(57)【要約】【課題】  慢性型成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）患者における急性転化の早期診断による慢性型のＡＴＬ患者のＱＯＬ向上を指向し、慢性型のＡＴＬ患者における急性転化を試験する方法を提供する。【解決手段】  慢性型のＡＴＬ患者より採取された試料中の可溶性ＣＤ３０(ｓＣＤ３０)と可溶性インターロイキン−２受容体（ｓＩＬ−２Ｒ）とを測定し、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が２５００Ｕ／ｍＬ以上となり、ｓＩＬ−２Ｒ濃度／ｓＣＤ３０濃度が（Ａ）時間経過とともに減少しながら１０に近づく場合、又は、（Ｂ）１０以下である場合には、急性転化しやすいという基準と比較することにより、慢性型のＡＴＬ患者の急性転化のし易さを試験する方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
慢性型の成人Ｔ細胞白血病患者より採取された試料中の可溶性ＣＤ３０(ｓＣＤ３０)と可溶性インターロイキン−２受容体（ｓＩＬ−２Ｒ）とを測定し、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が２５００Ｕ／ｍＬ以上となり、ｓＩＬ−２Ｒ濃度／ｓＣＤ３０濃度が（Ａ）時間経過とともに減少しながら１０に近づく場合、又は、（Ｂ）１０以下である場合には、急性転化しやすいという基準と比較することにより、慢性型の成人Ｔ細胞白血病患者の急性転化のし易さを試験する方法。
【請求項２】
可溶性インターロイキン−２受容体測定用試薬と可溶性ＣＤ３０測定用試薬を含有することを特徴とする、慢性型の成人Ｔ細胞白血病患者の急性転化のし易さを試験するキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、慢性型の成人Ｔ細胞白血病（以下、ＡＴＬという）患者の急性転化のし易さを試験する方法、及び、当該方法のためのキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトＴリンパ球向性ウィルス（以下、ＨＴＬＶという）は、レトロウィルスの１種であり、１型と２型の２つの型が存在する。このうち、１型、すなわち、ＨＴＬＶ−１は、日沼らによって成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫の原因ウィルスとして同定されている（非特許文献１、２、３参照）。
【０００３】
ヒトにおけるＨＴＬＶ−１感染は、主に母から子への垂直感染ならびに夫から妻への水平感染であるが、輸血による医原性感染も知られている。輸血による医原性感染は、１９８６年から開始された抗ＨＴＬＶ−１（または２）抗体を検査することにより防止されてきた。輸血による医原性感染の疫学的研究から、ＨＴＬＶ−１感染は血球細胞成分が介在していることが知られている。ＨＴＬＶ−１に感染すると、生体中に抗ＨＴＬＶ−１抗体が生成してくるので、抗ＨＴＬＶ−１抗体を測定することにより、ＨＴＬＶ−１の感染を知ることができる。
【０００４】
抗ＨＴＬＶ−１抗体を測定する方法としては、免疫学的手法を用いた測定方法が知られており、ゼラチン粒子凝集法（PA法）、蛍光抗体法（FA法）、間接蛍光抗体法（IF法、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ法）、ウェスタンブロット法（ＷＢ法）などが知られている。ＨＴＬＶ−１キャリア 指導の手引き（厚生労働省研究班「本邦におけるHTLV-１感染及び関連疾患の実態調査と総合対策」、２０１１年）によると、一般医療機関ではスクリーニング検査としてＰＡ法やＣＬＥＩＡ法が用いられる。スクリーニング検査で陽性と判断された場合であっても、ＷＢ法による確認検査が実施される。さらに、ＷＢ法による確認検査で判定保留となった場合、ＨＴＬＶ−１プロウイルスを検出するＰＣＲ法（ポリメラーゼ連鎖反応法）による検査を実施することがある。
【０００５】
ＨＴＬＶ−１が引き起こす疾患としては、例えば血流内やリンパ器官内で発症する成人Ｔ細胞性白血病／リンパ腫、脊髄内で発症するＨＴＬＶ−１関連脊髄症（ＨＡＭ／ＴＳＰ）、眼球内で発症したブドウ膜炎（ＨＵ）等が知られている。
【０００６】
ＡＴＬは、ＨＴＬＶ−１の感染が原因となって起こる独立した疾患である。ＨＴＬＶ−１キャリア（ＨＴＬＶ−１に感染した者で、上記のＨＴＬＶ−１が引き起こす疾患を発症していない者）は、２００８年の段階で、日本国内で約１０８万人と推定されている。年間ＨＴＬＶ−１キャリア１０００人に１人の割合でＡＴＬを発症し、また、ＡＴＬ生涯発症率はＨＴＬＶ−１キャリアの約５％と言われている。発症率は非常に低いがひとたび発症するときわめて短期間で重篤な結果もたらすと言われている。
【０００７】
ＡＴＬは、急性型、リンパ腫型、慢性型、くすぶり型の４種類の臨床病型に分類され、この臨床病型は化学療法を含めた治療方針の決定に広く使用されている。１９９０〜１９９５年の本邦全国ＡＴＬ実態調査によると、ＡＴＬ２１２３例中、急性型は１３２８例（６２．６％）、リンパ腫型は５０５例（２３．８％）、慢性型は１７６例（８．３％）、くすぶり型は１１４例（５．４％）であった。
【０００８】
リンパ腫型や急性型は高悪性度ＡＴＬと定義され、予後（生存率）が悪く早急な治療が必要となる。一方、くすぶり型や慢性型は低悪性度ＡＴＬと定義され、無治療で経過を観察することが一般的に行われている。このように、急性型、リンパ腫型に比べると、慢性型やくすぶり型は生存率が高いと言われている。
【０００９】
しかしながら、慢性型やくすぶり型から、急性型やリンパ腫型の病状へと急性転化する場合があると言われている。くすぶり型ＡＴＬ、慢性型ＡＴＬ患者の長期追跡結果によるとくすぶり型ＡＴＬの３割は急性転化し、慢性型ＡＴＬの８割が経過中に急性転化していたと報告されている。急性転化した場合は、急性型やリンパ腫型と同様に、早急に治療を開始する必要がある。現在、血清中の乳酸デヒドロゲナーゼ活性（以下、ＬＤＨ活性と記す）や可溶型インターロイキン−２受容体（以下、ｓＩＬ−２Ｒと記す）濃度、白血球数、末梢血ＡＴＬ細胞数、カルシウム濃度などを検査し、異常がみられた場合には、リンパ節腫脹の有無と数、皮膚病変の有無、肺病変の有無、肝脾腫の有無、その他の病変の有無、画像診断としてのＣＴ（Computed Tomography）検査ならびにガリウムシンチグラフィ検査あるいはＰＥＴ（陽電子放射断層撮影）検査を行い、急性型やリンパ腫型への急性転化の確定診断を行っているが、急性転化を早期に予知することは困難である。
【００１０】
また、慢性型からの急性転化を判定する方法として、慢性型ＡＴＬ患者より採取した試料中ｓＣＤ３０濃度を測定する方法が知られている（特許文献１）。
【００１１】
ＡＴＬの予後は極めて不良と言われている。現在のところ、ｍＬＳＧ１５と呼ばれる多剤併用療法で最も良好な生存率が得られているが、生存期間の中央値は約１３ヵ月、３年生存割合は約２４％と依然極めて不良である。最近、ＣＣＲ４（ケモカイン受容体４）をターゲットとした抗体医薬であるポテリジオ（登録商標）が承認され、第２相試験で再発高悪性度ＡＴＬに対する奏功率が５０％であった事が報告されている。化学療法で十分な効果が期待できない場合は、骨髄移植（同種造血幹細胞移植）が積極的に行われるようになり、一部の患者では治癒も期待できるようになってきた（非特許文献４参照）。
【００１２】
インターロイキン−２受容体（以下、ＩＬ−２Ｒという）はα鎖（ＣＤ２５）、β鎖（ＣＤ１２２）、γ鎖（ＣＤ１３２）の３つの細胞膜表面タンパク質から構成され、α鎖はプロテアーゼによって切断され、ｓＩＬ−２Ｒとして血中に遊離することが報告されている（一般的に、ｓＩＬ−２Ｒとはプロテアーゼにより切断されたα鎖のことを指す）。ＡＴＬ細胞は制御性Ｔ細胞の表面形質を有しており、表面にＣＤ２５（ＩＬ−２Ｒα鎖）を発現しているため、ｓＩＬ−２ＲはＡＴＬの病態モニタリングや予後予測の有用な指標として活用されている。
【００１３】
ＣＤ３０は、ＴＮＦＲスーパーファミリーに属する受容体で、ホジキン病細胞、ステルンベルグ−リード（Sternberg-Reed）細胞、未分化大細胞リンパ腫(ALCL)細胞、ＡＴＬ細胞で発現していることが報告されている（非特許文献５、６参照）。その後、ＣＤ３０の細胞外部分が切断された可溶型ＣＤ３０（以下、ｓＣＤ３０と記す）が血中に存在すること事が報告されている。ＡＴＬ患者とｓＣＤ３０との関連については、健常人と比べＡＴＬ患者血液中のｓＣＤ３０量が多いこと、すでに増悪化した急性型ＡＴＬおよびリンパ腫型ＡＴＬにおいて、化学療法により寛解となるとｓＣＤ３０量が低下すること、寛解した後に再発した際にｓＣＤ３０量が増加することが報告されている（非特許文献７参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】特開２００８−２９２４７４号公報
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Proceeding of the National Academy of Sciences of the United States of America, Vol.78(10), pp.6476-6480. 1981
【非特許文献２】Proceeding of the National Academy of Sciences of the UnitedStates of America, Vol.79, 2031-2035. 1982
【非特許文献３】Sciences, Vol.219, pp.856-859. 1983
【非特許文献４】International Journal of Hematology, Vol.69(3), pp.203-205. 1999
【非特許文献５】Nature, Vol.299(5878), pp.65-67, 1982
【非特許文献６】Histopathology, Vol.26(6), pp.539-546, 1995
【非特許文献７】Cancer science, Vol.96(11), pp.810-815, 2005
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明の課題は、慢性型ＡＴＬ患者における急性転化の早期診断による慢性型ＡＴＬ患者のＱＯＬ向上を指向し、慢性型のＡＴＬ患者における急性転化し易さを試験する方法、及び、当該方法のためのキットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
発明者らは、本課題の解決のために鋭意検討し、慢性型のＡＴＬ患者の試料中ｓＣＤ３０およびｓＩＬ−２Ｒを測定し、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が２５００Ｕ／ｍＬ以上となり、ｓＩＬ−２Ｒ濃度／ｓＣＤ３０濃度が時間経過とともに減少しながら１０に近づく場合、又は、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が２５００Ｕ／ｍＬ以上となり、ｓＩＬ−２Ｒ濃度／ｓＣＤ３０濃度が１０以下である場合、急性転化しやすいという、という知見を見いだし、本発明を完成させた。
【００１８】
すなわち、本発明は、［１］慢性型のＡＴＬ患者より採取された試料中のｓＣＤ３０とｓＩＬ−２Ｒとを測定し、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が２５００Ｕ／ｍＬ以上となり、ｓＩＬ−２Ｒ濃度／ｓＣＤ３０濃度が（Ａ）時間経過とともに減少しながら１０に近づく場合、又は、（Ｂ）１０以下である場合には、急性転化しやすいという基準と比較することにより、慢性型のＡＴＬ患者の急性転化のし易さを試験する方法に関する。この発明の他の態様としては、慢性型のＡＴＬ患者より採取された試料中のｓＣＤ３０とｓＩＬ−２Ｒとを測定し、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が２５００Ｕ／ｍＬ以上となり、ｓＩＬ−２Ｒ濃度／ｓＣＤ３０濃度が（Ａ）時間経過とともに減少しながら１０に近づく場合、又は（Ｂ）１０以下である場合には、急性転化しやすいという基準と比較することにより、慢性型のＡＴＬ患者の急性転化のし易さを試験するためのデータの収集方法等を挙げることができる。
【００１９】
また本発明は、［２］ｓＩＬ−２Ｒ測定用試薬とｓＣＤ３０測定用試薬を含有することを特徴とする、慢性型のＡＴＬ患者の急性転化のし易さを試験するキットに関する。この発明の他の態様としては、ｓＩＬ−２Ｒ測定用試薬とｓＣＤ３０測定用試薬に加えて、試料中のｓＣＤ３０とｓＩＬ−２Ｒとの測定の結果、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が２５００Ｕ／ｍＬ以上となり、ｓＩＬ−２Ｒ濃度／ｓＣＤ３０濃度が（Ａ）時間経過とともに減少しながら１０に近づく場合、又は（Ｂ）１０以下である場合には、急性転化しやすい、という慢性型のＡＴＬ患者の急性転化のし易さについての記載を含む添付文書を含有することを特徴とする、慢性型のＡＴＬ患者の急性転化のし易さを試験するためのキットを挙げることができる。
【発明の効果】
【００２０】
本発明により、慢性型のＡＴＬ患者の急性転化のし易さを試験する方法、及び当該方法のためのキットが提供され、慢性型のＡＴＬ患者の急性転化の早期診断が可能となり、慢性型ＡＴＬ患者のＱＯＬが向上し得る。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明において、慢性型のＡＴＬとは、ＡＴＬの分類基準によって４種類の臨床病型に分類されるＡＴＬのうちの１つであり、早急な治療を必要とせず、主として経過観察が行われる状態のＡＴＬである。本発明において、急性転化とは、慢性型のＡＴＬより急性型のＡＴＬへ移行することを意味する。急性転化により慢性型のＡＴＬより急性型のＡＴＬへ移行すると、早急な治療が必要となる。
【００２２】
本発明において、慢性型のＡＴＬ患者より採取された試料としては、当該患者から採取された試料であって、ｓＩＬ−２Ｒ及びｓＣＤ３０が測定され得る試料であれば特に制限はなく、例えば血漿、血清等が挙げられる。
【００２３】
本発明において、慢性型のＡＴＬ患者の急性転化のし易さの試験は、例えば以下の工程（１）〜（８）を含有する方法により行うことができる。
（１）慢性型のＡＴＬ患者より試料を採取する工程；
（２）工程（１）で採取された試料を用いて、当該試料中のｓＩＬ−２Ｒを測定する工程；
（３）予め作成したｓＩＬ−２Ｒ濃度とｓＩＬ−２Ｒの測定値との関係を表す検量線と、工程（２）でのｓＩＬ−２Ｒの測定値とから、当該試料中のｓＩＬ−２Ｒ濃度を決定する工程；
（４）工程（１）で採取された試料を用いて、当該試料中のｓＣＤ３０を測定する工程；
（５）予め作成したｓＣＤ３０濃度とｓＣＤ３０の測定値との関係を表す検量線と、工程（４）でのｓＣＤ３０の測定値とから、当該試料中のｓＣＤ３０濃度を決定する工程；
（６）工程（３）で決定されたｓＩＬ−２Ｒ濃度と、工程（５）で決定されたｓＣＤ３０濃度とから、ｓＣＤ３０濃度に対するｓＩＬ−２Ｒ濃度の比、すなわち、ｓＩＬ−２Ｒ濃度／ｓＣＤ３０濃度（以下、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０と記す）を決定する工程；
（７）工程（１）〜工程（６）を複数の時点で行い、それぞれの時点でのｓＩＬ−２Ｒ濃度、及び、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０を比較し、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が２５００Ｕ／ｍＬ以上であり、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０が時間経過とともに減少しながら１０に近づく場合に、当該患者は急性転化し易い、という基準と比較する工程；
（８）工程（７）における基準との比較から、当該患者の急性転化のし易さを判定する工程。
【００２４】
また、上記工程（７）において、「ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０が時間経過とともに減少しながら１０に近づく」とは、具体的には、複数の異なる時点で算出したｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０のうち、遅い（晩い）時点で算出したｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０の値の方が早い時点で算出したｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０の値よりも１０に近いことをいう。なお、３つ以上の異なる時点でｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０を算出した場合、近似曲線を作成するなどしてｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０が時間の経過とともに、減少しながら１０に近づくことを確認してもよい。
【００２５】
また、本発明において、慢性型のＡＴＬ患者の急性転化のし易さの試験は、例えば以下の工程（１）〜（８）を含有する方法により行うこともできる。
（１）慢性型のＡＴＬ患者より試料を採取する工程；
（２）工程（１）で採取された試料を用いて、当該試料中のｓＩＬ−２Ｒを測定する工程；
（３）予め作成したｓＩＬ−２Ｒ濃度とｓＩＬ−２Ｒの測定値との関係を表す検量線と、工程（２）でのｓＩＬ−２Ｒの測定値とから、当該試料中のｓＩＬ−２Ｒ濃度を決定する工程；
（４）工程（１）で採取された試料を用いて、当該試料中のｓＣＤ３０を測定する工程；
（５）予め作成したｓＣＤ３０濃度とｓＣＤ３０の測定値との関係を表す検量線と、工程（４）でのｓＣＤ３０の測定値とから、当該試料中のｓＣＤ３０濃度を決定する工程；
（６）工程（３）で決定されたｓＩＬ−２Ｒ濃度と、工程（５）で決定されたｓＣＤ３０濃度とから、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０を決定する工程；
（７）ｓＩＬ−２Ｒ濃度が２５００Ｕ／ｍＬ以上であり、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０が１０以下である場合に、当該患者は急性転化し易い、という基準と比較する工程；
（８）工程（７）における基準との比較から、当該患者の急性転化のし易さを判定する工程。
【００２６】
また、上記工程（７）において、「ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０が１０以下である場合」のｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０の値としては、１０以下であれば特に制限されず、例えば８．５以下、８．０以下、７．５以下、７．０以下、６．５以下、６．０以下、５．５以下、５．０以下、４．５以下、４．０以下、３．５以下、３．０以下、２．５以下、２．０以下、１．７以下等を挙げることができる。
【００２７】
本発明において、慢性型のＡＴＬ患者より採取された試料中のｓＩＬ−２Ｒの測定は、公知の生体試料中のｓＩＬ−２Ｒ濃度の測定方法及びキットを用いることにより行うことができる。当該方法としては、生体試料中のｓＩＬ−２Ｒを測定可能とする方法であれば特に制限はないが、例えば免疫学的測定法が挙げられる。
【００２８】
本発明において、慢性型のＡＴＬ患者より採取された試料中のｓＣＤ３０の測定は、公知の生体試料中のｓＣＤ３０濃度の測定方法及びキットを用いることにより行うことができる。当該方法としては、生体試料中のｓＣＤ３０を測定可能とする方法であれば特に制限はないが、例えば免疫学的測定法が挙げられる。
【００２９】
免疫学的測定法としては、任意の公知の免疫学的測定方法があげられ、例えば放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡまたはＥＬＩＳＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、間接蛍光抗体法（Indirect Fluorescence assay）、発光免疫測定法（Luminescentimmunoassay）、物理化学的測定法［比濁免疫測定法（ＴＩＡ）、ラテックス凝集法（ＬＡＰＩＡ）、微粒子計数免疫凝集測定法（ＰＣＩＡ）］、ウェスタンブロッティング法等が挙げられるが、ＥＬＩＳＡ法が好ましく用いられる[単クローン抗体実験マニュアル（講談社サイエンティフィック、1987）、続生化学実験講座５免疫生化学研究法（東京化学同人、1986）]。
【００３０】
免疫学的測定法においては、サンドイッチ法、競合法等を用いることができ、また、ホモジアニス法、ヘテロジニアス法等も用いることができる。
【００３１】
本発明において、試料中のｓＩＬ−２Ｒは、ｓＩＬ−２Ｒ測定用試薬を用いて測定することができる。ｓＩＬ−２Ｒ測定用試薬としては、例えばｓＩＬ−２Ｒに特異的に結合する第１の抗体が結合した固相、及びｓＩＬ−２Ｒに特異的に結合する第２の抗体に標識が結合した標識化第２抗体を含む試薬を例示することができる。第１の抗体におけるｓＩＬ−２Ｒの抗原決定部位と、第２の抗体におけるｓＩＬ−２Ｒの抗原決定部位とは同じであっても異なっていてもよい。
【００３２】
標識化第２抗体における標識としては、例えば酵素や放射性物質等が挙げられる。酵素としては、例えばペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ等が挙げられる。放射性物質としては、例えば１２５Ｉ等が挙げられる。
【００３３】
第１の抗体が結合した固相における該抗体と固相との結合としては、例えば非共有結合、共有結合等が挙げられる。非共有結合としては、例えば物理吸着等が挙げられる。共有結合としては、例えば該抗体と固相との直接的な結合や、リンカー等を介した該抗体と固相との間接的な結合等が挙げられる。
【００３４】
固相としては、第１の抗体を固定化し、ｓＩＬ−２Ｒの免疫学的測定法を可能にする固相であれば特に制限はなく、例えばマイクロタイタープレートなどのポリスチレンプレート、ガラス製または合成樹脂製の粒子物（ビーズ）、ガラス製または合成樹脂製の球状物（ボール）、ラテックス、磁性粒子、ニトロセルロース膜などの各種メンブレン、合成樹脂製の試験管等が挙げられる。
【００３５】
第１の抗体が結合した固相を用いることにより、検体中のｓＩＬ−２Ｒと、該固相上の該抗体との反応後、固相を洗浄することにより、未反応の物質を固相から除去することができるので好ましい。このｓＩＬ−２Ｒ測定用試薬を用いることにより、試料中のｓＩＬ−２Ｒを測定することができる。試料中のｓＩＬ−２Ｒ濃度は、例えば以下の工程［１］〜［５］を含む方法により決定することが出来る。
［１］固相上に結合した第１の抗体と試料中のｓＩＬ−２Ｒとを反応させて、固相上に第１の抗体とｓＩＬ−２Ｒの複合体を形成させる工程；
［２］工程［１］で生成した複合体と標識化第２抗体とを反応させて、固相上に第１の抗体、ｓＩＬ−２Ｒ及び標識化第２抗体の複合体を形成させる工程；
［３］工程［２］での固相を洗浄し、未反応の物質を固相上から除去する工程；
［４］工程［３］の後、固相上に生成した第１の抗体、ｓＩＬ−２Ｒ及び標識化第２抗体の複合体中の標識量を測定する工程；
［５］工程［４］での測定値と、予め作成したｓＩＬ−２Ｒ濃度と標識量との関係を表す検量線とから、該試料中のｓＩＬ−２Ｒ濃度を決定する工程。
【００３６】
尚、上記［１］工程と［２］工程との間に洗浄工程を挿入してもよい。
【００３７】
試料中のｓＩＬ−２Ｒ濃度を決定する際に使用する検量線は、既知濃度のｓＩＬ−２Ｒを用いて作成することができる。すなわち、既知濃度のｓＩＬ−２Ｒを含む試料を、例えば上記の測定法に供し、得られる情報量とｓＩＬ−２Ｒ濃度とを関係付けることにより検量線を作成することができる。ここで、情報量としては、例えば吸光度、蛍光強度、発光強度、放射活性、濁度等が挙げられる。作成した検量線と測定値とから、測定に使用した試料中のｓＩＬ−２Ｒ濃度を決定することができる。
【００３８】
検量線作成および試料中のｓＩＬ−２Ｒの測定においては、市販のｓＩＬ−２Ｒ測定用キットを用いることもできる。市販のｓＩＬ−２Ｒ測定用キットとしては、例えばセルフリーＮ  ＩＬ−２Ｒ（協和メデックス社製）、デタミナーＣＬ  ＩＬ−２Ｒ（協和メデックス社製）、シーメンス・イムライズ  ＩＬ−２Ｒ  ＩＩ（シーメンス社製）やシーメンス・イムライズＩＬ−２Ｒ  ＩＩ  ２０００（シーメンス社製）、ＩＬ−２Ｒテスト・ＢＭＬ（ビー・エム・エル社製）等が挙げられる。
【００３９】
本発明において、試料中のｓＣＤ３０は、ｓＣＤ３０測定用試薬を用いて測定することができる。ｓＣＤ３０測定用試薬としては、ｓＣＤ３０に特異的に結合する第１の抗体が結合した固相、及びｓＣＤ３０に特異的に結合する第２の抗体に標識が結合した標識化第２抗体を含む試薬を例示することができる。第１の抗体におけるｓＣＤ３０の抗原決定部位と、第２の抗体におけるｓＣＤ３０の抗原決定部位とは同じであっても異なっていてもよい。標識化第２抗体における標識としては、例えば前述の標識等が挙げられる。
【００４０】
第１の抗体が結合した固相における該抗体と固相との結合としては、例えば前述の結合等が挙げられる。
【００４１】
固相としては、第１の抗体を固定化し、ｓＣＤ３０の免疫学的測定法を可能にする固相であれば特に制限はなく、例えば前述の固相等が挙げられる。
【００４２】
第１の抗体が結合した固相を用いることにより、検体中のｓＣＤ３０と、該固相上の該抗体との反応後、固相を洗浄することにより、未反応の物質を固相から除去することができるので好ましい。このｓＣＤ３０測定用試薬を用いることにより、試料中のｓＣＤ３０を測定することができる。試料中のｓＣＤ３０濃度は、例えば上記のｓＩＬ−２Ｒ濃度測定方法と同様の方法で決定することができる。
【００４３】
試料中のｓＣＤ３０濃度を決定するに際して使用する検量線は、既知濃度のｓＣＤ３０を用いて作成することができる。すなわち、既知濃度のｓＣＤ３０を含む試料を、例えば上記の測定法に供し、得られる情報量とｓＣＤ３０濃度とを関係付けることにより検量線を作成することができる。ここで、情報量としては、例えば吸光度、蛍光強度、発光強度、放射活性、濁度等が挙げられる。作成した検量線と測定値とから、測定に使用した試料中のｓＣＤ３０濃度を決定することができる。
【００４４】
検量線作成および試料中のｓＣＤ３０の測定においては、市販のｓＣＤ３０測定用キットを用いることもできる。市販のｓＣＤ３０測定用キットとしては、例えばHuman sCD30 Platinum ELISA (eBioscience社製)等を挙げることができる。
【００４５】
本発明におけるｓＩＬ−２Ｒ濃度の２５００Ｕ／ｍＬは、セルフリーＮ  ＩＬ−２Ｒ（協和メデックス社製）の添付文書に記載された方法、すなわち、１０％(W/V)インターロイキン２（ＩＬ−２）で４日間刺激した正常ヒトＩＬ−２依存性Ｔ細胞の無細胞培養上清（無希釈）中に含まれるｓＩＬ−２Ｒ濃度を１０００Ｕ／ｍＬとする方法により決定される濃度、又は、セルフリーＮ  ＩＬ−２Ｒでの測定と相関関係が認められる、他の測定により決定される濃度である。かかる他の測定により決定される濃度としては、セルフリーＮ  ＩＬ−２Ｒを用いた測定により決定されるｓＩＬ−２Ｒ濃度に換算したときに、当該ｓＩＬ−２Ｒ濃度と、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは１００％同一を示す濃度を挙げることができる。
【００４６】
本発明におけるｓＣＤ３０濃度は、Human sCD30 Platinum ELISA(eBioscience社製)の添付文書に記載された方法により決定される濃度、又は、Human sCD30 Platinum ELISAでの測定と相関関係が認められる、他の測定により決定される濃度である。かかる他の測定により決定される濃度としては、Human sCD30 Platinum ELISA(eBioscience社製)を用いた測定により決定されるｓＣＤ３０濃度に換算したときに、当該ｓＣＤ３０濃度と、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは１００％同一を示す濃度を挙げることができる。なお、Human sCD30 Platinum ELISA(eBioscience社製)の添付文書に記載された濃度単位「ｎｇ／ｍＬ」と本発明における濃度単位「Ｕ／ｍＬ」とは同一である。
【００４７】
本発明は、また、ｓＩＬ−２Ｒ測定用試薬とｓＣＤ３０測定用試薬を含有することを特徴とする、慢性型のＡＴＬ患者の急性転化のし易さを試験するキットに関する。本発明のキットに用いられるｓＩＬ−２Ｒ測定用試薬としては、例えば前述のｓＩＬ−２Ｒ測定用試薬等が挙げることができ、ｓＣＤ３０測定用試薬としては、例えば前述のｓＣＤ３０測定用試薬等が挙げることができる。上記キットには、ｓＩＬ−２Ｒ測定用試薬やｓＣＤ３０測定用試薬の他、慢性型のＡＴＬ患者の急性転化のし易さ（リスク）を判断するための指標、例えば、慢性型のＡＴＬ患者より採取された試料中のｓＣＤ３０とｓＩＬ−２Ｒとを測定し、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が２５００Ｕ／ｍＬ以上となり、ｓＩＬ−２Ｒ濃度／ｓＣＤ３０濃度が（Ａ）時間経過とともに減少しながら１０に近づく場合、又は（Ｂ）１０以下である場合には、急性転化しやすいという基準と比較する旨が記載された添付文書を含むものが好ましい。
【００４８】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００４９】
急性転化した６症例のｓＣＤ３０濃度とｓＩＬ-２Ｒ濃度
慢性型から急性型へ急性転化した６症例（インフォームドコンセントを取得）のそれぞれの症例について、ｓＩＬ−２Ｒ濃度、ｓＣＤ３０濃度、及び、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０を決定した。その結果を表１に示す。ｓＣＤ３０濃度はｓＣＤ３０測定用キット［Human sCD30 Platinum ELISA (eBioscience社製)］を用いて、ｓＩＬ−２Ｒ濃度はｓＩＬ−２Ｒ測定キット[セルフリーＮ  ＩＬ−２Ｒメデックス（協和メデックス社製）]を用いて測定した。
【００５０】
尚、表１中の急性転化前観察期間とは、慢性型のＡＴＬ症例として観察を開始した日、すなわち、慢性型のＡＴＬ患者より採取した血液から得られた血清を用いて、当該血清中のｓＩＬ−２Ｒ濃度とｓＣＤ３０濃度を測定した日を基準とし、急性転化と診断されるまでの期間（日）を示している。
【００５１】
【表１】
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【００５２】
症例１は、胸水に腫瘍病変が確認されたため急性型（急性転化）と診断された。症例２、症例３、症例５、症例６は、ＬＤＨ活性が正常値上限の２倍を超えたため急性型（急性転化）と診断された。症例４は、高カルシウム血症となったため急性型（急性転化）と診断された。
【００５３】
症例１は、慢性型として観察を開始した時点で、ｓＩＬ−２Ｒ濃度が２６９１Ｕ／ｍＬ、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０は８．６であった。この時点で急性転化しやすい状態であり、観察開始から１６８日目で急性転化と診断された。急性転化と診断された時点で、ｓＩＬ−２Ｒは３１２６Ｕ／ｍＬにまで上昇し、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０比は１．６まで低下していた。
【００５４】
症例２は、慢性型として観察を開始した時のｓＩＬ−２Ｒ濃度が２９２９Ｕ／ｍＬ、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０比は１１．４であった。観察開始から５１日目に急性転化と診断されたが、この時点でのｓＩＬ−２Ｒ濃度は１１７５０Ｕ／ｍＬにまで上昇し、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０は７．６まで低下していた。
【００５５】
症例３は、慢性型として観察を開始した時のｓＩＬ−２Ｒ濃度が２３３０Ｕ／ｍＬ、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０は１４．５であった。観察開始から２４４日目に急性転化と診断されたが、この時点でのｓＩＬ−２Ｒは５９５９Ｕ／ｍＬにまで上昇し、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０は１１．１まで低下していた。
【００５６】
症例４は、慢性型として観察を開始した時のｓＩＬ−２Ｒ濃度が３４７８Ｕ／ｍＬ、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０は１８．３であった。観察開始から９２２日目に急性転化と診断されたが、この時点でのｓＩＬ−２Ｒ濃度は２０９１２Ｕ／ｍＬにまで上昇し、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０は９．１まで低下していた。
【００５７】
症例５は、慢性型として観察を開始した時のｓＩＬ−２Ｒ濃度が９０００Ｕ／ｍＬ、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０は２３．９であった。観察開始から２０２日目に急性転化と診断されたが、この時点でのｓＩＬ−２Ｒ濃度は３９９１６Ｕ／ｍＬにまで上昇し、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０は１１．５まで低下していた。
【００５８】
症例６は、慢性型として観察を開始した時のｓＩＬ−２Ｒ濃度が１０８４２Ｕ／ｍＬ、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０比は１３．０であった。観察開始から３１日目に急性転化と診断されたが、この時点でのｓＩＬ−２Ｒ濃度は１６２２８Ｕ／ｍＬにまで上昇し、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０は７．３まで低下していた。
【００５９】
これからの結果より、急性転化した６症例では、急性転化前でｓＩＬ−２Ｒ濃度が２５００Ｕ／ｍＬ以上で、急性転化した時点でのｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０が急性転化前に比べて減少しながら１０に近づいている（症例２〜６）か、又は、急性転化前でｓＩＬ−２Ｒ濃度が２５００Ｕ／ｍＬ以上で、かつ、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０が１０以下であり、急性転化した時点でのｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０が急性転化前に比べてさらに低い値に変化している（症例１）ことがわかる。従って、慢性型のＡＴＬ患者由来の試料中のｓＩＬ−２Ｒ濃度が２５００Ｕ／ｍＬ以上で、かつ、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０が時間経過とともに減少し１０に近づく場合、及び、慢性型のＡＴＬ患者由来の試料中のｓＩＬ−２Ｒ濃度が２５００Ｕ／ｍＬ以上で、かつ、ｓＩＬ−２Ｒ／ｓＣＤ３０が１０以下の場合は、当該患者は急性転化し易い、ということが分かった。
【００６０】
このように、慢性型のＡＴＬ患者由来の試料中のｓＩＬ−２Ｒ濃度とｓＣＤ３０濃度をモニターすることで、急性転化のし易さを事前に予測することでき、早期に適切な治療を開始することができる。
【産業上の利用可能性】
【００６１】
本発明により、慢性型のＡＴＬ患者における急性転化を試験する方法、及び、当該方法のためのキットが提供される。