(57)【要約】【課題】抗ヒトＣＤ５２免疫グロブリンを提供すること。【解決手段】本発明は、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン、マウスモノクローナル抗体、およびキメラ抗体に関する。本発明はさらに、ヒト化免疫グロブリン軽鎖およびヒト化免疫グロブリン重鎖に関する。また、本発明は、ヒト化免疫グロブリンまたは免疫グロブリン軽鎖もしくは重鎖をコードする配列を含む単離された核酸、組換えベクター、および宿主細胞、ならびにヒト化免疫グロブリンを調製する方法にも関する。ヒト化免疫グロブリンを治療適用において使用して、例えば、自己免疫疾患、癌、非ホジキンリンパ腫、多発性硬化症、および慢性リンパ性白血病を治療することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００９年５月１３日に出願された米国仮出願第６１／１７７，８３７号からの優先権を主張する。該出願の開示は、そのすべての内容が全体として引用により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ５２は、種々の正常細胞および悪性リンパ腫細胞（例えば、Ｔ細胞およびＢ細胞）上で豊富に見出される（５００，０００分子／細胞）、グリコシル化した、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）で固定された細胞表面タンパク質である。例えば、非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６を参照されたい。ＣＤ５２は、単球、マクロファージ、および樹状細胞などの骨髄系細胞においてより低レベルで発現し、成熟ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、および血液系幹細胞においてほとんど発現が認められない。同上。また、ＣＤ５２は、精巣上体および導管（ｄｕｃｔ  ｄｅｆｅｒｅｎｓ）における上皮細胞によって産生され、生殖器の通過の間に精子によって獲得される（非特許文献１，上述；非特許文献７）。ＣＤ５２の正確な生物学的機能は不明のままであるが、いくつかの証拠は、ＣＤ５２がＴ細胞遊走および同時刺激に関与し得ることを示唆する（非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０）。
【０００３】
キャンパス−１Ｈ（登録商標）（アレムツズマブ、キャンパス（登録商標）、マブキャンパス（登録商標））は、強力なインビトロでの細胞毒性効果（抗体依存性細胞仲介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ））を呈するヒト化抗ヒトＣＤ５２モノクローナル抗体である。キャンパス（登録商標）は、成熟ＣＤ５２タンパク質のカルボキシ末端の４つのアミノ酸および負に帯電したＧＰＩアンカーの一部からなるエピトープを認識する。その有意な細胞毒性効果により、キャンパス（登録商標）は、インビボでＣＤ５２陽性細胞を枯渇させることができ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の最前線および第三次の治療のために認可されている。キャンパス（登録商標）は、関節リウマチ、血管炎、筋炎、およびウェゲナー病を含むいくつかの自己免疫疾患の治療におけるその有用性について評価されている。しかしながら、キャンパス（登録商標）の最も進んだ研究は、再発性寛解性の多発性硬化症（ＭＳ）を治療することにおいてである。これらの研究は、活性のある比較薬（Ｒｅｂｉｆ（登録商標）（すなわち、インターフェロンベータ−１ａ））と比較して、再発の時間に関して意な改良を示した。
【０００４】
ＣＤ５２を標的にするさらなる治療薬およびアプローチの必要性が存在する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｈａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ    Ｂｉｏｌ  ｒｅｇｕｌ  Ｈｏｍｅｏｓｔ  Ａｇｅｎｔｓ  １５：３８６−３９１  （２００１）
【非特許文献２】Ｈｕｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  ９２：  Ａｂｓｔｒａｃｔ  ４１９９  （１９９８）
【非特許文献３】Ｅｌｓｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  ８８：４６８４−４６９３  （１９９６）
【非特許文献４】Ｇｉｌｌｅｅｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  ８２：８０７−８１２  （１９９３）
【非特許文献５】Ｒｏｄｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １２：７１７４−７１７９  （２００６）
【非特許文献６】Ｇｉｎａｌｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｅｕｋ  Ｒｅｓ  ２２：１８５−１９１  （１９９８）
【非特許文献７】Ｄｏｍａｇａｌａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ  Ｍｏｎｉｔ  ７：３２５−３３１  （２００１）
【非特許文献８】Ｒｏｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ７：６９−７７  （１９９５）
【非特許文献９】Ｍａｓｕｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８９：９７９−９８９  （１９９９）
【非特許文献１０】Ｗａｔａｎａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２０：２４７−２５９  （２００６）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（ヒト化免疫グロブリン）
本発明は、ヒトＣＤ５２（ｈｕＣＤ５２）に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンに関する。該免疫グロブリンは、マウス抗ヒトＣＤ５２抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る。本発明のヒト化免疫グロブリンは、他のヒト化免疫グロブリンとは異なる、特にマウス抗ヒトＣＤ５２抗体のＣＤＲを含む他のヒト化免疫グロブリンとは異なるアミノ酸配列を有する。本発明のヒト化免疫グロブリンは、ヒト化免疫グロブリンキャンパス（登録商標）とは異なる。いくつかの実施態様において、本発明のヒト化免疫グロブリンは、キャンパス（登録商標）のＣＤＲを含むヒト化抗体を上回る利点を提供する。
【０００７】
本明細書に説明されるヒト化免疫グロブリンは、ヒト化重鎖およびヒト化軽鎖を含むことができる。一実施態様において、ヒト化免疫グロブリンは、配列番号３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１６の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号４の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１７の１つ以上のＣＤＲ（３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号５の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１８の１つ以上のＣＤＲ（３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号６の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１９の１つ以上のＣＤＲ（３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２０の１つ以上のＣＤＲ（３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号８の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２１の１つ以上のＣＤＲ（３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号９の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２２の１つ以上のＣＤＲ（３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１０の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２３の１つ以上のＣＤＲ（３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１１の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２４の１つ以上のＣＤＲ（３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１２の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２５の１つ以上のＣＤＲ（３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１２の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１３７の１つ以上のＣＤＲ（３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２６の１つ以上のＣＤＲ（３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖を含む。上記の配列番号におけるＣＤＲは、図２および図３によって示されており、本明細書に提供される表１〜６において引用される。
【０００８】
別の実施態様において、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンは、配列番号  ２７、配列番号  ２８、配列番号  ２９、配列番号  ３０、配列番号  ３１、配列番号  ３２、配列番号  ３３、配列番号  ３４、配列番号  ３５、配列番号  ３６、配列番号  ３７、配列番号  ３８、配列番号  ３９、配列番号  ４０、配列番号  ４１、配列番号  ４２、配列番号  ４３、配列番号  ４４、配列番号  ４５、配列番号  ４６、配列番号  ４７、および配列番号  ４８からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つすべて）を含む軽鎖；配列番号  ４９、配列番号  ５０、配列番号  ５１、配列番号  ５２、配列番号  ５３、配列番号  ５４、配列番号  ５５、配列番号  ５６、配列番号  ５７、配列番号  ５８、配列番号  ５９、配列番号  ６０、配列番号  ６１、配列番号  ６２、配列番号  ６３、配列番号  ６４、配列番号  ６５、配列番号  ６６、配列番号  ６７、配列番号  ６８、配列番号  ６９、配列番号  ７０、配列番号  ７１、配列番号  ７２、配列番号  ７３、配列番号  ７４、および配列番号  ２９４からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つすべて）を含む重鎖；またはこのような重鎖およびこのような軽鎖を含み；ここで、ヒト化免疫グロブリンは、キャンパス（登録商標）ではない。
【０００９】
別の実施態様において、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンは、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、もしくは配列番号１３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖；配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、もしくは配列番号１３７の１つ以上のＣＤＲ（３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；またはこのような軽鎖およびこのような重鎖を含み；ここで、ヒト化免疫グロブリンは、キャンパス（登録商標）ではない。
【００１０】
いくつかの実施態様において、ヒト化免疫グロブリンのフレームワーク領域は、軽鎖ＣＤＲおよび重鎖ＣＤＲが得られる免疫グロブリンのフレームワーク領域と少なくとも５０％相同性を有する。例えば、ヒト化免疫グロブリンのフレームワーク領域は、生殖系列ヒト免疫グロブリン配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であることができる。一実施態様において、ヒト化免疫グロブリンのフレームワーク領域は、ＩｇＧヒト抗体可変領域から得られまたは誘導することができる。別の実施態様において、ＣＤ５２は、野生型ヒトＣＤ５２である。なおも別の実施態様において、ヒト化免疫グロブリンは、ヒトＣＤ５２に対する結合について、アレムツズマブと競合することができ、例えば、該ヒト化免疫グロブリンは、アレムツズマブが結合するエピトープと同一のまたは重複するエピトープに結合することができる。
【００１１】
また、本発明は、本発明のヒト化免疫グロブリンのヒト化軽鎖にも関する。一実施態様において、ヒト化軽鎖は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、および配列番号４８からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲまたはそれらの組み合わせを含み、ここで、ヒト化軽鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化軽鎖ではない。
【００１２】
他の実施態様において、ヒト化軽鎖は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２または配列番号１３のうちの１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含み、ここで、ヒト化軽鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化軽鎖ではない。
【００１３】
また、本発明は、本発明のヒト化免疫グロブリンのヒト化重鎖にも関する。一実施態様において、ヒト化重鎖は、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、および配列番号２９４、またはこれらの組み合わせからなる群から選択されるＩｇ可変ドメインの１つ以上のＣＤＲを含み、ここで、ヒト化重鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化重鎖ではない。
【００１４】
他の実施態様において、ヒト化重鎖は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、または配列番号１３７のうちの１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含み、ここで、ヒト化重鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化重鎖ではない。
【００１５】
好ましくは、本発明のヒト化免疫グロブリンは、本発明のヒト化軽鎖および本発明のヒト化重鎖の両方を含む。
【００１６】
他の実施態様において、本発明は、配列番号３の軽鎖可変領域および配列番号１６の重鎖可変領域；配列番号４の軽鎖可変領域および配列番号１７の重鎖可変領域；配列番号５の軽鎖可変領域および配列番号１８の重鎖可変領域；配列番号６の軽鎖可変領域および配列番号１９の重鎖可変領域；配列番号７の軽鎖可変領域および配列番号２０の重鎖可変領域；配列番号８の軽鎖可変領域および配列番号２１の重鎖可変領域；配列番号９の軽鎖可変領域および配列番号２２の重鎖可変領域；配列番号１０の軽鎖可変領域および配列番号２３の重鎖可変領域；配列番号１１の軽鎖可変領域および配列番号２４の重鎖可変領域；配列番号１２の軽鎖可変領域および配列番号２５の重鎖可変領域；または配列番号１３の軽鎖可変領域および配列番号２６の重鎖可変領域を含むマウスモノクローナル抗体と、ヒトＣＤ５２に関して同じエピトープに結合し、または該マウスモノクローナル抗体と競合しもしくは交差競合するヒト化免疫グロブリンを提供する。他の実施態様において、ヒト化免疫グロブリンは、このようなマウスモノクローナル抗体が結合するエピトープと重複するヒトＣＤ５２におけるエピトープに結合する。
【００１７】
他の実施態様において、本発明は、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１を含むヒトＣＤ５２におけるエピトープ（例えば、配列番号１０４）に結合するヒト化免疫グロブリンを提供する（ここで、残基１は、成熟ヒトＣＤ５２配列のＮ末端、すなわち、Ｎ末端グリシン［Ｇ］残基である；図４参照）。ヒト化免疫グロブリンは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、３、４、および５を含むエピトープに結合し得る（これらの残基はそれぞれ、グリシン［Ｇ］、アスパラギン［Ｎ］、アスパラギン酸［Ｄ］、およびトレオニン［Ｔ］である）。ヒト化免疫グロブリンは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、２、３、４、および５を含むエピトープに結合し得る（これらの残基はそれぞれ、グリシン［Ｇ］、グルタミン［Ｑ］、アスパラギン［Ｎ］、アスパラギン酸［Ｄ］、およびトレオニン［Ｔ］である。）。他の実施態様において、本発明は、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基７、８、および９を含むヒトＣＤ５２におけるエピトープに結合するヒト化免疫グロブリンを提供する（これらの残基はそれぞれ、グルタミン［Ｑ］、トレオニン［Ｔ］、およびセリン［Ｓ］である。）。いくつかの実施態様において、エピトープは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基７（Ｑ）、８（Ｔ）、および１１（Ｐ）を含む。いくつかの実施態様において、エピトープは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基４（Ｄ）および１１（Ｐ）を含む。
【００１８】
いくつかの実施態様において、本発明は、ヒトＣＤ５２に結合し、かつ、配列番号１１５、配列番号１１８、および配列番号１２１からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む軽鎖、または配列番号１２４、配列番号１２７、および配列番号１３０からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む重鎖、またはこのような軽鎖およびこのような重鎖の両方を含む、ヒト化免疫グロブリンを提供する。他の実施態様において、本発明は、ＣＤ５２に結合し、かつ配列番号１１６、配列番号１１９、および配列番号１２２からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む軽鎖、または配列番号１２５、配列番号１２８、および配列番号１３１からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む重鎖、またはこのような軽鎖およびこのような重鎖の両方を含む、ヒト化免疫グロブリンを提供する。さらに更なる実施態様において、本発明は、ＣＤ５２に結合し、かつ、配列番号１１７、配列番号１２０、および配列番号１２３からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む軽鎖、または配列番号１２６、配列番号１２９、および配列番号１３２からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む重鎖、またはこのような軽鎖およびこのような重鎖の両方を含む、ヒト化免疫グロブリンを提供する。
【００１９】
ある実施態様において、ヒト化免疫グロブリンは、配列番号１１５、配列番号１１８、および配列番号１２１のＣＤＲを含む軽鎖、ならびに配列番号１２４、配列番号１２７、および配列番号１３０のＣＤＲを含む重鎖を含む。他の実施態様において、ヒト化免疫グロブリンは、配列番号１１６、配列番号１１９、および配列番号１２２のＣＤＲを含む軽鎖、ならびに配列番号１２５、配列番号１２８、および配列番号１３１のＣＤＲを含む重鎖を含む。他の実施態様において、ヒト化免疫グロブリンは、配列番号１１７、配列番号１２０、および配列番号１２３のＣＤＲを含む軽鎖、ならびに配列番号１２６、配列番号１２９、および配列番号１３２のＣＤＲを含む重鎖を含む。
【００２０】
本発明のヒト化免疫グロブリンは、ヒト化免疫グロブリンキャンパス（登録商標）とは異なる。
【００２１】
上記の配列番号１１５〜１３２のアミノ酸配列は、下記に提供され、本明細書の他所に提供されるように、表１〜６に報告されるアミノ酸配列に基づく。これらのアミノ酸配列において、「Ｘ」は、任意のアミノ酸を表し、記号「／」は、該記号の付近に示されるアミノ酸のいずれか（またはすべて）が、示される位置に存在し得ることを示す（例えば、Ｋ／Ｒは、リシンまたはアルギニン残基が、示される位置に存在することを示し、Ｆ／Ｌ／Ｖは、フェニルアラニン、ロイシン、またはバリン残基が、示される位置に存在することを示す。）。
【００２２】
軽鎖ＣＤＲ−１配列
Ｋ／ＲＳＳＱＳＬＬ／Ｖ／ＩＸＳ／ＴＮ／ＤＧＸＳ／ＴＹＬＸ（配列番号１１５）
Ｋ／ＲＳＳＱＳＬＬ／Ｖ／ＩＨＳ／ＴＮＧＸＳ／ＴＹＬＨ（配列番号１１６）
ＲＳＳＱＳＬＶＨＴＮＧＮＳ／ＴＹＬＨ（配列番号１１７）
軽鎖ＣＤＲ−２配列
ＸＶＳＸＸＸＳ（配列番号１１８）
ＸＶＳＸＲＸＳ（配列番号１１９）
ＭＶＳＸＲＦＳ（配列番号１２０）
軽鎖ＣＤＲ−３配列
ＸＱＸＸＨ／Ｒ／ＫＦ／Ｌ／Ｖ／ＩＸＸ（配列番号１２１）
ＳＱＳＸＨ／Ｒ／ＫＦ／Ｌ／Ｖ／ＩＰＸ（配列番号１２２）
ＳＱＳＸＨＶＰＦ／Ｐ（配列番号１２３）
重鎖ＣＤＲ−１配列
ＧＦＸＦＸＸＹＷ／ＹＭＸ（配列番号１２４）
ＧＦＴＦＸＸＹＷ／ＹＭＸ（配列番号１２５）
ＧＦＴＦＴＤＹＷ／ＹＭＳ（配列番号１２６）
重鎖ＣＤＲ−２配列
ＸＩＲＸＫＸＢＸＹＸＴＸＹＸＸＳＶＫＧ（配列番号１２７）
ＸＩＲＸＫＸＮＸＹＴＴＥＹＸＸＳＶＫＧ（配列番号１２８）
ＦＩＲＮＫＡＮＧＹＴＴＥＹＸＸＳＶＫＧ（配列番号１２９）
重鎖ＣＤＲ−３配列
ＴＸＸＸＹ／Ｆ／Ｗ（配列番号１３０
ＴＲＹＸＹ／Ｆ／ＷＦＤＹ（配列番号１３１）
ＴＲＹＩＦ／ＷＦＤＹ（配列番号１３２）
また、本発明は、配列番号１１５、配列番号１１８、および配列番号１２１からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化軽鎖；配列番号１１６、配列番号１１９、および配列番号１２２からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化軽鎖；または配列番号１１７、配列番号１２０、および配列番号１２３からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化軽鎖にも関する。
【００２３】
また、本発明は、配列番号１２４、配列番号１２７、および配列番号１３０からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化重鎖；配列番号１２５、配列番号１２８、および配列番号１３１からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化重鎖；または、配列番号１２６、配列番号１２９、および配列番号１３２からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化重鎖にも関する。
【００２４】
本発明のヒト化軽鎖およびヒト化重鎖は、ヒト化免疫グロブリンキャンパス（登録商標）のヒト化軽鎖およびヒト化重鎖とは異なる。
【００２５】
本発明のいくつかの実施態様において、本発明のヒト化免疫グロブリンは（該ヒト化免疫グロブリンが、別様に規定され得る様式とは無関係に、例えば、それらのＣＤＲの１つ以上の配列の点でおよび／またはマウスモノクローナル抗体もしくは別のヒト化免疫グロブリンとの該ヒト化免疫グロブリンの交差反応性によっても規定され得るかどうかにかかわらず）、（１）明らかな優先性を持たずにグリコシル化および脱グリコシル化したＣＤ５２に対する結合を呈し；（２）グリコシル化したＣＤ５２に対して特異的な結合を呈し；（３）脱グリコシル化したＣＤ５２に特異的な結合を呈し；または（４）脱グリコシル化したＣＤ５２に対してグリコシル化したＣＤ５２を上回る優先的な結合を呈する。ある実施態様において、本発明のヒト化免疫グロブリンは、グリコシル化していないまたは脱グリコシル化したヒトＣＤ５２よりもグリコシル化したヒトＣＤ５２に対するより大きな結合親和性を有する。実際、本発明のある実施態様において、本発明のヒト化免疫グロブリンは、グリコシル化したヒトＣＤ５２に特異的な結合を呈する。グリコシル化していないまたは脱グリコシル化したヒトＣＤ５２に対する結合親和性は、グリコシダーゼを用いて、例えば、エンドグリコシダーゼＰＮＧａｓｅ−Ｆを用いて、脱グリコシル化した成熟ヒトＣＤ５２の使用とともに決定され得る。本発明のある実施態様において、本発明のヒト化免疫グロブリンは、そのＮ連結した炭水化物部分を含む成熟ヒトＣＤ５２におけるエピトープに結合する。この炭水化物部分は、シアル酸付加した、ポリラクトサミン含有で中心をフコシル化した４つの触角をもつＮ連結したオリゴ糖である（Ｔｒｅｕｍａｎｎ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９５）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０：６０８８−６０９９）。このエピトープはまた、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基３、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、３、４、および５、または成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、２、３、４、および５を含み得る。いくつかの実施態様において、本発明のマウス抗体またはキメラ抗体は、これらのうちの任意の結合特色を有し得る。
【００２６】
また、本発明のヒト化免疫グロブリン、ヒト化軽鎖、およびヒト化重鎖をコードする単離された核酸分子も、本明細書の他所で規定されるように、提供される。いくつかの実施態様において、本発明は、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するよう互いに会合するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする（１つ以上の）単離された核酸分子であり、ここで、ヒト化軽鎖は、配列番号３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含むヒト化軽鎖および配列番号１６の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号４の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号５の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１８の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号６の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１９の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２０の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号８の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２１の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号９の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２２の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１０の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１１の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２４の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１２の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２５の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１２の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１３７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；または配列番号１３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２６の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖を含む。
【００２７】
いくつかの実施態様において、本発明は、互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合親和性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする１つ以上の単離された核酸分子であり、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、配列番号３の軽鎖可変領域および配列番号１６の重鎖可変領域；配列番号４の軽鎖可変領域および配列番号１７の重鎖可変領域；配列番号５の軽鎖可変領域および配列番号１８の重鎖可変領域；配列番号６の軽鎖可変領域および配列番号１９の重鎖可変領域；配列番号７の軽鎖可変領域および配列番号２０の重鎖可変領域；配列番号８の軽鎖可変領域および配列番号２１の重鎖可変領域；配列番号９の軽鎖可変領域および配列番号２２の重鎖可変領域；配列番号１０の軽鎖可変領域および配列番号２３の重鎖可変領域；配列番号１１の軽鎖可変領域および配列番号２４の重鎖可変領域；配列番号１２の軽鎖可変領域および配列番号２５の重鎖可変領域；配列番号１３の軽鎖可変領域および配列番号２６の重鎖可変領域を含むマウスモノクローナル抗体と、ヒトＣＤ５２上の同じエピトープに結合する。他の実施態様において、本発明は、互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする１つ以上の単離された核酸分子であり、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、このようなマウスモノクローナル抗体の結合するエピトープと重複するヒトＣＤ５２におけるエピトープに結合する。
【００２８】
他の実施態様において、本発明は、互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする１つ以上の単離された核酸分子であり、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、成熟ヒトＣＤ５２の少なくとも残基１を含むエピトープに結合し；ヒト化免疫グロブリンは、成熟ヒトＣＤ５２の少なくとも残基１、３、４、および５を含むエピトープに結合し；ヒト化免疫グロブリンは、成熟ヒトＣＤ５２の少なくとも残基７、８、および９を含むエピトープに結合する。いくつかの実施態様において、エピトープは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基７、８、および１１を含む。いくつかの実施態様において、エピトープは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基４および１１を含む。
【００２９】
他の実施態様において、本発明は、互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする１つ以上の単離された核酸分子であり、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、配列番号１１５、配列番号１１８、および配列番号１２１からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む軽鎖、ならびに／または配列番号１２４、配列番号１２７、および配列番号１３０からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む重鎖；配列番号１１６、配列番号１１９、および配列番号１２２からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む軽鎖、ならびに／または配列番号１２５、配列番号１２８、および配列番号１３１からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む重鎖；あるいは、配列番号１１７、配列番号１２０、および配列番号１２３からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む軽鎖、ならびに／または配列番号１２６、配列番号１２９、および配列番号１３２からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む重鎖を含む。
【００３０】
ある実施態様において、本発明は、互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする１つ以上の単離された核酸分子であり、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、配列番号１１５、配列番号１１８、および配列番号１２１のＣＤＲを含む軽鎖ならびに配列番号１２４、配列番号１２７、および配列番号１３０のＣＤＲを含む重鎖；配列番号１１６、配列番号１１９、および配列番号１２２のＣＤＲを含む軽鎖ならびに配列番号１２５、配列番号１２８、および配列番号１３１のＣＤＲを含む重鎖；または配列番号１１７、配列番号１２０、および配列番号１２３のＣＤＲを含む軽鎖ならびに配列番号１２６、配列番号１２９、および配列番号１３２のＣＤＲを含む重鎖を含む。
【００３１】
本発明の１つ以上の核酸は、ヒト化免疫であるグロブリンキャンパス（登録商標）をコードしない。
【００３２】
他の実施態様において、本発明は、互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする１つ以上の単離された核酸分子であり、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、グリコシル化していないまたは脱グリコシル化したヒトＣＤ５２に対するよりもグリコシル化したヒトＣＤ５２に対する大きな結合親和性を有し、例えば、グリコシル化したヒトＣＤ５２に特異的な結合を呈する。ヒト化免疫グロブリンは、そのＮ連結した炭水化物部分を含む成熟ヒトＣＤ５２におけるエピトープに結合し得る。このエピトープはまた、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基３、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、３、４、および５、または成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、２、３、４、および５を含み得る。
【００３３】
他の実施態様において、本発明は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含むヒト化軽鎖をコードする単離された核酸分子であり、ここで、ヒト化軽鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化軽鎖ではない。
【００３４】
他の実施態様において、本発明は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、または配列番号１３７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含むヒト化重鎖をコードする単離された核酸分子であり、ここで、ヒト化重鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化重鎖ではない。
【００３５】
他の実施態様において、本発明は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、および配列番号４８からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲまたはこれらの組み合わせを含むヒト化軽鎖をコードする単離された核酸分子であり、ここで、ヒト化軽鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化軽鎖ではない。
【００３６】
他の実施態様において、本発明は、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、および配列番号２９４からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲまたはこれらの組み合わせを含むヒト化重鎖をコードする単離された核酸分子であり、ここで、ヒト化重鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化重鎖ではない。
【００３７】
他の実施態様において、本発明は、配列番号１１５、配列番号１１８、および配列番号１２１からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化軽鎖；配列番号１１６、配列番号１１９、および配列番号１２２からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化軽鎖；配列番号１１７、配列番号１２０、および配列番号１２３からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化軽鎖をコードする単離された核酸分子である。
【００３８】
他の実施態様において、本発明は、配列番号１２４、配列番号１２７、および配列番号１３０からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化重鎖；配列番号１２５、配列番号１２８、および配列番号１３１からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化重鎖；または配列番号１２６、配列番号１２９、および配列番号１３２からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化重鎖をコードする単離された核酸分子である。
【００３９】
また、本発明は、本発明のヒト化免疫グロブリン（例えば、ヒト化軽鎖およびヒト化重鎖）、ヒト化軽鎖、またはヒト化重鎖を含む組換えベクター（例えば、哺乳類細胞発現ベクターを含む発現ベクター）にも関する。いくつかの実施態様において、本発明は、配列番号３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１６の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号４の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号５の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１８の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号６の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１９の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２０の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号８の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２１の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号９の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２２の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１０の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１１の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２４の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１２の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２５の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１２の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１３７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；または配列番号１３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２６の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖を含むヒト化免疫グロブリンをコードする核酸を含む組換えベクターである。
【００４０】
他の実施態様において、組換えベクターは、ヒト化軽鎖をコードする核酸を含み、ここで、ヒト化軽鎖は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、および配列番号４８からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲまたはこれらの組み合わせを含み、ヒト化軽鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化軽鎖ではない。
【００４１】
他の実施態様において、組換えベクターは、ヒト化重鎖をコードする核酸を含み、ここで、ヒト化重鎖は、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、および配列番号２９４からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲまたはこれらの組み合わせを含み、ヒト化軽鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化軽鎖ではない。
【００４２】
いくつかの実施態様において、本発明は、互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする核酸分子を含む組換えベクター、または該核酸分子を含む一対の組換えベクターを提供し、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、ヒトＣＤ５２において、配列番号３の軽鎖可変領域および配列番号１６の重鎖可変領域；配列番号４の軽鎖可変領域および配列番号１７の重鎖可変領域；配列番号４の軽鎖可変領域および配列番号１７の重鎖可変領域；配列番号５の軽鎖可変領域および配列番号１８の重鎖可変領域；配列番号６の軽鎖可変領域および配列番号１９の重鎖可変領域；配列番号７の軽鎖可変領域および配列番号２０の重鎖可変領域；配列番号８の軽鎖可変領域および配列番号２１の重鎖可変領域；配列番号９の軽鎖可変領域および配列番号２２の重鎖可変領域；配列番号１０の軽鎖可変領域および配列番号２３の重鎖可変領域；配列番号１１の軽鎖可変領域および配列番号２４の重鎖可変領域；配列番号１２の軽鎖可変領域および配列番号２５の重鎖可変領域；配列番号１３の軽鎖可変領域および配列番号２６の重鎖可変領域を含むマウスモノクローナル抗体と同じエピトープに結合する。他の実施態様において、本発明は、互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする核酸分子を含む組換えベクター、または該核酸分子を含む一対の組換えベクターを提供し、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、このようなマウスモノクローナル抗体の結合するエピトープと重複するヒトＣＤ５２における該エピトープに結合する。
【００４３】
他の実施態様において、組換えベクターは、互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする核酸分子を含み、または一対の組換えベクターは、該核酸分子を含み、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、成熟ヒトＣＤ５２の少なくとも残基１を含むエピトープに結合し；成熟ヒトＣＤ５２の少なくとも残基１、３、４、および５を含むエピトープに結合し；成熟ヒトＣＤ５２の少なくとも残基１、２、３、４、および５を含むエピトープに結合し；または成熟ヒトＣＤ５２の少なくとも残基７、８、および９を含むエピトープに結合する。いくつかの実施態様において、エピトープは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基７、８、および１１を含む。いくつかの実施態様において、エピトープは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基４および１１を含む。
【００４４】
いくつかの実施態様において、組換えベクターは、互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする核酸分子を含み、または一対の組換えベクターは、該核酸分子を含み、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、配列番号１１５、配列番号１１８、および配列番号１２１からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む軽鎖、ならびに／または配列番号１２４、配列番号１２７、および配列番号１３０からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む重鎖；配列番号１１６、配列番号１１９、および配列番号１２２からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む軽鎖、ならびに／または配列番号１２５、配列番号１２８、および配列番号１３１からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む重鎖；あるいは、配列番号１１７、配列番号１２０、および配列番号１２３からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む軽鎖、ならびに／または配列番号１２６、配列番号１２９、および配列番号１３２からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む重鎖を含む。
【００４５】
ある実施態様において、組換えベクターは、互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする核酸分子を含み、または一対の組換えベクターは、該核酸分子を含み、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、配列番号１１５、配列番号１１８、および配列番号１２１のＣＤＲを含む軽鎖ならびに配列番号１２４、配列番号１２７、および配列番号１３０のＣＤＲを含む重鎖；配列番号１１６、配列番号１１９、および配列番号１２２のＣＤＲを含む軽鎖ならびに配列番号１２５、配列番号１２８、および配列番号１３１のＣＤＲを含む重鎖；または配列番号１１７、配列番号１２０、および配列番号１２３のＣＤＲを含む軽鎖ならびに配列番号１２６、配列番号１２９、および配列番号１３２のＣＤＲを含む重鎖を含む。
【００４６】
本発明の組換えベクター（単数または複数）における１つ以上の核酸は、ヒト化免疫グロブリンキャンパス（登録商標）をコードしない。
【００４７】
他の実施態様において、組換えベクターは、互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする核酸分子を含み、または一対の組換えベクターは該核酸分子を含み、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、グリコシル化していないまたは脱グリコシル化したヒトＣＤ５２に対するよりもグリコシル化したヒトＣＤ５２に対する大きな結合親和性を有し、例えば、グリコシル化したヒトＣＤ５２に特異的な結合を呈する。ヒト化免疫グロブリンは、そのＮ連結した炭水化物部分を含む成熟ヒトＣＤ５２におけるエピトープに結合し得る。また、このエピトープは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基３、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、３、４、および５、または成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、２、３、４、および５を含み得る。
【００４８】
他の実施態様において、組換えベクターは、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３の１つ以上ＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含むヒト化軽鎖をコードする核酸分子を含み、ここで、ヒト化軽鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化軽鎖ではない。
【００４９】
他の実施態様において、組換えベクターは、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、または配列番号１３７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含むヒト化重鎖をコードする核酸分子を含み、ここで、ヒト化重鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化重鎖ではない。
【００５０】
他の実施態様において、組換えベクターは、配列番号１１５、配列番号１１８、および配列番号１２１からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化軽鎖；配列番号１１６、配列番号１１９、および配列番号１２２からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化軽鎖；または配列番号１１７、配列番号１２０、および配列番号１２３からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化軽鎖をコードする核酸分子を含み、ここで、ヒト化軽鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化軽鎖ではない。
【００５１】
他の実施態様において、組換えベクターは、配列番号１２４、配列番号１２７、および配列番号１３０からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化重鎖；配列番号１２５、配列番号１２８、および配列番号１３１からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化重鎖；または配列番号１２６、配列番号１２９、および配列番号１３２からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含むヒト化重鎖をコードする核酸分子を含み、ここで、ヒト化重鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化重鎖ではない。
【００５２】
特定の実施態様において、本発明の組換えベクターは、哺乳類細胞発現ベクターなどの発現ベクターである。ある実施態様において、ベクターは、プラスミドベクターまたはウイルスベクター（例えば、アデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクター）である。
【００５３】
また、本発明は、本発明のヒト化免疫グロブリン（ヒト化軽鎖およびヒト化重鎖）、ヒト化軽鎖、またはヒト化重鎖をコードする（１つ以上の）核酸（例えば、組換え体）を含む宿主細胞にも関する。いくつかの実施態様において、宿主細胞は、本発明の組換えベクター（例えば、哺乳類細胞発現ベクターを含む発現ベクター）を含む。
【００５４】
特定の実施態様において、宿主細胞は、ヒト化軽鎖およびヒト化重鎖をコードする核酸（１つ以上の核酸）を含み、ここで、ヒト化軽鎖およびヒト化重鎖は互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成し、ヒト化免疫グロブリンは、配列番号３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１６の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号４の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号５の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１８の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号６の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１９の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２０の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号８の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２１の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号９の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２２の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１０の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１１の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２４の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１２の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２５の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１２の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１３７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；または配列番号１３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２６の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖配列を含む。
【００５５】
いくつかの実施態様において、宿主細胞は、互いに会合してヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする１つ以上の核酸分子を含み、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、ヒトＣＤ５２において、配列番号３の軽鎖可変領域および配列番号１６の重鎖可変領域；配列番号４の軽鎖可変領域および配列番号１７の重鎖可変領域；配列番号５の軽鎖可変領域および配列番号１８の重鎖可変領域；配列番号６の軽鎖可変領域および配列番号１９の重鎖可変領域；配列番号７の軽鎖可変領域および配列番号２０の重鎖可変領域；配列番号８の軽鎖可変領域および配列番号２１の重鎖可変領域；配列番号９の軽鎖可変領域および配列番号２２の重鎖可変領域；配列番号１０の軽鎖可変領域および配列番号２３の重鎖可変領域；配列番号１１の軽鎖可変領域および配列番号２４の重鎖可変領域；配列番号１２の軽鎖可変領域および配列番号２５の重鎖可変領域；または配列番号１３の軽鎖可変領域および配列番号２６の重鎖可変領域を含むマウスモノクローナル抗体と同じエピトープに結合する。他の実施態様において、宿主細胞は、互いに会合してヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒトか重鎖およびヒト化軽鎖をコードする１つ以上の核酸分子を含み、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、このようなマウスモノクローナル抗体の結合するエピトープと重複するヒトＣＤ５２におけるエピトープに結合する。
【００５６】
他の実施態様において、宿主細胞は、互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする１つ以上の核酸分子を含み、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、成熟ヒトＣＤ５２の少なくとも残基１を含むエピトープに結合し；成熟ヒトＣＤ５２の少なくとも残基１、３、４、および５を含むエピトープに結合し；成熟ヒトＣＤ５２の少なくとも残基１、２、３、４、および５を含むエピトープに結合し；または成熟ヒトＣＤ５２の少なくとも残基７、８、および９を含むエピトープに結合する。いくつかの実施態様において、エピトープは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基７、８、および１１を含む。いくつかの実施態様において、エピトープは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基４および１１を含む。
【００５７】
いくつかの実施態様において、宿主細胞は、互いに会合してヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする１つ以上の核酸分子を含み、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、配列番号１１５、配列番号１１８、および配列番号１２１からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む軽鎖、ならびに／または配列番号１２４、配列番号１２７、および配列番号１３０からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む重鎖；配列番号１１６、配列番号１１９、および配列番号１２２からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む軽鎖、ならびに／または配列番号１２５、配列番号１２８、および配列番号１３１からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む重鎖；配列番号１１７、配列番号１２０、および配列番号１２３からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む軽鎖、ならびに／または配列番号１２６、配列番号１２９、および配列番号１３２からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ（例えば、該ＣＤＲの３つすべて）を含む重鎖を含む。
【００５８】
いくつかの実施態様において、宿主細胞は、互いに会合してヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする１つ以上の核酸分子を含み、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、配列番号１１５、配列番号１１８、および配列番号１２１のＣＤＲを含む軽鎖ならびに配列番号１１６、配列番号１１９、および配列番号１２２のＣＤＲを含む軽鎖ならびに配列番号１２５、配列番号１２８、および配列番号１３１のＣＤＲを含む重鎖；または、配列番号１１７、配列番号１２０、および配列番号１２３のＣＤＲを含む軽鎖ならびに配列番号１２６、配列番号１２９、および配列番号１３２のＣＤＲを含む重鎖を含む。
【００５９】
他の実施態様において、宿主細胞は、互いに会合してヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを形成するヒト化重鎖およびヒト化軽鎖をコードする１つ以上の核酸分子を含み、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、グリコシル化していないまたは脱グリコシル化したヒトＣＤ５２に対するよりもグリコシル化したヒトＣＤ５２に対する大きな結合親和性を有し、例えば、グリコシル化したヒトＣＤ５２に特異的な結合を呈する。ヒト化免疫グロブリンは、Ｎ連結した炭水化物部分を含む成熟ヒトＣＤ５２におけるエピトープに結合し得る。また、このエピトープは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基３、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、３、４、および５、または成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、２、３、４、および５を含み得る。
【００６０】
いくつかの実施態様において、宿主細胞は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含むヒト化軽鎖をコードする核酸分子を含む。ヒト化軽鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化軽鎖ではない。
【００６１】
他の実施態様において、宿主細胞は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、または配列番号１３７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含むヒト化重鎖をコードする核酸分子を含む。ヒト化重鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化重鎖ではない。
【００６２】
いくつかの実施態様において、宿主細胞は、ヒト化軽鎖をコードする核酸を含み、ここで、ヒト化軽鎖は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、および配列番号４８からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲまたはこれらの組み合わせを含み、ヒト化軽鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化軽鎖ではない。
【００６３】
他の実施態様において、宿主細胞は、ヒト化重鎖をコードする核酸を含み、ここで、ヒト化重鎖は、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、および配列番号２９４からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲ、またはこれらの組み合わせを含み、ヒト化重鎖は、キャンパス（登録商標）のヒト化重鎖ではない。
【００６４】
また、本発明は、ヒト化免疫グロブリンの発現に適した条件下で、本発明の宿主細胞（例えば、本発明のヒト化免疫グロブリン（例えば、本発明のヒト化軽鎖およびヒト化重鎖）をコードする１つ以上の組換え核酸を含む宿主）を維持し、それによりヒト化免疫グロブリン鎖が発現し、かつヒト化免疫グロブリンが産生されることを含む、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンを調製する方法にも関する。幾つかの実施態様において、方法はさらにヒト化免疫グロブリンを精製あるいは単離することを含む。いくつかの実施態様において、方法はさらに、精製または単離されたヒト化免疫グロブリンを生理学的に許容し得るビヒクルまたは担体と組み合わせて、医薬組成物を作製することを含む。
【００６５】
また、本発明は、本発明の宿主細胞（例えば、本発明のヒト化軽鎖をコードする１つ以上の組換え核酸を含む宿主細胞）を、ヒト化軽鎖の発現に適した条件下で維持し、それによりヒト化軽鎖が発現し、かつヒト化軽鎖が産生されることを含む、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化軽鎖を調製する方法にも関する。いくつかの実施態様において、方法はさらに、ヒト化軽鎖を精製または単離することを含む。
【００６６】
また、本発明は、本発明の宿主細胞を、ヒト化重鎖の発現に適した条件下で維持し、それによりヒト化重鎖が発現し、かつヒト化重鎖が産生されることを含む、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化重鎖を調製する方法にも関する。いくつかの実施態様において、方法はさらに、ヒト化重鎖を精製または単離することを含む。
【００６７】
本発明はさらに、（例えば、本発明のヒト化軽鎖および／または本発明のヒト化重鎖を含む）本発明のヒト化免疫グロブリンおよび生理学的に許容し得るビヒクルまたは担体を含む医薬組成物に関する。いくつかの実施態様において、医薬組成物は、単位用量組成物を含む。
【００６８】
また、本発明は、ヒトＣＤ５２についてのトランスジェニックマウスのリンパ球を、ヒトＣＤ５２トランスジェニックマウスと同じ、または類似の系（例えば、ＣＤ１）の非トランスジェニックマウスに投与し、それにより、免疫化した非トランスジェニックマウスを作出することを含む、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを作製する方法にも関する。免疫化した非トランスジェニックマウスの脾臓を不死化した細胞と融合させ、それによりハイブリドーマを作製する。ハイブリドーマは、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体を分泌するであろう条件下で維持される。いくつかの実施態様において、ＦＡＣＳ分析を使用して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを検出する。他の実施態様において、トランスジェニックマウスの系および非トランスジェニックマウスの系は同一である。ある実施態様において、ＣＤ５２は、野生型ヒトＣＤ５２である。いくつかの実施態様において、ＣＤ５２トランスジェニックマウスおよび非トランスジェニックマウスはＣＤ１マウスである。いくつかの実施態様において、免疫化に使用されるリンパ球は、ヒトＣＤ５２トランスジェニックマウスの脾臓から得られる。いくつかの実施態様において、不死化した細胞は、ＳＰ２／０Ａｇ１４細胞およびＮＳ１ミエローマ細胞からなる群から選択される。また、本発明は、本発明の方法によって作製されるハイブリドーマにも関する。任意に、ハイブリドーマによって分泌されるモノクローナル抗体が回収され、さらに精製されることができる（例えば、実質的に精製され、単離される。）。他の実施態様において、方法はさらに、ハイブリドーマによって分泌されるモノクローナル抗体のヌクレオチド配列を決定することを含む。
【００６９】
また、本発明は、治療することを必要とする患者に有効量の本発明のヒト化免疫グロブリンを投与することを含む、該患者における自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）（例えば、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ６：  ７５−９２  （２００７）参照））、血管炎（例えば、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ３９：２２９−２３７  （２０００）参照）、ベーチェット病（ＢＤ）（例えば、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ４２：１５３９−１５４４  （２００３）参照）、狼瘡および小児脂肪便症（Ｖｉｖａｓ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．
Ｊ．  Ｍｅｄ．，  ３５４（２３）：２５１４−２５１５  （２００６））、血管炎、乾癬、筋炎、強皮症、再生不良性貧血、および大腸炎）を治療するための方法に関する。
【００７０】
別の態様において、有効量の本発明のヒト化免疫グロブリンを、１つ以上の免疫抑制薬とともに投与して、固形臓器移植（Ａｇａｒｗａｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ２０：６−１１  （２００８））またはＣＤ３４＋幹細胞移植（Ｂｕｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ，  刊行されたオンライン  Ｊａｎｕａｒｙ  ３０，  ２００９）のために、準備することを必要とする患者を準備することができる。
【００７１】
また、本発明は、治療することを必要とする患者に、有効量の本発明のヒト化免疫グロブリンを投与することを含む、該患者における癌を治療するための方法にも関する。
【００７２】
また、本発明は、治療することを必要とする患者に、有効量の本発明のヒト化免疫グロブリンを投与することを含む、該患者における多発性硬化症を治療するための方法にも関する。
【００７３】
また、本発明は、治療することを必要とする患者に、有効量の本発明のヒト化免疫グロブリンを投与することを含む、該患者における慢性リンパ性白血病を治療するための方法にも関する。
【００７４】
本発明のヒト化免疫グロブリンの投与は、（例えば、医薬組成物における）ヒト化免疫グロブリン自体の投与、ヒト化免疫グロブリンをコードする１つ以上の組換えベクターの投与、またはヒト化免疫グロブリンをコードする１つ以上の核酸（例えば１つ以上の組み換えベクター）を含み、かつヒト化免疫グロブリンを発現する宿主細胞の投与を含み得る。
【００７５】
また、本発明は、インビトロで患者の試料を、本発明のヒト化免疫グロブリンを用いてアッセイすることを含む、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症、狼瘡、および血管炎）、癌（例えば、白血病（例えば、慢性リンパ性白血病）、およびリンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫）、移植（例えば、固形臓器移植（例えば、腎臓移植）および幹細胞移植）からなる群から選択される疾患を診断する方法にも関する。
【００７６】
また、本発明は、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症、関節リウマチ、および狼瘡）、癌、リンパ球過剰増殖容態（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病などの白血病および非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫を含むＴ細胞またはＢ細胞悪性腫瘍）など、本明細書に説明される疾患または障害を治療する上での使用のためなどの疾患の治療法および／または診断における使用のためなどの、医学における使用のための、（例えば、本発明のヒト化軽鎖および／または本発明のヒト化重鎖を含む）本発明のヒト化免疫グロブリン、本発明の組換えベクター、または本発明の宿主細胞にも関する。例えば、Ｌｕｎｄｉｎ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ，  １０１：４２６７−４２７２  （２００３）；  Ｒｏｄｉｇ，  ＳＪ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  １２（２３）：７１７４−７１７９  （２００６）を参照されたい。また、本発明は、本明細書に説明される疾患または障害（例えば、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症、狼瘡、血管炎）、癌（例えば、白血病（例えば、慢性リンパ性白血病）、およびリンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫））、および移植（例えば、固形臓器移植（例えば、腎臓移植）および幹細胞移植））を治療するための医薬の製造のための、本発明のヒト化免疫グロブリン、ヒト化軽鎖、もしくはヒト化重鎖、本発明の組換えベクター、または本発明の宿主細胞の使用にも関する。
【００７７】
本発明は、残基３６（Ｙ）および４６（Ｌ）（Ｋａｂａｔ番号付け）が置換されたヒトＶｋ２−Ａ１８ｂを利用するヒト軽鎖フレームワークを含むヒト化抗ヒトＣＤ５２を提供する。いくつかの実施態様において、残基３６はＶまたはＬであり、かつ残基４６はＲである。また、本発明は、残基４７（Ｗ）（Ｋａｂａｔ番号付け）が置換されたヒトＶＨ３−２３遺伝子を利用するヒト重鎖フレームワーク領域を含むヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体も提供する。いくつかの実施態様において、残基４７（Ｗ）および４９（Ｓ）（Ｋａｂａｔ番号付け）は両方とも置換されている。いくつかの実施態様において、残基４７はＬであり、かつ残基４９はＳである。他の実施態様において、残基４７はＬであり、かつ残基４９はＡである。
【００７８】
いくつかの実施態様において、本発明のヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体は、キャンパス−１Ｈ（登録商標）抗体についてのＥＣ５０値よりも２倍低い、実施例２９に説明されるアッセイなどの細胞結合アッセイにおいて決定されるＥＣ５０値を有する。種々の実施態様において、ヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体は、１１ｎＭ以下のＥＣ５０値を有する。
【００７９】
いくつかの実施態様において、本発明のヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体は、キャンパス−１Ｈ（登録商標）で治療されたことのあるヒト患者の血清由来の抗キャンパス−１Ｈ（登録商標）抗体の存在下で、細胞におけるＣＤ５２に結合する。すなわち、細胞におけるＣＤ５２に対する本発明のヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体の結合は、ＣＤ５２に対するキャンパス−１Ｈ（登録商標）の結合と比較して、このような抗キャンパス−１Ｈ（登録商標）抗体の存在下で低下せず、またはＣＤ５２に対するキャンパス−１Ｈ（登録商標）の結合と比較して、このような抗キャンパス−１Ｈ（登録商標）抗体の存在下で低下が少ない。
【００８０】
本発明はさらに、本明細書で提供されるヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体の血液および／または脾臓におけるリンパ球枯渇特性を有するヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体を提供する。
【００８１】
いくつかの実施態様において、本発明のヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体は、対象の血清におけるＴＮＦアルファ、ＩＬ−６、およびＭＣＰ−１のうちの１つ以上の循環レベルを増大させる。
【００８２】
いくつかの実施態様において、本発明のヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体は、対象におけるリンパ球レベルを少なくとも３０日間、少なくとも５０日間、少なくとも６０日間、少なくとも７０日間、少なくとも８０日間、または８０日間超低下させる。
【００８３】
いくつかの実施態様において、本発明のヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体は、マウス実験的自己免疫性脳脊髄炎モデルにおいて、疾患の発症を遅延させ、および／または、臨床スコアによって測定される疾患の重症度を低下させる。
【００８４】
いくつかの実施態様において、本発明のヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体は、実施例６９または７０において説明されるアッセイなどの免疫原性アッセイにおいて、キャンパス−１Ｈ（登録商標）よりも免疫原性が低い。
【００８５】
（マウスモノクローナル免疫グロブリン）
また、本発明は、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するマウスモノクローナル抗体（マウスモノクローナル免疫グロブリン）にも関する。一実施態様において、本発明は、配列番号３を含む軽鎖および配列番号１６を含む重鎖；配列番号４を含む軽鎖および配列番号１７を含む重鎖；配列番号５を含む軽鎖および配列番号１８を含む重鎖；配列番号６を含む軽鎖および配列番号１９を含む重鎖；配列番号７を含む軽鎖および配列番号２０を含む重鎖；配列番号８を含む軽鎖および配列番号２１を含む重鎖；配列番号９を含む軽鎖および配列番号２２を含む重鎖；配列番号１０を含む軽鎖および配列番号２３を含む重鎖；配列番号１１を含む軽鎖および配列番号２４を含む重鎖；配列番号１２を含む軽鎖および配列番号２５を含む重鎖；あるいは配列番号１３を含む軽鎖および配列番号２６を含む重鎖を含む、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するマウスモノクローナル抗体に関する。
【００８６】
一実施態様において、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するマウスモノクローナル抗体は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される軽鎖可変領域、または配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、および配列番号２６からなる群から選択される重鎖可変領域、またはこのような軽鎖可変領域およびこのような重鎖可変領域の両方を含む。
【００８７】
また、本発明は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３の可変領域を含むマウス免疫グロブリン軽鎖にも関する。
【００８８】
また、本発明は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、または配列番号２６の可変領域を含むマウス免疫グロブリン重鎖にも関する。
【００８９】
好ましくは、本発明のマウスモノクローナル抗体は、本発明のマウス抗体軽鎖および本発明のマウス抗体重鎖の両方を含む。いくつかの実施態様において、本発明は、ヒトＣＤ５２において、配列番号３の軽鎖可変領域および配列番号１６の重鎖可変領域；配列番号４の軽鎖可変領域および配列番号１７の重鎖可変領域；配列番号５の軽鎖可変領域および配列番号１８の重鎖可変領域；配列番号６の軽鎖可変領域および配列番号１９の重鎖可変領域；配列番号７の軽鎖可変領域および配列番号２０の重鎖可変領域；配列番号８の軽鎖可変領域および配列番号２１の重鎖可変領域；配列番号９の軽鎖可変領域および配列番号２２の重鎖可変領域；配列番号１０の軽鎖可変領域および配列番号２３の重鎖可変領域；配列番号１１の軽鎖可変領域および配列番号２４の重鎖可変領域；配列番号１２の軽鎖可変領域および配列番号２５の重鎖可変領域；配列番号１３の軽鎖可変領域および配列番号２６の重鎖可変領域を含むマウスモノクローナルマウスモノクローナル抗体と同じエピトープに結合するマウスモノクローナル免疫グロブリンを提供する。他の実施態様において、本発明は、このようなマウスモノクローナル抗体の結合するエピトープと重複するヒトＣＤ５２におけるエピトープに結合するマウスモノクローナル免疫グロブリンを提供する。
【００９０】
他の実施態様において、本発明は、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１を含むヒトＣＤ５２におけるエピトープに結合するマウスモノクローナル免疫グロブリンを提供する。マウスモノクローナル免疫グロブリンは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、３、４、および５を含むエピトープに結合し得、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、２、３、４、および５を含むエピトープに結合し得、または成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基７、８、および９を含むエピトープに結合し得る。いくつかの実施態様において、エピトープは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基７、８、および１１を含む。いくつかの実施態様において、エピトープは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基４および１１を含む。
【００９１】
また、本発明は、本発明のマウスモノクローナル免疫グロブリン、マウス免疫グロブリン軽鎖、またはマウス免疫グロブリン重鎖をコードする単離された核酸分子にも関する。いくつかの実施態様において、本発明は、互いに会合して、ヒトＣＤ５２配列に対する結合特異性を有するマウスモノクローナル免疫グロブリンを形成するマウス免疫グロブリン重鎖およびマウス免疫グロブリン軽鎖、またはこのような軽鎖およびこのような重鎖の両方をコードする単離された核酸分子であり、ここで、マウス免疫グロブリン軽鎖は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される可変領域を含み、またはマウス免疫グロブリン重鎖は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、および配列番号２６からなる群から選択される可変領域を含む。
【００９２】
いくつかの実施態様において、単離された核酸は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される可変領域を含むマウス免疫グロブリン軽鎖をコードする。
【００９３】
他の実施態様において、単離された核酸は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、および配列番号２６からなる群から選択される可変領域を含むマウス免疫グロブリン重鎖をコードする。
【００９４】
また、本発明は、本発明のマウスモノクローナル免疫グロブリン（例えば、マウス免疫グロブリン軽鎖およびマウス免疫グロブリン重鎖）、マウス免疫グロブリン軽鎖、またはマウス免疫グロブリン重鎖をコードする核酸を含む組換えベクター（例えば、哺乳類細胞発現ベクターを含む発現ベクター）にも関する。いくつかの実施態様において、本発明は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される軽鎖可変領域、または配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、および配列番号２６からなる群から選択される重鎖可変領域、またはこのような軽鎖可変領域および重鎖可変領域の両方を含むマウス免疫グロブリンをコードする核酸を含む組換えベクターまたは該核酸を含む一対の組換えベクターである。
【００９５】
他の実施態様において、組換えベクターは、マウス免疫グロブリン軽鎖をコードする核酸を含み、ここで、マウス免疫グロブリン軽鎖は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３を含む。
【００９６】
他の実施態様において、組換えベクターは、マウス免疫グロブリン重鎖をコードする核酸を含み、ここで、マウス免疫グロブリン重鎖は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、または配列番号２６を含む。
【００９７】
他の実施態様において、組換えベクターは、マウス免疫グロブリン軽鎖およびマウス免疫グロブリン重鎖をコードする核酸を含み、ここで、マウス免疫グロブリン軽鎖およびマウス免疫グロブリン重鎖は互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するマウスモノクローナル免疫グロブリンを形成する。一実施態様において、マウス免疫グロブリン軽鎖は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される可変領域を含み、マウス免疫グロブリン重鎖は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、および配列番号２６からなる群から選択される可変領域を含む。
【００９８】
特定の実施態様において、本発明の組換えベクターは、哺乳類細胞発現ベクターなどの発現ベクターである。ある実施態様において、ベクターは、プラスミドベクターまたはウイルスベクター（例えば、アデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクター）である。
【００９９】
また、本発明は、本発明のマウスモノクローナル免疫グロブリン（マウス免疫グロブリン軽鎖およびマウス免疫グロブリン重鎖）、マウス免疫グロブリン重鎖、またはマウス免疫グロブリン軽鎖をコードする核酸を含む。例えば、いくつかの実施態様において、宿主細胞は、本発明の組換えベクター（例えば、発現ベクター、哺乳類細胞発現ベクター）を含む。
【０１００】
いくつかの実施態様において、宿主細胞は、マウス免疫グロブリン軽鎖およびマウス免疫グロブリン重鎖をコードする核酸を含み、ここで、マウス免疫グロブリン軽鎖およびマウス免疫グロブリン重鎖は互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するマウスモノクローナル免疫グロブリンを形成し、かつマウス免疫グロブリン軽鎖は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される可変領域を含み、ならびに／またはマウス免疫グロブリン重鎖は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、および配列番号２６からなる群から選択される可変領域を含み、またはその両方である。
【０１０１】
いくつかの実施態様において、宿主細胞は、マウス免疫グロブリン軽鎖をコードする核酸を含み、ここで、マウス免疫グロブリン軽鎖は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される軽鎖可変領域を含む。
【０１０２】
いくつかの実施態様において、宿主細胞は、マウス免疫グロブリン重鎖をコードする核酸を含み、ここで、マウス免疫グロブリン重鎖は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、および配列番号２６からなる群から選択される重鎖可変領域を含む。
【０１０３】
また、本発明は、マウスモノクローナル免疫グロブリンの発現に適した条件下で、本発明の宿主細胞（例えば、本発明のマウスモノクローナル免疫グロブリン（例えば、マウス免疫グロブリン軽鎖およびマウス免疫グロブリン重鎖）をコードする１つ以上の組換え核酸（例えば、組換えベクター）を含む宿主細胞）を維持し、それによりマウスモノクローナル免疫グロブリンが発現しかつマウスモノクローナル免疫グロブリンが産生されることを含む、マウスモノクローナル免疫グロブリンを調製する方法にも関する。いくつかの実施態様において、方法はさらに、マウスモノクローナル免疫グロブリンを精製または単離することを含む。
【０１０４】
また、本発明は、本発明のマウス免疫グロブリン軽鎖をコードする核酸を含む本発明の宿主細胞を、該マウス免疫グロブリン軽鎖の発現に適した条件下で維持し、それにより、軽鎖が発現することを含む、マウスモノクローナル免疫グロブリンの軽鎖を調製する方法にも関する。いくつかの実施態様において、方法はさらに、軽鎖を精製または単離することを含む。
【０１０５】
また、本発明は、本発明のマウス免疫グロブリン重鎖をコードする核酸を含む本発明の宿主細胞を、該マウス免疫グロブリン重鎖の発現に適した条件下で維持し、それにより、重鎖が発現することを含む、マウスモノクローナル免疫グロブリンの重鎖を調製する方法にも関する。いくつかの実施態様において、方法はさらに、マウス免疫グロブリン重鎖を精製または単離することを含む。
【０１０６】
また、本発明は、患者の試料をインビトロで、本発明のマウスモノクローナル免疫グロブリンを用いてアッセイすることを含む、疾患（例えば、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症、狼瘡、血管炎）、癌（例えば、白血病（例えば、慢性リンパ性白血病）、およびリンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫））、ならびに移植（例えば、固形臓器移植（例えば、腎臓移植）および幹細胞移植））を診断する方法にも関する（例えば、Ｌｕｎｄｉｎ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ，  １０１：４２６７−４２７２  （２００３）；  Ｒｏｄｉｇ，  ＳＪ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓ．，  １２（２３）；７１７４−７１７１７９  （２００６））。
【０１０７】
（キメラ免疫グロブリン）
また、本発明は、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するキメラ免疫グロブリンにも関する。このようなキメラ免疫グロブリンは、本発明の任意のマウスモノクローナル免疫グロブリンの可変領域を含み得る。一実施態様において、本発明のキメラ免疫グロブリンは、配列番号３の軽鎖可変領域および配列番号１６の重鎖可変領域；配列番号４の軽鎖可変領域および配列番号１７の重鎖可変領域；配列番号５の軽鎖可変領域および配列番号１８の重鎖可変領域；配列番号６の軽鎖可変領域および配列番号１９の重鎖可変領域；配列番号７の軽鎖可変領域および配列番号２０の重鎖可変領域；配列番号８の軽鎖可変領域および配列番号２１の重鎖可変領域；配列番号９の軽鎖可変領域および配列番号２２の重鎖可変領域；配列番号１０の軽鎖可変領域および配列番号２３の重鎖可変領域；配列番号１１の軽鎖可変領域および配列番号２４の重鎖可変領域；配列番号１２の軽鎖可変領域および配列番号２５の重鎖可変領域；または配列番号１３の軽鎖可変領域および配列番号２６の重鎖可変領域を含む。
【０１０８】
また、本発明は、配列番号３の軽鎖可変領域、配列番号４の軽鎖可変領域、配列番号５の軽鎖可変領域、配列番号６の軽鎖可変領域、配列番号７の軽鎖可変領域、配列番号８の軽鎖可変領域、配列番号９の軽鎖可変領域、配列番号１０の軽鎖可変領域、配列番号１１の軽鎖可変領域、配列番号１２の軽鎖可変領域、および配列番号１３の軽鎖可変領域からなる群から選択される軽鎖可変領域、ならびに／または配列番号１６の重鎖可変領域、配列番号１７の重鎖可変領域、配列番号１８の重鎖可変領域、配列番号１９の重鎖可変領域、配列番号２０の重鎖可変領域、配列番号２１の重鎖可変領域、配列番号２２の重鎖可変領域、配列番号２３の重鎖可変領域、配列番号２４の重鎖可変領域、配列番号２５の重鎖可変領域、および配列番号２６の重鎖可変領域からなる群から選択される重鎖可変領域を含む、ヒトＣＤ５２に対する結合親和性を有するキメラ抗体にも関する。
【０１０９】
また、本発明は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される可変領域を含むキメラ軽鎖にも関する。
【０１１０】
また、本発明は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、および配列番号２６からなる群から選択される可変領域を含むキメラ重鎖にも関する。
【０１１１】
好ましくは、本発明のキメラ免疫グロブリンは、本発明のキメラ軽鎖および本発明のキメラ重鎖の両方を含む。
【０１１２】
いくつかの実施態様において、本発明は、ヒトＣＤ５２において、配列番号３の軽鎖可変領域および配列番号１６の重鎖可変領域；配列番号４の軽鎖可変領域および配列番号１７の重鎖可変領域；配列番号５の軽鎖可変領域および配列番号１８の重鎖可変領域；配列番号６の軽鎖可変領域および配列番号１９の重鎖可変領域；配列番号７の軽鎖可変領域および配列番号２０の重鎖可変領域；配列番号８の軽鎖可変領域および配列番号２１の重鎖可変領域；配列番号９の軽鎖可変領域および配列番号２２の重鎖可変領域；配列番号１０の軽鎖可変領域および配列番号２３の重鎖可変領域；配列番号１１の軽鎖可変領域および配列番号２４の重鎖可変領域；配列番号１２の軽鎖可変領域および配列番号２５の重鎖可変領域；または配列番号１３の軽鎖可変領域および配列番号２６の重鎖可変領域を含むマウスモノクローナル抗体と同じエピトープに結合するキメラ免疫グロブリンを提供する。他の実施態様において、キメラ免疫グロブリンは、このようなマウスモノクローナル抗体の結合するエピトープと重複するヒトＣＤ５２におけるエピトープに結合する。
【０１１３】
他の実施態様において、本発明は、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１を含むヒトＣＤ５２におけるエピトープに結合するキメラ免疫グロブリンを提供する。キメラ免疫グロブリンは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、３、４、および５を含むエピトープに結合し得、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基１、２、３、４、および５を含むエピトープに結合し得、または成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基７、８、および９を含むヒトＣＤ５２におけるエピトープに結合し得る。いくつかの実施態様において、エピトープは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基７、８、および１１を含む。いくつかの実施態様において、エピトープは、成熟ヒトＣＤ５２配列の少なくとも残基４および１１を含む。
【０１１４】
また、本発明は、本発明のキメラ免疫グロブリン、キメラ軽鎖、またはキメラ重鎖をコードする単離された核酸分子にも関する。いくつかの実施態様において、本発明は、互いに会合してヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するキメラ免疫グロブリンを形成するキメラ重鎖およびキメラ軽鎖をコードする単離された核酸分子（１つ以上の核酸分子）であり、ここで、キメラ軽鎖は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される可変領域を含み、ならびに／またはキメラ重鎖は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、および配列番号２６からなる群から選択される可変領域を含む。
【０１１５】
いくつかの実施態様において、本発明は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３の可変領域を含むキメラ軽鎖をコードする単離された核酸分子である。
【０１１６】
いくつかの実施態様において、本発明は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、または配列番号２６の可変領域を含むキメラ重鎖をコードする単離された核酸分子である。
【０１１７】
また、本発明は、本発明のキメラ免疫グロブリン（キメラ軽鎖およびキメラ重鎖）、キメラ軽鎖、またはキメラ重鎖をコードする核酸を含む組換えベクター（例えば、発現ベクター、哺乳類細胞発現ベクター）にも関する。いくつかの実施態様において、本発明は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される軽鎖可変領域、または配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、および配列番号２６からなる群から選択される重鎖可変領域、またはこのような軽鎖および重鎖の両方を含むキメラ免疫グロブリンをコードする核酸を含む組換えベクター（または該核酸を含む一対の組換えベクター）である。
【０１１８】
他の実施態様において、組換えベクターは、キメラ軽鎖をコードする核酸を含み、ここで、キメラ軽鎖は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３の可変領域を含む。
【０１１９】
他の実施態様において、組換えベクターは、キメラ重鎖をコードする核酸を含み、ここで、キメラ重鎖は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、または配列番号２６の可変領域を含む。
【０１２０】
特定の実施態様において、本発明の組換えベクターは、哺乳類細胞発現ベクターなどの発現ベクターである。ある実施態様において、ベクターは、プラスミドベクターまたはウイルスベクター（例えば、アデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクター）である。
【０１２１】
また、本発明は、本発明のキメラ免疫グロブリン（キメラ軽鎖およびキメラ重鎖）、キメラ軽鎖、またはキメラ重鎖をコードする１つ以上の核酸（例えば、１つ以上の組換えベクター）を含む宿主細胞にも関する。例えば、いくつかの実施態様において、宿主細胞は、本発明の組換えベクター（例えば、発現ベクター、哺乳類細胞発現ベクター）を含む。
【０１２２】
いくつかの実施態様において、宿主細胞は、キメラ軽鎖およびキメラ重鎖をコードする組換え核酸（または一対の組換え核酸）を含み、ここで、キメラ軽鎖およびキメラ重鎖は互いに会合して、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するキメラ免疫グロブリンを形成し、かつキメラ軽鎖は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される可変領域を含み；ならびに／またはキメラ重鎖は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、および配列番号２６の可変領域からなる群から選択される可変領域を含む。
【０１２３】
いくつかの実施態様において、宿主細胞は、キメラ軽鎖をコードする組換え核酸を含み、ここで、キメラ軽鎖は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される軽鎖可変領域を含む。
【０１２４】
いくつかの実施態様において、宿主細胞は、キメラ重鎖をコードする組換え核酸を含み、ここで、キメラ重鎖は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、および配列番号２６からなる群から選択される重鎖可変領域を含む。
【０１２５】
また、本発明は、キメラ免疫グロブリンの発現に適した条件下で、本発明の宿主細胞（例えば、本発明のキメラ免疫グロブリン（例えば、キメラ軽鎖およびキメラ重鎖）をコードする１つ以上の単離された核酸を含む宿主細胞）を維持し、それによりキメラ免疫グロブリン差が発現しかつキメラ免疫グロブリンが産生されることを含む、キメラ免疫グロブリンを調製する方法にも関する。いくつかの実施態様において、方法はさらに、キメラ免疫グロブリンを精製または単離することを含む。
【０１２６】
また、本発明の宿主細胞（例えば、本発明のキメラ軽鎖をコードする核酸を含む宿主細胞）を、キメラ軽鎖の発現に適した条件下で維持し、それによりキメラ軽鎖が発現しかつキメラ軽鎖が産生されることを含む、キメラ軽鎖を調製する方法にも関する。いくつかの実施態様において、方法はさらに、キメラ軽鎖を精製または単離することを含む。
【０１２７】
また、本発明の宿主細胞（例えば、本発明のキメラ重鎖をコードする核酸を含む宿主細胞）を、キメラ重鎖の発現に適した条件下で維持し、それによりキメラ重鎖が発現しかつキメラ重鎖が産生されることを含む、キメラ重鎖を調製する方法にも関する。いくつかの実施態様において、方法はさらに、キメラ重鎖を精製または単離することを含む。
【０１２８】
また、本発明は、患者試料をインビトロで、本発明のキメラ免疫グロブリンを用いてアッセイすることを含む、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症、狼瘡、血管炎）、癌（例えば、白血病（例えば、慢性リンパ性白血病）、およびリンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫））、ならびに移植（例えば、固形臓器移植（例えば、腎臓移植）および幹細胞移植）からなる群から選択される疾患を診断する方法にも関する。
【０１２９】
本発明の更なる実施態様は、以下の通り説明される。一態様において、本発明は、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで、該抗体の軽鎖および重鎖は、それぞれ配列番号３および１６；それぞれ配列番号４および１７；それぞれ配列番号５および１８；それぞれ配列番号６および１９；それぞれ配列番号７および２０；それぞれ配列番号８および２１；それぞれ配列番号９および２２；それぞれ配列番号１０および２３；それぞれ配列番号１１および２４；それぞれ配列番号１２および２５；それぞれ配列番号１２および１３７；またはそれぞれ配列番号１３および２６において認められる３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施態様において、本発明は、ヒトＣＤ５２において、先のモノクローナル抗体または抗原結合部分と同じエピトープに結合する抗体に関する。いくつかの実施態様において、本発明は、先のモノクローナル抗体または抗原結合部分と競合する抗体に関する。いくつかの実施態様において、本発明は、先のモノクローナル抗体または抗原結合部分と交差競合する抗体に関する。
【０１３０】
いくつかの実施態様において、任意の先の抗体または抗原結合部分は、配列番号１０４を含むアミノ酸配列に結合する。いくつかの関連実施態様において、配列番号１０４に対する該抗体または部分の結合は、配列番号１０４の残基４、７、８、または１１のうちの１つ以上におけるアラニン置換によって低下し得る。
【０１３１】
いくつかの実施態様において、抗体は、ヒト化抗体、マウス抗体、またはキメラ抗体である。ある実施態様において、該抗体の重鎖のフレームワーク領域は、ＶＨ３−７２またはＶＨ３−２３ヒト生殖系列配列を利用し、該抗体の軽鎖のフレームワーク領域は、ＶＫ２  Ａ１８ｂ非と生殖系列配列を利用する。
【０１３２】
いくつかの実施態様において、本発明は、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分に関し、該抗体は、アミノ酸配列が、それぞれ配列番号５１、５９、６９、２９、３６、および４３；それぞれ配列番号５０、６０、６９、２９、３７、および４３；配列番号５０、６１、６８、２９、３８、および４３；それぞれ配列番号５０、６１、６９、２９、３６、および４３；それぞれ配列番号５０、６２、６９、２９、３９、および４３；それぞれ配列番号５２、６１、７０、３０、４０、および４３；それぞれ配列番号５３、６３、７１、３１、３６、および４４；それぞれ配列番号５４、６４、７１、３１、３６、および４５；配列番号５５、６３、７２、３１、３６、および４６；それぞれ配列番号５６、６５、７３、３２、４１、および４７；それぞれ配列番号５６、６５、２９４、３２、４１、および４７；またはそれぞれ配列番号５６、６６、７４、３３、４１、および４８である重鎖（Ｈ）−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、Ｈ−ＣＤＲ３、ならびに軽鎖（Ｌ）−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、およびＬ−ＣＤＲ３を含む。
【０１３３】
いくつかの実施態様において、本発明は、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで、該抗体の軽鎖および重鎖は、それぞれ配列番号３および１６；それぞれ配列番号４および１７；それぞれ配列番号５および１８；それぞれ配列番号６および１９；それぞれ配列番号７および２０；それぞれ配列番号８および２１；それぞれ配列番号９および２２；それぞれ配列番号１０および２３；それぞれ配列番号１１および２４；それぞれ配列番号１２および２５；またはそれぞれ配列番号１３および２６のアミノ酸配列を含む。
【０１３４】
いくつかの実施態様において、本発明は、モノクロなる抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで、該抗体の重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号１０３および１０２；それぞれ配列番号１３６および１３８；それぞれ配列番号１３７および１３８；それぞれ配列番号１３９および１４７；それぞれ配列番号１４９および１５５；それぞれ配列番号１４９および１５６；それぞれ配列番号１５８および１６５；それぞれ配列番号１５８および１６６；それぞれ配列番号１５９および１６５；それぞれ配列番号１５９および１６６；それぞれ配列番号１６１および１６６；またはそれぞれ配列番号１６３および１６６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様において、本発明は、先のモノクローナル抗体または抗原結合部分と、ヒトＣＤ５２における同じエピトープに結合する抗体に関する。いくつかの実施態様において、本発明は、先のモノクローナル抗体または抗原結合部分と競合する抗体に関する。いくつかの実施態様において、本発明は、先のモノクローナル抗体または抗原結合部分と交差競合する抗体に関する。
【０１３５】
ある実施態様において、本発明は、モノクローナルヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで、該抗体の重鎖および軽鎖はそれぞれ、シグナル配列を持たない配列番号２７２および２７３のアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、本発明は、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで、該抗体の重鎖および軽鎖はそれぞれ、シグナル配列をもたない配列番号２７４および２７５のアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、本発明は、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで、該抗体の重鎖および軽鎖はそれぞれ、シグナル配列をもたない配列番号２７６および２７８のアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、本発明は、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで、該抗体の重鎖および軽鎖はそれぞれ、シグナル配列をもたない配列番号２７７および２７８のアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、本発明は、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで、該抗体の重鎖および軽鎖はそれぞれ、シグナル配列をもたない配列番号２７９および２８０のアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、本発明は、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで、該抗体の重鎖および軽鎖はそれぞれ、シグナル配列をもたない配列番号２８１および２８２のアミノ酸配列を含む。また、本発明は、これらのヒト化抗体のうちの１つとＣＤ５２における同じエピトープに結合する抗体、およびこれらのヒト化抗体のうちの１つと競合または交差競合する抗体も提供する。関連実施態様において、本発明は、このような１つのヒト化抗体および医薬として許容しうる担体を含む組成物を提供する。
【０１３６】
いくつかの実施態様において、本発明は、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで、該抗体の軽鎖は、配列番号１０２、１３８、１４５〜１４８、１５３〜１５７、および１６４〜１６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、本発明は、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで、該抗体の軽鎖は、シグナル配列を持たない配列番号２７３、２７５、２７８、２８０、および２８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、本発明は、存在する場合、シグナル配列を持たない配列番号１０２、１３８、１４５〜１４８、１５３〜１５７、１６４〜１６８、２７３、２７５、２７８、２８０、および２８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む抗体軽鎖またはその一部に関する。
【０１３７】
いくつかの実施態様において、本発明は、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで、該抗体の重鎖は、配列番号１０３、１３６、１３７、１３９〜１４４、１４９〜１５２、および１５８〜１６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、本発明は、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで、該抗体の重鎖は、シグナル配列を持たない配列番号２７２、２７４、２７６、２７７、２７９、および２８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、本発明は、存在する場合、シグナル配列を持たない配列番号１０３、１３６、１３７、１３９〜１４４、１４９〜１５２、１５８〜１６３、２７２、２７４、２７６、２７７、２７９、および２８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む抗体重鎖またはその一部に関する。
【０１３８】
いくつかの実施態様において、先の任意の抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ分子であり得る。ある実施態様のいて、該ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である。
【０１３９】
いくつかの実施態様において、先の任意の抗原結合部分は、一本鎖抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’２）２、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、二重特異性一本鎖Ｆｖ二量体、二重特異性抗体、ドメイン欠失抗体、または単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）であり得る。
【０１４０】
また、本発明は、先の任意の抗体または抗原結合部分にも関し、ここで、該抗体または抗原結合部分は、Ｔリンパ球もしくはＢリンパ球もしくはその両方を枯渇させ；Ｂリンパ球と比較してＴリンパ球を優先的に枯渇させ；ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、もしくはＭＣＰ−１の循環血清レベルを（少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、もしくは少なくとも２００％）増大させ；ＣＤ５２発現細胞の抗体依存性細胞仲介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を仲介し；ＣＤ５２発現細胞の補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を仲介し；アレムツズマブに対するヒト患者における中和抗体の存在にも関わらず、ヒトＣＤ５２に結合し；ならびに／またはヒトＴ細胞および／もしくはＢ細胞における細胞内シグナル伝達を促進する（例えば、Ｈｅｄｅｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２：５０５−６１６  （２０００）；Ｗａｔａｎａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２０：  ２４７−２５９  （２００６）参照）。
【０１４１】
本発明はさらに、先の任意の抗体の重鎖もしくはその抗原結合部分、または軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする単離された核酸に関する。いくつかの実施態様において、該単離された核酸は、配列番号２８３、２８５、２８７、２８８、２９０、および２９２からなる群から選択された重鎖ヌクレオチド配列、もしくはシグナルペプチドをコードする配列を持たない該ヌクレオチド配列；配列番号２８４、２８６、２８９、２９１、および２９３からなる群から選択される軽鎖ヌクレオチド配列、もしくはシグナルペプチドをコードする配列を持たない該ヌクレオチド配列；または該重鎖ヌクレオチド配列および該軽鎖ヌクレオチド配列の両方を含む。ある実施態様において、該単離された核酸は、両方ともシグナルペプチドをコードする配列を持たない、それぞれ配列番号２８３および配列番号２８４；両方ともシグナルペプチドをコードする配列を持たない、それぞれ配列番号２８５および配列番号２８６；両方ともシグナルペプチドをコードする配列を持たない、それぞれ配列番号２８７および配列番号２８９；両方ともシグナルペプチドをコードする配列を持たない、それぞれ配列番号２８８および配列番号２８９；両方ともシグナルペプチドをコードする配列を持たない、それぞれ配列番号２９０および配列番号２９１；両方ともシグナルペプチドをコードする配列を持たない、それぞれ配列番号２９２および配列番号２９３からなる群から選択される重鎖ヌクレオチド配列および軽鎖ヌクレオチド配列を含む。
【０１４２】
また、本発明は、治療を必要とする患者を治療するための医薬の製造のための重鎖ヌクレオチド配列を含む単離された核酸および軽鎖ヌクレオチド配列を含む単離された核酸の使用にも関し、ここで、該重鎖ヌクレオチド配列および軽鎖ヌクレオチド配列は、両方ともシグナルペプチドをコードする配列を持たない、それぞれ配列番号２８３および配列番号２８４；両方ともシグナルペプチドをコードする配列を持たない、それぞれ配列番号２８５および配列番号２８６；両方ともシグナルペプチドをコードする配列を持たない、それぞれ配列番号２８７および配列番号２８９；両方ともシグナルペプチドをコードする配列を持たない、それぞれ配列番号２８８および配列番号２８９；両方ともシグナルペプチドをコードする配列を持たない、それぞれ配列番号２９０および配列番号２９１；ならびに両方ともシグナルペプチドをコードする配列を持たない、それぞれ配列番号２９２および配列番号２９３からなる群から選択される。
【０１４３】
また、本発明は、先の任意の抗体の、（１）重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列；（２）軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列、または（３）その両方を含む組換えベクターにも関する。本発明はさらに、先の任意の抗体の重鎖もしくはその抗原結合部分をコードし、発現制御要素に作用可能に連結された第一の核酸配列、および該抗体の軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードし、発現制御要素に作用可能に連結された第二の核酸配列を含む宿主細胞に関する。本発明は、抗ヒトＣＤ５２抗体もしくはその抗原結合部分を作製する方法に関し、該宿主細胞を、該抗体もしくは部分の発現に適した条件下で維持することを含み、また、該抗体もしくは部分を単離する工程をさらに含む該方法にも関する。
【０１４４】
本発明は、請求項１〜２４のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合部分および医薬として許容し得るビヒクルもしくは担体を含む組成物に関する。
【０１４５】
いくつかの実施態様において、本発明は、治療を必要とする患者に、先の任意の抗体または抗原結合部分、または先の組成物の有効量を投与することを含む、該患者を治療するための方法に関する。ある実施態様において、該患者は、移植を受けているところである。
【０１４６】
いくつかの実施態様において、本発明は、治療を必要とする患者に、先の任意の抗体または抗原結合部分または先の組成物の有効量を投与することを含む、該患者における自己免疫疾患を治療するための方法に関する。ある実施態様において、自己免疫疾患は、多発性硬化症、関節リウマチ、または全身性エリテマトーデスである。
【０１４７】
いくつかの実施態様において、本発明は、治療を必要とする患者に、先の任意の抗体または抗原結合部分または先の組成物の有効量を投与することを含む、該患者における癌を治療するための方法に関する。ある実施態様において、癌は、例えば、非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫；Ｂ細胞慢性リンパ性白血病などの白血病；Ｔ細胞悪性腫瘍（ここでは抗体または部分は、Ｂ細胞と比較してＴ細胞を優先的に枯渇させる。）；または固形腫瘍である。
【０１４８】
いくつかの実施態様において、先の任意の治療方法は、患者に、好中球またはＮＫ細胞刺激薬を投与することをさらに含む。ある実施態様において、該薬剤は、Ｇ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦである。いくつかの実施態様において、先の任意の治療方法はさらに、患者に、制御性Ｔ細胞刺激薬を投与することを含む。ある実施態様において、該薬はラパマイシンである。
【０１４９】
いくつかの実施態様において、本発明は、先の任意の抗体または抗原結合部分の有効量を、血管新生を阻害することを必要とする患者に投与することを含む、該患者において血管新生を阻害するための方法に関する。ある実施態様において、患者は、固形腫瘍を有する。ある実施態様において、患者は、新血管新生を有する。ある実施態様において、該新血管新生は眼においてである。
【０１５０】
また、本発明は、治療を必要とする患者における自己免疫疾患を治療するための医薬の製造のための先の任意の抗体または抗原結合部分の使用にも関する。さらに、本発明は、治療を必要とする患者における癌を治療するための医薬の製造のための先の任意の抗体または抗原結合部分の使用に関する。本発明は、移植の必要のある患者を治療するための医薬の製造のための先の任意の抗体または抗原結合部分の使用に関する。
【０１５１】
また、本発明は、医薬としての先の任意の抗体または抗原結合部分の使用にも関する。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体の軽鎖および重鎖が、以下において認められる３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、該抗体またはその抗原結合部分
ａ）それぞれ配列番号３および１６；
ｂ）それぞれ配列番号４および１７；
ｃ）それぞれ配列番号５および１８；
ｄ）それぞれ配列番号６および１９；
ｅ）それぞれ配列番号７および２０；
ｆ）それぞれ配列番号８および２１；
ｇ）それぞれ配列番号９および２２；
ｈ）それぞれ配列番号１０および２３；
ｉ）それぞれ配列番号１１および２４；
ｊ）それぞれ配列番号１２および２５；
ｋ）それぞれ配列番号１２および１３７；または
ｌ）それぞれ配列番号１３および２６。
（項目２）
ヒトＣＤ５２上で項目１に記載のモノクローナル抗体または抗原結合部分と同じエピトープに結合する、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体、またはその抗原結合部分。
（項目３）
項目１に記載のモノクローナル抗体または抗原結合部分と競合しまたは交差競合する、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体、またはその抗原結合部分。
（項目４）
前記抗体が、ヒト化抗体、マウス抗体、またはキメラ抗体である、項目１、２、または３に記載のモノクローナル抗体または抗原結合部分。
（項目５）
前記重鎖のフレームワーク領域が、ＶＨ３〜７２またはＶＨ３〜２３のヒト生殖系列配列を利用し、かつ前記軽鎖のフレームワーク領域が、ＶＫ２  Ａ１８ｂヒト生殖系列配列を利用する、項目１に記載のモノクローナル抗体または抗原結合部分。
（項目６）
前記抗体が、重鎖（Ｈ）−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、Ｈ−ＣＤＲ３、および軽鎖（Ｌ）−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、およびＬ−ＣＤＲ３を含み、これらのアミノ酸配列が以下である、項目１に記載のモノクローナル抗体または抗原結合部分：
ａ）それぞれ配列番号５１、５９、６９、２９、３６、および４３；
ｂ）それぞれ配列番号５０、６０、６９、２９、３７、および４３；
ｃ）それぞれ配列番号５０、６１、６８、２９、３８、および４３；
ｄ）それぞれ配列番号５０、６１、６９、２９、３６、および４３；
ｅ）それぞれ配列番号５０、６２、６９、２９、３９、および４３；
ｆ）それぞれ配列番号５２、６１、７０、３０、４０、および４３；
ｇ）それぞれ配列番号５３、６３、７１、３１、３６、および４４；
ｈ）それぞれ配列番号５４、６４、７１、３１、３６、および４５；
ｉ）それぞれ配列番号５５、６３、７２、３１、３６、および４６；
ｊ）それぞれ配列番号５６、６５、７３、３２、４１、および４７；
ｋ）それぞれ配列番号５６、６５、２９４、３２、４１、および４７；または
ｌ）それぞれ配列番号５６、６６、７４、３３、４１、および４８。
（項目７）
該抗体の軽鎖および重鎖が、以下のアミノ酸配列を含む、項目１に記載のモノクローナル抗体または抗原結合部分：
ａ）それぞれ配列番号３および１６；
ｂ）それぞれ配列番号４および１７；
ｃ）それぞれ配列番号５および１８；
ｄ）それぞれ配列番号６および１９；
ｅ）それぞれ配列番号７および２０；
ｆ）それぞれ配列番号８および２１；
ｇ）それぞれ配列番号９および２２；
ｈ）それぞれ配列番号１０および２３；
ｉ）それぞれ配列番号１１および２４；
ｊ）それぞれ配列番号１２および２５；または
ｋ）それぞれ配列番号１３および２６。
（項目８）
該重鎖および軽鎖が、以下のアミノ酸配列を含む、項目１に記載のモノクローナル抗体または抗原結合部分
ａ）それぞれ配列番号１０３および１０２；
ｂ）それぞれ配列番号１３６および１３８；
ｃ）それぞれ配列番号１３７および１３８；
ｄ）それぞれ配列番号１３９および１４７；
ｅ）それぞれ配列番号１４９および１５５；
ｆ）それぞれ配列番号１４９および１５６；
ｇ）それぞれ配列番号１５８および１６５；
ｈ）それぞれ配列番号１５８および１６６；
ｉ）それぞれ配列番号１５９および１６５；
ｊ）それぞれ配列番号１５９および１６６；
ｋ）それぞれ配列番号１６１および１６６；または
ｌ）それぞれ配列番号１６３および１６６。
（項目９）
モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体の重鎖および軽鎖が、シグナル配列なしで、配列番号２７２および２７３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分。
（項目１０）
モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体の重鎖および軽鎖が、シグナル配列なしで、配列番号２７４および２７５のアミノ酸配列をそれぞれ含む、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分。
（項目１１）
モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体の重鎖および軽鎖が、シグナル配列なしで、配列番号２７６および２７８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分。
（項目１２）
モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体の重鎖および軽鎖が、シグナル配列なしで、配列番号２７７および２７８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分。
（項目１３）
モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体の重鎖および軽鎖が、シグナル配列なしで、配列番号２７９および２８０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分。
（項目１４）
モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体の重鎖および軽鎖が、シグナル配列なしで、配列番号２８１および２８２のアミノ酸配列をそれぞれ含む、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分。
（項目１５）
モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体の軽鎖が、配列番号１０２、１３８、１４５〜１４８、１５３〜１５７、および１６４〜１６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分。
（項目１６）
モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体の軽鎖が、シグナル配列なしで、配列番号２７３、２７５、２７８、２８０、および２８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分。
（項目１７）
存在する場合、シグナル配列なしで、配列番号１０２、１３８、１４５〜１４８、１５３〜１５７、１６４〜１６８、２７３、２７５、２７８、２８０、および２８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、抗体軽鎖またはその一部。
（項目１８）
モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体の重鎖が、配列番号１０３、１３６、１３７、１３９〜１４４、１４９〜１５２、および１５８〜１６３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分。
（項目１９）
モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分であって、該抗体の重鎖が、シグナル配列なしで、配列番号２７２、２７４、２７６、２７７、２７９、および２８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分。
（項目２０）
存在する場合、シグナル配列なしで、配列番号１０３、１３６、１３７、１３９〜１４４、１４９〜１５２、１５８〜１６３、２７２、２７４、２７６、２７７、２７９、および２８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、抗体重鎖またはその一部。
（項目２１）
該抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４分子である、項目１〜８、１５、１６、および１８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
（項目２２）
該部分が、一本鎖抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、二重特異性一本鎖Ｆｖ二量体、二重特異性抗体、ドメイン欠失抗体、または単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）である、項目１〜１６、１８、および１９のいずれか一項に記載の抗原結合部分。
（項目２３）
該抗体または部分が、配列番号１０４を含むアミノ酸配列に結合し、かつ任意に、配列番号１０４に対する該抗体または部分の結合が、配列番号１０４の残基４、７、８、および１１のうちの１つ以上におけるアラニン置換によって低下する、項目１、２、または３に記載のモノクローナル抗体または抗原結合部分。
（項目２４）
該抗体または抗原結合部分が、以下からなる群から選択される１つ以上の特性を有する、項目１〜１６、１８、および１９のいずれかに記載のモノクローナル抗体または抗原結合部分：
ａ）Ｔリンパ球もしくはＢリンパ球またはその両方を枯渇させる；
ｂ）Ｂリンパ球と比較してＴリンパ球を優先的に枯渇させる；
ｃ）ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６、またはＭＣＰ−１の循環血清レベルを増加させる；
ｄ）ＣＤ５２発現細胞の抗体依存性細胞仲介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を仲介する；
ｅ）ＣＤ５２発現細胞の補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を仲介する；
ｆ）アレムツズマブに対する中和抗体の存在下でヒトＣＤ５２に結合する；および
ｇ）ヒトＴリンパ球もしくはＢリンパ球またはその両方における細胞内シグナル伝達を促進する。
（項目２５）
項目１〜１６、１８、および１９のいずれか一項に記載の抗体の重鎖もしくはその抗原結合部分、または軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする単離された核酸。
（項目２６）
該単離された核酸が以下を含む、項目２５に記載の単離された核酸：
ａ）配列番号２８３、２８５、２８７、２８８、２９０、および２９２からなる群から選択される重鎖ヌクレオチド配列、もしくはシグナルペプチドをコードする配列のない該ヌクレオチド配列；
ｂ）配列番号２８４、２８６、２８９、２９１、および２９３からなる群から選択される軽鎖ヌクレオチド配列、もしくはシグナルペプチドをコードする配列のない該ヌクレオチド配列；または
ｃ）ａ）およびｂ）の両方のヌクレオチド配列。
（項目２７）
該単離された核酸が、以下からなる群から選択される重鎖ヌクレオチド配列および軽鎖ヌクレオチド配列を含む、項目２６に記載の単離された核酸：
ａ）両方ともシグナルペプチドをコードする配列のない、配列番号２８３および配列番号２８４のそれぞれ；
ｂ）両方ともシグナルペプチドをコードする配列のない、配列番号２８５および配列番号２８６のそれぞれ；
ｃ）両方ともシグナルペプチドをコードする配列のない、配列番号２８７および配列番号２８９のそれぞれ；
ｄ）両方ともシグナルペプチドをコードする配列のない、配列番号２８８および配列番号２８９のそれぞれ；
ｅ）両方ともシグナルペプチドをコードする配列のない、配列番号２９０および配列番号２９１のそれぞれ；
ｆ）両方ともシグナルペプチドをコードする配列のない、配列番号２９２および配列番号２９３のそれぞれ。
（項目２８）
治療することを必要とする患者を治療するための医薬の製造のための、重鎖ヌクレオチド配列を含む単離された核酸および軽鎖ヌクレオチド配列を含む単離された核酸の、使用であって、該重鎖ヌクレオチド配列および軽鎖ヌクレオチド配列は、以下からなる群から選択される、該使用：
ａ）シグナルペプチドをコードする配列を両方とも持たない、配列番号２８３および配列番号２８４のそれぞれ；
ｂ）シグナルペプチドをコードする配列を両方とも持たない、配列番号２８５および配列番号２８６のそれぞれ；
ｃ）シグナルペプチドをコードする配列を両方とも持たない、配列番号２８７および配列番号２８９のそれぞれ；
ｄ）シグナルペプチドをコードする配列を両方とも持たない、配列番号２８８および配列番号２８９のそれぞれ；
ｅ）シグナルペプチドをコードする配列を両方とも持たない、配列番号２９０および配列番号２９１のそれぞれ；
ｆ）シグナルペプチドをコードする配列を両方とも持たない、配列番号２９２および配列番号２９３のそれぞれ。  
（項目２９）
項目１〜１６、１８、および１９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体の、（１）該重鎖部分もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列、（２）軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列、または（３）その両方、を含む組換えベクター。
（項目３０）
項目１〜１６、１８、および１９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体の重鎖またはその抗原結合部分をコードし、発現制御要素に作用可能に連結された第一の核酸配列と、該モノクローナル抗体の軽鎖またはその抗原結合部分をコードし、発現制御要素に作用可能に連結された第二の核酸配列とを含む、宿主細胞。
（項目３１）
抗ヒトＣＤ５２抗体またはその抗原結合部分を作製する方法であって、前記抗体または部分の発現に適した条件下で、項目３０に記載の宿主細胞を維持することを含む、方法。（項目３２）
前記抗体または部分を単離することをさらに含む、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
項目１〜１６、１８、１９、および２１〜２４のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分と、医薬として許容されるビヒクルもしくは担体とを含む、組成物。
（項目３４）
項目１〜１６、１８、１９、および２１〜２４のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合部分または項目３３に記載の組成物の有効量を患者に投与することを含む、治療することを必要とする該患者を治療するための方法。
（項目３５）
前記患者が、移植を受けている、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
項目１〜１６、１８、１９、および２１〜２４のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、または項目３３に記載の組成物の有効量を患者に投与することを含む、自己免疫疾患を治療することを必要とする該患者において自己免疫疾患を治療するための方法。
（項目３７）
該自己免疫疾患が、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、または血管炎である、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
項目１〜１６、１８、１９、および２１〜２４のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分または項目３３に記載の組成物の有効量を患者に投与することを含む、癌を治療することを必要とする前記患者において癌を治療するための方法。
（項目３９）
該癌が、白血病である、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
該癌が、リンパ腫である、項目３８に記載の方法。
（項目４１）
該癌が、Ｔ細胞悪性腫瘍であり、かつ前記抗体または部分が、Ｂ細胞と比較してＴ細胞を優先的に枯渇させる、項目３８に記載の方法。
（項目４２）
該癌が、固形腫瘍である、項目３８に記載の方法。
（項目４３）
前記患者に好中球またはＮＫ細胞刺激薬を投与することをさらに含む、項目３４、３６、または３８に記載の方法。
（項目４４）
前記薬剤が、Ｇ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦである、項目４２に記載の方法。
（項目４５）
前記患者に制御性Ｔ細胞刺激薬を投与することをさらに含む、項目３４、３６、または３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４６）
前記薬剤が、ラパマイシンである、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
項目１〜１６、１８、１９、および２１〜２４のいずれか一項に記載の有効量のモノクローナル抗体または部分を患者に投与することを含む、血管新生を阻害することを必要とする該患者において血管新生を阻害する方法。
（項目４８）
前記患者が固形腫瘍を有する、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記患者が、新血管新生を有する、項目４７に記載の方法。
（項目５０）
自己免疫疾患を治療することを必要とする患者において自己免疫疾患を治療するための医薬の製造のための、項目１〜１６、１８、１９、および２１〜２４のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合部分の使用。
（項目５１）
癌を治療することを必要とする患者における癌を治療するための医薬の製造のための、項目１〜１６、１８、１９、および２１〜２４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分の使用。
（項目５２）
移植を必要とする患者を治療するための医薬の製造のための、項目１〜１６、１８、１９、および２１〜２４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分の使用。
（項目５３）
新血管新生を治療することを必要とする患者において新血管新生を治療するための医薬の製造のための、項目１〜１６、１８、１９、および２１〜２４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分の使用。
（項目５４）
項目１〜１６、１８、１９、および２１〜２４のいずれか一項に記載の抗体または一部の、医薬としての使用。
【図面の簡単な説明】
【０１５２】
【図１】図１Ａ〜１Ｂは、新たな抗ＣＤ５２モノクローナル抗体の開発の模式図である。一般的なスキームは、図１Ａに図示されており、マウス抗ヒトＣＤ５２抗体クローンおよびそのアイソタイプの名称が、図１Ｂに示されている。
【図２】図２は、いくつかのマウス抗ヒトＣＤ５２κ軽鎖配列（配列番号１〜１３）のアミノ酸配列の整列である。キャンパス−１Ｇは、ラットモノクローナル抗体であり、そこからヒト化キャンパス−１Ｈ抗体が由来する。
【図３】図３は、いくつかのマウス抗ヒトＣＤ５２重鎖配列（配列番号１４〜２６）のアミノ酸配列の整列である。
【図４】図４は、野生型ＣＤ５２および１０の変異体ＣＤ５２タンパク質（配列番号１０４〜１１４、上から下へ）の整列である。
【図５−Ａ】図５Ａは、ＣＤ５２アラニン走査変異体を発現する細胞における抗体４Ｂ１０および７Ｆ１１のＦＡＣＳベースのＮ末端結合特性を示す。
【図５−Ｂ】図５Ｂは、ＣＤ５２アラニン走査変異体を発現する細胞における抗体ＣＦ１Ｄ１２、３Ｇ７、９Ｄ９、５Ｆ７、４Ｇ７、および１１Ｃ１１のＦＡＣＳベースの中間領域結合特性を示す。
【図５−Ｃ】図５Ｃは、ＣＤ５２アラニン走査変異体を発現する細胞における抗体キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス１Ｈ」）、２Ｃ３、１２Ｇ６、および２３Ｅ６のＦＡＣＳベースの結合特性を示す。
【図５−Ｄ】図５Ｄは、キメラモノクローナル抗体のパネルを用いてプローブづけしたＣＤ５２＋／−Ｎ連結型グリコシル化のイムノブロットを示す。
【図６】図６は、ＣＨＯ−Ｋ１  ＣＤ５２  ＃６７細胞においてスクリーニングされた種々のキメラ抗ＣＤ５２抗体における１．５時間のＣＤＣアッセイの結果を示すグラフである。結果は、キメラ抗体４Ｂ１０および７Ｆ１１が、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス１Ｈ」）に匹敵しまたはそれよりも良好であることを示す。
【図７】図７は、ＣＨＯ−Ｋ１  ＣＤ５２  ＃６７細胞においてスクリーニングされたＣＤ５２に対する種々のキメラＩｇＧ１抗体における１４時間ＡＤＣＣアッセイの結果を示すグラフである。結果は、キメラ抗体２Ｃ３および１２Ｇ６が、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス１−Ｈ」）に匹敵しまたはそれよりも良好であることを示す。
【図８−Ａ】図８Ａ〜８Ｃは、規定されたヒトリンパ球集団に対する種々の抗ＣＤ５２抗体およびキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「Ｃ−１Ｈ」）抗体の比較結合を示す。これらの図は、ＦＡＣＳアッセイによってスクリーニングされたキメラ抗体の結合能力の階層性を示す。はるかに右への曲線は、最高結合能を示し、左への曲線はより低い親和性で結合する。
【図８−Ｂ】図８Ａ〜８Ｃは、規定されたヒトリンパ球集団に対する種々の抗ＣＤ５２抗体およびキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「Ｃ−１Ｈ」）抗体の比較結合を示す。これらの図は、ＦＡＣＳアッセイによってスクリーニングされたキメラ抗体の結合能力の階層性を示す。はるかに右への曲線は、最高結合能を示し、左への曲線はより低い親和性で結合する。
【図８−Ｃ】図８Ａ〜８Ｃは、規定されたヒトリンパ球集団に対する種々の抗ＣＤ５２抗体およびキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「Ｃ−１Ｈ」）抗体の比較結合を示す。これらの図は、ＦＡＣＳアッセイによってスクリーニングされたキメラ抗体の結合能力の階層性を示す。はるかに右への曲線は、最高結合能を示し、左への曲線はより低い親和性で結合する。
【図９】図９Ａ〜９Ｃは、キメラ抗体７Ｆ１１、８Ｇ３、２３Ｅ６、１２Ｇ６、４Ｂ１０、もしくは５Ｆ７、またはキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「Ｃａｍ」）を用いた投与７２時間後の血液中のＣＤ４  Ｔ細胞（図９Ａ）、ＣＤ８  Ｔ細胞（図９Ｂ）、およびＣＤ１９Ｂ細胞（図９Ｃ）のレベルを示す図である。
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｃは、キメラ抗体７Ｆ１１、８Ｇ３、２３Ｅ６、１２Ｇ６、４Ｂ１０、もしくは５Ｆ７、またはキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「Ｃａｍ」）を用いた投与７２時間後の脾臓におけるＣＤ４  Ｔ細胞（図１０Ａ）、ＣＤ８  Ｔ細胞（図１０Ｂ）、およびＣＤ１９  Ｂ細胞（図１０Ｃ）のレベルを示すグラフである。
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｃは、キメラ抗体２Ｃ３、９Ｄ９、４Ｂ１０、３Ｇ７、もしくは１１Ｃ１１、またはキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「Ｃａｍ」）を用いた投与７２時間後の血液中のＣＤ４  Ｔ細胞（図１１Ａ）、ＣＤ８  Ｔ細胞（図１１Ｂ）、およびＣＤ１９  Ｂ細胞（図１１Ｃ）のレベルを示すグラフである。
【図１２】図１２は、７Ｆ１１、４Ｂ１０、もしくは１２Ｇ６キメラモノクローナル抗体、またはキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）を用いた処置後の生存マウスのパーセントを示すＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ生存グラフである。
【図１３】図１３は、２Ｃ３、８Ｇ３、もしくは２３Ｅ６キメラモノクローナル抗体、またはキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」」を用いた処置後の生存マウスのパーセントを示すＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ生存グラフである。
【図１４】図１４は、９Ｄ９もしくは４Ｂ１０キメラモノクローナル抗体、またはキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）を用いた処置後の生存マウスのパーセントを示すＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ生存グラフである。
【図１５】図１５は、２Ｃ３もしくは１１Ｃ１１キメラモノクローナル抗体、またはキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）を用いた処置後の生存マウスのパーセントを示すＫａｐｋａｎ  Ｍｅｉｅｒ生存グラフである。
【図１６】図１６は、マウス抗ヒトＣＤ５２抗体４Ｂ１０重鎖可変領域（配列番号９６）配列と、最も近く符合したヒト生殖系列配列（配列番号９７）およびヒト化重鎖可変領域配列（配列番号９８）との整列である。また、マウス抗ヒトＣＤ５２抗体４Ｂ１０軽鎖可変領域（配列番号９９）と、最も近く符合したヒト生殖系列配列（配列番号１００）およびヒト化軽鎖可変領域配列（配列番号１０１）との整列も示されている。
【図１７】図１７は、ヒト化４Ｂ１０重鎖（配列番号１０３）および軽鎖（配列番号１０２）可変領域配列を示す。
【図１８】図１８は、ヒト化抗体４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０−ヒト化」）およびキメラ抗体４Ｂ１０が、ＣＤ５２を発現する細胞と同等に結合することを示すグラフである。
【図１９】図１９は、ヒト化抗体４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０ヒト化」）およびキメラ抗体４Ｂ１０が、ＣＤ５２を発現する細胞において同等のＡＤＣＣ活性を仲介することを示すグラフである。
【図２０】図２０は、ヒト化抗体４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０−ヒト化」）およびキメラ抗体４Ｂ１０が、ＣＤ５２を発現する細胞において同等のＣＤＣ活性を仲介することを示すグラフである。
【図２１】図２１は、ヘテロ接合性ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおけるキメラ抗ＣＤ５２抗体（１２Ｇ６、７Ｆ１１、および４Ｂ１０）、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、およびヒト化抗ＣＤ５２抗体４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０ヒト化（Ｈ１／Ｋ１）」）の薬物動態特性を示すグラフである。
【図２２】図２２Ａ−２２Ｃは、キメラ抗体４Ｂ１０またはヒト化抗体４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０−Ｈｕ」）またはキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）を用いた投与７２時間後の血液中のＣＤ４  Ｔ細胞（図２２Ａ）、ＣＤ８  Ｔ細胞（図２２Ｂ）、およびＣＤ１９  Ｂ細胞（図２２Ｃ）のレベルを示すグラフである。
【図２３】図２３は、抗ＣＤ５２モノクローナル抗体の相対的な結合親和性の要約を示すグラフである。
【図２４】図２４は、ヒト化７Ｆ１１重鎖および軽鎖（κ鎖）可変領域配列を示す。マウス残基に変異し戻したアミノ酸残基に下線を付し、ＣＤＲを太字で示す。
【図２５】図２５は、キメラ抗体およびヒト化７Ｆ１１抗体が、ＣＤ５２を発現する細胞に同等に結合することを示すヒストグラムである。Ｘ軸は、結合した抗ＣＤ５２抗体によって発光した蛍光を表し、各ピークの面積は、総細胞集団を表す。
【図２６−Ａ】図２６Ａは、ヒト化２Ｃ３重鎖可変領域配列を示す。マウス残基に変異し戻したアミノ酸残基に下線を付し、ＣＤＲを太字で示す。
【図２６−Ｂ】図２６Ｂは、ヒト化２Ｃ３軽鎖（κ鎖）可変領域配列を示す。マウス残基に変異し戻したアミノ酸残基に下線を付し、ＣＤＲを太字で示す。
【図２７】図２７Ａは、ＣＤ５２を発現する細胞に対するヒト化抗体およびキメラ２Ｃ３抗体の結合を示すヒストグラムである。Ｘ軸は、結合した抗ＣＤ５２抗体によって発光した蛍光を表し、各ピークの面積は、総細胞集団を表す。図２７Ｂは、キメラ抗体およびヒト化２Ｃ３抗体のサブセットが、ＣＤ５２を発現する細胞と同等に結合することを示すヒストグラムである。Ｘ軸は、結合した抗ＣＤ５２抗体によって発光した蛍光を表し、各ピークの面積は、総細胞集団を表す。
【図２８−Ａ】図２８Ａは、ヒト化１２Ｇ６重鎖可変領域配列を示す。マウス残基に変異し戻したアミノ酸残基に下線を付し、ＣＤＲを太字で示す。
【図２８−Ｂ】図２８Ｂは、ヒト化１２Ｇ６軽鎖（κ鎖）可変領域配列を示す。マウス残基に変異し戻したアミノ酸残基に下線を付し、ＣＤＲを太字で示す。
【図２９】図２９は、キメラ抗体およびヒト化１２Ｇ６抗体のサブセットが、ＣＤ５２を発現する細胞に同等に結合することを示すヒストグラムである。Ｘ軸は、結合した抗ＣＤ５２抗体によって発光した蛍光を表し、各ピークの面積は、総細胞集団を表す。
【図３０−Ａ】図３０Ａは、ヒト化９Ｄ９重鎖可変領域配列を示す。マウス残基に変異し戻したアミノ酸残基に下線を付し、ＣＤＲを太字で示す。
【図３０−Ｂ】図３０Ｂは、ヒト化９Ｄ９軽鎖（カッパ鎖）可変領域配列を示す。マウス残基に変異し戻したアミノ酸残基に下線を付し、ＣＤＲを太字で示す。
【図３１】図３１は、キメラ抗体およびヒト化９Ｄ９抗体のサブセットが、Ｄ５２を発現する細胞に同等に結合することを示すヒストグラムである。Ｘ軸は、結合した抗ＣＤ５２抗体によって発光した蛍光を表し、各ピークの面積は、総細胞集団を表す。
【図３２−Ａ】図３２Ａは、初代ヒトＴ細胞およびｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスＴ細胞に対するキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「Ｃ１Ｈ」）、キメラ２Ｃ３抗体、およびヒト化２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２の結合曲線を示す。
【図３２−Ｂ】図３２Ｂは、初代ヒトＴ細胞およびｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスＴ細胞に対するキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「Ｃ１Ｈ」）、キメラ９Ｄ９抗体、およびヒト化９Ｄ９抗体の結合曲線を示す。
【図３２−Ｃ】図３２Ｃは、初代ヒトＴ細胞およびｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスＴ細胞に対するキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「Ｃ１Ｈ」）、キメラ１２Ｇ６抗体、およびヒト化１２Ｇ６抗体の結合曲線を示す。
【図３３】図３３は、ｈｕＣＤ５２を発現するヒトおよびトランスジェニックマウスＴ細胞に対するキャンパス−１Ｈ（登録商標）、キメラ２Ｃ３および１２Ｇ６抗体、ならびにヒト化２Ｃ３および１２Ｇ６抗体の相対的な結合効率性を示す表である。
【図３４】図３４は、フローサイトメトリーによるヒト末梢血単核細胞集団の規定されたサブセットに対するヒト化抗ＣＤ５２キャンパス−１Ｈ（登録商標）、２Ｃ３、１２Ｇ６、および９Ｄ９抗体の比較結合パターンを示す。これらのヒストグラムは、ヒト化抗ＣＤ５２抗体の結合が、ＣＤ５２を発現する種々のヒトＰＢＭＣサブセットについてのキャンパス−１Ｈ（登録商標）のものと同等であることを示す。Ｘ軸は、結合した抗ＣＤ５２抗体によって発光した蛍光を表し、各ピークの面積は、総細胞集団を表す。
【図３５】図３５は、キメラ抗体およびヒト化７Ｆ１１抗体が、ＣＤ５２を発現する細胞における同等のＡＤＣＣ活性を仲介することを示すグラフである。
【図３６】図３６は、キメラ抗体およびヒト化７Ｆ１１抗体が、ＣＤ５２を発現する細胞におけるＣＤＣ活性を仲介することを示すグラフである。
【図３７】図３７は、キメラ抗体およびヒト化２Ｃ３抗体が、ＣＤ５２を発現する細胞におけるＡＤＣＣ活性を仲介することを示すグラフである。
【図３８】図３８は、キメラ抗体およびヒト化２Ｃ３抗体が、ＣＤ５２を発現する細胞におけるＣＤＣ活性を仲介することを示すグラフである。
【図３９】図３９は、キメラ抗体およびヒト化１２Ｇ６抗体が、ＣＤ５２を発現する細胞におけるＡＤＣＣ活性を仲介することを示すグラフである。
【図４０】図４０は、キメラ抗体およびヒト化１２Ｇ６抗体が、ＣＤ５２を発現する細胞におけるＣＤＣ活性を仲介することを示すグラフである。
【図４１】図４１は、キメラ抗体およびヒト化９Ｄ９抗体が、ＣＤ５２を発現する細胞におけるＡＤＣＣ活性を仲介することを示すグラフである。
【図４２】図４２は、キメラ抗体およびヒト化９Ｄ９抗体が、ＣＤ５２を発現する細胞におけるＣＤＣ活性を仲介することを示すグラフである。
【図４３】図４３は、初代Ｔ細胞におけるヒト化抗ＣＤ５２抗体のＡＤＣＣ活性を示すグラフである。
【図４４】図４４は、初代Ｔ細胞におけるヒト化抗ＣＤ５２抗体のＣＤＣ活性を示すグラフである。
【図４５】図４５は、抗キャンパス−１Ｈ（登録商標）中和抗体を含むＣＡＭＭＳ２２３研究ヒト血清試料を用いた、キャンパス−１Ｈの中和を示すが、他の抗ＣＤ５２抗体の中和を示さないグラフである。血清試料を、１２ヶ月目（Ｍ１２）および１３ヶ月目（Ｍ１３）における代表的な患者（ＭＳ−１）から採取した。
【図４６−Ａ】図４６Ａ〜４６Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、および好中球のレベルを示す。
【図４６−Ｂ】図４６Ａ〜４６Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、および好中球のレベルを示す。
【図４６−Ｃ】図４６Ａ〜４６Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、および好中球のレベルを示す。
【図４６−Ｄ】図４６Ａ〜４６Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、および好中球のレベルを示す。
【図４６−Ｅ】図４６Ａ〜４６Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、および好中球のレベルを示す。
【図４７−Ａ】図４７Ａ〜４７Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、好中球、およびマクロファージのレベルを示す。
【図４７−Ｂ】図４７Ａ〜４７Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、好中球、およびマクロファージのレベルを示す。
【図４７−Ｃ】図４７Ａ〜４７Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、好中球、およびマクロファージのレベルを示す。
【図４７−Ｄ】図４７Ａ〜４７Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、好中球、およびマクロファージのレベルを示す。
【図４７−Ｅ】図４７Ａ〜４７Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、好中球、およびマクロファージのレベルを示す。
【図４８】図４８Ａ〜４８Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体の投与２時間後の循環サイトカインのレベルを示す。
【図４９】図４９Ａおよび４９Ｂは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体を用いた投与後の経時的な循環リンパ球の再増殖を示す（ｍｇ／ｋｇ）。
【図５０−Ａ】図５０Ａ〜５０Ｅは、ヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ１」）および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ２」）抗体による投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５０−Ｂ】図５０Ａ〜５０Ｅは、ヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ１」）および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ２」）抗体による投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５０−Ｃ】図５０Ａ〜５０Ｅは、ヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ１」）および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ２」）抗体による投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５０−Ｄ】図５０Ａ〜５０Ｅは、ヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ１」）および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ２」）抗体による投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５０−Ｅ】図５０Ａ〜５０Ｅは、ヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ１」）および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ２」）抗体による投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５１−Ａ】図５１Ａ〜５１Ｅは、ヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ１」）および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ２」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５１−Ｂ】図５１Ａ〜５１Ｅは、ヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ１」）および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ２」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５１−Ｃ】図５１Ａ〜５１Ｅは、ヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ１」）および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ２」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５１−Ｄ】図５１Ａ〜５１Ｅは、ヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ１」）および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ２」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５１−Ｅ】図５１Ａ〜５１Ｅは、ヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ１」）および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ２」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５２】図５２Ａ〜５２Ｆは、ヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ１」）および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ２」）抗体を用いた投与の２時間後の循環サイトカインのレベルを示す。
【図５３】図５３Ａおよび５３Ｂは、ヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ１」）および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ２」）抗体（ｍｇ／ｋｇ）を用いた投与後の経時的な循環リンパ球の再増殖を示す（ｍｇ／ｋｇ）。
【図５４】図５４Ａおよび５４Ｂは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、７Ｆ１１−キメラ抗体、およびヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞のレベルを示す。
【図５５】図５５は、投与後の経時的な血液中のキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、７Ｆ１１−キメラ抗体、およびヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２抗体のレベルを示す。
【図５６−Ａ】図５６Ａ〜５６Ｅは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５６−Ｂ】図５６Ａ〜５６Ｅは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５６−Ｃ】図５６Ａ〜５６Ｅは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５６−Ｄ】図５６Ａ〜５６Ｅは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５６−Ｅ】図５６Ａ〜５６Ｅは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５７−Ａ】図５７Ａ〜５７Ｅは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｌ１２抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５７−Ｂ】図５７Ａ〜５７Ｅは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｌ１２抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５７−Ｃ】図５７Ａ〜５７Ｅは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｌ１２抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５７−Ｄ】図５７Ａ〜５７Ｅは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｌ１２抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５７−Ｅ】図５７Ａ〜５７Ｅは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｌ１２抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および好中球のレベルを示す。
【図５８】図５８Ａ〜５８Ｆは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）抗体を用いた投与の２時間後の循環サイトカインのレベルを示す。
【図５９】図５９は、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与後の経時的な循環リンパ球の再増殖を示す（ｍｇ／ｋｇ）。
【図６０−Ａ】図６０Ａ〜６０Ｅは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、マクロファージ、および好中球のレベルを示す。
【図６０−Ｂ】図６０Ａ〜６０Ｅは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、マクロファージ、および好中球のレベルを示す。
【図６０−Ｃ】図６０Ａ〜６０Ｅは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、マクロファージ、および好中球のレベルを示す。
【図６０−Ｄ】図６０Ａ〜６０Ｅは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、マクロファージ、および好中球のレベルを示す。
【図６０−Ｅ】図６０Ａ〜６０Ｅは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、マクロファージ、および好中球のレベルを示す。
【図６１−Ａ】図６１Ａ〜６１Ｅは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球のレベルを示す。
【図６１−Ｂ】図６１Ａ〜６１Ｅは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球のレベルを示す。
【図６１−Ｃ】図６１Ａ〜６１Ｅは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球のレベルを示す。
【図６１−Ｄ】図６１Ａ〜６１Ｅは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球のレベルを示す。
【図６１−Ｅ】図６１Ａ〜６１Ｅは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球のレベルを示す。
【図６２】図６２Ａ〜６２Ｆは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６  ｈｕ」）抗体を用いた投与の２時間後の循環サイトカインのレベルを示す。
【図６３】図６３は、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体を用いた投与後の経時的な循環リンパ球の再増殖を示す（ｍｇ／ｋｇ）。
【図６４】図６４Ａ〜６４Ｃは、投与後の経時的な血液中の２Ｃ３−キメラ、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−キメラ、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、９Ｄ９−キメラ、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２抗体のレベルを示す。
【図６５−Ａ】図６５Ａ〜６５Ｅは、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、マクロファージ、および好中球のレベルを示す。
【図６５−Ｂ】図６５Ａ〜６５Ｅは、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、マクロファージ、および好中球のレベルを示す。
【図６５−Ｃ】図６５Ａ〜６５Ｅは、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、マクロファージ、および好中球のレベルを示す。
【図６５−Ｄ】図６５Ａ〜６５Ｅは、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、マクロファージ、および好中球のレベルを示す。
【図６５−Ｅ】図６５Ａ〜６５Ｅは、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、マクロファージ、および好中球のレベルを示す。
【図６６−Ａ】図６６Ａ〜６６Ｅは、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、好中球、およびマクロファージのレベルを示す。
【図６６−Ｂ】図６６Ａ〜６６Ｅは、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、好中球、およびマクロファージのレベルを示す。
【図６６−Ｃ】図６６Ａ〜６６Ｅは、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、好中球、およびマクロファージのレベルを示す。
【図６６−Ｄ】図６６Ａ〜６６Ｅは、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、好中球、およびマクロファージのレベルを示す。
【図６６−Ｅ】図６６Ａ〜６６Ｅは、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、骨髄系細胞、好中球、およびマクロファージのレベルを示す。
【図６７】図６７Ａ〜６７Ｆは、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の２時間後の循環サイトカインのレベルを示す。
【図６８】図６８は、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与後の経時的な循環リンパ球の再増殖を示す（ｍｇ／ｋｇ）。
【図６９−Ａ】図６９Ａ〜６９Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）。２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６」）、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ細胞）、ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ細胞サブタイプのレベルを示す。
【図６９−Ｂ】図６９Ａ〜６９Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）。２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６」）、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ細胞）、ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ細胞サブタイプのレベルを示す。
【図６９−Ｃ】図６９Ａ〜６９Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）。２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６」）、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ細胞）、ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ細胞サブタイプのレベルを示す。
【図６９−Ｄ】図６９Ａ〜６９Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）。２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６」）、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ細胞）、ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ細胞サブタイプのレベルを示す。
【図７０−Ａ】図７０Ａ〜７０Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６」）、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ細胞）ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ細胞サブタイプのレベルを示す。
【図７０−Ｂ】図７０Ａ〜７０Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６」）、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ細胞）ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ細胞サブタイプのレベルを示す。
【図７０−Ｃ】図７０Ａ〜７０Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６」）、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ細胞）ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ細胞サブタイプのレベルを示す。
【図７０−Ｄ】図７０Ａ〜７０Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６」）、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ細胞）ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ細胞サブタイプのレベルを示す。
【図７１】図７１Ａ〜７１Ｆは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２抗体を用いた投与の２時間後の循環サイトカインのレベルを示す。
【図７２】図７２は、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２および９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ細胞のレベルを示す。
【図７３】図７３は、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２および９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ細胞のレベルを示す。
【図７４−Ａ】図７４Ａ〜７４Ｄは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６  Ｋ１１」）、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「１２Ｇ６  Ｋ１２」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図７４−Ｂ】図７４Ａ〜７４Ｄは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６  Ｋ１１」）、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「１２Ｇ６  Ｋ１２」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図７４−Ｃ】図７４Ａ〜７４Ｄは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６  Ｋ１１」）、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「１２Ｇ６  Ｋ１２」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図７４−Ｄ】図７４Ａ〜７４Ｄは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６  Ｋ１１」）、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「１２Ｇ６  Ｋ１２」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図７５−Ａ】図７５Ａ〜７５Ｄは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６  Ｋ１１」）および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「１２Ｇ６  Ｋ１２」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図７５−Ｂ】図７５Ａ〜７５Ｄは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６  Ｋ１１」）および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「１２Ｇ６  Ｋ１２」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図７５−Ｃ】図７５Ａ〜７５Ｄは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６  Ｋ１１」）および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「１２Ｇ６  Ｋ１２」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図７５−Ｄ】図７５Ａ〜７５Ｄは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６  Ｋ１１」）および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「１２Ｇ６  Ｋ１２」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図７６】図７６は、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｈ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）のレベルを示す。
【図７７−Ａ】図７７Ａ〜７７Ｄは、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図７７−Ｂ】図７７Ａ〜７７Ｄは、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図７７−Ｃ】図７７Ａ〜７７Ｄは、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図７７−Ｄ】図７７Ａ〜７７Ｄは、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図７８】図７８は、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）のレベルを示す。
【図７９−Ａ】図７９Ａ〜７９Ｄは、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２，９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のサブタイプのレベルを示す。
【図７９−Ｂ】図７９Ａ〜７９Ｄは、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２，９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のサブタイプのレベルを示す。
【図７９−Ｃ】図７９Ａ〜７９Ｄは、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２，９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のサブタイプのレベルを示す。
【図７９−Ｄ】図７９Ａ〜７９Ｄは、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２，９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のサブタイプのレベルを示す。
【図８０】図８０Ａ〜８０Ｆは、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を投与した２時間後の循環サイトカインのレベルを示す。
【図８１】図８１Ａおよび８１Ｂは、投与後の経時的な血液中の２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体のレベルを示す。
【図８２−Ａ】図８２〜８２Ｆは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、または９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与後の４８時間の経時的な血液中のサイトカインのレベルを示す。
【図８２−Ｂ】図８２〜８２Ｆは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、または９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与後の４８時間の経時的な血液中のサイトカインのレベルを示す。
【図８２−Ｃ】図８２〜８２Ｆは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、または９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与後の４８時間の経時的な血液中のサイトカインのレベルを示す。
【図８２−Ｄ】図８２〜８２Ｆは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、または９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与後の４８時間の経時的な血液中のサイトカインのレベルを示す。
【図８２−Ｅ】図８２〜８２Ｆは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、または９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与後の４８時間の経時的な血液中のサイトカインのレベルを示す。
【図８２−Ｆ】図８２〜８２Ｆは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、または９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与後の４８時間の経時的な血液中のサイトカインのレベルを示す。
【図８３−Ａ】図８３Ａ〜８３Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、または９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図８３−Ｂ】図８３Ａ〜８３Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、または９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図８３−Ｃ】図８３Ａ〜８３Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、または９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図８３−Ｄ】図８３Ａ〜８３Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、または９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図８３−Ｅ】図８３Ａ〜８３Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、または９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【図８４−Ａ】図８４Ａ〜８４Ｇは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与後の経時的な循環するＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、およびマクロファージの再増殖を示す。
【図８４−Ｂ】図８４Ａ〜８４Ｇは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与後の経時的な循環するＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、およびマクロファージの再増殖を示す。
【図８４−Ｃ】図８４Ａ〜８４Ｇは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与後の経時的な循環するＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、およびマクロファージの再増殖を示す。
【図８４−Ｄ】図８４Ａ〜８４Ｇは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与後の経時的な循環するＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、およびマクロファージの再増殖を示す。
【図８４−Ｅ】図８４Ａ〜８４Ｇは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与後の経時的な循環するＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、およびマクロファージの再増殖を示す。
【図８４−Ｆ】図８４Ａ〜８４Ｇは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与後の経時的な循環するＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、およびマクロファージの再増殖を示す。
【図８４−Ｇ】図８４Ａ〜８４Ｇは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与後の経時的な循環するＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、およびマクロファージの再増殖を示す。
【図８５】図８５は、脾臓におけるｈｕＣＤ５２リンパ球細胞集団を特異的に結合するＦＩＴＣ標識したキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３  Ｋ１２」）、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６  Ｋ１１」）、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「１２Ｇ６  Ｋ１２」）、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３（「９Ｄ９  Ｈ１６」）、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３（「９Ｄ９  Ｈ１８」）抗体の能力を示す。
【図８６−Ａ】図８６Ａ〜８６Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３を用いた投与の７２時間後の血液中におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のサブタイプのレベルを示す。
【図８６−Ｂ】図８６Ａ〜８６Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３を用いた投与の７２時間後の血液中におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のサブタイプのレベルを示す。
【図８６−Ｃ】図８６Ａ〜８６Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３を用いた投与の７２時間後の血液中におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のサブタイプのレベルを示す。
【図８６−Ｄ】図８６Ａ〜８６Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３を用いた投与の７２時間後の血液中におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のサブタイプのレベルを示す。
【図８６−Ｅ】図８６Ａ〜８６Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３を用いた投与の７２時間後の血液中におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のサブタイプのレベルを示す。
【図８７−Ａ】図８７Ａ〜８７Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のサブタイプのレベルを示す。
【図８７−Ｂ】図８７Ａ〜８７Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のサブタイプのレベルを示す。
【図８７−Ｃ】図８７Ａ〜８７Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のサブタイプのレベルを示す。
【図８７−Ｄ】図８７Ａ〜８７Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のサブタイプのレベルを示す。
【図８７−Ｅ】図８７Ａ〜８７Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のサブタイプのレベルを示す。
【図８８】図８８Ａ〜８８Ｆは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３を用いた投与の２時間後の循環サイトカインのレベルを示す。
【図８９−Ａ】図８９Ａ〜８９Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞の細胞タイプのレベルを示す。
【図８９−Ｂ】図８９Ａ〜８９Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞の細胞タイプのレベルを示す。
【図８９−Ｃ】図８９Ａ〜８９Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞の細胞タイプのレベルを示す。
【図８９−Ｄ】図８９Ａ〜８９Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞の細胞タイプのレベルを示す。
【図９０−Ａ】図９０Ａ〜９０Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞の細胞タイプのレベルを示す。
【図９０−Ｂ】図９０Ａ〜９０Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞の細胞タイプのレベルを示す。
【図９０−Ｃ】図９０Ａ〜９０Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞の細胞タイプのレベルを示す。
【図９０−Ｄ】図９０Ａ〜９０Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞の細胞タイプのレベルを示す。
【図９１−Ａ】図９１Ａ〜９１Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後のリンパ節におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞の細胞タイプのレベルを示す。
【図９１−Ｂ】図９１Ａ〜９１Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後のリンパ節におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞の細胞タイプのレベルを示す。
【図９１−Ｃ】図９１Ａ〜９１Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後のリンパ節におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞の細胞タイプのレベルを示す。
【図９１−Ｄ】図９１Ａ〜９１Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後のリンパ節におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞の細胞タイプのレベルを示す。
【図９２】図９２Ａは、ｈｕＣＤ５２−ＫＩ／ＫＯおよび非トランスジェニック対照マウスにおけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞のサブタイプにおけるｈｕＣＤ５２発現レベルを示す。図９２Ｂは、ｈｕＣＤ５２−ＫＩ／ＫＯおよびｈｕＣＤ５２  ＣＤ１トランスジェニックマウスにおけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ細胞におけるｈｕＣＤ５２発現レベルを示す。
【図９３】図９３は、キャンパス−１Ｈ（登録商標）対照と比較した種々の生成物源（「小規模」および「大規模」）からの１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体のｈｕＣＤ５２に対する結合を示す。
【図９４】図９４は、種々の生成物源（「小規模」および「大規模」）からの１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ細胞）のレベルを示す。
【図９５】図９５は、投与後の時間経過にわたる血液中の２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体のレベルを示す。
【図９６】図９６は、疾患の進行の時間経過にわたる２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２の実験的自己免疫性脳脊髄炎臨床スコアを示す。
【図９７−Ａ】図９７Ａおよび９７Ｂは、マウスおよびヒトＦｃＲｎ分子に結合するキャンパス１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、Ｈｉｓ４３５Ａｌａ  ２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「Ｈ４３５Ａ  ２Ｃ３」）、およびＨｉｓ３１０Ａｌａ／Ｈｉｓ４３５Ｇｌｎ  ２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「Ｈ３１０Ａ／Ｈ４３５Ｑ  ２Ｃ３」）の能力を示す。
【図９７−Ｂ】図９７Ａおよび９７Ｂは、マウスおよびヒトＦｃＲｎ分子に結合するキャンパス１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、Ｈｉｓ４３５Ａｌａ  ２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「Ｈ４３５Ａ  ２Ｃ３」）、およびＨｉｓ３１０Ａｌａ／Ｈｉｓ４３５Ｇｌｎ  ２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「Ｈ３１０Ａ／Ｈ４３５Ｑ  ２Ｃ３」）の能力を示す。
【図９８】図９８は、非トランスジェニックマウスにおける２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３未修飾」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾した１（「２Ｃ３−Ｆｃ変異体１」）および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾した２（「２Ｃ３−Ｆｃ変異体２」）のインビボでのクリアランスを示す。
【図９９】図９９は、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（２Ｃ３）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾した１（２Ｃ３−Ｆｃ変異体１）および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾した２（２Ｃ３−Ｆｃ変異体２）のインビボでのクリアランスを示す。
【図１００】図１００Ａおよび１００Ｂは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾した１（「２Ｃ３Ｆｃ変異体−１」）、および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾した２（「２Ｃ３Ｆｃ変異体−２」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液および脾臓におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ細胞）のレベルを示す。
【図１０１】図１０１Ａおよび１０１Ｂは、ヒト化１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体およびアラニン走査によって生じた変異体ペプチドのエピトープ特異性を決定するためのビアコアＴ１００アッセイの代表的なセンサーグラムである。図１０１Ａは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２とＭＵＴ  ８ペプチドの間に結合がないことを示すのに対し、図１０１Ｂは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２およびＭＵＴ  ９ペプチドの間の結合を示す。
【図１０２】図１０２は、ドナーＢＭＳ４８６についてのＴＣＲ  Ｖβ分析を示す。キャンパス−１Ｈ（登録商標）ペプチド群９８６〜９８９を用いて養われたＣＤ４＋  Ｔ細胞は、単一のＶβ（Ｖβ３）の優先的な拡張を呈した。
【図１０３】図１０３は、ドナーＢＭＳ９２８についてのＴＣＲ  Ｖβ分析を示す。１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２ペプチド群１０６６−６７−６８および１０８３−８４−８５を用いて養われたＣＤ４＋  Ｔ細胞は、単一のＶβ（Ｖβ２０）の優先的な拡張を呈した。
【図１０４−Ａ】図１０４Ａ〜１０４Ｊは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）免疫原性評価を示す。増殖応答を、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分において示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。Ｔ細胞の各群を、養っている抗原／ペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。
【図１０４−Ｂ】図１０４Ａ〜１０４Ｊは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）免疫原性評価を示す。増殖応答を、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分において示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。Ｔ細胞の各群を、養っている抗原／ペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。
【図１０４−Ｃ】図１０４Ａ〜１０４Ｊは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）免疫原性評価を示す。増殖応答を、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分において示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。Ｔ細胞の各群を、養っている抗原／ペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。
【図１０４−Ｄ】図１０４Ａ〜１０４Ｊは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）免疫原性評価を示す。増殖応答を、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分において示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。Ｔ細胞の各群を、養っている抗原／ペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。
【図１０４−Ｅ】図１０４Ａ〜１０４Ｊは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）免疫原性評価を示す。増殖応答を、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分において示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。Ｔ細胞の各群を、養っている抗原／ペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。
【図１０４−Ｆ】図１０４Ａ〜１０４Ｊは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）免疫原性評価を示す。増殖応答を、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分において示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。Ｔ細胞の各群を、養っている抗原／ペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。
【図１０４−Ｇ】図１０４Ａ〜１０４Ｊは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）免疫原性評価を示す。増殖応答を、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分において示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。Ｔ細胞の各群を、養っている抗原／ペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。
【図１０４−Ｈ】図１０４Ａ〜１０４Ｊは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）免疫原性評価を示す。増殖応答を、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分において示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。Ｔ細胞の各群を、養っている抗原／ペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。
【図１０４−Ｉ】図１０４Ａ〜１０４Ｊは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）免疫原性評価を示す。増殖応答を、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分において示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。Ｔ細胞の各群を、養っている抗原／ペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。
【図１０４−Ｊ】図１０４Ａ〜１０４Ｊは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）免疫原性評価を示す。増殖応答を、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分において示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。Ｔ細胞の各群を、養っている抗原／ペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。
【図１０５−Ａ】図１０５Ａ〜１０５Ｊは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２免疫原性評価を示す。増殖応答は、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分で示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。各群のＴ細胞を、養っているペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。培地対照を用いずにアッセイした群において、左のバー（白色）は、養っているペプチドで刺激したＤＣを表し、右側のバー（ストライプ）は、無関連のペプチドで刺激したＤＣを表す。
【図１０５−Ｂ】図１０５Ａ〜１０５Ｊは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２免疫原性評価を示す。増殖応答は、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分で示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。各群のＴ細胞を、養っているペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。培地対照を用いずにアッセイした群において、左のバー（白色）は、養っているペプチドで刺激したＤＣを表し、右側のバー（ストライプ）は、無関連のペプチドで刺激したＤＣを表す。
【図１０５−Ｃ】図１０５Ａ〜１０５Ｊは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２免疫原性評価を示す。増殖応答は、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分で示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。各群のＴ細胞を、養っているペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。培地対照を用いずにアッセイした群において、左のバー（白色）は、養っているペプチドで刺激したＤＣを表し、右側のバー（ストライプ）は、無関連のペプチドで刺激したＤＣを表す。
【図１０５−Ｄ】図１０５Ａ〜１０５Ｊは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２免疫原性評価を示す。増殖応答は、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分で示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。各群のＴ細胞を、養っているペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。培地対照を用いずにアッセイした群において、左のバー（白色）は、養っているペプチドで刺激したＤＣを表し、右側のバー（ストライプ）は、無関連のペプチドで刺激したＤＣを表す。
【図１０５−Ｅ】図１０５Ａ〜１０５Ｊは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２免疫原性評価を示す。増殖応答は、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分で示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。各群のＴ細胞を、養っているペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。培地対照を用いずにアッセイした群において、左のバー（白色）は、養っているペプチドで刺激したＤＣを表し、右側のバー（ストライプ）は、無関連のペプチドで刺激したＤＣを表す。
【図１０５−Ｆ】図１０５Ａ〜１０５Ｊは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２免疫原性評価を示す。増殖応答は、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分で示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。各群のＴ細胞を、養っているペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。培地対照を用いずにアッセイした群において、左のバー（白色）は、養っているペプチドで刺激したＤＣを表し、右側のバー（ストライプ）は、無関連のペプチドで刺激したＤＣを表す。
【図１０５−Ｇ】図１０５Ａ〜１０５Ｊは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２免疫原性評価を示す。増殖応答は、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分で示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。各群のＴ細胞を、養っているペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。培地対照を用いずにアッセイした群において、左のバー（白色）は、養っているペプチドで刺激したＤＣを表し、右側のバー（ストライプ）は、無関連のペプチドで刺激したＤＣを表す。
【図１０５−Ｈ】図１０５Ａ〜１０５Ｊは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２免疫原性評価を示す。増殖応答は、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分で示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。各群のＴ細胞を、養っているペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。培地対照を用いずにアッセイした群において、左のバー（白色）は、養っているペプチドで刺激したＤＣを表し、右側のバー（ストライプ）は、無関連のペプチドで刺激したＤＣを表す。
【図１０５−Ｉ】図１０５Ａ〜１０５Ｊは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２免疫原性評価を示す。増殖応答は、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分で示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。各群のＴ細胞を、養っているペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。培地対照を用いずにアッセイした群において、左のバー（白色）は、養っているペプチドで刺激したＤＣを表し、右側のバー（ストライプ）は、無関連のペプチドで刺激したＤＣを表す。
【図１０５−Ｊ】図１０５Ａ〜１０５Ｊは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２免疫原性評価を示す。増殖応答は、個々のドナーＡ〜Ｊについてのカウント毎分で示す。Ｘ軸は、自家性ＣＤ４＋  Ｔ細胞を３回刺激するために用いられるペプチドの群を図示する。各群のＴ細胞を、養っているペプチド群（特異的応答、左のバー、白色）、無関連なＤＲ結合ペプチド（中間のバー、ストライプ）、または培地（右側のバー、黒色）で刺激した自家性ＤＣを用いて三つ組でアッセイした。培地対照を用いずにアッセイした群において、左のバー（白色）は、養っているペプチドで刺激したＤＣを表し、右側のバー（ストライプ）は、無関連のペプチドで刺激したＤＣを表す。
【図１０６】図１０６は、２Ｃ３−ＳＦＤ１（配列番号２７２）の全長ヒト化重鎖アミノ酸配列、および２Ｃ３−Ｋ１２の全長ヒト化軽鎖アミノ酸配列（配列番号２７３）を示す。シグナル配列は、太字かつイタリック体であり、ＣＤＲは下線を付せられている。
【図１０７】図１０７は、７Ｆ１１−ＳＦＤ１の全長ヒト化重鎖アミノ酸配列（配列番号２７４）、および７Ｆ１１−Ｋ２の全長ヒト化軽鎖アミノ酸配列（配列番号２７５）を示す。シグナル配列は、太字かつイタリック体であり、ＣＤＲは下線を付せられている。
【図１０８】図１０８は、９Ｄ９−Ｈ１６（配列番号２７６）および９Ｄ９−Ｈ１８（配列番号２７７）の全長ヒト化重鎖アミノ酸配列、ならびに９Ｄ９−Ｋ１３の全長ヒト化軽鎖アミノ酸配列（配列番号２７８）を示す。シグナル配列は、太字かつイタリック体であり、ＣＤＲは下線を付せられている。
【図１０９】図１０９は、１２Ｇ６−ＳＦＤ１（配列番号２７９）の全長ヒト化重鎖アミノ酸配列、ならびに１２Ｇ６−Ｋ１２の全長ヒト化軽鎖アミノ酸配列（配列番号２８０）を示す。シグナル配列は、太字かつイタリック体であり、ＣＤＲは下線を付せられている。
【図１１０】図１１０は、４Ｂ１０−Ｈ１（配列番号２８１）の全長ヒト化重鎖アミノ酸配列および４Ｂ１０−Ｋ１（配列番号２８２）の全長ヒト化軽鎖アミノ酸配列を示す。シグナル配列は、太字かつイタリック体であり、ＣＤＲは下線を付せられている。
【図１１１】図１１１は、２Ｃ３−ＳＦＤ１（配列番号２８３）の全長ヒト化重鎖核酸配列および２Ｃ３−Ｋ１２（配列番号２８４）の全長ヒト化軽鎖核酸配列を示す。シグナル配列は下線を付せられており、可変ドメインは太字で、定常領域はイタリック体である。
【図１１２】図１１２は、７Ｆ１１−ＳＦＤ１（配列番号２８５）の全長ヒト化重鎖核酸配列および７Ｆ１１−Ｋ２（配列番号２８６）の全長ヒト化軽鎖核酸配列を示す。シグナル配列は下線を付せられており、可変ドメインは太字で、定常領域はイタリック体である。
【図１１３】図１１３は、９Ｄ９−Ｈ１６（配列番号２８７）および９Ｄ９−Ｈ１８（配列番号２８８）の全長ヒト化重鎖核酸配列を示す。シグナル配列は下線を付せられており、可変ドメインは太字で、定常領域はイタリック体である。
【図１１４】図１１４は、９Ｄ９−Ｋ１３（配列番号２８９）の全長ヒト化軽鎖核酸配列を示す。シグナル配列は下線を付せられており、可変ドメインは太字で、定常領域はイタリック体である。
【図１１５】図１１５は、１２Ｇ６−ＳＦＤ１（配列番号２９０）の全長ヒト化重鎖核酸配列および１２Ｇ６−Ｋ１２（配列番号２９１）の全長ヒト化軽鎖核酸配列を示す。シグナル配列は下線を付せられており、可変ドメインは太字で、定常領域はイタリック体である。
【図１１６】図１１６は、４Ｂ１０−Ｈ１（配列番号２９２）の全長ヒト化重鎖核酸配列、および４Ｂ１０−Ｋ１（配列番号２９３）の全長ヒト化軽鎖核酸配列を示す。シグナル配列は下線を付せられており、可変ドメインは太字で、定常領域はイタリック体である。
【発明を実施するための形態】
【０１５３】
ＣＤ５２は、ヒト末梢血リンパ球および単球／マクロファージすべての少なくとも９５％に存在するグリコシル化した、ＧＰＩで固定された細胞表面に豊富なタンパク質（細胞あたりおよそ５×１０５抗体結合部位）であるが、造血幹細胞由来のものはない。本発明は、ヒトＣＤ５２もしくはその一部に対する結合特異性を有するかまたはヒトＣＤ５２もしくはその一部に対する結合に対して選択的である免疫グロブリン（抗ＣＤ５２）に関する。抗ＣＤ５２免疫グロブリンとＣＤ５２の間の特異的結合は、例えば、ＣＤ５２＋細胞に対する免疫グロブリンの結合のＥＣ５０をフローサイトメトリーによって測定することによって決定することができる。特異的結合は、例えば０．５〜１０μｇ／ｍＬのＥＣ５０範囲によって示すことができる。本明細書に説明される免疫グロブリンは、ヒトＣＤ５２の全部または一部に対する結合特異性を有することができ、ここで、ヒトＣＤ５２は、単離されたおよび／または組換えヒトＣＤ５２であり、あるいはヒトＣＤ５２を発現する細胞の表面上にある。加えて、免疫グロブリンは、ヒトＣＤ５２の１つ以上の形態（例えば、グリコシル化したヒトＣＤ５２；脱グリコシル化したヒトＣＤ５２；グリコシル化していないヒトＣＤ５２；および対立遺伝子変異形）に対する結合特異性を有することができる。一実施態様において、免疫グロブリンは、天然の、内在性の、または野生型ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有する。野生型ヒトＣＤ５２のアミノ酸配列は、図４に示されている（配列番号１０４）。
【０１５４】
本明細書に説明される免疫グロブリンは、公知の技術を用いて精製または単離することができる。「精製」または「単離」された免疫グロブリンは、それらの起源（例えば、細胞の上清；ライブラリーにおける免疫グロブリンの混合物などにおける混合物における）の分子（例えば、ペプチド）から離れて分離されており、本明細書に説明される方法または他の好適な方法によって得られた免疫グロブリンを含む。単離された免疫グロブリンには、実質的に純粋な（本質的に純粋な）免疫グロブリン、ならびに、化学合成、組換え技術、およびこれらの組み合わせによって生成される免疫グロブリンを含む。
【０１５５】
より具体的には、本発明は、抗ヒトＣＤ５２免疫グロブリン、免疫グロブリンの抗原結合断片（すなわち部分）、免疫グロブリンの軽鎖、免疫グロブリンの重鎖、およびこれらの軽鎖または重鎖の断片に関する。また、本発明は、グリコシル化した免疫グロブリンなど、成熟免疫グロブリンまたはその鎖にも関する。また、本発明は、未成熟なまたは前駆体免疫グロブリン（タンパク質）にも関する。また、本発明は、これらの未成熟または成熟タンパク質の両方をコードする核酸分子（例えば、ベクター）、このような核酸を含むベクターおよび宿主細胞、未成熟および成熟タンパク質を生成する方法、ならびに免疫グロブリンを用いる方法にも関する。
【０１５６】
本発明の免疫グロブリンを使用して、該免疫グロブリンを必要とする対象（例えば、ヒト患者）を治療して、対象のリンパ球および他のＣＤ５２＋細胞（例えば、ＣＤ５２＋癌細胞）を必要とされるように枯渇させることができる。本明細書で使用する場合、「リンパ球枯渇」とは、循環しているリンパ球、例えば、Ｔ細胞および／またはＢ細胞の集団を減少させて、結果的にリンパ球減少症を生じることによる一種の免疫抑制である。また、本発明の免疫グロブリンを使用して、下記にさらに説明されるように血管新生を阻害することもできる。また、本発明の免疫グロブリンを使用して、例えば、エクスビボでの応用において造血幹細胞を濃縮することができる（例えば、Ｌｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １：１９  （２００８）参照）。
【０１５７】
天然の免疫グロブリンは、２つの同一の軽鎖（約２４ｋＤ）および２つの同一の重鎖（約５５または７０ｋＤ）が四量体を形成する共通の中心構造を有する。各鎖のアミノ末端部分は、可変（Ｖ）領域として公知であり、各鎖の残りのより保存された定常（Ｃ）領域から区別することができる。軽鎖の可変領域（ＶＬドメインとも呼ばれる。）内には、Ｊ領域としても知られるＣ末端部分がある。重鎖の可変領域（ＶＨドメインとも呼ばれる。）内には、Ｊ領域に加えてＤ領域がある。免疫グロブリンにおけるアミノ酸配列変動のほとんどは、超可変領域または抗原結合に直接関与する相補性決定領域（ＣＤＲ）として知られるＶ領域における３つの個別の位置に限局される。アミノ末端から始めて、これらの領域はそれぞれ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３と命名される。ＣＤＲは、より保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）によってしかるべきところに保持される。アミノ末端から始めて、これらの領域はそれぞれ、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４と命名される。ＣＤＲおよびＦＲ領域の位置ならびに番号付け体系は、Ｋａｂａｔら（Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  Ｕ．Ｓ．  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ  （１９９１），  Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ，  Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ
ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  １９６，  ９０１−９１７  （１９８７））、およびＩＭＧＴ（登録商標）番号付け体系（Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  Ｉｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｓｙｓｔｅｍ(R)，  Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．−Ｐ．，  Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ  ７，  
１３２−１３６  （１９９９））によって定義されている。視覚的検査および配列分析は、ＣＤＲ境界を特定するために実施することができる。本発明のために、ＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔ体系およびＩＭＧＴ体系の両方を用いることによって定義され；すなわち、２つの体系によって定義されたＣＤＲが完全に重ならない場合、本発明者らは、両体系によって定義された配列からの残基をすべて含む。
【０１５８】
ヒト免疫グロブリンは、重鎖のアイソタイプに応じて、クラスおよびサブクラスへと分けることができる。クラスには、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含み、ここで、重鎖はそれぞれ、ガンマ（γ）、ミュー（μ）、アルファ（α）、デルタ（δ）、またはイプシロン（ε）タイプである。サブクラスには、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２を含み、ここで、重鎖はそれぞれ、γ１、γ２、γ３、γ４、α１、およびα２のタイプである。選択されたクラスまたはサブクラスのヒト免疫グロブリン分子は、カッパ（κ）またはラムダ（λ）のいずれかの軽鎖を含み得る。例えば、Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｗｏｎｓｉｅｗｉｃｚ，  Ｍ．Ｊ．，  Ｅｄ．，  Ｃｈａｐｔｅｒ  ４５，  ｐｐ．
４１−５０，  Ｗ．  Ｂ．  Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  ＰＡ  ９１９９１）；Ｎｉｓｏｎｏｆｆ，  Ａ．，  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  ２ｎｄ  Ｅｄ．，  Ｃｈａｐｔｅｒ
４，  ｐｐ．  ４５−６５，  Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，  Ｉｎｃ．，
Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，  ＭＡ  （１９８４）を参照されたい。
【０１５９】
本明細書で使用する場合、「免疫グロブリン」および「抗体」という用語は、相互交換可能に使用され、全抗体および抗原結合断片（すなわち、「抗原結合部分」であり、２つの用語は、別段の記載がない限り、本明細書で相互交換可能に使用される）を指す。抗体の抗原結合断片は、例えば一本鎖抗体、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、二重特異性一本鎖Ｆｖ二量体（ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９６６５）、二重特異性抗体、ドメイン欠失抗体、および単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）の形式であることができる。例えば、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２２（９）：１１６１−１１６５  （２００４）を参照されたい。また、ＶＨおよび／またはＶＬを含む抗原結合分子も本発明内である。また、ＶＨの場合、分子は、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域のうちの１つ以上も含み得る。また、このような一本鎖抗体は、抗体の「抗原結合部分」という用語の中に包含されるよう意図される。
【０１６０】
抗体部分または断片は、酵素切断によってまたは組換え技術によって作製することができる。例えば、パパインまたはペプシン切断を用いて、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２断片をそれぞれ作製することができる。また、抗体は、天然終止部位の上流に１つ以上の終止コドンが導入された抗体遺伝子を用いて、種々の切り詰められた形態で作製することもできる。例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片の重鎖をコードする組換えコンストラクトを設計して、重鎖のＣＨ１ドメインおよびヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含めることができる。好ましい抗原結合断片は、野生型ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有する。
【０１６１】
別の態様において、本発明は、本明細書に説明された抗体またはその部分の変異形を提供し、ここで、該変異形は、ヒトＣＤ５２に特異的に結合するが、（例えば、ＣＤＲ領域、ＦＲ領域、または定常ドメインにおける）１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のアミノ酸置換によって基準抗体またはその部分とは異なる。例えば、変異形抗体は、重鎖、重鎖可変ドメイン、軽鎖、または軽鎖可変ドメインにおける基準抗体と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または少なくとも９９％同一である。
【０１６２】
ポリペプチドに対する配列類似性または同一性は、配列同一性とも呼ばれるが、配列分析ソフトウェアを用いて典型的に測定される。タンパク質分析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む種々の置換、欠失、および他の修飾に割り当てられた類似性の基準を用いて類似の配列を符合させる。例えば、ＧＣＧは、異なる種の生物由来のまたは野生型タンパク質とその変異タンパク質の間の相同的ポリペプチドなど、密接に関連したポリペプチド間の配列相同性または配列同一性を決定するために、デフォルトパラメータとともに使用することのできる「Ｇａｐ」および「Ｂｅｓｔｆｉｔ」などのプログラムを含む。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。また、ポリペプチド配列は、デフォルトまたは推奨されるパラメータを用いて、ＧＣＧバージョン６．１中のプログラムであるＦＡＳＴＡを用いても比較することができる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、質問配列と検索配列の間の最良の重複の領域の整列およびパーセント配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １８３：６３−９８  （１９９０）；Ｐｅａｒｓｏｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．
１３２：１８５−２１９  （２０００））。本発明の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含むデータベースと比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴであり、特にデフォルトパラメータを用いるｂｌａｓｔｐまたはｔｂｌａｓｔｎである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５：４０３−４１０  （１９９０）；Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：３３８９−４０２  （１９９７）を参照されたく；それらは引用により本明細書に組み込まれる。
【０１６３】
本発明によると、実施され得る１種類のアミノ酸置換は、抗体における１つ以上のシステイン（化学的に反応性であり得る。）をアラニンもしくはセリンなど（限定するものではない。）の別の残基に変化させることである。一実施態様において、非標準システインの置換がある。置換は、抗体の可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域において、または定常ドメインにおいて実施することができる。いくつかの実施態様において、システインは標準である。実施され得る別の種類のアミノ酸置換は、抗体における可能性のあるタンパク質分解性部位を除去することである。このような部位は、抗体の可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域において、または定常ドメインにおいて生じ得る。システイン残基の置換およびタンパク質分解性部位の除去は、抗体生成物における不均質性の危険性を低下させ得、したがって、その均質性を増大させ得る。別の種類のアミノ酸置換は、起こり得る脱アミド部位を形成するアスパラギン−グリシン対を該残基の１つまたは両方を変更させることによって除去することである。本発明の別の態様において、抗体を脱免疫化して、例えばＰＣＴ公報ＷＯ９８／５２９７６およびＷＯ００／３４３１７において説明される技術を用いてその免疫原性を低下させ得る。
【０１６４】
本発明に従った変異形のうちの１つにおいて実施され得る別の種類のアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の化学特性（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖Ｒ基を有する別のアミノ酸残基によって置換されるものである。一般的に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させない。２つ以上のアミノ酸配列が、保存的置換によって互いに異なっている場合、配列同一性パーセントまたは類似性の程度は、置換の保存的性質を補正するよう上向きに調整され得る。この調整を実施するための手段は、当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２４３：３０７−３１  （１９９４）を参照されたい。
【０１６５】
類似の化学特性を備えた側鎖を有するアミノ酸の基の例には、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン；２）脂肪族‐ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン；３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン；５）塩基性側鎖：リシン、アルギニン、およびヒスチジン；６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸；ならびに７）含硫側鎖：指数テインおよびメチオニンを含む。好ましい保存的アミノ酸置換基は：バリン‐ロイシン‐イソロイシン、フェニルアラニン‐チロシン、リシン‐アルギニン、アラニン‐バリン、グルタミン酸‐アスパラギン酸、およびアスパラギン‐グルタミンである。あるいは、保存的置換は、Ｇｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３−４５  （１９９２）において開示されるＰＡＭ２５０対数‐見込みマトリックスにおいて正の値を有する任意の変化である。「中程度に保存的な」置換とは、ＰＡＭ２５０対数‐見込みマトリックスにおいて非負の値を有する任意の変化である。
【０１６６】
ある実施態様において、本発明の抗体または抗原結合部分に対するアミノ酸置換は：（１）タンパク質分解に対する感受性を低下させ、（２）酸化に対する感受性を低下させ、（３）タンパク質複合体を形成するよう結合親和性を変化させて、例えば、抗体のＡＤＣＣおよびＣＤＣ活性を亢進させ、（４）このようなアナログの他の物理化学的または機能的特性を与えまたは修飾するが、ヒトＣＤ５２に対する特異的結合をなおも保有し、（５）Ｃ末端リシンを除去し、および（６）グリコシル化部位を付加または除去するものである。
【０１６７】
一態様において、本発明は、本発明の抗体の重鎖もしくはは軽鎖である、または重鎖もしくは軽鎖の可変ドメイン含有部分である、新たなかつ新規のポリペプチドを提供する。このようなポリペプチドは、反対の抗体鎖（軽鎖または重鎖）と対形成して、ＣＤ５２結合分子を形成することができるので、有用である。
【０１６８】
（ヒト化免疫グロブリン）
新規のマウス抗ヒトＣＤ５２抗体のＣＤＲを含むヒト化免疫グロブリンが本明細書に説明される。一実施態様において、ヒト化免疫グロブリンは、抗ＣＤ５２抗体の他のヒト化バージョン（例えば、キャンパス（登録商標））のアミノ酸配列とは異なるＣＤＲアミノ酸配列を有するヒト化軽鎖およびヒト化重鎖を含む。
【０１６９】
「ヒト化免疫グロブリン」という用語は、本明細書で使用する場合、本明細書でドナー抗体（例えば、マウス抗ＣＤ５２抗体）とも呼ばれる非ヒト起源の抗ＣＤ５２抗体の１つ以上の軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）ならびに１つ以上の重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む鎖を含む免疫グロブリン、ならびにヒト起源の免疫グロブリンの少なくとも一部（例えば、フレームワーク変化を伴うまたは伴わないＣＤＲ移植抗体など、ヒト起源の軽鎖および／または重鎖に由来するフレームワーク領域、またはフレームワークおよび定常領域）を指す。本発明のヒト化免疫グロブリンは、キャンパス（登録商標）に存在する少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、相応するＣＤＲ）とは異なる少なくとも１つのＣＤＲを含む。例えば、Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，  米国特許第４，８１６，５６７号；Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，  欧州特許第０，１２５，０２３  Ｂ１号；Ｂｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，  米国特許第４，８１６，３９７号；Ｂｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，  欧州特許第０，１２０，６９４  Ｂ１号；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，  Ｍ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ  ８６／０１５３３；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，
Ｍ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  欧州特許第０，１９４，２７６  Ｂ１号；Ｗｉｎｔｅｒ，
米国特許第５，２２５，５３９号；Ｗｉｎｔｅｒ，  欧州特許第０，２３９，４００  Ｂ１号；Ｐａｄｌａｎ，  Ｅ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  欧州特許出願第０，５１９，５９６  Ａｌ号を参照されたい。また、一本鎖抗体に関しては、Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  米国特許第４，９４６，７７８号；Ｈｕｓｔｏｎ，  米国特許第５，４７６，７８６号；およびＢｉｒｄ，  Ｒ．Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２４２：  ４２３−４２６  （１９８８）も参照されたい。いくつかの実施態様において、ヒト化免疫グロブリンは、脱免疫化抗体である。例えば、有望なＴ細胞エピトープの数を減少させるよう修飾され、それによりヒトへの投与の際、免疫グロブリンの免疫応答を誘発する傾向を減少させる、脱免疫化免疫グロブリンに関しては、Ｃａｒｒ  ｅｔ  ａｌ．，  米国特許第７，２６４，８０６号を参照されたい。
【０１７０】
特定の実施態様において、ヒト化免疫グロブリンは、以下のマウスモノクローナル抗体のうちの１つ以上の１つ以上の軽鎖ＣＤＲおよび１つ以上の重鎖ＣＤＲを含む：マウス８Ｇ３．２５．３．５、マウス４Ｇ７．Ｆ３、マウス９Ｄ９．Ａ２、マウス１１Ｃ１１．Ｃ５、マウス３Ｇ７．Ｅ９、マウス５Ｆ７．１．１．４、マウス１２Ｇ６．１５．１．２、マウス２３Ｅ６．２．２．１、マウス２Ｃ３．３．８．１、マウス７Ｆ１１．１．９．７、およびマウス４Ｂ１０．１．２．４。
【０１７１】
別の実施態様において、ヒト化免疫グロブリンは、キャンパス（登録商標）と類似のまたはそれより良好な親和性でヒトＣＤ５２に結合する。特定の実施態様において、本発明のヒト化免疫グロブリンは、本発明のマウス抗ヒトＣＤ５２抗体の結合特異性を有し（例えば、同じかもしくは類似のエピトープ特異性を有するヒトＣＤ５２にちあする特異性を有する。）、および／または同じ阻害機能を有する。ヒト化免疫グロブリンは、本明細書に説明されるマウス抗ヒトＣＤ５２抗体またはヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体の結合特異性および／または阻害活性を、ならびに／あるいは本明細書に説明されるマウス抗ヒトＣＤ５２抗体またはヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体のエピトープ特異性を有することができる（例えば、該ヒト化免疫グロブリンは、ＣＤ５２への結合に対して、マウス抗ヒトＣＤ５２抗体、または別のヒト化抗ＣＤ５２抗体（例えば、キャンパス（登録商標））と競合することができ、ならびに／あるいは該ヒト化免疫グロブリンは、マウスまたはヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体の阻害機能を有することができる）。特定の実施態様において、ヒト化免疫グロブリンは、マウス抗体８Ｇ３、４Ｇ７、９Ｄ９、１１Ｃ１１、３Ｇ７、５Ｆ７、１２Ｇ６、２３Ｅ６、２Ｃ３、７Ｆ１１、および４Ｂ１０のうちの任意の１つの結合特異性、エピトープ特異性、および／または阻害活性を有する。
【０１７２】
ヒト化免疫グロブリンまたはヒト起源である免疫グロブリン鎖の一部（例えば、フレームワーク領域；定常領域）は、任意の好適なヒト免疫グロブリンまたは免疫グロブリン鎖に由来することができる。例えば、ヒト化抗体またはキメラ抗体におけるヒト定常領域またはその一部は、ヒトκ軽鎖もしくはλ軽鎖遺伝子に由来することができ、および／または対立遺伝子変異形を含むヒトγ（例えば、γ１、γ２、γ３、γ４）、μ、α（例えば、α１、α２）、δ、もしくはε重鎖遺伝子に由来することができる。特定の定常領域（例えば、ＩｇＧ１）、変異形、またはその一部は、エフェクター機能を調節するために選択することができる。例えば、変異した定常領域（変異形）を免疫グロブリンまたは免疫グロブリン鎖へと組み込んで、Ｆｃ受容体に対する結合および／または５つの補体に対する能力を最小化することができる（例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ＧＢ  ２，２０９，７５７  Ｂ；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ  ８９／０７１４２；Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ  ９４／２９３５１，  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２２，  １９９４参照）。一実施態様において、ヒトフレームワークは、その構造または配列において変動も変異も有しない。特定の実施態様において、フレームワークは、その配列において変異も変動も有しない生殖系列フレームワーク配列である。
【０１７３】
本明細書で使用する場合、「生殖系列」という用語は、生殖細胞を介して親から後代に経代される場合の、抗体遺伝子および遺伝子セグメントのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を指す。この生殖系列配列は、Ｂ細胞成熟の経過の間の組換えおよび過剰変異事象によって変更した成熟Ｂ細胞における抗体をコードするヌクレオチド配列とは区別される。特定の生殖系列を「利用する」抗体は、その生殖系列ヌクレオチド配列と、または該配列が指定するアミノ酸配列と最も密接に整列するヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を有する。このような抗体は、生殖系列配列と比較して頻繁に変異する。
【０１７４】
他の実施態様において、ヒトフレームワークは、その構造または配列において生殖系列配列から最小の変動または変異を有する（例えば、３、４、５、６、７、８、９、または１０未満の受容体フレームワーク残基が、ドナーフレームワーク残基で置き換えられ、結合親和性を改良する（Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  米国特許第５，５３０，１０１号参照）。特定の実施態様において、ヒト化免疫グロブリン鎖のフレームワークにおける限定された数のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のアミノ酸）が、受容体配列におけるよりもむしろドナー配列におけるその位置のアミノ酸と同じであるよう選択され（すなわち、「変異し戻され」）、ヒトＣＤ５２に対するヒト化免疫グロブリン鎖を含む抗体の親和性を増大させる。
【０１７５】
（例えば、重鎖および／または軽鎖可変領域の）ヒトフレームワーク領域は好ましくは、ドナー免疫グロブリン（マウス抗ＣＤ５２抗体）の抗原結合領域の類似のまたは同等の領域（例えば、重鎖または軽鎖可変領域）と配列類似性を有するヒト抗体可変領域から得られまたは由来する。ヒト化免疫グロブリンのヒト起源の部分についてのフレームワーク領域の他の源には、ヒト可変領域共通配列を含む（例えば、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，  Ｃ．  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４：７７３−７８３  （１９９１）；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ  ９４／０４６７９；Ｃａｒｔｅｒ  米国特許第６，４０７，２１３号参照）。例えば、非ヒト部分を得るために使用される抗体のドナー配列（例えば、可変領域の配列）の領域は、Ｋａｂａｔ，  Ｅ．  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  Ｕ．Ｓ．  Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ  （１９９１）において説明されるヒト配列と比較して、ヒト化免疫グロブリンのヒト部分の特定の源、例えばフレームワーク領域の源を選択することができる。
【０１７６】
一実施態様において、ヒト化免疫グロブリン鎖のフレームワーク領域は、非ヒトドナーの可変領域と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の全体的な配列同一性を有するヒトＩｇ可変領域から得られまたは由来する。特定の実施態様において、ヒト化免疫グロブリン鎖のフレームワーク領域は、非ヒトドナー免疫グロブリンの可変領域のフレームワーク領域と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の全体的な配列同一性を有するヒト可変領域フレームワーク領域から得られまたは由来する。
【０１７７】
一実施態様において、ヒト化免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも１つは、ヒト起源の抗体の１つ以上の鎖から得られまたは由来する。したがって、ＦＲには、ヒト起源の１つ以上の抗体から（例えば、ヒト免疫グロブリン鎖から、ヒト共通配列から）得られまたは由来するＦＲ１および／またはＦＲ２および／またはＦＲ３および／またはＦＲ４を含むことができる。
【０１７８】
本発明における使用のための免疫グロブリン部分は、それらの由来する免疫グロブリンまたはその変異形と同一のまたは類似の配列を有する。このような変異形は、付加、欠失、または置換（例えば、保存的置換）によって異なる、例えば、１つ以上の付加、欠失、または置換によって親配列とは最大３、４、５、６、７、８、９、または１０の残基ほど異なる変異体を含む。上で示したように、本発明のヒト化免疫グロブリンは、本明細書に説明されるマウス抗ＣＤ５２抗体（ドナー抗体）の１つ以上からの１つ以上のＣＤＲを含む。ヒト起源のフレームワーク領域の残基を、ドナー抗体の相応する位置からの残基と置き換えるものなどの、フレームワーク領域における変化を実施することができる。フレームワーク領域における１つ以上のアミノ酸の欠失、挿入、および置換を含む１つ以上の変異を実施することができる。所望の場合、フレームワーク変異は、ヒト化抗体または鎖に含まれることができ、変異のための部位は、例えばＷＯ  ９８／０６２４８に説明されるような任意の好適な方法を用いて選択することができ、そのすべての教示が引用により組み込まれる。
【０１７９】
いくつかの場合、マウス抗ＣＤ５２抗体の１つ以上のＣＤＲに隣接する残基が、機能する（例えば、結合すること）に対して貢献し得、いくつかの場合、直接的にまたは間接的にのいずれかで、必須であり得ることは当業者によって明白であろう。したがって、いくつかの実施態様では、マウスフレームワークの１つ以上のＣＤＲに隣接する１つ以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０の隣接するアミノ酸）はまた、ヒト化免疫グロブリンに含まれる。
【０１８０】
いくつかの実施態様において、本発明のヒト化抗体のヒト重鎖フレームワーク領域は、ＶＨ３−７２またはＶＨ３−２３生殖系列配列を利用する。いくつかの実施態様において、本発明のヒト化抗体のヒト軽鎖フレームワーク領域は、ヒトＶｋ２−Ａ１８ｂ生殖系列配列を利用する。逆変異は任意に、残基の１つ以上におけるこれらのＦＲ領域において実施され、下記の作業実施例において説明されるように、ヒト化抗体のＣＤ５２結合親和性を改良し得る。
【０１８１】
「親和性」とは、結合相互作用の強度を説明する当該技術分野の用語であり、典型的にはヒトＣＤ５２に対する免疫グロブリンの結合の全体的な強度を指す。
【０１８２】
特定の実施態様において、免疫グロブリンは、（例えば、フローサイトメトリーによって決定して）１０μｇ／ｍＬ未満のＥＣ５０値として測定される結合活性を有する。別の実施態様において、免疫グロブリンは、（例えば、フローサイトメトリーによって決定して）５．０μｇ／ｍＬ未満の、または１．０μｇ／ｍＬ未満のＥＣ５０値として測定される結合活性を有する。
【０１８３】
いくつかの実施態様において、免疫グロブリンは、３００ｎＭ〜１ｐＭ（すなわち、３×１０‐７〜１×１０−１２Ｍ）、好ましくは５０ｎＭ〜１ｐＭ、より好ましくは５ｎｍ〜１ｐＭ、および最も好ましくは１ｎＭ〜１ｐＭのＫｏｆｆ（ｋｄ）／Ｋｏｎ（ｋａ）、例えば、１×１０−７Ｍ以下、好ましくは１×１０−８Ｍ以下、より好ましくは１×１０−９Ｍ以下、有利には１×１０−１０Ｍ以下、および最も好ましくは１×１０−１１Ｍまたは１××１０−１２以下の親和性（ＫＤ；ＫＤ＝Ｋｏｆｆ（ｋｄ）／Ｋｏｎ（ｋａ））で；ならびに／あるいは表面プラズモン共鳴によって決定して、５×１０−１ｓ−１〜１×１０−７ｓ−１、好ましくは１×１０−２ｓ−１〜１×１０−６ｓ−１、より好ましくは５×１０−３ｓ−１〜１×１０−５ｓ−１、例えば、５×１０−１ｓ−１以下、好ましくは１×１０−２ｓ−１以下、有利には１×１０−３ｓ−１以下、より好ましくは１×１０−４ｓ−１以下、なおもより好ましくは１×１０−５ｓ−１以下、および最も好ましくは１×１０−６ｓ−１以下のＫｏｆｆ速度定数で、ヒトＣＤ５２に結合する。
【０１８４】
当業者に明白なように、本明細書に提供されるおよび当該技術分野で公知の方法に従って生成される免疫グロブリンが、必要な特異性（例えば、結合特異性、エピトープ特異性）を有することを確認するために、種々の方法を使用することができる。例えば、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有する本発明のヒト化抗ＣＤ５２免疫グロブリンの結合機能は、任意の好適な方法、例えばヒト化免疫グロブリンとヒトＣＤ５２（例えば、ヒトＣＤ５２を含む膜画分；ヒトＴ細胞、ヒトＢ細胞など、ヒトＣＤ５２を保有する細胞；ヒトＣＤ５２をコードする核酸を含みかつ発現するＣＨＯ細胞または組換え宿主細胞；ＣＤ５２のアミノ酸配列を有するペプチド（例えば、合成ペプチド）；ヒトＣＤ５２を含む固相支持体）の間の複合体の形成をモニターするアッセイを用いて検出することができる。
【０１８５】
ヒトＣＤ５２において、特定のマウス、キメラ、もしくはヒト化モノクローナル抗体と同じエピトープに結合する、または特定のマウス、キメラ、もしくはヒト化モノクローナル抗体の結合するヒトＣＤ５２におけるエピトープと重複するヒトＣＤ５２におけるエピトープに結合する本発明の免疫グロブリン（例えば、本発明のヒト化免疫グロブリン）の能力は、例えば、競合的結合アッセイを含む当業者に公知の種々の技術を用いて容易に決定することができる。これらは、該特定の抗体の標識した形態の使用、ならびに本発明の免疫グロブリンの存在下および不在下でのヒトＣＤ５２に対するその標識した抗体の結合の測定を包含し得る。
【０１８６】
本明細書で使用する「エピトープ」には、免疫グロブリンに対すして特異的に結合することのできる任意ンタンパク質決定因子を含む。エピトープ決定因子は一般的に、アミノ酸または炭水化物または糖側鎖などの分子の化学的に活性のある表面のグループ化からなり、一般的に、特異的３次元構造特徴、および特異的帯電特徴を有する。エピトープは、「直鎖的」または「高次構造的」であり得る。直鎖エピトープにおいて、タンパク質と相互作用する分子（抗体など）の間の相互作用の点はすべて、タンパク質の一次アミノ酸配列に沿って直線的に生じる。高次構造エピトープにおいて、相互作用の地点は、互いに分離されたタンパク質におけるアミノ酸残基を通じて生じる。抗原における所望のエピトープがいったん決定されると、例えば、本発明において説明される技術を用いて、該エピトープに対する抗体を作製することができる。あるいは、発見の過程の間で、抗体の作製および特徴づけは、所望のエピトープについての情報を解明し得る。次に、この情報から、同じエピトープに対する結合について抗体を競合的にスクリーニングすることが可能である。これを達成するための１つのアプローチは、互いに競合的に結合する抗体を見出す競合試験を実施することであり、すなわち、抗体は、抗原に対する結合について競合する。
【０１８７】
一実施態様において、試験抗体が、本発明のヒト化抗体の同じまたは重複するエピトープに結合するかどうかを決定するために、本発明の抗ＣＤ５２抗体に、飽和条件下でＣＤ５２に結合させたのち、試験抗体がＣＤ５２に結合する能力を測定する。試験抗体が、基準抗ＣＤ５２抗体と同時にＣＤ５２に結合することができる場合、試験抗体は、基準抗ＣＤ５２抗体とは異なるエピトープに結合する。しかしながら、試験抗体が、同時にＣＤ５２に結合できない場合、試験抗体は、同じエピトープ、重複するエピトープ、または本発明の抗ＣＤ５２抗体によって結合したエピトープに近接するエピトープに結合する。本実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ビアコア（商標）、またはフローサイトメトリーを用いて実施することができる。抗ＣＤ５２抗体が、別の抗ＣＤ５２抗体と交差競合するかどうかを試験するために、２方向で先に説明した競合方法を用い得、すなわち、基準抗体が、試験抗体を遮断し、およびその逆もまた真であるかどうかを決定する。いくつかの実施態様において、本実験は、ビアコア（商標）を用いて実施される。
【０１８８】
また、エピトープビニングは、本発明の抗体を特徴づけるのに有用であり得る。「ビニング」という用語は、抗体の抗原結合特徴に基づいて抗体をグループ分けする方法を指す。交差競合に基づいて抗体を「ビニングする」ための高処理量プロセスは、国際特許出願第ＷＯ  ０３／４８７３１号に説明されている。「エピトープビニング」は、抗ＣＤ５２抗体の非標識形態「Ａ」をＣＤ５２の配列にまたはＣＤ５２陽性細胞に対応する合成ペプチドに結合させることによって研究することができる。その後、標識した第二の抗ＣＤ５２抗体「Ｂ」を添加し、細胞または合成ペプチドが、抗ＣＤ５２抗体「Ａ」にあらかじめ曝露されていない対照試料に対して結合することのできる標識した抗体の量を評価することができる。あるいは、抗ＣＤ５２抗体「Ａ」および「Ｂ」は両方とも、検出を可能にする異なる蛍光色素または化学物質を用いて標識することができ、フローサイトメトリーによってＣＤ５２陽性細胞に同時にかみ合う両方の抗体の標識を検出することができる、または該抗体の量を測定することができる装置を用いて同時にＣＤ５２ペプチドとかみ合うことのできる標識した両抗体の量を測定することができる。ビアコアおよびＯｃｔｅｔ技術によって、抗体の標識していない形態の競合的結合を試験することができる。標識していない形態の抗体のこの使用は、いくつかの抗体の化学的修飾が、結合活性損ない得るので、望ましい。また、Ｓｅｅ  ａｌｓｏ  Ｊｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８８：９１−９８  （２００４）において説明されている、エピトープビニングを実施するうえで同様に有用な技術も参照されたい。
【０１８９】
また、軽鎖、重鎖、ならびに軽鎖および重鎖の部分などのヒト化免疫グロブリンの部分も本明細書に提供される。これらの免疫グロブリン部分は、免疫グロブリンから得られることができまたは由来することができ（例えば、縮小および／または切断による）、あるいは所望の特性（例えば、ヒトＣＤ５２を結合する、配列類似性）を有する免疫グロブリンまたはその鎖の一部をコードする核酸によって生成または発現することができる。該免疫グロブリン部分は、例えば、関連部分の新規合成によって調製することができる。ヒトおよび非ヒト起源の所望の部分（例えば、抗原結合領域、ＣＤＲ、ＦＲ、Ｃ領域）を含むヒト化免疫グロブリンは、合成および／または組換え核酸を用いて、所望のヒト化鎖をコードするコンストラクト（例えば、ｃＤＮＡ）を調製するために生成することができる。例えば、免疫グロブリンの一部（例えば、鎖の一部）を調製するために、１つ以上の終止コドンを所望の位置に導入することができる。ヒト化可変領域をコードする核酸（例えば、ＤＮＡ）配列は、既存のＤＮＡ配列を変更させるためにＰＣＲ変異誘発法を用いて構築することができる（例えば、Ｋａｍｍａｎ，  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １７：５４０４  （１９８９）参照）。新たなＣＤＲをコードするＰＣＲプライマーは、同じまたは非常に類似したヒト可変領域に基づいたすでにヒト化した可変領域のＤＮＡテンプレートとハイブリッド形成することができる（Ｓａｔｏ，  Ｋ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：８５１−８５６  （１９９３））。類似のＤＮＡ配列が、テンプレートとしての使用に入手可能でない場合、可変領域配列をコードする配列を含む核酸を合成オリゴヌクレオチドから構築することができる（例えば、Ｋｏｌｂｉｎｇｅｒ，  Ｆ．，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ８：９７１−９８０  （１９９３）参照）。また、シグナルペプチドをコードする配列も核酸に組み込むことができる（例えば、合成で、ベクターへの挿入の際に）。シグナルペプチド配列が入手可能ではない（例えば、典型的には存在しない）場合、別の抗体からのシグナルペプチド配列を使用することができる（例えば、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，  Ｃ．Ａ．，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４：７７３−７８３  （１９９１）参照）。これらの方法、本明細書に説明された方法、または他の好適な方法を用いて、変異形を容易に作製することができる。
【０１９０】
本発明は、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有し、ヒト化軽鎖およびヒト化重鎖ならびに／またはその部分を含むヒト化免疫グロブリンに関する。一実施態様において、ヒト化免疫グロブリンは、配列番号３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１６の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号４の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号５の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１８の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号６の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号１９の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２０の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号８の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２１の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号９の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２２の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１０の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１１の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２４の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１２の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２５の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖；配列番号１３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖および配列番号２６の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖を含む。
【０１９１】
一実施態様において、本発明のヒト化免疫グロブリンは、重鎖（Ｈ）−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、Ｈ−ＣＤＲ３、軽鎖（Ｌ）−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、およびＬ−ＣＤＲ３を含み、これらのアミノ酸配列は、ａ）それぞれ配列番号５１、５９、６９、２９、３６、および４３；ｂ）それぞれ配列番号５０、６０、６９、２９、３７、および４３；ｃ）それぞれ配列番号５０、６１、６９、２９、３６、および４３；ｄ）それぞれ配列番号５０、６１、６９、２９、３６、および４３；ｅ）それぞれ配列番号５０、６２、６９、２９、３９、および４３；ｆ）それぞれ配列番号５２、６１、７０、３０、４０、および４３；ｇ）それぞれ配列番号５３、６３、７１、３１、３６、および４４；ｈ）それぞれ配列番号５４、６４、７１、３１、３６、および４５；ｉ）それぞれ配列番号５５、６３、７２、３１、３６、および４６；ｊ）それぞれ配列番号５６、６５、７３、３２、４１、および４７；ｋ）それぞれ配列番号５６、６５、２９４、３２、４１、および４７；またはｌ）それぞれ配列番号５６、６６、７４、３３、４１、および４８である。
【０１９２】
別の実施態様において、本発明のヒト化免疫グロブリンは、Ｈ−ＣＤＲ３およびＬ−ＣＤＲ３を含み、これらの配列は、ａ）それぞれ配列番号６９および４３；ｂ）それぞれ配列番号６８および４３；ｃ）それぞれ配列番号７０および４３；ｄ）それぞれ配列番号７１および４４；ｅ）それぞれ配列番号７１および４５；ｆ）それぞれ配列番号７２および４６；ｇ）それぞれ配列番号７３および４７；ｈ）それぞれ配列番号２９４および４７；またはｉ）それぞれ配列番号７４および４８である。
【０１９３】
別の実施態様において、ヒト化免疫グロブリンは、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有し、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、および配列番号４８からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲまたはそれらの組み合わせを含む軽鎖；ならびに配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号２９４からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲまたはそれらの組み合わせを含む重鎖を含み、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、キャンパス（登録商標）ではない。
【０１９４】
別の実施態様において、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリンは、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む軽鎖、および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、または配列番号１３７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、３つのＣＤＲすべて）を含む重鎖を含み、ここで、ヒト化免疫グロブリンは、キャンパス（登録商標）ではない。
【０１９５】
また、本発明は、本明細書に説明されたヒト化免疫グロブリンのヒト化免疫グロブリン軽鎖にも関する。一実施態様において、ヒト化免疫グロブリン軽鎖は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、および配列番号４８からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲならびにこれらの組み合わせを含み、ここで、ヒト化免疫グロブリン軽鎖は、キャンパス（登録商標）の軽鎖ではない。例えば、ヒト化抗体は、Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、およびＬ−ＣＤＲ３を有し、そのアミノ酸配列は、ａ）それぞれ配列番号２９、３６、および４３；ｂ）それぞれ配列番号２９、３７、および４３；ｃ）それぞれ配列番号２９、３８、および４３；ｄ）それぞれ配列番号２９、３６、および４３；ｅ）それぞれ配列番号２９、３９、および４３；ｆ）それぞれ配列番号３０、４０、および４３；ｇ）それぞれ配列番号３１、３６、および４４；ｈ）それぞれ配列番号３１、３６、および４５；ｉ）それぞれ配列番号３１、３６、および４６；ｊ）それぞれ配列番号３２、４１、および４７；またはｋ）それぞれ配列番号３３、４１、および４８である。
【０１９６】
また、本発明は、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、および配列番号２９４からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲまたはこれらの組み合わせを含むヒト化重鎖にも関し、ここで、ヒト化免疫グロブリン重鎖は、キャンパス（登録商標）の重鎖ではない。例えば、ヒト化抗体は、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、およびＨ−ＣＤＲ３を有し、これらのアミノ酸配列は：ａ）それぞれ配列番号５１、５９、および６９；ｂ）それぞれ配列番号５０、６０、および６９；ｃ）それぞれ配列番号５０、６１、および６８；ｄ）それぞれ配列番号５０、６１、および６９；ｅ）それぞれ配列番号５０、６２、および６９；ｆ）それぞれ配列番号５２、６１、および７０；ｇ）それぞれ配列番号５３、６３、および７１；ｈ）それぞれ配列番号５４、６４、および７１；ｉ）それぞれ配列番号５５、６３、および７２；ｊ）それぞれ配列番号５６、６５、および７３；ｋ）それぞれ配列番号５６、６５、および２９４；またはｌ）それぞれ配列番号５６、６６、および７４である。
【０１９７】
一実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１０２、１３８、１４５〜１４８、１５３〜１５７、および１６４〜１６８のうちの１つの可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む軽鎖を含む。関連実施態様において、ヒト化抗体は、アミノ酸配列が、配列番号２７３、２７５、２７８、２８０．および２８２のうちの１つを含むまたは１つからなる、軽鎖を含む。
【０１９８】
一実施態様において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１０３、１３６、１３７、１３９〜１４４、１４９〜１５２、および１５８〜１６３のうちの１つの可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む重鎖を含む。関連実施態様において、ヒト化抗体は、アミノ酸配列が、配列番号２７２、２７４、２７６、２７７、２７９、および２８１のうちの１つを含むまたは１つからなる、重鎖を含む。
【０１９９】
いくつかの実施態様において、本発明のヒト化抗体は、ＶＨおよびＶＬを含み、これらのアミノ酸配列は以下を含むかまたは以下からなる
ａ）それぞれ配列番号１０３および１０２（４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１）；
ｂ）それぞれ配列番号１３６および１３８（７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２）；
ｃ）それぞれ配列番号１３７および１３８（７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２）；
ｄ）それぞれ配列番号１３９および、配列番号１４５〜１４８のうちの１つ（例えば、それぞれ配列番号１３９および１４６（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１１）；ならびにそれぞれ配列番号１３９および１４７（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２））；
ｅ）それぞれ配列番号１４０および、配列番号１４５〜１４８のうちの１つ；
ｆ）それぞれ配列番号１４１および、配列番号１４５〜１４８のうちの１つ；
ｇ）それぞれ配列番号１４２および、配列番号１４５〜１４８のうちの１つ；
ｈ）それぞれ配列番号１４３および、配列番号１４５〜１４８のうちの１つ；
ｉ）それぞれ配列番号１４４および、配列番号１４５〜１４８のうちの１つ；
ｊ）それぞれ配列番号１４９および、配列番号１５３〜１５７のうちの１つ（例えば、それぞれ配列番号１４９および１５５（１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１）；それぞれ配列番号１４９および１５６（１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２）；ならびにそれぞれ配列番号１４９および１５７（１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１３））；
ｋ）それぞれ配列番号１５０および、配列番号１５３〜１５７のうちの１つ；
ｌ）それぞれ配列番号１５１および、配列番号１５３〜１５７のうちの１つ；
ｍ）それぞれ配列番号１５２および、配列番号１５３〜１５７のうちの１つ；
ｎ）それぞれ配列番号１５８および、配列番号１６４〜１６８のうちの１つ（例えば、それぞれ配列番号１５８および１６５（９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２）；ならびにそれぞれ配列番号１５８および１６６（９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１３））；
ｏ）それぞれ配列番号１５９および、配列番号１６４〜１６８のうちの１つ（例えば、それぞれ配列番号１５９および１６５（９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２）；ならびにそれぞれ配列番号１５９および１６６（９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１３））；
ｐ）それぞれ配列番号１６０および、配列番号１６４〜１６８のうちの１つ；
ｑ）それぞれ配列番号１６１および、配列番号１６４〜１６８のうちの１つ（例えば、それぞれ配列番号１６１および１６６（９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３））；
ｒ）それぞれ配列番号１６２および、配列番号１６４〜１６８のうちの１つ；または
ｓ）それぞれ配列番号１６３および、配列番号１６４〜１６８のうちの１つ（例えば、それぞれ配列番号１６３および１６６（９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３））。
【０２００】
カッコ内に含まれる抗体は、下記の作業実施例においてさらに説明される。
【０２０１】
一実施態様において、本発明のヒト化抗体は、軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を含み、これらのアミノ酸配列はａ）それぞれ配列番号２７３および２７２；ｂ）それぞれ配列番号２７５および２７４；ｃ）それぞれ配列番号２７８および２７６；ｄ）それぞれ配列番号２７８および２７７；ｅ）それぞれ配列番号２８０および２７９；またはｆ）それぞれ配列番号２８２および２８１を含み、またはこれらからなる。
【０２０２】
また、本発明は、本明細書に例示される抗体と同じエピトープに結合する、または該抗体と競合もしくは交差競合する抗ヒトＣＤ５２抗体（従来技術における任意の公知のもの以外）も提供する。これらの抗体は、例えば、ヒト化、キメラ、またはマウス抗体であり得る。例えば、本発明は、マウス抗体８Ｇ３、４Ｆ７、９Ｄ９、１１Ｃ１１、３Ｇ７、５Ｆ７、１２Ｇ６、２３Ｅ６、２Ｃ３、７Ｆ１１、および４Ｂ１０、ならびにこれらのマウス抗体のヒト化およびキメラバージョンのうちの１つと同じエピトープに結合する、または該抗体と競合もしくは交差競合する抗ＣＤ５２抗体を提供する。抗体の、基準抗体と同じエピトープに結合する、または該抗体と競合もしくは交差競合する能力は、上で説明されたとおりに決定することができる。例えば、本発明者らは、ヒト化抗体ＳＦＤ１／Ｋ１２および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２によって結合されたＣＤ５２エピトープが配列番号１０４の残基７、８、および１１を含み、ヒト化抗体９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３によって結合されたエピトープが配列番号１０４の残基４および１１を含むことを見出した。したがって、いくつかの実施態様において、本発明は、それらのヒト化抗体と同じエピトープに結合する、または該抗体と競合もしくは交差競合する抗ＣＤ５２抗体を提供する。
【０２０３】
所望の場合、例えば、診断またはアッセイ目的（例えば、治療法のモニタリングを可能にする撮像）のために、ヒト化免疫グロブリン（例えば、その抗原結合断片）は、検出可能な標識を含むことができる。ヒト化免疫グロブリンまたはその抗原結合断片を標識するのに好適な検出可能な標識および方法は、当該技術分野で周知である。好適な検出可能な標識には、例えば、放射性同位体（例えば、インジウム−１１１、テクネチウム−９９ｍ、またはヨウ素−１３１）、陽電子放射標識（例えば、フッ素−１９）、常磁性イオン（例えば、ガドリニウム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ））、エピトープ標識（タグ）、親和性標識（例えば、ビオチン、アビジン）、スピン標識、酵素、蛍光基、または化学発光基を含む。標識が採用されない場合、（例えば、ヒト免疫グロブリンとヒトＣＤ５２の間の）複合体形成は、表面プラズモン共鳴、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、または他の好適な方法によって決定することができる。
【０２０４】
また、本発明において使用される抗ＣＤ５２抗体は、例えば、化学反応または遺伝的修飾を介して、半減期などの抗体の薬物動態を改良する他の部分（例えば、ペグ化部分）と抱合し得る。いくつかの実施態様において、本発明において使用される抗ＣＤ５２は、例えば、化学抱合または遺伝的修飾を介して、好適なサイトカインに連結することができる（例えば、抗体コード配列に、インフレームでサイトカインのコード配列を付加し、それにより抗体：サイトカイン融合タンパク質を作製する。）。
【０２０５】
また、本発明は、本発明のヒト化免疫グロブリン（例えば、その抗原結合断片）が、生物活性化合物（例えば、サイトカイン、スーパー抗原、細胞毒性薬、および毒素）など、別の治療薬と連結する免疫抱合体にも関する。例えば、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン（例えば、その抗原結合断片）は、生物学的タンパク質、植物もしくは細菌起源の分子（もしくはそれらの誘導体）、インターロイキン−２抗体、またはジフテリア毒素抗体に連結することができる。
【０２０６】
（マウスモノクローナル免疫グロブリン）
本明細書で説明されるように、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するマウスモノクローナル免疫グロブリンが産生された。本発明のヒト化およびキメラ抗体は、本発明のマウスモノクローナル抗体に由来することができる。すなわち、いくつかの実施態様において、本発明のヒト化およびキメラ抗ＣＤ５２抗体は、１つ以上のＣＤＲ配列など、本発明のマウスモノクローナル抗体から採取した配列を含む。本発明のマウスモノクローナル免疫グロブリンは、公知のマウス抗ＣＤ５２モノクローナル抗体（例えば、ＣＦ１Ｄ１２由来）のＣＤＲアミノ酸配列とは異なるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖および重鎖を含む。
【０２０７】
本明細書で使用する場合、「マウスモノクローナル免疫グロブリン」とうい用語は、マウス抗ヒトＣＤ５２抗体、ならびにマウス起源のフレームワークおよび定常領域の、軽鎖ＣＤＲ（Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、およびＬ−ＣＤＲ３）ならびに重鎖ＣＤＲ（Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、およびＨ−ＣＤＲ３）を含む免疫グロブリンを指す。マウスモノクローナル免疫グロブリンは、例えば、ハイブリドーマ技術または組換え方法の使用によって調製される単一特異性の均一な抗体である。
【０２０８】
本発明は、マウスモノクロー丸免疫グロブリンの抗原結合断片（すなわち、部分）、マウスモノクローナル免疫グロブリンの軽鎖、マウスモノクローナル免疫グロブリンの重鎖、ならびにこれらの重鎖および軽鎖の断片を含む、本明細書に説明されたマウスモノクローナル免疫グロブリンに関する。特定の実施態様において、マウスモノクローナル抗体は、マウス８Ｇ３．２５．３．５（ＧＥＮＺ  ８Ｇ３．２５．３．５もしくは８Ｇ３とも呼ばれる）、マウスＧＭＡ  ４Ｇ７．Ｆ３（４Ｇ７．Ｆ３もしくは４Ｇ７とも呼ばれる。）、マウスＧＭＡ  ９Ｄ９．Ａ２（９Ｄ９．Ａ２もしくは９Ｄ９とも呼ばれる。）、マウスＧＭＡ  １１Ｃ１１．Ｃ５（１１Ｃ１１．Ｃ５もしくは１１Ｃ１１とも呼ばれる）、マウスＧＭＡ  ３Ｇ７．Ｅ９（３Ｇ７．Ｅ９もしくは３Ｇ７とも呼ばれる）、マウス５Ｆ７．１．１．４（ＧＥＮＺ  ５Ｆ７．１．１．４もしくは５Ｆ７とも呼ばれる）、マウス１２Ｇ６．１５．１．２（ＧＥＮＺ  １２Ｇ６．１５．１．２もしくは２Ｇ６とも呼ばれる）、マウス２３Ｅ６．２．２．１（ＧＥＮＺ  ２３Ｅ６．２．２．１もしくは２３Ｅ６とも呼ばれる）、マウス２Ｃ３．３．８．１（ＧＥＮＺ  ２Ｃ３．３．８．１もしくは２Ｃ３とも呼ばれる）、マウス７Ｆ１１．１．９．７（ＧＥＮＺ  ７Ｆ１１．１．９．７もしくは７Ｆ１１とも呼ばれる）、またはマウス４Ｂ１０．１．２．４（ＧＥＮＺ  ４Ｂ１０．１．２．４もしくは４Ｂ１０とも呼ばれる）である。本発明は、重鎖および軽鎖シグナルペプチドを除去するための加工後のマウスモノクローナル免疫グロブリンなどの成熟マウスモノクローナル免疫グロブリン、ならびに／またはグリコシル化した免疫グロブリンに関する。また、本発明は、シグナルペプチドを含むマウス免疫グロブリン軽鎖またはマウス免疫グロブリン重鎖など、未成熟または前駆体タンパク質にも関する。また、本発明は、これらの未成熟または成熟タンパク質をコードする核酸分子（例えば、ベクター）、このような核酸を含む宿主細胞、ならびにこれらの未成熟および成熟タンパク質を生成する方法にも関する。
【０２０９】
ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するマウスモノクローナル免疫グロブリンの結合機能は、任意の好適な方法を用いて、例えば、マウスモノクローナル免疫グロブリンとヒトＣＤ５２の間の複合体（例えば、ヒト５２を含む膜画分、あるいはヒトＣＤ５２をコードする核酸を含むヒトＴ細胞、ヒトＢ細胞ＣＨＯ細胞、または組換え宿主細胞など、ヒトＣＤ５２を保有する細胞；ＣＤ５２のアミノ酸配列を有するペプチド（例えば、合成ペプチド））の形成をモニターするアッセイを用いて、検出することができる。
【０２１０】
また、軽鎖、重鎖、ならびに軽鎖および重鎖の部分を含むマウス免疫グロブリンの部分も本明細書に提供される。これらの免疫グロブリン部分は、免疫グロブリンから（縮小および／または切断によって）得られまたは由来することができ、あるいは所望の特性（例えば、ヒトＣＤ５２を結合する、配列類似性）を有する免疫グロブリンまたはその鎖の一部をコードする核酸が、生成されおよび発現することができる。これらは、所望のモノクローナル免疫グロブリン鎖をコードするコンストラクト（例えば、ｃＤＮＡ）を調製するために合成および／または組換え核酸を用いて作製することのできるマウス起源の所望の部分（例えば、抗原結合領域、ＣＤＲ、ＦＲ、および／またはＣ領域）を含むマウスモノクローナル免疫グロブリンの一部の例えば新規合成によって調製することができる。鎖の一部を調製するために、１つ以上の終止コドンを所望の位置に導入することができる。また、シグナルペプチドをコードする配列を核酸に組み込むことができる（例えば、合成で、ベクターへの挿入の際に）。天然のシグナルペプチド配列が入手可能ではない場合、別の抗体からのシグナルペプチド配列を使用することができる（例えば、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，  Ｃ．Ａ．，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４：７７３−７８３  （１９９１）参照）。これらの方法、本明細書に説明される方法、または他の好適な方法を用いて、変異形を容易に作製することができる。
【０２１１】
一実施態様において、本発明のマウスモノクローナル免疫グロブリンは、配列番号３を含む軽鎖および配列番号１６を含む重鎖；配列番号４を含む軽鎖および配列番号１７を含む重鎖；配列番号５を含む軽鎖および配列番号１８を含む重鎖；配列番号６を含む軽鎖および配列番号１９を含む重鎖；配列番号７を含む軽鎖および配列番号２０を含む重鎖；配列番号８を含む軽鎖および配列番号２１を含む重鎖；配列番号９を含む軽鎖および配列番号２２を含む重鎖；配列番号１０を含む軽鎖および配列番号２３を含む重鎖；配列番号１１を含む軽鎖および配列番号２４を含む重鎖；配列番号１２を含む軽鎖および配列番号２５を含む重鎖；配列番号１３を含む軽鎖および配列番号２６を含む重鎖を含む。
【０２１２】
別の実施態様において、本発明はまた、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するマウスモノクローナル抗体にも関し、該抗体は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される軽鎖可変領域；ならびに配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６からなる群から選択される重鎖可変領域を含む。
【０２１３】
所望の場合、例えば、診断またはアッセイ目的（例えば、撮像）のために、マウスモノクローナル免疫グロブリン（例えば、その抗原結合断片）は、検出可能な標識を含むことができる。マウスモノクローナル免疫グロブリンを標識するのに好適な検出可能な標識および方法は、当該技術分野で周知である。好適な検出可能な標識には例えば、放射性同位体（例えば、インジウム−１１１、テクネチウム−９９ｍ、またはヨウ素−１３１など）、陽電子放射標識（例えば、フッ素−１９）、常磁性イオン（例えば、ガドリニウム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ））、エピトープ標識（タグ）、親和性標識（例えば、ビオチン、アビジン）、スピン標識、酵素、蛍光基、または化学発光基を含む。標識が採用されない場合、（例えば、マウスモノクローナル免疫グロブリンとＣＤ５２の間の）複合体形成は、表面プラズモン共鳴または他の好適な方法によって決定することができる。また、本発明のヒト化抗体に好適な上で説明された方法および技術はすべて本明細書で用いることができる。
【０２１４】
（キメラ免疫グロブリン）
本明細書で説明されるように、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するキメラ免疫グロブリンが作製された。キメラ免疫グロブリンは、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有する公知のキメラ抗体のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有するキメラ軽鎖および／またはキメラ重鎖を含む。
【０２１５】
本明細書で使用する場合、用語「キメラ免疫グロブリン」は、１つの種に由来する抗体、好ましくはマウス抗ヒトＣＤ５２モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変ドメインを含むが、抗体分子の定常ドメインが、異なる種のものに由来する、例えばヒト抗体からのものである組換えタンパク質を指す。
【０２１６】
本発明は、キメラ免疫グロブリンの抗原結合断片（すなわち、部分）、キメラ免疫グロブリンのキメラ軽鎖およびキメラ重鎖、ならびにこれらのキメラ軽鎖および重鎖の断片を含む本明細書に説明されるキメラ免疫グロブリンに関する。本発明は、重鎖および軽鎖シグナルペプチドを除去するための加工後のキメラ免疫グロブリンなどの成熟キメラ免疫グロブリン、ならびに／またはグリコシル化した免疫グロブリンに関する。また、本発明は、シグナルペプチドを含むキメラ重鎖など、未成熟または前駆体タンパク質にも関する。また、本発明は、これらの未成熟または成熟タンパク質をコードする核酸分子（例えば、ベクター）、このような核酸を含む宿主細胞、ならびにこれらの未成熟および成熟タンパク質を生成する方法にも関する。
【０２１７】
ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するキメラ免疫グロブリンの結合機能は、任意の好適な方法を用いて、例えば、キメラ免疫グロブリンとヒトＣＤ５２（例えば、ヒトＣＤ５２、ＣＤ５２のアミノ酸配列を有するペプチド（例えば、合成ペプチド）をコードする核酸を含むヒトＴ細胞、ヒトＢ細胞、ＣＨＯ細胞、または組換え宿主細胞など、ヒトＣＤ５２を保有する細胞における。ヒトＣＤ５２を含む膜画分）の間の複合体の形成をモニターするアッセイを用いて検出することができる。
【０２１８】
また、軽鎖、重鎖、および軽鎖もしくは重鎖の部分を含むキメラ免疫グロブリンの部分も本明細書に提供される。これらの免疫グロブリン部分は、免疫グロブリンから（例えば、縮小および／または切断によって）得られまたは由来することができ、あるいは、所望の特性（例えば、ヒトＣＤ５２を結合する、配列類似性）を有する免疫グロブリンまたはその鎖の一部をコードする核酸が生成および発現することができる。これらは、例えば、一部の新規合成によって調製され得る。ヒトおよび非ヒト起源の所望の部分（例えば、抗原結合領域、ＣＤＲ、ＦＲ、および／またはＣ領域）を含むキメラ免疫グロブリンは、所望のキメラ鎖をコードするコンストラクト（例えば、ｃＤＮＡ）を調製するよう、合成および／または組換え核酸を用いて作製することができる。鎖の一部を調製するために、１つ以上の終止コドンを所望の位置に導入することができる。また、シグナルペプチドをコードする配列を核酸へと組み込むこともできる（例えば、合成において、ベクターへの挿入の際に）。天然シグナルペプチド配列が入手できない（例えば、典型的には存在しない）場合、別の抗体由来のシグナルペプチド配列を使用することができる（例えば、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，  Ｃ．Ａ．，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４：７７３−７８３  （１９９１）参照）。これらの方法、本明細書に説明される方法、または他の好適な方法を用いて、変異形を容易に作製することができる。。
【０２１９】
一実施態様において、本発明のキメラ免疫グロブリンは、配列番号３の軽鎖可変領域および配列番号１６の重鎖可変領域；配列番号４の軽鎖可変領域および配列番号１７の重鎖可変領域；配列番号５の軽鎖可変領域および配列番号１８の重鎖可変領域；配列番号６の軽鎖可変領域および配列番号１９の重鎖可変領域；配列番号７の軽鎖可変領域および配列番号２０の重鎖可変領域；配列番号８の軽鎖可変領域および配列番号２１の重鎖可変領域；配列番号９の軽鎖可変領域および配列番号２２の重鎖可変領域；配列番号１０の軽鎖可変領域および配列番号２３の重鎖可変領域；配列番号１１の軽鎖可変領域および配列番号２４の重鎖可変領域；配列番号１２の軽鎖可変領域および配列番号２５の重鎖可変領域；または配列番号１３の軽鎖可変領域および配列番号２６の重鎖可変領域を含む。
【０２２０】
また、本発明は、配列番号３の軽鎖可変領域、配列番号４の軽鎖可変領域、配列番号５の軽鎖可変領域、配列番号６の軽鎖可変領域、配列番号７の軽鎖可変領域、配列番号８の軽鎖可変領域、配列番号９の軽鎖可変領域、配列番号１０の軽鎖可変領域、配列番号１１の軽鎖可変領域、配列番号１２の軽鎖可変領域、配列番号１３の軽鎖可変領域からなる群から選択される軽鎖可変領域配列、ならびに配列番号１６の重鎖可変領域、配列番号１７の重鎖可変領域、配列番号１８の重鎖可変領域、配列番号１９の重鎖可変領域、配列番号２０の重鎖可変領域、配列番号２１の重鎖可変領域、配列番号２２の重鎖可変領域、配列番号２３の重鎖可変領域、配列番号２４の重鎖可変領域、配列番号２５の重鎖可変領域、配列番号２６の重鎖可変領域からなる群から選択される重鎖可変領域配列を含む、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するキメラ抗体にも関する。
【０２２１】
また、本発明は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３の可変領域を含むキメラ軽鎖にも関する。
【０２２２】
また、本発明は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、または配列番号２６の可変領域を含むキメラ重鎖にも関する。
【０２２３】
所望の場合、例えば、診断またはアッセイ目的（例えば、撮像）のために、キメラ免疫グロブリン（例えば、その抗原結合断片）は、検出可能な標識を含むことができる。キメラ免疫グロブリンを標識するのに好適な検出可能な標識および方法は、当該技術分野で周知である。好適な検出可能な標識には例えば、放射性同位体（例えば、インジウム−１１１、テクネチウム−９９ｍ、またはヨウ素−１３１など）、陽電子放射標識（例えば、フッ素−１９）、常磁性イオン（例えば、ガドリニウム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ））、エピトープ標識（タグ）、親和性標識（例えば、ビオチン、アビジン）、スピン標識、酵素、蛍光基、または化学発光基を含む。標識が採用されない場合、（例えば、キメラ免疫グロブリンとヒトＣＤ５２の間の）複合体形成は、表面プラズモン共鳴または他の好適な方法によって決定することができる。また、本発明のヒト化抗体に好適な上で説明された方法および技術を、すべて本明細書で用いることができる。
【０２２４】
（核酸および組換えベクター）
また、本発明は、本発明のヒト化免疫グロブリン、ヒト化軽鎖、ヒト化重鎖、マウスモノクローナル免疫グロブリン、マウス免疫グロブリン軽鎖、マウス免疫グロブリン重鎖、キメラ免疫グロブリン、キメラ軽鎖、またはキメラ重鎖をコードする配列を含む単離されたおよび／または組換え（例えば、本質的に純粋なを含む）核酸にも関する。
【０２２５】
「単離された」または「精製された」と本明細書で呼ばれる核酸は、起源に関するそれらの源のゲノムＤＮＡまたは細胞ＲＮＡの核酸から離れて分離された核酸であり（例えば、これらが細胞中に、またはライブラリーなどの核酸の混合物に存在する場合）、本質的に純粋な核酸、化学合成によって、生物学的および生化学的方法の組み合わせによって作製された核酸、ならびに単離された組換え核酸を含む、本明細書で説明される方法および他の好適な方法によって得られる核酸を含む（例えば、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ，  Ｂ．Ｌ．
ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  １９（９）：  ２４７１−２４７６  （１９９１）；Ｌｅｗｉｓ，  Ａ．Ｐ．  ａｎｄ  Ｊ．Ｓ．  Ｃｒｏｗｅ，
Ｇｅｎｅ，  １０１：  ２９７−３０２  （１９９１）参照）。
【０２２６】
「組換え」と本明細書で呼ばれる核酸は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および／または制限酵素を用いてのベクターへのクローニングなど、人工的な組換え方法に依存する手順によって作製される核酸を含む、組換えＤＮＡ技術によって作製された核酸である。また、「組換え」核酸は、細胞の天然基所を通じて生じる組換え事象から結果として生じるが、所望の組換え事象を可能にしかつ所望の組換え事象をありそうにするよう設計された核酸の細胞への導入後に選択されるものでもある。
【０２２７】
また、本発明は、より具体的には、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン、マウス免疫グロブリン、またはキメラ免疫グロブリン（例えば、非ヒト部分（例えば、ＣＤＲ）がマウス抗ＣＤ５２モノクローナル抗体に由来する本発明のヒト化免疫グロブリン；本発明のマウス免疫グロブリン；非ヒト部分（例えば、ＶＨおよびＶＬ）がマウス抗ＣＤ５２スモノクローナル抗体に由来する本発明のキメラ免疫グロブリン）またはその部分（例えば、抗原結合部分）（例えば、その重鎖または軽鎖）をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたおよび／または組換え核酸にも関する。
【０２２８】
本発明の核酸は、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するマウス免疫グロブリン、およびヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するキメラ免疫グロブリンを作製するのに使用することができる。例えば、本発明のヒト化免疫グロブリン、マウス免疫グロブリン、もしくはキメラ免疫グロブリンをコードする核酸（例えば、（ｃＤＮＡなどの）ＤＮＡ、もしくはＲＮＡ）、または本発明のヒト化免疫グロブリン、マウス免疫グロブリン、もしくはキメラ免疫グロブリンを、配列の更なる操作のために、または好適な宿主細胞におけるコードされた免疫グロブリンの作製のために、好適なコンストラクト（例えば、組換えベクター）へと組み込むことができる。
【０２２９】
また、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するマウス免疫グロブリン、またはヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するキメラ免疫グロブリンの発現に好適なコンストラクトまたはベクター（例えば、発現ベクター）も提供される。宿主細胞における単一のコピーもしくは複数のコピーにおいて維持された、または宿主細胞の染色体に組み込まれたベクターを含む種々のベクターが入手可能である。ベクターのコンストラクトは、好適な宿主細胞へと導入することができ、本発明のヒト化免疫グロブリン、マウス免疫グロブリン、またはキメラ免疫グロブリンを発現する細胞を、培養において産生および維持することができる。単一のベクターまたは複数のベクターを、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン、マウス免疫グロブリン、またはキメラ免疫グロブリンの発現のために使用することができる。
【０２３０】
また、好適な発現ベクター、例えば、哺乳類細胞発現ベクターは、以下のうちの１つ以上を含むがこれらに限定されないいくつかの構成要素を含むことができる：複製起点；選択可能なマーカー遺伝子；転写制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、ターミネーター）および／または１つ以上の翻訳シグナルなど、１つ以上の発現制御エレメント；膜ターゲティングまたは分泌のためのシグナル配列またはリーダー配列。コンストラクトまたはベクターにおいて、シグナルペプチド配列は、コンストラクト、またはベクター、または他の源によって提供することができる。例えば、免疫グロブリンの転写および／または翻訳シグナルは、直接的な発現に使用することができる。
【０２３１】
プロモーターを、好適な宿主細胞における発現のために提供することができる。プロモーターは、構成的または誘導可能であり得る。例えば、プロモーターは、ヒト化免疫グロブリンまたは免疫グロブリン鎖をコードする核酸に作用可能に連結することができ、それによりコードされたポリペプチドの発現を指示する。原核宿主（例えば、大腸菌のためのｌａｃ、ｔａｃ、Ｔ３、Ｔ７プロモーター）および真核宿主（例えば、酵母アルコール脱水素酵素（ＡＤＨ１）、ＳＶ４０、ＣＭＶ）に好適な種々のプロモーターが入手可能である。当業者は、本発明の抗ＣＤ５２抗体またはその部分を発現するのに適したプロモーターを選択することができるであろう。
【０２３２】
加えて、ベクター（例えば、発現ベクター）は典型的には、ベクターを保有する宿主細胞の選択のための選択可能なマーカーを、複製可能なベクターの場合には複製起点を含む。抗生物質または薬剤耐性を与える生成物をコードする遺伝子は、共通の選択可能なマーカーであり、原核細胞（例えば、β−ラクタマーゼ遺伝子（アンピシリン耐性）、Ｔｅｔ遺伝子（テトラサイクリン耐性））および真核細胞（例えば、ネオマイシン（Ｇ４１８またはジェネテシン）、ｇｐｔ（ミコフェノール酸）、アンピシリン、またはハイグロマイシン耐性遺伝子）において使用され得る。ジヒドロ葉酸還元酵素マーカー遺伝子は、種々の宿主におけるメトトレキサートを用いた選択を可能にする。宿主の栄養要求性マーカーの遺伝子産物をコードする遺伝子（例えば、ＬＥＵ２．ＵＲＡ３、ＨＩＳ３）はしばしば、酵母における選択可能なマーカーとして使用される。また、ウイルス（例えば、バキュロウイルス）ベクターまたはファージベクター、およびレトロウイルスベクターなど、宿主細胞のゲノムに組み込むことのできるベクターの使用も企図される。
【０２３３】
したがって、本発明は、本発明のヒト化免疫グロブリン、ヒト化軽鎖、ヒト化重鎖、マウス免疫グロブリン、マウス免疫グロブリン軽鎖、マウス免疫グロブリン重鎖、キメラ免疫グロブリン、キメラ軽鎖、またはキメラ重鎖をコードする単離された核酸分子に関する。また、本発明は、免疫グロブリンおよびそれらの鎖の抗原結合部分をコードする単離された核酸分子にも関する。本発明の核酸によってコードされたポリペプチド配列は、上で、おおび以下の実施例において説明される。
【０２３４】
いくつかの実施態様において、本発明の核酸およびベクターは、本発明の重鎖（もしくはその抗原結合部分）または軽鎖（もしくはその抗原結合部分）をコードする。重鎖コード核酸および軽鎖コード核酸の両方を含む宿主細胞を使用して、重鎖および軽鎖（または抗体の抗原結合部分）を含む抗体を作製することができる。重鎖コード核酸および軽鎖コード核酸は、個別の発現ベクターに配置することができる。これらはまた、同じかまたは異なる発現制御の下で単一の発現ベクターに配置することもできる。例えば、Ｃａｂｉｌｌｙ  米国特許第６，３３１，４１５号；Ｆａｎｇ  米国特許第７，６６２，６２３号を参照されたい。
【０２３５】
（ヒトＣＤ５２に対する特異性を有する免疫グロブリンを作製する方法）
本発明の別の態様は、本発明の抗ヒトＣＤ５２抗体を作製する方法に関する。本発明の抗体は、例えば、好適な宿主細胞における抗体をコードする１つ以上の組換え核酸の発現によって作製することができる。宿主細胞は、任意の好適な方法を用いて作製することができる。例えば、本明細書に説明される発現コンストラクト（例えば、１つ以上のベクター、例えば、哺乳類細胞発現ベクター）を好適な宿主細胞へと導入することができ、結果として生じる細胞を（例えば、培養物において、動物において、植物において）コンストラクトまたはベクターの発現に好適な条件下で維持することができる。好適な宿主細胞は、大腸菌（例えば、ＤＨ５α（商標）株（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，
ＣＡ））、バチルス・スブチリス。および／または他の好適な細菌などの細菌を含む原核細胞；真菌もしくは酵母細胞（例えば、ピキア・パストリス・アスペルギルス種、出芽酵母、分裂酵母、アカパンカビ）、または他の低級真核細胞、および昆虫（例えば、ドロソフィラ・シュナイダー（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ）  Ｓ２細胞、Ｓｆ９昆虫細胞（ＷＯ  ９４／２６０８７  （Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ））、ＴＮ５Ｂ１−４  （ＨＩＧＨ  ５）昆虫細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））、哺乳類（例えば、ＣＯＳ−１  （ＡＴＣＣ受入番号ＣＲＬ−１６５０）およびＣＯＳ−７  （ＡＴＣＣ受入番号ＣＲＬ−１６５１）などのＣＯＳ細胞、ＣＨＯ  （例えば、ＡＴＣＣ受入番号ＣＲＬ−９０９６）、ＣＨＯ  ＤＧ４４  （Ｕｒｌａｕｂ，  Ｇ．  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，  ＬＡ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｃ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ７７（７）：４２１６−４２２０  （１９８０））、２９３  （ＡＴＣＣ受入番号ＣＲＬ−１５７３）、ＨｅＬａ  （ＡＴＣＣ受入番号ＣＣＬ−２）、ＣＶ１  （ＡＴＣＣ受入番号ＣＣＬ−７０），  ＷＯＰ  （Ｄａｉｌｅｙ，  Ｌ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．，  ５４：７３９−７４９  （１９８５））、３Ｔ３、２９３Ｔ  （Ｐｅａｒ，  Ｗ．  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．，  ９０：８３９２−８３９６  （１９９３））、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＨｕＴ  ７８細胞、およびこれらに類するもの））、または植物（例えば、タバコ、アオウキクサ（ｌｅｍｎａ）（アオウキクサ（ｄｕｃｋｗｅｅｄ）、および藻類）などのより高級な真核生物の細胞であり得る（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，  Ｆ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆
Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．  （１９９３）参照）。いくつかの実施態様において、宿主細胞は、多細胞生物（例えば、植物または動物）の一部ではなく、例えば、宿主細胞は、単離された宿主細胞であるかまたは、細胞培養物の一部である。
【０２３６】
また、本発明は、本発明の核酸、例えばベクター（例えば、発現ベクター）を含む細胞にも関する。例えば、ヒト化免疫グロブリンの重鎖および軽鎖、マウス免疫グロブリンの重鎖および軽鎖、またはキメラ免疫グロブリンの重鎖および軽鎖をコードする核酸（すなわち、１つ以上の核酸）（該免疫グロブリンは、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有し、またはコンストラクト（すなわち、１つ以上のコンストラクト、例えば、１つ以上のベクター）は、このような核酸を含む。）は、選択された宿主細胞に適した方法（例えば、形質転換、形質移入、電気穿孔法、感染）によって好適な宿主細胞へ、（ベクターにおける、細胞における加工によって作製されたコンストラクトにおける、宿主細胞ゲノムへと組み込まれた）１つ以上の発現制御エレメントに作用可能に連結しているかまたは連結した核酸を導入することができる。宿主細胞は、発現に好適な条件下（例えば、導入剤、適切な塩、増殖因子、抗生物質、栄養補助物質などで補充された好適な培地の存在下）で維持することができ、それにより、コードされたポリペプチドが作製される。所望の場合、コードされたタンパク質（例えば、ヒト化免疫グロブリン、マウス免疫グロブリン、キメラ免疫グロブリン）は、例えば、宿主細胞、培地、または乳から単離することができる。この処理過程は、トランスジェニック動物または植物（例えば、タバコ）の宿主細胞（例えば、乳腺細胞）における発現を包含する（例えば、ＷＯ  ９２／０３９１８参照）。
【０２３７】
免疫グロブリン部分（例えば、ヒト化免疫グロブリン；免疫グロブリン鎖）が、融合タンパク質に対してＮ末端の位置、Ｃ末端の位置、または内部における非免疫グロブリン部分（すなわち、免疫グロブリンにおいて天然に認められるものとして生じない部分）に連結された融合タンパク質を作製することができる。例えば、いくつかの実施態様は、ｐＥＴベクター（例えば、ｐＥＴ−１５ｂ，  Ｎｏｖａｇｅｎ）、ファージベクター（例えば、ｐＣＡＮＴＡＢ  ５  Ｅ，  Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、または他のベクター（例えば、ｐＲＩＴ２ＴプロテインＡ融合ベクター，  Ｐｈａｒｍａｃｉａ）など、好適な発現ベクターへの免疫グロブリン配列をコードする核酸の挿入によって作製することができる。結果として生じるコンストラクトは、発現に好適な宿主細胞へと導入することができる。発現の際に、いくつかの融合タンパク質は、好適な親和性マトリックスによって細胞溶解液から単離または精製することができる（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （Ａｕｓｕｂｅｌ，  Ｆ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｄｓ．），  Ｖｏｌ．  ２，  Ｓｕｐｐｌ．  ２６，  ｐｐ．  １６．４．１−１６．７．８  （１９９１）参照）。
【０２３８】
本発明は、本明細書に提供された免疫グロブリン（例えば、本発明のヒト化免疫グロブリン、ヒト化軽鎖もしくはヒト化重鎖、マウス免疫グロブリン、マウス軽鎖もしくはマウス重鎖、キメラ免疫グロブリン、キメラ重鎖、またはキメラ軽鎖）をコードする組換え核酸を含む宿主細胞に関する。また、本発明は、免疫グロブリンまたはその鎖の抗原結合部分をコードする組換え核酸を含む宿主細胞にも関する。いくつかの実施態様において、宿主細胞は、本明細書に引用されるような、本発明の組換えベクター（例えば、発現ベクター、哺乳類細胞発現ベクター）を含む。
【０２３９】
また、本発明は、本発明の免疫グロブリンまたは免疫グロブリンポリペプチド鎖を調製する方法にも関する。一実施態様において、方法は、本明細書に説明されるような本発明の宿主細胞（免疫グロブリンまたはポリペプチド鎖の発現に適した条件下で免疫グロブリンまたはポリペプチド鎖（例えば、本発明の軽鎖および重鎖、軽鎖のみ、または重鎖のみ）をコードする１つ以上の単離された核酸を含む宿主細胞）を維持することを含む。例えば、宿主細胞は、基質上でまたは懸濁液中で培養することができる。いくつかの実施態様において、方法はさらに、免疫グロブリンまたはポリペプチド鎖を精製または単離する工程を含む。
【０２４０】
本発明はさらに、ファージディスプレイを通じて免疫グロブリンを調製する方法に関する。例えば、ＣＤ５２抗原における未処理の抗体ファージディスプレイライブラリーをパニングすることができる。あるいは、誘導された選択を通じて免疫グロブリンを調製する方法を使用することができる（米国特許出願公報ＵＳ  ２００６−０２５１６５８  Ａ１）。例えば、公知の抗ＣＤ５２抗体の固定された重鎖（および／または軽鎖）ＣＤＲ領域について構築されたカスタムライブラリーを作製することができる。重鎖および軽鎖のＣＤＲ１およびＣＤＲ２領域は、未処理のレパートリーに由来し得る（Ｏｓｂｕｒｎ  ｅｔ
ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  ３６：６１−６８  （２００５））。一実施態様において、所望の結合特性を有するマウス−ヒトキメラ抗体を得るために用いられるＳｃＦｖ未処理抗体ライブラリーから抗ＣＤ５２ＳｃＦｖを作製することができる。これらのライブラリーは、所望の結合特性を有する抗体についてスクリーニングされ得る。ＳｃＦｖファージライブラリーが使用され得る。例えば、ヒトＣＤ５２を認識するＳｃＦｖは、本質的にＶａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）において説明されるように、組換えヒトＣＤ５２に関する反復した一連の選択周期後のｓｃＦｖにより誘導される選択ライブラリーから単離することができる。簡潔には、ライブラリーと共にインキュベーションした後、常磁性ビーズにあらかじめ連結された固定化した抗原、および結合したファージを、磁気分離によって回収することができ、一方、結合していないファージが洗い流される。次に、結合したファージは、Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）によって説明される通り回収することができ、選択プロセスが反復される。
【０２４１】
特定の実施態様において、未処理のヒト軽鎖可変領域のレパートリーに一本鎖フォーマットで融合したマウス抗ＣＤ５２抗体の重鎖の可変ドメイン全体からなるライブラリーが構築される。選択後、マウス重鎖可変領域を補完するヒト軽鎖可変領域のプールが特定される。次に、未処理のヒトＣＤＲ１およびＣＤＲ２領域およびマウス抗ＣＤ５２抗体重鎖可変ドメイン由来の固定されたＣＤＲ３領域からなるキメラ重鎖可変領域に、一本鎖フォーマットで融合した先の選択されたヒト軽鎖可変領域のレパートリーからなるライブラリーが構築される。ＣＤ５２結合物質についての選択後、最良の結合クローンが選択される。６つのＣＤＲ領域のうちの５つが、本来ヒトであり得るのに対し、重鎖可変領域のＣＤＲ−３は、マウス重鎖可変ドメインの本来のＣＤＲ３と同一であり得る。
【０２４２】
選択は、製造元の推奨に従って、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ  Ｍ−２７０アミン（Ｄｙｎａｌ）に連結されたＣＤ５２を用いて実施することができる。あるいは、ビオチン化ＣＤ５２を用いた選択を、製造元の説明書に従って、第一級アミン特異的試薬スクシンイミジル−６−（ビオチンアミド）ヘキサノアートを用いて調製することができる（ＥＺ  ｌｉｎｋ
ＮＨＳ  ＬＣ  Ｂｉｏｔｉｎ，  Ｐｉｅｒｃｅ）。
【０２４３】
選択からの出力は、ＣＤ５２に対する結合と競合するよう周辺質の調製物中に存在するｓｃＦｖの能力を測定する競合アッセイに基づいた高処理量スクリーニングにおける周辺質調製物として試験することができる。
【０２４４】
高処理量スクリーニングにおいて競合することのできる試料は、Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ
ａｌ．  （１９９６）およびＯｓｂｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）において説明されるＤＮＡ配列決定に供し得る。次に、クローンが発現し、ｓｃＦｖまたはＩｇＧとして精製され、例えば、抗体依存性細胞仲介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）アッセイおよび補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）アッセイなどのアッセイを用いて、ＣＤ５２に結合し、ＣＤ５２またはその組み合わせを中和する能力について評価される。次に、精製されたｓｃＦｖ調製物は、ＷＯ  ０１／６６７５４の実施例３に説明される通り調製することができる。精製されたｓｃＦｖ調製物のタンパク質濃度は、ＢＣＡ法（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて決定した。類似のアプローチを使用して、固定された免疫グロブリン重鎖もしくは軽鎖（またはＶＨもしくはＶＬ）の最適なパートナー（反対鎖）についてスクリーニングすることができる。
【０２４５】
特定の実施態様において、本発明は、ＣＤ５２トランスジェニックマウスのリンパ球を、ヒトＣＤ５２トランスジェニックマウスと同じ系（例えば、ＣＤ１）を有する非トランスジェニックマウスに投与し、それにより免疫化した非トランスジェニックマウスを作出することを含む、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを作製する方法に関する。免疫化した非トランスジェニックマウスの脾細胞を不死化した細胞と接触させ、それにより融合した細胞を作製し。融合した細胞は、ヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマが作製される条件下で維持され、それによりヒトＣＤ５２に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを作製する。
【０２４６】
（毒素部分または毒素を含む免疫グロブリン）
また、本発明は、毒素部分または毒素を含む免疫グロブリンにも関する。好適な毒素部分は、毒素（例えば、表面活性毒素、細胞毒）を含む。毒素部分または毒素は、任意の好適な方法を用いて、免疫グロブリンに連結または抱合することができる。例えば、毒素部分または毒素は、直接的にまたは好適なリンカーを通じて、免疫グロブリンに共有結合することができる。好適なリンカーには、切断不可能なまたは切断可能なリンカー、例えば、ｐＨ切断可能リンカーまたは細胞酵素のための切断部位を含むリンカー（例えば、細胞エステラーゼ、カテプシンＢなどの細胞プロテアーゼ）を含むことができる。このような切断可能なリンカーを使用して、免疫グロブリンが内在化した後に毒素部分または毒素を放出することのできる免疫グロブリンを調製することができる。
【０２４７】
毒素部分または毒素を免疫グロブリンに連結または抱合するための種々の方法を使用することができる。選択される特定の方法は。連結または抱合される毒素部分または毒素および免疫グロブリンに依存する。所望の場合、末端機能基を含むリンカーを使用して。免疫グロブリンと毒素部分または毒素を連結することができる。一般的に、抱合は、反応性官能基を含む（かまたは反応性官能基を含むよう修飾された）毒素部分または毒素をリンカーと、あるいは、免疫グロブリンと直接的に反応させることによって達成される。共有結合は、適切な条件下で第二の化学基と反応することのできる化学部分または官能基を含む（かまたは含むよう修飾される）毒素部分または毒素を反応させ、それにより共有結合を形成することによって形成される。所望の場合、好適な反応性化学基を、任意の好適な方法を用いて免疫グロブリンにまたはリンカーに付加することができる（例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，  Ｇ．  Ｔ．，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ  （１９９６）参照）。多くの好適な反応性化学基の組み合わせは、当該技術分野で公知であり、例えば、アミン基は、トシラート、メシラート、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＮＨＳ）、およびこれらに類するものなどの求電子基と反応することができる。チオールは、マレイミド、ヨードアセチル、アクリロリル、ピリジルジスルフィド、５−チオール−２−ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ−チオール）、およびこれらに類するものと反応することができる。アルデヒド官能基は、三価の亜リン酸基と反応して、ホスホロアミド酸またはホスホールイミド（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍｉｄｅ）連結を形成することができる。活性化基を分子に導入する好適な方法は。当該技術分野で公知である（例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，  Ｇ．  Ｔ．，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ  （１９９６）参照）。
【０２４８】
好適な毒素部分および毒素には、例えば、マイタンシノイド（例えば、マイタンシノール、例えば、ＤＭ１、ＤＭ４）、タキサン、カリチアマイシン、デュオカルマイシン、またはこれらの誘導体を含む。マイタンシノイドは、例えば、マイタンシノール、またはマイタンシノールアナログであり得る。マイタンシノールアナログの例には、修飾された芳香環を有するもの（例えば、Ｃ−１９−デクロロ、Ｃ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ）および他の位置において修飾を有するもの（例えば、Ｃ−９−ＣＨ、Ｃ−１４−アルコキシメチル、Ｃ−１４−ヒドロキシメチルもしくはアセロキシメチル（ａｃｅｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）、Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ、Ｃ−１５−メトキシ、Ｃ−１８−Ｎ−デメチル、４，５−デオキシ）を含む。マイタンシノールおよびマイタンシノールアナログは、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号および第６，３３３，４１０号に説明されており、これらの内容は引用により本明細書に組み込まれる。マイタンシノールは、例えば、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロプリオナート（ｐｒｏｐｒｉｏｎａｔｅ）（Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノアート（またはＳＰＰ））、４−スクシンイミジル−オキシカルボニル−ａ−（２−ピリジルジチオ）−トルエン（ＳＭＰＴ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）ブチラート（ＳＤＰＢ）、２イミノチオラン、またはＳ−アセチルコハク酸無水物を用いて抗体および抗体断片に連結することができる。タキサンは、例えばタキソール、タキソテール、または新規のタキサンであり得る（例えば、ＷＯ  ０１／３８３１８参照）。カリチアマイシンは、例えば、臭素複合体カリチアマイシン（例えば、アルファ、ベータ、またはガンマ臭素複合体）、ヨウ素複合体カリチアマイシン（例えば、アルファ、ベータ、またはガンマヨウ素複合体）、またはこれらのアナログおよび模倣薬であり得る。臭素複合体カリチアマイシンには、Ｉ１−ＢＲ、Ｉ２−ＢＲ、Ｉ３−ＢＲ、Ｉ４−ＢＲ、ＪＩ−ＢＲ、Ｊ２−ＢＲ、およびＫ１−ＢＲを含む。ヨウ素複合体カリチアマイシンＩｌ−Ｉ、Ｉ２−Ｉ、Ｉ３−Ｉ、Ｊ１−Ｉ、Ｊ２−Ｉ、Ｌ１−Ｉ、およびＫ１−ＢＲを含む。カリチアマイシンならびにその変異体、アナログ、および模倣薬は、例えば、第４，９７０，１９８号；第５，２６４，５８６号；第５，５５０，２４６号；第５，７１２，３７４号、および第５，７１４，５８６号に説明されており、それらの各々の内容は引用により本明細書に組み込まれる。デュオカルマイシンアナログ（例えば、ＫＷ−２１８９、ＤＣ８８、ＤＣ８９  ＣＢＩ−ＴＭＩ、およびそれらの誘導体）は、例えば、米国特許第５，０７０，０９２号、米国特許第５，１８７，１８６号、米国特許第５，６４１，７８０号、米国特許第４，９２３，９９０号、および米国特許第５，１０１，０３８号に説明されており、これらの各々の内容は引用により本明細書に組み込まれる。
【０２４９】
他の毒素の例には、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化薬（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル（ｔｈｉｏｅｐａ  ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、ＣＣ−１０６５（米国特許第５，４７５，０９２号、第５，５８５，４９９号、第５，８４６，５４５号参照）、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（旧ダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ミトマイシン、ピューロマイシンアントラマイシン（ＡＭＣ）、デュオカルマイシン、およびこれらのアナログまたは誘導体）、ならびに有糸分裂阻害薬（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソール、アウリスタチン（例えば、アウリスタチンＥ）、およびマイタンシノイド）、ならびにこれらのアナログまたはホモログを含むが、これらに限定されない。
【０２５０】
また、毒素は、フリーラジカル発生薬（例えば、毒素部分を含むセレニウム）である毒素などの表面活性毒素、または放射性核種含有部分であり得る。好適な放射性核種含有部分には、例えば、放射性ヨウ素（１３１Ｉまたは１２５Ｉ）、イットリウム（９０Ｙ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、アクチニウム（２２５Ａｃ）、プラセオジム、  アスタチン
（２１１Ａｔ）、  レニウム  （１８６Ｒｅ）、  ビスマス  （２１２Ｂｉまたは２１３Ｂｉ）、  インジウム（１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９ｍＴｃ）、リン（３２Ｐ）、ロジウム（１８８Ｒｈ）、硫黄（３５Ｓ）、炭素（１４Ｃ）、トリチウム（３Ｈ）、クロム（５１Ｃｒ）、塩素（３６Ｃｌ）、コバルト（５７Ｃｏまたは５８Ｃｏ）、鉄（５９Ｆｅ）、セレン（７５Ｓｅ）、またはガリウム（６７Ｇａ）を含む部分を含む。
【０２５１】
毒素は、細菌源、例えば、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素（ＰＥ）由来のタンパク質、ポリペプチド、またはペプチド、および植物タンパク質であり得、例えば、リシンＡ鎖（ＲＴＡ）、リボソーム不活性化タンパク質（ＲＩＰ）ゲロニン、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、サポリン、およびドデカンドロン（ｄｏｄｅｃａｎｄｒｏｎ）が毒素としての使用に企図される。
【０２５２】
また、特定の標的タンパク質を生成する原因となるｍＲＮＡに結合し、不能にし、分解を促進し、または生成を防止する核酸のアンチセンス化合物も毒素として使用することができる。アンチセンス化合物には、個々のｍＲＮＡ種に特異的にハイブリッド形成して、ｍＲＮＡ種の転写および／またはＲＮＡプロセシングならびに／あるいはコードされたポリペプチドの翻訳を防止することができ、それにより個々のコードされたポリペプチドの量の減少に影響するアンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡ、一本鎖または二本鎖のオリゴヌクレオチド、あるいはそれらのアナログを含む（Ｃｈｉｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８６：  １０００６−１００１０  （１９８９）；Ｂｒｏｄｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ．  Ｉｎｔ．  Ｍｅｄ．  １１３：  ６０４−６１８  （１９９０）；Ｌｏｒｅａｕ，  ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２７４：  ５３−５６  （１９９０））。有用なアンチセンス治療薬には、例えば、Ｖｅｇｌｉｎ（商標）（ＶａｓＧｅｎｅ）およびＯＧＸ−０１１（Ｏｎｃｏｇｅｎｉｘ）を含む。
【０２５３】
また、毒素は、光活動性薬であり得る。好適な光活動性薬には、ポルフィマーナトリウム、緑色ポルフィリン、クロリンＥ６、そのヘマトポルフィリン誘導体、フタロシアニン、エチオプルプリン、テキサフリン、およびこれらに類するものなどのポルフィリンベースの物質を含む。
【０２５４】
毒素は、細胞内標的に結合する抗体または抗体断片であり得る。このような抗体または抗体断片は、規定された細胞内区画または標的に向けさせることができる。例えば、抗体または抗体断片は、ｅｒｂＢ２、ＥＧＦＲ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ｐ２１Ｒａｓ、カスパーゼ３、カスパーゼ７、Ｂｃｌ−２、ｐ５３、サイクリンＥ、ＡＴＦ−１／ＣＲＥＢ、ＨＰＶ１６  Ｅ７、ＨＰ１、ＩＶ型コラゲナーゼ、カテプシンＬおよびそのすべての内容が引用により本明細書に組み込まれるＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ，  Ｒ．Ｅ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ，
３４：１６３−１７０  （２００４）に説明されるその他のものから選択される細胞内標的に結合することができる。
【０２５５】
（治療法および組成物）
本発明の抗体は、免疫抑制および免疫切除において有用である。抗体は、ＣＤ５２発現細胞（例えば、Ｔ細胞およびＢ細胞）を標的とし、抗体を必要とする対象におけるＣＤ５２発現細胞の集団を減少させる（または本明細書で使用される場合「枯渇させる」）。リンパ球枯渇は、炎症、自己免疫疾患、および癌（例えば、リンパ球（Ｂ細胞またはＴ細胞のいずれか）悪性腫瘍）などの種々の疾患および容態を治療する上で有用であり得る。例えば、Ｒｅｉｆｆ，  Ａ．，  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，  １０（２）：７９−９３  （２００５）を参照されたい。本発明の抗体または抗原結合部分を用いて治療することのできる疾患および容態の例には、多発性硬化症、狼瘡、関節リウマチ、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、炎症性腸疾患、血管炎、ベーチェット病、ウェゲナー肉芽腫症、シェーグレン症候群、ぶどう膜炎、乾癬、強皮症、多発性筋炎、Ｉ型（自己免疫ベースの）糖尿病、自己免疫血球減少（例えば、自己免疫好中球減少症、輸液依存性難治性赤芽球癆、白血病、ならびに巨大腫瘤病変およびＢ細胞慢性リンパ性白血病を伴う非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫）を含むが、これらに限定されない。
【０２５６】
したがって、本発明の態様は、本発明の抗体を必要とする対象（例えば、自己免疫疾患、血液癌を有するヒト患者、または移植を受けることになっている患者）に本発明の抗体の有効量を投与することによる、リンパ球の枯渇のための、および炎症、自己免疫疾患、または癌を治療するための方法である。また、抗体は、炎症の発症または自己免疫疾患もしくは癌の再発を防止するために予防的に投与することもできる。例えば、本発明の抗体は、移植（例えば、幹細胞移植、同種Ｔ細胞の自己注入、または固形臓器移植）のために患者を準備する前処置投与計画の一部として投与することもできる。
【０２５７】
本発明のいくつかの抗ＣＤ５２抗体は、ＣＤ５２＋細胞のある集団を優先的に標的とする。１つの考えられる説明は、これらの抗体が結合するエピトープが、ＣＤ５２タンパク質における１つ以上の炭水化物基を含み、このような炭水化物基が、別種と比べ１つの細胞種において発現したＣＤ５２においてより優勢であり得ることである。例えば、本発明者らは、抗体７Ｆ１１、５Ｆ７、３Ｇ７、および１１Ｃ１１がＴ細胞をＢ細胞よりも大きな程度まで枯渇させることを発見した。したがって、これらの抗体のヒト化したおよびキメラバージョンを使用して、Ｔ細胞悪性腫瘍をより穏やかな免疫抑制性副作用で治療し得る。
【０２５８】
本発明の抗体が、ＣＤ５２発現細胞を標的とするので、抗体を使用して、Ｔ細胞およびＢ細胞以外のＣＤ５２＋細胞種を枯渇させることもできる。例えば、研究は、血管性白血球（ＶＬＣ）およびＴｉｅ２＋単球（高レベルのＣＤ５２を発現する骨髄系細胞）が、腫瘍の血管新生を促進し、抗ＶＥＧＦ治療法に対する腫瘍耐性に貢献することを示している（Ｐｕｌａｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．    Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄ．  ７：４９  （２００９））。したがって、本研究の抗ＣＤ５２抗体を使用して、ＶＬＣおよびＴｉｅ２＋単球を標的とすることによって腫瘍血管新生を阻害することができる。この目的のために、抗ＣＤ５２抗体は、全身に、または腫瘍部位など新血管新生の部位に局所的に投与することができる。抗ＣＤ５２抗体治療法は、化学療法、手術、または放射線照射などの標準治療の癌治療とともに、あるいは抗ＶＥＧＦ抗体治療法などの別の標的治療法とともに使用することができる。抗ＣＤ５２抗体治療法を使用して、例えば、乳癌、肺癌、神経膠腫、結腸直腸癌、および抗ＶＥＧＦ抗体のその他の適応症を治療することができる。また、抗ＣＤ５２抗体治療法は、非癌性血管新生容態を含む他の新血管新生において使用することもできる。
【０２５９】
本発明の抗体は、個体（例えば、ヒト）に単独で、または併用療法における別の薬剤（例えば、免疫抑制薬）とともに投与することができる。抗体は、追加的な薬剤の投与の前、同時、または後に投与することができる。いくつかの実施態様において、追加的な薬剤は、例えば、スルファサラジンなどの抗炎症性化合物、別の非ステロイド性抗炎症性化合物、またはステロイド性抗炎症性化合物などの抗炎症性化合物である。いくつかの実施態様において、追加的な薬剤は、別の抗ＣＤ５２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＢＡＦＦ抗体、抗ＢＡＦＦ−Ｒ抗体、およびこれらに類するものなど、別のリンパ球枯渇（ｌｙｍｐｈｏ−ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ）抗体である。いくつかの実施態様において。追加的な薬剤は、例えば、抗ＣＤ５２抗体によって仲介されるリンパ球枯渇後に生じる再構成プロセスを歪曲、操作および／または増強するサイトカイン（例えば、ＩＬ−７）、抗サイトカイン受容体抗体、または可溶性受容体である（例えば、Ｓｐｏｒｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  “”Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ：  Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  １１８２：２８−３８  （２００９）参照）。別の実施態様において、合成ペプチド模倣薬は、本発明の免疫グロブリンとともに投与することができる。
【０２６０】
研究は、アレムツズマブによるリンパ球枯渇は、好中球およびＮＫ細胞によって仲介されることを示している（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２８：２６０−２７０  （２００９））。したがって、併用療法の一実施態様において、好中球およびＮＫ細胞を刺激する薬剤を、患者に、抗ＣＤ５２抗体治療法の前、間、または後に投与して、抗体治療法を増強することができる。好中球および／またはＮＫ細胞の刺激には、（１）分裂速度を増大させること、（２）抗ＣＤ５２抗体のアイソタイプに相応するＦｃ受容体（ＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩ、およびＦｃαＲＩ）の細胞表面発現を増大させること、（３）循環する細胞数を動員および増加させること、（４）細胞を標的部位（例えば、腫瘍、炎症、または組織損傷の部位）に動員すること、（５）これらの細胞毒性活性を増大させることを含むが、これらに限定されない。好中球および／またはＮＫ細胞を刺激する薬剤の例には、例えば、顆粒球単球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）（例えば、ＬＥＵＫＩＮＥ（登録商標）またはサルグラモスチムおよびモルグラモスチム）；顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）（例えば、ＮＥＵＰＯＧＥＮ（登録商標）またはフィルグラスチム、ペグ化フィルグラスチム、およびレノグラスチム）；インターフェロンガンマ（例えば、ＡＣＴＩＭＭＵＮＥ（登録商標））；ＣＸＣケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）アンタゴニスト（例えば、ＭＯＺＯＢＩＬ（商標）またはプレリキサホル）；およびＣＸＣケモカイン受容体２（ＣＸＣＲ２）アゴニストを含む。患者の好中球計数は、最適な治療有効性を確実にするために定期的にモニターされ得る。また、患者の好中球計数は。抗ＣＤ５２抗体治療の開始前に測定することができる。刺激薬の量は、患者の好中球計数に基づいて調整することができる。より高い用量の刺激薬は、患者が、正常よりも低い好中球計数を有する場合に使用され得る。また、抗ＣＤ５２抗体による治療によって生じ得る好中球減少症の期間の間、より高い用量の好中球刺激薬を抗ＣＤ５２抗体の効果を最大化するために投与し得る。
【０２６１】
好中球および／またはＮＫ刺激が、抗ＣＤ５２抗体治療法の有効性を改善するので、この併用療法の実施態様によって、類似の治療有効性を維持しながら、患者においてより少ない抗体を使用することができる。治療有効性を維持しながら、より少ない抗ＣＤ５２抗体を使用することは、投与された抗体に対する患者における免疫応答および二次的な自己免疫の発達（抗ＣＤ５２抗体治療の間または後に生じる自己免疫）を含む、抗ＣＤ５２抗体の副作用を低下させるのに役立ち得る。また、併用療法に関する本実施態様は、例えば、患者が好中球減少症を有する場合、腫瘍学設定において有用である。
【０２６２】
併用療法の別の実施態様において、抗ＣＤ５２抗体治療法を増強するために、制御性Ｔ細胞の刺激薬を使用することができる。本発明者らのデータは、抗ＣＤ５２抗体が。他のＣＤ４＋Ｔ細胞と比較して、かなりより少ない程度まで、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔ細胞を枯渇させることを示している。制御性Ｔ細胞（「Ｔｒｅｇ」またはサプレッサーＴ細胞としても公知）は、接触依存性または接触非依存性（例えば、サイトカイン産生）機序を介した他のリンパ球の増殖および／または機能を阻害することのできる細胞である。いくつかの種類の制御性Ｔ細胞が説明されており、それにはγδＴ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、および二重陰性ＣＤ４−ＣＤ８−Ｔ細胞を含む。例えば、Ｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３：１８９−９８  （２００３）を参照されたい。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔ細胞は「天然の」制御性Ｔ細胞と呼ばれており；これらは、ＣＤ４、ＣＤ２５、およびフォークヘッドファミリー転写因子ＦｏｘＰ３（フォークヘッドボックスｐ３）を発現する。したがって、併用療法に関する本実施態様において、抗ＣＤ５２抗体治療法の前、間、または後にＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔ細胞を刺激する薬剤を投与して、リンパ球枯渇後の免疫系の組成を歪曲することができる。薬剤は例えば、それらのＴ細胞を活性化させ、細胞の集団を安定化および／または拡大し、細胞の循環を動員および増加させ、および／または標的部位に細胞を動員し得る。このような薬剤の例は、ラパマイシン、活性型または不顕性ＴＧＦ−β（例えば、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４、およびＴＧＦ−β５）、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＦＮ−α、ビタミンＤ３、デキサメタゾン、およびミコフェノラートモフェチルである（例えば、Ｂａｒｒａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １９５：６０３−６１６  （２００２）；Ｇｒｅｇｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６７：  １９４５−１９５３  （２００１）；Ｂａｔｔａｇｌｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １０５：
４７４３−４７４８  （２００５）；Ｂａｔｔａｇｌｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７７：８３３８−８３４７  （２００６）参照）。
【０２６３】
本発明において、疾患を治療するための抗ＣＤ５２抗体の有効量は、１つ以上の所望の臨床終点に到達するために、治療された対象を助ける量である。例えば、狼瘡（その徴候に、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、皮膚エリテマトーデス、中枢神経系ループス、心臓血管系の徴候、肺の徴候、肝臓の徴候、血液学的徴候、胃腸の徴候、筋骨格の徴候、新生児エリテマトーデス、小児期発症全身性エリテマトーデス、薬剤誘発性エリテマトーデス、抗リン脂質症候群、および狼瘡の徴候を結果として生じる補体欠乏性症候群を含む；例えば、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｇ．  Ｌａｈｉｔａ，  Ｅｄｉｔｏｒ，  Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｌｕｐｕｓ  Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ，  ４ｔｈ  Ｅｄ．，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ
Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  ２００４参照）については、臨床的終点は、罹患した臓器系のモニタリング（例えば、ループス腎炎については血尿および／または蛋白尿）ならびに／あるいはいくつかの臓器系にわたる疾患の重症度の混成スコアを提供する疾患活性指数を使用すること（例えば、ＢＩＬＡＧ、ＳＬＡＭ、ＳＬＥＤＡＩ、ＥＣＬＡＭ）によって測定することができる。例えば、Ｍａｎｄｌ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ”  ｉｎ  Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｌｕｐｕｓ  Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ，  ４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  ｐｐ．  ６１９−６３１，  Ｒ．Ｇ．  Ｌａｈｉｔａ，
Ｅｄｉｔｏｒ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  （２００４）を参照されたい。
【０２６４】
自己免疫疾患の別の例において、多発性硬化症（再発寛解型、二次性進行型、一次性進行型、進行性再発型（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｒｅｌａｐｓｉｎｇ）多発性硬化症を含む（Ｌｕｂｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ４６  （４），  ９０７-１
１  （１９９６））。）は、例えば、症状の病歴ならびに磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、脊椎穿刺、誘発電位試験、および血液試料の実験室分析などの試験の助力を用いた神経学的検討によって診断される。多発性硬化症において、治療の目的は、再発の頻度および重症度を低下させること、疾患の進行から生じる能力障害を防止すること、ならびに組織の修復を促進することである（Ｃｏｍｐｓｔｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｌｅｓ，  ２００８）。したがって、該目的と一致した臨床終点に達するのに役立つ抗ＣＤ５２抗体の量は、治療のための抗体の有効量である。
【０２６５】
免疫原性を最小化するために、本発明の治療方法および組成物においてヒト患者を治療するためにヒト化抗体を使用すべきであることが好ましい。反復した投与が必要でない場合、本発明のマウス：ヒトキメラ抗体をヒト患者に投与することも適切であり得る。
【０２６６】
本発明の抗体を使用して、キャンパス−１Ｈ（登録商標）を用いて以前に治療したことがあり、キャンパス−１Ｈ（登録商標）に対する中和抗体を発現させた個人を治療することができる。例えば、キャンパス−１Ｈ（登録商標）で以前に治療したことがあり（例えば、キャンパス−１Ｈ（登録商標）治療の１回以上の経過を有する）、更なるキャンパス−１Ｈ（登録商標）治療の有効性を低下させるキャンパス−１Ｈ（登録商標）に対する中和抗体を発現させた自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症、狼瘡、血管炎）および／または癌（例えば、白血病（例えば、慢性リンパ性白血病）、リンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫））を有する個人を治療し得る。本発明者らは、本発明のヒト化抗体（例えば、ヒト化２Ｃ３、１２Ｇ６、および９Ｄ９）が、アレムツズマブに対する中和抗体の存在にも関わらずヒトＣＤ５２に結合することができることを示した。別の実施態様において、本明細書に説明された特定のヒト化抗体を用いた治療に対して不応性となった個人を、本明細書に説明されたその他のヒト化抗体のうちの１つを用いて治療し得る。
【０２６７】
本発明の抗体は、医療提供者によって適切と思われる任意の時点で、単回の単位用量または複数の用量において投与することができる。薬用量は、当該技術分野で公知の方法によって決定することができ、例えば、個人の齢、感受性、耐性、および全体的な健康（ｗｅｌｌｌ−ｂｅｉｎｇ）に依存し得る。治療されるべき疾患または容態に応じて、非経口（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、くも膜下腔内、腹膜内、皮下注射）、経口（例えば、食事性）、局所的、外用の、吸入（例えば、気管支内、鼻腔内、または経口吸入、点鼻薬）、または直腸を含むがこれらに限定されることを必要としない種々の投与経路を使用することができる。非経口投与が、投与の１つの好ましい様式であり得る。
【０２６８】
一実施態様において、本発明の抗体は、キャンパス−１Ｈ（登録商標）と同じ投与計画を用いて患者に投与される（例えば、慢性リンパ性白血病のためのキャンパス−１Ｈ（登録商標）の投与計画）。別の実施態様において、本発明の抗体は、抗体の第一の周期に続いて抗体の少なくとも１回の更なる周期の投与を含む投与計画における自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症（ＭＳ））を有する患者に投与され、ここで、各治療周期は、次の周期から、少なくとも１〜２４ヶ月（例えば、１２ヶ月）ほど分離される。例えば、一実施態様において、多発性硬化症を有する患者は、抗体の５日用量を含む抗体の第一の周期に次いで、抗体の治療の少なくとも１回の更なる周期を用いて治療され、ここで、治療は第一の周期の１２ヶ月後に生じ、連続した日に適用される３用量の抗体を含む。別の実施態様において、多発性硬化症を有する患者は、再生した多発性硬化症活性に関する証拠がいったん観察される際にのみ再治療される（例えば、ＷＯ  ２００８／０３１６２６参照；この教示は、それらのすべての内容が引用により本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施態様において、より進行した形態の多発性硬化症またはより進行した形態の他の自己免疫疾患（血管炎など；例えば、Ｗａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ６７：１３２２−１３２７  （２００８）参照）を有する患者が、治療の最後の経過後に早期に再発を経験する場合、治療のより頻繁なコース（例えば、４ヶ月ごと、６ヶ月ごと）を投与することが必要であり得る。再生した多発性硬化症活性の証拠は、治療している臨床医に入手可能であり得る任意の手段を用いて、このような臨床医の専門的判断に基づいて決定され得る。臨床的手段（神経学的能力障害の再発または進行）によって、または脳もしくは脊髄の磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によってを含むがこれらに限定されない種々の技術は、再生した多発性硬化症活性を診断するために臨床医に現に入手可能である。医療従事者によって十分に理解されるように、ＭＲＩを介して検出される疾患活性は、Ｔ１（高感度もしくは非高感度）またはＴ２の重みを加えた画像における新たな脳または脊髄病変の発症によって、あるいはこのような病変の体積の増加によって示され得る。多発性硬化症についての診断方法が持続的に進化しているので、再生した多発性硬化症活性を検出する追加的な方法が将来あり得ることが予測される（例えば、磁化転移比またはＭＲ分光法）。再生された多発性硬化症活性を検出するために使用される特定の診断方法は、請求される本発明を限定しない。ある実施態様において、反復ＭＲＩが、任意の所与の患者の再治療が必要であるかどうか、およびこのような患者の再治療に最適な時点を決定するために、治療周期後の固定された間隔で実施される。一般的に、疾患が臨床的に再度顕在化する前に、再治療が生じることが望ましい。
【０２６９】
製剤は、選択される投与の経路（例えば、溶液、エマルション）に従って変動する。投与されるべき抗体を含む適切な組成物は、生理学的に許容し得るビヒクルまたは担体において調製することができる。組成物は、複数用量を含むことができるか、または単一の単位用量組成物であり得る。溶液またはエマルションについて、好適な担体には、例えば、塩類溶液および緩衝媒体を含む、水性またはアルコール性／水性の溶液、エマルション、または懸濁液を含む。非経口ビヒクルには、塩化ナトリウム溶液、リンゲルのデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル液、または固定油を含むことができる。静脈内ビヒクルには、種々の添加物、保存料、または流体、栄養物質、もしくは電解質補充物を含むことができる（一般的には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  ＰＡ，  １９８５参照）。吸入のためには、化合物は、可溶化して、投与に好適な噴霧器（例えば、アトマイザー、ネブライザー、または加圧したエアロゾルディスペンサー）へと負荷することができる。
【０２７０】
（診断方法および組成物）
また、本発明の免疫グロブリンは、研究および診断における応用を用いた種々の過程において有用である。例えば、該免疫グロブリンを使用して、ヒトＣＤ５２またはその変異形を検出、単離、および／または精製して、ヒトＣＤ５２構造（例えば、高次構造）および機能を研究することができる（例えば、アフィニティ精製または、例えば懸濁液中のリンパ球などの細胞のためのフローサイトメトリーなど、他の好適な方法による）。抗体の免疫原性が懸念されないインビトロでの応用については、本発明のマウスおよびキメラ抗体が、ヒト化抗体に加えて有用であろう。
【０２７１】
本発明の免疫グロブリンは、診断応用に使用することができる（例えば、インビトロ、エクスビボ）。例えば、本発明のヒト化免疫グロブリンを使用して、試料における（例えば、ヒトＣＤ５２を保有する炎症性漏出物、血液、血清、腸液、組織など、組織または体液におけるヒトＣＤ５２を発現する細胞における）ヒトＣＤ５２のレベルを検出および／または測定することができる。試料（例えば、組織および／または体液）は、個体から得ることができ、本明細書に説明される免疫グロブリンを、（リンパ球などの懸濁液における細胞のための）フローサイトメトリー、化学発光アッセイを含む酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ、および免疫組織学を含む、ヒトＣＤ５２発現を検出および／または測定するのに好適な免疫学的方法で使用することができる。
【０２７２】
一実施態様において、ヒトＣＤに対する免疫グロブリンの特異的結合に好適な条件下で試料を本発明の免疫グロブリンと接触させること、および形成される抗体−ＣＤ５２複合体を検出することを含む、試料におけるヒトＣＤ５２を検出する方法が提供される。方法の適用において、本明細書に説明される免疫グロブリンを使用して、ヒトＣＤ５２反応性および／または発現について正常組織対炎症組織（例えば、ヒト由来）を分析して（例えば、免疫組織学）、例えば。炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、自己免疫疾患（多発性硬化症および狼瘡など）、癌（非ホジキンリンパ腫および慢性リンパ性白血病など）、または他の容態と、（例えば、罹患した組織における）ヒトＣＤ５２の発現増加の間の関係を検出することができる。したがって、本発明の免疫グロブリンは、正常組織および炎症組織におけるヒトＣＤ５２の存在の評価に関する免疫学的方法を可能にし、それを通じて疾患の存在、疾患の進行、および／または、疾患、例えば、炎症性疾患の治療における抗ヒトＣＤ５２治療法の有効性を評価することができる。
【０２７３】
加えて、免疫グロブリンを使用して、枯渇させる抗ＣＤ５２治療用抗体を用いた治療後に組織を検査して、枯渇がどれだけ有効であったかを計測し、およびＣＤ５２の発現における任意の下方制御があったかどうかを決定することができる（Ｒａｗｓｔｒｏｍ  ｅｔ
ａｌ．，  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｈｅａｍ．，  １０７：１４８−１５３  （１９９９））。
【０２７４】
別段に規定されない限り、本明細書で使用されるすべての技術および科学用語は、本発明の属する技術分野における当業者によって普遍的に理解されるのと同じ意味を有する。典型的な方法および材料を下で説明するが、本明細書に説明されたものと類似のまたは等価の方法および材料を本発明の実施または試験において使用することもできる。本明細書に記載されたすべての刊行物および他の参考文献は、それらのすべてが引用により組み込まれる。矛盾する場合、定義を含め、本明細書が優先される。いくつかの文書が本明細書で引用されているが、この引用は、これらの任意の文書が当該技術分野における普遍的な一般的知識の一部を形成することの承認を構成していない。本明細書および特許請求の範囲を通じて、「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語、または「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「を含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、記載された完全体または完全体の群を包含することを含意するが、その他の完全体または完全体の群を排除しないことを含意するよう理解される。材料、方法、および例は、説明目的のみであり、限定しているよう意図されるものではない
【実施例】
【０２７５】
（実施例１：マウス抗ヒトＣＤ５２抗体の作製）
以下の作業実施例におけるマウス抗ヒトＣＤ５２抗体を、ＣＤ１背景を有するヒトＣＤ５２トランスジェニックマウス由来の脾細胞でＣＤ１系マウスを免疫化することによって作製し、ここで、トランスジェニックマウスのマウスＢ細胞およびＴ細胞の表面におけるヒトＣＤ５２のディスプレイをフローサイトメトリーによって検証した。トランスジェニックマウスは、免疫化したマウスと同じ背景（ＣＤ１）を有したので、トランスジェニックマウス由来の脾細胞は、天然のフォーマットにおける独特の非自己抗原として細胞表面にヒトＣＤ５２を呈し、免疫化した非トランスジェニックマウスは、主としてヒトＣＤ５２に対して抗体応答を開始した。
【０２７６】
ヒトＣＤ５２トランスジェニックマウス由来の脾細胞を回収するために、マウスを安楽死させ、脾臓を回収し、単一細胞の懸濁液を。シリンジを通過させることによって調製した。次に、ＣＤ１マウスを、１個体あたり１００μＬにおいて５×１０６個で、回収したヒトＣＤ５２陽性脾細胞で、フロイント完全アジュバントを用いてまたは用いずに、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって免疫化した。マウスに、フロイント不完全アジュバントを用いて腹腔内で１個体あたり１００μＬにおいて５×１０６個を用いた最初の免疫化の後、２週ごとに２追加免疫用量を与えた。
【０２７７】
基線レベル反応性を決定するために、免疫化の前に、および基線レベル反応性を決定するために、免疫化の各ラウンドの１週間後に、および抗ヒトＣＤ５２特異的免疫応答を決定するために、免疫化の各ラウンドの１週間後に、すべてのマウスから黄色のキャップをした血清分離チューブにおいて１個体あたり１００〜２００μＬの眼の出血を回収した。ヒトＣＤ５２タンパク質を発現するように操作したＣＨＯ  Ｋ１細胞に対して、ＦＡＣＳによって測定して高いレベルの抗ヒトＣＤ５２反応性を示したが、親ＣＨＯ  Ｋ１細胞に対しては示さなかったマウスを屠殺し、血液を採取し、脾臓を滅菌条件下で回収して、ハイブリドーマを作製した。免疫化の３〜４日後に融合パートナーとして非分泌マウスミエローマ細胞株ＳＰ２／０  Ａｇ１４またはＮＳ１ミエローマ細胞を用いることによって、ハイブリドーマを作製した。融合した細胞を、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含む完全増殖培地に配置して、ハイブリドーマを作製した。多くのハイブリドーマ上清をスクリーニングした後、特異的抗ヒトＣＤ５２抗体を産生するいくつかのクローンを選択し、さらにサブクローニングして、クローン集団を派生させた。抗ヒトＣＤ５２抗体を産生するハイブリドーマクローンを、さらなる展開のために規模拡大した。
【０２７８】
（実施例２：マウス抗ヒトＣＤ５２抗体の重鎖および軽鎖のＰＣＲ分析）
いくつかのマウス抗ヒトＣＤ５２モノクローナル抗体（図１Ｂ）を、抗ヒトＣＤ５２反応性の存在についてハイブリドーマ上清を試験することによって特定した。個々のクローンを選択し、マウス重鎖および軽鎖可変配列をＰＣＲクローニングおよび配列決定によって特定した。軽鎖の配列をＹＴＨ  ３４．５ＨＬ（すなわち、キャンパスＩＧカッパ（ラット）および試薬抗体ＣＦ１Ｄ１２（ＣＦ１Ｄ１２カッパ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））と比較して図２に示す。同様に、重鎖の配列をＹＴＨ３４．５  ＨＬおよび試薬抗体ＣＦ１Ｄ１２と比較して図３に示す。
【０２７９】
合計１０のズニーク（Ｚｕｎｉｑｕｅ）軽鎖可変配列および１１の独特な重鎖可変配列を特定した。１つがキャンパス（登録商標）およびＣＦ１Ｄ１２を含むなら、７の独特なＣＤＲ−１領域（表１）、８の独特なＣＤＲ−２領域（表２）、および７の独特なＣＤＲ−３領域（表３）を抗ヒトＣＤ５２抗体の軽鎖内で特定した。
【０２８０】
【表１】
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【０２８１】
【表２】
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【０２８２】
【表３】
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１つがキャンパス（登録商標）およびＣＦ１Ｄ１２を含なら、合計８の独特なＣＤＲ−１領域（表４）、１０の独特なＣＤＲ−２領域（表５）、および８の独特なＣＤＲ−３領域（表６）が、抗ヒトＣＤ５２抗体の重鎖内で特定された。
【０２８３】
【表４】
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【０２８４】
【表５】
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【０２８５】
【表６】
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１３の異なる抗ヒトＣＤ５２抗体内の特異的軽鎖および重鎖ＣＤＲ領域の関係を表７に示す。
【０２８６】
【表７−１】
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【０２８７】
【表７−２】
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（実施例３：マウス／ヒトキメラＩｇＧ１抗体を作製するためのマウスハイブリドーマ細胞からのマウスＩｇＧ可変領域遺伝子のクローニング）
製造元の示唆したプロトコールに従って、活動的に増殖しおよび抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を使用して、ＲＮＡを、トリアゾール試薬（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）を用いて単離した。ＲＮＡを、Ｎａｎｏｄｒｏｐを用いて光学密度を測定することによって定量化し、ゲル上で泳動することによって、またはバイオアナライザーを用いることによって、ＲＮＡの完全性を決定した。全ＲＮＡをｃＤＮＡへと逆転写し、重鎖および軽鎖の可変領域をポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅した。ｃＤＮＡを、０．５μｇ／μＬのＢＤ  Ｓｐｒｉｎｔ  ＰｏｗｅｒＳｃｒｉｐｔ逆転写酵素（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）およびオリゴ（ｄＴ）プライマー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号Ｙ０１２１２）ならびに１０μＭの下記に数字の列挙された逆方向プライマー（重鎖および軽鎖の定常領域に配置）を用いて、製造元のプロトコールに従って作製した。具体的には、３（配列番号７７）、１１（配列番号８５）、１９（配列番号９３）、２０（配列番号９４）、および２１（配列番号９５）の番号のプライマーを採用した。重鎖および軽鎖可変領域のＰＣＲ増幅を、上で説明したとおり作製したｃＤＮＡを用いて実施した。１μＬのｃＤＮＡを順方向プライマーおよび逆方向プライマーと、重鎖および軽鎖の両方について各１０μＭで混合し、２５ｍＭの２μＬのＭｇＣｌ２の存在下で、ＰＣＲスーパー混合物（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と混合した。ＰＣＲプログラムは、以下の工程で実施した：１）９５℃で２分間；２）９５℃で３０秒間；３）５６℃で３０秒間；４）６８℃で４５秒間；５）工程２〜４を２５回反復；６）６８℃で１０分間および１６℃で保持。ＰＣＲ産物を２％ゲル上で約３００〜４００ｂｐのサイズの可変領域配列産物の存在について分析し、適切なバンドを製造元の説明書に従ってｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯ  ＴＡクローニングキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）へとクローニングし、ＭＣ１３プライマーを用いて、クローニングした配列を確認した。逆転写のために用いたプライマーならびに軽鎖および重鎖配列のＰＣＲ増幅のために用いたプライマーを提示する：
軽鎖プライマー
１）Ｌｅａｄ−ＭＬκ＝５’  ＡＴＧＧＧＣＷＴＣＡＡＲＡＴＧＲＡＲＷＣＷＣＡＴ  ３’  （リーダー配列における順方向プライマー）  （配列番号７５）
２）  ＦＲ１−ＭＬκ＝  ５’  ＧＡＹＡＴＴＧＴＧＭＴＲＡＣＭＣＡＲＫＭＴＣＡＡ
３’  （フレームワーク１における順方向プライマー）  （配列番号７６）
３）  ＭＬκ定常  ＝  ５’  ＡＣＴＧＧＡＴＧＧＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＧＡ    ３’（定常領域における逆方向プライマー）  （配列番号７７）
４）  ＶＫ−ＭＫ  ＝  ５’  ＧＡＹＡＴＴＧＴＧＭＴＳＡＣＭＣＡＲＷＣＴＭＣＡ  ３’  （フレームワーク１における順方向プライマー）  （配列番号７８）
５）ＭＫＣ−定常  ＝  ５’  ＧＧＡＴＡＣＡＧＴＴＧＧＴＧＣＡＧＣＡＴＣ  ３’  （定常領域における逆方向プライマー）  （配列番号７９）
重鎖プライマー
６）ＭＨ−ＳＰ−ＡＬＴ１  ＝  ５’  ＡＴＧＲＡＳＴＴＳＫＧＧＹＴＭＡＲＣＴＫＧＲＴＴ  ３’  （リーダー配列における順方向プライマー）  （配列番号８０）
７）ＭＨ−ＳＰ−ＡＬＴ２  ＝  ５’  ＡＴＧＲＡＡＴＧＳＡＳＣＴＧＧＧＴＹＷＴＹＣＴＣＴ  ３’  （リーダー配列における順方向プライマー）  （配列番号８１）
８）  ＭＨ−ＦＲ１  ＝  ５’  ＳＡＧＧＴＳＭＡＲＣＴＧＣＡＧＳＡＧＴＣＴ  ３’
（フレームワーク１における順方向プライマー）  （配列番号８２）
９）ＭＨ−ＦＲ１−１  ＝  ５’  ＳＡＧＧＴＧＭＡＧＣＴＣＳＷＲＳＡＲＹＣＳＧＧＧ  ３’  （Ｆｏｒｗａｒｄ  ｐｒｉｍｅｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｆｒａｍｅ  ｗｏｒｋ  １）  （ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ８３）
１０）  ＭＨ−Ｊ２  ＝  ５’  ＴＧＡＧＧＡＧＡＣＴＧＴＧＡＧＡＧＴＧＧＴＧＣＣ
３’  （Ｊ領域における逆方向プライマー）  （配列番号８４）
１１）ＭＨ−γ−定常  ＝  ５’  ＡＹＣＴＣＣＡＣＡＣＡＣＡＧＧＲＲＣＣＡＧＴＧＧＡＴＡＧＡＣ  ３’  （定常領域における逆方向プライマー）  （配列番号８５）
１２）ＶＨ  ＭＨ１  ＝  ５’  ＳＡＲＧＴＮＭＡＧＣＴＧＳＡＧＳＡＧＴＣ  ３’  （フレームワーク１における順方向プライマー）  （配列番号８６）
１３）  ＶＨ  ＭＨ２  ＝  ５’  ＳＡＲＧＴＮＭＡＧＣＴＧＳＡＧＳＡＧＴＣＷＧＧ
３’  （フレームワーク１における順方向プライマー）  （配列番号８７）
１４）  ＶＨ  ＭＨ３  ＝  ５’  ＣＡＧＧＴＴＡＣＴＣＴＧＡＡＡＧＷＧＴＳＴＧ  ３’  （フレームワーク１における順方向プライマー）  （配列番号８８）
１５）  ＶＨ  ＭＨ４  ＝  ５’  ＧＡＧＧＴＣＣＡＲＣＴＧＣＡＡＣＡＲＴＣ  ３’（フレームワーク１における順方向プライマー）  （配列番号８９）
１６）  ＶＨ  ＭＨ５  ＝  ５’  ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＶＣＡＧＣＡＲＣＣ  ３’（フレームワーク１における順方向プライマー）  （配列番号９０）
１７）  ＶＨ  ＭＨ６  ＝  ５’  ＧＡＧＧＴＧＡＡＳＳＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣ  ３’（フレームワーク１における順方向プライマー）  （配列番号９１）
１８）  ＶＨ  ＭＨ７  ＝  ５’  ＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＴＧＧＡＡＧＴＧＴＣ  ３’（フレームワーク１における順方向プライマー）  （配列番号９２）
１９）  ＩｇＧ１  ＝  ５’  ＡＴＡＧＡＣＡＧＡＴＧＧＧＧＧＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＧＣ  ３’  （マウスＩｇＧ１  ＣＨ１定常領域における逆方向プライマー）  （配列番号９３）
２０）  ＩｇＧ２Ａ  ＝  ５’  ＣＴＴＧＡＣＣＡＧＧＣＡＴＣＣＴＡＧＡＧＴＣＡ  ３’  （マウスＩｇＧ２Ａ  ＣＨ１定常領域における逆方向プライマー）  （配列番号９４）
２１）  ＩｇＧ２Ｂ  ＝  ５’  ＡＧＧＧＧＣＣＡＧＴＧＧＡＴＡＧＡＧＴＧＡＴＧＧ
３’  （マウスＩｇＧ２Ｂ  ＣＨ１定常領域における逆方向プライマー）  （配列番号９５）
縮重プライマーは、重鎖および軽鎖双方のフレームワーク１領域の５’末端におけるいくらかの縮重をもたらした。いくつかの独立した重鎖可変領域クローン由来のおよび軽鎖可変領域クローン由来の共通ＤＮＡ配列を用いて、アミノ酸配列を派生させた。
【０２８８】
機能的キメラ抗ＣＤ５２抗体を、重鎖および軽鎖可変領域を、ヒトＩｇＧ１重鎖（キャンパス−１Ｈ（登録商標）において認められるものと同一の配列）およびヒトκ軽鎖定常領域（キャンパス−１Ｈ（登録商標）において認められるものと同一の配列）をコードするＤＮＡにそれぞれ接合することによって作製した。ＣＤ５２抗体軽鎖をコードするｐＣＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）軽鎖ベクターを作製するために、軽鎖可変配列をＰＣＲ増幅し、ｐＣＥＰ４  ＬＩＣ軽鎖ベクターへのリガーゼ非依存性クローニングによって操作し、５’末端におけいてヒトκシグナル配列および３’末端において軽鎖定常領域を有するようにした。同様に、ｐＣＥＰ４重鎖ベクターを作製するために、重鎖配列の可変領域を、ｐＣＥＰ４  ＬＩＣ重鎖ベクターへのリガーゼ非依存性クローニングによって操作して、５’末端においてヒトκ鎖シグナル配列ならびに、３’末端においてＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域を包含する重鎖定常領域を有するようにした。重鎖および軽鎖の両方についての定常領域アミノ酸配列は、キャンパス１Ｈ抗体に存在する定常領域のものと同一である。
【０２８９】
簡潔には、ｐＣＥＰ４  ＬＩＣベクターを。製造元の推奨に従って、適切な緩衝液中のＢｆｕＡ１（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ−ＮＥＢ）を用いて消化し、完全な消化の後に、ベクターを、ＰｕｒｅＬｉｎｋ  ＰＣＲ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｏｉｎ  Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて精製した。次に、直鎖状になったプラスミドをＴ４  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）を用いて処理して、一本鎖末端を生じ、これを用いて、可変領域断片をクローニングした。重鎖特異的ｐＣＥＰ４  ＬＩＣベクターを、重鎖可変領域をクローニングするのに用い、軽鎖特異的ｐＣＥＰ４  ＬＩＣベクターを、軽鎖可変領域をクローニングするのに用いた。ｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯ重鎖可変領域含有プラスミドまたはｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯ軽鎖可変領域含有プラスミドをテンプレートとして、および可変鎖特異的配列およびベクターオーバーハングを含むプライマーを用いたＰＣＲによって、可変領域インサートを作製した。ＶＥＮＴ
ＤＮＡポリメラーゼ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）をインサートのＰＣＲ増幅に用いた。ＰＣＲ増幅したインサートをゲル精製し、Ｔ４  ＤＮＡポリメラーゼで処理して、一本鎖末端を作製した。重鎖および軽鎖ならびに個々の可変領域インサート断片のために調製されたベクターを組み合わせて、室温で１０分間インキュベートし、これを用いて、ＴＯＰＯ１０細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を形質転換し、アンピシリン耐性コロニーを拾い上げ、配列を検証した。正確な重鎖および軽鎖配列をインフレームで挿入したｐＣＥＰ４重鎖およびｐＣＥＰ４軽鎖クローンを増幅し、タンパク質生成のために使用した。重鎖コンストラクトを相応の軽鎖コンストラクトと１：１の比でＨＥＫ２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）へと、陽イオン性脂質リポフェクタミン（商標）２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて同時形質移入した。条件培地を形質移入の３日後に回収し、キメラ抗体を、プロテインＡクロマトグラフィーを用いて精製した。このクロマトグラフィーの方法のために、培地をプロテインＡに添加して、５０カラム容積のＰＢＳで洗浄した。キメラ抗体を５カラム容積１２．５ｍＭクエン酸、ｐＨ３．０で溶出した。溶出した抗体のｐＨを、０．５Ｍ  ＨＥＰＥＳの添加によって中和した。緩衝液をＰＢＳへと、ＰＤ−１０ゲル濾過カラムを用いることによって交換した。
【０２９０】
（実施例４．キメラ抗ヒトＣＤ５２モノクローナル抗体のエピトープ特異性の分析）
クローンのエピトープ特異性を、キメラ抗体の、アラニン走査変異誘発によって作製したヒトＣＤ５２の変異体を発現するよう操作された細胞株のパネルに結合する能力を評価することによって決定した（図４）。ＣＤ５２の１２個のアミノ酸細胞外領域の最初の１０個のアミノ酸の抗体置換を、ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ  ＱＵＩＫＣＨＡＮＧＥ  ＩＩ  ＸＬ位置指定変異誘発キットを用いてヒトＣＤ５２  ｃＤＮＡにおいてｐｃＤＮＡ３．１発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）において実施した。野生型または変異体ＣＤ５２配列をコードするｐｃＤＮＡ３．１ベクターを配列検証し、リポフェクタミン（商標）を用いて、Ｇ４１８を含む培地における選択によって、ＣＨＯ細胞へと形質移入し、野生型またはアラニン変異体ＣＤ５２を発現するＣＨＯ細胞株を作出した。抗ヒトＣＤ５２キメラ抗体のエピトープ特異的結合を、野生型および変異体ＣＤ５２発現細胞に対する抗体の結合をＦＡＣＳによって測定することによって決定した。ＦＡＣＳ分析は、ＰＥ抱合したヤギ抗ヒト二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｓ）を用いてキメラ抗ＣＤ５２抗体の結合を検出することによって実施した。図５Ａ〜５Ｃは、野生型および変異体ＣＤ５２発現細胞株に対する抗ＣＤ５２モノクローナル抗体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。ＣＤ５２は非常に短い１２のアミノ酸のＧＰＩ固定タンパク質だが、ＦＡＣＳの結果は、３組の抗体があることを明確に規定する：（１）Ｎ末端結合基（４Ｂ１０など）；（２）中間結合基（４Ｇ７、９Ｄ９、および１１Ｃ１など）、ならびに（３）Ｃ末端結合基（２３Ｅ６、１２Ｇ６、および２Ｃ３など）。（実施例２の終わりに説明された略称によって特定される）抗ヒトＣＤ５２モノクローナル抗体のエピトープ特異性を表８に要約する。
【０２９１】
【表８】
2014195474.tif 000010
ＣＤ５２は、極めて小さな抗原だが、比較的大きな親水性Ｎ連結グリカン部分および疎水性ＧＰＩアンカーを有する。糖が抗ＣＤ５２抗体によって認識されるエピトープの全部または部分を構成し得る可能性を探索するために、ＣＨＯ−ＣＤ５２細胞からアフィニティ精製されたＣＤ５２の試料を、エンドグリコシダーゼＰＮＧａｓｅ−Ｆで処理して、抗原からＮ連結糖を完全に除去した。次に、処理された試料および偽の処理をした対照試料をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、フッ化ポリビニリデン（ＰＶＤＦ）メンブレン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）へとブロッティングし、示される抗ＣＤ５２キメラモノクローナル抗体の各々の最終３μｇ／ｍＬでプローブづけし、その後。高感度化学発光検出を用いた標準的なウェスタンブロッティング手順に従って顕色した。キャンパス−１Ｈ（登録商標）（Ｃ１Ｈ）を用いたおよび二次抗体単独（２°単独）を用いたブロットをそれぞれ、陽性対照および陰性対照として泳動し、モノクローナル抗体の各々でプローブづけした（図５Ｄ）。本結果は、グリコシル化したＣＤ５２対脱グリコシル化したＣＤ５２についての抗体に対する異なる結合優先性を明らかにした。この特徴づけは、１１の抗体の４種類の結合群へのカテゴリー分けを可能にした：
１．グリコシル化したＣＤ５２対脱グリコシル化したＣＤ５２について明らかな優先性を持たない結合を呈する抗体（４Ｇ７、９Ｄ９）
２．グリコシル化したＣＤ５２に特異的な結合を呈する抗体（７Ｆ１１、４Ｂ１０）
３．脱グリコシル化したＣＤ５２に特異的な結合を呈する抗体（８Ｇ３）
４．グリコシル化したＣＤ５２よりも脱グリコシル化したＣＤ５２に対する結合優先性を呈する抗体（１２Ｇ６、５Ｆ７、２３Ｅ６、２Ｃ３、１１Ｃ１１、３Ｇ７）。
【０２９２】
（実施例５：キメラ抗ＣＤ５２抗体のＣＤＣ活性）
補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）アッセイを、下に説明する通り実施した。簡潔には、ＣＤ５２タンパク質を発現するよう操作したＣＨＯ  Ｋ１細胞（ＣＨＯ−ＣＤ５２）を標的細胞として使用し、Ｎａ２５１ＣｒＯ４（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ，  Ｂｏｓｔｏｎ，  ＭＡ）を用いて３７℃で１〜２時間標識した。細胞を洗浄し、Ｘ−Ｖｉｖｏ培地で再懸濁し、抗ヒトＣＤ５２抗体と混合して２．２μｇ／ｍＬの終濃度にした。ヒト補体（Ｓｉｇｍａ）を実験ウェルに添加して１０％の終濃度にした。１〜５時間のインキュベーション後、２５μＬの無細胞上清を各ウェルから回収し、ＭＩＣＲＯＢＥＴＡ
ＴＲＩＬＵＸ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｃｏｕｎｔｅｒ  （Ｗａｌｌａｃ，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  ＭＤ）において計数した。自発的に放出される５１Ｃｒの量を培地のみにおいて標的細胞をインキュベートすることによって得た。標的細胞からの自発的な放出は、典型的には２０％未満であった。組み込まれた５１Ｃｒの総量を、蒸留水における１％トリトンＸ−１００を添加することによって決定し、溶解パーセントを以下の通り算出した：［（１分間あたりの試料計数（ｃ．ｐ．ｍ）−自発的ｃ．ｐ．ｍ）／（総ｃ．ｐ．ｍ−自発的ｃ．ｐ．ｍ）］×１００。
【０２９３】
１２の異なるキメラ抗ＣＤ５２抗体（マウス可変領域およびヒトＩｇＧ１定常領域）を、ＣＨＯ−ＣＤ５２細胞におけるヒト補体を用いたＣＤＣアッセイにおいて試験した。キャンパス−１Ｈ（登録商標）ヒト化抗体を陽性対照として用いた。陰性対照は、キャンパス−１Ｈ（登録商標）欠損であった（キャンパス−１Ｈ（登録商標）の無細胞結合最小変異体‐Ｈ２ループ重鎖ＣＤＲ２領域における２つの点変異（Ｋ５２ｂＤおよびＫ５３Ｄ；Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ  ＬＫ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  １６２：３６６３−３６７１  （１９９９）））。結果は、キメラ抗体が、ＣＤ５２発現細胞におけるＣＤＣ殺滅を仲介することができることを示す。キメラ抗体のうちのいくつかは、キャンパス（登録商標）と等価のまたはそれより良好な頑強な殺滅を仲介した（図６）。
【０２９４】
（実施例６：キメラ抗ＣＤ５２抗体のＡＤＣＣ活性）
抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）アッセイを下で説明する通り実施した。簡潔には、ＣＤ５２タンパク質を発現するよう操作されたＣＨＯ  Ｋ１細胞（ＣＨＯ−ＣＤ５２）を標的細胞として用い、３７℃で１〜２時間、Ｎａ２５１ＣｒＯ４（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ
Ｎｕｃｌｅａｒ，  Ｂｏｓｔｏｎ，  ＭＡ）を用いて標識した。細胞を洗浄し、Ｘ−Ｖｉｖｏ培地で再懸濁し、抗ヒトＣＤ５２抗体と混合して終濃度１．１μｇ／ｍＬにした。ヒトＰＢＭＣをエフェクター細胞として用い、１：１００の標的対エフェクター細胞比で添加した。６時間の一晩のインキュベーション後、２５μＬの無細胞上清を各ウェルから回収し、ＭＩＣＲＯＢＥＴＡ  ＴＲＩＬＵＸ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｃｏｕｎｔｅｒ  （Ｗａｌｌａｃ，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  ＭＤ）において計数した。自発的に放出された５１Ｃｒの量を、培地のみにおいて標的細胞をインキュベートすることによって得た。標的細胞からの自発的な放出は、典型的には２０％未満であった。組み込まれた５１Ｃｒの総量を、蒸留水における１％トリトンＸ−１００を添加することによって決定し、溶解パーセントを以下の通り算出した：［（試料ｃ．ｐ．ｍ．−自発的ｃ．ｐ．ｍ．）／（総ｃ．ｐ．ｍ．−自発的ｃ．ｐ．ｍ．）］×１００。
【０２９５】
１２の異なるキメラ抗ＣＤ５２抗体（マウス可変領域およびヒトＩｇＧ１定常領域）を、ヒトＰＢＭＣをエフェクター細胞として使用するＡＤＣＣアッセイにおいて試験した。キャンパス−１Ｈ（登録商標）ヒト化抗体を陽性対照として使用した。陰性対照として使用したのは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）欠損であった（キャンパス−１Ｈ（登録商標）の無細胞結合最小変異体‐Ｈ２ループ重鎖ＣＤＲ２領域における２つの点変異（Ｋ５２ｂＤおよびＫ５３Ｄ；Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ，  １９９９，  上述））。本結果は。キメラ抗体がＣＤ５２発現細胞におけるＡＤＣＣ殺滅を仲介することができることを示す。キメラ抗体のいくつかは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）と同等のまたはより良好な頑強な殺滅を仲介した（図７）。
【０２９６】
（実施例７：規定されたリンパ球集団に対するキメラ抗ＣＤ５２抗体の結合の評価）
以下の蛍光色素抱合抗体をフローサイトメトリー分析に用いた：抗ＣＤ３−ＦＩＴＣ、抗ＣＤ２７−ＰＥ、抗ＣＤ６２Ｌ−ＰＥ  Ｃｙ５、抗ＣＤ５６−  ＰＥ  Ｃｙ７、抗ＣＤ１６−ＡＰＣ  Ｃｙ７  （ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）、抗ＣＤ４５ＲＡ−ＥＣＤ  （Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）、抗ＣＤ１９−パシフィックブルー、抗ＣＤ４−ＡＰＣ  Ｃｙ５．５、および抗ＣＤ８パシフィックオレンジ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＣＡ）。マウスキメラ抗ヒトＣＤ５２抗体すべておよびヒト化キャンパス−１Ｈ（登録商標）をＡｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ６４７（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）に抱合した。健常なヒト末梢血単核細胞を、凍結保存したバフィーコートまたは、販売業者（Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ，  ＮＹ，  ＵＳＡ）から得られた正常ドナーの血液から分離された単核細胞のいずれかから得た。単核細胞の濃縮のために、ヒト末梢血を滅菌済みリン酸緩衝塩類溶液（ＰＢＳ）で１：１に希釈し、Ｆｉｃｏｌｌ−ｈｙｐａｑｕｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｕｐｐｓａｌａ，  Ｓｗｅｄｅｎ）上で注意深く層状にし、室温で３０分間遠心分離した。単核細胞の間期層を引き出し、５％ウシ胎仔血清を含むＰＢＳにおいて洗浄した（ＦＡＣＳ緩衝液）。混入している赤血球細胞（ＲＢＣ）をＲＢＣ溶解溶液で溶解した（Ｓｉｇｍａ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ，  ＵＳＡ）。細胞を冷ＦＡＣＳ緩衝液において再懸濁し、細胞片を、４０ミクロンフィルターを用いて除去した。１０色のフローサイトメトリーを実施して、キャンパス−１Ｈ（登録商標）と比較した９のキメラ抗ヒトＣＤ５２抗体（４Ｂ１０、７Ｆ１１、９Ｄ９、５Ｆ７、２Ｃ３、４Ｇ７、２３Ｅ６、８Ｇ３、３Ｇ７）の結合能力を評価した。
【０２９７】
簡潔には、ＦＡＣＳ緩衝液における１×１０６ＰＢＭＣの複製物を９のキメラ抗ヒトＣＤ５２抗体（４Ｂ１０、７Ｆ１１、９Ｄ９、５Ｆ７、２Ｃ３、４Ｇ７、２３Ｅ６、８Ｇ３、３Ｇ７）のうちの１つとともに、ＣＤ３、ＣＤ２７、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ５６、ＣＤ１９、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ１６に対する抗体のあらかじめ用量設定した希釈物のカクテルとともに、４℃で３０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、１％パラホルムアルデヒドを含むＰＢＳにおいて固定した。染色した細胞の１００，０００の事象をＢＤ  ＬＳＲ−ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，  ＣＡ）において取得し、データを、ＦｌｏｗＪｏ  ７．２バージョンソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ，  Ｉｎｃ，  Ｏｒｅｇａｎ，  ＵＳＡ）を用いて分析した。異なる表現型特徴を有する複数のサブセットを、Ｂリンパ球およびＴリンパ球間で規定し、ＣＤ５２がヒトリンパ球すべてにおいて発現することが示された。１０色のフローサイトメトリー分析を実施して、リンパ球サブセットを特定し、規定されたサブセットにおける細胞表面ＣＤ５２に対する抗ＣＤ５２抗体の結合特徴における類似性と差を評価した。マーカーの組み合わせを用いて、Ｂ細胞、Ｔ細胞、およびＮＫ細胞の系譜に相応する１１の表現型として異なる細胞集団をまず、リンパ球ゲートから規定した。次に、ＣＤ５２の発現を検出する抗ＣＤ５２抗体の能力に対応する染色強度を評価した。ヒストグラム（図８Ａ〜８Ｃ）は個々のリンパ球集団における各抗体を用いたＣＤ５２の検出のレベルの比較を示す。本データは、抗体が、ＣＤ５２に対する結合において顕著な差を呈することを示す。４Ｂ１０、９Ｄ９、７Ｆ１１、およびキャンパス−１Ｈ（登録商標）での検出のレベルは同程度だが、４Ｂ１０は、検討された細胞サブセットのほぼすべてにおいて、キャンパス−１Ｈ（登録商標）を含む他の抗体よりも最高レベルの検出を示す。その一方で、３Ｇ７、４Ｇ７、８Ｇ３、および２３Ｅ６抗体でのＣＤ５２の検出レベルは、顕著により低い。本結果は、異なる細胞集団におけるＣＤ５２を認識する能力に関して、抗体間での階層性を示し、４Ｂ１０が最高でかつ３Ｇ７が最低である。興味深いことに、これらの差は、ＣＤ４エフェクターに対してあまり明白ではなく、ＣＤ５２が比較的より低いレベルで発現するように見えるＮＫ細胞サブセットに関してより明白であった。結合特徴における変動は、キメラ抗体の特性が。キャンパス−１Ｈ（登録商標）と顕著に異なるだけでなく、抗体間の特性の差も反映していることを示す。
【０２９８】
（実施例８：ヒトＣＤ５２トランスジェニックマウスにおけるキメラ抗ＣＤ５２抗体（７Ｆ１１、８Ｇ３、２３Ｅ６、１２Ｇ６、４Ｂ１０、および５Ｆ７）の分析）
ヒトＣＤ５２トランスジェニックマウスにキャンパス（登録商標）またはキメラ抗ＣＤ５２抗体（７Ｆ１１、８Ｇ３、２３Ｅ６、１２Ｇ６、４Ｂ１０、および５Ｆ７）のいずれかを投与して、リンパ球枯渇のレベルを検討した。マウスに、１ｍｇ／ｋｇの用量で１００μＬの容積でキャンパス（登録商標）またはキメラ抗ＣＤ５２抗体のいずれかを腹腔内注射した。３日後、マウスを屠殺し、血液および脾臓を回収して、Ｂ細胞およびＴ細胞の枯渇のレベルを決定した。フローサイトメトリーを利用して、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスの循環末梢血または脾臓に存在する全ヘルパーＴ細胞、細胞毒性Ｔ細胞、およびＢ細胞の絶対数を評価した。これらのリンパ球集団を、以下のタンパク質抗原の表面発現によって規定した：ＣＤ４発現は、ヘルパーＴ細胞集団を特定し、ＣＤ８発現は、細胞毒性Ｔ細胞集団を特定し、ＣＤ１９発現はすべての成熟Ｂ細胞集団を特定する。有意なレベルのＴ細胞およびＢ細胞の枯渇を１２Ｇ６および４Ｂ１０抗体の両方について観察し、該レベルは、キャンパス（登録商標）で観察された枯渇に匹敵した。キャンパス（登録商標）、キメラ１２Ｇ６、またはキメラ４Ｂ１０抗体のいずれかを用いた処置は、この用量レベルで処置されたマウスの血液および脾臓の両方においてＴ細胞およびＢ細胞を有意に減少させた。７Ｆ１１および５Ｆ７キメラ抗体は、血液および脾臓におけるＴ細胞枯渇レベルの有意なレベルを結果として生じたが、両方の区画におけるＢ細胞を枯渇させる点で有効がより低かった。２３Ｅ６抗体による処置は、この用量における枯渇の中程度のレベルを結果的に生じたが、より低い親和性の８Ｇ３抗体では枯渇はほとんどないしまったく観察されなかった。
【０２９９】
図９Ａ〜９Ｃは、キメラ抗体投与の７２時間後の血液中のＣＤ４  Ｔ細胞、ＣＤ８  Ｔ細胞、およびＣＤ１９  Ｂ細胞のレベルを示す。図１０Ａ〜１０Ｃは、投与の７２時間後の脾臓中のＣＤ４  Ｔ細胞、ＣＤ８  Ｔ細胞、およびＣＤ１９  Ｂ細胞のレベルを示す。
【０３００】
（実施例９：ヒトＣＤ５２トランスジェニックマウスにおけるキメラ抗ＣＤ５２抗体（２Ｃ３、３Ｇ７、４Ｂ１０、９Ｄ９、および１１Ｃ１１）の分析）
ヒトＣＤ５２トランスジェニックマウスに、キャンパス（登録商標）またはキメラ抗ＣＤ５２抗体（２Ｃ３、３Ｇ７、４Ｂ１０、９Ｄ９、および１１Ｃ１１）のいずれかを投与して、リンパ球枯渇のレベルを検討した。マウスに、１００μＬ容積の１ｍｇ／ｋｇの用量でのキャンパス（登録商標）またはキメラ抗ＣＤ５２抗体のいずれかを静脈内注射した。３日後、マウスを屠殺し、血液および脾臓を回収し、Ｂ細胞およびＴ細胞の枯渇を決定した。フローサイトメトリーを利用して、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスの循環末梢血に存在する全ヘルパーＴ細胞、細胞毒性Ｔ細胞、およびＢ細胞の絶対数を評価した。これらのリンパ球集団は、以下のタンパク質抗原の表面発現によって規定した：ＣＤ４発現は、ヘルパーＴ細胞集団を特定し、ＣＤ８発現は、細胞毒性Ｔ細胞集団を特定し、ＣＤ１９発現はすべての成熟Ｂ細胞集団を特定する。有意なレベルのＴ細胞およびＢ細胞の枯渇を血液および脾臓の両方において、いくつかの抗体について観察した。２Ｃ３および９Ｄ９についての枯渇活性は。キャンパス（登録商標）を用いて観察されたものに匹敵し、有意なレベルのＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞ならびにＣＤ１９Ｂ細胞が枯渇した。また、キメラ４Ｂ１０による処置は、トランスジェニックマウスの血液におけるリンパ球の数の有意な減少を結果として生じた。キメラ抗体３Ｇ７または１１Ｃ１１抗体のいずれかを用いた治療が、血液中のＴ細胞を有意に枯渇させたのに対し、存在するＢ細胞のレベルは、この用量で有意に影響されなかった。
【０３０１】
図１１Ａ〜１１Ｃは、キメラ抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４  Ｔ細胞、ＣＤ８  Ｔ細胞、およびＣＤ１９  Ｂ細胞のレベルを示す。
【０３０２】
（実施例１０：抗ＣＤ５２抗体（７Ｆ１１、４Ｂ１０、および１２Ｇ６）の有効性の分析）
４０個体のＳＣＩＤマウス（１群あたりｎ＝８）に右側腹部に、１００μＬの容積で１×１０６個のＢ１０４腫瘍細胞を注射した。腫瘍細胞注射の１１日後に、キャンパス（登録商標）、７Ｆ１１、４Ｂ１０、または１２Ｇ６キメラ抗体を用いた処置を開始した。抗体を毎週１回、１０ｍｇ／ｋｇで、実験の残りを通じて腹膜内注射によって投与した。処置していない群におけるマウスはすべて、２９日間の中央値生存で、屠殺を必要とする漸増的に増殖する腫瘍を発達させた。キャンパス（登録商標）による治療は、未処置の群と比較して生存において統計的に優位な増大を結果として生じた（５０日間の中央値生存（ＭＳ）で、ｐ＜０．０００１）。また、キメラ抗ＣＤ５２抗体による処置は、処置していないマウスと比較して生存において統計的に有意な増大を結果として生じた（７Ｆ１１および４Ｂ１０についてはｐ＜０．０００１、および１２Ｇ６についてはｐ＝０．００２０）。生存率に基づいて、７Ｆ１１および４Ｂ１０の両方の抗体の活性は、キャンパス（登録商標）よりも大きいようであった（キャンパス（登録商標）についての５０％生存と比較して７Ｆ１１については６３％生存、および４Ｂ１０については７５％生存）。図１２は、処置後のマウスの生存パーセントを示す。
【０３０３】
（実施例１１：抗ＣＤ５２抗体（２Ｃ３、８Ｇ３、および２３Ｅ６）の有効性の分析）
４０個体のＳＣＩＤマウス（１群あたりｎ＝８）に１×１０６個のＢ１０４腫瘍細胞を１００μＬ容積で右側腹部に注射した。腫瘍細胞注射の１１日後に、キャンパス（登録商標）、２Ｃ３、８Ｇ３、または２３Ｅ６キメラ抗体を用いた処置を開始した。抗体を週１回、実験の残りを通じて腹腔内注射によって投与した。未処置の群におけるマウスはすべて、２６日間の生存中央値で屠殺を必要とする漸増的に増殖する腫瘍を発達させた。キャンパス（登録商標）、２３Ｅ６、および２Ｃ３抗体を用いた治療は、生存において統計的に有意な延長を結果として生じた（それぞれｐ＝０．００２５、ｐ＝０．０００７、およびｐ＝０．０００２）。図１３は、処置後のマウスの生存パーセントを示す。
【０３０４】
（実施例１２：異種移植腫瘍モデルにおけるキメラ抗ＣＤ５２抗体の有効性の分析）
４０個体のＳＣＩＤマウス（１群あたりｎ＝８）に１×１０６個のＢ１０４腫瘍細胞を１００μＬ容積で右側腹部に注射した。腫瘍細胞注射の１１日後に、キャンパス（登録商標）、９Ｄ９、または４Ｂ１０キメラ抗体のいずれかを用いた処置を開始した。抗体を週１回１０ｍｇ／ｋｇで、実験の残りを通じて腹腔内注射によって投与した。未処理の群におけるマウスはすべて、２７日間の生存中央値で屠殺を必要とする漸増的に増殖する腫瘍を発達させた。キャンパス（登録商標）を用いた処置は、未処置の群（生存中央値に達しておらず、ｐ＜０．０００１）と比較して生存において統計的に有意な延長を結果として生じた。また、キメラ抗ＣＤ５２抗体を用いた処置は。未処理のマウスと比較して生存において統計的に有意な延長を結果として生じた（９Ｄ９および４Ｂ１０についてｐ＜０．０００１）。生存曲線の統計分析は、９Ｄ９キメラ抗体が、本実験においてキャンパス（登録商標）に匹敵する活性を示す（ｐ＝０．０６７５）ことを明らかにする。図１４は、処置後のマウスの生存パーセントを示す。
【０３０５】
（実施例１３：異種移植腫瘍モデルにおけるキメラ抗ＣＤ５２抗体（２Ｃ３および１１Ｃ１１の有効性の分析））
４０個体のＳＣＩＤマウス（１群あたりｎ＝８）に１×１０６個のＢ１０４腫瘍細胞を１００μＬ容積で右側腹部に注射した。腫瘍細胞注射の１１日後に、キャンパス（登録商標）、２Ｃ３、または１１Ｃ１１キメラ抗体のいずれかを用いた処置を開始した。抗体を週１回１０ｍｇ／ｋｇで、実験の残りを通じて腹腔内注射によって投与した。未処置の群におけるマウスはすべて、３２日間の生存中央値で屠殺を必要とする漸増的に増殖する腫瘍を発達させた。キャンパス（登録商標）を用いた処置は、未処理の群（生存中央値に達しておらず、ｐ＜０．０００１）と比較して生存において統計的に有意な延長を結果として生じた。また、キメラ抗ＣＤ５２抗体を用いた処置は。未処理のマウスと比較して生存において統計的に有意な延長を結果として生じた（２Ｃ３についてはｐ＜０．０００１、および１１Ｃ１１についてはｐ＝０．０００４）。生存曲線の統計分析は、２Ｃ３および１１Ｃ１１の両キメラ抗体が、キャンパス（登録商標）に匹敵する活性を示す（２Ｃ３についてはｐ＝０．３１７３、およおび１１Ｃ１１についてはｐ＝０．９７０３）ことを明らかにする。図１５は、キャンパス（登録商標）、２Ｃ３キメラ抗体、または１１Ｃ１１キメラ抗体を用いた処置後のマウスの生存パーセントを示す。
【０３０６】
（実施例１４：ヒト化抗ＣＤ５２抗体４Ｂ１０の作製および分析）
ヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体４Ｂ１０を、マウス４Ｂ１０抗体からヒト抗体可変領域フレームワークへとＣＤＲ領域を移植することによって作製した。マウス４Ｂ１０重鎖および軽鎖配列を、ウェブベースの配列アラインメントによって評価し、ＣＤＲ移植片に好適な受容体として機能するであろうヒト生殖系列重鎖および軽鎖フレームワーク配列を特定した（図１６）。ＫａｂａｔおよびＩＭＧＴ（登録商標）によるＣＤＲ領域を規定する残基を、高い配列同一性を有するヒトフレームワーク領域に重ね、ヒト化重鎖および軽鎖配列を作製した。重ねた４Ｂ１０重鎖および軽鎖配列の視覚的検査および配列分析を実施して、もっとも好適な受容体配列を特定した。高い類似性を有する生殖系列配列すべてのうち、重鎖のためのＶＨ３−７２生殖系列配列および軽鎖のためのＶＫ２−Ａ１８ｂ（ヒト生殖系列配列は、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，  ＩＭ，  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｊ．，  １４（１８）：４６２８−４６３８  （１９９５）；Ｃｏｏｋ，  ＧＰ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，  ７：１６２−１６８  （１９９４）による刊行物において説明されるウェブサイトにおいて認めることができる）をそれらの高い程度の類似性、マウスフレームワーク領域に対する配列類似性から、ＣＤＲ受容体配列としてのＣＤＲループ構造の最小破壊のために選択した。４Ｂ１０についての重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、２、および３の配列を、ＶＨ３−７２およびＶＫ２−Ａ１８ｂヒトフレームワーク領域へとそれぞれ移植し、４Ｂ１０についてのヒト化重鎖および軽鎖配列を作製した（図１７；図１１０に図示）。
【０３０７】
（実施例１５：キメラおよびヒト化４Ｂ１０モノクローナル抗体の結合活性の評価）
キメラおよびヒト化４Ｂ１０抗体を、実施例３において説明される通り作製して精製し、ＣＤ５２を内在的に発現するＢ細胞株Ｂ１０４に結合する該抗体の能力について分析した。簡潔には、２×１０５個のＢ１０４細胞を５％ウシ胎仔血清および５％ヤギ血清を含むＰＢＳにおける抗体（０．０２μｇ／ｍＬ〜１６．７μｇ／ｍＬ）とともにインキュベートした。結合した抗体を、キメラヒト化抗ＣＤ５２抗体を検出するＦＩＴＣ標識ヤギ抗ヒト二次抗体で検出した。標識した細胞を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒシステム（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて分析した。図１８は。２°のみの試料のものに対して正規化された（除された）各試料の幾何平均蛍光強度における倍数増加を示す。本アッセイにおいて使用されるヒト化およびキメラ抗体の１１の異なる濃度をＸ軸上に示し（Ｘ軸上の１２番目の点は二次抗体単独である）、平均蛍光における幾何平均倍数増加をＹ軸上に示す。本結果は、ヒト化４Ｂ１０抗体が、ＣＤ５２発現細胞に対するキメラ４Ｂ１０抗体と同程度にまたはそれよりもわずかにより良好に結合したことを示す。
【０３０８】
（実施例１６：キメラおよびヒト化４Ｂ１０モノクローナル抗体のＡＤＣＣ活性の評価）
ヒト化およびキメラ４Ｂ１０抗体を、ＣＤ５２発現細胞のＡＤＣＣ殺滅を仲介する能力について評価した。ＡＤＣＣアッセイを実施例６において上で説明したとおり実施した。簡潔には、ＣＤ５２タンパク質を発現するよう操作されたＣＨＯ  Ｋ１細胞（ＣＨＯ−ＣＤ５２）を標的細胞として使用し、Ｎａ２５１ＣｒＯ４（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ，  Ｂｏｓｔｏｎ，  ＭＡ）を用いて３７℃で１〜２時間標識した。細胞を洗浄し、１０％ＦＣＳを有するＲＰＭＩ  １６４０培地において再懸濁し、キメラまたはヒト化４Ｂ１０抗体と、１０μｇ／ｍＬ〜０．０１μｇ／ｍＬまでの範囲の種々の濃度で混合した。ヒトＰＢＭＣをエフェクター細胞として使用し、１：５０の標的対エフェクター細胞比で添加した。６時間の一晩のインキュベーション後、２５μＬの無細胞上清を各ウェルから回収し、ＭＩＣＲＯＢＥＴＡ  ＴＲＩＬＵＸ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｃｏｕｎｔｅｒ  （Ｗａｌｌａｃ，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  ＭＤ）において計数した。自発的に放出された５１Ｃｒの量を、培地単独における標的細胞をインキュベートすることによって得た。標的細胞からの自発的な放出は典型的には、２０％未満であった。組み込まれた５１Ｃｒの総量を。蒸留水における１％トリトンＸ−１００を添加することによって決定し、溶解パーセントを以下の通り算出した：［（試料ｃ．ｐ．ｍ．−自発的ｃ．ｐ．ｍ．）／（総ｃ．ｐ．ｍ．−自発的ｃ．ｐ．ｍ．）］×１００。
【０３０９】
図１９は、アッセイにおいて使用した対照、キメラ、およびヒト化４Ｂ１０抗体の濃度を示し（Ｘ軸）、Ｙ軸は、特異的殺滅の％を示す。本結果は、ヒト化４Ｂ１０抗体がキメラ４Ｂ１０抗体と同等のまたはわずかに良好なＡＤＣＣ殺滅を仲介したことを示す。対照ＩｇＧ１アイソタイプ対照は、試験した濃度において、低レベルの背景殺滅しか示さなかった。
【０３１０】
（実施例１７：キメラおよびヒト化４Ｂ１０モノクローナル抗体のＣＤＣ活性の評価）
ヒト化およびキメラ４Ｂ１抗体を、ヒト補体の存在下で、ＣＤ５２を内在的に発現するＢ１０４細胞に及ぼす細胞毒性効果を仲介する能力について評価した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、アッセイにおいて残った生細胞を測定した。簡潔には、Ｂ１０４細胞（標的細胞）を９６ウェルプレートにおいて２．５×１０４個／ウェルで蒔種し、１μｇ／ｍＬ〜２５μｇ／ｍＬの範囲の種々の濃度でキメラまたはヒト化４Ｂ１０抗体と、および終濃度が１０％になるまでのヒト補体と混合した。抗体を有さない補体単独、および補体を有さない抗体単独を対照として用い、背景を決定した。３７℃で３時間のインキュベーション後、プレートを１５００ｒｐｍで３分間遠心分離し、ペレットに存在する生細胞を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏアッセイを用いて測定した。プレートをＥｎｖｉｓｉｏｎ機械で読み取った。図２０は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏアッセイを用いて測定した、アッセイにおいて存在した生細胞を示す。ここでも、、ヒト化およびキメラ４Ｂ１０抗体の増大する濃度とともに、生細胞数の減少がある。これらの結果は、ヒト化抗体が、Ｂ１０４細胞のＣＤＣ仲介性殺滅において、キメラ４Ｂ１０抗体と同じかまたはわずかに良好に作用したことを示唆する。
【０３１１】
（実施例１８：ＣＤ５２トランスジェニックマウスにおけるキメラおよびヒト化抗ＣＤ５２抗体（１２Ｇ６、７Ｆ１１、キメラおよびヒト化４Ｂ１０）の薬物動態特性の分析）
ヒトＣＤ５２トランスジェニックマウスに、キャンパス（登録商標）、１２Ｇ６、７Ｆ１１、ならびにキメラおよびヒト化４Ｂ１０抗ＣＤ５２抗体のうちの１つを投与し、リンパ球枯渇のレベルを検討した。マウスに、１００μＬ容積における該抗体のうちの１つを１ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内注射した。抗抗体応答の分析のために、１００μＬの血液を血清分離チューブへと、眼窩後血管叢の穿刺を介して、抗体注射２時間後、１、２、４、７、おび１０日間後に回収した。ＥＬＩＳＡ分析を使用して、各血清試料における循環ヒトＩｇＧ１のレベルを決定した。抗体の循環レベルに基づくと、キャンパス（登録商標）、７Ｆ１１、ならびにキメラおよびヒト化形態の４Ｂ１０の間に差がほとんどないしまったくないように見える。１２Ｇ６抗体は、注射後により低いｃｍａｘ値を示し、この抗体がより迅速に分解し得ることを示唆した。図２１は、キャンパス（登録商標）、１２Ｇ６（キメラ）、７Ｆ１１（キメラ）、４Ｂ１０（キメラ）、および４Ｂ１０（ヒト化）抗体の薬物動態特性を示す。
【０３１２】
（実施例１９：ＣＤ５２トランスジェニックマウスにおけるキメラおよびヒト抗ＣＤ５２抗体（キメラおよびヒト化４Ｂ１０）の枯渇活性の分析）
ヒトＣＤ５２トランスジェニックマウスに、キャンパス（登録商標）、またはキメラもしくはヒト化４Ｂ１０抗ヒトＣＤ５２抗体のいずれかを投与して、リンパ球枯渇のレベルを検討した。マウスに、１００μＬ容積におけるキャンパス（登録商標）、またはキメラもしくはヒト化４Ｂ１０抗ヒトＣＤ５２抗体のいずれかを０．１ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内注射した。３日後、マウスを屠殺し、血液および脾臓を回収して、Ｂ細胞およびＴ細胞の枯渇のレベルを決定した。フローサイトメトリーを利用して、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスの循環末梢血中に存在する総ヘルパーＴ細胞、細胞毒性Ｔ細胞、およびＢ細胞の絶対数を評価した。これらのリンパ球集団を、以下のタンパク質抗原の細胞表面によって規定した：ＣＤ４発現は、ヘルパーＴ細胞集団を特定し、ＣＤ８発現は、細胞毒性Ｔ細胞集団を特定し、ＣＤ１９発現はすべての成熟Ｂ細胞集団を特定する。脾臓における枯渇活性の比較は、キャンパス（登録商標）またはキメラもしくはヒト化形態の４Ｂ１０のいずれかの投与後に枯渇したＴ細胞のレベルにおける差がないことを明らかにした。使用した低用量に起因して、脾臓ではＢ細胞の中程度のレベルの枯渇しか観察されなかった。動物あたりのベースでは、ヒト化４Ｂ１０抗体は、リンパ球枯渇を仲介することにおいてキャンパス（登録商標）と同じくらい良好かまたはわずかにより良好であるようである。図２２Ａ〜２２Ｃは、キメラおよびヒト化抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４  Ｔ細胞、ＣＤ８  Ｔ細胞、およびＣＤ１９  Ｂ細胞のレベルを示す。
【０３１３】
（実施例２０：抗ヒトＣＤ５２抗体の相対的な結合効率）
選択された抗ＣＤ５２抗体のＥＣ５０値を、ＣＤ５２を発現するよう操作されたＣＨＯ細胞を用いて推定した。ＣＨＯ−ＣＤ５２細胞を０．２５％トリプシンにおいてトリプシン処理し、回収し、ＰＢＳ／５％ＦＢＳを用いてすすいだ。次に、細胞をウェルあたり１×１０５細胞で丸底９６ウェルプレートへと配置した。一次抗体染色を５０μｇ／ｍＬで出発する各抗ＣＤ５２キメラ抗体の１２点連続希釈（１：２）を用いて実施した。１０μｇ／ｍＬで二次抗ヒトＦｃγ（Ｊａｃｋｓｏｎ  １０９−０９６−０９８）のＦＩＴＣ抱合ヤギＦＡＢ２断片を使用した。各インキュベーションの前後に細胞を氷冷ＰＢＳ／５％ＰＢＳで３回洗浄した。２％メタノール非含有パラホルムアルデヒドを含むＰＢＳで細胞を固定し、フローサイトメトリーによって評価した。フローサイトメトリーデータを、Ｇｒａｐｈ  ｐａｄ  Ｐｒｉｚｍソフトウェアを用いて分析し、フローサイトメトリーによって評価した。フローサイトメトリーデータを、Ｇｒａｐｈ  ｐａｄ  Ｐｒｉｚｍソフトウェアを用いて分析し、９５％信頼間隔でＥＣ５０値を決定した。
【０３１４】
結合データ（図２３）は、新たなＣＤ５２抗体が、先に述べたとおり異なるエピトープ特異性を有するだけでなく、下で示す表に示されるように異なる結合特徴も有することを示す。キャンパス−１Ｈ（登録商標）、７Ｆ１１、４Ｂ１０、２Ｃ３、および１２Ｇ６キメラ抗体は、０．５〜２．５μｇ／ｍＬ間の比較的類似したＥＣ５０を示した。９Ｄ９キメラ抗体は、およそ５〜７μｇ／ｍＬのＥＣ５０値で、わずかに異なる結合特徴を示した。４Ｂ１０ヒト化抗体は、キメラ４Ｂ１０抗体のものと類似する結合特徴を示し、ヒト化抗体が、キメラ４Ｂ１０抗体のものような結合特徴を保有することを示した。
【０３１５】
【表９】
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（実施例２１：抗ＣＤ５２抗体クローン７Ｆ１１のヒト化）
抗ヒトＣＤ５２抗体クローン７Ｆ１１のヒト化を、マウス７Ｆ１１抗体由来のＣＤＲ領域をヒト抗体可変領域フレームワークへと、４Ｂ１０抗体のヒト化について実施例１４において説明したとおり移植することによって実施した。７Ｆ１１の重鎖および軽鎖のＣＤＲ−１、ＣＤＲ−２、およびＣＤＲ−３配列をそれぞれ、ＶＨ３−７２およびＶＫ２  Ａ１８ｂヒトフレームワーク領域へと移植した。ヒトＪＨ６（ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ：配列番号１３３）およびＪＫ２（ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ：配列番号１３４）配列をそれぞれ、ヒト化重鎖および軽鎖についてのＣ末端ペプチドとして選択し、７Ｆ１１についてのヒト化重鎖（７Ｆ１１−ＳＦＤ１および７Ｆ１１−ＳＦＤ２）ならびにヒト化軽鎖（７Ｆ１１−ＶＫ２）可変領域配列を作製した（図２４）。２つのヒト化重鎖可変領域配列（７Ｆ１１−ＳＦＤ１および７Ｆ１１−ＳＦＤ２）は、ＣＤＲ−３領域において１つのアミノ酸残基だけ異なる。７Ｆ１１−ＳＦＤ１バージョンは、（Ｋａｂａｔ番号付けシステムによって示される）位置９３においてトレオニンを有するのに対し、７Ｆ１１−ＳＦＤ２バージョンは、この位置においてアラニンを有する。位置９３に、図２４において７Ｆ１１−ＳＦＤ１および７Ｆ１１−ＳＦＤ２の両方について下線を付す。
【０３１６】
７Ｆ１１−ＳＦＤ１（配列番号２７４）の全長重鎖アミノ酸配列および７Ｆ１１−Ｋ２（配列番号２７５）の全長軽鎖アミノ酸配列を図１０７において示す。
【０３１７】
（実施例２２：キメラおよびヒト化７Ｆ１１モノクローナル抗体の結合活性の評価）
キメラおよびヒト化７Ｆ１１抗体（７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２）を、実施例３において説明された方法を用いて作製して精製し、該抗体が、ＣＨＯ−ＣＤ５２細胞（ヒトＣＤ５２を発現するよう操作されたＣＨＯ細胞）の表面に発現したＣＤ５２に結合する能力について、フローサイトメトリーによって分析した。簡潔には、２×１０５個のＣＨＯ−ＣＤ５２細胞を、５％ウシ胎仔血清および５％ヤギ血清を含むＰＢＳにおいて１０μｇ／ｍＬで抗体とともにインキュベートした。結合した抗体をキメラまたはヒト化抗ＣＤ５２抗体を検出するＦＩＴＣ標識ヤギ抗ヒト二次抗体を用いて検出した。標識した細胞を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒシステム（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて分析し、データをＦｌｏｗＪｏバージョン７．２ソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ，  Ｉｎｃ，  Ｏｒｅｇｏｎ，  ＵＳＡ）を用いて分析した。図２５におけるヒストグラムは、キメラおよびヒト化７Ｆ１１抗体で検出されたＣＤ５２のレベルを比較する。本結果は、ヒト化７Ｆ１１抗体がＣＤ５２発現細胞に対してキメラ７Ｆ１１抗体と同様にまたはわずかにより良好に結合したことを示す。
【０３１８】
（実施例２３：抗ＣＤ５２抗体クローン２Ｃ３のヒト化）
クローン４Ｂ１０抗体のヒト化について実施例１４において説明される通り、抗ヒトＣＤ５２抗体クローン２Ｃ３のヒト化を、マウス２Ｃ３抗体由来のＣＤＲ領域をヒト抗体可変領域フレームワークへと移植することによって実施した。２Ｃ３の重鎖および軽鎖のＣＤＲ−１、ＣＤＲ−２、およびＣＤＲ−３配列をそれぞれ、ＶＨ３−７２およびＶＫ２  Ａ１８ｂヒトフレームワーク領域へと移植した。ヒトＪＨ６（配列番号１３３）およびＪＫ５（配列番号１３５）の配列をそれぞれ、ヒト化重鎖および軽鎖のためのＣ末端ペプチドとして選択し、２Ｃ３についてのヒト化重鎖（２Ｃ３−ＳＦＤ１）および軽鎖（２Ｃ３−ＶＫ１）可変領域配列を生じた（図２６ＡおよびＢ）。ヒト化クローン４Ｂ１０および７Ｆ１１とは異なり、ＣＤＲを移植したヒト化２Ｃ３抗体についての結合親和性は大いに低下した。結合親和性は、ＣＤＲを移植した構造への逆変異を導入することによって回復し、その目的は、再成形した抗体をできるだけ「ヒト」に維持する最小値に逆変異の数を制限し、したがって免疫原性の可能性を低下させるすることであった。単一または複数の逆変異を、ヒト化重鎖および軽鎖の両可変領域配列へと組み込んだ。逆変異の位置（Ｋａｂａｔ番号付けシステムによって記載）を下記の表１０および表１１に示す。これらの逆変異を用いて生じた抗体を、回復した結合親和性について評価した。３つの軽鎖変異形（２Ｃ３−ＶＫ１１とも呼ばれる２Ｃ３−ＶＫ１（Ｌ４６Ｒ）；２Ｃ３−ＶＫ１２とも呼ばれる２Ｃ３−ＶＫ１（Ｙ３６Ｌ−Ｌ４６Ｒ）；および２Ｃ３−ＶＫ１３とも呼ばれる２Ｃ３−ＶＫ１（Ｍ４Ｉ−Ａ１９Ｖ−Ｙ３６Ｌ−Ｑ４５Ｋ−Ｌ４６Ｒ））および５つの重鎖変異形（２Ｃ３−ＶＨ１２とも呼ばれる２Ｃ３−ＳＦＤ１（Ｌ７８Ｖ）；２Ｃ３−ＶＨ１５とも呼ばれる２Ｃ３−ＳＦＤ１（Ｇ４９Ａ）；２Ｃ３−ＶＨ１６とも呼ばれる２Ｃ３−ＳＦＤ１（Ｇ４９Ａ−Ｌ７８Ｖ）；２Ｃ３−ＶＨ１７とも呼ばれる２Ｃ３−ＳＦＤ１（Ｌ１８Ｍ−Ｇ４９Ａ−Ｌ７８Ｖ）；および２Ｃ３−ＶＨ１９とも呼ばれる２Ｃ３−ＳＦＤ１（Ｌ１８Ｍ−Ｇ４２Ｅ−Ｇ４９Ａ−Ｌ７８Ｖ））を、標準的な分子生物学技術を用いて作製した。ＣＤＲを移植した重鎖可変領域配列２Ｃ３−ＳＦＤ１および逆変異体２Ｃ３−ＶＨ１２、２Ｃ３−ＶＨ１５、２Ｃ３−ＶＨ１６、２Ｃ３−ＶＨ１７、および２Ｃ３−ＶＨ１９を図２６Ａに示し。逆変異したアミノ酸に下線を付し、ＣＤＲを太字にした。同様に、軽鎖配列について。ＣＤＲを移植した可変領域配列２Ｃ３−ＶＫ１および逆変異体２Ｃ３−ＶＫ１１、２Ｃ３−ＶＫ１２、および２Ｃ３−ＶＫ１３を図２６Ｂに示し、逆変異したアミノ酸に下線を付し、ＣＤＲを太字にした。
【０３１９】
２Ｃ３−ＳＦＤ１の全長重鎖アミノ酸配列（配列番号２７２）および２Ｃ３−Ｋ１２の全長軽鎖アミノ酸配列（配列番号２７３）を図１０６に示す。
【０３２０】
【表１０】
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【０３２１】
【表１１】
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（実施例２４：キメラおよびヒト化２Ｃ３モノクローナル抗体の結合活性の評価）
実施例３に説明される方法を用いて、キメラおよびヒト化２Ｃ３抗体を作製および精製した。重鎖変異体を軽鎖変異体と対形成することによって作製されたいくつかのヒト化抗体および対応するキメラ抗体を、実施例２２に説明される方法を用いて、ＣＨＯ−ＣＤ５２細胞の表面に発現したＣＤ５２に結合する能力について、フローサイトメトリーによって分析した。結合データは、重鎖変異体を軽鎖変異体２Ｃ３−ＶＫ１または２Ｃ３−ＶＫ１１と対形成することによって作製されたクローンが結合能力の低下を有したのに対し、重鎖変異体を２Ｃ３−ＶＫ１２または２Ｃ３−ＶＫ１３と対形成することによって作製されたクローンが、キメラ２Ｃ３抗体のものと同等のまたはより良好な結合を示したことを示唆する。選択されたクローンの代表的なヒストグラム（図２７Ａ）は、キメラおよびヒト化２Ｃ３抗体によって検出されたＣＤ５２のレベルを比較する。２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１の結合は、対応するキメラ抗体のものと比較して有意に低下している。軽鎖における位置４６において単一マウス残基を組み込むこと（ロイシンからアルギニン）（結果として２Ｃ３−ＶＫ１１を生じる）は、重鎖２Ｃ３−ＳＦＤ１と対形成して抗体２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１１を作製した場合、結合を回復しなかった。さらに、結合は、重鎖における３つの逆変異（結果として２Ｃ３−ＶＨ１７を生じる）を組み込んで抗体２Ｃ３−Ｈ１７／Ｋ１１を作製することによって回復しなかった。しかしながら、結合は、２Ｃ３−ＳＦＤ１重鎖が２つの逆変異を有する２Ｃ３−ＶＫ１２と対形成して抗体２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２を作製した場合には完全に回復し、特異的逆変異が結合活性を回復するよう組み込まれる必要があることを示唆した。図２７Ｂは、キメラ２Ｃ３抗体のものと同等の結合を示す選択されたヒト化クローンのヒストグラムを示す。これらの結果は、２Ｃ３−ＶＫ１２軽鎖における２つのアミノ酸残基の逆変異が、抗体の結合活性を完全に回復するのに十分であったことを示す。残基３６（ＹからＬ）および４６（ＬからＲ）における変化は、ほぼすべての重鎖変異体と対形成する場合の結合を回復することができた。このように、元のマウス抗体に由来する最小のフレームワーク残基との回復した結合を示すヒト化２Ｃ３クローンは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２である。
【０３２２】
（実施例２５：抗ＣＤ５２抗体クローン１２Ｇ６のヒト化）
クローン４Ｂ１０抗体のヒト化について実施例１４に説明される通り、抗ヒトＣＤ５２抗体クローン１２Ｇ６のヒト化を、マウス１２Ｇ６抗体由来のＣＤＲをヒト抗体可変領域フレームワークへと移植することによって実施した。１２Ｇ６の重鎖および軽鎖のＣＤＲ−１、ＣＤＲ−２、およびＣＤＲ−３配列をそれぞれ、ＶＨ３−７２およびＶＫ２  Ａ１８ｂヒトフレームワーク領域へと移植した。ヒトＪＨ６（ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ：配列番号１３３）およびＪＫ２（ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ：配列番号１３４）配列をそれぞれ、ヒト化重鎖および軽鎖のためのＣ末端ペプチドとして選択して、１２Ｇ６についてのヒト化重鎖（１２Ｇ６−ＳＦＤ１）および軽鎖（１２Ｇ６−ＶＫ１）可変領域配列を作製した（図２８Ａおよび２８Ｂ）。１２Ｇ６−ＳＦＤ１重鎖可変領域および１２Ｇ６−ＶＫ１軽鎖可変領域をヒト化１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１抗体において組み合わせた場合、ＣＤ５２についての結合親和性は大きく低下した。結合親和性は、ＣＤＲを移植した構造へ逆変異を導入することによって回復した。単一または複数の逆変異をヒト化重鎖および軽鎖の両可変領域配列へと組み込んだ。これらの逆変異の位置（Ｋａｂａｔの番号付けシステムによって示される。）を下記の表１２および表１３に示す。これらの変異を用いて作製された抗体を、回復した結合親和性について評価した。また、４つの軽鎖変異体（１２Ｇ６−ＶＫ１０とも呼ばれる１２Ｇ６−ＶＫ１（Ｙ３６Ｖ）；１２Ｇ６−ＶＫ１１とも呼ばれる１２Ｇ６−ＶＫ１（Ｙ３６Ｖ−Ｑ４５Ｋ−Ｌ４６Ｒ）；１２Ｇ６−ＶＫ１２とも呼ばれる１２Ｇ６−ＶＫ１（Ｙ３６Ｖ−Ｌ４６Ｒ）；および１２Ｇ６−ＶＫ１３とも呼ばれる１２Ｇ６−ＶＫ１（Ｌ４６Ｒ））ならびに３つの重鎖変異体（１２Ｇ６−ＶＨ１０とも呼ばれる１２Ｇ６−ＳＦＤ１（Ｌ７８Ｖ）；１２Ｇ６−ＶＨ１１とも呼ばれる１２Ｇ６−ＳＦＤ１（Ｇ４９Ａ）；および１２Ｇ６−ＶＨ１２とも呼ばれる１２Ｇ６−ＳＦＤ１（Ｇ４９Ａ−Ｌ７８Ｖ））を、標準的な分子生物学技術を用いて作製した。ＣＤＲを移植した重鎖可変領域配列１２Ｇ６−ＳＦＤ１ならびに逆変異体１２Ｇ６−ＶＨ１０、１２Ｇ６−ＶＨ１１、および１２Ｇ６−ＶＨ１２を図２８に示し、逆変異したアミノ酸に下線を付し、ＣＤＲを太字にした。同様に、軽鎖配列について、ＣＤＲを移植した可変領域配列１２Ｇ６−ＶＫ１ならびに逆変異体１２Ｇ６−ＶＫ１０、１２Ｇ６−ＶＫ１１、１２Ｇ６−ＶＫ１２、および１２Ｇ６−ＶＫ１３を図２８Ｂに示し。逆変異したアミノ酸に下線を付し、ＣＤＲを太字にした。
【０３２３】
１２Ｇ６−ＳＦＤ１の全長の重鎖アミノ酸配列（配列番号２７９）および１２Ｇ６−Ｋ１２の全長の軽鎖アミノ酸配列（配列番号２８０）を図１０９に示す。
【０３２４】
【表１２】
2014195474.tif 000014
【０３２５】
【表１３】
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（実施例２６：キメラおよびヒト化１２Ｇ６モノクローナル抗体の結合活性の評価）
キメラおよびヒト化１２Ｇ６抗体を、実施例３に説明された方法を用いて作製および精製した。重鎖変異体を軽鎖変異体と対形成することによって作製したいくつかのヒト化抗体、および対応するキメラ抗体を、実施例２２において説明された方法を用いて、ＣＨＯ−ＣＤ５２細胞の表面に発現したＣＤ５２に結合する能力について、フローサイトメトリーによって分析した。結合データは、重鎖変異体を軽鎖変異体１２Ｇ６−ＶＫ１、１２Ｇ６−ＶＫ１０、または１２Ｇ６−ＶＫ１３と対形成することによって作製されたクローンが結合能力を低下させたのに対し、重鎖変異体を１２Ｇ６−ＶＫ１１または１２Ｇ６−ＶＫ１２と対形成することによって作製されたクローンが。対応するキメラ１２Ｇ６抗体のものと等価かまたはそれより良好な結合を示したことを示唆する。選択されたクローンの代表的なヒストグラム（図２９）は、キメラおよびヒト化１２Ｇ６抗体によって検出されたＣＤ５２のレベルを比較する。これらの結果は、１２Ｇ６軽鎖可変領域における２つのアミノ酸残基の逆変異（クローン１２Ｇ６−ＶＫ１２）が、抗体特異性を完全に回復させるのに十分であったことを示す。Ｋａｂａｔ番号付け残基３６（ＹからＶ）および４６（ＬからＲ）における変化は、ほぼすべての重鎖変異体と対形成した場合、結合を回復させることができた。このように、元のマウス抗体に由来する最小のフレームワークとの回復した結合を示すヒト化１２Ｇ６クローンは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２である。
【０３２６】
（実施例２７：抗ＣＤ５２抗体クローン９Ｄ９のヒト化）
抗ヒトＣＤ５２抗体クローン９Ｄ９のヒト化を、クローン４Ｂ１０抗体のヒト化について実施例１４において説明された通り、マウス９Ｄ９抗体由来のＣＤＲ領域をヒト抗体可変領域フレームワークへと移植することによって実施した。９Ｄ９の重鎖および軽鎖のＣＤＲ−１、ＣＤＲ−２、およびＣＤＲ−３配列をそれぞれ、ＶＨ３−２３およびＶＫ２  Ａ１８ｂヒトフレームワーク領域へと移植した。ヒトＪＨ６（ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ：配列番号１３３）およびＪＫ２（ＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ配列番号１３４）配列をそれぞれ、ヒト化重鎖および軽鎖についてのＣ末端ペプチドとして選択し、ヒト化重鎖（９Ｄ９−ＶＨ１０）および軽鎖（９Ｄ９−ＶＫ２）可変領域配列を生じた（図３０Ａおよび３０Ｂ）。９Ｄ９−ＶＨ１０重鎖および９Ｄ９−ＶＫ２軽鎖をヒト化９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ２抗体において組み合わせた場合、ＣＤ５２に対する結合親和性は大きく低下した。結合親和性は、ＣＤＲを移植した構造に逆変異を導入することによって回復した。単一のまたは複数の逆変異をヒト化重鎖および軽鎖の両可変領域配列へと組み込んだ。（Ｋａｂａｔ番号付けシステムによって示される）逆変異の位置を下記の表１４および表１５に示す。これらの逆変異で生じた抗体を、回復した結合親和性について評価した。４つの軽鎖変異体（９Ｄ９−ＶＫ１２とも呼ばれる９Ｄ９−ＶＫ２（Ｙ３６Ｌ−Ｑ４５Ｋ−Ｌ４６Ｒ）；９Ｄ９−ＶＫ１３とも呼ばれる９Ｄ９−ＶＫ２（Ｙ３６Ｌ−Ｌ４６Ｒ）；９Ｄ９−ＶＫ１４とも呼ばれる９Ｄ９−ＶＫ２（Ｌ４６Ｒ）；および９Ｄ９−ＶＫ１５とも呼ばれる９Ｄ９−ＶＫ２（Ｑ４５Ｋ−Ｌ４６Ｒ））ならびに５つの重鎖変異体（９Ｄ９−ＶＨ１１とも呼ばれる９Ｄ９−ＶＨ１０（Ｗ４７Ｌ−Ｖ４８Ｔ−Ｓ４９Ａ−Ｎ７６Ｓ−Ｌ７８Ｖ）；９Ｄ９−ＶＨ１５とも呼ばれる９Ｄ９−ＶＨ１０（Ｗ４７Ｌ−Ｖ４８Ｔ−Ｓ４９Ａ）；９Ｄ９−ＶＨ１６とも呼ばれる９Ｄ９−ＶＨ１０（Ｗ４７Ｌ）；９Ｄ９−ＶＨ１７とも呼ばれる９Ｄ９−ＶＨ１０（Ｗ４７Ｌ−Ｖ４８Ｔ）；および９Ｄ９−ＶＨ１８とも呼ばれる９Ｄ９−ＶＨ１０（Ｗ４７Ｌ−Ｓ４９Ａ））を、標準的な分子生物学技術を用いて作製した。ＣＤＲを移植した重鎖可変領域配列９Ｄ９−ＶＨ１０および逆変異体９Ｄ９−ＶＨ１１、９Ｄ９−ＶＨ１５、９Ｄ９−ＶＨ１６、９Ｄ９−ＶＨ１７、および９Ｄ９−ＶＨ１８についてのアミノ酸配列を図３０Ａに示し、逆変異したアミノ酸に下線を付し、ＣＤＲを太字にした。同様に、軽鎖配列については、ＣＤＲを移植した可変領域配列９Ｄ９−ＶＫ２および逆変異体９Ｄ９−ＶＫ１２、９Ｄ９−ＶＫ１３、９Ｄ９−ＶＫ１４、および９Ｄ９−ＶＫ１５を図３０Ｂに示し、逆変異したアミノ酸に下線を付し、ＣＤＲを太字にした。
【０３２７】
９Ｄ９−Ｈ１６（配列番号２７６）および９Ｄ９−Ｈ１８（配列番号２７７）の全長の重鎖アミノ酸配列ならびに９Ｄ９−Ｋ１３（配列番号２７８）の全長の軽鎖アミノ酸配列を図１０８に示す。
【０３２８】
【表１４】
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【０３２９】
【表１５】
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（実施例２８：キメラおよびヒト化９Ｄ９モノクローナル抗体の結合活性の評価）
キメラおよびヒト化９Ｄ９抗体を、実施例３に説明された方法を用いて作製および精製した。重鎖変異体を軽鎖変異体と対形成することによって作製されたいくつかのヒト化抗体および相応のキメラ抗体を、実施例２２に説明された方法を用いて、ＣＨＯ−ＣＤ５２細胞（ヒトＣＤ５２を発現するよう操作されたＣＨＯ細胞）の表面に発現したＣＤ５２に結合する能力について、フローサイトメトリーによって分析した。結合データは、重鎖変異体を軽鎖変異体９Ｄ９−ＶＫ２、９Ｄ９−ＶＫ１４、または９Ｄ９−ＶＫ１５と対形成することによって生じたクローンが、結合能力を低下させたのに対し、９Ｄ９−ＶＫ１２または９Ｄ９−ＶＫ１３軽鎖変異体を逆変異した重鎖変異体９Ｄ９−ＶＨ１１、９Ｄ９−ＶＨ１５、９Ｄ９−ＶＨ１６、および９Ｄ９−ＶＨ１８と対形成することによって生じたクローンが、対応するキメラ９Ｄ９抗体のものと同等のまたはそれより良好な結合を示したことを示唆する。軽鎖変異体９Ｄ９−ＶＫ１２および９Ｄ９−ＶＫ１３を、親ＣＤＲを移植した重鎖９Ｄ９−ＶＨ１０または逆変異した９Ｄ９−ＶＨ１７配列と対形成した場合、結合は有意に低下し、ヒト化９Ｄ９クローンについて、重鎖および軽鎖の両配列が、結合能力を回復させるよう逆変異を用いて操作されなければならないことを示唆した。選択されたクローンの代表的なヒストグラム（図３１）は、キメラおよびヒト化９Ｄ９抗体によって検出されたＣＤ５２のレベルを比較する。これらの結果は、１つの位置（例えば、位置４７におけるＷからＬ）または２つの位置（例えば、位置４７におけるＷからＬおよび位置４９におけるＳからＡ）において変異した重鎖と対形成する場合に、９Ｄ９軽鎖可変領域（クローン９Ｄ９−ＶＫ１３）における２つのアミノ酸残基の逆変異（例えば、位置３６におけるＹからＬ、および位置４６におけるＬからＲ）が、抗体の特異性を回復させるのに必要であったことを示す。このように、元のマウス抗体に由来する最小のフレームワーク残基を用いて回復した結合を示すヒト化９Ｄ９クローンは、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３である。
【０３３０】
（実施例２９：ヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体の相対的な結合有効性の決定）
キメラおよびヒト化抗ＣＤ５２抗体のＥＣ５０値を、商業源（Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ，  ＮＹ，  ＵＳＡ）から得られた健常ドナーから単離されたＣＤ４＋  Ｔ細胞を用いて推定した。ＣＤ４＋  Ｔ細胞を、ＥａｓｙＳｅｐキット（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いた陰性選択によって単離した。また、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックＣＤ１マウス脾臓組織から単離されたＣＤ４＋  Ｔ細胞も、ＣＨＯ−ＣＤ５２細胞について実施例２０において先に説明された方法に従って使用した（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。簡潔には、ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞を、健常なボランティア由来の５０ｍＬの末梢血から単離し（Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ）、また、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスＣＤ４＋  Ｔ細胞を脾臓組織から単離した。細胞をＰＢＳ／５％ＰＢＳですすぎ、ウェルあたり１×１０５個で丸底９６ウェルプレートへと配置した。一次抗体染色を、１００μｇ／ｍＬで出発する抗ＣＤ５２キメラおよびヒト化の各抗体の８点連続希釈（１：３）で実施した。１０μｇ／ｍＬ（Ｊａｃｋｓｏｎ  １０９−０９６−０９８）二次抗体における抗ヒトＦｃガンマのＦＩＴＣ抱合ヤギＦ（ａｂ’）２断片を用いた。細胞をインキュベーションの前後に氷冷ＰＢＳ／５％ＦＢＳにおいて３回洗浄した。細胞を、２％メタノール非含有パラホルムアルデヒドを含むＰＢＳで固定し、フローサイトメトリーによって評価した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いてフローサイトメトリーデータを分析し、９５％信頼区間でＥＣ５０値を決定した。ヒトＰＢＭＣから単離されたＣＤ４＋  Ｔ細胞に対する、およびヒトＣＤ５２トランスジェニックマウスの脾臓組織から単離されたＣＤ４＋  Ｔ細胞に対する抗ＣＤ５２抗体の結合に基づいて、結合曲線（図３２Ａ、３２Ｂ、３２Ｃ）を生じ、ＥＣ５０値を推定して、図３３に示す。抗体はすべて、ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞と、ヒトＣＤ５２トランスジェニックマウスから単離されたＣＤ４＋  Ｔ細胞との両方に対して類似の結合特徴を示した。結合データは、ヒト化抗体が、それらの親キメラ抗体と同等のまたは該抗体と比較してより良好な結合親和性を有することを示し、結合親和性が、ヒト化の際に保持または改良されることを示唆する。ヒト化２Ｃ３および１２Ｇ６抗体は、この細胞結合アッセイによって決定して、キャンパス−１Ｈ（登録商標）抗体よりも少なくとも２倍低いＥＣ５０値を有する。
【０３３１】
（実施例３０：規定されたリンパ球集団に対するヒト化抗ＣＤ５２抗体の結合の評価）
キャンパス−１Ｈ（登録商標）（Ｃ１Ｈ）ならびにヒト化２Ｃ３（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２）、９Ｄ９（９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３）、および１２Ｇ６（１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２）抗体を、先の実施例７においてキメラ抗ＣＤ５２抗体ついて説明された方法を用いて、正常ドナーＰＢＭＣにおける種々のＰＢＭＣサブセットに対するそれらの結合について評価した。いくつかの蛍光色素抱合した抗体をフローサイトメトリー分析に用いた。抗ＣＤ２７−ＰＥ、抗ＣＤ１９および抗ＣＤ１１ｃ−ＰＥ  Ｃｙ５、抗ＣＤ５６および抗ＣＤ１２３−ＰＥ  Ｃｙ７、抗ＣＤ１６−ＡＰＣ  Ｃｙ７、ならびにＣＤ４−ＡＰＣを、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）から得、抗ＣＤ５４ＲＡ−ＥＣＤおよび抗ＨＬＡ−ＤＲ−ＥＣＤをＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒから得た。抗ＣＤ３−パシフィックブルー、抗ＣＤ８および抗ＣＤ１４−パシフィックオレンジ、ならびにＣＤ４−ＡＰＣ  ｃｙ５．５をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（ＣＡ）から得た。ヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体（９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２）およびキャンパス−１Ｈ（登録商標）をすべて、ＦＩＴＣに抱合した。健常ヒト末梢血単核細胞を、凍結保存したバフィーコート、または実施例７において上で説明したとおり、商業的売主（Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ，  ＮＹ，  ＵＳＡ）から得られた正常ドナーの血液から分離された単核細胞のいずれかから得た。単核細胞の濃縮のために、ヒト末梢血を滅菌済みリン酸緩衝塩類溶液（ＰＢＳ）で１：１希釈し、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｕｐｐｓａｌａ，  Ｓｗｅｄｅｎ）の上に注意深く層状にし、室温で３０分間遠心分離した。単核細胞の相間層を引き抜き、５％ウシ胎仔血清を含むＰＢＳ（ＦＡＣＳ緩衝液）で洗浄した。混入している赤血球細胞（ＲＢＣ）をＲＢＣ溶解溶液（Ｓｉｇｍａ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ，  ＵＳＡ）で溶解した。細胞を冷ＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、細胞片を、４０μｍフィルターを用いて除去した。多重色フローサイトメトリーを実施して、キャンパス−１Ｈ（登録商標）と比較してヒト化抗ヒトＣＤ５２抗体２Ｃ３（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２）、９Ｄ９（９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３）、および１２Ｇ６（１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２）の結合能力を評価した。
【０３３２】
簡潔には、ＦＡＣＳ緩衝液における１×１０６のＰＢＭＣの複製物をあらかじめ用量設定した希釈の抗体のカクテルとともにインキュベートして、リンパ球または骨髄由来細胞のいずれかを検討した。リンパ球カクテルは、ＣＤ３、ＣＤ２７、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ５６、ＣＤ１９、ＣＤ８、ＣＤ４、およびＣＤ１６に対する抗体を含んだ。骨髄系集団を規定する抗体カクテルは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ４、およびＣＤ１４に対する抗体を含んでいた。各カクテルにおいて、抗ＣＤ５２抗体のうちの１つを、１０μｇ／ｍＬ濃度で含めた。細胞を４℃で３０分間染色し、１％パラホルムアルデヒドを含むＰＢＳにおいて洗浄および固定した。染色した細胞のうちの１００，０００の事象をＢＤ  ＬＳＲ  ＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，  ＣＡ）で獲得し、データを、ＦｌｏｗＪｏバージョン７．２ソフトウェアを用いて分析した（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ，  Ｉｎｃ，  Ｏｒｅｇｏｎ，  ＵＳＡ）。異なる表現型特徴を有する複数のサブセットをＢリンパ球およびＴリンパ球の間で規定し、ＣＤ５２は、ヒトリンパ球すべてにおいて発現することが示された。多重色フローサイトメトリー分析を実施して、リンパ球サブセットを特定し、規定されたサブセットに関する細胞表面ＣＤ５２に対するヒト化抗ＣＤ５２抗体の結合特徴における類似性および差を評価した。マーカーの組み合わせを用いて、Ｂ、Ｔ、ＮＫ、および抗原提示細胞系譜に対応する表現型的に異なる細胞集団を最初に規定した。規定された核細胞集団におけるＣＤ５２発現を検出するヒト化抗ＣＤ５２抗体の能力に対応する染色強度を評価し、キャンパス−１Ｈ（登録商標）のそれと比較した。ヒストグラム（図３４）は、個々の集団における各抗体によって検出されたＣＤ５２のレベルを比較する。本結果は、ヒト化抗ＣＤ５２抗体のすべてが、細胞表面ＣＤ５２に、類似した程度まで結合することを示す。さらに、細胞表面ＣＤ５２の検出のレベルに関して、キャンパス−１Ｈ（登録商標）とヒト化抗ＣＤ５２抗体の間の差は観察されなかった。分析は、６の異なるドナーについて実施した。１つのドナーに由来する細胞を用いて生じた代表的なデータを図３４に示す。類似の結合パターンが他のドナー由来の細胞で観察された。
【０３３３】
（実施例３１：キメラおよびヒト化７Ｆ１１モノクローナル抗体のＡＤＣＣ活性の評価）
ヒト化およびキメラ７Ｆ１１抗体を、ＣＤ５２発現細胞のＡＤＣＣ殺滅を仲介する能力について評価した。ＡＤＣＣアッセイを、実施例６において先に説明した方法を用いて実施した。簡潔には、ＣＤ５２タンパク質を発現するよう操作されたＣＨＯ  Ｋ１細胞（ＣＨＯ−ＣＤ５２）を標的細胞として用いた。標的細胞をＮａ２５１ＣｒＯ４（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ，  Ｂｏｓｔｏｎ，  ＭＡ）を用いて３７℃で２〜３時間標識した。細胞を洗浄し、１０％ＦＣＳを有するＲＰＭＩ  １６４０培地において再懸濁し、ＩｇＧ対照抗体、キメラ７Ｆ１１抗体、またはヒト化７Ｆ１１抗体（７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２または７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２）とともに、５μｇ／ｍＬ〜０．０１μｇ／ｍＬの範囲の種々の濃度で混合した。ＮＫ細胞単離キット（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてＰＢＭＣから単離されたヒトＮＫ細胞をエフェクター細胞として用い、１：５の標的対エフェクター細胞比で添加した。２〜６時間のインキュベーション後、２５μＬの無細胞上清を各ウェルから回収し、ＭｉｃｒｏＢｅｔａ  Ｔｒｉｌｕｘシンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃ，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  ＭＤ）において計数した。自発的に放出した５１Ｃｒの量を、標的細胞を培地単独においてインキュベートすることによって得た。標的細胞からの自発的な放出は典型的には、２０％未満であった。組み込まれた５１Ｃｒの総量を、蒸留水における１％トリトンＸ−１００を添加することによって決定し、溶解パーセントを以下の通り算出した：［（試料ｃ．ｐ．ｍ．−自発的ｃ．ｐ．ｍ．）／（総ｃ．ｐ．ｍ．−自発的ｃ．ｐ．ｍ．）］×１００。図３５は、本アッセイで用いられた対照ＩｇＧ、キメラ７Ｆ１１抗体、およびヒト化７Ｆ１１抗体の濃度（Ｘ軸）対特異的溶解％（Ｙ軸）を示す。本結果は、ヒト化７Ｆ１１抗体（７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２）が。キメラ７Ｆ１１抗体と比較して同等のまたはわずかにより良好な
ＡＤＣＣ殺滅を仲介したことを示す。対照ＩｇＧ１アイソタイプは、試験した濃度では低レベルの背景殺滅しか示さなかった。
【０３３４】
（実施例３２：キメラおよびヒト化７Ｆ１１モノクローナル抗体のＣＤＣ活性の評価）
ヒト化およびキメラ７Ｆ１１抗体を、ＣＤ５２発現細胞の補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を仲介する能力について評価した。ＣＤＣアッセイを、キメラ抗ＣＤ５２抗体について上の実施例５において説明された方法を用いて実施した。簡潔には、ＣＤ５２タンパク質を発現するよう操作されたＣＨＯ  Ｋ１細胞（ＣＨＯ−ＣＤ５２）を標的細胞として用い、Ｎａ２５１ＣｒＯ４（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ，  Ｂｏｓｔｏｎ，  ＭＡ）とともに３７℃で２〜３時間標識した。細胞を洗浄し、ＲＰＭＩ１６４０培地において再懸濁し、ＩｇＧ対照抗体、キメラ７Ｆ１１抗体、またはヒト化７Ｆ１１抗体（７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２または７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２）と２０μｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬの範囲の種々の濃度で混合した。ヒト補体（Ｓｉｇｍａ）を１０％の終濃度まで実験ウェルに添加した。１〜５時間のインキュベーション後、２５μＬの無細胞上清を各ウェルから回収し、ＭｉｃｒｏＢｅｔａ  Ｔｒｉｌｕｘシンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃ，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  ＭＤ）において計数した。自発的に放出された５１Ｃｒの量を、培地単独における標的細胞をインキュベートすることによって得た。標的細胞からの自発的放出は典型的には、２０％未満であった。組み込んだ５１Ｃｒの総量を、蒸留水中の１％トリトンＸ−１００を添加することによって決定し、パーセント溶解を以下の通り算出した：［（１分間あたりの試料計数（ｃ．ｐ．ｍ．）−自発的ｃ．ｐ．ｍ．）／（総ｃ．ｐ．ｍ．−自発的ｃ．ｐ．ｍ．）］×１００。図３６は、本アッセイで用いた対照ＩｇＧ、キメラ７Ｆ１１抗体、およびヒト化７Ｆ１１抗体（７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２）の濃度（Ｘ軸）対特異的溶解％（Ｙ軸）を示す。本結果は、キメラ７Ｆ１１抗体およびヒト化抗体７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２がキメラ７Ｆ１１抗体と同等の殺滅を仲介したのに対し、ヒト化抗体７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２が、キメラ７Ｆ１１抗体よりも有意に良好なＣＤＣ殺滅を仲介したことを示す。対照ＩｇＧ１アイソタイプ抗体は、試験した濃度において、低レベルの背景殺滅しか示さなかった。
【０３３５】
（実施例３３．キメラおよびヒト化２Ｃ３モノクローナル抗体のＡＤＣＣ活性の評価）
ヒト化およびキメラ２Ｃ３抗体を、ＣＤ５２発現細胞のＡＤＣＣ殺滅を仲介する能力について評価した。ＡＤＣＣアッセイを、先の実施例６において説明した方法でわずかに変法したものを用いて実施した。簡潔には、ＣＤ４＋  Ｔ細胞単離キット（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて健常ドナーＰＢＭＣから単離されたＴ細胞を標的細胞として用いた。標的細胞をＮａ２５１ＣｒＯ４（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ，  Ｂｏｓｔｏｎ，  ＭＡ）を用いて３７℃で一晩標識した。細胞を洗浄し、１０％ＦＣＳを有するＲＰＭＩ１６４０培地において再懸濁し、ＩｇＧ対照抗体、キメラ２Ｃ３抗体、またはヒト化２Ｃ３抗体（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２）と、１０μｇ／ｍＬ〜１００ｐｇ／ｍＬの範囲の種々の濃度で混合した。ＰＢＭＣから単離されたヒトＮＫ細胞（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製のＮＫ細胞単離キットを用いる）をエフェクター細胞として使用し、１：５の標的対エフェクター細胞の比で添加した。２〜６時間のインキュベーション後、２５μＬの無細胞上清を各ウェルから回収し、ＭｉｃｒｏＢｅｔａ  Ｔｒｉｌｕｘシンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃ，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  ＭＤ）において計数した。自発的に放出された５１Ｃｒの量を、培地単独における標的細胞をインキュベートすることによって得た。標的細胞からの自発的な放出は、典型的には２０％未満であった。組み込まれた５１Ｃｒの総量を、蒸留水中の１％トリトンＸ−１００を添加することによって決定し、溶解パーセントを以下の通り算出した：［（試料ｃ．ｐ．ｍ．−自発的ｃ．ｐ．ｍ．）／（総ｃ．ｐ．ｍ．−自発的ｃ．ｐ．ｍ．）］×１００。図３７は、本アッセイにおいて使用した対照ＩｇＧ、キメラ２Ｃ３抗体、およびヒト化２Ｃ３抗体（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２）の濃度（Ｘ軸）対特異的溶解％（Ｙ軸）を示す。本結果は、ヒト化２Ｃ３抗体２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２が、２Ｃ３キメラ抗体のそれと同等のＡＤＣＣ殺滅を仲介したことを示す。ＩｇＧ１アイソタイプ対照は、試験した濃度において低レベルの背景殺滅しか示さなかった。
【０３３６】
（実施例３４：キメラおよびヒト化２Ｃ３モノクローナル抗体のＣＤＣ活性の評価）
ヒト化およびキメラ２Ｃ３抗体を、ＣＤ５２発現細胞の補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を仲介する能力について評価した。ＣＤＣアッセイを、先の実施例５において説明した方法をわずかに変法したものを用いて実施した。簡潔には、健常ドナーＰＢＭＣから単離したＴ細胞を標的細胞として用い、Ｎａ２５１ＣｒＯ４（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ，  Ｂｏｓｔｏｎ，  ＭＡ）を用いて３７℃で一晩標識した。一晩標識した後、細胞を洗浄し、１０％ＦＣＳを有するＲＰＭＩ１６４０培地において再懸濁し、１０μｇ／ｍＬ〜１０ｎｇ／ｍＬの範囲の種々の濃度のＩｇＧ対照抗体、キメラ２Ｃ３抗体、またはヒト化２Ｃ３抗体（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２）と混合した。ヒト補体（Ｓｉｇｍａ）を実験ウェルに１０％の終濃度まで添加した。１〜５時間のインキュベーションの後、２５μＬの無細胞上清を各ウェルから回収し、ＭｉｃｒｏＢｅｔａ  Ｔｒｉｌｕｘシンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃ，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  ＭＤ）において計数した。自発的に放出された５１Ｃｒの量を培地単独における標的細胞をインキュベートすることによって得た。標的細胞からの自発的放出は、典型的には２０％未満であった。組み込まれた５１Ｃｒの総量を、蒸留水中の１％トリトンＸ−１００を添加することによって決定し、溶解パーセントを以下の通り算出した：［（１分間あたりの試料計数（ｃ．ｐ．ｍ．）−自発的ｃ．ｐ．ｍ．）／（総ｃ．ｐ．ｍ．−自発的ｃ．ｐ．ｍ．）］×１００。図３８は、本アッセイにおいて使用した対照ＩｇＧ、キメラ２Ｃ３抗体、およびヒト化２Ｃ３抗体（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２）の濃度（Ｘ軸）対特異的溶解％（Ｙ軸）を示す。本結果は、キメラ２Ｃ３抗体およびヒト化２Ｃ３抗体（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２）が同等の溶解を仲介したことを示す。対照ＩｇＧ１アイソタイプ抗体は、試験した濃度では低レベルの背景殺滅しか示さなかった。
【０３３７】
（実施例３５：キメラおよびヒト化１２Ｇ６モノクローナル抗体のＡＤＣＣ活性の評価）
ヒト化およびキメラ１２Ｇ６抗体を、ＣＤ５２発現細胞のＡＤＣＣ殺滅を仲介する能力について評価した。ＡＤＣＣアッセイは、先の実施例３１において説明したとおり、標的細胞として健常ドナーＰＢＭＣから単離されたＴ細胞を用いたクロム放出アッセイによって実施した。図３９は、本アッセイにおいて使用した対照ＩｇＧ、キメラ１２Ｇ６抗体、およびヒト化１２Ｇ６抗体（１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１または１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２）の濃度（Ｘ軸）対特異的溶解％（Ｙ軸）を示す。本結果は、ヒト化１２Ｇ６抗体１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２が、１２Ｇ６キメラ抗体と比較して同等のＡＤＣＣ殺滅を仲介したことを示す。ＩｇＧ１アイソタイプ対照は、試験した濃度において低レベルの背景殺滅しか示さなかった。
【０３３８】
（キメラおよびヒト化１２Ｇ６モノクローナル抗体のＣＤＣ活性の評価）
ヒト化およびキメラ１２Ｇ６抗体を。ＣＤ５２発現細胞の補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を仲介する能力について評価した。ＣＤＣアッセイを、先の実施例３２において説明したとおり、健常ドナーＰＢＭＣから単離されたＴ細胞を標的細胞として用いるクロム放出アッセイによって実施した。図４０は、本アッセイにおいて用いた対照ＩｇＧ、キメラ１２Ｇ６抗体、およびヒト化１２Ｇ６抗体（１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２）の濃度（Ｘ軸）対特異的溶解％（Ｙ軸）を示す。本結果は、キメラ１２Ｇ６抗体が、ヒト化１２Ｇ６抗体（１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２）と比較して同等の溶解を仲介したことを示す。対照ＩｇＧ１アイソタイプ抗体は、試験した濃度において低レベルの背景殺滅しか示さなかった。
【０３３９】
（実施例３７：キメラおよびヒト化９Ｄ９モノクローナル抗体のＡＤＣＣ活性の評価）
ヒト化およびキメラ９Ｄ９抗体を、ＣＤ５２発現細胞のＡＤＣＣ殺滅を仲介する能力について評価した。ＡＤＣＣアッセイは、先の実施例３１において説明される通り、健常ドナーＰＢＭＣから単離されたＴ細胞を標的細胞として用いるクロム放出アッセイによって実施した。図４１は、本アッセイにおいて用いた対照ＩｇＧ、キメラ９Ｄ９抗体、およびヒト化９Ｄ９抗体（９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１３、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１３、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３）の濃度（Ｘ軸）対特異的溶解％（Ｙ軸）を示す。本結果は、キメラおよびヒト化９Ｄ９抗体（９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１３を除く）が、同等のＡＤＣＣ殺滅を仲介したことを示す。ＩｇＧ１アイソタイプ対照は、試験した濃度において低レベルの背景殺滅しか示さなかった。
【０３４０】
（実施例３８：キメラおよびヒト化９Ｄ９モノクローナル抗体のＣＤＣ活性の評価）
ヒト化およびキメラ９Ｄ９抗体を、ＣＤ５２発現細胞の補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を仲介する能力について評価した。ＣＤＣアッセイを、先の実施例３２において説明される通り、健常ドナーＰＢＭＣから単離されたＴ細胞を標的細胞として用いるクロム放出アッセイによって実施した。図４２は、本アッセイにおいて用いた対照ＩｇＧ、キメラ９Ｄ９抗体、およびヒト化９Ｄ９抗体（９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１３、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１３、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３）の濃度（Ｘ軸）対特異的溶解％（Ｙ軸）を示す。本結果は、キメラ９Ｄ９抗体が、ヒト化９Ｄ９抗体（９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１３を除く）と比較して同等の溶解を仲介したことを示す。対照ＩｇＧ１アイソタイプ抗体は、試験した濃度において低レベルの背景殺滅しか示さなかった。
【０３４１】
（実施例３９：初代Ｔ細胞に及ぼすキャンパス−１Ｈ（登録商標）およびヒト化抗ＣＤ５２抗体のＡＤＣＣ活性の評価）
キャンパス−１Ｈ（登録商標）およびヒト化抗ＣＤ５２抗体を、ＣＤ５２発現細胞のＡＤＣＣ殺滅を仲介する能力について評価した。先の実施例３１において説明される通り、健常ドナーＰＢＭＣから単離されたＴ細胞を標的細胞として用いるクロム放出アッセイによって、ＡＤＣＣアッセイを実施した。図４３は、本アッセイにおいて用いた対照ＩｇＧ、キャンパス−１Ｈ（登録商標）、ならびにヒト化２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体の濃度（Ｘ軸）対特異的溶解％（Ｙ軸）を示す。本結果は、上のヒト化２Ｃ３、９Ｄ９、および１２Ｇ６抗体が、１０ｎｇ／ｍＬの過剰濃度で、キャンパス−１Ｈ（登録商標）のそれと同等のＡＤＣＣ殺滅を仲介したことを示す。ＩｇＧ１アイソタイプ対照は、試験した濃度において低レベルの背景殺滅しか示さなかった。
【０３４２】
（実施例４０：初代Ｔ細胞に及ぼすキャンパス−１Ｈ（登録商標）およびヒト化抗ＣＤ５２抗体のＣＤＣ活性の評価）
キャンパス−１Ｈ（登録商標）およびヒト化抗ＣＤ５２抗体を、ＣＤ５２発現細胞の補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を仲介する能力について評価した。先の実施例３２において説明される通り、健常ドナーＰＢＭＣから単離されたＴ細胞を標的細胞として用いるクロム放出アッセイによって、ＣＤＣアッセイを実施した。図４４は、本アッセイにおいて用いた対照ＩｇＧ、キャンパス−１Ｈ（登録商標）、ならびにヒト化２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体の濃度（Ｘ軸）対特異的溶解％（Ｙ軸）を示す。本結果は、ヒト化２Ｃ３および１２Ｇ６抗体が、キャンパス−１Ｈ（登録商標）と同等のＣＤＣ殺滅を仲介したのに対し、ヒト化９Ｄ９抗体が、その対応するキメラ抗体に類似して、有意に低下したＣＤＣ活性を示したことを示す。ＩｇＧ１アイソタイプ対照は、試験した濃度において低レベルの背景殺滅しか示さなかった。
【０３４３】
（実施例４１：ヒト化２Ｃ３、１２Ｇ６、および９Ｄ９抗ＣＤ５２抗体活性を遮断する抗キャンパス−１Ｈ（登録商標）中和抗体を含む血清試料の中和能力の評価）
キャンパス−１Ｈ（登録商標）に対する中和抗体の存在下でのＣＤ５２発現細胞に結合するヒト化抗体の能力を評価するために、抗ＣＤ５２抗体（キャンパス−１Ｈ（登録商標）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２）を、抗キャンパス−１Ｈ（登録商標）抗体活性を含むヒト血清と反応させ、ＣＤ５２を発現するラジ細胞への結合について評価した。ＣＡＭＭＳ２２３研究（Ｔｈｅ  ＣＡＭＭＳ２２３  Ｔｒｉａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓ，  “Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｖｓ．  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｂｅｔａ−１ａ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，”  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５９：１７８６−１８０１  （２００８））において登録された再発性寛解性の多発性硬化症患者から得られた血清試料を本アッセイにおいて用いた。キャンパス−１Ｈ（登録商標）抗体の反復投与は結果として、ほとんどの患者において抗キャンパス−１Ｈ（登録商標）抗体応答の発生を生じた。抗キャンパス−１Ｈ抗体力価は、ほとんどの患者において１２ヶ月後に非常に低く、キャンパス−１Ｈ（登録商標）の第二の周期の投与の際に有意に高くなり、結果的に１３ヶ月後に血清において高い力価の抗キャンパス−１Ｈ（登録商標）応答を生じる。抗ＣＤ５２抗体中和アッセイを、ＣＡＭＭＳ２２３プロトコールの下でキャンパス−１Ｈ（登録商標）を用いて治療したことのある５名の異なる多発性硬化症患者（ＭＳ−１〜ＭＳ−５）から得られた１２ヶ月後および１３ヶ月後の血清試料を用いて実施した。ＦＩＴＣ抱合した抗ＣＤ５２抗体である（実施例３０において使用され、ＣＤ５２発現細胞に結合することが示された）キャンパス−１Ｈ（登録商標）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、および９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３を用いて、キャンパス−１Ｈで治療したことのある患者から得られた血清のある範囲の希釈物の不在下または存在下でヒトＣＤ５２を発現するラジ細胞を染色した。簡潔には、多発性硬化症患者血清試料（１２ヶ月後および１３ヶ月後）を６倍連続希釈にし、１０μｇ／ｍＬのＦＩＴＣ抱合型抗ＣＤ５２抗体（キャンパス−１Ｈ（登録商標）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、および９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３）とともに３７℃で１時間インキュベートした。ラジ細胞を、ＨＢＳＳ、５％ＦＢＳ、および０．１％アジ化物を含む染色緩衝液ですすいだ後、ウェルあたり１×１０５個で丸底９６ウェルプレートへと配置した。細胞を、１０μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ  Ｆｃ断片で、染色緩衝液において氷上で３０分間ブロッキングした。次に、細胞を染色緩衝液で洗浄し、上で説明した１００μＬの抗体‐血清混合物において再懸濁した。氷上で３０分後、細胞を洗浄し、ＢＤ  Ｃｙｔｏｆｉｘで固定し、ＦＩＴＣ標識した抗体でコーティングした細胞を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒシステム（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて分析した後、データをＦｌｏｗＪｏバージョン７．２ソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ，  Ｉｎｃ，  Ｏｒｅｇｏｎ，  ＵＳＡ）を用いて分析した。血清における抗キャンパス−１Ｈ（登録商標）中和抗体の存在下でのＦＩＴＣ抱合型抗ＣＤ５２抗体の���合をフローサイトメトリーによって評価し、阻害の目安として対照に対する結合％を、（血清を有するＭＦＩ／ＭＦＩ対照（無血清））×１００として算出した。ドナーのうちの１名（ＭＳ−１）からの代表的なデータを図４５に示す。Ｘ軸は、血清希釈倍数を示し、Ｙ軸は、抗体中和活性の目安としての対照結合に対する％を示す。本データは、１２ヶ月後の血清試料が、キャンパス−１Ｈ（登録商標）または他の抗ＣＤ５２抗体に及ぼす阻害効果を有さないことを明確に示し、血清中に存在する抗キャンパス−１Ｈ（登録商標）ブロッキング抗体が低いか全くないことを示唆している。１３ヶ月後の血清試料は、１：１０００希釈の血清でさえ、キャンパス−１Ｈ（登録商標）結合の完全な阻害を仲介したが、試験した最高濃度（１：２４希釈）でさえ２Ｃ３、１２Ｇ６、および９Ｄ９ヒト化抗ＣＤ５２抗体の阻害を仲介しなかった。５名の患者のうちの２名は、１：１０００超の抗キャンパス−１Ｈ（登録商標）中和抗体力価を発現したのに対し、他の３名は、約１：１００のキャンパス−１Ｈ（登録商標）中和抗体力価を有していた。患者の１３ヶ月後の血清のうちの２例が、キャンパス−１Ｈ（登録商標）に対して１：１０００超の比較的高い中和抗体力価を有していたが、これらの血清は、ヒト化２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、および９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３抗体の結合を阻害せず、キャンパス−１Ｈ（登録商標）を用いて治療した患者における抗キャンパス−１Ｈ（登録商標）抗体反応性が、細胞に提示されるようなＣＤ５２に対するこれらのヒト化抗体の結合をブロッキングしないことを示唆した。
【０３４４】
（実施例４２：ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける抗ＣＤ５２抗体（４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１）の枯渇および再増殖の分析）
異なる用量レベルにおけるキャンパス−１Ｈ（登録商標）およびヒト化抗ＣＤ５２抗体（４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１）の枯渇活性を、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて検討した。マウスに各抗体の０．１、０．５、１．０、または５．０ｍｇ／ｋｇを静脈内注射した。投与２時間後、血清を回収して、循環サイトカインのレベルを検討した。投与３日後、マウスを屠殺し、血液および脾臓を各マウス（Ｎ＝５）から回収し、フローサイトメトリー分析を用いて細胞枯渇のレベルを決定した。試料を評価して、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスの循環末梢血または脾臓に存在する全ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋）、細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）、Ｂ細胞（Ｂ２２０＋）、および骨髄系細胞亜集団の相対数を決定した。加えて、Ｔ細胞およびＢ細胞のサブセットの分析を実施して。全体的な枯渇効果を決定した。マウスのサブセット（Ｎ＝５）を生存したままにして、再増殖動態をモニターした。枯渇は、Ｔ細胞区画において最大であり、ＣＤ４＋  Ｔ細胞は、最も枯渇し、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および他の骨髄系細胞がそれに続いた。ＣＤ４＋  Ｔ細胞区画内で、未処理のＣＤ４＋  Ｔ細胞が最も枯渇し、ＣＤ４＋  中央記憶装置（ＣＭ）、ＣＤ４＋  エフェクター記憶装置（ＥＭ）、およびＣＤ４＋  制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）がそれに続いた。類似のパターンが、ＣＤ８＋  Ｔ細胞について観察された（未処理＞ＣＭ＞ＥＭ）。逆に、成熟Ｂ細胞は、未成熟Ｂ細胞よりも大きな程度まで枯渇した。キャンパス−１Ｈ（登録商標）で処置したマウスと４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１で処置したマウスとの比較は、検討した各用量で血液および脾臓の両方における細胞の類似のパターンを示した。
【０３４５】
血清サイトカイン分析は、ＴＮＦα、ＩＬ−６、およびＭＣＰ−１について用量依存性増加を示した。これらのサイトカインの循環レベルは、未処理のマウスと比較して、０．５および０．１ｍｇ／ｋｇ用量で同様に上昇したままであった。また、３つの最大用量でキャンパス−１Ｈ（登録商標）で処理した群におけるＩＬ−１０についてわずかな増加が観察されたが、ヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１で処理した群の最大用量についてのみ観察された。循環しているＩＬ−１２またはＩＦＮｇ（非表示）のレベルにおける有意な増大は示されなかった。
【０３４６】
投与５０〜６０日後までに、１．０ｍｇ／ｋｇ群を除き、キャンパス−１Ｈ（登録商標）を投与した群すべてのリンパ球レベルは、未処理のマウスのレベルにまでリバウンドした。１．０ｍｇ／ｋｇ群において、リンパ球は。投与８０日後までに正常レベルに戻った。また、類似の再増殖動態は、ヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１抗体で処理したマウスについても観察された。リンパ球は、０．５ｍｇ／ｋｇレベルを除き、４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１で処理した群すべてにおいて投与５０日後までに対照レベルにまでリバウンドした。０．５ｍｇ／ｋｇ群における循環リンパ球のレベルは、モニターしている期間、経時的に低下したままであった。総リンパ球を血液における増殖についてモニターした。
【０３４７】
図４６Ａ〜４６Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体を投与した７２時間後に血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞のレベルを示す。図４７Ａ〜４７Ｅは。キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体を投与した７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞のレベルを示す。図４８Ａ〜４８Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体を投与した２時間後の循環しているサイトカインのレベルを示す。図４９Ａ〜４９Ｂは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）およびヒト化４Ｂ１０−Ｈ１／Ｋ１（「４Ｂ１０」）抗体を投与した後の経時的な循環しているリンパ球の再増殖を示す。
【０３４８】
（実施例４３：ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける抗ＣＤ５２抗体（７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２）の枯渇および再増殖の分析）
異なる用量レベルのヒト化抗体（７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２）の枯渇活性を、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて検討した。マウスに各抗体を０．１、０．５、１．０、または５．０ｍｇ／ｋｇ静脈内注射した。投与２時間後、血清を採取し、循環サイトカインのレベルを検査した。投与３日後、マウスを屠殺し、血液および脾臓を各マウス（Ｎ＝５）から回収し、フローサイトメトリー分析を用いて細胞枯渇のレベルを決定した。試料を評価して、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスの循環している末梢血または脾臓に存在する全ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋）、細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）、Ｂ細胞（Ｂ２２０＋）、および骨髄系細胞の亜集団の相対数を決定した。加えて、Ｔ細胞およびＢ細胞のサブセットの分析を実施して、全体的な枯渇効果を決定した。マウスのサブセット（Ｎ＝５）を生きたままにしておいて。再増殖動態をモニターした。全用量における各ヒト化７Ｆ１１抗体（７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２）の投与は。血液中のＴ細胞およびＢ細胞の両方の有意な数の枯渇を結果として生じた。また、これらのデータは、種々のＴ細胞およびＢ細胞のサブセットが、使用される抗体の用量に応じて、異なる程度まで枯渇することも示した。未処理のＴ細胞（ＣＤ４およびＣＤ８の両方）は。他の細胞集団（記憶細胞および制御性Ｔ細胞を含む。）を用いた枯渇のほとんどが、より低い程度まで枯渇することを示した。Ｂ細胞区画において。成熟Ｂ細胞は。未成熟Ｂ細胞よりも容易に枯渇した。脾臓において、用量依存性枯渇は、リンパ球の有意な枯渇が、５および１ｍｇ／ｋｇ用量レベルで観察されることを観察した。血液を用いた場合と同様に、未処理のＴ細胞は、記憶細胞よりも迅速に枯渇した。Ｂ細胞は、各ヒト化７Ｆ１１クローン（７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２）を用いたＴ細胞よりも低い程度まで枯渇した。枯渇は、注射した任意の用量で血液または脾臓におけるＮＫ細胞または好中球について観察されなかった。血清サイトカイン分析は、ＴＮＦαおよびＩＬ−６の両方について用量依存性増加を示した。これらのサイトカインのレベルは。未処理のマウスと比較して、０．５および０．１ｍｇ／ｋｇ用量で同様に上昇したままであった。循環しているＭＣＰ−１のレベルの用量依存性増加も示された。
【０３４９】
投与３０日後までに、０．５および０．１ｍｇ／ｋｇを投与した群におけるリンパ球レベルは、未処理のマウスのレベルにまでリバウンドした。１．０および５．０ｍｇ／ｋｇ群において、リンパ球は、クローン７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２についてはそれぞれ５０日および８０日までに、クローン７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２の１．０および５．０ｍｇ／ｋｇの両方については投与８０日後までに正常レベルに戻った。総リンパ球を、血液における再増殖についてモニターした。
【０３５０】
図５０Ａ〜５０Ｅは、ヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ１」）および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ２」）を投与した７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞のレベルを示す。図５１Ａ〜５１Ｅは、ヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ１」）および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ２」）抗体を投与した７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞のレベルを示す。図５２Ａ〜５２Ｆは、ヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ１」）および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２（「７Ｆ１１  ＳＦＤ２」）抗体を投与した後の経時的な循環しているリンパ球の再増殖を示す。
【０３５１】
（実施例４４：ＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける７Ｆ１１ヒト化抗ＣＤ５２抗体（７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２）の分析）
キャンパス−１Ｈ（登録商標）と比較したキメラ７Ｆ１１抗体ならびにヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２抗体の枯渇活性をｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて検討した。マウスに各抗体１．０ｍｇ／ｋｇを静脈内注射した。投与３日後、マウスを屠殺し、各マウス（Ｎ＝５）から血液および脾臓を回収し、フローサイトメトリー分析を用いて細胞枯渇のレベルを決定した。試料を評価して、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスの循環している末梢血または脾臓に存在する全ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋）、細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）、Ｂ細胞（Ｂ２２０＋）、および骨髄系細胞亜集団の相対数を決定した。キャンパス−１Ｈ（登録商標）の投与は、血液および脾臓におけるＴ細胞およびＢ細胞の両方の有意な数の枯渇を結果的に生じた。同程度のレベルのＴ細胞枯渇が、キメラおよびヒト化７Ｆ１１抗体（７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２）の両方について血液中で観察されたが、Ｂ細胞は。それより低い程度で枯渇した。また、この観察は脾臓においても明らかであり、そこでは有意なＴ細胞枯渇が認められたが、中程度のレベルのＢ細胞枯渇が７Ｆ１１抗体（７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２）を用いて達成された。
【０３５２】
図５４Ａ〜５４Ｂは。キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、７Ｆ１１−キメラ抗体、およびヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２抗体を投与した７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞のレベルを示す。
【０３５３】
（実施例４５：ＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける抗ＣＤ５２抗体（７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２）のＰＫ特性の分析）
ヒト化過程が、抗体のクリアランス速度を変化させないことを確かめるために、キメラ７Ｆ１１抗ＣＤ５２抗体およびヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２抗ＣＤ５２抗体の薬物動態特性をｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて決定した。マウスに５ｍｇ／ｋｇで抗体を静脈内注射し、血液を投与２時間後に始まる種々の時点で回収した。各抗体の循環しているレベルを、抗ヒトＩｇＧ  ＥＬＩＳＡを用いて評価した。各ヒト化クローンについて、投与２時間後にＣｍａｘのわずかな差が認められた。キメラ７Ｆ１１抗体ならびにヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２抗体についてのクリアランス速度は、本実験において経時的に互いに、およびキャンパス−１Ｈ（登録商標）と同様であり、ヒト化過程が、抗体の薬物動態特性を有意に変化させないことを示した。
【０３５４】
図５５は、投与後の経時的な血液中のキャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、７Ｆ１１−キメラ抗体、ならびにヒト化７Ｆ１１−ＳＦＤ１／Ｋ２および７Ｆ１１−ＳＦＤ２／Ｋ２抗体のレベルを示す。
【０３５５】
（実施例４６：ｈｕＣＤ５２トランスジェニックますうにおける抗ＣＤ５２抗体（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２）の枯渇および再増殖の分析）
異なる用量レベルの２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２の枯渇活性をｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて検討した。マウスに０．１、０．５、１．０、または５．０ｍｇ／ｋｇの抗体を静脈内注射した。投与２時間後、循環しているサイトカインレベルを検討し得るように血清を回収した。投与３日後、マウスを屠殺し、各マウス（Ｎ＝５）から血液および脾臓を回収し、フローサイトメトリー分析を用いて細胞枯渇のレベルを決定した。試料を評価し、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスの循環している末梢血液または脾臓に存在する全ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋）。細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）、Ｂ細胞（Ｂ２２０＋）、および骨髄系細胞亜集団の相対数を決定した。加えて、Ｔ細胞およびＢ細胞サブセット分析を実施して、全体的な枯渇効果を決定した。マウスのサブセット（Ｎ＝５）を生きたままにしておき、再増殖動態をモニターした。５、１、および０．５ｍｇ／ｋｇ用量の２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２の投与は結果的に、血液中のＴ細胞およびＢ細胞の両方の有意な数の枯渇を生じた。変化するレベルのリンパ球枯渇が、０．１ｍｇ／ｋｇ用量で血液中で観察され、ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＢ細胞は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞よりも大きな程度まで枯渇した。これらのデータはまた、種々のＴ細胞およびＢ細胞サブセットが、使用された抗体の用量に応じて異なる程度まで枯渇することも示した。未処理のＴ細胞（ＣＤ４およびＣＤ８の両方）は、他の細胞集団（記憶細胞および制御性Ｔ細胞を含む。）と比較して最大の枯渇を示し、後者は、より低い程度で枯渇した。Ｂ細胞区画において、成熟Ｂ細胞は、未成熟Ｂ細胞よりも容易に枯渇した。脾臓において、用量依存性枯渇は、５および１ｍｇ／ｋｇ用量レベルで観察されたリンパ球の有意な枯渇で観察された。キャンパス−１Ｈ（登録商標）と類似して、未処理のＴ細胞は、記憶細胞よりも容易に枯渇した。枯渇は、血液中のＮＫ細胞および好中球について観察されたが、注射された任意の用量において脾臓ではほとんどないしまったく枯渇が観察されなかった。血清サイトカイン分析は、ＴＮＦαおよびＩＬ−６の両方について用量依存性増加を示した、５ｍｇ／ｋｇ用量で各サイトカインの最高レベルを誘導した。未処理のマウスに匹敵するレベルが、ＴＮＦαについて０．５および０．１ｍｇ／ｋｇ用量レベルで、ＩＬ−６について０．１ｍｇ／ｋｇ用量レベルで観察された。また、循環しているＭＣＰ−１のレベルの用量依存性増加も認められた。
【０３５６】
投与３０日後までに、０．１および０．５ｍｇ／ｋｇ群についてのリンパ球レベルは、未処理のマウスのレベルまでリバウンドした。１．０および５．０ｍｇ／ｋｇ群において、リンパ球は、投与８０日後までに正常レベルに戻った。総リンパ球を、血液中での再増殖についてモニターした。
【０３５７】
図５６Ａ〜５６Ｅは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を投与した７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞。ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０  Ｂ細胞のレベルを示す。図５７Ａ〜５７Ｅは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を投与した７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞のレベルを示す。図５８Ａ〜５８Ｆは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を投与した２時間後の循環サイトカインのレベルを示す。図５９は、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を投与した後の経時的な循環しているリンパ球の再増殖を示す。
【０３５８】
（実施例４７：ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける抗ＣＤ５２抗体（１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１）の枯渇および再増殖の分析）
異なる用量レベルの１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１クローンの枯渇活性を、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて検討した。マウスに０．１、０．５、１．０、または５．０ｍｇ／ｋｇの抗体を静脈内注射した。投与２時間後、循環しているサイトカインのレベルを検討し得るように、血清を回収した。投与３日後、マウスを屠殺し、血液および脾臓を各マウス（Ｎ＝５）から回収して、フローサイトメトリー分析を用いて細胞枯渇のレベルを決定した。試料を評価して、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスの循環している末梢血または脾臓に存在する全ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋）、細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）、Ｂ細胞（Ｂ２２０＋）、および骨髄系細胞亜集団を決定した。加えて、Ｔ細胞およびＢ細胞サブセット分析を実施して、全枯渇効果を決定した。マウスのサブセット（Ｎ＝５）を生きたままにしておいて。再増殖動態をモニターした。５、１、および０．５ｍｇ／ｋｇの１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１の投与は結果的に、血液中のＴ細胞およびＢ細胞の両方の有意な数の枯渇を生じた。変化するレベルのリンパ球枯渇を血液中で０．１ｍｇ／ｋｇ用量で観察し、ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＢ細胞は。ＣＤ８＋  Ｔ細胞よりも大きな程度まで枯渇した。これらのデータはまた、種々のＴ細胞およびＢ細胞サブセットが、使用した抗体の容量に応じて異なる程度まで枯渇することを示した。未処理のＴ細胞（ＣＤ４およびＣＤ８の両方）は、より低い程度まで枯渇した他の細胞集団（記憶細胞および制御性Ｔ細胞を含む）と比較して最大の枯渇を示した。Ｂ細胞区画において、成熟Ｂ細胞は、未成熟Ｂ細胞よりも容易に枯渇した。脾臓において、用量依存性枯渇は、５および１ｍｇ／ｋｇ用量レベルで観察されたリンパ球の有意な枯渇で観察された。キャンパス−１Ｈ（登録商標）と同様に、未処理のＴ細胞は、記憶細胞よりも容易に枯渇した。注射した任意の用量において、枯渇は血液中のＮＫ細胞および好中球について観察されたが、脾臓では枯渇はほとんどないしまったく観察されなかった。血清サイトカイン分析は、ＴＮＦαおよびＩＬ−６の両方について用量依存性増加を示し、５ｍｇ／ｋｇ用量が最大レベルの各サイトカインを誘導した。未処理のマウスに匹敵するレベルが、ＴＮＦαについては０．５および０．１ｍｇ／ｋｇ用量レベルで、ＩＬ−６については０．１ｍｇ／ｋｇ用量レベルで観察された。また、循環しているＭＣＰ−１のレベルの用量依存的増加も認められた。
【０３５９】
投与３０日後までに、リンパ球レベルは、未処理のマウスのレベルにまでリバウンドした。１．０および５．０ｍｇ／ｋｇ群において、リンパ球は、投与８０日後までに正常レベルに戻った。総リンパ球を血液中の再増殖についてモニターした。
【０３６０】
図６０Ａ〜６０Ｅは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体を投与した７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞のレベルを示す。図６１Ａ〜６１Ｅは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体の投与７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞のレベルを示す。図６２Ａ〜６２Ｆは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６ｈｕ」）抗体を投与した２時間後の循環しているサイトカインのレベルを示す。図６３は、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体を投与した後の経時的な循環しているリンパ球の再増殖を示す。
【０３６１】
（実施例４８：ＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける抗ＣＤ５２抗体（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２）のＰＫ特性の分析）
抗ＣＤ５２抗体の薬物動態特性をｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて決定した。本実験は、ヒト化およびキメラ形態の抗体を比較して、ヒト化過程が抗体のクリアランス速度を変化させないことを確かめた。比較には、キメラ２Ｃ３、１２Ｇ６、および９Ｄ９抗体ならびにヒト化２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２抗体を含めた。マウスに５ｍｇ／ｋｇで抗体を静脈内注射し、血液を投与２時間後に開始する種々の時点で回収した。各抗体の循環しているレベルを、抗ヒトＩｇＧ  ＥＬＩＳＡを用いて評価した。分析した各キメラ／ヒト化抗体対について、投与２時間後にＣｍａｘにおけるわずかな差が認められた。２Ｃ３および１２Ｇ６抗体については、ヒト化バージョン（すなわち、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１）のＣｍａｘはわずかにより高かったのに対し、キメラバージョンは、９Ｄ９対についてわずかにより高かった。抗体対についてのクリアランス速度は、本実験で経時的に類似しており、ヒト化過程が抗体の薬物動態特性を有意に変化させないことを示した。
【０３６２】
図６４Ａ〜６４Ｃは、投与後に経時的に血液中の２Ｃ３−キメラ、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−キメラ、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、９Ｄ９−キメラ、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２抗体のレベルを示す。
【０３６３】
（実施例４９：ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける抗ＣＤ５２抗体（９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２）の枯渇および再増殖の分析）
異なる用量レベルの９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２クローンの枯渇活性をｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて検討した。マウスに０．１、０．５、１．０、または５．０ｍｇ／ｋｇの抗体を静脈内注射した。投与２時間後、循環しているサイトカインのレベルを検査し得るように血清を回収した。投与３日後、マウスを屠殺し、血液および脾臓を各マウス（Ｎ＝５）から回収し、フローサイトメトリー分析を用いて細胞枯渇のレベルを決定した。試料を評価して、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける循環している末梢血または脾臓における全ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋）、細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）、Ｂ細胞（Ｂ２２０＋）、および骨髄系細胞の亜集団の相対数を決定した。加えて、Ｔ細胞およびＢ細胞のサブセット分析を実施して、全体的な枯渇効果を決定した。マウスのサブセット（Ｎ＝５）を生きたままにしておいて、再増殖動態をモニターした。５、１、および０．５ｍｇ／ｋｇ用量の９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２の投与は、血液中のＴ細胞およびＢ細胞の両方の有意な数の枯渇を結果的に生じた。０．１ｍｇ／ｋｇ用量では、中程度のレベルのリンパ球の枯渇しか血液中で観察されなかった。これらのデータはまた、種々のＴ細胞およびＢ細胞サブセットが、使用した抗体の用量に応じて異なる程度まで枯渇することを示した。未処理のＴ細胞（ＣＤ４およびＣＤ８の両方）は、他の細胞集団（記憶細胞および制御性Ｔ細胞を含む）と比較して最大の枯渇を示し、後者は、より少ない程度まで枯渇した。Ｂ細胞の区画において、成熟Ｂ細胞は、未成熟Ｂ細胞よりも容易に枯渇した。脾臓において、これらの細胞の有意な枯渇は、５および１ｍｇ／ｋｇ用量レベルでのみ観察された。キャンパス−１Ｈ（登録商標）と同様に、未処理のＴ細胞は、記憶細胞よりも容易に枯渇した。枯渇は、注射された任意の用量で、血液中のＮＫ細胞および好中球については観察されたが、脾臓においては、枯渇はほとんどないしまったく観察されなかった。血清サイトカイン分析は、分析された任意の用量レベルでＴＮＦαまたはＩＬ−６についての有意な増加を示さなかった。しかしながら、循環しているＭＣＰ−１のレベルにおける用量依存性増加が認められた。
【０３６４】
本実験の再増殖部分は、リンパ球が５０〜８０％再増殖した場合（用量に依存する）早期に終止した。リンパ球再増殖は、全リンパ球計数に基づいてモニターされ、Ｔ細胞およびＢ細胞ベースに基づかなかった。
【０３６５】
図６５Ａ〜６５Ｅは、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を投与した７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞のレベルを示す。図６６Ａ〜６６Ｅは、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を投与した７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞のレベルを示す。図６７Ａ〜６７Ｆは、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を投与した２時間後の循環しているサイトカインのレベルを示す。図６８は、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を投与した後の経時的な循環しているリンパ球の再増殖を示す。
【０３６６】
（実施例５０：ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける抗ＣＤ５２抗体（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２）の枯渇および再増殖の分析）
異なる用量レベルのキャンパス−１Ｈ（登録商標）ならびにヒト化２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２クローンの枯渇活性をｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて検討した。マウスに０．１または１．０ｍｇ／ｋｇのいずれかの抗体を静脈内注射した。投与２時間後、循環しているサイトカインのレベルを検査し得るように血清を回収した。投与３日後、マウスを屠殺し、血液および脾臓を各マウスから回収し、フローサイトメトリー分析を用いて細胞枯渇のレベルを決定した。試料を評価して、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスの循環している末梢血または脾臓に存在する全ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋）、細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）、Ｂ細胞（Ｂ２２０＋）、および骨髄系細胞亜集団の相対数を決定した。加えて、Ｔ細胞およびＢ細胞のサブセット分析を実施して、全体的な枯渇効果を決定した。ヒト化抗体（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２）はすべて、ＰＢＳ処理した動物と比較して、脾臓および血液内のリンパ球の枯渇を仲介した。枯渇は、すべての抗体について脾臓よりも血液中でより頑強であり、枯渇は両組織において用量依存性であった。枯渇は、ＣＤ４およびＣＤ８＋  Ｔ細胞について最も劇的であり、Ｂ細胞区画においては、より少ない枯渇であった。種々のＴ細胞およびＢ細胞のサブセットを異なる程度まで枯渇させた。未処理のＴ細胞（ＣＤ４およびＣＤ８の両方）は、より少ない程度まで枯渇した他の細胞集団（記憶細胞および制御性Ｔ細胞を含む）と比較して、最大の枯渇を示した。Ｂ細胞区画において、成熟Ｂ細胞は、未成熟Ｂ細胞よりも迅速に枯渇した。血清サイトカイン分析は、投与２時間後のＩＬ−６、ＭＣＰ−１、およびＴＮＦαのレベルにおける有意な増加を明らかにした。キャンパス−１Ｈ（登録商標）を含むすべての抗体についての増加が認められ、用量依存性であった（すなわち、より高いサイトカインレベルが、０．１ｍｇ／ｋｇ用量よりも１．０ｍｇ／ｋｇ用量レベルについて認められた）。キャンパス−１Ｈ（登録商標）との比較において、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１は、ＩＬ−６と類似のレベルを誘導したのに対し、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２は、ＩＬ−６を有意により低い程度まで誘導した。ＭＣＰ−１について、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体はより低いレベルを誘導し、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２の両方は。キャンパス−１Ｈ（登録商標）と比較してＴＮＦαレベルを低下させた。
【０３６７】
図６９Ａ〜６９Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６」）、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ細胞）、ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ／ＮＫ細胞サブタイプのレベルを示す。図７０Ａ〜７０Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６」）、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２（「９Ｄ９」）抗体を投与した７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ細胞）、ならびにＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ／ＮＫ細胞サブタイプのレベルを示す。図７１Ａ〜７１Ｆは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、および９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２抗体を投与した２時間後の循環しているサイトカインのレベルを示す。
【０３６８】
（実施例５１：ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける抗ｈｕＣＤ５２ヒト化９Ｄ９（９Ｄ９  Ｈ１０／Ｋ１２および９Ｄ９  Ｈ１１／Ｋ１２）の直接的な比較）
２つのヒト化抗ＣＤ５２  ９Ｄ９クローン（９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２および９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２）の枯渇活性をｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて検討した。マウスに０．１または１．０ｍｇ／ｋｇのいずれかの抗体を静脈内注射した。投与３日後、マウスを屠殺し、血液および脾臓を各マウスから回収し、フローサイトメトリー分析を用いて細胞枯渇のレベルを決定した。試料を評価して、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスの循環末梢血または脾臓に存在する全ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋）、細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）、Ｂ細胞（Ｂ２２００＋）、およびＮＫ細胞亜集団の相対数を決定した。いずれかの抗体を用いた処置は結果的に、血液および脾臓内で類似のリンパ球枯渇を生じ、血液中のリンパ球枯渇がより頑強であった。さらに、ＣＤ４およびＣＤ８＋  Ｔ細胞は、両組織においてＢ細胞およびＮＫ細胞よりも強く枯渇した。９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２クローンを用いた枯渇が、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２クローンを用いた枯渇ほど頑強ではないように見えたが、差は統計的に有意ではなかった。
【０３６９】
図７２は、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２および９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ細胞のレベルを示す。図７３は、９Ｄ９−Ｈ１０／Ｋ１２および９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ細胞のレベルを示す。
【０３７０】
（実施例５２：ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける抗ｈｕＣＤ５２ヒト化１２Ｇ６クローン（１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１および１２Ｇ６−ＳＦＤ１−Ｋ１２）の直接的な比較）
２つのヒト化抗ＣＤ５２  １２Ｇ６クローン（１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１および１２Ｇ６−ＳＦＤ１−Ｋ１２）の枯渇活性をｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて検討した。マウスに０．１または１．０ｍｇ／ｋｇのいずれかの抗体を静脈内注射した。投与２時間後、循環しているサイトカインのレベルを検査し得るように血清を回収した。投与３日後、マウスを屠殺し、血液および脾臓を各マウスから回収して、フローサイトメトリー分析を用いて細胞枯渇のレベルを決定した。試料を評価して、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスの循環末梢血または脾臓に存在する全ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋）、細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）、Ｂ細胞（Ｂ２２０＋）、および骨髄系細胞亜集団の相対数を決定した。加えて、Ｔ細胞およびＢ細胞のサブセット分析を実施して、全体的な枯渇効果を決定した。１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１抗体または１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体のいずれかの投与は結果的に、血液内での有意なレベルのリンパ球枯渇を生じた。２つのクローンのリンパ球枯渇活性に差はほとんどないしまったくないように見えた。リンパ球枯渇のパターンは、未処理のＣＤ４およびＣＤ８＋  Ｔ細胞が、記憶Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞よりも高い程度まで枯渇するようであった。骨髄系細胞集団は、クローン（１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１または１２Ｇ６−ＳＦＤ１−Ｋ１２）または用量に関わらず、より低い程度で枯渇した。血清サイトカイン分析は、本実験について実施されなかった。
【０３７１】
図７４Ａ〜７４Ｄは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６  Ｋ１１」）および１２Ｇ６−ＳＦＤ１−Ｋ１２（「１２Ｇ６  Ｋ１２」）抗体を用いた投与の７２時間後の血液中のＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ／ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。図７５Ａ〜７５Ｄは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１（「１２Ｇ６  Ｋ１１」）および１２Ｇ６−ＳＦＤ１−Ｋ１２（「１２Ｇ６  Ｋ１２」）抗体を用いた投与の７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ／ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【０３７２】
（実施例５３：ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける抗ｈｕＣＤ５２ヒト化９Ｄ９クローン（９Ｄ９  Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９  Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９  Ｈ１８／Ｋ１３）の直接的な比較）
３つのヒト化９Ｄ９抗体（９Ｄ９  Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９  Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９  Ｈ１８／Ｋ１３）の枯渇活性を、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて比較した。ヒトＣＤ５２トランスジェニックマウスを、ビヒクル対照としてのＰＢＳで処置し、または１ｍｇ／ｋｇもしくは０．１ｍｇ／ｋ１の各抗体のいずれかを注射した。投与２時間後、血清を回収して、循環しているサイトカインのレベルを決定した。３日後、マウスを屠殺し、末梢血および脾臓を回収して、フローサイトメトリー分析のために加工した。試料を評価して、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスの循環末梢血または脾臓に存在する全ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋）、細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）、Ｂ細胞（Ｂ２２０＋）、および骨髄系細胞亜集団の相対数を決定した。加えて、Ｔ細胞およびＢ細胞のサブセット分析を実施して、全体的な枯渇効果を決定した。全ての９Ｄ９抗体（９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３）は、血液および脾臓において類似の程度まで、リンパ球および骨髄系細胞集団の細胞枯渇を仲介した。より頑強なリンパ球および骨髄系細胞枯渇が、脾臓よりも血液において観察された。９Ｄ９クローン（９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３）の枯渇活性の比較は、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３が最も頑強な枯渇を結果的に生じ、それに９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３および９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２が続くことを示した。このことは、１ｍｇ／ｋｇ用量の脾臓におけるリンパ球について最も明らかであり、ここで、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３処理は結果として、他のクローン（９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３および９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２）のいずれかよりも高い程度の枯渇を生じた。さらに、枯渇のパターンは、未処理のＣＤ４およびＣＤ８＋  Ｔ細胞が、記憶Ｔ細胞または制御性Ｔ細胞よりも高い程度まで枯渇し、Ｂ細胞集団が９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３を用いてより高いレベルにまで枯渇するようであった。骨髄系細胞集団は、抗体のクローン（９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、もしくは９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３）または用量にかかわらず、抗ＣＤ５２処置による影響が少なかった。分析したサイトカインのうち、増加は、ＩＬ−６、ＴＮＦα、およびＭＣＰ−１において認められた。注射後、ＩＬ６およびＭＣＰ−１の類似の循環レベルが、９Ｄ９クローン（９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３）のすべてについて、０．１および１．０ｍｇ／ｋｇの両用量レベルで観察された。僅かな差が循環しているＴＮＦαレベルで観察され、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３クローンの注射が、１．０ｍｇ／ｋｇ用量で中程度の増加を結果的に生じた。
【０３７３】
図７６は、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３を投与した７２時間後の血液におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）のレベルを示す。図７７Ａ〜７７Ｄは、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を投与した７２時間後の血液におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ／ＮＫ細胞、および骨髄系細胞サブタイプを示す。図７８は、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を投与した７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）のレベルを示す。図７９Ａ〜７９Ｄは、９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を投与した７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ／ＮＫ細胞、および骨髄系細胞サブタイプのレベルを示す。図８０Ａ〜８０Ｆは。９Ｄ９−Ｈ１１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を投与した２時間後の循環サイトカインのレベルを示す。
【０３７４】
（実施例５４：ＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける２Ｃ３、１２Ｇ６、および９Ｄ９ファミリー由来の抗ＣＤ５２抗体のＰＫ特性の分析）
ヒト化２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３の薬物動態特性をｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて決定した。マウスに、１ｍｇ／ｋｇの抗体を静脈注射し。血液を投与２時間後に始まる種々の時点で回収した。各抗体の循環レベルを、抗ヒトＩｇＥＬＩＳＡを用いて評価した。算出した半減期は、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２が７９．０±２３．９時間、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１が４９．０±１４．４時間、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２が７５．１±２８・５時間、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３が５９．８±２６．６時間、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３が４２．２±１５．７時間であった。
【０３７５】
全体として、これらの研究における曝露について有意な個体間のばらつきがあった。２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２についての終末相排出半減期は同様であったのに対し、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１の半減期はより短かったが有意には異ならなかった。クリアランスは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２で最も速く、次いで、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２であった。２つの１２Ｇ６処理は、測定された時点のほとんどについて互いに酷似していたのに対し、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２は、より少ない曝露およびより迅速なクリアランスを示した。９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３は。測定されたすべてのＰＫパラメータについて非常に類似していた。
【０３７６】
図８１Ａ〜８１Ｂは。投与後の経時的な血液中の２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３のレベルを示す。
【０３７７】
【表１６】
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（実施例５５：抗ＣＤ５２抗体による処置に応答するサイトカイン襲来の評価）
抗ＣＤ５２抗体を用いた処置後の血清サイトカインの放出をｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて評価した。動物を１ｍｇ／ｋｇのキャンパス−１Ｈ（登録商標）、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、または９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３で処置した。２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２の注射が、他の抗体と比較してより低レベルの枯渇を結果として生じ得ることを示す先行結果を考慮して、１群の動物を５ｍｇ／ｋｇの２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２で処置し、それにより類似のレベルの枯渇に到達するのに必要な用量に基づいて該群を正規化した。すべての群から治療１、２、４、２４、および４８時間後に採血し、炎症性サイトカインについてのＣＢＡ分析を実施した。また、すべての群を治療３日後に屠殺し、脾臓を、フローサイトメトリーによって脾臓におけるリンパ球の枯渇について評価した。各抗体を用いた処置は結果的に、キャンパス−１Ｈ（登録商標）について観察されたものと類似の種々の標的の枯渇を生じた。このことはまた、５ｍｇ／ｋｇ用量を用いて類似の枯渇を誘発した２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２についても真であった。枯渇におけるいくつかのばらつきは、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２および９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３を用いて観察され、サイトカイン分析のための血清を獲得するために動物の反復した採血による可能性が最も高い。しかしながら、サイトカイン発現は、１２Ｇ６（１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１および１２Ｇ６−ＳＧＤ１／Ｋ１２）および９Ｄ９（９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３）ファミリー由来の抗体について低下した。このことは、早期の１および２時間の時点で、ＩＬ−６．ＭＣＰ−１、およびＴＮＦαの放出について最も顕著であった。
【０３７８】
図８２Ａ〜８２Ｆは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、または９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を投与後の４８時間にわたる、経時的な血液中のサイトカインのレベルを示す。図８３Ａ〜８３Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、または９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体の投与７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球であるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ／ＮＫ細胞、および骨髄系細胞のレベルを示す。
【０３７９】
（実施例５６：抗ＣＤ５２抗体を用いた処置後のＣＤ５２トランスジェニックマウスの血液における再増殖動態の評価）
血液中のいくつかの細胞腫の増殖動態を、ヒト化抗ＣＤ５２  ２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体の投与後に評価した。マウスに２ｍｇ／ｋｇの各抗体を静脈内注射し、頑強なレベルの枯渇を確実にした。注射後の種々の時点で、血液をフローサイトメトリー分析のために回収し、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、およびマクロファージを含む、血液中の循環しているリンパ球のレベルを決定した。各抗体についての初期枯渇活性において差は観察されず、このことは、注射３日後に確認された。マウスから最初の１ヶ月間は毎週、その後は２週ごとに採血して、再増殖の動態をモニターした。リンパ球増殖の動態は、キャンパス−１Ｈ（登録商標）と比較して、任意の抗ＣＤ５２（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２）抗体について類似していた。５７日後までに、Ｂ細胞は血液において基線に戻ったのに対し、Ｔ細胞は、８４日後までに基線レベルに到達した。１１６日後まで、ＣＤ８＋  Ｔ細胞は、対照レベルに戻らなかったが、モニターした他の細胞種すべてについての類似の増殖動態が、各抗ＣＤ５２（ＣＤ５２  ２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２）抗体およびキャンパス−１Ｈ（登録商標）で観察された。
【０３８０】
図８４Ａ〜８４Ｇは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を投与した後の、循環しているＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、およびマクロファージの経時的な増殖を示す。
【０３８１】
（実施例５７：抗ＣＤ５２抗体を用いたＣＤ５２トランスジェニックマウスにおけるＣＤ５２発現の評価）
ｈｕＣＤ５２の発現を、ヒト化抗ＣＤ５２抗体を用いて評価して、類似の染色パターンが、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける成熟および発達中の細胞集団において観察することができるかどうかを決定した。２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体をＦＩＴＣと共役し、フローサイトメトリー染色において使用した。ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウス由来の組織を回収し、染色のために処理した。２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体は、キャンパス−１Ｈ（登録商標）と類似して、トランスジェニックマウスの脾臓由来のｈｕＣＤ５２発現リンパ球を染色した。染色パターンは、胸腺および骨髄などの他のリンパ系臓器において認められるリンパ球集団およびサブセットを表すものであった。
【０３８２】
図８５は、ＦＩＴＣ標識したキャンパス−１Ｈ（登録商標）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体の、脾臓におけるｈｕＣＤ５２リンパ球細胞集団に特異的に結合する能力を示す。
【０３８３】
（実施例５８：ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける抗ｈｕＣＤ５２を用いた単回用量処置の直接的な比較）
いくつかのヒト化抗ＣＤ５２抗体（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３）の枯渇活性をヒトＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて比較した。マウスに１ｍｇ／ｋｇで抗体を静脈内注射した。投与２時間後、血清をサイトカイン分析のために回収した。３日後、マウスを屠殺し、血液および脾臓を回収して、リンパ球枯渇のレベルを比較した。有意なレベルのＢ細胞およびＴ細胞枯渇がすべての抗ＣＤ５２抗体（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３）について観察され、キャンパス−１Ｈ（登録商標）投与後に観察されるものに匹敵した。また、サブセット分析は、血液または脾臓のいずれにおいても各抗体（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３）についての枯渇レベルにおける有意差のないことが明らかになった。キャンパス−１Ｈ（登録商標）の注射後、ＩＬ−６およびＴＮＦαの両方の循環しているレベルにおいて顕著な増大があった。各抗ＣＤ５２抗体（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３）の注射が結果的に、キャンパス−１Ｈ（登録商標）と比較してＴＮＦαのレベルにおける有意な低下を生じたが、ＩＬ−６のレベルは同様であった。
【０３８４】
図８６Ａ〜８６Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を投与した７２時間後の血液におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）ならびに、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ／ＮＫ細胞、および骨髄系細胞サブタイプのレベルを示す。図８７Ａ〜８７Ｅは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を投与した７２時間後の脾臓におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）ならびに、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋
Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ／ＮＫ細胞、および骨髄系細胞サブタイプのレベルを示す。図８８Ａ〜８８Ｃは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１１、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および９Ｄ９−Ｈ１８／Ｋ１３抗体を投与した２時間後の循環しているサイトカインのレベルを示す。
【０３８５】
（実施例５９：抗ｈｕＣＤ５２抗体を用いた単回用量治療後のｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおけるリンパ球の徹底的な枯渇）
ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて広範な枯渇分析を、抗ＣＤ５２  ２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を用いて実施した。マウス（Ｎ＝４）に１ｍｇ／ｋｇの各抗体の単回用量を静脈内注射した。３日後、マウスを屠殺し、血液、脾臓、リンパ節、および胸腺を回収して、多重色フローサイトメトリー分析を用いてリンパ球枯渇のレベルを比較した。有意なレベルのＢ細胞およびＴ細胞枯渇が抗ＣＤ５２  ２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体のすべてについて観察され、検討した各組織におけるキャンパス  １Ｈ（登録商標）投与後に観察されたものに匹敵した。また、サブセット分析は、血液または脾臓のいずれにおいても各抗体についての枯渇レベルにおいて有意差のないことを明らかにした。また、リンパ球枯渇の有意なレベルがマウスのリンパ節において観察された。しかしながら、特に中枢およびエフェクターの記憶Ｔ細胞サブセットを観察した場合、抗体の活性にいくらかのばらつきがあるように見えた。ＬＳＲ‐ＩＩおよびＣＤ８染色に関する技術的な問題により、胸腺は評価することができなかった。
【０３８６】
図８９Ａ〜８９Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を投与した７２時間後の血液におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞サブタイプのレベルを示す。図９０Ａ〜９０Ｄは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を投与した７２時間後の脾臓におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞サブタイプのレベルを示す。図９１Ａ〜９１Ｄは。キャンパス−１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を投与した７２時間後のリンパ節におけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞サブタイプのレベルを示す。
【０３８７】
（実施例６０：ＣＤ５７ＢＬ／６背景におけるｈｕＣＤ５２ノックイン／ノックアウト（ＫＩ／ＫＯ）トランスジェニックマウスの作出および評価）
新たなヒトＣＤ５２ノックイン／ノックアウトマウスモデルをＣＤ５７Ｂｌ／６背景において作出した。このマウスを作出するために、マウスＣＤ５２遺伝子配列をヒトＣＤ５２遺伝子配列によって置き換えた。このターゲティング戦略は、エクソン−イントロン構造を維持しながら、マウス配列のヒト配列との置き換えを可能にした。選択マーカーを用いて、新たな遺伝子配列を含む後代を特定した。最終的な対立遺伝子を、ヒトＣＤ５２遺伝子配列のみを残す選択マーカーの除去によって作製した。
【０３８８】
ｈｕＣＤ５２  ＫＩ／ＫＯマウスモデルの基本的な特徴づけは、リンパ球におけるヒトＣＤ５２発現のレベルを決定することを包含した。ｈｕＣＤ５２−ＫＩ／ＫＯトランスジェニックマウス（Ｎ＝４）およびＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｎ＝２）由来の血液を、ｈＣＤ５２発現について染色し、ＣＤ５２分子／細胞の数を、Ｂａｎｇ研究室のＳｉｍｌｙ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ抗ヒト抗体アッセイを用いて計数した。ｈｕＣＤ５２−ＫＩ／ＫＯトランスジェニックマウス由来の末梢血細胞の染色は、ｈｕＣＤ５２の発現がこれらの動物由来のリンパ球の大部分において非常に高いことを示した。発現レベルは、ヒトＣＤ４、ＣＤ８、およびＢ細胞集団において観察されるものと同様であった。ＮＫ細胞およびマクロファージにおける発現レベルは、Ｔ細胞およびＢ細胞について観察されるものよりも低かった。ｈｕＣＤ５２発現レベルの増大が、これらのマウスにおける好中球において検出され、ヒト好中球または、ＣＤ‐１背景における元のトランスジェニックマウスの系由来の類似の細胞における発現レベルの低下とは対照的であった。類似のレベルのＣＤ５２発現が、元のｈｕＣＤ５２  ＣＤ１トランスジェニックマウスおよびｈｕＣＤ５２  ＫＩ／ＫＩマウス由来のＴ細胞およびＢ細胞において観察された。
【０３８９】
図９２Ａは、ｈｕＣＤ５２−ＫＩ／ＫＯおよび非トランスジェニック対照マウスにおけるＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ／骨髄系細胞サブタイプ上のｈｕＣＤ５２発現レベルを示す。図９２Ｂは、ｈｕＣＤ５２−ＫＩ／ＫＯおよびｈｕＣＤ５２  ＣＤ１トランスジェニックマウスにおけるＣＤ４＋  Ｔ細胞。ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ細胞上のｈｕＣＤ５２発現を示す。
【０３９０】
（実施例６１：１２Ｇ６および２Ｃ３の小規模ロットおよび大規模ロット間の枯渇特徴の直接的な比較）
ｈｕＣＤ５２  ＫＩ／ＫＯトランスジェニックマウスに１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２または２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２を投与して、枯渇活性を決定した。加えて、Ｇｅｎｚｙｍｅにおける２つの異なる源（小規模および大規模ロット）から生じた抗体を用いて、活性を検討した。マウスに１ｍｇ／ｋｇの各抗体を静脈内注射した。注射３日後、マウスを屠殺し、フローサイトメトリー分析のために血液を回収して、循環しているＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、およびマクロファージのレベルを決定した。ＣＤ４  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞の枯渇における有意差は、小規模および大規模ロットに由来する抗体間で観察されなかった。
【０３９１】
また、種々のロットの１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を、フローサイトメトリーによって評価して、ｈｕＣＤ５２−ＫＩ／ＫＯトランスジェニックマウス由来の脾細胞に関する染色の強度を比較した。１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２の両抗体は、単離された脾細胞上で、キャンパス−１Ｈ（登録商標）と同じ程度まで、ヒトＣＤ５２を認識するように見える。加えて、抗体の２つの源（小規模および大規模ロット）間の認識のレベルに差はなかった。
【０３９２】
図９３Ａ〜９３Ｂは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）対照と比較した、（種々の製造源に由来する）１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２の抗体のｈｕＣＤ５２への結合を示す。図９４は、種々の製造源由来の１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２の抗体を投与した７２時間後の血液におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、およびＢ２２０＋  Ｂ細胞）のレベルを示す。
【０３９３】
（実施例６２：ｈｕＣＤ５２−ＫＩ／ＫＯトランスジェニックマウスにおける抗ＣＤ５２抗体についてのＰＫ特性の分析）
ヒト化２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体の薬物動態特性を、ｈｕＣＤ５２  ＫＩ／ＫＯトランスジェニックマウスにおいて決定した。マウスに１ｍｇ／ｋｇの抗体を静脈内注射し、血液を投与２時間後に始まる種々の時点で回収した。各抗体の循環レベルを、抗ヒトＩｇ  ＥＬＩＳＡを用いて評価した。全体的なクリアランス速度は、ヒト化抗ＣＤ５２  ２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体の各々について類似しており、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２が潜在的により速い動態を呈したのに対し、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２は血清中に最長時間存在した。
【０３９４】
図９５Ａ〜９５Ｂは、投与後の血液における経時的な２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３、および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体のレベルを示す。
【０３９５】
（実施例６３：ｈｕＣＤ５２−ＫＩ／ＫＯトランスジェニックマウスにおけるＥＡＥに関する１２Ｇ６および２Ｃ３前処理の評価）
実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の全体的な疾患発症率および重症度を低下させることに及ぼす抗ＣＤ５２抗体処置の有効性をｈｕＣＤ５２  ＫＩ／ＫＯマウスにおいて評価した。ｈｕＣＤ５２−ＫＩ／ＫＯマウスを５〜１日前における２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２または１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２のいずれかのコースで処置した。ＥＡＥ（多発性硬化症のモデル）を、ＣＦＡにおいて乳化したＭＯＧ３５−５５ペプチドによる免疫化によって誘導し、０および２日後に百日咳毒素による処置をした。ビヒクルで処置したマウスは、注射１０日後までに運動麻痺の徴候を示し始め、重度の進行性疾患へと発達した。対照的に、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２または１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２のいずれの抗体によるマウスの前処理も、疾患の発症を遅延させ、全体的な疾患の重症度を低下させた。
【０３９６】
図９６は、疾患の進行の２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２の経時的なＥＡＥ臨床スコアを示す。
【０３９７】
（実施例６４：抗ＣＤ５２抗体の薬物動態特性を変更させる抗体のＦｃ修飾）
抗体のＦｃ領域の変更は、１）Ｒｃ受容体との相互作用を変更させることによって抗体の生物学的活性に影響を及ぼし、および／または２）ＦｃＲｎ新生児受容体との相互作用を変更させることによって抗体の薬物動態特性を変更させる。ＦｃＲｎ分子は、血管内皮に発現し、ＩｇＧリサイクルの主要部位であると考えられている。ＦｃＲｎは抗体Ｆｃ部分に結合し、次に抗体Ｆｃ部分が細胞内に内部移行する。ＦｃＲｎとの高い親和性相互作用を有する抗体は、細胞の表面へとリサイクルし戻され、循環へと放出し戻される。より低い親和性相互作用を有する抗体は、細胞内で解離し、最終的には分解する。ＦｃＲｎとの相互作用を増大させる位置指定変異誘発は、修飾されてない抗体と比較してより長時間循環に維持されることのできる抗体を生じる。逆に、ＦｃＲｎ結合を低下させる抗体のＦｃ領域内での変異は、抗体の循環半減期を短縮する。より短い循環半減期を結果として生じるＦｃＲｎに対する結合を低下させると説明されている変異には、Ｈｉｓ４３５Ａｌａ単一変異およびＨｉｓ３１０Ａｌａ／Ｈｉｓ４３５Ｇｌｎ二重変異が含まれる（例えば、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｍａｐｐｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｉｔｅ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  ｆｏｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  Ｉ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，  ＦｃＲｎ，”  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ２９：２８１９−２８２５  （１９９９）およびＫｅｎａｎｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｔａｉｌｏｒｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｏｓｉｔｒｏｎ
Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉ−Ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｓｉｎｇｌｅ−Ｃｈａｉｎ  Ｆｖ−Ｆｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ，”  Ｃａｎｃｅｒ．
Ｒｅｓ．  ６５（２）：６２２−６３１  （２００５）参照）。
【０３９８】
２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体を変異させて、ＰＫ特性を変更したＨｉｓ４３５Ａｌａ
２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１」）およびＨｉｓ３１０Ａｌａ／Ｈｉｓ４３５Ｇｌｎ  ２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２」）抗体を生じた。ビアコア分析を実施して、マウスおよびヒトの両ＦｃＲｎ分子に対する結合の低下を確認した。キャンパス−１Ｈ（登録商標）および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体の両方は、マウスおよびヒトＦｃＲｎ分子の各々に対して類似の動態で結合した。対照的に、Ｈｉｓ４３５Ａｌａ  ２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体は、マウスＦｃＲｎに対して低レベルで結合したが、ヒトＦｃＲｎには結合しなかった。Ｈｉｓ３１０Ａｌａ／Ｈｉｓ４３５Ｇｌｎ  ２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体は、マウスまたはヒトのいずれのＦｃＲｎ分子にも結合せず、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２  Ｆｃ領域への単一または二重変異のいずれかの組み込みが、マウスおよびヒトＦｃＲｎに対する結合に有意に影響することを示した。
【０３９９】
図９７Ａ〜９７Ｂは、マウスおよびヒトＦｃＲｎ分子に結合するキャンパス１Ｈ（登録商標）（「キャンパス」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）。Ｈｉｓ４３５Ａｌａ  ２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「Ｈ４３５Ａ  ２Ｃ３」）。およびＨｉｓ３１０Ａｌａ／Ｈｉｓ４３５Ｇｌｎ  ２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「Ｈ３１０Ａ／Ｈ４３５Ｑ  ２Ｃ３」）の能力を示す。
【０４００】
（実施例６５：Ｃ５７Ｂｌ／６マウスの静脈内投与後のＦｃ修飾した抗ＣＤ５２抗体の半減期の評価）
Ｆｃ修飾を２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２主鎖に組み込み、循環において抗体を維持する原因となるＦｃＲｎ受容体に対する結合の低下を呈する２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２抗体を生じた。薬物動態特性を２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体ならびにＦｃＲｎ結合の低下した２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２抗体について決定した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを用いて、標的抗原の不在下でＰＫ特性を評価した（２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２はヒトＣＤ５２に結合するが、マウスＣＤ５２と交差反応しない）。マウスに１ｍｇ／ｋｇで抗体を静脈内注射した。種々の時点で、血液を回収して、マウス血清における循環しているヒトＩｇＧ１のレベルをＥＬＩＳＡによって分析した。２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２抗体は、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体よりも迅速に血液から除去された。２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２の半減期は、４０３時間であったのに対し、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１の半減期は５１時間であり、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２の半減期は８時間であった。２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１についてのＰＫ特性は、除去の単一相のみを有する１−区画モデルと一致した。対照的に、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２は、２区画モデルと一致し、除去の２つの異なる相を有していた（表のαおよびβとして指定）。第一の相は、投与４８時間後まで持続し（α）、第二の相（β、または終末排出相とも呼ばれる）は、投与４８時間後に開始した。
【０４０１】
図９８は、非トランスジェニックマウスにおける２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３非修飾」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１（「２Ｃ３−Ｆｃ変異体１」）および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２（「２Ｃ３−Ｆｃ変異体２」）のインビボでの除去を示す。
【０４０２】
【表１７】
2014195474.tif 000019
【０４０３】
【表１８−１】
2014195474.tif 000020
【０４０４】
【表１８−２】
2014195474.tif 000021
（実施例６６：ヘテロ接合性ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける静脈内投与後のＦｃ修飾した抗ＣＤ５２抗体の半減期の評価）
薬物動態特性を、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体ならびにインビトロでのＦｃＲｎ結合の低下した２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２抗体について決定した。ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスを用いて、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体標的抗原の存在下でＰＫ特性を評価した。マウスに１ｍｇ／ｋｇで抗体を静脈内注射した。種々の時点で血液を回収して、マウス血清における循環しているヒトＩｇＧ１のレベルをＥＬＩＳＡによって決定した。２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２の両抗体は、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体よりも迅速に血液から除去された。２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２の半減期は６４時間であったのに対し、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１の半減期は３２時間であり、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２の半減期は６．５時間であった。
【０４０５】
図９９は、ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおける２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１（「２Ｃ３−Ｆｃ変異体１」）、および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２（「２Ｃ３−Ｆｃ変異体２」）のインビボでの除去を示す。
【０４０６】
【表１９】
2014195474.tif 000022
【０４０７】
【表２０】
2014195474.tif 000023
ＰＫパラメータは、不十分なデータにより４．１１、４．５、４．６、４．７、４．８、および４．９について入手できなかった。
【０４０８】
＃−試験した群は、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２−修飾型１（「２Ｃ３−Ｍ１」）および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２−修飾型２（「２Ｃ３−Ｍ２」）であった。
【０４０９】
（実施例６７：ヘテロ接合性ｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおけるＦｃ修飾した抗ＣＤ５２抗体の静脈内投与後のインビボ枯渇の評価）
枯渇活性を、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１、および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２抗体についてｈｕＣＤ５２トランスジェニックマウスにおいて決定した。マウスを１ｍｇ／ｋｇの２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１、または２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２抗体で処置し、７２時間後にＣＤ４  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞の存在について評価した。２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１または２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２抗体の投与は結果的に、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体の投与と比較して、血液および脾臓における枯渇のレベル低下を生じた。さらに、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１は、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２よりも大きな枯渇を血液および脾臓の両方において誘発した。
【０４１０】
図１００Ａ〜１００Ｂは、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２（「２Ｃ３」）、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型１（「２Ｃ３  Ｆｃ変異体１」）、および２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２修飾型２（「２Ｃ３  Ｆｃ変異体２」）抗体を投与した７２時間後の血液および脾臓におけるバルクのリンパ球集団（ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ２２０＋  Ｂ細胞、およびＮＫ細胞）のレベルを示す。
【０４１１】
（実施例６８：ヒト化抗ＣＤ５２抗体の詳細なエピトープ特異性）
ヒト化１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２、２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２、および９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３抗体の詳細なエピトープ特異性を、ビアコアＴ１００機を用いて決定した。対照として、クローン０９７（精製された抗ヒトＣＤ５２抗体、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）のエピトープ特異性を、同じ手順を用いて評価した。クローン０９７のエピトープ特異性は、ペプチドＥＬＩＳＡ法を用いてすでに特徴付けられていた（Ｈａｌｅ  Ｇ，  “Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｏｔｙｐｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＡＭＰＡＴＨ−１  （ＣＤ５２）  ａｎｔｉｇｅｎ，  ａ  ｓｍａｌｌ  ｇｌｙｃｏｓｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ−ａｎｃｈｏｒｅｄ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，”  Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  １：１７５−１８７  （１９９５））。本ビアコアＴ１００アッセイにおいて、抗体を、アミン共役を用いてビアコアＣＭ５シリーズＳカルボキシメチルデキストランセンサーチップ（ＧＥ  ＃ＢＲ−１００６−６８）に直接固定した。カルボキシメチルデキストラン表面を、１：１の０．１Ｍ  Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）および０．４Ｍ  Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣ）を用いて活性化し、表面に、抗体における反応性アミン基を結合させた。ＩｇＭ抗体が、より高いレベルの非特異的結合をＩｇＧと比較して有する傾向にあるので、マウスＩｇＭκ（ｍＩｇＭκ）アイソタイプ対照（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄクローン＃ＭＭ−３０）の結合も検査した。抗体の固定後、反応性センサーチップ表面を１Ｍエタノールアミンヒドロクロリド／ＮａＯＨ  ｐＨ８．５を用いてクエンチした。各チップにおける１つのフローセルは、空の基準表面であり、その後のフローセルは。１０，０００ＲＵの抗体で固定された。
【０４１２】
ヒトＣＤ５２配列を含む一連のアラニン走査変異体ペプチド（ＭＵＴ１〜ＭＵＴ１２（それぞれ配列番号１６９〜１８０）、表２１）（例えば、Ｈａｌｅ  Ｇ，  “Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｏｔｙｐｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＡＭＰＡＴＨ−１  （ＣＤ５２）  ａｎｔｉｇｅｎ，  ａ  ｓｍａｌｌ  ｇｌｙｃｏｓｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ−ａｎｃｈｏｒｅｄ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，”  Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  １：１７５−１８７  （１９９５）参照）を合成した。これらの変異体ＣＤ５２ペプチドおよび野生型ヒトＣＤ５２ペプチドに対する抗体結合を、５００ｎＭ、１００ｎＭ、および０ｎＭの濃度で試験した。アッセイ実行緩衝液ＨＢＳ−ＥＰ＋（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０５％Ｐ２０界面活性剤、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）へと希釈した。１００ｎＭ試料の二つ組が含まれた。また、軽鎖（カッパ鎖）特異的ラット抗マウスＩｇＭ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｌｏｎｅ  ＃１Ｂ４Ｂ１）を、ＩｇＭ対照として含めた。Ｔ１００機試料チャンバーおよびアッセイの温度をそれぞれ４℃および２５℃に設定した。ヒトＣＤ５２ペプチド試料を５分間、５０μＬ／分の流速で注入して会合を測定し、ＨＢＳ−ＥＰ＋において５分間、５０μＬ／分の流速で洗浄して解離を測定した。抗体表面から、１０ｍＭグリシン−ＨＣｌ  ｐＨ２０の５０μＬ／分の流速での６０秒注入を用いて、残留するすべての結合ペプチドを取り除いた。ビアコアＴ１００動態評価ソフトウェアｖ２．０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて分析を実施した。データを基準フローセルおよび０ｎＭ濃度減算（二重基準減算）を用いて１：１モデルに当てはめた。１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体陰性（（−）、ＭＵＴ８）および陽性（（＋）、ＭＵＴ９）ペプチドエピトープ認識の代表的なセンサーグラム（ｓｅｎｓｏｒｇｒａｍ）を図１０１Ａおよび図１０１Ｂにそれぞれ示す。編集したペプチド結合データを表２１に要約する。
【０４１３】
クローン０９７の既に特徴付けられた結合特異性（Ｈａｌｅ  Ｇ，  “Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｏｔｙｐｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＡＭＰＡＴＨ−１  （ＣＤ５２）  ａｎｔｉｇｅｎ，  ａ  ｓｍａｌｌ  ｇｌｙｃｏｓｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ−ａｎｃｈｏｒｅｄ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，”  Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  １：１７５−１８７  （１９９５））を、ヒトＣＤ５２のＣ末端部分の６残基を含むペプチドでＥＬＩＳＡプレートをコーティングした後、固定されたペプチドに対する抗体の結合を測定することによって決定した。その残基の各々を、２０のアミノ酸全てで置き換えた。ペプチドをこのＥＬＩＳＡにおける固体表面に付着させたので、本アッセイは、ペプチドが流れる該表面に固定された抗体を用いる本明細書に説明されたビアコアＴ１００アッセイよりも結合活性効果によって影響され得たであろう。ＥＬＩＳＡ研究において、ヒトＣＤ５２の成熟形態の位置１１および１２（それぞれ野生型残基プロリンおよびセリン）におけるアラニン置換は、ペプチドに対するクローン０９７の強い結合を低下させることが認められた。本ビアコアＴ１００研究において、位置１１および１２（ならびに７、８、９、および１０）におけるアラニン置換は、クローン０９７の結合を抑止することが認められた。ＥＬＩＳＡアッセイの仮説を立てられた結合活性効果が、クローン０９７のマッピングされたエピトープが、説明されたビアコアＴ１００アッセイによって決定される場合よりもＥＬＩＳＡ法によって決定される場合に小さいという理由でありそうである。
【０４１４】
ヒトＣＤ５２ペプチド配列に対する２Ｃ３−ＳＦＤ１／Ｋ１２および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２双方のヒト化抗体の結合は、位置７、８、および１１におけるアラニン置換に対して高感度であり、ヒト化９Ｄ９−Ｈ１６／Ｋ１３の結合は、位置４および１１におけるアラニン置換に対して高感度である。これらの規定されたエピトープ特異性は、実施例４において観察された結果と重なる（表８に要約）。結果間のわずかな変動は、本場合における結合を測定するのに使用されたビアコアＴ１００法が実施例４において使用された方法とは顕著に異なることを考慮すると、予期せぬことではない。本場合とは対照的に。実施例４においては、操作されたＣＨＯ細胞を用いて、ヒトＣＤ５２の野生型またはアラニン置換変異体を発現させた。このような哺乳類細胞において発現したヒトＣＤ５２は、グリコシル化して結合に影響を及ぼし得る。このことは、ビアコアＴ１００アッセイにおいて用いられるヒトＣＤ５２についてはそうならない。
【０４１５】
【表２１】
2014195474.tif 000024
（＋）    結合が検出される：５００ｎＭペプチド注射についての２ＲＵ超の最大応答（Ｒｍａｘ）
（−）    結合が検出されない：５００ｎＭペプチド注射についての２ＲＵ未満の最大応答（Ｒｍａｘ）
（実施例６９：キャンパス−１Ｈ（登録商標）または１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２によって誘導されるＣＤ４＋  Ｔ細胞応答の評価）
ＣＤ４＋  Ｔ細胞増殖応答を、キャンパス−１Ｈ（登録商標）またはヒト化１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２抗体のいずれかの可変領域由来の配列を含む１組みの重複する１５マーペプチドをあらかじめ負荷した自己樹状細胞（ＤＣ）を用いたインビトロでの反復した刺激後のＣＤ４＋  Ｔ細胞増殖応答を評価した。これらの実験は、正常なヒトドナーＴ細胞およびＤＣを利用した。結果は、自己ペプチドで刺激された抗原提示細胞（ＡＰＣ）に応答して増殖するヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞のトリチウム標識したチミジンの組み込みを定量化することによって測定した。
【０４１６】
細胞調製：ＰＢＭＣを、ＢｉｏＭｅｄ  Ｓｕｐｐｌｉｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ）から獲得した正常ヒトドナー亜フェレーシス産物から単離した。ドナー血液のＨＬＡハプロタイプスクリーニングを、Ｋｅｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，  ＬＬＣ（Ｍｅｍｐｈｉｓ，  ＴＮ）によって実施した（表２２）。ＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ密度勾配（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）およびリン酸緩衝塩類溶液（ＰＢＳ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ）を用いた一連の洗浄を用いて単離した。製造元の推奨したプロトコールに従って、ＣＤ４＋  Ｔ細胞を、Ｄｙｎａｌ  ＣＤ４＋ビーズベースの陽性単離キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてＰＢＭＣから単離した。単離されたＣＤ４＋  Ｔ細胞をＲｅｃｏｖｅｒｙ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｆｒｅｅｚｉｎｇ  Ｍｅｄｉａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）において凍結し、液体窒素において保存した。樹状細胞（ＤＣ）を、接着細胞をＧＭ−ＣＳＦ（Ｌｅｕｋｉｎｅ，  Ｂａｙｅｒ，  Ｌｅｖｅｒｋｕｓｉｎ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）およびＩＬ−４（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ，
Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，  ＮＪ）とともに６日間蒔種することによってＰＢＭＣから誘導した。ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４を補充した培地を４日後に交換した。ＤＣをその後フラスコから単離し、凍結培地中で凍結した後、液体窒素保存タンクへと移した。
【０４１７】
表２２：血液ドナーのＨＬＡハプロタイプ
【０４１８】
【表２２】
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ペプチド：  キャンパス−１Ｈ（登録商標）および１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２の重鎖および軽鎖可変領域を包含するペプチドを、ＣＬＥＡＲ樹脂における標準的なＦｍｏｃ化学物質を用いるＲａｉｎｉｎ  Ｓｙｍｐｈｏｎｙ自動ペプチド合成装置（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，  ＫＹ）を用いて合成した。アミノ酸（ＥＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ、またはＡｎａｓｐｅｃ，  Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，  Ｃａ）を、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔＢｕ）、２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロ−ベンゾフラン−５−スルホニル（Ｐｂｆ）、またはトリチル（Ｔｒｔ）基を用いて直交性に保護した。共役を、６：６：３：１２：１のモル比でアミノ酸／ＨＣＴＵ／ＨＯＢｔ／ＤＩＥＡ／樹脂を用いて実施した。ＤＭＦにおける２０％ピペリジンおよび２．５％１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）の溶液を用いて、各周期の間にアミノ末端からＦｍｏｃを除去した。樹脂からの脱保護／切断を、１５ｍＬ／２．５％水／２．５％ＴＩＳ／５％アニソール／９０％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）比の０．１ｍＭ樹脂のカクテルを用いて３時間実施した。上清をジエチルエーテル（−８０℃）において沈殿させ、３０００ｒｐｍで１０分間ペレットにした。エーテルをデカンテーションし、ペレットを再度洗浄した。粗ペプチドを次に凍結乾燥させた。分析用ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ４．５×１００ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．，  Ｍｉｌｆｏｒｄ，  ＭＡ）およびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析（Ｓｙｎａｐｔ，  Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．，
Ｍｉｌｆｏｒｄ，  ＭＡ）を用いて、配列を確認し、純度を評価した。すべての試薬は、ＨＰＬＣ等級であった（ＥＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣａまたはＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）。凍結乾燥したペプチドを１００％ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ）において再懸濁した。４３のキャンパス−１Ｈ（登録商標）ペプチドを、各々３または４のペプチドを１群あたり含む１１の直鎖基に組み合わせた。（表２３：上から下へと、軽鎖ペプチドは配列番号１８７〜２０６によって示され、重鎖ペプチドは配列番号２０７〜２２９によって示される）。４２の１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２ペプチドを、各々５または６のペプチドを１群あたり含む８の直鎖基へと組み合わせた（表２４：上から下へと、軽鎖ペプチドは、配列番号２３０〜２５０によって示され、重鎖ペプチドは、配列番号２５１〜２７１によって示される。）。
【０４１９】
表２３：各１０のアミノ酸だけ重複するキャンパス−１Ｈ（登録商標）１５マー軽鎖および重鎖ペプチド
キャンパス−１Ｈ（登録商標）ペプチド
【０４２０】
【表２３】
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表２４：各１０のアミノ酸だけ重複する４２の１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２  １５マー軽鎖および重鎖ペプチド
１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２  ペプチド
【０４２１】
【表２４】
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（インビトロ刺激）
ＤＣ抗原刺激および成熟：  ペプチドを用いた処置の前に、ＤＣを解凍し、洗浄し、５％ヒト血清（ＨＳ，  Ｓｉｇｍａ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）、１％ペニシリン‐ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ）、１００ｎｇ／ｍＬ  ＧＭ−ＣＳＦ、および２０ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−４を補充したＲＰＭＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ）に蒔種した。ＤＣを６ウェル組織培養プレートにおける４ｍＬ培地において２×１０５個／ｍＬで蒔種し、３７℃で１時間接着させておいた。細胞接着後、各ペプチド１０μｇ／ｍＬ（合計４０μｇ）を、ＤＣを含むウェルに添加し、各ウェルに添加した２０μｇもしくは１６０μｇの総ペプチド（キャンパス−１Ｈ（登録商標）３−ペプチドもしくは４−ペプチド群）、または各ウェルに添加した２００μｇもしくは２４０μｇの総ペプチド（１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２  ５−ペプチドもしくは６−ペプチド群）のいずれかと相関づけた。４０μｇの汎−ＤＲ結合エピトープ（ＰＡＤＲＥ）は、ほとんどのＨＬＡ−ＤＲ分子に結合できる（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ
Ｊ，  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｐｏｔｅｎｃｙ
ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＤＲ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ｈｅｌｐｅｒ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ
ｂｙ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ＤＲ−ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ，”  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，  １：７５１−７６１  （１９９４））ので、ＰＡＤＲＥをＤＣの１つのウェルに添加し、陽性対照として供した。同様に、３つのＨＬＡ−ＤＲ結合破傷風トキソイドペプチド（ＤＴＩＭＭＥＰＰＹＣＫＧＬＤＩＹＹＫＡ（配列番号１８３）、ＳＡＭＬＴＮＬＩＩＦＧＰＧＰＶＬＮＫＮＥＶ（配列番号１８４）、およびＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ（配列番号１８５））の各４０μｇをＤＣの１つのウェルに添加した。同様に、熱失活したアデノウイルスを陽性抗原源として採用し、１μｇ／ｍＬでＤＣの１つのウェルに添加した。最後に、１つの群のＤＣは、抗原で刺激されていないままであり、「欠損」に慣らされた群として供された。種々の抗原で刺激されたＤＣを３７℃で少なくとも３時間インキュベートした。次に、ＤＣを、５０ｎｇ／ｍＬ  ＴＮＦ−α、１０ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−６、２５ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−１ベータ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ，  Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，  ＮＪ）、および５００ｎｇ／ｍＬ  ＰＧＥ−２（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）を含む「成熟化サイトカインカクテル」で処理した。次に、抗原で刺激されたＤＣを３７℃で一晩成熟させておいた。
【０４２２】
共培養の確立：  ペプチドの負荷および成熟の後、ＤＣをＰＢＳで２回洗浄し、１０％ＨＳを補充した４ｍＬのＲＰＭＩを補充した。自己ＣＤ４＋  Ｔ細胞を解凍し、１０％ＨＳ、ペニシリン、およびストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩに２×１０６個／ｍＬで再懸濁した。次に、ＤＣを未処理のＣＤ４＋  Ｔ細胞とともに１０：１のＴ細胞：ＤＣ比（８×１０６のＴ細胞：８×１０５のＤＣ）で８ｍＬ培地において培養した。次に、共培養物を３７℃で７日間インキュベートした。共培養の開始およそ７２時間後、細胞に２５ＩＵの組換えＩＬ−２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ，  Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，  ＮＪ）を補充し、さらに、その後、３〜４日ごとに新鮮培地における２５ＩＵの組換えＩＬ−２を補充した。
【０４２３】
共培養の再刺激：  ７日後（刺激＃２）および１４日後（刺激＃３）、共培養物を先の手順に従って再度刺激した。
【０４２４】
増殖アッセイ：  ＤＣを蒔種し、抗原で刺激し、２４ウェル低結合プレートにおいて１ｍＬ培地中で５×１０５個／ｍＬで先に記載したとおり成熟させた。無関係なＨＬＡ＿ＤＲ結合ペプチド、ＣＳ  ３７８−３９８（ペプチド配列ＤＩＥＫＫＩＡＫＭＥＫＡＳＳＶＦＮＶＶＮＳ（配列番号１８６））を陰性対照として用いた（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  Ｊ，
ｅｔ  ａｌ．，  “Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｐｏｔｅｎｃｙ  ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＤＲ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ｈｅｌｐｅｒ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ  ｂｙ
ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ＤＲ−ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ，”  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，  １：７５１−７６１  （１９９４））。２４時間のＤＣ成熟の後、細胞をプレートから氷冷ＰＢＳ洗浄液を用いて脱離させた。Ｕ底９６ウェルプレートにおいて、ＤＣを抗原で刺激したＴ細胞とともに１：１のＴ細胞：ＤＣ比（２．５×１０４ＤＣ／ウェル）で蒔種した。各Ｔ細胞群を三つ組で、馴らしペプチドで刺激したＤＣ（特異的応答）、および無関係なペプチドで刺激したＤＣ（非特異的応答）、ならびにＴ細胞のみおよびＤＣのみの対照を用いてアッセイした。本アッセイは、ウェル当たり１ｕＣｉのトリチウム標識したチミジン（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，  Ｗａｌｔｈａｍ，  ＭＡ）の添加の７２時間前に実施した。細胞を９６ウェルプレート回収機（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で回収し、組み込まれたトリチウム標識したチミジンの量を、Ｗａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  Ｔｒｉｌｕｘカウンタ（Ｐｅｒｋｉｎ
Ｅｌｍｅｒ）におけるＣＰＭを測定することによって定量化した。刺激指数を、特異的ＣＰＭを非特異的ＣＰＭによって除することによって算出した。
【０４２５】
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）Ｖベータの使用：  増殖アッセイの確立後に残存するすべてのＣＤ４＋  Ｔ細胞を、Ｔ細胞受容体Ｖベータ鎖発現の最終的な決定のために凍結した。細胞を解凍し、ＩＯＴｅｓｔ  Ｂｅｔａ  Ｍａｒｋ  Ｋｉｔ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，  Ｆｒａｎｃｅ）における製造元の指示書に従って、２４の抱合型Ｖベータファミリーメンバーを認識する抗体を用いて３０分間染色した。ＰＢＳによる洗浄および１％ホルムアルデヒドにおける再懸濁の後、細胞をＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，  Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，  ＮＪ）において分析した。検出された各Ｖベータ鎖の各々を発現する細胞のパーセンテージを。図１０２および図１０３において要約するように算出した。
【０４２６】
（キャンパス−１Ｈ（登録商標）免疫原性評価）
キャンパス−１Ｈ（登録商標）ペプチドの免疫原性評価を、ＢｉｏＭｅｄＳｕｐｐｌｙ（ＢＭＳ）製の、１０の正常ドナー由来のＰＢＭＣを用いて、先に説明したとおり実施した。刺激指数によって示される応答の要約を表２５Ａに示す。各ドナーを１列に列挙し、各行はＣＤ４＋  Ｔ細胞を刺激するのに使用されたペプチドの群を列挙する。刺激指数（ＳＩ）を、馴らしペプチド群に対する特異的免疫応答を無関係な応答によって除することによって決定する。２．０未満のＳＩ値は列挙されていない。表２５Ａに要約された１０のドナーの各々についての増殖データを図１０４Ａ〜Ｊに報告する。６のドナーは２．０超の刺激指数を呈し、結果として、「キャンパス−１Ｈ（登録商標）応答子」と呼ばれた。応答子のうちの１つであるＢＭＳ３５２に由来する馴らされたＣＤ４＋  Ｔ細胞は、２つの異なるペプチド群を用いてアッセイした場合、特異的免疫応答を呈した。また、７個目のドナーＢＭＳ４８６も、「応答子」として分類された。このドナーにおいて、背景の１．７倍の刺激指数は、軽鎖ペプチド群９８６〜９８９で報告された。このドナー内で馴らされたＴ細胞培養物におけるＶベータ上方制御を評価する場合、９８６−９８９の馴らされたＴ細胞が、単一のＶベータであるＶβ３の高い上方制御を呈することが示された（図１０２）。単一のＶβの上方制御および特異的増殖応答は、ＢＭＳ４８６がキャンパス−１Ｈ（登録商標）応答子であることを示した。３つの非応答ドナーであるＢＭＳ２００、ＢＭＳ１５４、およびＢＭＳ１６７は。増殖データもＶベータ上方制御も示さず、ペプチド特異的免疫応答が生じないことを示した。キャンパス−１Ｈ（登録商標）を、７０％（７／１０）応答子率として定量化した。免疫応答を誘発するペプチド群の総数は８であった。該８の免疫原性ペプチド群のうちの３つは、３．０以上の刺激指数で個々のドナーにおいて強い応答を誘発した（表２６）。
【０４２７】
表２５：刺激指数データの要約
表２５Ａ：キャンパス−１Ｈ（登録商標）刺激指数
【０４２８】
【表２５Ａ】
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表２５Ｂ：１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２刺激指数
【０４２９】
【表２５Ｂ】
2014195474.tif 000029
（実施例７０：１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２によって誘導されるＣＤ４＋  Ｔ細胞応答の評価）
１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２の可変領域の免疫原性評価およびＶベータ分析を、１０の正常ドナー由来の細胞を採用して、キャンパス−１Ｈ（登録商標）について実施例６９に説明される通り実施した。表２５Ｂに要約された１０のドナーの各々についての増殖データを図１０５Ａ〜Ｊに報告する。また、これら１０のドナーのうちの２つを、上で説明したキャンパス−１Ｈ（登録商標）評価において使用し、残りの８のドナーは１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２ペプチドのみを用いて試験した。１つのドナーＢＭＳ４８４は、３つのペプチド群に応答し、「１２Ｇ６−ＳＦＤ／Ｋ１２応答子」と分類された（表２５Ｂ）。また、各々が１群のペプチドに応答した２つのドナーＢＭＳ９２７およびＢＭＳ９２８はそれゆえ応答子として分類された。ドナーＢＭＳ９２８は、重鎖ペプチド１０６６、１０６７、１０６８、１０８３、１０８４、および１０８５を含む群に対して２．０という弱い刺激指数を示した。この応答は、Ｖベータ使用について増殖性Ｔ細胞を分析することによって確認された。応答するＢＭＳ９２８  Ｔ細胞は、単一のＶベータであるＶβ２０の上方制御を呈した（図１０３）。ドナーＢＭＳ９２７は、軽鎖ペプチドの１群で馴らされたＴ細胞において２．５の指数を呈した。応答するＢＭＳ９２７  Ｔ細胞のＶベータ分析は、背景を上回る単一のＶベータ上方制御を示さなかった。しかしながら、このドナーは、Ｖベータキットが、すべての起こり得るＶベータ使用の７０％しか表さないので、「応答子」カテゴリーにとどまる。これらの１０のドナーにおける免疫原性の１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２は３０％（３／１０）であり、キャンパス応答子の割合（７０％）の半分未満であった。合計５つのペプチド群は、応答を誘発したが、該５つの群のうちのいずれも、３．０おり大きな刺激指数を結果として生じなかった（表２６）。
【０４３０】
【表２６−１】
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（要約）
ヒト化抗ＣＤ５２モノクローナル抗体１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２の重鎖および軽鎖可変領域に相互関連するペプチドは、キャンパス−１Ｈ（登録商標）の重鎖および軽鎖可変領域由来のペプチド（７０％）よりも１０のドナー由来のより低い免疫応答（３０％）を誘導した。また、１２Ｇ６−ＳＦＤ１／Ｋ１２を用いて生じたＣＤ４＋  Ｔ細胞ベースの免疫応答は、キャンパス−１Ｈ（登録商標）誘発性応答よりも低い程度であった。
【０４３１】
以下の表は、本明細書で使用された配列番号を列挙する。
【０４３２】
【表２６−２】
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【０４３３】
【表２６−３】
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【０４３４】
【表２６−４】
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【０４３５】
【表２６−５】
2014195474.tif 000034
【０４３６】
【表２６−６】
2014195474.tif 000035
【０４３７】
【表２６−７】
2014195474.tif 000036
【０４３８】
【表２６−８】
2014195474.tif 000037
【０４３９】
【表２６−９】
2014195474.tif 000038
【０４４０】
【表２６−１０】
2014195474.tif 000039
本明細書で引用されたすべての特許、刊行された出願、および参考文献は、それらの全体が引用によって組み込まれる。
【０４４１】
本発明は、その例となる実施態様に関して特に示されかつ説明されているが、形態および詳細における種々の変更が、添付の特許請求の範囲によって包含される本発明の範囲から逸脱することなくそこでなされ得ることは当業者によって理解されるであろう。
【図１】
2014195474.tif 000040
【図２】
2014195474.tif 000041
【図３】
2014195474.tif 000042
【図４】
2014195474.tif 000043
【図５−Ａ】
2014195474.tif 000044
【図５−Ｂ】
2014195474.tif 000045
【図５−Ｃ】
2014195474.tif 000046
【図５−Ｄ】
2014195474.tif 000047
【図６】
2014195474.tif 000048
【図７】
2014195474.tif 000049
【図８−Ａ】
2014195474.tif 000050
【図８−Ｂ】
2014195474.tif 000051
【図８−Ｃ】
2014195474.tif 000052
【図９】
2014195474.tif 000053
【図１０】
2014195474.tif 000054
【図１１】
2014195474.tif 000055
【図１２】
2014195474.tif 000056
【図１３】
2014195474.tif 000057
【図１４】
2014195474.tif 000058
【図１５】
2014195474.tif 000059
【図１６】
2014195474.tif 000060
【図１７】
2014195474.tif 000061
【図１８】
2014195474.tif 000062
【図１９】
2014195474.tif 000063
【図２０】
2014195474.tif 000064
【図２１】
2014195474.tif 000065
【図２２】
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【図２３】
2014195474.tif 000067
【図２４】
2014195474.tif 000068
【図２５】
2014195474.tif 000069
【図２６−Ａ】
2014195474.tif 000070
【図２６−Ｂ】
2014195474.tif 000071
【図２７】
2014195474.tif 000072
【図２８−Ａ】
2014195474.tif 000073
【図２８−Ｂ】
2014195474.tif 000074
【図２９】
2014195474.tif 000075
【図３０−Ａ】
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【図３０−Ｂ】
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【図３１】
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【図３２−Ａ】
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【図３２−Ｂ】
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【図３２−Ｃ】
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【図３３】
2014195474.tif 000082
【図３４】
2014195474.tif 000083
【図３５】
2014195474.tif 000084
【図３６】
2014195474.tif 000085
【図３７】
2014195474.tif 000086
【図３８】
2014195474.tif 000087
【図３９】
2014195474.tif 000088
【図４０】
2014195474.tif 000089
【図４１】
2014195474.tif 000090
【図４２】
2014195474.tif 000091
【図４３】
2014195474.tif 000092
【図４４】
2014195474.tif 000093
【図４５】
2014195474.tif 000094
【図４６−Ａ】
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【図４６−Ｂ】
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【図４６−Ｃ】
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【図４６−Ｄ】
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【図４６−Ｅ】
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【図４７−Ａ】
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【図４７−Ｂ】
2014195474.tif 000101
【図４７−Ｃ】
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【図４７−Ｄ】
2014195474.tif 000103
【図４７−Ｅ】
2014195474.tif 000104
【図４８】
2014195474.tif 000105
【図４９】
2014195474.tif 000106
【図５０−Ａ】
2014195474.tif 000107
【図５０−Ｂ】
2014195474.tif 000108
【図５０−Ｃ】
2014195474.tif 000109
【図５０−Ｄ】
2014195474.tif 000110
【図５０−Ｅ】
2014195474.tif 000111
【図５１−Ａ】
2014195474.tif 000112
【図５１−Ｂ】
2014195474.tif 000113
【図５１−Ｃ】
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【図５１−Ｄ】
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【図５１−Ｅ】
2014195474.tif 000116
【図５２】
2014195474.tif 000117
【図５３】
2014195474.tif 000118
【図５４】
2014195474.tif 000119
【図５５】
2014195474.tif 000120
【図５６−Ａ】
2014195474.tif 000121
【図５６−Ｂ】
2014195474.tif 000122
【図５６−Ｃ】
2014195474.tif 000123
【図５６−Ｄ】
2014195474.tif 000124
【図５６−Ｅ】
2014195474.tif 000125
【図５７−Ａ】
2014195474.tif 000126
【図５７−Ｂ】
2014195474.tif 000127
【図５７−Ｃ】
2014195474.tif 000128
【図５７−Ｄ】
2014195474.tif 000129
【図５７−Ｅ】
2014195474.tif 000130
【図５８】
2014195474.tif 000131
【図５９】
2014195474.tif 000132
【図６０−Ａ】
2014195474.tif 000133
【図６０−Ｂ】
2014195474.tif 000134
【図６０−Ｃ】
2014195474.tif 000135
【図６０−Ｄ】
2014195474.tif 000136
【図６０−Ｅ】
2014195474.tif 000137
【図６１−Ａ】
2014195474.tif 000138
【図６１−Ｂ】
2014195474.tif 000139
【図６１−Ｃ】
2014195474.tif 000140
【図６１−Ｄ】
2014195474.tif 000141
【図６１−Ｅ】
2014195474.tif 000142
【図６２】
2014195474.tif 000143
【図６３】
2014195474.tif 000144
【図６４】
2014195474.tif 000145
【図６５−Ａ】
2014195474.tif 000146
【図６５−Ｂ】
2014195474.tif 000147
【図６５−Ｃ】
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【図６５−Ｄ】
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【図６５−Ｅ】
2014195474.tif 000150
【図６６−Ａ】
2014195474.tif 000151
【図６６−Ｂ】
2014195474.tif 000152
【図６６−Ｃ】
2014195474.tif 000153
【図６６−Ｄ】
2014195474.tif 000154
【図６６−Ｅ】
2014195474.tif 000155
【図６７】
2014195474.tif 000156
【図６８】
2014195474.tif 000157
【図６９−Ａ】
2014195474.tif 000158
【図６９−Ｂ】
2014195474.tif 000159
【図６９−Ｃ】
2014195474.tif 000160
【図６９−Ｄ】
2014195474.tif 000161
【図７０−Ａ】
2014195474.tif 000162
【図７０−Ｂ】
2014195474.tif 000163
【図７０−Ｃ】
2014195474.tif 000164
【図７０−Ｄ】
2014195474.tif 000165
【図７１】
2014195474.tif 000166
【図７２】
2014195474.tif 000167
【図７３】
2014195474.tif 000168
【図７４−Ａ】
2014195474.tif 000169
【図７４−Ｂ】
2014195474.tif 000170
【図７４−Ｃ】
2014195474.tif 000171
【図７４−Ｄ】
2014195474.tif 000172
【図７５−Ａ】
2014195474.tif 000173
【図７５−Ｂ】
2014195474.tif 000174
【図７５−Ｃ】
2014195474.tif 000175
【図７５−Ｄ】
2014195474.tif 000176
【図７６】
2014195474.tif 000177
【図７７−Ａ】
2014195474.tif 000178
【図７７−Ｂ】
2014195474.tif 000179
【図７７−Ｃ】
2014195474.tif 000180
【図７７−Ｄ】
2014195474.tif 000181
【図７８】
2014195474.tif 000182
【図７９−Ａ】
2014195474.tif 000183
【図７９−Ｂ】
2014195474.tif 000184
【図７９−Ｃ】
2014195474.tif 000185
【図７９−Ｄ】
2014195474.tif 000186
【図８０】
2014195474.tif 000187
【図８１】
2014195474.tif 000188
【図８２−Ａ】
2014195474.tif 000189
【図８２−Ｂ】
2014195474.tif 000190
【図８２−Ｃ】
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【図８２−Ｄ】
2014195474.tif 000192
【図８２−Ｅ】
2014195474.tif 000193
【図８２−Ｆ】
2014195474.tif 000194
【図８３−Ａ】
2014195474.tif 000195
【図８３−Ｂ】
2014195474.tif 000196
【図８３−Ｃ】
2014195474.tif 000197
【図８３−Ｄ】
2014195474.tif 000198
【図８３−Ｅ】
2014195474.tif 000199
【図８４−Ａ】
2014195474.tif 000200
【図８４−Ｂ】
2014195474.tif 000201
【図８４−Ｃ】
2014195474.tif 000202
【図８４−Ｄ】
2014195474.tif 000203
【図８４−Ｅ】
2014195474.tif 000204
【図８４−Ｆ】
2014195474.tif 000205
【図８４−Ｇ】
2014195474.tif 000206
【図８５】
2014195474.tif 000207
【図８６−Ａ】
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【図８６−Ｂ】
2014195474.tif 000209
【図８６−Ｃ】
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【図８６−Ｄ】
2014195474.tif 000211
【図８６−Ｅ】
2014195474.tif 000212
【図８７−Ａ】
2014195474.tif 000213
【図８７−Ｂ】
2014195474.tif 000214
【図８７−Ｃ】
2014195474.tif 000215
【図８７−Ｄ】
2014195474.tif 000216
【図８７−Ｅ】
2014195474.tif 000217
【図８８】
2014195474.tif 000218
【図８９−Ａ】
2014195474.tif 000219
【図８９−Ｂ】
2014195474.tif 000220
【図８９−Ｃ】
2014195474.tif 000221
【図８９−Ｄ】
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【図９０−Ａ】
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【図９０−Ｂ】
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【図９０−Ｃ】
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【図９０−Ｄ】
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【図９１−Ａ】
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【図９１−Ｂ】
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【図９１−Ｃ】
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【図９１−Ｄ】
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【図９２】
2014195474.tif 000231
【図９３】
2014195474.tif 000232
【図９４】
2014195474.tif 000233
【図９５】
2014195474.tif 000234
【図９６】
2014195474.tif 000235
【図９７−Ａ】
2014195474.tif 000236
【図９７−Ｂ】
2014195474.tif 000237
【図９８】
2014195474.tif 000238
【図９９】
2014195474.tif 000239
【図１００】
2014195474.tif 000240
【図１０１】
2014195474.tif 000241
【図１０２】
2014195474.tif 000242
【図１０３】
2014195474.tif 000243
【図１０４−Ａ】
2014195474.tif 000244
【図１０４−Ｂ】
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【図１０４−Ｃ】
2014195474.tif 000246
【図１０４−Ｄ】
2014195474.tif 000247
【図１０４−Ｅ】
2014195474.tif 000248
【図１０４−Ｆ】
2014195474.tif 000249
【図１０４−Ｇ】
2014195474.tif 000250
【図１０４−Ｈ】
2014195474.tif 000251
【図１０４−Ｉ】
2014195474.tif 000252
【図１０４−Ｊ】
2014195474.tif 000253
【図１０５−Ａ】
2014195474.tif 000254
【図１０５−Ｂ】
2014195474.tif 000255
【図１０５−Ｃ】
2014195474.tif 000256
【図１０５−Ｄ】
2014195474.tif 000257
【図１０５−Ｅ】
2014195474.tif 000258
【図１０５−Ｆ】
2014195474.tif 000259
【図１０５−Ｇ】
2014195474.tif 000260
【図１０５−Ｈ】
2014195474.tif 000261
【図１０５−Ｉ】
2014195474.tif 000262
【図１０５−Ｊ】
2014195474.tif 000263
【図１０６】
2014195474.tif 000264
【図１０７】
2014195474.tif 000265
【図１０８】
2014195474.tif 000266
【図１０９】
2014195474.tif 000267
【図１１０】
2014195474.tif 000268
【図１１１】
2014195474.tif 000269
【図１１２】
2014195474.tif 000270
【図１１３】
2014195474.tif 000271
【図１１４】
2014195474.tif 000272
【図１１５】
2014195474.tif 000273
【図１１６】
2014195474.tif 000274
【配列表】
2014195474000001.app
【外国語明細書】
2014195474000001.pdf