(57)【要約】【課題】組織トロンボプラスチンを含有する安価で安定な血液凝固能測定試薬及び測定方法を提供する。【解決手段】前記組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬は、オリゴペプチドを含有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
オリゴペプチドを含有することを特徴とする、組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
【請求項２】
前記オリゴペプチドが、少なくとも２つのアミノ酸からなる、請求項１に記載の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
【請求項３】
前記オリゴペプチドが、グリシン、アラニン、グルタミン酸、及びロイシンの中から選択された少なくとも１種のアミノ酸を含有する、請求項１又は２に記載の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
【請求項４】
前記オリゴペプチドが、グリシルグリシン、グリシルグリシルグリシン、アラニルアラニン、アラニルグルタミン酸、及びグリシルロイシンの中から選択された少なくとも１つのオリゴペプチドである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
【請求項５】
前記オリゴペプチドの濃度が０．１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１００ｍｍｏｌ／Ｌである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
【請求項６】
血清アルブミンを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
【請求項７】
前記血清アルブミンの濃度が、０．１〜５（Ｗ／Ｖ）％である、請求項６に記載の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
【請求項８】
前記血液凝固能測定試薬がプロトンビン時間測定試薬である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
【請求項９】
前記血液凝固能測定試薬が、凝固第ＩＩ因子、凝固ＶＩＩ因子、または凝固Ｘ因子を測定する複合因子測定試薬である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
【請求項１０】
前記血液凝固能測定試薬が、特定因子活性測定試薬である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
【請求項１１】
前記血液凝固能測定試薬が液状である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
【請求項１２】
オリゴペプチドを含有することを特徴とする、組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬の製造方法。
【請求項１３】
被検試料、組織トロンボプラスチン、カルシウムイオン、オリゴペプチドを溶液中で接触させ、その接触開始から凝固までの時間を測定する工程を含むことを特徴とする、組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定方法。
【請求項１４】
組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬にオリゴペプチドを共存させることを特徴とする、組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬の安定化方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液凝固能測定試薬、とりわけ組織トロンボプラスチンを利用する血液凝固能測定試薬に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
血液凝固検査としては、プロトロンビン時間（以下、ＰＴと略す）測定、発色性基質が用いられる凝固試験、内因性トロンビン生成能（ＥＴＰ）のような凝固系の個々の構成要素を測定する試験など、様々な検査法が知られている。
ＰＴ測定は、血液凝固検査では最も良く用いられている検査で、主に外因系の出血スクリーニング、経口抗凝固剤のモニター、肝疾患の診断に用いられる。一般的にＰＴ測定の検査は、被検血漿サンプルを組織トロンボプラスチンとカルシウムイオンの混合物からなるＰＴ測定試薬と混合し、混合した瞬間からフィブリン形成（凝固）が観察されるまでの時間（凝固時間）を秒単位で測定することにより行われている。
発色性基質が用いられる凝固試験においては、凝固時間の代わりに、混合した瞬間から特定の吸収の変化が達成されるまでの時間が測定される。
また、組織トロンボプラスチンは、凝固時間を測定するのではなく、例えば、内因性トロンビン生成能（ＥＴＰ）のような凝固系の個々の構成要素を測定するのに役立つその他の試験方法でも用いられている（特許文献１）。
【０００３】
ＰＴ測定試薬の主構成成分は、組織トロンボプラスチンとカルシウムイオンである。組織トロンボプラスチンは、一般的にウシやウサギ等の大脳より抽出される天然由来タイプと、遺伝子組み換えにより調製された組織因子をリン脂質に組み込んだ組み換えタイプが使用されている。
【０００４】
組織トロンボプラスチンを得る方法およびＰＴ測定試薬を製造する多くの方法が公知であり、多数のＰＴ測定試薬が市販されている。動物の大脳から抽出された天然の組織トロンボプラスチンには、血液成分、リポタンパク質及び血漿タンパク質等の不純物が含まれており、長期間保存した場合、不溶性物質の析出等が生じ、安定性が悪いという問題があった。一方、大腸菌、酵母、昆虫細胞などを宿主とした遺伝子組換えのヒト組織因子、ウシ組織因子、又はウサギ組織因子を用いた血液凝固能測定試薬が市販されている。しかしながら、その遺伝子組換え組織因子原料であっても、その保存溶液の状態によってはタンパク質の変性や生物活性の低下を生じ、結果として保存安定性が悪いという問題があった。従って、現在、市販のＰＴ測定試薬のほとんどは凍結乾燥させた形態で販売されている。そのため使用前に、再構成媒質、例えば蒸留水または緩衝溶液で溶解させなければならない。凍結乾燥試薬は、製造元において余分な時間と費用を要する凍結乾燥の工程が必要であり、使用者においては使用前に蒸留水等の溶媒を用いて溶解する必要がある。このような問題を解決するためには液状で安定なＰＴ測定試薬を提供することが望まれる。液状試薬が達成できれば、これらの操作が不要となるため取り扱いが容易となり、使用者の負担を軽減することができる。
【０００５】
組織因子、組織トロンボプラスチン、ＰＴ測定試薬の安定化に関しては、例えば、アルブミン、プロピオン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、又はグルコン酸を添加する方法（特許文献２）、酒石酸、グルコン酸、又は乳酸を添加する方法（特許文献３）、非イオン性界面活性剤とニッケルイオンを添加する方法（特許文献４）、水溶性ポリフェノールやカテコールを添加する方法（特許文献５）、抗酸化剤を添加する方法（特許文献６）などの技術が開示されている。
しかし、これらは安定性が十分でないものや、高価な物質を添加する必要がある等の問題がある。また、アミノ酸やアミノ酸誘導体を添加することにより、凍結乾燥品において安定なＰＴ測定試薬が開示されている（特許文献８）が、液状試薬としては安定可能か不明であり、更に、後述する実施例に示すように、安定効果を得られるものではなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】欧州特許出願公開第ＥＰ４２０３３２Ａ２号明細書
【特許文献２】特開平６−２０１７０２号公報
【特許文献３】米国特許第３，５２２，１４８号明細書
【特許文献４】特開２００８−２４１６２１号公報
【特許文献５】特開２００９−１４８２６１号公報
【特許文献６】特開平１１−３１６２２８号公報
【特許文献７】特表平６−５０５５６２号公報
【特許文献８】特開２００２−３０３６３２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明はこれらの問題に鑑みてなされたものであり、組織トロンボプラスチンを含有する安価で安定な血液凝固能測定試薬及び測定方法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記のような課題に鑑みて鋭意検討を重ねた結果、オリゴペプチドを含有することによって、組織トロンボプラスチンを含有する液状のプロトロンビン時間（ＰＴ）測定試薬を長期間安定化することを可能とし、安定して保存可能で、安価に且つ高精度に測定可能な血液凝固能測定試薬及び測定方法を見出した。
本発明はこの知見に基づいて成し遂げられたものである。
【０００９】
本発明は、以下の発明に関する：
［１］オリゴペプチドを含有することを特徴とする、組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
［２］前記オリゴペプチドが、少なくとも２つのアミノ酸からなる、［１］の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
［３］前記オリゴペプチドが、グリシン、アラニン、グルタミン酸、及びロイシンの中から選択された少なくとも１種のアミノ酸を含有する、［１］又は［２］の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
［４］前記オリゴペプチドが、グリシルグリシン、グリシルグリシルグリシン、アラニルアラニン、アラニルグルタミン酸及、びグリシルロイシンの中から選択された少なくとも１つのオリゴペプチドである、［１］〜［３］のいずれかの組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
［５］前記オリゴペプチドの濃度が０．１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１００ｍｍｏｌ／Ｌである、［１］〜［４］のいずれかの組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
［６］血清アルブミンを含む、［１］〜［５］のいずれかの組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
［７］前記血清アルブミンの濃度が、０．１〜５（Ｗ／Ｖ）％である、［６］の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
［８］前記血液凝固能測定試薬がプロトンビン時間測定試薬である、［１］〜［７］のいずれかの組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
［９］前記血液凝固能測定試薬が、凝固第ＩＩ因子、凝固ＶＩＩ因子、または凝固Ｘ因子を測定する複合因子測定試薬である、［１］〜［７］のいずれかの組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
［１０］前記血液凝固能測定試薬が、特定因子活性測定試薬である、［１］〜［７］のいずれかの組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
［１１］前記血液凝固能測定試薬が液状である、［１］〜［１０］のいずれかの組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬。
［１２］オリゴペプチドを含有することを特徴とする、組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬の製造方法。
［１３］被検試料、組織トロンボプラスチン、カルシウムイオン、オリゴペプチドを溶液中で接触させ、その接触開始から凝固までの時間を測定する工程を含むことを特徴とする、組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定方法。
［１４］組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬にオリゴペプチドを共存させることを特徴とする、組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬の安定化方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬及び測定方法によれば、安定して保存可能で、安価に且つ高精度に血液凝固能を測定することができる。特には、凍結乾燥品だけではなく、液状品としても長期に安定して保存可能な組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬を製造できる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】オリゴペプチドの添加による調製直後のＰＴと、３７℃で４週間保存後のＰＴの延長度を求めた結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明において使用可能なオリゴペプチドは、アミノ酸が少なくとも２個ペプチド結合したものであり、同一種のアミノ酸からなるもの、又は異種のアミノ酸からなるものを適宜選択して使用することができる。好ましくはアミノ酸が２〜１０個、より好ましくは２〜５個、更に好ましくは２〜３個が良い。またオリゴぺプチドの配列は、組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬、特にＰＴ測定試薬の安定化効果を示すものであれば特に限定されるものではない。例えば、グリシン、アラニン、グルタミン酸、ロイシン等を含むものが挙げられる。具体的には、グリシルグリシン、グリシルグリシルグリシン、アラニルアラニン、アラニルグルタミン酸、及びグリシルロイシンが挙げられる。これらのオリゴペプチドは、１種類を単独で、あるいは、２種類以上を組み合わせて使用することができる。
【００１３】
本発明において用いる用語「オリゴペプチド」には、狭義のオリゴペプチド（すなわち、天然アミノ酸からなるオリゴペプチド）だけでなく、その誘導体が含まれる。このような誘導体としては、例えば、ペプチドの安定性を向上させる各種修飾を施したペプチド誘導体を挙げることができる。前記修飾としては、例えば、Ｌ体アミノ酸のＤ体化（例えば、Ｎ末端アミノ酸のＤ体化、Ｃ末端アミノ酸のＤ体化、Ｎ末端及びＣ末端以外のアミノ酸のＤ体化）、Ｎ末アミノ基のアセチル化、Ｃ末端カルボキシル基のアミド化、天然型アミノ酸の（性質の類似した）非天然型アミノ酸への置換、又はこれらの組合せを挙げることができる。
【００１４】
前記オリゴペプチドは、組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬、好ましくはＰＴ測定試薬に添加されていれば良い。
添加されるオリゴペプチドの濃度は、液状の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬中、好ましくはＰＴ測定試薬中の濃度として、０．１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１００ｍｍｏｌ／Ｌが好適であり、０．５ｍｍｏｌ／Ｌ〜１００ｍｍｏｌ／Ｌがより好適であり、さらに、５〜３０ｍｍｏｌ／Ｌが特に好適である。
【００１５】
また、本発明の好適態様として、血清アルブミンを含有することができる。血清アルブミンの存在により、組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬の安定性を向上することができるため好ましい。
本発明において使用可能な血清アルブミンは、ヒト又は動物の血清アルブミンが用いられ、天然のものあるいは遺伝子組み換えによって調製されたものも用いることが可能である。
【００１６】
前記血清アルブミンは、組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬、好ましくはＰＴ測定試薬に添加されていれば良い。
添加される血清アルブミンの濃度は、液状の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬中、好ましくはＰＴ測定試薬中の濃度として、０．１〜５（Ｗ／Ｖ）％が好適であり、より好適には、０．５〜２（Ｗ／Ｖ）％である。
【００１７】
一般的に組織トロンボプラスチンは、組織因子とリン脂質の複合体からなるリポタンパク質である。天然型組織トロンボプラスチンはヒトまたは動物の臓器から抽出される。遺伝子組み換え技術により、ヒト、ウサギ、ウシ等の組織因子のｃＤＮＡ配列を含む遺伝子を人工的に組み込んだ大腸菌、酵母又は動物細胞から産生される組織因子、或いは組織因子発現動物細胞の培養細胞から産生される組織因子にリン脂質を人工的に結合させて調製することも可能である。組織因子と適当な組成のリン脂質小胞体との複合体を調製する方法は既に多くの報告がされている（例えば、特許文献７など）。本発明においては、天然型及び遺伝子組み替え型のいずれの組織トロンボプラスチンも用いることができる。
【００１８】
本発明の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬及び測定方法は、既知の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬に、本発明で使用可能なオリゴペプチドを含有することを特徴とする。該オリゴペプチドは、測定時に添加されても良いし、試薬製造時に添加されても良いが、試薬製造時に添加された方が好ましい。該オリゴペプチドにより、組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬が安定化されるため、試薬製造後から使用時（測定時）の長期間の保存安定性を望むことができる。
【００１９】
また、本発明の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬及び測定方法の実施形態としては、液状品でも、凍結品であっても良いが、該オリゴペプチドにより、液状品の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬であっても、長期間安定化できるため、特に液状品に適用することが好ましい。
【００２０】
また、本発明の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬及び測定方法の実施形態としては、１試薬系、あるいは２試薬系などの複数の試薬からなる製剤でも良い。具体的には、ＰＴ測定試薬を液状試薬として提供する場合には、試薬の反応主成分である組織トロンボプラスチン（凝固第ＩＩＩ因子）及び凝固第ＩＶ因子であるカルシウムイオンを混合した１試薬系の製剤で提供できるのみならず、より長期の保存安定性を有する製剤として、組織トロンボプラスチンとカルシウム化合物の水溶液を分離させた２試薬系の製剤や、凍結乾燥品製剤としても提供することもできる。
【００２１】
本発明の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬及び測定方法の第一の実施形態としては、ＰＴ測定試薬として構成し、検体と反応させて、血液凝固因子のうち、第ＩＩ因子、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、及び第Ｘ因子の総合的な活性を検査する試薬として用いることが挙げられる。具体的には、前記ＰＴ測定試薬は、上記に記載の天然型組織トロンボプラスチン或いは遺伝子組み換え細胞や培養細胞から調製される組織トロンボプラスチンに、血液凝固活性を発現しうる濃度のカルシウムイオンを添加することによって提供される。その試薬には防腐剤、ｐＨ緩衝剤、ＰＴ測定に影響を及ぼす抗凝固作用物質の影響を回避するための添加剤等を加えることができる。
【００２２】
本発明の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬及び測定方法の第二の実施形態としては、前記ＰＴ測定試薬と同様に構成し、前記凝固因子の内、第Ｖ因子を除いた血漿（欠乏血漿：すなわち、凝固因子としては、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、及び第Ｘ因子を含有）と混合して、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、及び第Ｘ因子の活性を検査する複合因子測定試薬としても用いることが挙げられる。
第二の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬は、前記ＰＴ測定試薬と前記欠乏血漿を別々に用意した２試薬系として構成することもできるし、前記ＰＴ測定試薬と前記欠乏血漿を混合して用意した１試薬系として構成することもできる。２試薬系の例としては、第一試薬をＰＴ測定試薬、第二試薬を欠乏血漿とし、検体を第一試薬と反応させ、次に欠乏血漿と反応させて測定することが挙げられる。１試薬系の例としては、ＰＴ測定試薬と欠乏血漿を混合した試薬を構成し、検体を反応させ測定することが挙げられる。当業者であれば、いずれの試薬構成をとるか、適宜選択して実施することができる。
【００２３】
本発明の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬及び測定方法の第三の実施形態としては、前記ＰＴ測定試薬と同様に構成し、前記凝固因子の内、いずれか一つの因子を欠乏させた因子欠乏血漿と組み合わせて、特定の因子活性を検査する特定因子活性測定試薬としても用いることが挙げられる。例えば、第ＶＩＩ因子の欠乏血漿（すなわち、凝固因子としては、第ＩＩ因子、第Ｖ因子、及び第Ｘ因子を含有）とＰＴ測定試薬を組み合わせて、被験検体の第ＶＩＩ因子の活性を測定することができる。また、第ＩＩ因子の欠乏血漿（すなわち、凝固因子としては、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、及び第Ｘ因子を含有）とＰＴ測定試薬を組み合わせて、被験検体の第ＶＩＩ因子の活性を測定することができる。また、第Ｘ因子の欠乏血漿（すなわち、凝固因子としては、第ＩＩ因子、第Ｖ因子、及び第ＶＩＩ因子を含有）とＰＴ測定試薬を組み合わせて、被験検体の第ＶＩＩ因子の活性を測定することができる。
第三の組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬は、前記ＰＴ測定試薬と前記欠乏血漿を別々に用意した２試薬系として構成することもできるし、前記ＰＴ測定試薬と前記欠乏血漿を混合して用意した１試薬系として構成することもできる。２試薬系の例としては、第一試薬を欠乏血漿、第二試薬をＰＴ測定試薬とし、検体を第一試薬と反応させ、次に欠乏血漿と反応させて測定することが挙げられる。１試薬系の例としては、ＰＴ測定試薬と欠乏血漿を混合した試薬を構成し、検体を反応させ測定することが挙げられる。当業者であれば、いずれの試薬構成をとるか、適宜選択して実施することができる。
【００２４】
前記の各因子の活性は、フィブリン形成（凝固）が観察されるまでの時間（凝固時間）を評価したり、標準血漿に対する時間（％）を評価したりすることで検査できる。当業者であれば、目的に応じて適宜評価方法を選択して実施することができる。
【実施例】
【００２５】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
【００２６】
《実施例１：ＰＴ測定試薬の調製》
ＰＴ測定試薬の調製は以下の操作によって実施した。
組織トロンボプラスチンは、以下に従って調製した。まず、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、及びホスファチジルセリンを含むリン脂質混合物の懸濁液（３．３ｍｇ／ｍＬ）に、トライトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００（２０％）と、組み換え組織因子（４９０ｎｍｏｌ／Ｌ）を加えて攪拌した。そこに、バイオビーズ（ＢｉｏＢｅａｄｓ）ＳＭ−２（ＢＩＯ−ＲＡＤ）を添加し、トライトンＸ−１００を吸着除去した。バイオビーズ添加から９０分間攪拌後、バイオビーズを除去し、組織トロンボプラスチン溶液とした。
調製した組織トロンボプラスチン溶液を、組織因子濃度が２０ｎｍｏｌ／Ｌとなるように以下の緩衝液で希釈してＰＴ測定試薬を調製した。緩衝液は、１００ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ、１（Ｗ／Ｖ）％ウシ血清アルブミン、１（Ｗ／Ｖ）％ポリエチレングリコール（分子量＝６０００）、１５ｍｍｏｌ／Ｌ  ＣａＣｌ２、及び０．０２（Ｗ／Ｖ）％アジ化ナトリウムを含む２０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）を基本組成とした。基本組成に、グリシン、グリシルグリシン、グリシルグリシルグリシン、アラニルアラニン、アラニルグルタミン酸、及びグリシルロイシンをそれぞれ最終濃度１０ｍｍｏｌ／Ｌとなるように添加して、各ＰＴ測定試薬を調製した。
【００２７】
《実施例２：ＰＴ測定試薬の保存安定性の検討》
実施例１に従って調製したＰＴ測定試薬の保存安定性を検討した。調製直後の各試薬において、ノーマルコントロール血漿（ＩＬ社製）のＰＴを測定しておき、各試薬を３７℃で４週間保存後に同一ロットのノーマルコントロール血漿のＰＴを測定し、各試薬の調製直後のＰＴと保存後のＰＴの差（秒）を求めた。
調製した試薬のＰＴ測定は、血液凝固分析装置、コアプレスタ（登録商標）２０００（積水メディカル）を用いて行った。調製直後と保存後のＰＴの差を図１に示す。この結果、無添加のもの、及び安定化効果が開示されているアミノ酸であるグリシン（特許文献７）を添加したものでは、基準とした０．３秒を超えるＰＴの延長を認めたのに対して、オリゴペプチドを添加したＰＴ測定試薬では、すべて０．３秒以下の延長にとどまっていることが確認できた。
また、グリシルグリシルグリシンが最も効果が高く、次いで、アラニルグルタミン酸、次いで、グリシルグリシン及びグリシルロイシンが同程度であり、次いで、アラニルアラニンが効果があるという結果であった。
従って、オリゴペプチドを添加したＰＴ測定試薬は、液状安定性に優れ、液状試薬として提供できることが示された。
【００２８】
一般的に、体外診断薬において試薬には、４℃の条件下で１２ヶ月以上の安定性が求められる。ＰＴ測定試薬において、凝固時間の変動は、試薬の感度・信頼性に大きく影響する。その中でも正常血漿のＰＴ（約１０〜１３秒）の変動は極めて重要であることから、４℃で１２ヶ月後の凝固時間の変動が、±０．３秒以内にはいることが望ましい。４℃で１２ヶ月後の安定性について迅速に情報を得るためには、３７℃での安定性の結果からアルレニウスの式を適用することによって評価することが一般的に行われている。一般的に、温度が１０℃上昇すると、反応速度定数は２倍になることから、アルレニウスの式より安定性４℃の安定性は３７℃の安定性の約１２倍となる。つまり、３７℃で１ヶ月の液状安定性が確認できれば、４℃で１年の液状安定性を担保できると推定できる。つまり試薬調製初日の凝固時間と３７℃で１ヶ月の保存後の凝固時間の差が±０．３秒以内であることが液状安定性の許容条件とできる。この条件に従って上記の検討を行ったところ、オリゴペプチドをＰＴ測定試薬に添加することにより、４℃保存で少なくとも１年の保存安定性を有する液状のＰＴ測定試薬を調製でき、画期的な安定化方法と試薬を提供できることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００２９】
本発明は、血液凝固能測定試薬に利用できる。とりわけ、液状の血液凝固能測定試薬の製造に利用することができる。
【図１】
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