(57)【要約】【課題】    本発明の目的は、安全性が高く、製造方法も容易な蛋白質の加水分解の方法を得ることにある。【解決手段】  蛋白質を硫酸で加水分解し、水酸化カルシウムで中和した後、親水性有機溶媒を加えたのち、濾過する蛋白質の加水分解の方法。  上記の方法で得た、蛋白質加水分解物は、食品、内服薬等にも勿論利用できるが、化粧品をはじめとする皮膚外用剤に用いることが、本発明の趣旨にかなう。  親水性有機溶媒はエタノールは最終製品になる前に必ずしも除く必要もなく、コストも低い。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
蛋白質を硫酸で加水分解し、水酸化カルシウムで中和した後、親水性有機溶媒を加えたのち、濾過する蛋白質の加水分解の方法。
【請求項２】
親水性有機溶媒がエタノール、多価アルコールより選択される１種以上である請求項１の蛋白質の加水分解の方法。
【請求項３】
請求項１乃至請求項２の方法で加水分解した蛋白質加水分解物。
【請求項４】
請求項１乃至請求項２の方法で加水分解した皮膚外用剤用蛋白質加水分解物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、安全性が高く、製造方法も容易な蛋白質の加水分解の方法である。
【背景技術】
【０００２】
蛋白質を加水分解する方法には塩酸や硫酸を使用する方法がよく取られる。しかし加水分解後中和すると塩が大量にでき、皮膚外用剤等でエマルジョンの剤形で用いるときに塩を多く含む蛋白質加水分解物を配合すると、エマルジョンの破壊等の問題があった。
また、皮膚外用剤に用いるとき、分子量の大きい蛋白質加水分解物があるとアレルギー等の問題を発生させる場合があった。
そこでいろいろ工夫されており、その１つに蛋白質を硫酸で分解し、第１段の中和として水酸化バリウムを用いて中和し、第２段の中和としてナトリウム、カリウムの水酸化物、炭酸塩等を用いて中和する方法が知られている。（特許文献１）
これは、生成した硫酸バリウムの水に対する溶解性がないので、不溶化し、脱塩の方法が非常に容易になること、中和によって生じる不溶性物質（硫酸バリウム）とともに分子量の大きい蛋白質加水分解物等を共沈させ、安全性も高くなることがわかっている。
【０００３】
上記の２段階中和を行う理由は、硫酸バリウムはＸ線造影剤として広く用いられており、安全性は高いとされているが、硫酸を水酸化バリウムで中和するときに水酸化バリウムは毒性が強く、未中和の水酸化バリウムが残らないように、２段階中和を行う。
このため、操作が増え、さらには残留塩分が増加し、多少のイオン交換樹脂等による脱塩処理が必要となる。
【０００４】
【特許文献１】特開昭６２−２２３１０４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的はより安全性が高く、脱塩がより容易にできる蛋白質の加水分解の方法を見出すことにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らが鋭意検討した結果、蛋白質の加水分解の方法を以下の方法で行うと本課題を解決することがわかった。
１．蛋白質を硫酸で加水分解する。
２．水酸化カルシウムで中和する。
３．親水性有機溶媒を加え撹拌後、静置する。
４．不要物を除去する。
以上の方法を詳しく以下に記載します。
【０００７】
蛋白質は食品や皮膚外用剤に用いられる蛋白質であればどれでも加水分解できるが、塩が残留すると使用できる剤形が制限させる皮膚外用剤等の原料の加工に用いることが好ましく、さらには、蛋白分解酵素の作用しにくい、シルク、ケラチン、エラスチン、コンキオリン等に用いることがより有効である。
また、加水分解の前処理として、洗浄、脱脂、細断、粉砕等を行うと、加水分解がスムーズに進むので必要に応じて加える。
コンキオリンは真珠や貝殻に存在するので、脱灰（炭酸カルシウムを除去すること）しておく必要があり、通常、もっとも安価である塩酸がよく用いられる。
前処理した原料に硫酸を加え、温度や撹拌を加え、加水分解する。
加水分解時の硫酸の濃度は、加水分解する蛋白の種類や状況、処理する温度、撹拌効率、処理時間等によって大きく異なるが、０．２〜２０Ｎ、好ましくは０．５〜１０Ｎである。
また、加熱温度は室温〜１５０℃、時間は３０分〜１０日程度が好ましい。
【０００８】
加水分解が終了したら、必要に応じて冷却後、水酸化カルシウムを撹拌しつつ徐々に加え、ｐＨが５．０〜８．０、好ましくは６．０〜７．０程度になるまで中和する。
中和すると、沈殿ができるので、場合によってはこれを除去する。後工程でも沈殿の除去工程があるので完全に除去しなくともよい。デカンテーション、遠心分離、濾過等で沈殿を除去する。
これに親水性有機溶媒を加える。
ここで用いられる親水性有機溶媒を例示すると、メタノール、エタノール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ジエチレングリコール、グリセリン、トリメチロールプロパン、１，３ブチレングリコール、アセトン、メチルエチルケトンがあげられる。
このなかで、好ましいのはエタノール、１，３ブチレングリコール等の多価アルコールであるが、分解する蛋白質の種類や分解の程度、溶媒中の蛋白質の濃度、さらには蛋白質加水分解物の用途などによって１つ以上の親水性有機溶媒を選択する。
親水性有機溶媒は、親水性有機溶媒の種類や期待する脱塩の程度、コスト等によって異なるが蛋白質分解中和液の量の１／５〜１０倍、好ましくは１／２〜３倍である。
【０００９】
これを室温又は低温（０〜１０℃）で静置する。静置時間は１時間〜２０日間、好ましくは１２時間〜５日間である。
これをデカンテーション、遠心分離、濾過等の任意の方法の１つ以上を選択し、沈殿物や浮遊物を除去した。
その後、親水性有機溶媒の一部又は全部にエタノールを使用した場合、その蛋白質加水分解物の利用方法によっては、エタノールを、減圧や加熱、その組み合わせでエタノールの一部又は全部を除去することもできる。
また、これらの工程以外にも精製を高めたいときは、活性炭処理、限外濾過等を適切な工程で実施する。
さらに水分も留去し、乾燥物として利用することも可能で、減圧や加熱、その組み合わせ、凍結乾燥等実施する。
【００１０】
上記のような操作により得た蛋白質或いはその溶液を食品、内服薬、外用剤に用いることができる。特に化粧品等の皮膚外用剤に用いる場合には、塩濃度の低さや分子量の大きい蛋白質加水分解物によるアレルギーの発生がなく特に有効である。
【実施例】
【００１１】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。
【００１２】
実施例１
細断したアコヤ貝貝殻１kgに水１２０kgを加え、ゆっくり撹拌しながら徐々に塩酸を１kg加え、１日放置した。さらに塩酸を１kg加え、２日放置した。さらに塩酸を２００g加え、１日放置した。
これに水酸化ナトリウムを撹拌しながらゆっくりと加え、ｐＨ７．０になるように調整した。
これを遠心分離し、沈殿を得た。この沈殿に水２kgを加えよく撹拌した後遠心分離し、沈殿を得た。これをもう２回繰り返した。
この沈殿に水１０kgを加えよく撹拌した後、１日放置後遠心分離し、沈殿を得た。（固形分として１２．８ｇ）
冷却器の付いたフラスコに入れ、水を１００ｇと硫酸３０ｇを加え、１１０℃に設定したマントルヒーターで加温しながら１８時間加温した。
冷却後、撹拌しながら、水酸化カルシウムを２５ｇ徐々に加えて１時間撹拌した。
さらに徐々に水酸化カルシウムを加えてｐＨが７．０にした。
この液を遠心分離（３０００rpm×１５分間）し、上澄みを得た。これにエタノールをk加え２倍量l加え撹拌した。
４℃で２日間静置した後、濾過し、濾液を得た。
これをエバポレートした後、凍結乾燥した。
【００１３】
実施例２
実施例１のアコヤ貝貝殻に替えて、クロチョウガイ貝殻で、他は実施例１と同様な処理をした。
【００１４】
実施例３
冷却器の付いたフラスコに、絹を細断したものを１０ｇに精製水９０mlと硫酸１０mlを加え、１１０℃に設定したマントルヒーターで加温しながら１８時間加温した。
冷却後、撹拌しながら、水酸化カルシウムを１５ｇ徐々に加えて１時間撹拌した。
徐々に水酸化カルシウムを加えてｐＨが７．０にした。
この液を遠心分離（３０００rpm×１５分間）し、上澄みを得た。これに１．３ブチレングリコールを１００ml加え撹拌した。
０℃で１０日間静置した後、遠心分離（６０００rpm×３０分間）し、上澄みを得た。
【００１５】
実施例１〜３の蛋白質加水分解物は塩分濃度が低く、高分子のペプチドの残留もなく、安全性の高い蛋白質加水分解物であるにも関わらず、コストのかかる脱塩が容易に行え、安価で良質な蛋白質加水分解物