(57)【要約】【課題】本発明は、非常に優れた創傷治癒促進作用を示すものであって、且つ、安全であることから実用的な創傷治療外用剤を提供することを目的とする。【解決手段】本発明に係る創傷治療外用剤は、β−１，３−１，６−グルカンおよび海洋深層水を有効成分として含むことを特徴とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
β−１，３−１，６−グルカンおよび海洋深層水を有効成分として含むことを特徴とする創傷治療外用剤。
【請求項２】
β−１，３−１，６−グルカンを０．１０質量％以上含む請求項１に記載の創傷治療外用剤。
【請求項３】
含有水分が全て海洋深層水である請求項１または２に記載の創傷治療外用剤。
【請求項４】
海洋深層水として脱塩化されたものを含む請求項１〜３のいずれかに記載の創傷治療外用剤。
【請求項５】
海洋深層水が、高知県室戸沖の３００ｍ以深から採取されたものである請求項１〜４のいずれかに記載の創傷治療外用剤。
【請求項６】
β−１，３−１，６−グルカンがＡｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ由来のものである請求項１〜５のいずれかに記載の創傷治療外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、創傷の治癒を促進することができる安全な創傷治療外用剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
一般的に、創傷の語における「創」とは開放性損傷を意味し，「傷」とは非開放性損傷を意味するが、広義には全ての損傷を意味する（日本救急医学会ホームページより）。創傷には様々な種類があり皮膚損傷の有無に基づく開放性損傷と非開放性損傷の他、創傷の形態に基づく切創、割創、刺創、挫創、裂創、杙創、剥皮創などの分類がよく用いられる。また、その他には、急性創傷と慢性創傷とに分類されることがある。急性創傷は、上記の切創など急激な外部刺激により生じるものであり、より一般的であるといえる。それに対して慢性創傷は、長期間治癒の傾向がみられないものをいい、内部刺激などによっても発生する。例えば、褥瘡（圧迫性潰瘍）、糖尿病性潰瘍、静脈不全に伴う潰瘍、動脈不全に伴う潰瘍を挙げることができる。
【０００３】
創傷の治療としては、まず、洗浄などにより創傷部位から異物を除去した後、過剰の滲出液をガーゼなどにより吸い取って適度に乾燥させ、肉芽形成と繊維化を促すのが一般的である。特に、皮膚細胞を増殖させて創傷部を塞ぐことが非常に重要である。
【０００４】
ところで、グルコースがβ１，３結合で重合しているβ−１，３−グルカンは、ヒトが摂取しても消化できないものではあるが、様々な生理作用を有していることが知られている。例えば特許文献１には、水不溶性β−グルカンを有効成分として含有する抗炎症経口投与剤が開示されている。また、特許文献２〜３に記載の紫外線による肌荒れを防ぐための皮膚外用剤や、快適な感触を有するなどの特性を有する化粧品組成物の成分として、β−グルカンが用いられている。
【０００５】
また、近年、海洋深層水が話題となっている。一般的な海洋深層水は、深度２００ｍ以深の海水をいう。海洋深層水は河川の影響を受け難く、また、太陽光が届かないのでプランクトン等が生育し難いことから、汚染物や雑菌などが極めて少ないという特長がある。その他、無機栄養分が豊富であることや、温度が低温で安定しており、水質も一定に保たれているという特長も有する。
【０００６】
上記の特長故かまたは未知の成分故か、或いは有効成分の特別な組合せによるものかは不明であるが、海洋深層水は通常の海水には見られない特別な作用効果を示すことが知られている。例えば特許文献４には、海洋深層水とその淡水化処理水を含む外用剤であって、日焼けなどの軽度皮膚障害に効果を示すものが開示されている。また、特許文献５には、海洋深層水をナノフィルター膜で濾過し、さらに濃縮することにより、皮膚細胞を賦活するための組成物を製造する方法が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１２−４１３１２号公報
【特許文献２】特開平６−２１９９２０号公報
【特許文献３】特開２００３−１０４８３２号公報
【特許文献４】特開２０１０−３７２７５号公報
【特許文献５】特開２００７−２１７３５６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
上述したように、創傷の治癒には皮膚細胞を増殖させて創傷部位を塞ぐことが特に重要である。また、β−グルカンが炎症に効果を示すことも公知ではある。しかし、炎症は生体の主要な防御機構であり、あらゆる外部刺激に対する応答に伴うものであって、炎症の抑制作用があるからといって個々の症状や状態の改善に有効であるとは限らない。また、海洋深層水が皮膚細胞を賦活するとの知見もあるが、創傷治療のためには、より一層優れた効果を示すものが求められている。
【０００９】
そこで本発明は、非常に優れた創傷治癒促進作用を示すものであって、且つ、安全であることから実用的な創傷治療外用剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた。その結果、β−１，３−１，６−グルカンと海洋深層水とを併用すれば、それぞれを単独で用いた場合に比べ、創傷に対して顕著に優れた相乗的な皮膚細胞の増殖促進効果や創傷治癒の促進効果が発揮されることを見出して、本発明を完成した。
【００１１】
本発明に係る創傷治療外用剤は、β−１，３−１，６−グルカンおよび海洋深層水を有効成分として含むことを特徴とする。
【００１２】
本発明に係る創傷治療外用剤におけるβ−１，３−１，６−グルカンの配合量としては、０．１０質量％以上が好適である。当該配合量が０．１０質量％以上であれば、創傷の治癒促進効果がより確実に得られる。
【００１３】
本発明に係る創傷治療外用剤においては、含有水分が全て（１００ｖ／ｖ％）海洋深層水であることが好ましい。一部通常の水などを用いてもよいが、含有水分を全て海洋深層水にすることにより、優れた創傷治癒促進効果がより一層確実に得られる。
【００１４】
本発明に係る創傷治療外用剤に配合される海洋深層水としては、脱塩化されたものが好適である。脱塩海洋深層水を用いれば、創傷部位に対する刺激を低減するための等張化を容易に行うことができる。
【００１５】
本発明に係る創傷治療外用剤に配合される海洋深層水としては、高知県室戸沖の３００ｍ以深から採取されたものが特に好適である。かかる海洋深層水の優れた効果は、本発明者らの実験により確認されている。
【００１６】
本発明に係る創傷治療外用剤に配合されるβ−１，３−１，６−グルカンとしては、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ由来のものが好適である。β−１，３−１，６−グルカンは、Ｄ−グルコースがβ−１，３結合で重合したものを主鎖とし、その６位にβ−１，６結合で１個のＤ−グルコースが導入されている構造を有し、側鎖グルコースの結合割合や分子量などにより、様々なものが存在する。Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ由来のβ−１，３−１，６−グルカンの効果は、本発明者らの実験により確認されている。
【発明の効果】
【００１７】
一般的に、β−１，３−１，６−グルカンは生体内で分解吸収されないため、生体に害を与えることはなく、極めて安全である。また、海洋深層水は生体に対して当然に安全である。その一方で、β−１，３−１，６−グルカンと海洋深層水を有効成分として含む本発明に係る創傷治療外用剤は、皮膚細胞の増殖を高めるなどして、創傷の治癒を顕著に促進することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、溶媒として純水のみ、β−グルカン水溶液、海洋深層水のみ、またはβ−グルカンの海洋深層水溶液を含む培地を用いて培養した場合の皮膚細胞の培養程度を比較するためのグラフである。
【図２】図２は、本発明に係る創傷治療外用剤の創傷モデルマウスに対する効果を皮膚スコアで評価した結果である。
【図３】図３は、本発明に係る創傷治療外用剤の創傷モデルマウスに対する効果を病巣の肥厚で評価した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明に係る創傷治療外用剤は、β−１，３−１，６−グルカンおよび海洋深層水を有効成分として含むことを特徴とする。
【００２０】
β−１，３−１，６−グルカンは、Ｄ−グルコースがβ−１，３結合で結合した主鎖の第６位に、Ｄ−グルコースがβ−１，６結合で置換した多糖類である。かかる多糖類は、ヒト体内では分解や代謝はされないはずであるが、後述する実験結果のとおり、β−１，３−１，６−グルカンと海洋深層水との併用により皮膚細胞の増殖が活発となり、また、実際に創傷の治癒が顕著に促進される。
【００２１】
β−１，３−１，６−グルカンとしては、例えばその分子量や側鎖における置換率によ
り、様々なものがある。
【００２２】
β−１，３−１，６−グルカンの分子量は特に制限されないが、１０，０００以上、５００，０００以下が好適である。上述したようにβ−１，３−１，６−グルカンはヒト体内では分解や代謝はされないが、海洋深層水との併用により創傷の治癒促進に対して優れた効果を発揮することができる。一方、β−１，３−１，６−グルカンの構成要素であるグルコースでは、かかる効果を発揮することはできないと考えられる。よって、上記効果をより確実に発揮するためには、当該分子量は１０，０００以上が好ましい。一方、当該分子量が大き過ぎると、その水溶液の粘度が過剰に高くなり製剤化が難しくなるおそれがあり得るため、当該分子量としては５００，０００以下が好ましい。当該分子量としては、２０，０００以上がより好ましく、５０，０００以上がより好ましく、１００，０００以上がさらに好ましく、２００，０００以上が特に好ましく、また、３５０，０００以下がより好ましく、３２０，０００以下がさらに好ましい。なお、β−１，３−１，６−グルカンの分子量は、ゲル濾過法などにより測定することができる。ゲル濾過法による分子量の測定は、多孔質担体を充填したカラムから分子量が既知の標準高分子溶液を溶出させ、各標準高分子の溶出体積と分子量から検量線を作成した後、測定すべき試料溶液を同様のカラムから溶出させ、検量線から試料溶液に含まれる高分子の分子量を求めることにより行われる。
【００２３】
β−１，３−１，６−グルカンの構造としては、主鎖を構成するＤ−グルコースの６位に、１分子のＤ−グルコースのみがβ−１，６結合により結合しているものが好ましい。さらに、その分岐しているＤ−グルコースが、置換基として極性基を有して電荷を持ち、β−１，３−１，６−グルカン全体として水溶性を有することが好ましい。β−１，３−１，６−グルカンの側鎖分岐率、即ち、主鎖グルコースを構成するＤ−グルコースのモル数に対する、主鎖グルコースの６位にβ−１，６結合により結合しているＤ−グルコースのモル数の割合としては、６０％以上、１００％以下が好ましい。当該側鎖分岐率が高いほどβ−１，３−１，６−グルカンの水中での立体構造が安定し、水溶性が高まることから、当該側鎖分岐としては６０％以上が好ましい。当該割合としては７０％以上がより好ましく、８０％以上がさらに好ましく、８５％以上が特に好ましい。一方、当該側鎖分岐率が１００％であるβ−１，３−１，６−グルカンは容易に入手し難い場合があり得るので、当該側鎖分岐率としては９８％以下がより好ましく、９５％以下がさらに好ましい。
【００２４】
菌類が産生するβ−１，３−１，６−グルカンは菌体を構成する構造多糖であるので、通常、単離精製が非常に難しいといえる。しかし、真菌類であるＡｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓの中には菌体外へβ−１，３−１，６−グルカンを放出するものがあり、そのような真菌を用いれば単離精製が容易である。また、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓに属するＦＯ−６８株（受託番号：ＦＥＲＭ  Ｐ−１９３２７）が産生するβ−１，３−１，６−グルカンは、上記の好適な分子量や側鎖分岐率を示すものとして、非常に有用である。但し、一般的な担子菌（いわゆるキノコ）やパン酵母などの酵母など、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ以外に由来するβ−１，３−１，６−グルカンも同様の効果が期待され、使用可能である。
【００２５】
なお、ＦＯ−６８株は、下記の通り寄託機関に寄託されている。
（ｉ）  寄託機関の名称およびあて名
名称：  独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センター
あて名：  日本国茨城県つくば市東１−１−１  つくばセンター中央第６
（ｉｉ）  寄託日：  平成１５年４月２３日
（ｉｉｉ）  受託番号：  ＦＥＲＭ  Ｐ−１９３２７
【００２６】
β−１，３−１，６−グルカンは、市販のものを用いてもよいし、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓなどの培養液から単離精製してもよい。Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓの培養液から単離精製するには、特開２００４−３２９０７７号公報を参考にすればよい。
【００２７】
本発明では、β−１，３−１，６−グルカンに加え、海洋深層水を併用する。
【００２８】
一般的な海洋深層水は、深度２００ｍ以深の海水と定義されている。海洋深層水の特性としては、低温安定性、富無機栄養性、清浄性、熟成性がある。即ち、海洋深層水は太陽光の影響を受け難いため、その水温は年中ほぼ一定である。よって、本発明外用剤の原料としての海洋深層水には、製造条件を一定にできるという利点がある。また、太陽光の乏しさ故にプランクトンが生育し難く有機栄養が少ない一方で、表層の栄養分が沈降して深層部で消費されずに蓄積するため、例えば、海洋深層水の無機栄養塩類の濃度は表層水の約５〜１０倍であるとのデータもある。さらに、海洋深層水は河川などの影響を受け難いため、物理的にも化学的にも清浄であり、また、生物の混入も極めて少ない。その他、海洋深層水は高い圧力下で長い年月をかけて海洋深層部を移動しているものであるため、熟成されているといえる。
【００２９】
海洋深層水としては、脱塩化されたものが好適である。海洋深層水をそのまま用いると、浸透圧の関係から創傷部に投与すると痛みを感ずることがある。それに対して脱塩海洋深層水を用いれば、創傷部位に対する刺激を低減するための等張化を容易に行うことができる。海洋深層水の脱塩化の方法としては、逆浸透膜を用いた加圧濾過など常法を用いることができる。また、脱塩海洋深層水は、逆浸透膜濾過により濃縮された海洋深層水の添加により等張化することが好ましい。かかる態様により、海洋深層水の主な有効成分と考えられるミネラルや、濃縮された海洋深層水自体を有効利用することができる。なお、ここでいう等張化は、その浸透圧が血清の浸透圧と厳密に同一であることを意味するのではなく、β−１，３−１，６−グルカンと混合した状態で、或いはさらに製剤化した状態で、創傷部位に投与された際に患者が痛みや違和感を覚えない程度であればよいことを意味する。
【００３０】
本発明で用いる海洋深層水としては、高知県室戸沖の３００ｍ以深から採取されたものが特に好適である。かかる海洋深層水の優れた効果は、本発明者らの実験により確認されている。
【００３１】
本発明外用剤におけるβ−１，３−１，６−グルカンの配合割合は特に制限されず、適宜調整すればよいが、０．００１質量％以上が好ましい。当該割合が０．００１質量％以上であれば、優れた創傷治癒促進効果がより確実に得られる。一方、β−１，３−１，６−グルカンは生体に対して安全であり、上記割合の上限は特に制限されないが、当該割合が高過ぎるとβ−１，３−１，６−グルカンを溶媒へ十分に溶解または分散できず製剤化が難しくなるおそれがあり得るので、当該割合としては２０質量％以下が好ましい。当該割合としては、０．０１質量％以上がより好ましく、０．１０質量％以上がさらに好ましい。
【００３２】
海洋深層水は、本発明外用剤において、水分として利用することができる。好適には、本発明外用剤に含まれる水分を全て（１００ｖ／ｖ％）海洋深層水とすることが好ましい。但し、市販の水溶液を他成分として配合する方が製剤上の理由などから都合が良い場合もある。よって、本発明外用剤の含有水分に対する海洋深層水の割合を９９ｖ／ｖ％以下にしてもよく、９８ｖ／ｖ％以下にしてもよい。一方、海洋深層水の効果を十分に発揮せしめるために、本発明外用剤の含有水分に対する海洋深層水の割合を７０ｖ／ｖ％以上とすることが好ましく、８０ｖ／ｖ％以上とすることがより好ましく、９０ｖ／ｖ％以上とすることがさらに好ましく、９５ｖ／ｖ％以上とすることが特に好ましい。
【００３３】
本発明における海洋深層水は、溶媒として利用されるのみならず、その作用機構は必ずしも明らかではないが、海洋深層水自体がβ−１，３−１，６−グルカンと組み合わされることにより優れた創傷治癒促進効果を示す。本発明外用剤における海洋深層水の配合割合は特に制限されず、適宜調整すればよいが、例えば１０質量％以上とすることができる。一方、当該割合が高過ぎるとβ−１，３−１，６−グルカンやその他の成分の含有割合が過剰に低くならざるを得ないおそれがあり得るので、当該割合としては９５質量％以下が好ましい。
【００３４】
本発明外用剤におけるβ−１，３−１，６−グルカンと海洋深層水の割合も適宜調整すればよいが、β−１，３−１，６−グルカンを海洋深層水に溶解または分散させた溶液または懸濁液の状態で、β−１，３−１，６−グルカンの割合が０．００１ｗ／ｖ％以上、２０ｗ／ｖ％以下となるように両者を配合することが好ましい。当該範囲であれば、β−１，３−１，６−グルカンと海洋深層水とによる相乗的な創傷治癒促進をより確実に発揮せしめることが可能になる。
【００３５】
本発明に係る創傷治療外用剤は、β−１，３−１，６−グルカンを海洋深層水に溶解または分散させた溶液または懸濁液であってもよいし、その他、一般的な外用剤の形態にしてもよい。例えば、各剤形に応じた常法によって、上記溶液または懸濁液と他の成分を混合して、ローション剤、エアゾール剤、軟膏剤、硬膏剤、水性パップ剤などの外用剤とすることができるが、これらに限定されない。
【００３６】
上記溶液または懸濁液は、そのまま患部等へ適用してもよいが、好ましくは他の添加成分と共に製剤化する。他の添加成分としては、例えば、エーテル型界面活性剤（ポリオキシエチレンステアリルエーテルなど）、エステル型界面活性剤（プロピレングリコール脂肪酸エステルなど）、エーテル・エステル型界面活性剤（モノステアリン酸ポリエチレングリコールなど）などの界面活性剤；白糖やセルロース誘導体などの賦形剤；多糖類やカルボマーなどの増粘剤；多価アルコール（グリセリン、プロピレングリコール、１，３-ブチレングリコールなど）、液状ポリエチレングリコール、植物抽出エキス、アミノ酸、グリチルリチン酸誘導体などの湿潤剤；ポリエチレングリコール、セバシン酸ジエチル、ワセリン、高級脂肪酸、高級アルコールなどの基剤；パラヒドロキシ安息香酸エステル類などの保存剤；水やエタノールなどの溶剤；塩化ベンザルコニウムなどの殺菌剤；緩衝剤；ｐＨ調整剤；着色剤；ステアリン酸カルシウムやステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤を挙げることができる。
【００３７】
本発明に係る創傷治療外用剤の投与量は、患者の重篤度や年齢、配合する薬剤の種類や量などに適宜調整すればよい。また、本発明外用剤は非常に安全なものであるので、投与回数は特に制限されないが、例えば、１日当たり１回以上、５回以下程度とすることができる。
【００３８】
本発明に係る創傷治療外用剤は、非常に安全なものである上に、皮膚細胞の増殖を促進するなどして、創傷の治癒を顕著に促進することができる。よって、実際の創傷治療に適用できるものとして非常に有用である。
【実施例】
【００３９】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はもとより下記実施例によって制限を受けるものではなく、前・後記の趣旨に適合し得る範囲で適当に変更を加えて実施することも勿論可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。
【００４０】
実施例１  皮膚細胞の増殖促進試験
皮膚損傷の修復や治癒には皮膚細胞の増殖が必須であることから、ヒト正常繊維芽細胞に対する海洋深層水とβ−グルカンの効果の検証を行った。
【００４１】
（１）  等張海洋深層水の調製
高知県室戸岬沖、水深約３００〜４００ｍから海水を汲み上げ、活性炭フィルタ−（ＡＳ  ＯＮＥ社製，製品名「ＡＰ−１１７Ｘ」）と限外濾過膜（栗田工業社製，製品名「Ｕ−１５０５−Ｃ１」）を使って限外濾過を行った後、さらに逆浸透膜（東レ社製，製品名「ＳＵ-８１０  ＫＲＯＡ−９８−４ＨＰＬ」）を用い、圧力２．０〜６．０ＭＰａで脱塩した。得られた脱塩海洋深層水に、逆浸透膜濾過により脱塩されて濃縮された海洋深層水を適量添加し、電気伝導度を７０〜１４０μＳ／ｃｍに調整することにより等張化した。
【００４２】
（２）  皮膚細胞の増殖促進試験
１０％ウシ胎仔血清、１．０ｍＭピルビン酸および０．１ｍＭ非必須アミノ酸を含むイーグル最少必須培地を９６穴プレートに１００μＬずつ添加し、２６歳の健常女性由来のヒト正常繊維芽細胞（ＤＳファーマバイオメディカル社，ＣＣＤ−１０５６ＳＫ）を１×１０6ｃｅｌｌ／ｍＬの割合で播種し、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で２４時間前培養した。別途、純水または上記等張海洋深層水を用い、上記と同様のイーグル最小必須培地を調製した。また、さらに各培地へβ−１，３−１，６−グルカン（ソフィ社製，分子量：約１００，０００〜５００，０００，側鎖分岐率：約９０％，Aureobasidium pullulans由来）を終濃度０．００３ｗ／ｖ％で溶解した培地も調製した。各培地は、塩化ナトリウム水溶液を用い、等張に調整した。
【００４３】
前培養した上記皮膚細胞からプレートに付着していない細胞を前培養用培地と共に除去し、上記各培地（１００μＬ）を加え、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で５日間培養した。各細胞の増殖程度を、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ（同人堂社製）を用い、４５０〜６００ｎｍの比色測定により評価した。また、純水、純水＋β−グルカン、海洋深層水、海洋深層水＋β−グルカンの各群間の結果について、ｔ−テストにより有意差検定を行った。比色測定の結果を図１に、有意差検定の結果を表１に示す。
【００４４】
【表１】
2014009182.tif 000002
【００４５】
上記のとおり、培地に海洋深層水またはβ−グルカンを添加した場合、純水のみの場合に比べて皮膚細胞が有意に増殖した。さらに、海洋深層水とβ−グルカンを併用した場合には、海洋深層水のみを用いた場合とβ−グルカンのみを用いた場合に比べ、それぞれｐ＝０．０００２３００、０．０００００８６で皮膚細胞が有意に増殖した。このように、皮膚細胞の増殖効果に関して、海洋深層水とβ−グルカンとの相乗的な併用効果が確認された。
【００４６】
実施例２  創傷モデルマウスを用いたｉｎ  ｖｉｖｏ実験
創傷モデルマウスを用い、海洋深層水とβ−グルカンとの併用効果を確認する実験を行った。具体的には、６週齢の雌性ＨＯＳ−ＨＲヘアレスマウス（日本ＳＬＣ社）１０匹を任意に５匹ずつ対照群と海洋深層水＋β−グルカン併用投与群に分け、２，４，６−トリニトロクロロベンゼン（ＴＮＣＢ）の７％アセトン溶液（３０μＬ）を腹部に塗布することにより感作を行った。感作から１週間後、２日毎に頚背部へ１％ＴＮＣＢアセトン溶液（３０μＬ）を塗布することにより惹起を行い、皮膚炎を発症させた。惹起は実験終了まで継続して行った。さらに、併用投与群には、上記実施例１で用いたβ−グルカンと海洋深層水から調製した０．１５ｗ／ｖ％溶液（１００μＬ）を、耳介および背部へ、ＴＮＣＢによる惹起の開始から毎日塗布した。なお、当該溶液の塗布は、ＴＮＣＢ溶液の塗布から８時間以上の間隔を空けて行った。
【００４７】
評価は、惹起開始から２週間後に、皮膚スコアと患部（耳介）の腫脹に関して行った。皮膚スコアは、紅斑、浮腫と肥厚、出血や掻破痕、乾燥の４項目に関して、以下の４段階（最大合計１２点）で評価した。
無症状  −  ０点
軽度    −  １点
中度    −  ２点
重度    −  ３点
【００４８】
また、患部（耳介）の腫脹に関しては、同じく惹起開始から２週間後に、病巣である左右の耳介の厚さをマイクロメータにより測定した。また、両評価に関し、各群間の有意差をｔ−テストで検定した。皮膚スコアの結果を図２に、病巣（耳介）の肥厚を図３に、また、これらの平均値±標準偏差を表２に示す。
【００４９】
【表２】
2014009182.tif 000003
【００５０】
上記結果に加え、皮膚スコアに関しては、対照群に対して、海洋深層水とβ−グルカンを併用投与した場合、ｐ＝０．０４２で有意差があった。また、病巣の肥厚に関しては、ｐ＝０．０００で両群間に有意差があった。
【００５１】
以上の結果より、海洋深層水とβ−グルカンを併用すれば、創傷などによる皮膚の異常を有効に緩和できることから、海洋深層水とβ−グルカンとを含む併用剤は、創傷を治療できるものとして優れていることが明らかとなった。
【図１】
2014009182.tif 000004
【図２】
2014009182.tif 000005
【図３】
2014009182.tif 000006