(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
固体培地の溶解水以外の各成分を溶解水に溶解し、得られる溶液を固化し、固化した培地を乾燥して水を除去することを含み、除去する水の量は、溶解水の少なくとも５％であって、水の除去後の固体培地の１０分間平均吸水速度が少なくとも０．０５ｍｌ／分となる量であり、除去する水の量を除いた溶解水の量は、所定量の９７〜１０３％であることを特徴とする寒天固体培地の製造方法によって得られる、１０分間平均吸水速度が少なくとも０．０５ｍｌ／分である寒天固体培地。
【請求項２】
除去する水の量が、溶解水の少なくとも３０％である請求項１記載の固体培地。
【請求項３】
固体培地の水分含量が少なくとも９０％である請求項１又は２に記載の固体培地。
【請求項４】
固体培地の溶解水以外の各成分を溶解水に溶解し、得られる溶液を固化し、固化した培地を乾燥して水を除去することを含み、除去する水の量は、溶解水の少なくとも５％であって、水の除去後の固体培地の１０分間平均吸水速度が少なくとも０．０５ｍｌ／分となる量であり、除去する水の量を除いた溶解水の量は、所定量の９７〜１０３％であることを特徴とする寒天固体培地の製造方法。
【請求項５】
除去する水の量が、溶解水の少なくとも３０％である請求項４記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、各種微生物の増殖、試験等に使用する固体培地及びその製造方法に関する。
背景技術
従来、固体培地を乾燥させた例として、プラスチック製のシャーレに注入して固化させたものを凍結真空乾燥した乾燥固体培地が知られている（特公昭６０−１９９８８号公報。以下、従来技術１と記載する。）。
また、寒天等のゲル化剤を含み、無菌水を添加すると容易にほぼフィルム化前の培地に復元されるフィルム状の乾燥固体培地が知られている（特開平６−３１１８８０号公報。以下、背景技術２と記載する。）。
しかしながら、これらの従来技術には、次に記載するとおりの問題点があった。
前記従来技術１及び従来技術２は、培地の保存性を向上させるために適用されるもので、最終的な固体培地組成中の水分含量が５０％以下となるまで、乾燥されていることから、使用時の培地の完全な復元に約３時間にも及ぶ長い時間を必要とするという問題点を有している。
また、前記従来技術により得られた乾燥固体培地は、前記のとおり復元に長時間を必要とするため、１乃至１０分間という比較的短時間の復元では、復元が不十分であり、微生物検査に使用した場合、後記する試験例の結果から明らかなとおり、培地が十分に復元していないため、食品の微生物検査等において重要な菌種であるスタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）ＡＴＣＣ  ６５３８Ｐ、バシラス・ステアロサーモフィラス・バル・カリドラクティス（Bacillus stearothermophilus var. calidolactis）ＮＩＺＯ  Ｃ９５３等の微生物の生育が一部阻害され、正確な微生物数を計測できないという問題点を有している。
即ち、従来の乾燥固体培地は、復元のために長時間を要し、迅速で正確な微生物数の測定試験には適さないという問題点を有している。
また、固体培地の作成後、培地表面の過剰な水分を除くために、乾燥することが知られている。この乾燥では、所定の組成で作成した固体培地から溶解水の一部が除去されることになるので、実際に微生物が培養されるときの水分含量は、固体培地の特定に用いられる組成における量である所定量からかなり異なることになる。このような培地の乾燥が微生物の培養に与える影響は無視できないものである。例えば、綿栓した試験管で培地を数週間保存した場合でも、乾燥などのために微生物の生育が悪くなることがあることが知られている。また、コントロールされた水分の除去が行われないので、固体培地の組成が一定にならないことがある。従って、微生物の培養試験、特に培地の水分含量の影響を受けやすい微生物の培養試験においては、再現性のある正確な結果が得られないことがある。
発明の開示
本発明の目的は、吸水速度に優れ、短時間に大量の試料を塗抹することが可能で、迅速で正確な微生物数の測定試験に最適な固体培地、及びその製造方法を提供することである。
本発明者らは、前記従来技術に鑑みて、鋭意検討した結果、固体培地の各成分を所定量より多い量の溶解水に溶解し、得られる溶液を固化し、固化した培地を乾燥して溶解水の過剰量とほぼ同量の水を除去することにより得られる固体培地が、乾燥に起因する微生物の生育阻害が認められず、吸水速度に優れ、短時間に大量の試料を塗抹することが可能であり、迅速で正確な微生物数の測定試験に最適な固体培地であることを見い出し、本発明を完成した。
本発明は、固体培地の溶解水以外の各成分を溶解水に溶解し、得られる溶液を固化し、固化した培地を乾燥して水を除去することを含み、除去する水の量は、水の除去後の固体培地の１０分間平均吸水速度が少なくとも０．０５ｍｌ／分となる量であり、溶解水の量は、除去する水の量とほぼ同量、所定量より多いことを特徴とする固体培地の製造方法によって得られる、１０分間平均吸水速度が少なくとも０．０５ｍｌ／分である固体培地（以下、「本発明の固体培地」ともいう）を提供する。
本発明の固体培地においては、除去する水の量が、溶解水の少なくとも５％であることが好ましく、溶解水の少なくとも３０％であることがさらに好ましい。
本発明の固体培地は、水分含量が少なくとも９０％であることが好ましい。
本発明はまた、固体培地の溶解水以外の各成分を溶解水に溶解し、得られる溶液を固化し、固化した培地を乾燥して水を除去することを含み、除去する水の量は、水の除去後の固体培地の１０分間平均吸水速度が少なくとも０．０５ｍｌ／分となる量であり、溶解水の量は、除去する水の量とほぼ同量、所定量より多いことを特徴とする固体培地の製造方法を提供する。
本発明の製造方法においては、除去する水の量が、溶解水の少なくとも５％であることが好ましく、溶解水の少なくとも３０％であることがさらに好ましい。
本明細書において、固体培地とは、寒天等のゲル化剤で固化させた平板、斜面培地等の使用時に固体状の培地を意味する。
溶解水の所定量とは、培地は一般にその組成により特定（定義）されているが、その培地の特定に用いられる組成における水の量である。溶解水の所定量とは、固体培地の水以外の成分を溶解するために配合される水の量を意味し、固体培地の成分に水溶液とされた成分がある場合には、この成分中の水の量は含まない。
１０分間平均吸水速度とは、試料平板（円形、外径９ｃｍ、内径８．６ｃｍ（面積：５８．１ｃｍ2）、培地量１５ｇ）の総重量（Ｂ）を測定し、平板培地上にイオン交換水１０ｍｌを添加して吸水を開始し、１０分経過時点で未吸水の水を廃棄し、シャーレ壁面に付着している水分を拭き取り、吸水処理後の試料平板の総重量（Ａ）を測定し、次式により算出される吸水速度である。測定は２５℃で実施される。試料平板の面積が上記面積と異なる場合には、上記面積当たり１０ｍｌになる量のイオン交換水を用いて試験を行い、上記面積当たりの吸水速度に換算する。
吸水速度（ｍｌ／分）＝（Ａ−Ｂ）／１０
乾燥による水の除去量は、乾燥減量の測定により算出される。即ち、乾燥前の培地重量（ａ）及び乾燥後の培地重量（ｂ）から、乾燥減量、いわゆる減水量（ｃ）は、ａ−ｂ＝ｃにより求められる。次いで、溶解水の総配合量（ｄ）と、前記減水量（ｃ）から水の除去量、すなわち水の乾燥除去百分率（ｅ）（％）が次式により求まる。
ｅ（％）＝ｃ／ｄ×１００
固体培地の水分含量とは、固体培地中の水分量／（固形分量＋水分量）×１００で求められる水分含量百分率（％）を意味する。なお、水分量及び固形分量はともに重量である。
発明を実施するための最良の形態
培地は、細菌、酵母、又はカビ等の微生物を生育、繁殖せしめる栄養物であり、また、その生育の場でもある。通常培地は、培地成分として、微生物の生育に必要な成分であるグルコース、乳糖等の種類、アミノ酸、ペプトン、硝酸塩、アンモニウム塩等の窒素源、カリウム、リン、マグネシウム等の無機塩類、ビタミン等の生育因子を含有している。また培地は、単に培地成分を溶解水に溶解させた液体培地と液体培地にゲル化剤を添加して固化させた固体培地に大別されている。本発明は固体培地を提供するものであり、本発明の固体培地とは、前記定義したとおり、寒天等のゲル化剤で固化させた平板、斜面培地等の使用時に固体状の培地（培養基）である。
ゲル化剤としては、寒天、ゼラチン、ジェランガム、カラギーナン等を例示することができる。
本発明の固体培地の組成を具体的に例示するならば、以下のものの組成が挙げられる。日本国食品衛生法、日本国薬局方、国際酪農連盟の規格基準（ＩＤＦ  STANDARD）等の微生物試験法等が規定されている普通寒天培地、標準寒天培地、デオキシコレート寒天培地、ＥＭＢ培地、遠藤培地、ＢＣＰ加プレートカウント寒天培地、卵黄加マンニット食塩寒天培地、ポテトデキストロース寒天培地、バイオレットレッド胆汁酸塩乳糖（VRBL）寒天培地、酵母エキス−ブドウ糖−クロラムフェニコール−寒天培地、酸性ＭＲＳ培地、Ｍ１７培地、Baird−Parker寒天培地（ETGP寒天培地）等［日本薬学会編、「乳製品試験法・注解」、金原出版株式会社、第１１１乃至１２５頁、平成２年４月１０日（文献１）、「ＩＤＦ  STANDARD（1991年改訂版）」、社団法人日本国際酪農連盟発行、第３０６頁、第４７０頁、第６４５乃至６４７頁、平成３年１２月２５日（文献２）、坂崎利一監修、「新  細菌培地学講座・下II（第二版）」、株式会社近代出版、第６２乃至６３頁、１９９６年８月１５日（文献３）。］である。
尚、参考までに文献１に記載される前記各固体培地の各成分の各所定量を示す。
普通寒天培地（ｐＨ７．０〜７．４）の固体培地組成は、肉エキス５ｇ、ペプトン１０ｇ、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）１〜２ｇ、寒天１２〜１５ｇ、精製水（溶解水）１０００ｍｌ（１リットル）が各成分の各所定量である。
標準寒天培地（ｐＨ６．８〜７．２）の固体培地組成は酵母エキス２．５ｇ、ペプトン５ｇ、グルコース１ｇ、寒天１５ｇ、精製水（溶解水）１０００ｍｌ（１リットル）が各成分の各所定量である。
デオキシコレート寒天培地（ｐＨ７．０〜７．４）の固体培地組成は、ペプトン１０ｇ、乳糖１０ｇ、デオキシコール酸ナトリウム１ｇ、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）５ｇ、Ｋ2ＨＰＯ4２ｇ、ニュートラルレッド０．０３３ｇ、クエン酸鉄アンモニウム２ｇ、寒天１５ｇ、精製水（溶解水）１０００ｍｌ（１リットル）が各成分の各所定量である。
ＥＭＢ培地（ｐＨ６．６〜７．０）の固体培地組成は、ペプトン１０ｇ、乳糖１０ｇ、Ｋ2ＨＰＯ4２ｇ、エオジンＹ０．４ｇ、メチレンブルー０．０６５ｇ、寒天１８ｇ、精製水（溶解水）１０００ｍｌ（１リットル）が各成分の各所定量である。
遠藤培地（ｐＨ７．０〜７．４）の固体培地組成は、ペプトン１０ｇ、肉エキス３ｇ、乳糖１０ｇ、Ｎａ2ＳＯ3１．６ｇ、塩基性フクシン０．１ｇ、寒天１５ｇ、精製水（溶解水）１０００ｍｌ（１リットル）が各成分の各所定量である。
ＢＣＰ加プレートカウント寒天培地（ｐＨ６．０〜７．０）の固体培地組成は、酵母エキス２．５ｇ、ペプトン５ｇ、グルコース１ｇ、Ｔｗｅｅｎ８０  １ｇ、Ｌ−システイン０．１ｇ、ブロムクレゾールパープル０．０６ｇ、寒天１５ｇ、精製水（溶解水）１０００ｍｌ（１リットル）が各成分の各所定量である。
卵黄加マンニット食塩寒天培地［ｐＨ７．２〜７．６、新鮮卵黄液（卵黄を同量の生理食塩水で溶解したもの）５０〜６０ｍｌは、高圧蒸気滅菌後平板とする前に混和する。］の固体培地組成は、肉エキス２．５ｇ、ペプトン１０ｇ、マンニット１０ｇ、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）７５ｇ、フェノールレッド０．０２５ｇ、寒天１５ｇ、精製水（溶解水）１０００ｍｌ（１リットル）が各成分の各所定量である。
ポテトデキストロース寒天培地（ｐＨ５．６〜５．７）の固体培地組成は、ポテト浸出液２００ｇ、グルコース２０ｇ、寒天１５ｇ、精製水（溶解水）１０００ｍｌ（１リットル）が各成分の各所定量である。
次に、文献２に記載される前記各固体培地の各成分の各所定量を示す。
バイオレットレッド胆汁酸塩乳糖（VRBL）寒天培地（ｐＨ７．４±０．１）の固体培地組成は、ペプトン７ｇ、酵母エキス３ｇ、乳糖（C12H22O11・H2O）１０ｇ、塩化ナトリウム（NaCl）５ｇ、胆汁酸塩１．５ｇ、中性紅０．０３ｇ、クリスタルバイオレット０．００２ｇ、寒天１２〜１８ｇ、水（溶解水）１０００ｍｌが各成分の各所定量である。
酵母エキス−ブドウ糖−クロラムフェニコール−寒天培地（ｐＨ６．６）の固体培地組成は、酵母エキス５ｇ、ブドウ糖（C6H12O6）２０ｇ、クロラムフェニコール（C11H12Cl2N2O5）又はオキシテトラサイクリン（C22H3ON2O11）０．１ｇ、寒天１２〜１５ｇ、水（溶解水）１０００ｍｌが各成分の各所定量である。
酸性ＭＲＳ培地（酢酸によりｐＨ５．４に調整。）の固体培地組成は、ペプトン１（カゼインのトリプシン分解物）１０ｇ、肉エキス１０ｇ、酵母エキス（粉末）５ｇ、グルコース（C6H12O6）２０ｇ、Tween８０（Sorbitan mono-oleate）１ｍｌ、オルトリン酸水素二カリウム（K2HPO4）２ｇ、酢酸ナトリウム三水和物（CH3CO2Na・3H2O）５ｇ、クエン酸二アンモニウム（C6H6O7(NH4)2）２ｇ、硫酸マグネシウム七水和物（MgSO4・7H2O）０．２ｇ、硫酸マンガン四水和物（MnSO4・4H2O）０．０５ｇ、寒天９〜１８ｇ、水（溶解水）１０００ｍｌが各成分の各所定量である。
Ｍ１７培地［ｐＨ７．１〜７．２、乳糖（C12H22O11）は１０％乳糖（C12H22O11）滅菌水溶液として、高圧蒸気滅菌後平板とする前に混和する。］の固体培地組成は、ペプトン１（カゼインのトリプシン分解物）２．５０ｇ、ペプトン２（肉のペプシン分解物）２．５０ｇ、ペプトン３（大豆のパパイン分解物）５．００ｇ、酵母エキス（粉末）２．５０ｇ、肉エキス５．００ｇ、β−グリセロリン酸塩（二ナトリウム塩）（C6H7O6PNa2）１９．００ｇ、硫酸マグネシウム7水塩（MgSO4・7H2O）０．２５ｇ、アスコルビン酸（C6H8O6）０．５０ｇ、乳糖（C12H22O11）５ｇ、寒天９〜１８ｇ、水（溶解水）１０００ｍｌが各成分の各所定量である。
次に、文献３に記載される前記各固体培地の各成分の各所定量を示す。
Baird−Parker寒天培地（ETGP寒天培地）［ｐＨ６．８、亜テルル酸カリウム１％水溶液１０ｍｌ及び卵黄５０％乳液５０ｍｌは、高圧蒸気滅菌後平板とする前に混和する。］の固体培地組成は、ペプトン１０ｇ、肉エキス５ｇ、酵母エキス１ｇ、塩化リチウム５ｇ、グリシン１２ｇ、ピルビン酸ナトリウム１０ｇ、寒天１７ｇ、精製水（溶解水）１０００ｍｌが各成分の各所定量である。
次に、本発明の固体培地の製造方法について説明する。
本発明の固体培地の製造方法においては、溶解水の量が所定量より多いこと及び固化の後に乾燥して水を除去することの他は、通常の固体培地の製造と同様に、固体培地の各成分の溶解水への溶解、及び、固化を行えばよい。例えば、固体培地組成として文献等に記載されている、又は新たに特定（定義）された所定量の各培地成分を溶解水に溶解し、必要に応じてｐＨを調整し、前記溶解液に、ゲル化剤を添加し、加熱溶解し、滅菌し、シャーレ等の容器に分注し、固化すればよい。
除去する水の量は、水の除去後の固体培地の１０分間平均吸水速度が少なくとも０．０５ｍｌ／分となる量である。この量は、培地組成（特にゲル化剤）により変化し得るが、後記試験例３に記載のような方法により、種々の過剰量の溶解水を含む培地を作成して１０分間平均吸水速度を測定することにより、定めることができる。
除去する水の量は、好ましくは、溶解水の少なくとも５％であり、より好ましくは、溶解水の少なくとも３０％である。
所定量の溶解水を用いて作成した固体培地に対し、このような水の除去を行った場合、水の除去後の固体培地における水の量はかなり少なくなり、乾燥に起因する微生物の生育阻害が認められることがある。本発明においては、固体培地の溶解水の量を予め所定量よりも多くしておくことで、水の除去後に所定量に相当する水の量が固体培地に含まれるようにする。従って、溶解水の量は、除去する水の量とほぼ同量、所定量より多くする。ここでほぼ同量とは、その多くした量を所定量に加えた溶解水の総配合量から、除去する水の量を除いた量が、所定量とほぼ同量（通常には、９７〜１０３％）になる量である。
通常には、溶解水の追加量は、固体培地組成として文献等に記載されている、又は新たに特定された組成における溶解水量（溶解水の所定量）を１００％と定義した場合に、その５乃至１５０％であり、この量の溶解水を、溶解水の所定量に加えて、多く配合する。これにより、溶解水の乾燥除去操作の結果物として、所定の水分を含み、かつ十分な吸水速度を有する本発明の固体培地が調製できる。
ゲル化剤として寒天を使用した場合には、寒天の添加濃度は、前記溶解水の所定量を１００％として、その１．０乃至３％（重量）が好ましい。また、加熱溶解は、寒天を十分に溶解するので、１００℃以上が好ましく、１２１℃で１５分以上加熱すれば、溶解と共に滅菌することもできる。滅菌は、常法により、高圧蒸気滅菌法等により実施することができる。
容器としてシャーレを使用した場合には、乾燥除去後の固体培地の量が１０乃至３０ｍｌの範囲の量を分注することが好ましい。
培地からの水の除去のための乾燥除去方法としては、滅菌乾燥法、真空乾燥法、温風乾燥法、赤外線乾燥法、高周波乾燥法等を例示することができるが、これらに限定されるものではない。
本発明の固体培地は、上記の定義による１０分間平均吸水速度が少なくとも０．０５ｍｌ／分である。上記の定義に示したような標準的な大きさの固体培地１平板当たり１０分間で少なくとも０．５ｍｌの吸水があれば、固体培地に、短時間に大量の試料を塗抹することが可能となる。１０分間平均吸水速度が少なくとも０．０５ｍｌ／分である固体培地は、培地を乾燥して、上述のような適当量の水を除去することにより製造できる。なお、固体培地の露出面積（空気に触れる面積）当たりの培地量は、上記の範囲の１０分間平均吸水速度が得られる量であればよい。培地量が少なすぎると、十分な１０分間平均吸水速度が得られないことがある。
本発明の固体培地は、水の除去後にほぼ所定量の溶解水を含んでいることになるため、乾燥に起因する微生物の生育阻害が認められない。固体培地の特定に用いられる組成における溶解水の所定量は、培養しようとする微生物が生育するように定められるからである。あるいは、培養しようとする微生物に対し、生育阻害の認められない組成の培地が選択されるからである。
固体培地の水分含量は少なくとも９０％であることが好ましい。これにより、高い水分含量を要求する微生物も培養することができる。例えば、後記する試験例の結果からも明らかなとおり、最終的な固体培地組成中の水分含量を９０％未満とした場合、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）ＡＴＣＣ  ６５３８Ｐ等の微生物の生育がほぼ完全に阻害されるため、この微生物を培養するためには、固体培地の水分含量を少なくとも９０％とすることが必要である。
更に、比較的乾燥に弱く、食品の微生物検査等において重要な菌種であるスタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）ＡＴＣＣ  ６５３８Ｐ、バシラス・ステアロサーモフィラス・バル・カリドラクティス（Bacillus stearothermophilus var. calidolactis）ＮＩＺＯ  Ｃ９５３等の微生物の生育の阻害を一切惹起させずに培養するためには、本発明の固体培地が適している。本発明の固体培地は、前記のとおり、固体培地の溶解水の量を所定量より多く配合して、乾燥することにより、十分な吸水速度を保持し、かつ乾燥に起因する微生物の生育阻害が認められない。
本発明の固体培地の製造方法の理解を一層容易とするため、前記文献１に記載の標準寒天培地の製造方法を例として説明する。
即ち、標準寒天培地の固体培地組成は文献１に記載されるとおり、酵母エキス２．５ｇ、ペプトン５ｇ、グルコース１ｇ、寒天１５ｇ、精製水（溶解水）１０００ｍｌが各成分の各所定量である。
よって、酵母エキス２．５ｇ、ペプトン５ｇ、及びグルコース１ｇの各培地成分を、溶解水の所定量（１０００ｍｌ）を１００％として、この量より好ましくは５乃至１５０％（５０乃至１５００ｍｌ）多く配合した溶解水に溶解し、約１０５０ｍｌ乃至２５００ｍｌの溶解液を得る。前記溶解液のｐＨを６．８乃至７．２に調整し、寒天１５ｇを添加し、高圧蒸気滅菌法により１２１℃で１５分加熱し、溶解と共に滅菌する。
滅菌処理済みの培地を無菌的にシャーレに１枚当たり１６〜３８ｇ分注し、冷却固化し、のち固化した培地を乾燥機（LABCONCO社製）を使用して１０3Ｐａの圧力で減圧乾燥法により乾燥し、溶解水を除去する。
前記乾燥除去により、溶解水の過剰に配合した量の水を除去し、かつ１０分間平均吸水速度が少なくとも０．０５ｍｌ／分である固体培地を調製する。
前記方法により製造された固体培地は、乾燥に起因する微生物の生育阻害が認められず、吸水速度に優れ、短時間に大量の試料を塗抹することが可能で、迅速で正確な微生物数の測定試験に最適な固体培地である。
実施例
次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
実施例１
酵母エキス（オリエンタル酵母社製）２．５ｇ、ペプトン（ディフコ社製）５ｇ、及びグルコース（和光純薬工業社製）１ｇを、既知の固体培地組成における溶解水（精製水）の所定量（１０００ｍｌ）を１００％として、この量に加えて、溶解水（精製水）の量を２０％（２００ｍｌ）多く配合した溶解水１２００ｍｌに溶解し、約１２００ｍｌの溶解液を得た。前記溶解液のｐＨを、０．１ｍｏｌ／ｌ水酸化ナトリウム溶液を使用して、７．２に調整し、寒天（伊那食品工業社製）１５ｇを添加し、オートクレーブ（岩楯医療器械製作所社製）を使用して１２１℃で１５分加熱し、溶解と共に滅菌した。
滅菌処理済みの固体培地を無菌室内で直径９ｃｍのプラスチック製シャーレ（栄研器材社製）に１枚当たり１８ｇ分注し、冷却固化し、固化した培地を乾燥機（LABCONCO社製）を使用して１０3Ｐａの圧力で減圧乾燥法により乾燥し、水３ｍｌを除去した。この結果、培地量１５ｇの固体培地平板が得られた。
前記水の除去は、前記所定量に加えて多く配合した溶解水の量（２００ｍｌ）の全量に相当する水、即ち、溶解水（精製水）の総配合量（１２００ｍｌ）を１００％として、約１７％（２００ｍｌ）の水を乾燥により除去したことを示す。
よって、前記水の除去により、固体培地の水分含量は、約９８％に調整される。
前記方法により製造された固体培地（標準寒天培地）平板は、後記試験方法で試験した結果、１０分間平均吸水速度は０．１５ｍｌ／分であり、大量の試料を塗抹することが可能で、乾燥に起因する微生物の生育阻害が認められない迅速で正確な微生物数の測定試験に最適な固体培地であった。
実施例２
肉エキス（メルク社製）２．５ｇ、ペプトン（ディフコ社製）１０ｇ、塩化ナトリウム（和光純薬工業社製）７５ｇ、マンニット（和光純薬工業社製）１０ｇ、及びフェノールレッド（和光純薬工業社製）０．０２５ｇを、既知の固体培地組成における溶解水（精製水）の所定量（１０００ｍｌ）を１００％として、この量に加えて、溶解水（精製水）の量を６．６％（６６ｍｌ）多く配合した溶解水１０６６ｍｌに溶解し、約１０６６ｍｌの溶解液を得た。前記溶解液のｐＨを、０．１ｍｏｌ／ｌ水酸化ナトリウム溶液を使用して、７．４に調整し、寒天（伊那食品工業社製）１５ｇを添加し、オートクレーブ（岩楯医療器械製作所社製）を使用して１２１℃で１５分加熱し、溶解と共に滅菌した。
滅菌処理済みの固体培地を無菌室内で直径９ｃｍのプラスチック製シャーレ（栄研器材社製）に１枚当たり１６ｇ分注し、冷却固化し、固化した培地を乾燥機（LABCONCO社製）を使用して１０3Ｐａの圧力で減圧乾燥法により乾燥し、溶解水約１ｍｌを除去した。この結果、培地量１５ｇの固体培地平板が得られた。
前記水の除去は、前記所定量より多く配合した溶解水の量（６６ｍｌ）の全量に相当する水、即ち、溶解水（精製水）の総配合量（１０６６ｍｌ）を１００％として、約６％（６６ｍｌ）の水を乾燥により除去したことを示す。
よって、前記溶解水の除去により、固体培地の水分含量は、約９０％に調整される。
前記方法により製造された固体培地（マンニット食塩寒天培地）平板は、後記試験方法で試験した結果、１０分間平均吸水速度は０．０７ｍｌ／分であり、大量の試料を塗抹することが可能で、スタフィロコッカス属の乾燥に起因する微生物の生育阻害が認められない迅速で正確な微生物数の測定試験に最適な固体培地であった。
実施例３
既知の固体培地の組成を改変した新たな組成の固体培地を作成した。
ペプトン（ディフコ社製）１０ｇ、肉エキス（メルク社製）５ｇ、及び塩化ナトリウム（和光純薬工業社製）２ｇを、既知の固体培地組成における溶解水（精製水）の所定量（１０００ｍｌ）より少ない９００ｍｌを所定量とし、この量を１００％として、この量に加えて、溶解水（精製水）の量を約３３．３％（３００ｍｌ）多く配合した溶解水１２００ｍｌに溶解し、約１２００ｍｌの溶解液を得た。前記溶解液のｐＨを、０．１ｍｏｌ／ｌ水酸化ナトリウム溶液を使用して、７．０に調整し、寒天（伊那食品工業社製）１５ｇを添加し、オートクレーブ（岩楯医療器械製作所社製）を使用して１２１℃で１５分加熱し、溶解と共に滅菌した。
滅菌処理済みの固体培地を無菌室内で直径９ｃｍのプラスチック製シャーレ（栄研器材社製）に１枚当たり２０ｇ分注し、冷却固化し、固化した培地を乾燥機（LABCONCO社製）を使用して１０3Ｐａの圧力で減圧乾燥法により乾燥し、溶解水５ｍｌを除去した。この結果、培地量１５ｇの固体培地平板が得られた。
前記水の除去は、前記所定量より多く配合した溶解水の量（３３０ｍｌ）の全量に相当する水、即ち、溶解水（精製水）の総配合量（１２００ｍｌ）を１００％として、約２５％（３００ｍｌ）の溶解水を乾燥により除去したことを示す。
よって、前記溶解水の除去により、固体培地の水分含量は、約９６％に調整される。
前記方法により製造された固体培地（普通寒天培地）平板は、後記試験方法で試験した結果、１０分間平均吸水速度は０．１７ｍｌ／分であり、大量の試料を塗抹することが可能で、乾燥に起因する微生物の生育阻害が認められない迅速で正確な微生物数の測定試験に最適な固体培地であった。
試験例１
この試験は、微生物生育試験の結果を指標として、従来技術と本発明を比較するために行った。
（１）試料の調製
次に示す３種類の試料をそれぞれ５回反復して調製した。
試料１：本発明の実施例１と同一の方法により製造した固体培地。
試料２：培地の種類を標準寒天培地に変更し、培地の分注量及び乾燥固体培地の復元水（滅菌水）の量をそれぞれ１５ｍｌとし、乾燥固体培地の復元時間を５分間とし、余分な復元水（遊離水）を傾斜して放棄したことを除き、従来技術１の実施例１と同一の方法により製造した固体培地。
試料３：培地の種類を標準寒天培地に変更し、培地の分注量及び乾燥固体培地の復元水（滅菌水）の量をそれぞれ１５ｍｌとし、乾燥固体培地の復元時間を５分間とし、余分な復元水（遊離水）を傾斜して放棄したことを除き、従来技術２の実施例１と同一の方法により製造した固体培地。
（２）試験方法
各試料の微生物生育を、次の試験方法により試験した。
試験菌株として、微生物寄託機関であるアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションより分譲されたスタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）ＡＴＣＣ  ６５３８Ｐ、及びオランダ酪農研究所（ＮＩＺＯ）より分譲されたバシラス・ステアロサーモフィラス・バル・カリドラクティス（Bacillus stearothermophilus var. calidolactis）ＮＩＺＯ  Ｃ９５３を使用した。
既知の固体培地組成による所定量の溶解水を使用し、即ち、既知の固体培地組成の溶解水量をそのまま使用し、乾燥工程を付加することなく、従来どおり、常法で調製した標準寒天培地の１平板に０．１ｍｌ塗抹し、３７℃で４８時間培養した場合に、前記試験菌株の１００個の集落が得られる各試験菌株の希釈液を調製した。
尚、標準寒天培地の固体培地組成は、酵母エキス２．５ｇ、ペプトン５ｇ、グルコース１ｇ、寒天１５ｇ、精製水１０００ｍｌ（溶解水の所定量）である。
各試料の１平板に、前記試験菌株の希釈液を０．１ｍｌ塗抹し、３７℃で４８時間培養し、集落数を肉眼で観察した。尚、試験は５回行い、集落数の平均値を算出した。
（３）試験結果
この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１から明らかなとおり、従来技術の試料２及び試料３に比較して、本発明の試料１が、食品の微生物検査等において重要な菌であるスタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）ＡＴＣＣ  ６５３８Ｐ、及びバシラス・ステアロサーモフィラス・バル・カリドラクテイス（Bacillus stearothermophilus var. calidolactis）ＮＩＺＯ  Ｃ９５３の生育が一切阻害されることなく検出され、迅速に正確な微生物数の計測ができる点で優れていることが判明した。
以上の結果から、従来技術の乾燥固体培地は、復元のために長時間を必要とし、迅速で正確な微生物数の測定試験には適さないということが判明した。
尚、培地の種類、培地の分注量及び乾燥固体培地の復元水（滅菌水）の量、並びに、乾燥固体培地の復元時間を１乃至１０分間の範囲で適宜変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
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試験例２
この試験は、微生物生育試験の結果を指標として、固体培地の適正な水分含量を調べるために行った。
（１）試料の調製
次に示す２種類の試料をそれぞれ５回反復して調製した。
試料４：乾燥して溶解水を除去し、固体培地の水分含量を９０％としたことを除き、本発明の実施例２と同様の方法により製造した固体培地。
試料５：乾燥して溶解水を除去し、固体培地の水分含量を８０％としたことを除き、本発明の実施例２と同様の方法により製造した固体培地。
（２）試験方法
各試料の微生物生育を、試験菌株として、前記スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）ＡＴＣＣ  ６５３８Ｐのみを使用したことを除き、前記試験例１の試験方法と同一の方法により試験した。
また、乾燥に伴う固体培地の水分含量の変化は、乾燥減量によりモニターした。即ち、乾燥前の培地重量（ａ）及び乾燥後の培地重量（ｂ）から、乾燥減量、いわゆる減水量（ｃ）を、ａ−ｂ＝ｃにより求めた。次いで、溶解水の総配合量より、前記減水量（ｃ）を除いて残存する水分量を求めた。この残存水分量及び前記水分含量の定義に基づいて、乾燥後の水分含量を求め、乾燥に伴う固体培地の水分含量の変化をモニターした。
尚、マンニット食塩寒天培地の固体培地組成は、肉エキス２．５ｇ、ペプトン１０ｇ、塩化ナトリウム７５ｇ、マンニット１０ｇ、フェノールレッド０．０２５ｇ寒天１５ｇ、精製水１０００ｍｌ（溶解水の所定量）である。
（３）試験結果
この試験の結果は、表２に示すとおりである。表２から明らかなとおり、固体培地の水分含量を、８０％、いわゆる９０％未満とした場合、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）ＡＴＣＣ  ６５３８Ｐの生育がほぼ完全に阻害されることから、微生物数が測定不可能となり、正確な微生物数の計測のためには、水分含量が少なくとも９０％であることが必要であることが判明した。
尚、培地の種類を適宜変更し、水分含量を変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
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試験例３
この試験は、吸水速度試験の結果を指標として、固体培地組成として文献等に記載されている溶解水量を１００％として、この溶解水の適正な除去量（％）を調べるために行った。
（１）試料の調製
次に示す４種類の試料をそれぞれ５回反復して調製した。
試料６：溶解水を所定量より多く配合せず、溶解水の乾燥除去を行わないことを除き、本発明の実施例１と同様の方法により製造した固体培地。
試料７：溶解水を所定量の２．５％多く配合し、この溶解水の総配合量の２．５％を乾燥除去したことを除き、本発明の実施例１と同様の方法により製造した固体培地。
試料８：溶解水を所定量の５％多く配合し、この溶解水の総配合量の５％を乾燥除去したことを除き、本発明の実施例１と同様の方法により製造した固体培地。
試料９：溶解水を所定量の４０％多く配合し、この溶解水の総配合量の３０％を乾燥除去したことを除き、本発明の実施例１と同様の方法により製造した固体培地。
（２）試験方法
各試料の吸水速度を、次の試験方法により試験した。尚、測定は２５℃で実施した。
試料平板の総重量（Ｂ）を測定し、平板培地（円形、外径９ｃｍ、内径８．６ｃｍ（面積：５８．１ｃｍ2）、培地量１５ｇ）上にイオン交換水１０ｍｌを添加して吸水を開始し、１０分経過時点で未吸水の水を破棄し、シャーレ壁面に付着している水分を拭き取り、吸水処理後の試料平板の総重量（Ａ）を測定し、次式により１０分間平均吸水速度を算出した。
吸水速度（ｍｌ／分）＝（Ａ−Ｂ）／１０
また、溶解水の乾燥除去百分率（ｅ）は、溶解水の総配合量（ｄ）を１００％として、前記試験例２と同一の方法でモニターされ求まる減水量（ｃ）から、次式により求まる。
ｅ（％）＝ｃ／ｄ×１００
（３）試験結果
この試験の結果は、表３に示すとおりである。表３から明らかなとおり、培地を乾燥し、溶解水の少なくとも５％を除去した場合、吸水速度が少なくとも０．０５ｍｌ／分となることから、短時間に大量の試料を塗抹することが可能となり、従って、迅速な微生物数の測定のためには、溶解水の少なくとも５％を除去することが必要であることが判明した。また、溶解水の少なくとも３０％を除去した場合、吸水速度が少なくとも０．２ｍｌ／分となることから、短時間に一層大量の試料を塗抹することが可能となり、従って迅速な微生物数の測定のためには、溶解水の少なくとも３０％を除去することが好ましいことが判明した。
尚、培地の種類を適宜変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
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産業上の利用の可能性
本発明により奏せられる効果は次のとおりである。
１）本発明の製造方法により製造される本発明の固体培地は、吸水速度に優れ、短時間に大量の試料を塗抹することが可能であり、迅速な微生物数の測定試験に最適である。
２）本発明の製造方法により製造される本発明の固体培地は、大量の試料を塗抹することができることから、微生物の検出精度が高く、正確な微生物数の測定試験に最適である。
３）本発明の製造方法により製造される本発明の固体培地は、乾燥に起因する微生物の生育阻害が認められないことから、正確な微生物数の測定試験に最適である。
４）本発明の製造方法により吸水速度に優れ、短時間に大量の試料を塗抹することが可能で、迅速で正確な微生物数の測定試験に最適な固体培地を製造することができる。