(57)【要約】【課題】単離抗体、またはその抗原結合断片を提供すること。【解決手段】ネオエピトープ、たとえばＡＡのＣ末端領域からのＡＡ断片と、凝集アミロイドタンパク質のネオエピトープに特異的な抗体、たとえばＡＡ原線維のＣ末端領域に特異的な抗体とを含むペプチドを投与することによって、ＡＡアミロイドーシスおよびＡＬアミロイドーシスを含む、アミロイドーシスの予防または処置を実施するのに有用な方法。患者のアミロイド沈着の形成の抑制および／または排除の増加による、アミロイド疾患の予防の実施またはアミロイド疾患の処置のための抗体。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
優先権を、２００８年９月１０日に出願された米国仮出願第６１／０９５，９３２号および２００７年１２月２８日に出願された米国仮出願第６１／００７，５４４号（各々は、その全体が参考として本明細書に援用される）に対して主張する。
【０００２】
技術分野
本発明は、免疫学および医学の技術分野に存する。
【背景技術】
【０００３】
アミロイドーシスは、局所部位でまたは全身的に発生し得る、多くの「アミロイド沈着物」または「アミロイド斑」を形成するタンパク質原線維の細胞外沈着を伴うことが多い、アミロイドタンパク質の病理形態の存在を特徴とするいくつかの疾患を説明する一般用語である。これらの沈着物または斑は、各種の組織部位において直径１０〜１００μｍの広範囲に及ぶ不溶性沈着物へと凝集する、主に天然発生型可溶性タンパク質またはペプチドから成る。沈着物は、直径約１０〜１５ｎｍである原線維の一般に側方への凝集体から成る。アミロイド原線維は、コンゴーレッド染料で染色したときに、偏光中で特徴的な青リンゴ色の複屈折を生じる。一般にこれらの沈着物の原線維組成物は、各種の形態のアミロイド疾患を識別する特徴である。
【０００４】
斑沈着物を形成するペプチドまたはタンパク質は、より大型の前駆体タンパク質から産生されることが多い。さらに詳細には、原線維沈着物などのアミロイド凝集体の病原は一般に、「異常な」前駆体タンパク質の、逆平行βプリーツシートへ凝集する断片へのタンパク質分解切断を含む。
【０００５】
これらの沈着物の原線維組成物は、各種の形態のアミロイド疾患を識別する特徴である。たとえば、主にベータアミロイドペプチド（β−ＡＰ）の原線維から成る脳内および脳血管沈着物は、アルツハイマー病（家族型および散発型の両方）の特徴を示しており、膵島アミロイドタンパク質ペプチド（ＩＡＰＰ；アミリン）は、ＩＩ型糖尿病に関連する膵島細胞アミロイド沈着物における原線維の特徴を示しており、β２−ミクログロブリンは、長期の血液透析治療の結果として生成するアミロイド沈着物の主成分である。さらに最近ではプリオン関連疾患、たとえばクロイツフェルト−ヤコブ病もアミロイド疾患として認識されてきた。
【０００６】
一般に疾患の原発性アミロイドーシスは、ＡＬ原線維のＮ末端領域の、免疫グロブリン軽鎖の可変断片（カッパまたはラムダ）に対する相同性にちなんで名付けられた、「アミロイド軽鎖型」（ＡＬ型）タンパク質原線維の存在を特徴とする。
【０００７】
各種の疾患の形態は、アミロイドーシスが基礎全身性疾病に関連するか否かに主に基づいてクラスに分類されている。それゆえ、ある障害は、既存のまたは同時に存在する疾患の証拠がない原発性アミロイドーシスと見なされる。アミロイドタンパク質Ａ（ＡＡ）原線維の沈着の存在を特徴とする続発性または反応性（ＡＡ型）アミロイドーシスでは、基礎または関連する慢性炎症性または感染性疾患状態がある。
【０００８】
家族遺伝性アミロイドーシスは、ＡＴＴＲトランスサイレチン型の関連する神経障害性、腎臓、または心血管沈着物を有することがある。他の家族遺伝性アミロイドーシスは、他の症候群を含み、異なるアミロイド構成成分（たとえばＡＡ原線維を特徴とする家族性地中海熱）を有し得る。アミロイドーシスの他の形態は、独立した器官に発生する限局性の、しばしば腫瘍様の沈着物を特徴とする局所形態を含む。他のアミロイドーシスは加齢に関連しており、一般に心臓または脳における斑形成を特徴とする。長期血液透析に関連するアミロイド沈着物も一般的である。アミロイド疾患のこれらのおよび他の形態は、表１（非特許文献１；非特許文献２）に要約されており、その全体が参照により本明細書に組み入れられている特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、および特許文献５に記載されている。
【０００９】
【表１−１】
2014080434.tif 000002
【００１０】
【表１−２】
2014080434.tif 000003
しばしばアミロイド沈着物の大部分を形成する原線維は、１つ以上の主要な前駆体タンパク質またはペプチドに由来しており、通常、硫酸化グリコサミノグリカンに関連している。さらにアミロイド沈着物は、多様な種類の微量タンパク質およびペプチドを、続く節でさらに詳細に記載するように、他の構成成分、たとえばプロテオグリカン、ガングリオシドおよび他の糖と共に含み得る。
【００１１】
ＡＡ原線維は、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＳＡ）のタンパク質分解切断によって形成された、サイズに幅があるが、一般に約８０００ダルトン（ＡＡペプチドまたはタンパク質）であるペプチド断片より成り、血清アミロイドＡタンパク質は、ＨＤＬ粒子内に存在して、インターロイキン（ＩＬ）−１およびＩＬ−６などのサイトカインはもちろんのこと、腫瘍壊死因子αにも応答して肝細胞で合成される、循環アポリポタンパク質である。非特許文献３を参照。タンパク質分解切断は、ＳＡＡタンパク質の〜７６残基Ｎ末端の３分の２の病的沈着を引き起こす。ヒトでは、ＳＡＡの血漿濃度は通常〜０．１ｍｇ／ｍｌであるが、炎症性刺激に応答して１，０００倍超に上昇することがある。このプロセスの一環として、ＳＡＡ分子はタンパク質分解を受けて、Ｎ末端切断生成物が肝臓、脾臓、腎臓、および副腎を含む重要器官にＡＡ原線維として全身的に沈着する。沈着は心臓および消化管でも一般的である。
【００１２】
一般に、ＡＡアミロイドーシスは、持続性急性期応答を誘導する疾患の顕在化である。このような疾患は、慢性炎症性障害、慢性限局性または全身性微生物感染症、および悪性新生物を含む。ＡＡアミロイド疾患は、これに限定されるわけではないが、炎症性疾患、たとえば関節リウマチ、若年性慢性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬、乾癬性関節症（ｐｓｏｒｉａｔｉｃ  ａｒｔｈｒｏｐａｔｈｙ）、ライター症候群、成人スティル病、ベーチェット症候群、およびクローン病を含む。ＡＡ沈着物は、慢性微生物感染症、たとえばらい、結核、気管支拡張症、褥瘡性潰瘍、慢性腎盂腎炎、骨髄炎、およびウィップル病の結果としても生じる。ある悪性新生物もＡＡ原線維アミロイド沈着物を引き起こす可能性がある。これらはホジキンリンパ腫、腎臓癌、消化管、肺および尿生殖路の癌、基底細胞癌、およびヘアリー細胞白血病などの状態も含む。ＡＡアミロイド疾患は、家族性地中海熱などの遺伝性炎症性疾患からも発生し得る。さらにＡＡアミロイド疾患は、キャッスルマン病などのリンパ球増殖性障害から発生し得る。
【００１３】
ＡＡアミロイドーシスは潜行性および進行性である。症状は一般に、疾患の後期に現れる。患者は、著しい器官損傷が発生するまで診断されないことが多い。ＡＡ原線維は重要器官に沈着して、器官不全に、そして続いて死へ至らせる。５年生存率は４５〜５０％である。診断後の生存期間中央値は４〜８年である。末期腎疾患は、症例の４０〜６０％で死の原因である。非特許文献４を参照。
【００１４】
現在、ＡＡアミロイドーシスを含むアミロイド疾患のいずれにも、具体的なアミロイドに対する治療法は承認されていない。非特許文献４を参照。基礎または関連した疾患状態がある場合には、療法は、基礎疾患を治療することによって、アミロイド形成性タンパク質の産生を低下させることを目的としている。たとえば、ＡＡアミロイドーシスの現在の治療方法は、基礎炎症を標的として、ＡｐｏＳＳＡレベルを１０ｍｇ／ｌ以下に低下させることである。現在利用されている療法は、化学療法（クロラムブシル（ｃｈｏｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）およびＭＴＸ）、免疫抑制剤（アザチオプリン）、抗炎症薬（コルヒチン）およびＴＮＦ阻害薬を含む。本発明はそれゆえ、ＡＡアミロイドーシスの影響を予防または緩和するための治療計画に対する長年の要求を満足する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】米国特許６，８７５，４３４号明細書
【特許文献２】米国特許６，８９０，５３５号明細書
【特許文献３】米国特許６，９１３，７４５号明細書
【特許文献４】米国特許６，９２３，９６４号明細書
【特許文献５】米国特許６，９３６，２４６号明細書
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ｔａｎ，Ｓ．Ｙ．ａｎｄ  Ｐｅｐｙｓ，Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ（１９９４）２５：４０３−４１４
【非特許文献２】Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１３ｔｈ  Ｅｄ．，Ｉｓｓｅｌｂａｃｈｅｒ，Ｋ．Ｊ．ら、ｅｄｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，１９９５
【非特許文献３】Ｈｕｓｂｙ，Ｇ．ら、Ａｍｙｌｏｉｄ（１９９４）１，１１９−１３７
【非特許文献４】Ｇｉｌｌｍｏｒｅ  Ｊ．Ｄ．ら、Ｌａｎｃｅｔ（２００１）３５８：２４−９
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明は、ヒトアミロイドＡペプチドの残基７０〜７６内のエピトープ、たとえば配列番号２の残基７０〜７６内のエピトープまたは配列番号４、５、６、７、８、９、１０、または１１として示される残基を含むエピトープに特異的に結合する、単離されたヒト抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体、またはその抗原結合断片を提供する。本発明の抗体または抗原結合断片は、ＡＴＣＣアクセション番号      によって産生された抗体２Ａ４またはＡＴＣＣアクセション番号      によって産生された抗体７Ｄ８と、ヒトアミロイドＡペプチドへの結合で競合するものを含む。本発明のさらなる抗体は、配列番号１５２の残基２０〜１３１または１５３の残基２０〜１３１として示される軽鎖可変領域および配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される重鎖可変領域を有する抗体と、ヒトアミロイドＡペプチドへの結合で競合する。
【００１８】
開示した抗体は、ＡＴＣＣアクセション番号      によって産生された抗体２Ａ４のヒト化バージョンまたはキメラバージョン、またはＡＴＣＣアクセション番号      によって産生された抗体７Ｄ８のヒト化バージョンもしくはキメラバージョンを含む。
【００１９】
たとえば代表的な抗体および抗原結合断片は、配列番号１５２の残基２０〜１３１として示される２Ａ４軽鎖可変領域の１つ以上の相補性領域または配列番号１５３の残基２０〜１３１として示される７Ｄ８軽鎖可変領域の１つ以上の相補性領域を含む軽鎖可変領域を含む。別の例として、代表的な抗体および抗原結合断片は、配列番号１５２の残基２０〜１３１として示される２Ａ４軽鎖可変領域の２つの相補性領域または配列番号１５３の残基２０〜１３１として示される７Ｄ８軽鎖可変領域の２つの相補性領域を含む軽鎖可変領域を含む。さらなる代表的な抗体および抗原結合断片は、配列番号１５２の残基２０〜１３１として示される２Ａ４軽鎖可変領域の３つの相補性領域または配列番号１５３の残基２０〜１３１として示される７Ｄ８軽鎖可変領域の３つの相補性領域を含む軽鎖可変領域を含む。２Ａ４または７Ｄ８抗体の代表的なヒト化バージョンは、ＹおよびＦによってそれぞれ占有されるＬ８７およびＬ９０（Ｋａｂａｔナンバリング規則）から成る群より選択される少なくとも１つの軽鎖フレームワーク残基を含み、ここで軽鎖可変領域の残りは、ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される。代表的な抗体および抗原結合断片は、Ｔ、Ｓ、Ｌ、Ｄ、Ｑ、Ｋ、Ｙ、Ｌ、Ｆ、およびＬによってそれぞれ占有される＋７、＋１４、＋１５、＋１７、＋１８、＋５０、＋７５、＋８８、＋９２、および＋１０９（リニアナンバリング）から成る群より選択される少なくとも１つの軽鎖フレームワーク残基を含み、ここで軽鎖可変領域の残りは、ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される。たとえば、代表的な抗体および抗原結合断片は、ＹおよびＦによってそれぞれ占有される＋７５および＋９２（リニアナンバリング）から成る群より選択される少なくとも１つの軽鎖フレームワーク残基を含み、ここで軽鎖可変領域の残りは、ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される。本発明の他の代表的な抗体および抗原結合断片において、軽鎖可変領域は、Ｑに占有される＋１０５（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む。
【００２０】
たとえば本発明の抗体および抗原結合断片は、Ｔに占有される＋７（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む軽鎖可変領域を含み、ここで軽鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有されるもの；Ｓに占有される＋１４（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む軽鎖可変領域を含み、ここで軽鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｌに占有される＋１５（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む軽鎖可変領域を含み、ここで軽鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｄに占有される＋１７（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む軽鎖可変領域を含み、ここで軽鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｑに占有される＋１８（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む軽鎖可変領域を含み、ここで軽鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｋに占有される＋５０（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む軽鎖可変領域を含み、ここで軽鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｙに占有される＋７５（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む軽鎖可変領域を含み、ここで軽鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｌに占有される＋８８（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む軽鎖可変領域を含み、ここで軽鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｆに占有される＋９２（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む軽鎖可変領域を含み、ここで軽鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｌに占有される＋１０９（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む軽鎖可変領域を含み、ここで軽鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；およびＱに占有される＋１０５（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む軽鎖可変領域を含み、ここで軽鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；を含む。
【００２１】
本発明で使用するヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域は、ヒトカッパサブグループ２軽鎖可変領域（Ｋａｂａｔ規則）、たとえばヒト生殖細胞系ＶＫＩＩＡ１９／Ａ３からのヒトサブグループ２軽鎖可変領域、たとえば配列番号１６６または１６７として示される配列を含む、ヒトＶｋ軽鎖可変領域を含む。本発明の詳細な態様において、抗体および抗原結合断片は、配列番号１５２の残基２０〜１３１、配列番号１５３の残基２０〜１３１として示される、または配列番号１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１７４、１７５、または１７６として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００２２】
本発明の代表的な抗体および抗原結合断片は、配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される２Ａ４重鎖可変領域の１つ以上の相補性領域を含む重鎖可変領域、たとえば配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される２Ａ４重鎖可変領域の２つの相補性領域を含む重鎖可変領域または配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される２Ａ４重鎖可変領域の３つの相補性領域を含む重鎖可変領域を含むものも含む。代表的なヒト化２Ａ４および７Ｄ８抗体および抗原結合断片は、Ｉ、Ａ、Ｆ、またはＶによってそれぞれ占有されるＨ３７、Ｈ４９、Ｈ７０、およびＨ９３（Ｋａｂａｔナンバリング規則）から成る群より選択される少なくとも１つの重鎖フレームワーク残基を含み、ここで重鎖可変領域の残りは、ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される。代表的なヒト化抗体および抗原結合断片は、Ｒ、Ｋ、Ｋ、Ｉ、Ａ、Ｆ、Ｑ、Ｓ、Ｍ、Ｎ、Ｍ、Ｖ、またはＡによってそれぞれ占有される＋１０、＋１５、＋１９、＋３７、＋４９、＋７３、＋７８、＋７９、＋８０、＋８７、＋９５、＋９９、＋１１９（リニアナンバリング）から成る群より選択される少なくとも１つの重鎖フレームワーク残基を含み、ここで重鎖可変領域の残りは、ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される。たとえば代表的なヒト化抗体および抗原結合断片は、Ｉ、Ａ、Ｆ、またはＶによってそれぞれ占有される＋３７、＋４９、＋７３、および＋９９（リニアナンバリング規則）から成る群より選択される少なくとも１つの重鎖フレームワーク残基を含み、ここで重鎖可変領域の残りは、ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される。
【００２３】
たとえば本発明の抗体および抗原結合断片は、Ｒに占有される＋１０（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む重鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有されるもの；Ｋに占有される＋１５（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む重鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｋに占有される＋１９（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む重鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｉに占有される＋３７（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む重鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ａに占有される＋４９（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む重鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｆに占有される＋７３（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む重鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｑに占有される＋７８（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む重鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｓに占有される＋７９（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む重鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｍに占有される＋８０（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む重鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｎに占有される＋８７（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む重鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｍに占有される＋９５（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む重鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；Ｖに占有される＋９９（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む重鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；およびＡに占有される＋１０９（リニアナンバリング）にフレームワーク残基を含む重鎖可変領域を含み、ここで重鎖可変領域の残りがヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、抗体および抗原結合断片；を含む。
【００２４】
ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域は、ヒトガンマサブグループ３重鎖可変領域（Ｋａｂａｔ規則）、たとえば配列番号１６５として示される配列を含むヒトガンマサブグループ３重鎖可変領域、たとえば配列番号１５４の残基２０〜１３８として示されるまたは配列番号１６１、１６２、もしくは１６３として示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【００２５】
さらなる代表的な抗体および抗原結合断片は、配列番号１５２の残基２０〜１３１として示される２Ａ４軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域または配列番号１５３の残基２０〜１３１として示される７Ｄ８軽鎖可変領域の３つの相補性領域を含む軽鎖可変領域、および配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される２Ａ４重鎖可変領域の３つの相補性領域を含む重鎖可変領域を含む。たとえば、このような抗体および抗原結合断片は、配列番号１６８、１６９、および１７０として示される３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域、ならびに配列番号１７１、１７２、および１７３として示される３つの相補性領域を含む重鎖可変領域を有するものを含む。別の例として、このような抗体および抗原結合断片は、配列番号１７７、１６９、および１７０として示される３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域、ならびに配列番号１７１、１７２、および１７３として示される３つの相補性領域を含む重鎖可変領域を有するものを含む。別の例として、このような抗体および抗原結合断片は、配列番号１５２の残基２０〜１３１としてまたは配列番号１５３の残基２０〜１３１として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１５４の残基２０〜１３８として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むものを含む。別の例として、このような抗体および抗原結合断片は、配列番号１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１７４、１７５、または１７６として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、ならびに配列番号１６１、１６２、または１６３として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有するものを含む。
【００２６】
本発明の詳細な態様において、抗体または抗原結合断片は、配列番号１５５として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６１として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１５５として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６２として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１５５として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６３として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１５６として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６１として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１５６として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６２として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１５６として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６３として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１５７として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６１として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１５７として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６２として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１５７として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６３として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１５８として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６１として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１５８として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６２として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１５８として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６３として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１５９として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６１として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１５９として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６２として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１５９として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６３として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１６０として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６１として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１６０として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６２として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１６０として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６３として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１７４として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６１として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１７４として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６２として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１７４として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６３として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１７５として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６１として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１７５として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６２として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１７５として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６３として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１７６として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６１として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；配列番号１７６として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６２として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；または配列番号１７６として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６３として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【００２７】
ヒトアミロイドＡペプチドの残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する、ヒト抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体、またはその抗原結合断片をコードする単離核酸も、本明細書で上述され、請求項で示されるこのようなすべての抗体および抗原結合断片を含めて提供される。このような核酸を発現する細胞がさらに提供される。
【００２８】
他の態様において、本発明は、凝集アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２（式中、Ｘ１およびＸ２は任意のアミノ酸である）を含むエピトープに特異的に結合する単離抗体、またはその抗原結合断片を提供する。このような抗体および抗原結合断片は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体、およびその抗原結合断片、たとえばヒトアミロイドＡペプチドの残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合するものを含む。
【００２９】
さらなる代表的な抗体および抗原結合断片は、Ｘ１がＨ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、Ａ、Ｌ、Ｃ、Ｑ、Ｒ、Ｅ、Ｋ、Ｄ、Ｇ、Ｖ、Ｙ、Ｉ、もしくはＷであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｅ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、Ｆ、Ｄ、Ａ、Ｇ、Ｍ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｃ、Ｋ、Ｙ，もしくはＱである；またはＸ１がＨ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、もしくはＡであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｅ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、Ｆ、Ｄ、もしくはＡである；またはＸ１がＨ、Ｔ、Ｆ、もしくはＡである；またはＸ２がＴ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、もしくはＡである；またはＸ１がＨ、Ｔ、Ｆ、またはＡであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、もしくはＡである；またはＸ１がＨ、Ｔ、もしくはＡであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｅ、もしくはＡである；またはＸ１がＨもしくはＡであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、もしくはＡである；またはＸ１がＨであり、Ｘ２がＴもしくはＡである；またはＸ１がＡであり、Ｘ２がＳ、Ｔ、ＥもしくはＶである；またはＸ１はＡであり、Ｘ２がＳ、ＴもしくはＥである；またはＸ１がＴであり、Ｘ２がＥである；またはＸ１がＦであり、Ｘ２がＤである；またはＸ１がＳであり、Ｘ２がＥ、ＦもしくはＡである；またはＸ１がＰであり、Ｘ２がＥ、ＩまたはＦであるものを含む。たとえば、このような抗体および抗原結合断片は、ＧＨＥＤＴ（配列番号３）、ＨＥＤＴ（配列番号１２）、ＡＥＤＳ（配列番号１３）、ＡＥＤＴ（配列番号１４）、ＨＥＤＡ（配列番号１５）、ＴＥＤＥ（配列番号１６）、ＦＥＤＤ（配列番号１７）、ＳＥＤＥ（配列番号１８）、ＡＥＤＥ（配列番号１９）、ＰＥＤＥ（配列番号２０）、ＰＥＤＩ（配列番号２１）、ＰＥＤＦ（配列番号２２）、ＡＥＤＶ（配列番号２３）、ＳＥＤＦ（配列番号２４）、およびＳＥＤＡ（配列番号２５）から成る群より選択されるアミノ酸配列から成るエピトープ；またはＧＨＥＤＴ（配列番号３）、ＨＥＤＴ（配列番号１２）、ＡＥＤＳ（配列番号１３）、ＡＥＤＴ（配列番号１４）、ＨＥＤＡ（配列番号１５）、ＴＥＤＥ（配列番号１６）、ＦＥＤＤ（配列番号１７）、ＳＥＤＥ（配列番号１８）、ＡＥＤＥ（配列番号１９）、ＰＥＤＥ（配列番号２０）、ＰＥＤＩ（配列番号２１）、ＰＥＤＦ（配列番号２２）、ＳＥＤＦ（配列番号２４）、およびＳＥＤＡ（配列番号２５）から成る群より選択されるアミノ酸配列から成るエピトープ；またはＧＨＥＤＴ（配列番号３）、ＨＥＤＴ（配列番号１２）、ＡＥＤＳ（配列番号１３）、ＡＥＤＴ（配列番号１４）、ＨＥＤＡ（配列番号１５）、およびＴＥＤＥ（配列番号１６）から成る群より選択されるアミノ酸配列から成るエピトープを結合する。開示されたエピトープ、たとえばＧＨＧＡＥＤＳ（配列番号４）、ＧＨＤＡＥＤＳ（配列番号５）、ＧＤＨＡＥＤＳ（配列番号７）、配列番号ＳＴＶＩＥＤＳ（配列番号８）、およびＧＲＧＨＥＤＴ（配列番号９）から成る群より選択されるアミノ酸配列を含むエピトープ；またはアミノ酸配列ＧＨＧＡＥＤＳ（配列番号４）を含むエピトープ；またはアミノ酸ＨＥＤＴ（配列番号１２）を含むエピトープ；またはアミノ酸ＨＥＤＡ（配列番号１５）を含むエピトープ；またはアミノ酸ＡＥＤＳ（配列番号１３）を含むエピトープもしくはアミノ酸ＡＥＤＴ（配列番号１４）を含むエピトープ；またはアミノ酸ＴＥＤＥ（配列番号１６）を含むエピトープ；またはアミノ酸配列ＡＥＤＶ（配列番号２３）を含むエピトープ；またはアミノ酸配列ＳＥＤＦ（配列番号２４）もしくはＰＥＤＦ（配列番号２２）を含むエピトープ；またはＰＥＤＳ（配列番号２６）、ＰＥＤＬ（配列番号２７）、ＴＥＤＶ（配列番号２８）、ＡＥＤＥ（配列番号１９）、ＳＥＤＩ（配列番号２９）およびＴＥＤＴ（配列番号３０）から成る群より選択されるアミノ配列を含むエピトープ；またはＬＥＤＧ（配列番号３１）、ＡＥＤＭ（配列番号３２）、ＨＥＤＳ（配列番号３３）、ＣＥＤＤ（配列番号３４）、ＱＥＤＳ（配列番号３５）、ＲＥＤＳ（配列番号３６）、ＴＥＤＧ（配列番号１６）、ＱＥＤＲ（配列番号３８）、ＴＥＤＬ（配列番号３９）、ＰＥＤＮ（配列番号４０）、ＥＥＤＰ（配列番号４１）、ＬＥＤＬ（配列番号４２）、ＫＥＤＡ（配列番号４３）、ＳＥＤＣ（配列番号４４）、ＥＥＤＤ（配列番号４５）、ＳＥＤＫ（配列番号４６）、ＤＥＤＤ（配列番号４７）、ＤＥＤＧ（配列番号１３）、ＬＥＤＥ（配列番号４９）、ＧＥＤＡ（配列番号１３）、ＶＥＤＦ（配列番号５１）、ＹＥＤＥ（配列番号５２）、ＩＥＤＬ（配列番号５３）、ＷＥＤＹ（配列番号５４）、ＤＥＤＷ（配列番号５５）、ＳＥＤＬ（配列番号５６）、ＹＥＤＱ（配列番号５７）、ＬＥＤＷ（配列番号５８）、ＹＥＤＲ（配列番号５９）およびＰＥＤＫ（配列番号６０）から成る群より選択されるアミノ配列を含むエピトープは、凝集アミロイドタンパク質に見出され得る。
【００３０】
本明細書に記載する抗体および抗原結合断片は、約１０７Ｍ−１未満の親和性で単量体形のアミロイドタンパク質に結合するものを含む。代表的なアミロイドタンパク質は、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、免疫グロブリン軽鎖タンパク質（たとえばＶλ６  ＷｉｌおよびＶκ）、ヒト膵島アミロイド前駆体ポリペプチド（ｈｕｍａｎ  ｉｓｌｅｔ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）（ＩＡＰＰ）、ベータアミロイドペプチド、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、およびＡｐｏＡ１を含む。
【００３１】
凝集アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２（式中、Ｘ１およびＸ２は任意のアミノ酸である）を含むエピトープに特異的に結合する抗体、またはその抗原結合断片をコードする単離核酸も、本明細書で上述され、請求項で示されるこのようなすべての抗体および抗原結合断片を含めて提供される。このような核酸を発現する細胞がさらに提供される。
【００３２】
本発明は、ヒトアミロイドＡペプチドの残基７０〜７６内のエピトープ、たとえば配列番号２の残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合するヒト抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体、またはその抗原結合断片を使用して、ＡＡアミロイドーシスを有する被験体を治療的に処置するまたは予防的に処置する方法をさらに提供する。ＡＡアミロイドーシスを処置する開示した治療方法から恩恵を受け得る被験体は、関節リウマチ、若年性慢性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬、乾癬性関節症、ライター症候群、成人スティル病、ベーチェット症候群、クローン病、らい、結核、気管支拡張症、褥瘡性潰瘍、慢性腎盂腎炎、骨髄炎、ウィップル病、ホジキンリンパ腫、腎臓癌、消化管、肺および尿生殖路の癌、基底細胞癌、ヘアリー細胞白血病、家族性地中海熱、およびキャッスルマン病から成る群より選択されるアミロイド疾患に罹患している被験体を含む。開示した予防方法から恩恵を受け得る被験体は、上述の障害のいずれかに罹りやすいまたは発症するリスクに瀕した被験体を含む。
【００３３】
凝集アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２（式中、Ｘ１およびＸ２は任意のアミノ酸である）を含むエピトープに特異的に結合する抗体または抗体結合断片を使用して、アミノ酸配列ＥＤを含む凝集アミロイドタンパク質に関連するアミロイドーシスを有する被験体を治療的に処置するまたは予防的に処置する方法も提供される。凝集アミロイドタンパク質に関連するアミロイドーシスを処置する開示した治療方法から恩恵を受け得る被験体は、ＡＡアミロイドーシス、ＡＬアミロイドーシス、アルツハイマー病、軽度認知障害、アミロイド多発性神経障害、地中海熱、マックル−ウェルズ症候群、全身性炎症性疾患に関連する反応性全身性アミロイドーシス、骨髄腫またはマクログロブリン血症関連アミロイドーシス、免疫担当細胞疾患（ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｅ  ｄｙｓｃｒａｓｉａ）に関連するアミロイドーシス、単クローン性高ガンマグロブリン血症、不顕性疾患（ｏｃｃｕｌｔ  ｄｙｓｃｒａｓｉａ）、および慢性炎症性疾患に関連する限局性結節性アミロイドーシスに罹患している被験体を含む。開示した予防方法から恩恵を受け得る被験体は、上述の障害のいずれかに罹りやすいまたは発症するリスクに瀕した被験体を含む。本発明の一態様において、アミロイドタンパク質は配列ＡＥＤＶ（配列番号２３）を含み、開示した方法を使用して治療的または予防的に処置されるアミロイド形成性疾患（ａｍｙｌｏｉｄｏｇｅｎｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）は、ＡＡアミロイドーシス、ＡＬアミロイドーシス、アミロイド多発性神経障害、地中海熱、マックル−ウェルズ症候群、全身性炎症性疾患に関連する反応性全身性アミロイドーシス、骨髄腫またはマクログロブリン血症関連アミロイドーシス、免疫担当細胞疾患に関連するアミロイドーシス、単クローン性高ガンマグロブリン血症、不顕性疾患、および慢性炎症性疾患に関連する限局性結節性アミロイドーシスである。
【００３４】
開示した治療的および予防的方法は、ヒト被験体を処置するのに有用である。
【００３５】
有効な治療的処置の代表的な指標は、アミロイドーシスの進行を遅らせること、アミロイド原線維凝集体の沈着を抑制すること、および／またはアミロイド原線維凝集体を除去することを含む。有効な予防的処置の代表的な指標は、アミロイドーシスの開始を遅延することおよび／またはアミロイドーシスのリスクを低下させることを含む。
【００３６】
ヒトアミロイドＡペプチドの残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合するヒト抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体、またはその抗原結合断片であって、検出可能な標識に結合されている抗体または抗原結合断片によって、被験体におけるＡＡアミロイドーシスに関連するアミロイド沈着物を検出して、次に被験体における検出可能な標識を検出する方法もなおさらに提供される。さらなる方法は、凝集アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２（式中、Ｘ１およびＸ２は任意のアミノ酸である）を含むエピトープに特異的に結合する抗体または抗原結合断片を使用して、アミノ酸配列ＥＤを含む凝集アミロイドタンパク質を検出することを含む。上述の検出方法はたとえば、上記の疾患および障害のいずれかにおいて疾患の開始もしくは進行または治療を監視するために使用され得る。本明細書に開示した処置方法に関して、このような監視はヒトにおいてはもちろんのこと、非ヒト被験体においても実施され得る。有用な検出可能な標識は、放射性標識、たとえば１２５Ｉを含む。このような検出方法を実施するにあたって、検出可能な標識を検出するステップは、非侵襲性技法、たとえばＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像化およびＮＭＲ分光法によって実現され得る。
【００３７】
アミロイドＡペプチドの残基７０〜７６に対する抗体を含む免疫応答を誘導するのに有効なアミロイドＡペプチドの残基７０〜７６に対する免疫応答を誘導する薬剤を使用して、ＡＡアミロイドーシスを有する被験体の能動免疫療法の方法がなお提供される。免疫応答を誘導する代表的な薬剤は、アミロイドＡペプチドの残基７０〜７６またはＡＡペプチドからの２０未満の隣接アミノ酸を有するその少なくとも３つの隣接残基のサブ断片を含む。これらの方法は、受動免疫療法、すなわちアミロイドＡペプチドの残基７０〜７６に特異的に結合する抗体または抗原結合断片を投与することに関して本明細書で上述した被験体の処置に、治療上および／または予防上の両方で有用である。治療的および予防的有効性の指標も、受動免疫療法に関して本明細書で上述した通りである。
したがって、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
ヒトアミロイドＡペプチドの残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する、単離ヒト抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体、またはその抗原結合断片。
（項目２）
配列番号２の残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する、項目１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３）
配列番号４、５、６、７、８、９、１０、または１１として示される残基を含むエピトープに特異的に結合する、項目１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４）
ＡＴＣＣアクセション番号ＰＴＡ−９６６２によって産生された抗体２Ａ４と、ヒトアミロイドＡペプチドへの結合で競合する、項目１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５）
配列番号１５２の残基２０〜１３１として示される軽鎖可変領域および配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される重鎖可変領域を有する抗体と、ヒトアミロイドＡペプチドへの結合で競合する、項目１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目６）
ＡＴＣＣアクセション番号ＰＴＡ−９４６８によって産生された抗体７Ｄ８と、ヒトアミロイドＡペプチドへの結合で競合する、項目１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目７）
配列番号１５３の残基２０〜１３１として示される軽鎖可変領域および配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される重鎖可変領域を有する抗体と、ヒトアミロイドＡペプチドへの結合で競合する、項目１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目８）
ＡＴＣＣアクセション番号ＰＴＡ−９６６２によって産生された抗体２Ａ４のヒト化もしくはキメラバージョンまたはＡＴＣＣアクセション番号ＰＴＡ−９４６８によって産生された抗体７Ｄ８のヒト化もしくはキメラバージョンである、項目１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目９）
配列番号１５２の残基２０〜１３１として示される２Ａ４軽鎖可変領域の１つ以上の相補性領域または配列番号１５３の残基２０〜１３１として示される７Ｄ８軽鎖可変領域の１つ以上の相補性領域を含む軽鎖可変領域を含む、項目８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１０）
配列番号１５２の残基２０〜１３１として示される２Ａ４軽鎖可変領域の３つの相補性領域または配列番号１５３の残基２０〜１３１として示される７Ｄ８軽鎖可変領域の３つの相補性領域を含む軽鎖可変領域を含む、項目９に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１１）
ＹおよびＦによってそれぞれ占有されるＬ８７およびＬ９０（Ｋａｂａｔナンバリング規則）から成る群より選択される少なくとも１つの軽鎖フレームワーク残基を含み、ここで上記軽鎖可変領域の残りが、ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、項目１０に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１２）
Ｔ、Ｓ、Ｌ、Ｄ、Ｑ、Ｋ、Ｙ、Ｌ、Ｆ、およびＬによってそれぞれ占有される＋７、＋１４、＋１５、＋１７、＋１８、＋５０、＋７５、＋８８、＋９２、および＋１０９（リニアナンバリング）から成る群より選択される少なくとも１つの軽鎖フレームワーク残基を含み、ここで上記軽鎖可変領域の残りが、ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、項目１０に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１３）
ＹおよびＦによってそれぞれ占有される＋７５および＋９２（リニアナンバリング）から成る群より選択される少なくとも１つの軽鎖フレームワーク残基を含み、ここで上記軽鎖可変領域の残りが、ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、項目１２に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１４）
上記ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域がヒトカッパサブグループ２軽鎖可変領域（Ｋａｂａｔ規則）である、項目１１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１５）
上記ヒトサブグループ２軽鎖可変領域がヒト生殖細胞系ＶＫＩＩＡ１９／Ａ３からである、項目１４に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１６）
上記ヒトＶｋ軽鎖可変領域が配列番号１６６または１６７として示される配列を含む、項目１５に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１７）
上記軽鎖可変領域が、配列番号１５２の残基２０〜１３１、配列番号１５３の残基２０〜１３１として示されるか、または配列番号１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１７４、１７５、もしくは１７６として示されるアミノ酸配列を含む、項目８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１８）
配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される２Ａ４重鎖可変領域の１つ以上の相補性領域を含む重鎖可変領域を含む、項目８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１９）
配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される２Ａ４重鎖可変領域の２つの相補性領域を含む重鎖可変領域を含む、項目１８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２０）
配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される２Ａ４重鎖可変領域の３つの相補性領域を含む重鎖可変領域を含む、項目１９に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２１）
Ｉ、Ａ、Ｆ、またはＶによってそれぞれ占有されるＨ３７、Ｈ４９、Ｈ７０、およびＨ９３（Ｋａｂａｔナンバリング規則）から成る群より選択される少なくとも１つの重鎖フレームワーク残基を含み、ここで上記重鎖可変領域の残りが、ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、項目２０に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２２）
Ｒ、Ｋ、Ｋ、Ｉ、Ａ、Ｆ、Ｑ、Ｓ、Ｍ、Ｎ、Ｍ、Ｖ、またはＡによってそれぞれ占有される＋１０、＋１５、＋１９、＋３７、＋４９、＋７３、＋７８、＋７９、＋８０、＋８７、＋９５、＋９９、＋１１９（リニアナンバリング）から成る群より選択される少なくとも１つの重鎖フレームワーク残基を含み、ここで上記重鎖可変領域の残りが、ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、項目２０に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２３）
Ｉ、Ａ、Ｆ、またはＶによってそれぞれ占有される＋３７、＋４９、＋７３、および＋９９（リニアナンバリング）から成る群より選択される少なくとも１つの重鎖フレームワーク残基を含み、ここで上記重鎖可変領域の残りが、ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、項目２２に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２４）
上記ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域がヒトガンマサブグループ３重鎖可変領域（Ｋａｂａｔ規則）である、項目２１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２５）
上記ヒトガンマサブグループ３重鎖可変領域が配列番号１６５として示される配列を含む、項目２４に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２６）
上記重鎖可変領域が配列番号１５４の残基２０〜１３８として示されるか、または配列番号１６１、１６２、もしくは１６３として示されるアミノ酸配列を含む、項目８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２７）
配列番号１５２の残基２０〜１３１として示される２Ａ４軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域、または配列番号１５３の残基２０〜１３１として示される７Ｄ８軽鎖可変領域の３つの相補性領域を含む軽鎖可変領域、および配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される２Ａ４重鎖可変領域の３つの相補性領域を含む重鎖可変領域を含む、項目８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２８）
配列番号１６８、１６９、および１７０として示される３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域、ならびに配列番号１７１、１７２、および１７３として示される３つの相補性領域を含む重鎖可変領域を含む、項目８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２９）
配列番号１７７、１６９、および１７０として示される３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域、ならびに配列番号１７１、１７２、および１７３として示される３つの相補性領域を含む重鎖可変領域を含む、項目８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３０）
配列番号１５２の残基２０〜１３１または配列番号１５３の残基２０〜１３１として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１５４の残基２０〜１３８として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、項目２７に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３１）
配列番号１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１７４、１７５、または１７６として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６１、１６２、または１６３として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、項目２７に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３２）
上記軽鎖可変領域が配列番号１５５として示されるアミノ配列を含み、上記重鎖可変領域が配列番号１６１として示されるアミノ酸配列を含む、項目３１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３３）
上記軽鎖可変領域が配列番号１５６として示されるアミノ配列を含み、上記重鎖可変領域が配列番号１６２として示されるアミノ酸配列を含む、項目３１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３４）
上記軽鎖可変領域が配列番号１５７として示されるアミノ配列を含み、上記重鎖可変領域が配列番号１６３として示されるアミノ酸配列を含む、項目３１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３５）
凝集アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２を含むエピトープに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、式中、Ｘ１およびＸ２は任意のアミノ酸である、単離抗体またはその抗原結合断片。
（項目３６）
Ｘ１がＨ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、Ａ、Ｌ、Ｃ、Ｑ、Ｒ、Ｅ、Ｋ、Ｄ、Ｇ、Ｖ、Ｙ、Ｉ、またはＷであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｅ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、Ｆ、Ｄ、Ａ、Ｇ、Ｍ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｃ、Ｋ、Ｙ、またはＱである、項目３５に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３７）
Ｘ１がＨ、Ｔ、Ｆ、またはＡである、項目３６に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３８）
Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、またはＡである、項目３６に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３９）
Ｘ１がＨまたはＡであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、またはＡである、項目３７に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４０）
Ｘ１がＴであり、Ｘ２がＥである、項目３７に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４１）
Ｘ１がＦであり、Ｘ２がＤである、項目３７に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４２）
Ｘ１がＳであり、Ｘ２がＥ、ＦまたはＡである、項目３６に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４３）
Ｘ１がＰであり、Ｘ２がＥ、ＩまたはＦである、項目３６に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４４）
上記エピトープがＧＨＥＤＴ（配列番号３）、ＨＥＤＴ（配列番号１２）、ＡＥＤＳ（配列番号１３）、ＡＥＤＴ（配列番号１４）、ＨＥＤＡ（配列番号１５）、およびＴＥＤＥ（配列番号１６）から成る群より選択されるアミノ酸配列から成る、項目３６に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４５）
アミノ酸配列ＧＨＧＡＥＤＳ（配列番号４）を含むエピトープにて凝集アミロイドタンパク質に特異的に結合する、項目４４に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４６）
約１０７Ｍ−１未満の親和性で、単量体形の上記アミロイドタンパク質に上記抗体が結合する、項目３５に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４７）
上記アミロイドタンパク質が血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）である、項目３５に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４８）
上記アミロイドタンパク質が免疫グロブリン軽鎖タンパク質、ヒト膵島アミロイド前駆体ポリペプチド（ＩＡＰＰ）、ベータアミロイドペプチド、トランスサイレチン（ＴＴＲ）およびＡｐｏＡ１から成る群より選択される、項目３５に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４９）
上記アミロイドタンパク質が免疫グロブリン軽鎖タンパク質である、項目４８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５０）
免疫グロブリン軽鎖タンパク質がＶλ６  Ｗｉｌである、項目４９に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５１）
免疫グロブリン軽鎖タンパク質がＶκである、項目４９に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５２）
上記アミロイドタンパク質がヒト膵島アミロイド前駆体ポリペプチド（ＩＡＰＰ）である、項目４８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５３）
上記アミロイドタンパク質がベータアミロイドペプチドである、項目４８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５４）
上記アミロイドタンパク質がトランスサイレチン（ＴＴＲ）である、項目４８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５５）
上記アミロイドタンパク質がＡｐｏＡ１である、項目４８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５６）
ヒト抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体または抗原結合断片である、項目３５に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５７）
ヒトアミロイドＡペプチドの残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する、項目５６に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５８）
有効投薬量の項目１に記載の抗体または抗原結合断片を被験体に投与して、それにより該被験体のＡＡアミロイドーシスを処置するステップを含む、ＡＡアミロイドーシスを有する該被験体を治療的に処置する方法。
（項目５９）
上記被験体がヒトである、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
治療的に処置するステップがＡＡアミロイドーシスの進行を遅らせることを含む、項目５８に記載の方法。
（項目６１）
治療的に処置するステップがＡＡアミロイド原線維凝集体の沈着を抑制することを含む、項目５８に記載の方法。
（項目６２）
治療的に処置するステップがＡＡアミロイド原線維凝集体の排除を含む、項目５８に記載の方法。
（項目６３）
上記被験体が関節リウマチ、若年性慢性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬、乾癬性関節症、ライター症候群、成人スティル病、ベーチェット症候群、クローン病、らい、結核、気管支拡張症、褥瘡性潰瘍、慢性腎盂腎炎、骨髄炎、ウィップル病、ホジキンリンパ腫、腎臓癌、消化管、肺および尿生殖路の癌、基底細胞癌、ヘアリー細胞白血病、家族性地中海熱、およびキャッスルマン病から成る群より選択されるアミロイド疾患に罹患する、項目５８に記載の方法。
（項目６４）
有効投薬量の項目１に記載の抗体または抗原結合断片を被験体に投与して、それにより該被験体のＡＡアミロイドーシスの予防を達成するステップを含む、ＡＡアミロイドーシスに罹りやすい該被験体を予防的に処置する方法。
（項目６５）
上記被験体がヒトである、項目６４に記載の方法。
（項目６６）
予防的に処置するステップがＡＡアミロイドーシスの開始を遅延することである、項目６４に記載の方法。
（項目６７）
予防的に処置するステップがＡＡアミロイドーシスのリスクを低下させることである、項目６４に記載の方法。
（項目６８）
項目３０に記載の抗体または抗原結合断片を被験体に投与して、それによりアミロイドーシスを処置するステップを含む、アミノ酸配列ＥＤを含む凝集アミロイドタンパク質に関連する該アミロイドーシスに罹患している該被験体を治療的に処置する方法。
（項目６９）
上記被験体がヒトである、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
治療的に処置するステップがアミロイドーシスの進行を遅らせることを含む、項目６８に記載の方法。
（項目７１）
治療的に処置するステップがアミロイド原線維凝集体の沈着を抑制することを含む、項目６８に記載の方法。
（項目７２）
治療的に処置するステップがアミロイド原線維凝集体の排除を含む、項目６８に記載の方法。
（項目７３）
上記アミロイドタンパク質が配列ＡＥＤＶ（配列番号２３）を含み、アミロイド形成性疾患が、ＡＡアミロイドーシス、ＡＬアミロイドーシス、アミロイド多発性神経障害、地中海熱、マックル−ウェルズ症候群、全身性炎症疾患に関連する反応性全身性アミロイドーシス、骨髄腫またはマクログロブリン血症関連アミロイドーシス、免疫担当細胞疾患に関連するアミロイドーシス、単クローン性高ガンマグロブリン血症、不顕性疾患、および慢性炎症疾患に関連する限局性結節性アミロイドーシスである、項目６８に記載の方法。
（項目７４）
項目３０に記載の抗体または抗原結合断片を被験体に投与して、それによりアミロイドーシスを処置するステップを含む、アミノ酸配列ＥＤを含む凝集アミロイドタンパク質に関連する該アミロイドーシスに罹りやすい該被験体を予防的に処置する方法。
（項目７５）
検出可能な標識に結合されている項目１に記載の抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与するステップと、該被験体において該検出可能な標識を検出するステップとを含む、該被験体においてＡＡアミロイドーシスに関連するアミロイド沈着物を検出する方法。
（項目７６）
上記被験体がヒトである、項目７５に記載の方法。
（項目７７）
上記被験体が関節リウマチ、若年性慢性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬、乾癬性関節症、ライター症候群、成人スティル病、ベーチェット症候群、クローン病、らい、結核、気管支拡張症、褥瘡性潰瘍、慢性腎盂腎炎、骨髄炎、ウィップル病、ホジキンリンパ腫、腎臓癌、消化管、肺および尿生殖路の癌、基底細胞癌、ヘアリー細胞白血病、家族性地中海熱、およびキャッスルマン病から成る群より選択されるアミロイド疾患に罹患するかまたは罹りやすい、項目７５に記載の方法。
（項目７８）
上記検出可能な標識が放射性標識である、項目７５に記載の方法。
（項目７９）
放射性標識が１２５Ｉである、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
上記検出がＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像化によって実施される、項目７５に記載の方法。
（項目８１）
上記検出がＮＭＲ分光法によって実施される、項目７５に記載の方法。
（項目８２）
検出可能な標識に結合されている項目３０に記載の抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与するステップと、該検出可能な標識を検出するステップとを含む、該被験体においてアミロイド沈着物を検出する方法。
（項目８３）
上記被験体がヒトである、項目８２に記載の方法。
（項目８４）
アミロイドーシスがＡＡアミロイドーシス、ＡＬアミロイドーシス、アルツハイマー病、軽度認知障害、アミロイド多発性神経障害、地中海熱、マックル−ウェルズ症候群、全身性炎症疾患に関連する反応性全身性アミロイドーシス、骨髄腫またはマクログロブリン血症関連アミロイドーシス、免疫担当細胞疾患に関連するアミロイドーシス、単クローン性高ガンマグロブリン血症、不顕性疾患、または慢性炎症疾患に関連する限局性結節性アミロイドーシスである、項目８２に記載の方法。
（項目８５）
上記検出可能な標識が放射性標識である、項目８２に記載の方法。
（項目８６）
上記放射性標識が１２５Ｉである、項目８５に記載の方法。
（項目８７）
上記検出がＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像化によって実施される、項目８２に記載の方法。
（項目８８）
上記検出がＮＭＲ分光法によって実施される、項目８２に記載の方法。
（項目８９）
アミロイドＡペプチドの残基７０〜７６に対する抗体を含む、免疫応答を誘導して、それにより被験体のＡＡアミロイドーシスを処置するのに有効なアミロイドＡペプチドの残基７０〜７６に対する免疫応答を誘導する薬剤を投与するステップを含む、ＡＡアミロイドーシスを有する該被験体を治療的に処置する方法。
（項目９０）
アミロイドＡペプチドの残基７０〜７６に対する抗体を含む、免疫応答を誘導して、それにより被験体のＡＡアミロイドーシスの予防を達成するのに有効なアミロイドＡペプチドの残基７０〜７６に対する免疫応答を誘導する薬剤を投与するステップを含む、ＡＡアミロイドーシスに罹りやすい該被験体を予防的に処置する方法。
【００３８】
上記で本発明の詳細な態様が要約され、本発明のさらなる態様が本明細書に記載される。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】ヒトＳＡＡ１、ヒトＳＡＡ２、ヒトＳＡＡ３およびヒトＳＡＡ４の配列アラインメント。
【図２】ヒトＳＡＡ１およびヒトＡＡ１の配列アラインメント。
【図３】ヒトＳＡＡ２およびヒトＡＡ２の配列アラインメント。
【図４】ヒトＳＡＡ３およびヒトＡＡ３の配列アラインメント。
【図５】ヒトＳＡＡ４およびヒトＡＡ４の配列アラインメント。
【図６】ヒトＡＡ１、ヒトＡＡ２、ヒトＡＡ３およびヒトＡＡ４の配列アラインメント。
【図７】ヒトＡＡ１、ヒトＡＡ２、ヒトＡＡ３およびヒトＡＡ４の最後の７残基の配列アラインメント。
【図８】マウスＳＡＡ１、マウスＳＡＡ２、マウスＳＡＡ３およびマウスＳＡＡ４の配列アラインメント。
【図９】マウスＳＡＡ１およびマウスＡＡ１の配列アラインメント。
【図１０】マウスＳＡＡ２およびマウスＡＡ２の配列アラインメント。
【図１１】マウスＳＡＡ３およびマウスＡＡ３の配列アラインメント。
【図１２】マウスＳＡＡ４およびマウスＡＡ４の配列アラインメント。
【図１３】マウスＡＡ１、マウスＡＡ２、マウスＡＡ３、マウスＡＡ４の配列アラインメント。
【図１４】マウスＡＡ１、マウスＡＡ２、マウスＡＡ３およびマウスＡＡ４の最後の７残基の配列アラインメント。
【図１５】マウスＳＡＡ１およびマウスＳＡＡ１の配列アラインメント。
【図１６】ヒトＡＡ１およびマウスＡＡ１の配列アラインメント。
【図１７】ヒトＳＡＡ１およびマウスＳＡＡ１断片の配列アラインメント。
【図１８】ヒトＳＡＡ１アルファ、ヒトＳＡＡ１ベータ、およびヒトＳＡＡ１ガンマの配列アラインメント。
【図１９】ヒトＳＡＡ２アルファおよびヒトＡＡ２ベータの配列アラインメント。
【図２０】ＳＡＡタンパク質の配列比較。２Ａ４、８Ｇ９および７Ｄ８を産生するのに使用したペプチド領域を破線で示す。シャーペイ配列の位置６７と６８の間に挿入した８アミノ酸を下線および矢印で示す。アライメントはＣＬＵＳＴＡＬＷによって実施。
【図２１】Ｖκ軽鎖の生殖細胞系配列。
【図２２】Ｖλ軽鎖の生殖細胞系配列。
【図２３】Ｖλ６  Ｗｉｌのアミノ酸配列。
【図２４】Ｇｌｕ５０−Ａｓｐ５１の位置を示すＶλ６  ＷｉｌのＸ線結晶。
【図２５】Ｇｌｕ８１−Ａｓｐ８２の位置を示すＶλ６  ＷｉｌのＸ線結晶。
【図２６】合成Ｖλ６  Ｗｉｌ原線維へのＥｌａｎ  ｍＡｂｓの結合動態。ｍＡｂ  ２Ａ４、７Ｄ８および８Ｇ９の６．６ｎＭにおける固定化Ｖλ６  Ｗｉｌ原線維への相互作用のＢＩＡｃｏｒｅ測定。各相互作用について計算したＫＤは〜１ｎＭであった。
【図２７】合成Ｖλ６  Ｗｉｌ原線維へのｍＡｂ  ７Ｄ８の濃度依存性結合動態。固定化Ｖλ６  Ｗｉｌ原線維への濃度６．６〜３３．３ｎＭにおける抗体相互作用をＢＩＡｃｏｒｅによって測定した。
【図２８】ｐ３９およびｐ４１ペプチドの存在下でのｍＡｂ  ７Ｄ８の合成Ｖλ６  Ｗｉｌ原線維への結合動態。６．６ｎＭにおけるｍＡｂ  ７Ｄ８の固定化Ｖλ６  Ｗｉｌ原線維との相互作用は、１または２０μｇ／ｍＬでのｐ３９およびｐ４１ペプチドの存在下で、ＢＩＡｃｏｒｅによって測定した。
【図２９】モノクローナル抗体のＡＬλ組織アミロイド沈着物との反応性。
【図３０】ヒトＡＬλアミロイドーマを持つマウスにおける１２５Ｉ標識ｍＡｂ  ７Ｄ８の生体内分布。
【図３１】培養物上清の抗ＡＡとマウス由来ＡＡ原線維との相互作用。マウスＡＡ  ＡＥＦを結合するｍＡｂ培養物上清の結果。上パネルおよび下パネルは、第１および第２の培養液流体回収物それぞれのデータである。
【図３２】プロテインＡ精製２Ａ４、８Ｇ９および７Ｄ８  ｍＡｂのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析。
【図３３】精製ｍＡｂｓの免疫化ペプチド（ｐ＃３９）および対照ペプチド（ｐ＃４１）への結合。
【図３４】マウスＡＡアミロイド抽出物（ＡＥＦ）への結合。
【図３５】精製ｍＡｂｓのヒト腎ＡＡアミロイド抽出物への結合。
【図３６Ａ】マウス２Ａ４、７Ｄ８、および８Ｇ９軽鎖および重鎖可変領域の配列（図３６Ａ）；ヒト化２Ａ４／８Ｇ９および７Ｄ８軽鎖可変領域の配列（図３６Ｂ〜３６Ｃ）；アクセプタフレームワークとして使用したヒト軽鎖可変領域の配列（図３６Ｄ）；アクセプタフレームワークとして使用したヒト化２Ａ４／７Ｄ８／８Ｇ９重鎖可変領域およびヒト重鎖可変領域の配列（図３６Ｅ）。下線、ＣＤＲ；二重下線、リーダー配列；小文字、復帰変異。
【図３６Ｂ】マウス２Ａ４、７Ｄ８、および８Ｇ９軽鎖および重鎖可変領域の配列（図３６Ａ）；ヒト化２Ａ４／８Ｇ９および７Ｄ８軽鎖可変領域の配列（図３６Ｂ〜３６Ｃ）；アクセプタフレームワークとして使用したヒト軽鎖可変領域の配列（図３６Ｄ）；アクセプタフレームワークとして使用したヒト化２Ａ４／７Ｄ８／８Ｇ９重鎖可変領域およびヒト重鎖可変領域の配列（図３６Ｅ）。下線、ＣＤＲ；二重下線、リーダー配列；小文字、復帰変異。
【図３６Ｃ】マウス２Ａ４、７Ｄ８、および８Ｇ９軽鎖および重鎖可変領域の配列（図３６Ａ）；ヒト化２Ａ４／８Ｇ９および７Ｄ８軽鎖可変領域の配列（図３６Ｂ〜３６Ｃ）；アクセプタフレームワークとして使用したヒト軽鎖可変領域の配列（図３６Ｄ）；アクセプタフレームワークとして使用したヒト化２Ａ４／７Ｄ８／８Ｇ９重鎖可変領域およびヒト重鎖可変領域の配列（図３６Ｅ）。下線、ＣＤＲ；二重下線、リーダー配列；小文字、復帰変異。
【図３６Ｄ】マウス２Ａ４、７Ｄ８、および８Ｇ９軽鎖および重鎖可変領域の配列（図３６Ａ）；ヒト化２Ａ４／８Ｇ９および７Ｄ８軽鎖可変領域の配列（図３６Ｂ〜３６Ｃ）；アクセプタフレームワークとして使用したヒト軽鎖可変領域の配列（図３６Ｄ）；アクセプタフレームワークとして使用したヒト化２Ａ４／７Ｄ８／８Ｇ９重鎖可変領域およびヒト重鎖可変領域の配列（図３６Ｅ）。下線、ＣＤＲ；二重下線、リーダー配列；小文字、復帰変異。
【図３６Ｅ】マウス２Ａ４、７Ｄ８、および８Ｇ９軽鎖および重鎖可変領域の配列（図３６Ａ）；ヒト化２Ａ４／８Ｇ９および７Ｄ８軽鎖可変領域の配列（図３６Ｂ〜３６Ｃ）；アクセプタフレームワークとして使用したヒト軽鎖可変領域の配列（図３６Ｄ）；アクセプタフレームワークとして使用したヒト化２Ａ４／７Ｄ８／８Ｇ９重鎖可変領域およびヒト重鎖可変領域の配列（図３６Ｅ）。下線、ＣＤＲ；二重下線、リーダー配列；小文字、復帰変異。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
発明の詳細な説明
本発明は、凝集アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２（式中、Ｘ１およびＸ２は任意のアミノ酸である）を含むエピトープに特異的に結合する単離抗体、またはその抗原結合断片を提供する。
【００４１】
本発明の代表的な抗体は、（ａ）Ｘ１ＥＤＸ２を含むエピトープへの結合で２Ａ４、７Ｄ８、もしくは８Ｇ９抗体と競合する；（ｂ）２Ａ４、７Ｄ８、もしくは８Ｇ９抗体と同じＸ１ＥＤＸ２を含むエピトープに結合する；（ｃ）２Ａ４、７Ｄ８、もしくは８Ｇ９抗体の抗原結合ドメインを含む；または（ｄ）２Ａ４、７Ｄ８、もしくは８Ｇ９抗体の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む；抗体またはその断片も含む。
【００４２】
本発明は、（ａ）２Ａ４、７Ｄ８、もしくは８Ｇ９抗体に由来する抗体の軽鎖可変領域；または（ｂ）２Ａ４、７Ｄ８、もしくは８Ｇ９抗体に由来する抗体の重鎖可変領域；を含む単離抗体可変領域も提供する。
【００４３】
本発明は、（ａ）７Ｄ８、２Ａ４、もしくは８Ｇ９抗体の軽鎖または重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列；（ｂ）軽鎖または重鎖可変領域をコードする７Ｄ８、２Ａ４、もしくは８Ｇ９抗体のヌクレオチド配列と同一であるヌクレオチド配列；（ｃ）（ａ）もしくは（ｂ）のヌクレオチド配列と実質的に同じであるヌクレオチド配列；または（ｄ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）もしくは（ｂ）のヌクレオチド配列の相補体であるヌクレオチド配列を有する核酸に特異的にハイブリダイズする核酸；を含む抗体軽鎖可変領域または重鎖可変領域をコードする単離核酸も提供する。
【００４４】
本発明の抗体および抗原結合断片を発現する細胞も提供される。本発明は、本発明の核酸を発現する細胞をさらに提供する。
【００４５】
本発明は、本発明の抗体および抗原結合断片を使用してアミロイド疾患を処置する方法およびアミロイド疾患を予防する方法も含む。現在、ＡＡアミロイドーシスおよびＡＬアミロイドーシスを含むアミロイド疾患のいずれにも、具体的なアミロイドに対する治療法は承認されていない。Ｇｉｌｌｍｏｒｅ  Ｊ．Ｄ．ら、Ｌａｎｃｅｔ  ３５８：２４−９（２００１）を参照。基礎または関連した疾患状態がある場合には、療法は、基礎疾患を治療することによって、アミロイド形成性タンパク質の産生を低下させることを目的としている。たとえば、ＡＡアミロイドーシスの現在の治療ストラテジは、基礎炎症を標的として、ＡｐｏＳＳＡレベルを１０ｍｇ／ｌ未満に低下させることである。現在利用されている療法は、化学療法（クロランブシルおよびＭＴＸ）、免疫抑制剤（アザチオプリン）、抗炎症薬（コルヒチン）およびＴＮＦ阻害薬を含む。本発明は、アミロイドーシス、たとえばＡＡアミロイドーシスおよびＡＬアミロイドーシスを含む、いくつかのアミロイド疾患を処置するための製薬組成物および方法を提供する。一態様により、本発明は、アミロイド構成成分に対する患者の免疫応答を誘導するのに有効である薬剤を活性成分として含む製薬組成物を含む。薬剤は、アミロイドタンパク質に由来するアミノ酸配列Ｘ１ＥＤＸ２から成る断片を含むペプチドであることが可能である。薬剤は、Ｘ１ＥＤＸ２を含むエピトープに特異的に結合する抗体であることが可能である。他の実施形態において、薬剤は抗体の抗原結合断片であることが可能である。このような組成物は一般に賦形剤も含み、好ましい実施形態では、アジュバントも含み得る。さらに好ましい実施形態において、アジュバントはたとえば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、ＭＰＬ（商標）、ＱＳ−２１（ＳＴＩＭＵＬＯＮ（商標））またはフロイント不完全アジュバントを含む。関連する実施形態により、このような製薬組成物は、患者における２つ以上のアミロイド構成成分に対して免疫応答を誘導するのに有効である複数の薬剤を含み得る。
【００４６】
関連実施形態において、薬剤は、凝集アミロイドタンパク質、たとえば原線維ペプチドまたはタンパク質アミロイド構成成分に対する免疫応答を生じるのに有効である。好ましくは、このような原線維ペプチドまたはタンパク質は、本明細書に記載するようなある形態のアミロイド疾患に関連することが公知である原線維前駆体タンパク質に由来する。このような前駆体タンパク質は、これに限定されるわけではないが、血清アミロイドＡタンパク質（ＡｐｏＳＳＡ）、免疫グロブリン軽鎖、免疫グロブリン重鎖、ＡｐｏＡＩ、トランスサイレチン、リゾチーム、フィブロゲンα鎖、ゲルソリン、シスタチンＣ、アミロイドβタンパク質前駆体（β−ＡＰＰ）、ベータ２ミクログロブリン、プリオン前駆体タンパク質（ＰｒＰ）、心房性ナトリウム利尿因子、ケラチン、膵島アミロイドポリペプチド、ペプチドホルモン、およびシヌクレインを含む。このような前駆体は、このような前駆体のミュータントタンパク質、タンパク質断片およびタンパク質分解ペプチドも含む。好ましい実施形態において、薬剤は、原線維前駆体タンパク質に関して、原線維タンパク質またはペプチドによって形成されたネオエピトープに対する免疫応答を誘導するのに有効である。すなわち本明細書でさらに詳細に記載するように、多くの原線維形成ペプチドまたはタンパク質は、上で挙げたようなこのような前駆体タンパク質の断片である。このような断片がたとえばタンパク質分解切断によって形成されるとき、前駆体に存在せずに、したがって断片が前駆体タンパク質の一部であるときに免疫系が免疫学的に利用できないエピトープが出現し得る。このようなエピトープに対する薬剤は、それらが患者において自己免疫応答を誘導しにくいことがあるため、好ましい治療剤であり得る。好ましくはこのような薬剤は、アミロイドタンパク質の非病的形態と比べて、アミロイドタンパク質の病的形態、たとえば凝集アミロイドタンパク質に対する免疫応答を優先的に生じる。
【００４７】
関連する実施形態により、本発明の製薬組成物は、これに限定されるわけではないが、以下の凝集（たとえば原線維）ペプチドまたはタンパク質：ＡＡ、ＡＬ、ＡＴＴＲ、ＡＡｐｏＡ１、Ａｌｙｓ、Ａｇｅｌ、Ａｃｙｓ、Ａβ、ＡＢ２Ｍ、ＡＳｃｒ、Ａｃａｌ、ＡＩＡＰＰおよびシヌクレイン−ＮＡＣ断片を含む群より選択されるものなどの、アミロイド凝集体に向けられた薬剤を含む。これらのペプチドのフルネームおよび組成は本明細書に記載する。このようなペプチドは本明細書に記載するように、当分野で周知の方法に従って作製できる。
【００４８】
方法は、アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２を含むエピトープに特異的に結合する有効投薬量の抗体を患者に投与するステップを含み、式中、Ｘ１は、Ｈ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、Ａまたはこのようなアミロイドタンパク質でＥＤの直前に先行する任意の他のアミノ酸残基であり；式中、Ｘ２は、Ｔ、Ｓ、Ｅ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、Ｆ、Ａまたはこのようなアミロイドタンパク質でＥＤの直後に続く任意の他のアミノ酸残基である。いくつかの方法において、患者は、アミノ酸配列ＥＤを含む凝集アミロイドタンパク質に関連するアミロイドーシスに罹患している。いくつかの抗体は、このようなＸ１ＥＤＸ２から成るエピトープに特異的に結合する。いくつかの抗体において、Ｘ１は、Ｈ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、またはＡであり、Ｘ２は、Ｔ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、ＦまたはＡである。いくつかのこのような抗体において、Ｘ１がＨであるとき、Ｘ２は、ＴまたはＡである；Ｘ１がＡであるとき、Ｘ２は、Ｓ、Ｔ、ＥまたはＶである；Ｘ１がＴであるとき、Ｘ２はＥである；Ｘ１がＦであるとき、Ｘ２はＤである；Ｘ１がＳであるとき、Ｘ２は、Ｅ、ＦまたはＡである；Ｘ１がＰであるとき、Ｘ２は、Ｅ、ＩまたはＦである。いくつかの抗体において、Ｘ１がＡならば、Ｘ２はＶでないという条件で、Ｘ１は、Ｈ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、またはＡであり、Ｘ２は、Ｔ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、ＦまたはＡである。いくつかの抗体において、Ｘ１がＡであるとき、Ｘ２はＳ、ＴまたはＥである。
【００４９】
いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＧＨＥＤＴ、（配列番号３）、ＨＥＤＴ、（配列番号１２）、ＡＥＤＳ、（配列番号１３）、ＡＥＤＴ、（配列番号１４）、ＨＥＤＡ、（配列番号１５）、ＴＥＤＥ、（配列番号１６）、ＦＥＤＤ、（配列番号１７）、ＳＥＤＥ、（配列番号１８）、ＡＥＤＥ、（配列番号１９）、ＰＥＤＥ、（配列番号２０）、ＰＥＤＩ、（配列番号２１）、ＰＥＤＦ、（配列番号２２）、ＡＥＤＶ、（配列番号２３）、ＳＥＤＦ、（配列番号２４）、またはＳＥＤＡ、（配列番号２５）を含むエピトープを特異的に結合する。
【００５０】
いくつかの抗体は、ＧＨＥＤＴ、（配列番号３）、ＨＥＤＴ、（配列番号１２）、ＡＥＤＳ、（配列番号１３）、ＡＥＤＴ、（配列番号１４）、ＨＥＤＡ、（配列番号１５）、ＴＥＤＥ、（配列番号１６）、ＦＥＤＤ、（配列番号１７）、ＳＥＤＥ、（配列番号１８）、ＡＥＤＥ、（配列番号１９）、ＰＥＤＥ、（配列番号２０）、ＰＥＤＩ、（配列番号２１）、ＰＥＤＦ、（配列番号２２）、ＳＥＤＦ、（配列番号２４）、またはＳＥＤＡ、（配列番号２５）から成る群より選択されるアミノ酸配列を含むペプチドに特異的に結合する。いくつかの抗体は、ＧＨＥＤＴ、（配列番号３、ＨＥＤＴ、（配列番号１２）、ＡＥＤＳ、（配列番号１３）、ＡＥＤＴ、（配列番号１４）、ＨＥＤＡ、（配列番号１５）、およびＴＥＤＥ、（配列番号１６）から成る群より選択されるアミノ酸配列を含むペプチドに特異的に結合する。
【００５１】
いくつかの抗体は、ＡＡの残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する。いくつかの抗体は、ＡＡの残基７１〜７５内のエピトープに特異的に結合する。いくつかの抗体は、ＧＨＥＤＴ、（配列番号３）を含むペプチドに対して産生される。
【００５２】
いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＰＥＤＳ、（配列番号２６）、ＰＥＤＬ、（配列番号２７）、ＴＥＤＶ、（配列番号２８）、ＡＥＤＥ、（配列番号１９）、ＳＥＤＩ、（配列番号２９）、およびＴＥＤＴ、（配列番号３０）を含むペプチドに特異的に結合する。いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＬＥＤＧ、（配列番号：３１）、ＡＥＤＭ、（配列番号３２）、ＨＥＤＳ、（配列番号３３）、ＣＥＤＤ、（配列番号３４）、ＱＥＤＳ、（配列番号３５）、ＲＥＤＳ、（配列番号３６）、ＴＥＤＧ、（配列番号３７）、ＱＥＤＲ、（配列番号３８）、ＴＥＤＬ、（配列番号３９）、ＰＥＤＮ、（配列番号４０）、ＥＥＤＰ、（配列番号４１）、ＬＥＤＬ、（配列番号４２）、ＫＥＤＡ、（配列番号４３）、ＳＥＤＣ、（配列番号４４）、ＥＥＤＤ、（配列番号４５）、ＳＥＤＫ、（配列番号４６）、ＤＥＤＤ、（配列番号４７）、ＤＥＤＧ、（配列番号４８）、ＬＥＤＥ、（配列番号４９）、ＧＥＤＡ、（配列番号５０）、ＶＥＤＦ、（配列番号５１）、ＹＥＤＥ、（配列番号５２）、ＩＥＤＬ、（配列番号５３）、ＷＥＤＹ、（配列番号５４）、ＤＥＤＷ、（配列番号５５）、ＳＥＤＬ、（配列番号５６）、ＹＥＤＱ、（配列番号５７）、ＬＥＤＷ、（配列番号５８）、ＹＥＤＲ、（配列番号５９）、およびＰＥＤＫ、（配列番号６０）を含むペプチドに特異的に結合する。
【００５３】
いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＡＥＤＶ、（配列番号：２３）を含むペプチドに特異的に結合する。いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＳＥＤＦ、（配列番号：２４）またはＰＥＤＦ、（配列番号２２）を含むペプチドに特異的に結合する。いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＡＥＤＳ、（配列番号：１３）を含むペプチドに特異的に結合する。いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＰＥＤＩ（配列番号２１）、ＡＥＤＶ、（配列番号２３）、ＳＥＤＦ、（配列番号２４）、ＳＥＤＡ、（配列番号２５）、ＳＥＤＥ、（配列番号１８）、ＡＥＤＥ、（配列番号１９）、およびＰＥＤＥ、（配列番号２０）を含むペプチドに特異的に結合する。いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＴＥＤＥ、（配列番号１６）を含むペプチドに結合する。
【００５４】
いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＡＥＤＶ、（配列番号：２３）を含むペプチドに特異的に結合する。いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＳＥＤＦ、（配列番号：２４）またはＰＥＤＦ、（配列番号２２）を含むペプチドに特異的に結合する。いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＡＥＤＳ、（配列番号：１３）を含むペプチドに特異的に結合する。いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＰＥＤＩ（配列番号２１）、ＡＥＤＶ、（配列番号２３）、ＳＥＤＦ、（配列番号２４）、ＳＥＤＡ、（配列番号２５）、ＳＥＤＥ、（配列番号１８）、ＡＥＤＥ、（配列番号１９）、およびＰＥＤＥ、（配列番号２０）を含むペプチドに特異的に結合する。いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＴＥＤＥ、（配列番号１６）を含むペプチドに結合する。
【００５５】
上述の抗体のいずれも、アミロイドタンパク質、たとえばアミノ酸配列ＥＤを含むアミロイドタンパク質の沈着を特徴とする疾患の処置または予防実施のために、上述の方法で投与することができる。いくつかの方法において、アミロイドタンパク質がアミノ酸配列ＡＥＤＶ、（配列番号２３）を含む場合、抗体はアルツハイマー病または軽度認知障害の処置または予防実施のために投与されない。アミロイドタンパク質は、血清アミロイドＡタンパク質、免疫グロブリン軽鎖タンパク質、たとえばＶλ６  ＷｉｌもしくはＶκ、ヒト膵島アミロイド前駆体ポリペプチド（ＩＡＰＰ）、ベータアミロイドペプチド、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、またはＡｐｏＡ１のいずれでも可能である。
【００５６】
場合により、患者はヒトである。場合により、抗体は、残基が配列番号４、５、６、７、８、９、１０、または１１から成るペプチドに特異的に結合する。場合により、抗体は（配列番号２）の残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する。場合により、抗体はヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。場合により、ヒト抗体は、ヒトアイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＩｇＧ２またはＩｇＧ３である。場合により、ヒト化抗体は、ヒトアイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＩｇＧ２またはＩｇＧ３のヒト化抗体である。場合により、キメラ抗体は、ヒトアイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＩｇＧ２またはＩｇＧ３のキメラ抗体である。場合により、抗体はマウス抗体である。場合により、抗体はポリクローナル抗体である。場合により、抗体はモノクローナル抗体である。
【００５７】
いくつかの処置方法において、抗体は軽鎖および重鎖の同じ対を２コピー含む。他の方法において、抗体は、Ａβのエピトープに特異的に結合する第１の軽鎖および重鎖の対ならびに小グリア細胞のＦｃ受容体に特異的に結合する第２の軽鎖および重鎖の対を含む２重特異性抗体である。他の方法において、抗体の鎖は異種ポリペプチドに融合する。
【００５８】
いくつかの処置方法において、抗体の投薬量は、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ患者の体重である。他の方法において、抗体の投薬量は、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ患者の体重である。
【００５９】
いくつかの処置方法において、抗体は担体と共に製薬組成物として投与される。他の方法において、抗体は、ＡＡペプチドによって免疫化されたヒトからのＢ細胞から調製されたＡＡに対するヒト抗体である。場合により、ＡＡペプチドによって免疫化されたヒトは患者である。いくつかの方法において、抗体は、腹腔内に、経口的に、鼻内に、皮下に、筋肉内に、局所的にまたは静脈内に投与される。
【００６０】
いくつかの処置方法において、抗体は少なくとも１つの抗体鎖をコードするポリヌクレオチドを患者に投与することによって投与され、ポリヌクレオチドが発現されて患者内で抗体を産生する。場合により、ポリヌクレオチドは抗体の重鎖および軽鎖をコードして、ポリヌクレオチドが発現されて患者内で重鎖および軽鎖を産生する。
【００６１】
上の処置方法のいくつかは、ＡＡの異なるエピトープに結合する少なくとも１つの他の抗体の有効投薬量を投与するステップをさらに含む。上の処置方法のいくつかは、患者を患者の血液中の投与抗体のレベルについて監視するステップをさらに含む。他の方法において、抗体は少なくとも６ヶ月の期間にわたって複数回の投薬量で投与される。他の方法において、抗体は持続放出組成物として投与される。
【００６２】
本発明は、ＡＡアミロイドーシスに罹りやすい患者でのＡＡアミロイドーシスの予防を達成する方法をさらに提供する。方法は、ＡＡの残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する抗体の有効投薬量を患者に投与するステップを含む。場合により、患者はヒトである。場合により、抗体は、残基が配列番号４、５、６、７、８、９、１０、または１１から成るペプチドに特異的に結合する。場合により、抗体は（配列番号２）の残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する。いくつかの方法において、患者は、関節リウマチ、若年性慢性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬、乾癬性関節症、ライター症候群、成人スティル病、ベーチェット症候群、クローン病、らい、結核、気管支拡張症、褥瘡性潰瘍、慢性腎盂腎炎、骨髄炎、ウィップル病、ホジキンリンパ腫、腎臓癌、消化管、肺および尿生殖路の癌、基底細胞癌、ヘアリー細胞白血病、家族性地中海熱、およびキャッスルマン病から成る群より選択される基礎アミロイド疾患に罹患する。
【００６３】
本発明は、ＡＡの残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合するヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体をさらに提供する。場合により、ヒト化抗体は、ＡＡの残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する。場合により、ヒト化抗体はヒト化バージョン７Ｄ８抗体（ＡＴＣＣアクセション番号      ）である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン７Ｄ２９抗体である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン７Ｄ１９抗体である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン７Ｄ４７抗体である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン７Ｄ３９抗体である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン７Ｄ６６抗体である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン８Ｇ９抗体である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン８Ｇ３抗体である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン８Ｇ４抗体である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン８Ｇ５１抗体である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン８Ｇ２２抗体である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン８Ｇ３０抗体である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン８Ｇ４６抗体である。場合により、ヒト化抗体はヒト化バージョン２Ａ４抗体（ＡＴＣＣアクセション番号      ）である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン２Ａ２０抗体である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン２Ａ４４抗体である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン２Ａ７７抗体である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン２Ａ１３抗体である。場合により、ヒト化抗体は、ヒト化バージョン２Ａ１４抗体である。
【００６４】
本発明は製薬組成物をさらに提供する。製薬組成物は、ＡＡの残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する抗体、および製薬的に許容される担体を含む。いくつかの製薬組成物は、ＡＡの残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合するヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体、および製薬的に許容される担体を含む。他の製薬組成物は、ＡＡの残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する抗体および製薬的に許容される担体を含み、ここで抗体のアイソタイプはヒトＩｇＧ１であり、および製薬的に許容される担体である。いくつかの製薬組成物において、抗体のアイソタイプはヒトＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である。いくつかの製薬組成物において、抗体はヒトである。いくつかの製薬組成物において、抗体はヒト化である。いくつかの製薬組成物において、抗体はキメラである。いくつかの製薬組成物において、抗体はポリクローナル抗体である。いくつかの製薬組成物において、抗体はモノクローナル抗体である。
【００６５】
いくつかの製薬組成物において、抗体は軽鎖および重鎖の同じ対を２コピー含む。いくつかの製薬組成物において、抗体は、ＡＡのエピトープに特異的に結合する第１の軽鎖および重鎖の対ならびに小グリア細胞のＦｃ受容体に特異的に結合する第２の軽鎖および重鎖の対を含む２重特異性抗体である。いくつかの製薬組成物において、抗体の鎖は異種ポリペプチドに融合される。いくつかの製薬組成物において、担体は、非経口投与のための生理学的に許容される希釈剤である。いくつかの製薬組成物は、腹腔内に、経口的に、鼻内に、皮下に、筋肉内に、局所的にまたは静脈内に投与されるのに適合される。いくつかの製薬組成物は、少なくとも６ヶ月の期間にわたって複数回の投薬量で投与されるのに適合される。いくつかの製薬組成物は、持続放出組成物として投与されるのに適合される。いくつかの製薬組成物は、ＡＡの異なるエピトープに結合する少なくとも１つの他の抗体をさらに含む。
【００６６】
本発明は、患者のＡＡアミロイドーシスを処置する方法を提供する。方法は、ＡＡ７０〜７６に対する抗体を含む免疫応答を誘導するのに有効な投薬計画において、ＡＡ７０〜７６に対する抗体を含む免疫応答を誘導するのに有効な投薬計画において、ＡＡ７０〜７６に対する免疫応答を誘導する薬剤を投与するステップを含む。いくつかの方法において、患者はヒトである。場合により、薬剤は、ＡＡ７０〜７６またはその少なくとも３つの隣接残基のサブ断片を含み、ＡＡペプチドからの２０未満の隣接アミノ酸を有する。場合により、薬剤は、配列番号４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択される配列を有するペプチドおよびその少なくとも３つの隣接残基のサブ断片であり、ＡＡペプチドからの２０未満のアミノ酸を有する。場合により、薬剤はそのＮおよびＣ末端にて第１および第２の異種ポリペプチドに結合される。場合により、薬剤はそのＮ末端において異種ポリペプチドに、そのＣ末端においてＮ末端セグメントの少なくとも１つのさらなるコピーに結合される。いくつかの方法において、異種ポリペプチドは、異種ポリペプチドに対するＴ細胞応答を、それによりＡＡに対するＢ細胞応答を誘導する。いくつかの方法において、ポリペプチドはＡＡの少なくとも１つのさらなるコピーを含む。場合により、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端までのＡＡ、ＡＡの複数のさらなるコピーおよび異種アミノ酸セグメントを含む。
【００６７】
いくつかの処置方法において、ポリペプチドは、Ｎ末端セグメントに対する免疫応答を向上させるアジュバントと共に投与される。場合により、アジュバントおよびポリペプチドは組成物として共に投与される。場合により、アジュバントはポリペプチドの前に投与される。場合により、アジュバントはポリペプチドの後に投与される。いくつかの方法において、アジュバントはミョウバンである。いくつかの方法において、アジュバントはＭＰＬである。いくつかの方法において、アジュバントはＱＳ−２１である。いくつかの方法において、アジュバントは不完全フロイントアジュバントである。いくつかの方法において、免疫応答は、ＡＡペプチドにＭＨＣ  ＩまたはＭＨＣ  ＩＩ複合体の成分として結合するＴ細胞を含む。
【００６８】
本発明は、患者のＡＡアミロイドーシスの予防を達成する方法を提供する。方法は、ＡＡ７０〜７６に対する抗体を含む免疫応答を誘導するのに有効な投薬計画において、ＡＡ７０〜７６に対する抗体を含む免疫応答を誘導するのに有効な投薬計画において、ＡＡ７０〜７６に対する免疫応答を誘導する薬剤を投与するステップを含む。いくつかの方法において、患者はヒトである。いくつかの方法において、患者は無症候性である。いくつかの方法において、患者は、関節リウマチ、若年性慢性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬、乾癬性関節症、ライター症候群、成人スティル病、ベーチェット症候群、クローン病、らい、結核、気管支拡張症、褥瘡性潰瘍、慢性腎盂腎炎、骨髄炎、ウィップル病、ホジキンリンパ腫、腎臓癌、消化管、肺および尿生殖路の癌、基底細胞癌、ヘアリー細胞白血病、家族性地中海熱、およびキャッスルマン病から成る群より選択される基礎アミロイド疾患に罹患する。
【００６９】
予防を達成するいくつかの方法において、薬剤はＡＡ７０〜７６またはその少なくとも３つの隣接残基のサブ断片を含み、ＡＡペプチドからの２０未満の隣接アミノ酸を有する。場合により、薬剤は、配列番号４、５、６、７、８、９、１０および１１から成る群より選択される配列を有するペプチドおよびその少なくとも３つの隣接残基のサブ断片であり、ＡＡペプチドからの２０未満のアミノ酸を有する。場合により、薬剤はそのＮおよびＣ末端にて第１および第２の異種ポリペプチドに結合される。場合により、薬剤はそのＮ末端において異種ポリペプチドに、そのＣ末端においてＮ末端セグメントの少なくとも１つのさらなるコピーに結合される。いくつかの方法において、異種ポリペプチドは、異種ポリペプチドに対するＴ細胞応答を、それによりＡＡに対するＢ細胞応答を誘導する。いくつかの方法において、ポリペプチドはＡＡの少なくとも１つのさらなるコピーを含む。場合により、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、ＡＡ、ＡＡの複数のさらなるコピーおよび異種アミノ酸セグメントを含む。
【００７０】
本発明は製薬組成物をさらに提供する。製薬組成物は、ＡＡの残基７０で開始して、ＡＡの残基７６で終了する残基から成るＡＡ断片を含む。場合により、ＡＡ断片はそのＣ末端で異種ポリペプチドに結合される。場合により、ＡＡ断片はそのＮ末端で異種ポリペプチドに結合される。場合により、ＡＡ断片はそのＮおよびＣ末端にて第１および第２の異種ポリペプチドに結合される。場合により、ＡＡ断片はそのＮ末端において異種ポリペプチドに、そのＣ末端においてＮ末端セグメントの少なくとも１つのさらなるコピーに結合される。場合により、ポリペプチドはＮ末端セグメントの少なくとも１つのさらなるコピーをさらに含む。場合により、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、ＡＡ、Ｎ末端セグメントの複数のさらなるコピー、および異種アミノ酸セグメントを含む。いくつかの製薬組成物において、異種ポリペプチドは、異種ポリペプチドに対するＴ細胞応答を、それによりＮ末端セグメントに対するＢ細胞応答を誘導する。
【００７１】
いくつかの製薬組成物は、ＡＡに対する免疫応答を向上させるアジュバントをさらに含む。場合により、アジュバントはミョウバンである。場合により、アジュバントはＭＰＬである。場合により、アジュバントはＱＳ−２１である。場合により、アジュバントは不完全フロイントアジュバントである。場合により、アジュバントはＧＭ−ＣＳＦをさらに含む。場合により、アジュバントはＭ−ＣＳＦである。場合により、組成物は１０マイクログラムを超えるポリペプチドを含む。
【００７２】
本発明は、患者のＡＡアミロイドーシスを処置する方法を提供する。方法は、患者のアミロイド沈着物のペプチド構成成分に対する免疫応答を誘導するのに有効な薬剤、および基礎疾患を処置する別の薬剤を投与するステップ、ならびにそれにより患者のＡＡアミロイドーシスを処置するステップを含む。いくつかの方法において、基礎疾患は、関節リウマチ、若年性慢性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬、乾癬性関節症、ライター症候群、成人スティル病、ベーチェット症候群、クローン病、らい、結核、気管支拡張症、褥瘡性潰瘍、慢性腎盂腎炎、骨髄炎、ウィップル病、ホジキンリンパ腫、腎臓癌、消化管、肺および尿生殖路の癌、基底細胞癌、ヘアリー細胞白血病、家族性地中海熱、およびキャッスルマン病から成る群より選択される。
【００７３】
本発明は、患者のＡＡアミロイドーシスの予防を達成する方法を提供する。方法は、患者のアミロイド沈着物のペプチド構成成分に対する免疫応答を誘導するのに有効な薬剤、および基礎疾患を処置する別の薬剤を投与するステップ、ならびにそれにより患者のＡＡアミロイドーシスを処置するステップを含む。いくつかの方法において、基礎疾患は、関節リウマチ、若年性慢性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬、乾癬性関節症、ライター症候群、成人スティル病、ベーチェット症候群、クローン病、らい、結核、気管支拡張症、褥瘡性潰瘍、慢性腎盂腎炎、骨髄炎、ウィップル病、ホジキンリンパ腫、腎臓癌、消化管、肺および尿生殖路の癌、基底細胞癌、ヘアリー細胞白血病、家族性地中海熱、およびキャッスルマン病から成る群より選択される。
【００７４】
本発明は、ＡＡアミロイドーシスを有する患者を処置することにおける活性について抗体をスクリーニングする方法を提供する。方法は、抗体をＡＡペプチドと接触させるステップと、抗体がＡＡに特異的に結合するか否かを決定するステップとを含み、特異的結合は、抗体がＡＡアミロイドーシスの処置に活性を有するという指標を与える。
【００７５】
本発明は、抗原と物理的に結合した生物学的実体を除去することにおける活性について抗体をスクリーニングする方法を提供する。方法は、抗原結合生物学的実体、抗体およびＦｃ受容体を持つ食細胞を培地中で混合するステップと；培地に残存する抗原結合生物学的実体の量を監視するステップとを含み、抗原結合生物学的実体の量の減少は、抗体が抗原に対して除去活性を有することを示す。いくつかの方法において、監視ステップは、培地に残存する抗原の量を監視する。いくつかの方法において、混合は、抗原結合生物学的実体を培地に添加することと、培地をＦｃ受容体を持つ食細胞と接触させることを含む。いくつかの方法において、抗原結合生物学的実体は組織試料として提供される。いくつかの方法において、抗原は生物学的実体である。いくつかの方法において、組織試料はアミロイド沈着物を含む。場合により、組織試料は、ＡＡアミロイドーシス病態を有する患者または哺乳動物からである。いくつかの方法において、抗原はＡＡである。いくつかの方法において、食細胞は小グリア細胞である。いくつかの方法において、組織試料は、癌性組織試料、ウイルス感染組織試料、炎症細胞を含む組織試料、非悪性異常細胞増殖、および異常細胞外基質を含む組織試料から成る群より選択される。
【００７６】
本発明は、患者のアミロイド沈着物を検出する方法を提供する。方法は、ＡＡのアミノ酸７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する抗体を患者に投与するステップと、患者における抗体の存在を検出するステップとを含む。場合により、抗体は標識される。場合により、抗体は常磁性標識によって標識される。場合により、標識抗体は核磁気共鳴によって検出される。場合により、標識抗体はＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像化によって検出される。いくつかの方法において、抗体には、患者におけるアミロイド沈着物への結合時にクリアランス応答を誘導する能力がない。
【００７７】
本発明は、診断キットを提供する。キットは、ＡＡの残基７０〜７６を持つエピトープに特異的に結合する抗体を含む。いくつかのキットは、患者におけるＡＡのアミロイド沈着物に関連する疾患のインビボ診断または監視のための抗体の使用について説明するラベルをさらに含む。いくつかの実施形態において、キットはＡＡの検出での抗体またはその抗原結合断片の使用についての説明書を含む。
【００７８】
本発明は：（ａ）検出可能な標識に結合されており、凝集アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２（式中、Ｘ１およびＸ２は任意のアミノ酸である）を含むエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与するステップと；（ｂ）結合した抗体または断片の存在または非存在がＡＡアミロイドーシスの診断を示す、結合した抗体またはその断片の存在または非存在を検出するステップと；を含む、被験体のアミロイドーシスを診断する方法をさらに提供する。
【００７９】
凝集アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２（式中、Ｘ１およびＸ２は任意のアミノ酸である）を含むエピトープに特異的に結合する抗体、またはその抗原結合断片を使用する、アミロイドーシスの処置または予防の方法が本明細書でさらに提供される。
【００８０】
本発明は、凝集アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２（式中、Ｘ１およびＸ２は任意のアミノ酸である）を含むエピトープに特異的に結合する抗体、またはその抗原結合断片を提供する。たとえばＸ１は、Ｈ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、Ａ、Ｌ、Ｃ、Ｑ、Ｒ、Ｅ、Ｋ、Ｄ、Ｇ、Ｖ、Ｙ、ＩもしくはＷ、たとえばＨ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、もしくはＡ、またはたとえばＨ、Ｔ、Ｆ、もしくはＡを含む。Ｘ２は、Ｔ、Ｓ、Ｅ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、Ｆ、Ｄ、Ａ、Ｇ、Ｍ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｃ、Ｋ、Ｙ、もしくはＱ、たとえばＴ、Ｓ、Ｅ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、Ｆ、Ｄ、もしくはＡ、またはたとえばＴ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、またはＡを含む。他の例において、Ｘ１は、Ｈ、Ｔ、またはＡであり、Ｘ２は、Ｔ、Ｓ、Ｅ、またはＡであり、たとえばＸ１は、ＨまたはＡであり、Ｘ２は、Ｔ、Ｓ、またはＡである。またさらなる例において、Ｘ１はＨであり、Ｈ２はＴもしくはＡである；またはＸ１はＡであり、Ｘ２はＳ、Ｔ、Ｅ、もしくはＶであり、たとえばＸ１はＡであり、Ｘ２はＳ、Ｔ、もしくはＥであり、またはＸ１はＴであり、Ｘ２はＥであり、またはＸ１はＦであり、Ｘ２はＤであり、またはＸ１はＳであり、Ｘ２はＥ、Ｆ、もしくはＡであり；またはＸ１はＰであり、Ｘ２はＥ、Ｉ、もしくはＦである。
【００８１】
詳細には、エピトープは、配列番号３〜配列番号２５、たとえば配列番号３、１２、１３、１４、１５、および１６に示されている配列のようなアミノ酸配列を含む。さらなる例は、配列番号４、５、７、８、および９、たとえば配列番号４を含む。エピトープに、たとえば配列番号３に結合する本発明の抗体は、２Ａ４、７Ｄ８、および８Ｇ９抗体を含む。
【００８２】
本発明の抗体が結合する凝集アミロイドタンパク質は、非単量体タンパク質である。このような凝集アミロイドタンパク質は、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、免疫グロブリン軽鎖タンパク質、ヒト膵島アミロイド前駆体ポリペプチド（ＩＡＰＰ）、ベータアミロイドペプチド、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、およびＡｐｏＡ１、たとえばＳＡＡを含む。
【００８３】
本発明は、（ａ）Ｘ１ＥＤＸ２を含むエピトープへの結合で２Ａ４、７Ｄ８、もしくは８Ｇ９抗体と競合する；（ｂ）２Ａ４、７Ｄ８、もしくは８Ｇ９抗体と同じＸ１ＥＤＸ２を含むエピトープに結合する；（ｃ）２Ａ４、７Ｄ８、もしくは８Ｇ９抗体の抗原結合ドメインを有する；または（ｄ）２Ａ４、７Ｄ８、もしくは８Ｇ９抗体の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む；抗体またはその抗原結合断片をさらに提供する。本発明は、２Ａ４、７Ｄ８、または８Ｇ９抗体のキメラバージョンまたはヒト化バージョンも提供する。
【００８４】
Ｘ１ＥＤＸ２を含むエピトープに特異的に結合する代表的な抗体は、２Ａ４、７Ｄ８、または８Ｇ９抗体の軽鎖の少なくとも１つ、２つ、または３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する抗体も含む。Ｘ１ＥＤＸ２を含むエピトープに特異的に結合する本発明の抗体は、２Ａ４、７Ｄ８、または８Ｇ９抗体の重鎖の少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを有する抗体も含む。
【００８５】
ＣＤＲは、当分野で公知の方法で同定することができる。たとえば、ＣＤＲを同定するナンバリング系は普通に使われる。Ｋａｂａｔ定義は配列可変性に基づいており、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は構造ループ領域の位置に基づいている。ＡｂＭ定義は、Ｋａｂａｔ手法とＣｈｏｔｈｉａ手法の折衷案である。軽鎖可変領域のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＡｂＭアルゴリズムに従って、位置２４および３４（ＣＤＲ１−Ｌ）、５０および５６（ＣＤＲ２−Ｌ）、ならびに８９および９７（ＣＤＲ３−Ｌ）の残基によって境界が示される。Ｋａｂａｔ定義により、重鎖可変領域のＣＤＲは、位置３１および３５Ｂ（ＣＤＲ１−Ｈ）、５０および６５（ＣＤＲ２−Ｈ）、ならびに９５および１０２（ＣＤＲ３−Ｈ）（Ｋａｂａｔによるナンバリング）の残基によって境界が示される。Ｃｈｏｔｈｉａ定義により、重鎖可変領域のＣＤＲは、位置２６および３２（ＣＤＲ１−Ｈ）、５２および５６（ＣＤＲ２−Ｈ）、ならびに９５および１０２（ＣＤＲ３−Ｈ）（Ｃｈｏｔｈｉａによるナンバリング）の残基によって境界が示される。ＡｂＭ定義により、重鎖可変領域のＣＤＲは、位置２６および３５Ｂ（ＣＤＲ１−Ｈ）、５０および５８（ＣＤＲ２−Ｈ）、ならびに９５および１０２（ＣＤＲ３−Ｈ）（Ｋａｂａｔによるナンバリング）の残基によって境界が示される。Ｍａｒｔｉｎら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：９２６８−９２７２；Ｍａｒｔｉｎら（１９９１）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２０３：１２１−１５３；Ｐｅｄｅｒｓｅｎら（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  １：１２６；およびＲｅｅｓら（１９９６）Ｉｎ  Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ  Ｍ．Ｊ．Ｅ．（ｅｄ．），Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，ｐｐ．１４１−１７２を参照。
【００８６】
本発明の抗体は、２Ａ４、７Ｄ８、または８Ｇ９抗体の可変領域に由来する可変領域を有する、凝集アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２（式中、Ｘ１およびＸ２は任意のアミノ酸である）を含むエピトープに特異的に結合する抗体をさらに含む。２Ａ４、７Ｄ８、または８Ｇ９抗体の可変領域を有する抗体も含まれる。
【００８７】
本発明の抗体は、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体、４量体抗体、４価抗体、多重特異性抗体ドメイン特異性抗体、ドメイン欠失抗体または融合タンパク質をさらに含む。
【００８８】
本発明の抗体の断片も提供される。本発明の断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片またはＳｃＦｖ断片であり得る。このような抗体またはその断片は、細胞毒性剤、放射線治療剤、または検出可能な標識と結合させることができる。
【００８９】
本発明は、（ａ）７Ｄ８、２Ａ４、もしくは８Ｇ９抗体軽鎖可変領域に由来する軽鎖可変領域；または（ｂ）７Ｄ８、２Ａ４、もしくは８Ｇ９抗体軽鎖可変領域に由来する重鎖可変領域；を含む単離抗体可変領域も提供する。７Ｄ８、２Ａ４、もしくは８Ｇ９抗体の軽鎖または重鎖可変領域を有する単離可変領域も提供される。単離抗体可変領域は、抗体産生においても有用である。
【００９０】
本発明は、（ａ）７Ｄ８、２Ａ４、もしくは８Ｇ９抗体の軽鎖または重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列；（ｂ）軽鎖または重鎖可変領域をコードする７Ｄ８、２Ａ４、もしくは８Ｇ９抗体のヌクレオチド配列と同一であるヌクレオチド配列；または（ｃ）（ａ）もしくは（ｂ）のヌクレオチド配列と実質的に同一、すなわち少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または９９％同一であるヌクレオチド配列；または（ｄ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件、たとえば６５℃にて０．１×ＳＣＣの最終洗浄条件の下で、（ａ）もしくは（ｂ）のヌクレオチド配列の相補体であるヌクレオチド配列を有する核酸に特異的にハイブリダイズする核酸；を有する抗体軽鎖可変領域または重鎖可変領域をコードする単離核酸も提供する。
【００９１】
本発明は、本発明の抗体または核酸を発現する細胞または細胞株もさらに提供する。代表的な宿主細胞は、哺乳動物およびヒト細胞、たとえばＣＨＯ細胞、ＨＥＫ−２９３細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＶ−１細胞、およびＣＯＳ細胞を含む。異種構築物の宿主細胞中への形質転換の後に安定な細胞株を産生する方法は、当分野で公知である。代表的な非哺乳動物宿主細胞は、昆虫細胞を含む（Ｐｏｔｔｅｒら（１９９３）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０（２−３）：１０３−１１２）。抗体は、トランスジェニック動物（Ｈｏｕｄｅｂｉｎｅ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３（６）：６２５−６２９）およびトランスジェニック植物（Ｓｃｈｉｌｌｂｅｒｇら（２００３）Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ．Ｓｃｉ．６０（３）：４３３−４５）においても産生され得る。
【００９２】
本発明は、Ｘ１ＥＤＸ２を含むアミロイドタンパク質の免疫原性断片を使用する、関連するアミロイドーシスの処置または予防の実施の方法も提供し、式中、Ｘ１は、Ｈ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、Ａまたはこのようなアミロイドタンパク質でＥＤの直前に先行する任意の他のアミノ酸残基であり；式中、Ｘ２は、Ｔ、Ｓ、Ｅ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、Ｆ、Ａまたはこのようなアミロイドタンパク質でＥＤの直後に続く任意の他のアミノ酸残基である。特定の理論に縛られたくはないが、Ｘ１ＥＤＸ２を含むエピトープは、アミロイドタンパク質が凝集する、または原線維形成を受ける、または他の方法で原線維構造になるときに、より大型の前駆体タンパク質からの切断、または立体配座変化のどちらかによって露出され得ることが考えられる。たとえばＡＡアミロイドーシスの処置または予防の代表的な方法は、ＡＡ７０〜７６断片またはその免疫原性断片の投与を含む。本発明は、凝集アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２と反応性である抗体を使用する、アミロイドタンパク質の沈着に関連するアミロイドーシスの処置または予防の実施の方法も提供し、式中、Ｘ１は、Ｈ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、Ａまたはこのような凝集アミロイドタンパク質でＥＤの直前に先行する任意の他のアミノ酸残基であり；式中、Ｘ２は、Ｔ、Ｓ、Ｅ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、Ｆ、Ａまたはこのような凝集アミロイドタンパク質でＥＤの直後に続く任意の他のアミノ酸残基である。好ましくは、このような抗体は、非病的アミロイドタンパク質と比較して、凝集アミロイドタンパク質と優先的に反応性である。たとえば、ＡＡ原線維に関連するＡＡアミロイドーシスの処置または予防の方法は、ＡＡ原線維のＣ末端領域（〜ＡＡの残基７０〜７６）に特異的な抗体の投与を含み得る。抗体は、ＡＡ凝集体（たとえば原線維）の形成を妨害する、またはその脱凝集および除去を引き起こすことが可能であり、それゆえＡＡアミロイドーシスの処置または予防の実施を行う。
【００９３】
Ｉ．定義
「実質的同一性」という用語は、２つのペプチド配列が、デフォルトギャップ重み付けを使用してプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列されたときに、少なくとも６５パーセントの配列同一性、好ましくは少なくとも８０または９０パーセントの配列同一性、さらに好ましくは少なくとも９５パーセントの配列同一性またはそれ以上（たとえば９９パーセントの配列同一性またはそれ以上）を共有することを意味する。好ましくは、同一でない残基位置は、保存アミノ酸置換によって異なる。
【００９４】
配列比較のために、通例一方の配列は、試験配列が比較される参照配列として作用する。配列比較アルゴリズムを使用して、試験配列および参照配列をコンピュータに入力するときに、サブ配列座標が指定され、必要ならば配列アルゴリズムプログラムのパラメータが指定される。配列比較アルゴリズムは次に、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。
【００９５】
比較のための配列の最適なアラインメントは、たとえばＳｍｉｔｈ  ＆  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ＆  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アラインメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ  ＆  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ処理による実施（ＧＡＰ，ＢＥＳＴＦＩＴ，ＦＡＳＴＡ，ａｎｄ  ＴＦＡＳＴＡ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）によって、または目視検査（一般にＡｕｓｕｂｅｌら、同上を参照）によって実施することができる。配列同一性および配列類似性のパーセントを決定するのに好適であるアルゴリズムの一例はＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、これはＡｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）に記載されている。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）から公的に入手できる。通例、デフォルトのプログラムパラメータを使用して配列比較を実施することができるが、カスタマイズされたパラメータも使用できる。アミノ酸配列の場合、ＢＬＡＳＴＰプログラムはデフォルトとして、語長（Ｗ）３、期待値（Ｅ）１０、およびＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリクスを使用する（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ＆  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９，１０９１５（１９８９）を参照）。
【００９６】
アミノ酸置換基を保存的または非保存的として分類する目的で、アミノ酸は次のように分類される：群Ｉ（疎水性側鎖）：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；群ＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；群ＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；群ＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｉｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；群Ｖ（側鎖配向に影響する残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；および群ＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は、同じクラスのアミノ酸間の置換を含む。非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバを別のメンバと交換することを構成する。
【００９７】
「オールＤ」という用語は、≧７５％、≧８０％、≧８５％、≧９０％、≧９５％、および１００％のＤ配置アミノ酸を有するペプチドを指す。
【００９８】
「薬剤」という用語は、薬理学的活性を有するまたは有し得る化合物を説明するために使用される。薬剤は、公知の薬物である化合物、薬理学的活性が確認されているが、さらなる治療的評価を受けている化合物、ならびに薬理学的活性についてスクリーニングされる集合およびライブラリのメンバである化合物を含む。
【００９９】
「アミロイド疾患」または「アミロイドーシス」は、症状としてまたはその病態の一部としてアミロイド斑の蓄積または形成を有するいくつもの障害を指す。「アミロイド斑」は、主にタンパク質性原線維で構成される細胞外沈着物である。一般に、原線維は支配的なタンパク質またはペプチドで構成される；しかし斑は、本明細書に記載するようなペプチドまたは非ペプチド分子であるさらなる構成成分も含み得る。
【０１００】
「アミロイドタンパク質」または「アミロイドペプチド」は、切断、立体配座変化、凝集または原線維形成を受けることが可能なタンパク質またはペプチドであり、病的オリゴマー、アミロイド原線維、アミロイド斑および／またはアミロイド構成成分の形成を引き起こす。
【０１０１】
「アミロイド構成成分」は、このような分子の抗原部分を含む、アミロイド斑に存在する任意の分子実体である。アミロイド構成成分は、これに限定されるわけではないが、タンパク質、ペプチド、プロテオグリカン、および炭水化物を含む。
【０１０２】
「抗アミロイド剤」は、能動または受動免疫化技法によって投与されるときに、脊椎動物被験体においてアミロイド斑成分に対する免疫応答を産生することができる薬剤である。
【０１０３】
「ＡＡタンパク質」または「ＡＡペプチド」は、単量体であるかまたは凝集しているか、可溶性であるかまたは不溶性であるかにかかわらず、血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）のタンパク質分解切断によって形成されるアミロイドタンパク質Ａタンパク質またはペプチドを指す。
【０１０４】
「凝集アミロイドタンパク質」または「凝集アミロイドペプチド」または「アミロイド凝集体」は、アミロイドタンパク質またはアミロイドペプチドの病的非単量体凝集形を指す。凝集アミロイドタンパク質およびアミロイドペプチドは、可溶性または不溶性であることが可能である。いくつかの凝集アミロイドタンパク質および凝集アミロイドペプチドは、オリゴマー、原線維および／またはアミロイド斑を形成することができる。原線維ペプチドおよびタンパク質を含むこのような凝集アミロイドタンパク質および凝集アミロイドペプチドの例が、本明細書で提供される。
【０１０５】
「ＡＡ凝集体」は、ＡＡの凝集形を指す。
【０１０６】
本発明の治療剤は通例、望ましくない汚染物質を含まず実質的に純粋である。このことは、薬剤が通例少なくとも約５０％ｗ／ｗ（重量／重量）の純度であることはもちろんのこと、妨害タンパク質および汚染物質を実質的に含まないことも意味する。時々、薬剤は少なくとも約８０％ｗ／ｗ、さらに好ましくは少なくとも９０または約９５％ｗ／ｗの純度である。しかし、在来のタンパク質精製技法を使用すると、少なくとも９９％ｗ／ｗの均質なペプチドを得ることができる。本発明の治療剤は、アミロイド沈着物に関連する疾患の防止、予防の実施、または処置を行い得る。
【０１０７】
２つの実体の間の特異的結合は、実体が、対照、たとえば無関係な抗原または異なる抗原に対する抗体に対する、どちらかの実体の親和性よりも少なくとも１０倍、１００倍または１００倍の大きさである、互いに対する相互親和性を有することを意味する。２つの実体の互いに対する相互親和性は通常、少なくとも１０７Ｍ−１、１０８Ｍ−１、１０９Ｍ−１、または１０１０Ｍ−１、である。１０８Ｍ−１を超える親和性が好ましい。
【０１０８】
「免疫グロブリン」または「抗体」という用語（本明細書で互換的に使用される）は、抗原を特異的に結合する能力を有し、２つの重鎖および２つの軽鎖から成る基本的な４ポリペプチド鎖構造を有する抗原結合タンパク質を指し、前記鎖はたとえば、鎖間ジスルフィド結合によって安定化されている。重鎖および軽鎖はどちらもドメインに折畳まれる。「ドメイン」という用語は、たとえばβプリーツシートおよび／または鎖間ジスルフィド結合によって安定化されたペプチドループを含む（たとえば３〜４個のペプチドループを含む）重鎖または軽鎖ポリペプチドの球状領域を指す。ドメインは、「定常」ドメインの場合には各種のクラスメンバのドメイン内の配列変化の相対的な欠如に基づいて、または「可変」ドメインの場合には各種のクラスメンバのドメイン内の著しい変化に基づいて、本明細書で「定常」または「可変」とさらに呼ばれる。軽鎖の「定常」ドメインは、互換的に「軽鎖定常領域」、「軽鎖定常ドメイン」、「ＣＬ」領域または「ＣＬ」ドメインと呼ばれる。重鎖の「定常」ドメインは、互換的に「重鎖定常領域」、「重鎖定常ドメイン」、「ＣＨ」領域または「ＣＨ」ドメインと呼ばれる。軽鎖の「可変」ドメインは、互換的に「軽鎖可変領域」、「軽鎖可変ドメイン」、「ＶＬ」領域または「ＶＬ」ドメインと呼ばれる。重鎖の「可変」ドメインは、互換的に「重鎖定常領域」、「重鎖定常ドメイン」、「ＣＨ」領域または「ＣＨ」ドメインと呼ばれる。
【０１０９】
「領域」という用語は、抗体鎖の一部または部分を指し、本明細書で定義するような定常または可変ドメインはもちろんのこと、前記ドメインのより不連続な一部または部分も含む。たとえば、軽鎖可変ドメインまたは領域は、本明細書で定義するように、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」間に散在した「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」を含む。
【０１１０】
免疫グロブリンまたは抗体は、単量体または重合体形で存在することができる。「抗原結合断片」という用語は、抗原と結合する、または抗原結合（すなわち特異的結合）のためにインタクトな抗体（すなわちそれらが由来したインタクトな抗体）と競合する、免疫グロブリンまたは抗体のポリペプチド断片を指す。「立体配座」という用語は、タンパク質またはポリペプチドの３次構造（たとえば抗体、抗体鎖、そのドメインまたは領域）を指す。たとえば、「軽（または重）鎖立体配座」という句は、軽（または重）鎖可変領域の３次構造を指し、「抗体立体配座」または「抗体断片立体配座」という句は、抗体またはその断片の３次構造を指す。
【０１１１】
抗体の「特異的結合」は、抗体が抗原または好ましいエピトープに対して評価可能な親和性を示し、好ましくは著しい交差反応性を示さないことを意味する。「評価可能な」または好ましい結合は、少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９Ｍ−１、または１０１０Ｍ−１の親和性での結合を含む。１０７Ｍ−１を超える、好ましくは１０８Ｍ−１を超える親和性がさらに好ましい。本明細書で示す親和性の中間の値も本発明の範囲内に含まれるものとされ、好ましい結合親和性は、たとえば１０６〜１０１０Ｍ−１、好ましくは１０７〜１０１０Ｍ−１、さらに好ましくは１０８Ｍ−１〜１０１０Ｍ−１の親和性の範囲として示すことができる。「著しい交差反応性を示さない」抗体は、望ましくない実体（たとえば望ましくないタンパク質性実体）に評価可能なほど結合しない抗体である。たとえばＡＡに特異的に結合する抗体は、ＡＡに評価可能なほど結合するが、非ＡＡタンパク質またはペプチド（たとえば斑に含有された非ＡＡタンパク質またはペプチド）とは著しく反応しない。好ましいエピトープに特異的な抗体は、同じタンパク質またはペプチド上の離れたエピトープと著しく交差反応しないであろう。特異的結合は、このような結合を決定するための当分野で認識された任意の手段に従って決定することができる。好ましくは、特異結合は、スキャッチャード分析および／または競合結合アッセイに従って決定される。
【０１１２】
抗原結合抗体断片は、組換えＤＮＡ技法によって、またはインタクトな免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断によって産生される。結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃ、Ｆｖ、単鎖、および単鎖抗体を含む。さらなる抗体断片およびエフェクタ機能変種は、本明細書の「抗体」という名称の節で議論される。「２重特異性」または「２官能性」免疫グロブリンまたは抗体以外に、免疫グロブリンまたは抗体は、その結合部位それぞれが同一であることが理解される。「２重特異性」または「２官能性抗体」は、２つの異なる重鎖／軽鎖対および２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。２重特異的抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’断片の結合を含む各種の方法によって産生できる。たとえばＳｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ＆  Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７−１５５３（１９９２）を参照。
【０１１３】
「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」という用語は、少なくとも１つのヒト化免疫グロブリンまたは抗体鎖（すなわち少なくとも１つのヒト化軽鎖または重鎖）を含む免疫グロブリンまたは抗体を指す。「ヒト化免疫グロブリン鎖」または「ヒト化抗体鎖」（すなわち「ヒト化免疫グロブリン軽鎖」または「ヒト化免疫グロブリン重鎖」）は、実質的にヒト免疫グロブリンまたは抗体からの可変フレームワーク領域および実質的に非ヒト免疫グロブリンまたは抗体からの相補性決定領域（ＣＤＲ）（たとえば少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは２つのＣＤＲ、さらに好ましくは３つのＣＤＲ）を含み、定常領域（たとえば軽鎖の場合には、少なくとも１つの定常領域またはその部分、好ましくは重鎖の場合には３つの定常領域）をさらに含む可変領域を有する免疫グロブリンまたは抗体鎖（すなわちそれぞれ軽鎖または重鎖）を指す。「ヒト化可変領域」（たとえば「ヒト化軽鎖可変領域」または「ヒト化重鎖可変領域」）という用語は、実質的にヒト免疫グロブリンまたは抗体からの可変フレームワーク領域および実質的に非ヒト免疫グロブリンまたは抗体からの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変領域を指す。
【０１１４】
「実質的にヒト免疫グロブリンまたは抗体からの」または「実質的にヒト」という句は、比較の目的でヒト免疫グロブリンまたは抗体アミノ配列と整列させたときに、領域が、たとえば保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、復帰変異などを可能にするヒトフレームワークまたは定常領域配列と少なくとも８０〜９０％の、好ましくは９０〜９５％の、さらに好ましくは９５〜９９％の同一性（すなわち局所配列同一性）を共有することを意味する。保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、復帰変異などの導入は、ヒト化抗体または鎖の「最適化」と呼ばれることが多い。「実質的に非ヒト免疫グロブリンまたは抗体からの」または「実質的に非ヒト」という句は、非ヒト生物、たとえば非ヒト哺乳動物の免疫グロブリンまたは抗体配列と少なくとも８０〜９５％、好ましくは９０〜９５％、さらに好ましくは９６％、９７％、９８％、または９９％同一である免疫グロブリンまたは抗体配列を有することを意味する。
【０１１５】
したがって、おそらくＣＤＲを除く、ヒト化免疫グロブリンもしくは抗体の、またはヒト化免疫グロブリンまたは抗体鎖のすべての領域または残基は、１つ以上の未変性ヒト免疫グロブリン配列の対応する領域または残基と実質的に同一である。「対応する領域」または「対応する残基」という用語は、第１および第２の配列が比較の目的で最適に整列されているときに、第１のアミノ酸またはヌクレオチド配列上の領域または残基と同じ（すなわち同等の）位置を占有する第２のアミノ酸またはヌクレオチド配列上の領域または残基を指す。
【０１１６】
「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」という用語は、以下で定義するように、キメラ免疫グロブリンまたは抗体を含むことを意図しない。ヒト化免疫グロブリンまたは抗体はその構造がキメラである（すなわち１種を超えるタンパク質からの領域を含む）が、それらは本明細書で定義するように、キメラ免疫グロブリンまたは抗体で見出されないさらなる特徴（すなわちドナーＣＤＲ残基およびアクセプタフレームワーク残基を含む可変領域）を含んでいる。
【０１１７】
「キメラ免疫グロブリン」または抗体という用語は、その可変領域が第１の種に由来して、その定常領域が第２の種に由来する免疫グロブリンまたは抗体を指す。キメラ免疫グロブリンまたは抗体は、たとえば異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントから遺伝子組み換えによって構築することができる。
【０１１８】
「抗原」は、抗体が特異的に結合する実体（たとえばタンパク質（ｐｒｏｔｅｎａｃｅｏｕｓ）実体またはペプチド）である。
【０１１９】
「エピトープ」または「抗原決定基」は、免疫グロブリンまたは抗体（またはその抗原結合断片）が特異的に結合する抗原上の部位を差す。エピトープは、タンパク質の３次折畳みによって並置された隣接アミノ酸または非隣接アミノ酸の両方から形成することができる。隣接アミノ酸から形成されたエピトープは通例、変性溶媒への曝露時に保持されるが、３次折畳みによって形成されたエピトープは通例、変性溶媒による処理時に消失する。エピトープは、独自の空間立体配座に少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５のアミノ酸を含む。エピトープの空間立体配座を決定する方法はたとえば、ｘ線結晶学および２次元核磁気共鳴を含む。たとえばＥｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照。
【０１２０】
本発明の代表的な抗体は、たとえば２Ａ４、７Ｄ８、または８Ｇ９抗体によっても結合されるＸ１ＥＤＸ２を含むエピトープに結合する、凝集アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２を含むエピトープに特異的に結合する抗体またはその断片を含む。同じエピトープを認識する抗体は、１つの抗体が別の抗体の標的抗原への結合を遮断する能力を示す簡単な免疫測定法、すなわち競合結合アッセイで同定することができる。競合結合は、試験中の免疫グロブリンが参照抗体の共通抗原、たとえばＡβへの特異的結合を阻害するアッセイで決定される。多くの種類の競合結合アッセイ、たとえば：固相直接または間接放射性免疫測定法（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ９：２４２（１９８３）を参照）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）を参照）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（１９８８）を参照）；Ｉ−１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）を参照）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６：５４６（１９９０））；および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒら、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７（１９９０））が公知である。通例、このようなアッセイは、固体表面に結合した精製抗原またはこれらのいずれかを持つ細胞、未標識試験免疫グロブリンおよび標識参照免疫グロブリンの使用を含む。競合的阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面または細胞に結合された標識の量を決定することによって測定される。通常、試験免疫グロブリンは過剰に存在する。通常、競合抗体が過剰に存在するとき、競合抗体は、参照抗体の共通抗原への特異的結合を少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％またはそれ以上阻害するであろう。
【０１２１】
エピトープは、免疫細胞、たとえばＢ細胞および／またはＴ細胞によっても認識される。エピトープの細胞認識は、３Ｈ−チミジン取り込みによって、サイトカイン分泌によって、抗体分泌によって、または抗原依存性死滅（細胞毒性Ｔリンパ球アッセイ）によって決定されるような、抗原依存性増殖を測定するインビトロアッセイによって決定できる。
【０１２２】
「ネオエピトープ」という用語は、Ｂおよび／またはＴ細胞が応答する抗原上の新規および／または独自部位を指す。
【０１２３】
「ネオエピトープ抗体」という用語は、分子のタンパク質分解切断によって露出された新規のＮまたはＣ末端アミノ酸配列を特異的に認識するが、未変性（未切断）分子上のこのようなエピトープには結合しない抗体を指す。「ネオエピトープ抗体」という用語は、ＳＡＡのタンパク質分解切断によって露出された新規のＮまたはＣ末端アミノ酸配列を特異的に認識するが、未変性（未切断）ＳＡＡ分子上のこのようなエピトープには結合しない抗体を指し得る。いくつかのネオエピトープ抗体は、可溶性または不溶性ＡＡのどちらかに結合して、ＡＡ原線維を含むＡＡ凝集体の解離を引き起こす。「ネオエピトープ抗体」は、たとえばＡＬアミロイドーシスおよび軽鎖の場合（軽鎖のみが発現されて、アミロイドを形成するとき）と同様に、タンパク質が立体配座変化を受けた後にのみ抗体に結合することが可能である新規エピトープを特異的に認識する抗体でもあり得る。
【０１２４】
「免疫学的」または「免疫」応答という用語は、レシピエント患者においてアミロイドペプチドに向けられた有益な体液性（抗体媒介）および／または細胞性（抗原特異的Ｔ細胞またはその分泌生成物が媒介）応答の発生である。このような応答は、免疫原の投与によって誘導された能動応答または抗体または初回刺激を受けたＴ細胞の投与によって誘導された受動応答であり得る。細胞性免疫応答は、抗原特異性ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞および／またはＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞を活性化するための、クラスＩまたはクラスＩＩ  ＭＨＣ分子と結合したポリペプチドエピトープの提示によって誘導される。応答は、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、好塩基球、樹状細胞、星状細胞、ミクログリア細胞、好酸球または自然免疫の他の構成成分の活性化も含み得る。細胞媒介免疫応答の存在は、増殖アッセイ（ＣＤ４＋Ｔ細胞）またはＣＴＬ（細胞毒性Ｔリンパ球）アッセイによって決定することができる（Ｂｕｒｋｅ，同上；Ｔｉｇｇｅｓ，同上を参照）。免疫原の保護または治療効果への体液性および細胞性応答の相対的寄与は、免疫化同系動物から抗体およびＴ細胞を個別に単離して、第２の被験体における保護または治療効果を測定することによって区別することができる。
【０１２５】
「免疫原性剤」または「免疫原」は、場合によりアジュバントと併せた哺乳動物への投与時にそれ自体に対して、免疫応答を誘導することができる。
【０１２６】
「裸のポリヌクレオチド」という用語は、コロイド状物質と複合体化していないポリヌクレオチドを指す。裸のポリヌクレオチドは時には、プラスミドベクターにてクローニングされる。
【０１２７】
「アジュバント」という用語は、抗原と併せて投与したときに抗原に対する免疫応答を増強するが、単独で投与したときには抗原に対する免疫応答を発生しない化合物を指す。アジュバントは、リンパ球補充、Ｂおよび／またはＴ細胞の刺激、およびマクロファージの刺激を含む複数の機構によって、免疫応答を増強することができる。
【０１２８】
「有効用量」または「有効投薬量」という用語は、所望の効果を達成または少なくとも部分的に達成するのに十分な量として定義される。「治療的有効用量」という用語は、疾患にすでに罹患している患者において疾患およびその合併症を治癒または少なくとも部分的に停止するのに十分な量として定義される。この用途に有効な量は、感染症の重症度および患者自身の免疫系の一般的な状態に依存するであろう。
【０１２９】
「患者」という用語は、予防的または治療的処置のどちらかを受けるヒトおよび他の哺乳動物被験体を含む。
【０１３０】
本発明は、凝集アミロイドタンパク質中にＸ１ＥＤＸ２を含むエピトープに特異的に結合して、Ｘ１ＥＤＸ２を含むエピトープへの結合においてたとえば２Ａ４、７Ｄ８、または８Ｇ９抗体と競合する、抗体またはその抗原結合断片を提供する。抗体間の競合は、試験中の免疫グロブリンが参照抗体の共通抗原、たとえばＡＡへの特異的結合を阻害するアッセイで決定される。多くの種類の競合結合アッセイ、たとえば：固相直接または間接放射性免疫測定法（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、９：２４２−２５３（１９８３）を参照）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４−３６１９（１９８６）を参照）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，”  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（１９８８）を参照）；Ｉ−１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌら、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７−１５（１９８８）を参照）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１７６：５４６−５５２（１９９０））；および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒら、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７−８２（１９９０））が公知である。通例、このようなアッセイは、固体表面に結合した精製抗原または抗原を発現する細胞、未標識試験免疫グロブリンおよび標識参照免疫グロブリンの使用を含む。競合的阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面または細胞に結合された標識の量を決定することによって測定される。通常、試験免疫グロブリンは過剰に存在する。競合アッセイによって同定された抗体（競合抗体）は、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体および立体障害を発生させるために参照抗体によって結合されたエピトープに十分に近接した隣接エピトープに結合する抗体を含む。通常、競合抗体が過剰に存在するとき、競合抗体は、参照抗体の共通抗原への特異的結合を少なくとも５０％〜７５％阻害するであろう。
【０１３１】
アミロイドタンパク質に特異的に結合する抗体は、少なくとも１０７Ｍ−１の親和性でアミロイドタンパク質に結合する抗体を意味する。いくつかの抗体は、１０８Ｍ−１〜１０１１Ｍ−１の親和性でアミロイドタンパク質に結合する。
【０１３２】
単量体アミロイドタンパク質に特異的に結合することなく、凝集アミロイドタンパク質、たとえば凝集ＡＡに特異的に結合する抗体は、たとえば上記の原線維（たとえば元ＡＡアミロイドーシス患者の死体またはトランスジェニック動物モデルからなどの凝集β−プリーツシート形のＡＡ）などの凝集アミロイドタンパク質に結合して、アミロイドタンパク質の単量体形に対する親和性の、少なくとも１０分の１の、通常は少なくとも１００分の１の特異的結合親和性を有する抗体を意味する。たとえばこのような抗体は、１０９Ｍ−１の親和性で可溶性ＡＡに、そして１０７Ｍ−１未満の親和性で斑に結合するかもしれない。このような抗体の斑に対する親和性は通常、１０７または１０６Ｍ−１未満である。このような抗体は、抗体が原線維に接触して、結合が蛍光標識によって評価されるときに、無関係な対照抗体（たとえばリバースマーＡＡペプチドに対する抗体またはポリクローナル抗体の混合物）に対する蛍光強度によってさらにまたは代わりに定義される。斑に結合することなく、可溶性ＡＡペプチドに結合する抗体の蛍光強度は、対照抗体の蛍光強度の５倍以内、時には２倍以内であり、時には実験誤差範囲内で対照抗体の蛍光強度と識別不能である。
【０１３３】
１つ以上の引用された要素を「含む」組成物または方法は、特に引用されない他の要素を含み得る。たとえば、ＡＡペプチドを含む組成物は、単離ＡＡペプチドおよびより大きいポリペプチドの配列の成分としてのＡＡペプチドの両方を含む。
【０１３４】
ＩＩ．アミロイド疾患
１．概要および病原
アミロイド疾患またはアミロイドーシスは、多種多様な外部症状を有するいくつかの疾患状態を含む。これらの障害は、通常は直径が約１０〜１００μｍであり、特定の臓器または組織領域に局在化する「アミロイド沈着物」または「アミロイド斑」として公知である、タンパク質原線維の異常な細胞外沈着物の存在を共通して有する。このような斑は、天然発生型可溶性タンパク質またはペプチドから主に構成される。これらの不溶性沈着物は、直径約１０〜１５ｎｍである原線維の一般に側方への凝集体から成る。アミロイド原線維は、コンゴーレッド染料で染色したときに、偏光中で特徴的な青リンゴ色の複屈折を生じる。障害は、以下で議論するように、斑沈着物を形成する主な原線維構成成分に基づいて分類される。
【０１３５】
斑沈着物を形成するペプチドまたはタンパク質は、より大型の前駆体タンパク質から産生されることが多い。さらに詳細には、アミロイド原線維沈着物の病原は一般に、「異常な」前駆体タンパク質の断片へのタンパク質分解切断を包含する。これらの断片は一般に、逆平行βプリーツシートに凝集する；しかし、家族性アミロイド多発性神経障害（変種トランスサイレチン原線維）および透析関連アミロイドーシス（β２マイクログロブリン原線維）において、前駆体タンパク質のある未分解形は凝集して原線維を形成することが報告されている（Ｔａｎら、１９９４，同上）。
【０１３６】
２．臨床的症候群
本節は、主要な種類のアミロイドーシスの説明を、その特徴的な斑原線維組成を含めて提供する。各種の疾患特異的アミロイド沈着物の構成要素に対する免疫応答を刺激するように作用する薬剤を投与することによってアミロイド疾患を処置できることは、本発明の全体的な発見である。下のＣ節でさらに詳細に議論するように、このような構成成分は好ましくは、斑を形成する原線維の構成要素である。下の節は、アミロイドーシスの主な形態を例示する役割を果たし、本発明を制限する意図はない。
【０１３７】
ａ．ＡＬアミロイドーシス
ＡＬアミロイド沈着は一般に、形質細胞の悪性疾患（多発性骨髄腫）から良性単クローン性高ガンマグロブリン血症に及ぶ、Ｂリンパ球系統のほぼすべての疾患に関連する。時々、アミロイド沈着物の存在は、基礎疾患の主要な指標であり得る。
【０１３８】
ＡＬアミロイド沈着物の原線維は、モノクローナル免疫グロブリン軽鎖またはその断片から構成される。さらに詳細には、断片は、軽鎖（カッパまたはラムダ）のＮ末端領域に由来しており、その可変（ＶＬ）ドメインの全部または一部を含有する。沈着物は一般に間葉組織で発生して、末梢および自律性神経障害、手根管症候群、巨舌、拘束型心筋症、大関節の関節症、免疫疾患、骨髄腫はもちろんのこと、潜在性疾患を引き起こす。しかし、ほぼすべての組織、特に内臓器官、特に心臓が関与し得ることに注目すべきである。
【０１３９】
ｂ．遺伝性全身性アミロイドーシス
遺伝性全身性アミロイドーシスには多くの形態がある。それらは比較的まれな状態であるが、症状の成人発症およびその遺伝パターン（通常は常染色体優性）は、一般集団におけるこのような障害の持続をもたらしている。一般に症候群は、変種アミロイド形成性ペプチドまたはタンパク質の産生をもたらす、前駆体タンパク質の点変異に起因し得る。表２に、これらの障害の例示的形態の原線維組成をまとめる。
【０１４０】
【表２】
2014080434.tif 000004
表２に与えたデータは例示的であり、本発明の範囲を制限する意図はない。たとえばトランスサイレチン遺伝子の４０を超える別個の点変異が記載されており、そのすべては家族性アミロイド多発性神経障害の臨床的に同様の形態を生じさせる。
【０１４１】
トランスサイレチン（ＴＴＲ）は、時にはプレアルブミンと呼ばれる１４キロダルトンタンパク質である。トランスサイレチンは肝臓および脈絡叢によって産生され、甲状腺ホルモンおよびビタミンＡの運搬で機能する。該タンパク質の少なくとも５０の変種形は、それぞれ１個のアミノ酸変化を特徴として、家族性アミロイド多発性神経障害の各種の形態の原因となっている。たとえば位置５５におけるロイシンのプロリンによる置換によって、特に進行型の神経障害が生じる；位置１１１におけるロイシンのメチオニンによる置換によって、デンマーク人患者に重篤な心臓疾患が生じた。全身性アミロイドーシス患者の心臓組織から単離したアミロイド沈着物によって、沈着物が集合的にＡＴＴＲと呼ばれる、ＴＴＲおよびその断片の不均質な混合物から構成されることが明らかになり、ＡＴＴＲの全長配列はキャラクタリゼーションされている。ＡＴＴＲ原線維構成成分は、このような斑から抽出可能であり、その構造および配列は当分野で公知の方法に従って決定できる（たとえばＧｕｓｔａｖｓｓｏｎ，Ａ．ら、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｉｎｖｅｓｔ．７３：７０３−７０８，１９９５；Ｋａｍｅｔａｎｉ，Ｆ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１２５：６２２−６２８，１９８４；Ｐｒａｓ，Ｍ．ら、ＰＮＡＳ  ８０：５３９−４２，１９８３）。
【０１４２】
分子アポリポタンパク質ＡＩに点変異（たとえばＧｌｙ→Ａｒｇ２６；Ｔｒｐ→Ａｒｇ５０；Ｌｅｕ→Ａｒｇ６０）を有する人々は、タンパク質アポリポタンパク質ＡＩまたはその断片（ＡＡｐｏ  ＡＩ）の沈着物を特徴とするアミロイドーシスの形態（「オステルターク型」）を示す。これらの患者は、低レベルの高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）を有し、末梢神経障害または腎不全を示す。
【０１４３】
酵素リゾチームのアルファ鎖における変異（たとえばＩｌｅ→Ｔｈｒ５６またはＡｓｐ→Ｈｉｓ５７）は、英国の家族で報告されたオステルターク型非神経障害性遺伝性アミロイドの別の基礎形である。ここでミュータントリゾチームタンパク質の原線維（Ａｌｙｓ）が沈着して、患者は一般に腎機能障害を示す。このタンパク質は、本明細書に記載する大半の原線維形成タンパク質とは異なり、通常は全体（非断片化）形で存在する（Ｂｅｎｓｏｎ，Ｍ．Ｄ．ら、ＣＩＢＡ  Ｆｄｎ．Ｓｙｍｐ．１９９：１０４−１３１，１９９６）。
【０１４４】
β−アミロイドペプチド（Ａβ）は、ベータアミロイド前駆体タンパク質（βＡＰＰ）として公知の大型タンパク質からのタンパク質分解によって得られる３９〜４３アミノ酸ペプチドである。βＡＰＰの変異は、以下でさらに詳細に説明する、Ａβ原線維および他の構成成分から構成される斑の脳沈着を特徴とする家族型のアルツハイマー病、ダウン症候群および／または老年性認知症を引き起こす。アルツハイマー病に関連するＡＰＰの公知の変異は、βまたはγセクレターゼの切断部位の近位で、またはＡβ内で発生する。たとえば位置７１７は、そのβＡへのプロセシングにおいてＡＰＰのγ−セクレターゼ切断部位の近位であり、位置６７０／６７１はβ−セクレターゼ切断部位の近位である。これらの残基のいずれにおける変異も、ＡＰＰから生成したＡβの４２／４３アミノ酸形の量をおそらく増加させることによって、アルツハイマー病を引き起こし得る。各種の長さのＡβペプチドの構造および配列が当分野で周知である。このようなペプチドは、当分野で公知の方法によって作製できる（たとえばＧｌｅｎｎｅｒ  ａｎｄ  Ｗｏｎｇ，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１２９：８８５−８９０，１９８４；Ｇｌｅｎｎｅｒ  ａｎｄ  Ｗｏｎｇ，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１２２：１１３１−１１３５，１９８４）。さらに各種の形態のペプチドが市販されている。
【０１４５】
シヌクレインは、アリポタンパク質に似たシナプス結合タンパク質であり、ニューロンサイトゾルおよびシナプス前終末に豊富である。ＮＡＣと呼ばれるα−シヌクレインに由来するペプチド断片も、アルツハイマー病のアミロイド斑の構成成分である（Ｃｌａｙｔｏｎら、１９９８）。この構成成分も、下で詳説するように、本発明の免疫学に基づく処置の標的として作用する。
【０１４６】
ゲルソリンは、アクチンフィラメントに結合して、アクチンフィラメントを断片化するカルシウム結合タンパク質である。タンパク質の位置１８７における変異（たとえばＡｓｐ→Ａｓｎ；Ａｓｐ→Ｔｙｒ）は、オランダまたは日本出身の人々と同様に、フィンランドからの患者に通常見出される、遺伝性全身性アミロイドーシスの形態を引き起こす。罹患した個人において、ゲルソリン断片から形成された原線維（Ａｇｅｌ）は通常、アミノ酸１７３〜２４３（６８ｋＤａカルボキシ末端断片）から構成され、血管および基底膜に沈着して、角膜ジストロフィおよび脳神経障害を引き起こして、これらは末梢神経障害、ジストロフィ性皮膚変化および他の臓器への沈着に進行する（Ｋａｎｇａｓ，Ｈ．ら、Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５（９）：１２３７−１２４３，１９９６）。
【０１４７】
他の変異タンパク質、たとえばフィブリノゲンのミュータントアルファ鎖（ＡｆｉｂＡ）およびミュータントシスタチンＣ（Ａｃｙｓ）も原線維を形成して、特徴的な遺伝性障害を生じる。ＡｆｉｂＡ原線維は、腎疾患を伴う非神経障害性遺伝性アミロイドに特有の沈着物を形成する；Ａｃｙｓ沈着物は、アイスランドで報告された遺伝性脳アミロイド血管症の特徴である（Ｉｓｓｅｌｂａｃｈｅｒら、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｓａｎ
Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，１９９５；Ｂｅｎｓｏｎら、同上）。少なくともいくつかの症例において、脳アミロイド血管症（ＣＡＡ）患者は、ベータタンパク質と併せて非変異型のシスタチンＣを含有するアミロイド原線維を有することが示されている（Ｎａｇａｉ，Ａ．ら、Ｍｏｌｅｃ．Ｃｈｅｍ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．３３：６３−７８，１９９８）。
【０１４８】
ある形態のプリオン疾患は現在、遺伝性であると見なされており、症例の最大１５％を占めており、以前は自然界において主に感染性であると考えられていた（Ｂａｌｄｗｉｎら、ｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９５）。このようなプリオン障害で、患者には正常プリオンタンパク質（ＰｒＰｃ）の異常アイソフォームから成る斑が発生する。主な変異アイソフォームＰｒＰＳｃは、ＡＳｃｒとも呼ばれ、プロテアーゼ分解に対するその耐性、洗浄剤抽出後の不溶性、２次リソソームでの沈着、翻訳後合成、および高いβプリーツシート含有率で正常な細胞タンパク質とは異なる。クロイツフェルト−ヤコブ病（ＣＪＤ）、ゲルストマン−ストロイスラー−シャインカー症候群（ＧＳＳ）、および致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）を引き起こす少なくとも５つの変異に関して、遺伝連鎖が確立されている。（Ｂａｌｄｗｉｎ）スクレピー原線維から原線維ペプチドを抽出して、配列を決定し、このようなペプチドを作製する方法は、当分野で公知である（たとえばＢｅｅｋｅｓ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７６：２５６７−７６，１９９５）。
【０１４９】
たとえばＧＳＳの１つの形態はコドン１０２におけるＰｒＰ変異に関連しているのに対して、終脳ＧＳＳはコドン１１７における変異によって分離される。コドン１９８および２１７における変異は、アルツハイマー病に特徴的な老人斑がＡβペプチドの代わりにＰｒＰを含有するＧＳＳの形態を引き起こす。家族性ＣＪＤのある形態は、コドン２００および２１０における変異と関連付けられている；コドン１２９および１７８の変異は、家族性ＣＪＤおよびＦＦＩの両方で見出されている（Ｂａｌｄｗｉｎ、同上）。
【０１５０】
ｃ．老人性全身性アミロイドーシス
全身性または限局性のどちらのアミロイド沈着も年齢と共に増加する。たとえば野生型トランスサイレチン（ＴＴＲ）の原線維は高齢者の心臓組織で一般に見出される。これらは無症候性であり、臨床的に無症状であり得るか、または心不全を引き起こし得る。無症候性原線維限局性沈着物も脳（Ａβ）、前立腺のアミロイド小体（Ａβ２ミクログロブリン）、関節および精嚢に発生し得る。
【０１５１】
ｄ．脳アミロイドーシス
アミロイドの局所沈着は特に高齢者の脳で一般的である。脳で最も多いアミロイドの種類は、主にＡβペプチド原線維から構成されており、認知症または散発性（非遺伝性）アルツハイマー病を引き起こす。実際に、散発性アルツハイマー病の発生率は、遺伝性であると見られる形態を大きく超えている。これらの斑を形成する原線維ペプチドは、アルツハイマー病（ＡＤ）の遺伝性形態に関連して上述したものと非常に類似している。
【０１５２】
ｅ．透析関連アミロイドーシス
β２ミクログロブリン（Ａβ２Ｍ）原線維から構成される斑は一般に、長期血液透析または腹膜透析を受けている患者に発生する。β２ミクログロブリンは、１１．８キロダルトンのポリペプチドであり、すべての有核細胞に存在する、クラスＩ  ＭＨＣ抗原の軽鎖である。通常の状況下では、β２ミクログロブリンは細胞膜から絶え間なく放出されて、通常は腎臓によって濾過される。腎機能障害の場合などにクリアランスができないと、腎臓または他の部位における（主に関節のコラーゲンが豊富な組織における）沈着が生じる。他の原線維タンパク質とは異なり、Ａβ２Ｍ分子は一般に、原線維に未断片形で存在する（Ｂｅｎｓｏｎ，同上）。
【０１５３】
ｆ．ホルモン由来アミロイドーシス
特に高齢者の内分泌器官は、アミロイド沈着物を有し得る。ホルモン分泌腫瘍は、ホルモン由来アミロイド斑も含有することがあり、その原線維はカルシトニン（甲状腺髄様癌）、膵島アミロイドポリペプチド（アミリン；大半のＩＩ型糖尿病患者で発生する）、および心房性ナトリウム利尿ペプチド（孤立性心房性アミロイドーシス）などのポリペプチドホルモンで構成されており、これらのタンパク質の配列および構造は当分野で周知である。
【０１５４】
ｇ．多様なアミロイドーシス
通常はアミロイドの局所沈着物として顕在化する、多種多様の他の形態のアミロイド疾患がある。一般に、これらの疾患はおそらく、特異性原線維前駆体の局所産生および／もしくはその異化の不足または特定の組織（たとえば関節）の原線維沈着への素因の結果である。これらの特発性沈着の例は、結節性ＡＬアミロイド、皮膚アミロイド、内分泌アミロイド、および腫瘍関連アミロイドを含む。
【０１５５】
ＩＩＩ．ＡＡアミロイド疾患
ＡＡアミロイドーシスは、既存または共存する疾患の次に発症するために、以前は２次または反応性アミロイドーシスと呼ばれた。このような疾患は、これに限定されるわけではないが、炎症性疾患、たとえば関節リウマチ、若年性慢性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬、乾癬性関節症、ライター症候群、成人スティル病、ベーチェット症候群、およびクローン病を含む。ＡＡ沈着物は、慢性微生物感染症、たとえばらい、結核、気管支拡張症、褥瘡性潰瘍、慢性腎盂腎炎、骨髄炎、およびウィップル病の結果としても生じる。ある悪性新生物もＡＡ原線維アミロイド沈着物を引き起こす可能性がある。これらは、ホジキンリンパ腫、腎臓癌、消化管、肺および尿生殖路の癌、基底細胞癌、およびヘアリー細胞白血病などの状態も含む。ＡＡアミロイド疾患は、家族性地中海熱などの遺伝性炎症性疾患からも発生し得る。さらにＡＡアミロイド疾患は、キャッスルマン病などのリンパ球増殖性障害から発生し得る。
【０１５６】
１．ＡＡアミロイドーシスに関連する炎症性疾患
関節リウマチは、主に関節の慢性全身性疾患である。関節リウマチの症状は、滑膜および関節構造（関節）の炎症性変化ならびに骨の萎縮および粗鬆化（骨密度低下）を特徴とする。関節リウマチの後期には、変形および強直（関節の固定）が発生する。関節リウマチのモデルを、フロイント完全アジュバント中のＩＩ型コラーゲンを投与することによって、マウスまたはラットで誘導することができる。
【０１５７】
若年性慢性関節炎は、多くの形態で生じる；最も一般的なのは、若年性関節リウマチである。若年性関節リウマチは、どの年齢の小児にも発症する可能性があるが、最初に２〜６歳に最も多く現れる。３種類の主な若年性関節リウマチ、すなわち少関節性関節炎、多関節性関節炎、および全身性関節炎（スティル病としても公知）がある。少関節性関節炎は通例、４個以下の関節、通常は膝などのより大きい関節に影響を及ぼす。硬直を伴い、小児に跛行を引き起こす可能性がある。多関節性関節炎は、５個以上の関節、最も一般的には手および足のより小さい関節が罹患していることを特徴とする。多関節性関節炎の小児は、より重篤な形態の疾患を有することが多い。全身性関節炎は、発熱および淡紅色発疹を伴う関節腫脹を特徴とする。関節は、発熱開始後、数ヶ月または数年まで腫脹を開始しないことがある。全身性関節炎は、肝臓、心臓、脾臓およびリンパ節などの内部器官に影響を及ぼすこともあり、貧血は一般的である。全身性関節炎は自然に寛解する傾向があるが、これらの小児のほんの数パーセンテージが成人期まで継続する重篤な関節炎を有する可能性がある。
【０１５８】
強直性脊椎炎は、脊椎および仙腸関節の関節炎を引き起こすリウマチ性疾患であり、眼、肺、および心臓弁の炎症を引き起こす可能性がある。強直性脊椎炎は、生涯を通じて発生する背痛の間欠的な症状発現から脊椎、末梢関節および他の体器官を攻撃する重篤な慢性疾患まで様々であり、年齢を重ねるにつれて重篤な関節および背硬直、運動低下および奇形を生じる。
【０１５９】
乾癬は、増悪および寛解を特徴として、多遺伝子性遺伝パターンを有する一般的な慢性扁平皮膚病である。乾癬の症状は、伸筋表面、爪、頭皮、生殖器および腰仙部への偏向を有する灰色がかった白色または銀色がかった白色の鱗屑に覆われた、各種の大きさの円形で乾燥した落屑性斑の存在を特徴とする。
【０１６０】
乾癬性関節症は、乾癬が関節炎の発症に関連している障害である。該障害は各種の方法で示すことが可能である。関節炎は一般に軽症であり、ごく少数の関節を含む。数人の患者で、該疾患は重篤であり、通常、指および脊椎に影響を及ぼす。脊椎が罹患しているとき、症状は強直性脊椎炎の症状と非常に似ている。
【０１６１】
ライター症候群は、関節炎、尿道炎（尿生殖路の炎症）、結膜炎（目の裏層の炎症）、ならびに皮膚および粘膜の病変から成る症状の群である。ライター症候群は、反応性関節炎とも呼ばれ、関節炎が体の別の箇所で発生した感染症に対する「反応」として起こることを意味する。Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓは、性的接触を介して得られたライター症候群にほとんどの場合関連している細菌である。Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、およびＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒを含む、消化管を介して得られた複数の異なる細菌がライター症候群に関連している。
【０１６２】
成人スティル病は、成人発症スティル病とも呼ばれ、内部器官、関節および体の他の部分を攻撃するまれな炎症性状態である。成人スティル病は突然出現および消失することがある。非常に重篤な症例では、成人スティル病は、慢性で非常に消耗性となり、激痛および硬直を引き起こす。該疾患は何年も後に、心臓および肺などの重要器官に障害を与える。
【０１６３】
ベーチェット症候群は、再発性口腔内および／または性器潰瘍形成、失明および神経学的障害を引き起こし得る慢性再発性ブドウ膜炎を示す多臓器障害である。ベーチェット症候群は、４つの主要な症状：口腔内アフタ性潰瘍、皮膚病変、眼の症状、および性器潰瘍形成によって、そして時には、消化管、中枢神経系、脈管系、肺、および腎臓を含む体全体の組織および器官における炎症によって特徴付けられる。ベーチェット症候群の関節炎は通常は間欠的で自己限定性であり、変形性ではなく、膝および足首に局在する。
【０１６４】
クローン病は、口から肛門までの消化管の任意の部分に関係するが、一般に、回腸（小腸下部５分の３）に関与して腸壁の瘢痕および肥厚を伴う、慢性肉芽腫性（小粒様体または増殖）炎症性疾患である。クローン病の症状は、慢性下痢の存在、腸音の増大、痙攣を含み、おそらく体重減少および摂食嫌悪によって明らかである。
【０１６５】
２．ＡＡアミロイドーシスに関連する慢性微生物感染疾患
らいは、外観を損なう皮膚びらん、末梢神経損傷、および進行性衰弱を特徴とする感染性疾患である。らいは、感染性が低く、長い潜伏期間を有するＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅという生物によって引き起こされる。らいは、結核型および癩腫型の２つの一般的な形態がある。どちらの形態も皮膚にびらんを発生させるが、癩腫型は非常に重篤であり、大きく外観を損なう結節（塊および瘤）を生成する。らいは最終的に、末梢神経学的障害を引き起こす。長期のらい患者は、感覚喪失から生じる反復性傷害により、手や足を使用できなくなることがある。
【０１６６】
結核は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによる感染性細菌感染症である。該疾患は、感染組織での肉芽腫（顆粒腫瘍）の発生を特徴とする。肺が主に関係するが、感染症は他の器官にも広がる可能性がある。
【０１６７】
気管支拡張症は、太い気道の異常な破壊および拡張である。気管支拡張症は、気道の再発性炎症または感染症によって引き起こされることが多い。気管支拡張症患者に見られる古典的な細菌は、根絶が困難なことで悪名高い、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである。この細菌による気道の反復感染症は、この生物による気管支のコロニー形成につながることがあり、処置には特殊な抗生物質を必要とするＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｌ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｓにこのような人々が罹りやすくなる。
【０１６８】
褥瘡性潰瘍は、圧迫潰瘍または床ずれとしても公知であり、罹患部位に対する長期の圧迫によって引き起こされた皮膚および下層組織の潰瘍形成である。それらは皮膚の赤みとして始まり、進行的に悪化して、水疱、次に開放びらん、最後にクレータを形成する。これらの潰瘍形成は通常、かかと、臀部の尾骨部位および頭後部などの骨張っている隆起に発生する。
【０１６９】
慢性腎盂腎炎は、腎臓および輸尿管（腎臓から尿を運搬する管）の感染症である。腎盂腎炎は、膀胱から輸尿管または腎盂への尿の時折のまたは持続性の逆流の存在下で特に、尿路感染症の結果として起こることが最も多い。
【０１７０】
骨髄炎は、通常は細菌によって発生する急性または慢性骨感染症である。骨髄炎は、体の別の部分で発症して、血液を介して骨に広がることが多い。骨が感染しているときに、骨内で膿が産生されて、膿瘍を引き起こし得る。膿瘍によって次に、骨からその血液供給が奪われる。慢性骨髄炎は、血液供給消失の結果として骨組織が死滅したときに発生する。慢性的な感染が数年にわたって間欠的に持続する可能性がある。
【０１７１】
ウィップル病は、腸の感染のために腸管からの栄養吸収が不十分となる、まれな状態である。これはＴｒｏｐｈｅｒｙｍａ  ｗｈｉｐｐｅｌｉｉという細菌によって引き起こされる。症状は、下痢、腸内出血、腹痛、食欲不振、体重減少、疲労、および脱力を含む。関節炎および発熱は、腸症状が発症する数年前に発生することが多い。患者は、神経学的症状も同様に経験し得る。診断は、症状および小腸または罹患している他の器官からの組織生検の結果に基づく。認識および処置されると、ウィップル病は通常治癒が可能である。処置を行わないと、状態は通常、致死的である。
【０１７２】
３．ＡＡアミロイドーシスに関連する悪性新生物
ホジキンリンパ腫は、リンパ節、脾臓、肝臓、および骨髄に見出されるリンパ組織の癌である。癌の最初の徴候は、リンパ節の膨大であることが多い。該疾患は、近くのリンパ節に広がることが可能であり、後で肺、肝臓、または骨髄まで広がり得る。
【０１７３】
腎臓癌は腎臓の癌である。癌性細胞は腎尿細管の内層に見出される。最初の症状は通常、血尿である。時には両方の腎臓が関係する。癌はほとんどの場合、肺および他の器官まで容易に広がる。腎細胞癌は、乳頭状腎細胞癌、色素嫌性腎臓癌および集合管腎臓癌が後に続く、一般的な種類の腎臓癌である。腎臓癌の約５％は、その外観が他の分類のいずれにも適合しないために分類されていない。
【０１７４】
消化管の癌は、たとえば結腸直腸、膵臓、胃および食道などの消化管癌を含む。結腸直腸癌は、大腸から直腸まで発生する癌である。ほぼすべての結腸直腸癌は、良性ポリープとして始まり、数年の期間にわたって癌へと進行する。結腸直腸癌の大半の症例は症状がない。膵臓癌は、膵臓の悪性疾患である。症状は腹痛、食欲不振、著しい体重減少および無痛性黄疸を含む。胃（ｓｔｏｍａｃｈ）癌は、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）癌とも呼ばれ、胃のいずれの部分にも発生する可能性があり、胃全体および他の器官；特に食道および小腸に広がることがある。胃癌は胃壁を通じて、付近のリンパ節ならびに肝臓、膵臓、および肺などの器官に、または鎖骨の上のリンパ節、結腸、および卵巣などの離れた器官にまで広がることがある。胃癌は、無症候性であることが多い。食道癌は、食道の悪性疾患である。症状は嚥下障害（嚥下困難）、疼痛および実質的な体重減少を含む。
【０１７５】
肺癌は、悪性腫瘍の存在を特徴とする肺の癌である。肺がんには主な２つの形態：非小細胞肺癌および小細胞肺癌がある。症状は癌の特定の形態によって変わるが、慢性的な咳、喀血、息切れ、喘鳴、胸痛、食欲不振、体重減少および疲労を含み得る。
【０１７６】
尿生殖路の癌は、これに限定されるわけではないが、前立腺癌、膀胱癌、子宮内膜癌、子宮頸癌および卵巣癌を含む。前立腺癌は、前立腺内での悪性腫瘍増殖を含む。症状は、頻尿、一定の尿流の開始および維持の困難、血尿、尿排泄時疼痛、勃起困難または射精時疼痛を含み得る。膀胱癌は、複数の形態の膀胱の悪性増殖のいずれかを指す。症状は血尿、頻尿、尿排泄時疼痛、および尿意逼迫を含む。子宮内膜癌は、子宮内膜（子宮の内層）の癌性増殖を含む。子宮内膜癌は主に閉経後に発生して、膣出血を示す。子宮頸癌は、子宮頸部の悪性腫瘍である。子宮頸癌の早期は、完全に無症候性であり得る。膣出血は、悪性腫瘍の存在を示し得る。進行段階では、転移が腹部、肺または他の箇所に存在し得る。卵巣癌は、卵巣の悪性新生物である。卵巣癌の症状は不明瞭で非特異的であることが多く、不明瞭な下腹部不快感、骨盤重感、月経周期異常、膣出血、体重増加または減少、非特異的消化管症状を含む。卵巣癌が放出した癌細胞は、子宮、膀胱、腸、および腸壁内層に埋没することが多い。これらの癌細胞は、癌が疑われる前にさえ、新しい腫瘍増殖の形成を開始する可能性がある。
【０１７７】
基底細胞癌は、基底皮膚細胞の癌性変化を含む進行の遅い皮膚腫瘍である。症状は、顔、耳、頸部、胸部、背部、または頭皮に位置する皮膚病変；病変または隣接皮膚における目に見える血管：および持続性で治癒しないびらんを含む。この癌は通常、局所に留まり、体の離れた部分に広がることはほとんどないが、増殖を続けて、神経、骨、および脳を含む付近の組織および構造に浸潤し得る。
【０１７８】
ヘアリー細胞白血病は、血球数の低下を引き起こすリンパ球（Ｂ細胞）の癌である。該疾患は、頭髪様突起を持つ異常な形状のＢ細胞によって引き起こされる。症状は不明瞭なことが多い。ヘアリー細胞白血病によって引き起こされた血球数の低下は、感染症、疲労、および過剰な出血をもたらす可能性がある。
【０１７９】
４．ＡＡに関連する遺伝性炎症性疾患
家族性地中海熱は、腹部または肺に関係することが多い、再発性の発熱および炎症を特徴とする遺伝性障害である。症状は、通常１２〜２４時間後にピークに達する高熱と共に発生する、腹腔内層、胸腔、皮膚、または関節における炎症を含む。発作は症状の重症度で異なることがあり、人々は通常、発作の間は無症状である。この疾患は非常にまれである。リスク因子は、家族性地中海熱の家族歴または地中海の祖先を有することを含む。
【０１８０】
５．ＡＡアミロイドーシスに関連するリンパ球増殖性障害
キャッスルマン病は、病理学的に形質細胞浸潤を伴う巨大リンパ節増殖の存在を特徴とする、リンパ球増殖性障害の形態である。キャッスルマン病患者は、発熱、貧血、高ガンマグロブリン血症、および急性期反応物質タンパク質の血清濃度の上昇を一般に有し、そのすべてはリンパ節で産生された大量のＩＬ−６に起因している。
【０１８１】
ＩＶ．血清アミロイドＡ
１．ヒト血清アミロイドＡ
血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）は、アミロイド沈着物の原線維構成成分である、アミロイドＡタンパク質の循環前駆体である。構造的研究により、ヒトＳＡＡは不均一であり、多形ＳＡＡ遺伝子およびタンパク質生成物のファミリを表すことが示された。ＳＡＡ遺伝子スーパーファミリは、１１ｐ１５．１に局在する密接に結合した遺伝子のクラスタを含む。Ｓｅｌｌａｒ，ＧＣら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １９：２２１−２２７（１９９４）を参照。ヒトでは、４つのＳＡＡ遺伝子が説明されている。４つのＳＡＡ遺伝子によってコードされたタンパク質の代表的なアミノ酸配列を図１に示す。２つの遺伝子（ＳＡＡ１およびＳＡＡ２）は、急性期血清アミロイドＡ（Ａ−ＳＡＡ）をコードして、炎症に応答して協調的に誘導される。ＳＡＡ１およびＳＡＡ２は、コード領域および非コード領域の両方で９５％の同一性を共有している。図１８および１９に示すように、ヒトＳＡＡ１のアルファ、ベータおよびガンマアイソフォームならびにヒトＳＡＡ２のアルファおよびベータアイソフォームがある。ＳＡＡ３は偽遺伝子である。ＳＡＡ４は、構成的なＳＡＡをコードして、最小限の誘導性である。Ｃｕｎｎａｎｅ  Ｇ．Ｂａｉｌｌｉｅｒｅ’ｓ  Ｃｌｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１３（４）：６１５−６２８を参照。すべてのヒトＳＡＡ／ＡＡ分子は、自己凝集のためにおそらく重要であり、原線維形成におけるアミロイドの原線維外部分を有する、理論的カルシウム結合テトラペプチド配列Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙを含有する。Ｆｙｋｓｅ，Ｅ．Ｍ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２５６：９７３−９８０（１９８８）およびＴｕｒｎｅｌｌら、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．３：３８７−４０７（１９８６）を参照。ＳＡＡ／ＡＡのＮ末端部分は強い疎水性であり、自己凝集およびアミロイド沈着物における他の構成成分にとっておそらく重要である。Ｈｕｓｂｙら、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．７０（ｌ）：２−９（１９９４）を参照。ＡＡの各アイソフォームの配列およびその対応するＳＡＡアイソフォームに対するその関係を図２〜５に示す。たとえばヒトＳＡＡ１アルファは、配列：
【０１８２】
【化１】
2014080434.tif 000005
を有する。
【０１８３】
ＳＡＡのタンパク質分解断片であるＡＡも不均質である。主なヒトＡＡペプチドは、７６アミノ酸から成る。ＡＡの例は配列：
【０１８４】
【化２】
2014080434.tif 000006
を有する。
【０１８５】
ＡＡ７０〜７６は、配列ＧＨＧＡＥＤＳ（配列番号４）から成る（配列番号２）の残基７０にて開始して、残基７６にて終結するＡＡ断片、またはそのタンパク質の配列が配列番号２と最大限に整列されたときの、ヒトまたは他の種からの別の天然発生型ＡＡタンパク質由来の対応するセグメントを指す。
【０１８６】
２．マウス血清アミロイドＡ
マウスでは、４つのＳＡＡ遺伝子が説明されている。４つのマウスＳＡＡ遺伝子によってコードされたタンパク質の代表的なアミノ酸配列を図８に示す。マウスＳＡＡ遺伝子ファミリは、染色体７にて密接に関連する４つのメンバを含む。主要なマウスＳＡＡアイソタイプ（ＳＡＡ１およびＳＡＡ２）をコードするこれらの遺伝子のうち２つは、エキソンにおいてだけではなく、イントロンおよびフランキング領域においても高い配列同一性を共有しており、アミロイド誘導モデルに応答してほぼ等しい量で誘導される。これらの２つのアイソタイプは、１０３アミノ酸残基のうち９つのみが異なる；しかし、ＳＡＡ２のみがアミロイド原線維中に選択的に沈着する。ｄｅ  Ｂｅｅｒ  Ｍ．Ｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ
Ｊ．１９９１  ２８０（Ｐｔ  １）：４５−４９（１９９１）；Ｈｏｆｆｍａｎ  Ｊ．Ｓ．ら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１５９：６４１−６４６（１９８４）；Ｓｈｉｒｏｏ  Ｍら、Ｓｃａｎｄ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：７０９−７１６（１９８７）を参照。ＳＡＡ３は、微量のＨＤＬアポリポタンパク質であり、急性期に末梢で産生される。ＳＡＡ４は、恒常性の間にＳＡＡの９０％超を構成する、微量の正常ＨＤＬアポリポタンパク質である構成的なサブファミリである。Ｓｔｅａｒｍａｎ  Ｒ．Ｓ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１４（２）７９７−８０９（１９８６）およびｄｅ  Ｂｅｅｒ  Ｍ．Ｃ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，３４（１）：１３９−４２（１９９６）を参照。
【０１８７】
ＳＡＡのタンパク質分解断片であるマウスＡＡも不均質である。ＡＡの各マウスアイソフォームの配列およびその対応するＳＡＡアイソフォームに対するその関係を図９〜１２に示す。マウスＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３およびＡＡ４の配列アラインメントを図１３に示す。
【０１８８】
マウスＡＡ１は、ヒトＡＡ１のマウス同等物である。図１６を参照。特に、マウスＡＡ１の残基６９〜７５（ＧＲＧＨＥＤＴ、配列番号９）は、ヒトＡＡ１の残基７０〜７６（ＧＨＧＡＥＤＡＳ、配列番号４）と最大限に配列されている。図１７も参照。
【０１８９】
３．シャーペイ血清アミロイドＡ
シャーペイ配列を図２０に示す。興味深いことに、ヒトＳＡＡタンパク質の相同領域−ＡＥＤＳ、（配列番号１３）は、位置７６に保存的Ｔｈｒ〜Ｓｅｒ置換はもちろんのこと、位置７３に残基の著しく異なる残基（Ｈｉｓ〜Ａｌａ；図１）も含有する。−ＡＥＤＳ、（配列番号：１３）配列は、ＡＡアミロイドーシスに対して特に罹りやすい血統である、イヌのシャーペイ種でも観察され、ＡＡアミロイド特異性抗体および他の化合物の新規診断および治療用途を評価するための全身性ＡＡの天然発生型モデルを提供することができる。
【０１９０】
４．ＡＡタンパク質のＮ末端セグメントがその原線維形成特性を決定する
アミロイド原線維タンパク質ＡＡは、前駆体タンパク質血清ＡＡの可変長Ｎ末端部分から成る。証拠は、分子のアミロイド形成部がＮ末端１０〜１５アミノ酸長セグメントであることを示している。分子のこの部分でのアミノ酸置換は、２つのマウスＳＡＡアイソフォームの一方のみがアミロイド形成性である理由を説明し得る。Ｗｅｓｔｅｒｍａｒｋ  Ｇ．Ｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．１８２（ｌ）：２７−３３（１９９２）を参照。
【０１９１】
Ｖ．他のヒトアミロイド形成性タンパク質
上の表２に挙げたもののいくつかも含めて、複数のヒトアミロイド形成性タンパク質のＧｅｎｂａｎｋアクセション番号およびＸ１ＥＤＸ２配列を下の表３に示す。
【０１９２】
【表３−１】
2014080434.tif 000007
【０１９３】
【表３−２】
2014080434.tif 000008
【０１９４】
【表３−３】
2014080434.tif 000009
【０１９５】
【表３−４】
2014080434.tif 000010
【０１９６】
【表３−５】
2014080434.tif 000011
【０１９７】
【表３−６】
2014080434.tif 000012
【０１９８】
【表３−７】
2014080434.tif 000013
ＶＩ．能動免疫化のためのアミロイドペプチド
本発明の方法で使用するための治療剤は、患者への投与時にたとえばＡＡの残基７０〜７６間のエピトープなどの、Ｘ１ＥＤＸ２を含む１つ以上のエピトープに特異的に結合する抗体を生成する、免疫原性ペプチド、たとえばＡＡペプチドおよびＡＬペプチドである（「ＡＡ剤」）。薬剤のさらなる例は、他のアミロイドタンパク質に由来するＸ１ＥＤＸ２（「Ｘ１ＥＤＸ２断片」）から成る免疫原性ペプチドを含み、たとえばＡＬ  Ｖκ断片は、アミノ酸配列ＰＥＤＩ、（配列番号２１）、ＰＥＤＦ、（配列番号２２）、ＡＥＤＶ、（配列番号２３）、ＳＥＤＦ、（配列番号２４）、またはＳＥＤＡ、（配列番号２５）から成り、ＡＬ  Ｖλ断片は、アミノ酸配列ＳＥＤＥ、（配列番号１８）、ＡＥＤＥ、（配列番号１９）、ＴＥＤＥ、（配列番号１６）またはＰＥＤＥ、（配列番号２０）から成る。アミノ酸配列ＦＥＤＤ、（配列暗号：１７）から成るＡＬ  Ｖλ断片も使用され得る。いくつかの好適なアミロイドタンパク質は、血清アミロイドＡタンパク質、免疫グロブリン軽鎖タンパク質、ヒト膵島アミロイド前駆体ポリペプチド（ＩＡＰＰ）、ベータアミロイドペプチド、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、ＡｐｏＡ１ならびに表１に挙げ、配列Ｘ１ＥＤＸ２を含む他のアミロイドタンパク質を含む。いくつかの薬剤において、Ｘ１は、Ｈ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、Ａまたはアミロイドタンパク質でＥＤの直前に先行する任意の他のアミノ酸残基であり；Ｘ２は、Ｔ、Ｓ、Ｅ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、Ｆ、Ｄ、Ａまたはこのようなアミロイドタンパク質でＥＤの直後に続く任意の他のアミノ酸残基である。いくつかの薬剤において、Ｘ１は、Ｈ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、またはＡであり、Ｘ２は、Ｔ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、ＦまたはＡである。いくつかのこのような薬剤において、Ｘ１がＨであるとき、Ｘ２は、ＴまたはＡである；Ｘ１がＡであるとき、Ｘ２は、Ｓ、Ｔ、ＥまたはＶである；Ｘ１がＴであるとき、Ｘ２はＥである；Ｘ１がＦであるとき、Ｘ２はＤである；Ｘ１がＳであるとき、Ｘ２は、Ｅ、ＦまたはＡである；Ｘ１がＰであるとき、Ｘ２は、Ｅ、ＩまたはＦである。いくつかの薬剤において、Ｘ１がＡならば、Ｘ２はＶでないという条件で、Ｘ１は、Ｈ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、またはＡであり、Ｘ２は、Ｔ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、ＦまたはＡである。いくつかの薬剤において、Ｘ１がＡであるとき、Ｘ２はＳ、ＴまたはＥである。
【０１９９】
いくつかの薬剤は、アミノ酸配列ＧＨＥＤＴ、（配列番号３）、ＨＥＤＴ、（配列番号１２）、ＡＥＤＳ、（配列番号１３）、ＡＥＤＴ、（配列番号１４）、ＨＥＤＡ、（配列番号１５）、ＴＥＤＥ、（配列番号１６）、ＦＥＤＤ、（配列番号１７）、ＳＥＤＥ、（配列番号１８）、ＡＥＤＥ、（配列番号１９）、ＰＥＤＥ、（配列番号２０）、ＰＥＤＩ、（配列番号２１）、ＰＥＤＦ、（配列番号２２）、ＡＥＤＶ、（配列番号２３）、ＳＥＤＦ、（配列番号２４）、またはＳＥＤＡ、（配列番号２５）を含む。いくつかの薬剤は、コンジュゲートを形成するために担体と連結されたＧＨＥＤＴ、（配列番号３）、ＨＥＤＴ、（配列番号１２）、ＡＥＤＳ、（配列番号１３）、ＡＥＤＴ、（配列番号１４）、ＨＥＤＡ、（配列番号１５）、ＴＥＤＥ、（配列番号１６）、ＦＥＤＤ、（配列番号１７）、ＳＥＤＥ、（配列番号１８）、ＡＥＤＥ、（配列番号１９）、ＰＥＤＥ、（配列番号２０）、ＰＥＤＩ、（配列番号２１）、ＰＥＤＦ、（配列番号２２）、ＡＥＤＶ、（配列番号２３）、ＳＥＤＦ、（配列番号２４）、またはＳＥＤＡ、（配列番号２５）から成る群より選択されるアミノ酸配列から成る。いくつかの薬剤は、アミノ酸配列ＧＨＥＤＴ、（配列番号３）、ＨＥＤＴ、（配列番号１２）、ＡＥＤＳ、（配列番号１３）、ＡＥＤＴ、（配列番号１４）、ＨＥＤＡ、（配列番号１５）、ＴＥＤＥ、（配列番号１６）、ＦＥＤＤ、（配列番号１７）、ＳＥＤＥ、（配列番号１８）、ＡＥＤＥ、（配列番号１９）、ＰＥＤＥ、（配列番号２０）、ＰＥＤＩ、（配列番号２１）、ＰＥＤＦ、（配列番号２２）、ＡＥＤＶ、（配列番号２３）、ＳＥＤＦ、（配列番号２４）、またはＳＥＤＡ、（配列番号２５）を含む。いくつかの薬剤は、コンジュゲートを形成するために担体と連結されたＧＨＥＤＴ、（配列番号３、ＨＥＤＴ、（配列番号１２）、ＡＥＤＳ、（配列番号１３）、ＡＥＤＴ、（配列番号１４）、ＨＥＤＡ、（配列番号１５）、ＴＥＤＥ、（配列番号１６）、ＦＥＤＤ、（配列番号１７）、ＳＥＤＥ、（配列番号１８）、ＡＥＤＥ、（配列番号１９）、ＰＥＤＥ、（配列番号２０）、ＰＥＤＩ、（配列番号２１）、ＰＥＤＦ、（配列番号２２）、ＳＥＤＦ、（配列番号２４）、およびＳＥＤＡ、（配列番号２５）から成る群より選択されるアミノ酸配列から成る。いくつかの薬剤は、ＧＨＥＤＴ、（配列番号３）、ＨＥＤＴ、（配列番号１２）、ＡＥＤＳ、（配列番号１３）、ＡＥＤＴ、（配列番号１４）、ＨＥＤＡ、（配列番号１５）、およびＴＥＤＥ、（配列番号１６）から成る群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【０２００】
好ましいＡＡ断片は、ヒトＡＡ１（ＨＡＡ１）アルファアイソフォーム残基７０〜７６（ＧＨＧＡＥＤＳ、配列番号４）、ＨＡＡ１ベータアイソフォーム残基７０〜７６（ＧＨＤＡＥＤＳ、配列番号５）、ＨＡＡ１ガンマアイソフォーム残基７０〜７６（ＧＨＤＡＥＤＳ、配列番号５）、ＨＡＡ２アルファおよびベータアイソフォーム残基７０〜７６（ＧＨＧＡＥＤＳ、配列番号４）、ＨＡＡ３残基７０〜７６（ＧＤＨＡＥＤＳ、配列番号７）、ＨＡＡ４残基７８〜８４（ＳＴＶＩＥＤＳ、配列番号８）、マウスＡＡ１（ＭＡＡｌ）残基６９〜７５（ＧＲＧＨＥＤＴ、配列番号９）、ＭＡＡ２残基６９〜７５（ＧＲＧＨＥＤＴ、配列番号９）、ＭＡＡ３残基６２〜６８（ＧＨＧＡＥＤＳ、配列番号１０）、およびＭＡＡ４残基７６〜８２（ＮＨＧＬＥＴＬ、配列番号１１）またはこれらのいずれかの少なくとも３個の隣接アミノ酸のサブ断片である。いくつかのＡＡ断片は、上で示したセグメント以外のＡＡアミロイドーシスペプチドの残基を含有しない。他のＡＡ断片は、ＡＡアミロイドーシスペプチドからのさらなるフランキング残基を含有するが、ＡＡアミロイドーシスペプチドから合計で２０個を超える、または好ましくは１０個を超える隣接残基を含有しない。さらなる好ましいＸ１ＥＤＸ２およびＡＬ断片は、ＧＨＥＤＴ、（配列番号３）、ＨＥＤＴ、（配列番号１２）、ＡＥＤＳ、（配列番号１３）、ＡＥＤＴ、（配列番号１４）、ＨＥＤＡ、（配列番号１５）、およびＴＥＤＥ、（配列番号１６）を含む。
【０２０１】
本発明の方法で使用するための治療剤は、患者への投与時にＡＡのＮ末端エピトープに特異的に結合する抗体を生成する免疫原性ＡＡペプチドも含む。好ましい薬剤は、ヒトＡＡの残基１〜１５内のエピトープに向けた免疫原性応答を誘導する。
【０２０２】
好ましくは、投与されたＡＡもしくはＡＬの断片またはＸ１ＥＤＸ２断片などの他の薬剤は、断片に対するＴ細胞応答を生成するエピトープを欠失している。一般に、Ｔ細胞エピトープは１０隣接アミノ酸より大きい。したがってアミロイドタンパク質の好ましい断片、たとえばＡＡまたはＸ１ＥＤＸ２断片は、４〜１０または好ましくは７〜１０隣接アミノ酸のサイズ；すなわちＴ細胞応答を生成せずに抗体応答を生成するのに十分な長さである。Ｔ細胞エピトープが存在しないことが好ましいのは、これらのエピトープが断片の免疫原性活性には不要であり、患者のサブセットで望ましくない炎症性応答を引き起こし得るからである（Ａｎｄｅｒｓｏｎら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８，３６９７−３７０１；Ｓｅｎｉｏｒ（２００２）Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ．１，３）。
【０２０３】
好ましいＡＡ断片は、ヒトＡＡ１（ＨＡＡ１）アルファアイソフォーム残基７０〜７６（ＧＨＧＡＥＤＳ、配列番号４）、ＨＡＡ１ベータアイソフォーム残基７０〜７６（ＧＨＤＡＥＤＳ、配列番号５）、ＨＡＡ１ガンマアイソフォーム残基７０〜７６（ＧＨＤＡＥＤＳ、配列番号５）、ＨＡＡ２アルファおよびベータアイソフォーム残基７０〜７６（ＧＨＧＡＥＤＳ、配列番号４）、ＨＡＡ３残基７０〜７６（ＧＤＨＡＥＤＳ、配列番号７）、ＨＡＡ４残基７８〜８４（ＳＴＶＩＥＤＳ）（配列番号８）、マウスＡＡ１（ＭＡＡｌ）残基６９〜７５（ＧＲＧＨＥＤＴ）（配列番号９）、ＭＡＡ２残基６９〜７５（ＧＲＧＨＥＤＴ、配列番号９）、ＭＡＡ３残基６２〜６８（ＧＨＧＡＥＤＳ）（配列番号１０）、およびＭＡＡ４残基７６〜８２（ＮＨＧＬＥＴＬ）（配列番号１１）またはこれらのいずれかの少なくとも３個の隣接アミノ酸のサブ断片である。いくつかのＡＡ断片は、上で示したセグメント以外のＡＡアミロイドーシスペプチドの残基を含有しない。他のＡＡ断片は、ＡＡアミロイドーシスペプチドからのさらなるフランキング残基を含有するが、ＡＡアミロイドーシスペプチドから合計で２０個を超える、または好ましくは１０個を超える隣接残基を含有しない。さらなる好ましいＸ１ＥＤＸ２およびＡＬ断片は、ＧＨＥＤＴ、（配列番号３）、ＨＥＤＴ、（配列番号１２）、ＡＥＤＳ、（配列番号１３）、ＡＥＤＴ、（配列番号１４）、ＨＥＤＡ、（配列番号１５）、およびＴＥＤＥ、（配列番号１６）を含む。
【０２０４】
天然型ＡＡアミロイドーシス、ＡＬアミロイドーシス、および他のアミロイドーシスペプチドの類似体も、免疫応答を誘導するために本発明の方法および組成物で使用可能である。類似体としては対立遺伝子、種および誘導変種が挙げられる。ＡＡの類似体は、天然ＡＡ７０〜７６ペプチドと特異的に結合する抗体を誘導する。いくつかのこのような類似体は、ＡＡ７０〜７６外部のエピトープに特異的に結合する抗体を誘導できない。ＡＡの類似体は通例、天然発生型ペプチドとは、３０％までのアミノ酸位置にて１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０までの位置変化で異なる。天然アミノ酸残基の各欠失または置換は、置換を伴わない残基の挿入と同様に、位置変化と見なされる。アミノ酸置換は保存的置換であることが多い。
【０２０５】
ＡＡもしくはＡＡ断片またはＡＬもしくはＡＬ断片または他のアミロイドタンパク質断片、たとえばＸ１ＥＤＸ２断片のいくつかの類似体も、非天然アミノ酸またはＮもしくはＣ末端アミノ酸の１、２、５、１０またはすべての位置でさえの修飾を含む。たとえば天然アスパラギン酸残基は、イソアスパラギン酸によって置換することができる。非天然アミノ酸の例は、Ｄ，アルファ，アルファ置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、４−ヒドロキシプロリン、ガンマ−カルボキシグルタメート、イプシロン−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、イプシロン−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、オメガ−Ｎ−メチルアルギニン、β−アラニン、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン（ｈｙｄｒｏｘｐｒｏｌｉｎｅ）、チロキシン、ガンマ−アミノ酪酸、ホモセリン、シトルリン、およびイソアスパラギン酸である。本発明のいくつかの治療剤は、オールＤペプチド、たとえばオールＤ  ＡＡまたはオールＤ  ＡＡ断片、およびオールＤペプチド類似体である。本発明のいくつかの治療剤は、９０％オールＤペプチド、たとえば９０％オールＤ  ＡＡまたは９０％オールＤ  ＡＡ断片、および９０％オールＤペプチド類似体である。本発明のいくつかの治療剤は、８０％オールＤペプチド、たとえば８０％オールＤ  ＡＡまたは８０％オールＤ  ＡＡ断片、および８０％オールＤペプチド類似体である。断片および類似体は、後述するように未処置またはプラセボ対照と比較したトランスジェニック動物モデルにおける予防または治療有効性についてスクリーニングできる。
【０２０６】
ＡＡ、ＡＬ、その断片、および類似体ならびにＸ１ＥＤＸ２断片およびその類似体は、固相ペプチド合成もしくは組換え発現によって合成することができるか、または天然源から得ることができる。自動ペプチド合成装置は、多くの供給者、たとえばＡｐｐｌｉｅｄ
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから市販されている。組換え発現は細菌、たとえばＥ．ｃｏｌｉ、酵母、昆虫細胞または哺乳動物細胞において可能である。組換え発現の手順は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃ．Ｓ．Ｈ．Ｐ．Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ  ２ｄ  ｅｄ．，１９８９．）に記載されている。
【０２０７】
治療剤は、たとえばＡＡペプチド、ＡＬペプチドの免疫原性断片またはＸ１ＥＤＸ２断片を、ＡＡペプチド、ＡＬペプチドまたはＸ１ＥＤＸ２断片の片側または両側で隣接している１つ以上の他のアミノ酸と共に含む、より長いポリペプチドも含む。たとえば好ましい薬剤は、異種アミノ酸配列に融合されたＡＡ、ＡＬまたはＸ１ＥＤＸ２断片のセグメントを含む融合タンパク質を含み、異種アミノ酸配列は、異種アミノ酸配列に対してヘルパーＴ細胞応答を、それによりＡＡセグメント、ＡＬセグメントまたはＸ１ＥＤＸ２断片に対してＢ細胞応答を誘導する。１つ以上のフランキング異種アミノ酸を使用して、ＡＡもしくはＡＬペプチドまたはＸ１ＥＤＸ２断片をキャップして製造、貯蔵または使用時の分解からそれを保護することができる。このようなポリペプチドは、後述するように未処置またはプラセボ対照と比較した動物モデルにおける予防または治療有効性についてスクリーニングできる。本発明の治療剤は、ポリリジン配列に隣接されたＡＡもしくはＡＬの免疫原性断片またはＸ１ＥＤＸ２断片を含む。ポリリジン配列は、ＡＡもしくはＡＬまたはＡＡもしくはＡＬの免疫原性断片またはＸ１ＥＤＸ２断片のＮ末端、Ｃ末端、またはＮおよびＣ末端の両方に融合することができる。ＡＡまたはＡＬペプチド、Ｘ１ＥＤＸ２断片、類似体、ＡＡまたは他のポリペプチドの活性断片は、結合もしくは多量体形または解離形で投与することができる。治療剤は、単量体免疫原性剤の多量体も含む。
【０２０８】
さらなる変形において、ＡＡもしくはＡＬの免疫原性断片またはＸ１ＥＤＸ２断片は、免疫原性組成物の一部としてウイルスまたは細菌によって提示されることが可能である。免疫原性ペプチドをコードする核酸は、ウイルスまたは細菌のゲノムまたはエピソーム中に包含される。場合により核酸は、ペプチドが提示されるために、免疫原性ペプチドが分泌タンパク質としてまたはウイルスの外面タンパク質もしくは細菌の膜貫通タンパクとの融合タンパク質として発現されるような方式で包含される。このような方法で使用されるウイルスまたは細菌は非病原性であるか、または弱毒化されているべきである。好適なウイルスは、アデノウイルス、ＨＳＶ、ベネズエラウマ脳炎ウイルスおよび他のアルファウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ならびに他のラブドウイルス、ワクシニアおよび鶏痘を含む。好適な細菌は、ＳａｌｍｏｎｅｌｌａおよびＳｈｉｇｅｌｌａを含む。免疫原性ペプチドのＨＢＶのＨＢｓＡｇへの融合が特に好適である。
【０２０９】
治療剤は、ＡＡもしくはＡＬまたはＸ１ＥＤＸ２断片との著しいアミノ酸配列類似性を必ずしも有さないが、それにもかかわらずＡＡもしくはＡＬまたはＸ１ＥＤＸ２断片のミメティックとして作用して、類似の免疫応答を誘導するペプチドおよび他の化合物も含む。たとえば、β−プリーツシートを形成する任意のペプチドおよびタンパク質は好適性についてスクリーニングすることができる。ＡＡもしくはＡＬまたは他のアミロイド形成性ペプチド、たとえばＸ１ＥＤＸ２断片へのモノクローナル抗体に対する抗イディオタイプ抗体も使用できる。このような抗Ｉｄ抗体は、抗原を模倣して、それに対する免疫応答を生成する（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｒｏｉｔ  ｅｄ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，６ｔｈ  ｅｄ．），ｐ．１８１を参照）。ＡＡペプチド以外の薬剤は、上に挙げたＡＡ（たとえばＡＡ７０−７６またはＧＨＥＤＴ、（配列番号３）または上に挙げたＡＬもしくはＸ１ＥＤＸ２断片、たとえばＨＥＤＴ，（配列番号１２）、ＡＥＤＳ、（配列番号１３）、ＡＥＤＴ、（配列番号１４）、ＨＥＤＡ，（配列番号１５）およびＴＥＤＥ，（配列番号１６）の好ましいセグメントの１つ以上に対する免疫原性応答を誘導するはずである。
【０２１０】
好ましくは、このような薬剤は、Ｘ１ＥＤＸ２断片が由来したＡＡもしくはＡＬまたはアミロイドタンパク質の他のセグメントに向けられることなく、これらの断片の１つに特異的に向けられた免疫原性応答を誘導する。
【０２１１】
ペプチドまたは他の化合物のランダムライブラリも好適性についてスクリーニングすることができる。段階的方式で合成することができる多くの種類の化合物について、コンビナトリアルライブラリを作製することができる。このような化合物は、ポリペプチド、ベータターンミメティック、ポリサッカライド、リン脂質、ホルモン、プロスタグランジン、ステロイド、芳香族化合物、複素環式化合物、ベンゾジアゼピン、オリゴマーＮ置換グリシンおよびオリゴカルバメートを含む。化合物の大規模なコンビナトリアルライブラリは、Ａｆｆｙｍａｘ，ＷＯ  ９５／１２６０８，Ａｆｆｙｍａｘ，ＷＯ  ９３／０６１２１，Ｃｏｌｕｍｂｉａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＷＯ  ９４／０８０５１，Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ，ＷＯ  ９５／３５５０３およびＳｃｒｉｐｐｓ，ＷＯ  ９５／３０６４２（そのそれぞれはあらゆる目的のために参照により組み入れられている）に記載されたコード化合成ライブラリ（ＥＳＬ）法によって構築できる。ペプチドライブラリもファージ提示法によって作製できる。たとえばＤｅｖｌｉｎ，ＷＯ  ９１／１８９８０を参照。
【０２１２】
コンビナトリアルライブラリおよび他の化合物は、ＡＡまたは他のアミロイド形成性ペプチドに対して特異的であることが公知の抗体またはリンパ球（ＢまたはＴ）に特異的に結合するその能力を決定することによって、好適性について最初にスクリーニングされる。たとえば初期スクリーニングはＡＬもしくはＡＬまたはその断片に対する、またはＸ１ＥＤＸ２断片に対する任意のポリクローナル血清またはモノクローナル抗体を用いて実施できる。化合物は次に、ＡＡ（たとえばＡＡ７０−７６またはＧＨＥＤＴ、（配列番号３）もしくはＡＬ内の特異的エピトープまたは上に挙げたＸ１ＥＤＸ２断片、たとえばＨＥＤＴ，（配列番号１２）、ＡＥＤＳ、（配列番号１３）、ＡＥＤＴ、（配列番号１４）、ＨＥＤＡ，（配列番号１５）およびＴＥＤＥ，（配列番号１６）への特異的結合についてスクリーニングすることができる。
【０２１３】
化合物は、抗体エピトープ特異性をマッピングするために記載されたのと同じ手順によって試験することができる。このようなスクリーンによって同定された化合物は次に、ＡＡもしくはＡＬまたはその断片に対して、またはＸ１ＥＤＸ２断片に対して抗体または反応性リンパ球を誘導する能力についてさらに分析される。たとえば血清の複数の希釈物を、ＡＡもしくはＡＬまたはその断片またはＸ１ＥＤＸ２断片によってプレコートされたマイクロタイタープレートで試験することが可能であり、ＡＡもしくはＡＬまたはその断片に対する、またはＸ１ＥＤＸ２断片に対する反応性抗体について試験するために標準ＥＬＩＳＡを実施することが可能である。化合物は次に、アミロイドーシス、たとえばＡＡアミロイドーシスまたはＡＬアミロイドーシスへの素因があるトランスジェニック動物における予防および治療有効性について試験することができる。同じスクリーニング手法を、上述のＡＡ、ＡＬの断片およびＸ１ＥＤＸ２断片を含む、他の潜在的な薬剤、ＡＡの類似体、ＡＬの類似体およびより長いペプチドに対して使用することができる。
【０２１４】
ＶＩＩ．コンジュゲート
免疫応答を誘導するいくつかの薬剤は、ＡＡに対する免疫応答を誘導するための適切なエピトープを含有するが、小さすぎて免疫原性にはなれない。この状況で、ペプチド免疫原を好適な担体分子に連結して、免疫応答の誘導を補助するコンジュゲートを形成できる。単一の薬剤を単一の担体に連結することが可能であり、薬剤の複数のコピーを、次に相互に連結される担体の複数のコピーに連結することが可能であり、薬剤の複数のコピーを担体の単一のコピーに連結することが可能であり、または薬剤の単一のコピーを担体の複数のコピー、または別の担体に連結することが可能である。好適な担体は、血清アルブミン、キーホール・リンペット・ヘモシアニン、免疫グロブリン分子、サイログロブリン、オボアルブミン、破傷風トキソイド、または他の病原菌、たとえばジフテリア、Ｅ．ｃｏｌｉ、コレラ、もしくはＨ．ｐｙｌｏｒｉなどからのトキソイド、または減弱された毒素誘導体を含む。Ｔ細胞エピトープも好適な担体分子である。いくつかのコンジュゲートは、本発明の薬剤を免疫賦活性ポリマー分子（たとえばトリパルミトイル−Ｓ−グリセリンシステイン（Ｐａｍ３Ｃｙｓ）、マンナン（マンノースポリマー）またはグルカン（ベータ１→２ポリマー））、サイトカイン（たとえばＩＬ−１、ＩＬ−１アルファおよびベータペプチド、ＩＬ−２、ガンマ−ＩＮＦ、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ）、およびケモカイン（たとえばＭＩＰ１アルファおよびベータ、ならびにＲＡＮＴＥＳ）に連結することによって形成できる。免疫原性剤も、Ｏ’Ｍａｈｏｎｙ，ＷＯ  ９７／１７６１３およびＷＯ  ９７／１７６１４に記載されているように、組織での輸送を促進するペプチドに連結することができる。免疫原は、スペーサアミノ酸（たとえばｇｌｙ−ｇｌｙ）を用いて、または用いずに担体に連結され得る。
【０２１５】
いくつかのコンジュゲートは、本発明の薬剤を少なくとも１つのＴ細胞エピトープに連結することによって形成することができる。いくつかのＴ細胞エピトープは無差別的であるが、他のＴ細胞エピトープはユニバーサルである。無差別的Ｔ細胞エピトープは、各種のＨＬＡ型を提示する多種多様の被験体におけるＴ細胞免疫の誘導を促進することができる。無差別的Ｔ細胞エピトープとは対照的に、ユニバーサルＴ細胞エピトープは、Ｔ細胞免疫の誘導を高いパーセンテージで、たとえば異なるＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子によってコードされた各種のＨＬＡ分子を提示する被験体の少なくとも７５％で促進することができる。
【０２１６】
多数の天然型Ｔ細胞エピトープ、たとえば破傷風トキソイド（たとえばＰ２およびＰ３０エピトープ）、Ｂ型肝炎表面抗原、百日咳トキソイド、麻疹ウイルスＦタンパク質、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍｉｔｉｓ主要外膜タンパク質、ジフテリアトキソイド（たとえばＣＲＭ１９７）、熱帯熱マラリア原虫スポロゾイド周囲Ｔ、熱帯熱マラリア原虫ＣＳ抗原、マンソン住血吸虫トリオースリン酸イソメラーゼ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＴｒａＴ、およびインフルエンザウイルス血球凝集素（ＨＡ）が存在する。本発明の免疫原性ペプチドもＳｉｎｉｇａｇｌｉａ  Ｆ．ら、Ｎａｔｕｒｅ，３３６：７７８−７８０（１９８８）；Ｃｈｉｃｚ  Ｒ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７８：２７−４７（１９９３）；Ｈａｍｍｅｒ  Ｊ．ら、Ｃｅｌｌ  ７４：１９７−２０３（１９９３）Ｆａｌｋ  Ｋ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，３９：２３０−２４２（１９９４）；ＷＯ  ９８／２３６３５；Ｓｏｕｔｈｗｏｏｄ  Ｓ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６０：３３６３−３３７３（１９９８）；およびＧｉａｎｎｉｎｉ，Ｇ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１２：４０６３−４０６９（１９８４）（そのそれぞれはすべての目的のために、参照により本明細書に組み入れられている）に記載されたＴ細胞エピトープに結合することができる。さらなる例は：
【０２１７】
【化３】
2014080434.tif 000014
を含む。
【０２１８】
またはコンジュゲートは、本発明の薬剤を、ＭＨＣクラスＩＩ分子の大部分を結合することができる少なくとも１つの人工Ｔ細胞エピトープ、たとえばパンＤＲエピトープ（「ＰＡＤＲＥ」）に連結することによって形成できる。ＰＡＤＲＥは、ＵＳ  ５，７３６１４１、ＷＯ  ９５／０７７０７、およびＡｌｅｘａｎｄｅｒ  Ｊら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１：７５１−７６１（１９９４）（そのそれぞれはすべての目的のために、参照により本明細書に組み入れられている）に記載されている。好ましいＰＡＤＲＥペプチドは、
【０２１９】
【化４】
2014080434.tif 000015
（共通残基は太字）であり、ここでＸは好ましくはシクロヘキシルアラニン、チロシンまたはフェニルアラニンであり、シクロヘキシルアラニンが最も好ましい。
【０２２０】
免疫原性剤は化学架橋によって担体に連結することができる。免疫原を担体に連結する技法は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジル−チオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）およびスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＳＭＣＣ）を使用するジスルフィド結合の形成（このペプチドが、スルフヒドリル基を欠失している場合、これはシステイン残基の付加によって提供できる）を含む。これらの試薬は、それ自体と１つのタンパク質のペプチドシステイン残基との間のジスルフィド結合およびリジンのイプシロンアミノ、または他のアミノ酸の遊離アミノ基によるアミド結合を生成する。各種のこのようなジスルフィド／アミド形成剤は、Ｉｍｍｕｎ．Ｒｅｖ．６２，１８５（１９８２）に記載されている。他の２官能性カップリング剤は、ジスルフィド結合よりもチオエーテルを形成する。これらのチオエーテル形成剤の多くは市販されており、６−マレイミドカプロン酸、２−ブロモ酢酸、および２−ヨード酢酸、４−（Ｎ−マレイミド−メチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸の反応性エステルを含む。カルボキシ基は、それらをスクシンイミドまたは１−ヒドロキシル−２−ニトロ−４−スルホン酸ナトリウム塩と化合させることによって活性化することができる。
【０２２１】
免疫原性は、スペーサ残基（たとえばＧｌｙ−Ｇｌｙ）をＴｈエピトープと本発明のペプチド免疫原との間に付加することによって改善することができる。ＴｈエピトープをＢ細胞エピトープ（すなわちペプチド免疫原）から物理的に分離することに加えて、グリシン残基は、Ｔｈエピトープのペプチド免疫原との結合によって生成された任意の人工的な２次構造を破壊して、それによりＴおよび／またはＢ細胞応答の間の干渉を排除することができる。それゆえヘルパーエピトープと抗体誘導ドメインとの間の立体配座上の分離によって、提示された免疫原と適切なＴｈおよびＢ細胞との間で、より効率的な相互作用が可能となる。
【０２２２】
本発明の薬剤に対して各種のＨＬＡ型を提示する被験体の大部分のパーセンテージでＴ細胞免疫の誘導を促進するために、コンジュゲートと各種のＴｈ細胞エピトープとの混合物を調製することができる。混合物は、少なくとも２つのコンジュゲートと各種のＴｈ細胞エピトープとの混合物、少なくとも３つのコンジュゲートと各種のＴｈ細胞エピトープとの混合物、または少なくとも４つのコンジュゲートと各種のＴｈ細胞エピトープとの混合物を含有し得る。混合物はアジュバントと共に投与され得る。
【０２２３】
免疫原ペプチドは、担体との融合タンパク質としても発現することができる（すなわち異種ペプチド）。免疫原性ペプチドは、そのアミノ末端、そのカルボキシ末端、またはその両方で担体に連結することができる。場合により、融合タンパク質中には免疫原性ペプチドの複数の反復が存在することができる。場合により、免疫原性ペプチドは、異種ペプチドの複数のコピーにペプチドのＮおよびＣ末端の両方にて連結することができる。場合により、免疫原性ペプチドの複数のコピーを、相互に連結される異種ペプチドの複数のコピーに連結することができる。いくつかの担体ペプチドは、担体ペプチドに対するヘルパーＴ細胞応答を誘導するように作用する。誘導されたヘルパーＴ細胞は次に、担体に連結された免疫原性ペプチドに対するＢ細胞応答を誘導する。
【０２２４】
本発明で使用するのに好適な融合タンパク質のいくつかの例を下に示す。これらの融合タンパク質のいくつかは、ＵＳ  ５，１９６，５１２、ＥＰ  ３７８，８８１およびＥＰ
４２７，３４７に記載されているような、破傷風トキソイドエピトープに連結されたＡＡのセグメントを含む。いくつかの融合タンパク質は、ＵＳ  ５，７３６，１４２に記載されているように少なくとも１つのＰＡＤＲＥペプチドに連結されたＡＡのセグメントを含む。いくつかの異種ペプチドは無差別的Ｔ細胞エピトープであるが、他の異種ペプチドはユニバーサルＴ細胞エピトープである。いくつかの方法において、投与のための薬剤は単に、ＡＡセグメントが異種セグメントに線形構成で連結された単一の融合タンパク質である。本発明の治療剤は、式を使用して表すことができる。たとえばいくつかの方法において、薬剤は、式２ｘによって表される融合タンパク質の多量体であり、式中、ｘは１〜５の整数である。好ましくは、ｘは１、２または３であり、２が最も好ましい。ｘが２であるとき、このような多量体は、ＭＡＰ４と呼ばれる好ましい構成で連結された４つの融合タンパク質を有する（ＵＳ  ５，２２９，４９０）を参照）。
【０２２５】
ＭＡＰ４構成を下に示すが、ここで分枝構造は、Ｎ末端およびリジンの側鎖アミンの両方でペプチド合成を開始することによって産生される。リジンが配列に包含されて分枝される場合の回数に応じて、得られる構造は複数のＮ末端を示すであろう。この例では、４つの同じＮ末端が分枝リジン含有コアに産生されている。このような多重度によって、同族Ｂ細胞の応答性が大きく促進される。下の例では、ＺはＡＡ、ＡＬの免疫原性断片またはＸ１ＥＤＸ２断片を示し、Ｚ１〜４はＡＡ、ＡＬ（複数の）免疫原性断片またはＸ１ＥＤＸ２断片を示す。断片は相互に同じであるか、または異なることが可能である。
【０２２６】
【化５】
2014080434.tif 000016
融合タンパク質の他の例は：
【０２２７】
【化６】
2014080434.tif 000017
ＰＡＤＲＥペプチド（すべて線形構成）、ここでＸは好ましくは、シクロヘキシルアラニン、チロシンまたはフェニルアラニンであり、シクロヘキシルアラニンが最も好ましい−Ｚである：
【０２２８】
【化７】
2014080434.tif 000018
を含む。
【０２２９】
融合タンパク質のさらなる例は：
【０２３０】
【化８】
2014080434.tif 000019
【０２３１】
【化９】
2014080434.tif 000020
を含む。断片は相互に同じであるか、または異なることが可能である。
【０２３２】
【化１０】
2014080434.tif 000021
ＡＡまたはＡＡ、ＡＬの免疫原性断片またはＸ１ＥＤＸ２断片に対する抗体の生成に使用される免疫原を生成するために、同じまたは同様の担体タンパク質および連結方法を使用することができる。たとえば担体に連結されたＡＡまたはＡＡ、ＡＬの免疫原性断片またはＸ１ＥＤＸ２断片は、ＡＡまたはＡＡ、ＡＬの免疫原性断片またはＸ１ＥＤＸ２断片に対するモノクローナル抗体の産生の際に実験動物に投与することができる。
【０２３３】
ＶＩＩＩ．治療剤をコードする核酸
本発明の治療剤は核酸も含む。アミロイド沈着物に対する免疫応答は、受動免疫化に使用される、ＡＡペプチドのセグメント、およびその断片、Ｘ１ＥＤＸ２断片などの他のペプチド免疫原、または抗体およびその構成成分鎖、たとえば抗体２Ａ４、８Ｇ９および７Ｄ８をコードする核酸の投与によっても誘導することができる。本発明の方法で使用するためのこのような薬剤は、患者への投与時にＡＡ、ＡＬの残基７０〜７６間の１つ以上のエピトープに特異的に結合する抗体を生成するＡＡペプチドをコードする核酸、またはＸ１ＥＤＸ２断片を含むペプチドをコードする核酸を含む。本発明の方法で使用するためのこのような薬剤は、ＡＡのＣ末端ネオエピトープまたはＸ１ＥＤＸ２に特異的に結合する抗体をコードする核酸も含む。特にこのような核酸は、残基７０〜７６内のＨＡＡ１アルファアイソフォーム（ＧＨＧＡＥＤＳ、（配列番号４）、残基７０〜７６内のＨＡＡ１ベータアイソフォーム（ＧＨＤＡＥＤＳ、（配列番号５）、残基７０〜７６内のＨＡＡ１ガンマアイソフォーム（ＧＨＤＡＥＤＳ、（配列番号５）、ＨＡＡ２アルファおよびベータアイソフォーム残基７０〜７６（ＧＨＧＡＥＤＳ、（配列番号４）、残基７０〜７６内のＨＡＡ３（ＧＤＨＡＥＤＳ、（配列番号７）、残基７８〜８４内のＨＡＡ４（ＳＴＶＩＥＤＳ、（配列番号８）、残基６９〜７５内のマウスＡＡ１（ＭＡＡ１）（ＧＲＧＨＥＤＴ、（配列番号９）、残基６９〜７５内のＭＡＡ２（ＧＲＧＨＥＤＴ、（配列番号９）、残基６２〜６８内のＭＡＡ３（ＧＨＧＡＥＤＳ、（配列番号４）、および残基７６〜８２内のＭＡＡ４（ＮＨＧＬＥＴＬ、（配列番号１１）に特異的に結合する抗体をコードする。このような核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡであることが可能である。さらに好ましい核酸は、ＨＥＤＴ（配列番号１２）、ＡＥＤＳ（配列番号１３）、ＡＥＤＴ（配列番号１４）、ＨＥＤＡ（配列番号１５）もしくはＴＥＤＥ（配列番号１６）または上に挙げた他のＸ１ＥＤＸ２に特異的に結合する抗体をコードする。免疫原をコードする核酸セグメントは通例、患者の所期の標的細胞内でのＤＮＡセグメントの発現を可能にする調節エレメント、たとえばプロモータおよびエンハンサに連結される。血液細胞での発現では、免疫応答の誘導に所望であるように、軽鎖または重鎖免疫グロブリン遺伝子からのプロモータもしくはエンハンサエレメントまたはＣＭＶ主要中間体早期プロモータおよびエンハンサは、発現を指示するのに好適である。連結された調節エレメントおよびコード配列はベクター中にクローニングされることが多い。２重鎖抗体の投与では、２つの鎖を同じまたは別個のベクター中にクローニングすることができる。本発明の治療剤をコードする核酸は、少なくとも１つのＴ細胞エピトープもコードすることができる。アジュバントの使用および担体の使用に関連する本明細書の開示は、必要な変更を加えて、本発明の治療剤をコードする核酸でのその使用に適用される。
【０２３４】
レトロウイルス系（たとえばＬａｗｒｉｅ  ａｎｄ  Ｔｕｍｉｎ，Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．３，１０２−１０９（１９９３））；アデノウイルスベクター（たとえばＢｅｔｔら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７，５９１１（１９９３）を参照）；アデノ随伴ウイルスベクター（たとえばＺｈｏｕら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７９，１８６７（１９９４）を参照）、ワクシニアウイルスおよび鶏痘ウイルスを含む水痘ファミリからのウイルスベクター、シンドビスおよびセムリキ森林熱ウイルスからのウイルスベクターなどのアルファウイルス属からのウイルスベクター（たとえばＤｕｂｅｎｓｋｙら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０，５０８−５１９（１９９６）を参照）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＵＳ  ５，６４３，５７６を参照）ならびにラブドウイルス、たとえば水疱性口内炎ウイルス（ＷＯ  ９６／３４６２５を参照）およびパピローマウイルス（Ｏｈｅら、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ６，３２５−３３３（１９９５）；Ｗｏｏら、ＷＯ  ９４／１２６２９およびＸｉａｏ  ＆  Ｂｒａｎｄｓｍａ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２４，２６３０−２６２２（１９９６））を含む、いくつかのウイルスベクター系が利用可能である。
【０２３５】
免疫原をコードするＤＮＡ、またはそれを含有するベクターをリポソーム中にパッケージすることができる。好適な脂質および関連類似体は、ＵＳ  ５，２０８，０３６、５，２６４，６１８、５，２７９，８３３および５，２８３，１８５に記載されている。免疫原をコードするベクターおよびＤＮＡは、粒子担体に吸収または結合させることも可能であり、その例はポリメチルメタクリレートポリマーならびにポリラクチドおよびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）を含む、たとえばＭｃＧｅｅら、Ｊ．Ｍｉｃｒｏ  Ｅｎｃａｐ．（１９９６）を参照。
【０２３６】
遺伝子療法ベクターまたは裸のＤＮＡは、個々の患者への投与によって、通例は全身投与（たとえば静脈内、腹腔内、経鼻、胃、皮内、筋肉内、皮下、または頭蓋内注入）または局所適用（たとえばＵＳ  ５，３９９，３４６を参照）によってインビボに送達することができる。このようなベクターは、ブピバカイン（ｂｕｐｉｖａｃｉｎｅ）などの促進剤をさらに含むことができる（ＵＳ  ５，５９３，９７０）。ＤＮＡは、遺伝子銃を使用して投与することも可能である（Ｘｉａｏ  ＆  Ｂｒａｎｄｓｍａ、同上を参照）。免疫原をコードするＤＮＡは、微視的な金属ビーズの表面に沈殿する。微小発射体は、衝撃波または膨張ヘリウムガスによって加速されて、組織に数細胞層の深さまで浸透する。たとえばＡｇａｃｅｔｕｓ，Ｉｎｃ．Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ  ＷＩによって製造されたＡｃｃｅｌ（商標）遺伝子送達装置が好適である。または裸のＤＮＡは、ＤＮＡを化学的または機械的炎症のある皮膚にスポットするだけで、皮膚を通じて血流まで通過することができる（ＷＯ  ９５／０５８５３を参照）。
【０２３７】
さらなる変形において、免疫原をコードするベクターをエクスビボで細胞、たとえば個々の患者から外植された細胞（たとえばリンパ球、骨髄吸引物、組織生検）または万能給血者造血幹細胞に送達して、続いてベクターを取り込んだ細胞の選抜の後に、患者に細胞を再移植することが可能である。
【０２３８】
ＩＸ．アジュバント
本発明の免疫原性剤、たとえばペプチドは時々アジュバントと組み合せて投与される。アジュバントは、ペプチドが単独で使用される場合の状況と比較して、誘導された抗体の力価および／または誘導された抗体の結合親和性を上昇させる。各種のアジュバントをＡＡの免疫原性断片と組み合せて使用して、免疫応答を誘導することができる。好ましいアジュバントは、応答の質的な形態に影響を及ぼす免疫原の立体配座変化を引き起こすことなく、免疫原に対する固有応答を増強する。好ましいアジュバントは、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウム、３Ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ（商標））（ＧＢ  ２２２０２１１を参照（ＲＩＢＩ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍｏｎｔａｎａ、現在、Ｃｏｒｉｘａの一部）、ＲＣ−５２９（Ｃｏｒｉｘａ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍｏｎｔａｎａ）を含む。ＳＴＩＭＵＬＯＮ（商標）ＱＳ−２１は、南米で見出されるキラヤ・サポナリア・モリナという木の樹皮から単離されたトリテルペングリコシドまたはサポニンである（Ｋｅｎｓｉｌら、ｉｎ
Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ
Ａｐｐｒｏａｃｈ（ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ  ＆  Ｎｅｗｍａｎ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９９５）；ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．５，０５７，５４０を参照）（Ａｑｕｉｌａ  ＢｉｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ）。他のアジュバントは、場合により免疫刺激薬、たとえばモノホスホリル脂質Ａ（Ｓｔｏｕｔｅら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，８６−９１（１９９７））、プルロニックポリマー、および死菌ミコバクテリアと組み合された、水中油型エマルジョン（スクアレンまたはラッカセイ油など）である。別のアジュバントはＣｐＧである（ＷＯ  ９８／４０１００）。アジュバントは、活性剤を含む治療組成物の構成成分として投与することができるか、または治療剤投与の前、同時、または後に別個に投与することができる。
【０２３９】
アジュバントの好ましいクラスはアルミニウム塩（ミョウバン）、たとえば水酸化ミョウバン、リン酸ミョウバン、硫酸ミョウバンである。このようなアジュバントは、他の特異的な免疫刺激剤、たとえばＭＰＬまたは３−ＤＭＰ、ＱＳ−２１、重合体または単量体アミノ酸、たとえばポリグルタミン酸またはポリリジンと共に、またはそれらなしで使用することができる。アジュバントの別のクラスは、水中油型エマルジョン製剤である。このようなアジュバントは、他の特異的な免疫刺激剤、たとえばムラミルペプチド（たとえばＮ−アセチルムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）、Ｎ−アセチルグルコサミニル（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｓａｍｉｙｌ）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌ−Ｄ−イソグル−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド（ＤＴＰ−ＤＰＰ）ＴＨＥＲＡＭＩＤＥ（商標））、または他の細菌細胞壁構成成分と共に、またはそれらなしで使用することができる。水中油型エマルジョンは、（ａ）Ｍｏｄｅｌ  １１０Ｙマイクロ流体化装置（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ  ＭＡ）などのマイクロ流体化装置を使用してミクロン未満の粒子に配合された、５％スクアラン、０．５％  Ｔｗｅｅｎ  ８０、および０．５％  Ｓｐａｎ  ８５（場合により各種の量のＭＴＰ−ＰＥを含有する）を含有するＭＦ５９（ＷＯ  ９０／１４８３７）、（ｂ）ミクロン未満のエマルジョンにマイクロ流体化された、またはボルテックスにかけてより大きい粒径のエマルジョンに生成された、１０％スクアレン、０．４％  Ｔｗｅｅｎ  ８０、５％  ｐｌｕｒｏｎｉｃ遮断重合体Ｌ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含有するＳＡＦ、（ｃ）２％スクアレン、０．２％  Ｔｗｅｅｎ  ８０、およびモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））から成る群より選択される１つ以上の細菌細胞壁構成成分を含有する、ＲＩＢＩ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）を含む。
【０２４０】
別のクラスの好ましいアジュバントは、サポニンアジュバント、たとえばＳＴＩＭＵＬＯＮ（商標）（ＱＳ−２１，Ａｑｕｉｌａ，Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ）またはそこから生成した粒子、たとえばＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸである。他のアジュバントは、ＲＣ−５２９、ＧＭ−ＣＳＦならびに完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）を含む。他のアジュバントは、サイトカイン、たとえばインターロイキン（たとえばＩＬ−Ｉαおよびβペプチド、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ１３、およびＩＬ−１５）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ケモカイン、たとえばＭＩＰ１αおよびβならびにＲＡＮＴＥＳを含む。別のクラスのアジュバントは、Ｎ−グリコシルアミド、Ｎ−グリコシル尿素およびＮ−グリコシルカルバメートを含む糖脂質類似体であり、そのそれぞれは免疫調節薬またはアジュバントとして、糖残基においてアミノ酸によって置換される（ＵＳ  Ｐａｔ．Ｎｏ．４，８５５，２８３を参照）。熱ショックタンパク質、たとえばＨＳＰ７０およびＨＳＰ９０もアジュバントとして使用され得る。
【０２４１】
アジュバントは、免疫原と共に単一組成物として投与することができるか、または免疫原投与の前、免疫原投与と同時、または免疫原投与の後に投与することができる。免疫原およびアジュバントは、同じバイアルで包装および供給することができるか、または別個のバイアルに包装して使用前に混合することができる。免疫原およびアジュバントは通例、所期の治療用途を示すラベルを用いて包装される。免疫原およびアジュバントが別個に包装される場合、包装物は通例、使用前に混合するための説明書を含む。アジュバントおよび／担体の選択は、アジュバントを含有する免疫原性製剤の安定性、投与経路、投薬スケジュール、ワクチン接種される種に対するアジュバントの有効性に依存しており、ヒトにおいては、製薬的に許容されるアジュバントは、関係規制機関によって承認されたまたは承認され得るアジュバントである。たとえば完全フロイントアジュバントは、ヒトへの投与には好適でない。ミョウバン、ＭＰＬおよびＱＳ−２１が好ましい。場合により、２つ以上の異なるアジュバントを同時に使用することができる。好ましい組み合せは、ミョウバンとＭＰＬ、ミョウバンとＱＳ−２１、ＭＰＬとＱＳ−２１、ＭＰＬまたはＲＣ−５２９とＧＭ−ＣＳＦ、ならびに一緒になったミョウバン、ＱＳ−２１およびＭＰＬを含む。または不完全フロイントアジュバントは、場合により、ミョウバン、ＱＳ−２１、およびＭＰＬならびにそのすべての組み合せと組み合せて使用することができる（Ｃｈａｎｇら、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ３２，１７３−１８６（１９９８））。
【０２４２】
Ｘ．抗体の受動投与
本発明の治療剤は、ＡＡなどのアミロイドペプチド中のエピトープを含む、凝集アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２を含むエピトープに特異的に結合する抗体を含み、式中、Ｘ１は、Ｈ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、Ａまたはこのような凝集アミロイドタンパク質でＥＤの直前に先行する任意の他のアミノ酸残基であり；式中、Ｘ２は、Ｔ、Ｓ、Ｅ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、Ｆ、Ａまたはこのような凝集アミロイドタンパク質でＥＤの直後に続く任意の他のアミノ酸残基である。受動投与に使用する抗体は、ＡＡのＣ末端またはＮ末端エピトープに結合する抗体であることが可能である。他のアミロイドタンパク質は、血清アミロイドＡタンパク質に加えて、血清アミロイドＡタンパク質、免疫グロブリン軽鎖タンパク質、たとえばＶλ６  ＷｉｌまたはＶκ、ヒト膵島アミロイド前駆体ポリペプチド（ＩＡＰＰ）、ベータアミロイドペプチド、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、およびＡｐｏＡ１はもちろんのこと、上の表１に挙げたその他も含む。
【０２４３】
ＡＡは、ＳＡＡのタンパク質分解切断によって形成される。好ましい抗体は、ＳＡＡのタンパク質分解切断時に生成するＡＡのネオエピトープに特異的に結合する。好ましい抗体はＡＡのＣ末端ネオエピトープに特異的に結合し、特にこのような抗体は残基７０〜７６内のＨＡＡ１アルファアイソフォーム（ＧＨＧＡＥＤＳ、配列番号４）、残基７０〜７６内のＨＡＡ１ベータアイソフォーム（ＧＨＤＡＥＤＳ、配列番号５）、残基７０〜７６内のＨＡＡ１ガンマアイソフォーム（ＧＨＤＡＥＤＳ、配列番号５）、残基７０〜７６内のＨＡＡ２アルファおよびベータアイソフォーム（ＧＨＧＡＥＤＳ、配列番号１０）、残基７０〜７６内のＨＡＡ３（ＧＤＨＡＥＤＳ、配列番号７）、残基７８〜８４内のＨＡＡ４（ＳＴＶＩＥＤＳ、配列番号８）、残基６９〜７５内のマウスＡＡ１（ＭＡＡ１、ＧＲＧＨＥＤＴ、配列番号９）、残基６９〜７５内のＭＡＡ２（ＧＲＧＨＥＤＴ、配列番号９）、残基６２〜６８内のＭＡＡ３（ＧＨＧＡＥＤＳ、配列番号１０）、および残基７６〜８２内のＭＡＡ４（ＮＨＧＬＥＴＬ、配列番号１１）に特異的に結合する。いくつかの抗体はこれらのペプチドの１つの中のエピトープのみに結合する。他の抗体はこれらのペプチドの２つ以上の中のエピトープに結合する。たとえばいくつかの抗体は、ＧＨＧＡＥＤＳ（配列番号４）ペプチドおよびＧＨＤＡＥＤＳ、配列番号５）ペプチドに特異的に結合する。たとえばいくつかの抗体は、ＧＨＤＡＥＤＳ、配列番号５）ペプチドに特異的に結合することなく、ＧＨＧＡＥＤＳ（配列番号４）ペプチドに特異的に結合する。ヒトＡＡペプチドの少なくとも１つに結合することが好ましい。ヒトＡＡペプチドの少なくとも１つおよび対応するマウスペプチドに結合することは、同じ抗体をマウスモデルで試験して、続いてヒトで使用することができるという点で有用である。いくつかの好ましい抗体は、ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７１〜７６、７２〜７６、７３〜７６、７４〜７６、７０〜７５、７０〜７４、７０〜７３、７０〜７２、７１〜７５、７２〜７５、７３〜７５、７１〜７４、７１〜７３、７２〜７４、またはＭＡＡ１残基７０〜７５、７１〜７５、７２〜７５、７３〜７５、６９〜７４、６９〜７３、６９〜７２、６９〜７１、７０〜７４、７１〜７４、７２〜７４、７０〜７３、７０〜７２内のエピトープに特異的に結合する。このような抗体は通例、アミロイド沈着物に特異的に結合するが、可溶性ＡＡには結合することも結合しないこともある。たとえばＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６などの、規定された残基内のエピトープに抗体が特異的に結合すると言われるとき、抗体が規定された残基（すなわちこの例ではＨＡＡ１アルファアイソフォームの残基７０〜７６）を含有するポリペプチドに特異的に結合するということを意味する。このような抗体は、ＨＡＡ１アルファアイソフォームの残基７０〜７６内の各残基と必ずしも接触するわけではない。ＨＡＡ１アルファアイソフォームの残基７０〜７６内での１つ１つのアミノ酸置換または欠失も、結合親和性に必ずしも著しい影響を及ぼすわけではない。このようなネオエピトープ抗体はＡＡには結合するが、ＳＡＡには結合しない。抗体のエピトープ特異性は、たとえばＷＯ  ００／７２８８０に記載されているように決定できる。
【０２４４】
受動投与に使用される抗体は、ＡＡのＮ末端エピトープに対する抗体であることが可能である。好ましい抗体は、ＡＡのＮ末端ネオエピトープに特異的に結合して、このような抗体はＨＡＡｌ残基１〜１５（ＲＳＦＦＳＦＬＧＥＡＦＤＧＡＲ、配列番号８０）、ＨＡＡ２残基１〜１５（ＲＳＦＦＳＦＬＧＥＡＦＤＧＡＲ、配列番号８０）、ＨＡＡ３残基１〜１５（ＱＧＷＬＴＦＬＫＡＡＧＱＧＡＫ、配列番号８１）、ＨＡＡ４残基１〜１５（ＥＳＷＲＳＦＦＫＥＡ、（配列番号８２）、ＭＡＡｌ残基１〜１５（ＧＦＦＳＦＶＨＥＡＦＱＧＡＧＤ、配列番号８３）、ＭＡＡ２残基１〜１５（ＧＦＦＳＦＶＨＥＡＦＱＧＡＧＤ、配列番号８３）、ＭＡＡ３残基１〜９（ＥＡＧＱＧＳＲＤ、（配列番号８４）、および残基１〜１４  ＭＡＡ４（ＷＹＳＦＦＲＥＡＶＱＧＴＷＤ、配列番号８５）に特異的に結合する。いくつかの抗体はこれらのペプチドの１つの中のエピトープのみに結合する。他の抗体はこれらのペプチドの２つ以上の中のエピトープに結合する。たとえばいくつかの抗体は、ＲＳＦＦＳＦＬＧＥＡＦＤＧＡＲ、配列番号８０）ペプチドおよびＱＧＷＬＴＦＬＫＡＡＧＱＧＡＫ、配列番号８１）ペプチドに特異的に結合する。いくつかの抗体は、ＱＧＷＬＴＦＬＫＡＡＧＱＧＡＫ、配列番号８１）ペプチドに特異的に結合せずにＲＳＦＦＳＦＬＧＥＡＦＤＧＡＲ、配列番号８０）ペプチドに結合する。ヒトＡＡペプチドの少なくとも１つに結合することが好ましい。ヒトＡＡペプチドの少なくとも１つおよび対応するマウスペプチドに結合することは、同じ抗体をマウスモデルで試験して、続いてヒトで使用することができるという点で有用である。
【０２４５】
いくつかの抗体は、このようなＸ１ＥＤＸ２から成るエピトープに特異的に結合する。好ましくは、このような抗体は、凝集アミロイドタンパク質中のこのようなエピトープに特異的に結合する。このような抗体のいくつかは、このようなアミロイドタンパク質の単量体形と比較して、凝集アミロイドタンパク質に優先的に特異的に結合する。いくつかの抗体において、Ｘ１は、Ｈ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、またはＡであり、Ｘ２は、Ｔ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、ＦまたはＡである。いくつかのこのような抗体において、Ｘ１がＨであるとき、Ｘ２は、ＴまたはＡである；Ｘ１がＡであるとき、Ｘ２は、Ｓ、Ｔ、ＥまたはＶである；Ｘ１がＴであるとき、Ｘ２はＥである；Ｘ１がＦであるとき、Ｘ２はＤである；Ｘ１がＳであるとき、Ｘ２は、Ｅ、ＦまたはＡである；Ｘ１がＰであるとき、Ｘ２は、Ｅ、ＩまたはＦである。いくつかの抗体において、Ｘ１がＡならば、Ｘ２はＶでないという条件で、Ｘ１は、Ｈ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、またはＡであり、Ｘ２は、Ｔ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、ＦまたはＡである。いくつかの抗体において、Ｘ１がＡであるとき、Ｘ２はＳ、ＴまたはＥである。
【０２４６】
いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＧＨＥＤＴ、（配列番号３）、ＨＥＤＴ、（配列番号１２）、ＡＥＤＳ、（配列番号１３）、ＡＥＤＴ、（配列番号１４）、ＨＥＤＡ、（配列番号１５）、ＴＥＤＥ、（配列番号１６）、ＦＥＤＤ、（配列番号１７）、ＳＥＤＥ、（配列番号１８）、ＡＥＤＥ、（配列番号１９）、ＰＥＤＥ、（配列番号２０）、ＰＥＤＩ、（配列番号２１）、ＰＥＤＦ、（配列番号２２）、ＡＥＤＶ、（配列番号２３）、ＳＥＤＦ、（配列番号２４）またはＳＥＤＡ、（配列番号２５）を含むエピトープを特異的に結合する。
【０２４７】
いくつかの抗体は、ＧＨＥＤＴ、（配列番号３）、ＨＥＤＴ、（配列番号１２）、ＡＥＤＳ、（配列番号１３）、ＡＥＤＴ、（配列番号１４）、ＨＥＤＡ、（配列番号１５）、ＴＥＤＥ、（配列番号１６）、ＦＥＤＤ、（配列番号１７）、ＳＥＤＥ、（配列番号１８）、ＡＥＤＥ、（配列番号１９）、ＰＥＤＥ、（配列番号２０）、ＰＥＤＩ、（配列番号２１）、ＰＥＤＦ、（配列番号２２）、ＳＥＤＦ、（配列番号２４）、またはＳＥＤＡ、（配列番号２５）から成る群より選択されるアミノ酸配列を含むペプチドに特異的に結合する。いくつかの抗体は、ＧＨＥＤＴ、（配列番号３）、ＨＥＤＴ、（配列番号１２）、ＡＥＤＳ、（配列番号１３）、ＡＥＤＴ、（配列番号１４）、ＨＥＤＡ、（配列番号１５）、およびＴＥＤＥ、（配列番号１６）から成る群より選択されるアミノ酸配列を含むペプチドに特異的に結合する。
【０２４８】
いくつかの抗体は、ＧＨＥＤＴ、（配列番号３）を含むペプチド、たとえば２Ａ４、７Ｄ８および８Ｇ９に対して産生されるか、またはそのヒト化もしくはキメラバージョンである。
【０２４９】
抗体はポリクローナルまたはモノクローナルであることが可能である。ポリクローナル血清は通例、ＡＡの長さに沿った複数のエピトープに特異的に結合する抗体の混合集団を含有する。しかし、ポリクローナル血清は、ＡＡの特定のセグメント、たとえばＨＡＡ１アルファアイソフォームの残基７０〜７６に対して特異的であることが可能である。好ましい抗体は、キメラ、またはヒト化（Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）およびＷＯ  ９０／０７８６１、ＵＳ  ５，６９３，７６２、ＵＳ  ５，６９３，７６１、ＵＳ  ５，５８５，０８９、ＵＳ  ５，５３０，１０１およびＷｉｎｔｅｒ、ＵＳ  ５，２２５，５３９を参照）、またはヒト（Ｌｏｎｂｅｒｇら、ＷＯ９３／１２２２７（１９９３）；ＵＳ  ５，８７７，３９７、ＵＳ  ５，８７４，２９９、ＵＳ  ５，８１４，３１８、ＵＳ  ５，７８９，６５０、ＵＳ  ５，７７０，４２９、ＵＳ  ５，６６１，０１６、ＵＳ  ５，６３３，４２５、ＵＳ  ５，６２５，１２６、ＵＳ  ５，５６９，８２５、ＵＳ  ５，５４５，８０６、Ｎａｔｕｒｅ  １４８，１５４７−１５５３（１９９４）、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４，８２６（１９９６）、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ，ＷＯ  ９１／１０７４１（１９９１））である。ベニアリングとしても公知である抗体をヒト化する別の手法は、ＵＳ  ６，７９７，４９２に記載されている。結合特異性が異なる複数のマウス抗体は、ヒト化抗体を作製するための開始材料として利用できる。
【０２５０】
代表的なヒト化抗体は、ヒト化バージョン７Ｄ８抗体（ＡＴＣＣアクセション番号    
）、ヒト化バージョン７Ｄ２９抗体、ヒト化バージョン７Ｄ１９抗体、ヒト化バージョン７Ｄ４７抗体、ヒト化バージョン７Ｄ３９抗体、ヒト化バージョン７Ｄ６６抗体、ヒト化バージョン８Ｇ９抗体、ヒト化バージョン８Ｇ３抗体、ヒト化バージョン８Ｇ４抗体、ヒト化バージョン８Ｇ５１抗体、ヒト化バージョン８Ｇ２２抗体、ヒト化バージョン８Ｇ３０抗体、ヒト化バージョン８Ｇ４６抗体、ヒト化バージョン２Ａ４抗体（ＡＴＣＣアクセション番号      ）、ヒト化バージョン２Ａ２０抗体、ヒト化バージョン２Ａ４４抗体、ヒト化バージョン２Ａ７７抗体、ヒト化バージョン２Ａ１３抗体、およびヒト化バージョン２Ａ１４抗体である。７Ｄ８抗体（ＪＨ８０  ７Ｄ８．２９．１９．４７）および２Ａ４抗体（ＪＨ８０  ２Ａ４．２０．４４０７７）を産生するハイブリドーマは、特許手続きのための微生物寄託の国際認識に関するブダペスト条約（「ブダペスト条約」）の条項に基づいて、現在は１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ２０１１０−２２０９にあるＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）へ２００８年９月４日および２００８年１２月１７日にそれぞれ寄託した。ＡＴＣＣは、７Ｄ８を産生するハイブリドーマにＡＴＣＣアクセション番号      を、２Ａ４を産生するハイブリドーマにＡＴＣＣアクセション番号
を割り当てた。
【０２５１】
ヒトアイソタイプＩｇＧ１がＡＡのＣ末端領域に対する抗体に好ましいのは、食細胞のＦｃＲＩ受容体に対してヒトアイソタイプの最も高い親和性を有するためである。いくつかの抗体は、約１０７、１０８、１０９、もしくは１０１０Ｍ−１またはそれ以上の結合親和性でＡＡに特異的に結合する。
【０２５２】
ＡＡの断片の能動免疫化は、抗体の受動投与と組み合せることができる。特異的組み合せの例は、ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する抗体；ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７１〜７６内のエピトープに特異的に結合する抗体；ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７２〜７６内のエピトープに特異的に結合する抗体；ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７３〜７６内のエピトープに特異的に結合する抗体；ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７４〜７６内のエピトープに特異的に結合する抗体；ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７５内のエピトープに特異的に結合する抗体；ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７４内のエピトープに特異的に結合する抗体；ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７３内のエピトープに特異的に結合する抗体；ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７２内のエピトープに特異的に結合する抗体；ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７１〜７５内のエピトープに特異的に結合する抗体；ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７２〜７５内のエピトープに特異的に結合する抗体；ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７３〜７５内のエピトープに特異的に結合する抗体；ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７３〜７５内のエピトープに特異的に結合する抗体；ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７１〜７４内のエピトープに特異的に結合する抗体；ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７１〜７３内のエピトープに特異的に結合する抗体；ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６を含むＡＡ断片とＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７２〜７４内のエピトープに特異的に結合する抗体を含む。さらに、ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７１〜７６、７２〜７６、７３〜７６、７４〜７６、７０〜７５、７０〜７４、７０〜７３、７０〜７２、７１〜７５、７２〜７５、７３〜７５、７１〜７４、７１〜７３、７２〜７４を含むＡＡ断片は、ＨＡＡ１残基アルファアイソフォーム残基７１〜７６、７２〜７６、７３〜７６、７４〜７６、７０〜７５、７０〜７４、７０〜７３、７０〜７２、７１〜７５、７２〜７５、７３〜７５、７１〜７４、７１〜７３、７２〜７４内のエピトープに特異的に結合する抗体と組み合され得る。ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６、ＨＡＡ１ベータアイソフォーム残基７０〜７６、ＨＡＡ１ガンマアイソフォーム残基７０〜７６、ＨＡＡ２アルファおよびベータアイソフォーム残基７０〜７６、ＭＡＡ１残基６９〜７５、ＭＡＡ２残基６９〜７５、またはＭＡＡ３残基６２〜６８を含むＡＡ断片は、ＨＡＡ１アルファアイソフォーム残基７０〜７６、ＨＡＡ１ベータアイソフォーム残基７０〜７６、ＨＡＡ１ガンマアイソフォーム残基７０〜７６、ＨＡＡ２アルファおよびベータアイソフォーム残基７０〜７６、ＭＡＡ１残基６９〜７５、ＭＡＡ２残基６９〜７５、またはＭＡＡ３残基６２〜６８内のエピトープに特異的結合する抗体と組み合され得る。
【０２５３】
上記の抗体のいくつかは、アミロイドタンパク質の単量体形または前駆体形に特異的に結合しない。このような抗体のいくつかは、アミロイドタンパク質を生じる前駆体タンパク質の切断時に生成されるネオエピトープに特異的に結合する。たとえばいくつかの抗体は、マウスＡＡ原線維−ＨＥＤＴ、（配列番号１２）のＣ末端残基に特異的に結合するが、ＳＡＡの非アミロイド部分（ＧＨＥＤＴＭＡＤＱＥ、配列番号６１）内に伸長するペプチドには特異的に結合しない。いくつかの抗体は、立体配座エピトープに特異的に結合する。立体配座エピトープのいくつかは線形である。このような立体配座エピトープのいくつかは、アミロイドタンパク質が凝集（たとえば原線維）構造に入るときに、または部分的に変性されるときに露出される。このような抗体の例は、マウスモノクローナル抗体２Ａ４（ＡＴＣＣアクセション番号      ）、８Ｇ９（ＡＴＣＣアクセション番号      ）および７Ｄ８（ＡＴＣＣアクセション番号      ）、そのヒト抗体、ヒト化抗体およびキメラ形抗体、２Ａ４、８Ｇ９または７Ｄ８と同じエピトープに特異的に結合する他の抗体、ならびに任意のそのような抗体の抗原結合断片を含む。いくつかの抗体は、アミノ酸配列ＥＤを含むアミロイドタンパク質に特異的に結合する。いくつかの抗体は、免疫グロブリン軽鎖タンパク質、ヒト膵島アミロイド前駆体ポリペプチド（ＩＡＰＰ）、ベータアミロイドペプチド、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、およびＡｐｏＡ１から成る群より選択されるアミロイドタンパク質に特異的に結合する。
【０２５４】
基本的な抗体構造単位は、サブユニットの４量体を含むことが公知である。各４量体はポリペプチド鎖の２つの同一の対で構成され、各対は１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクタ機能に関与する定常領域を画成する。
【０２５５】
１．抗体
本発明は、インタクトな抗体および抗原結合抗体断片はもちろんのこと、ペグ化抗体および抗体断片はもちろんのこと、改変（たとえば低減または排除された）エフェクタ機能を持つ抗体、たとえばＦｃ領域に変異または置換残基を含む抗体も含む。免疫グロブリン分子の免疫学的活性部分の例は、抗体を酵素、たとえばペプシンによって処理することによって生成できる、または当分野で認識された組換え工学技法によって産生できる、Ｆ（ａｂ）およびＦ（ａｂ’）２トリＦａｂ’、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ジＦａｂ’断片を含む。本発明のさらなる抗原結合断片は、ペグ化抗体断片、たとえばペグ化Ｆａｂ’およびペグ化ジＦａｂ’を含む、治療用抗体断片を含む。エフェクタ機能ミュータントの例は、その全体が参照により本明細書に組み入れられているＵ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．５，６２４，８２１に記載されている。いくつかの抗体は、ＦｃガンマＲＩ受容体に対する結合親和性が低下した。エフェクタ機能ミュータント抗体は、ヒンジ領域に変異を含む抗体を含む。いくつかのミュータントＩｇＧ抗体は、重鎖定常領域内の位置２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０および３２２の１つ以上に変異を含む。いくつかの抗体において、残基２３４、２３６および２３７の１つ以上がアラニンによって置換される。いくつかの抗体において、残基２３５はグルタミンによって置換される。いくつかの抗体において、残基２９７はアラニンによって置換される。いくつかの抗体において、残基３１８、３２０および３２２はアラニンによって置換される。いくつかの抗体において、残基３１８はバリンによって置換される。いくつかの抗体において、残基３２２はグルタミンによって置換される。エフェクタ機能が向上した抗体は、抗体単Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅならびに２重および３重ミュータントＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ（Ｋａｂａｔナンバリング）を含む。
【０２５６】
２．ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、好適な被験体を免疫原によって免疫化することによって上述のように調製できる。免疫化被験体の抗体力価は、固定化標的抗原を使用する酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）などの標準技法によって、経時的に監視することができる。所望ならば、標的抗原に向けられた抗体分子を哺乳動物から（たとえば血液から）単離して、周知の技法、たとえばプロテインＡセファロースクロマトグラフィーによってさらに精製して、抗体、たとえばＩｇＧ画分を得ることができる。免疫化後の適切な時間に、たとえば抗抗原抗体力価が最も高いときに、抗体産生細胞を被験体から得て、モノクローナル抗体を標準方法、たとえばＫｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７）によって最初に記載されたハイブリドーマ技法によって調製することができる（Ｂｒｏｗｎら（１９８１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２７：５３９−４６；Ｂｒｏｗｎら（１９８０）Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５５：４９８０−８３；Ｙｅｈら（１９７６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７６：２９２７−３１；およびＹｅｈら（１９８２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ２９：２６９−７５も参照）。キメラポリクローナル抗体の調製については、Ｂｕｅｃｈｌｅｒら、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．６，４２０，１１３を参照。
【０２５７】
３．モノクローナル抗体
リンパ球および不死化株化細胞を融合するために使用される多くの周知のプロトコルのいずれも、モノクローナル抗体を生成する目的で利用できる（たとえばＧ．Ｇａｌｆｒｅら（１９７７）Ｎａｔｕｒｅ  ２６６：５５０５２；Ｇｅｆｔｅｒら、Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔ．，上で引用；Ｌｅｒｎｅｒ，Ｙａｌｅ  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，上で引用；Ｋｅｎｎｅｔｈ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，上で引用を参照）。さらに当業者は、また有用であるこのような方法の多くの変形があることを認識するであろう。通例、不死株化細胞（たとえば骨髄腫株化細胞）は、リンパ球と同じ哺乳動物種に由来する。たとえばマウスハイブリドーマは、本発明の免疫原性調製物によって免疫化したマウスからのリンパ球を不死化マウス株化細胞と融合することによって作製できる。好ましい不死株化細胞は、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含有する培養培地（「ＨＡＴ培地」）に感受性であるマウス骨髄腫株化細胞である。いくつかの骨髄腫株化細胞のいずれも、たとえばＰ３−ＮＳ１／１−Ａｇ４−１、Ｐ３−ｘ６３−Ａｇ８．６５３またはＳｐ２／Ｏ−Ａｇ１４骨髄腫系統も、標準技法による融合パートナーとして使用することができる。これらの骨髄腫系統はＡＴＣＣから入手できる。通例、ＨＡＴ感受性マウス骨髄腫細胞は、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）を使用してマウス脾細胞に融合される。融合から生じるハイブリドーマ細胞は次にＨＡＴ培地を使用して選択され、ＨＡＴ培地は未融合または融合が無効な骨髄腫細胞を死滅させる（未融合脾細胞は、形質転換されないため、数日後に死滅する）。本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、標準ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、標的抗原、たとえばＡβを結合する抗体についてハイブリドーマ培養上清をスクリーニングすることによって検出される。
【０２５８】
４．組換え抗体
モノクローナル抗体分泌ハイブリドーマを調製する代わりに、組換えコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリ（たとえば抗体ファージ提示ライブラリ）を標的抗原によってスクリーニングして、それにより標的抗原を結合する免疫グロブリンライブラリのメンバを単離することによって、モノクローナル抗体を同定および単離することができる。ファージ提示ライブラリを生成およびスクリーニングするためのキットは市販されている（たとえばＰｈａｒｍａｃｉａ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｈａｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｃａｔａｌｏｇ  Ｎｏ．２７−９４００−０１；およびＳｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＳｕｒｆＺＡＰ（商標）Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｋｉｔ，Ｃａｔａｌｏｇ  Ｎｏ．２４０６１２）。さらに、抗体提示ライブラリの生成およびスクリーニングでの使用に特に適した方法および試薬の例は、たとえばＬａｄｎｅｒら、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．５，２２３，４０９；Ｋａｎｇら、ＰＣＴ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＷＯ  ９２／１８６１９；Ｄｏｗｅｒら、ＰＣＴ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＷＯ  ９１／１７２７１；Ｗｉｎｔｅｒら、ＰＣＴ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ  ９２／２０７９１；Ｍａｒｋｌａｎｄら、ＰＣＴ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＷＯ  ９２／１５６７９；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇら、ＰＣＴ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ  ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、ＰＣＴ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＷＯ  ９２／０１０４７；Ｇａｒｒａｒｄら、ＰＣＴ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＷＯ  ９２／０９６９０；Ｌａｄｎｅｒら、ＰＣＴ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＷＯ  ９０／０２８０９；Ｆｕｃｈｓら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０−１３７２；Ｈａｙら（１９９２）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５；Ｈｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６；Ｃｌａｒｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：３５７６−３５８０；Ｇａｒｒａｄら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：４１３３−４１３７；Ｂａｒｂａｓら（１９９１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８：７９７８−７９８２；およびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９０）３４８：５５２−５５４に見出される。
【０２５９】
５．キメラおよびヒト化抗体
さらに、標準組換えＤＮＡ技法を使用して作製できる、ヒトおよび非ヒト部分の両方を含む組換え抗体、たとえばキメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、本発明の範囲内である。
【０２６０】
「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」という用語は、少なくとも１つのヒト化免疫グロブリンまたは抗体鎖（すなわち少なくとも１つのヒト化軽鎖または重鎖）を含む免疫グロブリンまたは抗体を指す。「ヒト化免疫グロブリン鎖」または「ヒト化抗体鎖」（すなわち「ヒト化免疫グロブリン軽鎖」または「ヒト化免疫グロブリン重鎖」）は、実質的にヒト免疫グロブリンまたは抗体からの可変フレームワーク領域および実質的に非ヒト免疫グロブリンまたは抗体からの相補性決定領域（ＣＤＲ）（たとえば少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは２つのＣＤＲ、さらに好ましくは３つのＣＤＲ）を含み、定常領域（たとえば軽鎖の場合には、少なくとも１つの定常領域またはその部分、重鎖の場合には３つの定常領域）をさらに含む可変領域を有する免疫グロブリンまたは抗体鎖（すなわちそれぞれ軽鎖または重鎖）を指す。「ヒト化可変領域」（たとえば「ヒト化軽鎖可変領域」または「ヒト化重鎖可変領域」）という用語は、実質的にヒト免疫グロブリンまたは抗体からの可変フレームワーク領域および実質的に非ヒト免疫グロブリンまたは抗体からの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変領域を指す。
【０２６１】
「実質的にヒト免疫グロブリンまたは抗体からの」または「実質的にヒト」という句は、比較の目的でヒト免疫グロブリンまたは抗体アミノ酸配列と整列させたときに、領域が、ヒトフレームワークまたは定常領域配列と少なくとも８０〜９０％の、９０〜９５％の、または９５〜９９％の同一性（すなわち局所配列同一性）を共有して、たとえば保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、復帰変異などを可能にすることを意味する。保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、復帰変異などの導入は、ヒト化抗体または鎖の「最適化」と呼ばれることが多い。「実質的に非ヒト免疫グロブリンまたは抗体からの」または「実質的に非ヒト」という句は、非ヒト生物、たとえば非ヒト哺乳動物の免疫グロブリンまたは抗体配列と少なくとも８０〜９５％、好ましくは少なくとも９０〜９５％、さらに好ましくは９６％、９７％、９８％、または９９％同一である免疫グロブリンまたは抗体配列を有することを意味する。
【０２６２】
したがってＣＤＲを除く、ヒト化免疫グロブリンもしくは抗体の、またはヒト化免疫グロブリンもしくは抗体鎖のすべての領域または残基は、１つ以上の未変性ヒト免疫グロブリン配列の対応する領域または残基と実質的に同一である。「対応する領域」または「対応する残基」という用語は、第１および第２の配列が比較の目的で最適に整列されているときに、第１のアミノ酸またはヌクレオチド配列上の領域または残基と同じ（すなわち同等の）位置を占有する第２のアミノ酸またはヌクレオチド配列上の領域または残基を指す。
【０２６３】
「有意な同一性」という用語は、２つのポリペプチド配列が、デフォルトギャップ重み付けを使用してプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列されたときに、少なくとも５０〜６０％の配列同一性、好ましくは少なくとも６０〜７０％の配列同一性、さらに好ましくは少なくとも７０〜８０％の配列同一性、さらに好ましくは少なくとも８０〜９０％の配列同一性、なおさらに好ましくは少なくとも９０〜９５％の配列同一性、およびなおさらに好ましくは少なくとも９５％の配列同一性またはそれ以上（たとえば９９パーセントの配列同一性またはそれ以上）を共有することを意味する。「実質的同一性」という用語は、２つのポリペプチド配列が、デフォルトギャップ重み付けを使用してプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列されたときに、少なくとも８０〜９０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９０〜９５パーセントの配列同一性、さらに好ましくは少なくとも９５パーセントの配列同一性またはそれ以上（たとえば９９パーセントの配列同一性またはそれ以上）を共有することを意味する。配列比較のために、通例一方の配列は、試験配列が比較される参照配列として作用する。配列比較アルゴリズムを使用して、試験配列および参照配列をコンピュータに入力するときに、サブ配列座標が指定され、必要ならば配列アルゴリズムプログラムのパラメータが指定される。配列比較アルゴリズムは次に、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。
【０２６４】
比較のための配列の最適なアラインメントは、たとえばＳｍｉｔｈ  ＆  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ＆  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性整列アルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ  ＆  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ処理による実施（ＧＡＰ，ＢＥＳＴＦＩＴ，ＦＡＳＴＡ，ａｎｄ  ＴＦＡＳＴＡ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）によって、または目視検査（一般にＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙを参照）によって実施することができる。配列同一性および配列類似性のパーセントを決定するのに好適であるアルゴリズムの一例はＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３（１９９０）に記載されている。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ＮＣＢＩ  ｉｎｔｅｒｎｅｔ  ｓｅｒｖｅｒを通じて公にアクセスできる）Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを通じて公に入手できる。通例、デフォルトのプログラムパラメータを使用して配列比較を実施することができるが、カスタマイズされたパラメータも使用できる。アミノ酸配列の場合、ＢＬＡＳＴＰプログラムはデフォルトとして、語長（Ｗ）３、期待値（Ｅ）１０、およびＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリクスを使用する（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ＆  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９，１０９１５（１９８９）を参照）。
【０２６５】
好ましくは、同一でない残基位置は、保存アミノ酸置換によって異なる。アミノ酸置換基を保存的または非保存的として分類する目的で、アミノ酸は次のように分類される：群Ｉ（疎水性側鎖）：ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；群ＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；群ＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；群ＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｉｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；群Ｖ（側鎖配向に影響する残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；および群ＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は、同じクラスのアミノ酸間の置換を含む。非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバを別のメンバと交換することを構成する。
【０２６６】
好ましくは、ヒト化免疫グロブリンまたは抗体は、対応する非ヒト化抗体の親和性の３倍、４倍、または５倍以内である親和性で抗原を結合する。たとえば非ヒト化抗体が１０−９Ｍの結合親和性を有する場合、ヒト化抗体は少なくとも３×１０−８Ｍ、４×１０−８Ｍ、５×１０−８Ｍ、または１０−９Ｍの結合親和性を有するであろう。免疫グロブリンまたは抗体鎖の結合特性を説明するときに、鎖は「抗原（たとえばＡβ）結合を指示する」その能力に基づいて説明することができる。鎖は、インタクトな免疫グロブリンまたは抗体（またはその抗原結合断片）に特異的結合特性または結合親和性を与えるときに、「抗原結合を指示する」と言われる。変異（たとえば復帰変異）は、重鎖または軽鎖が前記鎖を含むインタクトな免疫グロブリンまたは抗体（またはその抗原結合断片）の結合親和性に、前記変異のない同等の鎖を含む抗体（またはその抗原結合断片）の結合親和性と比較して少なくとも１桁だけ影響を及ぼす（たとえば低下させる）場合に、重鎖または軽鎖が抗原結合を指示する能力に実質的に影響を及ぼすと言われる。変異は、鎖が前記鎖を含むインタクトな免疫グロブリンまたは抗体（またはその抗原結合断片）の結合親和性に、前記変異のない同等の鎖を含む抗体（またはその抗原結合断片）の結合親和性のわずか２倍、３倍、または４倍だけ影響を及ぼす（たとえば低下させる）場合に、「鎖が抗原結合を指示する能力に実質的に影響を及ぼさない（たとえば低下させない）」。
【０２６７】
「キメラ免疫グロブリン」または抗体という用語は、その可変領域が第１の種に由来して、その定常領域が第２の種に由来する免疫グロブリンまたは抗体を指す。キメラ免疫グロブリンまたは抗体は、たとえば異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントから遺伝子組み換えによって構築することができる。「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」という用語は、以下で定義するように、キメラ免疫グロブリンまたは抗体を含むことを意図しない。ヒト化免疫グロブリンまたは抗体はその構造がキメラである（すなわち１種を超えるタンパク質からの領域を含む）が、それらは本明細書で定義するように、キメラ免疫グロブリンまたは抗体で見出されないさらなる特徴（すなわちドナーＣＤＲ残基およびアクセプタフレームワーク残基を含む可変領域）を含んでいる。
【０２６８】
このようなキメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、たとえばＲｏｂｉｎｓｏｎら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Ａｋｉｒａら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  １８４，１８７；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  １７１，４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  １７３，４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、ＰＣＴ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＷＯ  ８６／０１５３３；Ｃａｂｉｌｌｙら、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．４，８１６，５６７；Ｃａｂｉｌｌｙら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  １２５，０２３；Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：３４３９−３４４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−３５２６；Ｓｕｎら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：２１４−２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら（１９８７）Ｃａｎｅ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４４６−４４９；およびＳｈａｗら（１９８８）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７；Ｏｉら（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４；Ｗｉｎｔｅｒ  Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  ５，２２５，５３９；Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５５２−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４；およびＢｅｉｄｌｅｒら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０に記載された方法を使用して、当分野で公知の組換えＤＮＡ技法によって産生することができる。治療剤は、相補性決定領域（ＣＤＲ）ミメティックなどの抗体ミメティックも含む。
【０２６９】
６．トランスジェニック動物およびファージ提示からのヒト抗体
または免疫化時に内因性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の全レパートリーを産生できるトランスジェニック動物（たとえばマウス）を産生することが、今や可能である。たとえば、キメラおよび生殖系列ミュータントマウスにおける抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合欠失は、内因性抗体産生の完全な抑制を生じることが記載されている。このような生殖系列ミュータントマウスへのヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの転移は、抗原投与時にヒト抗体の産生を引き起こす。たとえばＵ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏｓ．６，１５０，５８４；６，１１４，５９８；および５，７７０，４２９を参照。
【０２７０】
完全ヒト抗体もファージ提示ライブラリから得ることができる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２２：５８１−５９７（１９９１））。キメラポリクローナル抗体もファージ提示ライブラリから得ることもできる（Ｂｕｅｃｈｌｅｒら、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．６，４２０，１１３）。
【０２７１】
７．２重特異性抗体、抗体融合ポリペプチド、および単鎖抗体
２重特異性抗体（ＢｓＡｂ）は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。このような抗体は、全長抗体または抗体断片（たとえばＦ（ａｂ）’２  ２重特異性抗体）から得ることができる。２重特異性抗体を作製する方法は当分野で公知である。全長２重特異性抗体の慣習的な産生は、２つの鎖が異なる特異性を有する、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づいている（Ｍｉｌｓｔｅｉｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダムな組み合せのために、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、異なる抗体分子の潜在的な混合物を産生する（ＷＯ  ９３／０８８２９およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）を参照）。
【０２７２】
２重特異性抗体は、架橋または「ヘテロ接合」抗体も含む。たとえばヘテロ接合体における抗体の一方をアビジンに、他方をビオチンまたは他のペイロードに結合させることができる。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の好都合な架橋法を使用して作製され得る。適切な架橋剤は当分野で公知であり、多くの架橋技法と共にＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，６７６，９８０に開示されている。
【０２７３】
また別の態様において、抗体は反応性、検出可能、または官能性部分などのペイロード、たとえば免疫毒素に化学的または遺伝的に融合させて、抗体融合ポリペプチドを産生することができる。このようなペイロードはたとえば、免疫毒素、化学治療薬、および放射性同位体を含み、そのすべては当分野で周知である。
【０２７４】
単鎖抗体も本発明による安定化に好適である。断片は軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）にリンカによって連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み、このことによって各可変領域は相互に作用して、ＶＬおよびＶＨ領域が由来する親抗体の抗原結合ポケットを再形成する。Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照。
【０２７５】
上記のポリペプチドの分子のいずれも単独でまたは組み合されて、本発明による安定化製剤としての調製に好適であることが理解される。
【０２７６】
ＸＩ．処置に適した被験体
処置に適した被験体および患者は、疾患のリスクに瀕しているが症状を示していない個人はもちろんのこと、現在症状を示している患者も含む。したがって本方法は、対象患者のリスク評価を一切必要とせずに、一般集団に対して予防的に投与することができる。本方法は、公知の遺伝的リスクである自己免疫障害を有する個人に特に有用である。このような個人は、この疾患を経験したことがある親戚を有する個人および遺伝マーカーまたは生化学マーカーの分析によってそのリスクが決定される個人を含む。
【０２７７】
ＡＡアミロイドーシスに罹患している患者は、長期間にわたって無症候性であり得る。したがってＡＡアミロイドーシスの臨床診断は、アミロイド沈着物が大規模になるまで遅れるか、または見落とされることが多い。症候性である患者の場合、症例のわずか５３％が診断されると推定される。Ｌ．Ｅ．Ｋ．Ｃｏｎｓｕｌｔｉｎｇ，Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｍａｒｋｅｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００３）を参照。
【０２７８】
本発明は、表１に挙げた疾患を含む、たとえば上述の疾患などのアミロイドタンパク質の沈着を特徴とする疾患を処置するまたは疾患の予防を達成するのに有用な方法を提供する。いくつかの方法は、アミノ酸配列ＥＤを含むアミロイドタンパク質の沈着を特徴とする疾患を処置するまたは疾患の予防を達成するのに有用である。いくつかの方法において、アミロイドタンパク質がアミノ酸配列ＡＥＤＶを含む場合、ここで抗体はアルツハイマー病または軽度認知障害の処置または予防実施のために投与されない。アミロイドタンパク質は、表１に挙げたアミロイドタンパク質、たとえば血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）、免疫グロブリン軽鎖タンパク質、たとえばＶλ６  ＷｉｌおよびＶκ、ヒト膵島アミロイド前駆体ポリペプチド（ＩＡＰＰ）、ベータアミロイドペプチド、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、またはＡｐｏＡ１を含む、上述のアミロイドタンパク質のいずれでも可能である。
【０２７９】
本方法は、ＡＡアミロイドーシスまたはＡＬアミロイドーシスの既知のリスクを有する、ＡＡアミロイドーシスまたはＡＬアミロイドーシスを有することが疑われる、またはＡＡアミロイドーシスまたはＡＬアミロイドーシスであると診断されている個人に特に有用である。このような個人は、これに限定されるわけではないが、慢性炎症性疾患、遺伝性炎症性疾患、および慢性微生物感染疾患、たとえば関節リウマチ、若年性慢性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬、乾癬性関節症、ライター症候群、成人スティル病、ベーチェット症候群、クローン病、家族性地中海熱、らい、結核、気管支拡張症、褥瘡性潰瘍、慢性腎盂腎炎、骨髄炎、ウィップル病、骨髄腫、マクログロブリン血症、免疫担当細胞疾患、単クローン性高ガンマグロブリン血症、不顕性疾患を有する個人を含む。慢性炎症性および感染性状態はＡＡアミロイドーシス発症に不可欠であり、限局性結節性アミロイドーシスによって顕在化したＡＬアミロイドーシスは、慢性炎症性疾患に関連することがある。ＡＡアミロイドーシスの既知のリスクを有する個人は、これに限定されるわけではないが、ホジキンリンパ腫、腎臓癌、消化管、肺および尿生殖路の癌、基底細胞癌、およびヘアリー細胞白血病などの悪性新生物を有する個人も含む。さらに、ＡＡアミロイドーシスの既知のリスクを有する個人は、これに限定されるわけではないが、キャッスルマン病などのリンパ球増殖性障害を有する個人も含む。
【０２８０】
無症候性および症候性患者の両方において、処置は基礎ＡＡまたはＡＬアミロイド疾患の診断前または後のいつでも開始することができる。処置は通例、期間にわたる複数回の投薬を含む。処置は、治療剤（たとえばＡＡペプチド）に対する抗体、活性化Ｔ細胞（副作用）もしくはＢ細胞応答を評価することによって、または経時的に放射性標識ＳＡＰシンチグラフィーを利用することによって監視することができる。応答が低下する場合、ブースター投薬量が指示される。
【０２８１】
ＸＩＩ．処置投薬計画
一般に処置投薬計画は、アミロイドタンパク質に対して、および好ましくはこのようなアミロイドタンパク質、たとえばＡＡまたはＡＬの凝集形に対して免疫応答を誘導するのに有効な薬剤を投与することを含む。好ましくは、ＡＡもしくはＡＬの免疫原性断片またはＸ１ＥＤＸ２断片が患者に投与される。予防用途では、製薬組成物または薬剤は、アミロイドーシス、たとえばＡＡアミロイドーシスまたはＡＬアミロイドーシスに罹りやすい、またはそうでなければアミロイドーシスのリスクに瀕した患者に、疾患の身体的、生化学的、組織学的および／または行動上の症状、その合併症ならびに疾患発症の間に現れる中間病的表現型を含めて、疾患のリスクを排除もしくは低下させる、重症度を軽減する、または開始を遅延させるのに十分な量で投与される。治療用途では、薬剤は、このような疾患が疑われる、またはこのような疾患にすでに罹患している患者に、その合併症および疾患発症時の中間病的表現型を含めて、疾患の（身体的、生化学的、組織学的および／または行動上の）症状を治癒させる、または少なくとも部分的に停止させる、またはその悪化を抑制するのに十分な薬剤の投与の量および頻度を含む投薬計画で投与される。いくつかの方法において、薬剤の投与によって、特徴的なＡＡまたはＡＬアミロイドーシス病状をまだ発症していない患者における早期の総体的症状が低減または排除される。治療的または予防的処置を実現するのに十分な量は、治療的または予防的有効用量として定義される。治療的または予防的処置を実現するのに十分な量および投薬頻度の組み合せは、治療的または予防的有効投薬計画として定義される。予防的および治療的投薬計画の両方において、十分な免疫応答が実現されるまで、薬剤は通常、複数の投薬量で投与される。治療的または予防的処置を実現するのに十分な投与の投薬量および頻度は、治療的または予防的有効投薬計画として定義される。通例、患者の免疫応答は監視され、免疫応答が低下し始めた場合には、反復投与量が投与される。免疫応答は、患者の血中でたとえばＡＡもしくはＡＬに対する抗体を検出することによって、またはたとえばＡＡまたはＡＬのレベルを検出することによって監視することができる。
【０２８２】
上述の状態の処置のための本発明の薬剤および組成物の有効用量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトまたは動物であるか、投与された他の薬剤、および処置が予防または治療であるかを含む、多くの異なる因子に応じて変化する。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック動物を含む非ヒト哺乳動物も処置することができる。処置投薬量は、安全性および有効性を最適化するために滴定する必要がある。免疫原の量はアジュバントも投与されるか否かによって変わり、アジュバントがない場合にはより高い投薬量が必要とされる。投与のための免疫原の量は、時々、患者１名当り１〜５００μｇで、通常はヒト投与のための注射１回当り５〜５００μｇで変化する。時々、注射１回当り１〜２ｍｇのより高い用量が使用される。通例、各ヒト注射に少なくとも１０、２０、５０または１００μｇが使用される。免疫原の質量はまた、免疫原中の免疫原性エピトープの、免疫原全体としての質量に対する質量比に応じて変わる。通例、免疫原性エピトープの１０−３〜１０−５マイクロモルが免疫原１マイクログラムに使用される。注射のタイミングは、１日１回から１年に１回、１０年に１回まで著しく変わることがある。免疫原の投薬量が投与されるいずれの日においても、投薬量は、アジュバントも投与される場合には、１μｇ／患者を超え、通常は１０μｇ／患者を超えるが、アジュバントがない場合には、１０μｇ／患者を超え、通常は１００μ／患者を超える。代表的な投薬計画は、免疫化と、続いての６週間隔などの間隔でのブースター注射とで構成される。別の投薬計画は、免疫化と、それに続く１、２および１２ヵ月後のブースター注射とで構成される。別の投薬計画は、生涯にわたって２ヶ月おきの注射を含む。またはブースター注射は、免疫応答の監視によって示されるように、不規則ベースでもよい。
【０２８３】
免疫原をコードする核酸の用量は、患者１名当りＤＮＡ約１０ｎｇ〜１ｇ、１００ｎｇ〜１００ｍｇ、１μｇ〜１０ｍｇ、または３０〜３００μｇの範囲である。感染ウイルスベクターの用量は、用量当り１０〜１００ビリオンまたはそれ以上で変化する。
【０２８４】
（併用療法での）抗体による受動免疫化では、投薬量は宿主体重１ｋｇあたり約０．０００１〜１００ｍｇ、０．５〜５ｍｇ未満、およびさらに通常は０．０１〜５ｍｇ、０．５〜３ｍｇの範囲である。たとえば投薬量は、１ｍｇ／ｋｇ体重もしくは１０ｍｇ／ｋｇ体重または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内、または言い換えれば、７０ｋｇの患者に対してそれぞれ、７０ｍｇもしくは７００ｍｇまたは７０〜７００ｍｇの範囲内であることが可能である。さらなる例として、投薬量は、５ｍｇ／ｋｇ体重もしくは１．５ｍｇ／ｋｇ体重未満、または０．５〜１．５ｋｇ／ｋｇの範囲内、好ましくは少なくとも１．５ｍｇ／ｋｇであることが可能である。例示的な処置投薬計画は、２週間に１回または１ヶ月に１回または３〜６ヶ月に１回の投与を含む。いくつかの方法において、結合特異性の異なる２つ以上のモノクローナル抗体が同時に投与され、このような場合に、投与された各抗体の投薬量は示された範囲内に含まれる。抗体は通常、複数回の機会に投与される。単回投薬間の間隔は毎週、毎月または毎年であることが可能である。間隔は、患者のＡＡに対する抗体の血中レベルを測定することによって示されるように、不規則でも可能である。いくつかの方法において、投薬量は、１〜１０００μｇ／ｍｌの、いくつかの方法では２５〜３００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達成するように調整される。または、抗体は持続放出製剤として投与することが可能であり、この場合にはより低頻度の投与が必要とされる。投薬量および頻度は、患者における抗体の半減期に応じて変化する。一般に、ヒト抗体は最も長い半減期を示し、ヒト化抗体、キメラ抗体、および非ヒト抗体が続く。投与の投薬量および頻度は、処置が予防的または治療的のどちらであるかに応じて変化する可能性がある。予防用途では、比較的低い投薬量が長期間にわたって比較的低頻度の間隔で投与される。何人かの患者は、生涯にわたって処置を受け続ける。治療用途においては、疾患の進行が低減または停止するまで、好ましくは患者が疾患の症状の部分的または完全な緩和を示すまで、比較的短い間隔での比較的高い用量が時には必要とされる。その後、患者に予防的投薬計画を投与することができる。
【０２８５】
免疫応答を誘導する薬剤は、予防的および／または治療的処置のために非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、腹腔内、鼻内または筋肉内手段によって投与することができる。免疫原性剤の最も代表的な投与経路は皮下であるが、他の経路も等しく有効である可能性ある。次に最も一般的な経路は、筋肉内注射である。この種の注射は、最も通例は腕または脚の筋肉に行われる。いくつかの方法において、薬剤は、沈着物が蓄積した特定の組織に、たとえば頭蓋内注射で直接注射される。筋肉内注射または静脈内注入は、（併用療法での）抗体の投与に好ましい。いくつかの方法において、特定の治療抗体は、頭蓋内に直接注射される。いくつかの方法において、抗体は持続放出組成物またはデバイス、たとえばＭＥＤＩＰＡＤ（商標）デバイスとして投与される。
【０２８６】
本発明の薬剤は、すなわち活性治療剤および各種の製薬的に許容される構成成分を含む製薬組成物として投与されることが多い。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（１５ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１９８０）を参照。好ましい形態は、所期の投薬方式および治療用途によって異なる。組成物は、所望の製剤に応じて、動物またはヒトへの投与のための製薬組成物を調合するために一般に使用されるビヒクルとして定義される、製薬的に許容される非毒性担体または希釈剤も含むことができる。希釈剤は、組み合せの生物活性に影響を及ぼさないように選択される。このような希釈剤の例は、滅菌水、リン酸生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、およびハンクス液である。さらに製薬組成物または製剤は、他の担体、アジュバント、または非毒性非治療的非免疫原性安定剤なども含み得る。
【０２８７】
製薬組成物は、大型の低速で代謝される高分子、たとえばタンパク質、キトサンなどのポリサッカライド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸および共重合体（たとえばラテックス官能化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）、アガロース、セルロースなど）、重合体アミノ酸、アミノ酸共重合体、および脂質凝集体（たとえば油滴またはリポソーム）も含むことができる。さらに、これらの単体は免疫刺激剤（たとえばアジュバント）として機能することができる。
【０２８８】
非経口投与では、本発明の薬剤は、水、油、食塩水、グリセロール、またはエタノールなどの滅菌液体であり得る製薬的担体と共に、生理学的に許容される希釈剤中の物質の溶液または懸濁液の注射可能な投薬量として投与することが可能である。さらに補助物質、たとえば湿潤剤または乳化剤、界面活性剤、ｐＨ緩衝物質などが組成物中に存在することができる。製薬組成物の他の構成成分は、石油、動物、野菜、または合成起源の構成成分、たとえばラッカセイ油、ダイズ油、および鉱油である。一般にグリセロール、たとえばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールは特に注射用溶液に好ましい液体担体である。抗体は、活性成分の持続放出を可能にするような方法で調合可能なデポー注射またはインプラント調製物の形でも投与することができる。例示的な組成物は、５０ｍＭ
Ｌ−ヒスチジン、１５０ｍＭ  ＮａＣｌから成り、ＨＣｌによってｐＨ６．０に調整された水性緩衝液中で調合されたモノクローナル抗体を５ｍｇ／ｍＬで含む。非経口投与用組成物は通例、実質的に滅菌、等張性であり、ＦＤＡまたは同様の機関のＧＭＰ条件下で製造される。
【０２８９】
通例、組成物は、液体液剤または懸濁剤のどちらかとしての注射用剤として調製される；注射前に液体ビヒクルへの溶解または懸濁に適した固体形も調製することができる。調製物は、上述のようにアジュバント効果を増強するために、乳化するか、またはリポソームもしくは微粒子、たとえばポリラクチド、ポリグリコリド、もしくは共重合体の中にカプセル化することも可能である（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９，１５２７（１９９０）およびＨａｎｅｓ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２８，９７−１１９（１９９７）を参照。本発明の薬剤は、活性成分の持続またはパルス放出を可能にするような方法で調合可能なデポー注射またはインプラント調製物の形でも投与することができる。
【０２９０】
他の投与様式に適したさらなる製剤は、経口、経鼻および肺内製剤、坐剤、ならびに経皮塗布を含む。
【０２９１】
坐剤では、結合剤および担体はたとえばポリアルキレングリコールまたはトリグリセリドを含む；このような坐剤は、活性成分を０．５％〜１０％の、好ましくは１％〜２％の範囲で含有する混合物から形成することができる。経口製剤は賦形剤、たとえば製薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカライド、セルロース、および炭酸マグネシウムを含む。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、持続放出製剤または粉剤の形を取り、１０〜９５％の、好ましくは２５％〜７０％の活性成分を含有する。
【０２９２】
局所用途は、経皮または皮内送達で行うことができる。局所投与は、薬剤のコレラ毒素またはその解毒誘導体もしくはサブユニットまたは他の同様の細菌毒素との同時投与によって促進することができる（Ｇｌｅｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３９１，８５１（１９９８）を参照）。同時投与は、混合物もしくは化学的架橋によって得た連結分子を使用することによって、または融合タンパク質としての発現によって実現することができる。
【０２９３】
または経皮送達は、皮膚パッチを使用することまたはトランスフェロソームを使用することによって実現することができる（Ｐａｕｌら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５，３５２１−２４（１９９５）；Ｃｅｖｃら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ
１３６８，２０１−１５（１９９８））。
【０２９４】
ＸＩＩＩ．併用薬物療法処置投与計画
本発明による併用療法は、ＡＡアミロイドーシスの処置または予防の実施のために単独でまたは別の療法と併せて実施され得る。本発明による併用療法はまた、基礎アミロイド疾患、たとえば炎症性疾患、慢性微生物感染症、悪性新生物、遺伝性炎症性疾患、およびリンパ球増殖性障害を処置するまたは予防する別の療法と併せて実施され得る。併用薬物療法によってＡＡアミロイドーシスの予防および処置を実施するために現在開示された発明で使用するために選択できる、商業用途、臨床評価および前臨床開発で利用可能な多くの処置がある。このような処置は、これに限定されるわけではないが、複数の主要な分類、すなわち（ｉ）非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ；たとえばデトプロフェン、ジクロフェナク、ジフルニサル、エトドラク、フェノプロフェン、フルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナム酸塩、メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン（ｎａｂｕｍｅｏｎｅ）、ナプロキセンナトリウム、オキサプロジン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン、セレコキシブ、ロフェコキシブ、アスピリン、サリチル酸コリン、サルサラート（ｓａｌｓａｌｔｅ）、ならびにサリチル酸ナトリウムおよびマグネシウム）；（ｉｉ）ステロイド（たとえばコルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン）；（ｉｉｉ）ＤＭＡＲＤ、すなわち疾患修飾抗リウマチ薬（たとえばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキセート、レフルノミド、シクロホスファミド、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、Ｄ−ペニシラミン、ミノサイクリン、および金）または（ｉｖ）組換えタンパク質（たとえばＥＮＢＲＥＬ（登録商標）（エタネルセプト、可溶性ＴＮＦ受容体）およびＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）（インフリキシマブ）キメラモノクローナル抗ＴＮＦ抗体）から選択される１つ以上の化合物であることが可能である。
【０２９５】
併用療法の期間は、処置される基礎疾患の種類、患者の年齢および状態、患者の疾患の段階および種類、ならびに患者の処置に対する応答に応じて変わる。医師は療法の効果を厳密に観察して、必要とされる任意の調整を行うことができる。さらに、ＡＡアミロイドーシス（たとえば遺伝的に素因がある、または以前に炎症性障害もしくは他の基礎疾患を有した人）またはＡＬアミロイドーシスを発症するリスクがより大きい人は、ＡＡ、ＡＬ凝集体、たとえば原線維の発生を抑制または遅延するための予防処置を受けることができる。
【０２９６】
併用の各構成成分の投薬量、頻度および投与様式は、個別に制御することができる。たとえば１つの薬剤は１日３回経口投与され得るが、第２の薬剤は１日１回筋肉内投与され得る。併用療法は、休止期間を含むオン・オフサイクルで投与され得る。化合物は、１回の投与が両方の化合物を送達するように共に調合されることもある。本発明の組み合せは、製薬パックの構成成分としても供給することができる。薬物は共にまたは別個に、個々の投薬量で調合することができる。各化合物は好適な担体物質と混合され、一般に組成物の総重量の１〜９５重量％の量で存在する。
【０２９７】
組成物は、経口、非経口（たとえば静脈内、筋肉内、皮下）、直腸、経皮、経鼻、経膣、吸入、または眼内投与に好適である投薬形で供給され得る。それゆえ組成物は、たとえば錠剤、カプセル剤、丸剤、粉剤、顆粒剤、懸濁剤、乳剤、液剤、ハイドロゲルを含むゲル、ペースト、軟膏、クリーム、硬膏剤、水薬、送達デバイス、坐剤、浣腸剤、注射剤、インプラント、スプレー剤またはエアゾール剤の形であり得る。製薬組成物は、在来の薬務に従って調合され得る（たとえばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，（１９ｔｈ  ｅｄ．）ｅｄ．Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，１９９５，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．およびＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｅｄｓ．Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ，１９８８−１９９９，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎ．Ｙ．を参照。
【０２９８】
ＸＩＶ．ＡＡまたはＡＬアミロイドーシスの監視または診断方法
ＡＡまたはＡＬアミロイドーシスを監視または診断する方法は、ＳＡＡおよびＣ反応性タンパク質の血漿濃度の測定、組織生検（腎臓、直腸、胃、歯肉、脂肪、唾液、口唇腺）ならびにコンゴーレッド染色を用いた組織診断および／または原線維などのＡＡまたはＡＬ凝集体に向けられた特異的抗体を用いた免疫染色の実施を含む。本発明は、ＡＡアミロイドーシスに罹患している、またはＡＡアミロイドーシスに罹りやすい患者においてＡＡペプチドに対する抗体応答を検出する方法を提供する。方法は患者に投与されている処置経過を監視するのに特に有用である。方法は、症候性患者に対する治療的処置および無症候性患者に対する予防的処置の両方を監視するために使用できる。いくつかの方法は、免疫原性剤の投薬量を投与する前に患者の抗体応答の基準値を決定するステップと、これを処置後の免疫応答の値と比較するステップとを含む。抗体応答の値の著しい上昇（すなわちこのような測定値の平均からの１標準偏差として表される、同じ試料の反復測定値における実験誤差の通例の範囲を超える）は、正の処置結果（すなわち薬剤の投与が免疫応答を実現または増強したこと）を示す。抗体応答の値が著しく変化しない、または低下する場合、負の処置結果が示されている。一般に、免疫原性剤を用いた初期処置経過を受けている患者は、連続投薬量によって、最終的にプラトーに達する抗体応答の上昇を示すことが期待される。薬剤の投与は一般に、抗体応答が上昇する間に継続される。プラトーに到達することは、投与された処置が中止可能であること、または処置の投薬量もしくは頻度を低減できることの指標である。
【０２９９】
他の方法では、対照集合に対して抗体応答の対照値（すなわち平均および標準偏差）が決定される。通例、対照集団の個人は前処置を受けていない。次に治療剤投与後の患者における抗体応答の測定値が、対照値と比較される。対照値に対して著しい上昇（たとえば平均から１標準偏差を超える）は、正の処置結果を示す。著しい上昇がないことまたは低下は、負の処置結果を示す。薬剤の投与は一般に、抗体応答が対照値と比較して上昇する間に継続される。前と同様に、対照値と比較してプラトーに到達することは、処置の投与が中止可能であること、または処置の投薬量もしくは頻度を低減できることの指標である。
【０３００】
他の方法において、抗体応答の対照値（たとえば平均および標準偏差）は、治療剤による処置を受けて、その抗体応答が処置に応答してプラトーに到達した個人の対象集団から決定される。患者の抗体応答の測定値は対照値と比較される。患者の測定レベルが対照値とは著しく異ならない（たとえば１標準偏差を超える）場合、処置を中止することができる。患者のレベルが対照値より著しく低い場合、薬剤の継続投与が正当化される。患者において対照値よりも低いレベルが継続する場合、ここで処置投薬計画の変更、たとえば別のアジュバント、断片の使用または受動投与への切り替えが指示され得る。
【０３０１】
他の方法において、現在処置を受けていないが、以前の治療経過を受けた患者は、処置の再開が必要か否かを決定するために抗体応答が監視される。患者の抗体応答の測定値を、以前の治療経過後に患者で以前に実現された抗体応答の値と比較することができる。以前の測定値に対する著しい低下（すなわち同じ試料の反復測定値の通例の誤差範囲を超える）は、処置を再開できるという指標である。または患者の測定値は、治療経過を受けた後の患者の集合で決定された対照値（平均プラス標準偏差）と比較することができる。または患者の測定値は、疾患の症状がないままである予防的処置患者の集団の、または疾患特徴の緩和を示す治療的処置患者の集合の対照値と比較することができる。これらの症例すべてにおいて、対照値に対する著しい低下（すなわち１標準偏差を超える）は、患者の処置を再開すべきであるという指標である。
【０３０２】
いくつかの方法は、ヨウ素１２３標識またはヨウ素１２５標識血清アミロイドＰ構成成分（１２３Ｉ−ＳＡＰまたは１２５Ｉ−ＳＡＰ）シンチグラフィーを利用する。１２３Ｉ−ＳＡＰまたは１２５Ｉ−ＳＡＰは、患者に静脈内注射されて、ガンマカメラで観察される。放射性標識ＳＡＰシンチグラフィーは、患者のアミロイドーシス進行を監視して、処置を評価するのに有用な方法である。それはアミロイドに対して特異性であり、患者でのアミロイド沈着物の位置および量を定量的に監視するために使用できる。１２３Ｉ−ＳＡＰまたは１２５Ｉ−ＳＡＰは、健常被験体または非アミロイド患者には蓄積しない。放射性標識ＳＡＰシンチグラフィーは、アミロイドの動的ターンオーバーを監視するために使用することが可能であり、アミロイド沈着物の消失を目的とする処置の有効性を評価することができる。さらに放射性標識ＳＡＰシンチグラフィーは、非侵襲性であり、全身スキャンを与える。本発明の方法は、薬剤の投薬量を投与する前に患者の抗体応答の基準値を決定することと、これを患者の処置後の免疫応答の値と比較することを含む。抗体応答の値の著しい上昇（すなわちこのような測定値の平均からの１標準偏差として表される、同じ試料の反復測定値における実験誤差の通例の範囲を超える）は、正の処置結果（すなわち薬剤の投与が免疫応答を実現または増強したこと）を示す。抗体応答の値が著しく変化しない、または低下する場合、負の処置結果が示されている。一般に、免疫原性剤を用いた初期処置経過を受けている患者は、連続投薬によって、最終的にプラトーに達する抗体応答の上昇を示すことが期待される。薬剤の投与は一般に、抗体応答が上昇する間に継続される。プラトーへの到達は、投与された処置が中止可能であること、または処置の投薬量もしくは頻度を低減できることの指標である。
【０３０３】
分析のための組織試料は通例、患者からの血液、血漿、血清、粘膜または脳脊髄液である。試料は、ＡＡまたはＡＬペプチドの任意の形に対する免疫応答の指標について分析される。免疫応答は、ＡＡまたはＡＬペプチドに特異的に結合する抗体の存在から決定することができる。抗体は、抗体に特異的に結合するリガンドに対する結合アッセイで検出することができる。通例、リガンドは固定化される。結合は、標識抗イディオタイプ抗体を使用して検出できる。
【０３０４】
能動および受動投与の両方を利用する併用投薬計画において、類似の手法を使用して受動投与から生じた抗体のレベルを監視することができる。
【０３０５】
アミロイドーシスを診断する方法は、検出可能な標識に結合されている抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与すること（ここで抗体またはその断片は凝集アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２を含むエピトープに特異的に結合し、式中、Ｘ１およびＸ２は任意のアミノ酸である）と、結合した抗体またはその断片の存在または非存在を検出することとによって利用することによっても可能である。結合した抗体または断片の検出によって、アミロイドーシスの診断が裏付けられる。アミロイドーシスの診断に有用な抗体および断片は、本発明の開示された抗体を含む。
【０３０６】
本発明の診断抗体または断片は、たとえば患者の体内への静脈内注射によって、または頭蓋内注射によって脳内へ直接、投与することができる。抗体投薬量は、当業者によってただちに決定される。通例、抗体は標識されるが、いくつかの方法において、抗体は未標識であり、２次標識剤を使用して抗体に結合する。標識の選択は、検出手段に依存する。たとえば蛍光標識は、光学的検出に好適である。常磁性標識の使用は、外科的介入を伴わない断層撮影検出に好適である。２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、６７Ｃｕ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、３２Ｐ、２１２Ｐｂ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、９９ｍＴｃ、または９０Ｙを含む放射性標識が使用され得る。このような標識は、ＰＥＴもしくはＳＰＥＣＴまたは他の好適な技法を使用して検出され得る。
【０３０７】
診断は、対応する基準値に対して標識部位の数、サイズ、および／または強度を比較することによっても実施され得る。基準値は、罹患していない個人の集合の平均値を表すことができる。基準値は、同じ患者で決定された前のレベルも表すことができる。たとえば基準値は患者にて決定され、その後に測定した値を基準値と比較することができる。基準シグナルに対する値の上昇により、ＡＡアミロイドーシスの診断が裏付けられる。
【０３０８】
本発明の診断方法は、ＡＡアミロイドーシス、ＡＬアミロイドーシス、アルツハイマー病、軽度認知障害、アミロイド多発性神経障害、地中海熱、マックル−ウェルズ症候群、全身性炎症疾患に関連する反応性全身性アミロイドーシス、骨髄腫またはマクログロブリン血症関連アミロイドーシス、免疫担当細胞疾患に関連するアミロイドーシス、単クローン性高ガンマグロブリン血症、不顕性疾患、または慢性炎症疾患に関連する限局性結節性アミロイドーシスを含むアミロイドーシス疾患を診断するために使用され得る。
【０３０９】
ＸＶ．ＡＡアミロイドーシスの動物モデル
ＡＡアミロイドーシスは、硝酸銀、カゼイン、またはリポサッカライドの注射によってＳＡＡ濃度が著しく上昇するマウスにおいて実験的に誘導することができる。これらの薬剤は、サイトカインの産生を刺激する。Ｓｋｉｎｎｅｒら、Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ．３６：４２０−４２７（１９９７）およびＫｉｓｉｌｅｖｓｋｙら、Ｂａｉｌｌｉｅｒｅ’ｓ
Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．８（３）６１３−６２６（１９９４）を参照。炎症性刺激後の２〜３週間以内に、動物は、ＡＡアミロイドーシス患者に見出されるように、全身性ＡＡ沈着物を発達させる。マウスにＡＡアミロイド罹患マウス脾臓または肝臓から抽出したタンパク質の静脈内注射を同時に投与すると、この遅滞期は劇的に短縮される。Ａｘｅｌｒａｄら、Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ．４７（２）：１３９−４６（１９８２）を参照。このような調製物のアミロイド形成性加速活性は、「アミロイド増強因子」（ＡＥＦ）と呼ばれた。Ｌｕｎｄｍａｒｋらは、ＡＥＦの有効成分が明らかにＡＡ線維そのものであることを報告している。さらにＬｕｎｄｍａｒｋらは、この物質がきわめて強力であり、１ｎｇ未満の用量で活性であることと、かなりの長さの期間にわたってその生物活性を維持することとを証明した。特にＡＥＦも、経口投与されたときに有効であった。Ｌｕｎｄｍａｒｋらは、ＡＡおよびアミロイドーシスの他の形態が、プリオン関連障害と似て、伝染性疾患であるという結論を下した。Ｌｕｎｄｍａｒｋら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９９：６９７９−６９８４（２００２）を参照。
【０３１０】
ＡＡアミロイドも、メタロチオネインＩプロモータの制御下で、ヒトインターロイキン６遺伝子を保持するマウスのトランスジェニック系統において誘導することが可能であり、ＳＡＡの濃度の顕著な上昇がもたらされ、３月齢までに脾臓、肝臓および腎臓にアミロイドを発症する。約８〜９ヶ月の死亡時に、これらのトランスジェニックマウスの器官は広範囲のアミロイド沈着物を有している。Ｓｏｌｏｍｏｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５４（４）：１２６７−１２７２（１９９９）を参照。
【０３１１】
トランスジェニック急速誘導アミロイド疾患（ＴＲＩＡＤ）トランスジェニック・マウス・モデルは、上述のトランスジェニック・マウス・モデルの改良である。ＴＲＩＡＤマウスは、Ｈ−２ＬＤ組織適合性プロモータの制御下でヒトインターロイキン６遺伝子を保持する。ＡＥＦの８週齢ＴＲＩＡＤマウスへの投与によって、３〜４週間以内に顕著な脾臓および肝臓ＡＡアミロイド沈着物が生じる。次に、このプロセスは他の器官へ進行して、４〜６週間後に死に至らしめる。全身性アミロイドーシスの発症は、上述のトランスジェニック・マウス・モデルと比較して加速される。Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＷＯ  ０１／７７１６７，Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ，ＷＯ  ９５／３５５０３およびＳｃｒｉｐｐｓ，ＷＯ  ９５／３０６４２  Ｗａｌｌら、Ａｍｙｌｏｉｄ  １２（３）：１４９−１５６（２００５）を参照（そのそれぞれはすべての目的のために参照により組み入れられている）。
【０３１２】
コモンマーモセット（Ｃａｌｌｉｔｈｒｉｘ  ｊａｃｃｈｕｓ）は、ブラジル原産の新世界小型霊長類であり、生物医学研究で幅広く使用されてきた。Ｌｕｄｌａｇｅらは、コモンマーモセットが肝臓、副腎、腎臓、および腸を含む１つ以上の器官にアミロイド沈着物を有することが判明したと報告している。著者らは、この霊長類におけるＡＡアミロイドーシスの発症には遺伝的因子が寄与しているかもしれないことを推測している。この点で、コモンマーモセットは、ＡＡおよび他の全身性アミロイド障害の病原および治療の研究のための独自の実験モデルとして役立つ可能性がある。Ｌｕｄｌａｇｅら、Ｖｅｔ  Ｐａｔｈｏｌ  ４２：１１７−１２４（２００５）を参照。
【０３１３】
シャーペイ種のイヌは、−ＡＥＤＳモチーフのあるＡＡ配列を有し、ＡＡアミロイドーシスに特に罹りやすい品種であり、ＡＡアミロイド特異性抗体および他の化合物の新規な診断および治療用途を評価するための、全身性ＡＡの天然発生型モデルを提供する。
【実施例】
【０３１４】
（実施例Ｉ）
ＡＡ断片
Ｙａｍａｍｏｔｏ  ａｎｄ  Ｍｉｇｉｔａ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：２９１５−２９１９に記載されたような、アミノ酸７１〜７５−ＧＨＥＤＴに相当するペプチドをＡｎａＳｐｅｃ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡによって合成した。Ｂａｒｄ，Ｆ．ら（２０００）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．６，９１６−９１９によって先に記載されたように、ポリクローナル抗体（Ｐａｂ）ＡＡを産生して、免疫グロブリン画分を単離した。
【０３１５】
（実施例ＩＩ）
マウス抗体調製のための免疫原
使用したエピトープは、そのＮ末端にＣＧリンカを有するＧＨＥＤＴ、（配列番号３）であった。エピトープを含有するペプチドＥＰＲＢ−３９をヒツジ抗マウス抗体に結合させる。ＥＰＲＢ−３９は、Ａｎａｓｅｃ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡから入手する。産生された抗体は、領域ＧＨＥＤＴＩＡＤＱＥ、（配列番号８９）に及ぶペプチドに特異的に結合しないため、ネオエピトープ特異的であるように思われる。
【０３１６】
（実施例ＩＩＩ）
免疫化手順
６週齢Ａ／Ｊマウスに、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）と共にＥＰＲＢ−３９／ヒツジ抗マウスＩｇＧ  ５０ｕｇを腹腔内注射し、続いて不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）を１週おきに、合計３回の注射を行った。融合の３日前に、尾静脈にＰＢＳ
９０ｕｌ中のＥＰＲＢ−３９  ＳＡＭ  ＩｇＧ  ５０ｕｇを注射した。力価は高バックグラウンドのＥＬＩＳＡから１／１００００で概算した。
【０３１７】
ＪＨ８０は、ＥＰＲＢ−３９の融合番号である。以下は、活性であるクローンおよび限界希釈クローンのリストである：
７Ｄ８．２９．１９．４７＊，３９，６６  ＩｇＧ２ｂ  ｋ
８Ｇ９．３．４．５１．２２＊，３０，４６  ＩｇＧ２ｂ  ｋ
２Ａ４．２０．４４．７７＊，１３，１４  ＩｇＧ２ｂ  ｋ
７Ｄ４７、８Ｇ９および２Ａ７７は、好ましいサブクローンを示す。産生した抗体は、ＳＡＡのＣ末端切断部位に及ぶペプチドと反応しないため、ネオエピトープ特異的であると思われる。
【０３１８】
（実施例ＩＶ）
凝集および可溶性ＡＡへの抗体結合
血清力価（段階希釈によって決定）および凝集ＡＡへのモノクローナル抗体結合は、Ｓｃｈｅｎｋ  Ｄ．ら（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  ４００，１７３−１７７で先に記載されたように、ＥＬＩＳＡによって実施した。可溶性ＡＡは、ジメチルスルホキシド中で超音波処理したＡＡ原線維を指す。抗体の段階希釈物は、５０，０００ｃｍｐの１２５Ｉ−ＡＡと共に一晩室温にてインキュベートした。７５ｍｇ／ｍｌプロテインＡセファロース（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）／２００μｇウサギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ，ＵＳＡ）を含有するスラリ５０μｌを、希釈した抗体と共に１時間室温にてインキュベートして、２回洗浄し、Ｗａｌｌａｃガンマカウンタ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ，ＵＳＡ）でカウントした。すべてのステップは、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、０．５Ｍ  ＮａＣｌ、１ｍｇ／ｍｌゼラチン、および０．５％  Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０から成る放射免疫測定緩衝液、ｐＨ８．０中で実施した。
【０３１９】
（実施例Ｖ）
Ｖλ６  Ｗｉｌ構造の分析
発現されたヒトＶκおよびＶλ免疫グロブリン軽鎖生殖細胞系遺伝子の配列を図２１および２２に示す。κ１ａ、λ１ａ、λ３ａ、およびλ３ｃサブグループを除いて、すべてのＶκおよびＶλ生殖細胞系遺伝子配列の位置８１および８２にＧｌｕ−Ａｓｐ残基対形成がある（図２１および２２）。さらに位置５０および５１の第２の生殖細胞系コード化Ｇｌｕ−Ａｓｐ対形成は、Ｖλ６生殖細胞系遺伝子に独自のものである。それゆえＶλ６  Ｗｉｌは、５０〜５１および８１〜８２  Ｇｌｕ−Ａｓｐ対の両方を含有する。残基５０および５１の側鎖は、ｘ線結晶学によって示されるように、Ｖλ６  Ｗｉｌの表面上でどちらにも到達可能である（図２４）。これに対して、Ｇｌｕ８１側鎖だけが表面露出されているが、Ａｓｐ８２は側鎖は部分的に埋もれており、Ｌｙｓ７９およびＡｒｇ６１の側鎖と相互作用（静電相互作用またはＨ結合のどちらかによって）しているように思われる（図２５）。
【０３２０】
ｘ線結晶構造のこのような分析およびＧｌｕ−Ａｓｐ側鎖の相対的有効性に基づいて、出願人らは、ドメインが凝集（たとえば原線維）構造に入る（または部分的に変性されるようになる）と、埋もれたＧｌｕ８１に到達可能となり、それゆえ他の隠れている潜在性エピトープであるものが露出されるという結論に達する。
【０３２１】
（実施例ＶＩ）
Ｖλ６への抗ＡＡモノクローナル抗体結合の分析
Ａ．表面プラズモン共鳴
表面プラズモン共鳴を使用して、複数のモノクローナル抗体とＶλ６  Ｗｉｌ原線維および単量体との結合動態を確立した。６．６ｎＭの濃度にて、３つの抗体すべてを固定化合成Ｖλ６  Ｗｉｌ原線維に、〜１ｎＭのＫＤ（マウスＡＡ原線維とのその反応性について見出された値に匹敵する値）で結合させた（図２６）。結合段階の間の偏向（ＲＵで表す）は、ｍＡｂ  ７Ｄ８および２Ａ４では同様であったが、８Ｇ９では５０％低かった。このことは、計算した親和性が３つの抗体すべてで同様であったため、原線維に対するこの抗体の密度が他の２つの試薬よりも低かったことを示唆する。ＩｇＧ１  ｍＡｂは、対照として作用して、Ｖλ６  Ｗｉｌ原線維への結合は示さなかった。
【０３２２】
６．６ｎＭ〜３３．３ｎＭの範囲にわたるｍＡｂ  ７Ｄ８の滴定によって、ｋｏｎに関連する、予測された最大偏向の低下が生じた（図２７）。一般に、各濃度において結合動態は同様であったが、これらのパイロット実験における、２６．６ｎＭでの７Ｄ８のＫＤ値は、他の濃度で得られた値とは異なっていた。
【０３２３】
反応の特異性を評価し、（Ｆｃ媒介結合または非特異性吸着とは対照的に）古典的なＦ（ａｂ）−抗原相互作用によってｍＡｂと原線維との結合が発生することを確実にするために、２０および１μｇ／ｍＬの免疫原ペプチド（ｐ３９）の存在下で結合データを得た（図８）。低濃度のｍＡｂ  ７Ｄ８を結合しないペプチドｐ４１は、対照として役割を果たした。２０μｇ／ｍＬ  ｐ４１ペプチドの存在下でのｍＡｂ  ７Ｄ８とＶλ６  Ｗｉｌ原線維との結合動態は、７Ｄ８単独と同じであった。対照的に、１μｇ／ｍＬの免疫原ペプチドｐ３９は、測定したシグナルの偏向によって判断されるように、結合の程度を２分の１未満に低下させた（図２８）。７Ｄ８による原線維結合の抑制は、２０μｇ／ｍＬのｐ３９ペプチドを使用したときに、ほぼ完全に抑制された。これらのデータは、免疫原ペプチドによってこの相互作用を完全に抑制できる限り、ｍＡｂ  ７Ｄ８が分子のＦ（ａｂ）領域を介して原線維を結合することを示した。
【０３２４】
ｍＡｂ  ７Ｄ８とチップに固定されたＶλ６単量体との反応性は、ＢＩＡｃｏｒｅを使用して調査した。抗体は、単量体タンパク質と反応しなかった。これらのデータは、ｍＡｂ  ７Ｄ８によって認識された結合部位が原線維に存在するが、可溶性前駆体タンパク質には存在しないことを示し、抗原が実際に立体配座的または潜在性であることを示唆している。
【０３２５】
Ｂ．免疫組織化学
免疫組織化学は次のように実施した：ホルマリン固定パラフィン包埋ブロックから切り出した６μｍ厚切片をＣｉｔｒａＰｌｕｓ（ＢｉｏＧｅｎｅｘ，Ｓａｎ  Ｒａｍｏｎ，ＣＡ）によって９０℃での３０分間のインキュベーションによって、抗原賦活を受けさせた。組織をｍＡｂ  ２Ａ４、７Ｄ８、または８Ｇ９の３μｇ／ｍＬ溶液によって免疫染色した。ＩｇＧ２ａ  ｍＡｂ  ＴＹ１１は対照として役割を果たした。ＨＲＰＯ結合ウマ抗マウスＩｇ抗体（ＩｍｍＰＲＥＳＳ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｒｅａｇｅｎｔ，Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を２次試薬として使用した。３，３’−ジアミノベジデン（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ）を使用してスライドを発色させて、Ｌｅｉｃａ  ＤＭ５００顕微鏡を使用して調査した。モノクローナル抗体とＡＬκおよびＡＬλアミロイド組織沈着物との相互作用も免疫組織化学を使用して調査した。図２９に示すように、λ２断片で構成された患者の甲状腺におけるアミロイド沈着物を７Ｄ８、２Ａ４および８Ｇ９によって免疫染色した。コンゴーレッド染色組織切片で見られた緑金の複屈折によって示されるように、反応性の範囲はアミロイド沈着物と相関していた。最も印象的な反応性は、ｍＡｂ  ７Ｄ８および２Ａ４  ｍＡｂで実現されたのに対して、８Ｇ９は陽性であるものの、かなり弱かった。これらの定性的データは、８Ｇ９がＶλ６  Ｗｉｌ原線維に他の２つの試薬よりも弱く結合したＢＩＡｃｏｒｅ分析とよく一致する（図２６）。対照としての役割を果たしたアイソタイプマッチｍＡｂ  ＴＹ１１は、アミロイド免疫反応性を示さなかった。
【０３２６】
このλ２タンパク質のアミノ酸配列（配列番号８６）（以下に示す）は、位置８１および８２に生殖細胞系コードＧｌｕおよびＡｓｐ残基をそれぞれ含有する。
【０３２７】
【化１１】
2014080434.tif 000022
ＡＬκアミロイド組織沈着物の調査によって、２Ａ４が、そしてより低い程度で７Ｄ８および８Ｇ９が正の反応性を有することが明らかになった。再び、免疫染色および複屈折によるコンゴ好染アミロイド領域間に一致が見られた。ＴＹ１１  ｍＡｂは未反応であった。
【０３２８】
Ｃ．１２５Ｉ標識７Ｄ８を使用するＡＬアミロイドーマの放射線画像化
ＡＬアミロイドーマの実験的インビボモデルを使用して、放射性標識ｍＡｂ  ７Ｄ８がヒトＡＬアミロイドを画像化するか否かを調査した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定したような７Ｄ８の放射性標識効率によって、ＩｇＨおよびＩｇＬ鎖の両方がＩ−１２５標識を取り込むことが明らかとなり、断片化または凝集に関連するバンドの証拠は観察されなかった。ＡＬアミロイドーマが誘導されたマウスのＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像化によって、アミロイドを含まない組織（たとえば肝臓、心臓、脾臓、および腎臓）と比較したアミロイド中の放射性標識抗体の蓄積によって明らかであるように、誘導された背側に位置するアミロイド塊に１２５Ｉ標識抗体が局在することが判明した。放射性標識された無関係のＩｇＧ
ｍＡｂは塊中に蓄積しなかった；しかし遊離した放射性ヨウ素が甲状腺に蓄積しているのが観察され、ＩｇＧ抗体の異化および脱ハロゲン化が示された。アミロイドーマ保有マウスでの１２５Ｉ−７Ｄ８  ｍＡｂの分布を、肝臓、脾臓、腎臓、胃、心臓、および肺と比較した、アミロイド塊に関連する活性を測定することによって定量した。データによってＳＰＥＴＣ／ＣＴ画像化調査が確認された。注射７２時間後（この時点で画像を取り込み、組織を回収した）、アミロイドーマは、肝臓−ｍＡｂ異化の部位−および残留血液プール活性が高いことが予想された心臓で見られるよりも４倍高い、〜８％  ＩＤを含有していた。肺で見られた活性は、安楽死の方式によるものであった（データは示さず）。
【０３２９】
生体内分布データを確認するために、アミロイドーマはもちろんのこと、肝臓、脾臓、心臓、および腎臓を回収して、オートラジオグラフ分析用の組織切片を作製した。放射性標識は次の通りであった：７Ｄ８抗体を還元剤を含まない１２５Ｉ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）２ｍＣｉで制限量のクロラミンＴを使用して標識して、５ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミンを含有するＰＢＳ（ＢＳＡ／ＰＢＳ）に懸濁させた。未結合同位体およびタンパク質凝集体を、Ｕｌｔｒｏｇｅｌ  ＡｃＡ３４カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ）によるサイズ排除液体クロマトグラフィーによって除去した。ＩｇＧ単量体を含有する画分は、画像化実験のためにプールした。放射化学物質の収率は〜５０％であり、〜２５μＣｉ／μｇの比放射能を与えた。１２５Ｉ標識ｍＡｂは、還元剤の存在下または非存在下でＳＤＳ／ＰＡＧＥ（１０％ゲル）にかけて、Ｃｙｃｌｏｎｅホスホイメージャによって解析した。ＳＰＥＣＴ画像化および生体内分布測定値と一致して、オートラジオグラフによって、肝臓に対してアミロイドーマにおける１２５Ｉ−７Ｄ８の著しい蓄積が確認された。任意の他の器官では放射性標識抗体１２５Ｉ−７Ｄ８の取り込みの証拠はなかった（予想肝臓活性以外が抗体の異化に関係している）。ｍＡｂ  ７Ｄ８はアミロイド塊のバルクの至るところに比較的均一に分布していたが、腹部−アミロイド境界の周辺区域に中程度により高い密度が見られた。いずれの器官にも放射性標識対照ＩｇＧの取り込みはなかった。
【０３３０】
Ｄ．概要および結論
表面プラズモン共鳴、免疫組織化学およびインビボ放射線画像化によって、ＡＡ反応性抗体２Ａ４、７Ｄ８、および８Ｇ９が免疫グロブリン軽鎖に由来するＡＬアミロイドおよび原線維（Ｋｄ〜１ｎＭ）を結合することが確認された。この相互作用は、位置８１および８２における高度に保存されたＧｌｕおよびＡｓｐアミノ酸にてそれぞれ発生しやすく、アミロイド形成性軽鎖が原線維中に取り込まれるときにのみ露出されるようになる潜在性線形エピトープを形成する。
（実施例ＶＩＩ）
ＥＬＩＳＡ分析によって、Ｘ１ＥＤＸ２ペプチドへの抗体結合が証明される
ＢＩＡｃｏｒｅ分析を実施して、各種配列のペプチドに対する抗体２Ａ４、７Ｄ８および８Ｇ４の結合を評価した。下の表４に示すように、抗体は配列Ｘ１ＥＤＸ２を有するペプチドと反応することが見出された。興味深いことに、抗体はさらなるＣ末端残基を有するペプチドとは反応しなかった。このことは、ネオエピトープに特異的に結合する抗体がＳＡＡの切断を引き起こして、遊離Ｃ末端を生成したことを示唆している。しかし実施例Ｖで示したように、これらの抗体のＶλ６  Ｗｉｌへの結合には遊離端は必須ではなく、むしろＸ１ＥＤＸ２ドメインは凝集（たとえば原線維）構造に入る（または部分的に変性されるようになる）ときに抗体への結合に好ましい立体配座を取り、他の隠れた潜在性エピトープを露出する。
【０３３１】
【表４】
2014080434.tif 000023
（実施例ＶＩＩＩ）
マウスＡＡの免疫組織化学分析
マウスＡＡ脾臓および肝臓アミロイド沈着物（アミロイド沈着の主要な部位）に対する抗体２Ａ４、８Ｇ９および７Ｄ８を発現するハイブリドーマからの上清の反応性を免疫組織化学的に実証した。これらの調査では、（緑色複屈折コンゴー好染沈着物によって証明されたような）肝臓および脾臓に広範囲のＡＡアミロイドがあるＴＲＩＡＤマウスから回収した組織切片を、ｍＡｂ含有上清によって染色した。３つすべてが肝臓および脾臓アミロイドに結合した。対照的に、無関係なハイブリドーマに由来する培養上清との反応性はなかった。２Ａ４、８Ｇ９および７Ｄ８を使用するアミロイドが新鮮な（未固定）、ＯＣＴ包埋マウス肝臓および脾臓中のアミロイドを免疫染色する能力を試験した。ｍＡｂが肝類洞中のＡＡアミロイドを結合するその能力を保持する証拠があった。さらに脾臓組織との抗体反応性は容易に解釈され、毛包周囲のアミロイドは強く免疫染色された。ｍＡｂが特異的結合ＡＡアミロイドであることを証明するために、１：２５希釈のｍＡｂ上清をペプチド＃３９（ｐ＃３９）または＃４１（ｐ＃４１）のどちらか５０μｇ／ｍＬによって室温にて１時間プリインキュベートした。基質としてのホルマリン固定組織を用いて、ｐ＃３９ペプチド（５０μｇ／ｍＬ）は、２Ａ４および７Ｄ８  ｍＡｂの両方のアミロイド反応性を著しく抑制した（８Ｇ９による結果は保留されている）。対照的に、ｐ＃４１は無効であった。新鮮な組織によって匹敵する結果が得られた。
（実施例ＩＸ）
ヒトＡＡの免疫組織化学分析
位置７３〜７６からのマウスおよびヒトＳＡＡのアミノ酸配列の比較によって、２つの同じ残基、保存的Ｓｅｒ→Ｔｈｒ置換、および非保存的Ａｌａ→Ｈｉｓ交換が明らかになる。２Ａ４、８Ｇ９および７Ｄ８  ｍＡｂがヒトＡＡアミロイド沈着物と交差反応するか否かを試験するために、我々はヒトＡＡ含有腎臓、副腎、卵巣および肝臓に対するその反応性を試験した。すべての場合において、ｍＡｂ上清はアミロイド沈着物を免疫染色した。卵巣組織において、ｐ＃３９ペプチドはｍＡｂの血管周囲ＡＡアミロイドへの結合を効果的に遮断したのに対して、ｐ＃４１ペプチドはこの反応を抑制しなかった。
（実施例Ｘ）
培養物上清の抗ＡＡとマウス由来ＡＡ原線維との相互作用。
【０３３２】
２Ａ４、８Ｇ９および７Ｄ８  ｍＡｂとＡＡアミロイドとの相互作用は、最初にＥＬＩＳＡによって試験を行い、ＳｉｇｍａＰｌｏｔ（ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ．）を使用して解析したデータを図３１に与える。各点は平均±ＳＥを表す（ｎ＝３）。無関係なハイブリドーマからの培養物上清を対照として使用した（Ｃｔｒｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｓｕｐ）。きわめて低い信号対雑音比があり、結果は、対照上清に対してより大きい吸収度信号によって明らかであるように、最初の回収物が第２の回収物よりも多くのｍＡｂを含有していることを示した。（さらに、第１日の物質の免疫組織化学反応性は、第２日の試料よりも大きかった）。ＳＥ値は大きかったが、これらのデータから、２Ａ４、８Ｇ９および７Ｄ８の結合親和性はほぼ等しく、反応性は〜１：６４希釈以降に存在しないことが明らかであった。結合データは、容量、すなわち結合したｍＡｂの量が７Ｄ８＞８Ｇ９＞２Ａ４と変化することも示している；しかしこれらのデータは、ｍＡｂ濃度に対して補正されず、次の試験ではこの傾向は見られなかった。培養物上清によって見出された低い信号および高い可変性のために、そしてより高い精度でｍＡｂのマウスおよびヒトＡＡアミロイド原線維への相対結合親和性を決定するために（および、インビボ生体内分布試験のための材料を提供するためにも）、ｍＡｂをプロテインＡ親和性クロマトグラフィーによって単離することが必要であった。単離ｍＡｂの純度は、還元および非還元条件下で１０％アクリルアミドゲルを使用してＳＡＳ−ＰＡＧＥによって確認した（図３２）。レーン１〜４のサンプルはメルカプトエタノールを用いて、レーン５〜９は用いずに処理した。ゲルをクマシーブルーによって染色した：ｍＡｂ  ８Ｇ９、レーン１および６；ｍＡｂ  ２Ａ４、レーン２および７；ｍＡｂ  ７Ｄ８、レーン３および８；ＳＰ２／０対照上清、レーン４および９；ブランク、レーン５。タンパク質Ｍｒマーカー（Ｓｔｄ）は、上から下へ：１７６、１１９、７５、４９、３９、２５および１９ｋＤａである。精製ｍＡｂの免疫化ペプチドｐ＃３９、対照ペプチド（ｐ＃４１）、マウスおよびヒトＡＡ抽出物との相互作用は、上述のようにＥＬＩＳＡによって決定した。データはＳｉｇｍａＰｌｏｔソフトウェアを使用してＳ字形曲線を当てはめることによって解析して、５０％飽和のｍＡｂ濃度（ＥＣ５０）を決定した（表５）。
【０３３３】
【表５】
2014080434.tif 000024
３つのｍＡｂとペプチドｐ＃３９との相互作用は、低ナノモル範囲にＥＣ５０値を持つ飽和性の結合を示した（上記の表５を参照のこと）。対照的に、使用したｍＡｂの最高濃度においても（１００ｎＭ）、ｐ＃４１ペプチドに対する検出可能な結合はほとんどなかった（図３３−各点は平均±ＳＥを表す（各濃度においてｎ＝３））。これらのデータは、上に記載した免疫組織化学結果、すなわちペプチドｐ＃３９がｍＡｂのＡＡアミロイド沈着組織への結合を完全に遮断できることを確証した。各ｍＡｂのｐ＃３９ペプチドとの結合について計算したＥＣ５０値は、マウスＡＡアミロイド抽出物を基質として使用した場合と本質的に同じであった（図３４−各点は平均±ＳＥを表す（各濃度においてｎ＝３））。マウスＡＡ抽出物へのｍＡｂの結合について計算したＥＣ５０値は、ｐ＃３９ペプチドを基質として使用したときに得た値と本質的に同じであった（図３４；表５）。対照的にヒトＡＡアミロイド抽出物をマイクロプレートのウェル上へ乾燥させたときに、ＥＣ５０は、マウスＡＡおよびペプチドｐ＃３９で観察された値の７分の１〜５分の１の低さであった（図３５−各点は平均±ＳＥを表す（各濃度においてｎ＝３）表５）。７Ｄ８  ｍＡｂ結合のＥＣ５０値は、試験を行った３つの抗体のうちで最も低く、出願人はこの試薬をインビボ同時局在化および画像化試験のために選択した。マウスタンパク質と比較して、ヒトＳＡＡ配列における２アミノ酸置換は、ＥＣ５０値に影響を及ぼした。特定の理論に縛られたくはないが、出願人は、ヒトＡＡのより高いＥＣ５０が抗原結合部位のアミノ酸側鎖のより低い「適合」に起因すると考えているが、この効果はＥＬＩＳＡにおけるように、アミロイド抽出物が表面吸着されるときの相対親和性のわずか５分の１までの低下に相当する。さらにこれらのデータは、３つのｍＡｂすべてがマウスおよびヒト組織ＡＡアミロイド沈着物に結合したという観察結果を裏付けている。
【０３３４】
（実施例ＸＩ）
ＭａｂのマウスおよびヒトＡＡアミロイドへの競合結合
マイクロタイターウェルの表面に吸着されたときに、潜在的な変性がある場合に、その効果を決定するために、マウスまたはヒトＡＡアミロイド抽出物をｍＡｂと表面結合ＡＡ抽出物との相互作用での可溶性競合物として用いる競合ＥＬＩＳＡを使用して、２Ａ４、８Ｇ９および７Ｄ４の反応性を評価した。
【０３３５】
すべての場合において、ヒトおよびマウス起源の両方の可溶性（非吸着）ＡＡアミロイド原線維は３つのｍＡｂと競合することが可能であり、試薬によって認識されたエピトープは表面吸着から生じる部分変性に依存しないことを示している。一般に、マウスＡＡ（ＡＥＦ）抽出物は、ヒトＡＡよりも良好な競合物であった（表６）。
【０３３６】
【表６】
2014080434.tif 000025
溶液中のマウスＡＥＦのＩＣ５０値（ｍＡｂ結合を５０％低下させたＡＡの（重量による）濃度）は〜２０μｇ／ｍｌであったのに対して、ヒトＡＡでは値は６〜４４倍高かった（対照的にヒトＡＡのＥＣ５０値は、マウスＡＡのＥＣ５０値のわずか７分の１の低さであった）。このことは、溶液中にあるときに、アミロイド原線維のエピトープはマウスＡＡと比較してヒトＡＡ調製物に到達しにくいという事実を反映し得る。
【０３３７】
予想した通り、表面吸着されたときにヒトおよびマウスＡＡ原線維に対して最高の相対親和性を示した７Ｄ８  ｍＡｂは、競合を実現するためにＡＡアミロイドの最高濃度を必要とした。
【０３３８】
（実施例ＸＩＩ）
放射性標識ＭＡｂ  ７Ｄ８
７Ｄ８の放射性標識効率はＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定した。還元および未変性ｍＡｂを分析して、ホスホイメージャを使用してタンパク質を可視化した。ＩｇＨおよびＩｇＬ鎖のどちらもＩ−１２５標識を組み込んでおり、断片化または凝集に関連するバンドの証拠は観察されなかった。
【０３３９】
（実施例ＸＩＩＩ）
１２５Ｉ標識７Ｄ８を使用するＡＡアミロイドの画像化
放射性標識ｍＡｂ  ７Ｄ８のインビボ局在化を調査するために、３群のマウスを使用した：トランスジェニックＩＬ−６；ＡｇＮＯ３／ＡＥＦ誘導、およびアミロイド欠失対照（ＷＴ）。ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像化により、肝臓における低い血液プール活性および甲状腺における遊離ヨウ素のみを示す対照マウスと比較したこれらの組織への放射性標識ｍＡｂの蓄積によって明らかであるように、１２５Ｉ−７Ｄ８  ｍＡｂは脾臓および肝臓のマウスＡＡアミロイド沈着物に局在化することが明らかになった。
【０３４０】
これらのマウスとは対照的に、ＡｇＮＯ３注入マウスは、遊離ヨウ素の甲状腺摂取、多少の肝臓活性を示したが、１２５Ｉ−７Ｄ８結合の主要部位は皮下ＡｇＮＯ３注射の部位（右下腹側範囲）に見られた。この範囲における活性は、ＣＴで見られるようにｘ線減弱銀溶液によって明確に制限されている。７Ｄ８  ｍＡｂは、ＳＰＥＣＴ画像によって明らかであるように、ＴＲＩＡＤマウスにおける循環ｓＡＡの存在下で肝臓および脾臓の両方のＡＡアミロイド沈着物に結合することが示されている。
【０３４１】
Ａ．マウスにおける１２５Ｉ−７Ｄ８の生体内分布
１２５Ｉ−７Ｄ８注射の４８時間後、血液プールに放射能があり、このことによって肺での比較的高い摂取が説明された（マウスを殺処分するときに肺は血液で満たされている）。注目すべきは、ＩＬ−６マウスでのｍＡｂの肝脾蓄積がアミロイドの存在を示すということである。ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像により、これらの器官へのｍＡｂの分布が確認された。注射７２時間後に、血液プール値は、４８時間で殺処分されたマウスと比較して心臓および肺での活性が不変であったことによって明らかであるように、このｍＡｂについての比較的長いＴ１／２ｂｉｏ（〜６０時間）に起因して、ほとんど変化しなかった。ＩＬ−６マウスには放射性標識ｍＡｂの著しい蓄積があり、このことは顕著な脾臓摂取と、より少ない程度の肝臓摂取を示す、取得されたＳＰＥＣＴ画像と相関していた。他の器官のうち、最も重要なのは肝臓であった（急性期応答の間にＩｇＧの異化の部位およびｓＡＡ源である）。ＷＴマウスでは、炎症誘導またはアミロイドはなく、肝臓は、血液プールがほぼ排他的に信号に寄与する腎臓および心臓に匹敵した、＜６％  ＩＤ／ｇを含有していた。
【０３４２】
Ｂ．オートラジオグラフおよび組織化学分析
ＩＬ−６およびＡｇＮＯ３マウスの１２５Ｉ−７Ｄ８の肝臓蓄積の増加がアミロイド摂取、異化クリアランスまたは新たに合成されたｓＡＡへの結合から生じたか否かを決定するために、肝臓はもちろんのこと、他の組織に対してもオートラジオグラフ分析を実施した。
【０３４３】
ＳＰＥＣＴ画像化および生体内分布測定値に基づいて、トランスジェニックＩＬ−６マウスにおける最大量のアミロイドは肝臓および脾臓にあることが推測された。この推測は、赤色脾髄全体はもちろんのこと、肝臓の血管周囲領域および洞様毛細血管でも有意なアミロイドが観測されたコンゴーレッド染色切片において確認された。さらに、より目立たない複屈折沈着物が腎臓および心臓に存在していた。これらの組織内での１２５Ｉ−７Ｄ８の分布は、コンゴーレッドおよびＡＡ反応性物質と十分に相関があった。アミロイドを含まない肝細胞には蓄積はなかった。
【０３４４】
生体内分布データに基づいて、ＡｇＮＯ３処置マウスは脾臓よりも肝臓に多くの１２５Ｉ−７Ｄ８摂取があり、このことはこのような動物におけるＡＡ蓄積の通常のパターンでないため予想外であった。コンゴーレッド染色によって、脾臓の単一の毛包周囲領域における少量のアミロイド（上右角）および広範囲の肝臓血管周囲沈着物が明らかとなり、そのどちらもオートラジオグラフで明白であった。さらにＡｇＮＯ３注射の皮下部位はＳＰＥＣＴ画像で相当の濃度の１２５Ｉ−７Ｄ８があることがわかった（我々は、放射性ヨウ素化ＳＡＰを造影剤として使用したときにもこれを観察している）。この部位はアミロイド（すなわちコンゴーレッド複屈折物質）を含有していない；しかしアミロイドは抗ＡＡ
ｍＡｂによって免疫染色された。特定の理論に縛られたくはないが、ｍＡｂ  ７８Ｄは炎症または（成熟アミロイド沈着物と同様に）「プレアミロイド」の部位に局在する可能性がある。ＩＬ−６マウスの器官での７Ｄ８の顕著な蓄積に対して、対照マウスの組織は血液プール以外のどの器官にもトレーサはほとんどまたは全くないことが見出された。これらの対照のどの器官のコンゴーレッド染色切片にも、アミロイドは見出されなかった。
【０３４５】
Ｃ．１２５Ｉ−７Ｄ８の薬物動態学
放射性標識７Ｄ８抗体の注射後に、分子の消失速度を測定して、半減期測定を表７にまとめる。結果は７Ｄ８のＴ１／２ｂｉｏが〜６０時間であり、ＩｇＧ２ｂマウスｍＡｂのＴ１／２ｂｉｏと一致することを示した（７Ｄ８がＩｇＧ２ｂサブクラスであることに注意）。ＩＬ−６（ＴＲＩＡＤ）マウスにおける１２５Ｉ−７Ｄ８のややより急速なクリアランスは有意とは見なされなかった。これらのデータに基づいて、ＳＰＥＣＴデータで明らかであるように、７２時間にわたる組織アミロイドによるｍＡｂの保持によって、排出速度は影響を受けない。
【０３４６】
【表７−１】
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１．トランスジェニックまたはＴＲＩＡＤマウスを使用してアミロイドーシスを予防または処置する薬剤を同定する方法。薬剤の調製手順は、Ｓｃｈｅｎｋら、Ｎａｔｕｒｅ  ４００：１７３−１７７に記載されている。薬剤はトランスジェニックマウスの最初の免疫化のために完全フロイントアジュバントによって１：１（ｖ／ｖ）で乳化して、その後、２週間後および毎月、完全フロイントアジュバントでのブーストを続けた。ＰＢＳ注射は同じスケジュールに従って、マウスには対照のためにＰＢＳ／アジュバントの１：１ミックスを注射した。トランスジェニックマウスの寿命を比較して、薬剤が動物の寿命を延長することによってＡＡアミロイドーシスを予防するのに有効であるか否かを決定する。
【０３４７】
２．組織病理学。光学および偏光顕微鏡法のために、４〜６μｍ厚の組織切片を切り出し、ヘマトキシリンおよびエオシン（ＨＥ）および新たに調製したアルカリ性コンゴーレッド溶液によってそれぞれ染色した。電子顕微鏡法のためには、切片をＥｐｏｎ（Ｔｅｄ
Ｐｅｌｌａ，Ｒｅｄｄｉｎｇ，ＣＡ）に包埋して、薄切りにして、ＪＥＯＬ  １００Ｓ
透過型電子顕微鏡によって調査した。Ｌｕｄｌａｇｅら、Ｖｅｔ  Ｐａｔｈｏｌ  ４２：１１７−１２４（２００５）を参照。
【０３４８】
３．免疫組織化学。パラフィン包埋組織切片（６μｍ厚）をマイクロトームで切り出して、ポリ−Ｌリジンコートスライドに載せ、室温にて一晩乾燥させて、脱パラフィンした。先に記載されたようにアビジンビオチン複合体（ＡＢＣ−ｅｌｉｔｅ）技法を使用して、免疫染色を実施した。１次抗体は、マウス抗ヒトアミロイドＡ（Ａｃｃｕｒａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｗｅｓｔｂｕｒｙ，ＮＹ）および抗マウスＳＡＡポリクローナル抗血清であった。アフィニティ精製ウマ抗マウス免疫グロブリン−Ｇ（ＩｇＧ）ホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲート（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）またはヤギ抗ウサギ、ヤギ抗マウス、もしくはヤギ抗ラットＩｇＧホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲート（ＢｉｏＲａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ）を２次抗体として使用した。
【０３４９】
４．ＥＬＩＳＡによるＳＡＡ定量。ＳＡＡ濃度は、製造者（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ）が提供した指示に従ってＭｕｌｔｉｓｐｅｃｉｅｓ  ＳＡＡ  ＥＬＩＳＡキットを使用して、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって測定した。既知量のヒトＳＡＡタンパク質を使用して標準曲線を作成して、モデル４４５０  ＢｉｏＲａｄプレートリーダ（Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）によって４０５ｎｍで吸光度を測定した。
【０３５０】
５．マウスにおける放射性標識ＳＡＰシンチグラフィーターンオーバー試験。Ｎ−ブロモスクシンイミドを使用することによって、ＳＡＰを１２５Ｉ（２〜５ＭＢｑ／ｍｇ）により酸化的にヨウ素化した。６〜１２週齢マウスに２００μＬ中１２５Ｉ−ＳＡＰ  ２〜１０μｇを静脈内投与した。正確に測定した尾の出血（０．０１〜０．０４ｇ）を規定の時間間隔で採取して、各実験の終りに同じランにおいて注入トレーサの標準のアリコートと共にトリクロロ酢酸沈殿性放射能をカウントした。Ｐｅｐｙｓら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：５６０２−５６０６（１９９４）。
【０３５１】
６．ヒトにおける放射性標識ＳＡＰシンチグラフィーターンオーバーおよび画像化試験。ヒトに使用するＳＡＰは、正常な適格ドナー１名の血漿から単離して、Ｎ−ブロモスクシンイミドを使用することによって、１２５Ｉ（２〜５ＭＢｑ／ｍｇ）または１２３Ｉ（１１０ＭＢｑ／タンパク質５０μｇ）により酸化的にヨウ素化した。１２３Ｉ  ＳＡＰの注射後に、データを取得して、ＩＧＥ  Ｓｔａｒｃａｍガンマカメラ（ＩＧＥ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｌｏｕｇｈ，Ｕ．Ｋ．で処理した。１２５Ｉ標識ＳＡＰのクリアランスは、健常者およびＡＡアミロイドーシスに罹患した患者で試験した。Ｐｅｐｙｓら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：５６０２−５６０６（１９９４）。
【０３５２】
７．アミロイドの抽出および精製。組織からアミロイドを抽出するために使用した方法は、Ｐｒａｓらによって記載された。Ｐｒａｓら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．４７：９２４−９３３（１９６８）を参照。簡潔には、肝臓または他の器官の組織の部分を検死時に得て、−８０℃に維持して、Ｏｍｎｉ−Ｍｉｘｅｒ（Ｏｍｎｉ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｗａｔｅｒｂｕｒｙ，ＣＴ）を使用して氷浴中で冷生理食塩水を用いてホモジナイズした。抽出物を１０，０００ｒｐｍで３０分間、４℃にて遠心分離して、ペレットを冷生理食塩水で２回、０．１Ｍクエン酸ナトリウムＴｒｉｓ緩衝生理食塩水、ｐＨ８．０で１回、次に生理食塩水で、Ａ２８０の上清が＜０．１０となるまで再抽出した。生じたペレットを、冷蒸留水を用いてホモジナイズして、混合物を３５，０００ｒｐｍで３時間、４℃にて遠心分離した。水抽出から得たペレットを次に凍結乾燥させた。
【０３５３】
８．表面プラズモン共鳴。結合動態はＢＩＡｃｏｒｅ  Ｘ装置で測定した。Ｖλ６  Ｗｉｌから調製した原線維をプローブ超音波処理装置で短時間超音波処理して、次にＢＩＡｃｏｒｅプロトコルに従ってアミン化学作用を使用してＣＭ−５チップに結合した。このプロセスはＥＤＣおよびＮＨＳを利用して、原線維の遊離アミノ基との結合のためにチップのカルボキシル基を活性化する。結合は１００μｇ／ｍＬの濃度のＮａＯＡｃ緩衝液、ｐＨ４．０中で実施した。対照チャネルは「偽結合」され、どちらのチャネルもエタノールアミンと反応させて未反応部位を飽和させた。約１６，０００ＲＵのＶλ６  Ｗｉｌ原線維が結合された。
【０３５４】
センソグラムをＢＩＡｃｏｒｅからのＨＢＳ−ＥＰ緩衝液中で、２０μＬ／分にてＦｃ１（Ｖλ６  Ｗｉｌ原線維）マイナスＦｃ−２（対照）モードで運転した。ｍＡｂまたはｍＡｂプラスペプチド阻害薬を含有する試料を注入して（７０μＬ）、２００秒の遅延洗浄機能を使用してセンソグラムを収集した。データは、質量作用補正を用いた１：１ラングミュアモデルを使用して、ＢＩＡｅｖａｌｕｔａｔｉｏｎソフトウェアで解析した。
【０３５５】
９．ＭｉｃｒｏＳＰＥＣＴ／ＣＴ。マウス各３匹のコホート２つにヒトＡＬアミロイド抽出物５０ｍｇを肩甲骨の間に皮下注射した。７日後、マウスの１群に１２５Ｉ標識ｍＡｂ  ７Ｄ８  〜３００μＣｉのｉｖ尾静脈注射を投与した。第２群には、同量のマウスｍＡｂ  ＭＯＰＣ  ３１Ｃを対照として投与した。７２時間後、マウスを過量のイソフルランによって殺処分して、ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像を取得した。ＣＴ画像の血管コントラストを増強するために、走査５分前にマウスにＦｅｎｅｓｔｒａ  ＶＣ（商標）（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｃａｎａｄａ）２００μＬを静脈内投薬で与えた。
【０３５６】
０．５ｍｍ孔径ピンホールコリメータを装着したときにミリメートル未満の空間分解能が可能であるｍｉｃｒｏＣＡＴ  ＩＩ＋ＳＰＥＣＴデュアルモダリティ画像化プラットフォーム（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ，ＴＮ）によって、ＳＰＥＣＴデータを収集した。画像化時に、２個の検出装置（１．２ｍｍ２グリッド上に配置された１×１×８ｍｍ  ＣｓＩ（Ｔｌ）結晶アレイに連結された直径５０ｍｍのＨａｍａｍａｔｓｕ  Ｒ２４８６−０２マルチアノード光電子増倍管で構成された）を回転中心から〜４５ｍｍに位置決めした。各ＳＰＥＣＴデータセットは、〜５０分間の経過中に３６０°にわたって収集した４５個の投影を含んでいた。期待値最大化−最尤（ＥＭ−ＭＬ）アルゴリズムの実行を使用して、画像を再構築した。
【０３５７】
ＳＰＥＣＴデータの収集後、高分解能ＣＴ画像を得た。ｍｉｃｒｏＣＡＴ  ＩＩスキャナは、円軌道円錐ビーム形状を有し、２０〜８０ｋＶｐの微小焦点Ｘ線源を装備しており、光ファイバ束によってｍｉｎＲ蛍光スクリーンに光学的に結合された、２０４８×３０７２ＣＣＤアレイ検出装置を使用して９０ｍｍ×６０ｍｍ視野を捕捉する。１°方位角で３６０の投射で構成された各ＣＴデータセットを８分間で得た。Ｆｅｌｄｋａｍｐ逆投影アルゴリズムの実行を使用して、画像をリアルタイムで等方性７７μｍボクセル上に再構築した。
【０３５８】
再構築したＳＰＥＣＴおよびＣＴ画像の同時登録を容易にするために、Ｃｏ−５７密閉源を画像化ベッド上に配置した。ｍｉｃｒｏＳＰＥＣＴおよびＣＴデータセットを描出して、３Ｄ画像解析ソフトウェアパッケージ（Ａｍｉｒａ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．１：Ｍｅｒｃｕｒｙ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて手動で同時登録した。
【０３５９】
１０．生体内分布。肝臓、脾臓、腎臓、心臓、肺、および移植アミロイド腫瘍（すなわちアミロイドーマ）の試料をマウスから回収して、風袋を差し引いたバイアルに入れ、秤量して、放射能を測定した。１次指数値を％注入線量／ｇ組織（％ＩＤ／ｇ）として表した。
【０３６０】
１１．オートラジオグラフィ。１２５Ｉ−７Ｄ８注射７２時間後に殺処分したマウスから得た組織のホルマリン固定パラフィン包埋ブロックから切り出した６μｍ厚切片をＰｒｏｂｏｎｄ顕微鏡スライド（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上に配置して、ＮＴＢ−２エマルジョン（Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ）に浸漬し、暗所で貯蔵して、２４時間露出後に現像した。切片をヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で対比染色して、Ｐｅｒｍｏｕｎｔ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてカバーガラスをかけ、光学顕微鏡で調査した。さらに連続スライドをアルカリ性コンゴーレッドで染色して、交差偏光照明下で観察した。最後に第３のスライドを、１次試薬として我々のＡＡ反応性ｍＡｂを使用して免疫染色した。デジタルカメラ顕微鏡画像を撮影して、画像解析ソフトウェアパッケージ（Ｉｍａｇｅ  Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ，Ｍｅｄｉａ，Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ）を使用して評価した。
【０３６１】
（実施例ＸＩＶ）
ヒト化２Ａ４および７Ｄ８抗体の調製。
【０３６２】
ヒト化２Ａ４、７Ｄ８および８Ｇ９抗体は、当分野で公知の技法に従ってマウス２Ａ４、７Ｄ８および８Ｇ９  ＣＤＲをヒトアクセプタフレームワークにグラフトすることによって調製した。復帰変異を行って、結合親和性を保全しながら抗原性を低下させた。マウス２Ａ４の軽鎖および重鎖可変領域は、配列番号１５２の残基２０〜１３１および残基１５４の残基２０〜１３８としてそれぞれ示される。７Ｄ８の軽鎖および重鎖可変領域は、配列番号１５３の残基２０〜１３１および残基１５４の残基２０〜１３８としてそれぞれ示される。マウス２Ａ４および８Ｇ９の軽鎖可変領域は相互に同じであり、７Ｄ８の軽鎖可変領域とはＣＤＲ１の１つの残基が異なる。２Ａ４、７Ｄ８、および８Ｇ９それぞれの重鎖可変領域は同じである。
【０３６３】
２Ａ４および７Ｄ８の可変カッパ（Ｖｋ）は、ヒトサブグループ２に対応するマウスサブグループ２に属しており、可変重鎖（Ｖｈ）はヒトサブグループ３に対応するマウスサブグループ３ｃに属している（Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）。ＣＤＲ−Ｌ１は、１６残基を含み、Ｖｋの標準クラス４に属する。ＣＤＲ−Ｌ２は、７残基を含み、Ｖｋのクラス１に属する。ＣＤＲ−Ｌ３は、９残基を含み、Ｖｋのクラス１に属する。Ｍａｒｔｉｎ  ＡＣ，Ｔｈｏｒｎｔｏｎ  ＪＭ．（１９９６）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２６３，８００−１５を参照。７Ｄ８における位置２７のロイシンはかなり珍しく、２Ａ４のグルタミンはより普通である。モデルは、側鎖が結合部位表面にあり、したがって抗原結合にとって重要であるはずであることを示している。ＣＤＲ−Ｈ１は５残基を含んでクラス１に属し、ＣＤＲ−Ｈ２は１９残基を含んでクラス４に属する（Ｍａｒｔｉｎ  ＆  Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，１９９６）。ＣＤＲ−Ｈ３には標準クラスがないが、８残基ループはおそらくＳｈｉｒａｉら（１９９９）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４５５，１８８−９７の規則に従ってねじれた塩基を有する。これはモデルに保存されるが、ＣＤＲ−Ｈ３の頂端の立体配座は異なり得る。ＶｋドメインとＶｈドメインとの間の界面の残基は、２Ａ４  Ｖｋ、７Ｄ８  Ｖｋおよび２Ａ４  Ｖｈに一般に見られる残基とは異なる。
【０３６４】
復帰変異の選択を案内する構造を見出すために、ＰＤＢデータベースの検索が行われた（Ｄｅｓｈｐａｎｄｅら（２００５）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３３：Ｄ２３３−７）。ＮＣＢＩからの非冗長タンパク質配列データベース検索によって、マウスＣＤＲを中にグラフトするのに好適なヒトフレームワークの選択が可能となった。Ｖｋについては、ＮＣＢＩアクセションコードＢＡＣ０１５６２（ｇｉ：２１６６９０７５）（配列番号１６６）のヒトκ軽鎖が選択された。これは同じ長さのＣＤＲ−Ｌ３を有し、ヒト生殖細胞系ＶＫＩＩＡ１９／Ａ３およびヒトカッパサブグループ２に属する。ＮＣＢＩアクセションコードＢＡＣ０１７３３（ｇｉ：２１６６９４１７）（配列番号１６７）の、Ｊ領域においてのみ異なる同様のフレームワークも見出された。ＢＡＣ０１５６２を２Ａ４  Ｖｋのフレームワークとして使用して、ＢＡＣ０１７３３を７Ｄ８  Ｖｋのフレームワークとして使用した。Ｖｈの場合、ヒトＩｇ重鎖ＡＡＣ５１０２４（ｇｉ：１７９１０６１）（配列番号１６５）を使用した。Ｇｌａｓら（１９９７）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０７：３７２−３８０を参照。これはヒト生殖細胞系ＶＨ３−７２およびヒト重鎖サブグループ３に属する。
【０３６５】
代表的なヒト化２Ａ４軽鎖可変領域は、配列番号１５５、１５６、および１５７として示される。代表的なヒト化７Ｄ８軽鎖可変領域は、配列番号１５８、１５９、１６０、１７４、１７５、および１７６として示される。代表的なヒト化２Ａ４／７Ｄ８重鎖可変領域は、配列番号１６１、１６２、および１６３として示される。図３６Ａ〜３６Ｅを参照。
【０３６６】
本発明の代表的なヒト化抗体は、配列番号１５２の残基２０〜１３１、配列番号１５３の残基２０〜１３１、ならびに配列番号１５５、１５６、１５７、１５７、１５９、１６０、１７４、１７５、および１７６のうちの１つから選択される軽鎖可変領域；ならびに配列番号１５４の残基２０〜１３８ならびに配列番号１６１、１６２、および１６３のうちの１つから選択される重鎖可変領域を含む。
【０３６７】
（実施例ＸＶ）
重篤な全身性ＡＡアミロイドーシスのマウスにおけるＭＡｂ  ２Ａ４の治療効果
ｍＡｂ  ２Ａ４の治療有効性を重篤な全身性アミロイドーシスのＨ２／ｈｕＩＬ−６マウスで評価した。ヒトＩＬ−６トランスジーンを構成的に発現するトランスジェニックＨ２／ｈｕＩＬ−６マウスは、急速および不可逆性の全身性ＡＡアミロイドーシスであることが証明されている。第１および第２の試験では、マウスにおける活性が報告されていないアイソタイプマッチｍＡｂ  ＴＹ−１１で処置したマウスを対照として使用した。ＡＡを誘導するためのアミロイド増強因子を投与する前に、Ｈ２／ｈｕＩＬ−６マウスを試料採取して、後眼窩洞を介して採血し、血清を調製して、市販のＥＬＩＳＡキットを使用してｓＡＡ濃度を決定した。代表的な値は次の通りである：２１９６．７μｇ／ｍＬ、８２３．９１μｇ／ｍＬ、１４１５．００μｇ／ｍＬ、１６７３．０１μｇ／ｍＬ、８１４．５３μｇ／ｍＬ、１０８８．１８μｇ／ｍＬ、７３６．３４μｇ／ｍＬ、１５４６．３５μｇ／ｍＬ、９５３．７０μｇ／ｍＬ、８８６．４６μｇ／ｍＬ、平均＝１２１３．４±４７８μｇ／ｍＬ。
【０３６８】
第２の試験の開始時（第０週）に、Ｈ２／ｈｕＩＬ−６マウスにアミロイド増強因子（ＡＥＦ）１００μｇを静脈内注射した。ＡＥＦを注射することによるＡＡ病態の誘導後に、マウスにｍＡｂ  ２Ａ４（１３匹）またはＴＹ１１（１１匹）１００μｇの皮下注射を、四肢へ代わるがわる５回投与した。治療はＡＥＦ注射の約１週間後に開始した。各処置群の動物の生存をプロットし、そして解析した。結果を表７に示す。ｍＡｂ  ＴＹ１１処置マウスのわずか４５％が試験終了まで生存した。対照的に２Ａ４処置マウスのいずれも、試験経過を通じて死亡しなかった。標準方法を使用する生存データの分析によって、両群の生存曲線に有意差（Ｐ＜０．００２５）が示された。ＴＹ１１処置マウスの生存中央値は、先の試験で観察された値（３８．５日）に匹敵して、４１日と計算された。
【０３６９】
【表７−２】
2014080434.tif 000027
ＡＥＦ後の第６週に、マウスを採血および殺処分して、さらなる分析のためにその器官を回収した。肝臓および脾臓のアミロイド定量のために、コンゴーレッド複屈折を交差偏光照明下で顕微鏡により可視化して、デジタル記録した。複屈折物質の面積は、アミロイド関連画素を（スペクトルセグメント化法を使用して）選択して、定量することによって決定した。アミロイド含有量の尺度であるアミロイド負荷指数（ＡＢＩ）を、各器官においてアミロイドに占有された面積のパーセンテージとして表した。２Ａ４およびＴＹ１１処置マウスの肝臓および脾臓でのアミロイドの定量によって、２つの処置の間に有意差はないことが明らかになった。しかし２Ａ４処置マウスとの比較のために第４２日まで生存したＴＹ１１処置マウスは、ＡＡアミロイドの病的な程度も分布（それにより病的状態を生じる）も生じなかったマウスであった。生存試験の経過中に肝脾アミロイド負荷も監視して、病的状態に関連するアミロイド負荷の増加を評価する。
【０３７０】
第３の試験では、ｍＡｂ  ２Ａ４を、マウスでは反応性が報告されていないアイソタイプマッチｍＡｂ  ＪＨ７０と比較した。さらに血液化学および他のパラメータを処置期間を通じて監視した。この試験では、０８年８月１日〜０８年９月７日に生まれたオスおよびメスＨ２／ｈｕＩＬ−６マウスを使用した。メスマウス２３匹およびオスマウス１６匹から後眼窩洞を介して採血した。全血を血液尿素窒素（ＢＵＮ）およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の化学的キャラクタリゼーションに使用して、ＶｅｔＳｃａｎ  Ｖ２（Ａｂａｘｉｓ，Ｕｎｉｏｎ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を使用することによって腎および肝機能を測定した。他の１２のタンパク質および検体の血清濃度を同時に測定した。ＶｅｔＳｃａｎ  ＨＭ５プラットフォームを使用して、全血球計算（ＣＢＣ）を実施した。さらに各マウスに、５ｍｇ／ｍＬウシ血清アルブミン中の放射性ヨウ素化ヒト血清アミロイドＰ構成成分（１２５Ｉ−ＳＡＰ）の低線量（〜５０〜６０μＣｉ）を投与して、疾患プロセスの開始前にマウスのアミロイド負荷を評価した。注射後（ｐｉ）２４時間にて維持された１２５Ｉ−ＳＡＰのパーセントを、各マウスを線量検定物質におくことによって測定した。非トランスジェニック（対照）マウスで観察されたよりも高い１２５Ｉ−ＳＡＰが維持されたことは、アミロイド疾患を示していた。最後に、血清を使用して、市販のＥＬＩＳＡアッセイを用いて血清アミロイドタンパク質Ａ（ｓＡＡ）の濃度を測定した。これらの処置前データ、選択した血液化学値、および各マウスに投与した処置のまとめを下の表８および９に示す。
【０３７１】
【表８】
2014080434.tif 000028
【０３７２】
【表９】
2014080434.tif 000029
第３の試験の開始時（第０週）に、すべてのＨ２／ｈｕＩＬ−６マウスのすべてにアミロイド増強因子（１ｍｇ／ｍＬ）１００μｇを静脈内投与した。その１週間後、治療を開始し、表８にまとめるように、各マウスにｍＡｂ  ２Ａ４またはＪＨ７０のどちらか１００μｇを皮下投与した。ｍＡｂ注射は７週間にわたって毎週続けた。
【０３７３】
ＡＥＦの２週間後、後眼窩洞を介して収集した血液を使用して、ＣＢＣ、血液化学、および血清ｓＡＡ測定を実施した。またこの時点で、群１のマウスにＢＳＡ中の１２５Ｉ−ＳＡＰ  〜６０μＣｉを前と同様に投与して、放射性標識ＳＡＰの維持によって明らかにされるアミロイドの蓄積を評価した。複数の動物が極度に窮迫した有害作用を示し、したがって１２５Ｉ−ＳＡＰを使用するアミロイド負荷の評価を中止した。ＡＥＦの２週間後に得た、選択した血液化学パラメータの結果を表１０に示す。
【０３７４】
【表１０】
2014080434.tif 000030
ＡＥＦの８週後に、マウスから最後に採血して、その直後に担体として５％正常マウス血清を使用して１２５Ｉ−ＳＡＰ  〜２００μＣｉを投与した。この処置に応答して、２、３匹の動物が多少の異常挙動を示し、３０分以内に軽減された。２４時間後、マウスにｘ線ＣＴ造影剤（尾静脈に〜２００μＬ静脈内）を注射して、次にイソフルラン過量によって殺処分した。各動物のシングルフォトンエミッション（ＳＰＥＣＴ）およびｘ線（ＣＴ）断層画像を得た。器官を回収して、各試料の放射能の量を計算して、組織１グラム当りの注入線量％として表した。さらに切片作成および顕微鏡分析の準備のために、各組織の部分を緩衝ホルマリンで一晩固定した。
【０３７５】
７週間の治療試験の間、マウス２匹が死亡しているのが発見され、マウス３匹は一晩生存しそうにないと見なされ、ボディ・コンディション・スコアが低かった（＜２；＞１５％の体重減少と関連）ために殺処分した。１２５Ｉ−ＳＡＰ注射に対する有害反応を経験したマウスおよび後眼窩出血から生じた合併症のために殺処分されたマウス１匹は、生存分析の一部として評価しなかった。各ｍＡｂ処置群のマウスの生存を表１１に示す。
【０３７６】
【表１１】
2014080434.tif 000031
評価可能であったｍＡｂ  ＪＨ７０処置マウスの約６５％が試験終了まで生存した。対照的に、評価可能であった２Ａ４マウスのいずれも５７日間に死亡しなかった。標準方法を使用する生存データの解析によって、生存曲線の有意差が示された（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ検定を使用してＰ＝０．０１５およびＧｒｅｈａｎ−Ｂｒｅｓｌｏｗ−Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定を使用してＰ＝０．０１６）。
【０３７７】
最終血液化学データは、各マウスに投与された療法に従って解析した。オスおよびメスＨ２／ｈｕＩＬ−６マウスに関連する平均パラメータ値の相違のために（殺処分時に、メスマウスのＢＵＮレベルは、２Ａ４処置およびＪＨ７０処置マウスの両方でより高かった）、生存したメスマウスのみを下の表１２に含める。
【０３７８】
【表１２】
2014080434.tif 000032
２Ａ４で処置したマウスは、ＪＨ７０で処置したマウスと比較したときに、血液尿素窒素（ＢＵＮ）およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベルの低下を示した。ＢＵＮおよびＡＬＴは、腎機能および肝機能それぞれのマーカーであり、そのレベルの低下は、器官機能が２Ａ４処置によってより良好に保存され得ることを示している。
（項目１）  ヒトアミロイドＡペプチドの残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する、単離ヒト抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体、またはその抗原結合断片。
（項目２）  配列番号２の残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する、項目１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３）  配列番号４、５、６、７、８、９、１０、または１１として示される残基を含むエピトープに特異的に結合する、項目１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４）  ＡＴＣＣアクセション番号      によって産生された抗体２Ａ４と、ヒトアミロイドＡペプチドへの結合で競合する、項目１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５）  配列番号１５２の残基２０〜１３１として示される軽鎖可変領域および配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される重鎖可変領域を有する抗体と、ヒトアミロイドＡペプチドへの結合で競合する、項目１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目６）  ＡＴＣＣアクセション番号      によって産生された抗体７Ｄ８と、ヒトアミロイドＡペプチドへの結合で競合する、項目１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目７）  配列番号１５３の残基２０〜１３１として示される軽鎖可変領域および配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される重鎖可変領域を有する抗体と、ヒトアミロイドＡペプチドへの結合で競合する、項目１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目８）  ＡＴＣＣアクセション番号      によって産生された抗体２Ａ４のヒト化もしくはキメラバージョンまたはＡＴＣＣアクセション番号      によって産生された抗体７Ｄ８のヒト化もしくはキメラバージョンである、項目１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目９）  配列番号１５２の残基２０〜１３１として示される２Ａ４軽鎖可変領域の１つ以上の相補性領域または配列番号１５３の残基２０〜１３１として示される７Ｄ８軽鎖可変領域の１つ以上の相補性領域を含む軽鎖可変領域を含む、項目８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１０）  配列番号１５２の残基２０〜１３１として示される２Ａ４軽鎖可変領域の３つの相補性領域または配列番号１５３の残基２０〜１３１として示される７Ｄ８軽鎖可変領域の３つの相補性領域を含む軽鎖可変領域を含む、項目９に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１１）  ＹおよびＦによってそれぞれ占有されるＬ８７およびＬ９０（Ｋａｂａｔナンバリング規則）から成る群より選択される少なくとも１つの軽鎖フレームワーク残基を含み、ここで上記軽鎖可変領域の残りが、ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、項目１０に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１２）  Ｔ、Ｓ、Ｌ、Ｄ、Ｑ、Ｋ、Ｙ、Ｌ、Ｆ、およびＬによってそれぞれ占有される＋７、＋１４、＋１５、＋１７、＋１８、＋５０、＋７５、＋８８、＋９２、および＋１０９（リニアナンバリング）から成る群より選択される少なくとも１つの軽鎖フレームワーク残基を含み、ここで上記軽鎖可変領域の残りが、ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、項目１０に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１３）  ＹおよびＦによってそれぞれ占有される＋７５および＋９２（リニアナンバリング）から成る群より選択される少なくとも１つの軽鎖フレームワーク残基を含み、ここで上記軽鎖可変領域の残りが、ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、項目１２に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１４）  上記ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖可変領域がヒトカッパサブグループ２軽鎖可変領域（Ｋａｂａｔ規則）である、項目１１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１５）  上記ヒトサブグループ２軽鎖可変領域がヒト生殖細胞系ＶＫＩＩＡ１９／Ａ３からである、項目１４に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１６）  上記ヒトＶｋ軽鎖可変領域が配列番号１６６または１６７として示される配列を含む、項目１５に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１７）  上記軽鎖可変領域が、配列番号１５２の残基２０〜１３１、配列番号１５３の残基２０〜１３１として示されるか、または配列番号１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１７４、１７５、もしくは１７６として示されるアミノ酸配列を含む、項目８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１８）  配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される２Ａ４重鎖可変領域の１つ以上の相補性領域を含む重鎖可変領域を含む、項目８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目１９）  配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される２Ａ４重鎖可変領域の２つの相補性領域を含む重鎖可変領域を含む、項目１８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２０）  配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される２Ａ４重鎖可変領域の３つの相補性領域を含む重鎖可変領域を含む、項目１９に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２１）  Ｉ、Ａ、Ｆ、またはＶによってそれぞれ占有されるＨ３７、Ｈ４９、Ｈ７０、およびＨ９３（Ｋａｂａｔナンバリング規則）から成る群より選択される少なくとも１つの重鎖フレームワーク残基を含み、ここで上記重鎖可変領域の残りが、ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、項目２０に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２２）  Ｒ、Ｋ、Ｋ、Ｉ、Ａ、Ｆ、Ｑ、Ｓ、Ｍ、Ｎ、Ｍ、Ｖ、またはＡによってそれぞれ占有される＋１０、＋１５、＋１９、＋３７、＋４９、＋７３、＋７８、＋７９、＋８０、＋８７、＋９５、＋９９、＋１１９（リニアナンバリング）から成る群より選択される少なくとも１つの重鎖フレームワーク残基を含み、ここで上記重鎖可変領域の残りが、ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、項目２０に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２３）  Ｉ、Ａ、Ｆ、またはＶによってそれぞれ占有される＋３７、＋４９、＋７３、および＋９９（リニアナンバリング）から成る群より選択される少なくとも１つの重鎖フレームワーク残基を含み、ここで上記重鎖可変領域の残りが、ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域内の対応する残基によって占有される、項目２２に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２４）  上記ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖可変領域がヒトガンマサブグループ３重鎖可変領域（Ｋａｂａｔ規則）である、項目２１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２５）  上記ヒトガンマサブグループ３重鎖可変領域が配列番号１６５として示される配列を含む、項目２４に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２６）  上記重鎖可変領域が配列番号１５４の残基２０〜１３８として示されるか、または配列番号１６１、１６２、もしくは１６３として示されるアミノ酸配列を含む、項目８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２７）  配列番号１５２の残基２０〜１３１として示される２Ａ４軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域、または配列番号１５３の残基２０〜１３１として示される７Ｄ８軽鎖可変領域の３つの相補性領域を含む軽鎖可変領域、および配列番号１５４の残基２０〜１３８として示される２Ａ４重鎖可変領域の３つの相補性領域を含む重鎖可変領域を含む、項目８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２８）  配列番号１６８、１６９、および１７０として示される３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域、ならびに配列番号１７１、１７２、および１７３として示される３つの相補性領域を含む重鎖可変領域を含む、項目８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目２９）  配列番号１７７、１６９、および１７０として示される３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域、ならびに配列番号１７１、１７２、および１７３として示される３つの相補性領域を含む重鎖可変領域を含む、項目８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３０）  配列番号１５２の残基２０〜１３１または配列番号１５３の残基２０〜１３１として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１５４の残基２０〜１３８として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、項目２７に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３１）  配列番号１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１７４、１７５、または１７６として示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１６１、１６２、または１６３として示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、項目２７に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３２）  上記軽鎖可変領域が配列番号１５５として示されるアミノ配列を含み、上記重鎖可変領域が配列番号１６１として示されるアミノ酸配列を含む、項目３１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３３）  上記軽鎖可変領域が配列番号１５６として示されるアミノ配列を含み、上記重鎖可変領域が配列番号１６２として示されるアミノ酸配列を含む、項目３１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３４）  上記軽鎖可変領域が配列番号１５７として示されるアミノ配列を含み、上記重鎖可変領域が配列番号１６３として示されるアミノ酸配列を含む、項目３１に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３５）  凝集アミロイドタンパク質中のＸ１ＥＤＸ２を含むエピトープに特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合断片であって、式中、Ｘ１およびＸ２は任意のアミノ酸である、単離抗体またはその抗原結合断片。
（項目３６）  Ｘ１がＨ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、Ｐ、Ａ、Ｌ、Ｃ、Ｑ、Ｒ、Ｅ、Ｋ、Ｄ、Ｇ、Ｖ、Ｙ、Ｉ、またはＷであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｅ、Ｒ、Ｉ、Ｖ、Ｆ、Ｄ、Ａ、Ｇ、Ｍ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｃ、Ｋ、Ｙ、またはＱである、項目３５に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３７）  Ｘ１がＨ、Ｔ、Ｆ、またはＡである、項目３６に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３８）  Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、またはＡである、項目３６に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目３９）  Ｘ１がＨまたはＡであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、またはＡである、項目３７に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４０）  Ｘ１がＴであり、Ｘ２がＥである、項目３７に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４１）  Ｘ１がＦであり、Ｘ２がＤである、項目３７に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４２）  Ｘ１がＳであり、Ｘ２がＥ、ＦまたはＡである、項目３６に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４３）  Ｘ１がＰであり、Ｘ２がＥ、ＩまたはＦである、項目３６に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４４）  上記エピトープがＧＨＥＤＴ（配列番号３）、ＨＥＤＴ（配列番号１２）、ＡＥＤＳ（配列番号１３）、ＡＥＤＴ（配列番号１４）、ＨＥＤＡ（配列番号１５）、およびＴＥＤＥ（配列番号１６）から成る群より選択されるアミノ酸配列から成る、項目３６に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４５）  アミノ酸配列ＧＨＧＡＥＤＳ（配列番号４）を含むエピトープにて凝集アミロイドタンパク質に特異的に結合する、項目４４に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４６）  約１０７Ｍ−１未満の親和性で、単量体形の上記アミロイドタンパク質に上記抗体が結合する、項目３５に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４７）  上記アミロイドタンパク質が血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）である、項目３５に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４８）  上記アミロイドタンパク質が免疫グロブリン軽鎖タンパク質、ヒト膵島アミロイド前駆体ポリペプチド（ＩＡＰＰ）、ベータアミロイドペプチド、トランスサイレチン（ＴＴＲ）およびＡｐｏＡ１から成る群より選択される、項目３５に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目４９）  上記アミロイドタンパク質が免疫グロブリン軽鎖タンパク質である、項目４８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５０）  免疫グロブリン軽鎖タンパク質がＶλ６  Ｗｉｌである、項目４９に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５１）  免疫グロブリン軽鎖タンパク質がＶκである、項目４９に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５２）  上記アミロイドタンパク質がヒト膵島アミロイド前駆体ポリペプチド（ＩＡＰＰ）である、項目４８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５３）  上記アミロイドタンパク質がベータアミロイドペプチドである、項目４８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５４）  上記アミロイドタンパク質がトランスサイレチン（ＴＴＲ）である、項目４８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５５）  上記アミロイドタンパク質がＡｐｏＡ１である、項目４８に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５６）  ヒト抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体または抗原結合断片である、項目３５に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５７）  ヒトアミロイドＡペプチドの残基７０〜７６内のエピトープに特異的に結合する、項目５６に記載の抗体または抗原結合断片。
（項目５８）  有効投薬量の項目１に記載の抗体または抗原結合断片を被験体に投与して、それにより該被験体のＡＡアミロイドーシスを処置するステップを含む、ＡＡアミロイドーシスを有する該被験体を治療的に処置する方法。
（項目５９）  上記被験体がヒトである、項目５８に記載の方法。
（項目６０）  治療的に処置するステップがＡＡアミロイドーシスの進行を遅らせることを含む、項目５８に記載の方法。
（項目６１）  治療的に処置するステップがＡＡアミロイド原線維凝集体の沈着を抑制することを含む、項目５８に記載の方法。
（項目６２）  治療的に処置するステップがＡＡアミロイド原線維凝集体の排除を含む、項目５８に記載の方法。
（項目６３）  上記被験体が関節リウマチ、若年性慢性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬、乾癬性関節症、ライター症候群、成人スティル病、ベーチェット症候群、クローン病、らい、結核、気管支拡張症、褥瘡性潰瘍、慢性腎盂腎炎、骨髄炎、ウィップル病、ホジキンリンパ腫、腎臓癌、消化管、肺および尿生殖路の癌、基底細胞癌、ヘアリー細胞白血病、家族性地中海熱、およびキャッスルマン病から成る群より選択されるアミロイド疾患に罹患する、項目５８に記載の方法。
（項目６４）  有効投薬量の項目１に記載の抗体または抗原結合断片を被験体に投与して、それにより該被験体のＡＡアミロイドーシスの予防を達成するステップを含む、ＡＡアミロイドーシスに罹りやすい該被験体を予防的に処置する方法。
（項目６５）  上記被験体がヒトである、項目６４に記載の方法。
（項目６６）  予防的に処置するステップがＡＡアミロイドーシスの開始を遅延することである、項目６４に記載の方法。
（項目６７）  予防的に処置するステップがＡＡアミロイドーシスのリスクを低下させることである、項目６４に記載の方法。
（項目６８）  項目３０に記載の抗体または抗原結合断片を被験体に投与して、それによりアミロイドーシスを処置するステップを含む、アミノ酸配列ＥＤを含む凝集アミロイドタンパク質に関連する該アミロイドーシスに罹患している該被験体を治療的に処置する方法。（項目６９）  上記被験体がヒトである、項目６８に記載の方法。
（項目７０）  治療的に処置するステップがアミロイドーシスの進行を遅らせることを含む、項目６８に記載の方法。
（項目７１）  治療的に処置するステップがアミロイド原線維凝集体の沈着を抑制することを含む、項目６８に記載の方法。
（項目７２）  治療的に処置するステップがアミロイド原線維凝集体の排除を含む、項目６８に記載の方法。
（項目７３）  上記アミロイドタンパク質が配列ＡＥＤＶ（配列番号２３）を含み、アミロイド形成性疾患が、ＡＡアミロイドーシス、ＡＬアミロイドーシス、アミロイド多発性神経障害、地中海熱、マックル−ウェルズ症候群、全身性炎症疾患に関連する反応性全身性アミロイドーシス、骨髄腫またはマクログロブリン血症関連アミロイドーシス、免疫担当細胞疾患に関連するアミロイドーシス、単クローン性高ガンマグロブリン血症、不顕性疾患、および慢性炎症疾患に関連する限局性結節性アミロイドーシスである、項目６８に記載の方法。
（項目７４）  項目３０に記載の抗体または抗原結合断片を被験体に投与して、それによりアミロイドーシスを処置するステップを含む、アミノ酸配列ＥＤを含む凝集アミロイドタンパク質に関連する該アミロイドーシスに罹りやすい該被験体を予防的に処置する方法。
（項目７５）  検出可能な標識に結合されている項目１に記載の抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与するステップと、該被験体において該検出可能な標識を検出するステップとを含む、該被験体においてＡＡアミロイドーシスに関連するアミロイド沈着物を検出する方法。
（項目７６）  上記被験体がヒトである、項目７５に記載の方法。
（項目７７）  上記被験体が関節リウマチ、若年性慢性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬、乾癬性関節症、ライター症候群、成人スティル病、ベーチェット症候群、クローン病、らい、結核、気管支拡張症、褥瘡性潰瘍、慢性腎盂腎炎、骨髄炎、ウィップル病、ホジキンリンパ腫、腎臓癌、消化管、肺および尿生殖路の癌、基底細胞癌、ヘアリー細胞白血病、家族性地中海熱、およびキャッスルマン病から成る群より選択されるアミロイド疾患に罹患するかまたは罹りやすい、項目７５に記載の方法。
（項目７８）  上記検出可能な標識が放射性標識である、項目７５に記載の方法。
（項目７９）  放射性標識が１２５Ｉである、項目７８に記載の方法。
（項目８０）  上記検出がＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像化によって実施される、項目７５に記載の方法。
（項目８１）  上記検出がＮＭＲ分光法によって実施される、項目７５に記載の方法。
（項目８２）  検出可能な標識に結合されている項目３０に記載の抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与するステップと、該検出可能な標識を検出するステップとを含む、該被験体においてアミロイド沈着物を検出する方法。
（項目８３）  上記被験体がヒトである、項目８２に記載の方法。
（項目８４）  アミロイドーシスがＡＡアミロイドーシス、ＡＬアミロイドーシス、アルツハイマー病、軽度認知障害、アミロイド多発性神経障害、地中海熱、マックル−ウェルズ症候群、全身性炎症疾患に関連する反応性全身性アミロイドーシス、骨髄腫またはマクログロブリン血症関連アミロイドーシス、免疫担当細胞疾患に関連するアミロイドーシス、単クローン性高ガンマグロブリン血症、不顕性疾患、または慢性炎症疾患に関連する限局性結節性アミロイドーシスである、項目８２に記載の方法。
（項目８５）  上記検出可能な標識が放射性標識である、項目８２に記載の方法。
（項目８６）  上記放射性標識が１２５Ｉである、項目８５に記載の方法。
（項目８７）  上記検出がＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像化によって実施される、項目８２に記載の方法。
（項目８８）  上記検出がＮＭＲ分光法によって実施される、項目８２に記載の方法。
（項目８９）  アミロイドＡペプチドの残基７０〜７６に対する抗体を含む、免疫応答を誘導して、それにより被験体のＡＡアミロイドーシスを処置するのに有効なアミロイドＡペプチドの残基７０〜７６に対する免疫応答を誘導する薬剤を投与するステップを含む、ＡＡアミロイドーシスを有する該被験体を治療的に処置する方法。
（項目９０）  アミロイドＡペプチドの残基７０〜７６に対する抗体を含む、免疫応答を誘導して、それにより被験体のＡＡアミロイドーシスの予防を達成するのに有効なアミロイドＡペプチドの残基７０〜７６に対する免疫応答を誘導する薬剤を投与するステップを含む、ＡＡアミロイドーシスに罹りやすい該被験体を予防的に処置する方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
2014080434.tif 000062
【図３４】
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【図３６Ａ】
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【図３６Ｂ】
2014080434.tif 000065
【図３６Ｃ】
2014080434.tif 000066
【図３６Ｄ】
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【図３６Ｅ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図３３】
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【図３５】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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