【手続補正書】
【提出日】令和3年9月27日(2021.9.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）をコードする核酸変異体であって、
前記核酸変異体は、野性型ＦＶＩＩＩにおけるＴＴＡ、ＴＴＧ、ＣＴＴ、ＣＴＣ又はＣＴＡと対比してＣＴＧに変化した１つ以上のロイシンコドン、及び、少なくとも４５．２％のＧＣ含有量を有し、配列番号１の配列と９４％以上の配列同一性を有し、
前記核酸変異体によってコードされるＦＶＩＩＩは、野性型ＦＶＩＩＩ発現と比較して発現が多い、核酸変異体。
【請求項２】
第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）をコードする核酸変異体であって、
前記核酸変異体は、野性型ＦＶＩＩＩにおけるＴＴＡ、ＴＴＧ、ＣＴＴ、ＣＴＣ又はＣＴＡと対比してＣＴＧに変化した１つ以上のロイシンコドン、及び、少なくとも４５．２％のＧＣ含有量を有し、配列番号１の配列と９４％以上同一であり、
前記核酸変異体によってコードされるＦＶＩＩＩがＢドメイン欠損を含み、Ｂドメイン欠損発現を含む野性型ＦＶＩＩＩと比較して発現が多い、核酸変異体。
【請求項３】
前記核酸変異体は、前記野性型ＦＶＩＩＩのゲノム組込みと比較して、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター中により効率的にゲノム組込される、請求項１又は２に記載の核酸変異体。
【請求項４】
前記核酸変異体によってコードされるＦＶＩＩＩが、野性型ＦＶＩＩＩと比較して又はＢドメイン欠損を含む野性型ＦＶＩＩＩと比較してより大きな生物活性を示す、請求項１〜３のいずれか１項に記載の核酸変異体。
【請求項５】
前記生物活性は、凝固分析、又は、ＦＶＩＩＩアッセイ若しくはＦＶＩＩＩ欠失モデルにおける出血減少によって決定される、請求項４に記載の核酸変異体。
【請求項６】
前記核酸変異体のコドンの少なくとも８５％は、ＣＴＧロイシンコドンである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の核酸変異体。
【請求項７】
前記核酸変異体は、野性型ＦＶＩＩＩにおけるＴＴＡ、ＴＴＧ、ＣＴＴ、ＣＴＣ又はＣＴＡロイシンコドンから変化したすべてのＣＴＧロイシンコドンを有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の核酸変異体。
【請求項８】
前記核酸変異体は、野性型ＦＶＩＩＩにおいてＡＡＡリジンコドンと対照として１つ以上のＡＡＧリジンコドンを有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の核酸変異体。
【請求項９】
前記核酸変異体は、５０−５９％、５０−５６％、５０−５３％又は４５．２−５９．２％のＧＣ含有量を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の核酸変異体。
【請求項１０】
前記核酸変異体は、野生型ヒトＦＶＩＩＩ核酸又はＢドメイン欠損を含む野生型ヒトＦＶＩＩＩ核酸に対して少なくとも７５％同一である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の核酸変異体。
【請求項１１】
前記核酸変異体がヒトＦＶＩＩＩであり、及び／又は、前記野性型ＦＶＩＩＩ又はＢドメイン欠損を含む野性型ＦＶＩＩＩがヒトＦＶＩＩＩである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の核酸変異体。
【請求項１２】
前記核酸変異体は配列番号１−７及び９のいずれかで構成される、請求項１に記載の核酸変異体。
【請求項１３】
ＰＡＣＥ／フーリン切断部位をコードするコドンの１個、２個、３個又は４個すべてが欠損している、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の核酸変異体。
【請求項１４】
位置１６４５−１６４８からＨＨＱＲ又はＲＨＱＲと示されているＰＡＣＥ／フーリン切断部位をコードするコドンの１個、２個、３個又は４個すべてが欠損している、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の核酸変異体。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれかの核酸変異体を含む発現ベクター。
【請求項１６】
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、プラスミド及びレンチウイルスベクターからなる群から選択される、請求項１５に記載の発現ベクター。
【請求項１７】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４又はＡＡＶ−２ｉ８ＡＡＶ血清型を含む、請求項１６に記載の発現ベクター。
【請求項１８】
イントロン、発現制御因子、１つ以上のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆方向末端リピート（ＩＴＲ）、及び／又は、フィラーポリヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１５に記載の発現ベクター。
【請求項１９】
前記イントロンが前記変異体ＦＶＩＩＩの内部若しくは前記変異体ＦＶＩＩＩに隣接しているか、又は、前記発現制御因子が前記変異体ＦＶＩＩＩに作用可能に連結しているか、又は、前記ＡＡＶ  ＩＴＲが前記変異体ＦＶＩＩＩの５’末端若しくは３’末端に隣接しているか、又は、前記フィラーポリヌクレオチド配列が前記変異体ＦＶＩＩＩの５’末端又は３’末端に隣接している、請求項１８に記載の発現ベクター。
【請求項２０】
前記発現制御因子は、構成的制御因子、若しくは、調節可能制御因子、又は、組織特異的発現制御因子、若しくは、プロモーターを含む、請求項１８に記載の発現ベクター。
【請求項２１】
前記発現制御因子は、肝臓中の発現を与える因子を含む、請求項１８に記載の発現ベクター。
【請求項２２】
前記発現制御因子はＴＴＲプロモーターか変異体ＴＴＲプロモーターを含む、請求項１８に記載の発現ベクター。
【請求項２３】
前記変異体ＴＴＲプロモーターは配列番号８で構成される、請求項２２に記載の発現ベクター。
【請求項２４】
前記ＩＴＲは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、若しくは、ＡＡＶ−２ｉ８ＡＡＶ血清型又はこれらの組み合わせのいずれかの１つ以上のＩＴＲを含む、請求項１８に記載の発現ベクター。
【請求項２５】
請求項１〜１４のいずれかに記載の核酸変異体又は請求項１５〜２４のいずれかの発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項２６】
請求項１〜１４のいずれかの核酸変異体又は請求項１５〜２４のいずれかの発現ベクターを含むＡＡＶベクター。
【請求項２７】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、又は、ＡＡＶ−２ｉ８のＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３配列の少なくとも１つに対して７５％以上の配列同一性を有するＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３キャプシド配列の少なくとも一つを含む、請求項２６に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２８】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４及びＡＡＶ−２ｉ８  ＡＡＶ血清型のいずれかから選択されるＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３キャプシド配列の少なくとも１つを含む、請求項２６に記載のＡＡＶベクター。
【請求項２９】
生物学的適合性を有する担体又は賦形剤中に、請求項１〜１４のいずれかに記載の核酸変異体、請求項１５〜２４のいずれかに記載の発現ベクター、又は、請求項２６〜２８のいずれかのウイルス若しくはＡＡＶベクターを含み、空のカプシドＡＡＶを任意に含む、医薬組成物。
【請求項３０】
哺乳動物又は哺乳動物細胞へ核酸配列を送達又は移動するための薬剤の製造における発現ベクター、ウイルス、又はＡＡＶベクターの使用であって、
前記薬剤は、請求項１〜１４のいずれかに記載の核酸変異体、請求１５〜２４のいずれかに記載の発現ベクター、又は、請求項２６〜２８のいずれかのウイルス若しくはＡＡＶベクターを含む、発現ベクター、ウイルス、又はＡＡＶベクターの使用。
【請求項３１】
第ＶＩＩＩ因子を必要とする哺乳動物への送達のための薬剤の製造における発現ベクター、ウイルス、又はＡＡＶベクターの使用であって、前記薬剤は、請求項１〜１６のいずれかに記載の核酸変異体、請求項１５〜２４のいずれかに記載の発現ベクター又は請求項２６〜２８のいずれかのウイルス若しくはＡＡＶベクターを含む、発現ベクター、ウイルス、又はＡＡＶベクターの使用。
【請求項３２】
前記第ＶＩＩＩ因子は、前記哺乳動物の細胞、組織又は器官において発現される請求項３０又は３１に記載の発現ベクター、ウイルス、又はＡＡＶベクターの使用。
【請求項３３】
前記哺乳動物の細胞が分泌細胞を含む、請求項３０又は３１に記載の発現ベクター、ウイルス、又はＡＡＶベクターの使用。
【請求項３４】
前記哺乳動物の細胞が内分泌細胞又は内皮細胞を含む、請求項３０又は３１に記載の発現ベクター、ウイルス、又はＡＡＶベクターの使用。
【請求項３５】
前記哺乳動物の細胞が肝細胞、シヌソイドの内皮細胞、巨核球、血小板細胞又は造血幹細胞を含む、請求項３０又は３１に記載の発現ベクター、ウイルス、又はＡＡＶベクターの使用。
【請求項３６】
前記哺乳動物の組織又は器官が肝臓を含む、請求項３２に記載の発現ベクター、ウイルス、又はＡＡＶベクターの使用。
【請求項３７】
前記哺乳動物は、不十分な量の第ＶＩＩＩ因子タンパクを生産するか、又は、不完全若しくは異常な第ＶＩＩＩ因子タンパクを生産する、請求項３０又は３１に記載の発現ベクター、ウイルス、又はＡＡＶベクターの使用。
【請求項３８】
前記哺乳動物には血友病Ａを有する、請求項３０又は３１に記載の発現ベクター、ウイルス、又はＡＡＶベクターの使用。
【請求項３９】
静脈内に、動脈内に、筋肉内に、皮下に、腔内に、又は、挿管若しくはカテーテルによって送達するための前記薬剤の製造における、請求項１〜１４のいずれかに記載の核酸変異体、請求項１５〜２４のいずれかに記載の発現ベクター、請求項２６〜２８のいずれかに記載のウイルス若しくはＡＡＶベクターの使用、又は請求項３０〜３８のいずれかに記載の発現ベクター、ウイルス、若しくはＡＡＶベクターの使用。
【請求項４０】
前記哺乳動物がヒトである、請求項３０又は３１に記載の発現ベクター、ウイルス、又はＡＡＶベクターの使用。
【請求項４１】
配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、及び配列番号１１のいずれか１つに従う、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）をコードする核酸変異体。