(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
妊娠雌哺乳動物における子癇前症、毒血症又は早期分娩の徴候を改善するための医薬組成物であって、50〜300mgの注射されたプロゲステロンに生体等価なプロゲスチンの量及び循環Ｌ−アルギニンの血中レベルをその正常な２〜３ミリモルの循環レベルを少なくとも１ミリモル上廻るまでに上昇させ又は１〜1000ナノモルまでその一酸化窒素ドナーのレベルを上昇させるために有効な量の一酸化窒素シンターゼ基質、一酸化炭素ドナー又はその両者を提供するために有効な量で、（ａ）プロゲスチンと（ｂ）一酸化窒素シンターゼ基質、一酸化窒素ドナー又はその両者との混合物を含む前記医薬組成物。
【請求項２】
（ｂ）が一酸化窒素シンターゼ基質である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記一酸化窒素シンターゼ基質がＬ−アルギニンである、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
（ｂ）が一酸化窒素ドナーである、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記一酸化窒素ドナーが、ニトロプルシド・ナトリウム、ニトログリセリン、グリセリルトリニトリット、SIN−１、イソソルビッドモノニトリット又はイソソルビッドジニトリットである、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
シクロオキシゲナーゼ阻害剤、PGI2−擬態、トロンボキサン（TXA2）阻害剤、TXA2−作用性及びTXA2−阻害性を有する化合物、TXA2−拮抗活性及びPGI2−擬態活性を有する化合物、及びTXA2拮抗薬の中の少なくとも１をさらに含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、プロゲステロン剤（progestational agent）と一酸化窒素シンターゼ（nitric oxide synthase）基質及び／又は一酸化窒素ドナーとの組合せ単独による、又はシクロオキシゲナーゼ（cyclooxygenase）阻害剤、PGI2−擬態（PGI2−mimetic）、トロンボキサン（thromboxane）（TXA2）阻害剤、TXA2−作用性及びTXA2−阻害性を有する化合物、TXA2−拮抗活性及びPGI2−擬態活性を有する化合物、及びTXA2拮抗薬の中の１以上とのさらなる組合せによる、子癇前症（preeclampsia）及び早期分娩（preterm labor）の治療方法、並びにこのような組合せを含んで成る医薬組成物に関する。
妊娠の子癇前症、毒血症（toxemia）又は子癇（eclampsia）は、妊娠の間の重大な健康問題であることができ、そしてそれらは胎児成長遅延、胎児の死亡及び罹患、早産及び母親の死亡の原因を導く。この疾患の病因は、かなりの部分知られておらず、そして有効な治療法は利用されていない。妊娠の子癇前症は、高血圧、病理学的浮腫及びタンパク尿の３つの組を特徴とする。この疾患は全妊娠の６〜10％に襲う。
最近、一酸化窒素が血管の内皮からの内皮細胞由来平滑筋弛緩因子（endothelium derived relaxing factor（EDRF））であることが示された。一酸化窒素は、血管反応性の制御における主要な仲介物質であると考えられる。一酸化窒素は内皮細胞内にある一酸化窒素シンターゼによりＬ−アルギニンから合成される。一酸化窒素は、さまざまな一酸化窒素ドナー、例えばニトロプルシド・ナトリウム（sodium nitroprusside）、ニトログリセリン、グリセリン・トリニトリット（glycertl trinitrite）、SIN−１、イソソルビッド・モノニトリット（isosorbid mononitrite）、イソソルビッド・ジニトリット（isosorbid dinitrite）等の適用により作られることもできる。
Ｌ−アルギニンの同族体である一酸化窒素シンターゼ阻害剤（例えばＬ−NAME、NG−ニトロ−Ｌ−アルギニン・メチル・エステル）による妊娠ラットの処理は、上昇血圧、胎児の遅延成長及びタンパク尿をもたらす。従って、一酸化窒素シンターゼの阻害は妊娠の子癇前症と同一の症状及び徴候を作り出し、そして子癇前症が血管弾性（vascular tone）の調節における変化及び／又は一酸化窒素合成における直接的結果であるということを確信させる。これらの症状は、増加された血圧、胎児への減少された血液の流れ、遅延した胎児の発達及びタンパク尿を生じさせる。それ故、一酸化窒素のレベルを高める剤は妊娠の子癇前症の治療において有用である。一酸化窒素ドナーも妊娠の間の子宮の収縮性を減少させるので、一酸化窒素ドナーも早期分娩における使用に有用である。
一酸化窒素は、グアニル酸シクラーゼの活性及び緩和を作り出すためのcGMPの生成に依存する平滑筋に対する効果をもち、そしてこの段階はプログステロン（progesterone）依存性である。従って、プロゲステロンと一酸化窒素ドナーの組合せは子癇前症と早期分娩の治療に特に効力をもつ。
EP 0441 119 A2は、高血圧及び他の血管失調の治療におけるＬ−アルギニンの使用について開示している。それはＬ−アルギニンが上記目的に有効である機構はそれが“最も強力な内皮細胞由来平滑筋弛緩因子、一酸化炭素”の生理学的前駆体であることができるからであるということを示唆する。この医薬活性剤との組合せにおけるＬ−アルギニンの使用は、この刊行物中には討議されていない。
発明の目的
本発明の目的は、プロゲステロン剤と一酸化窒素基質及び／又はドナーの組合せによる子癇前症の予防及び治療方法を提供することである。
他の目的は、子癇前症の予防及び治療のための一酸化窒素基質及び／又はドナーとの組合せにおいてプロゲステロン剤を使用するような方法を提供することである。
さらなる目的は、一酸化窒素基質及び／又はドナーとの組合せにおいてプロゲステロン剤を使用する早期分娩の予防及び治療方法を提供することである。
さらなる目的は、本発明に係る方法の実施において有用な医薬組成物の提供である。
他の目的は、当業者に自明であろう。
発明の要約
方法の態様においては、本発明は、妊娠女性における子癇前症及び早期分娩の中の少なくとも１を治療する方法であって、それらの徴候を改善するのに有効な量において、それらの徴候を明示する妊娠女性に、（ａ）プロゲステロン剤と（ｂ）一酸化窒素シンターゼ基質及び一酸化窒素ドナーの中の１又は両方を単独又は、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、PGI2−擬態、トロンボキサン（TXA2）阻害剤、TXA2−作用性及びTXA2−阻害性を有する化合物、TXA2−拮抗活性及びPGI2−擬態活性を有する化合物、及びTXA2拮抗薬の中の１以上とのさらなる組合せにおいて投与することを含んで成り、その投与されるプロゲステロン剤の量が50−300mgの注射されたプロゲステロンに生体等価（bioequivalent）であり、そしてその一酸化窒素基質、一酸化窒素ドナー又はその両方がそれぞれ、その組成物が投与される妊娠女性における循環Ｌ−アルギニンの血中レベルをその正常な２〜3mモルの循環レベルを少なくとも約1mモル上廻るまで上昇させるか又は約１〜100nモル（ナノモル）まで一酸化窒素ドナーのレベルを上昇させるかのいずれかに有効である、ような方法に関する。
他の方法の態様においては、本発明は、妊娠女性における早期分娩を治療する方法であって、それらの徴候を明示する妊娠女性に、その早期分娩を終わらせるのに有効な（ａ）プロゲステロン剤と（ｂ）一酸化窒素シンターゼ基質及び一酸化窒素ドナーの中の少なくとも１を単独又は、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、PGI2−擬態、トロンボキサン（TXA2）阻害剤、TXA2−作用性及びTXA2−阻害性を有する化合物、TXA2拮抗活性及びPGI2−擬態活性を有する化合物、及びTXA2拮抗薬の中の１以上とのさらなる組合せにおいて、投与することを含んで成り、その投与されるプロゲステロン剤の量が50−300mgの注射されたプロゲステロンに生体等価であり、そして一酸化窒素シンターゼ基質、一酸化窒素ドナー又はその両方がそれぞれ、その組成物が投与される妊娠女性における循環Ｌ−アルギニンの血中レベルをその正常な２〜3mモルの循環レベルを少なくとも約1mモル上廻るまで上昇させるか又は約１〜100nモルまで一酸化窒素ドナーのレベルを上昇させるかのいずれかに有効である、ような方法に関する。
物の態様においては、本発明は、（ａ）プロゲステロン剤と（ｂ）一酸化窒素シンターゼ基質及び一酸化窒素ドナーの中の少なくとも１とを単独又は、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、PGI2−擬態、トロンボキサン（TXA2）阻害剤、TXA2−作用性及びTXA2−阻害性を有する化合物、TXA2−拮抗活性及びPGI2−擬態活性を有する化合物、及びTXA2拮抗薬の中の１以上とのさらなる組合せにおいて含んで成る医薬組成物であって、単位投薬当りのそのプロゲステロン剤の量が50−300mgの注射されたプロゲステロンに生体等価であり、そして単位投薬当りのその一酸化窒素シンターゼ基質、一酸化窒素ドナー又はその両方の量がそれぞれ、循環Ｌ−アルギニンの血中レベルをその正常な２〜3mモルの循環レベルを少なくとも約1mモル上廻るまで上昇させるか又は約１〜1000nモルまでその一酸化窒素ドナーのレベルを上昇させるかのいずれかに有効であるような、組成物に関する。
他の態様においては、本発明は、妊娠雌哺乳類における子癇前症及び早期分娩の中の少なくとも１を治療するための薬物の製造のための、（ａ）プロゲスチン（progestin）と（ｂ）一酸化窒素シンターゼ基質、一酸化窒素ドナー又は両方、場合により、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、PGI2−擬態、トロンボキサン（TXA2）阻害剤、TXA2−作用性及びTXA2−阻害性を有する化合物、TXA2−拮抗活性及びPGI2−擬態活性を有する化合物、及びTXA2拮抗薬の中の１以上とのさらなる組合せにおけるもの、の使用に関する。
好ましい態様においては、（ａ）は50−300mgの注射されたプロゲステロンに生体等価である量において使用され、そして（ｂ）は、循環Ｌ−アルギニンの血中レベルをその正常な２〜3mモルの循環レベルを少なくとも約1mモル上廻るまで上昇させるのに有効である量において使用される。
本発明のさらなる態様においては、雌哺乳類は子癇前症を患うヒトである。
また、本発明のさらなる態様においては、雌哺乳類は早期分娩を示した又はその候補であるヒトである。
さらなる態様に従えば、雌哺乳類はヒトであり、そして（ｂ）は一酸化窒素シンターゼ基質である。
好ましい態様においては、基質はＬ−アルギニンである。他の態様に従えば、雌哺乳類はヒトであり、そして（ｂ）は一酸化窒素ドナーである。
好ましい態様においては、一酸化窒素ドナーは、ニトロプルシド・ナトリウム、ニトログリセリン、グリセリル・トリニトリット、SIN−１、トソソルビッド・モノニトリット又はイソソルビッド・ジニトリットである。
さらなる態様においては、一酸化窒素ドナーは経口投与のためのものであることができる。
他の態様においては、雌哺乳類はヒトであり、そして一酸化窒素基質又はドナーはシクロオキシデナーゼ阻害剤との組合せにおける投与のためのものである。
阻害剤としてのアスピリン（aspirin）の使用が好ましい。
本発明のさらに他の態様においては、雌哺乳類はヒトであり、そして一酸化窒素基質又はドナーはPGI2−擬態との組合せにおける投与のためのものである。
PGI2−擬態は好ましくは、イロプロスト（iloprost）又はシカプロスト（cicaprost）である。
他の好ましい態様においては、雌哺乳類はヒトであり、そしてプロゲスチンはプロゲステロンである。
詳細な開示
本発明に係る方法は、子癇前症及び早期分娩の中の１以上の徴候を明示し、又は例えば、現在の又は先の妊娠の進行により決定されるようになるであろうことについての高い危険のある候補である妊娠雌哺乳類、好ましくはヒトにおける上記子癇前症及び早期分娩（preterm labor）の中の１以上を治療する。
これらの妊娠の異常な症状は、正常を下廻る一酸化窒素の合成により作り出され又はそれにより悪化されるので、一酸化窒素シンターゼ基質、例えばＬ−アルギニンと、一酸化窒素ドナー、例えば、ニトロプルシド・ナトリウム、ニトログリセリン、グリセリン・トリニトリット、SIN−１、イソソルビッド・モノニトリット及びイソソルビッド・ジニトリットとの両方が徴候を改善するのに有用であり、そして本発明に係る方法の１の態様においては、両方の組合せが使用される。
共同効果（synergistic effect）は、プロゲステロン剤が一酸化窒素基質及び／又は一酸化窒素ドナーと同時に投与されるときに達成される。
従って、本発明の方法態様及び本発明の医薬組成物態様は、（ａ）プロゲステロン剤、例えばプロゲステロンと（ｂ）一酸化窒素ドナー及び一酸化窒素シンターゼ基質の中のいずれか又は両方と、場合により（ｃ）シクロオキシゲナーゼ阻害剤、例えばアスピリン;PGI2−擬態、例えばイソプロスト及びシカプロスト；トロンボキサン（TXA2）阻害剤、例えば塩酸ダゾキシベン（dazoxiben hydrochloride）（安息香酸、４−〔２−（1H−イミダゾール−１−イル）−エトキシ〕−,1塩酸;UK 372 48）ダズメグレル（dazmegrel）（1H−イミダゾール−１−プロパン酸、３−（1H−イミダゾール−１−イルメチル）−２−メチル−;UK 3885）、オザグレル（ozagrel）（２−プロパン酸、３−〔４−（１−Ｈ−イミダゾール−１−イルメチル）フェニル〕−;OKY−046）及びピルマグレル（pirmagrel）（イミダゾ〔1,5−ａ〕ピリジン−５−ヘキサン酸;CGS−13080）;TXA2−作用性及びTXA2−阻害性を有する化合物、例えばリドグレル（ridogrel）（ペンタン酸、５−〔〔〔３−ピリジル〔３−（トリフルオロメチル）フェニル〕メチレン〕−アミノ〕オキシ〕−;R−68070）及びラボグレル（labogrel）（６−ヘプテン酸、７−フェニル−７−（３−ピリジニル）−;TXA2−拮抗活性及びPGI2−擬態活性を有する化合物、例えば５−ヘプテン酸、７−〔３−〔〔ジフェニルメトキシ）−イミノ〕−ビシクロ、〔2.2.1〕ヘプト−２−イル〕−;EP 035−rac）及び５−ヘプテン酸、７−〔３−〔〔（ジフェニルメトキシ）−イミノ〕メチル〕ビシクロ〔2.2.2〕−オクト−５−エン−２−イル〕−（EP157）；及びTXA2拮抗薬、例えば５−ヘプテン酸、７−〔３−〔〔２−（フェニル−アミノ）カルボニル〕−ヒドラジノ〕メチル〕７−オキサビシクロ〔2.2.1〕ヘプト−２−イル〕−、1S〔1.アルファ.,2・アルファ．（Ｚ）,3.アルファ.,4.アルファ．〕〕−（SQ29548）；ベンゼンプロパン酸、２−〔〔３−４〔（ペンチルアミノ）カルボニル〕−２−オキサゾールイル〕−７−オキサビシクロ〔2.2.1〕ヘプト−２−イルメチル〕−（BMS180291）；酢酸、〔４−〔２−〔（フェニルスルホニル）アミノ〕−エチル〕フェノキシ〕−（スルトロバン（sultrohan）、BM−13177）；ベンゼン酢酸、４−〔２−〔〔（４−クロロフェニル）スルホニル〕アミノ〕エチル〕−（ダルトロバン（daltroban）、BM−13505）；（Ｓ−145rac）;5−ヘキサン酸、６−〔３−〔〔〔（４−ブロモフェニル）スルホニル〕アミノ〕メチル〕ビシクロ〔2.2.1〕へプ−２−イル〕−、デシル・エステル、〔IS〔１・アルファ・2.アルファ・2.アルファ・（Ｚ）、3.ベータ.,4.アルファ・〕〕−（ONO 8809）;9H−カルバゾール−９−プロパン酸、３−〔〔４−フルオロフェニル）スルホニル〕アミノ〕−1,2,3,4−テトラ−ヒドロ−，（Ｒ）−（bay−ｎ−3405）；及び（4Z）−６−〔（5S）−５−（４−クロロフェニルスルホニル（アミノメチル）−シクロエント−Ｌ−エニル〕４−ヘキセン酸（ZV154343）との組合せを使用する。
一酸化窒素基質及び／又は一酸化窒素ドナー及びプロゲステロン（又は他のプロゲステロン剤）と同時に投与されることができる活性剤の組合せの例は、低投与量（例えば、10−100mg）のアスピリン（又は他のシクロオキシゲナーゼ阻害剤）;PGI2−擬態（例えば、イソプロスト、シカプロスト）;PGI2−擬態と低投与量アスピリンの組合せである。
典型的なNO−基質とNO−ドナー（経口）の投薬レンジの例は以下のようである：
0003665068.tif 000002
以下のものは、一酸化窒素基質又はドナーと同時に投与されるプロゲスチンと任意的な他の活性剤の典型的な経口投与レンジの活性剤である：
プロゲスチン：毎日の投与量は50−300mgのプロゲステロン／日に生体等価である、例えば酢酸ヒドロキシプロゲステロンの注射懸濁液は100−1000mgのその週毎の投与量を提供し、又は錠剤又は糖剤は５−10mg/日のその経口投与量を提供し；カプロン酸ヒドロキシプロゲステロンの注射懸濁液は250−500mgの週毎の投与量を提供し；酢酸ノルチンドロン（northindrone acetate）の錠剤、カプセル又は糖剤は５−20mgの毎日投与量を提供する。
シカプロスト:5−100μg/kg/日  経口
アスピリン:10−100mg/kg/日  経口
本発明において使用される薬理学的に活性な剤は、慣用の賦形剤、すなわち医薬として許容される液体、半液体又は固体の有機又は無機の担体であって例えば非経口又は経腸適用に好適なものであり、そしてそれとの混合においてその活性化合物と有害に反応しないものと混合されて投与されることができる。好適な医薬として許容される担体は、非限定的に、水、塩溶液、アルコール、植物油、ポリエチレン・グリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、珪酸、高粘性パラフィン（viscous paraffin）、香油（perfume oil）、脂肪酸、モノグリセリド及びジグリセリド、ペンタエリスリトール脂肪酸エステル、ヒドロキシ・メチルセルロース、ポリビニル・ピロリドン、等を含む。これらの医薬組成物は、滅菌されることができ、そして所望により補助剤、例えば潤滑剤、保存料、安定剤、水和剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼす塩、バッファー、着色料、香料及び／又は芳香性物質その他であって上記活性化合物と有害に反応しないものと混合されることができる。
非経口的な適用のために、特に好適なのは、溶液、好ましくは油性又は水性溶液、並びに懸濁液、エマルジョン、又はインプラントであって座剤を含むものである。アンプルが便利な単位剤形である。
好ましい態様においては、本発明に係る組成物は、摂取のために改作される。
経腸的適用においては、特に好ましいのは、単位剤形、例えば錠剤、糖剤又はカプセルであってタルク及び／又は炭水化物担体又はバインダーその他をもち、その担体が好ましくはラクトース及び／又はコーン・スターチ及び／又はポテト・スターチであるもの；粒状固体、例えば粒状物；及び液体及び半液体、例えばシロップ及びエリキシルその他であって甘味のある媒質が使用されるものである。徐放性組成物であってその活性化合物が例えばマイクロカプセル化、多層コーティング等により差異を伴って分解することができるコーティングにより保護されるようなものを含むものが配合されることができる。
経口投与に好適なものは、とりわけ、錠剤、糖剤、カプセル、ピル、粒状物、懸濁液及び溶液である。各単位投与量、例えば液体の各テーブルスプーン又は各錠剤、又は糖剤は、例えば、５−5000mgの各活性成分を含む。
非経口投与のための溶液は、例えば、水性又はアルコール溶液中0.01〜１％の各活性成分を含む。
一酸化窒素基質及び／又はドナーは、プロゲステロン剤及びいずれかの他の任意的活性剤との混合物として又は別個の単位剤形として、それらと同時にか又は日の間の互いに異なる時にかのいずれかにおいて、投与されることができる。
活性剤の組合せは、（活性成分を連続的にデリバリーする剤形において投与されない場合）好ましくは、少なくとも１日に１回、そしてより好ましくは、例えば２〜６に分割された投与量において一日に数回において投与される。典型的な投与量は、約0.5〜1000mgの各活性剤である。但し、いくつかのより低い活性の剤、例えばＬ−アルギニンはより高い経口投与量、例えば500〜10,000mgを要求し、そして他、例えばニトロプルシド・ナトリウムは、低投与量、例えば500−2,000μg/kg/日を要求する。ニトログリセリンについての投与量は典型的には、経口で2.5μg2×日；舌下で0.8mg1−４×日；及び経皮で0.2−0.4mg/時である。これらの活性剤の大部分のLD50投与量は、本分野において公知であるので、より低い投薬養生法が開始されることができ、そしてその投与量は、正の効果が達成されるまで増加し、又はより高い投薬養生法が例えば危機的な情況において最初に使用されることができ、そしてその徴候から緩解するとき低く調節された投与量が達成される。
ヒトにおいては、Ｌ−アルギニンとプロゲステロン（又は他のプロゲスタンの生体等価物）の両方がそれぞれ約１−5mモル/mlと300−1,000ng/ml（0.9−３μモル11）の血漿レベルを作り出す比において与えられなければならない。NO−ドナー、例えばニトロプルシド・ナトリウムは、それぞれ約１−10μモル/1と300−1,000mg/ml（0.9−３μモル/1）の血漿レベルを作り出す比においてプロゲステロン（又は他のプロゲスチンの生体等価物）により与えられなければならない。
【図面の簡単な説明】
図面を参照すれば、
図１は、妊娠期間18日目における自然収縮性子宮ストリップに対するＬ−アルギニンの効果を示す一連のストリップのチャート記録であり；
図２は、分娩の間と分娩後の、妊娠期間の異なる段階におけるラットからの自発収縮性子宮ストリップに対するＬ−アルギニン（0.1mM〜10mM）の投与量依存性弛緩効果。これらの組織は、妊娠期間17−22日目（d17,d18,d19及びd22）に、自然分娩の間の22日目（d22del）（１−３の子（pups）が分娩された）、又は分娩後の１日目（d1pp）と２日目（d2pp）に、得られた。自然子宮収縮の完全な阻害の経過時間は投与量依存性である。1mMの濃度からのＬ−アルギニンの効果は他の全ての時間に比べて、予定日（term）における自然分娩の間及び分娩後に有意に（Ｐ＜0.01）減少する。各データ点は平均±標準誤差（S.E.M）を表す。各時間期間において試験したストリップの全数は１群当り４−６動物から８−16であった。
図3:卵巣切除成長マウスからの子宮ストリップの自然収縮に対するＬ−アルギニン（0.6mM〜10mM）の投与量応答効果。動物は収縮性計測に先立って３日間、ゴマ油中の１μｇエストラジオール−17b（OVX＋Ｅ）、2mgプロゲステロン（OVX＋Ｐ）エストラジオール及びプロゲステロン（OVX＋Ｅ＋Ｐ）、又は油単独（OVX＋OIL）の皮下注射を受容した。値は１群当り４ラットからの各動物からの４ストリップについての平均±SEMである。データを４群について反復測定ANOVA（repeated measures ANOVA）により分析する。＊Ｐ＜0.05OVX＋Ｐ対OVX＋Ｅ。
図4:ラットの分娩、予定日における自然（DEL）、ZK299による早期（PRETEDM DEL）及び妊娠期間の18日目における非分娩（NONDEL）からの子宮組織についての８−ブロモ−cGMP投与量弛緩応答曲線。各点は、１群当り４ラットからの各動物からの４ストリップについての平均±SEMを表す。
図５は50mgの高血圧剤Ｌ−NAME単独又は、Ｌ−アルギニン及びプロゲステロン（Ｒ−5020）の中の１又は両方との組合せにおけるもののテスト動物の血圧に対する効果を示す棒グラフであり；そして
図６は、これらの化合物の子（pup）重量に対する同一実験における効果を示す棒グラフである。
図面の討議
図１のストリップ・チャート記録は、筋肉バス（baths）への、Ｌ−アルギニン（１−3mM）（A,B,E）、ニトロプルシド・ナトリウム（sodium nitroprusside）（5mM）（Ｃ）、一酸化窒素（0.1mM）（Ｄ）の適用が実質的な弛緩（relaxations）を作り出したことを示している。Ｌ−アルギニンの効果は、Ｌ−NAME（3mM）（Ｂ）とメチレン・ブルー（0.mM）（Ｅ）により逆転された。これは、各群における６動物からの８−16ストリップの典型的な記載である。ベースラインからの各上向線は収縮を表す。
図1Cのストリップ・チャート記録は、ニトロプルシド・ナトリウム（SNP）の適用がラグ期間後に子宮ストリップの自然収縮における持続性の弛緩を引き起こしたこと、そしてその弛緩状態が塩化カリウムに応答したことを示している。４動物からの12子宮ストリップの同様の記録を得た。
図1Dにおけるストリップ・チャート記録は、純一酸化窒素ガス（0.1mM）により作り出された弛緩を示す。同様の記録は４動物からの８ストリップから得られた。
図1Eのストリップ・チャート記録は、Ｌ−アルギニン（1mM）が自然収縮組織の弛緩を作り出したこと、そして（図1Aにおけるようにこれらの効果が同一ストリップにおいて反復可能であること、そしてＬ−アルギニン（1mM）の弛緩効果が、Ｌ−アルギニンの適用前に添加されたとき、メチレン・ブルー（0.1mM）により取り除かれること（Ｂ）を示している。
それらの結果が図２のグラフにより示される実験においては、これらの組織は、妊娠期間の17−22日目（d17,d18,d19及びd22）、自然分娩の間の22日目（d22del）（１−３子が分娩された）、又は分娩後の１日目（d1pp）及び２日目（d2pp）について得た。自然子宮収縮の完全阻害の経過時間は投与量依存性である。1mMの濃度からのＬ−アルギニンの効果は他のすべての時間に比べて、予定日における自然分娩の間及び分娩後に有意に（Ｐ＜0.01）減少される。各データ点は平均±標準誤差（S.E.M）を表す。各時間期間において試験したストリップの全数は１群当り４−６動物から８−16であった。
それらの結果が図３のグラグにより示される実験においては、非妊娠卵巣切除マウスは収縮性計測に先立って３日間、ゴマ油中の、１μｇエストラジオール−17−β（OVX＋Ｅ）、2mgプロゲステロン（OVX＋Ｐ）エストラジオール及びプロゲステロン（OVX＋Ｅ＋Ｐ）、又は油単独（OVX＋OIL）の皮下注射を受容した。値は１群当り４ラットの各動物からの４ストリップについての平均±SEMである。＊Ｐ＜0.05OVX＋Ｐ対OVX＋Ｅ。
図４のチャートは、ラットの分娩、予定日における自然（DEL）、ZK299による早期（PRETEDM DEL）及び妊娠期間の18日目における非分娩（NONDEL）からの子宮組織についての８−ブロモ−cGMP投与量弛緩応答曲線を示す。各点は、１群当り４ラットからの各動物からの４ストリップについての平均±SEMを表す。
以下の表１中のデータは，妊娠ラットにおける血圧（mmHg）に対するＬ−NAMEの効果を示す。
0003665068.tif 000003
異なる上付きをもつ平均は有意差をもつ（Ｐ＜0.05）。
以下の表２中のデータは、妊娠ラットへのＬ−NAME輸注の分娩と分娩子を示す。
0003665068.tif 000004
異なる上付きをもつ平均は有意差をもつ（Ｐ＜0.05）。
Ｌ−NAME誘導“子癇前症”を使用した他の実験は、Ｌ−アルギニン単独による処理が部分的に血圧を減少させたことを示した（図５）。同様に、Ｌ−NAMとR5020（プロゲステロン）、抗鉱物コルチコイド効果又は他の拮抗性又は作用性を全くもたないプロゲステロン剤により処理された動物も部分的にＬ−NAME誘導高血圧を減少させた。また図５中に示されるように、Ｌ−アルギニンとR5020の同一投与量が同時に与えられたとき、それらの併合効果は正常レベルまで血圧を低下させた。
さらに、上記のように処理された同一動物における胎児重量の評価は、子宮内胎児遅延（子の減少重量）、典型的な子癇前症胎児（preeclamptic fetuses）を示した（図６）。
Ｌ−アルギニン単独又はR5020単独のいずれかによる動物の“子癇前症（preeclamptic）”群の処理は、僅かではあるが統計的に有意に胎児重量を増加させた。また図６中に示すように、一緒に投与された上記２つの化合物の併合効果は、各化合物単独により観察されたものを上廻って２胎児重量を有意に増加させた。これはこれらの条件下胎児の生存にかなり高く有利である。
これらの試験から、その活性がR5020と同様に、“純粋（pure）”であるプロゲステロン剤とのＬ−アルギニンの併合処理は各タイプの医薬単独によっては達成されることができない結果を提供する。これらの試験は、この有効性についての基礎が、一酸化窒素（又はＬ−アルギニン、一酸化窒素の基質）が血管を拡張する効果を増加させ、そしてそれにより血圧を低下させ、さらに胎児母親の灌流を増加させ、それにより胎児重量を増加させるプロゲステロン剤の能力にあるということを示している。
これらの剤の組合せの併合効果は、驚くべき程劇的であり、そしてより重要にはかなりの胎児と母親の効果がこの組合せ物による処理により観察される。従来の医薬的証拠は、この組合せが上記利点を提供するであろうということを示唆していない。なぜなら、それらについての基礎が、２つの拮抗性化合物の単純な組合せでなく、その代わりにプロゲスチンにより提供される一酸化窒素の感作であるからである。上記試験は、プロゲスチンが一酸化窒素についてのエフェクター系を増加させ（一酸化窒素を増加させない）ことをはっきりと示している。
本発明において使用される治療方法は、本明細書中に記載された投薬養生法に従って、（雌及び雄の両方における）高血圧、閉経期の女性における更年期失調（顔面紅潮（hot flushes）、気分変動（mood smings）、血栓失調、月経失調（月経困難症（dysmenorrhen）、機能性子宮出血（functional uterine bleeding））、及び出血（hemorrhage）等の治療のためにも使用されることができる。
さらに苦心することなく、当業者はこれまでの説明を使用して本発明を最大程度に使用すると信じられる。それ故、好ましい特定の態様は、単に説明として解され、そしていずれの方法においてもその開示を限定として解されてはならない。
以上及び以下に引用するすべての出願、特許及び刊行物の開示全体を引用により本明細書中に取り込む。
実施例
実施例１−子癇前症の治療
普通には妊娠の第２半期にあり、そして子癇前症の徴候であって高血圧（140mmを上廻る収縮期及び90mmを上廻る拡張期）、浮腫及びタンパク尿を含むものを示す妊娠ヒト雌（約20−40歳:60−80kg）に、それらの徴候が改善されるまで一日当り３回に分けて経口により0.5〜20gのＬ−アルギニンと200mgの微紛化プロゲステロンを投与する。その後、拡張期圧が80mmを上廻って上昇するとき、毎日経口で0.5〜5mgのＬ−アルギニンと60mgのプロゲステロンを投与し；これらの徴候の緩解が再び生じるまで毎日５〜20mgまでＬ−アルギニンの投与量を増加させる。
実施例２−子癇前症の治療
実施例１に記載した女性と同一の徴候を示し、そしてこれに匹敵するヒト雌に、それらの徴候が改善されるまで、同一のプロトコールに従って毎日２×2.5mgのニトログリセリンと200mgのプロゲステロンを投与する。
実施例３−早期分娩の治療
妊娠６ケ月目にあり、そして血液のしみ及び周期的な子宮痙縮を含む致死性自然流産の徴候を示すヒト雌に、その徴候が改善されるまで３つに分けた投与量において毎日経口で、17gのＬ−アルギニンと50mgのプロゲステロンを投与する。その後、その徴候の緩解が再び生じるまで毎日20gのＬ−アルギニンまで投与量を増加させながら、5gのＬ−アルギニンと50mgのプロゲステロンを毎日経口投与する。
実施例５−早期分娩の治療
実施例３中に記載した者と同一の徴候を示し、そしてこれに匹敵する妊娠ヒト雌に、それらの徴候が改善されるまで、同一のプロトコールに従って、２×25mgのニトログリセリンと180mgまでのプロゲステロンを毎日投与する。
先の実施例は、その先の実施例中で使用されたものと、本発明の総括的に又は特に記載された反応体及び／又は操作条件を置換することにより同様に首尾よく繰り返されることができる。
これまでの記載から、当業者は、本発明の本質的な特徴を容易に確かめることができ、そして本発明の本質及び範囲から外れずに、本発明のさまざまな変更及び修正を行ってそれをさまざまな用い方及び条件に改作することができる。
【図２】
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【図１】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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