(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アクリジニウム−９−カルボン酸エステルもしくはアクリジニウム−９−カルボン酸アミドで標識された抗原または抗体を含む水性溶液中にα−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、メチル−シクロデキストリン、ジメチル−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリンおよびそれらを重合させたポリマーからなる群から選ばれる少なくとも１種を存在させることを特徴とする標識された抗原または抗体の安定化法。
【請求項２】
アクリジニウム−９−カルボン酸エステルもしくはアクリジニウム−９−カルボン酸アミドで標識された抗原がβ２ミクログロブリンである請求項１記載の安定化法。
【請求項３】
アクリジニウム−９−カルボン酸エステルもしくはアクリジニウム−９−カルボン酸アミドで標識された抗体が抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体である請求項１記載の安定化法。
【請求項４】
アクリジニウム−９−カルボン酸エステルが４−（２−スクシンイミジルオキシカルボニルエチル）フェニル  １０−メチルアクリジニウム−９−カルボキシレート  フルオロスルホネート、５−（２−スクシンイミジルオキシカルボニルエチル−２，２−ジメチルカルボヒドラジニウム）−９−メチルアクリジニウムフルオロスルホネートもしくは２’，６’−ジメチル−４’−（Ｎ−スクシンイミジルオキシカルボニル）フェニル  １０−メチルアクリジニウム−９−カルボキシレートメソスルフェートであるか、またはアクリジニウム−９−カルボン酸アミドがＮ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（スクシンイミジルオキシカルボニルメチル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドテトラフルオボレート、Ｎ−フェニル−Ｎ−（４−スクシンイミジルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドフルオロスルホネート、Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（４−スクシンイミジルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドフルオロスルホネートもしくはＮ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（３−スクシンイミジルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドフルオロスルホネートである請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
アクリジニウム−９−カルボン酸エステルもしくはアクリジニウム−９−カルボン酸アミドで標識された抗原または抗体およびα−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、メチル−シクロデキストリン、ジメチル−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリンおよびそれらを重合させたポリマーからなる群から選ばれる少なくとも１種を含有してなる標識抗原または標識抗体試薬。
【請求項６】
アクリジニウム−９−カルボン酸エステルもしくはアクリジニウム−９−カルボン酸アミドで標識された抗原がβ２ミクログロブリンである請求項５記載の標識抗原試薬。
【請求項７】
アクリジニウム−９−カルボン酸エステルもしくはアクリジニウム−９−カルボン酸アミドで標識された抗体が抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体である請求項５記載の標識抗体試薬。
【請求項８】
アクリジニウム−９−カルボン酸エステルが４−（２−スクシンイミジルオキシカルボニルエチル）フェニル  １０−メチルアクリジニウム−９−カルボキシレート  フルオロスルホネート、５−（２−スクシンイミジルオキシカルボニルエチル−２，２−ジメチルカルボヒドラジニウム）−９−メチルアクリジニウムフルオロスルホネートもしくは２’，６’−ジメチル−４’−（Ｎ−スクシンイミジルオキシカルボニル）フェニル  １０−メチルアクリジニウム−９−カルボキシレートメソスルフェートであるか、またはアクリジニウム−９−カルボン酸アミドがＮ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（スクシンイミジルオキシカルボニルメチル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドテトラフルオボレート、Ｎ−フェニル−Ｎ−（４−スクシンイミジルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドフルオロスルホネート、Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（４−スクシンイミジルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドフルオロスルホネートもしくはＮ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（３−スクシンイミジルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドフルオロスルホネートである請求項５〜７のいずれか１項に記載の標識抗体試薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は化学発光物質であるアクリジニウム誘導体で標識された抗原または抗体（以下、標識体という）の安定化法に関する。水溶液中での標識体の安定性を高めることにより免疫測定に有効に利用できる。
【０００２】
【従来の技術】
化学発光を用いる免疫測定法の一つとして発光物質を直接抗体や抗原に標識する方法があり、標識する発光物質としてはアクリジニウム化合物の９位カルボン酸をエステルあるいはアミドなどとしたアクリジニウム誘導体が知られている。アクリジニウム誘導体は、ＧＢ−Ｂ−２００８２４７に開示され、現在代表的な発光物質となっている。アクリジニウム誘導体は過酸化水素とアルカリからなる発光補助剤で発光し、２秒以内に発光が終了するため、検出反応が短時間で行えるという特徴を有している。この発光量は免疫測定試薬として用いるには十分であるが、アクリジニウム誘導体は水溶液で保存すると分解しやすく発光量が低下するという問題がある。特開昭６３−１０１３６８にはアクリジニウムフェニルエステル誘導体のフェニル環のオルト位をメチルで置換した、アクリジニウムジメチルフェニルエステルなどの誘導体とすることにより、ｐＨ７．４の緩衝液において保存安定性が改善されることが開示されている。また、特開昭６３−５７５７２にはアクリジニウムアシルスルホンアミド誘導体も安定性が高いことが開示されている。
【０００３】
アクリジニウムエステルの発光に関しては、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムクロライドやシクロデキストリンがアクリジニウムエステルの発光を高めることが知られている〔Biolumin. Chemilumin., Proc. Int. Biolumin. Chemilumin. Symp., 415-18 (1987)〕が、アクリジニウム誘導体の保存安定化に及ぼすシクロデキストリンの影響については知られていない。
【０００４】
アクリジニウム誘導体を標識物質とした測定用試薬の場合、試料中の測定対象の濃度を算出するには標準曲線が必要となる。この標準曲線は標識物質が不安定な試薬の場合、測定毎に設定する必要がある。たとえば、標識物質として２’，６’−ジメチル−４’−（Ｎ−スクシンイミジルオキシカルボニル）フェニル  １０−メチルアクリジニウム−９−カルボキシレートメソスルフェート（以下、ＤＭＡＥという）を用いたマジックライト試薬（チバコーニング社製）では、予め設定された標準曲線を二点の較正剤で補正し濃度を算出する。１回の補正により、長期間安定した結果を得るためには、その間測定値がほとんど変化しないことが必要となる。現在、一回補正した後の１０℃以下での保存では７日から２８日程度の無補正が可能となっているが、より安定化された試薬の開発が望まれている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
前記のように安定化を目指した標識体が種々開発されているが、水性溶液中での安定性は不十分で、発光量も低下する。
本発明の目的は、標識体の水性溶液中での安定性を高め、発光性能を保持できるようにすることである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明は、アクリジニウム誘導体で標識された抗原または抗体（標識体）を含む水性溶液中にシクロデキストリン類を存在させることを特徴とする標識された抗原または抗体の安定化法に関する。また本発明によれば、標識体およびシクロデキストリン類を含有してなる免疫測定用試薬を提供することができる。
【０００７】
以下に本発明を詳細に説明する。
アクリジニウム誘導体としては、アクリジニウム化合物の９位カルボン酸をエステルあるいはアミドとしたアクリジニウム−９−カルボン酸エステル誘導体あるいはアクリジニウム−９−カルボン酸アミド誘導体などがあげられる。アクリジニウム−９−カルボン酸エステル誘導体としては、たとえば４−（２−スクシンイミジルオキシカルボニルエチル）フェニル  １０−メチルアクリジニウム−９−カルボキシレート  フルオロスルホネート（Dojin news No.42；Acridinium-I，以下、Ａ−Ｉという）、５−（２−スクシンイミジルオキシカルボニルエチル−２，２−ジメチルカルボヒドラジニウム）−９−メチルアクリジニウムフルオロスルホネート（以下、Ａ−ＭＸという）およびＤＭＡＥなどをあげることができる。アクリジニウム−９−カルボン酸アミド誘導体としては、たとえばＮ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（スクシンイミジルオキシカルボニルメチル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドテトラフルオボレート、Ｎ−フェニル−Ｎ−（４−スクシンイミジルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）−10−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドフルオロスルホネート、Ｎ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（４−スクシンイミジルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドフルオロスルホネートおよびＮ−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−（３−スクシンイミジルオキシカルボニルベンゼンスルホニル）−１０−メチルアクリジニウム−９−カルボン酸アミドフルオロスルホネートなどをあげることができる。
【０００８】
抗原もしくは抗体としては、β2 ミクログロブリン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、免疫グロブリン（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ）、補体  （Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ１ｑ）、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）、α1 −アンチトリプシン、α1 −マイクログロブリン、ハプトグロブリン、トランスフェリン、セルロプラスミン、フェリチン、アルブミン、ヘモグロビンＡ1 、ヘモグロビンＡ1C、ミオグロビン、ミオシン、デュパン−２、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、組織ポリペプチド抗原（ＴＰＡ）、アポリポ蛋白Ａ1 、アポリポ蛋白Ｅ、リウマチ因子、抗ストレプトリジンＯ（ＡＳＯ）、フィブリン分解産物（ＦＤＰ）、フィブリン分解産物Ｄ分画（ＦＤＰ−Ｄ）、フィブリン分解産物Ｄ−Ｄ分画（ＦＤＰ−ＤＤｉｍｅｒ）、フィブリン分解産物Ｅ分画（ＦＤＰ−Ｅ）、アンチトロンビン−III （ＡＴ−III)等の蛋白質、アミラーゼ、前立腺由来酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、神経特異エノラーゼ（ＮＳＥ）、フィブリノーゲン、エラスターゼ、プラスミノーゲン、クレアチンキナーゼ心筋型（ＣＫ−ＭＢ）等の酵素、インシュリン、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、3,5,3'−トリヨードサイロニン（Ｔ3 ）、サイロキシン（Ｔ4 ）、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、成長ホルモン（ＧＨ）、黄体化ホルモン（ＬＨ）等のホルモン、Ｂ型肝炎ウイルス関連抗体、Ｂ型肝炎ウイルス関連抗原、Ｃ型肝炎ウイルス抗体、ＨＴＬＶ（成人Ｔ細胞白血病ウイルス）抗体、ＨＩＶ（エイズウイルス）抗体、クラミジア抗体、梅毒の抗体、トキソプラズマ抗体等各種感染症の原因ウイルスに対する抗体などがあげられる。
【０００９】
シクロデキストリン類としては、グルコース残基数６、７、８の環状デキストリンであるα−、β−、γ−シクロデキストリンまたはメチル−シクロデキストリン、ジメチル−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリンなどの誘導体、またはこれらを架橋剤により重合させたポリマーなどをあげることができる。とくにヒドロキシプロピル−シクロデキストリンが好ましい。
【００１０】
水性溶液中の標識体を安定に保存するためのシクロデキストリン類の濃度は、シクロデキストリン類の溶解度がその種類によって異なるため、有効濃度がその種類により異なる。一般的には有効濃度は１〜１５００ｍｇ／ｍｌである。好ましくは、たとえばα−シクロデキストリンでは１０〜１５０ｍｇ／ｍｌ、β−シクロデキストリンでは１〜２０ｍｇ／ｍｌ、γ−シクロデキストリンでは１０〜２５０ｍｇ／ｍｌ、ジメチル−β−シクロデキストリンは１０〜６００ｍｇ／ｍｌ、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリンでは１０〜１５００ｍｇ／ｍｌである。さらに好ましくは、α−シクロデキストリンでは５０〜１４５ｍｇ／ｍｌ、β−シクロデキストリンでは１０〜１８．５ｍｇ／ｍｌ、γ−シクロデキストリンでは５０〜２３２ｍｇ／ｍｌ、ジメチル−β−シクロデキストリンは１００〜５７０ｍｇ／ｍｌ、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリンでは１００〜１２００ｍｇ／ｍｌである。
【００１１】
水性溶液としては、水や１０〜２００ｍＭのリン酸、ピロリン酸、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、グリシン、クエン酸、グッドの緩衝液などの緩衝液類があげられ、そのｐＨは５〜９の範囲で使用できるが、６〜８が望ましい。塩化ナトリウムなどの塩類の添加は抗原抗体反応性に影響しない範囲であれば可能であるが１Ｍ以下が好ましい。
【００１２】
また、水溶液中には免疫測定のために必要な物質、たとえばアジ化ナトリウムなどの防腐剤、Ｔｗｅｅｎ２０などの界面活性剤や非特異反応抑制剤としてウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ゼラチン、乳清（ホエー）由来蛋白などを含有してもよい。
標識体を前記したような水性溶液中で、シクロデキストリン類と共に、必要により防腐剤、界面活性剤、非特異反応抑制剤の共存下、溶解し、溶液状に調製しておくことにより、室温下においても７〜２８日程度、アクリジニウム誘導体の発光性能を安定に保持することができる。このようにして得られる水性溶液は、標識抗原試薬や標識抗体試薬として通常の免疫測定法に用いることができる。
【００１３】
測定用試薬は、たとえば試薬１ｍｌ中、標識体  １〜４μｇ／ｍｌ、シクロデキストリン類  ４０〜６０ｍｇ／ｍｌおよびリン酸１ナトリウム（２水塩）  １０〜２０ｍｇ／ｍｌ、さらに必要に応じて塩化ナトリウムなどの塩類  ５〜１０ｍｇ／ｍｌ、アジ化ナトリウムなどの防腐剤  ０．１〜３ｍｇ／ｍｌ、ＢＳＡなどの非特異反応抑制剤  １０〜３０ｍｇ／ｍｌ、Ｔｗｅｅｎ２０などの界面活性剤０．５〜５ｍｇ／ｍｌなどを含有し、上記調製法に従い製造される。
【００１４】
測定は、試料中の抗原もしくは抗体（被検体）と該抗原もしくは該抗体と反応製を有する標識体とを反応させ、得られる抗原抗体反応物中の標識体の量を発光光度計を用いた発光光度測定法などにより行えばよい。
被検体に対応する抗体は、試料中の抗原に対するポリクローナル抗体、試料中の抗原に対するモノクローナル抗体など通常抗原に対して反応し得る抗体があげられる〔「単クーロン抗体実験マニュアル」，富山朔二ら編、講談社サイエンティフィック刊，１９８７年：新生化学実験講座  第１２巻，「分子免疫学 III  抗原、抗体、補体」，日本生化学会編，東京化学同人社刊，１９９２年〕。該抗体は複数の抗体からなるものでもよく、抗体を限定分解したもの、蛋白修飾したものでもよい。
【００１５】
被検体に対応する抗原は、天然の抗原の抗体結合部位でもよく、遺伝子操作等により人工的に作成されたものでもよい。例えば、被測定抗体が各種感染症の原因ウイルスに対する抗体である場合、被測定抗体に対する抗原は上述の感染症のウイルスのマーカー蛋白質等を用いることができる。該抗原は複数の抗原分子からなるものでもよく、抗原分子を限定分解したもの、蛋白修飾したものでもよい。  以下に本発明の実施例および参考例を示す。
【００１６】
【実施例】
次に実施例を用いて本発明を説明する。
【００１７】
実施例１．β2 ミクログロブリンの測定用標識体の安定化
（１）抗ヒトβ2 ミクログロブリン抗体固定化磁性粒子の調製
磁性粒子として、ダイナビーズ  Ｍ２８０（日本ダイナル社製）を使用し、抗体を固定化した磁性粒子を調製した。すなわち、ｐＨ９．５、０．５Ｍ  ホウ酸緩衝液に溶解した１５０μｇ／ｍｌの抗ヒトβ2 ミクログロブリン抗体溶液を３０ｍｇ／ｍｌのダイナビーズに等量添加し一晩放置した。磁石で粒子を集め、上清を吸引除去後、０．１％  ＢＳＡ、０．１％  アジ化ナトリウムを含む５０ｍＭ  リン酸緩衝液（ｐＨ８．０）（ＢＳＡ／ＰＢＳ）を５００μｌ加え、ブロッキングした。使用時までこのまま保存した。
【００１８】
（２）β2 ミクログロブリン抗原とＡ−Ｉとの反応による標識抗原の調製
Ａ−Ｉを化学発光物質として用い、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド化アクリジニウムエステルと抗体とを反応させるIan Weeks らの方法（CLIN.CHEM.29/8,1474-1479(1983)）に従い、β2 ミクログロブリン抗原に標識した。
すなわち、０．５ｍＭのＡ−Ｉのジメチルホルムアミド溶液１０μｌに５０μｇのβ2 ミクログロブリンを溶解したｐＨ８．０、０．１Ｍリン酸緩衝液３００μｌを添加し、１０分間標識化反応したのち、１０g/l のリジン塩酸塩溶液１００μｌを加えて反応を停止した。セファデックス  Ｇ−５０カラム（８０×６ｍｍ、ファルマシア社）で未反応のＡ−Ｉを除去し、標識抗原を得た。
【００１９】
（３）標識溶液の調製
０．５％牛アルブミンおよび０．１５Ｍ塩化ナトリウムを含むｐＨ７．０、２５ｍＭリン酸緩衝液に防腐剤として０．１％アジ化ナトリウムを添加して得られたものを対照希釈液とした。
この対象希釈液に下記第１表中に記載の７種のシクロデキストリン類を各１０ｍｇ／ｍｌで溶解し、評価標識希釈液とした。対象希釈液および得られた７種の評価標識希釈液で、上記（２）で得られた標識抗原を抗原濃度１００〜２００ｎｇ／ｍｌになるように希釈し、８種の標識溶液とした。このときのアクリニジウム誘導体の濃度は５〜１０ｎｇ／ｍｌである。
【００２０】
（４）標識体の安定性に及ぼすシクロデキストリン類の効果
（３）で得られた８種の標識溶液を３０℃に保存し、経時的に抗原抗体反応を行い、反応前の発光量（以下、発光カウントという）および反応後の発光量（以下、反応カウントという）を測定した。
発光量は試料０．０２５ｍｌに０．１％過酸化水素を含む０．１規定硝酸の第一試薬を０．３ｍｌ加え、次いで界面活性剤（０．５％塩化セチルピリジニウム）を含む０．１５規定水酸化ナトリウムの第二試薬を０．３ｍｌ加え、２秒間で得られる発光量をケミルミアナライザーＩ型（チバコーニング社製）で測定した。
【００２１】
なお、抗原抗体反応は（１）で調製した磁性粒子を１００μｇ／ｍｌになるようにＢＳＡ／ＰＢＳ中に分散し、その５００μｌをチューブに採取し、１０００ｎｇ／ｍｌのβ2 ミクログロブリン抗原を含む標準試料５０μｌを加え、（３）で得られた標識溶液１００μｌと混合して１時間放置し反応させた。磁性粒子を分離、洗浄後、蒸留水１００μｌ中に分散し、発光量の測定に供した。
【００２２】
結果を第１表、図１および第２表に示した。表中、発光性能は初日の発光カウントを、反応性能は初日の反応カウントをそれぞれ１００としたときの比率として表示した。発光性能は標識体の安定性を、反応性能は標識体と抗原とが結合した状態での安定性をそれぞれ評価する。
表および図より明らかなように、シクロデキストリン（ＣＤ）類無添加に比べて、いずれの場合もシクロデキストリン類添加により安定性の向上が認められた。
【００２３】
【表１】
0003708140.tif 000002
【００２４】
【表２】
0003708140.tif 000003
【００２５】
（５）標識体の安定性に及ぼすシクロデキストリン濃度の影響
（１）〜（４）と同様の方法により、対照希釈液にヒドロキシプロピル−シクロデキストリン類を各々１０、５０、１００ｍｇ／ｍｌの濃度で添加し、安定性を試験した。第３表のように発光性能は濃度依存性を示し、ヒドロキシプロピルγシクロデキストリン（ＨＰ−γＣＤ）は１００ｍｇ／ｍｌ添加すると３０℃２８日でも発光性能は１００％維持していた。
【００２６】
【表３】
0003708140.tif 000004
【００２７】
実施例２．癌胎児性抗原（ＣＥＡ）測定用標識体の安定性
標識される対象を実施例１の抗原に代えて、抗体をアクリジニウム誘導体で標識した場合の安定性について検討した。
（１）抗ＣＥＡ抗体固定化磁性粒子の調製
抗体は標識に使用した抗体とは反応性の異なる抗ＣＥＡモノクローナル抗体を使用した。すなわち、ｐＨ９．５，０．５Ｍ  ホウ酸緩衝液に溶解した１５０μｇ／ｍｌの抗体溶液を３０ｍｇ／ｍｌのダイナビーズに等量添加し一晩放置した。磁石で粒子を集め、上清を吸引除去後、０．１％  ＢＳＡ、０．１％  アジ化ナトリウムを含むリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）（ＢＳＡ／ＰＢＳ）を５００μｌ加え、ブロッキングした。使用時までこのまま保存した。
【００２８】
（２）抗ＣＥＡ抗体とＤＭＡＥとの反応による標識体の調製
実施例１と同様にして抗体ＣＥＡマウスモノクローナル抗体に標識した。すなわち、０．５ｍＭのＤＭＡＥのジメチルホルムアミド溶液１０μｌに５０μｇの抗ＣＥＡマウスモノクローナル抗体を溶解したｐＨ８．０、０．１Ｍリン酸緩衝液３００μｌを添加し、１０分間標識化反応したのち、１０g/l のリジン塩酸塩溶液１００μｌを加えて反応を停止した。セファデックス  Ｇ−５０カラム（８０×６ｍｍ、ファルマシア社）で未反応のＤＭＡＥを除去し、標識抗体を得た。
【００２９】
（３）標識溶液の調整
実施例１（３）で得られた対象希釈液に１００ｎｇ／ｍｌの濃度でヒドロキシプロピルγＣＤを添加し、評価標識希釈液とした。対象希釈液および評価標識希釈液で（２）で得られた標識抗体を抗体濃度１．５〜３μｇ／ｍｌになるように希釈し、標識溶液とした。このときのアクリジニウム誘導体の濃度は５〜１０ｎｇ／ｍｌである。
【００３０】
（４）標識体の安定性に及ぼすヒドロキシプロピルγＣＤの効果
（３）で得られた標識溶液を３０℃に保存し、経時的に抗原抗体反応を行い、発光カウントおよび反応カウントを測定した。
１０００ｎｇ／ｍｌのβ2 ミクログロブリン抗原を用いる代わりに１００ｎｇ／ｍｌのＣＥＡ抗原を用いる以外は実施例１（４）に記載の抗原抗体反応を行った。結果を第４表に示す。抗原に標識した実施例１と同様に、シクロデキストリン類無添加に比べて、いずれの場合もシクロデキストリン類添加により安定性の向上が認められた。
【００３１】
【表４】
0003708140.tif 000005
【００３２】
実施例３．標識抗体試薬（剤形：溶液）
0003708140.tif 000006
【００３３】
参考例  アクリジニウム誘導体の安定性
ＤＭＡＥ、Ａ−Ｉ、Ａ−ＭＸをそれぞれ０．１ｍｇ／ｍｌになるようにジメチルホルムアミドに溶解した。さらに、０．１％  ＢＳＡ含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）および下記第５表記載のＣＤを含む緩衝液で１μｇ／ｍｌに希釈した。得られた希釈液を２５μｌ試験管に採り、ケミルミ試薬で発光させ、初日の発光カウントを測定した。別にさきの希釈液を４０℃恒温庫に密閉して保存した。６日後、２５μｌを同様に発光させ、発光カウントを測定し、初日に得た発光カウントを除して残存率を算出した。結果を第５表に示す。
【００３４】
【表５】
0003708140.tif 000007
【００３５】
【発明の効果】
本発明により、アクリジニウム誘導体で標識された抗原または抗体の水溶液中での安定性をたかめることにより、アクリジニウム誘導体の発光性能を維持した標識溶液を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  発光性能に及ぼすシクロデキストリン類の効果を表した図である。
【図１】
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