【手続補正書】
【提出日】令和3年9月6日(2021.9.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ナチュラルキラーグループ２メンバーＤ（ＮＫＧ２Ｄ）に結合する第１の抗原結合部位と、
（ｂ）ＥｐＣＡＭ、がん抗原１２５（ＣＡ１２５）、ナトリウム／リン酸共輸送体２Ｂ（ＮａＰｉ２ｂ）、フコシル−ＧＭ１（モノシアロテトラヘキソシルガングリオシド）、ディスインテグリンおよびメタロプロテイナーゼドメイン含有タンパク質８（ＡＤＡＭ８）、ディスインテグリンおよびメタロプロテイナーゼドメイン含有タンパク質９（ＡＤＡＭ９）、溶質キャリアファミリー４４メンバー４（ＳＬＣ４４Ａ４）、およびシアリル化ルイスａ抗原（ＣＡ１９−９）からなる群から選択される抗原に結合する第２の抗原結合部位と、
（ｃ）表面抗原分類１６（ＣＤ１６）に結合するのに十分な抗体Ｆｃドメインもしくはその一部分またはＣＤ１６に結合する第３の抗原結合部位と
を含むタンパク質。
【請求項２】
前記第１の抗原結合部位が、ヒトおよび非ヒト霊長類におけるＮＫＧ２Ｄに結合する、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項３】
（ａ）ＮＫＧ２Ｄに結合するＦａｂ断片を含む第１の抗原結合部位と、
（ｂ）ＥｐＣＡＭに結合する一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む第２の抗原結合部位と、
（ｃ）ＣＤ１６に結合するのに十分な抗体Ｆｃドメインもしくはその一部分またはＣＤ１６に結合する第３の抗原結合部位と
を含むタンパク質。
【請求項４】
前記ｓｃＦｖが、ＣＤ１６に結合するのに十分な前記抗体Ｆｃドメインもしくはその一部分またはＣＤ１６に結合する前記第３の抗原結合部位に、Ａｌａ−ＳｅｒまたはＧｌｙ−Ａｌａ−Ｓｅｒを含むヒンジを介して連結しており、前記ｓｃＦｖが、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、請求項３に記載のタンパク質。
【請求項５】
（ａ）前記ｓｃＦｖが、前記抗体Ｆｃドメインに連結している、
（ｂ）前記ｓｃＦｖの前記重鎖可変ドメインが前記ｓｃＦｖの前記軽鎖可変ドメインとジスルフィド架橋を形成する、または
（ｃ）前記ｓｃＦｖが、可動性リンカーを介して軽鎖可変ドメインに連結する重鎖可変ドメインを含む、
請求項４に記載のタンパク質。
【請求項６】
前記ジスルフィド架橋が、前記重鎖可変ドメインのＣ４４と前記軽鎖可変ドメインのＣ１００との間で形成されている、請求項５に記載のタンパク質。
【請求項７】
前記ｓｃＦｖの前記重鎖可変ドメインが、前記ｓｃＦｖの前記軽鎖可変ドメインに、（ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）４（（Ｇ４Ｓ）４）を含む可動性リンカーを介して連結している、請求項４から６のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項８】
前記ｓｃＦｖの前記重鎖可変ドメインが、前記ｓｃＦｖの前記軽鎖可変ドメインのＮ末端またはＣ末端に位置している、請求項４から７のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項９】
前記Ｆａｂ断片が、前記抗体Ｆｃドメインに連結している、請求項３から８のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１０】
配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０、配列番号２１１、配列番号２１２および配列番号２１３から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３から９のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１１】
配列番号２１０、配列番号２１１、配列番号２１２および配列番号２１３から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項４から９のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１２】
（ａ）ＮＫＧ２Ｄに結合する一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む第１の抗原結合部位と、
（ｂ）ＥｐＣＡＭに結合する第２の抗原結合部位と、
（ｃ）ＣＤ１６に結合するのに十分な抗体Ｆｃドメインもしくはその一部分またはＣＤ１６に結合する第３の抗原結合部位と
を含むタンパク質。
【請求項１３】
ＥｐＣＡＭに結合するさらなる抗原結合部位をさらに含む、請求項１２に記載のタンパク質。
【請求項１４】
ＥｐＣＡＭに結合する前記第２の抗原結合部位が、Ｆａｂ断片である、請求項１２または１３に記載のタンパク質。
【請求項１５】
ＥｐＣＡＭに結合する前記第２の抗原結合部位および前記さらなる抗原結合部位が、Ｆａｂ断片である、請求項１３または１４に記載のタンパク質。
【請求項１６】
ＮＫＧ２Ｄに結合する前記ｓｃＦｖの前記重鎖可変ドメインが、前記ｓｃＦｖの前記軽鎖可変ドメインのＮ末端またはＣ末端に位置している、請求項１２から１５のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１７】
ＮＫＧ２Ｄに結合する前記ｓｃＦｖが、Ａｌａ−ＳｅｒもしくはＧｌｙ−Ａｌａ−Ｓｅｒを含むヒンジを介してまたはＳＧＳＧＧＧＧＳを含む可動性リンカー（配列番号２０７）を介して、ＣＤ１６に結合するのに十分な前記抗体Ｆｃドメインもしくはその一部分またはＣＤ１６に結合する第３の抗原結合部位に連結している、請求項１２から１６のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１８】
前記抗体ＦｃドメインのＣ末端が、ＮＫＧ２Ｄに結合する前記ｓｃＦｖの前記軽鎖可変ドメインのＮ末端に連結している、またはＮＫＧ２Ｄに結合する前記ｓｃＦｖ内で、前記ｓｃＦｖの前記重鎖可変ドメインのＣ４４と前記ｓｃＦｖの前記軽鎖可変ドメインのＣ１００との間でジスルフィド架橋が形成されている、請求項１２から１６のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１９】
ＮＫＧ２Ｄに結合する前記ｓｃＦｖ内で、
（ａ）前記重鎖可変ドメインが、前記軽鎖可変ドメインに、可動性リンカーを介して連結している、または
（ｂ）前記可動性リンカーが、（ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）４（Ｇ４Ｓ）４）を含む、請求項１２から１８のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項２０】
前記第２の抗原結合部位ｓｃＦｖおよび前記さらなる抗原結合部位ｓｃＦｖが、Ａｌａ−Ｓｅｒを含むヒンジを介して、ＣＤ１６に結合するのに十分な前記抗体Ｆｃドメインもしくはその一部分またはＣＤ１６に結合する前記第３の抗原結合部位に連結している、請求項１５から１９のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項２１】
前記ジスルフィド架橋が、前記重鎖可変ドメインのＣ４４と前記軽鎖可変ドメインのＣ１００との間で形成されている、請求項２０に記載のタンパク質。
【請求項２２】
（ａ）配列番号２０３のアミノ酸配列を含む、または
（ｂ）配列番号２０３および配列番号２０４のアミノ酸配列を含む、
タンパク質。
【請求項２３】
配列番号２０３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むタンパク質。
【請求項２４】
前記第１の抗原結合部位が、配列番号１、配列番号４１、配列番号４９、配列番号５７、および配列番号５９から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項２５】
前記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４１と少なくとも９０％同一の重鎖可変ドメインアミノ酸配列と、配列番号４２と少なくとも９０％同一の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列とを含む、
（ｂ）配列番号４９と少なくとも９０％同一の重鎖可変ドメインアミノ酸配列と、配列番号５０と少なくとも９０％同一の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列とを含む、
（ｃ）配列番号５７と少なくとも９０％同一の重鎖可変ドメインアミノ酸配列と、配列番号５８と少なくとも９０％同一の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列とを含む、
（ｄ）配列番号５９と少なくとも９０％同一の重鎖可変ドメインアミノ酸配列と、配列番号６０と少なくとも９０％同一の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列とを含む、
（ｅ）配列番号１０１と少なくとも９０％同一の重鎖可変ドメインアミノ酸配列と、配列番号１０２と少なくとも９０％同一の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列とを含む、または
（ｆ）配列番号１０３と少なくとも９０％同一の重鎖可変ドメインアミノ酸配列と、配列番号１０４と少なくとも９０％同一の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列とを含む、
請求項１から２３のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項２６】
前記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１０５のアミノ酸配列と同一である重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号１０６のアミノ酸配列と同一である重鎖ＣＤＲ２配列、および配列番号１０７のアミノ酸配列と同一である重鎖ＣＤＲ３配列、
（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列と同一である重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４４のアミノ酸配列と同一である重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号４５のアミノ酸配列と同一である重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号４６のアミノ酸配列と同一である軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４７のアミノ酸配列と同一である軽鎖ＣＤＲ２配列、および配列番号４８のアミノ酸配列と同一である軽鎖ＣＤＲ３配列、
（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列と同一である重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５２のアミノ酸配列と同一である重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号５３のアミノ酸配列と同一である重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号５４のアミノ酸配列と同一である軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５５のアミノ酸配列と同一である軽鎖ＣＤＲ２配列、および配列番号５６のアミノ酸配列と同一である軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｄ）配列番号１０９のアミノ酸配列と同一である重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号１１０のアミノ酸配列と同一である重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号１１１のアミノ酸配列と同一である重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１１２のアミノ酸配列と同一である軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号１１３のアミノ酸配列と同一である軽鎖ＣＤＲ２配列、および配列番号１１４のアミノ酸配列と同一である軽鎖ＣＤＲ３配列、
を含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項２７】
前記第１または第２の抗原結合部位が、単一ドメイン抗体である、請求項１または２に記載のタンパク質。
【請求項２８】
前記単一ドメイン抗体が、ＶＨＨ断片またはＶＮＡＲ断片である、請求項２７に記載のタンパク質。
【請求項２９】
（ａ）前記第２の抗原結合部位がＥｐＣＡＭに結合し、かつ
（ｉ）前記第２の抗原結合部位の前記重鎖可変ドメインが配列番号１１５と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み、前記第２の抗原結合部位の前記軽鎖可変ドメインが配列番号１１９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｉｉ）前記第２の抗原結合部位の前記重鎖可変ドメインが配列番号１２３と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み、前記第２の抗原結合部位の前記軽鎖可変ドメインが配列番号１２７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｉｉｉ）前記第２の抗原結合部位の前記重鎖可変ドメインが配列番号１３１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み、前記第２の抗原結合部位の前記軽鎖可変ドメインが配列番号１３５と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、もしくは
（ｉｖ）前記第２の抗原結合部位の前記重鎖可変ドメインが配列番号１３９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み、前記第２の抗原結合部位の前記軽鎖可変ドメインが配列番号１４３と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記第２の抗原結合部位がＣＡ１２５に結合し、かつ
（ｉ）前記第２の抗原結合部位の前記重鎖可変ドメインが配列番号１５５と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み、前記第２の抗原結合部位の前記軽鎖可変ドメインが配列番号１５９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、もしくは
（ｉｉ）前記第２の抗原結合部位の前記重鎖可変ドメインが配列番号１６３と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み、前記第２の抗原結合部位の前記軽鎖可変ドメインが配列番号１６７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｃ）前記第２の抗原結合部位がＮａＰｉ２ｂに結合し、前記第２の抗原結合部位の前記重鎖可変ドメインが配列番号１７１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み、前記第２の抗原結合部位の前記軽鎖可変ドメインが配列番号１７５と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、
（ｄ）前記第２の抗原結合部位がフコシル−ＧＭ１に結合し、前記第２の抗原結合部位の前記重鎖可変ドメインが配列番号１８７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み、前記第２の抗原結合部位の前記軽鎖可変ドメインが配列番号１９１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、または
（ｅ）前記第２の抗原結合部位がＳＬＣ４４Ａ４に結合し、前記第２の抗原結合部位の前記重鎖可変ドメインが配列番号１９５と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み、前記第２の抗原結合部位の前記軽鎖可変ドメインが配列番号１９９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、
請求項１から２８のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項３０】
（ａ）前記第２の抗原結合部位がＥｐＣＡＭに結合し、
（ｉ）配列番号１１６のアミノ酸配列と同一の重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号１１７のアミノ酸配列と同一の重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号１１８のアミノ酸配列と同一の重鎖ＣＤＲ３配列、前記配列番号１２０のアミノ酸配列と同一の軽鎖ＣＤＲ１配列、前記配列番号１２１のアミノ酸配列と同一の軽鎖ＣＤＲ２配列、および前記配列番号１２２のアミノ酸配列と同一の軽鎖ＣＤＲ３配列を含む、
（ｉｉ）配列番号１２４の重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１２５の重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号１２６の重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号１２８の軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１２９の軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１３０の軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、
（ｉｉｉ）配列番号１３２の重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３３の重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号１３４の重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号１３６の軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３７の軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１３８の軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、もしくは
（ｉｖ）配列番号１４０の重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４１の重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号１４２の重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号１４４の軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４５の軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１４６の軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記第２の抗原結合部位がＣＡ１２５に結合し、      （ｉ）配列番号１５６の重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５７の重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号１５８の重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号１６０の軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１６１の軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１６２の軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、もしくは
（ｉｉ）配列番号１６４の重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１６５の重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号１６６の重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号１６８の軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１６９の軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１７０の軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、
（ｃ）前記第２の抗原結合部位がＮａＰｉ２ｂに結合し、配列番号１７２の重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１７３の重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号１７４の重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号１７６の軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１７７の軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１７８の軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、
（ｄ）前記第２の抗原結合部位がフコシル−ＧＭ１に結合し、配列番号１８８の重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１８９の重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号１９０の重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号１９２の軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１９３の軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１９４の軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、または
（ｅ）前記第２の抗原結合部位がＳＬＣ４４Ａ４に結合し、配列番号１９６の重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１９７の重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号１９８の重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号２００の軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２０１の軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号２０２の軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、
請求項１から２９のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項３１】
前記抗体Ｆｃドメインが、
（ａ）ヒトＩｇＧ１抗体のヒンジおよびＣＨ２ドメイン、
（ｂ）ヒトＩｇＧ１抗体のアミノ酸２３４〜３３２と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列、または
（ｃ）ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインと少なくとも９０％同一であって、ヒトＩｇＧ１抗体のアミノ酸２３４〜３３２と少なくとも９０％同一であり、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１、およびＫ４３９からなる群から選択される１つまたは複数の位置において異なるアミノ酸配列を含む、
請求項１から３０のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項３２】
ＮＫＧ２Ｄに１０ｎＭのＫＤまたはそれよりも弱い親和性で結合する、請求項１から３１のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項３３】
請求項１から３２のいずれか一項に記載のタンパク質および薬学的に許容される担体を含む製剤。
【請求項３４】
請求項１から３２のいずれか一項に記載のタンパク質を発現する１つまたは複数の核酸を含む細胞。
【請求項３５】
請求項１から３２のいずれか一項に記載のタンパク質を含む組成物または治療に使用するための請求項３３に記載の製剤。
【請求項３６】
請求項１から３２のいずれか一項に記載のタンパク質を含む組成物または前記組成物に腫瘍細胞およびナチュラルキラー細胞を曝露することを含む、腫瘍細胞死を直接的および／または間接的に増強する方法に使用するための請求項３３に記載の製剤。
【請求項３７】
請求項１から３２のいずれか一項に記載のタンパク質を含む組成物またはがんを処置する方法に使用するための請求項３３に記載の製剤。
【請求項３８】
（ｉ）前記第２の結合部位がＥｐＣＡＭに結合する場合、前記がんが、頭頸部がん、卵巣がん、膀胱がん、乳がん、結腸直腸がん、前立腺がん、胃がん、肝がん、食道がん、および肺がんからなる群から選択される、または
（ｉｉ）前記がんが、卵巣がん、子宮体がん、膵がん、肺がん、甲状腺がん、膀胱がん、乳がん、結腸直腸がん、小細胞肺がん、神経芽細胞腫、肝がん、腎がん、黒色腫、子宮頸がん、前立腺がん、骨肉腫、脳がん、胃がん、および胆管癌からなる群から選択される、
請求項３７に記載の組成物。