(57)【要約】【課題】ヒトＩＬ−２３Ｒに対する抗体ならびにたとえば炎症性障害、自己免疫障害、および増殖障害の処置でのその使用を提供すること。【解決手段】本発明の一実施形態では、交差遮断アッセイで、ヒトＩＬ−２３Ｒと本発明の結合性化合物の結合を遮断することができる抗体に関し、別の実施形態では、ＩＬ−２３Ｒ媒介性の活性を遮断することができる結合性化合物に関するものであり、そのような活性は、ＩＬ−２３の結合またはＴＨ１７細胞の増殖もしくは生存の媒介を含むが、これらに限定されない。また、本発明は、ヒト被験体において免疫応答を抑制する方法であって、ＩＬ−２３シグナル伝達を遮断するのに有効な量で、ＩＬ−２３Ｒに特異的な抗体（またはその抗原結合性断片）をその必要のある被験体に投与する工程を含む方法を包含する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の結合性化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、インターロイキン−２３Ｒ（ＩＬ−２３Ｒ）に特異的な抗体およびその使用に関する。より具体的には、本発明は、ヒトＩＬ−２３Ｒを認識し、特に炎症性障害、自己免疫障害、および増殖障害でその活性を調整するヒト化抗体に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫系は、感染体、たとえば細菌、多細胞生物、およびウイルスからならびに癌から個体を防御するために機能する。この系は、単球、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）、好酸球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および好中球などのいくつかのタイプのリンパ系細胞および骨髄性細胞を含む。これらのリンパ系細胞および骨髄性細胞は、サイトカインとして知られているシグナル伝達タンパク質を産生することが多い。免疫応答は、炎症、つまり、全身的なまたは体の特定の位置での免疫細胞の蓄積を含む。感染体または外来性物質に応答して、免疫細胞は、免疫細胞の増殖、発達、分化、または移動を交互に調整するサイトカインを分泌する。免疫応答は、たとえば、免疫応答が、自己免疫障害における場合のように過剰な炎症を伴う場合、病的結果をもたらし得る。たとえば非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４を参照されたい。
【０００３】
インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）は、ｐ３５サブユニットおよびｐ４０サブユニットから構成されるヘテロ二量体分子である。研究により、ＩＦＮγを分泌するＴ−ヘルパー１型ＣＤ４＋リンパ球へのナイーブＴ細胞の分化にＩＬ−１２が重大な役割を果たすことが示されている。ＩＬ−１２は、インビボでのＴ細胞依存性の免疫応答および炎症応答に必須であることもまた示されている。たとえば非特許文献５を参照されたい。ＩＬ−１２受容体は、ＩＬ−１２Ｒβ１サブユニットおよびＩＬ−１２Ｒβ２サブユニットから構成される。
【０００４】
インターロイキン−２３（ＩＬ−２３）は、２つのサブユニット、ＩＬ−２３に特有のｐ１９およびＩＬ−１２と共有されるｐ４０から構成されるヘテロ二量体サイトカインである。ｐ１９サブユニットは、ＩＬ−６、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）およびＩＬ−１２のｐ３５サブユニットに構造的に関係する。ＩＬ−２３は、ＩＬ−２３ＲおよびＩＬ−１２受容体によって共有されるＩＬ−１２Ｒβ１から構成されるヘテロ二量体受容体に結合することによってシグナル伝達を媒介する。非特許文献６を参照されたい。ＩＬ−１２受容体は、ＩＬ−１２Ｒβ１サブユニットおよびＩＬ−１２Ｒβ２サブユニットの複合体である。非特許文献７を参照されたい。
【０００５】
ｐ４０の遺伝子欠損の結果（ｐ４０ノックアウトマウス；ｐ４０ＫＯマウス）は、ｐ３５ＫＯマウスで認められるものよりも重症であることが多くの初期の研究で実証された。これらの結果のいくつかは、ＩＬ−２３の発見およびｐ４０ＫＯがＩＬ−１２だけではなくＩＬ−２３の発現をも妨げるといった知見によって最終的に説明された（たとえば非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１；非特許文献１２を参照されたい）。
【０００６】
ｐ４０ＫＯマウスの使用を通しての最近の研究は、ＩＬ−２３およびＩＬ−１２の両方の遮断が多様な炎症性障害および自己免疫障害の有効な処置となることを示した。しかしながら、ｐ４０を通してのＩＬ−１２の遮断は、日和見微生物感染に対する感受性の増加などの多様な全身性の結果を有するようにみえる。非特許文献１３。
【０００７】
ＩＬ−２３Ｒは、重大な遺伝的要因として炎症性腸障害クローン病および潰瘍性大腸炎に関連付けられてきた。非特許文献１４。全ゲノム関連研究（ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉｄｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ）により、ＩＬ−２３Ｒの遺伝子は、クローン病と高度に関連し、まれなコード改変体（Ａｒｇ３８１Ｇｌｎ）はこの疾患から強く保護することが分かった。この遺伝的関連性は、先の生物学的知見を確証するものであり（非特許文献１５）、ＩＬ−２３およびその受容体は、ＩＢＤの処置に対する新しい治療的アプローチのための有望な目標となることを示唆する。
【０００８】
治療用抗体は、サイトカイン活性を遮断するために使用されてもよい。インビボで治療薬として抗体を使用する際の最も重要な制約は抗体の免疫原性である。ほとんどのモノクローナル抗体はげっ歯類に由来するので、ヒトで繰り返し使用すると、治療用抗体に対する免疫応答が発生する。そのような免疫応答は、最小で治療効果の損失をもたらし、最大で、致命的になる可能性のあるアナフィラキシー応答をもたらす。げっ歯類抗体の免疫原性を低下させるための最初の試みは、マウス可変領域をヒト定常領域と融合させるキメラ抗体の産生を伴った。非特許文献１６。しかしながら、ヒト可変領域およびマウス定常領域のハイブリッドを注射されたマウスは、ヒト可変領域に対して向けられる強い抗抗体応答を起こし、そのようなキメラ抗体中でのげっ歯類Ｆｖ領域全体の保持が患者において、望まれない免疫原性をなおもたらし得ることを示唆する。
【０００９】
可変ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）ループは、抗体分子の結合部位を含むと一般に考えられている。そのため、げっ歯類ＣＤＲループのヒトフレームワークへの移植（つまりヒト化）が、げっ歯類配列をさらに最小化するために試みられた。非特許文献１７；非特許文献１８。しかしながら、ＣＤＲループの交換は、なお、元の抗体と同じ結合特性を有する抗体を均一にもたらさない。ヒト化抗体中の、ＣＤＲループ支持に関与する残基であるフレームワーク残基（ＦＲ）の変更もまた、抗原結合親和性を維持するために必要とされる。非特許文献１９。多くのヒト化抗体構築物でのＣＤＲ移植の使用およびフレームワーク残基維持が報告されてきたが、特定の配列が、所望の結合特性および時に生物学的特性を有する抗体をもたらすかどうかを予測するのは困難である。たとえば非特許文献２０、非特許文献２１、および非特許文献２２を参照されたい。その上、ほとんどの先の研究は、異なるヒト配列を、動物の軽鎖可変配列および重鎖可変配列（ｌｉｇｈｔ  ａｎｄ  ｈｅａｖｙ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）に使用し、そのような研究の予測的な性質を疑わしいものにした。知られている抗体の配列が使用されてきたまたはより典型的には、知られているＸ線構造を有する抗体、抗体ＮＥＷおよび抗体ＫＯＬの配列が使用されてきた。たとえば非特許文献１７、前掲；非特許文献１８、前掲；および非特許文献２１、前掲を参照されたい。正確な配列情報は、いくつかのヒト化構築物について報告されてきた。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Abbasら（編）（２０００年）Cellular andMolecular Immunology、W.B. Saunders Co.、Philadelphia、PA
【非特許文献２】OppenheimおよびFeldmann（編）（２００１年）CytokineReference、Academic Press、SanDiego、CA
【非特許文献３】von AndrianおよびMackay（２０００年）NewEngl. J. Med. 343：１０２０〜１０３４頁
【非特許文献４】DavidsonおよびDiamond（２００１年）NewEngl. J. Med. 345：３４０〜３５０頁
【非特許文献５】Cuaら（２００３年）Nature 421：７４４〜７４８頁
【非特許文献６】Parhamら（２０００年）J. Immunol. 168：５６９９頁
【非特許文献７】Preskyら（１９９６年）Proc. Nat'l Acad.Sci. USA 93：１４００２頁
【非特許文献８】Oppmannら（２０００年）Immunity 13：７１５〜７２５頁
【非特許文献９】Wiekowskiら（２００１年）J. Immunol. 166：７５６３〜７５７０頁
【非特許文献１０】Parhamら（２００２年）J. Immunol. 168：５６９９〜７０８頁
【非特許文献１１】Frucht（２００２年）Sci STKE 2002、E1-E3
【非特許文献１２】Elkinsら（２００２年）InfectionImmunity 70：１９３６〜１９４８頁
【非特許文献１３】Bowmanら（２００６年）Curr. Opin.Infect. Dis. 19：２４５頁
【非特許文献１４】Duerrら（２００６年）Science 314：１４６１頁
【非特許文献１５】Yenら（２００６年）J. Clin.Investigation 116：１２１８頁
【非特許文献１６】Liuら（１９８７年）Proc. Natl. Acad. Sci.USA 84：３４３９〜４３頁
【非特許文献１７】Jonesら（１９８６年）Nature 321:５２２頁
【非特許文献１８】Verhoeyenら（１９８８年）Science 239：１５３４頁
【非特許文献１９】Kabatら（１９９１年）J. Immunol. 147：１７０９頁
【非特許文献２０】Queenら（１９８９年）Proc. Natl. Acad.Sci. USA 86：１００２９頁
【非特許文献２１】Gormanら（１９９１年）Proc. Natl. Acad.Sci. USA 88：４１８１頁
【非特許文献２２】Hodgson（１９９１年）Biotechnology(NY) 9：４２１〜５頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
たとえば、ＩＬ−２３およびＩＬ−２３受容体の相互作用のアンタゴニストなどの、その受容体を介したＩＬ−２３シグナル伝達を妨げる作用物質を使用することにより、炎症性障害、自己免疫障害、および増殖障害を処置するための改善された方法および組成物の必要性が存在する。あるいは、そのような作用物質は、特異的切断のために、ＩＬ−２３Ｒを発現する標的細胞に対して使用することができる。好ましくは、そのようなアンタゴニストは、標的分子に対して高い親和性を有し、および、比較的低用量で、ＩＬ−２３とその受容体の相互作用を遮断することができる。好ましくは、そのような方法および組成物は、ＩＬ−２３に高度に特異的であり、ＩＬ−１２などの他のサイトカインの活性に干渉しない。好ましくは、そのような方法および組成物は、標的細胞への細胞傷害性ペイロードの送達のための改変に適切でかつ、非細胞傷害性の使用のためにも適切なアンタゴニストを用いる。好ましくは、そのような方法および組成物は、その必要のある被験体に投与される場合、それらの抗原性を制限するために改変された抗体を用いる。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、当技術分野でのこれらの必要性を満たし、さらには、ヒトＩＬ−２３Ｒのアンタゴニスト、たとえばヒト化抗ヒトＩＬ−２３Ｒ抗体を提供することによって満たす。
【００１３】
一局面では、本発明は、配列番号２６〜４０および５２からなる群から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを有する抗体軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む、ヒトＩＬ−２３Ｒに結合する、ヒト化抗体またはキメラ組換え抗体を含む抗体またはその断片などの結合性化合物を提供する。一実施形態では、本発明の結合性化合物は、配列番号２６〜３０および５２からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲＬ１、配列番号３１〜３５からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲＬ２、ならびに配列番号３６〜４０からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００１４】
一実施形態では、結合性化合物は、配列番号１１〜２５からなる群から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを有する抗体重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む。一実施形態では、本発明の結合性化合物は、配列番号１１〜１５からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲＨ１、配列番号１６〜２０からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲＨ２、および配列番号２１〜２５からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む重鎖可変ドメインを含む。
【００１５】
他の実施形態では、本発明の結合性化合物は、前の２つの段落に記載の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態では、結合性化合物は、フレームワーク領域を含み、ここでフレームワーク領域のアミノ酸配列は、すべてまたは実質的にすべてのヒト免疫グロブリンアミノ酸配列である。
【００１７】
いくつかの実施形態では、軽鎖可変ドメインおよび／または重鎖可変ドメインは、１つまたは複数のＣＤＲの改変体を含む。種々の実施形態では、改変体ドメインは、各配列番号の配列と比較して、最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の保存的に改変されたアミノ酸残基を含む。保存的アミノ酸置換は、表１に提供される。
【００１８】
いくつかの実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号４８〜４９および５３からなる群から選択される配列またはその改変体を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号４５〜４７からなる群から選択される配列を含む。種々の実施形態では、改変体可変ドメインは、各配列番号の配列と比較して、最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、もしくは５０またはそれ以上の保存的に改変されたアミノ酸残基を含む。その上更なる実施形態では、結合性化合物は、本段落に記載の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む。
【００１９】
他の実施形態では、本発明の結合性化合物は、配列番号４８〜４９および５３からなる群から選択される配列から本質的になる軽鎖可変ドメインもしくはその抗原結合性断片ならびに／または配列番号４５〜４７からなる群から選択される配列から本質的になる重鎖可変ドメインもしくはその抗原結合性断片を含む。
【００２０】
他の実施形態では、本発明の結合性化合物は、配列番号６〜１０、４８〜４９、および５３からなる群から選択される配列と、少なくとも５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、もしくは９９％の配列相同性を有する軽鎖可変ドメインもしくはその抗原結合性断片ならびに／または配列番号１〜５および４５〜４７からなる群から選択される配列と、少なくとも５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、もしくは９９％の配列相同性を有する重鎖可変ドメインもしくはその抗原結合性断片を含む。
【００２１】
別の実施形態では、本発明の結合性化合物は、配列番号４９または５３の抗体軽鎖可変ドメインおよび配列番号４７の抗体重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む。さらなる実施形態では、結合性化合物は、配列番号５１または５４の軽鎖および配列番号５０の重鎖またはその抗原結合性断片を含む。その上更なる実施形態では、結合性化合物は、配列番号５５（重鎖）および配列番号５６（軽鎖）の核酸配列によってコードされる。さらなる実施形態では、結合性化合物は、配列番号５８の軽鎖可変ドメインおよび配列番号５７の重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む。
【００２２】
一実施形態では、本発明は、交差遮断アッセイ（ｃｒｏｓｓ−ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ａｓｓａｙ）で、ヒトＩＬ−２３Ｒと本発明の結合性化合物の結合を遮断することができる抗体に関する。種々の実施形態では、抗体は、本明細書に開示されるように、ヒトＩＬ−２３Ｒと、抗体４１Ｆ１１、８Ｂ１０、３Ｃ１１、２０Ｄ７（Ｓ３２Ｔ配列改変を有するまたは有していない）、２０Ｅ５のＣＤＲ配列を含む抗体との結合を遮断することができる。他の実施形態では、抗体は、交差遮断アッセイで、ヒトＩＬ−２３Ｒと、アクセッション番号ＰＴＡ−７８００の下でＡＴＣＣに寄託された抗体および／またはＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−７８０１の下で寄託された抗体との結合を遮断することができる。別の実施形態では、本発明は、ＩＬ−２３Ｒ媒介性の活性を遮断することができる結合性化合物に関するものであり、そのような活性は、ＩＬ−２３の結合またはＴＨ１７細胞の増殖もしくは生存の媒介を含むが、これらに限定されない。
【００２３】
いくつかの実施形態では、本発明の結合性化合物は、親抗体のげっ歯類フレームワークの位置のヒト生殖細胞系列の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列および重鎖可変ドメインフレームワーク配列と組み合わせて、本明細書に開示される抗体のＣＤＲから選択されるＣＤＲまたはその改変体を含むヒト化抗体を含む。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本発明の結合性化合物は、重鎖定常領域をさらに含み、ここで重鎖定常領域は、γ１、γ２、γ３、もしくはγ４のヒト重鎖定常領域またはその改変体を含む。種々の実施形態では、軽鎖定常領域は、ラムダ（ｌａｍｂｄａ）ヒト軽鎖定常領域またはカッパ（ｋａｐｐａ）ヒト軽鎖定常領域を含む。
【００２５】
種々の実施形態では、本発明の結合性化合物は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、もしくは完全ヒト抗体またはその断片である。本発明はまた、抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、およびダイアボディからなる群から選択される抗体断片であることを企図する。
【００２６】
本発明は、ヒト被験体において免疫応答を抑制する方法であって、ＩＬ−２３シグナル伝達を遮断するのに有効な量で、ＩＬ−２３Ｒに特異的な抗体（またはその抗原結合性断片）をその必要のある被験体に投与する工程を含む方法を包含する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２３Ｒに特異的な抗体は、ヒト化抗体またはキメラ抗体である。さらなる実施形態では、免疫応答は、関節炎、乾癬、および炎症性腸疾患を含む炎症応答である。他の実施形態では、免疫応答は、多発性硬化症、ブドウ膜炎、全身性エリテマトーデス、および糖尿病を含む自己免疫応答である。別の実施形態では、被験体は癌を有し、免疫応答はＴｈ１７応答である。
【００２７】
本発明はまた、さらなる免疫抑制剤または抗炎症剤を投与する工程をも企図する。本発明の結合性化合物は、薬学的に許容可能な担体または希釈剤と組み合わせて、結合性化合物またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物の形とすることができる。さらなる実施形態では、医薬組成物は、免疫抑制剤または抗炎症剤をさらに含む。
【００２８】
本発明は、本発明の結合性化合物の抗体の実施形態のポリペプチド配列をコードする単離核酸を包含する。核酸は、発現ベクターをトランスフェクトした宿主細胞によって認識される制御配列に作動可能に連結された発現ベクターの形とすることができる。ベクターを含む宿主細胞、ならびに核酸配列が発現される条件下で宿主細胞を培養し、それによってポリペプチドを産生する工程および宿主細胞または培地からポリペプチドを回収する工程を含む、ポリペプチドを産生するための方法もまた包含される。
【００２９】
種々の実施形態では、本発明は、炎症疾患、自己免疫疾患、癌、感染症（たとえば、慢性感染症を含む細菌感染症、マイコバクテリア感染症、ウイルス感染症、または真菌感染症）、関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、多発性硬化症、ブドウ膜炎、全身性エリテマトーデス、および糖尿病を含むが、これらに限定されない障害を処置するための薬剤の製造における本発明の結合性化合物の使用に関する。他の実施形態では、本発明は、前述の使用によって限定される組成物に関する。
【００３０】
他の実施形態では、本発明は、炎症疾患、自己免疫疾患、癌、感染症（たとえば、慢性感染症を含む細菌感染症、マイコバクテリア感染症、ウイルス感染症、または真菌感染症）、関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、多発性硬化症、ブドウ膜炎、全身性エリテマトーデス、および糖尿病を含むが、これらに限定されない障害を処置するための、本発明の結合性化合物を含む医薬組成物に関する。
【００３１】
いくつかの実施形態では、本発明の結合性化合物または医薬組成物は、被験体において疾患症状からの長期の寛解を招来するので、たとえば再発寛解型疾患の処置において、被験体で、投薬間隔を結合性化合物の半減期よりもはるかに長くまで延長することができる。種々の実施形態では、一方の投与と他方の投与の間隔は、６、８、１０、１２、１６、２０、２４、３０週間、またはそれ以上に長い。他の実施形態では、単回投与は、再発を永続的に防止するのに十分である。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
配列番号２６〜４０および５２からなる群から選択される１つまたは複数のＣＤＲ配列を含む抗体軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む、ヒトＩＬ−２３Ｒに結合する結合性化合物。
（項目２）
配列番号１１〜２５からなる群から選択される１つまたは複数のＣＤＲ配列を含む抗体重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む、ヒトＩＬ−２３Ｒに結合する結合性化合物。
（項目３）
項目１に記載の抗体軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片および
配列番号１１〜２５からなる群から選択される１つまたは複数のＣＤＲ配列を含む抗体重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片
を含むヒトＩＬ−２３Ｒに結合する結合性化合物。
（項目４）
配列番号２６〜４０および５２からなる群から選択される２つ以上のＣＤＲ配列を含む抗体軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む、項目１に記載の結合性化合物。（項目５）
配列番号１１〜２５からなる群から選択される２つ以上のＣＤＲ配列を含む抗体重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む、項目２に記載の結合性化合物。
（項目６）
項目４に記載の抗体軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片および
配列番号１１〜２５からなる群から選択される２つ以上のＣＤＲ配列を含む抗体重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片
を含む、項目３に記載の結合性化合物。
（項目７）
配列番号２６〜４０および５２からなる群から選択される３つのＣＤＲ配列を含む抗体軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む、項目４に記載の結合性化合物。
（項目８）
配列番号１１〜２５からなる群から選択される３つのＣＤＲ配列を含む抗体重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む、項目５に記載の結合性化合物。
（項目９）
項目７に記載の抗体軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片および
配列番号１１〜２５からなる群から選択される３つのＣＤＲ配列を含む抗体重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む、項目６に記載の結合性化合物。
（項目１０）
配列番号２６〜３０および５２からなる群からの少なくとも１つのＣＤＲＬ１、
配列番号３１〜３５からなる群からの少なくとも１つのＣＤＲＬ２、および
配列番号３６〜４０からなる群からの少なくとも１つのＣＤＲＬ３
を含む軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む、ヒトＩＬ−２３Ｒに結合する結合性化合物。
（項目１１）
配列番号１１〜１５からなる群からの少なくとも１つのＣＤＲＨ１、
配列番号１６〜２０からなる群からの少なくとも１つのＣＤＲＨ２、および
配列番号２１〜２５からなる群からの少なくとも１つのＣＤＲＨ３
を含む重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む、ヒトＩＬ−２３Ｒに結合する結合性化合物。
（項目１２）
項目１０に記載の抗体軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片および
配列番号１１〜１５からなる群からの少なくとも１つのＣＤＲＨ１、
配列番号１６〜２０からなる群からの少なくとも１つのＣＤＲＨ２、および
配列番号２１〜２５からなる群からの少なくとも１つのＣＤＲＨ３を含む
重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片
を含む、ヒトＩＬ−２３Ｒに結合する結合性化合物。
（項目１３）
ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む、ヒトＩＬ−２３Ｒに結合する結合性化合物であって、
ＣＤＲＬ１は、配列番号２９または５２の配列またはその改変体を含み、
ＣＤＲＬ２は、配列番号３４の配列またはその改変体を含み、および
ＣＤＲＬ３は、配列番号３９の配列またはその改変体を含み、
各改変体は、５つまでの保存的に改変されたアミノ酸置換を含む結合性化合物。
（項目１４）
前記軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片は、配列番号４８、４９および５３からなる群から選択される配列を含む、項目１３に記載の結合性化合物。
（項目１５）
ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む、ヒトＩＬ−２３Ｒに結合する結合性化合物であって、
ＣＤＲＨ１は、配列番号１４の配列またはその改変体を含み、
ＣＤＲＨ２は、配列番号１９の配列またはその改変体を含み、および
ＣＤＲＨ３は、配列番号２４の配列またはその改変体を含み、
各改変体は、５つまでの保存的に改変されたアミノ酸置換を含む結合性化合物。
（項目１６）
前記重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片は、配列番号４５、４６および４７からなる群から選択される配列を含む、項目１５に記載の結合性化合物。
（項目１７）
項目１３に記載の抗体軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片および
ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含み、
ＣＤＲＨ１は、配列番号１４の配列またはその改変体を含み、
ＣＤＲＨ２は、配列番号１９の配列またはその改変体を含み、
ＣＤＲＨ３は、配列番号２４の配列またはその改変体を含み、
各改変体は、５つまでの保存的に改変されたアミノ酸置換を含む、ヒトＩＬ−２３Ｒに結合する結合性化合物。
（項目１８）
項目１４に記載の抗体軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片および
配列番号４５、４６および４７からなる群から選択される配列を含む抗体重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片
を含む、ヒトＩＬ−２３Ｒに結合する結合性化合物。
（項目１９）
配列番号４８、４９および５３からなる群から選択される配列またはその改変体を含む抗体軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片および
配列番号４５、４６および４７からなる群から選択される配列またはその改変体を含む抗体重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片
を含む、ヒトＩＬ−２３Ｒに結合する結合性化合物であって、
各改変体は、２０個までの保存的に改変されたアミノ酸置換を含む結合性化合物。
（項目２０）
配列番号４８、４９および５３からなる群から選択される配列から本質的になる抗体軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片および配列番号４５、４６および４７からなる群から選択される配列から本質的になる抗体重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片を含む、ヒトＩＬ−２３Ｒに結合する結合性化合物。
（項目２１）
配列番号４８、４９および５３からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の相同性を有する軽鎖可変ドメインおよび
配列番号４５、４６および４７からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の相同性を有する重鎖可変ドメイン
を含む、ヒトＩＬ−２３Ｒに結合する結合性化合物。
（項目２２）
交差遮断アッセイで、項目１８に記載の結合性化合物とヒトＩＬ−２３Ｒの結合を遮断することができる抗体。
（項目２３）
項目１７に記載の結合性化合物の軽鎖可変ドメインまたは重鎖可変ドメインの少なくとも１つをコードする単離核酸。
（項目２４）
制御配列に作動可能に連結された項目２３に記載の核酸を含む発現ベクターであって、宿主細胞に該ベクターをトランスフェクトした際、該制御配列が、該宿主細胞によって認識される発現ベクター。
（項目２５）
項目２４に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
（項目２６）
ポリペプチドを産生するための方法であって、
前記核酸配列が発現される条件下で培地中で項目２５に記載の宿主細胞を培養し、それによって、前記軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含むポリペプチドを産生する工程ならびに
該宿主細胞または培地から該ポリペプチドを回収する工程
を含む方法。
（項目２７）
ａ）前記抗体軽鎖可変ドメイン中のヒト生殖細胞系列軽鎖フレームワーク配列および
ｂ）前記抗体重鎖可変ドメイン中のヒト生殖細胞系列重鎖フレームワーク配列
をさらに含む、項目１７に記載の結合性化合物。
（項目２８）
γ１ヒト重鎖定常領域またはその改変体を含む重鎖定常領域をさらに含み、該定常領域改変体は、２０個までの保存的に改変されたアミノ酸置換を含む、項目１７に記載の結合性化合物。
（項目２９）
γ４ヒト重鎖定常領域またはその改変体を含む重鎖定常領域をさらに含み、該定常領域改変体は、２０個までの保存的に改変されたアミノ酸置換を含む、項目１７に記載の結合性化合物。
（項目３０）
Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、およびダイアボディからなる群から選択される抗体断片である、項目１７に記載の結合性化合物。
（項目３１）
ヒト被験体で免疫応答を抑制する方法であって、ＩＬ−２３Ｒの生物学的活性を遮断するのに有効な量で、項目１７に記載の抗体またはその抗原結合性断片をその必要のある被験体に投与する工程を含む方法。
（項目３２）
前記生物学的活性は炎症性応答である、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記被験体は、関節炎、乾癬、および炎症性腸疾患からなる群から選択される障害を有する、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記生物学的活性は自己免疫応答である、項目３１に記載の方法。
（項目３５）
前記被験体は、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、および糖尿病からなる群から選択される障害を有する、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記被験体は癌を有し、前記生物学的活性はＴｈ１７応答である、項目３１に記載の方法。
（項目３７）
免疫抑制剤または抗炎症剤を投与する工程をさらに含む、項目３１に記載の方法。
（項目３８）
薬学的に許容可能な担体または希釈剤と組み合わせて項目１７に記載の結合性化合物を含む医薬組成物。
（項目３９）
免疫抑制剤または抗炎症剤をさらに含む、項目３８に記載の医薬組成物。
（項目４０）
交差遮断アッセイで、アクセッション番号ＰＴＡ−７８００の下でＡＴＣＣに寄託された抗体へのヒトＩＬ−２３Ｒの結合を遮断することができる抗体。
（項目４１）
交差遮断アッセイで、アクセッション番号ＰＴＡ−７８０１の下でＡＴＣＣに寄託された抗体へのヒトＩＬ−２３Ｒの結合を遮断することができる抗体。
（項目４２）
配列番号５３の配列を含む抗体軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片および
配列番号４７の配列を含む抗体重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片
を含む、ヒトＩＬ−２３Ｒに結合する結合性化合物。
（項目４３）
配列番号５４の配列を含む抗体軽鎖またはその抗原結合性断片および
配列番号５０の配列を含む抗体重鎖またはその抗原結合性断片
を含む、項目４２に記載の結合性化合物。
（項目４４）
配列番号５８の配列を含む抗体軽鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片および
配列番号５７の配列を含む抗体重鎖可変ドメインまたはその抗原結合性断片
を含む、ヒトＩＬ−２３Ｒに結合する結合性化合物。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】ラット（「ｒ」）、マウス（「ｍ」）、およびヒト化（「ｈｕ」）抗ヒトＩＬ−２３Ｒ抗体クローン重鎖可変ドメイン配列の比較を示す図である。配列は、クローンｒ４１Ｆ１１、ｒ８Ｂ１０、ｈｕ８Ｂ１０、ｒ３Ｃ１１、ｍ２０Ｅ５、ｍ２０Ｄ７、ｈｕ２０Ｄ７−ａ、ｈｕ２０Ｄ７−ｂ、およびｈｕ２０Ｄ７−ｃについて提供される。ＣＤＲを示す。配列表中の配列識別子に対する相互参照は表４に提供される。
【図２】ラット、マウス、およびヒト化抗ヒトＩＬ−２３Ｒ抗体クローン軽鎖可変ドメイン配列の比較を示す図である。配列は、クローンｒ４１Ｆ１１、ｒ８Ｂ１０、ｈｕ８Ｂ１０、ｒ３Ｃ１１、ｍ２０Ｅ５、ｍ２０Ｄ７、ｈｕ２０Ｄ７−ＩＶ、ｈｕ２０Ｄ７−ＩＩ−ａ、およびｈｕ２０Ｄ７−ＩＩ−ｂについて提供される。ＣＤＲを示す。配列表中の配列識別子に対する相互参照は表４に提供される。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
本明細書に使用されるように、添付される特許請求の範囲を含めて、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」などの単語の単数形は、文脈が明瞭に他を指図しない限り、それらの対応する複数形の言及を含む。下記の表４は、本出願で使用される配列識別子の一覧を提供する。本明細書に引用される参考文献はすべて、あたかも各個々の刊行物、データベースエントリー（たとえばＧｅｎｂａｎｋ配列もしくはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願、または特許が参照によって組み込まれるように具体的におよび個別に示されるのと同じ程度に参照によって組み込まれる。本明細書での参考文献の引用は、該参考文献が、関連する先行技術であることを承認するものとして意図されたものでもなく、これらの刊行物または文書の内容または日付に関し如何なる承認をなすものでもない。
Ｉ．定義
「増殖活性」は、たとえば、正常な細胞分裂ならびに癌、腫瘍、異形成、細胞の形質転換、転移、および新脈管形成を促進するまたはそれに必要であるまたはそれに特異的に関連する活性を包含する。
【００３４】
「投与」および「処置」は、動物、ヒト、実験被験体、細胞、組織、器官、または生物学的液体に適用されるように、外因性の医薬品、治療剤、診断用薬、または組成物の、動物、ヒト、被験体、細胞、組織、器官、または生物学的液体に対する接触を指す。「投与」および「処置」は、たとえば、治療方法、薬物動態学的方法、診断方法、研究方法、および実験方法を指すことができる。細胞の処置は、細胞に対する試薬の接触および細胞と接触している液体に対する試薬の接触を包含する。「投与」および「処置」はまた、たとえば、試薬、診断薬、結合性組成物による、または他の細胞による細胞のインビトロおよびエキソビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）での処置をも意味する。「処置」は、ヒト被験体、獣医学的被験体、または研究被験体に適用されるように、治療処置、予防的または防止的手段、研究への応用、および診断への応用を指す。「処置」は、ヒト被験体、獣医学的被験体、もしくは研究被験体または細胞、組織、もしくは器官に適用されるように、動物被験体、細胞、組織、生理的コンパートメント、または生理的液体との作用物質（ａｇｅｎｔ）の接触を包含する。「細胞の処置」はまた、作用物質が、たとえば液体相またはコロイド相中でＩＬ−２３受容体（ＩＬ−２３Ｒ／ＩＬ−１２Ｒβ１ヘテロ二量体）と接触する状況だけではなく、アゴニストまたはアンタゴニストが細胞または受容体と接触しない状況をも包含する。
【００３５】
本明細書に使用されるように、用語「抗体」は、所望の生物学的活性を呈する抗体の任意の形態を指す。したがって、それは、最も広い意味で使用され、具体的には、所望の生物学的活性を呈する限り、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（たとえば二重特異性抗体）、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体などを包含する。
【００３６】
本明細書に使用されるように、用語「ＩＬ−２３Ｒ結合性断片」、「その結合性断片」、または「その抗原結合性断片」は、ＩＬ−２３Ｒに結合するその生物学的活性をなお実質的に保持する、抗体の断片または誘導体を包含する。いくつかの実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＩＬ−２３受容体を介してのＩＬ−２３シグナル伝達を阻害し、そのような阻害は、本明細書で、「ＩＬ−２３Ｒ阻害活性」と呼ばれる。ＩＬ−２３Ｒのアンタゴニストは、ＩＬ−２３シグナル伝達を阻害する生物学的活性を有するので、そのようなアンタゴニストは、ＩＬ−２３Ｒを阻害する、ＩＬ−２３を阻害する、またはＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒの両方を阻害すると表現される（交換可能に）。用語「抗体断片」またはＩＬ−２３Ｒ結合性断片は、完全長抗体の一部分、一般にその抗原結合領域または可変領域を指す。抗体断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片、ダイアボディ、直鎖状抗体、１本鎖抗体分子、たとえばｓｃＦｖ、ならびに抗体断片から形成される多重特異性抗体を含む。典型的には、結合性断片または誘導体は、そのＩＬ−２３Ｒ阻害活性の少なくとも１０％を保持する。好ましくは、結合性断片または誘導体は、そのＩＬ−２３Ｒ阻害活性の少なくとも２５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、もしくは１００％（またはそれ以上）を保持するが、所望の生物学的効果を発揮するのに十分な親和性を有するあらゆる結合性断片が有用である。ＩＬ−２３Ｒ結合性断片は、特定される場合、その生物学的活性を実質的に変化させない保存的アミノ酸置換を有する改変体を含むことができることもまた意図される。
【００３７】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書に使用されるように、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指す、つまり、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る可能性のある自然発生の変異がなければ同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原エピトープに対して向けられる。対照的に、従来の（ポリクローナル）抗体調製物は、異なるエピトープに対して向けられる（またはそれに特異的な）多数の抗体を典型的には含む。修飾語句「モノクローナル」は、抗体の実質的に均質な集団から得られるような抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されないものとする。たとえば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Kohlerら（１９７５年）Nature256：４９５頁によって最初に記載されたハイブ
リドーマ法によって作製されてもよいまたは組換えＤＮＡ法によって作製されてもよい（たとえば米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。「モノクローナル抗体」はまた、たとえばClacksonら（１９９１年）Nature352：６２４〜６２８頁およびMarksら（１９９１年）J.Mol.Biol. 222：５８１〜５９７頁に記載の技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。
【００３８】
本明細書のモノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖の一部分は、特定の種に由来するまたは特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるまたはそれに相同性であるが、鎖（複数可）の残りの部分は、他の種に由来するまたは他の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるまたはそれに相同性である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）ならびに所望の生物学的活性を呈する限り、そのような抗体の断片を具体的には含む。米国特許第４，８１６，５６７号；Morrisonら（１９８４年）Proc.Natl.Acad. Sci. USA 81：６８５１〜６８５５
頁。
【００３９】
「ドメイン抗体」は、重鎖の可変領域または軽鎖の可変領域のみを含有する免疫学的に機能的な免疫グロブリン断片である。いくつかの例では、２個以上のＶＨ領域は、ペプチドリンカーを用いて共有結合で結合されて、２価ドメイン抗体を作り出す。２価ドメイン抗体の２個のＶＨ領域は、同じまたは異なる抗原を標的にしてもよい。
【００４０】
「２価抗体」は、２つの抗原結合部位を含む。いくつかの例では、２つの結合部位は、同じ抗原特異性を有する。しかしながら、２価抗体は、二重特異性であってもよい（下記を参照されたい）。
【００４１】
本明細書に使用されるように、用語「１本鎖Ｆｖ」抗体または「ｓｃＦｖ」抗体は、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖中に存在する抗体断片を指す。一般に、Ｆｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合のために所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーを、ＶＨドメインおよびＶＬドメインの間にさらに含む。ｓｃＦｖの検討については、Pluckthun（１９９４年）THEPHARMACOLOGYOF MONOCLONAL ANTIBODIES、第１１３巻、RosenburgおよびMoore編Springer-Verlag、NewYork、２６９〜３１５頁を参照されたい。
【００４２】
本明細書のモノクローナル抗体はまた、ラクダ化単一ドメイン抗体をも含む。たとえばMuyldermansら（２００１年）TrendsBiochem.Sci.26：２３０頁；Reichmannら（１９９
９年）J. Immunol. Methods 231：２５頁；国際公開第９４／０４６７８号；国際公開第
９４／２５５９１号；米国特許第６，００５，０７９号を参照されたい）。一実施形態では、本発明は、単一ドメイン抗体が形成されるような改変を有する２個のＶＨドメインを含む単一ドメイン抗体を提供する。
【００４３】
本明細書に使用されるように、用語「ダイアボディ」は、２個の抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指し、この断片は、同一ポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）中に軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）につなぎ合わされた重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。短過ぎるために、同一鎖上の２個のドメインの間で対合させることができないリンカーを使用することによって、ドメインは、他の鎖の相補ドメインと対合することを強いられて、２個の抗原結合部位を作り出す。ダイアボディは、たとえば欧州特許第４０４，０９７号；国際公開第９３／１１１６１号；およびHolligerら（１９９３年）Proc.Natl.Acad.
Sci. USA 90：６４４４〜６４４８頁に、より十分に記載されている。操作された抗体改変体の検討については、一般に、HolligerおよびHudson（２００５年）Nat.Biotechnol.23：１１２６〜１１３６頁を参照されたい。
【００４４】
本明細書に使用されるように、用語「ヒト化抗体」は、非ヒト（たとえばマウス）抗体およびヒト抗体からの配列を含有する抗体の形態を指す。そのような抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を有する。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、超可変ループのすべてまたは実質的にすべては非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてはヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部分を任意選択で含む。接頭語「ｈｕｍ」、「ｈｕ」、または「ｈ」は、ヒト化抗体をげっ歯類親抗体から区別するのに必要な場合、抗体クローンの名称に付加される（これらの同じ名称はまた、文脈に依存して、特定のタンパク質のヒト形態を示し得る）。げっ歯類抗体のヒト化形態は、げっ歯類親抗体と同じＣＤＲ配列を一般に含むが、ヒト化抗体の親和性を増加させるために、安定性を増加させるために、または他の理由で、ある種のアミノ酸置換が含まれていてもよい。
【００４５】
本発明の抗体はまた、変化したエフェクター機能を提供するために改変（または遮断）Ｆｃ領域を有する抗体を含む。たとえば米国特許第５，６２４，８２１号；国際公開第２００３／０８６３１０号；国際公開第２００５／１２０５７１号；国際公開第２００６／００５７７０２号；Presta（２００６年）Adv.DrugDelivery Rev. 58：６４０〜６５６
頁を参照されたい。そのような改変は、診断および治療での可能性のある有益な効果を伴って、免疫系の多様な反応を増強するまたは抑制するために使用することができる。Ｆｃ領域の変更は、アミノ酸変化（置換、欠失、および挿入）、糖鎖付加または糖鎖除去、ならびに複数のＦｃの付加を含む。Ｆｃに対する変更はまた、治療用抗体中の抗体の半減期を変化させることもできる。より長い半減期により、投薬がそれほど頻繁ではなくなり、同時に利便性が増加し、材料の使用量が減少し得る。Presta（２００５年）J.AllergyClin.Immuno1.116：７３１および７３４〜３５頁を参照されたい。
【００４６】
本発明の抗体はまた、標的細胞中で、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘発する、全エフェクター機能を提供する完全なＦｃ領域を有する抗体、たとえばアイソタイプＩｇＧ１の抗体をも含む。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、細胞の集団からＩＬ−２３Ｒ陽性細胞を選択的に除去するために投与される。一実施形態では、このＩＬ−２３Ｒ陽性細胞の除去は、病原性Ｔｈ１７細胞の除去である。そのような病原性Ｔ細胞サブセットの除去は、再発／寛解型自己免疫疾患に罹患している被験体で効果を示した場合、寛解の持続をもたらし得る。
【００４７】
本発明の抗体はまた、細胞傷害性作用物質または放射性核種などの細胞傷害性ペイロードとコンジュゲートした抗体をも含む。そのような抗体コンジュゲートは、それらの表面上に１Ｌ−２３Ｒを発現する細胞を選択的に標的とし、殺滅するために、免疫治療で使用されてもよい。例示的な細胞傷害性作用物質は、リシン、ビンカアルカロイド、メトトレキサート、アメリカヤマゴボウ外毒素、サポリン、ジフテリア毒素、シスプラチン、ドキソルビシン、アブリン毒素、ゲロニン、およびpokeweed抗ウイルスタンパク質を含む。本発明の抗体を用いる免疫治療で使用される例示的な放射性核種は、１２５Ｉ、１３１Ｉ、９０Ｙ、６７Ｃｕ、２１１Ａｔ、１７７Ｌｕ、１４３Ｐｒ、および２１３Ｂｉを含む。たとえば、米国特許出願公開第２００６／００１４２２５号を参照されたい。
【００４８】
用語「完全ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を指す。完全ヒト抗体は、マウス、マウス細胞、またはマウス細胞に由来するハイブリドーマ中で産生される場合、マウス糖鎖を含有していてもよい。同様に、「マウス抗体」または「ラット抗体」は、それぞれマウス免疫グロブリン配列またはラット免疫グロブリン配列のみを含む抗体を指す。完全ヒト抗体は、ヒトで、ヒト免疫グロブリン生殖細胞系列配列を有するトランスジェニック動物で、ファージディスプレイ法によって、または他の分子生物学的方法によって生成されてもよい。
【００４９】
本明細書に使用されるように、用語「超可変領域」は、抗原結合を担う、抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（たとえば、軽鎖可変ドメイン中の残基２４〜３４（ＣＤＲＬ１）、５０〜５６（ＣＤＲＬ２）、および８９〜９７（ＣＤＲＬ３）ならびに重鎖可変ドメイン中の残基３１〜３５（ＣＤＲＨ１）、５０〜６５（ＣＤＲＨ２）、および９５〜１０２（ＣＤＲＨ３）（Kabatら（１９９１年）SequencesofProteins of Immunological Interest、第５版PublicHealth Service、NationalInstitutesof Health、Bethesda、Md.）ならびに／または「超可変ループ」からのそれらの残基（つまり、軽鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、および９１〜９６（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメイン中の２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、および９６〜１０１（Ｈ３）（ChothiaおよびLesk
（１９８７年）J.Mol.Biol. 196：９０１〜９１７頁）を含む。本明細書に使用される
ように、用語「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、ＣＤＲ残基として本明細書に定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を指す。残基の上記番号付けは、Ｋａｂａｔ番号体系に関するものであり、添付の配列表の配列番号付けと詳細には必ずしも対応しない。ＣＤＲおよびフレームワーク領域の両方の配列改変体は、企図され、「ＸｂｂＺ」として表わされてもよく、位置「ｂｂ」のアミノ酸「Ｘ」は、アミノ酸「Ｚ」と交換され、ＸおよびＺは、３文字（ｔｉｐｌｅ）または単一文字のアミノ酸コードであり、位置番号「ｂｂ」は、典型的には、配列表に開示される特定の配列の番号付けに関して定義される。
【００５０】
「結合性化合物（ｂｉｎｄｉｎｇ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」は、標的に結合することができる分子、小分子、高分子、ポリペプチド、抗体またはその断片もしくは類似体、または可溶性受容体を指す。「結合性化合物」はまた、標的に結合することができる、分子の複合体、たとえば非共有結合複合体、イオン化分子、共有結合でまたは非共有結合で改変された分子、たとえばリン酸化、アシル化、架橋、環化、または限定切断で改変された分子を指すものであってもよい。抗体に関して使用される場合、用語「結合性化合物」は、抗体およびその抗原結合性断片の両方を指す。「結合（ｂｉｎｄｉｎｇ）」は、結合性化合物の標的との関連性を指し、その関連性は、結合性化合物が溶液中に溶解するまたは懸濁することができる場合、結合性化合物の通常のブラウン運動の低下をもたらす。「結合性組成物」は、安定剤、賦形剤、塩、緩衝剤、溶媒、または添加剤と組み合わせた、標的に結合することができる分子、たとえば結合性化合物を指す。
【００５１】
「保存的修飾改変体」または「保存的置換」は、当業者に公知のアミノ酸の置換を指し、多くの場合、ポリペプチドの必須領域中でさえ、結果として生じる分子の生物学的活性を変化させずに作製されてもよい。そのような例示的な置換は、好ましくは、以下の通り表１に記載の置換に従って成される。
【００５２】
【表１−１】
2014087374.tif 000002
【００５３】
【表１−２】
2014087374.tif 000003
当業者らは、一般に、ポリペプチドの非必須領域中の単一アミノ酸置換は生物学的活性を実質的に変化させ得ないことを認識する。たとえばWatsonら（１９８７年）MolecularBiologyof the Gene、The Benjamin/CummingsPub. Co.、２２４頁（第４版）を参照され
たい。
【００５４】
明細書および特許請求の範囲の全体にわたって使用されるような語句「〜から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」または「〜から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」もしくは「〜から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」などの変形は、任意の記載される要素または要素の群の包含および特定された投薬計画、方法、または組成物の基本的なまたは新規な特性を実質的に変化させない、記載される要素と類似のまたはそれと異なる性質を持つ他の要素の任意選択の包含を示す。非限定的な例として、記載されるアミノ酸配列から本質的になる結合性化合物はまた、結合性化合物の特性に実質的に影響しない１つまたは複数のアミノ酸残基の置換を含む、１つまたは複数のアミノ酸を含んでいてもよい。
【００５５】
「有効量」は、病状（ｍｅｄｉｃａｌ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）の症候または徴候を改善するまたは防止するのに十分な量を包含する。そのような有効量は、そのような症状または徴候を必ずしも完全に改善するまたは防止する必要はない。有効量はまた、診断を可能にするまたは容易にするのに十分な量をも意味する。特定の患者または獣医学的被験体にとっての有効量は、処置されている状態、患者の全体的な健康状態、投与の方法の経路および用量、ならびに副作用（ｓｉｄｅ  ａｆｆｅｃｔ）の重症度などの要因に依存して変動してもよい。たとえば米国特許第５，８８８，５３０号を参照されたい。有効量は、著しい副作用（ｓｉｄｅ  ｅｆｆｅｃｔ）または毒性作用を回避する最大用量または投薬プロトコルとすることができる。その効果は、１００％を、正常被験体によって示される診断パラメーターとして定義する場合、少なくとも５％、一般に少なくとも１０％、より一般に少なくとも２０％、最も一般に少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも６０％、理想的には少なくとも７０％、より理想的には少なくとも８０％、および最も理想的には少なくとも９０％、診断の尺度または診断パラメーターの改善をもたらす。たとえばMaynardら（１９９６年
）A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice、InterpharmPress、Boca Raton、FL；Dent（２００１年）GoodLaboratoryand Good Clinical Practice、UrchPubl.、London、UKを参照されたい。
【００５６】
「免疫状態」または「免疫障害」は、たとえば、病的炎症、炎症性障害、および自己免疫障害または自己免疫疾患を包含する。「免疫状態」はまた、免疫系による根絶に抵抗する感染症、腫瘍、ならびに癌を含む感染症、持続性感染症、ならびに癌、腫瘍、および新脈管形成などの増殖状態を指す。「癌性状態」は、たとえば、癌、癌細胞、腫瘍、新脈管形成、および異形成などの前癌性状態を含む。
【００５７】
「炎症性障害」は、その病理が、全体的にまたは部分的に、たとえば、免疫系の細胞の数の変化、移動の速度の変化、または活性化の変化から生じる障害または病的状態を意味する。免疫系の細胞は、たとえば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球もしくはマクロファージ、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、樹状細胞、ミクログリア、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、好中球、好酸球、肥満細胞、または免疫に特異的に関連する他の任意の細胞、たとえば、サイトカイン産生内皮細胞もしくはサイトカイン産生上皮細胞を含む。
【００５８】
「ＩＬ−１７産生細胞」は、ＴＨ１７細胞と呼ばれる、古典的ＴＨ１型Ｔ細胞または古典的ＴＨ２型Ｔ細胞ではないＴ細胞を意味する。ＴＨ１７細胞は、CuaおよびKastelein（２００６年）Nat.Immunol.7：５５７〜５５９頁；TatoおよびO'Shea（２００６年）Nature441：１６６〜１６８頁；IwakuraおよびIshigame（２００６年）J.Clin.Invest. 116：１２１８〜１２２２頁により詳細に論じられる。「ＩＬ−１７産生細胞」はまた米国
特許出願公開第２００４／０２１９１５０号の表１０Ｂの遺伝子またはポリペプチド（たとえばマイトジェン応答Ｐタンパク質、ケモカインリガンド２、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、ＲＡＲ関連転写因子、および／またはサイトカインシグナル伝達抑制因子３）を発現するＴ細胞を意味し、ＩＬ−２３アゴニストによる処置を用いる発現は、ＩＬ−１２アゴニストを用いる処置よりも大きく、ここで「よりも大きい」は、以下のように定義される。ＩＬ−２３アゴニストを用いる発現は、通常、ＩＬ−１２処置を用いるよりも、少なくとも５倍大きい、典型的には少なくとも１０倍大きい、より典型的には少なくとも１５倍大きい、最も典型的には少なくとも２０倍大きい、好ましくは少なくとも２５倍大きい、および最も好ましくは少なくとも３０倍大きい。発現は、たとえば、実質的に純粋なＩＬ−１７産生細胞の集団の処置で測定することができる。Ｔｈ１７応答は、Ｔｈ１７細胞の活性および／または増殖が、Ｔｈ１応答の抑制と典型的には共役して増強される免疫応答である。
【００５９】
その上、「ＩＬ−１７産生細胞」は、上記に定義されるように、細胞発生または細胞分化の経路で、ＩＬ−１７産生細胞への分化に傾倒する前駆細胞（ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌ）または前駆細胞（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｃｅｌｌ）を含む。ＩＬ−１７産生細胞に至る前駆細胞（ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌ）または前駆細胞（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｃｅｌｌ）は、流入領域リンパ節（ＤＬＮ）中に見つけることができる。加えて、「ＩＬ−１７産生細胞」は、たとえばホルボールエステル、イオノフォア、および／または発癌物質によってたとえば活性化された、さらに分化された、保存された、凍結された、乾燥された、不活性化された、たとえばアポトーシス、タンパク質分解、もしくは脂質酸化によって部分的に分解された、またはたとえば組換え技術によって改変された上記に定義されるようなＩＬ−１７産生細胞を包含する。
【００６０】
本明細書に使用されるように、用語「単離核酸分子」は、単離核酸分子が抗体核酸の天然源（ｎａｔｕｒａｌ  ｓｏｕｒｃｅ）中に通常付随している少なくとも１つの混入核酸分子から同定され、分離される核酸分子を指す。単離核酸分子は、自然に見つけられる形態または状況以外のものである。したがって、単離核酸分子は、天然細胞中に存在する核酸分子と区別される。しかしながら、単離核酸分子は、たとえば、核酸分子が、天然細胞の位置と異なる染色体位置にある、抗体を通常発現する細胞中に含有される核酸分子を含む。
【００６１】
「制御配列」という表現は、特定の宿主生物中で作動可能に連結されたコード配列の発現に関与するＤＮＡ配列を指す。原核生物に適切な制御配列は、たとえば、プロモーター、任意選択でオペレーター配列、およびリボソーム結合部位を含む。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、およびエンハンサーを用いることが知られている。
【００６２】
核酸は、他の核酸配列との機能的な関係に置かれる場合、「作動可能に連結される」。たとえば、プレ配列もしくは分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結される、プロモーターもしくはエンハンサーは、配列の転写に影響する場合、コード配列に作動可能に連結される、またはリボソーム結合部位は、翻訳を容易にするように位置する場合、コード配列に作動可能に連結される。一般に、「作動可能に連結される」は、連結されているＤＮＡ配列が隣接することを意味し、分泌リーダーの場合には、隣接し、リーディングフレーム中にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは隣接する必要はない。連結は、好都合な制限部位でライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドのアダプターまたはリンカーが、従来の方式に従って使用される。
【００６３】
本明細書に使用されるように、「細胞」、「細胞系列」、および「細胞培養」という表現は、交換可能に使用され、そのような名称はすべて子孫を含む。したがって、単語「形質転換体」および「形質転換細胞」は、初代被験体細胞および植え継ぎ数に関係なくそれらに由来する培養物を包含する。計画的なまたは偶発性の変異のために、すべての子孫はＤＮＡ含有量が正確に同一であるとは限らないこともまた理解される。最初に形質転換された細胞についてスクリーニングされたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異子孫が包含される。個別の名称が表わされる場合、それは文脈から明らかとなる。
【００６４】
本明細書に使用されるように、「ポリメラーゼ連鎖反応」または「ＰＣＲ」は、たとえば米国特許第４，６８３，１９５号に記載されるように、核酸、ＲＮＡ、および／またはＤＮＡの微量の特定片が増幅される手順または技術を指す。一般に、興味のある領域の末端からの配列情報またはそれ以降の配列情報は、オリゴヌクレオチドプライマーを設計することができるために、入手可能である必要があり、これらのプライマーは、増幅されることとなる鋳型の反対の鎖に配列が同一であるまたは類似している。２つのプライマーの５’末端ヌクレオチドは、増幅物質の末端と一致し得る。ＰＣＲは、特定のＲＮＡ配列、全ゲノムＤＮＡからの特定のＤＮＡ配列、および全細胞ＲＮＡから転写されたｃＤＮＡ、バクテリオファージまたはプラスミド配列などを増幅するために使用することができる。一般にMullisら（１９８７年）ColdSpringHarbor Symp. Quant. Biol. 51：２６３頁；Erlich編、（１９８９年）PCRTECHNOLOGY（StocktonPress、N.Y.）を参照されたい。本
明細書に使用されるように、ＰＣＲは、核酸の特定片を増幅するまたは生成するためのプライマーとして知られている核酸および核酸ポリメラーゼの使用を含む、核酸試験サンプルを増幅するための核酸ポリメラーゼ反応法の一例とみなすが、唯一の例とはみなさない。
【００６５】
本明細書に使用されるように、用語「生殖細胞系列配列」は、げっ歯類（たとえばマウス）生殖細胞系列配列およびヒト生殖細胞系列配列を含む非再配列免疫グロブリンＤＮＡ配列の配列を指す。非再配列免疫グロブリンＤＮＡの任意の適切な供給源が使用されてもよい。ヒト生殖細胞系列配列は、たとえば、米国Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  ＨｅａｌｔｈのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔａｌ  ａｎｄ  Ｓｋｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅｓのウェブサイト上のＪＯＩＮＳＯＬＶＥＲ（登録商標）生殖細胞系列データベースから得られてもよい。マウス生殖細胞系列配列は、たとえばGiudicelliら（２００５年）NucleicAcidsRes. 33：Ｄ２５６〜Ｄ２６１頁に記載されるように得られてもよい。
【００６６】
ＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒ活性の阻害の程度を検査するために、たとえば、所与の、たとえばタンパク質、遺伝子、細胞、または生物を含むサンプルまたはアッセイは、可能な活性化作用物質または阻害作用物質を用いて処置し、作用物質なしの対照サンプルと比較される。対照サンプル、つまり作用物質を用いて処置されていないサンプルに１００％の相対的活性値を割り当てる。阻害は、対照と比較した活性値が、約９０％以下、典型的には８５％以下、より典型的には８０％以下、最も典型的には７５％以下、一般に７０％以下、より一般に６５％以下、最も一般に６０％以下、典型的には５５％以下、一般に５０％以下、より一般に４５％以下、最も一般に４０％以下、好ましくは３５％以下、より好ましくは３０％以下、さらにより好ましくは２５％以下、および最も好ましくは２０％未満である場合、達成される。活性化は、対照と比較した活性値が、約１１０％、一般に少なくとも１２０％、より一般に少なくとも１４０％、より一般に少なくとも１６０％、多くの場合、少なくとも１８０％、より多くの場合、少なくとも２倍、最も多くの場合、少なくとも２．５倍、一般に少なくとも５倍、より一般に少なくとも１０倍、好ましくは少なくとも２０倍、より好ましくは少なくとも４０倍、および最も好ましくは４０倍より高い場合、達成される。
【００６７】
活性化または阻害の終点（ｅｎｄｐｏｉｎｔ）は、以下のようにモニターすることができる。たとえば細胞、生理的液体、組織、器官、および動物またはヒト被験体の、処置に対する活性化、阻害、および応答は、終点によってモニターすることができる。終点は、サイトカイン、毒性酸素、またはプロテアーゼの放出などの、所定の数量またはパーセンテージのたとえば炎症、腫瘍原性、または細胞脱顆粒もしくは細胞分泌の兆候を含んでいてもよい。終点は、たとえば、所定の数量のイオンフラックス（ｉｏｎ  ｆｌｕｘ）または輸送、細胞移動、細胞接着、細胞増殖、転移の可能性、細胞分化、および表現型の変化、たとえば、炎症、アポトーシス、形質転換、細胞周期、または転移に関する遺伝子の発現の変化を含んでいてもよい（たとえばKnight（２０００年）Ann.Clin. Lab. Sci. 30
：１４５〜１５８頁；HoodおよびCheresh（２００２年）NatureRev. Cancer 2：９１〜１００頁；Timmeら（２００３年）Curr.DrugTargets 4：２５１〜２６１頁；Robbinsおよ
びItzkowitz（２００２年）Med.Clin. North Am. 86：１４６７〜１４９５頁；GradyおよびMarkowitz（２００２年）Annu.Rev.Genomics Hum.Genet. 3：１０１〜１２８頁；Bauerら（２００１年）Glia 36：２３５〜２４３頁；StanimirovicおよびSatoh（２０００年
）BrainPathol.10：１１３〜１２６頁を参照されたい）。
【００６８】
阻害の終点は、一般に対照の７５％以下、好ましくは、対照の５０％以下、より好ましくは、対照の２５％以下、および最も好ましくは、対照の１０％以下である。一般に、活性化の終点は、少なくとも対照の１５０％、好ましくは、少なくとも対照の２倍、より好ましくは、少なくとも対照の４倍、および最も好ましくは、少なくとも対照の１０倍である。
【００６９】
「小分子」は、１０ｋＤａ未満、典型的には２ｋＤａ未満、および好ましくは、１ｋＤａ未満である分子量を有する分子として定義される。小分子は、無機分子、有機分子、無機成分を含有する有機分子、放射性原子を含む分子、合成分子、ペプチド模倣物質、および抗体模倣物質を含むが、これらに限定されない。治療剤として、小分子は、大分子よりも細胞に対してより透過性があり、分解に対してより感受性が少なく、および免疫応答を誘発する傾向がより少なくあり得る。抗体およびサイトカインのペプチド模倣物質などの小分子ならびに小分子トキシンが記載されている。たとえばCassetら（２００３年）Biochem.Biophys.Res. Commun. 307：１９８〜２０５頁；Muyldermans（２００１年）J.Biotechnol. 74：２７７〜３０２頁；Li（２０００年）Nat.Biotechnol.18：１２５１〜１２５６頁；Apostolopoulosら（２００２年）Curr.Med. Chem. 9：４１１〜４２０頁；Monfardiniら（２００２年）Curr.Pharm.Des. 8：２１８５〜２１９９頁；Dominguesら（１９９９年）Nat.Struct. Biol. 6：６５２〜６５６頁；SatoおよびSone（２００３年）Biochem.J.371：６０３〜６０８頁；米国特許第６，３２６，４８２号を参照されたい。
【００７０】
「特異的に」または「選択的に」結合するは、リガンド／受容体、抗体／抗原、または他の結合対を指す場合、タンパク質および他の生物製剤の不均質な集団中のタンパク質の存在の決定因である結合反応を示す。したがって、指定された条件下で、特定されたリガンドは、特定の受容体に結合し、サンプル中に存在する他のタンパク質に相当な量で結合しない。本明細書に使用されるように、抗体が、ＩＬ−２３Ｒの配列を含むポリペプチドに結合するが、ＩＬ−２３Ｒの配列を欠くタンパク質に結合しない場合、抗体は、所与の配列（この場合、ＩＬ−２３Ｒ）を含むポリペプチドに特異的に結合すると表現される。たとえば、ＩＬ−２３Ｒを含むポリペプチドに特異的に結合する抗体は、ＩＬ−２３ＲのＦＬＡＧ（登録商標）タグ付き形態に結合してもよいが、他のＦＬＡＧ（登録商標）タグ付きタンパク質に結合しない。
【００７１】
企図される方法の抗体または抗体の抗原結合部位に由来する結合性組成物は、無関係な抗原との親和性よりも、少なくとも２倍大きい、好ましくは、少なくとも１０倍大きい、より好ましくは、少なくとも２０倍大きい、および最も好ましくは、少なくとも１００倍大きい親和性でその抗原に結合する。好ましい実施形態では、抗体は、たとえば、スキャチャード解析（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ）によって決定されるように、約１０９リットル／モルよりも大きな親和性を有する。Munsenら（１９８０年）Analyt.Biochem. 107：２２０〜２３９頁。
【００７２】
本明細書に使用されるように、用語「免疫調節剤」は、免疫応答を抑制するまたは調整する天然作用物質または合成作用物質を指す。免疫応答は、液性応答または細胞性応答であり得る。免疫調節剤は、免疫抑制剤または抗炎症剤を包含する。
【００７３】
本明細書に使用されるような「免疫抑制剤」、「免疫抑制薬」、または「免疫抑制物質」は、免疫系の活性を阻害するまたは防止するために免疫抑制治療で使用される治療剤である。臨床的に、それらは、移植器官および移植組織（たとえば骨髄、心臓、腎臓、肝臓）の拒絶を防止するためにならびに／または自己免疫疾患もしくは自己免疫性が起源である可能性がすこぶる高い疾患（たとえば関節リウマチ、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症）の処置で使用される。免疫抑制薬は、４つの群に分類することができる：グルココルチコイド細胞増殖抑制剤；抗体（生物学的応答調節物質またはＤＭＡＲＤを含む）；イムノフィリンに作用する薬剤；増殖障害の処置で使用される、既知の化学療法剤を含む他の薬剤。多発性硬化症については、特に、本発明の抗体は、コパキソン（ｃｏｐａｘｏｎｅ）として知られている、新しいクラスのミエリン結合性タンパク質様治療剤と共に投与することができる。
【００７４】
「抗炎症剤」または「抗炎症薬」は、ステロイド性治療剤および非ステロイド性治療剤の両方を表わすために使用される。コルチコステロイドとしても知られているステロイドは、副腎によって天然に産生されるホルモンであるコルチゾールに非常によく類似している薬剤である。ステロイドは、全身性血管炎（血管の炎症）および筋炎（筋肉の炎症）などのある種の炎症状態の主な処置として使用される。ステロイドはまた、関節リウマチ（体の両側の関節に生じる慢性炎症性関節炎）；全身性エリテマトーデス（異常な免疫系機能によって引き起こされる全身性疾患）；シェーグレン症候群（眼乾燥症および口腔乾燥症を引き起こす慢性の障害）などの炎症状態を処置するために選択的に使用されてもよい。
【００７５】
ＮＳＡＩＤと一般に略される非ステロイド性抗炎症薬は、鎮痛効果、解熱効果、および抗炎症効果を有する薬剤であり、それらは、痛み、発熱、および炎症を低下させる。用語「非ステロイド性」は、これらの薬剤とステロイドを区別するために使用され、これらは（広範囲の他の効果の中で）、類似のエイコサノイド抑制、抗炎症作用を有する。ＮＳＡＩＤは、以下の状態の症状の軽減のために一般に必要とされる：関節リウマチ；骨関節炎；炎症性関節症（たとえば強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ライター症候群）；急性痛風；月経困難症；転移部骨痛；頭痛および片頭痛；術後痛；炎症および組織傷害のための軽度から中程度の痛み；発熱；ならびに腎仙痛。ＮＳＡＩＤは、サリチル酸塩、アリールアルカン酸（ａｒｌｙａｌｋｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）、２−アリールプロピオン酸（プロフェン）、Ｎ−アリールアントラニル酸（フェナム酸）、オキシカム、コキシブ、およびスルホンアニリドを含む。
ＩＩ．総論
本発明は、炎症性障害、自己免疫障害、および増殖障害を処置するための操作された抗ＩＬ−２３Ｒ抗体およびその使用を提供する。
【００７６】
多くのサイトカインは、神経障害の病理または回復での役割を有する。ＩＬ−６、ＩＬ−１７、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮガンマ、ＩＦＮ−γ）、および顆粒球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）は、多発性硬化症と関連してきた。Matuseviciusら（１９９９年）MultipleSclerosis5：１０１〜１０４頁；Lockら（２００２年）NatureMed. 8：５００〜５０８頁。ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、および形質転換成長因子ベータ１（ＴＧＦ−ベータ１）は、ＡＬＳ、パーキンソン病、およびアルツハイマー病で役割を果たす。Hoozemansら（２００１年）Exp.Gerontol.36：５５９〜５７０頁；Griffinおよ
びMrak（２００２年）J. Leukocyte Biol. 72：２３３〜２３８頁；Ilzeckaら（２００２年）Cytokine20：２３９〜２４３頁。ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、インターフェロン−ガンマ、およびＩＬ−１７は、脳虚血に対する応答を調整するようにみえる。たとえばKostulasら（１９９９年）Stroke30：２１７４〜２１７９頁；Liら（２００１年）J.Neuroimmunol.116：５〜１４頁を参照されたい。血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）はＡＬＳと関連する。ClevelandおよびRothstein（２００１年）Nature2：８０６〜８１９頁。
【００７７】
炎症性腸障害、たとえばクローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病、および過敏性腸症候群は、免疫系の細胞およびサイトカインによって媒介される。たとえば、潰瘍性大腸炎は、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、および形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦベータ）の増加と関連するが、クローン病は、ＩＬ−１２およびＩＦＮγの増加と関連する。ＩＬ−１７発現もまた、クローン病および潰瘍性大腸炎を増加させ得る。たとえばPodolsky（２００２年）NewEngl.J. Med. 347：４１７〜４２９頁；BoumaおよびStrober（２００３年）Nat.Rev. Immunol. 3：５２１〜５３３頁；Bhanら（１９９９年）Immunol.Rev.169：１９５〜
２０７頁；Hanauer（１９９６年）NewEngl. J. Med. 334：８４１〜８４８頁；Green（２００３年）TheLancet 362：３８３〜３９１頁；McManus（２００３年）NewEngl.J. Med.348：２５７３〜２５７４頁；HorwitzおよびFisher（２００１年）NewEngl. J. Med. 344：１８４６〜１８５０頁；Andohら（２００２年）Int.J.Mol. Med. 10：６３１〜６３４頁；Nielsenら（２００３年）Scand. J. Gastroenterol. 38：１８０〜１８５頁；Fujinoら（２００３年）Gut52：６５〜７０頁を参照されたい。
【００７８】
ＩＬ−２３受容体は、ＩＬ−２３ＲサブユニットおよびＩＬ−１２Ｒβ１サブユニットのヘテロ二量体複合体である。Parhamら（２０００年）J.Immunol.168:５６９９頁を参照されたい。ＩＬ−１２受容体は、ＩＬ−１２Ｒβ１サブユニットおよびＩＬ−１２Ｒβ２サブユニットの複合体である。Presleyら（１９９６年）Proc.Nat'lAcad.Sci. USA 93：１４００２頁を参照されたい。ＩＬ−２３Ｒは、重大な遺伝因子（ｇｅｎｅｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒ）として炎症性腸障害、クローン病および潰瘍性大腸炎に関係してきた。Duerrら（２００６年）Science314：１４６１頁。全ゲノム関連研究により、ＩＬ−２３Ｒの
遺伝子は、まれなコード改変体（Ａｒｇ３８１Ｇｌｎ）を有するクローン病と非常に関連し、疾患から強く保護することが分かった。この遺伝的関連性は、先の生物学的知見を確証するものであり（Yenら（２００６年）J.Clin.Investigation116：１２１８頁）、ＩＬ−２３およびその受容体（ＩＬ−２３Ｒを含む）は、ＩＢＤの処置に近づくための新しい治療剤の有望な標的であることを示唆する。
【００７９】
皮膚、関節、ＣＮＳの炎症疾患および増殖障害は、類似の免疫応答を誘発し、したがって、ＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒ遮断は、全身性感染症と戦うための宿主の能力を含まずに、これらの免疫媒介性炎症性障害の阻害をもたらすはずである。ＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒの拮抗は、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、乾癬、強直性脊椎炎、およびアトピー性皮膚炎に関連する炎症を軽減するはずである。ＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒ阻害剤の使用はまた、増殖障害、たとえば癌、自己免疫障害、たとえば多発性硬化症、Ｉ型糖尿病、およびＳＬＥの阻害をもたらす。これらの多様な障害におけるＩＬ−２３の記載は、以下の公開されたＰＣＴ出願に見つけることができる：国際公開第０４／０８１１９０号；国際公開第０４／０７１５１７号；国際公開第００／５３６３１号；および国際公開第０１／１８０５１号。ＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒ阻害剤はまた細菌感染症、マイコバクテリア感染症、ウイルス感染症、および真菌感染症などの慢性感染症を含む感染症の処置での使用を見い出し得る。
【００８０】
ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットは、ヘリカルサイトカインのＩＬ−６ファミリーのメンバーである。ｐ１９サブユニットは、３つのサイトカイン受容体サブユニットと相互作用して、十分な（ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ）シグナル伝達複合体を形成する。細胞中で発現されると、ｐ１９サブユニットは、第１に、それがＩＬ−１２と共有するｐ４０サブユニットと複合体を形成する。上記に示されるように、ｐ１９ｐ４０複合体は、ヘテロ二量体タンパク質として細胞から分泌され、ＩＬ−２３と呼ばれる（たとえばOppmannら、前掲を
参照されたい）。ＩＬ−２３シグナルを伝達するために必要とされる細胞受容体複合体は、サイトカインのＩＬ−６／ＩＬ−１２ファミリーのトール（ｔａｌｌ）シグナル伝達受容体サブユニットの２つのメンバー、ＩＬ−２３特異的ＩＬ−２３Ｒ（たとえばParhamら、前掲を参照されたい）およびＩＬ−１２と共有されるＩＬ−１２Ｒβ１サブユニットからなる。ヒトＩＬ−２３Ｒのアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＭ４４２２９（配列番号４１）に見つけられ、ｍＲＮＡの配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿１４４７０１に見つけられる。ヒトＩＬ−２３Ｒ遺伝子は、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号１４９２３３に記載されている。マウス（ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）ＩＬ−２３Ｒのアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＭ４４２３０に見つけられ、配列番号４２に提供される。ヒトおよびマウスの両方のＩＬ−２３Ｒ配列のアミノ酸残基１〜２３は、ＩＬ−２３Ｒの成熟形態に存在しないシグナル配列を表わす。ヒトおよびマウス（ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）のＩＬ−１２Ｒβ１のアミノ酸配列は、それぞれ、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００５５２６およびＱ６０８３７に見つけられ、配列番号４３および４４に提供される。アミノ酸残基１〜２４および１〜１９は、ヒトおよびマウスのＩＬ−１２Ｒβ１のシグナル配列をそれぞれ表わす。
【００８１】
ＩＬ−１２およびＩＬ−２３の天然の役割を比較すると、ＩＬ−１２の阻害またはＩＬ−２３およびＩＬ−１２の両方の阻害と比較した場合、ＩＬ−２３を標的とした阻害において有害な副作用の発生がより少ないことを示唆する。Bowmanら（２００６年）Curr.Opin.Infect. Dis. 19：２４５頁。ＩＬ−１２は、全身性Ｔｈ１媒介性免疫応答の開始に決定的であるが、ＩＬ−２３（ＩＬ−６およびＴＮＦ−αと共に）は、Ｔｈ−１７細胞の促進および維持を担うと考えられる。そのようなＴｈ−１７細胞は、肺または消化管の粘膜関門の破れなどの破局的な傷害に対する応答ならびに致命的な病原体K.pneumoniaeおよびC.rodentiumへの結果として生じる曝露に関与すると考えられる。そのような破局的な傷
害は、ほぼ確実に、大量の好中球流入の形態での即時の免疫応答を必要とする。Cuaおよ
びKastelein（２００６年）NatureImmunology7：５５７頁を参照されたい。そのような破局的な傷害および感染症は、現代社会で比較的まれであり、それらが生じた場合、抗生物質を用いて処置することができるので、このＴｈ−１７「中心の選択肢」は、ヒト進化でのより初期ほど生存にとって重大ではないといい得る。その天然の活性は、現代社会でほとんど重要ではないので、これは、ＩＬ−２３／ＩＬ−２３受容体シグナル伝達の破壊が比較的小さな副作用プロファイルを有し得ることを示唆する。McKenzieら（２００６年）TrendsImmunol.27：１７頁を参照されたい。
【００８２】
ＩＬ−１２受容体およびＩＬ−２３受容体の別個のサブユニット組成物は、ＩＬ−１２受容体ではなく、ＩＬ−２３受容体のみを標的とする治療を設計することを可能にする。ＩＬ−２３ｐ１９またはＩＬ−２３Ｒに結合し、およびＩＬ−２３ｐ１９またはＩＬ−２３Ｒの活性を阻害する化合物は、遊離状態でまたはそれらの各ヘテロ二量体複合体の成分として、ＩＬ−１２ではなくＩＬ−２３を阻害する。ＩＬ−１２ではなくＩＬ−２３に存在する場合に、ＩＬ−１２ｐ４０に結合することができる化合物も存在し得、またはＩＬ−１２受容体ではなくＩＬ−２３受容体に存在する場合に、ＩＬ−１２Ｒβ１に結合し、阻害する化合物もまた存在し得る。そのような特異的な結合性作用物質もまた、ＩＬ−１２活性ではなくＩＬ−２３活性を阻害する。ＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒ特異的作用物質は、ＩＬ−１２もまた阻害する作用物質よりも安全である（つまり、より小さい副作用のプロファイルを有する）と予想される。
【００８３】
ＩＬ−１２の阻害の初期の研究の多くは、ＩＬ−１２ｐ４０の阻害を伴った。これらの実験は、ＩＬ−１２の阻害だけではなくＩＬ−２３の阻害をも伴い、実際に、これらの実験の多くにおける効果は、ＩＬ−２３阻害の結果であったことがその後認められた。ＩＬ−１２の阻害によって改善することができる、病原性のＴｈ１応答によって引き起こされると以前考えられていた多くの障害は、その代りに、ＩＬ−２３の阻害によって改善されるＴｈ１７応答によって引き起こされることが示された。Yenら（２００６年）J.Clin.Invest. 116：１３１０頁；IwakuraおよびIshingame（２００６年）J.Clin. Invest. 116
：１２１８頁。
【００８４】
ＩＬ−２３受容体、および具体的にはＩＬ−２３Ｒは、治療的介入のための魅力的な標的を表わす。ＩＬ−２３Ｒは、ＴＨ１７細胞の表面上に発現され、本発明の抗体は、具体的にはそのＴ細胞サブセットに、細胞傷害性ペイロードを送達するために使用されてもよい。新しい標的組織への浸潤および疾患（たとえばＣＮＳのＭＳ）の誘発に先立って、細胞は標的とされ、殺滅され得るので、そのような細胞特異的免疫治療は、それらが誘発される組織（たとえば消化管、肺、または皮膚）からＣＮＳなどの他の組織にＴＨ１７細胞が移動する障害の処置に特に適合する。Chenら（２００６年）J.Clin.Invest. 116：１
３１７頁を参照されたい。
【００８５】
しかしながら、他の実施形態では、ＩＬ−２３Ｒを発現する細胞における細胞傷害性効果を好ましくは回避し得、その代りに、ＩＬ−２３シグナル伝達を単純に遮断してよい。たとえば腫瘍の処置の場合には（たとえば国際公開第２００４／０８１１９０号を参照されたい）、好ましくはＴｈ０細胞中でＩＬ−２３シグナル伝達を遮断し、したがって、細胞の殺滅を誘発することなくＴｈ１７形成を遮断し得る。次いで、Ｔｈ０細胞は、ＩＬ−１２によって誘発されるＴｈ１系列の細胞産生に利用可能になる、次いで、これらは、有益な効果を伴って、腫瘍細胞の生産的な免疫監視に参加することができる。本発明の組成物および方法は、どちらが特定の治療的使用にとって好ましいアプローチであるかに依存して、ＩＬ−２３Ｒ発現細胞の殺滅を増強してもよいまたは増強しなくてもよい結合性化合物（抗体）を提供することによる両方のシナリオを包含する。いくつかの実施形態では、サブクラスＩｇＧ１以外のＩｇＧ抗体またはＦａｂもしくは他の抗体断片などの、エフェクター機能を欠く抗体またはその断片が使用されてもよい。
【００８６】
ＩＬ−２３Ｒの阻害は、ＩＬ−２３シグナル伝達を破壊するが、ＩＬ−１２シグナル伝達を破壊しないので、ＩＬ−２３Ｒを標的とすることは、ヘテロ二量体ＩＬ−２３受容体の他方のサブユニットであるＩＬ−１２Ｒβ１を標的とすることに対して利点を有する。ＩＬ−１２Ｒβ１の阻害は、ＩＬ−２３およびＩＬ−１２の両方のシグナル伝達を破壊する。一般的な原理では、より厳密な標的治療は、好ましく、この特定の場合では、ＩＬ−１２の破壊は、ある感染症に抵抗し、腫瘍監視を維持するための被験体の能力を低下させるということを予想するのに十分な理由がある。
【００８７】
その２つの治療的アプローチが、共に、その受容体を通してのＩＬ−２３シグナル伝達を破壊することによって作用するという事実にも関わらず、ＩＬ−２３Ｒを標的とすることは、ＩＬ−２３ｐ１９を標的とすることに対して利点を有する。ＩＬ−２３Ｒは、ＩＬ−２３ｐ１９よりも著しく低いレベルで存在し、ＩＬ−２３Ｒを遮断するのに必要な抗ＩＬ−２３Ｒ抗体の量は、相応して、被験体でｐ１９の活性を遮断するために必要とされる量よりも低いことが予想される。抗体の量のこの低下は、処置の費用の低減、送達される薬剤の濃度および／または容量の減少、ならびに投与頻度の低減を容易にするなどのいくつかの利点を提供し得る。加えて、ＩＬ−２３ｐ１９を標的とすることは、ＩＬ−２３およびＩＬ−１２の両方のサブユニットであり、ｐ４０ホモ二量体形態でも存在するように現れるＩＬ−１２ｐ４０の循環レベルを変化させ得る。ＩＬ−１２および／またはＩＬ−１２ｐ４０ホモ二量体のレベルの変化の潜在的な生物学的作用は、十分に理解されていないので、可溶性サイトカイン（ＩＬ−２３）を標的とすることを伴わず、その代りに、ＩＬ−２３特異的受容体サブユニットＩＬ−２３Ｒを標的とする方法でＩＬ−２３シグナル伝達を遮断することは、好ましい。
ＩＩＩ．ＩＬ−２３Ｒ特異抗体の生成
モノクローナル抗体を生成するための任意の適切な方法が使用されてもよい。たとえば、ＩＬ−２３Ｒまたはその断片を用いてレシピエントは免疫されてもよい。免疫の任意の適切な方法を使用することができる。そのような方法は、アジュバント、他の免疫刺激剤、繰り返しの追加免疫、および１つまたは複数の免疫経路の使用を含むことができる。ＩＬ−２３Ｒの任意の適切な供給源は、本明細書に開示される組成物および方法の、非ヒト抗体の生成のための免疫原として使用することができる。そのような形態は、当技術分野で知られている組換え手段、合成手段、化学的手段、または酵素分解手段を通して生成される全タンパク質、ペプチド（複数可）、ならびにエピトープを含むが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、免疫原は、ＩＬ−２３Ｒの細胞外部分を含む。ＩＬ−２３Ｒのドメイン構造は、米国特許第６，７５６，４８１号に論じられ、この中で細胞外ドメインは、本出願の配列番号４１の残基２４〜３５１に対応する、ヒトＩＬ−２３Ｒの成熟形態のアミノ酸１〜３２８を含むことが予測される。国際公開第２００４／０５２１５７号もまた参照されたい。細胞外ドメインは、免疫原性ポリペプチド構築物の設計などの提唱される目的に依存して別々に定義されてもよい。
【００８８】
抗原の任意の形態は、生物学的活性抗体を生成するのに十分な抗体を生成するために使用することができる。したがって、誘発性抗原は、単独のまたは当技術分野で知られている１つもしくは複数の免疫原性増強剤と組み合わせた単一のエピトープ、複数のエピトープ、または全タンパク質であってもよい。誘発性抗原は、単離完全長タンパク質、細胞表面タンパク質（たとえば、抗原の少なくとも一部分をトランスフェクトした細胞を用いて免疫する）、または可溶性タンパク質（たとえば、タンパク質の細胞外ドメイン部分のみを用いて免疫する）であってもよい。抗原は、遺伝的改変細胞中で産生されてもよい。抗原をコードするＤＮＡは、ゲノムＤＮＡまたは非ゲノムＤＮＡ（たとえばｃＤＮＡ）であってもよく、細胞外ドメインの少なくとも１つの一部分をコードする。本明細書に使用されるように、用語「部分」は、適宜に、興味のある抗原の免疫原性エピトープを成すための最小数のアミノ酸または核酸を指す。アデノウイルスベクター、プラスミド、および陽イオン性脂質などの非ウイルスベクターを含むが、これらに限定されない、興味のある細胞の形質転換に適切な任意の遺伝子ベクターが用いられてもよい。
【００８９】
任意の適切な方法は、ＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒを阻害するための所望の生物学的特性を有する抗体を誘発するために使用することができる。マウス、ラット、他のげっ歯類、ヒト、他の霊長類などの多様な哺乳類宿主からモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を調製することが望ましい。そのようなモノクローナル抗体を調製するための技術の説明は、たとえばStitesら（編）BASICANDCLINICAL IMMUNOLOGY（第４版）Lange MedicalPublications
、Los Altos、CA、およびそこに引用される参考文献；HarlowおよびLane（１９８８年）ANTIBODIES:ALABORATORY MANUALCSH Press；Goding（１９８６年）MONOCLONAL ANTIBODIES: PRINCIPLESANDPRACTICE（第２版）AcademicPress、New York、NY.に見出され得る
。したがって、モノクローナル抗体は、当業者によく知られている種々の技術によって得られてもよい。典型的には、所望の抗原を用いて免疫された動物からの脾臓細胞は、骨髄腫細胞との融合によって通例、不死化される。KohlerおよびMilstein（１９７６年）Eur.J.Immunol.6：５１１〜５１９頁を参照されたい。不死化の代替方法は、エプスタイン
バーウイルス、癌遺伝子、もしくはレトロウイルスを用いる形質転換または当技術分野で知られている他の方法を含む。たとえばDoyleら（１９９４年版および定期的な増刊）CELLANDTISSUECULTURE: LABORATORY PROCEDURES、John Wiley and Sons、New York、NYを参照されたい。単一の不死化細胞から生じるコロニーは、抗原に対する所望の特異性および親和性の抗体の産生のためにスクリーニングされ、そのような細胞によって産生されたモノクローナル抗体の収量は、脊椎動物宿主の腹膜腔への注射を含む多様な技術によって増強されてもよい。あるいは、たとえば、Huseら（１９８９年）Science246：１２７５〜１２８１頁によって概要を述べられる一般的なプロトコルに従って、ヒトＢ細胞からのＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片をコードするＤＮＡ配列を単離してもよい。
【００９０】
他の適切な技術は、ファージまたは類似のベクター中の抗体のライブラリーの選択を含む。たとえばHuseら前掲；およびWardら（１９８９年）Nature 341：５４４〜５４６頁を参照されたい。キメラ抗体またはヒト化抗体を含む、本発明のポリペプチドおよび抗体は、改変を伴ってまたは改変を伴わずに使用されてもよい。ポリペプチドおよび抗体は、検出可能なシグナルを提供する物質を共有結合でまたは非共有結合のいずれかで結合することによって標識されることが多い。種々様々な標識およびコンジュゲーション技術が知られており、科学文献および特許文献の両者で広範囲に報告されている。適切な標識は、放射性核種、酵素、基質、補因子、阻害剤、蛍光成分、化学発光成分、磁気粒子などを含む。そのような標識の使用を教示する特許は、米国特許第３，８１７，８３７号；第３，８５０，７５２号；第３，９３９，３５０号；第３，９９６，３４５号；第４，２７７，４３７号；第４，２７５，１４９号；および第４，３６６，２４１号を含む。さらに、組換え免疫グロブリンは、産生されてもよく、Cabilly  米国特許第４，８１６，５６７号；
およびQueenら（１９８９年）Proc.Nat'l Acad. Sci. USA 86：１００２９〜１００３３
頁を参照されたい；またはトランスジェニックマウス中で作製されてもよく、Mendezら（１９９７年）NatureGenetics 15：１４６〜１５６頁を参照されたい。AbgenixおよびMedarexの技術もまた参照されたい。
【００９１】
ＩＬ−２３Ｒの所定の断片に対する抗体または結合性組成物は、ポリペプチド、断片、ペプチド、またはエピトープと担体タンパク質とのコンジュゲートを用いる動物の免疫によって出現させることができる。モノクローナル抗体は、所望の抗体を分泌する細胞から調製される。これらの抗体は、正常ＩＬ−２３Ｒまたは欠損ＩＬ−２３Ｒに対する結合性についてスクリーニングすることができる。これらのモノクローナル抗体は、一般にＥＬＩＳＡまたはＢｌＡｃｏｒｅ（登録商標）  ｌａｂｅｌ−ｆｒｅｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｓｙｓｔｅｍによって決定される、一般に少なくとも約１μＭ、より一般に少なくとも約３００ｎＭ、３０ｎＭ、１０ｎＭ、３ｎＭ、１ｎＭ、３００ｐＭ、１００ｐＭ、３０ｐＭ、１０ｐＭ、１ｐＭ、またはそれよりも良好なＫｄで結合する。適切な非ヒト抗体はまた、以下の実施例５、６、および７に記載される生物学的アッセイを使用して同定されてもよい。
【００９２】
抗体８Ｂ１０（ラットＩｇＧ２ａカッパ）および２０Ｄ７（マウスＩｇＧ１カッパ）を発現するハイブリドーマは、それぞれアクセッション番号ＰＴＡ−７８００およびＰＴＡ−７８０１の下で、２００６年８月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ−Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ、ＵＳＡ）にブダペスト条約に従って寄託された。
ＩＶ．ＩＬ−２３Ｒ特異抗体のヒト化
任意の適切な非ヒト抗体は、超可変領域のための供給源として使用することができる。非ヒト抗体の供給源は、マウス（たとえばＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）、ラット（たとえばＲａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）、ウサギ目（ウサギを含む）、ウシ、および霊長類を含むが、これらに限定されない。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、および能力（ｃａｐａｃｉｔｙ）を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）からの超可変領域残基と交換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基と交換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体中に見つけられない残基を含んでいてもよい。これらの改変は、所望の生物学的活性の抗体性能をさらに改善するために成される。より詳細については、Jonesら（１９８６年）Nature321：５２２〜５２５頁；Reichmannら（１９８８年）Nature332：３２３〜３２９頁；およびPresta（１９９２年）Curr.Op.Struct. Biol. 2：５９３〜５９６頁を参照されたい。
【００９３】
抗体を組換え操作するための方法は、たとえばBossら（米国特許第４，８１６，３９７号）、Cabillyら（米国特許第４，８１６，５６７号）、Lawら（欧州特許出願公開第４３８３１０Ａ１号）およびWinter（欧州特許出願公開第２３９４００Ｂ１号）に記載されている。
【００９４】
ヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体のアミノ酸配列改変体は、適正なヌクレオチド変更をヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体ＤＮＡの中に導入することによってまたはペプチド合成によって調製される。そのような改変体は、たとえば、ヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体について示されるアミノ酸配列内の残基からの欠失および／またはそれへの挿入および／またはその置換を含む。欠失、挿入、および置換の任意の組合せは、最終的な構築物に到達するために成されるが、ただし、最終的な構築物が所望の特徴を持つことを条件とする。アミノ酸変化はまた、糖鎖付加部位の数または位置の変更などの、ヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体の翻訳後プロセスをも変更し得る。
【００９５】
変異誘発の好ましい位置である、ヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体ポリペプチドのある種の残基または領域の同定のための有用な方法は、CunninghamおよびWells（１９８９年）Science244：１０８１〜１０８５頁に記載されているように「アラニンスキャニング変異誘発
（ａｌａｎｉｎｅ  ｓｃａｎｎｉｎｇ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）」と呼ばれる。ここで、残基または標的残基の群は、同定され（たとえば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＧｌｕなどの荷電残基）、ＩＬ−２３Ｒ抗原とアミノ酸との相互作用に影響するように、中性アミノ酸または負に荷電したアミノ酸と交換される（最も好ましくはアラニンまたはポリアラニン）。次いで、置換に対して機能的な感度を示すアミノ酸残基は、置換の部位にまたはその代わりにさらなる改変体または他の改変体を導入することによって改善される。したがって、アミノ酸配列改変を導入するための部位は予め決定されるが、変異の性質自体を予め決定する必要はない。たとえば、所与の部位での変異の性能を分析するために、Ａｌａスキャニングまたはランダム変異誘発は、標的コドンまたは標的領域で行われ、発現されたヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体改変体は、所望の活性についてスクリーニングされる。
【００９６】
アミノ酸配列の挿入は、長さが１残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドに及ぶアミノ末端および／またはカルボキシル末端の融合ならびに単一のアミノ酸残基または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例は、Ｎ末端メチオニル残基を有するヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体またはエピトープタグに融合された抗体を含む。ヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体分子の他の挿入改変体は、ヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体のＮ末端またはＣ末端と、抗体の血清半減期を増加させる酵素またはポリペプチドとの融合を含む。
【００９７】
他のタイプの改変体は、アミノ酸置換改変体である。これらの改変体は、ヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体分子中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、その位置に異なる残基が挿入されている。置換変異誘発にとって最も興味のある部位は、超可変ループを含むが、ＦＲ変更もまた企図される。
【００９８】
抗体の他のタイプのアミノ酸改変体は、抗体の元の糖鎖付加パターンを変化させる。変化させることによって、抗体中に見つけられる１つもしくは複数の糖鎖成分を欠失させることおよび／または抗体中に存在しない１つもしくは複数の糖鎖付加部位を付加することを意味する。抗体の糖鎖付加は、典型的には、Ｎ連結（Ｎ−ｌｉｎｋｅｄ）またはＯ連結（Ｏ−ｌｉｎｋｅｄ）のいずれかである。Ｎ連結は、アスパラギン残基の側鎖への糖鎖成分の付加を指す。Ｘがプロリン以外の任意のアミノ酸である、トリペプチド配列、アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−トレオニンは、糖鎖成分のアスパラギン側鎖への酵素的付加のための認識配列である。したがって、ポリペプチド中のこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在により、潜在的な糖鎖付加部位が作り出される。Ｏ連結糖鎖付加は、糖であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つのヒドロキシアミノ酸、最も通例ではセリンまたはトレオニンへの付加を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンが使用されてもよい。
【００９９】
抗体への糖鎖付加部位の追加は、抗体が、１つまたは複数の上記トリペプチド配列を含有するように（Ｎ連結糖鎖付加部位について）、アミノ酸配列を変化させることによって好都合に達成される。変更はまた、元の抗体の配列に対する１つまたは複数のセリン残基またはトレオニン残基の追加またはそれによる置換によって成されてもよい（Ｏ連結糖鎖付加部位について）。
【０１００】
その上更なるタイプのアミノ酸改変体は、最終的なヒト化抗体のより大きな化学的安定性をもたらすための残基の置換である。たとえば、げっ歯類ＣＤＲ内の任意のＮＧ配列でイソアスパラギン酸の形成の能力を低下させるために、アスパラギン（Ｎ）残基を変更してもよい。類似の問題は、ＤＧ配列で生じ得る。ReissnerおよびAswad（２００３年）Cell.Mol.Life Sci.60：１２８１頁。イソアスパラギン酸形成は、その標的抗原に対する
抗体の結合を弱め得るかまたは完全に抑止し得る。Presta（２００５年）J.Allergy Clin. Immunol. 116：７３１および７３４頁。一実施形態では、アスパラギンは、グルタミン（Ｑ）に変更される。小さなアミノ酸が、アスパラギンまたはグルタミンに近接して生じる場合、より大きな率で生じる脱アミド化の可能性を低下させるために、アスパラギン（Ｎ）残基またはグルタミン（Ｑ）残基に近接するアミノ酸を変化させることもまた望ましいかもしれない。BischoffおよびKolbe（１９９４年）J.Chromatog.662：２６１頁。加
えて、げっ歯類ＣＤＲ中のメチオニン残基は、抗原結合親和性を低下させ得るおよび最終的な抗体調製物中の分子の不均質性の一因ともなり得る、メチオニンの硫黄が酸化する可能性を低下させるために変更されてもよい。同上文献。一実施形態では、メチオニンは、アラニン（Ａ）に変更される。そのような置換を有する抗体は、置換が、許容できないレベルまでＩＬ−２３Ｒ結合親和性を減少させていないことを確認するためにその後スクリーニングされる。
【０１０１】
ヒト化ＩＬ−２３Ｒ特異抗体のアミノ酸配列改変体をコードする核酸分子は、当技術分野で知られている種々の方法によって調製される。これらの方法は、天然源からの単離（自然発生アミノ酸配列改変体の場合）または先に調製された改変体バージョンもしくは非改変体バージョンのヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体のオリゴヌクレオチド媒介性の（もしくは部位特異的な）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、およびカセット変異誘発による調製を含むが、これらに限定されない。
【０１０２】
通常、ヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体のアミノ酸配列改変体は、重鎖または軽鎖のいずれかの元のヒト化抗体アミノ酸配列と少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％、および最も好ましくは、少なくとも９５％、９８％、または９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。この配列に関しての同一性または相同性は、配列を整列させ、必要であればギャップを導入して、最大の配列同一性パーセントを達成した後に、配列同一性の一部としてのあらゆる保存的置換も考慮に入れず、ヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ残基と同一となる、候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして本明細書に定義される。Ｎ末端、Ｃ末端、または内部の延長、欠失、または抗体配列中への挿入のいずれも、配列の同一性または相同性に影響しないものと見なされるものと見なす。
【０１０３】
ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥを含む任意のクラスの免疫グロブリンから選択することができる。好ましくは、抗体は、ＩｇＧ抗体である。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む、ＩｇＧの任意のアイソタイプを使用することができる。ＩｇＧアイソタイプの改変体もまた企図される。ヒト化抗体は、１つを超えるクラスまたはアイソタイプからの配列を含んでいてもよい。所望の生物学的活性を生成するのに必要な定常ドメイン配列の最適化は、実施例に記載の生物学的アッセイで抗体をスクリーニングすることによって容易に達成される。
【０１０４】
同様に、いずれかのクラスの軽鎖は、本明細書の組成物および方法で使用することができる。具体的には、カッパ、ラムダ、またはその改変体が本発明の組成物および方法で有用である。
【０１０５】
非ヒト抗体からのＣＤＲ配列の任意の適切な部分を使用することができる。ＣＤＲ配列は、ＣＤＲ配列が、用いられるヒト抗体配列および非ヒト抗体配列と別個なものとなるように、少なくとも１つの残基の置換、挿入、または欠失によって変異誘発することができる。そのような変異は、最小限となるように企図される。典型的には、ヒト化抗体残基の少なくとも７５％、より多くの場合９０％、および最も好ましくは９５％超は、非ヒトＣＤＲ残基のそれに対応する。
【０１０６】
ヒト抗体からのＦＲ配列の任意の適切な部分を使用することができる。ＦＲ配列は、ＦＲ配列が、用いられるヒト抗体配列および非ヒト抗体配列と別個なものとなるように、少なくとも１つの残基の置換、挿入、または欠失によって変異誘発することができる。そのような変異は、最小限となるように企図される。典型的には、ヒト化抗体残基の少なくとも７５％、より多くの場合９０％、および最も好ましくは９５％、９８％、または９９％超は、ヒトＦＲ残基のそれに対応する。
【０１０７】
ＣＤＲ残基およびＦＲ残基は、Kabatの標準的な配列定義によって決定される。Kabatら（１９８７年）Sequencesof ProteinsofImmunological Interest、National Institutes
of Health、Bethesda Md。配列番号：１〜５は、様々なマウス抗ヒトＩＬ−２３Ｒ抗体
および様々なラット抗ヒトＩＬ−２３Ｒ抗体の重鎖可変ドメイン配列を示し、配列番号６〜１０は、軽鎖可変ドメイン配列を表わす。配列番号４５〜４７は、ヒト化マウス抗ヒトＩＬ−２３Ｒクローン２０Ｄ７抗体の様々な形態の重鎖可変ドメイン配列を示し、配列番号４８〜４９および５３は、軽鎖可変ドメイン配列を表わす。図１および２は、本発明の様々な抗体の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインの配列一覧を提供する。ＣＤＲは、図に示され、個々のＣＤＲ配列は、表２および表４に示されるように特有の配列識別名（配列番号１１〜４０）を用いてそれぞれ提示される。
【０１０８】
【表２】
2014087374.tif 000004
【０１０９】
【表３】
2014087374.tif 000005
一実施形態では、ＣＤＲは、本明細書に開示される任意の単一配列ＣＤＲの改変体を含み（配列番号１１〜４０および５２）、その改変体は、表１を使用して決定されるように、開示される配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上の保存的アミノ酸置換を含む。
【０１１０】
キメラ抗体もまた企図される。上記に示されるように、典型的なキメラ抗体は、特定の種に由来するまたは特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるまたはそれに相同性である重鎖および／または軽鎖の一部分を含むが、鎖（複数可）の残りの部分は、他の種に由来するまたは他の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるまたはそれに相同性であり、ならびにキメラ抗体が所望の生物学的活性を呈する限り、そのような抗体の断片を含む。米国特許第４，８１６，５６７号およびMorrisonら（１９８４年）Proc.Natl.Acad. Sci. USA 81：
６８５１〜６８５５頁を参照されたい。
【０１１１】
二重特異性抗体もまた本発明の方法および組成物で有用である。本明細書に使用されるように、用語「二重特異性抗体」は、少なくとも２つの異なる抗原エピトープに対する結合特異性を有する抗体、典型的にはモノクローナル抗体を指す。一実施形態では、エピトープは、同じ抗原に由来する。他の実施形態では、エピトープは、２つの異なる抗原に由来する。二重特異性抗体を作製するための方法は、当技術分野で知られている。たとえば、二重特異性抗体は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現を使用して組換えで産生することができる。たとえばMilsteinら（１９８３年）Nature305：５３７〜３９頁
を参照されたい。あるいは、二重特異性抗体は、化学的連結を用いて調製することができる。たとえばBrennanら（１９８５年）Science229：８１頁を参照されたい。二重特異性
抗体は、二重特異性抗体の断片を含む。たとえばHolligerら（１９９３年）Proc.Natl. Acad.Sci. U.S.A. 90：６４４４〜４８頁、Gruberら（１９９４年）J.Immunol. 152：５
３６８頁を参照されたい。
【０１１２】
その上更なる実施形態では、異なる定常ドメインは、本明細書に提供される、ＣＤＲに由来するヒト化ＶＬ領域およびヒト化ＶＨ領域に付加されてもよい。たとえば、本発明の抗体（または断片）の特定の意図される使用が、エフェクター機能の変更を求めるためのものである場合、ＩｇＧ１以外の重鎖定常ドメインが使用されてもよい。ＩｇＧ１抗体は、長い半減期ならびに補体活性化および抗体依存性細胞傷害などのエフェクター機能を提供するが、そのような活性は、抗体のすべての使用に使用には望めない。そのような例では、たとえばＩｇＧ４定常ドメインが使用されてもよい。
Ｖ．ヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体の生物学的活性
ヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体で望ましいとして本明細書で同定される特徴を有する抗体は、インビトロでの阻害性生物学的活性または適切な結合親和性についてスクリーニングすることができる。アンタゴニスト抗体は、実施例５、６、および７に提供される生物学的アッセイを使用してアゴニスト抗体から区別されてもよい。アゴニスト活性を呈する抗体は、ＩＬ−２３の活性を遮断しないが、その代り、実施例５のＢａ／Ｆ３アッセイでの細胞増殖の増加および／または実施例６の脾細胞アッセイでのＩＬ−１７産生の増加などの、ＩＬ−２３によって典型的には引き起こされる応答を刺激する。アゴニスト抗体は、いくつかの治療的適応で使用を見い出し得るが、本明細書に開示される抗ＩＬ−２３Ｒ抗体は、他に示されない限り、アンタゴニスト抗体であることが意図される。
【０１１３】
興味のある抗体（たとえば、ＩＬ−２３の結合を遮断するもの）が結合する、ヒトＩＬ−２３Ｒ上のエピトープに結合する抗体についてスクリーニングするために、ANTIBODIES,ALABORATORY MANUAL、Cold Spring Harbor Laboratory、HarlowおよびDavidLane編（１９８８年）に記載されているものなどのルーチン的な交差遮断アッセイを行うことができる。同じエピトープに結合する抗体は、そのようなアッセイで交差遮断する可能性が高いが、交差遮断が、重複するエピトープまたは近くの重複しないエピトープに結合する抗体による抗体結合の立体障害に起因し得るため、すべての交差遮断抗体は、必ずしも、正確に同じエピトープに結合するとは限らない。
【０１１４】
あるいは、エピトープマッピングは、たとえばChampeら（１９９５年）J.Biol. Chem. 270：１３８８〜１３９４頁に記載されているように、抗体が、興味のあるエピトープに
結合するかどうかを決定するために行うことができる。CunninghamおよびWells（１９８
９年）Science244：１０８１〜１０８５頁に記載されている「アラニンスキャニング変異誘発」またはヒトＩＬ−２３Ｒ中のアミノ酸残基の点変異誘発の他のある形態もまた、本発明の抗ＩＬ−２３Ｒ抗体について機能的エピトープを決定するために使用されてもよい。しかしながら、変異誘発研究はまた、ＩＬ−２３Ｒの全体的な三次元構造にとって重大であるが、抗体−抗原接触に直接関与しないアミノ酸残基をも明らかにし得、したがって、他の方法は、この方法を使用して決定される機能的エピトープを確証するために必要となり得る。
【０１１５】
特異抗体が結合するエピトープはまた、ヒトＩＬ−２３Ｒ（配列番号４１）の断片を含むペプチドへの抗体の結合を評価することによって決定されてもよい。ＩＬ−２３Ｒの配列を包含する、一連の重複するペプチドは、合成され、たとえば直接ＥＬＩＳＡで、競合的ＥＬＩＳＡで（ここでペプチドは、マイクロタイタープレートのウェルに結合されたＩＬ−２３Ｒへの抗体の結合を妨害するその能力について評価される）、またはチップ上で結合についてスクリーニングされてもよい。そのようなペプチドスクリーニング法は、いくつかの不連続な機能的エピトープ、つまり、ＩＬ−２３Ｒポリペプチド鎖の一次配列に沿って隣接していないアミノ酸残基を含む機能的エピトープを検出でき得ない。
【０１１６】
本発明の抗体が結合するエピトープはまた、Ｘ線結晶構造決定（たとえば国際公開第２００５／０４４８５３号）、分子モデリング、ならびに遊離している場合および興味のある抗体との複合体中で結合している場合の、ＩＬ−２３Ｒ中の不安定なアミド水素のＨ−Ｄ交換速度のＮＭＲ決定を含む核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法などの構造的な方法によって決定されてもよい（Zinn-Justinら（１９９２年）Biochemistry31：１１３３５〜１１３
４７頁；Zinn-Justinら（１９９３年）Biochemistry32：６８８４〜６８９１頁）。
【０１１７】
Ｘ線結晶学に関して、結晶化は、マイクロバッチ（ｍｉｃｒｏｂａｔｃｈ）（たとえばChayen（１９９７年）Structure5：１２６９〜１２７４頁）、懸滴蒸気拡散（たとえばMcPherson（１９７６年）J.Biol.Chem. 251：６３００〜６３０３頁）、シーディング（ｓｅｅｄｉｎｇ）、および透析を含む当技術分野で知られている方法のいずれかを使用して達成されてもよい（たとえばGiegeら（１９９４年）ActaCrystallogr.D50：３３９〜３５０頁；McPherson（１９９０年）Eur.J. Biochem. 189：１〜２３頁）。少なくとも約１ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの濃度を有するタンパク質調製物を使用することが望ましい。結晶化は、ポリエチレングリコール１０００〜２０，０００（ＰＥＧ：約１０００〜約２０，０００Ｄａに及ぶ平均分子量）、好ましくは約５０００〜約７０００Ｄａ、より好ましくは約６０００Ｄａを、約１０％〜約３０％（ｗ／ｖ）に及ぶ濃度で含有する沈殿剤溶液中で最も良好に達成され得る。望ましくは、タンパク質安定化剤、たとえばグリセロールを、約０．５％〜約２０％に及ぶ濃度で含み得る。望ましくは、塩化ナトリウム、塩化リチウム、クエン酸ナトリウムなどの適切な塩もまた、好ましくは約１ｍＭ〜約１０００ｍＭに及ぶ濃度で沈殿剤溶液中に入ってよい。沈殿剤は、好ましくは、約４．０〜約１０．０、好ましくは、約７．０〜８．５、たとえば８．０のｐＨに緩衝化される。沈殿剤溶液中で有用な特別の緩衝液は変えられてもよく、当技術分野でよく知られている。Scopes、ProteinPurification:Principlesand Practice、第３版、（１９９４年）Springer-Verlag、New York。有用な緩衝液の例は、ＨＥＰＥＳ、Ｔｒｉｓ、ＭＥＳ、および酢酸塩を含むが、これらに限定されない。結晶は、２℃、４℃、８℃、および２６℃を含む広範囲の温度で成長し得る。
【０１１８】
抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回析技術を使用して研究されてもよく、Ｘ−ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、１９９２、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．によって販売；たとえばBlundell&Johnson（１９８５年）Meth. Enzymol. 114 & 115、H. W.Wyckoffら編、Academic Press；米国特許出願公開第２００４／００
１４１９４号を参照されたい）およびＢＵＳＴＥＲ（Bricogne（１９９３年）ActaCryst.D49：３７〜６０頁；Bricogne（１９９７年）Meth.Enzymol.276A：３６１〜４２３頁、Carter &Sweet編；Roversiら（２０００年）Acta Cryst. D56：１３１３〜１３２３頁）などのコンピューターソフトウェアを使用して改善されてもよい。
【０１１９】
本発明の抗体と同じエピトープに結合するさらなる抗体は、たとえば、エピトープへの結合でＩＬ−２３Ｒに対して出現させた抗体をスクリーニングすることによってまたはエピトープ配列を含むヒトＩＬ−２３Ｒの断片を含むペプチドを用いる動物の免疫によって得られてもよい。同じ機能的エピトープに結合する抗体は、受容体結合の遮断などの類似の生物学的活性を呈することを予想し得、そのような活性は、抗体の機能アッセイによって確証することができる。
【０１２０】
抗体親和性は、標準的な分析を使用して決定されてもよい。好ましいヒト化抗体は、ヒトＩＬ−２３Ｒに、約１×１０−７Ｍ以下、好ましくは、約１×１０−８Ｍ以下、より好ましくは、約１×１０−９Ｍ以下、および最も好ましくは、約１×１０−１０Ｍ以下または１×１０−１１ＭのＫｄ値で結合する抗体である。
【０１２１】
本発明の組成物および方法に有用な抗体およびその断片は、生物学的活性抗体および生物学的活性断片である。本明細書に使用されるように、用語「生物学的活性」は、所望の抗原エピトープに結合し、直接または間接的に生物学的作用を発揮することができる抗体または抗体断片を指す。典型的には、これらの作用は、ＩＬ−２３がＩＬ−２３受容体に結合することができないことに起因する。本明細書に使用されるように、用語「特異的」は、抗体の標的抗原エピトープへの選択的結合を指す。抗体は、所与の条件下で、ＩＬ−２３Ｒへの結合を、関係のない抗原または抗原混合物への結合と比較することによって、結合の特異性について試験することができる。抗体が、関係のない抗原または抗原混合物に対するよりも、少なくとも１０倍、および好ましくは５０倍多くＩＬ−２３Ｒに結合する場合、それは特異的とみなす。ＩＬ−２３Ｒに「特異的に結合する」抗体は、ＩＬ−２３Ｒ由来の配列を含まないタンパク質に結合しない、つまり、本明細書に使用されるような「特異性」は、ＩＬ−２３Ｒ特異性に関するものであり、問題のタンパク質中に存在し得る任意の他の配列にも関するものではない。たとえば、本明細書に使用されるように、ＩＬ−２３Ｒを含むポリペプチドに「特異的に結合する」抗体は、ＩＬ−２３ＲおよびＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドタグを含む融合タンパク質であるＦＬＡＧ（登録商標）−ｈＩＬ−２３Ｒに典型的には結合するが、ＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドタグ単独のものにはまたはそれがＩＬ−２３Ｒ以外のタンパク質に融合している場合は結合しない。
【０１２２】
阻害性ＩＬ−２３Ｒ特異抗体などの本発明のＩＬ−２３Ｒ特異的結合性化合物は、任意の様式で、腹腔マクロファージによるＩＬ−１βおよびＴＮＦの産生の減少ならびにＴＨ１７  Ｔ細胞によるＩＬ−１７の産生の減少を含むが、これらに限定されないその生物学的活性を阻害することができる。Langrishら（２００４年）Immunol.Rev.202：９６〜１０５頁を参照されたい。抗ＩＬ−２３Ｒ抗体はまた、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＣＣＬ７、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２２、ＣＣＲ１、およびＧＭ−ＣＳＦの遺伝子発現を阻害することもできる。Langrishら（２００５年）J.Exp.Med.201：２３３〜２４０頁を参照されたい。抗ＩＬ−２３Ｒ抗体などの本発明のＩＬ−２３Ｒ特異的結合性化合物はまた、ＴＨ１７細胞の増殖または生存を増強するＩＬ−２３の能力をも遮断する。CuaおよびKastelein（２００６年）Nat.Immunol.7：５５７〜５５９頁。抗ＩＬ−２３Ｒ抗体の阻害活性は、炎症性障害、自己免疫障害、および増殖障害の処置で有用である。そのような障害の例は、ＰＣＴ特許出願国際公開第０４／０８１１９０号；国際公開第０４／０７１５１７号；国際公開第００／５３６３１号；および国際公開第０１／１８０５１号に記載されている。
ＶＩ．医薬組成物
ＩＬ−２３Ｒ抗体を含む医薬組成物または無菌組成物を調製するために、サイトカイン類似体もしくはムテイン、それに対する抗体、またはその核酸は、薬学的に許容可能な担体または賦形剤と混合される。たとえばRemington'sPharmaceuticalSciences and U.S.Pharmacopeia: NationalFormulary、Mack PublishingCompany、Easton、PA（１９８４年）を参照されたい。
【０１２３】
治療薬および診断用薬の処方物は、生理学的に許容可能な担体、賦形剤、または安定剤と混ぜることによって、たとえば凍結乾燥粉末、スラリー、水性溶液、または懸濁液の形態で調製されてもよい。たとえばHardmanら（２００１年）GoodmanandGilman's The Pharmacological Basis ofTherapeutics、McGraw-Hill、New York、NY；Gennaro（２０００年）Remington:TheScience andPractice of Pharmacy、Lippincott, Williams, and Wilkins、New York、NY；Avisら（編）（１９９３年）PharmaceuticalDosageForms:Parenteral Medications、Marcel Dekker、NY；Liebermanら（編）（１９９０年）PharmaceuticalDosageForms:Tablets、Marcel Dekker、NY；Liebermanら（編）（１９９０年）PharmaceuticalDosageForms:Disperse Systems、Marcel Dekker、NY；WeinerおよびKotkoskie（２０００年）ExcipientToxicityandSafety、Marcel Dekker, Inc.、New York、NY
を参照されたい。
【０１２４】
単独でまたは免疫抑制剤と組み合わせて投与される抗体組成物の毒性および治療効果は、たとえばＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％で治療的に有効な用量）を決定するための、細胞培養物または実験動物での標準的な薬学の手順によって決定することができる。毒性作用および治療的作用の間の用量比は、治療指数であり、それは、ＥＤ５０に対するＬＤ５０の比として表現することができる。高い治療指数を呈する抗体が好ましい。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトで使用されるある範囲の投薬量を処方する際に使用することができる。そのような化合物の投薬量は、好ましくは、ほとんどまたは全く毒性がないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。投薬量は、用いられる剤形および投与の経路に依存して、この範囲内で変動してもよい。
【０１２５】
投与のモードは、特に重要ではない。投与の適切な経路は、たとえば、経口投与、直腸投与、経粘膜投与、または腸管投与；筋肉内注射、皮内注射、皮下注射、髄内注射、および鞘内注射、直接脳室内注射、静脈内注射、腹腔内注射、鼻腔内注射、または眼内注射を含む非経口的送達を含んでいてもよい。医薬組成物中に使用されるまたは本発明の方法を実施するための抗体の投与は、経口摂取、吸入、局所適用または皮膚注射、皮下注射、腹腔内注射、非経口的注射、動脈内注射、もしくは静脈内注射などの種々の従来の方法で実行されてもよい。
【０１２６】
あるいは、多くの場合デポー処方物または徐放性処方物で、たとえば、直接、関節炎の関節または免疫病理によって特徴付けられる病原体誘発性の病巣の中へ、抗体の注射を介して、全身性の様式よりもむしろ局所性の様式で、抗体を投与してもよい。さらに、標的薬剤送達系（たとえば、たとえば関節炎の関節または免疫病理によって特徴付けられる病原体誘発性の病巣を標的とする組織特異的抗体でコートされたリポソーム）で、抗体を投与してもよい。リポソームは、罹患組織を標的とし、罹患組織によって選択的に取り込まれる。
【０１２７】
治療剤に対する投与計画の選択は、その実体（ｅｎｔｉｔｙ）の血清代謝回転速度または組織代謝回転速度、症状のレベル、その実体の免疫原性、および生物学的マトリックス中での標的細胞の到達性を含むいくつかの要因に依存する。好ましくは、投与計画は、許容可能なレベルの副作用と調和した、患者に送達される治療剤の量を最大限にする。したがって、送達される生物製剤の量は、部分的に、特定の実体および処置されている状態の重症度に依存する。抗体、サイトカイン、および小分子の適正用量の選択の手引き（ｇｕｉｄａｎｃｅ）が入手可能である。たとえばWawrzynczak（１９９６年）AntibodyTherapy、BiosScientific Pub. Ltd、Oxfordshire、UK；Kresina（編）（１９９１年）MonoclonalAntibodies,Cytokinesand Arthritis、Marcel Dekker、New York、NY；Bach（編）（１９９３年）MonoclonalAntibodiesandPeptide Therapy in Autoimmune Diseases、Marcel Dekker、New York、NY；Baertら（２００３年）NewEngl.J.Med. 348：６０１〜６０８頁；Milgromら（１９９９年）New Engl. J. Med. 341：１９６６〜１９７３頁；Slamonら（２００１年）NewEngl.J.Med. 344：７８３〜７９２頁；Beniaminovitzら（２０００年）New Engl. J. Med. 342：６１３〜６１９頁；Ghoshら（２００３年）NewEngl.J.Med.348：２４〜３２頁；Lipskyら（２０００年）NewEngl. J. Med. 343：１５９４〜１６０２頁を参照されたい。
【０１２８】
適正用量の決定は、たとえば、処置に影響することが当技術分野で知られているもしくは疑われるまたは処置に影響することが予測されるパラメーターまたは因子を使用して、臨床家によって成される。一般に、用量は、やや最適用量未満の量から始まり、その後、あらゆる負の副作用と比較して所望または最適の効果が達成されるまで少量ずつ増加させることによって増加する。重要な診断尺度は、たとえば炎症の症状または産生される炎症性サイトカインのレベルの尺度を含む。好ましくは、使用される生物製剤は、実質的に、処置の標的とされる動物と同じ種に由来し（たとえば、ヒト被験体の処置のためのヒト化抗体）、それによって、試薬に対するあらゆる免疫応答を最小限とする。
【０１２９】
抗体、抗体断片、およびサイトカインは、連続注入によってまたはたとえば１日、１週間当たり１〜７回、１週間、２週間、毎月、隔月などの間隔の用量で提供することができる。用量は、たとえば静脈内に、皮下に、局所に、経口的に、経鼻的に、直腸に、筋肉内に、脳内に、髄腔内に、または吸入によって提供されてもよい。好ましい用量プロトコルは、著しい望ましくない副作用を回避する最大用量または最大用量頻度を含むものである。毎週の用量の合計は、一般に、少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ体重、０．２μｇ／ｋｇ体重、０．５μｇ／ｋｇ体重、１μｇ／ｋｇ体重、１０μｇ／ｋｇ体重、１００μｇ／ｋｇ体重、０．２ｍｇ／ｋｇ体重、１．０ｍｇ／ｋｇ体重、２．０ｍｇ／ｋｇ体重、１０ｍｇ／ｋｇ体重、２５ｍｇ／ｋｇ体重、５０ｍｇ／ｋｇ体重、またはそれ以上である。たとえばYangら（２００３年）NewEngl.J. Med. 349：４２７〜４３４頁；Heroldら（２００２年）New Engl.J. Med. 346：１６９２〜１６９８頁；Liuら（１９９９年）J.Neurol.Neurosurg. Psych. 67：４５１〜４５６頁；Portieljiら（２０００３）CancerImmunol.Immunother. 52：１３３〜１４４頁を参照されたい。小分子治療剤、たとえばペプチド模倣物質、天然産物、または有機化学物質の所望の用量は、モル／ｋｇベースで、抗体またはポリペプチドとほぼ同じである。
【０１３０】
本明細書に使用されるように、「阻害する」または「処置する」または「処置」は、自己免疫疾患もしくは病原体誘発性の免疫病理と関連する症状の発達の遅延および／または発達するもしくは発達が予想されるような症状の重症度の低下を含む。用語は、既存の制御されないまたは望まれない、自己免疫に関係するまたは病原体誘発性の免疫病理症状を改善すること、さらなる症状を防止すること、およびそのような症状の根本的な原因を改善することもしくは防止することをさらに含む。したがって、その用語は、有益な結果が、自己免疫性のもしくは病原体誘発性の免疫病理疾患もしくは症状を有するまたはそのような疾患もしくは症状を発達させる可能性を有する脊椎動物被験体に与えられることを意味する。
【０１３１】
本明細書に使用されるように、用語、「治療有効量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」または「有効量」は、単独でまたはさらなる治療薬と組み合わせて細胞、組織、または被験体に投与される場合、自己免疫疾患または病原体誘発性の免疫病理関連性の疾患もしくは状態またはその疾患の進行を防止するまたは改善するのに有効である、ＩＬ−２３Ｒ特異的結合性化合物、たとえば抗体の量を指す。治療有効用量は、症状の改善、たとえば、関係のある病状の処置、治癒、防止、もしくは改善またはそのような状態の処置、治癒、防止、もしくは改善の速度の増加をもたらすのに十分な、化合物のその量をさらに指す。単独で投与される個々の有効成分に適用される場合、治療有効用量はその成分を単独で指す。組合せに適用される場合、組み合わせて、連続的に、または同時に投与されるかどうかに関わらず、治療有効用量は、治療的作用をもたらす、有効成分の組み合わせられた量を指す。治療剤の有効量は、典型的には少なくとも１０％、一般に少なくとも２０％、好ましくは、少なくとも約３０％、より好ましくは、少なくとも４０％、および最も好ましくは、少なくとも５０％、症状を減少させる。
【０１３２】
第２の治療薬、たとえばサイトカイン、抗体、ステロイド、化学療法剤、抗生物質、または放射線との同時投与または同時処置のための方法は、当技術分野でよく知られている。たとえばHardmanら（編）（２００１年）GoodmanandGilman's The Pharmacological B
asis ofTherapeutics、第１０版、McGraw-Hill、New York、NY；PooleおよびPeterson（編）（２００１年）PharmacotherapeuticsforAdvancedPractice: A Practical Approach、Lippincott, Williams & Wilkins、Phila.、PA；ChabnerおよびLongo（編）（２００１年）CancerChemotherapyandBiotherapy、Lippincott, Williams & Wilkins、Phila.、PAを参照されたい。本発明の医薬組成物はまた、他の免疫抑制剤または免疫調節剤を含有してもよい。抗炎症剤、コルチコステロイド、シクロスポリン、タクロリムス（つまりＦＫ−５０６）、シロリムス、インターフェロン、可溶性サイトカイン受容体（たとえばｓＴＮＲＦおよびｓＩＬ−１Ｒ）、サイトカイン活性を中和する作用物質（たとえばインフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｍａｂ）、エタネルセプト）、ミコフェノール酸モフェチル、１５−デオキシスパーガリン、サリドマイド、グラチラマー、アザチオプリン、レフルノミド、シクロホスファミド、メトトレキサートなどを含むが、これらに限定されない任意の適切な免疫抑制剤を用いることができる。医薬組成物はまた、光線療法および放射線などの他の治療様式と共に用いることができる。
【０１３３】
典型的な獣医学的被験体、実験被験体、または研究被験体は、サル、イヌ、ネコ、ラット、マウス、ウサギ、モルモット、ウマ、およびヒトを含む。
ＶＩＩ．抗体産生
一実施形態では、本発明の抗体の組換え産生のために、２つの鎖をコードする核酸は、単離され、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のために１つまたは複数の複製可能なベクターの中に挿入される。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、容易に単離され、従来の手順を使用して配列決定される（たとえば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）。多くのベクターは入手可能である。ベクター成分は、一般に、１つまたは複数の次のものを含むが、これらに限定されない：シグナル配列、複製開始点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列。一実施形態では、本発明のヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体の軽鎖および重鎖の両方は、同じベクター、たとえばプラスミドまたはアデノウイルスベクターから発現される。
【０１３４】
本発明の抗体は、当技術分野で知られている任意の方法によって産生されてもよい。一実施形態では、抗体は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児由来（ＨＥＫ）２９３細胞、マウス骨髄腫ＮＳＯ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、Spodopterafrugiperda卵巣（Ｓｆ９）細胞などの、培養物中の哺乳類細胞または昆虫細胞中で発現される。一実施形態では、ＣＨＯ細胞から分泌された抗体は、回収され、プロテインＡクロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、疎水的相互作用クロマトグラフィー、およびヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーなどの標準的なクロマトグラフ法によって精製される。一実施形態では、結果として生じる抗体は、濃縮され、２０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５中に保存される。
【０１３５】
他の実施形態では、本発明の抗体は、国際公開第２００５／０４０３９５号に記載の方法に従って酵母中で産生される。手短かに言えば、興味のある抗体の個々の軽鎖または重鎖をコードするベクターは、異なる酵母半数体細胞、たとえば、異なる交配型の酵母Pichiapastorisの中に導入される。これらの酵母半数体細胞は、任意選択で、相補的な栄養素要求株である。次いで、形質転換された半数体酵母細胞は、交配してまたは融合して、重鎖および軽鎖の両方を産生することができる二倍体酵母細胞を生じ得る。二倍体系統は、次いで、完全に構築された生物学的活性抗体を分泌することができる。２つの鎖の相対的な発現レベルは、たとえば、異なるコピー数を有するベクターを使用すること、異なる強度の転写プロモーターを使用すること、または一方もしくは両方の鎖をコードする遺伝子の転写を駆動する誘発性のプロモーターからの発現を誘発することによって最適化することができる。
【０１３６】
一実施形態では、複数の異なる抗ＩＬ−２３Ｒ抗体（「元の」抗体）の各重鎖および軽鎖は、酵母半数体細胞の中に導入されて、複数の軽鎖を発現する一方の交配型の半数体酵母系統のライブラリーおよび複数の重鎖を発現する異なる交配型の半数体酵母系統のライブラリーを作り出す。半数体系統のこれらのライブラリーは、交配して（またはスフェロプラストとして融合して）、様々な可能性のある順列の軽鎖および重鎖から構成される抗体のコンビナトリアルライブラリーを発現する一連の二倍体酵母細胞を産生することができる。次いで、抗体のコンビナトリアルライブラリーは、抗体のいずれかが、元の抗体の特性よりも優れた特性（たとえばＩＬ−２３Ｒに対するより高い親和性）を有するかどうか決定するためにスクリーニングすることができる。たとえば国際公開第２００５／０４０３９５号を参照されたい。
【０１３７】
他の実施形態では、本発明の抗体は、抗体可変ドメインの部分が、分子量約１３ｋＤａのポリペプチド中で連結されているヒトドメイン抗体である。たとえば、米国特許公開第２００４／０１１０９４１号を参照されたい。そのような単一ドメイン低分子量作用物質は、合成の容易性、安定性、および投与の経路の点から多数の利点を提供する。
ＶＩＩＩ．使用
本発明は、たとえば中枢神経系、末梢神経系、および胃腸管の炎症性障害および炎症性状態ならびに自己免疫障害および増殖障害の処置ならびに診断のための、抗ＩＬ−２３Ｒ抗体およびその断片を使用するための方法を提供する。
【０１３８】
方法は、たとえば再発寛解型ＭＳおよび原発性進行性ＭＳを含む多発性硬化症（ＭＳ）、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（別名ＡＬＳ；ルー  ゲーリック病）、虚血性脳傷害、プリオン病、およびＨＩＶ関連認知症の処置のために提供される。神経障害性疼痛、外傷後ニューロパシー、ギラン−バレー症候群（ＧＢＳ）、末梢多発性神経障害、および神経再生を処置するための方法もまた提供される。
【０１３９】
多発性硬化症または神経系の他の炎症性障害もしくは炎症性状態の１つまたは複数の以下の特徴、症状、側面、所見、または徴候を処置するまたは改善するための方法が提供される：脳病変、ミエリン病変、脱髄、脱髄斑、視覚障害、バランスまたは協調の喪失、痙縮、感覚障害、失禁、疼痛、脱力、疲労、麻痺、認知障害、精神緩徐、複視、視神経炎、感覚異常、歩行失調、疲労、ウートッフ症状（Ｕｈｔｏｆｆ’ｓ  ｓｙｍｐｔｏｍ）、神経痛、失語症、失行症、痙攣、視野損失、認知症、錐体外路系の徴候、うつ病、健康感または他の情緒的症状、慢性進行性ミエロパシー、およびガドリニウム増強病変を含む、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によって検出される症状、誘発電位記録によって検出される症状、または脳脊髄液の検査によって検出される症状。たとえばKenealyら（２００３年）J.Neuroimmunol.143：７〜１２頁；Noseworthyら（２０００年）NewEngl. J. Med. 343：９３８〜９５２頁；Millerら（２００３年）NewEngl. J. Med. 348：１５〜２３頁；Changら（２００２年）NewEngl. J.Med. 346：１６５〜１７３頁；BruckおよびStadelmann（２００３年）Neurol.Sci. 24 増刊5：Ｓ２６５〜Ｓ２６７頁を参照されたい。
【０１４０】
その上、本発明は、炎症性腸障害、たとえばクローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病、および過敏性腸症候群を処置するおよび診断するための方法を提供する。炎症性腸障害の１つまたは複数の以下の症状、側面、所見、または徴候を処置するまたは改善するための方法が提供される：食物の吸収不良、腸運動性の変化、感染症、発熱、腹痛、下痢、直腸出血、体重減少、栄養失調の徴候、肛門周囲の疾患、腹部塊、および成長不全、ならびに狭窄、フィステル、中毒性巨大結腸症、穿孔、および癌などの腸管合併症ならびに脆弱性、アフタ性潰瘍、および線状潰瘍などの内視鏡的な知見、敷石状外観、偽ポリープ、ならびに直腸合併症、および加えて抗酵母抗体を含む。たとえばPodolsky、前掲；Hanauer
、前掲；HorwitzおよびFisher、前掲を参照されたい。
【０１４１】
乾癬、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ、骨関節炎、および乾癬性関節炎を含む関節炎などの炎症性障害、全身性エリテマトーデスおよびＩ型糖尿病などの自己免疫障害、ならびに癌などの増殖障害の処置もまた企図される。たとえばＰＣＴ特許出願国際公開第０４／０８１１９０号；国際公開第０４／０７１５１７号；国際公開第００／５３６３１号；および国際公開第０１／１８０５１号を参照されたい。
【０１４２】
本発明のＩＬ−２３Ｒ結合性化合物はまた、ＩＬ−２３ｐ１９、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、およびＴＧＦ−βを含むが、これらに限定されない他のサイトカインの１つまたは複数のアンタゴニスト（たとえば抗体）と組み合わせて使用することができる。たとえばVeldhoen（２００６年）Immunity24：１７９〜１８９頁；Dong（２００６年）Nat.Rev. Immunol.6(4)：３２９〜３３３頁を参照されたい。種々の実施形態では、本発明のＩＬ−２３Ｒ結合性化合物は、抗−ＩＬ−１７Ａ抗体などの１つまたは複数の他のアンタゴニストの投与の前に、それと同時に、またはその投与の後に投与される。一実施形態では、ＩＬ−１７Ａ結合性化合物は、有害な免疫応答（たとえばＭＳ、クローン病）の急性初期の処置で、単独でまたは本発明のＩＬ−２３Ｒアンタゴニスト抗体と組み合わせて使用される。後者の場合では、ＩＬ−１７Ａ結合性化合物は、徐々に減少させてもよく、ＩＬ−２３Ｒのアンタゴニストを単独で用いる処置は、有害な応答の抑制を維持するために継続される。あるいは、ＩＬ−２３ｐ１９、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、および／またはＴＧＦ−βに対するアンタゴニストは、本発明のＩＬ−２３Ｒ結合性化合物の前にまたはその後に同時に投与されてもよい。CuaおよびKastelein（２００６年）Nat.Immunol.7：５５７〜５５９頁；TatoおよびO'Shea（２００６年）Nature441：１６６〜１６８頁；IwakuraおよびIshigame（２００６年）J.Clin.Invest. 116：１２１８〜１２２２頁を参照されたい。
【０１４３】
広範囲の本発明は、以下の実施例に関して最も理解され、これらは、本発明を特定の実施形態に限定することを意図するものではない。本明細書に記載の特定の実施形態は、ただ例の目的で提示され、本発明は、添付される特許請求の範囲が権利を与えられる全範囲の等価物と共に、添付される特許請求の範囲の用語によって限定されるものとする。
【実施例】
【０１４４】
（実施例１）
一般的な方法
分子生物学における標準的な方法を記載する。Maniatisら、（１９８２年）MolecularCloning、A Laboratory Manual、ColdSpringHarbor Laboratory Press、Cold SpringHarbor、NY;Sambrook and Russell（２００１年）MolecularCloning、第３版、ColdSpringHarborLaboratory Press、Cold Spring Harbor、NY;Wu（１９９３年）RecombinantDNA、第２１７巻、AcademicPress、SanDiego、CA。標準的な方法はAusbelら、（２００１年）Current Protocols inMolecular Biology、第１〜４巻、JohnWileyand Sons、Inc.New York、NY中にも載っており、これは細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ変異誘発（第１巻）、哺乳動物細胞および酵母におけるクローニング（第２巻）、複合糖質およびタンパク質発現（第３巻）、およびバイオインフォマティクス（第４巻）を記載している。
【０１４５】
免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、および結晶化を含めたタンパク質精製のための方法を記載する。Coliganら、（２０００年）CurrentProtocolsin Protein Science、第１巻、John Wileyand Sons、Inc.、New York。化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の生成、タンパク質のグリコシル化を記載する。たとえば、Coliganら、（２０００年）CurrentProtocolsinProtein Science、第２巻、John Wiley and Sons、Inc.、New York；Ausbelら、（２００１年）CurrentProtocolsinMolecular Biology、第３巻、John Wiley and Sons、Inc.、NY、NY、１６．０．５〜１６．２２．１
７頁；Sigma-Aldrich、Co.（２００１年）Productsfor Life Science Research、St.Louis、MO；４５〜８９頁；AmershamPharmaciaBiotech（２００１年）BioDirectory、Piscataway、N.J.３８４〜３９１頁を参照。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の産生、精製、および断片化を記載する。Coliganら、（２００１年）CurrentProtocolsinImmunology、第１巻、John Wiley and Sons、Inc.、New York；Harlow and Lane（１９９９年）UsingAntibodies、ColdSpringHarbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、NY; Harlowand Lane、上記。リガンド／受容体相互作用を特徴付けするための標準的な技法が利
用可能である。たとえば、Coliganら、（２００１年）CurrentProtocolsin Immunology、第４巻、John Wiley Inc.、NewYorkを参照。
【０１４６】
蛍光標識細胞分取（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｃｅｌｌ  ｓｏｒｔｉｎｇ）検出システム（ＦＡＣＳ（登録商標））を含めた、フローサイトメトリーのための方法が利用可能である。たとえば、Owensら、（１９９４年）FlowCytometryPrinciples for Clinical LaboratoryPractice、John Wiley and Sons、Hoboken、NJ；Givan（２００１年）FlowCytometry、第２版；Wiley-Liss、Hoboken、NJ；Shapiro（２００３年
）PracticalFlow Cytometry、JohnWiley and Sons、Hoboken、NJ中を参照。たとえば診断用試薬として使用するための、核酸プライマーおよびプローブ、ポリペプチド、および抗体を含めた核酸を改変するのに適した蛍光試薬が利用可能である。MolecularProbes（２
００３年）Catalogue、MolecularProbes、Inc.、Eugene、OR；Sigma-Aldrich（２００３
年）Catalogue、St.Louis、MO。
【０１４７】
免疫系の組織学の標準的な方法を記載する。たとえば、Muller-Harmelink(ed.)（１９
８６年）HumanThymus：Histopathology and Pathology、Springer Verlag、New York、NY；Hiattら、（２０００年）ColorAtlasofHistology、Lippincott、Williams、and Wilkins、Phila、PA；Louisら、（２００２年）BasicHistology：TextandAtlas、McGraw-Hill、New York、NYを参照。
【０１４８】
たとえば抗原断片、リーダー配列、タンパク質フォールディング、機能性ドメイン、グリコシル化部位、および配列アラインメントを決定するための、ソフトウェアパッケージおよびデータベースが利用可能である。たとえば、GenBank、VectorNTI（登録商標）Suite（Informax、Inc、Bethesda、MD）；GCGWisconsinPackage（Accelrys、Inc.、SanDiego、CA）；DeCypher（登録商標）（TimeLogicCrop.、CrystalBay、Nevada）；Menneら、（
２０００年）Bioinformatics16：７４１〜７４２頁；Menneら、（２０００年）BioinformaticsApplications Note16：７４１〜７４２頁；Wrenら、（２００２年）Comput.MethodsPrograms Biomed. 68：１７７〜１８１頁；vonHeijne（１９８３年）Eur.J.Biochem.133：１７〜２１頁；vonHeijne（１９８６年）Nucleic Acids Res. 14：４６８３〜４６９
０頁を参照。
【０１４９】
（実施例２）
抗ヒトＩＬ−２３Ｒ抗体の作製およびヒト化
抗ヒトＩＬ−２３Ｒ抗体は、Ｃ末端ヒスチジンタグと共にまたはＩｇ（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）融合タンパク質として、ヒトＩＬ−２３Ｒの細胞外ドメイン（配列番号４１の残基２４〜３５３）を用いてラットまたはマウスを免疫することによって生成される。次いで、モノクローナル抗体は、標準的な方法によって調製される。
【０１５０】
抗体のヒト化は、たとえばＰＣＴ特許出願国際公開第２００５／０４７３２４号および国際公開第２００５／０４７３２６号に一般に記載されている。例示的なヒト化重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列は、それぞれ図１および２にならびに配列表に提供される。
【０１５１】
手短かに言えば、非ヒトＶＨドメインのアミノ酸配列（たとえば配列番号１〜５）は、５つのヒトＶＨ生殖細胞系列アミノ酸配列の群；亜群（ｓｕｂｇｒｏｕｐ）ＩＧＨＶ１およびＩＧＨＶ４からの１つの代表的配列ならびに亜群ＩＧＨＶ３からの３つの代表的配列と比較される。ＶＨ亜群は、M.-P.Lefranc(２００１年)「Nomenclatureof the Human Immunoglobulin Heavy(IGH) Genes」、Experimentaland ClinicalImmunogenetics 18：
１００〜１１６頁にリストされる。最も密接にマッチしているヒト生殖細胞系列配列のフレームワーク配列は、ヒト化ＶＨドメインを構築するために使用される。
【０１５２】
本明細書に開示されるげっ歯類抗ｈｕＩＬ−２３Ｒ抗体は、ＶＬのカッパサブクラスのすべてである。非ヒトＶＬドメインのアミノ酸配列（たとえば配列番号６〜１０）は、４つのヒトＶＬカッパ生殖細胞系列アミノ酸配列の群と比較される。４つの群は、V.BarbieandM.-P.Lefranc（１９９８年）「The Human Immunoglobulin KappaVariable(IGKV)GenesandJoining(IGKJ)Segments」、Experimental and ClinicalImmunogenetics 15：１７１〜１８３頁およびM.-P.Lefranc（２００１年）「Nomenclatureofthe HumanImmunoglobulin Kappa(IGK)Genes」、Experimental andClinicalImmunogenetics 18：１６１〜１７４頁中に記載された４つの確立したヒトＶＬ亜群の各々由来の代表的な１つからなる。４つの亜群は、Kabatら（１９９１年、第５版）「SequencesofProteinsof Immunological Interest」、米国保健社会福祉省、NIH Pub.９１−３２４２、１０３〜１３０頁中に記載された４つの亜群にも対応する。最も密接にマッチしているヒト生殖細胞系列配列のフレームワーク配列は、ヒト化ＶＬドメインを構築するために使用される。
【０１５３】
前述の分析に基づいて、マウス抗体クローン２０Ｄ７のヒト化形態は、亜群Ｉ（生殖細胞系列配列ＤＰ−１４）からのヒト重鎖配列を使用して構築される。結果として生じるヒト化重鎖可変ドメイン（ｈｕ２０Ｄ７−ａ）の配列は、配列番号４５に提供される。ｈｕ２０Ｄ７−ａの改変体、ｈｕ２０Ｄ７−ｂ（配列番号４６）は、Ｔ７２Ｌ置換を除いて同一である。第２の改変体ｈｕ２０Ｄ７−ｃ（配列番号４７）は、Ｍ７０Ｆ置換を除いてｈｕ２０Ｄ７−ｂと同一である。これらの配列改変の両方は、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３の間のフレームワーク領域中にあり、図１に太字体の書体の残基として示される。ｈｕ２０Ｄ７−ｃ可変ドメインおよびヒトＩｇＧ１定常ドメインを含む完全長ヒト化重鎖は、配列番号５０に提供される。
【０１５４】
軽鎖可変ドメイン配列もまたマウス抗体クローン２０Ｄ７から構築される。ある軽鎖可変ドメイン配列、ｈｕ２０Ｄ７−ＩＶ（配列番号４８）は、親マウス抗体のＣＤＲ配列および軽鎖亜群ＩＶ（生殖細胞系列配列Ｚ−Ｂ３）からのヒト軽鎖フレームワーク配列を含む。他の軽鎖可変ドメイン配列、ｈｕ２０Ｄ７−ＩＩ−ａ（配列番号４９）は、親マウス抗体のＣＤＲ配列および軽鎖亜群ＩＩ（生殖細胞系列配列Ｚ−Ａ１９）からのヒト軽鎖フレームワーク配列を含む。さらなる軽鎖可変ドメイン配列改変体（ｈｕ２０Ｄ７−ＩＩ−ｂ）は、配列番号５３に提供され、位置３２のセリン残基は、トレオニンと交換される（Ｓ３２Ｔ）。セリンは、前のアスパラギン残基の脱アミド化の可能性を低下させるために交換される。BischoffおよびKolbe（１９９４年）J.Chromatog.662：２６１頁を参照されたい。３つの軽鎖可変ドメイン配列はすべて図２に提示される。ヒトカッパ軽鎖の構成でｈｕ２０Ｄ７−ＩＩ−ａ可変ドメインおよびｈｕ２０Ｄ７−ＩＩ−ｂ可変ドメインを含む完全長ヒト化軽鎖は、配列番号５１および５４にそれぞれ提供される。
【０１５５】
本実施例に記載されるヒト化重鎖およびヒト化軽鎖の任意の対での組合せ（たとえばｈｕ２０Ｄ７−ＩＩ−ｂ軽鎖およびｈｕ２０Ｄ７−ｃ重鎖）は、機能的な抗ヒトＩＬ−２３Ｒ抗体を作り出すために使用することができる。完全長重鎖および完全長軽鎖は、それぞれ、配列番号４７および４９からの配列番号５０および５１の構成との類似性によって、本明細書に開示される可変ドメインのいずれかから構築することができる。あるいは、他の重鎖定常ドメイン（たとえばＩｇＧ２）または他の軽鎖（たとえばラムダ）は、知られているヒト免疫グロブリン配列を使用して構築されてもよい。
【０１５６】
可変重鎖および軽鎖の標的アミノ酸配列を決定した後、完全長ヒト化抗体をコードするプラスミドを作製することができる。プラスミド配列はKunkel変異誘発（たとえばKunkelTA.（１９８５年）Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A82：４８８〜４９２頁を参照されたい）を
使用して改変して、ＤＮＡ配列を標的ヒト化抗体配列に変えることができる。同時に、コドン最適化を実施して可能で最適な発現をもたらすことができる。配列最適化はまた、ＧＥＮＥＡＲＴ，Ｉｎｃ．、Ｔｏｒｏｎｔｏ、ＯＮ、Ｃａｎａｄａなどの民間のベンダーによって行われてもよい。
【０１５７】
２０Ｄ７抗体のヒト化の場合には、げっ歯類可変ドメインへの最もマッチしたヒト生殖細胞系列フレームワークの単純な置換は、親（げっ歯類）形態と比較した場合にＩＬ−２３Ｒに対する結合親和性が実質的に低下した抗体（たとえば配列番号４８または４９と対になる配列番号４５）を産生した。親和性の低下の原因を決定するために、ヒト化軽鎖およびヒト化重鎖がキメラ重鎖およびキメラ軽鎖とそれぞれ対になったヘミキメラ（ｈｅｍｉｃｈｉｍｅｒｉｃ）構築物を作り出した。キメラ鎖は、げっ歯類可変ドメインおよびヒト定常ドメインを含む。２０Ｄ７抗体のキメラ形態がげっ歯類親抗体と同じ親和性を本質的に保持していることは以前により先に決定されている。ヒト化重鎖を有するヘミキメラ抗体は、結合性が低下していたのに対して、ヒト化軽鎖を有するヘミキメラ抗体は、親抗体の親和性を保持していたことが観察され、問題は、ヒト化重鎖であったことを示した。次いで、ヒト化重鎖は、詳細に調べて、ヒト化フレームワーク配列が親（げっ歯類）フレームワーク配列と異なる位置を見つけた。これらの位置は、親和性の低下の原因となる可能性が高いと考えられた。配列改変は、いくつかの位置で生じ、Ｔ７２ＬおよびＭ７０Ｆの置換を有する重鎖は、実質的に、結合親和性を改善することが分かった。以下実施例４を参照されたい。たとえばTramontanoら（１９９０年）J.Mol.Biol. 215：１７５頁を参照されたい。（他に示されない限り、本特許出願の配列番号付けは、配列表の番号付けに関するものであり、Ｋａｂａｔの系などの他の番号付け体系に関するものではないことに注意されたい。）
ラット抗体クローン８Ｂ１０のヒト化形態は、亜群ＩＩＩ（生殖細胞系列配列ＤＰ−４６）からのヒト重鎖配列を使用して類似の方法で構築される。結果として生じるヒト化重鎖可変ドメイン（ｈｕ８Ｂ１０）の配列は、配列番号５７に提供される。ｈｕ８Ｂ１０重鎖可変ドメインの改変体は、結合親和性を改善するためにまたは他の場合には、結果として生じる抗体の特性を改善するために作り出されてもよい。たとえば、配列番号５７の位置３０のアスパラギン残基（ＣＤＲＨ１中）は、結合親和性を改善するためにトレオニン（Ｎ３０Ｔ）に変更されてもよい。フレームワーク残基、残基Ａ２４、Ｅ４６、Ｗ４７、Ｎ７６、Ｎ７９、Ｌ８１、またはＲ１００などもまた変化されてもよい。例示的なフレームワーク変化はＥ４６ＤおよびＷ４７Ｌを含む。
【０１５８】
軽鎖可変ドメイン配列もまた、ラット抗体クローン８Ｂ１０から構築される。親ラット抗体のＣＤＲ配列および軽鎖亜群カッパ−１（生殖細胞系列配列Ｚ−０１２）からのヒト軽鎖フレームワーク配列を含むｈｕ８Ｂ１０軽鎖可変ドメイン配列は、配列番号５８に提供される。
【０１５９】
（実施例３）
ＫｉｎＥｘＡ技術を使用した抗ヒトＩＬ−２３Ｒ抗体に関する平衡解離定数（Ｋｄ）の決定
抗ヒトＩＬ−２３Ｒ抗体に関する平衡解離定数（Ｋｄ）を、ＫｉｎＥｘ３０００機器を使用して決定する。Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｉｎｃ．、Ｂｏｉｓｅ  Ｉｄａｈｏ、ＵＳＡ．ＫｉｎＥｘＡは、抗体、抗原および抗体−抗原複合体の混合物中で複合体を形成していない抗体の濃度の測定に基づいた結合平衡除外（ｋｉｎｅｔｉｃ  ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ）アッセイ法の原理を使用する。遊離抗体の濃度は、非常に短い時間の間、固相固定化抗原に混合物を曝すことによって測定する。実際、溶液相の抗原−抗体混合物をフローセル中に流し抗原コート粒子（ａｎｔｉｇｅｎ−ｃｏａｔｅｄ  ｐａｒｔｉｃｌｅ）を通して捕捉することによってこれを実施する。この機器によって作製したデータは、カスタムソフトウェアを使用して分析する。平衡定数は、以下の仮定に基づく数学的理論を使用して計算する：
１．結合は、平衡に関する可逆的結合の等式に従う：
ｋｏｎ［Ａｂ］［Ａｇ］＝ｋｏｆｆ［ＡｂＡｇ］
２．抗体と抗原は１：１で結合し、かつ全抗体は抗原−抗体複合体および遊離抗体に等しい。
【０１６０】
３．機器シグナルは、遊離抗体の濃度と直線的関係がある。
【０１６１】
ＰＭＭＡ粒子（Ｓａｐｉｄｙｎｅ、カタログ番号４４０１９８）は、Sapidyne「Protocolfor coating PMMA particleswithbiotinylated ligands having short ornonexistentlinker arms」に従って、ビオチン化ＩＬ−２３Ｒ（または細胞外ドメインなどのその断片）を用いてコートする。ＥＺ−ｌｉｎｋ  ＴＦＰ  ＰＥＯ−ｂｉｏｔｉｎ（Ｐｉｅｒｃｅ、カタログ番号２１２１９）を使用して、製造業者の推奨（Ｐｉｅｒｃｅ会報０８７４）に従って、ビオチン化ＩＬ−２３Ｒを作製する。
【０１６２】
ＫｉｎＥｘＡ分析によって決定されるように、ヒトＩＬ−２３Ｒへの結合について、抗体ｒ８Ｂ１０は、４．２×１０−１１ＭのＫｄを示し、抗体ｍ２０Ｄ７は、９×１０−１２ＭのＫｄを示した。
【０１６３】
（実施例４）
ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）  Ｌａｂｅｌ−Ｆｒｅｅ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙを使用する、ヒト化抗ヒトＩＬ−２３Ｒ抗体の平衡解離定数（Ｋｄ）の決定  ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）  ｌａｂｅｌ−ｆｒｅｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｓｙｓｔｅｍによる決定は、米国特許出願公開第２００７／００４８３１５号の実施例４に記載されるように本質的に行った。手短かに言えば、リガンド（抗ＩＬ−２３Ｒ  ｍＡｂ）は、標準的なアミンカップリング法を使用して、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）  ｌａｂｅｌ−ｆｒｅｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｓｙｓｔｅｍ  ＣＭ５センサーチップ上に固定する。様々な相互作用についての反応速度定数（ｋｉｎｅｔｉｃ  ｃｏｎｓｔａｎｔ）は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア３．１を使用して決定する。Ｋｄは、計算した解離速度定数および結合速度定数を使用して決定する。
【０１６４】
ヒトＩＬ−２３Ｒに対するマウス２０Ｄ７抗体のＫｄについてのＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）  ｌａｂｅｌ−ｆｒｅｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｓｙｓｔｅｍによる決定は、マウスフレームワーク配列のヒトフレームワーク配列（ｈｕ２０Ｄ７−ａ、配列番号４５）との交換により約５０倍、約８５ｐＭから４３００ｐＭに結合親和性が低下したことを示した。重鎖へのＴ７２Ｌ変異の導入（ｈｕ２０Ｄ７−ｂ、配列番号４６）は、約３６０ｐＭまでＫｄを改善し、Ｍ７０Ｆ変異に加えたＴ７２Ｌの導入（ｈｕ２０Ｄ７−ｃ、配列番号４７）は、約２３０ｐＭまでＫｄをさらに改善した。したがって、ｈｕ２０Ｄ７−ｃ重鎖に導入された変異は、続く最適化なしの単純なヒト化と比較して約２０倍の結合親和性の改善を表わす。
【０１６５】
比較として、親ラット８Ｂ１０抗体は、同じアッセイを使用して評価された場合、ヒトＩＬ−２３Ｒに対して約３００ｐＭのＫｄを呈した。
【０１６６】
（実施例５）
抗ＩＬ−２３Ｒ抗体の中和を評価するための増殖バイオアッセイ
ＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒを生物学的に中和するモノクローナル抗体の能力を、組換えＩＬ−２３受容体を発現する細胞を使用する短期の増殖バイオアッセイの適用によって評価する。トランスフェクタントＢａ／Ｆ３−２．２ｌｏ細胞は、ヒトＩＬ−２３に応答して増殖し、応答は、中和抗ＩＬ−２３Ｒ抗体によって阻害することができる。アッセイに選ばれるＩＬ−２３の濃度は、用量応答曲線の直線領域内、ほぼ平坦域、およびＥＣ５０超となるように選択される。増殖、またはその欠如は、アラマーブルー（ａｌａｍａｒ  ｂｌｕｅ）、代謝活性の検出に基づく増殖指標色素を使用する、比色分析手段によって測定する。ＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒを中和する抗体の能力は、そのＩＣ５０値、またはＩＬ−２３増殖の半最大阻害を誘導する抗体の濃度によって評価する。
【０１６７】
アッセイは本質的に以下のように行う。Ｂａ／Ｆ３トランスフェクタントは、ＲＰＭＩ−１６４０培地、１０％ウシ胎児血清、５０μＭの２−メルカプトエタノール、２ｍＭのＬ−グルタミン、５０μｇ／ｍＬのペニシリン−ストレプトマイシン、および１０ｎｇ／ｍＬのマウスＩＬ−３中に維持する。増殖バイオアッセイは、ＲＰＭＩ−１６４０培地、１０％ウシ胎児血清、５０μＭの２−メルカプトエタノール、２ｍＭのＬ−グルタミン、および５０μｇ／ｍＬのペニシリン−ストレプトマイシン中で実施する。
【０１６８】
アッセイは、ウェル当たり１５０μＬ中、９６ウェル平底プレート（Ｆａｌｃｏｎ  ３０７２または類似のもの）中で行う。ＩＬ−２３および抗ＩＬ−２３Ｒ抗体の両方は、一連の濃度、たとえば１：３段階希釈度で添加する。興味のある抗ＩＬ−２３Ｒ抗体の滴定は、任意選択で、ＩＬ−２３の添加に先立って細胞とプレインキュベートする。バイオアッセイプレートは、４０〜４８時間、加湿した組織培養チャンバー（３７Ｃ、５％ＣＯ２）中でインキュベートする。培養時間の終了時に、アラマーブルー（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  カタログ番号ＤＡＬ１１００）を１６．５μＬ／ウェルで添加し、５〜１２時間、発色させる。次いで、吸光度は、５７０ｎｍおよび６００ｎｍで読み取り（ＶＥＲＳＡｍａｘ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇｏｎ、ＵＳＡ）、ＯＤ５７０−６００を得る。各サンプルについて２回実行する。吸光度は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）３．０ソフトウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）を使用してサイトカイン濃度または抗体濃度に対してプロットし、ＩＣ５０値は、Ｓ字状（ｓｉｇｍｏｉｄａｌ）用量応答曲線の非線形回帰（カーブフィット）を使用して決定する。
【０１６９】
（実施例６）
ＩＬ−１７産生に基づくＩＬ−２３に関するマウス脾細胞アッセイ  本発明の抗ＩＬ−２３Ｒ抗体の生物学的活性を、本質的にAggarwalら、（２００３年）J.Biol.Chem.２７８：１９１０頁およびStumhoferら、（２００６年）NatureImmunol.7：９３７頁中に記載されたように、マウス脾細胞アッセイを使用して評価してもよい。このマウス脾細胞アッセイは、マウス脾細胞によるＩＬ−１７産生のレベルとしてサンプル中のＩＬ−２３の活性を測定する。次いで抗ＩＬ−２３Ｒ抗体の阻害活性を、所与のサンプル中のＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒの活性を５０％低下させるのに必要な抗体の濃度（ＩＣ５０）を決定することによって評価する。このアッセイによって測定したようにＩＣ５０は平衡解離結合定数（Ｋｄ）以上である、すなわち、ＫｄはＩＣ５０以下であり得る。通常通り、より低いＩＣ５０およびＫｄ値はより高い活性および親和性を反映する。
【０１７０】
簡単に言うと、８〜１２週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｍａｉｎｅ、ＵＳＡ）から脾臓を得る。脾臓を砕き、２回ペレット状にし、かつ細胞濾過器（７０μｍナイロン製）を通して濾過する。回収した細胞は、ヒトＩＬ−２３（１０ｎｇ／ｍｌ、約１７０ｐＭ）およびマウス抗ＣＤ３ｅ抗体（１μｇ／ｍｌ）（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、ＵＳＡ）の存在下で、アッセイする抗ＩＬ−２３Ｒ抗体有りまたはなしで、９６ウェルプレート中において培養する（４×１０５個細胞／ウェル）。抗ＩＬ−２３Ｒ抗体は、一連の３倍希釈で加える。細胞は７２時間培養し、ペレット状にし、かつ上清はサンドウィッチＥＬＩＳＡによりＩＬ−１７のレベルに関してアッセイする。
【０１７１】
ＩＬ−１７のＥＬＩＳＡは以下のように実施する。プレートは捕捉抗ＩＬ−１７抗体（１００ｎｇ／ウェル）で４℃において一晩コートし、洗浄およびブロッキングする。サンプルおよび標準物を加え、振とうしながら室温で２時間インキュベートする。プレートを洗浄し、ビオチン化抗ＩＬ−１７検出抗体（１００ｎｇ／ウェル）を加え、振とうしながら室温で１時間インキュベートする。捕捉抗体と検出抗体は、いずれもマウスＩＬ−１７と結合するが交差遮断しない異なる抗体である。プレートを洗浄し、かつ結合した検出抗体は、ストレプトアビジン−ＨＲＰ（西洋わさびペルオキシダーゼ）およびＴＭＢ（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）を使用して検出する。次いでプレートを４５０−６５０ｎｍで読み取り、かつサンプル中のＩＬ−１７の濃度は、標準物との比較によって計算する。
【０１７２】
（実施例７）
抗ＩＬ−２３Ｒ抗体Ｈｕｍ２０Ｄ７の特徴付け
ヒト化抗ＩＬ−２３Ｒ抗体は、重鎖配列ｈｕ２０Ｄ７−ｃおよび軽鎖配列ｈｕ２０Ｄ７−ＩＩ−ｂを使用して生成し、これらの配列は、配列番号５０および５４にそれぞれ提供される。結果として生じる抗体は、本実施例でｈｕｍ２０Ｄ７と呼ばれる。同じポリペプチド配列をコードする他のＤＮＡ配列が使用されてもよいが、抗体は、それぞれ配列番号５５（ｈｕ２０Ｄ７−ｃ）および５６（ｈｕ２０Ｄ７−ＩＩ−ｂ）に提供されるような重鎖および軽鎖をコードするＤＮＡ配列を有するベクターを使用して哺乳類細胞から調製する。
【０１７３】
本質的に実施例４（上掲）に記載したようにＢＩＡｃｏｒｅ分析によりアッセイしたとき、ｈｕｍ２０Ｄ７はヒトＩＬ−２３Ｒに関して１３１ｐＭのＫｄを有する。
【０１７４】
ｈｕｍ２０Ｄ７の生物学的活性は、本質的に実施例６（上掲）に記載したようにヒト脾細胞アッセイを使用しても評価する、ただし脾細胞はマウスではなくヒト脾臓から得て、抗ＣＤ３ｅ抗体は使用せず、かつＩＬ−１７ではなくＩＦＮ−γが読み出しある。このアッセイは、ヒト初代脾細胞によるＩＦＮ−γ産生のレベルを決定することによってサンプル中のＩＬ−２３の活性を測定する。ヒト脾細胞は、様々な濃度の抗ＩＬ−２３Ｒ抗体ｈｕｍ２０Ｄ７の存在下、または抗体の不在下で、ヒトＩＬ−２３（１７０ｐＭ）に曝す。ＩＦＮ−γはサンドウィッチＥＬＩＳＡによって検出する。ｈｕｍ２０Ｄ７は、ヒト脾細胞アッセイにおいて３４ｐＭのＩＣ５０を示す。
【０１７５】
ｈｕｍ２０Ｄ７の生物学的活性は、本質的にParhamら、（２００２年）J.Immunol.168：５６９９頁中に記載されたように、ＫＩＴ２２５ＳＴＡＴ−３リン酸化アッセイを使用してさらに評価する。ヒトＫＩＴ２２５細胞、白血病性のＴ細胞系列は、様々な濃度の抗ＩＬ−２３Ｒ抗体ｈｕｍ２０Ｄ７の存在下、または抗体の不在下で、１３８ｐＭのヒトＩＬ−２３で刺激する。ＩＬ−２３活性はＳＴＡＴ３リン酸化のレベルを検出することによって測定する。ｈｕｍ２０Ｄ７は、ＫＩＴ２２５アッセイにおいて３４ｐＭのＩＣ５０を示す。
【０１７６】
表４は、配列表中の配列の簡単な記載を与える。
【０１７７】
【表４−１】
2014087374.tif 000006
【０１７８】
【表４−２】
2014087374.tif 000007
【図１】
2014087374.tif 000008
【図２】
2014087374.tif 000009
【配列表】
2014087374000001.app
【外国語明細書】
2014087374000001.pdf