(57)【要約】【課題】放射線による障害を防護する作用に優れた放射線障害防護剤を提供する。【解決手段】本発明の放射線障害防護剤は、オオバギ抽出物を有効成分として含有する。好ましくは、放射線による血管障害を軽減又は抑制するために用いられる。好ましくは、放射線による肝機能障害を軽減又は抑制するために用いられる。好ましくは、放射線による腎機能障害を軽減又は抑制するために用いられる。好ましくは、放射線による遺伝子の損傷を軽減又は抑制するために用いられる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
オオバギ抽出物を有効成分として含有する放射線障害防護剤。
【請求項２】
放射線による血管障害を軽減又は抑制するために用いられる請求項１に記載の放射線障害防護剤。
【請求項３】
放射線による肝機能障害を軽減又は抑制するために用いられる請求項１に記載の放射線障害防護剤。
【請求項４】
放射線による腎機能障害を軽減又は抑制するために用いられる請求項１に記載の放射線障害防護剤。
【請求項５】
放射線による遺伝子の損傷を軽減又は抑制するために用いられる請求項１に記載の放射線障害防護剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射線障害防護剤に係り、詳しくは有効成分としてオオバギ抽出物を含有する放射線障害防護剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に、我々は日常生活において自然放射線以外の人工放射線を浴びる場合がある。例えば、病院・診療所等の医療機関において放射線を用いた検査・治療を行う診療放射線技師及び原子力発電所等の核関連の施設従事者は、日常生活において一般的に浴びる自然放射線以外の人工放射線を長期間浴びることがある。また、Ｘ線を用いた医療検査の受診者又は癌等の放射線治療を受ける患者は、自然放射線よりも高いレベルの放射線を一度に受ける場合がある。さらには、原発事故、原爆等により一度に大量の放射線を浴び、被曝する可能性もある。
【０００３】
人間が一度に大量の放射線を浴び、被曝すると、まずＤＮＡが損傷することにより細胞死が起こる。そして、骨髄、消化器や呼吸器等の臓器、中枢神経、皮膚等の組織に障害が発生することにより、急性放射線症候群が生ずることが知られている。また、長期間の被曝によっても、発がん率の増加、白内障、老化促進等の慢性（晩発性）放射線障害が生ずる場合がある。
【０００４】
例えば、従来より放射線による障害を軽減又は治療するための医薬として、特許文献１に開示される放射線障害防護剤等が知られている。しかしながら、放射線障害防護剤として、実用化されている薬剤は極めて少なく、より安全性が高く、効能の優れる放射線障害防護剤が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１１−２０７８４１号公報
【特許文献２】特開２００７−３９３６５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ところで、従来よりトウダイグサ科オオバギ属に属する常緑広葉樹としてオオバギが知られている。そのオオバギ抽出物は、特許文献２に開示されるように、抗菌作用、抗酸化作用、抗癌作用等の有用な作用を有することが知られて、医薬品、飲食品等の分野において用いられてきた。
【０００７】
この発明は、本発明者らの鋭意研究の結果、オオバギ抽出物が、放射線による障害を軽減又は抑制する作用を有することを見出したことによりなされたものである。その目的とするところは、放射線による障害を防護する作用に優れた放射線障害防護剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記の目的を達成するために本発明の放射線障害防護剤は、オオバギ抽出物を有効成分として含有する。
好ましくは、放射線障害防護剤は、放射線による血管障害を軽減又は抑制するために用いられる。
【０００９】
好ましくは、放射線障害防護剤は、放射線による肝機能障害を軽減又は抑制するために用いられる。
好ましくは、放射線による腎機能障害を軽減又は抑制するために用いられる。
【００１０】
好ましくは、放射線障害防護剤は、放射線による遺伝子の損傷を軽減又は抑制するために用いられる。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の放射線障害防護剤によれば、放射線による障害を防護することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明を具体化した放射線障害防護剤の一実施形態を説明する。
オオバギ抽出物を含有する放射線障害防護剤は、原料としてオオバギ（大葉木）が用いられる。オオバギ（大葉木）は、マカランガ・タナリウス（Ｍａｃａｒａｎｇａ  ｔａｎａｒｉｕｓ）とも呼ばれる植物であって、トウダイグサ科オオバギ属に属する常緑広葉樹（雌雄異株）である。オオバギは、沖縄、台湾、中国南部、マレー半島、フィリピン、マレーシア、インドネシア、タイなどの東南アジア、オーストラリア北部などに生育している。また、オオバギは、樹木の中でも成長が極めて早く、荒廃地における成長も可能である。
【００１３】
オオバギ抽出物の原料としては、オオバギの各器官やそれらの構成成分を用いることができる。原料としては、単独の器官又は構成成分を用いてもよいし、二種以上の器官や構成成分を混合して用いてもよい。オオバギの器官やその構成成分としては、例えば果実、種子、花、根、幹、茎の先端部、葉身、及び分泌物（ワックス等）が挙げられる。また、オオバギの全体に対して各器官が占める割合を比較すると、幹、根、及び葉の占める割合は高い。このため、オオバギの葉身をオオバギ抽出物の原料として用いることは、原料確保が容易であるという観点から、工業的に好適である。
【００１４】
こうした原料は、採取したままの状態、採取後に破砕、粉砕若しくはすり潰した状態、採取・乾燥後に粉砕、破砕若しくはすり潰した状態、又は、採取後に粉砕、破砕若しくはすり潰した後に乾燥させた状態として、抽出操作を行うことができる。抽出操作を効率的に行うべく、破砕した原料を用いることが好ましい。こうした破砕には、例えばカッター、裁断機、クラッシャー等を用いることができる。また、粉砕した原料を調製する際には、例えばミル、クラッシャー、グラインダー等を用いることができる。すり潰した原料を調製する際には、ニーダー、乳鉢等を用いることができる。
【００１５】
上述した原料からオオバギ抽出物を抽出するための抽出溶媒としては、水、有機溶媒、及び同有機溶媒と水との混合溶媒を用いることができるが、オオバギに含まれる有効成分を効率的に抽出できることから、少なくとも有機溶媒を含む抽出溶媒を用いることが好ましい。上記有機溶媒としては、例えば低級アルコール、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、グリセリン、及びプロピレングリコールが挙げられる。低級アルコールとしては、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールが挙げられる。また、有機溶媒としては、単独種を用いてもよいし、複数種を混合した混合溶媒を用いてもよい。抽出溶媒として水と有機溶媒の混合溶媒を用いる場合には、混合溶媒中における有機溶媒の含有量は、好ましくは５０体積％以上、より好ましくは８０体積％以上である。なお、有機溶媒としては、低級アルコールが好ましく、エタノールがより好ましい。
【００１６】
なお、抽出溶媒中に、有機塩、無機塩、緩衝剤、乳化剤、デキストリン等を溶解させてもよい。抽出操作としては、抽出溶媒中に上記原料を所定時間浸漬させる。こうした抽出操作においては、抽出効率を高めるべく、必要に応じて攪拌操作、加温、加圧等を行ってもよい。抽出操作の後には固液分離操作が行われることで、オオバギ抽出液と原料の残渣とを分離する。こうした固液分離操作の分離法としては、例えばろ過、遠心分離等の公知の分離法を利用することができる。得られたオオバギ抽出液は、必要に応じて濃縮してもよい。
【００１７】
また、オオバギ抽出液に含まれる抽出溶媒を必要に応じて除去することにより、固体状のオオバギ抽出物を得ることができる。こうした溶媒の除去は、例えば減圧下で加熱することにより行ってもよいし、凍結乾燥により行ってもよい。
【００１８】
上記抽出処理を経て得られたオオバギ抽出物には、ニムフェオール類が主要な成分として含有されていることから、こうしたニムフェオール類が放射線による障害を防護する作用に寄与しているものと推測される。なお、ニムフェオール類としては、ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ、及びニムフェオール−Ｃか挙げられる。ニムフェオール−Ａ（ｎｙｍｐｈａｅｏｌ−Ａ）は、５，７，３´，４´−テトラヒドロキシ−６−ゲラニルフラバノン（５，７，３´，４´−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｘｙ−６−ｇｅｒａｎｙｌｆｌａｖａｎｏｎｅ）である。ニムフェオール−Ｂ（ｎｙｍｐｈａｅｏｌ−Ｂ）は、５，７，３´，４´−テトラヒドロキシ−２´−ゲラニルフラバノン（５，７，３´，４´−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｘｙ−２´−ｇｅｒａｎｙｌｆｌａｖａｎｏｎｅ）である。ニムフェオール−Ｃ（ｎｙｍｐｈａｅｏｌ−Ｃ）は、５，７，３´，４´−テトラヒドロキシ−６−（３´´´，３´´´−ジメチルアリル）−２´−ゲラニルフラバノン（５，７，３´，４´−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｘｙ−６−（３´´´，３´´´−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｌｌｙｌ）−２´−ｇｅｒａｎｙｌｆｌａｖａｎｏｎｅ）である。
【００１９】
放射線障害防護剤には、その放射線障害の防護作用を損なわない範囲でオオバギ抽出物以外の成分を含有させてもよい。オオバギ抽出物以外の成分としては、例えば賦形剤、基剤、乳化剤、安定剤、香料等が挙げられる。放射線障害防護剤は、液状であってもよいし、固体状であってもよい。剤形としては、特に限定されないが、例えば散剤、粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、液剤等が挙げられる。
【００２０】
放射線障害防護剤は、主に放射線による障害の防護、軽減、又は抑制作用を効果・効能とする医薬品、医薬部外品等の有効成分として有効量配合されることにより摂取される。また、放射線障害防護剤は、放射線防護を目的とする飲食品に有効量添加することにより摂取してもよい。放射線防護を目的とした摂取により、主に体内被曝（内部被曝）による障害の防護に対して有用である。また、放射線障害防護剤は、皮膚外用剤において、放射線防護を目的として有効量配合することにより皮膚に適用される。また、放射線障害防護剤は、化粧品において、放射線防護を目的として有効量添加することにより皮膚に適用してもよい。このような皮膚外用剤又は化粧品による放射線防護を目的とした皮膚表面への塗布は、主に皮膚表面に対する体外被曝（外部被曝）の障害の防護に対して有用である。
【００２１】
本実施形態の放射線障害防護剤を医薬品に有効量配合する場合は、服用（経口摂取）により投与する場合の他、血管内投与、経皮投与等のあらゆる投与方法を採用することが可能である。医薬品の剤形としては、特に限定されないが、例えば、散剤、粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、坐剤、液剤、注射剤等が挙げられる。また、添加剤として賦形剤、基剤、乳化剤、溶剤、安定剤等を配合してもよい。
【００２２】
本実施形態の放射線障害防護剤が飲食品に有効量添加される場合、種々の食品素材又は飲料品素材に添加することによって使用することができる。飲食品の形態としては、特に限定されず、例えば、粉末状、錠剤状、顆粒状、液状（ドリンク剤等）、カプセル状、シロップ、キャンディー等の形状が挙げられる。前記飲食品としては、具体的にはスポーツドリンク、果汁や野菜汁を含有した飲料、茶葉、ハーブなどから抽出した茶類飲料、牛乳やヨーグルト等の乳製品、ペクチンやカラギーナン等のゲル化剤含有食品、グルコース、ショ糖、果糖、乳糖やデキストリン等の糖類、香料、ステビア、アスパルテーム、糖アルコール等の甘味料、植物性油脂及び動物性油脂等の油脂等を含有する飲料品や食料品が挙げられる。また、飲食品に基材、賦形剤、添加剤、副素材、増量剤等を適宜添加してもよい。
【００２３】
この放射線障害防護剤の投与量は、放射線の強さ、用法、適用者の年齢、性別、及びその他の条件を考慮し、適宜決定される、例えば成人１日当たり上記有効成分の投与量として好ましくは０．００１〜２０００ｍｇ／ｋｇ（体重）、より好ましくは０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）である。有効成分の１日当たりの投与量が０．００１ｍｇ以上の場合には前記有効成分による放射線による障害の防護作用をより効果的に高めることができる。一方、有効成分の投与量が２０００ｍｇ以下の場合にはより経済的に摂取することができる。
【００２４】
本実施形態の放射線障害防護剤を皮膚外用剤に有効量配合する場合、皮膚外用剤の皮膚への塗布により生体へ適用される。皮膚外用剤の剤形としては、放射線障害防護剤の目的等に応じ公知の剤形を適宜採用することができる。例えば、軟膏、液剤、スプレー剤、シート剤、散剤、粉剤等の剤形が挙げられる。また、添加剤として、例えば賦形剤、基剤、安定剤等を配合してもよい。
【００２５】
本実施形態の放射線障害防護剤が化粧品に有効量添加される場合、種々の化粧品素材にオオバギ抽出物、好ましくは上記オオバギの有機溶媒抽出物を添加することにより使用される。化粧品としては、例えば化粧水、乳液、ファンデーション、フェイスパウダー、頬紅、口紅、マスカラ、アイライナー、アイシャドー、クレンジング、マニキュア、毛髪化粧料等が挙げられる。
【００２６】
次に、上記のように構成された放射線障害防護剤の作用を説明する。
本実施形態の放射線障害防護剤は、有効成分であるオオバギ抽出物により高い放射線障害防護作用を有する。一般に、人間が一度に大量の放射線を浴び、被曝すると、まずＤＮＡが損傷することにより細胞死が起こる。そして、骨髄、消化器や呼吸器等の臓器、中枢神経、皮膚等の組織に障害が発生することにより、急性放射線症候群が生ずることが知られている。また、長期間の被曝によっても、発がん率の増加、白内障、老化促進等の慢性（晩発性）放射線障害が生ずる場合がある。本実施形態の放射線障害防護剤は、特に、放射線に対する障害の中でも血管障害、肝機能障害や腎機能障害等の臓器障害、及び放射線による遺伝子の損傷に対し、優れた軽減又は抑制作用を発揮する。
【００２７】
本実施形態の放射線障害防護剤によれば、以下のような効果を得ることができる。
（１）本実施形態の放射線障害防護剤は、有効成分としてオオバギ抽出物を含有するため、優れた放射線に対する障害の防護作用を発揮する。したがって、放射線障害防護剤として、放射線に対する障害の防護作用の発揮を目的とした医薬品、医薬部外品、又は皮膚外用剤として好ましく適用することができる。また、飲食品又は化粧品等に添加することによって、好ましく適用することができる。
【００２８】
（２）本実施形態の放射線障害防護剤は、放射線に対する障害の中でも特に血管障害、肝機能障害、腎機能障害、及び放射線による遺伝子の損傷に対し、優れた軽減又は抑制作用を発揮する。したがって、それらの症状の軽減又は抑制剤として好ましく適用することができる。
【００２９】
（３）本実施形態の放射線障害防護剤は、原料として、天然素材であるオオバギが用いられる。したがって、副作用を生ずるおそれがなく、安全に各種用途に適用することができる。
【００３０】
（４）本実施形態の放射線障害防護剤は、有効成分としてオオバギ抽出物を含有するため、優れた放射線に対する障害の防護作用を発揮する。したがって、日常生活において浴びる自然放射線以外の人工放射線を長期間浴びる者、例えば病院・診療所等の医療機関において放射線を用いた検査・治療を行う診療放射線技師及び原子力発電所等の核関連の施設従事者に好ましく適用することができる。
【００３１】
また、自然放射線よりも高いレベルの放射線を一度に受ける者、例えばＸ線を用いた医療検査の受診者又は癌等の放射線治療を受ける患者に好ましく適用することができる。また、原発事故、原爆等により一度に大量の放射線を浴び、被曝した患者に好ましく適用することができる。
【００３２】
（５）本実施形態の放射線障害防護剤は、有効成分としてオオバギ抽出物を含有するため、優れた放射線に対する障害の防護作用を発揮する。したがって、急性放射線症候群又は慢性（晩発性）放射線障害に対し、好ましく適用することができる。
【００３３】
なお、上記実施形態は以下のように変更してもよい。
・上記実施形態の放射線障害防護剤は、ヒトに適用される医薬品等に使用することができるのみならず、家畜等の飼養動物に対する薬剤等に適用してもよく、また飼料等に添加することにより適用してもよい。
【００３４】
・上記実施形態の放射線障害防護剤は、放射線に対する障害の予防剤としても適用することができる。
【実施例】
【００３５】
次に、実施例及び比較例を挙げて前記実施形態を更に具体的に説明する。
＜試験例１：発育鶏卵を用いたオオバギ抽出物の放射線防護試験＞
オオバギ抽出物の放射線防護作用は、発育鶏卵を用いて評価を行った。発育鶏卵による放射線防護剤の評価法は、発育鶏卵に評価物質を投与し、Ｘ線を照射後、鶏卵の血管障害、臓器機能障害、及び遺伝子損傷の各抑制作用や致死率抑制作用を指標に評価を行うものである。発育鶏卵による放射線防護剤の評価法により、評価物質のｉｎ  ｖｉｖｏ放射線防護活性を簡便且つ迅速に評価することが可能である。
【００３６】
（１）血管障害に対する防護効果
オオバギ抽出物の放射線防護作用を評価するために、発育鶏卵（孵卵状態の受精鶏卵）を用いた漿尿膜（ＣＡＭ）法を用いた。漿尿膜法は、鶏卵の胚の成長に伴う漿尿膜上で起こる生理的な血管新生に対する阻害効果を調べる方法であるが、血管障害に対する防護効果を調べることにも有用である。
【００３７】
オオバギ抽出物としてオオバギのエタノール抽出物を用いた。オオバギのエタノール抽出物は、まずオオバギの乾燥葉を細かく刻んだ後に乳鉢ですり潰し、すり潰された乾燥葉１００ｇに対して１０００ｍＬの９９．５％エタノールを加えた後、約１週間室温（２５℃）暗所で抽出を行った。続いて、活性炭等のろ過剤を用いて固液分離による精製を行った後、抽出液を乾固することにより、オオバギのエタノール抽出物を得た。
【００３８】
試験に用いる発育鶏卵は、孵卵０日目の受精鶏卵を湿度６０％、温度３７．６℃のインキュベーターに入れ、転卵（１回／１ｈ）を行い、孵卵５日目に受精卵を７０％エタノールで消毒後、気室上方部と鶏卵側部の卵殻の２ヶ所に錐で穴をあけた。鶏卵側部の穴から卵白（４ｍＬ）を注射器で吸引除去した後、気室上方部の卵殻上の穴にシリコンスポイトをあてて吸引し、卵殻膜から卵黄のうや胚を剥離し、卵殻膜の除去を行い、ステンレス製のキャップをかぶせてインキュベート（転卵なし）を行った。
【００３９】
孵卵１５日目に、ＣＡＭ内に適量のイントラリポスを入れ写真撮影を行った。オオバギのエタノール抽出物を１０％エタノール溶液にて溶解して得た６５μｇ／２００μＬ（１０ｍｇ／ｋｇ／卵  相当量）溶液をＣＡＭに投与し、ＣＡＭの表面全体に行き渡るようにゆすった。コントロール群には、１０％エタノール溶液２００μＬを同様な操作で投与した。オオバギ抽出物及び１０％エタノール溶液を投与して６０分後に１５ＧｙのＸ線照射（Ｘ線照射装置：ＭＢＲ−１５２０Ａ−３（１５０ｋＶ））を行った。Ｘ線照射後、１時間毎に写真撮影と生死チェックを行った。生死チェックは心音計（Avitronics buddy）を用いて行った。尚、放射線を照射しなかった場合も同様に試験した。
【００４０】
この評価では、コントロール０Ｇｙ照射、オオバギ抽出物投与０Ｇｙ照射、コントロール１５Ｇｙ照射、及びオオバギ抽出物投与１５Ｇｙ照射の４系列を用い、照射前（０時間）と照射後（６時間）の血管障害の程度を数値化した。数値化には、血管新生定量ソフトウェア（AngiogenesisImageAnalyzer V.2.0.0、倉敷紡績社製）を使用し、血管の面積及び長さを測定した。各系列で３個ずつの鶏卵に対して、定量を実施し、照射前（０時間）の血管面積値を１００とした場合の相対値を求めた。結果を表１に示す。尚、データは平均±標準誤差で表した。
【００４１】
【表１】
2014125486.tif 000002
表１に示されるように、コントロールでは、照射により有意な数値低下が認められ、血管障害が確認された。一方、照射を受けたオオバギ抽出物の投与卵は、照射を受けたコントロール卵と比較して、有意に血管障害が抑制されていることが示唆された。尚、未照射区分の結果から、発育鶏卵はオオバギ抽出物の投与による影響をほとんど受けていないことが確認された。
【００４２】
（２）肝機能障害に対する防護効果
オオバギ抽出物の放射線防護作用を評価するために、肝臓機能障害指標となるＡＳＴ（Aspartate Aminotransferase）活性を測定した。ＡＳＴは肝機能障害のマーカーとして一般的に用いられており、肝機能障害が生じた場合にＡＳＴ活性の上昇が認められる。
【００４３】
肝機能障害の評価は、孵卵０日目の受精鶏卵を湿度６０％、温度３７．６℃のインキュベーターに入れ、転卵（１回／１ｈ）を行った。
孵卵１４日目に気室の位置を確認した後、受精卵を７０％エタノールで消毒し、気室上方部の卵殻に小さな穴を開け、同じ高さの鶏卵をまとめることで系列を割り振り、鶏卵重量を測定した。
【００４４】
次に、孵卵１５日目に試料を投与した。試料は、コントロールとして１０％エタノール溶液及びオオバギ抽出物溶解液（オオバギ抽出物６５μｇを２００ｍＬの１０％エタノールで溶解）を用いた。これらの試料を、前日に開けた穴から、それぞれの系列に２００μＬずつ気室内投与（オオバギ抽出物  １０ｍｇ／ｋｇ／卵  相当量）した後、オプサイトで穴を塞いだ。試料投与１時間後に、１３ＧｙのＸ線照射（Ｘ線照射装置：ＭＢＲ−１５２０Ａ−３（１５０ｋＶ））した後、鶏卵をインキュベーターに戻した。
【００４５】
Ｘ線照射２４時間後、鶏卵の太い血管をマークし、グラインダーでその周囲に切り込みを入れ、ピンセットで卵殻を除去した後、１ｍＬシリンジに針（２５Ｇ）を取り付け、穿刺して３００μＬの血液を採取した。採取した血液は、チューブ（エッペンドルフ社製）に移し、氷浴で保存した。照射４８時間後、７２時間後も同様の操作で採血を行った。採取した血液は３０分放置した後、チューブを４℃、３０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し、血清を新しいチューブ（エッペンドルフ社製）に分離回収して−８０℃で保存した。
【００４６】
上記の操作で得られた各血液試料を用いて肝臓に対する影響を測定した。肝機能の調査には、BioVision社のAspartate Aminotransferase（AST or SGOT）Activity Assay Kitを使用し、ＡＳＴ活性（ｍＵ／ｍＬ）を求めた。コントロール群でＡＳＴ活性の有意な上昇が認められた照射７２時間後の結果を表２に示す。尚、測定は、３回行い、データは平均±標準偏差で表した。
【００４７】
【表２】
2014125486.tif 000003
表２に示されるように、照射によりコントロールのＡＳＴ活性が、有意に上昇していることが確認された。一方、オオバギ抽出物を投与した場合、照射区分のＡＳＴ活性はコントロールと比較して低く、上昇抑制されていることが確認された。従って、投与されたオオバギ抽出物が、放射線による障害から肝機能を防護している可能性が示唆された。尚、オオバギ抽出物を投与した未照射区分では、コントロールと比較してＡＳＴ活性に大きな変化は認められなかった。
【００４８】
（３）腎機能障害に対する防護効果
オオバギ抽出物の放射線防護作用を評価するために、腎機能障害の指標となる血中クレアチニン濃度（ｍｇ／ｄＬ）を測定した。クレアチニンは腎能障害のマーカーとして一般的に用いられており、腎機能障害が生じた場合は血中のクレアチニン濃度が上昇することが知られている。
【００４９】
腎機能評価に用いた血液は、上記（２）欄に記載の方法で採取した血液を用いた。また同様な方法で、孵卵１５日目に投与する試料において、アミフォスチン溶液（アミフォスチン１．８ｍｇを２００μＬの１０％エタノールで溶解）を用いた陽性コントロールを設けた（アミフォスチン  ３０ｍｇ／ｋｇ／卵  相当量）。測定はクレアチニン分析キット（血液用）（Cayman Chemical Company社製）を用いて行った。コントロール群で血中クレアチニン濃度の上昇が認められた照射７２時間後の結果を表３に示す。尚、測定は、３回行い、データは平均値で表した。
【００５０】
【表３】
2014125486.tif 000004
表３に示されるように、照射によりコントロール群の血中クレアチニン濃度の上昇が確認され、アミフォスチン及びオオバギ抽出物を投与した場合、血中クレアチニン濃度の上昇がコントロールと比較して低く抑えられていることが確認された。従って、投与されたオオバギ抽出物は、陽性コントロールのアミフォスチンと同様に、放射線による障害から腎機能を防護している可能性が示唆された。
【００５１】
（４）遺伝子の損傷に対する防護効果
オオバギ抽出物の放射線防護作用を評価するために、発育鶏卵を用いた遺伝子損傷を測定した。遺伝子損傷程度は、8-OH-dG（８−ヒドロキシ−２−デオキシグアノシン）を測定することにより行った。放射線によって生じた酸化ストレスによってＤＮＡ中の２’−デオキシグアノシンの８位が酸化され8-OH-dGが生成する。よって、血中の8-OH-dGを定量することで、生体内でどの程度遺伝子が損傷しているのかを判断することができる。
【００５２】
評価に用いた血液は、上記（２）欄に記載の方法で採取した血液を用いた。また同様な方法で、孵卵１５日目に投与する試料において、アミフォスチン溶液（アミフォスチン１．８ｍｇを２００μＬの１０％エタノールで溶解）を用いた陽性コントロールを設けた（アミフォスチン  ３０ｍｇ／ｋｇ／卵  相当量）。測定は、Cayman Chemical Companyの8-hydroxy-2-deoxy Guanosine EIA Kitを使用し、8-OH-dGをＢ／Ｂ0値として求めた。照射後４８時間後の結果を表４に示す。Ｂ／Ｂ0値が低いほど遺伝子が損傷していることを示す。尚、測定は、３回行い、データは平均値で表した。
【００５３】
【表４】
2014125486.tif 000005
表４に示されるように、照射４８時間後で、コントロールはＢ／Ｂ0値の低下が確認された。一方、アミフォスチン及びオオバギ抽出物区分のＢ／Ｂ0値はコントロールと比較して高いことが確認された。従って、アミフォスチンと同様、オオバギ抽出物の投与により、放射線による遺伝子の損傷を防護している可能性が示唆された。尚、アミフォスチン及びオオバギ抽出物を投与した未照射区分では、コントロールと比較してＢ／Ｂ0値に大きな変化は認められなかった。
【００５４】
（５）放射線防護作用効果
オオバギ抽出物の放射線防護作用を評価するために、Ｘ線照射後の発育鶏卵の生存率を測定した。まず、発育鶏卵（後藤孵卵場、白色レグホーン）を湿度６０％、温度３７．６℃のインキュベーターに入れ転卵（１回／１ｈ）を行った。
【００５５】
孵卵１４日目に発育鶏卵の重量測定を行い、各系列の平均重量が同じになるように振り分けを行い、孵卵１５日目に７０％エタノールで消毒後、気室上方部に錐で穴を開け、オオバギのエタノール抽出物を１０％エタノール溶液にて溶解して得た６５μｇ／２００μＬ（１０ｍｇ／ｋｇ／卵  相当量）溶液を気室内投与し、オプサイトで添加穴を塞いだ。投与６０分後に１５ＧｙのＸ線照射を行った。Ｘ線照射はＸ線照射装置：ＭＢＲ−１５２０Ａ−３（１５０ｋＶ）にて行った。また、コントロールとして、１０％エタノール溶液２００μＬを同様な操作で投与した。
【００５６】
孵卵１６〜１９日目の間、Ｘ線を照射してから２４時間毎に目視又は心音計（Avitronics buddy）を用いて鶏卵の生死チェックを行った。カウントした死亡卵数より全卵数に対する生存率を求めた。結果を表５に示す。
【００５７】
【表５】
2014125486.tif 000006
表５に示されるように、オオバギ抽出物により、鶏卵の致死率が大幅に低下することが確認された。オオバギ抽出物は放射線照射に対して有意な致死抑制効果を示した。尚、オオバギ抽出物を投与した未照射の鶏卵では、コントロールと比較して生存率に大きな変化は認められなかった。
【００５８】
＜参考試験例１：発育鶏卵の放射線照射によって生じる血中の酸化障害の測定＞
発育鶏卵の放射線照射によって生じる血中の酸化障害を測定した。まず、発育鶏卵（後藤孵卵場、白色レグホーン）を湿度６０％、温度３７．６℃のインキュベーターに入れ転卵（１回／１ｈ）を行い、孵卵１５日目に７０％エタノールで消毒後、気室上方部に錐で穴を開け、精製水２００μＬを気室内投与し、投与６０分後に１２ＧｙのＸ線照射を行った。Ｘ線照射はＸ線照射装置：ＭＢＲ−１５２０Ａ−３（１５０ｋＶ）にて行った。
【００５９】
孵卵１６〜１９日目にＸ線照射後２４時間毎に血液を採取し、ＴＢＡＲＳアッセイにて脂質過酸化を測定した。また、ＤＮＰＨアッセイにてカルボニル化タンパクを測定した。血液の採取は、卵殻下の漿尿膜に存在しているできるだけ太い血管の周囲をマークし、７０％エタノール綿で卵殻を消毒後、グラインダーでマークに沿って切り込みを入れ、ピンセットで卵殻を除去した後、１ｍＬシリンジに針（２５Ｇ）を取り付け穿刺し４００μＬの血液を採取した。
【００６０】
（ＴＢＡＲＳアッセイ法）
採取した血液を氷上で３０分保存後、３０００ｒｐｍ・４℃・１０分で遠心して血漿を得た。その血漿１００μＬに１／１２ＮのＨ２ＳＯ４を４ｍＬ、１０％リンタングステン酸５００μＬを加えてボルテックスで混合し、上記同条件にて遠心した。上清を捨て、得られた沈殿に１／１２ＮのＨ２ＳＯ４を２ｍＬ、１０％リンタングステン酸３００μＬを加えてボルテックスで混合し、上記同条件にて遠心した。遠心後、上清を捨て沈殿を得た。沈殿に１％リン酸溶液１ｍＬ、ＴＢＡ液１ｍＬを加え、１００℃で３０分処理後、氷上で１０分保存した。ブタノール１ｍＬを加えてボルテックスで混合し、上記同条件にて遠心した。ブタノール層を石英セルに移し、波長５３２ｎｍの吸光度を測定した。ランベルト・ベールの式を用いてＴＢＡＲＳ量を求めた。結果を表６に示す。尚、データは平均±標準誤差で表した。
【００６１】
【表６】
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表６に示されるように、発育鶏卵の致死が生じない１２Ｇｙの放射線照射後２４時間毎に血漿を単離し脂質過酸化物量を測定した結果、いずれの時間においても１２ＧｙのＸ線照射によるＴＢＡＲＳ値の増加は見られなかった。よって、放射線照射による血中脂質過酸化反応は生じていないことが示唆された。
【００６２】
（ＤＮＰＨアッセイ法）
上記血液より得られた血漿を、１００μｇ／１００μＬになるように調製し、その０．５ｍＬと１０ｍＭのＤＮＰＨ０．５ｍＬをチューブに入れ、暗所で混合した。その混合溶液を入れたチューブを暗所に置き１０分毎に２〜３秒のボルテックス操作を１時間行った。３０％ＴＣＡを８００μＬ加え、ボルテックス後、４０００×ｇ（７０００ｒｐｍ）、４℃、１０分で遠心分離した。上澄み液をデカントで捨て、沈殿物に１ｍＬの溶媒（エタノール：酢酸エチル＝１：１）加え、上記と同条件にて遠心分離を行い３回洗浄した。デカントで上澄みを除去後、得られた沈殿物にグアニジン溶液（２０ｍＭのリン酸二水素カリウム、６Ｍグアニジン塩酸塩（ｐＨ２．３））を１ｍＬ加え、沈殿物を溶解させ３７０ｎｍで測定した。ランベルト・ベールの式を用いてＤＮＰＨ量を求めた。結果を表７に示す。尚、データは平均±標準誤差で表した。
【００６３】
【表７】
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表７に示されるように、いずれの時間においても１２ＧｙのＸ線照射によるＤＮＰＨ値の有意な増加は見られなかった。よって、放射線照射によるカルボニル化タンパク質は生成していないことが示唆された。
【００６４】
以上の試験結果より、オオバギ抽出物を用いた放射線防護活性の試験結果より、オオバギ抽出物によって、血管障害、肝機能障害、腎機能障害、遺伝子の損傷、及び鶏卵致死を有意に抑制することが明らかとなった。したがって、オオバギ成分が血管内皮に局在して放射線照射によって生じる活性酸素種を抑制するのみならず、異なるメカニズムにおいても血管内皮細胞の細胞死を抑制していることが考えられる。
【００６５】
次に、上記実施形態及び別例から把握できる技術的思想について、それらの効果とともに以下に追記する。
（ａ）前記オオバギ抽出物はエタノール又はエタノール／水抽出物である前記放射線障害防護剤。従って、この（ａ）に記載の発明によれば、放射線による障害を防護する作用をより向上させることができる。
【００６６】
（ｂ）急性放射線症候群又は慢性（晩発性）放射線障害に対して適用される前記放射線障害防護剤。従って、この（ｂ）に記載の発明によれば、放射線による障害を防護する作用をより有効に発揮することができる。