(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式【Ｉ】で表される４，５−ジヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とする抗リウマチ剤。
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【発明の詳細な説明】
発明の属する技術分野
本発明は慢性関節リウマチ等の炎症性疾患の治療・予防に有用な医薬、食品及び飲料に関する。
従来の技術
炎症は生体が外からの侵襲に対して防御的に働いて、内因性の活性物質を産生し、体の状態を適応させている結果と考えられている。しかしそれらによって引起こされる反応が害になり、病的な状態を引起こすことが多い。また、自己免疫疾患における炎症は免疫細胞が自己を異物と見なし、正常細胞に対しても障害的に働くことにより生じる。
ヘルパーＴ（Th）細胞にはマクロファージ（Ｍφ）などの細胞性免疫の活性化を促すサイトカインであるインターフェロン  γ（IFN-γ）、インターロイキン−２を産生するTh1細胞と抗体産生に関与した液性免疫を活性化するインターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−１０を産生するTh2細胞が存在することが報告されている。
またTh1細胞とTh2細胞はそれぞれ産生するサイトカインによって互いに制御し合っていることも示されている。すなわちTh1細胞の産生するIFN−γはTh2細胞の活性化を制御しTh1細胞の活性化を誘導する。逆にTh2細胞の産生するインターロイキン−１０はTh1細胞の活性化を制御し、インターロイキン−４はTh2細胞の活性化を誘導する。
自己免疫疾患は大別して臓器特異性のものと全身性のものとに分類されている。全身性自己免疫疾患やアレルギー疾患はTh2優位の免疫応答により病態が形成されるのに対して、臓器特異自己免疫疾患や炎症性疾患はTh1優位の免疫応答で病態が形成されると考えられる。
自己免疫疾患の一つである慢性関節リウマチは関節部位での特異的な炎症と考えられ、臓器特異的、すなわちTh1介在自己免疫疾患である可能性が示唆される。実際、リウマチ患者の炎症部位においてはTh1由来のサイトカインにより誘導、活性化されたと考えられるＭφ及び好中球の浸潤、並びにＭφから産生される腫瘍壊死因子−αの著明な増加が認められている。またその他の臓器特異自己免疫疾患や炎症性疾患においても同様の組織所見が観察されており、Th1により誘導されたこれら炎症細胞および炎症性サイトカインにより炎症が増悪化していると考えられる。
これらのことより、慢性関節リウマチなどの臓器特異自己免疫疾患や炎症性疾患の治療においては炎症を直接惹起していると考えられる、Ｍφから産生される腫瘍壊死因子の抑制、およびTh1抑制サイトカインであるインターロイキン−１０の誘導が重要であると考えられる［医学の歩み、医歯薬出版（株）発刊、第１８２巻、第５２３〜５２８頁、同、第６６１〜６６５頁（１９９７）］。
慢性関節リウマチの薬物治療法としては、ステロイド、非ステロイド系抗炎症剤と、金、Ｄ−ペニシラミン等の寛解導入薬による内科的治療が行われている。
発明が解決しようとする課題
本発明の目的は、慢性関節リウマチ等の炎症性疾患の治療に有用な化合物を開発し、該化合物を含有する医薬、食品および飲料を提供することにある。
課題を解決するための手段
本発明者らは上記目的を達成するために鋭意検討した結果、式【Ｉ】で表される４，５−ジヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン（以下、単にシクロペンテノンと称す）がリウマチ等の炎症性疾患や免疫異常を伴う疾患等の治療又は予防に有用であることを見出し、本発明を完成させた。
本発明を概説すれば、本発明の第１の発明は下記式【Ｉ】で表される４，５−ジヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とする抗リウマチ剤に関する。
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本発明の第２の発明は上記式【Ｉ】で表される４，５−ジヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を含有することを特徴とするリウマチ改善用食品又は飲料、又はリウマチ予防用食品又は飲料に関する。
【図面の簡単な説明】
図１はＪｕｒｋａｔ細胞の増殖に対するシクロペンテノンの影響を示す図である。
図２はＭｏｌｔ−３細胞の増殖に対するシクロペンテノンの影響を示す図である。
図３はＭｏｌｔ−３細胞におけるファス抗原の発現を示す図である。
図４はＪｕｒｋａｔ細胞におけるファス抗原の発現を示す図である。
図５はＭｏｌｔ−３細胞に１０μＭシクロペンテノンを添加して培養したときのファス抗原発現細胞の比率の変化を示す図である。
図６はシクロペンテノン量と足浮腫増加率の関係を示す図である。
図７はシクロペンテノン量と腫瘍壊死因子産生量の関係を示す図である。
図８は培養液中のシクロペンテノン濃度とNO2-濃度の関係を示す図である。
図９はシクロペンテノン存在下の培養時間と生細胞数の関係を示す図である。
図１０はシクロペンテノンの遅延型過敏反応抑制作用を示す図である。
図１１はシクロペンテノンのリンパ球幼若化抑制作用を示す図である。
図１２はシクロペンテノンの混合リンパ球反応抑制作用を示す図である。
図１３は（−）体シクロペンテノンのｐ−ジメチルアミノベンゾイル誘導体のＣＤ及び（−）体シクロペンテノンの立体構造を示す図である。
図１４は（＋）体シクロペンテノンのｐ−ジメチルアミノベンゾイル誘導体のＣＤ及び（＋）体シクロペンテノンの立体構造を示す図である。
発明の実施の形態
以下、本発明を具体的に説明する。
本発明において使用する式【Ｉ】で表されるシクロペンテノンは、４位と５位のヒドロキシル基の立体配置がシスの異性体とトランスの異性体の双方を包含する。本発明においてはシス体シクロペンテノンを用いてもよいし、トランス体シクロペンテノンを用いてもよいし、シス体シクロペンテノンとトランス体シクロペンテノンの混合物を用いてもよい。また、これらの光学活性体を用いてもよい。
シス体シクロペンテノンは化学合成法によって得られる〔ヘルベチカ  キミカ  アクタ（Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ）、第５５巻、第２８３８〜２８４４頁（１９７２）〕。トランス体シクロペンテノンは化学合成法によっても得られるし〔カーボハイドレート  リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｒｅｓ．）、第２４７巻、第２１７〜２２２頁（１９９３）〕、またウロン酸、例えばグルクロン酸、ウロン酸誘導体、例えばグルクロノラクトン、又はこれらの含有物等を加熱処理することによっても得られる（ＰＣＴ／ＪＰ９７／０３０５２号明細書参照）。本発明ではシクロペンテノンを含有するこれらの加熱処理物、その部分精製物及び精製物も使用できる。
例えば、ウロン酸としてＤ−グルクロン酸を使用し、その１％溶液を１２１℃で４時間加熱処理することにより、加熱処理物中にシクロペンテノンが生成される。この加熱処理物中のシクロペンテノンを溶媒で抽出し、抽出物を濃縮する。次にこの濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離し、溶出するシクロペンテノン画分を濃縮し、濃縮物からシクロペンテノンをクロロホルムで抽出し、抽出濃縮物の順相カラムクロマトグラフィーを行うことにより、加熱処理物中のシクロペンテノンが単離される。
シクロペンテノンの物性を下記に示す。なおシクロペンテノンの質量分析はＤＸ３０２質量分析計（日本電子社製）を用いて行った。また、重クロロホルム溶媒を用いたＮＭＲスペクトルの測定はＪＮＭ−Ａ５００（日本電子社製）を用いた。比旋光度はＤＩＰ−３７０型旋光計（日本分光社製）、ＵＶ吸収スペクトルはＵＶ−２５００分光光度計（島津製作所社製）、赤外吸収スペクトル（ＩＲ）はＦＴＩＲ−８０００赤外分光光度計（島津製作所社製）をそれぞれ用い測定した。
ＭＳ  ｍ／ｚ  １１５〔Ｍ＋Ｈ〕+
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）
δ４．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，５−Ｈ）、４．８３（１Ｈ，ｍ，４−Ｈ）、６．３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．２，６．１Ｈｚ，２−Ｈ）、７．４８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．１，６．１Ｈｚ，３−Ｈ）
但し、1Ｈ−ＮＭＲの化学シフト値はＣＨＣｌ3の化学シフト値を７．２６ｐｐｍとして表した。
旋光度：〔α〕D20０°（ｃ１．３、  水）
ＵＶ：λｍａｘ  ２１５ｎｍ（水）
ＩＲ（ＫＢｒ法）：３４００、１７１５、１６３０、１１１５、１０６０、１０２５ｃｍ-1に吸収を有する。
単離されたシクロペンテノンを光学分割することにより、（−）−４，５−ジヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び（＋）−４，５−ジヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オンを得ることができる。当然、合成方法により得られたシクロペンテノンも光学分割することができる。
例えば、シクロペンテノンをエタノールに溶かす。このエタノール溶液にヘキサン／エタノール（94/6）を更に加え、シクロペンテノン溶液を調製する。この試料溶液を、例えばキラールパックAS（ダイセル化学工業）カラムを用いカラム温度：４０℃、移動相：ヘキサン／エタノール（94/6）でＨＰＬＣを行うことにより、シクロペンテノンを光学分割することができる。
分割された（−）−トランス−４，５−ジヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン〔以下、（−）体シクロペンテノンと称する〕の旋光度は〔α〕D20−１０５°（ｃ0.30、エタノール）であり、（＋）−トランス−４，５−ジヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン〔以下、（＋）体シクロペンテノンと称する〕の旋光度は〔α〕D20＋１０４°（ｃ0.53、エタノール）である。なお旋光度は前記のＤＩＰ−３７０型旋光計（日本分光社製）を用いて測定した。
次に（−）体シクロペンテノン及び（＋）体シクロペンテノンのそれぞれの質量分析、核磁気共鳴法（ＮＭＲ）による構造解析、ＵＶ吸収スペクトルの測定、赤外吸収スペクトルの測定を上記記載の方法に準じ行う。その結果、両光学活性体は光学分割前のシクロペンテノンと同一の結果を示す。
光学分割された（−）体シクロペンテノン及び（＋）体シクロペンテノンをそれぞれｐ−ジメチルアミノベンゾイル誘導体とし、Ｊ−７２０型円二色性分散計（日本分光社製）を用い、円二色性スペクトル（ＣＤ）を測定し、その結果をジベンゾエートキラリティルールに適用し［ジャーナル  オブ  アメリカン  ケミカル  ソサイエティ（J．Am．Chem．Soc．）、第９１巻、第３９８９〜３９９１頁（１９６９）］、その立体配置を決定した。
（−）体シクロペンテノンのｐ−ジメチルアミノベンゾイル誘導体のＣＤ及び（−）体シクロペンテノンの立体構造を図１３に示す。図中縦軸はモル円二色性、横軸は波長（ｎｍ）を示す。なお、上記立体構造を、式【II】として下記に示す：
0003664736.tif 000003
（＋）体シクロペンテノンのｐ−ジメチルアミノベンゾイル誘導体のＣＤ及び（＋）体シクロペンテノンの立体構造を図１４に示す。図中縦軸はモル円二色性、横軸は波長（ｎｍ）を示す。なお、上記立体構造を、式【III】として下記に示す：
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図１３、１４及び式【II】、式【III】に示すように（−）体シクロペンテノンは（−）−（４Ｒ，５Ｓ）−トランス−４，５−ジヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン、（＋）体シクロペンテノンは（＋）−（４Ｓ，５Ｒ）−トランス−４，５−ジヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オンである。
以上、本発明に使用するシクロペンテノン又はその光学活性体はいかなる方法で製造しても良く、明細書で開示の方法で製造しても良く、化学合成方法で合成しても良く、シクロペンテノンのトランス体、シス体、それらの混合物およびそれらの光学活性体も本発明に使用される。
シクロペンテノン又はその光学活性体の塩としては、医薬として許容される塩があり、公知の方法にて変換することができる。
シクロペンテノンは生体内で、例えばＳＨ基含有化合物（例えばシステイン、グルタチオン等）と反応し、医薬として有用な代謝誘導体を生成する。したがって、この代謝誘導体が示す薬効はシクロペンテノンを投与した場合においても得られると考えられる。生体内でのシクロペンテノンとＳＨ基含有化合物との反応生成物は代謝有効物質の一つと推定される。
すなわちＳＨ基含有化合物（Ｒ−ＳＨ）について例示すれば、シクロペンテノンはＳＨ基含有化合物と反応し、例えば下記一般式【IV】又は下記一般式【Ｖ】で表される化合物となる。また一般式【Ｖ】で表される化合物は一般式【IV】で表される化合物に変換される。
このようにシクロペンテノンはＳＨ基含有化合物（Ｒ−ＳＨ）の存在下、各代謝誘導体に変換され、生体中において生成されるこれらの代謝誘導体も医薬としての効果を発揮する。
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（但し、ＲはＳＨ基含有化合物からＳＨ基を除いた残基である）。
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（但し、ＲはＳＨ基含有化合物からＳＨ基を除いた残基である）。
したがってこれら生体内で形成される反応生成物、すなわち生体内での代謝誘導体の形成を目的とするシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩の使用も本発明に包含されるものである。
シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩は抗リウマチ作用、慢性関節リウマチ抑制作用等の生理活性を有する化合物であり、シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を有効成分とし、これを公知の医薬用担体と組合せ製剤化すれば抗リウマチ剤を製造することができる。該医薬の製造は一般的には、シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を薬学的に許容できる液状又は固体状の担体と配合し、かつ必要に応じて溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を加えて、錠剤、顆粒剤、散剤、粉末剤、カプセル剤等の固形剤、通常液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤とすることができる。またこれを使用前に適当な担体の添加によって液状となし得る乾燥品とすることができる。
医薬用担体は、上記投与形態及び剤型に応じて選択することができ、経口剤の場合は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩等が利用される。また経口剤の調製に当っては、更に結合剤、崩壊剤、界面活性剤、潤沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を配合することもできる。
一方、非経口剤の場合は、常法に従い本発明の有効成分であるシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を希釈剤としての注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油、ゴマ油、ラッカセイ油、ダイズ油、トウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等に溶解ないし懸濁させ、必要に応じ、殺菌剤、安定剤、等張化剤、無痛化剤等を加えることにより調製される。
本発明の抗リウマチ剤は、製剤形態に応じた適当な投与経路で投与される。投与方法も特に限定はなく、内用、外用及び注射によることができる。注射剤は、例えば静脈内、筋肉内、皮下、皮内等に投与し得、外用剤には座剤等も包含される。
本発明の抗リウマチ剤の投与量は、適応症、その製剤形態、投与方法、使用目的及びこれに適用される患者の年齢、体重、症状によって適宜設定され、一定ではないが一般には製剤中に含有されるシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される１以上の化合物の量が成人１日当り０．１μｇ〜２００ｍｇ／ｋｇである。もちろん投与量は、種々の条件によって変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、あるいは範囲を超えて必要な場合もある。本発明の薬剤はそのまま経口投与するほか、任意の食品又は飲料に添加して日常的に摂取させることもできる。
シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩は前述の抗リウマチ作用、慢性関節リウマチ抑制作用に加えて関節炎等への抗炎症作用、カラゲナン浮腫抑制作用、腫瘍壊死因子産生抑制作用、インターロイキン−１０産生増強作用、一酸化窒素産生抑制作用、滑膜細胞へのアポトーシス誘発作用、ファス（Ｆａｓ）抗原産生誘導作用、免疫調節作用、例えば遅延型過敏反応抑制作用、リンパ球幼若化反応抑制作用、混合リンパ球反応抑制作用、ＩｇＥ産生抑制作用、トポイソメラーゼ阻害作用等の多様な生理活性を有し、シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも一つの化合物を有効成分とする抗炎症剤又は炎症予防剤、腫瘍壊死因子産生抑制剤又は腫瘍壊死因子産生予防剤、インターロイキン−１０産生増強剤、一酸化窒素産生抑制剤、ファス抗原産生誘導剤、免疫調節剤、ＩｇＥ産生抑制剤、遅延型過敏反応抑制剤、トポイソメラーゼ阻害剤等の医薬を上記抗リウマチ剤に準じ製剤化することができ、上記抗リウマチ剤に準じた方法で投与することができる。
これら製剤の投与量は、上記抗リウマチ剤に準じて適宜設定することができる。例えば抗炎症剤、腫瘍壊死因子産生抑制剤としては製剤中に含有されるシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される１以上の化合物の量は好適には成人１日当り１０ｐｇ〜５０ｍｇ／ｋｇであり、一酸化窒素産生抑制剤としては製剤中に含有されるシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される１以上の化合物の量は好適には成人１日当り０．１μｇ〜２０ｍｇ／ｋｇであり、使用目的により製剤中の有効成分量を調節することができる。これらの薬剤はそのまま経口投与するほか、任意の飲食品に添加して日常的に摂取させることもできる。
リウマチは骨膜細胞や軟骨細胞に障害が起こる自己免疫疾患であり、本発明の抗リウマチ剤は自己免疫疾患治療剤としても有用である。
シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩は慢性関節リウマチなどの臓器特異自己免疫疾患や炎症性疾患において、炎症を直接惹起していると考えられる腫瘍壊死因子の産生を抑制し、Th1抑制サイトカインであるインターロイキン−１０の産生を増強する。したがって炎症、例えば臓器特異自己免疫疾患であるリウマチ、特に慢性関節リウマチの症状が改善され、炎症マーカーであるＣ反応タンパク（ＣＲＰ）値、リウマトイド因子（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ｆａｃｔｏｒ：ＲＦ）値、赤血球沈降速度（血沈）値が激減し、歩行困難等の合併症状も顕著に改善される。
腫瘍壊死因子は、腫瘍部位に出血性壊死を誘導する因子として発見されたが、現在では炎症を基本とした生体防御・免疫機構に広くかかわるサイトカインとして認識されている。この腫瘍壊死因子の産生調節機構の破綻は様々な不都合を宿主にもたらし、腫瘍壊死因子の過度又は未調節の産生は、慢性関節性リウマチ、リウマチ性脊髄炎、変形性関節症、痛風性関節炎、敗血症、敗血性ショック、内毒素ショック、グラム陰性菌敗血症、毒性ショック症候群、脳性マラリア、慢性肺炎、移植片対宿主反応、同種移植片拒絶反応、インフルエンザのような感染症による発熱及び筋肉痛、感染又は悪性腫瘍に対して二次的な悪液質、ヒト後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に対して二次的な悪液質、ＡＩＤＳ、ＡＩＤＳ関連症候群、ケロイド形成、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、自己免疫糖尿病及び全身エリテマトーデス等の自己免疫疾患を含む、これらの多くの疾患に関連している［モレキュラー  メディシン（Molecular Medicine）、第３３巻、第１０１０〜１０２０頁、第１１８２〜１１８９頁（１９９６）］。本発明の抗リウマチ剤は、腫瘍壊死因子により媒介されるか又は悪化する病状の治療にも有用である。また本発明により、シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を有効成分として使用する腫瘍壊死因子の産生の調節方法が提供される。また本発明により、シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を含有し、腫瘍壊死因子により媒介されるか又は悪化する疾病の病状の改善用食品又は飲料、又は疾病予防用食品又は飲料が提供される。
一酸化窒素（以下、ＮＯと略す）は内皮細胞由来血管平滑筋弛緩因子（ＥＤＲＦ）の本体である〔ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、第３２７巻、第５２４〜５２６頁（１９８７）〕。本発明はシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を有効成分として含有するＮＯ産生の抑制を必要とする疾病治療用医薬又は疾病予防用医薬を提供する。本発明において、ＮＯ産生の抑制を必要とする疾病とは、特に限定はないが、例えば毒性ショックやある種のサイトカインによる治療等による全身性血圧低下、血圧応答低下、自己免疫疾患、炎症、関節炎、リウマチ性関節炎、糖尿病、炎症性腸疾患、血管機能不全、病因性血管拡張、組織損傷、心臓血管系虚血、痛感過敏症、脳虚血、血管新生を伴う疾病、がん等があり、特表平９−５０４５２４号、特表平９−５０５２８８号、特表平８−５０１０６９号、特表平８−５１２３１８号、特表平６−５０８８４９号の各公報に記載の疾病を含むものである。
シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を有効成分として含有するＮＯ産生抑制剤はＮＯ産生機構研究、ＮＯ作用機作研究にも有用であり、またＮＯ産生機構に関与する物質のスクリーニングに使用することもできる。
シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩はＮＯ産生細胞に対してＮＯ産生抑制作用を示す。例えば、マクロファージ細胞株にエンドトキシン（ＬＰＳ）を添加すれば誘導型ＮＯ合成酵素（ＮＯＳ）が発現してＮＯが培地中に分泌されるが、シクロペンテノン、シクロペンテノン誘導体、又はそれらの光学活性体共存下でＬＰＳを作用させるとＮＯ産生は抑えられる。ＬＰＳ処理でＮＯ産生を誘導した場合、ＮＯの細胞障害活性によって細胞生存率は低下するが、ＬＰＳ処理時にシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩を添加するとＮＯの産生が低下し、細胞に対する障害も減少する。
固形がんの増大に血管新生は必須であるが、欠陥内皮増殖因子／血管透過性亢進因子（ＶＥＧＦ）はこの過程に重要な役割を演じている。様々ながん細胞においてＶＥＧＦがＮＯによって誘導される。シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩はＮＯ産生を抑制することによってがん細胞のＶＥＧＦ産生も抑制し、その結果、がん組織周辺での血管新生が阻害される。がん細胞を皮下に移植して固形腫瘍を形成させたマウスにシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩を投与するとがん組織の周辺の血管の形成が不十分となり、がんは脱落する。
ニトロソアミンは２級アミンにニトロソ基が付加した一群の化合物で数百種類が知られており、その多くがＤＮＡに損傷を加えることにより動物に対して発がん性を示す。ニトロソアミンはヒトの発がんにも深く関わっているとされており、通常胃の中で亜硝酸塩とアミンが反応することによって生成する。ＮＯはｐＨ中性の生理的条件下でもアミンと反応してニトロソアミンを生成する。また、疫学的にがんとの関係が高い肝吸虫感染患者や肝硬変患者においてＮＯ産生は亢進している。したがって、シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩を投与してＮＯ産生の亢進を防ぐことによって特にハイリスクグループの発がんを予防することができる。以上のように、シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩は発がんの抑制とがん組織における血管新生阻害という２段階で制がん作用を示す。
ＮＯはまた、炎症性病変に特徴的に認められる浮腫、すなわち血管透過性亢進作用を誘発し〔マエダ（Ｍａｅｄａ）ら、ジャパニーズ  ジャーナル  オブ  カンサー  リサーチ（Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第８５巻、第３３１〜３３４頁（１９９４）〕、また、炎症性メディエーターであるプロスタグランジン類の生合成を亢進させる〔サルベミニ（Ｓａｌｖｅｍｉｎｉ）ら、プロシーディングズ  オブ  ナショナル  アカデミー  オブ  サイエンシズ  ＵＳＡ（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＵＳＡ）、第９０巻、第７２４０〜７２４４頁（１９９３）〕。一方、ＮＯはスーパーオキシドラジカルと速やかに反応してパーオキシナイトライトを生じ、パーオキシナイトライトが炎症性の細胞、組織障害を引き起こすとも考えられている。
活性化された免疫細胞が臓器に入り込みサイトカインを放出するとＮＯの産生が誘導される。インスリン依存型糖尿病は膵島β細胞が特異的に破壊されることによって引き起こされる疾患であり、ＮＯによる破壊であるとされている。また、慢性関節性リウマチ、変形性関節リウマチ、痛風性関節炎、ベーチェット病に伴う関節炎の患者の病変部の関節液には同患者の正常な関節や健常人の関節の関節液に比べて高濃度のＮＯが含まれている。これらの患者にシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩を投与すると病変部におけるＮＯ産生を抑制し、症状が改善する。
脳虚血中及び再潅流後にはＮＯ産生が増大し、それに伴って脳組織が損傷を受ける。脳虚血時に患者にシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩を投与することにより脳組織の損傷が軽減され、予後が改善される。
ファス抗原（ＡＰＯ−１抗原、ＣＤ９５）と呼ばれる細胞表面抗原はアポトーシスを誘導する分子として注目されている〔セル（Ｃｅｌｌ）、第６６巻、第２３３〜２４３頁（１９９１）、ジャーナル  オブ  エクスペリメンタル  メディスン（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．）、第１６９巻、第１７４７〜１７５６頁（１９８９）、ジャーナル  オブ  バイオロジカル  ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）第２６７巻、第１０７０９〜１０７１５頁（１９９２）、ジャーナル  オブ  イムノロジー（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、第１８４巻、第１２７４〜１２７９頁（１９９２）〕。
ファス抗原は、胸腺細胞、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、Ｂ細胞あるいはＮＫ細胞等の免疫系細胞に発現している。免疫系は外来の非自己抗原の侵入に際しては、免疫反応を惹起して非自己抗原を排除する。しかしながら、自己抗原に対しては免疫反応を示さず自己寛容が成立している。これは自己反応性を有するリンパ球系幹細胞が、クローン除去というネガティブセレクションを受けアポトーシスによる細胞死により排除されることによる。しかしながらファス抗原の遺伝子的欠陥等の生体の何らかの異常によりこれらの細胞がアポトーシスを受けなかった場合には、例えば自己反応性Ｔ細胞が末梢に蓄積される。また正常な生体においては、免疫担当細胞であるＢ細胞についても自己寛容が成立しており、この自己反応性Ｂ細胞も通常、アポトーシスにより死に至るが、自己反応性Ｂ細胞がファス抗原の遺伝子的な欠陥等の異常によりアポトーシスを受けなかった場合には、自己反応性Ｂ細胞が末梢に蓄積される。更に、関節リウマチの場合には、上記の自己反応性リンパ球の異常、滑膜細胞のターンオーバーの異常が病因の一端となっている。
シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を有効成分とするファス抗原産生誘導剤は自己反応性リンパ球、ターンオーバーの異常により生体から排除され得なかった不用の生体構成細胞のアポトーシス誘導に有用であり、ファス抗原産生誘導方法に使用することができる。またシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を有効成分として含有するファス抗原産生異常を伴う疾病の予防剤又は治療剤として有用である。本発明においてファス抗原産生異常を伴う疾病とは、特に限定は無いが、例えば自己反応性Ｔ細胞、自己反応性Ｂ細胞により惹起される自己免疫疾患、関節リウマチ等が例示され、ＷＯ９７／０９６５公報に記載の疾病を含むものである。
シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩はインターロイキン−１０産生増強作用、遅延型過敏反応抑制作用、リンパ球幼若化反応抑制作用、混合リンパ球反応抑制作用、ＩｇＥ産生抑制作用、カラゲナン浮腫抑制作用等の免疫調節作用を有し、シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を有効成分とする免疫調節剤はこれらの免疫系、免疫因子の異常が起因となる疾病の治療剤又は予防剤として有用である。
すなわちインターロイキン−１０の産生低下によりTh1が活性化され、Th1優位な自己免疫の炎症が惹起される。この炎症は腎炎、肝炎等臓器特異的自己免疫疾患、及び移植片拒絶反応やアレルギー性接触性皮膚炎等の疾患に関与している。前記免疫調節剤はインターロイキン−１０の産生を増強させ、Th1の活性を抑制することにより、これらの疾患の治療又は予防に有用である。
またリンパ球幼若化反応とは、マイトジェンがリンパ球表面の受容体に結合し、リンパ球を活性化させ、その分裂、増殖を促す反応である。混合リンパ球反応とは、同種異系の動物より得られたリンパ球を混合培養することにより、主要組織適合抗原の不一致によるリンパ球の活性化が誘導され、リンパ球の分裂、増殖が促進される反応である。前記免疫調節剤はこれらの反応を抑制し、リンパ球の異常亢進が起因となる自己免疫性疾患、例えば慢性腎炎、慢性大腸炎、Ｉ型糖尿病、慢性関節リウマチ等の慢性の疾患の治療又は予防に特に有用であり、また移植片拒絶反応の抑制においても有用である。
カラゲナン足浮腫モデルは、起炎剤であるカラゲナンを足蹠部に皮下注射することにより、マクロファージ、好中球等の炎症細胞が誘導され、これらの細胞から産生された炎症性の因子により血管透過性が亢進し、浮腫が惹起される反応である。前記免疫調節剤の浮腫抑制作用は、血管透過性の亢進の制御を必要とする疾患、例えば慢性関節リウマチの治療又は予防に有用である。
喘息やアトピー性皮膚炎に代表されるアレルギー疾患においてはマスト細胞からのケミカルメディエーターの放出がアレルギー反応において大きな役割を果たす。この反応はＩｇＥが細胞膜上のレセプターに結合し、架橋することによって惹起され、前記免疫調節剤はＩｇＥの産生を抑制し、ＩｇＥ産生により媒介されるか悪化する症状、例えばＩｇＥが起因となるアレルギー疾患、例えば気管支喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性結膜炎、じん麻疹、アナフィラキシーショック等の症状改善及び／又は疾患予防に極めて有用である。また前記免疫調節剤は遅延型過敏反応を抑制し、遅延型過敏反応を伴う疾病、例えば接触性過敏症、アレルギー性接触性皮膚炎、細菌アレルギー、真菌アレルギー、ウイルスアレルギー、薬物アレルギー、甲状腺炎、アレルギー性脳炎等の治療、予防において有用である。
本発明においてはシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩、シクロペンテノンを含有する加熱処理物、及び該加熱処理物からの部分精製シクロペンテノンから選択される原料を使用し、抗リウマチ作用、抗炎症作用、腫瘍壊死因子産生抑制作用、インターロイキン−１０産生増強作用、一酸化窒素産生抑制作用、滑膜細胞へのアポトーシス誘発作用、ファス抗原産生誘導作用、免疫調節作用、例えば遅延型過敏反応抑制作用、リンパ球幼若化反応抑制作用、混合リンパ球反応抑制作用、ＩｇＥ産生抑制作用、トポイソメラーゼ阻害作用等を有する機能性食品又は飲料、例えばリウマチ改善用食品又は飲料、炎症改善用食品又は飲料、腫瘍壊死因子産生抑制用食品又は飲料、インターロイキン−１０産生増強用食品又は飲料、一酸化窒素産生抑制用食品又は飲料、ファス抗原産生誘導用食品又は飲料、免疫調節用食品又は飲料、ＩｇＥ産生抑制用食品又は飲料、トポイソメラーゼ阻害用食品又は飲料を提供することができる。
本発明の食品又は飲料の製造法は、特に限定はないが、調理、加工及び一般に用いられている食品又は飲料の製造法による製造を挙げることができ、製造された食品又は飲料に抗リウマチ作用等の生理作用を有するシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される１以上の化合物が有効成分として含有されていれば良く、シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される１以上の化合物を含有、添加及び／又は希釈してなる食品又は飲料は本発明の食品又は飲料と定義される。
本発明の食品又は飲料としてはシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される１以上の化合物が有効成分として含有、添加及び／又は希釈されていれば特にその形状に限定は無く、タブレット状、顆粒状、カプセル状、ゲル状、ゾル状等の形状の経口的に摂取可能な形状物も包含する。
本発明の食品は飲料は生理活性を有するシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物の抗リウマチ作用、抗炎症作用、腫瘍壊死因子産生抑制作用、インターロイキン−１０産生増強作用、一酸化窒素産生抑制作用、ファス抗原産生誘導作用、免疫調節作用、例えば遅延型過敏反応抑制作用、ＩｇＥ産生抑制作用、トポイソメラーゼ阻害作用等によって、これらを摂取することによりシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩に感受性を示す疾病の症状改善効果又は該疾病の予防効果を有する健康食品又は飲料であり、生体の恒常性の維持に有用な食品又は飲料である。
以上、本発明により、食品又は飲料中に生理活性を有するシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はその塩の適量を含有させることが可能となった。これらの化合物が有する生理作用、例えば滑膜細胞へのアポトーシス誘発作用、ファス抗原産生誘導作用、腫瘍壊死因子産生抑制作用、ＮＯ産生抑制作用、リウマチ特に慢性関節リウマチの症状改善作用及び／又は予防作用等によって、本発明の食品又は飲料はリウマチ、リウマチに伴う合併症状、歩行困難等の症状の改善又は予防に極めて有用である。
本発明で使用する化合物はその生理活性の有効量の投与を行っても毒性は認められず、例えば経口投与の場合シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩は１００ｍｇ／ｋｇでラットに単回投与しても死亡例は認められない。
実施例
以下、実施例を挙げて、本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。なお、実施例における％は重量％を意味する。
参考例  １
１０ｇのＤ−グルクロン酸（シグマ社製  Ｇ  ５２６９）を１リットルの水に溶解し、１２１℃で４時間加熱した後約１０ｍｌになるまで減圧下濃縮した。これに酢酸ブチル：酢酸：水＝３：２：２混合液の上層４０ｍｌを加えて混合後、遠心によって得た上清を減圧下約１０ｍｌまで濃縮した。
上記抽出液をカラムクロマトグラフィー用シリカゲルＢＷ−３００ＳＰ（２×２８ｃｍ、富士シリシア化学社製）にアプライし、酢酸ブチル：酢酸：水＝３：２：２の上層を溶離液としてコンプレッサーで０．２ｋｇ／ｃｍ2に加圧し、毎分５ｍｌの流速で分離を行った。１画分当り１０ｍｌになるようにフラクショネーションを行い、各画分の一部をとって薄層クロマトグラフィーで分析したところ６１番から８０番までの画分に高純度のシクロペンテノンが含まれていた。これらの画分を集めて減圧下濃縮した後４０ｍｌのクロロホルムで抽出し、抽出液を減圧下濃縮することによって１００ｍｇのシクロペンテノンを得た。
この画分をパルパックタイプＳカラムを用いた順相ＨＰＬＣで分離し、２１５ｎｍの紫外線吸収で検出したところ、純度は９８％であった。
上記シクロペンテノン113.9mgをエタノール2.85mlに溶かした。このエタノール溶液にヘキサン／エタノール（94/6）3.85mlを更に加え、17mg/mlのシクロペンテノン溶液を調製した。この液を0.5μmのフィルターでろ過し、光学分割HPLC試料溶液とした。
この試料溶液を以下の条件で光学分割HPLCを行い、前ピークの（−）体シクロペンテノン及び後ピークの（＋）体シクロペンテノンのフラクションをそれぞれ集め、減圧乾固し、（−）体シクロペンテノン43.2mg、（＋）体シクロペンテノン43.0mgをそれぞれ得た。
光学分割HPLC条件
カラム：キラールパックAS（ダイセル化学工業）2.0cm×25.0cm
カラム温度：40℃
移動相：ヘキサン／エタノール（94/6）
流速：14.0ml/min
検出：UV 210nm
試料注入量：150μl（2.55mg）
得られた（−）体シクロペンテノン及び（＋）体シクロペンテノンは両者共に約１％のエナンチオマーを含有していたため再度上記の条件で光学分割した。その結果、前ピークの（−）体シクロペンテノン30.0mgから19.7mgのエナンチオマーを含有しない（−）体シクロペンテノンを、後ピークの（＋）体シクロペンテノン37.4mgから27.7mgのエナンチオマーを含有しない（＋）体シクロペンテノンをそれぞれ得た。なお（−）体シクロペンテノン及び（＋）体シクロペンテノンの光学分割ＨＰＬＣの溶出時間はそれぞれ３３分、４０分であった。
実施例  １
５年前に慢性関節リウマチと診断され、治療薬としてステロイド剤、抗リウマチ剤、鎮痛消炎剤により、慢性関節炎リウマチの治療を受けてきたが、ＣＲＰ定量値  ３ｍｇ／ｄｌ以上、ＲＦ定量値  ３００Ｕ／ｍｌ以上、血沈  ２０ｍｌ／ｈｒ以上と症状の改善が見られず、歩行困難のためほとんど寝たきりの状態であった女性（５６才）が、後記実施例１２−（２）で得られた飲料を毎日５０ｍｌ（シクロペンテノン２ｍｇ含有）、１ヵ月飲用した結果、ＣＲＰ定量値、ＲＦ定量値、血沈等の慢性関節リウマチ症状の血液学的な改善が認められた。またこれらの数値の低下と共に、歩行等日常生活における運動機能が顕著に改善された。
実施例  ２
慢性関節リウマチ患者の滑膜から樹立された線維芽細胞株であるＤＳＥＫ細胞（埼玉医科大学総合医療センター第２内科保存細胞株）を１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、ギブコ社製、２６１４０−０７９）含有イスコブ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ、ギブコ社製、１２４４０−０５３）で５％炭酸ガス存在下、３７℃でコンフルエントになるまで培養し、トリプシン−ＥＤＴＡ（ギブコ社製、２５３００−０５４）で細胞をはがして集めた。この細胞を２５０００個／ｍｌとなるように上記培地に懸濁し、９６穴マイクロタイタープレートの各ウェルに１００μｌずつ分注した。培養５日後、ほぼコンフルエントになった時点で培地を捨て、２．５、５、１０、２０又は３０μＭ  シクロペンテノンを含有する上記培地を加えた。２４時間又は４８時間培養後、１０μｌのプレミックスＷＳＴ−１（宝酒造社製、ＭＫ４００）を加えて３７℃で４時間反応させ、４５０ｎｍにおける吸光度（Ａ450）から６５０ｎｍにおける吸光度（Ａ650）を差し引いた値を細胞増殖度とした。
その結果は表１の通りであった。
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２４時間培養、４８時間ともに５μＭ以上のシクロペンテノンを添加した区分で水添加の対照に比べて細胞増殖が抑制されており、１０μＭのシクロペンテノンを添加した区分でアポトーシス小体の形成が見られた。２０μＭ以上のシクロペンテノンを添加した区分では生細胞はほとんど見られなかった。
以上、シクロペンテノンは滑膜細胞にアポトーシス誘発作用、増殖抑制作用を示した。また（−）体シクロペンテノン、（＋）体シクロペンテノンについても同様の結果を得た。
実施例  ３
（１）５×１０5個／ｍｌのヒトＴ細胞性白血病細胞株であるＪｕｒｋａｔ細胞（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−１５２）及びＭｏｌｔ−３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５５２）を１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、バイオウィタカー社製）を含むＲＰＭＩ１６４０培地（ギブコＢＲＬ社製）にて、５％  ＣＯ2存在下、３７℃で培養し、０、５、１０又は２０μMのシクロペンテノンを添加して更に２４時間培養した。細胞増殖はＭＴＴ法〔モスマン（Ｍｏｓｍａｎｎ）ら、ジャーナル  オブ  イムノロジカル  メソッズ（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ）、第６５巻、第５５〜６３頁（１９８３）〕を用い、細胞増殖度を５６０ｎｍにおける吸光度で測定した。
その結果、水添加の対照に比べて両細胞株とも１０μMシクロペンテノン添加区分では約５０％、２０μMシクロペンテノン添加区分では７５％以上、細胞増殖が抑えられた。５μＭ以下のシクロペンテノンを添加しても細胞の増殖に有意な影響はなかった。
以上のように、シクロペンテノンはＴ細胞性白血病細胞株であるＪｕｒｋａｔ細胞及びＭｏｌｔ−３細胞の増殖を濃度依存的に抑制した。
その結果を図１と図２に示す。すなわち、図１はＪｕｒｋａｔ細胞の増殖に対するシクロペンテノンの影響を示す図であり、図２はＭｏｌｔ−３細胞の増殖に対するシクロペンテノンの影響を示す図である。図１と図２において、横軸はシクロペンテノン濃度（μM）を、縦軸は５６０ｎmにおける吸光度を示す。
（２）Ｊｕｒｋａｔ細胞及びＭｏｌｔ−３細胞におけるファス抗原発現（産生誘導）に対するシクロペンテノンの影響を以下のようにして測定した。０、１、５、１０又は２０μMのシクロペンテノンを含む１０％ＦＣＳ含有ＰＲＭＩ１６４０培地で５×１０5個／ｍｌのＪｕｒｋａｔ細胞又はＭｏｌｔ−３細胞を５％  ＣＯ2存在下、３７℃で２４時間培養し、ムンカー（Ｍｕｎｋｅｒ，Ｒ．）の方法〔アナルズ  オブ  ヘマトロジー（Ａｎｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．）第７０巻、第１５〜１７頁（１９９５）〕に従って抗ファス抗体（ベーリンガー・インゲルハイム社製）を用いて、２ステップ免疫染色した。
染色した細胞１×１０4個の蛍光強度をフローサイトメーター（オーソサイトロン：オーン・ダイアグノスティック・システムズ社製）を用いて測定し、一定値以上の蛍光強度を示す細胞をファス抗原発現細胞としてその比率を計算した。
その結果、両細胞株において、シクロペンテノンを添加した場合には１〜２０μＭの範囲でファス抗原発現細胞の比率が濃度依存的に上昇した。
その結果を図３と図４に示す。すなわち図３はＭｏｌｔ−３、図４はＪｕｒｋａｔ細胞におけるファス抗原の発現を示す図である。図３と図４においては横軸はシクロペンテノンの濃度（μＭ）、縦軸はファス抗原発現細胞の比率（％）を示し、シクロペンテノンによるファス抗原産生誘導作用が確認された。
（３）１０μＭシクロペンテノンを添加してＭｏｌｔ−３細胞を１、３、６、１２又は２４時間培養し、ファス抗原発現細胞の比率を測定した。
その結果、１０μＭシクロペンテノンを添加した場合、ファス抗原発現細胞の比率は培養１時間後から上昇して２４時間後まで徐々に上昇した。
その結果を図５に示す。すなわち図５はＭｏｌｔ−３細胞に１０μＭシクロペンテノンを添加して培養したときのファス抗原発現細胞の比率の変化を示す図であり、横軸は培養時間（時間）、縦軸はファス抗原発現細胞の比率（％）を示す。
以上、実施例３−（１）〜（３）に記載のように、シクロペンテノンによるファス抗原産生誘導作用が確認された。また（−）体シクロペンテノン、（＋）体シクロペンテノンで同様の結果を得た。
実施例  ４
６週齢の雄性ルイスラット（セアック吉富社より５週齢、体重約１３０ｇで購入し、１週間の予備飼育）を用い、慢性関節リウマチ動物モデルであるカラゲナン誘発足浮腫モデルを次のように作製し、被験薬を評価した。
実験開始１８時間前から絶食したラットに蒸留水（大塚製薬社製）で１、５ｍｇ／ｍｌとなるよう調整したシクロペンテノンを１０ｍｌ／ｋｇの投与量で経口投与した。
被験薬投与０．５時間後に生理食塩水（大塚製薬社製）に懸濁して１％の濃度に調整したカラゲナン（ワコー社製）を１００μｌ／ラットで右足足蹠に注射し、足浮腫を惹起した。カラゲナン注射３時間後にラットの右足容積をラット足容積測定装置（ウゴバジール社製）で測定した。なお測定値はカラゲナン投与前に測定した各ラットの右足容積から増加率を算定して表示した。
その結果を図６に示す。すなわち図６はシクロペンテノンと足浮腫増加率の関係を示す図であり、縦軸は増加率（％）、横軸はシクロペンテノン量（ｍｇ／ｋｇ）を示す。
シクロペンテノンは５０ｍｇ／ｋｇの投与量において有意な足浮腫抑制作用を示した。また（−）体シクロペンテノン、（＋）体シクロペンテノンで同様の効果を得た。
実施例  ５
（１）２０週令の雌性ＣＤＦ１系マウスに生理食塩水に溶解したサルモネラアボータス  イークウィー（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ  ｅｑｕｉ）由来のＬＰＳ（リポポリサッカライド：シグマ社製、L-2012）を腹腔内投与（０．１ｍｇ／ｋｇ）し、エンドトキシンショックモデルを作製した。
シクロペンテノンはＬＰＳ投与の３０分前に３０ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与あるいは経口投与した。一方、対照群は無処置とした。ＬＰＳ投与９０分後にマウスより血液を採取し、血清を分離した。次に血清中の腫瘍壊死因子量をＴＮＦ−α・ＥＬＩＳＡキット（ジェンザイム社製）にて測定し、シクロペンテノン投与による腫瘍壊死因子産生抑制効果を測定した。
その結果を表２に示す。すなわち、対照群に対し、シクロペンテノン投与群では腹腔内投与群、経口投与群のいずれの群においても、血清中の腫瘍壊死因子の濃度は低値であり、シクロペンテノン投与により、腫瘍壊死因子の産生が有意に抑制されていた。
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（２）８週齢の雌性ＣＤＦ１系マウスを用いＬＰＳを腹腔内投与（１０μｇ／マウス）し、エンドトキシンショックモデルを作製した。シクロペンテノンはＬＰＳ投与の１５分前に、０．０３、０．３、３、３０ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与した（一群４匹）。ＬＰＳ投与１時間後にマウスより採血し、血清を分離し、血清中腫瘍壊死因子−α量及びインターロイキン−１０量を市販のＥＬＩＳＡキット（エンドジェン社製）にて測定した。
その結果を表３に示す。すなわち、ＬＰＳ投与による血清中の腫瘍壊死因子−α濃度の上昇を、シクロペンテノンは用量依存的に抑制した。また、シクロペンテノン３０ｍｇ／ｋｇ投与群において蒸留水を投与したコントロール群（一群４匹）に対し、血清中のインターロイキン−１０濃度を有意に上昇させた。
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（３）  ８週齢の雌性ＣＤＦ１系マウスの腹腔内にパラフィンオイル（コスモバイオ社）２ｍｌを投与し、腹腔Ｍφを誘導した。パラフィンオイル投与１週間後にマウスの腹腔内にRPMI-1640培地（ギブコ社）４ｍｌを注入しよくマッサージした後回収し、腹腔細胞を得た。
腹腔細胞はRPMI-1640培地で２回洗浄した後、１０％牛胎児血清（FCS：ハイクローン社）を含んだRPMI-1640培地に懸濁し、細胞濃度を１×１０6cells/mlに調整した。調整した細胞液１ｍｌを２４穴プレートに播取し、３７℃ CO2インキュベーターで２時間培養した。培養後上清に含まれる非接着細胞を除去し、接着細胞を腹腔Ｍφとして用いた。
プレートの各穴に１０％FCSを含んだRPMI-1640培地８００μｌを加え、次いで生理食塩水（大塚製薬社製）に溶解した１、１０、１００μＭのシクロペンテノンを１００μｌ添加し３７℃ CO2インキュベーターで１時間培養した。
培養後１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳを１００μｌ添加し、更に２４時間培養した。培養終了後、培養上清を回収し産生された腫瘍壊死因子−α量を市販のＥＬＩＳＡキット（エンドジェン社製）を用いて定量した。
その結果を図７に示す。すなわち図７はシクロペンテノンと腫瘍壊死因子産生量の関係を示す図であり、縦軸は腫瘍壊死因子量（ｐｇ／ｍｌ）、横軸は各試料のシクロペンテノン濃度（μＭ）を示す。
シクロペンテノンは１０μM以上の濃度においてＬＰＳが誘発するマウス腹腔マクロファージからの腫瘍壊死因子産生を著明に抑制した。
以上、実施例５−（１）〜（３）で示すようにシクロペンテノンは腫瘍壊死因子産生抑制作用、インターロイキン−１０産生増強作用を示した。また（−）体シクロペンテノン、（＋）体シクロペンテノンについても同様の結果を得た。
実施例  ６
シクロペンテノンのＮＯ産生の抑制活性及び細胞障害抑制活性をマウスマクロファージ細胞株RAW264.7細胞（ATCC  TIB 71）及びＬＰＳを用い、以下のように測定した。
1.5×106個のRAW264.7細胞を含む5mlの10％ウシ胎児血清（ギブコ社製）含有フェノールレッド不含2mM L-グルタミン（ライフテックオリエンタル社製、25030-149）含有ダルベッコ改良イーグル培地（ライフテックオリエンタル社製、11054-020）を、６個のウエルを有する組織培養プレートにおいて５％炭酸ガス存在下37℃で12時間培養した後、50μlの50μg/ml  ＬＰＳ（シグマ社製）を加え、各々のウエルに各々50μlの500μMシクロペンテノン、250μMシクロペンテノン、100μMシクロペンテノン、50μMシクロペンテノンを加えて、更に12時間培養した後、NOが培地中で酸化されることによって生ずるNO2-及び生細胞数の測定を行った。なお、対照としてＬＰＳを加えない区及びシクロペンテノンを加えない区を設定した。
NO2-の測定には各ウエルから100μlの培養上清を分離し、10μlの50μg/ml  2,3−ジアミノナフタレン（同仁化学研究所社製、341-07021）溶液（0.62N塩酸溶液）を加え室温で15分間放置し、５μlの2.8Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加え、生じたナフタレントリアゾールの蛍光をタイターテックフルオロスキャンII（大日本製薬社販売）を用いて励起波長355nm、測定波長460nmにて測定した。実験はすべて２連で行い、この平均値からＬＰＳ非添加の対照値を控除して、ＬＰＳ添加区分の値に対する各区分の相対値で比較した。
その結果、シクロペンテノンはＬＰＳによりRAW264.7細胞に誘導されるNO産生を抑制し、更に、ＬＰＳによるRAW264.7細胞に対する細胞障害を抑制した。
その結果を図８、図９に示す。図８は培養液中のシクロペンテノン濃度とNO2-濃度の関係を示す図であり、縦軸はNO2-濃度の相対値（％）を示す。図９はシクロペンテノン存在下の培養時間と生細胞数の関係を示す図であり、縦軸は培養液５ml中に含まれる生細胞数（×105個/5ml）を示し、横軸は培養時間（時間）を示す。図９において、白四角（□）はコントロールを、白ひし形（◇）はＬＰＳを、白丸（○）は５μMシクロペンテノンを、白三角（△）は５μMシクロペンテノン＋ＬＰＳを、黒四角（■）は2.5μMシクロペンテノン＋ＬＰＳを、黒ひし形（◆）は１μMシクロペンテノン＋ＬＰＳを、黒丸（●）は0.5μMシクロペンテノン＋ＬＰＳを表す。
以上、シクロペンテノンはＮＯ産生抑制作用を示した。また（−）体シクロペンテノン、（＋）体シクロペンテノンも同様の効果を示した。
実施例  ７
（１）１群５匹の５週令のBALB/c系雄性マウス（日本クレア社）に、卵白アルブミン（シグマ社）の０．０１％生理食塩水溶液100μl及びアラム（Alum）［商品名イムジェクト  アラム（Imject  Alum）；ピアス社］100μlを腹腔内投与して感作し、その11日後に眼低静脈より末梢血を採取した。
採取した血液は遠心分離（2000rpm，5分）後、血漿を分離し、ELISA（IgEマウスEIA  キット；生化学工業）で血漿中総IgE量を測定した。
シクロペンテノン投与群は抗原感作日から採血前日まで10mg/kgを１日１回強制経口投与した。
また対照群では蒸留水を同様に経口投与し、非感作群を無処置群とした。
その結果を表４に示す。卵白アルブミン感作による血漿中総IgE量の上昇はシクロペンテノンの投与により抑制された。
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（２）１群５匹の５週令のＷｉｓｔｅｒ系雄性ラット（日本エスエルシー社）に、卵白アルブミン（シグマ社）の０．０１％生理食塩水溶液100μl及びアラム（Alum）［商品名イムジェクト  アラム（Imject Alum）；ピアス社］100μlを腹腔内投与して感作し、その１４日後に腹大静脈より血液を採取した。
採取した血液は遠心分離（2000rpm，5分）後、血漿を分離し、４８時間ラット受身皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）反応で抗原特異的IgE量を測定した。
すなわち血漿の倍々希釈系列を４倍から６４倍まで、生理食塩水を用いて作製し、毛刈りした７週令のＷｉｓｔｅｒ系雄性ラットの背部の皮内に０．１ｍｌずつ注射した。皮内注射の４８時間後、０．０５％卵白アルブミン及び０．５％エバンスブルー（ナカライテスク社製）の混液１ｍｌを尾静脈より注射した。尾静脈注射３０分後、ラットを断頭、放血死させ、背部に現れた青色スポットを観察し、直径５ｍｍ以上のスポットを陽性とし、最高希釈度をＩｇＥ力価として表した。
シクロペンテノン投与群は抗原感作日から３日間、１ｍｇ／ｋｇあるいは１０ｍｇ／ｋｇのシクロペンテノンを１日１回腹腔内投与した。また対照群では蒸留水を同様に腹腔内投与した。
その結果を表５に示す。
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卵白アルブミン感作による抗原特異的IgE量の上昇は用量依存的にシクロペンテノンの投与により抑制された。
以上、シクロペンテノンによりＩｇＥ産生が抑制された。また（−）体シクロペンテノン、（＋）体シクロペンテノン同様のＩｇＥ産生抑制活性が認められた。
実施例  ８
（１）C57BL/6マウス（メス、５週令）は日本エスエルシー社より購入し、１週間の予備飼育の後、実験に用いた。遅延型過敏反応の惹起抗原であるヒツジ赤血球（清水実験材料）を生理食塩水（大塚製薬社製）で３回洗い１ｘ１０9cells/mlに調整し、２００μｌをマウスの腹腔内に注射して抗原感作した。
感作から５日後に同様に調製した抗原４０μｌを右足足蹠に注射して抗原誘発し、足浮腫を惹起した。シクロペンテノンは１群５匹のマウスに抗原感作日から１日１回、３日間腹腔内に１ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇを投与した。
抗原誘発から２日後にマウスの右足容積を足浮腫測定装置（ウゴバジル社製）で測定し、遅延型過敏反応の指標とした。測定値は抗原誘発前に測定したマウスの右足容積からの増加率を算定して表示した。
その結果を図１０に示す。すなわち図１０はシクロペンテノンの遅延型過敏反応抑制作用を示す図であり、縦軸は増加率（％）、横軸はシクロペンテノン投与量（ｍｇ／ｋｇ）を示す。なお図中＊＊は対照に対してｐ＜０．０１で有意であることを意味する。
シクロペンテノンは１ｍｇ／ｋｇの投与で、遅延型過敏反応を抑制し、１０ｍｇ／ｋｇの投与で有意な遅延型過敏反応抑制作用を示した。
また（−）体シクロペンテノン、（＋）体シクロペンテノンも同様の効果を示した。
（２）Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウス（日本エスエルシー社；オス、５週令）より脾臓を摘出し、細かく粉砕して１０％牛胎児血清（ハイクローン社製）を含んだＲＰＭＩ−１６４０培地（ギブコ社製）に懸濁して単細胞液を得た。細胞浮遊液をプラスチックシャーレに播種し３７℃で炭酸ガス培養器で２時間培養し、接着性細胞をシャーレに接着させて除き、非接着性細胞を脾臓リンパ球として用いた。細胞濃度を２ｘ１０6細胞／ｍｌに調整し、９６ウェルマイクロタイタープレートに２００μｌ／ウェルで播種し、対照群以外の各ウェルに、各濃度のシクロペンテノンを添加し、さらにすべてのウェルに５μｇのコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ：ナカライテスク社製）を添加し３７℃で炭酸ガス培養器で１日間培養した。培養後１μＣｉの3Ｈ−チミジンを各ウェルに加えさらに１日間培養して細胞への取り込み量を液体シンチレーションカウンターで測定した。
その結果を図１１に示す。すなわち図１１はシクロペンテノンのリンパ球幼若化抑制作用を示す図であり、縦軸は3Ｈ−チミジン取り込み量（ＣＰＭ）、横軸はＣｏｎＡの添加、非添加の対照、及びシクロペンテノンの濃度（μｇ／ｍｌ）を示す。図から明かなように、シクロペンテノンはマイトジェン刺激のマウスリンパ球の幼若化に対し、用量依存的な抑制作用を示し、１０μｇ／ｍｌでほぼ完全にリンパ球の増殖を抑え、リンパ球の活性化に対する抑制作用が認められた。
また（−）体シクロペンテノン、（＋）体シクロペンテノンも同様な効果を示した。
（３）ＢＡＬＢ／ｃマウス（日本エスエルシー社；オス、５週令）およびＣ５７ＢＬ／６マウス（日本エスエルシー社；オス、５週令）より脾臓を摘出し、上記の方法により脾臓リンパ球を得た。各細胞浮遊液の濃度を２ｘ１０6細胞／ｍｌに調整し、１００μｌづつを混合して９６ウェルマイクロタイタープレートに播種した。対照群以外の各ウェルに、各濃度のシクロペンテノンを添加し、３７℃で炭酸ガス培養器で４日間培養した。培養後１μＣｉの3Ｈ−チミジンを各ウェルに加えさらに１日間培養して細胞への取り込み量を液体シンチレーションカウンターで測定した。
その結果を図１２に示す。すなわち図１２はシクロペンテノンの混合リンパ球反応抑制作用を示す図であり、縦軸は3Ｈ−チミジン取り込み量（ＣＰＭ）、横軸はＢＡＬＢ／ｃ脾臓リンパ球の対照（図中、ＢＡＬＢ／ｃで示す）、Ｃ５７ＢＬ／６脾臓リンパ球対照（図中、Ｃ５７ＢＬ／６で示す）、ＢＡＬＢ／ｃ脾臓リンパ球とＣ５７ＢＬ／６脾臓リンパ球混合対照（図中、Ｍｉｘで示す）及びシクロペンテノンの濃度（μｇ／ｍｌ）を示す。図から明かなように、アロ抗原刺激により活性化されたリンパ球に対してシクロペンテノンは用量依存的な抑制作用を示し、１０μｇ／ｍｌでほぼ完全に抑え、混合リンパ球反応によるリンパ球の活性化に対する抑制作用が認められた。
また（−）体シクロペンテノン、（＋）体シクロペンテノンも同様の混合リンパ球反応抑制作用を示した。
実施例  ９
（１）トポイソメラーゼII〔トポジェン（ＴｏｐｏＧＥＮ）社製、２単位／μｌ〕  ２μｌ、１０倍濃度緩衝液〔０．５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１．２Ｍ  ＫＣｌ、０．１Ｍ  ＭｇＣｌ2、５ｍＭ  アデノシン三リン酸、５ｍＭ  ジチオスレイトール〕  ２μｌ、０．１％  ウシ血清アルブミン（宝酒造社製）  ２μｌ、蒸留水  １１μｌ及び対照の蒸留水又は試料（１００、２００、５００、１０００又は２５００μＭのシクロペンテノン）  ２μｌを混合したものに、０．２５μｇ／μｌ  ｐＢＲ３２２  ＤＮＡ（宝酒造社製）  １μｌを添加して３７℃で反応させた。３０分間反応後、１％  ドデシル硫酸ナトリウム、５０％  グリセロール、０．０２％  ブロモフェノールブルー水溶液  ２μｌを添加して反応を停止した。
アガロースＬ０３（宝酒造社製）とＴＡＥ緩衝液〔４０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、５ｍＭ  酢酸ナトリウム、１ｍＭ  エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）、酢酸でｐＨ７．８に調整〕を用いて作製した１％  アガロースゲルに上記反応液  ２０μlをアプライし、ＴＡＥ緩衝液中で電気泳動を行った。泳動後、ゲルを１μｇ／ｍｌ  エチジウムブロミド水溶液に浸漬し、紫外線を照射してＤＮＡ電気泳動パターンを観察した。なお、水添加の対照ではＤＮＡが超らせん型から弛緩型に完全に変化するが、トポイソメラーゼII活性が阻害されると超らせん型から弛緩型への変化が一部又は完全に阻害される。
その結果を表６に示す。
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水添加の対照ではＤＮＡが超らせん型から弛緩型に完全に変化したが、２０μＭ以上のシクロペンテノン濃度でＤＮＡの超らせん型から弛緩型への変化が一部又は完全に阻害され、シクロペンテノンのトポイソメラーゼII阻害活性が確認された。表６において、−は超らせん型から弛緩型に完全に変化していることを、＋は中程度の、＋＋は大半の超らせん型が残っていることを、＋＋＋は超らせん型が全く減少していないことを示す。
（２）実施例９−（１）と同様の方法でシクロペンテノンのトポイソメラーゼＩ阻害活性を測定した。但し、トポイソメラーゼIIの代りにトポイソメラーゼＩ〔トポジェン社製、０．０１単位／μｌ〕、１０倍濃度緩衝液として１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．９）、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  スペルミジン、５０％  グリセロールを用いた。また、試料として最終濃度１ｍＭとなるようシクロペンテノンを添加した。
その結果、１ｍＭ  シクロペンテノンでトポイソメラーゼＩは阻害された。
以上、正常細胞では分裂期のみに一過的に発現しているが、がん化により全細胞周期を通じて高発現するようになるトポイソメラーゼIIや、がん化により発現量や活性が増大するトポイソメラーゼＩに対してシクロペンテノン阻害活性を示した。また（−）体シクロペンテノン、（＋）体シクロペンテノンについても同様の結果を得た。
実施例  １０
注射剤
（１）生理食塩液（日本薬局法収載品）にシクロペンテノンを１％濃度で加え注射剤を作製した。
（２）生理食塩水（前記と同じ）に（−）体シクロペンテノン及びグリシルリチン酸をそれぞれ０．５％及び０．１％濃度で加え、注射剤を作製した。
実施例  １１
錠剤
（１）シクロペンテノン１００ｍｇと微結晶性セルロースの適量とを含有する錠剤を調製し、糖衣を施し、錠剤を作製した。
（２）（＋）体シクロペンテノン０．１ｍｇ、グリシルリチン酸ジカリウム１０ｍｇ及び微結晶セルロースの適量を含有する錠剤を調製し、糖衣を施し、錠剤を作製した。
実施例  １２
（１）ペクチン（ポモシンペクチンＬＭ−１３ＣＧ：ハーキュリーズ社製）５ｋｇを水道水１００リットルに添加し、液温２８℃から液温１２０℃となるまで水蒸気吹込みにより３５分間昇温させ、次いでかくはん下で１２０℃、５時間保温し、次いで冷却し、冷却物１３５リットルを調製した。次いで冷却物にろ過助剤として、セライト＃５４５（セライト社製）１．３５ｋｇ、及びシリカ＃６００−Ｓ（中央シリカ社製）１．３５ｋｇを添加し、次いでセライト＃５４５の０．１ｋｇ、及びシリカ＃６００−Ｓの０．１ｋｇでプレコートしたコンパクトフィルター（６インチ１６段ろ紙：ＡＤＶＡＮＴＥＣ＃３２７）でろ過を行った。得られたろ液はプレートヒーター（日阪製作所製）による連続瞬間加熱処理（９８℃、６０秒）を行った後冷却し、１５０リットルのシクロペンテノン含有のペクチン加熱処理液を調製した。
シクロペンテノン含有のペクチン加熱処理液のｐＨは約３．５、酸度は６．２ｍｌ、糖度は５．８Ｂｒｉｘ％であった。なおｐＨはｐＨメーターで測定し、酸度は試料１０ｍｌをｐＨ７．０に中和するのに要する０．１Ｎ  ＮａＯＨ量（ｍｌ）で表示した。更に糖度はブリックス糖度計で測定した。
（２）下記組成で飲料を調製した。
果糖ブドウ糖液糖                  ５．００％
砂糖                              ４．００％
酸味料                            １．２０％
香料                              ０．３０％
シクロペンテノン含有物            ０．５  ％
精製水                            残        
計                            １００．００％
なおシクロペンテノン含有物としては実施例１２−（１）記載のシクロペンテノン含有ペクチン加熱処理液を使用し、その固形物換算量を添加した。この飲料１００ｍｌ中には４ｍｇのシクロペンテノンが含有されている。
発明の効果
本発明によりシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を有効成分として含有する医薬が提供される。該医薬は抗リウマチ剤又はリウマチ予防剤として、また炎症性サイトカインの制御による抗炎症剤又は炎症予防剤として炎症を伴う疾病の治療剤は予防剤として極めて有用である。また本発明により、食品又は飲料中に生理活性を有するシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩の適量を含有させることが可能となった。これらの化合物が有する生理機能により本発明の機能性食品又は飲料は、リウマチ特に慢性関節リウマチの症状改善作用及び／又は予防作用によって、リウマチに伴う合併症状、歩行困難等の治療又は予防等に極めて有用である。また炎症性サイトカインの制御作用により、本発明の食品又は飲料は炎症を伴う疾病の症状改善又は予防に有用である。
また本発明の医薬により腫瘍壊死因子の産生が抑制され、本発明の医薬は腫瘍壊死因子の産生により媒介される疾病、該因子の産生により悪化する疾病、敗血症、ＡＩＤＳ、慢性関節性リウマチ、等の疾病の治療又は予防に有用である。また本発明の食品又は飲料は腫瘍壊死因子の産生により媒介される疾病、該因子の産生により悪化する疾病、敗血症、ＡＩＤＳ、慢性関節性リウマチ、等の疾病の症状の改善又は該疾病の予防に極めて有用であり、シクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を有効成分として使用する本発明の方法は腫瘍壊死因子の産生量の調節に極めて有用である。
更に本発明によりＮＯ産生抑制作用を有するシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩を含有する医薬が提供され、該医薬はＮＯ産生の抑制を必要とする疾病、例えば全身性血圧低下、血圧応答低下、自己免疫疾患、炎症、関節炎、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、血管機能不全、病因性血管拡張、組織損傷、心臓血管系虚血、痛感過敏症、脳虚血、血管新生を伴う疾病、がんの治療又は予防、及び生体の恒常性の維持に有用な医薬品である。
またＮＯ産生抑制作用を有するシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を有効成分とするＮＯ産生抑制剤、血管新生抑制、発がん予防剤、制がん剤、抗炎症剤、虚血性脳損傷改善剤も提供される。該ＮＯ産生抑制剤は生化学研究や、医薬のスクリーニングに有用である。
本発明により、食品又は飲料中に生理活性を有するシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩の適量を含有させることが可能となった。このシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩が有するＮＯ産生抑制作用によって、本発明の食品又は飲料はＮＯ産生抑制作用を介した発がん予防、制がん作用、抗炎症作用、虚血性脳損傷改善作用、生体防御作用増強等の生体の恒常性維持機能を有する健康食品又は飲料である。
本発明によりシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物を有効成分とするファス抗原産生誘導剤、これらの化合物を有効成分として使用しファス抗原の生理機能研究や拮抗剤の探索等に有用なファス抗原産生誘導方法、及びファス抗原産生異常を伴う疾病、例えば自己免疫疾患、関節リウマチ等の予防剤又は治療剤が提供される。
またシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも１以上の化合物の有効量を含有する食品又は飲料は、これらの化合物が有するファス抗原産生誘導作用により本発明の機能性食品又は飲料であり、上記疾患の症状改善、発病予防作用に極めて有用である。またシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩は滑膜細胞にアポトーシス誘発作用を有し、本発明の医薬、食品又は飲料は抗リウマチ用の医薬、食品又は飲料として特に有用である。
本発明によりＩｇＥ産生抑制作用、遅延型過敏反応抑制作用、リンパ球幼若化抑制作用、混合リンパ球反応抑制作用を有するシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも一つの化合物を有効成分として含有する免疫調節剤が提供される。
またシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩が有する免疫調節作用により、これらの化合物から選択される化合物を含有する食品又は飲料は免疫調節用食品又は免疫調節用飲料として、自己免疫疾患等の免疫機能の調節を必要とする疾患症状の改善又は免疫異常症の予防に有用である。
また本発明の方法はＩｇＥの産生量の調節、免疫調節等に有用である。
また本発明によりシクロペンテノン若しくはその光学活性体又はそれらの塩から選択される少なくとも一以上の化合物を有効成分として含有するトポイソメラーゼ阻害剤、これらの化合物から選択される１以上の化合物を有効成分として使用するトポイソメラーゼ阻害方法が提供される。該トポイソメラーゼ阻害剤は制がん剤として有用であり、該トポイソメラーゼ阻害方法は生化学研究や制がん剤のスクリーニング等に有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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