(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
妊婦からの母体体液の試料を、少なくとも１つのマーカーおよび／または前記マーカーの前駆体もしくは代謝産物のレベルについて測定し、そしてこのマーカーの測定されたレベルを女性の妊娠齢と共に、（ａ）スクリーニングを受ける異常を有する胎児を身ごもっている妊婦の、および／または（ｂ）正常な胎児を身ごもっている妊婦の、種々の妊娠齢におけるマーカーのレベルの参照値と比較することにより、妊娠異常について妊娠期間中にスクリーニングするための方法であって、
前記比較は、スクリーニングを受ける異常を有する胎児を妊婦が身ごもっている危険率を示し、
前記マーカーは、インヒビンのサブユニットではなく、インヒビン二量体であり、かつ、インヒビンのβ−サブユニット上のエピトープとインヒビンのα−サブユニット上のエピトープが使用されることを特徴とする、前記スクリーニング方法。
【請求項２】
前記妊娠異常が胎児染色体異常であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記スクリーニングされる異常がダウン症候群であることを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記スクリーニングされる異常が、エドワーズ症候群（トリソミー18）、パトー症候群（トリソミー13）、ターナー症候群、モノソミーＸおよびクラインフェルター症候群の少なくとも１つを含むことを特徴とする、請求項２または請求項３に記載の方法。
【請求項５】
追加のマーカーの測定が含まれることを特徴とする、請求項１から請求項４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記追加のマーカーがｈＣＧの遊離ベータ−サブユニットであることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記追加のマーカーが、完全なｈＣＧ、ＡＦＰ、ＵＥ３、ＰＡＰＰ−Ａまたは別のインヒビン関連タンパク質であることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記測定が、妊娠第８週の始めから第１３週の終わりまでの期間に採取された体液の試料で行われる、請求項１から請求項７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
妊婦の母体体液の少なくとも１つのマーカーおよび／または前記マーカーの前駆体もしくは代謝産物のレベルを測定するために適応された手段、ならびにこのレベルの測定値を数組の参照データと比較して妊娠異常を決定するためのコンピューター手段を含む装置であって、前記マーカーは、インヒビンのサブユニットではなく、インヒビン二量体であり、かつ、インヒビンのβ−サブユニット上のエピトープとインヒビンのα−サブユニット上のエピトープが使用されることを特徴とする前記装置。
【請求項１０】
前記妊娠異常が胎児染色体異常であることを特徴とする、請求項９に記載の装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、妊娠異常、例えば、胎児（特に染色体）異常について妊娠期間中にスクリーニングするための方法、および前記方法を実施するための装置に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】
胎児におけるダウン症候群およびその他の染色体異常の危険率が、母親の年齢と共に増加することは既知であり、この情報が、更なる調査について妊婦が選択する際に基準となることは認識されている。ダウン症候群の場合における更なる調査は羊水穿刺による羊水のサンプリングを含み、その操作自体、胎児の母親への危険を伴っており、この方法の認識されている危害は流産の誘発である。
【０００３】
妊娠期間中、ダウン症候群についての母性マーカーは、スクリーニングで広範に使用されており、最も一般的なものは、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）（ｈＣＧの完全な分子もしくは遊離ベータ−サブユニットのいずれか）および非複合型エストリオール（ＵＥ３）である。妊婦の年齢と組み合わせて用いられるそのようなマーカーの使用に関連する開示は、米国特許第  ４，８７４，６９３号明細書、ＷＯ  ８９／００６９６  およびＷＯ  ９０／０８３２５  を含む。
母体のスクリーニングは、異常を伴う子供を出産する危険率が最も高い女性のサブグループを選択することを基本としている。これらの女性では、先天異常の危険率は侵入的診断方法の危険率より重要であると考えられている。危険率は、優先年齢関連危険率（ｐｒｉｏｒｉ  ａｇｅ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｒｉｓｋ  ）に尤度比（ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ  ｒａｔｉｏ）を掛けることにより計算される。尤度比は、個々のマーカー濃度の値に応じて、ダウン症候群に冒された妊娠およびダウン症候群におかされていない正常な妊娠におけるマーカー被分析物の多変量ガウス分布関数の相対度数（ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｈｅｉｇｈｔｓ）から計算される。
【０００４】
一般的に用いられる被分析物の濃度は通常妊娠齢と共に変化するので、それに従って被分析物濃度を加重しなければならない。また、ダウン症候群に冒された妊娠を効果的に判別することに関して、これらの被分析物は、妊娠齢の推定の正確さに比較的高く依存している。疾患に冒されていない妊娠をしている女性の特定の妊娠齢で期待される濃度のメジアンで被分析物の濃度を割ることにより、加重が行われる。これは、メジアンの倍数（ｔｈｅ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｅｄｉａｎ，  ＭｏＭ  ）と呼ばれる。
複数の被分析物の組合せは、いずれか単一の被分析物単独の場合よりは多くの情報を提供する。多変量の組合せから決定される尤度比は、ダウン症候群に冒された子供を女性が身ごもっている危険率に関連する情報を得る最も有効な手段である。
【０００５】
インヒビンは、システイン橋を介して互いに共有結合しているアルファおよびベータ−サブユニットを有する二量体分子である。アルファ−サブユニットはインヒビン分子に独特であり、そしてベータ−サブユニット（ＡおよびＢと称される、２種のタイプのものが存在する）は、所定の成長因子と幾つかの相同関係を有する。インヒビン二量体に加えて、「遊離」アルファ−サブユニット型（「プロ−アルファ−ＮアルファＣ」、「プロ−アルファ−Ｃ」および「アルファ−Ｃ」と称される）ならびにベータ−ベータ二量体（アクチビン）が存在することが知られている。データには、生物学的活性を与えるインヒビン二量体のみが示されており、そしてアルファ−サブユニットについての生物学的活性もまた解明されてきた。さらに、多量の免疫反応性アルファ−サブユニットが生物学的流体中に認められてきた（Ｓｃｈｎｅｙｅｒ，  Ｍａｓｏｎ，  Ｂｕｒｔｏｎ，  ＺｉｅｇｎｅｒおよびＣｒｏｗｌｅｙ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  Ｍｅｔａｂ．，  ７０，  １２０８−１２，  １９９０  ならびに  Ｌａｍｂｅｒｔ−Ｍｅｓｓｅｒｌｉａｎ，  Ｉｓａａｃｓｏｎ，  Ｃｒｏｗｌｅｙ，  Ｓｌｕｓｓ  および  Ｓｃｈｎｅｙｅｒ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，  ７８，  ４３３−９，  １９９４  ）。また、生物学的流体は、免疫反応性インヒビン二量体を含有することが知られている（Ｋｎｉｇｈｔ，  ＧｒｏｏｍｅおよびＢｅａｒｄ，  Ｊ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，  １２９，  Ｒ９−Ｒ１２，  １９９１）。
【０００６】
インヒビンの役割の中心が、成長であることが証明されているとはいえ、それは下垂体性ゴナドトロピン分泌の調節剤として作用させてもよく、または測定の組織の局所パラクリン／オートクリン機能で作用させてもよい（ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｕｒｇｅｒ，  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，  １，  １−２０，  １９９２  ）。免疫反応性「アルファ−インヒビン」は、月経周期中に分泌され（ＭｃＬａｃｈｌａｎ，  Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，  Ｈｅａｌｙ，  Ｂｕｒｇｅｒ  および  ｄｅ  Ｋｒｅｔｓｅｒ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，  ６５，  ９５４−６１，  １９８７）、女性で人工的に調節された周期中に外因性ゴナドトロピン刺激に応じて分泌され（ＭｃＬａｃｈｌａｎ，  Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，  Ｈｅａｌｙ，  Ｂｕｒｇｅｒ  および  ｄｅ  Ｋｒｅｓｔｓｅｒ  １９８７，ならびにＲｏｂｅｒｔｓｏｎ，  Ｆｅｒｔｉｌ．  Ｓｔｅｒｉｌ．  ４８，  １００１−０８，  １９８７）、そして妊娠中に胎児側胎盤により分泌される（Ｔｏｖａｎａｂｕｔｒａ，  Ｉｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ，  Ｌｅｄｇｅｒ，  Ｇｌａｓｉｅｒ  およびＢａｉｒｄ，  Ｃｌｉｎ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，  ３８，  １０１−７，  １９９３  ）。「免疫反応性アルファ−インヒビン」なる語は、これらの研究および下記ダウン症候群の研究で使用されるすべてのインヒビン・アッセイが、限定的にアルファ−サブユニット特異性であるか、またはインヒビン−アルファ−サブユニットの遊離型と優先的に交差反応性であったので、このような関係において用いられている（Ｌａｍｂｅｒｔ−Ｍｅｓｓｅｒｌｉａｎ，  Ｉｓａａｃｓｏｎ，  Ｃｒｏｗｌｅｙ，  ＳｌｕｓｓおよびＳｃｈｎｅｙｅｒ，  １９９４）。従って、免疫反応性アルファ−インヒビンレベルは免疫反応性インヒビン二量体レベルを反映するようである。
【０００７】
別の研究では、生まれていない子供がダウン症候群であるかどうかの母体血清中の潜在的マーカーとして「アルファ−インヒビン」を調査してきた（ｖａｎ  Ｌｉｔｈ，  Ｐｒａｔｔ，  Ｂｅｅｋｈｕｉｓ  および  Ｍａｎｔｉｎｇｈ，  Ｐｒｅｎａｔａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，  １２，  ８０１−６，  １９９２；  Ｓｐｅｎｃｅｒ，  Ｗｏｏｄ  および  Ａｎｔｈｏｎｙ，  Ａｎａｌ．  Ｃｌｉｎ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  ３０，  ２１９−２０，  １９９３，  Ｃｕｃｋｌｅ，  Ｈｏｌｄｉｎｇ  および  Ｊｏｎｅｓ，  Ｐｒｅｎａｎｔａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，  １４，  ３８７−９０，  １９９３  ）。アルファ−インヒビン濃度を妊娠齢と合わせることにより（ｖａｎ  Ｌｉｔｈ，  Ｐｒａｔｔ，  Ｂｅｅｋｈｕｉｓ  および  Ｍａｎｔｉｎｇｈ，  １９９２  ）、偽陽性検出率５％で、異常妊娠の４０％のみが検出され、かつまたアルファ−インヒビン濃度は遊離ベータｈＣＧレベル（Ｓｐｅｎｃｅｒ，  Ｗｏｏｄ  および  Ａｎｔｈｏｎｙ，  １９９３）および完全なｈＣＧ（Ｃｕｃｋｌｅ，  Ｈｏｌｄｉｎｇ  および  Ｊｏｎｅｓ，  １９９３）に大いに相関した。結果として、これらの発見は、ダウン症候群スクリーニング・プログラム（Ｓｐｅｎｃｅｒ，  Ｗｏｏｄ  および  Ａｎｔｈｏｎｙ，  １９９３）における追加の生化学的マーカーとしてアルファ−インヒビン免疫反応性の使用の反論になるようだという結論であった。Ｃｕｃｋｌｅ他，１９９４までは、そのような「制限された値」の使用を言及している。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明に従って、本発明者らは、妊婦からの母体体液の試料を、少なくとも１つのマーカーおよび／または前記マーカーの前駆体もしくは代謝産物のレベルについて測定し、そしてこのマーカーの測定されたレベルを女性の妊娠齢と共に、（ａ）スクリーニングを受ける（複数の）異常を有する胎児を身ごもっている妊婦の、および／または（ｂ）正常な胎児を身ごもっている妊婦の、種々の妊娠齢におけるマーカーのレベルの参照値と比較することにより、妊娠異常、例えば、胎児（特に染色体）異常について妊娠期間中にスクリーニングするための方法であって、
前記比較は、スクリーニングを受ける異常を有する胎児を妊婦が身ごもっている危険率を示し、
前記マーカーが、インヒビン二量体であることを特徴とする、スクリーニング方法を提供する。
【０００９】
さらに、本発明に従えば、本発明者らは、妊婦の母体体液の少なくとも１つのマーカーおよび／または前記マーカーの前駆体もしくは代謝産物のレベルを測定するために適応された手段、ならびにこのレベルの測定値を数組の参照データと比較して妊娠異常、例えば、胎児（特に染色体）異常を決定するためのコンピューター手段を含む装置であって、前記マーカーがインヒビン二量体であることを特徴とする装置を提供する。
【００１０】
詳細には、本発明は、インヒビン二量体を、別のインヒビン関連タンパク質、例えば、母体血清中のインヒビン・アルファ−サブユニットから区別できるアッセイの使用に関する。そのようなアッセイは、インヒビン二量体分子上に存在する２つの特異的な結合部位に結合する抗体を使用する。一方の抗体は、ベータ−サブユニット上のエピトープに特異的に結合し、そしてもう一方の抗体は、アルファ−サブユニットに結合する。一方の抗体がインヒビン分子を捕捉するために用いられ、かつもう一方の抗体が適当な信号発生体で標識されるときは、完全なインヒビン二量体が試料中に存在するときのみ、信号が得られるだろう。
【００１１】
本発明の方法および装置は、別のマーカー、例えば、完全なｈＣＧ、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、非複合型エストリオール（ＵＥ３）、妊娠関連血漿タンパク質Ａ（ＰＡＰＰ−Ａ）もしくは別のインヒビン関連タンパク質、例えば、アクチビンの測定と合わせてインヒビン二量体を測定して、疾患に冒された子供を身ごもっている女性一人一人の危険率の指標を求めるときに非常に適する。本発明の好ましい態様では、インヒビン二量体測定は、ｈＣＧの遊離ベータ−サブユニットの測定と合わせて行われる。
測定が行われる母体体液は、例えば、唾液、尿、羊水そして特に血液を含む。
【００１２】
本発明の方法および装置は、幅広い妊娠異常について妊娠期間中にスクリーニングするために使用できる。これらは、異常、例えば、子宮外妊娠そして特に胎児染色体異常を含む。最も重要かつ頻繁に生じる染色体異常は、ダウン症候群（トリソミー２１）である。本発明を用いてスクリーニングされうる別のそのような異常には、エドワーズ症候群（トリソミー１８）、パトー症候群（トリソミー１３）、ターナー症候群、モノソミーＸおよびクラインフェルター症候群が含まれる。本発明は、個々の異常をスクリーニングするために用いてもよく、または数組の異常を一緒にスクリーニングするために用いてもよく、例えば、ダウン症候群およびエドワーズ症候群の両方をスクリーニングするために使用することができる。
【００１３】
測定は、本発明方法を用いて適当な妊娠期間中に採取された血液試料で実施および分析される。好ましくは、測定は、第一のおよび第二の３か月間にそして特に第８週の始めから第二の３か月間の終わりの間の期間に採取した血液試料で行われる。女性の個々の血清マーカーについて測定された血清値を、同じ妊娠齢における疾患に冒されていない妊娠をしている女性に見出される予測メジアンで割ると、メジアンの倍数（ＭｏＭ）が導かれる。試験された血清マーカーの組合せについての（ＭｏＭ）値が、疾患に冒されていない妊娠で見出される多変量分布の値に属する確率が計算される。個々の値の組合せが、異常妊娠で見出される多変量分布の部分を形成する確率を参照することにより、同様の計算が行われる。２つの確率の危険率は、女性一人一人が疾患に冒された妊娠をしているかまたはそうではない見込みを示す尤度比（ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ  ｒａｔｉｏ，  ＬＲ）と称される。疾患に冒された妊娠と疾患に冒されていない妊娠についての多変量分布間の分離の程度は、妊娠齢に伴って変化する。すなわち、妊娠齢に依存して確率を計算する方法には、連続的変化が存在する。この連続的変化は、計算に用いられるアルゴリズムに組み込むことができる。
【００１４】
女性一人一人は、母性血清マーカー濃度から独立している優先年齢関連危険率を有する。女性の年齢関連危険率は、ベイの理論（Ｂａｙｅ’ｓ  ｔｈｅｏｒｅｍ）により、予め得られた尤度比（ＬＲ）を掛けることにより変えられる。次いで危険率と組み合わされたこれは、次の侵入的診断方法に関連する流産の危険率とは反対に、異常の相対危険率を考えている女性に助言を与えるのに用いられる。
【００１５】
【実施例】
本発明は、インヒビン二量体を、別のインヒビン関連タンパク質、例えば、母体血清中のインヒビン・アルファ−サブユニットから区別できるアッセイの使用に関する。試薬は、Ｓｅｒｏｔｅｃ  Ｌｔｄ．  ２２  Ｂａｎｋｓｉｄｅ，  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｒｏａｄ，  Ｋｉｄｌｉｎｇｔｏｎ，  Ｏｘｆｏｒｄ，  ＯＸ５  １ＪＥ，  ＵＫ  から購入した。アッセイは、インヒビン二量体分子上に存在する２つの特異的な結合部位に結合する抗体を使用する。一方の抗体は、ベータ−Ａサブユニット上のエピトープに特異的に結合し、そしてもう一方の抗体は、アルファ−サブユニットに結合する。一方の抗体がインヒビン分子を捕捉するために用いられ、かつもう一方の抗体が適当な信号発生体で標識されるときは、完全なインヒビン二量体−Ａが試料中に存在するときのみ、信号が得られるだろう（図１）。
【００１６】
ダウン症候群の子供を身ごもっていると予め確認されている２１人の女性一人一人から採取された試料、および適当な数の釣り合った対照（女性一人一人が疾患に冒されていない子供を身ごもっている）を、インヒビン二量体に特異的である２部位イムノメトリック・アッセイ（前記）でアッセイした。総数  １８９の対照試料をアッセイした。
アッセイは、販売者の使用説明書に従って行った。
【００１７】
簡単には、インヒビン二量体アッセイでアッセイする直前に、少量の試料を酸化してアッセイ感度を増強した。この研究では、インヒビン二量体アッセイは、ベータ−サブユニットを介してインヒビンを捕捉するように設計され、第２段階では、洗浄後、第２抗体（本アッセイ設計では、それは酵素標識抗体断片（Ｆａｂ）であった）をインヒビン二量体のアルファ−サブユニットと接触させた。さらに洗浄して標識抗体を除去した後、適切な信号機構試薬を用いて信号を生成させて、従来のＥＬＩＳＡプレート・リーダーで検出した。アッセイは、重量測定的に調製されたインヒビン二量体標準を用いて較正した。未知量のインヒビン二量体を含有する試験試料中のインヒビン二量体のレベルを、これらの標準と比較することにより測定した。
【００１８】
インヒビン測定が別のマーカー由来のデータと組み合わされるときの、検出率の増大を具体的に説明するために、母体血清試料中の第２の被分析物、遊離ベータｈＣＧを、同じ試料について２段階イムノメトリック・アッセイを用いて測定した。簡単に、被分析物を、ベータｈＣＧに特異的な固相モノクローナル抗体と接触させた。洗浄後、捕捉された遊離ベータｈＣＧを、酵素標識ポリクローナル抗ｈＣＧ免疫グロブリン調製物と接触させた。もう一度洗浄した後、信号基質を添加し、そして発生した信号を検した。試験試料中の遊離ベータｈＣＧのレベルを、既知量の遊離ベータｈＣＧを含有するキャリブレーターと比較することにより推定した。
【００１９】
結果
第１表に、両方の場合および対照についてのアッセイ・データを示す。
【表１】
0003626251.tif 000002
【００２０】
【表２】
0003626251.tif 000003
【００２１】
【表３】
0003626251.tif 000004
【００２２】
【表４】
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【００２３】
【表５】
0003626251.tif 000006
【００２４】
【表６】
0003626251.tif 000007
【００２５】
妊娠の各週において結果に影響する試料の数で加重された、妊娠齢（日）に対して妊娠の各週で見出されたメジアン濃度の自然対数の線形回帰により、インヒビン二量体の濃度および遊離ベータｈＣＧの濃度からメジアン回帰方程式を誘導した。用いた回帰方程式を第２表に示す。
【００２６】
【表７】
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【００２７】
インヒビン二量体濃度のメジアンは、図２に示されるように妊娠齢による変量はほとんど認められなかった。対照的に、遊離ベータｈＣＧ濃度は、図３に示されるように、調査された妊娠の日々に渡って著しい濃度の低下が認められた。
各濃度を、その妊娠齢における予測正常メジアン濃度で割ることによりＭｏＭ値を計算した。後者（その妊娠齢における予測正常メジアン濃度）は、第２表に示される回帰方程式から誘導した。ダウン症候群のケースにおけるインヒビン二量体についてのメジアンＭｏＭは、疾患に冒されていない対照（メジアンＭｏＭ  １．３０３０５，  ９５％信頼限界（Ｃｌ）  ０．９３２０−１．０９６０）と比較して１．８７８  ＭｏＭ（９５％信頼限界  １．５３９  −２．７５１  ）で著しく上昇した。同様に、これらのケースの遊離ベータｈＣＧ  ＭｏＭも、対照（メジアンＭｏＭ  １．０３１０，  ９５％信頼限界  ０．９０９０−１．１２１０）と比較して２．２６８７ＭｏＭ（９５％信頼限界  １．５８７０−３．２４７０）で著しく上昇した。
【００２８】
インヒビン二量体および遊離ベータｈＣＧ  ＭｏＭの両方の正規確率プロットは、両ケースおよび対照についてｌｏｇガウス分布を示した（それぞれ図４および図５）。インヒビン二量体および遊離ベータｈＣＧ  ＭｏＭの両方についてのＭｏＭの自然対数の平均および標準偏差は、平均から標準偏差の３倍大きいアウトライアーを排除した後に計算した（Ｈｅａｌｙ，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍ．，  ２５，  ６７５−７），  １９７９  ）。インヒビン二量体および遊離ベータ  ＭｏＭ間の自然対数の相関関係は、疾患に冒されていない対照について０．２５４７であり、そしてダウン症候群のケースについては０．０３６５であった。
データの統計的概要を第３表に示す。
【００２９】
【表８】
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【００３０】
モンテカルロ・シミュレーション技法を使用して、遊離ベータ−ｈＣＧおよびインヒビン二量体の組合せを妊婦の一般人口に適用した場合に認められるだろう、ダウン症候群についての検出率を算定した。簡単には、種として観察された二変量の統計的分布を用いて、対照  １８９およびケース２１のもとのデータ・セットに対応する程度のこれらの分布から、ランダムな試料を引き出した新しい統計的分布を、これらのシミュレーションにかけたデータ・セットから計算した。次いで２０，０００セットのケースおよび対照を、これらの人口から引き出し、そして各試料について尤度比を計算して、異なる妊婦の年齢の女性についての優先年齢危険率を掛けると、妊婦の年齢および生化学的マーカーを合わせた危険率が得られた。これらに、１９８６〜１９８８年の期間にイングランドおよびウェールズの一般人口に認められた異なる妊婦の年齢の妊婦の数（人口調査および測量局（ＯＰＣＳ），１９８７〜１９８９）を加重して、一般人口の中の危険率の分布を得た。
１００回そのようなシミュレーションを行って、連合９５％信頼限界（ＣＩ）で、異なるダウン症候群危険率切断レベルについて偽陽性率（１−特異性）に関して試験の検出率（感度）の計算をした。これらのデータを、図６に示される受容体オペレーティング特性曲線（ＲＯＣ）に図示する。データの概要を第４表に示す。
【００３１】
【表９】
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【００３２】
スクリーニング陽性率５％で、妊婦の年齢およびインヒビン二量体は、ダウン症候群に冒された妊娠の５０．９％（９５％信頼限界  ３８．４％〜６３．３％）を検出すると予測されるだろう。妊婦の年齢および遊離ベータｈＣＧを用いると、検出率は、同じスクリーニング陽性率５％で５７．６％（９５％信頼限界  ４２．３％〜７２．９％）であるだろう。最も高い検出率は、両マーカーを妊婦の年齢と組み合わせて用いて達成されるだろう。同じスクリーニング陽性率５％で、検出率は、６６．４％（９５％信頼限界  ５０．２％〜８２．７％）であるだろう。インヒビン二量体を妊婦の年齢および遊離ベータｈＣＧの組合せに加えることにより認められる増加は、統計的に有意である（平均増加率  ８．８％，９５％信頼限界    １．５％〜１６．１％）。
【００３３】
この研究におけるデータは、子供を身ごもっている女性の母体血清中の循環インヒビン二量体レベルが、子供がダウン症候群に冒されている危険率の指標であることを具体的に示している。さらにまた、インヒビン二量体の結果を、別の妊娠特異的被分析物、例えば、遊離ベータｈＣＧと組み合わせると、ダウン症候群に冒された妊娠の検出率を向上するかもしれない。
インヒビン二量体濃度の回帰メジアンの安定性は（試験した妊娠期間の日数の範囲内）、別の被分析物、例えば、遊離ベータｈＣＧ（この研究では）と比較して実際の妊娠齢への依存性は低くなる。
【００３４】
妊婦の年齢と組み合わせて母体血清中のインヒビン二量体測定を用いると（本研究では）、偽陽性レベル５％で、アルファ特異的２部位インヒビン・アッセイを利用して以前に報告されたもの（ｖａｎ  Ｌｉｔｈ，  Ｐｒａｔｔ，  Ｂｅｅｋｈｕｉｓ  およびＭａｎｔｉｎｇｈ，  Ｐｒｅｎａｔａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，  １２，  ８０１−６，  １９９２  ）より、ダウン症候群に冒された妊娠が１０％多く検出される。検出率の正確さは、別の被分析物の結果、例えば、遊離ベータｈＣＧを含むことにより改良できる。以前の研究で報告されたデータ（Ｓｐｅｎｃｅｒ，  Ｗｏｏｄ  およびＡｎｔｈｏｎｙ，  Ａｎａｌ．  Ｃｌｉｎ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  ３０，  ２１９−２０，  １９９３  ）とは対照的に、この改良は、遊離ベータｈＣＧの値とインヒビン二量体の値との間の低い相関により増強される。
結論として、この研究のデータは、母体免疫反応性インヒビン二量体濃度が、ダウン症候群に冒された胎児を女性が身ごもっている危険率の実に有用な指標である。ダウン症候群に冒された妊娠の検出率は、インヒビン二量体データを別の被分析物（前記実施例では遊離ベータｈＣＧ）のものと合わせることにより、さらに改良できる。従って、インヒビン二量体の測定は、ダウン症候群スクリーニング・プログラムにおいて追加の生化学的マーカーとして有用であるだろう。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、特異的２部位インヒビン二量体アッセイの概略図である。
【図２】図２は、妊娠齢に対するインヒビン二量体濃度のメジアンのグラフである。
【図３】図３は、妊娠齢に対する遊離ベータｈＣＧ濃度のグラフである。
【図４】図４は、インヒビン二量体ＭｏＭの正規確率分布のグラフである。
【図５】図５は、遊離ベータｈＣＧ  ＭｏＭの正規確率分布のグラフである。
【図６】図６は、受容体オペレーティング特性曲線（ＲＯＣ）である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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