(57)【要約】【課題】植物抽出物またはその溶液に含まれるスチルベン類の安定化方法、及び、スチルベン類を含有した植物抽出物またはその溶液を提供すること。【解決手段】植物抽出物またはその溶液に含まれるスチルベン類の安定化方法として、植物抽出物またはその溶液にキレート剤と抗酸化剤とを加える工程を含む安定化方法とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物抽出物またはその溶液に含まれるスチルベン類の安定化方法であって、前記植物抽出物またはその溶液にキレート剤と抗酸化剤とを加える工程を含む、安定化方法。
【請求項２】
植物抽出物の溶液に含まれるスチルベン類の安定化方法であることを特徴とする、請求項１に記載の安定化方法。
【請求項３】
前記植物抽出物が、パッションフルーツ種子抽出物、テンニンカ抽出物、または、ブラシノキ抽出物であることを特徴とする、請求項１または２に記載の安定化方法。
【請求項４】
前記スチルベン類が、ピセアタンノールまたはスキルプシンＢであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の安定化方法。
【請求項５】
前記溶液の溶媒が、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の安定化方法。
【請求項６】
前記キレート剤が、ＥＤＴＡ、または、メタリン酸であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の安定化方法。
【請求項７】
前記抗酸化剤が、アスコルビン酸、ビタミンＥ、ローズマリー抽出物、カテキン類、フェルラ酸、ヤマモモ抽出物、または、ルチン類であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の安定化方法。
【請求項８】
前記植物抽出物またはその溶液にシクロデキストリンを加える工程を更に含むことを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の安定化方法。
【請求項９】
前記植物抽出物が、前記植物から、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒を溶媒として抽出された物であることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載の安定化方法。
【請求項１０】
キレート剤と抗酸化剤とを含む、スチルベン類を含有した植物抽出物またはその溶液。
【請求項１１】
前記植物抽出物またはその溶液を製造する工程で、キレート剤と抗酸化剤とが添加された、請求項１０に記載の植物抽出物またはその溶液。
【請求項１２】
前記植物抽出物が、パッションフルーツ種子抽出物、テンニンカ抽出物、または、ブラシノキ抽出物であることを特徴とする、請求項１０または１１に記載の植物抽出物またはその溶液。
【請求項１３】
前記スチルベン類が、ピセアタンノールまたはスキルプシンＢであることを特徴とする、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の植物抽出物またはその溶液。
【請求項１４】
前記溶液の溶媒が、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であることを特徴とする、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の植物抽出物またはその溶液。
【請求項１５】
前記キレート剤が、ＥＤＴＡ、または、メタリン酸であることを特徴とする、請求項１０〜１４のいずれか１項に記載の植物抽出物またはその溶液。
【請求項１６】
前記抗酸化剤が、アスコルビン酸、ビタミンＥ、ローズマリー抽出物、カテキン類、フェルラ酸、ヤマモモ抽出物、または、ルチン類であることを特徴とする、請求項１０〜１５のいずれか１項に記載の植物抽出物またはその溶液。
【請求項１７】
シクロデキストリンをさらに含むことを特徴とする、請求項１０〜１６のいずれか１項に記載の植物抽出物またはその溶液。
【請求項１８】
前記植物抽出物が、前記植物から、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒を溶媒として抽出された物であることを特徴とする、請求項１０〜１７のいずれか１項に記載の植物抽出物またはその溶液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物抽出物またはその溶液に含まれるスチルベン類の安定化方法、及び、スチルベン類を含有した植物抽出物またはその溶液に関する。
【背景技術】
【０００２】
パッションフルーツは、トケイソウ科トケイソウ属（Passiflora）の果物である。パッションフルーツの種子抽出物は、シミ、ソバカス、日焼けなどによる色素沈着の原因となるメラニンの生成を抑制する効果があり、この抑制効果の有効成分は、パッションフルーツの種子抽出物に含まれるピセアタンノールであることが報告されている（特許文献１を参照）。
また、テンニンカは、フトモモ科テンニンカ属（Rhodomyrtus）の常緑低木である。テンニンカ抽出物は、紫外線ダメージ回復効果があり、この回復効果の有効成分は、テンニンカ抽出物に含まれるピセアタンノールであることが報告されている（特許文献２を参照）。
ブラシノキはフトモモ科ブラシノキ属（Callistemon）の常緑の木本である。マキバブラシノキ（Callistemon rigidus）抽出物はＭＭＰ-２の阻害作用を有することが明らかとなっており、この阻害作用の有効成分の一つは、マキバブラシノキ抽出物に含まれるピセアタンノールであることが報告されている（非特許文献１を参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００９−１０２２９８号公報
【特許文献２】特開２０１２−  ４６４４８号公報
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】佐々木健郎他、東北薬科大学研究誌、５７、６１−６５（２０１０）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、植物抽出物またはその溶液に含まれるスチルベン類の安定化方法、及び、植物抽出物またはその溶液を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者等は、パッションフルーツの種子抽出物の溶液に含まれるスチルベン類は、時間の経過に伴って、別の化合物へと変換されることを見出した。さらに、パッションフルーツの種子抽出物の溶液に、ＥＤＴＡなどのキレート剤とアスコルビン酸などの抗酸化剤とを加えると、スチルベン類が別の化合物へと変換されるのを抑制できることを見出した。本発明は、これらの発見に基づき、完成されたものである。
【０００７】
本発明に係る、植物抽出物またはその溶液に含まれるスチルベン類の安定化方法は、植物抽出物またはその溶液にキレート剤と抗酸化剤とを加える工程を含む。
【０００８】
植物抽出物の溶液に含まれるスチルベン類の安定化方法であることが好ましい。
【０００９】
植物抽出物が、パッションフルーツ種子抽出物、テンニンカ抽出物、または、ブラシノキ抽出物であることが好ましい。
【００１０】
スチルベン類が、ピセアタンノールまたはスキルプシンＢであることが好ましい。また、溶液の溶媒が、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であることが好ましい。
キレート剤が、ＥＤＴＡ、または、メタリン酸であることが好ましく、抗酸化剤が、アスコルビン酸、ビタミンＥ、ローズマリー抽出物、カテキン類、フェルラ酸、ヤマモモ抽出物、または、ルチン類であることが好ましい。
【００１１】
安定化方法は、植物抽出物またはその溶液に、シクロデキストリンを加える工程を更に含んでいても良い。
植物抽出物が、植物から、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒を溶媒として抽出された物であることが好ましい。
【００１２】
本発明に係るスチルベン類を含有した植物抽出物またはその溶液は、キレート剤と抗酸化剤とを含む。
【００１３】
植物抽出物またはその溶液を製造する工程で、キレート剤と抗酸化剤とが添加されても良い。
【００１４】
植物抽出物が、パッションフルーツ種子抽出物、テンニンカ抽出物、または、ブラシノキ抽出物であることが好ましい。
【００１５】
スチルベン類が、ピセアタンノールまたはスキルプシンＢであることが好ましい。また、溶液の溶媒が、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であることが好ましい。
キレート剤が、ＥＤＴＡ、または、メタリン酸であることが好ましく、抗酸化剤が、アスコルビン酸、ビタミンＥ、ローズマリー抽出物、カテキン類、フェルラ酸、ヤマモモ抽出物、または、ルチン類であることが好ましい。
【００１６】
植物抽出物またはその溶液がシクロデキストリンをさらに含んでいても良い。植物抽出物が、植物から、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒を溶媒として抽出された物であることが好ましい。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によって、植物抽出物またはその溶液に含まれるスチルベン類の安定化方法、及び、植物抽出物またはその溶液を提供することが可能になった。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の一実施形態に係る、ピセアタンノールの残存率の変化を示すグラフである。
【図２】本発明の一実施形態に係る、スキルプシンＢの残存率の変化を示すグラフである。
【図３】本発明の別の実施形態に係る、ピセアタンノールの残存率の変化を示すグラフである。
【図４】本発明の別の実施形態に係る、スキルプシンＢの残存率の変化を示すグラフである。
【図５】本発明のさらに別の実施形態に係る、ピセアタンノールの残存率を示すグラフである。
【図６】本発明のまた別の実施形態に係る、ピセアタンノールの残存率を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、上記知見に基づき完成した本発明の実施の形態を、実施例を挙げながら詳細に説明する。なお、本発明の目的、特徴、利点、および、そのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的な実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をこれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々な改変並びに修飾ができることは、当業者にとって明らかである。
【００２０】
＝＝キレート剤と抗酸化剤とを含む、スチルベン類を含有した植物抽出物またはその溶液＝＝
本発明の一実施形態は、キレート剤と抗酸化剤とを含む、スチルベン類を含有した植物抽出物またはその溶液である。このような構成とすることによって、抽出物またはその溶液に含まれるスチルベン類が別の化合物へと変換されるのを抑制し、その安定性を向上させることができるため、植物抽出物またはその溶液を、スチルベン類の濃度を高濃度に保ったまま、長期間保存することができる。
【００２１】
スチルベン類とは、スチルベン骨格を基本とした化合物の総称であり、例えば、スチルベン、ピセアタンノール、スキルプシンＡ、スキルプシンＢ、スキルプシンＣ、ラポンチゲニン、イソラポンチゲニン、プテロスチルベン、レスベラトロール、オキシレスベラトロール、ピセイド、アストリンジン、ラポンチシン、及び、ε-ビニフェリンなどが挙げられる。スチルベン類は、単量体、二量体などの多量体、または、配糖体であっても良い。スチルベン類の分子量は、特に限定されないが、例えば、２０００以下であっても良く、１０００以下であることが好ましく、６００以下であることがより好ましい。
【化１】
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【００２２】
また、植物の種類は、スチルベン類を含む植物であれば特に限定されず、パッションフルーツ（例えば、Passiflora edulis、Passiflora alata、Passiflora amethystine、Passiflora antioquiensis、Passiflora biflora、Passiflora buonapartea、Passiflora capsularis、Passiflora cearensis、Passiflora coccinea、Passiflora cochinchinesis、Passiflora filamentosa、Passiflora herbertiana、Passiflora laurifolia、Passiflora ligularis、Passiflora lunata、Passiflora lutea、Passiflora maliformis、Passiflora mixta、Passiflora mucronata、Passiflora mollissima、Passiflora nibiba、Passiflora organensis、Passiflora pallida、Passiflora parahypensis、Passiflora pedeta、Passiflora pinnatistipula、Passiflora popenovii、Passiflora quadrangularis、Passiflora riparia、Passiflora rubra、Passiflora serrate、Passiflora tiliaefolia、Passiflora tripartite、Passiflora villosa、Passiflora warmingiiなど）（例えば種子）、テンニンカ（例えば、Rhodomyrtus tomentosaなど）、ブラシノキ（例えば、Callistemon rigidusなど）（例えば茎）、カラガナチベチカ（Caragana tibetica）（例えば茎）、イタドリ（Fallopia japonica）（例えば根）、落花生（Arachis hypogaea）、ブドウ（Vitaceae）（例えば果実）、ブルーベリー（Cyanococcus）（例えば果実）、
ディアベリー（Vaccinium stamineum）（例えば果実）などが挙げられるが、例えば、ピセアタンノールを高濃度で含むことが知られている、パッションフルーツ、テンニンカ、または、ブラシノキであることが好ましい。テンニンカである場合には、植物全体のうち、どの部分であっても良いが、例えば、果実、花、種子、葉、枝、樹皮、幹、茎、または、根であっても良く、果実であることが好ましい。
【００２３】
キレート剤と抗酸化剤とを含む、スチルベン類を含有した植物抽出物またはその溶液の使用方法は特に限定されないが、ヒト及びヒト以外の動物や、それらの細胞などを対象として使用でき、食品、医薬、医薬部外品、試薬、または、化粧品などに用いることができる。
植物抽出物またはその溶液を使用する際は、植物抽出物が粉末などの固体であれば、再度溶液にしてもよく、植物抽出物の溶液であれば、さらに濃縮や希釈をしてもよく、および／または、ゼリー状、プリン状またはクリーム状などの半固体にしてもよく、どのような最終の使用形状にするかは、当業者が適宜決めることができる。
【００２４】
＝＝スチルベン類を含有した植物抽出物またはその溶液の製造方法＝＝
本発明で用いるスチルベン類を含有した植物抽出物またはその溶液は、植物から抽出された成分を含有し、この成分の少なくとも一部としてスチルベン類を含む。
植物抽出物の具体的な製造方法として、公知の方法を用いることができ、例えば、植物を、乾燥した後に、破砕、粉砕、または、切断などし、溶媒を用いて抽出することによって抽出液を得、さらに、抽出液から溶媒を留去することによって、植物抽出物を製造しても良い。
抽出に用いる溶媒の種類は、当業者であれば適切に選択することができるが、例えば、水、メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、２−プロパノール、１，４−ジオキサン、ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であっても良く、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であることが好ましく、水、エタノール、または、水およびエタノールの混合溶媒であることがより好ましい。混合溶媒を用いる場合の、各溶媒の混合比は特に限定されないが、例えば水およびエタノールの混合溶媒を用いる場合には、水とエタノールとの体積比は、１：９９〜９９：１であっても良く、３：９７〜８０：２０であることが好ましく、５：９５〜５０：５０であることがより好ましく、１０：９０〜４０：６０であることが特に好ましい。
溶媒として、水、または、水との混合溶媒を用いる場合には、熱水、または、熱水との混合溶媒であることが好ましい。水、または、水との混合溶媒は塩を含んでいても良く、塩を含む溶媒の例として、バッファー（緩衝液）であっても良い。バッファーのｐＨは、特に限定されず、酸性、中性、または、アルカリ性のいずれであっても良いが、酸性であることが好ましく、ｐＨ６以下の酸性であることがより好ましく、ｐＨ１〜ｐＨ５の酸性であることがさらに好ましい。バッファーに用いる塩の種類は特に限定されず、例として、クエン酸塩、リンゴ酸塩、リン酸塩、酢酸塩および炭酸塩などが挙げられる。
抽出液から溶媒を留去する方法は、特に限定されず公知の方法を用いることができる。例えば、減圧留去、凍結乾燥、または、スプレードライ（噴霧乾燥）であっても良いが、凍結乾燥、または、スプレードライであることが好ましく、スプレードライであることがより好ましい。
植物抽出物の形状は、特に限定されず、例えば粉体などの固体状、アモルファス状、または、オイル状であっても良いが、抽出に用いた溶媒は実質的に除去されている。
また、植物抽出物は、スチルベン類以外の植物から抽出された成分を含んでも良い。
植物抽出物は、含まれるスチルベン類の安定性が著しく損なわれない限り、植物抽出物以外の物質を含んでいても良いが、例えば、ウィルスや生きた細胞は含まないことが好ましい。
植物抽出物中には、植物抽出物が由来する植物から抽出されたスチルベン類以外に、別途抽出または合成されたスチルベン類が添加されていても良い。
なお、植物がパッションフルーツの場合、植物抽出物は、パッションフルーツの果肉の抽出物を含んでいても良く含まなくても良いが、実質的に含まないことが好ましい。
【００２５】
植物抽出物の溶液を製造する方法は、特に限定されず公知の方法を用いることができるが、例えば、植物抽出物を希釈することによって製造しても良く、もしくは、植物抽出物の少なくとも一部を溶媒で溶解することによって製造しても良い。または、植物抽出物を製造する過程で得られる抽出液を、そのまま、植物抽出物の溶液として用いても良く、もしくは、抽出液を希釈、濃縮、もしくは濃縮及び希釈したものを、植物抽出物の溶液として用いても良い。このように、植物抽出物の溶液の形状は、植物抽出物及び溶媒を実質的に含んでいれば特に限定されず、例えば澄んだ溶液、濁りや沈殿が生じた溶液（懸濁液）、または、スラリー状であっても、本明細書では、植物抽出物の溶液に含まれるものとする。
植物抽出物を溶解もしくは希釈する溶媒、または、抽出液を希釈する際に用いる溶媒の種類は、特に限定されないが、例えば、水、メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、２−プロパノール、１，４−ジオキサン、ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であっても良く、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であることが好ましく、水、エタノール、または、水およびエタノールの混合溶媒であることがより好ましい。混合溶媒を用いる場合の、各溶媒の混合比は特に限定されない。水、または、水との混合溶媒は、塩を含んでいても良く、塩を含む溶媒の例として、バッファー（緩衝液）であっても良い。バッファーのｐＨは、特に限定されず、酸性、中性、または、アルカリ性のいずれであっても良いが、酸性であることが好ましく、ｐＨ６以下の酸性であることがより好ましく、ｐＨ１〜ｐＨ５の酸性であることがさらに好ましい。バッファーに用いる塩の種類は特に限定されず、例として、クエン酸塩、リンゴ酸塩、リン酸塩、酢酸塩および炭酸塩などが挙げられる。
なお、植物抽出物の溶液の形状は、上述したように、濁りや沈殿が生じた溶液（懸濁液）であっても良いが、この場合には、沈殿や濁りは、例えばろ過、遠心分離、または、デカンテーションなどの方法により除去することが好ましい。
【００２６】
＝＝植物抽出物またはその溶液に含まれるスチルベン類の安定化方法＝＝
本発明の一実施形態である、植物抽出物またはその溶液に含まれるスチルベン類の安定化方法は、植物抽出物またはその溶液にキレート剤と抗酸化剤とを加える工程を含む。
このように、植物抽出物またはその溶液に、キレート剤と抗酸化剤とを加えることによって、スチルベン類が別の化合物へ変換されるのを抑制することができる。即ち、スチルベン類の安定性を向上させることができる。
植物抽出物またはその溶液に、キレート剤と抗酸化剤を加えるタイミングは特に限定されず、上述したように植物抽出物またはその溶液を製造する工程の途中で、キレート剤と抗酸化剤を添加しても良く、植物抽出物またはその溶液を製造した後で、キレート剤と抗酸化剤を添加しても良い。また、キレート剤と抗酸化剤とは、同時に添加しても良いが、両方の相乗的効果が発揮される限り、別々に添加しても良い。
【００２７】
抗酸化剤と組み合わせてスチルベン類の安定性を向上させることができるキレート剤は、特に限定されず、例えば、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、ピロリン酸、メタリン酸、グリシン、及び、これらから選択される２以上のキレート剤の混合物が挙げられ、ＥＤＴＡ、ピロリン酸、メタリン酸、及び、これらから選択される２以上の混合物であることが好ましく、ＥＤＴＡ、メタリン酸、及び、これらから選択される２以上の混合物であることがより好ましく、ＥＤＴＡ、メタリン酸、及び、これらの混合物であることがさらに好ましい。なお、ピロリン酸とは、Ｈ４Ｐ２Ｏ７で表される二リン酸のことであり、メタリン酸とは、Ｈn+2ＰnＯ3n+1で表されるｎが３以上の縮合リン酸のことである。
キレート剤が酸である場合には、遊離酸であっても良く、塩であっても良い。例えば、キレート剤としてＥＤＴＡを用いる場合には、遊離のＥＤＴＡであっても良く、ＥＤＴＡの塩であっても良く、また、キレート剤として、メタリン酸を用いる場合には、遊離のメタリン酸であっても良く、メタリン酸の塩であっても良い。ＥＤＴＡの塩の具体例として、ＥＤＴＡ・２Ｎａが挙げられ、また、メタリン酸の塩の具体例として、グラハム塩が挙げられる。
植物抽出物またはその溶液中のキレート剤濃度は、スチルベン類の安定性や、植物抽出物またはその溶液の用途を考慮しながら、当業者は適宜適切に設定することができるが、例えば、０．０００１重量％〜５０重量％であっても良いが、０．００１重量％〜１０重量％であることが好ましい。また、植物抽出物の原料となった植物の乾燥体の重量に対して、０．０００００１重量％〜１００００重量％であっても良いが、０．００００１重量％〜５０００重量％であることが好ましい。
【００２８】
キレート剤と組み合わせてスチルベン類の安定性を向上させることができる抗酸化剤は、特に限定されず、例えば、アスコルビン酸、ビタミンＥ、ローズマリー抽出物、カテキン類、フェルラ酸、ヤマモモ抽出物、ルチン類、及び、これらから選択される２以上の抗酸化剤の混合物が挙げられ、アスコルビン酸、ビタミンＥ、フェルラ酸、ルチン類、及び、これらから選択される２以上の混合物であることが好ましく、アスコルビン酸であることがより好ましい。
なお、カテキン類は、抗酸化作用を有する限り特に限定されないが、例えば、エピガロカテキンガレートであっても良く、エピガロカテキンガレートを含有するテアビゴであっても良い。また、ルチン類は、抗酸化作用を有する限り特に限定されないが、例えば、酵素処理イソクエルシトリンやグルコシルルチンであっても良く、ルチン類を含有するサンメリンＡＯ−３０００であっても良い。
アスコルビン酸は、光学活性体であっても良く、ラセミ及び／またはジアステレオマー混合物であっても良いが、光学活性体であることが好ましく、Ｌ−アスコルビン酸であることがより好ましい。アスコルビン酸は、遊離酸であっても良く、塩であっても良いが、遊離酸であることが好ましい。
植物抽出物またはその溶液中の抗酸化剤濃度は、スチルベン類の安定性や、植物抽出物またはその溶液の用途を考慮しながら、当業者は適宜適切に設定することができるが、例えば、０．０００１重量％〜５０重量％であっても良いが、０．００１重量％〜１０重量％であることが好ましい。また、植物抽出物の原料となった植物の乾燥体の重量に対して、０．０００００１重量％〜１００００重量％であっても良いが、０．００００１重量％〜５０００重量％であることが好ましい。
【００２９】
植物抽出物またはその溶液に、シクロデキストリンを更に加えても良い。シクロデキストリンの種類は、特に限定されないが、例えば、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、または、γ−シクロデキストリンであっても良く、α−シクロデキストリンまたはβ−シクロデキストリンであることが好ましく、α−シクロデキストリンであることがさらに好ましい。植物抽出物またはその溶液中のシクロデキストリン濃度は、スチルベン類の安定性や、植物抽出物またはその溶液の用途を考慮しながら、当業者は適宜適切に設定することができるが、例えば、０．０００１重量％〜５０重量％であっても良いが、０．００１重量％〜１０重量％であることが好ましい。また、植物抽出物の原料となった植物の乾燥体の重量に対して、０．０００００１重量％〜１００００重量％であっても良いが、０．００００１重量％〜５０００重量％であることが好ましい。
シクロデキストリンを加えることによって、植物抽出物またはその溶液中のスチルベン類の安定性がさらに向上する。加えるシクロデキストリンの種類によって、安定性が向上するスチルベン類の種類が異なり、例えば、α−シクロデキストリンを加えると、スチルベン類のうち、ピセアタンノールの安定性が向上する。また、β−シクロデキストリンを加えると、スチルベン類のうち、ピセアタンノール及びスキルプシンＢの安定性が向上する。
植物抽出物またはその溶液に、シクロデキストリンを加えるタイミングは特に限定されず、上述したように植物抽出物またはその溶液を製造する工程の途中で、シクロデキストリンを添加しても良く、植物抽出物またはその溶液を製造した後で、シクロデキストリンを添加しても良い。
【００３０】
このように、本発明に係る安定化方法によって、植物抽出物またはその溶液に含まれるスチルベン類を安定化することができる。この結果、植物抽出物またはその溶液に、スチルベン類を、長期間、高濃度で存在させることが可能となった。
なお、本発明に係る安定化方法を参照することによって、本発明に係るキレート剤と抗酸化剤とを含む植物抽出物またはその溶液を製造することができる。
【００３１】
＝＝植物抽出物またはその溶液においてスチルベン類を安定化するキレート剤と抗酸化剤との組み合わせを選択する方法＝＝
植物抽出物またはその溶液に含まれるスチルベン類を安定化するのに用いるキレート剤は、キレート剤として知られる公知の物質の中から適宜選択することができる。即ち、当業者であれば、公知のキレート剤の中から、抗酸化剤と組み合わせることによって、スチルベン類の安定性を向上させることができる物を、例えば本願実施例のような安定性試験を行うことによって、容易に、そして、適切に選択することができる。
同様に、植物抽出物またはその溶液に含まれるスチルベン類を安定化するのに用いる抗酸化剤は、抗酸化剤として知られる公知の物質の中から適宜選択することができる。即ち、当業者であれば、公知の抗酸化剤の中から、キレート剤と組み合わせることによって、スチルベン類の安定性を向上させることができる物を、例えば本願実施例のような安定性試験を行うことによって、容易に、そして、適切に選択することができる。
【００３２】
本発明の一実施形態である、植物抽出物またはその溶液においてスチルベン類を安定化するキレート剤と抗酸化剤との組み合わせを選択する方法は、植物抽出物またはその溶液に、キレート剤と抗酸化剤とを添加する工程と、キレート剤と抗酸化剤とが添加された植物抽出物またはその溶液において、スチルベン類の濃度を調べる工程とを含む方法によって、キレート剤と抗酸化剤との組み合わせがスチルベン類を安定化するかどうかを調べる工程と、スチルベン類を安定化したキレート剤と抗酸化剤の組み合わせを選択する工程と、を含む。
ここで用いる植物抽出物またはその溶液は、「植物抽出物またはその溶液の製造方法」及び「植物抽出物またはその溶液に含まれるスチルベン類の安定化方法」を参照することによって製造できる。
候補として添加するキレート剤と抗酸化剤とは、公知のものから、適宜選択できる。
スチルベン類の濃度は、ＨＰＬＣ、ＧＣ、ＭＳ、ＴＬＣ、または、ＮＭＲなどの公知の方法によって測定できるので、経時的に、キレート剤と抗酸化剤とを添加した植物抽出物またはその溶液中のスチルベン類の濃度を測定し、キレート剤と抗酸化剤とを添加しない植物抽出物またはその溶液中のスチルベン類の濃度と比較することによって、そのキレート剤と抗酸化剤との組み合わせがスチルベン類を安定化するかどうかを調べることができる。そして、実際に安定化した組み合わせを選択し、植物抽出物またはその溶液に添加することによって、上述したような様々な用途に用いることができる。
【実施例】
【００３３】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、下記の実施例は本発明の範囲を限定するために記載されるものではない。
【００３４】
［実施例１］
パッションフルーツ（Passiflora edulis）の種子を破砕し、含水エタノール（水：エタノール＝２０：８０（ｖ／ｖ））で抽出した。含水エタノール抽出液を、適量にまで濃縮した後、スプレードライすることによって、パッションフルーツ種子抽出物を粉体として得た。得られた抽出物の組成を調べたところ、抽出物はピセアタンノール及びスキルプシンＢをはじめとするスチルベン類を含有していた。
この抽出物を用いて、キレート剤であるＥＤＴＡ、及び／または、抗酸化剤であるＬ−アスコルビン酸による、スチルベン類の安定性試験を行った。
【００３５】
パッションフルーツ種子抽出物を、ｐＨ３．５の０．１４Ｍクエン酸−０．１１Ｍリン酸バッファーに室温にて溶解させることによって、０．５重量％の抽出物水溶液を得た。抽出物水溶液（試験１）、抽出物水溶液に０．３７重量％でＥＤＴＡ・２Ｎａ（株式会社同仁化学研究所製）を添加した溶液（試験２）、抽出物水溶液に０．１０重量％でＬ−アスコルビン酸（和光純薬工業製）を添加した溶液（試験３）、及び、抽出物水溶液に０．３７重量％でＥＤＴＡ・２Ｎａ及び０．１０重量％でＬ−アスコルビン酸を添加した溶液（試験４）の４種類の水溶液を調製した。
これら４種類の水溶液を、それぞれ５０℃の恒温器中で７日間加温した。加温を始める直前、並びに、加温開始から２日後及び７日後に、各水溶液について、ピセアタンノールの量及びスキルプシンＢの量を、下記の条件のＨＰＬＣを用いて測定した。
【００３６】
［ＨＰＬＣ条件］
・カラム：Mightysil RP-18 GP250-10  径10 mm、長さ250 mm（関東化学株式会社製）
・カラム温度：40℃
・溶出条件：流速3mL/min、0％メタノール−100％純水  →  30％メタノール−70％純水（グラジエント、10min）
・ＵＶ検出：280nm
【００３７】
加熱を始める直前のピセアタンノールの量を１００とした場合の、加温開始から２日後及び７日後のピセアタンノールの量の測定結果を表１及び図１に、加熱を始める直前のスキルプシンＢの量を１００とした場合の、加温開始から２日後及び７日後のスキルプシンＢの量の測定結果を表２及び図２に示す。
【００３８】
【表１】
2014224049.tif 000003
【００３９】
【表２】
2014224049.tif 000004
【００４０】
表１及び図１が示すように、ＥＤＴＡのみを添加した試験２では、何も添加していない試験１に比べ、ごく僅かにピセアタンノールの残存率が向上した。一方で、Ｌ−アスコルビン酸のみを添加した試験３では、何も添加していない試験１に比べ、ピセアタンノールの残存率が７日後では３割近く減少していた。これらの結果に対し、ＥＤＴＡとＬ−アスコルビン酸との両方を添加した試験４では、ピセアタンノールの残存率が飛躍的に向上し、２日後で９７％、７日後でも８８％が残存していた。
また、スキルプシンＢの残存率をまとめた表２及び図２が示すように、ＥＤＴＡのみを添加した試験２では、何も添加していない試験１に比べ、僅かにスキルプシンＢの残存率が向上した。Ｌ−アスコルビン酸のみを添加した試験３では、何も添加していない試験１と、同程度の残存率となった。これらの結果に対し、ＥＤＴＡとＬ−アスコルビン酸との両方を添加した試験４では、スキルプシンＢの残存率が飛躍的に向上し、７日後では、何も添加していない試験１に比べて４倍の残存率となった。
【００４１】
このように、スチルベン類を含有する溶液に、キレート剤であるＥＤＴＡと抗酸化剤であるＬ−アスコルビン酸とを添加することによって、スチルベン類の安定性が飛躍的に向上した。
【００４２】
［実施例２］
実施例１で得たスチルベン類を含有するパッションフルーツ種子抽出物を用いて、メタリン酸塩及び／またはアスコルビン酸による、スチルベン類の安定性試験を行った。即ち、実施例１では、キレート剤としてＥＤＴＡを用いたが、実施例２ではＥＤＴＡの代わりにメタリン酸ナトリウムを用いて、安定性試験を行った。
【００４３】
パッションフルーツ種子抽出物を、ｐＨ３．５の０．１Ｍ酢酸バッファーに室温にて溶解させることによって、０．５重量％の抽出物水溶液を得た。抽出物水溶液（試験１）、抽出物水溶液に０．１１重量％でメタリン酸ナトリウム（グラハム塩、和光純薬工業製）を添加した溶液（試験２）、抽出物水溶液に０．１０重量％でＬ−アスコルビン酸を添加した溶液（試験３）、及び、抽出物水溶液に０．１１重量％でメタリン酸ナトリウム及び０．１０重量％でＬ−アスコルビン酸を添加した溶液（試験４）の４種類の水溶液を調製した。
これら４種類の水溶液を、それぞれ５０℃の恒温器中で５日間加温した。加温を始める直前、及び、加温開始から５日後に、各溶液について、ピセアタンノールの量及びスキルプシンＢの量を、実施例１と同じ条件にてＨＰＬＣにより測定した。加熱を始める直前のピセアタンノールの量を１００とした場合の、加温開始から５日後のピセアタンノールの量の測定結果を表３及び図３に、加熱を始める直前のスキルプシンＢの量を１００とした場合の、加温開始から５日後のスキルプシンＢの量の測定結果を表４及び図４に示す。
【００４４】
【表３】
2014224049.tif 000005
【００４５】
【表４】
2014224049.tif 000006
【００４６】
表３及び図３が示すように、メタリン酸ナトリウムのみを添加した試験２では、何も添加していない試験１に比べ、僅かにピセアタンノールの残存率が向上した。一方で、Ｌ−アスコルビン酸のみを添加した試験３では、何も添加していない試験１に比べ、ピセアタンノールの残存率が４割減少していた。これらの結果に対し、メタリン酸ナトリウムとＬ−アスコルビン酸との両方を添加した試験４では、ピセアタンノールの残存率が飛躍的に向上し、５日後でも９３％が残存していた。
また、スキルプシンＢの残存率をまとめた表４及び図４が示すように、メタリン酸ナトリウムのみを添加した試験２では、何も添加していない試験１に比べ、僅かにスキルプシンＢの残存率が向上した。Ｌ−アスコルビン酸のみを添加した試験３では、何も添加していない試験１と、同程度の残存率となった。これらの結果に対し、メタリン酸ナトリウムとＥＤＴＡとＬ−アスコルビン酸との両方を添加した試験４では、スキルプシンＢの残存率が飛躍的に向上し、５日後では、何も添加していない試験１に比べて２倍以上の残存率となった。
【００４７】
このように、キレート剤としてＥＤＴＡではなくメタリン酸塩を用いた場合であっても、キレート剤と抗酸化剤とを添加することによって、溶液中のスチルベン類の安定性が飛躍的に向上した。
【００４８】
［実施例３］
実施例１で得たスチルベン類を含有するパッションフルーツ種子抽出物を用いて、キレート剤としてＥＤＴＡを使用し、そして、抗酸化剤として種々の物質を使用することによる、スチルベン類の安定性試験を行った。即ち、実施例１では、抗酸化剤としてアスコルビン酸を用いたが、実施例３ではアスコルビン酸の他にも種々の抗酸化剤となる物質を用いて、安定性試験を行った。
【００４９】
パッションフルーツ種子抽出物を、ｐＨ３．５の０．１４Ｍクエン酸−０．１１Ｍリン酸バッファーに室温にて溶解させることによって、０．５重量％の抽出物水溶液を得た。抽出物水溶液（試験１）、抽出物水溶液に０．３７重量％でＥＤＴＡ・２Ｎａを添加した溶液（試験２）、抽出物水溶液に０．３７重量％でＥＤＴＡ・２Ｎａ及び０．１０重量％で抗酸化剤となる物質を添加した溶液（試験３〜試験１０）、並びに、抽出物水溶液に０．３７重量％でＥＤＴＡ・２Ｎａ、０．１０重量％で抗酸化剤となる化合物、及び、１．０重量％でα−シクロデキストリンを添加した溶液（試験１１及び試験１２）を調製した。
試験３〜試験１０で用いた抗酸化剤となる物質は、それぞれ、Ｌ−アスコルビン酸（試験３）、ビタミンＥ（試験４）、ローズマリー抽出物（試験５）、テアビゴ（登録商標、エピガロカテキンガレートを含有、試験６）、フェルラ酸（試験７）、ヤマモモ抽出物（試験８）、サンメリンＡＯ−３０００（登録商標、酵素処理イソクエルシトリンを含有、試験９）、並びに、Ｌ−アスコルビン酸及びビタミンＥの等重量混合物（試験１０）である。また、試験１１及び試験１２で用いた抗酸化剤となる化合物は、ビタミンＥ（試験１１）、並びに、Ｌ−アスコルビン酸及びビタミンＥの等重量混合物（試験１２）である。
【００５０】
これら１２種類の水溶液を、それぞれ５０℃の恒温器中で２日間加温した。加温を始める直前、及び、加温開始から２日後に、各溶液について、ピセアタンノールの量及びスキルプシンＢの量を、実施例１と同じ条件にてＨＰＬＣにより測定した。加熱を始める直前のピセアタンノール及びスキルプシンＢの量を１００とした場合の、加温開始から２日後のピセアタンノール及びスキルプシンＢの量の測定結果を表５に示す。また、試験１〜試験９のピセアタンノールの測定結果については、図５にも示す。
【００５１】
【表５】
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【００５２】
表５及び図５が示すように、キレート剤であるＥＤＴＡと各種抗酸化剤とを添加した試験３〜試験９では、いずれの試験においても、何も添加していない試験１に比べ、ピセアタンノール及びスキルプシンＢの残存率が向上した。特に、アスコルビン酸、ビタミンＥ、フェルラ酸、及び、サンメリンＡＯ−３０００を使用した、試験３、試験４、試験７、及び、試験９では、ＥＤＴＡのみを添加した試験２と比べても、ピセアタンノール及びスキルプシンＢの残存率が向上した。
加えて、表５が示すように、抗酸化剤としてアスコルビン酸及びビタミンＥの２種類を添加した試験１０及び試験１２においても、ピセアタンノール及びスキルプシンＢの残存率が向上した。また、キレート剤及び抗酸化剤の他に、α−シクロデキストリンを添加した試験１１及び試験１２においては、α−シクロデキストリンを添加していない試験４及び試験１０に比べて、ピセアタンノールの残存率がさらに向上した。
【００５３】
このように、抗酸化剤としてアスコルビン酸ではなく、抗酸化剤となる種々の物質を用いた場合であっても、キレート剤と抗酸化剤とを添加することによって、溶液中のスチルベン類の安定性が向上した。さらに、抗酸化剤の中から特に優れた効果を奏するものを、実施例３のような安定性試験を行うことによって、当業者であれば適切に選択することができる。実施例３では、特に優れた効果を奏する抗酸化剤の例として、アスコルビン酸、ビタミンＥ、フェルラ酸、及び、サンメリンを挙げた。
抗酸化剤は、単一種類を用いた場合であっても複数種類を組み合わせた場合であっても、スチルベン類の安定性が向上した。キレート剤及び抗酸化剤の他に、α−シクロデキストリンを添加することによって、溶液中のピセアタンノールの安定性がさらに向上した。
【００５４】
［実施例４］
実施例１で得たスチルベン類を含有するパッションフルーツ種子抽出物を用いて、抗酸化剤としてアスコルビン酸を使用し、そして、キレート剤として種々の物質を使用することによる、スチルベン類の安定性試験を行った。即ち、実施例１では、キレート剤としてＥＤＴＡを用いたが、実施例４ではＥＤＴＡの他にも種々のキレート剤となる物質を用いて、安定性試験を行った。
【００５５】
パッションフルーツ種子抽出物を、ｐＨ３．５の０．１４Ｍクエン酸−０．１１Ｍリン酸バッファーに室温にて溶解させることによって、０．５重量％の抽出物水溶液を得た。抽出物水溶液（試験１）、抽出物水溶液に０．１０重量％でＬ−アスコルビン酸を添加した溶液（試験２）、並びに、抽出物水溶液に０．１０重量％でＬ−アスコルビン酸、及び、各種濃度でキレート剤となる物質を添加した溶液（試験３〜試験７）を調製した。
試験３〜試験７で用いたキレート剤となる物質及びその濃度は、それぞれ、０．３７重量％ＥＤＴＡ・２Ｎａ（試験３）、０．４５重量％ピロリン酸（試験４）、０．４５重量％メタリン酸（試験５）、０．９０重量％フィチン酸（試験６）、及び、１．５重量％グリシン（試験７）である。
【００５６】
これら７種類の水溶液を、それぞれ５０℃の恒温器中で４日間加温した。加温を始める直前、及び、加温開始から４日後に、各溶液について、ピセアタンノールの量及びスキルプシンＢの量を、実施例１と同じ条件にてＨＰＬＣにより測定した。加熱を始める直前のピセアタンノール及びスキルプシンＢの量を１００とした場合の、加温開始から４日後のピセアタンノール及びスキルプシンＢの量の測定結果を表６に示す。また、ピセアタンノールの測定結果については、図６にも示す。
【００５７】
【表６】
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【００５８】
表６及び図６が示すように、抗酸化剤であるアスコルビン酸と各種キレート剤とを添加した試験３〜試験７では、フィチン酸を用いた試験６を除いて、アスコルビン酸のみを添加した試験２よりも、ピセアタンノール及びスキルプシンＢの残存率が向上した。特に、ＥＤＴＡ、及び、メタリン酸を使用した、試験３及び試験５では、抗酸化剤もキレート剤も加えていない試験１と比べても、ピセアタンノール及びスキルプシンＢの残存率が向上した。
【００５９】
このように、キレート剤としてＥＤＴＡではなく、キレート剤となる種々の候補物質を用いた場合であっても、実施例４のような安定性試験を行うことによって、抗酸化剤と組み合わせて、溶液中のスチルベン類の安定性を向上させることができるキレート剤を、当業者であれば適切に選択することができる。実施例４では、候補となるキレート剤の例として、ＥＤＴＡ、ピロリン酸、メタリン酸、フィチン酸及びグリシンを挙げた。さらに、同じく安定性試験を行うことによって、キレート剤の中から優れた効果を奏する物を、当業者であれば適切に選択することができる。実施例４では、優れた効果を奏するキレート剤として、ＥＤＴＡ、ピロリン酸、メタリン酸及びグリシンを挙げ、特に優れた効果を奏するキレート剤として、ＥＤＴＡ及びメタリン酸を挙げた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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