(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
バークホルデリア セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株（FERM BP-7308）。
【請求項２】
排水と、バークホルデリア セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株（FERM BP-7308）を接触させることを特徴とする排水の処理方法。
【請求項３】
前記排水と、前記バークホルデリア セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株（FERM BP-7308）を、２０〜３５℃の温度条件下で接触させることを特徴とする請求項２記載の排水の処理方法。
【請求項４】
前記排水が常温で固形状の油脂を含むことを特徴とする請求項２又は３に記載の排水の処理方法。
【請求項５】
前記常温で固形状の油脂がラード、牛脂、又はやし油のうち一種以上であることを特徴とする請求項４に記載の排水の処理方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規微生物及び排水の処理方法に係り、その目的は、広い温度域にわたって液状及び固形状の油脂、その他の有機物等を好気的に分解することができる新規微生物及びこの新規微生物を用いた排水の処理方法を提供することにある。
【０００２】
【従来の技術】
食品工場、飲食店、一般家庭等から排出される排水中には、動植物性油脂が多量に含まれていることが多い。通常の場合、排水中に含まれる油脂は、自然浮上装置や加圧浮上装置により分離除去されている。このような物理的、或いは化学的な分離除去方法では排水中の油脂を完全に除去することはできず、油脂が含まれた排水は分解槽にまで供給されて、活性汚泥法等の浮遊生物法、回転生物接触法等の生物膜法等の生物学的な処理方法により分解除去されているのが現状である。
【０００３】
油脂が含まれた排水の生物学的な処理方法としては、例えば、特開平８−１９７９８６号公報に、シュードモナス属に属する特定の菌株を用いて、排水中に含まれる動植物性油脂を分解処理する方法が開示されている。
また、特開平９−８５２８３号公報に、バークホルデリア属に属する高温で動植物性油脂を分解し得る細菌を用いて排水を処理する方法が開示されている。
さらに、特開平１１−４７７９８号公報に、シュドモナス属に属する特定の菌株を用いて排水中に含まれる動植物性油脂を分解処理する方法が開示されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上記した従来の排水の処理方法には、以下のような問題が存在していた。
従来の排水の処理方法において用いられる油脂分解性細菌は、ある特定の温度域、例えば特開平９−８５２８３号公報に開示された細菌の場合では約４０℃以上の温度域、において油脂を分解することができる。しかしながら、生物学的な分解が行われる分解槽内の温度は、気象条件、季節或いは設置場所等により大きな温度変化が発生していることが知られている。このために、従来の油脂分解性細菌は、激しい温度変化が生じる分解槽内では常に高い分解能を発揮することは困難であった。この結果、分解槽内において処理されて排出された処理水の水質は常に一定ではなく、しかも、油脂が完全に分解されずに排出されることがあった。
また、上記の排水の処理方法において用いられる油脂分解性細菌は、液状の油脂を分解することはできるが、固形状の油脂を同様に分解処理することは困難であった。排水中に固形状の油脂が大量に含まれる場合は、処理水の水質を悪化させるとともに、嫌気性細菌が発生して悪臭が発生することがあった。
【０００５】
上記の課題に鑑みて鋭意研究を行った結果、バークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）に属する一菌株が、広い温度域にわたって液状及び固形状油脂に対する高い分解能を有することを見いだし、本発明の完成に至った。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
即ち、請求項１に係る発明は、バークホルデリア セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株（FERM BP-7308）に関する。
請求項２に係る発明は、排水と、バークホルデリア セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株（FERM BP-7308）を接触させることを特徴とする排水の処理方法に関する。
請求項３に係る発明は、前記排水と、前記バークホルデリア セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株（FERM BP-7308）を、２０〜３５℃の温度条件下で接触させることを特徴とする請求項２記載の排水の処理方法に関する。
請求項４に係る発明は、前記排水が常温で固形状の油脂を含むことを特徴とする請求項２又は３に記載の排水の処理方法に関する。
請求項５に係る発明は、前記常温で固形状の油脂がラード、牛脂、又はやし油のうち一種以上であることを特徴とする請求項４に記載の排水の処理方法に関する。
【０００７】
【発明の実施の形態】
まず、本発明に係る新規微生物について説明する。
本発明に係る新規微生物は、沖縄県石垣島の土壌をサンプリングし、スクリーニングを行った結果、得られた細菌であり、広い温度域において油脂に対する優れた分解能を有するとともに、脂肪酸、タンパク質、炭水化物、糖類等の有機物に対する分解能も有する。
以下、本発明に係る新規微生物の分離方法について説明する。
まず、沖縄県石垣島でサンプリングした１２６サンプルの土壌を、培地▲１▼で培養した。培地▲１▼で成育の良好であったサンプルのみを培地▲２▼で培養した。以下、同様に成育の良好なサンプルのみを順に次の培地で培養することによって最終的に６サンプルを得た。
▲１▼オリーブ油を５％添加した栄養培地（組成；後記表１の組成を精製水に溶解して１０００．０ｍｌとすることにより調整した培地にイーストエキス及びカザミノ酸をそれぞれ１．０ｇ／Ｌ添加）。
▲２▼オリーブ油を１０％添加した栄養培地。
▲３▼オリーブ油を１０％添加した栄養培地。尚、三回植えつぎを行った。
▲４▼実排水。
▲５▼豚脂を２％添加した栄養培地。
▲６▼サラダ油を２％添加した栄養培地。
▲７▼豚脂を１０％添加した栄養培地。
▲８▼サラダ油を１％添加した栄養培地。尚、三回植えつぎを行った。
▲９▼牛脂を２％添加した栄養培地。
【０００８】
上記の方法により分離された６サンプルについて、リパーゼ活性及び油脂含有排水における油脂分解量を測定して、最も良好な結果が得られたサンプルを採取した。
こうして沖縄県石垣島の土壌からバークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株を分離した。
【０００９】
以下、分離されたバークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株の菌学的性質について説明する。尚、菌学的性質の試験及び分類方法は、E.Yabuuchi et al.,Microbiology and Immunology,36,1251-1275,1992 の記載に基づいて行った。
【００１０】
（１）形態的性質
(a) 細胞の形及び大きさ；長さ１．０〜１．５μｍ、幅０．８μｍの桿菌
(b) グラム染色性；−
(c) 胞子；−
(d) 運動性；＋
(e) コロニーの形態；円形、周縁波状、低凸状、表層縞紋状、黄色（水溶性色素）
(f) 鞭毛の着性；極毛
【００１１】
（２）培養的性質
(a) 肉汁液体培養；表面皮膜形成
(b) リトマスミルク；不変
【００１２】
（２）生理学的性質
(a) カタラーゼ；＋
(b) オキシターゼ；＋
(c) Ｏ／Ｆ試験；−
(d) 硝酸塩還元；−
(e) インドール産生；−
(f) ブドウ糖酸性化；−
(g) アルギニンジヒドロラーゼ；−
(h) ウレアーゼ；−
(i) エスクリン加水分解；＋
(j) ゼラチン加水分解；−
(k) β−ガラクトシダーゼ；−
(l) 脱窒反応；−
(m) ＭＲテスト；＋
(n) ＶＰテスト；−
(o) Ｈ2 Ｓ産生；−
(p) 澱粉加水分解；−
(q) クエン酸の利用； Koser／＋、 Christensen／＋
(r) 無機窒素源の利用；ＮａＮＯ3 ／＋、（ＮＨ4 ）2 ＳＯ4 ／＋
(s) 色素生成；水溶性黄色色素
(t) 嫌気的成育；−
(u) Ｔｗｅｅｎ８０の分解；＋
(v) ポリ−β−ヒドロキシ酪酸の分解；−
(w) 基質資化能；ブドウ糖、Ｌ−アラビノース、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、グルコン酸カリウム、ｎ−カプリン酸、アジピン酸、ＤＬ−リンゴ酸、クエン酸ナトリウム、酢酸フェニルは資化する。マルトースは資化せず。
(x) 糖類から酸の生成の有無；ブドウ糖、キシロース、マンニトール、乳糖、麦芽糖は酸の生成有。
(y) ＯＦ培地による酸及びガス生成（酸／ガス）；Ｌ−アラビノース（−／−）、Ｄ−キシロース（＋／−）、Ｄ−グルコース（＋／−）、Ｄ−マンノース（−／−）、Ｄ−フルクトース（−／−）、Ｄ−ガラクトース（＋／−）、マルトース（＋／−）、シュークロース（＋／−）、ラクトース（＋／−）、トレハロース（＋w ／−）、Ｄ−ソルビトール（−／−）、Ｄ−マンニトール（＋／−）、イノシトール（−／−）、グリセリン（−／−）、デンプン（−／−）。
【００１３】
前記の菌学的性質及び上記の文献の記載から、運動性を有するグラム陰性桿菌でカタラーゼ及びオキシダーゼ共に陰性を示し、ブドウ糖から酸を産生することから、本発明に係る新規微生物は、バークホルデリア属（Burkholderia）に属する微生物であると同定された。
さらに、本発明に係る新規微生物は、ブドウ糖、キシロース、マンニトール、乳糖及び麦芽糖から酸を産生し、アルギニンジヒドロラーゼ陰性を示すことからバークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）に属する微生物と判断して、バークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株と命名した。
バークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、平成１２年９月２５日に、通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に微生物寄託番号FERM BP-7308として寄託された。
【００１４】
バークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株を培養するために用いられる培地は特に限定されず、通常の液体培地、固体培地が用いられる。培地の栄養源としては、炭素源、窒素源、無機塩類などの細菌の成育に必要な栄養源であればよい。炭素源としては、グルコース、ショ糖、糖蜜、澱粉等を例示することができる。窒素源としては、有機窒素源、無機窒素源のいずれも用いることができ、有機窒素源としては、ペプトン、酵母エキス、麦芽エキス、肉エキス、大豆分解物、尿素等を、無機窒素源としては、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム等を例示することができる。無機塩類としては、リン酸塩、硫酸マグネシウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム、銅、マンガン、亜鉛、塩化カルシウム、硫酸第一鉄等を例示することができる。
【００１５】
培地のｐＨは、２．０〜１２．０、好ましくは５．０〜８．０、より好ましくは６．０〜８．０とされ、７．０〜８．０とすることが最も好ましい。
また、培地の温度は、バークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株が成育できる温度であればよく、具体的には、１５〜４５℃、好ましくは１５〜４０℃、より好ましくは２０〜３５℃とされる。
【００１６】
バークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、油脂を好適に分解することができる。バークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株の油脂を分解する際の温度は特に限定されないが、１５〜４５℃、好ましくは１５〜４０℃、より好ましくは２０〜３５℃とされる。分解槽内の温度は、通常の場合、約２０〜３５℃の範囲内で変動するから、バークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、分解槽内において極めて優れた分解能を発揮することが可能である。
また、バークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、動物性油脂、植物性油脂のいずれの油脂も好適に分解することができ、さらに、サラダ油、オリーブ油、ゴマ油等のような常温で液状の油脂に限られることなく、ラード、牛脂、やし油等の常温で固形状の油脂も好適に分解することができる。しかも、後述する実施例からも明らかなように、短時間で極めて低濃度に分解することが可能である。
また、バークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、界面活性剤の存在下においても油脂を分解することが可能である。即ち、洗剤が混入している実際の排水中の油脂であっても分解処理することができる。
さらに、バークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は油脂に加え、ラウリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸等の脂肪酸、タンパク質、炭水化物、糖類等の有機物を好適に分解することができる。これらの有機物を分解する際の温度は特に限定されないが、油脂の場合と同様、１５〜４５℃、好ましくは１５〜４０℃、より好ましくは２０〜３５℃とされる。
【００１７】
次に、本発明に係る排水の処理方法について説明する。本発明に係る排水の処理方法は、バークホルデリア（Burkholderia）属に属する細菌と、排水とを接触させることを特徴としている。
バークホルデリア（Burkholderia）属に属する細菌としては、主として油脂を分解することができる細菌であれば特に限定はされないが、広い温度域にわたって油脂等を分解処理することができる細菌であることが好ましい。この理由は、分解槽内の温度は常に一定ではなく、気象条件、季節、或いは設置場所等の様々な条件によって激しく変動するからである。（図３参照。尚、図３は、或る分解槽内の月毎の平均温度の変化を示したグラフである。）この分解槽内の温度変動が微生物の分解能に影響を与えるために、分解槽において分解処理された処理水の水質は安定せず、また微生物の分解能力が低下する時期には、油脂が完全に分解処理されず処理水中に油脂が混入して排出されてしまうことがあった。（図４参照。尚、図４は、或る分解槽において分解処理されて排出された処理水中に含まれるｎ−ヘキサン抽出物の量、即ち油脂含有量の平均を示したグラフである。）つまり、少なくとも分解槽内の温度域、具体的には１５〜４０℃、好ましくは２０〜３５℃の温度域の略全域にわたって高い分解能を発揮することができる細菌を用いることにより、たとえ分解槽内で温度変化が生じたとしても分解能力が低下することなく、常に安定した処理を行うことができるからである。
さらに、用いられるバークホルデリア（Burkholderia）属に属する細菌としては、常温で液状の油脂だけでなく、常温で固形状の油脂も好適に分解することができる細菌であることが好ましい。この理由は、分解槽に流入する排水中には常温で液状の油脂の加え、常温で固形状の油脂も含まれているからである。
また、用いられるバークホルデリア（Burkholderia）属に属する細菌としては、油脂に加えて、油脂以外の有機物、例えば脂肪酸、タンパク質、炭水化物、糖類等も分解することができる細菌であることが望ましい。この理由は、油脂以外の有機物も分解することにより、排水のＢＯＤ（生物化学的酸素要求量）、ＣＯＤ（化学的酸素要求量）を低減することができるからである。
以上の条件を兼ね備えた細菌としては、バークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株（FERM BP-7308）等を例示することができる。
【００１８】
本発明に係る排水の処理方法は、活性汚泥法等の浮遊生物法、回転生物接触法、散水ろ床法、接触酸化法、好気性ろ床法等の生物膜法、或いは固定化微生物法のうちのいずれの方法によってもよい。即ち、バークホルデリア（Burkholderia）属に属する細菌は、活性汚泥を構成する微生物群のうちの一種として用いても、また、円板等の表面に固着された生物膜を構成する微生物群のうちの一種として用いても、さらには、担体に担持された微生物群のうちの一種として用いても構わない。
【００１９】
本発明に係る排水の処理方法は、分解槽内の温度変化に影響されずに液状及び固形状の油脂を好適に分解することができるから、季節、気象条件、設置場所等の環境条件に左右されずに油脂を分解することが可能である。しかも、嫌気性生物の繁殖を抑制して悪臭の発生を防ぐことができるとともに、高い分解能を常に発揮することができるために、分解槽から処理されて排出される処理水の水質を略一定に維持することができる。
【００２０】
【実施例】
以下、本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、本発明は以下の実施例により何ら限定されるものではない。
（実施例及び比較例の試料）
バークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株を実施例１の試料とした。また、スーパーＨ菌（商品名、コンドーＦＲＰ社製）を比較例１の試料、活性汚泥（工業技術院生命工学工業技術研究所にて培養）を比較例２の試料とした。
【００２１】
（試験例１；ラードの分解）
表１に示される組成を精製水に溶解して１０００．０ｍｌとすることにより調製した培地に、ラード５００ｐｐｍ、洗剤１０ｐｐｍを加えて滅菌した後に、速度１５０ｒｐｍで１６時間振盪して合成排水とした。尚、この合成排水は、性質比較試験により、実際の排水と略同等の性質であることが確かめられた。
次に、ＬＢ培地で前培養した実施例の試料２０ｍｌ（乾燥重量０．０６ｇの菌体含有）を前記調製した合成排水で洗浄した後に、合成排水２００ｍｌに添加して、３０℃、１５０ｒｐｍで振盪培養した。
最後に、所定時間経過後の合成排水中のラードの濃度を測定した。測定方法は、所定時間経過後の合成排水中のｎ−ヘキサン抽出物の濃度を、抽出効率９８．６％（コントロールを三本作成して別途算出）として測定することにより行った。一回の測定につき、サンプルを三本ずつ作成して、その平均値を求めた。尚、比較例１の試料を用いて同様の実験を行った。
結果を表２に示す。
【００２２】
【表１】
0003728721.tif 000002
【００２３】
【表２】
0003728721.tif 000003
【００２４】
表２に示される結果の通り、本発明に係る新規微生物であるバークホルデリアセパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、比較例１に比べ格段に優れた分解能を示し、固形状油脂を４時間で約１／４、９時間で約１／１０の濃度にまで分解することができ、さらに２４時間経過後には略完全に分解することができる。
【００２５】
（試験例２；サラダ油の分解）
試験例１で使用した培地と同様の培地に、サラダ油５００ｐｐｍ、洗剤１０ｐｐｍを加えて滅菌した後に、速度１５０ｒｐｍで１６時間振盪して合成排水とした。尚、この合成排水は、性質比較試験により、実際の排水と略同等の性質であることが確かめられた。
次に、ＬＢ培地で前培養した実施例の試料２０ｍｌ（乾燥重量０．０６ｇの菌体含有）を前記調製した合成排水で洗浄した後に、合成排水２００ｍｌに添加して、３０℃、１５０ｒｐｍで振盪培養した。
最後に、所定時間経過後の合成排水中に含まれるサラダ油の濃度を測定した。測定方法は、所定時間経過後の合成排水中のｎ−ヘキサン抽出物の濃度を、抽出効率９７．５％（コントロールを三本作成して別途算出）として測定することにより行った。一回の測定につき、サンプルを三本ずつ作成して、その平均値を求めた。
尚、比較例１及び比較例２の試料を用いて同様の実験を行った。
結果を表３に示す。
【００２６】
【表３】
0003728721.tif 000004
【００２７】
表３に示される結果の通り、本発明に係る新規微生物であるバークホルデリアセパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、比較例１及び２に比べ格段に優れた分解能を示し、液状の油脂を４時間で約１／７、９時間で約１／１０の濃度にまで分解することができ、さらに２４時間経過後には略完全に分解することができる。
【００２８】
（試験例３；油脂分解における温度依存性）
試験例１同様の組成の培地に、サラダ油５００ｐｐｍ、洗剤１０ｐｐｍを加えて滅菌した後に、速度１５０ｒｐｍで１６時間振盪して合成排水とした。
次に、ＬＢ培地で前培養した実施例の試料２０ｍｌ（乾燥重量０．０６ｇの菌体含有）を上記調製した合成排水で洗浄した後に、合成排水２００ｍｌに添加して、所定温度で、１５０ｒｐｍ、４時間振盪培養した。
最後に、サラダ油の分解率を測定した。測定方法は、合成排水中のｎ−ヘキサン抽出物の濃度を抽出効率９７．５％（コントロールを三本作成して別途算出）として測定することにより行った。
一回の測定につき、サンプルを三本ずつ作成して、その平均値を求めた。
尚、比較例１の試料を用いて同様の実験方法により測定した。
結果を表４及び図１に示す。尚、図１中の実線は実施例、破線は比較例１の結果を示したグラフである。
【００２９】
【表４】
0003728721.tif 000005
【００３０】
表４及び図１に示される結果の通り、本発明に係る新規微生物であるバークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、１５℃以下という低温においても、また４０℃以上の高温においても油脂の分解能を有することが分かる。さらに、約２０〜３５℃の温度域においては、８０％以上という極めて優れた分解能を常に発揮できることが分かる。
【００３１】
（試験例４；サラダ油分解における植菌量変化の影響）
試験例１と同様の組成の培地に、サラダ油５００ｐｐｍ、洗剤１０ｐｐｍを加えて滅菌した合成排水とした。
次に、ＬＢ培地で前培養した実施例の試料（培地１リットル中に乾燥重量３．０ｇの菌体含有）の所定量を前記調製した合成排水で洗浄した後に、合成排水２００ｍｌに添加して、３０℃、１５０ｒｐｍで４時間振盪培養した。
最後に、合成排水中におけるサラダ油の濃度を測定した。測定方法は、所定時間経過後の合成排水中のｎ−ヘキサン抽出物の濃度を抽出効率９７．５％（コントロールを三本作成して別途算出）として測定することにより行った。
一回の測定につき、サンプルを三本ずつ作成して、その平均値を求めた。
結果を表５に示す。
【００３２】
【表５】
0003728721.tif 000006
【００３３】
表５の結果の通り、本発明に係る新規微生物であるバークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、極めて少ない添加量でも短時間で油脂を分解することができる。
【００３４】
（試験例５；実際の排水中における油脂の分解）
実際の排水を採取した後に滅菌、濾過した。尚、この排水中のｎ−ヘキサン抽出物の量は１５ｐｐｍであった。
次に、この排水のｎ−ヘキサン抽出物の量が５００ｐｐｍとなるようにサラダ油を添加した後に、１６時間振盪した。
ＬＢ培地で前培養した実施例の試料２０ｍｌ（乾燥重量０．０６ｇの菌体含有）を前記調整した排水で洗浄した後に、排水２００ｍｌに添加して、３０℃、１５０ｒｐｍで振盪培養した。
最後に、所定時間経過後の排水中に含まれるｎ−ヘキサン抽出物の濃度を測定した。
尚、一回の測定につき、サンプルを三本ずつ作成して、その平均値を求めた。結果を表６に示す。
【００３５】
【表６】
0003728721.tif 000007
【００３６】
表６の結果の通り、本発明に係る新規微生物であるバークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、合成排水においても（合成排水を用いて同様の実験を行った表３に示される実施例の結果参照）また実際の排水中においても、略同等の能力を発揮できることが分かる。
【００３７】
（試験例６；ペプトン添加によるサラダ油の分解への影響）
試験例１と同様の組成の培地に、サラダ油５００ｐｐｍ、洗剤１０ｐｐｍ、ペプトン０．１％を加えて滅菌した後に、速度１５０ｒｐｍで１６時間振盪して合成排水とした。
次に、上記説明した試験例２と全く同様の方法により、所定時間経過後の合成排水中のｎ−ヘキサン抽出物の濃度を測定した。結果を表７に示す。
【００３８】
【表７】
0003728721.tif 000008
【００３９】
表７に示される結果の通り、本発明に係る新規微生物であるバークホルデリアセパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、油脂に比べ分解しやすいと考えられるペプトンが存在していたとしても、存在していない場合（ペプトンを添加せずに同様の実験を行った表３に示される実施例の結果参照）と略同等の分解能力を発揮することができる。
【００４０】
（試験例７；ｐＨの変化によるサラダ油分解への影響）
試験例１と同様の組成の培地に、０．５ＮのＨＣｌと０．５ＮのＮａＯＨを用いてｐＨメーターにて調整することにより、表８に示されるｐＨの培地をそれぞれ調整した。次に、それぞれの培地にサラダ油５００ｐｐｍ、洗剤１０ｐｐｍを加えて滅菌した後に、速度１５０ｒｐｍで１６時間振盪して合成排水とした。
次に、ＬＢ培地で前培養した実施例の試料２０ｍｌ（乾燥重量０．０６ｇの菌体含有）を前記調製したそれぞれの合成排水で洗浄した後に、合成排水２００ｍｌに添加して、３０℃、１５０ｒｐｍで４時間振盪培養した。
最後に、合成排水中に含まれるサラダ油の濃度を測定した。測定方法は、所定時間経過後の合成排水中のｎ−ヘキサン抽出物の濃度を、抽出効率９７．５％（コントロールを三本作成して別途算出）として測定することにより行った。
一回の測定につき、サンプルを三本ずつ作成して、その平均値を求めた。
結果を表８及び図２に示す。
【００４１】
【表８】
0003728721.tif 000009
【００４２】
表８及び図２に示される結果の通り、本発明に係る新規微生物であるバークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、幅広いｐＨ域において油脂を分解することができる。特に、ｐＨが７．０〜８．０においては、極めて優れた分解能を発揮することが分かる。
【００４３】
（試験例８；水道水中におけるサラダ油の分解）
水道水にサラダ油５００ｐｐｍを加えて滅菌した後に、速度１５０ｒｐｍで１６時間振盪して合成排水とした。次に、ＬＢ培地で前培養した実施例の試料２０ｍｌ（乾燥重量０．０６ｇの菌体含有）を生理食塩水で洗浄した後に、前記調製した合成排水２００ｍｌに添加して、３０℃、１５０ｒｐｍで２４時間振盪培養した。
最後に、合成排水中に含まれるサラダ油の濃度を測定した。測定方法は、培地中のｎ−ヘキサン抽出物の濃度を抽出効率９７．５％（コントロールを三本作成して別途算出）として測定することにより行った。
また、比較例１の試料を用いて同様の実験を行った。
尚、コントロールとして実施例及び比較例１の試料のいずれも添加しなかった場合も同様の方法により測定を行った。
それぞれのサンプルにつき３回ずつ測定した結果を表９に示す。
【００４４】
【表９】
0003728721.tif 000010
【００４５】
表９に示される結果の通り、本発明に係る新規微生物であるバークホルデリアセパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、油脂以外の栄養分が極端に少ない状況においても活動して油脂を分解できることが分かる。
【００４６】
（試験例９；ラードの分解における洗剤の影響）
試験例１と同様の組成の培地に、ラード５００ｐｐｍを加え滅菌した後に、速度１５０ｒｐｍで１６時間振盪して合成排水とした。
次に、ＬＢ培地で前培養した実施例の試料２０ｍｌ（乾燥重量０．０６ｇの菌体含有）を前記調製した合成排水で洗浄した後に、合成排水２００ｍｌに添加して、３０℃、１５０ｒｐｍで振盪培養した。
最後に、所定時間経過後の合成排水中におけるラードの濃度を測定した。測定方法は、所定時間経過後の合成排水中のｎ−ヘキサン抽出物の濃度を、抽出効率９８．６％（コントロールを三本作成して別途算出）として測定することにより行った。
一回の測定につき、サンプルを三本ずつ作成して、その平均値を求めた。
結果を表１０に示す。
【００４７】
【表１０】
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【００４８】
表１０に示される結果の通り、本発明に係る新規微生物であるバークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、洗剤を添加することにより（洗剤を添加して同様の実験を行った表２に示される実施例の結果参照）固形油脂に対する分解能力が高まることが分かる。
【００４９】
（試験例１０；サラダ油の分解における洗剤の添加による影響）
試験例１と同様の組成の培地に、サラダ油５００ｐｐｍを加え滅菌した後に、速度１５０ｒｐｍで１６時間振盪して合成排水とした。
次に、ＬＢ培地で前培養した実施例の試料２０ｍｌ（乾燥重量０．０６ｇの菌体含有）を前記調製した合成排水で洗浄した後に、合成排水２００ｍｌに添加して、３０℃、１５０ｒｐｍで振盪培養した。
最後に、所定時間経過後の合成排水中におけるサラダ油の濃度を測定した。測定方法は、所定時間経過後の合成排水中のｎ−ヘキサン抽出物の濃度を、抽出効率９８．６％（コントロールを三本作成して別途算出）として測定することにより行った。
一回の測定につき、サンプルを三本ずつ作成して、その平均値を求めた。
結果を表１１に示す。
【００５０】
【表１１】
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【００５１】
表１１に示される結果の通り、本発明に係る新規微生物であるバークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、洗剤を添加することにより（洗剤を添加して同様の実験を行った表３に示される実施例の結果参照）液状の油脂に対する分解能が高まることが分かる。
【００５２】
（試験例１１；活性汚泥に組み込んだ際のサラダ油の分解）
試験例１で使用した培地と同様の培地に、サラダ油５００ｐｐｍ、洗剤１０ｐｐｍを加えて滅菌した後に、速度１５０ｒｐｍで１６時間振盪して合成排水とした。尚、この合成排水は、性質比較試験により、実際の排水と略同等の性質であることが確かめられた。
次に、ＬＢ培地で前培養した実施例の試料２０ｍｌ（乾燥重量０．０６ｇの菌体含有）を前記調製した合成排水で洗浄した後に、比較例２の活性汚泥２００ｍｌに組み込み、これを、合成排水２００ｍｌに添加して、３０℃、１５０ｒｐｍで振盪培養した。
最後に、９時間経過後の合成排水中に含まれるサラダ油の濃度を測定した。測定方法は、所定時間経過後の合成排水中のｎ−ヘキサン抽出物の濃度を、抽出効率９７．５％（コントロールを三本作成して別途算出）として測定することにより行った。一回の測定につき、サンプルを三本ずつ作成して、その平均値を求めた。
尚、比較例２の試料を用いて同様の実験を行った。
結果を表１２に示す。
【００５３】
【表１２】
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【００５４】
表１２に示される結果の通り、本発明に係る新規微生物であるバークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、活性汚泥に組み込んだ場合であっても、油脂に対する優れた分解能を発揮できることが分かる。
【００５５】
（試験例１２；脂肪酸の分解）
バークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株による脂肪酸の分解能について実験を行った。尚、基質としては、ラード及びサラダ油の脂肪酸組成を分析し、その双方に最も多く含まれているオレイン酸の単一グリセリドであるトリオレインを使用した。
実験方法は、まず、試験例１で使用した培地と同様の培地に、トリオレイン５００ｐｐｍ、洗剤１０ｐｐｍを加えて滅菌した後に、速度１５０ｒｐｍで１６時間振盪して合成排水とした。
次に、ＬＢ培地で前培養した実施例の試料２０ｍｌ（乾燥重量０．０６ｇの菌体含有）を前記調製した合成排水で洗浄した後に、合成排水２００ｍｌに添加して、３０℃、１５０ｒｐｍで振盪培養した。
最後に、１時間、２時間、４時間経過後の合成排水中に含まれるｎ−ヘキサン抽出物の全量をメチル化して、内部標準物質としてHeptadecanoate acid を等量ずつ添加した後に、その一定量をガスクロマトグラフィーによりそれぞれ分析した。１時間経過後のピーク面積を基準として、内部標準物質で補正したオレイン酸のピーク面積を表１３に示す。
【００５６】
【表１３】
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【００５７】
表１３に示される結果の通り、本発明に係る新規微生物であるバークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、オレイン酸等の脂肪酸を短時間で分解できることが分かる。
【００５８】
【発明の効果】
本発明に係る新規微生物であるバークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、広い温度域における高い油脂分解能を有する。特に、約２０〜３５℃の温度域においては、常に高い分解能を有する。
また、分解される油脂は、液状の油脂に限定されず、固形状の油脂についても液状の油脂の場合と略同等の分解能を有する。
さらに、バークホルデリア  セパシア（Burkholderia cepacia）ＡＩＫ菌株は、油脂に加え、脂肪酸、タンパク質、炭水化物、糖類等の有機物も分解することができるために、排水中のＢＯＤ（生物化学的酸素要求量）、ＣＯＤ（化学的酸素要求量）を低減することが可能である。
【００５９】
本発明に係る排水の処理方法は、主として油脂を好適に分解することができる細菌を用いた排水の処理方法であるから、分解槽内の温度に影響されることなく、常に略一定した分解処理を行うことが可能できる。このために、嫌気性細菌の繁殖を防止して悪臭の発生を抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】試験例３の試験結果を示すグラフである。
【図２】試験例７の試験結果を示すグラフである。
【図３】或る分解槽における月毎の分解槽内の平均温度を示したグラフである。
【図４】或る分解槽における処理水中のｎ−ヘキサン抽出物の月毎の平均量を示したグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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