(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式３〜８のいずれかで示されるセラミド類似物質からなることを特徴とする皮膚保湿剤。
【式３】
0003703904.tif 000010
【式４】
0003703904.tif 000011
【式５】
0003703904.tif 000012
【式６】
0003703904.tif 000013
【式７】
0003703904.tif 000014
【式８】
0003703904.tif 000015
【請求項２】
次の式３〜８のいずれかで示されるセラミド類似物質を皮膚保湿剤として使用することを特徴とする皮膚保湿剤。
【式３】
0003703904.tif 000016
【式４】
0003703904.tif 000017
【式５】
0003703904.tif 000018
【式６】
0003703904.tif 000019
【式７】
0003703904.tif 000020
【式８】
0003703904.tif 000021
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規な皮膚保湿剤、つまり、肌に潤い感と柔軟性とを与える皮膚保湿剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
人の肌に潤いを与え、肌を柔軟にするためには、角質層の水分が重要であることは周知の事実である。この角質層の水分は、角質層に含まれている水溶性成分、つまり、遊離アミノ酸、有機酸、尿素又は無機イオンによって保持されるものであるとされ、従来、これらの物質を、単独で、あるいは組み合わせて、薬用皮膚用剤あるいは化粧料に配合して、肌荒れの改善又は予防の目的で使用していた。
【０００３】
また、これらとは別に、水と親和性が高い、例えば、アロエエキス等の植物抽出液に代表されるように、多くの保湿性物質が開発され、同様の目的で使用されている。
【０００４】
しかしながら、角質層内に存在する水溶性成分の保湿性物質を皮膚に適用した場合、その作用は、皮膚角質層にあって、水分を角質に供給するというものである。しかも、その効果は一時的であり、根本的に角質層の水分保持能力を改善し、肌荒れを本質的に予防あるいは治癒させるというものではなかった。
【０００５】
また、近年では角質細胞間に存在する脂質が、高い保湿能を有することが見出され、当該角質細胞間脂質成分と類似する構造を有する物質で構成された人工細胞間脂質によって、代用化が試みられているが、これらの物質を化学的に合成したのでは、ラセミ体及び類似体しか作り出せず、天然の脂質性保湿剤の発見が望まれていた。
【０００６】
さらに、これらの人工細胞間脂質を皮膚に適用した場合には、角質層の水分保持能を根本的に改善し、肌荒れの予防あるいは治癒させる効果を、一時的にある程度得ることはできるが、人工細胞間脂質と皮膚との相互関係については、充分な検討が行われておらず、自然の皮膚に近いレベルまでには至っておらず、未だ満足し得る皮膚保湿剤ものではなかった。
【０００７】
本発明は叙上の従来例の欠点に鑑みてなされたものであり、その目的とするところは、角質層の水分保持能を、健常な皮膚と同等のレベルまでに機能回復させることができ、肌に潤い感と柔軟性とを付与する皮膚保湿剤を開発することである。
【０００８】
かかる実状において、角質細胞との親和性とが良好である、生体から分離されたセラミドが着目されて来た。セラミドは、次の式２で示されるスフィンゴシンのアミノ基に脂肪酸が酸アミド結合した構造を有しており、このセラミドの末端の水酸基に、糖がグルコシド結合したスフィンゴ糖脂質や、エタノールアミンリン酸がエステル結合したスフィンゴリン脂質（狭義のスフィンゴリン脂質）などとして、あるいは、遊離型として動植物界に広く存在している。
【式２】
0003703904.tif 000002
【０００９】
これら天然に存在するセラミドについては、動物や植物、あるいは微生物が、その供給源として考えられているが、これら動植物等から抽出されたセラミドは、人体に存在するセラミドと大きく構造が異なっており、また、動物体、特に哺乳類からセラミドを得ることは、動物愛護を考えた場合に好ましくない。
【００１０】
また、コリネバクテリウム属、ノカルジア属またはミコバクテリウム属に属する細菌が、皮膚常在菌として、その存在が認められている。これらの細菌と角質細胞との親和性は、それらの産生する接着因子と深く関わっており、これまで接着因子として、かかる細菌が生産するミコール酸エステルやセラミドが何等かの役割を演じていると言われている。
【００１１】
そこで本発明者らは、鋭意研究を行ったところ、式１で示されるセラミド類似物質が、皮膚角質層の水分保持能を根本的に改善する効果を奏することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明の皮膚保湿剤は、次の式１
【式１】
0003703904.tif 000003
で示されるセラミド類似物質（ただし、式１中、Ｒ１基はアシル基、Ｒ２基は飽和アルキル基、Ｘは、水素、エタノールアミンリン酸基、単糖類リン酸基、イノシトールリン酸基のいずれか１種である。）のうち、前記式３〜式８のいずれかで示されるセラミド類似物質からなることを特徴としている。つまり、本願発明は、式３〜式８のいずれかで示されるセラミド類似物質を皮膚保湿剤として使用するものである。
【００１３】
本発明の皮膚保湿剤である式１に示されるセラミド類似物質は、主としてスフィンゴバクテリウム（Ｓｐｈｉｎｇｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属によって産生される物質であって、スフィンゴバクテリウム（Ｓｐｈｉｎｇｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の細菌を培養することにより、主として菌体中に当該化合物を生成せしめ、かかる菌体から抽出することによって得ることができる。例えば、Ｓ．ｓｐｉｒｉｔｉｖｏｒｕｍ、Ｓ．ｍｕｌｔｉｖｏｒｕｍ、Ｓ．ｖｅｒｓａｔｉｌｉｓ、Ｓ．ｍｉｚｕｔａｅなどの菌種を培養することにより、本発明のセラミド類似物質を得ることができる。また、これらの菌種に限られず、その他の近縁菌、あるいはＦｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ及びその他の近縁菌からも得ることができる。
【００１４】
これらの細菌から得られるセラミド類似物質は、特に、Ｒ２基として飽和アルキル基が結合している。これまで、自然界にセラミドにあっては、スフィンゴシンに代表されるように、不飽和のアルキル基がほとんどであったが、本発明においては、例えばスフィンガニン（ジヒドロスフィンゴシン）に代表されるように、飽和のアルキル基を有している。
【００１５】
また、従来のセラミドにあっては、Ｒ１基、Ｒ２基ともに、直鎖アルキル基が主たるものであったが、本発明のセラミド類似物質にあっては、Ｒ１基、Ｒ２基ともに分岐鎖を有しており、特に、イソ体であることを特徴としている。
【００１６】
さらに、本発明にあっては、Ｒ１基に水酸基を有するものが好ましく、具体的には、２位の炭素に水酸基が結合した２−ヒドロキシアシル基が望ましい。
【００１７】
また、自然界においては、Ｒ１では偶数個の炭素数を有するアシル基及びＲ２基では奇数個の炭素数（末端の水酸基までは偶数個の炭素数）を有するものが一般的であるが、本発明のセラミド類似物質は、Ｒ１基の炭素数が奇数個であり、Ｒ２基の炭素数が偶数個である。
【００１８】
具体的には、例えば、式１のＸ基が水素である
【式３】
0003703904.tif 000004
（以下、「ＬＣＢＦＡ−１」と称す。）
又は、式１のＸ基としてエタノールアミンリン酸がエステル結合した
【式４】
0003703904.tif 000005
（以下、「ＣｅｒＰＥ−１」と称す。）
に示すように、Ｒ１基として、ＣＨ３ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）１０ＣＨ２ＣＯ基（炭素数１５）であり、Ｒ２基として、ＣＨ３ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）１１基（炭素数１４）であるものを得ることができる。
【００１９】
また、式１のＸ基が水素である
【式５】
0003703904.tif 000006
（以下、「ＬＣＢＦＡ−２」と称す。）
又は、式１のＸ基としてエタノールアミンリン酸がエステル結合した
【式６】
0003703904.tif 000007
（以下、「ＣｅｒＰＥ−２」と称す。）
に示すように、Ｒ１基として、ＣＨ３ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＯＨ）ＣＯ基（炭素数１５）であり、Ｒ２基として、ＣＨ３ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）１１基（炭素数１４）であるものを得ることができる。
【００２０】
さらに、本発明のセラミド類似物質の単糖類としては、グルコース、マンノース、フルクトースなどが挙げられる。また、スフィンゴバクテリウム属からは、イノシトールが結合したものが得られ、例えば、
【式７】
0003703904.tif 000008
（以下、「ＣｅｒＸ−１」と称す。）
又は、
【式８】
0003703904.tif 000009
（以下、「ＣｅｒＸ−２」と称す。）
に示すように、ホスホリルイノシトール誘導体が、優れた保湿作用を発揮する。
【００２１】
これらのセラミド類似物質を産生するスフィンゴバクテリウム属の培養法としては、従来から用いられている公知の合成培地および天然培地を用いることができ、特にスフィンゴバクテリウム属に属する細菌の培養に用いられる培地であれば、すべての培地が使用できる。
【００２２】
例えば、生育炭素源としては、グルコース、フルクトース、マンノースなどの単糖類、スクロース、トレハロース等の二糖類等を用いることができる。また、窒素源としては、例えば、硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機窒素化合物、ペプトン、肉エキス、コーンスティーブリカー等の有機窒素化合物を利用できる。また、無機塩として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛、マグネシウム、マンガン、リン酸等を、さらに、成長因子として、各種ビタミン、アミノ酸類、または、それらを豊富に含む酵母エキスを適宜加えることにしてもよい。
【００２３】
培地のｐＨは５〜９、特に７〜７．５が至適範囲であり、培養温度は１０〜４０℃、好ましくは３０〜３７℃が適している。培養は、液体培養または固体培養で好気的条件下に行うことが好ましい。また、培養時間は、通常１〜７日程度とするのが適当である。
【００２４】
このようにして得られる菌体から、本発明のセラミド類似物質を得るには、菌体成分を採取する通常の方法を用いることができる。例えば、培養液を遠心分離をして集菌したのち、有機溶媒を加えて溶媒抽出すればよい。具体的に言うと、有機溶媒として、クロロホルムとメタノールの混液や、クロロホルムとメタノール、アセトンの混液のように、クロロホルムなどの疎水性溶媒やメタノールやアセトンなどの親水性溶媒とを単独、あるいは混合したものを用いるとよい。
【００２５】
次に、抽出した菌体成分をシリカゲルやモレキュラシーブなどに吸着させ、その後、先に述べたような溶媒で溶出して、さらに精製を加える。そして、溶媒に対する溶解度差やイオン結合力の差などを利用し、それぞれ単独の方法で、または２以上の方法を適当に組み合わせて、あるいは同様な操作を数回繰り返すことにより、本発明のセラミド類似物質等をほぼ純粋な物質として分離精製することができる。
【００２６】
こうして精製されたセラミド類似物質は、そのまま、あるいは適当な溶媒で希釈したり、さらに適当な賦形剤と混合することにより用いることができ、慣用の製剤化手段によって、各種軟膏剤、外用皮膚剤に用いることができる。例えば、クリーム、乳液等に代表される各種の水／油、油／水型乳化化粧料、口紅、ファンデーション、皮膚洗浄剤、育毛剤等として適用することができる。
【００２７】
また、セラミド類似物質としては、菌体から上述した方法により抽出し、純粋なものにまで精製する必要もなく、また、各種のセラミド類似物質の混合物として用いることとしてもよい。また、セラミド類似物質としては、炭素数の異なるものが混合した状態で得られるが、炭素数の異なるものそれぞれにまで分離精製する必要もない。さらに、毒性が発揮されず、適度な保湿作用を発揮する程度に、粗精製した菌体抽出物として用いてもよい。もちろん、合成によってもセラミド誘導体を得ることとしてもよく、合成した場合には純度の高いセラミド誘導体を得ることができる。
【００２８】
【実施例】
以下に本発明の実施例について具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（実施例１）
〔菌体の培養〕
スフィンゴバクテリウム属（Ｓ．ｓｐｉｒｉｔｉｖｏｒｕｍ）を１白金耳採り、ハートインフージョンの平面寒天培地（日本製薬社製）に画線し、３０℃で２日間培養する。２日間培養したシャーレから１コロニーを白金耳で採り、ハートインフージョンの斜面寒天培地へ画線し、３０℃で１日間培養する。この斜面培地から培養菌体を１白金耳採り、ｐＨ７．０に調整した、以下に示す組成の培養用ＰＹＧ（Ｍ、Ｆ）培地２００ｍｌに植菌し、３０℃で１〜２日間、振とう培養法によって前培養した。この前培養菌液１０〜５０ｍｌ（前培養菌液の菌体濃度により、液量を適宜調整する。）を、同じ組成のＰＹＧ（Ｍ、Ｆ）培地１．５ｌに加え、３０℃で１〜７日間、本培養した。
【００２９】
〔ＰＹＧ（Ｍ、Ｆ）培地の組成〕
・ｐｏｌｙｐｅｐｔｏｎ（日本製薬製）          ０．５％
・ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ（ＤＩＦＣＯ製）    ０．５％
・糖  （Ｄ（＋）−Ｇｌｕｃｏｓｅ、
和光純薬製）                          １％
【００３０】
〔セラミド類似物質の抽出精製〕
こうして得られた培養菌液を、７５００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、菌体を集菌する。次に集菌された菌体を、クロロホルムとメタノールの混液（容積比で２：１）を加え、超音波ホモジナイザーにて１５分間、超音波処理を行う。この処理した溶液を分液ロートに移し、水を加えて２層に分離させ、溶媒相を分取する。そして、分取した溶媒をエバポレーターにて濃縮し、脂質成分を得た。
【００３１】
ついて、この脂質成分を、水酸化カリウムの濃度が０．５Ｎとなるように調整したクロロホルムとメタノール混液（容積比１：２）に溶解させ、３７℃で２時間振盪して加水分解（弱アルカリ水解）を行い、その後、水酸化ナトリウムでｐＨを中性にして、アルカリ安定脂質とする。
【００３２】
さらに、得られたアルカリ安定脂質を薄層クロマトグラフィーにより展開して、分離精製した。つまり、アルカリ安定脂質を少量のクロロホルムなど適当な溶媒に溶かし、シリカゲルからなる分取用薄層板（ＵＮＩＰＬＡＴＥ  ＳＩＬＩＣＡ  ＧＥＬ  Ｇ  ＭＥＲＣＫ社製）上に、スポットした。そして、クロロホルムとメタノール、酢酸の混液（容量比１００：１０：５）にて展開した。次に、この薄層板上で分離された各脂質部分を掻き取り、掻き取ったシリカゲルを、それぞれ、ガラスカラムに充填して、クロロホルムとメタノールの混液（容量比３：１）で溶出し、薄層クロマトグラム上で単一スポットになるまで繰り返し行う。最後に溶媒を留去して、ＣｅｒＦＡ−１及びＣｅｒＦＡ−２で示すセラミド類似物質を得た。
【００３３】
また、分離されたリン脂質部分（ＣｅｒＰＥ−１、ＣｅｒＰＥ−２、ＣｅｒＸ−１、ＣｅｒＸ−２を含む部分）は、さらにクロロホルムとメタノール、酢酸、水の混液（容量比１００：２０：１２：５）で、３回展開し、薄層板上で分離された各成分を掻き取り、掻き取ったシリカゲルをガラスカラムに充填し、クロロホルムとメタノールの混液（容量比、２：１）で溶出し、薄層クロマトグラム上で単一スポットになるまで繰り返し行う。最後に溶媒を留去して、ＣｅｒＰＥ−１、ＣｅｒＰＥ−２、ＣｅｒＸ−１、ＣｅｒＸ−２を、それぞれ得た。
【００３４】
次に、こうして得られた各種のセラミド類似物質について、本発明の効果を確認するため、以下の試験を行なった。
【００３５】
（吸湿性試験）
本発明の皮膚保湿剤であるセラミド類似物質としてＬＣＢＦＡ−２について、スフィンゴ脂質を比較対照として、重量法による吸湿性試験を行った。まず、ＬＣＢＦＡ−２およびスフィンゴ脂質を、それぞれ１０ｍｇずつ別個の試験管に秤量した。各試験管に、それぞれ適量のクロロホルムとメタノールの混液（容量比２：１）を加えて溶解した後、それぞれ、試験管壁に均一な皮膜を形成するようにして、溶媒を窒素ガスで除去した。その後、真空デシケーター内で十分乾燥させた後、その重量を測定した。次に、これらを多湿条件下（４０℃、９８％）で吸湿させ、再び重量を測定した。これら各サンプルの、乾燥後の重量と吸湿後の重量との変化率をもって吸湿能とした。
【００３６】
この結果によれば、スフィンゴ脂質にあっては、１２．５％の増加にとどまったのに対し、ＬＣＢＦＡ−２にあっては、３０．０％も増加しており、優れた保湿能を有していることが分かる。
【００３７】
（皮膚コンダクタンスの測定）
次に、本発明のＬＣＢＦＡ−２を使ってクリームを作製し、当該クリームを塗付した後における皮膚コンダクタンスを測定した。
〔クリームの作製〕
以下の処方１に示す成分分量に従い、まず、（１）〜（８）を混合、加熱して７５℃として、油相とする。これとは別に（９）（１０）を混合し、加熱溶解して７５℃とした水相を、先の油相に加え、ホモミキサーで均一に乳化し、油中水型の実施例のクリームを得た。また、同様にして、ＬＣＢＦＡ−２の入っていない対照例のクリームを得た。
【００３８】
〔処方１〕クリーム
成分（％）                            実施例      対照例
（１）ＬＣＢＦＡ−２                            ０．５      ０．０
（２）ミリスチン酸オクチルドデシル              １．０      １．０
（３）トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリン    ８．０      ８．０
（４）バチルアルコール                          ５．０      ５．０
（５）ラノリン                                  ２．０      ２．０
（６）トリステアリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（９Ｅ．Ｏ．）    １．０      １．０
（７）自己乳化型モノステアリン酸グリセリン      ５．０      ５．０
（８）防腐剤                                    適  量      適  量
（９）１、３−ブチレングリコール                ７．５      ７．５
（１０）精製水                                  残  量      残  量
【００３９】
〔皮膚コンダクタンスの測定〕
上記で得られた実施例及び対照例のクリームを用いて、皮膚コンダクタンスを測定した。健常人１０名を被験者とし、それぞれ上腕屈側部に、実施例のクリームと対照例のクリームをそれぞれ塗布し、角質層の水分含有量を皮膚コンダクタンスメーター（ＩＢＳ社製）にて測定した。その結果を図１に示す。図中、−○−は実施例のクリームを、−△−は対照例のクリームについて示す。
【００４０】
図１から分かるように、本実施例のクリーム及び対照例のクリームともに皮膚塗付後、約１０分後に最大となり、その後急速に低下し、約２０〜３０分後にはプラトーに戻る。しかし、このとき、本実施例のクリームにあっては、対照例のクリームよりも皮膚コンダクタンスが大きく、プラトーな状態に戻った場合でも、大きい状態であった。このことよりも、ＬＣＢＦＡ−２は良好な水分保持能を有することが分かる。また、これ以外のセラミド類似物質についても同様に良好な水分保持能を示した。
【００４１】
さらに、本発明のＬＣＢＦＡ−２を用いて、各種の化粧品を作製した。以下の実施例においても、単離精製されたＬＣＢＦＡ−２を用いた。
【００４２】
（実施例２）
次に示す処方２にしたがって、化粧水を作製した。
〔処方２〕化粧水
配合成分                              配合量（重量％）
（１）ＬＣＢＦＡ−２                                  ０．１
（２）エタノール                                    １０．０
（３）ポリオキシエチレンノニル
フェニルエーテル（９Ｅ．Ｏ．）          ０．１
（４）グリセリン                                      ２．０
（５）防腐剤                                          適  量
（６）精製水                                          残  量
上記成分（１）〜（３）を室温にて混合し、（４）〜（６）を順次添加して混合し、化粧水を得た。
【００４３】
（実施例３）
次に示す処方３にしたがって、乳液を作製した。
〔処方３〕乳液
配合成分                              配合量（重量％）
（１）ＬＣＢＦＡ−２                                  ０．１
（２）ステアリン酸                                    ２．０
（３）セタノール                                      １．５
（４）スクワラン                                      ５．０
（５）自己乳化型モノステアリン酸グリセリン            ２．０
（６）グリセリン                                      ２．０
（７）１、３−ブチレングリコール                      ６．０
（８）水酸化ナトリウム                                ０．０３
（９）防腐剤                                          適  量
（１０）精製水                                        残  量
上記成分（１）〜（５）を混合し、７０℃で加熱溶解して油相とする。これとは別に（６）〜（１０）を混合溶解して７０℃に加熱した水相に、前記油相を加え、ホモミキサーで均一に乳化した。その後、撹拌しながら３０℃まで冷却し、乳液を得た。
【００４４】
（実施例４）
次に示す処方４にしたがって、エッセンスを作製した。
〔処方４〕エッセンス
配合成分                              配合量（重量％）
（１）ＬＣＢＦＡ−２                                  ０．１
（２）エタノール                                    １０．０
（３）グリセリン                                    １０．０
（４）カルボキシメチルセルロースナトリウム            ０．１
（５）防腐剤                                          適  量
（６）精製水                                          残  量
上記成分（１）（２）を室温にて混合したのち、（３）〜（６）を添加撹拌して、エッセンスを得た。
【００４５】
（実施例５）
次に示す処方５にしたがって、ファンデーションを作製した。
〔処方５〕ファンデーション
配合成分                              配合量（重量％）
（１）ＬＣＢＦＡ−２                                  ０．１
（２）１、３−ブチレングリコール                      ５．０
（３）カルボキシメチルセルロースナトリウム            ０．１
（４）ケイ酸アルミニウムマグネシウム                  ０．０５
（５）精製水                                          残  量
（６）黄酸化鉄                                        ０．０７
（７）黒酸化鉄                                        ０．０１
（８）べンガラ                                        ０．０２
（９）酸化チタン                                      ５．０
（１０）タルク                                        ４．０
（１１）ステアリン酸                                  ２．０
（１２）セタノール                                    １．０
（１３）スクワラン                                    ５．０
（１４）自己乳化型モノステアリン酸グリセリン          ２．０
（１５）防腐剤                                        適  量
上記成分（１）〜（５）を混合し、７０℃で加熱溶解させ、（６）〜（１０）をあらかじめ混合したものを加え、充分に撹拌する。これを、（１１）〜（１４）を混合溶解後、７０℃に加熱した油相に加え、ホモミキサーで均一に乳化した。その後、撹拌しながら３０℃まで冷却し、ファンデーションを得た。
【００４６】
（実施例６）
次に示す処方６にしたがって、パックを作製した。
〔処方６〕パック
配合成分                              配合量（重量％）
（１）ＬＣＢＦＡ−２                                  ０．１
（２）ポリビニルアルコール                          １０．０
（３）酢酸ビニル樹脂エマルジョン                    １０．０
（４）エタノール                                      ５．０
（５）カオリン                                      １５．０
（６）グリセリン                                      １．０
（７）防腐剤                                          適  量
（８）精製水                                          残  量
上記成分（８）に（６）を混合した後、（３）及び（５）を添加し、更に（４）の一部に湿潤させた（２）を添加し、７０℃に加熱し溶解させた。次に残りの成分（４）に（１）及び（７）を加えて溶解したものを添加した後冷却し、パックを得た。
【００４７】
【発明の効果】
本発明の皮膚保湿剤によれば、角質層の水分保持能を高めることができ、肌荒れ等に対して、優れた改善力及び予防効果を発揮することが期待できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明の一実施例であるセラミド類似物質（ＬＣＢＦＡ−２）を使用したクリームと対照例のクリームを用いて、皮膚コンダクタンスの比較試験を行なった結果を示す図である。
【図１】
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