(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で示される化合物。
【化１】
0003615240.tif 000004
（Ｒは水素又はメトキシである。）
【請求項２】
Ｒが水素であるフェチジン１と称する請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒがメトキシであるフェチジン２と称する請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
次の工程からなる請求項１に記載の化合物の製造方法。
ａ）低分子量脂肪族アルコール又はケトンの単独で又は水との混合物で、室温でマピア・ホエチダ植物の種々の部分を抽出する工程；
ｂ）真空下で２５℃以下の温度で抽出物を濃縮する工程；
ｃ）塩基度の低いアルカロイドを抽出するため、有機溶剤を部分的に除去することによって得られたヒドロアルコール又はヒドロケトン濃縮物を塩素化溶剤を用いて抽出する工程；
ｄ）ｎ−ブタノール又は水不混和性アルコールを用いて水相を抽出する工程；
ｅ）塩素化溶剤及び脂肪族アルコールの混合物を溶剤として用いたシリカゲル又は類似の吸着剤上でのクロマトグラフィーにより、真空下低温で濃縮して得られたブタノール又は水不混和性アルコール抽出物を精製する工程；
ｆ）アルカロイドを含む分画を乾燥するまで濃縮し、１：１のメタノール／水比から出発し純粋メタノールに至るまでのメタノール／水勾配で溶出する分取ＨＰＬＣにより残渣を精製する工程；
ｇ）得られた水性抽出物を凍結乾燥し、純粋なアルカロイドを結晶化させる工程。
【請求項５】
工程（ｅ）の塩素化溶剤及び脂肪族アルコールの混合物が、、塩化メチレン及びメタノール又はエタノールの４：１〜１：１の混合物である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
工程（ｆ）で、シリカゲル逆相カラムを使用する、請求項４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、マピア・ホエチダ（Ｍａｐｐｉａ  ｆｏｅｔｉｄａ）からの新規なアルカロイド、それらを含む抗ウイルス剤に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
腫瘍学の分野及びある種のウイルス疾患の治療において、そのままの形で又は誘導体の形で薬理学的及び臨床的に広く試験されてきた化合物であるアルカロイドカンプトテシン又は同じ適応症に有用な９−メトキシカンプトテシン（ＩＩ）が知られている。
【０００３】
【化２】
0003615240.tif 000002
【０００４】
カンプトテシンは水中及び生物学的に許容できるあらゆる液体に完全に不溶性であり、従ってこのような欠点を回避するため半合成的観点から徹底的な努力が払われてきた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
構造式（ＩＩ）をもつカンプトテシンは、最初その他の化合物と共に  Ｃａｍｐｔｏｔｅｃａ  ａｃｕｍｉｎａｔａ（Ｎｙｓｓａｃｅａｅ）から、そして  Ｍａｐｐｉａ  ｆｏｅｔｉｄａ（Ｏｌｉｎａｃｅａｅ）を含むその他の植物から分離された。後者は長い間研究されてきたが、さらに化学的スクリーニングにより、驚くべきことに該植物の粗抽出の過程において、カンプトテシンを生成する新しいアルカロイドを発見した。
【０００６】
本発明のアルカロイドは、以下の構造式（Ｉ）を有する：
【０００７】
【化３】
0003615240.tif 000003
【０００８】
（式中、Ｒが水素のものはフェチジン１であり、Ｒがメトキシのものはフェチジン２である）
【０００９】
フェチジン１及び２は、酸又は塩基、あるいは加水分解酵素を用いた処理によって、定量的にそれぞれカンプトテシン及び９−メトキシカンプトテシンを生成する。
カンプトテシンを生成する化合物の中でも特に重要なものは、該植物中に比較的豊富に存在するフェチジン１である。分光分析及び化学分解によるその構造の解明によって、開環カンプトテシン単位と、２つのクマル酸でエステル化されたスペルミジン単位を有することを特徴とする化合物〔構造式（Ｉ）参照〕と同定することができた。この化合物は、該植物のあらゆる部分に含まれ、特に種子及び根の中に０．１〜０．５％の量で含まれている。カンプトテシンと比較して、これは、わずかに酸性のｐＨで水中に容易に溶けるという利点をもつ。
【００１０】
フェチジン１は、低分子量の脂肪族アルコール又はケトンを単独で又はその水との混合物で、室温で該植物の種々の部分を抽出することによって得られる。抽出物は低い温度、好ましくは２５℃以下の温度で真空下で濃縮する。有機溶剤を除去し、水性濃縮物を塩素化溶剤で抽出して、カンプトテシン、９−メトキシカンプトテシン及びマピシンを含む塩基度の低いアルカロイドを抽出する。ひきつづき水相をｎ−ブタノール又は水不混和性アルコールを用いて抽出し、これらのブタノール又はアルコール相は次に真空下で低温にて乾燥するまで濃縮する。ブタノール抽出物からの残渣は、塩素化溶剤、好ましくは塩化メチレンと、脂肪族アルコール、好ましくはメタノール又はエタノールとの混合物を溶出剤として用いて、シリカゲル又は類似の吸着剤で精製する。好ましくは４：１乃至１：１の混合物が使用される。本発明のアルカロイドを含む分画を合わせ、乾燥するまで濃縮し、残渣は、例えば  Ｌｉ  Ｃｈｒｏｐｒｅｐ  ＲＰ８カラムを用い、１：１のメタノール／水比から出発し純粋なメタノールに至るまでのメタノール／水勾配で溶出する分取ＨＰＬＣによってさらに精製する。アルカロイド含有分画は真空下低温で濃縮し、水性濃縮物は凍結乾燥する。純粋なアルカロイドは結晶化によって得られる。
【００１１】
得られた化合物は、ヒト腫瘍セルライン（他の抗腫瘍物質に対して耐性をもつ又はもたない、卵巣、乳房、結腸、肺などの）及びいくつかのウイルス株に対して生物学的に評価した。実際、カンプトテシン又その誘導体は、ＤＮＡトポイソメラーゼＩ型及びＩＩ型の阻害と関係している細胞障害活性を有することが知られている。
【００１２】
例えば結腸ガン腫セルラインに対する細胞障害は約２５ｎＭである。フェチジン１の抗ウイルス活性は、株の異なる耐性が関係するが、１〜１００ｎｇ／ｍｌ  の範囲の濃度で発現する。９の位置のメトキシのため、フェチジン１とは異なる構造のフェチジン２も、類似した作用をする。ヘルペス、サイトメガロウイルス及びＨＩＶウイルスは本発明のアルカロイドに対し感受性をもつことが実証された。
【００１３】
本発明の化合物は、あらゆる種類の薬学製剤に含有させることが可能であるが、上記の製剤はすべて沈殿又は相容性の欠如といった問題をひき起こすことなく、血液と相容性のｐＨで水溶液の形で非経口的に容易に投与することができる。製剤中には、従来の薬学的賦形剤がすべて使用可能である。これらの新規アルカロイドの投薬は、一用量及び治療サイクルにつき０．５ｍｇ〜２００ｍｇの範囲であってよい。約５０ｍｇ／ｍ２  の用量が予備的に有効であることが実証された。
以下の例はさらに本発明を例示するものであって、本発明の範囲を制限するものではない。
【００１４】
【実施例】
実施例１−Ｍａｐｐｉａ  ｆｏｅｔｉｄａ種子からのフェチジン１の調製
細かく摩砕した  Ｍａｐｐｉａ  ｆｏｅｔｉｄａ  の種子５ｋｇを、室温で攪拌しながら５０Ｌ  のアセトンを用いて３回抽出する。合わせたアセトン抽出物を真空下で１０Ｌ  になるまで濃縮する。濃縮物を１％のクエン酸溶液１０Ｌ  を用いて希釈する。不溶物をろ過し、廃棄する一方で、ヒドロアセトン相をアルカロイド抽出可能物質（カンプトテシン、メトキシカンプトテシンなど）が完全になくなるまで塩化メチレンで逆抽出する。ヒドロアセトン相を水に濃縮し、ｐＨ７．５に中和の後、フェチジン１及び２が完全になくなるまでｎ−ブタノールを用いて濃縮物を抽出する。ｎ−ブタノール溶液を濃縮し、残渣を乾燥させて約２００ｇのブタノール分画を得、この分画を以下のように分画する。すなわち、５００ｇのシリカゲル上で３０ｇのブタノール分画をクロマトグラフィに付し、カラムを、まず４：１の塩化メチレン／メタノール混合物、次に７：３の同じ溶剤の混合物で溶出する。７：３の混合物で溶出された分画中に含まれる生成物を  Ｌｉ  Ｃｈｒｏｐｒｅｐ  ＲＰ８カラム上で精製し、メタノール／水勾配で溶出する。フェチジン１及び２を含む分画を合わせ、３０℃以下の温度で真空下乾燥するまで濃縮し、残渣をアセトン／ヘキサンから結晶化させる。次の特性をもつフェチジン１が５．１ｇ得られた。
ｍ．  ｐ．  （融点）  １５７〜５８℃；αｄ＝−３７．９  （ｃ＝０．３１，  ＭｅＯＨ）．
【００１５】
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ  ｄ６）  ８．６０（１Ｈ，  ｓ，  Ｈ−７），  ８．１９（１Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝５．２，  Ｈ−１０’），  ８．１５（１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．６，  Ｈ−１２），  ８．０５（１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．６，  Ｈ−９），  ８．０４（１Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝５．２，  Ｈ−１９  ’），  ７．８０（１Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．８，  Ｈ−１１），  ７．６５（１Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝７．８，  Ｈ−１０），  ７．３５（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．６，  Ｈ−３’＋Ｈ−５’），  ７．３４（２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．６，  Ｈ−２４’＋Ｈ−２８’），  ７．２９（１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１５．８，  Ｈ−７’），  ７．２８（１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１５．８，  Ｈ−２２’），  ６．７６（４Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．６，  Ｈ−２’＋Ｈ−６’＋Ｈ−２５’＋Ｈ−２７’），  ６．３６（１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１５．８，  Ｈ−８’），  ６．３５（１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝１５．８，  Ｈ−２１’），  ５．５８，  ５．４１（２Ｈ，  ｓｙｓｔｅｍ  ＡＢ，  Ｊ＝１０．６，  Ｈ−１７），  ５．１８（２Ｈ，  ｓ，  Ｈ−５），  ３．２１（２Ｈ，  ｍ，  Ｈ−１１’），  ３．１３（２Ｈ，  ｍ，  Ｈ−１８’），  ２．８４（４Ｈ，  ｂｔ，  Ｊ＝７．２，  Ｈ−１３’＋Ｈ−１５’），  ２．０２（１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−１９Ａ），  １．９６（３Ｈ，  ｓ，  ＣＨ３ＣＯ），  １．９０（１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−１９Ｂ），  １．７４（２Ｈ，  ｍ，  Ｈ−１２’），  １．５５（２Ｈ，  ｍ，  Ｈ−１６’），  １．４６（２Ｈ，  ｍ，  Ｈ−１７’），  ０．８４（３Ｈ，  ｔ，  Ｊ−７．２，  Ｈ−１８）
【００１６】
１３Ｃ−ＮＭＲ（７８．１ＭＨｚ，    ＤＭＳＯ  ｄ６）δ：  １７５．２３（Ｓ，  Ｃ−２１），  １７０．８１（ｓ，  ＣＨ３ＣＯ），  １６６．２７（ｓ，  Ｃ−９’），  １６５．８３（ｓ，  Ｃ−２０’），  １６１．４３（ｓ，  Ｃ−１６ａ），  １５９．４０（ｓ，  Ｃ−１’），  １５９．１４（ｓ，  Ｃ−１５），  １５３．５０（ｓ，  Ｃ−２），  １４８．３６（ｓ，  Ｃ−１３），  １４３．５６（ｓ，  Ｃ−３），  １３９．３７（ｄ，  Ｃ−７），  １３９．０６（ｄ，  Ｃ−２２’），  １３１．７４（ｄ，  Ｃ−７），  １３０．５８（ｄ，  Ｃ−１１），  １３０．３３（ｓ，  Ｃ−６），  １２９．６３（ｓ，  Ｃ−３’＋Ｃ−５’），  １２９．５６（ｄ，  Ｃ−２４’＋Ｃ−２８’），  １２９．４０（ｄ，  Ｃ−１２），  １２８．８３（ｄ，  Ｃ−９），  １２８．２３（ｓ，  Ｃ−８），  １２７．７８（ｄ，  Ｃ−１０），  １２６．２３（ｄ，  Ｃ−４’），  １２６．１３（ｓ，  Ｃ−２３’），  １２３．４２（ｓ，  Ｃ−１６），  １１９．０１（ｄ，  Ｃ−８’），  １１８．６８（ｄ，  Ｃ−２１’），  １１６．１８（ｄ，  Ｃ−２’＋Ｃ−６’＋Ｃ−２５’＋Ｃ−２７’），  １００．６８（ｄ，  Ｃ−１４），  ８０．２８（ｄ，  Ｃ−２０），  ５９．８７（ｔ，  Ｃ−１７），  ５０．４５（ｔ，  Ｃ−５），  ４７．２３（ｔ，  Ｃ−１３’），  ４５．３６（ｔ，  Ｃ−１５’），  ３８．４１（ｔ，  Ｃ−１８），  ３６．３６（ｔ，  Ｃ−１１’），  ３３．４０（ｔ，  Ｃ−１９），  ２６．９９（ｔ，  Ｃ−１２’），  ２６．８７（ｔ，  Ｃ−１７’），  ２４．０４（ｔ，  Ｃ−１６’），  ２１．２２（ｑ，  ＣＨ３ＣＯ），  ９．２９（ｑ，  Ｃ−１８）．
【００１７】
フェチジン１の結晶化母液から、逆相での同じクロマトグラフィー溶出液の精製により、以下の特性を持つフェチジン２（１．２ｇ）が得られた。
ｍ．  ｐ．  （融点）１７２  〜１７４  ℃；  αｄ＝−４４．６（ｃ＝０．３５，  ＭｅＯＨ）  。ＮＭＲスペクトルは、３．２ｐｐｍ  での芳香環上の−ＯＣＨ３  の信号を除いて、フェチジン１のスペクトルと重ね合わせることができる。
【００１８】
実施例２−フェチジン１を含む凍結乾燥されたバイアルびんの調製
１．２ｇのクエン酸を含む５００ｍｌの精製水の中に５ｇのフェチジン１を溶解させ、溶液をろ過し、滅菌し、無菌室内で１００本のバイアルびんの中に充填し、これらのバイアルびんを急速凍結させ凍結乾燥させる。