ），２．５４（ｓ，３Ｈ，２−ＣＨ３），３．４６（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２−），６．９８−６．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｈ−４），７．０５−７．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｈ−３）
【００９７】
・３−（２’−アセチル−３’，６’−ジメチルフェニル）−３，３−ジメチルプロパノール（８Ｂ）の合成
【化４４】
2014084313.tif 000045
【００９８】
化合物（２５）（２．１９ｇ、６．０１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１８ｍＬ）に溶解し、この溶液にＴＥＡ（トリエチルアミン）／３ＨＦ（１．１ｍＬ、６．６１ｍｍｏｌ）を加え、室温で２３時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０）で精製し、化合物（８Ｂ）を無色油状化合物（１．２９ｇ、５．１９ｍｍｏｌ、収率８６％）として得た。
化合物（８Ｂ）の各物性値は、以下の通りである。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．４１−１．４４（ｓ，６Ｈ，−Ｃ（ＣＨ３）２），１．８７−２．００（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｏ），１．９８（ｓ，３Ｈ，５−ＣＨ３），２．２９（ｓ，３Ｈ，ＡｃＯ），２．５１（ｓ，３Ｈ，２−ＣＨ３），３．２２（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２−），４．２４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＯＨ），６．９２−６．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｈ−４），６．９９−７．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｈ−３）