【手続補正書】
【提出日】令和3年1月12日(2021.1.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体を貯留可能な内部空間が形成された容器本体と、
前記内部空間を複数の液体貯留部に区画する隔壁と、を備え、
前記隔壁に、前記複数の液体貯留部のうち少なくとも２つを連通させる孔であって、ハイドロゲルが保持される孔が形成されており、
前記孔の開口部は、前記隔壁の厚さ方向から見て、前記隔壁の周縁から離れた位置に形成されている、容器。
【請求項２】
前記孔の表面の少なくとも一部に、前記ハイドロゲルを固定するための化合物が積層されている、請求項１に記載の容器。
【請求項３】
前記孔に前記ハイドロゲルが配置され、前記ハイドロゲルの前記液体と接する面が前記隔壁の厚さ方向に垂直な平面である、請求項１又は２に記載の容器。
【請求項４】
前記ハイドロゲルが、下記式（Ａ）で表される化合物、下記式（Ｂ）で表される化合物及び水系液体を混合することにより得られるものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の容器。
【化１】
2019122341.tif 000001
［式（Ａ）中、Ａ１は、それぞれ独立に、単結合又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキレン基を表し、Ｒ１〜Ｒ４は、それぞれ独立に、水素原子、−Ｌ−Ｚ１、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｌ−Ｚ１又は炭素原子数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキル基を表す。ここで、Ｌは、それぞれ独立して、単結合又は炭素数１〜２０の２価の基を表し、Ｚ１はアルキニル基を表し、ｎは２０〜５００の整数を表す。ｐは０以上の整数を表す。ｐが２以上の整数である場合、複数存在するＲ２及びＲ４はそれぞれ同一であってもよく異なっていてもよい。］
【化２】
2019122341.tif 000002
［式（Ｂ）中、Ａ１は、それぞれ独立に、単結合又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキレン基を表し、Ｒ５〜Ｒ８は、それぞれ独立に、水素原子、−Ｌ−Ｚ２、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｌ−Ｚ２又は炭素原子数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキル基を表す。ここで、Ｌは、それぞれ独立して、単結合又は炭素数１〜２０の２価の基を表し、Ｚ２はアジド基を表し、ｎは２０〜５００の整数を表す。ｐは０以上の整数を表す。ｐが２以上の整数である場合、複数存在するＲ６及びＲ８はそれぞれ同一であってもよく異なっていてもよい。］
【請求項５】
前記ハイドロゲルが、下記式（Ａ）で表される化合物、下記式（Ｂ）で表される化合物、培地及び細胞を混合することにより得られるものである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の容器。
【化３】
2019122341.tif 000003
［式（Ａ）中、Ａ１は、それぞれ独立に、単結合又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキレン基を表し、Ｒ１〜Ｒ４は、それぞれ独立に、水素原子、−Ｌ−Ｚ１、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｌ−Ｚ１又は炭素原子数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキル基を表す。ここで、Ｌは、それぞれ独立して、単結合又は炭素数１〜２０の２価の基を表し、Ｚ１はアルキニル基を表し、ｎは２０〜５００の整数を表す。ｐは０以上の整数を表す。ｐが２以上の整数である場合、複数存在するＲ２及びＲ４はそれぞれ同一であってもよく異なっていてもよい。］
【化４】
2019122341.tif 000004
［式（Ｂ）中、Ａ１は、それぞれ独立に、単結合又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキレン基を表し、Ｒ５〜Ｒ８は、それぞれ独立に、水素原子、−Ｌ−Ｚ２、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｌ−Ｚ２又は炭素原子数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキル基を表す。ここで、Ｌは、それぞれ独立して、単結合又は炭素数１〜２０の２価の基を表し、Ｚ２はアジド基を表し、ｎは２０〜５００の整数を表す。ｐは０以上の整数を表す。ｐが２以上の整数である場合、複数存在するＲ６及びＲ８はそれぞれ同一であってもよく異なっていてもよい。］
【請求項６】
請求項１又は２に記載の容器と、前記ハイドロゲルの材料とを含む、キット。
【請求項７】
前記ハイドロゲルの材料が、下記式（Ａ）で表される化合物及び下記式（Ｂ）で表される化合物を含む、請求項６に記載のキット。
【化５】
2019122341.tif 000005
［式（Ａ）中、Ａ１は、それぞれ独立に、単結合又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキレン基を表し、Ｒ１〜Ｒ４は、それぞれ独立に、水素原子、−Ｌ−Ｚ１、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｌ−Ｚ１又は炭素原子数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキル基を表す。ここで、Ｌは、それぞれ独立して、単結合又は炭素数１〜２０の２価の基を表し、Ｚ１はアルキニル基を表し、ｎは２０〜５００の整数を表す。ｐは０以上の整数を表す。ｐが２以上の整数である場合、複数存在するＲ２及びＲ４はそれぞれ同一であってもよく異なっていてもよい。］
【化６】
2019122341.tif 000006
［式（Ｂ）中、Ａ１は、それぞれ独立に、単結合又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキレン基を表し、Ｒ５〜Ｒ８は、それぞれ独立に、水素原子、−Ｌ−Ｚ２、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｌ−Ｚ２又は炭素原子数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキル基を表す。ここで、Ｌは、それぞれ独立して、単結合又は炭素数１〜２０の２価の基を表し、Ｚ２はアジド基を表し、ｎは２０〜５００の整数を表す。ｐは０以上の整数を表す。ｐが２以上の整数である場合、複数存在するＲ６及びＲ８はそれぞれ同一であってもよく異なっていてもよい。］
【請求項８】
請求項１又は２に記載の容器の前記孔にハイドロゲルを配置する工程と、
前記複数の液体貯留部の少なくとも２つに、対象物質の濃度が互いに異なる液体をそれぞれ入れ、その結果、前記ハイドロゲルに前記対象物質の濃度勾配が形成される工程と、
を含む、対象物質の濃度勾配を有する前記ハイドロゲルの製造方法。
【請求項９】
前記ハイドロゲルが、下記式（Ａ）で表される化合物、下記式（Ｂ）で表される化合物及び水系液体を混合することにより得られるものである、請求項８に記載の製造方法。
【化７】
2019122341.tif 000007
［式（Ａ）中、Ａ１は、それぞれ独立に、単結合又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキレン基を表し、Ｒ１〜Ｒ４は、それぞれ独立に、水素原子、−Ｌ−Ｚ１、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｌ−Ｚ１又は炭素原子数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキル基を表す。ここで、Ｌは、それぞれ独立して、単結合又は炭素数１〜２０の２価の基を表し、Ｚ１はアルキニル基を表し、ｎは２０〜５００の整数を表す。ｐは０以上の整数を表す。ｐが２以上の整数である場合、複数存在するＲ２及びＲ４はそれぞれ同一であってもよく異なっていてもよい。］
【化８】
2019122341.tif 000008
［式（Ｂ）中、Ａ１は、それぞれ独立に、単結合又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキレン基を表し、Ｒ５〜Ｒ８は、それぞれ独立に、水素原子、−Ｌ−Ｚ２、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｌ−Ｚ２又は炭素原子数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキル基を表す。ここで、Ｌは、それぞれ独立して、単結合又は炭素数１〜２０の２価の基を表し、Ｚ２はアジド基を表し、ｎは２０〜５００の整数を表す。ｐは０以上の整数を表す。ｐが２以上の整数である場合、複数存在するＲ６及びＲ８はそれぞれ同一であってもよく異なっていてもよい。］
【請求項１０】
請求項１又は２に記載の容器の前記孔に細胞含有ハイドロゲルを配置する工程と、
前記複数の液体貯留部の少なくとも２つに、対象物質の濃度が互いに異なる培地をそれぞれ入れ、その結果、前記細胞含有ハイドロゲルに前記対象物質の濃度勾配が形成される工程と、
前記細胞含有ハイドロゲルをインキュベートする工程と、
を含む、細胞培養方法。
【請求項１１】
前記細胞含有ハイドロゲルが、下記式（Ａ）で表される化合物、下記式（Ｂ）で表される化合物、培地及び細胞を混合することにより得られるものである、請求項１０に記載の細胞培養方法。
【化９】
2019122341.tif 000009
［式（Ａ）中、Ａ１は、それぞれ独立に、単結合又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキレン基を表し、Ｒ１〜Ｒ４は、それぞれ独立に、水素原子、−Ｌ−Ｚ１、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｌ−Ｚ１又は炭素原子数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキル基を表す。ここで、Ｌは、それぞれ独立して、単結合又は炭素数１〜２０の２価の基を表し、Ｚ１はアルキニル基を表し、ｎは２０〜５００の整数を表す。ｐは０以上の整数を表す。ｐが２以上の整数である場合、複数存在するＲ２及びＲ４はそれぞれ同一であってもよく異なっていてもよい。］
【化１０】
2019122341.tif 000010
［式（Ｂ）中、Ａ１は、それぞれ独立に、単結合又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキレン基を表し、Ｒ５〜Ｒ８は、それぞれ独立に、水素原子、−Ｌ−Ｚ２、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｌ−Ｚ２又は炭素原子数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキル基を表す。ここで、Ｌは、それぞれ独立して、単結合又は炭素数１〜２０の２価の基を表し、Ｚ２はアジド基を表し、ｎは２０〜５００の整数を表す。ｐは０以上の整数を表す。ｐが２以上の整数である場合、複数存在するＲ６及びＲ８はそれぞれ同一であってもよく異なっていてもよい。］
【請求項１２】
前記細胞が下垂体原基の性質を有する細胞塊であり、前記対象物質が、糖質コルチコイド、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）及びソニック・ヘッジホッグ（Ｓｈｈ）からなる群より選択される分化誘導因子である、請求項１０又は１１に記載の細胞培養方法。
【請求項１３】
下垂体の製造方法であって、
請求項１又は２に記載の容器の前記孔に、下垂体原基の性質を有する細胞塊を含有する、細胞塊含有ハイドロゲルを配置する工程と、
前記複数の液体貯留部の少なくとも２つに、糖質コルチコイド、ＢＭＰ、ＦＧＦ及びＳｈｈからなる群より選択される分化誘導因子の濃度が互いに異なる培地をそれぞれ入れ、その結果、前記細胞塊含有ハイドロゲルに前記分化誘導因子の濃度勾配が形成される工程と、
前記細胞塊含有ハイドロゲルをインキュベートし、その結果、前記細胞塊から下垂体が形成される工程と、
を含む、製造方法。
【請求項１４】
前記細胞塊含有ハイドロゲルが、下記式（Ａ）で表される化合物、下記式（Ｂ）で表される化合物、培地及び下垂体原基の性質を有する細胞塊を混合することにより得られるものである、請求項１３に記載の製造方法。
【化１１】
2019122341.tif 000011
［式（Ａ）中、Ａ１は、それぞれ独立に、単結合又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキレン基を表し、Ｒ１〜Ｒ４は、それぞれ独立に、水素原子、−Ｌ−Ｚ１、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｌ−Ｚ１又は炭素原子数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキル基を表す。ここで、Ｌは、それぞれ独立して、単結合又は炭素数１〜２０の２価の基を表し、Ｚ１はアルキニル基を表し、ｎは２０〜５００の整数を表す。ｐは０以上の整数を表す。ｐが２以上の整数である場合、複数存在するＲ２及びＲ４はそれぞれ同一であってもよく異なっていてもよい。］
【化１２】
2019122341.tif 000012
［式（Ｂ）中、Ａ１は、それぞれ独立に、単結合又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキレン基を表し、Ｒ５〜Ｒ８は、それぞれ独立に、水素原子、−Ｌ−Ｚ２、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｌ−Ｚ２又は炭素原子数１〜２０の直鎖状若しくは分岐鎖状のアルキル基を表す。ここで、Ｌは、それぞれ独立して、単結合又は炭素数１〜２０の２価の基を表し、Ｚ２はアジド基を表し、ｎは２０〜５００の整数を表す。ｐは０以上の整数を表す。ｐが２以上の整数である場合、複数存在するＲ６及びＲ８はそれぞれ同一であってもよく異なっていてもよい。］