(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式：
【化１１】
0003708957.tif 000035
（ここで、Ｒ1'はＨ、−CH3基またはベンジル基を示し、Ｒ2'はＣ1〜Ｃ10の直鎖または側鎖アルキル基を示し、Ｒ3'はＨまたはＣ1〜Ｃ10の直鎖または側鎖アルキル基を示し、Ｒ4'およびＲ5'は水素を示す。）
で示される化合物および薬理学的に許容されるその塩。
【請求項２】
（−）−２’−メチルフェニルカルバモイルエゼロリン、（−）−２’−４’−ジメチルフェニルカルバモイルエゼロリン、（−）−２’−エチルフェニルカルバモイルエゼロリン、（−）−２’−イソプロピルフェニルカルバモイルエゼロリン、（−）−２’−メチルフェニルカルバモイル−Ｎ１−ノルエゼロリン、（−）−２’−４’−ジメチルフェニルカルバモイル−Ｎ１−ノルエゼロリン、（−）−２’−メチルフェニルカルバモイル−Ｎ１−ベンジル−ノルエゼロリン、（−）−２’−４’−ジメチルフェニルカルバモイル−Ｎ１−ベンジル−ノルエゼロリン及び（−）−４’−イソプロピルフェニルカルバモイル−Ｎ１−ベンジル−ノルエゼロリンから成る群から選択した化合物。
【請求項３】
Ｒ1'が水素である請求項１に記載の化合物および薬理学的に許容されるその塩。
【請求項４】
Ｒ1'が−CH3である請求項１に記載の化合物および薬理学的に許容されるその塩。
【請求項５】
Ｒ1'がベンジル基である請求項１に記載の化合物および薬理学的に許容されるその塩。
【請求項６】
Ｒ1'はＨまたは−CH3基、Ｒ2'はＣ1〜Ｃ10の直鎖または側鎖アルキル基、Ｒ3'はＨまたはＣ1〜Ｃ10の直鎖または側鎖アルキル基、Ｒ4'およびＲ5'は水素である請求項１に記載の化合物および薬理学的に許容されるその塩。
【請求項７】
請求項１または２に記載の化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含むアセチルコリンエステラーゼ活性阻害剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は疾患の改良治療法に関し、特にアセチルコリンエステラーゼおよびブチリルコリンエステラーゼに対して選択的阻害効果を発揮する化合物に関する。
背景技術
フィゾスチグミン（別名：エゼリン）およびその特定の誘導体は、抗コリンエステラーゼ剤として従来から知られている。このような公知の化合物は、緑内障、重症筋無力症、アルツハイマー症の治療や有機リン剤中毒の解毒剤としても有用である。
フィゾスチグミンは１８４０年、Ｄａｎｉｅｌｌ（英国の医務官）によりカラバル豆の形で英国に導入された。化合物自体は、１８６４年にＪｏｂｓｔおよびＨｅｓｓｅにより初めて分離された。フィゾスチグミンは、前世紀から緑内障ならびにアトロピン誘発昏睡の治療用として使用されていた。近年、この化合物およびその誘導体は中枢神経に対して抗コリン作動性を有する数種類の薬物の有効な解毒剤として使用されている。
神経−筋接合部のアセチルコリン受容体−イオンチャネル複合体（ＡＣｈＲ）については過去２０年間の研究成果により、受容体の機能に関する知識が著しく進歩した。ニコチン様ＡＣｈＲはシビレエイおよび電気ウナギの電気器官にきわめて高濃度で存在しているため、その膜受容体が試験に利用されている。また、受容体の色々な作用部位に特殊な化学的プローブを適用することにより、この受容体の形態および機能についての理解が著しく進歩した。
約２０年前、このＡＣｈＲの試験に役立つ重要な発見があった。蛇毒から、ニコチン様ＡＣｈＲ上のアセチルコリン（ＡＣｈ）認識部位と特異的に非可逆的結合をするα−ブンガロトキシン（α−ＰＧＴ）が得られた。α−ＰＧＴはきわめて選択性の高いプローブであるため、これを用いニコチン様ＡＣｈＲを形成する各サブユニットの分離・精製が可能となった。このサブユニットは機能上、人工的な脂質膜に再構成された後、最終的にクローン化された。
まもなく別の種類の毒度が発見され、さらにニコチン様ＡＣｈＲの別の部位が利用されるようになった。これらの毒素はヒストリオニコトキシンと呼ばれ、Dendrobatidae科のカエルの皮膚分泌物より分離された。ヒストリオニコトキシンは神経−筋刺激伝達のアロステリック変化または非競合的阻害に関与することが明らかになり、新しい作用部位が明らかにされた。これらの部位は、α−ＰＧＴプローブにより発見された認識部位とは全く異なり、ＡＣｈＲのイオンチャネル成分上に位置していると考えられている。
また、その他の薬物もＡＣｈＲの活性化を非競合的に修飾しうることが実証されている。これらの薬物の例としては、末梢神経系ならびに中枢神経系に作用する公知の薬物がある。特に、三環系抗うつ剤、フェノチアジン系抗精神病剤、フェンシリジン（ＰＣＰ）幻覚剤、局所麻酔剤、抗ムスカリン剤、抗コリンエステラーゼ剤ならびにその他の類似化合物が挙げられるが、それほど多くはない。
ＡＣｈＲを試験する別の方法としては、顕微鏡動態模型、ならびに作用物質の結合による透過性の変化およびニコチン様受容体分子の配座転位を試験する生化学的急速混合法がある。
ニコチン様ＡＣｈＲにおける作用物質認識部位は、立体特異性が強いことが知られている。この結論は、ある種のセミリジット作用物質の光学異性体の試験結果に基づいている。例えば、Ｓｐｉｖａｋら，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，Ｖｏｌ．２３，３３７−３４３頁（１９８３）参照。
一方、イオンチャネル部位は立体特異性を有さないと考えられている。この結論は、ペルヒドロヒストリオニコトキシンの鏡像異性体がニコチン様ＡＣｈＲに対して同程度の定性的および定量的作用を示すことに基づいている。例えば、Ｓｐｉｖａｋら，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，Ｖｏｌ．１６３，１８９−１９３頁（１９８３）参照。
フィゾスチグミンの天然異性体は、神経−筋接合部のＡＣｈＲに対して遮断ならびに作動作用を有することが知られている。一方、（＋）−フィゾスチグミンはコリンエステラーゼ（ＣｈＥ）をほとんど阻害しない。Ｂｒｏｓｓｉら，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，Ｖｏｌ．２０１，１９０−１９２頁（１９８６）を参照。
（＋）−フィゾスチグミンはＣｈＥ阻害作用がほとんどないにもかかわらず、致死量のサリンを繰り返し投与する場合の前処理用保護剤として極めて有効である。Ａｌｂｕｑｕｅｒｑｕｅら，Ｆｕｎｄａｍ．Ａｐｐｌ．Ｃａｌｔｏｘｉｃｏｌ．，Ｖｏｌ．５，１８２−２０３頁（１９８５）参照。このような有益な保護効果は、カルバミン酸塩とシナプス後膜のニコチン様ＡＣｈＲとの直接的な相互作用によるものと考えられる。有機リン剤に対するカルバミン酸塩の保護効果は、神経刺激伝達物質の蓄積による機能亢進を抑制するカルバミン酸塩の直接的な効力と関連があると思われる。
この分野における研究の結果得られた前記の情報は、重症筋無力症およびアルツハイマー症などのコリン作動性障害治療用の新薬の評価に重要である。このような新薬は、電気ウナギのアセチルコリンエステラーゼ（ＡＣｈＥ）およびヒト血漿中のブチリルコリンエステラーゼ（ＢＣｈＥ）に対する効果をin vitroで試験して評価することができる。
in vivoでアセチルコリン（ＡＣｈ）を加水分解することが知られている２種類の酵素のうち、ＡＣｈＥは赤血球、脳および神経組織中に存在し、血清、膵および肝に存在するＢＣｈＥと比較して特異性が高い。しかし、２種類の酵素のうちの一方を選択的に阻害する化合物が医学的に優れていることは今まで知られていない。従来、生物学的標準として用いられている天然アルカロイドの（−）−フィゾスチグミン、その代謝物と考えられている（−）−（Ｎ１）−ノルフィゾスチグミンおよび天然アルカロイドのフィゾベニンは、in vitroにおいて、同じ濃度でＡＣｈＥおよびＢＣｈＥを同じ程度に阻害する。
したがって、ＡＣｈＥおよびＢＣｈＥの一方に対して高度に選択的な活性を有し、別の一方にはそれほど強力ではなく、特定のコリン作動性障害を治療に優れ、副作用の少い薬剤が望ましい。このような化合物は、コリン作動性障害の治療の分野において医学的にきわめて重要であると思われる。
発明の概略
本発明の目的は、背景技術の項に記載した先行技術の問題点を解決することである。
本発明の第２の目的は、強力かつ選択性の高いコリン作動性または遮断性薬剤を提供することである。
本発明の第３の目的は、緑内障、重症筋無力症、アルツハイマー症などのコリン作動性障害、ならびに有機リン剤中毒の改良治療法を提供することである。
本発明の第４の目的は、選択的なアセチルコリンエステラーゼまたはブチリルコリンエステラーゼ活性を有する化合物を提供することである。
本発明の第５の目的は、以下の一般式で示される化合物およびその異性体ならびに薬理学的に許容されるその塩を提供することである。
0003708957.tif 000002
ここで、Ｒは−Ｏ−またはＮ（−Ｒ1）であり、
Ｒ1はＨまたはＣ1−Ｃ10のアルキル基、
Ｒ2およびＲ3はＨまたはＣ1−Ｃ10のアルキル基のいずれかであり、
Ｒ4は
0003708957.tif 000003
であり、
ここで、Ｒ5は、ハロゲンまたはＣ1〜Ｃ10のアルキル基のいずれかであり、ｘは１〜５の整数であり、Ｒ5が該アルキル基であって、かつｘが１の場合は該アルキル基は前記フェニル基のオルト位に置換しており、Ｒ6およびＲ7はＨ、ハロゲンまたはＣ1−Ｃ10のアルキル基のいずれかであり、
ｘは０または１〜５の整数、
ｙは０または１〜３の整数、
ｚは０または１〜４の整数である。
Ｒ8はＨまたはＣ1−Ｃ10のアルキル基を示す。
本発明の第６の目的は、以下の一般式（VIII）で示される化合物およびその異性体ならびに薬理学的に許容されるその塩を提供することである。
0003708957.tif 000004
ここで、Ｒ1'はＨ，−ＣＨ3基またはベンジル基を示し、Ｒ2'はＨまたはＣ1−Ｃ10の直鎖または側鎖アルキル基を示し、
Ｒ3'はＨまたはＣ1−Ｃ10の直鎖または側鎖アルキル基を示し、
Ｒ4'およびＲ5'は水素もしくはそれぞれが結合している炭素原子とともに芳香族炭素の６員環を形成してもよい。
【図面の簡単な説明】
図１は、フィゾスチグミンおよびその２’，４’−ジメチルフェニルカルバミン酸塩によるラット血漿中のＡＣｈＥ阻害率の経時的変化を示す。
実施例
本発明によると、以下の一般式で示され、その異性体および薬理学的に許容されるその塩を含む化合物が開示される。
0003708957.tif 000005
ここで、Ｒは−Ｏ−またはＮ（−Ｒ1）であり、
Ｒ1はＨまたはＣ1−Ｃ10のアルキル基、
Ｒ2およびＲ3はＨまたはＣ1−Ｃ10のアルキル基のいずれかであり、
Ｒ4は
0003708957.tif 000006
であり、
ここで、Ｒ5は、ハロゲンまたはＣ1〜Ｃ10のアルキル基のいずれかであり、ｘは１〜５の整数であり、Ｒ5が該アルキル基であって、かつｘが１の場合は該アルキル基は前記フェニル基のオルト位に置換しており、Ｒ6およびＲ7はＨ、ハロゲンまたはＣ1−Ｃ10のアルキル基のいずれかであり、
ｘは０または１〜５の整数、
ｙは０または１〜３の整数、
ｚは０または１〜４の整数である。
Ｒ8はＨまたはＣ1−Ｃ10のアルキル基を示す。
なお、一般式（Ｉ）の化合物のうち、以下の一般式（II）で示される化合物およびその異性体ならびに薬理学的に許容されるその塩が好ましい。
0003708957.tif 000007
ここで、Ｒは−Ｏ−またはＮ（−Ｒ1）基であり、
Ｒ1はＨまたはＣ1−Ｃ10のアルキル基であり、
Ｒ2およびＲ3はＨまたはＣ1−Ｃ10のアルキル基のいずれかであり、
Ｒ4は
0003708957.tif 000008
であり、
ここで、Ｒ5は、ハロゲンまたはＣ1〜Ｃ10のアルキル基のいずれかであり、ｘは１〜５の整数であり、Ｒ5が該アルキル基であって、かつｘが１の場合は該アルキル基は前記フェニル基のオルト位に置換しており、Ｒ6およびＲ7はＨ、ハロゲンまたはＣ1−Ｃ10のアルキル基のいずれかであり、
ｘは０または１〜５の整数、
ｙは０または１〜３の整数、
ｚは０または１〜４の整数である。
また、一般式（II）の化合物のうち、以下の一般式（III）および（IV）で示される化合物が好ましい。
0003708957.tif 000009
0003708957.tif 000010
さらに、一般式（III）および（IV）の化合物のうち、以下の一般式（Ｖ）および（VI）で示される化合物が好ましい。
0003708957.tif 000011
また、一般式（Ｖ）の化合物のうち、以下の一般式（VII）で示される化合物がさらに好ましい。
0003708957.tif 000012
前記の一般式（III）〜（VII）で、Ｒ1〜Ｒ7の構造（存在する場合）は、一般式（II）で記載した置換基と同じである。
さらに好ましいのは、一般式（Ｉ）〜（VII）で示される化合物であり、ここでｘ、ｙおよびｚは１または２である。さらに好ましい化合物はｘが１または２であり、Ｒ5がベンゼン環のオルトもしくはパラ位に存在する。特にＲ5はハロゲンまたはＣ1−Ｃ5のアルキル基であるのが好ましい。さらに、Ｒ5はＣ1、−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ3、−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ3および−ＣＨ（ＣＨ3）2であることが好ましい。
好ましい構造を以下に示し、主要な構造式を示すローマ数字と各主要構造式のＲ4置換基の好ましい置換基を示すために、ローマ数字の後にａ、ｂ、ｃまたはｄを付した（Ｉａ〜Ｉｄ、ＩＩａ〜ＩＩｄ等）。
0003708957.tif 000013
0003708957.tif 000014
0003708957.tif 000015
0003708957.tif 000016
0003708957.tif 000017
0003708957.tif 000018
0003708957.tif 000019
0003708957.tif 000020
0003708957.tif 000021
0003708957.tif 000022
また、本発明は、一般式（VIII）で示される化合物を開示するものである。
0003708957.tif 000023
ここで、Ｒ1'はＨ、−ＣＨ3またはベンジル基、
Ｒ2'はＣ1〜Ｃ10の直鎖または側鎖アルキル基、
Ｒ3'はＨまたはＣ1〜Ｃ10の直鎖または側鎖アルキル基、
Ｒ4'およびＲ5'はＨまたはそれぞれが結合している炭素原子とともに形成した６員環の芳香族炭素環である。また、これらの化合物は、その異性体および薬理学的に許容されるその塩を含む。許容される塩は、酒石酸塩、フマール酸塩、リン酸塩、サリチル酸塩等である。
一般式（VIII）で示される化合物のうち、好ましい化合物はＲ4'およびＲ5'がＨで現される化合物である。
さらに好ましい化合物は、Ｒ3'がＨで、Ｒ2'がＣ1〜Ｃ10のアルキル基で現される化合物である。また、さらに好ましい化合物は、これら２つの基がそれぞれ−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3または−ＣＨ（−ＣＨ3）2で現される化合物である。
前記一般式（VIII）で現される化合物には、アセチルコリンエステラーゼおよびブチリルコリンエステラーゼに対して強い阻害力を有するエゼロリンおよび（１）Ｎ−ノルエゼロリンが含まれる。これらカルバミン酸のうち、いくつかの化合物はＡＣｈＥに対して特異性が高く、その他の化合物はＢＣｈＥに対して特異性が高い。
また、本発明に係わる化合物のうち好ましい化合物は、異性体およびその薬理学的に許容される塩である。薬理学的に許容される塩としては、例えばアルカリ金属塩、アルカリ土金属塩およびアンモニウム塩である。さらに、薬理学的に許容させる有機および無機酸との塩であってもよい。その他の許容できる塩の例として、酒石酸塩、フマール酸塩、リン酸塩、サリチル酸塩等をあげることができる。
一般式（１）で示される化合物は非対称炭素原子を有し、光学異性体として存在する。本発明の目的のために、ラセミ体ならびに右旋体および左旋体の異性体が本発明の範囲に含まれる。したがって、特定の右旋体および左旋体または特定の異性体が、本発明に係わる特定の処方に望ましい場合もある。
その他にもコリンエステラーゼ阻害剤が知られている。フィゾスティグミンおよびフィゾベニンは光学的に活性なアルカロイドであり、キラール炭素原子（Ｃ（３ａ）に（３ａＳ）絶対配置を有している。これらの化合物はｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏにおける強力なコリンエステラーゼ阻害剤であり、アセチルコリンのコリンへの変換を可逆的に遮断する。フィゾスティグミンはこのプロセスの異常をもたらす障害の医学的治療に有用であることが知られている。
驚くべきことに、本発明に係わるカルバミン酸塩は高い効果を示した。すなわち、本発明に係わるフエニルカルバミン酸誘導体は、公知のカルバミン酸塩に比較して持続性が長く、かつ毒性も弱いものと考えられる。したがって、本発明に係わる化合物は、従来の化合物よりも著しく優れている。
さらに、本発明に係わる前記の化合物は、きわめて強力で、かつ選択性の高いコリン作動剤および遮断剤として有用である。したがって、本発明に係わる化合物は、適当量の有効成分を含む錠剤、カプセル、ピル、粉末、顆粒、坐薬、殺菌非経口投与用液剤または懸濁剤、殺菌経口投与用液剤または懸濁剤、経口投与用液剤または懸濁剤、油、水または水／油乳化剤等の形態で、人間および動物に全身投与する医薬品組成物として有用である。局所処理用としては、軟膏、クリーム、ローション、ジェリー、スプレー、灌注剤等の形態が考えられる。経口投与のためには、一般式（Ｉ）の化合物を用い、固形または液体の形態に製剤してもよい。
本発明の範囲に含まれる組成物としては、その目的を達成できる有効量の有効成分を含む組成物が含まれる。化合物は、あらゆる薬理学的に許容される量、例えば体重ｋｇあたり０．００１〜約１ｇの範囲で投与することができる。当該技術分野の専門家は、ここに提示する情報に基づいて、有効量を決定することができる。一般に当該化合物は、約０．１〜９９重量％、好ましくは約２５〜８５重量％の有効成分と担体を含む医薬品組成物として有用である。
経口投与用として、液状または固形の組成物を容易に調製することができる。例えば、一般式（Ｉ）の化合物は、リン酸第二カルシウム、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、硫酸カルシウム、デンプン、タルク、ラクトース、アラビアゴム、メチルセルロース、および医薬品用の付形剤または担体として機能的に同等な材料等の公知の成分と混合することができる。また、本発明に係わる化合物はサリチル酸塩、シュウ酸塩等の水溶性の塩として投与してもよい。必要であれば、徐放性製剤を使用してもよい。当該化合物は、不活性の医薬品用希釈剤と混合し、適当な大きさのハードカプセルに封入することにより、カプセル化してもよい。ソフトカプセルが必要であれば、当該化合物と許容できる植物油、軽油またはその他の不活性油とのスラリーを調製し、ゲラチンカプセルとしてもよい。
懸濁液、シロップおよびエリキシルを経口投与用液体組成物としてもよい。油を含む液体調製物を油溶性組成物としてもよい。例えば、コーン油、落花生油、サフラワー油を香料、甘味料、保存剤と混合し、許容できる液状調製物を製造する。界面活性剤を水に添加して、液体投与用のシロップを調製してもよい。砂糖、サッカリン、または生物甘味料等の許容できる甘味料と香料をエリキシルの形態とし、含水アルコール医薬品調製物を使用してもよい。
また、公知の技術を用いて、非経口投与または坐薬用の医薬品組成物を得ることもできる。
本発明に係わる化合物の好ましい使用法は、経口投与用に適した医薬品である。当該化合物の別の好ましい使用法は、経皮投与によるコリン作動および遮断剤であり、特に緑内症、重症筋無力症、アルツハイマー症および有機リン剤中毒等のコリン作動性障害の治療に有用である。したがって、これらの分野の使用に適した組成物は、特に本発明の範囲に含まれる。前記の非経口投与用液剤または懸濁剤は経皮投与にも使用でき、必要であれば、さらに高濃度の徐放性の形態として投与してもよい。前記の非経口投与用液剤または懸濁剤は皮膚パッチを用いて適用してもよい。必要であれば、これらの液剤または懸濁剤をごま油等の適当な溶媒で希釈し、注射してもよい。
また、有効成分を徐放性マトリックスと混合し、経皮投与することもできる。当該化合物は、組成物あたり約０．０１〜９９％、好ましくは約２５〜８５重量％を担体または溶媒に混合し、経皮投与してもよい。
経皮治療システムは自給式であり、無傷の皮膚に適用した場合、薬剤を所定の速度で循環器系に供給するものである。経皮経路を使用する利点は、治療効果が高く、投与回数を低減することができ、血中濃度−時間プロフィールを最適化できるため副作用を低減することができ、反復投与計画が不要のため投薬指導が容易となり、肝の「ファーストパス」代謝を回避することができ、胃腸不適合を回避できることであり、効果の持続期間の予測および延長も可能である。その結果、経皮治療は、皮膚のバリアーを透過できる生理化学的特性を有する数少ない薬剤に適した方法である。皮膚のバリアー機能を克服することのできる一つの有効な方法は、経皮治療システム用の製剤に透過増強剤を添加することである。
透過増強剤は、製剤に添加した場合皮膚の透過性を一時的に増加させることによって、薬剤が短時間内に吸収され易くする化合物である。透過増強剤として、ジメチルスルフォキシド、ｎ−デシルメチルスルフォキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルフォルムアミド、１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン（アゾン）、プロピレングリコール、エタノール、またはＮ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）等のピロリドン類、および界面活性剤等が報告されている。
上記の化合物は、単独または医薬用担体と混合して、容器に充填することができる。本発明の目的に適した医薬用担体は、従来知られている担体であって、薬剤、宿主、または薬剤投与装置を構成する材料に悪影響のないものである。適当な医薬用担体としては、殺菌水、生理食塩水、デキストロース、デキストロース水溶液、またはデキストロースの生理食塩水溶液、ヒマシ油モルあたり約３０〜３５モルのエチレンオキサイドを混合したヒマシ油とエチレンオキサイドの縮合物、液体の酸、低級アルカノール類、またはコーン油、落花生油、ごま油等の油類と、脂肪酸のモノまたはジ−グリセライド、レシチン等のリン脂質、グリセロール、ポリアルキレングリコール、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニールピロリドン等の単独またはレシチン、ポリエチレンステアレート等の適当な懸垂剤と混合した乳化剤との混合物である。また、担体は、保存剤、安定剤、水和剤、乳化剤等のアジュバントと、透過増強剤および本発明の化合物を含むものでもよい。
哺乳類に対する有効薬量は、年齢、体重、活性レベル、または処理対象の状況によって異なる。典型的に、本発明に係わる特定の化合物の有効薬量は、１日１〜３回経口または直腸内投与した場合、約１〜８００ｍｇである。これは約０．００２〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日に相当する。成人の場合、約１０〜約３００ｍｇを１日１〜３回経口または直腸内投与するのが望ましい。非経口的に投与する場合、必要薬量はかなり低い。成人の場合、好ましくは約０．０１〜約１５０ｍｇを１日１〜２回筋肉内または経皮投与する。
本発明に係わる化合物は、約０．０１〜約９９重量％、好ましくは約２５〜８５重量％を含む組成物を局所投与することもできる。また、本発明の化合物は、緑内症、重症筋無力症、アルツハイマー症等のコリン作動性障害の治療法として、また有機リン剤中毒に対する解毒剤として有用である。本発明に係わる方法は、本発明に係わる化合物の有効量または本発明に係わる医薬品組成物の有効量を当該処置を必要とする哺乳動物に投与することから成る。
驚くべきことに、本発明に係わる化合物は選択的なコリン作動性作用および遮断作用を示した。ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてアセチルコリンを加水分解することが知られている２種類の酵素のうち、アセチルコリンエステラーゼ（ＡＣｈＥ）は赤血球、脳および神経組織に存在し、血漿、膵臓および肝臓に存在するブチルコリンエステラーゼ（ＢＣｈＥ）に比較して特異性が高いと考えられている。しかし、２種類の酵素の一方を選択的に阻害する化合物が医学的に優れているということはいままで知られていない。
比較のため、また保護基を有する誘導体の合成に用いたこれらの生物学的標準化合物は、以下のような構造を有する。
0003708957.tif 000024
また、上記の構造は、本発明に係わる化合物の製造にも、出発物質として使用した。
しかし、（−）−エゼロリンのフェニルカルバミン酸塩（文献ではフェンゼリンとも呼ばれている）は、本発明の実験でｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるヒト赤血球ＡＣｈＥに対する阻害度が、ヒト血漿ＢＣｈＥに対する阻害度に比較して５０倍も強いことが認められた。したがって、さらに誘導体を合成し、試験した。
本発明によると、フェニル基のパラ位にメチル基、塩素原子、またはメトキシ基を置換した化合物は同一濃度で両酵素を阻害するが、その阻害力は前記の生物学的標準化合物に比較して、著しく劣った。（−）−フィゾベノール（２２）のフェニルカルバミン酸塩もＡＣｈＥに対して高い効果（ＩＣ50はＡＣｈＥ＝１１；ＢＣｈＥ＝７００）を示したが、クミルカルバミン酸塩（４’−イソプロピルフェニルカルバミン酸塩）（２４）は逆の酵素特異性（ＡＣｈＥ＝３８００；ＢＣｈＥ＝１６．５）を示した。
このような発見は、ＡＣｈＥまたはＢＣｈＥの選択的阻害はフェニルカルバミン酸塩のフェニル基の水素を各種の置換基で置換し、前記の生物学的標準化合物の基本骨格にこれら修飾フェニルカルバミン酸塩を挿入することにより達成されることを明瞭に示している。ＡＣｈＥまたはＢＣｈＥに特異的に作用する阻害剤の設計が可能であることが明らかとなったので、広範な研究に注力した結果、本発明を完成することができた。
次の表１および２に示したフェニルカルバミン酸塩は、（−）−エゼロリン（４）、（２）のＮ−保護相当化合物として（−）−（Ｎ１）−ベンジルノルエゾロリン（５）および天然の（３ａＳ）絶対配置を有する（−）−フィゾベノール（６）から合成した（この出発物質の番号は前記の規格に関連した構造を示した比較化合物および保護誘導体の番号に相当する）
天然の（３ａＳ）絶対配置を有するフェノール、例えば（−）−エゼロリン、（−）−（Ｎ１）−ノルエゼロリンまたは（−）−（Ｎ１）−ベンジルノルエゼロリンを乾燥エーテル中で、触媒量の金属ナトリウムの存在下で、市販のイソシアネートと反応させると、目的とするカルバミン酸塩が得られる。以下に示す反応スキーム１を参照。必然的に生成するダイマーからクロマトグラフィーによって、最初に溶出する物質を分離した。カルバミン酸塩は不定形である場合が多かったが、ＭＳおよび１Ｈ−ＮＭＲによってその構造を確認し、ＴＬＣ分析および旋光度によって特性を確認した。本発明に係わるカルバミン酸塩の合成法は実験の項で詳しく説明する。（Ｎ１）保護カルバミン酸塩の（Ｎ１）系化合物への変換は、スキーム２に示し、以下に記載するようにＰｄ（ＯＨ）２触媒を用いた水素添加反応によって行なった。
得られたフェニルカルバミン酸塩は表１〜３に示し、反応スキーム１および２で説明する。一般式（VIII）のフェニルカルバミン酸塩は表３に示すが、いずれも天然の（３ａＳ）絶対配置を有す。
0003708957.tif 000025
0003708957.tif 000026
本発明に係わる化合物、すなわち化合物７〜２４は、以下の表１および２に示す。
0003708957.tif 000027
0003708957.tif 000028
0003708957.tif 000029
本発明に係わる化合物、すなわち化合物２５〜３８および比較化合物Ａ’，Ｂ’およびＣ’は表３に示す。
0003708957.tif 000030
実  験
融点（未補正）：Ｆｉｓｈｅｒ−Ｊｏｈｎｓの装置；旋光度（［α］D，ＣＨＣｌ3：Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ−２４１  ＭＣ自動偏光計，ＩＲスペクトル（ｃｍ-1，ＣＨＣｌ3）：Ｂｅｃｋｍａｎ−ＩＲ−４２３０，ＢＩＯ−ＲＡＤ  ＦＴＳ−４５；1Ｈ  ＮＭＲ（内部標準としてＭｅ4Ｓｉを加えたＣＤＣｌ3中で測定，δｐｐｍ，Ｊ  Ｈｚ）：Ｖａｒｉａｎ  ＸＬ−３００  ＭＨｚ，Ｇｅｍｉｎｉ  ３００  ＭＨｚスペクトロメータ，化学イオン化（ＣＩ）ＭＳ（ｍ／ｚ）：Ｆｉｎｎｉｇａｎ−１０１５Ｄマススペクトロメータ・電子衝撃（ＥＩ）ＭＳ：Ｖ．Ｇ．  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ７０７０マススペクトロメータ；ＨＲ  ＭＳ（ＦＡＢ）：ＪＥＯＬ  ＪＭＳ−ＳＸ  １０２マグネティック  セクターマススペクトロメータ；薄層クロマトグラフィー（シリカゲルＧＨＬＦ，２５０μｍ）：Ａｎａｌｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．，；カラムクロマトグラフィー（シリカゲルＧＨＬＦ，２５０μｍ）：Ｍｅｒｃｋ  ６０（２３０〜４００メッシュ）；ＴＬＣ分析の溶媒系は以下の通りである：ＣＨ2Ｃｌ2/５％  ＭｅＯＨ；カラムクロマトグラフィー分析の溶媒系は以下の通りである；ＣＨ2Ｃｌ2／５％  ＭｅＯＨ（Ａ）；ＣＨ2Ｃｌ2／１０％  ＭｅＯＨ（Ｂ）。
（−）−２’−メチルフェニルカルバモイルエゼロリン（７）：
（−）−エゼロリン（４）  ０（０．１２ｇ，０．５５ｍｍｏｌ）を無水Ｅｔ2Ｏ（１０ｍＬ）に溶解し、金属ナトリウムの小片を加えた。窒素気流下、室温で約２分間撹拌した後、２−メチルフェニルイソシアネート（０．０９ｇ，０．７０ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。添加終了後ただちに溶媒を溜去した。残渣をシリカゲルカラム（溶媒系Ｂ）で精製して、泡沫状の（７）（０．８８ｇ，４６％）を得た；［α］D−６９．６°（ｃ＝０．５，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５２（Ｍ+＋１）；ＥＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５１（Ｍ+），（Ｍ+＋１）Ｃ21Ｈ26Ｎ3Ｏ2３５２．２０２５について算出したＨＲ  ＭＳ（ＦＡＢ）：３５２．２０２０，ＩＲ；３４１０，２９３０，１７４５；1Ｈ  ＮＭＲ  １．４６（ｓ，３Ｈ，Ｃ１０−ＣＨ3），１．９０〜２．１２（ｍ  ２Ｈ，ｃ３−Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−Ｐｈ），２．５５（ｓ，３Ｈ，Ｎ１−ＣＨ3），２．５８〜２．７０（ｍ，２Ｈ，Ｃ２−Ｈ2），２．９１（ｓ，３Ｈ，Ｎ*−ＣＨ3），４．１８（ｓ，1Ｈ，Ｃ９−Ｈ），６．３３（ｄ，Ｊ＝８．４，1Ｈ，Ｃ７−Ｈ），６．６３（ｂｒ  ｓ，1Ｈ，Ｎ−Ｈ），６．８５〜６．９５（ｍ，２Ｈ，Ｃ４−Ｈ，Ｃ６−Ｈ），７．０５（ｔ，Ｊ＝１Ｈ，Ｃ５’−Ｈ），７．１５〜７．２３（ｍ，ＣＨ，ＣＨ３’−Ｈ，Ｃ６’−Ｈ），７．８５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，Ｃ４’−Ｈ）。その他の全てのカルバミン酸塩：（−）−２’−４’−ジメチルフェニルカルバモイルエゼロリン（８），（−）−４’−イソプロピルカルバモイルエゼロリン（９），（−）４’−メチルフェニルカルバモイルエゼロリン（１０），（−）−２’，６’−ジエチルフェニルカルバモイルエゼロリン（１１），（−）−２’−エチルフェニルカルバモイルエゼロリン（１２），（−）−２’−イソプロピルフェニルカルバモイルエゼロリン（１３），（−）−フェニルカルバモイルエゼロリン（１４），（−）−（−）−２’，４’，６’−トリメチルフェニルカルバモイルエゼロリン（１５），ナフチルカルバモイルエゼロリン（１６），（−）−２’−クロロフェニルカルバモイルエゼロリン（１７）および（−）−２’，６’−ジクロロフェニルカルバモイルエゼロリン（１８）は、対応するイソシアン酸を用いて（−）−エゼロリン（４）から同様に調製し、（７）と類似したＩＲおよびＮＭＲスペクトルを示した。これらの化合物の主要なデータは表４に示す。
カルバミン酸塩：（−）−２’メチルフェニルカルバモイル−Ｎ１−ノルエゼロリン（１９），（−）−２’，４’−ジメチルフェニルカルバモイル−Ｎ１−ノルエゼロリン（２０）および（−）−４’−イソプロピルフェニル−カルバモイル−Ｎ１−ノルエゼロリン（２１）は、（４）の代わりに（−）−（Ｎ１）−ベンジルノルエゼロリン（５）を用い対応するイソシアネートと（５）とを反応させることにより同様に調製した。ついで、ベンジル保護基を除去し、ベンジルノルエゼロリン化合物からノルエゼロリン化合物を得た。これらの化合物の主要なデータは、表４に示す。
次に、（−）−２’−メチルフェニル−カルバモイル−（Ｎ１）−ベンジリノルエゼロリンからベンジル保護基を除去して化合物（１９）を得る例を示す。
（−）−２’メチルフェニルカルバモイル−Ｎ１−ノルエゼロリン（１９）：
（−）−２’メチルフェニルカルバモイル−（Ｎ１）−ベンジリノルエゼロリン（０．０９ｇ，０．２１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、炭素に吸収させた水酸化パラジウム（７ｍｇ）を加えた。常圧で５時間水素化した後、パラジウム触媒をセライトで濾過し、減圧下で溶媒を溜去した。残渣をプレパライブＴＬＣ（シリカゲルプレート  ２０００μｍ，ＣＨ2Ｃｌ2／１０％ＭｅＯＨ）でクロマトグラフし、泡沫状の化合物（１９）（０．０４ｇ，５６％）を得た；［α］D−６２．４°（ｃ＝０．５，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３８（Ｍ+＋１）；ＥＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３７（Ｍ+），Ｃ20Ｈ23Ｎ3Ｏ2  ３３７．１７９０について算出したＨＲ  ＭＳ（ＥＩ）（Ｍ+）：３３７．１７７６；1Ｈ  ＮＭＲ：１．４２（ｓ，３Ｈ，Ｃ１０−ＣＨ3），１．７０〜１．８０（ｍ，１Ｈ，Ｃ３−Ｈ），１．９５〜２．０８（ｍ，１Ｈ，Ｃ２−Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ，Ｃ２’−ＣＨ3），２．７０〜２．８０（ｍ，１Ｈ，Ｃ２−Ｈ），２．８１（ｓ，１Ｈ，Ｎ８−ＣＨ3），３．０１〜３．１０（ｄｄｄ，Ｊ＝２．５、２．５．２．５，１Ｈ，Ｃ２−Ｈ），４．５１（ｓ，１Ｈ，Ｃ９−Ｈ），６．２５（ｄ，Ｊ＝９．０，１Ｈ，Ｃ７−Ｈ），６．６３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，Ｎ−Ｈ），６．８３〜６．８６（ｍ，２Ｈ，Ｃ４−Ｈ，Ｃ６−Ｈ），７．０２（ｔ，Ｊ−７．５，１Ｈ，Ｃ５’−Ｈ），７．１５〜７．２２（ｍ，２Ｈ，Ｃ３’−Ｈ，Ｃ６’−Ｈ），７．８５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，Ｃ４’−Ｈ）。
化合物（２０）および（２１）は、化合物（１９）と類似したＩＲおよびＮＭＲスペクトルを示した（表ＩＩＩ参照）。
（−）−５−Ｏ−（２’−メチルフェニルカルバモイル）フィゾベノール（２３）：
（−）−フィゾベノール（６）（０．０４２ｇ，０．２０ｍｍｏｌ）を無水Ｅｔ2Ｏ（８ｍＬ）に溶解し、金属ナトリウムの小片を加えた。窒素気流下、室温で約２分間撹拌した後、２−メチルフェニル−イソシアネート（０．０３２ｇ，０．２４ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。添加終了後、反応混合液を室温でさらに１時間撹拌し、ついで１．５時間還流した。溶媒を溜去した後、残渣をシリカゲルカラム（溶媒系Ｂ）でクロマトグラフし、泡沫状の（２３）（ＴＬＣで純粋ではない）を得た。この物質は、１．５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2溶液を５ｍＬ／分の流速で流し、Ａｘｉｏｍシリカゲルカラムを用いたＨＰＬＣでさらに精製した。こうして得た泡沫状の物質（０．０３ｇ，４３％）は、ＴＬＣ上純粋であった：［α］D−３１．０°（ｃ＝１．０，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３９（Ｍ+＋１）；ＥＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３８（Ｍ+）；ＩＲ：３４００，２９５０，１７４０；1Ｈ  ＮＭＲ；１．４６（ｓ，３Ｈ，Ｃ１０−ＣＨ3），１．９５〜２．２０（ｍ  ２Ｈ，Ｃ３−Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ，Ｃ２’−ＣＨ3），２．９１（ｓ，３Ｈ，Ｎ８−ＣＨ3），３．４０〜３．５５（ｄｄｄ，Ｊ＝５．３；８．６；１１．０，1Ｈ，Ｃ２−Ｈ），３．９８（ｄｔ，Ｊ＝１．４；８．６  Ｈ，Ｃ２−Ｈ），５．１０（ｓ，１Ｈ，Ｃ９−Ｈ），６．３１（ｄ，Ｊ＝９．０，１Ｈ，Ｃ７−Ｈ），６．５５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，Ｎ−Ｈ），６．８５（ｍ，２Ｈ，Ｃ４−Ｈ，Ｃ６Ｈ），７．０５（ｔ，Ｊ＝７．４  １Ｈ，Ｃ５’−Ｈ），７．１３（ｍ，２Ｈ，Ｃ３’−Ｈ，Ｃ６’−Ｈ），７．８６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，Ｃ４’−Ｈ）。
化合物（２２）および（２４）は、上記と同様に２−メチルイソシアネートをそれぞれフェニルイソシアネートおよび４−イソプロピルフェニルイソシアネートを用い化合物（２３）と同様に合成した。化合物（２２）および（２４）は、化合物（２３）と類似したＩＲおよびＮＭＲスペクトルを示した。
表４には、本発明に係わる化合物の主要な物理的データを示す。表４における化合物番号は、表１および２における化合物番号と一致する。
0003708957.tif 000031
0003708957.tif 000032
エゼロリン
（−）−エゼロリン  ０（０．１２ｇ，０．５５ｍｍｏｌ）を無水Ｅｔ2Ｏ（１０ｍＬ）に溶解し、金属ナトリウムの小片を加えた。窒素気流下、室温で約２分間撹拌した後、２’−メチルフェニルイソシアネート（０．０９ｇ，０．７０ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。添加終了後ただちに、溶媒を溜去した。残渣をシリカゲルカラム（溶媒系Ｂ）でクロマトグラフし、泡沫状の（−）−２’−メチルフェニルカルバモイルエゼロリン（０．８８ｇ，４６％）を得た。［α］D−６９．６°（ｃ＝０．５，ＣＨＣｌ3）；ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５２（Ｍ+＋１）；ＥＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５１（Ｍ+）；（Ｍ+＋１）  Ｃ21Ｈ26Ｎ3Ｏ2  ３５２．２０２５について算出したＨＲ  ＭＳ（ＦＡＢ）：３５２．２０２０，ＩＲ；３４１０，２９３０，１７４５；1Ｈ  ＮＭＲ  １．４６（ｓ，３Ｈ，Ｃ１０−ＣＨ3），１．９０〜２．１２（ｍ  ２Ｈ，Ｃ３−Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−Ｐｈ），２．５５（ｓ，３Ｈ，Ｎ１−ＣＨ3），２．５８〜２．７０（ｍ，２Ｈ，Ｃ２−Ｈ2），２．９１（ｓ，３Ｈ，Ｎ*−ＣＨ3），４．１８（ｓ，１Ｈ，Ｃ９−Ｈ），６．３３（ｄ，Ｊ＝８．４，１Ｈ，Ｃ７−Ｈ），６．６３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，Ｎ−Ｈ），６．８５〜６．９５（ｍ，２Ｈ，Ｃ４−Ｈ，Ｃ６−Ｈ），７．０５（ｔ，Ｊ＝１Ｈ，Ｃ５’−Ｈ），７．１５〜７．２３（ｍ，ＣＨ，ＣＨ３’−Ｈ，Ｃ６’−Ｈ），７．８５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，Ｃ４’−Ｈ）。
その他の全てのカルバミン酸塩：（−）−２’−４’−ジメチルフェニルカルバモイルエゼロリン，４’−イソプロピルカルバモイルエゼロリン，（−）−２’−エチルフェニルカルバモイルエゼロリン，（−）−２’−イソプロピルフェニルカルバモイルエゼロリンおよびナフチルカルバモイルエゼロリンは、対応するイソシアネートと（−）−エゼロリンとから同様に調製した。これらの化合物の主要な物理的データは、以下に示す。
例２６：（−）−２’−４’−ジメチルフェニル−カルバモイルエゼロリン
主要なデータは次の通りである。泡沫状；［α］D−７９．６°（ｃ＝１，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６６；1Ｈ  ＮＭＲ  ２．２８（ｓ，３Ｈ，Ｃ２’−ＣＨ3），２．２９（ｓ，３Ｈ，Ｃ４’−ＣＨ3）。
例２７：（−）−４’−イソプロピルフェニルカルバモイルエゼロリン
主要なデータは次の通りである。ｍ．ｐ．（℃）１５２〜１５３；［α］D−６７．８°（ｃ＝１，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８０（Ｍ+＝１）；（Ｍ+＋１）  Ｃ23Ｈ30Ｎ3Ｏ2について算出したＨＲ  ＭＳ（ＦＡＢ）：３８０．２３３８；1Ｈ−ＮＭＲ：１．２３（ｄ，Ｊ＝６．８，６Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2）。
例２８：（−）−２’−エチルフェニルカルバモイルエゼロリン
主要なデータは次の通りである。泡沫状；［α］D−６２．８°（ｃ＝１，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６６（Ｍ+＝１）；（Ｍ+＋１）  Ｃ22Ｈ28Ｎ3Ｏ2について算出したＨＲ  ＭＳ（ＦＡＢ）：３６６．２１８２；1Ｈ−ＮＭＲ：１．２６（ｔ，Ｊ＝７．５，３Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ3），２．５５〜２．７８（ｍ，４Ｈ，Ｃ２−Ｈ，−ＣＨ2−ＣＨ3）。
例２９：（−）−２’−イソプロピルフェニルカルバモイルエゼロリン
主要なデータは次の通りである。泡沫状；［α］D−５８．８°（ｃ＝１，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８０（Ｍ+＝１）；（Ｍ+＋１）  Ｃ23Ｈ29Ｎ3Ｏ2について算出したＨＲ  ＭＳ（ＦＡＢ）：３７９．２２５９；1Ｈ−ＮＭＲ：１．３０（ｄ，Ｊ＝６．８，６Ｈ，−ＣＨ−（ＣＨ3）2）。
例３０：（−）−１−ナフチルカルバモイルエゼロリン
主要なデータは次の通りである。泡沫状；［α］D−６２．０°（ｃ＝１，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８８（Ｍ+＝１）；（Ｍ+＋１）  Ｃ24Ｈ26Ｎ3Ｏ2について算出したＨＲ  ＭＳ（ＦＡＢ）：３８８．２０２５；1Ｈ−ＮＭＲ：７．５１（ｍ，３Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝８．１，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝７．５，１Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝７．９，２Ｈ）。
関連カルバミン酸塩：（−）−２’メチルフェニルカルバモイル−Ｎ１−ノルエゼロリン，（−）−２’，４’−ジメチルフェニルカルバモイル−Ｎ１−ノルエゼロリン，（−）−４’−イソプロピルフェニルカルバモイル−Ｎ１−ノルエゼロリンおよびフェニルカルバモイル−Ｎ１−ノルエゼロリン，ならびに（−）−フェニル−カルバモイル−Ｎ１−ノルエゼロリンは、エゼロリンの代わりに（−）−（Ｎ１）−ベンジルノルエゼロリンを用い、対応するイソシアネートと（−）−（Ｎ１）−ベンジルノルエゼロリンを反応させることにより、同様に調製した。ついで、ベンジル保護基を除去し、ベンジルノルエゼロリン化合物からノルエゼロリン化合物を得た。
次の例は、（−）−２’−メチルフェニルカルバモイル−（Ｎ１）−ベンジリノルエゼロリンからベンジル保護基を除去して、（−）−２’−メチルフェニルカルバモイル−（Ｎ１）−ノルエゼロリンを合成する方法を示す。
例３１：（−）−２’−メチルフェニルカルバモイル−Ｎ１−ベンジルノルエゼロリン
（Ｎ1）−ベンジルノルエゼロリン（２．０ｇ）を無水Ｅｔ2Ｏ（１０ｍＬ）に溶解し、金属ナトリウムの小片を加えた。窒素気流下、室温で２分間撹拌した後、２−メチルフェニルイソシアネート（０．０４ｇ）を加えた。１５分間撹拌した後、溶媒を溜去し、残渣をクロマトグラフィーで精製して泡沫状のカルバミン酸塩を得た。［α］D−６２．０°（ｃ＝０．５，ＣＨＣｌ3）；ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２８（Ｍ+＋１）。
例３２−３４：（−）−Ｎ1−ベンジルノルエゼロリン系に属する例３２〜３４のカルバミン酸塩は、例３１に記載したように（−）−Ｎ1−ベンジルノルエゼロリンとイソシアネートから調製した。主要な物理的データは次の通りである。
例３２：（−）−２’−４’−ジメチルフェニルカルバモイル−（Ｎ１）−ベンジルノルエゼロリン
主要なデータは次の通りである。泡沫状；［α］D−５８．４°（ｃ＝０．５，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４２；1Ｈ  ＮＭＲ：２．２８（２ｓ，６Ｈ），３．９１（ｄｄ，２Ｈ）。
例３３：（−）−４’−イソプロピルフェニルカルバモイル−（Ｎ１）−ベンジルノルエゼロリン
主要なデータは次の通りである。泡沫状；［α］D−４４．８°（ｃ＝０．５，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５６（Ｍ+＋１）；1Ｈ−ＮＭＲ：１．２４（ｄ，Ｊ＝７．０，６Ｈ），３．９４（ｄｄ，２Ｈ）。
例３４：（−）−フェニルカルバモイル−（Ｎ１）−ベンジルノルエゼロリン
主要なデータは次の通りである：ｍ．ｐ．（℃）１５８〜１５９；［α］D−５６．４°（ｃ＝０．５，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１４（Ｍ+＋１）；1Ｈ−ＮＭＲ：３．９２（ｄｄ，２Ｈ）。
例３５：（−）−２’−メチルフェニルカルバモイル−Ｎ１−ノルエゼロリン
例３１から得た（−）−２’−メチルフェニルカルバモイル−Ｎ１−ベンジルノルエゼロリン（０．０９ｇ，０．２１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、炭素吸着水酸化パラジウム（７ｍｇ）を加えた。常圧で５時間水素化した後、パラジウム触媒をセライトで濾過し、減圧下で溶媒を除去した。残渣をプレパラティブＴＬＣ（シリカゲルプレート  ２０００μｍ，ＣＨ2Ｃｌ2／１０％ＭｅＯＨ）で精製し、泡沫状の（−）−２’−メチルフェニルカルバモイル−Ｎ１−ノルエゼロリン（０．０４ｇ，５６％）を得た。［α］D−６２．４°（ｃ＝０．５，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３８（Ｍ+＋１）；ＥＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３７（Ｍ+），Ｃ20Ｈ23Ｎ3Ｏ2  ３３７．１７９０について算出したＨＲ  ＭＳ（ＥＩ）（Ｍ+）：３３７．１７７６，  1Ｈ  ＮＭＲ：１．４２（ｓ，３Ｈ，Ｃ１０−ＣＨ3），１．７０〜１．８０（ｍ，１Ｈ，Ｃ３−Ｈ），１．９５〜２．０８（ｍ，１Ｈ，Ｃ２−Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ，Ｃ２’−ＣＨ3），２．７０〜２．８０（ｍ，１Ｈ，Ｃ２−Ｈ），２．８１（ｓ，１Ｈ，Ｎ８−ＣＨ3），３．０１〜３．１０（ｄｄｄ，Ｊ＝２．５，２．５．２．５，１Ｈ，Ｃ２−Ｈ），４．５１（ｓ，１Ｈ，Ｃ９−Ｈ），６．２５（ｄ，Ｊ＝９．０，１Ｈ，Ｃ７−Ｈ），６．６３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，Ｎ−Ｈ），６．８３〜６．８６（ｍ，２Ｈ，Ｃ４−Ｈ，Ｃ６−Ｈ），７．０２（ｔ，Ｊ−７．５，１Ｈ，Ｃ５’−Ｈ），７．１５〜７．２２（ｍ，２Ｈ，Ｃ３’−Ｈ，Ｃ６’−Ｈ），７．８５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，Ｃ４’−Ｈ）。
例３６〜３８：（−）−Ｎ１−ノルエゼロリン系に属する例３６〜３８のカルバミン酸塩は、例３５の項に記載したように、触媒脱ベンジル化によって一連の（−）−Ｎ１−ベンジルノルエゼロリンに属する例３２〜３４の化合物から調製した。主要な物理的データは次の通りである。
例３６：（−）−２’−４’−ジメチルフェニルカルバモイル−（Ｎ１）−ノルエゼロリン
主要なデータは次の通りである。泡沫状；［α］D−５５．４°（ｃ＝０．５，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５２；1Ｈ  ＮＭＲ：２．４５（２ｓ，６Ｈ）。
例３７：（−）−４’−イソプロピルフェニルカルバモイル−（Ｎ１）−ノルエゼロリン
主要なデータは次の通りである。ｍ．ｐ．（℃）８２〜８４；［α］D−４３．５°（ｃ＝０．５，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６６（Ｍ+＋１）；1Ｈ−ＮＭＲ：１．２３（ｄ，Ｊ＝７．０，６Ｈ）。
例３８：（−）−フェニルカルバモイル−（Ｎ１）−ノルエゼロリン
主要なデータは次の通りである。ｍ．ｐ．（℃）１２９〜１３１；［α］D−５０．４°（ｃ＝０．５，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２４（Ｍ+＋１）；1Ｈ−ＮＭＲ：７．２５〜７．５２（ｍ，５Ｈ）。
次の不活性化合物は、前記の方法を用いて調製した。
例Ａ’：（−）−４’−メチルフェニルカルバモイルエゼロリン
主要なデータは次の通りである。ｍ．ｐ．（℃）１４３〜１４５，［α］D−７４．２°（ｃ＝１，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５２（Ｍ+＝１）；（Ｍ+＋１）  Ｃ21Ｈ26Ｎ3Ｏ2について算出したＨＲ  ＭＳ（ＦＡＢ）：３５２．２０２５；1Ｈ−ＮＭＲ：２．３１（ｓ，３Ｈ，Ｃ４’−ＣＨ3）。
例Ｂ’：（−）−２’，６’−ジエチルフェニルカルバモイルエゼロリン
主要なデータは次の通りである。油状；［α］D−３６．１°（ｃ＝１，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９４（Ｍ+＝１）；（Ｍ+＋１）  Ｃ24Ｈ32Ｎ3Ｏ2について算出したＨＲ  ＭＳ（ＦＡＢ）：３９４．２４９５；1Ｈ−ＮＭＲ：１．２４（ｔ，Ｊ＝７．４，６Ｈ，２−ＣＨ2−ＣＨ3），２．６８（ｍ，６Ｈ，Ｃ２−Ｈ，２−ＣＨ2−ＣＨ3）。
例Ｃ’：（−）−２’，４’，６’−トリメチルフェニルカルバモイルエゼロリン
主要なデータは次の通りである。泡沫状；［α］D−５５．８°（ｃ＝１，ＣＨＣｌ3），ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８０（Ｍ+＝１）；1Ｈ−ＮＭＲ：２．２８（３ｓ，９Ｈ，Ｃ２’，Ｃ４’，Ｃ６’−ＣＨ3）。
比較用の（−）−フェニルカルバモイルエゼロリン化合物（（−）−フェンゼリン）は、次のように調製した。
例Ｄ’：（−）−フェニルカルバモイルエゼロリン：
（−）−エゼロリン  ０（０．１２ｇ，０．５５ｍｍｏｌ）を無水Ｅｔ2Ｏ（１０ｍＬ）に溶解し、金属ナトリウムの小片を加えた。窒素気流下、室温で約２分間撹拌した後、フェニルイソシアネート（０．０９ｇ，０．７０ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。添加終了後ただちに溶媒を溜去した。残渣をシリカゲルカラム（溶媒系Ｂ）で精製し、（−）−フェニルカルバモイルエゼロリン，ｍ．ｐ．（℃）１４２〜１４３（０．８８ｇ，４６％）を得た。［α］D−７４．２°（ｃ＝１，ＣＨＣｌ3）；ＣＩ  ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３８；1Ｈ  ＮＭＲ  ７．０１（ｔ，Ｊ＝７．４，１Ｈ，Ｃ４’−Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝７．４，２Ｈ，Ｃ３’−Ｈ，Ｃ５’−Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝７．４，２Ｈ，Ｃ２’−Ｈ，Ｃ６’−Ｈ）。この化合物の一般名は、（−）−フェンゼリンである。
表３および５の化合物番号は、上記の例と一致する。比較用の例Ｄ’は、（−）−フェンゼリンである。
下記の表５には、本発明に係わる化合物の主要な物理的データを示し、化合物番号は表３と一致する。
0003708957.tif 000033
0003708957.tif 000034
in vitroにおけるヒトＡＣｈＥおよび−ＢＣｈＥ阻害活性（ＩＣ50値）の検定
古典的酵素阻害試験を実施し、ＡＣｈＥおよびＢＣｈＥに対する誘導体の活性を定量した。Ｅｌｌｍａｎらの分光分析法（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７：８８，１９６１）を用いて、０．１ＭのＮａ3ＰＯ4緩衝液（ｐＨ  ８．０）におけるヒト赤血球ＡＣｈＥおよび血漿ＢＣｈＥに対する抗コリンエステラーゼ活性を測定した。採取直後の血漿を０．１ＭのＮａ3ＰＯ4（ｐＨ  ７．４）で１．１２５に希釈し、溶融赤血球も同様に１：２００に希釈した。ＡＣｈＥおよびＢＣｈＥ用の特異的基質としてそれぞれアセチル−Ｂ−メチルチオコリン（０．５ｍＭ）およびｓ−ブチルチオコリン（０．５ｍＭ）を用いた（基質２５μＬ、酵素２５μＬ、総容量：０．７５ｍＬ）。半対数的に１ｘ１０-5Ｍ〜３ｘ１０-10Ｍの濃度に希釈したフィゾスチグミン誘導体をあらかじめ酵素とともにインキュベートし（２１℃、３０分間）た後、基質を添加した。インキュベーション（３７℃で３０分間）終了後、波長を４１２ｎｍに設定したスペクトロフォトメータを用いて黄色のチオニトロベンゾエート陰イオンの生成率を測定した。完全な酵素阻害（フィゾスチグミンを１ｘ１０-5Ｍ添加）条件下で基質の非特異的加水分解率を測定し、供試化合物の測定値から差し引いた。最後に、公知（Ａｔａｃｋら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐｌ．Ｔｈｅｒ．２４９：２９４，１９８９）のフィゾスチグミンを外部標準として用いて、各化合物の活性を評価した。
各化合物のＡＣｈＥおよびＢＣｈＥに対する活性は、ＩＣ50値として表示した。ＩＣ50値は、酵素活性を５０％阻害する濃度（ｎｍｏｌ）と定義する（Ａｔａｃｋら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐｌ．Ｔｈｅｒ．２４９：２９４，１９８９に記載された方法で算出）。
Ｉｎ  ｖｉｖｏにおける活性持続時間の試験
ヘパリン化生理食塩水を充満したカテーテルを麻酔下のラット雄の右側大腿静脈および動脈内に挿入した後、動物をプラスターギブスで拘束し、温度を調節したエンクロージャー内で麻酔から覚醒させた。血漿試料を採取し、無処理動物のＡＣｈＥ活性レベルを定量した。外科手術９０分後に臭化ヘキサメソニウムを投与（５ｍｇ／ｋｇ，腹腔内）し、ついで１０分後に臭化メチルアトロピン（４ｍｇ／ｋｇ，ｓ．ｃ．）を投与した。これらの４級ニコチン様およびムスカリン様拮抗物質は、脳には移行しないが、コリンエステラーゼの阻害による末梢神経のコリン作動を阻害し、動物に対して有害である。外科手術２時間後に、（ｉ）フィゾスチグミン、（ｉｉ）フィゾスチグミン誘導体もしくは（ｉｉｉ）ＴＨＡを静脈内投与した。２分〜８時間間隔で血漿試料を採取した後、ただちに−７０℃で凍結し、ついでコリンエステラーゼ阻害を測定した。上記の方法に、ラットの血漿を用いた定量に必要な修正を加え、ＡＣｈＥ阻害を測定した。
薬剤は全て静脈内投与の場合と同じ方法で製剤した。約１００μＬのＴｗｅｅｎ  ８０／ＥｔＯＨ（３：１，Ｖ：Ｖ）に薬剤を溶解し、ついで等張生理食塩水を用いて１：９（Ｖ：Ｖ）に希釈した。Ｔｗｅｅｎ  ８０／ＥｔＯＨを使用しても、in vitroにおける試験（Ｙｕら，Ｈｅｌｙ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ  ７４，７６１〜７６６頁，（１９９１））で、化合物のＡＣｈＥもしくはＢＣｈＥ阻害に対する影響は認められなかった。コリンエステラーゼ阻害剤およびコリン作動剤の主要な作用である直腸温度および振せんの測定に先だって投与量を決定した。
図１には、フィゾスチグミンおよびその２’，４’−ジメチルフェニル  カルバミン酸塩誘導体によるin vivoにおけるアセチルコリンエステラーゼ（ＡＣｈＥ）阻害、すなわちラットにおけるこれらのコリンエステラーゼ阻害薬の経時的活性を示す。in vitroにおけるＩＣ50試験の結果から予想されるように、フィゾスチグミンおよび本特許に係わる置換フェニル  カルバミン酸塩（この場合、２’，４’−ジメチルフェニル−フィゾスチグミン）はin vivoにおいてすぐれたコリンエステラーゼ阻害を示した。しかし、フィゾスチグミンは静脈内投与後の酵素阻害の持続時間が短い。阻害率は投与２分後以内に最高値の４６％に達したが、その後１５分以内に急速に２５％まで低下し、１時間後にはほとんど認められなかった。同量の２’，４’−メチルフェニル  カルバミン酸塩を投与した場合、投与後２分で６０％のＡＣｈＥ阻害が認められた。この阻害率は、２時間一定レベルに保たれた後、徐々に低下し、投与後８時間で３６％まで低下した。２’，４’−ジメチルフェニル  フィゾスチグミンは活性、および特異性が高くまた持続性も長いにもかかわらず、副作用もしくは毒性を示さないという所見は驚くべきもので、これらの化合物が強力で新規な選択性コリンエステラーゼ阻害剤であることを裏付けるものである。
上記の具体例は、本発明の一般的な特性を完全に記載するためのものであり、現在の知識を適用することにより、一般的な概念の範囲内で前記の具体例を各種の用途に容易に修正もしくは応用することができる。したがって、このような応用は、開示された具体例と同じ意味および範囲内にあると理解されるものである。ここに用いた語句もしくは専門用語は、説明を目的とするもので、限定を目的とするものではない。
【図１】
0003708957.tif 000036