(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）親水性セグメントおよび疎水性セグメントを有するブロックコポリマーと、糖類、無機塩類およびポリエチレングリコールからなる群より選ばれる１種または２種以上の助剤とを含む水分散液を調製する工程、
（Ｂ）水非混和性の有機溶媒を使用して水難溶性薬物の有機溶媒を調製する工程、ならびに
（Ｃ）工程（Ａ）および工程（Ｂ）で、それぞれ得られた水分散液と有機溶液を混合し、こうして得られた混合液を撹拌しながら有機溶媒を揮散させて薬物含有高分子ミセルの分散液を調製する工程、
を含んでなる薬物含有高分子ミセルの製造方法。
【請求項２】
さらに、（Ｄ）前記薬物含有高分子ミセルの分散液に糖類およびポリエチレングリコールからなる群より選ばれる１種または２種以上の助剤を添加する工程を含む請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
親水性セグメントがポリエチレングリコールセグメントである請求項１または２記載の製造方法。
【請求項４】
ポリエチレングリコールセグメントがオキシエチレン(すなわち、−（ＯＣＨ2ＣＨ2）−)反復単位を１０〜２５００個有する請求項３記載の製造方法。
【請求項５】
糖類がマルト−ス、トレハロース、キシリトール、グルコース、スクロース、フルクト−ス、ラクトース、マンニトールおよびデキストリンからなる群より選ばれるか、あるいは無機塩類が塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウムおよび塩化カルシウムからなる群より選ばれるか、あるいはポリエチレングリコールが分子量１０００〜３５０００のポリエチレングリコールからなる群より選ばれる請求項１〜４のいずれかに記載の製造方法。
【請求項６】
水難溶性薬物が、パクリタキセル、トポテカンおよびドセタキセルからなる群より選ばれる請求項１〜５のいずれかに記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、薬物含有高分子ミセルの分散液の製造方法に関する。このような分散液は、そのまま医薬製剤として、また、水性分散液に再構成の容易な凍結乾燥物を調製するための組成物としても、有用である。
【０００２】
【従来の技術】
親水性セグメントおよび疎水性セグメントを有するブロックコポリマーを使用して水難溶性薬物を封入した高分子ミセルの調製方法の典型的なものとしては、以下のものが知られている（特許第２７７７５３０号公報参照）。
ａ）撹拌による薬物の封入法
水難溶性薬物を、必要により水混和性の有機溶媒に溶解して、ブロックコポリマー分散水溶液と撹拌混合する。なお、撹拌混合時に加熱することにより薬物の高分子ミセル内への封入を促進できる場合もある。
ｂ）溶媒揮散法
水難溶性薬物の水非混和性の有機溶媒溶液とブロックコポリマー分散水溶液とを混合し、撹拌しながら有機溶媒を揮散させる。
ｃ）透析法
水混和性の有機溶媒に水難溶性薬物およびブロックコポリマーを溶解した後、得られる溶液を透析膜を用い緩衝液および／または水に対して透析する。
ｄ）その他（上記公報等に未載）
水非混和性の有機溶媒に水難溶性薬物およびブロックコポリマーを溶解し、得られる溶液を水と混合し、撹拌して水中油（Ｏ／Ｗ）型エマルジョンを形成し、次いで有機溶媒を揮散させる（特願２０００−０３２１５６号明細書参考）。
【０００３】
ところで、以上の各方法には、それぞれ一長一短があるといわれている。例えば、ａ）およびｂ）は、一般的に高分子ミセル内への薬物の導入率が低く、ｃ）は操作が煩雑であり、薬物の種類によっては高分子ミセルが形成できず、ｄ）は、使用するブロックコポリマーの種類あるいは薬物の種類によって溶液粘度が高まり、撹拌操作が困難である場合がある。
【０００４】
いずれにしても、高分子ミセルの形成機序は、水に対して溶解性の低い連鎖（ブロックコポリマーの疎水性セグメント）の水中での集合する凝集力に基づいて多分子間会合体（高分子ミセル）が形成されるものとみなされている。また、かような高分子ミセルは、低分子リン脂質等を用いて形成されるミセルであるリポソームより一般的に安定であることも確認されている。にもかかわらず、医薬製剤の長期保存を行うとの観点に立てば、分散液中に存在する高分子ミセルを固体状で保存することが必要な場合があり、該分散液を凍結乾燥することが試みられている。しかし、上記方法で得られる高分子ミセルは、一般的に、凍結乾燥に際して、ミセル粒子間で凝集したり、その他の理由で得られる凍結乾燥物を水分散体に再構成するには不都合な場合がよくある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、水難溶性薬物含有高分子ミセル分散体を容易かつ、工業的規模での実施が可能であり、しかも、凍結乾燥にも適する高分子ミセル分散体を得ることのできる方法を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上述の高分子ミセルの形成機序に関連し、ブロックコポリマーの疎水性セグメントの凝集力は、水難溶性薬物の存在下で増強されると推測されている。そのため、高分子ミセルの形成に際しては、ブロックコポリマー、薬物、溶媒、場合によって緩衝剤等の他に、さらなる化合物を積極的に加える場合は少ない。
【０００７】
ところで、本発明者らは、上記高分子ミセル形成に際し、糖類、無機塩類、ポリエチレングリコールのいずれか１種以上を共存させても、得られる薬物含有高分子ミセルの安定性が低下することなく、しかも凍結乾燥に適した分散系（または組成物）が得られることを見出した。また、工業的規模での実施にも適することが確認された。
【０００８】
したがって、上記課題は、本発明に従う、
（Ａ）親水性セグメントおよび疎水性セグメントを有するブロックコポリマーと、糖類、無機塩類およびポリエチレングリコールからなる群より選ばれる１種または２種以上の助剤とを含む水分散液を調製する工程、
（Ｂ）水非混和性の有機溶媒を使用して水難溶性薬物の有機溶液を調製する工程、ならびに
（Ｃ）工程（Ａ）および工程（Ｂ）で、それぞれ得られた水分散液と有機溶液を混合し、こうして得られた混合液を撹拌しながら有機溶媒を揮散させて薬物含有高分子ミセルの分散液を調製する工程、
を含んでなる薬物含有高分子ミセルの製造方法の提供によって解決される。
【０００９】
本発明の方法は、さらに、（Ｄ）前記薬物含有高分子ミセルの分散液に糖類およびポリエチレングリコールからなる群より選ばれる１種または２種以上の助剤を添加する工程を含むことができる。
【００１０】
こうして得られる薬物含有高分子ミセルに加えて、糖類、無機塩類およびポリエチレングリコールの１種以上が含まれる分散液は、そのまま凍結乾燥した場合でも、水に溶解容易な凍結乾燥物を提供できる。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明で使用できるブロックコポリマーとしては、親水性セグメント（以下、Ａセグメントともいう）および疎水性セグメント（以下、Ｂセグメントともいう）からなる、所謂、ＡＢ型またはＡＢＡ型のブロックコポリマーであることができる。Ａセグメントを構成するポリマーとしては、限定されるものでないが、ポリエチレングリコール（もしくはポリオキシエチレン）、ポリサッカライド、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等をあげることができる。これらの中、好ましいものとしてはポリエチレングリコールから構成されるものをあげることができる。限定されるものでないが、ポリエチレングリコールセグメントのオキシエチレンの反復単位は１０〜２５００個となるものがより好ましい。
【００１２】
Ａセグメントは、Ｂセグメントとの結合端と反対側の末端に、高分子ミセルを形成する上で悪影響を及ぼさない限り、いかなる低分子官能基または分子の部分（例、低級アルキル、アミノ基、カルボキシル基、糖残基、タンパク質残基等）を有していてもよい。
【００１３】
他方、Ｂセグメントとしては、限定されるものでないが、ポリアミノ酸エステル（ポリアスパラギン酸エステル、ポリグルタミン酸エステル、またこれらの部分加水分解物等）、ポリ（メタ）アクリル酸エステル、ポリラクチド、ポリエステル、等をあげることができる。Ｂセグメントも、Ａセグメントとの結合端との反対の末端に、高分子ミセルを形成する際に薬物とＢセグメントとの相互作用に悪影響を及ぼさない範囲で、Ａセグメントについて説明したのと同様な低分子官能基を有することができる。かようなブロックコポリマーの代表的なものは、例えば、特許第２７７７５３０号公報、ＷＯ９６／３２４３４、ＷＯ９６／３３２３３およびＷＯ９７／０６２０２等、に記載されているポリマーそれら自体またはそれらから誘導されるものをあげることができる。
【００１４】
本発明に従えば、上記ブロックコポリマーと、糖類、無機塩類およびポリエチレングリコールからなる群より選ばれる１種または２種以上の助剤とを含む水分散液が調製される。かような助剤として使用できる糖類としては、本発明の目的に沿う限り制限されるものでないが、好ましいものとしては、マルトース、トレハロース、キシリトール、グルコース、スクロース、フルクトース、ラクトース、マンニトール、デキストリン等の単糖もしくはオリゴ糖または糖アルコールがあげられる。一方、無機塩類も、本発明の目的に沿い、そして製剤学的に許容されるものであれば、本発明においていずれも使用できるが、好ましいものとしては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム等の塩化物があげられる。他方、ポリエチレングリコールとしてはオキシエチレン（−（ＯＣＨ２ＣＨ２）−）単位が２０〜８００、好ましくは２０〜２００個のポリエチレングリコールがあげられる。このようなポリエチレングリコールとしては、例えば、医薬品添加物事典に記載のマクロゴール１０００、１５４０、４０００、６０００、２００００および３５０００を使用するのが好都合である。
【００１５】
なお、本明細書では、ポリエチレングリコール、ならびにＡセグメントおよびＢセグメントに言及する際に「ポリ」の語が使用されているが、上記ポリエチレングリコールの例に見られるように、適する場合には、所謂、「オリゴ」の意味をも包含するものと理解されている。
【００１６】
前記分散液は、ブロックコポリマーおよび各助剤を同時に水に加えて撹拌するか、予め助剤の水溶液を用意し、それにブロックコポリマーを加えるか、あるいはその逆の順序で混合物を作成し、そして撹拌混合することにより調製できる。撹拌には、通常の撹拌機の他、超音波を利用してもよい。かような分散液は、限定されるものでないが、一般に、ブロックコポリマーが、０．１〜４０重量％濃度で、そしてそれぞれ、糖類が０．５〜１５重量％の濃度で、ポリエチレングリコールが０．５〜１０重量％の濃度で、そして無機塩類が０．５〜１０重量％となるように含めることができる。
【００１７】
また、本発明で使用することのできる薬物は、上記ブロックコポリマーによって形成される高分子ミセルに封入できるものであれば、いかなる薬物であってもよいが、一般的に、水に対する溶解度が１００μｇ／ｍＬ以下であるような水難溶性薬物であることを意図している。このような薬物の例としては、限定されるものでないが、パクリタキセル、トポテカン、カンプトテシン、シスプラチン、ダウノルビシン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ドセタキセル、ビンクレスチンなどおよびそれらの誘導体からなる制癌剤、ポリエン系抗生物質、例えばアンホテリシンＢ、ナイスタチンなど、その他、プロスタグランジン類およびそれらの誘導体などの脂溶性薬物があげられる。なかでも、パクリタキセル、トポテカン、ドセタキセルには本発明方法が都合よく使用できる。
【００１８】
本発明に従えば、このような薬物を、水非混和性の有機溶媒で溶解した有機溶液が調製される。このような溶媒としては、限定されるものでないが、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル、ジブチルエーテル、酢酸エチル、酢酸ブチル、およびこれらの混合溶媒があげられる。溶液における薬物濃度は、使用する溶媒および薬物の組み合わせによって、好適濃度が変動するが、一般的に、０．１〜１０重量％の濃度であることができる。以上の混合操作は、室温または低温下で行うことができる。
【００１９】
こうして調製された水分散液と有機溶液は、一度に両者を混合するか、あるいは前者に後者を徐々に添加するかまたはその逆であることもでき、こうして形成した混合液は薬物が高分子ミセルに封入されるのに十分な時間撹拌（超音波処理を包含する）処理にかけられる。かかる処理は室温下でまたはより低温下（〜５℃）で行うのがよい。なお、撹拌処理を通して有機溶媒を揮散させてもよい。
【００２０】
以上の操作により、薬物含有高分子ミセル分散液が得られるが、さらに必要により、上記で例示したような、糖類およびポリエチレングリコールを該分散液に加えて、例えば、場合によって、その後行われる凍結乾燥処理における薬物含有高分子ミセルの安定化またはかかるミセル粒子間の凝集の抑制を図ることができる。糖類および／またはポリエチレングリコールは、上述の高分子ミセル分散液を調製する際にこれらが加えられたか否かを考慮して、最終濃度が、それぞれ糖類が０．１〜１５重量％、ポリエチレングリコールが０．５〜１０重量％になるように加えることが好ましいが、薬物含有高分子ミセルの凍結乾燥物を調製し、そして得られた凍結乾燥物を水系媒体で再構成するのに悪影響がでない範囲内であれば、かような濃度を超えるように加えてもよい。なお、ここにいう水系媒体とは、純水、脱イオン水、緩衝化された水、等張化された水等であることができる。さらに本発明の製剤を調製する際のｐＨは、４．０〜７．５が好ましく、場合によってはｐＨ調製剤及び抗酸化剤（アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム）などを混合できる。
【００２１】
以上の本発明の方法に従えば、水難溶性薬物含有高分子ミセル分散液（または組成物）が工業的規模で容易に製造でき、しかも、こうして製造された組成物は凍結乾燥処理に供する上で好適なものである。
【００２２】
【実施例】
以上、具体例をあげ本発明をより詳細に説明するが、これらは本発明の理解を容易にする目的で提供するにすぎない。
比較例１（パクリタキセルのミセルの調製法１）
パクリタキセル２０ｍｇおよびポリエチレングリコール（分子量１２０００）−コ−５０％部分加水分解ポリアスパラギン酸ベンジルエステル（ｎ＝５０）（以下、ＰＥＧ−ＰＢＬＡ１２−５０  Ｐ．Ｈ．５０％という）、１００ｍｇをスクリュー管瓶に秤量し、ジクロロメタン１０ｍＬを加え、撹拌溶解する。次に窒素ガスを吹き付けることによりジクロロメタンを揮散させ乾固する。さらにジクロロメタン１ｍＬを加え、緩やかに撹拌し、管壁に付着している試料も溶解するようにしながら、均一な状態になるまで再溶解する。これに５％塩化ナトリウム水溶液１０ｍＬを加え、密栓し３０分間激しく撹拌する。その後開栓をし、冷所で一昼夜激しく撹拌し限外濾過にて脱塩後超音波処理（１３０Ｗ、１ｓｅｃＰｕｌｓ、１０分間）し、一部サンプルをとりダイナミック光散乱光度計（大塚電子（株）、ＤＬＳ−７０００ＤＨ型）を使用し粒度測定をした。さらにマルトースを４０ｍｇ／ｍＬおよびマクロゴール４０００を２０ｍｇ／ｍＬ濃度になるように添加溶解し、ドライアイスアセトン寒剤で凍結し、凍結乾燥製剤を調製した。
【００２３】
超音波処理後の平均粒子径は９７．５ｎｍであった。
【００２４】
超音波処理行程までの時間は３２時間であった。
比較例２（パクリタキセルのミセルの調製法２）
パクリタキセル６０ｍｇおよびＰＥＧ−ＰＢＬＡ１２−５０、Ｐ．Ｈ．５０％、３００ｍｇをスクリュー管瓶に秤量し、ジクロロメタン３０ｍＬを加え、撹拌溶解する。次に窒素ガスを吹き付けることによりジクロロメタンを揮散させ乾固する。さらにジクロロメタン３ｍＬを加え、緩やかに撹拌し、管壁に付着している試料も溶解するようにしながら、均一な状態になるまで再溶解する。これに４０ｍｇ／ｍＬマルトース水溶液３０ｍＬを加え、密栓し冷蔵庫内で３０分間激しく撹拌する。その後開栓をし、冷蔵庫内で一昼夜激しく撹拌し、超音波処理（１３０Ｗ、１ｓｅｃＰｕｌｓ、１０分間）し、一部サンプルをとりダイナミック光散乱光度計（大塚電子（株）、ＤＬＳ−７０００ＤＨ型）を使用し粒度測定をした。さらにマクロゴール４０００を２０ｍｇ／ｍＬ濃度になるように添加溶解し、除菌濾過後ドライアイスアセトン寒剤で凍結し、凍結乾燥製剤を調製した。
【００２５】
超音波処理後の平均粒子径は１１１．４ｎｍであった。
【００２６】
超音波処理行程までの時間は２５時間であった。
比較例３（ベラプロストのミセルの調製法）
ベラプロスト３０ｍｇおよびＰＥＧ−ＰＢＬＡ１２−５０、３００ｍｇをスクリュー管瓶に秤量し、ジクロロメタン３０ｍＬを加え撹拌溶解する。次に窒素ガスを吹き付けることによりジクロロメタンを揮散させ乾固する。さらにジクロロメタン３ｍＬを加え、緩やかに撹拌し、管壁に付着している試料も溶解するようにしながら、均一な状態になるまで再溶解する。これに５％塩化ナトリウム水溶液３０ｍＬを加え、密栓し室温で６０分間激しく撹拌する。その後開栓をし、室温で一昼夜激しく撹拌し、超音波処理（１３０Ｗ、１ｓｅｃＰｕｌｓ、１０分間）をし、一部サンプルをとりダイナミック光散乱光度計（大塚電子（株）、ＤＬＳ−７０００ＤＨ型）を使用し粒度測定をした。さらに限外濾過にて脱塩、除菌濾過し調製した。
【００２７】
超音波処理後の平均粒子径は７２．２ｎｍであった。
【００２８】
超音波処理行程までの時間は３２時間であった。
比較例４（透析法）
パクリタキセル１０ｍｇ、ＰＥＧ−ＰＢＬＡ１２−５０、Ｐ．Ｈ．５０％をＤＭＳＯ（ジメチルスルホオキサイド）５ｍＬに溶解し、透析膜（分画分子量  １２−１４０００）で生理食塩水１００ｍＬに対して１６時間透析を行った。
【００２９】
その結果透析後、透析試料は沈殿をしていてミセル状にはなっていなかった。
比較例５（透析法）
パクリタキセル１０ｍｇ、ＰＥＧ−ＰＢＬＡ１２−５０、Ｐ．Ｈ．５０％をＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）５ｍＬに溶解し、透析膜（分画分子量  １２−１４０００）で生理食塩水１００ｍＬに対して１６時間透析を行った。
【００３０】
その結果透析後、透析試料は沈殿をしていてミセル状にはなっていなかった。
実施例１（本発明に従うパクリタキセルのミセルの調製法１）
スクリュウー管瓶にＰＥＧ−ＰＢＬＡ１２−５０  Ｐ．Ｈ．５０％、３００ｍｇを秤量し、４０ｍｇ／ｍＬマルトース水溶液３０ｍＬを加え撹拌し分散液として。さらに撹拌しながら４℃まで冷却する。さらに２０ｍｇ／ｍＬパクリタキセルジクロロメタン溶液３ｍＬを添加し、密栓せず冷蔵庫内で１６時間撹拌する。その後超音波処理（１３０Ｗ、１ｓｅｃＰｕｌｓ、１０分間）し、一部サンプルをとりダイナミック光散乱光度計（大塚電子（株）、ＤＬＳ−７０００ＤＨ型）を使用し粒度測定をした。さらに除菌濾過後ドライアイスアセトン寒剤で凍結し、凍結乾燥製剤を調製した。
【００３１】
超音波処理後の平均粒子径は１０７．３ｎｍであった。
【００３２】
超音波処理行程までの時間は１９時間であった。
実施例２（本発明に従うパクリタキセルのミセルの調製法２）
スクリュウー管瓶にＰＥＧ−ＰＢＬＡ１２−５０  Ｐ．Ｈ．５０％、３００ｍｇを秤量し、４０ｍｇ／ｍＬマルトース水溶液３０ｍＬを加え撹拌し分散液として。さらに撹拌しながら４℃まで冷却する。さらに２０ｍｇ／ｍＬパクリタキセルジクロロメタン溶液３ｍＬを添加し、密栓せず冷蔵庫内で１６時間撹拌し、超音波処理（１３０Ｗ、１ｓｅｃＰｕｌｓ、１０分間）をし、一部サンプルをとりダイナミック光散乱光度計（大塚電子（株）、ＤＬＳ−７０００ＤＨ型）を使用し粒度測定をした。さらにマクロゴール４０００を２０ｍｇ／ｍＬ濃度になるように添加溶解し、除菌濾過後ドライアイスアセトン寒剤で凍結し、凍結乾燥製剤を調製した。
【００３３】
超音波処理後の平均粒子径は１０７ｎｍであった。
【００３４】
超音波処理行程までの時間は１９時間であった。
実施例３（本発明に従うベラプロストのミセルの調製法）
スクリュウー管瓶にＰＥＧ−ＰＢＬＡ１２−５０、３００ｍｇを秤量し、これに５％塩化ナトリウム水溶液３０ｍＬを加え撹拌し分散液とした。さらに１０ｍｇ／ｍＬベラプロストジクロロメタン溶液３ｍＬを添加し、その後室温で一昼夜激しく撹拌し超音波処理（１３０Ｗ、１ｓｅｃＰｕｌｓ、１０分間）をし、一部サンプルをとりダイナミック光散乱光度計（大塚電子（株）、ＤＬＳ−７０００ＤＨ型）を使用し粒度測定をした。その後限外濾過にて脱塩、除菌濾過し調製した。
【００３５】
超音波処理後の平均粒子径は７２．１ｎｍであった。
【００３６】
超音波処理行程までの時間は２５時間であった。