(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類を、Ｎ，Ｎ−ジ置換カルボン酸アミド化合物の存在下において還元剤と接触処理させる際に、紫外線を照射することにより得られる反応生成物を含有することを特徴とする化学発光試薬。
【請求項２】
前記Ｎ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類が下記の一般式（１）
【化１】
0003720977.tif 000008
（上記一般式（１）において、Ｒ1 及びＲ2 は、アルキル基、アリール基及びハロゲン化アリール基からなる群より選択され、互いに同一でも又は異なるものでもよく、Ｒ3 、Ｒ4 、Ｒ5 及びＲ6 は、水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、アリーロキシ基及びハロゲン原子からなる群より選択され、互いに同一でも又は異なるものでもよく、Ｘはｎ価の陰イオンであり、ｎは１又は２である。）
で表わされる化合物である請求項１に記載の化学発光試薬。
【請求項３】
前記Ｎ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類がＮ，Ｎ’−ジメチル−９，９’−ビスアクリジニウムジナイトレートである請求項１又は２に記載の化学発光試薬。
【請求項４】
前記Ｎ，Ｎ−ジ置換カルボン酸アミド化合物がＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド及びＮ−メチル−２−ピロリドンからなる群より選択される少なくとも一種の化合物である請求項１〜３のいずれかの請求項に記載の化学発光試薬。
【請求項５】
前記Ｎ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類を、前記Ｎ，Ｎ−ジ置換カルボン酸アミド化合物の存在下において前記還元剤と接触処理させる際に、更に、蟻酸が添加されてなる請求項１〜４のいずれかの請求項に記載の化学発光試薬。
【請求項６】
Ｎ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類を、Ｎ，Ｎ−ジ置換カルボン酸アミド化合物の存在下において還元剤と接触処理させる際に、紫外線を照射することを特徴とする化学発光試薬の製造方法。
【請求項７】
前記Ｎ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類は下記の一般式（１）
【化２】
0003720977.tif 000009
（上記一般式（１）において、Ｒ1 及びＲ2 は、アルキル基、アリール基及びハロゲン化アリール基からなる群より選択され、互いに同一でも又は異なるものでもよく、Ｒ3 、Ｒ4 、Ｒ5 及びＲ6 は、水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、アリーロキシ基及びハロゲン原子からなる群より選択され、互いに同一でも又は異なるものでもよく、Ｘはｎ価の陰イオンであり、ｎは１又は２である。）
で表わされる化合物である請求項６に記載の化学発光試薬の製造方法。
【請求項８】
前記還元剤との接触処理の際に、更に、蟻酸を添加することからなる請求項６〜７のいずれかの請求項に記載の化学発光試薬の製造方法。
【請求項９】
前記Ｎ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類１モルに対し、前記Ｎ，Ｎ−ジ置換カルボン酸アミド化合物及び前記蟻酸が各々当モル以上である請求項８に記載の化学発光試薬の製造方法。
【請求項１０】
前記還元剤が水素化リチウムアルミニウムであることを特徴とする請求項６〜９のいずれかの請求項に記載の化学発光試薬の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、制御された化学発光が可能な化学発光試薬として、化学発光分析による種々の物質の検出及び定量等に用いられる新規化学発光試薬及びその製造方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
化学発光試薬として、古くから用いられているルシゲニン（Ｎ，Ｎ’−ジメチル−９，９’−ビスアクリジニウムジナイトレート）は、アルカリ性水溶液中で微光を呈し、過酸化水素を加えると強く発光することが知られており、種々の微量分析に利用されている。しかしながら、ルシゲニンは過酸化水素とアルカリの存在により定量的に発光するので、過酸化水素の定量には利用することができるが、この反応による発光を制御して発光量で酵素活性を測定する化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）等には利用し難いと云う問題点がある。この問題点を解決する手段として、標識酵素にグルコースオキシダーゼを用いて、グルコースの酸化反応により生成する過酸化水素をアルカリ存在下においてルシゲニンに作用させることにより、測定対象物質の濃度に依存した化学発光量を測定する方法等が開発されている。
【０００３】
しかしながら、グルコースオキシダーゼを標識酵素とする化学発光分析法は、試薬の調製及び発光系の操作が煩雑であり、ペルオキシダーゼを標識酵素に用いる化学発光分析法用の安価な化学発光試薬の開発が望まれていた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の課題は、過酸化水素を基質とするペルオキシダーゼを用いることができる新規な化学発光試薬及びその製造方法を提供することを課題とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
そこで、本発明者らは、従来の化学発光試薬の開発状況に鑑み、上記課題を達成するために鋭意検討を行なった結果、ルシゲニン等のＮ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスジアクリジニウム塩類を、Ｎ，Ｎ−ジ置換カルボン酸アミド化合物の存在下において還元剤と接触処理させる際に、紫外線を照射することにより得られる化学発光試薬が、特定アルカリ性ｐＨ条件下において、過酸化水素とは反応せず、過酸化水素とペルオキシダーゼの存在下において、ペルオキシダーゼの量に依存して化学発光することを見い出し、これらの知見に基づいて本発明に到達したものである。
【０００６】
従って、本発明の第一は、
Ｎ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類を、Ｎ，Ｎ−ジ置換カルボン酸アミド化合物の存在下において還元剤と接触処理させる際に、紫外線を照射することにより得られる反応生成物を含有することを特徴とする化学発光試薬に関するものである。
【０００７】
また、本発明の第二は、
Ｎ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類を、Ｎ，Ｎ−ジ置換カルボン酸アミド化合物存在下において還元剤と接触処理させる際に、紫外線を照射することを特徴とする化学発光試薬の製造方法に関するものである。
【０００８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明につき更に詳しく説明する。
【０００９】
本発明の化学発光試薬は、Ｎ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類を、Ｎ，Ｎ−ジ置換カルボン酸アミド化合物の存在下において還元する際に、紫外線を照射することにより得られる反応生成物を含有するものである。
【００１０】
また、本発明の化学発光試薬の製造方法は、Ｎ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類をＮ，Ｎ−ジ置換カルボン酸アミド化合物の存在下において、好ましくは、有機溶媒中で還元剤と接触処理させる際に、紫外線を照射することからなるものである。
【００１１】
本発明の化学発光試薬に用いられるＮ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類は、次の一般式（１）
【００１２】
【化３】
0003720977.tif 000002
で表すことができる。
【００１３】
前記一般式（１）において、Ｒ1 及びＲ2 は、各々、アルキル基、アリール基及びハロゲン化アリール基からなる群より選択され、互いに同一でも異なるものでもよい。アルキル、アリール基及びハロゲン化アリール基は、炭素数１〜１４を有するものであり、好ましいアルキル基は炭素数１〜１０のものである。例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基及びデシル基等の直鎖状又は分岐状アルキル基を挙げることができる。また、アリール基は、炭素数６〜２０のものが好ましく、フェニル基、トリール基、キシリル基等を挙げることができ、さらにアルキル基で置換されたものでもよい。アリール基としては、特に、フェニル基が好ましい。ハロゲン化アリール基としてはハロゲン化フェニル基、ハロゲン化トリル基、ハロゲン化キシリル基等を挙げることができ、特に、クロロフェニル基が好ましい。
【００１４】
また、一般式（Ｉ）において、Ｒ3 、Ｒ4 、Ｒ5 及びＲ6 は、各々、水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、アリーロキシ基及びハロゲン原子からなる群より選択され、互いに同一でも又は異なるものでよい。これらの炭化水素基としては、炭素数１〜２０、好ましくは、１〜１０のものを挙げることができる。例えば、炭素数１〜２０の直鎖状又は分岐状アルキル基、アルコキシ基、炭素数６〜２０のアリール基、アリーロキシ基を挙げることができ、アリール基、アリーロキシ基にはアルキル基が置換されたものでもよい。
【００１５】
前記Ｎ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類の具体例としては、Ｎ，Ｎ’−ジメチル−９，９’−ビスアクリジニウム塩、Ｎ，Ｎ’−ジエチル−９，９’−ビスアクリジニウム塩、Ｎ，Ｎ’−ジプロピル−９，９’−ビスアクリジニウム塩、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−９，９’−ビスアクリジニウム塩、Ｎ，Ｎ’−ジブチル−９，９’−ビスアクリジニウム塩、Ｎ，Ｎ’−ジイソブチル−９，９’−ビスアクリジニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジフェニル−９，９’−ビスアクリジニウム塩、Ｎ，Ｎ’−ジ−ｍ−クロロフェニル−９，９’−ビスアクリジニウムジナイトレート（ルシゲニン）等を挙げることができる。特に、Ｎ，Ｎ’−ジメチル−９，９’−ビスアクリジニウムジナイトレート（ルシゲニン）が好適である。
【００１６】
前記一般式（Ｉ）において、Ｘn-はｎ価の陰イオンであり、ｎは１又は２である。陰イオンとしては、特に限定されるものではなく、硝酸イオン（ＮＯ3-）、ハロゲン化物イオン（例えば、塩化物イオン、フッ化物イオン、臭化物イオン等）、（メタ）リン酸イオン（ＰＯ3-）等を挙げることができる。これらの陰イオンのなかで、特に硝酸イオンが好ましい。
【００１７】
本発明の化学発光試薬の製造に用いられるＮ，Ｎ−ジ置換カルボン酸アミド化合物は、次の一般式（２）
【００１８】
【化４】
0003720977.tif 000003
で表すことができる。一般式（２）において、Ｒ１は、水素原子、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数６〜２０のアリール基であり、アリール基はアルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基、水酸基、アミノ基等で置換されていてもよい。Ｒ２は、メチル基又はエチル基であり、Ｒ３は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数６〜２０のアリール基であり、アリール基はアルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基、水酸基、アミノ基等で置換されていてもよい。また、Ｒ１及びＲ３は互いに結合して、各々が結合しているカルボニル基の炭素原子及びアミド基の窒素原子と共に環を形成していてもよい。Ｎ，Ｎ−ジ置換カルボン酸アミド化合物の具体例を例示すると、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルプロピオンアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルベンズアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン及びＮ−エチル−２−ピロリドン等を挙げることができる。
【００１９】
前記のＮ，Ｎ−ジ置換カルボン酸アミド化合物は、本発明の化学発光試薬の製造には必須であり、Ｎ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類と複合体を形成した後、アクリジニウム塩構造の還元反応に伴い、より発光収率の高い化合物へと変化するものと考えられ、本発明の化学発光試薬の製造反応に反応成分として関与し、反応生成物の水溶性の付与等に寄与しているものと考えられる。
【００２０】
また、本発明の化学発光試薬の製造に用いられる蟻酸は、Ｎ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類に対して０〜５０００当量、好ましくは、０．５〜１０００当量、特に好ましくは１〜５００当量の割合で添加され、Ｎ，Ｎ’−ジ置換−９，９’−ビスアクリジニウム塩類の還元反応を促進し、化学発光試薬の反応収率を著しく高める作用を有する。
【００２１】
本発明の化学発光試薬の製造に用いられる還元剤としては、水素化リチウムアルミニウム、水素化リチウムボロン、水素化ナトリウムボロン等が挙げられるが、水素化リチウムアルミニウムが特に好ましく用いられる。
【００２２】
還元処理において用いられる有機溶媒としては、反応試薬に対して不活性であり、かつ、溶解性を有するものであれが、特に限定されるものではなく、例えば、テトラヒドロフラン、ジオキサン類等の環状エーテル類等が好ましく用いられる。
【００２３】
本発明の化学発光試薬の製造に用いられる紫外線の光源としては、高圧水銀灯、低圧水銀灯、殺菌灯等を非限定的に用いることができるが、高圧水銀灯が好ましく用いられる。この紫外線照射により得られる化学発光試薬は、紫外線を照射せずに製造した化学発光試薬に較べて同濃度で使用した場合に、非常に高い発光強度を示すことが認められることから、化学発光性化合物の生成反応を促進する作用を有するものと考えられる。
【００２４】
反応温度は、用いられる還元剤及び反応溶媒の種類によって異なるが、一般的に、−１０〜＋１５０℃、好ましくは０〜１２０℃、特に好ましくは２０〜９０℃の範囲の温度である。反応時間は１分〜一昼夜、好ましくは１０分〜１２時間、特に好ましくは３０分〜５時間の範囲の時間を採用することができる。
【００２５】
本発明の化学発光試薬は、塩基性条件下において過酸化水素及びペルオキシダーゼの存在で反応して発光するが、この反応は過酸化水素の検出及びペルオキシダーゼの定量等に利用することが可能であり、ペルオキシダーゼを標識物質として用いることにより、更に、種々の物質の定量に用いることが可能になる。
【００２６】
本発明の化学発光試薬は、ｐＨ７．５〜１３の塩基性条件下において、過剰の過酸化水素の存在下、ペルオキシダーゼの濃度に依存した量で発光する。この発光はフェノール性化合物等の発光増強剤によって増強することが認められる。このようなフェノール性化合物としては、ｐ−ヒドロキシ桂皮酸、ｐ−フェニルフェノール、ｐ−（４−クロロフェニル）フェノール、ｐ−（４−ブロモフェニル）フェノール、ｐ−（４−ヨードフェニル）フェノール、ｐ−ヨードフェノール、ｐ−ブロモフェノール、ｐ−クロロフェノール、６−ヒドロキシベンゾチアゾール、２−ナフトール、ホタルルシフェニリン等が非限定的に挙げられる。
【００２７】
本発明の新規化学発光試薬を用いて化学発光分析を行なう場合には、１０-8〜１Ｍ、好ましくは１０-6〜１０-2Ｍの範囲の濃度で用いられ、その使用量は１０〜５００μｌ、好ましくは５０〜３００μｌの範囲でよい。また、発光増強剤の使用量は、化学発光試薬の０．０１〜１００倍モル、好ましくは０．１〜１０倍モルの範囲で用い、その濃度は１０-6〜１Ｍ、好ましくは１０-4〜１０-2Ｍの範囲で用いるのが好ましい。また、化学発光反応に用いる過酸化水素の量は化学発光試薬に対して充分に過剰な量で用いることが必要であり、その使用量は化学発光試薬に対して３〜１万倍モル、好ましくは１０〜１０００倍モルの範囲で用いるのが望ましい。
【００２８】
また、ペルオキシダーゼを標識物質として抗体、核酸等を標識して種々の物質を定量する場合には、特に限定されるものではないが、ペルオキシダーゼとして、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）が好ましく用いられる。化学発光反応に用いる塩基性緩衝液としては、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、グリシン−水酸化ナトリウム緩衝液等を任意に用いることができる。これらの緩衝液の濃度は１ｍＭ〜１Ｍの範囲で用いるのが望ましい。また、反応時に界面活性剤、キレート剤等の添加剤を任意に用いることができる。
【００２９】
【実施例】
以下、実施例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記実施例等により限定されるものではない。
【００３０】
［実施例１］
ルシゲニン１ｍｇを試験管に採り、これにＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド１５０μｌを加えて溶解させた後、攪拌下に１，４−ジオキサン１ｍｌ中へ加えてルシゲニンを１，４−ジオキサン中に微分散させた。次に、これに蟻酸２０μｌを加えてよく攪拌してから、水素化リチウムアルミニウム粉末５ｍｇを添加して、１ＫＷの高圧水銀灯の照射下に、２５℃で３０分間攪拌して還元反応させた後、反応混合液を氷冷下に脱イオン水１ｍｌ中へ少量ずづ注入して過剰量の水素化リチウムアルミニウムを分解させた。次に、生成した水酸化アルミニウム等の沈殿を濾別してから、濾液のｐＨを１Ｎ塩酸で７．０に調整することにより新規化学発光試薬を得た。
［ペルオキシダーゼ活性の測定］
この化学発光試薬を０．１Ｍトリス塩酸緩衝液(pH8.4) で１００倍に希釈した後、その２０μｌずつを複数の化学発光測定用ウェルに充填した西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）の種々の濃度水準の０．１Ｍトリス塩酸緩衝液(pH8.4) 溶液２００μｌ及びｐ−ヨードフェノール１０ｍＭトリス塩酸緩衝液(pH8.4) 溶液２０μｌを含む混合液に添加し、次にこれに０．００３４重量％過酸化水素水溶液５０μｌを添加して、ルミノメーター（ダイアヤトロン社製ルミナスＣＴ−９０００Ｄ）で０〜５秒間発光量を積算した結果、表１に示すような発光強度が得られ、ペルオキシダーゼ活性を濃度依存性良く測定できることが認められた。
【００３１】
【表１】
0003720977.tif 000004
【００３２】
［実施例２］
ルシゲニン１ｍｇを試験管に採り、これにＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１５０μｌを加えて溶解させた後、攪拌下に１，４−ジオキサン１ｍｌ中へ加えてルシゲニンを１，４−ジオキサン中に微分散させた。次に、これに蟻酸２０μｌを加えてよく攪拌してから、水素化リチウムアルミニウム粉末５ｍｇを添加して、１ＫＷの高圧水銀灯の照射下に、２５℃で３０分間攪拌して還元反応させた後、反応混合液を氷冷下に脱イオン水１ｍｌ中へ少量ずづ注入して過剰量の水素化リチウムアルミニウムを分解させた。次に、生成した水酸化アルミニウム等の沈殿を濾別してから、濾液のｐＨを１Ｎ塩酸で７．０に調整することにより新規化学発光試薬を得た。
［ペルオキシダーゼ活性の測定］
この化学発光試薬を０．１Ｍトリス塩酸緩衝液(pH8.4) で１００倍に希釈した後、その２０μｌずつを複数の化学発光測定用ウェルに充填した西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）の種々の濃度水準の０．１Ｍトリス塩酸緩衝液(pH8.4) 溶液２００μｌ及びｐ−ヨードフェノール１０ｍＭトリス塩酸緩衝液(pH8.4) 溶液２０μｌの混合液に加え、次にこれに０．００３４重量％過酸化水素水溶液５０μｌを加え、ルミノメーター（ダイアヤトロン社製ルミナスＣＴ−９０００Ｄ）で０〜５秒間発光量を積算した結果、表２に示すような発光強度が得られ、ペルオキシダーゼ活性を濃度依存性良く測定出来ることが認められた。
【００３３】
【表２】
0003720977.tif 000005
【００３４】
［実施例３］
ルシゲニン１ｍｇを試験管に採り、これにＮ−メチル−２−ピロリドン１５０μｌを加えて溶解させた後、攪拌下に１ｍｌ中へ加えて、ルシゲニンを１，４−ジオキサン中に微分散させる。次に、これに蟻酸２０μｌを添加してよく攪拌してから、水素化リチウムアルミニウム粉末５ｍｇを添加して、１ＫＷの高圧水銀灯の照射下に、２５℃で３０分間攪拌して還元反応させた後、反応混合液を氷冷下に脱イオン水１ｍｌ中へ少量ずつ注入して過剰量の水素化リチウムアルミニウムを分解させた。次に、生成した水酸化アルミニウム等の沈殿を濾別してから、濾液のｐＨを１Ｎ塩酸で７．０に調整することにより新規化学発光試薬を得た。
［ペルオキシダーゼ活性の測定］
この化学発光試薬を０．１Ｍトリス塩酸緩衝液(pH8.4) で１００倍に希釈した後、その２０μｌずつを複数の化学発光測定用ウェルに充填した西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）の種々の濃度水準の０．１Ｍトリス塩酸緩衝液(pH8.4) 溶液２００μｌ及びｐ−ヨードフェノール１０ｍＭトリス塩酸緩衝液(pH8.4) 溶液２０μｌの混合液に加え、次にこれに０．００３４重量％過酸化水素水溶液５０μｌを加え、ルミノメーター（ダイアヤトロン社製ルミナスＣＴ−９０００Ｄ）で０〜５秒間発光量を積算した結果、表２に示すような発光強度が得られ、ペルオキシダーゼ活性を濃度依存性良く測定出来ることが認められた。
【００３５】
【表３】
0003720977.tif 000006
【００３６】
［比較例１］
ルシゲニン１ｍｇを試験管に採り、これにＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１５０μｌを加えて溶解させた後、攪拌下に１，４−ジオキサン１ｍｌ中へ加えてルシゲニンを１，４−ジオキサン中に微分散させる。次に、これに蟻酸２０μｌを加えてよく攪拌してから、水素化リチウムアルミニウム粉末２００μｇを添加して、６０℃で３時間攪拌して還元反応させた後、反応混合液を氷冷下に脱イオン水１ｍｌ中へ少量ずつ注入して過剰量の水素化リチウムアルミニウムを分解させた。次に、生成した水酸化アルミニウム等の沈殿を濾別してから、濾液のｐＨを１Ｎ塩酸で７．０に調整することにより化学発光試薬を得た。
［ペルオキシダーゼ活性の測定］
この化学発光試薬を０．１Ｍトリス塩酸緩衝液(pH8.4) で１００倍に希釈した後、その２０μｌずつを複数の化学発光測定用ウェルに充填した西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）の種々の濃度水準の０．１Ｍトリス塩酸緩衝液(pH8.4) 溶液２００μｌ及びｐ−ヨードフェノール１０ｍＭトリス塩酸緩衝液(pH8.4) 溶液２０μｌの混合液に加え、次にこれに０．００３４重量％過酸化水素水溶液５０μｌを加え、ルミノメーター（ダイアヤトロン社製ルミナスＣＴ−９０００Ｄ）で０〜５秒間発光量を積算した結果、表４に示すような発光強度が得られ、この化学発光試薬濃度ではペルオキシダーゼ活性を正確に測定することは出来ないことが認められた。
【００３７】
【表４】
0003720977.tif 000007
【００３８】
【発明の効果】
本発明により提供される新規化学発光試薬は、安価な製造原料を用いて比較的に短時間で容易に製造することができ、過酸化水素とペルオキシダーゼの存在下に、ペルオキシダーゼの濃度に依存して化学発光する性質を有することを利用して、ペルオキシダーゼ酵素を高感度で検出することができる。更に、ペルオキシダーゼを標識物質として抗原、抗体、核酸等を標識した酵素標識物を用いて、酵素免疫測定法により抗体、抗原等をウェスタンブロット法により蛋白質を、サザーン及びノーザンブロット法によりＤＮＡ及びＲＮＡを、そして酵素標識核酸プローブを用いて核酸を各々、特異的に、且つ高感度で測定することができる。