(57)【要約】【課題】マメ科ラッカセイ属の落花生の葉や茎について、抗酸化作用を有することやポリフェノールを含有することについてこれまで具体的に開示されていなかった。【解決手段】そこで、本願においては、落花生の葉又は／及び茎をすりつぶすことによって得られる複数成分混合液体を単離調整なしで含有した抗酸化混合物、及び、落花生の葉又は／及び茎を洗浄する洗浄工程と、洗浄された落花生の葉又は／及び茎をすりつぶすすりつぶし工程と、すりつぶされた落花生の葉又は／及び茎をアルコール溶媒に１２時間以上浸漬して浸漬液を製造する浸漬工程と、浸漬液のアルコール溶媒を蒸発させる蒸発工程と、からなる抗酸化混合物の製造方法などを提案する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
落花生の葉又は／及び茎をすりつぶすことによって得られる複数成分混合液体を単離調整なしで含有した抗酸化混合物。
【請求項２】
請求項１に記載の抗酸化混合物を含有した医薬品。
【請求項３】
請求項１に記載の抗酸化混合物を含有した医薬部外品。
【請求項４】
請求項１に記載の抗酸化混合物を含有した健康食品。
【請求項５】
請求項１に記載の抗酸化混合物を含有したサプリメント。
【請求項６】
請求項１に記載の抗酸化混合物を含有した化粧剤。
【請求項７】
落花生の葉又は／及び茎を洗浄する洗浄工程と、
洗浄された落花生の葉又は／及び茎をすりつぶすすりつぶし工程と、
すりつぶされた落花生の葉又は／及び茎をアルコール溶媒に１２時間以上浸漬して浸漬液を製造する浸漬工程と、
浸漬液のアルコール溶媒を蒸発させる蒸発工程と、
からなる抗酸化混合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、落花生の葉、茎から抽出した成分を主要成分とする抗酸化混合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
これまで落花生の利用は、種子をそのまま食用に供するか圧搾して搾油することがほとんどで、葉や茎は廃棄されていた。そこで、廃棄する他なかった落花生の葉や茎を有効活用する一態様として、人体に有益な成分を抽出しようとする試みがなされている。
【０００３】
例えば、特許文献１においては、乾燥させた落花生の茎から得た抽出物を用いて血糖調節機能性食品を製造する技術が提案されている。
【０００４】
また、落花生が属するラッカセイ属を含むマメ科の植物から人体に有益な成分を抽出する技術も提案されている。例えば、特許文献２は、マメ科エンドウ属のエンドウを、ブレビバクテリウム属の菌を用いて醗酵させて得た成分から抗酸化剤を製造する技術を開示している。また、特許文献３は、マメ科レンリソウ属のスイートピーの花や葉からポリフェノールを抽出する方法が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００６−３４０６３２号公報
【特許文献２】特開２０１１−１９５５３７号公報
【特許文献３】特開２００９−９１３３８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、上記特許文献１は、血糖調節機能や健康増進の効果を謳うものの、含有する成分や具体的な作用・効果について立証し得るデータが開示されていない。また、上記特許文献２及び３については、エンドウが抗酸化作用を有することと、スイートピーからポリフェノールが抽出できることが開示されているものの、マメ科ラッカセイ属の落花生の葉や茎の作用等については何ら具体的に開示されていない。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そこで、上記課題を解決するための手段として、以下の発明などを提供する。すなわち、落花生の葉又は／及び茎をすりつぶすことによって得られる複数成分混合液体を単離調整なしで含有した抗酸化混合物を提供する。また、係る抗酸化混合物を含有する医薬品、医薬部外品、健康食品、サプリメント、化粧剤を提供する。また、落花生の葉又は／及び茎を洗浄する洗浄工程と、洗浄された落花生の葉又は／及び茎をすりつぶすすりつぶし工程と、すりつぶされた落花生の葉又は／及び茎をアルコール溶媒に１２時間以上浸漬して浸漬液を製造する浸漬工程と、浸漬液のアルコール溶媒を蒸発させる蒸発工程と、からなる抗酸化混合物の製造方法を提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、廃棄対象とする他なかった落花生の葉や茎から抗酸化混合物を製造することが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】抗酸化混合物の製造方法の流れの一例を示す図
【図２】没食子酸濃度と吸光度（750nm）の検量線を示すグラフ
【図３】ポリフェノール量測定試験の流れを示すフロー図
【図４】ポリフェノール量測定試験の結果を示すグラフ
【図５】抗酸化作用測定試験の流れの概略を示す図
【図６】Trolox濃度とABTSラジカルの吸光度の検量線を示すグラフ
【図７】抗酸化作用測定試験の結果を示すグラフ
【図８】抗酸化作用測定試験の結果を示すグラフ
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明の実施の形態について説明する。なお、本発明は、これらの実施形態に何ら限定されるべきものではなく、その要旨を逸脱しない範囲において、種々なる態様で実施し得る。
＜実施形態＞
＜概要＞
【００１１】
本実施形態は、落花生の葉や茎から得られる抽出物を含有する抗酸化混合物である。この抗酸化混合物を医薬品、健康食品、化粧剤として応用することにより、これまで廃棄する他なかった落花生の葉や茎を有益な製品として提供することができる。
＜構成＞
【００１２】
本実施形態の抗酸化混合物は、落花生の葉又は／及び茎をすりつぶすことによって得られる複数成分混合液体から抽出物を単離調製なしで含有した混合物である。
【００１３】
「落花生（Arachis hypogaea）」は、マメ科ラッカセイ属の植物である。
【００１４】
抗酸化混合物を得るためには、まず、落花生の葉又は／及び茎をすりつぶして複数成分混合液体を得る。後述する試験結果からも明らかであるが、落花生の葉と茎のいずれにおいても抗酸化作用が認められた。そこで、本実施形態の抗酸化混合物は、落花生の葉と茎のいずれか一方のみを用いてもよいし、葉と茎との両方を用いてもよい。
【００１５】
また、落花生の葉又は／及び茎をすりつぶして得た液体を構成する詳細な成分については明らかではないが、少なくとも複数の成分が混合してなる液体であることから、「複数成分混合液体」という。
【００１６】
本実施形態の抗酸化混合物は、上記の複数成分混合液体を単離調製なしで含有した混合物である。すなわち、複数成分混合液体のなかに混在している複数の成分のなかから抗酸化作用を奏する特定の成分のみを取り出して抗酸化混合物を得るものではない。
【００１７】
本実施形態は、落花生の葉や茎の含有成分のなかから抗酸化物質を特定し、それを抽出して得るものではなく、落花生の葉や茎をすりつぶして得た抽出物に抗酸化作用があることを示すとともに、当該抽出物を医薬品や化粧剤などとして供するものである。
【００１８】
単離調製を行うことなく抗酸化混合物を得ることにより、製造に要する工程数を少なくすることができ、それに伴い、医薬品や化粧剤として応用する場合も比較的安価にそれらの製品を提供することが可能となる。
【００１９】
以下に、本実施形態の抗酸化混合物を製造する方法の好適な例を示しつつ、抗酸化混合物の作用等に関して行った試験について説明する。
＜製造方法＞
【００２０】
図１は、実施形態の抗酸化混合物の製造方法の流れの一例を示すフロー図である。まず、落花生の葉又は／及び茎を洗浄する（洗浄工程  Ｓ０１０１）。この工程は、落花生の葉や茎に付着する土や汚れ等を除去する工程である。
【００２１】
そして、洗浄工程にて洗浄された落花生の葉又は／及び茎をすりつぶす（すりつぶし工程  Ｓ０１０２）。すりつぶす前処理として、切断、破砕、ホモジナイズ（均質化）などの処理を行ってもよい。また、果実などから抽出する場合には、果実を凍結乾燥させた後にすりつぶすことがよく行われるが、本工程においては、落花生の葉又は／及び茎を生のままですりつぶせばよい。
【００２２】
そして、すりつぶし工程にてすりつぶされた落花生の葉又は／及び茎をアルコール溶媒に１２時間以上浸漬して浸漬液を製造する（浸漬工程  Ｓ０１０３）。アルコール溶媒は既知の溶媒を用いることができ、例えば、エタノール、メタノール、グリセロール、ブチレングリコールなどを用いることができる。より好ましくは、80％程度のエタノールが好適である。なお、すりつぶし工程に先立ち、落花生収穫後に数日間放置し不要な水分の蒸発と自然発酵を促すことにより、浸漬工程に要する時間をより短くすることもできる。
【００２３】
そして、浸漬工程にて製造された浸漬液のアルコール溶媒を蒸発させる（蒸発工程  Ｓ０１０４）。この工程でアルコール溶媒を除去し、抗酸化混合物を得る。蒸発工程には、例えば、ロータリーエバポレーターなどを用いることができる。なお、蒸発させる前に浸漬液を濾過することが好ましい。
【００２４】
上記方法は、落花生の葉又は／及び茎から抗酸化混合物を得るための方法の一例を示すものであり、この方法に限らず、植物の抽出物を得るための既知の方法を用いてもよい。
【００２５】
上記方法などにより得られた抗酸化混合物は、さらに既知の方法を用いることにより、当該抗酸化混合物を含有する医薬品、医薬部外品、健康食品、サプリメント、化粧剤として提供することも可能である。
【００２６】
例えば、医薬品とする場合には、本実施形態の抗酸化混合物を粉体や粒体としカプセルに充填したり、あるいは、賦形剤、結合剤、崩壊剤などを添加して打錠機等を用いて製造することができる。また、サプリメント、健康食品とする場合には、医薬品のようにカプセルや錠剤のような形態で提供してもよいし、飲料、調味料、菓子等の各種の食品に抗酸化混合物を添加した態様で提供することもできる。
【００２７】
また、美容液、クリーム、ローションなどの化粧剤とすることもできる。例えば、美容液とする場合には、本実施形態の抗酸化混合物の他、水、コメヌカ油、ペンチレングリコール、グリセリン、スクワラン、パルミチン酸セチル、ダイマージリノール酸などを主成分とし、ヒアルロン酸Na、水添ナタネ油アルコール、カルボマー、キサンタンガム、水酸化K、ジメチコン、ポリソルベート-60、ステアリン酸グリセリル、水添ヒマシ油、フェノキシエタノール、尿素、アルギニン、アルブチン、クエン酸などを添加剤とする。そして、各成分を水溶性原料・油溶性原料に分けて溶解してから、それらを加熱して混合・乳化する。これを冷却しながらエキスなどの添加物を配合し、さらに低温になったところで精油や香料などの揮発性の高いものを添加する。その後、所定の安全性の検査（菌、pH、温度安定性、粘度等）を行い、瓶などに充填して製品として提供することができる。また、アスタキサンチン、トコフェロール、ユビキノン、アスコルビン酸Naなどの抗酸化作用成分をさらに添加することにより、製品としての抗酸化作用をより向上させることも好ましい。また、パラベン類を防腐剤として添加することも可能である。
＜試験＞
【００２８】
本実施形態に係る抗酸化混合物の作用について、ポリフェノール量の測定試験と抗酸化作用の評価試験を行った。両試験に用いた試料について説明した後、それぞれの試験方法及び試験結果を示す。
＜試料＞
【００２９】
供試した落花生の品種は、「千葉半立」と「オオマサリ」であり、いずれも千葉県産である。また、それぞれの品種について、「葉のみ」、「茎のみ」、「葉と茎」の３態様にて用意した。なお、「葉と茎」は、葉と茎とを概ね半々にして用いた。
【００３０】
まず、落花生の葉や茎から、上述した製造方法に基づき抽出液を得る。具体的には、落花生の葉、茎を生のまますりつぶし、上記３態様にて各4ｇ用意する。これらを80％エタノール60mlにつけて室温で一晩（12時間程度）静置する。これをろ過して得た抽出液を試料とする。医薬品や健康食品などとする場合には、この抽出液に含まれるエタノールを蒸発させて除去するが、本試験においては抽出液を供試した。
＜ポリフェノール量の測定試験＞
【００３１】
この試験は、上述した抗酸化混合物に含まれるポリフェノール量を測定するものである。ポリフェノールは分子内に複数のフェノール性の水酸基を持つ植物成分の総称であり、抗酸化作用を有するといわれている。ポリフェノール量を測定することにより、本実施形態の抗酸化混合物が有する抗酸化作用を示す。
【００３２】
試験方法は、ポリフェノールの総量の測定法として一般的に用いられているフォーリン・チオカルト法を一部改変した方法を用いた。フォーリン・チオカルト法はフェノール試液を用いる吸光光度法であり、ポリフェノール総量の分析法としてISO（国際標準化機構）の公定法(ISO14502-1:2005)に採用されている方法である。本試験では、フェノール試液と蒸留水を1:1で調製したフェノール試液希釈液を用いた。測定は、ポリフェノールの一種でタンニンの成分である没食子酸（gallic acid）を標準物質とし、没食子酸の濃度と吸光度（波長750nm）との検量線をあらかじめ作成し、この検量線に基づき上記抽出液の没食子酸相当量を算出する。
【００３３】
まず、没食子酸の検量線を作成するために、３つの濃度の没食子酸を用意する。具体的には、60,180,300nmol/assayの各濃度の没食子酸を作る。作り方は、没食子酸17mgを80％エタノール100mlに溶かした溶液を３本の試験管に0.6ml,1.8ml,3mlずつ80％エタノールを加え、それぞれ10mlになるようにする。これらの溶液を分光光度計にて波長750nmで測定する。この測定結果から、図２に示すように一次式で近似した検量線を作成した。
【００３４】
図２に示したグラフは、横軸に没食子酸溶液濃度をとり、縦軸に波長750nmでの吸光度（ABS）をとったグラフである。グラフ中にプロットされている３点が、上記の３つの濃度における吸光度を示している。この測定結果から、一次式y=0.0117x+0.0764を近似して得た（決定係数R2=0.9969）。
【００３５】
図３は、試験の流れを示したフロー図である。まず、上述したように調製した抽出液を10ｍｌ分注する（Ｓ０３０１）。そして、フェノール試薬と純水を１：１で調整したフェノール試薬希釈液１ｍｌを分注する（Ｓ０３０２）。そして、これらを3分間ボルテックスを使用して混合させる（Ｓ０３０３）。60分間放置した後、液を遠心分離機にセットし、遠心分離（10000rpm、20分、22度）を行う（Ｓ０３０４）。その後、上澄み液を分光光度計にて波長750nmで吸光度を測定する（Ｓ０３０５）。そして、あらかじめ作成した没食子酸の検量線に基づき、新鮮重量(生体重量）100ｇあたりの没食子酸相当量を算出する（Ｓ０３０６）。なお、上澄みを測定対象としているのは、抽出成分の純度を高めるとともに、測定精度を阻害するノイズを除去するためである。
【００３６】
図４は、上記試験の結果を示すグラフである。測定量の単位は、「mg of GAE / 100g-fw」とした。これは、新鮮重量(fresh weight）100gあたりの没食子酸相当量（galic acid equivalence）を意味する。また、落花生と比較するためにブドウの「甲州」と「デラウェア」に対しても同様の試験を行い、その結果も合わせて示している。また、オオマサリについては、渋皮からの抽出物についても試験を行った。落花生の渋皮にポリフェノールが含まれることは知られており、茎や葉が渋皮と比べてどの程度のポリフェノールを含むかについても検証するために試料に加えた。
【００３７】
オオマサリの結果から分かるように、とくに葉については渋皮と遜色のない程度の没食子酸相当量が認められた。また、千葉半立については若干劣るものの、オオマサリはブドウの結果に対しても遜色のない没食子酸相当量が認められた。
【００３８】
これまで、落花生の葉や茎は、ポリフェノールの含有量について明らかにされていなかったが、本試験によりブドウと遜色のないポリフェノールが含有されることが測定された没食子酸相当量より分かった。
＜抗酸化作用の測定試験＞
【００３９】
つづいて、落花生の葉や茎の抗酸化作用を測るための試験を行った。上記のポリフェノール量測定試験に供試したものと同様の抽出液を試料とし、比較対象としてブドウの「甲州」及び「デラウェア」も試料に加えた。本試験は、抗酸化作用の評価方法としてよく知られているABTS法により行った。この方法は、ABTSラジカルを反応溶液とし、これに添加する試料の抗酸化作用を既知の抗酸化物質であるTrolox（6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸）換算値として評価するものである。
【００４０】
図５は、本試験の概略を示す図である。まず、反応溶液であるABTSラジカルを生成する。ABTSラジカルの生成は、ABTS（2,2'-アジノビス（3-エチルベンゾチアゾリン-6-スルホン酸））（7mmol/l）と過硫酸カリウムとを、1:1で調製し、この溶液を16時間暗所で静置して生成する。そして、分光光度計を用いて波長630nmにおける吸光度が0.7になるまでエタノールで希釈し調整を行う。
【００４１】
つづいて、上述の各試料及びTroloxのそれぞれ20μlと、ABTSラジカルの反応溶液300μlとを、マイクロプレートに分注する。
【００４２】
そして、プレートリーダーにて30分ごとに分光光度計で波長630nmにて吸光度を測定する（0〜2時間）。ここで、Trolox濃度とABTSラジカルの吸光度との関係を示す検量線を作成しておく。
【００４３】
図６は、Trolox濃度とABTSラジカルの吸光度との関係を示す検量線を示すグラフである。この検量線は、Trolox濃度（μg/ml）を0,10,20,30,40,50のそれぞれに調整し、それぞれを添加したABTSラジカル反応溶液の吸光度（波長630nm）を測定した結果から一次式として近似して得たものでる。近似した一次式は、y=-0.0061x+0.7447（決定係数 R2=0.9893）である。
【００４４】
あらかじめ作成した上記の検量線を用いて、上記各試料を添加したABTSラジカル反応溶液の吸光度を測定した結果からTrolox換算値を取得した。
【００４５】
図７は、オオマサリと千葉半立における結果を示すグラフである。図示するように、オオマサリの煮汁や渋皮には及ばないものの、オオマサリの葉や茎、千葉半立の葉や茎についても抗酸化作用が認められる。
【００４６】
図８は、比較対象とした甲州とデラウェアについての結果を示すグラフである。図７の結果と比較すると、甲州の葉や茎に高い抗酸化作用が認められるものの、希釈の程度によっては、オオマサリと千葉半立の葉や茎の抗酸化作用と大差がないことも認められる。
＜試験  結果＞
【００４７】
上記の各試験により、落花生の葉や茎にはポリフェノールが含有されることが明らかになり、また、抗酸化作用を有することも明らかになった。
＜効果＞
【００４８】
本実施形態により、落花生の葉及び／又は茎由来の抗酸化混合物を提供することができる。
【符号の説明】
【００４９】
Ｓ０１０１  洗浄工程
Ｓ０１０２  すりつぶし工程
Ｓ０１０３  浸漬工程
Ｓ０１０４  蒸発工程
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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