(57)【要約】      （修正有）【課題】抗肥満剤となる脂肪蓄積抑制剤の提供。【解決手段】下式（１）の構造で示される、海洋細菌の産生する酸性ムコ多糖類またはその生理学的に許容される塩もしくは誘導体を有効成分として含有する脂肪蓄積抑制剤。該脂肪蓄積抑制剤は、皮膚外用剤または美容用飲食品であることが好ましい。2014009161.tif 000014（式中、GlcNAcpはピラノース型Ｎ-アセチルグルコサミン残基を、GlcUApはピラノース型グルクロン酸残基を、Gluはグルタミン酸を、ＤはＤ型を、ＬはＬ型を、ｎはゲル濾過クロマトグラフィーで測定した平均分子量がプルランを標準として１００万〜１５０万であることを示す繰り返しの数をそれぞれ表す。）【選択図】図１
2014009161.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式（１）で示される構造の酸性ムコ多糖類またはそれらの生理学的に許容される塩もしくは誘導体を有効成分として含む脂肪蓄積抑制剤。
【化１】
2014009161.tif 000013
（上記の構造式において、GlcNAcpはピラノース型Ｎ-アセチルグルコサミン残基を、GlcUApはピラノース型グルクロン酸残基を、Gluはグルタミン酸を、ＤはＤ型を、ＬはＬ型を、ｎはゲル濾過クロマトグラフィーで測定した平均分子量がプルランを標準として１００万〜１５０万であることを示す繰り返しの数をそれぞれ表す。）
【請求項２】
皮膚外用剤である請求項１に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項３】
美容用飲食品である請求項１に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、海洋細菌の産生する酸性ムコ多糖類を有効成分として配合した脂肪蓄積抑制剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
現代の生活様式は過食の機会が多く、さらに、ストレス、ホルモンバランスの乱れ、老化などの様々な要因によって生体内での脂肪代謝がうまく行われず、その結果、脂肪の異常な蓄積を起こす。体脂肪の増加および肥大は、肥満症を引き起こし、糖尿病、高血圧症、動脈硬化症、虚血性心疾患など様々な生活習慣病の要因となっている。また、最近の健康や美容への関心の高まりから、老若男女を問わず体を健康的でスリムにしたいと願う人も増加しており、肥満症でない人においても、局所の脂肪蓄積に関して非常に高い関心が持たれている。
【０００３】
肥満を細胞レベルで見ると、体脂肪の蓄積は、脂肪細胞中への脂肪の取り込みによるものである。すなわち、この脂肪細胞の減少が調節可能ならば肥満を防止することができるであろうと期待されている。
【０００４】
従来、上記肥満を解消する抗肥満剤としては、蓄積した脂肪を分解することにより脂肪蓄積抑制効果を示すものが多かった。しかし、脂肪細胞数の増加を抑制することにより脂肪蓄積抑制効果を示す抗肥満剤はあまり知られていなかった。
【０００５】
脂肪細胞数の増加を抑制することにより脂肪蓄積抑制効果を示す抗肥満剤としては、ペプチド（特許文献１）、キノコや植物抽出物（特許文献２）、活性化乳清（特許文献３）、多糖類の誘導体（特許文献４）等に前駆脂肪細胞分化抑制作用のあることが提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平６−２９３７９６号公報
【特許文献２】特開２００４−７５６４０号公報
【特許文献３】特開２００２−３７７３８号公報
【特許文献４】特許第４９４４４１２号公報
【特許文献５】特願２０１２−５７１８５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、上記の従来の抗肥満剤では効果が十分でなかったり、効果が認められる高い濃度まで配合すると安全上の問題が生じるおそれがあった。そのため、抗肥満剤に用いられる成分として脂肪細胞数の増加を抑制することにより十分な脂肪蓄積抑制効果を示す天然の安全な脂肪蓄積抑制剤が求められていた。
【０００８】
そこで、本発明は、今まで探索の遅れていた海洋微生物の産生する安全性の高い天然物の中から、脂肪蓄積抑制作用を有するものを見出し、それを有効成分とする脂肪蓄積抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するために、未利用資源の豊富な海洋微生物の産生する安全な多糖類の中から、前駆脂肪細胞分化抑制作用を有するものについて鋭意研究を重ねた結果、海洋細菌の産生する酸性ムコ多糖類が前駆脂肪細胞の分化を抑制して脂肪蓄積抑制作用を有すること、そして、それを有効成分とすることにより、脂肪蓄積抑制および肥満の予防または改善に有効な脂肪蓄積抑制剤が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
即ち、本発明は海洋細菌の産生する酸性ムコ多糖類またはその生理学的に許容される塩もしくは誘導体を有効成分として含有することを特徴とする脂肪蓄積抑制剤に関する。
【００１１】
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、下記式（１）により表わされる本酸性ムコ多糖類またはその生理学的に許容される塩もしくは誘導体（以下「本酸性ムコ多糖類」と記す）を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１２】
【化１】
2014009161.tif 000003
（上記の構造式において、GlcNAcpはピラノース型Ｎ-アセチルグルコサミン残基を、GlcUApはピラノース型グルクロン酸残基を、Gluはグルタミン酸を、ＤはＤ型を、ＬはＬ型を、ｎはゲル濾過クロマトグラフィーで測定した平均分子量がプルランを標準として１００万〜１５０万であることを示す繰り返しの数をそれぞれ表す。）
【００１３】
海洋細菌が産生する本酸性ムコ多糖類を有効成分とする脂肪蓄積抑制剤は、前駆脂肪細胞に対して細胞毒性を示すことなく前駆脂肪細胞の脂肪細胞への分化を抑制する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、海洋細菌の産生する本酸性ムコ多糖類を含有することにより、安全性が高く、優れた脂肪蓄積抑制作用を発揮することができるため、脂肪蓄積抑制剤および抗肥満剤としてこれまでの多糖類にない有用性を備えている。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、前駆脂肪細胞の分化抑制効果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下に実施形態を挙げて本発明を説明するが、本発明は以下の実施形態に限定されない。
【００１７】
本酸性ムコ多糖類は、マウスメラノーマ細胞のメラニン生成抑制作用を有し、その誘導体が抗ウイルス作用を有することが知られているが、これを脂肪蓄積抑制剤として使用したという報告は、現在までに全く知られていないものである。
【００１８】
本発明において、脂肪蓄積抑制剤とは、前駆脂肪細胞の分化を抑制することによって、脂肪蓄積抑制および肥満の予防または改善に有効な組成物である。本発明の脂肪蓄積抑制剤は、皮膚外用剤組成物または経口用組成物であって、化粧品や医薬部外品としてのローション、乳液、クリーム、パック剤、石鹸等の薬用化粧品、および医薬品としてのローション、乳液、クリーム、軟膏等の皮膚外用剤、ならびに美容用飲食品などの経口剤を含むものである。
【００１９】
本発明の脂肪蓄積抑制用皮膚外用剤組成物は、有効成分である本酸性ムコ多糖類と、皮膚外用剤に一般に用いられている各種成分、例えば、油分、界面活性剤、紫外線吸収剤、アルコール、保湿剤、防腐剤、殺菌剤、色剤、香料、増粘剤、緩衝剤などを、その剤形にあわせ、本発明の効果を損なわない範囲で適宜配合することにより調製される。
また、本発明の脂肪蓄積抑制用経口用組成物は、有効成分である本酸性ムコ多糖類と、経口用組成物に一般的に用いられている各種成分、例えば、賦形剤、防腐剤、色剤、香料などとを、その剤形に合わせ、本発明の効果を損なわない範囲で適宜配合することにより調製される。
【００２０】
本発明の脂肪蓄積抑制用皮膚外用剤組成物に、本酸性ムコ多糖類を配合するに当たっては、これら化合物の脂肪蓄積抑制作用ならびに皮膚の角質透過性等を考慮することが好ましく、一般にはこれら化合物を有効成分として少なくとも０．００１重量％以上、好ましくは０．０１〜２０．０重量％程度添加すればよい。必ずしも有効成分を単離して使用する必要はなく、必要に応じて本発明の効果を損なわない範囲で、本発明の化合物を含む粗精製物を使用することができる。
【００２１】
本発明の脂肪蓄積抑制用皮膚外用剤組成物の剤型は任意であり、例えば化粧水等の可溶化系、乳液またはクリーム等の乳化系、あるいは軟膏または分散液などの剤型をとることができる。
また、本発明の脂肪蓄積抑制用経口剤の剤型は任意であり、例えば錠剤、カプセル剤、液剤、シロップ剤、粉末剤、ゼリー剤などの剤型をとることができる。
こうして所望の脂肪蓄積抑制効果、例えば、皮膚外用剤であれば顔や二の腕、太ももなど局所の脂肪蓄積の改善効果、経口剤であれば全身における体脂肪の脂肪蓄積の改善効果が得られる脂肪蓄積抑制剤が提供される。
【００２２】
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、かかる脂肪蓄積抑制剤を添加しない場合に比べ、前駆脂肪細胞の脂肪細胞への分化を有意に抑制することができる。
【００２３】
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、前駆脂肪細胞分化を有効に抑制すると共に、安定性および生体に対する高い安全性を併せ持つ。そのため、抗肥満効果が期待される医薬分野、食品分野および化粧品分野において有効に使用され得る。特に肥満、糖尿病、高血圧症、動脈硬化症、虚血性心疾患、高尿酸血症を含む生活習慣病に起因する疾病の予防または治療に有効である。また、睡眠時無呼吸症候群、リポジストロフィー、バセドウ病眼症などにも利用可能である。更に皮膚のシワやたるみ、糖尿病由来の合併症などの様々な前駆脂肪細胞の分化誘導作用に関わる疾患の予防または治療にも利用可能である。
【００２４】
（有効成分）
本酸性ムコ多糖類を有効成分として含有する脂肪蓄積抑制剤は、ＰＰＡＲγアゴニスト活性化阻害作用を有する。本発明で使用される本酸性ムコ多糖類は、医薬として使用できる程度に精製されたものであれば、種々の方法で調製されたものを用いることができる。本ムコ多糖類の調製方法としては、各種の方法が知られている。例えば、海洋微生物を炭素源として蔗糖、窒素源としてペプトン、酵母エキスを含有する海水を寒天で固めた培地で培養して産生する多糖類を採取、精製して得ることができる。
【００２５】
本酸性ムコ多糖類の産生に用いられる微生物としては、多糖類を産生しうるものであれば特に制限なく使用することができる。好ましくは海洋微生物、さらに好ましくは本酸性ムコ多糖類を産生する能力のある海洋微生物が用いられる。具体的にはコベチア（Ｃｏｂｅｔｉａ）属細菌が挙げられ、より具体的にはコベチア（Ｃｏｂｅｔｉａ）属に属し寄託番号がＦＥＲＭ Ｐ-２１２９７として寄託されている菌株またはその変異株が挙げられる。本菌株は本発明者らが瀬戸内海において海水より分離した海洋性細菌であり、その分類学的特性は、特許文献５に記載されている。
【００２６】
本酸性ムコ多糖類を産生する微生物を培養する基本培地としては、多糖類を産生しうる微生物が生育できるものであって、少なくとも炭素源と、窒素源と、各種無機塩と、微量元素とを適量含有するものが用いられる。さらに好ましくは、前記基本培地として、コベチア（Ｃｏｂｅｔｉａ）属に属する微生物が生育できるものが用いられる。炭素源としては、グルコース、フラクトース、ガラクトース、シュクロース等の糖、あるいは糖蜜や廃糖蜜が挙げられる。炭素源として１種または２種以上を単独で、または組み合わせて用いることができる。窒素源としては、硝酸塩、アンモニウム塩等の化合物やペプトン、酵母エキス、アミノ酸などの天然物が挙げられる。窒素源として１種または２種以上を単独でまたは組み合わせて用いることができる。無機塩としては、例えば、リン酸塩、マグネシウム塩、カリウム塩等が挙げられる。無機塩として１種または２種以上を単独でまたは組み合わせて用いることができる。固体培地の場合には寒天を用いる。
【００２７】
使用する培地、培地のｐＨ、培地への添加物、培養温度などの培養条件は、通常微生物の培養の際に用いられている条件に従って設定することができる。
【００２８】
本発明における培養条件は、培養時のｐＨは微生物が生育し、かつ多糖類を産生する範囲であれば制限されないが、通常は６から７．５の範囲のｐＨが好ましい。培養温度については微生物が生育し、かつ多糖類を産生する範囲であれば制限されないが、２５℃から３０℃の範囲が多糖類の産生には良好である。培養期間は培養のｐＨや温度により変化するが、通常２日間から５日間が適切である。
【００２９】
上述した培地と微生物を用いて従来法を用いて微生物を培養することにより、本発明の有効成分である本酸性ムコ多糖類が効率的に産生されることとなる。
【００３０】
本発明に用いられる本酸性ムコ多糖類は、構成糖のモル比がＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン：Ｄ−グルクロン酸：Ｌ−グルタミン酸が２：１：１（モル濃度比）で、ゲル濾過クロマトグラフィーで測定した平均分子量がプルランを標準として１００〜１５０万であることが好ましい。構成成分の分析には、セルロースアセテート膜電気泳動、または高速液体クロマトグラフィーを用いることができる。この構成成分の分析には、多糖類を２Ｍのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）または４Ｎ-ＨＣｌで１００℃、１２時間加水分解し、ロータリーエバポレイターでＴＦＡまたはＨＣｌを除いたものを検体とし、中性糖、ウロン酸、有機酸、アミノ酸およびアミノ糖の分析を行う。構成有機酸の分析にはこの他に酵素法を用いることができる。
【００３１】
本酸性ムコ多糖類の分子量の測定は、ゲル濾過クロマトグラフィー法を用いることができる。具体的には、Ａｓａｈｉｐａｋ ＧＦＡ-７Ｍ（昭和電工社製）をカラムとする高速液体クロマトグラフィー（島津製作所社製）を使用し、０．１Ｍ-ＮａＣｌを移動相とし、分子量既知のプルラン（Ｓｈｏｄｅｘ ＳＴＡＮＤＡＲＤ ＫＩＴ Ｐ-８２、昭和電工社製）を標準サンプルとして作成した分子量保持時間標準曲線を使用して測定することができる。
【００３２】
（有効成分の製造方法）
次に、本発明の脂肪蓄積抑制剤の有効成分である本酸性ムコ多糖類の製造方法について、好ましい実施形態を挙げて説明する。尚、本酸性ムコ多糖類の生産方法は以下の製法に限定されない。
好ましい一実施形態としての本酸性ムコ多糖類の製造方法は、（ａ）培地において微生物を培養し多糖類を産生する工程と、（ｂ）産生された本酸性ムコ多糖類を抽出・回収する工程とを有する。
【００３３】
続いて、上述の実施形態を各工程毎に詳細に説明していく。
上述した本発明の脂肪蓄積抑制剤の有効成分である本酸性ムコ多糖類の製造に適した培地を用いることが望ましく、その際に炭素源として蔗糖、窒素源としてペプトン、酵母エキスを用いることがより望ましい。
（ａ）培地において微生物を培養し多糖類を産生する工程
上述のようにして調製した培地を用いて微生物を培養して目的の多糖類を産生させるわけであるが、本酸性ムコ多糖類を得るためには微生物としてコベチア（Ｃｏｂｅｔｉａ）属の細菌を用いることが好ましい。さらに好ましくはコベチア（Ｃｏｂｅｔｉａ）属に属し寄託番号がＦＥＲＭ Ｐ-２１２９７として寄託されている菌株またはその変異株を用いることが望ましい。微生物として該菌株またはその変異株を用いることで、本酸性ムコ多糖類を効率的に産生することができる。
そして、以下に説明する抽出・回収工程を経ることにより高純度の本酸性ムコ多糖類を高収率で得ることが可能となる。
【００３４】
（ｂ）産生された所定の多糖類を抽出・回収する工程
上記製造方法で得られた培養液から本酸性ムコ多糖類を抽出する方法としては、当技術分野において知られている方法を用いることができる。例えば、培養液をそのまま、あるいは高温で殺菌した後で、遠心分離により菌体を除去し、これをそのまま、あるいは濃縮してから、２〜３倍量のエタノール、イソプロパノール、あるいはアセトン等を加え、沈殿を生じさせる。この沈殿物を再度、水あるいは１〜１５％塩化ナトリウム溶液に溶解させた後で、アルコール等による沈殿を２〜３回繰り返し、水で透析を行い、噴霧乾燥機や凍結乾燥機等を用いて乾燥させることにより、本酸性ムコ多糖類を得る。これ以外にも電気透析法や限外濾過法も利用することができる。さらに精製するためには、イオン交換、ゲル濾過等の各種クロマトグラフィーや、第４級アンモニウム塩による沈殿や塩析などを用いることができる。
【００３５】
かくして本酸性ムコ多糖類が産生および回収されることになる。本発明により得られる本酸性ムコ多糖類は特に制限なく種々の用途に使用されうるものであるが、好ましくは上述の脂肪蓄積抑制剤として好適に用いられる。
【００３６】
ここで、本酸性ムコ多糖類は下記構造単位を有するものである。
【化２】
2014009161.tif 000004
（上記の構造式において、GlcNAcpはピラノース型Ｎ-アセチルグルコサミン残基を、GlcUApはピラノース型グルクロン酸残基を、Gluはグルタミン酸を、ＤはＤ型を、ＬはＬ型を、ｎはゲル濾過クロマトグラフィーで測定した平均分子量がプルランを標準として１００万〜１５０万であることを示す繰り返しの数をそれぞれ表す。）
【００３７】
本発明では、有効成分として少なくとも０．００１重量％以上、好ましくは、０．０１〜２０重量％の本酸性ムコ多糖類を脂肪蓄積抑制剤に配合する。
この本酸性ムコ多糖類を有効成分として含有する脂肪蓄積抑制剤は、通常使用されている皮膚外用剤基材を使用することにより、クリーム、乳液、化粧水等の適当な形態とすることができる。さらに、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、アルブチン等のメラニン合成抑制剤、その他の薬効成分、増粘剤、可塑剤、着色料、香料等、任意の添加物をこの脂肪蓄積抑制剤に含有させることができる。なお、本発明の脂肪蓄積抑制剤の有効成分である本酸性ムコ多糖類については、皮膚に対する毒性も刺激も無く、副作用も無い。
【００３８】
本酸性ムコ多糖類は、脂肪蓄積抑制作用を有しており、安全性にも優れているため、美容用飲食品をはじめ、健康用飲食品や機能性飲食品などに配合するのにも好適である。
【００３９】
本酸性ムコ多糖類を美容用飲食品に配合する場合、それらにおける有効成分の配合量は、使用目的、症状、性別等を考慮して適宜変更することができるが、添加対象飲食品の一般的な摂取量を考慮して、成人１日あたりの本酸性ムコ多糖類の摂取量が約１〜１０００ｍｇになるようにするのが好ましい。
【００４０】
本発明の美容用飲食品は、本酸性ムコ多糖類をその活性を妨げないような任意の飲食品に配合したものであってもよいし、本酸性ムコ多糖類を主成分とする栄養補助飲食品であってもよい。
【００４１】
以上説明した本発明の脂肪蓄積抑制剤、皮膚外用剤および美容用飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対しても適用することもできる。
【実施例】
【００４２】
次に実施例を挙げ、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら実施例になんら制約されるものではない。尚、特記しない限り、百分率（％）は重量基準である。
【００４３】
（実施例１）
ペプトン０．５％、酵母エキス０．１％、蔗糖３％の組成を有し海水で調製した培地を、温度１２１℃としたオートクレーブ中で１５分間滅菌し、本菌株（ＦＥＲＭ Ｐ-２１２９７）の斜面培養から、１白金耳を試験管中の上記滅菌培地（１０ｍｌ）に接種し、２５℃の温度で２４時間静置培養を行い、次いでこの前培養液を５００ｍｌ容の三角フラスコ中に上記組成の培地１００ｍｌ（１２１℃、１５分間滅菌）に接種し、２５℃の温度で３日間の静置培養を行った。培養後培養液を遠心分離した後濾過助剤（ラヂオライト＃５００）を用いてＧＦ-７５濾紙（Ａｄｖａｎｔｅｃ社製）で濾過し、菌体を除いた培養濾過液から分子量５万カットの中空糸ＵＦ膜モジュール（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ社製）を備えた膜濾過装置により得られる高分子画分を５〜６時間のうちに濃縮、脱塩回収し、活性炭処理し、凍結乾燥により粉末化した。膜濾過装置は東洋紡エンジニアリング社製ＳＹＬＳ-ＳＢ０４型を用いた。
このようにして得られた多糖画分については、セルロースアセテート膜電気泳動を用いて均一性を確認すると共に、ＤＥＡＥ-セルロースイオン交換カラムクロマト分析、化学分析、核磁気共鳴分析により、公知の本酸性ムコ多糖類であることを確認した。
【００４４】
（実施例２）
前培養までは実施例１と同様に処理し、次いでこの前培養液を５００ｍｌ容の三角フラスコ中に上記組成を有する海水から調製した滅菌培地１００ｍｌ（１２１℃、１５分間）に接種し、２５℃の温度で３日間振とう培養を行った。次いで培養液を遠心分離した後濾過助剤（ラヂオライト＃５００）を用いてＧＦ−７５濾紙（Ａｄｖａｎｔｅｃ社製）で濾過し、菌体を除いた培養濾液から分子量５万カットの中空糸ＵＦ膜モジュール（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ社製）を備えた膜濾過装置により得られる高分子画分を５〜６時間のうちに濃縮、脱塩回収し、活性炭処理し、凍結乾燥により粉末化した。膜濾過装置は東洋紡エンジニアリング社製ＳＹＬＳ-ＳＢ０４型を用いた。このようにして得られた多糖画分については、セルロースアセテート膜電気泳動を用いて均一性を確認すると共に、ＤＥＡＥ-セルロースイオン交換カラムクロマト分析、化学分析、核磁気共鳴分析により、公知の本酸性ムコ多糖類であることを確認した。
【００４５】
（実施例３）
前培養までは実施例１と同様に処理し、上記実施例２で述べた培地に寒天を１．５％添加した寒天平板培地２５０ｍｌを平板（１８×２６ｃｍ）に広げて前培養液を塗沫し、２５℃の温度で４日間培養を行った。寒天平板の表面に生じた粘質物をかきとり、１％フェノール液に懸濁させ、遠心分離した後濾過助剤（ラヂオライト＃５００）を用いてＧＦ-７５濾紙で濾過し、菌体を除いた上澄液にエタノールを加えて沈殿する画分を集め、水に溶解後再度エタノールを加えて沈殿する画分を集め、水に溶解後透析した。次いで活性炭処理し、凍結乾燥により多糖画分を得た。尚、実用的な精製レベルとしては、培養濾過液から分子量５万カットの中空糸ＵＦ膜モジュール（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ社製）を備えた膜濾過装置により得られる高分子画分を５〜６時間のうちに濃縮、脱塩回収し、活性炭処理し、凍結乾燥により粉末化した。膜濾過装置は東洋紡エンジニアリング社製ＳＹＬＳ-ＳＢ０４型を用いた。このようにして得られた多糖画分については、セルロースアセテート膜電気泳動を用いて均一性を確認すると共に、ＤＥＡＥ-セルロースイオン交換カラムクロマト分析、化学分析、核磁気共鳴分析により、公知の本酸性ムコ多糖類であることを確認した。
【００４６】
（実施例４）
（脂肪蓄積抑制剤）
ヒト皮下前駆脂肪細胞におけるin vitroでの脂肪細胞への分化抑制活性について調べた。ヒト皮下脂肪細胞の脂肪蓄積抑制作用の測定は、ゼンバイオ社（Ｚｅｎ-Ｂｉｏ,Ｉｎｃ.、Ｕ.Ｓ.Ａ.）のプロトコールに従い、以下の方法で行った。実施例１で得られた本酸性ムコ多糖類を使用して、ヒト皮下脂肪細胞の脂肪蓄積抑制作用を調べ、試料無添加の場合と比較して試料添加系での抑制率を求めた。脂肪細胞の脂肪蓄積抑制作用は脂肪細胞に蓄積したトリグリセリド濃度を指標とし、ＰＰＡＲγアゴニスト添加と本試料無添加とによる促進効果（対照）およびＰＰＡＲγアゴニストとＴＮＦ-α（腫瘍壊死因子-α）との同時添加による抑制効果（Ｐ）と比較した。脂肪蓄積量の低いものほど前駆脂肪細胞の分化が低いことを示す。
この結果を図１に示す（平均値±ＳＥ）。
【００４７】
図１から明らかなように、ＰＰＡＲγアゴニストを添加し本酸性ムコ多糖類は無添加である対照では分化誘導が認められた。一方、本酸性ムコ多糖類の添加により濃度依存的に分化誘導を抑制し、ヒト皮下脂肪細胞の脂肪蓄積抑制作用のあることが認められた。また、ＰＰＡＲγアゴニストと、ＰＰＡＲγアゴニストを介した前駆脂肪細胞の分化抑制物質として知られているＴＮＦ-αとの同時添加による抑制効果（Ｐ）と比較して、本酸性ムコ多糖類を１０００μｇ/ｍｌ添加した場合では、１/２程度の抑制値を示した。同濃度で細胞毒性に伴う細胞形態の変化は見られなかった。
【００４８】
本発明に係る脂肪蓄積抑制剤は種々の剤型で使用されるが、例示として、実施例１で得られた本酸性ムコ多糖類を使用した美容液、クリーム、乳液、石けん、乳化型ファンデーションおよび浴用剤の処方例を処方例１〜６、美容用飲食品の処方例を処方例７および８として下記に説明する。
【００４９】
処方例１(美容液)
下記成分により常法で美容液を調製した。
【表１】
2014009161.tif 000005
【００５０】
処方例２(クリーム)
下記成分Ａ、別に成分Ｂを加温溶解させてそれぞれＡ液およびＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて乳化し、撹拌しながら冷却し、クリームを調製した。
【表２】
2014009161.tif 000006
【００５１】
処方例３(乳液)
下記成分Ａ、別に成分Ｂを加温溶解させてそれぞれＡ液およびＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて乳化し、撹拌しながら冷却し、乳液を調製した。
【表３】
2014009161.tif 000007
【００５２】
処方例４(石けん)
石けん製造の常法により下記成分を混合して石けんを製造した。
【表４】
2014009161.tif 000008
【００５３】
処方例５(乳化型ファンデーション)
下記成分Ａを充分に混合粉砕した粉末部Ａとし、成分ＢをＢ液、成分ＣをＣ液とする。Ｃ液を加温攪拌後、Ａを添加しホモミキサー処理し、さらに加温混合したＢ液を加えてホモミキサー処理する。攪拌しながら室温まで冷却して乳化型ファンデーションを調製した。
【表５】
2014009161.tif 000009
【００５４】
処方例６(浴用剤)
下記成分により常法により浴用剤を調製した。
【表６】
2014009161.tif 000010
【００５５】
処方例７(錠剤)
下記成分Ａをそれぞれ篩過して混合し、次に成分Ｂを添加して混合した。その後、常法により打錠して、全量が６００ｍｇの錠剤を得た。
【表７】
2014009161.tif 000011
【００５６】
処方例８(清涼飲料)
下記成分により常法により清涼飲料を調製した。
【表８】
2014009161.tif 000012
【受託番号】
【００５７】
なお、本実施例において用いられた上記のＦＥＲＭ Ｐ-２１２９７菌株は、日本国独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター 〒３０５−８５６６ 日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６ に寄託し、平成１９年５月１６日 受託番号 ＦＥＲＭ Ｐ-２１２９７として受託されたものである。
【図１】
2014009161.tif 000015