(57)【要約】      （修正有）【課題】高純度のセレブロシドまたはセレブロシド群を製造すると共に、製造コストを低減する製造法の提供。【解決手段】吸着剤としてＯＤＳ−シリカゲルを充填した複数の単位充填塔を無端直列に接続した循環流路に対し、セレブロシド、第１および第２の成分を含有する原料液を通流することにより原料液からセレブロシドを分離・回収する、高純度セレブロシドの製造方法。第１工程では、第１、第２および第３の吸着帯域を分けて形成している系に対し、第２と第３の吸着帯域の間で系の循環を遮断しながら、第３の吸着帯域に原料液を供給すると共に第２の吸着帯域から高純度セレブロシドを回収する。第２工程では、原料液を供給することなく循環流路内に脱離剤を供給して循環流路内の流体を通流させながら第１および第３の吸着帯域のうち少なくとも一方の吸着帯域から成分の回収を行う。第１工程および第２工程を複数回、繰り返す高純度セレブロシドの製造方法。【選択図】図１
2014224063.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
吸着剤としてＯＤＳ−シリカゲルを充填した複数の単位充填塔を無端直列に接続し、内部を流体が循環可能または任意の位置で遮断可能に構成された循環流路に対し、（ａ）１成分以上のセレブロシド、（ｂ）前記セレブロシドよりも前記ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が強い第１の成分、および（ｃ）前記セレブロシドよりも前記ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が弱い第２の成分を含有する原料液を通流することにより、前記原料液からセレブロシドを分離・回収する、高純度セレブロシドの製造方法であって、
下記第１工程および第２工程を有するサイクルを複数回、繰り返すことを特徴とする高純度セレブロシドの製造方法。
第１工程；前記第１の成分が富化された第１の吸着帯域、前記セレブロシドが富化された第２の吸着帯域および前記第２の成分が富化された第３の吸着帯域を分けて形成している系に対し、前記第２と第３の吸着帯域の間で前記系の循環を遮断しながら、前記第３の吸着帯域に原料液を供給すると共に、前記第２の吸着帯域から高純度セレブロシドを回収する工程、
第２工程；原料液を供給することなく、前記循環流路内に脱離剤を供給して循環流路内の流体を通流させながら、前記第１および第３の吸着帯域のうち少なくとも一方の吸着帯域から成分の回収を行い、かつ前記循環流路内の流体の通流に伴う第1から第３の吸着帯域の移動に合わせて前記循環流路内の脱離剤の供給位置と前記成分の回収位置を順次、循環流の下流側に移動させる工程。
【請求項２】
前記原料液が米糠油由来のものであることを特徴とする請求項１に記載の高純度セレブロシドの製造方法。
【請求項３】
前記セレブロシドが実質的に吸着せず、かつ第１の成分が吸着した１以上の単位充填塔を第１区画、
前記セレブロシドが吸着した１以上の単位充填塔を第２区画、
前記セレブロシドが実質的に吸着せず、かつ第２の成分が吸着した単位充填塔を第３区画とし、
前記第１、第２および第３の区画における流体速度をそれぞれ、Ｕ１、Ｕ２、Ｕ３とし、
吸着剤の擬似的移動速度ＵＳを（単位充填塔の長さ）／（前記第２工程における脱離剤の供給位置と前記成分の回収位置を移行させる時間）としたとき、
前記第２工程では、Ｕ１〜Ｕ３を下記（１）〜（３）の条件に設定することを特徴とする請求項１又は２に記載の高純度セレブロシドの製造方法。
（１）第１区画において１．０＜Ｕ1／ＵS＜１０．０、
（２）第２区画において０．３＜Ｕ2／ＵS＜３．０、
（３）第３区画において０．０＜Ｕ3／ＵS＜２．０。
【請求項４】
前記第２工程では、Ｕ１〜Ｕ３を下記（１）’〜（３）’の条件に設定することを特徴とする請求項３に記載の高純度セレブロシドの製造方法。
（１）’第１区画において２．０＜Ｕ1／ＵS＜５．０、
（２）’第２区画において０．５＜Ｕ2／ＵS＜１．０、
（３）’第３区画において０．０＜Ｕ3／ＵS＜１．０。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高純度セレブロシドの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
セレブロシドはスフィンゴ脂質の一種であり、長鎖アミノアルコールであるスフィンゴイド塩基のアミノ基に長鎖脂肪酸が結合したセラミド骨格を基本とし、糖が結合したグルコセレブロシドのような形態で存在する。セレブロシドは動物、植物、真菌などに広く存在し、グルコースが結合したグルコセレブロシドおよびガラクトースが結合したガラクトセレブロシドなどが存在する。また、スフィンゴイド塩基はジヒドロキシ型、トリヒドロキシ型、２重結合の有無と、そのシストランス型が異なるものが１０種程度、存在する。脂肪酸は炭素数１４〜２６の２−ヒドロキシ脂肪酸からなる。セレブロシドは構成する糖、スフィンゴイド塩基、脂肪酸の組み合わせにより多種多様に存在する（非特許文献１参照）。
【０００３】
セレブロシドは細胞組織の生体膜成分として普遍的に存在し、特に皮膚角質層に高濃度で存在し、皮膚のバリア機能、水分保持機能の役割を担っている。皮膚角質のセレブロシドは加齢と共に減少し、しわ、肌荒れの原因となる他、アトピー性皮膚炎患者でも減少していることが報告されており（非特許文献２参照）、セレブロシド量が減少するとバリア機能が低下することが知られている（非特許文献３参照）。セレブロシドをヒトの乾燥落屑性皮膚へ塗布することにより水分保持機能改善効果、経口摂取による経皮水分蒸発量の低減効果を有することが報告されており、化粧品や機能性食品の原料として注目されている。これらセレブロシドは消化管において糖、脂肪酸、スフィンゴイド塩基に分解された後、体内に吸収され効力を発揮すると考えられている。
【０００４】
セレブロシドの種類によって吸収率、効力が異なると考えられており分子種毎による効果の解析により、今後、セレブロシドの分子種、由来による差別化がされると考えられている。このほか、近年ではセレブロシドのセカンドメッセンジャーとしての生理機能が明らかになりつつあり、セレブロシドを総量全体としてではなく、クラス別・分子種別の機能が重要であると認識され、今後の医薬品等への展開も期待されている。
【０００５】
産業的にかつては、牛脳由来のセレブロシドが主であったが、狂牛病による安全性に不安があることから、現在は米、コムギ、トウモロコシ、大豆、コンニャク、甜菜などの穀類や、マイタケ、タモギダケなどのキノコ類、牛乳などに由来するセレブロシドが製造されている。これらは、原料の一部または全体、その一次加工、二次加工品などを弱アルカリ分解する方法（特許文献１参照）、アルカリ性アルコール溶液などの溶媒によって抽出し、液液分配を行う方法（特許文献２参照）、クロロホルム−メタノール混液を用いてシリカゲルにより精製する方法（非特許文献４，５，特許文献２参照）、多糖体による吸着等の処理により濃縮する方法（特許文献３参照）などがあった。
【０００６】
しかし、原料中のセレブロシドの含有量は少なく、分離物中のセレブロシドの濃度は０．１〜１０質量％程度のものが主流であり、産業適用が可能な高純度な製品は存在しなかった。現状の粗精製品は中性脂質、遊離脂肪酸、ステロールなどを大量に含み、またノネナールなどの悪臭成分や、脂肪酸などの着色成分が含まれていることから食品・化粧品用途に使用するには問題があった。また、現状でも高純度のセレブロシド、さらに分子種毎に精製されたセレブロシドは存在するが、コストが非常に高く研究用途の標準試薬を目的としたもので（特許文献３参照）、食品、化粧品等への産業適用可能なものはなかった。
【０００７】
したがって、高純度の天然セレブロシド、さらにはその使用目的に応じ、特定の分子種（群）のセレブロシドを、低コストで製造する方法が切望されていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００２−３４５４２７号公報
【特許文献２】特開２００２−２９４２７４号公報
【特許文献３】特開２００６−２２００５号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】R.X.Tan and J.H.Chen(2003) The cerebrosides Nat Prod Rep.:509-34．
【非特許文献２】Ohnishi Y, Okino N, Ito M, Imayama S.(1999) Clin Diagn Lab Immunol. 6, 101-10.4
【非特許文献３】最新皮膚科学大系 中山書店
【非特許文献４】大西正男、藤野安彦 (1975) Aspergillus oryzaeのセラミド 農化 49(4), 205-212.
【非特許文献５】M. Ohnishi and Y. Fujino (1980) Structural study on new sterylglycosides in rice bran: cellotetraosylsitosterol and cellopentaosylsitosterol Agric Biol Chem 44: 333-338.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
従来の分離法では、セレブロシドの分離効率が不十分であり、高純度のセレブロシドまたは複数の分子種のセレブロシドの高純度混合物（以下では、複数の分子種のセレブロシドを総じて「セレブロシド群」と呼ぶ場合がある。）を得ることが困難であった。また、従来の分離法では、セレブロシドまたはセレブロシド群の分離に多数の複雑な工程を必要とし、製造コストの増大に至っていた。
【００１１】
本発明は上記課題に鑑みてなされたものであり、単純で作業性が優れた処理により高純度のセレブロシドまたはセレブロシド群を製造すると共に、製造コストを低減することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
一実施形態は、
吸着剤としてＯＤＳ−シリカゲルを充填した複数の単位充填塔を無端直列に接続し、内部を流体が循環可能または任意の位置で遮断可能に構成された循環流路に対し、（ａ）１成分以上のセレブロシド、（ｂ）前記セレブロシドよりも前記ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が強い第１の成分、および（ｃ）前記セレブロシドよりも前記ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が弱い第２の成分を含有する原料液を通流することにより、前記原料液からセレブロシドを分離・回収する、高純度セレブロシドの製造方法であって、
下記第１工程および第２工程を有するサイクルを複数回、繰り返すことを特徴とする高純度セレブロシドの製造方法に関する。
【００１３】
第１工程；前記第１の成分が富化された第１の吸着帯域、前記セレブロシドが富化された第２の吸着帯域および前記第２の成分が富化された第３の吸着帯域を分けて形成している系に対し、前記第２と第３の吸着帯域の間で前記系の循環を遮断しながら、前記第３の吸着帯域に原料液を供給すると共に、前記第２の吸着帯域から高純度セレブロシドを回収する工程、
第２工程；原料液を供給することなく、前記循環流路内に脱離剤を供給して循環流路内の流体を通流させながら、前記第１および第３の吸着帯域のうち少なくとも一方の吸着帯域から成分の回収を行い、かつ前記循環流路内の流体の通流に伴う第1から第３の吸着帯域の移動に合わせて前記循環流路内の脱離剤の供給位置と前記成分の回収位置を順次、循環流の下流側に移動させる工程。
【発明の効果】
【００１４】
高純度のセレブロシドまたはセレブロシド群を製造すると共に、製造コストを低減することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明の一実施形態に係る高純度セレブロシドの製造方法に用いるクロマト分離装置を表す模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の高純度セレブロシドの製造方法の一例では、吸着剤としてＯＤＳ−シリカゲルを充填した複数の単位充填塔を無端直列に接続し、内部を液が循環可能または任意の位置で遮断可能に構成された循環流路を使用する。この循環流路に対して、（ａ）１成分以上のセレブロシド、（ｂ）セレブロシドよりもＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が強い第１の成分、および（ｃ）セレブロシドよりもＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が弱い第２の成分を含有する原料液を通流する。これにより、原料液からセレブロシドを分離・回収する。具体的には、下記第１工程および第２工程を有するサイクルを複数回、繰り返す。
【００１７】
すなわち、第１工程では、予め第１の成分が富化された第１の吸着帯域、セレブロシドが富化された第２の吸着帯域および第２の成分が富化された第３の吸着帯域を分けて形成している系に対し、第２と第３の吸着帯域の間で系の循環を遮断する。また、第３の吸着帯域に原料液を供給すると共に、第２の吸着帯域から、最終的に得たい高純度セレブロシドを回収する。ここで、２サイクル目以降では、前のサイクルの第２工程によって第１から第３の吸着帯域が形成される。一方、１サイクル目の第１工程では前のサイクルがないため、予め第１から第３の吸着帯域は形成されていない。このため、１サイクル目の第１工程の前処理として、予め循環流路内に第１から第３の吸着帯域を形成する工程を設けても良い。また、第１工程では、任意の吸着帯域から循環流路内に脱離剤を供給しても良い。更に、第1工程では、セレブロシドに加えて、第１の成分、第２の成分または第1と第２の成分の両方を回収することもできる。
【００１８】
第２工程では、原料液を供給することなく、循環流路内に脱離剤を供給して循環流路内の流体を通流させながら、第１および第３の吸着帯域のうち少なくとも一方の吸着帯域から成分の回収を行う。また、第２工程では、循環流路内の流体の通流に伴う第1から第３の吸着帯域の移動に合わせて循環流路内の脱離剤の供給位置と成分の回収位置を順次、循環流の下流側に一単位充填塔分づつ間欠的に複数回、移動させる。この第２工程では、「擬似移動床の方法」に従って、第１および第２の成分のうち少なくとも一方の成分を各別に系外に回収する操作を行なう。また、これと共に、第１の吸着帯域、第２の吸着帯域および第３の吸着帯域を分けて形成する系を形成する。第２工程では、第１の吸着帯域から第１の成分のみを回収しても良いし、第３の吸着帯域から第２の成分のみを回収しても良いし、第１と第３の吸着帯域から第１と第２の成分の両方を回収しても良い。
【００１９】
なお、サイクルを行う回数は複数回であれば特に限定されず、使用する原料液の総量や、回収したいセレブロシドの量に応じて適宜、サイクルの数を設定することができる。また、典型的には第１〜第３の吸着帯域はそれぞれ、１以上の整数個の単位充填塔から構成されるが、単位充填塔の部分的な領域から構成されても良い。
【００２０】
本発明の方法によれば、上記（ａ）〜（ｃ）の３以上の成分を含む原料液から、疑似移動床の方法を利用して簡易な装置で連続的に高純度のセレブロシドの回収を行うことができる。このため、製造コストを低減することができる。原料液中にセレブロシドが単一の分子種としてしか存在しない場合、高純度で単一の分子種のセレブロシドを回収することができる。また、原料液中に複数の分子種のセレブロシドを含む場合、高純度のセレブロシド群として回収することができるし、単一の分子種ごとのセレブロシドに分けて高純度で回収することもできる。単一の分子種のセレブロシドごとに分けて回収する場合には例えば、第１の工程においてセレブロシドの回収を行うタイミングを複数回に分けて回収を行えば良い。分子種が異なる各セレブロシドは各々、ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が若干、異なるため、第２の吸着帯域の中でそれぞれ、異なる吸着帯域を形成する。従って、セレブロシドを回収するタイミングを複数回に分けることにより、それぞれの回収時に、回収口に位置する分子種のセレブロシドを回収することができる。また、セレブロシド群として回収する場合、回収したセレブロシド群に対して更に分離処理を行うことにより、単一の分子種のセレブロシドごとに分けて回収することができる。
【００２１】
また、第１の成分は、セレブロシドよりもＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が強い成分であれば１成分であっても多成分であっても良い。同様に、第２の成分は、セレブロシドよりもＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が弱い成分であれば１成分であっても多成分であっても良い。
【００２２】
脱離剤としては例えば、水、水酸化ナトリウム水溶液等の塩基性水溶液、塩酸水溶液等の酸性水溶液、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール等のアルコール類等を挙げることができる。脱離剤は、これらの一種を単独で脱離剤としても良いし、二種以上を混合した混合溶液を脱離剤としても良い。また、脱離剤は、酸、塩基、緩衝剤、塩を含んでいても良い。これらの脱離剤の中でも、セレブロシドの分離特性に優れるため、水および炭素数Ｃ１〜Ｃ３のアルコールから選ばれる一種または二種以上の親水性溶液を用いることが好ましく、エタノールを用いることがより好ましい。
【００２３】
本明細書中、「下流」とは、基点に対して相対的に流体の循環方向の下流であることを意味する。「上流」とは、基点に対して相対的に流体の循環方向の上流であることを意味する。「下流」および「上流」の範囲は特に限定されず、吸着剤の種類や、分離対象とする成分等に応じて適宜、その範囲を定めることができる。
【００２４】
原料液としてはセレブロシド、第１および第２の成分を含むものであれば特に限定されない。原料液が例えば、セレブロシド、ステロールおよびセレブロシドよりもＯＤＳ−シリカゲルへの親和性が弱い成分、を含む溶液の場合、ステロールが第１の成分、セレブロシドよりもＯＤＳ−シリカゲルへの親和性が弱い成分が第２の成分を構成し、第１工程において第２の吸着帯域からセレブロシドが回収される。
【００２５】
原料液を得るための植物原料としては特に限定されないが、例えば、小麦、米等の穀類、大豆、ピーナツなどの豆類、ほうれん草等の葉菜、ゴマ等の種子、米糠油が挙げられる。セレブロシドの含有率が高く、本発明の方法を効果的に適用できるため、原料液は米糠油由来のものであることが好ましい。この場合、原料液は例えば、米糠に搾油処理を行うことにより原油を得た後、原油に対して脱ガム処理を行い油さいを得る。次に、油さいのエタノール抽出を行い、セレブロシドを含む内容成分の濃縮を行うことにより、原料液を調整することができる。
【００２６】
複数の単位充填塔のうち、セレブロシドが実質的に吸着せず、かつ第１の成分が吸着した１以上の単位充填塔を第１区画、
セレブロシドが吸着した１以上の単位充填塔を第２区画、
セレブロシドが実質的に吸着せず、かつ第２の成分が吸着した単位充填塔を第３区画とし、
第1、第２および第３の区画における流体速度（各区画を構成する単位充填塔内を流れる流体の速度）をそれぞれ、Ｕ１、Ｕ２、Ｕ３とし、
吸着剤の擬似的移動速度ＵＳを（単位充填塔の長さ）／（第２工程における脱離剤の供給位置と成分の回収位置を移行させる時間）としたとき、
第２工程では、Ｕ１〜Ｕ３を下記（１）〜（３）の条件に設定することが好ましい。
（１）第１の区画において１．０＜Ｕ1／ＵS＜１０．０、
（２）第２の区画において０．３＜Ｕ2／ＵS＜３．０、
（３）第３の区画において０．０＜Ｕ3／ＵS＜２．０。
【００２７】
Ｕ1／ＵSが１．０以下であるとＯＤＳ−シリカゲルからの第１の成分の脱離が十分に行われず、循環流路内に第１の成分が蓄積して第２の区画にも入り込み、回収するセレブロシドの純度が低下する場合がある。Ｕ1／ＵSが１０．０以上であるとＯＤＳ−シリカゲルから第１の成分を脱離させるのに必要な脱離液量が増加して、製造コストが増加する場合がある。
【００２８】
Ｕ２／ＵSが０．３以下であると循環流路内での第２の成分の移動速度が遅くなるため第２の区画にも入り込み、回収するセレブロシドの純度が低下する場合がある。Ｕ２／ＵSが３．０以上であると循環流路内でのセレブロシドの移動速度が速くなり第３の区画に入り込み、セレブロシドの回収率が低下する場合がある。
【００２９】
Ｕ３／ＵSが０．０以下であると脱離液の使用量が増加して、製造コストが増加する場合がある。Ｕ３／ＵSが２．０以上であると循環流路内での第２の成分の移動速度が速くなるため第２の区画にも入り込み、回収するセレブロシドの純度が低下する場合がある。
【００３０】
なお、第１〜第３区画はそれぞれ、１以上の単位充填塔から構成される。セレブロシドが吸着して、その全領域または一部の領域にセレブロシドが実質的に存在する単位充填塔は「第２区画」に相当する。セレブロシドが吸着せず実質的に存在しない単位充填塔であって、第１の成分が吸着したものは「第１区画」に相当する。セレブロシドが吸着せず実質的に存在しない単位充填塔であって、第２の成分が吸着したものは「第３区画」に相当する。
【００３１】
また、第２工程では、Ｕ１〜Ｕ３を下記（１）’〜（３）’の条件に設定することがより好ましい。
（１）’第１の区画において２．０＜Ｕ1／ＵS＜５．０、
（２）’第２の区画において０．５＜Ｕ2／ＵS＜１．０、
（３）’第３の区画において０．０＜Ｕ3／ＵS＜１．０。
【００３２】
上記（１）〜（３）および上記（１）’〜（３）’の条件に設定することにより、更に高純度、高濃度、高い回収率でセレブロシドまたはセレブロシド群を回収することができる。なお、上記（１）〜（３）の条件および（１）’〜（３）’の条件は、吸着剤としてＯＤＳ−シリカゲルを使用し、原料液として植物原料由来のもの、脱離液としてエタノールを使用した場合に特に顕著な効果を発揮する。
【００３３】
（第１実施形態）
本発明の一実施形態に係る、高純度セレブロシドまたはセレブロシド群の製造方法について以下に説明する。図１は、高純度セレブロシドまたはセレブロシド群の製造に使用するクロマト分離装置１００の模式図である。図１に示すとおり、クロマト分離装置１００は、吸着剤としてＯＤＳ−シリカゲルを充填した４本の単位充填塔１５ａ〜１５ｄが配管２１ａ〜２１ｄにより直列に連結され、循環経路１６が形成された擬似移動層方式のクロマト分離装置である。「ＯＤＳ−シリカゲル」とは、シリカゲルの極性を下げるように、その表面に分布するシラノール基にオクタデシルシラン（Ｏｃｔａ  Ｄｅｃｙｌ  Ｓｉｌａｎｅ）化したものを表す。
【００３４】
単位充填塔１５ａは、遮断弁Ｚ１を介して配管２１ｂにより単位充填塔１５ｂと接続され、単位充填塔１５ｂは、遮断弁Ｚ２を介して配管２１ｃにより単位充填塔１５ｃと接続されている。単位充填塔１５ｃは、遮断弁Ｚ３を介して配管２１ｄにより単位充填塔１５ｄと接続され、単位充填塔１５ｄは、遮断弁Ｚ４を介して配管２１ａにより単位充填塔１５ａと接続されている。こうして、単位充填塔１５ａ〜１５ｄ、配管２１ａ〜２１ｄと、遮断弁Ｚ１〜Ｚ４とにより、循環流路１６が構成されている。遮断弁Ｚ１〜Ｚ４を開とし、循環ポンプ１３を駆動することにより循環経路１６内を矢印の方向に流体が循環可能となり、遮断弁Ｚ１〜Ｚ４の何れかを閉とすることにより循環経路１６内の所定の位置で流体が遮断可能となっている。
【００３５】
原料液タンク１には、ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が中程度のセレブロシド又はセレブロシド群と、ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が強い第１の成分と、ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性が弱い第２の成分を含有する原料液が貯蔵されている。原料液タンク１には、原料液供給ポンプ２が接続され、ポンプ２によって原料液タンク１から原料液が供給されるようになっている。原料液タンク１から供給された原料液はプレカラム３を通った後、原料液供給ライン４を通って各単位充填塔１５ａ〜１５ｄに供給されるようになっている。すなわち、原料液供給ライン４は、配管２２ａ〜２２ｄに分岐している。単位充填塔１５ａには、配管２２ａと供給弁Ｆ１を介して接続された配管２１ａから原料液が供給される。単位充填塔１５ｂには配管２２ｂと供給弁Ｆ２を介して接続された配管２１ｂから原料液が供給され、単位充填塔１５ｃには配管２２ｃと供給弁Ｆ３を介して接続された配管２１ｃから原料液が供給され、単位充填塔１５ｄには配管２２ｄと供給弁Ｆ４を介して接続された配管２１ｄから原料液が供給される。そして、原料液タンク１、ポンプ２、プレカラム３、原料液供給ライン４、配管２１ａ〜２１ｄの一部、２２ａ〜２２ｄ、供給弁Ｆ１〜Ｆ４により、原料液の供給手段が構成されている。
【００３６】
脱離剤タンク５には、脱離剤が貯蔵されている。脱離剤としては、原料液中の各成分を単位充填塔１５ａ〜１５ｄ内に流下させ、かつ、分離対象とする成分を適切に分離できるものであれば特に限定されず、目的に応じて決定することができる。
【００３７】
脱離剤タンク５には脱離剤供給ライン７が接続され、脱離剤供給ポンプ６によって脱離剤タンク５から各単位充填塔１５ａ〜１５ｄに脱離剤が供給されるようになっている。すなわち、脱離剤供給ライン７は、配管２３ａ〜２３ｄに分岐している。単位充填塔１５ａには、配管２３ａと供給弁Ｄ１を介して接続された配管２１ａから脱離剤が供給される。単位充填塔１５ｂには配管２３ｂと供給弁Ｄ２を介して接続された配管２１ｂから脱離剤が供給され、単位充填塔１５ｃには配管２３ｃと供給弁Ｄ３を介して接続された配管２１ｃから脱離剤が供給され、単位充填塔１５ｄには配管２３ｄと供給弁Ｄ４を介して接続された配管２１ｄから脱離剤が供給される。そして、脱離剤タンク５、脱離剤供給ポンプ６、脱離剤供給ライン７、配管２１ａ〜２１ｄの一部、２３ａ〜２３ｄ、供給弁Ｄ１〜Ｄ４により、脱離剤の供給手段が構成されている。
【００３８】
各単位充填塔１５ａ〜１５ｄ間を接続する配管２１ａ〜２１ｄはそれぞれ、分岐しており、各単位充填塔１５ａ〜１５ｄからセレブロシドまたはセレブロシド群、第１および第２の成分を回収できるようになっている。すなわち、配管２１ｂは回収弁Ｃ１を介して配管２４ａと、回収弁Ａ１を介して配管２５ａに分岐している。同様に、配管２１ｃは回収弁Ｃ２を介して配管２４ｂと、回収弁Ａ２を介して配管２５ｂに分岐している。配管２１ｄは回収弁Ｃ３を介して配管２４ｃと、回収弁Ａ３を介して配管２５ｃに分岐している。配管２１ａは回収弁Ｃ４を介して配管２４ｄと、回収弁Ａ４を介して配管２５ｄと、回収弁Ｂ４を介して配管２６に分岐している。配管２４ａ〜２４ｄは回収ライン８に接続されており、ポンプ９により矢印の方向に流れて第１の成分（図１中に「Ｃ」として表示）が回収されるようになっている。配管２５ａ〜２５ｄは回収ライン１１に接続されており、ポンプ１２により矢印の方向に流れて第２の成分（図１中に「Ａ」として表示）が回収されるようになっている。
【００３９】
また、配管２１ａは弁Ｂ４を介して配管２６に分岐しており、配管２６は回収ライン１０に接続されている。回収ライン１０は、背圧弁１７を介して矢印の方向にセレブロシドまたはセレブロシド群を回収できるようになっている。
【００４０】
以下では、図１のクロマト分離装置１００を用いた、セレブロシドまたはセレブロシド群の製造方法について説明する。本実施形態における製造方法は、循環流路１６に対してセレブロシドまたはセレブロシド群、並びに第１および第２の成分を含む原料液を通流することにより、原料液から高純度のセレブロシドまたはセレブロシド群を分離・回収する。本実施形態の製造方法では、第１および第２工程を有するサイクルを複数回、繰り返す。以下では、第１および第２工程について詳細に説明する。
【００４１】
（１）第１工程
第１工程では、予め第１から第３の吸着帯域を分けて形成した系に対し、第２と第３の吸着帯域の間で系の循環を遮断しながら、第３の吸着帯域に原料液を供給すると共に第２の吸着帯域から高純度セレブロシドを回収する。
【００４２】
具体的には、第１工程の開始前に予め、単位充填塔１５ａに原料液を通流させることにより、第１から第３の吸着帯域を分けて形成する。すなわち、第１工程の開始時には概ね、単位充填塔１５ａが第２の成分で富化された第３の吸着帯域を構成し、単位充填塔１５ｃが第１の成分で富化された第１の吸着帯域を構成し、単位充填塔１５ｄがセレブロシドで富化された第２の吸着帯域を構成する。第２と第３の吸着帯域の間に位置する遮断弁Ｚ４を閉とし、系内の流体の循環を遮断する。
【００４３】
次に、原料液供給ポンプ２により原料タンク１から原料液を供給する。供給された原料液は、原料液供給ライン４および供給弁Ｆ１を開とした配管２２ａ内を通流し、配管２１ａ内を通って単位充填塔１５ａ内に供給される。また、脱離剤供給ポンプ６により脱離剤タンク５から脱離剤を供給する。供給された脱離剤は、脱離剤供給ライン７および供給弁Ｄ３を開とした配管２３ｃ内を通流して、配管２１ｃ内を通って単位充填塔１５ｃ内に供給される。
【００４４】
そして、遮断位置の上流側に位置する第２の吸着帯域に相当する単位充填塔１５ｄの下流側の回収弁Ｂ４を開とし、セレブロシドまたはセレブロシド群を回収する。回収されたセレブロシドまたはセレブロシド群は、背圧弁１７を開とした回収ライン１０を経由して流出する。また、第３の吸着帯域に相当する単位充填塔１５ａの下流側の回収弁Ａ１を開とし、第２の成分を回収する。回収された第２の成分は、回収ポンプ１２により回収ライン１１を経由して流出する。
【００４５】
（２）第２工程
第２工程では、循環流路１６内に脱離剤を供給して循環流路１６内の流体を通流させながら、第１から第３の吸着帯域を移動させる。そして、第１の吸着帯域からの第１の成分の回収、第３の吸着帯域からの第２の成分の回収、または第１および第３の吸着帯域からの第１および第２の成分の回収を行う。また、第１から第３の吸着帯域の移動に合わせて循環流路１６内の脱離剤の供給位置と各成分の回収位置を順次、循環流の下流側に移動させる。具体的には、第２工程は、下記工程（２−１）〜（２−４）からなる。
【００４６】
（２−１）第２工程ではまず、遮断弁Ｚ４を開とし、循環ポンプ１３を駆動させることにより循環流路１６内の流体を通流させる。次に、第１の吸着帯域が単位充填塔１５ｄ内の下部（配管２１ａ近傍）に到達し、第３の吸着帯域が単位充填塔１５ｂ内の下部（配管２１ｃ近傍）に到達した時点で、弁Ｄ４を開とした配管２３ｄおよび配管２１ｄを介して、脱離剤を単位充填塔１５ｄ内に供給する。また、回収ポンプ９により弁Ｃ４を開とした配管２４ｄおよび回収ライン８を通って第１の成分を回収すると共に、回収ポンプ１２により弁Ａ２を開とした配管２５ｂおよび回収ライン１１を通って第２の成分を回収する。
【００４７】
（２−２）次に、所定時間経過後、弁Ａ２、Ｃ４およびＤ４を閉とした後、第１から第３の吸着帯域の移動に伴い、第１の吸着帯域が単位充填塔１５ａ内の下部（配管２１ｂ近傍）に到達し、第３の吸着帯域が単位充填塔１５ｃ内の下部（配管２１ｄ近傍）に到達した時点で、弁Ｄ１を開とした配管２３ａおよび配管２１ａを介して、脱離剤を単位充填塔１５ａ内に供給する。また、弁Ｃ１を開とした配管２４ａおよび回収ライン８を通って第１の成分を回収すると共に、弁Ａ３を開とした配管２５ｃおよび回収ライン１１を通って第２の成分を回収する。
【００４８】
（２−３）次に、所定時間経過後、弁Ａ３、Ｃ１およびＤ１を閉とした後、第１から第３の吸着帯域の移動に伴い、第１の吸着帯域が単位充填塔１５ｂ内の下部（配管２１ｃ近傍）に到達し、第３の吸着帯域が単位充填塔１５ｄ内の下部（配管２１ａ近傍）に到達した時点で、弁Ｄ２を開とした配管２３ｂおよび配管２１ｂを介して、脱離剤を単位充填塔１５ｂ内に供給する。また、弁Ｃ２を開とした配管２４ｂおよび回収ライン８を通って第１の成分を回収すると共に、弁Ａ４を開とした配管２５ｄおよび回収ライン１１を通って第２の成分を回収する。
【００４９】
（２−４）次に、所定時間経過後、弁Ａ４、Ｃ２およびＤ２を閉とした後、第１から第３の吸着帯域の移動に伴い、第１の吸着帯域が単位充填塔１５ｃ内の下部（配管２１ｄ近傍）に到達し、第３の吸着帯域が単位充填塔１５ａ内の下部（配管２１ｂ近傍）に到達した時点で、遮断弁Ｚ４を閉とし循環ポンプ１３の駆動を停止することにより、循環流路１６内の流体の循環を停止させる。これにより、第２工程は終了し、第１および第２サイクルからなる１サイクルが完了する。
【００５０】
この状態で更に次サイクルの第１工程、第２工程を順次、実施する。そして、必要な回数のサイクルを実施後、装置の操作を終了する。
【００５１】
なお、図１では単位充填塔が４つ、接続されたクロマト分離装置１００を示したが、使用する単位充填塔の数は複数であれば、４つに限定されない、例えば、５つ以上の単位充填塔を接続したクロマト分離装置とする時、各吸着帯域が複数の単位充填塔にわたって形成される場合がある。
【実施例】
【００５２】
（実施例１）
図１の装置を使用し、単位充填塔１５ａ〜１５ｄにはＯＤＳ−シリカゲル（ＦＳ１８３０ＦＭＴ−３０；平均細孔径７０Å、粒径３０μｍ）を充填した内径１０ｍｍ，長さ５００ｍｍのカラムを用いた。また、脱離剤には、９５質量％のエタノール、５質量％の水を含む醗酵エタノールを使用した。また、図１の装置を用いて、（第１実施形態）に記載の通りに第１工程、第２工程を順次、実施した。操作条件は、カラム内の温度を４０℃に維持し、Ｕ1／ＵS＝３．６、Ｕ2／ＵS＝１．８、Ｕ3／ＵS＝１．１とし、原料液供給量を０．０４（Ｌ／Ｌ−Ｒ／ｈ）とした。
【００５３】
なお、（第１実施形態）の（２−１）の工程では、単位充填塔１５ｄが第１区画、単位充填塔１５ａおよび１５ｂが第２区画、単位充填塔１５ｃが第３区画に相当する。（第１実施形態）の（２−２）の工程では、単位充填塔１５ａが第１区画、単位充填塔１５ｂおよび１５ｃが第２区画、単位充填塔１５ｄが第３区画に相当する。（第１実施形態）の（２−３）の工程では、単位充填塔１５ｂが第１区画、単位充填塔１５ｃおよび１５ｄが第２区画、単位充填塔１５ａが第３区画に相当する。（第１実施形態）の（２−４）の工程では、単位充填塔１５ｃが第１区画、単位充填塔１５ｄおよび１５ａが第２区画、単位充填塔１５ｂが第３区画に相当する。また、（Ｌ／Ｌ−Ｒ／ｈ）は、Ｌ（原料液の供給量）／Ｌ−Ｒ（クロマト分離装置１００内に充填されているＯＤＳ−シリカゲルの量）／ｈ（１サイクルの時間）を意味し、ＯＤＳ−シリカゲルの単位量当たりかつ単位時間あたりに供給される原料液の量を表す。（Ｌ／Ｌ−Ｒ／ｈ）で表される原料液供給量が大きいほど、装置の生産性が高いことを表す。
【００５４】
原料液は、米脱ガム油由来グルコシルセラミド（日本製粉株式会社製）を真空乾固後、醗酵エタノールで５質量％に調整し、４℃でウィンタリング処理にかけた。次に、４０℃に昇温後、澱をグラスフィルタ（ＧＡ２００）、次いでＰＴＦＥ膜（０．５μｍ）濾過したものを固形分濃度５％Ｗ／Ｖに調整することで得た。原料液の組成の分析結果を表１に示す。なお、組成の分析には、ＨＰＬＣ−ＥＳＬＤ（蒸発光散乱検出器）を使用した。ＨＰＬＣ条件は、東北大学宮澤氏らの報告（Ｌｉｐｉｄ，  Ｖｏｌ．３４，  Ｎｏ．１１，  ｐ．１２３２〜１２３７（１９９９年））に準じて行った。
【００５５】
【表１】
2014224063.tif 000003
【００５６】
表１の中で、「d18:2-20:0h」がセレブロシド群に該当し、ＯＤＳ−シリカゲルに対する親和性は表１の左側から右側に向かって順に強くなっている。すなわち、親和性は、Others1＜SG＜d18:2-18:0h＜d18:1-20:0h＜d18:2-20:0h＜Others2＜d18:2-22:0h＜d18:1-24:0h＜d18:2-24:0hとなる。
【００５７】
図１の装置に、この原料液を導入して、第１工程および第２工程からなるサイクルを複数回、実施したところ、図１の回収ライン１０からd18:2-20:0hであるセレブロシド群を高純度で回収することができた。
【符号の説明】
【００５８】
１  原料液タンク
２  原料液供給ポンプ
３  プレカラム
４  原料液供給ライン
５  脱離剤タンク
６  脱離剤供給ポンプ
７  脱離剤供給ライン
８、１０、１１  回収ライン
９、１２  ポンプ
１３  循環ポンプ
１５ａ、１５ｂ、１５ｃ、１５ｄ  単位充填塔
１６  循環経路
１７  背圧弁
２１ａ、２１ｂ、２１ｃ、２１ｄ、２２ａ、２２ｂ、２２ｃ、２２ｄ、２３ａ、２３ｂ、２３ｃ、２３ｄ、２４ａ、２４ｂ、２４ｃ、２４ｄ、２５ａ、２５ｂ、２５ｃ、２５ｄ、２６  配管
１００  クロマト分離装置
Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４  第２の成分の回収弁
Ｂ４  セレブロシドの回収弁
Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４  第１の成分の回収弁
Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４  脱離剤の供給弁
Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４  原料液の供給弁
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４  遮断弁
【図１】
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