(57)【要約】      （修正有）【課題】血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ）発現に関係する疾病を診断するための新規化合物、その調製方法、及び医療用イメージングにおけるその使用の提供。【解決手段】Ｓｉｇｎａｌ−Ｌｉｎｋ−Ｐｅｐｔｉｄｅであって、ＶＣＡＭ標的ペプチドを含むペプチドであり、前記ＶＣＡＭ標的ペプチドは、以下のペプチド：ａ）Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９、好ましくは、ペプチドＮＮＳＫＳＨＴというペプチド；又は、ｂ）Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８、好ましくは、ペプチドＣＭＫＴＤＴＲＬＣ、及びその機能的等価物から選択される化合物、及び化合物ａ）又はｂ）の薬学的に許容される塩。更に、Ｓｉｇｎａｌが、常磁性金属、放射性核種にカップリングされていてもいなくてもよいキレート、ＰＥＴイメージング用の放射性核種がＧａ６８である化合物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｓｉｇｎａｌ−Ｌｉｎｋｅｒ−Ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｉ）
という一般式（Ｉ）の化合物であって、
式中、
−  Ｓｉｇｎａｌはシグナル実体を表わし；
−  存在していてもいなくてもよいＬｉｎｋｅｒが化学的結合を表わし、
−  Ｐｅｐｔｉｄｅが、ＶＣＡＭ標的ペプチドを含むペプチドを表わし、このＶＣＡＭ標的ペプチドは、
ａ）  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９（１）（配列番号１）
［ここで式中、
−  Ｘ１は不在であるか、またはシステインおよびメチオニンから選択され、
−  Ｘ２はアスパラギンおよびグルタミンから選択され、
−  Ｘ３はアスパラギンおよびグルタミンから選択され、
−  Ｘ４はセリンおよびトレオニンから選択され、
−  Ｘ５はリジン、アルギニン、ヒスチジン、およびオルニチンから選択され、
−  Ｘ６はセリンおよびトレオニンから選択され、
−  Ｘ７はヒスチジン、アルギニンおよびリジンから選択され、
−  Ｘ８はトレオニンおよびセリンから選択され、
−  Ｘ９は不在であるかまたはシステインおよびメチオニンから選択される］
好ましくは、ペプチドＣＮＮＳＫＳＨＴＣ（配列番号２）およびペプチドＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）、ただしＫＩＡＡ０１３７タンパク質およびＨＰＩＶ−３タンパク質は除く；
ｂ）  Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８（２）（配列番号４）、
［なおここで、
−  Ｘ１０はシステインおよびメチオニンから選択され、
−  Ｘ１１は、メチオニンおよびシステインから選択され、
−  Ｘ１２は、リジン、アルギニンおよびアラニンから選択され、
−  Ｘ１３はトレオニンおよびセリンから選択され、
−  Ｘ１４はアスパラギン酸およびグルタミン酸から選択され、
−  Ｘ１５はトレオニンおよびセリンから選択され、
−  Ｘ１６はアルギニン、アラニンおよびリジンから選択され、
−  Ｘ１７はロイシン、イソロイシンおよびバリンから選択され、
−  Ｘ１８は、システインおよびメチオニンから選択される］
好ましくは、ペプチドＣＭＫＴＤＴＲＬＣ（配列番号５）；
という式のペプチドから選択される、
化合物、およびａ）またはｂ）のこれらの化合物の薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｐが式ＣＮＮＳＫＳＨＴＣ（配列番号２）またはＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）のペプチドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｓｉｇｎａｌが、常磁性金属Ｍにカップリングされていてもいなくてもよいキレートであり、Ｍが有利にはＧｄ、Ｍｎ、Ｆｅ、ＤｙおよびＴｍから選択される、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｓｉｇｎａｌが、放射性核種にカップリングされていてもいなくてもよいキレートである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５】
ＰＥＴイメージング用の放射性核種がＧａ６８である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
キレートがＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＯ３Ａ、ＨＰＤＯ３Ａ、ＴＲＩＴＡ、ＴＥＴＡ、ＢＯＰＴＡ、ＮＯＴＡ、ＰＣＴＡ、ＤＯＴＭＡ、ＡＡＺＴＡ、ＨＯＰＯおよびその誘導体から選択される、請求項３〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｌｉｎｋｅｒが、
ａ）  Ｑ１−ｌ−Ｑ２という式の基、
［なお式中、同一であっても異なっていてもよいＱ１およびＱ２は、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＯ２、−ＮＨＣＯ、ＣＯＮＨ、ＮＨＣＯＮＨ、ＮＨＣＳＮＨ、ＳＯ２ＮＨ−またはＮＨＳＯ２−を表わし、ｌは、アルキル基、アルコキシアルキル基、ポリアルコキシアルキレン基、アルケニル基、アルキニル基、１つ以上のスクアレート、１つ以上のアリール、有利にはフェニルまたは−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＮＨ（ＣＯ）−、−（ＣＯ）ＮＨ−、−Ｏ（ＣＯ）−または−（ＯＣ）Ｏ−から選択された１つ以上の基で中断されたアルキル基を表わす］
ｂ）  式中、ｎ＝２〜１０である（ＣＨ２）ｎ、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨ−ＣＯ−基、式中、ｑ＝１〜１０かつｒ＝２〜１０である（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｑ（ＣＨ２）ｒ−ＣＯ−、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｑ（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−ＣＯ−基、式中、ｎ＝１〜５で有利にはｎ＝４または５である（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨ−、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨ−ＰＥＧ、（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−、
【化１】
2014114318.tif 000022
基、ＨＯＯＣ−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ；ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）２−ＣＯ２−（ＣＨ２）２−ＯＣＯ−（ＣＨ２）２−ＣＯＯＨ；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＯＯＨ基、式中、ｎ＝１〜２０であるＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ；ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２基；式中、ｎ＝１〜１０であるＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｈ；またはＮＨ２−ＣＨ２−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｈ基、
を表わしている、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｓｉｇｎａｌが、好ましくは酸化鉄コアを有する、有機層でコーティングされた超常磁性ナノ粒子を表わしている、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項９】
有機層がｇｅｍ−ビスホスホネート層である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｓｉｇｎａｌが光学的イメージングのための標識を表わしている、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｓｉｇｎａｌが少なくとも１つのキレート、有利には請求項６に記載のキレートを含む脂質ナノ粒子を表わしている、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の一般構造式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む、有利には非経口投与向けの医療用イメージングのための組成物。
【請求項１３】
薬学的に許容される賦形剤を含む注射用媒質に対して請求項１〜１１のいずれか一項に記載の一般構造式（Ｉ）の化合物を添加することを含む、請求項１２に記載の組成物の調製方法。
【請求項１４】
心血管疾患および／または虚血性発作の危険性を診断するための組成物の調製を目的とする、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物（Ｉ）の使用。
【請求項１５】
心血管疾患が、アテローマプラーク、有利には脆弱性プラークに付随する疾患そして冠動脈疾患から選択される、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
虚血性発作の危険性が、心筋梗塞、脳卒中、腎塞栓症、急性虚血肢および大動脈瘤破裂から選択される、請求項１４に記載の使用。
【請求項１７】
心血管疾患および／または虚血性発作の危険性の治療的処置の監視に使用するための診断用組成物の調製を目的とする、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物（Ｉ）の使用。
【請求項１８】
必要に応じて、心血管疾患用の別の治療的または予防的処置と組み合わせた形での心血管疾患の治療的または予防的処置において使用するための薬剤の調製を目的とする、請求項１に記載のＰｅｐｔｉｄｅの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＶＣＡＭ発現に関係する疾病を診断するための新規化合物、その調製方法、および医療用イメージングにおけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＶＣＡＭ−１（血管細胞接着分子−１）は、心血管病態における関心対象の、特に診断的関心対象の免疫グロブリンである。これは、ＶＣＡＭ−１が、アテローム性となる素因を有する領域のためのマーカーであるからである。ＶＣＡＭ−１は、活性化された内皮細胞上で高度に過剰発現される。ＩＣＡＭ−１、２および３といったようなその他の接着分子と同様に、ＶＣＡＭ−１は、アテローム性動脈硬化の間の内皮細胞に対する白血球の接着に関与している。いくつかの生体内モデルが記載されてきた。進行したアテローム性動脈硬化領域内では、ＶＣＡＭ−１の発現は、プラークをキャッピングする内皮細胞上で陽性である。ＶＣＡＭ−１は同様に、病巣近くの内皮細胞上にも存在し、内膜内の平滑筋細胞レベルで極めて豊富である。
【０００３】
ヒトにおいては、ヒトアテローム硬化性大動脈および大腿動脈内のＶＣＡＭ−１の発現は、以下のような形で記述されてきた：
正常な外観を有する、すなわち内皮レベルでの発現が弱い動脈；
マクロファージ浸潤の無い、新生内膜の肥厚化、すなわちＶＣＡＭ−１のわずかな内皮増加を伴う動脈；
「成熟」マクロファージを含む、すなわち先行状況と比べて発現が倍増している発達した病巣；
最近のマクロファージ浸潤を含む、すなわち、著しく高く免疫標識し、内皮領域のより大きな部分を網羅する、発達した病巣。
【０００４】
冠動脈のレベルでは、ＶＣＡＭ−１はプラークの内皮上でのみ発現され、健康な壁のレベルでは発現されない。
【０００５】
腫瘍学の分野では、ＶＣＡＭは、α４β１インテグリンを介して活性化される内皮細胞に対するリンパ球、単球および好酸球の接着に参与する。それは、慢性潰瘍性大腸炎またはクローン病といったような病態において強く発現される。ＩＣＡＭ−１と同様、それは、癌の周辺で過剰発現されると考えられており、転移プロセスに参与する可能性がある。
【０００６】
当業者に公知のイメージング方法、特にＭＲＩ、Ｘ線、ガンマ線シンチグラフィ、ＣＴスキャン、超音波、ＰＥＴおよび光学的イメージングのために意図された新規で非常に特異的なマーカーを用いた心血管疾患および癌性疾患の生体内診断の質を向上させるための試みが継続的に行なわれている。ＭＲＩの場合、水プロトンの緩和能に対して効果を有する常磁性または超常磁性金属を含有する造影剤の投与を通して、造影が得られるということが喚起される。シンチグラフィの場合には、ガンマまたはベータ線を放射する放射性医薬品化合物の特異的局在化によって、造影が得られる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
使用が複雑な放射性元素を使用しないで済むように特にＭＲＩ用として、化学的合成が過度に複雑でなく、医療用イメージングで使用するため生体内で充分に安定しており、かつその原価が過度に高くない化合物が求められている。
【０００８】
本出願人は、生体外のみならず特にＭＲＩにおいて生体内でも有効であるＶＣＡＭ領域ターゲティング部分を含む化合物を獲得することに成功した。かかる化合物は、事実、生体外で有効であるバイオベクターを同定するだけでなく、人体臨床診断用イメージングにおいて有効な化合物を得ることも必要であることから、確保が困難である。これは特にＭＲＩの場合に該当するが、それはＭＲＩが放射能を使用しないことから極めて望ましい技術として認知されてはいるものの、核医学のものに比べ感度がはるかに低いからである。
【０００９】
得られた化合物は、同時に、その標的を認識するのに充分な親和力、病理学的状態を識別し得るインジケータとなるための高い特異性、および生体内で分解または修飾されないように適切な安定性を有し；しかもシグナル部分が介入してこれらのさまざまなパラメータ（特に親和力および安定性）を損なうことのないものでなくてはならない。
【００１０】
数多くの試みの後、本出願人は、有効な化合物を獲得することに成功した。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
かくして、本発明は、
Ｓｉｇｎａｌ−Ｌｉｎｋｅｒ−Ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｉ）
という一般式（Ｉ）の化合物であって、
式中、
−  Ｓｉｇｎａｌはシグナル実体を表わし；
−  存在していてもいなくてもよいＬｉｎｋｅｒが化学的結合を表わし、
−  Ｐｅｐｔｉｄｅが、ＶＣＡＭ標的ペプチドを含むペプチドを表わし、このＶＣＡＭ標的ペプチドは、
ａ）  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９（１）（配列番号１）
［式中、
−  Ｘ１は不在であるか、またはシステインおよびメチオニンから選択され、
−  Ｘ２はアスパラギンおよびグルタミンから選択され、
−  Ｘ３はアスパラギンおよびグルタミンから選択され、
−  Ｘ４はセリンおよびトレオニンから選択され、
−  Ｘ５はリジン、アルギニン、ヒスチジン、およびオルニチンから選択され、
−  Ｘ６はセリンおよびトレオニンから選択され、
−  Ｘ７はヒスチジン、アルギニンおよびリジンから選択され、
−  Ｘ８はトレオニンおよびセリンから選択され、
−  Ｘ９は不在であるかまたはシステインおよびメチオニンから選択される］
好ましくは、ペプチドＣＮＮＳＫＳＨＴＣ（配列番号２）（Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ）およびペプチドＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）；
ｂ）  Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８（２）（配列番号４）、
［なおここで、
−  Ｘ１０はシステインおよびメチオニンから選択され、
−  Ｘ１１は、メチオニンおよびシステインから選択され、
−  Ｘ１２は、リジン、アルギニンおよびアラニンから選択され、
−  Ｘ１３はトレオニンおよびセリンから選択され、
−  Ｘ１４はアスパラギン酸およびグルタミン酸から選択され、
−  Ｘ１５はトレオニンおよびセリンから選択され、
−  Ｘ１６はアルギニン、アラニンおよびリジンから選択され、
−  Ｘ１７はロイシン、イソロイシンおよびバリンから選択され、
−  Ｘ１８は、システインおよびメチオニンから選択される］
好ましくは、ペプチドＣＭＫＴＤＴＲＬＣ（配列番号５）（Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ）；
という式のペプチドおよびその機能的等価物から選択される、
化合物、およびａ）またはｂ）のこれらの化合物の薬学的に許容される塩に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】ＶＣＡＭ−１についてのＫｄ＊（見かけの解離定数）値の計算を例示する。
【図２】ペプチドＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）の親和力の測定値を示す（阻害定数−５０またはＩＣ５０を評価）。
【図３】ＤＯＴＡ−ＮＮＳＫＳＨＴ製品のＭＲＩにおける増強を例示する。
【図４】ＤＯＴＡ−ＮＮＳＫＳＨＴ製品のＭＲＩにおける増強を例示する。
【図５】ＤＯＴＡ−ＮＮＳＫＳＨＴ製品を用いて得られたＡｐｏＥ／ｃマウス上のＭＲＩ画像を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
「ＶＣＡＭ標的ペプチド」という表現は、この出願中ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥとも記されている。有利には、ペプチドは、ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥを表わす。
【００１４】
有利には、本発明に係るＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥは、多くとも２０個のアミノ酸、有利には多くとも１５個のアミノ酸、有利には多くとも１０個のアミノ酸を含む。
【００１５】
有利には、ＫＩＡＡ０１３７タンパク質およびＨＰＩＶ−３タンパク質は、特にＳｉｇｎａｌが蛍光分子などの光学的イメージング用の標識である場合に、本発明に係るＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥから除外される。ＫＩＡＡ０１３７タンパク質は、特に、国際公開第０３／０３８１３０号パンフレット中で記述されており、ＨＰＩＶ−３タンパク質は特に、米国特許第６，１１０，４５７号明細書中に記載されている。
【００１６】
「Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＣＮＮＳＫＳＨＴＣ（配列番号２）、ＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）およびその機能的等価物」という表現は、本出願人がその有効性を実証したペプチドＣＮＮＳＫＳＨＴＣ（配列番号２）、ペプチドＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）、およびひとたび化合物（Ｉ）中に含み入れられた時点でＣＮＮＳＫＳＨＴＣ（配列番号２）（これはペプチドミメティックスを含む）と類似のまたはそれ以上のイメージング有効性を示し、この有効性が出願中に詳述されている生体内試験およびモデルまたは適切な類似のモデルを用いてテストされるＸ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９（１）（配列番号１）という式の誘導ペプチド、を意味するように意図されている。研究対象のペプチドＣＮＮＳＫＳＨＴＣ（配列番号２）は、環状ペプチドであり、出願中で詳細に例示される。
【００１７】
同様に、「ＣＭＫＴＤＴＲＬＣ（配列番号５）およびその機能的等価物」という表現は、本出願人がその有効性を実証したペプチドＣＭＫＴＤＴＲＬＣ（配列番号５）およびＸ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８（２）（配列番号４）という式の有効な誘導ペプチドを意味するように意図されている。研究対象のペプチドＣＭＫＴＤＴＲＬＣ（配列番号５）は環状ペプチドであり、出願中で詳細に例示される。
【００１８】
特に、ペプチドＣＮＮＳＫＳＨＴＣ（配列番号２）およびＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）の誘導体としては、少なくとも１つのアミノ酸の付加、欠失、置換または修飾によって、配列を構成するＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）が修飾されているペプチドまたは化合物が含まれる。
【００１９】
置換は、保存的置換または非保存的置換であってよい。置換は、１つのアミノ酸が、類似の特性（例えば極性、水素結合ポテンシャル、酸性度、塩基性度、疎水性、芳香族基の存在など）を有するアミノ酸で置換される場合に保存的である。天然アミノ酸は、非天然アミノ酸、例えばＤ立体配置のアミノ酸、ベータアミノ酸またはガンマアミノ酸と交換可能である。ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥは例えば、有効な化合物（Ｉ）を選択するべく、米国特許出願公開第２００５１００９６３号明細書（ＫＤＲレセプタを標的とするペプチドの場合、第２０〜２１欄、段落［５２９］〜［５４１］）などでの、先行技術において記載されている適切な方法論を用いて修飾される。
【００２０】
ＣＮＮＳＫＳＨＴＣ（配列番号２）およびＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）の場合、
−  Ｎ、アスパラギンを、アミド鎖を担持する別のアミノ酸、特にグルタミン、または置換誘導体例えばアルキル置換誘導体と交換することができ；
−  Ｓ、セリンを、ヒドロキシル基を担持する別のアミノ酸、例えばトレオニンまたはホモセリンと交換することができ；
−  Ｋ、リジンを、その他の二塩基性アミノ酸（アルギニン、ヒスチジン、オルチニン）または、例えばＣ１〜Ｃ１０アルキルで置換されたリジンまたはこれらのその他のアミノ酸の誘導体と交換でき；
−  Ｈ、ヒスチジンを、その他の塩基性親水性アミノ酸特にアルギニンまたはリジンと交換でき；
−  Ｔ、トレオニンを、セリンと交換できる。
【００２１】
ＮＮＳＫＳＨＴ配列（配列番号３）は、１つ以上のアミド結合を、生体内での安定性の増加を付与する、例えばタンパク質分解に対する耐性の増大を付与する結合で交換することによって修飾され得る。
【００２２】
「少なくとも１つのＶＣＡＭ標的ペプチドを含むペプチド」という表現は、イメージングにおけるこの配列の有効性と干渉しない化学的基によってＮおよび／またはＣ末端に任意にフランキングしている、生物学的標的の認識のためにこのペプチド配列を示すペプチドを意味するように意図されている。
【００２３】
「Ｓｉｇｎａｌ」または「シグナル実体」という用語は、特に
−  常磁性金属にカップリングされ得るキレート、
−  金属ナノ粒子、特に酸化鉄の超常磁性ナノ粒子、
−  常磁性金属にカップリングされ得る少なくとも１つのキレートを担持する、有利にはエマルジョンの形をした脂質ナノ粒子（この場合、ペプチドは、それ自体キレートを担持する、エマルジョン中の脂質ナノ粒子にグラフトされ；脂質ナノ粒子に対するペプチドの結合は、化学的連結基を用いて実施される）、
といった医療用イメージングにおいて信号を得ることを可能にする化学的実体を意味するように意図されている。
【００２４】
１つの実施形態にしたがうと、シグナル実体は、少なくとも１つのキレートＣｈを（金属Ｍを錯化する形態で）含む。有利には、キレートは金属Ｍにカップリングされる。有利には、金属Ｍは、常磁性金属イオンまたは放射性核種である。キレートおよび金属Ｍにより形成される錯体は、生理学的条件下で安定しているため体内での金属Ｍの望ましくない放出が回避される。有利には、キレートまたはシグナル実体は、Ｌｉｎｋｅｒに対してかまたは直接Ｐｅｐｔｉｄｅに対してシグナル実体を連結させるための少なくとも１つの官能基を含んでいる。本発明は同様に、キレートが金属と錯化されていない式（Ｉ）の化合物にも関する。
【００２５】
有利には、Ｃｈは、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡジエチレントリアミノペンタ酢酸、Ｎ−［２−［ビス（カルボキシメチル）アミノ］−３−（４−エトキシフェニル）プロピル］−Ｎ−［２−［ビス（カルボキシメチル）アミノ］エチル］−Ｌ−グリシン（ＥＯＢ−ＤＴＰＡ）、ＤＴＰＡのモノアミドまたはビスアミド誘導体、例えばＮ，Ｎ−ビス［２−［カルボキシメチル［（メチルカルバモイル）メチル］アミノ］エチル］グリシン（ＤＴＰＡ−ＢＭＡ）、または４−カルボキシ−５，８，１１−トリス（カルボキシメチル）−１−フェニル−２−オキサ−５，８，１１−トリアザトリデカン−１３−オイン酸（ＢＯＰＴＡ）から選択される直鎖キレートである。
【００２６】
有利には、Ｃｈは１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリ酢酸（ＤＯ３Ａ）、１０−）２−ヒドロキシプロピル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリ酢酸（ＨＰＤＯ３Ａ）、２−メチル−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸（ＭＣＴＡ）、（アルファ、アルファ’、アルファ’’、アルファ’’’）−テトラメチル−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸（ＤＯＴＭＡ）、３，６，９，１５−テトラアザビシクロ［９．３．１］ペンタデカ−１（１５），１１，１３−トリエン−３，６，９−トリ酢酸（ＰＣＴＡ）、１，４，７−トリアザシクロノナン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ４４−トリ酢酸（ＮＯＴＡ）、ＡＡＺＴＡ（特に国際公開第２００６／００２７３号パンフレット、式ＩＩＩ、１２０頁および米国特許出願公開第２００６／００１１８８３０号明細書、２および８９頁に記述されている）、ＴＥＴＡ、ＴＥＴＭＡ、ＰＤＴＡ、およびそれらのベンゾ誘導体、ＬＩＣＡＭ、ＭＥＣＡＭおよびＨＯＰＯ（独国特許第１０２００４０６２２５８号明細書）から選択される大環状キレートである。
【００２７】
Ｃｈは同時に、１つ以上のカルボン酸基が対応する塩、エステルまたはアミドの形をしているこれらの化合物の誘導体；または１つ以上のカルボン酸基がホスホンおよび／またはホスフィン基と交換されている対応する化合物であってもよい。
【００２８】
同様に、ＤＯＴＡガドフルオリン類、ＤＯ３Ａ、ＨＰＤＯ３Ａ、ＴＥＴＡ、ＴＲＩＴＡ、ＨＥＴＡ、ＤＯＴＡ−ＮＨＳ、Ｍ４ＤＯＴＡ、Ｍ４ＤＯ３Ａ、ＰＣＴＡおよびそれらの誘導体から選択された、有利にはＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＯ３Ａ、ＨＰＤＯ３Ａ、ＴＲＩＴＡ、ＴＥＴＡ、ＢＯＰＴＡ、ＮＯＴＡ、ＰＣＴＡ、ＤＯＴＭＡ、ＡＡＺＴＡ、ＨＯＰＯおよびそれらの誘導体から選択されたキレートを使用してもよい。
【００２９】
より広範には、シグナル実体を形成する１つまたは複数のキレートは国際公開第０１／６０４１６号パンフレットの以下の式に対応していてよい：
【化１】
2014114318.tif 000002
【００３０】
特に、化合物ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、ＤＯ３Ａおよび誘導体を使用してもよい。特に以下の式を有する国際公開第０３／０１１１１５号パンフレットの中で喚起されているキレートにも言及しておく：
【化２】
2014114318.tif 000003
なお、式中、Ｘは、Ｒが脂肪族鎖でありＹが化学的リンカーであるものとして、好ましくはＯ−、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＰＯ３−またはＮＨＲである金属カチオンを配位することのできる基である。
【００３１】
特に、
【化３】
2014114318.tif 000004
という式を有する欧州特許第６６１２７９号明細書（米国特許第５９１９４３２号明細書）に記載されている本出願人のＰ７３０という名称のキレート、ならびに特に米国特許第６４４０９５６号明細書中で本出願人により記載されているＰＣＴＡ主鎖を伴うキレートを、これらのキレートまたはその中間体が親水性鎖特に短または長アミノアルコール鎖を担持しているか否かに関わらず、使用してよい。
【化４】
2014114318.tif 000005
［ここで、上述のキレートのＸ１〜Ｘ４およびＫ１〜Ｋ１６は、ＨまたはＣ１−Ｃ２０鎖を表わし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は独立して−ＣＯＯＨまたは−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２を表わし、かつ直接またはリンカーを用いてＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥにカップリングされ得る少なくとも１つの官能基をキレートが含むような形で選択されている］
【００３２】
同様に、米国特許出願公開第２００６／００１８８３０号明細書、明細書段落［０１５０］〜［０１５８］の９〜１１頁のキレートについても言及される。
【００３３】
有利には、本発明に関しては、ＣｈはＤＴＰＡまたはＤＯＴＡまたはその誘導体である。
【００３４】
ＭＲＩの場合、これらのキレートの緩和能ｒ１は、標準的に、０．５〜１．５Ｔの磁場でおよそ４〜２０ｓ−１ｍＭｏｌ−１Ｇｄ−１である。常磁性造影製品の縦方向緩和能ｒ１がその磁気有効性の尺度を提供し、記録された信号に対するその影響を評価することを可能にする、ということが喚起される。
【００３５】
ＭＲＩ医療用イメージングにおいては、造影製品は陽子緩和時間を修正し、得られた緩和能の増大によって、さらに高い信号を得ることが可能となる。
【００３６】
式Ｉ中、「化学的結合」という用語は、連結基すなわちＬｉｎｋｅｒ  Ｌ、すなわち
−  Ｓｉｇｎａｌと１つまたは複数のＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥを連結できるようにし、
−  それ自体は、Ｓｉｇｎａｌによって提供されるシグナル実体機能を有しておらず、
−  それ自体はＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥにより提供される標的化機能を有していない、
化学的基を意味するように意図されている。
【００３７】
バイオベクター、特にペプチドとキレートのカップリングは先行技術において記載されており、一般にこれには、国際公開第０１／６０４１６号パンフレットに記載されているように化学的結合（リンカー）が関与する。化学的結合の構造および化学的性質は、ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥのペプチド部分と使用される１つまたは複数のキレートとの間の化学的カップリングを可能にするように、そしてその標的に対するＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥ部分の親和力および用途に適した認識特異性を得るような形で定義される。
【００３８】
少なくとも１つのバイオベクター官能基および少なくとも１つのキレート官能基と相互作用することができるかぎりにおいて多数のＬｉｎｋｅｒが使用可能である。
【００３９】
有利には、Ｌｉｎｋｅｒは以下のものを表わす；
ａ）  Ｑ１−ｌ−Ｑ２という式の基、
［なお式中、同一であっても異なっていてもよいＱ１およびＱ２は、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＯ２、−ＮＨＣＯ、ＣＯＮＨ、ＮＨＣＯＮＨ、ＮＨＣＳＮＨ、ＳＯ２ＮＨ−またはＮＨＳＯ２−を表わし、ｌは、アルキル基（有利にはＣ１〜Ｃ１０）、アルコキシアルキル基（有利にはＣ１〜Ｃ１０）、アルケニル基（有利にはＣ２〜Ｃ６）、アルキニル基（有利にはＣ２〜Ｃ６）、ポリアルコキシアルキレン基、１つ以上のスクアレート、１つ以上のアリール、有利にはフェニルまたは−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＮＨ（ＣＯ）−、−（ＣＯ）ＮＨ−、−Ｏ（ＣＯ）−または−（ＯＣ）Ｏ−から選択された１つ以上の基で中断されたアルキル基を表わす］
ｂ）  （ＣＨ２）ｎ、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨ−ＣＯ−基（式中、ｎ＝１〜１０である）、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｑ（ＣＨ２）ｒ−ＣＯ−、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｑ（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−ＣＯ−基（式中、ｑ＝１〜１０かつｒ＝１〜１０である）、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨ−、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨ−ＰＥＧ、（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−、
【化５】
2014114318.tif 000006
基、（ＣＨ２）ｎ−スクアレート−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｑ（ＣＨ２）ｒ−ＣＯ基（式中、ｎ＝１〜５で有利にはｎ＝３、４または５である）、ＨＯＯＣ−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ；ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）２−ＣＯ２−（ＣＨ２）２−ＯＣＯ−（ＣＨ２）２−ＣＯＯＨ；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＯＯＨ基、ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ；ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２基（式中、ｎ＝１〜２０である）；ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｈ；またはＮＨ２−ＣＨ２−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｈ基（式中、ｎ＝１〜１０である）、
特に；
【化６】
2014114318.tif 000007
（式中、ｎ＝１〜４、ｍ＝０〜５である）
【化７】
2014114318.tif 000008
（式中、ｎ＝１〜４、ｍ＝０〜５である）
（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ（式中、ｎ＝１〜５である）、
（ＣＨ２）３−スクアレート−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２（ＣＨ２）−ＣＯ；
ｃ）  米国特許第６，２６４，９１４号明細書の定義にしたがって、（バイオベクターおよびキレートの）アミノ、ヒドロキシル、スルフヒドリル、カルボキシル、カルボニル、炭水化物、チオエーテル、２−アミノアルコール、２−アミノチオール、グアニジニル、イミダゾリル、フェノール官能基と反応することのできる、この文献に記載されているリンカー；
ｄ）−  米国特許第６，５３７，５２０号明細書の第８欄のものと同一の定義で、ｇ＋ｈ＋ｇ’＋ｋ＋ｈ’＋ｇ’’＋ｈ’’＋ｇ’’’が０以外のものである（Ｃｒ６ｒ７）ｇ−（Ｗ）ｈ−（Ｃｒ６ａｒ７ａ）ｇ’−（Ｚ）ｋ−（Ｗ）ｈ’−（Ｃｒ８ｒ９）ｇ’’−（Ｗ）ｈ’’−（Ｃｒ８ａｒ９ａ）ｇ’’’、
という式を有する、この文献に記載された幾つかのリンカー；
ｅ）  例えば、
−  Ｒ’’’３が窒素または酸素と反応できる基であるＣＲ６’’’Ｒ７’’’−、−（Ｒ６’’’）Ｃ＝Ｃ（Ｒ７’’’）＝、−ＣＣ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ２−、−Ｎ（Ｒ３’’’）−、−（Ｒ６’’’）Ｃ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｐ（Ｏ０（ＯＲ３’’’）−、−Ｐ（Ｏ）−（ＯＲ３’’’）Ｏ−、
−  環状領域（２価のシクロアルキル、２価の複素環）、
−  ポリアルキレン、ポリアルキレングリコール、
から選択される直鎖または分枝有機連結鎖といった（国際公開第０２／０８５９０８号パンフレットのものと同一の定義で）この文献に記載されているいくつかのリンカー；
ｆ）  国際公開第０３／０１１１１５号パンフレット、１２４〜１２５頁のリンカー；
ｇ）  米国特許出願公開第２００６／００１８８３０号明細書のリンカー（出願人のＬｉｎｋｅｒはこの文献、米国特許出願公開第２００６／００１８８３０号明細書中でＮ−Ｏ−Ｐと呼称されているリンカーに対応する）、
−  少なくとも１つの非アルファアミノ酸を含むリンカー（この文献の１２頁〜１５頁、表１）、
−  環状基を担持する少なくとも１つの非アルファアミノ酸を含むリンカー（この文献の１８頁〜２５頁、表３）、
−  アミノ酸を含まないリンカー、
−  その他のリンカー（この文献の２７頁、２８頁）。
【００４０】
Ｌｉｎｋｅｒの選択（構造およびサイズ）は、特に、生物学的ターゲティング、生体内分布を最適化する目的で、式（Ｉ）の生成物の電荷、親油性および／または親水性を制御するような形で実施してよい。生体内で生分解性のあるリンカー、ＰＥＧリンカーまたはミニ−ＰＥＧリンカーを特に使用してよい。
【００４１】
リンカーは、本発明にしたがった式（Ｉ）の化合物の有効性を大幅に改変することがないような形で選択され、生体外および生体内でのこの有効性を確認するためのテストは詳細な説明の中に提示されている。
【００４２】
別の実施形態にしたがうと、Ｓｉｇｎａｌは、光学的イメージングのための標識（光学的イメージングで使用される蛍光分子）を表わす。光学的イメージング用の標識としては、特に米国特許出願公開第２００６／００１８８３０号明細書の標識、特に１１頁および１２頁、段落１．Ｂに引用されている標識が挙げられ、精確なイメージングモードは、段落６の第３３欄（［０２５９］）に記載されている（技術および発色団とフルオロフォアが詳述されている）。
【００４３】
別の実施形態に従うと、Ｓｉｇｎａｌは、量子ドット（ナノ結晶を含む無機フルオロフォア）を表わす。
【００４４】
別の実施形態にしたがうと、Ｓｉｇｎａｌは、一般にＳＰＩＯまたはＵＳＰＩＯ（「酸化鉄極微粒子」）と呼ばれる有機層でコーティングされた超常磁性ナノ粒子を表わす。有利には、ナノ粒子は、酸化鉄または水酸化物、特にマグネタイト（Ｆｅ３Ｏ４）、磁赤鉄鉱（γ−Ｆｅ２Ｏ３）のコアを含む。有利には、国際公開第２００４０５８２７５号パンフレットに記載されているビスホスホネート、有利にはｇｅｍ−ビスホスホネートで被覆されたナノ粒子が使用され、粒子およびペプチドとナノ粒子との間のカップリング方法は、本出願の実施例の中で詳述されている。使用される磁気ナノ粒子は、鉄化合物をベースとし、同一であっても異なるものであってもよい１つ以上のｇｅｍ−ビスホスホネートを含む層で被覆された酸性ナノ粒子であり、ナノ粒子を被覆する層は、以下の式（Ｃ）を有する：
Ｔ−Ｌ２−ＣＨ（ＰＯ３Ｈ２）２      （Ｃ）
なお式中、
・  リンカーＬ２は、ｇｅｍ−ビスホスホネート−ＣＨ（ＰＯ３Ｈ２）２官能基に対し官能基Ｔを連結する有機基を表わす；
・  Ｔは、本出願のＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥまたはＬｉｎｋｅｒにカップリングされた化学的官能基を表わす。１つの特定の実施形態においては、Ｔ−Ｌ２は、式（Ｉ）の化合物のリンカーを表わす。
【００４５】
組成物は、ナノ粒子の安定した水溶液の形態である。これらの組成物の中では、粒子上の化合物（Ｃ）の錯化度は５０％超、有利には７０％超、そして好ましくは８０、９０、９５％超である。酸性磁気粒子（ｐ）がその少なくとも９０％のプロトン化部位上で式（Ｃ）の化合物と錯化されていることが特に好ましい。１つの変形形態に従うと、層の官能基Ｔの一部分がＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥにカップリングされており、官能基Ｔの一部分は親水性化合物、特にヒドロキシル基を担持する化合物そして特に国際公開第２００４０５８２７５号パンフレット（実施例８）に記載されているＡＡＧ１ＡＡ２８と呼ばれるアミノアルコール親水性化合物またはＰＥＧ基にカップリングされている。
【００４６】
磁気粒子（ｐ）は、５〜３００ｎｍの間、好ましくは５〜６０ｎｍの間、より好ましくは５〜３０ｎｍの間の流体力学直径を有する。
【００４７】
リンカーＬ２は、場合によってはＬｉｎｋｅｒを用いてナノ粒子上へのＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥ（バイオベクター）の共有グラフトを提供できる反応性実体Ｔとｇｅｍ−ビスホスホネート官能基とを連結させかつ／または離隔させることを可能にする。
【００４８】
好ましくは、リンカーＬ２は２価の基を表わす。
【００４９】
好ましくは、リンカーＬ２は以下から選択される：
−  脂肪族基；脂環式基；脂肪族脂環式基；芳香族基；脂肪族芳香族基；ここで前記脂肪族、脂環式および芳香族基を、任意にはメチル、ヒドロキシル、メトキシ、アセトキシまたはアミド基またはハロゲン原子、有利には塩素、ヨウ素または臭素原子で置換することが可能である；
−  同一であっても異なるものであってもよいｌ１およびｌ２が脂肪族基；脂環式基；芳香族基；脂肪族脂環式基または脂肪族芳香族基であり、前記基を任意にはメチル、ヒドロキシル、メトキシ、アセトキシまたはアミド基または塩素、ヨウ素または臭素原子で置換することが可能である、−ｌ１−ＮＨＣＯ−ｌ２。
【００５０】
好ましい実施形態にしたがうと、Ｌ２は置換または未置換脂肪族基、そしてより好ましくは、ｐが１〜５の整数である−（ＣＨ２）ｐ−基または好ましくは、ｎとｍが０〜５の整数を表わす−（ＣＨ２）ｎ−ＮＣＨＯ−（ＣＨ２）ｍ−基を表わす。
【００５１】
好ましいＴ基としては、ＣＯＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＣＳ、−ＮＨ−ＮＨ２、−ＣＨＯ、アルキルピロカルボニル（−ＣＯ−Ｏ−ＣＯ−アルク）、アシルアジジル（−ＣＯ−Ｎ３）、イミノカルボネート（−Ｏ−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨ２）、ビニルスルフリル（−Ｓ−ＣＨ＝ＣＨ２）、ピリジルジスルフリル（−Ｓ−Ｓ−Ｐｙ）、ハロアセチル、マレイミジル、ジクロロトリアジニルおよびハロゲン基を挙げることができ、特に好ましいのは−ＣＯＯＨおよび−ＮＨ２基である。
【００５２】
好ましくは、Ｔは−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２基を表わし、Ｌ２は置換または未置換脂肪族基、有利には、ｐが１〜５の整数である−（ＣＨ２）ｐ−基である。
【００５３】
ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）２−ＣＨ（ＰＯ３Ｈ２）２
という式（Ｃ１）の層が特に好ましい。
【００５４】
ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥを担持する酸化鉄のナノ粒子タイプの複数の化合物が、詳細な説明に記載される（特に、ＰＥＧ−ＵＳＰＩＯ）。
【００５５】
別の実施形態にしたがうと、Ｓｉｇｎａｌは、少なくとも１つのキレートを含む脂質ナノ粒子を表わす。脂質ナノ粒子は、国際公開第０３／０６２１９８号パンフレット、米国特許第５９５８３７１号明細書、米国特許第５０８０８８５号明細書および米国特許第６４０３０５６号明細書に記載されているもののようなペルフルオロカーボンを場合によって含有するナノ粒子エマルジョンの形態をしていてよい。
【００５６】
脂質ナノ粒子は、水性または親水性媒質中に懸濁していてよい。これらのナノ粒子は、およそ１０ｎｍ〜５００ｎｍ、特に２０〜２５０ｎｍの直径を有する。エマルジョン中のナノ粒子は、１ナノ粒子あたり例えば１０，０００〜１００，０００個のキレートといった多数のキレートを含むかまたはそれとカップリングされていてよい。エマルジョンは、アポトーシス領域の認識を可能にするために充分な式（Ｉ）の化合物ひいてはＰｅｐｔｉｄｅを含む。考えられるナノ粒子としては、表面が親油性である、単層または多層であってよいリポソーム、ミセル、ミクロゲル、油滴、リポタンパク質例えばＨＤＬ、ＬＤＬ、ＩＤＬまたはＶＬＤＬ、カイロミクロン、フルオロカーボンナノ粒子、ナノバブルなどが挙げられる。
【００５７】
有利には、キレートは親油性であり、ナノ粒子の膜に付着させられる。
【００５８】
有利には、式（Ｉ）の化合物のＬｉｎｋｅｒは、Ｐｅｐｔｉｄｅを脂質ナノ粒子の膜にカップリングさせるのに充分親油性であり、ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥは、ナノ粒子の外部部分上で、アポトーシス標的の特異的認識のために充分発現されている。Ｌｉｎｋｅｒは、例えばＣ１０−Ｃ２０アルキレン鎖といったような親油性基であり、この鎖はナノ粒子の脂質層の中に挿入され、かくしてＰｅｐｔｉｄｅをナノ粒子に付着させることを可能にしている。
【００５９】
脂質膜と会合されるように親油性にされた数多くのキレートが、特に米国特許第６，０４５，８２１号明細書、国際公開第９０／０４９４３号パンフレットおよび国際公開第２００６／１００３０５号パンフレットなどの文献中で詳述されている。実施形態に応じて、キレートは、脂質ナノ粒子（リポソーム、ミセル、ナノエマルジョン）の膜内に挿入される長い親油性鎖（例えばリン脂質）を担持する。同様に、ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥは有利には、脂質ナノ粒子の膜の中に挿入される親油性鎖（Ｌｉｎｋｅｒ、例えばＣ１０〜Ｃ２０アルキル鎖）を担持する。
【００６０】
有利な実施形態にしたがうと、脂質ナノ粒子は、米国特許第５，９５８，３７１号明細書に記載されているように、ペルフルオロカーボンを含み、ナノ粒子を含む液体エマルジョンは、脂質および／または界面活性剤から成るコーティングでとり囲まれたかなり高い沸点（例えば５０〜９０℃）を有するペルフルオロカーボンを含む。界面活性剤は、ターゲティングバイオベクターに直接カップリングするかまたは、必要に応じて化学的結合剤を用いてバイオベクターに対して共有結合される中間化合物を含むことができる。
【００６１】
さまざまなペルフルオロカーボンエマルジョンが、米国特許第６６７６９６３号明細書の中で喚起されている（ペルフルオロデカリン、ペルフルオロオクタン、ペルフルオロジクロロオクタン、ペルフルオロ−ｎ−オクチルブロミド、ペルフルオロヘプタン、ペルフルオロデカン、ペルフルオロシクロヘキサン、ペルフルオロモルホリン、ペルフルオロトリプロピルアミン、ペルフルオロトリブチルアミン、ペルフルオロジメチルシクロヘキサン、ペルフルオロトリメチルシクロヘキサン、ペルフルオロジシクロヘキシルエーテル、ペルフルオロ−ｎ−ブチルテトラヒドロフラン）。
【００６２】
ナノ粒子の膜を形成するリン脂質としては、以下の化合物が慣習的に使用される；ホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン。
【００６３】
かかる化合物は、例えば、特にペルフルオロデカリン、ペルフルオロオクタン、ペルフルオロジクロロオクタン、ペルフルオロ−ｎ−オクチルブロミド、ペルフルオロヘプタンなどといったペルフルオロカーボン化合物を引用する米国特許出願公開第２００４０２４８８５６号明細書中で喚起されているように、例えば米国特許第５９８９５２０号明細書および米国特許第５９５８３７１号明細書に記載されている。
【００６４】
有利な実施形態にしたがうと、本発明にしたがった造影剤を調製するためには、特に脂質組成物およびリポソーム、ミセルおよびエマルジョンの調製の詳細な記述に関して米国特許第６，０１０，６８２号明細書で喚起されている適切な方法および脂質組成物が使用されることになる。
【００６５】
エマルジョンというのは乳化剤の機械的撹拌および／または添加によって適切な要領で得られる不均一な脂質混合物である、ということが喚起される。例えば、親油性にされたキレートは、クロロホルムといったような有機溶媒と機械的に混合される。溶媒が蒸発させられた後、脂質は、ＰＢＳといったような水性媒質の中に再懸濁させられてエマルジョンが得られ、このエマルジョンはその後標準的には音波処理およびミクロ流体化を受ける。得られたエマルジョンは、必要に応じて、抗凝集剤を用いて凍結乾燥させることができる。
【００６６】
標準的には、エマルジョンの全成分に対し１〜７５重量％の親油性キレート化合物が、所望の常磁性造影剤エマルジョンを調合するために使用される。造影剤を形成する組成物は、好ましくは検査対象患者に応じて患者の体重１ｋｇあたり０．１ｍｇ〜１ｇの親油性キレート化合物そして１〜５０マイクロモルの常磁性金属イオンという割合で血管内投与される。
【００６７】
得られる脂質組成物は、必要に応じて、特に静脈内注射による投与のため、米国特許第６０１０６８２号明細書中で喚起されている添加剤を用いて調合される。デキストロース、塩化ナトリウムおよび抗菌剤が挙げられる。
【００６８】
有利にも、本発明にしたがった組成物により、１イオンあたりの緩和能の増大を得ることができる。エマルジョンの精確な組成およびその調製方法によって変動し得る以下の特徴が、標準的に得られる：
−  多分散性指数：０．２〜０．３
−  ［Ｇｄ３＋］＝２〜１０ｍＭ、好ましくは３〜７ｍＭ、
−  粒子濃度：５０〜１００ｎｍ
−  ｒ１（ｍＭ−１ｓ−１Ｇｄ−１）：５〜４０、好ましくは１０〜４０、
−  ｒ２（ｍＭ−１ｓ−１Ｇｄ−１）：２０〜４０
−  ｒ１（ｍＭ−１ｓ−１粒子−１）：１０６〜４×１０６
−  バイオベクター数：５０〜１０００、特に１００〜３００。
【００６９】
本発明は同様に、Ｐｅｐｔｉｄｅが標的に対する親和力および特異性および生体内での化合物の有効性を損なうことなく修飾されたペプチド配列を含んでいる式（Ｉ）の化合物にも関する。ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥは、例えば、式（Ｉ）の有効な化合物を選択するため、例えば米国特許出願公開第２００５１００９６３号明細書（ＫＤＲレセプタを標的化するペプチドの場合、第２０−２１欄、段落［５２９］〜［５４１］）といった先行技術に記載されている適切な方法を用いて修飾される：
１）  疎水性アミノ酸、芳香族アミノ酸、酸性アミノ酸、ヒドロキシルを含有するアミノ酸、アミド側鎖を含有するアミノ酸についてこの文献において喚起されている方法にしたがった、その官能性を損なうことのないアミノ酸置換。リジンについては、その他の２塩基性アミノ酸（アルギニン、ヒスチジン、オルニチン）またはリジンもしくはこれらのその他のアミノ酸の誘導体、特にアルキル、アルケニルまたはアリール誘導体；例えばＮ−イプシロン−イソプロピルリジン誘導体も使用される。米国特許出願公開第２００５１００９６３号明細書の段落［５３３］中で挙げられている誘導体を特にテストしてよい；
２）  ペプチドの分解を制限するためおよび／またはペプチドの柔軟性を調整するための、ポリペプチドの主鎖上に存在するアミド結合の置換（例えばアルファ−Ｎ−メチルアミドまたはチオアミドの挿入、アザ−アミノ酸でのアミノ酸の交換）；
３）  側鎖の配向性に対して立体的修飾がもたらす効果による、その標的に対するペプチドのアクセス可能性を調節することを目的とした、Ｄ−アラニンといったようなＤ系列アミノ酸の導入；
４）  例えば、ペプチドのＣまたはＮ末端部分に対する、またはペプチドのアミノ酸側鎖に対する、特に遊離アミン官能基を有するリジン（または２，３−ジアミノプロピオン酸といった誘導体）に対する結合を用いて、親水性または塩基性基、またはアルキルまたは芳香族非極性基を付加することによる、式（Ｉ）の化合物の溶解度および薬物動態を調整するための化学的修飾；
５）  グリコシル化；
６）  その他の修飾：
−  Ｎ−メチルグルカミン（メグルミン）、酢酸塩、シュウ酸塩、アスコルビン酸塩などの塩の形成、
−  ペプチド配列の操作（例えばレトロペプチドまたは環化）。
【００７０】
出願中に詳述されている生物学的試験によって、本出願中で詳細に例示されているペプチドと比べＶＣＡＭ標的活性に関して同等かまたは改善された有効なペプチドを選択することが可能になる。
【００７１】
別の態様にしたがうと、本発明は、原子番号２１〜２９、４２〜４４または５８または７０の常磁性金属Ｍイオン、好ましくはガドリニウムを有する上述の通りの式（Ｉ）の化合物を含むＭＲＩ造影製品にも関する。常磁性金属Ｍには、原子番号５８〜７０のランタニドおよび原子番号２１〜２９、４２または４４の遷移金属、例えばスカンジウム、チタン、バナジウム、クロム、マンガン、鉄、コバルト、ニッケル、銅、モリブデン、ルテニウム、セリウム、プラセオジム、ネオジム、プロメチウム、サマリウム、ユウロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウムおよびイッテルビウムが含まれる。元素Ｇｄ（ＩＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩ）、ユウロピウムおよびジスプロシウムが特に好ましい。有利にはＭは、Ｇｄ、Ｍｎ、Ｆｅ、ＤｙおよびＴｍから選択される。
【００７２】
有利には、Ｓｉｇｎａｌ−Ｌｉｎｋｅｒ−Ｐｅｐｔｉｄｅ化合物は、（国際公開第２００６／０３２７０５号パンフレット内で詳述されているように）リポソームといったような脂質粒子タイプの化合物の中にそれらを組込むことにより、ＣＥＳＴ（飽和移動）イメージングのために使用される。脂質粒子を伴うかまたは伴わず、またバイオベクターを伴うか伴わないＣＥＳＴイメージングがｑ＝１という値またはｑ＝２という値のキレートを用いて実施可能であるということが喚起される。
【００７３】
別の態様にしたがうと、本発明は、原子番号２１〜３１、３９〜５０、５６〜８０、８２、８３または９０の重金属Ｍイオンを有する上述の通りの化合物（Ｉ）を含むＸ線またはＣＴイメージング用の造影製品に関する。
【００７４】
別の態様にしたがうと、本発明は、上述の通りの式（Ｉ）の化合物を含み、そのキレートが当業者にとって公知の放射性核種または放射性ハロゲン、標準的にはガドリニウム、テクネチウム、クロム、ガリウム、インジウム、イッテルビウム、レニウム、ランタン、イットリウム、ジスプロシウム、銅などとカップリングされている放射性医薬製品に関する。この放射性核種は、元素Ｓｍ、Ｈｏ、Ｙ、Ｐｍ、Ｇｄ、Ｌａ、Ｌｕ、Ｙｂ、Ｓｃ、Ｐｒ、Ｔｃ、Ｒｅ、Ｒｕ、Ｒｈ、Ｐｄ、Ｐｔ、Ｃｕ、Ａｕ、Ｇａ、Ｉｎ、Ｓｎ、Ｃｒ、Ｐｂ、特に９９Ｔｃ、１１７Ｓｎ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、８９Ｚｒ、１７７Ｌｕ、４７Ｓｃ、１０５Ｒｈ；１８８Ｒｅ、６０Ｃｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｒ、１６６Ｈｏ；有利には６８Ｇａの放射性形態を含む。放射性医薬製品として使用可能な化合物の調製は、米国特許出願公開第２００６／００１８８３０号明細書、３２頁、段落４の中でまとめられており、これらの技術は、この文献中でガストリン標的ペプチドにカップリングされたキレートを含む化合物に関して記載されている。
【００７５】
放射線治療における適応については、米国特許出願公開第２００６／００１８８３０号明細書、第３５および３６欄（参照として援用）の中に、ＤＯＴＡタイプの大員環のカップリング、適切な核種の選択およびこれらの放射線治療化合物の調製が要約されている。
【００７６】
別の態様にしたがうと、本発明は、上述の通りの式（Ｉ）の化合物を用いた診断方法および放射性医薬治療方法に関する。
【００７７】
本発明は同様に、有利には非経口投与向けの、上述の通りの一般式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む組成物にも関する。さらに、本発明は、薬学的に許容される賦形剤を含む注射用媒質に対して上述の一般構造式（Ｉ）の化合物を添加することを含む、かかる組成物の調製方法にも関する。
【００７８】
本発明は、ＶＣＡＭに付随する病態の診断を目的とする本発明にしたがった組成物の使用に関する。本発明にしたがった診断および放射性医薬組成物は、米国特許出願公開第２００２／００９０３４２号明細書、米国特許出願公開第２００２／００９８１４９号明細書および国際公開第０２／０５５１１１号パンフレットといった出願に記載されている通りに、抗癌適応のために使用可能である。さらに本発明は、心血管疾患、虚血性発作の危険性、慢性潰瘍性大腸炎、クローン病および／または癌の中から、有利には心血管疾患および虚血性発作危険性の中から有利に選択されたＶＣＡＭに付随する疾患を診断するための作用物質としてのそれらの使用のための、上述の通りの一般式（Ｉ）の化合物に関する。
【００７９】
有利には、心血管疾患は、アテローマプラーク、有利には脆弱性プラークに付随する疾患そして冠動脈疾患から選択される。
【００８０】
有利には、虚血性発作の危険性は、心筋梗塞、脳卒中、腎塞栓症、急性虚血肢および大動脈瘤破裂から選択される。
【００８１】
本発明は同様に、有利には心血管疾患および／または虚血性発作危険性から選択されたＶＣＡＭ発現に付随する疾患の診断および／または治療において使用するための診断または放射性医薬組成物の調製向けの上述の化合物の使用にも関する。
【００８２】
必要に応じて、本出願人の式（Ｉ）の化合物およびＶＣＡＭペプチドは、診断薬としてか、またはＶＣＡＭ発現領域レベルでの治療的処置のための作用物質としてか、または治療有効性の診断的監視のための作用物質として使用される。必要に応じて、化合物は、ＶＣＡＭ発現領域を標的化するその他の診断用および／または治療用作用物質と同時に、または一定の遅延の後に併用される。本発明は同様に、病理学的領域を標的化することのできる本発明にしたがった常磁性金属を含む化合物の合成、患者に対するその投与そしてＭＲＩによるイメージングを含む方法にも関する。本発明は同様に、病理的領域を標的化することのできる本発明にしたがった放射性医薬化合物の合成、患者に対するその投与およびＳＰＥＣＴまたはプレナーガンマシンチグラフィまたはポジトロン放出型断層撮影法によるイメージングを含む診断方法にも関する。
【００８３】
ＭＲＩによる診断のためには、通常は食塩溶液中の注射による静脈内投与は、標準的に、体重１ｋｇあたり０．００１〜１．５ｍｍｏｌの金属イオン用量、例えば１〜５００μｍｏｌ  Ｇｄ／ｋｇで実施される。
【００８４】
放射性医薬診断のためには、通常は食塩溶液中の注射による静脈内投与は、９９Ｔｃのための注射から３０〜１８０分後の診断的イメージングを伴って、標準的に体重７０ｋｇあたり１〜１００ｍＣｉの用量で、好ましくは５〜５０ｍＣｉの用量で実施される。
【００８５】
Ｘ線造影剤としての使用のためには、重原子の濃度は、およそ０．５〜１．５ｍｍｏｌ／ｋｇという静脈内投与一回あたりの濃度で、標準的に０．１Ｍ〜５Ｍである。
【００８６】
別の態様にしたがうと、本発明は、光学的イメージングにおいて使用するための組成物の調製を目的とした、上述の通りの化合物（Ｉ）の使用に関する。
【００８７】
医療用イメージングのための組成物の投与例が、例えば国際公開第０２／２６７７６号パンフレットおよび米国特許出願公開第２００６／００１８８３０号明細書、第３６欄（［０２８２］）、段落８（投薬量および添加剤）といった文献などの先行技術において記載されている。
【００８８】
上述の化合物を含む診断用組成物（造影製品）を形成するための薬学的、生理学的に許容できる担体は、先行技術において公知である。例えば、塩（ナトリウム、カルシウム、メグルミン）、ｐＨ調節剤（酢酸、クエン酸、フマル酸）および酸化防止剤が使用される。
【００８９】
本発明は同様に、少なくとも１つのキレートとＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥのカップリングを含む、化合物を調製するための方法にも関する。米国特許出願公開第２００６／００１８８３０号明細書（ブラッコ（Ｂｒａｃｃｏ））に記載されている式（Ｉ）の化合物を調製するためのいくつかの一般的方法が適用可能であり、これらの文献のペプチドの代りにＰｅｐｔｉｄｅが使用される。特に選択されたキレートに応じて選択されたこれらの方法は、米国特許出願公開第２００６／００１８８３０号明細書、第３７欄（［０２８８］〜［０２９１］）（「化合物の一般的調製（ｇｅｎｅｒａｌ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）」および「セグメントカップリングを介した化合物の代替的調製（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｖｉａ  ｓｅｇｍｅｎｔ  ｃｏｕｐｌｉｎｇ）」）、例えばＳＰＰＳおよびＦＭＯＳ（９−フルオレニルメチルカルバメート）方法の中で喚起されている。
【００９０】
本発明は同様に、化合物（Ｉ）の投与、適切な機器を用いたイメージング検査の実施および結果の分析を含む、放射性医薬治療または診断の方法にも関する。
【００９１】
他に指示のないかぎり、本発明は、記載された化合物の全てのキラル、ジアステレオ異性体およびラセミ形態、特にシス−トランス形態およびＬ−Ｄ形態を網羅する。
【００９２】
本出願人は、同様に、式（Ｉ）の化合物中の複数のキレートに対してカップリングされたＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥの会合の可能性をも研究した。その上、本出願人は、標的に対するアクセスが１つまたは複数のキレートの存在にも関わらず妨害されないような形で、式（Ｉ）の化合物の１つ以上のＶＣＡＭ標的Ｐｅｐｔｉｄｅｓと１つ以上のキレートとの間の集合を示す式（Ｉ）の化合物を研究した。例えば、キレートは、充分なサイズをもちかつその標的による１つまたは複数のペプチドの認識が損なわれないような化学的構造を有するＬｉｎｋｅｒによって、１つまたは複数のＰＥＰＴＩＤＥ  Ｐから離隔されている。
【００９３】
バイオベクター（ペプチドまたは任意のその他のバイオベクター）／キレート会合の中でも、特に、
−  同一のまたは異なるものであってよい複数のキレートに連結された中心バイオベクター；
−  同一のまたは異なるものであってよい複数のペプチドに連結された中心キレート；
−  例えばＣｈが同一または異なるものであってよいキレートを表わしペプチド１およびペプチド２が同一または異なるものであってよいＰｅｐｔｉｄｅを表わすものとして、Ｃｈ１−ペプチド１−Ｌｉｎｋｅｒ−ペプチド２−Ｃｈ２と記される、第２の［１つまたは複数のキレートを担持するペプチド］集合体に対して疎水性または親水性リンカーを用いてカプリングされた第１の［１つまたは複数のキレートを担持するペプチド］集合体；
−  ペプチド１−（Ｃｈ担持リンカー）−ペプチド２−Ｃｈ集合体、
を挙げることができる。
【００９４】
例えば、ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥを用いて（例えば米国特許出願公開第２００５１００９６３号明細書の図４４〜４７の化合物のペプチドはＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥで交換される）ではあるものの、（例えば「ホモ二量体およびヘテロ二量体の調製」という実施例の方法１３によって）ＫＤＲレセプタを標的化するペプチドの場合、米国特許出願公開第２００５／０１００９６３号明細書（国際公開第２００６／０３１８８５号パンフレット、６６頁、２５行目〜６９頁、３０行目）に記載された多量体化合物を構築する方法が使用される。したがって化合物は有利には、同一かまたは異なるものであり得る、複数のキレートに対しカップリングされたペプチドまたは複数のペプチドにカップリングされたキレートを含んでいてよい。本発明は同様に、ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥに加えて少なくとも１つのその他のＶＣＡＭ標的バイオベクターを含む混合型化合物にも関し、ここでバイオベクターは、別のペプチドかまたは別の非ペプチドバイオベクターである。
【００９５】
必要に応じて、ペプチド部分またはキレート部分は、血液中における製品の寿命または生体内分布を促進するため化学基に結合され得る。
【００９６】
製品の特異性というのは、ＶＣＡＭまたは付随する任意の病的障害のための少なくとも１つのマーカーに対するその特異的親和性を意味し、結合特異性は標準的にＫｄおよびＫａ定数によって表現され、標的マーカーのＫｄ値は１０μＭ未満、好ましくは１μＭ未満である。
【００９７】
薬学的に許容される塩としては、特に、無機塩基のカチオン（カリウム、ナトリウム、カルシウム、マグネシウムなど）、有機塩基のカチオン（エタノールアミン、ジエタノールアミン、モルフォリン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルグルカミンなど）、無機酸のアニオン（特に塩化物、臭化物、ヨウ化物、サルフェートなど）、有機酸のアニオン（アセテート、スクシネート、シトレート、フマレート、マレエート、オキサレート、トリフルオロアセテートなど）、およびアミノ酸のイオン（タウリン、グリシン、リジン、アルギニン、オルニチン、アスパラギン酸、グルタミン酸など）の塩が挙げられる。
【００９８】
本発明は同様に、生体外診断（血漿中の可溶性ＶＣＡＭ−１の検定）および抗炎症療法（ペプチドの多量体化は、多原子価効果を介してその有効性を増大させるかもしれない）のためのＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥの使用にも関する。
【００９９】
定義：
その診断が国際公開第２００６０３７８８号パンフレットの中で開示されている本発明の主題である病態の定義を、ここであらためて明らかにする。
【０１００】
「ＶＣＡＭ標的ペプチド」または「ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥ」という用語は、ＶＣＡＭ（より詳細にはＶＣＡＭ−１）に対し選択的に結合できる分子を表わす。
【０１０１】
「心血管疾患」という用語は、プラークの発生を顕著に示す状態、そしてアテローマプラークの形成（狭窄、虚血）および／またはその急性虚血性発作（血栓症、塞栓症、梗塞、動脈破裂）に至るまでの進行の結果としてもたらされる合併症を含む。心血管疾患は、例えば、アテローム性動脈硬化症、アテローマプラーク、特に脆弱性プラーク、冠動脈疾患、アンギナ、血栓症、脳卒中、心筋梗塞、血管狭窄症、梗塞症を意味する。
【０１０２】
「冠動脈疾患」が、心血管疾患の最も一般的な徴候である。それは、１つ以上の冠動脈の狭小化（狭窄）または石灰化（硬化）の後の心筋灌流の不足に起因する進行性の疾患である。冠動脈疾患の主たる症候は、狭心症（ａｎｇｉｎａ  ｐｅｃｔｏｒｉｓ）とも呼ばれる（安定したまたは不安定な）アンギナを構成する疼痛の形で現われる。１つ以上の冠動脈の完全な閉塞は、結果として梗塞症をもたらす。
【０１０３】
「梗塞症」というのは、動脈の閉塞に起因する壊死の限定的な病巣を意味する。より具体的には、心筋梗塞は、心筋の壊死であり、一般に、血小板の凝集そして次に冠状動脈の閉塞を導くプラーク破裂（一般には不安定プラークまたは脆弱性プラーク）に二次的な急性冠動脈血栓症の結果である。
【０１０４】
「血栓症」という用語は、血栓の形成を結果としてもたらす血管腔（動脈、静脈、毛細血管または心腔）内の血液の凝固に対応する。
【０１０５】
「塞栓症」というのは、最も一般的には血塊（血栓）から成る異物の血管内移動、そしてそれを通過させるには不充分な内径をもつ脈管内でのその急激な停止である。塞栓症の局所的帰結は、最も一般的には梗塞を結果としてもたらす、血管閉塞に関係する循環障害である。
【０１０６】
「虚血」という用語は、身体の一部の領域における動脈血供給の減少を意味する。その主要な局所的原因は血栓症と塞栓症である。
【０１０７】
「脆弱性プラーク」という表現は、細かい繊維性シェル（厚み約６５〜１５０μｍ）と大きい脂質コアを有するアテローマプラークを表わす。破裂する傾向をもつこれらの不安定なプラークは、冠状動脈中および大動脈およびその分岐の中に見られる。脆弱性冠状動脈プラークの破裂は「急性冠動脈症候群」をひき起こす。完全閉塞性血栓症の場合には、この症候群は心筋梗塞である。動脈の血栓症が不完全なものにとどまっている場合、この症候群は不安定アンギナである。頸動脈内では、脆弱性プラークはさらに狭窄性であり、炎症度は低い。これらのプラークも同様にＶＣＡＭ−１を発現する。
【０１０８】
本出願では、以下の対応表が使用される。
【０１０９】
【表１】
2014114318.tif 000009
【０１１０】
以下で例示されている通り、本出願人は、ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥ特にＮＮＳＫＳＨＴに連結したキレートを含むＭＲＩ製品の有効性を特に実証した。
【０１１１】
したがってペプチドが先行技術から公知であるにしても、可能な生物学的標的が極めて多数ある中でＶＣＡＭ特にＶＣＡＭ−１を標的化するための機序における有用性の特定は、決して容易ではない。その上、カップリングされた化合物のこの特定された生物学的標的（ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥ−シグナル実体）が、本出願人により解決される特に以下のもののような技術的問題の解決を可能にするということは非常に困難である：
−  シグナル実体に対するカップリングによる生体内での立体配座修飾の可能性および立体障害に関わらない、生物学的認識部位に対する生体内親和力の保存；
−  シグナル実体との化学的カップリングの可能性；特にＰＣＴＡ誘導体とのカップリングは、専用の化学合成が開発されなくてはならなかったということを意味していた；
−  数多くのペプチドについての主要な制限を構成する生体内の物理化学的安定性；
−  生体内でのイメージング、特に感度レベルがＰＥＴイメージングのほぼ１０００分の１の技術であるＭＲＩにおいて認識される能力。
【０１１２】
したがって、全体として、当業者にとっては、
−  一方では本発明の主題であるペプチドを選択すること、
−  他方ではこれらのペプチドを組込んだ製品を生体内で実際に有効にすること、
は全く困難であった。
【０１１３】
以下の詳細な説明においては、さまざまなシグナル実体についての変形実施形態（第Ｉ部）および生物学的結果（第ＩＩ部）と共に、有効性が示されたペプチドについての説明が提供される。
【実施例】
【０１１４】
実施例第Ｉ部：ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥを含む化合物の調製
一般的情報
Ｍ：モル濃度（ｍｏｌ／ｌ）
Ｍ／Ｚ：質量分析法によって決定される質量電荷比。
ＥＳ＋：ポジティブモードエレクトロスプレー
ＥＳ−：ネガティブモードエレクトロスプレー
ｋＤａ：分子質量単位（キロダルトン）
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィ
Ｚａｖｅ：ＰＣＳにより測定された流体力学直径。
【０１１５】
全鉄の検定：
鉄を、濃ＨＣｌでの鉱化および第二鉄イオンの標準的範囲（０、５、１０、１５および２０ｐｐｍ）との対比による希釈の後、原子吸光分光法（ＶＡＲＩＡＮ  ＡＡ１０分光光度計）によって検定する。
【０１１６】
粒径：
グラフトされた粒子の流体力学直径（Ｚａｖｅ）：
０．２２μｍを通してろ過された注射用調製物について水で約１ミリモル濃度に希釈した試料上でＰＣＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ４７００計器、９０°で４８８ｎｍのレーザ）により測定。
【０１１７】
ＰＣＳ＝光子相関分光法＝動的光散乱による技術−参考文献：Ｒ．Ｐｅｃｏｒａ、Ｊ．ｏｆ  Ｎａｎｏ．Ｒｅｓ．（２０００年）、第２号、１２３〜１３１頁中。
【０１１８】
構造解析：
エレクトロスプレー源を用いた質量分光法（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＶＧ  Ｑｕａｔｔｒｏ  ＩＩ計器）による。
【０１１９】
緩和能測定：
緩和時間Ｔ１およびＴ２を、２０ＭＨｚ（０．４７Ｔ）および３７℃でＭｉｎｉｓｐｅｃ  １２０計器（Ｂｒｕｋｅｒ）上で標準的手順によって測定した。反転−回復シーケンスを用いて縦方向緩和時間Ｔ１を測定し、ＣＰＭＧ技術を用いて横方向緩和時間Ｔ２を測定する。
【０１２０】
３７℃の水溶液中で、（０．１×１０−３〜１×１０−３ｍｏｌ／ｌ）の範囲内の）全金属のさまざまな濃度について、緩和速度Ｒ１（＝１／Ｔ１）およびＲ２（＝１／Ｔ２）を計算した。濃度の関数としてのＲ１またはＲ２間の相関関係は線形であり、傾きは、（１／秒）×（１／ｍｍｏｌ／ｌ）すなわち（ｓ−１・ｍＭ−１）として表現された緩和能ｒ１（Ｒ１／Ｃ）またはｒ２（Ｒ２／Ｃ）を表わしている。
【０１２１】
ナノ粒子は、特許の国際公開第２００４／０５８２７５号パンフレット（米国特許出願公開第２００４／２５３１８１号明細書）、磁気粒子のコロイド溶液の調製については実施例８および９、そして国際公開第２００４／０５８２７５号パンフレットの実施例１のｇｅｍ−ビスホスホネートコーティングと磁気粒子の錯化については実施例１０〜１２に記載されている方法にしたがって調製された。
【０１２２】
実施例１：酸化鉄の粒子に対するペプチドのカップリング
（生成物ＰＥＧ−ＵＳＰＩＯ−ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥ）
関心対象のペプチド配列を下表に記す：
【０１２３】
【表２】
2014114318.tif 000010
【０１２４】
酸化鉄粒子に対するペプチドＮｏ．１のカップリング
プロトコル：
【０１２５】
【表３】
2014114318.tif 000011
【０１２６】
カップリング：
１５ｍｌのナノ粒子（［Ｆｅ］＝０．３３８Ｍ）を周囲温度で撹拌し、ｐＨは７．２に等しい。水１ｍｌ中の保護されたペプチド（Ｎｏ．１、−Ｌｙｓ（ｔｆａ）−、２０ｍｇ）の溶液を、１５分毎に２．２５ｍｇのＥＤＣＩと共に１００μｌの分量で添加する。ひとたび添加が完了した時点で、溶液を一晩撹拌する。ｐＨを０．１ＭのＮａＯＨ溶液で７に調整する。
【０１２７】
その後溶液を０．２２μｍ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（登録商標）Ｄｕｒａｐｏｒｅフィルタ）を通してろ過し、３０ｋＤａの膜を通して限外ろ過し、その後、１５ｍｌという最終体積まで濃縮する。
【０１２８】
ＰＥＧのカップリング：
５ｍｌの水中の１．０６０ｇのアミノ−ＰＥＧ（Ｏ−（２−アミノエチル）−Ｏ’−メチルポリエチレングリコール７５０、Ａｌｄｒｉｃｈ、ＲＮ［８０５０６−６４−５］）の溶液２．５ｍｌを、上述の溶液１５ｍｌに添加する。溶液のｐＨを１ＭのＨＣｌで８に調整し、その後０．３２５ｇのＥＤＣＩを添加し、混合物を３時間撹拌する。アミノ−ＰＥＧ溶液（２．５ｍｌ）とＥＤＣＩ（０．３２５ｇ）の添加を一回反復し、混合物を一晩周囲温度で撹拌する。１ＭのＨＣｌで、ｐＨを７．５に戻す。溶液を、０．２２μｍを通してろ過し、３０ｋＤａの膜を通して限外ろ過する。溶液の最終体積は１５ｍｌである。
【０１２９】
脱保護：
１ＭのＮａＯＨでｐＨ１０．１まで溶液を調整し、６時間周囲温度で撹拌する。その後ｐＨを１ＭのＨＣｌで７．５まで戻し、溶液を、０．２２μを通してろ過し、１２ｋＤａのカットオフ閾値の膜を通して限外ろ過する。
【０１３０】
特徴づけ：ＰＣＳ：Ｚａｖｅ＝２６ｎｍ
鉄濃度：１３７．６１ｍＭ
ｒ１（２０ＭＨｚ、３７℃）：３０．５４ｓ−１ｍＭ−１
ｒ２（２０ＭＨｚ、３７℃）：７６ｓ−１ｍＭ−１
ｒ１（６０ＭＨｚ、３７℃）：１４．９４ｓ−１ｍＭ−１
ｒ２（６０ＭＨｚ、３７℃）：８５．０６ｓ−１ｍＭ−１
【０１３１】
【表４】
2014114318.tif 000012
【０１３２】
もう一方の生成物を得るために同じプロトコルにしたがった。
【０１３３】
酸化鉄粒子に対するペプチドＮｏ．２のカップリング
【０１３４】
【表５】
2014114318.tif 000013
【０１３５】
特徴づけ：
ＰＣＳ：Ｚａｖｅ＝２９ｎｍ
鉄濃度：１１８．６０ｍＭ
ｒ１（２０ＭＨｚ、３７℃）：３１．３４ｓ−１ｍＭ−１
ｒ２（２０ＭＨｚ、３７℃）：７９．６１ｓ−１ｍＭ−１
ｒ１（６０ＭＨｚ、３７℃）：１４．３０ｓ−１ｍＭ−１
ｒ２（６０ＭＨｚ、３７℃）：７８．０５ｓ−１ｍＭ−１
【０１３６】
実施例２：ガドリニウムキレートに対するペプチドのカップリング
一般スキーム：
【化８】
2014114318.tif 000014
【０１３７】
カップリングされたペプチドの配列：
【０１３８】
【表６】
2014114318.tif 000015
【０１３９】
縮合、脱保護：
２１０ｍｇのＧｄ−ＤＯＴＡ−ジエチルスクアレート（実施例３に詳細に示されたプロトコルにしたがって調製されたもの）を２０ｍｌの水中に溶解させる。Ｎａ２ＣＯ３の飽和溶液でｐＨを９に調整する。３５０ｍｇの保護されたペプチドＮｏ．１（−Ｌｙｓ（ｔｆａ）−）を添加し、ｐＨを９．２に調整する。混合物を４日間反応させる。４８時間１０００Ｄａのカットオフ閾値の膜を通して溶液を透析し、その後ＲＰ−１８カラム上でクロマトグラフィに付す（溶離剤：ＭｅＯＨ／水（５０／５０））。
【０１４０】
同じ手順にしたがってペプチド２および３を縮合させる。
【０１４１】
得られた生成物は、以下の構造を有する：
【０１４２】
【表７】
2014114318.tif 000016
【０１４３】
実施例３：ＤＯＴＡから誘導された２官能性キレートの合成
ステップ１：５−（１，３−ジオクソ−１，３−ジヒドロイソインドール−２−イル）−２−（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデス−１−イル）ペンタノイン酸ベンジルエステル
【化９】
2014114318.tif 000017
【０１４４】
５５０ｍｌのＣＨ３ＣＮ中に５５ｇのシクレン塩基（ｃｙｃｌｅｎ  ｂａｓｅ）（３２０ｍｍｏｌ）を溶解させ、それに、５５０ｍｌのＣＨ３ＣＮ中に溶解させた１１９．８ｇの臭素化誘導体（２−ブロモ−５−（１，３−ジオクソ−１，３−ジヒドロイソインドール−２−イル）ペンタノイン酸ベンジルエステル、２８８ｍｍｏｌ）を滴下により添加する。一晩周囲温度で媒質を撹拌する。沈殿物をろ過して取り出し、アセトニトリルで完全に洗浄する。白色粉末の形で１３８ｇの生成物を得る（補正後収量８１．３％）。
ＴＬＣ：２５％でＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（８０／４０／３）
顕色ＵＶおよびＣｕＳＯ４
Ｒｆ：０．３
【０１４５】
ステップ２：５−（１，３−ジオクソ−１，３−ジヒドロイソインドール−２−イル）−２−（４，７，１０−トリス（エトキシカルボニルメチル）−１，４，７，１０−テトラアザ−シクロデス−１−イル）ペンタノイン酸ベンジルエステル
【化１０】
2014114318.tif 000018
【０１４６】
ステップ１で得た化合物（１０２ｍｍｏｌ）６０ｇおよびＮａ２ＣＯ３（４６４ｍｍｏｌ）５０．１ｇを、ＣＨ３ＣＮ（１．１ｌ）中のエチルブロモアセテート（Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標）、３５８ｍｍｏｌ）５９．１ｇの溶液に添加する。アルゴンの被覆下で８０℃で一晩、反応媒質を加熱する。沈殿物を除去した後、ろ液を濃縮し、ＣＨ３ＣＮで完全に洗浄する。生成物をＥｔ２Ｏの滴下による添加によってＣＨ３ＣＮから結晶化させる。白色固体の形で８９．８ｇの生成物を得る（補正後収量１００％）。
ＴＬＣ：ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）
顕色ＵＶおよびＫＭｎＯ４；Ｒｆ：０．４。
【０１４７】
ステップ３：５−アミノ−２−（４，７，１０−トリス（カルボキシメチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデス−１−イル）ペンタノイン酸
【化１１】
2014114318.tif 000019
【０１４８】
５リットル入り反応装置の中で、３７％の塩酸（１．８ｌ）中のステップ２で得た化合物（６４ｍｍｏｌ）５４ｇの溶液を一晩還流させる。冷却とろ過の後、ろ液を濃縮し、シラン化シリカで精製する（水で溶出）。減圧下での蒸発の後、生成物をエーテルで洗浄する。４５ｇの生成物を白色固体の形で得る。ＯＨ−樹脂を通過させることによって生成物を脱塩させる。３０ｇの生成物を白色結晶の形で単離する（収量１００％）。
ＨＰＬＣ：Ｈｙｐｅｒｃａｒｂ（登録商標）５μ、２００×４．６、２５０Å；溶媒Ａ：０．０３７Ｎの硫酸
溶媒Ｂ：ＣＨ３ＣＮ：２０１ｎｍでのＵＶ検出；Ｔｒ：１８分
【０１４９】
ステップ４：５−アミノ−２−（４，７，１０−トリス（カルボキシメチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデス−１−イル）ペンタノイン酸ガドリニウム錯体
【化１２】
2014114318.tif 000020
【０１５０】
ステップ３（１６ｍｍｏｌ）で得られた化合物７．２ｇを７０ｍｌの水中に溶解させ、６Ｎの塩酸を添加することによりｐＨを５．５に調整する。２．９ｇのＧｄ２Ｏ３（８ｍｍｏｌ）を添加し、反応媒質を８０℃に加熱する。溶液のｐＨは定常的に増大するが、６Ｎの塩酸の滴下による添加によって５．２〜５．７に維持しなければならない。２時間後に、ｐＨは５．７で安定化する。Ｗｈａｔｍａｎ（登録商標）フィルタを通してわずかな濁りをろ過して除き、ろ液を濃縮させる。白色フレークの形で１１．１ｇの生成物を得る（補正後収量１００％）。
ＨＰＬＣ：Ｈｙｐｅｒｃａｒｂ（登録商標）５μ、２００×４．６、２５０Å；溶媒Ａ：０．０３７Ｎ硫酸
溶媒Ｂ：ＣＨ３ＣＮ：２０１ｎｍでＵＶ検出；Ｔｒ：１０分
【０１５１】
ステップ５：５−（２−エトキシ−３，４−ジオソシクロブト−１−エニルアミノ）−２−（４，７，１０−トリス（カルボキシメチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデス−１−イル）ペンタノイン酸ガドリニウム錯体
【化１３】
2014114318.tif 000021
【０１５２】
ステップ４で得た化合物８ｇをトルエンでの共沸蒸留で乾燥させ、その後アルゴンの被覆下で９０ｍｌの無水ＤＭＳＯ中に懸濁させる。その後、２．８ｍｌのスクリーン乾燥したＥｔ３Ｎ（１．７当量）および５ｇのジエチルスクアレート（Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標）、２．５当量）を添加する。１時間アルゴン被覆下で周囲温度で媒質を撹拌する。混合物を６００ｍｌのエーテルから沈澱させる。得られた固体をろ過し、次にジクロロメタンで洗浄する。ろ過と乾燥の後、７．５ｇの白色固体（８１．５％の収量）を回収する。
ＨＰＬＣ：Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８、５μ、２５０×４．６、１００Å
Ａ：ＴＦＡを含む水、ｐＨ＝２．７；Ｂ：ＣＨ３ＣＮ：２０１および２５４ｎｍでの検出；Ｔｒ：１９．８分
【０１５３】
実施例第ＩＩ部：ＶＣＡＭ  ＰＥＰＴＩＤＥの有効性の実証
以下の第ＩＩ部全体ならびに関連する図を通して、環状ペプチドＣＮＮＳＫＳＨＴＣ（配列番号２）は、配列を示すＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）形態で記される。
【０１５４】
ＩＩ．１  ペプチドＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）
ペプチドとＶＣＡＭ−１との間の相互作用は、ＥＬＩＳＡ検定を用いて評価される。ペプチドＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）を、４℃で一晩５０μｇ／ｍｌ（３μｇ／ウェル）の濃度で平板上に固定化する。その後４℃で２時間ＢＳＡ富化緩衝液中で、非特異的部位を飽和させる。複数回洗い流した後、ＶＣＡＭ−１分子（組換え型ヒトＶＣＡＭ−１／Ｆｃキメラ）を、周囲温度で２時間、増大する濃度（３．９×１０−９〜４．９×１０−７Ｍ）でインキュベートする。ペプチドに結合したＶＣＡＭ−１を、ＴＢＳ緩衝液中１／５００まで希釈させたマウス抗ヒトＶＣＡＭ−１モノクローナル抗体の溶液の添加を通して検出する。周囲温度で１時間インキュベーションを維持する。未結合抗体を除去した後、リン酸緩衝液中で１／２００に希釈させたペルオキシダーゼ共役抗マウスＩｇＧ抗体（二次抗体）（４℃で１時間）およびＨ２Ｏ２中で富化されたＡＢＴＳ基質の溶液を添加することによって顕色を実施する。４０５ｎｍでＯＤの測定により、ＶＣＡＭ−１のＫ＊ｄ値を計算することが可能になる。
【０１５５】
ＶＣＡＭ−１に対するペプチドの親和力は、細胞接着の阻害を測定することから成る機能的細胞検定から直接計算される。ＶＣＡＭ−１タンパク質を、４℃で一晩２０μｇ／ｍｌ（１．２μｇ／ウェル）の濃度でＥＬＩＳＡ平板上に固定化する。その後、ペプチドＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）を周囲温度で１時間、増大する濃度でプレインキュベートする。洗浄後、３時間５０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡで、予備刺激したシャーカット細胞を、周囲温度で１時間インキュベートする（１０５細胞／ウェル）。複数回洗い流した後、ＶＣＡＭ−１に結合した細胞を１％のグルタルアルデヒド溶液中で定着させる（４℃で４５分）。洗浄後、１％のクレシル・バイオレット溶液を３０分間インキュベートする。ウェルを再度洗い流し、その後エタノール溶液と共に周囲温度で一晩インキュベートする。接着細胞の青色着色により、６３０ｎｍでのＯＤの測定が可能となる。ペプチドＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）による細胞接着の阻害により、ＩＣ５０値を計算することが可能となる。
【０１５６】
ＩＩ．２．  Ｇｄ−ＤＯＴＡ−ＮＮＳＫＳＨＴ造影製品
ＴＦＡで保護されたペプチドＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）はＤＯＴＡにカップリングされる。ひとたびカップリングが実施された時点で、リジンは脱保護される。
【０１５７】
ＭＲＩ収集前に、マウスをペントバルビタールで麻酔する。全ての実験は、垂直磁石およびマイクロイメージングシステムの備わった２００ＭＨｚのＢｒｕｋｅｒ分光計（４．７Ｔ）上で実施される。
【０１５８】
造影製品は、２つの異なるモデル上でテストされる。
【０１５９】
ＩＩ．２．１．  マウスにおけるコンカナバリン−Ａ（Ｃｏｎ−Ａ）で誘発された肝炎のモデルに対する試験
肝炎は、体重約２６ｇのＢａｌｂ／ｃマウスにおける２０ｍｇ／ｋｇのＣｏｎ−Ａの静脈内注射によって誘発される。文献では、Ｃｏｎ−Ａの注射後４〜８時間の間に肝臓内でＶＣＡＭ−１が大量に発現されることが報告されている。ＭＲＩプロトコルは、以下の通りである：（１）造影前ＭＲＩを、Ｃｏｎ−Ａの注射から４時間半後に開始する；（２）Ｃｏｎ−Ａの注射からおよそ５時間後に１００μｍｏｌ  Ｇｄ／ｋｇの用量で造影製品を注入する；（３）７分おきに１時間半の間、複数回の造影後の収集を実施する。ＭＳＭＥ（マルチスライス−マルチエコー）シーケンスを用いて画像を収集し、そのパラメータは、以下の通りである：ＴＲ／ＴＥ＝３０７．４／１４．７ｍｓ、マトリクス＝２５６、ＦＯＶ＝５ｃｍ、スライス厚み＝３ｍｍ、８枚の軸方向スライス（これは、腎臓を含む腹部領域を完全に網羅している）、ＴＡ＝５分１４秒。
【０１６０】
ＩＩ．２．２．  ａｐｏＥ−／−マウスにおけるアテローム性動脈硬化症モデルに対する試験
月齢約１５ヵ月の雌のＣ５７Ｂ１６ＡｐｏＥ−／−マウスを、ＭＲＩ研究以前の３ヵ月間にわたりコレステロールの多い食餌に付す。ＭＲＩによる収集のために動物を麻酔する。１００μｍｏｌ  Ｇｄ／ｋｇの用量で、Ｇｄ−ＤＯＴＡ−ＮＮＳＫＳＨＴ造影剤を注射する。画像は全て、腹大動脈のレベル、特に、動脈分岐の存在のためアテローマプラークが発生する場所として知られる腎臓に近い領域で収集する。
【０１６１】
次の２つのシーケンスを用いて画像を収集する：
−  次のパラメータを用いたＭＳＭＥ（マルチスライス−マルチエコー）：
ＴＲ／ＴＥ＝６９５．８／８．９ｍｓ、ＮＥＸ＝２、スペクトル幅＝５０ｋＨｚ、マトリクス＝２５６×２５６、ＦＯＶ＝２．３×２．３ ｃｍ、スライス厚み＝１ｍｍ、２０軸方向スライス、空間解像度＝９０×９０μｍ、ＴＡ＝５分５６秒
−  Ｇｄ−ＤＯＴＡの１ｍＭ溶液が満たされた基準管を用いて、ＲＡＲＥ（緩和増強を伴う高速収集）シーケンスのパラメータを調整する。画像収集パラメータは以下の通りである：ＴＲ＝４７０．９−１０４８．５ｍｓ、ＴＥ＝４ｍｓ、ＲＡＲＥ係数＝１−４、ＮＥＸ＝４、マトリクス＝２５６×２５６、ＦＯＶ＝２．３ｃｍ、スペクトル幅＝３３．３３ｋＨｚ、スライス厚み＝０．８ｍｍ、空間解像度＝９０μｍ。
【０１６２】
ＩＩ．２．３．  シグナル処理
２つのモデルについて、ＯＳＩＲＩＳ画像解析ソフトウェアを用いて、（腹大動脈の動脈壁または肝臓全体のレベルで）さまざまな関心対象領域内でＳＩ値を測定する。領域をまず、造影後画像上に描き、次に造影前画像上に複製する。動脈壁および肝臓が見える全ての画像スライスの上でＳＩ値を測定する。最後に、３．２〜８ｍｍの長さにわたる大動脈の連続スライスについて得たＳＩ値を各動物について平均する。シグナル／ノイズ比の増加（％ΔＳＮＲ）を以下の等式にしたがって計算する：
％ΔＳＮＲ＝［（ＳＩｐｏｓｔ／ＳＤｎｏｉｓｅ）−（ＳＩｐｒｅ／ＳＤｎｏｉｓｅ）］／［ＳＩｐｒｅ／ＳＤｎｏｉｓｅ］×１００
なお式中、ＳＤｎｏｉｓｅは動物の体外で測定した雑音の標準偏差である。
【０１６３】
参考文献
Ｗｏｌｆ  Ｄ、Ｈａｌｌｍａｎｎ  Ｒ、Ｓａｓｓ  Ｇ、Ｓｉｘｔ  Ｍ、Ｋｕｓｔｅｒｓ  Ｓ、Ｆｒｅｇｉｅｎ  Ｂ、Ｔｒａｕｔｗｅｉｎ  ＣおよびＴｉｅｇｓ  Ｇ（２００１年）「ＴＮＦ−α−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌｉｖｅｒ  ｉｓ  ｕｎｄｅｒ  ｔｈｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ＴＮＦＲ１−ｒｅｌｅｖａｎｃｅ  ｆｏｒ  ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎ  Ａ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  １」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．第１６６号：１３００〜１３０７頁。
Ｂｕｒｔｅａ  Ｃ、Ｌａｕｒｅｎｔ  Ｓ、Ｖａｎｄｅｒ  Ｅｌｓｔ  Ｌ、Ｔｏｕｂｅａｕ  ＧおよびＭｕｌｌｅｒ  ＲＮ（２００６年）「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ｂｌｏｏｄ  ｖｅｓｓｅｌｓ  ｉｎ  ｖｕｌｎｅｒａｂｌｅ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｐｌａｑｕｅｓ  ｗｉｔｈ  ａ  ｍｉｍｅｔｉｃ  ｏｆ  ＲＧＤ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｇｒａｆｔｅｄ  ｔｏ  Ｇｄ−ＤＴＰＡ」、ＥＳＭＲＭＢ（Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、Ｗａｒｓａｗ、Ｐｏｌａｎｄ。
【０１６４】
ＩＩ．３  結果
ＩＩ．３．１．  ペプチドＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）
増大する濃度のＶＣＡＭ−１の存在下でのペプチドＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）の固定化に基づくＥＬＩＳＡ検定（図１）により１．３５×１０−７Ｍに等しい見かけの解離定数値Ｋ＊ｄ（ＶＣＡＭ−１）を計算することが可能となり、これにより、ペプチドとＶＣＡＭ−１分子の間の優れた相互作用が実証される。
【０１６５】
ペプチドＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）による細胞の接着阻害についての機能的検定（図２）によって、６．３×１０−５Ｍに等しいＩＣ５０値（ペプチド）を計算することが可能となり、これにより、ペプチドとＶＣＡＭ−１との間の特異的相互作用が証明される。
【０１６６】
ＩＩ．３．２  Ｇｄ−ＤＯＴＡ−ＮＮＳＫＳＨＴ造影製品
ＩＩ．３．２．１  マウスにおけるＣｏｎ−Ａ誘発型肝炎モデルについての生体内ＭＲＩ
経時的なシグナル／ノイズ比（％ΔＳＮＲ）の変化は、健常マウスの肝臓と比べた肝炎モデルにおけるＭＲＩシグナルのより大幅な増強が、Ｇｄ−ＤＯＴＡ−ＮＮＳＫＳＨＴの静脈内注射によって誘発されるということを示している。ΔＳＮＲの動態学的プロファイルは、１００μｍｏｌ  Ｇｄ／ｋｇのＧｄ−ＤＯＴＡの注射後の健常マウスと肝炎を患うマウスにおいて、実質的に同一である。肝炎を患うマウスにおけるＧｄ−ＤＯＴＡ−ＮＮＳＫＳＨＴの注射後に記録されたシグナルは、最初の数分の収集以降、健常マウスで記録されたシグナルまたはＧｄ−ＤＯＴＡの注射後に収集したシグナルより大きく、より長く（少なくとも７０分）維持される（３つの条件について１０分以降はシグナルが低下）。
【０１６７】
（図３：１００μｍｏｌ  Ｇｄ／ｋｇのＧｄ−ＤＯＴＡまたはＧｄ−ＤＯＴＡ−ＮＮＳＫＳＨＴの静脈内注射後のＣｏｎ−Ａ−誘発型肝炎を患うマウスまたは健常マウス（ｎ＝６）における肝臓のターゲティングの経時的監視）。
【０１６８】
これらの結果は、Ｇｄ−ＤＯＴＡに対するペプチドＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）のグラフトにより、ＶＣＡＭ−１のターゲティングを介してマウスにおいてＣｏｎ−Ａ−誘発型肝炎を特異的に標的化することが可能となる、ということを実証している。
【０１６９】
ＩＩ．３．２．２．  ＡｐｏＥ−／−マウスについての生体内ＭＲＩ
アテローム性動脈硬化症モデル（ａｐｏＥ−／−マウス）についてのＭＲＩシグナルの動的監視は、Ｇｄ−ＤＯＴＡに対するペプチドＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）のグラフトにより、ＶＣＡＭ−１の確率の高いターゲティングを介してアテローマプラークを特異的に標的化することが可能となる、ということを示している。実際、１００μｍｏｌ  Ｇｄ／ｋｇという用量でのＧｄ−ＤＯＴＡ−ＮＮＳＫＳＨＴの静脈内注射によって、グラフトされていないＧｄ−ＤＯＴＡ生成物で測定されたものよりも大きいシグナル増強を腹大動脈レベルで検出することが可能となる。この差異は、全ての収集時間について（造影製品の注射から７〜６０分後）、２つのＭＲＩシーケンス（ＲＡＲＥおよびＭＳＭＥ）で観察される。
【０１７０】
図４：Ｇｄ−ＤＯＴＡまたはＧｄ−ＤＯＴＡ−ＮＮＳＫＳＨＴの注射（静脈内１００μｍｏｌ  Ｇｄ／ｋｇ）後のａｐｏＥ−／−マウス（ｎ＝４〜６）におけるアテローマプラークのターゲティングの動的監視。ＲＡＲＥおよびＭＳＭＥシーケンス。
【０１７１】
図５：Ｇｄ−ＤＯＴＡまたはＧｄ−ＤＯＴＡ−ＮＮＳＫＳＨＴの注射（静脈内１００μｍｏｌ  Ｇｄ／ｋｇ）後のａｐｏＥ−／−マウスにおけるアテローマプラークのターゲティング。３．２ｍｍの長さにわたる腹大動脈（円で囲まれた領域）の連続スライスのＭＲＩ。ＲＡＲＥシーケンス、造影製品の注射から２７分後。円で囲まれた領域の増強（白色）は、アテローマプラークに対応する。
【図１】
2014114318.tif 000023
【図２】
2014114318.tif 000024
【図３】
2014114318.tif 000025
【図４】
2014114318.tif 000026
【図５】
2014114318.tif 000027
【配列表】
2014114318000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成26年2月17日(2014.2.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｓｉｇｎａｌ−Ｌｉｎｋｅｒ−Ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｉ）
で表される一般式（Ｉ）の化合物であって、
式中、
−  Ｓｉｇｎａｌは、（１）常磁性金属にカップリングされたキレート、（２）金属ナノ粒子、（３）常磁性キレートにカップリングされた脂質ナノ粒子、および（４）元素：Sm, Ho, Y, Pm, Gd, La, Lu, Yb, Sc, Pr, Tc, Re, Ru, Rh, Pd, Pt, Cu, Au, Ga, In, Sn, Cr, またはPの放射性形態の中から選択される放射性核種にカップリングされたキレート、からなる群から選択されるシグナル実体を表し；
−  存在しても存在しなくてもよいＬｉｎｋｅｒは、
ａ）式：Ｑ１−ｌ−Ｑ２［式中、同一であっても異なってもよいＱ１およびＱ２は、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＯ２、−ＮＨＣＯ、ＣＯＮＨ、ＮＨＣＯＮＨ、ＮＨＣＳＮＨ、ＳＯ２ＮＨ−またはＮＨＳＯ２−を表し、ｌは、アルキル基、アルコキシアルキル基、ポリアルコキシアルキレン基、アルケニル基、アルキニル基、または１つ以上のスクアレート、１つ以上のアリール、もしくは−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＮＨ（ＣＯ）−、−（ＣＯ）ＮＨ−、−Ｏ（ＣＯ）−もしくは−（ＯＣ）Ｏ−から選択される１つ以上の基で中断されたアルキル基を表す］、または
ｂ）式中ｎ＝２〜１０である（ＣＨ２）ｎ、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−、もしくは−（ＣＨ２）ｎＮＨ−ＣＯ−基；式中ｑ＝１〜１０かつｒ＝２〜１０である（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｑ（ＣＨ２）ｒ−ＣＯ−、もしくは（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｑ（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−ＣＯ−基；式中ｎ＝１〜５である（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨ−、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨ−ＰＥＧ、（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−、もしくは
2014114318.tif 000028
基；ＨＯＯＣ−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ；ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）２−ＣＯ２−（ＣＨ２）２−ＯＣＯ−（ＣＨ２）２−ＣＯＯＨ；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＯＯＨ基；式中ｎ＝１〜２０であるＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、もしくはＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２基；または式中ｎ＝１〜１０であるＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｈ、もしくはＮＨ２−ＣＨ２−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｈ基、
を表し；
−  Ｐｅｐｔｉｄｅが、ＶＣＡＭ標的ペプチドからなるペプチドを表わし、このＶＣＡＭ標的ペプチドは、式：
Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８（２）（配列番号４）
［ここで式中、
−  Ｘ１０はシステインおよびメチオニンから選択され、
−  Ｘ１１は、メチオニンおよびシステインから選択され、
−  Ｘ１２は、リジン、アルギニンおよびアラニンから選択され、
−  Ｘ１３はトレオニンおよびセリンから選択され、
−  Ｘ１４はアスパラギン酸およびグルタミン酸から選択され、
−  Ｘ１５はトレオニンおよびセリンから選択され、
−  Ｘ１６はアルギニン、アラニンおよびリジンから選択され、
−  Ｘ１７はロイシン、イソロイシンおよびバリンから選択され、
−  Ｘ１８は、システインおよびメチオニンから選択される］
を有する、
化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｐｅｐｔｉｄｅが式：ＣＭＫＴＤＴＲＬＣ（配列番号：５）のペプチドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｓｉｇｎａｌが、常磁性金属Ｍにカップリングされたキレートであり、Ｍが、Ｇｄ、Ｍｎ、Ｆｅ、ＤｙおよびＴｍから選択される、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｓｉｇｎａｌが、放射性核種にカップリングされてもされなくてもよいキレートである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
放射性核種がＰＥＴイメージング用のＧａ６８である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
キレートがＤＯＴＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸）、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミノペンタ酢酸）、ＤＯ３Ａ（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリ酢酸）、ＨＰＤＯ３Ａ（１０−（２−ヒドロキシプロピル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリ酢酸）、ＴＲＩＴＡ（２，２’，２’’，２’’’−（１，４，７，１０−テトラアザシクロトリデカン−１，４，７，１０−テトライル）テトラ酢酸）、ＴＥＴＡ（２，２’，２’’，２’’’−（１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−１，４，８，１１−テトライル）テトラ酢酸）、ＢＯＰＴＡ（４−カルボキシ−５，８，１１−トリス（カルボキシメチル）−１−フェニル−２−オキサ−５，８，１１−トリアザトリデカン−１３−オイン酸）、ＮＯＴＡ（１，４，７−トリアザシクロノナン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ４４−トリ酢酸）、ＰＣＴＡ（３，６，９，１５−テトラアザビシクロ［９．３．１］ペンタデカ−１（１５），１１，１３−トリエン−３，６，９−トリ酢酸）、ＤＯＴＭＡ（（アルファ、アルファ’、アルファ’’、アルファ’’’）−テトラメチル−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸）、ＡＡＺＴＡ（６−アミノ−６−メチルペルヒドロ−１，４−ジアゼピンテトラ酢酸）、およびＨＯＰＯ（１，２−ヒドロキシピリジノン）から選択される、請求項３〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
式（Ｉ）中、Ｓｉｇｎａｌが、有機層でコーティングされた酸化鉄コアを有する超常磁性ナノ粒子を表す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項８】
有機層がｇｅｍ−ビスホスホネート層である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｓｉｇｎａｌが少なくとも１つのキレートを含む脂質ナノ粒子を表し、ここで、該キレートが請求項６に記載のキレートである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む、医療用イメージングのための組成物。
【請求項１１】
前記薬学的に許容される賦形剤が非経口投与向けである、請求項１０記載の組成物。
【請求項１２】
薬学的に許容される賦形剤を含む注射用媒質に対して請求項１〜９のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の化合物を添加することを含む、請求項１０または１１に記載の組成物の調製方法。
【請求項１３】
心血管疾患および／または虚血性発作の危険性を診断するための組成物の調製のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物（Ｉ）の使用。
【請求項１４】
心血管疾患が、脆弱性プラークから選択されるアテローマプラークに付随する疾患、および冠動脈疾患から選択される、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
虚血性発作の危険性が、心筋梗塞、脳卒中、腎塞栓症、急性虚血肢および大動脈瘤破裂から選択される、請求項１３に記載の使用。
【請求項１６】
心血管疾患および／または虚血性発作の危険性の治療的処置の監視に使用するための診断用組成物の調製のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物（Ｉ）の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１３】
以下の詳細な説明においては、さまざまなシグナル実体についての変形実施形態（第Ｉ部）および生物学的結果（第ＩＩ部）と共に、有効性が示されたペプチドについての説明が提供される。
以下に、本発明の基本的な諸特徴および種々の態様を列挙する。
［１］
Ｓｉｇｎａｌ−Ｌｉｎｋｅｒ−Ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｉ）
という一般式（Ｉ）の化合物であって、
式中、
−  Ｓｉｇｎａｌはシグナル実体を表わし；
−  存在していてもいなくてもよいＬｉｎｋｅｒが化学的結合を表わし、
−  Ｐｅｐｔｉｄｅが、ＶＣＡＭ標的ペプチドを含むペプチドを表わし、このＶＣＡＭ標的ペプチドは、
ａ）  Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９（１）（配列番号１）
［ここで式中、
−  Ｘ１は不在であるか、またはシステインおよびメチオニンから選択され、
−  Ｘ２はアスパラギンおよびグルタミンから選択され、
−  Ｘ３はアスパラギンおよびグルタミンから選択され、
−  Ｘ４はセリンおよびトレオニンから選択され、
−  Ｘ５はリジン、アルギニン、ヒスチジン、およびオルニチンから選択され、
−  Ｘ６はセリンおよびトレオニンから選択され、
−  Ｘ７はヒスチジン、アルギニンおよびリジンから選択され、
−  Ｘ８はトレオニンおよびセリンから選択され、
−  Ｘ９は不在であるかまたはシステインおよびメチオニンから選択される］
好ましくは、ペプチドＣＮＮＳＫＳＨＴＣ（配列番号２）およびペプチドＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）、ただしＫＩＡＡ０１３７タンパク質およびＨＰＩＶ−３タンパク質は除く；
ｂ）  Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｘ１３−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７−Ｘ１８（２）（配列番号４）、
［なおここで、
−  Ｘ１０はシステインおよびメチオニンから選択され、
−  Ｘ１１は、メチオニンおよびシステインから選択され、
−  Ｘ１２は、リジン、アルギニンおよびアラニンから選択され、
−  Ｘ１３はトレオニンおよびセリンから選択され、
−  Ｘ１４はアスパラギン酸およびグルタミン酸から選択され、
−  Ｘ１５はトレオニンおよびセリンから選択され、
−  Ｘ１６はアルギニン、アラニンおよびリジンから選択され、
−  Ｘ１７はロイシン、イソロイシンおよびバリンから選択され、
−  Ｘ１８は、システインおよびメチオニンから選択される］
好ましくは、ペプチドＣＭＫＴＤＴＲＬＣ（配列番号５）；
という式のペプチドから選択される、
化合物、およびａ）またはｂ）のこれらの化合物の薬学的に許容される塩。
［２］
Ｐが式ＣＮＮＳＫＳＨＴＣ（配列番号２）またはＮＮＳＫＳＨＴ（配列番号３）のペプチドである、［１］に記載の化合物。
［３］
Ｓｉｇｎａｌが、常磁性金属Ｍにカップリングされていてもいなくてもよいキレートであり、Ｍが有利にはＧｄ、Ｍｎ、Ｆｅ、ＤｙおよびＴｍから選択される、［１］または［２］に記載の化合物。
［４］
Ｓｉｇｎａｌが、放射性核種にカップリングされていてもいなくてもよいキレートである、［１］または［２］に記載の化合物。
［５］
ＰＥＴイメージング用の放射性核種がＧａ６８である、［４］に記載の化合物。
［６］
キレートがＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＯ３Ａ、ＨＰＤＯ３Ａ、ＴＲＩＴＡ、ＴＥＴＡ、ＢＯＰＴＡ、ＮＯＴＡ、ＰＣＴＡ、ＤＯＴＭＡ、ＡＡＺＴＡ、ＨＯＰＯおよびその誘導体から選択される、［３］〜［５］のいずれか一項に記載の化合物。
［７］
Ｌｉｎｋｅｒが、
ａ）  Ｑ１−ｌ−Ｑ２という式の基、
［なお式中、同一であっても異なっていてもよいＱ１およびＱ２は、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＯ２、−ＮＨＣＯ、ＣＯＮＨ、ＮＨＣＯＮＨ、ＮＨＣＳＮＨ、ＳＯ２ＮＨ−またはＮＨＳＯ２−を表わし、ｌは、アルキル基、アルコキシアルキル基、ポリアルコキシアルキレン基、アルケニル基、アルキニル基、１つ以上のスクアレート、１つ以上のアリール、有利にはフェニルまたは−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＮＨ（ＣＯ）−、−（ＣＯ）ＮＨ−、−Ｏ（ＣＯ）−または−（ＯＣ）Ｏ−から選択された１つ以上の基で中断されたアルキル基を表わす］
ｂ）  式中、ｎ＝２〜１０である（ＣＨ２）ｎ、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨ−ＣＯ−基、式中、ｑ＝１〜１０かつｒ＝２〜１０である（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｑ（ＣＨ２）ｒ−ＣＯ−、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｑ（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−ＣＯ−基、式中、ｎ＝１〜５で有利にはｎ＝４または５である（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨ−、（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＮＨ−ＰＥＧ、（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−、
［化１］
2014114318.tif 000029
基、ＨＯＯＣ−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ；ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）２−ＣＯ２−（ＣＨ２）２−ＯＣＯ−（ＣＨ２）２−ＣＯＯＨ；ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＯＯＨ基、式中、ｎ＝１〜２０であるＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ；ＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２基；式中、ｎ＝１〜１０であるＮＨ２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｈ；またはＮＨ２−ＣＨ２−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｈ基、
を表わしている、［１］〜［６］のいずれか一項に記載の化合物。
［８］
Ｓｉｇｎａｌが、好ましくは酸化鉄コアを有する、有機層でコーティングされた超常磁性ナノ粒子を表わしている、［１］または［２］に記載の化合物。
［９］
有機層がｇｅｍ−ビスホスホネート層である、［８］に記載の化合物。
［１０］
Ｓｉｇｎａｌが光学的イメージングのための標識を表わしている、［１］または［２］に記載の化合物。
［１１］
Ｓｉｇｎａｌが少なくとも１つのキレート、有利には［６］に記載のキレートを含む脂質ナノ粒子を表わしている、［１］または［２］に記載の化合物。
［１２］
［１］〜［１１］のいずれか一項に記載の一般構造式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む、有利には非経口投与向けの医療用イメージングのための組成物。
［１３］
薬学的に許容される賦形剤を含む注射用媒質に対して［１］〜［１１］のいずれか一項に記載の一般構造式（Ｉ）の化合物を添加することを含む、［１２］に記載の組成物の調製方法。
［１４］
心血管疾患および／または虚血性発作の危険性を診断するための組成物の調製を目的とする、［１］〜［１２］のいずれか一項に記載の化合物（Ｉ）の使用。
［１５］
心血管疾患が、アテローマプラーク、有利には脆弱性プラークに付随する疾患そして冠動脈疾患から選択される、［１４］に記載の使用。
［１６］
虚血性発作の危険性が、心筋梗塞、脳卒中、腎塞栓症、急性虚血肢および大動脈瘤破裂から選択される、［１４］に記載の使用。
［１７］
心血管疾患および／または虚血性発作の危険性の治療的処置の監視に使用するための診断用組成物の調製を目的とする、［１］〜［１２］のいずれか一項に記載の化合物（Ｉ）の使用。
［１８］
必要に応じて、心血管疾患用の別の治療的または予防的処置と組み合わせた形での心血管疾患の治療的または予防的処置において使用するための薬剤の調製を目的とする、［１］に記載のＰｅｐｔｉｄｅの使用。