(57)【要約】【課題】細胞凝集塊を吸い取ることなく簡便に培地の交換が可能であり、また、細胞凝集塊を崩すことなく確実に回収する位置決め器具を提供する。【解決手段】本発明の位置決め器具は、一方の面に開放するウェルを有する基板に装着して使用され、液体をウェルに供給し又は吸引する細管のウェルに対する位置を決める。位置決め器具は、天板と、天板に設けられ基板に対して位置決め器具を固定する固定部とを有し、天板には、位置決め器具を基板に装着したときのウェルに対応する位置に、細管を挿入する第１の孔と第２の孔が形成されている。これにより、ウェルに対する細管の先端位置を制御でき、細胞凝集塊を吸い取ることなく簡便に培地の交換が可能であり、また、細胞凝集塊を崩すことなく確実に回収することができる。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
一方の面に開放するウェルを有する基板の前記面側に装着して使用され、液体を前記ウェルに供給し又は吸引する細管の前記ウェルに対する位置を決める位置決め器具であって、
天板と、前記天板に設けられ前記基板に対して前記位置決め器具を固定する固定部とを有し、
前記天板には、前記位置決め器具を前記基板に装着したときの前記ウェルに対応する位置に、前記細管を挿入する第１の孔と第２の孔が形成されていることを特徴とする位置決め器具。
【請求項２】
前記第１の孔は、前記第１の孔に挿入された前記細管の先端が前記ウェルの最深部付近に到達するように細管を係合する形状及び大きさに形成されている請求項１に記載の位置決め器具。
【請求項３】
前記第２の孔は、前記第２の孔に挿入された前記細管の先端が、前記第１の孔に挿入された前記細管の先端よりも浅い位置で固定されるように細管を係合する形状及び大きさに形成されている請求項２に記載の位置決め器具。
【請求項４】
前記第１の孔及び前記第２の孔はそれぞれ円形をなしており、前記第１の孔の直径は、前記第２の孔の直径よりも大きい請求項１ないし３のいずれか一項に記載の位置決め器具。
【請求項５】
前記第１の孔は、前記ウェルの最深部の直上に形成されている請求項１ないし４のいずれか一項に記載の位置決め器具。
【請求項６】
前記第２の孔は、前記ウェルの最深部の直上からずれた位置に形成されている請求項１ないし５のいずれか一項に記載の位置決め器具。
【請求項７】
前記細管は先端に向かって外径が漸減するテーパー状をなしており、前記第１の孔及び前記第２の孔はそれぞれ前記ウェルの方向に向かって直径が漸減するように形成されている請求項４ないし６のいずれか一項に記載の位置決め器具。
【請求項８】
前記基板には前記ウェルが複数形成されており、前記天板は、前記複数のウェルの少なくとも１つに対応する位置に前記第１の孔及び前記第２の孔が形成されている請求項１ないし７のいずれか一項に記載の位置決め器具。
【請求項９】
前記天板は、前記複数のウェルの全てに対応する位置に前記第１の孔及び前記第２の孔が形成されている請求項８に記載の位置決め器具。
【請求項１０】
複数の前記ウェルは前記基板上に複数行複数列に配置されており、複数の前記ウェルの各々に対する前記第１の孔及び前記第２の孔の形成位置が、複数の前記ウェルの全てにおいて同一の位置関係にある請求項９に記載の位置決め器具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、位置決め器具に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、薬効評価のスクリーニングや分化誘導因子の研究が盛んに行われている。このような研究では、種々の細胞凝集塊が評価に用いられる。そのため、細胞凝集塊を効率的に形成する培養方法が求められている。
【０００３】
細胞凝集塊の形成方法としては、例えば懸垂培養（ハンギングドロップ法）による方法（非特許文献１、２）、超親水性処理ディッシュを用いた培養による方法（特許文献１）、ポリプロピレン製円錐チューブを用いた培養による方法（特許文献２）が挙げられる。
【０００４】
しかしながらこれらの方法にはそれぞれ以下のような問題点がある。懸垂培養による方法では、培養操作が煩雑であり細胞凝集塊を形成させるのに技術を要する。また、培地の交換ができないため形成できる細胞凝集塊の大きさが制限される。さらに、顕微鏡観察ができないため、研究に最適な大きさの細胞凝集塊を得にくい。
【０００５】
一方、超親水性処理ディッシュを用いた培養による方法では、操作の容易さ、培地交換、顕鏡性といった点は改善できる。しかし、形成される細胞凝集塊の大きさがバラバラであったり、凝集塊同士の癒着が発生したりすることから、細胞凝集塊の大きさが制御できずスクリーニングにおいて安定したデータが得られない。
また、ポリプロピレン製円錐チューブを用いた培養による方法では、単一の細胞凝集塊を形成することが可能であるが、材質が不透明であるため顕鏡性が得られない。
【０００６】
これらの課題を解決するべく細胞非接着処理が施されたマルチウェルプレートが開発されている。このマルチウェルプレートは、顕鏡性に優れ、スクリーニング等の研究に適した単一の細胞凝集塊を多数得ることができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特表２００１−５０２９５９号公報
【特許文献２】特開２００４−２５４６２２号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ  ＣＥＬＬ  ＲＥＳＥＡＲＣＨ、２００、３２６−３３２、１９９２
【非特許文献２】Ｋｅｌｌｅｒ、Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（Ｌｏｎｄ）１６８、１３１−１３９、１９９８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながらマルチウェルプレートを用いた培養においても、操作者の感覚や経験に依存し、なお操作に技術を要するところがある。第一に、培地交換では細胞凝集塊を吸い取らないように培地のみを交換する必要がある。このため慎重な操作を要するが、それでも細胞凝集塊を吸い取ってしまうことがあり培地の交換が困難である。第二に、細胞凝集塊の回収では凝集塊を崩さないように慎重な操作が求められる。特にマルチウェルプレートではこのような操作を多数のウェルについて連続して行うため、全てのウェルを均一な条件で扱うことは難しい。
【００１０】
本発明は上記の課題に鑑みてなされたものであり、細胞凝集塊を吸い取ることなく簡便に培地の交換が可能であり、また、細胞凝集塊を崩すことなく確実に回収する位置決め器具を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
このような目的は、下記（１）〜（１０）に記載の本発明により達成される。
（１）一方の面に開放するウェルを有する基板の前記面側に装着して使用され、液体を前記ウェルに供給し又は吸引する細管の前記ウェルに対する位置を決める位置決め器具であって、
天板と、前記天板に設けられ前記基板に対して前記位置決め器具を固定する固定部とを有し、
前記天板には、前記位置決め器具を前記基板に装着したときの前記ウェルに対応する位置に、前記細管を挿入する第１の孔と第２の孔が形成されていることを特徴とする位置決め器具。
（２）前記第１の孔は、前記第１の孔に挿入された前記細管の先端が前記ウェルの最深部付近に到達するように細管を係合する形状及び大きさに形成されている（１）に記載の位置決め器具。
（３）前記第２の孔は、前記第２の孔に挿入された前記細管の先端が、前記第１の孔に挿入された前記細管の先端よりも浅い位置で固定されるように細管を係合する形状及び大きさに形成されている（２）に記載の位置決め器具。
（４）前記第１の孔及び前記第２の孔はそれぞれ円形をなしており、前記第１の孔の直径は、前記第２の孔の直径よりも大きい（１）ないし（３）のいずれか一項に記載の位置決め器具。
（５）前記第１の孔は、前記ウェルの最深部の直上に形成されている（１）ないし（４）のいずれか一項に記載の位置決め器具。
（６）前記第２の孔は、前記ウェルの最深部の直上からずれた位置に形成されている（１）ないし（５）のいずれか一項に記載の位置決め器具。
（７）前記細管は先端に向かって外径が漸減するテーパー状をなしており、前記第１の孔及び前記第２の孔はそれぞれ前記ウェルの方向に向かって直径が漸減するように形成されている（４）ないし（６）のいずれか一項に記載の位置決め器具。
（８）前記基板には前記ウェルが複数形成されており、前記天板は、前記複数のウェルの少なくとも１つに対応する位置に前記第１の孔及び前記第２の孔が形成されている（１）ないし（７）のいずれか一項に記載の位置決め器具。
（９）前記天板は、前記複数のウェルの全てに対応する位置に前記第１の孔及び前記第２の孔が形成されている（８）に記載の位置決め器具。
（１０）複数の前記ウェルは前記基板上に複数行複数列に配置されており、複数の前記ウェルの各々に対する前記第１の孔及び前記第２の孔の形成位置が、複数の前記ウェルの全てにおいて同一の位置関係にある（９）に記載の位置決め器具。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、ウェルに対する細管の先端部の位置を適正化することができる。このため、例えば、培地交換時や細胞凝集塊回収時においてピペットの挿入位置および挿入長さを規定することができ、細胞凝集塊を吸い取ることなく培地を簡便に交換でき、また、細胞凝集塊を崩すことなく確実に回収することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明の実施形態に係る位置決め器具を装着したマルチウェルプレートの上面図である。
【図２】図１のＩＩ−ＩＩ断面における側断面図である。
【図３】図１のＩＩＩ部の拡大図である。
【図４】図２のＩＶ部の拡大図である。
【図５】本発明の実施形態に係る位置決め器具の使用方法を説明した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の位置決め器具の好適な実施形態について、図面を参照しつつ詳細に説明する。
図１は、本発明の実施形態に係る位置決め器具１を装着したマルチウェルプレート２の上面図である。図２は、図１のＩＩ−ＩＩ断面における側断面図である。図３は、図１のＩＩＩ部の拡大図、図４は、図２のＩＶ部の拡大図である。なお、以下の説明では図２、図４中、図面の上方を上側、下方を下側と呼ぶことがある。
【００１５】
まず、図１、図２を用いて、本実施形態に係る位置決め器具１を装着する基板について説明する。本実施形態では基板は複数のウェル２１を有するマルチウェルプレート２である。マルチウェルプレート２は、通常小スケールの細胞培養や生化学実験等に用いられる。なお、本実施形態の基板はウェルの深さ以上の厚さを有する平板にウェルを形成したものであるが、本発明はこれに限らず、ウェルの深さ未満の厚さを有する平板の一部を凹没させてウェルを形成するようにしてもよい。
【００１６】
マルチウェルプレート２は、図２に示すように、樹脂製の平板の一方の面（上側の面）に開放するウェル２１が形成されている。ウェル２１の開口部は円形をなしている。ウェルは一般にｎ行ｍ列に配置されており、その数は６、１２、２４、４８、９６、３８４等のものが用いられている。以下では９６ウェル（８行１２列）のマルチウェルプレート２を例として説明する。なお、本実施形態に係るマルチウェルプレート２はこれに限られず様々な形状、寸法、ウェル数のものを用いてもよい。
【００１７】
本実施形態のマルチウェルプレート２は、図１に示すように縦１２５ｍｍ程度、横８３ｍｍ程度、厚さ１４ｍｍ程度の平板状である。
マルチウェルプレート２の材料としては、例えば、ポリプロピレン樹脂、ポリエチレン樹脂、エチレン-プロピレン共重合体等のポリオレフィン系樹脂または環状ポリオレフィン系樹脂、ポリスチレン、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン系樹脂等のポリスチレン系樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリエチレンテレフタレート樹脂、ポリメチルメタクリレート樹脂等のメタクリル系樹脂、塩化ビニル樹脂、ポリブチレンテレフタレート樹脂、ポリアリレート樹脂、ポリサルホン樹脂、ポリエーテルサルホン樹脂、ポリエーテルエーテルケトン樹脂、ポリエーテルイミド樹脂、ポリテトラフルオロエチレン等のフッ素系樹脂、ポリメチルペンテン樹脂、ポリアクリロニトリル等のアクリル系樹脂、プロピオネート樹脂等の繊維素系樹脂等が挙げられる。これらの中でも、培養容器に求められる成形性、放射線滅菌耐性の点においてポリスチレン樹脂が好ましい。
【００１８】
本実施形態では、各ウェル２１の形状は同一である。本実施形態ではウェル２１は縦断面形状がＵ字状（Ｕ底タイプ）である。なお、ウェルの縦断面形状はこれに限られず、底面が平坦の平底タイプや、底面がＶ字状のＶ底タイプを用いてもよい。さらに、底面に複数の凹部を形成するようにしてもよい。
また、ウェル２１の大きさは、開口部の直径が７ｍｍ程度、最深部の深さが１０ｍｍ程度である。また、底面の曲率半径は３．２ｍｍ程度である。
【００１９】
図４に示すように、各ウェル２１の開口縁部には環状のリブ２２が形成されている。リブ２２はマルチウェルプレート２の表面より０．４ｍｍ程度膨出して形成されている。リブ２２によってウェル２１間のコンタミネーションが効果的に防止できる。なお、図１及び図２ではリブ２２の図示を省略している。
【００２０】
マルチウェルプレート２の側面下側の周囲には支持部２３が形成されている。支持部２３は、図２に示すように、マルチウェルプレート２の半分程度の高さであり、マルチウェルプレート２の側面から外方に１．３ｍｍ程度突出している。支持部２３は後に説明するように脚部１２が当接し、マルチウェルプレート２に対する位置決め器具１の装着高さを規定する。
【００２１】
次いで図１から図４を用いて本実施形態の位置決め器具１について説明する。位置決め器具１は、天板１１と、天板１１に設けられマルチウェルプレート２に対して位置決め器具１を固定する固定部とを有する。天板１１には位置決め器具１をマルチウェルプレート２に装着したときのウェル２１の各々に対応する位置に第１の孔１１１と第２の孔１１２が形成されている。
【００２２】
位置決め器具１は、例えば、各ウェル２１で細胞凝集塊６を培養する場合において、ピペット４による培地５の交換や細胞凝集塊６の回収の際に用いられる。培地５の交換では細胞凝集塊６を吸い取ることなく培地のみを回収する必要がある。また、細胞凝集塊６の回収では細胞凝集塊６を容易かつ円滑に回収する必要がある。このため、これらの操作ではピペット４の先端がウェル２１の適正な位置に確実に挿入されることが望ましい。第１の孔１１１及び第２の孔１１２はこのようにピペット４による吸引の目的が異なる場合に、目的に適した位置にピペット４を挿入することを補助するものである。
【００２３】
ピペット４のウェル２１に対する適正な位置について説明する。培地５の交換では細胞凝集塊６から離れた位置かつ可能な限り底面近傍にピペット４の先端を挿入することが好ましい。また、細胞凝集塊６の回収では細胞凝集塊６の直上にピペット４の先端を位置させることが好ましい。このようにウェル２１の適正な位置にピペット４の先端を位置させるためには、ピペット４の横方向及び深さ方向の位置を規制するとよい。以下では本実施形態における横方向及び深さ方向の位置の規制について具体的に説明する。
【００２４】
本実施形態の位置決め器具１はマルチウェルプレート２の蓋を兼用する。図２に示すように天板１１はマルチウェルプレート２とほぼ同等の縦横寸法の平板である。また、固定部は、天板１１の周囲の縁部から天板１１と直交する方向に延出した脚部１２である。脚部１２は、マルチウェルプレート２に装着したときにマルチウェルプレート２の外周に内面が当接して位置決め器具１の横方向の位置を規定するとともに、先端が支持部２３に当接して位置決め器具１の深さ方向の位置を規定する。このようにマルチウェルプレート２（ウェル２１）に対する位置決め器具１の横方向及び深さ方向の位置が規定されることにより、後に説明するように位置決め器具１にピペット４を挿入したときのウェル２１に対するピペット４の横方向及び深さ方向の位置を規定することができる。
【００２５】
本実施形態の位置決め器具１の天板１１は、図１に示すように縦１２８ｍｍ程度、横８５ｍｍ程度、厚さ２ｍｍ程度の平板状である。脚部１２の高さは５ｍｍ程度である。位置決め器具１の材料としては、前述したマルチウェルプレート２と同様の材料が挙げられる。
【００２６】
脚部１２は、前述のように位置決め器具１のマルチウェルプレート２に対する横方向及び深さ方向の位置を規定する。本実施形態では、図２に示すように、位置決め器具１とマルチウェルプレート２との間には一定の間隙３が存在する。間隙３の大きさは、マルチウェルプレート２の全面にわたり一定である。すなわち、天板１１はマルチウェルプレート２と略平行に固定される。また、間隙３により複数のウェル２１の開口が分断されているため液滴が位置決め器具１の天板１１を伝ってコンタミネーションが生じることを良好に防止することができる。
【００２７】
図３は位置決め器具１をマルチウェルプレート２に装着したときのウェル２１の一つについての拡大上面図である。図３に示すように、天板１１には、位置決め器具１をマルチウェルプレート２に装着したときのウェル２１の各々に対応する位置に第１の孔１１１と第２の孔１１２が形成されている。第１の孔１１１および第２の孔１１２はそれぞれ液体を供給又は吸引する細管の挿入口として用いられる。以下では細管として先端に向かって外径が漸減するピペット４を例に説明をするが、細管はこれに限られずガラス管などでもよい。
【００２８】
本実施形態では、第１の孔１１１はウェル２１の最深部の直上に形成されている。本実施形態のウェル２１は縦断面がＵ字形状であるのでウェル２１の最深部はウェル２１の中央にある。このため、第１の孔１１１はウェル２１の中心軸上に形成される。したがって、第１の孔１１１からピペット４を挿入すると、ピペット４の先端もウェル２１の中央（中心軸上）に位置することとなる。ここで細胞凝集塊６は自重によりウェル２１の最深部（中央）に集積するため、第１の孔１１１は細胞凝集塊６の直上に位置する。したがって、細胞凝集塊６を回収する場合には第１の孔１１１からピペット４を挿入すれば、ピペット４の先端は細胞凝集塊６の直上に到達し、細胞凝集塊６を効率的に回収できる。
【００２９】
また、第２の孔１１２はウェル２１の最深部の直上からずれた位置に形成されている。さらに後述するように第２の孔１１２は、挿入された細管の先端が、第１の孔１１１に挿入された細管の先端よりも浅い位置で固定されるように細管を係合する形状及び大きさに形成されている。このため、第２の孔１１２からピペット４を挿入すると、ピペット４の先端もウェル２１の中央から横方向及び高さ方向のいずれもずれた位置に挿入される。したがって、培地５を交換する場合に、第２の孔１１２からピペット４を挿入すると、ピペット４の先端は細胞凝集塊６から離れた位置に挿入されるので、細胞凝集塊６を吸い取ることなく培地５のみを回収することができる。
【００３０】
本実施形態では第１の孔１１１は円形をなしており、第１の孔１１１にピペット４を挿入したときに、第１の孔１１１の上面側の縁部にピペット４の外周が当接する。このため、第１の孔１１１に挿入されたピペット４は横方向の動きが規制される。第２の孔１１２も同様に円形をなしており、ピペット４の横方向の動きを規制することができる。なお、第１の孔１１１、第２の孔１１２の形状は円形に限らず、楕円形や多角形など挿入された細管の横方向の動きを規制できる形状であればいかなる形状としてもよい。
【００３１】
図４は位置決め器具１をマルチウェルプレート２に装着したときのウェル２１の一つについての拡大縦断面図である。第１の孔１１１は天板１１を貫通し、開口面積が図４の下側に向かって漸減するテーパー状に形成されている。これによりピペット４を第１の孔１１１に挿入したときに、第１の孔１１１の上面側の縁部にピペット４の外周が当接することに加えて、第１の孔１１１の下面側の縁部にもピペット４の外周が当接する。このようにピペット４が第１の孔１１１の上端及び下端で固定されているため、第１の孔１１１に挿入されたピペット４の軸ブレが抑制され、ピペット４が安定して保持される。なお、第１の孔１１１のテーパー角度は挿入するピペット４のテーパー角度とほぼ同じであることが好ましい。
【００３２】
第２の孔１１２も同様に天板１１を貫通し、開口面積が図４の下側に向かって漸減するテーパー状に形成されている。これにより第１の孔１１１と同様に、ピペット４を第２の孔１１２に挿入したときに、第２の孔１１２の上面側の縁部にピペット４の外周が当接することに加えて、第２の孔１１２の下面側の縁部にもピペット４の外周が当接する。このようにピペット４が第２の孔１１２の上端及び下端で固定されているため、第２の孔１１２に挿入されたピペット４の軸ブレが抑制され、ピペット４が安定して保持される。なお、第２の孔１１２のテーパー角度は挿入するピペット４のテーパー角度とほぼ同じであることが好ましい。
【００３３】
なお、第１の孔１１１のテーパー角度は第２の孔１１２のテーパー角度よりも緩やかに形成してもよい。細胞凝集塊６の回収に用いるピペットと培地５の交換に用いるピペットは同種のものを用いてもよいが、異種のものを用いることもできる。細胞凝集塊６の回収では、細胞凝集塊６を崩さないように先端の開口径の大きいピペットを使用することが好ましい。このような開口径の大きいピペットは通常のピペットよりもテーパー角度が緩やかとなっている。そこでピペットのテーパー角度に合せて、第１の孔１１１のテーパー角度を第２の孔１１２のテーパー角度よりも緩やかに形成すれば、それぞれのピペットを良好に固定することができる。
【００３４】
また、本実施形態では第１の孔１１１はウェル２１に対するピペット４の先端の深さ位置を規定する。前述のようにピペット４の先端部は先端に向かって外径が漸減している。したがって、ピペット４を第１の孔１１１に挿入すると、ピペット４の外径が第１の孔１１１の上面側の直径と等しくなるところまで挿入され、それ以上は挿入されない。このため、ピペット４の外径に合わせて第１の孔１１１の直径を調整すれば、ピペット４の挿入長さを調整することができる。よって、ウェル２１に対するピペット４の先端の深さ位置を規定することができる。本実施形態では、第１の孔１１１から挿入したピペット４の先端は細胞凝集塊６にできる限り接近することが望ましい。したがって、第１の孔１１１の直径はピペット４の先端がウェル２１の最深部付近に到達する大きさに形成されている。
【００３５】
第２の孔１１２についても同様に直径の調整によりウェル２１に対するピペット４の先端の深さ位置を規定することができる。本実施形態では、第２の孔１１２から挿入したピペット４の先端は細胞凝集塊６からできる限り離れていることが望ましい。したがって、第２の孔１１２の直径はピペット４の先端が第１の孔１１１に挿入した場合の先端位置よりも浅いところまでしか挿入されない大きさに形成されている。
【００３６】
上述のように、ウェル２１に対するピペット４の先端の深さ位置は第１の孔１１１及び第２の孔１１２の直径により調整できる。本実施形態では第１の孔１１１にピペット４を挿入したときの先端の深さ位置は第２の孔１１２に挿入したときの深さ位置よりも深くなっている。図３、図４に示すように本実施形態では、第１の孔１１１の直径は第２の孔１１２の直径よりも大きい。本実施形態では第１の孔１１１は上側の直径が２．７ｍｍ程度、下側の直径が２．６ｍｍ程度、第２の孔１１２は上側の直径が２．０ｍｍ程度、下側の直径が１．９ｍｍ程度である。このように第１の孔１１１の直径を第２の孔１１２の直径よりも大きく形成すると、第１の孔１１１にピペット４を挿入した場合に第２の孔１１２に挿入した場合よりも深く挿入することができる。なお、本実施形態では第１の孔１１１及び第２の孔１１２が共に円形の場合について説明したが、非円形の場合には各々の孔の内接円をもとに孔の大きさを調整すればよい。
【００３７】
なお、上記では第１の孔１１１と第２の孔１１２は独立して形成されているが、それぞれの孔はその一部同士が重なり合っていてもよい。このときピペット４を固定するためには、重なりは円周の５０％未満であることが必要であり、特に３０％〜４０％未満であればピペット４を良好に位置決めすることができ好ましい。
【００３８】
なお、本実施形態では第１の孔１１１および第２の孔１１２は複数のウェル２１の全てに対応する位置に形成されている。また、各ウェル２１に対する第１の孔１１１及び第２の孔１１２の形成位置は、複数のウェル２１の全てにおいて同一である。これにより、複数の第１の孔１１１や複数の第２の孔１１２がそれぞれ８行１２列に整列するため、マルチチャンネルピペットなどを用いて効率的に操作をすることができる。
なお、第１の孔１１１および第２の孔１１２は複数のウェル２１の一部に対応する位置にのみ形成されていてもよい。
【００３９】
本実施形態では、位置決め器具１はマルチウェルプレート２の蓋を兼用する。このため、培養時には天板１１の上側の面にフィルム（図示せず）を貼る等により第１の孔１１１および第２の孔１１２を塞ぐとよい。これによりウェル２１が直接外気にさらされないためコンタミネーションが効果的に防止できる。
【００４０】
また、本実施形態では位置決め器具１はマルチウェルプレート２の蓋を兼用したが、蓋は別に用意してもよい。この場合、培地の交換や細胞凝集塊の回収の際には蓋を外して位置決め器具１を装着して操作を行う。
【００４１】
また、本実施形態では固定部は天板１１の周囲から天板１１と直交する方向に延出する脚部１２として形成したが、固定部の形状はこれに限られない。例えば天板１１の下側にリブ２２と係合する環状溝部（図示せず）を形成してもよい。この場合、位置決め器具１をマルチウェルプレート２に載せると複数のリブ２２と複数の環状溝部の係合により、位置決め器具１とマルチウェルプレート２が固定される。
【００４２】
また、位置決め器具１をフィルム状に形成してもよい。この場合、位置決め器具１の下側に固定部として粘着層（図示せず）を設け、貼り合わせにより位置決め器具１とマルチウェルプレート２を固定するとよい。なお、位置決め器具１をフィルム状に形成する場合は、ピペット４を挿入したときにこれを固定できる程度の強度を有していることが必要である。このような材料として、例えば、環状ポリオレフィン系樹脂、ポリスチレン、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン系樹脂等のポリスチレン系樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリエチレンテレフタレート樹脂、ポリメチルメタクリレート樹脂等のメタクリル系樹脂、塩化ビニル樹脂、ポリブチレンテレフタレート樹脂、ポリアリレート樹脂、ポリサルホン樹脂、ポリエーテルサルホン樹脂、ポリエーテルエーテルケトン樹脂、ポリエーテルイミド樹脂、ポリテトラフルオロエチレン等のフッ素系樹脂、ポリメチルペンテン樹脂、ポリアクリロニトリル等のアクリル系樹脂、プロピオネート樹脂等の繊維素系樹脂等が挙げられる。
【００４３】
次に、図５を用いて本実施形態の位置決め器具１の使用方法を説明する。
【００４４】
本実施形態の位置決め器具１は目的により第１の孔１１１と第２の孔１１２を使い分けることを特徴とする。以下では細胞凝集塊６の培養について説明する。
【００４５】
まず、使用する細胞の懸濁液を用意する。懸濁液の細胞濃度を計測し、１ｃｌｏｎｅ／ｗｅｌｌとなるように９６ウェルのマルチウェルプレート２に播種し、３７℃、５％ＣＯ２濃度で培養を開始する。播種した細胞は非接着の状態で増殖し、ウェル２１の最深部で細胞凝集塊６を形成する。培養中は２、３日間隔で培地５を交換し、細胞凝集塊６が所望の大きさになったところで細胞凝集塊６を回収する。このときに位置決め器具１を使用する。
【００４６】
次に位置決め器具１を用いた細胞凝集塊６の回収の手順について説明する。細胞凝集塊６を回収する際には位置決め器具１の第１の孔１１１にピペット４を挿入する。前述のように第１の孔１１１はウェル２１の最深部の直上に形成されている。したがって、第１の孔１１１から挿入したピペット４の先端は、図５に示すように細胞凝集塊６の直上まで接近する。この状態でピペット４により吸引すると細胞凝集塊６を確実に回収することができる。
【００４７】
ここで前述のように第１の孔１１１がテーパー状に形成されているため、挿入したピペット４は第１の孔１１１の上端及び下端において固定されている。このためピペット４の軸ブレが効果的に防止でき、ピペット４は確実に固定される。さらに、第１の孔１１１の直径は第２の孔１１２の直径よりも大きく形成されている。このため、ピペット４をより奥まで挿入することができ、ピペット４の先端を細胞凝集塊６に接近させることができる。したがって、細胞凝集塊６を回収し損なうことがなく、ピペッティングを繰り返すことにより細胞凝集塊６を崩すといったことが防止される。
【００４８】
次いで位置決め器具１を用いた培地５の交換の手順について説明する。培地５の交換は細胞凝集塊６が所望の大きさに成長するまで定期的に行う。このとき細胞凝集塊６に不要な振動・衝撃を与えないよう培地５の交換を行うことが好ましい。一方で、培地５は可能な限り全量を交換することが望ましい。したがって、培地５の交換では細胞凝集塊６に接近せず、できる限り深い位置にピペット４の先端を挿入するよう、ピペット４の先端の位置を制御することが望まれる。
【００４９】
具体的には、培地５を交換する際には位置決め器具１の第２の孔１１２にピペット４を挿入する。この状態でピペット４により吸引すると培地５を全量回収することができる。このとき、ピペット４の先端はウェル２１の最深部から横方向及び深さ方向がともに離れた位置に挿入される。したがって、細胞凝集塊６を誤って吸引することが防止できる。
【００５０】
ここで前述のように第２の孔１１２がテーパー状に形成されているため、挿入したピペット４は第２の孔１１２の上端及び下端において固定されている。このためピペット４の軸ブレが効果的に防止でき、誤って細胞凝集塊６を吸引することがない。さらに、第２の孔１１２の直径は第１の孔１１１の直径よりも小さく形成されている。このため、ピペット４を培地５の回収に十分な深さまで挿入でき、ピペット４の先端を不要に細胞凝集塊６に接近させることが防止できる。したがって、細胞凝集塊６を誤って吸引することなく培地５のみを全量回収・交換することができる。
【符号の説明】
【００５１】
１      位置決め器具
１１    天板  
１１１  第１の孔
１１２  第２の孔
１２    脚部
２      マルチウェルプレート
２１    ウェル
２２    リブ
２３    支持部
３      間隙
４      ピペット
５      培地
６      細胞凝集塊
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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