【誤訳訂正書】
【提出日】令和3年6月22日(2021.6.22)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００９】
代替的には、本発明は、（ａ）関心ポリペプチドおよび種々の混入物を含む組成物を、陽イオン交換膜に通し、前記ポリペプチドのｐＩを約１から約５ｐＨ単位下回るｐＨを有するバッファ、および、約４０ｍＳ／ｃｍ以下の伝導率を含む操作条件で、前記ポリペプチドおよび前記膜は反対電荷を有して、前記ポリペプチドおよび少なくとも１つの前記混入物を前記膜に結合させ、（ｂ）前記関心ポリペプチドを含む、前記イオン交換膜からの分画を採取し、（ｃ）前記ポリペプチドを含む前記組成物について１つまたはそれ以上のさらなる精製工程を行い、（ｄ）前記精製ポリペプチドを前記溶出液から回収することを含む、タンパク質の精製のための下流のクロマトグラフィー工程の効率を高める方法に関する。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
さらに代替的には、本発明は、（ａ）関心ポリペプチドおよび種々の混入物を含む組成物を、陰イオン交換膜に通し、前記ポリペプチドのｐＩを約１から約５ｐＨ単位上回るｐＨを有するバッファ、および、約４０ｍＳ／ｃｍ以下の伝導率を含む操作条件で、前記ポリペプチドおよび前記膜は反対電荷を有して、前記ポリペプチドおよび少なくとも１つの前記混入物を前記膜に結合させ、（ｂ）前記関心ポリペプチドを含む、前記イオン交換膜からの分画を採取し、（ｃ）前記ポリペプチドを含む前記組成物について１つまたはそれ以上のさらなる精製工程を行い、（ｄ）前記精製ポリペプチドを前記溶出液から回収することを含む、タンパク質の精製のための下流のクロマトグラフィー工程の効率を高める方法に関する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９３】
オーバーロードモードにおける膜陽イオン交換クロマトグラフィーのランに関し、ロードする物質のｐＨは、抗体のｐＩを約１から約５ｐＨ単位下回って調製され、ロードする物質の伝導率は、ｐＨに応じて約４０ｍＳ／ｃｍ以下に調節され、抗体は、その後、膜を通って放出される。いくつかの実施形態では、ロードする物質のｐＨは、抗体のｐＩを約１から約４ｐＨ単位、約１から約３ｐＨ単位、約１から約２ｐＨ単位、または約１ｐＨ単位、下回って調製される。他の実施形態では、ロードする物質の伝導率は、ｐＨに応じて、約２０ｍＳ／ｃｍ以下または約１０ｍＳ／ｃｍ以下に調節される。ロードのｐＨは抗体のｐＩよりも低いので、抗体は（正に帯電しており）最初には通過しないであろう。さらに、抗体は、陽イオン交換の負の官能基に静電気的に結合しているであろう。これは、抗体（正）および膜（負）が反対電荷を有しているからである。プロテインＡアフィニティクロマトグラフィー中に抗体とともに溶出する、多くの混入物、例えば、ＣＨＯＰまたはＥＣＰのような宿主細胞のタンパク質、ゲンタマイシンのようなアミノグリコシド系抗生物質、およびポリエチレンイミン（ＰＥＩ）のようなイオンポリマー添加物、のｐＩは、抗体のｐＩとは少しだけ異なっている、つまり、それらのｐＩは約０．０５から約０．２ｐＩ単位だけ異なり得るので、「塩基性」の抗体のようなこれらの混入物もまた、膜に結合するであろう。プロテインＡクロマトグラフィーを使用しない精製スキームでは、ゲンタマイシンもしくはＰＥＩまたは他の不純物は、膜が使用されない限り、ＩＥＸカラムの性能を妨害するのに十分に高い濃度で留まるであろう。理論に拘束されることなく、最小限のイオン遮蔽により電荷を誘発するｐＨおよび伝導率条件での、オーバーロードモードの膜陽イオン交換クロマトグラフィーのランに関し、競合吸着が発生し、混入物は優先的に膜に結合し、または、さもなければ、効果的に抗体を膜から「移動」させ（ＲＲ  Ｄｒａｇｅｒ  ，  ＦＥ  Ｒｅｇｎｉｅｒ，  Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．  ３５９：１４７−５５  （１９８６））、結合後に、抗体をマトリックスまたはフロースルーから「溶出」させて、溶出液に回収することを可能にするようである。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９４】
オーバーロードモードにおける膜陰イオン交換クロマトグラフィーのランに関し、ロードする物質のｐＨは、抗体のｐＩを約１から約５ｐＨ単位上回って調製され、ロードする物質の伝導率は、ｐＨに応じて約４０ｍＳ／ｃｍ以下に調節され、抗体は、その後、膜を通って放出される。いくつかの実施形態では、ロードする物質のｐＨは、抗体のｐＩを約１から約４ｐＨ単位、約１から約３ｐＨ単位、約１から約２ｐＨ単位、または約１ｐＨ単位、上回って調製される。他の実施形態では、ロードする物質の伝導率は、ｐＨに応じて、約２０ｍＳ／ｃｍ以下または約１０ｍＳ／ｃｍ以下に調節される。ロードのｐＨは抗体のｐＩよりも高いので、抗体は（負に帯電しており）最初には通過しないであろう。さらに、抗体は、陰イオン交換の正の官能基に静電気的に結合しているであろう。これは、抗体（負）および膜（正）が反対電荷を有しているからである。プロテインＡアフィニティクロマトグラフィー中に抗体とともに溶出する、多くの混入物、例えば、ＣＨＯＰのような宿主細胞のタンパク質のｐＩは、抗体のｐＩとは少しだけ異なっている、つまり、それらのｐＩは約０．０５から約０．２ｐＩ単位だけ異なり得るので、「酸性」の抗体のようなこれらの混入物もまた、膜に結合するであろう。理論に拘束されることなく、最小限のイオン遮蔽により電荷を誘発するｐＨおよび伝導率条件での、オーバーロードモードの膜陰イオン交換クロマトグラフィーのランに関し、競合吸着が発生し、混入物は優先的に膜に結合し、または、さもなければ、効果的に抗体を膜から「移動」させ（ＲＲ  Ｄｒａｇｅｒ  ，  ＦＥ  Ｒｅｇｎｉｅｒ，  Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．  ３５９：１４７−５５  （１９８６））、結合後に、抗体をマトリックスまたはフロースルーから「溶出」させて、溶出液に回収することを可能にするようである。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４５】
スモールスケール陰イオン交換膜収率
比較対象に関し、ｍＡｂ２は、７．７の等電点を超えて陰イオン交換膜を使用する試験のために選択された。タンパク質は高いｐＨでは脱アミドおよび凝集する傾向があるので、類似の試験はｍＡｂ１では行わなかった。ｐＨ５．５および９ｍＳ／ｃｍでの陽イオン交換プールは、１．５Ｍトリス塩基を用いて、ｐＨを８．０に調節した。フィードストックは、その後、３つの分離プールに分けられ、精製水を用いて伝導率が調節された。最初のプールは１０ｍＳ／ｃｍであり、２番目および３番目のプールは７ｍＳ／ｃｍおよび４ｍＳ／ｃｍにそれぞれ調節された。全ての３つのプールは、ｐＨ８．０に維持された。各フィードストリームは、その後、スモールスケールの０．３５ｍＬムスタング（商標）Ｑで６００ＭＶ／時の一定流速にて処理された。ｍＡｂ３はｐＨ８．０で、ｐＩを０．３ｐＨ単位上回り、よって、抗体は負に帯電した。ロードおよびフロースループールは、抗体濃度に関して分析された。図４は、収率が全ての３つのｐＨ濃度に類似し、最初に２００ｇ／Ｌの負荷密度下で急激に増加し、約１０００ｇ／Ｌの負荷密度のあとに９６％以上であることを示す。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４６】
スモールスケール陽イオン交換膜の不純物クリアランス
陽イオン交換膜の不純物クリアランスを評価するために、ｐＨ５．５かつ３．２ｍＳ／ｃｍでのｍＡｂ３プロテインＡプールは、スモールスケールの０．１８ｍＬムスタング（商標）Ｓ膜で１３３３ＭＶ／時の一定流速にて処理された。ｍＡｂ３のロードは、算出されたｐＩを３．４単位下回り、よって、抗体は正に帯電した。ロード、フロースルー分画、および溶出サンプルが分析され、ＣＨＯＰに関する結果は図５に示される。データは、ムスタング（商標）Ｓが、最初に４３８から１０９ｐｐｍまでＣＨＯＰを低減することを示す。負荷密度が５５，３００ｇ／Ｌに達した時、ＣＨＯＰは３１８ｐｐｍに増加した。高い塩を含む溶液を用いて膜を溶出した。塩のイオンは、電荷を遮蔽するために使用され、よって、静電的相互作用を妨害し、タンパク質を膜表面から離脱させて、移動相中に自由に移動させる。溶出プールの分析は、静電力による膜へのＣＨＯＰ結合を裏付ける、不純物の濃縮を示す。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４７】
吸着材性能をさらに評価するために、ｐＨ５．５かつ６．０ｍＳ／ｃｍでのｍＡｂ３陰イオン交換プールは、スモールスケールの０．１８ｍＬムスタング（商標）Ｓ膜で６６７ＭＶ／時の一定流速にて処理された。ｍＡｂ３のｐＨは、ｐＩを３．４ｐＨ単位下回り、よって抗体は正に帯電した。フィードおよびフロースルーグラブサンプルは、ｍＡｂ、ＣＨＯＰ、およびゲンタマイシン濃度について分析された。フィードおよびグラブサンプル濃度を比較するために、膜負荷密度の関数としての、Ｃ／Ｃ０のグラフ（グラブサンプル／ロード）が生成された。図６に示されるように、ｍＡｂのＣ／Ｃ０値は、２〜１６ｋｇ／Ｌの負荷密度で１．０に近く、グラブサンプル濃度がロードした濃度とほぼ同一であり、改めて収率が高くなるであろうことが示唆される。逆に、ＣＨＯＰおよびゲンタマイシンのＣ／Ｃ０値は低く、０．２以下で２〜１６ｋｇ／Ｌの負荷密度であることから、グラブサンプル濃度がロードした濃度よりもかなり低く、ｍＡｂによるオーバーロードにも関わらず、ムスタング（商標）Ｓがこれらの不純物の大部分を取り除いていることが示唆される。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．関心ポリペプチドおよび１以上の混入物を含む組成物をイオン交換膜に通すこと、ここで、前記１以上の混入物が、宿主細胞タンパク質、アミノグリコシド系抗生物質、核酸、関心ポリペプチドのバリアント、他のポリペプチド、エンドトキシン、又はウイルス混入物の内の１以上であり、前記ポリペプチドおよび前記膜が、前記ポリペプチドおよび少なくとも１つの混入物を前記膜に結合させる操作条件において、反対の荷電を有し、前記操作条件は、前記ポリペプチドの荷電を促進するように前記ポリペプチドのｐＩとは十分に区別されるｐＨと、バッファイオンによる荷電の遮蔽を阻害するのに効果的な低イオン強度とを有するバッファを含み、
ｂ．少なくとも１つの前記混入物が前記膜に結合したままで、前記関心ポリペプチドが主に溶出液中にあるように、前記イオン交換膜をオーバーロードさせること、
ｃ．前記関心ポリペプチドを含む、前記イオン交換膜からの前記溶出液を採取すること、
ｄ．前記関心ポリペプチドを含む、前記膜の溶出液に対して、前記膜と類似の荷電のイオン交換クロマトグラフィー工程を行うこと、および
ｅ．精製された前記ポリペプチドを、前記荷電のイオン交換クロマトグラフィー工程の前記溶出液から回収すること
を含む、タンパク質の精製のための下流のクロマトグラフィー工程の効率を高める方法。
【請求項２】
ａ．関心ポリペプチドおよび１以上の混入物を含む組成物を、イオン交換膜に通すこと、ここで、前記ポリペプチドおよび前記膜が、前記ポリペプチドおよび少なくとも１つの混入物を前記膜に結合させる操作条件において、反対の荷電を有し、前記操作条件は、前記ポリペプチドの荷電を促進するように前記ポリペプチドのｐＩとは十分に区別されるｐＨと、バッファイオンによる荷電の遮蔽を阻害するのに効果的な低イオン強度とを有するバッファを含み、
ｂ．少なくとも１つの前記混入物が前記膜に結合したままで、前記関心ポリペプチドが主に溶出液中にあるように、前記イオン交換膜をオーバーロードさせること、
ｃ．前記関心ポリペプチドを含む、前記イオン交換膜からの前記溶出液を採すること、
ｄ．前記関心ポリペプチドを含む、前記膜の溶出液に対して、前記膜と類似の荷電のイオン交換クロマトグラフィー精製工程を行うこと、および
ｅ．精製された前記ポリペプチドを、前記荷電のイオン交換クロマトグラフィー工程の前記溶出液から回収すること
を含み、
さらなる精製手順が、膜イオンクロマトグラフィーに先立って又は続いて実施され、前記さらなる精製手順が、疎水性相互作用クロマトグラフィー、エタノール沈殿、熱沈殿、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）沈殿、等電点フォーカシング、逆相ＨＰＬＣ、クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、混合モードのイオン交換、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、硫安沈殿、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、親水性荷電誘導クロマトグラフィー、高性能タンジェンシャルフロー・フィルトレーション（ＨＰＴＦＦ）、およびアフィニティークロマトグラフィーから選択される、
タンパク質の精製のための下流のクロマトグラフィー工程の効率を高める方法。
【請求項３】
前記さらなる精製手順は、プロテインＡクロマトグラフィー、プロテインＧクロマトグラフィー、捕捉剤として抗体、抗原、基質、又はリガンドを用いるクロマトグラフィーから選択されるアフィニティークロマトグラフィーである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記１以上の混入物は、宿主細胞タンパク質である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記宿主細胞タンパク質は、チャイニーズハムスター卵巣タンパク質（ＣＨＯＰ）又はＥ．ｃｏｌｉタンパク質（ＥＣＰ）である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記混入物は、アミノグリコシド系抗生物質である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記イオン交換膜は、０．１から１００μｍのポアサイズを有する、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記イオン交換膜は、モノリス又はデプスフィルターにより置き換えられる、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記イオン交換膜は、陽イオン交換膜である、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ｐＨは、前記ポリペプチドの前記ｐＩを約１から約４ｐＨ単位下回る、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記陽イオン交換膜は、陽イオン交換モノリス又はデプスフィルターである、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記イオン交換膜は、陰イオン交換膜である、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ｐＨは、前記ポリペプチドの前記ｐＩを約１から約４ｐＨ単位上回る、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記バッファの伝導率は約４０ｍＳ／ｃｍ未満である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記膜は混合モードの吸着材である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ポリペプチドはＣＨ２／ＣＨ３領域を含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ポリペプチドは抗体である、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体はモノクローナル抗体である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
精製した前記ポリペプチドを薬学的に許容可能な担体と組み合わせることにより、薬学的組成物を調製することをさらに含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。