(57)【要約】【課題】メタボリック症候群（糖・脂質代謝異常）の発症リスクを１年以上前に早期診断するための予測方法に関する。【解決手段】被験者のアディポネクチンと高感度ＣＲＰの血中濃度を測定し、アディポネクチン濃度が６．６以下かつ／または高感度ＣＲＰ濃度が０．８以上である被験者は、３年以内にメタボリック症候群を発症する危険性が高いと予測できるようになった。このことにより、健常人において、メタボリック症候群への発症リスクの早期予知が可能になったので、適切な早期に治療を開始でき、将来のメタボリック症候群の発症を早期に回避できるようになる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液サンプル中のアディポネクチンと高感度ＣＲＰの血中濃度を測定し、
被験者の３年以内のメタボリック症候群の発症リスクを予測する方法であって、
ａ）血中の全アディポネクチン濃度が６．６μｇ／ｍＬ以下、
及び／又は
ｂ）血中の高感度ＣＲＰ濃度が０．８ｍｇ／Ｌ以上
の被験者が、３年以内にメタボリック症候群を発症する危険性が高いと予測することを特徴とする、発症リスクの予測方法。
【請求項２】
上記全アディポネクチン濃度が５．０μｇ／ｍＬ以下の数値であることを特徴とする、請求項１に記載の発症リスクの予測方法。
【請求項３】
上記ａ）の全アディポネクチン濃度が上記閾値以下となること及び/又はｂ）の血中の高感度ＣＲＰ濃度が上記閾値以上となることを特徴とする、請求項１または２に記載の発症リスクの予測方法。
【請求項４】
上記発症リスクが、Ｃｏｘ比例ハザードモデルによるハザード比として、４〜５倍以上であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の発症リスクの予測方法。
【請求項５】
血中の全アディポネクチン濃度を４分位（≧８．９、８．８〜６．７、６．６〜５．１、５．０≧）して、ハザード比を評価することを特徴とする、請求項１に記載の発症リスクの予測方法。
【請求項６】
血中の高感度ＣＲＰ濃度を４分位（≧０．８、０．４〜０．７、０．３、０．２≧）して、ハザード比を評価することを特徴とする、請求項１に記載の発症リスクの予測方法。
【請求項７】
上記請求項１〜６の発症リスクの予測方法で、３年以内のメタボリックシンドロームの発症リスクの危険性が高いと予測された被験者に対して、治療法を提示する方法。
【請求項８】
上記治療法が運動及び／又は栄養に関する介入療法であることを特徴とする、請求項７の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖尿病を招来するメタボリック症候群（糖・脂質代謝異常）の初期症状の診断のために、血中のアディポネクチン濃度と高感度ＣＲＰ濃度を測定することにより、メタボリック症候群の発症リスクを予測する方法に関するものである。更には、メタボリック症候群に対する介入療法の効果の診断とコントロール状態を評価するための方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、糖尿病が日本で急激に増加しているが、その理由として高脂肪食や運動不足によるインスリン抵抗性が原因と考えられている。一方、脂肪細胞から分泌されるアディポネクチンは、インスリン抵抗性を改善し、動脈硬化性疾患の防衛因子になる因子であることが解明されてきている。また、アディポネクチンの血中濃度は、肥満度（ＢＭＩ）と逆相関し、内臓脂肪の蓄積に伴い、有意に低下することが明らかになっている。更に、糖尿病患者は、健常人と比べて、アディポネクチンの血中濃度が有意に低くなっており、冠動脈疾患（ＣＡＤ）を伴う糖尿病患者では、アディポネクチンの血中濃度が更に低くなっている。このように、インスリン抵抗性、動脈硬化に対する関連が検討され、アディポネクチンは生体内の抗糖尿病因子であることが示されている（非特許文献１）。
【０００３】
また、アディポネクチンの血中濃度が、ＨｂＡ１ｃの濃度とも負の相関性を示すことが知られている（非特許文献３）。更に、これらの文献では、アディポネクチンの血中濃度が糖尿病や脂質代謝異常のパラメーターと相関性を有すると言う、定性的な報告に止まっている。そして、アディポネクチンの血中濃度と他のパラメーターを組み合せた、発症予測は進み始めたばかりであり（特許文献２）、充分な結果は得られていない状況である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】ＷＯ２００３／０１６９０６
【特許文献２】特表２０１１−５２１２４８号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】「わかる実験医学シリーズ  生活習慣病がわかる」第１章（羊土社、２００５年刊）
【非特許文献２】Ｓｅｌｖｉｎ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｌｙｃａｔｅｄ  Ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ，  Ｄｉａｂｅｔｅｓ，  ａｎｄ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｉｓｋ  ｉｎ  Ｎｏｎｄｉａｂｅｔｉｃ  Ａｄｕｌｔｓ．  ＮＥＪＭ．  ２０１０；３６２：８００−８１１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、糖尿病の予備段階と考えられるメタボリック症候群の発症リスクを予測する方法を提供するものであり、更には、その後の介入療法による効果の確認、評価の方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、健常人が徐々に高血圧、脂質代謝異常と糖尿病に移行していく現象の中で、どのような血中因子を用いれば、上記病気への移行を適切に予測できるかと言うことを鋭意検討してきた。特に、徳島県におけるコホート研究の中で本発明者は、どのような血中因子が脂質代謝異常と糖尿病に関するパラメーターに相関性よく影響するかを評価した。その結果、血中因子の中で、糖・脂質代謝や血圧に影響を及ぼすアディポネクチンや慢性炎症の状態を示す高感度ＣＲＰがメタボリック症候群に関連しているとの知見が得られてきた。そこで今回、徳島県における３年間の追跡調査の成績（合計４６８名）に基づいて、血清アディポネクチンや高感度ＣＲＰ（ｈｓ−ＣＲＰ）がメタボリック症候群の予測指標としての有用か否かを検討した。
本発明者らは、上記検討の結果、徳島県の男性労働者では、血清アディポネクチン濃度の低下と高感度ＣＲＰの上昇というパラメーター変化を組み合わせて評価することにより、メタボリック症候群の発症リスクの上昇を明確に評価できることを見出した。本発明者らは、これらの知見に基づき、本発明を完成させた。
【０００８】
即ち、本発明の要旨は以下の通りである。
（１）血液サンプル中のアディポネクチンと高感度ＣＲＰの血中濃度を測定し、
被験者の３年以内のメタボリック症候群の発症リスクを予測する方法であって、
ａ）血中の全アディポネクチン濃度が６．６μｇ／ｍＬ以下、
及び／又は
ｂ）血中の高感度ＣＲＰ濃度が０．８ｍｇ／Ｌ以上
の被験者が、３年以内にメタボリック症候群を発症する危険性が高いと予測することを特徴とする、発症リスクの予測方法。
（２）上記全アディポネクチン濃度が５．０μｇ／ｍＬ以下の数値であることを特徴とする、上記（１）に記載の発症リスクの予測方法。
（３）上記ａ）の全アディポネクチン濃度が上記閾値以下となること及び/又はｂ）の血中の高感度ＣＲＰ濃度が上記閾値以上となることを特徴とする、上記（１）または（２）に記載の発症リスクの予測方法。
（４）上記発症リスクが、Ｃｏｘ比例ハザードモデルによるハザード比として、４〜５倍以上であることを特徴とする、上記（１）〜（３）のいずれかに記載の発症リスクの予測方法。
（５）血中の全アディポネクチン濃度を４分位（≧８．９、８．８〜６．７、６．６〜５．１、５．０≧）して、ハザード比を評価することを特徴とする、上記（１）に記載の発症リスクの予測方法。
（６）血中の高感度ＣＲＰ濃度を４分位（≧０．８、０．４〜０．７、０．３、０．２≧）して、ハザード比を評価することを特徴とする、上記（１）に記載の発症リスクの予測方法。
（７）上記（１）〜（６）の発症リスクの予測方法で、３年以内のメタボリックシンドロームの発症リスクの危険性が高いと予測された被験者に対して、治療法を提示する方法。
（８）上記治療法が運動及び／又は栄養に関する介入療法であることを特徴とする、上記（７）の方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明は、アディポネクチンと高感度ＣＲＰを指標とする、健常人がメタボリック症候群になる発症リスクの予測方法である。即ち、健常人のアディポネクチンの血中濃度に一定の閾値（６．６μｇ／ｍＬ以下）を定め、更に高感度ＣＲＰの血中濃度にも同様に閾値（０．８ｍｇ／Ｌ以上）を定め、これを越えて悪化した被験者に対して、その後３年間にメタボリック症候群を発症するリスク（ハザード比）を予測する方法である。
即ち、アディポネクチンと高感度ＣＲＰの濃度が正常値（アディポネクチンが≧８．９、高感度ＣＲＰが０．２≧）の被験者における３年間のメタボリック症候群の発症比率を１として、上記血中因子の各閾値の被験者におけるメタボリック症候群の発症リスク（ハザード比）を算出した。その結果、本発明の予測方法では、アディポネクチンと高感度ＣＲＰの上記閾値を越えた被験者に関して、その３年以内にメタボリック症候群に移行し、発症するリスクは約４〜５倍高くなることが見出された。
このように、アディポネクチンと高感度ＣＲＰの閾値を指標として数値の変動に注意すれば、健常人のメタボリック症候群の発症リスクを適切に評価できるので、該当する被験者にとっては、発症リスクを明瞭に自覚できることになる。それ故、被験者の行動変容が起こり易くなり、被験者が積極的に発症リスクを回避するために行動する。その結果、メタボリック症候群の前段階の被験者が回避療法を早期に開始し易くなっている。
本発明の予測方法により、メタボリック症候群の前段階の被験者に、適切な運動治療、食事コントロール等を行なうことにより、メタボリック症候群への移行頻度を大きく低減させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】平成２０年度から３年間の徳島県糖尿病追跡調査（徳島コホート研究）で得られた、血中の全アディポネクチン濃度の減少に伴って増加するメタボリック症候群の発症率（年齢調整）を表した図である。
【図２】血中の全アディポネクチン濃度の減少に伴って増加するメタボリック症候群発症のハザード比（ＨＲ：Ｈａｚａｒｄ  ｒａｔｉｏｓ）を表した図である。このＨＲは、年齢、ＢＭＩ、喫煙習慣、アルコールの摂取と運動習慣で調整されている。
【図３】血中の高感度ＣＲＰの濃度の増加に伴って増大するメタボリック症候群の発症率（年齢調整）を表した図である。
【図４】血中の高感度ＣＲＰ濃度の減少に伴って増加するメタボリック症候群発症のハザード比（ＨＲ：Ｈａｚａｒｄ  ｒａｔｉｏｓ）を表した図である。このＨＲは、年齢、ＢＭＩ、喫煙習慣、アルコールの摂取と運動習慣で調整されている。
【図５】高感度ＣＲＰで調整した後の血中の全アディポネクチン濃度の減少に伴って増加するメタボリック症候群発症のハザード比（ＨＲ：Ｈａｚａｒｄ  ｒａｔｉｏｓ）を表わした図である。このＨＲは、年齢、ＢＭＩ、喫煙習慣、アルコールの摂取、運動習慣と高感度ＣＲＰで調整されている。
【図６】全アディポネクチンで調整した後の血中の高感度ＣＲＰの濃度の増加に伴って増加するメタボリック症候群発症の多変量調整されたハザード比（ＨＲ：Ｈａｚａｒｄ  ｒａｔｉｏｓ）を表わした図である。このＨＲは、年齢、ＢＭＩ、喫煙習慣、アルコールの摂取、運動習慣と全アディポネクチンで調整されている。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明のアディポネクチンの血中濃度、高感度ＣＲＰの測定は、それぞれ公知の方法に準じて測定し、算出することができる。例えば、酵素、抗体等を使用する生物学的方法（特に免疫学的方法）、血糖値の測定に使用可能な光学的方法などの公知の方法に基づき、各々血液（血清ないし血漿）サンプルから、常法に従って測定することができる。
本発明で「アディポネクチン」とは、脂肪細胞より分泌されるアディポサイトカインの１つであり、２４４個のアミノ酸からなる蛋白質であり、血中には３量体を基本にして、数種類の多量体が存在すると報告されている。最近、１２〜１８量体に相当する高分子量アディポネクチンの存在比率などが、より病態を反映するとの報告もなされている。本発明では、アディポネクチンの総濃度が病態を反映することに変わりがないことから、アディポネクチンの血中濃度としては、アディポネクチンの総濃度と高分子量アディポネクチンの濃度等を区別せず使用する。なお、高分子量アディポネクチンの濃度を測定した場合には、その存在比率からアディポネクチンの総濃度に換算して評価する。
なお、アディポネクチンの生理活性としては、インスリン感受性の亢進、動脈硬化の抑制、抗炎症、心筋肥大の抑制などが報告されている。アディポネクチンの血中濃度は内臓脂肪量に逆相関するとされており、ヒトの正常値の範囲はアディポネクチンの総濃度として５〜１５μｇ／ｍｌであると報告されている。
なお、本発明では、血中の全アディポネクチン濃度（μｇ／ｍｌ）を４分位（≧８．９、８．８〜６．７、６．６〜５．１、５．０≧）して、メタボリック症候群発症のハザード比を評価した。これらの閾値の中で全アディポネクチン濃度（μｇ／ｍｌ）が６．６以下になると、ハザード比が約５倍に上昇することが見出された。更に、５．０以下になれば、より有意差を持ってハザード比が上昇した。
【００１２】
本発明で「高感度ＣＲＰ」とは、炎症性疾患のマーカーとして広く利用されているものであり、ｈｉｇｈ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｃ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ｈｓＣＲＰ）のことである。高感度ＣＲＰは単球からのＩＬ−６、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−αなどの炎症性サイトカイン分泌促進作用や血管内皮細胞でのＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、ＭＣＰ−１の発現増強を介して単球内皮細胞への接着を亢進させる作用を有しており、最近の研究では、高感度ＣＲＰは内臓脂肪やインスリン抵抗性と相関があると報告されている。また、高感度ＣＲＰ濃度は血管内皮の機能障害の程度と相関することが明らかになり、その微増が狭心症や心筋梗塞を起こす危険因子として注目されている。
以上のように、高感度ＣＲＰを測定することにより、慢性炎症の存在を予見し、動脈硬化性疾患発症のリスクを知ることができると考えられている。
なお、本発明では、血中の高感度ＣＲＰ濃度（ｍｇ／Ｌ）を４分位（≧０．８、０．４〜０．７、０．３、０．２≧）して、メタボリック症候群発症のハザード比を評価した。これらの閾値の中で高感度ＣＲＰ濃度（ｍｇ／Ｌ）が０．８以上になると、ハザード比が約４倍に上昇することが見出された。なお、０．３以上になれば、ハザード比は、２倍以上に上昇し始めることが見出さされた。
【００１３】
本発明で「治療法」とは、健康の維持向上を図るための療法のことを言い、例えばサプリメントや健康補助食品の摂取や運動及び／又は栄養に関する介入療法などを挙げることができる。
本発明で「運動及び／又は栄養に関する介入療法」とは、糖尿病、高血圧、脂質代謝異常などに関して早期介入、早期治療を行うため、食事や運動に関して、適切な生活習慣指導を行ない、特定健診レベルでの数値管理を行なうことを言う。例えば、糖代謝異常の数値管理としては、特定保健指導レベルの基準値としてＨｂＡ１ｃ（ＪＤＳ値）は５．２％未満、空腹時血糖値は１００ｍｇ／ｄＬ未満になるように、適切な生活習慣指導や肥満の是正などが行なわれている。
【実施例】
【００１４】
次に実施例を挙げて本発明を更に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１５】
（実施例１）メタボリック症候群（糖・脂質代謝異常）の発症予測パラメーターの検討
ａ）方法
（コホート研究の対象者）
性別、糖尿病の有無を問わず、２０−６０歳以下の人について、平成２０年度の徳島県糖尿病断面調査を行なった（８１７名、内男子５５０名）。その中で、男性のうち、食後受診者と既にメタボリック症候群を発症していた者の８２名を除いた４６８名を３年間追跡し、毎年実施している疫学調査にてメタボリック症候群の有無を判定できた３５５名を本研究の対象者とした。
メタボリック症候群（ＭｅｔＳ）の定義として、ＩＤＦ、ＮＨＬＢＩ、ＡＨＡ、Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｒｔ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｏｂｅｓｉｔｙの共同暫定声明基準を用いた。なお、追跡期間内に４０例がメタボリック症候群を発症した。
【００１６】
（評価データ）
対象者から採取したデータは、血糖値、インスリン濃度、その他の血中因子（アディポネクチン、遊離脂肪酸、中性脂肪（トリグリセリド）、ＨＤＬ−コレステロール、インターロイキン−６、インターロイキン−１８、高感度ＣＲＰ等）、生活習慣（栄養素摂取量、日常生活の活動度）、バックグラウンド（年齢、身長、体重、ウェスト、ヒップ、体脂肪率、薬剤使用歴等）である。なお、１０時間以上の絶食後に採血し、血中の因子を測定した。
【００１７】
（１）メタボリック症候群の基準：
以下のイ）〜ホ）の３〜５つを充足する人をメタボリック症候群と定義する。
イ）腹囲：    男性≧９０ｃｍ、
ロ）トリグリセライド：  ≧１５０ｍｇ／ｄＬ
ハ）ＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）＜４０ｍｇ／ｄＬ
ニ）血圧：  最高血圧    ≧１３０ｍｍＨｇ
最低血圧    ≧８５ｍｍＨｇ
ホ）空腹時血糖値：≧１００ｍｇ／ｄＬ
【００１８】
（２）データ処理：
イ）血清アディポネクチン濃度：
対象者を血清アディポネクチン濃度で４分位し、Ｃｏｘ比例ハザードモデルを用いてハザードを算出した。その結果を図１、２に示す。
ロ）高感度ＣＲＰ濃度：
前項と同様の解析を高感度ＣＲＰでも行った。その結果を図３、４に示す。
【００１９】
ｂ）結果
イ）血清アディポネクチン濃度：
図1-２に示されるように、血清アディポネクチン濃度（μｇ／ｍＬ）の低下とともにメタボリック症候群の発症率は有意に上昇した（傾向性検定ｐ＜０．０１）。年齢、ＢＭＩ、喫煙、飲酒、運動で調整したメタボリック症候群のハザード比は、第１分位に比べ第３分位４．９２（９５％信頼区間１．１０−２２．０６、ｐ＝０．０４）、第４分位４．９２（１．１２−２１．７１、ｐ＝０．０４）と有意に上昇した。
ロ）高感度ＣＲＰ濃度：
高感度ＣＲＰでも前項と同様の結果を認め、図3-４に示されるように、高感度ＣＲＰ濃度（ｍｇ／Ｌ）の上昇とともにメタボリック症候群の発症率は有意に上昇し（傾向性検定ｐ＜０．０１）、多変量調整後のハザード比は、第１分位に比べ第４分位で４．１７（１．３６−１２．７５、ｐ＝０．０１）と有意に上昇した。
更に、血清アディポネクチン濃度とメタボリック症候群の発症時のメタボリック症候群構成因子数との関連では、血清アディポネクチン濃度はメタボリック症候群構成因子数が増加するとともに有意に低下した（傾向性検定ｐ＜０．０１）。
【００２０】
上記結果（図１〜４）に示されるように、徳島県の男性労働者では、血中アディポネクチン濃度の低下と高感度ＣＲＰ濃度の上昇に伴って、メタボリックシンドロームの発症リスクが上昇することが明らかになった。加えて、健常人（血中アディポネクチン濃度が≧８．９、又は高感度ＣＲＰ濃度が０．２≧）を基準として（１．０とする）、メタボリック症候群発症のハザード比を表したところ、図５のように血中アディポネクチンでは、高感度ＣＲＰの影響を除いても、アディポネクチン濃度（μｇ／ｍＬ）が６．６以下に低下すると、健常人と比較し、発症ハザード比が約５倍上昇することが示された。
一方、高感度ＣＲＰ濃度（ｍｇ／Ｌ）の場合、図６のように、血中アディポネクチンの影響を除いても、高感度ＣＲＰ濃度が０．８以上になれば、健常人と比較し、発症ハザード比が約３倍上昇することが示された。
メタボリック症候群発症・進展の過程において脂肪組織慢性炎症によって血中アディポネクチン値が低下し、高感度ＣＲＰ濃度が上昇するとされてきた。したがって血中アディポネクチン値の低下と高感度ＣＲＰ濃度の上昇はメタボリック症候群の発症・進展過程の同一の事態を報告するマーカーと考えられてきた。しかし図５−６に示されたデータは、メタボリック症候群の発症や進展過程において、血中アディポネクチン値低下を来す生体内の変化によらず、あるいは高感度ＣＲＰ値上昇を来す生体内の変化によらずに発生・進展するメタボリック症候群があることを示している。さらに血中アディポネクチン値低下を来す生体内の変化なしにメタボリック症候群が発生・進展する過程を高感度ＣＲＰ濃度上昇で検出でき、高感度ＣＲＰ値上昇を来す生体内の変化なしにメタボリック症候群が発生・進展する過程を血中アディポネクチン値で検出できることを示している。したがって血中アディポネクチン濃度と高感度ＣＲＰ濃度の両方を用いることで、より高い精度で将来のメタボリック症候群発症のリスクを予測できる。上記結果（図５、６）で用いた血中アディポネクチン濃度（６．６μｇ／ｍＬ）と高感度ＣＲＰ濃度（０．８ｍｇ／Ｌ）に対するメタボリック症候群発症の感度、特異度を以下の表１に示す。
【表１】
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上記の表１より血中アディポネクチンと高感度ＣＲＰを両方用いてメタボリック症候群の発症を検討した場合、単独で検討した場合よりも感度が高い。メタボリック症候群は、適切な運動治療、食事コントロール等を行なうことにより、発症・進展を防ぐことが可能であるため、最も高い感度を示した血中アディポネクチンと高感度ＣＲＰの両方を用いることが極めて重要と考えられる。
以上より、血中の全アディポネクチン濃度が６．６以下、あるいは高感度ＣＲＰ濃度が０．８以上となると、３年以内に、メタボリック症候群を発症するリスクが高いと予測できるようになった。加えて、血中アディポネクチンと高感度ＣＲＰの両方を測定することにより、メタボリック症候群予備軍への早期介入が可能になる。
【産業上の利用可能性】
【００２１】
本発明の糖尿病発症リスクの予測方法によれば、被験者の血液データ（血中のアディポネクチン濃度と高感度ＣＲＰ濃度）を用いて、メタボリック症候群への発症リスクを早期（約３年前）に予測できる。それ故、発症前または発症初期のステージで食生活や運動習慣の改善や治療が開始でき、メタボリック症候群又は２型糖尿病への移行を回避することができる。即ち、アディポネクチンと高感度ＣＲＰの血中濃度を指標にして閾値を越える数値変動の見られた被験者については、数年（約３年）以内のメタボリック症候群を発症するハザード比を予測することができる。従って、本発明は、メタボリック症候群の初期診断と治療にとって、極めて有用な予測方法の発明である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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