【手続補正書】
【提出日】令和3年3月19日(2021.3.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
放射線架橋構造を有するハイドロゲル粒子に標識プローブ又は薬学的に活性な物質を担持する医薬。
【請求項２】
前記ハイドロゲル粒子の粒径は、１〜７０ｎｍである、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
前記ハイドロゲル粒子の粒径は、１〜１０ｎｍである、請求項１に記載の医薬。
【請求項４】
前記ハイドロゲル粒子の平均粒径は、３０ｎｍ以下である、請求項１に記載の医薬。
【請求項５】
前記ハイドロゲル粒子の平均粒径は、５ｎｍ以下である、請求項１に記載の医薬。
【請求項６】
投与後に迅速に腎排泄させるための、請求項２〜５の何れか１項に記載の医薬。
【請求項７】
前記標識プローブの腎髄質での信号強度が、投与前の該信号強度に対して、投与後１時間以内に１０％以上増大し、投与後２時間以内に１０％以下の増加レベルになる、請求項６に記載の医薬。
【請求項８】
肝臓への蓄積無しにイメージ化又は治療を行なうための、請求項２〜７の何れか１項に記載の医薬。
【請求項９】
前記標識プローブの肝臓での信号強度が、投与前の該信号強度に対して、少なくとも投与後２時間まで１０％以上増加しない、請求項８に記載の医薬。
【請求項１０】
肝臓機能が低下している患者に用いる、請求項２〜９の何れか１項に記載の医薬。
【請求項１１】
細胞内に取り込まれて該細胞を標識又は該細胞に作用するための、請求項１に記載の医薬。
【請求項１２】
前記ハイドロゲル粒子の粒径が１ｎｍ〜５μｍである、請求項１１に記載の医薬。
【請求項１３】
前記ハイドロゲル粒子の粒径が１０〜２００ｎｍである、癌組織の標識又は抗癌治療のための、請求項１１に記載の医薬。
【請求項１４】
前記ハイドロゲル粒子の粒径が５００ｎｍ〜５μｍである、貪食細胞を標識するための、請求項１１に記載の医薬。
【請求項１５】
前記ハイドロゲルは、ゼラチン、コラーゲン、及びペプチドからなる群から選択される少なくとも１種の親水性ポリマーに由来する、請求項１〜１４の何れか１項に記載の医薬。
【請求項１６】
投与後、脳室への移行が無い、請求項１〜１５の何れか１項に記載の医薬。
【請求項１７】
前記標識プローブの脳室での信号強度が、投与前の該信号強度に対して、少なくとも投与後２時間まで５％以上増加しない、請求項１６に記載の医薬。
【請求項１８】
ＰＥＴイメージング剤、ＳＰＥＣＴイメージング剤、ＣＴ造影剤、又はＭＲＩ造影剤である、請求項１〜１７の何れか１項に記載の医薬。
【請求項１９】
細胞内に導入されるＭＲＩ造影剤である、請求項１８に記載の医薬。
【請求項２０】
細胞内に導入された際、ＭＲＩ装置で撮像されたＴ１強調画像法において水および生体組織において信号低下を生じさせない、請求項１９に記載の医薬。
【請求項２１】
細胞外液分布造影剤として用いられるＭＲＩ造影剤である、請求項２〜９の何れか１項に記載の医薬。
【請求項２２】
前記標識プローブが、Ｇｄ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｉ、Ａｕ、酸化鉄、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ、２９Ｓｉ、６２Ｃｕ、６８Ｇａ、８２Ｒｂ、１３Ｃ、１９Ｆ、３Ｈｅ、１２９Ｘｅ、１５Ｎ、１２３Ｉ又は９９ｍＴｃを含む、請求項１８〜２１の何れか１項に記載の医薬。
【請求項２３】
Ｇｄ、Ｍｎ、又はＦｅが、前記ハイドロゲル粒子に直接結合しているか、又はこれら原子の少なくとも１つの１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸モノ−Ｎ−ヒドロキシスクシニミドエステル（ＤＯＴＡ−ＮＨＳ−エステル）の錯体が前記ハイドロゲル粒子に結合している、請求項１８に記載の医薬。
【請求項２４】
請求項１〜２３の何れか１項に記載の医薬がイメージング剤であり、前記イメージング剤を、in vitroで、対象細胞と共培養して該細胞に該イメージング剤を取り込ませ、該細胞中の該イメージング剤からの信号を検出し、画像化する、細胞イメージング方法。
【請求項２５】
請求項１〜２３の何れか１項に記載の医薬がイメージング剤であり、前記イメージング剤を取り込んでいる対象からの信号を検出し、画像化する、組織又は細胞のイメージング方法。
【請求項２６】
親水性ポリマーを含む水溶液に放射線を照射して、ハイドロゲル粒子を製造する方法であって、
該溶液中の溶存酸素濃度を調整し、且つ／又は特定の範囲の分子量を有する該親水性ポリマーを選択して、前記ハイドロゲル粒子の粒径を制御することを特徴とする、方法。
【請求項２７】
前記溶液中の溶存酸素濃度を０〜４０ｍｇ／Ｌの範囲で調整し、且つ／又は分子量１，０００〜１，０００，０００の範囲の前記親水性ポリマーから選択する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記親水性ポリマーは、デキストリン、デキストラン、キチン、キトサン、ゼラチン、コラーゲン、寒天、アガロース、ジェランガム、キサンタンガム、フィブリン、カラヤガム、カラギーナン、セルロース、スターチ、ペプチド、タンパク質および核酸からなる群から選択される天然高分子化合物、該天然高分子化合物をヒドロキシ低級アルキル基、又は低級アルコキシアルキル基で置換した誘導体、並びにポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、およびポリエチレングリコールからなる群から選択される合成高分子からなる群から選択される少なくとも１種を含む、請求項２６又は２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記放射線が、電子線、Ｘ線、及びγ線のいずれか１種、或いはこれらの混合放射線である、請求項１〜２８の何れか１項に記載の方法。
【請求項３０】
さらに、前記水溶液中の前記親水性ポリマーの濃度、前記放射線の線量、前記放射線の線量率、および／又は前記放射線の照射時の温度を調整することにより、前記ハイドロゲル粒子の粒径を制御する、請求項２６〜２９の何れか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記水溶液中の前記親水性ポリマーの濃度を０．０５〜５．０質量％に調整し、放射線の線量を０．０４〜１００ｋＧｙの範囲で調整し、前記放射線の線量率を、ガンマ線やX線の場合は０．1〜１０ｋＧｙ／ｈの範囲で、電子線の場合は０．０４〜５０ｋＧｙ／ｐａｓｓの範囲で調整し、前記放射線の照射時の温度を０〜７０℃の範囲で調整する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
分子量が５０，０００〜１，０００，０００の前記親水性ポリマーを選択し、前記溶液中の溶存酸素濃度を８〜４０ｍｇ／Ｌの範囲で調節し、前記水溶液中の前記天然高分子化合物又はその誘導体の濃度を０．０５〜５．０質量％に調整し、前記放射線の線量を０．１〜１００ｋＧｙの範囲で調整し、前記放射線の線量率をγ線又はＸ線では０．1〜１００ｋＧｙ／ｈの範囲で、電子線では０．０４〜５０ｋＧｙ／ｐａｓｓの範囲で調整し、前記放射線の照射時の温度を２５〜６０℃の範囲で調整し、必要に応じて限外ろ過フィルターにかけ、所望の粒径のゼラチンナノゲルを分取する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
分子量が１，０００〜５０，０００の前記親水性ポリマーを選択し、前記溶液中の溶存酸素濃度を８〜４０ｍｇ／Ｌの範囲で調節し、前記水溶液中の前記天然高分子化合物又はその誘導体の濃度を０．０５〜０．５質量％に調整し、前記放射線の線量を０．１〜１００ｋＧｙの範囲で調整し、前記放射線の線量率を０．1〜１０ｋＧｙ／ｈの範囲で調整し、前記放射線の照射時の温度を２５〜６０℃の範囲で調整する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
前記溶液中の溶存酸素濃度を３０〜４０ｍｇ／Ｌの範囲で調節する、請求項３０〜３３の何れか１項に記載の方法。
【請求項３５】
分子量が１，０００〜１０，０００の前記親水性ポリマーを選択する、請求項３０〜３４の何れか１項に記載の方法。
【請求項３６】
粒径が１〜１０ｎｍの放射線架橋構造を有するハイドロゲル粒子に、標識プローブ又は薬学的に活性な物質を担持する工程を含む、医薬の製造方法。
【請求項３７】
請求項２６〜３５の何れか１項に記載の方法で得られたハイドロゲル粒子に、標識プローブ又は薬学的に活性な物質を担持する工程を含む、医薬の製造方法。
【請求項３８】
前記イメージング剤は、ＭＲＩ造影剤であり、前記ハイドロゲル粒子にマクロ環型キレート剤を結合し、前記マクロ環型キレート剤に標識化合物を結合させて錯体を形成する、  請求項３６又は３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記マクロ環型キレート剤は、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸モノ−Ｎ−ヒドロキシスクシニミドエステル（ＤＯＴＡ−ＮＨＳ−エステル）であり、前記標識化合物は、Ｇｄである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
放射線架橋構造を有するハイドロゲル粒子であって、粒径が１〜１０ｎｍの粒子を含む水性組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６４】
（坦がんマウスの体内でのイメージング剤の集積及び排出の動態）
実施例１０で得られた平均粒径４．９ｎｍ、濃度５ｍＭのＭＲＩ造影剤を、２１．３ｇの坦がんマウスの静脈に３００μＬ注入し、体内での集積及び排出の様子をＭＲＩにより計測・撮像した。担がんマウスは、Colon26 s.c. Day9 modelを用いた。装置は、７テスラ前臨床用ＭＲＩおよび送受信バードケージコイルを用い、Ｔ１強調画像、Ｔ２強調画像、Ｔ１計算画像、Ｔ２計算画像を撮像した。
図５は、実施例１０で得られたＭＲＩ造影剤を担癌マウスに投与する前のＭＲＩのＴ１強調画像であり、信号強度を測定した各部位を枠で囲んでいる。図６は、実施例１０で得られたＭＲＩ造影剤を静脈投与する前、投与直後及び投与から１間後にＭＲＩ計測を行った際の腎臓付近のＴ１強調画像であり、図７は、担癌マウスに実施例１０で得られたＭＲＩ造影剤を静脈投与する前、投与直後及び投与から１間後にＭＲＩ計測を行った際の各部位（肝臓、腎臓皮質、腎臓髄質及び腫瘍部）の信号強度を示す。
これらの図に示すように、造影剤は腫瘍や肝臓には集積せず、投与直後腎臓に集積し、その後、２時間以内で腎排出され正常な値（複数回の投与で投与前の信号強度の１００〜１１０％）に戻ることが分かった。このことから、２時間後には投与された造影剤の大半の排出が終わったことが示唆される。