(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
天然型ヒトインターフェロン−αを有効成分とするネコの呼吸器疾患治療剤。
【請求項２】
天然型ヒトインターフェロン−αがヒトリンパ芽球様細胞株の産生する天然型ヒトインターフェロン−αである請求項１に記載のネコの呼吸器疾患治療剤。
【請求項３】
ヒトリンパ芽球様細胞株がＢＡＬＬ−１細胞であることを特徴とする請求項２に記載のネコの呼吸器疾患治療剤。
【請求項４】
天然型ヒトインターフェロン−αが、投与されるネコの体重１ｋｇ当たり０．００５乃至５，０００国際単位含有せしめられている請求項１、２又は３に記載のネコの呼吸器疾患治療剤。
【請求項５】
投薬形態が経口投与形態または非経口投与形態である請求項１、２、３又は４に記載のネコの呼吸器疾患治療剤。
【請求項６】
天然型ヒトインターフェロン−αをネコ体重１ｋｇ当たり０．００５乃至５，０００国際単位／回投与することを特徴とするネコの呼吸器疾患治療方法。
【請求項７】
天然型ヒトインターフェロン−αがヒトリンパ芽球様細胞株の産生する天然型ヒトインターフェロン−αであることを特徴とする請求項６に記載のネコの呼吸器疾患治療方法。
【請求項８】
ヒトリンパ芽球様細胞株がＢＡＬＬ−１細胞であることを特徴とする請求項７に記載のネコの呼吸器疾患治療方法。
【請求項９】
投与形態が経口投与形態または非経口投与形態である請求項６、７又は８に記載のネコの呼吸器疾患治療方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
この発明は、ネコを対象とする動物医薬、とりわけ、ヒトインターフェロン（以下、「ＨｕＩＦＮ」と略記することがある。）を有効成分とするネコの呼吸器疾患治療剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
近年、生活が豊かになるに伴い、心の豊さを愛玩動物に求める人が増えている。愛玩動物の中でも、とりわけ、ネコは、古来より、イヌと並んで最も人気のある愛玩動物であり、長年に亙る品種改良により多種多様な品種が作出され、現在では驚くほど高価な品種も出現するようになった。前述のような昨今の傾向から、家庭で飼育されるネコの数も驚異的に増加し、それに伴なって、動物病院に持ち込まれるネコの数が急増している。
【０００３】
動物病院で取り扱われるネコは、外傷や骨折などにより外科的治療を必要とするものを除けば、さまざまな感染症、とりわけ、ネコの呼吸器疾患、いわゆる「ネコ風邪」に罹患して持ち込まれるケースが多発している。ネコ風邪の主因は気道感染ウイルスと考えられており、ネコがこれに感染すると、多くの場合、咳、鼻水、流涎、発熱、上部気道炎、肺炎、口内炎、舌炎、結膜炎、顆粒性腺炎、舌部潰瘍、鼻端部潰瘍、全身性皮膚潰瘍、鼻甲介部潰瘍、下痢、嘔吐、食欲減退、活動性減退などの感冒様症状をきたす。殊に、患畜がネコ免疫不全ウイルス（以下、「ＦＩＶ」と略記することがある。）に感染していると、これら諸症状が一段と顕著になり、急速に衰弱する。現在、ネコの呼吸器疾患も含めて、ネコのウイルス疾患にはこれといった治療法が無く、呼吸器疾患の場合も、脱水症状を和らげ、体力を回復させるために補液による栄養療法を施したり、複合感染や二次感染をしないように抗生物質を投与したり、或は、単に粘性分泌物を取り除いてやるだけといったような、専ら対症療法的な治療しか行なわれていないのが実状である。
【０００４】
最近、数百万国際単位程度の遺伝子組換型ネコインターフェロンを静脈内投与してネコの呼吸器疾患を治療する試みが為され、ある程度の有効性が認められたことが、内野富弥等、『小動物臨床』、第１１巻、第６号、第１１〜２５頁（１９９２年）によって報告された。しかしながら、この方法を効果的に実施しようとすると、患畜に大量のネコインターフェロンを投与しなければならず、飼主の経済的負担が甚だ大きくなる。すなわち、遺伝子組換型であっても、インターフェロンを始めとする生理活性ポリペプチドは一般に非常に高価なのが現状であり、大量のネコインターフェロンを長期連用するとなると、飼主の経済的負担が大きくなるのは避けられない。また、一般に、ネコは神経質で警戒心が強く、取扱いが難しいことから、実際に治療を担当する獣医師の立場からも、静脈以外に投与して著効の得られる方法が望ましい。
【０００５】
このようなことから、ネコの呼吸器疾患を簡便且つ効果的に治療でき、飼主の経済的負担も少ない方法の開発が希求されている。
【０００６】
【発明により解決すべき課題】
このような状況に鑑み、この発明の目的とするところは、静脈以外の経路より投与しても著効を示し、治療担当者の労力・負担や飼主の経済的負担が少なくて済むネコの呼吸器疾患治療剤を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
このような課題を解決すべく、本発明者等が鋭意研究したところ、ＨｕＩＦＮは、小用量でネコの呼吸器疾患に伴なう咳、鼻水、流涎、発熱、上部気道炎、肺炎、口内炎、舌炎、結膜炎、顆粒性腺炎、舌部潰瘍、鼻端部潰瘍、全身性皮膚潰瘍、鼻甲介部潰瘍、下痢、嘔吐、食欲減退、活動性減退などの一般臨床症状の改善に著効を発揮することを見出した。しかも、その投与経路は静脈内投与に限定されず、静脈以外の経路より非経口的に投与したり、経口的に投与することもできる。
【０００８】
すなわち、この発明は、ＨｕＩＦＮを有効成分とするネコの呼吸器疾患治療剤を要旨とするものである。
【０００９】
インターフェロンは、もともと抗ウイルス作用のある物質として見出されたものではあるが、種特異性が高く、ある動物を治療するには、同じ種の動物に由来するインターフェロンでなければ効果が無いと言われてきた。したがって、ヒト由来のインターフェロンがネコの呼吸器疾患の治療に効果のあること自体、全く意外なことであった。
【００１０】
【発明の作用】
この発明の治療剤は、呼吸器疾患に罹患したネコに投与すると、有効成分たるＨｕＩＦＮが効果的に作用し、ネコの呼吸器疾患に伴なう咳、鼻水、流涎、発熱、上部気道炎、肺炎、口内炎、舌炎、結膜炎、顆粒性腺炎、舌部潰瘍、鼻端部潰瘍、全身性皮膚潰瘍、鼻甲介部潰瘍、下痢、嘔吐、食欲減退、活動性減退などの一般臨床症状を改善する。
【００１１】
ＨｕＩＦＮは、ネコの呼吸器疾患に対する治療効果が高く、通常、ネコ体重ｋｇ当たり約０．００５乃至５，０００国際単位と極めて小用量で事足りる。
【００１２】
ＨｕＩＦＮは、静脈以外の経路より非経口投与しても、経口投与しても、ネコの呼吸器疾患の治療に著効を発揮する。
【００１３】
以下、実施例などにより、この発明を詳細に説明する。
【００１４】
この発明でいうネコとは、いわゆるネコ科ネコ属に属する動物であって、ネコの呼吸器疾患の主因であるネコヘルペスウイルスやネコカリシウイルスなどの気道感染ウイルスに感受性を有し、これに感染するか、さらに、ＦＩＶ、マイコプラズマ、細菌、寄生虫などに複合乃至二次感染して、咳、鼻水、流涎、発熱、上部気道炎、肺炎、口内炎、舌炎、結膜炎、顆粒性腺炎、舌部潰瘍、鼻端部潰瘍、全身性皮膚潰瘍、鼻甲介部潰瘍、下痢、嘔吐、食欲減退、活動性減退から選ばれる二種以上の一般臨床症状を示す動物全般を意味し、通常、飼いネコ全般をその治療対象とするものである。
【００１５】
この発明によるネコの呼吸器疾患治療剤は、ヒト由来の細胞か、ヒト由来の細胞から採取したＨｕＩＦＮ関連遺伝子を導入した微生物若しくは動物細胞が産生するインターフェロンを有効成分とするものである。今日、ＨｕＩＦＮは、その抗原性の違いに基づき、主としてＨｕＩＦＮ−α、ＨｕＩＦＮ−β、ＨｕＩＦＮ−γなる三種類の型に分類されている。ネコの呼吸器疾患に対する治療効果においてやや違いはあるものの、何れもこの発明で使用することができる。その際、ただ一種の型のＨｕＩＦＮを使用してもよいし、型の違う二種以上のＨｕＩＦＮを組合せて使用してもよい。何れのＨｕＩＦＮの場合でも、比活性ができるだけ高いものを使用するのが望ましく、経口投与には、比活性が約１０5国際単位／ｍｇ蛋白質以上の部分精製品及び精製品が、また、非経口投与には、約１０7国際単位／ｍｇ蛋白質以上の精製品が望ましい。
【００１６】
本発明者等が試験したところ、これらＨｕＩＦＮのうち、ＨｕＩＦＮ−α、とりわけ、ＢＡＬＬ−１細胞やナマルバ細胞などのヒトリンパ芽球様細胞株や、人血から分離した白血球が産生する、いわゆる、「天然型ＨｕＩＦＮ−α」はネコの呼吸器疾患に対する治療効果が格段に高く、副作用も僅少という特徴がある。ことに、ＢＡＬＬ−１細胞由来のＨｕＩＦＮ−αは、サブタイプα２やサブタイプα８などのＨｕＩＦＮ−αのサブタイプを極めてバランス良く含んでおり、この発明に使用して最上の効果をもたらした。遺伝子組換型ＨｕＩＦＮは、一般に、治療効果において天然型ＨｕＩＦＮに劣り、副作用もやや強い傾向にあった。
【００１７】
この発明によるネコの呼吸器疾患治療剤は、ＨｕＩＦＮ単独の形態はもとより、ＨｕＩＦＮとそれ以外の生理的に許容される、例えば、担体、賦形剤、希釈剤、免疫助成剤、安定剤、さらには、必要に応じて、解熱剤、抗炎症剤、抗菌剤、消化剤、栄養剤、餌料などとの組成物としての形態を包含する。さらに、この発明の治療剤は、投薬単位形態の薬剤をも包含し、その投薬単位形態の薬剤とは、この発明の有効成分たるＨｕＩＦＮの、例えば、一日当たりの用量又はその整数倍（４倍まで）若しくはその約数（１／４０まで）に相当する量を含有し、投与に適する物理的に分離した一体の剤型にある薬剤を意味する。このような投薬形態の薬剤としては、注射剤、液剤、ゲル状経口用剤、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、舌下剤などが挙げられる。
【００１８】
この発明によるネコの呼吸器疾患治療剤の用量、用法について説明すると、この発明の治療剤は、経口的に投与しても非経口的に投与しても、所期の治療効果が得られる。具体的には、ネコの種類、原因ウイルスの種類、症状、用量、用法、使用するＨｕＩＦＮの種類などに依っても変わるけれども、患畜の症状や様子を観察しながら、通常、ネコ体重ｋｇ当たり約０．００５乃至５，０００国際単位／回、望ましくは、約０．５乃至５０国際単位／回、より望ましくは、約１乃至２０国際単位／回のＨｕＩＦＮを１日１乃至３回若しくは１週間に１乃至５回、約１日乃至１カ月間投与すればよい。
【００１９】
この発明の治療剤を経口投与するには、治療剤を、例えば、液剤、トローチ剤、散剤、顆粒剤、錠剤、舌下剤、餌料などの経口投与可能な形態に調製し、必要に応じて、経口投与器や胃ゾンデなどの適宜投与補助器具を使いながら、常法にしたがって口腔内、鼻腔内、食道内若しくは胃内に挿入すればよい。また、非経口投与するには、この発明による注射剤をネコの皮内、皮下、筋肉内、静脈内若しくは腹腔内に注射すればよい。本発明者等が試験したところ、用量が上記の範囲を下回ると所期の治療効果が得られ難くなり、逆に、上回ると、抗体産生や副作用が顕著になったり、治療効果に比べて飼主の経済的負担が大きくなることがあり、上記範囲を以て最良とした。
【００２０】
治療効果と投与のし易さという観点から個々の投与経路を比較すると、経口投与は一般家庭でも容易に実施できるという利点はあるものの、所定量のＨｕＩＦＮを正確に投与するのが難しい欠点がある。これにより、本来必要とされる以上のＨｕＩＦＮを投与することを余儀無くされたり、治療が比較的長期に亙り、飼主の経済的負担が大きくなることがある。これに対して、非経口投与の場合は、一般家庭で実施し難いという欠点はあるものの、患畜に所定量のＨｕＩＦＮを正確に投与でき、所期の治療効果を必要最少量のＨｕＩＦＮで達成できる利点がある。これにより、患畜を比較的短期間で完治させることができ、飼主の経済的負担もより少なくて済む。とりわけ、この発明の治療剤を皮内、皮下若しくは筋肉内に投与するときには、経口投与や上記以外の経路より非経口投与する場合に比べてより少量のＨｕＩＦＮで事足り、投与がし易く、飼主の経済的負担も僅少となる。このことは、天然型ＨｕＩＦＮ−α、とりわけ、ＢＡＬＬ−１細胞由来のＨｕＩＦＮ−αの場合、特に顕著であった。
【００２１】
なお、本明細書を通じて、ＨｕＩＦＮの活性は、ＨｕＩＦＮがシンドビスウイルスによるＦＬ細胞の細胞変性を抑制する度合をマイクロタイター法により測定し、その測定値を世界保健機関によるＨｕＩＦＮの国際標準品「Ｇａ２３−９０１−５３２」に基づき「国際単位」に換算して表示している。
【００２２】
以下、２〜３の実施例に基づき、この発明をより具体的に説明する。
【００２３】
【実施例１  乾燥注射剤】
特公昭５６−５４１５８号公報に記載された方法に準じ、ハムスター体内で増殖させたＢＡＬＬ−１細胞に培養培地中でセンダイウイルスを作用させてインターフェロンを誘発させた。この培養培地を遠心分離して得られた上清を濃縮し、濃縮物にフェニルセファロースを用いるアフィニティークロマトグラフィーを適用することにより、比活性約１０6国際単位／ｍｇ蛋白質の部分精製ＨｕＩＦＮを得た。次に、この部分精製ＨｕＩＦＮを、常法により、モノクローナル抗ＨｕＩＦＮ−α抗体を水不溶性担体に結合させたセルテック社製『ＮＫ−２セファロース』を用いるアフィニティークロマトグラフィーによりさらに精製した後、ネコ血清アルブミン約０．１ｍｇ／ｍｌを含有する燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化させたゲル濾過クロマトグラフィーを適用することにより、比活性約２×１０8国際単位／ｍｇの精製ＨｕＩＦＮ−αを含有するＨｕＩＦＮ−α溶液を得た。
【００２４】
このようにして調製した精製ＨｕＩＦＮ−αを約５ｍｇ蛋白質／ｍｌにまで膜濃縮し、１％（ｗ／ｖ）ネコ血清アルブミンと０．０１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を含有する生理食塩水にＨｕＩＦＮ−α濃度が１５国際単位／ｍｌになるよう希釈し、膜濾過して滅菌した後、バイアルに１ｍｌずつ無菌的に充填し、凍結乾燥した。
【００２５】
本品は、有効成分としてＢＡＬＬ−１細胞由来の精製ＨｕＩＦＮ−αを含有し、賦形剤たる血清アルブミンはネコ由来のものを使用しているので、ネコの呼吸器疾患治療用注射剤として有用である。
【００２６】
【実施例２  乾燥注射剤】
常法により、人血から分離した白血球にセンダイウイルスを作用させて誘発させたＨｕＩＦＮをケー・カンテル（Ｋ．Ｃａｎｔｅｌｌ）等、『ザ・ジャーナル・オブ・ジェネラル・バイロロジー（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ）』、第３９巻、第５４１〜５４３頁（１９７８年）に記載された方法に準じて精製し、比活性約２×１０6国際単位／ｍｇ蛋白質の部分精製ＨｕＩＦＮを得た。次いで、この部分精製ＨｕＩＦＮを、実施例１と同様、モノクローナル抗ＨｕＩＦＮ−α抗体を用いる抗体クロマトグラフィーによりさらに精製した後、局方精製ゼラチン約０．１ｍｇ／ｍｌを含有する燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡化させたゲル濾過クロマトグラフィーを適用することにより、比活性約２×１０8国際単位／ｍｇの精製ＨｕＩＦＮ−αを含有するＨｕＩＦＮ−α溶液を得た。
【００２７】
このようにして調製した精製ＨｕＩＦＮ−αを約５ｍｇ蛋白質／ｍｌにまで膜濃縮し、１％（ｗ／ｖ）局方精製ゼラチンと０．０１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を含有する生理食塩水にＨｕＩＦＮ−α濃度が２０国際単位／ｍｌになるよう希釈し、膜濾過して滅菌した後、バイアルに１ｍｌずつ無菌的に充填し、凍結乾燥した。
【００２８】
有効成分としてヒト白血球由来の精製ＨｕＩＦＮ−αを含有せしめた本品は、治療効果及び副作用において実施例１の注射剤よりやや劣るものの、ネコの呼吸器疾患治療用注射剤として有用である。
【００２９】
【実施例３  乾燥注射剤】
実施例１と同様にしてＢＡＬＬ−１細胞にセンダイウイルスを作用させて調製した精製ＨｕＩＦＮ−αを、３％（ｗ／ｖ）ネコ血清アルブミンと０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を含有する生理食塩水にＨｕＩＦＮ−α濃度が２０，０００国際単位／ｍｌとなるように希釈し、膜濾過して滅菌した後、バイアルに１ｍｌずつ充填し、凍結乾燥した。
【００３０】
本品は、実施例１の注射剤と同様、有効成分としてＢＡＬＬ−１細胞由来の精製ＨｕＩＦＮ−αを含有し、賦形剤たる血清アルブミンはネコ由来のものを使用しているので、ネコの呼吸器疾患治療用注射剤として有用である。
【００３１】
【実施例４  ゲル状経口用剤】
蒸留水にウシ血清アルブミンを１％（ｗ／ｖ）溶解し、溶液に実施例１の方法で調製したＢＡＬＬ−１細胞由来の部分精製ＨｕＩＦＮを含有する溶液を加え、１ｇ当たりＨｕＩＦＮを３００国際単位含有するＨｕＩＦＮ溶液を得た。この溶液３２．０重量部に０．５重量部の『ツイーン８０』を１５．０重量部のエタノールに溶解して混合し、さらに、その混合物に０．５重量部のトリエタノールアミンを１５．０重量部のグリセリンに溶解して混合した後、少量のトリエタノールアミンを加えて、１ｍｌ当たりＨｕＩＦＮを約１００国際単位含む、ほぼ中性のゲル状製剤を得た。
【００３２】
有効成分としてＢＡＬＬ−１細胞由来のＨｕＩＦＮを含有する本品は、適度の口腔内滞留時間を有し、患畜に飲ませ易い呼吸器疾患治療用ゲル状経口用剤である。
【００３３】
【実施例５  散剤】
株式会社林原が製造する高純度無水結晶マルトース製品『ファイントース』１００重量部に実施例２の方法で調製したヒト白血球由来の部分精製ＨｕＩＦＮ（約１０6国際単位／ｍｌ）２重量部を均一に噴霧し、真空乾燥し、粉砕した後、篩にかけて粒度１００乃至５００ミクロンの粉状物を得た。粉状物にさらに適当量の『ファイントース』を均一に混合し、１ｇ当たりＨｕＩＦＮを約１００国際単位含む散剤を得た。
【００３４】
本品は適度の口腔内滞留時間と優れた保存安定性を有し、ネコの呼吸器疾患治療用散剤として有用である。本品は適度の甘味を有し、ネコの口腔内に投与して刺激少なく、患畜に飲ませ易い散剤である。
【００３５】
【実施例６  顆粒剤】
株式会社林原が製造する高純度無水結晶マルトース製品『ファイントース』１００重量部に実施例１の方法で調製したＢＡＬＬ−１細胞由来の部分精製ＨｕＩＦＮを含有する水溶液（約３０，０００国際単位／ｍｌ）１５重量部を均一に混ぜた後、打錠機にかけて顆粒剤を得た。
【００３６】
本品は、１ｇ当たりＨｕＩＦＮを約４，４００国際単位含み、優れた保存安定性を有し、ネコの呼吸器疾患治療用散剤として有用である。また、本品は適度の甘味を有し、ネコの口腔内に投与して刺激少なく、患畜に飲ませ易い顆粒剤である。
【００３７】
次に、実施例の治療剤を使用して行った臨床試験について説明する。
【００３８】
【実験例１  臨床試験】
咳、鼻水、流涎、発熱、上部気道炎、肺炎、口内炎、舌炎、結膜炎、顆粒性腺炎、舌部潰瘍、鼻端部潰瘍、全身性皮膚潰瘍、鼻甲介部潰瘍、下痢、嘔吐、食欲減退、活動性減退などを主徴として動物病院に持ち込まれ、診断の結果、呼吸器疾患と判定された飼いネコ５２匹につき、実際に実施例１の乾燥注射剤を投与し、その経過を観察することにより、この発明による治療剤の効果と副作用を評価した。
【００３９】
すなわち、初診時の一般臨床所見から呼吸器疾患と診断され、且つ、ウイルス検査の結果、ＦＩＶ抗体陽性と判定された１乃至６歳と推定される雄ネコ３３匹と雌ネコ１９匹を対象とし、その頚部皮下に体重ｋｇ当たり約１乃至２０国際単位／回の用量で実施例１の乾燥注射剤を毎日１回、１週間に亘って注射投与した。投与開始直後より経過を注意深く観察し、用量とともに、全身状態、脱水状態、食欲、飲水欲、活動性、鼻水、咳、下痢、流涎、結膜炎、口内炎、鼻端部潰瘍、呼吸様式、嘔吐など計１４項目の一般臨床所見を記録した。なお、ウイルス検査の結果、患畜の殆どは、ネコヘルペスウイルスおよび／またはネコカリシウイルスとの複合感染が疑われた。
【００４０】
臨床実験は主として獣医師が行ない、患畜の様子や症状、副作用などを観察しながら、インターフェロンの用量や投与回数を調節した。そして、投与を終了した時点で結果を取り纒め、次の判定規準に基づいてこの発明による治療剤の有効性を判定した。すなわち、５日以内にすべての症状が正常に復帰したものは「著効」とする、口内炎が初診時よりは改善し、且つ、他の３項目以上の症状が改善するか、口内炎が発症せず、他の５項目が改善したものは「有効」とする、口内炎は改善しないものの、他の４項目以上が改善したものは「やや有効」とする、何れの症状も改善しなかったものは「無効」とする、そして、症状が悪化したものは「悪化」とするというものである。
【００４１】
臨床実験の結果、何れの臨床例においても、投与開始直後から３日以内に咳、鼻水、流涎及び下痢が停止し、体温も正常値の３７℃台に回復した。そして、投与開始から１週間以内に、上部気道炎、口内炎、結膜炎及び鼻端部潰瘍が顕著に改善乃至修復し、食欲や活動性が向上した。上記の判定規準に基づいて判定したところ、全５２臨床例のうち、「著効」が２８例、「有効」が１５例、「やや有効」が５例、「無効」が４例、「悪化」が０例と、全５２例のうち「著効」、「有効」又は「やや有効」と判定される臨床例が約９２％にも達した。しかも、投与期間中、特段の副作用は全く認められず、この発明による治療剤がネコの呼吸器疾患の治療に極めて効果的且つ安全であることを裏付けていた。なお、一部の患畜については、完治後も血液検査を継続したところ、ＨｕＩＦＮ−αに起因するとおもわれる抗体産生は全く検出されなかった。このことは、この発明による治療剤が、ネコの呼吸器疾患を治療する目的で、同一のネコに反復投与しても安全なことを示唆している。
【００４２】
上記知見に基づき、実施例２、４および５の実施態様についても同様の臨床実験をしたところ、非経口投与で約７０％以上、経口投与でも約６０％以上と、極めて優秀な治療成績が得られた。非経口投与に比べると、経口投与の有効率がやや低いが、普通一般の薬剤より遥かに高いものである。なお、非経口投与は、皮内、皮下、筋肉内、静脈内若しくは腹腔内への注射に依ったが、用量が僅少なことから、注射針を挿入する時間が短かくて済み、殆どの患畜が暴れだすことなく、ほぼ一回の挿入で投与を完了できた。
【００４３】
なお、実施例１、２、４および５の実施態様で使用する部分精製ＨｕＩＦＮ及び精製ＨｕＩＦＮ−αにつき、健常ネコを対象に急性毒性試験したところ、何れもネコに対する毒性の極めて低いことが判明した。
【００４４】
【実験例２  臨床試験】
実験例１で使用した飼いネコと同様の症状を呈し、呼吸器疾患と診断された飼いネコ４０匹について実施例３の乾燥注射剤を投与し、投与後の経過を観察することにより、その効果と副作用を評価した。
【００４５】
すなわち、初診時の一般臨床所見から呼吸器疾患と診断され、且つ、ウイルス検査の結果、ＦＩＶ抗体陽性と判定された１乃至６歳と推定される雄ネコ１９匹と雌ネコ２１匹を対象とし、その背部皮下に体重ｋｇ当たり約５００乃至５，０００国際単位／回の用量で実施例３の乾燥注射剤を毎日１回、１週間に亙って注射投与した。投与開始直後より経過を注意深く観察し、用量とともに、実施例１と同様、１４項目の一般臨床所見を記録した。
【００４６】
臨床実験は主として獣医師が行ない、患畜の様子や症状、副作用などを観察しながら、インターフェロンの用量や投与回数を調節した。そして、投与を終了した時点で結果を取り纒め、実験例１と同じ判定規準に基づいて本品の有効性を判定した。
【００４７】
臨床試験の結果、何れの臨床例においても、投与開始直後から臨床症状の改善が認められ、３日以内に咳、鼻水、流涎及び下痢が停止し、体温も正常値の３７℃台に回復した。そして、投与開始から１週間以内に、上部気道炎、口内炎、結膜炎及び鼻端部潰瘍が顕著に改善乃至修復し、食欲や活動性が向上した。
【００４８】
上記の判定規準に基づいて判定したところ、全４０臨床例のうち、「著効」が２５例、「有効」が１１例、「やや有効」が２例、「無効」が２例、「悪化」が０例と、全４０例のうち「著効」、「有効」又は「やや有効」と判定される臨床例が９５％にも達した。しかも、投与期間中、特段の副作用は全く認められず、この発明による治療剤がネコの呼吸器疾患の治療に極めて効果的且つ安全であることを裏付けていた。なお、一部の患畜については、完治後も血液検査を継続したところ、ＨｕＩＦＮ−αに起因するとおもわれる抗体産生は全く検出されなかった。このことは、この発明による治療剤が、ネコの呼吸器疾患を治療する目的で、同一のネコに体重ｋｇ当たり約５００乃至５，０００国際単位を反復投与しても安全なことを示唆している。
【００４９】
上記知見に基づき、実施例６の実施態様についても同様の臨床実験をしたところ、経口投与で約７５％以上の極めて優秀な治療成績が得られた。非経口投与に比べると、経口投与の有効率がやや低いが、普通一般の薬剤より遥かに高いものである。
【００５０】
なお、実施例３及び６の実施態様で使用する部分精製ＨｕＩＦＮ及び精製ＨｕＩＦＮ−αにつき、健常ネコを対象に急性毒性試験したところ、何れもネコに対する毒性の極めて低いことが判明した。
【００５１】
【急性毒性試験】
０．０１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を含む生理食塩水に、ネコ血清アルブミンと実施例１又は実施例２の方法で調製したＢＡＬＬ−１細胞又はヒト白血球由来の部分精製ＨｕＩＦＮ又は精製ＨｕＩＦＮ−αとを、この順序で、それぞれの最終濃度が０．１％（ｗ／ｖ）及び１×１０6国際単位／ｍｌになるよう溶解した。かくして得られる４種類の溶液を生後１乃至２年と推定される健常な雑種ネコ５匹／群からなる４群に対して、体重ｋｇ当たり、この発明における最大投与量の２万倍に当たる１×１０6国際単位のＨｕＩＦＮに相当する量の生理食塩水を皮下若しくは経口投与し、投与後の経過を観察した。対照群には、ＨｕＩＦＮを溶解しなかったこと以外、前記と同様に調製した同量の生理食塩水を同じ経路で投与した。
【００５２】
その結果、いずれのＨｕＩＦＮでも試験群と対照群とで有意差は認められず、投与後における死亡例や、投与前後における一般状態、体重、摂餌量にも特段の変化は認められなかった。このことは、ＨｕＩＦＮが、ネコに投与して、極めて毒性の低いことを示唆している。
【００５３】
【発明の効果】
叙上のとおり、本発明によるネコの呼吸器疾患治療剤は、ＨｕＩＦＮを有効成分としているので、ネコの呼吸器疾患に伴なう咳、鼻水、流涎、発熱、上部気道炎、肺炎、口内炎、舌炎、結膜炎、顆粒性腺炎、舌部潰瘍、鼻端部潰瘍、全身性皮膚潰瘍、鼻甲介部潰瘍、下痢、嘔吐、食欲減退、活動性減退などの一般臨床症状の改善に著効を発揮する。
【００５４】
しかも、本発明の治療剤が有効成分として含有するＨｕＩＦＮは、患畜に大量投与しても安全である上、小用量でも著効を発揮するので、小用量投与の場合は、飼主の経済的負担を大幅に低減する。同じ理由により、本発明の治療剤によるときには、インターフェロンを必ずしも患畜の静脈内に投与する必要が無くなり、経口投与や、皮内、皮下、筋肉内などの静脈以外の経路より非経口的に投与することによっても、所期の効果が得られる。これにより、神経質で警戒心が強いネコに所定量のＨｕＩＦＮを確実且つ容易に投与できることとなり、獣医師等の治療担当者の労力・負担も大幅に低減する。
【００５５】
以上の諸効果は、有効成分として天然型ＨｕＩＦＮ−α、とりわけ、ＢＡＬＬ−１細胞由来のＨｕＩＦＮ−αを配合使用することによって、いよいよ顕著となる。
【００５６】
この発明は、斯くも顕著な作用効果を奏する発明であって、斯界に貢献すること誠に多大な発明である。