【手続補正書】
【提出日】令和3年2月12日(2021.2.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
陸生植物における防御エリシターまたは刺激物質としての、少なくとも１つの寒天性紅藻類の抽出物または抽出物画分であって、互いに共有結合する２〜５０糖単位を有する少なくとも１つのオリゴ糖、および互いに共有結合する５０を超える糖単位を有する多糖を含有し、これらは全オリゴ糖および／または多糖に対して０．０１重量％を超えることなく含有される、抽出物または抽出物画分。
【請求項２】
寒天性紅藻類が、テングサ（Ｇｅｌｉｄｉｕｍ）属およびオゴノリ（Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ）属のものから選択されることを特徴とする、請求項１に記載の抽出物または抽出物画分。
【請求項３】
寒天性紅藻類が、Ｇｅｌｉｄｉｕｍ  ｓｅｓｑｕｉｐｅｄａｌｅであることを特徴とする、請求項２に記載の抽出物または抽出物画分。
【請求項４】
オリゴ糖として、以下から選択される少なくとも１つの天然のオリゴ糖または置換オリゴ糖を含有することを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抽出物または抽出物画分：
−Ｇａｌ＝ガラクトース単位であり、２≦ｎ≦４である、（Ｇａｌ）ｎ−グリセロール;
−２つの六炭糖単位からなる二糖;
−２つのガラクツロン酸単位からなる二糖。
【請求項５】
天然の、またはグリセロールもくしはメチルで置換された、少なくとも１つの単糖をさらに含有することを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抽出物または抽出物画分。
【請求項６】
少なくとも１つの単糖が、フロリドシドもしくはイソフロリドシド（Ｇａｌ−グリセロール）、３，６−アンヒドロガラクトース、ガラクツロン酸、六炭糖または五炭糖から選択されることを特徴とする、請求項５に記載の抽出物または抽出物画分。
【請求項７】
抽出物が、：
−塩基性ｐＨのアルカリ水溶液、特に０．１〜１０重量％、好ましくは２〜５重量％の水酸化ナトリウムによる抽出物であり、次いで酸により中和され、互いに共有結合する５０を超える糖単位を有する多糖が少なくとも部分的に除去された抽出物；または
−含水アルコール溶液による抽出物であり、アルコールがその後除去された抽出物；または
−エタノールなどのアルコールによる抽出物であり、アルコールがその後除去された抽出物であって、
抽出物はまた、寒天性紅藻類から寒天を抽出する方法の間に行われたろ過によって、それぞれ、藻類のアルカリ処理後、こうして得られた残渣を水で洗浄後、洗浄中に得られた残渣の酸による中和後、この中和中に得られた残渣を水で洗浄後に得られた水相の１つであってよく；または、最後の水による洗浄後に得られた残渣の熱抽出およびろ過中に、寒天ゲルと同時に得られた残渣の熱抽出により得られた抽出物であってよく；または、この寒天ゲルの凍結融解および／または機械プレス後に得られた離水液であってよく、
抽出物画分が、限外ろ過またはサイズ排除クロマトグラフィーによる、抽出物の分画から得られ、
抽出物または抽出物画分が、その後濃縮、脱水または凍結乾燥されてもよい、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抽出物または抽出物画分。
【請求項８】
１つ以上の寒天性紅藻類を、熱いうちに、水性抽出、アルコール抽出または含水アルコール抽出し、アルコール抽出または含水アルコール抽出の場合は、その後アルコールを除去する方法によって、調製されることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抽出物または抽出物画分であって、
ここで、抽出は、水性アルカリ抽出であることができ、特に以下による水性アルカリ抽出であることができ、該水性アルカリ抽出では、アルカリ処理後にろ過によって、一方では水相（Ａ１）を得て、他方では残渣（Ｒ１）を得て；
その後、該残渣（Ｒ１）を蒸留水により洗浄して、ろ過後に、一方では水相（Ａ２）を得て、他方では残渣（Ｒ２）を得て；
その後、該残渣（Ｒ２）の酸による中和を行い、ろ過後に、一方では水相（Ａ３）を得て、他方では残渣（Ｒ３）を得てもよく；
その後、該残渣（Ｒ３）を蒸留水で洗浄して、ろ過後に、一方では水相（Ａ４）を得て、他方では残渣（Ｒ４）を得ることが可能であり；
その後、該残渣（Ｒ４）の熱抽出およびろ過を行い、一方では残渣（Ｒ５）を得て、他方では寒天ゲルを得てもよく；
その後、該残渣（Ｒ５）の熱水による抽出を行い、水相（Ａ５）を得てもよく；
その後、寒天ゲルの凍結融解および／または機械プレスを行い、一方では離水液（ＪＳ）および純粋な寒天ゲルを得てもよく；
該水相（Ａ１）〜（Ａ５）および離水液（ＪＳ）はまた、それぞれ所望の抽出物を表し、
該抽出物を、エタノールによる処理に供し、一方ではエタノール抽出物（ＥＥ）を得て、他方では沈殿物を得てもよく、
該エタノール抽出物を、限外ろ過またはサイズ排除による分画に供し、互いに共有結合する２〜５０の糖単位を有する少なくとも１つのオリゴ糖と、互いに共有結合する５０を超える糖単位を有する多糖を含有する抽出物画分の単離を可能にし、これらは全オリゴ糖および／または多糖に対して０．０１重量％を超えないで含有されてよく、
該抽出物または抽出物画分が、その後濃縮、脱水または凍結乾燥され得る、抽出物または抽出物画分。
【請求項９】
水性媒体中にあるか、粉末形態であることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抽出物または抽出物画分。
【請求項１０】
植物の栄養組織、根系、果実、子実および種子を含む、植物の全体またはその一部に、または、植物を栽培するための土壌または基質に、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抽出物または抽出分画分の、植物の自然防御を刺激するのに十分有効な量を、液体状態で、または粉末もしくは顆粒の形態で、適用することからなることを特徴とする、陸生植物の自然防御を刺激する方法。
【請求項１１】
農学的に有用な植物、ヒマワリまたはダイズなどの油糧種子を含む畑作物、ヒヨコ豆などのタンパク質作物、トウモロコシや小麦などの穀物、洋ナシの木、リンゴの木、ネクタリンの木などの果樹、バラの木などの園芸植物、草原植物、およびトマト、メロン、レタスまたはホウレンソウなどの市販の栽培植物を処理することを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
液体抽出物または液体抽出物画分が、植物もしくは植物の一部もしくは子実もしくは種子に、または土壌もしくは基質に、０．０００１〜１００ｇ／Ｌ、好ましくは１〜１０ｍｇ／Ｌのオリゴ糖濃度で、適用されることを特徴とする、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
抽出物または抽出物画分が、１ヘクタール当たり１〜１０００ｇのオリゴ糖の割合で、液体状態で、または粉末もしくは顆粒の形態で、適用されることを特徴とする、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
適用を、１年の栽培中に１〜２０回、好ましくは３〜５回、実施することを特徴とする、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の方法を実行するための組成物であって、組成物は、液体状態の、または粉末もしくは顆粒の形態の、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抽出物または抽出物画分からなることを特徴とし、必要に応じて、植物衛生製品または肥料製品に組み込まれるか、または界面活性剤、分散剤、保存剤、固結防止剤、微量元素、土壌改良剤、欠乏矯正剤、殺菌剤、殺虫剤、除草剤、成長ホルモンから選択される少なくとも１つのアジュバントと組み合わせられる、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、陸生植物における自然防御刺激物質（ＮＤＳ：natural defense stimulator）としての、寒天性紅藻類（ａｇａｒｏｐｈｙｔｅ  ｒｅｄ  ａｌｇａｅ）の抽出物、特に天然抽出物、または画分抽出物の使用に関するものである。本発明はまた、これらの抽出物または抽出物画分を得る方法に関するものである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
植物は自分自身を守り、自身が受けているストレスの種類への適応を可能にする多様な武器を持っている。エリシターによって誘導される抵抗性の一種は、獲得全身抵抗性（ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）である。これは、植物全体に一般化されている抵抗性である。これは、病原菌に対する、および、新たな潜在的攻撃に対する、最適化された防御を可能にする。特に、ＮＤＳの効果が有効である限り、植物は常にスタンバイ状態になる。これは、植物において抵抗性を誘導し、病原菌の攻撃に対する反応時間を顕著に減らす予防方法である。採用されている戦略は、攻撃への反応時間を大幅に減少させるために、低濃度のエリシターを植物に提供することである(Levine, A., Tenhaken, R., Dixon, R., and Lamb, C. (1994), H202 from the oxidative burst orchestrates the plant hypersensitive disease resistance response, Cell 79, 583-593, Bolwell, GP (1999). Current Opinion in Plant Biology 2, 287-294)。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
抽出物または抽出物画分はまた、天然の、またはグリセロールもしくはメチルで置換された、少なくとも１つの単糖を含有してよく、１つ以上の単糖はフロリドシド／イソフロリドシド（Ｇａｌ−グリセロール）、３，６−アンヒドロガラクトース、ガラクツロン酸、六炭糖または五炭糖から選択されてよい。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
実施例３  水性抽出物、またはアルコール抽出物、または含水アルコール抽出物の取得
１００ｇの乾燥藻類を、１Ｌの水またはエタノールまたは水−エタノール混合物（２０／８０ｖ／ｖ）と混合して、５０〜６０℃で１時間攪拌する。その後、混合物をポアサイズ５３μｍのナイロン布でろ過する。不溶性粒子はフィルター上に保持され、除去される。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８３】
２ｍｇ／ＬのＦ１画分の濃度は、ペルオキシダーゼ活性を７０％刺激する。１ｍｇ／ＬのＦ１画分の濃度は、フェニルアラニンアンモニアリアーゼの酵素活性を８２％増強する。