【手続補正書】
【提出日】令和3年10月8日(2021.10.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
無核細胞内にペイロードを送達するための方法であって、
圧力を前記無核細胞へ適用してペイロードの通過に十分な大きさの前記無核細胞の摂動を引き起こすように、バッファー中に懸濁された前記無核細胞を細胞変形狭窄を含むマイクロ流体チャネルを介して通過させることであって、前記狭窄が、幅、長さ及び深さを含み、前記狭窄の前記幅が、前記無核細胞の最大直径未満である、前記通過させることと；
前記無核細胞が前記狭窄を介して通過する前又は後にペイロード含有溶液中で前記無核細胞をインキュベーションすること
とを含む、前記方法。
【請求項２】
幅が、無核細胞の最大直径の約２０％〜９９％である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
無核細胞が、
（ｉ）非修飾血液の構成要素である；
（ii）健康な無核細胞である；又は
（iii）疾患無核細胞若しくは感染無核細胞である；
請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
無核細胞が、赤血球、網状赤血球、又は血小板のうちの１つ又は２つ以上である、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
（ｉ）幅が４μｍ以下である；
（ii）長さが３０μｍ以下である；
（iii）深さが１μｍ〜１ｍｍである；及び／又は
（iv）バッファーが細胞を膨潤させる低張バッファーである；及び／又は
（ｖ）チャネルの横断面が、円形、楕円形、細長いスリット、正方形、六角形、及び三角形からなる群から選択される；
請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
（ｉ）幅が０．５μｍ〜４μｍである；
（ii）長さが１０μｍ〜３０μｍである；及び／又は
（iii）深さが１μｍ〜２０μｍである；
請求項５に記載の方法。
【請求項７】
（ｉ）幅が１μｍ〜３μｍである；
（ii）長さが１０μｍ〜２０μｍである；及び／又は
（iii）深さが２０μｍである；
請求項５又は６に記載の方法。
【請求項８】
（ｉ）マイクロ流体チャネルが、複数のマイクロ流体チャネルの１つである；及び／又は
（ii）狭窄が、複数の細胞変形狭窄の１つである；
請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
（ｉ）複数のマイクロ流体チャネルが、並列して配置される；
（ii）複数の細胞変形狭窄が、同じマイクロ流体チャネル中で並列して配置される；及び／又は
（iii）複数の細胞変形狭窄が、同じマイクロ流体チャネル中で連続して配置される；
請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
バッファー中に懸濁された無核細胞が細胞変形狭窄を介して通過するように、前記バッファーへ圧力を適用するように細胞駆動装置が適合されている、請求項１〜９のいずれかに記載の方法であって、
（ｉ）前記細胞駆動装置が、前記バッファーへ９０ｐｓｉを超える圧力を適用するように適合される；及び／又は
（ii）前記細胞駆動装置が、圧力ポンプ、ガスボンベ、コンプレッサー、真空ポンプ、シリンジポンプ、蠕動ポンプ、ピペット、ピストン、キャピラリーアクター、ヒト心臓、ヒト筋肉、重力、マイクロ流体ポンプ、及びシリンジからなる群から選択される；
前記方法。
【請求項１１】
（ｉ）バッファー中に懸濁された無核細胞が細胞変形狭窄を介して通過するように、前記バッファーへ約１２０ｐｓｉの圧力を適用するように細胞駆動装置が適合されている；及び／又は
（ii）バッファーが、無核細胞を膨潤させる低張バッファーである；
請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
ペイロード含有溶液が、タンパク質、ペプチド、小分子、核酸、脂質、炭水化物、マクロ分子、ビタミン、ポリマー、蛍光色素、フルオロフォア、カーボンナノチューブ、量子ドット、ナノ粒子、及び／又はステロイドのうちの１つ又は２つ以上を含む、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
ペイロード含有溶液が、
（ｉ）タンパク質又はポリマーを含むか、
（ii）タンパク質及びポリマーを含むか、
（iii）小分子又はタンパク質を含むか、
（iv）小分子及びタンパク質を含むか、或いは
（ｖ）クロロキン、アトバクオン−プログアニル、アルテメテル／リメファントリン（ｌｙｍｅｆａｎｔｒｉｎｅ）、キニーネ硫酸塩、メフロキン、ヒドロキシクロロキン、プリマキン、キニジン、アルテスネート、アルテミシニン、スルファドキシン／プリメサミン（ｐｒｙｉｍｅｔｈａｍｉｎｅ）、アモジアキン、スルホンアミド、ハロファントリン、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、クリンダマイシン、ヒドロキシ尿素、ハイドレア、ビタミンＥ、Ｌ−グルタミン、アシクロビル、ガンシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、トリ−ペプチド、又はテトラ−ペプチドのうちの１つ又は２つ以上を含む、
請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ペイロード含有溶液中で無核細胞をインキュベーションすることが、０．０００１秒〜２０分間にわたって、又は２０分間〜６０分間にわたって無核細胞をインキュベーションすることを含む、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
ペイロードが細胞内に含有されるように、無核細胞の摂動が停止するのを所定時間にわたって待機することをさらに含む、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
細胞内ペイロードを含む無核細胞を含む組成物であって、
前記組成物が、
バッファー中に懸濁した無核細胞を、前記ペイロードの通過に十分な大きさの１つ又は２つ以上の前記無核細胞の摂動を引き起こす細胞変形狭窄を含むマイクロ流体チャネルを介して通過させることであって、前記狭窄が、幅、長さ及び深さを含み、前記狭窄の前記幅が、前記無核細胞の最大直径未満である、前記通過させること；及び
前記無核細胞が前記狭窄を介して通過する前又は後に前記ペイロードを含む溶液中で前記無核細胞をインキュベーションすること；
を含む方法によって調製される、前記組成物。
【請求項１７】
感染又は疾患を治療する方法において使用するための、細胞内ペイロードを含む無核細胞を含む組成物であって、
前記方法が、
バッファー中に懸濁した無核細胞を、前記ペイロードの通過に十分な大きさの１つ又は２つ以上の前記無核細胞の摂動を引き起こす細胞変形狭窄を含むマイクロ流体チャネルを介して通過させることであって、前記狭窄が、幅、長さ及び深さを含み、前記狭窄の前記幅が、前記無核細胞の最大直径未満である、前記通過させること；
前記無核細胞が前記狭窄を介して通過する前又は後に前記ペイロードを含む溶液中で前記無核細胞をインキュベーションすること；及び
前記無核細胞の投与を、それを必要とする患者に行うこと；
を含む、前記組成物。
【請求項１８】
幅が、無核細胞の最大直径の約２０％〜９９％である、請求項１６又は１７に記載の組成物。
【請求項１９】
無核細胞が、
（ｉ）非修飾血液の構成要素である；
（ii）健康な無核細胞である；又は
（iii）疾患無核細胞若しくは感染無核細胞である；
請求項１６〜１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
無核細胞が、赤血球、網状赤血球、又は血小板のうちの１つ又は２つ以上である、請求項１６〜１９のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
（ｉ）幅が４μｍ以下である；
（ii）長さが３０μｍ以下である；
（iii）深さが１μｍ〜１ｍｍである；及び／又は
（iv）バッファーが細胞を膨潤させる低張バッファーである；及び／又は
（ｖ）チャネルの横断面が、円形、楕円形、細長いスリット、正方形、六角形、及び三角形からなる群から選択される；
請求項１６〜２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
（ｉ）幅が０．５μｍ〜４μｍである；
（ii）長さが１０μｍ〜３０μｍである；及び／又は
（iii）深さが１μｍ〜２０μｍである；
請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
（ｉ）幅が１μｍ〜３μｍである；
（ii）長さが１０μｍ〜２０μｍである；及び／又は
（iii）深さが２０μｍである；
請求項２１又は２２に記載の組成物。
【請求項２４】
（ｉ）マイクロ流体チャネルが、複数のマイクロ流体チャネルの１つである；及び／又は
（ii）狭窄が、複数の細胞変形狭窄の１つである；
請求項１６〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
（ｉ）複数のマイクロ流体チャネルが、並列して配置される；
（ii）複数の細胞変形狭窄が、同じマイクロ流体チャネル中で並列して配置される；及び／又は
（iii）複数の細胞変形狭窄が、同じマイクロ流体チャネル中で連続して配置される；
請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
細胞内ペイロードを含む無核細胞が、バッファー中に懸濁された無核細胞が細胞変形狭窄を介して通過するように、前記バッファーへ圧力を適用するように適合させた細胞駆動装置によって適用された圧力によってマイクロ流体チャネルを介して通過することによって調製される、請求項１６〜２５のいずれかに記載の組成物であって、
（ｉ）前記細胞駆動装置が、前記バッファーへ９０ｐｓｉを超える圧力を適用するように適合される；及び／又は
（ii）前記細胞駆動装置が、圧力ポンプ、ガスボンベ、コンプレッサー、真空ポンプ、シリンジポンプ、蠕動ポンプ、ピペット、ピストン、キャピラリーアクター、ヒト心臓、ヒト筋肉、重力、マイクロ流体ポンプ、及びシリンジからなる群から選択される；
前記組成物。
【請求項２７】
（ｉ）細胞内ペイロードを含む無核細胞が、バッファー中に懸濁された無核細胞が細胞変形狭窄を介して通過するように、前記バッファーへ約１２０ｐｓｉの圧力を適用するように適合させた細胞駆動装置によって適用された圧力によってマイクロ流体チャネルを介して通過することによって調製される；及び／又は
(ii)バッファーが、無核細胞を膨潤させる低張バッファーである；
請求項１６〜２６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
ペイロード含有溶液が、タンパク質、ペプチド、小分子、核酸、脂質、炭水化物、マクロ分子、ビタミン、ポリマー、蛍光色素、フルオロフォア、カーボンナノチューブ、量子ドット、ナノ粒子、及び／又はステロイドのうちの１つ又は２つ以上を含む、請求項１６〜２７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
ペイロード含有溶液が、
（ｉ）タンパク質又はポリマーを含む；
（ii）タンパク質及びポリマーを含む；
（iii）小分子又はタンパク質を含む；
（iv）小分子及びタンパク質を含む；或いは
（ｖ）クロロキン、アトバクオン−プログアニル、アルテメテル／リメファントリン（ｌｙｍｅｆａｎｔｒｉｎｅ）、キニーネ硫酸塩、メフロキン、ヒドロキシクロロキン、プリマキン、キニジン、アルテスネート、アルテミシニン、スルファドキシン／プリメサミン（ｐｒｙｉｍｅｔｈａｍｉｎｅ）、アモジアキン、スルホンアミド、ハロファントリン、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、クリンダマイシン、ヒドロキシ尿素、ハイドレア、ビタミンＥ、Ｌ−グルタミン、アシクロビル、ガンシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、トリ−ペプチド、又はテトラ−ペプチドのうちの１つ又は２つ以上を含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
ペイロード含有溶液中で無核細胞をインキュベーションすることが、０．０００１秒〜２０分間にわたって、又は２０分間〜６０分間にわたって無核細胞をインキュベーションすることを含む、請求項１６〜２９のいずれかに記載の組成物。
【請求項３１】
方法が、ペイロードが細胞内に含有されるように、無核細胞の摂動が停止するのを所定時間にわたって待機することをさらに含む、請求項１６〜３０のいずれかに記載の組成物。
【請求項３２】
（ｉ）無核細胞が、マラリアを引き起こす寄生生物に感染している；及び／又は患者がマラリアを引き起こす寄生生物に感染している；或いは
（ii）それを必要とする患者が、鎌型赤血球症を患っている；或いは
（iii）それを必要とする患者が、がんを患っている；
請求項１７〜３１のいずれかに記載の組成物。
【請求項３３】
マラリアを引き起こす寄生生物が、P.falciparumである、請求項３２に記載の組成物。