(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
水中に１％（ｗ／ｖ）以上のＬ−アスコルビン酸と、局部的適用に適する担体とを含み、水と担体との比は１：１以上であり、３．５以下のｐＨを有する皮膚用局所組成物。
【請求項２】
前記担体は、アルキレングリコールを含む請求の範囲１に記載の組成物。
【請求項３】
前記アルキレングリコールはプロピレングリコールである請求の範囲２に記載の組成物。
【請求項４】
前記担体は、アルキレングリコールとヒドロキシアルキルセルロースとの組合せである請求の範囲１に記載の組成物。
【請求項５】
前記担体はプロピレングリコールとヒドロキシアルキルセルロースである請求の範囲４に記載の組成物。
【請求項６】
前記水と担体との比は２：１〜１０：１である請求の範囲１に記載の組成物。
【請求項７】
前記水と担体との比は２：１〜１０：１である請求の範囲２に記載の組成物。
【請求項８】
前記水と担体との比は２：１〜１０：１である請求の範囲３に記載の組成物。
【請求項９】
３〜２０重量％（ｗ／ｖ）のＬ−アスコルビン酸と、８０〜９７％の水と、局部的適用に適する担体とを含み、水と担体との比は１：１以上であり、３．５以下のｐＨを有する皮膚用局所組成物。
【請求項１０】
前記担体は、アルキレングリコールとヒドロキシアルキルセルロースとの組合せである請求の範囲９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記アルキレングリコールとヒドロキシアルキルセルロースとの比は、３０：１〜５：１である請求の範囲１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記アルキレングリコールはプロピレングリコールであり、前記ヒドロキシアルキルセルロースはヒドロキシプロピルセルロースである請求の範囲１１に記載の組成物。
【請求項１３】
水中に１％（ｗ／ｖ）以上のＬ−アスコルビン酸と、局部的適用に適する担体とを含み、水と担体との比は１：１以上であり、３．５以下のｐＨを有する紫外線による皮膚の損傷を阻止するための皮膚用局所組成物。
【請求項１４】
前記局所組成物は、３〜２０重量％（ｗ／ｖ）のＬ−アスコルビン酸と、８０〜９７％の水と、担体（ｗ／ｖ）とを含む請求の範囲１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記担体は、アルキレングリコールとヒドロキシアルキルセルロースとを含む請求の範囲１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記アルキレングリコールはプロピレングリコールであり、前記ヒドロキシアルキルセルロースはヒドロキシプルピルセルロースである請求の範囲１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記水と担体との比は２：１〜１０：１である請求の範囲１５に記載の組成物。
【請求項１８】
前記水と担体との比は２：１〜１０：１である請求の範囲１６に記載の組成物。
【請求項１９】
水中に１％（ｗ／ｖ）以上のＬ−アスコルビン酸と、局所的適用に適する担体と、０．０１〜０．１％の金属キレート剤とを含み、水と担体との比は１：１以上であり、３．５以下のｐＨを有する皮膚用局所組成物。
【請求項２０】
前記金属キレート剤は、ジエチレントリアミンペンタ酢酸、エチレンジアミンジ（ｏ−ヒドロキシフェニル酢酸）、及びそれらの組合せからなる群から選ばれたものである請求の範囲１９に記載の組成物。
【請求項２１】
皮膚の異常を防止するための請求の範囲１，９または１９に記載の組成物。
【請求項２２】
皮膚の異常を治療するための請求の範囲１，９または１９に記載の組成物。
【請求項２３】
前記皮膚の異常は、紫外線の照射により生ずる請求の範囲２１に記載の組成物。
【請求項２４】
前記皮膚の異常は、紫外線の照射により生ずる請求の範囲２２に記載の組成物。
【請求項２５】
前記皮膚の異常は、皮膚の炎症である請求の範囲２１に記載の組成物。
【請求項２６】
前記皮膚の異常は、皮膚の炎症である請求の範囲２２に記載の組成物。
【請求項２７】
創傷を受けた後、創傷の治癒速度を増加させるための請求の範囲１，９または１９に記載の組成物。
【請求項２８】
皮膚の紫外線照射障害による皮膚の新生物の出現を減少させるための請求の範囲１，９または１９に記載の組成物。
【請求項２９】
ｐＨが２．５以下である請求の範囲１，９，または１９に記載の組成物。
【請求項３０】
前記水は、蒸留水、脱イオン水、及び蒸留脱イオン水からなる群から選ばれたものである請求の範囲１に記載の組成物。
【請求項３１】
ｐＨが２．５以下である請求の範囲３０に記載の組成物。
【請求項３２】
５〜１０重量％（ｗ／ｖ）のＬ−アスコルビン酸と、９０〜９５％の水と、局部的適用に適する担体とを含み、水と担体との比は１：１以上であり、３．５以下のｐＨを有する皮膚用局所組成物。
【請求項３３】
前記担体は、アルキレングリコールとヒドロキシアルキルセルロースとの組合せである請求の範囲３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記アルキレングリコールとヒドロキシアルキルセルロースとの比は、３０：１〜５：１である請求の範囲３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記アルキレングリコールはプロピレングリコールであり、前記ヒドロキシアルキルセルロースはヒドロキシプルピルセルロースである請求の範囲３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記水は、蒸留水、脱イオン水、及び蒸留脱イオン水からなる群から選ばれたものである請求の範囲３２に記載の組成物。
【請求項３７】
前記担体は皮膚用担体である請求の範囲１，９，または１９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、Ｌ−アスコルビン酸を含有し、皮膚への紫外線による障害を防止する安定な局所的組成物に関する。特に、本発明は、約１％（ｗ／ｖ）以上のＬ−アスコルビン酸濃度を提供し、ｐＨを約３．５以下に維持することにより水溶液中で安定化された、Ｌ−アスコルビン酸（ビタミンＣ）を含有する局所的組成物に関する。
紫外線（ＵＶ）の照射によりもたらされる皮膚の損傷を防止するための道を見つけるために、かなりの努力が費やされてきた。防止手段は、それが皮膚に入り込む前にＵＶ照射を物理的に阻止又は吸収することを含んでいる。この技術は有効であるが、これらの従来の太陽光阻止剤又は吸収剤は、照射を受けるごとにその前に適用しなければならず、また水で洗浄しなければならないため、面倒である。こうして、例えば、泳ぐたびに再び適用しなければならない。更に、これらの従来の組成物の多くの長期の副作用は知られていない。
Ｌ−アスコルビン酸は、酵素の補助因子からビタミンＥの欠乏に対する“代用”剤までの多くの公知の生物学的機能を有している。例えば、Englaed及びSeifter著“The boichemical Functions of Ascorbic Acid”Ann. Rev. Nutri. 6 : 365-406, (1986) ; Kunert及びTappel著“The Effect of Vitamin C on in vivo Lipid Petroxidation in Guinea Pigs as Measured by Pentane and Ethane Production, ”Lipids 18: 271-74 (1983)参照。後者の機能は、部分的にその“耐酸化性”状態に負っている。
更に、アスコルビン酸が、より高い濃度で超酸化物及びヒドロキシルラジカルと反応することが知られている。超酸化物及びその結果発生した過酸化水素及び水素ラジカルは、種々の、通常の及び病的な状態の下で、生体内で発生することが知られている酸素含有遊離ラジカルである。全く単純に、これらのラジカルは、サンバ−ンから老化までのすべての原因となるものと考えられていた。これらのラジカルは、脂質膜を破壊し、ＤＮＡを切断し、酵素を不活性化する等を行う。酸素ラジカルの有害な挙動を立証する多くの作業が、過去２０年間なされてきた。この問題に関する幾つかの最近のテキストを以下に示す。
Oxy-radicals in Molecular Biology & Pathology, D. Cerutti, I. Fridovich, J. McCord, eds., (Alan Liss, Inc. New York, 1988) ;
Biological Role of Reactive Oxygen Spesies in Skin,O. Hayaishi, S. Inamura, Y. Mayachi, eds. (Elsevier, Press, New York, 1987) ;
Freee Radicals, Aging and Degenerative Diseases, J. E. Johnson, Jr., R. Walford, D. Harmon, J. E. Miquel, eds. (Alan Liss, Inc. New York, 1986) ;
Freee Radicals in Biology and Medicine, B. Hlliwell and J. M. C. Gutteridge, eds. (Clarendon Press, Oxford, 1985) ; 及び
Oxidative Stress Helmut Sies, ed. (Academic Press, 1985)。
このテ−マに向けられた幾つかのシンポジウムがあり、それらは、Upjohnシンポジウム（１９８７年４月）からの議事録“酸素ラジカルと皮膚障害”及びNational Heart, Lung & Blood Institute (National Institute of Health, Washington, D.C. １９８７年１２月）からの議事録“酸素フリ−ラジカル”である。
アスコルビン酸は、生体内でのコラ−ゲンの生成の減少に関する病変のより良い理解を提供する、生体内でのコラ−ゲン合成を刺激するものとして示されている。例えば、S. R. Pinnell, “Regulation of Collagen Biosynthesis by Ascorbic Acid : A Review”, Yale J. Biol. Med. 58: 554-59 (1985)参照。
長く、輝かしい歴史があるＬ−アスコルビン酸（ビタミンＣ）は、次の構造式を有するα−ケト−ラクトンとして化学的に定義される。
0003708540.tif 000002
第２及び３の炭素が二重結合であり、水中で酸をイオン化し得る水素（ｐｋ＝４．２）を含有している。アスコルビン酸はまた、並の強さを持つ還元剤である。アスコルビン酸の構造を不安定とするこれらの特性は、よく知られており、活性なアスコルビン酸溶液を調製しようと試みる際に、薬剤師にとって極めて厄介であった。このように、より高いｐＨではアスコルビン酸は、ますます不安定はアスコルビン酸陰イオンとなる。この不安定さは、以下のものに限定されないが、幾つかの原因によるものである。
ａ）極性反発力による立体化学的歪み
２−ヒドロキシ基がイオン化するようなものであるならば、それは開環を助ける２つの負の電荷（他はカルボキシル炭素上にある）を近接して置く。
ｂ）還元剤として作用するアスコルビン酸陰イオンの特性による酸化性劣化
１電子酸化生成物（脱水アスコルビン酸フリ−ラジカル）は、不均衡となる傾向にあり、他のアスコルビン酸塩分子及び２電子酸化生成物である脱水アスコルビン酸塩を形成し、これは水溶液中では極めて不安定であり、分裂して最終的にＬ−トレオニン酸及びシュウ酸のような種を生成する。遷移金属イオンは、これらの反応に対し、触媒として作用する。
ｃ）バルクの水の攻撃による劣化
より低いアスコルビン酸濃度又はイオン強度において、水はそれ自体アスコルビン酸分子と反応し、劣化させる。この反応の詳細については、“Bitamin C : Its Molecular Biology and Medical Potential ”Sherry Lewin, ed. (Academic Press, London, 1976)参照のこと。
これらの理由から、この分野で働く科学者は、化粧品の、皮膚科学の、又は眼科の用途に有用なアスコルビン酸の安定名溶液を調製する上で困難に遭遇している。それにもかかわらず、アスコルビン酸に帰せられる多くの優れた薬学的効果のため、これらの困難に打ち勝つための多くの試みがなされてきた。
こうして、文献は、非常に低い重量％のアスコルビン酸を用いることにより、又はアスコルビン酸の誘導体を用いることにより、通常約４．０以上のｐＨの緩衝液中で形成されたアスコルビン酸組成物について記載している。例えば、Takashima et al, “Ascorbic Acid Esters and Skin Pigmentation,” Am. Perfumer & Cosmetics 86: 29（1971年7月）（ヒドロキシル基をエステル化してアスコルビン酸−３−ホスフェ−トを形成し、アルカリｐＨを維持する）; Cimineraa and Wilcox, “Stable Ascorbic Acid Solution for Parenteral Use”, J. Am. Pharm. Assoc. Sci. Ed. 35: 363 (1946)（アルカリナトリウム塩で水溶液をバッファ−する）を参照のこと。また、モノチオグリセロ−ルを加え、ｐＨを４〜７に維持することによりアスコルビン酸水溶液を安定化することを開示する米国特許第4,367,157号、アスコルビン酸をそのカルシウム又は亜鉛塩に変換し、好ましくはｐＨを７〜７．３に維持することによりアスコルビン酸を安定化することを開示する米国特許第2,400,171号、脂肪族チオカルボン酸を加え、ｐＨを５．２〜５．６に維持することによりアスコルビン酸カルシウムを安定化することを開示する米国特許第2,442,461号、チオ糖類でアスコルビン酸を安定化し、ｐＨを４．０〜６．５に維持することを開示する米国特許第2,585,580号、及び乾燥剤を用いることにより水を０．５重量％に実際に除去することを開示する米国特許第4,372,874号を参照のこと。多くの場合、これらの方法は、安定な溶液を得る上で成功しているが、かなり高価であり、修飾されない形のアスコルビン酸よりも望ましからぬ特性を有する生成物を生じた。
発明の開示
本発明者らは、水中に約１重量％以上のＬ−アスコルビン酸、好ましくは約３〜２０重量％のＬ−アスコルビン酸、より好ましくは約５〜１０重量％のＬ−アスコルビン酸と、局部的適用のための担体とから基本的に構成される、新規な、経済的な、安定な局部的に適用される組成物を見出だした。約１重量％以上のＬ−アスコルビン酸を含有するどのような組成物も優れた効果を有するものと期待され、Ｌ−アスコルビン酸の濃度は、水／担体系におけるその溶解度により主として制限される。水と担体との比は、１：１以上、より好ましくは２：１〜１０：１であり、組成物のｐＨは、約３〜３．５以下、好ましくは約２．５以下である。そのような組成物は、皮膚への容易な浸透を許容するように思われ、紫外線により生じた損傷を阻止する。
本発明を実施する上で有用な局部的適用のための担体としては、これに限定されないが、アルキレングリコ−ル、又はヒドロキシアルキルセルロ−スの１種以上の誘導体との組合わせたアルキレングリコ−ルがある。１つの態様では、アルキレングリコ−ルは、プロピレングリコ−ルであり、ヒドロキシアルキルセルロ−スはヒドロキシプロピルセルロ−スである。アルキレングリコ−ルとヒドロキシアルキルセルロ−スとの組合わせを用いる場合には、アルキレングリコ−ルとヒドロキシアルキルセルロ−スの有用な比は約３０：１〜５：１であり、特に有用な比は、３０：１である。水と相溶性を有し、生物学的に許容し得る、当業者に知られた他の担体が、制限されることなく、本発明の範囲内の等価な組成物を提供するものと期待される。例えば、エタノ−ル及びプロパノ−ルのようなアルコ−ル、ブチレン又はヘキシルギリコ−ルのようなグリコ−ル、ソルビト−ルのようなポリオ−ルを採用してもよい。或いは、ポリエチレン又はポリプロピレングリコ−ル、鉱油、又はグリセロ−ルを用いることが出来る。生物学的に許容し得るヒドロキシアルキルセルロ−スも又、本発明により意図される。
当業者により理解されるように、アスコルビン酸は、Ｄ−イソアスコルビン酸のようなアスコルビン酸の還元性類似体を加えることにより、又は多分、これに限定されないが、グルタチオン、Ｌ−システアミン等のような他の少量の還元性組成物を加えることにより、提供されてもよい。そのような形は、請求されている組成物と等価な組成物を提供するものと期待される。
使用される水は、蒸留水又は脱イオン水が好ましいが、アスコルビン酸組成物の安定性に影響を与えない汚染物質を含有しないどのような水を用いてもよい。純度の変化のアスコルビン酸組成物の安定性に対する効果は、Meucci et al., “Ascorbic Acid Stability in Aqueous Solutions,”Acta Vitaminol. Enzymol. 7(3-4) : 147-54 (1985)において議論されている。
ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）又はエチレンジアミン−ジ（ｏ−ヒドロキシフェニル酢酸）（ＥＤＤＨＡ）のような金属キレ−ト剤を少量（０．００１％〜０．１％（ｗ／ｖｘ））添加することにより、特に低濃度で用いたときに、アスコルビン酸に追加の安定性を提供することが出来る。
組成物の必要なｐＨは、２％以上のアスコルビン酸がプロトン化された、荷電されない形に維持されることを確保する。理論により縛られることは望まないが、本発明者らは、本発明に使用されるアスコルビン酸のプロトン化された形が、幾つかの理由から皮膚科学的に重要であると考えている。第１に、この形は、２つの酸素基のイオン性反発を除去し、分子を安定化する。第２に、アスコルビン酸のプロトン化された形は荷電されないので、皮膚への侵入（それ自体約３−５のｐＨを有する）は促進されるべきである。H. Schaefer et al., Skin Permeability 739-40 (Springer-Verlag Co., Berlin, 1982)を参照のこと。
【図面の簡単な説明】
第１図は、水性化粧料ビヒクル中の種々の濃度のＬ−アスコルビン酸の安定性を示す図。
第２図は、Ｌ−アスコルビン酸の安定性に対するプロピレングリコ−ル濃度の効果を示す図。
第３図は、種々のｐＨにおける５％Ｌ−アスコルビン酸水溶液の安定性を示す図。
第４図は、ｐＨ２．４の５％Ｌ−アスコルビン酸水溶液のスペクトル分析を示す図。
第５図は、ｐＨ２．４の５％Ｌ−アスコルビン酸水溶液のスペクトル分析を示す図。
第６図は、Ｌ−アスコルビン酸水性配合物で処理された紫外線照射された豚の皮膚の顕微鏡写真図。
第７図は、家畜豚の急性のサンバ−ンに対する５％Ｌ−アスコルビン酸水性配合物及びハイドロアルコ−ルビヒクル中の５％Ｌ−アスコルビン酸の効果を示す図。
第８図は、豚の急性サンバ−ン反応に対する５％Ｌ−アスコルビン酸水性配合物の後照射適用の効果を示す図。
発明を実施するための最良の形態
以下の実施例は、例示の目的のみであり、本発明の範囲を何ら制限するものではない。シマズＵＶ−２６０ジュアルビ−ム分光光度計を用いて、以下の条件で分光分析がなされた。アスコルビン酸のサンプルは、（特にことわらない限り）室温に維持され、頭部空間の空気を変化させることにより、光から遮蔽された。種々の時間において、それぞれのサンプルから分別し、分光光度計のサンプルビ−ムにおける石英セル内の水中に希釈された。参照セルは、水で希釈されたビヒクル又は水のみ（相違は検出されなかった）のいずれかを収容していた。次いで、２００〜４００ｎｍからスペクトルを採り、濃度を決定するために、（特にことわらない限り）最大の吸収における光密度を用いた。
実施例Ｉ
実施例Ｉは、本発明の組成物の製造及び安定性を示す。
８０ｍｌの蒸留、脱イオン水に１０ｇのＬ−アスコルビン酸（シグマ社から市販）を溶解し、プロピレングリコール（アルドリッヒケミカル社から購入した１，２−プロパンジオール）を加えて１００ｍｌにすることにより、１０％のＬ−アスコルビン酸（ｗ／ｖ）の濃縮溶液を調製した。任意に、１ｇのヒドロキシプロピルセルロ−ス（平均分子量３００、０００）を加えてもよい。最大の安定性を得るためには、この溶液は、最小の頭部空間をもって及び／又は窒素でパ−ジされて、約２２℃以下の温度で、光不透過性ボトル内に貯蔵すべきである。
実施例Ｉでは、８０％のＨ2Ｏ（ｖ／ｖ）、２０％のプロピレングリコ−ル（ｖ／ｖ）、１％のヒドロキシプロピルセルロ−ス（ｗ／ｖ）中の１−１０％のＬ−アスコルビン酸溶液を４種調製し、室温下、暗中で（約１０％の頭部空気空間を有する）蓋をしたマイクロフュ−ジチュ−ブ内に保存した。指定された時間に、分取した試料を取りだし、残留アスコルビン酸を分光分析により決定した。その結果を第１図に示す。
実施例II
実施例IIは、Ｌ−アスコルビン酸の安定性がプロピレングリコ−ルの濃度により影響されないことを示す。種々の濃度のプロピレングリコ−ルにおいて、２％のＬ−アスコルビン酸溶液を調製した。これらを室温下、暗中で約２０％の頭部空気空間を有する蓋をしたマイクロフュ−ジチュ−ブ内に貯蔵した。４．５及び８週間で、分取した試料を取りだし、残留アスコルビン酸を分光分析により決定した。その結果を第２図に示す。
実施例III
実施例IIIは、８０％のＨ2Ｏ（ｖ／ｖ）、２０の％プロピレングリコ−ル（ｖ／ｖ）、１％のヒドロキシプロピルセルロ−ス（ｗ／ｖ）中のＬ−アスコルビン酸の安定性に対するｐＨの効果を示す。５％のアスコルビン酸溶液を種々のｐＨに調整し、室温下、暗中で約２５％の頭部空気空間を有する蓋をしたマイクロフュ−ジチュ−ブ内に保存した。６及び１２週間で、分取した試料を取りだし、残留アスコルビン酸を分光分析により決定した。これらの結果を第３図に示す。比較的高いｐＨにおいてさえ、５％の濃度のアスコルビン酸は全く安定であることが明らかである。
実施例IＶ
実施例IＶは、例えアスコルビン酸が安定であっても、比較的高いｐＨで、８０％のＨ2Ｏ（ｖ／ｖ）、２０％のプロピレングリコ−ル（ｖ／ｖ）、１％のヒドロキシプロピルセルロ−ス（ｗ／ｖ）中の５％のＬ−アスコルビン酸溶液にスペクトル変化が生じることを示している。実施例IIIからのｐＨ２．４〜４．２の組成物を、調製後直ちに、又は実施例IIIにおけるように１２週間後のいずれかにスキャンした。そのスペクトルを第４図及び第５図に示す。これらの結果は、溶液の“黄ばみ”の増加により明らかなように、反応が、近紫外線への主要なピ−クのスペクトルの広がりに導くｐＨ４．２で生じていることを示している。
実施例Ｖ
実施例Ｖは、蒸留、脱イオンＨ2Ｏ及び配合物（≧３％）で用いた高濃度のアスコルビン酸／アスコルビン酸塩を用いる事により、キレ−ト剤がアスコルビン酸塩を安定化するわずかな傾向を示すことを例示している。比較として、プロピレングリコ−ル／エタノ−ル／Ｈ2Ｏビヒクル中の１％のアスコルビン酸塩が、０．１ｍＭのＤＴＰＡと共に、又はそれなしに作られたとき、アスコルビン酸塩の安定性に対するＤＴＰＡのわずかな保護効果が見出だされた。しかし、プロピレングリコ−ル／Ｈ2Ｏ中の５％アスコルビン酸塩では、分光分析により、ＤＴＰＡはもはや保護効果を示さなかった。そのデ−タを表Ｉに示す。キレ−ト剤の効果は、実施例Ｖで用いられているもの、または成分のいずれかが金属イオンで汚染されているものより純粋でない水で配合された組成物において増加することが期待される。
実施例ＶI
実施例ＶIは、８０％のＨ2Ｏ、２０％のプロピレングリコ−ル、１％のヒドロキシプロピルセルロ−スの化粧料調剤における、１％（ｗ／ｖ）及び１０％（ｗ／ｖ）の濃度でのＮａ−アスコルビン酸塩の安定性に比較して、Ｌ−アスコルビン酸の安定性がより大きいことを示している。１％では、Ｌ−アスコルビン酸は、Ｌ−アスコルビン酸のナトリウム塩よりも少し安定である。１０％の濃度では、Ｌ−アスコルビン酸とアスコルビン酸のナトリウム塩の両方は、分光分析により顕著な安定性を示している。しかし、アスコルビン酸のナトリウム塩は、２週間後に、両方の濃度で、かなりの黄色の着色を示しており、一方、Ｌ−アスコルビン酸は、７週間においてさえ、わずかな変化のみを示している。その結果を表IIに示す。
実施例ＶII
実施例ＶIIは、Ｌ−アスコルビン酸の安定化した水性配合物の局所適用による、紫外線障害からの皮膚の保護を示している。この実験では、ヨ−クシャ−種の豚の背中をバリカンで刈り、その領域を８０％のＨ2Ｏ（ｖ／ｖ）、２０％のプロピレングリコ−ル（ｖ／ｖ）、１％のヒドロキシプロピルセルロ−ス（ｗ／ｖ）中の１０％のＬ−アスコルビン酸溶液、又はビヒクルの参照試料により６日で５回予備処理した。次いで、背中に約４インチの距離から１０分間、２つのウエスチングハウス社のＦＳ−４０サンランプの列で照射した（この照射量は、ＭＥＤ（最小エリセマル照射量）の約５倍に等しい。）。この領域を、引続き２４時間、２回後処理した。２４時間で、それぞれの部位から５ｍｍのパンチのバイオプシ−ズを採取し、ヒストロジ−のため準備した。典型的な結果を第６図の顕微鏡写真に示す。第６図では、Ａ＝Ｌ−アスコルビン酸による処理であり、Ｂ＝ビヒクルによる処理である。ＵＶに応答しての、外皮における形成異常の基底細胞（サンバ−ン）の存在は、皮膚の短波長ＵＶ障害の特徴である。Ｌ−アスコルビン酸により処理された部位からの断面は、これらの細胞が殆どないことを染めしている。他の相違は、皮膚の浮腫状の応答を示す全体のしみの強さに関するものである。全く典型的には、処理されずに照射された皮膚のしみからの断面は、Ｌ−アスコルビン酸により処理された皮膚からの断面よりも、しみが少なく、防御された皮膚の浮腫状の応答の減少を示す。
実施例ＶIII
実施例ＶIIIは、皮膚への紫外線障害に対するＬ−アスコルビン酸の保護の効果を示す。実施例ＶIIにおけると同様に処理された動物は、ＵＶ照射前４時間、最終の予備処理を受けた。加えて、すべての処理された部位を、照射直前にぬるま湯で洗浄し、サンブロックとして作用する残留溶液を除去した。このことは、防御が、皮膚により取られたＬ−アスコルビン酸によるものであることを保証している。これは、最適な性能のために、照射の直前に適用しなければならない、局所的な、市販されているサンスクリ−ンとは反対である。
実施例IＸ
実施例IＸは、皮膚のひどい紫外線照射障害を緩和するためのＬ−アスコルビン酸の局所的適用の可能性を示す。実施例IＸでは、試験動物は照射前に６日間で５回、（水性配合物又は“ハイドロアルコ−ス性”ビヒクルのいずれかの形で）Ｌ−アスコルビン酸の５％配合物により予備処理された。６日で、処理された、及び対照試料の領域を、２つのウエスチングハウス社のＦＳ−４０ランプの列で照射した。照射量は、ＭＥＤの３０倍に等しい。照射後１１日で写真をとったが、この写真は、対照部位に対する、Ｌ−アスコルビン酸で処理された部位の外観の改善を示している。
実施例Ｘ
実施例Ｘは、Ｌ−アスコルビン酸の水性配合物の局所適用は、ＵＶの照射後に適用されてさえ、第８図の写真に示すように、優れた創傷治癒効果を有することを確立している。実施例Ｘでは、実施例IＸにおけるように、試験動物が予備処理され、照射された。この動物の１つの領域（第８図に示す底部列）は、予備処理を受けなかった。照射後、部位は、後処理を受けないか、又は１日、２日、３日、４日、５日又は７日に後処理を受けた。また７日については、ビヒクルのみで後処理を受けた。Ｌ−アスコルビン酸溶液による３〜４日の後処理（第８図のＩ〜Ｊ）では、皮膚の外観は、ビヒクルのみで処理された又は処理されなかった領域に比較して、皮膚の外観は改善された。
毒性の研究
公式の毒性の研究は行われていないが、１０％溶液（ｗ／ｖ）がヒトの顔に１日につき１回、１週間で５回、３０週間、何ら逆反応なしに適用された。付加的に、ペンシルバニア大学のDr. Lorraine Kligmanにより行われた予備的研究では、無毛ネズミが、ｐＨ２．１又は３で５％又は１０％のＬ−アスコルビン酸溶液により、又はｐＨの対照試料により、１週間につき５回、４週間処理された。これらの局所適用が、毒性又は刺激性を生ずる証拠（臨床的又は組織的）は認められなかった。
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１％のアスコルビン酸塩溶液は、水、プロピレングリコ−ル、エタノ−ル溶液（１０：６０：３０；ｖ／ｖ／ｖ）中で、５％のアスコルビン酸塩溶液は、水、プロピレングリコ−ル溶液（８０：２０；ｖ／ｖ）中で、所定量のＤＴＰＡを含んで、又は含むことなく作られた。試料を、蓋をしたチュ−ブ（実質的な空気の頭部空間をもった）内に室温下で維持された。分取量を毎日、次いで１週間採取し、残留アスコルビン酸塩を分光光度分析により測定した。
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アスコルビン酸／アスコルビン酸塩溶液は、８０％水、２０％プロピレングリコ−ル、１％ヒドロキシプロピルセルロ−ス中で作られた。試料を、蓋をしたチュ−ブ（約１０％の空気の頭部空間をもった）内に室温下で維持された。分取試料を指定された時間に採取し、残留アスコルビン酸／アスコルビン酸塩を分光光度分析により測定した。
第１図
水性化粧料ビヒクル中のＬ−アスコルビン酸の種々の濃度の安定性
種々の濃度のＬ−アスコルビン酸を、８０％水、２０％プロピレングリコ−ル、１％ヒドロキシプロピルセルロ−スからなるビヒクル中で作り、（約１０％の空気の頭部空間をもって）室温下で、光から遮蔽した。１日、３週間、７週間後に、分取試料を石英セル中で希釈し、得られたスペクトルを２００〜４００ｎｍの間をスキャンした。２６０−２６５ｎｍのピ−クの光学密度を、Ｌ−アスコルビン酸のより低い濃度について記録し、一方、２８０ｎｍにおける光学密度をＬ−アスコルビン酸のより高い濃度について記録した。
１：１％Ｌ−アスコルビン酸
２：３％Ｌ−アスコルビン酸
３：５％Ｌ−アスコルビン酸
４：１０％Ｌ−アスコルビン酸
第２図
Ｌ−アスコルビン酸の安定性に対するプロピレングリコ−ルの濃度の効果
種々の濃度のプロピレングリコ−ルを含むＬ−アスコルビン酸の水溶液（２％ｗ／ｖ）（約２０％の空気の頭部空間を有する）蓋をされたマイクロヒュ−ジチュ−ブ内で、室温下で、暗中に維持した。４．５週間、８週間で、分取試料をそれぞれのサンプルから除去し、残留アスコルビン酸を図１に示すように記録した。
０：０％プロピレングリコ−ル
□：１０％プロピレングリコ−ル
△：２０％プロピレングリコ−ル
★：４０％プロピレングリコ−ル
◆：６０％プロピレングリコ−ル
第３図
種々のｐＨにおけるＬ−アスコルビン酸の５％水溶液の安定性
５％のＬ−アスコルビン酸溶液を、所定のｐＨで、８０％水、２０％プロピレングリコ−ル、１％ヒドロキシプロピルセルロ−スからなるビヒクル中で製造した。試料を光から遮蔽して（約２０％の空気の頭部空間をもって）、４℃で貯蔵した。１日、６週間、１２週間後に、分取試料をそれぞれの試料から除去し、残留アスコルビン酸を図１に示すように記録した。
１：ｐＨ２．４；  ２：ｐＨ３．２；  ３：ｐＨ４．２；  ４：ｐＨ４．５；  ５：ｐＨ５．１
第４図
ｐＨ２．４の５％Ｌ−アスコルビン酸水溶液のスペクトル分析
条件を第３図に示した。製造直後、及び１２週間の貯蔵後、スペクトルをとった。
第５図
ｐＨ４．２の５％Ｌ−アスコルビン酸水溶液のスペクトル分析
条件を第３図に示した。製造直後、及び１２週間の貯蔵後、スペクトルをとった。
第６図
アスコルビン酸の水性配合物又はビヒクル対照試料により処理された、紫外線照射された豚の皮膚の顕微鏡写真
動物の背中の部位を、照射前６日に８回、アスコルビン酸又はビヒクル対照試料で予備処理した。最後の予備処理は、照射前４時間である。照射は、２つのウエスチングハウス社のＦＳ−４０サンランプを用いて１０分間行った。４ｍｍのパンチバイオプシ−を２４時間後にとり、通常の方法で固定し、（Hematoxylian and Eosin）で染色した。矢印は、サンバ−ン細胞をさしている。
第７図
家畜豚の急性のサンバ−ンに対する５％Ｌ−アスコルビン酸水性配合物及びハイドロアルコ−ルビヒクル中の５％Ｌ−アスコルビン酸の効果
２種のアスコルビン酸溶液（又はそれらのビヒクルのみ）２を６日で５回、大量に適用した。７日目に、動物に６０分間紫外線を照射した（４インチの距離で２つのＦＳ−４０サンランプで）。照射後１１日に、写真をとった。
ＶＣ−Ｉ＝５％Ｌ−アスコルビン酸水性配合物
ＶＣ−Ｉ−Ｖ＝ＶＣ−Ｉビヒクルのみ
ＣＢ＝ハイドロアルコ−ルビヒクル中の５％Ｌ−アスコルビン酸
ＣＢＶ＝ハイドロアルコ−ルビヒクルのみ
第８図
豚の急性サンバ−ン反応に対する５％Ｌ−アスコルビン酸水性配合物の後照射適用の効果
先頭の列は、アスコルビン酸（Ａ−Ｆ）又はビヒクルの適用を、６日で５回、予備照射を受けた。後部の列は、予備処理を受けなかった。先頭及び後部の列の選択された部位は、後照射の期間を変化させてＬ−ＡＡ適用を受けた。
Ａ：更なる適用なし
Ｂ：Ｌ−ＡＡ、１日
Ｃ：Ｌ−ＡＡ、２日
Ｄ：Ｌ−ＡＡ、３日
Ｅ：Ｌ−ＡＡ、５日
Ｆ：Ｌ−ＡＡ、７日  後照射
Ｇ：Ｌ−ＡＡ、１日
Ｈ：Ｌ−ＡＡ、２日
Ｉ：Ｌ−ＡＡ、３日
Ｊ：Ｌ−ＡＡ、４日
Ｋ：Ｌ−ＡＡ、５日
Ｌ：Ｌ−ＡＡ、７日  後照射
ビヒクル部位をＶＣ−Ｉビヒクルで処理し、７日後照射した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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