(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物を有効成分とする固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を、日本薬局方のパドル法で溶出試験を行ったとき溶出時間０乃至１０分における溶出液のウロカニン酸、ウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン又はチミンを測定して確認することを特徴とする試験方法。
【請求項２】
固形製剤が錠剤である請求項１記載の溶出試験方法。
【請求項３】
ワクシニアウイルスを接種したウサギの炎症皮膚組織を原料として有効成分を抽出し、該有効成分を含有する固形製剤を製造する方法において、消化管にて該固形製剤から必要量の有効成分が放出されることを確認するため、日本薬局方のパドル法で溶出試験を行ったとき溶出時間０乃至１０分における溶出液のウロカニン酸、ウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン又はチミンを測定して該固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を確認することを特徴とする固形製剤の製造方法。
【請求項４】
固形製剤が錠剤である請求項３に記載の固形製剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、生物学的製剤や生薬製剤等の動植物を起源とする分画又は抽出製剤において、錠剤等の固形製剤からの有効成分の溶出を確認する試験方法、該試験方法を特徴とする固形製剤の製造方法、並びに該試験方法により品質を担保された医薬品製剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
溶出試験法とは、日本薬局方解説書・第十三改正の一般試験法の項に説明されている通り、内用固形製剤（錠剤、散剤、カプセル剤、ドライシロップ剤など）からの主成分の溶出を試験する方法であって、内用固形製剤の品質を一定水準に確保し、併せて著しい生物学的非同等性を防ぐことを目的とするものである。
【０００３】
有機化学的に合成され有効成分が明確である薬剤については、サンプリングした溶出試験液中の有効成分量を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等を用いた分析試験や特異的反応試薬等を用いた定量分析によって、固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出状態を定量的に検出して確認することができる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、生物学的製剤や生薬製剤のように動物や植物の組織からの抽出製剤である場合、その有効成分としては種々の組織成分が含まれており、これらの多種成分が総合的に作用して薬効を奏するため、このような薬剤の溶出試験は非常に困難である。従ってワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物等の有効成分未詳の抽出物製剤につき、それを有効成分として含有する経口用固形製剤の定量的且つ簡便な溶出試験方法の確立が望まれていた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明の目的は、有効成分の溶出を正確に反映し且つ簡便に測定可能な生物学的製剤や生薬製剤等の固形製剤からの溶出試験方法、該試験方法を特徴とする固形製剤の製造方法、並びに該試験方法により品質を担保された医薬品製剤を提供することにある。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明は、動植物起源の分画又は抽出製剤の固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を紫外部吸光度又は紫外部吸収物質を測定して確認することを特徴とする試験方法、該試験方法を特徴とする固形製剤の製造方法、並びに該試験方法により品質を担保された医薬品製剤である。
【０００７】
さらに具体的には、ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物を有効成分とする固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を紫外部吸光度又は紫外部吸収物質を測定して確認することを特徴とする錠剤等の固形製剤の溶出試験方法、該溶出試験方法を特徴とする固形製剤の製造方法、並びに該溶出試験方法により品質を担保された医薬品製剤である。
【０００８】
生体はウイルス等の外界からの侵襲や内的な病態状態の進行に対して、過剰反応に対する抑制作用と機能低下に対する増強作用という二相性をもってその恒常性を維持し、生体機能を調整し正常化するために種々の生体機能調整物質を産生することが知られている。例えばワクシニアウイルスを接種した炎症組織において産生される生体機能調整物質、該物質を病態組織から抽出する製造方法並びにそれらの薬理活性については種々報告されている（特公昭63-39572号公報、特公昭63-25600号公報、特公平3-43279号公報、特許第2594222号公報など）。
【０００９】
実際の医薬品としてはワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物製剤（商品名：ノイロトロピン）がある。この製剤は例えば医療薬日本医薬品集（1998-99年、第22版、日本医薬情報センター編、薬業時報社発行）の1925及び1926頁に記載されているように、ワクシニアウイルスを接種した家兎の炎症皮膚組織から抽出分離した非蛋白性の活性物質を含有する薬剤であり、腰痛症、頸肩腕症候群、肩関節周囲炎、変形性関節症、症候性神経痛、皮膚疾患（湿疹、皮膚炎、じんま疹）に伴う掻痒、アレルギー性鼻炎、スモン後遺症状の冷感、痛み、異常知覚等に対する適応が認められており、皮下、筋注、静注用の注射剤並びに錠剤が医療用医薬品として製造承認を受けて市販されている。本発明の目的の一つは、具体的にはこのワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物製剤の錠剤の溶出試験方法、該溶出試験方法を特徴とするワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物製剤の錠剤の製造方法、並びに該溶出試験方法により品質を担保されたワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物製剤の錠剤である。
【００１０】
上記ワクシニアウイルス接種炎症組織抽出物の有効成分は未詳であるため、重量ではなく鎮痛効力（力価）によって有効成分量が規定される場合がある。例えば市販製剤（ノイロトロピン錠）には、１錠中ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出液4.0ノイロトロピン単位（ＮＵ）が含有されている。鎮痛効力試験は、痛覚過敏状態にある病態モデル動物（詳しくは後述）を用いて行われる。従って、錠剤からの溶出試験もこの鎮痛効力試験を用いてワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物の溶出量を定量して確認するのが基本と考えられる。しかし、通常のＨＰＬＣや特異的反応試薬等を用いた定量分析の場合とは異なって、前記実験動物を用いて溶出試験を実施する方法は、
▲１▼前記病態モデル動物の作成に日数とコストがかかる、
▲２▼製造ロット毎に実施する溶出試験法としては煩雑である、
▲３▼動物を用いた効力試験は一般的に感度が鋭敏ではなく、多量の被験試料（錠剤）を必要とする、
等の日常的に繰り返し実施する溶出試験方法として経済性、簡便性などの面で必ずしも好ましい方法とは言えない。
【００１１】
そこで、上記の力価に基づく定量試験の測定値と良い相関性のある代替試験法を種々検討した結果、溶出液の紫外部吸光度又は紫外部吸収物質を測定することによって、操作が簡便で且つ有効成分の溶出を正確に反映し得ることを明らかにし、本発明を完成した。
【００１２】
以下に本発明の好ましい態様を示す。
（１）動植物起源の分画又は抽出製剤の固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を紫外部吸光度又は紫外部吸収物質を測定して確認することを特徴とする試験方法。
（２）ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物を有効成分とする固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を紫外部吸光度又は紫外部吸収物質を測定して確認することを特徴とする試験方法。
（３）固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を紫外部吸光度を測定して確認する上記（１）又は（２）記載の溶出試験方法。
（４）固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を紫外部吸収物質を測定して確認する上記（１）又は（２）記載の溶出試験方法。
（５）紫外部吸収物質がウロカニン酸、ウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン及び／又はチミンである上記（４）記載の溶出試験方法。
（６）固形製剤が錠剤である上記（１）乃至（５）のいずれか一つに記載の溶出試験方法。
【００１３】
（７）動植物起源の分画又は抽出製剤の固形製剤を製造する方法において、該固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を紫外部吸光度又は紫外部吸収物質を測定して確認することを特徴とする固形製剤の製造方法。
（８）ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物を有効成分とする固形製剤を製造する方法において、該固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を紫外部吸光度又は紫外部吸収物質を測定して確認することを特徴とする固形製剤の製造方法。
（９）ワクシニアウイルスを接種した動物の炎症組織を原料として有効成分を抽出し、該有効成分を含有する固形製剤を製造する方法において、消化管にて該固形製剤から必要量の有効成分が放出されることを確認するため、紫外部吸光度又は紫外部吸収物質を測定して該固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を確認することを特徴とする固形製剤の製造方法。
（１０）動物の炎症組織がウサギの皮膚組織である上記（９）記載の製造方法。
（１１）固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を紫外部吸光度を測定して確認する上記（７）乃至（１０）のいずれか一つに記載の固形製剤の製造方法。
（１２）固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を紫外部吸収物質を測定して確認する上記（７）乃至（１０）のいずれか一つに記載の固形製剤の製造方法。
（１３）紫外部吸収物質がウロカニン酸、ウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン及び／又はチミンである上記（１２）記載の溶出試験方法。
（１４）固形製剤が錠剤である上記（７）乃至（１３）のいずれか一つに記載の製造方法。
【００１４】
（１５）動植物起源の分画又は抽出製剤の固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を紫外部吸光度又は紫外部吸収物質を測定して確認することにより品質を担保された医薬品製剤。
（１６）ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物を有効成分とする固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を紫外部吸光度又は紫外部吸収物質を測定して確認することにより品質を担保された医薬品製剤。
（１７）ワクシニアウイルスを接種した動物の炎症組織を原料として有効成分を抽出し、該有効成分を含有する固形製剤を製造する方法において、消化管にて該固形製剤から必要量の有効成分が放出されることを確認するため、紫外部吸光度又は紫外部吸収物質を測定して該固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を確認することにより品質を担保された医薬品製剤。
（１８）固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を、紫外部吸光度を測定して確認することにより品質を担保された上記（１５）乃至（１７）のいずれか一つに記載の医薬品製剤。
（１９）固形製剤から水溶液中への有効成分の溶出を、紫外部吸収物質を測定して確認することにより品質を担保された上記（１５）乃至（１７）のいずれか一つに記載の医薬品製剤。
（２０）紫外部吸収物質がウロカニン酸、ウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン及び／又はチミンである上記（１９）記載の医薬品製剤。
（２１）固形製剤が錠剤である上記（１５）乃至（２０）のいずれか一つに記載の医薬品製剤。
【００１５】
錠剤の溶出試験の操作は通常行われている方法、例えば日本薬局方の一般試験法に記載されている溶出試験法に従って行うことができる。ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出液の市販されている錠剤は、フィルムコーティングされた錠剤であるため、日本薬局方の一般試験法・溶出試験法の第２法（パドル法）で溶出試験を行うこととされているが、固形製剤の種類によって下記ガイドライン等に従って適切な方法を選択すればよい。
【００１６】
溶出液の種類は紫外部吸光度の測定や紫外部吸収物質の定量に影響を与えない溶液、即ち測定波長付近に吸収のない溶液（溶媒自体及び添加される緩衝剤等の試薬に測定波長付近の吸収がないもの）などが好ましく、例えば日本薬局方の一般試験法・崩壊試験法記載の試験液などを用いることができる。厚生省が指導している溶出試験の方法は、例えば平成9年12月22日付医薬審第487号のガイドラインに詳述されており、試験条件としては、試験液の量は900ｍL、試験液の温度は37℃としてパドル法で行うこととされ、中性又は塩基性薬物を含む製剤やコーティング製剤については、日本薬局方の一般試験法・崩壊試験法記載の▲１▼第１液（pH1.2）、▲２▼同第２液（pH6.8）、▲３▼McIlvaine緩衝液（pH3.0〜5.0）及び▲４▼水で溶出試験を行うことが示されている。
【００１７】
本発明において、ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物の錠剤等の固形製剤から水溶液中への溶出を確認するために測定する紫外部吸光度の波長は適宜設定可能であるが、ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物の紫外部スペクトルは255乃至275nmの範囲内に吸収の極大値があるため、245乃至285nmの範囲内の波長を設定するのが好ましいが、前記範囲外でも充分吸光度を測定できる波長ならば測定可能なので、これは特に限定されるものではない。
【００１８】
また本発明において、紫外部吸光度と同様にワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物の溶出試験の指標と成り得る紫外部吸収物質としては、該抽出物に含まれるウロカニン酸、ウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、チミン等が好ましい物質として挙げることができる。これらの定量試験方法としては、繁用されているＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）が利用しやすい。ＨＰＬＣにおける測定条件は、測定対象物質や溶出液の種類によって常法に従って適宜設定すればよい。当分野で常識であるように、事前に測定対象物質の標準試薬等を用いて、各対象物質が適切に分離できる条件を設定し、その条件下での対象物質の保持時間を確認しておき、それを指標に被験溶液中の各物質の濃度を定量することができる。測定条件によっては、チャージする被験溶液（溶出液）のｐＨによりウロカニン酸とウラシルが完全に分離できずにピークが重なることなどがあり、その場合は両物質の総和を測定値として求めてもよい。上記の紫外部吸収物質の測定においては、ＨＰＬＣが一般的に用いられているが、当然ながらその他の測定方法、例えば測定対象物質に特異的な呈色反応を用いる定量試験法等を利用して本発明を実施してもよい。又、本発明方法が、錠剤以外の内用固形製剤の溶出試験にも適用できることは言うまでもない。
以下の実施例によって、本発明をさらに詳細に説明する。
【００１９】
【実施例】
（１）溶出試験
日本薬局方解説書・第十三改正の一般試験法・溶出試験法の第２法（パドル法）に準じて行った。即ち、錠剤試料を試験液（水900mL、液温37±0.5℃）に入れ、パドルの回転数を50rpmとして溶出試験を行った。採取した試験液は孔径0.45μmのディスクフィルターで加圧濾過し、紫外部吸収測定用の試料溶液とした。また鎮痛効力試験用の試料溶液も同様に溶出試験を行い、濃縮して調製した。即ち、採取した溶出試験液を同様に孔径0.45μmのディスクフィルターで加圧濾過し、最初の濾液100mLは除いて、次の濾液（約700mL）をとり、45℃以下で減圧下に濃縮乾固し正確に5mLとして鎮痛効力試験に供した。
【００２０】
（２）紫外部吸収測定
錠剤試料として、上記ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出液4.0ノイロトロピン単位を含有する錠剤を4錠用いて（１）の溶出試験を行い、試料溶液の波長270nmにおける吸光度を経時的に測定した。
【００２１】
（３）鎮痛効力試験
鎮痛効力試験には、ＳＡＲＴストレスマウスという慢性的な痛覚過敏状態を呈する病態モデル動物を用いた。ＳＡＲＴ（Specific Alternation of Rhythm in Temperature）ストレス、即ち反復寒冷ストレスの負荷は、喜多らの方法に（日薬理誌、71巻、195-210頁、1975年）に準じて行った。飼育用恒温槽を用い、ddY系雄性マウスの飼育環境温度を午前10時から午後5時までは1時間毎に4℃と24℃に交互に変更し、次いで午後5時から翌朝の午前10時の間は4℃に維持し、水及び飼料は自由に摂取させ4日間飼育して反復寒冷ストレスを負荷した後、実験に供した。被験薬の投与前および投与30分後にRandall-Selitto変法（尾圧法：日薬理誌、72巻、573-584頁、1976年）により痛覚閾値を測定した。即ち、圧力子をマウス尾部用に改変したRandall-Selitto式鎮痛効果測定装置を用い、マウス尾根部より先端側へ1.5cmの部位に圧刺激を16g/secの速度で加え、逃避或いは啼鳴反応を示す加圧重量を測定し、「被験薬投与後の加圧重量(g)」を「被験薬投与前の加圧重量(g)」で除して鎮痛係数を算出した。従って、被験薬に全く効果の無い場合は鎮痛係数が1.0となり、効果が強くなるにつれて、1.1、1.2、1.3と鎮痛係数の値は増加してゆく。ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出液16.0ノイロトロピン単位を含有する錠剤を4錠用いて上記（１）の溶出試験を行い、濃縮して調製した試料溶液を被験薬として用いマウス体重1kgあたり20mLを腹腔内に投与して、その鎮痛効力を測定した。
【００２２】
上記（２）の紫外部吸収測定および（３）鎮痛効力試験につき、溶出液の紫外部吸光度と鎮痛係数を経時的に測定した結果の一例を図１に示す。
【００２３】
（４）紫外部吸収物質測定
上記紫外部吸収測定で用いた試料溶液につき、オクタデシルシリル化シルカゲルカラム（NUCLEOSIL 5C18、ケムコ社製、4.0mm I.D.×250mm、5μm）によるＨＰＬＣを行った結果を図２に示した。ウロカニン酸、ウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、チミン等の紫外部吸収物質の溶出挙動は、溶出液の270nmにおける吸光度測定値の変化と良い一致を示した。また水以外の溶出液、即ちコーティング製剤について溶出試験を行うことが指導されている日本薬局方の一般試験法・崩壊試験法記載の第１液（pH1.2）、同第2液（pH6.8）及びMcIlvaine緩衝液（pH3.0〜5.0）を用いた場合も、同様に各紫外部吸収物質の溶出濃度と吸光度測定値とは相関することが認められた。
【００２４】
上記（４）の紫外部吸収物質測定につき、溶出液中の紫外部吸収物質の濃度および紫外部吸光度を経時的に測定した結果の一例を図２に示す。
【００２５】
【発明の効果】
図１に示した結果より明らかなように、ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物の錠剤から水溶液中への溶出において、溶出液の紫外部吸光度と鎮痛係数の経時的増加は良い相関関係を示した。上記試験に用いた錠剤の場合は、紫外部吸光度および鎮痛係数は共に20分後にはプラトーに達することから、ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物を含有する上記錠剤は水中では約20分程で有効成分の溶出が完了していることが確認できた。また図２に示した通り、溶出液における紫外部吸光度とウロカニン酸、ウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、チミン等の紫外部吸収物質の溶出液中濃度の両変化は良い相関性を示し、ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物の錠剤から水溶液中への溶出は、吸光度測定だけでなく各紫外部吸収物質を指標としても確認できることが明らかになった。
【００２６】
ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物の有効成分量が力価（鎮痛効力など）によって規定されている場合、溶出液中の有効成分量を測定するためには動物を用いなければならず、更には動物に投与可能な試料とするための濃縮等の煩雑な操作が必要とされる。これに対して、紫外部吸光度やウロカニン酸、ウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、チミン等の紫外部吸収物質を測定する本発明試験方法の操作は、溶出液の少量を分取して分光光度計又はＨＰＬＣを用いて測定するだけの極めて簡便且つ短時間で実施可能なものである。このように本発明は、ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物の錠剤等の内用固形製剤に関して、有効成分の溶出を正確に反映し且つ簡便に測定可能な溶出試験方法を提供するものであり、本発明方法は、動物を必要とし操作が煩雑な力価に基づく定量試験に代わり得る新規且つ有用性の高いものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物を有効成分として含有する錠剤の溶出試験において、溶出液の紫外部吸光度および鎮痛係数を経時的に測定した結果を示すものである。
【図２】図２は、ワクシニアウイルス接種家兎炎症皮膚抽出物を有効成分として含有する錠剤の溶出試験において、溶出液中の紫外部吸収物質の濃度および紫外部吸光度を経時的に測定した結果を示すものである。
【図１】
0003649989.tif 000002
【図２】
0003649989.tif 000003