(57)【要約】      （修正有）【課題】生活習慣によるむくみ症状を再現するための動物モデルの作製及びむくみ治療薬の有効性を簡単に評価する方法を提供する。【解決手段】被験動物を強制的に３日以上立位状態にさせることでむくみ症状を発症させる動物モデルであり、被被験動物の足容積の変動差を測定することでむくみ症状の評価を可能とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験動物を２足による立位状態で３日以上保持して、むくみを発生させることを特徴とするむくみ症状モデル動物の作製方法。
【請求項２】
被験動物を２足による立位状態で３日以上保持して、該被験動物の足容積の変動量によりむくみ状態を測定するむくみ測定方法。
【請求項３】
請求項２に記載のむくみ測定方法を用いるむくみ治療薬の評価方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、むくみ症状モデルの作製及びむくみ治療薬の評価方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
むくみとは、顔や手足などの末端が体内の水分により痛みを伴わない形で腫れる症候をいう。むくみ症状には種々の態様があるが、疾患による症状には、腎臓やリンパ管などの器官異常によるむくみ症状があり、一般的に病院での治療が必要となる。そして、このような疾患によるむくみ症状を評価するために、腎不全モデルやリンパ管結紮モデルなどが知られている。
【０００３】
一方、上記疾患がないにも関わらず、日常的な立ち仕事、ストレスや疲労、食生活の乱れなど生活習慣によるむくみ症状も多く、一般的にマッサージや弾性ストッキング等の処置を施している。この種のむくみ症状は、一過性で、軽度のものがほとんどであるが、ＱＯＬの妨げともなる。そして、このような生活習慣によるむくみ症状を評価するための標準的な評価モデルは知られていない。
【０００４】
そこで、特開２００７−９１６８３号公報にはラットを水浸飼育することでむくみを発生させる方法が開示されている。しかし、この開示された方法ではむくみが発生するまで６日間要するという問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００７−９１６８３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、生活習慣によるむくみ症状を再現するための動物モデルの作製及びむくみ治療薬の有効性を簡易に評価する方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、むくみ症状を再現するためにラットを強制的に立位状態で３〜４日間飼育することで、むくみ症状を安定的に発症させることを見出し、本発明を完成させた。
【０００８】
すなわち本発明は、被験動物を２足による立位状態で３日以上保持することでむくみを発生させることを特徴とするむくみ症状モデル動物の作製方法である。
【０００９】
第２の発明は、被験動物を２足による立位状態で３日以上保持させて、該被験動物の足容積の変動量によりむくみ状態を測定するむくみ測定方法である。
【００１０】
第３の発明は、上記むくみ測定方法を用いたむくみ治療薬の評価方法である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、生活習慣によるむくみ症状に近似した動物モデルを簡易に短期間で作ることが可能となった。
【００１２】
また、当該動物モデルにより、むくみ治療薬の有効性を容易に評価、スクリーニングすることができるようになった。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】動物モデルによるむくみ発生結果（日本エスエルシー製ラット）
【図２】動物モデルによるむくみ発生結果（日本チャールス・リバー製ラット）
【図３】動物モデルによるむくみ治療薬有効性評価結果
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、以下の手順で行う。
【００１５】
（ラットの準備）
被験動物として、８週齢のＳＤ系雄性ラットを準備する。ラットの体重は２７０±３０ｇであることが望ましい。また被験動物の供給元である動物生産会社は１社に限定するのが望ましい。動物生産会社の違いにより、むくみの発症状態が異なってくるからである。
【００１６】
（飼育ケージの準備）
飼育ケージを準備する。飼育ケージに、ラットが後肢２足による立位状態を３日以上保持できるような環境を準備する。例えば、ラットの４足立位状態で、水が胴体に浸かる程度にケージ内に水を満たす方法がよい。具体的には、前記８週齢のＳＤ系雄性ラットの大きさであれば、水深を１．５ｃｍ（水温２２±１℃）とするのが好ましい。水深が１．０ｃｍ以下の場合、２足による立位状態を保持しないで４足立位状態の時間が生じ、むくみ発生にばらつきが生じるからである。
【００１７】
（飼育ケージ内での水浸飼育）
上記水を張った飼育ケージにラットを入れ、後肢２足による立位状態を保持させる。４足立位ではむくみは発生せず、後肢２足による立位状態を保持したときにむくみが発生するからである。
【００１８】
後肢２足による立位状態のまま３日以上水浸飼育をする。２日目までの場合は顕著なむくみ症状が発生しないからである。なお、５日目以降になるとむくみが再び小さくなってしまう傾向がある。したがって、むくみ状態としては３〜４日目が適している。
【００１９】
（むくみの測定）
ラットを飼育ケージから取り出し、ラットの後肢の足容積を測定する。水浸飼育前後での足容積の差をむくみ率とする。
【００２０】
（むくみ治療薬の有効性評価）
むくみ治療剤の有効性評価を行う場合は、被験薬をラットの腹腔内、皮下注射又は経口などの経路にて投与し、ラットの水浸飼育前、水浸飼育中、水浸飼育後等にむくみ率の変動を評価する。
【実施例】
【００２１】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２２】
（実施例１）
被験動物として、日本エスエルシー株式会社の８週齢ＳＤ系雄性ラットを準備し、１６匹を無作為にそれぞれ８匹ずつ２群に分けた。
【００２３】
次にラットの後肢の足容積を室町機械株式会社製の足容積測定装置（プレシスモメーターＭＫ−１０１Ｐ）を用いて測定した。
【００２４】
水温２２℃の水を深さ１．５ｃｍまで満たした透明飼育ケージ（３８×２５×１８ｃｍ、東洋理工）にラットを入れ、後肢２足による立位状態のままで水浸飼育し、５日目まで毎日足容積の測定をした。
【００２５】
結果を図１に示す。水浸飼育群は１日目に足容積が一旦減少するが、２日目から足容積が増加し、３日目をピークにしてその後足容積は減少した。
【００２６】
（実施例２）
他の動物生産会社のラットとして、日本チャールス・リバー株式会社の８週齢ＳＤ系雄性ラットを準備し、１６匹を無作為にそれぞれ８匹ずつ２群に分けた。その後、実施例１と同様の方法で足容積を測定した。
【００２７】
結果を図２に示す。水浸飼育群は１日目に一旦足容積が減少した後、２日目から足容積が増加し、４日目をピークにしてその後足容積は減少した。３〜４日目には見た目でもわかる大きなむくみが発症した。
【００２８】
（実施例３）
次に、上記動物モデルをむくみ治療薬の有効性評価に用いることができるかについて、既存のむくみ治療薬を被験薬として用いて評価した。
【００２９】
被験動物として、より大きなむくみが観察された日本チャールス・リバー株式会社の８週齢ＳＤ系雄性ラット１６匹を無作為にそれぞれ４群に分けた。
【００３０】
次に、むくみの改善効果を評価したい薬物を選定した。ここでは、抗疲労効果のあるビタミンＢ１誘導体のベンフォチアミン、むくみに対する効能がある漢方薬の九味檳榔湯を選択した。それぞれ投与する群を「ベンフォチアミン投与群」および「九味檳榔湯投与群」とした。
薬物投与群には、足容積測定時にそれぞれベンフォチアミン（１０００ｍｇ／ｋｇ／日）、九味檳榔湯（１０００ｍｇ／ｋｇ／日）を経口投与した。一方、正常飼育群と水浸飼育群には同量の蒸留水を経口投与した。
【００３１】
水温２２℃の水を深さ１．５ｃｍまで満たした透明飼育ケージ（３８×２５×１８ｃｍ、東洋理工）にラットを入れ、後肢２足による立位状態のままで４日間水浸飼育した。
【００３２】
ラットの後肢の足容積は、室町機械株式会社製の足容積測定装置（プレシスモメーターＭＫ−１０１Ｐ）を用いて、飼育ケージ投入時、１日目、２日目、３日目、４日目に測定した。
【００３３】
結果を図３に示す。水浸飼育群は日を追うごとに足容積が増加し、むくみ症状が確認された。一方、ベンフォチアミン投与群および九味檳榔湯投与群は、水浸飼育群と比較し有意にむくみ量が抑制されており、正常飼育群と変わらない結果が示された。
この結果から、本動物モデルはむくみ治療薬の有効性評価に有用であることが示された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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