(57)【要約】【課題】タンパク質分解障害の治療の提供。【解決手段】本発明は、細胞増殖障害（例えば癌）およびタンパク質分解障害（例えば神経変性障害）のようなタンパク質分解障害を治療する方法に関する。本発明は、アグレソーム阻害剤、またはアグレソーム阻害剤とプロテアソーム阻害剤との組み合わせを用いてこれらの疾患を治療するための方法および薬学的組成物を提供する。本発明は、さらに、多発性骨髄腫を治療するための方法および薬学的組成物に関する。新しいＨＤＡＣ／ＴＤＡＣ阻害剤およびアグレソーム阻害剤ならびにこれらの化合物を合成するための合成方法も提供される。【選択図】図５
2014224158.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願明細書に記載された発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で米国仮特許出願ＵＳＳＮ  ６０／６６４，４７０号（２００５年３月２２日出願）に対する優先権を主張する。この仮特許出願は、参考として本明細書に援用される。
【０００２】
政府の支援
本明細書に記載される研究は、部分的に、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈからの助成（ＣＡ０７８０４８、ＧＭ０７６２６２）によって支援された。米国政府は、本発明における一定の権利を有し得る。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
動的細胞状態は、迅速で効率的なタンパク質異化の機序を必要とする。癌細胞は、連続細胞周期、超変異および染色体再配置によるタンパク質分解に高度に依存する（参考として本明細書に援用されるＡｄａｍｓ  Ｊ．Ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ：ａ  ｓｕｉｔａｂｌｅ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．２００４；４：３４９−３６０）。プロテアソームとアグレソームとは、細胞内タンパク質異化に関与する二つの主要な細胞組織である。正常細胞および新生細胞中のプロテアソームの生物学的特性は良く理解されている。プロテアソーム複合体は、小胞体（ＥＲ）、核および細胞質など、細胞全体の多数の場所に存在する。プロテアソームの主な役割は、ユビキチン化タンパク質の標的分解である。アグレソームは、ミスフォールディングタンパク質、シャペロンおよびプロテアソーム成分の核近傍複合体であり、特定の病理状態に関連するプロテアソーム阻害またはタンパク質ストレスに応答して膨張する（参考として本明細書に援用されるＫｏｐｉｔｏ  ＲＲ．Ａｇｇｒｅｓｏｍｅｓ，ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ  ｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ．Ｔｒｅｎｄｓ
Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２０００；１０：５２４−５３０）。これらの病理状態を標的とする既知の治療法はない。
【０００４】
迷走性タンパク質異化は癌の特徴であり、発癌性タンパク質の安定化および腫瘍阻害因子の分解に関係する（参考として本明細書に援用される非特許文献１）。従って、当分野では、迷走性タンパク質異化が関与する疾患の治療法ならびにタンパク質分解経路および成分を標的とすることによってこれらの疾患（例えば癌）を治療する新しい治療薬を開発する選別方法が求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ａｄａｍｓ  Ｊ．Ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ：ａ  ｓｕｉｔａｂｌｅ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．２００４；４：３４９−３６０
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
発明の要旨
一態様では、本発明は、タンパク質分解障害を患っている被験体またはタンパク質分解障害にかかりやすい被験体を治療する方法を提供する。本方法は、治療を必要とする被験体に、治療的に有効な量の少なくとも一つのタンパク質分解阻害剤を投与するステップを含む。特定の実施態様では、プロテアソームの阻害剤をアグレソームの阻害剤との組み合わせとして投与する。特定の実施態様では、タンパク質分解障害は、細胞増殖障害またはタンパク質沈着障害である。詳しくは、細胞増殖障害は癌である。好ましい実施態様では、癌は多発性骨髄腫、白血病、リンパ腫、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌および肝癌の一つ以上である。他の実施態様では、タンパク質沈着障害は、ウィルソン病、脊髄小脳失調、プリオン病、パーキンソン病、ハンチントン病、家族性筋萎縮性側索硬化症、アミロイド沈着症、アルツハイマー病、アレグザンダー病、アルコール性肝疾患、嚢胞性線維症、ピック病またはレヴィー小体認知症である。
【０００７】
別の態様では、本発明は、タンパク質分解障害の症状を示す細胞を処理する方法を提供する。本方法は、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を細胞に投与するステップを含む。特定の実施態様では、細胞は、被験体由来細胞または培養細胞の一つ以上である。特定の実施態様では、被験体由来細胞は、骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、リンパ球、毛嚢、造血細胞、血球、上皮細胞、骨髄形質細胞、原発性癌細胞、患者由来腫瘍細胞、正常造血幹細胞または癌性造血幹細胞、神経幹細胞、固形腫瘍細胞または星状細胞の一つ以上である。特定の実施態様では、培養細胞は、ＭＭ．１Ｓ、Ｕ２６６、ＲＰＭＩ８２２６、ＤＯＸ４０、ＭＭ．１Ｒ、ＩＮＡ‐６、ＬＲ５、原発性癌細胞株および株化癌細胞株、原発性正常細胞株および株化正常細胞株の一つ以上である。タンパク質ストレスを加えて細胞中のタンパク質分解経路を阻害すると細胞死が起る。従って、タンパク質分解阻害剤を用いてタンパク質ストレスを癌細胞に加える癌などの疾患の治療法は、癌細胞を殺す新しい方法を提供する。
【０００８】
別の態様では、本発明は、多発性骨髄腫を患う被験体または多発性骨髄腫にかかりやすい被験体を治療する方法を提供する。本方法は、治療を必要とする被験体に、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を投与し、それによって多発性骨髄腫を患う被験体または多発性骨髄腫にかかりやすい被験体を治療するステップを含む。免疫グロブリンの産生によって細胞にタンパク質ストレスが加えられ、タンパク質分解が阻害されたとき細胞死が起こりやすくなる。
【０００９】
別の態様では、本発明は、乳癌または卵巣癌を患う被験体あるいは乳癌または卵巣癌にかかりやすい被験体を治療する方法を提供する。本方法は、治療を必要とする被験体に、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を投与し、それによって乳癌または卵巣癌を患う被験体あるいは乳癌または卵巣癌にかかりやすい被験体を治療するステップを含む。
【００１０】
さらに別の態様では、本発明は、被験体におけるタンパク質分解障害治療の効力を評価する方法を提供する。本方法は、一つ以上の治療前表現型を決定するステップ、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を被験体に投与するステップ、およびタンパク質分解阻害剤による初期治療期間の後に一つ以上の表現型を決定するステップを含み、一つ以上の表現型の調節はタンパク質分解阻害剤治療の効力を示す。
【００１１】
さらに別の態様では、本発明は、アグレソーム阻害剤による治療を受けている被験体の経過をモニタリングする方法を提供する。本方法は、一つ以上の治療前表現型を決定するステップ、治療的に有効な量のアグレソーム阻害剤を被験体に投与するステップ、およびアグレソーム阻害剤による初期治療期間の後に一つ以上の表現型を決定するステップを含み、一つ以上の表現型の調節はアグレソーム阻害治療の効力を示す。
【００１２】
さらにまた別の態様では、本発明は、タンパク質分解阻害剤による治療に適する、タンパク質分解障害を有する被験体を選択する方法を提供する。本方法は、一つ以上の治療前表現型を決定するステップ、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を被験体に投与するステップ、タンパク質分解阻害剤による初期の治療期間の後に一つ以上の表現型を決定するステップを含み、一つ以上の表現型の調節はタンパク質分解阻害剤による治療に対して疾患が好ましい臨床応答を示す可能性があることを示す。
【００１３】
上記で説明した任意の態様において、タンパク質分解阻害剤は、好ましくは、ｔｕｂａｃｉｎ（チューバシン）、ｔｕｂａｃｉｎ様化合物、ｔｕｂａｃｉｎ誘導体、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））、ＳＡＨＡ、Ｒ１１５７７７  ＦＴＩ、１６６ホルミウム‐ＤＯＴＭＰ、三酸化ヒ素、１７‐ＡＡＧ、ＭＧ１３２、ｓａｐｏｊａｒｇｏｎ、ＮＰＩ‐００５２または本明細書に記載されているその他の化合物の一つ以上から選択される。参照によって本明細書にそれぞれ組み込まれる２００１年５月９日出願の米国特許出願第６０／２８９，８５０号、２００２年５月９日出願の米国特許出願第１０／１４４，３１６号および２００３年７月１７日出願の米国特許出願第１０／６２１，２７６号にｔｕｂａｃｉｎ、ｔｕｂａｃｉｎ様化合物およびｔｕｂａｃｉｎ誘導体が記載されている。
【００１４】
上記で説明した態様の特定の好ましい実施態様では、タンパク質分解阻害剤は、式
【００１５】
【化２３】
2014224158.tif 000003
の化合物である。
ここで、
各Ｘは、独立に、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２またはＮＲ３であり、
Ｙは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２またはＮＲ４であり、
Ａｒ１およびＡｒ２は、それぞれ独立に、アリール基であり、
Ｒ１は、低級アルキル基またはアリール基であり、
Ｒ２は、水素、低級アルキル基またはアリール基であり、
Ｒ３は、水素、低級アルキル基、アリール基、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル基またはアミノカルボニル基である。特定の好ましい実施態様では、Ｘは、両方の箇所でＯである。特定の好ましい実施態様では、ＹはＳである。特定の好ましい実施態様では、Ａｒ１はフェニルまたは置換フェニルである。特定の好ましい実施態様では、Ａｒ２はヘテロアリールであり、より好ましくは、必要に応じて、置換オキサゾリルである。特定の好ましい実施態様では、Ｒ１はフェニルまたは置換フェニルであり、より好ましくは、４‐アミノ置換フェニルである。特定の好ましい実施態様では、Ｒ２は水素である。
【００１６】
特定の実施態様では、タンパク質分解阻害剤は、式
【００１７】
【化２４】
2014224158.tif 000004
【００１８】
【化２５】
2014224158.tif 000005
の一つである。特定の好ましい実施態様では、タンパク質分解阻害剤は、下式
【００１９】
【化２６】
2014224158.tif 000006
の化合物である。図には立体化学を示してある。本発明のこれらの化合物は、本発明の方法、薬学的組成物およびキットにおいて特に有用である。
【００２０】
上記で説明した任意の態様において、タンパク質分解阻害剤はＨＤＡＣ阻害剤である。参照によって本明細書にそれぞれ組み込まれ２００６年２月１４日出願の米国特許出願第６０／７７３，５１０号、２００６年２月１４日出願の米国特許出願第６０／７７３，１７２号、２００１年５月９日出願の米国特許出願第６０／２８９，８５０号、２００２年５月９日出願の米国特許出願第１０／１４４，３１６号および２００３年７月１７日出願の米国特許出願第１０／６２１，２７６号にＨＤＡＣを阻害することが知られている化合物が記載されている。特定の実施態様では、好ましくは、タンパク質分解阻害剤はＨＤＡＣ６を阻害する。特定の実施態様では、タンパク質分解阻害剤はＨＤＡＣ６に特異的である。
【００２１】
上記で説明した任意の態様において、タンパク質分解阻害剤は、好ましくはＨＤＡＣ６酵素活性を阻害し、それによってアグレソーム媒介タンパク質分解を阻害する。好ましい実施態様では、タンパク質分解阻害剤は、ＨＤＡＣ６のＣ末端アセチル化活性を阻害し、それによってアグレソーム媒介タンパク質分解を阻害する。
【００２２】
特定の実施態様では、ＨＤＡＣ６の阻害剤は、Ｈｓｐ９０のアセチル化をもたらす。Ｈｓｐ９０のアセチル化によって、複数のＨｓｐ９０クライアントタンパク質に対するＨｓｐ９０の活性が低下し、それによって細胞中のタンパク質ストレスが増大する。詳しくは、前立腺癌および乳癌の場合、糖コルチコイド受容体は糖コルチコイドを捕捉するためにＨｓｐ９０機能を必要とするという知見によって、ＨＤＡＣ６の阻害とそれに続くＨｓｐ９０のアセチル化とはステロイド結合受容体の活性の減少をもたらす。従って、ＨＤＡＣ６阻害は乳癌においてはエストロゲン、前立腺癌においてはアンドロゲンに対する感受性を減少させる。
【００２３】
上記で説明した任意の態様において、特定の好ましい実施態様では、タンパク質分解阻害剤はアグレソーム阻害剤である。特定の好ましい実施態様では、アグレソーム阻害剤は、ｔｕｂａｃｉｎ、スクリプテイドまたは本明細書に記載されている化合物の一つ以上である。特定のその他の実施態様では、アグレソーム阻害剤は、参照によってそれぞれ本明細書に組み込まれる２００６年２月１４日出願の米国特許出願第６０／７７３，５１０号、２００６年２月１４日出願の米国特許出願６０／７７３，１７２号、２００１年５月９日出願の米国特許出願第６０／２８９，８５０号、２００２年５月９日出願の米国特許出願第１０／１４４，３１６号および２００３年７月１７日出願の米国特許出願１０／６２１，２７６号に記載されている化合物の一つ以上である。
【００２４】
上記で説明した任意の態様において、特定の好ましい実施態様では、タンパク質分解阻害剤はプロテアソーム阻害剤である。特定の好ましい実施態様では、プロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ、ＭＧ１３２、ｓａｐｏｊａｒｇｏｎおよびＮＰＩ‐００５２の一つ以上である。特定の実施態様では、プロテアソーム阻害剤は、本明細書に記載されている化合物である。
【００２５】
上記で説明した任意の態様において、特定の好ましい実施態様では、タンパク質分解阻害剤は、ＨＤＡＣ６由来のペプチド、ダイニン、ＨＤＡＣ６のＮ末端ペプチドまたはＨＤＡＣ６のＣ末端ペプチドである。特定の好ましい実施態様では、Ｃ末端ＨＤＡＣ６ペプチドは、細胞の表現型を調節するのに十分である。
【００２６】
上記で説明した任意の態様において、特定の好ましい実施態様では、表現型は、特定の治療または化合物への応答としての生物学的または臨床的後遺症、貧血症、血小板減少症、好中球減少症、溶骨性病変、骨痛、免疫不全、腎不全症、高カルシウム血症、成熟形質細胞の異数性、悪性細胞の百分率、チューブリンのアセチル化状態、成熟形質細胞のアポトーシス、成熟形質細胞中のアグレソームのレベル、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６ユビキチン化、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６とダイニンとの会合、成熟形質細胞中のユビキチン化タンパク質の細胞レベル、成熟形質細胞中のカスパーゼ‐８のレベル、成熟形質細胞中のＰＡＲＰのレベル、成熟形質細胞中のチミジン取り込み、拡張ＥＲシスターネ、成熟形質細胞の凝集、成熟形質細胞中の免疫グロブリンの沈着物、非ヒストンタンパク質のアセチル化状態、ヒストンタンパク質のアセチル化、前記細胞タンパク質の全体的なユビキチン化、細胞周期調節の状態、壊死、アポトーシスの指標、アポトーシス状態、ラッセル小体形成、嚢胞性線維症膜貫通タンパク質受容体状態、および細胞タンパク質沈着物の変調、または細胞タンパク質または細胞外タンパク質全体のアセチル化状態であってよい。
【００２７】
好ましい実施態様では、アグレソームのレベル、血小板減少症、好中球減少症、溶骨性病変、骨痛、免疫不全、腎不全症、高カルシウム血症、成熟形質細胞の異数性、悪性細胞の百分率、成熟形質細胞中のチミジン取り込み、成熟形質細胞中の完全長カスパーゼ‐８のレベル、成熟形質細胞中の完全長ＰＡＲＰのレベルまたは成熟形質細胞の凝集の一つ以上の減少は、治療が有効であることを示す。
【００２８】
好ましい実施態様では、チューブリンのアセチル化状態、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６ユビキチン化、カスパーゼ‐８の切断形のレベル、ＰＡＲＰの切断形のレベル、壊死、非ヒストンタンパク質のアセチル化状態、細胞ユビキチン化レベル、アポトーシス、アポトーシスの指標、細胞周期調節解除または成熟形質細胞中の免疫グロブリンの沈着物の増加は、治療が有効であることを示す。
【００２９】
上記で説明した任意の態様において、特定の好ましい実施態様では、本方法は、被験体から生物学的試料を得るさらに別のステップを含み、特定の実施態様では、被験体から第二の生物学的試料を得るさらに別のステップを含んでもよい。
【００３０】
上記で説明した任意の態様において、特定の好ましい実施態様では、本方法は、タンパク質分解阻害剤による第二の治療期間の後、被験体の表現型を決定するさらに別のステップを含む。
【００３１】
上記で説明した任意の態様において、特定の好ましい実施態様では、本方法は、治療的に有効な量の一つ以上の追加のタンパク質分解阻害剤を被験体または細胞に投与するステップをさらに含む。特定の好ましい実施態様では、追加のタンパク質分解阻害剤の少なくとも一つは、アグレソーム阻害剤である。特定の好ましい実施態様では、追加のタンパク質分解阻害剤の少なくとも一つは、プロテアソーム阻害剤である。好ましい実施態様では、追加のタンパク質分解阻害剤は、ボルテゾミブ、ｔｕｂａｃｉｎ、ＭＧ１３２、ｓａｐｏｊａｒｇｏｎ、ＮＰＩ‐００５２または本明細書に記載されている一つ以上の化合物である。特定の他の実施態様では、タンパク質分解阻害剤は、参照によって本明細書にそれぞれ組み込まれる２００６年２月１４日出願の米国特許出願第６０／７７３，５１０号、２００６年２月１４日出願の米国特許出願第６０／７７３，１７２号、２００１年５月９日出願の米国特許出願第６０／２８９，８５０号、２００２年５月９日出願の米国特許出願第１０／１４４，３１６号、および２００３年７月１７日出願の米国特許出願第１０／６２１，２７６号に記載されている化合物の一つ以上である。
【００３２】
上記で説明した任意の態様において、特定の好ましい実施態様では、本方法は、細胞または被験体の治療または経過をモニタリングすることをさらに含む。
【００３３】
上記で説明した任意の態様において、特定の好ましい実施態様では、本方法は、タンパク質分解阻害剤を得ることをさらに含む。
【００３４】
上記で説明した任意の態様において、特定の好ましい実施態様では、本方法は、化学療法剤、放射線剤、ホルモン剤、生物剤、または抗炎症剤の一つ以上を被験体に共投与することをさらに含む。特定の実施態様では、化学療法剤は、タモキシフェン、トラスツザマブ、ラロキシフェン、ドキソルビシン、フルオロウラシル／５‐ＦＵ、パミドロネート二ナトリウム、アナストロゾール、エクセメスタン、シクロホスファミド、エピルビシン、レトロゾール、トレミフェン、フルベストラント、フルオキシメステロン、トラスツズマブ、メトトレキセート、メガストロールアセテート、ドセタキセル、パクリタキセル、テストラクトン、アジリジン、ビンブラスチン、カペシタビン、ゴセレリンアセテート、ゾレドロン酸、タキソール、ビンブラスチンまたはビンクリスチンである。
【００３５】
上記で説明した任意の態様において、特定の好ましい実施態様では、本方法は、治療前表現型または治療後表現型の一つ以上を標準表現型と比較することをさらに含む。好ましい実施態様では、標準表現型は、参照細胞または細胞のポピュレーションの対応する表現型である。好ましい実施態様では、参照細胞は、被験体由来細胞、培養細胞、被験体由来培養細胞または被験体由来治療前細胞の一つ以上である。特定の実施態様では、被験体由来細胞は、骨髄間質細胞、（ＢＭＳＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、リンパ球、毛嚢、血球、他の上皮細胞、骨髄形質細胞、原発性癌細胞、患者由来腫瘍細胞、正常造血幹細胞または癌性造血幹細胞、神経幹細胞、固形腫瘍細胞、または星状細胞である。
【００３６】
別の態様では、本発明は、細胞中のアグレソーム媒介タンパク質分解を阻害する方法を提供する。本方法は、細胞をアグレソーム阻害剤と接触させるステップを含む。好ましい実施態様では、アグレソームタンパク質分解は、ＨＤＡＣ６によって媒介される。特定の好ましい実施態様では、本方法は、細胞中のプロテアソームタンパク質分解を阻害するステップをさらに含む。特定の好ましい実施態様では、アグレソーム阻害剤は、ｔｕｂａｃｉｎ、本明細書に記載されている化合物、または本明細書中下記で説明する、候補化合物を同定する方法によって同定された化合物である。特定の他の実施態様では、アグレソーム阻害剤は、参照によってそれぞれ本明細書に組み込まれる２００６年２月１４日出願の米国特許出願第６０／７７３，５１０号、２００６年２月１４日出願の米国特許出願第６０／７７３，１７２号、２００１年５月９日出願の米国特許出願第６０／２８９，８５０号、２００２年５月９日出願の米国特許出願第１０／１４４，３１６号および２００３年７月１７日出願の米国特許出願第１０／６２１，２７６号に記載されている化合物の一つ以上である。
【００３７】
別の態様では、本発明は、細胞中のタンパク質分解を阻害する候補化合物または分子を同定する方法を提供する。本方法は、アグレソーム形成を示す細胞を候補化合物と接触させるステップ、および細胞の表現型を決定するステップを含み、表現型の調節は化合物の効力を示す。特定の実施態様では、候補分子は、低分子、ペプチド（またはペプチドミメティック）、あるいは核酸（または核酸ミメティック（例えばペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む））の一つ以上である。特定の好ましい実施態様では、核酸は、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡまたはＤＮＡである。特定の好ましい実施態様では、ペプチドは、ＨＤＡＣ６から誘導されたペプチド、ＨＤＡＣ６のダイニン結合ドメイン、ＨＤＡＣ６のＴＤＡＣドメイン、ＨＤＡＣ６のＮ末端またはＨＤＡＣ６のＣ末端である。特定の好ましい実施態様では、低分子は、化合物のライブラリに含まれるか、または化合物のライブラリ由来である。特定の好ましい実施態様では、表現型を決定するステップは、画像ベースの多次元スクリーニングを用いることを含む。
【００３８】
さらに別の態様では、本発明は、試験化合物を評価するための方法を提供する。本方法は、アグレソーム形成を示す細胞を試験化合物と接触させるステップ、および接触の後で細胞を評価するステップを含み、一つ以上の表現型の調節の基準値に対する相関は、試験化合物がタンパク質分解障害治療薬として有用であり得ることを示す。特定の好ましい実施態様では、テスト化合物は、低分子、ペプチドまたは核酸の一つ以上である。
【００３９】
上記の方法の特定の好ましい実施態様では、本方法は、タンパク質分解阻害剤による初期の治療期間の後、細胞の表現型を決定するステップをさらに含む。上記の方法の特定の好ましい実施態様では、表現型は、特定の治療または化合物への応答としての生物学的または臨床的後遺症である。表現型は、貧血症、血小板減少症、好中球減少症、溶骨性病変、骨痛、免疫不全、腎不全症、高カルシウム血症、成熟形質細胞の異数性、悪性細胞の百分率、チューブリンのアセチル化状態、成熟形質細胞のアポトーシス、アグレソームのレベル、成熟形質細胞中のアグレソームのレベル、ＨＤＡＣ６ユビキチン化、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６ユビキチン化、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６とダイニンとの会合、成熟形質細胞中のユビキチン化タンパク質の細胞レベル、成熟形質細胞中のカスパーゼ‐８のレベル、成熟形質細胞中のＰＡＲＰのレベル、成熟形質細胞中のチミジン取り込み、拡張ＥＲシスターネ、成熟形質細胞の凝集、成熟形質細胞中の免疫グロブリンの沈着物、非ヒストンタンパク質のアセチル化状態、前記細胞タンパク質の全体的なユビキチン化、細胞周期調節の状態、壊死、アポトーシスの指標、アポトーシス状態、ラッセル小体形成、嚢胞性線維症膜貫通タンパク質受容体状態、および細胞タンパク質沈着物の変調、あるいは細胞タンパク質および細胞外タンパク質の全体的なアセチル化状態を含む。特定の好ましい実施態様では、貧血症、アグレソームのレベル、血小板減少症、好中球減少症、溶骨性病変、骨痛、免疫不全、腎不全症、高カルシウム血症、成熟形質細胞の異数性、悪性細胞の百分率、成熟形質細胞中のチミジン取り込み、成熟形質細胞中の完全長カスパーゼ‐８のレベル、成熟形質細胞中の完全長ＰＡＲＰのレベルまたは成熟形質細胞の凝集の一つ以上の減少は、治療が有効であることを示す。特定の好ましい実施態様では、チューブリンのアセチル化状態、全体的なアセチル化状態、非ヒストンタンパク質上のアセチル化状態、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６ユビキチン化、カスパーゼ‐８の切断形のレベル、ＰＡＲＰの切断形のレベル、壊死、非ヒストンタンパク質のアセチル化状態、細胞ユビキチン化レベル、アポトーシス、アポトーシスの指標、細胞周期調節解除、または成熟形質細胞中の免疫グロブリンの沈着物の増加は、治療が有効であることを示す。
【００４０】
上記で説明した任意の方法の特定の実施態様では、被験体または細胞はヒトである。上記で説明した任意の方法の特定の実施態様では、被験体または細胞は、哺乳動物である。上記で説明した任意の方法の特定の実施態様では、被験体または細胞は、飼育動物（例えば犬、猫、齧歯類、牛、ブタ、ヤギ、羊等）由来である。上記で説明した任意の方法の他の実施態様では、被験体または細胞は、実験動物（例えばマウス、ラット、ブタ、犬、霊長類、猿、チンパンジー等）由来である。
【００４１】
別の態様では、本発明は、被験体のタンパク質分解障害を治療するためのキットを提供する。キットは、本明細書に記載されている化合物または薬学的に受容可能な該化合物のエステル、塩およびプロドラッグならびに使用説明書を含む。特定の好ましい実施態様では、化合物は、治療的に有効な量の化合物および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物として存在する。
【００４２】
さらにまた別の態様では、本発明は、包装された組成物を提供する。包装された組成物は、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤と薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤とを含み、組成物は、タンパク質分解障害を患う被験体またはタンパク質分解障害にかかりやすい被験体を治療するために調合され、タンパク質分解障害を患う被験体またはタンパク質分解障害にかかりやすい被験体を治療する説明書とともに包装される。
【００４３】
さらに別の態様では、本発明は、ＨＤＡＣ６由来のポリペプチドをコードする単離された核酸分子を提供し、このポリペプチドはアグレソームを示す細胞中で発現されるとタンパク質分解阻害を引き起こす。特定の好ましい実施態様では、核酸は、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０をコードする核酸由来である。特定の好ましい実施態様では、核酸は、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０と少なくとも約６０％同一である。特定の好ましい実施態様では、核酸は、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０と少なくとも約８０％同一である。特定の好ましい実施態様では、核酸は、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０と少なくとも約９０％同一である。特定の好ましい実施態様では、核酸は、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０と少なくとも約９９．９％同一である。
【００４４】
さらに別の態様では、本発明は、ＨＤＡＣ６由来の単離されたポリペプチドを提供し、ポリペプチドはアグレソーム媒介タンパク質分解を阻害する。特定の好ましい実施態様では、単離されたポリペプチドは、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０によって同定されるアミノ酸配列を含む。特定の好ましい実施態様では、ペプチドは、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０のいずれか一つ以上と少なくとも約６０％同一である。特定の好ましい実施態様では、ペプチドは、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０のいずれか一つ以上と少なくとも約８０％同一である。特定の好ましい実施態様では、ペプチドは、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０のいずれか一つ以上と少なくとも約９０％同一である。特定の好ましい実施態様では、ペプチドは、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０のいずれか一つ以上と少なくとも約９９．９％同一である。
【００４５】
さらに別の態様では、本発明は、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０と少なくとも約８０％の配列同一性を有し、タンパク質分解を阻害する能力を特徴とする、ポリペプチドをコードすることができるポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
【００４６】
さらに別の態様では、本発明は、タンパク質分解障害または細胞増殖障害を治療する方法を提供する。本方法は、治療を必要とする被験体に、有効な量のＲＮＡを投与してＨＤＡＣ６と特異的に結合させ、不活性化させるステップを含む。特定の好ましい実施態様では、ＲＮＡは、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡまたはリボザイムである。活性のあるｓｉＲＮＡ試薬の例は、ヌクレオチド２１１〜２３１または２１７〜２３７にある、ＨＤＡＣ６のアミノ酸に対応する二本鎖またはヘアピン配列を含むが、それらに限定されない（Ｈｕｂｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  （２００２）  ４１７（６８８７）：４５５−８を参照すること）。
例えば、本願発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
タンパク質分解障害を患っている被験体またはタンパク質分解障害にかかりやすい被験体を治療する方法であって、治療を必要とする被験体に、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を投与することを含む、方法。
（項目２）
前記タンパク質分解障害は、細胞増殖障害またはタンパク質沈着障害である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記細胞増殖障害は癌である、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記癌は、多発性骨髄腫、白血病、リンパ腫、乳癌、肺癌および肝癌の一つ以上である、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記癌は多発性骨髄腫である、項目３に記載の方法。
（項目６）
前記タンパク質沈着障害は、ウィルソン病、脊髄小脳失調、プリオン病、パーキンソン病、ハンチントン病、家族性筋萎縮性側索硬化症、アミロイド沈着症、アルツハイマー病、アレグザンダー病、アルコール性肝臓疾患、嚢胞性線維症、ピック病またはレヴィー小体認知症である、項目２に記載の方法。
（項目７）
前記タンパク質分解阻害剤は、プロテアソーム阻害剤とアグレソーム阻害剤との組み合わせである、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記プロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ）である、項目７に記載の方法。
（項目９）
タンパク質分解障害の症状を示している細胞を処理する方法であって、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を前記細胞に投与することを含む、方法。
（項目１０）
前記細胞は、被験体または培養細胞由来の細胞の一つ以上である、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記被験体由来細胞は、骨髄間質細胞、（ＢＭＳＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、リンパ球、毛嚢、血液細胞、他の上皮細胞、骨髄形質細胞、原発性癌細胞、患者由来腫瘍細胞、正常造血幹細胞または癌性造血幹細胞、神経幹細胞、固形腫瘍細胞または星状細胞の一つ以上である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記培養細胞は、ＭＭ．１Ｓ、Ｕ２６６、ＲＰＭＩ８２２６、ＤＯＸ４０、ＭＭ．１Ｒ、ＩＮＡ‐６、ＬＲ５、原発性癌細胞株および株化癌細胞株、原発性正常細胞株および株化正常細胞株の一つ以上である、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
多発性骨髄腫を患っている被験体または多発性骨髄腫にかかりやすい被験体を治療する方法であって、治療を必要とする被験体に、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を投与し、それによって多発性骨髄腫を患っている前記被験体または多発性骨髄腫にかかりやすい前記被験体を治療する、方法。
（項目１４）
被験体におけるタンパク質分解障害治療の効力を評価する方法であって、
一つ以上の治療前表現型を決定すること、
治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を前記被験体に投与すること、および
前記タンパク質分解阻害剤による初期治療期間の後、前記一つ以上の表現型を決定すること
を含み、一つ以上の表現型の調節は、タンパク質分解阻害剤治療の効力を示す、方法。
（項目１５）
アグレソーム阻害剤による治療を受けている被験体の経過をモニタリングする方法であって、
一つ以上の治療前表現型を決定すること、
治療的に有効な量のアグレソーム阻害剤を前記被験体に投与すること、および
前記アグレソーム阻害剤による初期治療期間の後、一つ以上の表現型を決定すること、を含み、表現型の一つ以上の調整は、アグレソーム阻害治療の効力を示す、方法。
（項目１６）
タンパク質分解阻害剤による治療に適するタンパク質分解障害を有する被験体を選択する方法であって、
一つ以上の治療前表現型を決定すること、
治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を前記被験体に投与すること、
前記タンパク質分解阻害剤による初期治療期間の後、前記一つ以上の表現型を決定すること、を含み、
一つ以上の表現型の調節は、前記障害がタンパク質分解阻害剤による治療に対して好ましい臨床応答を示す可能性があることを示す、方法。
（項目１７）
前記タンパク質分解阻害剤は、ｔｕｂａｃｉｎ、ボルテゾミブ、ＳＡＨＡ、Ｒ１１５７７７  ＦＴＩ、１６６ホルミウム‐ＤＯＴＭＰ、三酸化ヒ素、１７‐ＡＡＧ、ＭＧ１３２、ｓａｐｏｊａｒｇｏｎおよびＮＰＩ‐００５２からなる群から選択される、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
前記タンパク質分解阻害剤はＨＤＡＣ６を阻害する、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
前記タンパク質分解阻害剤は、以下の式：
【化１】
2014224158.tif 000007
のもの、およびその薬学的に受容可能な塩および誘導体であり、
ここで、
Ｒ１は、環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐脂肪族；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロ脂肪族；置換または非置換、分岐または非分岐アシル；置換または非置換、分岐または非分岐アリール；置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロアリール；‐ＯＲＡ；‐Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ；‐ＣＯ２ＲＡ；‐ＳＲＡ；‐ＳＯＲＡ；‐ＳＯ２ＲＡ；‐Ｎ（ＲＡ）２；‐ＮＨＣ（Ｏ）ＲＡまたは‐Ｃ（ＲＡ）３であり、各ＲＢの箇所は、独立に、水素、保護基、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アシル部分；アリール部分；ヘテロアリール部分；アルコキシ；アリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロアリールオキシまたはヘテロアリールチオ部分であり、
Ｒ２は、水素；ハロゲン；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐肪族；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロ脂肪族；置換または非置換、分岐または非分岐アシル；置換または非置換、分岐または非分岐アリール；置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロアリール；‐ＯＲＢ；‐Ｃ（＝Ｏ）ＲＢ；‐ＣＯ２ＲＢ；‐ＣＮ；‐ＳＣＮ；‐ＳＲＢ；‐ＳＯＲＢ；‐ＳＯ２ＲＢ；‐ＮＯ２；‐Ｎ（ＲＢ）２；‐ＮＨＣ（Ｏ）ＲＢまたは‐Ｃ（ＲＢ）３であり、各ＲＢの箇所は、独立に、水素、保護基、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アリール部分；アリール部分；ヘテロアリール部分；アルコキシ；アリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロアリールオキシまたはヘテロアリールチオ部分であり、
Ｒ３は、水素；ハロゲン；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐脂肪族；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロ脂肪族；置換または非置換、分岐または非分岐アシル；置換または非置換、分岐または非分岐アリール；置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロアリール；‐ＯＲＣ；‐Ｃ（＝Ｏ）ＲＣ；‐ＣＯ２ＲＣ；‐ＣＮ；‐ＳＣＮ；‐ＳＲＣ；‐ＳＯＲＣ；‐ＳＯ２ＲＣ；‐ＮＯ２；‐Ｎ（ＲＣ）２；‐ＮＨＣ（Ｏ）ＲＣまたは‐Ｃ（ＲＣ）３であり、各ＲＣの箇所は、独立に、水素、保護基、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アシル部分；アリール部分；ヘテロアリール部分；アルコキシ；アリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロアリールオキシまたはヘテロアリールチオ部分である、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０）
前記タンパク質分解阻害剤は、以下の式：
【化２】
2014224158.tif 000008
のもの、およびその薬学的に受容可能な誘導体であり、
Ｒ１は、水素、あるいは脂肪族部分、脂環式部分、ヘテロ脂肪族部分、複素環部分、芳香族部分またはヘテロ芳香族部分であり、
ｎは１〜５であり、
Ｒ２は、水素、保護基、あるいは脂肪族部分、脂環式部分、ヘテロ脂肪族部分、複素環部分、芳香族部分またはヘテロ芳香族部分であり、
Ｘは‐Ｏ‐、‐Ｃ（Ｒ２Ａ）２‐、‐Ｓ‐または‐ＮＲ２Ａ‐であり、Ｒ２Ａは、水素、保護基、あるいは脂肪族部分、脂環式部分、ヘテロ脂肪族部分、複素環部分、芳香族部分またはヘテロ芳香族部分であり、
あるいは、Ｒ２およびＲ２Ａの二つ以上の箇所は、一緒に、脂環式部分または複素環部分、あるいはアリール部分またはヘテロアリール部分を形成し、
Ｒ３は、脂肪族部分、脂環式部分、ヘテロ脂肪族部分、複素環部分、芳香族部分またはヘテロ芳香族部分であり、
Ｙは、水素、あるいは脂肪族部分、脂環式部分、ヘテロ脂肪族部分、複素環部分、芳香族部分またはヘテロ芳香族部分である、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２１）
前記タンパク質分解阻害剤は、以下の式：
【化３】
2014224158.tif 000009
【化４】
2014224158.tif 000010
の一つである、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２）
前記タンパク質分解阻害剤は、式
【化５】
2014224158.tif 000011
の化合物である、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２３）
前記タンパク質分解阻害剤は、以下の式：
【化６】
2014224158.tif 000012
のものである、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
前記タンパク質分解阻害剤は、式
【化７】
2014224158.tif 000013
の化合物であり、
各Ｘは、独立に、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２またはＮＲ３であり、
Ｙは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２またはＮＲ４であり、
Ａｒ１およびＡｒ２は、それぞれ独立にアリール基であり、
Ｒ１は、低級アルキル基またはアリール基であり、
Ｒ２は、水素、低級アルキル基またはアリール基であり、
Ｒ３は、水素、低級アルキル基、アリール基、アルキルカルボニル基、アルコキシカルボニル基またはアミノカルボニル基である、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２５）
項目２４に記載の方法であって、
両方の箇所のＸはＯであり、
ＹはＳであり、
Ａｒ１はフェニルまたは置換フェニルであり、
Ａｒ２はヘテロアリールであり、より好ましくは、必要に応じて、置換オキサゾリルであり、
Ｒ１はフェニルまたは置換フェニルであり、より好ましくは４‐アミノ置換フェニルであり、
Ｒ２は水素である、方法。
（項目２６）
前記タンパク質分解阻害剤は、ＨＤＡＣ６酵素活性を阻害し、それによってアグレソーム媒介タンパク質分解を阻害する、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
前記タンパク質分解阻害剤は、ＨＤＡＣ６のＣ末端アセチル化活性を阻害し、それによってアグレソーム媒介タンパク質分解を阻害する、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記タンパク質分解阻害剤は、アグレソーム阻害剤である、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
前記タンパク質分解阻害剤は、プロテアソーム阻害剤である、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目３０）
前記プロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ、ＭＧ１３２、ｓａｐｏｊａｒｇｏｎまたはＮＰＩ‐００５２の一つ以上である、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記タンパク質分解阻害剤は、ＨＤＡＣ６由来のペプチド、ダイニン、ＨＤＡＣ６のＮ末端ペプチドまたはＨＤＡＣ６のＣ末端ペプチドである、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
前記Ｃ末端ＨＤＡＣ６ペプチドは、細胞の表現型を調節するのに十分である、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記表現型は、特定の治療または化合物への応答としての生物学的後遺症または臨床的後遺症、貧血症、血小板減少症、好中球減少、溶骨性病変、骨痛、免疫不全、腎不全症、高カルシウム血症、成熟形質細胞の異数性、悪性細胞の百分率、チューブリンのアセチル化状態、成熟形質細胞のアポトーシス、成熟形質細胞中のアグレソームのレベル、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６ユビキチン化、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６とダイニンとの会合、成熟形質細胞中のユビキチン化タンパク質の細胞レベル、成熟形質細胞中のカスパーゼ‐８のレベル、成熟形質細胞中のＰＡＲＰのレベル、成熟形質細胞中のチミジン取り込み、拡張ＥＲシスターネ、成熟形質細胞の凝集、成熟形質細胞中の免疫グロブリンの沈着物、非ヒストンタンパク質のアセチル化状態、細胞タンパク質の全体的なユビキチン化、細胞周期調節の状態、壊死、アポトーシスの指標、アポトーシス状態、ラッセル小体形成、嚢胞性線維症膜貫通タンパク質受容体状態、および細胞タンパク質沈着物の変化、あるいは細胞タンパク質または細胞外タンパク質の全体的なアセチル化状態である、項目１４から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目３４）
アグレソームのレベル、血小板減少症、好中球減少症、溶骨性病変、骨痛、免疫不全、腎不全症、高カルシウム血症、成熟形質細胞の異数性、悪性細胞の百分率、成熟形質細胞中のチミジン取り込み、成熟形質細胞中の完全長カスパーゼ‐８のレベル、成熟形質細胞中の完全長ＰＡＲＰのレベル、または成熟形質細胞の凝集の一つ以上の減少は、前記治療が有効であることを示す、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
チューブリンのアセチル化状態、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６ユビキチン化、カスパーゼ‐８の切断形のレベル、ＰＡＲＰの切断形のレベル、壊死、非ヒストンタンパク質のアセチル化状態、細胞ユビキチン化レベル、アポトーシス、アポトーシスの指標、細胞周期調節解除、または成熟形質細胞中の免疫グロブリンの沈着物の増加は、前記治療が有効であることを示す、項目３３に記載の方法。
（項目３６）
生物学的試料を被験体から入手することをさらに含む、項目１から１６に記載の方法。
（項目３７）
前記タンパク質分解阻害剤による第二の治療期間の後、前記被験体の表現型を決定することをさらに含む、項目１から１６に記載の方法。
（項目３８）
第二の生物学的試料を前記被験体から入手することをさらに含む、項目１から１６に記載の方法。
（項目３９）
治療的に有効な量の一つ以上の追加のタンパク質分解阻害剤を前記被験体または細胞に投与することをさらに含む、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目４０）
前記少なくとも一つの追加のタンパク質分解阻害剤は、アグレソーム阻害剤である、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記少なくとも一つの追加のタンパク質分解阻害剤はプロテアソーム阻害剤である、項目３９に記載の方法。
（項目４２）
前記追加のタンパク質分解阻害剤は、ボルテゾミブ、ｔｕｂａｃｉｎ、ＭＧ１３２、ｓａｐｏｊａｒｇｏｎまたはＮＰＩ‐００５２の一つ以上である、項目３９に記載の方法。
（項目４３）
前記細胞または被験体の前記治療または経過をモニタリングすることをさらに含む、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目４４）
前記タンパク質分解阻害剤を入手することをさらに含む、項目１から１６の任意のものに記載の方法。
（項目４５）
化学療法薬剤、放射線薬剤、ホルモン薬剤、生物薬剤または抗炎症薬剤の一つ以上を前記被験体に同時投与することをさらに含む、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目４６）
前記化学療法薬剤は、タモキシフェン、トラスツザマブ、ラロキシフェン、ドキソルビシン、フルオロウラシル／５‐ｆｕ、パミドロネート二ナトリウム、アナストロゾール、エクセメスタン、シクロホスファミド、エピルビシン、レトロゾール、トレミフェン、フルベストラント、フルオキシメステロン、トラスツズマブ、メトトレキセート、メガストロールアセテート、ドセタキセル、パクリタキセル、テストラクトン、アジリジン、ビンブラスチン、カペシタビン、ゴセレリンアセテート、ゾレドロン酸、タキソール、ビンブラスチンまたはビンクリスチンである、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記治療前表現型または治療後表現型の一つ以上を標準表現型と比較することをさらに含む、項目１から１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目４８）
前記標準表現型は、参照細胞または参照細胞集団における対応する表現型である、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記参照細胞は、前記被験体由来細胞、培養細胞、前記被験体由来培養細胞、または治療前前記被験体由来細胞の一つ以上である、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記被験体由来細胞は、骨髄間質細胞、（ＢＭＳＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、リンパ球、毛嚢、血球、他の上皮細胞、骨髄形質細胞、原発性癌細胞、患者由来腫瘍細胞、正常造血幹細胞または癌性造血幹細胞、神経幹細胞、固形腫瘍細胞または星状細胞である、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
細胞におけるアグレソーム媒介タンパク質分解を阻害する方法であって、前記細胞をアグレソーム阻害剤と接触させることを含む、方法。
（項目５２）
前記アグレソームタンパク質分解は、ＨＤＡＣ６によって媒介される、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記細胞におけるプロテアソームタンパク質分解を阻害することをさらに含む、項目５１に記載の方法。
（項目５４）
前記アグレソーム阻害剤は、ｔｕｂａｃｉｎ、項目１６に記載の化合物、または項目４７に記載の方法によって同定される化合物である、項目５１に記載の方法。
（項目５５）
細胞におけるタンパク質分解を阻害する候補化合物を同定する方法であって、
アグレソーム形成を示す細胞を候補化合物と接触させること、および
前記細胞の表現型を決定すること、
を含み、表現型の調節は前記化合物の前記効力を示している、方法。
（項目５６）
前記候補分子は、低分子、ペプチドまたは核酸の一つ以上である、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記核酸は、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡまたはＤＮＡである、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
前記ペプチドは、ＨＤＡＣ６由来のペプチド、ＨＤＡＣ６のダイニン結合ドメイン、ＨＤＡＣ６のＴＤＡＣドメイン、ＨＤＡＣ６のＮ末端またはＨＤＡＣ６のＣ末端である、項目５５に記載の方法。
（項目５９）
前記低分子は、多重チャネルアレイライブラリに含まれる、項目５５に記載の方法。
（項目６０）
前記表現型を決定するステップは、画像ベースの多次元スクリーニングによる、項目５５に記載の方法。
（項目６１）
試験化合物を評価するための方法であって、
アグレソーム形成を示す細胞を試験化合物と接触させること、および
接触の後に前記細胞を評価することを含み、一つ以上の表現型の調節の基準値に対する相関は、前記試験化合物がタンパク質分解障害治療薬として有用であり得ることを示している、方法。
（項目６２）
前記タンパク質分解阻害剤による初期治療期間の後に前記細胞の表現型を決定することをさらに含む、項目５１から６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６３）
前記表現型は、貧血症、血小板減少、好中球減少、溶骨性病変、骨痛、免疫不全、腎不全症、高カルシウム血症、成熟形質細胞の異数性、悪性細胞の百分率、チューブリンのアセチル化状態、成熟形質細胞のアポトーシス、アグレソームのレベル、成熟形質細胞中のアグレソームのレベル、ＨＤＡＣ６ユビキチン化、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６ユビキチン化、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６とダイニンとの会合、成熟形質細胞中のユビキチン化タンパク質の細胞レベル、成熟形質細胞中のカスパーゼ‐８のレベル、成熟形質細胞中のＰＡＲＰのレベル、成熟形質細胞中のチミジン取り込み、拡張ＥＲシスターネ、成熟形質細胞の凝集、成熟形質細胞中の免疫グロブリンの沈着物、非ヒストンタンパク質のアセチル化状態、細胞タンパク質の全体的なユビキチン化、細胞周期調節の状態、壊死、アポトーシスの指標、アポトーシス状態、ラッセル小体形成、嚢胞性線維症膜貫通タンパク質受容体状態、および細胞タンパク質沈着物の変化、または細胞タンパク質および細胞外タンパク質の全体的なアセチル化状態を含む、特定の治療または化合物への応答としての生物学的後遺症または臨床的後遺症である、項目５１から６１に記載の方法。
（項目６４）
貧血症、アグレソームのレベル、血小板減少、好中球減少、溶骨性病変、骨痛、免疫不全症、腎不全症、高カルシウム血症、成熟形質細胞の異数性、悪性細胞の百分率、成熟形質細胞中のチミジン取り込み、成熟形質細胞中の完全長カスパーゼ‐８のレベル、成熟形質細胞中の完全長ＰＡＲＰのレベルまたは成熟形質細胞の凝集の一つ以上の減少は、前記治療が有効であることを示している、項目６３に記載の方法。
（項目６５）
チューブリンのアセチル化状態、全体的なアセチル化状態、非ヒストンタンパク質上のアセチル化状態、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６ユビキチン化、カスパーゼ‐８の切断形のレベル、ＰＡＲＰの切断形のレベル、壊死、非ヒストンタンパク質のアセチル化状態、細胞ユビキチン化レベル、アポトーシス、アポトーシスの指標、細胞周期調節解除、または成熟形質細胞中の免疫グロブリンの沈着物の増加は、前記治療が有効であることを示している、項目６３に記載の方法。
（項目６６）
前記評価することは、画像ベースの多次元スクリーニングによる、項目６３に記載の方法。
（項目６７）
前記試験化合物は、低分子、ペプチドまたは核酸の一つ以上である、項目６１に記載の方法。
（項目６８）
前記被験体または前記細胞はヒトである、項目１から６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６９）
被験体におけるタンパク質分解障害を治療するためのキットであって、
項目９１に記載の化合物、あるいはその薬学的に受容可能なエステル、塩およびプロドラッグ、および
使用説明書
を含むキット。
（項目７０）
前記化合物は、治療的に有効な量の前記化合物と薬学的に受容可能なキャリアとを含む薬学的組成物として存在する、項目６９に記載のキット。
（項目７１）
治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤および薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤を含む包装された組成物であって、前記組成物は、タンパク質分解障害を患っている被験体またはタンパク質分解障害にかかりやすい被験体を治療するために調合され、タンパク質分解障害を患っている被験体またはタンパク質分解障害にかかりやすい被験体を治療する説明書とともに包装される、組成物。
（項目７２）
ＨＤＡＣ６由来のポリペプチドをコードする単離された核酸分子であって、前記ポリペプチドは、アグレソームを示す細胞において発現されると、タンパク質分解の阻害を引き起こす、核酸分子。
（項目７３）
前記核酸は、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０をコードする核酸由来である、項目７２に記載の単離された核酸。
（項目７４）
ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０と少なくとも６０％同一である、項目７２または７３に記載の単離された核酸。
（項目７５）
ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０と少なくとも８０％同一である、項目７２または７３に記載の単離された核酸。
（項目７６）
ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０と少なくとも９０％同一である、項目７２に記載の単離された核酸。
（項目７７）
ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０と少なくとも９９．９％同一である、項目７２に記載の単離された核酸。
（項目７８）
前記ポリペプチドは、アグレソーム媒介タンパク質分解を阻害する、ＨＤＡＣ６由来の単離されたポリペプチド。
（項目７９）
項目７８に記載の単離されたポリペプチドであって、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０によって同定されるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
（項目８０）
前記ペプチドは、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０のいずれか一つ以上と少なくとも約６０％同一である、項目７８に記載の単離されたポリペプチド。
（項目８１）
前記ペプチドは、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０のいずれか一つ以上と少なくとも約８０％同一である、項目７８に記載の単離されたポリペプチド。
（項目８２）
前記ペプチドは、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０のいずれか一つ以上と少なくとも約９０％同一である、項目７８に記載の単離されたポリペプチド。
（項目８３）
前記ペプチドは、ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０のいずれか一つ以上と少なくとも約９９．９％同一である、項目７８に記載の単離されたポリペプチド。
（項目８４）
ＨＤＡＣ６のＣ末端、ＨＤＡＣ６のアミノ酸４３９〜５０３、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０と少なくとも約８０％の配列同一性を有するポリペプチドをコードすることができるポリヌクレオチドを含み、タンパク質分解を阻害する能力を特徴とする、ベクター。
（項目８５）
タンパク質分解障害または細胞増殖障害を治療する方法であって、治療を必要とする被験体に、ＨＤＡＣ６に特異的に結合し、不活性化するのに有効な量のＲＮＡを投与することを含む、方法。
（項目８６）
前記ＲＮＡは、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡまたはリボザイムである、項目８５に記載の方法。
（項目８７）
ＨＤＡＣまたはＴＤＡＣ阻害剤を同定する方法であって、
細胞を提供するステップ、
試験薬剤を提供するステップ、
前記細胞を試験薬剤と接触させるステップ、
前記細胞をアセチル化チューブリンに特異的な第一の一次抗体で処理するステップ、
前記細胞をアセチル化リジンに特異的な第二の一次抗体で処理するステップ、
前記細胞を前記第一の一次抗体に特異的であり、固有のフルオロフォアで標識された第一の二次抗体で処理するステップ、
前記細胞を前記第二の一次抗体に特異的であり、固有のフルオロフォアで標識された第二の二次抗体で処理するステップであって、前記フルオロフォアは、前記第一の二次抗体の前記フルオロフォアと異なるステップ、
前記二つのフルオロフォアによって前記細胞を画像化するステップ、および
ＴＤＡＣとＨＤＡＣとの両方の阻害の程度を定量するステップ、
を含む、方法。
（項目８８）
前記細胞は、ヒト癌細胞株由来である、項目８７に記載の方法。
（項目８９）
前記細胞は、ヒト多発性骨髄腫細胞株由来である、項目８７に記載の方法。
（項目９０）
項目７８に記載の方法を用いてＨＤＡＣ阻害剤またはＴＤＡＣ阻害剤として同定された化合物。
（項目９１）
以下の式：
【化８】
2014224158.tif 000014
の化合物、およびその薬学的に受容可能な塩および誘導体であって、
ここで、
Ｒ１は、環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐脂肪族；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロ脂肪族；置換または非置換、分岐または非分岐アシル；置換または非置換、分岐または非分岐アリール；置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロアリール；‐ＯＲＡ；‐Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ；‐ＣＯ２ＲＡ；‐ＳＲＡ；‐ＳＯＲＡ；‐ＳＯ２ＲＡ；‐Ｎ（ＲＡ）２；‐ＮＨＣ（Ｏ）ＲＡまたは‐Ｃ（ＲＡ）３であり、各ＲＢの箇所は、独立に、水素、保護基、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アシル部分；アリール部分；ヘテロアリール部分；アルコキシ；アリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロアリールオキシ；またはヘテロアリールチオ部分であり、
Ｒ２は、水素；ハロゲン；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐肪族；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロ脂肪族；置換または非置換、分岐または非分岐アシル；置換または非置換、分岐または非分岐アリール；置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロアリール；‐ＯＲＢ；‐Ｃ（＝Ｏ）ＲＢ；‐ＣＯ２ＲＢ；‐ＣＮ；‐ＳＣＮ；‐ＳＲＢ；‐ＳＯＲＢ；‐ＳＯ２ＲＢ；‐ＮＯ２；‐Ｎ（ＲＢ）２；‐ＮＨＣ（Ｏ）ＲＢまたは‐Ｃ（ＲＢ）３であり、各ＲＢの箇所は、独立に、水素、保護基、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アシル部分；アリール部分；ヘテロアリール部分；アルコキシ；アリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロアリールオキシ；またはヘテロアリールチオ部分であり、
Ｒ３は、水素；ハロゲン；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐脂肪族；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロ脂肪族；置換または非置換、分岐または非分岐アシル；置換または非置換、分岐または非分岐アリール；置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロアリール；‐ＯＲＣ；‐Ｃ（＝Ｏ）ＲＣ；‐ＣＯ２ＲＣ；‐ＣＮ；‐ＳＣＮ；‐ＳＲＣ；‐ＳＯＲＣ；‐ＳＯ２ＲＣ；‐ＮＯ２；‐Ｎ（ＲＣ）２；‐ＮＨＣ（Ｏ）ＲＣまたは‐Ｃ（ＲＣ）３であり、各ＲＣの箇所は、独立に、水素、保護基、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アシル部分；アリール部分；ヘテロアリール部分；アルコキシ；アリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロアリールオキシまたはヘテロアリールチオ部分である、化合物。
（項目９２）
Ｒ３は、
【化９】
2014224158.tif 000015
である、項目９１に記載の化合物。
（項目９３）
以下の式：
【化１０】
2014224158.tif 000016
のものであり、
ｎは、１と５との間にあって１と５とを含む整数であり、
Ｒ３’の各箇所は、独立に、水素；ハロゲン；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐脂肪族；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロ脂肪族；置換または非置換、分岐または非分岐アシル；置換または非置換、分岐または非分岐アリール；置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロアリール；‐ＯＲＣ；‐Ｃ（＝Ｏ）ＲＣ；‐ＣＯ２ＲＣ；‐ＣＮ；‐ＳＣＮ；‐ＳＲＣ；‐ＳＯＲＣ；‐ＳＯ２ＲＣ；‐ＮＯ２；‐Ｎ（ＲＣ）２；‐ＮＨＣ（Ｏ）ＲＣまたは‐Ｃ（ＲＣ）３であり、ＲＣの各箇所は、独立に、水素、保護基、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アシル部分；アリール部分；ヘテロアリール部分；アルコキシ；アリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロアリールオキシ；またはヘテロアリールチオ部分である、項目９１に記載の化合物。
（項目９４）
式
【化１１】
2014224158.tif 000017
のものである、項目９１に記載の化合物。
（項目９５）
以下の式：
【化１２】
2014224158.tif 000018
の一つである、項目９４に記載の化合物。
（項目９６）
以下の式：
【化１３】
2014224158.tif 000019
の一つである、項目９５に記載の化合物。
（項目９７）
以下の式：
【化１４】
2014224158.tif 000020
の一つである、項目９４に記載の化合物。
（項目９８）
各Ｒ３’は、独立に、ハロゲン、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシル、アルコキシ、チオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、‐ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルケニル、Ｃ１〜Ｃ６アルキニル、またはアシルである、項目９３、９５、９６または９７に記載の化合物。
（項目９９）
Ｒ２は以下の式：
【化１５】
2014224158.tif 000021
のものであり、
ｍは０と８との間にあって０と８とを含み、好ましくは、１と６との間にあって１と６とを含む整数であり、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、ＮＨまたはＮＲ２’であり、
Ｒ２’は、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アシル、置換または非置換アリール、あるいは置換または非置換ヘテロアリールである、項目９１に記載の化合物。
（項目１００）
ＸはＯである、項目９９に記載の化合物。
（項目１０１）
ＸはＳである、項目９９に記載の化合物。
（項目１０２）
ｍは１である、項目９９に記載の化合物。
（項目１０３）
Ｒ２’は、置換または非置換ヘテロアリールである、項目９９に記載の化合物。
（項目１０４）
Ｒ２は、以下：
【化１６−１】
2014224158.tif 000022
の一つから選択される、項目９９に記載の化合物。
（項目１０５）
Ｒ２は、
【化１６−２】
2014224158.tif 000023
である、項目９１に記載の化合物。
（項目１０６）
Ｒ１は、以下の式：
【化１７】
2014224158.tif 000024
のものであり、
Ｒ１’は
【化１８】
2014224158.tif 000025
であり、
Ｙは、ＮＨまたはＯであり、
Ｌは、リンカー部分であり、
Ａは、ヒストンデアセチラーゼを阻害する官能基を含む、
項目９１に記載の化合物。
（項目１０７）
Ｒ１’は、
【化１９】
2014224158.tif 000026
である、項目１０６に記載の化合物。
（項目１０８）
以下の式：
【化２０】
2014224158.tif 000027
【化２１】
2014224158.tif 000028
の一つである、項目９１に記載の化合物。
（項目１０９）
以下の式：
【化２２】
2014224158.tif 000029
の一つである、項目９１に記載の化合物。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】図１は、多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞株におけるＨＤＡＣ６の発現を示す。ＭＭ細胞株を溶解させ、細胞可溶化物全体をウエスタンブロッティングに付してＨＤＡＣ６のタンパク質発現を評価した。図１は、ＭＭ細胞株（レーン１〜７）がＨＤＡＣ６タンパク質を構成発現することを示している。
【図２】図２は、ｔｕｂａｃｉｎによるＭＭ細胞株におけるアセチル化α‐チューブリンの誘導を示す。ＭＭ．１Ｓ、ＲＰＭＩ８２２６およびＩＮＡ‐６細胞をｔｕｂａｃｉｎ（０〜５μＭ）とともに２４時間培養した。抗アセチル化リジン抗体を用いるウエスタンブロッティングによって、α‐チューブリンのアセチル化を評価した。図２は、ｔｕｂａｃｉｎが用量に依存してα‐チューブリンのアセチル化を特異的に誘導することを示している。
【図３Ａ】図３は、ＭＭ細胞株におけるｔｕｂａｃｉｎの増殖阻害効果を示す。ＭＭ細胞株をｔｕｂａｃｉｎ（１．２５〜２０μＭ）とともに４８時間培養した。ＭＴＴアッセイ（図３Ａ）および３Ｈ‐チミジン取り込み（図３Ｂ）によってｔｕｂａｃｉｎの増殖阻害効果を評価した。図３は、ＭＭ細胞株におけるｔｕｂａｃｉｎの単剤としての用量依存性増殖阻害効果を示している。
【図３Ｂ】図３は、ＭＭ細胞株におけるｔｕｂａｃｉｎの増殖阻害効果を示す。ＭＭ細胞株をｔｕｂａｃｉｎ（１．２５〜２０μＭ）とともに４８時間培養した。ＭＴＴアッセイ（図３Ａ）および３Ｈ‐チミジン取り込み（図３Ｂ）によってｔｕｂａｃｉｎの増殖阻害効果を評価した。図３は、ＭＭ細胞株におけるｔｕｂａｃｉｎの単剤としての用量依存性増殖阻害効果を示している。
【図４】図４は、ＩＬ‐６がｔｕｂａｃｉｎの効果を克服しないことを示している。ＭＭ．１Ｓ細胞をＩＬ‐６存在下（５〜２０ｎｇ／ｍｌ）または非存在下でｔｕｂａｃｉｎ（１．２５〜５μＭ）とともに４８時間培養した。３Ｈ‐チミジン取り込みによってＤＮＡ合成を決定した。図４は、ＭＭの主要な成長因子の一つであるＩＬ‐６がｔｕｂａｃｉｎの増殖阻害効果を克服しなかったことを示している。
【図５】図５は、タンパク質分解経路と、タンパク質分解障害の治療においてＶｅｌｃａｄｅをｔｕｂａｃｉｎと組み合わせることの科学的根拠とを図によって示す。ユビキチン化されたミスフォールディングタンパク質／変性タンパク質を分解する二つの経路がある。前者はプロテアソーム経路、後者はアグレソーム経路であり、後者はＨＤＡＣ６活性を必要とする。従って、両方の経路を特異的阻害剤ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））とｔｕｂａｃｉｎとによって阻害すると、細胞毒性のミスフォールディングタンパク質／変性タンパク質の蓄積が誘導された。
【図６】図６は、ｔｕｂａｃｉｎがＭＭ細胞株におけるＶｅｌｃａｄｅ誘導細胞毒性を著しく強めることを示す。ＭＭ．１Ｓ（Ａ）およびＲＰＭＩ８２２６（Ｂ）細胞をｔｕｂａｃｉｎ存在下（５および１０μＭ）または非存在下でＶｅｌｃａｄｅ（５および１０ｎＭ）とともに２４時間培養した。ＭＴＴアッセイによって細胞毒性を評価した。図６は、ｔｕｂａｃｉｎがＶｅｌｃａｄｅによって誘導される細胞毒性をどちらの細胞株においても著しく増大させた（ｐ＜０．０１）ことを示している。
【図７】図７は、ＭＭ細胞においてＶｅｌｃａｄｅが誘発するＧ２／Ｍ停止をｔｕｂａｃｉｎが阻害することを示す。ＭＭ．１Ｓ細胞をｔｕｂａｃｉｎ存在下（５μＭ）または非存在下でＶｅｌｃａｄｅ（５ｎＭ）とともに２４時間培養した。プロピジウムヨウ素染色法を用いるフローサイトメトリー解析によって細胞周期を調べた。ｔｕｂａｃｉｎは、ＭＭ．１Ｓ細胞において、Ｖｅｌｃａｄｅが誘発するｐ２１Ｃｉｐ１のＧ２／Ｍ停止関連下方制御を著しく阻害し、サブＧ０／Ｇ１期（アポトーシス）を誘導する。
【図８】図８は、カスパーゼおよびＰＡＲＰ切断がＶｅｌｃａｄｅとｔｕｂａｃｉｎとの組み合わせによって誘導されることを示している。ＭＭ．１Ｓ細胞およびＲＰＭＩ８２２６細胞をｔｕｂａｃｉｎの存在下（５μＭ）または非存在下でＶｅｌｃａｄｅ（５ｎＭ）とともに２４時間培養した。特異的抗体を用いるウエスタンブロッティングによってカスパーゼ‐８／９／３およびＰＡＲＰ切断を評価した。図８は、Ｖｅｌｃａｄｅとｔｕｂａｃｉｎとの組み合わせが、どちらの細胞株においてもカスパーゼ／ＰＡＲＰ切断を著しく増大した（誘起する）ことを示している。
【図９】図９は、ｔｕｂａｃｉｎがＭＭ患者腫瘍細胞におけるＶｅｌｃａｄｅ誘導細胞毒性を著しく強めることを示す。精製したＭＭ患者由来腫瘍細胞をｔｕｂａｃｉｎの存在下（５μＭ）または非存在下でＶｅｌｃａｄｅ（５および１０ｎＭ）とともに２４時間培養した。ＭＴＴアッセイによって細胞毒性を評価した。図９は、ｔｕｂａｃｉｎが患者腫瘍細胞においてＶｅｌｃａｄｅが誘発する細胞毒性を著しく増大する（ｐ＜０．０１）ことを示している。
【図１０】図１０は、Ｖｅｌｃａｄｅとｔｕｂａｃｉｎとの複合治療が正常末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において細胞毒性を誘発しないことを示している。３名の健常志願者由来ＰＢＭＣをｔｕｂａｃｉｎの存在下（５μＭ）または非存在下でＶｅｌｃａｄｅ（５〜２０ｎＭ）とともに２４時間培養した。ＭＴＴアッセイによって細胞毒性を評価した。図１０は、Ｖｅｌｃａｄｅとｔｕｂａｃｉｎとの複合治療がＰＢＭＣにおいて細胞毒性を誘発しなかったことを示している。
【図１１】図１１は、ｔｕｂａｃｉｎが骨髄微細環境においてＭＭ．１Ｓ細胞増殖を阻害することを示す。骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）を添加して、またはＢＭＳＣを添加せずに、ＭＭ．１Ｓ細胞をＶｅｌｃａｄｅの存在下（２．５および５ｎＭ）または非存在下でｔｕｂａｃｉｎ（１．２５〜５μＭ）とともに２４時間培養した。３Ｈ‐チミジン取り込みによって細胞増殖を評価した。図１１は、ｔｕｂａｃｉｎがＢＭＳＣの存在下でもＭＭ．１Ｓ細胞増殖を著しく阻害することを示している。さらに、ｔｕｂａｃｉｎはＶｅｌｃａｄｅの細胞毒性を一段と増大した。
【図１２】図１２は、ｔｕｂａｃｉｎがＭＭ細胞中のα‐チューブリンのアセチル化を特異的に誘導することを示している。（Ａ）ｔｕｂａｃｉｎおよび不活性アナログｎｉｌｔｕｂａｃｉｎの化学構造。（Ｂ）ＭＭ細胞株中のＨＤＡＣ６のベースライン発現のウエスタンブロット。（Ｃ）ＭＭ．１ＳおよびＲＰＭＩ８２２６細胞をｔｕｂａｃｉｎ存在下（２．５および５μＭ）または非存在下で２４時間培養した。（Ｄ）ＲＰＭＩ８２２６細胞をｔｕｂａｃｉｎの存在下（５μＭ）で表示の時間培養した。細胞可溶化物全体を、抗Ａｃリジン抗体を用いるウエスタンブロットに付した。抗α‐チューブリンによる免疫ブロッティングを用いてタンパク質担持量が等しいことを確認する。（Ｅ）ＭＭ．１ＳおよびＲＰＭＩ８２２６細胞をＳＡＨＡの存在下（２．５および５μＭ）または非存在下で２４時間培養した。細胞可溶化物全体を、抗Ａｃリジン抗体を用いるウエスタンブロッティングに付した。ＳＡＨＡは、ｔｕｂａｃｉｎとは対照的に、ヒストンＨ３およびＨ４のアセチル化を著しく誘発する。
【図１３】図１３は、ｔｕｂａｃｉｎがカスパーゼの活性化によって細胞毒性を誘導することを示している。ＭＭ．１Ｓ（黒丸）、ＭＭ．１Ｒ（黒丸）、Ｕ２６６（黒三角）、ＲＰＭＩ８２２６（黒三角）、ＲＰＭＩ‐ＬＲ５（黒四角）およびＲＰＭＩ‐Ｄｏｘ４０（黒四角）細胞をｔｕｂａｃｉｎの存在下（１．２５〜２０μＭ）で４８時間（Ａ）および７２時間（Ｂ）培養した。（Ｃ）ＰＢＭＣ形健常志願者（ｎ＝３）をｔｕｂａｃｉｎの存在下（２．５〜２０μＭ）で４８時間培養した。ＭＴＴアッセイによって細胞増殖を評価し、データは４回の培養の平均（±ＳＤ）を表す。（Ｄ）ＭＭ．１ＳおよびＲＰＭＩ８２２６細胞をｔｕｂａｃｉｎ（１０μＭ）とともに表示の時間培養した。抗カスパーゼ‐８抗体およびＰＡＲＰ抗体を用いて細胞可溶化物全体をウエスタンブロッティングに付した。
【図１４】図１４は、ｔｕｂａｃｉｎがＨＤＡＣ６とダイニンとの結合を阻害し、ボルテゾミブと併用されると、顕著なポリユビキチン化タンパク質の蓄積を誘導することを示している。（Ａ）ボルテゾミブが誘導する細胞毒性をｔｕｂａｃｉｎが強めるとする仮説根拠（Ｋａｗａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ（１７）から適用）。（Ｂ）ＭＭ．１Ｓ細胞をｔｕｂａｃｉｎ（２．５および５μＭ）とともに８時間培養した。細胞可溶化物全量を抗Ｕｂ抗体で免疫沈降した。免疫沈降物を、抗ＨＤＡＣ６抗体を用いるウエスタンブロッティングに付した。（Ｃ）ＭＭ．１Ｓ細胞をｔｕｂａｃｉｎ（２．５および５μＭ）とともに８時間培養した。細胞可溶化物全量を抗ダイニン抗体で免疫沈降した。次に、免疫沈降物を抗ＨＤＡＣ６抗体および抗ダイニン抗体を用いるウエスタンブロッティングに付した。（Ｄ）ＭＭ．１Ｓ細胞およびＲＰＭＩ細胞をｔｕｂａｃｉｎ（２．５および５μＭ）とともに２４時間培養した。細胞可溶化物全体を、抗Ｕｂ抗体を用いるウエスタンブロットに付した。（Ｅ）ＭＭ．１Ｓ細胞およびＲＰＭＩ８２２６細胞をｔｕｂａｃｉｎ（Ｔ：５μＭ）および／またはボルテゾミブ（Ｂ：５ｎＭ）とともに１２時間培養した。細胞可溶化物全体を、抗Ｕｂ抗体を用いるウエスタンブロッティングに付した。
【図１５】図１５は、ｔｕｂａｃｉｎとボルテゾミブとがＭＭ細胞株において相乗効果的な抗腫瘍活性を誘導することを示している。（Ａ）ＭＭ．１Ｓ細胞およびＲＰＭＩ８２２６ＭＭ細胞を対照培地（白四角）中、ならびに５ｎＭ（黒四角）または１０ｎＭ（黒四角）ボルテゾミブとともに、ｔｕｂａｃｉｎの存在下（５μＭ）または非存在下で２４時間培養し、ＭＴＴアッセイによって細胞毒性を評価した。（Ｂ）ＭＭ．１Ｓ細胞をｔｕｂａｃｉｎ（５μＭ）および／またはボルテゾミブ（５ｎＭ）存在下または非存在下で２４時間培養し、ＰＩ染色を用いるフローサイトメトリーによって細胞周期プロフィルを評価した。（Ｃ）ＭＭ．１Ｓ細胞をｔｕｂａｃｉｎ（Ｔ：５μＭ）および／またはボルテゾミブ（Ｂ：５ｎＭ）の存在下または非存在下で２４時間培養し、細胞可溶化物全体を抗ｐ２１Ｃｉｐ１抗体、ｐ‐ＪＮＫ（ＳＡＰＫ）抗体、カスパーゼ‐９抗体、カスパーゼ‐８抗体、カスパーゼ‐３抗体およびＰＡＲＰ抗体を用いるウエスタンブロッティングに付した。ＭＭ．１Ｓ細胞をＨＤＡＣ６  ｓｉＲＮＡで過渡トランスフェクションした。次に、細胞を５ｎＭボルテゾミブ（黒四角）の存在下または非存在下で、（Ｄ）抗ＨＤＡＣ６抗体を用いるウエスタンブロッティングまたは（Ｅ）ＭＴＴアッセイに付した。ＭＭ．１Ｓ細胞をｎｉｌｔｕｂａｃｉｎ（２．５および５μＭ）またはｔｕｂａｃｉｎ（２．５および５μＭ）とともに２４時間培養した。次に、細胞を５ｎＭボルテゾミブの存在下または非存在下で（Ｆ）Ａｃ‐Ｌｙｓ抗体を用いるウエスタンブロッティングまたは（Ｇ）ＭＴＴアッセイに付した（黒四角）。データは４回の培養の平均（±ＳＤ）を表す。
【図１６】図１６は、ｔｕｂａｃｉｎがＰＢＭＣへの細胞毒性なしに患者ＭＭ細胞中のボルテゾミブ誘起細胞毒性を相乗効果的に強めることを示している。３名のＭＭ患者由来ＢＭＰＣ（Ａ、Ｂ，Ｃ）およびＰＢＭＣ（Ｄ）を対照培地（白四角）中ならびに１０ｎＭ（黒四角）または２０ｎＭ（黒四角）ボルテゾミブを添加してｔｕｂａｃｉｎ存在下（５μＭ）または非存在下で２４時間培養し、ＭＴＴアッセイによって細胞毒性を評価した。（Ｅ）ＭＭ患者ＰＢＭＣをｔｕｂａｃｉｎ（５μＭ）の存在下または非存在下で培養した。細胞可溶化物全体を抗ＨＤＡＣ６抗体、Ａｃ‐Ｌｙｓ抗体またはα‐チューブリン抗体を用いるウエスタンブロッティングに付した。
【図１７】図１７は、ｔｕｂａｃｉｎがパラクリンＭＭ細胞増殖を阻害することを示している。ＭＭ．１Ｓ（Ａ）およびＲＰＭＩ８２２６（Ｂ）細胞を、対照培地（白四角）中ならびに１．２５μＭ（黒四角）、２．５μＭ（黒四角）、または５μＭ（黒四角）ｔｕｂａｃｉｎを添加して、ボルテゾミブの（２．５ｎＭ、５ｎＭ）存在下または非存在下でＢＭＳＣ被覆または非被覆プレート中で２４時間培養した。［３Ｈ］‐チミジン取り込みによってＤＮＡ合成を評価し、データは４回の培養の平均（±ＳＤ）を表す。
【図１８】図１８は、ｔｕｂａｃｉｎ単独、ボルテゾミブ単独、およびｔｕｂａｃｉｎとボルテゾミブとの組み合わせがＭＭ．１Ｓ細胞およびＲＰＭＩ細胞におけるタンパク質異化の強力な阻害剤であることを示している。
【図１９】図１９は、アセチル化チューブリンのハイスループット免疫蛍光定量アッセイの概略を結果の画像とともに示している。
【図２０】図２０は、ＭＭ．１Ｓ細胞におけるｔｕｂａｃｉｎおよびＬＢＨ５８９とボルテゾミブとの毒性および相乗効果を示す。
【図２１】図２１は、ＲＰＭＩ‐８２２６細胞でのｔｕｂａｃｉｎおよびＬＢＨ５８９とボルテゾミブとの毒性ならびに相乗効果を示す。
【図２２】図２２は、サイトブロットアッセイを用いる、アセチル化リジンと対比したアセチル化チューブリンに対するＬＢＨ５８９およびｔｕｂａｃｉｎの効果を示す。
【図２３】図２３は、ｔｕｂａｃｉｎの化学構造を示す。
【図２４】図２４は、骨髄腫細胞株（Ａ）ＭＭ．１Ｓ細胞および（Ｂ）ＲＰＭＩ細胞におけるｔｕｂａｃｉｎとＶｅｌｃａｄｅとの間の相乗効果を示す。
【図２５】図２５は、リジンアセチル化と対比したチューブリンアセチル化におけるｔｕｂａｃｉｎの特異性を示している。
【図２６】図２６は、デス（ヒドロメチル）‐ｔｕｂａｃｉｎ（ＤＨＭ‐ｔｕｂａｃｉｎ）の化学構造を示す。ｔｕｂａｃｉｎのフェニル環からヒドロキシメチル置換基が除去されている。
【図２７】図２７は、骨髄腫細胞株（Ａ）ＭＭ．１Ｓ細胞および（Ｂ）ＲＰＭＩ細胞におけるＤＨＭ‐ｔｕｂａｃｉｎとＶｅｌｃａｄｅとの間の相乗効果を示す。
【図２８】図２８は、リジンアセチル化と対比したチューブリンアセチル化におけるＤＨＭ‐ｔｕｂａｃｉｎの特異性を示す。
【図２９】図２９は、ＮＫＩ‐８１‐１の化学構造を示す。
【図３０】図３０は、骨髄腫細胞株（Ａ）ＭＭ．１Ｓ細胞および（Ｂ）ＲＰＭＩ細胞におけるＮＫＩ‐８１‐１とＶｅｌｃａｄｅとの間の相乗効果を示す。
【図３１】図３１は、リジンアセチル化と対比したチューブリンアセチル化におけるＮＫＩ‐８１‐１の特異性を示す。
【図３２】図３２は、ＮＫＩ‐９４‐１の化学構造を示す。
【図３３】図３３は、骨髄腫細胞株（Ａ）ＭＭ．１Ｓ細胞および（Ｂ）ＲＰＭＩ細胞におけるＮＫＩ‐９４‐１とＶｅｌｃａｄｅとの間の相乗効果を示す。
【図３４】図３４は、リジンアセチル化と対比したチューブリンアセチル化におけるＮＫＩ‐９４‐１の特異性を示す。
【図３５】図３５は、ＮＫＩ‐５９‐１の化学構造を示す。
【図３６】図３６は、骨髄腫細胞株（Ａ）ＭＭ．１Ｓ細胞および（Ｂ）ＲＰＭＩ細胞におけるＮＫＩ‐５９‐１とＶｅｌｃａｄｅとの間の相乗効果を示す。
【図３７】図３７は、リジンアセチル化と対比したチューブリンアセチル化におけるＮＫＩ‐５９‐１の特異性を示す。
【図３８】図３８は、ＮＫＩ‐６０‐１の化学構造を示す。
【図３９】図３９は、骨髄腫細胞株（Ａ）ＭＭ．１Ｓ細胞および（Ｂ）ＲＰＭＩ細胞におけるＮＫＩ‐６０‐１とＶｅｌｃａｄｅとの間の相乗効果を示す。
【図４０】図４０は、リジンアセチル化と対比したチューブリンアセチル化におけるＮＫＩ‐６０‐１の特異性を示す。
【図４１】図４１は、ＮＫＩ‐８２‐１の化学構造を示す。
【図４２】図４２は、骨髄腫細胞株（Ａ）ＭＭ．１Ｓ細胞および（Ｂ）ＲＰＭＩ細胞におけるＮＫＩ‐８２‐１とＶｅｌｃａｄｅとの間の相乗効果を示す。
【図４３】図４３は、リジンアセチル化と対比したチューブリンアセチル化におけるＮＫＩ‐８２‐１の特異性を示す。
【図４４】図４４は、ＮＫＩ‐８４‐１の化学構造を示す。
【図４５】図４５は、骨髄腫細胞株（Ａ）ＭＭ．１Ｓ細胞および（Ｂ）ＲＰＭＩ細胞におけるＮＫＩ‐８４‐１とＶｅｌｃａｄｅとの間の相乗効果を示す。
【図４６】図４６は、２９３Ｔ細胞中のリジンアセチル化と対比したチューブリンアセチル化におけるＮＫＩ‐８２‐１の特異性を示す。
【図４７】図４７は、ＲＰＭＩ‐８２２６細胞中のチューブリンアセチル化におけるｔｕｂａｃｉｎおよびＮＫＩ‐８４‐１の効果を示す。
【図４８】図４８は、Ａ５４９細胞中のリジンアセチル化と対比したチューブリンアセチル化におけるＮＫＩ‐８４‐１の特異性を示す。
【図４９】図４９は、Ａ５４９細胞中のリジンアセチル化に対するチューブリンアセチル化へのｔｕｂａｃｉｎの特異性を示す。
【図５０】図５０は、Ａ５４９細胞中のチューブリンアセチル化に対するｔｕｂａｃｉｎおよびＮＫＩ‐８４‐１の効果を示す。
【図５１】図５１は、ｔｕｂａｃｉｎ、ＮＫＩ‐８２‐１、ＮＫＩ‐８１‐１、ＮＫＩ‐９３‐１、ＮＫＩ‐９４‐１、ＮＫＩ‐５９‐１、ＮＫＩ‐６０‐１、ＤＨＭ‐ｔｕｂａｃｉｎおよびＭＡＺ‐１４２８などの化合物のＴＤＡＣ阻害活性を示す。
【図５２】図５２は、ｔｕｂａｃｉｎ、ＤＨＭ‐ｔｕｂａｃｉｎ、ＮＫＩ‐５９‐１、ＮＫＩ‐６０‐１、ＮＫＩ‐８２‐１、ＮＫＩ‐８４‐１、ＮＫＩ‐９４‐１およびＮＫＩ‐８１‐１などの化合物のＨＤＡＣ阻害およびＴＤＡＣ阻害を示すチャートである。
【図５３Ａ】図５３Ａは、さまざまな化合物のＨＳＡに対する結合を示す。
【図５３Ｂ】図５３Ｂは、図５３Ａに列挙されたさまざまな化合物の構造を示す。これらの化合物はこれまでの図には含まれていなかった。
【図５４】図５４は、マウス多発性骨髄腫モデルおよび薬物動力学用のさまざまな溶液中のｔｕｂａｃｉｎの溶解度を示す。
【図５５Ａ】図５５は、ｔｕｂａｃｉｎの全合成を示す。
【図５５Ｂ】図５５は、ｔｕｂａｃｉｎの全合成を示す。
【図５６】図５６は、デス（ヒドロキシメチル）‐ｔｕｂａｃｉｎの合成において有用な中間体を合成するための合成経路である。他のアルデヒドを用いてこの合成を開始し、それによってこの部位を非常に多様に変化させることができる。
【図５７】図５７は、ｔｕｂａｃｉｎの別の合成の例を示す。
【図５８】図５８は、本発明の化合物のさまざまなアナログを調製する際に有用なエポキシド開環反応の例を示す。この案は、エポキシ基を開環させ、後でキャップしてｔｕｂａｃｉｎ構造を出現させるジオール官能基を作り出すさまざまな求核基の使用の例を示す。
【図５９】図５９は、乳癌におけるボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））とｔｕｂａｃｉｎとの間の相乗効果を示している。ｔｕｂａｃｉｎなどのＨＤＡＣ６阻害剤を用いると、乳がん細胞がプロテアソーム阻害薬（例えばボルテゾミブ）感受性になる。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
本発明の特定の態様の詳細な説明
本発明は、新規なＨＤＡＣ阻害剤およびＴＤＡＣ阻害剤を提供する。これらの化合物のあるものは、アグレソームの阻害剤である。本発明は、アグレソームおよび／またはプロテアソームが媒介する細胞内タンパク質分解障害を治療する方法も提供する。アグレソームは、治療戦略がアグレソームとプロテアソームとの両方を標的とするという意味で新規な治療法の標的である。本発明の新規な治療戦略は、従来の治療の諸問題、例えば薬剤耐性および毒性を克服する。
【００４９】
プロテアソームの特性は、癌細胞生物学においてよく理解されている。アグレソームは、プロテアソーム阻害またはミスフォールディングタンパク質ストレスへの応答として形成される、核近傍タンパク質分解性複合体である。アグリソーは、嚢胞性線維症と、タンパク質沈着を特徴とする特定の神経変性疾患の病態生理学に直接関係する。癌におけるアグレソームの具体的な役割は説明されていない。
【００５０】
最近、細胞質ヒストンデアセチラーゼタンパク質であるＨＤＡＣ６がアグレソーム形成およびユビキチン化ミスフォールディングタンパク質ストレス後の細胞の生存に必要であるとして同定された。アグレソームは、癌細胞における不可欠の生存成分である。ＨＤＡＣ６媒介アグレソーム形成の機序は、特徴未解明の非ヒストン標的を標的とするカルボキシ末端デアセチラーゼドメインの触媒活性の結果である。本発明は、ＨＤＡＣ６の低分子阻害剤も提供する。特定の実施態様では、これらの新しい化合物は、ＨＤＡＣ６の強力な選択阻害剤である。
【００５１】
アグレソームは、１９９８年に初めて記載された。その報告は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス受容体（ＣＦＴＲ）の病理ΔＦ５０８対立遺伝子を過剰発現させた細胞中に微小管関連の核周辺封入小体が出現したというものであった。その後の報告によって、過剰発現したプレセニリン‐１（参考として本明細書に援用されるＪｏｈｎｓｔｏｎ  ＪＡ，Ｗａｒｄ  ＣＬ，Ｋｏｐｉｔｏ  ＲＲ．Ａｇｇｒｅｓｏｍｅｓ：ａ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｍｉｓｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９９８；１４３：１８８３−１８９８）、パーキン（参考として本明細書に援用されるＪｕｎｎ  Ｅ，Ｌｅｅ  ＳＳ，Ｓｕｈｒ  ＵＴ，Ｍｏｕｒａｄｉａｎ  ＭＭ．Ｐａｒｋｉｎ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｇｇｒｅｓｏｍｅｓ  ｄｕｅ  ｔｏ  ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００２；２７７：４７８７０−４７８７７）、末梢ミエリンタンパクＰＭＰ２２（参考として本明細書に援用されるＮｏｔｔｅｒｐｅｋ  Ｌ，Ｒｙａｎ  ＭＣ，Ｔｏｂｌｅｒ  ＡＲ，Ｓｈｏｏｔｅｒ  ＥＭ．ＰＭＰ２２  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｇｇｒｅｓｏｍｅｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ＣＭＴ１Ａ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．Ｎｅｕｒｏｈｉｏｌ  Ｄｉｓ．１９９９；６：４５０−４６０）、インフルエンザウイルス核タンパク質（参考として本明細書に援用されるＡｎｔｏｎ  ＬＣ，Ｓｃｈｕｂｅｒｔ  Ｕ，Ｂａｃｉｋ  Ｉ，Ｐｒｉｎｃｉｏｔｔａ  ＭＦ，Ｗｅａｒｓｃｈ  ＰＡ，Ｇｉｂｂｓ  Ｊ，Ｄａｙ  ＰＭ，Ｒｅａｌｉｎｉ  Ｃ，Ｒｅｃｈｓｔｅｉｎｅｒ  ＭＣ，Ｂｅｎｎｉｎｋ  ＪＲ，Ｙｅｗｄｅｌｌ  ＪＷ．Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅａｓｏｍａｌ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｖｉｒａｌ  ａｎｔｉｇｅｎ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９９９；１４６：１１３−１２４）、ＧＦＰおよび膜輸送タンパク質ｐ１１５のキメラ（参考として本明細書に援用されるＧａｒｃｉａ−Ｍａｔａ  Ｒ，Ｂｅｂｏｋ  Ｚ，Ｓｏｒｓｃｈｅｒ  ＥＪ，Ｓｚｔｕｌ  ＥＳ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  ａｇｇｒｅｓｏｍｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  ａ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ＧＦＰ−ｃｈｉｍｅｒａ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９９９；１４６：１２３９−１２５４）および、特に、アミロイド形成軽鎖（参考として本明細書に援用されるＤｕｌ  ＪＬ，Ｄａｖｉｓ  ＤＰ，Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ  ＥＫ，Ｓｔｅｖｅｎｓ  ＦＪ，Ａｒｇｏｎ  Ｙ．Ｈｓｐ７０  ａｎｄ  ａｎｔｉｆｉｂｒｉｌｌｏｇｅｎｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄｏｇｅｎｉｃ  ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎｓ，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２００１；１５２：７０５−７１６）によるアグレソームの病理出現が同定された。アグレソームへのユビキチン化（ΔＦ５０８ＣＦＴＲ）（参考として本明細書に援用されるＪｏｈｎｓｔｏｎ  ＪＡ，Ｗａｒｄ  ＣＬ，Ｋｏｐｉｔｏ  ＲＲ．Ａｇｇｒｅｓｏｍｅｓ：ａ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｍｉｓｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏ���ｅｉｎｓ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９９８；１４３：１８８３−１８９８）および非ユビキチン化（ＧＦＰ‐２５０）（参考として本明細書に援用されるＧａｒｃｉａ−Ｍａｔａ  Ｒ，Ｂｅｂｏｋ  Ｚ，Ｓｏｒｓｃｈｅｒ  ＥＪ，Ｓｚｔｕｌ  ＥＳ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  ａｇｇｒｅｓｏｍｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  ａ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ＧＦＰ−ｃｈｉｍｅｒａ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９９９；１４６：１２３９−１２５４）タンパク質凝集体輸送を研究するためにモデル系が確立された。分泌タンパク質、変異タンパク質および野生型タンパク質は不安定な反応速度中間体となり、その結果、２６Ｓプロテアソームの狭いチャネル中では分解することができない安定な凝集体となることができる。これらの複合体は、細胞質ヒストンデアセチラーゼであるＨＤＡＣ６が部分的に媒介するダイニンによる中心体周辺アグレソームへの能動的な逆輸送を受ける（参考として本明細書に援用されるＫａｗａｇｕｃｈｉ  Ｙ，Ｋｏｖａｃｓ  ＪＪ，ＭｃＬａｕｒｉｎ  Ａ，Ｖａｎｃｅ  ＪＭ，Ｉｔｏ  Ａ，Ｙａｏ  ＴＰ．Ｔｈｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ＨＤＡＣ６  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ａｇｇｒｅｓｏｍｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｍｉｓｆｏｌｄｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｔｒｅｓｓ．Ｃｅｌｌ．２００３；１１５：７２７−７３８）。
【００５２】
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）は、ヒストンタンパク質上のリジン残基の脱アセチル化を触媒する、少なくとも１１種類の亜鉛結合ヒドロラーゼの系である。ＨＤＡＣ阻害は、癌細胞株におけるクロマチンの過剰アセチル化、転写の変更、成長停止およびアポトーシスを生じさせる結果となる。利用可能な非選択的ＨＤＡＣ阻害剤による初期相臨床試験によれば、顕著な毒性を伴ってはいたが、多発性骨髄腫を含む血液悪性腫瘍中に応答が見られる。プロテアソーム‐アグレソーム二重阻害は提案されなかったが、骨髄腫細胞株において従来の化学療法剤（メルファランなど）とボルテゾミブとのインヴィトロの相乗効果が報告されたことは注目される。最近まで、選択的ＨＤＡＣ阻害剤は実現されていない。
【００５３】
ＨＤＡＣ６は、ユビキチン化タンパク質ストレス下のアグレソーム形成に必要であり、従って、細胞生存に必須である。ＨＤＡＣ６は、亜鉛フィンガードメインを介してユビキチン化タンパク質と結合し、別の孤立結合モテーフを介してダイニンモーター複合体と相互作用すると考えられる。ＨＤＡＣ６は、二つの触媒的デアセチラーゼドメインを有する。アグレソーム形成をアミノ末端ヒストンデアセチラーゼが媒介するのか、あるいはカルボキシ末端チューブリンデアセチラーゼ（ＴＤＡＣ）ドメインが媒介するのかは現在知られていない。
【００５４】
異常型タンパク質異化は癌の特徴であり、発癌性タンパク質の安定化および腫瘍サプレッサの分解に関係する（参考として本明細書に援用されるＡｄａｍｓ  Ｊ．Ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ：ａ  ｓｕｉｔａｂｌｅ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．２００４；４：３４９−３６０）。核因子カッパＢ（ＮＦκＢ）の腫瘍壊死因子アルファ誘起賦活は、悪性形質細胞中のＮＦκＢ阻害剤ベータ（ＩκＢ）タンパク質分解によって媒介される関連例である。プロテアソーム阻害剤によるＩκＢ異化の阻害は、治療された骨髄腫細胞のアポトーシス成長停止を部分的に説明する（参考として本明細書に援用されるＨｉｄｅｓｈｉｍａ  Ｔ，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ
Ｐ，Ｃｈａｕｈａｎ  Ｄ，Ｐａｌｏｍｂｅｌｌａ  ＶＪ，Ｅｌｌｉｏｔｔ  ＰＪ，Ａｄａｍｓ  Ｊ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＫＣ．Ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＰＳ−３４１  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｇｒｏｗｔｈ，ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ａｎｄ  ｏｖｅｒｃｏｍｅｓ  ｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００１；６１：３０７１−３０７６）。多発性骨髄腫は、癌におけるタンパク質分解の機序を研究するための理想的な系である。１８９０年のウィリアムラッセル（Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｒｕｓｓｅｌｌ）以来、細胞質内封入体は、悪性形質細胞の組織学的特徴を定めるとみられてきた。ラッセル小体は、正確な組成は未知であるが、単一タイプの免疫グロブリンの凝集体を含むＥＲ由来ベシクルとみられ（参考として本明細書に援用されるＫｏｐｉｔｏ
ＲＲ，Ｓｉｔｉａ  Ｒ．Ａｇｇｒｅｓｏｍｅｓ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ  ｂｏｄｉｅｓ．Ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｏｆ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｎｄｉｇｅｓｔｉｏｎ？  ＥＭＢＯ
Ｒｅｐ．２０００；１：２２５−２３１）、ユビキチンには染料ポジティブである（参考として本明細書に援用されるＭａｎｅｔｔｏ  Ｖ，Ａｂｄｕｌ−Ｋａｒｉｍ  ＦＷ，Ｐｅｒｒｙ  Ｇ，Ｔａｂａｔｏｎ  Ｍ，Ａｕｔｉｌｉｏ−Ｇａｍｂｅｔｔｉ  Ｌ，Ｇａｍｂｅｔｔｉ  Ｐ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ  ｉｎ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｎｃｌｕｓｉｏｎｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．１９８９；１３４：５０５−５１３）。酵母中のＣＦＴＲ過剰発現とともにラッセル小体が記載され（参考として本明細書に援用されるＳｕｌｌｉｖａｎ  ＭＬ，Ｙｏｕｋｅｒ  ＲＴ，Ｗａｔｋｉｎｓ  ＳＣ，Ｂｒｏｄｓｋｙ  ＪＬ．Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＢｉＰ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｈａｐｅｒｏｎｅ  ｗｉｔｈ  ｒｅｓｐｅｃｔ  ｔｏ  ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  ｆｏｃｉ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｉｎ  ｙｅａｓｔ．Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．２００３；５１：５４５−５４８）、従って、これらの構造体は圧倒されたタンパク質異化、ひいては潜在的にアグレソームに関連している疑いが生じた。癌におけるアグレソームの役割は未解明のままである。
【００５５】
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、従来の治療（参考として本明細書に援用されるＧｒｅｇｏｒｙ，Ｗ．Ｍ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓ，Ｍ．Ａ．＆  Ｍａｌｐａｓ，Ｊ．Ｓ．（１９９２）  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １０，３３４−３４２）でも高用量療法および幹細胞移植（参考として本明細書に援用されるＡｔｔａｌ，Ｍ．，Ｈａｒｏｕｓｓｅａｕ，Ｊ．Ｌ．，Ｆａｃｏｎ，Ｔ．，Ｇｕｉｌｈｏｔ，Ｆ．，Ｄｏｙｅｎ，Ｃ．，Ｆｕｚｉｂｅｔ，Ｊ．Ｇ．，Ｍｏｎｃｏｎｄｕｉｔ，Ｍ．，Ｈｕｌｉｎ，Ｃ．，Ｃａｉｌｌｏｔ，Ｄ．，Ｂｏｕａｂｄａｌｌａｈ，Ｒ．，Ｖｏｉｌｌａｔ，Ｌ．，Ｓｏｔｔｏ，Ｊ．Ｊ．，Ｇｒｏｓｂｏｉｓ，Ｂ．＆  Ｂａｔａｉｌｌｅ，Ｒ．（２００３）  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３４９，２４９５−２５０２）でも依然不治の形質細胞悪性腫瘍である。最近、ＭＭ細胞だけでなく骨髄（ＢＭ）微細環境も標的とし、従来の薬剤耐性を克服することができる新規な薬剤が開発された（参考として本明細書に援用されるＨｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００２）  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ２，９２７−９３７）。例えば、プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（正式にはＰＳ‐３４１）は、ヒトＭＭ細胞株および新たに単離された患者ＭＭ細胞において、ｃ‐Ｊｕｎ  ＮＨ２末端キナーゼ（ＪＮＫ）（ストレス活性化タンパク質キナーゼとしても知られている）およびカスパーゼ活性化と関連した顕著な抗腫瘍活性（参照によってそれぞれ本明細書に組み込まれるＨｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００２）  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ２，９２７−９３７、Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｐ．，Ｃｈａｕｈａｎ，Ｄ．，Ｐａｌｏｍｂｅｌｌａ，Ｖ．，Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｐ．，Ａｄａｍｓ，Ｊ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００１）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１，３０７１−３０７６；Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｎ．，Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｃ．Ｓ．，Ｐｏｕｌａｋｉ，Ｖ．，Ｃｈａｕｈａｎ，Ｄ．，Ｇｕ，Ｘ．，Ｂａｉｌｅｙ，Ｃ．，Ｊｏｓｅｐｈ，Ｍ．，Ｌｉｂｅｒｍａｎｎ，Ｔ．Ａ．，Ｔｒｅｏｎ，Ｓ．Ｐ．，Ｍｕｎｓｈｉ，Ｎ．Ｃ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｐ．Ｇ．，Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９９，１４３７４−１４３７９；Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．，Ｃｈａｕｈａｎ，Ｄ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｐ．，Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｃ．，Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｎ．，Ｈａｙａｓｈｉ，Ｔ．，Ｍｕｎｓｈｉ，Ｎ．，Ｄａｎｇ，Ｌ．，Ｃａｓｔｒｏ，Ａ．，Ｐａｌｏｍｂｅｌｌａ，Ｖ．，Ａｄａｍｓ，Ｊ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００２）  ＪＢｉｏｌ  Ｃｈｅｎｔ  ２７７，１６６３９−４７；Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｎ．，Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｃ．Ｓ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｐ．Ｇ．，Ｐｏｕｌａｋｉ，Ｖ．，Ｔａｉ，Ｙ．Ｔ．，Ｃｈａｕｈａｎ，Ｄ．，Ｆａｎｏｕｒａｋｉｓ，Ｇ．，Ｇｕ，Ｘ．，Ｂａｉｌｅｙ，Ｃ．，Ｊｏｓｅｐｈ，Ｍ．，Ｌｉｂｅｒｍａｎｎ，Ｔ．Ａ．，Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ，Ｒ．，Ｍｕｎｓｈｉ，Ｎ．Ｃ．，Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００３���  Ｂｌｏｏｄ  １０１，２３７７−８０；Ｃｈａｕｈａｎ，Ｄ．，Ｌｉ，Ｇ．，Ｓｈｒｉｎｇａｒｐｕｒｅ，Ｒ．，Ｐｏｄａｒ，Ｋ．，Ｏｈｔａｋｅ，Ｙ．，Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００３）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６３，６１７４−６１７７；Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．，Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｃ．，Ａｋｉｙａｍａ，Ｍ．，Ｈａｙａｓｈｉ，Ｔ．，Ｃｈａｕｈａｎ，Ｄ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｐ．，Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ，Ｒ．，Ｐｏｄａｒ，Ｋ．，Ｍｕｎｓｈｉ，Ｎ．Ｃ．，Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｎ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００３）  Ｂｌｏｏｄ  １０１，１５３０−１５３４；Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．，Ｃｈａｕｈａｎ，Ｄ．，Ｈａｙａｓｈｉ，Ｔ．，Ａｋｉｙａｍａ，Ｍ．，Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｎ．，Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｃ．，Ｐｏｄａｒ，Ｋ．，Ｍｕｎｓｈｉ，Ｎ．Ｃ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｐ．Ｇ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００３）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２２，８３８６−８３９３；Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．，Ｐｏｄａｒ，Ｋ．，Ｃｈａｕｈａｎ，Ｄ．，Ｉｓｈｉｔｓｕｋａ，Ｋ．，Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｃ．，Ｔａｉ，Ｙ．−Ｚ．，Ｈａｍａｓａｋｉ，Ｍ．，Ｒａｊｅ，Ｎ．，Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｈ．，Ｓｃｈｒｅｉｎｅｒ，Ｇ．，Ｎｇｕｙｅｎ，Ａ．Ｎ．，Ｎａｖａｓ，Ｔ．，Ｍｕｎｓｈｉ，Ｎ．Ｃ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｐ．Ｇ．，Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｌ．Ｓ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００４）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２３，８７６６−８７７６）と、それに続くアポトーシス（参照によってそれぞれ本明細書に組み込まれるＨｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｐ．，Ｃｈａｕｈａｎ，Ｄ．，Ｐａｌｏｍｂｅｌｌａ，Ｖ．，Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｐ．，Ａｄａｍｓ，Ｊ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００１）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１，３０７１−３０７６；Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｎ．，Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｃ．Ｓ．，Ｐｏｕｌａｋｉ，Ｖ．，Ｃｈａｕｈａｎ，Ｄ．，Ｇｕ，Ｘ．，Ｂａｉｌｅｙ，Ｃ．，Ｊｏｓｅｐｈ，Ｍ．，Ｌｉｂｅｒｍａｎｎ，Ｔ．Ａ．，Ｔｒｅｏｎ，Ｓ．Ｐ．，Ｍｕｎｓｈｉ，Ｎ．Ｃ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｐ．Ｇ．，Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００２）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９９，１４３７４−１４３７９；Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．，Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｃ．，Ａｋｉｙａｍａ，Ｍ．，Ｈａｙａｓｈｉ，Ｔ．，Ｃｈａｕｈａｎ，Ｄ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｐ．，Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ，Ｒ．，Ｐｏｄａｒ，Ｋ．，Ｍｕｎｓｈｉ，Ｎ．Ｃ．，Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｎ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，ＩＣ．Ｃ．（２００３）  Ｂｌｏｏｄ  １０１，１５３０−１５３４）とを誘導する。ボルテゾミブは、接着分子（ＩＣＡＭ‐１およびＶＣＡＭ‐１）を下方調節することによってＭＭ細胞の骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）への接着も阻害し（参考として本明細書に援用されるＨｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．，Ｃｈａｕｈａｎ，Ｄ．，Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ，Ｒ．Ｌ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｐ．Ｒ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００１）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２０，４５１９−４５２７）、同時にＤ��Ａタンパク質キナーゼの触媒サブユニットの切断および変異した毛細血管拡張性運動失調を誘導し、ボルテゾミブはＤＮＡ修復も阻害することを示唆する。ＩＬ‐６もＭＭ細胞のＢＭＳＣへの接着も、ボルテゾミブ誘導アポトーシスからの防護とはならない。いかなる学術理論にとらわれることも望まないが、ボルテゾミブは、感受性を高め、従来の化学療法剤、特にＤＮＡ損傷剤へのＭＭ細胞中の耐性を克服することができる（参考として本明細書に援用されるＭｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｎ．，Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｃ．Ｓ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｐ．Ｇ．，Ｐｏｕｌａｋｉ，Ｖ．，Ｔａｉ，Ｙ．Ｔ．，Ｃｈａｕｈａｎ，Ｄ．，Ｆａｎｏｕｒａｋｉｓ，Ｇ．，Ｇｕ，Ｘ．，Ｂａｉｌｅｙ，Ｃ．，Ｊｏｓｅｐｈ，Ｍ．，Ｌｉｂｅｒｍａｎｎ，Ｔ．Ａ．，Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ，Ｒ．，Ｍｕｎｓｈｉ，Ｎ．Ｃ．，Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ，＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００３）  Ｂｌｏｏｄ  １０１，２３７７−８０）。これを支持するものとして、２０２名の難治性再発ＭＭの患者のボルテゾミブ治療の第２相試験では、１０％の完全寛解および準完全寛解を含む、３５％の応答が示された（参考として本明細書に援用されるＲｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｐ．Ｇ．，Ｂａｒｌｏｇｉｅ，Ｂ．，Ｂｅｒｅｎｓｏｎ，Ｊ．，Ｓｉｎｇｈａｌ，Ｓ．，Ｊａｇａｎｎａｔｈ，Ｓ．，Ｉｒｗｉｎ，Ｄ．，Ｒａｊｋｕｍａｒ，Ｓ．Ｖ．，Ｓｒｋａｌｏｖｉｃ，Ｇ．，Ａｌｓｉｎａ，Ｍ．，Ａｌｅｘａｎｉａｎ，Ｒ．，Ｓｉｅｇｅｌ，Ｄ．，Ｏｒｌｏｗｓｋｉ，Ｒ．Ｚ．，ＩＣｕｔｅｒ，Ｄ．，Ｌｉｍｅｎｔａｎｉ，Ｓ．Ａ．，Ｌｅｅ，Ｓ．，Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．，Ｅｓｓｅｌｔｉｎｅ，Ｄ．Ｌ．，Ｋａｕｆｆｍａｎ，Ｍ．，Ａｄａｍｓ，Ｊ．，Ｓｃｈｅｎｋｅｉｎ，Ｄ．Ｐ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００３）  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３４８，２６０９−２６１７）が、６５％の患者は応答しなかった。熱ショックタンパク質（ｈｓｐ）‐２７は、ボルテゾミブ耐性を媒介し、逆に、ｈｓｐ‐２７アンチセンス阻害剤、ｐ３８分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）ｓｉＲＮＡ阻害剤、またはｐ３８  ＭＡＰＫ阻害剤を用いてｈｓｐ‐２７発現を阻害してｈｓｐ‐２７を下方調節すると、ＭＭ細胞のボルテゾミブへの感受性を回復させることができる（参照によってそれぞれ本明細書に組み込まれるＣｈａｕｈａｎ，Ｄ．，Ｌｉ，Ｇ．，Ｓｌｉｒｉｎｇａｒｐｕｒｅ，Ｒ．，Ｐｏｄａｒ，Ｋ．，Ｏｈｔａｋｅ，Ｙ．，Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００３）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６３，６１７４−６１７７；Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｔ．，Ｐｏｄａｒ，Ｋ．，Ｃｈａｕｈａｎ，Ｄ．，Ｉｓｈｉｔｓｕｋａ，Ｋ．，Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｃ．，Ｔａｉ，Ｙ．−Ｚ．，Ｈａｍａｓａｋｉ，Ｍ．，Ｒａｊｅ，Ｎ．，Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ，Ｈ．，Ｓｃｈｒｅｉｎｅｒ，Ｇ．，Ｎｇｕｙｅｎ，Ａ．Ｎ．，Ｎａｖａｓ，Ｔ．，Ｍｕｎｓｈｉ，Ｎ．Ｃ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｐ．Ｇ．，Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｌ．Ｓ．＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｃ．（２００４）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２３，８７６６−８７７６）。
【００５６】
アグレソームは、ポリユビキチン化ミスフォールディング／変性タンパク質の分解のためのプロテアソームの代替系である（参照によってそれぞれ本明細書に組み込まれるＫｏｐｉｔｏ，Ｒ．Ｒ．（２０００）  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １０，５２４−５３０；Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｅ．Ｊ．，Ｂｅｎｃｅ，Ｎ．Ｆ．，Ｊａｙａｋｕｍａｒ，Ｒ．＆  Ｋｏｐｉｔｏ，Ｒ．Ｒ．（２００５）  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  １７，３５１−３６５）。アグレソーム形成は、リソソーム分解で終わる自己貪食クリアランスを誘導する。従って、アグレソーム経路は、細胞形質からライソソームへ分解するために凝集タンパク質を供給するための新規な系を提供する可能性がある（参考として本明細書に援用されるＧａｒｃｉａ−Ｍａｔａ，Ｒ．，Ｇａｏ，Ｙ．Ｓ．＆  Ｓｚｔｕｌ，Ｅ．（２００２）  Ｔｒａｆｆｉｃ  ３，３８８−３９６）。アグレソームタンパク質分解において、ヒストンデアセチラーゼ６（ＨＤＡＣ６）は、ポリユビキチン化タンパク質とダイニンモーターとの両方と結合し、それによってアグレソームへ輸送するためのタンパク質貨物をダイニンモーターに集めるように働く（参考として本明細書に援用されるＫａｗａｇｕｃｈｉ，Ｙ．，Ｋｏｖａｃｓ，Ｊ．Ｊ．，ＭｃＬａｕｒｉｎ，Ａ．，Ｖａｎｃｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｉｔｏ，Ａ．＆  Ｙａｏ，Ｔ．Ｐ．（２００３）  Ｃｅｌｌ  １１５，７２７−７３８）。本発明の方法は、プロテアソームタンパク質分解系とアグレソームタンパク質分解系との両方の阻害を含む。いかなる理論にもとらわれないが、阻害によってポリユビキチン化タンパク質の蓄積および顕著な細胞ストレスと、続くアポトーシスカスケードとが誘導される。例えば、ボルテゾミブを利用してプロテアソームとｔｕｂａｃｉｎとを阻害し、それによってＨＤＡＣ６を特異的に阻害して（参考として本明細書に援用されるＨａｇｇａｒｔｙ，Ｓ．Ｊ．，Ｋｏｅｌｌｅｒ，Ｋ．Ｍ．，Ｗｏｎｇ，Ｊ．Ｃ．，Ｇｒｏｚｉｎｇｅｒ，Ｃ．Ｍ．＆  Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．（２００３）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １００，４３８９−４３９４；Ｈａｇｇａｒｔｙ，Ｓ．Ｊ．，Ｋｏｅｌｌｅｒ，Ｋ．Ｍ．，Ｗｏｎｇ，Ｊ．Ｃ．，Ｂｕｔｃｈｅｒ，Ｒ．Ａ．＆  Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．（２００３）  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  １０，３８３−３９６；Ｗｏｎｇ，Ｊ．Ｃ．，Ｈｏｎｇ，Ｒ．＆  Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．（２００３）  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２５，５５８６−５５８７）アグレソームを遮断した。本発明の方法においては、ボルテゾミブと組み合わされたｔｕｂａｃｉｎまたはその他のＨＤＡＣ６阻害剤は、多発性骨髄腫細胞株ならびに多発性骨髄腫患者由来の新鮮分離骨髄形質細胞において、相乗効果的な細胞毒性を誘導する。
【００５７】
定義
本発明をさらに説明する前に、本発明をさらに理解しやすくすることができるように、便宜上、最初に特定の用語を定義し、以下にまとめる。
【００５８】
本発明の特定の化合物、および特定の官能基の定義を下記により詳細に説明する。本発明については、化学元素はＰｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ、ＣＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ、７５ｔｈ  Ｅｄ．の内表紙によって同定され、特定の官能基は一般に該書籍中に記載されているように定義される。さらに、有機化学の一般原理、ならびに特定の機能部分および反応性は、参照によって内容全体が本明細書に組み込まれる”Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ、Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９０に記載されている。さらに、本明細書に記載されている合成方法がさまざまな保護基を利用することは、当分野の当業者には自明である。本明細書で用いられる用語「保護基」は、多官能化合物中の別の反応部位で反応を選択的に実行することができるように、特定の官能基、例えばＣ、Ｏ、ＳまたはＮを一時的にブロックすることを意味する。好ましい実施態様では、保護基は、良好な収率で選択的に反応して計画された反応に安定な被保護基質を形成する。保護基は、容易に入手でき、好ましくは無毒性で、他の官能基を攻撃しない試薬によって良好な収率で選択的に除去されなければならない。保護基は、容易に分離できる誘導体を形成する（より好ましくは、新しい立体中心を発生させずに）。保護基はさらに別の反応部位が発生しないように最小限の別の官能基を有する。本明細書で詳細に説明するように、酸素、硫黄、窒素および炭素保護基を利用することができる。本明細書では保護基の例を詳細に説明するが、本発明はこれらの保護基に限定されるものではなく、上記の基準を用いてさまざまな別の同等な保護基を容易に特定し、本発明の方法において利用することができることは自明である。さらに、参照によって内容全体が本明細書に組み込まれる”Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”  Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．，Ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：１９９９には、さまざまな保護基が記載されている。さらに、参照によって内容全体が本明細書に組み込まれるＭｙｅｒｓ，Ａ．；Ｋｕｎｇ，Ｄ．Ｗ．；Ｚｈｏｎｇ，Ｂ．；Ｍｏｖａｓｓａｇｈｉ，Ｍ．；Ｋｗｏｎ，Ｓ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９９，１２１，８４０１−８４０２にはさまざまな炭素保護基が記載されている。
【００５９】
本明細書に記載されている化合物が任意の数の置換基または官能部分で置換されていてもよいことは自明である。一般に、用語「任意選択として」が前にあるか否かに関係なく、用語「置換」、および本発明の式に含まれる置換基は、特定の置換基のラジカルによる所定の構造中の水素ラジカルの置換を指す。任意の所定の構造中の二つ以上の位置が指定された群から選択される二つ以上の置換基で置換することができるとき、置換基はすべての位置で同じであってもよく、または異なっていてもよい。本明細書で用いられる用語「置換」は、有機化合物のすべての許される置換基を含むことを意図する。幅広い態様において、許容される置換基は、有機化合物の非環状および環状置換基、分岐および非分岐置換基、炭素環および複素環置換基、芳香族および非芳香族置換基を含む。本発明については、窒素などのヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満たす本明細書に記載される有機化合物の水素置換基および／または任意の許容される置換基を有してよい。さらに、本発明は、いかなる意味においても許容される有機化合物の置換基に限定されるものではない。好ましくは、本発明によって想定される置換基と変数との組み合わせは、結果として、例えば、癌を含むがそれに限定されない増殖障害治療に有用な安定化合物を形成するものである。本明細書で用いられる用語「安定な」は、好ましくは、製造を可能にするのに十分な安定性を有し、検出するのに十分な時間、好ましくは、本明細書で詳細に説明する目的に有用であるのに十分な時間化合物の完全性を維持する化合物を指す。
【００６０】
本明細書で用いられる用語「アシル」は、カルボニル含有官能基、例えば‐Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’を指す。ここで、Ｒ’は、脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、アリール、ヘテロアリール、（脂肪族）アリール、（ヘテロ脂肪族）アリール、ヘテロ脂肪族（アリール）またはヘテロ脂肪族（ヘテロアリール）部分）であり、それによって、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール部分のそれぞれは、置換または非置換、あるいは置換（例えば水素または脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリールまたはヘテロアリール部分）酸素または窒素含有官能基（例えば、カルボン酸、エステルまたはアミド官能基を形成する）である。
【００６１】
本明細書で用いられる用語「脂肪族」は、任意選択として一つ以上の官能基で置換された、飽和および不飽和、直鎖（すなわち非分岐）または分岐脂肪族炭化水素を含む。当業者には自明であるように、本明細書では「脂肪族」は、アルキル、アルケニル、アルキニル部分を含むが、それらに限定されないものとする。従って、本明細書で用いられる用語「アルキル」は、直線および分岐アルキル基を含む。「アルケニル」、「アルキニル」および類似物などの他の総称に、類似の規約が適用される。さらに、本明細書で用いられる用語「アルキル」、「アルケニル」、「アルキニル」および類似用語は置換および非置換基を含む。特定の実施態様では、本明細書で用いられる「低級アルキル」は、１〜６個の炭素原子を有するアルキル基（置換、非置換、分岐または非分岐）を示すために用いられる。
【００６２】
特定の実施態様では、本発明において使用されるアルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、１〜２０個の脂肪族炭素原子を含む。特定の他の実施態様では、本発明において使用されるアルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、１〜１０個の脂肪族炭素原子を含む。さらに他の実施態様では、本発明において使用されるアルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、１〜８個の脂肪族炭素原子を含む。さらに他の実施態様では、本発明において使用されるアルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、１〜６個の脂肪族炭素原子を含む。さらにまた他の実施態様では、本発明において使用されるアルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、１〜４個の炭素原子を含む。従って、例を示す脂肪族基は、例えば、メチル、エチル、ｎ‐プロピル、イソプロピル、アリル、ｎ‐ブチル、ｓｅｃ‐ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ‐ブチル、ｎ‐ペンチル、ｓｅｃ‐ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ‐ペンチル、ｎ‐ヘキシル、ｓｅｃ‐ヘキシル部分および類似部分を含むがそれらに限定されず、それ自体一つ以上の置換基を有してもよい。アルケニル基は、例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、１‐メチル‐２‐ブテン‐１‐イルおよび類似物を含むがそれらに限定されない。代表的なアルキニル基は、エチニル、２‐プロピニル（プロパルギル）、１‐プロピニルおよび類似基を含むが、それらに限定されない。
【００６３】
本明細書で用いられる用語「脂環式」は、脂肪族および環状化合物の性質を組み合わせ、任意選択として一つ以上の官能基で置換された環式、または多環式脂肪族炭化水素および橋かけシクロアルキル化合物を含むがそれらに限定されない化合物を指す。当業者には自明であるように、本明細書における「脂環式」は、任意選択として一つ以上の官能基で置換されたシクロアルキル、シクロアルケニルおよびシクロアルキニル部分を含むがそれらに限定されないものとする。従って、例を示す脂環式基は、例えば、それ自体が一つ以上の置換基を有するシクロプロピル、‐ＣＨ２‐シクロプロピル、シクロブチル、‐ＣＨ２‐シクロブチル、シクロペンチル、‐ＣＨ２‐シクロペンチル‐ｎ、シクロヘキシル、‐ＣＨ２‐シクロヘキシル、シクロヘキセニルエチル、シクロヘキサニルエチル、ノルボルビル部分および類似物を含むがそれらに限定されない。
【００６４】
本明細書で用いられる用語「アルコキシ」（または「アルキルオキシ」）、または「チオアルキル」は、酸素原子または硫黄原子を介して親分子部分に結合された既に定義されたアルキル基を指す。特定の実施態様では、アルキル基は１〜２０個の脂肪族炭素原子を含む。特定の他の実施態様では、アルキル基は１〜１０個の脂肪族炭素原子を含む。さらに他の実施態様では、本発明において使用されるアルキル、アルケニルおよびアルキニル基は１〜８個の脂肪族炭素原子を含む。さらにまた他の実施態様では、アルキル基は１〜６個の脂肪族炭素原子を含む。さらに他の実施態様では、アルキル基は１〜４個の脂肪族炭素原子を含む。アルコキシの例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ‐ブトキシ、ｔｅｒｔ‐ブトキシ、ネオペントキシおよびｎ‐ヘキソキシを含むがそれらに限定されない。チオアルキルの例は、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ｎ‐ブチルチオおよび類似物を含むがそれらに限定されない。
【００６５】
用語「アルキルアミノ」は、構造‐ＮＨＲ’を有する基を指す。ここで、Ｒ’は本明細書で定められるアルキルである。用語「アミノアルキル」は、構造‐ＮＨ２Ｒ’を有する基を指す。ここで、Ｒ’は本明細書で定められるアルキルである。特定の実施態様では、アルキル基は１〜２０個の脂肪族炭素原子を含む。特定の他の実施態様では、アルキル基は１〜１０個の脂肪族炭素原子を含む。さらに他の実施態様では、本発明において使用されるアルキル、アルケニルおよびアルキニル基は１〜８個の脂肪族炭素原子を含む。さらにまた他の実施態様では、アルキル基は１〜６個の脂肪族炭素原子を含む。さらに他の実施態様では、アルキル基は１〜４個の脂肪族炭素原子を含む。アルキルアミノの例は、メチルアミノ、エチルアミノ、イソプロピルアミノおよび類似物を含むがそれらに限定されない。
【００６６】
上記で説明した本発明の化合物の脂肪族（およびその他の）部分の置換基のいくつかの例は、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアルキルチオ、ヘテロアリールチオＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、‐ＯＨ、‐ＮＯ２、‐ＣＮ、‐ＣＦ３、‐ＣＨ２ＣＦ３、‐ＣＨＣｌ２、‐ＣＨ２ＯＨ、‐ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、‐ＣＨ２ＮＨ２、‐ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、‐Ｃ（Ｏ）Ｒｘ、‐ＣＯ２（Ｒｘ）、‐ＣＯＮ（Ｒｘ）２、‐ＯＣ（Ｏ）Ｒｘ、‐ＯＣＯ２Ｒｘ、‐ＯＣＯＮ（Ｒｘ）２、‐Ｎ（Ｒｘ）２、‐Ｓ（Ｏ）２Ｒｘ、‐ＮＲｘ（ＣＯ）Ｒｘを含むがそれらに限定されない。ここで、Ｒｘのそれぞれの箇所は、独立に、脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリールまたはアルキルヘテロアリールを含むがそれらに限定されず、上記および本明細書に記載されている脂肪族、ヘテロ脂肪族、アルキルアリールまたはアルキルヘテロアリール置換基の任意のものは、置換または非置換、分岐または非分岐、環式または非環式であってよく、上記および本明細書に記載されているアリールまたはヘテロアリール置換基の任意のものは、置換または非置換であってよい。一般的に利用可能な置換基の追加の例は、本明細書に記載されている実施例に示される特定の実施態様によって例示される。
【００６７】
一般に、本明細書で用いられる用語「芳香族部分」は、好ましくは３〜１４個の炭素原子を有し、それぞれが置換または非置換であってよい安定な単環または多環、不飽和部分を指す。特定の実施態様では、用語「芳香族部分」は、各環原子において環の平面に対して垂直なｐ‐軌道を有し、ｎを整数として環内のパイ電子の数が（４ｎ＋２）であるＨｕｃｋｅｌ則を満たす平面環を指す。本明細書において、これらの芳香族性の基準の一つまたはすべてを満たさない単環または多環、不飽和部分は、「非芳香族」として定義され、用語「脂環式」に包含される。
【００６８】
一般に、本明細書で用いられる用語「複素環芳香族部分」は、好ましくは、それぞれが置換または非置換であってよい３〜１４個の炭素原子を有し、環内にＯ、ＳおよびＮから選択される少なくとも一つのヘテロ原子を含む（すなわち環の炭素原子の代わりに）安定な単環または多環、不飽和部分を指す。特定の実施態様では、用語「ヘテロ芳香族部分」は、各環原子において環の平面に対して垂直なｐ‐軌道を有し、ｎを整数として環内のパイ電子の数が（４ｎ＋２）であるＨｕｃｋｅｌ則を満たす、少なくとも一つのヘテロ原子を含む平面環を指す。
【００６９】
本明細書で定義される芳香族部分およびヘテロ芳香族化合物部分は、アルキルまたはヘテロアルキル部分を介して結合することができ、従って、‐（アルキル）芳香族、‐（ヘテロアルキル）芳香族、‐（ヘテロアルキル）ヘテロ芳香族および‐（ヘテロアルキル）ヘテロ芳香族部分も含んでよいことも理解されよう。従って、本明細書で用いられる句「芳香族またはヘテロ芳香族」および「芳香族、ヘテロ芳香族、‐（アルキル）芳香族、‐（ヘテロアルキル）芳香族、‐（ヘテロアルキル）ヘテロ芳香族および‐（ヘテロアルキル）ヘテロ芳香族」は同じ意味で用いられる。置換基は、これまでに言及された置換基、すなわち本明細書に開示されている、結果として安定な化合物を形成させる脂肪族部分としてまたは他の部分として挙げられた置換基の任意のものを含むがそれらに限定されない。
【００７０】
本明細書で用いられる用語「アリール」は、当分野におけるこの用語の普通の意味とそれほど異ならず、少なくとも一つの芳香環を含む不飽和環式部分を指す。特定の実施態様では、「アリール」は、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、インデニルおよび類似の基を含むがそれらに限定されない一つまたは二つの芳香環を有する単環または二環炭素環系を指す。
【００７１】
本明細書で用いられる用語「ヘテロアリール」は、当分野におけるこの用語の普通の意味とあまり異ならず、例えば、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニルおよび類似の基など、５から１０の環原子を有し、うち一つの環原子はＳ、ＯおよびＮから選ばれ、ゼロ、一個または二個の環原子はＳ、ＯおよびＮから独立に選択される別のヘテロ原子であり、残りの環原子は炭素であり、ラジカルは任意の環原子を介して分子の他の部分に結合される環状芳香族ラジカルを指す。
【００７２】
アリールおよびヘテロアリール基（二環アリール基を含む）は、置換されていなくてもよくまたは置換されていてもよいことが理解されよう。ここで、置換は、脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、芳香族、ヘテロ芳香族、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアルキルヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアルキルチオ、ヘテロアリールチオ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、‐ＯＨ、‐ＮＯ２、‐ＣＮ、‐ＣＦ３、‐ＣＨ２ＣＦ３、‐ＣＨＣｌ２、‐ＣＨ２ＯＨ、‐ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、‐ＣＨ２ＮＨ２、‐ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、‐Ｃ（Ｏ）Ｒｘ、‐ＣＯ２（Ｒｘ）、‐ＣＯＮ（Ｒｘ）２、‐ＯＣ（Ｏ）Ｒｘ、‐ＯＣＯ２Ｒｘ、‐ＯＣＯＮ（Ｒｘ）２、‐Ｎ（Ｒｘ）２、‐Ｓ（Ｏ）２Ｒｘ、‐ＮＲｘ（ＣＯ）Ｒｘを含むがそれらに限定されない部分のいずれか一つ以上による一つ以上の水素原子の独立な置き換えを含む。Ｒｘのそれぞれの箇所は、独立に、脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、芳香族、ヘテロ芳香族、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアルキルアリールまたはヘテロアルキルへテロアリールを含むがそれらに限定されない。上記および本明細書に記載される脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、アルキルアリールまたはアルキルヘテロアリール置換基の任意のものは、置換または非置換、分岐または非分岐、飽和または不飽和であってよい。上記および本明細書に記載される芳香族、ヘテロ芳香族、アリール、ヘテロアリール、‐（アルキル）アリールまたは‐（アルキル）ヘテロアリール置換基の任意のものは、置換または非置換であってよい。さらに、任意の二つの隣接基は、一緒になって、４、５、６または７員環の置換または非置換脂環式または複素環部分を表してもよいことが理解されよう。一般的に利用可能な置換基の別の例は、本明細書に記載されている実施例に示されている特定の実施態様によって例示される。
【００７３】
本明細書で用いられる用語「シクロアルキル」は、詳しくは、３から７個、好ましくは３から１０個の炭素原子を有する基を指す。適当なシクロアルキルは、脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族または複素環部分の場合と同じく、任意選択として脂肪族；脂環式；ヘテロ脂肪族；複素環；芳香族；ヘテロ芳香族；アリール；ヘテロアリール；アルキルアリール；ヘテロアルキルアリール；アルキルヘテロアリール；ヘテロアルキルへテロアリール；アルコキシ；アリールオキシ；ヘテロアルコキシ；ヘテロアリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；ヘテロアルキルチオ；ヘテロアリールチオ；Ｆ；Ｃｌ；Ｂｒ；Ｉ；‐ＯＨ；‐ＮＯ２；‐ＣＮ；‐ＣＦ３；‐ＣＨ２ＣＦ３；‐ＣＨＣｌ２；‐ＣＨ２ＯＨ；‐ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ；‐ＣＨ２ＮＨ２；‐ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３；‐Ｃ（Ｏ）Ｒｘ；‐ＣＯ２（Ｒｘ）；‐ＣＯＮ（Ｒｘ）２；‐ＯＣ（Ｏ）Ｒｘ；‐ＯＣＯ２Ｒｘ；‐ＯＣＯＮ（Ｒｘ）２；‐Ｎ（Ｒｘ）２；‐Ｓ（Ｏ）２Ｒｘ；‐ＮＲｘ（ＣＯ）Ｒｘを含むがそれらに限定されない置換基で置換されていてもよいシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよび類似物を含むがそれらに限定されない。Ｒｘのそれぞれの箇所は、独立に、脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、芳香族、ヘテロ芳香族、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアルキルアリールまたはヘテロアルキルへテロアリールを含むがそれらに限定されない。上記および本明細書に記載されている脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、アルキルアリールまたはアルキルヘテロアリール置換基の任意のものは、置換または非置換、分岐または非分岐、飽和または不飽和であってよい。上記および本明細書に記載されている芳香族、ヘテロ芳香族、アリールまたはヘテロアリール置換基の任意のものは、置換または非置換であってよい。一般的に利用可能な置換基の別の例は、本明細書に記載されている実施例に示されている特定の実施態様によって例示される。
【００７４】
本明細書で用いられる用語「ヘテロ脂肪族」は、主鎖中の一つ以上の炭素原子がヘテロ原子で置換された脂肪族部分を指す。従って、ヘテロ脂肪族基は、例えば、炭素原子の代わりに一つ以上の酸素、硫黄、窒素、リンまたはケイ素原子を含む脂肪族鎖を指す。ヘテロ脂肪族部分は、直鎖または分岐であってよく、飽和または不飽和であってよい。特定の実施態様では、ヘテロ脂肪族部分は、脂肪族；脂環式；ヘテロ脂肪族；複素環；芳香族；ヘテロ芳香族；アリール；ヘテロアリール；アルキルアリール；アルキルヘテロアリール；アルコキシ；アリールオキシ；ヘテロアルコキシ；ヘテロアリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；ヘテロアルキルチオ；ヘテロアリールチオ；Ｆ；Ｃｌ；Ｂｒ；Ｉ；‐ＯＨ；‐ＮＯ２；‐ＣＮ；‐ＣＦ３；‐ＣＨ２ＣＦ３；‐ＣＨＣｌ２；‐ＣＨ２ＯＨ；‐ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ；‐ＣＨ２ＮＨ２；‐ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３；‐Ｃ（Ｏ）Ｒｘ；‐ＣＯ２（Ｒｘ）；‐ＣＯＮ（Ｒｘ）２；‐ＯＣ（Ｏ）Ｒｘ；‐ＯＣＯ２Ｒｘ；‐ＯＣＯＮ（Ｒｘ）２；‐Ｎ（Ｒｘ）２；‐Ｓ（Ｏ）２Ｒｘ；‐ＮＲｘ（ＣＯ）Ｒｘを含むがそれらに限定されない一つ以上の部分による一つ以上の水素原子の独立な置き換えによって置換される。ここで、Ｒｘのそれぞれの箇所は、独立に、脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、芳香族、ヘテロ芳香族、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアルキルアリールまたはヘテロアルキルへテロアリールを含むがそれらに限定されない。上記および本明細書に記載されている脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、アルキルアリールまたはアルキルヘテロアリール置換基の任意のものは、置換または非置換、分岐または非分岐、飽和または不飽和であってよい。上記および本明細書に記載されている芳香族、ヘテロ芳香族、アリールまたはヘテロアリール置換基の任意のものは、置換または非置換であってよい。一般的に利用可能な置換基の別の例は、本明細書に記載されてい実施例に示されている特定の実施態様によって例示される。
【００７５】
本明細書で用いられる用語「ヘテロシクロアルキル」、「複素環」または「複素環式」は、５〜１６の原子を有する飽和および不飽和の単環または多環の環系を含むがそれらに限定されないヘテロ脂肪族および環化合物の性質を組み合わせた化合物を指し、少なくとも一つの環原子はＯ、ＳおよびＮから選ばれたヘテロ原子であり（窒素および硫黄ヘテロ原子は任意選択として酸化されていてもよい）、環系は任意選択として本明細書で定められる一つ以上の官能基で置換されている。特定の実施態様では、用語「ヘテロシクロアルキル」、「複素環」または「複素環式」は５、６、７員環または多環基を指し、少なくとも一つの環原子はＯ、ＳおよびＮから選ばれたヘテロ原子であり（窒素および硫黄ヘテロ原子は任意選択として酸化されていてもよい）、酸素、硫黄および窒素から独立に選ばれた１個と３個との間のヘテロ原子を有する縮合６員環を含む二環または三環基を含むがそれらに限定されず、（ｉ）各５員環は０から２個の二重結合を有し、各６員環は０から２個の二重結合を有し、各７員環は０から３個の二重結合を有し、（ｉｉ）窒素および硫黄ヘテロ原子は任意選択として酸化されていてもよく、（ｉｉｉ）窒素ヘテロ原子は任意選択として四級化されていてもよく、（ｉｖ）上記の複素環の任意のものは、アリールまたはヘテロアリール環と縮合していてもよい。代表的な複素環化合物は、フラニル、チオフラニル、ピラニル、ピロリル、チエニル、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリル、イソオキサゾリジニル、ジオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、トリアゾリル、チアトリアゾリル、オキサトリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、モルホリニル、チアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、ジチアゾリル、ジチアゾリジニル、テトラヒドロフリルおよびそれらのベンゾ縮合誘導体などのヘテロ環を含むがそれらに限定されない。特定の実施態様では、「置換複素環、ヘテロシクロアルキルまたは複素環式」基が利用される。これらの基は、本明細書で用いられると同じく、それ自体の１個、２個または３個の水素原子が脂肪族；脂環式；ヘテロ脂肪族；複素環；芳香族；ヘテロ芳香族；アリール；ヘテロアリール；アルキルアリール；ヘテロアルキルアリール；アルキルヘテロアリール；ヘテロアルキルへテロアリール；アルコキシ；アリールオキシ；ヘテロアルコキシ；ヘテロアリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；ヘテロアルキルチオ；ヘテロアリールチオ；Ｆ；Ｃｌ；Ｂｒ；Ｉ；‐ＯＨ；‐ＮＯ２；‐ＣＮ；‐ＣＦ３；‐ＣＨ２ＣＦ３；‐ＣＨＣｌ２；‐ＣＨ２ＯＨ；‐ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ；‐ＣＨ２ＮＨ２；‐ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３；‐Ｃ（Ｏ）Ｒｘ；‐ＣＯ２（Ｒｘ）；‐ＣＯＮ（Ｒｘ）２；‐ＯＣ（Ｏ）Ｒｘ；‐ＯＣＯ２Ｒｘ；‐ＯＣＯＮ（Ｒｘ）２；‐Ｎ（Ｒｘ）２；‐Ｓ（Ｏ）２Ｒｘ；‐ＮＲｘ（ＣＯ）Ｒｘを含むがそれらに限定されない独立な置き換えによって置換された、上記で定められる複素環、ヘテロシクロアルキルまたは複素環式基を指す。ここで、Ｒｘのそれぞれの箇所は、独立に、脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、芳香族、ヘテロ芳香族、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、ヘテロアルキルアリールまたはヘテロアルキルへテロアリールを含むがそれらに限定されない。上記および本明細書に記載されている脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、アルキルアリールまたはアルキルヘテロアリール置換基の任意のものは、置換または非置換、分岐または非分岐、飽和または不飽和であってよい。上記および本明細書に記載されている芳香族、ヘテロ芳香族、アリールまたはヘテロアリール置換基の任意のものは、置換または非置換であってよい。別の例または一般的に利用可能な置換基は、本明細書に記載されている実施例に示されている特定の実施態様によって例示される。
【００７６】
さらに、上記および本明細書に記載されている脂環式または複素環部分の任意のものは、それに縮合したアリールまたはヘテロアリール部分を含んでもよいことが理解されよう。一般的に利用可能な置換基の別の例が、本明細書に記載されている実施例に示されている特定の実施態様によって例示される。本明細書で用いられる用語「ハロ」および「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から選ばれた原子を指す。
【００７７】
本明細書で用いられる用語「ハロ」および「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から選ばれた原子を指す。
【００７８】
用語「ハロアルキル」は、１個、２個または３個のハロゲン原子が結合した上記で定義されるアルキル基を示し、クロロメチル、ブロモエチル、トリフロロメチルおよび類似の基のような基によって例示される。
【００７９】
本明細書で用いられる用語「アミノ」は、第一（‐ＮＨ２）、第二（‐ＮＨＲｘ）、第三（‐ＮＲｘＲｙ）または第四（‐Ｎ＋ＲｘＲｙＲｚ）アミンを指す。ここで、Ｒｘ、ＲｙおよびＲｚは、独立に、本明細書で定められる脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、芳香族またはヘテロ芳香族部分である。アミノ基の例は、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、ジエチルアミノカルボニル、メチルエチルアミノ、イソプロピルアミノ、ピペリジノ、トリメチルアミノおよびプロピルアミノを含むがそれらに限定されない。
【００８０】
本明細書で用いられる用語「アルキリデン」は、炭素原子および水素原子だけからなり、１からｎ個の炭素原子を有し、ラジカルの両端に遊離の原子価「‐」を有する置換または非置換、直鎖または分岐飽和二価ラジカルを指す。
【００８１】
本明細書で用いられる用語「アルケニリデン」は、炭素原子および水素原子だけからなり、２からｎ個の炭素原子を有し、ラジカルの両端に遊離の原子価「‐」を有し、不飽和結合は二重結合としてだけ存在し、二重結合は分子鎖の第一の炭素と分子の他の部分との間に存在することができる、置換または非置換、直鎖または分岐飽和二価ラジカルを指す。
【００８２】
本明細書で用いられる用語「アルキニリデン」は、炭素原子および水素原子だけからなり、２からｎ個の炭素原子を有し、ラジカルの両端に遊離の原子価「‐」を有し、不飽和結合は三重結合としてだけ存在し、三重結合は分子鎖の第一の炭素と分子の他の部分との間に存在することができる、置換または非置換、直鎖または分岐飽和二価ラジカルを指す。
【００８３】
特に断らない限り、本明細書で用いられる用語「アルキル」、「アルケニル」、「アルキニル」、「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルケニル」、「ヘテロアルキニル」、「アルキリデン」、「アルケニリデン」、‐（アルキル）アリール、‐（ヘテロアルキル）アリール、‐（ヘテロアルキル）アリール、‐（ヘテロアルキル）ヘテロアリールおよび類似の基は、置換および非置換、ならびに直鎖および分岐基を包含する。同様に、用語「脂肪族」、「ヘテロ脂肪族」および類似の基は、置換および非置換、飽和および不飽和、直鎖および分岐基を包含する。同様に、用語「シクロアルキル」、「複素環」、「複素環」および類似の基は、置換および非置換、ならびに飽和および不飽和基を包含する。さらに、用語「シクロアルケニル」、「シクロアルキニル」、「ヘテロシクロアルケニル」、「ヘテロシクロアルキニル」、「芳香族」、「ヘテロ芳香族」、「アリール」、「ヘテロアリール」および類似の基は、置換および非置換基を包含する。
【００８４】
本明細書で用いられる句「薬学的に受容可能な誘導体」は、患者に投与されると、本明細書に他の化合物として記載された化合物、またはそれらの代謝物または残渣を提供する（直接または間接に）ことができる、そのような化合物の任意の薬学的に受容可能な塩、エステル、またはそのようなエステルの塩、または任意の他の付加体または誘導体を示す。従って、薬学的に受容可能な誘導体は、特に、プロドラッグを含む。プロドラッグとは、通常、著しく低下した薬理活性を有し、インビボで除去され、薬理活性化学種として親分子を生じやすい追加部分を含む化合物の誘導体である。プロドラッグの例は、インビボで切断されて対象化合物を生じるエステルである。さまざまな化合物のプロドラッグ、ならびに親化合物を誘導化してプロドラッグを作り出すための材料および方法が知られており、本発明に適用することができる。薬学的に受容可能な誘導体は、「逆プロドラッグ」も含む。逆プロドラッグは、吸収されると賦活されるのではなく不活性化される。例えば、本明細書で考察されるように、本発明のエステル含有化合物の多くは、生物的に活性であるが、エステラーゼ活性を含む血液、リンパ液、血清、細胞外液等などの特定の生理環境に曝露されると不活性化される。逆プロドラッグおよびプロドラッグの生物活性は、酵素によって触媒することができる官能基を化合物に結合することによって変化させることもできる。酵素触媒酸化および還元反応を含む酸化および還元反応も含まれる。薬学的組成物および薬学的に受容可能な誘導体の特定の例を、本明細書で下記にさらに詳しく考察する。
【００８５】
本明細書で用いられる用語「リンカー」は、対象化合物の一つの部分を該化合物の別の部分に取り付けるために利用される化学部分を指す。リンカーの例を、本明細書に記載する。
【００８６】
特に断らない限り、下記で定義される用語は、以下の意味を有する。
【００８７】
「化合物」。本明細書で用いられる用語「化合物」または「化学的化合物」は、有機金属化合物、有機化合物、金属、遷移金属錯体および低分子を含むことができる。特定の好ましい実施態様では、ポリヌクレオチドは化合物の定義から除外される。他の好ましい実施態様では、ポリヌクレオチドおよびペプチドは化合物の定義から除外される。特に好ましい実施態様では、用語化合物は、低分子（例えば、好ましくは、非ペプチドおよび非オリゴマー）を指し、ペプチド、ポリヌクレオチド、遷移金属錯体、金属および有機金属化合物を除外する。
【００８８】
「低分子」。本明細書で用いられる用語「低分子」は、非ペプチド、非オリゴマー有機化合物を指し、実験室で合成されたものであっても天然に見いだされたものであってもよい。本明細書で用いられる低分子は「天然物様」の化合物を指してもよいが、用語「低分子」は「天然物様」化合物に限定されない。むしろ、一般に、低分子は、いくつかの炭素‐炭素結合を含み、１５００未満の分子量を有することを特徴とするが、本発明の目的の場合にはこの特徴は限定的でないものとする。自然界に生起する「低分子」の例は、タキソール、ダイネミシンおよびラパマイシンを含むがそれらに限定されない。実験室で合成される「低分子」の例は、Ｔａｎら（参考として本明細書に援用される”Ｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｏｖｅｒ  ｔｗｏ  Ｍｉｌｌｉｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｈａｖｉｎｇ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｆｅａｔｕｒｅｓ  Ｂｏｔｈ  Ｒｅｍｉｎｉｓｃｅｎｔ  ｏｆ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ  ｗｉｔｈ  Ｍｉｎｉａｔｕｒｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌ‐Ｂａｓｅｄ  Ａｓｓａｙｓ”  Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２０：８５６５，１９９８）に記載されている化合物を含むがそれらに限定されない。特定の他の好ましい実施態様では、天然物様低分子が利用される。
【００８９】
「天然物様化合物」。本明細書で用いられる用語「天然物様化合物」は、進化の過程で自然界が選択した複雑な天然物に類似の化合物を指す。一般に、これらの化合物は、一つの構造内に一つ以上の立体中心、高密度で多様な官能基、および多様に選択された原子群を含む。このような状況では、官能基の多様性は、ちょっと例を挙げるだけでも、化合物中に存在する官能基のトポロジー、電荷、サイズ、親水性、疎水性および反応性を変化させるものとして定義することができる。好ましくは、本明細書で用いられる用語「高密度の官能基」を用いて、好ましくは三つ以上の潜在的または活動中の分散可能な官能基を含む任意の分子を定義することができる。これらの構造的特性は、さらに、本発明の化合物を、特定の生物受容体と特異的に相互作用し、ひいては機能的に天然物様であることもできるという点で、機能的に複雑な天然物を想起させるものとすることができる。
【００９０】
「金属キレート化剤」。本明細書で用いられる用語「金属キレート化剤」は、金属イオンと錯体（すなわち「キレート」）を形成することができる任意の分子または部分を指す。特定の実施態様の例では、金属キレート化剤は、溶液中で金属イオンに「結合」し、金属イオンを化学／酵素反応に利用できなくする任意の分子または部分を指す。特定の実施態様では、溶液は、生理学的条件下の水環境を含む。金属イオンの例は、Ｃａ２＋、Ｆｅ３＋、Ｚｎ２＋、Ｎａ２＋等を含むがそれらに限定されない。特定の実施態様では、金属キレート化剤はＺｎ２＋と結合する。特定の実施態様では、金属イオンを沈殿させる分子も部分も金属キレート化剤とはみなさない。
【００９１】
本明細書で用いられる用語「生物学的試料」は、細胞培養物またはその抽出物、動物（例えば哺乳類）から得た生検材料またはその抽出物、および血液、唾液、尿、糞便、精液、涙液またはその他の体液またはそれらの抽出物を含むがそれらに限定されない。例えば、用語「生物学的試料」は、単細胞微生物（細菌および酵母など）および多細胞生物（植物および動物、例えば脊椎動物または哺乳類、特に健康なまたは外見上健康なヒト被験体、あるいは診断または検討の対象である病態または疾患の影響を受けているヒト患者など）を含む任意の生体から得られ、排泄され、あるいは分泌された任意の固体または流体試料を指す。生物学的試料は、組織、細胞、細胞ペレット、細胞抽出物、細胞ホモジネートまたは細胞画分などの固体成分、あるいは生検、もしくは生体液を含む任意の形であってよい。生体液は、任意の部位（例えば、血液、唾液（またはバッカル細胞を含む口内洗浄液）、涙液、血漿、血清、尿、胆汁、脳脊髄液、羊水、腹膜流体および胸膜液、またはそれら由来の細胞、水性体液またはガラス状体液、あるいは任意の体分泌物）、濾出液、滲出液（例えば膿瘍または任意の他の感染症または炎症部位から得られる流体）、または関節から得られる流体（例えば通常関節または慢性関節リウマチ、変形性関節症、痛風または腐敗性関節炎などの疾患に影響を受けた関節）から得られたものであってよい。生物学的試料は、任意の器官または組織（生検試料または剖検試料を含む）から得られたものであってよく、細胞（原発性細胞であろうと培養細胞であろうと）を含んでもよく、あるいは任意の細胞、組織または器官で調整した培地を含んでもよい。生物学的試料は、組織学上の目的のために採取された凍結切片などの組織の区画を含んでもよい。生物学的試料は、細胞ホモジネートまたは組織ホモジネートの部分的分画または完全な分画によって作り出されたタンパク質、脂質、炭水化物および核酸を含む生体分子の混合物も含む。試料は、好ましくはヒト被験体から採取するが、生物学的試料はいかなる動物、植物、細菌、ウイルス、酵母等由来であってもよい。本明細書で用いられる用語動物は、例えば、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、蠕虫類および単細胞を含む、任意の発育段階にあるヒトならびにヒト以外の動物を指す。細胞培養物および生体組織試料は、複数の動物であるとみなされる。特定の実施態様の例では、ヒト以外の動物は、哺乳類（例えば齧歯類、マウス、ラット、ウサギ、猿、犬、猫、羊、牛、霊長類またはブタ）である。動物は、トランスジェニック動物またはヒトクローンであってよい。望むなら、生物学的試料を、予備分離技法を含む予備プロセスに付してよい。
【００９２】
用語「投与」または「投与する」は、本発明（単数または複数）の化合物を被験体に導入してそれらの意図される機能を実行する経路を含む。用いることができる投与経路の例は、注射（皮下、静脈、非経口、腹膜内、髄腔内）、経口、吸入、直腸および経皮を含む。医薬品調製物は、各投与経路に適した形で与えることができる。例えば、これらの調製物は、錠剤形またはカプセル形で、注射、吸入、点眼剤、軟膏、坐薬等、注射による投与、注入または吸入によって投与され、ローションまたは軟膏によって局所塗布され、坐薬によって直腸投与される。経口投与が好ましい。注射は、静脈注射であってもよく、あるいは連続注入であってもよい。投与の経路によっては、本発明の化合物は、意図される機能を実行する能力に有害な効果を及ぼす自然条件から本発明の化合物を保護するために選択された材料で被覆され、または選択された材料中に入れてもよい。本発明の化合物は単独で投与してもよく、あるいは上記で説明した別の薬剤または薬学的に受容可能なキャリアの一方または両方とともに投与してもよい。本発明の化合物は、他の薬剤の投与の前に投与してもよく、他の薬剤と同時に、または他の薬剤の投与の後に投与してもよい。さらに、本発明の化合物は、インビボで活性代謝物または高活性代謝物に変換される前駆形で投与してもよい。
【００９３】
本発明の化合物の用語「生物活性」は、本発明の化合物によって応答細胞中で引き出されるすべての活性を含む。「生物活性」は、これらの化合物によって引き出されるゲノムおよび非ゲノム活性を含む。
【００９４】
「生体組成物」、「生物学的試料」または「試料」は、細胞または生体高分子を含むか、または細胞または生体高分子由来の組成物を指す。細胞含有組成物は、例えば、哺乳類の血液、赤血球濃縮物、血小板濃縮物、白血球濃縮物、血球タンパク質、血漿、血小板浮遊血漿、プラズマ濃縮物、プラズマの任意の画分由来の沈殿物、血漿タンパク質画分、精製または部分精製血液タンパク質またはその他の成分、血清、精液、哺乳類初乳、ミルク、唾液、胎盤抽出物、低温沈降物、凍結上清、細胞可溶化物、哺乳類細胞培養物または培養培地、発酵生成物、腹水液、血球中に誘導されたタンパク質、および正常細胞または変換細胞（例えば組換えＤＮＡまたはモノクローナル抗体技術による）によって細胞培養物中に産生された産物を含む。生体組成物は、無細胞であってもよい。好ましい実施態様では、適当な生体組成物または生物学的試料は、赤血球懸濁物である。いくつかの実施態様では、血球懸濁物は、哺乳類血球を含む。好ましくは、血球は、ヒト、非ヒト霊長類、犬、猫、馬、牛、ヤギ、羊またはブタから得られる。好ましい実施態様では、血球懸濁物は、赤血球および／または血小板および／または白血球および／または骨髄細胞を含む。
【００９５】
用語「有効な量」は、所望の結果を実現するのに必要な、例えばタンパク質分解障害を治療するのに十分な用量および時間における有効な量を含む。本発明の化合物の有効な量は、被験体の疾患状態、年齢および体重などの因子および被験体において所望の応答を引き出す本発明の化合物の能力によって変化させてよい。用量・用法は、最適の治療応答を提供するために調節してよい。有効な量は、本発明の化合物の任意の毒性効果または有害効果（例えば副作用）より医薬品として有益な効果の方が優勢になる量でもある。
【００９６】
本発明の化合物の医薬品として有効な量（すなわち効果のある用量）は、約０．００１から３０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．０１から２５ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約０．１から２０ｍｇ／ｋｇ体重、さらにより好ましくは約１から１０ｍｇ／ｋｇ、２から９ｍｇ／ｋｇ、３から８ｍｇ／ｋｇ、４から７ｍｇ／ｋｇまたは５から６ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にあるとよい。疾患または障害の重篤さ、治療履歴、被験体の全体的健康状態および／または年齢、および抱えている他の疾患を含むがそれらに限定されない特定の因子が被験体を効果的に治療するために必要な用量に影響を及ぼし得ることは、当業者に理解されよう。さらに、治療法として有効な量の本発明の化合物による被験体の治療は、単回の治療を含んでもよく、または、好ましくは、一連の治療を含んでもよい。一例では、被験体は、約１から１０週間、好ましくは２から８週間、より好ましくは約３から７週間、さらにより好ましくは約４、５または６週間、１週間に１度、約０．１から２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の本発明の化合物によって治療を受ける。治療のための本発明の化合物の効果のある用量は、特定の治療の途中で増減してよいことも理解されよう。
【００９７】
用語「ホメオスタシス」は、当分野では、体内環境における静止している、または一定の条件の維持を意味すると認識される。
【００９８】
用語「生物的性質の向上」は、インビボで本発明の化合物の有効性を高める本発明の化合物に固有の任意の活性を指す。好ましい実施態様では、この用語は、毒性の低下、例えば高カルシウム血症活性の低下など、本発明の化合物の任意の定性的または定量的治療特性の向上を指す。
【００９９】
本明細書で用いられる「不活性化する」、「不活性化」または「不活性化する」、「抗癌」および「タンパク質分解障害を治療する」は、影響を受けた細胞（例えば治療を受けた生体組成物のｍｌあたり）を減少させるかまたは取り除くことを指す。さらに、これらの用語は、タンパク質分解障害またはタンパク質分解障害を低下させることまたは根絶することを含む。以上述べたことを下記の実施例で詳しく例示する。好ましくは、本発明の方法によると、治療を受けた調製物中の影響を受けた細胞の少なくとも５０％が取り除かれ、好ましくは細胞の少なくとも７０％が取り除かれ、より好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９９％、さらにより好ましくは影響を受けた細胞の１００％が取り除かれる結果となる。調製物中の影響を受けた細胞の数は、調製物のｍｌあたりの細胞数で決定してよい。そのような決定は、当業者によく知られたさまざまな公知のアッセイによって実現してよい。
【０１００】
本明細書で用いられる「最初の治療期間」および「治療期間」は、本発明の治療化合物の安定なおよび／または治療法として効果のある血清レベルを確立するまでに要する時間、被験体が治療薬の大部分を分解するまでに要する時間、または被験体またはヘルスケア専門家によって選ばれた、治療に適する任意の期間であってよい。
【０１０１】
本明細書で用いられる「治療薬」は、タンパク質分解障害を治療するのに効果のある、または治療するのに効果のあると考えられる低分子、ペプチド、タンパク質、酵素抗体、核酸等を指す。
【０１０２】
用語「調節する」は、本発明の化合物への曝露への応答として細胞の活性、例えば、動物の細胞の少なくとも亜集団の増殖および／またはタンパク質分解の阻害を、所望の最終結果、例えば治療結果が実現されるように、増加または減少させることを指す。好ましい実施態様では、この句は、タンパク質分解障害および／または細胞のタンパク質分解障害を含むものとする。
【０１０３】
用語「得ること」は、購入すること、合成すること、または他の方法で本発明の化合物を取得することを含むものとする。
【０１０４】
本明細書で用いられる句「非経口投与」および「非経口的に投与された」は、腸内投与および局所投与を除く、通常は注射による投与モードを意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮膚内、腹腔内、経気管内、皮膚下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内および胸骨内注射および注入を含むがそれらに限定されない。
【０１０５】
用語「プロドラッグ」は、インビボで代謝することができる部分を有する化合物を含む。一般に、プロドラッグは、エステラーゼによってまたはその他の機序によってインビボで代謝されて活性薬物となる。プロドラッグは、生物学的条件下のそのような反応を受けて初めて活性になるものであってもよく、または未反応形で活性を有してもよい。プロドラッグおよびそれらの使用の例は、当分野で公知である（例えば、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）  “Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９）を参照すること）。プロドラッグは、化合物の最終的な単離および精製時にインサイチュで、または精製された化合物をその遊離酸形またはヒドロキシルで適当なエステル化試薬と別々に反応させることによって調製することができる。ヒドロキシル基は、カルボン酸による処理によってエステルに変換することができる。プロドラッグ部分の例は、置換および非置換、分岐または非分岐低級アルキルエステル部分（例えばプロピオノン酸エステル）、低級アルケニルエステル、ジ低級アルキルアミノ低級アルキルエステル（例えばジメチルアミノエチルエステル）、アシルアミノ低級アルキルエステル（例えばアセチルオキシメチルエステル）、アシルオキシ低級アルキルエステル（例えばピバロイルオキシメチルエステル）、アリールエステル（フェニルエステル）、アリール低級アルキルエステル（例えばベンジルエステル）、置換（例えばメチル、ハロまたはメトキシ置換基による）アリールおよびアリール低級アルキルエステル、アミド、低級アルキルアミド、ジ低級アルキルアミドおよびヒドロキシアミドを含む。プロドラッグのその他の例は、‐ＮＯ、‐ＮＯ２、‐ＯＮＯまたは‐ＯＮＯ２部分を含む、本明細書に開示されている任意の式の化合物の誘導体を含む。好ましいプロドラッグ部分は、アシルエステルである。インビボで他の機序によって活性形に変換されるプロドラッグも含まれる。本発明の化合物は、被験体によって本発明の化合物に代謝されるプロドラッグとして合成してもよい。
【０１０６】
用語化合物の「予防法として有効な量」は、患者への単一または複数用量投与によって、タンパク質分解障害を予防するかまたは治療する際に効果のある、式（Ｉ）またはその他の式で本明細書に記載されている本発明の化合物の量を指す。
【０１０７】
言語「毒性の軽減」は、インビボで投与されたとき本発明の化合物によって誘導される、任意の望ましくない副作用の軽減、例えば高カルシウム血症活性の軽減を含むものとする。
【０１０８】
用語「被験体」および「患者」は、本明細書で同じ意味に用いられ、ヒトおよびヒト以外の動物など、タンパク質分解障害を患うことがある生物、または本発明の化合物の投与によって他の面で利益を受けることがある生物を含む。好ましいヒトは、本明細書に記載されているタンパク質分解障害または関連する病態を患っている、またはタンパク質分解障害または関連する病態にかかりやすいヒト患者を含む。本発明の用語「ヒト以外の動物」は、すべての脊椎動物、例えば哺乳類、例えば齧歯類、例えばマウス、およびヒト以外の霊長類、例えば羊、犬、牛、鶏、両生類、爬虫類等などの非哺乳類を含む。タンパク質分解障害になりやすいとは、タンパク質分解障害を発症する危険がある被験体、すなわち、骨髄腫を患う被験体、タンパク質分解障害の家族履歴を有する被験体等を含むものとする。
【０１０９】
本明細書で用いられる句「全身投与」、「全身投与された」、「抹消投与」および「抹消投与された」は、本発明（単数または複数）の化合物、薬物またはその他の材料が投与され、その結果患者の体内に入り、従って、代謝およびその他の類似の過程に付されること、例えば皮下投与を含む。
【０１１０】
用語「タンパク質分解障害」は、本発明化合物の一つ以上の投与によって予防、治療または他の方法で治癒することができる状態または疾患（例えば、被験体の細胞内または体内のアグレソームの存在が原因であり、悪化させまたは特徴となる）である。タンパク質分解障害は、細胞増殖障害およびタンパク質沈着障害を含む。細胞増殖障害は、癌、例えば骨髄腫を含む。他の癌は、上皮由来の癌を含む。胸、肺および肝臓などの固形腫瘍も含まれる。タンパク質沈着障害は、ウィルソン病、脊髄小脳失調、プリオン病、パーキンソン病、ハンチントン病、家族性筋萎縮性側索硬化症、アミロイド沈着症、アルツハイマー病、アレグザンダー病、アルコール性肝疾患、嚢胞性線維症またはレヴィー小体認知症を含む。
【０１１１】
タンパク質分解障害は癌を含む。癌は、例えば、上皮誘導癌、固形腫瘍、およびタンパク質解離が関与する癌を含む。他の癌は、多発性骨髄腫、白血病、リンパ腫、乳癌、肺癌および肝癌を含む。
【０１１２】
タンパク質分解障害は、例えばウィルソン病、脊髄小脳失調、プリオン病、パーキンソン病、ハンチントン病、家族性筋萎縮性側索硬化症、アミロイド沈着症、アルツハイマー病、アレグザンダー病、アルコール性肝疾患、嚢胞性線維症、狭窄性心嚢炎またはレヴィー小体認知症を含む。
【０１１３】
本明細書で用いられる「タンパク質分解障害を患っている、またはタンパク質分解障害にかかりやすい」は、そのような障害を有する、またはそのような障害にかかりやすい被験体を指す。
【０１１４】
本発明の化合物または他の治療薬は、直接または間接にタンパク質分解を阻害してよい。本発明の化合物または他の治療薬は、直接または間接にアグレソーム形成または活性を阻害してよい。本発明の化合物または他の治療薬は、直接または間接にプロテアソーム活性を阻害してよい。あるいは、本発明の化合物または他の治療薬は、直接または間接にアグレソームおよびプロテアソーム活性を阻害してよい。本発明の化合物または他の治療薬は、直接または間接にＨＤＡＣ６活性を阻害してよい。細胞を接触させること、または本発明の化合物または他の治療薬を被験体に投与することは、タンパク質分解障害になりやすい細胞または被験体を治療し、またはタンパク質分解障害の発生を阻害する一つの方法である。
【０１１５】
本明細書で用いられる「被験体由来細胞」は、骨髄間質細胞、（ＢＭＳＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、リンパ球、毛嚢、血球、他の上皮細胞、髄形質細胞、原発性癌細胞、患者由来腫瘍細胞、正常造血幹細胞または癌性造血幹細胞、神経幹細胞、固形腫瘍細胞、星状細胞および類似細胞を含む。「培養細胞」は、ＭＭ．１Ｓ、Ｕ２６６、ＲＰＭＩ８２２６、ＤＯＸ４０、ＭＭ．１Ｒ、ＩＮＡ‐６、ＬＲ５、原発性癌細胞株および株化癌細胞株、原発性正常細胞株および株化正常細胞株の一つ以上を含んでよい。
【０１１６】
本明細書で用いられる「細胞の表現型」、「被験体の表現型」または「被験体の症状」は、細胞または被験体の外見上の、身体的な表象または特性、例えば、観察可能な表象または観察可能な属性を指す。属性または表象は、構造上、生化学上、生理学上および／または行動上のものであってよい。表現型は、特定の治療または化合物への応答としての生物学的または臨床的後遺症であってよい。表現型は、貧血症、血小板減少症、好中球減少、溶骨性病変、骨痛、免疫不全、腎不全症、高カルシウム血症、成熟形質細胞の異数性、悪性細胞の百分率、チューブリンのアセチル化状態、成熟形質細胞のアポトーシス、成熟形質細胞中のアグレソームのレベル、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６ユビキチン化、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６とダイニンとの会合、成熟形質細胞中のユビキチン化タンパク質の細胞レベル、成熟形質細胞中のカスパーゼ‐８のレベル、成熟形質細胞中のＰＡＲＰのレベル、成熟形質細胞中のチミジン取り込み、拡張ＥＲシスターネ、成熟形質細胞の凝集、成熟形質細胞中の免疫グロブリンの沈着、非ヒストンタンパク質のアセチル化状態、細胞タンパク質の全体的なユビキチン化状態、細胞周期調節の状態、壊死、アポトーシスの標識、アポトーシス状態、ラッセル小体形成、嚢胞性線維症膜貫通タンパク質受容体状態、および細胞タンパク質沈着の変調、または細胞タンパク質および細胞外タンパク質の全体的なアセチル化状態を含む。
【０１１７】
「表現型の調節」は、観察可能な表現型における変化または変性を指す。変調は、例えば、特性の増加または減少、あるいは特定の表現型の出現または消失であってよい。
【０１１８】
「好ましい臨床応答」は、被験体の表現型における任意の有利なまたは有益な変化を指す。例えば、障害の症状または決定可能な示度の減少。好ましい臨床応答は、疾患状態の完全治癒であってよい。
【０１１９】
「タンパク質分解阻害剤」は、細胞または被験体におけるタンパク質分解を軽減することができる化合物または治療薬である。タンパク質分解阻害剤は、例えばＨＤＡＣ６を阻害するとよい。例は、ヒストンアセチラーゼ阻害剤（１４、１５）、ｔｕｂａｃｉｎ、ボルテゾミブ、Ｖｅｌｃａｄｅ、ＳＡＨＡ、Ｒ１１５７７７ＦＴＩ、１６６ホルミウム‐ＤＯＴＭＰ、三酸化ヒ素、１７‐ＡＡＧまたは本明細書に記載されている化合物を含む。タンパク質分解阻害剤は、直接または間接にＨＤＡＣ６酵素活性を阻害し、いかなる特定の科学理論にもこだわることは望まないが、それによって、アグレソーム媒介タンパク質分解を阻害するとよい。タンパク質分解阻害剤は、ＨＳＰ９０、転写因子、または他のシャペロンタンパク質を阻害するとよい。あるいは、タンパク質分解阻害剤は、ＨＤＡＣ６のＣ末端アセチル化活性を阻害し、それによって、アグレソーム媒介タンパク質分解を阻害するとよい。タンパク質分解阻害剤は、アグレソーム阻害剤であってよい。アグレソーム阻害剤の例は、ｔｕｂａｃｉｎ、スクリプテイドまたは本明細書に記載されているその他の化合物を含む。タンパク質分解阻害剤は、直接または間接にプロテアソームを阻害するとよい。プロテアソーム阻害剤の例は、ボルテゾミブ、ＭＧ１３２、ｓａｐｏｊａｒｇｏｎまたはＮＰＩ‐００５２を含む。
【０１２０】
追加のタンパク質分解阻害剤は、細胞の表現型を調節するのに十分なＨＤＡＣ６由来ペプチドを含む。例えば、ＨＤＡＣ６のＣ末端ペプチド由来のペプチド。ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＩ）は、ほとんどすべてのヒトＨＤＡＣ酵素（１４、１５）を非選択的に標的とするヒドロキサメートなどの化合物を含む。
【０１２１】
本発明の化合物の治療薬として効果のある抗増殖量または予防薬として効果のある抗増殖量の決定は、既知の技法を用いて、類似の状況下で得られる結果を観測することによって、当業者としての医師または獣医（「主治医」）によって容易に行うことができる。用量は、主治医の判断で、被験体の要件、治療される状態の重篤さおよび使用される特定の化合物によって変化させてよい。治療薬として有効な抗増殖量または用量および予防薬として有効な抗増殖量または用量を決定する際に、特定の疾患状態、特定の剤およびその投与モードおよび経路の薬力学的特性、所望の治療の時間経過、哺乳類の種、そのサイズ、年齢、および一般的健康状態、関与する特定の疾患、疾患の程度または疾患の関与または重篤さ、個々の患者の応答、投与される特定の化合物、投与モード、投与される調製液の生物学的利用能特性、選ばれた用量・用法、並行治療の種類（すなわち本発明の化合物と他の同時投与治療薬との相互作用）、およびその他の関連する状況を含むがそれらに限定されない複数の因子が主治医によって考慮される。
【０１２２】
治療は、化合物の適量より少ない低用量で開始してよい。その後、状況に応じた最適の効果に到達するまで、用量を少しずつ増加させるとよい。便宜上、望むなら、一日分の用量を分割し、一日の間に分割投与してもよい。本発明の化合物の治療的に有効な量および予防薬として効果のある抗増殖量は、１日当り体重１キログラム当り約０．１ミリグラム（ｍｇ／ｋｇ／日）から約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であるとよい。
【０１２３】
動物、例えば犬、鶏および齧歯類におけるタンパク質分解障害の予防または治療に効果があると定められた化合物は、ヒトにおけるこれらの障害の治療においても有用なことがある。ヒトにおけるこれらの障害を治療する当業者には、動物試験において得られたデータによってこれらの化合物のヒトへの用量および投与経路が分るであろう。一般に、ヒトにおける用量および投与経路は、動物におけるそれらと同様であると予想される。
【０１２４】
増殖性疾患状態のための予防治療を必要とする患者の識別は、十分に当業者の能力および知識の範囲内にある。本発明の方法によって治療することができる、増殖性疾患状態を発症する危険のある患者の識別のための方法のあるものは、家族歴、被験患者における該疾患状態の発症と関連するリスク因子の存在など、医術において理解されている。当業臨床医であれば、例えば、臨床試験、理学検査および医学／家族履歴を用いて、そのような候補患者を容易に同定することができる。
【０１２５】
被験体における抗増殖性治療の効力を評価する方法は、当分野で公知の方法によって治療前表現型を決定し、次に治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を投与することを含む。化合物を投与した後、適切な期間、例えば、２時間、４時間、８時間、１２時間または７２時間を置いて表現型を再び決定する。表現型の調節は治療法の効力を示す。治療の全期間にわたって表現型を定期的に決定してよい。例えば、２、３時間、２，３日または２，３週ごとに表現型をチェックし、その後の治療の効力を評価してよい。表現型および表現型を決定する方法を下記で考察する。説明した方法を用いて、タンパク質分解阻害剤による治療が有益になり得る患者を選別、または選択するとよい。
【０１２６】
本明細書で用いられる「被験体から生物学的試料を得ること」は、本明細書に記載されている方法のために試料を得ることを含む。生物学的試料は、本明細書に記載されている。
【０１２７】
別の態様では、治療的に有効な量の本発明の化合物または他の治療薬は、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤とともに包装される。組成物は、タンパク質分解障害を患っている被験体またはタンパク質分解障害にかかりやすい被験体を治療するために調合され、タンパク質分解障害を患っている被験体またはタンパク質分解障害にかかりやすい被験体を治療するための使用説明書とともに包装するとよい。
【０１２８】
さらに別の態様では、タンパク質分解障害を患っている被験体またはタンパク質分解障害にかかりやすい被験体を治療する方法は、その方法を必要とする被験体に、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を投与し、それによってタンパク質分解障害を患っている被験体またはタンパク質分解障害にかかりやすい被験体を治療することを含む。タンパク質分解障害、例えば骨髄腫を患う被験体またはタンパク質分解障害、例えば骨髄腫にかかりやすい被験体を特定したら、タンパク質分解阻害剤を投与する。
【０１２９】
タンパク質分解障害におけるタンパク質分解を阻害する方法は、細胞または被験体をタンパク質分解阻害剤と接触させることを含む。接触させることは、細胞の周りの流体、例えば、細胞が生存している成長培地への阻害剤の添加によってであってよい。接触させることは、阻害剤を細胞に直接接触させることによってであってよい。あるいは、接触させることは、被験体の体内の阻害剤の通過によってであってよく、例えば、投与後、投与経路によって、阻害剤は、消化管または血流中を移動してよく、または阻害を必要とする細胞に直接塗布または投与してよい。
【０１３０】
別の態様では、被験体におけるタンパク質分解障害を阻害する方法は、有効な量の阻害剤を被験体に投与することを含む。投与は、医薬品分野で既知の任意の投与経路によってであってよい。被験体は、タンパク質分解障害を有してもよく、タンパク質分解障害を発症する危険にさらされていてもよく、または、予防的な治療を必要としてもよい。
【０１３１】
一態様では、タンパク質分解障害を有する、またはタンパク質分解障害にかかりやすい被験体を治療する方法は、細胞をタンパク質分解阻害剤と接触させることを含む。接触させることは、細胞の周りの流体、例えば、細胞が生存している成長培地への阻害剤の添加によってであってよい。接触させることは、阻害剤を直接細胞に接触させることによってであってよい。あるいは、接触させることは、被験体の体内の阻害剤の通過によってであってよく、例えば、投与後、投与経路によって、阻害剤は、消化管または血流中を移動してよく、または治療を必要とする細胞に直接塗布または投与してよい。
【０１３２】
一態様では、被験体における抗増殖治療の効力を評価する方法は、一つ以上の治療前表現型を決定すること、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を被験体に投与すること、および阻害剤による初期の治療期間の後一つ以上の表現型を決定することを含み、表現型の調節は、治療の効力を示す。
【０１３３】
治療の効力は、例えば、表現型の増加、減少、出現または消失として決定してよい。効力は、タンパク質分解障害に関わる徴候の減少、徴候の安定化またはタンパク質分解障害に関わる徴候の停止によって決定してよい。
【０１３４】
表現型は、特定の治療または化合物への応答としての生物学的または臨床的後遺症を含む。例えば、貧血症、血小板減少症、好中球減少、溶骨性病変、骨痛、免疫不全、腎不全症、高カルシウム血症、成熟形質細胞の異数性、悪性細胞の百分率、チューブリンのアセチル化状態、成熟形質細胞のアポトーシス、成熟形質細胞中のアグレソームのレベル、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６ユビキチン化、成熟形質細胞中のダイニンと会合したＨＤＡＣ６、成熟形質細胞中のユビキチン化タンパク質の細胞レベル、成熟形質細胞中のカスパーゼ‐８のレベル、成熟形質細胞中のＰＡＲＰのレベル、成熟形質細胞中のチミジン取り込み、拡張ＥＲシスターネ、成熟形質細胞の凝集、成熟形質細胞中の免疫グロブリンの沈着、非ヒストンタンパク質のアセチル化状態、細胞タンパク質の全体的なユビキチン化状態、細胞周期調節の状態、壊死、アポトーシスの標識、アポトーシス状態、ラッセル小体形成、嚢胞性線維症膜貫通タンパク質受容体状態、および細胞タンパク質沈着の変調、または細胞タンパク質および細胞外タンパク質の全体的なアセチル化状態。表現型は、本明細書に記載されているように、視覚によって、診断によって、または、アッセイによって決定してよい。
【０１３５】
特定の実施態様では、本明細書に記載されている特定の表現型の軽減は効力を示す。しかし、阻害剤の作用機序によっては、表現型は、一定期間重篤になってから減少してよい。これも治療の効力を示すと考えられる。
【０１３６】
一実施態様では、治療の前に表現型を１回以上決定して基線表現型を定めてもよい。治療中および／または治療後に表現型を１回以上決定してもよい。あるいは、治療と治療との間に表現型を１回以上決定してもよい。
【０１３７】
本発明の化合物
別の態様では、本発明は、本発明の化合物、例えば本方法において有用な化合物、薬学的組成物、キットおよび包装された組成物を提供する。本発明において有用な化合物は、阻害剤ヒストンデアセチラーゼおよび／またはチューブリンデアセチラーゼである。参照によってそれぞれ本明細書に組込まれる２００６年２月１４出願の米国特許出願第６０／７７３，５１０号、２００６年２月１４日出願の米国特許出願第６０／７７３，１７２号、２００１年５月９日出願の米国特許出願第６０／２８９，８５０号、２００２年５月９日出願の米国特許出願第１０／１４４，３１６号および２００３年７月１７日出願の米国特許出願第１０／６２１，２７６号に有用な化合物が記載されている。
【０１３８】
本発明において有用な化合物は、式
【０１３９】
【化２７】
2014224158.tif 000030
の化合物を含む。ここで
Ｒ１は、環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐脂肪族；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロ脂肪族；置換または非置換、分岐または非分岐アシル；置換または非置換、分岐または非分岐アリール；置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロアリール；‐ＯＲＡ；‐Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ；‐ＣＯ２ＲＡ；‐ＳＲＡ；‐ＳＯＲＡ；‐ＳＯ２ＲＡ；‐Ｎ（ＲＡ）２；‐ＮＨＣ（Ｏ）ＲＡ；または‐Ｃ（ＲＡ）３であり、ＲＢのそれぞれの箇所は、独立に、水素、保護基、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アシル部分；アリール部分；ヘテロアリール部分；アルコキシ；アリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロアリールオキシまたはヘテロアリールチオ部分であり、
Ｒ２は、水素；ハロゲン；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐脂肪族化合物；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロ脂肪族；置換または非置換、分岐または非分岐アシル；置換または非置換、分岐または非分岐アリール；置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロアリール；‐ＯＲＢ；‐Ｃ（＝Ｏ）ＲＢ；‐ＣＯ２ＲＢ；‐ＣＮ；‐ＳＣＮ；‐ＳＲＢ；‐ＳＯＲＢ；‐ＳＯ２ＲＢ；‐ＮＯ２；‐Ｎ（ＲＢ）２；‐ＮＨＣ（Ｏ）ＲＢ；または‐Ｃ（ＲＢ）３であり、ＲＢの各箇所は、独立に、水素、保護基、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アシル部分；アリール部分；ヘテロアリール部分；アルコキシ；アリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロアリールオキシ；またはヘテロアリールチオ部分であり、
Ｒ３は、水素；ハロゲン；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐脂肪族；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロ脂肪族；置換または非置換、分岐または非分岐アシル；置換または非置換、分岐または非分岐アリール；置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロアリール；‐ＯＲＣ；‐Ｃ（＝Ｏ）ＲＣ；‐ＣＯ２ＲＣ；‐ＣＮ；‐ＳＣＮ；‐ＳＲＣ；‐ＳＯＲＣ；‐ＳＯ２ＲＣ；‐ＮＯ２；‐Ｎ（ＲＣ）２；‐ＮＨＣ（Ｏ）ＲＣ；または‐Ｃ（ＲＣ）３であり、ＲＣの各箇所は、独立に、水素、保護基、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アシル部分；アリール部分；ヘテロアリール部分；アルコキシ；アリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロアリールオキシ；またはヘテロアリールチオ部分および薬学的に受容可能なそれらの塩および誘導体である。一般に、Ｒ１は、金属キレート化官能基（例えば、ヒドロキシアミン酸、チオール、カルボン酸、オルト‐アミノアニリド等）を含む。金属キレート化基は、デアセチラーゼ酵素の活性部位Ｚｎ＋２イオンと結合すると考えられる。特定の実施態様では、Ｒ２は、置換または非置換ヘテロ脂肪族部分（例えば、任意選択として置換されていてもよいヘテロアリール環で置換されたヘテロ脂肪族部分）である。特定の実施態様では、Ｒ３は、置換または非置換芳香族環系（例えば置換または非置換フェニル）である。
【０１４０】
上記に記載の化合物の多くは、参照によってそれぞれ本明細書に組み込まれる２００１年５月９日出願の米国特許出願第６０／２８９，８５０号、２００２年５月９日出願の米国特許出願第１０／１４４，３１６号および２００３年７月１７日出願の米国特許出願第１０／６２１，２７６号に既に開示されている。本発明は、この種類の範囲内の特定の化合物および亜種の化合物を含む。これらの亜種および種類の範囲内の特定の化合物は、アグレソームによるタンパク質の分解において役割を演じることが知られているＨＤＡＣ６を阻害することによって多発性骨髄腫の治療において特に有用であることが見いだされた。癌（例えば、多発性骨髄腫、乳癌、非ホジキンリンパ腫、卵巣癌、急性骨髄性白血病）、タンパク質分解障害（例えば多発性骨髄腫、神経変性障害）、タンパク質沈着障害（例えば神経発生障害）、および増殖性障害（例えば糖尿病性網膜症、炎症性疾患、血管形成、感染症）を治療する方法、ならびに本発明の化合物を用いるこれらの障害の治療のための薬学的組成物、およびキットも提供される。本発明は、本発明の化合物を合成するための新しい合成方法も提供する。
【０１４１】
特定の実施態様では、化合物は、下記式
【０１４２】
【化２８】
2014224158.tif 000031
の一つであり、図に示した立体化学を有する。
【０１４３】
特定の実施態様では、Ｒ３は、置換または非置換アリール部分である。特定の実施態様では、Ｒ３は、置換または非置換ヘテロ芳香族部分である。特定の実施態様では、Ｒ３は単環部分である。他の実施態様では、Ｒ３は二環部分である。さらに他の実施態様では、Ｒ３は三環部分である。さらに他の実施態様では、Ｒ３は多環部分である。特定の実施態様では、Ｒ３は置換または非置換５員環または６員環芳香族またはヘテロ芳香族部分である。特定の実施態様では、Ｒ３は置換または非置換６員環芳香族またはヘテロ芳香族部分である。特定の実施態様では、Ｒ３は置換または非置換６員環芳香族部分である。特定の実施態様では、Ｒ３は置換または非置換６員環ヘテロ芳香族部分である。特定の実施態様では、Ｒ３は置換または非置換非芳香族炭素環または複素環部分である。
【０１４４】
特定の実施態様では、本発明は、式
【０１４５】
【化２９】
2014224158.tif 000032
の化合物を提供する。ここで、Ｒ１およびＲ２は上記と同じように定められ、
ｎは、１と５との間の整数であって１と５とを含み、
Ｒ３’の各箇所は、独立に、水素；ハロゲン；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐脂肪族；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロ脂肪族；置換または非置換、分岐または非分岐アシル；置換または非置換、分岐または非分岐アリール；置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロアリール；‐ＯＲＣ；‐Ｃ（＝Ｏ）ＲＣ；‐ＣＯ２ＲＣ；‐ＣＮ；‐ＳＣＮ；‐ＳＲＣ；‐ＳＯＲＣ；‐ＳＯ２ＲＣ；‐ＮＯ２；‐Ｎ（ＲＣ）２：‐ＮＨＣ（Ｏ）ＲＣまたは‐Ｃ（ＲＣ）３であり、ＲＣの各箇所は、独立に、水素、保護基、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アシル部分；アリール部分；ヘテロアリール部分；アルコキシ；アリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロアリールオキシ；またはヘテロアリールチオ部分である。
【０１４６】
特定の実施態様では、ｎは０であり、フェニル環は非置換である。
【０１４７】
他の実施態様では、ｎは１であり、化合物は式
【０１４８】
【化３０】
2014224158.tif 000033
の一つである。特定の実施態様では、パラ‐置換パターンが好ましい。他の実施態様では、メタ‐置換パターンが好ましい。さらにその他の実施態様では、オルト‐置換パターンが好ましい。特定の実施態様では、Ｒ３は
【０１４９】
【化３１】
2014224158.tif 000034
ではない。
【０１５０】
他の実施態様では、ｎは２である。本発明の化合物は、式
【０１５１】
【化３２】
2014224158.tif 000035
の一つの化合物を含む。
【０１５２】
他の実施態様では、ｎは３である。さらにその他の実施態様では、ｎは４であり、他の実施態様では、ｎは５である。
【０１５３】
特定の実施態様では、Ｒ３’は、ハロゲン、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシル、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、‐ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルケニル、Ｃ１〜Ｃ６アルキニルまたはアシルである。特定の実施態様では、Ｒ３’は‐ＮＯ２である。特定の実施態様では、Ｒ３’は‐ＣＨ２ＯＨである。特定の実施態様では、Ｒ３’は‐ＮＨ２である。特定の実施態様では、Ｒ３’は‐Ｈである。他の実施態様では、Ｒ３’は‐ＯＨである。他の実施態様では、Ｒ３’は‐ＣＮである。さらに他の実施態様では、Ｒ３’は‐ＳＣＮである。さらにまた他の実施態様では、Ｒ３’はアシルである。特定の実施態様では、Ｒ３’はアセチルである。他の実施態様では、Ｒ３’は‐Ｆである。他の実施態様では、Ｒ３’は‐Ｃｌである。他の実施態様では、Ｒ３’は‐Ｂｒである。他の実施態様では、Ｒ３’は‐Ｉである。他の実施態様では、Ｒ３’はメチル、エチル、ｎ‐プロピル、イソプロピル、ｎ‐ブチル、ｔｅｒｔ‐ブチルまたはイソブチルである。特定の実施態様では、Ｒ３’は、ビニルである。特定の実施態様では、Ｒ３’は、ハロゲン置換アルキル（例えばトリフロロメチル）である。特定の実施態様では、Ｒ３’はメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシまたはペントキシである。
【０１５４】
この種類の特定の化合物では、Ｒ２は置換または非置換脂肪族基である。他の実施態様では、Ｒ２は、置換または非置換ヘテロ脂肪族基である。特定の実施態様では、Ｒ２は、任意選択として置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール基で置換されたヘテロ脂肪族基である。特定の実施態様では、Ｒ２は、任意選択として置換されていてもよいヘテロアリール基で置換されたヘテロ脂肪族基である。特定の実施態様では、Ｒ２は、置換ヘテロアリール基で置換されたヘテロ脂肪族基である。
【０１５５】
特定の実施態様では、Ｒ２は、式
【０１５６】
【化３３】
2014224158.tif 000036
のものである。ここで、ｍは０と８との間の整数であって０と８とを含み、好ましくは、１と６との間であって１と６とを含み、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、ＮＨまたはＮＲ２’であり、
Ｒ２’は、脂肪族、ヘテロ脂肪族、アシル、置換または非置換アリール、あるいは置換または非置換ヘテロアリールである。特定の実施態様では、ｍは１、２または３である。特定の実施態様では、ｍは１である。特定の実施態様では、ＸはＯである。その他の実施態様では、ＸはＳである。特定の実施態様では、ＸはＮＨである。他の実施態様では、ＸはＣＨ２である。特定の実施態様では、Ｒ２’はＣ１〜Ｃ６アルキルである。特定の実施態様では、Ｒ２’は、置換ヘテロアリール部分である。他の実施態様では、Ｒ２’は、非置換ヘテロアリール部分である。特定の実施態様では、Ｒ２’は、置換オキサゾリル部分である。その他の実施態様では、Ｒ２’は置換チアゾリル部分である。さらに他の実施態様では、Ｒ２’は置換イミダゾリル部分である。特定の実施態様では、Ｒ２は
【０１５７】
【化３４】
2014224158.tif 000037
である。他の実施態様では、Ｒ２は
【０１５８】
【化３５】
2014224158.tif 000038
である。さらに他の実施態様では、Ｒ２は
【０１５９】
【化３６】
2014224158.tif 000039
であり、ここで、二つのＲ２’部分は、一緒に、複素環基を形成してもよい。さらに他の実施態様では、Ｒ２は
【０１６０】
【化３７】
2014224158.tif 000040
である。さらに他の実施態様では、Ｒ２は
【０１６１】
【化３８】
2014224158.tif 000041
である。さらに他の実施態様では、Ｒ２は
【０１６２】
【化３９】
2014224158.tif 000042
である。特定の実施態様では、Ｒ２は
【０１６３】
【化４０】
2014224158.tif 000043
であり、ここで、ＸはＮであり、ＹはＮＨ、ＳまたはＯである。特定の実施態様では、Ｒ２は、以下
【０１６４】
【化４１】
2014224158.tif 000044
の一つから選択される
特定の実施態様では、Ｒ１は置換フェニル環である。特定の実施態様では、Ｒ１は式
【０１６５】
【化４２】
2014224158.tif 000045
のものであり、ここで、Ｒ１’は
【０１６６】
【化４３】
2014224158.tif 000046
であり、ＹはＮＨまたはＯであり、Ｌはリンカー部分であり、Ａは、ヒストンまたはチューブリンデアセチラーゼを阻害する官能基を含む。
【０１６７】
特定の実施態様では、Ｒ１は、式
【０１６８】
【化４４】
2014224158.tif 000047
のものである。
【０１６９】
他の実施態様では、Ｒ１は、式
【０１７０】
【化４５】
2014224158.tif 000048
のものである。特定の実施態様では、ＹはＮＨである。特定の実施態様では、Ｌは、置換または非置換、環式または非環式、分岐または非分岐脂肪族部分；置換または非置換、環式または非環式、分岐または非分岐ヘテロ脂肪族部分；置換または非置換アシル部分；置換または非置換ヘテロアリール部分である。特定の実施態様では、Ｌは、置換または非置換、環式または非環式、分岐または非分岐脂肪族部分である。特定の実施態様では、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ２０アルキリデン、好ましくはＣ１からＣ１２アルキリデン、より好ましくはＣ４〜Ｃ７アルキリデンである。特定の実施態様では、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ２０アルケニリデン、好ましくはＣ１からＣ１２アルケニリデン、より好ましくはＣ４〜Ｃ７アルケニリデンである。特定の実施態様では、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ２０アルキニリデン、好ましくはＣ１からＣ１２アルキニリデン、より好ましくはＣ４〜Ｃ７アルキニリデンである。特定の実施態様では、Ｌは、置換または非置換、環式または非環式、分岐または非分岐ヘテロ脂肪族部分である。特定の実施態様では、Ｌは環系を含み、ここで、環は、アリール、ヘテロアリール、非芳香族炭素環または非芳香族複素環であってよい。さらに他の実施態様では、Ｌは、置換または非置換ヘテロアリール部分を含む。特定の実施態様では、Ｌはフェニル環を含む。特定の実施態様では、Ｌは、複数のフェニル環（例えば、１、２、３または４個のフェニル環）を含む。
【０１７１】
特定の実施態様では、Ｌは
【０１７２】
【化４６】
2014224158.tif 000049
であり、ここで、ｎは１と４との間の整数であって１と４とを含み、好ましくは、１と３との間であって１と３とを含み、より好ましくは、１または２であり、Ｒ１は、水素；ハロゲン；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐脂肪族；環式または非環式、置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロ脂肪族；置換または非置換、分岐または非分岐アシル；置換または非置換、分岐または非分岐アリール；置換または非置換、分岐または非分岐ヘテロアリール；‐ＯＲＡ；‐Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ；‐ＣＯ２ＲＡ；‐ＣＮ；‐ＳＣＮ；‐ＳＲＡ；‐ＳＯＲＡ；‐ＳＯ２ＲＡ；‐ＮＯ２；‐Ｎ（ＲＡ）２；；‐ＮＨＲＡ；‐ＮＨＣ（Ｏ）ＲＡ；または‐Ｃ（ＲＡ）３；ＲＡの各箇所は、独立に、水素、保護基、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アシル部分；アリール部分；ヘテロアリール部分；アルコキシ；アリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロアリールオキシ；またはヘテロアリールチオ部分である。特定の実施態様では、Ｌは
【０１７３】
【化４７】
2014224158.tif 000050
である。
【０１７４】
特定の実施態様では、Ｌは
【０１７５】
【化４８】
2014224158.tif 000051
である。
【０１７６】
特定の実施態様では、Ｌは、非分岐、非置換、非環式アルキル鎖である。特定の実施態様では、Ｌは
【０１７７】
【化４９】
2014224158.tif 000052
である。他の実施態様では、Ｌは
【０１７８】
【化５０】
2014224158.tif 000053
である。特定の他の実施態様では、Ｌは
【０１７９】
【化５１】
2014224158.tif 000054
である。他の実施態様では、Ｌは
【０１８０】
【化５２】
2014224158.tif 000055
である。さらに他の実施態様では、Ｌは
【０１８１】
【化５３】
2014224158.tif 000056
である。
【０１８２】
特定の実施態様では、Ｌは、置換、非環式脂肪族鎖である。特定の実施態様では、Ｌは
【０１８３】
【化５４】
2014224158.tif 000057
である。
【０１８４】
特定の実施態様では、Ｌは、非分岐、非置換、非環式ヘテロ脂肪族鎖である。特定の実施態様では、Ｌは
【０１８５】
【化５５】
2014224158.tif 000058
であり、ここで、ｎは０と１０との間にあって０と１０とを含み、好ましくは、０と５との間にあって０と５とを含む整数であり、ｍは０と１０との間にあって０と１０とを含み、好ましくは、０と５との間にあって０と５とを含む整数である。特定の実施態様では、Ｌは
【０１８６】
【化５６】
2014224158.tif 000059
であり、ここで、ｎは０と１０との間にあって０と１０とを含み、好ましくは、０と５との間にあって０と５とを含む整数であり、ｍは０と１０との間にあって０と１０とを含み、好ましくは、０と５との間にあって０と５とを含む整数である。特定の実施態様では、Ｌは
【０１８７】
【化５７】
2014224158.tif 000060
であり、ここで、ｎは０と１０との間にあって０と１０とを含み、好ましくは、０と５との間にあって０と５とを含む整数であり、ｍは０と１０との間にあって０と１０とを含み、好ましくは、０と５との間にあって０と５とを含む整数であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１〜Ｃ６脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、ヘテロアリールまたはアシルである。特定の実施態様では、Ｌは
【０１８８】
【化５８】
2014224158.tif 000061
であり、ここで、ｎは０と１０との間にあって０と１０とを含み、好ましくは、０と５との間にあって０と５とを含む整数であり、ｍは０と１０との間にあって０と１０とを含み、好ましくは、０と５との間にあって０と５とを含む整数である。特定の実施態様では、Ａは、金属キレート化官能基を含む。例えば、Ａは、Ｚｎ２＋キレート化基を含む。特定の実施態様では、Ａは、
【０１８９】
【化５９】
2014224158.tif 000062
からなる群から選択される官能基を含む。特定の実施態様では、Ａは、ヒドロキサム酸
【０１９０】
【化６０】
2014224158.tif 000063
またはその塩を含む。他の実施態様では、Ａは式
【０１９１】
【化６１】
2014224158.tif 000064
を含む。特定の実施態様では、Ａは式
【０１９２】
【化６２】
2014224158.tif 000065
を含む。他の実施態様では、Ａは、カルボン酸（‐ＣＯ２Ｈ）を含む。他の実施態様では、Ａは、ｏ‐アミノアニリド
【０１９３】
【化６３】
2014224158.tif 000066
を含む。他の実施態様では、Ａは、ｏ‐ヒドロキシアニリド
【０１９４】
【化６４】
2014224158.tif 000067
を含む。さらに他の実施態様では、Ａは、チオール（‐ＳＨ）を含む。特定の実施態様では、Ｒ１’は
【０１９５】
【化６５】
2014224158.tif 000068
であり、ここで、ｎは０と１５との間にあって０と１５とを含み、好ましくは０と１０との間にあって０と１０とを含み、より好ましくは１と８との間にあって１と８とを含む整数であり、さらにより好ましくは４、５、６、７または８である。特定の実施態様では、Ｒ１’は
【０１９６】
【化６６】
2014224158.tif 000069
であり、ここで、ｎは０と１５との間にあって０と１５とを含み、好ましくは０と１０との間にあって０と１０とを含み、より好ましくは１と８との間にあって１と８とを含む整数であり、さらにより好ましくは４、５、６、７または８である。特定の実施態様では、Ｒ１’は
【０１９７】
【化６７】
2014224158.tif 000070
である。他の特定の実施態様では、Ｒ１’は
【０１９８】
【化６８】
2014224158.tif 000071
である。
【０１９９】
本発明において有用な特定の化合物は、式
【０２００】
【化６９】
2014224158.tif 000072
の化合物と、薬学的に受容可能なその誘導体とを含む。
【０２０１】
ここで、Ｒ１は、水素、または脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、芳香族またはヘテロ芳香族部分であり、
ｎは１〜５であり、
Ｒ２は、水素、保護基、または脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、芳香族またはヘテロ芳香族部分であり、
Ｘは、‐Ｏ‐、‐Ｃ（Ｒ２Ａ）２‐、‐Ｓ‐または‐ＮＲ２Ａ‐であり、ここで、Ｒ２Ａは、水素、保護基または脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、芳香族またはヘテロ芳香族部分であり、
あるいは、ここで、Ｒ２およびＲ２Ａの二つ以上の箇所、一緒に、脂環式または複素環部分、あるいはアリールまたはヘテロアリール部分を形成し、
Ｒ３は、脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、芳香族またはヘテロ芳香族部分であり、
Ｙは、水素、または脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、芳香族またはヘテロ芳香族部分である。
【０２０２】
特定の実施態様では、本発明による化合物は、式
【０２０３】
【化７０】
2014224158.tif 000073
によって表すことができる。ここで、
各Ｘは、独立に、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２またはＮＲ３であり、
Ｙは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２またはＮＲ４であり、
Ａｒ１およびＡｒ２は、それぞれ独立にアリール基であり、
Ｒ１は、低級アルキル基またはアリール基であり、
Ｒ２は、水素、低級アルキル基またはアリール基であり、
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素、低級アルキル基、アリール基、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル基またはアミノカルボニル基である。特定の好ましい実施態様では、Ｘの各箇所はＯ、ＳまたはＣＨ２、より好ましくはＯまたはＳ、さらにより好ましくはＯである。特定の好ましい実施態様では、ＹはＳである。特定の好ましい実施態様では、Ａｒ１は、フェニルまたは置換フェニル、特に４‐ヒドロメチルフェニルである。特定の好ましい実施態様では、Ａｒ２は、ヘテロアリール、より好ましくは任意選択として置換オキサゾリル、さらにより好ましくはフェニル置換オキサゾリル、最も好ましくは４，５‐ジフェニルオキサゾール‐２‐イルである。特定の好ましい実施態様では、Ｒ１は、フェニルまたは置換フェニル、より好ましくは４‐アミノ置換フェニルまたは４‐アミド置換フェニルである。より好ましい実施態様では、Ｒ１は、アルキレン部分を有し、アルキレン鎖はアルキレン鎖中に４個と８個との間の炭素原子（より好ましくは６個の炭素原子）を有し、アルキレン鎖は、好ましくは、末端のヒドロオキサメート基（‐ＮＨＯＨ）を有する、アミド基で４‐位を置換されたフェニル基である。特定の好ましい実施態様では、Ｒ２は水素である。
【０２０４】
化合物の例は、式
【０２０５】
【化７１】
2014224158.tif 000074
【０２０６】
【化７２】
2014224158.tif 000075
【０２０７】
【化７３】
2014224158.tif 000076
の化合物を含む。
【０２０８】
特定の実施態様では、化合物は、式
【０２０９】
【化７４】
2014224158.tif 000077
のものである。
【０２１０】
特定の実施態様では、化合物は、ｔｕｂａｃｉｎ
【０２１１】
【化７５】
2014224158.tif 000078
である。
【０２１２】
好ましい実施態様では、本発明において有用な化合物は、以下の性質の一つ以上を有する。化合物は、タンパク質分解阻害剤である。化合物は、少なくとも一つのヒストンデアセチラーゼを阻害することができる。化合物は、ＨＤＡＣ６を阻害することができる。化合物は、選択的ＨＤＡＣ６阻害剤である。化合物は、ＨＤＡＣ６のポリユビキチン結合ドメインと結合する。化合物は、癌細胞（特に多発性骨髄腫細胞、非ホジキンリンパ腫（ＮＭＬ）細胞、乳がん細胞、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞）中にアポトーシスを誘導することができる。および／または化合物は、アグレソーム形成を阻害することができる。
【０２１３】
本発明の方法、薬学的組成物、キットおよび包装組成物の少なくともいくつかにおいて有用な化合物は、例えば、本明細書に記載されている任意のスクリーニング方法によって同定することができる。
【０２１４】
特定の好ましい実施態様では、本発明の化合物は、金属結合部分、好ましくはヒドロキサメートなどの亜鉛結合部分を含む。上記に記したように、特定のヒドロキサメートは、ＨＤＡＣ６活性の強力な阻害剤である。理論にこだわることは望まないが、これらのヒドロキサメートの効力は、少なくとも部分的に、亜鉛と結合する化合物の能力によるものと考えられている。好ましい実施態様では、本発明の化合物は、アグレソーム経路に含まれる生物学的標的、例えばチューブリンデアセチラーゼ（ＴＤＡＣ）またはＨＤＡＣ活性を有する生物学的標的、例えばＨＤＡＣ６に対する選択性を付与することができる少なくとも一つの部分または標的を含む。従って、特定の好ましい実施態様では、化合物は、生物学的標的に結合する原因となる、分子の他の部分から離れた亜鉛結合部分を含む。例えば、本発明の化合物は、分子の別の部分（単数または複数）がＨＤＡＣ６などの生物学的標的と結合するとき、有利な配向の亜鉛結合部分を提示することができるリンカーアームまたはその他のスペーサ用部分を含んでもよい。理論にこだわるわけではないが、化合物のキャッピング領域中の立体『バルク』は、すべての場合にそのようなバルクが必要なわけではないが、ＴＤＡＣ特異性に貢献することができると考えられている。さらに、理論にこだわるわけではないが、アロステリック部位阻害が本発明の特定の化合物のＴＤＡＣ活性に寄与すると考えられている。
【０２１５】
特定の実施態様では、本発明の少なくともいくつかの方法、薬学的組成物、キットおよび包装組成物において有用な化合物は、参照によって本明細書に全体が組み込まれる米国特許公開第２００４／００７２８４９号に開示されている１，３‐ジオキサンＨＤＡＣ阻害剤化合物である。Ｓｔｅｒｎｓｏｎ  ＳＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｒｇ  Ｌｅｔｔ．２００１  Ｄｅｃ  ２７；３（２６）：４２３９−４２；Ｈａｇｇａｒｔｙ  ＳＪ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２００３  Ｍａｙ；１０（５）：３８３−９６；Ｈａｇｇａｒｔｙ  ＳＪ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００３
Ａｐｒ  １５；１００（８）：４３８９−９４．Ｅｐｕｂ  ２００３  Ａｐｒ  ２００３  Ａｐｒ  ０３；ａｎｄ  Ｈａｇｇａｒｔｙ  ＳＪ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ．２００４  Ｎｏｖ；７（７）：６６９−７６に関連化合物が記載されている。これらの参考文献のそれぞれの内容は参照によって全体が本明細書に組み込まれる。
【０２１６】
本発明の方法、組成物、キットおよび包装組成物の少なくともいくつかにおいて有用な別の化合物は、ＮＶＰ‐ＬＡＱ８２４（下記に示される構造
【０２１７】
【化７６】
2014224158.tif 000079
を有するけい皮酸ヒドロキサメート）を含む。
【０２１８】
本発明の方法、組成物、キットおよびパッケージ化組成物の少なくともいくつかにおいて有用な別の化合物は、下記
【０２１９】
【化７７】
2014224158.tif 000080
【０２２０】
【化７８】
2014224158.tif 000081
【０２２１】
【化７９】
2014224158.tif 000082
に示されるものを含む。それぞれの化合物は、ヒドロキサメート部分（ヒドロキサメートおよび環状ヒドロキサメートのＯ‐エーテルを含む）を含む。
【０２２２】
本発明の化合物は、化合物自体ならびに利用可能なら任意の塩（好ましくは薬学的に受容可能な塩）、溶媒和物、クラスレート、水和物、多形またはプロドラッグを含む。本明細書で用いられる用語「薬学的に受容可能な塩」は、例えば、本明細書に開示されている式のいずれか一つの化合物の酸性および塩基性基から形成される塩である。塩の例は硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ベシン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ‐トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩（すなわち１，１’‐メチレン基‐ビス‐（２‐ヒドロキシ‐３‐ナフトエ酸塩））塩を含むがそれらに限定されない。用語「薬学的に受容可能な塩」は、カルボン酸官能基などの酸性官能基を有する、本明細書に開示されている式のいずれか一つの化合物と、薬学的に受容可能な無機または有機塩基とから調製される塩も指す。適当な塩基は、ナトリウム、カリウムおよびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムおよび亜鉛などの他の金属の水酸化物；アンモニア、および非置換またはヒドロキシ置換モノ‐、ジ‐、またはトリアルキルアミンなどの有機アミン；ジシクロヘキシルアミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ‐メチル、Ｎ‐エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ‐、ビス‐、またはトリス‐（２‐ヒドロキシエチル）アミン、２‐ヒドロキシ‐ｔｅｒｔ‐ブチルアミン、またはトリス‐（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどのモノ‐、ビス‐またはトリス‐（２‐ヒドロキシ‐低級アルキルアミン）、Ｎ，Ｎ‐ジメチル‐Ｎ‐（２‐ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ‐（２‐ヒドロキシエチル）アミンなどのＮ，Ｎ‐ジ‐低級アルキル‐Ｎ‐（ヒドロキシ低級アルキル）‐アミン；Ｎ‐メチル‐Ｄ‐グルカミン；およびアルギニン、リジンおよび類似物などのアミノ酸を含むがそれらに限定されない。用語「薬学的に受容可能な塩」は、アミノ官能基などの塩基性官能基を有する本明細書に開示されている任意の式の一つの化合物と、薬学的に受容可能な無機酸または有機酸とから調製される塩も指す。適当な酸は、硫酸水素塩；クエン酸、酢酸、シュウ酸、塩酸（ＨＣｌ）、臭化水素（ＨＢｒ）、ヨウ化水素（ＨＩ）、硝酸、二硫化水素、リン酸、乳酸、サリチル酸、酒石酸、二酒石酸、アスコルビン酸、コハク酸、マレイン酸、ベシン酸、フマル酸、グルコン酸、グルクロン酸、ギ酸、安息香酸、グルタミン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸およびｐ‐トルエンスルホン酸を含む。
【０２２３】
本明細書で用いられる用語「多形」は、本発明の化合物または本発明の化合物の錯体の固体結晶形を意味する。同じ化合物の異なる多形体は、異なる物理的、化学的および／または分光学的性質を示すことがある。異なる物理的性質は、安定性（例えば、熱または光に対する）、圧縮率および密度（剤形および製品製造において重要）および溶解速度（生物学的利用能に影響を及ぼすことができる）を含むがそれらに限定されない。安定性における差異は、化学反応性（例えば、剤形が一つの多形体で構成されると別の多形体で構成されたときより急速に変色するような酸化の差異）または機械的特性（例えば、錠剤は貯蔵時に速度論的に有利な多形体が熱力学的に安定な多形体に変換すると砕ける）あるいはそれらの両方（例えば、一つの多形体の錠剤の方が高湿度で変形しやすい）の変化の結果として生じることがある。多形体の物理的性質が異なると多形体のプロセス加工が影響を受けることがある。例えば、一つの多形体は、溶媒和体を形成する傾向が強いかもしれず、あるいは、例えば粒子の形状またはサイズ分布によって別の多形体よりろ過するか、または洗浄して不純物を除去するのが難しいかもしれない。
【０２２４】
本明細書で用いられる用語「水和物」は、非共有結合的な分子間力によって結合された化学量論的または非化学量論的な量の水をさらに含む、本発明の化合物または本発明の化合物の塩を意味する。
【０２２５】
本明細書で用いられる用語「クラスレート」は、内部に捕捉されたゲスト分子（例えば溶媒または水）を有する空間（例えばチャネル）を含む結晶格子の形状の本発明の化合物または本発明の化合物の塩を意味する。
【０２２６】
さらに、本発明の化合物のいくつかは、一つ以上の二重結合、または一つ以上の不斉中心を有する。そのような化合物は、ラセミ化合物、ラセミ混合物、単一エナンチオマ、個別ジアステレオマー、ジアステレオマー混合物、ｃｉｓ‐またはｔｒａｎｓ‐あるいはＥ‐またはＺ‐二重異性体形として存在してよい。これらの化合物のすべてのそのような異性体形は、本発明にはっきりと含まれる。本発明の化合物は、複数の互変異性体として表してもよく、そのような場合には、本発明は、本明細書に記載されている化合物のすべての互変異性型を明示的に含む（例えば、環系のアルキル化の結果複数の部位がアルキル化されてよく、本発明はすべてのそのような反応生成物を明示的に含む）。そのような化合物のすべてのそのような異性体形は、本発明に明示的に含まれる。本明細書に記載されている化合物のすべての結晶形は、本発明に明示的に含まれる。
【０２２７】
化合物の合成
上記で説明したように、本発明は新規な化合物を提供する。本明細書に記載されている化合物の多くの合成は、参照によってそれぞれ本明細書に組み込まれる、既出願の２００１年５月９日出願の米国特許出願第６０／２８９，８５０号；２００２年５月９日出願の米国特許出願第１０／１４４，３１６号；および２００３年７月１７日出願の米国特許出願第１０／６２１，２７６号に記載されている。当業者なら理解するように、これらの特許出願に記載されているさまざまな反応および合成経路は、本発明の化合物を調製する際に用いてよい。
【０２２８】
図５５に本発明の化合物を調製するための方法論を示す。この合成によって、１，３‐ジオキサンコア構造の特定の位置における置換基の多様性が増大する。特定の実施態様では、この合成は、Ｒ３における置換基の変化をより多彩にする。
【０２２９】
式
【０２３０】
【化８０】
2014224158.tif 000083
の化合物について、コア構造の合成のための方法が提供され、一方法は、
構造
【０２３１】
【化８１】
2014224158.tif 000084
を有するエポキシアルコールを提供するステップ、
エポキシアルコールを適当な条件下で構造ＲＢＸＨを有する試薬と反応させてコア構造
【０２３２】
【化８２】
2014224158.tif 000085
を有するジオールを生成させるステップ、
ジオールを適当な条件下で構造Ｒ１ＣＨ（ＯＭｅ）２を有する試薬と反応させてコア構造
【０２３３】
【化８３】
2014224158.tif 000086
を有する骨格を生成させるステップ工程を含み、
ここで、Ｒ１は、置換または非置換芳香族またはヘテロ芳香族部分（例えば金属キレート化部分で置換されたアリール環）であり、
ＲＢは、水素、保護基、または脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、芳香族またはヘテロ芳香族部分であり
Ｘは、‐Ｏ‐、‐Ｃ（Ｒ’）２‐、‐Ｓ‐または‐ＮＲ’‐であり、Ｒ’は、水素、保護基または脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、芳香族またはヘテロ芳香族部分であり、
Ｒ３は、脂肪族、脂環式、ヘテロ脂肪族、複素環、芳香族またはヘテロ芳香族部分であることが理解されよう。
【０２３４】
特定の実施態様では、Ｒ３は脂肪族である。特定の実施態様では、Ｒ３はヘテロ脂肪族である。特定の実施態様では、Ｒ３は複素環である。特定の実施態様では、Ｒ３は炭素環である。特定の実施態様では、Ｒ３は芳香族である。他の実施態様では、Ｒ３はヘテロ芳香族である。当業者なら理解するように、Ｒ３におけるさまざまな置換基は、合成における出発原料と異なるアルデヒドを用いて合成中に導入することができる。この例は、出発原料としてベンズアルデヒドが用いられる図３において見られる。脂肪族アルデヒド、非環状アルデヒドまたは非芳香族アルデヒドだけでなく、さまざまな置換ベンズアルデヒドも、例を示した合成において用いることができると考えられる。
特定の実施態様の例では、エポキシアルコールは構造
【０２３５】
【化８４】
2014224158.tif 000087
を有する。ジオールは、構造
【０２３６】
【化８５】
2014224158.tif 000088
を有する。ここで、ＸはＳまたはＯである；および、コア骨格は、構造
【０２３７】
【化８６】
2014224158.tif 000089
を有する：
特定の他の実施態様の例では、エポキシアルコールは構造
【０２３８】
【化８７】
2014224158.tif 000090
を有し、ジオールは、構造
【０２３９】
【化８８】
2014224158.tif 000091
を有する。ここで、ＸはＳまたはＯであり、
コア骨格は、構造
【０２４０】
【化８９】
2014224158.tif 000092
を有する。
【０２４１】
本発明の化合物の使用
本明細書において下記に記載されるように、驚くべきことに、今や、本発明の化合物および類似体は、タンパク質分解障害、特に骨髄腫を治療し、予防することができることが見いだされた。従って、一実施態様では、本発明は、被験体のタンパク質分解障害を、本明細書に記載されている化合物の有効量を被験体に投与することによって治療するための方法も提供する。化合物は、アグレソーム経路、あるいはアグレソーム経路およびプロテアソーム経路を介してタンパク質分解を阻害してよい。
【０２４２】
健康管理の専門家によって、または被験体による自己特定によって、タンパク質分解障害を有する被験体またはタンパク質分解障害にかかりやすい被験体を同定することができる。
【０２４３】
本発明は、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を細胞に投与することを含む、タンパク質分解障害の徴候を示す細胞を処理する方法も提供する。細胞は、被験体または培養細胞由来の一つ以上の細胞を含む。細胞は、被験体から取り出すか、または分離してよい。有用な被験体由来細胞は、骨髄間質細胞、（ＢＭＳＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、リンパ球、毛嚢、血球、他の上皮細胞、骨髄形質細胞、原発性癌細胞、患者由来腫瘍細胞、正常造血幹細胞または癌性造血幹細胞、神経幹細胞、固形腫瘍細胞、星状細胞および類似細胞の一つ以上を含む。培養細胞は、ＭＭ．１Ｓ、Ｕ２６６、ＲＰＭＩ８２２６、ＤＯＸ４０、ＭＭ．１Ｒ、ＩＮＡ‐６、ＬＲ５、原発性癌細胞株および株化癌細胞株、原発性正常細胞株および株化正常細胞株の一つ以上を含む。治療を受ける細胞は、細胞の純集団であってもよく、または他の細胞型、例えば他の血球、支持細胞または骨髄細胞と混合してもよい。培養細胞は、純集団であってもよく、または他の細胞と混合してもよい。それらは、他の培養細胞または被験体由来細胞と混合してもよい。あるいは、培養細胞は、支持細胞または骨髄細胞と混合される。
【０２４４】
本発明は、多発性骨髄腫を患う被験体または多発性骨髄腫にかかりやすい被験体を治療するための諸方法も提供する。これらの方法は、これらの方法を必要とする被験体に、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を投与し、それによって多発性骨髄腫を患う被験体または多発性骨髄腫にかかりやすい被験体を治療することを含む。多発性骨髄腫は、例えば、血清または尿中のＭ‐タンパク質の検出、骨髄検査における１０％を超える形質細胞の検出、骨格Ｘ線における溶解性骨病変または一般化骨粗鬆症の検出、および／または軟部組織形質細胞増加症の存在によって診断することができる。特定の実施態様では、多発性骨髄腫の治療において、ＨＤＡＣ阻害剤をプロテアソーム阻害剤と組み合わす。特定の実施態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、本発明の化合物である。特定の実施態様では、プロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））である。
【０２４５】
本発明は、固形腫瘍を患う被験体または固形腫瘍にかかりやすい被験体を治療するための諸方法も提供する。これらの方法は、これらの方法を必要とする被験体に、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を投与し、それによって固形腫瘍を患う被験体または固形腫瘍にかかりやすい被験体を治療することを含む。タンパク質分解阻害剤による治療に特に感受性のある固形腫瘍は、乳癌、肺癌、大腸癌および前立腺癌を含む。特定の実施態様では、これらの癌の治療において、ＨＤＡＣ阻害剤をプロテアソーム阻害剤と組み合わす。特定の実施態様では、ＨＤＡＣ阻害剤は、本発明の化合物である。特定の実施態様では、プロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））である。
【０２４６】
本発明は、被験体におけるタンパク質分解障害治療の効力を評価するための諸方法を提供する。これらの方法は、一つ以上の治療前表現型を決定すること、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を被験体に投与すること、およびタンパク質分解阻害剤による初期治療期間後に一つ以上の表現型を決定することを含み、一つ以上の表現型の調節がタンパク質分解阻害剤治療の効力を示す。被験体は、タンパク質分解障害の予備診断を受けてもよく、または、本方法は、タンパク質分解障害を有する被験体を診断することをさらに含んでもよい。
【０２４７】
「初期治療期間の後に」またはタンパク質分解阻害剤の投与後の適切な期間の後に、例えば２時間後、４時間後、８時間後、１２時間後または７２時間後、数週間後または数ヶ月後に、比率、レベルおよび／または細胞位置の一つ以上を再び決定してもよい。一つ以上の表現型の調節は、タンパク質分解阻害剤の効力を示すことがある。治療期間を通じて一つ以上の表現型を定期的に決定してもよい。例えば、数時間ごと、数日ごとまたは数週ごとに一つ以上の表現型を検査して治療の効力をさらに評価してもよい。記載されている方法を用いて、タンパク質分解阻害剤による治療によって恩恵を受けることがある患者を検索し、または選択してよい。
【０２４８】
本明細書において、アグレソーム阻害剤による治療を受けている被験体の経過をモニタリングする諸方法が提供される。これらの方法は、一つ以上の治療前表現型を決定すること、治療的に有効な量のアグレソーム阻害剤を被験体に投与すること、およびアグレソーム阻害剤による初期治療期間の後に一つ以上の表現型を決定することを含み、一つ以上の表現型の調節がアグレソーム阻害治療の効力を示す。
【０２４９】
タンパク質分解阻害剤による治療に適するタンパク質分解障害を有する被験体を選択するための諸方法も提供される。これらの選択方法は、一つ以上の治療前表現型を決定すること、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤を被験体に投与すること、およびタンパク質分解阻害剤による初期治療期間の後、一つ以上の表現型を決定することを含み、一つ以上の表現型の調節は、該障害がタンパク質分解阻害剤による治療に対して好ましい臨床応答を示す可能性がある示度である。
【０２５０】
本明細書に記載されている方法において、ヒストンアセチラーゼ阻害剤（参照によってそれぞれ本明細書に組み込まれるＭｉｔｓｉａｄｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｓｉｇｎａｔｕｒｅ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２００４；１０１：５４０−５４５；Ｒｏｓａｔｏ  ＲＲ，Ｇｒａｎｔ  Ｓ．Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ．２００４；１３：２１−３８）、ｔｕｂａｃｉｎ、ボルテゾミブ、Ｖｅｌｃａｄｅ、ＳＡＨＡ、Ｒ１１５７７７  ＦＴＩ、１６６ホルミウム‐ＤＯＴＭＰ、三酸化ヒ素、１７‐ＡＡＧ、ＭＧ１３２、ｓａｐｏｊａｒｇｏｎ、ＮＰＩ‐００５２または本明細書に記載されているその他の化合物の一つ以上がタンパク質分解阻害剤として有用である。
【０２５１】
本発明のタンパク質分解阻害剤は、細胞タンパク質（例えば酵素）の活性を阻害してもよく、例えば、適当なタンパク質分解阻害剤は、ＨＤＡＣ６の活性、例えばＨＤＡＣ６酵素活性を阻害してもよい。ＨＤＡＣ６酵素活性の阻害によって、今度は、アグレソーム媒介タンパク質分解を阻害してもよい。適当なタンパク質分解阻害剤は、例えば、ＨＤＡＣ６のＣ末端アセチル化活性を阻害し、それによって、アグレソーム媒介タンパク質分解を阻害してもよい。他の適当なタンパク質分解阻害剤は、アグレソームの活性を阻害してもよい。
【０２５２】
特定の実施態様では、本発明の方法および組成物によってＨＤＡＣ６を阻害すると、ＨＳＰ９０がアセチル化される。ＨＳＰ９０がアセチル化されると、複数のクライアントタンパク質に対するこのタンパク質の活性は低下し、従って、細胞内のタンパク質ストレスが増加する。これは、乳癌および前立腺癌などの癌において特に重要である。これらの癌では、糖コルチコイド受容体は糖コルチコイドと結合するためにＨＳＰ９０機能を必要とするため、ＨＳＰ９０がアセチル化されると、ステロイド結合受容体の活性が低下する。ＨＳＰ９０を阻害すると、糖コルチコイド受容体含有細胞の糖コルチコイド応答性が低下することが見いだされた。従って、ＨＤＡＣ６阻害剤を投与するとＨＳＰ９０は過剰アセチル化され、乳癌細胞においてはエストロゲンへの感度、前立腺癌細胞においてはアンドロゲンへの感受性が低下する。
【０２５３】
適当なアグレソーム阻害剤は、ｔｕｂａｃｉｎ、スクリプテイド、または本明細書に記載されている化合物を含む。
【０２５４】
本発明のタンパク質分解阻害剤は、プロテアソーム活性も阻害してよい。適当なプロテアソーム阻害剤は、ヒストンアセチラーゼ阻害剤（１４、１５）、ｔｕｂａｃｉｎ、ボルテゾミブ、Ｖｅｌｃａｄｅ、ＳＡＨＡ、Ｒ１１５７７７  ＦＴＩ、１６６ホルミウムＤＯＴＭＰ、三酸化ヒ素、１７‐ＡＡＧ、ＭＧ１３２、ｓａｐｏｊａｒｇｏｎ、ＮＰＩ‐００５２または式Ｉの化合物、式Ｉの化合物の誘導体の一つ以上を含む。
【０２５５】
別の適当なタンパク質分解阻害剤は、ペプチド阻害剤、例えばＨＤＡＣ６由来ペプチド、ＨＳＰ９０由来ペプチド、上流および下流の両方のアグレソーム経路のタンパク質を含む。例えば、Ｂｕｚドメインを含むＨＤＡＣ６のＣ末端部分。
【０２５６】
本発明のタンパク質分解阻害剤は、細胞の一つ以上の表現型を調節することができる。表現型は、特定の治療または化合物への応答としての生物学的または臨床的後遺症であってよい。表現型は、貧血症、血小板減少症、好中球減少、溶骨性病変、骨痛、免疫不全、腎不全症、高カルシウム血症、成熟形質細胞の異数性、悪性細胞の百分率、チューブリンのアセチル化状態、成熟形質細胞のアポトーシス、アグレソームのレベル、成熟形質細胞中のアグレソームのレベル、ＨＤＡＣ６ユビキチン化、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６ユビキチン化、成熟形質細胞中のダイニンとのＨＤＡＣ６会合、成熟形質細胞中のユビキチン化タンパク質の細胞レベル、成熟形質細胞中のカスパーゼ‐８のレベル、成熟形質細胞中のＰＡＲＰのレベル、成熟形質細胞中のチミジン取り込み、拡張ＥＲシスターネ、成熟形質細胞の凝集、成熟形質細胞中の免疫グロブリンの沈着、非ヒストンタンパク質のアセチル化状態、細胞タンパク質の全体的なユビキチン結合状態、細胞周期調節の状態、壊死、アポトーシスの標識、アポトーシス状態、ラッセル小体形成、嚢胞性線維症膜貫通タンパク質受容体状態、および細胞タンパク質沈着の変調、または細胞タンパク質および細胞外タンパク質の全体的なアセチル化状態を含む。
【０２５７】
貧血症、アグレソームのレベル、血小板減少症、好中球減少、溶骨性病変、骨痛、免疫不全、腎不全症、高カルシウム血症、成熟形質細胞の異数性、悪性細胞の百分率、成熟形質細胞中のチミジン取り込み、成熟形質細胞中の完全長カスパーゼ‐８のレベル、成熟形質細胞中の完全長ＰＡＲＰのレベルまたは成熟形質細胞の凝集の一つ以上の減少は、治療法が有効であることを示す。
【０２５８】
チューブリンのアセチル化状態、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６ユビキチン化、カスパーゼ‐８の切断形のレベル、ＰＡＲＰの切断形のレベル、壊死、非ヒストンタンパク質のアセチル化状態、細胞ユビキチン化レベル、アポトーシス、アポトーシスの標識、細胞周期調節解除または成熟形質細胞中の免疫グロブリンの沈着の増加は、治療が有効であることを示す。
【０２５９】
表現型は、当分野で既知の多くの異なる方法によって決定してよい。例えば、被験体の表現型、例えば、貧血症、血小板減少症、好中球減少、溶骨性病変、骨痛、免疫不全、腎不全症および高カルシウム血症は、当分野で既知のこれらの病態を診断するための診断法によって決定するとよい。成熟形質細胞の表現型異数性は、細胞遺伝学的な方法によって決定するとよい。悪性細胞の百分率は、例えば、組織染色、フローサイトメトリー、ＦＩＳＨ、ＰＣＲ、エックス線撮影技法、ＭＲＩ、ＣＴスキャン、代謝方法および類似方法によって決定するとよい。チューブリンのアセチル化状態、成熟形質細胞のアポトーシス、成熟形質細胞中のアグレソームのレベル、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６ユビキチン化、成熟形質細胞中のＨＤＡＣ６とダイニンとの会合、成熟形質細胞中のユビキチン化タンパク質の細胞レベル、成熟形質細胞中のカスパーゼ‐８のレベル、カスパーゼ‐８の切断形のレベル、成熟形質細胞中のＰＡＲＰのレベル、ＰＡＲＰの切断形のレベル、および成熟形質細胞中のチミジン取り込みは、生化学的方法、例えば、免疫沈降法、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、質量分析法またはこれらの方法と他の方法との組み合わせによって決定するとよい。
【０２６０】
本発明の方法によれば、試料の表現型は、治療の前、タンパク質分解障害の可能性の診断の後、治療の後、および治療中の任意の時点で決定してよい。これらの期間の任意のものの間または任意のその他の期間の間の被験体由来試料に対して、これらの方法を１回以上使用してよい。
【０２６１】
本発明の方法は、タンパク質分解阻害剤による第二の治療期間の後に被験体の表現型を決定することをさらに含んでもよい。第二の治療期間は、第一の期間または最初の治療期間と同じ長さであってもよく、あるいは、第一または最初の治療期間より長いかまたは短くてもよい。第二の治療期間としての決定は、被験体から得られた第二の生物学的試料に対してであってよい。
【０２６２】
タンパク質分解阻害剤による治療を受けている被験体または細胞に、治療的に有効な量の一つ以上の追加のタンパク質分解阻害剤をさらに投与してもよい。別の阻害剤は、アグレソーム阻害剤またはプロテアソーム阻害剤であってよい。別の阻害剤は、例えば、ボルテゾミブ、ｔｕｂａｃｉｎ、ヒストンアセチラーゼ阻害剤、ｔｕｂａｃｉｎ、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））、ＳＡＨＡ、Ｒ１１５７７７  ＦＴＩ、１６６ホルミウム‐ＤＯＴＭＰ、三酸化ヒ素、１７‐ＡＡＧ、または式Ｉの化合物、式Ｉの化合物の誘導体であってもよい。
【０２６３】
被験体または細胞がタンパク質分解障害の治療を受けている間に、化学療法剤、放射線剤、ホルモン剤、生物剤または抗炎症剤の一つ以上を共投与してもよい。化学療法剤は、タモキシフェン、トラスツザマブ、ラロキシフェン、ドキソルビシン、フルオロウラシル／５‐ＦＵ、パミドロネート二ナトリウム、アナストロゾール、エクセメスタン、シクロホスファミド、エピルビシン、レトロゾール、トレミフェン、フルベストラント、フルオキシメステロン、トラスツズマブ、メトトレキセート、メガストロールアセテート、ドセタキセル、パクリタキセル、テストラクトン、アジリジン、ビンブラスチン、カペシタビン、ゴセレリンアセテート、ゾレドロン酸、タキソール、ビンブラスチンまたはビンクリスチンを含んでよい。有用な非ステロイド系抗炎症剤は、アスピリン、イブプロフェン、ジクロフェナク、ナプロキセン、ベノキサプロフェン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、フルブフェン、ケトプロフェン、インドプロフェン、ピロプロフェン、カルプロフェン、オキサプロジン、プラモプロフェン、ムロプロフェン、トリオキサプロフェン、スプロフェン、アミノプロフェン、チアプロフェン酸、フルプロフェン、ブクロキシ酸、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、ゾメピラック、チオピナック、ジドメタシン、アセメタシン、フェンチアザク、クリダナク、オキシピナク、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、ニフルム酸、トルフェナム酸、ジフルリザール、フルフェニザール、ピロキシカム、スドキシカム、イソキシカム；アスピリン、サリチル酸ナトリウム、トリサリチル酸コリンマグネシウム、サルサリン酸、ジフルニサル、サリチルサリチル酸、スルファサラジンおよびオルサラジンを含むサリチル酸誘導体；アセトアミノフェンおよびフェナセチンを含むパラ‐アミノフェノール誘導体；インドメタシン、スリンダクおよびエトドラクを含むインドールおよびインデン酢酸類；トルメチン、ジクロフェナクおよびケトロラクを含むヘテロアリール酢酸；メフェナム酸およびメクロフェナム酸を含むアントラニル酸（フェナム酸塩）；オキシカム（ピロキシカム、テノキシカム）およびピラゾリジンジオン（フェニルブタゾン、オキシフェンタルタゾン）を含むエノール酸；およびナフメトンを含むアルカノンならびに薬学的に受容可能なそれらの塩およびそれらの混合物を含むがそれらに限定されない。もっと詳しいＮＳＡＩＤの説明については、参照によって本明細書に全体が組み込まれるＧｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ
６１７−５７  （Ｐｅｒｒｙ  Ｂ．Ｍｏｌｉｎｈｏｆｆ  ａｎｄ  Ｒａｙｍｏｎｄ  Ｗ．Ｒｕｄｄｏｎ  ｅｄｓ．，９ｔｈ  ｅｄ  １９９６）中のＰａｕｌ  Ａ．Ｉｎｓｅｌ，Ａｎａｌｇｅｓｉｃ−Ａｎｔｉｐｙｒｅｔｉｃ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇｓ  Ｅｍｐｌｏｙｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｇｏｕｔ，と、Ｇｌｅｎ  Ｒ．Ｈａｎｓｏｎ，Ａｎａｌｇｅｓｉｃ，Ａｎｔｉｐｙｒｅｔｉｃ  ａｎｄ  Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ
Ｐｈａｒｍａｃｙ  Ｖｏｌ  ＩＩ  １１９６−１２２１  （Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄ．１９ｔｈ  ｅｄ．１９９５とを参照すること。
【０２６４】
被験体または細胞がタンパク質分解阻害剤による治療を受けている間、細胞または被験体をモニタリングするとよい。
【０２６５】
本発明の方法は、治療前表現形または治療後表現型の一つ以上を標準表現型と比較することをさらに含んでもよい。標準表現型は、参照細胞または参照細胞集団における対応する表現型である。参照細胞は、タンパク質分解障害の疑いのない人物または被験体由来の細胞、被験体由来の細胞、培養細胞、被験体由来の培養細胞または治療前被験体由来の細胞の一つ以上である。被験体由来の細胞は、例えば、骨髄間質細胞、（ＢＭＳＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、リンパ球、毛嚢、血球、他の上皮細胞、骨髄形質細胞、原発性癌細胞、患者由来腫瘍細胞、正常造血幹細胞または癌性造血幹細胞、神経幹細胞、固形腫瘍細胞、星状細胞および類似細胞を含んでもよい。
【０２６６】
本発明の方法は、細胞または被験体におけるアグレソーム媒介タンパク質分解を阻害する諸方法も含む。これらの方法は、細胞をアグレソーム阻害剤と接触させることを含む。一実施態様では、アグレソームタンパク質分解は、ＨＤＡＣ６によって媒介される。本方法は、細胞または被験体におけるプロテアソームタンパク質分解を阻害することをさらに含んでよい。例えば、ボルテゾミブおよびｔｕｂａｃｉｎの投与によって。
【０２６７】
薬学的組成物
本発明は、薬学的組成物も提供する。本薬学的組成物は、式Ｉ、式ＩＩまたは本明細書に他の方法で記載されている本発明の化合物の有効な量と薬学的に受容可能なキャリアとを含む。さらに別の実施態様では、有効な量は、既に説明したように、タンパク質分解障害を治療するために効果がある。
【０２６８】
一実施態様では、本発明の化合物は、薬学的に受容可能な剤形、例えば、薬学的に受容可能な剤形が被験体に投与された後、少なくとも１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間または４週間、本発明の化合物の被験体への持続的な供給を提供する、薬学的に受容可能な剤形を用いて被験体に投与される。
【０２６９】
特定の実施態様では、これらの薬学的組成物は、被験体への局所投与または経口投与に適している。他の実施態様では、下記に詳細に説明するように、本発明の薬学的組成物は、（１）経口投与、例えば、飲み薬（水溶液または非水溶液または懸濁液）、錠剤、ボーラス、粉末、顆粒、ペースト、（２）例えば無菌溶液または懸濁液として、例えば皮下注射、筋肉内注射または静脈内注射による非経口投与、（３）局所塗布、例えば、皮膚に塗布されるクリーム、軟膏またはスプレーとして、（４）膣内または直腸内投与、例えば、ペッサリー、クリームまたは発泡体として、あるいは（５）エーロゾル、例えば、化合物を含む水性エーロゾル、リポソーム調製物または固体粒子として、などの場合に適応したものを含む、固形または液体形での投与のために特に調合してよい。
【０２７０】
句「薬学的に受容可能な」は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、またはその他の問題または合併症なく、妥当な利点／危険の比を伴う、人類および動物の組織と接触させて用いるのに適する、本発明の化合物、そのような化合物を含む組成物、および／または剤形を指す。
【０２７１】
句「薬学的に受容可能なキャリア」は、主題化学物質を担持しまたは一つの器官または体の部分から別の器官または体の部分へ輸送することに関与する液体または固体充填材、希釈剤、添加剤、溶媒またはカプセル化材料などの薬学的に受容可能な材料、組成物またはベヒクルを含む。各キャリアは、剤形の他の成分と適合し、患者に有害でないという意味で「許容される」。薬学的に受容可能なキャリアとして働くことができる材料のいくつかの例は、（１）ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖、（２）コーンスターチおよびジャガイモ澱粉などの澱粉、（３）セルロース、およびカルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのセルロースの誘導体、（４）粉体化トラガカント、（５）モルト、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）カカオバターおよび坐薬ワックスなどの医薬品添加物、（９）落花生油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油などの油、（１０）プロピレングリコールなどのグリコール、（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール、（１２）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル、（１３）寒天、（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤、（１５）アルギン酸、（１６）発熱性物質を含まない水、（１７）等張食塩水、（１８）リンゲル液、（１９）エチルアルコール、（２０）リン酸緩衝液および（２１）医薬調合品中に使用されるその他の無毒性適合物質を含む。
【０２７２】
ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなどの濡れ剤、乳化剤および潤滑剤、ならびに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味料、香味料および芳香剤、防腐剤および酸化防止剤も組成物中に存在してよい。
【０２７３】
薬学的に受容可能な抗酸化剤の例は、（１）アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムおよび類似物などの水溶性抗酸化剤、（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキソトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ‐トコフェロールおよび類似物などの油溶性抗酸化剤および（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸および類似物などの金属キレート化剤を含む。
【０２７４】
本発明（単数または複数）の化合物を含む組成物は、経口、鼻孔、局所（バッカルおよび舌下を含む）、直腸内、膣内、エーロゾルおよび／または非経口投与に適するものを含む。本組成物は、簡便に単位剤形で提供してもよく、薬学分野で公知の任意の方法によって調製してもよい。キャリア材料と組み合わせて単一剤形を作り出すことができる有効成分の量は、治療されるホスト、特定の投与モードによって変化する。キャリア材料と組み合わせて単一剤形を作り出すことができる有効成分の量は、一般的に、治療効果を生み出す化合物の量となる。一般に、１００パーセント中、この量は、有効成分の約１パーセントから約９９％、好ましくは約５パーセントから約７０パーセント、より好ましくは約１０パーセントから約３０パーセントの範囲になる。
【０２７５】
これらの組成物を調製する方法は、本発明（単数または複数）の化合物をキャリアおよび任意選択として一つ以上の付属成分と会合させる工程を含む。一般に、剤形は、本発明の化合物を液体キャリアまたは微細に粉砕された固体キャリアあるいは両方と一様におよび緊密に会合させ、次に、必要なら、製品の形状を整えることによって調製される。
【０２７６】
経口投与に適する本発明の組成物は、カプセル、カシェ剤、丸薬、錠剤、トローチ剤（風味基剤、通常はスクロースおよびアカシアまたはトラガカントを用いる）、粉剤、顆粒、または溶液として、あるいは水性液体または非水性液体中の懸濁液として、または水中油または油中水液体エマルジョンとして、またはエリキシル剤またはシロップとして、またはトローチ（ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシアなどの不活性基剤を用いる）として、および／または口内洗浄液および類似物としての形であってよく、それぞれは予め定められた量の本発明（単数または複数）の化合物を有効成分として含む。ボーラス、舐剤またはペーストとして化合物を投与してもよい。
【０２７７】
経口投与のための本発明の固体剤形（カプセル、錠剤、丸薬、糖衣錠、粉末、顆粒および類似物）においては、有効成分は、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムなどの一つ以上の薬学的に受容可能なキャリア、および／または（１）澱粉、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよび／またはケイ酸などの充填剤または増量剤、（２）例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシアなどのバインダ、（３）グリセロールなどの湿潤剤、（４）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカ澱粉、アルギン酸、特定のシリケートおよび炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、（５）パラフィンなどの溶解減速剤、（６）第四アンモニウム化合物などの吸収促進剤、（７）例えばアセチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤、（８）カオリンおよびベントナイト粘土などの吸収剤、（９）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびそれらの混合物などの潤滑剤および（１０）着色剤の任意のものと混合される。カプセル、錠剤および丸薬の場合、薬学的組成物は、緩衝剤も含んでよい。ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコールおよび類似物のような医薬品添加物を用いるソフトおよびハード充填ゼラチンカプセル中の充填剤として同様な種類の固体組成物も使用してよい。
【０２７８】
錠剤は、任意選択として一つ以上の付属成分とともに、圧縮または成型によって作ってよい。圧縮型錠剤は、バインダ（例えばゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えばナトリウム澱粉グリコレートまたは架橋型カルボキシルメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤または分散剤を用いて調製してよい。成形型錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末状有効成分の混合物を適当な機械中で成型することによって作ってよい。
【０２７９】
本発明の薬学的組成物の錠剤、および糖衣丸、カプセル、丸薬および顆粒剤などの他の固体剤形は、必要に応じて、医薬品調合分野で公知の腸溶コーティングおよびその他のコーティングなどのコーティングおよびシェルで仕上げまたは調製してよい。それらは、例えば、所望の放出プロフィルを提供するさまざまな比率のヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／またはミクロスフェアを用いて、体内で低速または制御された有効成分の放出を提供するように調合してよい。それらは、例えば、細菌を遮断するフィルターを通してろ過することによって、または滅菌水またはその他の無菌注射可能媒体中に使用前に溶解させることができる無菌固体組成物の形の滅菌剤を組み込むことによって、滅菌してよい。これらの組成物は、任意選択として乳白剤も含んでよく、これらの組成物が、任意選択として遅らせて、胃腸管の特定の部分の中でだけ、または優先的に、有効成分（単数または複数）を放出する組成物であってもよい。使用することができる埋め込み用組成物の例は、重合体材料およびワックスを含む。有効成分は、適切なら、上記で説明した医薬品添加物の一つ以上によってマイクロカプセル化された形であってよい。
【０２８０】
本発明（単数または複数）の化合物の経口投与のための液体剤形は、薬学的に受容可能な乳濁液、マイクロ乳濁液、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシル剤を含む。有効成分に加えて、液体剤形は、例えば水またはその他の溶媒などの当分野で一般的に用いられる不活性希釈剤、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３‐ブチレングリコール、油（特に、綿実油、落花生油、コーン油、胚油、オリーブ油、キャスター油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステルおよびそれらの混合物などの可溶化剤および乳化剤を含んでよい。
【０２８１】
経口組成物は、不活性希釈剤に加えて、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味料、香味料、着色剤、芳香剤および防腐剤などの補助剤を含んでよい。
【０２８２】
懸濁液は、本発明（単数または複数）の活性化合物に加えて、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール類、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル類、微結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガカントおよびそれらの混合物のような懸濁剤を含んでよい。
【０２８３】
直腸内投与または膣内投与用の本発明の薬学的組成物は、坐薬として提供してよい。座薬は、一つ以上の本発明（単数または複数）の化合物を、例えば、カカオバター、ポリエチレングリコール、坐薬ワックスまたはサリチレートを含む一つ以上の適当な非刺激性医薬品添加物またはキャリアと混合することによって調製することができ、室温では固体であるが、体温では液体となり、従って、直腸腔または膣腔中で融解し、活性薬剤を放出する。
【０２８４】
膣内投与に適する本発明の組成物は、当分野で適切であると知られているようなキャリアを含むペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、発泡体またはスプレー調合物を含む。
【０２８５】
本発明（単数または複数）の化合物の局所投与または経皮投与用の剤形は、粉剤、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチおよび吸入薬を含む。本発明（単数または複数）の活性化合物は、薬学的に受容可能なキャリアおよび必要とされる任意の防腐剤、緩衝液、または噴霧剤と無菌条件下で混合してよい。
【０２８６】
軟膏、ペースト、クリームおよびゲルは、本発明の発明（単数または複数）化合物に加えて、動物脂肪および植物脂肪、油、ワックス、パラフィン、澱粉、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛またはそれらの混合物などの医薬品添加物を含んでよい。
【０２８７】
粉剤およびスプレー剤は、本発明（単数または複数）の化合物に加えて、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉剤またはこれらの物質の混合物などの医薬品添加物を含んでよい。スプレー剤は、さらに、クロロフルオロ炭化水素などの通常の噴霧剤、ならびにブタンおよびプロパンなどの揮発性非置換炭化水素を含んでよい。
【０２８８】
あるいは、本発明（単数または複数）の化合物は、エーロゾルによって投与してよい。これは、化合物を含む水性エーロゾル、リポソーム調製物または固体粒子を調製することによって実現される。非水系懸濁液（例えば、フルオロカーボン噴霧剤）を用いてよいと考えられる。音波噴霧器は、化合物を分解させる結果に終わることがあるせん断力に薬剤を曝露することが最も少ないので好ましい。
【０２８９】
元来、水性エーロゾルは、薬剤の水溶液または懸濁液を、通常の薬学的に受容可能なキャリアおよび安定剤と調合することによって作られる。キャリアおよび安定剤は、特定の化合物の要件によって変るが、一般に、非イオン界面活性剤（トゥイーン類、プルロニック類またはポリエチレングリコール）、血清アルブミンのような無害タンパク質、ソルビタンエステル、オレイン酸、レシチン、グリジンなどのアミノ酸、緩衝液、塩、糖または糖アルコールを含む。一般に、エーロゾルは、等張液から調製される。
【０２９０】
経皮パッチには、本発明（単数または複数）の化合物の制御された供給を体に提供するという別の利点がある。そのような剤形は、薬剤を適切な媒質に溶解させるか、または分散させることによって作ることができる。皮膚を通過する有効成分の流束を増加させるために吸収促進薬も用いてよい。そのような流束の速度は、速度を制御する膜を提供するかまたは有効成分を高分子マトリックスまたはゲル中に分散させることによって制御してもよい。
【０２９１】
眼薬剤形、眼軟膏剤、粉剤、溶液および類似物も本発明の範囲内にあるとみなされる。
【０２９２】
非経口投与に適する本発明の薬学的組成物は、一つ以上の薬学的に受容可能な無菌等張水溶液または非水溶液、分散液、懸濁液または乳濁液、あるいは無菌粉剤と組み合わされた一つ以上の本発明（単数または複数）の化合物を含み、使用の直前に再構成して無菌注射可能溶液または分散液としてよく、抗酸化剤、緩衝液、静菌薬、調合物を意図される被験体の血液と等張化する溶質、あるいは懸濁剤または増粘剤を含んでよい。
【０２９３】
本発明の薬学的組成物中に使用してよい適当な水系キャリアおよび非水系キャリアの例は、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールおよび類似物など）、およびそれらの適当な混合物、オリーブ油などの植物オイル、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルを含む。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合には必要な粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって維持してもよい。
【０２９４】
これらの組成物は、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤などのアジュバントも含んでよい。微生物の作用の予防は、さまざまな抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸および類似物などを含ませることによって確実化してよい。砂糖、塩化ナトリウムおよび類似物などの等張剤を組成物中に含むことも望ましい。さらに、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅くする薬剤を含ませることによって、注射可能剤形の吸収を長期化してよい。
【０２９５】
場合によっては、薬物の効果を長引かせるために、皮下注射または筋肉内注射からの薬物の吸収を遅くすることが望ましい。これは、水溶性の低い結晶または非晶質材料の液体懸濁物を用いることによって実現してよい。こうすると、薬物の吸収速度は薬剤の溶解速度に依存し、溶解速度は結晶のサイズ及び結晶形に依存する。あるいは、薬物を油ベヒクル中に溶解し、または懸濁させることによって非経口投与した剤形の吸収の遅延を実現する。
【０２９６】
ポリラクチド‐ポリグリコリドなどの生分解性高分子中の本発明（単数または複数）の化合物のマイクロカプセル化マトリックスを形成することによって注射可能デポー剤形を作る。重合体に対する薬物の比および使用される特定の重合体の性質によって、薬物放出の速度を制御することができる。他の生分解性高分子の例は、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）を含む。デポー剤注射調合物は、体組織と適合するリポソームまたはマイクロ乳濁液中に薬物を捕捉することによっても調製される。
【０２９７】
本発明（単数または複数）の化合物をヒトおよび動物に医薬品として投与するときは、それ自体として、または、例えば、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わされた０．１から９９．５％（より好ましくは０．５から９０％）の有効成分を含む薬学的組成物として投与してよい。
【０２９８】
選択された投与経路にかかわらず、適当な水和形で用いることができる本発明（単数または複数）の化合物、および／または本発明の薬学的組成物は、当業者に既知の従来の方法によって薬学的に受容可能な剤形に調合される。
【０２９９】
本発明の薬学的組成物中の有効成分の実際の用量レベルおよび時間的な投与計画は、患者に対して有毒荷ならずに、特定の患者、組成物および投与モードで所望の治療応答を実現するのに効果のある有効成分の量が得られるように変化させてよい。用量範囲の例は、１日あたり０．１から１０ｍｇである。
【０３００】
本発明の場合の本発明化合物の好ましい用量は、患者が許容することができ、重篤な高カルシウム血症を発症させることのない最大値である。好ましくは、本発明の本発明化合物は、体重１キログラム当り約０．００１ｍｇから約１００ｍｇ、約０．００１〜約１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．００１ｍｇ〜約１００ｍｇ／体重ｋｇの濃度で投与される。上記記載の値の中間にある範囲も本発明の一部であるものとする。
【０３０１】
スクリーニングアッセイ
本発明は、タンパク質分解、特にＨＤＡＣ６の高性能選択的阻害剤（例えばナノモル濃度域で効果がある）を追求して、新規なスクリーニング方法を提供する。一実施態様では、スクリーニング方法は、癌細胞の定量的、細胞、画像利用スクリーニングである。
【０３０２】
本発明のスクリーニング方法は、癌細胞の定量的、ハイスループット、画像利用スクリーニングを含む。例えば、マルチウェルプレートまたはチップ、例えば、バイオトローブオープンアレイ（ＴＭ）（ＢｉｏＴｒｏｖｅ  ＯｐｅｎＡｒｒａｙ（ＴＭ））チップ（マサチューセッツ州ウォバーン（Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）のバイオトローブ（ＢｉｏＴｒｏｂｅ）社）などの３８４ウェルプレートフォーマットまたはチップ中で細胞を成長させるとよい。これらのウェルおよびプレート中で細胞を成長させ、処理するとよい。細胞を、低分子ライブラリ、ペプチドライブラリ、核酸ライブラリで処理する。いくつかのライブラリを、本明細書で考察されるように、ＨＤＡＣ阻害専用にしてよい。他のライブラリを、他のアグレソームまたはプロテアソーム阻害標的の阻害専用にしてよい。処理したら、細胞を、本明細書で考察される表現型によってモニタリングするとよい。例えば、チューブリンおよびヒストンアセチル化状態特異性抗体を用い、対応する蛍光性二次抗体によって認識するとよく、または、結合するなら直接標識化し、検出するとよい。次に、ウェルまたはスルーホールを公平な方法で採点する。これは、例えば、自動化アクソン（Ａｘｏｎ）５０００Ａ落射蛍光顕微鏡で実行するとよい。採点に際しては、例えば、対照と比較した蛍光の量、基準に対する相対蛍光量、または蛍光の量を考慮する。基準として対照を用いてよい。例えば、ｔｕｂａｃｉｎ用の対照として、トリコスタチンおよびＤＭＳＯを対照として用いてよい。次に、ＲＰＭＩ‐８２２６骨髄腫細胞株における直接細胞毒性およびボルテゾミブとの相乗効果の評価に従って、分子に順位を付ける。
【０３０３】
チューブリン選択的サブライブラリは、多様性を指向した合成経路から誘導された分子を含んでもよい。例えば、Ｓｔｅｒｎｓｏｎ  ＳＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｒｇ  Ｌｅｔｔ．２００１  Ｄｅｃ  ２７；３（２６）：４２３９−４２；Ｈａｇｇａｒｔｙ  ＳＪ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２００３  Ｍａｙ；１０（５）：３８３−９６；Ｈａｇｇａｒｔｙ  ＳＪ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００３  Ａｐｒ  １５；１００（８）：４３８９−９４．Ｅｐｕｂ  ２００３  Ａｐｒ  ０３；ａｎｄ  Ｈａｇｇａｒｔｙ  ＳＪ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  Ｈｉｇｈ
Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ．２００４  Ｎｏｖ；７（７）：６６９−７６に記載されている化合物のライブラリをスクリーニングして別の活性化合物を特定してもよい。
【０３０４】
細胞中のタンパク質分解を阻害する候補化合物を同定するための方法は、アグレソーム形成を示す細胞を候補化合物と接触させること、および細胞の表現型を決定することを含み、表現型の調節は化合物の効力を示す。細胞の表現型は、本明細書に記載されているように、例えば、画像ベースの多次元スクリーニングによって決定するとよい。スクリーニングアッセイにおいて用いられる細胞の種類は、骨髄腫患者細胞、骨髄腫細胞株、骨髄腫細胞株の一次細胞培養物を含んでよい。細胞培養物、一次培養物または患者細胞は、間質細胞または他の細胞と共培養してよい。接触させることは、候補化合物を培地に、直接細胞に、または、例えば側方流または平面流パッチクランプデバイス中で細胞上を流れる流体として加えることによってであってよい。当業者なら、本開示の利点を発揮する他の適切な方法を同定することができると考えられる。
【０３０５】
候補分子は、低分子、ペプチドまたは核酸の一つ以上であってよい。核酸は、例えば、ＲＮＡまたはＤＮＡ分子、例えばｍＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡまたはオリゴであってよい。
【０３０６】
適当なペプチドは、ＨＤＡＣ６、ダイニン、ユビキチンまたはシャペロン由来のペプチドを含んでよい。例えば、ＨＤＡＣ６のＣ末端（アミノ酸４３９〜５０３）、ＨＤＡＣ６のアミノ酸５００〜７９０、ＨＤＡＣ６のアミノ酸７８１〜９３１またはアミノ酸１〜４６０由来のペプチド。他の適当なペプチドは、Ｙａｏが特定したＨＤＡＣ６のダイニン結合ドメイン（アミノ酸４３９〜５０３）、Ｃ末端ＴＤＡＣドメイン（アミノ酸５００〜７９０）、ユビキチン結合ＢＵＺドメイン（アミノ酸７８１〜９３１）またはＮ末端の４６０個のアミノ酸を含む。
【０３０７】
適当な低分子は、天然物および合成物を含む。分子は、ライブラリに含まれていてよく、化合物のライブラリは、市販され（例えば、カリフォルニア州サンディエゴ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）のケムブリッジ（ＣｈｅｍＢｒｉｄｇｅ）から）、あるいは既知の方法（例えば、本明細書に記載されているように）によって調製してもよい）。
【０３０８】
試験化合物を評価するための他のスクリーニング方法は、アグレソーム形成を示す細胞を試験化合物と接触させること、および接触の後に細胞を評価することを含み、基準値に対する一つ以上の表現型の調節の相関は、試験化合物がタンパク質分解障害治療薬として有用であり得る示度である。
【０３０９】
本方法は、タンパク質分解阻害剤による初期治療期間の後に細胞の表現型を決定することをさらに含んでよい。初期治療期間は、本発明の治療化合物の安定なおよび／または治療薬として有効な血清レベルが達成されるのに要する時間、被験体が治療薬のほとんどの部分を分解するのに要する時間、または被験体またはヘルスケア専門家が選択した治療に関連する任意の期間であってよい。
【０３１０】
本発明のこの実施態様は、細胞、組織または被験体におけるタンパク質分解を調節、例えば、阻害するか、または細胞、組織または被験体の本明細書に記載されている表現型を調節する分子のための化合物ライブラリをスクリーニングするのに十分適している。化合物ライブラリは、ペプチドライブラリ、ペプチドミメティックライブラリ、化学合成ライブラリ、組換え、例えばファージ提示ライブラリ、およびインビトロ翻訳利用ライブラリ、その他の非ペプチド合成有機ライブラリ等であってよい。
【０３１１】
本発明の方法を用いてスクリーニングされたライブラリは、さまざまな種類の化合物を含んでよい。本発明の方法によってスクリーニングすることができるライブラリの例は、ペプチド；ランダム生物オリゴマー；ヒダントイン類、ベンゾジアゼピン類およびジペプチドなどのダイバーソマー（ｄｉｖｅｒｓｏｍｅｒｓ）；ビニローグ型ポリペプチド；非ペプチドペプチドミメティック；オリゴカルバメート；ペプチジルホスホナート；ペプチド核酸ライブラリ；抗体ライブラリ；炭水化物ライブラリ；および低分子ライブラリ（好ましくは有機低分子ライブラリ）を含むがそれらに限定されない。いくつかの実施態様では、スクリーニングされたライブラリ中の化合物は、核酸またはペプチド分子である。非限定的な例では、ペプチド分子は、ファージ提示ライブラリ中に存在してよい。他の実施態様では、これらの種類の化合物は、非天然アミノ酸、例えばＤ‐アミノ酸を含むペプチド、γ‐アミノリン酸およびγアミノリン酸などのアミノ酸のリンアナログ、または非ペプチド結合を有するアミノ酸を含むペプチドアナログ、ホスホロチオエートおよびＰＮＡなどの核酸アナログ、ホルモン、抗原、合成または天然薬物、オピエート類、ドーパミン、セロトニン、カテコールアミン類、トロンビン、アセチルコリン、プロスタグランジン類、有機分子、フェロモン、アデノシン、スクロース、グルコース、ラクトースおよびガラクトースを含むがそれらに限定されない。本発明のアッセイにおいては、ポリペプチドまたはタンパク質のライブラリも用いてよい。
【０３１２】
好ましい実施態様では、これらのコンビナトリアルライブラリは、ベンゾジアゼピン類、イソプレノイド、チアゾリジノン類、メタチアザノン類、ピロリジン類、モルホリノ化合物およびベンゾジアゼピン類を含むがそれらに限定されない小有機分子ライブラリである。別の実施態様では、コンビナトリアルライブラリは、ペプチド；ランダム生体オリゴマー；ベンゾジアゼピン類；ヒダントイン類、ベンゾジアゼピン類およびジペプチド類などのダイバーソマー；ビニローグ型ポリペプチド；非ペプチドペプチドミメティック；オリゴカルバメート；ペプチジルホスホネート；ペプチド核酸ライブラリ；抗体ライブラリ；または炭水化物ライブラリを含む。コンビナトリアルライブラリ自体が市販されている（例えば、ニュージャージー州プリンストン（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）のコムジェネックス（ＣｏｍＧｅｎｅｘ）、ロシアのモスクワ（Ｍｏｓｃｏｗ，Ｒｕ）のアシネックス（Ａｓｉｎｅｘ）、ミズーリ州セントルイス（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）のトライポス社（Ｔｒｉｐｏｓ  Ｉｎｃ．）、ロシアのモスクワのケムスタット社（ＣｈｅｍＳｔａｒ、Ｌｔｄ）、ペンシルベニア州エクストン（Ｅｘｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）の３Ｄファーマシューティカルズ（３Ｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、メリーランド州コロンビア（Ｃｏｌｕｍｂｉａ、Ｍａｒｙｌａｎｄ）のマーテックバイオサイエンス（Ｍａｒｔｅｋ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）等を参照すること）。
【０３１３】
好ましい実施態様では、ライブラリの化合物が細胞取り込みにより適するように、ライブラリを予め選択する。例えば、化合物が細胞に進入する可能性を高めるサイズ、親油性、親水性および水素結合など、しかしそれらに限定されない特定のパラメータによって化合物を選択する。別の実施態様では、３次元または４次元コンピュータ計算プログラムによって化合物を解析する。
【０３１４】
本発明の方法によって使用するためのコンビナトリアル化合物ライブラリは、合成してよい。薬理活性、生物活性またはその他の活性をスクリーニングすることができる小さな有機化合物の大きな集合、すなわちライブラリの創出を目的とする合成方法には多大な関心が寄せられている。膨大なコンビナトリアルライブラリを創製するために利用される合成方法は、溶液中で、または固相すなわち固体担体上で実行される。固相合成は、過剰の試薬を容易に加え、各反応段階後に洗い流すことができるので、多段階反応を実行し、反応を高収率で完了させることをより容易にする。固相コンビナトリアル合成は、単離、精製およびスクリーニングを改善する傾向もある。しかし、もっと伝統的な溶液相化学は、固相化学より幅広い有機反応を支える。
【０３１５】
本発明のコンビナトリアル化合物ライブラリは、参照によって本明細書に全体が組み込まれるキルコイン（Ｋｉｌｃｏｉｎ）らの米国特許第６，１９０，６１９号に記載されている装置を用いて合成してよい。米国特許第６，１９０，６１９号は、複数の個別の化合物の並列合成、すなわちコンビナトリアル化合物ライブラリのための複数の反応槽を保持することができる合成装置を開示している。
【０３１６】
一実施態様では、コンビナトリアル化合物ライブラリは、溶液中で合成してよい。参照によって全体が本明細書に組み込まれるボウジャー（Ｂｏｇｅｒ）らの米国特許第６，１９４，６１２号に開示されている方法は、コンビナトリアルライブラリの溶液相合成用のテンプレートとして有用な化合物を主題としている。テンプレートは、液／液または固／液抽出を用いて反応生成物を未反応の反応物から容易に精製することができるように設計されている。このテンプレートを用いるコンビナトリアル合成によって作り出される化合物は、好ましくは小有機分子である。ライブラリ中のいくつかの化合物は、非ペプチドまたはペプチドの効果を模倣してよい。コンビナトリアル化合物ライブラリの固相合成とは対照的に、液相合成では、多段階固相合成の個別ステップをモニタリングするための専門のプロトコルを使用する必要がない（Ｅｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６０：２６５２；Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６０：２６５０；Ｆｉｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５９：７９５５；Ｌｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４９：７５８８；Ｍｅｔｚｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ，１９９３，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３２：８９４；Ｙｏｕｎｇｑｕｉｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｒａｐｉｄ  Ｃｏｍｍｕｎ．Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔ．８：７７；Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１７：５４１９；Ｂｒｕｍｍｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４：３９９  および  Ｓｔｅｖａｎｏｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．３：４３１）。
【０３１７】
本発明の方法に有用なコンビナトリアル化合物ライブラリを固体担体上に合成することができる。一実施態様では、合成中に固体担体を分離し、混合するプロトコルである分割合成法を用いて、化合物のライブラリを固体担体上に合成する（例えば、Ｌａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９７：４１−４４８；Ｏｈｌｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：１０９２２−１０９２６およびそれらの文献中の引用文献を参照すること）。最終的なライブラリにおける各固体担体は、その表面に取り付けられた実質的に一種類の化合物を有する。一つの生成物が各担体に取り付けられている、固体担体上のコンビナトリアルライブラリを合成するための他の方法は、当業者には既知である（例えば、Ｎｅｆｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９７：４４９−４７２を参照すること）。
【０３１８】
ＨＤＡＣ阻害剤およびＴＤＡＣ阻害剤を同定するための免疫蛍光アッセイ
本発明は、ＨＤＡＣ阻害活性および／またはＴＤＡＣ阻害活性を有する試験薬剤を同定するための免疫蛍光法利用アッセイを提供する。本発明のアッセイは、アセチル化チューブリンおよびアセチル化リジン用の特異的な抗体（すなわちアセチル化ヒストン用の標識）の使用によっている。本アッセイは、ＴＤＡＣに対してＨＤＡＣを、または反対に、特異的に阻害する薬剤を同定する際に特に有用である。上記で説明したように、本発明のアッセイを用いて、低分子、重合体、生体分子、タンパク質、ペプチド、ポリヌクレオチド等を含む任意の種類の薬剤をスクリーニングしてよい。特定の実施態様では、低分子がスクリーニングされる。特定の実施態様では、低分子はｔｕｂａｃｉｎ様分子またはｔｕｂａｃｉｎ誘導体である。特定の実施態様では、低分子は本発明の化合物である。試験薬剤は、購入された、従来の合成技法によって合成された、コンビナトリアルケミストリー技法によって合成された、または歴史的な化合物の集団から得られた低分子でもあってよい。特定の実施態様では、試験薬剤は生体分子である。特定の実施態様では、試験薬剤はタンパク質またはペプチドである。さらに別の実施態様では、試験薬剤はポリヌクレオチドである。特定の実施態様では、試験薬剤は重合体である。
【０３１９】
本アッセイは、特定の条件下で細胞を特定の濃度の試験薬剤と接触させることを含む。特定の条件は、培地の種類、薬剤の濃度、薬剤を溶解するかまたは懸濁させる溶媒、ｐＨ、温度、培養時間等を含む。これらの特定のパラメータは、当業者なら理解するように、アッセイを実行するオペレータまたは科学者が決定することができる。試験化合物による所定の培養時間の後、アセチル化チューブリンに対する第一の一次抗体とアセチル化リジンに対する第二の一次抗体とで細胞を処理する。次に、細胞を、一次抗体のそれぞれに特異的であり、固有のシグナルによって同定することができる二つの二次抗体と接触させる。特定の実施態様では、固有のシグナルは、固有の蛍光シグナルである。しかし、化学発光、りん光、比色、酵素反応産物またはその他のレポータも用いてよい。各二次抗体からのシグナルを決定し、任意選択として定量して試験薬剤による特定の条件下のＴＤＡＣおよびＨＤＡＣ阻害の量を決定する。必要に応じて、試験薬剤を加えなかった対照と対比して阻害の程度を決定する。特定の実施態様では、二次抗体には構わず、特定し、任意選択として定量するために一次抗体を固有標識化する。
【０３２０】
本発明のアッセイにおいては、任意の種類の細胞を用いてよい。細胞は、任意の種由来であってよい。例えば、細菌細胞、酵母細胞、哺乳類細胞、マウス細胞、ラット細胞、霊長類細胞またはヒト細胞を用いてよい。特定の実施態様では、細胞は、任意の組織または器官系由来であってよく、または任意の成長段階にあってよいヒト細胞である。細胞は、皮膚、体毛、神経、筋肉、骨、消化管、尿生殖器管、血管、骨髄、心臓、肺、肝臓、すい臓、胃、結腸、腎臓、膀胱、精巣、卵巣、子宮、頸部、脾臓、内分泌系、脳、脊髄、眼等由来であってよい。細胞は、幹細胞、胚幹細胞、胎児細胞、始原細胞等であってよい。特定の実施態様では、細胞はヒト癌細胞株である。癌細胞の任意の種類を用いてよい。細胞株の特定の例は、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、大腸癌、白血病、リンパ腫、皮膚癌、脳ガン、子宮頸癌、胃癌、骨癌等を含む。特定の細胞株は、ＭＭ．１Ｓ、Ｕ２６６、ＲＰＭＩ８２２６、ＤＯＸ４０、ＭＭ．１Ｒ、ＩＮＡ‐６、ＬＲ５等を含む。
【０３２１】
一般に、多重ウェル組織培養プレート（例えば３８４ウェルプレート）に細胞を塗布し、特定の濃度の試験薬剤を添加する前にプレートに付着させる。各試験薬剤の複数の濃度を試験し、用量‐応答曲線を作成してＩＣ５０値の計算を可能にするとよい。生理条件下で試験薬剤を１〜２４時間、好ましくは４〜１６時間、細胞と培養してやる。その後、細胞を固定し、保護し、洗浄する。処理済み細胞を、一方はアセチル化チューブリン、他方はアセチル化リジンに特異的な一次抗体とともに培養する。抗体は、モノクローナルであってもよく、またはポリクローナルであってもよい。特定の実施態様では、市販の供給源から抗体を入手する。次に、一次抗体を蛍光二次抗体での標識を付ける。プレートを画像化し、必要に応じて、二次抗体のそれぞれからの蛍光シグナルを定量する。当業者なら理解するように、他のタンパク質、核酸内容物、ＤＮＡ内容物、ＲＮＡ内容物、細胞小器官等などのその他の標識を用いて細胞を染色してよい
次に、集めたデータを用いて用量‐応答曲線を計算してよく、ＩＣ５０値を計算してよく、構造機能相関を定めてよく、ＴＤＡＣ阻害に対するＨＤＡＣ阻害の比を計算してよく、ＨＤＡＣまたはＴＤＡＣの特異性等を求めてよい。
【０３２２】
本発明のアッセイは、多重ウェルプレート、流体操作ロボット、プレート画像化装置およびハイスループットスクリーニング用に開発されたコンピュータおよびソフトウェアを用いるハイスループットシステムでの使用に特に適している。特定の実施態様では、少なくとも１００の試験条件（例えば、試験薬剤、試験薬剤の濃度、細胞の種類、温度、試験薬剤による培養の長さ、ｐＨ、培地等）を並列評価する。他の実施態様では、少なくとも３００の試験条件を並列評価する。さらに他の実施態様では、少なくとも５００の試験条件を並列評価する。さらにまた他の実施態様では、少なくとも１０００の試験条件を並列評価する。
【０３２３】
本発明のアッセイを用いてＨＤＡＣ阻害剤および／またはＴＤＡＣ阻害剤であると同定された化合物は、本発明の一部とみなされる。特定の実施態様では、本アッセイを用いてＨＤＡＣの特異的阻害剤を同定する。他の実施態様では、本アッセイを用いてＴＤＡＣの特異的阻害剤を同定する。
【０３２４】
キット
本発明は、被験体におけるタンパク質分解障害を治療するためのキットを提供する。キットは、一つ以上の本発明の化合物（例えば式Ｉの化合物ｔｕｂａｃｉｎ）または薬学的に受容可能な該一つ以上の本発明の化合物のエステル、塩およびプロドラッグ、ならびに使用説明書を含んでよい。使用説明書は、用量、投与経路、患者教育情報、有効期限、保管条件、適応症および類似の項目を含んでよい。
【０３２５】
本発明の化合物は、治療的に有効な量で、薬学的に受容可能なキャリアとともにキット中に提供してよく、または、薬学的に受容可能なキャリアとともにバルク量で提供してよい。
【０３２６】
本発明は、治療的に有効な量のタンパク質分解阻害剤と薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤とを含む包装された組成物も提供する。包装された組成物は、タンパク質分解障害を患っている被験体またはタンパク質分解障害にかかりやすい被験体を治療するために調合され、タンパク質分解障害を患っている被験体またはタンパク質分解障害にかかりやすい被験体を治療するための説明書とともに包装される。
【０３２７】
本発明は、タンパク質分解阻害剤をスクリーニングするためのキットも提供する。キットは、対照組成物、例えば、基準用のｔｕｂａｃｉｎおよびニルチュービシンを含んでよい。キットは、薬剤、例えば試験化合物、緩衝液、培地（例えば細胞増殖培地）、細胞等も含んでよい。試験化合物は、既知の化合物または新たに発見された化合物、例えばコンビナトリアル化合物ライブラリを含んでよい。
【０３２８】
タンパク質分解障害治療の効力を評価するためのキットも提供される。キットは、本明細書に記載されている表現型を決定するための試薬（例えば、チューブリンのアセチル化状態を決定するための試薬）、使用説明書および被験体試料を採取するための器具の一つ以上を含んでよい。
【０３２９】
一つ以上の本発明のキットを一緒に包装してよく、例えば、タンパク質分解治療の効力を評価するためのキットをタンパク質分解障害を治療するためのキットとともに包装してよい。
【実施例】
【０３３０】
実験手順
骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）培養物
ＭＭを有する患者からＢＭ試料を得た。Ｆｉｃｏｌｌ‐Ｈｉｐａｑｕｅ密度沈降法によって分離した単核細胞（ＭＮＣ）を用いて長期ＢＭ培養物を株化した。接着性細胞単一層が成長したら、０．２５％トリプシンおよび０．０２％ＥＤＴＡを含むＨａｎｋの緩衝塩溶液に細胞を回収し、洗浄し、遠心分離によって集めた。
【０３３１】
細胞株、患者ＢＭ形質細胞およびＢＭ間質細胞（ＳＣ）
デックス感受性（ＭＭ．１Ｓ）および抵抗性（ＭＭ．１Ｒ）ヒトＭＭ細胞株は、スティーブンローゼン（Ｓｔｅｖｅｎ  Ｒｏｓｅｎ）博士（イリノイ州シカゴ（Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）のノースウェスタン大学（Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔｅｒｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）のご厚意によって提供された。ＲＰＭＩ８２２６およびＵ２６６ヒトＭＭ細胞株は、米国バクテリア登録機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（メリーランド州ロックビル（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から入手した。ＩＬ‐６依存性ＩＮＡ‐６細胞株は、Ｍ．グラマツキ（Ｍ．Ｇｒａｍａｔｚｋｉ）博士（ドイツのエアランゲン（Ｅｒｌａｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ））のご厚意によって提供された。メルファラン抵抗性ＲＰＭＩ‐ＬＲ５およびドキソルビシン抵抗性ＲＰＭＩ‐Ｄｏｘ４０細胞株は、ウィリアムドルトン（Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｄａｌｔｏｎ）博士（フロリダ州タンパ（Ｔａｍｐａ，ＦＬ）のリーモフィット癌センター（Ｌｅｅ  Ｍｏｆｆｉｔｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ）によって提供された。ＭＭ細胞株はすべて１０％ウシ胎仔血清（ミズーリ州セントルイスのシグマケミカル社のＦＢＳ）、２μＭ  Ｌ‐グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、および１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（ニューヨーク州グランドアイランド（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）のジブコ（ＧＩＢＣＯ）社）を含むＲＰＭＩ‐１６４０中で培養した。ＩＬ‐６（１ｎｇ／ｍｌ）を加えて、ＩＮＡ‐６細胞を維持した。既に記載した（３１）ように、抗体カクテル（カナダのバンクーバー（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）のステムセルテクノロジーズ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のロゼットセップ（ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ）分離システム）を用いる負型選択によって、骨髄（ＢＭ）吸引液からＭＭ患者形質細胞を精製した。抗ＣＤ１３８抗体（カリフォルニア州サンディエゴ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）のＢＤファーミンジェン（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ））を用いるフローサイトメトリー分析によって確認したＭＭ細胞の純度は＞９０％であった。既に説明した（２８、４３）ように、ＢＭ吸引液からＦｉｃｏｌｌ‐Ｈｉｐａｑｕｅ密度沈降法によって分離した単核細胞（ＭＮＣ）も用いて、長期ＢＭ間質細胞（ＢＭＳＣ）を株化した。患者試料による実験はすべて施設内倫理委員会によって承認されたプロトコルによって実行した。
【０３３２】
阻害剤
ペプチドボロナートプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブは、ミレニアムファーマシューティカルズ（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（マサチューセッツ州ケンブリッジ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ））によって提供された。ＨＤＡＣ６特異的阻害剤ｔｕｂａｃｉｎおよびその非活性誘導体ｎｉｌｔｕｂａｃｉｎは、ハーバード大学（Ｈａｒｖａｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）のブロード研究所（Ｂｒｏａｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（１８）およびマサチューセッツ工科大学（Ｍａｓｓａｃｈｕｓｓｅｔｔｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）から入手した。どちらの阻害剤もＤＭＳＯに溶解し、使用するまで−２０℃で保管した。
【０３３３】
ＤＮＡ合成
３Ｈ‐チミジン取り込みによって増殖を決定した。簡単に紹介すると、培地、Ｖｅｌｃａｄｅおよび／またはｔｕｂａｃｉｎの存在下９６ウェル培養プレート中でＭＭ細胞（３×１０４細胞／ウェル）を３７℃で４８時間培養した。［３Ｈ］‐チミジン（［３Ｈ］‐ＴｄＲ、マサチューセッツ州ボストン（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）のパーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ））摂取量によってＤＮＡ合成を決定した。４８時間の培養の最後の８時間、［３Ｈ］‐ＴｄＲ（０．５μＣｉ／ウェル）を細胞にパルス照射した。すべての実験を３回行った。
【０３３４】
増殖阻害アッセイ
既に説明した（３３）ように、３‐（４，５‐ジメチルチアゾール‐２‐イル）‐２，５‐ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）染料吸光度を決定することによって、ＭＭ細胞増殖に対するボルテゾミブおよび／またはｔｕｂａｃｉｎの阻害効果を評価した。５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴの１０μｌを各ウェルに加え、４８時間培養の最後の４時間、４８時間培養からの細胞にパルスを照射し、続いて、０．０４ＮのＨＣｌを含むイソプロパノールの１００μｌを加えた。分光光度計（カリフォルニア州サニーベイル（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）のモレキュラーデバイス社（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐ．）を用いて５７０ｎｍの吸光度を決定した。すべての実験を４回繰り返した。
【０３３５】
ウエスタンブロッティング
ＭＭ細胞をＶｅｌｃａｄｅおよび／またはｔｕｂａｃｉｎとともに培養し、回収し、洗浄し、５０ｍＭトリス‐ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％ＮＰ‐４０、５ｍＭのＥＤＴＡ、５ｍＭのＮａＦ、２ｍＭのＮａ３ＶＯ４、１ｍＭのＰＮＳＦ、５μｇ／ｍｌのロイペプチンおよび５μｇ／ｍｌのアプロチニンの溶菌緩衝液を用いて溶解した。細胞可溶化物をＳＤＳ‐ＰＡＧＥに付し、ＰＶＤＦ膜（カリフォルニア州ハーキュリーズ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）のバイオラッドラボラトリーズ（ＢｉｏＲａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））に写し、特異性タンパク質に対する抗体によって免疫ブロットした。
【０３３６】
フローサイトメトリー解析
細胞周期分析には、Ｖｅｌｃａｄｅ（５μＭ）および／またはｔｕｂａｃｉｎ（５μＭ）中で２４時間培養したＭＭ細胞を回収し、リン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、７０％エタノールで固定し、１０μｇ／ｍｌのＲＮアーゼ（インディアナ州インディアナポリス（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）のロッシュダイアグノスティクス社（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐ．）で処理した。次に、細胞をプロピジウムヨウ素（ＰＩ、シグマ）（５μｇ／ｍｌ）で染色し、イーピクス（Ｅｐｉｃｓ）フローサイトメーター（フロリダ州ハイアリア（Ｈｉａｌｅａｈ、ＦＬ）のコールターイムノロジー（Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）（４４）上でプログラムＭソフトウェアを使用して細胞周期プロフィルを決定した。
【０３３７】
ＢＭ中のパラクリンＭＭ細胞増殖に対するＶｅｌｃａｄｅおよびｔｕｂａｃｉｎの効果
ＢＭＳＣに接着するＭＭ細胞中の成長刺激およびシグナル伝達を評価するために、ＢＭＳＣ被覆９６ウェルプレート中で３×１０４のＭＭ．１Ｓ細胞をＶｅｌｃａｄｅおよび／またはｔｕｂａｃｉｎの存在下４８時間培養した。上記で説明したように、ＤＮＡ合成を決定した。
【０３３８】
免疫ブロッティング
ｔｕｂａｃｉｎおよび／またはボルテゾミブとともに培養した細胞を回収し、洗浄し、５０ｍＭトリス‐ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のＮＰ‐４０、５ｍＭのＥＤＴＡ、５ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのＮａ３ＶＯ４、１ｍＭのＰＭＳＦ、５μｇ／ｍｌのロイペプチンおよび５μｇ／ｍｌのアプロチニンの溶菌緩衝液を用いて溶解させた。細胞溶解物全体をＳＤＳ‐ＰＡＧＥに付し、ニトロセルロース膜（カリフォルニア州ハーキュリーズのバイオラッドラボラトリーズ）へ移し、特異的抗体（３１）によって免疫ブロッティングした。抗ＨＤＡＣ６抗体、アセチル化リジン抗体、アセチル化ヒストンＨ３抗体、アセチル化ヒストンＨ４抗体、ユビキチン（Ｕｂ）抗体、ホスホ‐ＳＡＰＫ（ＪＮＫ）抗体、カスパーゼ‐８抗体、カスパーゼ‐９抗体、カスパーゼ‐３抗体およびＰＡＲＰ抗体（マサチューセッツ州ビバリー（Ｂｅｖｅｒｌｅｙ，ＭＡ）のセルシグナリング（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ））を、抗‐α‐チューブリン抗体（カリフォルニア州サンタクルズ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ）のサンタクルズバイオテクノロジー（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ））とともに、ならびに抗‐ダイニン抗体（ミズーリ州セントルイスのシグマ）とともに用いてウエスタンブロッティングを実行した。免疫沈降法の場合、我々の以前の研究（３１）におけると同じく、細胞可溶化物全体を、抗‐Ｕｂ抗体またはダイニン抗体とともに４℃で一夜培養し、次に、タンパク質Ａ／Ｇ  ＰＬＵＳ‐アガロース（サンタクルズバイオテクノロジーズ）とともに４℃で２時間培養した。次に、免疫沈降物をウエスタンブロッティングに付してＨＤＡＣ６およびダイニンを検出した。
【０３３９】
ＨＤＡＣ６のｓｉＲＮＡの過渡移入
「セルラインヌクレオフェクトＴＭ（Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  ＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏＴＭ）キットＶ」を用いて、製造業者（メリーランド州ゲイサーズバーグ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）のアマクサバイオシステムズ（Ａｍａｘａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の使用説明書（３３）に従って、ＭＭ．１Ｓ細胞にＨＤＡＣ６のｓｉＲＮＡ（コロラド州ラファイエット（Ｌａｆａｙｅｔｔｅ，ＣＯ）のダーマコン社（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ））を過渡移入した。移入の後、ＭＭ．１Ｓ細胞をボルテゾミブ存在下または非存在下でウエスタンブロッティングおよびＭＴＴアッセイに付した。
【０３４０】
ＢＭＳＣへ付着するＭＭ細胞の成長
ＢＭＳＣへ付着するＭＭ細胞の成長に対するｔｕｂａｃｉｎとボルテゾミブとの複合処理の効果を評価するために、ＭＭ．１ＳおよびＲＰＭＩ８２２６細胞をＢＭＳＣ被覆した９６ウェルプレート中で、ｔｕｂａｃｉｎおよび／またはボルテゾミブの存在または非存在下、２４時間培養した。処理の後、既に説明した（４４）ように、［３Ｈ］‐チミジン（マサチューセッツ州ボストンのパーキンエルマー）摂取量によってＤＮＡ合成を決定した。すべての実験を４回繰り返した。
【０３４１】
統計学的解析
ウィルコクソン（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ）符号化順位検定を用いて、対照培養物と対比した薬物処理培養物中で観測された差異の統計学的有意性を決定した。最小有意水準はｐ＜０．０５であった。カルキュシン（ＣａｌｃｕＳｙｎ）ソフトウェアプログラム（ミズーリ州ファーガソンのバイオソフト（Ｂｉｏｓｏｆｔ））を用いるイソボログラム解析によってｔｕｂａｃｉｎとボルテゾミブとの間の相互作用を解析し、既に説明した（４５）ように、この組み合わせが加成性であるのか、または相乗効果があるのかを決定した。
【０３４２】
実施例１
ｔｕｂａｃｉｎはＭＭ細胞株におけるα‐チューブリンのアセチル化を特異的に誘導する。
【０３４３】
いくつかのＭＭ細胞株においてＨＤＡＣ６の基線発現を調べた。ＭＭ．１Ｓ、Ｕ２６６、ＩＮＡ‐６、ＲＰＭＩ８２２６およびＲＰＭＩ‐ＬＲ５  ＭＭ細胞株はＨＤＡＣ６を構成発現するが、ＲＰＭＩ‐Ｄｏｘ‐４０細胞では低レベルのＨＤＡＣ６しか認められない（図１Ａ）。ｔｕｂａｃｉｎはＨＤＡＣ６活性の特異的な阻害によってＡ５４９ヒト肺癌細胞株におけるα‐チューブリンのアセチル化を誘導する（４０）ので、ＭＭ．１ＳおよびＲＰＭＩ８２２６  ＭＭ細胞におけるα‐チューブリンのアセチル化に対するｔｕｂａｃｉｎの効果を調べた。図１Ｂに示すように、ｔｕｂａｃｉｎは、タンパク質発現を変化させずに、用量に依存してＭＭ．１ＳとＲＰＭＩ８２２６細胞との両方のα‐チューブリンのアセチル化を顕著に誘導する。ウエスタンブロッティングによって他のアセチル化タンパク質は認められなかった点が重要である。ＩＮＡ‐６およびＲＰＭＩ‐Ｄｏｘ４０細胞で同様の結果が観測された（データは示されていない）。ｔｕｂａｃｉｎの用量依存性効果を評価し、ｔｕｂａｃｉｎ（５μＭ）は、（図１Ｃ）ＲＰＭＩ８２２６細胞中のα‐チューブリンのピークアセチル化を１２時間で誘導することを示す。ＨＤＡＣ６の発現は、ｔｕｂａｃｉｎ処理によって変化しない（データは示されていない）ことが重要である。
【０３４４】
ヒストンアセチル化は、悪性腫瘍の進展と関連付けられている（４６、４７）。逆に、ヒストンデアセチラーゼの阻害剤は有望な新しい治療戦略を表す（４８）。ハイブリッド極性化合物ＳＡＨＡの第二世代（４９）と新規なヒドロキサム酸誘導体ＮＶＰ‐ＬＡＱ８２４（５０）との両方が反ＭＭ活性を媒介することが示されている。これらの薬剤はＨＤＡＣを非選択阻害するので、ＭＭ．１Ｓ細胞およびＲＰＭＩ８２２６細胞中のリジンのアセチル化に対するＳＡＨＡの効果も調べた。α‐チューブリンのアセチル化を特異的に誘導する（図１Ｂ、１Ｃ）ｔｕｂａｃｉｎと対照的に、ＳＡＨＡは、ヒストンＨ３およびＨ４上のリジンに対してα‐チューブリンより強力なアセチル化を誘発する（図１Ｄ）。これらの結果は、ＨＤＡＣ６はＭＭ細胞株において構成発現されること、および、ｔｕｂａｃｉｎはα‐チューブリンのアセチル化を特異的に誘起することを示し、ＭＭ細胞中のＨＤＡＣ６活性に対するｔｕｂａｃｉｎの特異的阻害効果を確認する。
【０３４５】
実施例２
ｔｕｂａｃｉｎはＭＭ細胞増殖を阻害する
ＨＤＡＣ６に対するｔｕｂａｃｉｎの特異的阻害効果にもとづいて、次に、薬物感受性（ＭＭ．１Ｓ、Ｕ２６６、ＩＮＡ‐６およびＲＰＭＩ８２２６）ならびに薬物抵抗性（ＲＰＭＩ‐ＬＲ５およびＲＰＭＩ‐Ｄｏｘ４０）ＭＭ細胞株に対するｔｕｂａｃｉｎの細胞毒性を調べた。これらの細胞をｔｕｂａｃｉｎ（１．２５〜２０μＭ）で４８時間（図２Ａ）および７２時間（図２Ｂ）処理し、説明したように、ＭＴＴアッセイによって細胞毒性を評価した。ｔｕｂａｃｉｎは、薬物感受性ＭＭ細胞と薬物抵抗性ＭＭ細胞との両方の成長を顕著に阻害し、７２時間後のＩＣ５０は５〜２０μＭであった。最も感受性の高い細胞株および最も抵抗性の高い細胞株は、それぞれＲＰＭＩ８２２６細胞およびＭＭ．１Ｒ細胞である（図２Ｂ）。ｔｕｂａｃｉｎによってＰＢＭＣ中に細胞毒性は誘導されない（図２Ｃ）ことが重要である。これらの結果は、ｔｕｂａｃｉｎ感受性が従来の化学療法剤（デキサメタゾン、メルファランおよびドキソルビシン）に対する抵抗性とは独立したものであることを示し、正常細胞と対比した腫瘍細胞の有利な治療係数を示唆する。ＨＤＡＣ阻害剤ＳＡＨＡおよびＮＶＰ‐ＬＡＱ８２４は、カスパーゼ依存アポトーシスによってＭＭ細胞死を誘発することが示され、ｔｕｂａｃｉｎ誘導細胞毒性もアポトーシスによって媒介されるかどうかを研究した。ｔｕｂａｃｉｎ（１０μＭ）で０〜２４時間処理したＭＭ．１ＳおよびＲＰＭＩ８２２６細胞では、時間依存性カスパーゼ‐８／ＰＡＲＰ切断が誘導され（図２Ｄ）、我々のＭＴＴ結果を確認する。これらのデータは、ＭＭ細胞におけるｔｕｂａｃｉｎ誘導細胞毒性がカスパーゼ依存アポトーシスによって媒介されることを強く示唆する。
【０３４６】
実施例３
ｔｕｂａｃｉｎはＨＤＡＣ６とダイニンとの相互作用を阻害し、ボルテゾミブと組み合わされるとユビキチン化タンパク質の蓄積を誘導する
ＭＭにおけるボルテゾミブ抵抗性を克服するために、新規な治療オプションが緊急に必要である。ボルテゾミブがＤＮＡ修復を阻害する（２９、３１）ことを示す我々の前臨床研究によると、ボルテゾミブの複合治療がＤＮＡ損傷薬剤（すなわち、メルファランおよびドキソルビシン）に対する抵抗性を増感させるかまたは克服することが示された（２９）。ｈｓｐ‐２７発現がボルテゾミブ抵抗性に関連し（３０、５１）、逆に、ｐ３８ＭＡＰＫ阻害剤がボルテゾミブ抵抗性ＭＭ細胞株および患者細胞中のｈｓｐ‐２７を下方調節し、ボルテゾミブ抵抗を克服することができることも示された。最近の研究によると、ポリユビキチン化タンパク質は、プロテアソームとアグレソーム経路との両方によって分解される（図３Ａ）。
【０３４７】
ＨＤＡＣ６は、ポリユビキチン化ミスフォールディングタンパク質とダイニンとの両方と構成的に結合し、それによって微小管に沿ってアグレソームへ輸送するためにミスフォールディングタンパク質貨物をダイニンモーターに集める（３９）。ｔｕｂａｃｉｎによるＨＤＡＣ６活性の阻害がＨＤＡＣ６とＵｂおよび／またはダイニンとの相互作用を変化させるかどうかを調べた。ＨＤＡＣ６は、ＭＭ．１Ｓ細胞（図３Ｂ）およびダイニン（図３Ｃ）中のポリユビキチン化タンパク質とともに一貫して共免疫沈降される。ｔｕｂａｃｉｎによる処理（２．５μＭおよび５μＭ、８時間）の後、ＨＤＡＣ６とダイニンとの共免疫沈降は用量に依存して著しく阻害されるが、一方、ＨＤＡＣ６とユビキチン化タンパク質との間の共免疫沈降は影響を受けない（図３Ｂ）。次に、タンパク質のポリユビキチン化に対するｔｕｂａｃｉｎの影響を調べた。予想通り、ｔｕｂａｃｉｎ処理したＲＰＭＩ８２２６細胞中にはポリユビキチン化タンパク質が顕著に蓄積するが、処理したＭＭ．１Ｓ細胞中に顕著な変化は認められず（図３Ｄ）、ポリユビキチン化タンパク質の補償プロテアソーム分解を示唆した。これらの結果も、ＲＰＭＩ８２２６細胞中のポリユビキチン化タンパク質の分解がプロテアソームよりアグレソームに依存することを示し、ＲＰＭＩ８２２８細胞はＭＭ．１Ｓ細胞よりｔｕｂａｃｉｎに対して感受性が高いことを示すＭＴＴデータと矛盾しない（図２Ａ、２Ｂ）。ｔｕｂａｃｉｎ（５μＭ）とボルテゾミブ（５ｎＭ）との組み合わせは、どちらか一方の薬剤単独（図３Ｅ）と比較すると、ＭＭ．１ＳおよびＲＰＭＩ８２２６細胞におけるポリユビキチン化タンパク質の蓄積を劇的に増加させることが重要である。これらの結果は、さらに、プロテアソームとアグレソームとの両方においてポリユビキチン化の分解が起こり、従って、両方の経路を阻害すると、ＭＭ細胞においてポリユビキチン化タンパク質の顕著な蓄積が誘導されることを示している。
【０３４８】
実施例４
ｔｕｂａｃｉｎとボルテゾミブとの相乗効果的な抗ＭＭ活性は、ＪＮＫ‐カスパーゼ賦活によって媒介される。
【０３４９】
ｔｕｂａｃｉｎとボルテゾミブとによる複合処理後の顕著なポリユビキチン化タンパク質の蓄積を示した後、複合処理がＭＭ細胞において顕著な細胞毒性を誘導することができるかどうかを調べた。予想通り、ｔｕｂａｃｉｎは、ＭＭ．１Ｓ細胞とＲＰＭＩ８２２６細胞との両方においてボルテゾミブ誘導細胞毒性を相乗効果的に強める。例えば、５ｎＭおよび１０ｎＭボルテゾミブは、それぞれ２６％および６６％のＲＰＭＩ８２２６細胞死を誘発するが、５μＭｔｕｂａｃｉｎと組み合わされると、それぞれ８７％および９１％に増加する（図４Ａ）。この複合処理が相乗効果的な抗ＭＭ毒性を媒介する機序を解析するために、次に、ＭＭ．１Ｓ細胞における細胞周期プロファイリングを実行した。ｔｕｂａｃｉｎ（５μＭ）単独では細胞周期プロフィルを変化させず、一方、ボルテゾミブ（５ｎＭ）単独では我々の以前の研究（４）と同じく、Ｇ２Ｍ相ＭＭ．１Ｓ細胞の増加（１４．２％から３９．２％へ）を誘発した。ｔｕｂａｃｉｎとボルテゾミブとを組み合わせとすると、サブＧ０／Ｇ１相細胞の顕著な増加（５．６％から３０．４％へ）を誘発し、複合処理がアポトーシス細胞死を誘発することを示唆した（図４Ｂ）ことが重要である。さらに、ｐ２１Ｃｉｐ１の発現を調べた。ｔｕｂａｃｉｎはｐ２１Ｃｉｐ１の誘導を開始させず、細胞周期プロフィルと矛盾しない。ｔｕｂａｃｉｎは、ボルテゾミブによって誘導されるｐ２１Ｃｉｐ１の誘導を阻害する（図４Ｃ）ことが重要である。
【０３５０】
ポリユビキチン化タンパク質が蓄積すると細胞ストレス応答を誘導するので、次に、我々の以前の研究（９、２２）で説明したように、このＭＭ．１Ｓ細胞の複合処理が細胞ストレス応答の指標であるＪＮＫ（ストレス活性化プロテインキナーゼとしても知られる）の賦活と、それに続くカスパーゼ切断を誘発するかどうかを調べた。ｔｕｂａｃｉｎ単独ではＪＮＫのリン酸化もカスパーゼ／ＰＲＡＰ切断も誘発せず、ボルテゾミブ単独では若干のＪＮＫリン酸化ならびにカスパーゼ‐９、‐８、‐３およびＰＡＲＰ切断を誘発する（図４Ｃ）。非常に興味深いことに、ｔｕｂａｃｉｎとボルテゾミブとの複合処理によって、ＭＭ．１Ｓ細胞中のＪＮＫリン酸化とカスパーゼ／ＰＲＡＰ切断との両方が明らかに増加し（図４Ｃ）、細胞毒性アッセイ（図４Ａ）と矛盾しなかった。この複合処理によって他の細胞ストレス応答関連タンパク質（すなわち、ｈｓｐ‐７０およびＧｒｐ７８）も誘導される（データは示されていない）。これらの結果は、ｔｕｂａｃｉｎがボルテゾミブによって誘導されるＧ２期停滞を阻害し、それによって、ストレス誘導ＪＮＫ賦活と、それに続くカスパーゼ／ＰＡＲＰ切断とによって媒介されるアポトーシスを容易にすることを示している。
【０３５１】
ボルテゾミブとの相乗効果的ＭＭ細胞毒性を媒介するＨＤＡＣ６阻害の特異的な役割を同定するために、既に説明したように、ＭＭ．１Ｓ細胞にＨＤＡＣ６のｓｉＲＮＡを過渡移入した。移入によってＨＤＡＣ６タンパク質発現は顕著に下方調節された（図４Ｄ）。ボルテゾミブは、移入剤の細胞毒性を用量に依存して顕著に増加させる（図４Ｅ）ことが重要である。対照的に、不活性カルボン酸ｔｕｂａｃｉｎアナログであるｎｉｌｔｕｂａｃｉｎは、α‐チューブリンのアセチル化に影響を及ぼすこと（図４Ｆ）も、ボルテゾミブによって誘導されるＭＭ．１Ｓ細胞中の細胞毒性を強めることもない（図４Ｇ）。ＲＰＭＩ８２２６細胞においても同様な結果が観測された（データは示されていない）。これらの結果は、ＨＤＡＣ６を阻害すると、ＭＭ中のボルテゾミブ誘導細胞毒性が特異的に増えることを示す。
【０３５２】
実施例５
ボルテゾミブと組み合わされたｔｕｂａｃｉｎはＭＭ患者形質細胞において顕著な細胞毒性を示す。
【０３５３】
ＭＭ細胞株におけるｔｕｂａｃｉｎとボルテゾミブとの複合処理の顕著な細胞毒性を示した後、さらに、ＢＭ（ＢＭＰＣ）由来の分離ＣＤ１３８陽性ＭＭ患者形質細胞における組み合わせの効果を調べた。これらのＢＭＰＣをｔｕｂａｃｉｎ（５μＭ）とともに、またはｔｕｂａｃｉｎを加えずに、ボルテゾミブ（５ｎＭおよび１０ｎＭ）の存在下または非存在下で２４時間培養した。ボルテゾミブによって誘起されるＢＭＰＣ中の細胞毒性は、ｔｕｂａｃｉｎによって著しく増加し（図５Ａ、５Ｂおよび５Ｃ）、ＭＭ細胞株データと矛盾しない。同様に処理した正常ＰＢＭＣ中では毒性は認められない（図５Ｄ）ことが重要である。
【０３５４】
次に、ボルテゾミブと組み合わされたｔｕｂａｃｉｎがＭＭ患者形質細胞において細胞毒性を特異的に誘導するが、ＰＢＭＣにおいては誘導しない機序を調べた。同じＭＭ患者から得られたＰＢＭＣとＢＭＰＣとをｔｕｂａｃｉｎ（５μＭ）で１２時間処理した。ＢＭＰＣ中のＨＤＡＣ６の構成的発現は、ＰＢＭＣより比較的高かった。α‐チューブリンのアセチル化はＢＭＰＣ中ではｔｕｂａｃｉｎによって明らかに促進されるが、ＰＢＭＣ中では促進されない（図５Ｅ）ことが重要である。現在進行中の研究によって、この観測の分子機序をさらに詳細に明らかにしつつある。
【０３５５】
実施例６
ボルテゾミブと組み合わされたｔｕｂａｃｉｎはパラクリンＭＭ細胞増殖を阻害する。
【０３５６】
ＢＭ微細環境は、ＭＭ細胞における細胞増殖および薬剤耐性を付与することを既に示し（３、３０、３１）た。次に、ＢＭ環境内のＭＭ細胞中のボルテゾミブ存在下または非存在下でのＨＤＡＣ６阻害の機能後遺症を調べた。ｔｕｂａｃｉｎ（２．５および５μＭ）および／またはボルテゾミブ（２．５〜１０ｎＭ）の存在下または非存在下、ＢＭＳＣ添加または非添加でＭＭ．１ＳおよびＲＰＭＩ８２２６細胞を培養した。ＭＭ細胞がＢＭＳＣへ付着すると、ＭＭ．１Ｓ細胞（１．７５、ｐ＜０．０１）（図６Ａ）とＲＰＭＩ８２２６細胞（２．０倍、ｐ＜０．０１）（図６Ｂ）との両方の［３Ｈ］‐チミジン取り込みの増加が誘発される。ｔｕｂａｃｉｎもボルテゾミブもＢＭＳＣ誘導［３Ｈ］‐チミジン取り込みを単独で用量に依存して阻害する（ｐ＜０．０１）。ｔｕｂａｃｉｎは、接着性ＭＭ．１Ｓ（図６Ａ）およびＲＰＭＩ８２２６（図６Ｂ）細胞中の［３Ｈ］‐チミジン取り込みのボルテゾミブ誘導阻害を顕著に促進することが重要である。ＭＴＴアッセイで評価したＢＭＳＣの生存度は、複合処理によって変化しない（データは示されていない）。これらのデータは、ｔｕｂａｃｉｎとボルテゾミブとの複合処理がＢＭ環境内のＭＭ細胞に対する相乗効果的な選択的抗腫瘍活性を誘発し、それによって従来の治療に対する細胞接着媒介抵抗性を克服することを示す。結論として、これらの結果は、ｔｕｂａｃｉｎとボルテゾミブとのそれぞれによるアグレソームとプロテアソームとの二重阻害がＭＭ細胞毒性を相乗効果的に強めることを強く示唆する。これらは、ボルテゾミブに対する感受性を高め、抵抗性を克服し、それによってＭＭにおける患者の結果を改良するように設計された臨床試験のための枠組みを提供する。
【０３５７】
ｔｕｂａｃｉｎは、ＨＤＡＣ６のカルボキシ末端ドメインを選択的に阻害し、チューブリン超アセチル化を引き起こす。特に、ｔｕｂａｃｉｎは、以前、Ａ５４９肺癌細胞のヒストンアセチル化、転写プロフィル、細胞周期または生存度に対して効果がないと報告されていた。
【０３５８】
ｔｕｂａｃｉｎは、チューブリンアセチル化に影響を及ぼすために必要な濃度で、骨髄腫細胞株に対して細胞毒性を有する（図１ａ、ｂ）。ｔｕｂａｃｉｎと強力なプロテアソーム阻害剤であるボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ）との間に相乗効果が観測される（図１ｃ）。これらの分子を組み合わせても、明らかに、末梢血単核細胞の生存度に影響しない（図１ｄ）。これらのデータは、阻害されたタンパク質異化のもっともらしい細胞毒性結果を示唆し、さらなる検討の意義を保証する。ＲＰＭＩ‐８２２６細胞株で得た予備的データによると、細胞ユビキチン化タンパク質は、ｔｕｂａｃｉｎとともに増加する（図２ａ）。ラット星状細胞と線条体ニューロンとにおける同程度の濃度のｔｕｂａｃｉｎによる以前の実験は、ラッセル小体形成を示唆する特徴を明らかにした（図２ｂ）。これらのデータは、ＨＤＡＣ６媒介アグレソーム形成がカルボキシ末端デアセチラーゼドメインによって媒介されるという仮説を支持し、ｔｕｂａｃｉｎ細胞毒性の機序を示す。
【０３５９】
本発明のスクリーニング方法は、３８４ウェルプレートフォーマット中でＨＤＡＣ阻害専用の低分子ライブラリによって処理された癌細胞の定量的、ハイスループット、画像利用スクリーニングを含む。チューブリンおよびヒストンアセチル化状態特異的抗体を用い、対応する蛍光性二次抗体によって認識した。自動化アクソン５０００Ａ落射蛍光顕微鏡上でウェルに選択的チューブリンアセチル化能力の点数を客観的に付けた。トリコスタチン、ｔｕｂａｃｉｎおよびＤＭＳＯの対照物を基準として用いた。続いて、ＲＰＭＩ‐８２２６骨髄腫細胞株における直接細胞毒性およびボルテゾミブとの相乗効果の評価に従って分子に順位を付けた。
【０３６０】
ｔｕｂａｃｉｎは、第一ドメイン選択的ＨＤＡＣ阻害剤であり、ＨＤＡＣ６を標的とする。低マイクロモル濃度で、ｔｕｂａｃｉｎは、すべての骨髄腫細胞株に対して、チューブリン超アセチル化および明らかな抗増殖性、プロアポトーシス効果を引き起こす。さらに、ｔｕｂａｃｉｎは、ボルテゾミブの準毒性濃度に対する骨髄腫細胞の感受性を強力に高める。ボルテゾミブ添加時にも非添加時にも、末梢血単核細胞に対するｔｕｂａｃｉｎの悪影響は知られていない。明らかに、ｔｕｂａｃｉｎの堅実な細胞毒性効果は、骨髄間質およびインターロイキン６の存在下ですべての細胞株において維持された。
【０３６１】
実施例７
悪性形質細胞のタンパク質異化におけるアグレソームの役割のキャラクタリゼーション
アグレソームの生化学的精製。アグレソームは、古典的な多発性骨髄腫のヒト細胞モデルのパネルにおいて生化学的に単離される。下記で考察するように、中心体周辺微小管組織性複合体（ＭＴＯＣ）中のプロテアソームサブユニットの存在量を決定する。これらの細胞株のそれぞれにおけるＨＤＡＣ６の発現は、免疫ブロットによって既に検証されている。説明したように中心体の調製を実行する２０。簡単に述べると、細胞を回収し、サイトカラシンＤおよびノコダゾールで処理して細胞骨格および微小管を解重合させる。溶菌および核ペレッティングの後、スクロース勾配によって中心体を精製し、２０Ｓプロテアソーム含有量を評価する。精製したアグレソームのプロテアソーム含有量に対するプロテアソーム阻害およびタンパク質折り畳みストレスの効果も決定する。
【０３６２】
アグレソームの蛍光顕微鏡検出。アグレソームが形成されると、中心体においてビメンチンキャップの形成を伴う中間フィラメント再組織化が起こる。ＨＤＡＣ６、ｈｓｐ７０およびビメンチンに対する抗体を用いる蛍光顕微鏡法によってアグレソーム形成を評価する。既に報告したように、プロテアソーム阻害剤およびミスフォールディングタンパク質ストレスを引き起こす分子で処理した骨髄腫細胞株の検査によってアグレソーム形成が増えるか決定する。
【０３６３】
患者由来骨髄腫細胞中のアグレソーム形成。骨髄腫細胞中のタンパク質異化作用におけるアグレソームの役割をインビボで決定し、アグレソーム形成に対するプロテアソーム阻害およびＨＤＡＣ６阻害の効果を患者由来骨髄腫細胞において評価する。免疫蛍光手法を用いて、アグレソームの構造および組成を上記のようにキャラクタリゼーションする。蛍光顕微鏡法を用いる免疫グロブリンによって単一タイプの細胞リザーバを調べる。末梢血単核細胞を対照として用いてボルテゾミブ感受性患者由来細胞とボルテゾミブ抵抗性患者由来細胞とを調べる。この分析によって、アグレソームを癌細胞生存のタンパク質分解性指標およびプロテアソーム阻害に対する臨床抵抗の決定因子として確立することができる。
【０３６４】
実施例８
ＨＤＡＣ６媒介アグレソーム生成の機序を決定する。
【０３６５】
ＨＤＡＣ６の構造‐機能解析。アグレソーム生成の古典的ユビキチン化タンパク質モデル（ＤＦ５０８  ＣＦＴＲ）３を用いて、遺伝学手法と化学遺伝学手法との両方によってアグレソーム生成に関連する酵素ドメインのキャラクタリゼーションを行う。一つの方法は、野生型ＨＤＡＣ６および移入細胞をアミノ末端デアセチラーゼドメインとカルボキシ末端デアセチラーゼドメインとの両方を変異させたＨＤＡＣ６タンパク質でノックダウンすることである９。別の手法は、小さな、干渉ＲＮＡで、好ましくは、別個に移入した各酵素ドメインの選択的変異体を用いて、ＨＤＡＣ６をノックダウンすることである。
【０３６６】
ＨＤＡＣ６の化学遺伝学分析。ＤＦ５０８  ＣＦＴＲ過剰発現細胞において、適切なトリコスタチンおよびトラポキシン対照を用いてユビキチン化タンパク質ストレスおよびアグレソーム生成に対するｔｕｂａｃｉｎの効果を評価する。トリコスタチンは、ＨＤＡＣ６の両方のドメインの強力な阻害剤であるが、トラポキシンは、ＨＤＡＣ６を一意に阻害しない、強力なＨＤＡＣ阻害剤である。
【０３６７】
ＨＤＡＣ６のタンパク質標的のプロテオーム解析。ＨＤＡＣ６の非ヒストン標的を決定する。遺伝生化学および質量分析法にもとづく２つの手法を用いる。接着性細胞をｔｕｂａｃｉｎで２４時間処理し、核または微小管を乱さずに培養皿上で溶解し、細胞質タンパク質標的とするために濃縮する。変性リジン残基によって多数の細胞タンパク質と結合することが知られているアセチル化リジンウサギポリクローナル抗体を用いる抗体利用精製検出経路を使用する。選択的にアセチル化された標的を質量分析法によって決定する。ｔｕｂａｃｉｎ処理細胞からの細胞質可溶化液を上記と同じように調製し、スクシンイミドと反応させ、非アセチル化リジン残基を共有結合によって修飾する。可溶化液を官能基カルボキシ末端デアセチラーゼドメインだけを有する精製ＨＤＡＣ６‐Ｈ２１６Ａで処理する。次に、ストレプトアビジン精製および質量分析検出のために、新たに脱アセチル化したリジンをスクシンイミジルビオチンで共有結合によって修飾する。
【０３６８】
実施例９
多発性骨髄腫のマウスモデルにおけるタンパク質異化およびアグレソーム生成の検討を可能にするＨＤＡＣ６の強力な選択的阻害剤の特定
インシリコ構造‐活性相関モデル化において、多様性指向合成経路によって誘導される分子を用いて、選択性、効力および細胞毒性の変調決定因子を確認する。
【０３６９】
参考文献
【０３７０】
【表１】
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【０３７１】
【表２】
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【０３７２】
【表３】
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【０３７３】
【表４】
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【０３７４】
【表５】
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本明細書において引用したすべての参考文献、特許および特許出願の内容は、参照によって本明細書に全体が組み込まれる。本明細書に添付された付録Ａ（２５頁）の内容は、参照によって本明細書に全体が組み込まれる。
【０３７５】
他の実施態様は、添付の請求項の範囲内にある。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３Ａ】
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【図５３Ｂ】
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【図５４】
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【図５５Ａ】
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【図５５Ｂ】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【外国語明細書】
2014224158000001.pdf