(57)【要約】【課題】新たなジャガイモそうか病抑制剤の提供。【解決手段】一般式（１）2014224102.tif 000020（式中、Ｒ1はヒドロキシ基又はアルコキシ基を示す）で表されるボレリジン類、その塩又はそれらを産生する微生物を含有するジャガイモそうか病抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
2014224102.tif 000018
（式中、Ｒ1はヒドロキシ基又はアルコキシ基を示す）
で表されるボレリジン類、その塩又はそれらを産生する微生物を含有するジャガイモそうか病抑制剤。
【請求項２】
一般式（１）
【化２】
2014224102.tif 000019
（式中、Ｒ1はヒドロキシ基又はアルコキシ基を示す）
で表されるボレリジン類、その塩又はそれらを産生する微生物を用いるジャガイモそうか病抑制方法。
【請求項３】
ボレリジン類若しくはその塩、ボレリジン類若しくはその塩を産生する微生物、ボレリジン類若しくはその塩を産生する微生物の培養物、又はボレリジン類若しくはその塩を産生する微生物を接種した植物を用いる請求項２記載のジャガイモそうか病抑制方法。
【請求項４】
ストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−１（ＮＩＴＥ  Ｐ−１１６２）、ストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−２（ＮＩＴＥ  Ｐ−１１６３）、ストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−３（ＮＩＴＥ  Ｐ−１１６４）又はそれらの突然変異体。
【請求項５】
ボレリジン類又はその塩を含有する培地で試料を培養し、生育する微生物を選抜することを特徴とするボレリジン類又はその塩を生産する微生物の選抜方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジャガイモそうか病抑制剤及びジャガイモそうか病抑制方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ジャガイモそうか病（ｃｏｍｍｏｎ  ｓｃａｂ，ｄｅｅｐ  ｓｃａｂ）は土壌中のジャガイモそうか病菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｃａｂｉｅｉ，Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｔｕｒｇｉｄｉｓｃａｂｉｅｓなど）がジャガイモ（バレイショ）に感染することにより、可食部である塊茎の表皮の汚れ・陥没などを引き起こすことにより品質の低下を招き、重度の場合は減収となる難防除土壌病害である。その被害は全世界に広まっており、発生面積は国内北海道だけでも２２，２１５ｈａで栽培面積の実に３９％に上る（２００８年，北海道病害虫防除所資料）。その防除方法として、化学農薬による種芋消毒のほか、輪作、休閑緑肥栽培、土壌酸度調整、土壌水分調整など様々な対策が講じられているものの、十分な防除効果は得られていない。また、抵抗性品種の育成も精力的に行われているが、抵抗性が極めて弱い従来品種の栽培を望む声は依然として高い。小規模畑作である暖地においては、化学農薬を用いた土壌消毒によりそうか病防除が可能である。しかし、土壌消毒は、防除効果は高いが環境負荷の面からは望ましくなかった。
【０００３】
微生物を利用した新たなそうか病防除方法として、これまでに、各種糸状菌（特許文献１〜４）、細菌（特許文献５〜１０）、放線菌（特許文献１１）を利用した方法が開発されている。ジャガイモそうか病菌は土壌水分が少ない条件で被害が大きくなる一方で、糸状菌、細菌は増殖に高水分を要求することもあり、その防除効果は十分ではなかった。この点から、ジャガイモそうか病菌と同様に乾燥条件で増殖が旺盛な放線菌の中でジャガイモそうか病抑制作用の高いものが望まれていた。また、これら微生物は単独でそうか病防除に利用されているが、微生物単独での施用法は、殺菌土壌では効果があっても、自然土壌では効果が低いことが問題であった。この原因としては（１）土壌中は栄養の豊かな培地上とは異なり、根圏や新鮮な有機物の近傍を除き極めて貧栄養であり、微生物が培地上で発現する拮抗作用を土壌中では発揮できない場合が多いこと；（２）根圏や有機物の近傍では在来微生物との競合が激しく、添加した微生物が定着できない場合も多いこと；などが挙げられる。
【０００４】
また、拮抗微生物の病害抑制機構が明らかでないため、防除効果がばらつく原因の解析や技術的な改良ができないことも問題であった。病害抑制機構の１つとして、バチルス属またはロドコッカス属細菌やストレプトマイセス属放線菌がそうか病菌に対し抗菌活性を有する物質を産生することが報告されている（特許文献５、１１、１２）。そうか病菌に対し抗菌活性を有する物質としては、バチラス属細菌が産生するサーファクチン、イツリンＡ、マクロラクチンＡが報告されている（特許文献１３、非特許文献１）。
【０００５】
一方、マクロライド系抗生物質の一種であるボレリジン（ｂｏｒｒｅｌｉｄｉｎ）は、ダニ・シラミ媒介性の回帰熱の原因菌（スピロヘータ）であるボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ）属菌を抑制する物質として放線菌培養液中から単離された。その後、この物質は脈管新生阻害活性があることから抗がん剤のリード化合物として（非特許文献２）、また、薬剤耐性となったマラリア病原体プラスモジウム（Ｐｌａｓｍｏｄｉａ）属原虫の抑制作用があることからマラリア薬のリード化合物として（非特許文献３）開発がすすんでいる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００９−１３６２１６号公報
【特許文献２】特開２００６−１９９６０１号公報
【特許文献３】特開２００４−２６２８０１号公報
【特許文献４】特開平１０−１７４２２号公報
【特許文献５】特開２００７−１５３８７３号公報
【特許文献６】特開２００５−２８９８７８号公報
【特許文献７】特開２００５−６０２８７号公報
【特許文献８】特開２００１−３２７２８１号公報
【特許文献９】特公平５−８７０４４号公報
【特許文献１０】特公平２−４８５０９号公報
【特許文献１１】特開２００５−２９５９２４号公報
【特許文献１２】特開２００８−２３１０２３号公報
【特許文献１３】特開２００７−９９６２６号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｊ．Ｓ．Ｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００５．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．９９：２１３−２２１．
【非特許文献２】Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．１９９７．Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ５０：６７１−６７６．
【非特許文献３】Ｏｔｏｇｕｒｏ  ｅｔ  ａｌ．２００３．Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ５６：７２７−７２９．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の課題は、新たなジャガイモそうか病抑制剤及び抑制方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
そこで本発明者は、ジャガイモそうか病の原因菌に対する抗菌作用が高い物質を探索したところ、ボレリジン（ｂｏｒｒｅｌｉｄｉｎ）、その塩又はそれらのエステルの効果が極めて高いことを見出した。またボレリジン、その塩又はそれらのエステルを産生する微生物もジャガイモそうか病を抑制する効果があることを見出した。さらに、ボレリジン類又はその塩を含有する培地を用いて土壌等の試料を培養し、生育する微生物を選抜すればボレリジン類又はその塩を生産する微生物が選抜できることを見出し、本発明を完成した。
【００１０】
すなわち、本発明は、次の〔１〕〜〔５〕を提供するものである。
〔１〕一般式（１）
【００１１】
【化１】
2014224102.tif 000002
【００１２】
（式中、Ｒ1はヒドロキシ基又はアルコキシ基を示す）
で表されるボレリジン類、その塩又はそれらを産生する微生物を含有するジャガイモそうか病抑制剤。
【００１３】
〔２〕一般式（１）
【００１４】
【化２】
2014224102.tif 000003
【００１５】
（式中、Ｒ1はヒドロキシ基又はアルコキシ基を示す）
で表されるボレリジン類、その塩又はそれらを産生する微生物を用いるジャガイモそうか病抑制方法。
〔３〕ボレリジン類若しくはその塩、ボレリジン類若しくはその塩を産生する微生物、ボレリジン類若しくはその塩を産生する微生物の培養物、又はボレリジン類若しくはその塩を産生する微生物を接種した植物を用いる〔２〕記載のジャガイモそうか病抑制方法。
〔４〕ストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−１（ＮＩＴＥ  Ｐ−１１６２）、ストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−２（ＮＩＴＥ  Ｐ−１１６３）、ストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−３（ＮＩＴＥ  Ｐ−１１６４）又はそれらの突然変異体。
〔５〕ボレリジン類又はその塩を含有する培地で試料を培養し、生育する微生物を選抜することを特徴とするボレリジン類又はその塩を生産する微生物の選抜方法。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、ボレリジン類、その塩又はそれらを産生する微生物を用いることにより、ジャガイモそうか病の発生を顕著に抑制することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明のジャガイモそうか病抑制剤の有効成分は、上記一般式（１）で表されるボレリジン類、その塩又はそれらを産生する微生物である。ここで、ボレリジン類は、ボレリジン及びそのアルキルエステル（Ｒ1＝アルコキシ基）である。
【００１８】
一般式（１）において、Ｒ1はヒドロキシ基又はアルコキシ基である。アルコキシ基としてはメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基など炭素数１〜６の直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基が挙げられる。これらのアルコキシ基のうち、炭素数１〜４の直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基が好ましく、メトキシ基、エトキシ基がより好ましい。
【００１９】
また、一般式（１）において、Ｒ1がヒドロキシ基である場合の塩としては、特に限定されないが、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩；カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩等が挙げられる。
【００２０】
当該ボレリジン類（１）又はその塩は、ストレプトマイセス属に属するボレリジン生産菌を培養することによって製造することができ、また公知の化学合成法によっても製造することができる（Ｎａｇａｍｉｔｓｕ  ｅｔ  ａｌ．２００４．Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ６：１８６５−１８６９）。ボレリジン類生産菌としては、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｂｉｋｏｅｎｓｉｓ、Ｓ．ａｂｕｒａｖｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ａｂｙｓｓａｌｉｓ、Ｓ．ａｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ａｃｉｄｉｓｃａｂｉｅｓ、Ｓ．ａｃｒｉｍｙｃｉｎｉ、Ｓ．ａｃｕｌｅｏｌａｔｕｓ、Ｓ．ａｆｇｈａｎｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ａｆｒｉｃａｎｕｓ、Ｓ．ａｌａｎｏｓｉｎｉｃｕｓ、Ｓ．ａｌｂａｄｕｎｃｕｓ、Ｓ．ａｌｂｉａｘｉａｌｉｓ、Ｓ．ａｌｂｉｄｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ａｌｂｉｄｏｆｌａｖｕｓ、Ｓ．ａｌｂｉｆｌａｖｉｎｉｇｅｒ、Ｓ．ａｌｂｉｒｅｔｉｃｕｌｉ、Ｓ．ａｌｂｏｆａｃｉｅｎｓ、Ｓ．ａｌｂｏｆｌａｖｕｓ、Ｓ．ａｌｂｏｇｒｉｓｅｏｌｕｓ、Ｓ．ａｌｂｏｌｏｎｇｕｓ、Ｓ．ａｌｂｏｎｉｇｅｒ、Ｓ．ａｌｂｏｓｐｉｎｕｓ、Ｓ．ａｌｂｏｓｐｏｒｅｕｓ、Ｓ．ａｌｂｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔｕｓ、Ｓ．ａｌｂｏｖｉｎａｃｅｕｓ、Ｓ．ａｌｂｏｖｉｒｉｄｉｓ、Ｓ．ａｌｂｕｌｕｓ、Ｓ．ａｌｂｕｓ、Ｓ．ａｌｄｅｒｓｏｎｉａｅ、Ｓ．ａｌｍｑｕｉｓｔｉｉ、Ｓ．ａｌｎｉ、Ｓ．ａｌｔｈｉｏｔｉｃｕｓ、Ｓ．ａｍａｋｕｓａｅｎｓｉｓ、Ｓ．ａｍｂｏｆａｃｉｅｎｓ、Ｓ．ａｍｉｎｏｐｈｉｌｕｓ、Ｓ．ａｎａｎｄｉｉ、Ｓ．ａｎｇｕｓｔｍｙｃｅｔｉｃｕｓ、Ｓ．ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｃｕｓ、Ｓ．ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｕｓ、Ｓ．ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃｕｓ、Ｓ．ａｎｕｌａｔｕｓ、Ｓ．ａｏｍｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ａｒａｂｉｃｕｓ、Ｓ．ａｒｄｕｓ、Ｓ．ａｒｅｎａｅ、Ｓ．ａｒｇｅｎｔｅｏｌｕｓ、Ｓ．ａｒｍｅｎｉａｃｕｓ、Ｓ．ａｒｔｅｍｉｓｉａｅ、Ｓ．ａｓｃｏｍｙｃｉｎｉｃｕｓ、Ｓ．ａｓｉａｔｉｃｕｓ、Ｓ．ａｓｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ、Ｓ．ａｔａｃａｍｅｎｓｉｓ、Ｓ．ａｔｒａｔｕｓ、Ｓ．ａｔｒｉｒｕｂｅｒ、Ｓ．ａｔｒｏａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ、Ｓ．ａｔｒｏｏｌｉｖａｃｅｕｓ、Ｓ．ａｔｒｏｖｉｒｅｎｓ、Ｓ．ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ、Ｓ．ａｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｓ、Ｓ．ａｕｒａｔｕｓ、Ｓ．ａｕｒｅｏｃｉｒｃｕｌａｔｕｓ、Ｓ．ａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ、Ｓ．ａｕｒｅｏｒｅｃｔｕｓ、Ｓ．ａｕｒｅｏｖｅｒｓｉｌｉｓ、Ｓ．ａｕｒｅｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔｕｓ、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ａｖｅｌｌａｎｅｕｓ、Ｓ．ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎｉｕｓ、Ｓ．ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ、Ｓ．ａｖｉｃｅｎｎｉａｅ、Ｓ．ａｖｉｄｉｎｉｉ、Ｓ．ａｘｉｎｅｌｌａｅ、Ｓ．ａｚａｔｉｃｕｓ、Ｓ．ａｚｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｂａａｒｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｂａｃｉｌｌａｒｉｓ、Ｓ．ｂａｄｉｕｓ、Ｓ．ｂａｌｄａｃｃｉｉ、Ｓ．ｂａｌｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｂａｍｂｅｒｇｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｂａｎｇｌａｄｅｓｈｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｂｅｉｊｉａｎｇｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｂｅｌｌｕｓ、Ｓ．ｂｉｋｉｎｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｂｉｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔｕｓ、Ｓ．ｂｌａｓｔｍｙｃｅｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｂｌｕｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｂｏｂｉｌｉ、Ｓ．ｂｏ��ｔｒｏｐｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｂｒｅｖｉｓｐｏｒａ、Ｓ．ｂｕｎｇｏｅｎｓｉｓ、
【００２１】
ストレプトマイセス  カカオイ（Ｓ．ｃａｃａｏｉ）、Ｓ．ｃａｅｌｅｓｔｉｓ、Ｓ．ｃａｅｒｕｌｅａｔｕｓ、Ｓ．ｃａｅｒｕｌｅｕｓ、Ｓ．ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｓ、Ｓ．ｃａｌｖｕｓ、Ｓ．ｃａｎａｒｉｕｓ、Ｓ．ｃａｎｄｉｄｕｓ、Ｓ．ｃａｎｅｓｃｅｎｓ、Ｓ．ｃａｎｇｋｒｉｎｇｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｃａｎｉｆｅｒｕｓ、Ｓ．ｃａｎｕｓ、Ｓ．ｃａｐｉｌｌｉｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｓ．ｃａｐｏａｍｕｓ、Ｓ．ｃａｒｐａｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｃａｒｐｉｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｃａｓｔｅｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｃａｔｅｎｕｌａｅ、Ｓ．ｃａｖｉｓｃａｂｉｅｓ、Ｓ．ｃａｖｏｕｒｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｃｅｌｌｏｓｔａｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｃｅｌｌｕｌｏｆｌａｖｕｓ、Ｓ．ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｃｅｌｌｕｌｏｓａｅ、Ｓ．ｃｈａｍｐａｖａｔｉｉ、Ｓ．ｃｈａｒｔｒｅｕｓｉｓ、Ｓ．ｃｈａｔｔａｎｏｏｇｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｃｈｅｏｎａｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｃｈｉｂａｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｃｈｒｅｓｔｏｍｙｃｅｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｃｈｒｏｍｏｆｕｓｃｕｓ、Ｓ．ｃｈｒｙｓｅｕｓ、Ｓ．ｃｈｒｙｓｏｍａｌｌｕｓ、Ｓ．ｃｉｎｅｒｅｏｒｅｃｔｕｓ、ストレプトマイセス  シネレオルバー（Ｓ．ｃｉｎｅｒｅｏｒｕｂｅｒ）、Ｓ．ｃｉｎｅｒｅｏｓｐｉｎｕｓ、Ｓ．ｃｉｎｅｒｅｕｓ、Ｓ．ｃｉｎｅｒｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｃｉｎｎａｂａｒｉｎｕｓ、Ｓ．ｃｉｎｎａｍｏｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｓ、Ｓ．ｃｉｒｒａｔｕｓ、Ｓ．ｃｉｓｃａｕｃａｓｉｃｕｓ、Ｓ．ｃｉｔｒｅｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｓ．ｃｌａｖｉｆｅｒ、Ｓ．ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ、Ｓ．ｃｏａｃｅｒｖａｔｕｓ、Ｓ．ｃｏｃｈｌｅａｔｕｓ、Ｓ．ｃｏｃｋｌｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｃｏｅｌｅｓｃｅｎｓ、Ｓ．ｃｏｅｌｉｃｏｆｌａｖｕｓ、Ｓ．ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ、Ｓ．ｃｏｅｒｕｌｅｏｆｌａｖｕｓ、Ｓ．ｃｏｅｒｕｌｅｏｆｕｓｃｕｓ、Ｓ．ｃｏｅｒｕｌｅｏｐｒｕｎｕｓ、Ｓ．ｃｏｅｒｕｌｅｏｒｕｂｉｄｕｓ、Ｓ．ｃｏｅｒｕｌｅｓｃｅｎｓ、Ｓ．ｃｏｌｌｉｎｕｓ、Ｓ．ｃｏｌｏｍｂｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｃｏｒｃｈｏｒｕｓｉｉ、Ｓ．ｃｏｓｔａｒｉｃａｎｕｓ、Ｓ．ｃｒｅｍｅｕｓ、Ｓ．ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｕｓ、Ｓ．ｃｕｒａｃｏｉ、Ｓ．ｃｕｓｐｉｄｏｓｐｏｒｕｓ、Ｓ．ｃｙａｎｅｏｆｕｓｃａｔｕｓ、ストレプトマイセス  シアネウス（Ｓ．ｃｙａｎｅｕｓ）、Ｓ．ｃｙａｎｏａｌｂｕｓ、Ｓ．ｃｙｓｔａｒｇｉｎｅｕｓ、Ｓ．ｄａｇｈｅｓｔａｎｉｃｕｓ、Ｓ．ｄａｌｉｅｎｓｉｓ、
【００２２】
ストレプトマイセス  デカネンシス（Ｓ．ｄｅｃｃａｎｅｎｓｉｓ）、Ｓ．ｄｅｃｏｙｉｃｕｓ、Ｓ．ｄｅｍａｉｎｉｉ、Ｓ．ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ、ストレプトマイセス  ジアスタトクロモゲネス（Ｓ．ｄｉａｓｔａｔｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）、Ｓ．ｄｉｓｔａｌｌｉｃｕｓ、Ｓ．ｄｊａｋａｒｔｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｄｒｏｚｄｏｗｉｃｚｉｉ、Ｓ．ｄｕｒｈａｍｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｄｕｒｍｉｔｏｒｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｅｃｈｉｎａｔｕｓ、Ｓ．ｅｃｈｉｎｏｒｕｂｅｒ、Ｓ．ｅｄｅｒｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｅｈｉｍｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｅｍｅｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｅｎｄｕｓ、Ｓ．ｅｎｉｓｓｏｃａｅｓｉｌｉｓ、Ｓ．ｅｒｕｍｐｅｎｓ、Ｓ．ｅｒｙｔｈｒａｅｕｓ、Ｓ．ｅｒｙｔｈｒｏｇｒｉｓｅｕｓ、Ｓ．ｅｕｒｏｃｉｄｉｃｕｓ、Ｓ．ｅｕｒｏｐａｅｉｓｃａｂｉｅｉ、Ｓ．ｅｕｒｙｔｈｅｒｍｕｓ、Ｓ．ｅｘｆｏｌｉａｔｕｓ、Ｓ．ｆｅｌｌｅｕｓ、Ｓ．ｆｅｎｇｈｕａｎｇｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｆｅｒｒａｌｉｔｉｓ、Ｓ．ｆｅｒｖｅｎｓ、Ｓ．ｆｉｌａｍｅｎｔｏｓｕｓ、Ｓ．ｆｉｌｄｅｓｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｆｉｌｉｐｉｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｆｉｍｂｒｉａｔｕｓ、Ｓ．ｆｉｍｉｃａｒｉｕｓ、Ｓ．ｆｉｎｌａｙｉ、Ｓ．ｆｌａｖｅｏｌｕｓ、Ｓ．ｆｌａｖｅｕｓ、Ｓ．ｆｌａｖｉｄｏｆｕｓｃｕｓ、Ｓ．ｆｌａｖｉｄｏｖｉｒｅｎｓ、Ｓ．ｆｌａｖｉｓｃｌｅｒｏｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｆｌａｖｏｆｕｎｇｉｎｉ、Ｓ．ｆｌａｖｏｆｕｓｃｕｓ、Ｓ．ｆｌａｖｏｇｒｉｓｅｕｓ、Ｓ．ｆｌａｖｏｐｅｒｓｉｃｕｓ、Ｓ．ｆｌａｖｏｔｒｉｃｉｎｉ、Ｓ．ｆｌａｖｏｖａｒｉａｂｉｌｉｓ、Ｓ．ｆｌａｖｏｖｉｒｅｎｓ、Ｓ．ｆｌａｖｏｖｉｒｉｄｉｓ、Ｓ．ｆｌｏｃｃｕｌｕｓ、Ｓ．ｆｌｏｒｉｄａｅ、Ｓ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｓ．ｆｒａｄｉａｅ、Ｓ．ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｓ．ｆｕｌｖｉｓｓｉｍｕｓ、Ｓ．ｆｕｌｖｏｒｏｂｅｕｓ、Ｓ．ｆｕｍａｎｕｓ、Ｓ．ｆｕｍｉｇａｔｉｓｃｌｅｒｏｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｇａｌｂｕｓ、Ｓ．ｇａｌｉｌａｅｕｓ、Ｓ．ｇａｎｃｉｄｉｃｕｓ、Ｓ．ｇａｒｄｎｅｒｉ、Ｓ．ｇｅｌａｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎｉｎｕｓ、Ｓ．ｇｅｙｓｉｒｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｇｈａｎａｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｇｉｂｓｏｎｉｉ、Ｓ．ｇｌａｕｃｅｓｃｅｎｓ、Ｓ．ｇｌａｕｃｉｎｉｇｅｒ、Ｓ．ｇｌａｕｃｏｓｐｏｒｕｓ、Ｓ．ｇｌａｕｃｕｓ、Ｓ．ｇｌｏｂｉｓｐｏｒｕｓ、Ｓ．ｇｌｏｂｏｓｕｓ、Ｓ．ｇｌｏｍｅｒａｔｕｓ、Ｓ．ｇｌｏｍｅｒｏａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ、
【００２３】
Ｓ．ｇｌｙｃｏｖｏｒａｎｓ、Ｓ．ｇｏｂｉｔｒｉｃｉｎｉ、Ｓ．ｇｏｓｈｉｋｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｇｏｕｇｅｒｏｔｉｉ、Ｓ．ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｓ、Ｓ．ｇｒａｍｉｎｅｕｓ、Ｓ．ｇｒａｍｉｎｏｆａｃｉｅｎｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｉｎｉｇｅｒ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｉｎｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｂｒｕｎｎｅｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｃａｒｎｅｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｆｌａｖｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｆｕｓｃｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｉｎｃａｒｎａｔｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｌｏａｌｂｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｌｏｓｐｏｒｅｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｌｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｌｕｔｅｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｍｙｃｉｎｉ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｐｌａｎｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｒｕｂｅｎｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｒｕｂｅｒ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｒｕｂｉｇｉｎｏｓｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｓｐｏｒｅｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｓｔｒａｍｉｎｅｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔｕｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｏｖｉｒｉｄｉｓ、Ｓ．ｇｒｉｓｅｕｓ、Ｓ．ｇｕａｎｄｕｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｇｕｌｂａｒｇｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｈａｃｈｉｊｏｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｈａｉｎａｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｈａｌｉｃｌｏｎａｅ、Ｓ．ｈａｌｓｔｅｄｉｉ、Ｓ．ｈａｗａｉｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｈｅｂｅｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｈｅｌｉｏｍｙｃｉｎｉ、Ｓ．ｈｅｌｖａｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｈｅｒｂａｃｅｕｓ、Ｓ．ｈｅｒｂａｒｉｃｏｌｏｒ、Ｓ．ｈｉｍａｓｔａｔｉｎｉｃｕｓ、Ｓ．ｈｉｒｏｓｈｉｍｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｈｉｒｓｕｔｕｓ、ストレプトマイセス  ヒュミダス（Ｓ．ｈｕｍｉｄｕｓ）、Ｓ．ｈｕｍｉｆｅｒｕｓ、Ｓ．ｈｙｄｅｒａｂａｄｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｈｙｄｒｏｇｅｎａｎｓ、Ｓ．ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ、Ｓ．ｈｙｐｏｌｉｔｈｉｃｕｓ、Ｓ．ｉａｋｙｒｕｓ、Ｓ．ｉｎｃａｎｕｓ、Ｓ．ｉｎｄｉａｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｉｎｄｉｃｕｓ、Ｓ．ｉｎｄｉｇｏｆｅｒｕｓ、Ｓ．ｉｎｄｏｎｅｓｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ、Ｓ．ｉｎｕｓｉｔａｔｕｓ、Ｓ．ｉｐｏｍｏｅａｅ、Ｓ．ｉｒａｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｊａｎｔｈｉｎｕｓ、Ｓ．ｊａｖｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｊｉｅｔａｉｓｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｋａｎａｍｙｃｅｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｋａｓｈｉｍｉｒｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｋａｓｈｍｉｒｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｋａｓｕｇａｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｋａｔｒａｅ、Ｓ．ｋｅｎｔｕｃｋｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｋｉｆｕｎｅｎｓｉｓ、
【００２４】
Ｓ．ｋｉｓｈｉｗａｄｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｋｏｙａｎｇｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｋｕｎｍｉｎｇｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｋｕｒｓｓａｎｏｖｉｉ、Ｓ．ｌａｂｅｄａｅ、Ｓ．ｌａｃｅｙｉ、Ｓ．ｌａｃｔｉｃｉｐｒｏｄｕｃｅｎｓ、Ｓ．ｌａｃｕｌａｔｉｓｐｏｒａ、Ｓ．ｌａｄａｋａｎｕｍ、Ｓ．ｌａｎａｔｕｓ、Ｓ．ｌａｔｅｒｉｔｉｕｓ、Ｓ．ｌａｕｒｅｎｔｉｉ、Ｓ．ｌａｖｅｎｄｏｆｏｌｉａｅ、Ｓ．ｌａｖｅｎｄｕｌａｅ、Ｓ．ｌａｖｅｎｄｕｌｉｇｒｉｓｅｕｓ、Ｓ．ｌａｖｅｎｄｕｌｏｃｏｌｏｒ、Ｓ．ｌｅｖｉｓ、Ｓ．ｌｉｂａｎｉ、Ｓ．ｌｉｅｎｏｍｙｃｉｎｉ、Ｓ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ、Ｓ．ｌｉｍｏｓｕｓ、Ｓ．ｌｉｎｃｏｌｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｌｉｐｍａｎｉｉ、Ｓ．ｌｉｔｍｏｃｉｄｉｎｉ、Ｓ．ｌｏｍｏｎｄｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｏｆｌａｖｕｓ、Ｓ．ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｏｒｕｂｅｒ、Ｓ．ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｓ、Ｓ．ｌｏｎｇｗｏｏｄｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｌｕｃｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｌｕｎａｌｉｎｈａｒｅｓｉｉ、Ｓ．ｋｏｙａｎｇｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｋｕｎｍｉｎｇｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｋｕｒｓｓａｎｏｖｉｉ、Ｓ．ｌａｂｅｄａｅ、Ｓ．ｌａｃｅｙｉ、Ｓ．ｌａｃｔｉｃｉｐｒｏｄｕｃｅｎｓ、Ｓ．ｌａｃｕｌａｔｉｓｐｏｒａ、Ｓ．ｌａｄａｋａｎｕｍ、Ｓ．ｌａｎａｔｕｓ、Ｓ．ｌａｔｅｒｉｔｉｕｓ、Ｓ．ｌａｕｒｅｎｔｉｉ、Ｓ．ｌａｖｅｎｄｏｆｏｌｉａｅ、Ｓ．ｌａｖｅｎｄｕｌａｅ、Ｓ．ｌａｖｅｎｄｕｌｉｇｒｉｓｅｕｓ、Ｓ．ｌａｖｅｎｄｕｌｏｃｏｌｏｒ、Ｓ．ｌｅｖｉｓ、Ｓ．ｌｉｂａｎｉ、Ｓ．ｌｉｅｎｏｍｙｃｉｎｉ、Ｓ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ、Ｓ．ｌｉｍｏｓｕｓ、Ｓ．ｌｉｎｃｏｌｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｌｉｐｍａｎｉｉ、Ｓ．ｌｉｔｍｏｃｉｄｉｎｉ、Ｓ．ｌｏｍｏｎｄｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｏｆｌａｖｕｓ、Ｓ．ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｏｒｕｂｅｒ、Ｓ．ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｓ、Ｓ．ｌｏｎｇｗｏｏｄｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｌｕｃｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｌｕｎａｌｉｎｈａｒｅｓｉｉ、Ｓ．ｍｉｓａｋｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｍｉｓｉｏｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｍｏｂａｒａｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｍｏｎｏｍｙｃｉｎｉ、Ｓ．ｍｏｒｄａｒｓｋｉｉ、Ｓ．ｍｏｒｏｏｋａｅｎｓｅ、Ｓ．ｍｏｒｏｏｋａｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｍｕｒｉｎｕｓ、Ｓ．ｍｕｔａｂｉｌｉｓ、Ｓ．ｍｕｔｏｍｙｃｉｎｉ、Ｓ．ｎａｇａｎｉｓｈｉｉ、Ｓ．ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｎａｎｓｈｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｎａｒｂｏｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｎａｓｈｖｉｌｌｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｎｅｔｒｏｐｓｉｓ、Ｓ．ｎｅｙａｇａｗａｅｎｓｉｓ、
【００２５】
Ｓ．ｎｉｇｅｒ、Ｓ．ｎｉｇｒｅｓｃｅｎｓ、Ｓ．ｎｉｇｒｉｆａｃｉｅｎｓ、Ｓ．ｎｉｔｒｏｓｐｏｒｅｕｓ、Ｓ．ｎｉｖｅｉｓｃａｂｉｅｉ、Ｓ．ｎｉｖｅｏｒｕｂｅｒ、Ｓ．ｎｉｖｅｕｓ、Ｓ．ｎｏｂｏｒｉｔｏｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｎｏｄｏｓｕｓ、Ｓ．ｎｏｇａｌａｔｅｒ、Ｓ．ｎｏｊｉｒｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｎｏｕｒｓｅｉ、Ｓ．ｎｏｖａｅｃａｅｓａｒｅａｅ、Ｓ．ｏｃｈｒａｃｅｉｓｃｌｅｒｏｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｏｄｏｒｉｆｅｒ、Ｓ．ｏｌｉｖａｃｅｉｓｃｌｅｒｏｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｏｌｉｖａｃｅｏｖｉｒｉｄｉｓ、Ｓ．ｏｌｉｖａｃｅｕｓ、Ｓ．ｏｌｉｖｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎｉ、Ｓ．ｏｌｉｖｏｒｅｔｉｃｕｌｉ、Ｓ．ｏｌｉｖｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔｕｓ、Ｓ．ｏｌｉｖｏｖｉｒｉｄｉｓ、Ｓ．ｏｍｉｙａｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｏｒｉｎｏｃｉ、Ｓ．ｏｓｍａｎｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｐａｃｔｕｍ、Ｓ．ｐａｎａｃａｇｒｉ、Ｓ．ｐａｒａｃｏｃｈｌｅａｔｕｓ、Ｓ．ｐａｒａｄｏｘｕｓ、Ｓ．ｐａｒｖｉｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｐａｒｖｕｌｕｓ、Ｓ．ｐａｒｖｕｓ、Ｓ．ｐａｕｃｉｓｐｏｒｅｕｓ、Ｓ．ｐｅｕｃｅｔｉｕｓ、Ｓ．ｐｈａｅｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｐｈａｅｏｆａｃｉｅｎｓ、Ｓ．ｐｈａｅｏｇｒｉｓｅｉｃｈｒｏｍａｔｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｐｈａｅｏｌｕｔｅｉｃｈｒｏｍａｔｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｐｈａｅｏｌｕｔｅｉｇｒｉｓｅｕｓ、Ｓ．ｐｈａｅｏｐｕｒｐｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｐｈａｅｏｖｉｒｉｄｉｓ、Ｓ．ｐｈａｒｅｔｒａｅ、Ｓ．ｐｈａｒｍａｍａｒｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｐｈｏｓａｌａｃｉｎｅｕｓ、Ｓ．ｐｈｙｔｏｈａｂｉｔａｎｓ、Ｓ．ｐｉｌｏｓｕｓ、Ｓ．ｐｌａｔｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｐｌｉｃａｔｕｓ、Ｓ．ｐｌｕｍｂｉｒｅｓｉｓｔｅｎｓ、Ｓ．ｐｌｕｒｉｃｏｌｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｓ．ｐｏｌｙａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｐｏｌｙｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｐｏｏｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｐｒａｅｃｏｘ、Ｓ．ｐｒａｓｉｎｏｐｉｌｏｓｕｓ、Ｓ．ｐｒａｓｉｎｏｓｐｏｒｕｓ、Ｓ．ｐｒａｓｉｎｕｓ、Ｓ．ｐｒａｔｅｎｓ、Ｓ．ｐｒｕｎｉｃｏｌｏｒ、Ｓ．ｐｓａｍｍｏｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｐｓｅｕｄｏｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒｅｕｓ、Ｓ．ｐｓｅｕｄｏｇｒｉｓｅｏｌｕｓ、Ｓ．ｐｓｅｕｄｏｖｅｎｅｚｕｅｌａｅ、Ｓ．ｐｕｌｖｅｒａｃｅｕｓ、Ｓ．ｐｕｎｉｃｅｕｓ、Ｓ．ｐｕｎｉｃｉｓｃａｂｉｅｉ、Ｓ．ｐｕｒｐｅｏｆｕｓｃｕｓ、Ｓ．ｐｕｒｐｕｒａｓｃｅｎｓ、Ｓ．ｐｕｒｐｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｅｉｓｃｌｅｒｏｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｑｉｎｇｌａｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｒａｃｅｍｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｒａｄｉｏｐｕｇｎａｎｓ、Ｓ．ｒａｍｅｕｓ、Ｓ．ｒａｍｕｌｏｓｕｓ、Ｓ．ｒａｎｇｏｏｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｒａｐａｍｙｃｉｎｉｃｕｓ、Ｓ．ｒｅｃｉｆｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｒｅｃｔｉｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔｕｓ、Ｓ．ｒｅｃｔｉｖｉｏｌａｃｅｕｓ、Ｓ．ｒｅｇｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｒｅｓｉｓｔｏｍｙｃｉｆｉｃｕｓ、Ｓ．ｒｅｔｉｃｕｌｉｓｃａｂｉｅｉ、Ｓ．ｒｈｉｚｏｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ、Ｓ．ｒｈｉｚｏｓｐｈａｅｒｉｕｓ、Ｓ．ｒｉｍｏｓｕｓ、
【００２６】
ストレプトマイセス  リシリエンシス（Ｓ．ｒｉｓｈｉｒｉｅｎｓｉｓ）、Ｓ．ｒｏｃｈｅｉ、Ｓ．ｒｏｓｅａｌｂｕｓ、Ｓ．ｒｏｓｅｉｓｃｌｅｒｏｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｒｏｓｅｏｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｒｏｓｅｏｆｌａｖｕｓ、Ｓ．ｒｏｓｅｏｆｕｌｖｕｓ、Ｓ．ｒｏｓｅｏｌｉｌａｃｉｎｕｓ、Ｓ．ｒｏｓｅｏｌｕｓ、Ｓ．ｒｏｓｅｏｓｐｏｒｕｓ、Ｓ．ｒｏｓｅｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔｕｓ、Ｓ．ｒｏｓｅｏｖｉｏｌａｃｅｕｓ、Ｓ．ｒｏｓｅｏｖｉｒｉｄｉｓ、Ｓ．ｒｕａｎｉｉ、Ｓ．ｒｕｂｅｒ、Ｓ．ｒｕｂｉｄｕｓ、Ｓ．ｒｕｂｉｇｉｎｏｓｏｈｅｌｖｏｌｕｓ、Ｓ．ｒｕｂｉｇｉｎｏｓｕｓ、Ｓ．ｒｕｂｒｏｇｒｉｓｅｕｓ、Ｓ．ｒｕｂｒｕｓ、Ｓ．ｒｕｔｇｅｒｓｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｓａｌｍｏｎｉｓ、Ｓ．ｓａｍｐｓｏｎｉｉ、Ｓ．ｓａｍｓｕｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｓａｎｇｌｉｅｒｉ、Ｓ．ｓａｎｎａｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｓａｎｙｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｓａｐｐｏｒｏｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｓｃａｂｉｅｉ、Ｓ．ｓｃａｂｒｉｓｐｏｒｕｓ、Ｓ．ｓｃｌｅｒｏｔｉａｌｕｓ、Ｓ．ｓｃｏｐｉｆｏｒｍｉｓ、Ｓ．ｓｃｏｐｕｌｉｒｉｄｉｓ、Ｓ．ｓｅｄｉ、Ｓ．ｓｅｏｕｌｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｓｅｐｔａｔｕｓ、Ｓ．ｓｅｒａｎｉｍａｔｕｓ、Ｓ．ｓｅｔａｅ、Ｓ．ｓｅｔｏｎｉｉ、Ｓ．ｓｈａａｎｘｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｓｈｅｎｚｈｅｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｓｈｏｗｄｏｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｓｉｌａｃｅｕｓ、Ｓ．ｓｉｎｄｅｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｓｉｏｙａｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｓｏｄｉｉｐｈｉｌｕｓ、Ｓ．ｓｏｍａｌｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｓｐａｒｓｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｓｐａｒｓｕｓ、Ｓ．ｓｐｅｃｉａｌｉｓ、Ｓ．ｓｐｅｃｔａｂｉｌｉｓ、Ｓ．ｓｐｅｉｂｏｎａｅ、Ｓ．ｓｐｅｌｅｏｍｙｃｉｎｉ、Ｓ．ｓｐｈｅｒｏｉｄｅｓ、Ｓ．ｓｐｉｎｏｖｅｒｒｕｃｏｓｕｓ、Ｓ．ｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｓ．ｓｐｉｒｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔｕｓ、Ｓ．ｓｐｉｔｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｓｐｏｎｇｉａｅ、Ｓ．ｓｐｏｒｏｃｉｎｅｒｅｕｓ、Ｓ．ｓｐｏｒｏｃｌｉｖａｔｕｓ、Ｓ．ｓｐｏｒｏｒａｖｅｕｓ、Ｓ．ｓｐｏｒｏｖｅｒｒｕｃｏｓｕｓ、Ｓ．ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｉｎｕｓ、Ｓ．ｓｔｅｌｌｉｓｃａｂｉｅｉ、Ｓ．ｓｔｒａｍｉｎｅｕｓ、Ｓ．ｓｕｂｒｕｔｉｌｕｓ、Ｓ．ｓｕｌｆｏｎｏｆａｃｉｅｎｓ、Ｓ．ｓｕｌｐｈｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｓｕｎｄａｒｂａｎｓｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｓｙｎｎｅｍａｔｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｓ．ｓｙｒｉｎｇｉｕｍ、Ｓ．ｔａｃｒｏｌｉｍｉｃｕｓ、Ｓ．ｔａｎａｓｈｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｔａｔｅｙａｍｅｎｓｉｓ、
【００２７】
Ｓ．ｔａｕｒｉｃｕｓ、Ｓ．ｔｅｎｄａｅ、Ｓ．ｔｅｒｍｉｔｕｍ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏａｌｃａｌｉｔｏｌｅｒａｎｓ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃｕｓ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｃａｒｂｏｘｙｄｏｖｏｒａｎｓ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｃａｒｂｏｘｙｄｕｓ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｇｒｉｓｅｕｓ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｌｉｎｅａｔｕｓ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｓｐｉｎｏｓｉｓｐｏｒｕｓ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｖｉｏｌａｃｅｕｓ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｓ．ｔｈｉｎｇｈｉｒｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｔｈｉｏｌｕｔｅｕｓ、Ｓ．ｔｏｒｕｌｏｓｕｓ、Ｓ．ｔｏｘｙｔｒｉｃｉｎｉ、Ｓ．ｔｒｉｃｏｌｏｒ、Ｓ．ｔｒｉｔｏｌｅｒａｎｓ、Ｓ．ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｃｕｓ、Ｓ．ｔｕｉｒｕｓ、Ｓ．ｔｕｒｇｉｄｉｓｃａｂｉｅｓ、Ｓ．ｕｍｂｒｉｎｕｓ、Ｓ．ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ、Ｓ．ｖａｒｉｅｇａｔｕｓ、Ｓ．ｖａｒｓｏｖｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｖａｓｔｕｓ、Ｓ．ｖｅｎｅｚｕｅｌａｅ、Ｓ．ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｖｉｎａｃｅｕｓ、Ｓ．ｖｉｎａｃｅｕｓｄｒａｐｐｕｓ、Ｓ．ｖｉｏｌａｃｅｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｖｉｏｌａｃｅｏｌａｔｕｓ、Ｓ．ｖｉｏｌａｃｅｏｒｅｃｔｕｓ、Ｓ．ｖｉｏｌａｃｅｏｒｕｂｅｒ、Ｓ．ｖｉｏｌａｃｅｏｒｕｂｉｄｕｓ、Ｓ．ｖｉｏｌａｃｅｕｓ、Ｓ．ｖｉｏｌａｃｅｕｓｎｉｇｅｒ、Ｓ．ｖｉｏｌａｒｕｓ、Ｓ．ｖｉｏｌａｓｃｅｎｓ、Ｓ．ｖｉｏｌａｔｕｓ、Ｓ．ｖｉｏｌｅｎｓ、Ｓ．ｖｉｒｅｎｓ、Ｓ．ｖｉｒｇｉｎｉａｅ、Ｓ．ｖｉｒｉｄｉｆｌａｖｕｓ、Ｓ．ｖｉｒｉｄｉｖｉｏｌａｃｅｕｓ、Ｓ．ｖｉｒｉｄｏｂｒｕｎｎｅｕｓ、Ｓ．ｖｉｒｉｄｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｖｉｒｉｄｏｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｖｉｒｉｄｏｆｌａｖｕｍ、Ｓ．ｖｉｒｉｄｏｓｐｏｒｕｓ、Ｓ．ｖｉｔａｍｉｎｏｐｈｉｌｕｓ、Ｓ．ｗｅｄｍｏｒｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｗｅｌｌｉｎｇｔｏｎｉａｅ、Ｓ．ｗｅｒｒａｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｗｉｌｌｍｏｒｅｉ、Ｓ．ｘａｎｔｈｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｘａｎｔｈｏｃｉｄｉｃｕｓ、Ｓ．ｘａｎｔｈｏｌｉｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｘａｎｔｈｏｐｈａｅｕｓ、Ｓ．ｘｉａｍｅｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｘｉｎｇｈａｉｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｘｉｓｈｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｙａｎｇｌｉｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｙａｎｉｉ、Ｓ．ｙａｔｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｙｅｏｃｈｏｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｙｅｒｅｖａｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｙｏｇｙａｋａｒｔｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｙｏｋｏｓｕｋａｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｙｏｕｓｓｏｕｆｉｅｎｓｉｓ、
【００２８】
Ｓ．ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ、Ｓ．ｚａｏｍｙｃｅｔｉｃｕｓ、Ｓ．ｚｉｎｃｉｒｅｓｉｓｔｅｎｓに属する微生物が挙げられる。このうち、ストレプトマイセス  ロケイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｒｏｃｈｅｉ）、ストレプトマイセス  グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ）、ストレプトマイセス  パルバルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐａｒｖｕｌｕｓ）、ストレプトマイセス  カリフォルニカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｓ）、ストレプトマイセス  アルボビナセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｌｂｏｖｉｎａｃｅｕｓ）及びストレプトマイセス  カンジダス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃａｎｄｉｄｕｓ）に属する微生物が好ましい。
本発明に用いられる微生物の好ましい具体例としては、ストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−１（ＮＩＴＥ  Ｐ−１１６２）、ＡＲＤＢ−２（ＮＩＴＥ  Ｐ−１１６３）、ＡＲＤＢ−３（ＮＩＴＥ  Ｐ−１１６４）株、及びそれらの突然変異体が挙げられる。ここで、突然変異体には、自然発生突然変異体及び通常の物理的、化学的手段による突然変異体が含まれる。
【００２９】
上記のボレリジンを産生する微生物の選抜法としては、土壌、根圏土壌、バレイショ塊茎表面、堆肥、腐葉土、河川水など任意の自然環境に存在する分離源サンプルから単離した微生物を培養し、その培養液中からボレリジン量を測定する方法が挙げられる。この場合用いる培地に特に制限はないが、オートミール・カザミノ酸添加培地、Ｔｒｙｐｔｉｃ  Ｓｏｙ  Ｂｒｏｔｈなどが好ましい。また、分離源としては特に制限はないが、緑肥への定着性の面から緑肥作物の根圏土壌や、バレイショへの定着性の面からバレイショ表面およびその付着土壌が好ましい。
【００３０】
また、試料を、ボレリジンを含有する選択培地に接種し、コロニーを形成できる微生物をボレリジン産生株の候補として選抜することもできる。この場合、培地中のボレリジン濃度は０．１〜１００μｇ／ｍＬとするのが好ましく、１〜３５μｇ／ｍＬとするのが特に好ましい。
【００３１】
これらの微生物を増殖させる場合、また、これらの微生物を用いて一般式（１）のボレリジン類またはその塩を製造するには、通常のストレプトマイセス属微生物が増殖する条件で培養を行えばよい。培地には、ストレプトマイセス属微生物の増殖に必要な炭素源、窒素源、ビタミン源、ミネラル源等を添加するのが好ましい。炭素源としては、グルコース、水飴、可溶性デンプンなどが用いられる。窒素源としては、カザミノ酸、カゼイン酵素分解物、大豆酵素分解物、オートブラン、小麦フスマ、米糠、酵母エキス、ペプトン、肉エキス、コーンスティープリカー、アミノ酸液、大豆粕、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム等を用いることが出来る。炭素源及び窒素源の双方を兼用するものとして、オートミール、小麦全粒粉等を用いることが出来る。ミネラル源としては、マグネシウム塩、カリウム塩、リン酸塩、鉄塩などを用いることが出来る。培地は固形培地でもよいし、液体培地でも良い。液体培養の場合は、振盪培養、撹拌培養を行えばよい。
【００３２】
培養条件としては好気的条件で、８〜４５℃、ｐＨ３．２〜９．５が好ましい。培養時間は２４〜２４０時間でよい。
【００３３】
前記培養により、培地中に菌体が増殖し、ボレリジン類又はその塩が蓄積するので、これら培養液をそのまま用いることが出来る。また、菌体と培養液を常法により分離して、それぞれ使用することもできる。
また、上記ボレリジン類又はその塩を含む培養物から、多孔性合成吸着剤、イオン交換樹脂、溶媒抽出等によってボレリジン類又はその塩を部分精製又は精製単離して利用することも出来る。
例えば、当該培養液はポリスチレン系合成吸着剤、スチレン−ジビニルベンゼン系合成吸着剤又はメタクリル系合成吸着剤に吸着させた後、アルコール又はケトン水溶液で溶出することによって濃縮液を得ることができる。
また、例えば、当該濃縮液は酢酸エチル、ジエチルエーテル、ｎ−ブタノールなどの有機溶媒と混和、分離することによって有機溶媒中にボレリジン類又はその塩を濃縮することができる。
上記菌体を用いる場合は、液体培養後、遠心分離により沈殿を回収し、通常用いられる保護剤を加えて凍結乾燥したものを用いることが出来る。保護剤としては例えばスキムミルク、トレハロースなどを挙げることが出来る。
【００３４】
ボレリジンの単離物は以下の方法により、各種アルキルエステルに変換することも出来る。すなわち、ボレリジン（ｂ−１）を原料として、例えば硫酸、ｐ−トルエンスルホン酸などの酸触媒の存在下にて、メタノール、エタノール、プロパノールなどのアルコール（Ｒ2ＯＨ）中、加熱還流することによって、化合物（ｂ−２）を得ることが出来る。この時、ボレリジン（ｂ−１）の初濃度に特に制限はないが、例えば１〜２０質量％、特に５〜１０質量％であることが好ましい。反応後、反応液から生成物を採取するには、反応溶媒を留去し、水と混合しない生成物可溶性有機溶媒と水を加え、有機溶媒層を回収後、アルカリ水溶液、例えば飽和炭酸ナトリウム水溶液で、洗浄し、次いで水で洗浄した後乾燥し、有機溶媒を留去した後、必要に応じて単一もしくは混合溶媒から再結晶すればよい。また、必要に応じてＨＰＬＣによって単離すればよい。
【００３５】
【化３】
2014224102.tif 000004
【００３６】
（式中、Ｒ2はアルキル基を示す）
【００３７】
ボレリジン類又はその塩は、後記実施例に示すように、優れたジャガイモそうか病菌の生育抑制効果を有し、ジャガイモそうか病の発病を抑制する効果に優れる。また、ボレリジン類又はその塩のジャガイモそうか病抑制効果は、ボレリジン類又はその塩を直接用いても得られるが、ボレリジン類又はその塩を産生する微生物、当該微生物の培養物、又は当該微生物を接種した植物を用いても得られる。従って、本発明のジャガイモそうか病抑制剤及び抑制方法は、ボレリジン類若しくはその塩、ボレリジン類若しくはその塩を産生する微生物、ボレリジン類若しくはその塩を産生する微生物の培養物、又はボレリジン類若しくはその塩を産生する微生物を接種した植物を用いることができる。
【００３８】
上記によって得られたボレリジン類又はその塩、ボレリジン類又はその塩を含有する培養物や、その培養物の精製物はそのまま土壌に混和してもよいが、粉剤、粒剤、水和剤、乳剤、ペースト剤等、通常用いられている担体を利用して製剤化してもよい。
例えば、固体担体としては、植物質粉末（小麦粉、コーングリッツ、大豆粉、小麦フスマ、オートブラン、デンプン、結晶セルロース、米糠、菜種油粕、大豆油粕、脱脂米糠等）、鉱物質粉末（バーミキュライト、ゼオライト、カオリン、クレー、ベントナイト、タルク、ケイソウ土等）、高分子化合物（ポリビニル酢酸樹脂、ポリビニルアルコール樹脂、石油樹脂等）、更に、アルミナ、ワックス類等を使用することが出来る。また、液体担体としては、例えば、アルコール類（メタノール、エタノール、プロパノール等）、エーテル類（ジオキサン、テトラヒドロフラン等）、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、又は水等を使用することができる。
【００３９】
本発明のジャガイモそうか病抑制剤を水溶液又は懸濁液とした場合のｐＨは、２〜８となるのが好ましく、当該ｐＨを調整する緩衝剤としては、酢酸、クエン酸、フマル酸、リンゴ酸、乳酸、グルコン酸、酒石酸等の有機酸塩、リン酸、塩酸、硫酸などの無機塩、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化物、アンモニア又はアンモニア水等が挙げられ、これらを単独又は２種以上組み合わせて用いてもよく、さらに他のｐＨ調整剤と適宜組み合わせてもよい。
【００４０】
本発明のジャガイモそうか病抑制剤はそのまま土壌処理してもよく、農薬、肥料、土壌改良資材、堆肥等と混用してもよい。特に農薬としてはジャガイモそうか病抑制効果を持つＤ−Ｄ剤、オキシテトラサイクリン剤、ストレプトマイシン剤、オキソリニック酸剤、カスガマイシン剤、カーバム剤、チオファメートメチル剤、ダゾメット剤、トルクロホスメチル剤、フルスルファミド剤、フルアジナム剤、銅水和剤などと併用することが望ましいことは言うまでもない。
【００４１】
また、上記によって得られたボレリジン類又はその塩、ボレリジン類又はその塩を含有する培養物や、その培養物の精製物を土壌混和用として使用する場合の使用濃度は、土壌中のボレリジン類又はその塩の濃度として０．０１〜１００ｐｐｍ、より好ましくは０．１〜１０ｐｐｍの範囲とすることができる。この場合、播種前にあらかじめ混合しておいてもよく、生育期間中に散布あるいは灌注してもよい。
投与時期も特に制限はないが、バレイショ作付け直前や塊茎形成期に処理することが特に有効である。
【００４２】
ボレリジン類又はその塩を産生する微生物は直接土壌に混和してもよく、ジャガイモ（種バレイショ）に接種してもよく、また植物に接種してもよい。
直接土壌に施用する場合は、菌体をそのまま土壌に混和してもよく、培養液と合わせて混和しても良いが、さらに粉剤、粒剤、水和剤など、通常用いられている担体を利用して製剤化しても良い。
例えば、固体担体としては、植物質粉末（小麦粉、コーングリッツ、大豆粉、小麦フスマ、オートブラン、デンプン、結晶セルロース、米糠、菜種油粕、大豆油粕、脱脂米糠等）、鉱物質粉末（バーミキュライト、ゼオライト、カオリン、クレー、ベントナイト、タルク、ケイソウ土等）、高分子化合物（ポリビニル酢酸樹脂、ポリビニルアルコール樹脂、石油樹脂等）、更に、アルミナ、ワックス類等を使用することが出来る。この中で、オートブラン、小麦フスマ、米糠が好ましい。また、液体担体としては、例えば水等を使用することができる。
上記微生物を水溶液又は懸濁液とした場合のｐＨは、５〜８となるのが好ましく、当該ｐＨを調整する緩衝剤としては、酢酸、クエン酸、フマル酸、リンゴ酸、乳酸、グルコン酸、酒石酸等の有機酸塩、リン酸、塩酸、硫酸などの無機塩、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化物、アンモニア又はアンモニア水等が挙げられ、これらを単独又は２種以上組み合わせて用いてもよく、さらに他のｐＨ調整剤と適宜組み合わせてもよい。
また、上記微生物を土壌混和用として使用する場合、土壌中の当該微生物数は乾土１ｇ当り１０5〜１０9ｃ．ｆ．ｕ．（Ｃｏｌｏｎｙ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｕｎｉｔ，以下ＣＦＵ）、より好ましくは１０7〜１０8ＣＦＵの範囲とすることができる。この場合、播種前にあらかじめ混合しておいてもよく、生育期間中に散布あるいは灌注してもよい。
投与時期も特に制限はないが、バレイショ作付け直前や塊茎形成期に処理することが特に有効である。
【００４３】
また、上記の微生物をバレイショに接種する場合は、溶液中の当該微生物数は１ｍＬ当り１０6〜１０8ＣＦＵ、より好ましくは１０8ＣＦＵとすることができる。この場合、溶液に展着剤、例えばカルボキシメチルセルロースを加え、種バレイショを浸漬して植え付けることができる。
【００４４】
また、上記の微生物を植物に接種し、その植物を混和して使用することも出来る。この場合は、当該植物の種子に接種してもよいし、当該植物が生育中に接種してもよく、当該植物を生育させた後、地上部を刈り倒した後に接種してもよい。土壌混和は当該植物が生育中に行ってもよいし、刈り倒した後に行っても良い。その場合、土壌混和前に植物地上部はチョッパー、モアーなどで細断することが望ましい。植物生育中あるいは生育後に接種する場合は、上記微生物を水で懸濁したものを通常用いられる農薬散布用スプレーヤーで散布することもできる。この場合、散布液中の当該微生物密度が１ｍＬ当り１０7〜１０10ＣＦＵ、より好ましくは１０8〜１０10ＣＦＵの範囲とすることができる。また、散布液量は土地面積１ｈａ当り１００〜１０，０００Ｌ、より好ましくは４００〜１，０００Ｌの範囲とすることができる。
この場合用いられる植物は特に限定されないが、例えば、一般に緑肥作物として用いられているものが好ましい。具体例としては、エンバク野生種（Ａｖｅｎａ  ｓｔｒｉｇｏｓａ）、エンバク（Ａｖｅｎａ  ｓａｔｉｖａ）、クリムソンクローバ（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ  ｉｎｃａｒｎａｔｕｍ）、シロガラシ（Ｓｉｎａｐｉｓ  ａｌｂａ）、ハイブリッド・ソルガム（Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｂｉｃｏｌｏｒ×Ｓ．  ｓｕｄａｎｅｎｓｅ）、カラシナ（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｊｕｎｃｅａ）、アカクローバ（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ）、ハゼリソウ（Ｐｈａｃｅｌｉａ  ｔａｎａｃｅｔｉｆｏｌｉａ）、ウーリーポッドベッチ（Ｖｉｃｉａ  ｖｉｌｌｏｓａ  ｓｓｐ．  ｄａｓｙｃａｒｐａ）、スーダングラス（Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｓｕｄａｎｅｎｓｅ）、ヒマワリ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ａｎｎｕｕｓ）、ライムギ（Ｓｅｃａｌｅ  ｃｅｒｅａｌｅ）、トウモロコシ（Ｚｅａ  ｍａｙｓ）、イタリアンライグラス（Ｌｏｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）、センチピードグラス（Ｅｒｅｍｏｃｈｌｏａ  ｏｐｈｉｕｒｏｉｄｅｓ）、ナギナタガヤ（Ｖｕｌｐｉａ  ｍｙｕｒｏｓ）、ヘアリーベッチ（Ｖｉｃｉａ  ｖｉｌｌｏｓａ）、レンゲ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ  ｓｉｎｉｃｕｓ）、クロタラリア（Ｃｒｏｔａｌａｒｉａ  ｊｕｎｃｅａ、Ｃ．ｓｐｅｃｔａｂｉｌｉｓ）、セスバニア（Ｓｅｓｂａｎｉａ  ｒｏｓｔｒａｔａ、Ｓ．  ｃａｎｎａｂｉｎａ）、ダイカンドラ（Ｄｉｃｈｏｎｄｒａ  ｍｉｃｒａｎｔｈａ）、ギニアグラス（Ｐａｎｉｃｕｍ  ｍａｘｉｍｕｍ）、アニュアルライグラス（Ｌｏｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）、バヒアグラス（Ｃｙｎｏｄｏｎ  ｄａｃｔｙｌｏｎ）、トールフェスク（Ｆｅｓｔｕｃａ  ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ）、ケンタッキーブルーグラス（Ｐｏａ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓ）、シロクローバ（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ  ｒｅｐｅｎｓ）、ライコムギ（×Ｔｒｉｔｉｃｏｓｅｃａｌｅ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）、マリーゴールド（Ｔａｇｅｔｅｓ  ｅｒｅｃｔａ）、オオムギ（Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ）、コムギ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）、ヒエ（Ｅｃｈｉｎｏｃｈｌｏａ  ｅｓｃｕｌｅｎｔａ）、エビスグサ（Ｓｅｎｎａ  ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ）等が挙げられる。また、スイートコーン（Ｚｅａ  ｍａｙｓ）は雌穂を収穫後、地上部を土壌混和することが出来るため緑肥作物と同様に好ましい。これらのうち、エンバク野生種（Ａｖｅｎａ  ｓｔｒｉｇｏｓａ）、エンバク（Ａｖｅｎａ  ｓａｔｉｖａ）、ハイブリッド・ソルガム（Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｂｉｃｏｌｏｒ×Ｓ．  ｓｕｄａｎｅｎｓｅ）、スーダングラス（Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｓｕｄａｎｅｎｓｅ）、ヒマワリ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ａｎｎｕｕｓ）、ライムギ（Ｓｅｃａｌｅ  ｃｅｒｅａｌｅ）、トウモロコシ（Ｚｅａ  ｍａｙｓ）、イタリアンライグラス（Ｌｏｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）、センチピードグラス（Ｅｒｅｍｏｃｈｌｏａ  ｏｐｈｉｕｒｏｉｄｅｓ）、ナギナタガヤ（Ｖｕｌｐｉａ  ｍｙｕｒｏｓ）、ギニアグラス（Ｐａｎｉｃｕｍ  ｍａｘｉｍｕｍ）、アニュアルライグラス（Ｌｏｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）、バヒアグラス（Ｃｙｎｏｄｏｎ  ｄａｃｔｙ���ｏｎ）、トールフェスク（Ｆｅｓｔｕｃａ  ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ）、ケンタッキーブルーグラス（Ｐｏａ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓ）、ライコムギ（×Ｔｒｉｔｉｃｏｓｅｃａｌｅ）、オオムギ（Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ）、コムギ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）、ヒエ（Ｅｃｈｉｎｏｃｈｌｏａ  ｅｓｃｕｌｅｎｔａ）などが特に好ましい。
【実施例】
【００４５】
次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００４６】
製造例１（ボレリジンの生産）
オートミール（Ｔｈｅ  Ｑｕａｋｅｒ  Ｏａｔｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ社製）２０ｇ／Ｌとカザミノ酸１ｇ／Ｌ加えた培地をｐＨ７．２に調整した後、オートクレーブ滅菌し、３Ｌ容ジャー３本に各２．５Ｌ分注した。この培地にあらかじめＴｒｙｐｔｉｃ  Ｓｏｙ  Ｂｒｏｔｈ（ベクトン・ディッキンソンアンドカンパニー社製、以下ＴＳＢ）で前培養したストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−１株を接種した。培養温度は２７℃とし、撹拌回転数１００ｒｐｍで１０日間ジャーファーメンター［ＴＳ−Ｍ３Ｌ型ミニジャーファーメンターシステム、（株）高杉製作所製］で通気培養した。得られた培養液は以下の通り粗精製した。培養液を６，５００ｒｐｍ、３０分で遠心分離し、上澄み液を塩酸でｐＨ３．０に調整した。別途、スチレン−ジビニルベンゼン系合成吸着樹脂ダイヤイオンＨＰ２０をプロパノールで洗浄した後、カラム（内径４５０ｍｍ×長さ５５０ｍｍ）に充填し、次いでｐＨ３．０酢酸水を通液して調整した。本カラムに、上記上澄み液を流すことによってボレリジンを吸着した。カラムは３０容量％イソプロパノール２Ｌで洗浄した後、９９容量％イソプロパノール３Ｌでボレリジンを溶出した。溶出液はエバポレータで約５００ｍＬに濃縮し、酢酸エチルを混合・撹拌を３回繰り返すことによってボレリジンを抽出した。酢酸エチル層は無水硫酸マグネシウムで脱水した後、シリカゲル（ワコーゲルＣ１００、和光純薬社製）を加えてから溶媒を留去した。このシリカゲルは別途ｎ−ヘキサンで懸濁、充填したシリカゲルカラム（内径２０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ）の上部に重層した。このカラムはｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝６：４混合液１Ｌで洗浄し、次いでｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝２：８混合液１Ｌでボレリジンを溶出した。溶出液は濃縮、乾固し、少量の１０容量％メタノールに溶解し、別途メタノールで洗浄後、１０容量％メタノールを通液して調整したＳｅｐＰａｋ  ｔＣ１８カートリッジに通液することによってボレリジンを吸着した。カートリッジは４０容量％メタノール２０ｍＬで洗浄した後、次いで９９容量％メタノール２０ｍＬでボレリジンを溶出した。
【００４７】
このサンプルはＨＰＬＣ［カラム，ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ内径１０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ（ＹＭＣ社製）；移動相，８０容量％メタノール；流速，３．０ｍＬ／分］を用いて精製し、ボレリジン保持時間相当画分（８〜１４分）を分取した。さらに分取した画分はＨＰＬＣ（カラム，ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ内径１０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ；移動相，６０容量％アセトニトリル；流速，３．０ｍＬ／分）を用いて精製し、ボレリジン保持時間相当画分（１３〜１６分）を分取した。さらに分取した画分はＨＰＬＣ（カラム，ＹＭＣ  Ｐｈｅ内径１０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ；移動相，６０容量％メタノール；流速，３．０ｍＬ／分）を用いて精製し、ボレリジン保持時間に相当する単一ピークを示す画分（９〜１８分）を分取した。このピークの紫外部吸光極大は２５９ｎｍで、試薬として販売されているボレリジン（Ａｌｅｘｉｓ社製，北海道和光純薬販売）と一致した。得られた画分は濃縮乾固し、五酸化二燐存在下、デシケータ内で減圧乾燥した結果、ボレリジンの結晶３．１ｍｇを得た。この結晶についてＥＭＳ−ＭＳ（負イオン）によって質量分析を行ったところ、ｍ／ｚ４８８．３００２に脱プロトン分子（Ｍ−Ｈ）−が認められた。この質量数について組成演算を行った結果、誤差１．６ｍＤａでＣ28Ｈ43ＮＯ6が得られ、ボレリジンと一致した。また、1Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ）・13Ｃ−ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ）の化学シフトを表１に示したが、この内容はボレリジンの化学構造を支持した。この結果から、上記培養液中のボレリジン濃度は０．４ｍｇ／Ｌと算出された。
【００４８】
これらの結果から、ストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−１株はボレリジン生産能を有することが確認され、この菌株を培養することによってボレリジン含有培養液を製造し、さらにこれを精製することによってボレリジンを製造できることが確認された。
【００４９】
【表１】
2014224102.tif 000005
【００５０】
製造例２（別菌株）
５００ｍＬ容バッフル付き三角フラスコに製造例１に示した培地を３００ｍＬ入れ、オートクレーブ滅菌後、ストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−２株を接種し、撹拌回転数６０ｒｐｍで１０日間振盪培養を行った。培養液は製造例１と同様に遠心分離し、以下の通り粗精製した。上澄を製造例１と同様に調整したＨＰ２０カラム（内径２０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ）に通液することによってボレリジンを吸着し、次いで３０容量％イソプロパノール５００ｍＬで洗浄した後、９９容量％イソプロパノール５００ｍＬでボレリジンを溶出した。溶出液はエバポレータで濃縮し、酢酸エチルを混合・撹拌を３回繰り返すことによってボレリジンを抽出した。酢酸エチル層は無水硫酸マグネシウムで脱水した後、濃縮し、製造例１と同様にＳｅｐＰａｋ  ｔＣ１８で精製した。この粗精製物はＨＰＬＣ［カラム，ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ内径１０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ（ＹＭＣ社製）；移動相，８０容量％メタノール；流速，３．０ｍＬ／分］を用いて分析した。保持時間１０．５分にピークが認められ、これはボレリジンの保持時間とほぼ一致した。また、紫外部吸光極大は２５８ｎｍで、ボレリジンとほぼ一致した。ピーク面積から培地中のボレリジン濃度は０．２ｍｇ／Ｌと算出された。
以上の結果から、ＡＲＤＢ−２菌株はボレリジン生産能を有することが確認された。
【００５１】
製造例３（培地種類）
５００ｍＬ容バッフル付き三角フラスコにＴＳＢ、オートミール（Ｔｈｅ  Ｑｕａｋｅｒ  Ｏａｔｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ社製）２％とカザミノ酸０．１％を混合した培地、オートミール２％とソイトン（Ｓｏｙｔｏｎｅ、ベクトン・ディッキンソンアンドカンパニー社製）０．３％を混合した培地を、各３００ｍＬ準備し、ｐＨ７．２に調整後、オートクレーブ滅菌した。ここにあらかじめＴＳＢで前培養したストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−１株を接種した。培養温度は２７℃とし、回転数８０ｒｐｍで７日間振盪培養することによってボレリジンとボレリジン生産菌の混合物を得た。これをさらに６，５００ｒｐｍで３０分間遠心分離することによってボレリジン含有液を得た。
これらのボレリジン含有液中のボレリジン濃度を測定するため、培養液の上澄を製造例２と同様に粗精製し、ＨＰＬＣ［カラム，Ｊｕｐｉｔｅｒ  Ｃ１８  ３００Å内径１０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ（ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製）；移動相，１容量％酢酸含有７０容量％メタノール；流速，３．０ｍＬ／分］を用いて、ボレリジンに相当するピーク（保持時間，１１．２分；紫外部吸光極大，２５９ｎｍ）の面積によって定量を行った。結果を表２に示した。
【００５２】
この結果から、上記のような様々な培地を用いてボレリジン生産菌とボレリジンを含有する培養液を調製できることが明らかとなった。
【００５３】
【表２】
2014224102.tif 000006
【００５４】
製造例４（オートミール濃度）
５００ｍＬ容バッフル付き三角フラスコにオートミール（Ｔｈｅ  Ｑｕａｋｅｒ  Ｏａｔｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ社製）０．５％、１．０％、１．５％、２．０％、２．５％、３．０％とカザミノ酸０．１％を混合した培地をそれぞれ３００ｍＬ準備し、ｐＨ７．２に調整後、オートクレーブ滅菌した。ここにあらかじめＴＳＢで前培養したストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−１株を接種した。培養温度は２７℃とし、回転数８０ｒｐｍで７日間振盪培養することによってボレリジンとボレリジン生産菌の混合物を得た。これをさらに６，５００ｒｐｍで３０分間遠心分離することによってボレリジン含有液を得た。
これらのボレリジン含有液中のボレリジン濃度を測定するため、培養液の上澄を製造例３と同様に粗精製・ＨＰＬＣ定量を行った。結果を表３に示した。
【００５５】
この結果から、ボレリジンを高含有させるためにはオートミール濃度は１〜２％が好ましいことが明らかとなった。
【００５６】
【表３】
2014224102.tif 000007
【００５７】
製造例５（菌体スキムミルクＦＤ）
製造例１と同様に調整した培養液を遠心分離し、沈殿した菌体に１０重量％のスキムミルクに懸濁した後、凍結乾燥を行った。４℃で保存した後、凍結乾燥品中の当該菌数を希釈平板法で測定した。すなわち、凍結乾燥品を滅菌水に懸濁し、段階希釈した液をそれぞれ１００μＬずつデンプン培地（培地１Ｌ当りに寒天１５ｇ、デンプン１０ｇ、酵母エキス１ｇ、サッカロース１ｇ、塩化カリウム０．１ｇ、リン酸水素一カリウム０．１ｇ、硫酸マグネシウム七水和物０．１ｇ、硝酸カリウム０．１ｇを溶解し、オートクレーブ滅菌したもの）に塗布した。２５℃で７日間培養後、コロニー数を計測した結果を表４に示した。
凍結乾燥品中の当該菌数は１０5ＣＦＵ／ｇであり、本方法によって凍結乾燥菌体を製造できることが確認された。
【００５８】
【表４】
2014224102.tif 000008
【００５９】
製造例６（ＨＰ２０粗精製物）
オートミール（Ｔｈｅ  Ｑｕａｋｅｒ  Ｏａｔｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ社製）１０ｇ／Ｌとカザミノ酸１ｇ／Ｌ加えた培地をｐＨ７．２に調整した後、オートクレーブ滅菌し、３Ｌ容ジャー３本に各２．５Ｌ分注した（計７．５Ｌ）。この培地にあらかじめＴＳＢで前培養したストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−１株を接種した。培養温度は２７℃とし、撹拌回転数１００ｒｐｍで１０日間ジャーファーメンター［ＴＳ−Ｍ３Ｌ型ミニジャーファーメンターシステム、（株）高杉製作所製］で通気培養した。得られた培養液は６，５００ｒｐｍ、３０分で遠心分離し、上澄み液を塩酸でｐＨ３．０に調整した。別途、スチレン−ジビニルベンゼン系合成吸着樹脂ダイヤイオンＨＰ２０をプロパノールで洗浄した後、カラム（内径４５０ｍｍ×長さ５５０ｍｍ）に充填し、次いでｐＨ３．０酢酸水を通液して調整した。本カラムに、上記上澄み液を流すことによってボレリジンを吸着した。カラムは３０容量％イソプロパノール２Ｌで洗浄した後、９９容量％イソプロパノール３Ｌでボレリジンを溶出した。溶出液はエバポレータで約５００ｍＬに濃縮した。
この濃縮液中のボレリジン濃度を製造例３と同様に粗精製・ＨＰＬＣ定量を行った結果、１６．３ｍｇ／Ｌであることが判明した。
【００６０】
製造例７（バーミキュライト混合接種源）
バーミキュライト・オートミール培地（バーミキュライト１Ｌ当たりに粉砕したオートミール５．１４ｇと０．０７３質量％カザミノ酸３５０ｍＬを混合したもの）２Ｌを、ミリシール［（株）アズワン社製］を貼ったオートクレーブバック（３００ｍｍ×６１０ｍｍ）に詰め、オートクレーブ滅菌（１２１℃、６０分を１日以上あけて２回）した。この培地に、デンプン培地で培養したストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−１株を寒天片ごと接種し、２５℃で６〜８週間培養した。培養物１０ｇを９０ｍＬの滅菌水に懸濁し、室温で２０分間振盪した後、希釈平板法を行った。
培養物中の当該菌数は３．２×１０8〜２．３×１０9ＣＦＵ／ｇ乾土であり、この培養物を４℃で５週間保存した後にも、同程度の生菌数が確認された。このことから、本方法によって菌体を含むバーミキュライト混合接種源を製造できることが確認された。
【００６１】
実施例１（ボレリジンの効果の証明）
製造例１によって得られたボレリジンおよび試薬として販売されているボレリジン（Ａｌｅｘｉｓ社製，北海道和光純薬販売）それぞれ１ｍｇをエタノール１ｍＬに希釈し、直径８ｍｍの濾紙ディスクに１０μＬおよび１００μＬ添加し、減圧デシケータ内で乾燥させた（ディスク当たりのボレリジン量はそれぞれ１０μｇおよび１００μｇとなる）。これらのディスクをジャガイモそうか病菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｔｕｒｇｉｄｉｓｃａｂｉｅｓ  ９４−３株を接種したデンプン培地に置床し、２７℃で３日間培養した。培養後の阻止円の大きさ（３反復）を表５に示した。
その結果、市販されているボレリジンも製造例１によって得られたボレリジンも明確な阻止円を形成することから、ジャガイモそうか病菌の生育抑制作用を有することが明らかとなった。
【００６２】
【表５】
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【００６３】
実施例２（２菌株のポット試験での効果の証明）
ジャガイモそうか病菌（Ｓ．ｔｕｒｇｉｄｉｓｃａｂｉｅｓ  ９４−３株）を培地（黒ボク土２．４Ｌ、バーミキュライト１．２Ｌ、フスマ１．２Ｌ、オートミール６０ｇ、蒸留水１Ｌを混合し、硝石灰を１４〜１６ｇ加えてｐＨを７．２に調整し、１２１℃、６０分間のオートクレーブ滅菌を１日以上あけて２回行ったもの）で培養し、畑土（黒ボク土、川砂、ピートモスを体積比で７．７：２．３：５に混合したもの）に混合して、そうか病人工汚染土壌を作製した（そうか病菌数は７．４×１０6ＣＦＵ／ｇ乾土）。また、ストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−１およびＡＲＤＢ−２株をバーミキュライト・オートミール培地で培養し、そうか病人工汚染土壌に５または１０体積％混合した。これら土壌を３Ｌ不織布ポット［（資）桃木商店］に詰めてバレイショ品種「男爵いも」を植え付け、ポットごと圃場（北海道芽室町）に埋めて栽培した。３ヶ月後に新生塊茎のそうか病発生程度を調査した結果を表６に示した。
ＡＲＤＢ−１およびＡＲＤＢ−２株を施用したポットでは、ジャガイモそうか病の発病が軽減されたことから、ボレリジン産生能を有する微生物のバーミキュライト・オートミール培地培養物を土壌に混和することにより、ジャガイモそうか病の発病を抑制できることが明らかとなった。
【００６４】
【表６】
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【００６５】
実施例３（圃場試験での効果の証明）
ストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−１株のバーミキュライト・オートミール培地培養物（当該菌数は約１．２×１０9ＣＦＵ／ｇ乾土）をそうか病汚染圃場（北海道芽室町、病原菌はＳ．ｔｕｒｇｉｄｉｓｃａｂｉｅｓ）のバレイショ根圏域（１株当たり３０ｃｍ×３０ｃｍ×１５ｃｍ）に１０体積％混合し、バレイショ品種「男爵いも」を植え付けた。３ヶ月後に新生塊茎のそうか病発生程度を調査した結果を表７に示した。
ＡＲＤＢ−１株施用区では、ジャガイモそうか病の発病が軽減されたことから、ボレリジン産生能を有する微生物のバーミキュライト・オートミール培地培養物を土壌に混和することにより、圃場においてもジャガイモそうか病の発病を抑制できることが明らかとなった。
【００６６】
【表７】
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【００６７】
実施例４［菌体のみ（ボレリジン無し）の効果の証明］
２Ｌ容バッフル付き三角フラスコ８本にそれぞれＴＳＢ培地を５００ｍＬ入れ、オートクレーブ滅菌後、ストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−１株を接種し、２５℃、撹拌回転数１２０ｒｐｍ／分で３日間振盪培養を行った。培養液を８，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上澄み液を捨て、沈殿を滅菌水に懸濁することを繰り返して菌体を洗浄した。菌体は４００ｍＬの滅菌水に懸濁し、ホモジナイザー［エースホモジナイザーＡＭ−３、（株）日本精機製作所製］で破砕した。菌体破砕液２００ｍＬは、遠心分離後、沈殿を１５０ｍＬの０．１質量％カルボキシメチルセルロース（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ，以下ＣＭＣ）に懸濁し、半分に切断した種バレイショ（品種「男爵いも」）を浸漬した。また、残りの菌体破砕液２００ｍＬは、遠心分離後、沈殿を５４０ｍＬの０．１％ＣＭＣに懸濁し、１０５ｍＬずつをバーミキュライト３００ｍＬと混合した。実施例２と同様に作製したそうか病人工汚染土壌（そうか病菌数は２．０×１０4ＣＦＵ／ｇ乾土）を３Ｌ不織布ポットに詰め、菌体破砕液に浸漬した種バレイショを植え付けた。また、そうか病人工汚染土壌に菌体破砕液を混合したバーミキュライトを１０体積％混合し、ポットに詰めてバレイショ（品種「男爵いも」）を植え付けた。対照として、０．１％ＣＭＣ浸漬種バレイショ播種区と、０．１％ＣＭＣ添加バーミキュライト施用区を設けた。各ポットを圃場（北海道芽室町）に埋めてバレイショを栽培し、３ヶ月後に新生塊茎のそうか病発生程度を調査した結果を表８に示した。
ＡＲＤＢ−１株の液体培養菌体を土壌混和または種芋処理したポットでは、ジャガイモそうか病の発病が軽減されたことから、ボレリジン産生能を有する微生物の菌体を施用することにより、ジャガイモそうか病の発病を抑制できることが明らかとなった。
【００６８】
【表８】
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【００６９】
実施例５（緑肥との併用による効果の証明）
ジャガイモそうか病菌（Ｓ．ｔｕｒｇｉｄｉｓｃａｂｉｅｓ  ９４−３株）をバーミキュライト・オートミール培地で培養し、畑土に混合してそうか病人工汚染土壌を作製した（そうか病菌は４．６×１０6ＣＦＵ／ｇ乾土）。また、ストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−１株も同様に培養し、そうか病人工汚染土壌に１０体積％混合した（当該菌数は１．５×１０7ＣＦＵ／ｇ乾土）。これら土壌を３Ｌ不織布ポットに詰め、エンバク野生種（Ａｖｅｎａ  ｓｔｒｉｇｏｓａ）、エンバク（Ａｖｅｎａ  ｓａｔｉｖａ）を播種し、温室（１８℃、明期１４時間／暗期１０時間）で２ヶ月間栽培した。エンバク野生種、エンバクの根および葉を細断して土壌と混合した後、水分を補給しながら３週間放置した。エンバク野生種およびエンバクを再度播種して、栽培と植物体の土壌混合を繰り返した土壌にバレイショ品種「男爵いも」を植え付け、３ヶ月後に新生塊茎のそうか病発生程度を調査した。結果を表９に示した。
エンバク野生種およびエンバク栽培は、後作バレイショのそうか病発病軽減効果があることが知られているが、これら緑肥単独よりも、ボレリジン産生微生物を組み合わせることにより、高い発病抑制効果が得られることが明らかとなった。
【００７０】
【表９】
2014224102.tif 000013
【００７１】
実施例６（作物との併用による効果）
ストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−１株をバーミキュライト・オートミール培地で培養し、畑土に混合して３Ｌ不織布ポットに詰め（当該菌数は１．４×１０7ＣＦＵ／ｇ乾土）、エンバク野生種（Ａｖｅｎａ  ｓｔｒｉｇｏｓａ）、コムギ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）、バレイショ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、テンサイ（Ｂｅｔａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ）を栽培し、温室（１８℃、明期１４時間／暗期１０時間）で４ヶ月間栽培した。回収した根圏土壌からＤＮＡを抽出し、当該菌のリボソームＲＮＡ遺伝子のＩＴＳ領域をプライマーとした競合的Ｑｐｒｏｂｅ−ＰＣＲ法を行って、当該菌遺伝子のコピー数を定量した。各種作物の栽培期間中に増減した当該菌遺伝子数を表１０に示した。
エンバク野生種（Ａｖｅｎａ  ｓｔｒｉｇｏｓａ）、コムギ、バレイショの根圏土壌では、ＡＲＤＢ−１株の遺伝子数が増加していたことから、これら作物の併用は、接種したボレリジン産生微生物の菌数を増加させ、土壌への定着性を高める効果があることが明らかになった。
【００７２】
【表１０】
2014224102.tif 000014
【００７３】
製造例８（ボレリジンメチルエステルの合成）
ボレリジン５００μg（Ａｌｅｘｉｓ社製，北海道和光純薬販売）にメタノール１０ｍＬを加え、室温で撹拌しながらパラトルエンスルホン酸２０μgを加え、６２−６４℃に加温し、２時間撹拌した。冷却後、ｐＨ８．０とし、水と酢酸エチルを加えて分液した。酢酸エチル相は無水硫酸マグネシウムで脱水、乾燥後、減圧化にて酢酸エチルを留去した。この画分は製造例３と同様の条件でＨＰＬＣに供試し、未反応のボレリジン（保持時間１０〜１２．５分で溶出）と合成されたボレリジンメチルエステル（保持時間１３〜１５．５分で溶出，ピークトップの保持時間１４．１分；紫外部吸光極大２６１ｎｍ）を分取した。ボレリジンメチルエステル画分は減圧乾固した結果、収量は７０μｇであった。
【００７４】
実施例７（ボレリジンエチルエステルの効果の証明）
製造例８によって得られたボレリジンメチルエステル５０μｇをエタノール５００μＬで溶解し、直径８ｍｍの濾紙ディスクに１００μＬ添加し、減圧デシケータ内で乾燥させた（ディスク当たりのボレリジンメチルエステル量は１０μｇとなる）。このディスクを実施例１と同様にデンプン培地上でジャガイモそうか病菌に対する阻止円形成活性を検討した。結果は表１１に示した。
ボレリジンメチルエステルも明確な阻止円を形成することから、ジャガイモそうか病菌の生育抑制作用を有することが明らかとなった。
【００７５】
【表１１】
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【００７６】
実施例８（土壌中からのボレリジン生産菌の選抜法）
エンバクを２回作付し、その後、ソルガム品種「つちたろう」［雪印種苗（株）］を栽培した圃場（宮崎県都城市）から土壌を採取し、２ｍｍ×２ｍｍの篩で植物残渣を除去した。土壌１０ｇを９０ｍＬの滅菌水に懸濁し、２５℃で３０分間振盪した後、段階希釈液を作製した。一方、希釈ＰＴＹＧＡ培地［培地１Ｌ当りにバクトプロテアーゼペプトン（Ｄｉｆｃｏ社製）０．２５ｇ、バクトトリプトン（Ｄｉｆｃｏ社製）０．２５ｇ、酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ社製）０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、硫酸マグネシウム七水和物３０ｍｇ、塩化カルシウム二水和物３.５ｍｇを溶解し、ｐＨ７．０に調整した後、寒天１５ｇを加えてオートクレーブ滅菌したもの］に、エタノールに溶解したボレリジン（５ｍｇ/ｍＬ）を１プレート当たり１００μＬ添加し、素早くコンラージ棒を用いて均一に塗布し、溶液を風乾した。この培地に上記土壌懸濁液を接種し、３０℃で８日間培養後、生育してきたボレリジン耐性放線菌のコロニーを単離した。単離したコロニーについては別途希釈ＰＴＹＧＡ培地に移植し、ジャガイモそうか病菌Ｓ．ｔｕｒｇｉｄｉｓｃａｂｉｅｓ  Ｓｙ９１１３株の懸濁液を噴霧接種し、抗菌性の有無を生育阻止円の形成によって確認した。抗菌性を示した２８株については，製造例４中のオートミール１．０％とした培地で培養し、培養液の上澄を製造例３と同様に粗精製し，ＨＰＬＣによって定量した。その結果、１菌株が２．８５μｇ/Ｌのボレリジンを生産していることが確認された。
以上のことから、ボレリジン添加培地を用いることによって効率よくボレリジン生産菌を選抜することができることが明らかとなった。
【００７７】
実施例９（培養液粗精製物による効果の証明）
帯広川西地区のジャガイモそうか病重度発生土壌を採取し、風乾後、５ｍｍ×５ｍｍの篩で粗大物を除去し、１／２０００ａワグナーポットに充填した。一方で、２つ切りにして浴光催芽してあったバレイショ品種「男爵いも」を植え付け、温室内で栽培した。出芽７日後にはさらに同じ土壌を１０ｃｍの高さで添加した。栽培開始後から２週間に１回の割合で、製造例６の通り調整した培養液粗精製液を２倍希釈したものをポット当たり５００ｍＬ潅注処理し、対照区には水５００ｍＬを潅注した（各２反復）。この処理は計４回行った。ジャガイモそうか病の発生を誘発するために、栽培中の潅水は下位葉がやや萎れたことを確認してから十分潅水するという方法を繰り返した。地上部が枯凋してから塊茎をサンプリングし、ジャガイモそうか病により陥没した病斑をカウントした結果を表１２に示した。
ボレリジンを含有する培養液のＨＰ２０粗精製物のみでも生育中に潅注処理することにより、ジャガイモそうか病を抑制できることが明らかとなった．
【００７８】
【表１２】
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【００７９】
実施例１０（菌体コーティング緑肥種子による効果の証明）
製造例４中のオートミール１．０％とした培地に、あらかじめＴＳＢで前培養したストレプトマイセス  ｓｐ．ＡＲＤＢ−１株を接種し、２７℃、回転数８０ｒｐｍで７日間振盪培養した。培養液を遠心分離し、沈殿した菌体を少量の滅菌水に懸濁した。エンバク野生種（Ａｖｅｎａ  ｓｔｒｉｇｏｓａ）の種子を菌体懸濁液に10分間浸漬した後、陰干しした。実施例５と同様に作製したそうか病人工汚染土壌（そうか病菌はＳ．ｔｕｒｇｉｄｉｓｃａｂｉｅｓ  ＫＨＨ１−１−３株、２．０×１０4ＣＦＵ／ｇ乾土）を３Ｌ不織布ポットに詰め、菌体懸濁液に浸漬したエンバク野生種種子を播種した。対照として、菌体懸濁液に浸漬していないエンバク野生種種子の播種区と、菌体懸濁液を土壌に滴下する区を設けた。各ポットを圃場（宮崎県都城市）に埋め、２ヶ月後にエンバク野生種の根および葉を細断して土壌と混合し、３週間放置した後、全てのポットにバレイショ品種「ニシユタカ」を植え付けた。３ヶ月後に新生塊茎のそうか病発生程度を調査した結果を表１３に示した。
種子に付着する菌体は微量であるが、菌体懸濁液に浸漬したエンバク野生種の種子を用いると、エンバク野生種の種子を用いるよりも高い発病抑制効果が得られることが明らかとなった。
【００８０】
【表１３】
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