(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
霊芝の細砕物を、アルコール濃度７０〜９９容量％の加熱しない含水エタノールで抽出処理することを特徴とするトリテルペンの抽出法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、霊芝エキスの抽出法、特に霊芝からのアルコールによるトリテルペンの抽出法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、霊芝をメタノールで抽出したエキスを分画し、通常のカラムクロマトグラフィーや高速液体クロマトグラフィーで分離、精製し、抗ＨＩＶ作用を有するガノデリオールＦ（ｇａｎｏｄｅｒｉｏｌ  Ｆ）及びガノデルマノントリオール（ｇａｎｏｄｅｒｍａｎｏｎｔｒｉｏｌ）やＨＩＶ−プロテアーゼ阻害作用を有するガノデリン酸Ａ（ｇａｎｏｄｅｒｉｃ  ａｃｉｄ  Ａ）、ガノデリン酸Ｂ（ｇａｎｏｄｅｒｉｃ  ａｃｉｄ  Ｂ）、ルシデュモールＡ（ｌｕｃｉｄｕｍｏｌ  Ａ）、ガノデリオールＡ（ｇａｎｏｄｅｒｉｏｌ  Ａ）などのトリテルペンのアルコール類画分及び酸類画分の各種の化合物が有効成分として単離することが知られている。
一方、霊芝をメタノールやエタノールなどのアルコールにより有効成分を抽出するには、特開平５−５１３２４号公報では、４０〜７０℃の温度に加熱した５０〜６０％濃度のアルコール水溶液で抽出することが好ましいことを教示している。また、特開平９−５６３６２号公報では、５０℃以上に加熱した３０〜７０体積％のアルコール水溶液で抽出することが好ましいことを教示している。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかし乍ら、霊芝からアルコールを用いて上記の抗ＨＩＶ作用やＨＩＶ−プロテアーゼ阻害作用を有する各種の有効成分化合物を含むトリテルペンを効率良く抽出するには、上記従来の出願公開公報に記載のようなアルコール濃度のアルコールで加熱抽出する抽出法では、むしろ不適であることが判った。
本発明者等は、上記従来の特許出願公開公報に教示する上記の抽出手段を廃し、アルコールを用いて霊芝から特に高濃度に含むトリテルペンを確実に抽出することを発明の目的とし、従って、更に詳細には、霊芝からその酸類画分及びアルコール類画分を含むトリテルペンの有効成分を多量に含むエキスを高能率に且つ確実に抽出することを発明の目的とする抽出法を提供することに在る。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明は、上記従来の課題を解決し、且つ上記の目的を達成したトリテルペンを高濃度に含むエキスの抽出法を提供するもので、霊芝の細砕物を、アルコール濃度７０〜９９容量％の加熱しない含水エタノールで抽出処理することを特徴とする。
【０００５】
【作用】
上記の本発明の抽出法によれば、霊芝を上記特定の濃度範囲の加熱しない含水エタノールで抽出処理することにより、後記に明らかにするように、従来のアルコール濃度で且つ加熱したアルコール水溶液による抽出法に比し、トリテルペンの抽出量は著しく増大する。更に詳細には、その酸類画分の抽出量の増大と共に、特に、アルコール類画分の抽出量の増大が顕著に認められると共に、上記特定の濃度範囲の加熱しない含水エタノールによるトリテルペンを高濃度に含むエキスを高能率且つ確実に抽出することができる。
【０００６】
【発明の実施の形態】
次に、本発明の実施の態様を詳述する。
採取した霊芝（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ）別名、マンネンタケの無数の胞子が付着している子実体を、天日乾燥や温風乾燥により水分含量約１０〜１５％程度に乾燥した乾物を切細し、或いは粉砕して得られる細砕物を被抽出物として用意する。目的とする抽出物である苦味性のトリテルペンは、特に胞子に含まれるので、特許第１４６６３９５号により開示された発明に係る霊芝類の凍結粉砕法を用いて細砕物を調製することが好ましい。
該細砕物からトリテルペンを抽出するに用いるアルコール溶剤としては、人体に無害で且つ容易に且つ多量に入手し得るエタノール（エチルアルコール）が最適である。本発明によれば、そのアルコール濃度の範囲を特定することにより、トリテルペンの抽出量の増大を確実にもたらす、換言すれば、トリテルペンの抽出効率の向上を確実にもたらすための抽出条件は、多くの比較試験研究の結果、（１）アルコール濃度は、７０〜９９容量％の含水エタノールであること、（２）そのアルコール濃度範囲のエタノールを加熱することなく、冷たい常温で抽出処理に使用することである。アルコール濃度１００容量％の無水のエタノールで抽出した場合は、後記に明らかにするように、トリテルペンの酸類画分の抽出量は、従来用いられる好ましいアルコール濃度７０％の加熱した含水エタノールで抽出処理する場合に比し、低くなり、増量効果は得られなかった。酸類画分の抽出量の増大ばかりでなく、同時にアルコール類画分の抽出量の増大をもたらすためには、即ち、両区分を含むトリテルペンの抽出量を増大するには、水分含有量が少なくとも１容量％含む、換言すれば、アルコール濃度９９％の加熱しない水エタノールで抽出処理することにより、その目的を達成することが判った。
上記のアルコール濃度範囲の加熱しない含水エタノールにより、霊芝の細砕物を抽出処理するに当たり、浸漬抽出処理と還流抽出処理のいずれでも良い。浸漬抽出処理の場合は、容器内に投入した一定量細砕物当たり、例えば、細砕物１００ｇに当たり２０００ｍｌ程度注入し、撹拌又は振とうし乍ら所定時間抽出処理を行う。還流処理は、公知の所望の還流装置を用い所定時間還流抽出処理を行う。
このようにして抽出処理を行った後、その処理液を濾過し、得られた濾液を減圧濃縮乾固し、クロロホルムを用い、以下定法により３回抽出し次いで得られた抽出液のシリカゲルにコートし、フロリジルで酸類画分とアルコール類画分に分画し、次いで夫々の画分につきＨＰＬＣで分析し、各成分を定量した。その結果は、酸類画分に含有成分の総量及びアルコール類画分に含有する各有効成分の総量は、いずれも従来の最も好ましいアルコール濃度の加熱した含水エタノールによる抽出に比し増大し、抽出効率の著しい向上をもたらしトリテルペンを高濃度に含有するエキスが確実に得られることが認められた。
【０００７】
以下にその詳細な比較試験につき詳述する。
抽出処理：
霊芝の子実体の乾物（水分含量約１０％）を、粉砕により被処理物を多量に用意した。アルコールとしてエタノールを用い、そのアルコール濃度が、容量で７０％、８０％、９０％の３種類の含水エタノールとアルコール濃度１００％の無水エタノールとを調製して用意した。前記の霊芝粉体を試料とし、その一定量、例えば５０ｇの試料を容器に夫々投入し、その夫々の容器に、上記に調製した加熱しない７０％エタノール（サンプル１）、加熱しない８０％エタノール（サンプル２）、加熱しない９０％エタノール（サンプル３）、加熱しない無水エタノール（サンプル４）を夫々１０００ｍｌ注入し、振とう機にて６０回／分で２４時間振とう抽出処理を行った。比較のため、５０ｇの試料を容器に投入し、これに７０％含水エタノールを１０００ｍｌ注入し、振とうすると共に加熱により沸点付近まで加熱した７０％エタノール（サンプル５）により、３時間振とう抽出処理を行った。
トリテルペンの抽出と測定：
次に、上記のサンプル１〜５により抽出した夫々の抽出処理物を濾紙で濾過を行い、各濾液をエバポレーターにて減圧乾燥し、各検体とした。
次に、その夫々のトリテルペンの抽出量を測定するため、各検体につき、先ず、検体が漬かる程度にクロロホルムを添加し、７０〜８０℃程度で３時間還流抽出を行い、その抽出液を濾過し、濾液を得た。次にその残渣につき、再度、同量のクロロホルムで還流抽出を行い、その抽出液を濾過し、濾液を得た。その残渣につき、再度、同量のクロロホルムで還流抽出を行い、その抽出液を濾過し、濾液を得た。かくして、上記３回で取得した濾液を合わせ、予め風袋重量を測ったナスコルを用いて、該合体した濾液を３５℃のエバポレーターで減圧濃縮乾固し、そのトリテルペンの抽出量を測定した。
分画：
上記の抽出した各トリテルペンにつき、酸類画分とアルコール類画分とに次のように分画した。
使用カラムとして、フロリジル（半井テスクフロリジル）を用い、これにヘキサン対アセトン＝９対１でフロリジルをカラムに充填し、サンプルとして上記の抽出したトリテルペンをクロロホルムに溶かし、該サンプルの３倍量のシリカゲル（富士シリカゲル化学  ＢＷ／８２０ＭＨ）にコーティングし、そのコーティングしたシリカゲルをカラムに充填し、次で、予め風袋を測定したナスコルにヘキサン７：アセトン３の配合比の混合溶剤でアルコール類画分を溶出した。また、予め風袋を測定したナスコルにクロロホルム１：メタノール２の配合比の混合溶剤で酸類画分を溶出した。次いで、アルコール類の画分及び酸類の画分の夫々を減圧乾固し、重量を測定した。次いで、乾固して得た酸類の画分を、メタノールに２０〜４０ｍｇ／ｍｌの割合で溶解し、液クロ用サンプルを調製する一方、乾固して得たアルコール類の画分を、メタノールに４０〜２０ｍｇ／ｍｌの割合で溶解し、液クロ用サンプルを調製した。
各画分の成分の分析定量：
上記の調製した酸類の画分及びアルコール類の画分の夫々の液クロ用サンプルにつき、下記の条件の液体クロマトグラフィーにてＨＰＬＣにより分析を行い、酸類画分の各成分及びアルコール類画分の各成分を定量した。その結果を下記表１及び表２に示す。また、酸類画分の総量とアルコール類画分の総量を合わせた全総量を表３に示す。
液クロの条件：
カラム  ：ＯＤＳ−８０Ｔｓ
測定波長：２４３ｎｍ（アルコール類）
２５０ｎｍ（酸類）
移動相  ：２％ＡｃＯＨ−ＣＨ3 ＣＮ（４：６）（アルコール用）
２％ＡｃＯＨ−ＣＨ3 ＣＮ（７：３）（酸類用）
条件    ：流速  １．０ｍｌ／ｍｉｎ
溶媒  Ａ液  ２％ＡｃＯＨ−水
Ｂ液  ＣＨ3 ＣＮ
【０００８】
【表１】
0003665298.tif 000002
【０００９】
【表２】
0003665298.tif 000003
【００１０】
【表３】
0003665298.tif 000004
【００１１】
上記表１〜表３から明らかなように、アルコール濃度７０〜９０％の加熱しないエタノールによる抽出は、エタノール濃度９０％の加熱したアルコールによる抽出に比し、トリテルペンの酸類画分として抽出したＨＩＶ−プロテアーゼ阻害作用を有する化合物として既知のガノデリン酸Ａ（ｇａｎｏｄｅｒｉｃ  ａｃｉｄ  Ａ）他４種の抽出成分の抽出総量は増大し、抽出効率の向上をもたらすと特に、トリテルペンのアルコール類画分として抽出したＨＩＶ−プロテアーゼ阻害作用を有する化合物として既知のルシデュモールＡ（ｌｕｃｉｄｕｍｏｌ  Ａ）その他４種の抽出成分及び強い抗ＨＩＶ作用を有する化合物として既知のガノデリオールＡ（ｇａｎｏｄｅｒｉｏｌ  Ａ）及びガノデリオールＦ（ｇａｎｏｄｅｒｉｏｌ  Ｆ）の抽出成分の抽出総量は著しく増大し、両画分を合わせた全総量、即ち、トリテルペンの抽出量は、抽出効率の著しい向上をもたらすことが判る。
一方、加熱しない無水エタノールによるトリテルペンの抽出効率は、加熱した７０％エタノールによる抽出効率に比しむしろ低下することが判明し、トリテルペンの抽出効率を向上するにはエタノールに水分を含有しなければならないことが判った。
この点に鑑み、エタノール濃度９５％、９７％、９９％の３種の加熱しないエタノールにより上記の比較試験と同じ条件の浸漬振とう抽出処理を行ったところ、これら３種のアルコール濃度の加熱しないエタノールのいずれも加熱した７０％エタノールに比しトリテルペンの抽出効率の向上をもたらした。
一方、比較のため、アルコール濃度７０％未満の加熱しないエタノールとして、加熱しない６５％エタノールにより上記の比較試験と同じ条件の振とう抽出処理を行ったところ、上記の加熱した７０％エタノールによるトリテルペンの抽出効率より低下する結果を得た。
結局、アルコール濃度７０〜９９％の加熱しない含水エタノールによるトリテルペンの抽出効率は、従来の最大の抽出効率をもたらす加熱した７０％エタノールによるトリテルペンの抽出効率を比し、向上をもたらすことが判った。
また、特に、エタノール濃度９０％を中心とし、アルコール濃度８５〜９５％の範囲の加熱しない含水エタノールによる抽出効率が特に優れていることが判った。
尚、上記の浸漬抽出処理に代え、還流抽出処理によってもトリテルペン抽出効率の向上、即ち、その酸類画分及びアルコール類画分を含むトリテルペンの抽出効率の向上をもたらした。
【００１２】
【発明の効果】
このように本発明によるときは、霊芝からのトリテルペンを抽出溶剤として、アルコール濃度が７０〜９９％の範囲に限定した加熱しない含水アルコールを用い、これにより霊芝の抽出処理を行うようにしたので、従来の加熱した含水アルコール、アルコール濃度７０％未満の加熱しない含水エタノール、或いは無水エタノールによる抽出処理に比し、抗ＨＩＶ作用及びＨＩＶ−プロテアーゼ阻害作用をもたらす各種の化合物を含むトリテルペンを高濃度に含むエキスを確実に抽出でき、トリテルペンの抽出効率の向上をもたらす。