(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤマモモ科植物抽出物を添加することなく、２つ以上のカルボキシル基を有する有機酸（但し、クエン酸を除く）若しくはこれらの塩のうち１種または２種以上を、カロテノイド系色素若しくはカロテノイド系色素の含有物に添加することを特徴とする、カロテノイド系色素の安定化方法。
【請求項２】
ヤマモモ科植物抽出物を添加することなく、２つ以上のカルボキシル基を有する有機酸（但し、クエン酸を除く）若しくはこれらの塩のうち１種または２種以上を、水の存在下でカロテノイド系色素若しくはカロテノイド系色素の含有物に添加して、当該水処理の後に乾燥することを特徴とする、カロテノイド系色素の安定化方法。
【請求項３】
カロテノイド系色素の含有物が、カロテノイド系色素を含有する細胞、又は当該細胞をアルカリ処理して得られるものである、請求項１又は請求項２に記載されたカロテノイド系色素の安定化方法。
【請求項４】
カロテノイド系色素を含有する細胞が、アスタキサンチンを含有する酵母である、請求項３に記載のカロテノイド系色素の安定化方法。
【請求項５】
２つ以上のカルボキシル基を有する有機酸が、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、アスパラギン酸、又はグルタミン酸である請求項１乃至４のいずれかに記載のカロテノイド系色素の安定化方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、食品、医薬品、飼料分野において、着色料又は医薬原料として有用なカロテノイド系色素の安定化方法、当該方法により製造された安定化組成物、及び当該方法により安定化されたカロテノイド系色素を含有する飼料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
カロテノイド系色素は動植物界に広く分布する黄色乃至赤色の色素であり、ニンジン、トマト、キノコ等の植物類；エビ、カニ、タイ、サケ、マス類等の魚類；藻類、酵母、細菌等の微生物類に広く分布している。
カロテノイド系色素は、食品の着色料や医薬原料として用いられる。さらに、ビタミンＡの前駆体として、若しくは抗酸化剤としても用いられている。また、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、ドラデキサンチン、カンタキサンチン、クリプトキサンチン若しくはそのエステル等は魚類の色揚げに用いられている。この他、カロテノイド系色素を含有するパプリカ色素、クチナシ色素等は鶏卵の色揚げ用にも用いられている。
【０００３】
以上のようにカロテノイド系色素は、種々の用途を有する有用な色素である。
しかしながら、カロテノイド系色素は一般に、熱、光、酸素等により容易に分解され保存時の安定性が悪いという欠点を同時に有することが知られている。
かかるカロチノイド系色素が有する欠点を克服するために種々の手段が現在まで試みられている。
【０００４】
先ず特開昭63-145367 号公報に、カロテノイド系色素の安定性を向上させることを目的として、ルチン等のフラボノイド類、ヒマワリ抽出物、フィチン酸等の植物抽出物、トコフェロール、アスコルビン酸、クエン酸等を添加し得ることが開示されている。しかしながら、これらの安定化剤のうちビタミン類、フラボノイド類、植物抽出物は概して高価であり、現実的にはカロテノイド系色素の安定剤として採用するのは困難である。さらに、アスコルビン酸やクエン酸をカロテノイド系色素又はカロテノイド系色素の含有物にそのまま添加してもその効果は小さく、カロテノイド系色素の安定化剤として採用するには問題がある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明が解決すべき課題は、比較的安価な原料を用い、かつ高度にカロテノイド系色素を安定化するカロテノイド系色素の安定化方法、並びに当該安定化方法により得られた安定化カロテノイド系色素を含有する飼料を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者は鋭意検討した結果、安定化剤として一般の有機酸等を用いることができること、さらにかかる有機酸を安定化剤として用いた安定化処理に際して、水を介在させて乾燥処理を施すことにより上記課題を解決し得る方法が提供され得ることを見出した。
【０００７】
すなわち、本発明は以下の事項をその要旨とするものである。
(1) ２つ以上のカルボキシル基を有する有機酸（但し、クエン酸を除く）、グリシン、若しくはこれらの塩のうち１種又は２種以上をカロテノイド系色素若しくはカロテノイド系色素の含有物に添加することを特徴とする、カロテノイド系色素の安定化方法。
【０００８】
(2) ２つ以上のカルボキシル基を有する有機酸（但し、クエン酸を除く）、グリシン、若しくはこれらの塩のうち１種又は２種以上を、水の存在下でカロテノイド系色素若しくはカロテノイド系色素の含有物に添加して、当該水処理の後に乾燥することを特徴とする、カロテノイド系色素の安定化方法。
(3) カロテノイド系色素の含有物が、カロテノイド系色素を含有する細胞、又は当該細胞をアルカリ処理して得られるものである前記(1)又は(2)に記載されたカロテノイド系色素の安定化方法。
【０００９】
(4) カロテノイド系色素を含有する細胞が、アスタキサンチンを含有する酵母である前記(3)記載のカロテノイド系色素の安定化方法。
(5) ２つ以上のカルボキシル基を有する有機酸（但し、クエン酸を除く）、グリシン、若しくはこれらの塩のうち１種又は２種以上、並びにカロテノイド系色素若しくはカロテノイド系色素の含有物を含む組成物。
上記安定化方法或いは組成物において、２つ以上のカルボキシル基を有する有機酸としては、リンゴ酸，マロン酸，コハク酸，酒石酸，フマル酸，マレイン酸、グルタミン酸等が挙げられる。
【００１０】
(6)２つ以上のカルボキシル基を有する有機酸（但し、クエン酸を除く）、グリシン、若しくはこれらの塩のうち１種又は２種以上、並びにカロテノイド系色素若しくはカロテノイド系色素の含有物を含む組成物。
(7)カロテノイド系色素がアスタキサンチン、アスタキサンチンと脂肪酸とのエステル、若しくはアスタキサンチンと蛋白質との複合体である、前記(6)記載の組成物。
(8)２つ以上のカルボキシル基を有する有機酸がリンゴ酸，マロン酸，コハク酸，酒石酸，フマル酸，マレイン酸又はグルタミン酸である前記(6)又は(7)に記載の組成物。
(9)前記(6)乃至(8)のいずれかに記載された組成物を含む飼料。
(10)カロテノイド系色素がアスタキサンチン、アスタキサンチンと脂肪酸とのエステル、又はアスタキサンチンと蛋白質との複合体である、前記(9)記載の飼料。
【００１１】
以下に、本発明について詳細に説明する。
本発明はカロテノイド系色素の安定化剤として、２つ以上のカルボキシル基を有する有機酸（但し、クエン酸を除く），若しくはグリシンを用いることを特徴とする。かかる２つ以上のカルボキシル基を有する有機酸としては、例えばリンゴ酸，マロン酸，コハク酸，酒石酸，フマル酸，マレイン酸，グルタミン酸等を挙げることができる。これらの２つ以上のカルボキシル基を有する有機酸の中で、リンゴ酸は、またグリシンは、その安定化剤としての効果が高く、かつ安価であるという点で特に好ましい。
【００１２】
なお、２つ以上のカルボキシル基を有する有機酸（但し、クエン酸を除く），若しくはグリシンを水の存在下でカロテノイド系色素若しくはカロテノイド系色素の含有物に添加して、当該水処理の後に乾燥する場合、２つ以上のカルボキシル基を有する有機酸としては、例えばリンゴ酸，マロン酸，コハク酸，酒石酸，フマル酸，マレイン酸，グルタミン酸等を挙げることができる。これらの２つ以上のカルボキシル基を有する有機酸のなかで、リンゴ酸及びマロン酸は、そのカロテノイド系色素の安定化効果が高いという点で特に好ましい。
【００１３】
また、本発明において安定化されるべきカロテノイド系色素は、天然物であると合成品であるとを問わない。例えば、α−カロテン，β−カロテン，γ−カロテン，アスタキサンチン，カンタキサンチン，ゼアキサンチン，リコペン，クリプトキサンチン，クロシン，ロドキサンチン等を挙げることが可能であり、これらの色素を単独又は組み合わさせて用いることも可能である。また当該カロテノイド系色素と脂肪酸等とのエステル、例えばオレイン酸，リノール酸，パルミチン酸，ミリスチン酸等とのモノエステル若しくはジエステル；並びにこれらと蛋白質等との複合体、例えばカロテノプロテイン等を用いることができる。これらカロテノイド系色素等の中で、カロテノイド系色素と脂肪酸とのエステルやカロテノイド系色素の単独体は、自然界から容易にとりだし得るという点において好ましい。なお本発明においては、カロテノイド系色素として、下記のカロテノイド系色素を含有する細胞若しくは油からの溶媒等による抽出物や酸，アルカリ，酵素等で当該細胞を破砕処理したものをも包含される。また本発明において安定化剤として用いられる、前記有機酸の塩としては、ナトリウム，カリウム等のアルカリ金属塩；カルシウム，マグネシウム等のアルカリ土類金属塩が挙げられる。なお、グリシン，グルタミン酸，及びアスパラギン酸については、上記のアルカリ金属塩とアルカリ土類金属塩以外に塩酸塩，硫酸塩，若しくは有機酸塩であってもよい。
【００１４】
上記有機酸、グリシン，グルタミン酸，アスパラギン酸，及びこれらの塩からなる群から選ばれる１種又は２種以上の安定剤の添加量は、カロテノイド系色素若しくはカロテノイド系色素含有物に対して 0.3重量％以上、好ましくは、アスコルビン酸を除く有機酸については、安定化すべきカロテノイド系色素若しくはカロテノイド系色素含有物の乾燥物に対して３重量％以上を、アスコルビン酸については、安定化すべきカロテノイド系色素若しくはカロテノイド系色素含有物に対して 0.5重量％を添加する。一般にカロテノイド系色素は水不溶性であり、上記の有機酸等の安定化剤は水可溶性であるため、カロテノイド系色素への当該安定化剤の添加は、固体状のカロテノイド系色素若しくはカロテノイド系色素含有物に、固体状若しくは水に溶解した状態の上記安定化剤を混合添加することによって行われる。なお、カロテノイド系色素若しくはカロテノイド系色素含有物の水懸濁液に水溶液状若しくは固体状の上記安定剤を混合, 溶解し乾燥させることにより、上記安定化剤のカロテノイド系色素の安定化効果をさらに一層向上させることができる。故に当該添加形態を採るのが特に好ましい。なお、かかる混合形態を採る場合には、必要により混合に際し、攪拌下でカロテノイド系色素若しくはカロテノイド系色素含有物と上記安定化剤を混合して均一化することもできる。
【００１５】
次に本発明の飼料について説明する。
本発明の飼料は前記の安定化されたカロテノイド系色素等、又はカロテノイド系色素等と上記安定化剤を含んでなる飼料である。
本発明の飼料におけるカロテノイド系色素とカロテノイド系色素含有物並びに安定化剤は、前述の本発明の安定化方法と安定化されたカロテノイド系色素等の説明において示したものと同じである。また、本発明飼料において当該カロテノイド系色素及びその含有物は単独に又は組み合わせて、さらに当該安定化剤も単独に又は組み合わせて用いられる。
【００１６】
本発明飼料は、上述の安定化したカロテノイド含有物をそのまま飼料として用いてもよいが、これを他の飼料原料に添加してなる飼料であってもよい。すなわち、本発明の飼料中には、魚類やニワトリの飼料に通常添加する他の飼料原料が含まれていてもよい。ここに、飼料に通常添加する飼料原料としては、いわし, さんま, さば, いか等の魚肉；魚粉，骨肉粉，大豆粕，コーングルテンミール，酵母，小麦粉，米ぬか，ビタミン類等の混合物があげられる。
【００１７】
カロテノイド系色素の当該他の飼料原料への添加方法としては、上記の本発明方法で安定化したカロテノイド系色素若しくはカロテノイド系色素含有物の乾燥物を、他の飼料原料に添加混合したものでもよいが、カロテノイド系色素若しくはカロテノイド系色素含有物に上記安定化剤を水の存在下で添加したものを乾燥せずに、そのまま飼料原料に添加したものでもよい。また飼料は水を含んだ湿潤状のものでもよく、これを乾燥したものであってもかまわない。
【００１８】
本発明飼料の製造方法としては、好ましくはカロテノイド系色素の水懸濁液に好ましくは水溶液状の上記安定化剤を添加するか、又は固体状の当該安定化剤をカロテノイド系色素の水懸濁液に添加後攪拌溶解して加えることができる。ここで具体的にカロテノイド系色素としてアスタキサンチンを含む細胞を用いる本発明飼料の製造法を以下に示す。
【００１９】
アスタキサンチンを含む細胞、例えばファフィア・ロドチーマ酵母細胞は常法により、ブドウ糖、麦芽糖、蔗糖、糖蜜等の炭素源、酵母エキス、麦芽エキス、ペプトン、硫安等の有機および無機窒素源、その他微量栄養源を含有する培地（ｐＨ４〜６）において、21〜25℃で好気的条件下、２〜８日間で培養することができる。
【００２０】
次に当該細胞を培養した後、この培養物にアルカリ溶液を加えるか、又は遠心分離等により培養液と分離した細胞をアルカリ溶液中に浸漬させるか、当該分離細胞にアルカリ溶液を噴霧することによって、細胞のアルカリ処理を行う。ここで用いられるアルカリ溶液としては、例えば水酸化ナトリウム，水酸化カリウム，水酸化カルシウム，水酸化マグネシウム，炭酸ナトリウム，炭酸水素ナトリウム等のアルカリ溶液；ホウ酸−炭酸ナトリウム，塩化アンモニウム−アンモニア，グリシン−水酸化ナトリウム，重炭酸ナトリウム−炭酸ナトリウム，ホウ砂−炭酸ナトリウム，ホウ砂−水酸化ナトリウム，塩酸−炭酸ナトリウム，燐酸水素二ナトリウム−水酸化ナトリウム等の緩衝液を挙げることができる。かかるアルカリ溶液はpHを10以上に調整して用いられる。
【００２１】
上記のアルカリ処理をした細胞にその乾燥物に対して 0.3重量％の上記安定化剤を加え、混合攪拌してpHを７以下に下げることにより、カロテノイド系色素を安定化した飼料を製造することができる。またアルカリ処理した酵母細胞をpH７以下に中和後、上記の方法により、上記安定化剤を加えることによってもカロテノイド系色素が安定化された飼料を製造することができる。これらの安定化した飼料はそのまま飼料として用いてもよいが、他の飼料原料と混合して用いてもよい。
【００２２】
本発明飼料は、好ましくは水酸化ナトリウム又は塩酸等でpHを好適な保存条件である５以下に調整し、懸濁液のまま、又は真空乾燥，凍結乾燥，スプレー乾燥等により粉体として使用することができる。これらの安定化した飼料はそのまま飼料として用いてもよいが、さらに他の飼料原料と混合して用いてもよい。
また本発明飼料は、そのままマダイ，サケ，マス等の魚類又はニワトリの飼料としてもよいが、湿潤させあるいは乾燥させて、配合飼料用配合物と混合して、配合飼料とすることができる。かかる配合物としては、一般に用いられる養殖魚用配合飼料用配合物、例えば魚粉，肉骨粉，大豆油粕，コーングルテンミール，トルラ酵母，小麦粉，米糠，油粕，ビタミン等を挙げることができる。また、本発明飼料と配合物を混合して粉状，液状，ペレット状又はマッシュ状に形成して配合飼料とすることができる。配合飼料中、本発明飼料は0.03〜30重量％の割合で配合される。
【００２３】
【実施例】
以下に実施例等を挙げ、本発明をより具体的に説明する。
〔実施例１〕
ニンジンを破砕し水に懸濁させた。これに乾燥物換算で８重量％のリンゴ酸ナトリウム，マロン酸ナトリウム，グリシン，ヒマワリ抽出物又はトコフェロールを加え、各検体を真空乾燥により乾燥させた。各検体を褐色瓶に入れ、70℃の温度で１週間放置した後、ガラスビーズを用いて破砕しアセトンでカロテノイド系色素を抽出した。抽出液中のカロテノイド系色素を480nm で吸光光度法により測定した。添加物なしの場合のコントロールのカロテノイド残存量を 100％として各検体中のカロテノイドの相対値を第１表に示した。また合成アスタキサンチン（カロフィルピンク；ホフマンロッシュ製）を40℃の温湯で懸濁液とし、7.5mg／g になるよう分配し、乾燥物対比で８重量％のリンゴ酸ナトリウム，マロン酸ナトリウム，グリシン，ヒマワリ抽出物又はトコフェロールを加え、各検体を真空乾燥より乾燥させた。当該検体をニンジン懸濁液と同様の方法で処理し、カロテノイド系色素を測定した。添加物なしの場合のコントロールのカロテノイド残存量を 100％とした場合の各検体中のカロテノイド量を第１表に示した。
【００２４】
【表１】
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【００２５】
〔実施例２〕
ファフィア・ロドチーマ（IFO 10129 ）を酵母エキス 0.3％、ポリペプトン0.5％および蔗糖 3.0％からなる液体培地（pH5.0 ）100ml に接種し通気下23℃で５日間培養した後、培養菌体を遠心分離法により集菌した。当該菌体の乾燥重量対比で15重量％のリンゴ酸ナトリウム又は３重量％のアスコルビン酸ナトリウムを添加（コントロールは無添加）した後スプレー乾燥した。得られた組成物を市販のマダイ用飼料に対し10重量％の割合で添加し、これを瓶に入れて40℃で２ヶ月放置した後、アセトンにてカロテノイド類を抽出し、総カロテノイド量を480nm における吸光光度法により、またアスタキサンチン量を高速液体クロマトグラフィーにて測定した。コントロールにおける残存量を 100％とした場合の相対値として結果を第２表に示した。
【００２６】
【表２】
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【００２７】
〔実施例３〕
ファフィア・ロドチーマ（IFO 10129 ）を酵母エキス 0.3％、ポリペプトン0.5％および蔗糖 3.0％からなる液体培地（pH 5.0）100ml に接種し、通気下23℃で５日間培養した。培養菌体を遠心分離法により集菌後凍結乾燥した。この菌体に対して15重量％の乳鉢上で十分破砕した固体状のリンゴ酸を加えて混合攪拌して組成物１ａを得た。なお、かかる組成物１ａにおけるカロテノイド系色素の残存率については、参考例における当該残存率と共に、後記試験例１に記載する。
〔実施例４〜10〕
リンゴ酸の代わりにマロン酸，リンゴ酸ナトリウム，マロン酸ナトリウム，グリシン，コハク酸ナトリウム，フマル酸カリウム又はマレイン酸ナトリウムを用いる以外は実施例３と同様にして組成物２ａ（実施例４）、１ａａ（実施例５）、２ａａ（実施例６）、３ａ（実施例７）、４ａａ（実施例８）、８ａａ（実施例９）、又は９ａａ（実施例10）を得た。なお、上記組成物におけるカロテノイド系色素の残存率については、参考例における当該残存率と共に、後記試験例１に記載する。
〔実施例11〕
ファフィア酵母（IFO 10129 ）を実施例３と同様の方法により培養し、培養終了後酵母を集菌し、当該酵母の10％水懸濁液を作製した。当該懸濁液に菌体の乾物対比で15重量％の溶液状のリンゴ酸を加え、20分間放置した後、水酸化ナトリウムおよび硫酸でpH５に調整した。当該溶液を凍結乾燥して組成物１ｂを得た。なお、かかる組成物１ｂにおけるカロテノイド系色素の残存率については、参考例における当該残存率と共に、後記試験例１に記載する。
〔実施例12〜21〕
リンゴ酸の代わりにリンゴ酸ナトリウム，マロン酸，グリシン，コハク酸，酒石酸，グルタミン酸，アスパラギン酸，フマル酸，マレイン酸又はクエン酸を用いる以外は実施例11と同様にして、各組成物１ｂａ（実施例12），２ｂ（実施例13），３ｂ（実施例14），４ｂ（実施例15），５ｂ（実施例16），６ｂ（実施例17），７ｂ（実施例18），８ｂ（実施例19），９ｂ（実施例20），31ｂ（実施例21）を得た。なお、上記組成物におけるカロテノイド系色素の残存率については、参考例における当該残存率と共に、後記試験例１に記載する。
〔実施例22〜26〕
リンゴ酸の添加量を菌体に対して１％，３％，６％，12％又は36％に代える以外は実施例11と同様の方法にして各組成物10ｂ（実施例22) ，11ｂ（実施例23），12ｂ（実施例24），13ｂ（実施例25），14ｂ（実施例26）を得た。上記の組成物におけるカロテノイド系色素の残存率については、参考例と共に、試験例２に記載する。
〔実施例27〕
ファフィア酵母（IFO 10129 ）を酵母エキス 0.3％、ポリペプトン 0.5％および蔗糖 3.0％からなる液体培地 100mlに接種し通気下でpH5.0 、23℃の条件下５日間培養した後、菌体を遠心分離法により集菌し懸濁液を得た。当該菌体の乾物重量対比で15重量％のリンゴ酸ナトリウムを加え、10時間放置した後凍結乾燥し、組成物15ｃを得た。かかる組成物15c におけるカロテノイド系色素の残存率については、参考例における当該残存率と共に、試験例３に記載する。
〔実施例28〜33〕
リンゴ酸ナトリウムの添加量を菌体に対して２％，４％，５％，10％，20％又は36％に代える以外は実施例27と同様の方法にして各組成物16ｃ（実施例28），17ｃ（実施例29），18ｃ（実施例30），19ｃ（実施例31），20ｃ（実施例32) ，21ｃ（実施例33）を得た。上記組成物におけるカロテノイド系色素の残存率については、参考例における当該残存率と共に、試験例３に記載する。
〔実施例34〜37〕
リンゴ酸の代わりに各１％，３％，５％又は８％のアスコルビン酸ナトリウムを用いる以外は実施例11と同様の方法にして、各組成物33ｂａ（実施例34），34ｂａ（実施例35），35ｂａ（実施例36）又は36ｂａ（実施例37）を得た。上記組成物におけるカロテノイド系色素の残存率については、後記試験例４に記載する。
〔実施例38〕
リンゴ酸の代わりに菌体乾物対比で10重量％のクエン酸と３重量％のアスコルビン酸の２種の酸を混合して用いる以外は実施例11と同様にして組成物37ｂを得た。かかる組成物37ｂにおけるカロテノイド系色素の残存率については、参考例における当該残存率と共に、後記試験例１に記載する。
〔実施例39〕
15重量％のリンゴ酸の代わりに３重量％のアスコルビン酸を用いる以外は実施例３の方法と同様にして組成物32ａを得た。なお、かかる組成物32ａにおけるカロテノイド系色素の残存率については参考例における当該残存率と共に後記試験例１に記載する。
〔実施例40〕
15重量％のリンゴ酸の代わりに３重量％のアスコルビン酸を用いる以外は実施例11の方法と同様にして組成物32ｂを得た。なお、かかる組成物32ｂにおけるカロテノイド系色素の残存率については、参考例における当該残存率と共に、後記試験例１に記載する。
〔実施例41〕
サケの身をホモジナイザーで粉砕し水懸濁液とした。当該懸濁液に対し乾物対比３重量％のアスコルビン酸ナトリウム（コントロールは無添加）を溶解添加し、10分間浸漬した後真空乾燥した。当該試料を瓶に入れ、70℃で１週間放置した後、アセトンにてカロテノイド類を抽出し、総カロテノイド量を480nm における吸光光度法により、またアスタキサンチン量を高速液体クロマトグラフィにて測定した。結果を第３表に示した。
【００２８】
【表３】
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【００２９】
〔実施例42〕
ファフィア・ロドチーマ（IFO 10129 ）を酵母エキス 0.3％、ポリペプトン0.5％および蔗糖 3.0％からなる液体培地（pH5.0 ）100ml に接種し、通気下23℃で５日間培養した後、培養菌体を遠心分離法により集菌後凍結乾燥した。得られた菌体を0.2N水酸化ナトリウム中に60分浸したアルカリ処理した後、硫酸でpHを５に調整した群とアルカリ処理を行わないアルカリ無処理群に酵母を分けた後、酵母の乾物対比で３重量％の溶液状のアスコルビン酸ナトリウムを加えてスプレー乾燥した。得られた試料を瓶に入れ、70℃で２週間放置した後、アセトンにてカロテノイド類を抽出し、総カロテノイド量を480nm における吸光光度法により、またアスタキサンチン量を高速液体クロマトグラフィにて測定した。結果を第４表に示した。なお、結果はアルカリ無処理でアスコルビン酸無添加のコントロールに対する相対値で示した。
【００３０】
【表４】
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【００３１】
〔参考例１〕
リンゴ酸の代わりに酢酸ナトリウムを用いる以外は実施例３と同様にして組成物Ａａａを得た。
〔参考例２〕
リンゴ酸の代わりに酢酸を用いる以外は実施例11と同様にして組成物Ａｂを得た。
〔参考例３〕
リンゴ酸を加えない以外は実施例３と同様にして組成物Ｃａを得た。
〔参考例４〕
リンゴ酸を加えない以外は実施例11と同様にして組成物Ｃｂを得た。
〔参考例５〕
リンゴ酸の代わりに硫酸ナトリウムを用いる以外は実施例３と同様にして組成物Ｄａａを得た。
〔参考例６〕
リンゴ酸の代わりにフタル酸カリウムを用いる以外は実施例３と同様にして組成物Ｅａａを得た。
〔参考例７〕
リンゴ酸ナトリウムを加えない以外は実施例27と同様にして組成物Ｃｃを得た。
〔試験例１〕
上記の実施例３〜10および実施例39のカロテノイド系色素含有酵母細胞と固体状の安定化剤を混合して得た組成物、実施例11〜21、実施例38および実施例40のカロテノイド系色素含有酵母細胞の水懸濁液に安定化剤を添加し混合溶解して後これを乾燥して得た組成物、並びに参考例１〜６で得られた各種組成物、各１g を褐色瓶に入れ、70℃の温度で１週間保存した。各組成物200mg にアセトン２mlとガラスビーズ２ｇを加えて振盪し破砕した後、アセトン48mlを加えカロテノイド系色素を抽出し、総カロテノイド量を480nm の可視部の吸収強度から吸光光度法で測定した。参考例３および４で得られる当該安定化剤なしの場合の組成物Ｃａ（固体混合組成物のコントロール）およびＣｂ（水存在下で混合後、乾燥して得る組成物のコントロール）のカロテノイド系色素の残存量を 100％として、各種組成物中のカロテノイド系色素の残存量をコントロールに対する相対値で示した。結果を第５表に示す。
【００３２】
【表５】
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【００３３】
第５表によれば各実施例組成物におけるカロテノイド系色素の残存率はコントロールよりも高く、本発明における安定化剤がカロテノイド系色素を安定化させていることが示された。またいずれの場合も、カロテノイド系色素含有酵母の水懸濁液に安定化剤を溶解添加後乾燥して作製した組成物の方が、酵母菌体に安定化剤を固体状態で混合して得た組成物よりカロテノイド系色素の残存率がかなり高かった。またアスコルビン酸と他の有機酸との間には併用効果が認められた。
〔試験例２〕
前記実施例22〜26で得られた各種濃度のリンゴ酸含有組成物各１g を褐色瓶に入れ、70℃の温度で１週間保存した。各組成物 100mgにアセトン２ml、ガラスビーズ２g を加え振盪して破砕した後、アセトン48mlを加えカロテノイド系色素を抽出し、総カロテノイド量を480nm の可視部吸収強度から吸光光度計で測定し、更に高速液体クロマトグラフィにてアスタキサンチンを分離定量した。参考例４で得られる添加物なしの場合の組成物Ｃｂ（コントロール）のカロテノイド系色素又はアスタキサンチンの残存量を 100％としてコントロールに対する相対値で示した。結果を第６表に示した。
【００３４】
【表６】
0003665084.tif 000007
【００３５】
〔試験例３〕
実施例27〜33で得られた各種リンゴ酸ナトリウム含有組成物各１g を褐色瓶に入れ、70℃の温度で１週間保存した。各組成物200mg にアセトン２ml、ガラスビーズ２g を加え振盪し破砕した後、アセトン48mlを加えカロテノイド系色素を抽出し、総カロテノイド量を480nm の可視部吸収強度から吸光光度計で測定した。
【００３６】
参考例７で得られる酸無添加の場合の組成物Ｃｃ（コントロール）のカロテノイド系色素残存量を 100％として、各種組成物中のカロテノイド系色素の残存量をコントロールに対する相対値で示した。結果を第７表に示した。
【００３７】
【表７】
0003665084.tif 000008
【００３８】
〔試験例４〕
各種リンゴ酸含有組成物の代わりに前記実施例34〜37で得られた各種アスコルビン酸ナトリウムを用いる以外は試験例２と同様の方法にして、試料中のカロテノイド系色素およびアスタキサンチンの残存量をコントロールに対する相対値で示した。結果を第８表に示した。
【００３９】
【表８】
0003665084.tif 000009
【００４０】
【発明の効果】
本発明により、食品、医薬品、飼料分野において、着色料又は医薬原料として有用なカロテノイド系色素の安定化方法、当該方法により製造された安定化組成物、及び当該方法により安定化されたカロテノイド系色素を含有する飼料が提供される。