(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラフィノースを有効成分として含有すること、を特徴とする抗カンジダ剤。
【請求項２】
ラフィノースを有効成分として含有すること、を特徴とする経口抗カンジダ剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗カンジダ組成物に関するものであり、更に詳細には、ラフィノース（オリゴ糖）を有効成分とするカンジダ菌排除用組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
カンジダ菌（Candida）はヒトの腸内に常在しており、各種疾患やその化学的治療などで宿主の免疫能が低下すると、真菌症を引き起こす日和見菌として知られている。また Candida はアレルギー疾患のアレルゲンの一つでもある。この他、腸管内の Candida 自体あるいはそれの出すカンジダトキシン（Candidatoxin）が、アトピー性皮膚炎に深い関わりがあるとされている（松田三千雄ら：アレルギーの症例、１１，７６８（１９９１））。
【０００３】
一方、オリゴ糖は、２〜１０個の単糖類が結合した糖であり、ビフィズス菌を増殖させ、腸の働きを助ける性質がある。最近は乳酸菌飲料、清涼飲料水、缶コーヒーなどに使用されている。
ラフィノースは、ビフィズス菌・乳酸桿菌に資化されるオリゴ糖の一つで、植物界に広く分布する三糖類である。白色で針状の結晶構造をしており、ビートなどに含まれている。ラフィノースは、ビフィズス菌の増殖を誘導し、大腸菌やウェルシュ菌などの増殖を抑制すると考えられる。
【０００４】
しかしながら、ラフィノースがカンジダ菌を抑制、排除することは従来知られていないし、ましてや本発明のようにその作用を実際に in vivo で確認したことは全く報告されていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
カンジダ菌による真菌症の発症、アトピー性皮膚炎との重大な関連性の指摘等、カンジダ菌による害作用はもはや看過できなくなった技術の現状において、カンジダ菌を抑制、排除ないし死滅させる効率的なシステムの開発が強く希求されている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記目的を達成するために各方面から検討の結果、抗カンジダ作用のほかに安全性の面にも注目し、経口投与も可能な抗カンジダ組成物を開発することとし、副作用の少ない天然物に着目した。
【０００７】
そして数多くの天然物の内、オリゴ糖、特にラフィノースに着目し、鋭意研究の結果、本発明者らは、カンジダ菌がラット腸管内に定着したカンジダ菌定着ラットの創製にはじめて成功し、この新規モデル動物を用いて各方面から幅広い研究を行った。その結果、ラフィノースの投与による消化管内容物の検討、ミクロフローラの変化、カンジダ菌の減少等について、in vitro のみではなく in vivo で実際に確認し、更に研究を重ねて本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、ラフィノース（オリゴ糖）を有効成分とする抗カンジダ組成物に関するものであり、本発明によれば、安全性が高く、経口投与も可能な卓越した抗カンジダ組成物が提供される。
以下、本発明について詳述する。
【０００９】
本発明に係る抗カンジダ組成物は、ラフィノースを有効成分としてこれに常用される無機又は有機の担体ないし医薬用賦形剤を加えて、常法にしたがい、固体、半固体又は液体の形で、経口投与剤のほか、外用剤等の非経口投与剤に製剤化する。
経口投与剤の場合、その投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、うがい薬等が挙げられる。これらの各種製剤は、主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。
【００１０】
その使用量は、症状、年令、体重、投与方法および剤形等によって異なるが、通常、成人１日当り１〜１５ｇ、好ましくは３〜１０ｇを経口投与することができる。
本発明に係る有効成分は、天然起源でありしかも食品として使用されているものを起源とするため、毒性については格別の問題はなく、ラットに対して１日当り５００ｍｇ経口投与しても急性毒性は全く認められなかった。したがって、必要あれば上記範囲よりも多量に使用してもさしつかえないが、ラフィノースは難消化性糖類であるため、１日１０ｇ以上投与した場合、人によって浸透圧性の下痢を伴うこともある。
【００１１】
本発明に係る抗カンジダ組成物は、ヒトのほか、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、スイギュウといった各種の哺乳動物に対して適用することができ、また、ウサギ、ラット、マウスといった実験動物に対しても適用することができる。
そして有効成分についても、精製されたラフィノースを使用するのが最適ではあるが、例えば一部の経口投与剤の場合においては、甜菜糖の製造工程で副生するシロップの加工品といった精製度は多少低下したものを使用することも可能である。
【００１２】
以下、本発明の実施例について述べる。
【００１３】
【実施例１】
以下により、３週齢 Wistar 系雄ラットにカンジダ菌（Candida albicans JCM 1542）を強制経口投与し、糞便中のカンジダ菌の排泄を調査し、カンジダ菌が腸管内に定着することを確認し、カンジタ菌定着ラットを作製するとともに、オリゴ糖摂食ラットにカンジダ菌を投与し、その定着を調査した。
【００１４】
（１）方  法
下記表１に示す基本飼料（スターチ６１．７％、カゼイン２３％、セルロース５％を主要成分とする飼料）でラットを１週間飼育した後、試験飼料に切り換え、３日目に１０10ケ／ｍｌに調製したカンジダ菌（Candida albicans JCM 1542）を１ｍｌ強制経口投与し、１５日目に解剖し、小腸及び盲腸中のカンジダ菌数を調査した。
【００１５】
【表１】
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【００１６】
（２）試験群（各群３匹）
Ａ群：基本飼料                    カンジダ菌投与なし
Ｂ群：基本飼料                    カンジダ菌投与
Ｃ群：５％ラフィノース添加飼料    カンジダ菌投与
【００１７】
（３）結  果
Ａ群では糞便中にカンジダ菌は検出されなかった。Ｂ、Ｃ群ではカンジダ菌投与後１日目に糞便中より高レベルのカンジダ菌が検出されたが、それ以降は１０4ケ／ｇ前後のレベルで安定して推移し、ラットの腸管にカンジダ菌が定着したことが示された。またＢ群よりＣ群の方が低値を示す傾向であった。盲腸内のカンジダ菌の菌数は糞便中のそれよりおよそ１０倍ほど高値を示し、小腸および盲腸においてＣ群の菌数はＢ群のおよそ１／１０であった。ラフィノース投与で腸管内のカンジダ菌を排除できる可能性が示された（図１：但し、実線は基本飼料群を示し、破線はラフィノース添加群を示す）。
【００１８】
【実施例２】
カンジダ菌定着ラットを作製し、該ラットにオリゴ糖を投与して、オリゴ糖（ラフィノース）によるカンジダ菌の排除効果を調査、確認した。
【００１９】
（１）方  法
基本飼料（但し、コーンスターチにかえてスクロースを配合）でラットを１週間飼育した後、１０10ケ／ｍｌに調製したカンジダ菌（Candida albicans JCM 1542）を１ｍｌ経口強制投与し、投与４日目から試験飼料を摂取させた。１２日間飼育した後、盲腸内容物を調査した。
【００２０】
（２）試験群（１群５匹）
Ａ群：基本飼料                    カンジダ菌投与
Ｂ群：５％ラフィノース添加飼料    カンジダ菌投与
【００２１】
（３）結  果
実施例１で示されたほどの差は認められなかったが、同様の傾向を示した（図２：但し、実線は基本飼料群を示し、破線はラフィノース添加群を示す）。
【００２２】
【実施例３】
カンジダ菌定着ラットにオリゴ糖（ラフィノース、ラクチュロース）添加飼料を与え、特にラフィノースが腸管内のカンジダ菌の抑制に有用であることを以下により調査、確認した。
【００２３】
（１）方  法
３週齢 Wistar 系雄ラット１８匹を基本飼料で１週間予備飼育後、１０10ケ／ｍｌに調製したカンジダ菌(Candida albicans JCM1542）を１ｍｌを強制経口投与した。１週間後体重の平均値が等しくなるように３群に分けし、試験飼料で２週間飼育し、最終日の午前８時から１０時の間に断頭屠殺した後、腸内容物を摘出し、分析に供した。
【００２４】
１）試験群（各群６匹）
コントロール群：基本飼料（Ｃ）
ラフィノース群：Ｃ＋５％ラフィノース
ラクチュロース群：Ｃ＋５％ラクチュロース
【００２５】
２）飼料組成
実施例１で使用した基本飼料を用いた。但し、オリゴ糖は添加量に相当するコーンスターチを減らして、添加した。
【００２６】
３）分析項目
盲腸フローラ
回腸フローラ（特に盲腸より２つ目のパイエル板から上流部）
【００２７】
４）統計処理
ボンフェローニの多重比較を用いた。また検出率の異なる菌については、シェッフェの多重比較を用いた。菌の検出率の検定は、フィッシャーの直接確率計算法を用いた。
【００２８】
（２）結  果
上記試験の結果、摂食量および増体重に有意な差は認められなかった。試験飼料に切り替えた直後は、ラフィノース群（Ｒａｆｆ群）、ラクチュロース群（Ｌａｃ群）の半数のラットに軟便傾向が見られたが、いずれも数日間で解消した。具体的には、それぞれ次のような結果が得られた。
【００２９】
盲腸の内容物重量は、Ｒａｆｆ群とＬａｃ群で有意に増加していた。盲腸内容物と回腸内容物のｐＨは、Ｒａｆｆ群とＬａｃ群で有意に低下していた（表２）。盲腸の有機酸量は、Ｒａｆｆ群とＬａｃ群で酢酸とプロピオン酸、ｎ−酪酸が有意に増加し（表３）、盲腸内容物１ｇあたりの有機酸濃度では、Ｒａｆｆ群で酢酸が有意に増加していた（表４）。回腸内容物１ｇあたりの有機酸濃度は、Ｒａｆｆ群で酢酸が有意に増加していた（表５）。
【００３０】
【表２】
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【００３１】
【表３】
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【００３２】
【表４】
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【００３３】
【表５】
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【００３４】
盲腸フローラのうち、嫌気性菌については、Ｒａｆｆ群とＬａｃ群で Bifidobacterium が有意に増加し、それに伴って総菌数も有意に増加した。またＲａｆｆ群では Peptococaceae が有意に増加し、Clostridium の検出率の有意な増加がＲａｆｆ群とＬａｃ群で認められた。好気性菌については、Ｒａｆｆ群で Enterobacteriaceae の有意な減少が認められた（表６）。
回腸フローラでは、Ｒａｆｆ群とＬａｃ群で Enterobacteriaceae と Streptococcus の有意な減少が認められた（表７）。
【００３５】
【表６】
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【００３６】
【表７】
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【００３７】
盲腸内容物中の カンジダ菌はＲａｆｆ群で有意に減少し、Ｌａｃ群についても減少傾向が認められた。回腸内容物のカンジダ菌についても同様の傾向が認められた（図３）。
【００３８】
宿主に消化吸収されることのないオリゴ糖は、腸内細菌の生息する消化管下部に達し、主にビフィズス菌に資化される。その時産生される有機酸は、消化管内のｐＨを低下させ、耐酸性のない有害菌は抑制されると一般的にいわれている。実施例３においても、Ｒａｆｆ群とＬａｃ群で、盲腸および回腸内容物のｐＨは有意に低下し、有機酸の有意な増加が観察された。
【００３９】
【表８】
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【００４０】
表８に示すように、Ｒａｆｆ群およびＬａｃ群で減少した回腸 EnterobacteriaceaeとStreptococcusの菌数は、回腸ｐＨと有意な強い正の相関が認められた。またこれらの菌の間にも正の相関がみられた。以上のことから EnterobacteriaceaeとStreptococcusの減少はｐＨの低下と関係があることが推察される。一方耐酸性のあるカンジダ菌の菌数は回腸ｐＨや回腸 Enterobacteriaceae、Streptococcusと相関はみられなかった。よってカンジダ菌の減少メカニズムは EnterobacteriaceaeやStreptococcusのそれと異なるのではないかと思われる。
【００４１】
これらの結果から、ラフィノースが腸管内のカンジダ菌を抑制することが明かとなった。
【００４２】
【実施例４】
カンジダ菌定着ラットにオリゴ糖（ラフィノース）１および５％添加飼料を与え、特に５％ラフィノース添加飼料の場合において、腸管内のカンジダ菌を顕著に抑制することを以下により調査、確認した。
【００４３】
（１）方法
３週齢Wistar系雄ラット１８匹を基本飼料で１週間予備飼育後、１０10ケ／ｍｌに調製したカンジダ菌（Candida albicans JCM 1542）を１ｍｌ強制経口投与した。基本飼料で１週間飼育した後、体重の平均値が等しくなるように３群に分け、試験飼料で５週間飼育した。
以後、実施例３と同様に処理した。
【００４４】
１）試験群（各群６匹）
コントロール群：基本飼料（Ｃ）
１％ラフィノース群：Ｃ＋１％ラフィノース
５％ラフィノース群：Ｃ＋５％ラフィノース
【００４５】
２）飼料組成
実施例３と同様に作成した。
３）分析項目
盲腸内容物のカンジダ菌数
回腸内容物のカンジダ菌数（特に盲腸より２つ目のパイエル板から上流部）
４）統計処理
ボンフェローニの多重比較を用いた。
【００４６】
（２）結果
得られた結果を図４に示した。この結果から明らかなように、ラフィノースが腸管内のカンジダ菌を抑制すること、しかも特に５％ラフィノースの場合にすぐれたカンジダ菌抑制効果が奏されることが盲腸及び回腸のいずれにおいても立証された。
【００４７】
【発明の効果】
本発明によれば、ラフィノースを用いることにより、すぐれたカンジダ菌抑制効果が奏され、カンジダ菌による真菌症の予防／治療に有効であるだけでなく、アレルゲンのひとつであるカンジダ菌を排除することにより、アトピー性皮膚炎の改善も期待できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１における菌数の測定結果を示す。
【図２】実施例２における菌数の測定結果を示す。
【図３】盲腸及び回腸におけるラフィノースのカンジダ菌抑制効果を示す。
【図４】各種ラフィノース濃度によるカンジダ菌抑制効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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