(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式（１）で表される構造単位と、
【化１】
0003664822.tif 000031
〔式（１）中、Ｑ1 は水素原子、メチル基又はシアノ基を示し、
Ｑ2 は水素原子、
【化２】
0003664822.tif 000032
（Ｒ1 は水素原子又はハロゲノメチル基を示し、Ｒ2 は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ3 は水素原子又は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ4 は炭素数１〜１０のアルキル基を示す（ただしＲ3 及びＲ4 の総炭素数は３〜２０である））を示す〕
下記式（２）、（３）、（４）及び（５）で表される構造単位よりなる群から選ばれる任意の２種以上のグラフト鎖構造単位
【化３】
0003664822.tif 000033
〔式（２）中、Ｑ3 は水素原子又はメチル基を示し、
Ｑ4 は
【化４】
0003664822.tif 000034
（Ａ1 は炭素数１〜１０のアルキレン基を示す）を示し、
Ｑ5 は酸素原子又は-NH-を示し、
Ｑ6 は炭素数１〜１０のアルキレン基を示し、
Ｑ7 は酸素原子又は硫黄原子を示し、
Ｘ1 は酸素原子又は２個の水素原子を示し、
Ｒ4 は水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ5 は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、
ｌは１〜１００の数を示す〕
【化５】
0003664822.tif 000035
〔式（３）中、Ｑ8 は水素原子又はメチル基を示し、
Ｑ9 は
【化６】
0003664822.tif 000036
（Ａ2 は炭素数１〜１０のアルキレン基を示す）を示し、
Ｑ10は酸素原子又は-NH-を示し、
Ｑ11は炭素数１〜１０のアルキレン基を示し、
Ｑ12は酸素原子又は硫黄原子を示し、
Ｘ2 は酸素原子又は２個の水素原子を示し、
Ｒ6 は水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ7 は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、
Ｒ8 及びＲ9 は水素原子又はメチル基を示し、
ｍは１〜１００の数を示し、
ｎ及びｐはそれぞれ０〜１００であってｎ＋ｐが１以上となる数を示す〕
【化７】
0003664822.tif 000037
〔式（４）中、Ｑ13は水素原子又はメチル基を示し、
Ｑ14は
【化８】
0003664822.tif 000038
（Ａ3 は炭素数１〜１０のアルキレン基を示す）を示し、
Ｑ15は酸素原子又は-NH-を示し、
Ｑ16は炭素数１〜１０のアルキレン基を示し、
Ｑ17は酸素原子又は硫黄原子を示し、
Ｘ3 は酸素原子又は２個の水素原子を示し、
Ｒ10及びＲ11は水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ12は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、
ｑ及びｒはそれぞれ０〜１００であってｑ＋ｒが１以上となる数を示す〕
【化９】
0003664822.tif 000039
〔式（５）中、Ｑ18は水素原子又はメチル基を示し、
Ｑ19は
【化１０】
0003664822.tif 000040
（Ａ4 は炭素数１〜１０のアルキレン基を示す）を示し、
Ｑ20は酸素原子又は-NH-を示し、
Ｑ21は炭素数１〜１０のアルキレン基を示し、
Ｑ22は酸素原子又は硫黄原子を示し、
Ｘ4 は酸素原子又は２個の水素原子を示し、
Ｒ13及びＲ14は水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ15は水素原子又は炭素数２〜１１のアルカノイル基を示し、
ｓ及びｔはそれぞれ０〜１００であってｓ＋ｔが１以上となる数を示す〕
とを有するグラフトコポリマーを含有する微粒子性運搬体。
【請求項２】
グラフトコポリマーが、式（１）で表される構造単位（ａ）と、式（２）、（３）、（４）及び（５）で表される構造単位よりなる群から選ばれる任意の２種以上のグラフト鎖構造単位の和（ｂ）とのモル分率（（ａ）／（ｂ））が、０．００１〜１の範囲である請求項１記載の微粒子性運搬体。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はドラッグ・デリバリー・システム（Drug Delivery System:DDS）における薬物運搬体として有用なグラフトコポリマー及びこれを用いた医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ＤＤＳ分野において薬物運搬体とは、薬物を標的臓器や細胞に運ぶためのキャリヤーを意味し、その形態が粒子状であるものを粒子性運搬体という。特に、微粒子性運搬体という場合は、キャリヤーである粒子がミリメートル以下の細かい大きさであることを意味し、その大きさ、形態及び機能などからマイクロカプセル、マイクロスフェアー及びナノパーティクル等に分けることができる。また、微粒子性運搬体の材料としては、脂質や高分子などが用いられる。
【０００３】
マイクロカプセルとマイクロスフェアーは、通常、粒子径数μｍ程度のものを言う。一般的には、マイクロカプセルが広義の概念で用いられるが、最近では粒子内部まで高分子で構成されたものをマイクロスフェアーと区別して呼ぶことが多い。
【０００４】
ナノパーティクルとは、乳化重合法により調製された高分子ラテックスの分散相の大きさが数１００ｎｍであることから、従来これらのコロイドを表すときに用いられていた言葉である。しかし、最近では、その他の製法で調製されたものであっても、天然あるいは合成高分子をその構成成分とし、粒子径がナノメーターサイズであればナノパーティクルと総称されている。
【０００５】
微粒子性運搬体としてのナノパーティクルは、抗癌剤などのターゲティング用キャリヤーとして研究されはじめ、主に注射剤が対象とされていた（Ｌ．Ｇｒｉｓｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，１５，３３５（１９８４））。しかし、１９８０年代中頃から、ナノパーティクルを経口投与剤として利用しようとする研究が、報告されるようになってきた。
【０００６】
薬物をナノパーティクル化し、経口投与剤として利用する場合、主な目的としては難吸収性薬物の吸収改善（Ｐ．Ｍａｉｎｃｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，７５，９５５（１９８６）；Ｃ．Ｄａｍｇｅ  ｅｔ  ａｌ．  ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３６，１２１（１９８７））、インシュリンなどのペプチド性医薬品の経口化（Ｃ．Ｄａｍｇｅ  ｅｔａｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，３７，２４６（１９８８）；Ｐ．Ｃｏｕｖｒｅｕｒａｎｄ  Ｆ．Ｐｕｉｓｉｅｕｘ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，１０，１４１（１９９３））、経口ワクチン（Ｊ．Ｈ．Ｅｌｄｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅ，１１，２０５（１９９０）；Ｐ．Ｕ．Ｊａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，８６，２３９（１９９２））又は薬物の放出制御（Ｂ．Ｈｕｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，８，７３４（１９９１））などが挙げられている。
【０００７】
また、マイクロカプセルと同様、薬物の消化管内での安定性確保（Ｍ．Ｒｏｇｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，４１，４５１（１９９２））又は刺激性の強い薬物の消化管への刺激性の低減（Ｎ．Ａｍｍｏｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，８，１０１（１９９１））などの目的で利用される場合もある。
【０００８】
医薬用ナノパーティクルの製造方法としては、主に以下の２種類の方法が用いられている。一つは、代表的なマイクロカプセル化法である相分離法あるいは液中乾燥法を用いてナノパーティクルを調製する方法である。
【０００９】
この場合、ポリ乳酸（Ａ．Ｍ．Ｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，８３，８４５（１９９４））、セルロース誘導体（Ｈ．Ｉｂｒａｈｉｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，８７，２３９（１９９２））又はポリアクリル酸エステル誘導体（Ｅ．Ａｌｌｅｍａｎｎｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，８７，２４７（１９９２））など、医薬品の添加剤として既に使用されている疎水性の高分子が繁用されている。
【００１０】
他の方法は、乳化重合法を用いてナノパーティクルを調製する方法である（Ｌ．Ｖａｎｓｎｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１，３６（１９８５）；Ｎ．Ａｌ  Ｋｈｏｕｒｉ  Ｆａｌｌｏｕｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２８，１２５（１９８６））。この場合、スチレン、アクリル酸エステル、メタクリル酸エステルなどの疎水性のビニル化合物がナノパーティクルの材料となりうると考えられる。中でも、シアノアクリル酸エステル、特に外科手術用の接着剤であるシアノアクリル酸イソブチルを用いた例が多い。
【００１１】
これらのナノパーティクルに薬物を保持させて製剤とするが、対象となる薬物は脂溶性化合物が多い。これは、ナノパーティクルの製法が水溶性化合物に不向きなのが原因である。また、水溶性化合物をナノパーティクル化した例も報告されているが、あるｐＨで水に溶解しないような性質を有する化合物（例えばペプチド）に限定（川島  嘉明、日本薬学会第１１４年会講演要旨集４、９頁、１９９４年、東京）されているのが現状である。
【００１２】
このようにして調製されたナノパーティクルと薬物のコンプレックスを用いた難吸収性薬物の吸収改善、ペプチド性医薬品の経口化、薬物の放出制御などを目的とした報告としては以下の様なものがある。
【００１３】
例えば、Ｐ．Ｍａｉｎｃｅｎｔらは、難吸収性薬物として降圧剤ビンカミンを用い、シアノアクリル酸ヘキシルでナノパーティクル化した製剤の吸収促進効果を検討していた。しかし、ビンカミンの吸収率はナノパーティクル化により１．６倍増加した程度である（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，７５，９５５（１９８６））。
【００１４】
また、Ｃ．Ｄａｍｇｅは、インシュリンをシアノアクリル酸イソブチルによりナノパーティクル化した製剤を用いてペプチドの経口化を検討しているが、糖尿病を惹起させたラットに絶食下、かなり多量のインシュリンを含むナノパーティクルを投与した時だけ血中グルコース濃度がやや低下する程度であった（Ｄｉａｂｅｔｅｓ，３７，２４６（１９８８））。
【００１５】
更に、薬物の放出制御についてもＢ．Ｈｕｂｅｒｔらが降圧剤ダロジピンを用いて検討しているが、ナノパーティクル化により初期の薬物放出が抑えられたのみで血中濃度を持続させたという報告は未だなされていない（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，８，７３４（１９９１））。
【００１６】
【発明が解決しようとする課題】
上記の如く、従来微粒子性運搬体を利用した薬物のＤＤＳは未だその吸収促進効果が充分でない。従って、本発明の目的は、薬物の吸収促進効果に優れた微粒子運搬体として利用できる新たな高分子、及びこれを用いた医薬組成物を提供することにある。
【００１７】
【課題を解決するための手段】
そこで本発明者は、グラフトコポリマーに着目してその薬物運搬性能、特に経口吸収促進能について種々検討してきたところ、ポリＮ−アルキルアクリルアミドやポリＮ−アルキルメタクリルアミド鎖等をグラフト鎖とするグラフトコポリマーに優れた経口吸収促進作用があることを見出し、先に特許出願した（特願平７−６９００８号、同７−２４３０２２号、同８−３３２００号及び同８−１２６１３７号）。そして更に研究を続けたところ、意外にも後記式で示されるような２種以上のグラフト鎖を有するコポリマーが、１種のグラフト鎖を有するコポリマーに比べて極めて優れた経口吸収促進効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１８】
すなわち、本発明は下記の式（１）で表される構造単位と、
【００１９】
【化１１】
0003664822.tif 000002
【００２０】
〔式（１）中、Ｑ1 は水素原子、メチル基又はシアノ基を示し、
Ｑ2 は水素原子、
【００２１】
【化１２】
0003664822.tif 000003
【００２２】
（Ｒ1 は水素原子又はハロゲノメチル基を示し、Ｒ2 は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ3 は水素原子又は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ4 は炭素数１〜１０のアルキル基を示す（ただしＲ3 及びＲ4 の総炭素数は３〜２０である））を示す〕
【００２３】
下記式（２）、（３）、（４）及び（５）で表される構造単位よりなる群から選ばれる任意の２種以上のグラフト鎖構造単位とを有するグラフトコポリマーを提供するものである。
【００２４】
【化１３】
0003664822.tif 000004
【００２５】
〔式（２）中、Ｑ3 は水素原子又はメチル基を示し、
Ｑ4 は
【００２６】
【化１４】
0003664822.tif 000005
【００２７】
（Ａ1 は炭素数１〜１０のアルキレン基を示す）を示し、
Ｑ5 は酸素原子又は-NH-を示し、
Ｑ6 は炭素数１〜１０のアルキレン基を示し、
Ｑ7 は酸素原子又は硫黄原子を示し、
Ｘ1 は酸素原子又は２個の水素原子を示し、
Ｒ4 は水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ5 は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、
ｌは１〜１００の数を示す〕
【００２８】
【化１５】
0003664822.tif 000006
【００２９】
〔式（３）中、Ｑ8 は水素原子又はメチル基を示し、
Ｑ9 は
【００３０】
【化１６】
0003664822.tif 000007
【００３１】
（Ａ2 は炭素数１〜１０のアルキレン基を示す）を示し、
Ｑ10は酸素原子又は-NH-を示し、
Ｑ11は炭素数１〜１０のアルキレン基を示し、
Ｑ12は酸素原子又は硫黄原子を示し、
Ｘ2 は酸素原子又は２個の水素原子を示し、
Ｒ6 は水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ7 は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、
Ｒ8 及びＲ9 は水素原子又はメチル基を示し、
ｍは１〜１００の数を示し、
ｎ及びｐはそれぞれ０〜１００であってｎ＋ｐが１以上となる数を示す〕
【００３２】
【化１７】
0003664822.tif 000008
【００３３】
〔式（４）中、Ｑ13は水素原子又はメチル基を示し、
Ｑ14は
【００３４】
【化１８】
0003664822.tif 000009
【００３５】
（Ａ3 は炭素数１〜１０のアルキレン基を示す）を示し、
Ｑ15は酸素原子又は-NH-を示し、
Ｑ16は炭素数１〜１０のアルキレン基を示し、
Ｑ17は酸素原子又は硫黄原子を示し、
Ｘ3 は酸素原子又は２個の水素原子を示し、
Ｒ10及びＲ11は水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ12は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、
ｑ及びｒはそれぞれ０〜１００であってｑ＋ｒが１以上となる数を示す〕
【００３６】
【化１９】
0003664822.tif 000010
【００３７】
〔式（５）中、Ｑ18は水素原子又はメチル基を示し、
Ｑ19は
【００３８】
【化２０】
0003664822.tif 000011
【００３９】
（Ａ4 は炭素数１〜１０のアルキレン基を示す）を示し、
Ｑ20は酸素原子又は-NH-を示し、
Ｑ21は炭素数１〜１０のアルキレン基を示し、
Ｑ22は酸素原子又は硫黄原子を示し、
Ｘ4 は酸素原子又は２個の水素原子を示し、
Ｒ13及びＲ14は水素原子又はメチル基を示し、
Ｒ15は水素原子又は炭素数２〜１１のアルカノイル基を示し、
ｓ及びｔはそれぞれ０〜１００であってｓ＋ｔが１以上となる数を示す〕
【００４０】
とを有するグラフトコポリマーを含有する微粒子性運搬体を提供するものである。
【００４２】
【発明の実施の形態】
本発明のグラフトコポリマーは、上記式（１）で表される構造単位と、式（２）、（３）、（４）及び（５）で表される構造単位よりなる群から選ばれる任意の２種以上の構造単位を有することを特徴とするものであり、当該２種以上の構造単位は、式（２）、（３）、（４）及び（５）の群から２種以上を選んでもよいし、式（２）で表される構造単位群から２種以上、式（３）で表される構造単位群から２種以上、式（４）で表される構造単位群から２種以上、又は式（５）で表される構造単位から２種以上を選んでもよい。より好ましい組合せは、式（１）で表される構造単位と、式（２）、（３）、（４）及び（５）の群から選ばれる２種以上の構造単位との組合せである。更に好ましい組合せは、式（１）で表される構造単位と、式（２）及び（３）から選ばれる１種以上の構造単位と、式（４）及び（５）から選ばれる１種以上の構造単位との組合せである。特に好ましい組合せは、式（１）で表される構造単位と、式（２）及び（３）から選ばれる１種の構造単位と、式（４）及び（５）から選ばれる１種の構造単位との組合せである。
【００４３】
また、本発明のグラフトコポリマーにおけるグラフト鎖の比率は特に制限されないが、薬物吸収促進効果の観点から、式（１）で表される構造単位（ａ）と、式（２）、（３）、（４）及び（５）で表される構造単位よりなる群から選ばれる任意の２種以上の構造単位の和（ｂ）とのモル分率（（ａ）／（ｂ））が、０．００１〜１の範囲であるグラフトコポリマーが好ましい。
【００４４】
本発明のグラフトコポリマーを構成する構造単位を示す式（１）、（２）、（３）、（４）及び（５）中における各記号について説明する。
【００４５】
まず、式（１）中、Ｒ1 で示されるハロゲノメチル基としては、クロロメチル基、ブロモメチル基、ヨードメチル基等を挙げることができる。Ｒ2 、Ｒ3 及びＲ4 で示される炭素数１〜１０のアルキル基としては、直鎖又は分枝状の炭素数１〜１０のアルキル基が挙げられ、具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基等が挙げられる。このうち、Ｒ2 としては炭素数１〜５のアルキル基がより好ましく、メチル基、エチル基、イソプロピル基が特に好ましい。またＲ3 及びＲ4 はいずれか一方が水素原子で他方がアルキル基の場合、及び両者がアルキル基の場合があるが、両者の総炭素数が３〜２０である。例えばＲ3 が水素原子の場合、Ｒ4 は炭素数３〜１０のアルキル基であり、Ｒ3 及びＲ4 がアルキル基の場合にはＲ3 及びＲ4 のアルキル基の炭素数が３〜２０となる組合せである。
【００４６】
式（１）の構造単位中、次の式（１ａ）
【００４７】
【化２１】
0003664822.tif 000012
【００４８】
（式中、Ｑ1 及びＲ1 は前記と同じ）
【００４９】
である構造単位がより好ましく、次の式（１ｂ）
【００５０】
【化２２】
0003664822.tif 000013
【００５１】
（式中、Ｒ1 は前記と同じ）
で表される構造単位が特に好ましい。
【００５２】
式（２）、（３）、（４）及び（５）中、Ａ1 、Ａ2 、Ａ3 、Ａ4 、Ｑ6 、Ｑ11、Ｑ16及びＱ21で示される炭素数１〜１０のアルキレン基としては、炭素数１〜１０の直鎖又は分枝状のアルキレン基が挙げられ、具体的にはメチレン基、エチレン基、トリメチレン基、ヘキサメチレン基、プロピレン基、（エチル）エチレン基、（ジメチル）エチレン基等が挙げられる。このうち、炭素数１〜５の直鎖又は分枝状のアルキレン基がより好ましい。
【００５３】
Ｒ5 、Ｒ7 及びＲ12で示される炭素数１〜１０のアルキル基としては、炭素数１〜１０の直鎖又は分枝状のアルキル基が挙げられ、具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基等が挙げられる。このうち、Ｒ5 及びＲ7 としては炭素数３〜１０の分枝状のアルキル基がより好ましく、イソプロピル基が特に好ましい。また、Ｒ12としては炭素数１〜８の直鎖又は分枝状のアルキル基が好ましく、メチル基、エチル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ヘキシル基等が特に好ましい。
【００５４】
Ｒ15で示される炭素数２〜１１のアルカノイル基としては、直鎖又は分枝状のものが挙げられるが、炭素数２〜６のアルカノイル基がより好ましく、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基等が特に好ましい。
【００５５】
式（２）の構造単位中、次の式（２ａ）
【００５６】
【化２３】
0003664822.tif 000014
【００５７】
（式中、Ｑ5 、Ｑ6 、Ｑ7 、Ｘ1 、Ｒ4 、Ｒ5 及びｌは前記と同じ）
で表される構造単位がより好ましく、式（２ｂ）
【００５８】
【化２４】
0003664822.tif 000015
【００５９】
（式中、Ｒ5 及びｌは前記と同じ）
で表される構造単位が特に好ましい。
【００６０】
式（３）の構造単位は、ｎ及びｐがそれぞれ０となる場合があるので、次の式（３ａ）、（３ｂ）及び（３ｃ）の構造となる場合がある。
【００６１】
【化２５】
0003664822.tif 000016
【００６２】
（式中、Ｑ8 、Ｑ9 、Ｑ10、Ｑ11、Ｑ12、Ｘ2 、Ｒ6 、Ｒ7 、Ｒ8 、Ｒ9 、ｍ、ｎ及びｐは前記と同じ）
【００６３】
式（３）の構造単位のうち、次の式（３ｄ）
【００６４】
【化２６】
0003664822.tif 000017
【００６５】
（式中、Ｑ10、Ｑ11、Ｑ12、Ｘ2 、Ｒ6 、Ｒ7 、Ｒ8 、Ｒ9 、ｍ、ｎ及びｐは前記と同じ）
で表される構造単位がより好ましく、次の式（３ｅ）
【００６６】
【化２７】
0003664822.tif 000018
【００６７】
（式中、Ｒ7 、ｍ、ｎ及びｐは前記と同じ）
で表される構造単位が特に好ましい。
【００６８】
式（４）の構造単位は、ｑ及びｒがそれぞれ０となる場合があるので、次の式（４ａ）、（４ｂ）及び（４ｃ）の構造となる場合がある。
【００６９】
【化２８】
0003664822.tif 000019
【００７０】
（式中、Ｑ13、Ｑ14、Ｑ15、Ｑ16、Ｑ17、Ｘ3 、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、ｑ及びｒは前記と同じ）
【００７１】
式（４）の構造単位のうち、次の式（４ｄ）
【００７２】
【化２９】
0003664822.tif 000020
【００７３】
（式中、Ｑ15、Ｑ16、Ｑ17、Ｘ3 、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、ｑ及びｒは前記と同じ）で表される構造単位がより好ましく、次の式（４ｅ）
【００７４】
【化３０】
0003664822.tif 000021
【００７５】
（式中、Ｒ12、ｑ及びｒは前記と同じ）
で表される構造単位が特に好ましい。
【００７６】
式（５）の構造単位は、ｓ及びｔがぞれぞれ０となる場合があるので、次の式（５ａ）、（５ｂ）及び（５ｃ）の構造となる場合がある。
【００７７】
【化３１】
0003664822.tif 000022
【００７８】
（式中、Ｑ18、Ｑ19、Ｑ20、Ｑ21、Ｑ22、Ｘ4 、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、ｓ及びｔは前記と同じ）
【００７９】
式（５）の構造単位のうち、次の式（５ｄ）
【００８０】
【化３２】
0003664822.tif 000023
【００８１】
（式中、Ｑ20、Ｑ21、Ｑ22、Ｘ4 、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、ｓ及びｔは前記と同じ）
【００８２】
で表される構造単位がより好ましく、次の式（５ｅ）
【００８３】
【化３３】
0003664822.tif 000024
【００８４】
（式中、Ｒ15、ｓ及びｔは前記と同じ）
で表される構造単位が特に好ましい。
【００８５】
本発明のグラフトコポリマーにおいて、グラフト鎖中の繰り返し単位（Ｎ−アルキルアクリルアミド、Ｎ−アルキルメタクリルアミド、アクリルアミド、メタクリルアミド、アクリル酸、ビニルアミン、Ｎ−アルカノイルビニルアミン等）は、ランダム型及びブロック型のいずれでもよい。また、式（１）の構造単位と式（２）、（３）、（４）及び（５）から選ばれる２種以上の構造単位との結合形式もランダム型でも、ブロック型でもよい。
【００８６】
本発明のグラフトコポリマーは、例えば式（２）、（３）、（４）及び（５）の構造単位に相当するマクロモノマーを合成し、次いで得られたマクロモノマーの任意の２種以上と、式（１）に相当するビニルモノマーとを共重合させることにより製造することができる。
【００８７】
以下にその製造方法を詳しく説明する。
【００８８】
式（２）、（３）、（４）及び（５）の構造単位に相当するマクロモノマーは、アルキルアクリルアミド誘導体、アルキルメタクリルアミド誘導体等の式（２）〜（５）の構造のうちの繰り返し単位に相当するモノマーの１種又は２種以上をアミノ基、水酸基又はカルボキシル基を分子内に有する連鎖移動剤の存在下、ラジカル重合させ、末端にアミノ基、水酸基又はカルボキシル基を持つ、アルキルアクリルアミド誘導体、アルキルメタクリルアミド誘導体等の１種又は２種以上の重合体又は共重合体を合成した後、ビニルベンジルハライド、メタクリル酸アルキルエステルジオキシド等のビニルモノマーと反応させることにより容易に製造できる。
【００８９】
アルキルアクリルアミド誘導体、アルキルメタクリルアミド誘導体等の１種又は２種以上のモノマーの重合は、連鎖移動剤、ラジカル重合開始剤の存在下で行うが、その際、溶媒は存在してもしなくてもよい。反応の制御、操作面から、溶媒が存在した方が好ましい。溶媒としては、水、アルコール類、ジメチルホルムアミド、ベンゼン等が使用可能であるが、溶媒の種類に特に限定はない。また、連鎖移動剤としてはメルカプトアルキルアミン類、メルカプトアルカノール類、ω−メルカプトカルボン酸類、アルキレングリコール類等が使用できるが、２−メルカプトエチルアミン、２−メルカプトエタノール、β−メルカプトプロピオン酸が好ましい。ラジカル重合開始剤としては、アゾビスイソブチロニトリル、過酸化ベンゾイル、過硫酸アンモニウム等が使用できるが、アゾビスイソブチロニトリル、過酸化ベンゾイルが好ましい。
【００９０】
末端にアミノ基、水酸基あるいはカルボキシル基の入ったアルキルアクリルアミド誘導体又はアルキルメタクリルアミド誘導体の１種又は２種以上の重合体又は共重合体とビニルモノマーの反応は、一般の酸アミド反応、エーテル化反応あるいはエステル化反応などにより容易に達成しうる。ビニルモノマーとしては、クロロメチルスチレンやメタアクリル酸プロピレンジオキシドが好ましい。
【００９１】
例えば、末端に水酸基を有する、アルキルアクリルアミド誘導体又はアルキルメタクリルアミド誘導体とアクリルアミド又はメタクリルアミドからなるランダム共重合体とクロロメチルスチレンとの反応は、ジメチルホルムアミド等の溶媒中、５０％水酸化カリウム水溶液及び必要であれば相間移動触媒の存在下、０〜１００℃の反応温度で行なわれる。
【００９２】
上記の如くして得られた式（２）、（３）、（４）及び（５）の構造単位に相当するマクロモノマーの任意の２種以上を、単独重合およびラジカル重合可能なビニル化合物と共重合することにより、本発明のグラフトコポリマーを製造することができる。
【００９３】
共重合し得るビニル化合物としては、スチレン、ハロメチルスチレン、メチルアクリレート、メチルメタクリレート、イソブチルシアノアクリレート、アクリロニトリル、アクリルアミド、酢酸ビニル等を挙げることができる。スチレン、ハロメチルスチレン、メチルアクリレート及びメチルメタクリレートが好ましい。
【００９４】
また、本発明のグラフトコポリマーのうち、前記式（３ａ）、（３ｂ）、（３ｃ）、（４ａ）、（４ｂ）、（５ａ）又は（５ｂ）のように、グラフト鎖中に酸アミド基、カルボキシル基又は１級アミノ基を有するグラフトコポリマーは、式（２）、式（４ｃ）及び／又は式（５ｃ）の構造単位を有するマクロモノマーを単独重合及びラジカル重合可能なビニル化合物と共重合し、次いで公知の方法により加水分解することによっても製造することができる。
【００９５】
重合度を変えることにより、水、アルコール、クロロホルムおよびジメチルスルホキシドなどに可溶な両親媒性を有するものを作ることができる。
【００９６】
本発明のグラフトコポリマーを材料とする微粒子は、式（２）、（３）、（４）及び（５）で表される構造単位に相当する水溶性マクロモノマー２種以上と疎水性モノマーとを分散重合し、必要に応じて加水分解することにより得られ、表面に水溶性マクロモノマーが局在し、内部が疎水性ポリマーからなる微粒子となる。
【００９７】
この微粒子は表面が水溶性であるため、水溶性薬物を効率良く保持することができる。一方、脂溶性薬物については内部の疎水性ポリマー部分との疎水的相互作用により保持できると考えられる。また、表面の両親媒性を利用することにより、微粒子表面に脂溶性薬物を保持することも可能である。言い換えると、本微粒子は特に薬物の物性に依存することなく、薬物を効率良く保持できると考えられることから、微粒子性運搬体として有用である。また、本発明グラフトコポリマーは、水溶性マクロモノマーに由来するグラフト鎖を２種以上有することから、薬物の保持性能、保護性能及び腸管における吸収促進効果が向上するものと考えられる。
【００９８】
本発明のグラフトコポリマーを、微粒子性運搬体として利用するには、該グラフトコポリマーを、マイクロカプセル化、マイクロスフェアー化又はナノパーティクル化すればよい。
【００９９】
マイクロカプセル化及びマイクロスフェアー化は常法により行うことができる。また、ナノパーティクル化等は、明石らが開発したマクロモノマー法を利用し（Ｄｉｅ  Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｋｕｌａｒｅ  Ｃｈｅｍｉｅ，１３２，８１（１９８５）；  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｊｏｕｒｎａｌ，２４，９５９（１９９２）；ケミカル・エンジニヤリング、５０５頁、１９９４年）、分散重合により表面に水溶性マクロモノマーが局在し、内部が疎水性ポリマーからなるナノパーティクルを調製することで達成できる。
【０１００】
なお、ナノパーティクルの粒子径はマクロモノマーの分子量、マクロモノマー作成時の反応条件等に依存して変化する。更に、適当な設定条件を選ぶことにより、粒子径がμｍオーダーとなるマイクロスフェアーの調製も可能である。
【０１０１】
本発明のグラフトコポリマーは上記の如く薬物の運搬体として有用であることから、当該グラフトコポリマーと薬物を配合すれば、経口吸収性の良好な医薬組成物となる。該グラフトコポリマーは前記の如く薬物の保持能力に優れていることから、該グラフトコポリマーと薬物とを配合した組成物においては、グラフトコポリマーと薬物とは何らかの作用で複合体（以下、コンプレックスという）を形成しているものと考えられる。当該コンプレックス形成の作用としては、静電的相互作用、水素結合（表面に存在する水溶性官能基との相互作用）、疎水的相互作用（微粒子内部への取り込み）などが考えられる。
【０１０２】
本発明の医薬組成物に用いることのできる薬物は、特に制限がなく、水溶性薬物でも脂溶性薬物でもよい。このような薬物としては徐放性を期待する薬物及び吸収促進性薬物のいずれも挙げることができる。
【０１０３】
徐放性を期待する薬物としては、１）血中濃度半減期の短い薬物、２）血中
濃度の最適治療域の狭い薬物が挙げられ、吸収促進を期待する薬物（難吸収性薬物）としては、３）水溶性が高いために膜親和性が低い薬物、４）消化管内での分解、低吸収性等により薬効発現が妨げられている薬物や５）ワクチンなどが挙げられる。
【０１０４】
１）血中濃度半減期の短い薬物としては、イソソルビド、パパベリン、ニトログリセリン、ケトプロフェン、ジルチアゼム、プロプラノロール、イソプレテレノール、イソチペンジル、アスピリン、ピンドロール、ニフェジピン、アセタゾラミド、セファレキシン、セファクロル、キニジン及びプロカインアミド等が挙げられる。
【０１０５】
２）血中濃度の最適治療域の狭い薬物としては、ピロカルピン、テオフィリン、スコポラミン、メチルスコポラミン、クロルフェニラミン、フェニレフリン、トリヘキシフェニジル、カルベタペンテン、ペルフェナジン、ノスカピン、チオリダジン、ジメチンデン、ピリドスチグミン及びトリプロリジン等が挙げられる。
【０１０６】
３）水溶性が高いために膜親和性が低い薬物としては、フェノールスルフォンフタレイン、サリチル酸及びその誘導体、バルビツール酸及びその誘導体、ツボクラリン、スキサメトニウムなどの４級アミン類、スルファニル酸、スルファニルアセトアミド、スルファグアニジンなどのサルファ剤、キニン、エフェドリン、トラゾリン、プロカインアミド、アテノロール及びクロロチアジド等が挙げられる。
【０１０７】
４）消化管内での分解、低吸収性等により薬効発現を妨げている薬物としては、ペプチド性薬物が挙げられる。具体的には、インターフェロン、インターロイキン、エリスロポエチン、インシュリン、ネオカルチノスタチン、パラトルモン、オピオイドペプチド及びカルシトニン等のポリペプチドが挙げられる。
【０１０８】
５）ワクチンとしては、経口で供されることが有用と考えられるワクチンなどが挙げられる。具体的には、インフルエンザＨＡワクチン、Ｂ型肝炎ワクチン及びポリオワクチンなどが挙げられる。
【０１０９】
ワクチンの抗原としては、インフルエンザウイルスＡ型、インフルエンザウイルスＢ型、インフルエンザウイルスＣ型、ロタウイルス、サイトメガロウイルス、ＲＳウイルス、アデノウイルス、エイズウイルス（ＨＩＶ）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス（１型及び２型）、成人型Ｔ細胞白血病ウイルス（ＡＴＬＶ）、コクサッキーウイルス、エンテロウイルス、突発性発疹ウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ムンプスウイルス（おたふく風邪ウイルス）、ポリオウイルス、日本脳炎ウイルス及び狂犬病ウイルスなどのウイルス類、虫歯連鎖球菌、コレラ菌、インフルエンザ菌、肺炎球菌、百日ぜき菌、ジフテリア菌及び破傷風菌などの菌類、クラミジアなどのリッケチア類、マラリヤ原虫などの微生物の蛋白質が挙げられる。更に、これらウイルス類、菌類、リッケチア類及び原虫類そのものの病原性を弱めたものも抗原となり得る。
【０１１０】
従って、本発明においては上記の薬物のうち、吸収促進を期待する薬物（難吸収性薬物）を用いるのが好ましく、ペプチド性薬物がより好ましく、カルシトニンが特に好ましい。
【０１１１】
上記のコンプレックスを経口投与した場合、粒子が微小であるため、大部分の薬物をコンプレックスのまま、消化管の微絨毛の近くにまで送達させることができると考えられる。（Ｊ．Ｋｒｅｕｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，５５，３９（１９８９））。また、本発明のグラフトコポリマーは表面に水溶性の官能基が存在するため、消化管膜への親和性も高い。
【０１１２】
つまり、本発明のグラフトコポリマーの微粒子性運搬体、特にナノパーティクルと薬物のコンプレックスは、膜近傍に高濃度で薬物を蓄積させることができると考えられる。その結果、難吸収性薬物の吸収性を改善することができる。
【０１１３】
更に、ペプチドのように消化管内において消化酵素により分解されやすい薬物については、微粒子化することにより、消化酵素からの攻撃を防ぐことができる。
【０１１４】
また、この微粒子と薬物のコンプレックスは、膜への高親和性ゆえに、薬物の消化管内移動速度を遅延させることができると考えられる。その結果、薬物が長時間に渡って吸収部位である消化管に滞留するため、薬物の徐放効果も期待される。
【０１１５】
本発明医薬組成物におけるグラフトコポリマーと薬物との配合比は、適宜薬物に応じて調整すればよい。
【０１１６】
実際の投与剤形としては、前記グラフトコポリマーと薬物の混合物又はコンプレックスを、公知の方法により、製剤化して経口投与すればよい。また、軟カプセル等に前記グラフトコポリマーと薬物の混合物又はコンプレックスを入れる方法もある。
当該製剤としては特に制限されず、錠剤、顆粒剤、細粒剤、エリキシル剤、カプセル剤等が挙げられる。これらの製剤を調製するにあたり、通常の添加剤、例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤等を配合することができることは言うまでもない。
【０１１７】
【実施例】
以下に、参考例、実施例および試験例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【０１１８】
参考例１  ｔ−ブチルメタクリレート（ｔ−ＢＭＡ）オリゴマーの合成
ｔ−ＢＭＡモノマー２５．０ｇ（１７５．８mmol）をテトラヒドロフラン６０mlに溶解させ、連鎖移動剤として２−メルカプトエタノール０．２５６ｇ（３．２８mmol）、重合開始剤としてアゾビスイソブチロニトリル０．２８９ｇ（０．１７６mmol）を加え、窒素気流下６０℃で６時間反応させ、ｔ−ＢＭＡオリゴマーを合成した。反応終了後、水／メタノール（１／１）混合溶媒に対し、再沈殿を数回行い、精製を行った。得られたｔ−ＢＭＡポリマーの分子量はゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）を用いて測定し、Mn＝２８６０であった。
【０１１９】
参考例２  ｔ−ＢＭＡマクロモノマーの合成
参考例１で得たｔ−ＢＭＡオリゴマー１０．０ｇ（３．５０mmol）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１００mlに溶解させ、水素化ナトリウム０．２５０ｇ（１０．５mmol）、相間移動触媒としてテトラブチルホスホニウムブロマイド（ＴＢＰＢ）１．１９ｇ（３．５０mmol）とｐ−クロロメチルスチレン（ｐ−ＣＭＳｔ）５．３８ｇ（３５．０mmol）を加え、３０℃で４８時間反応させた。得られた生成物を水／メタノール（１／１）混合溶媒に対し、再沈殿を数回行い、精製を行った。1Ｈ−ＮＭＲの測定により、オリゴマー末端へビニルベンジル基が導入されていることを確認した。ＧＰＣによる分子量測定の結果、Mn＝３１２０であった。
【０１２０】
参考例３  メチルアクリリックアシッド（ＭＡＡ）マクロモノマーの合成
参考例２で得たｔ−ＢＭＡマクロモノマー３．８０ｇ（１．２２mmol）をエタノール／濃塩酸（６／１）混合溶媒に加え、ヒドロキノン存在下、７５℃で２４時間反応させることでｔ−ＢＭＡ側鎖の加水分解を行い、ＭＡＡマクロモノマーに誘導した。得られた生成物は透析することで精製した。1Ｈ−ＮＭＲにより加水分解率を計算した結果、９８．０％であった。
【０１２１】
参考例４  Ｎ−ビニルアセトアミド（ＮＶＡ）オリゴマーの合成
ＮＶＡモノマー１２．０ｇ（１４１mmol）をエタノール１００mlに溶解させ、連鎖移動剤として２−メルカプトエタノール１．３７ｇ（１７．５８mmol）、重合開始剤としてアゾビスイソブチロニトリル０．２３１ｇ（１．４１mmol）を加え、窒素気流下６０℃で６時間反応させ、ＮＶＡオリゴマーを合成した。反応終了後、エーテルに再沈殿することで精製を行った。得られた生成物の分子量をＧＰＣを用いて測定した結果、Mn＝４９２０であった。
【０１２２】
参考例５  ＮＶＡマクロモノマーの合成
参考例４で得たＮＶＡオリゴマー６．２５ｇ（１．２７mmol）をＤＭＦ５０mlに溶解させ、５０％水酸化カリウム水溶液（ＫＯＨａｑ）１．４３ｇ（１２．７mmol）、相間移動触媒としてＴＢＰＢ  ０．２１５ｇ（０．６３５mmol）とｐ−ＣＭＳｔ  １．９５ｇ（１２．７mmol）を加え、３０℃で４８時間反応を行った。反応終了後、エーテルに対し再沈殿を数回行い、精製を行った。1Ｈ−ＮＭＲの測定により、ＮＶＡオリゴマー末端へのビニルベンジル基の導入率を計算した結果、ほぼ定量的に導入されていることを確認した。ＧＰＣによる分子量測定の結果、Mn＝５１６０であった。
【０１２３】
参考例６  Ｎ−イソプロピルアクリルアミド（ＮＩＰＡＡｍ）オリゴマーの合成ＮＩＰＡＡｍモノマー２０．０ｇ（１７７mmol）をエタノール８０mlに溶解させ、連鎖移動剤として２−メルカプトエタノール０．２０ｇ（２．５６mmol）、重合開始剤としてＡＩＢＮ  ０．６０ｇ（３．６６mmol）を加え、窒素気流下６０℃で７時間重合を行った。反応終了後、溶媒除去し水に溶解させた後、５０℃以上に加温し、遠心分離することで、精製を行った。ＧＰＣを用いて測定した結果、オリゴマーの分子量はMn＝３４００であった。
【０１２４】
参考例７  ＮＩＰＡＡｍマクロモノマーの合成
参考例６で得たＮＩＰＡＡｍオリゴマー１０．０ｇ（２．９４mmol）をＤＭＦ５０mlに溶解させ、５０％ＫＯＨａｑ  １．６５ｇ（１４．７mmol）、相間移動触媒としてＴＢＰＢ  ０．４９９ｇ（１．４７mmol）とｐ−ＣＭＳｔ  ４．５８ｇ（２９．８mmol）を加え、３０℃で７２時間反応を行った。反応終了後、透析により精製を行った。オリゴマー末端へのビニルベンジル基の導入率を1Ｈ−ＮＭＲにより計算した結果、７６％であった。マクロモノマーの分子量をＧＰＣで測定した結果、Mn＝３５００であった。
【０１２５】
製造例１  ＮＶＡマクロモノマー、ＮＩＰＡＡｍマクロモノマーとスチレンの共重合（グラフトコポリマーの作成；ナノパーティクル化（ＰＮＩＰＡＡｍ−ＰＮＶＡナノパーティクル））
ＮＶＡマクロモノマー０．３１７ｇ（０．０７２mmol）、ＮＩＰＡＡｍマクロモノマー０．２５４ｇ（０．０７２mmol）とスチレン０．６０ｇ（５．６７mmol）をエタノール５mlに溶解させ、重合開始剤としてＡＩＢＮ  ９．６９mg（０．０５９０mmol）を加え、脱気封管後、６０℃で４８時間共重合を行った。反応終了後、透析により精製を行った。光散乱法による測定の結果、平均粒径（重量平均）は２０℃で４３６nm、４０℃で３７３nmであった。
【０１２６】
【化３４】
0003664822.tif 000025
【０１２７】
製造例２  ＰＮＩＰＡＡｍ−（ＰＮＶＡ−ｃｏ−ＶＡｍ）ナノパーティクル
製造例１で合成したＰＮＩＰＡＡｍ−ＰＮＶＡナノパーティクルを２Ｎ−ＨＣｌ中に分散させ、９６℃で１２時間加水分解を行い、３時間毎に分取した。分取した分散液はＮａＯＨで中和し、透析により精製、凍結乾燥することで生成物を得た。光散乱法による粒径測定の結果、加水分解による大きな粒径の変化は見られなかった。また、ＩＲ測定の結果、アルキル部に由来する吸収ピーク（２９００〜３１００cm-1）に変化がなかったことと、カルボキシル基に由来する吸収ピーク（１７００cm-1）付近がみられなかったこと、及びξ電位測定の結果からグラフト鎖であるＰＮＩＰＡＡｍ鎖は加水分解されておらず、同じくグラフト鎖であるＰＮＶＡ鎖が経時的に加水分解されていると考えられる。
従って、下記のグラフトコポリマーが得られたと考えられる。
【０１２８】
【化３５】
0003664822.tif 000026
【０１２９】
製造例３
ｔ−ＢＭＡマクロモノマー、ＮＩＰＡＡｍマクロモノマーとスチレンの共重合（グラフトコポリマーの作成；ナノパーティクル化（ＰＮＩＰＡＡｍ−Ｐｔ−ＢＭＡナノパーティクル））
ｔ−ＢＭＡマクロモノマー０．２４５ｇ（０．０７２mmol）、ＮＩＰＡＡｍマクロモノマー０．３６４ｇ（０．０７２mmol）とスチレン０．６０ｇ（５．７６mmol）をエタノール５mlに溶解させ、重合開始剤としてＡＩＢＮ  ９．６９mg（０．０５９mmol）を加え、脱気封管後、６０℃で４８時間共重合を行った。反応終了後、透析により精製を行い、メタノール中に分散させた。光散乱法による測定の結果、平均粒径は２０℃で５４３nmであった。
【０１３０】
【化３６】
0003664822.tif 000027
【０１３１】
製造例４
ＭＡＡマクロモノマー、ＮＩＰＡＡｍマクロモノマーとスチレンの共重合（グラフトコポリマーの作成；ナノパーティクル化）
ＭＡＡマクロモノマー０．１３５ｇ（０．０８１３mmol）、ＮＩＰＡＡｍマクロモノマー０．３５８ｇ（０．０８１３mmol）とスチレン０．５０８ｇ（４．８７mmol）をエタノール／水（４／１）混合溶媒５mlに溶解させ、重合開始剤としてＡＩＢＮ  ８．２７mg（０．０５０４mmol）を加え、脱気封管後、６０℃で４８時間共重合を行った。反応終了後、透析により精製を行った。光散乱法による測定の結果、平均粒径は２０℃で８０５nmであった。
【０１３２】
【化３７】
0003664822.tif 000028
【０１３３】
実施例１
１−１  サーモンカルシトニン（ｓＣＴ）を保持した微粒子（ナノパーティクル）の調製  以下の製剤を調製した。製剤（１）はネガティブコントロール、製剤（２）〜（４）はポジティブコントロールとした。また、製剤（５）及び（６）は本発明品であり、これに含まれるナノパーティクルはあらかじめ調製したＰＮＩＰＡＡｍ−ＰＮＶＡナノパーティクルを加水分解したものであり、それぞれの加水分解時間は９及び１２時間とした（加水分解時間が長いものほどＶＡｍの比率が高くなる、また、ＰＮＩＰＡＡｍ基は加水分解されない、製造例２参照）。なお、製剤（２）〜（６）はｓＣＴ水溶液とそれぞれのナノパーティクル分散液を混合して調製した。
【０１３４】
（１）０．１mg／mlサーモンカルシトニン（ｓＣＴ）水溶液
（２）０．１mg／ml  ｓＣＴ，１０mg／ml  ＰＮＩＰＡＡｍナノパーティクル分散液
（３）０．１mg／ml  ｓＣＴ，１０mg／ml  ＰＮＶＡ  ナノパーティクル分散液
（４）０．１mg／ml  ｓＣＴ，１０mg／ml  ＰＮＶＡ−ｃｏ−ＶＡｍナノパーティクル分散液
（５）０．１mg／ml  ｓＣＴ，１０mg／ml  ＰＮＩＰＡＡｍ−（ＰＮＶＡ−ｃｏ−ＶＡｍ）ナノパーティクル（９hr）分散液
（６）０．１mg／ml  ｓＣＴ，１０mg／ml  ＰＮＩＰＡＡｍ−（ＰＮＶＡ−ｃｏ−ＶＡｍ）ナノパーティクル（１２hr）分散液
【０１３５】
製剤（２）〜（４）で使用したナノパーティクルは下記の如くして合成した。
【０１３６】
（１）ＰＮＩＰＡＡｍナノパーティクルの調製
（１）−１  Ｎ−イソプロピルアクリルアミドの重合
Ｎ−イソプロピルアクリルアミド（興人株式会社製）２０ｇ、２，２’−アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）０．６ｇ及び２−メルカプトエタノール０．２０ｇをエタノール８０mlに溶かし、窒素気流下、６０℃、７時間で重合を行った。重合後、反応液中に含まれる溶媒をエバポレーターにより除去した。更に、プレポリマーを蒸留水に再溶解させ、加熱し、６０℃以上で遠心分離して精製した後、凍結乾燥した。ポリマーの収率は８３％であった。ポリマーの数平均分子量をゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）により求めると、３４００であった。
【０１３７】
（１）−２  マクロモノマーの合成
（１）−１で得られたポリＮ−イソプロピルアクリルアミド８ｇをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）５０mlに溶かし、５０％水酸化カリウム３．３ｇを加え、３０℃で３０分間攪拌した。次に、臭化テトラブチルリン酸５００mgを加えた後、クロロメチルスチレン４．６５ｇを加えて、３０℃で７２時間反応させた。反応後の沈澱物を濾過により除去した後、反応液を透析し、凍結乾燥した。マクロモノマーの収率は８２％であった。マクロモノマーの数平均分子量をＧＰＣにより求めると、３５００であった。このマクロモノマーは水とエタノールに可溶であった。
【０１３８】
（１）−３  ＰＮＩＰＡＡｍナノパーティクルの合成
数平均分子量３５００のマクロモノマー６３５mg、スチレン５２０mg及びＡＩＢＮ８．５mgをエタノール５mlに溶かし、６０℃で２４時間反応させた。重合終了後、未反応物と溶媒を透析により除去し、ついで凍結乾燥した。このポリマーはクロロホルム、ＤＭＳＯに可溶であった。このグラフトポリマー（ＰＮＩＰＡＡｍナノパーティクル）の粒子径を動的光散乱法により測定した結果、直径は４３０nmであった。
【０１３９】
（２）ＰＮＶＡナノパーティクルの調製
（２）−１  Ｎ−ビニルアセトアミド  オリゴマーの合成
Ｎ−ビニルアセトアミド（ＮＶＡ）モノマー１０ｇ（１１７．６mmol）をエタノール５０mlに溶解し、連鎖移動剤２−メルカプトエタノール２．３ｇ（２９．４４mmol）と開始剤にアゾビスイソブチロニトリル０．１９７ｇ（１．２mmol）を加え、窒素気流下６０℃、６時間、重合を行い、ＮＶＡオリゴマーを合成した。反応終了後、ジエチルエーテルを用いて再沈殿を数回行い精製した。分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）により測定し、Mn＝２５００であった。
【０１４０】
（２）−２  ＮＶＡマクロモノマーの合成
ＮＶＡオリゴマー１．８７５ｇ（０．７５mmol）をジメチルホルムアミド５０mlに溶解し、５０％水酸化カリウム水溶液０．８４ｇ（７．５mmol）、テトラブチルホスホニウムブロマイド０．１２７ｇ（０．３７４mmol）（相間移動触媒）を加え３０分間攪拌し、クロルメチルスチレン１．１５２ｇ（７．５mmol）を加え３０℃、４８時間、反応し、ＮＶＡマクロモノマーを得た。反応終了後、ジエチルエーテルを用いて数回再沈殿を行って精製し、1Ｈ−ＮＭＲによりビニルベンジル基の導入率を計算し、ほぼ定量的に導入されていることを確認した。ＧＣＰによる分子量測定の結果、Mn＝２６００であった。
【０１４１】
（２）−３  ＰＮＶＡナノパーティクルの合成
ＮＶＡマクロモノマー０．２５ｇ（０．０９６mmol）とスチレン０．２３ml（１．９９mmol）をエタノール５mlに溶解し、開始剤にアゾビスイソブチロニトリル３．３４mg（０．０２mmol）を用い、脱気封入管中で、６０℃、４８時間、共重合反応を行った。反応終了後、透析処理を行い未反応物質を除去した。光散乱法による測定の結果、グラフトポリマー（ＰＮＶＡナノパーティクル）の粒径は２５７nmであった。
【０１４２】
（３）ＰＮＶＡ−ｃｏ−ＶＡｍナノパーティクルの調製
上記（２）−３で得られたナノパーティクルを、２Ｎ−塩酸中に分散し、１００℃、１２時間、マクロモノマー鎖のアミド結合部分を加水分解した。得られたナノパーティクルは、反応終了後、透析処理で精製した。光散乱法による測定の結果ＰＮＶＡ−ｃｏ−ＶＡｍナノパーティクルの粒径は２７３nmであった。
【０１４３】
１−２  動物実験
ＳＤ系雄性ラット（７週令、約２００ｇ）を２４時間絶食した後、上記製剤をそれぞれ０．５mlずつ経口投与した（ｎ＝５）。投与後、４０分、８０分、２、３、４、６及び８時間に尾静脈より血液約６０μｌ採血した。この血液中に含まれるカルシウムイオン濃度を６３４Ｃａ++／pHアナライザー（チバコーニング社製）にて測定した。
【０１４４】
１−３  解析
０時点のカルシウムイオン濃度と各時点との温度の差を計算し、時間に対してプロットした。血中カルシウムイオン濃度の低下量と時間との間に含まれる面積を台形法により計算し、時間−血中カルシウムイオン濃度曲線上面積とした。それぞれのナノパーティクル製剤について、ｓＣＴ水溶液（ネガティブコントロール）との面積の比を計算し、その値から吸収促進効果の強さを推測した（この比が大きいものほど吸収促進効果が強いことを意味する）。
【０１４５】
１−４  結果
表１に示すように、本発明のナノパーティクル（製剤（５）及び（６））は優れたｓＣＴの吸収促進効果を示した。すなわち、製剤（５）及び（６）に含まれるナノパーティクルは、ポジティブコントロールとして用いた二元グラフトコポリマーのナノパーティクル（製剤（２）〜（４））に比べて、その吸収促進効果は顕著に増大していた。このことから、ＰＮＩＰＡＡｍ基とＰＮＶＡ−ｃｏ−ＶＡｍ基あるいはＰＶＡｍ基をナノパーティクル表面に同時に結合させることにより、その吸収促進効果は相乗的に強くなることが証明された。
【０１４６】
【表１】
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【０１４７】
実施例２
２−１  製剤の調製
以下の製剤を調製した（製剤（３）に含まれるナノパーティクルの調製方法は製造例３参照）。製剤（１）はネガティブコントロール、製剤（２）はポジティブコントロールとした。なお、製剤（２）及び（３）はｓＣＴ水溶液とそれぞれのナノパーティクル分散液を混合して調製した。
（１）０．１mg／ml  サーモンカルシトニン（ｓＣＴ）水溶液
（２）０．１mg／ml  ｓＣＴ，１mg／ml  ＰＮＩＰＡＡｍナノパーティクル（実施例１の製剤（２）で使用したものと同じ）分散液
（３）０．１mg／ml  ｓＣＴ，１mg／ml  ＰＮＩＰＡＡｍ−Ｐｔ−ＢＭＡナノパーティクル分散液
【０１４８】
２−２  動物実験
試験例１に同じ
【０１４９】
２−３  解析
試験例１に同じ
【０１５０】
２−４  結果
表２に示すように、本発明のナノパーティクル（製剤（３））は、ポジティブコントロールとして用いた二元グラフトコポリマーのナノパーティクル（製剤（２））に比べて、その吸収促進効果は顕著に増大していた。このことから、ＰＮＩＰＡＡｍ基とＰｔＢＭＡ基をナノパーティクル表面に同時に結合させることにより、その吸収促進効果は相乗的に強くなることが証明された。
【０１５１】
【表２】
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【０１５２】
【発明の効果】
本発明のグラフトコポリマーを用いれば、腸管からの薬物の吸収が顕著に促進されることから、当該コポリマーと薬物とを配合した医薬組成物はＤＤＳとして有用である。