(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬物、生体内分解性ポリマー及びアセトン（水と混和する前記ポリマーの良溶媒である溶媒Ａ）を含むポリマー溶液（ハロゲン化脂肪族炭化水素系溶媒を含有しない）を、水および炭素数１〜４の１価アルコールからなる群より選択される１種または２種以上の溶媒（溶媒Ａと混和する前記ポリマーの貧溶媒である溶媒Ｂ）とグリセリン（溶媒Ａと混和しない前記ポリマーの貧溶媒である溶媒Ｃ）を含む均一混合液中に添加して乳化することによりポリマー溶液が分散相、均一混合液が連続相を形成するエマルションを調製し、分散相から溶媒Ａを除去することを特徴とするマイクロスフェアの製法。
【請求項２】
生体内分解性ポリマーが、ヒドロキシ脂肪酸のポリエステルである請求項１記載の製法。
【請求項３】
生体内分解性ポリマーが、ポリ乳酸、乳酸−グリコール酸共重合体および２−ヒドロキシ酪酸−グリコール酸共重合体から選択される１種または２種以上である請求項１記載の製法。
【請求項４】
炭素数１〜４の１価アルコールが、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｉ−プロパノール、ｎ−ブタノール、ｉ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブタノールである請求項１〜３のいずれか１項記載の製法。
【請求項５】
溶媒Ｂが水である請求項４項記載の製法。
【請求項６】
溶媒Ｂがエタノール又は含水エタノールである請求項４項記載の製法。
【請求項７】
均一混合液の溶媒Ｂと溶媒Ｃの重量比が、５：９５〜７５：２５の範囲内である請求項１〜６のいずれか１項記載の製法。
【請求項８】
溶媒Ａの量が、溶媒Ｂと溶媒Ｃとの均一混合液に混和可能な溶媒Ａの最大量以下である請求項１〜７のいずれか１項記載の製法。
【請求項９】
ポリマー溶液が、溶媒Ｂを含有する請求項１〜７のいずれか１項記載の製法。
【請求項１０】
ポリマー溶液における溶媒Ｂの含有率が、０．００１〜５０重量％である請求項９記載の製法。
【請求項１１】
均一混合液が、乳化安定剤を含有する請求項１〜１０のいずれか１項記載の製法。
【請求項１２】
均一混合液が、溶媒Ａを含有する請求項１〜１１のいずれか１項記載の製法。
【請求項１３】
乳化が０℃以下で行われる請求項１２記載の製法。
【請求項１４】
ポリマー溶液と均一混合液との重量比が、１：１〜１：１０００の範囲内である請求項１〜１３のいずれか１項記載の製法。
【請求項１５】
乳化後、得られたエマルションと別途用意した増量用溶媒とを混合することにより連続相を増量し、溶媒Ａを除去する請求項１〜１４のいずれか１項記載の製法。
【請求項１６】
増量用溶媒が、溶媒Ｂ又は溶媒Ｂと溶媒Ｃの混合液である請求項１５記載の製法。
【請求項１７】
増量用溶媒に用いる溶媒Ｂが、炭素数１〜４の１価アルコールであり、溶媒Ａの除去が０℃以下で行われる請求項１６記載の製法。
【請求項１８】
増量後のエマルションの連続相における溶媒Ｂの割合が、増量前と同一または増量前よりも大きい請求項１５〜１７のいずれか１項記載の製法。
【請求項１９】
増量後の連続相の体積が増量前の２〜１００倍である請求項１５〜１８のいずれか１項記載の製法。
【請求項２０】
エマルションを加温し、溶媒Ａを除去する請求項１〜１２、１４〜１６、１８、１９のいずれか１項記載の製法。
【請求項２１】
加温条件が３０〜７０℃の範囲内である請求項２０記載の製法。
【請求項２２】
エマルションを減圧し、溶媒Ａを除去する請求項１〜２１のいずれか１項記載の製法。
【請求項２３】
減圧後の圧力が５〜８０ｋＰａの範囲内である請求項２２記載の製法。
【請求項２４】
溶媒Ａの除去が、密閉下に行われる請求項１〜２３のいずれか１項記載の製法。
【請求項２５】
請求項１〜２４のいずれか１項記載の製法より得られたマイクロスフェアを水中に再分散して攪拌することを特徴とするマイクロスフェア中に残存する溶媒Ａの除去方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、水混和性有機溶媒を用いたマイクロスフェアの製法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ポリ乳酸、乳酸−グリコール酸共重合体等の水難溶性の生体内分解性ポリマー中に薬物を含有させたマイクロスフェア製剤を、皮下、筋肉等の生体組織内に投与することにより、１回の投与で長期間にわたる薬物治療が可能となる。
【０００３】
かかるマイクロスフェア製剤は、例えば、薬物をポリマーの有機溶媒溶液に溶解或いは分散し、これを水相中に乳化後、水相中で有機溶媒を除去し、ポリマーを固化することにより調製されている（特開昭６１−６３６１３、特開昭６３−１２２６２０、特開平４−４６１１６など）。
【０００４】
この調製法では、従来、ポリマーを溶解し、かつ、水非混和性である有機溶媒を使用することが重要であると考えられており、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化脂肪族炭化水素系溶媒が一般に使用されている。
【０００５】
しかし、これら溶媒は人体に対する毒性が高く、マイクロスフェア中の残存量が厳しく規制されることになっている（日米ＥＵ医薬品規制整合化国際会議（ＩＣＨ）で合意され、１９９８年３月３０日に公表された「医薬品の残留溶媒ガイドライン」）。また、ハロゲン化脂肪族炭化水素系溶媒はオゾン層破壊、環境ホルモンとして作用する危険性のため、製造装置から環境への排出に対しても規制が設けられつつある（例えば、１９９９年７月１３日公布された特定化学物質の環境への排出量の把握及び管理の改善の促進に関する法律、並びに２０００年３月２９日公布されたその施行令）。
【０００６】
一方、日本特許第２５６４３８６号、ドラッグ  デベロプメント  アンド  インダストリアル  ファーマシー（Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ），２４（１２），１１１３−１１２８，１９９８）には、人体、環境への悪影響が少なく、水混和性であるアセトンにポリマーを溶解させ、無機電解質などの溶質を高濃度に含む水溶液をこのポリマー溶液に添加し、転相させてＯ／Ｗエマルションを調製し、更に、このエマルションに水を添加してアセトンを抽出してナノスフェアを製造する方法が記載されている。
【０００７】
しかし、この方法では、ポリマー溶液を乳化する際の溶媒としては水のみを使用しており、水に溶解する溶質の具体例も塩析を生じさせるための無機塩基に限られている。またこの方法は、脂溶性薬物にしか適用できないとも記載されている。
【０００８】
なお、日本特許第２６０８２４２号には、Ｏ／Ｗエマルションを糖類等を含む水溶液に分散させてＷ／Ｏ／Ｗエマルションを調製後、水中乾燥することによりマイクロスフェアを製造する方法が記載されているが、Ｏ／Ｗエマルションに用いる有機溶媒は、塩化メチレン等の水非混和性溶媒であり、糖類等は、内水相から水溶性薬物が漏出するのを抑制するための浸透圧調節剤として水に添加されている。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、水混和性の有機溶媒を用い、水溶性薬物、脂溶性薬物の何れにも適用可能なマイクロスフェアの製法を提供することにあり、特に、アセトンやテトラヒドロフランなど人体、環境への悪影響が少ない水混和性有機溶媒を用いたマイクロスフェアの製法を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明の発明者らは、鋭意研究の結果、次の（１）、（２）の媒体の組合せを使用すれば、優れた特性を有するマイクロスフェアを効率的に製造することができ、しかもこの製法が水溶性薬物、脂溶性薬物の何れにも適用できることを見出して本発明を完成した。
（１）生体内分解性ポリマーを溶解する水混和性の有機溶媒（水と混和する生体内分解性ポリマーの良溶媒：溶媒Ａ）。
（２）溶媒Ａと混和性の前記ポリマー非溶解性溶媒（溶媒Ａと混和する前記ポリマーの貧溶媒：溶媒Ｂ）及び溶媒Ａと非混和性の前記ポリマー非溶解性溶媒（溶媒Ａと混和しない前記ポリマーの貧溶媒：溶媒Ｃ）を含む均一混合液。
【００１１】
すなわち本発明は、薬物、生体内分解性ポリマーおよび溶媒Ａを含むポリマー溶液を、溶媒Ｂと溶媒Ｃを含む均一混合液中に添加して乳化することにより、ポリマー溶液が分散相、均一混合液が連続相を形成するエマルションを調製し、分散相から溶媒Ａを除去することを特徴とするマイクロスフェアの製法に関する。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明を実施するにあたっては、まず、薬物、生体内分解性ポリマーおよび水と混和する前記ポリマーの良溶媒（溶媒Ａ）を含むポリマー溶液を調製する。
【００１３】
薬物は、特に限定されず、水溶性、脂溶性に関わらず、好適に実施可能である。
【００１４】
薬物の具体例としては、例えば、抗腫瘍剤、生理活性ペプチド、抗生物質、解熱・鎮痛・消炎剤、鎮咳去痰剤、鎮静剤、筋弛緩剤、抗てんかん剤、抗潰瘍剤、抗うつ剤、抗アレルギー剤、強心剤、不整脈治療剤、血管拡張剤、降圧利尿剤、糖尿病治療剤、抗脂血症剤、抗凝血剤、止血剤、抗結核剤、ホルモン剤、麻薬拮抗剤、骨吸収抑制剤、骨形成促進剤、血管新生抑制剤、抗嘔吐剤、ビタミン剤などが挙げられる。
【００１５】
抗腫瘍剤としては、たとえばパクリタキセル、ブレオマイシン、メトトレキセート、アクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ，硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ネオカルチノスタチン、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、テトラヒドロフリル−５−フルオロウラシル、クレスチン、ピシバニール、レンチナン、タモキシフェン、レバミゾール、ベスタチン、アジメキソン、グリチルリチン、シスプラチン、カルボプラチン、塩酸イリノテカンなどが挙げられる。
【００１６】
生理活性ペプチドとしては、インスリン、ソマトスタチン、サンドスタチン、成長ホルモン、プロラクチン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、ＡＣＴＨ誘導体、メラノサイト刺激ホルモン（ＭＳＨ）、甲状腺ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）およびその誘導体（例えば、タルチレリンなど）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）およびその誘導体（例えば、酢酸リュープロレリンなど）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、バソプレッシン、デスモプレシン、オキシトシン、カルシトニン、エルカトニン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、グルカゴン、ガストリン、セクレチン、パンクレイオザイミン、コレシストキニン、アンジオテンシン、ヒト胎盤ラクトーゲン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）、エンケファリン、エンケファリン誘導体、エンドルフィン、キョウトルフィン、インターフェロン類（例えば、α、β、γ型等）、インターロイキン類（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２等）、タフトシン、サイモポイエチン、サイモシン、サイモスチムリン、胸腺液性因子（ＴＨＦ）、血中胸腺因子（ＦＴＳ）およびその誘導体、およびその他の胸腺因子、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ケモカイン類およびその誘導体、ミニサイトカイン類およびその誘導体、コロニー誘発因子（ＣＳＦ、ＧＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＭＣＳＦ等）、モチリン、ダイノルフイン、ボムベシン、ニューロテンシン、セルレイン、ブラジキン、ウロキナーゼ、アスパラキナーゼ、カリクレイン、サブスタンスＰ、インスリン様成長因子（ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、細胞増殖因子（ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＰＤＧＦ、塩酸ＦＧＦ、塩基性ＦＧＦ等）、骨形成因子（ＢＭＰ）、神経栄養因子（ＮＴ−３、ＮＴ−４、ＣＮＴＦ、ＧＤＮＦ、ＢＤＮＦ等、血液凝固因子の第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、塩化リゾチーム、ポリミキシンＢ、コリスチン、グラミシジン、バシトラシン、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）等が挙げられる。
【００１７】
抗生物質としては、例えばゲンタマイシン、ジベカシン、カネンドマイシン、リビドマイシン、トブラマイシン、アミカシン、フラジオマイシン、シソマイシン、塩酸テトラサイクリン、塩酸オキシテトラサイクリン、ロリテトラサイクリン、塩酸ドキシサイクリン、アンピシリン、ピペラシリン、チカルシリン、アスポキシシリン、セファロチン、セファロリジン、セフォチアム、セフスロジン、セフメノキシム、セフメタゾール、セファゾリン、セフォタキシム、セフォペラゾン、セフチゾキシム、モキサラクタム、チエナマイシン、スルファゼシン、アズスレオナム等が挙げられる。
【００１８】
解熱・鎮痛・消炎剤としては、例えばサリチル酸、スルピリン、フルフェナム酸、ジクロフェナック、インドメタシン、モルヒネ、塩酸ペチジン、酒石酸レボルファノール、オキシモルフォン等が挙げられる。
【００１９】
鎮咳去痰剤としては、例えば塩酸エフェドリン、塩酸メチルエフェドリン、塩酸ノスカピン、リン酸コデイン、リン酸ジヒドロコデイン、塩酸アロクラマイド、塩酸クロフェダノール、塩酸ピコペリダミン、クロペラスチン、塩酸プロトキロール、塩酸イソプロテレノール、硫酸サルブタモール、硫酸テレブタリン等が挙げられる。
【００２０】
鎮静剤としては、例えばクロルプロマジン、プロクロルペラジン、トリフロペラジン、硫酸アトロピン、臭化メチルスコポラミン等が挙げられる。
【００２１】
筋弛緩剤としては、例えばメタンスルホン酸プリジノール、塩化ツボクラリン、臭化パンクロニウム等が挙げられる。
【００２２】
抗てんかん剤としては、例えばフェニトイン、エトサクシミド、アセタゾラミドナトリウム、クロルジアゼポキシド等が挙げられる。
【００２３】
抗潰瘍剤としては、例えばメトクロプロミド、塩酸ヒスチジン等が挙げられる。
【００２４】
抗うつ剤としては、例えばイミプラミン、クロミプラミン、ノキシプチリン、硫酸フェネルジン等が挙げられる。
【００２５】
抗アレルギー剤としては、例えば塩酸ジフェンヒドラミン、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸トリペレナミン、塩酸メトジラミン、塩酸クレミゾール、塩酸ジフェニルペラリン、塩酸メトキシフェナミン等が挙げられる。
【００２６】
強心剤としては、例えばトランスパイオキソカンファー、テオフィロール、アミノフィリン、塩酸エチレフリン等が挙げられる。
【００２７】
不整脈治療剤としては、例えばアジミライド、プロプラノロール、アルプレノロール、ブフェトロール、オキシプレノロール等が挙げられる。
【００２８】
血管拡張剤としては、例えば塩酸オキシフェドリン、塩酸ジルチアゼム、塩酸トラゾリン、ヘキソベンジン、硫酸バメタン等が挙げられる。
【００２９】
降圧利尿剤としては、例えばヘキサメトニウムブロミド、ペントリニウム、塩酸メカミルアミン、塩酸エカラジン、クロニジン等が挙げられる。
【００３０】
糖尿病治療剤としては、例えばグリミジンナトリウム、グリピザイド、塩酸フェンフォルミン、塩酸ブフォルミン、メトフォルミン等が挙げられる。
【００３１】
抗脂血症剤としては、例えばメバロチン、プラバスタチンナトリウム、シンバスタチン、クリノフィブラート、クロフィブラート、シンフィブラート、ベザフィブラート等が挙げられる。
【００３２】
抗凝血剤としては、例えばヘパリンナトリウム等が挙げられる。
【００３３】
止血剤としては、例えばトロンボプラスチン、トロンビン、メナジオン亜硫酸水素ナトリウム、アセトメナフトン、ε−アミノカプロン酸、トラネキサム酸、カルバゾクロムスルホン酸ナトリウム、アドレノクロムモノアミノグアニジンメタンスルホン酸塩等が挙げられる。
【００３４】
抗結核剤としては、例えばイソニアジド、エタンブトール、パラアミノサリチル酸等が挙げられる。
【００３５】
ホルモン剤としては、例えばプレドニゾロン、リン酸ナトリウムプレドニゾリゾロン、デキサメタゾン塩酸ナトリウム、リン酸ヘキセストロール、メチマゾール、エストロン等が挙げられる。
【００３６】
麻薬拮抗剤としては、例えば酒石酸レバロルファン、塩酸ナロルフィン、塩酸ナロキソン等が挙げられる。
【００３７】
骨吸収抑制剤としては、例えばイプリフラボン等が挙げられる。
【００３８】
骨形成促進剤としては、例えばＢＭＰ、ＰＴＨ、ＴＧＦ−β、ＩＧＦ−Ｉなどのポリペプチド等が挙げられる。
【００３９】
血管新生抑制剤としては、例えば血管新生抑制ステロイド、フマギリン、フマギロール誘導体、アンジオスタチン、エンドスタチン等が挙げられる。
【００４０】
抗嘔吐剤としては、オンダンセトロン、トロピセトロンなどの５−ヒドロキシトリプタミンタイプ３受容体拮抗薬、ニューロキニン１受容体拮抗薬等があげられる。
ビタミン剤としては、ビタミンＡ，β−カロチン、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ナイアシン、ニコチン酸アミド、パントテン酸、パントテン酸カルシウム、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、葉酸、イノシトール、パラアミノ馬尿酸、ビオチン、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ等があげられる。
【００４１】
上記薬物は、遊離のものであっても、その薬理学的に許容される塩であってもよい。例えば、薬物がアミノ基等の塩基性基を有する化合物である場合、無機酸（例えば、塩酸、硫酸、硝酸等）または有機酸（例えば、炭酸、コハク酸等）との塩の形で用いることもできる。また、薬物がカルボキシル基等の酸性基を有する場合、無機塩基（例えば、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属）または有機塩基化合物（例えば、トリエチルアミン等の有機アミン類、アルギニン等の塩基性アミノ酸類）との塩の形で用いることもできる。
【００４２】
また、薬物が塩を形成しているためにマイクロスフェアへの取込率が低い場合には、遊離の形に変換して用いてもよい。遊離の形に変換するには、酸付加塩の場合には、塩基性水溶液（例えば、炭酸水素アルカリ金属水溶液、炭酸アルカリ金属水溶液、水酸化アルカリ金属、リン酸アルカリ金属、リン酸水素アルカリ金属水溶液、弱塩基性緩衝液など）で処理した後、有機溶媒で抽出すればよく、塩基付加塩の場合には、弱酸性水溶液（例えば、塩化アンモニウム水溶液、弱酸性緩衝液など）で処理したのち、有機溶媒で抽出すればよい。抽出液からは、慣用の方法で溶媒を留去すれば遊離の形の薬物を得ることができる。
【００４３】
ポリマー溶液中の薬物濃度は、０．００１〜９０重量％、好ましくは、０．０１〜５０重量％である。
【００４４】
ポリマー溶液中で薬物は、溶解状態であっても、分散状態であってもよい。分散状態とする場合には、薬物は事前に微粒子化しておくことが好ましい。微粒子化は、粉砕法、晶析法、スプレードライ法など、慣用の微粒子化法を適宜使用すればよい。
【００４５】
粉砕法で行う場合には、ジェットミル、ハンマーミル、回転ボールミル、振動ボールミル、ビーズミル、シェーカーミル、ロッドミル、チューブミルなどの粉砕機により、物理的に粉砕すればよい。
【００４６】
晶析法で行う場合には、薬物を一旦適当な溶媒に溶解させた後、ｐＨ調製、温度変化、溶媒組成の変更等を行って薬物を晶析させ、濾過、遠心分離などの方法で回収すればよい。
【００４７】
スプレードライ法で行う場合には、薬物を適当な溶媒に溶解させ、これをスプレーノズルを用いてスプレードライヤーの乾燥室内に噴霧し、きわめて短時間に噴霧液滴内の溶媒を揮発させればよい。
【００４８】
また、薬物としてポリペプチドを用いる場合には、ポリペプチドおよびポリエチレングリコールの混合水溶液を凍結乾燥し、得られた固形物に、ポリペプチドは溶解しえないがポリエチレングリコールは溶解しうる有機溶媒を添加することによっても（特開平１１−３０２１５６）、微粒子化できる。
【００４９】
生体内分解性ポリマーとしては、製剤分野で一般に使用される生体内分解性ポリマーをいずれも使用することができるが、とりわけ、ヒドロキシ脂肪酸のポリエステルがとりわけ好ましい。該ヒドロキシ脂肪酸のポリエステルの好ましい平均分子量は約２０００〜約８０００００の範囲内であり、より好ましくは約５０００〜約２０００００の範囲内である。
【００５０】
また、前記ヒドロキシ脂肪酸のポリエステルのうち、更に好ましいのは、ポリ乳酸、乳酸−グリコール酸共重合体、２−ヒドロキシ酪酸−グリコール酸共重合体である。乳酸−グリコール酸共重合体における乳酸／グリコール酸のモル比は、好ましくは９０／１０〜３０／７０、より好ましくは８０／２０〜４０／６０である。一方、２−ヒドロキシ酪酸−グリコール酸共重合体における２−ヒドロキシ酪酸／グリコール酸のモル比は、好ましくは９０／１０〜３０／７０、より好ましくは８０／２０〜４０／６０である。
【００５１】
ポリマー溶液中の生体内分解性ポリマー濃度は、ポリマーの種類、分子量などによって変動するが、通常１〜８０重量％、好ましくは、２０〜６０重量％である。
【００５２】
水と混和する生体内分解性ポリマーの良溶媒（溶媒Ａ）としては、生体内分解性ポリマー１ｇを完全に溶解するのに要する量が２５ｇ未満であり、水と完全に混和する性質のものであれば特に限定されず、例えば、アセトン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、ジグリム、エチレングリコールジメチルエーテルなどがあげられる。中でも、毒性の点から、アセトン、テトラヒドロフランが好ましく、アセトンが最も好ましい。これら溶媒は、１種のみならず、２種以上を混合して用いてもよい。
【００５３】
ポリマー溶液は、溶媒Ａに生体内分解性ポリマーを溶解させ、薬物を溶解もしくは分散させて調製すればよく、薬物、生体内分解性ポリマーの添加順序は、特に限定されない。
【００５４】
また、ポリマー溶液中には、溶媒Ａと混和する生体内分解性ポリマーの貧溶媒（溶媒Ｂ）が少量含まれていてもよい。
【００５５】
ポリマー溶液中に含まれる溶媒Ｂの量は、生体内分解性ポリマーが析出してしまわない程度の量であることが好ましく、例えば、ポリマー溶液に対して０．００１〜５０重量％、好ましくは０．０１〜２０重量％である。
【００５６】
次いで、調製したポリマー溶液を、溶媒Ａと混和する生体内分解性ポリマーの貧溶媒（溶媒Ｂ）と溶媒Ａと混和しない生体内分解性ポリマーの貧溶媒（溶媒Ｃ）を含む均一混合液中に添加して乳化することにより、ポリマー溶液が分散相、均一混合液が連続相を形成するエマルションを調製する。
【００５７】
溶媒Ｂとしては、生体内分解性ポリマー１ｇを完全に溶解するのに２５ｇ以上要し、溶媒Ａと完全に混和するようなものであれば特に制限はなく、具体例としては、水、炭素数１〜４の１価アルコールがあげられ、アルコールの具体例としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｉ−プロパノール、ｎ−ブタノール、ｉ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノールまたはｔｅｒｔ−ブタノールなどがあげられる。これらのうち、水、エタノールが好ましく、とりわけ水が好ましい。
【００５８】
また、溶媒Ｃとしては、生体内分解性ポリマー１ｇを完全に溶解するのに２５ｇ以上要し、溶媒Ｃ１００重量部に混和する溶媒Ａが２５重量部以下であり、溶媒Ｂと完全に混和して均一な混合液を形成するようなものであれば特に制限はなく、具体例としては、グリセリンがあげられる。
【００５９】
好ましい溶媒Ａ、Ｂ、Ｃの組合せを非限定的に例示するとすれば、溶媒Ａとしてアセトン、溶媒Ｂとして水、溶媒Ｃとしてグリセリンの組合せ、溶媒Ａとしてアセトン、溶媒Ｂとしてエタノール、溶媒Ｃとしてグリセリンの組合せ、溶媒Ａとしてテトラヒドロフラン、溶媒Ｂとして水、溶媒Ｃとしてグリセリンの組合せ、溶媒Ａとしてアセトン、溶媒Ｂとして水−エタノール混液、溶媒Ｃとしてグリセリンの組合せ、溶媒Ａとしてアセトン、溶媒Ｂとしてｎ−プロパノール、溶媒Ｃとしてグリセリンの組合せ、溶媒Ａとしてアセトン、溶媒Ｂとしてｎ−ブタノール、溶媒Ｃとしてグリセリンの組合せ、溶媒Ａとしてアセトン、溶媒Ｂとしてｉ−プロパノール、溶媒Ｃとしてグリセリンの組合せ、などが考えられる。中でも、溶媒Ａとしてアセトン、溶媒Ｂとして水、溶媒Ｃとしてグリセリンの組合せが最も好ましい。
【００６０】
均一混合液における溶媒Ｂと溶媒Ｃとの重量比は、生体内分解性ポリマーの種類、選択する溶媒Ａ、Ｂ、Ｃの組合せにもよるが、５：９５〜７５：２５の範囲内であれば、好適にマイクロスフェアが得られる。とりわけ、凝集物の形成を防止し、薬物取込率を向上させる上で、１０：９０〜５０：５０の範囲内が好ましく、２０：８０〜４０：６０の範囲内が最も好ましい。
【００６１】
また、該均一混合液には、乳化安定剤を含んでいてもよく、乳化安定化剤としては、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、アラビアゴム、キトサン、ゼラチン、血清アルブミン、界面活性剤などがあげられ、中でも、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースが好ましい。乳化安定剤の混合液中の濃度は、０．００１〜１０重量％、好ましくは０．０１〜２重量％である。
【００６２】
溶媒Ａは、溶媒Ｂと溶媒Ｃを含む均一混合液と部分的に混和するが、混和する速度が制限されているため、薬物、生体内分解性ポリマー及び溶媒Ａを含むポリマー溶液が分散相、均一混合液が連続相を形成するエマルションを形成することができる。そして、エマルション形成と同時に、もしくはエマルション形成と平行して、溶媒Ａが、ポリマー溶液から均一混合液へ徐々に除去され、マイクロスフェア形成も開始される。
【００６３】
ポリマー溶液中の溶媒Ａの均一混合液への混和速度は、均一混合液における溶媒Ｂと溶媒Ｃの重量比を変えることにより調節でき、溶媒Ｃの比率を高くするほど混和速度は遅くなり、低くするほど速くなる。
【００６４】
また、均一混合液中に予め少量の溶媒Ａを含有させておくことによっても、ポリマー溶液中の溶媒Ａの均一混合液への混和速度を遅くすることが可能であり、均一混合液中に含有させる溶媒Ａの量としては、均一混合液中に均一に混和する量であれば特に制限はないが、好ましくは３０重量％以下、特に好ましくは２０重量％以下である。
【００６５】
ポリマー溶液と均一混合液との重量比は、均一混合液における溶媒Ｂと溶媒Ｃの重量比等により変動するが、１：１〜１：１０００の範囲内、好ましくは１：２〜１：２００の範囲内、とりわけ好ましくは１：３〜１：７５の範囲内である。
【００６６】
さらに、乳化後、分散相からの溶媒Ａ除去効率の面からは、ポリマー溶液中の溶媒Ａの量が、均一混合液と混和可能な最大量以下、とりわけ、最大量の１〜８０重量％程度であるのが好ましい。
【００６７】
乳化時の温度は特に限定されないが、薬物が熱に対して不安定な場合は、より低温で行うことが好ましい。乳化を低温下（とりわけ０℃以下）で行う場合には、エマルション形成より先に生体内分解性ポリマーが析出してしまうことを避けるため、ポリマー溶液に対する均一混合液の重量比を前記の範囲内で低くするか、或いは均一混合液中に溶媒Ａを予め少量添加しておくことが好ましい。とりわけ、均一混合液中に溶媒Ａを予め少量添加しておくことが好ましく、溶媒Ａの添加量は前記の範囲内とすればよい。
【００６８】
ポリマー溶液の均一混合液への乳化は、プロペラ式攪拌機、タービン型乳化機、高圧乳化機、超音波分散装置、スタティックミキサーなどの既知の乳化装置による攪拌下、ポリマー溶液を均一混合液中に添加することにより容易に実施可能である。乳化に要する時間は、用いる乳化装置、液量などによって異なるが、１〜１０分間程度である。
【００６９】
また、乳化は、膜乳化、噴霧などの方法によっても好適に実施することが出来る。
【００７０】
膜乳化により乳化を行うには、ポリマー溶液と均一混合液との間に多孔質膜を設け、ポリマー溶液を加圧して多孔質膜の細孔からポリマー溶液を均一混合液中に押出せばよく、必要に応じ、均一混合液を攪拌してもよい。多孔質膜の形状としては、平板状、チューブ状、球状などに成型したもの使用することができ、例えばチューブ状多孔質膜を使用する場合には、（ｉ）チューブ状多孔質膜の内側空洞部分に導通したポリマー溶液を、チューブ状多孔質膜の外側の均一混合液に押出す方法、及び（ｉｉ）チューブ状多孔質膜の外側のポリマー溶液を、チューブ状多孔質膜の内側空洞部分に導通した均一混合液に押出す方法（例えば、ジャーナル  オブ  マイクロエンカプスレーション（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ），１１（２），１７１−１７８，１９９４記載の方法）のいずれも使用することができる。
【００７１】
多孔質膜としては、多孔質セラミックス、多孔質ガラスなどを好適に使用することができ、多孔質セラミックスとしては、アルミナ、ジルコニア、ゼオライトなどがあげられ、多孔質ガラスとしては、米国特許第２１０６７４４号、米国特許第２２１５０３９号記載の多孔質シリカガラス、米国特許第４６５７８７５号記載のシラス多孔質ガラスなどがあげられる。これらのうち、多孔質ガラスを用いることが特に好ましい。
【００７２】
多孔質膜は、表面化学修飾により、表面を親水化したり疎水化したり、種々の官能基が導入されていてもよく、具体的には、オクタデシルトリクロロシランおよびトリメチルシランによって疎水化された多孔質ガラスなどがあげられる。
【００７３】
多孔質膜の細孔径は、０．２〜３００μｍのものから選択すればよく、とりわけ、４〜５０μｍのものから選択することが好ましい。
【００７４】
均一混合液中へのポリマー溶液の押出速度は、ポリマー溶液中の生体内分解性ポリマーの種類および濃度、均一混合液の組成、多孔質膜の細孔径などによっても変動するが、あえて例示するとすれば、多孔質膜１ｍ２におけるポリマー溶液の押出量が、１時間あたり５〜５００ｍｌとなるようにすることが好ましい。
【００７５】
また、噴霧により乳化を行う場合には、既知の噴霧装置を用い、ポリマー溶液を、均一混合液に噴霧すればよい。この際、必要に応じ、均一混合液を攪拌してもよい。噴霧装置としては、例えば、空気ノズル、圧力ノズル、超音波ノズル、ロータリーアトマイザーなどがあげられる。
【００７６】
本発明の方法では、ポリマー溶液を均一混合液に添加して乳化するため、均一混合液をポリマー溶液に添加して転相させる場合と比べて、マイクロスフェアの生成率が高いだけでなく、マイクロスフェア製造時の薬物取込率を向上させ、また、生成するマイクロスフェアからの初期バーストを抑制することができる。
【００７７】
乳化後、得られたエマルションを適当な方法で流動させ、分散相より残りの溶媒Ａを除去する。これにより、分散相の溶媒Ａが連続相へ除去され、分散相の生体内分解性ポリマーが完全に固化し、マイクロスフェアが得られる。
【００７８】
流動の方法は、循環または攪拌によって行うことができる。循環は、ポンプを用いて、エマルションの下部よりエマルションの一部を吸引し、パイプを通してこれをエマルションの上部に戻すことにより行うことが出来る。また、攪拌は、攪拌翼、マグネチックスターラーなどの通常の攪拌手段により行うことができる。
【００７９】
また、乳化後、一旦形成されたエマルションの連続相を増量すれば、分散相からの溶媒Ａの除去を促進でき、また、増量により、乳化中に連続相へ除去された溶媒Ａを希釈できるため、連続相中の溶媒Ａが形成段階のマイクロスフェアに悪影響を及ぼすことも防止できる。
【００８０】
連続相の増量は、エマルションを別途用意した増量用溶媒と混合することによって行うことができる。
【００８１】
増量用溶媒としては、溶媒Ｂ又は溶媒Ｂと溶媒Ｃの混合液を用いることができ、増量用溶媒に用いられる溶媒Ｂ、溶媒Ｃの種類は、均一混合液に使用可能なものであれば特に限定されず、必ずしも、均一混合液に用いられた溶媒Ｂ、溶媒Ｃと同一種である必要はない。増量用溶媒に用いる溶媒Ｂ、Ｃを非限定的に例示するとすれば、溶媒Ｂとして、エタノールなどの炭素数１〜４の１価アルコール、水などがあげられ、溶媒Ｃとしては、グリセリンなどがあげられる。薬物が熱に対して不安定な場合には、増量用溶媒に用いる溶媒Ｂとして、エタノールなどの炭素数１〜４の１価アルコールを用いれば、低温下（例えば０℃以下）でも効率的に溶媒Ａの除去が可能である。
【００８２】
増量の方法としては、別途用意した増量用溶媒をエマルションに添加して行ってもよく、逆に、別途用意した増量用溶媒にエマルションを添加して行ってもよい。
【００８３】
また、増量は１回で行っても、複数回に分けて行ってもよく、更に、連続的に徐々に増量することもできる。
【００８４】
増量による分散相からの溶媒Ａの除去促進効果を増大させるためには、増量後のエマルションの連続相における溶媒Ｂの割合が、増量前のエマルションにおける溶媒Ｂの割合よりも大きくなるように増量するのが好ましく、増量前の割合よりも０〜７０％大きくするのがとりわけ好ましい。また、増量後の連続相の体積が増量前の２〜１００倍となるようにするのが好ましい。
【００８５】
乳化後、溶媒Ａの除去に要する時間は、１２時間以内であり、エマルションの連続相を増量すれば、時間を短縮することも可能である。
【００８６】
また、エマルションの分散相から残った溶媒Ａを除去する際、加温、減圧等を行えば、溶媒Ａの除去を更に促進することができる。加温はエマルションの温度を３０〜７０℃とすればよく、温度は一定である必要はなく、例えば、徐々に昇温することも、段階的に昇温することもできる。また、減圧は適当な減圧装置を用いて、５〜８０ｋＰａとなるまでエマルションを減圧すればよい。
【００８７】
本発明のマイクロスフェア製法は、エマルションの分散相に含まれる溶媒Ａが連続相に除去されるため、（ａ）分散相から連続相に除去された溶媒Ａがマイクロスフェア製造装置外へ蒸散可能な開放系、（ｂ）マイクロスフェア製造装置外への蒸散できない密閉系の何れでも行うこともできるが、溶媒Ａの環境への悪影響を防止し、溶媒Ａを回収・再利用しやすい点で、密閉系で溶媒Ａの除去を行うのが好ましい。
【００８８】
密閉系でマイクロスフェアを製造する場合には、連続相から留去される溶媒Ａをトラップして回収するのが好ましく、溶媒Ａの回収は、溶媒Ａを含む気体を冷却して液化するか、又は多孔性粒子に導通して溶媒Ａを吸着させるなどの方法によって容易に行うことができる。
【００８９】
得られたマイクロスフェアは遠心分離またはフィルターによる濾取などの方法により分取し、必要に応じ水などで洗浄を行い、風乾、真空乾燥、凍結乾燥などの乾燥手段により水分を除去し、回収することができる。
【００９０】
また、マイクロスフェア中に残存する溶媒Ａの量を極力低減させたい場合（例えばマイクロスフェア重量に対して５０００ｐｐｍ以下まで）には、分取したマイクロスフェアを水中に再分散させて３分〜１２時間、好ましくは５分〜５時間攪拌し、その後、再度マイクロスフェアを分取し、必要に応じ洗浄を行い、乾燥させればよい。
【００９１】
剤形によっては、洗浄後のマイクロスフェアを適当な溶液に懸濁し、凍結乾燥により最終製剤の形に調製する。
【００９２】
以上の方法で得られるマイクロスフェアの粒子径は、平均粒子径として１〜１０００μｍである。とりわけ、粒子径２０〜１５０μｍのマイクロスフェアが７０％以上を占めるマイクロスフェアが容易に得られる。
【００９３】
このようにして得られたマイクロスフェアは、薬物の種類に関わらず、取り込み率が高く、また、実施例にも示すように溶出パターンは零次放出型とすることができる。
【００９４】
本発明の方法により得られたマイクロスフェアは、そのまま筋肉内、皮下、血管、臓器、あるいは関節腔、腹腔、腫瘍などの病巣に容易に注射剤、埋め込み剤として投与することができる。また、種々の製剤を製造する際の原料としても用いることができ、そのような製剤としては、例えば、注射剤、経口投与剤、経皮投与剤、坐剤、経鼻投与剤、経肺投与剤、口腔投与剤、眼内投与剤などがあげられる。
【００９５】
以下に実施例、比較例により、更に本発明を詳細に説明する。
【００９６】
【実施例】
実施例１
乳酸−グリコール酸コポリマー（乳酸とグリコール酸のモル比が５０：５０、分子量２万、和光純薬製）（以下、ＰＬＧＡ５０２０と略す）４８７．５ｍｇ、予めジェットミル（セイシン企業製）で粉砕したビタミンＢ１２  １２．５ｍｇにアセトン８００ｍｇを加え、ポリマー溶液（ビタミンＢ１２は分散状態）を調製した。室温において攪拌下（プロペラ式攪拌機、スリーワンモーターＢＬ３０００、ヘイドン社製、回転数：１５００ｒｐｍ）、ポリビニルアルコール（１．０重量％）を含有させたグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が７０：３０）４ｇにパスツールピペットを用いてポリマー溶液を添加して３分間乳化し、ポリマー溶液を分散相、グリセリン−水混合液を連続相とするエマルションを得た。このエマルションをグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が７０：３０）１４ｇ中に添加して密栓を施した後、マグネチックスターラーにて３時間撹拌を行い、アセトンをエマルションの分散相から除去し、マイクロスフェアの分散液を得た。この分散液を１５０μｍのフィルターで濾過し、さらに２０μｍのフィルターでマイクロスフェアを濾取した後、凍結乾燥を行い、マイクロスフェアを回収した。マイクロスフェアの回収率（仕込んだポリマーと薬物量に対する回収したマイクロスフェア量の割合）は、７９．５％であった。
【００９７】
得られたマイクロスフェアの平均粒子径は、４７．０μｍであり、薬物取込率は、８１．０％であった（ビタミンＢ１２の定量は、分光光度計（ＳＨＩＭＡＤＺＵ  ＵＶ−２５００ＰＣ）にて行った）。
【００９８】
このマイクロスフェアについてｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出試験を行ったところ（溶出液：９．６ｍＭリン酸緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．４）、溶出試験機：タイテック製回転培養機ＲＴ５０（攪拌強度：２５ｒｐｍ）、３７℃）、２１日間にわたってビタミンＢ１２が一定の速度で放出された。また、初期バースト率（試験開始１時間後における溶出率）は、わずか５．２％であった（図１）。
【００９９】
比較例１
実施例１と同様の操作を行ってポリマー溶液を得た。室温において攪拌下（プロペラ式攪拌機、スリーワンモーターＢＬ３０００、ヘイドン社製、回転数：１５００ｒｐｍ）、ポリマー溶液中に、ポリビニルアルコール（１．０重量％）を含有させたグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が７０：３０）４ｇをパスツールピペットを用いて添加して３分間乳化した。エマルションの転相が生じ、最終的には、ポリマー溶液を分散相、グリセリン−水混合液を連続相とするエマルションを得た。このエマルションをグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が７０：３０）１４ｇ中に添加して密栓を施した後、マグネチックスターラーにて３時間撹拌を行い、アセトンをエマルションの分散相から除去し、マイクロスフェアの分散液を得た。この分散液を１５０μｍのフィルターで濾過し、さらに２０μｍのフィルターでマイクロスフェアを濾取した後、凍結乾燥を行い、マイクロスフェアを回収した。
【０１００】
得られたマイクロスフェアの平均粒子径は、３７．７μｍであり、薬物取込率は、わずか２７．７％であった。
【０１０１】
このマイクロスフェアについてｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出試験を行ったところ、わずか１時間でほとんどの薬物が放出され、初期バースト率は、７４．１％にも達した（図１）。
【０１０２】
以上より、乳化に際し、ポリマー溶液中にグリセリン−水混合液を添加すると、薬物取込率が低下し、初期バースト率も増大することが判明した。
【０１０３】
比較例２
実施例１と同様の操作を行ってポリマー溶液を得た。室温において攪拌下（プロペラ式攪拌機、スリーワンモーターＢＬ３０００、ヘイドン社製、回転数：１５００ｒｐｍ）、ポリビニルアルコール（１．０重量％）を含有させた飽和ショ糖水溶液（ショ糖濃度：約６５重量％）４ｇにパスツールピペットを用いてポリマー溶液を添加して３分間乳化し、ポリマー溶液を分散相、飽和ショ糖水溶液を連続相とするエマルションを得た。このエマルションをグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が５０：５０）１４ｇ中に添加して密栓を施した後、マグネチックスターラーにて３時間撹拌を行い、アセトンをエマルションの分散相から除去し、微粒子の分散液を得た。この分散液を１５０μｍのフィルターで濾過し、さらに２０μｍのフィルターで微粒子を濾取した後、凍結乾燥を行い、微粒子を回収した。
【０１０４】
しかしながら、この微粒子は繊維状で、球状のマイクロスフェアではなく、回収率も僅か３．５％に過ぎなかった。
【０１０５】
したがって、ポリマー溶液を飽和糖（ショ糖）水溶液中に乳化しても、マイクロスフェアは得られないことが判明した。
【０１０６】
比較例３
比較例２において、ポリビニルアルコール（１．０重量％）を含有させた飽和ショ糖水溶液（ショ糖濃度：約６５重量％）にかえて、ポリビニルアルコール（１．０重量％）を含有させた飽和グルコース水溶液（グルコース濃度：約５０重量％）を用いた以外は同様の操作を行い、微粒子を得た。
【０１０７】
しかしながら、この微粒子は繊維状で、球状のマイクロスフェアではなく、回収率も僅か５．１％に過ぎなかった。
【０１０８】
したがって、ポリマー溶液を飽和糖（グルコース）水溶液中に乳化しても、マイクロスフェアは得られないことが判明した。
【０１０９】
比較例４
比較例２において、ポリビニルアルコール（１．０重量％）を含有させた飽和ショ糖水溶液（ショ糖濃度：約６５重量％）にかえて、ポリビニルアルコール（１．０重量％）を含有させた飽和マンニトール水溶液（マンニトール濃度：約１５重量％）を用いた以外は同様の操作を行い、微粒子を得た。
【０１１０】
しかしながら、この微粒子は繊維状で、球状のマイクロスフェアではなく、回収率も僅か０．７％に過ぎなかった。
【０１１１】
したがって、ポリマー溶液を飽和糖（マンニトール）水溶液中に乳化しても、マイクロスフェアは得られないことが判明した。
【０１１２】
実施例２
ＰＬＧＡ５０２０  ４８７．５ｍｇ、予めジェットミル（セイシン企業製）で粉砕したビタミンＢ１２  １２．５ｍｇにアセトン８００ｍｇを加え、ポリマー溶液（ビタミンＢ１２は分散状態）を調製した。１５℃において攪拌下（乳化機、商品名：ポリトロン、キネマティカ・アーゲー・リタウ社製、回転数：２５００ｒｐｍ）、ポリビニルアルコール（０．３重量％）を含有させたグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が７０：３０）６ｇにパスツールピペットを用いてポリマー溶液を添加して３分間乳化し、ポリマー溶液を分散相、グリセリン−水混合液を連続相とするエマルションを得た。このエマルションをグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が５０：５０）１４ｇ中に添加してマグネチックスターラーにて２．５時間撹拌し、さらに水１０ｍｌを添加して０．５時間攪拌を行い、アセトンをエマルションの分散相から除去し、マイクロスフェアの分散液を得た。この分散液を１５０μｍのフィルターで濾過し、さらに２０μｍのフィルターでマイクロスフェアを濾取した後、凍結乾燥を行い、マイクロスフェアを回収した。
【０１１３】
得られたマイクロスフェアの平均粒子径６２．７μｍであり、薬物取込率は、６１．３％であった。
【０１１４】
このマイクロスフェアについてｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出試験（溶出液：９．６ｍＭリン酸緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．４）、３７℃）を行ったところ、１４日間にわたってビタミンＢ１２を放出した（図２）。
【０１１５】
実施例３
特開平１１−３０２１５６記載の方法に従い、ウシ血清アルブミン（シグマ社製、以下ＢＳＡと略す）１ｇ、ポリエチレングリコール６０００（和光純薬製）２ｇを水１００ｍｌに溶解した溶液を凍結乾燥し、得られた固形物を、アセトン−塩化メチレン混液（アセトンと塩化メチレンの体積比が３：１）で洗浄してポリエチレングリコールを除去した後、１時間減圧乾燥して平均粒子径１μｍのＢＳＡ微粒子を得た。
【０１１６】
予め粉砕したビタミンＢ１２にかえて上記微粒子化したＢＳＡを用いてポリマー溶液（ＢＳＡは分散状態）を調製し、２０μｍのフィルターでマイクロスフェアを濾取する代わりに遠心分離（２０００ｒｐｍ、５分間）を２回繰返してマイクロスフェアを集めた以外は実施例２と同様の操作を行い、マイクロスフェアを得た。
【０１１７】
得られたマイクロスフェアの平均粒子径は、１４．３μｍであり、薬物取り込み率は、７４．８％であった（ＢＳＡの定量は、ミクロＢＣＡタンパク定量キット（ＰＩＥＲＣＥ）にて測定した）。
【０１１８】
実施例４
予め粉砕したビタミンＢ１２にかえてエストロンを用いてポリマー溶液（エストロンは溶解状態）を調製し、２０μｍのフィルターでマイクロスフェアを濾取する代わりに遠心分離（２０００ｒｐｍ、５分間）を２回繰返してマイクロスフェアを集めた以外は実施例２と同様の操作を行い、マイクロスフェアを得た。
【０１１９】
得られたマイクロスフェアの平均粒子径は、２２．４μｍ、薬物取り込み率は、ぼぼ１００％であった（エストロンの定量は、ＨＰＬＣ法にて測定した）。
【０１２０】
実施例５
ポリビニルアルコール（０．３重量％）を含有させたグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が７０：３０）にかえてヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ−Ｌ、日本曹達製）（１重量％）を含有させたグリセリン−エタノール混合液（グリセリンとエタノールの重量比が８０：２０）用い、ポリトロンの回転数を４０００ｒｐｍとした以外は実施例２と同様の操作を行い、平均粒子径５０．８μｍのマイクロスフェアを得た。
【０１２２】
実施例７
ＰＬＧＡ５０２０にかえてポリ乳酸（分子量：２００００、和光純薬製）、ビタミンＢ１２にかえて特開平１１−３０２１５６記載の方法により微粒子化したＢＳＡを用いてポリマー溶液（ＢＳＡは分散状態）を調製し、ポリトロンにかえてプロペラ式攪拌機（スリーワンモーターＢＬ３０００、ヘイドン社製、回転数：１５００ｒｐｍ）を用いた以外は実施例２と同様の操作を行い、マイクロスフェアを得た。
【０１２３】
得られたマイクロスフェアの平均粒子径は、７６．１μｍであり、薬物取込率は、７８．９％であった。
【０１２４】
また、このマイクロスフェアのｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出試験の結果を図３に示した。
【０１２５】
実施例８
ＰＬＧＡ５０２０  ４８７．５ｍｇ、タルチレリン水和物１２．５ｍｇにアセトン７００ｍｇ、水１００ｍｇを加え、ポリマー溶液（タルチレリン水和物は溶解状態）を調製した。室温において攪拌下（プロペラ式攪拌機、スリーワンモーターＢＬ３０００、ヘイドン社製、回転数：１５００ｒｐｍ）、ポリビニルアルコール（１．０重量％）を含有させたグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が７０：３０）４ｇにパスツールピペットを用いてポリマー溶液を添加して３分間乳化し、ポリマー溶液を分散相、グリセリン−水混合液を連続相とするエマルションを得た。このエマルションをグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が７０：３０）１４ｇ中に添加し、マグネチックスターラーにて３時間撹拌を行い、アセトンをエマルションの分散相から除去し、マイクロスフェアの分散液を得た。この分散液を１５０μｍのフィルターで濾過し、さらに２０μｍのフィルターでマイクロスフェアを濾取した後、凍結乾燥を行い、マイクロスフェアを回収した。
【０１２６】
得られたマイクロスフェアの平均粒子径は、７６．０μｍ、薬物取込率は、４６．１％であった（タルチレリンの定量は、ＨＰＬＣにて行った）。
【０１２７】
このマイクロスフェアについてｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出試験の結果を図４に示した。
【０１２８】
実施例９
ＰＬＧＡ５０２０  ４８７．５ｍｇ、予めジェットミル（セイシン企業製）で粉砕したビタミンＢ１２  １２．５ｍｇにアセトン８００ｍｇを加え、ポリマー溶液（ビタミンＢ１２は分散状態）を調製した。室温において攪拌下（ラモンドスターラーＳＴ０２型、ＥＳＴ環境科学工業製、回転数：５００ｒｐｍ）、ポリビニルアルコール（０．５重量％）を含有させたグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が７０：３０）４ｇにパスツールピペットを用いてポリマー溶液を添加して３分間乳化し、ポリマー溶液を分散相、グリセリン−水混合液を連続相とするエマルションを得た。このエマルションをグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が５０：５０）１４ｇ中に添加してマグネチックスターラーにて０．５時間撹拌し、さらに５０℃に加温して２．５時間攪拌を行い、アセトンをエマルションの分散相から除去し、マイクロスフェアの分散液を得た。この分散液を１５０μｍのフィルターで濾過し、さらに２０μｍのフィルターでマイクロスフェアを濾取した後、凍結乾燥を行い、マイクロスフェアを回収した。
【０１２９】
得られたマイクロスフェアの平均粒子径は、５５．１μｍ、薬物取込率は、７７．４％であった。
【０１３０】
このマイクロスフェアについてｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出試験の結果を図５に示した。
【０１３１】
実施例１０
ＢＳＡ１ｇ、ＰＥＧ６０００（ポリエチレングリコール６０００、片山化学製）３ｇを水２００ｍｌに溶解した溶液を−２０℃で凍結させ、得られた凍結物にアセトン５００ｍｌを添加し、プロペラ式撹拌機（スリーワンモーターＢＬ３０００、ヘイドン社製、回転数：５００ｒｐｍ）を用いて撹拌を行い、ＰＥＧ６０００および氷をアセトン中に溶解させ、ＢＳＡ微粒子分散液を得た。遠心分離（２０００ｒｐｍ、５分間）を行い上清を除去し、アセトン５０ｍｌでＢＳＡ微粒子を２回洗浄した後、一晩減圧乾燥し、平均粒子径３．７２μｍのＢＳＡ微粒子を得た。
【０１３２】
得られたＢＳＡ微粒子２５ｍｇ、ＲｅｓｏｍｅｒＲＧ５０３Ｈ（乳酸−グリコール酸コポリマー、乳酸とグリコール酸のモル比が５０：５０、分子量３万３千、ベーリンガー社製）４７５ｍｇ、アセトン１５００ｍｇを加え、ポリマー溶液（ＢＳＡは分散状態）を調製した。−２０℃において攪拌下（プロペラ式攪拌機、スリーワンモーターＢＬ３０００、ヘイドン社製、回転数：５００ｒｐｍ）、ポリビニルアルコール（０．５重量％）を含有させたグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が７０：３０）８ｇとアセトン１ｇとの混合液にパスツールピペットを用いてポリマー溶液を添加して３分間乳化し、ポリマー溶液を分散相、グリセリン−水混合液を連続相とするエマルションを得た。このエマルションを−２０℃のエタノール３０ｍｌ中に添加して密栓を施した後、マグネチックスターラーにて３時間撹拌を行い、アセトンをエマルションの分散相から除去し、マイクロスフェアの分散液を得た。この分散液を１５０μｍのフィルターで濾過し、さらに２０μｍのフィルターでマイクロスフェアを濾取し、水で洗浄後、凍結乾燥を行い、マイクロスフェアを回収した。マイクロスフェアの回収率は、７４．５％であった。
【０１３３】
得られたマイクロスフェアの薬物取り込み率は、６８．６％であった。
【０１３４】
実施例１１
実施例１０と同様の操作を行い得られたマイクロスフェア分散液を、１５０μｍのフィルターで濾過し、さらに２０μｍのフィルターでマイクロスフェアを濾取した後、水１０ｍｌ中に再分散し、室温にて密閉下、２．５時間攪拌した。攪拌終了後、再度２０μｍのフィルターでマイクロスフェアを濾取し、凍結乾燥を行い、マイクロスフェアを回収した。
【０１３５】
得られたマイクロスフェアをジオキサンに溶解し、ガスクロマトグラフィーにてマイクロスフェア中に残存していたアセトン量を測定したところ、５００ｐｐｍ以下であった。
【０１３６】
実施例１２
ＢＳＡ２ｇ、ＰＥＧ２００００（ポリエチレングリコール２００００、片山化学製）６ｇを水２００ｍｌに溶解した溶液を−８０℃で凍結させ、得られた凍結物にアセトン５００ｍｌを添加し、プロペラ式撹拌機（スリーワンモーターＢＬ３０００、ヘイドン社製、回転数：５００ｒｐｍ）を用いて撹拌を行い、ＰＥＧ２０００および氷をアセトン中に溶解させ、ＢＳＡ微粒子分散液を得た。遠心分離（２０００ｒｐｍ、５分間）を行い上清を除去し、アセトン５０ｍｌでＢＳＡ微粒子を２回洗浄した後、一晩減圧乾燥し、平均粒子径２．０４μｍのＢＳＡ微粒子を得た。
【０１３７】
得られたＢＳＡ微粒子１２．５ｍｇ、ＰＬＧＡ５０２０  ４８７．５ｍｇ、アセトン８００ｍｇを加え、ポリマー溶液（ＢＳＡは分散状態）を調製した。−２０℃において攪拌下（プロペラ式攪拌機、スリーワンモーターＢＬ３０００、ヘイドン社製、回転数：５００ｒｐｍ）、ポリビニルアルコール（０．５重量％）を含有させたグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が７０：３０）４ｇとアセトン０．５ｇとの混合液にパスツールピペットを用いてポリマー溶液を添加して３分間乳化し、ポリマー溶液を分散相、グリセリン−水混合液を連続相とするエマルションを得た。このエマルションを−２０℃のエタノール７．５ｍｌ中に添加して密栓を施した後、マグネチックスターラーにて１５分撹拌を行い、アセトンをエマルションの分散相から除去し、マイクロスフェアの分散液を得た。この分散液を１５０μｍのフィルターで濾過し、さらに２０μｍのフィルターでマイクロスフェアを濾取した後、水１０ｍｌ中に再分散し、室温にて密閉下、１時間攪拌した。攪拌終了後、再度２０μｍのフィルターでマイクロスフェアを濾取し、凍結乾燥を行い、マイクロスフェアを回収した。
【０１３８】
実施例１３
実施例１２において、ポリビニルアルコール（０．５重量％）を含有させたグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が７０：３０）４ｇとアセトン０．５ｇとの混合液にかえて、ポリビニルアルコール（０．５重量％）を含有させたグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が７０：３０）４ｇとテトラヒドロフラン０．５ｇとの混合液を用いた以外は同様の操作を行い、マイクロスフェアを得た。
【０１３９】
実施例１４
実施例１２において、ポリビニルアルコール（０．５重量％）を含有させたグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が７０：３０）４ｇとアセトン０．５ｇとの混合液にかえて、ポリビニルアルコール（０．５重量％）を含有させたグリセリン−水混合液（グリセリンと水の重量比が７０：３０）４ｇとアセトニトリル０．５ｇとの混合液を用いた以外は同様の操作を行い、マイクロスフェアを得た。
【０１４０】
実施例１５
実施例１２と同様の操作を行い得られたマイクロスフェア分散液を、１５０μｍのフィルターで濾過し、さらに２０μｍのフィルターでマイクロスフェアを濾取した後、水１ｍｌ中に再分散し、４℃にて密閉下、１時間攪拌した。攪拌終了後、凍結乾燥を行い、マイクロスフェアを回収した。
【０１４１】
【発明の効果】
本発明の方法によれば、水混和性の有機溶媒、特に、人体、環境への悪影響が少ないアセトンやテトラヒドロフランなどを用いてマイクロスフェアを調製することができる。
【０１４２】
また、本方法によれば、水溶性薬物、脂溶性薬物の何れであっても、高い取込率でマイクロスフェア中に包含することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】  均一混合液中にポリマー溶液を添加した場合（実施例１）とポリマー溶液中に均一混合液を添加した場合（比較例１）の、得られたビタミンＢ１２含有マイクロスフェアの溶出特性の比較を示すグラフである。
【図２】  ビタミンＢ１２含有マイクロフェア（実施例２）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出試験結果を示すグラフである。
【図３】  ウシ血清アルブミン含有マイクロスフェア（実施例７）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出試験結果を示すグラフである。
【図４】  タルチレリン含有マイクロスフェア（実施例８）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出試験結果を示すグラフである。
【図５】  ビタミンＢ１２含有マイクロフェア（実施例９）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶出試験結果を示すグラフである。
【図１】
0003709808.tif 000002
【図２】
0003709808.tif 000003
【図３】
0003709808.tif 000004
【図４】
0003709808.tif 000005
【図５】
0003709808.tif 000006