(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
中心線平均粗さＲａ値が０．５８μｍ〜２．４６μｍであり、でこぼこ平均間隔Ｓｍ値が５．８μｍ〜１０１μｍの範囲にある凹凸を表面に有する材料と血液とを接触させることにより、インターロイキン１の産生を誘導することを特徴とするインターロイキン１の産生誘導方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、特定の材料と血液とを接触させることによりインターロイキン１を産生誘導するための方法に関し、上記材料表面を工夫することによりインターロイキン１の産生を効果的に誘導し得るインターロイキン１の産生誘導方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
周知のごとく、生体の悪性腫瘍に対する免疫監視機構を担う抗腫瘍性細胞としては、キラー細胞、ＮＫ細胞、ＬＡＫ細胞及び、活性化マクロファージ等が重要な役割を果たしている。また、これらの細胞やリンパ球から分泌されるインターロイキン、インターフェロン等のサイトカインは、生体の抗腫瘍性に大きく関与している。近年、外科手術、放射線療法、化学療法と併用して、生体の持つ免疫監視機構を賦活することを目的とした免疫療法が、悪性腫瘍の治療法として盛んに行われてきている。このような、免疫療法剤として、例えば、レンチナンやシゾフィランの様な薬剤があるが、癌患者は免疫抑制状態にあり、かかる状態の中で抗腫瘍免疫に関係する上記の細胞や因子を誘導することはなかなか困難である。
【０００３】
このような困難を克服するために、最近、抗腫瘍免疫に関係する上記の細胞や因子を体外で誘導したり、直接体外から投与しようという試みがある。例えば、癌患者からリンパ球と腫瘍細胞とを体外に取りだし、遺伝子組み替えヒト・インターロイキンを加えて培養し、腫瘍を特異的に攻撃するリンパ球（ＬＡＫ細胞）を誘導した後に、癌患者体内に戻して、抗腫瘍効果を発揮する養子免疫療法が行われている。（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ａ．，Ｌｏｔｚｅ，Ｍ．Ｔ．，Ｍｕｕｌ，Ｌ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．：Ａ    Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｒｅｐｏｒｔ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  １５７    ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｕｓｉｎｇ  ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２  ｏｒ  ｈｉｇｈ−ｄｏｓｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２  ａｌｏｎｅ．  Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１６：８８９−８９７，１９８７）。
【０００４】
しかしながら、癌患者から大量のリンパ球を取り出し、無菌的に長期間、インターロイキンの存在下で培養した後に、癌患者に注入するという操作を行うため、非常に手間がかかること並びに、培養に長時間を要すること及び高価なインターロイキンが必要であることなどの多くの問題があった。
【０００５】
また、遺伝子組み替え技術により、抗腫瘍免疫に関係する上記の種々のサイトカインを大量に得ることができるようになり、これらのサイトカインの直接投与（高久史麿  編集、南江堂、サイトカイン療法、１９９２）が行われている。しかしながら、遺伝子組み替え技術により得られたサイトカインは、その蛋白質分子内に糖鎖を持たなかったり、翻訳後修飾を受けていないものであり、本来患者体内で作られるサイトカインと異なっている。そのため、患者に直接投与しても血液中での寿命が短く、本来の効果が発揮できなかったり、様々な副作用が伴うという欠点を有している。
【０００６】
近年、上記欠点を克服するために、癌患者が本来持っている抗腫瘍免疫機能を体外循環システム等を利用して、体外で産生を誘導しようという試みがある。例えば、グラム陰性菌細胞壁由来のリポ多糖（特開昭５９−２１１４５号公報）やレクチン（特開昭６３−３３３３９号公報）の様な生理活性物質を不溶性担体に固定化し、体外に取り出した血液および血液成分と接触させることによって抗腫瘍免疫機能を誘導することが開示されている。しかしながら、これらの生理活性物質は、体内にはいった場合に、強い毒性を示す物質であり、不溶性担体からの脱離の可能性が皆無である保証がない。また、特開平３−２３６７９０号公報、特開平３−２４０４８５号公報には、それぞれグルクロン酸やＮ−アセチルノイラミン酸のような酸性糖を不溶性材料に固定化し、サイトカインを誘導する血液処理剤が開示されている。これらは不溶性担体から脱離しても生体に対する毒性はないが、このようなリガンドであっても、不溶性担体に固定化するための反応を行わねばならず、煩雑な過程が必要である。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、上述した従来技術の諸欠点を解消し、抗腫瘍免疫機能を賦活するサイトカインであるインターロイキン１を、血液からより簡便に、かつより安全に産生誘導し得る方法を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明は、上記課題を達成するためになされたものであり、中心線平均粗さＲａ値が０．５８μｍ〜２．４６μｍであり、凸凹平均間隔Ｓｍ値が５．８μｍ〜１０１μｍの範囲にある凹凸を表面に有する材料と、血液とを接触させることにより、インターロイキン１の産生を誘導することを特徴とする、インターロイキン１の産生誘導方法である。
【０００９】
血液中の単球や好中球などの白血球が異物と反応すると、種々の酵素、メディエーターを放出し、炎症反応を引き起こす。これらの反応は、材料と接触するときにも同様に引き起こされる。これは、材料が異物とみなされて起こるものであるが、この反応は材料の性質によって大きく変わってくる。一方、インターロイキン１は１９４０年代に白血球が産生する発熱物質として古くから知られている物質であるが、種々の生理活性を持ち、炎症反応においても産生される。そこで、本発明者らは、材料の性質を制御することによって、インターロイキン１の白血球からの産生を制御できるのではないかと考えた。これまで、白血球と材料との上記反応については、材料の粒子径、繊維径や組成については調べられているが、材料表面の形状についてはよく分かっていなかった。そこで、我々は高分子材料の表面の形状と白血球のインターロイキン１の産生を調べた結果、本発明を完成するに至った。
【００１０】
すなわち、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム及び酢酸セルロースフィルムについてインターロイキン１の産生誘導試験を行ったところ、１２００メッシュ以下の荒さのサンドペーパーで各フィルムを研磨した場合には（Ｒａ値が０．２μｍ以上、１０μｍ以下の表面粗さを有するように研磨した場合には、）、未研磨の各フィルムに比べてインターロイキン１の産生を効果的に誘導し得ることがわかった。また、ナイロンや酢酸セルロースの球状ビーズは、表面にＲａ値が０．２μｍ以上、１０μｍ以下の粗さをつけることにより、著しくインターロイキン１の産生誘導が行われることもわかった。
【００１１】
上記の事実は、適度な表面粗さを有する材料では、その材質によらず、表面の凹凸性が原動力となり、インターロイキン１の産生誘導を促進することを意味しているものと考えられる。また、白血球などの大きさが１０μｍ〜２０μｍであるのに対し、上記材料のＲａ値が０．５８μｍ〜２．４６μｍの範囲であり、白血球などに比べて、上記Ｒａ値が非常に小さいため、上記表面粗さによる効果は、単なる接触表面積の増大によるものではないと考えられる。
【００１２】
従って、本発明において用いられる上記材料は、材料の種類を問うものではなく、中心線平均粗さＲａ値が０．５８μｍ〜２．４６μｍの範囲にあり、かつ後述の実施例から明らかなように凹凸平均間隔Ｓｍ値が５．８μｍ〜１０１μｍの範囲にある凹凸を表面に有するものであれば任意の材料を用いることができる。
【００１３】
なお、上記Ｒａ値とはＪＩＳ  Ｂ０６０１−１９８２における中心線平均粗さである。また、上記凹凸平均間隔Ｓｍ値は、以下のようにして定義される値である。
【００１４】
でこぼこ平均間隔Ｓｍ値
現在のＪＩＳ規格では、表面粗さの高さ方向の情報については規定されているが、面方向の情報に関しては規定されていない。しかしながら、本発明における凹凸は、凹凸の面方向における間隔によっても後述の実施例から明らかなように限界付けられるものである。そこで、本発明では、でこぼこ平均間隔Ｓｍ値を用いることにより凹凸の面方向の範囲を規定した。
【００１５】
上記でこぼこの平均間隔Ｓｍ値は、以下のようにして求められる。
まず、図１に示す粗さ曲線Ａの中心線Ｂに対して、それぞれ、一定の高さ及び深さの位置に上側カウントレベル及び下側カウントレベルを引く。次に、下側のカウントレベルと粗さ曲線Ａとが交差する２点間において、上側カウントレベルと粗さ曲線とが交差する点が一回以上存在するときに、一つの山として「山」を定義する。
【００１６】
そして、でこぼこ平均間隔Ｓｍ値は、図２に示すように、基準長さＬの間にある山の間隔をＳｍｉとしたときに、下記の式▲１▼で定義される値である。
【００１７】
【数１】
0003633637.tif 000002
【００１８】
すなわち、でこぼこ平均間隔Ｓｍ値とは、基準長さＬの間にある山同士の間隔の平均値を示す。このようにして、でこぼこの平均間隔Ｓｍ値により、凹凸の面方向の条件が定義される。
【００１９】
本発明者らは、前述したＲａ値が０．２μｍ以上、１０μｍ以下であるＰＥＴフィルムを１２００メッシュのサンドペーパーで研磨時間を変えて研磨することにより、Ｓｍ値が４７４、３７４、２１３、１０１、５６、３１μｍの各フィルムを作成し、後述のフィルムによるインターロイキン１の産生誘導試験を実施した結果、Ｓｍ値が５．８μｍ以上、１０１μｍ以下となるとインターロイキン１の産生誘導が著しく高められることを見いだした。
【００２０】
従って、インターロイキン１の産生誘導を高めるには、中心線平均粗さＲａ値が０．５８μｍ〜２．４６μｍであり、かつでこぼこの平均間隔Ｓｍ値が５．８μｍ〜１０１μｍであることが必要である。
【００２１】
本発明で血液と接触させるのに用いられる材料
本発明において用い得る上記材料としては、人体に対して有害でないもの、例えば、血液と材料とが接触された際に有害な金属や可塑剤などの添加物の流出が無いものであれば、その種類を問わず利用することができる。用い得る材料の例としては、ガラス及びアルミナ等の無機材料、並びに酢酸セルロース、ポリスチレン、ナイロン、ポリテトラフルオルエチレン、ポリトリフルオルエチレン、パーフルオロエチレン−プロピレン共重合体、ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、アクリル樹脂、エチルセルロースなどの合成及び天然の有機高分子材料等が挙げられる。
【００２２】
また、材料に上記表面粗さを付与する方法としては、研磨法が一般的であるが、他の方法によって上記特定の表面粗さを有するように構成してもよい。例えば、材料表面に微粒子を物理的或いは化学的に固定する方法や、表面が多孔質の材料を用いる方法等も利用することができる。
【００２３】
材料表面に微粒子を固定する方法としては、例えば０．１μｍ〜２０μｍの微粒子をコーティングする方法が挙げられ、それによってインターロイキン１を産生誘導させ得る。ここで用いる微粒子は、例えばスチレン系やアクリル系などのビニル系モノマーの単独あるいは２成分以上の混合物を乳化重合や懸濁重合することにより調製することができる。これらの微粒子としては、好ましくは、例えば、ジビニルベンゼンのような２官能基以上の多官能性モノマーとの共重合体からなるものが用いられる。
【００２４】
次に、上記微粒子コーティングする方法を説明する。先ず、コーティングのための結合剤としての合成高分子や天然高分子を０．１〜５重量％程度溶解させた液にこれらの微粒子を懸濁させる。次に、この懸濁液に予め成形しておいた有機もしくは無機材料からなるビーズ、繊維またはフィルム状の担体を浸漬し、その後乾燥することにより、本発明のインターロイキン１の産生誘導に用いられる材料を作製することができる。この場合のＲａ値の調整は微粒子の大きさにより、またＳｍ値の調整は懸濁粒子の濃度によって行い得る。
【００２５】
また、多孔質材料の場合でも、その形状は膜状、繊維状またはビーズ状の何れでもよく、かつ表面のみが多孔性であってもよく、材料全体が多孔性であってもよい。表面多孔質材料については、例えば、有機もしくは無機材料からなるビーズ、繊維またはフィルム状の担体に、コーティング液として合成高分子や天然高分子をそれらの良溶媒中に０．１〜５重量％程度溶解させた液をスプレーによって霧状に吹き付けて加熱乾燥することによって得られる。また、材料全体が多孔性になっているものの製法としては、一般的な多孔性膜及び多孔性ビーズなどの製法を使用することができる。例えば、多孔性膜では、合成高分子を良溶媒に溶解させてガラス板上に流延させてキャスティングフィルムを作製し、その後、合成高分子の貧溶媒にてフィルムを洗浄し、良溶媒を抽出することによって多孔性膜を調製することができる。
【００２６】
多孔性材料の場合のＲａ値やＳｍ値の調整は、細孔径や細孔量を調整することによって達成され、細孔径や細孔量は材料を溶解させる溶媒の種類や量を変えることにより容易に調節することができる。
【００２７】
本発明において、血液と上記材料とを接触させる方法については、血液と上記材料とが十分に接触され得る限り、任意の方法を用いることができる。例えば、繊維状の上記材料をカラムに充填し、該カラムに血液を循環させる方法、や粒径５０μｍ〜５ｍｍのビーズ状の材料をカラムに充填し、血液を循環させる方法を用いることができる。さらに、血液中に種々の形状の上記材料を浮遊させることにより、血液と上記材料を接触させてもよい。
【００２８】
上記材料と血液とを接触させる際の温度は、細胞や蛋白質への影響を考えた場合、１５℃〜４２℃の範囲で行うことが望ましいが、より好ましくは、３０℃〜４０℃の範囲の方が、インターロイキン１の産生誘導を高めるうえでは好ましい。
【００２９】
本発明では、上記材料を血液とを接触させることにより、上記材料と細胞との相互作用により、インターロイキン１の産生誘導が行われる。このインターロイキン１産生細胞とは、抹消血中の細胞に限らず、リンパ管、リンパ節または脾臓等から得られる細胞も含まれる。血液中には、インターロイキン１を産生するこれらの細胞が多く含まれている。血液中のこれらの細胞が、上記材料と作用し、インターロイキン１が産生誘導されるが、直接作用せずとも、上記材料と血液中の何らかの因子とが作用して誘導された別の因子を介して上記細胞により、インターロイキン１の産生が誘導されてもよい。
【００３０】
本発明では、上記特定の表面粗さの材料が、血液と接触されてインターロイキン１の産生誘導が行われるため、癌患者等の血液からインターロイキン１を産生誘導することができるため、本発明は癌などの治療に好適に用いることができる。また、本発明の方法によってインターロイキン１が産生誘導された血液を癌患者に戻すことにより、癌患者内因性のインターロイキン１を患者に与えることができるため、患者の体内において優れた抗腫瘍効果を発揮させることができる。
【００３１】
本発明を用いた癌治療法について以下に例示する。癌患者の血液を血液回路等を用いて連続的に体外に導き、繊維状またはビーズ状の上記インターロイキン１誘導材料を充填したカラム部にて、好ましくは体温付近の温度にて血液を上記材料と接触させ、血液内にインターロイキン１を産生誘導する。しかる後、この癌患者内因性のインターロイキン１を多量に含む血液および血液成分を癌患者体内に連続的に返血する。上記治療方法に用いられる装置としては、市販の体外循環システム等の上記操作過程を可能にする装置であれば任意のものを用いることができる。
【００３２】
また、本発明を用いた別の癌治療法としては、あらかじめ癌患者の血液を採血し、上記材料を内部に含有する血液バッグ内で上記材料と癌患者血液とを接触させ、インターロイキン１を産生誘導し、遠心分離等の手段を用いて血漿等を分離後、患者に投与する方法が挙げられる。また、上記方法によって得た癌患者内因性のインターロイキン１を多量に含む癌患者自身の血漿等を冷凍保存し、しかる後に、必要に応じて患者に投与することも可能である。
【００３３】
【作用】
本発明では、中心線平均粗さＲａ値が０．５８μｍ〜２．４６μｍであり、でこぼこ平均間隔Ｓｍ値が５．８μｍ〜１０１μｍの範囲にある凸凹を表面に有する材料が血液と接触されるため、上記材料の上記表面形状により血液中のインターロイキン１を産生する細胞と該材料との相互作用が促進されることにより、あるいは上記材料と何らかの因子とが相互作用し、それによって誘導された別の因子により、インターロイキン１の産生が効率よく誘導され得る。
【００３４】
【実施例】
以下、本発明の実施例及び比較例を挙げることにより、本発明を詳細に説明する。
【００３５】
まず、下記の実施例１〜１３及び比較例１〜１３に用いた試料の作製方法及び試験方法を説明する。
（１）研磨フィルムの作製方法（実施例１〜６、比較例１〜６）
インターロイキン１産生誘導材料としてのフィルムを用意し、該フィルムの表面をメチルアルコールで洗浄した後、ストルアス社（デンマーク）製、自動研磨機（商品名；プラノボールペデマックス）に、２２０、５００、１２００、２４００、及び４０００メッシュのサンドペーパーを取り付けたものを用い、表面の両側に表面粗さを持つ研磨フィルムを作製した。
【００３６】
（２）フィルムによるインターロイキン１産生誘導試験方法（実施例１〜９、比較例１〜９）
フィルムを３ｃｍ×４ｃｍの大きさに切り、これをさらに５ｍｍ×５ｍｍの大きさの細片にした。これらの細片を注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２ｍ１用チューブ（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  社）  にすべて充填した。
【００３７】
フィルムを充填したチューブにヘパリン採血した健常人新鮮血２．０ｍｌを加えて回転円盤に取り付けて、３７℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。しかる後、血液を回収し、後述の方法で血漿中のインターロイキン１の濃度を測定した。
【００３８】
（３）ビーズによるインターロイキン１産生誘導実験（実施例１０〜１３及び比較例１０〜１３）
ビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２ｍ１用チューブ（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  社）  に規定数を充填した。
【００３９】
各ビーズを充填したチューブにヘパリン採血した健常人新鮮血１．６ｍ１を加えて回転円盤に取り付けて、３７℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。しかる後、血液を回収し、後述の方法で血漿中のインターロイキン１の濃度を測定した。
【００４０】
（４）表面粗さの測定方法
各実施例及び比較例において記載されている中心線平均粗さＲａ値（カットオフ値は、フィルムでは０．８ｍｍ、ビーズでは０．０８ｍｍ）及びでこぼこ平均間隔Ｓｍ値は、表面粗さ測定装置（小坂研究所製、商品名；サーフコーダＳＥ−３０Ｄ）により測定した。
【００４１】
（５）血漿中インターロイキン１濃度測定方法
インターロイキン１産生誘導試験後の血液を遠心分離して血漿を採取し、血漿中のインターロイキン−１βの濃度をインターロイキン−１βモノクローナル抗体を用いて、免疫酵素抗体法（Ｍａｄｇｅｎｉｘ社製、商品名；ＩＬ−１Ｂ−ＥＡＳＩＡＲ）にて測定した。この測定方法の検出限界濃度は１０ｐｇ／ｍｌであった。
【００４２】
また、採血直後の血液を遠心分離して血漿を採取して、血漿中のインターロイキン−１βの濃度を同様にして測定した。採血直後の血液の血漿中インターロイキン−１β濃度は何れも検出限界以下であった。
【００４３】
実施例１〜３及び比較例１〜３
ＰＥＴフィルム（ユニチカ社製、ポリエチレンテレフタレートフィルム、商品名：エンブレットＳ−７５）を用い、上述した研磨フィルムの作製方法に従って、５段階に研磨されたフィルムを作製した。そして、未研磨のフィルム及び５段階に研磨されたフィルムのそれぞれについて、Ｒａ値及びＳｍ値を求めた後、上述したフィルムによるインターロイキン１産生誘導試験を行った。結果を下記の表１に示す。
【００４４】
【表１】
0003633637.tif 000003
【００４５】
表１から明らかなように、Ｒａ値が０．６ｌμｍ以上の実施例１〜３では、インターロイキン１の産生誘導が急激に増加した。
なお、Ｓｍ値については、比較例１の未研磨フィルムでは４７５μｍであったのに対して、それ以外のフィルムで３０〜１３０μｍの範囲であった。
【００４６】
実施例４〜６及び比較例４〜６
ＰＥＴフィルムをＣＡフィルム（アートプラス社製、酢酸セルロースフィルム、商品名；アセチフィルムＶＲ−Ｒ）に代え、さらに、メチルアルコールで洗浄する代わりにメチルアルコールでソックスレー抽出（２４時間）を行って可塑剤を抽出し、フィルムを取り出した後、１５時間風乾後、さらに８０℃で５時間乾燥させたこと以外は、実施例１〜３及び比較例１〜３と同様にして未研磨及び研磨フィルムを作製し、インターロイキン１産生誘導試験を行った。結果を表２に示す。
【００４７】
【表２】
0003633637.tif 000004
【００４８】
表２から明らかなように、実施例４〜６、すなわち１２００メッシュ以下のサンドペーパーで研磨した研磨フィルム（Ｒａ値＝０．５８μｍ以上）においてインターロイキン１の産生誘導は急激に増加した。
【００４９】
なお、Ｓｍ値については、未研磨フィルム（比較例３）が２５０μｍであったのに対して、研磨フィルムは３０〜１３０μｍの範囲であった。
実施例７〜９及び比較例７〜９
１２００メッシュのサンドペーパーを用いて研磨したこと、及び研磨時間を変化させたこと以外は実施例１〜３と同様にして、表面粗さＲａ値が０．６μｍ以上、Ｓｍ値が３０〜３７０μｍの範囲にある５種類の研磨フィルムを作製した（表３参照）。
【００５０】
上記５種類の研磨フィルムと未研磨のＰＥＴフィルム（比較例７）とを用意し、実施例１と同様にしてインターロイキン１の産生誘導試験を行った。結果を表３に併せて示す。
【００５１】
【表３】
0003633637.tif 000005
【００５２】
表３から明らかなように、Ｓｍ値が２００μｍを超えている比較例７〜９に比べて、Ｓｍ値が２００μｍ以下である実施例７〜９では、インターロイキン１の産生誘導が著しく大きいことがわかる。すなわち、同程度のＲａ値を持っていても、Ｓｍ値が２００μｍ以下でないと産生誘導の効果が出ないことがわかる。
【００５３】
実施例１０
酢酸セルロースペレット（アートプラス社製、可塑剤としてアセチルクエン酸トリエチル３０重量％含有）を射出成形し、直径２．５ｍｍの球状ビーズを作製した。このビーズ５０ｇをメタノール３００ｍｌにより、５０℃で２４時間ソックスレー抽出し、可塑剤を抽出した。しかる後、可塑剤が抽出されたビーズをステンレス製バットに取り出し、１５時間風乾した後、さらに８０℃で５時間乾燥させた。
【００５４】
ポットミル（東洋エンジニアリング社製、商品名；５ｌ−セラミックポットミルＢＰ−５）に、上記ビーズ２００ｍｌ及び同容量の研磨材；ＷＨＩＴＥ  ＡＢＲＡＸ（ＷＡ）＃３４（日本研磨材工業社製）を投入し、さらにセラミックポットミル用ボール（東洋エンジニアリング社製、商品名；ＢＢ−１３）数個を投入し、ボール研磨機（日陶科学社製ポットミル、商品名；ＡＮ−３Ｓ）により５時間研磨した。このようにして、Ｒａ値１．３６μｍ及びＳｍ値９７．２μｍのビーズを得た。
【００５５】
得られたビーズをメタノールで３回洗浄して、注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で５回洗浄した。その後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２ｍｌ用チューブ（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  社）に充填した。充填量はビーズ７０個とした。
【００５６】
比較例１０とともに上記ビーズによるインターロイキン１産生誘導実験を行った。結果を下記の表４に示す。
比較例１０
実施例１０と同様にして、但し、研磨をしていないＲａ値０．１８６μｍ、Ｓｍ値２９８．７μｍ  のビーズを作製した。
【００５７】
実施例１０と同様に、洗浄し、次に２ｍ１用チューブに上記ビーズ７０個を充填し、上記ビーズによるインターロイキン１産生誘導試験を行った。結果を、下記の表４に示す。
【００５８】
【表４】
0003633637.tif 000006
【００５９】
実施例１１
ナイロン６６ペレット（宇部興産社製、商品名；ウベ６６  ２０２０Ｂ）を射出成形し、直径２．５ｍｍの球状ビーズを作製した。
【００６０】
ポットミル（東洋エンジニアリング社製、商品名；５ｌ−セラミックポットミルＢＰ−５）に、上記ビーズ２００ｍｌ及び同容量の研磨材；ＷＨＩＴＥ  ＡＢＲＡＸ（ＷＡ）＃３４（日本研磨材工業社製）を投入し、さらにセラミックポットミル用ボール（東洋エンジニアリング社製、商品名；ＢＢ−１３）数個を投入し、ボール研磨機（日陶科学社製ポットミル、商品名；ＡＮ−３Ｓ）により５時間研磨した。
【００６１】
上記のようにして、Ｒａ値９．１μｍ及びＳｍ値１２３．５μｍのビーズを得た。
このビーズをメタノールで３回洗浄して、注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で５回洗浄した。その後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２ｍｌ用チューブ（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  社）に充填した。充填量はビーズ７０個とした。
【００６２】
比較例１１とともに上記のビーズによるインターロイキン１産生誘導実験を行った。結果を下記の表５に示す。
比較例１１
実施例１１と同様にして、但し、研磨をしていない、Ｒａ値０．２１０μｍ、Ｓｍ値２９４．４μｍのビーズを作製した。
【００６３】
実施例１１と同様に、上記ビーズを洗浄して、７０個を２ｍｌ用チューブに充填した。
【００６４】
【表５】
0003633637.tif 000007
【００６５】
実施例１２及び比較例１２
比較例１０で得たＣＡビーズ（未研磨ビーズ）を、懸濁重合により作製したスチレン−ジビニルベンゼン共重合体（共重合比は１：１）微粒子（積水化学工業社製、粒径３μｍ）２重量％を懸濁した酢酸セルロース（ダイセル化学工業社製、商品名；リンター）の１重量％の塩化メチル−エタノール（重量比で９：１）溶液に浸漬した後、風乾し、それによって微粒子コーティングビーズ（実施例１２）を作製した。
【００６６】
ビーズ表面上に、上記微粒子が酢酸セルロースによってコーティングされていることを電子顕微鏡により確認した。
上記のようにして得た微粒子コーティングビーズ（実施例１２）及び未コーティングビーズ（比較例１２）各７０個を用い、前述したビーズによるインターロイキン１産生誘導試験を行った。結果を表６に示す。
【００６７】
【表６】
0003633637.tif 000008
【００６８】
表６から明らかなように、微粒子コーティングビーズ（実施例１２）では、Ｒａ値が２．４６μｍ、Ｓｍ値が６２．５μｍであるためか、未コーティングビーズ（比較例１２）に比べて、インターロイキン１の産生誘導量は２５倍であった。
【００６９】
実施例１３及び比較例１３
インターロイキン１の産生誘導試験に用いる多孔性の担体として、ナイロン６６ペレット（宇部興産社製）を射出成形し、粒径２．５ｍｍのビーズを調製した。上記ビーズ４．６ｋｇをとり、コーティング液として、酢酸セルロース樹脂（ダイセル化学工業社製）５重量％の塩化メチレン／メタノール（重量比９：１）溶液を用い、フローコーター（フロイント産業社製、商品名；ＦＬ０−５）を用いスプレーし、酢酸セルロース樹脂でコーティングされたビーズを作製した。このコーティングされたビーズを走査型電子顕微鏡により写真撮影し、観察した結果、厚み２００μｍのコーティング層を有する表面多孔性のビーズが得られていることが確認された。
【００７０】
なお、コーティング条件は下記の通りである。
スプレー空気圧    ：３．５ｋｇ／ｃｍ２  
スプレー液温度    ：室度
スプレー液流速    ：１００ｍｌ／分
スプレー温度      ：６０℃
スプレーノズル口径：１．２ｍｍ
上記のようにして得たコーティングビーズ（実施例１３）及び未コーティングビーズ（比較例１３）各７０個を用い、前述したビーズによるインターロイキン１産生誘導試験を行った。結果を表７に示す。
【００７１】
【表７】
0003633637.tif 000009
【００７２】
表７から明らかなように、コーティングビーズ（実施例１２）ではＲａ値が１．１８μｍ、Ｓｍ値が５．８μｍであり、未コーティングビーズ（比較例１２）に比べて、インターロイキン１の産生誘導量は３１倍であった。
【００７３】
【発明の効果】
以上のように、本発明によれば、上記特定の表面形状を有する材料と血液とが接触されるため、インターロイキン１の産生が効果的に誘導される。従って、癌患者の血液を用いることにより、癌患者由来の内因性インターロイキン１を患者に与えることが出来、新規な癌治療方法を提供することが可能となる。
【００７４】
また、本発明では、上記のような表面形状を有する材料を用いれば良いだけであり、従来の生理活性物質固定化材料のように、固定化された生理活性物質等の脱離が発生しないため、安全性の点においても優れており、かつ特定の固定化リガンドも必要ないため効率的である。
【図面の簡単な説明】
【図１】でこぼこ平均間隔Ｓｍ値を求めるための山の定義方法を説明するため図。
【図２】でこぼこ平均間隔Ｓｍ値を求めるための方法を説明するための図。
【図１】
0003633637.tif 000010
【図２】
0003633637.tif 000011