【手続補正書】
【提出日】令和3年1月15日(2021.1.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フラタキシン（ＦＸＮ）をコードする改変された核酸であって、これ以外には同一の細胞中で配列番号２の野生型ＦＸＮの核酸配列の発現レベルと比較してより高いレベルで発現され、改変された核酸が配列番号３〜７に記載の配列からなる群から選択される核酸配列を含み、かつ当該改変された核酸が、
（ａ）少なくとも０．７６、少なくとも０．８６、少なくとも０．９５、または少なくとも０．９８のコドン適応指標（ＣＡＩ）、
（ｂ）少なくとも５５％、少なくとも５７％、少なくとも６１％、または少なくとも６９％であるＧＣ含有量、
（ｃ）１４４以下であるＣｐＧジヌクレオチドの数、
からなる群から選択される少なくとも１つの特徴を含む、
改変された核酸。
【請求項２】
ＦＸＮをコードする改変された核酸であって、これ以外には同一の細胞中で配列番号２の野生型ＦＸＮの核酸配列の発現レベルと比較してより高いレベルで発現され、改変された核酸が配列番号５に記載の核酸配列を含み、かつ、当該改変された核酸が少なくとも６１％のＧＣ含有量であり、ＣｐＧジヌクレオチドの数が１１７以下であり、ＣＡＩが少なくとも０．９５である、改変された核酸。
【請求項３】
配列番号４、５または７の核酸配列を含む、請求項１に記載の改変された核酸。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の改変された核酸を含むベクター。
【請求項５】
ベクターが、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターである、請求項４に記載のベクター。
【請求項６】
改変された核酸が、自己相補的である、請求項５に記載のベクター。
【請求項７】
ｒＡＡＶベクターが、ＡＡＶの血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ７４、ＲＨＭ４−１、ＲＨＭ１５−１、ＲＨＭ１５−２、ＲＨＭ１５−３／ＲＨＭ１５−５、ＲＨＭ１５−４、ＲＨＭ１５−６、ＡＡＶ  Ｈｕ．２６、ＡＡＶ１．１、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．３．１、ＡＡＶ９．４５、ＡＡＶ２ｉ８、ＡＡＶ２Ｇ９、ＡＡＶ２ｉ８Ｇ９、ＡＡＶ２−ＴＴ、ＡＡＶ２−ＴＴ−Ｓ３１２Ｎ、ＡＡＶ３Ｂ−Ｓ３１２ＮおよびＡＡＶ−ＬＫ０３のキャプシドからなる群から選択されるキャプシドをさらに含む、請求項６に記載のベクター。
【請求項８】
キャプシドが、ＡＡＶの血清型ＡＡＶ２ｉ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ−ＬＫ０３およびＡＡＶ２−ＴＴ−Ｓ３１２Ｎのキャプシドからなる群から選択される、請求項７に記載のベクター。
【請求項９】
改変された核酸が、少なくとも１つの組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）の末端反復配列、エンハンサー、プロモーター、コラーゲン安定化配列（ＣＳＳ）、終止コドン、およびポリ−アデニル化（ポリＡ）シグナル配列からなる群から選択される少なくとも１つのエレメントをさらに含む、請求項７または８に記載のベクター。
【請求項１０】
ベクターが、２つのＡＡＶの末端反復配列、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリベータアクチン（ＣＢｈ）プロモーターをコードする配列、およびウシ成長ホルモンのポリ−アデニル化シグナル配列（ｂＧＨポリＡ）を含む、請求項９に記載のベクター。
【請求項１１】
５’から３’に、
（ａ）ＡＡＶ２の末端反復、
（ｂ）配列番号２６の核酸配列を含むＣＢｈプロモーター、
（ｃ）配列番号３〜７に記載の配列からなる群から選択される核酸配列を含む、ＦＸＮをコードする請求項１に記載の改変された核酸、
（ｄ）配列番号２７の核酸配列を含むｂＧＨポリＡシグナル配列、および
（ｅ）ＡＡＶ２の末端反復
を含む核酸を含む、請求項９に記載のベクター。
【請求項１２】
キャプシドが、ＡＡＶの血清型ＡＡＶ２ｉ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ−ＬＫ０３およびＡＡＶ２−ＴＴ−Ｓ３１２Ｎのキャプシドからなる群から選択される、請求項１１に記載のベクター。
【請求項１３】
ＶＰ１が配列番号２９のアミノ酸配列を含むＡＡＶ２−ＴＴ−Ｓ３１２Ｎのキャプシドをさらに含み、５’から３’に、
（ａ）ＡＡＶ２の末端反復、
（ｂ）配列番号２６の核酸配列を含むＣＢｈプロモーター、
（ｃ）配列番号３〜７に記載の配列からなる群から選択される核酸配列を含む、ＦＸＮをコードする改変された核酸、
（ｄ）配列番号２７の核酸配列を含むｂＧＨポリＡシグナル配列、および
（ｅ）ＡＡＶ２の末端反復
を含む、請求項１２に記載のベクター。
【請求項１４】
ＶＰ１が配列番号３３のアミノ酸配列を含むＡＡＶ２−ＴＴ−Ｓ３１２Ｎのキャプシドをさらに含み、５’から３’に、
（ａ）ＡＡＶ２の末端反復、
（ｂ）配列番号２６の核酸配列を含むＣＢｈプロモーター、
（ｃ）配列番号３〜７に記載の配列からなる群から選択される核酸配列を含む、ＦＸＮをコードする改変された核酸、
（ｄ）配列番号２７の核酸配列を含むｂＧＨポリＡシグナル配列、および
（ｅ）ＡＡＶ２の末端反復
を含む、請求項１２に記載のベクター。
【請求項１５】
ベクターがＡＡＶ９のキャプシドを含み、５’から３’に、
（ａ）ＡＡＶ２の末端反復、
（ｂ）配列番号２６の核酸配列を含むＣＢｈプロモーター、
（ｃ）配列番号３〜７に記載の配列からなる群から選択される核酸配列を含む、ＦＸＮをコードする改変された核酸、
（ｄ）配列番号２７の核酸配列を含むｂＧＨポリＡシグナル配列、および
（ｅ）ＡＡＶ２の末端反復
を含む、請求項１２に記載のベクター。
【請求項１６】
ベクターがＡＡＶ−ＬＫ０３のキャプシドを含み、５’から３’に、
（ａ）ＡＡＶ２の末端反復、
（ｂ）配列番号２６の核酸配列を含むＣＢｈプロモーター、
（ｃ）配列番号３〜７に記載の配列からなる群から選択される核酸配列を含む、ＦＸＮをコードする改変された核酸、
（ｄ）配列番号２７の核酸配列を含むｂＧＨポリＡシグナル配列、および
（ｅ）ＡＡＶ２の末端反復
を含む、請求項１２に記載のベクター。
【請求項１７】
ＦＸＮをコードする配列の直後に配列番号２５の核酸配列を含むＣＳＳを含む、請求項１１〜１６のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項１８】
フリードライヒ運動失調症（ＦＲＤＡ）の治療を、それを必要とする患者において行うために使用する請求項１１〜１７のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項１９】
フリードライヒ運動失調症（ＦＲＤＡ）の治療を、それを必要とする患者において行うためのｒＡＡＶベクターであって、ＦＸＮをコードする請求項１に記載の改変された核酸を含む、ｒＡＡＶベクター。
【請求項２０】
請求項４〜１７のいずれか一項に記載のベクターまたは請求項１９に記載のｒＡＡＶベクターを含む医薬組成物。
【請求項２１】
請求項４〜１７のいずれか一項に記載のベクターまたは請求項１９に記載のｒＡＡＶベクターを含む、ＦＲＤＡ治療剤。
【請求項２２】
前記ｒＡＡＶベクターが、全身に、心臓への直接的な投与により、または頭蓋内への投与により投与される、請求項２１に記載の治療剤。
【請求項２３】
ｒＡＡＶベクターが頭蓋内に投与される、請求項２２に記載の治療剤。
【請求項２４】
ｒＡＡＶベクターが心臓内に直接投与される、請求項２２に記載の治療剤。
【請求項２５】
全身投与が静脈内投与である、請求項２２に記載の治療剤。
【請求項２６】
請求項４〜１７のいずれか一項に記載のベクターまたは請求項１９に記載のｒＡＡＶベクターを含む、ＦＸＮのレベルの減少により媒介される疾患、障害または状態の治療剤。
【請求項２７】
ＦＸＮをコードする請求項１〜３のいずれか一項に記載の改変された核酸を含む宿主細胞であって、請求項４〜１７のいずれか一項に記載のベクターまたは請求項１９に記載のｒＡＡＶベクターを含む、宿主細胞。
【請求項２８】
ＶＥＲＯ、ＷＩ３８、ＭＲＣ５、Ａ５４９、ＨＥＫ２９３細胞、Ｂ−５０またはＢ−５０以外のＨｅＬａ細胞、ＨｅｐＧ２、Ｓａｏｓ−２、ＨｕＨ７およびＨＴ１０８０からなる群から選択される、請求項２７に記載の宿主細胞。
【請求項２９】
懸濁培養物中で増殖するように適合させたＨＥＫ２９３細胞である、請求項２８に記載の宿主細胞。
【請求項３０】
ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ１３２７４を有するＨＥＫ２９３細胞である、請求項２９に記載の宿主細胞。
【請求項３１】
複製（Ｒｅｐ）タンパク質、キャプシド（Ｃａｐ）タンパク質、アデノウイルス初期領域１ａ（Ｅ１ａ）タンパク質、Ｅ１ｂタンパク質、Ｅ２ａタンパク質、Ｅ４タンパク質からなる群から選択される少なくとも１つのタンパク質、およびウイルス関連（ＶＡ）  ＲＮＡをコードする少なくとも１つの核酸を含む、請求項３０に記載の宿主細胞。
【請求項３２】
細胞中のＦＸＮのレベルの増加に使用するための、ＦＸＮをコードする請求項１〜３のいずれか一項に記載の改変された核酸。
【請求項３３】
対象におけるＦＲＤＡの治療に使用するための、請求項１９に記載のｒＡＡＶベクター。
【請求項３４】
対象におけるＦＲＤＡの治療薬を製造するための、請求項４〜１７のいずれか一項に記載のベクターまたは請求項１９に記載のｒＡＡＶベクターの使用。
【請求項３５】
対象におけるＦＲＤＡの治療薬を製造するための、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＦＸＮをコードする改変された核酸の使用。