(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リン酸イオンを含有するｐＨ４〜１０の被処理水を、リン酸結合タンパク質構造遺伝子を導入した微生物が産生したリン酸結合タンパク質を担体に固定化してなるリン酸イオン吸着剤と接触させて、被処理水中のリン酸イオンをリン酸イオン吸着剤に結合させるリン酸イオン吸着工程と、
リン酸イオンを吸着したリン酸イオン吸着剤をｐＨ２〜４の溶離水と接触させて、リン酸イオン吸着剤に結合しているリン酸イオンを解離させるリン酸イオン脱離工程と、
を含む被処理水からリン酸イオンを回収する方法。
【請求項２】
前記リン酸結合タンパク質構造遺伝子を導入した微生物は、Pseudomanas aeruginosa PA01である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記担体は、グラフト化側鎖を有するポリマー担体である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記リン酸イオン脱離工程において用いる溶離水を前記リン酸イオン吸着工程において用いる被処理水よりも少量として、濃縮されたリン酸イオン水溶液を得ることを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
リン酸結合タンパク質構造遺伝子を導入した微生物が産生したリン酸結合タンパク質を担体に固定化してなるリン酸イオン吸着剤を充填した接触装置と、リン酸イオンを含有するｐH４〜１０の被処理水を貯留する被処理水貯留槽と、ｐH２〜４の溶離水を貯留する溶離水貯留槽と、該被処理水貯留槽から該接触装置にリン酸イオンを含有する被処理水を流すように該被処理水貯留槽と該接触装置とを連結する被処理水用の配管と、該溶離水貯留槽から該接触装置に溶離水を流すように該溶離水貯留槽と該接触装置とを連結する溶離水用の配管と、該接触装置にてリン酸イオンが除去された処理水を流すように該処理装置の下流側に連結されている配管と、を具備する被処理水からリン酸イオンを除去するための装置。
【請求項６】
さらに、前記接触装置の下流側に連結されている配管には、前記接触装置からの処理水中のリン酸イオン濃度を検出するための測定器が設けられている、請求項５に記載の装置。
【請求項７】
前記リン酸結合タンパク質構造遺伝子を導入した微生物は、Pseudomanas aeruginosa PA01である、請求項５又は６に記載の装置。
【請求項８】
前記担体は、グラフト化側鎖を有するポリマー担体である、請求項５〜７のいずれか１項に記載の装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、リン酸イオン吸着剤、リン酸イオンの除去装置、リン酸イオンの除去方法及びリン酸イオン濃縮水の製造方法に関し、特に、リン酸イオンと結合することができるリン酸結合タンパク質を用いるリン酸イオン吸着剤、リン酸イオンの除去装置、リン酸イオンの除去方法及びリン酸イオン濃縮水の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
湖沼や内湾などの閉鎖水域において、富栄養化が問題となっている。富栄養化は、水中の有機物、窒素、リン酸イオン、ビタミン、微量栄養塩類などの増加が契機となって藻類が異常増殖することである。なかでもリン酸イオンは藻類増殖の制限因子と言われており、富栄養化を防止するためにはこのような閉鎖水域に流入する排水中のリン酸イオンの量をできるかぎり削減することが最も効果的である。そのため、従来より排水中のリン酸イオンを除去する技術が開発されている。
【０００３】
リン酸イオンを除去する技術は、化学的リン酸イオン除去法と、生物学的リン酸イオン除去法とに大別される。しかし、化学的リン酸イオン除去法では、原水中のリン酸イオン濃度が低い場合には、例えば、湖沼水、河川水等を処理する場合には、除去すべきリン酸イオンの量に対して大過剰の薬剤の添加が必要となり、コストがかかる。特に、処理水中のリン酸イオン濃度を富栄養化の閾値と言われている0.02mg/l以下にまで低下させるためには、コストがかかる。
【０００４】
これに対して、生物学的リン酸イオン除去法では、リン酸イオン及び有機物を含む有機性排水から微生物を利用してリン酸イオンを除去するものである。
ここで、微生物のポリリン酸合成代謝系の概要を説明する。微生物は、体外のリン酸イオンを体内に取り込み、次いで、ポリリン酸イオンに変換して体内に蓄積することができる。また、微生物は、その逆に、体内に蓄積したポリリン酸イオンをリン酸イオンに変換することもできる。変換されたリン酸イオンは、体外に放出することもできるし、体内で利用することもできる。
【０００５】
微生物には、体外のリン酸イオンを体内に取り込むためのリン酸イオン能動輸送系がある。リン酸イオン能動輸送系には、リン酸イオンに対する親和性が相対的に低いＰＩＴ(Phosphate Inorganic Transport)系と、リン酸イオンに対する親和性が相対的に高いＰＳＴ(Phosphate Specific Transport)系の２つがある。ＰＳＴ系は、リン酸イオンが欠乏した環境で発現することが多い。
【０００６】
そして、微生物は、ポリリン酸キナーゼの働きにより、体内のリン酸イオンをポリリン酸イオンに変換して、蓄積する。ポリリン酸イオンは糖代謝などにおけるエネルギー供給物として利用される。一方、ポリリン酸イオンは、ポリフォスファターゼによる加水分解を受け、リン酸イオンを解離する。なお、ポリリン酸キナーゼは、リン酸イオンをポリリン酸イオンに変換する酵素である。
【０００７】
生物学的リン酸イオン除去法としては、活性汚泥法、嫌気好気法、フォストリップ法などが知られている。
嫌気好気法では、まず、リン酸イオンを含有する有機性排水を微生物の存在下、嫌気条件で、例えば、３５℃に保持する。高速で行うときには、メタン発酵により、５０〜５５℃に保持する。嫌気条件では、微生物は体内に蓄積していたポリリン酸を消費することになり、必要な量のポリリン酸のみを体内に残存させる。
【０００８】
次いで、その有機性排水を曝気槽内でエアレーションし、好気条件にする。通常は、２０℃にする。これにより、活性汚泥中の微生物は、有機性排水中のリン酸イオンを体内に取り込み、ポリリン酸を蓄積させる。一度、嫌気条件で微生物を飢餓状態にしているので、好気条件では、多量のポリリン酸を蓄積することができるようになる。最後に、リン酸イオン含有率が高い活性汚泥を余剰汚泥として系外に排出する。
【０００９】
フォストリップ法では、上記した嫌気好気法などの方法により、リン酸イオン含有率が高い活性汚泥を得て、この活性汚泥から強制的にリン酸イオンを放出させ、これを凝集沈殿法または晶析法などの化学的リン酸イオン除去法によって除去する。
【００１０】
一方、有機物濃度の低い排水や、活性汚泥で有機物を除去した二次処理水からリン酸イオンを除去するためには、凝集沈殿法または晶析法などの化学的リン酸イオン除去法が用いられてきた。
【００１１】
生物学的リン酸イオン除去法ではリン酸イオンと有機物とを同時に除去することができ、処理水中のリン酸イオン濃度も0.1mg/l以下まで達成できる。しかし、原水中のリン酸イオン濃度と有機物濃度の割合が活性汚泥のリン含有率によって決定される一定範囲に保持されている必要があり、有機物に対してリン酸イオンが過剰な場合はリン酸イオンを除去しきれないという問題がある。
【００１２】
米国特許第５，７９２，６５０号には、リン酸結合タンパク質、ポリリン酸キナーゼの遺伝子及びそれにより遺伝子組み替えした微生物が記載されている。この遺伝子組み換え体では、ポリリン酸キナーゼ構造を含むDNA断片と自己増殖能を持つベクターDNA断片とを保有する新規プラスミドを含有するベクターを用いて形質転換されている。この遺伝子組み換え体では、ポリリン酸イオンを大量に蓄積することができるので、遺伝子組み換え体を活性汚泥に添加することによって、遺伝子組み換え体を常に優占化させることにより、排水中の有機物およびリン酸イオンを安定的に高効率で除去することができる。米国特許第５，７９２，６５０号の全ての開示は、本願に援用される。
【００１３】
しかし、この米国特許には、微生物からタンパク質を抽出することは記載されていない。また、有機物濃度が極めて低い、又は、ほとんど有機物が存在しない原水では、遺伝子組み換え体を増殖させるために、有機物を添加する必要がある。
【００１４】
ポリリン酸蓄積細菌として単離された細菌を固定化したカラムを用いて、有機物濃度が極めて低い原水からリンを除去する方法（特開平07-88498）も開発されている。しかし、この場合には固定化された菌体の活性を維持するために、菌体固定化カラムに定期的に基質となる有機物を供給する必要がある。また、特開平07-88498で用いられている細菌は、発明者が知る限り、ポリリン酸蓄積菌として単離されている唯一の細菌であるが、原水中のリン酸イオン濃度が湖沼水・河川水中程度に低い場合には、さらにリン酸イオンを吸収することはできない。
【００１５】
【発明が解決しようとする課題】
以上のように、有機物濃度が低く、かつリン酸イオン濃度も低い原水に対しては、従来、有効なリン酸イオン除去技術が確立されていなかった。一方、リン酸イオンは農作物の肥料として必須の成分であり、将来枯渇が心配されている資源でもある。湖沼水や河川水からリンを経済的にリン酸イオンを回収することができれば、富栄養化の防止とリン資源の供給が同時に達成できる。
【００１６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、リン酸結合タンパク質の高いリン酸イオン認識能力を利用して、低濃度のリン酸イオンを特異的に吸着除去できることを見い出し、本発明を完成するに至った。
【００１７】
即ち、本発明の第１の側面では、リン酸イオンと結合することができるリン酸結合タンパク質と；前記リン酸結合タンパク質を固定するための担体と；を有することを特徴とするリン酸イオン吸着剤が提供される。
【００１８】
本発明において、前記担体が、リン酸結合タンパク質に化学結合、特に共有結合しているポリマーを含むことが好ましい。
本発明の第２の側面では、被処理水を上記吸着剤に接触させるための接触装置と、前記接触装置に被処理水を供給するためのポンプと、を有することを特徴とするリン酸イオン除去装置が提供される。
【００１９】
本発明の第３の側面では、リン酸結合タンパク質と、前記リン酸結合タンパク質を固定するための担体と、を有するリン酸イオン吸着剤を設ける工程と；リン酸イオンを含有する被処理水を前記吸着剤に接触させ、リン酸イオンを前記吸着剤に結合させる工程と；を有することを特徴とするリン酸イオンの除去方法が提供される。
【００２０】
本発明において、吸着剤に結合しているリン酸イオンを解離するために十分なｐＨを有する溶離水を、前記吸着剤に接触させ、前記吸着剤に結合しているリン酸イオンを解離させる工程を更に有することが好ましい。
【００２１】
本発明の第４の側面では、リン酸結合タンパク質と、前記リン酸結合タンパク質を固定するための担体と、を有するリン酸イオン吸着剤を設ける工程と；リン酸イオンを含有する被処理水を前記吸着剤に接触させ、リン酸イオンを前記吸着剤に結合させる工程と；吸着剤に結合しているリン酸イオンを解離するために十分なｐＨを有する溶離水を、前記吸着剤に接触させ、前記吸着剤に結合しているリン酸イオンを解離させる工程と；有するリン酸イオン濃縮水の製造方法が提供される。
【００２２】
【発明の実施の形態】
本発明の第１の側面では、リン酸結合タンパク質を担体に固定する。ポリリン酸蓄積細菌を担体に固定するのと比較して、取扱いが容易であり、原水中の有機物濃度に依存することとなく、原水中のリン酸イオンを除去することができる。また、原水中のリン酸イオンが低い場合であっても、好適にリン酸イオンを除去することができる。
リン酸結合タンパク質
本明細書において、リン酸結合タンパク質とは、リン酸イオンと結合することができるタンパク質をいう。リン酸結合タンパク質は、リン酸イオンと特異的に結合することができるものであることが好ましい。
【００２３】
リン酸結合タンパク質は、一般的には、微生物などがリン酸イオンを特異的に選択して細胞内に輸送するシステム、特に上記ＰＳＴ系の一部をなす。大腸菌ではPstSタンパク質とも呼ばれ、細胞内膜と外膜の間に存在するペリプラズム領域に生産されることが知られている。リン酸結合タンパク質は、グラム陰性細菌に共通している構造であり、保存されている。また、高温菌中のリン酸結合タンパク質は、通常の微生物よりも高温に耐えられる。
【００２４】
本発明に用いるリン酸結合タンパク質は、リン酸結合タンパク質を生産する如何なる微生物から抽出し、次いで、精製したものでもよく、リン酸結合タンパク質構造遺伝子を導入した組換え体でもよい。本発明者らは後に示すように、大腸菌のリン酸結合タンパク質構造遺伝子（pstS）を導入したPseudomonas aeruginosa PAO1（Holloway,B.W., V.Krishnapillai,  and A.F. Morgan. 1979. Chromosomal genetics of Pseudomonas. Microbiological Review, 43:73-102）からリン酸結合タンパク質を精製し、これがリン酸吸着能を発揮することを確認している。リン酸結合タンパク質は菌体から抽出後、精製して用いても良いが、殺菌後の菌体を適正に処理して菌体のままリン酸結合タンパク質を固定しても良い。
担体
本発明では、担体(carrier)は、リン酸結合タンパク質を固定することができる限り、何ら制限はない。酵素等のタンパク質の固定化に利用できる担体を本発明でも、好適に用いることができる。
【００２５】
担体は、ポリマーであることが好ましく、有機ポリマーでも無機ポリマーでも良い。有機ポリマーは、天然ポリマーでも、合成ポリマーでもよい。
種々の担体を用い得るが、担体として備えているべき望ましい特性は、例えばＰｕｒｅ  ａｎｄ  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．ｖｏｌ．６７，Ｎｏ．４，ｐｐ．５９７〜６００（１９９５）に記載されているものが参考にできる。すなわち、担体は、下記の条件を満たすことが好ましい：
i.使用される条件下で不溶性である；
ii.固定化容量が大きい；及び
iii. 化学的に安定（ｉｎｅｒｔ）で、機械的強度が強い。
【００２６】
本発明における担体は、リン酸結合タンパク質を固定化する方法などに応じて適宜選定される。担体は、リン酸結合タンパク質を固定化するのに適した官能基を持っていることが好ましい。担体がスペーサを有し、このスペーサにこのような官能基が設けられていてもよい。
（１）有機ポリマーからなる担体
有機ポリマーとしては、天然有機ポリマーでもよいし、合成有機ポリマーでもよい。合成ポリマーは、吸着剤を膜、網、球状体のような形状に加工するためには有利な場合がある。
（１−１）合成有機ポリマーからなる担体
合成有機ポリマーとしては、ポリエチレン、ポリプロピレンなどのポリオレフィン類；ポリエチレンオキサイド、ポリプロピレンオキサイドなどのポリエーテル類；ポリアクリロニトリル；ポリアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸エステル、特にポリ（ヒドロキシエチル）メタクリル酸エステル、ポリアクリル酸アミドなどのポリアクリル酸誘導体類又はポリメタクリル酸誘導体類；ポリスチレン；ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、エチレン酢酸ビニル共重合体、ポリ酢酸ビニルスチレンなどのビニル共重合体類などのビニルポリマー類；ポリエステル類、ポリアミド類、ポリイミド類などの縮合重合体などを挙げることができる。
（１−２）天然有機ポリマーからなる担体
天然有機ポリマーとしては、従来からゲルろ過、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィーなどの担体を構成するのに使用されている天然有機ポリマーないし変成天然有機ポリマーを用いることができる。これらを例示すると、セルロース、アガロース、グルコマンナン、キトサン、プルラン、澱粉、デキストランなどが挙げられる。従来アフィニティクロマトグラフィー用などの担体は、これらの天然有機ポリマーの多孔性球状体として加工されている。
【００２７】
これに対し、繊維状や膜状に加工可能な素材としては、木綿繊維、麻繊維などを構成するセルロース、羊毛繊維や絹繊維などを構成する線状タンパクなどの天然有機ポリマーが挙げられる。
【００２８】
これらの天然有機ポリマーには、水酸基、アミノ基等の官能基が含まれているので、このような官能基とリン酸結合タンパク質とをカップリングさせることにより、リン酸結合タンパク質を固定することができる。
（２）無機ポリマーからなる担体
無機ポリマーとしては、ケイ素樹脂（シリコーンともいわれる。）が挙げられる。直鎖状ケイ素樹脂を幹とするポリマーを活性化するためには、例えばケイ素樹脂の主鎖を構成するケイ素化合物をヒドロシリル化ケイ素とするか、枝別れ部にヒドロシリル化ケイ素を構成単位として有するシリコーンを用い、これにエピクロルヒドリンを作用させてヒドロシリル化ケイ素の部分をエポキシ活性化してエポキシ活性化シリコーンとする方法が挙げられる。
（３）担体の好ましい加工形態
担体は、使用目的に応じて、繊維状、膜状や球状に成形・加工して用いることができる。また、繊維状の担体を種々のメッシュの網状に加工して使用することもできる。さらにまた、繊維状、膜状あるいは球状の担体を多孔性にすることもできる。これら担体は、他の金属やセラミックス、その他の材料からなる支持体や骨材等に保持されて用いられても良い。
【００２９】
ポリマーの主鎖からグラフト鎖を分岐し、それらグラフト鎖に設けた活性点（結合用の官能基）を利用してリン酸結合タンパク質を担体に結合してもよい。
（４）ポリマー担体のグラフト化
有機ポリマー又は無機ポリマーからなる担体の場合には、担体に適当な官能基（例えば、カルボキシル基またはアミノ基）を有するグラフト鎖を付加して、グラフトポリマー化し、次いで、リン酸結合タンパク質を固定化してもよい。
【００３０】
前記ポリマー担体にグラフト鎖を付加するための活性点を設ける方法としては、電離性放射線を照射する処理、１種または２種以上の酸化剤による酸化処理等の一般に用いられる方法を利用することができるが、特に線源として電子線またはコバルト６０等の放射性物質を用いる電離性放射線照射法が好ましい。ビニル重合法によって担体を合成する場合には、共重合性モノマーを混合して共重合し、担体ポリマの側鎖にビニル基からなる活性点を設ける方法もある。また、グラフト重合法としては液相グラフト重合法、気相グラフト重合法等を用いることができるが、モノマーを気体状態として担体に接触させる気相グラフト重合法が一般的に好ましい。
【００３１】
前記のグラフト化においては、それより形成されるグラフト鎖にスペーサとしての役割を持たせることができる。特に、グラフト鎖を十分に長くし、流体の流れや物質の濃度勾配等の条件に対応してグラフト鎖を動き得るようにすると、固定化されたリン酸結合タンパク質とリン酸イオンと接触確率を大きくすることができる。
【００３２】
ポリマー担体に配置されたグラフト鎖の途中あるいは末端にリン酸結合タンパク質の固定化のために設ける官能基は、リン酸結合タンパク質分子上の官能基の種類と様式に従って、最適化される。例えば、前記グラフト化側鎖にカルボキシル基（またはアミノ基）を設置しておくと、リン酸結合タンパク質のアミノ基（またはカルボキシル基）を使って、カルボジイミド法により安定なペプチド結合を構築することができる。
リン酸結合タンパク質の固定化
リン酸結合タンパク質は、担体の性状に合わせて包括、練り込み、非特異的吸着、共有結合などにより、担体に固定化することができる。
【００３３】
リン酸イオン吸着剤の使用環境下で、リン酸結合タンパク質が遊離しないように、リン酸結合タンパク質を担体に固定することが好ましく、化学結合により担体に固定することが更に好ましく、共有結合で担体に固定することが更になお好ましい。
【００３４】
リン酸結合タンパク質をポリマー担体に結合するために、スペ−サ−を予め担体側に設けておき、次いで、このスペ−サ−末端にリン酸結合タンパク質を固定化することもできる。一方、リン酸結合タンパク質の選ばれた活性点にスペ−サ−を取り付けておき、このスペーサ−を介して担体に固定化することもできる。
【００３５】
ポリマー担体のグラフト鎖を介してリン酸結合タンパク質に固定するときには、グラフト鎖としては、例えば直鎖状のメチレン（−ＣＨ2−）鎖やオキシエチレン（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2−）鎖等を有利に用いることができる。ポリマー骨格に設けた活性点、ポリマー骨格から分岐されたグラフト鎖上に設けた活性点などで使用可能な官能基としては、例えば二重結合、三重結合、水酸基、アミノ基、エポキシ基、グリシジル基、イソシアネート基、アルデヒド基、カルボキシル基、アリル基等を挙げることができる。また、無機ポリマー担体における活性点としてはシリコーン樹脂におけるヒドロシリル基を挙げることができる。これらの官能基を用いるカップリング反応については、次に説明する。
リン酸結合タンパク質と担体とのカップリング反応
リン酸結合タンパク質と担体とは、図２及び図３に示すような公知のカップリング法を用いて、固定することができる。図２及び図３に示すカップリング方法は、Ｖ．Ｐ．Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ：Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｉｒｙ  Ｒｅｖ．，１，４１（１９８７）、及び、社団法人日本化学会編「第４版  実験化学講座２９  高分子材料」、丸善株式会社  平成５年９月２５日発行に詳細に記載されている。
【００３６】
例えば、アミノ基とカルボキシル基とのカップリング反応で固定化する場合には、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドのようなカルボジイミド縮合剤を用いて固定化することができる。
【００３７】
例えば、アミノ基と水酸基とのカップリング反応で固定化する場合には、末端水酸基を過ヨウ素酸酸化により末端アルデヒド基とし、末端アミノ基を有する低分子薬理化合物を作用させてシッフベース結合を生成し、シッフベース結合を還元して化学的に安定な炭素−窒素（−ＣＨ2−ＮＨ−）結合として結合することができる。
【００３８】
以下、活性化エステル法（Ａ．Ｅ．ＫＡＲＵｅｔａｌ．：Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．42 301−309（１９９４））及び混合酸無水物法（Ｂ．Ｆ．Ｅｒｌａｎｇｅｒｅｔａｌ．：Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．234 1090‐1094（1954））によるカップリング反応を説明する。
【００３９】
活性化エステル法は、一般に以下のように行うことができる。まず、リン酸結合タンパク質を有機溶媒に溶解し、カップリング剤の存在下にてＮ−ヒドロキシこはく酸イミドと反応させ、Ｎ−ヒドロキシこはく酸イミド活性化エステルを生成させる。
【００４０】
カップリング剤としては、縮合反応に慣用されている通常のカップリング剤を使用でき、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、カルボニルジイミダゾール、水溶性カルボジイミド等が含まれる。有機溶媒としては、例えば、ジメチルスルホキシド（以下、「ＤＭＳＯ」と言う）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジオキサン等が使用できる。反応に使用するリン酸結合タンパク質とＮ−ヒドロキシこはく酸イミドのモル比は好ましくは１：１０から１０：１、より好ましくは１：１から１：１０、最も好ましくは１：１である。反応温度は、０℃から１００℃、好ましくは５℃から５０℃、より好ましくは２２℃から２７℃で、反応時間は５分から２４時間、好ましくは３０分から６時間、より好ましくは１時間から４時間である。反応温度は各々の融点以上沸点以下の温度で行うことができる。
【００４１】
カップリング反応後、反応液をポリマーを溶解した溶液に加え反応させると、例えばポリマーが遊離のアミノ基を有する場合、当該アミノ基とリン酸結合タンパク質のカルボキシル基の間に酸アミド結合が生成される。反応温度は、０℃から６０℃、好ましくは５℃から４０℃、より好ましくは２２℃から２７℃で、反応時間は５分から２４時間、好ましくは１時間から１６時間、より好ましくは１時間から２時間である。反応物を、透析、脱塩カラム等によって精製して、リン酸結合タンパク質とポリマーとの結合体を得ることができる。
【００４２】
次に、混合酸無水物法について、説明する。混合酸無水物法において用いられる混合酸無水物は、カルボン酸とハロゲン蟻酸エステルとの反応により得られ、これをポリマーと反応させることにより目的とするリン酸結合タンパク質−ポリマー結合体が製造される。この反応は塩基性化合物の存在下に行われる。塩基性化合物としては、例えば、トリブチルアミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、Ｎ−メチルホルマリン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、ＤＢＮ、ＤＢＵ、ＤＡＢＣＯ等の有機塩基、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素ナトリウム等の無機塩基等が挙げられる。該反応は、通常マイナス２０℃から１００℃、好ましくは０℃から５０℃において行われ、反応時間は５分から１０時間、好ましくは５分から２時間である。得られた混合酸無水物とポリマーとの反応は、通常マイナス２０℃から１５０℃、好ましくは０℃から１００℃において行われ、反応時間は５分から１０時間、好ましくは５分から５時間である。混合酸無水物法は一般に溶媒中で行われる。溶媒としては、混合酸無水物法に慣用されているいずれの溶媒も使用可能であり、具体的にはジオキサン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン等のエーテル類、ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ヘキサメチルリン酸トリアミド等の非プロトン性極性溶媒等が挙げられる。混合酸無水物法において使用されるハロ蟻酸エステルとしては、例えばクロロ蟻酸メチル、ブロモ蟻酸メチル、クロロ蟻酸エチル、ブロモ蟻酸エチル、クロロ蟻酸イソブチル等が挙げられる。当該方法におけるリン酸結合タンパク質とハロ蟻酸エステルとポリマーの使用割合は、広い範囲から適宜選択され得る。
以下、本発明の一側面に係るリン酸イオンの除去装置及びリン酸イオンの除去方法について説明する。
【００４３】
本発明の一側面では、リン酸イオンを含有する被処理水を吸着剤に接触させ、リン酸イオンをこの吸着剤に結合させる。これにより、被処理水中のリン酸イオンを除去することができる。被処理水を吸着剤に接触させるときに、本発明の一側面に係るリン酸イオンの除去装置を用いることができる。
【００４４】
図１の実施態様では、リン酸イオンの除去装置１０は、被処理水を吸着剤２２に接触させるための接触装置２０と、充填装置に被処理水を供給するためのポンプ３０と、接触装置２０とポンプ２０とを連結する流路３８と、被処理水４２を貯留するための貯留槽４０と、貯留槽４０とポンプ３０とを連結する流路４８と、を有する。
【００４５】
図１の実施態様では、除去装置１０は、接触装置２０に溶離水を供給するためのポンプ５０と、ポンプ５０と流路３８とを連結する流路５８と、溶離水６２を貯留するための貯留槽６０と、貯留槽６０とポンプ５０とを連結する流路６８と、を有する。接触装置２０の下流には、流路２８が設けられ、流路２８には、処理水中のリン酸イオン濃度を検出するための測定器２６が設けられていることが好ましい。
【００４６】
貯留槽４０の内部の被処理水４２は、ポンプ３０の駆動力により、流路４８及び流路３８を通って、接触装置２０に導入される。そして、被処理水は、接触装置２０の内部に配置されている吸着剤２２に接触し、リン酸イオンが吸着剤２２に吸着される。その後、接触装置２０から流路２８を通って、処理水が排出される。
【００４７】
測定器２６により、処理水中のリン酸イオン濃度をモニターすることが好ましい。被処理水中のリン酸イオンは、吸着剤２２に吸着されるので、処理水中のリン酸イオンは低下している。その後、処理水中のリン酸イオン濃度が上昇し始めるときには、吸着剤２２のリン酸イオン吸着能力の限界に近くまで、リン酸イオンが吸着されて、飽和が近い可能性があるからである。
【００４８】
このような場合には、溶離水を吸着剤２２に流して、吸着剤２２を再生することが好ましい。貯留槽６０の内部の溶離水６２は、ポンプ５０の駆動力により、流路６８、流路５８、及び流路３８を通って、接触装置２０に導入される。そして、溶離水は、接触装置２０の内部に配置されている吸着剤２２に接触し、吸着剤２２に吸着されているリン酸イオンを溶離する。その後、接触装置２０から流路２８を通って、リン酸イオンを含む処理水が排出される。
【００４９】
接触装置２０は、吸着剤が被処理水に接触することができる限り、制限がない。接触装置２０としては、充填剤をハウジングの内部に充填した、充填塔、充填槽又はカラムを用いることができる。あるいは、接触装置２０として、フィルター要素として作用する布形状等の充填剤を内部に配置した濾過器等を用いることができる。例えば、担体が、球状等の粒状である場合などには、吸着剤を充填塔、充填槽、カラム等に充填してもよい。また、担体が、不織布等の布形状の場合には、被処理水が布形状の吸着剤を透過するように、吸着剤を充填槽内に充填してもよいし、フィルター要素として作用するように配置してもよい。
【００５０】
接触装置が濾過器である場合には、例えば、吸着剤を筒形状のフィルター要素として用いても良い。そして、被処理水を筒形状のフィルター要素の外側から内側又は内側から外側に透過させてもよい。あるいは、被処理水をフィルター要素に透過させることを目的とせず、フィルター要素が延びる方向と平行な方向に被処理水を流すという、クロスフローを行ってもよい。更に、フィルター要素を動かすという、いわゆる動的濾過(dynamic filtration)を行ってもよい。
【００５１】
図１では、被処理水を接触装置２０の上から下に流している。しかし、被処理水を充填装置に流す方向には、制限がない。例えば、被処理水を接触装置２０の下から上に流しても良いし、接触装置２０を横に倒して、横方向に流しても良い。
被処理水
本発明では、通常の微生物処理を行うことができる被処理水中のリン酸イオンを除去することができる。例えば、河川、湖沼等の水を処理することができる。また、食品工場から排出される廃水のように、高濃度のリン酸イオンが含まれている被処理水であってもよい。
【００５２】
被処理水には、マンガン、クロム、コバルト、ニッケル、モリブデン等の重金属、及び、砒素等の有毒物の濃度が小さいことが好ましい。これらの重金属又は有毒物は、廃水を河川等に放出することができる環境基準以下の濃度であることが好ましく、上水道の基準以下の濃度であることが更に好ましい。
【００５３】
被処理水中には、リン酸結合タンパク質を変性させない程度の有機溶媒が含まれていても良い。例えば、被処理水中に、１重量％以下の有機溶媒が含まれていても良い。もっとも、被処理水の有機溶媒の濃度は小さいことが好ましい。
【００５４】
被処理水中には、微量の界面活性剤、例えば、洗剤が含まれていても良い。例えば、下水に含まれている程度の濃度の洗剤が含まれていても良い。
ｐＨ
リン酸イオンを含有する被処理水を吸着剤に接触させるときには、リン酸結合タンパク質が被処理水中のリン酸イオンと結合することができるｐＨで用いることが好ましい。即ち、リン酸結合タンパク質がリン酸イオンを放出するｐＨは、好ましくない。
【００５５】
一般的には、被処理水のｐＨは、４ないし１０であることが好ましく、４．５〜９．５が更に好ましく、５ないし９が更になお好ましく、ｐＨ７前後がさらになお好ましい。
【００５６】
被処理水のｐＨが１０より大きい場合には、処理槽等に格別の配慮が必要になり、また、後段に中和処理が必要になって、システムが複雑化するからである。また、被処理水中には、カルシウムイオンが存在することも多いが、このような強アルカリ性の雰囲気では、不溶性のリン酸カルシウムが生成し、リン酸イオンとして取り込めなくなるので、好ましくない。
【００５７】
被処理水のｐＨが４より小さいときには、リン酸結合タンパク質によっては、リン酸を結合せず、逆に、リン酸結合タンパク質に結合しているリン酸イオンを放出する場合があるからである。
【００５８】
もっとも、被処理水のｐＨは、リン酸結合タンパク質に依存する。例えば、強酸性又は強アルカリ性で生存しうる微生物から抽出、精製されたリン酸結合タンパク質は、通常の微生物のリン酸結合タンパク質とは、異なるｐＨで作用しうる。従って、このようなリン酸結合タンパク質などでは、上記のｐＨ範囲に限定されない。
溶離
リン酸イオンを吸着剤中のリン酸結合タンパク質に結合させた後に、吸着剤に結合しているリン酸イオンを解離するために十分なｐＨを有する溶離水を、吸着剤に接触させ、吸着剤に結合しているリン酸イオンを解離させてもよい。例えば、溶離水としては、ｐＨが２〜４の水を用いることができる。
【００５９】
多量の被処理水を吸着剤に接触させ、リン酸イオンを吸着剤に結合させ、次いで、少量の溶離水を吸着剤に接触させることにより、リン酸イオンを濃縮することができる。例えば、リン酸イオンを５０倍以上に濃縮することができ、１００倍以上に濃縮することができ、１０００倍以上に濃縮することすらできる。例えば、１〜１０ｐｐｍのリン酸イオンを１０００ｐｐｍに濃縮することができる。このように濃縮されたリン酸イオン水溶液は、肥料等の原料として再利用することができる。
【００６０】
例えば、１００容量部の被処理水を吸着剤に接触させた後に、０．０００１〜１０容量部の溶離水を吸着剤に接触させることが好ましく、０．００１〜１容量部の溶離水を吸着剤に接触させることが更に好ましい。
その他の条件
リン酸イオンを含有する被処理水を吸着剤に接触させるとき又は吸着剤からリン酸イオンを解離させるときに共通の条件について、主に説明する。
【００６１】
リン酸イオンを含有する被処理水を吸着剤に接触させるときなどには、通常、大気圧で行うが、リン酸結合タンパク質が変性しない限り、高圧下であってもよいし、減圧下であってもよい。
【００６２】
被処理水又は溶離水の温度は、リン酸結合タンパク質が変性しない温度であることが好ましい。被処理水又は溶離水は、７０℃以下であることが好ましく、６０℃以下が更に好ましい。
【００６３】
被処理水又は溶離水は、０℃以上であることが好ましく、１０℃以上であることが更に好ましく、１５℃以上であることが更になお好ましい。１０℃より小さいときには、リン酸結合タンパク質がリン酸イオンに結合する速度又は遊離する速度が小さいからである。
【００６４】
リン酸イオンを吸着した吸着剤からリン酸イオンを解離させるときの溶離水の温度は、被処理水を吸着剤に接触させるときの被処理水の温度より低いことが好ましい。リン酸イオンを素早く除去することが求められる場合には、４０℃〜７０℃、例えば、５５℃程度の高温の被処理水を吸着剤に接触させてもよい。高熱性細菌のリン酸結合タンパク質を含む吸着剤では、７０℃以上でも用いることができる場合があり得る。これに対して、溶離水は、何ら温度制御をしていない水、例えば、冬では、１０〜２０℃前後、夏では、１５〜２５℃前後の水をそのまま用いても良い。
【００６５】
リン酸イオンを吸着剤に吸着するとき、又は吸着剤から解離するときには、好気条件であっても、嫌気条件であってもよい。いずれの条件であっても、リン酸イオンを吸着又は解離することができるからである。
組換えリン酸結合タンパク質の製造
組換えリン酸結合ポリペプチドは、公知の方法で製造することができる。使用する宿主細胞に応じて選ばれた発現べクターに、哺乳動物、微生物、ウィルス、又は昆虫遺伝子等から誘導された、適当な転写又は翻訳調節ヌクレオチド配列に連結したリン酸結合タンパク質ＤＮＡ配列を挿入する。調節配列の例として、転写プロモーター、オペレーター、又はエンハンサー、ｍＲＮＡリボソーム結合部位、及び転写及び翻訳の開始及び終結を制御する適切な配列が挙げられる。加えて、リン酸結合タンパク質遺伝子に本来存在しない適切なシグナルペプチドをコードする配列を発現べクター内に組み込んでもよい。
【００６６】
リン酸結合ポリペプチドの発現に適する宿主細胞には、原核細胞、酵母又は高等真核細胞が含まれる。細菌、真菌、酵母、及び哺乳動物細胞宿主で用いる適切なクローニング及び発現べクターは、例えば、Ｐｏｕｗｅｌｓら，ＣｌｏｎｉｎｇＶｅｃｔｏｒｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，Ｅ１ｓｅｖｉｅｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ，（１９８５）に記載されている。
【００６７】
原核生物には、グラム陰性又はグラム陽性菌、例えば、大腸菌又は枯草菌が含まれる。大腸菌のような原核細胞内では、リン酸結合ポリペプチドは、原核細胞内でも組換えポリペプチドの発現を容易にするためにＮ末端メチオニン残基を含んでもよい。このＮ末端Ｍｅｔは、発現後に組換えリン酸結合ポリペプチドから切り離すことができる。
【００６８】
原核宿主細胞内で用いる発現べクターは、一般に１又は２以上の表現型選択可能マーカー遺伝子を含む。表現型選択可能マーカー遺伝子は、例えば、抗生物質耐性を付与するか又は独立栄養要求性を付与する遺伝子である。原核宿主細胞に適する発現べクターの例には、ｐＢＲ３２２（ＡＴＣＣ３７０１７）の如き市販のプラスミドまたはそれらから誘導されるものが含まれる。ｐＢＲ３２２は、アンピシリン及びテトラサイクリン耐性のための遺伝子を含有するので、形質転換細胞を同定するのが簡単である。適切なプロモーターおよびリン酸結合タンパク質ＤＮＡ配列が、このｐＢＲ３２２べクター内に挿入される。他の市販のべクターには、例えば、ｐＫＫ２２３−３（スェーデン、ウプサラのＰｈａｍａｃｉａＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａｌｓ）及びｐＧＥＭ１（米国、ウィスコンシン州、マジソンのＰｒｏｍｅｇａＢｉｏｔｅｃ）が含まれる。
【００６９】
原核宿主細胞用の発現べクターに普通に用いられるプロモーター配列には、β−ラクタマーゼ（ペニシリナーゼ）、ラクトースプロモータ一（Ｃｈａｎｇら，Ｎａｔｕｒｅ２７５：６１５，１９７８：及びＧｏｅｄｄｅｌら，Ｎａｔｕｒｅ２８１：５４４，１９７９）等が含まれる。特に有用な原核宿主細胞発現系は、ファージλＰLプロモーター及びｃ１８５７ｔｓ不耐熱性レプレッサー配列を用いる。λＰLプロモーターの誘導体を取り込んでいるアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションから入手できるプラスミドベクターには、プラスミドｐＨＵＢ２（大腸菌株ＪＭＢ９（ＡＴＣＣ３７０９２）内に存する）及びｐＰＬｃ２８（大腸菌ＲＰ１（ＡＴＣＣ５３０８２）内に存する）が含まれる。
【００７０】
また、リン酸結合タンパク質を酵母宿主細胞内で発現させてもよい。好ましくはサッカロミセス属（例えば、Ｓ．セレビシエ）を用いるが、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）又はクルイベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）の如き他の酵母の属を用いてもよい。酵母べクターは、２μ酵母プラスミドからの複製起点の配列、自律複製配列（ＡＲＳ）、プロモーター領域、ポリアデニル化のための配列、転写終結のための配列、及び選択可能なマーカー遺伝子を含有することが多い。酵母α因子リーダー配列を用いて、リン酸結合ポリペプチドの分泌を行わせることもできる。酵母宿主からの組換えポリペプチドの分泌を促進するのに適する他のリーダー配列も知られている。酵母を形質転換する方法は、例えばＨｉｎｎｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７５：１９２９，１９７８に記載されている。
【００７１】
哺乳動物又は昆虫宿主細胞培養系を用いて、組換えリン酸結合ポリペプチドを発現することもできる。哺乳動物起源の株化細胞系も用いることができる。哺乳動物宿主細胞発現べクターのための転写及び翻訳制御配列は、ウィルスゲノムから得ることができる。普通に用いられるプロモーター配列及びエンハンサー配列は、ポリオーマウィルス、アデノウィルス２等から誘導される。ＳＶ４０ウィルスゲノム、例えば、ＳＶ４０起点、初期及び後期プロモーター、エンハンサー、スプライス部位、及びポリアデニル化部位から誘導されるＤＮＡ配列を用いて、哺乳動物宿主細胞内での構造遺伝子配列の発現のための他の遺伝子要素を与えてもよい。哺乳動物宿主細胞内で用いるための発現べクターは、例えばＯｋａｙａｍａ及びＢｅｒｇ（Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２８０，１９８３）の方法で構築することができる。
【００７２】
本発明のリン酸結合タンパク質を産生する１つの方法は、リン酸結合タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含む発現べクターで形質転換した宿主細胞を、リン酸結合タンパク質が発現する条件下で培養することを含む。次いで、用いた発現系に依存して、リン酸結合タンパク質を培養培地又は細胞抽出液から回収する。組換えリン酸結合タンパク質を精製する操作は、用いた宿主細胞の型及びリン酸結合タンパク質が培養培地中に分泌されるかどうかといった要因に従って適宜選択するであろう。
【００７３】
【実施例】
以下、本発明について詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１
リン酸結合タンパク質の抽出及び精製
まず、微生物からリン酸結合タンパク質を抽出し、精製した。
【００７４】
Pseudomonas aeruginosa  PAO1をリン酸欠乏培地3.5リッターを用いて37℃で5時間培養した。培地としては、下記の組成の液体培地を用いた。
【００７５】
【表１】
0003709098.tif 000002
【００７６】
次いで、培地中の菌体を集菌した後、K.Poole and R.E.W.Hancockの論文（Eur. J. Biochem., Vol.144,p.607-612,1984）に従って精製した。すなわち、集めた菌体を30mMTris-HClバッファー（pH8.0）で洗浄し、30mlの50mM Tris-HCl、0.2M MgCl2バッファー（pH7.2）に懸濁した。コールドショック（30℃にて30分、次いで、氷水中にて15分、その後、室温にて15分放置）を行い、遠心後、上澄み（ペリプラズム画分）を得た。この操作をもう一度繰り返してペリプラズム画分を得た。合計60mlのペリプラズム画分を限外ろ過（分子量3万）して、次いで、10mlまで濃縮し、濃縮液を20mMTris-HClバッファー（pH7.4）で透析後、MonoQカラムにかけ、精製した。
リン酸吸着能の確認
精製したリン酸結合タンパク質と32Ｐ−リン酸を混合し、25℃15分静置した後、混合液をニトロセルロースフィルターでろ過した。10mMLiClでフィルターを洗浄し、フィルター上に残存している放射能を測定した。対照として牛血清アルブミンについても同様の操作を行った。
【００７７】
結果を図４に示す。ＰｓｔＳとは、リン酸結合タンパク質をいい、ＢＳＡとは、ウシ血清アルブミンをいう。
リン酸結合タンパク質では、ウシ血清アルブミンと異なり、放射能が測定されたので、リン酸結合タンパク質にはリン酸吸着能があることが確認できた。
リン酸結合タンパク質の固定化
精製したリン酸結合タンパク質5.6nmolを200mM Na2CO3、0.15MNaClバッファー（pH8.0）に対して透析した。次いで、得られたリン酸結合タンパク質を、1mlの市販されている固定化用担体（Ｎ−ヒドロキシこはく酸イミドで活性化されたSepharoseR、PharmaciaCo.）と混合し、次いで、4℃にて２４時間放置して、固定化した。その後、担体中の活性基をTrisバッファーでキャッピングし、リン酸イオン吸着剤を得た。対照として、4.7nmolの牛血清アルブミンについても同様の操作を行い担体に固定化した。
【００７８】
前記リン酸イオン吸着剤のうち0.35ml（リン酸結合タンパク質3.1nmol相当量）をとり常法に従い、直径５ｍｍ、長さ６０ｍｍのカラムに充填した。10mMTris-HClバッファー（pH7.4）で充填カラムを十分洗浄した後、1μM32Ｐ−リン酸溶液0.1mlをカラムに注ぎ、続いて10mMTris-HClバッファー（pH7.4）で溶出し、各フラクション（95μl）の放射活性を測定した。
【００７９】
対照として、前記牛血清アルブミン固定化担体のうち0.35ml（牛血清アルブミン2.5nmol相当量）についても同様に操作し、各フラクションの放射活性を測定した。
【００８０】
結果を図５に示す。図５で、縦軸は、全ての無機リン酸イオン（ｃｐｍ）に対して担体に吸着されている無機リン酸イオン（ｃｐｍ）のパーセントを示す。Ｐｉは、無機リン酸イオンを示す。
【００８１】
牛血清アルブミンを固定化した担体を充填したカラムではフラクション数９番までに91.6%のリン酸イオンが溶出した。これに対して、リン酸イオン吸着剤を充填したカラムでは、リン酸イオンは溶出液中に全く検出されなかった。即ち、この結果は、リン酸イオンが吸着剤に吸着されたことを示す。
リン酸イオンの脱着
前記カラムに充填されたリン酸結合タンパク質固定化担体に吸着されたリン酸イオンを、pH3.0のTris−酢酸バッファーで溶出した。溶出後のカラムをpH7.4のTris−酢酸バッファーで洗浄した後、リン酸イオンを吸着させ、脱着した。この吸着、脱着のサイクルを５回繰り返した。
【００８２】
図６に結果を示す。カラムの吸着能力の劣化は認められなかった。
実施例２
実施例１で、抽出、精製したリン酸結合タンパク質を用いた。ここで、カルボン酸型イオン交換繊維とは、ポリプロピレンからなる主鎖に、電子線を照射して活性点を得て、次いで、カルボキシル基をもつアクリル酸をモノマーとして重合を行ってグラフト鎖を伸ばしたものである。
【００８３】
このリン酸結合タンパク質10gと、イオン交換容量６meq/gのカルボン酸型イオン交換繊維からなる不織布３m2と、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（水溶性カルボジイミド）塩酸塩50gをｐＨ４．４のＭ／１００リン酸カリウム緩衝液約30リットルに加え、５℃で２０時間ゆるやかに振とうした。こうして、リン酸結合タンパク質をカルボン酸型イオン交換繊維上に固定化し、リン酸イオン吸着剤を得た。
【００８４】
得られた吸着剤、即ち、リン酸結合タンパク質が固定化された不織布を切断して、50cm×50cmのサイズの６枚の不織布を得た。この６枚の不織布を互いに重ね合わせて、5cm（長さ）×50cm（奥行き）×60cm（高さ）の直方体形状の槽に縦方向に充填した。この充填槽にリン酸イオンを0.06mg-P/l含む河川水１m3を上から下に、即ち、不織布が延びている方向と平行に通水したところ、処理水中のリン酸イオン濃度は0.01mg-P/l以下となった。得られた吸着剤がリン酸イオンを除去する能力を発揮することが確認された。
【００８５】
さらに通水を続け、処理水中のリン酸イオン濃度が0.05mg-P/l以上になった後、該リン酸タンパク質結合不織布を充填槽から取りだし、pH3.0のTris−酢酸バッファーで洗浄し、前記吸着剤からリン酸イオンを除去した。その後、純水で洗浄した後に再び吸着剤を充填槽に充填したところ、リン酸イオン除去能力が回復していることが確認された。
【００８６】
【発明の効果】
リン酸結合タンパク質を固定化した吸着剤によって、被処理水中のリン酸イオンを吸着、除去することができる。ポリリン酸蓄積微生物ではなく、リン酸結合タンパク質を固定化することにより、微生物の基質となる有機物を供給する必要がない。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の一実施態様の断面説明図である。
【図２】図２は、カップリング方法を示す。
【図３】図３は、カップリング方法を示す。
【図４】図４は、リン酸結合タンパク質（ＰｓｔＳ）及びウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）のリン酸イオン結合能力を示すグラフである。
【図５】図５は、リン酸結合タンパク質（ＰｓｔＳ）を固定した担体を充填したカラム及びウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を固定した担体を充填したカラムの、リン酸イオンの溶出パターンを示すグラフである。
【図６】図６は、ｐＨを変動させたときのリン酸イオンの吸着及び溶出パターンを示すグラフである。
【符号の説明】
１０…リン酸イオンの除去装置、２０…接触装置、２２…吸着剤、２６…測定器、２８…流路、３０…ポンプ、３８…流路、４０…貯留槽、４２…被処理液、４８…流路、５０…ポンプ、５８…流路、６０…貯留槽、６２…溶離水、６８…流路
【図１】
0003709098.tif 000003
【図２】
0003709098.tif 000004
【図３】
0003709098.tif 000005
【図４】
0003709098.tif 000006
【図５】
0003709098.tif 000007
【図６】
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