【手続補正書】
【提出日】令和3年10月7日(2021.10.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミロイドβを捕捉できるアフィニティ支持体であって、
支持体と、前記支持体に直接的に結合した複数のスペーサと、前記スペーサに各々直接的に結合した複数の免疫グロブリンとを含み、それにより、前記免疫グロブリンと前記アミロイドβとを結合させ、
前記スペーサの長さが１〜２０ｎｍであり、
前記免疫グロブリンが結合している前記スペーサの前記支持体上における固定位置間距離が１〜１０００Åであり、
前記免疫グロブリンは、アミロイドβのアフィニティ部位の少なくとも２つの部位に同時に結合することができ、コーポレイティブ結合によりアミロイドβを捕捉する、アフィニティ支持体。
【請求項２】
前記アフィニティ支持体上において、前記スペーサに結合した免疫グロブリンが１種類存在する、請求項１のアフィニティ支持体。
【請求項３】
前記アフィニティ支持体上において、前記スペーサに結合した前記免疫グロブリンが２種類以上、混合状態で存在する、請求項１のアフィニティ支持体。
【請求項４】
前記スペーサがオキシアルキレン基を含有する、請求項１〜３のいずれかのアフィニティ支持体。
【請求項５】
前記スペーサが、ポリアルキレングリコール、ポリオキシアルキル化ポリオール、ポリビニルアルコール、ポリビニルアルキルエーテル、ポリサッカライド、生分解性高分子、脂質重合体、及びポリペプチドからなる群から選ばれる１つ又はいずれか２つ以上を含む、請求項１〜４のいずれかのアフィニティ支持体。
【請求項６】
前記アミロイドβが複数の分子の多量体又は凝集体として存在し、複数のアフィニティ部位が、多量体又は凝集体それぞれに存在する、請求項１〜５のいずれかのアフィニティ支持体。
【請求項７】
前記スペーサが分岐しており、前記スペーサの主鎖側に前記支持体が結合し、前記スペーサの分岐鎖側に前記免疫グロブリンが結合している、請求項１〜６のいずれかのアフィニティ支持体。
【請求項８】
前記支持体が、アガロース、セファロース、デキストラン、シリカゲル、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリアクリロニトリル、（メタ）アクリル酸系ポリマー、フッ素樹脂、金属錯体樹脂、ガラス、金属及び磁性体からなる群から選ばれる素材からなるものである、請求項１〜７のいずれかのアフィニティ支持体。
【請求項９】
前記免疫グロブリンが、
（ａ）アミロイドβの第３−８アミノ酸残基を含むエピトープ、及び
（ｂ）アミロイドβの第１８−２２アミノ酸残基を含むエピトープ
からなる群から選ばれるアミロイドβのエピトープに結合する免疫グロブリンである、請求項１〜８のいずれかのアフィニティ支持体。
【請求項１０】
前記免疫グロブリンが、６Ｅ１０及び４Ｇ８からなる群から選ばれる、請求項１〜９のいずれかのアフィニティ支持体。
【請求項１１】
前記免疫グロブリンが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選ばれる、請求項１〜９のいずれかのアフィニティ支持体。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２４】
一方、目的のアミロイド・ベータ（１−２８）以外にもビーズに吸着しているかどうかを調べた。図１３に、血漿にスパイクされたアミロイド・ベータ（１−２８）の１ｐｇ（３０７ａｍｏｌ）を６Ｅ１０／４Ｇ８ Ｆ（ａｂ’）−ＰＥＧ２４ビーズで単離及び濃縮後、質量分析装置で測定して得られたマススペクトルを示す。図１３に示されるように、６Ｅ１０／４Ｇ８ Ｆ（ａｂ’）−ＰＥＧ２４ビーズにおいてｍ／ｚ１５００−５０００の範囲内にアミロイド・ベータ（１−２８）以外で検出されたピーク（Ｓ／Ｎ≧３）は無かった。これは、親水性の高いＰＥＧをビーズに結合させていることや、抗体のＦｃ領域を欠損させることにより、非特異的に吸着する夾雑物を抑制していると考えられる。このように、Ｆ（ａｂ’）−ＰＥＧ２４ビーズは特異性においても優れていると言える。
以下に、出願当初の特許請求の範囲に記載された発明を実施の態様として付記する。
［１］  アミロイドβの捕捉方法であって、
支持体と、前記支持体に直接的に結合した複数のスペーサと、前記スペーサに各々直接的に結合した複数の免疫グロブリンとを含むアフィニティ支持体に、アミロイドβを含む試料を接触させることにより、前記免疫グロブリンと前記アミロイドβとを結合させる工程を含み、
前記スペーサの長さが１〜１００ｎｍであり、
前記免疫グロブリンが結合している前記スペーサの前記支持体上における固定位置間距離が１〜１０００Åであり、
前記アミロイドβは複数のアフィニティ部位を有し、前記免疫グロブリンが前記複数のアフィニティ部位の少なくとも２つの部位に同時に結合し、前記アミロイドβが前記免疫グロブリンとコーポレイティブ結合により捕捉される、アミロイドβの捕捉方法。
［２］  前記アフィニティ支持体上において、前記スペーサに結合した免疫グロブリンが１種類存在する、［１］のアミロイドβの捕捉方法。
［３］  前記アフィニティ支持体上において、前記スペーサに結合した前記免疫グロブリンが２種類以上、混合状態で存在する、［１］のアミロイドβの捕捉方法。
［４］  前記スペーサがオキシアルキレン基を含有する、［１］〜［３］のいずれかのアミロイドβの捕捉方法。
［５］  前記スペーサが、ポリアルキレングリコール、ポリオキシアルキル化ポリオール、ポリビニルアルコール、ポリビニルアルキルエーテル、ポリサッカライド、生分解性高分子、脂質重合体、及びポリペプチドからなる群から選ばれる１つ又はいずれか２つ以上を含む、［１］〜［４］のいずれかのアミロイドβの捕捉方法。
［６］  前記アミロイドβが複数の分子の多量体又は凝集体として存在し、前記複数のアフィニティ部位が、多量体又は凝集体それぞれに存在する、［１］〜［５］のいずれかのアミロイドβの捕捉方法。
［７］  前記スペーサが分岐しており、前記スペーサの主鎖側に前記支持体が結合し、前記スペーサの分岐鎖側に前記免疫グロブリンが結合している、［１］〜［６］のいずれかのアミロイドβの捕捉方法。
［８］  前記支持体が、アガロース、セファロース、デキストラン、シリカゲル、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリアクリロニトリル、（メタ）アクリル酸系ポリマー、フッ素樹脂、金属錯体樹脂、ガラス、金属及び磁性体からなる群から選ばれる素材からなるものである、［１］〜［７］のいずれかのアミロイドβの捕捉方法。
［９］  前記免疫グロブリンが、
（ａ）アミロイドβの第３−８アミノ酸残基を含むエピトープ、及び
（ｂ）アミロイドβの第１８−２２アミノ酸残基を含むエピトープ
からなる群から選ばれるアミロイドβのエピトープに結合する免疫グロブリンである、［１］〜［８］のいずれかのアミロイドβの捕捉方法。
［１０］  前記免疫グロブリンが、６Ｅ１０及び４Ｇ８からなる群から選ばれる、［１］〜［９］のいずれかのアミロイドβの捕捉方法。
［１１］  前記免疫グロブリンが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選ばれる、［１］〜［９］のいずれかのアミロイドβの捕捉方法。
［１２］  アミロイドβの捕捉及び解析方法であって、
［１］〜［１１］のいずれかの方法によりアミロイドβを捕捉し、
前記アフィニティ支持体の表面を洗浄し、前記支持体に非特異的に吸着した成分を除去し、
前記免疫グロブリンと結合した前記アミロイドβを前記支持体から溶出させ、
溶出されたアミロイドβを回収し、
回収されたアミロイドβを表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）又は質量分析にて解析する、アミロイドβの捕捉及び解析方法。