【手続補正書】
【提出日】令和3年6月25日(2021.6.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）第１のＣＨＣＬ界面で相互作用して第１のＣＨＣＬドメイン（ＣＨＣＬ）を形成する、第１のＣＨ１ドメイン（ＣＨ１）および第１のＣＬドメイン（ＣＬ）；
（ｉｉ）第２のＣＨＣＬ界面で相互作用して第２のＣＨＣＬドメイン（ＣＨＣＬ）を形成する、第２のＣＨ１ドメイン（ＣＨ１）および第２のＣＬドメイン（ＣＬ）
を含むヘテロ二量体タンパク質であって、
第１のＣＨ１は、第１のＣＨ１中の少なくとも１つのＣＨ１突然変異残基だけ第２のＣＨ１と異なるように改変されており；第１のＣＬは、第１のＣＬ中の少なくとも１つのＣＬ突然変異残基だけ第２のＣＬと異なるように改変されており；
その結果、第１のＣＨＣＬのＣＨ１突然変異残基およびＣＬ突然変異残基は、第２のＣＨＣＬ上の対応する残基位置に優先して互いに相互作用し、第１のＣＨ１および第１のＣＬの相互作用している突然変異残基は、それによって第１の相補的残基セットを形成し、
ここで、第２のＣＨ１が、第２のＣＨ１中の少なくとも１つのＣＨ１突然変異残基だけ第１のＣＨ１と異なるように改変されており；第２のＣＬが、第２のＣＬ中の少なくとも１つのＣＬ突然変異残基だけ第１のＣＬと異なるように改変されており；その結果、第２のＣＨＣＬのＣＨ１突然変異残基およびＣＬ突然変異残基が、第１のＣＨＣＬ上の対応する残基位置に対して互いに優先的に相互作用し、第２のＣＨ１および第２のＣＬの相互作用している突然変異残基が、それによって第２の相補的残基セットを形成し、
第１の相補的残基セットの突然変異残基が、第２の相補的残基セットの突然変異残基と異なり、
第１のＣＨ１は、第１の可変重鎖ドメイン（ＶＨ）に付着されており、第１のＣＬは、第１の可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）に付着されており、第２のＣＨ１は、第２のＶＨに付着されており、第２のＣＬは、第２のＶＬに付着されており、その結果、組み合わされたとき、第１のＶＨ、第１のＶＬ、第１のＣＨ、および第１のＣＬは一緒に、第１のＦａｂを形成し、組み合わされたとき、第２のＶＨ、第２のＶＬ、第２のＣＨ１、および第２のＣＬは、第２のＦａｂを形成し、
第１のＦａｂおよび第２のＦａｂの優先的な形成は、可変ドメインの相補的対合を利用せず、
ここで、第１の相補的残基セットの突然変異残基が、ＣＨ１−Ｌ１２４Ｋの突然変異およびＣＬ１−Ｓ１７６Ｄの突然変異を含むか、あるいはＣＨ１−Ｌ１２４Ｅの突然変異およびＣＬ１−Ｓ１７６Ｋの突然変異を含み、第２の相補的残基セットの突然変異残基が、以下の群：
(i)
CH1-188E, CL-178K, CH1-143E;
(ii)
CH1-188K, CL-178D, CH1-143D;
(iii)
CH1-143K, CL-178D;
(iv)
CH1-143D, CL-178R;
(v)
CH1-143K, CL-178D;
(vi)
CH1-143D, CL-178K;
(vii)
CH1-143D, CL-178K, CL-176M;
(viii)
CH1-143E, CL-131R;
(ix)
CH1-143R, CL-131E;
(x)
CH1-143R, CL-131E, CH1-186A;
(xi)
CH1-221D, CL-123K;
(xii)
CH1-221D, CL-123K, CH1-190I, CL-135I;
(xiii)
CH1-145E, CL-131H;
(xiv)
CH1-143H, CH1-179D, CH1-186E, CL-131H;
(xv)
CH1-186E, CL-131H, CH1-145S;
(xvi)
CH1-143S, CL-131D, CH1-188W, CL-133S,
CL-178S;
(xvii)
CH1-143S, CH1-188W, CL-133M, CL-176G,
CL-178G;
(xviii)
CH1-143H, CH1-179D, CH1-186E, CL-131H,
CH-190I, CL-135I,;
(xix)
CH1-143S, CL-131D, CH1-188W, CL-133S,
CL-176C;
(xx)
CH1-143S, CH1-188W, CL-133M, CL-178G,
CL-176G;
(xxi)
CH1-143S, CH1-188W, CL-131D;
から選択され、
さらに、第１の相補的残基セットの溶媒接触可能表面積が、２．５Åプローブを使用して測定した場合、２２５Å２未満であり、第２の相補的残基セットの溶媒接触可能表面積が、２．５Åプローブを使用して測定した場合、２２５Å２未満である、
ヘテロ二量体タンパク質。
【請求項２】
第２の相補的残基セットが、以下の群：
(i)
CH1-221D, CH1-174C, CH1-190I, CH1-230S,
CL-123K, CL-176C, CL-135I, CL-214S;
(ii)
CH1-145E, CH1-122C, CH1-230S, CL-131H,
CL-123C, CL-214S;
(iii)
CH1-143H, CH1-179D, CH1-186E, CH1-174C,
CH1-190I, CH1-230S, CL-131H, CL-135I,
CL-176C, CL-214S;
(iv)
CH1-145S, CH1-186E, CH1-139C, CH1-230S,
CL-131H, CL-116C, CL-214S;
(v)
CH1-188W, CH1-143S, CH1-174C, CH1-230S,
CL-133S, CL-178S, CL-131D, CL-176C,
CL-214S;
(vi)
CH1-188W, CH1-143S, CH1-122C, CH1-230S,
CL-133M, CL-178G, CL-176G, CL-123C,
CL-214S;
(vii)
CH1-188W, CH1-143S, CH1-122C, CH1-139C,
CH1-174C, CH1-230S, CL-133S, CL-178S,
CL-131D, CL-116C, CL-123C, CL-176C;
(viii)
CH1-145E, CH1-122C, CH1-230S, CL-131H,
CL-123C, CL-214S;
(ix)
CH1-143H, CH1-179D, CH1-186E, CH1-174C,
CH1-190I, CH1-230S, CL-131H, CL-135I,
CL-176C, CL-214S;
(x)
CH1-145S, CH1-186E, CH1-139C, CH1-230S,
CL-131H, CL-116C, CL-214S;
(xi)
CH1-188W, CH1-143S, CH1-174C, CH1-230S,
CL-133S, CL-178S, CL-131D, CL-176C,
CL-214S;
(xii)
CH1-188W, CH1-143S, CH1-122C, CH1-230S,
CL-133M, CL-178G, CL-176G, CL-123C,
CL-214S;
(xiii)
CH1-188W, CH1-143S, CH1-122C, CH1-139C,
CH1-174C, CH1-230S, CL-133S, CL-178S,
CL-131D, CL-116C, CL-123C, CL-176C,
CL-214S;
から選択される、請求項１に記載のヘテロ二量体タンパク質。
【請求項３】
第１のＣＨＣＬおよび第２のＣＨＣＬの形成が、第１のＣＨ１および第２のＣＬ、または第２のＣＨ１および第１のＣＬから構成されるＣＨＣＬの形成に対して、少なくとも４倍優先的に起こる、請求項１または２に記載のヘテロ二量体タンパク質。
【請求項４】
ＣＬドメインの少なくとも１つが、カッパドメインである、請求項１から３のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
【請求項５】
相補的残基セットが、一方のドメイン中に正または負に荷電した残基、および他方のドメイン中に極性残基、または逆に荷電した残基を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
【請求項６】
第１のＣＨ１と第１のＣＬおよび／または第２のＣＨ１と第２のＣＬとの間に改変されたジスルフィド結合を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
【請求項７】
改変されたジスルフィド結合が、以下の位置：
（ｉ）ＣＨ１−１２２およびＣＬ−１２３；
（ｉｉ）ＣＨ１−１３９およびＣＬ−１１６；ならびに
（ｉｉｉ）ＣＨ１−１７４およびＣＬ−１７６
の１つまたは複数に位置している、請求項６に記載のヘテロ二量体タンパク質。
【請求項８】
野生型ジスルフィド結合が、第１のＣＨＣＬおよび／または第２のＣＨＣＬ上で、ＣＨ１−Ｃ２３０およびＣＬ−Ｃ２１４の一方または両方を、Ｃを除く任意の残基に突然変異させることによって除去されており、第１および／または第２のＣＨ１−Ｃ２３０ならびに第１および／または第２のＣＬ−Ｃ２１４が、Ｓに突然変異されている、請求項６または７に記載のヘテロ二量体タンパク質。
【請求項９】
第１のＣＨ３ドメイン（ＣＨ３）および第２のＣＨ３が、それぞれ第１のＣＨ３突然変異残基および第２のＣＨ３突然変異残基を含むように、第１のＣＨ１が、第１のＣＨ３に接続されている第１のＣＨ２ドメイン（ＣＨ２）に接続されており、第２のＣＨ１が、第２のＣＨ３に接続されている第２のＣＨ２に接続されており、第１のＣＨ３突然変異残基および第２のＣＨ３突然変異残基が、互いに異なり、かつ互いに優先的に相互作用するように改変されており、それによってＣＨ３ホモ二量体の形成より多くＣＨ３ヘテロ二量体を形成する、請求項１から８のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
【請求項１０】
第１の相補的残基セットの溶媒接触可能表面積が、２．５Åプローブを使用して測定した場合、１５０Å２未満であり、第２の相補的残基セットの溶媒接触可能表面積が、２．５Åプローブを使用して測定した場合、１５０Å２未満である、請求項１から９のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
【請求項１１】
第１の相補的残基セットの溶媒接触可能表面積が、２．５Åプローブを使用して測定した場合、１００Å２未満であり、第２の相補的残基セットの溶媒接触可能表面積が、２．５Åプローブを使用して測定した場合、１００Å２未満である、請求項１から９のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
【請求項１２】
第１の相補的残基セットの溶媒接触可能表面積が、２．５Åプローブを使用して測定した場合、５０Å２未満であり、第２の相補的残基セットの溶媒接触可能表面積が、２．５Åプローブを使用して測定した場合、５０Å２未満である、請求項１から９のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
【請求項１３】
第１の相補的残基セットの溶媒接触可能表面積が、２．５Åプローブを使用して測定した場合、２０Å２未満であり、第２の相補的残基セットの溶媒接触可能表面積が、２．５Åプローブを使用して測定した場合、２０Å２未満である、請求項１から９のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
【請求項１４】
第１の相補的残基セットの溶媒接触可能表面積が、２．５Åプローブを使用して測定した場合、１０Å２未満であり、第２の相補的残基セットの溶媒接触可能表面積が、２．５Åプローブを使用して測定した場合、１０Å２未満である、請求項１から９のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
【請求項１５】
第１の相補的残基セットの溶媒接触可能表面積が、２．５Åプローブを使用して測定した場合、５Å２未満であり、第２の相補的残基セットの溶媒接触可能表面積が、２．５Åプローブを使用して測定した場合、５Å２未満である、請求項１から９のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質をコードする核酸。
【請求項１７】
請求項１６に記載の核酸を含むベクター。
【請求項１８】
請求項１６に記載の核酸を含み、または請求項１７に記載のベクターを含む細胞。
【請求項１９】
請求項１から１５のいずれか一項に記載のヘテロ二量体タンパク質を作製する方法であって、
（ｉ）細胞株に１種または複数のベクターをコトランスフェクトして、第１のＣＨＣＬの第１のＣＨ１、第１のＣＬ、ならびに第２のＣＨＣＬの第２のＣＨ１および第２のＣＬを発現させることと；
（ｉｉ）１種または複数のベクターを発現させる、かつ第１のＣＨＣＬおよび第２のＣＨＣＬをアセンブルさせる条件下で細胞株を培養することと；
（ｉｉｉ）細胞培養液からヘテロ二量体タンパク質を精製することと
を含む、方法。
【請求項２０】
細胞株に、第１のＣＨ１、第１のＣＬ、第２のＣＨ１、および第２のＣＬを１：１：１：１の比で発現するベクターがコトランスフェクトされる、請求項１９に記載の方法。