(57)【要約】【課題】無菌性を担保しながら健全な細胞を高収率でかつ分散した状態で回収する。【解決手段】細胞懸濁液を収容する懸濁液容器３と、該懸濁液容器３に接続され、該懸濁液容器３から流入された細胞懸濁液に含まれる細胞を捕捉する細胞捕捉フィルタ２と、懸濁液容器３とは反対側において細胞捕捉フィルタ２に接続され、細胞捕捉フィルタ２に回収液を導入する第１の回収液導入部６と、懸濁液容器３と同一の側において細胞捕捉フィルタ２に接続され、細胞捕捉フィルタ２から流出した回収液に含まれる細胞を分散させる細胞分散部９と、細胞捕捉フィルタ２と細胞分散部９との間に接続され、細胞捕捉フィルタ２から流出した回収液を一旦貯留した後に該回収液を細胞分散部９に導入する第２の回収液導入部８とを備える細胞分離装置１を提供する。【選択図】図１
2014113064.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞懸濁液を収容する懸濁液容器と、
該懸濁液容器に接続され、該懸濁液容器から流入された前記細胞懸濁液に含まれる細胞を捕捉する細胞捕捉フィルタと、
前記懸濁液容器とは反対側において前記細胞捕捉フィルタに接続され、前記細胞捕捉フィルタに回収液を導入する第１の回収液導入部と、
前記懸濁液容器と同一の側において前記細胞捕捉フィルタに接続され、前記細胞捕捉フィルタから流出した前記回収液に含まれる前記細胞を分散させる細胞分散部と、
前記細胞捕捉フィルタと前記細胞分散部との間に接続され、前記細胞捕捉フィルタから流出した前記回収液を一旦貯留した後に該回収液を前記細胞分散部に導入する第２の回収液導入部とを備える細胞分離装置。
【請求項２】
前記第２の回収液導入部の前記細胞分散部への前記回収液の導入速度が、前記第１の回収液導入部の前記細胞捕捉フィルタへの前記回収液の導入速度よりも遅い請求項１に記載の細胞分離装置。
【請求項３】
前記第２の回収液導入部が、前記細胞捕捉フィルタと前記細胞分散部との間に直列に接続された貯留容器およびシリンジを備える請求項１または請求項２に記載の細胞分離装置。
【請求項４】
前記シリンジが、前記貯留容器を兼ねる請求項３に記載の細胞分離装置。
【請求項５】
前記第１の回収液導入部が、前記回収液を収容し前記細胞捕捉フィルタに接続された回収液容器を備えるとともに、前記第２の回収液導入部と共通の前記シリンジを備え、該シリンジによって前記細胞捕捉フィルタ内を負圧に吸引することによって前記回収液を前記細胞捕捉フィルタに導入する請求項４に記載の細胞分離装置。
【請求項６】
前記シリンジが前記細胞捕捉フィルタと同一の高さまたはそれよりも低い位置に配置され、
洗浄液を収容し、前記細胞捕捉フィルタに前記懸濁液容器と並列に接続されて前記細胞捕捉フィルタよりも高い位置に配置された洗浄液容器と、
前記細胞捕捉フィルタと前記シリンジとの間に、これらを接続する管路の内部を大気圧に開放するエアベントバルブとを備える請求項４または請求項５に記載の細胞分離装置。
【請求項７】
洗浄液を収容し、前記細胞捕捉フィルタに前記懸濁液容器と並列に接続されて前記細胞捕捉フィルタよりも高い位置に配置された洗浄液容器と、
前記懸濁液容器と前記細胞捕捉フィルタとの間に接続されたドリップチャンバと、
前記細胞捕捉フィルタに前記反対側において接続され、略鉛直上方に凸のＵ字管路とを備え、
該Ｕ字管路の湾曲部分が、前記ドリップチャンバよりも高く前記洗浄液容器よりも低い位置に配置されている請求項４または請求項５に記載の細胞分離装置。
【請求項８】
前記第２の回収液導入部が、前記細胞捕捉フィルタと前記細胞分散部との間に接続された貯留容器と、該貯留容器から前記細胞分散部への前記回収液の輸送を制御するポンプとを備える請求項１または請求項２に記載の細胞分離装置。
【請求項９】
洗浄液を収容し、前記細胞捕捉フィルタに前記懸濁液容器と並列に接続された洗浄液容器を備え、
前記第１の回収液導入部が、前記洗浄液容器内の前記洗浄液を前記回収液として前記細胞捕捉フィルタに導入する請求項１から請求項８のいずれかに記載の細胞分離装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞分離装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、再生医療において、生体から採取した脂肪組織から幹細胞のような治療に有効な細胞を分離する細胞分離装置が知られている（例えば、特許文献１参照。）。特許文献１によれば、脂肪組織を酵素によって分解することにより脂肪組織から細胞を遊離させ、遊離した細胞の懸濁液をフィルタに通過させることにより細胞をフィルタに捕捉し、フィルタに回収液を勢い良く反対方向に流すことによりフィルタから細胞を解放して回収している。このときに、フィルタに捕捉された細胞は互いに凝集しやすい。細胞が互いに凝集していると生体に均一の密度で移植することができないため、移植の際には細胞は単一に分散した状態であることが好ましい。
【０００３】
一方、液体と流路の壁面または液体同士を衝突させて乱流を発生させることにより２種類の液体を混合し、液体に含まれる微粒子をより微細化する分散装置が知られている（例えば、特許文献２参照。）。このような乱流を利用した分散装置は閉鎖系で粒子を分散させることができるため、無菌性が担保されなければならない移植用の細胞を分散させるのに好適に適用することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００７−２８９０７６号公報
【特許文献２】特許第２７８８０１０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、特許文献２の分散装置を特許文献１の細胞分離装置に適用し、フィルタから解放した細胞を分散装置によって分散してから回収しようとした場合、次のような問題が発生する。フィルタから細胞を確実に解放するためには回収液を勢い良くフィルタに導入する必要がある。一方、細胞を分散させるために必要とされる乱流の流速は十分に遅く、流速が過度に速い乱流が細胞に作用した場合には細胞に影響を及ぼす。すなわち、フィルタから解放された細胞が勢い良く分散装置に流入し、分散装置の内部において細胞が過度な乱流にさらされることにより、健全な細胞の回収率が低下してしまう。
【０００６】
本発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、無菌性を担保しながら健全な細胞を高収率でかつ分散した状態で回収することができる細胞分離装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成するため、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、細胞懸濁液を収容する懸濁液容器と、該懸濁液容器に接続され、該懸濁液容器から流入された前記細胞懸濁液に含まれる細胞を捕捉する細胞捕捉フィルタと、前記懸濁液容器とは反対側において前記細胞捕捉フィルタに接続され、前記細胞捕捉フィルタに回収液を導入する第１の回収液導入部と、前記懸濁液容器と同一の側において前記細胞捕捉フィルタに接続され、前記細胞捕捉フィルタから流出した前記回収液に含まれる前記細胞を分散させる細胞分散部と、前記細胞捕捉フィルタと前記細胞分散部との間に接続され、前記細胞捕捉フィルタから流出した前記回収液を一旦貯留した後に該回収液を前記細胞分散部に導入する第２の回収液導入部とを備える細胞分離装置を提供する。
【０００８】
本発明によれば、懸濁液容器から細胞捕捉フィルタへ細胞懸濁液が流入され、次に第１の回収液導入部から細胞捕捉フィルタへ先ほどとは反対方向に回収液が導入されることにより、細胞捕捉フィルタに捕捉されていた細胞が回収液と共に細胞捕捉フィルタから押し出され、細胞分散部において分散される。これにより、閉鎖系において無菌性を担保しながら分散した状態の細胞を得ることができる。
【０００９】
この場合に、細胞捕捉フィルタから押し出された回収液は、第２の回収液導入部において一旦貯留されてから細胞分散部に導入される。すなわち、細胞捕捉フィルタへの回収液の導入速度は第１の回収液導入部によって、細胞分散部への回収液の導入速度は第２の回収液導入部によって、それぞれ独立に制御される。これにより、細胞捕捉フィルタへの回収液の導入速度は十分に速く、細胞分散部への回収液の導入速度は十分に遅くすることが可能となり、健全な細胞を高収率でかつ分散した状態で回収することができる。
【００１０】
上記発明においては、前記第２の回収液導入部の前記細胞分散部への前記回収液の導入速度が、前記第１の回収液導入部の前記細胞捕捉フィルタへの前記回収液の導入速度よりも遅くてもよい。
このようにすることで、細胞分散部および細胞捕捉フィルタの各々へ、適切な導入速度で回収液を導入することができる。
【００１１】
また、上記発明においては、前記第２の回収液導入部が、前記細胞捕捉フィルタと前記細胞分散部との間に直列に接続された貯留容器およびシリンジを備えていてもよい。
このようにすることで、細胞捕捉フィルタから流出した回収液は、貯留容器に貯留され、貯留容器からシリンジに移し替えられ、シリンジから細胞分散部に導入される。これにより、取り扱いの容易なシリンジを使用して細胞分散部に回収液を導入することができる。
【００１２】
また、上記発明においては、前記シリンジが、前記貯留容器を兼ねていてもよい。
このようにすることで、細胞捕捉フィルタから流出した回収液が直接シリンジに貯留される。これにより、構成および操作をさらに簡易にすることができる。
【００１３】
また、上記発明においては、前記第１の回収液導入部が、前記回収液を収容し前記細胞捕捉フィルタに接続された回収液容器を備えるとともに、前記第２の回収液導入部と共通の前記シリンジを備え、該シリンジによって前記細胞捕捉フィルタ内を負圧に吸引することによって前記回収液を前記細胞捕捉フィルタに導入してもよい。
このようにすることで、細胞捕捉フィルタおよび分散部への回収液の導入を共通の部材の別々の動作によって行うことにより、構成をさらに簡易にすることができる。
【００１４】
また、上記発明においては、前記シリンジが前記細胞捕捉フィルタと同一の高さまたはそれよりも低い位置に配置され、洗浄液を収容し、前記細胞捕捉フィルタに前記懸濁液容器と並列に接続されて前記細胞捕捉フィルタよりも高い位置に配置された洗浄液容器と、前記細胞捕捉フィルタと前記シリンジとの間に、これらを接続する管路の内部を大気圧に開放するエアベントバルブとを備えていてもよい。
【００１５】
このようにすることで、エアベントバルブを開放した状態で洗浄液容器内の洗浄液を重力によって下降させると、洗浄液が細胞捕捉フィルタを介してシリンジまで移動し、細胞捕捉フィルタからシリンジまでの間の管路が洗浄液によって満たされる。これにより、回収液と共にシリンジに回収された空気が回収液に気泡となって混入し、細胞が気泡によって影響されることを防止し、健全な細胞の回収率をさらに向上することができる。
【００１６】
また、上記発明においては、洗浄液を収容し、前記細胞捕捉フィルタに前記懸濁液容器と並列に接続されて前記細胞捕捉フィルタよりも高い位置に配置された洗浄液容器と、前記懸濁液容器と前記細胞捕捉フィルタとの間に接続されたドリップチャンバと、前記細胞捕捉フィルタに前記反対側において接続され、略鉛直上方に凸のＵ字管路とを備え、該Ｕ字管路の湾曲部分が、前記ドリップチャンバよりも高く前記洗浄液容器よりも低い位置に配置されていてもよい。
【００１７】
このようにすることで、細胞を捕捉した細胞捕捉フィルタへ洗浄液容器から洗浄液を導入することによって細胞捕捉フィルタに捕捉されている細胞を洗浄した後に、洗浄液の液面が細胞捕捉フィルタよりも高い位置に維持される。したがって、細胞懸濁液の細胞捕捉フィルタへの流入に先立ち、洗浄液容器から細胞捕捉フィルタを介してシリンジまで洗浄液を流してこれらを接続する管路内を洗浄液によって満たしておくことにより、回収液と共にシリンジに回収された空気が回収液に気泡となって混入し、細胞が気泡によって影響されることを防止し、健全な細胞の回収率をさらに向上することができる。
【００１８】
また、上記発明においては、前記第２の回収液導入部が、前記細胞捕捉フィルタと前記細胞分散部との間に接続された貯留容器と、該貯留容器から前記細胞分散部への前記回収液の輸送を制御するポンプとを備えていてもよい。
このようにすることで、貯留容器から細胞分散部への回収液の導入速度をポンプによって制御することができる。
【００１９】
また、上記発明においては、洗浄液を収容し、前記細胞捕捉フィルタに前記懸濁液容器と並列に接続された洗浄液容器を備え、前記第１の回収液導入部が、前記洗浄液容器内の前記洗浄液を前記回収液として前記細胞捕捉フィルタに導入してもよい。
このようにすることで、細胞を捕捉した細胞捕捉フィルタへ洗浄液容器から洗浄液を導入することによって細胞捕捉フィルタに捕捉されている細胞を洗浄することができる。また、洗浄液容器と回収液容器とを共通化し、構成を簡易にすることができる。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によれば、無菌性を担保しながら健全な細胞を高収率でかつ分散した状態で回収することができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】本発明の一実施形態に係る細胞分離装置の全体構成図である。
【図２】細胞分散部への回収液の導入速度と、単一細胞回収率（左縦軸）および細胞の生存率（右縦軸）との関係を示すグラフである。
【図３】図１の細胞分離装置の変形例を示す全体構成図である。
【図４】図１の細胞分離装置のもう１つの変形例を示す全体構成図である。
【図５】図１の細胞分離装置のもう１つの変形例を示す全体構成図である。
【図６】図５の細胞分離装置の変形例を示す全体構成図である。
【図７】図５の細胞分離装置のもう１つの変形例を示す全体構成図である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
以下に、本発明の一実施形態に係る細胞分離装置１について図面を参照して説明する。
本実施形態に係る細胞分離装置１は、図１に示されるように、細胞懸濁液に含まれる細胞を捕捉する細胞捕捉フィルタ２と、該細胞捕捉フィルタ２に管路１３によって無菌的に接続された懸濁液容器３、洗浄液容器４、回収容器５、第１の回収液導入部６および排液容器７とを備えている。図１および図３〜図７において、紙面の上下方向は鉛直上下方向に対応している。
【００２３】
細胞捕捉フィルタ２は、細胞よりも小さい孔径を有し、細胞懸濁液に含まれる細胞を選択的に捕捉可能である。細胞捕捉フィルタ２の濾材は、織布、不織布または多孔質体からなる。濾材が不織布からなる場合、繊維径は２０μｍ〜１００μｍであることが好ましい。濾材が多孔質材料からなる場合、孔径は２０μｍ〜１００μｍであることが好ましい。
【００２４】
濾材の材料は、成形や滅菌の容易性および生体親和性の観点から、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、アクリル樹脂、ナイロン、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリアクリルアミド、ポリウレタン等の合成高分子、アガロース、セルロース、酢酸セルロース、キチン、キトサン、アルギン酸塩等の天然高分子、ヒドロキシアパタイト、ガラス、アルミナ、チタニア等の無機材料、もしくは、ステンレス、チタン、アルミニム等の金属が好ましい。
【００２５】
懸濁液容器３、洗浄液容器４および回収容器５は、細胞捕捉フィルタ２の上部にバルブＶ１，Ｖ２を介して並列に接続され、バルブＶ１，Ｖ２の切り替えによって択一的に細胞捕捉フィルタ２と連通可能になっている。
【００２６】
懸濁液容器３は、細胞懸濁液を収容している。この細胞懸濁液は、例えば、生体から採取した脂肪組織を消化酵素液内で撹拌して分解することによって得られた、脂肪組織由来細胞を含む消化酵素液である。
洗浄液容器４は、細胞懸濁液に含まれる細胞を洗浄するための生理食塩水のような洗浄液を収容している。
【００２７】
これら懸濁液容器３および洗浄液容器４は、細胞捕捉フィルタ２よりも高い位置に配置されるとともに、無菌的に内部を大気圧に開放するエアベントバルブ３ａ，４ａをそれぞれ有している。バルブＶ１，Ｖ２によって細胞捕捉フィルタ２と連通した状態でエアベントバルブ３ａ，４ａを開放することによって、懸濁液容器３および洗浄液容器４から細胞捕捉フィルタ２へ向かって細胞懸濁液または洗浄液が重力によって下降するようになっている。
【００２８】
回収容器５は、例えば、培養用の容器であって、回収された細胞をそのまま培養することができる。回収容器５は、移植材のようなスキャホールドを収容し、回収容器５内において細胞がスキャホールドに播種されるようになっていてもよい。
【００２９】
第１の回収液導入部６および排液容器７は、細胞捕捉フィルタ２の下部にバルブＶ３を介して並列に接続され、バルブＶ３の切り替えによって択一的に細胞捕捉フィルタ２と連通可能になっている。
【００３０】
第１の回収液導入部６は、図示しないポンプなどの流量制御手段によって十分に速い所定の吐出速度で回収液を吐出するようになっており、バルブＶ３を介して連通した細胞捕捉フィルタ２に回収液を圧入する。これにより、細胞捕捉フィルタ２に捕捉されていた細胞は、下から上へ向かう回収液の流体圧力によって細胞捕捉フィルタ２から解放され、回収液とともに細胞捕捉フィルタ２から押し出されるようになっている。
【００３１】
また、細胞分離装置１は、細胞捕捉フィルタ２と回収容器５との間に直列に接続された第２の回収液導入部８および細胞分散部９を備えている。
【００３２】
第２の回収液導入部８は、細胞捕捉フィルタ２に接続され該細胞捕捉フィルタ２から押し出された回収液を一時的に貯留する貯留容器８１と、該貯留容器８１と細胞分散部９との間に接続されたシリンジ８２と、該シリンジ８２の吸引および吐出を制御する図示しないシリンジポンプとを備えている。シリンジ８２は、バルブＶ４の切り替えによって、貯留容器８１および細胞分散部９に択一的に連通可能になっている。
【００３３】
細胞分散部９は、シリンジ８２から導入された回収液に乱流を発生させる構造を有している。具体的には、細胞分散部９は、５０μｍ〜５００μｍ程度の流路径を有する流路が形成されている。流路は、途中位置で屈曲および分岐し、分岐した流路は再び合流している。流路の屈曲または分岐した位置においては回収液が流路の壁面に衝突することによって、また、流路が合流する位置においては互いに異なる方向から流れてきた回収液同士が衝突することによって、回収液に効果的に乱流が発生する。流路を流れる回収液がこのような乱流によって撹拌されることにより、凝集した細胞がばらばらに分散するようになっている。
【００３４】
次に、このように構成された細胞分離装置１の作用について以下に説明する。
本実施形態に係る細胞分離装置１を用いて細胞懸濁液から細胞を分離回収するには、バルブＶ１，Ｖ２の切り替えによって懸濁液容器３から細胞捕捉フィルタ２を介して排液容器７まで連通させ、エアベントバルブ３ａを開放する。これにより、懸濁液容器３内の細胞懸濁液が重力によって下降して細胞捕捉フィルタ２を上から下へ流れる。細胞捕捉フィルタ２において、細胞懸濁液内の細胞は捕捉され、細胞懸濁液の他の成分は排液容器７へ流出する。
【００３５】
次に、バルブＶ１，Ｖ２の切り替えによって洗浄液容器４と細胞捕捉フィルタ２とを連通させ、エアベントバルブ４ａを開放する。これにより、洗浄液容器４内の洗浄液が重力によって下降して細胞捕捉フィルタ２を上から下へ流れ、細胞捕捉フィルタ２に捕捉されている細胞が洗浄される。
【００３６】
次に、バルブＶ２，Ｖ３の切り替えによって第１の回収液導入部６から細胞捕捉フィルタ２を介して貯留容器８１まで連通させ、第１の回収液導入部６から細胞捕捉フィルタ２へ回収液を圧入する。これにより、細胞捕捉フィルタ２に捕捉されていた細胞が回収液とともに貯留容器８１へ押し出され、細胞を含む回収液が貯留容器８１に貯留する。
【００３７】
次に、バルブＶ４の切り替えによって貯留容器８１とシリンジ８２とを連通させ、貯留容器８１内の細胞を含む回収液をシリンジ８２内に吸引する。次に、バルブＶ４の切り替えによってシリンジ８２から細胞分散部９を介して回収容器５まで連通させ、シリンジ８２から回収液を押し出すことにより細胞分散部９に回収液を導入する。このときのシリンジ８２の回収液の押し出し速度は、シリンジポンプによって十分に遅い速度に制御される。細胞分散部９において、回収液は撹拌されながら流路を流れることにより、回収液に含まれている凝集した細胞が分散する。これにより、回収容器５において、単一に分散した状態の細胞を無菌的に回収することができる。
【００３８】
ここで、細胞分散部９に導入する回収液の適切な流速と、細胞捕捉フィルタ２に導入する回収液の適切な流速とについて考える。
図２は、細胞分散部９に導入する回収液の流速と、回収液に含まれる細胞の単一細胞回収率および生存率とを実験的に評価した結果を表わしている。単一細胞回収率は、細胞分散部９から回収された細胞のうち、孤立して存在していた単一細胞の比率である。生存率は、細胞分散部９から回収された細胞のうち、生存していた細胞の比率である。
【００３９】
実験条件は、次の通りである。細胞分散部として、流路径が１００μｍであり、特許文献２に記載された実施形態の装置と同様の形状の流路を形成したものを用いた。この細胞分散部に、シリンジを用いて、ヒト肝ガン株化細胞（直径１８μｍ）を懸濁した生理食塩水を導入した。シリンジによる生理食塩水の導入速度は、シリンジポンプによって制御した。また、細胞分散部への流入前および流出後の生理食塩水の一部をサンプルとして採取し、採取したサンプル中の細胞をトリパンブルーによって染色し、サンプルに含まれる生細胞および死細胞の数を血球計算盤を用いて測定し、細胞の生存率を算出した。これと同時に、各サンプル中の単一細胞の数を測定し、流入前における単一細胞の数に対する流出後における単一細胞の比率を単一細胞回収率として算出した。
【００４０】
図２に示されるように、直径１８μｍの細胞を流路径１００μｍの細胞分散部に導入した場合、導入速度が０．２９ｍＬ／ｓｅｃ以上であると生存率が低下し、一方導入速度が０．０４６ｍＬ／ｓｅｃ以下であると細胞が単一に分散しないことが確認された。これは、細胞分散部９において細胞の健全性と分散効率とを両立するためには、細胞分散部９への回収液の導入速度を適切に制御する必要があることを意味する。
【００４１】
一方、細胞捕捉フィルタとして市販されている間葉系幹細胞分離デバイス（カネカ社製）において、回収液の導入速度の推奨値は、１６．７ｍＬ／ｓｅｃである。
このように、細胞分散部９への回収液の適切な導入速度と、細胞捕捉フィルタ２への回収的の適切な導入速度とは大きく異なる。
【００４２】
本実施形態によれば、細胞捕捉フィルタ２に回収液を導入する第１の回収液導入部６と、細胞分散部９に回収液を導入する第２の回収液導入部８とが別体に設けられ、細胞捕捉フィルタ２および細胞分散部９への回収液の導入が独立して行われる。すなわち、細胞捕捉フィルタ２への回収液の導入速度が、細胞分散部９への回収液の導入速度に影響を与えることがない。
【００４３】
したがって、細胞捕捉フィルタ２には十分に勢い良く回収液を導入することにより細胞を確実に解放させつつ、細胞分散部９には細胞の分散に必要十分な流速で回収液を導入して細胞への影響を最小限に抑えることが可能となる。これにより、健全な細胞を高収率でかつ分散した状態で回収することができる。
【００４４】
なお、本実施形態においては、第２の回収液導入部８が、貯留容器８１に貯留した回収液をシリンジ８２に移し替えてから該シリンジ８２によって細胞分散部９へ導入することとしたが、これに代えて、図３に示されるように、貯留容器８１と細胞分散部９との間に接続されたポンプ８３を備え、該ポンプ８３によって貯留容器８１から細胞分散部９へ回収液を送ってもよい。符号８１ａは、貯留容器８１の内部を無菌的に大気圧に開放するエアベントバルブであり、符号Ｖ４’は、貯留容器８１とポンプ８３とを連通または遮断するバルブである。
このようにすることで、貯留容器８１からシリンジ８２へ回収液を移し替える工程を省略し、工程数を減らすことができる。
【００４５】
また、本実施形態においては、図４に示されるように、シリンジ８２が貯留容器８１を兼ね、細胞捕捉フィルタ２から押し出された回収液を直接シリンジ８２に貯留してもよい。
このようにすることで、貯留容器８１からシリンジ８２へ回収液を移し替える工程を省略し、工程数を減らすことができる。
【００４６】
図４のように、シリンジ８２が貯留容器８１を兼ねた構成において、細胞捕捉フィルタ２とシリンジ８２との間の管路１３を液体で満たす機構が備えられていることが好ましい。すなわち、シリンジ８２と細胞分散部９との間からバルブＶ５を介して排液容器７に接続する管路１３がさらに備えられる。この細胞分離装置１によれば、細胞捕捉フィルタ２に捕捉された細胞を洗浄した後に、以下の工程が追加して行われる。
【００４７】
バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ４の切り替えによって洗浄液容器４からシリンジ８２までを連通させ、洗浄液容器４から洗浄液を下降させる。このときに、管路１３内に存在していた空気が洗浄液によってシリンジ８２へ押し出され、管路１３内が洗浄液によって満たされる。次に、バルブＶ４，Ｖ５の切り替えによってシリンジ８２と排液容器７とを連通させ、シリンジ８２から洗浄液を押し出す。ここで、シリンジ８２は、ノズルを略鉛直上方に向けてバルブＶ５に接続されており、シリンジ８２内からは空気が先に押し出され、続いて洗浄液が押し出される。この後に、第１の回収液導入部６の作動によって細胞捕捉フィルタ２に捕捉されていた細胞をシリンジ８２へ移動させる。
【００４８】
このようにすることで、シリンジ８２に貯留した回収液に気泡が混入し、気泡が細胞に影響を与えることが防止される。これにより、健全な細胞の収率をさらに向上することができる。
【００４９】
また、本実施形態においては、第１の回収液導入部６が細胞捕捉フィルタ２に向かって回収液を押し出すこととしたが、これに代えて、図５に示されるように、第１の回収液導入部６が回収液を収容する回収液容器６１を備え、第２の回収液導入部８と共通のシリンジ８２によって、回収液容器６１の回収液を細胞捕捉フィルタ２を介して吸引することにより、回収液を細胞捕捉フィルタ２へ導入してもよい。
このようにすることで、第１の回収液導入部６の構成を簡易にすることができる。
【００５０】
図５のように、シリンジ８２の吸引によって回収液を細胞捕捉フィルタ２に導入する構成においても、回収液に気泡が混入することによって細胞が影響を受けることを防止するために、図６または図７に示されるように、細胞を含む回収液が通過する管路１３を液体で満たす機構が備えられていることが好ましい。
【００５１】
図６においては、バルブＶ２とバルブＶ４との間に、管路１３内を大気圧に開放するエアベントバルブＶ６が備えられている。符号１０は、エアベントバルブＶａを開放した際に管路１３内に流入する空気を清浄するエアフィルタである。また、洗浄液容器４が回収液容器６１を兼ね、回収液として洗浄液が細胞捕捉フィルタ２に導入されるようになっている。
【００５２】
この細胞分離装置１によれば、細胞捕捉フィルタ２に捕捉された細胞を洗浄した後に、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ４の切り替えによって洗浄液容器４からシリンジ８２までを連通させ、エアベントバルブ４ａ，Ｖ６を開放することによって洗浄液容器４内の洗浄液を重力によってシリンジ８２のノズルまで下降させる。これにより、洗浄液容器４からシリンジ８２のノズルまでの管路１３の内部を洗浄液によって満たすことができる。この状態で、エアベントバルブＶ６を閉じ、シリンジ８２の吸引によって回収液を細胞捕捉フィルタ２に導入したときに、安定した吸引力を発揮することができる。
【００５３】
図７においては、懸濁液容器３および洗浄液容器４と細胞捕捉フィルタ２との間に接続されたドリップチャンバ１１と、細胞捕捉フィルタ２と排液容器７との間に接続された略鉛直上方に凸のＵ字管路１２とが備えられている。Ｕ字管路１２の湾曲部分は、ドリップチャンバ１１よりも高い位置に配置されている。
【００５４】
この細胞分離装置１によれば、細胞捕捉フィルタ２に捕捉された細胞を洗浄した後に、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ４の切り替えによって洗浄液容器４からシリンジ８２までを連通させ、洗浄液容器４内の洗浄液を下降させることによって、洗浄液容器４からシリンジ８２までの管路１３内を洗浄液によって満たす。次に、バルブＶ２，Ｖ３を切り替えることによって洗浄液容器４から回収液容器６１までを連通させ、洗浄液容器４内の洗浄液を下降させることによって、洗浄液を回収液として回収液容器６１に貯留する。
【００５５】
次に、上述したように、細胞捕捉フィルタ２に細胞を捕捉し、捕捉された細胞を洗浄する。このときに、ドリップチャンバ１１およびＵ字管路１２によって、懸濁液容器３または洗浄液容器４から下降する細胞懸濁液および洗浄液の液面は、ドリップチャンバ１１の液面の位置またはそれよりも高い位置に維持される。これにより、細胞捕捉フィルタ２とシリンジ８２との間の管路１３内を洗浄液によって満たすことができる。
【符号の説明】
【００５６】
１  細胞分離装置
２  細胞捕捉フィルタ
３  懸濁液容器
４  洗浄液容器
５  回収容器
６  第１の回収液導入部
６１  回収液容器
７  排液容器
８  第２の回収液導入部
８１  貯留容器
８２  シリンジ
８３  ポンプ
９  細胞分散部
１０  エアフィルタ
１１  ドリップチャンバ
１２  Ｕ字管路
１３  管路
Ｖ１〜Ｖ５  バルブ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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