【手続補正書】
【提出日】令和3年1月26日(2021.1.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
具体的には、乳糖、白糖等の賦形剤；天然ガム類、セルロース誘導体、アクリル酸重合体、塩化ナトリウム等の増粘剤；注射用水、プロピレングリコール、ゴマ油、トウモロコシ油、エタノール、ブチレングリコール、Ｄ−マンニトール、安息香酸ベンジル等の溶剤；リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩等の緩衝剤；メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェノキシエタノール、安息香酸等の防腐剤；亜硫酸塩、アスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ジブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、酢酸トコフェロール、アルブチン等の抗酸化剤；グリセリン、尿素、アミノ酸、ヒアルロン酸、スクワラン、マカデミアナッツ油、オリーブ油、ホホバ油、シリコン油等の保湿剤；ビタミンＥ類、トウガラシチンキ等の血行促進剤；核酸等の細胞賦活化剤；グルチルリチン、アラントイン、ピロクトンオラミン等の抗炎症剤；ヒノキチオール、塩化ベンザルコニウム、クロルヘキシジン塩等の抗菌剤；スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）等の過酸化物抑制剤；ポリエキシエチレンソルビタンモノオレアート、ポリオキシエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウレス硫酸ナトリウム、コカミドプロピルベタイン、コカミドモノエタノールアミド、ココイルメチルタウリンナトリウム、ベヘントリモニウムクロリド、ステアルトリモニウムクロリド、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の界面活性剤；セタノール、パルミチン酸イソプロピル等の基材成分；ポリクオタニウム−１０等のコンディショニング剤；クエン酸、リンゴ酸等のｐＨ調整剤；メトキシケイヒ酸エチルヘキシル等の紫外線吸収剤；ＥＤＴＡ−２Ｎａ等のキレート剤；香料；カラメル等の着色剤；アロエ、ショウキョウ、ソウハクヒ等の生薬及びこれらの抽出物や、パントテニルエチルエーテル、酢酸トコフェロール、フォルスコリン等の化合物等の育毛養毛効果を有する成分；イチョウエキス、胎盤抽出物、乳酸菌培養抽出物等の上記以外の植物や動物や微生物由来の各種抽出物等が挙げられる。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
（２）Ｗｎｔ１０ｂ産生促進試験
（２−１）細胞培養
細胞はヒト頭髪毛乳頭細胞（東洋紡（株））を使用した。サブコンフルエント状態の毛乳頭細胞をトリプシン処理で剥離し、２４ウェルプレートの各ウェルに播種し、１０％胎仔ウシ血清含有ダルベッコ改変イーグル培地で、３７℃、５％ＣＯ2条件下でサブコンフ
ルエントになるまで培養した。乾燥物換算で表２に記載の濃度となるように原料製造例１〜６の各植物抽出物、比較成分であるカルシトリオール（Ｃａｙｍａｎ  ＣＨＥＭＩＣＡＬ製）を同培地にそれぞれ添加し４８時間培養した。培養後、培地を除去し毛乳頭細胞にＩＳＯＧＥＮ−II（（株）ニッポンジーン製）を添加し付属のプロトコルに従って、トータルＲＮＡを得た。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
（２−３）リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによるＷｎｔ１０ｂのｍＲＮＡ発現量の定量
ＰＣＲ用の９６ウェルプレートの各ウェルへ、ＳＹＢＲ  Ｐｒｅｍｉｘ  Ｅｘ  ＴａｑII（タカラバイオ（株）製）１２．５μＬ、フォワードプライマー（０．４μＭ）１μＬ、リバースプライマー（０．４μＭ）１μＬ、ｃＤＮＡ（２０ｎｇ／μＬ）２μＬ、ＲＮａｓｅフリー水８．５μＬを加え、Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｃｙｃｌｅｒ  Ｄｉｃｅ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（タカラバイオ（株）製）用いてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲを行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲの反応は、９５℃で３０秒の初期変性、９５℃で５秒の変性、６０℃で３０秒のアニーリング・伸長反応からなるサイクルを４０回行った。表１にＷｎｔ１０ｂ増幅用プライマー及びハウスキーピング遺伝子として使用したグリセルアルデヒド３リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）の増幅用プライマー（インビトロジェン社製）の配列を示す。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５８】
【表３】
2019178099.tif 000001
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５９】
表２〜３に示すように、カルシトリオールは、Ｗｎｔ１０ｂ産生効果が認められた（比較例２）。一方、本発明のチンピ抽出物、セイヨウイラクサ抽出物、ボタン抽出物、センキュウ抽出物、ウメ抽出物、ステビア抽出物は優れたＷｎｔ１０ｂ産生促進剤が認められ（実施例１〜１２）、さらにこれらを組み合わせると相乗効果がみられた（実施例１３〜３６）。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
（ｉ）シャンプー
ポリクオタニウム−１０                         0.3
コカミドプロピルベタイン                       10
ココイルメチルタウリンナトリウム               5
コカミドモノエタノールアミド                   1
メチルパラベン                                 0.2
クエン酸２５質量％水溶液                       適量
塩化ナトリウム１０質量％水溶液                 適量
香料                                           0.4
精製水                                         残量
Ｗｎｔ１０ｂ産生促進剤                         表４に記載の量
比較成分                                       表４に記載の量
────────────────────────────────────
合計                                           100
（ii）  コンディショナー
ジメチコン                                     3
セタノール                                     4
パルミチン酸イソプロピル                       1
ステアルトリモニウムクロリド                   2.5
メチルパラベン                                 0.2
クエン酸２５質量％水溶液                       適量
香料                                           0.4
精製水                                         残量
Ｗｎｔ１０ｂ産生促進剤                         表４に記載の量
比較成分                                       表４に記載の量
────────────────────────────────────
合計                                           100
（iii）ヘアトニック
エタノール                                     40
ポリオキシエチレン（４０モル）硬化ヒマシ油     1
メチルパラベン                                 0.2
香料                                           0.1
精製水                                         残量
Ｗｎｔ１０ｂ産生促進剤                         表４に記載の量
比較成分                                       表４に記載の量
────────────────────────────────────
合計                                           100
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６３】
【表４】
2019178099.tif 000002