(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼科用治療剤のための３．０〜６．２のｐＨの持続的放出の眼科用水性液体デリバリーシステムであって、放出速度の制御剤として重合体のキトサン０．１〜５重量％を含み、該重合体が、重合体の分子中に無秩序に分布している、
（Ａ）単量体のβ（１→４）−Ｄ−グルコサミン結合単位、及び
（Ｂ）単量体のβ（１→４）−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン結合単位
からなり、ＡとＢの数的比率がＡ６０〜９９％及びＢ１〜４０％であり、かつ重合体の粘度評価値が３〜３，０００cpsであり；
液滴形態で投与されうる該デリバリーシステムが、眼内液のより高いｐＨと接触すると硬いゲルへと転換され、その結果、それに組み込まれた眼科用治療剤の眼内への長期の時間にわたる緩慢な放出を与えることを特徴とし；
ここで、粘度評価値は、１％酢酸への１％のキトサン重合体の溶液での測定された粘度であり（Brookfield ＬＶＴ粘度計、２番スピンドル、３０rpm、２０℃）、そして該硬いゲルは、２５℃で０．１Hzの振動周波数で測定された１Paの剪断応力の下で１，０００Paを上回る弾性率を特徴とする、眼科用デリバリーシステム。
【請求項２】
眼科用治療剤が、眼科用非ステロイド系抗炎症薬、眼科用ステロイド系抗炎症薬、眼科用抗菌剤、眼科用抗真菌剤、眼科用抗ウイルス剤、緑内障治療剤、縮瞳剤、眼科用充血除去剤、抗ヒスタミン剤、プロスタグランジン、経皮成長因子又は眼科用栄養剤である、請求項１記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項３】
非ステロイド系抗炎症剤が、ジクロフェナク、フルルビプロフェン、スプロフェン、ピロキシカム若しくはケトロラク、または眼科学上許容し得るそれらの塩である請求項２記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項４】
ステロイド系抗炎症剤が、酢酸プレドニゾロン、プレドニゾロン、フルオロメトロン、酢酸フルオロメトロン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン又はデキサメタゾンである、請求項２記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項５】
抗菌剤が、クロラムフェニルコール、シプロフロキサシン、ゲンタマイシン、ノルフロキサシン、スルファセタミド、テトラサイクリン、トブラマイシン、バンコマイシン、チカルシリン、ポリミキシンＢ、ペニシリンＧ、ネオマイシン、モキサラクタム、メチシリン、キナマイシン、ゲンタマイシン、エリスロマイシン、コリスチメタート、クリンダマイシン、セファゾリン、カルベニシリン、バシトラシン、アンピシリン若しくはアミカシン、又は眼科学上許容し得るそれらの塩である、請求項２記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項６】
抗真菌剤が、アムホテリシンＢ、フルシトシン、ナタマイシン又はミコナゾールである、請求項２記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項７】
抗ウイルス剤が、イドクスウリジン、トリフルリジン、ビダラビン、アシクロビル又はガンシクロビルである、請求項２記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項８】
縮瞳剤が、カルバコール、ピロカルピン、フィゾスチグミン、デメカリウム、エコチオファート若しくはイソフルロファート、又は眼科学上許容し得るそれらの塩である、請求項２記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項９】
緑内障治療剤が、ジプベフリン、エピネフリン、ヒドララジン、ピロカルピン、カルバコール、ベタキソロール、カルテオロール、レロブノロール、メチプラノロール、チモロール、イソソルビド、アゼタゾラミド若しくはメタゾラミド、又は眼科学上許容し得るそれらの塩である、請求項２記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項１０】
目の充血除去剤が、ナファゾリン、フェニレフリン若しくはテトラヒドロゾリン、又は眼科学上許容し得るそれらの塩である、請求項２記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項１１】
目の栄養剤が、ビタミンＡ酸、ビタミンＡアルコール、酢酸ビタミンＡ又はパルミチン酸ビタミンＡを含むビタミンＡの形態である、請求項２記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項１２】
配合物が、４．０〜６．０のｐＨを有する、請求項１記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項１３】
眼科用治療剤の濃度が、０．００１〜１０重量％である、請求項１記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項１４】
眼科用製剤組成物が、浸透圧調整剤及び防腐剤を含む、請求項１記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項１５】
眼科用製剤組成物が、界面活性剤又は湿潤剤をも含む、請求項１４記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項１６】
１６０〜６００mOsm/kgの浸透圧を有する、請求項１記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項１７】
２４０〜３４０mOms/kgの浸透圧を有する、請求項１６記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項１８】
更に浸透圧調整剤及び防腐剤を含む、請求項１６〜１７のいずれか１項記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項１９】
４．６〜６．０のｐＨを有する、請求項１６〜１８のいずれか１項記載の眼科用デリバリーシステム。
【請求項２０】
請求項１に定義された眼科用デリバリーシステムを製造する方法であって、
（ａ）請求項１に定義されたキトサンを水に接触させる工程、
（ｂ）キトサン−水混合物のｐＨを、酸及び／又は塩基で調整して、３．０〜６．２の範囲のｐＨとする工程、及び
（ｃ）眼科用治療剤を通常の方法で加える工程
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２１】
該ｐＨを、目に許容し得る酸及び／又は塩基で調整する、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
更に、防腐剤、張性調整剤、助溶剤、湿潤剤、複合体形成剤、緩衝剤、粘滑剤及び界面活性剤よりなる群から選ばれる化合物の１種類又はそれ以上を通常の方法で加える工程を含む、請求項２０〜２１いずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
便利な液滴形態で目に投与され、かつ同時に、局所的に投与された薬物を長期間眼内に滞留させ、その結果作用の局所的持続期間を最大化し、いかなる全身的効果をも最小化する、眼科用液体薬物のデリバリーシステムの必要性が存在する。
当技術に周知のとおり、薬物が目から急速に排出されることになる涙液の速やかな回転率からして、目に投与された眼科用薬物が吸収されるチャンスは僅かである。したがって、目の領域に留まり、遅延放出のために眼科用薬物を保持する賦形剤が必要とされる。
本発明は、眼科用薬物の眼内への好都合な長期的かつ持続的放出が、便利な液滴形態で約３．０〜６．２のｐＨで投与される、キトサンを含有するそれの眼科用水性液体配合物を用いて達成できるという発見に関する。
キチンは、単量体のβ（１→４）−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン結合単位の、様々な分子量の天然に産する生体重合体である。例えば、米国特許第３，９１１，０９８号明細書（参照によってここに組み込まれる）に記載されたとおり、キチンのＮ−脱アセチル化はキトサンへと導く。
キトサンは、部分的には、実質的に脱アセチル化されたキチンであり、キチンとは対照的に、重合体鎖に伴って遊離アミン（ＮＨ2）の基を有する。
キトサンは、酸性条件下でプロトン化され得る遊離アミンの基が存在するため、カチオン性重合体として分類される。米国特許第３，９５３，６０８号明細書によれば、キトサンは、「アルカリ性媒体中では不溶性であるという大きな欠点を示す」。当技術には、アルカリ性媒体中でのキトサンの不溶性を、眼科用治療剤の眼内容物への持続的放出を与えるような眼科用配合物製造のための利点として、実際に利用できるとの認識又は示唆は皆無である。
本発明は、キトサンを含む眼科用水性液体組成物を用いて、眼科用治療剤の緩慢かつ持続的な放出を与える方法、該眼科用治療剤をデリバリーするためのキトサンを含む液体の眼内デリバリーシステム、並びに結果的に得られるキトサン及び眼科用治療剤を含む眼科用液体組成物に向けられている。
本発明の目的は、眼科用治療剤の持続的かつ長期的放出を提供することである。本発明のもう一つの目的は、液滴形態で目に投与され、局所的に投与された眼科用治療剤の好都合な長期の眼内滞留をもたらし、局所作用に利用できる時間を最大化する眼科用水性液体デリバリーシステムを提供することである。
本発明に用いられる限りでのキトサンは、重合体の分子中に無秩序に分布している、単量体のβ（１→４）−Ｄ−グルコサミン（Ａ）の結合単位及び単量体のβ（１→４）−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（Ｂ）の結合単位から実質的になる重合体を意味し、ＡとＢの数的比率は、Ａ約６０〜約９９％及びＢ約１〜約４０％であり、重合体の粘度評価値は、約３〜約３，０００cpsである。
キトサンは、ここに指定された条件下では、特に、持続的放出性の眼科用液体薬物配合物での眼内放出速度の制御剤として、特に適していることがまさに発見されている。便利な液滴形態で投与できるものの、そのような配合物は、それに含まれた眼科用治療剤の眼内での長期的かつ持続的放出によって、眼内での好都合な滞留時間を達成する。キトサンは、約３．０〜約６．２のいずれかのｐＨで投与することができ、目の盲嚢への投与後に、眼内液のより高い生理的ｐＨと接触して粘稠な硬いゲルと転換され、眼科用液体薬物配合物の製造のためのｐＨ依存性の有益な眼内放出速度の制御剤であることが発見されている。
より具体的には、本発明は、哺乳類の目に対する１種類又はそれ以上の眼科用治療剤の緩慢で持続的な放出を与える方法であって、液滴形態で投与され、かつ目に効果的な濃度の該眼科用治療剤及び重合体のキトサン約０．０５〜約１０重量％を含有する、ｐＨが約３．０〜約６．２である均質な眼科用水性液体製剤組成物の有効量を該哺乳類の目に投与することを含み；該重合体が、重合体の分子中に無秩序に分布している。
（Ａ）単量体のβ（１→４）−Ｄ−グルコミサン結合単位、及び
（Ｂ）単量体のβ（１→４）−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン結合単位
から実質的になり、ＡとＢの数的比率が、Ａ約６０〜約９９％及びＢ約１〜約４０％であり、かつ重合体の粘度評価値が約３〜約３，０００cpsであり；眼内液のより高い生理的ｐＨと接触すると、該液体配合物が、その眼科用治療剤を長期の時間にわたってそれから徐々に放出する硬いゲルへ転換される方法に向けられている。
形成される硬いゲルは、眼科用治療剤の眼内への長期的な生体利用能を与えるのに充分なある時間長の間、目の組織に付着する。
本発明で用いられる限りでのキトサンは、約１万〜約１千万の様々な分子量の重合体を意味し、これらの重合体は、対応する粘度評価値によって特徴付けられる。
様々な形態のキトサンが、商業的に入手できるか、又は、例えば米国特許第３，９５３，０６８号明細書に記載のとおり、キチンの脱アセチル化によって製造できる。キトサンの商業的供給源は、例えば、カナダ国ノバスコシア州Halifax, ArmdaleのNova Chem Limited社；米国ワシントン州RedmondのVanson Company社；及び米国ニューヨーク州CommackのProtan社である。
キトサンは、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン単位とＤ−グルコサミン単位との比率に関しても特徴付けられ、そのようなものは、完全にアセチル化された重合体キチンの脱アセチル化の程度として表される。好ましくは、脱アセチル化の程度は７０〜９０％の範囲にわたるが、これは、キトサン中のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン単位とＤ−グルコサミン単位との比率が、１０〜３０％のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン単位及び７０〜９０％のＤ−グルコサミン単位であることを意味する。脱アセチル化（遊離アミン）の程度は、試料を希塩酸に溶解し、過剰な酸を希水酸化ナトリウムで逆滴定することによって決定できる。
粘度評価値は、１％酢酸への１％のキトサン重合体の溶液での測定された粘度である（Brookfield ＬＶＴ粘度計、２番スピンドル、３０rpm、２０℃）。キトサン重合体の粘度評価値は、約３〜約３，０００cps、好ましくは約５０〜２，０００cps、好都合には約１００〜１，０００cpsの範囲にわたる。
一般に、粘度評価値が高ければそれだけ、キトサン重合体の分子量が高い。
本発明のためには、硬いゲルは、２５℃で０．１Hzの振動周波数で測定された１Paの剪断応力の下で１，０００Paを上回る弾性率を特徴とする。
一般に、本発明のキトサン含有眼科用配合物の粘度は、例えば、重合体中のＤ−グルコサミン単位のアンモニウム塩形態からその遊離アミン形態への可逆的な相互転換のために、上昇するｐＨとともに増加し、こうして重合体担体の、より水に溶けない形態が生じる。この相互転換は、平衡過程であり、そのため時間依存性であることから、キトサン含有配合物は、硬いゲルへの転換が生じるためには目の盲嚢に投与しなければならない。
液滴形態で投与される液体配合物を得るのに好適なｐＨは、キトサンの粘度評価値及び分子量、キトサンの濃度、並びに個々のキトサンにおけるＤ−グルコサミン単位対Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン単位の比に左右される。このｐＨは、公知の手順に従い、必要に応じて無機若しくは有機酸のいずれか、好ましくは目に許容し得る酸（例えば、塩酸、酢酸）、又は無機若しくは有機塩基、好ましくは目に許容し得る塩基（例えば、水酸化ナトリウム又はアミン）を用いて調整して、液滴形態で目に投与するのに適した粘度の配合物を得る。適切なｐＨは、約３．０〜約６．２の範囲にわたる。
眼科用配合物に組み込み得る眼科用治療剤（薬物）は、当技術に周知のもの、例えば眼科用非ステロイド系抗炎症薬、眼科用ステロイド系抗炎症薬、眼科用抗菌剤、眼科用抗真菌剤、眼科用抗ウイルス剤、緑内障治療剤、縮瞳剤、眼科用充血除去剤、抗ヒスタミン剤、プロスタグランジン、経皮成長因子又は眼科用栄養剤である。そのようなものは、約０．００１〜約１０重量％、好ましくは約０．０１〜約５重量％にわたる有効濃度で用いられる。
代表的な非ステロイド系抗炎症剤は、例えばジクロフェナク、フルルビプロフェン、スプロフェン、ピロキシカム又はケトロラク、及び眼科学上許容し得るそれらの塩である。
代表的なステロイド系抗炎症剤は、例えば酢酸プレドニゾロン、プレドニゾロン、フルオロメトロン、酢酸フルオロメトロン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン又はデキサメタゾンである。
代表的な抗菌剤は、例えばクロラムフェニコール、シプロフロキサシン、ゲンタマイシン、ノルフロキサシン、スルファセタミド、テトラサイクリン、トブラマイシン、バンコマイシン、チカルシリン、ポリミキシンＢ、ペニシリンＧ、ネオマイシン、モキサラクタム、メチシリン、キナマイシン、ゲンタマイシン、エリスロマイシン、コリスチメタート、クリンダマイシン、セファゾリン、カルベニシリン、バシトラシン、アンピシリン又はアミカシン、及び眼科学上許容し得るそれらの塩である。
代表的な抗真菌剤は、例えばアムホテリシンＢ、フルシトシン、ナタマイシン又はミコナゾールである。
代表的な抗ウイルス剤は、例えばイドクスウリジン、トリフルリジン、ビダラビン、アシクロビル又はガンシクロビルである。
代表的な縮瞳剤は、例えばカルバコール、ピロカルピン、フィゾスチグミン、デメカリウム、エコチオファート又はイソフルロファート、及び眼科学上許容し得るそれらの塩である。
代表的な緑内障治療剤は、例えばジピベフリン、エピネフリン、ヒドララジン、ピロカルピン、カルバコール、ベタキソロール、カルテオロール、レロブノロール、メチプラノロール、チモロール、イソソルビド、アゼタゾラミド又はメタゾラミド、及び眼科学上許容し得るそれらの塩である。
代表的な眼科用充血除去剤は、例えばナファゾリン、フェニレフリン又はテトラヒドロゾリン、及び眼科学上許容し得るそれらの塩である。
代表的な眼科用栄養剤は、例えば、ビタミンＡ酸、ビタミンＡアルコール、酢酸ビタミンＡ又はパルミチン酸ビタミンＡのような各種形態のビタミンＡである。
本発明は、眼科用治療剤のための約３．０〜約６．２のｐＨの持続的放出の眼科用水性液体デリバリーシステムであって、放出速度の制御剤として重合体のキトサン約０．０５〜約１０重量％を含み、該重合体が、重合体の分子中に無秩序に分布している。
（Ａ）単量体のβ（１→４）−Ｄ−グルコサミン結合単位、及び
（Ｂ）単量体のβ（１→４）−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン結合単位
から実質的になり、ＡとＢの数的比率がＡ約６０〜約９９％及びＢ約１〜約４０％であり、かつ重合体の粘度評価値が約３〜約３，０００cpsであり；眼内液のより高いｐＨと接触すると、該液体配合物が、それに組み込まれた眼科用治療剤を長期の時間にわたってそれから徐々に放出される硬いゲルへ転換される眼科用デリバリーシステムも提供する。
本発明は、液滴形態で投与される、約３．０〜約６．２のｐＨの眼科用水性液体製剤組成物であって、放出速度の制御剤としての重合体のキトサン約０．０５〜約１０重量％及び１種類又はそれ以上の眼科用治療剤の有効濃度を含み、該重合体が、重合体の分子中に無秩序に分布している、
（Ａ）単量体のβ（１→４）−Ｄ−グルコサミン結合単位、及び
（Ｂ）単量体のβ（１→４）−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン結合単位
から実質になり、ＡとＢの数的比率がＡ約６０〜約９９％及びＢ約１〜約４０％であり、かつ重合体の粘度評価値が約３〜約３，０００cpsであり；該製剤組成物が眼内液のより高いｐＨと接触すると硬いゲルへと転換され、それにより、長期の時間にわたるその眼科用治療剤の眼内への緩慢な放出を与える眼科用製剤組成物にも向けられている。
眼科用配合物は、組成物が、液滴形態で投与される低粘度の液体であるが、点眼されると高粘度のゲル（硬いゲル）になる、液体配合物として投与される。
液滴形態で投与される眼科用液体組成物は、キトサンのアミンの基が実質的にプロトン化された形態である生理的ｐＨより低いｐＨで配合される。目にデリバリーされた場合、より高い（そしてより塩基性の）目の生理的ｐＨで重合体の不溶化が生じるにつれて、液体配合物は、粘稠な硬いゲルへと転換され、目に対する眼科用治療剤の長期的な生体利用能を与えるのに充分なある時間長の間、角膜表面に付着する。
粘度に影響する因子は、用いたキトサンの特性（粘度評価値、分子量、アセチル化対非アセチル化Ｄ−グルコサミン単位の比率）、キトサンの濃度、及び配合物のｐＨを含む。
キトサンを含有する眼科用治療剤配合物の粘度に影響する主な因子は、それらのｐＨであり、そのようなものは、当技術に周知の方法に従い、例えば、ｐＨを下げるために塩酸のような酸を用いるか、又はｐＨを上げるために水酸化ナトリウムのような塩基を用いて調整できる。液滴形態での投与に適した粘度を得るよう、ｐＨを調整する。一般に、ｐＨが高ければそれだけ、重合体の水溶性の低下に起因して粘度は高くなるが、それは、よりプロトン化されていない遊離アミンの基がそのとき存在するからである。目に対するいかなる刺激も最小化するよう、液滴形態で組成物を投与できる可能な限り最高のｐＨを選ぶ。
配合物の好適なｐＨは、約４．０〜約６．０、好都合には４．５〜６．０の範囲にわたる。
キトサンの好適な濃度は、約０．１〜約５％、好都合には約０．５〜約４％の範囲にわたる。一般に、キトサンの粘度評価値が高ければそれだけ、用いられる濃度は低い。
液滴形態で投与されるキトサン含有配合物の粘度は、Bohlin ＣＳというレオメーター（プレート−プレート幾何学的配置）を用いて測定する限り、１秒-1の剪断速度で約１０〜約１００，０００cps、好ましくは約１００〜８０，０００cps、好都合には約１，０００〜８０，０００cpsである。本配合物の粘度は、広い範囲の剪断速度にわたって実質的に一定のままである。
放出制御剤として好ましいのは、粘度評価値が約１００〜１，０００cpsで、脱アセチル化の程度が約８０〜９０％であるキトサンであり、約０．５〜５％の濃度及び約４．５〜約６．０のｐＨで用いられる。
活性成分及びキトサンに加え、本発明の組成物は、当技術に公知の他の成分、例えば、目に許容し得る防腐剤、張性調整剤、助溶剤、湿潤剤、複合体形成剤、緩衝剤、粘滑剤及び界面活性剤を包含してよい。
得られる眼科用配合物は、０．４５〜１．８％塩化ナトリウム溶液と実質的に同等の、好ましくは０．５〜１％塩化ナトリウム溶液と実質的に同等の、好都合には０．９％塩化ナトリウム溶液と実質的に同等の張性を有してよい。
適切な張性増強剤は、アルカリ金属ハロゲン化物（好ましくは塩化ナトリウム又はカリウム）、マンニトール、ソルビトールなどを包含する。
点眼しようとする配合物が高張性、低張性又は実質的に等張性である、すなわち生理的流体と同じ張性を有するよう、例えば張性が０．９％塩化ナトリウム溶液と実質的に同等になるよう、充分な張性増強剤を加えるのが好都合である。
好ましい浸透圧は、標準的方法論に従って測定した限りで、約１６０〜６００mOms/kg、好ましくは約２４０〜３４０mOsm/kgの範囲にわたる。
適切な防腐剤は、当技術に一般的に用いられるもの、例えば塩化ベンザルコニウム、チオメルサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸などである。１９９０年２月７日公開のヨーロッパ公開特許第３５４，１８６号明細書に記載されたような、過酸化水素安定剤と併用される過酸化水素又はその発生源も、防腐剤として用いてよい。更に、エチレンジアミン四酢酸を安定剤として加えてもよい。
適切な助溶剤は、例えばグリセリン、プロピレングリコール及びポリエチレングリコールである。
適切な錯化形成剤は、例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、シクロデキストリン類、例えばα−、β−若しくはγ−シクロデキストリン又はヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンである。適切な界面活性剤又は湿潤剤は、例えばソルビタンエステル類、ポリソルベート８０のようなポリソルベート類、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポールなどである。
適切な粘滑剤は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デキストラン７０、ゼラチン、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ポリエチレングリコール３００、ポリエチレングリコール４００、ポリソルベート８０、ポリビニルアルコール、ポビドン、プロピルグリコールなどである。
本発明は、請求項１に定義された眼科用デリバリーシステムを製造する方法であって、
（ａ）請求項１に定義されたキトサンを水に接触する工程、
（ｂ）キトサン−水混合物のｐＨを、酸及び／又は塩基、好ましくは目に許容し得る酸及び／又は塩基で調整して、約３．０〜約６．２の範囲のｐＨとする工程、及び
（ｃ）眼科用治療剤、並びに場合により、防腐剤、張性調整剤、助溶剤、湿潤剤、複合体形成剤、緩衝剤、粘滑剤及び界面活性剤よりなる群から選ばれる１種類若しくはそれ以上の化合物を、通常の方法で加える工程
を含む方法にも向けられている。
眼科用治療剤の眼内での制御された放出（例えば持続的かつ長期的デリバリー）のための本発明の配合物の適切さは、例えばJournal of Controlled Release，第６巻，367〜373ページ（1987年）に記載されたとおり、当技術に公知の様々な手順及びその変法によって決定できる。
ウサギにおける眼内滞留（保持）時間は、γ線検出を用いて下記のとおり決定できる：
Ludium１″×１″ＮａＩ（Ｔｉ）高エネルギー末端窓γ線シンチレーターを備えたLudium２２００パルス高分析装置を用いる。プローブを３mmの鉛（Ｔｃ−９９ｍに対するＰｂの１５という半減層）のシートで包み、鉛中でコリメーターの１．５cmの開口を切開した後に、検出器の面を３mmの鉛で覆う。データ収集のため、検出器の末端に取り付けたスペーサを用いて同じ検出器を目の間隔（２cm）に維持する。この系についての最低検出可能活性は、コバルト５７の円板を参照源として用いて、１．３９×１０-4μCiであった。
賦形剤の点眼の前に、プローブを動物の目にかぶせ、インクの標識をウサギに記して、類似する３標識をスタイロフォーム（商品名）のスペーサ上に対応させる。これらの標識は、その後のデータ収集のそれぞれに対して一定の計数用幾何学的配置を確保するように整列させる。エッペンドルフピペットを用いて、０．９％食塩水又はキトサン溶液への過テクネチウム酸ナトリウム−99mＴｃ３０μｌを左下眼瞼内に点眼する。キトサン重合体は、標準的な放射線製薬学の手法を用いて99mＴｃで直接、放射線標識する。
試験賦形剤の点眼が完了したならば、下眼瞼を一旦閉じて、混合を実施する。テクネチウム９９ｍ溶液のそれ以上の混合は、ウサギの自然なまばたきする性癖によって達成される。データ収集は点眼直後に開始する。投与された放射能の平均量は、２０．９４±４．６μCiであった。
次いで、各動物について、点眼後の様々な時間的間隔で活性を測定し、保持された活性の百分率を計算する。カウントは、それぞれ６秒間で得る。バックグラウンドカウントは、各手順の開始時に測定し、５〜８カウント／６秒の範囲にわたり、平均が６．８±２．６１カウント／６秒であった。
本発明の例示のため、正常な食塩水賦形剤、及び実施例１５のキトサン含有賦形剤からの放射能の、ウサギ８匹の目に対する点眼後５、３０、６０及び１２０分での眼内保持の平均百分率は、下記のとおりであった：
0003720359.tif 000002
キトサン賦形剤による放射能のより大きい保持は、キトサン含有賦形剤についての眼内でのより長い滞留時間を示す。正常な食塩水賦形剤を用いた投与３０分後での左程でない保持と比較して、顕著な放射能が、少なくとも２時間の期間にわたって眼内に保持された。
更に本発明の例示のため、キトサン含有配合物中の眼科用薬物の持続的放出は、特定の眼科用治療剤の効果、例えばピロカルピンによる縮瞳効果（瞳孔の収縮）を測定することによって、決定できる。
正常な眼内圧を有する健康なダッチベルテッド種のウサギ（２〜３kg）における瞳孔径に対するピロカルピンの効果を、下記のとおり決定する：
瞳孔径（mm）は、正常なウサギで定常的な照明下で、水平方向に測定する。治療した目と未治療の（反対側の）目との双方で、薬物投与の前に基線を読み取り、薬物投与後の決定を、それぞれ２０、３０、４０、６０、１２０、１８０、２４０及び３００分で実施する。
基線と比較した縮瞳（瞳孔の収縮）の百分率を、下記のとおり計算する：
縮瞳％＝（基線直径−測定直径）×１００／基線直径
実施例１４のキトサン含有配合物への２％塩酸ピロカルピン、及び対照としての２％塩酸ピロカルピンの市販持続的放出製品（Spersacarpine（登録商標）２％）を用いた、ウサギにおける結果は下記のとおりであった：
0003720359.tif 000003
Spersacarpine（登録商標）２％は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースである賦形剤中の２％塩酸ピロカルピンであって、スイス国HettlingenのCiba Vision社によって市販されている。
結果は、ピロカルピンの縮瞳活性は、縮瞳活性の３〜４時間という持続期間を有するにすぎない市販の２％塩酸ピロカルピンの持続的放出配合物と比較して、キトサン賦形剤を用いると、４〜５時間の期間にわたって維持されることを証明している。２％塩酸ピロカルピンをヒドロキシプロピルメチルセルロースではなくキトサンとともに配合すると、縮瞳活性の顕著な増大が得られる。
食塩水賦形剤からの放出と比較した、キトサン含有賦形剤からの活性成分、例えばピロカルピンの持続的放出は、拡散セル測定系で下記のとおり、生体外で決定できる：
標準的なフランツ拡散セル、すなわち直径１５mmの開口を有する平底グラスを用いる。細孔径０．４５μmのナイロン膜（Gelman Sciences社、米国ミシガン州Ann Arbor）を用いる。
ダルベッコのリン酸緩衝食塩水（ＫＣｌ、２００mg/l；ＫＨ2ＰＯ4、２００mg/l；ＮａＣｌ、８，０００mg/l及びＮａ2ＨＰＯ4・７Ｈ2Ｏ、２．１６mg/l）を受容体培地として用いる。分析のため、試料は５、１５、３０、６０、９０、１２０、１５０、２１０、２７０、３９０、５１０、６９０及び１，０６０分の間隔で採取する。
pH５．０の２％キトサンＰＴＬ−１２２（９８０cpsの粘度評価値）、または食塩水のいずれかへの１％塩酸ピロカルピン１ｇを、膜上に平坦に展開する。
試料採取及び分析のためには、Microette自動式試料採取装置（Hanson Research Corporation社、米国カリフォルニア州Chatsworth）、オートインジェクター、及びPhenomenex Selectosil ５Ｃ１８１００Ａ、２５cm×４．０mmカラム付きＨＰＣＬ装置系、並びに波長を２１６nmに設定した検出器を用いる。
標準的フランツ拡散セルの下部に受容体相培地を満たす。セルの頂部は、膜及び試料を保持していて、セルの底部の上に膜側を下にして締め金で定置する。培地を３５℃に平衡させる。HansonのMicroette自動式試料採取装置を拡散セルに接続し、１．５mlのアリコートを、プログラムされた時間隔でセルの中部から抽出し、試料カルーセル内に移す。
ピロカルピンのＨＰＬＣ分析は、Phenomenex Selectosil ５Ｃ１８カラムを用いて実施する。水：Ｈ3ＰＯ4：メタノール：トリエチルアミン（９７９：６：１０：５）からなるアイソクラチック移動相を用い、室温及び１．２ml/分の流速で、試料を溶出させる。試料中のピロカルピンの濃度は、既知濃度の基準標本を用いて計算する。
本発明の例示としては、ピロカルピンは、長期の時間、すなわち約５００分という期間にわたってキトサン賦形剤から放出される。これに対して、対照である食塩水賦形剤からは、ピロカルピンは２５０分の期間にわたって放出されるにすぎない。
本発明の眼科用のキトサン含有眼科配合物は、該配合物の１滴(約２５〜５０μl)中にその有効量が含まれるような濃度で、活性成分を含有する。
活性成分の有効濃度は、当技術に公知であるか、又は当業者が容易に決定できる。代表的には、有効濃度は、約０．００１〜約１０％、好ましくは約０．０１〜約５％の活性成分の範囲にわたり、例えば塩酸ピロカルピンについては約１％、ジクロフェナクナトリウムについては約０．１％、マレイン酸チモロールについては約０．２５％、硫酸ゲンタマイシンについては約０．３％等々である。
代表的には、１滴のキトサン含有眼科用薬用配合物は、それによる処置を必要とする、ヒトをはじめとする哺乳類の目の盲嚢内に１日約１〜４回投与する。約７という生理的ｐＨに接触すると、目に投与された液滴は硬いゲルとなって、目の下部盲嚢内に残留し、そこから活性成分が徐々に放出される。
下記の実施例は、例示の目的で提示され、本発明の範囲を限定するものではない。
用いたキトサンの品位は、１％酢酸中への１％キトサンの測定された粘度に対応する粘度評価値（BrookfieldＬＶＴ粘度計、２番スピンドル、３０rpm、２０℃）に従って分類される。
本例示的実施例でのキトサンの商業的品位は、１８０cps（ＰＴＬ−１３４）、３７０cps（ＰＴＬ−１３３）及び９８０cps（ＰＴＬ−１２２）の粘度評価値を有するとして定義される。
実施例１
キトサンＰＴＬ−１２２      １２．５６ｇ
濃塩酸                        ６．３ｇ
塩酸ピロカルピン              ２．７ｇ
水                        ２５１ｇ
１％水酸化ナトリウム      pH５．０まで適量
マンニトール              ２８０〜３２０mOsmまで適量
得られた眼科用配合物は、１％の塩酸ピロカルピン及び４．６５％のキトサン（ＰＴＬ−１２２）を含有した。
ＰＴＬ−１２２の品位のキトサン（Vanson Company社、米国ワシントン州Redmondより入手）は、約８０％脱アセチル化されており、１％酢酸へのキトサンＰＴＬ−１２２の１％溶液は、粘度が９８０cpsであった。
キトサンを希塩基２５１ｇ（濃塩酸６．３ｇを含有）に溶解した。（１０％）水酸化ナトリウムでｐＨを５．０に調整した。塩酸ピロカルピンを加え、次いで充分なマンニトールを加えて、浸透圧を２８０〜３２０mOsmに調整した。
実施例２
キトサンＰＴＬ−１３４      ２０．０ｇ
０．６９５％塩酸              ５００ml
塩酸ピロカルピン            １０．０ｇ
塩化ナトリウム                ５．０ｇ
１％水酸化ナトリウム        pH５．０まで適量
得られた眼科用溶液は、２％の塩酸ピロカルピン及び４％のキトサンＰＴＬ−１３４を含有した。
ＰＴＬ−１３４の品位のキトサン（Vanson Company社より入手）は、約８０％脱アセチル化されており、１％酢酸への１％溶液は、粘度が１８０cpsであった。
キトサンを希塩酸に溶解した。塩酸ピロカルピン、次いで塩化ナトリウムを加え、（１０％）水酸化ナトリウムでｐＨを４．８５に調整した。
実施例３
キトサンＰＴＬ−１３３      ２０．０ｇ
塩酸（０．７％）          ４８０．０ml
塩酸ピロカルピン              ５．０ｇ
１％水酸化ナトリウム      pH４．５まで適量
ソルビトール              ２８０〜３２０mOsmまで適量
得られた眼科用配合物は、１％の塩酸ピロカルピン及び４％のキトサンＰＴＬ−１３３を含有した。
ＰＴＬ−１３３の品位のキトサン（Vanson Company社より入手）は、約８５％脱アセチル化されていて、１％酢酸への１％溶液は、粘度が約３７０cpsであった。
キトサンを希塩酸に溶解した。塩酸ピロカルピンを加え、ソルビトールで浸透圧を２８０〜３２０mOsmに調整し、（１０％）水酸化ナトリウムでｐＨを４．５に調整した。
実施例４
キトサンＰＴＬ−１３３      ４０ｇ
１％酢酸                  ９６０ml
塩酸ピロカルピン            ２０ｇ
塩化ナトリウム            ２７０〜３３０mOsmまで適量
１％水酸化ナトリウム      pH４．５まで適量
キトサンを希酢酸に溶解した。塩酸ピロカルピンを加えた。塩化ナトリウムで浸透圧を２７０〜３３０mOsmに調整し、５％水酸化ナトリウムでｐＨを４．５に調整した。
得られた眼科用配合物は、２％の塩酸ピロカルピン及び４％のキトサンＰＴＬ−１３３を含有した。
実施例５
キトサンＰＴＬ−１３３      ２０ｇ
０．７％塩酸              ９６０ml
塩酸ピロカルピン            １０ｇ
塩化ベンザルコニウム          ０．１ｇ
１％水酸化ナトリウム      pH５．０まで適量
マンニトール              ２８０〜３２０mOsmまで適量
得られた眼科用配合物は、１％の塩酸ピロカルピン及び２％のキトサンＰＴＬ−１３３を含有した。
キトサンを希塩酸に溶解し、塩酸ピロカルピン及び塩化ベンザルコニウムを加えた。５％水酸化ナトリウムでｐＨを５に調整し、マンニトールで浸透圧を等張にした。
実施例６
キトサンＰＴＬ−１３４      ２５ｇ
０．９３％塩酸            ５００ml
マレイン酸チモロール          １．３１ｇ
１％水酸化ナトリウム      pH４．５まで適量
ソルビトール              ２８０〜３２０mOsmまで適量
得られた眼科用配合物は、０．２５％のマレイン酸チモロール及び４．６５％のキトサンＰＴＬ−１３４を含有する。キトサンを希塩酸に溶かし、マレイン酸モチロールを加える。次いで、希水酸化ナトリウムでｐＨを４．５に調整し、ソルビトールで浸透圧を等張にした。
実施例７
キトサンＰＴＬ−１３４      ４０ｇ
０．８％酢酸              ９５０ml
ジクロフェナクナトリウム      １．０ｇ
１％塩酸                  pH４．０まで適量
塩化ナトリウム            ２８０〜３２０mOsmまで適量
得られた眼科用配合物は、０．１％のジクロフェナクナトリウム及び４％のキトサンＰＴＬ−１３４を含有した。
キトサンを希酢酸（０．８％）に溶解し、ジクロフェナクナトリウムを加えた。希塩酸でｐＨを４．０に調整し、塩化ナトリウムで等張にした。
実施例８
キトサンＰＴＬ−１２２      ２０ｇ
１％塩酸                  ９６０ml
１％水酸化ナトリウム        pH５．０まで適量
塩化ナトリウム            ２８０〜３２０mOsmまで適量
得られた眼科用賦形剤は、２％のキトサンＰＴＬ−１２２を含有した。
キトサンを希塩酸に溶解し、充分な水酸化ナトリウムを加えて、ｐＨを５．０に調整し、マンニトールを加えて、浸透圧を２８０〜３２０mOsmに調整した。
実施例９
硫酸ゲンタマイシン            ３ｇ
塩化ベンザルコニウム          ０．１ｇ
実施例８の賦形剤          ９９７ml
硫酸ゲンタマイシン及び塩化ベンザルコニウムを実施例８の賦形剤に加えた。
得られた眼科用配合物は、０．３％の硫酸ゲンタマイシン及び２％のキトサンＰＴＬ−１２２を含有した。
実施例１０
フルオロメトロン（微粉化）    ２．５ｇ
ポリソルベート８０            ０．５ｇ
エデト酸二ナトリウム          ０．０５ｇ
実施例８の賦形剤          ９９７ml
３種類の成分をキトサン賦形剤に加えた。得られた眼科用配合物は、０．２５％のフルオロメトロン、０．０５％のポリソルベート８０及び２％のキトサンＰＴＬ−１２２を含有した。
実施例１１
キトサンＰＴＬ−１２２      ２０ｇ
クエン酸（０．０１％）    ９５０ml
硫酸ゲンタマイシン            ３ｇ
塩化カリウム              ２８０〜３２０mOsmまで適量
塩化ベンザルコニウム          ０．２ｇ
１％塩酸                  pH５．０まで適量
キトサンを希クエン酸溶液に溶解した。希塩酸でｐＨを５．０に調整した。硫酸ゲンタマイシンを加え、塩化カリウムで溶液を等張性にし、塩化ベンザルコニウムを加えた。得られた眼科用配合物は、０．３％の硫酸ゲンタマイシン及び２％のキトサンＰＴＬ−１２２を含有した。
実施例１２
キトサンＰＴＬ−１２２        ２．０ｇ
塩化ナトリウム                ０．２５ｇ
水                          ９８．０ｇ
水酸化ナトリウム            pH５まで適量
初めの２成分を水に溶解し、充分な水酸化ナトリウムを加えて、ｐＨを５．０に調整した。
得られた賦形剤は、２％のキトサンＰＴＬ−１２２を含有した。
実施例１３
キトサンＰＴＬ−１３３        ４．０ｇ
塩化ナトリウム                ０．３０ｇ
水酸化ナトリウム            pH５まで適量
水                          ９５ｇ
塩化ナトリウム０．３０ｇを含有する水にキトサン（脱アセチル化の程度は約８５％）を溶解した。水酸化ナトリウムでｐＨを５．０に調整した。
得られた賦形剤は、４％のキトサンＰＴＬ−１３３を含有した。
実施例１４
キトサンＰＴＬ−１２２      ２０ｇ
１％酢酸                  ９７５ｇ
塩化ナトリウム            ２７０〜３３０mOsmまで適量
１０％水酸化ナトリウム    pH４．５まで適量
塩酸ピロカルピン          ２０ｇ
得られた眼科用配合物は、２％の塩酸ピロカルピン及び２％のキトサンＰＴＬ−１２２を含有した。
キトサンを希酢酸に溶解した。塩酸ピロカルピンを加え、塩化ナトリウムで浸透圧を２８０〜３２０mOsmに調整し、１０％水酸化ナトリウム溶液でｐＨを４．５に調整した。
実施例１５
キトサンＰＴＬ−１３３      ２２ｇ
１％塩酸                  ９７４ｇ
マンニトール              ２７０〜３３０mOsmまで適量
１０％水酸化ナトリウム    pH６．２まで適量
得られた眼科用賦形剤は、２．２％のキトサンＰＴＬ−１３３を含有した。
キトサンを希塩酸に溶解した。水酸化ナトリウム溶液を加えて、ｐＨを６．２に調整し、マンニトールを加えて、浸透圧を２７０〜３３０mOsmに調整した。