【手続補正書】
【提出日】令和2年12月2日(2020.12.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(a) pH 7.4にて40℃で１週間にわたり加温した場合に、初期活性１００％のうち、３５％以上のデヒドロゲナーゼ活性が保持される、又は
(b) pH 7.4にて40℃で２週間にわたり加温した場合に、初期活性１００％のうち、２２％以上のデヒドロゲナーゼ活性が保持される、
FAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼ（FAD-GDH）を用いる、グルコース測定方法。
【請求項２】
前記FAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼ（FAD-GDH）が、配列番号３、４、１４若しくは２２と９０％以上の全長アミノ酸配列同一性を有するFAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼ（FAD-GDH）、又は、配列番号３、４、１４若しくは２２と７０％以上の全長アミノ酸配列同一性を有し、かつ前記FAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼ（FAD-GDH）の相同性領域のアミノ酸配列が配列番号１で示されるアミノ酸配列における相同性領域と９０％以上のアミノ酸配列同一性を有するFAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼ（FAD-GDH）からなる群より選択されるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記FAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼ（FAD-GDH）が、糖鎖富化されたものである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記FAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼ（FAD-GDH）が、脱糖鎖処理されたものであるか又は糖鎖付加部位の改変により付加糖鎖量が低減された変異体である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記糖鎖付加部位の改変が、
配列番号１の25位、101位、143位、156位、172位、198位、205位、214位、256位、247位、268位、353位、365位、379位、401位、402位、417位、430位、459位、496位、及び550位にそれぞれ対応する位置からなる群より選択される1以上の位置におけるアスパラギン以外のアミノ酸への置換であるか、
配列番号１の27位、103位、145位、158位、174位、200位、207位、216位、249位、258位、270位、355位、367位、381位、403位、404位、419位、432位、461位、498位、及び552位にそれぞれ対応する位置からなる群より選択される1以上の位置における、セリン及びトレオニン以外のアミノ酸への置換であるか、並びに／又は
配列番号１の26位、102位、144位、157位、173位、199位、206位、215位、257位、248位、269位、354位、366位、380位、402位、403位、418位、431位、460位、497位及び551位にそれぞれ対応する位置からなる群より選択される1以上の位置のアミノ酸のプロリンへの置換である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
(a) pH 7.4にて40℃で１週間にわたり加温した場合に、初期活性１００％のうち、３５％以上のデヒドロゲナーゼ活性が保持される、又は
(b) pH 7.4にて40℃で２週間にわたり加温した場合に、初期活性１００％のうち、２２％以上のデヒドロゲナーゼ活性が保持される、
FAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼ（FAD-GDH）を含むグルコースセンサーを備えてなる、連続グルコースモニタリングデバイス。
【請求項７】
前記FAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼ（FAD-GDH）が、配列番号３、４、１４又は２２と９０％以上の全長アミノ酸配列同一性を有するFAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼ（FAD-GDH）、或いは、
配列番号３、４、１４若しくは２２と７０％以上の全長アミノ酸配列同一性を有し、かつ前記FAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼ（FAD-GDH）の相同性領域のアミノ酸配列が配列番号１で示されるアミノ酸配列における相同性領域と９０％以上のアミノ酸配列同一性を有するFAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼ（FAD-GDH）からなる群より選択されるものである、請求項６に記載のデバイス。
【請求項８】
前記FAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼ（FAD-GDH）が、糖鎖富化されたものである、請求項７に記載のデバイス。
【請求項９】
前記FAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼ（FAD-GDH）が、脱糖鎖処理されたものであるか又は糖鎖付加部位の改変により付加糖鎖量が低減された変異体である、請求項７に記載のデバイス。
【請求項１０】
(i)配列番号１、３、４、５、６、７、８、９、１２、１４若しくは２２と９０％以上の全長アミノ酸配列同一性を有するFAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼ、又は、
(ii)配列番号１、３、４、１４若しくは２２と７０％以上の全長アミノ酸配列同一性を有し、かつグルコースデヒドロゲナーゼ変異体の相同性領域のアミノ酸配列が配列番号１で示されるアミノ酸配列における相同性領域と９０％以上のアミノ酸配列同一性を有するFAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼであって、
前記(i)又は(ii)のFAD依存性グルコースデヒドロゲナーゼにおいて
配列番号１の25位、101位、143位、156位、172位、198位、205位、214位、256位、247位、268位、353位、365位、379位、401位、402位、417位、430位、459位、496位、及び550位にそれぞれ対応する位置からなる群より選択される1以上の位置におけるアスパラギン以外のアミノ酸への置換であるか、
配列番号１の27位、103位、145位、158位、174位、200位、207位、216位、249位、258位、270位、355位、367位、381位、403位、404位、419位、432位、461位、498位、及び552位にそれぞれ対応する位置からなる群より選択される1以上の位置における、セリン及びトレオニン以外のアミノ酸への置換であるか、並びに／又は
配列番号１の26位、102位、144位、157位、173位、199位、206位、215位、257位、248位、269位、354位、366位、380位、402位、403位、418位、431位、460位、497位及び551位にそれぞれ対応する位置からなる群より選択される1以上の位置のアミノ酸のプロリンへの置換である、糖鎖付加部位の改変を有し、グルコースデヒドロゲナーゼ活性を有し、低減された糖鎖を有するグルコースデヒドロゲナーゼ変異体。
【請求項１１】
a)配列番号１の１０３位に対応する位置のアミノ酸がセリン及びトレオニン以外のアミノ酸に置換されている、
b)配列番号１の２４７位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン以外のアミノ酸に置換されている、
c)配列番号１の２４９位に対応する位置のアミノ酸がセリン及びトレオニン以外のアミノ酸に置換されている、及び／又は
d)配列番号１の３６５位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン以外のアミノ酸に置換されている、
請求項１０に記載のグルコースデヒドロゲナーゼ変異体。
【請求項１２】
A)配列番号１の１０３位に対応する位置のアミノ酸がグルタミンに置換されている、
B)配列番号１の２４７位に対応する位置のアミノ酸がセリンに置換されている、
C)配列番号１の２４９位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギンに置換されている、及び／又は
D)配列番号１の３６５位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン酸に置換されている、請求項１０又は１１に記載のグルコースデヒドロゲナーゼ変異体。
【請求項１３】
i)  配列番号１の２４７位に対応する位置のアミノ酸がセリンに置換されており、かつ配列番号１の２４９位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギンに置換されている、
ii) 配列番号１の１０３位に対応する位置のアミノ酸がグルタミンに置換されており、かつ配列番号１の３６５位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン酸に置換されている、又は
iii) 配列番号１の１０３位に対応する位置のアミノ酸がグルタミンに置換されており、配列番号１の２４７位に対応する位置のアミノ酸がセリンに置換されており、配列番号１の２４９位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギンに置換されており、かつ配列番号１の３６５位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン酸に置換されている、
請求項１０〜１２のいずれか１項に記載のグルコースデヒドロゲナーゼ変異体。
【請求項１４】
請求項１０〜１３のいずれか１項に記載のグルコースデヒドロゲナーゼ変異体を含む電極。