(57)【要約】【課題】選択的プロトン共役葉酸トランスポーターおよび葉酸受容体、ならびにＧＡＲＦＴアーゼインヒビター化合物、ならびにそれらの使用方法の提供。【解決手段】環状の縮合ピリミジン化合物（その互変異性体を含む）、ならびにその薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物および水和物を開示する。このような化合物は、癌を処置するため、プロトン共役葉酸トランスポーター、葉酸受容体αおよび／または葉酸受容体β経路によって癌性細胞を選択的に標的化するため、癌性細胞においてＧＡＲＦＴアーゼを阻害するため、ならびに自己免疫疾患（関節リウマチなど）を有する患者において活性化マクロファージを選択的に標的化するための方法に有用である。【選択図】図１
2014224159.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載された発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
政府の利益
本発明は、国立衛生研究所の助成金番号Ｒ０１  ＣＡ１２５１５３に一部支援された。合衆国政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、選択的プロトン共役葉酸トランスポーター（ＰＣＦＴ）およびα葉酸受容体（ＦＲα）、β葉酸受容体（ＦＲβ）、ならびにグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ（ＧＡＲＦＴアーゼ）酵素インヒビター化合物、ならびにその使用方法に関する。好ましくは、これらの化合物は、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート（ｇｌｕｔａｍａｔｅ）置換基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート置換基を有する。本発明の化合物は、経口活性選択的抗腫瘍剤を提供するために水溶性の塩にしてもよい。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
既知の癌化学療法剤では、正常細胞と癌性腫瘍細胞の両方が標的化される。この腫瘍細胞に対する選択性の欠如により、正常細胞に対して細胞傷害性がもたらされ、癌の処置における化学療法不奏功の主な原因の１つである。さらに、進行段階および化学療法剤抵抗性の腫瘍は、既知の化学療法剤（例えば、限定されないが、カルボプラチンまたはパクリタキセル（ドセタキセル（ｄｏｃｉｔａｘｅｌ））など）での処置が困難なことがあり得る。
【０００４】
葉酸類は、ビタミンＢ群の構成員であり、１炭素転移反応でのヌクレオチド前駆体、セリンおよびメチオニンの合成の補因子である。哺乳動物は葉酸類をデノボ合成することができないため、これらの誘導体の細胞内取込みは、細胞増殖および組織再生に必須である。その親水性のアニオン性の性質を反映して、葉酸類は、単独では、拡散して生体膜を通過することができない。したがって、哺乳動物細胞では、葉酸類の蓄積を助長するための精巧な膜輸送系が進化した。
【０００５】
遍在的に発現される還元型葉酸担体（ＲＦＣ）は、哺乳動物細胞における葉酸類の主な輸送系であり、葉酸基質の集中的取込みを媒介する。ＲＦＣは、トランスポーターの主な助長因子（ｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒ）スーパーファミリーの構成員であり、その生理学的基質５−メチルテトラヒドロ葉酸に対してマイクロモルレベルの親和性を有する内在性膜貫通タンパク質である。また、重要なことに、ＲＦＣは、癌に使用される臨床関連抗葉酸薬、例えば、メトトレキサート（ＭＴＸ）、ラルチトレキセド（ＺＤ１６９４，Ｔｏｍｕｄｅｘ）（ＲＴＸ）、およびペメトレキセド（ＬＹ２３１５１４，Ａｌｉｍｔａ）（ＰＭＸ）の主なトランスポーターでもある。ＲＦＣレベルまたは機能の低下は、抗葉酸抵抗性の一般的な様式である。これまで未認識のプロトン共役葉酸トランスポーター（ＰＣＦＴ）が、最近、十二指腸での葉酸吸収に寄与していると報告されたが、その組織特異性および葉酸の恒常性における全般的な役割はまだ明らかでない。
【０００６】
葉酸受容体（ＦＲ）ファミリーは、哺乳動物細胞内へのまた別の葉酸取込み様式を示す。ＦＲは、第１１染色体のｑ１３．３〜ｑ１３．５に存在し、ＦＲα、ＦＲβおよびＦＲγで表示される３つの相違する遺伝子にコードされた高親和性葉酸結合タンパク質である。ＲＦＣおよびＰＣＦＴとは対照的に、ＦＲαおよびＦＲβは、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーによって原形質膜にアンカーリングされている。ＦＲγはＧＰＩアンカーを含まないが、分泌される。ＦＲαおよびＦＲβは、受容体媒介性エンドサイトーシスにより低（ナノモル）濃度で葉酸類の細胞内蓄積を媒介するが（ＦＲγはしない）、これらの相同タンパク質は、還元型葉酸基質に対する結合親和性において違いを示す。
【０００７】
高親和性ＦＲは、その限局的組織発現パターンおよび機能を考慮すると、選択的腫瘍標的化手段の可能性をもたらすものである。例えば、ＦＲαは、腎臓、胎盤および脈絡叢などの正常組織の先端膜表面上に発現されるが、ＦＲβは、胎盤、脾臓および胸腺内で発現される。重要なことに、ＦＲαは、いくつかの癌腫（例えば、９０％までもの卵巣癌）において過剰発現される。ＦＲαの発現レベルと、卵巣腫瘍の悪性度分類および分化状態とに密接な関連性が報告された。ＦＲαは、正常組織では（腫瘍と異なり）、循環系に到達不可能であることが報告されている。ＦＲβは、広範な骨髄性白血病細胞で発現される。正常造血細胞内のＦＲβは、白血病細胞内のものと、葉酸リガンドに結合できない点で異なる。
【０００８】
葉酸コンジュゲート細胞毒、リポソーム、または放射性核種、または細胞傷害性抗葉酸剤はすべて、ＦＲを標的化するために使用されている。残念ながら、古典的抗葉酸剤（例えば、ＲＴＸ、ＰＭＸ、およびロメテレキソール（ＬＭＸ））などのほとんどの葉酸系治療薬では、ＦＲと遍在発現ＲＦＣとで基質が共有されるため、腫瘍選択性が低下する。実際、これにより、ＬＭＸでのフェーズ１試験で見られる重度の骨髄抑制が説明され得る。
【０００９】
ＦＲ標的化リガンド自体が細胞傷害性でＲＦＣ活性がない場合、結果として選択的腫瘍の標的化が起こり得る。ＲＦＣよりもＦＲを選択的に標的化する抗葉酸剤、例えばＣＢ３７１７、より最近では、シクロペンタ［ｇ］キナゾリン抗葉酸剤ＢＧＣ６３８およびＢＧＣ９４５が報告されており、これらはすべて、細胞内でチミジル酸シンターゼ（ＴＳ）を強力に阻害する。ＢＧＣ９４５をマウスで試験したとき、正常組織に対する毒性（体重減少に反映される）はなく、なんら主要器官に対する毒性の肉眼的徴候もなく、ＦＲ標的化は高度に選択性であるという仮定と整合した。
【００１０】
当業者にはわかるように、ＦＲαおよびＦＲβなどのＦＲは、いくつかの型の癌性腫瘍の相当な量の特定の表面上で過剰発現される。ＦＲαは、卵巣、子宮内膜、腎臓、肺、中皮腫、乳房および脳の腫瘍で過剰発現されることがわかっている。ＦＲβは、急性骨髄性白血病で過剰発現されることがわかっている。
【００１１】
ほとんどの正常細胞には、ＦＲが存在しない。ほとんどの正常細胞では、葉酸が還元型葉酸担体（ＲＦＣ）系によって取り込まれない。組織および腫瘍による葉酸類および抗葉酸の取込みは、主に、遍在発現ＲＦＣ系によるものである。葉酸の特異性に鑑み、毒素、リポソーム、画像化剤、および細胞傷害剤をＦＲ発現腫瘍に選択的に送達するために、葉酸のコンジュゲートが使用されている。葉酸コンジュゲートの主な制限は、例えば細胞傷害剤を放出させるために葉酸部分からの切断が必要とされることである。葉酸コンジュゲートからの細胞傷害剤部分の切断は、多くの場合、達成することが困難であり、細胞傷害剤の放出ができないこと、または放出能が低い結果、抗腫瘍活性は障害されるか、または存在しなくなる。葉酸コンジュゲートの別の制限は、輸送中および癌性腫瘍に達する前での細胞傷害剤の早期放出を必然的に伴うことである。したがって、この早期放出により、正常細胞に望ましくない毒性がもたらされる。
【００１２】
ＦＲαおよびβは、別の葉酸取込み様式を示し、当業者により、選択的腫瘍取込みのための潜在的な化学療法標的とみなされている。米国特許出願公開公報ＵＳ２００８／００４５７１０Ａ１（２００８年２月２１日公開（Ａｌｅｅｍ  Ｇａｎｇｊｅｅ））には、癌腫瘍を処置するための化合物が記載されており、ここでは、縮合環状のピリミジンを用いて、ＦＲαおよびＦＲβを発現しており、また、グリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ（ＧＡＲＦＴアーゼ）酵素が阻害されている癌性腫瘍のＦＲを選択的に標的化する。この化合物は、細胞または組織によってＲＦＣ系を用いて有意に取り込まれない。
【００１３】
癌性細胞のＦＲαとＦＲβを選択的に標的化し、癌性細胞においてＧＡＲＦＴアーゼを阻害し、ＲＦＣに対する基質活性がわずかである、強力な抗腫瘍活性を有する単独の化合物の必要性が存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
発明の概要
本発明は、選択的プロトン共役葉酸トランスポーター（ＰＣＦＴ）ならびにαおよびβＦＲ、ならびにＧＡＲＴＦアーゼ酵素インヒビター化合物を提供することにより、上記の必要性を満たすものである。
【００１５】
本発明は、式Ｉ：
【００１６】
【化１】
2014224159.tif 000003
（式中、Ｒ１は、（ａ）水素（Ｈ））、（ｂ）ＯＨ、（ｃ）ＣＨ３、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、ならびに（ｂ）および（ｄ）の互変異性体のうちの１つを含み；Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；５位と６位間の結合は単結合または二重結合のいずれかであり得；５員環の５、６または７位には側鎖が結合されており、前記側鎖の結合点が７位である場合、Ａは、（ａ）ＣＲ’と（ｂ）Ｎのうちの１つを含み、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、（ａ）炭素原子５と６間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含み、Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；Ｘは、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、または水素（Ｈ）のいずれかであり、ここで、Ｘが水素のとき、Ｒ４は、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基のとき、Ｒ４は水素または結合であり；Ｒ５は、Ｒ５が結合でないこと以外はＲ３と同じであり；ｙは、ゼロから６以下の範囲の整数であり；ｚは、ゼロから７以下の範囲の整数であり、ここで、整数ｙとｚの総和は７以下である）
を含む化合物を提供する。
【００１７】
本発明の別の実施形態は、側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、ＡがＣＲ’Ｒ”であり、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれか、およびその組合せが結合されている、本明細書に記載の式Ｉの化合物を含む。
【００１８】
本発明の別の実施形態において、側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む、本明細書に記載の式Ｉの化合物を提供する。
【００１９】
本発明のまた別の実施形態において、側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、ＡがＣＲ’Ｒ”であり、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む、本明細書に記載の式Ｉの化合物を提供する。
【００２０】
本発明の別の実施形態は、側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む、本明細書に記載の式Ｉの化合物を提供する。
【００２１】
本発明の別の実施形態において、本明細書に記載の式Ｉの化合物は、（Ｃ）ｙと（Ｃ）ｚの炭素原子間に１つ以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有する側鎖を含む。
【００２２】
本発明の好ましい実施形態において、ＡがＮＲ’であり、Ｒ’が水素原子であり、ｙが１〜６個の炭素原子であり、ｚがゼロであり、Ｒ３とＲ５が各々、水素原子であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基およびヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される場合を含む、本明細書に記載の式Ｉの化合物を提供する。ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基は、ジヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、モノヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピペリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ならびにその立体異性体からなる群より選択される。ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基は、チオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、フラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピリジン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される。
【００２３】
本発明の別の実施形態において、本明細書に記載の式Ｉの化合物は、式Ｉの側鎖が、Ｅ−異性体およびＺ−異性体を構成する二重結合をゼロ個または１個以上含む場合を提供する。
【００２４】
本発明の他の実施形態は、該環系の二重結合が切れた場合、本発明の複素環式化合物のＲおよびＳ光学異性体を提供する。
【００２５】
本発明の他の実施形態は、治療有効量の、本明細書に記載の式Ｉを含む化合物、および式Ｉを含む化合物の薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物または水和物を有する医薬組成物を提供する。
【００２６】
本発明のさらなる実施形態は、癌を処置するため、プロトン共役葉酸トランスポーター経路によって癌性細胞を標的化するため、癌性細胞においてＧＡＲＦＴアーゼを阻害するため、および自己免疫疾患（関節リウマチなど）を有する患者において活性化マクロファージを選択的に標的化するための方法を提供する。
【００２７】
本発明の好ましい一実施形態は、式ＩＩ：
【００２８】
【化２】
2014224159.tif 000004
（式中、Ｒ１は、水素（Ｈ）または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のうちの１つを含み；
Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；
Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；
５位と６位間の結合は二重結合であり；
５員環の６位に側鎖が結合されており、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、（ａ）１つの水素原子、または（ｂ）１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含み、
Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；
Ｂは、（ａ）イオウ（Ｓ）原子、（ｂ）酸素（Ｏ）原子、または（ｃ）窒素（Ｎ）原子のうちの１つであり；
ｙは、ゼロから７以下の範囲の整数である）
を含む化合物を提供する。
【００２９】
本発明の別の実施形態は、側鎖が（Ｃ）ｙ１〜７の炭素原子間に１つ以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有する場合を含む式ＩＩの化合物を提供する。本発明の別の実施形態では、式ＩＩの化合物は、側鎖が、Ｅ−異性体およびＺ−異性体を構成する二重結合をゼロ個または１個以上含む場合を含む。別の実施形態は、その薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物または水和物のうちの１つを含む式ＩＩの化合物を提供する。また、治療有効量の式ＩＩの化合物を含む医薬組成物も提供する。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
式Ｉ：
【化４４】
2014224159.tif 000005
（式中、Ｒ１は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＯＨ、（ｃ）ＣＨ３、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、ならびに前記（ｂ）および前記（ｄ）の互変異性体のうちの１つを含み；
Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；
Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；
５位と６位間の結合は単結合または二重結合のいずれかであり得；
５員環の５、６または７位には側鎖が結合されており、前記側鎖の結合点が７位である場合、Ａは、（ａ）ＣＲ’と（ｂ）Ｎのうちの１つを含み、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、
（ａ）炭素原子５と６間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または
（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基
のいずれかが結合されている、およびその組合せを含み、
Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；
Ｘは、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、または水素（Ｈ）のいずれかであり、ここで、Ｘが水素のとき、Ｒ４は、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基のとき、Ｒ４は水素または結合であり；
Ｒ５は、Ｒ５が結合でないこと以外はＲ３と同じであり；
ｙは、ゼロから６以下の範囲の整数であり；
ｚは、ゼロから７以下の範囲の整数であり、ここで、整数ｙとｚの総和は７以下である）を含む化合物。
（項目２）
前記側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、Ａが前記ＣＲ’Ｒ”であり、さらに、５位の炭素原子に、独立して、
（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または
（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む、項目１に記載の化合物。
（項目３）
前記側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目１に記載の化合物。
（項目４）
前記側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、Ａが前記ＣＲ’Ｒ”  であり、さらに、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目１に記載の化合物。
（項目５）
前記側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目１に記載の化合物。
（項目６）
前記ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基が、ジヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、モノヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピペリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ならびにその立体異性体からなる群より選択される、含む、項目１に記載の化合物。
（項目７）
（Ｃ）ｙと（Ｃ）ｚの炭素原子間に１つ以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有する前記側鎖を含む、項目１に記載の化合物。
（項目８）
ＡがＮＲ’であり、Ｒ’が水素原子であり、ｙが１〜６個の炭素原子であり、ｚがゼロであり、Ｒ３とＲ５が各々、水素原子であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基およびヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される、含む、項目１に記載の化合物。
（項目９）
前記ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基が、チオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、フラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピリジン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される、含む、項目１に記載の化合物。
（項目１０）
式Ｉの前記側鎖が、Ｅ−異性体およびＺ−異性体を構成する二重結合をゼロ個または１個以上含む、項目１に記載の化合物。
（項目１１）
その薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物または水和物を含む、項目１に記載の化合物。
（項目１２）
治療有効量の式Ｉ：
【化４５】
2014224159.tif 000006
（式中、Ｒ１は、（ａ）水素（Ｈ））、（ｂ）ＯＨ、（ｃ）ＣＨ３、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、ならびに前記（ｂ）および前記（ｄ）の互変異性体のうちの１つを含み；
Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；
Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；
５位と６位間の結合は単結合または二重結合のいずれかであり得；
５員環の５、６または７位には側鎖が結合されており、前記側鎖の結合点が７位である場合、Ａは、（ａ）ＣＲ’と（ｂ）Ｎのうちの１つを含み、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、（ａ）炭素原子５と６間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかが結合されている、およびその組合せを含み
Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；
Ｘは、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、または水素（Ｈ）のいずれかであり、ここで、Ｘが水素のとき、Ｒ４は、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基のとき、Ｒ４は水素または結合であり；
Ｒ５は、Ｒ５が結合でないこと以外はＲ３と同じであり；
ｙは、ゼロから６以下の範囲の整数であり；
ｚは、ゼロから７以下の範囲の整数であり、ここで、整数ｙとｚの総和は７以下である）
を含む化合物を含む医薬組成物。
（項目１３）
前記側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、Ａが前記ＣＲ’Ｒ”であり、さらに、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目１２に記載の医薬組成物。
（項目１４）
前記側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む、項目１２に記載の医薬組成物。
（項目１５）
前記側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、Ａが前記ＣＲ’Ｒ”である場合を含み、さらに、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む、項目１２に記載の医薬組成物。
（項目１６）
前記側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む、項目１２に記載の医薬組成物。
（項目１７）
前記ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基が、ジヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、モノヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピペリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ならびにその立体異性体からなる群、ジヒドロチオフェン−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロチオフェン−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロフラン−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロフラン−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピロール−Ｌ−グルタメート基、およびテトラヒドロピロール−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される、含む、項目１２に記載の医薬組成物。
（項目１８）
（Ｃ）ｙと（Ｃ）ｚの炭素原子間に１つ以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有する前記側鎖を含む、項目１２に記載の医薬組成物。
（項目１９）
ＡがＮＲ’であり、Ｒ’が水素原子であり、ｙが１〜６個の炭素原子であり、ｚがゼロであり、Ｒ３とＲ５が各々、水素原子であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基およびヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される、含む、項目１２に記載の医薬組成物。
（項目２０）
前記ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基が、チオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、フラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピリジン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される、含む、項目１２に記載の医薬組成物。
（項目２１）
式Ｉの前記側鎖が、Ｅ−異性体およびＺ−異性体を構成する二重結合をゼロ個または１個以上含む、項目１２に記載の医薬組成物。
（項目２２）
項目１２に記載の医薬組成物であって、その薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物または水和物を含む、医薬組成物。
（項目２３）
患者に、治療有効量の式Ｉ：
【化４６】
2014224159.tif 000007
（式中、Ｒ１は、（ａ）水素（Ｈ））、（ｂ）ＯＨ、（ｃ）ＣＨ３、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、ならびに前記（ｂ）および前記（ｄ）の互変異性体のうちの１つを含み；
Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；
Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；
５位と６位間の結合は単結合または二重結合のいずれかであり得；
５員環の５、６または７位には側鎖が結合されており、前記側鎖の結合点が７位である場合、Ａは、（ａ）ＣＲ’と（ｂ）Ｎのうちの１つを含み、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、（ａ）炭素原子５と６間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかが結合されている、およびその組合せを含み、
Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；
Ｘは、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、または水素（Ｈ）のいずれかであり、ここで、Ｘが水素のとき、Ｒ４は、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基のとき、Ｒ４は水素または結合であり；
Ｒ５は、Ｒ５が結合でないこと以外はＲ３と同じであり；
ｙは、ゼロから６以下の範囲の整数であり；
ｚは、ゼロから７以下の範囲の整数であり、ここで、整数ｙとｚの総和は７以下である）
の化合物を投与することを含む、癌と診断された患者の処置方法。
（項目２４）
前記化合物において、前記側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、Ａが前記ＣＲ’Ｒ”であり、さらに、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記化合物において、前記側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
前記化合物において、前記側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、Ａが前記ＣＲ’Ｒ”であり、さらに、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目２３に記載の方法。
（項目２７）
前記化合物において、前記側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目２３に記載の方法。
（項目２８）
前記ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基が、ジヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、モノヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピペリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ならびにその立体異性体からなる群より選択される、含む、項目２３に記載の方法。
（項目２９）
前記化合物において、前記側鎖が、（Ｃ）ｙと（Ｃ）ｚの炭素原子間に１つ以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有する、含む、項目２３に記載の方法。
（項目３０）
前記化合物において、ＡがＮＲ’であり、Ｒ’が水素原子であり、ｙが１〜６個の炭素原子であり、ｚがゼロであり、Ｒ３とＲ５が各々、水素原子であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基およびヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される、含む、項目２３に記載の方法。
（項目３１）
前記化合物において、前記ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基が、チオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、フラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピリジン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される、含む、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記化合物において、式Ｉの前記側鎖が、Ｅ−異性体およびＺ−異性体を構成する二重結合をゼロ個または１個以上含む、含む、項目２３に記載の方法。
（項目３３）
前記化合物の薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物または水和物を含む、項目２３に記載の方法。
（項目３４）
（ａ）式Ｉ：
【化４７】
2014224159.tif 000008
（式中、Ｒ１は、（ａ）水素（Ｈ））、（ｂ）ＯＨ、（ｃ）ＣＨ３、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、ならびに前記（ｂ）および前記（ｄ）の互変異性体のうちの１つを含み；
Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；
Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；
５位と６位間の結合は単結合または二重結合のいずれかであり得；
５員環の５、６または７位には側鎖が結合されており、前記側鎖の結合点が７位である場合、Ａは、（ａ）ＣＲ’と（ｂ）Ｎのうちの１つを含み、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、（ａ）炭素原子５と６間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかが結合されている、およびその組合せを含み、
Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；
Ｘは、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、または水素（Ｈ）のいずれかであり、ここで、Ｘが水素のとき、Ｒ４は、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基のとき、Ｒ４は水素または結合であり；
Ｒ５は、Ｒ５が結合でないこと以外はＲ３と同じであり；
ｙは、ゼロから６以下の範囲の整数であり；
ｚは、ゼロから７以下の範囲の整数であり、ここで、整数ｙとｚの総和は７以下である）
を含む化合物を準備すること；
（ｂ）ヒトプロトン共役葉酸トランスポーター（ＰＣＦＴ）を発現している癌性細胞を、前記式Ｉの化合物に供すること；
（ｃ）前記ヒトＰＣＦＴに対する前記式Ｉの化合物の選択的結合を確立すること；ならびに
（ｄ）標的癌性細胞に対する前記ヒトＰＣＦＴに結合させた前記式Ｉの化合物の選択的輸送を行なうこと、ここで、前記式Ｉの化合物は、前記標的癌性細胞の増殖インヒビターとしての機能を果たし、前記標的癌性細胞内のＧＡＲＦＴアーゼを阻害する、
を含む、プロトン共役葉酸トランスポーター経路による癌性細胞の標的化方法。
（項目３５）
前記式Ｉの化合物が、該発現癌性細胞と関連しているＦＲαおよびヒトＰＣＦＴの受容体に選択的である、含む、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
還元型葉酸担体系を用いて、前記式Ｉの化合物が組織または細胞によって有意に取り込まれない、含む、項目３４に記載の方法。
（項目３７）
前記化合物において、前記側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、Ａが前記ＣＲ’Ｒ”であり、さらに、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目３４に記載の方法。
（項目３８）
前記化合物において、前記側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目３４に記載の方法。
（項目３９）
該化合物において、前記側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、Ａが前記ＣＲ’Ｒ”であり、さらに、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目３４に記載の方法。
（項目４０）
前記化合物において、前記側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目３４に記載の方法。
（項目４１）
前記化合物において、前記ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基が、ジヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、モノヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピペリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ならびにその立体異性体からなる群より選択される、含む、項目３４に記載の方法。
（項目４２）
前記化合物において、前記側鎖が、（Ｃ）ｙと（Ｃ）ｚの炭素原子間に１つ以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有する、含む、項目３４に記載の方法。
（項目４３）
前記化合物において、ＡがＮＲ’であり、Ｒ’が水素原子であり、ｙが１〜６個の炭素原子であり、ｚがゼロであり、Ｒ３とＲ５が各々、水素原子であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基およびヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される、含む、項目３４に記載の方法。
（項目４４）
前記ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基が、チオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、フラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピリジン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される、含む、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記化合物において、式Ｉの前記側鎖が、Ｅ−異性体およびＺ−異性体を構成する二重結合をゼロ個または１個以上含む、含む、項目３４に記載の方法。
（項目４６）
前記化合物の薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物または水和物を含む、項目３４に記載の方法。
（項目４７）
前記化合物が、卵巣、乳房、頚部、および腎臓  脳の腫瘍からなる群より選択される癌性細胞を標的化する、含む、項目３４に記載の方法。
（項目４８）
（ａ）細胞傷害性の影響を有する式Ｉ：
【化４８】
2014224159.tif 000009
（式中、Ｒ１は、（ａ）水素（Ｈ））、（ｂ）ＯＨ、（ｃ）ＣＨ３、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、ならびに前記（ｂ）および前記（ｄ）の互変異性体のうちの１つを含み；
Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；
Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；
５位と６位間の結合は単結合または二重結合のいずれかであり得；
５員環の５、６または７位には側鎖が結合されており、前記側鎖の結合点が７位である場合、Ａは、（ａ）ＣＲ’と（ｂ）Ｎのうちの１つを含み、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、（ａ）炭素原子５と６間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかが結合されている、およびその組合せを含み、
Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；
Ｘは、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、または水素（Ｈ）のいずれかであり、ここで、Ｘが水素のとき、Ｒ４は、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基のとき、Ｒ４は水素または結合であり；
Ｒ５は、Ｒ５が結合でないこと以外はＲ３と同じであり；
ｙは、ゼロから６以下の範囲の整数であり；
ｚは、ゼロから７以下の範囲の整数であり、ここで、整数ｙとｚの総和は７以下である）
の化合物を準備する工程；
（ｂ）前記化合物を前記癌性細胞に選択的に送達する工程；
（ｃ）前記癌性細胞内への前記化合物の侵入を行なわせる工程；
（ｄ）前記癌性細胞内に前記化合物を、前記化合物とＧＡＲＦＴアーゼ酵素との結合が行なわれるのに充分な時間量保持する工程；ならびに
（ｅ）前記化合物と前記ＧＡＲＦＴアーゼ酵素との前記結合によって前記癌性細胞を溶解させ、前記癌性細胞のＤＮＡ複製を阻害する工程
を含む、癌性細胞においてＧＡＲＦＴアーゼを阻害するための方法。
（項目４９）
前記化合物が、該発現癌性細胞と関連しているＦＲαの受容体に選択的である、含む、項目４７に記載の方法。
（項目５０）
前記化合物において、前記側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、Ａが前記ＣＲ’Ｒ”であり、さらに、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目４７に記載の方法。
（項目５１）
前記化合物において、前記側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目４７に記載の方法。
（項目５２）
前記化合物において、前記側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、Ａが前記ＣＲ’Ｒ”であり、さらに、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目４７に記載の方法。
（項目５３）
前記化合物において、前記側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目４７に記載の方法。
（項目５４）
前記化合物において、前記ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基が、ジヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、モノヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピペリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ならびにその立体異性体からなる群より選択される、含む、項目４７に記載の方法。
（項目５５）
前記化合物において、前記側鎖が、（Ｃ）ｙと（Ｃ）ｚの炭素原子間に１つ以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有する、含む、項目４７に記載の方法。
（項目５６）
前記化合物において、ＡがＮＲ’であり、Ｒ’が水素原子であり、ｙが１〜６個の炭素原子であり、ｚがゼロであり、Ｒ３とＲ５が各々、水素原子であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基およびヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される、含む、項目４７に記載の方法。
（項目５７）
前記化合物において、前記ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基が、チオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、フラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピリジン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される、含む、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
前記化合物において、式Ｉの前記側鎖が、Ｅ−異性体およびＺ−異性体を構成する二重結合をゼロ個または１個以上含む、項目４７に記載の方法。
（項目５９）
前記化合物の薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物または水和物を含む、項目４７に記載の方法。
（項目６０）
（ａ）式Ｉ：
【化４９】
2014224159.tif 000010
（式中、Ｒ１は、（ａ）水素（Ｈ））、（ｂ）ＯＨ、（ｃ）ＣＨ３、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、ならびに前記（ｂ）および前記（ｄ）の互変異性体のうちの１つを含み；
Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；
Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；
５位と６位間の結合は単結合または二重結合のいずれかであり得；
５員環の５、６または７位には側鎖が結合されており、前記側鎖の結合点が７位である場合、Ａは、（ａ）ＣＲ’と（ｂ）Ｎのうちの１つを含み、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、（ａ）炭素原子５と６間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、およびその組合せのいずれかが結合されている、ならびにその組合せを含み、
Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；
Ｘは、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、または水素（Ｈ）のいずれかであり、ここで、Ｘが水素のとき、Ｒ４は、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基のとき、Ｒ４は水素または結合であり；
Ｒ５は、Ｒ５が結合でないこと以外はＲ３と同じであり；
ｙは、ゼロから６以下の範囲の整数であり；
ｚは、ゼロから７以下の範囲の整数であり、ここで、整数ｙとｚの総和は７以下である）
を含む化合物を準備する工程；
（ｂ）葉酸受容体（ＦＲ）を発現している活性化マクロファージを前記式Ｉの化合物に供する工程；
（ｃ）前記ＦＲに対する前記式Ｉの化合物の選択的結合を確立する工程；ならびに
（ｄ）自己免疫疾患の標的である活性化マクロファージに対して、前記ＦＲに結合された前記式Ｉの化合物の選択的輸送を行なう工程であって、ここで、前記式Ｉの化合物は、崩壊的炎症メディエーターの前記活性化マクロファージの放出のインヒビターとしての機能を果たす工程、
を含む、自己免疫疾患を有する患者において活性化マクロファージを選択的に標的化するための方法。
（項目６１）
前記式Ｉの化合物が、該発現マクロファージ細胞と関連しているＦＲαおよびヒトプロトン共役葉酸トランスポーターの受容体に選択的である、含む、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
前記ＦＲを発現している前記活性化マクロファージ細胞を有する自己免疫疾患が関節リウマチである、含む、項目６０に記載の方法。
（項目６３）
前記化合物において、前記側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、Ａが前記ＣＲ’Ｒ”であり、さらに、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは、１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目６０に記載の方法。
（項目６４）
前記化合物において、前記側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目６０に記載の方法。
（項目６５）
該化合物において、前記側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、Ａが前記ＣＲ’Ｒ”であり、さらに、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目６０に記載の方法。
（項目６６）
前記化合物において、前記側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている、およびその組合せを含む、項目６０に記載の方法。
（項目６７）
前記化合物において、前記ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基が、ジヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、モノヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピペリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ならびにその立体異性体からなる群より選択される、含む、項目６０に記載の方法。
（項目６８）
前記化合物において、前記側鎖が、（Ｃ）ｙと（Ｃ）ｚの炭素原子間に１つ以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有する、含む、項目６０に記載の方法。
（項目６９）
前記化合物において、ＡがＮＲ’であり、Ｒ’が水素原子であり、ｙが１〜６個の炭素原子であり、ｚがゼロであり、Ｒ３とＲ５が各々、水素原子であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基およびヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される、含む、項目６０に記載の方法。
（項目７０）
前記ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基が、チオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、フラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピリジン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される、含む、項目６０に記載の方法。
（項目７１）
前記化合物において、式Ｉの前記側鎖が、Ｅ−異性体およびＺ−異性体を構成する二重結合をゼロ個または１個以上含む、項目６０に記載の方法。
（項目７２）
前記式Ｉの化合物の薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物または水和物を含む、項目６０に記載の方法。
（項目７３）
患者の関節または滑液内への注射によって、前記式Ｉの化合物または前記式Ｉの化合物の薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物または水和物を送達する工程を含む、項目６０に記載の方法。
（項目７４）
式ＩＩ：
【化５０】
2014224159.tif 000011
（式中、Ｒ１は、水素（Ｈ）または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のうちの１つを含み；
Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；
Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；
５位と６位間の結合は二重結合であり；
５員環の６位に側鎖が結合されており、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、（ａ）１つの水素原子、または（ｂ）１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかが結合されている、およびその組合せを含み、
Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；
Ｂは、（ａ）イオウ（Ｓ）原子、（ｂ）酸素（Ｏ）原子、または（ｃ）窒素（Ｎ）原子のうちの１つであり；
ｙは、ゼロから７以下の範囲の整数である）
を含む化合物。
（項目７５）
前記側鎖が、（Ｃ）ｙ１〜７の炭素原子間に１つ以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有する、含む、項目７４に記載の化合物。
（項目７６）
式ＩＩの前記側鎖が、Ｅ−異性体およびＺ−異性体を構成する二重結合をゼロ個または１個以上含む、項目７４に記載の化合物。
（項目７７）
項目７４に記載の化合物であって、その薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物または水和物のうちの１つを含む、化合物。
（項目７８）
治療有効量の項目７４に記載の化合物を含む医薬組成物。
（項目７９）
Ａがイオウ原子である式Ｉの化合物を提供することによりＡＩＣＡＲＦＴアーゼを阻害する工程を含む、項目４７に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
好ましい実施形態の以下の説明を添付の図面と関連付けて読むと、本発明の充分な理解が得られ得よう。
【図１】図１は、本発明の７種類の化合物、すなわち、試料ＩＤ  ＡＡＧ１５４３５３、ＡＡＧ１５４３６０、ＡＡＧ１５４４８４、ＡＡＧ１５４４６８、ＡＡＧ１５４４７９、ＡＡＧ１５４４８９、ＡＡＧ１５４４８５、およびＡＡＧ１５４５４４の化学構造を示す。
【図２】図２は、本発明の種々の化合物の生物学的効果を示す。
【図３】図３は、比較化合物ＡＡＧ１２０３６６−２の構造を示す。
【図４】図４は、充実性腫瘍および白血病細胞株におけるｈＲＦＣおよびｈＰＣＦＴの転写物レベルを示す。
【図５】図５は、ｈＰＣＦＴＭｙｃ−ｈｉｓ６でのＨｅＬａ  Ｒ５およびＣＨＯ  Ｒ２細胞のトランスフェクションを示す。
【図６】図６は、ｈＰＣＦＴＭｙｃ−ｈｉｓ６で一過的にトランスフェクトしたＲ５  ＨｅＬａ細胞の輸送阻害、ならびに化合物ＡＡＧ１２０３６６−２（「Ｑ」）、ＡＡＧ１５４３５３（「７１」）、およびＰＴ５２３（「ＰＴ」）による阻害を示す。アッセイでは、３Ｈ−メトトレキサートを、３７℃でｐＨ５．５のＭＥＳ緩衝生理食塩水中、１もしくは１０マイクロモルのインヒビター化合物Ｑ、７１、およびＰＴの添加なし（「ＮＡ」）、または存在下で使用した。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
好ましい実施形態の説明
本発明は、式Ｉ：
【００３２】
【化３】
2014224159.tif 000012
（式中、Ｒ１は、（ａ）水素（Ｈ））、（ｂ）ＯＨ、（ｃ）ＣＨ３、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、ならびに（ｂ）および（ｄ）の互変異性体のうちの１つを含み；Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；５位と６位間の結合は単結合または二重結合のいずれかであり得；５員環の５、６または７位には側鎖が結合されており、前記側鎖の結合点が７位である場合、Ａは、（ａ）ＣＲ’と（ｂ）Ｎのうちの１つを含み、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、（ａ）炭素原子５と６間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含み；Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；Ｘは、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、または水素（Ｈ）のいずれかであり、ここで、Ｘが水素のとき、Ｒ４は、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基のとき、Ｒ４は水素または結合であり；Ｒ５は、Ｒ５が結合でないこと以外はＲ３と同じであり；ｙは、ゼロから６以下の範囲の整数であり；ｚは、ゼロから７以下の範囲の整数であり、ここで、整数ｙとｚの総和は７以下である）
を含む化合物を提供する。
【００３３】
本発明の別の実施形態は、側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、ＡがＣＲ’Ｒ”であり、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれか、およびその組合せが結合されている、本明細書に記載の式Ｉの化合物を含む。
【００３４】
本発明の別の実施形態において、側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む、本明細書に記載の式Ｉの化合物を提供する。
【００３５】
本発明のまた別の実施形態において、前記側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、ＡがＣＲ’Ｒ”であり、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む、本明細書に記載の式Ｉの化合物を提供する。
【００３６】
本発明の別の実施形態は、側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む、本明細書に記載の式Ｉの化合物を提供する。
【００３７】
ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基は、ジヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、モノヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピペリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ならびにその立体異性体からなる群より選択される。
【００３８】
ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基は、チオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、フラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピリジン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される。
【００３９】
本発明の別の実施形態において、本明細書に記載の式Ｉの化合物は、（Ｃ）ｙと（Ｃ）ｚの炭素原子間に１つ以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有する側鎖を含む。
【００４０】
本発明の好ましい実施形態において、ＡがＮＲ’であり、Ｒ’が水素原子であり、ｙが１〜６個の炭素原子であり、ｚがゼロであり、Ｒ３とＲ５が各々、水素原子であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される場合を含む、本明細書に記載の式Ｉの化合物を提供する。
【００４１】
本発明の別の実施形態において、本明細書に記載の式Ｉの化合物は、式Ｉの側鎖が、Ｅ−異性体およびＺ−異性体を構成する二重結合をゼロ個または１個以上含む場合を提供する。
【００４２】
本発明の別の実施形態は、本明細書に記載の式Ｉの化合物の薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物または水和物を提供する。
【００４３】
本発明のまた別の実施形態において、治療有効量の式Ｉ：
【００４４】
【化４】
2014224159.tif 000013
（式中、Ｒ１は、（ａ）水素（Ｈ））、（ｂ）ＯＨ、（ｃ）ＣＨ３、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、ならびに（ｂ）および（ｄ）の互変異性体のうちの１つを含み；Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；５位と６位間の結合は単結合または二重結合のいずれかであり得；５員環の５、６または７位には側鎖が結合されており、前記側鎖の結合点が７位である場合、Ａは、（ａ）ＣＲ’と（ｂ）Ｎのうちの１つを含み、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、（ａ）炭素原子５と６間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含み；Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；Ｘは、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、または水素（Ｈ）のいずれかであり、ここで、Ｘが水素のとき、Ｒ４は、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基のとき、Ｒ４は水素または結合であり；Ｒ５は、Ｒ５が結合でないこと以外はＲ３と同じであり；ｙは、ゼロから６以下の範囲の整数であり；ｚは、ゼロから７以下の範囲の整数であり、ここで、整数ｙとｚの総和は７以下である）を含む化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００４５】
本発明の別の実施形態において、医薬組成物は、側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、ＡがＣＲ’Ｒ”である場合を含み、さらに、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む。
【００４６】
本発明の別の実施形態において、式Ｉの医薬組成物は、側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む。
【００４７】
本発明の別の実施形態は、側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、Ａが前記ＣＲ’Ｒ”であり、さらに、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む、式Ｉの医薬組成物を提供する。
【００４８】
本発明のさらなる実施形態は、側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む、式Ｉの医薬組成物を提供する。
【００４９】
本発明の別の実施形態は、（Ｃ）ｙと（Ｃ）ｚの炭素原子間に１つ以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有する側鎖を含む式Ｉの医薬組成物を提供する。
【００５０】
本発明の好ましい実施形態において、式Ｉの医薬組成物は、ＡがＮＲ’であり、Ｒ’が水素原子であり、ｙが１〜６個の炭素原子であり、ｚがゼロであり、Ｒ３とＲ５が各々、水素原子であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基およびヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される場合を含む。
【００５１】
本発明の別の実施形態において、式Ｉの医薬組成物は、前記式Ｉの側鎖が、Ｅ−異性体およびＺ−異性体を構成する二重結合をゼロ個または１個以上含む場合を含む。
【００５２】
本発明は、本明細書に記載の式Ｉの医薬組成物の薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物または水和物を提供する。
【００５３】
本発明において、患者に、治療有効量の式Ｉ：
【００５４】
【化５】
2014224159.tif 000014
（式中、Ｒ１は、（ａ）水素（Ｈ））、（ｂ）ＯＨ、（ｃ）ＣＨ３、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、ならびに（ｂ）および（ｄ）の互変異性体のうちの１つを含み；Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；５位と６位間の結合は単結合または二重結合のいずれかであり得；５員環の５、６または７位には側鎖が結合されており、前記側鎖の結合点が７位である場合、Ａは、（ａ）ＣＲ’と（ｂ）Ｎのうちの１つを含み、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、（ａ）炭素原子５と６間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含み；Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；Ｘは、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、または水素（Ｈ）のいずれかであり、ここで、Ｘが水素のとき、Ｒ４は、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基のとき、Ｒ４は水素または結合であり；Ｒ５は、Ｒ５が結合でないこと以外はＲ３と同じであり；ｙは、ゼロから６以下の範囲の整数であり；ｚは、ゼロから７以下の範囲の整数であり、ここで、整数ｙとｚの総和は７以下である）の化合物を投与することを含む、癌と診断された患者の処置方法を提供する。
【００５５】
本発明の別の実施形態において、本明細書に記載の癌患者の処置方法は、患者に、側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、Ａが前記ＣＲ’Ｒ”である場合を含み、さらに、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む式Ｉの化合物を投与することを含む。
【００５６】
本発明の別の実施形態は、患者に、側鎖の結合点が６位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、５位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む式Ｉの化合物を投与することを含む、本明細書に記載の癌患者の処置方法を提供する。
【００５７】
本発明の別の実施形態において、本明細書に記載の癌患者の処置方法は、患者に、側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、ＡがＣＲ’Ｒ”であり、さらに、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む式Ｉの化合物を投与することを含む。
【００５８】
本発明の別の実施形態において、本明細書に記載の癌患者の処置方法は、患者に、側鎖の結合点が５位の炭素原子であり、ＡがＮＲ’（式中、Ｒ’は水素原子または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）であり、６位の炭素原子に、独立して、（ａ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、もしくは５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含む式Ｉの化合物を投与することを含む。
【００５９】
本明細書に記載の癌患者の処置方法は、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基が、ジヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、モノヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピペリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ならびにその立体異性体からなる群より選択される場合、ならびにヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基が、チオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、フラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピリジン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される場合を含む。
【００６０】
本明細書に記載の癌患者の処置方法は、患者に、側鎖が（Ｃ）ｙと（Ｃ）ｚの炭素原子間に１つ以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有する式Ｉの化合物の有効量を投与することを含む。
【００６１】
好ましくは、本明細書に記載の癌患者の処置方法は、患者に、ＡがＮＲ’であり、Ｒ’が水素原子であり、ｙが１〜６個の炭素原子であり、ｚがゼロであり、Ｒ３とＲ５が各々、水素原子であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基からなる群より選択される、本明細書に記載の式Ｉの化合物の有効量を投与することを含む。本明細書に記載の癌患者の処置方法は、患者に、式Ｉの側鎖がＥ−異性体およびＺ−異性体を構成する二重結合をゼロ個または１個以上含む式Ｉの化合物の有効量を投与することを含む。
【００６２】
本明細書に記載の癌患者の処置方法はすべて、患者に、有効量の本明細書に記載の式Ｉの化合物、または本明細書に記載の式Ｉの化合物の薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物もしくは水和物を投与することを含む。
【００６３】
（ａ）式Ｉ：
【００６４】
【化６】
2014224159.tif 000015
（式中、Ｒ１は、（ａ）水素（Ｈ））、（ｂ）ＯＨ、（ｃ）ＣＨ３、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、ならびに（ｂ）および（ｄ）の互変異性体のうちの１つを含み；
Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；
Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；
５位と６位間の結合は単結合または二重結合のいずれかであり得；
５員環の５、６または７位には側鎖が結合されており、前記側鎖の結合点が７位である場合、Ａは、（ａ）ＣＲ’と（ｂ）Ｎのうちの１つを含み、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、（ａ）炭素原子５と６間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含み、
Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；
Ｘは、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、または水素（Ｈ）のいずれかであり、ここで、Ｘが水素のとき、Ｒ４は、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基のとき、Ｒ４は水素または結合であり；
Ｒ５は、Ｒ５が結合でないこと以外はＲ３と同じであり；
ｙは、ゼロから６以下の範囲の整数であり；
ｚは、ゼロから７以下の範囲の整数であり、ここで、整数ｙとｚの総和は７以下である）
を含む化合物を準備すること；
（ｂ）ヒトプロトン共役葉酸トランスポーター（ＰＣＦＴ）を発現している癌性細胞を、前記式Ｉの化合物に供すること；
（ｃ）前記ヒトＰＣＦＴに対する前記式Ｉの化合物の選択的結合を確立すること；ならびに
（ｄ）標的癌性細胞に対する前記ヒトＰＣＦＴに結合させた前記式Ｉの化合物の選択的輸送を行なうこと、ここで、前記式Ｉの化合物は、前記標的癌性細胞の増殖インヒビターとしての機能を果たし、前記標的癌性細胞内のＧＡＲＦＴアーゼを阻害する、
を含む、プロトン共役葉酸トランスポーター経路による癌性細胞の標的化方法を提供する。
【００６５】
本明細書に記載の本発明の癌性細胞の標的化のためのこの方法の別の実施形態は、式Ｉの化合物が、該発現癌性細胞と関連しているＦＲαおよびヒトＰＣＦＴの受容体に選択的である場合を含む。この癌性細胞の標的化方法において、前記式Ｉの化合物は、還元型葉酸担体（ＲＦＣ）系を用いて組織または細胞によって有意に取り込まれない。
【００６６】
この癌性細胞の標的化方法の他の実施形態は、本明細書に記載の任意の種々の式Ｉの化合物、または式Ｉの化合物の薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物もしくは水和物を使用することを含み、したがって、当業者には、本明細書に記載の側鎖結合のための任意の位置が本発明の実施形態であることが理解されよう。このような癌細胞の標的化方法は、該化合物が、卵巣、乳房、頚部、および腎臓  脳の腫瘍からなる群より選択される癌性細胞を標的化する場合を含む。
【００６７】
（ａ）細胞傷害性の影響を有する式Ｉ：
【００６８】
【化７】
2014224159.tif 000016
（式中、Ｒ１は、（ａ）水素（Ｈ））、（ｂ）ＯＨ、（ｃ）ＣＨ３、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、ならびに（ｂ）および（ｄ）の互変異性体のうちの１つを含み；
Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；
Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；
５位と６位間の結合は単結合または二重結合のいずれかであり得；
５員環の５、６または７位には側鎖が結合されており、前記側鎖の結合点が７位である場合、Ａは、（ａ）ＣＲ’と（ｂ）Ｎのうちの１つを含み、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、（ａ）炭素原子５と６間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含み、
Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；
Ｘは、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、または水素（Ｈ）のいずれかであり、ここで、Ｘが水素のとき、Ｒ４は、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基のとき、Ｒ４は水素または結合であり；
Ｒ５は、Ｒ５が結合でないこと以外はＲ３と同じであり；
ｙは、ゼロから６以下の範囲の整数であり；
ｚは、ゼロから７以下の範囲の整数であり、ここで、整数ｙとｚの総和は７以下である）
の化合物を準備すること；
（ｂ）前記化合物を前記癌性細胞に選択的に送達すること；
（ｃ）前記癌性細胞内への前記化合物の侵入を行なわせること；
（ｄ）前記癌性細胞内に前記化合物を、前記化合物とＧＡＲＦＴアーゼ酵素との結合が行なわれるのに充分な時間量保持すること；ならびに
（ｅ）前記化合物と前記ＧＡＲＦＴアーゼ酵素との前記結合によって前記癌性細胞を溶解させ、前記癌性細胞のＤＮＡ複製を阻害すること
を含む、癌性細胞においてＧＡＲＦＴアーゼを阻害するための方法を提供する。
【００６９】
好ましくは、本明細書に記載のＧＡＲＦＴアーゼを阻害する本発明の方法は、式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物もしくは水和物が、該発現癌性細胞と関連しているＦＲαの受容体に選択的である場合を含む。
【００７０】
本明細書に記載のＧＡＲＴアーゼの阻害の本発明の他の実施形態は、本明細書に記載のように、種々の位置（５、６または７位）に側鎖の結合点を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）本明細書に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物もしくは水和物の種々の実施形態のいずれか１つの使用を含む。
【００７１】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物においてＡがイオウ原子である場合、ＡＩＣＡＲＦＴアーゼの阻害を提供する。
【００７２】
関節リウマチは、世界中で、数百万人の患者の生活の質に影響を及ぼしている自己免疫疾患である。関節リウマチは、患者の関節の炎症ならびに患者の軟骨および骨の崩壊を特徴とする。関節リウマチの病理は複雑であるが、患者の罹患関節の滑膜内への崩壊的炎症メディエーターの放出とともに、免疫細胞の浸潤および活性化を伴うことがわかっている。Ｐａｕｌｏｓ，Ｃｈｒｙｓｔａｌ  Ｍ．ら，“Ｆｏｌａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｄ  ｉｍａｇｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ  ｔｏ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ”，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，第５６巻，第１２０５〜１２１７頁（２００４）には、自然発生関節リウマチを有する患者モデル（ヒトおよび動物）における活性化マクロファージ細胞上での葉酸受容体発現の知見が記載されており、これは引用により本明細書に組み込まれる（特に、第１２０８頁のセクション３および第１２１２〜１２１４頁のセクション５）。
【００７３】
本発明は、
（ａ）式Ｉ：
【００７４】
【化８】
2014224159.tif 000017
（式中、Ｒ１は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＯＨ、（ｃ）ＣＨ３、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、ならびに（ｂ）および（ｄ）の互変異性体のうちの１つを含み；
Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；
Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；
５位と６位間の結合は単結合または二重結合のいずれかであり得；
５員環の５、６または７位には側鎖が結合されており、前記側鎖の結合点が７位である場合、Ａは、（ａ）ＣＲ’と（ｂ）Ｎのうちの１つを含み、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、（ａ）炭素原子５と６間の結合が単結合のときは２つの水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１つの水素原子、または（ｂ）５位と６位の炭素原子間の結合が単結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基と水素原子、もしくは炭素原子５と６間の結合が二重結合のときは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、およびその組合せのいずれかが結合されている場合、ならびにその組合せを含み、
Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；
Ｘは、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、または水素（Ｈ）のいずれかであり、ここで、Ｘが水素のとき、Ｒ４は、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基であり、Ｘが、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基またはヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基のとき、Ｒ４は水素または結合であり；
Ｒ５は、Ｒ５が結合でないこと以外はＲ３と同じであり；
ｙは、ゼロから６以下の範囲の整数であり；
ｚは、ゼロから７以下の範囲の整数であり、ここで、整数ｙとｚの総和は７以下である）
を含む化合物を準備すること；
（ｂ）葉酸受容体（ＦＲ）を発現している活性化マクロファージを前記式Ｉの化合物に供すること；
（ｃ）前記ＦＲに対する前記式Ｉの化合物の選択的結合を確立すること；ならびに
（ｄ）自己免疫疾患の標的である活性化マクロファージに対して、前記ＦＲに結合された前記式Ｉの化合物の選択的輸送を行なうこと、ここで、前記式Ｉの化合物は、崩壊的炎症メディエーターの前記活性化マクロファージの放出のインヒビターとしての機能を果たす、
を含む、自己免疫疾患を有する患者において活性化マクロファージを選択的に標的化するための方法を提供する。
【００７５】
本発明の活性化マクロファージを選択的に標的化するための方法は、式Ｉの化合物が、該発現マクロファージ細胞と関連しているＦＲαおよびヒトプロトン共役葉酸トランスポーター（ＰＣＦＴ）の受容体に選択的である場合を含む。
【００７６】
好ましくは、本明細書に記載の自己免疫疾患を有する患者において活性化マクロファージを選択的に標的化するための方法は、ＦＲを発現している活性化マクロファージ細胞が関節リウマチである場合を含む。
【００７７】
自己免疫疾患を有する患者において活性化マクロファージ細胞を標的化するための方法の他の実施形態は、式Ｉの化合物、または式Ｉの化合物の薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物もしくは水和物が、本明細書に記載のように、５、６または７位のいずれかに側鎖の結合点を含む、本明細書に記載の式Ｉの化合物の種々の実施形態のいずれかを含む場合を含む。
【００７８】
好ましくは、関節リウマチである自己免疫疾患を有する患者において活性化マクロファージを選択的に標的化する方法は、式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物もしくは水和物を、患者の関節または滑液内への注射によって送達することを含む。
【００７９】
本発明の好ましい一実施形態は、式ＩＩ：
【００８０】
【化９】
2014224159.tif 000018
（式中、Ｒ１は、水素（Ｈ）または１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のうちの１つを含み；
Ｒ２は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）ＯＨ、および（ｄ）ＮＨＲ（式中、Ｒは、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）のうちの１つを含み；
Ａは、（ａ）ＣＲ’Ｒ”、（ｂ）ＮＲ’（式中、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なっており、Ｈまたは１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかである）、（ｃ）イオウ（Ｓ）、および（ｄ）酸素（Ｏ）のうちの１つを含み；
５位と６位間の結合は二重結合であり；
５員環の６位に側鎖が結合されており、任意選択で、５位と６位の炭素原子に、独立して、（ａ）１つの水素原子、または（ｂ）１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のいずれかが結合されている場合、およびその組合せを含み、
Ｒ３は、（ａ）水素（Ｈ）、（ｂ）ＣＨ３、（ｃ）トリフルオロメチル、（ｄ）ジフルオロメチル、（ｅ）モノフルオロメチル、（ｆ）メチルケトン、（ｇ）トリフルオロメチルケトン、（ｈ）ジフルオロメチルケトン、（ｉ）モノフルオロメチルケトン、（ｊ）ホルミル、（ｋ）メチルアルコール、（ｌ）メチルアミン、または（ｍ）結合のうちの１つを含み；
Ｂは、（ａ）イオウ（Ｓ）原子、（ｂ）酸素（Ｏ）原子、または（ｃ）窒素（Ｎ）原子のうちの１つであり；
ｙは、ゼロから７以下の範囲の整数である）
を含む化合物を提供する。
【００８１】
本発明の別の実施形態は、側鎖が（Ｃ）ｙ１〜７の炭素原子間に１つ以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有する場合を含む式ＩＩの化合物を提供する。本発明の別の実施形態では、式ＩＩの化合物は、側鎖が、Ｅ−異性体およびＺ−異性体を構成する二重結合をゼロ個または１個以上含む場合を含む。別の実施形態は、その薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物または水和物のうちの１つを含む式ＩＩの化合物を提供する。また、治療有効量の式ＩＩの化合物を含む医薬組成物も提供する。本発明の他の好ましい実施形態は、式Ｉの化合物から得られる好ましい互変異性体としての式ＩＩの化合物を使用し、癌を処置するため、プロトン共役葉酸トランスポーター、葉酸受容体αおよび／または葉酸受容体β経路によって癌性細胞を選択的に標的化するため、癌性細胞においてＧＡＲＦＴアーゼを阻害するため、ならびに自己免疫疾患を有する患者において活性化マクロファージを選択的に標的化するための本明細書に記載の方法を提供する。
【００８２】
式ＩＩは、側鎖の５員環の結合点が２位と５位であるものを示しているが（「Ｂ」を１位として時計回りに番号付け）、側鎖の５員環に結合される置換基は、種々の位置、例えば、２位と３位、２位と４位、３位と４位、および３位と５位などであり得る。
【００８３】
本明細書で用いる場合、用語「患者」は、限定されないが、人間などの動物界の構成員を意味する。本明細書で用いる場合、用語「癌を有する」は、患者が癌と診断されたことを意味する。
【００８４】
本明細書で用いる場合、用語「治療有効量」は、患者において所望の効果をもたらすのに必要とされる本発明のいずれかの化合物の量をいう。所望の効果は、処置対象の病気に応じて異なる。例えば、所望の効果は、腫瘍の大きさの縮小、癌性細胞の破壊および／または転移の予防であり得る（これらのうちいずれか１つは所望の治療応答であり得る）。最も基本的なレベルでは、治療有効量は、癌性細胞の有糸分裂を抑止するのに必要な量である。
【００８５】
式ＩまたはＩＩに包含される本発明の化合物、およびその薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物または水和物はまた、１種類以上のさらなる処置剤、すなわち化学療法剤とともに投与してもよい。該さらなる化学療法剤の好適な候補としては、例えば、限定されないが、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンカアルカロイド類、コルヒチン、コルセミド、シスプラチン、およびノカダゾール（ｎｏｃａｄａｚｏｌ）が挙げられる。
【００８６】
本明細書で用いる場合、用語「低級アルキル」基は、１〜約１０個の炭素原子を有する低級アルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロヘキシル、シクロプロピルメチルまたはシクロブチルメチル基などをいう。共通して１〜約６個の炭素原子を有するアルキル基が好ましい。このような低級アルキル基は、直鎖、分枝鎖または環状（脂環式炭化水素）の配置である。このような直鎖、分枝鎖または環状に配置されたアルキル基の炭素原子は、該炭素原子に結合している水素に対して１つ以上の置換基を有していてもよい。
【００８７】
本明細書で用いる場合、用語「ヘテロアルキル」は、１〜約３個の原子のアルキル鎖であって、炭素の１個以上が窒素、酸素またはイオウで置き換えられたものをいう。したがって、「ヘテロアルキル」基としては、例えば、Ｃ−Ｃ−Ｎ、Ｃ−Ｓ、Ｓ−Ｃ、Ｃ−Ｏ、Ｃ−Ｃ−Ｏ、Ｏ−Ｃ、Ｎ−Ｃ−Ｃ、Ｎ−Ｃ＝Ｃおよび当業者に自明であろう他の種々の組合せが挙げられる。上記の列挙は排他的であることを意図せず、本発明の範囲に含まれる多くの組合せが想定される。
【００８８】
用語「アリール」基は、本明細書で用いる場合、分子が、芳香族環構造（６炭素環であるベンゼンなど）、または縮合型もしくは非縮合型のいずれかである多環（他の芳香族誘導体の縮合６炭素環など）を有する化合物をいう。また、用語「アリール」は、ジアリール、トリアリールおよびポリアリール基（それぞれ、２つ、３つまたはそれ以上の環を有するものであり得る）も包含すると定義する。したがって、好適なアリール基としては、例えば、フェニル、ビフェニル、ナフチル、フェナントレン、アントラセン基およびアリールオキシアリール基が挙げられ得る。この列挙は排他的であることを意図せず、任意のアリール基（該用語は上記に定義し、一般的に当該技術分野で理解されているものである）が本発明の範囲に含まれる。
【００８９】
用語「ヘテロアリール」は、環内に炭素でない酸素、窒素またはイオウなどの少なくとも１個の原子を有する芳香族環構造をいう。また、「ヘテロアリール」は、本明細書で用いる場合、より大きな環構造（２または３員環系など、縮合型であっても非縮合型であってもよく、該環のうちの１つは上記のものである）の一部である芳香族環構造をいう。したがって、「ヘテロアリール」は、１つ以上の環はヘテロ原子を含有するが、１つ以上の環は含有しない環系をいう。この列挙は排他的であることを意図しないこと、および任意のヘテロアリール基（該用語は上記に定義し、一般的に当該技術分野で理解されているものである）が本発明の範囲に含まれることは理解されよう。ヘテロアリール環系は縮合環系であっても非縮合型であってもよい。ヘテロアリール環系の例としては、例えば、限定されないが、ピリジン、キノリン、イソキノリン（ｉｓｏｑｕｉｎｏｌｏｉｎｅ）、ピロール、チオフェン、フラン、イミダゾールなど、ならびに異なる大きさの環を有する縮合環構造（例えば、ベンゾフラン、インドール、プリンなど）が挙げられる。
【００９０】
また、脂環式基（該用語は当該技術分野で理解されているものである）および複素環式基も本発明の範囲に含まれる。本明細書で用いる場合、用語「複素環式基」は、環の１つ以上の構成員が炭素でなく、例えば、酸素、イオウまたは窒素である環状の非芳香族置換基をいう。
【００９１】
用語「アルキルアリール」（もしくは「アルカリール」）または「アルキルヘテロアリール」は、本明細書で用いる場合、アリールまたはヘテロアリール環に結合しているアルキル部分を有する基をいう。アルキル部分は、好ましくは、１〜約６個の炭素原子を有する直鎖、分枝鎖または環状のアルキル基である。また、このアルキル部分は酸素、窒素またはイオウを含んでいてもよく、したがって、アルコキシ基であってもよい。アルキルアリール基のアリールまたはヘテロアリール部分は、置換または非置換のアリールまたはヘテロアリール基（該用語は上記のものである）である。また、本明細書で用いる場合、用語「アルキルアリール」または「アルキルヘテロアリール」は、アリールアルキル基またはヘテロアリールアルキル基（該用語は当該技術分野で理解されているものである）をいうためにも用い、かかる置換基の結合点が、該基のアルキル部分またはアリール部分のいずれかであることを表す。したがって、例えば、ベンジル基は用語「アルキルアリール」に包含され得る。
【００９２】
アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、脂環式、または複素環式基などの上記の環状置換基はいずれも、上記の１つ以上の置換基で任意選択的に置換されたものである。置換基が１つより多い場合、置換基は独立して選択される。「アルコキシ基」および「アルキル基」としては、約１０個までの構成員を有する直鎖または分枝鎖が挙げられる。「ハロゲン」は、塩素、臭素、ヨウ素およびフッ素をいう。「アリールおよびヘテロアリール基」は上記のものである。カルボン酸が置換基である場合、該部分は、安息香酸などの酸を表すことは認識されよう。本明細書で用いる場合、ヘテロシクロアリール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基という用語には、例えば、チオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、フラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピリジン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基が包含され得、ヘテロシクロアルキル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基という用語には、例えば、ジヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロチオフェン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロフラン−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、テトラヒドロピロール−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、モノヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ジヒドロピリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、およびピペリジル−カルボニル−Ｌ−グルタメート基、ならびにその立体異性体（該用語は当業者によって理解されているものである）が包含され得る。
【００９３】
本明細書で用いる場合、用語「アロイル」または「ヘテロアロイル」（用語ｐ−アロイル−Ｌ−グルタメートにおいて使用されている場合など）は、ベンゾイル、ナフトイル（ｎａｐｔｈｏｙｌ）、チオフェノイル、フロ（ｆｕｒｏ）フェノイル、ピロリル（ｐｙｒｒｏｙｌ）、および任意の他の「アロイル」または「ヘテロアロイル」（該用語は当業者によって理解されているものである）をいう。「アロイル」および「ヘテロアロイル」は、当該技術分野において、カルボニル部分を有する芳香族またはヘテロ芳香族化合物と一般的に定義されるものである。本明細書で用いる場合、用語「グルタメート」は、エステル形態（グルタミン酸エステル）と酸形態（グルタミン酸）の両方を表すことは理解されよう。
【００９４】
当業者には、式ＩＩの化学構造が本発明の好ましい一例であること、および式ＩＩは、式Ｉの化合物の一実施形態の互変異性体であることを理解されたい。当業者には、化学構造が、ほとんどの場合で、他にある中の１つの互変異性体形態を図示していることは理解されよう。本発明は、式Ｉの記載に包含されるいくつかの互変異性体形態を提供する。式Ｉにより教示する互変異性体形態は、当業者には認識されよういくつかの構造の実施形態（例えば、式ＩＩを有する化合物など）を示す。
【００９５】
本発明の方法に従って処置され得る増殖性の疾患および／または障害としては、限定されないが、卵巣癌、子宮内膜および頚部の癌、腎癌、および乳癌、ならびに自己免疫（ａｕｔｏｍｉｍｕｎｅ）疾患（例えば、関節リウマチなど）が挙げられる。
【００９６】
非経口組成物を、投与し易さおよび投薬量の均一性のために単位投薬形態に製剤化することは特に好都合である。単位投薬形態は、本明細書で用いる場合、処置対象の患者に対する単一の投薬量として適した物理的に個別の単位であって、医薬用担体とともに所望の効果がもたらされる所定量または有効量の本発明の化合物を含む各単位をいう。本発明の単位投薬形態の特定は、具体的な化合物および具体的な効果、または得ようとする治療応答によって決定され、また、これらに依存する。
【００９７】
式ＩもしくはＩＩの化合物、またはその薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物もしくは水和物は患者（動物またはヒト）に、種々の経路、例えば、非経口、経口または腹腔内によって投与され得る。非経口投与としては、消化管（ａｌｉｍｅｎｔａｒｙ
ｃａｎａｌ／ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ  ｔｒａｃｔ）外である以下の経路：静脈内；筋肉内；間質、動脈内；皮下；眼内；頭蓋内；脳室内；滑液包内（ｉｎｔｒａｓｙｎｏｖｉａｌ）；経上皮（例えば、経皮）、吸入による肺経由、経眼的、舌下および口腔内；経表面（例えば、真皮）、接眼、経直腸、または吹送もしくは噴霧による経鼻吸入が挙げられる。具体的な投与様式は、当然、適応症に依存する。具体的な投与経路および投与レジメンの選択は、至適治療応答を得るために医師がわかる方法に従って医師によって調整される、あるいは用量設定される。投与される化合物の量は、治療上有効な量である。患者に投与される投薬量は、当然、処置対象の患者の特徴、例えば限定されないが、患者の年齢、体重、健康状態、ならびに任意の他の化学療法剤（１種または複数種）の併用処置（あれば）の型および頻度などに依存し、これらはすべて、当業者である医師によって決定される。
【００９８】
経口投与される式ＩもしくはＩＩの化合物、またはその薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物もしくは水和物は、硬質もしくは軟質殻ゼラチンカプセル剤内に封入してもよく、圧縮して錠剤にしてもよい。また、該化合物は、賦形剤とともに組み込まれ得、飲み込み用の錠剤、口腔錠、トローチ剤、カプセル剤、サシェ剤、ロゼンジ剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、カシェ剤などの形態で使用され得る。式ＩまたはＩＩの化合物は、粉剤または顆粒剤の形態であってもよく、水性液または非水性液中の液剤または懸濁剤の形態であってもよく、水中油型乳剤の形態であってもよい。
【００９９】
また、錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセル剤などには、例えば、結合剤（ガムトラガカント、アカシア、コーンスターチなど）；ゲル化用賦形剤（リン酸二カルシウムなど）；崩壊剤（コーンスターチ、イモデンプン、アルギン酸など）；滑沢剤（ステアリン酸マグネシウムなど）；甘味剤（スクロース、ラクトースもしくはサッカリンなど）；またはフレーバー剤も含有され得る。単位投薬形態がカプセル剤である場合、上記の物質に加え、液状担体が含有され得る。種々の他の物質をコーティングとして、あるいは投薬単位の物理形態を変更するために存在させてもよい。例えば、錠剤、丸剤またはカプセル剤は、シェラック、糖または両方でコーティングされ得る。シロップ剤またはエリキシル剤には、活性化合物、甘味剤としてスクロース、保存料としてメチルおよびプロピルパラベン、着色料ならびにフレーバーが含有され得る。任意の単位投薬形態の調製に使用される物質はいずれも、薬学的に純粋であり、実質的に無毒性であるのがよい。また、式Ｉ、ＩＩの化合物、または式ＩもしくはＩＩの薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物もしくは水和物を、徐放性の調製物および製剤に組み込んでもよい。
【０１００】
式Ｉ、ＩＩの化合物、またはその薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、溶媒和物もしくは水和物は、中枢神経系に、非経口または腹腔内投与され得る。遊離塩基または薬学的に許容され得る塩としての該化合物の液剤は、適当な界面活性剤（ヒドロキシプロピルセルロースなど）と混合した水で調製され得る。また、分散剤は、グリセロール、液状ポリエチレングリコールおよびその混合物で、また、油類で調製され得る。通常の保存および使用条件下では、このような調製物には、微生物の増殖または化学分解を抑制するために保存料および／または抗酸化剤が含有され得る。
【０１０１】
注射用途に適した医薬形態としては、限定されないが、滅菌された水性の液剤または分散剤、および滅菌された注射用の液剤または分散剤の即時調製用の滅菌された粉剤が挙げられる。すべての場合において、該形態は、滅菌されたものでなければならず、易注射可能性がある程度に流体でなければならない。また、製造および保存条件下で安定なものであり得、微生物（細菌および真菌など）の汚染作用に対して保存されたものでなければならない。
【０１０２】
本発明の化合物は、所望の具体的な投与経路による患者への投与のための適当な（許容され得る）医薬用担体内に含有され得る、該担体と混合され得る、または関連させ得る。適当な、または許容され得る医薬用担体とは、本発明の化合物を可溶化し、不適合の問題を生じない任意の医薬用担体をいい、任意のあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、吸収遅延剤などが挙げられる。かかる適当な、または許容され得る医薬用担体の使用は、当業者に充分わかる。好ましい担体としては、滅菌水、生理食塩水、および５パーセントデキストロース水が挙げられる。他の適当な、または許容され得る医薬用担体の例としては、限定されないが、エタノール、ポリオール（プロピレングリコールおよび液状ポリエチレングリコールなど）、その適当な混合物、または植物油が挙げられる。適正な流動性は、例えば、コーティング（レシチンなど）の使用によって、必要とされる粒径の維持によって（分散剤の場合）、および界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用の抑制は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによってもたらされ得る。多くの場合において、等張剤（例えば、糖類または塩化ナトリウム）を含めることが好ましい。
【０１０３】
滅菌された注射用液剤は、式ＩまたはＩＩの化合物を必要とされる量で、適切な溶媒中に、上記に列挙した種々の他の成分とともに（必要に応じて）組み込んだ後、滅菌濾過することにより調製される。一般的に、分散剤は、滅菌した式ＩまたはＩＩの化合物を、基剤分散媒体および上記に列挙したものからの任意の他の成分を含有する滅菌されたビヒクル中に組み込むことにより調製される。滅菌注射用液剤の調製用の滅菌粉剤の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥である。
【０１０４】
鼻および口腔への投与に適した医薬組成物としては、限定されないが、自己噴射性製剤およびスプレー製剤（エーロゾル剤、アトマイザーおよびネブライザーなど）が挙げられる。
【０１０５】
本明細書に記載の治療用の式ＩまたはＩＩの化合物は患者に、単独で、もしくは薬学的に許容され得る担体と組み合わせて、またはその薬学的に許容され得る塩、溶媒和物もしくは水和物として投与され得、その割合は、該化合物の可溶性および化学的性質、患者への投与に選択される経路、ならびに標準的な製薬実務によって決定される。
【０１０６】
本発明を、以下の非限定的な実施例において、より具体的に説明する。該実施例において数多くの修正例および変形例が当業者に自明であるため、本実施例は単なる例示であることを意図する。
【実施例】
【０１０７】
実施例
図２は、本発明の種々の化合物、すなわち、試料：ＡＡＧ  １５４３５３、ＡＡＧ１５４３６０、ＡＡＧ１５４４８４、ＡＡＧ１５４４６８、ＡＡＧ１５４４７９、およびＡＡＧ１５４４８９の生物学的効果を示す。これらの化合物を、類別（ａｓｓｏｒｔｅｄ）細胞株、すなわち、ＦＲとＲＦＣ、ＰＣ４３−１０を発現しているＫＢヒト腫瘍細胞、およびＲＦＣを発現しているチャイニーズハムスター卵巣、およびＦＲを発現しているがＲＦＣは発現していないＲＴ１６チャイニーズハムスター卵巣細胞に対する細胞傷害性について評価した。図２は、各癌細胞株に対する本発明の各試料化合物のＩＣ５０を示す。ＩＣ５０は、細胞増殖の５０パーセント阻害が達成されるのに必要な阻害濃度である。
【０１０８】
化合物ＡＡＧ１５４３５３、ＡＡＧ１５４３６０、ＡＡＧ１５４４８９およびＡＡＧ１５４４６８は、高レベルの葉酸受容体α（ＦＲα）を発現することがわかっているＫＢヒト腫瘍細胞の強力インヒビターである（それぞれ、値は、０．２５、３．４、０．３および１２２ｎＭ）（図２参照）。また、これらの化合物は、ＦＲαを発現するＲＴ１６細胞および葉酸受容体β（ＦＲβ）を発現するＤ４細胞に対して強く阻害性である。これらの化合物はすべて、予測どおり、ＦＲαまたはＦＲβが欠損するように操作した細胞（ＰＣ４３（ＲＦＣのみ）およびＦＲαまたはβとＲＦＣが欠損しているＲ２細胞など）に対しては不活性であった。このような結果は、化合物ＡＡＧ１５４３５３、ＡＡＧ１５４３６０、ＡＡＧ１４５４８９およびＡＡＧ１５４４６８が、ＦＲを発現する細胞および腫瘍細胞に対してのみ選択的阻害性であることを示す。
【０１０９】
また、本発明の式Ｉの化合物のヘテロアロイル側鎖類似体の一例として、ＡＡＧ１５４３５３およびＡＡＧ１５４３６０の、ＲＦＣ輸送およびＦＲ結合に対する阻害効果も評価した。ＲＦＣのみを発現するＰＣ４３細胞（ＲＦＣ含有細胞）を使用し、該化合物が［３Ｈ］ＭＴＸ（メトトレキサート）取込みを阻害する能力。両実施例化合物ＡＡＧ１５４３５３およびＡＡＧ１５４３６０は、阻害活性が＜２０％と非常に不充分であり、これは、これらの化合物がＰＣ４３細胞において［３Ｈ］ＭＴＸ取込みを阻害しないことを示す。対照的に、葉酸と比較したＦＲα結合親和性の評価では、非常に高い結合親和性が示され、相対親和性は葉酸（値を１に設定）と同等であった（図２参照）。同様の結果がＦＲβで得られ、基本型の類似体はＦＲαおよびＦＲβに選択的であり、これらの優れた基質であることを示す。
【０１１０】
進行腫瘍異種移植片における試料：ＡＡＧ１５４３５３のインビボ評価
進行段階のヒトＫＢ頚部腫瘍を異種移植片（異種移植片腫瘍）として有するＳＣＩＤ雌マウスに、本発明の化合物ＡＡＧ１５４３５３を種々の用量およびスケジュールで静脈内投与した。
【０１１１】
マウスは、処置の開始時、葉酸欠乏飼料（Ｈａｒｌａｎ−Ｔｅｋｌａｄ  Ｄｉｅｔ  ＃００４３４；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）だけでほぼ３週間維持した。末期段階のＫＢ腫瘍異種移植片（処置の開始時、４４６〜６５０ｍｇ）を有する３匹のマウスを、各々、ＡＡＧ１５４３５３で種々の用量／スケジュールでＩＶ処置した。３例すべてにおいて、腫瘍は完全に退縮した。したがって、有意な抗腫瘍活性が検出された。体重減少に反映される毒性は中等度であった。
【０１１２】
試験用量／スケジュール：
１）Ｑ３ｄｘ４用量は、第３７日に開始；総用量７５０ｍｇ／ｋｇ−１ヶ月、３０日間無腫瘍マウス；
２）Ｑ２ｄｘ４用量は、第４３日に開始；総用量５００ｍｇ／ｋｇ−６３ｍｇの腫瘍を有するマウス；第６０日まで無腫瘍．
３）Ｑ４ｄｘ３用量は、第４８日に開始；総用量１８７．５ｍｇ／ｋｇ−１ヶ月、３０日間無腫瘍マウス。
【０１１３】
ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン抗葉酸剤を用いたＦＲおよびヒトプロトン共役葉酸トランスポーター（ｈＰＣＦＴ）試験の説明
葉酸受容体試験：ヒト還元型葉酸担体（ｈＲＦＣ）による輸送が低レベルであるＦＲ標的化薬剤を特定するための、化合物ＡＡＧ１２０３６６−２（図３に示す構造）で示す１または３と６との炭素結合置換を有するピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン抗葉酸剤の本発明者らの初期の試験後（Ｄｅｎｇら，２００８）、本発明者らは、本発明の式Ｉの化合物、すなわち、各々チエノイル側鎖を有する実施例化合物ＡＡＧ１５４３５３およびＡＡＧ１５４３６０を、ＫＢヒト腫瘍細胞において試験した（表１参照）。化合物ＡＡＧ１５４３５３およびＡＡＧ１５４３６０は、まず、ＦＲαおよびｈＲＦＣを発現するが、ヒトプロトン共役葉酸トランスポーター（ｈＰＣＦＴ）の発現レベルは有意でないＫＢヒト腫瘍細胞に対する増殖阻害効果について、蛍光系（「Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−ｂｌｕｅ」）細胞傷害性スクリーニングを用いて試験した。ＫＢ細胞において、化合物ＡＡＧ１５４３５３およびＡＡＧ１５４３６０では０．２５および３．４ｎＭのＩＣ５０が測定された。ＡＡＧ１５４３５３およびＡＡＧ１５４３６０によるＦＲ標的化活性を葉酸（２００ｎＭ）での同時処理によって確認し、これらの薬剤の増殖阻害が完全に逆転された。また、ＡＡＧ１５４３５３およびＡＡＧ１５４３６０を、ヒトＦＲ−（ＲＴ１６）またはｈＲＦＣ（ＰＣ４３−１０）を発現するように操作した同遺伝子系チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）亜系統において試験した。ＰＣ４３−１０では、結果を、由来するｈＲＦＣ−とＦＲ−ヌルＲ２  ＣＨＯ細胞と比較したが、ＲＴ１６細胞では、高濃度の葉酸（ＫＢ細胞の場合と同様）の存在下での並行インキュベーションと比較した。ＡＡＧ１５４３５３およびＡＡＧ１５４３６０では、ＲＴ１６細胞に対して高レベルのＦＲ標的化活性が示された。ＡＡＧ１５４３５３でもＡＡＧ１５４３６０でも、ｈＲＦＣ発現ＰＣ４３−１０細胞の認識可能な増殖阻害は示されなかった。この結果を表１にまとめる。
【０１１４】
【表１】
2014224159.tif 000019
ヒトプロトン共役葉酸トランスポーター（ｈＰＣＦＴ）試験．近位小腸および場合によっては充実性腫瘍において、ＰＣＦＴと称される新規なｐＨトランスポーターが報告された後、本発明者らは、このトランスポーターの発現プロフィールを、ｈＲＦＣおよびＦＲαと比較して、ヒト充実性腫瘍および白血病由来の広範な細胞株において確立した。ｈＰＣＦＴ、ｈＲＦＣおよびＦＲαのｍＲＮＡレベルをリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）によって測定し、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼレベルに対して標準化した。図４に示した結果は、異なる起源（例えば、乳房、前立腺、卵巣など）の多数のヒト充実性腫瘍細胞株における認識可能なｈＰＣＦＴ転写物、およびヒト白血病における均一に低レベルのｈＰＣＦＴを明白に示す。ｈＰＣＦＴレベルは、ＳＫＯＶ３（卵巣）、ＨｅｐＧ２（ヘパトーマ）、ＨｅＬａ（頚部）、およびＴ４７Ｄ（乳）癌細胞において非常に高かった。ｈＲＦＣ転写物は、ＨｅＬａ  Ｒ５およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１（ともに、ｈＲＦＣの発現は低度から検出不可能であることが示されている）を除く全細胞株において検出された。ＦＲαは、卵巣、頚部および乳房細胞株の少数サブセットのみに検出された（挿入部）。図４は、充実性腫瘍および白血病細胞株におけるｈＲＦＣおよびｈＰＣＦＴの転写物レベルを示す。転写物レベルは、Ｒｏｃｈｅ  ４８０  ＬｉｇｈｔｃｙｃｌｅｒおよびＳｙｂｒ  Ｇｒｅｅｎ  １検出を使用し、全ＲＮＡからｑＰＣＲによって測定した。ｈＲＦＣ／ｈＰＣＦＴ転写物レベルをＧＡＰＤＨ転写物に対して標準化した。挿入部（黒色バー）は、ＦＲα転写物が検出され得た充実性腫瘍の結果を示す。ＦＲαは、残りの充実性腫瘍および全白血病細胞では検出され得なかった。図４に示した充実性腫瘍の腫瘍型は以下のとおり：ＤＵ−１４５，ＰＣ−３（前立腺）；ＵＣＶＡ−１（膵臓）；ＳＫＯＶ３，Ｏｖｃａｒ−３，Ｉｇｒｏｖ−１（卵巣）；ＨＴＢ１３９（筋肉）；Ｈ２５９１，ＭＥＴ５Ａ，Ｈ２４５２，Ｈ２３１３（中皮腫）；ＳＫ−ＭＥＬ−２８（黒色腫）；ＨｅｐＧ２（ヘパトーマ）；ＨＴ１０８０（線維肉腫）；Ｙ７９（目）；ＳＷ−６２０，ＨＣＧ−１１６（結腸）；ＨｅＬａ，Ｒ５，ＫＢ（頚部）；Ｔ−４７Ｄ，ＭＤＡ−ＭＢ４３５，ＭＤＡ−ＭＢ２３１，ＭＣＦ−７（乳房）；ＳＫ−Ｎ−ＭＣ（脳）；およびＨＴＢ１６６，ＴＥ−８５（骨）である。
【０１１５】
ｈＰＣＦＴの機能的および生化学的特性を試験するため、本発明者らは、野生型（ｗｔ）ＨｅＬａ細胞から調製したＲＮＡからＲＴ−ＰＣＲによってｍｙｃ−ｈｉｓ６タグ化ｈＰＣＦＴ（ｈＰＣＦＴｍｙｃ−ｈｉｓ６）ｃＤＮＡ構築物を調製した。ｈＰＣＦＴｍｙｃ−ｈｉｓ６（ｐＣＤＮＡ３．１プラスミド内）を、Ｒ５  ＨｅＬａ細胞（いくらかの低レベルのｈＰＣＦＴを発現する）において一過的に発現させ、Ｍｙｃ特異的抗体を用いたウエスタンにおいてｈＰＣＦＴＭｙｃ−ｈｉｓ６タンパク質について、およびｐＨ５．５での輸送活性について、モック（ベクター対照）トランスフェクトＲ５細胞（図５，上側パネル）と比較してアッセイした。安定なトランスフェクト体を作製するため、ＰＣＦＴ−およびＲＦＣ−ヌルＲ２  ＣＨＯ細胞を、ｈＰＣＦＴｍｙｃ−ｈｉｓ６−ｐＣＤＮＡ３．１構築物でエレクトロポレーションした。細胞を、Ｇ４１８を用いて選択し、ｈＰＣＦＴｍｙｃ−ｈｉｓ６タンパク質についてスクリーニングした。最良のクローン（Ｒ２−ｈＰＣＦＴ＃４と命名）を、さらに特性評価した（図５，下側パネル）。高レベルのｈＰＣＦＴＭｙｃ−Ｈｉｓ６タンパク質をウエスタンブロット（ウエスタン）において検出し、ｐＨ５．５では有意な［３Ｈ］Ｍｔｘ輸送がみられた。ｐＨ７．２〜７．４での輸送はごくわずかであった（表示せず）。ｈＲＦＣ発現ｐＣ４３−１０細胞では、［３Ｈ］ＭＴＸ輸送は、ｐＨ７．２〜７．４において活発であったが、ｐＨ５．５では検出不可能であった（データ表示せず）。図５は、ｈＰＣＦＴＭｙｃ−ｈｉｓ１０でのＨｅＬａ  Ｒ５およびＣＨＯ  Ｒ２細胞のトランスフェクションを示す。細胞をｈＰＣＦＴＭｙｃ−ｈｉｓ６で、一過的に（ＨｅＬａ）または安定的（Ｒ２）のいずれかでトランスフェクトした。ＰＣＦＴＭｙｃ−Ｈｉｓ１０タンパク質を、Ｍｙｃ特異的抗体を用いたウエスタンにおいて測定し（挿入部）、ｈＰＣＦＴ活性を、基質として１マイクロモルの３Ｈ−Ｍｔｘを有するｐＨ５．５のＭＥＳ緩衝生理食塩水中で測定した。
【０１１６】
増殖阻害アッセイにおいて、本発明者らは、類別古典的抗葉酸剤、例えば、メトトレキサート（ＭＴＸ）、ＧＷ１８４３Ｕ８９、ロメテレキソール、ペメトレキセド、ＰＴ５２３、およびラルチトレキセドに対する感受性が、ベクター対照Ｒ２細胞と比べて、ｈＰＣＦＴＭｙｃ−ｈｉｓ６発現Ｒ２−ｈＰＣＦＴ＃４細胞およびｈＲＦＣ発現ｐＣ４３−１０細胞で、すべて増大する（それぞれ、約４〜８倍および約１０〜１５０倍）ことを見い出した（表１および２）。したがって、組織培養培地が比較的中性のｐＨ（約７．２）であっても、古典的抗葉酸剤は、ｈＰＣＦＴ−トランスフェクトおよびモックトランスフェクトＣＨＯ細胞における増殖阻害パターンに反映されるように、ｈＰＣＦＴの基質であるようである。Ｒ２−ｈＰＣＦＴ＃４とｐＣ４３−１０細胞で結果を比較することにより、抗葉酸剤ＰＴ５２３のみが、ｈＰＣＦＴよりもｈＲＦＣに対する効果において完全に選択的であったが、これらの薬剤ではいずれも、ｈＲＦＣよりもｈＰＣＦＴに対する有意な選択性は示されなかった。
【０１１７】
本発明の式Ｉの化合物は、例えば、いくつかの領域、例えば限定されないが、プテリジン部分、側鎖の炭素結合領域、ｐ−アミノ安息香酸、または末端グルタメート、およびその組合せに修飾を有する構造を有する。例えば、標準的な増殖阻害アッセイによって、本発明者らは、Ｒ２−ｈＰＣＦＴ＃４細胞に対して顕著な感受性を有し（ベクター対照Ｒ２細胞よりも約２０〜３０倍高い）（表２）、ｈＲＦＣ発現ｐＣ４３−１０細胞に対する薬物活性がほぼ完全に欠如した（表１）新規な６位−置換ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン抗葉酸剤、すなわちＡＡＧ１５４３５３を同定した。ｈＲＦＣよりもｈＰＣＦＴに対する特異性は、Ｒ２−ｈＰＣＦＴ＃４による細胞内取込みに関する［３Ｈ］ＭＴＸとの直接競合アッセイによってさらに示唆された（図６）。輸送および細胞傷害性の両実験において、化合物ＡＡＧ１５４３５３は、ｈＰＣＦＴについて報告された別の最良の基質であるペメトレキセドと同様の効力を示した。しかしながら、ｈＲＦＣ基質であるＰＴ５２３は、Ｒ２−ｈＰＣＦＴ＃４細胞を用いた細胞増殖阻害または［３Ｈ］ＭＴＸ取込みにおいて完全に不活性であった。ペメトレキセドとは対照的に、化合物ＡＡＧ１５４３５３で示されたｐＣ４３−１０細胞（ｐＨ７．２〜７．４）におけるｈＲＦＣによる［３Ｈ］ＭＴＸ輸送の阻害は、ごくわずかであった（表示せず）。
【０１１８】
細胞内酵素標的の特定．化合物ＡＡＧ１２０３６６−２は、以前に本出願人が、デノボプリン生合成経路の葉酸依存性の第１段階である、ＧＡＲＦＴアーゼの強力な阻害を行なうことを報告した（Ｄｅｎｇら，２００８）。化合物ＡＡＧ１５４３５３の推定酵素標的（１つまたは複数）の位置を特定するため、本発明者らは、ＫＢに対するこの化合物の増殖阻害効果を、アデノシン（６０μＭ）またはチミジン（１０μＭ）の存在下で試験した。チミジン（１０μＭ）では、ＡＡＧ１５４３５３の増殖阻害効果は改変されなかったが、アデノシン（６０μＭ）では完全に保護され、したがって、デノボプリン生合成経路が第一標的として確立した。化合物ＡＡＧ１５４３５３は、５−アミノ−４−イミダゾールカルボキサミド（ＡＩＣＡ）（３２０μＭ）によって完全に保護され、これにより、ＧＡＲＦＴアーゼは、おそらく細胞内標的であると特定された。本発明者らは、抗葉酸剤類似体を用いたインビトロおよびインサイチュＧＡＲＦＴアーゼ阻害アッセイを使用し、この酵素標的の阻害を確認した。精製組換えマウスＧＡＲＦＴアーゼを使用すると、化合物ＡＡＧ１５４３５３およびＡＡＧ１５４３６０は阻害性であり、ＩＣ５０は、それぞれ、０．０６μＭおよび３．３１μＭであった（表１）。インサイチュＧＡＲＦＴアーゼアッセイでは、ホルミルグリシンアミドリボヌクレオチド内への１４Ｃ−グリシンの組込みを測定し、この組込みは、該薬物でｎＭ濃度で阻害され、インヒビターＡＡＧ１５４３５３による効果が最も強力であった（表１）。これらの全薬剤でのＧＡＲＦＴアーゼのインサイチュ対インビトロでのアッセイによる阻害効力の劇的な違いは、おそらく、細胞内でのポリグルタメート薬による酵素結合親和性の悪化を反映している。
【０１１９】
【表２】
2014224159.tif 000020
本発明者らの結果により、白血病よりも充実性腫瘍においてｈＰＣＦＴが高頻度に発現されることが確立される。ｈＲＦＴは、充実性腫瘍と白血病の両方において発現されるが、ＦＲαは、充実性腫瘍サブセットにおいてのみ発現される。化合物ＡＡＧ１５４３５３を用いた本発明者らの結果は、ｈＲＦＣよりもＦＲαおよびｈＰＣＦＴに対して特有で選択的であり、かつ生理学的ｐＨであっても強力な増殖阻害がもたらされる結合が示された最初のものであるという点において前例がないことである。酸性ｐＨがｈＰＣＦＴに最適であることを考慮すると（ｐＨ５．５〜６．８）、このような増殖阻害効果は、例えば充実性腫瘍環境において生じる低ｐＨ値（６．５〜６．８）で明白に悪化する（ｅｘａｓｃｅｒｂａｔｅｄ）。実際、一連のｐＨ値での本発明者らの初期の試験により、中性（ｐＨ＞７）条件よりも酸性（ｐｈ＜７）条件で、ｈＰＣＦＴ輸送の阻害の２〜３倍の増大が確立される。
【０１２０】
本発明の式Ｉの化合物などの、ｈＰＣＦＴによって選択的に輸送される新規な小分子細胞毒の開発により、充実性腫瘍標的化のための新たな治療的適用の刺激が提供される。これは、本発明の細胞傷害性化合物を選択的に送達するために、充実性腫瘍の必須の生物学的特性、すなわち、その酸性微環境を有効に「ハイジャック」する概念に基づいている。
【０１２１】
化合物の合成
化学
スキーム１
【０１２２】
【化１０】
2014224159.tif 000021
ａ．塩化オキサリル，ＣＨ２Ｃｌ２，還流，１時間；ｂ．ジアゾメタン，Ｅｔ２Ｏ，室温，１時間；ｃ．ＨＢｒ，７０〜８０℃，２時間；ｄ．ＤＭＦ，室温，３日間；ｅ．９，ＣｕＩ，Ｐｄ（０）（ＰＰｈ３）４，Ｅｔ３Ｎ，ＤＭＦ，室温，１２時間；ｆ．５％Ｐｄ／Ｃ，Ｈ２，５５ｐｓｉ，２時間；ｇ．（ｉ）１Ｎ  ＮａＯＨ，室温，６時間；（ｉｉ）１Ｎ  ＨＣｌ；ｈ．Ｎ−メチルモルホリン，２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン，Ｌ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩，ＤＭＦ，室温，１２時間。
【０１２３】
目的化合物ＡＡＧ１５４３５３、ＡＡＧ１５４３６０およびＡＡＧ１５４４８４は、スキーム１に示すようにして合成した。市販のペント−４−イン酸１ａまたはヘキス−５−イン酸１ｂまたはヘプト−６−イン酸１ｃ（スキーム１）を酸塩化物２ａ〜ｃに変換させ、即座にジアゾメタンと、続いて４８％ＨＢｒと反応させて、所望のα−ブロモメチルケトン４ａ〜ｃを得た。２，４−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジンを４ａ〜ｃと室温で３日間縮合させ、６位−置換ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン５ａ〜ｃを得た（収率５１〜７４％）。５ａ〜ｃと（Ｓ）−２−［（５−ブロモ−チオフェン−２−カルボニル）−アミノ］−ペンタン二酸ジエチルエステル９との薗頭カップリングによって、化合物６ａ〜ｃを得た。６ａ〜ｃの水素化とケン化により、それぞれ、ＡＡＧ１５４３５３、ＡＡＧ１５４３６０およびＡＡＧ１５４４８４を得た。市販の５−ブロモ−２−チオフェン−カルボン酸８とＬ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩をカップリングさせることにより、化合物９（スキーム１）を合成した（収率７２％）。
【０１２４】
スキーム２
【０１２５】
【化１１】
2014224159.tif 000022
ｇ．（ｉ）１Ｎ  ＮａＯＨ，室温，６時間；（ｉｉ）１Ｎ  ＨＣｌ
化合物ＡＡＧ１５４４６８およびＡＡＧ１５４４７９の中間体を、スキーム２に示すようにして合成した。６ａおよび６ｃの直接ケン化により、ＡＡＧ１５４４６８およびＡＡＧ１５４４７９を得た（９５％収率）。
【０１２６】
スキーム３
【０１２７】
【化１２】
2014224159.tif 000023
ｅ．１３，ＣｕＩ，Ｐｄ（０）（ＰＰｈ３）４，Ｅｔ３Ｎ，ＤＭＦ，室温，１２時間；ｆ．５％Ｐｄ／Ｃ，Ｈ２，５５ｐｓｉ，２時間；ｇ．（ｉ）１Ｎ  ＮａＯＨ，室温，６時間；（ｉｉ）１Ｎ  ＨＣｌ；ｈ．Ｎ−メチルモルホリン，２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン，Ｌ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩，ＤＭＦ，室温，１２時間。
【０１２８】
ＡＡＧ１５４４８９はスキーム３に示すようにして合成した。５ａ（スキーム１の）と（Ｓ）−２−［（５−ブロモ−フラン−２−カルボニル）−アミノ］−ペンタン二酸ジエチルエステル１３との薗頭カップリングによって化合物１０を得た。市販の５−ブロモ−２−フラン−カルボン酸１２とＬ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩とをカップリングさせることにより、化合物１３（スキーム３）を合成した（７２％収率）。１０の水素化とケン化によりＡＡＧ１５４４８９を得た。
【０１２９】
スキーム４
【０１３０】
【化１３】
2014224159.tif 000024
ｇ．（ｉ）１Ｎ  ＮａＯＨ、室温，６時間；（ｉｉ）１Ｎ  ＨＣｌ
ＡＡＧ１５４４８５はスキーム４に示すようにして合成した。１０の直接ケン化によってＡＡＧ１５４４８５を得た（９５％収率）。
【０１３１】
実験の部
エバポレーションはすべて、回転式エバポレータにより真空内で行なった。分析試料は、Ｐ２Ｏ５中、ＣＨＥＭ−ＤＲＹ真空（０．２ｍｍＨｇ）乾燥炉内で乾燥させた。融点は、ＦＬＵＫＥ  ５１  Ｋ／Ｊ電子温度計を有するＭＥＬＴＥＭＰ  ＩＩ融点装置で測定した。補正はしていない。プロトン（１Ｈ）のＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＷＨ−３００（３００ＭＨｚ）分光計にて記録した。化学シフト値は、内部標準としてのテトラメチルシランに対するｐｐｍ（１００万分の１）で示す；ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｍ＝多重項、ｂｒ＝ブロード一重項。ピーク面積の相対積分値は、帰属される構造に対して予測したものと一致した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、ＰＥ  ＳＩＬ  Ｇ／ＵＶシリカゲルプレート上で蛍光指示薬を用いて行ない、スポットは、２５４および３６５ｎｍの照明下で可視化した。ＴＬＣで用いた溶媒の比率は容量基準である。カラムクロマトグラフィーは、２３０〜４００メッシュのシリカゲル（Ｆｉｓｈｅｒ，Ｓｏｍｅｒｖｉｌｌｅ，ＮＪから購入）にて行なった。元素分析は、Ａｔｌａｎｔｉｃ  Ｍｉｃｒｏｌａｂ，Ｉｎｃ．，Ｎｏｒｃｒｏｓｓ，ＧＡにて行なわれた。元素の組成は計算値の±０．４％以内である。一部の抗葉酸剤分析試料において頻出する水または有機溶媒のモル分率は、２４〜４８時間真空乾燥させたにもかかわらず、抑制されず、可能な場合は、１Ｈ  ＮＭＲスペクトル内の存在によって確認した。高分解度質量分析（ＨＲＭＳ）は、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡにて、Ｗａｔｅｒｓ  Ｑ−ＴＯＦ（ＡＰＩ−ＵＳ）で行なわれた。溶媒および化学薬品はすべて、Ａｌｄｒｉｃｈ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．およびＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入し、受領した状態のまま使用した。
【０１３２】
化合物５ａ〜ｃの合成のための一般手順
２５０ｍＬ容フラスコ内の１ａ〜ｃ（１０ｍｍｏｌ）に、塩化オキサリル（７．６１ｇ，６０ｍｍｏｌ）と無水ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）を添加した。得られた溶液を１時間還流し、次いで室温まで冷却した。減圧下での溶媒のエバポレーション後、残渣２ａ〜ｃを２０ｍＬのＥｔ２Ｏに溶解させた。得られた溶液を、氷浴内の氷冷ジアゾメタン（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｍｉｎｉ  Ｄｉａｚａｌｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓを使用することにより、１５ｇのジアザルドからインサイチュで生成）に１０分間にわたって滴下した。得られた混合物を３０分間静置し、次いで、さらに１時間攪拌した。この溶液に４８％ＨＢｒ（２０ｍＬ）を添加した。得られた混合物を１．５時間還流した。室温まで冷却後、有機層を分離し、水層をＥｔ２Ｏ（２００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層およびＥｔ２Ｏ抽出物を２分割した１０％Ｎａ２ＣＯ３溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒のエバポレーションにより、４ａ〜ｃを得た（９４％収率）。２，６−ジアミノピリミジン−４−オン（１．２６ｇ，１０ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２５ｍＬ）懸濁液に、４ａ〜ｃ（約９．４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物をＮ２下、室温で３日間攪拌した。減圧下での溶媒のエバポレーション後、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を添加した後、シリカゲル（５ｇ）を添加した。得られた栓（ｐｌｕｇ）をシリカゲルカラム（３．５×１２ｃｍ）上に負荷し、ＣＨＣｌ３で、続いて３％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣｌ３で、次いで５％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣｌ３で溶出した。Ｒｆ＝０．５８（ＴＬＣ）の画分をプールし、エバポレートし、５ａ〜ｃを白色粉末として得た。
【０１３３】
２−アミノ−６−ブト−３−イニル−３，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン（５ａ）
化合物５ａは、５ａ〜ｃの調製で記載した一般法を用いてペント−４−イン酸１ａ（０．９８ｇ，１０ｍｍｏｌ）から調製し、１．４ｇ（７４％）の５ａを白色粉末として得た。ｍｐ  ２３０〜２３１℃；
【０１３４】
【化１４】
2014224159.tif 000025
Ｃ１０Ｈ１０Ｎ４Ｏ（Ｍ＋）のＨＲＭＳ計算値，２０３．０９３３；実測値：２０３．０９２５。
【０１３５】
２−アミノ−６−ペント−４−イニル−３，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン（５ｂ）
化合物５ｂは、５ａ〜ｃの調製で記載した一般法を用いてヘキス−５−イン酸１ｂ（１．１２ｇ，１０ｍｍｏｌ）から調製し、１．１ｇ（５１％）の５ｂを白色粉末として得た。ｍｐ  ２３３〜２３４℃；
【０１３６】
【化１５】
2014224159.tif 000026
２−アミノ−６−ヘキス−５−イニル−３，７−ジヒドロ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン（５ｃ）
化合物５ｃは、５ａ〜ｃの調製で記載した一般法を用いてヘプト−６−イン酸１ｃ（１．２６ｇ，１０ｍｍｏｌ）から調製し、１．４３ｇ（６２％）の５ｃを白色粉末として得た。ｍｐ  ２３６〜２３７℃；
【０１３７】
【化１６】
2014224159.tif 000027
化合物６ａ〜ｃの合成のための一般手順
磁気攪拌器およびガス供給口を取り付けた２５０ｍＬ容丸底フラスコに、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１８５ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．０１ｇ，１０ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−２−［（５−ブロモ−チオフェン−２−カルボニル）−アミノ］−ペンタン二酸ジエチルエステル９（５８８ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）および無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）の混合物を添加した。この攪拌混合物に、Ｎ２下、ヨウ化銅（Ｉ）（３０ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）および５ａ〜ｃ（１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で一晩（１７〜１８時間）攪拌した。減圧下での溶媒のエバポレーション後、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を添加した後、シリカゲル（５ｇ）を添加した。得られた栓をシリカゲルカラム（３．５×１２ｃｍ）上に負荷し、ＣＨＣｌ３で、続いて３％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣｌ３で、次いで５％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣｌ３で溶出した。Ｒｆ＝０．５３（ＴＬＣ）の画分をプールし、エバポレートし、６ａ〜ｃを褐色粉末として得た。
【０１３８】
（Ｓ）−２−（｛５−［４−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ブト−１−イニル］−チオフェン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸ジエチルエステル（６ａ）
化合物６ａは、６ａ〜ｃの調製で記載した一般法を用いて５ａ（２０２ｍｇ，１ｍｍｏｌ）から調製し、３８６ｍｇ（７５％）の６ａを褐色粉末として得た。ｍｐ  ８１〜８２℃；
【０１３９】
【化１７】
2014224159.tif 000028
Ｃ２４Ｈ２７Ｎ５Ｏ６Ｓ（Ｍ＋）のＨＲＭＳ計算値，５１４．１７６０；実測値：５１４．１７５３。
【０１４０】
（Ｓ）−２−（｛５−［５−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ペント−１−イニル］−チオフェン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸ジエチルエステル（６ｂ）
化合物６ｂは、６ａ〜ｃの調製で記載した一般法を用いて５ｂ（２１６ｍｇ，１ｍｍｏｌ）から調製し、３８０ｍｇ（７２％）の６ｂを褐色粉末として得た。ｍｐ  ８４〜８５℃；
【０１４１】
【化１８】
2014224159.tif 000029
（Ｓ）−２−（｛５−［６−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ヘキス−１−イニル］−チオフェン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸ジエチルエステル（６ｃ）
化合物６ｃは、６ａ〜ｃの調製で記載した一般法を用いて５ｃ（２３０ｍｇ，１ｍｍｏｌ）から調製し、３９６ｍｇ（７３％）の６ｃを褐色粉末として得た。ｍｐ  ８５〜８６℃；
【０１４２】
【化１９】
2014224159.tif 000030
化合物７ａ〜ｃの合成のための一般手順
Ｐａｒｒフラスコに、６ａ〜ｃ（０．７５ｍｍｏｌ）、１０％パラジウム担持活性炭（１２０ｍｇ）、およびＭｅＯＨ（１００ｍＬ）を添加した。水素化は、５５ｐｓｉのＨ２で４時間行なった。反応混合物をセライトに通して濾過し、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮し、７ａ〜ｃを黄色粉末として得た。
【０１４３】
（Ｓ）−２−（｛５−［４−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ブチル］−チオフェン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸ジエチルエステル（７ａ）
化合物７ａは、７ａ〜ｃの調製で記載した一般法を用いて６ａ（３８６ｍｇ，０．７５ｍｍｏｌ）から調製し、３６９ｍｇ（９５％）の７ａを黄色粉末として得た。ｍｐ  ７４〜７５℃；
【０１４４】
【化２０】
2014224159.tif 000031
Ｃ２４Ｈ３ＩＮ５Ｏ６Ｓ（Ｍ＋）のＨＲＭＳ計算値，５１８．２０７３；実測値：５１８．２０７７。
【０１４５】
（Ｓ）−２−（｛５−［５−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ペンチル］−チオフェン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸ジエチルエステル（７ｂ）
化合物７ｂは、７ａ〜ｃの調製で記載した一般法を用いて６ｂ（３８０ｍｇ，０．７２ｍｍｏｌ）から調製し、３６０ｍｇ（９４％）の７ｂを黄色粉末として得た。ｍｐ  ７７〜７８℃；
【０１４６】
【化２１】
2014224159.tif 000032
（Ｓ）−２−（｛５−［６−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ヘキシル］−チオフェン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸ジエチルエステル（７ｃ）
化合物７ｃは、７ａ〜ｃの調製で記載した一般法を用いて６ｃ（３９６ｍｇ，０．７３ｍｍｏｌ）から調製し、３７９ｍｇ（９４％）の７ｃを黄色粉末として得た。ｍｐ  ７８〜７９℃；
【０１４７】
【化２２】
2014224159.tif 000033
目的化合物ＡＡＧ１５４３５３、ＡＡＧ１５４３６０、ＡＡＧ１５４４８４、ＡＡＧ１５４４６８、ＡＡＧ１５４４７９、ＡＡＧ１５４４８９およびＡＡＧ１５４４８５の合成のための一般手順
７ａ〜ｃ（０．７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液に１Ｎ  ＮａＯＨ（１０ｍＬ）を添加し、混合物を、Ｎ２下、室温で１６時間攪拌した。ＴＬＣにより出発材料の消失（Ｒｆ＝０．４５）、および起点に１つの大きなスポット（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３  １：５）が示された。反応混合物を減圧下で蒸発乾固した。残渣を水（１０ｍＬ）に溶解させ、得られた溶液を氷浴中で冷却し、１Ｎ  ＨＣｌの滴下によってｐＨを３〜４に調整した。得られた懸濁液をドライアイス−アセトン浴内で凍結させ、冷蔵庫内で４〜５℃まで解凍し、濾過した。残渣を少量の冷水で洗浄し、Ｐ２Ｏ５を用いて真空乾燥させ、目的化合物を白色粉末として得た。
【０１４８】
（Ｓ）−２−（｛５−［４−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ブチル］−チオフェン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸（ＡＡＧ１５４３５３）
化合物ＡＡＧ１５４３５３は、目的化合物の調製で記載した一般法を用いて７ａ（３６９ｍｇ，０．７１ｍｍｏｌ）から調製し、３１２ｍｇ（９５％）のＡＡＧ１５４３５３を白色粉末として得た。ｍｐ  １７９〜１８０℃；
【０１４９】
【化２３】
2014224159.tif 000034
Ｃ２０Ｈ２３Ｎ５Ｏ６Ｓ（Ｍ＋）のＨＲＭＳ計算値，４６２．１４４７；実測値：４６２．１４６２。
【０１５０】
（Ｓ）−２−（｛５−［５−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ペンチル］−チオフェン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸（ＡＡＧ１５４３６０）
化合物ＡＡＧ１５４３６０は、目的化合物の調製で記載した一般法を用いて７ｂ（３６０ｍｇ，０．６８ｍｍｏｌ）から調製し、３０６ｍｇ（９５％）のＡＡＧ１５４３６０を白色粉末として得た。ｍｐ  １８１〜１８２℃；
【０１５１】
【化２４】
2014224159.tif 000035
Ｃ２１Ｈ２５Ｎ５Ｏ６Ｓ（Ｍ＋）のＨＲＭＳ計算値，４７６．１６０４；実測値：４７６．１６１７。
【０１５２】
（Ｓ）−２−（｛５−［６−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ヘキシル］−チオフェン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸（ＡＡＧ１５４４８４）
化合物ＡＡＧ１５４４８４は、目的化合物の調製で記載した一般法を用いて７ｃ（３７９ｍｇ，０．６９ｍｍｏｌ）から調製し、３２２ｍｇ（９５％）のＡＡＧ１５４４８４を白色粉末として得た。ｍｐ  １８３〜１８４℃；
【０１５３】
【化２５】
2014224159.tif 000036
Ａｎａｌ．（Ｃ２２Ｈ２７Ｎ５Ｏ６Ｓ）Ｃ２２Ｈ２７Ｎ５Ｏ６Ｓ・１Ｈ２ＯのＣ，Ｈ，Ｎ，Ｓの計算値；Ｃ，５２．０６；Ｈ，５．６４；Ｎ，１６．６９；Ｓ，６．３２；実測値：Ｃ，５２．３９；Ｈ，５．２４；Ｎ，１３．３０；Ｓ，５．９８。
【０１５４】
（Ｓ）−２−（｛５−［４−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ブト−１−イニル］−チオフェン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸（ＡＡＧ１５４４６８）
化合物ＡＡＧ１５４４８４は、目的化合物の調製で記載した一般法を用いて６ａ（５０ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）から調製し、４２ｍｇ（９５％）のＡＡＧ１５４４６８を白色粉末として得た。ｍｐ  １９６〜１９７℃；
【０１５５】
【化２６】
2014224159.tif 000037
Ｃ２０Ｈ１９Ｎ５Ｏ６Ｓ（Ｍ＋）のＨＲＭＳ計算値，４５８．１１３４；実測値：４５８．１１５５。
【０１５６】
（Ｓ）−２−（｛５−［６−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ヘキス−１−イニル］−チオフェン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸（ＡＡＧ１５４４７９）
化合物ＡＡＧ１５４４７９は、目的化合物の調製で記載した一般法を用いて６ｃ（５０ｍｇ，０．０９ｍｍｏｌ）から調製し、４３ｍｇ（９５％）のＡＡＧ１５４４７９を白色粉末として得た。ｍｐ  １９７〜１９８℃；
【０１５７】
【化２７】
2014224159.tif 000038
Ｃ２２Ｈ２３Ｎ５Ｏ６Ｓ（Ｍ＋）のＨＲＭＳ計算値，４８６．１４４７；実測値：４８６．１４５２。
【０１５８】
（Ｓ）−２−（｛５−［４−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ブト−１−イニル］−フラン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸ジエチルエステル（１０）
化合物１０は、６ａ〜ｃの調製で記載した一般法を用いて５ａ（２０２ｍｇ，１ｍｍｏｌ）から調製し、２４９ｍｇ（５０％）の１０を褐色粉末として得た。ｍｐ  ７８〜７９℃；
【０１５９】
【化２８】
2014224159.tif 000039
（Ｓ）−２−（｛５−［４−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ブチル］−フラン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸ジエチルエステル（１１）
化合物１１は、７ａ〜ｃの調製で記載した一般法を用いて１０（２４９ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）から調製し、２３１ｍｇ（９２％）の１１を黄色粉末として得た。ｍｐ  ７１〜７２℃；
【０１６０】
【化２９】
2014224159.tif 000040
（Ｓ）−２−（｛５−［４−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ブチル］−フラン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸（ＡＡＧ１５４４８９）
化合物ＡＡＧ１５４４８９は、目的化合物の調製で記載した一般法を用いて１１（２３１ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）から調製し、１９４ｍｇ（９５％）のＡＡＧ１５４４８９を白色粉末として得た。ｍｐ  １７４〜１７５℃；
【０１６１】
【化３０】
2014224159.tif 000041
Ａｎａｌ．（Ｃ２０Ｈ２３Ｎ５Ｏ７）  Ｃ２０Ｈ２３Ｎ５Ｏ７・１．２５Ｈ２ＯのＣ，Ｈ，Ｎ．計算値；Ｃ，５１．３３；Ｈ，５．４９；Ｎ，１４．６２；実測値：Ｃ，５１．３４；Ｈ，５．３６；Ｎ，１４．６２。
【０１６２】
（Ｓ）−２−（｛５−［４−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−ブト−１−イニル］−フラン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸（ＡＡＧ１５４４８５）
化合物ＡＡＧ１５４４８５は、目的化合物の調製で記載した一般法を用いて１０（５０ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）から調製し、４２ｍｇ（９５％）のＡＡＧ１５４４８５を白色粉末として得た。ｍｐ  １９３〜１９４℃；
【０１６３】
【化３１】
2014224159.tif 000042
Ｃ２０Ｈ１９Ｎ５Ｏ７（Ｍ＋）のＨＲＭＳ計算値，４４１．１２８４；実測値：４４１．１２８６。
【０１６４】
化合物９および１３の合成のための一般手順
８または１２（１０ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に、Ｎ−メチルモルホリン（１．３ｍＬ，１８ｍｍｏｌ）と２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（２．１６ｇ，１８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。この混合物に、Ｎ−メチルモルホリン（１．３ｍＬ，１８ｍｍｏｌ）とＬ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩（３．６ｇ，１５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温でさらに４時間攪拌し、次いで減圧下で蒸発乾固した。残渣を最少量のＣＨ３Ｃｌ／ＭｅＯＨ（４：１）に溶解させ、シリカゲルカラム（２×１５ｃｍ）上で、溶離液として５％ＥｔＯＡｃ含有ヘキサンを用いてクロマトグラフィー処理した。所望のスポット（ＴＬＣ）を示した画分をプールし、溶媒を蒸発乾固し、９および１３を得た（７２％収率）。
【０１６５】
（Ｓ）−２−［（５−ブロモ−チオフェン−２−カルボニル）−アミノ］−ペンタン二酸ジエチルエステル（９）
化合物９は、化合物９および１３の調製で記載した一般法を用いて８（２．０７ｇ，１０ｍｍｏｌ）から調製し、２．８２ｇ（７２％）の９を黄色油状物として得た。
【０１６６】
【化３２】
2014224159.tif 000043
（Ｓ）−２−［（５−ブロモ−フラン−２−カルボニル）−アミノ］−ペンタン二酸ジエチルエステル（１３）
化合物１３は、化合物９および１３の調製で記載した一般法を用いて１２（１．９１ｇ，１０ｍｍｏｌ）から調製し、２．７１ｇ（７２％）の１３を黄色油状物として得た。
【０１６７】
【化３３】
2014224159.tif 000044
化合物ＡＡＧ１５４５４４の合成および実験
【０１６８】
【化３４】
2014224159.tif 000045
化学
スキーム５
【０１６９】
【化３５】
2014224159.tif 000046
ａ．５−ブロモ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル，ＣｕＩ，ＰｄＣｌ２，ＰＰｈ３，Ｅｔ３Ｎ，ＣＨ３ＣＮ，マイクロ波，１００℃，１０分；ｂ．１０％Ｐｄ／Ｃ，Ｈ２，５５ｐｓｉ，ＭｅＯＨ，２時間；ｃ．Ｈ２ＳＯ４，ＣｒＯ３，０℃〜室温；ｄ．塩化オキサリル，ＣＨ２Ｃｌ２，還流，１時間；ｅ．ジアゾメタン，Ｅｔ２Ｏ，室温，１時間；ｆ．ＨＢｒ，７０〜８０℃，２時間；ｇ．２，４−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジン，ＤＭＦ，室温，３日間；ｈ．（ｉ）１Ｎ  ＮａＯＨ，室温，１２時間；（ｉｉ）１Ｎ  ＨＣｌ；ｉ．Ｎ−メチルモルホリン，２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン，Ｌ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩，ＤＭＦ，室温，１２時間。
【０１７０】
目的化合物ＡＡＧ１５４５４４は、スキーム５に示すようにして合成した。５−ブロモ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステルとブト−３−イン−１−オール１（スキーム１）とのパラジウム触媒型薗頭カップリングにより、チオフェンブチニルアルコール２（７０％）を得、これを接触水素化し、飽和アルコール３を定量的収率で得た。続いて、ジョーンズ試薬を用いた３の酸化によって、カルボン酸４（４７％）を得、これを酸塩化物５に変換させ、ジアゾメタンと即座に反応させた後、４８％ＨＢｒと反応させ、所望のα−ブロモメチルケトン７を得た。２，４−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジンと７を室温で３日間縮合させ、６位−置換ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン８（３８％）を得た。８の加水分解により対応する遊離酸９（８９％）を得た。続いて、活性化剤として２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジンを用いたＬ−グルタミン酸ジエチルエステルとのカップリングによりジエステル１０を得た。最後に、このジエステルのケン化により所望の化合物ＡＡＧ１５４５４４を得た。
【０１７１】
実験の部
エバポレーションはすべて、回転式エバポレータにより真空内で行なった。分析試料は、Ｐ２Ｏ５中、ＣＨＥＭ−ＤＲＹ真空（０．２ｍｍＨｇ）乾燥炉内で乾燥させた。融点は、ＦＬＵＫＥ  ５１  Ｋ／Ｊ電子温度計を有するＭＥＬＴＥＭＰ  ＩＩ融点装置で測定した。補正はしていない。プロトン（１Ｈ）のＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＷＨ−３００（３００ＭＨｚ）分光計にて記録した。化学シフト値は、内部標準としてのテトラメチルシランに対するｐｐｍ（１００万分の１）で示す；ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｍ＝多重項、ｂｒ＝ブロード一重項。ピーク面積の相対積分値は、帰属される構造に対して予測したものと一致した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、ＰＥ  ＳＩＬ  Ｇ／ＵＶシリカゲルプレート上で蛍光指示薬を用いて行ない、スポットは、２５４および３６５ｎｍの照明下で可視化した。ＴＬＣで用いた溶媒の比率は容量基準である。カラムクロマトグラフィーは、２３０〜４００メッシュのシリカゲル（Ｆｉｓｈｅｒ，Ｓｏｍｅｒｖｉｌｌｅ，ＮＪから購入）にて行なった。元素分析は、Ａｔｌａｎｔｉｃ  Ｍｉｃｒｏｌａｂ，Ｉｎｃ．，Ｎｏｒｃｒｏｓｓ，ＧＡにて行なわれた。元素の組成は計算値の±０．４％以内である。一部の抗葉酸剤分析試料において頻出する水または有機溶媒のモル分率は、２４〜４８時間真空乾燥させたにもかかわらず、抑制されず、可能な場合は、１Ｈ  ＮＭＲスペクトル内の存在によって確認した。高分解度質量分析（ＨＲＭＳ）は、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡにて、Ｗａｔｅｒｓ  Ｑ−ＴＯＦ（ＡＰＩ−ＵＳ）で行なわれた。溶媒および化学薬品はすべて、Ａｌｄｒｉｃｈ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．およびＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入し、受領した状態のまま使用した。
【０１７２】
５−（４−ヒドロキシ−ブト−１−イニル）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（２）
マイクロ波反応のための２０ｍＬ容バイアルに、塩化パラジウム（５７ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（１０４ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（２４３ｍｇ，１．２８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（８．０８ｇ，８０ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（１．７７ｇ，８ｍｍｏｌ）および無水アセトニトリル（１０ｍＬ）の混合物を添加した。この攪拌混合物に、ヨウ化銅（２４３ｍｇ，１．２８ｍｍｏｌ）とブト−３−イン−１−オール１（５８８ｍｇ，８．４ｍｍｏｌ）を添加し、バイアルを密閉し、マイクロ波反応器内に１００℃で１０分間入れた。減圧下での溶媒のエバポレーション後、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を添加した後、シリカゲル（５ｇ）を添加した。得られた栓をシリカゲルカラム（３．５×１２ｃｍ）上に負荷し、ヘキサンで、続いて２０％ＥｔＯＡｃ含有ヘキサンで溶出した。Ｒｆ＝０．４２（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ４：１）の画分をプールし、エバポレートし、１．１７ｇの２を黄色油状物として得た。
【０１７３】
【化３６】
2014224159.tif 000047
５−（４−ヒドロキシ−ブチル）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（３）
Ｐａｒｒフラスコに、２（１．１７ｇ，５．６ｍｍｏｌ）、１０％パラジウム担持活性炭（６００ｍｇ）、およびＭｅＯＨ（１００ｍＬ）を添加した。水素化は５５ｐｓｉのＨ２で４時間行なった。反応混合物をセライトに通して濾過し、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で洗浄し、減圧濃縮し、１．１４ｇの３を黄色油状物として得た。
【０１７４】
【化３７】
2014224159.tif 000048
５−（３−カルボキシ−プロピル）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（４）
３（１．１４ｇ，５．３ｍｍｏｌ）のアセトン（１５ｍＬ）溶液を、ＣｒＯ３（３ｇ，３０ｍｍｏｌ）の硫酸（２３ｍＬ）／水（６７ｍＬ）冷却溶液（氷浴）に滴下した。滴下後、得られた溶液を氷浴内でさらに２時間攪拌し、溶液を室温まで一晩昇温させた。ＴＬＣにより出発アルコールの消失、およびＲｆ＝０．３５に１つの大きなスポット（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ２：１）の形成が示された。溶液を５×３０ｍＬのエチルエーテルで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。減圧下での溶媒のエバポレーション後、得られた残渣を、シリカゲルカラム（３．５×１５ｃｍ）によってフラッシュクロマトグラフィー処理した（溶離液としてヘキサン／ＥｔＯＡｃ（２：１）を使用）。所望の画分（ＴＬＣ）を収集し、溶媒を減圧下でエバポレートし、５７０ｍｇの４を無色の油状物として得た。
【０１７５】
【化３８】
2014224159.tif 000049
Ｃ１０Ｈ１２Ｏ４Ｓ（Ｍ＋）のＨＲＭＳ計算値，２２８．０４５６；実測値：２２８．０４５８。
【０１７６】
５−（５−ブロモ−４−オキソ−ペンチル）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（７）
１００ｍＬ容フラスコ内の４（５７０ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）に、塩化オキサリル（１．９ｇ，１５ｍｍｏｌ）と無水ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）を添加した。得られた溶液を１時間還流し、次いで室温まで冷却した。減圧下での溶媒のエバポレーション後、残渣５を２０ｍＬのＥｔ２Ｏに溶解させた。得られた溶液を、氷浴内の氷冷ジアゾメタン（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｍｉｎｉ  Ｄｉａｚａｌｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓを使用することにより、１０ｇのジアザルドからインサイチュで生成）に１０分間にわたって滴下した。得られた混合物を３０分間静置し、次いで、さらに１時間攪拌した。この溶液に４８％ＨＢｒ（２０ｍＬ）を添加した。得られた混合物を１．５時間還流した。室温まで冷却後、有機層を分離し、水層をＥｔ２Ｏ（５０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層およびＥｔ２Ｏ抽出物を２分割した１０％Ｎａ２ＣＯ３溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。溶媒のエバポレーションにより７を無色の結晶として得た。
【０１７７】
【化３９】
2014224159.tif 000050
Ｃ１１Ｈ１３ＢｒＯ３Ｓ（Ｍ＋）のＨＲＭＳ計算値，３０３．９７６９；実測値：３０３．９７５９。
【０１７８】
５−［３−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−プロピル］−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（８）
２，６−ジアミノピリミジン−４−オン（３１５ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１５ｍＬ）懸濁液に、７（約２．４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物をＮ２下、室温（ｔｅｒｐｅｒａｔｕｒｅ）で３日間攪拌した。減圧下での溶媒のエバポレーション後、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を添加した後、シリカゲル（１．５ｇ）を添加した。得られた栓をシリカゲルカラム（３．５×１２ｃｍ）上に負荷し、ＣＨＣｌ３で、続いて３％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣｌ３で、次いで５％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣｌ３で溶出した。Ｒｆ＝０．５６（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３  １：５）の画分をプールし、エバポレートし、３００ｍｇの８を白色粉末として得た（３８％収率）。
【０１７９】
【化４０】
2014224159.tif 000051
５−［３−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−プロピル］−チオフェン−２−カルボン酸（９）
８（３００ｍｇ，０．９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液に、１Ｎ  ＮａＯＨ（１０ｍＬ）を添加し、混合物をＮ２下、室温で１６時間攪拌した。ＴＬＣにより出発材料の消失（Ｒｆ＝０．５６）、および起点に１つの大きなスポット（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３
１：５）が示された。反応混合物を減圧下で蒸発乾固した。残渣を水（１０ｍＬ）に溶解させ、得られた溶液を氷浴中で冷却し、１Ｎ  ＨＣｌの滴下によってｐＨを３〜４に調整した。得られた懸濁液をドライアイス−アセトン浴内で凍結させ、冷蔵庫内で４〜５℃まで解凍し、濾過した。残渣を少量の冷水で洗浄し、Ｐ２Ｏ５を用いて真空乾燥させ、２５４ｍｇの９を白色粉末として得た。
【０１８０】
【化４１】
2014224159.tif 000052
（Ｓ）−２−（｛５−［３−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−プロピル］−チオフェン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸ジエチルエステル（１０）
９（２５４ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、Ｎ−メチルモルホリン（１４５ｍｇ，１．４４ｍｍｏｌ）と２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（２５３ｇ，１．４４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。この混合物に、Ｎ−メチルモルホリン（１４５ｍｇ，１．４４ｍｍｏｌ）とＬ−グルタミン酸ジエチルエステル塩酸塩（２９０ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温でさらに４時間攪拌し、次いで減圧下で蒸発乾固した。残渣を最少量のＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（４：１）に溶解させ、シリカゲルカラム（２×１５ｃｍ）上で、溶離液として５％ＣＨＣｌ３含有ＭｅＯＨを用いてクロマトグラフィー処理した。所望のスポット（ＴＬＣ）を示した画分をプールし、溶媒を蒸発乾固し、２５２ｍｇの１０を黄色粉末として得た（６３％収率）。
【０１８１】
【化４２】
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（Ｓ）−２−（｛５−［３−（２−アミノ−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル）−プロピル］−チオフェン−２−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸（ＡＡＧ１５４５４４）
１０（２５２ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液に１Ｎ  ＮａＯＨ（１０ｍＬ）を添加し、混合物をＮ２下、室温で１６時間攪拌した。ＴＬＣにより出発材料の消失（Ｒｆ＝０．４８）、および起点に１つの大きなスポット（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３
１：５）が示された。反応混合物を減圧下で蒸発乾固した。残渣を水（１０ｍＬ）に溶解させ、得られた溶液を氷浴中で冷却し、１Ｎ  ＨＣｌの滴下によってｐＨを３〜４に調整した。得られた懸濁液をドライアイス−アセトン浴内で凍結させ、冷蔵庫内で４〜５℃まで解凍し、濾過した。残渣を少量の冷水で洗浄し、Ｐ２Ｏ５を用いて真空乾燥させ、２１２ｍｇ（９５％）のＡＡＧ１５４５４４を白色粉末として得た。ｍｐ  １７５〜１７６℃；
【０１８２】
【化４３】
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Ａｎａｌ．（Ｃ１９Ｈ２１Ｎ５Ｏ６Ｓ）  Ｃ１９Ｈ２１Ｎ５Ｏ６Ｓ・１Ｈ２ＯのＣ，Ｈ，Ｎ，Ｓ．計算値；Ｃ，４９．０２；Ｈ，４．９８；Ｎ，１５．０５；Ｓ，６．８９；実測値：Ｃ，４９．２２；Ｈ，４．８０；Ｎ，１５．０３；Ｓ，６．９７。
【０１８３】
当業者には、上記の実施形態に対して、本発明の広い概念から逸脱することなく変更がなされ得ることが認識されよう。したがって、本発明は開示した具体的な実施形態に限定されず、添付の特許請求の範囲に規定される本発明の精神および範囲に含まれる修正例が包含されることを意図することが理解されよう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【外国語明細書】
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