(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0003616599.tif 000019
〔式中、
Ｒ1は、水素原子、又は直鎖若しくは分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基（場合によりアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキルから選択される１つ以上の同一であるか又は異なる基により置換されている）を表し、
下記式：
【化２】
0003616599.tif 000020
で示される基は、窒素原子に加えて、Ｏ、Ｓ及び−ＮＲ3基（ここでＲ3は、水素原子又は直鎖若しくは分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基を表す）から選択される１つ又は２つのヘテロ原子を含んでもよい、４〜７の環員を有する飽和環を表し、
ｎは、１≦ｎ≦６の整数を表し、
Ｒ2は、下記の式（ａ）、（ｂ）：
【化３】
0003616599.tif 000021
（式中、
Ｘは、ＣＨ基又は窒素原子を表し、
Ｒ4は、水素又はハロゲン原子を表し、
Ｒ5は、下記基：
ＲaＮＨＣＯＨＮ−（ここでＲaは、水素原子又は直鎖若しくは分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基を表す）、
ＲbＳＯ2ＮＨＣＯ（ＮＨ）p−（ここでＲbは、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基を表し、そしてｐは、０又は１を表す）、
ＨＯＮ＝Ｃ（ＮＨ2）−、ＨＮ＝Ｃ（ＮＨＯＨ）−、
Ｒc−（ＣＨ2）m−Ｙ−（式中、
Ｙは、ＣＨ2、Ｏ、Ｓ又はＲaＮを表し、
ｍは、０≦ｍ≦３の整数を表し、
Ｒcは、酸素、窒素及び硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を含む、５又は７の環員を有する飽和又は不飽和複素環を表す（該複素環は、場合により１つ以上のカルボニル官能基を含み、そして場合によりハロゲン原子、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ基、及びアミノ基（場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基により置換されている）から選択される１つ以上の同一であるか又は異なる置換基により置換されている））のいずれか１つを表す）で示される基、又は式（ｃ）：
【化４】
0003616599.tif 000022
（式中、
Ｘは、前記と同義であり、そしてＢは、これが結合している炭素原子と一緒に、酸素、窒素及び硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を含む、５又は７の環員を有する飽和又は不飽和複素環を形成する（該複素環は、少なくとも１つのカルボニル官能基を含み、そして場合によりハロゲン原子、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ基、及びアミノ基（場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基により置換されている）から選択される１つ以上の同一であるか又は異なる置換基により置換されている））で示される二環系のいずれか１つを表す〕で示される化合物、その異性体、そのＮ−オキシド及び酸又は塩基とのその薬学的に許容しうる付加塩〔ここで、
アリール基は、フェニル、ビフェニリル又はナフチル（これらの基のそれぞれは、場合によりハロゲン、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル（場合によりヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基（これ自体場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基により置換されている）又はカルバモイル基（これ自体場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基により置換されている）により置換されている）、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、ヒドロキシ、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）トリハロアルキル、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）トリハロアルコキシ、アミノ（場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基により置換されている）、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキルカルボニルオキシ、カルボキシメトキシ及びカルバモイルメトキシ（場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基によりＮ−置換されている）から選択される１つ以上の同一であるか又は異なる基により置換されている）と解釈され、
ヘテロアリール基は、酸素、窒素及び硫黄から選択される１個、２個又は３個のヘテロ原子を含む、５〜１２の環員を有する芳香族単環又は二環基（ここでこのヘテロアリールは、場合によりハロゲン、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル（場合によりヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基（これ自体場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基により置換されている）又はカルバモイル基（これ自体場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基により置換されている）により置換されている）、ヒドロキシ、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）トリハロアルキル、フェニル、アミノ（場合により１つ以上の直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基によりＮ−置換されている）、カルボキシメトキシ及びカルバモイルメトキシ（場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基により置換されている）から選択される１つ以上の同一であるか又は異なる基により置換されていてもよい）と解釈され、
シクロアルキル基は、３〜１２の環員を有する飽和又は不飽和の単環式又は二環式炭化水素基（ここでこの環は、場合によりハロゲン、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、ヒドロキシ、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）トリハロアルキル、アミノ（場合により１つ以上の直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基により置換されている）及びアリールから選択される１つ以上の同一であるか又は異なる基により置換されていてもよい）と解釈され、
ヘテロシクロアルキル基は、酸素、窒素及び硫黄から選択される１個、２個又は３個のヘテロ原子を含む、４〜１２の環員を有する飽和又は不飽和の単環又は二環基（ここでこの複素環は、場合によりハロゲン、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、ヒドロキシ、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）トリハロアルキル、アミノ（場合により１つ以上の直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基により置換されている）、アリール及びジアリールメチルから選択される１つ以上の同一であるか又は異なる基により置換されていてもよい）と解釈される〕。
【請求項２】
ｎが、１である、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
下記式：
【化５】
0003616599.tif 000023
で示される環が、ピロリジニル環である、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
Ｒ1が、１つ以上のアリール又はヘテロアリール基により置換されている、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基を表す、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項５】
アリール基が、フェニル基である、請求項４記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
ヘテロアリール基が、ピリジル基である、請求項４記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
Ｒ2が、下記式：
【化６】
0003616599.tif 000024
で示される基を表す、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項８】
Ｒ2が、下記式：
【化７】
0003616599.tif 000025
〔式中、
Ｘは、ＣＨ基又は窒素原子を表し、
Ｒ4は、水素又はハロゲン原子を表し、
Ｒ5は、下記基：
ＲaＮＨＣＯＨＮ−（ここでＲaは、水素原子又は直鎖若しくは分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基を表す）、
ＲbＳＯ2ＮＨＣＯ（ＮＨ）p−（ここでＲbは、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基を表し、そしてｐは、０又は１を表す）、
ＨＯＮ＝Ｃ（ＮＨ2）−、ＨＮ＝Ｃ（ＮＨＯＨ）−、
Ｒc−（ＣＨ2）m−Ｙ−（式中、
Ｙは、ＣＨ2、Ｏ、Ｓ又はＲaＮを表し、
ｍは、０≦ｍ≦３の整数を表し、
Ｒcは、酸素、窒素及び硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を含む、５又は７の環員を有する飽和又は不飽和複素環を表す（該複素環は、場合により１つ以上のカルボニル官能基を含み、そして場合によりハロゲン原子、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ基、及びアミノ基（場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基により置換されている）から選択される１つ以上の同一であるか又は異なる置換基により置換されている））
のいずれか１つを表す〕で示される基を表す、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項９】
Ｒ2が、下記式：
【化８】
0003616599.tif 000026
〔式中、
Ｘは、ＣＨ基又は窒素原子を表し、そして
Ｂは、これが結合している炭素原子と一緒に、酸素、窒素及び硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を含む、５又は７の環員を有する飽和又は不飽和複素環を形成する（該複素環は、少なくとも１つのカルボニル官能基を含み、そして場合によりハロゲン原子、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基、直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ基、及びアミノ基（場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル基により置換されている）から選択される１つ以上の同一であるか又は異なる置換基により置換されている）〕で示される二環系を表す、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１０】
（６Ｓ）−Ｎ−｛４−〔アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル〕ベンジル｝−３−〔（２，２−ジフェニルエチル）アミノ〕−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミドである、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、そのＮ−オキシド及び酸又は塩基とのその薬学的に許容しうる付加塩。
【請求項１１】
（６Ｓ）−Ｎ−｛４−〔アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル〕ベンジル｝−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミドである、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、そのＮ−オキシド及び酸又は塩基とのその薬学的に許容しうる付加塩。
【請求項１２】
（６Ｓ）−Ｎ−〔２−（｛〔アミノ（イミノ）メチル〕アミノ｝オキシ）エチル〕−３−〔（２，２−ジフェニルエチル）アミノ〕−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミドである、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、そのＮ−オキシド及び酸又は塩基とのその薬学的に許容しうる付加塩。
【請求項１３】
（６Ｓ）−４−オキソ−Ｎ−〔（３−オキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾオキサジン−８−イル）メチル〕−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミドである、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、そのＮ−オキシド及び酸又は塩基とのその薬学的に許容しうる付加塩。
【請求項１４】
（６Ｓ）−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−Ｎ−〔２−（２−ピリジルメトキシ）ベンジル〕−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミドである、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、そのＮ−オキシド及び酸又は塩基とのその薬学的に許容しうる付加塩。
【請求項１５】
（６Ｓ）−４−オキソ−Ｎ−｛２−〔（２−オキソ−３−ピロリジニル）オキシ〕ベンジル｝−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミドである、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、そのＮ−オキシド及び酸又は塩基とのその薬学的に許容しうる付加塩。
【請求項１６】
（６Ｓ）−Ｎ−〔２−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イルメトキシ）ベンジル〕−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミドである、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、そのＮ−オキシド及び酸又は塩基とのその薬学的に許容しうる付加塩。
【請求項１７】
（６Ｓ）−Ｎ−〔２−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルメトキシ）ベンジル〕−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミドである、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物、その異性体、そのＮ−オキシド及び酸又は塩基とのその薬学的に許容しうる付加塩。
【請求項１８】
請求項１記載の式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、式（II）：
【化９】
0003616599.tif 000027
〔式中、Ａは、式（Ｉ）と同義であり、Ｐ1は、アミノ官能基保護基を表し、そしてＢｎは、ベンジル基を表す〕で示される化合物を、還元剤を使用して還元することにより、式（III）：
【化１０】
0003616599.tif 000028
〔式中、Ａ、Ｐ1及びＢｎは、前記と同義である〕で示される化合物を得て、
この式（III）の化合物のヒドロキシ官能基を、メトキシに変換し、次にシアノ官能基に変換することによって、アミノ官能基の脱保護後、式（IV）：
【化１１】
0003616599.tif 000029
〔式中、Ａ及びＢｎは、前記と同義である〕で示される化合物を得て、
この式（IV）の化合物を、塩化オキサリルと反応させることにより、式（Ｖ）：
【化１２】
0003616599.tif 000030
〔式中、Ａ及びＢｎは、前記と同義である〕で示される化合物を得て、
この式（Ｖ）の化合物を、式（VI）：
【化１３】
0003616599.tif 000031
〔式中、Ｒ1は、式（Ｉ）と同義である〕で示される化合物と反応させることにより、式（VII）：
【化１４】
0003616599.tif 000032
〔式中、Ａ、Ｂｎ及びＲ1は、前記と同義である〕で示される化合物を得て、
この式（VII）の化合物を、次に接触水素化により式（VIII）：
【化１５】
0003616599.tif 000033
〔式中、Ａ及びＲ1は、前記と同義である〕で示される化合物に変換し、
この式（VIII）の化合物を、次にアルカリ媒体中での接触水素化により式（IX）：
【化１６】
0003616599.tif 000034
〔式中、Ａ及びＲ1は、前記と同義である〕で示される化合物に変換し、
この式（IX）の化合物を式（Ｘ）：
【化１７】
0003616599.tif 000035
〔式中、ｎ及びＲ2は、式（Ｉ）と同義である〕で示される化合物と反応させることにより、可能であれば脱保護後、式（Ｉ）の化合物を得て、
この式（Ｉ）の化合物を、場合により対応するＮ−オキシドに変換し、所望であれば、精製し、所望であれば、その異性体に分離し、そして所望であれば、薬学的に許容しうる酸又は塩基との付加塩に変換することを特徴とする方法。
【請求項１９】
活性成分として請求項１〜１７のいずれか１項記載の化合物を、１つ以上の薬学的に許容しうる不活性で非毒性の担体と組合せて含む、医薬組成物。
【請求項２０】
トリプシン関連セリンプロテアーゼのインヒビターとして使用するための、請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項２１】
トロンビンインヒビターとして使用するための、請求項２０記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新しい二環式アミノ−ピラジノン化合物、その製造方法、これらを含む医薬組成物及びトリプシン関連セリンプロテアーゼのインヒビターとしてのその使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】
このようなセリンプロテアーゼの１つであるトロンビンは、血液凝固の重要な酵素であり、そして特に凝固カスケードの自己増幅を引き起こす、その顕著な能力のために、静脈及び動脈血栓症の病理において中心的な役割を演じる（Ｆ．  Ｔｏｔｉら，  Ｓａｎｇ，  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｅ，  Ｖａｉｓｓｅａｕｘ  １９９２，  ４，  ４８３−４９４及びＴ．Ｍ．  Ｒｅｉｌｌｙら，  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ  １９９２，  ３，  ５１３−５１７）。
【０００３】
トロンビンの特異的かつ直接の阻害はより効率的であり、ヘパリンでの治療よりも出血の危険が少ない。トロンビンの直接のインヒビターは現在存在しているが、このようなペプチド物質の欠点は、経口経路により投与されると活性ではないということである。
【０００４】
経口抗血栓活性を有するペプチドミメティック化合物は、以前に文献に報告されている。これらは、特に、特許明細書ＥＰ  ２９３，８８１、ＥＰ  ４７１，６５１、ＥＰ  ６１５，９７８及びＥＰ  ７９２，８８３に記載されるボロン酸化合物、並びに特許明細書ＷＯ  ９４／２９３３６及びＷＯ  ９５／２３６０９に記載される化合物を含む。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
よって以前に文献中で報告された化合物の効力及び選択性を上昇させることを目的とした新しいセリンプロテアーゼインヒビターの合成は、特に興味深い。
【０００６】
新しい化合物の活性は、種々の凝固時間の延長により証明される。
【０００７】
更に、本化合物は、経口経路により投与されても活性である。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明は、更に具体的には、式（Ｉ）：
【０００９】
【化１８】
0003616599.tif 000002
【００１０】
〔式中、
Ｒ１は、水素原子、又は直鎖若しくは分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基（場合によりアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキルから選択される１つ以上の同一であるか又は異なる基により置換されている）を表し、
下記式：
【００１１】
【化１９】
0003616599.tif 000003
【００１２】
で示される基は、窒素原子に加えて、Ｏ、Ｓ及び−ＮＲ３基（ここでＲ３は、水素原子又は直鎖若しくは分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を表す）から選択される１つ又は２つのヘテロ原子を含んでもよい、４〜７の環員を有する飽和環を表し、
ｎは、１≦ｎ≦６の整数を表し、
Ｒ２は、下記の式（ａ）、（ｂ）：
【００１３】
【化２０】
0003616599.tif 000004
【００１４】
（式中、
Ｘは、ＣＨ基又は窒素原子を表し、
Ｒ４は、水素又はハロゲン原子を表し、
Ｒ５は、下記基：
ＲａＮＨＣＯＨＮ−（ここでＲａは、水素原子又は直鎖若しくは分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を表す）、
ＲｂＳＯ２ＮＨＣＯ（ＮＨ）ｐ−（ここでＲｂは、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を表し、そしてｐは、０又は１を表す）、
ＨＯＮ＝Ｃ（ＮＨ２）−、ＨＮ＝Ｃ（ＮＨＯＨ）−、
Ｒｃ−（ＣＨ２）ｍ−Ｙ−（式中、
Ｙは、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ又はＲａＮを表し、
ｍは、０≦ｍ≦３の整数を表し、
Ｒｃは、酸素、窒素及び硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を含む、５又は７の環員を有する飽和又は不飽和複素環を表す（該複素環は、場合により１つ以上のカルボニル官能基を含み、そして場合によりハロゲン原子、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、及びアミノ基（場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基により置換されている）から選択される１つ以上の同一であるか又は異なる置換基により置換されている））のいずれか１つを表す）で示される基、又は式（ｃ）：
【００１５】
【化２１】
0003616599.tif 000005
【００１６】
（式中、
Ｘは、前記と同義であり、そしてＢは、これが結合している炭素原子と一緒に、アリール、あるいは酸素、窒素及び硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を含む、５又は７の環員を有する飽和又は不飽和複素環を形成する（該複素環は、場合により少なくとも１つのカルボニル官能基を含み、そして場合によりハロゲン原子、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、及びアミノ基（場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基により置換されている）から選択される１つ以上の同一であるか又は異なる置換基により置換されている））で示される二環系のいずれか１つを表す〕で示される化合物、その異性体、そのＮ−オキシド及び酸又は塩基とのその薬学的に許容しうる付加塩に関する。
【００１７】
薬学的に許容しうる酸としては、いかなる限定をも意味することなく、塩酸、臭化水素酸、硫酸、ホスホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、アスコルビン酸、シュウ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ショウノウ酸などに言及することができる。
【００１８】
薬学的に許容しうる塩基としては、いかなる限定をも意味することなく、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエチルアミン、ｔｅｒｔ−ブチルアミンなどに言及することができる。
【００１９】
アリール基は、フェニル、ビフェニリル又はナフチル（これらの基のそれぞれは、場合によりハロゲン、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル（場合によりヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基（これ自体場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基により置換されている）又はカルバモイル基（これ自体場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基により置換されている）により置換されている）、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ヒドロキシ、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）トリハロアルキル、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）トリハロアルコキシ、アミノ（場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基により置換されている）、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ、カルボキシメトキシ及びカルバモイルメトキシ（場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基によりＮ−置換されている）から選択される１つ以上の同一であるか又は異なる基により置換されている）を意味すると解釈すべきである。
【００２０】
ヘテロアリール基は、酸素、窒素及び硫黄から選択される１個、２個又は３個のヘテロ原子を含む、５〜１２の環員を有する芳香族単環又は二環基（ここでこのヘテロアリールは、場合によりハロゲン、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル（場合によりヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基（これ自体場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基により置換されている）又はカルバモイル基（これ自体場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基により置換されている）により置換されている）、ヒドロキシ、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）トリハロアルキル、フェニル、アミノ（場合により１つ以上の直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基によりＮ−置換されている）、カルボキシメトキシ及びカルバモイルメトキシ（場合により１つ又は２つの直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基により置換されている）から選択される１つ以上の同一であるか又は異なる基により置換されていてもよい）を意味すると解釈すべきである。
【００２１】
ヘテロアリール基の中で、いかなる限定をも意味することなく、下記を挙げることができる：チエニル、ピリジル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル。
【００２２】
シクロアルキル基は、３〜１２の環員を有する飽和又は不飽和の単環式又は二環式炭化水素基（ここでこの環は、場合によりハロゲン、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ヒドロキシ、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）トリハロアルキル、アミノ（場合により１つ以上の直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基により置換されている）及びアリールから選択される１つ以上の同一であるか又は異なる基により置換されていてもよい）を意味すると解釈すべきである。
【００２３】
シクロアルキル基の中で、いかなる限定をも意味することなく、下記を挙げることができる：シクロペンチル、シクロヘキシル、インダニル、テトラヒドロナフチル。
【００２４】
ヘテロシクロアルキル基は、酸素、窒素及び硫黄から選択される１個、２個又は３個のヘテロ原子を含む、４〜１２の環員を有する飽和又は不飽和の単環又は二環基（ここでこの複素環は、場合によりハロゲン、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ヒドロキシ、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）トリハロアルキル、アミノ（場合により１つ以上の直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基により置換されている）、アリール及びジアリールメチルから選択される１つ以上の同一であるか又は異なる基により置換されていてもよい）を意味すると解釈すべきである。
【００２５】
ヘテロシクロアルキル基の中で、いかなる限定をも意味することなく、下記を挙げることができる：アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ジヒドロシクロペンタ〔ｂ〕ピリジル。
【００２６】
式（Ｉ）の好ましい化合物は、ｎが１である化合物である。
【００２７】
式（Ｉ）と同義の下記式：
【００２８】
【化２２】
0003616599.tif 000006
【００２９】
で示される環は、好ましくはピロリジニル基である。
【００３０】
下記式：
【００３１】
【化２３】
0003616599.tif 000007
【００３２】
で示される基が、ピロリジン環を表すとき、この環は、好ましくはＳ立体配置である。
【００３３】
好ましいＲ１基は、１つ以上のアリール又はヘテロアリール基により置換されている、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基である。
【００３４】
特に、好ましいＲ１基は、１つ以上のフェニル又はピリジル基により置換されている、直鎖又は分岐の（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基である。
【００３５】
好ましくは、Ｒ１基は、（２，２−ジフェニル）エチル又は（２−ピリジル）エチル基である。
【００３６】
Ｒ２が、（ｂ）基を表すとき、Ｘは、好ましくはＣＨ基を表し、そしてＲ５は、好ましくは基：ＨＮ＝Ｃ（ＮＨＯＨ）−又はＲｃ−（ＣＨ２）ｍ−Ｙを表す。この場合は、Ｒｃは、特にピリジン、ピロリジノン、イミダゾール又はイミダゾリン基であろう。
【００３７】
Ｒ２が、二環系（ｃ）を表すとき、この系は、好ましくはＸがＣＨ基を表すもの（この場合Ｂは、モルホリノン、イソオキサゾール又はピロール環を表す）又はＸが窒素原子を表すもの（この場合Ｂは、フェニル環を表す）のいずれかであろう。
【００３８】
以下は、本発明の好ましい化合物である：
（６Ｓ）−Ｎ−｛４−〔アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル〕ベンジル｝−３−〔（２，２−ジフェニルエチル）アミノ〕−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド、
（６Ｓ）−Ｎ−｛４−〔アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル〕ベンジル｝−４−オキソ−３−｛（２−（２−ピリジル）エチル〕−アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド、
（６Ｓ）−Ｎ−〔２−（｛〔アミノ（イミノ）メチル〕アミノ｝オキシ）エチル〕−３−〔（２，２−ジフェニルエチル）アミノ〕−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド、
（６Ｓ）−４−オキソ−Ｎ〔（３−オキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンズオキサジン−８−イル）メチル〕−３−｛〔２−（２−ピリジル）−エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド、
（６Ｓ）−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−Ｎ−〔２−（２−ピリジルメトキシ）ベンジル〕−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド、
（６Ｓ）−４−オキソ−Ｎ−｛２−〔（２−オキソ−３−ピロリジニル）オキシ〕ベンジル｝−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド、
（６Ｓ）−Ｎ−〔２−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イルメトキシ）ベンジル〕−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）−エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド、
（６Ｓ）−Ｎ−〔２−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルメトキシ）ベンジル〕−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド、
（６Ｓ）−Ｎ−〔１Ｈ−インドール−６−イルメチル）−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド。
【００３９】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の製造方法に関するものであり、そしてこの方法は、式（ＩＩ）：
【００４０】
【化２４】
0003616599.tif 000008
【００４１】
〔式中、Ａは、式（Ｉ）と同義であり、Ｐ１は、アミノ官能基保護基を表し、そしてＢｎは、ベンジル基を表す〕で示される化合物を、適切な還元剤を使用して還元することにより、式（ＩＩＩ）：
【００４２】
【化２５】
0003616599.tif 000009
【００４３】
〔式中、Ａ、Ｐ１及びＢｎは、前記と同義である〕で示される化合物を得て、
この式（ＩＩＩ）の化合物のヒドロキシ官能基を、有機化学の従来の反応により、メトキシに変換し、次にシアノ官能基に変換することによって、アミノ官能基の脱保護後、式（ＩＶ）：
【００４４】
【化２６】
0003616599.tif 000010
【００４５】
〔式中、Ａ及びＢｎは、前記と同義である〕で示される化合物を得て、
この式（ＩＶ）の化合物を、塩化オキサリルと反応させることにより、式（Ｖ）：
【００４６】
【化２７】
0003616599.tif 000011
【００４７】
〔式中、Ａ及びＢｎは、前記と同義である〕で示される化合物を得て、
この式（Ｖ）の化合物を、式（ＶＩ）：
【００４８】
【化２８】
0003616599.tif 000012
【００４９】
〔式中、Ｒ１は、式（Ｉ）と同義である〕で示される化合物と反応させることにより、式（ＶＩＩ）：
【００５０】
【化２９】
0003616599.tif 000013
【００５１】
〔式中、Ａ、Ｂｎ及びＲ１は、前記と同義である〕で示される化合物を得て、
この式（ＶＩＩ）の化合物を、次に接触水素化により式（ＶＩＩＩ）：
【００５２】
【化３０】
0003616599.tif 000014
【００５３】
〔式中、Ａ及びＲ１は、前記と同義である〕で示される化合物に変換し、
この式（ＶＩＩＩ）の化合物を、次にアルカリ媒体中での接触水素化により式（ＩＸ）：
【００５４】
【化３１】
0003616599.tif 000015
【００５５】
〔式中、Ａ及びＲ１は、前記と同義である〕で示される化合物に変換し、
この式（ＩＸ）の化合物を式（Ｘ）：
【００５６】
【化３２】
0003616599.tif 000016
【００５７】
〔式中、ｎ及びＲ２は、式（Ｉ）と同義である〕で示される化合物と反応させることにより、可能であれば脱保護後、式（Ｉ）の化合物を得て、
この式（Ｉ）の化合物を、場合により対応するＮ−オキシドに変換し、所望であれば、従来の精製法により精製し、所望であれば、従来の分離法によりその異性体に分離し、そして所望であれば、薬学的に許容しうる酸又は塩基との付加塩に変換することを特徴とする。
【００５８】
式（ＩＩ）の化合物は、対応する酸のベンジル化により得られる。
【００５９】
本発明の化合物は、新しいという事実に加えて、特に有用な薬理学的性質を有する。
【００６０】
これらは、他の凝固及び線溶系セリンプロテアーゼと比較するとトロンビンに関して顕著な選択性を示す、トリプシン関連セリンプロテアーゼの強力なインヒビターである。
【００６１】
よってこのような性質が、安定又は不安定狭心症、血栓由来の障害及び／又は血栓性合併症を引き起こす障害の治療において、心筋梗塞及び静脈又は動脈血栓の治療又は予防において、そしてまたアテローム動脈硬化、動脈炎、静脈疾患のような血管及び心血管疾患の合併症の治療において、並びにトロンビンの形成及び／又は活性が関係する全ての障害の治療において、これらを有用なものにしている。
【００６２】
これらは、血栓溶解薬による治療と関連しても同等に利用できる。
【００６３】
本発明はまた、活性成分として式（Ｉ）の化合物を、１つ以上の適切な不活性で非毒性の担体と一緒に含む医薬組成物にも及ぶ。本発明の医薬組成物としては、特に経口、非経口（静脈内又は皮下）又は鼻内投与に適したもの、錠剤又は糖衣錠、舌下錠、ゼラチンカプセル剤、トローチ剤、坐剤、クリーム剤、軟膏剤、皮膚用ゲル剤、注射用調剤、飲用懸濁剤などに言及することができる。
【００６４】
有用な用量は、障害の性質と重篤度、投与経路、更には患者の年齢と体重に応じて適合させることができる。この用量は、１日に１回以上の投与を行って１〜５００ｍｇの間を変動する。
【００６５】
【実施例】
以下の実施例は、本発明を説明するものであるが、これを何ら限定するものではない。
【００６６】
使用される出発物質は、既知生成物であるか、又は既知の方法により調製される。
【００６７】
実施例に記述される化合物の構造は、通常の分光光度法（赤外吸収、ＮＭＲ、質量分析など）により決定した。
【００６８】
実施例１：（６Ｓ）−Ｎ−｛４−〔アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル〕ベンジル｝−３−〔（２，２−ジフェニルエチル）アミノ〕−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
無水ジメチルホルムアミド５０ｍｌ中の出願ＦＲ  ９９／０７５３８に記載される方法により得られた（６Ｓ）−３−〔（２，２−ジフェニルエチル）アミノ〕−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボン酸２．５ｍｍｏｌに、Ｓｙｎｔｈ．  Ｃｏｍｍ．（２８（２３），  ４４１９−４４２９，  １９９８）に記載される方法により得られた４−（アミノメチル）−Ｎ′−ヒドロキシベンゼンカルボキシミドアミド塩酸塩０．９ｇ、ジイソプロピルエチルアミン１．３ｍｌ及びヒドロキシベンゾトリアゾール０．４ｇを加えた。溶解後、Ｏ−ベンゾトリアゾリル−テトラメチルイソウロニウム  テトラフルオロホウ酸塩０．９ｇを加え、全体を一晩撹拌した。濾過及び溶媒の留去後、残渣を酢酸エチルにとった。有機相を洗浄し、乾燥し、濾過して溶媒を留去した。溶離液として９５／５のジクロロメタン／メタノール混合物を使用するシリカゲルのクロマトグラフィーによる残渣の精製後に、目的生成物を固体の形で得た。
質量スペクトル：〔ＭＨ〕＋  ｍ／ｚ＝５２２
【００６９】
実施例２：（６Ｓ）−Ｎ−｛４−〔アミノ（ヒドロキシイミノ）メチル〕ベンジル｝−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
目的生成物は、（６Ｓ）−３−〔（２，２−ジフェニルエチル）アミノ〕−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボン酸を（６Ｓ）−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボン酸で置換して、実施例１に記載される方法により得た。
【００７０】
0003616599.tif 000017
【００７１】
実施例３：（６Ｓ）−Ｎ−〔２−（｛〔アミノ（イミノ）メチル〕アミノ｝オキシ）エチル〕−３−〔（２，２−ジフェニルエチル）アミノ〕−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド二塩酸塩
工程Ａ：（６Ｓ）−Ｎ−〔２−（｛〔（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルイミノ）メチル〕アミノ｝オキシ）エチル〕−３−〔（２，２−ジフェニルエチル）アミノ〕−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
目的生成物は、４−（アミノメチル）−Ｎ′−ヒドロキシベンゼンカルボキシミドアミド塩酸塩をＮ−（２−アミノエトキシ）−Ｎ′，Ｎ″−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）グアニジンで置換して、実施例１に記載される方法により得た。
【００７２】
工程Ｂ：（６Ｓ）−Ｎ−〔２−（｛〔アミノ（イミノ）メチル〕アミノ｝オキシ）エチル〕−３−〔（２，２−ジフェニルエチル）アミノ〕−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド二塩酸塩
ジオキサン中の塩酸の４Ｍ溶液１０ｍｌを、無水ジクロロメタン２０ｍｌ中の上記工程に記載した化合物１．８ｍｍｏｌに加えた。全体を周囲温度で一晩撹拌した。溶媒の留去後、残渣を水にとった。この溶液を濾過して凍結乾燥し、目的生成物を得た。
質量スペクトル：〔Ｍ＋Ｈ＋〕  ｍ／ｚ＝４７５
【００７３】
以下の実施例は、対応する出発物質を使用して、実施例１に記載される方法により調製した。
【００７４】
実施例４：（６Ｓ）−４−オキソ−Ｎ−〔（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ〔２，３−ｃ〕ピリド−５−イル）−メチル〕−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
実施例５：（６Ｓ）−４−オキソ−Ｎ−〔（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ〔４，５−ｃ〕ピリド−６−イル）−メチル〕−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
実施例６：（６Ｓ）−４−オキソ−Ｎ−〔（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−イル）メチル〕−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
実施例７：（６Ｓ）−４−オキソ−Ｎ−〔（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）メチル〕−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
実施例８：（６Ｓ）−４−オキソ−Ｎ−〔（３−オキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾオキサジン−８−イル）メチル〕−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
実施例９：（６Ｓ）−４−オキソ−Ｎ−〔４−オキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，３−ベンゾオキサジン−８−イル）メチル〕−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
実施例１０：（６Ｓ）−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−Ｎ−〔２−（２−ピリジルメトキシ）ベンジル〕−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
実施例１１：（６Ｓ）−Ｎ−｛２−〔（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）メチル〕ベンジル｝−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
実施例１２：（６Ｓ）−Ｎ−｛２−〔（２，４−ジオキソ−１，３−チアゾリジン−５−イル）オキシ〕ベンジル｝−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
実施例１３：（６Ｓ）−４−オキソ−Ｎ−｛２−〔（５−オキソ−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）オキシ〕ベンジル｝−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
実施例１４：（６Ｓ）−４−オキソ−Ｎ−｛２−〔（２−オキソ−３−ピロリジニル）オキシ〕ベンジル｝−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
実施例１５：（６Ｓ）−Ｎ−〔２−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イルメトキシ）ベンジル〕−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
実施例１６：（６Ｓ）−Ｎ−〔２−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルメトキシ）ベンジル〕−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
実施例１７：（６Ｓ）−Ｎ−〔３−アミノ−１，２−ベンゾイソオキサゾール−６−イル）メチル〕−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
実施例１８：（６Ｓ）−Ｎ−〔１Ｈ−インドール−６−イルメチル）−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
実施例１９：（６Ｓ）−Ｎ−〔３−イソキノリニルメチル）−４−オキソ−３−｛〔２−（２−ピリジル）エチル〕アミノ｝−４，６，７，８−テトラヒドロピロロ〔１，２−ａ〕ピラジン−６−カルボキサミド
【００７５】
本発明の化合物の薬理学的試験
実施例Ａ：トロンビン及び線溶系セリンプロテアーゼの阻害
ヒトトロンビン（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、比活性３２３０ＮＩＨ単位／ｍｇ）に及ぼす本発明の生成物の阻害活性のインビトロ評価のために、精製ヒトフィブリノーゲン（４ｍＭ、スターゴ（Ｓｔａｇｏ））（Ｆｇ）を、前もって試験すべきインヒビターと共に（又はインヒビターなしで）インキュベート（２０℃、１０分）した所定量のトロンビン（０．７ｎＭ）に加えた。
【００７６】
プラスミンに関する本生成物の選択性のインビトロ評価のために、基質としてパラニトロアニリド含有ペプチド：＜Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ｐＮＡ（０．５０ｍＭ、Ｓ２４０３、カビ（Ｋａｂｉ））を使用して、精製ヒトプラスミン（２ｎＭ、スターゴ（Ｓｔａｇｏ））に対して同じプロトコールを適用した。
【００７７】
インヒビター、酵素及び基質は、同じ緩衝液（０．０１ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．４、０．１２Ｍ塩化ナトリウム及び０．０５％ウシ血清アルブミンを含む）に希釈し、次に５０μｌの容量でポリスチレンマイクロタイタープレートに分配した。
【００７８】
トロンビンにより、又はセリンプロテアーゼの作用によって放出したパラニトロアニリドにより生成したフィブリンを、２０℃で１５〜３０分の反応後に分光光度法により４０５ｎｍで測定した。
【００７９】
本試験において、特に生成物なしの対照と比較したトロンビンの酵素活性を５０％阻害する濃度（ｎＭ）（ＩＣ５０）が、実施例１の化合物では１４１ｎＭ、実施例２の化合物では３１３ｎＭ、実施例３の化合物では４ｎＭ、実施例１０の化合物では１３６ｎＭ、実施例１５の化合物では１２ｎＭ、実施例１７の化合物では１４０ｎＭ、そして実施例１８の化合物では２２ｎＭであることを証明した。
【００８０】
本発明の化合物は更に、他の線溶系セリンプロテアーゼ（プラスミン、ｔＰａ及びｕＰａ）と比較して、トロンビンに関して非常に選択的であった。
【００８１】
実施例Ｂ：抗凝固活性、ヒトにおけるトロンビン時間及び活性化ケファリン時間の測定
本発明の化合物の抗凝固活性を評価するために、トロンビン時間（ＴＴ）及び活性化ケファリン時間（ＡＣＴ）をヒト血漿試料において測定した。ＳＴ４凝固計を使用した。血小板欠乏血漿を凍結乾燥して、蒸留水にとった。ＴＴは、試薬のトロンビンプレスト（Ｔｈｒｏｍｂｉｎｅ  Ｐｒｅｓｔ）を使用して得て、ＡＣＴは、試薬のケファリンＰＴＴオートメート（Ｃｅｐｈａｌｉｎｅ  ＰＴＴ  Ａｕｔｏｍａｔｅ）を使用して得た。インヒビター又は溶媒（１０μｌ）を血漿（９０μｌ）に加え、次にこれを３７℃で２分間インキュベートした。トロンビンプレスト（ＴＴ）又はケファリンＰＴＴオートメート（ＡＣＴ）１００μｌを加え、同時にタイマーを起動した。
【００８２】
このような条件下で、ＴＴは、ほぼ１８秒程度であり、ＡＣＴは、ほぼ１２秒程度であった。アンタゴニストの活性は、対照に対してのＴＴ及びＡＣＴに対する延長能により評価した。インヒビターの効果は、凝固時間を二倍にする濃度（μＭ）（Ｃｔｔ２）により表現される。
【００８３】
本発明の化合物は、凝固時間の非常に有意な延長を引き起こしたが、幾つかのＣｔｔ２を、一例として以下の表１に示した：
【００８４】
【表１】
0003616599.tif 000018
【００８５】
医薬組成物の例：
それぞれ活性成分１０ｍｇを含む錠剤１０００錠の調製のための処方：
実施例１の化合物                                    １０ｇ
ヒドロキシプロピルセルロース                          ２ｇ
コムギデンプン                                      １０ｇ
乳糖                                              １００ｇ
ステアリン酸マグネシウム                              ３ｇ
タルク                                                ３ｇ