(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ６またはモノ−Ｌ−グルタミルクロリンｅ６のクロリン環に金原子のカチオンを配位結合またはキレート化して生成されたモノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ６またはモノ−Ｌ−グルタミルクロリンｅ６のＸ線遮断性金錯体、あるいはこれの薬理学的に許容できる塩。
【請求項２】
次の一般式（Ｉ）
0003692298.tif 000010
（式中、Ａｕは金原子を示し、ｍは１、２または３の整数を示し、ｎは１または２の整数を示す）で表されるモノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ６またはモノ−Ｌ−グルタミルクロリンｅ６と１価、２価または３価の金原子とのＸ線遮断性金錯体、あるいはこれの薬理学的に許容できる塩。
【請求項３】
次の一般式（Ｉａ）
0003692298.tif 000011
（式中、Ａｕは金原子を示し、ｎは１または２の整数を示す）で表されるモノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ６またはモノ−Ｌ−グルタミルクロリンｅ６と３価の金原子とのＸ線遮断性金錯体である請求項２に記載の金錯体、あるいはこれの薬理学的に許容できる塩。
【請求項４】
請求項３に記載の一般式（Ｉａ）で表される金錯体が次式（Ｉａ−１）
0003692298.tif 000012
で表されるモノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ６と３価の金原子とのＸ線遮断性金錯体である請求項３に記載の金錯体、あるいはこれの薬理学的に許容できる塩。
【請求項５】
請求項３に記載される一般式（Ｉａ）の金錯体の塩が請求項４に示された式（Ｉａ−１）のモノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ６の金錯体のナトリウム塩である、請求項４に記載の金錯体の薬理学的に許容できる塩。
【請求項６】
１／１０〜１／２０モル濃度の燐酸緩衝液（ｐＨ７．０〜８．０）中でモノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ６四ナトリウム塩を１〜２モル当量のテトラクロロ金酸（ＨＡｕＣｌ４）と０〜５０℃の温度で反応させ、反応の終了するまで反応を続け、その後に、反応液を希塩酸の添加によりｐＨ２．５〜３．５に調整して、モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ６の金錯体よりなる沈澱を析出させ、この沈澱を分取し、次いで該金錯体の精製の目的のために、分取した沈澱を１／１０〜１／２０モル濃度の燐酸緩衝液（ｐＨ７．０〜８．０）に再溶解し、得られた溶液を、固定相としてオクタデシル基結合型シリカゲルを用い且つ移動相として５〜１５％（容量％）のメタノールを含む水を用いる逆相カラムクロマトグラフィーにかけ、該カラムからの溶出液を分画して集め、さらにモノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ６金錯体のみを含有する画分を減圧濃縮し、得られた濃縮溶液を希塩酸でｐＨ２．５〜３．５に調整して暗緑色の沈澱を析出させ、その沈澱を分取し、得られた沈澱を４０〜５０％（容量％）のアセトンを含む水で洗浄し、さらに沈澱から遠心分離により脱水し、さらに沈澱を減圧下に乾燥することから成る、請求項４に示された式（Ｉａ−１）のモノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ６の金錯体の精製品の製造法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、腫瘍または固形癌あるいは動脈の動脈硬化症病変部のＸ線撮影またはＸ線照射による探知、診断および（または）治療に有用であるクロリンe6誘導体の新規なＸ線遮断性金属錯体に関する。更に詳しく言えば、本発明は、哺乳類宿主に生じた腫瘍または固形癌あるいは動脈の動脈硬化症病変部（例えば動脈内壁の粥状硬化層）をＸ線撮影またはＸ線照射によって探知、診断および（または）治療する目的で投与でき且つ腫瘍、固形癌または動脈硬化症病変部内に選択的に蓄積および分布できてこれらのＸ線画像を鮮明に写し出すことができる造影剤として作用できるばかりでなく、腫瘍、固形癌または動脈硬化症病変部の治療的処理にも有効であるモノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6の新規なＸ線遮断性金錯体および白金錯体に関する。
【０００２】
また、本発明は、前記の新規な、クロリンe6誘導体のＸ線遮断性金錯体または白金錯体を有効成分として含有する医薬組成物にも関する。さらにまた、本発明は、前記の新規な、クロリンe6誘導体のＸ線遮断性金錯体または白金錯体を使用するところの、哺乳類宿主に生じた腫瘍、固形癌または動脈硬化症病変部の探知、診断および（または）治療方法を包含する。
【０００３】
【従来の技術】
光化学療法または光動力学的療法とは、紫外線またはレーザー光の照射により励起される光感受性物質の投与により癌または腫瘍や動脈硬化症などの治療を行なう方法である。前投与された光感受性物質が集積して存在する癌または腫瘍組織や動脈硬化症病変部、あるいは光感受性物質を含む血液を体外循環させた血流に紫外線またはレーザー光の照射を施すことにより光感受性物質を励起して治療を行なう化学療法である。
【０００４】
光化学療法または光動力学的療法に用いる光感受性物質としては、ヘマトポルフィリン誘導体およびクロリン誘導体などが知られている（例えば、特開平2-138280号公報（日本特許第2520735号として特許）、その対応の欧州特許出願公開第350948A1号公報ならびに特公平6-88902号公報、特公平6-89000号公報、米国特許第4,656,186号、第4,675,338号、第4,693,885号および第4,997,639号明細書、参照）。また、ヘマトポルフィリン誘導体を用いる表在性早期癌に対する光化学療法の臨床試験の結果が報告されている（日本癌治療学会誌、29巻、1757〜1766頁、1994年)。
【０００５】
特に、上記の特公平6-88902号公報および特公平6-89000号公報ならびに米国特許第4,656,186号、第4,675,338号および第4,693,885号明細書には、適当なクロリン誘導体、特に次の一般式(A)
0003692298.tif 000002
（式中、ｎは１または２の整数を示す）で表されるモノ-L-アスパルチルクロリンe6およびモノ-L-グルタミルクロリンe6、あるいはそれらの塩を、光化学療法剤として腫瘍または固形癌の診断および治療に用いることが記載されている。また、そこには、投与されたモノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6あるいはその塩が腫瘍または固形癌の組織中に選択的に取込まれて蓄積されることが開示されてある。
【０００６】
さらに、モノ-L-アスパルチルクロリンe6またはその他の適当なクロリン誘導体またはその塩は、哺乳類宿主に投与されると、その体内に沈析したコレステロールの蓄積部に選択的に取込まれてこれを光動力学的診断法により探知するのに有効であることが米国特許第4,997,639号明細書に記載される。また、特開平4-330013号公報および米国特許第5,308,861号明細書には、モノ-L-アスパルチルクロリンe6または適当なクロリン誘導体またはその塩は、心筋梗塞または狭心症を誘発する冠動脈硬化症、四肢末梢動脈または腹部大動脈に生じる閉塞性動脈硬化症、一過性脳虚血症または脳梗塞を誘発する脳動脈硬化症などに伴う動脈内壁に生じる動脈硬化症病変部に選択的に集積できて光動力学的診断法で動脈病変部を診断することに有用であること、及び上記クロリン誘導体を蓄積、含有した病変部にレーザー照射すると動脈硬化症病変部の改善・治療効果が認められることが報告されている。また特開平4-330013号および米国特許5,308,861号明細書には、クロリン誘導体とヘマトポルフィリン誘導体を比較した試験の結果から、クロリン誘導体がヘマトポルフィリン誘導体よりも動脈硬化症病変部への蓄積能及び治療効果において優れていることが報告されている。
【０００７】
さらにまた、上記の特公平6-88902号および特公平6-89000号公報ならびに米国特許第4,675,338号および第4,693,885号明細書には、そこに記載されるクロリンe6誘導体がマグネシウム、鉄、亜鉛、ニッケル、コバルトまたは銅と共に金属錯体を形成できることが開示されてある。上記の日本特許第2520735号明細書(1996年7月31日発行)および欧州特許出願公開第350948A号明細書には、配位結合した金属として亜鉛、鉄、銅、マンガン、カリウム、インジュウムまたはその他金属を含有する金属ポルフィリン類が癌または腫瘍の光動力学的診断法または光動力学的治療法で有用であると開示されてある。
【０００８】
さらに、「薬学雑誌（YAKUGAKU ZASSHI)」84巻12号、1152-1157頁(1964年)には、葉緑素(クロロフィル)から誘導されたクロロフィリンがマグネシウム、コバルト、マンガン、バナジウム、銀または金と共に金属キレート化合物を形成できることが報告されている。
【０００９】
しかしながら、本発明者の知る限りでは、モノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6の金または白金に対する金属錯体は今日まで知られていない。
【００１０】
他方、ヘマトポルフィリン誘導体またはクロリン誘導体を光感受性物質として用いる光化学療法および光動力学的診断法では、多くの場合、その光感受性物質の蛍光を発生させるための励起用の光として、例えば300〜800nmの波長の紫外線ないしレーザー光が用いられてきた。
【００１１】
しかし、レーザー光線の体内組織へ透過できる深度は通常の光化学療法の条件下では５mm〜８mmであり、レーザーのピーク出力を高めた場合でもせいぜい10mm〜20mmである（「Biotherapy」７巻、673〜680頁、1993年）。体内深部にある癌または腫瘍組織を対象とした光化学療法では、癌または腫瘍への切開を行う手術や、局部への光感受性物質の注入またはレーザー照射装置の挿入などの、患者への危険な外科的侵襲が必要である。また、動脈硬化症を対象とした光化学療法の場合には、血管内にレーザー照射装置を挿入させるなどの特殊で困難な外科的侵襲が必要となる。しかしながら、体内の深い場所の組織または器官への外科的侵襲は、煩雑な手術であり、常に予想外の危険を伴うから、可能ならば回避したい医療手段である。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、診断または治療すべき腫瘍あるいは固形癌または動脈の動脈硬化症病変部が従来の光化学療法で用いたレーザー光線が到達できないほどの患者体内の深い場所にある場合にも、危険且つ煩雑な外科的侵襲を全く必要とせずに行い得る新しい光化学療法および光動力学的診断法を開発する意図を以って、種々研究を行った。
【００１３】
この研究に際して、既知の化合物であるモノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6、あるいはその水溶性アルカリ金属塩が患者に投与されると、患者の体内に在る腫瘍または固形癌の組織内に、あるいは動脈硬化症の病変部に選択的に蓄積でき且つある時間後に速やかに排泄されうる特性を有することに着目した。また、従来の光化学療法学で光感受性物質の励起光として用いられる紫外線またはレーザー光線と違って、Ｘ線はその波長および強度を適当に選べば、患者の体内のどの深さにも到達でき且つ患者生体を貫通できる特性をもつことにも着目した。
【００１４】
これらの着想に基づいて、モノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6にＸ線を遮断できる性質およびＸ線により励起できる性質を付加できた新規なクロリンe6誘導体を創製するための広範な研究を行った。
【００１５】
種々研究の結果、本発明者らは、モノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6分子のクロリン環において動物生体を貫通し易い波長のＸ線に対するＸ線遮断性が優れた低毒性の金原子を配位結合またはキレート化して生成された、モノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6の新しいＸ線遮断性金錯体、またはその塩を合成して収得することに成功した。
【００１６】
さらに、このように収得したモノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6の新しいＸ線遮断性金錯体またはそのナトリウム塩を腹部内に固形腹水癌を有した宿主（ホスト）、あるいは動脈硬化症病変部を有した宿主に投与した場合には、前記のＸ線遮断性金錯体が投与後１〜３時間に腫瘍組織または動脈硬化症病変部内に選択的に蓄積できること、及び0.153Åの波長のＸ線を含むＸ線ビームの照射によりコンピューター断層Ｘ線撮影の技法により腫瘍組織または動脈硬化症病変部の鮮明なＸ線画像を造影できること、及び該Ｘ線ビームの照射時間を加減すると、前記の蓄積したＸ線遮断性金錯体が励起されて且つ腹水癌細胞または動脈硬化病変部に蓄積したコレステロールに対して殺細胞作用あるいは破壊作用を及ぼすことを本発明者らは知見した。そして、上記のモノ-L-アスパルチル（またはモノ-L-グルタミル）クロリンe6の新しい金錯体またはその塩は、投与されると、一般に、哺乳類宿主（ヒト、およびウマ、ウシ、ヒツジのような家畜動物、およびイヌ、ネコのようなペット動物を含めて）に生じた腫瘍、固形癌または動脈硬化症病変部内に選択的に蓄積できて且つ0.153Åの波長のＸ線を含むＸ線ビームの照射によるＸ線撮影法で鮮明なＸ線画像を造影できる作用を有し、またさらに腫瘍または固形癌の治療剤として及び動脈硬化症病変部の治療剤として作用できることを知見した。これらの知見によって、本発明は完成された。
【００１７】
従って、本発明の最も広い概念において、第１の本発明によると、新規な化合物として、モノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6のクロリン環に金原子のカチオンを配位結合またはキレート化して生成されたモノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6のＸ線遮断性金錯体、あるいはこれの薬理学的に許容できる塩が提供される。
【００１８】
第１の本発明によるＸ線遮断性金錯体は、一般的には、次の一般式（I）
0003692298.tif 000003
（式中、Auは金原子を示し、ｍは１、２または３の整数を示し、ｎは１または２の整数を示す）で表されるモノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6と１価、２価または３価の金原子とのＸ線遮断性金錯体と表記できるものである。一般式（I）で表される金錯体における金原子は１価、２価または３価のカチオンであり得る。
【００１９】
上記の一般式（I）で表される金錯体のうち、ｎ＝１の場合の金錯体は、上記の式に示されるクロリン環の20位の側鎖基-CH2COOHにL-アスパラギン酸がアミド結合している場合のモノ-L-アスパルチルクロリンe6の金錯体である。また、上記の一般式(I)で表される金錯体のうち、ｎ＝２の場合の金錯体は、上記のL-アスパラギン酸の代わりにL-グルタミン酸がアミド結合している場合のモノ-L-グルタミルクロリンe6の金錯体である。
【００２０】
本発明による一般式（I）クロリンe6誘導体金錯体は、その遊離のカルボキシル基において塩基と結合して塩を生成してもよい。塩基と反応して形成される塩としては、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムまたはアンモニウム塩があり、またトリエチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、モルホリンおよびピペリジンとの塩がある。さらに、一般式（I）のクロリンe6誘導体金錯体は、その塩基性の基で無機酸または有機酸と結合して酸付加塩を生成してもよい。酸と反応して形成される酸付加塩としては、例えば塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、酢酸塩および蟻酸塩などがある。
【００２１】
第１の本発明の一つの好ましい実施態様においては、上記の一般式（I）で表されるクロリンe6誘導体の金錯体は、次の一般式（Ia）
0003692298.tif 000004
（式中、Auは金原子を示し、ｎは１または２の整数を示す）で表される、モノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6と３価の金原子とのＸ線遮断性金錯体である。
【００２２】
一般式（Ia）の金錯体の特に好ましい例は、次式（Ia-1）
0003692298.tif 000005
で表されるモノ-L-アスパルチルクロリンe6と３価の金原子とのＸ線遮断性金錯体である。この式（Ia-1）で表されるモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体は、後記の実施例１では、モノ-L-アスパルチルクロリンe6四ナトリウム塩を１／15Ｍの燐酸緩衝液（pH7.5）中で１〜２モル当量のテトラクロロ金酸（HAuCl4）と反応させ且つ適当な方法で精製することによって、明確な融点を示さないが270℃またはその付近で分解して且つ分子式(経験式):C38H38AuN5O9で表される暗緑色の無晶粉末状の物質として得られた。なお、式（Ia-1）のモノ-L-アスパルチルクロリンe6の金錯体の３ナトリウム塩も得られた。
【００２３】
なお、第１の本発明の好ましい実施態様による一般式（I）のクロリンe6誘導体の金錯体の製造に原料として用いられるモノ-L-アスパルチルクロリンe6およびモノ-L-グルタミルクロリンe6は、例えば特公平6-88902号公報または米国特許第4,675,338号の実施例19および実施例21にそれぞれ記載された製法で得られる化合物である。
【００２４】
第１の本発明の好ましい実施態様による一般式（I）のクロリンe6誘導体の金錯体を製造するために、一般的には、モノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6あるいはそれらの四ナトリウム塩と、適当なモル当量で用いた１価、２価または３価の金原子の塩化物またはフッ化物、好ましくはテトラクロロ金酸（HAuCl4）とを適当な溶剤、好ましくはpH7.0〜8.0の燐酸緩衝液に溶解して両方の反応剤を０〜50℃の温度で反応せしめ、さらに反応の終了後に塩酸で酸性にして、反応液から金錯体生成物を沈澱させ、さらに沈澱した金錯体生成物を逆相カラムクロマトグラフィーにより精製することから成る方法が実施できる。
【００２５】
前記の式（Ia-1）で表されるモノ-L-アスパルチルクロリンe6の金錯体を製造し且つ純品として収得するためには、下記の手順から成る方法、すなわち１／10〜１／20モル濃度の燐酸緩衝液（pH7.0〜8.0）中でモノ-L-アスパルチルクロリンe6四ナトリウム塩を１〜２モル当量のテトラクロロ金酸（HAuCl4）と０〜50℃の温度で反応が終了するまで反応を続け、その後に、反応液を希塩酸の添加によりpH2.5〜3.5に調整して、モノ-L-アスパルチルクロリンe6の金錯体よりなる沈澱を析出させ、この沈澱を分取し、次いで該金錯体の精製の目的のために、分取した沈澱を１／10〜１／20モル濃度の燐酸緩衝液（pH7.0〜8.0）に再溶解し、得られた溶液を、固定相としてオクタデシル基結合型シリカゲル（ODS）を用い且つ移動相として５〜15％（容量％）のメタノールを含む水を用いる逆相カラムクロマトグラフィーにかけ、該カラムからの溶出液を分画して集め、さらにモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体のみを含有する画分を減圧濃縮し、得られた濃縮溶液を希塩酸でpH2.5〜3.5に調整して暗緑色の沈澱を析出させ、その沈澱を分取し、得られた沈澱を40〜50％（容量％）のアセトンを含む水で洗浄し、さらに沈澱から遠心分離により脱水し、さらに沈澱を減圧下に乾燥することから成る方法を用いるのが便利である。
【００２６】
モノ-L-アスパルチルクロリンe6四ナトリウム塩は、それの経口投与時の急性毒性をCD-1マウス（雄）で試験したところ、その50％致死量(LD50)は164mg／kgであることが認められており、低毒性の物質である（特開平9-71531号公報参照）。前記の式（Ia-1）のモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体のナトリウム塩の経口投与時の急性毒性は、モノ-L-アスパルチルクロリンe6四ナトリウム塩とほぼ同等であり、金と錯体化することによる毒性増加は認められない。
【００２７】
金原子は、Ｘ線遮断性を有するとともに、特定の波長（0.153Å）のＸ線を吸収して励起状態となり、基底状態に遷移する際に光子を放出するかわりに、原子内の他の電子にエネルギーを与えて電子を放出する性質（いわゆるオージェ効果）を有している。
【００２８】
本発明のクロリン誘導体金錯体中の金原子も同様の性質を有するため、本発明の金錯体はＸ線遮断性を有してＸ線による造影が可能である。また、0.153ÅのＸ線を吸収して励起状態となり、基底状態に遷移する際に放出される電子の作用によって、該金錯体は、これが特異的に蓄積している腫瘍または癌細胞を傷害させたり、あるいは動脈硬化病変部のコレステロールの分解を促進できる。
【００２９】
すなわち、本発明では、モノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6の有する腫瘍や動脈硬化層への選択的な蓄積性に加えて、金原子でＸ線遮断性とＸ線による電子放出作用を付与することにより、Ｘ線による造影診断可能性と腫瘍細胞の傷害作用および動脈硬化層の破壊作用を本発明の金錯体が獲取したのである。
【００３０】
第２の本発明においては、モノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6のクロリン環に金原子のカチオンを配位結合またはキレート結合して生成されたモノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6のＸ線遮断性金錯体、あるいはこれの薬理学的に許容できる塩を有効成分として含有し、また有効成分に組合せて、製薬学的に許容できる固体または液体状の担体を含有することを特徴とする、医薬組成物が提供される。
【００３１】
第２の本発明による医薬組成物に有効成分とし含有される上記のＸ線遮断性金錯体は、一般的には、次式(I)
0003692298.tif 000006
（式中、Auは金原子を示し、ｍは１、２または３の整数を示し、ｎは１または２の整数を示す）で表されるモノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6と１価、２価または３価の金原子とのＸ線遮断性金錯体であることができ、また好ましくは次式（Ia）
0003692298.tif 000007
（式中、Auは金原子を示し、ｎは１または２の整数を示す）で表される、モノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6と３価の金原子とのＸ線遮断性金錯体であることができる。
【００３２】
第２の本発明による医薬組成物は、腫瘍または固形癌をもつ哺乳類宿主の腫瘍または固形癌組織をＸ線撮影で探知および診断するため投与でき、また腫瘍または固形癌をもつ哺乳類宿主の腫瘍または固形癌組織をＸ線撮影で探知し、さらに探知された腫瘍または癌をＸ線照射により処置または治療するため投与できる。
【００３３】
また、第２の本発明による医薬組成物は、動脈硬化症をもつ哺乳類宿主の動脈硬化症病変部または動脈のコレステロール蓄積部をＸ線撮影で探知および診断するため投与でき、また動脈硬化症病変部またはコレステロール蓄積部をＸ線撮影で探知し、さらに探知された動脈硬化症病変部またはコレステロール蓄積部をＸ線照射により処置するため投与できる。
【００３４】
具体的には、第２の本発明による医薬組成物は、宿主体内の深い場所にある腫瘍、例えば脳腫瘍、肺癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、子宮癌、前立腺癌、腎臓癌、食道癌等ならびに体表上のおよび体表付近の腫瘍または癌の探知、診断および治療に有効である。また、動脈硬化症、例えば心筋梗塞または狭心症を誘発する冠動脈硬化症、四肢末梢動脈または腹部大動脈に生じる閉塞性動脈硬化症、および一過性脳虚血症を誘発する脳動脈硬化症等の動脈硬化症病変部の探知、診断および治療に有効である。
【００３５】
第２の本発明の組成物の有効成分の化合物は、経口的にあるいは静脈内または筋肉内注射により投与でき、またその他の非経口的な経路で投与することができる。また経皮的にも投与できる。その他、体内の深部の腫瘍組織へ直接に局所注入することができ、さらに特殊なカテーテルを用いて動脈硬化症の病変部の近傍に局所投与することも可能である。第２の本発明の組成物は、有効成分の化合物をナトリウム塩の形で含み、しかも凍結乾燥した無菌のかつ発熱物質を含まない形として製剤化することができる。
【００３６】
経口投与用の場合の第２の本発明の医薬組成物では、有効成分の化合物は固体または液体状の担体と混和することができ、そして錠剤、口腔剤、トローチ剤、カプセル剤、懸濁剤、シロップ剤等の形で製剤化することができる。
【００３７】
第２の本発明の組成物を注射用の製剤で調製する場合には、有効成分の化合物を含む無菌の水溶液または分散液あるいは無菌の凍結乾燥剤の形に製剤化できる。液体担体としては例えば水、食塩水、エタノール、含水エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、植物油が好ましい。また多くの場合、等張剤、例えば糖または塩化ナトリウムを配合するのが好ましい。
【００３８】
本発明によるクロリンe6誘導体の金錯体の投与量は病変部の探知、診断あるいは治療すべき対象や目的によって異なるが、一般的には成人に対し一回当たり0.01〜50mg/kg体重、好ましくは0.1〜10mg/kg体重の投与量で投与できる。
【００３９】
第３の本発明においては、腫瘍または固形癌の組織をＸ線照射により探知、診断および（または）治療するための医薬組成物の製造に用いられる前記の一般式（I）のクロリンe6誘導体のＸ線遮断性金錯体またはその塩、あるいは一般式（Ia）のクロリンe6誘導体のＸ線遮断性金錯体またはその塩の使用が提供される。
【００４０】
第４の本発明においては、動脈硬化症病変部または動脈のコレステロール蓄積部をＸ線照射により探知、診断および（または）治療するための医薬組成物の製造に用いられる前記の一般式（I）のクロリンe6誘導体のＸ線遮断性金錯体またはその塩、あるいは一般式（Ia）のクロリンe6誘導体のＸ線遮断性金錯体またはその塩の使用が提供される。
【００４１】
さらに、第５の本発明においては、第１の本発明による前記の一般式(I)のクロリンe6誘導体の金錯体またはそのナトリウム塩、あるいは一般式（Ia）のクロリンe6誘導体の金錯体またはそのナトリウム塩、特に前記の式（Ia-1）のモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体またはそのナトリウム塩を、該金錯体が腫瘍または固形癌組織中に蓄積するのに有効な金錯体の量で、腫瘍または固形癌をもつ哺乳類宿主に投与し、さらに宿主の体外から、0.153Åの波長のＸ線を含むＸ線ビームを照射して、該金錯体を含有した腫瘍または固形癌の組織のＸ線影像をＸ線コンピューター断層撮影の技法によりＸ線フィルム上に撮影し且つ診断することから成る、腫瘍または固形癌組織の探知および診断方法が提供される。
【００４２】
さらにまた、第６の本発明においては、第１の本発明による一般式(I)のクロリンe6誘導体の金錯体またはそのナトリウム塩、あるいは一般式（Ia）のクロリンe6誘導体の金錯体またはそのナトリウム塩、特に前記の式（Ia-1）のモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体またはそのナトリウム塩を、該金錯体が腫瘍または固形癌組織中に蓄積するのに有効な金錯体の量で、腫瘍または固形癌をもつ哺乳類宿主に投与し、さらに宿主の体外から、0.153Åの波長のＸ線を含むＸ線ビームを照射し、該金錯体を含有した腫瘍または固形癌組織のＸ線影像をＸ線コンピューター断層撮影の技法によりＸ線フィルム上に撮影して腫瘍または固形癌の場所を探知し、さらに次いで、腫瘍または固形癌の場所を0.153Åの波長のＸ線を含むＸ線ビームで照射し、腫瘍または固形癌の細胞の少くとも一部を、照射されたＸ線で励起された金錯体の作用により、ならびに金原子から放出された電子により殺滅することから成る、腫瘍または固形癌の探知および治療方法が提供される。
【００４３】
上記の第５の本発明の方法ならびに第６の本発明の方法は、哺乳類宿主の脳腫瘍、肺癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、子宮癌、前立腺癌、腎臓癌、食道癌をターゲットにして適用できる。
【００４４】
さらに第７の本発明においては、動脈硬化症をもつ哺乳類宿主に対して、前記の一般式(I)のクロリンe6誘導体の金錯体またはそのナトリウム塩、あるいは一般式（Ia）のクロリンe6誘導体の金錯体またはそのナトリウム塩、特に前記の式（Ia-1）のモノ-L-アスパルチルクロリンe6の金錯体またはそのナトリウム塩を、該金錯体が動脈硬化症病変部中に蓄積するのに有効な金錯体の量で投与し、さらに宿主の体外から、0.153Åの波長のＸ線を含むＸ線ビームを照射し、該金錯体を含有した動脈硬化症病変部のＸ線影像をＸ線コンピューター断層撮影の技法によりＸ線フィルム上に撮影して動脈硬化症病変部の場所を探知し、さらに次いで、動脈硬化症病変部の場所を0.153Åの波長のＸ線を含むＸ線ビームで照射し、該病変部のコレステロール蓄積部分を、照射されたＸ線で励起された金錯体の作用により、ならびに金原子から放出された電子により破壊することから成る、動脈硬化症病変部の探知および治療方法が提供される。
【００４５】
この第７の本発明の方法は、心筋梗塞または狭心症を誘発する冠動脈硬化症、四肢末梢または腹部大動脈に生じる閉塞性動脈硬化症および一過性脳虚血症を誘発する脳動脈硬化症病変部をターゲットとして適用できる。なお、0.153Åの波長を含むＸ線ビームは既知のＸ線発生装置を利用して得ることができる。
【００４６】
さらに、本発明者らは別段の研究を進めた。それらの研究の結果、金と同様に、白金もモノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6のクロリン環に配位結合またはキレート結合でき、そのクロリンe6誘導体のＸ線遮断性白金錯体を形成できることが見出された。
【００４７】
従って、第８の本発明においては、新規な化合物として、モノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6のクロリン環に白金原子のカチオンを配位結合またはキレート化して生成されたモノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6のＸ線遮断性白金錯体、あるいはこれの薬理学的に許容できる塩が提供される。
【００４８】
第８の本発明によるＸ線遮断性白金錯体は、一般的には、次の一般式（II）
0003692298.tif 000008
（式中、Ptは白金原子を示し、ｚは２または４の整数を示し、ｎは１または２の整数を示す）で表されるモノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6と２価または４価の白金原子とのＸ線遮断性白金錯体と表記できる。
【００４９】
第８の本発明の好ましい実施態様においては、上記の一般式（II）で表されるクロリンe6誘導体の白金錯体は次の一般式（IIa）
0003692298.tif 000009
（式中、ｎは１または２の整数である）で表されるモノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6と４価の白金原子とのＸ線遮断性白金錯体であることができる。
【００５０】
上記の一般式（IIa）のモノ-L-アスパルチルクロリンe6またはモノ-L-グルタミルクロリンe6の白金錯体は２ナトリウム塩を形成できる。
【００５１】
白金原子は、Ｘ線遮断性を有するとともに、特定の波長（0.158Å）のＸ線を吸収して励起状態となり、基底状態に遷移する際に光子を放出するかわりに、原子内の他の電子にエネルギーを与えて電子を放出する性質（いわゆるオージェ効果）を有している。
【００５２】
本発明によるクロリン誘導体白金錯体中の白金原子も同様の性質を有するため、本発明の白金錯体はＸ線遮断性を有してＸ線による造影が可能である。また、0.158ÅのＸ線を吸収して励起状態となり、基底状態に遷移する際に放出される電子の作用によって、該白金錯体は、これが特異的に蓄積している腫瘍または癌細胞を傷害させたり、あるいは動脈硬化病変部のコレステロールの分解を促進できる。
【００５３】
従って、第８の本発明によるクロリンe6誘導体のＸ線遮断性白金錯体またはその塩は、第１の本発明によるクロリンe6誘導体のＸ線遮断性金錯体またその塩と同様にして、腫瘍または固形癌、あるいは動脈硬化症病変部の探知、診断および治療に利用できる。
【００５４】
前記の一般式（II）のクロリンe6誘導体白金錯体は、モノ-L-アスパルチル（またはモノ-L-グルタミル）クロリンe6四ナトリウム塩に２〜５モル当量で用いた２価または４価の白金の塩化物またはフッ化物、好ましくはテトラクロロ白金酸またはヘキサクロロ白金酸を燐酸緩衝液中で０〜50℃の温度で反応することによって生成できる。
【００５５】
【発明の実施の形態】
本発明を、以下の実施例および試験例について具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
【００５６】
実施例１  モノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体の調製
特公平6-88902号公報（または米国特許第4,675,338号）の実施例に記載された方法で合成されて且つ添付図面の第1図に示される赤外線吸収スペクトル図を与えたモノ-L-アスパルチルクロリンe6四ナトリウム塩の５ｇを、1/15Mの燐酸緩衝液(pH7.5)の900mlに溶解した。得られた溶液に対して、水100mlにテトラクロロ金酸(HAuCl4)４水和物の３ｇを溶解した水溶液を添加した。テトラクロロ金酸の添加量は、モノ-L-アスパルチルクロリンe6四ナトリウム塩の１モル当り約1.1モル当量であった。
【００５７】
得られた反応混合物を室温で撹拌して反応を行った。反応液から経時的に取った試料を下記のシリカゲル薄層クロマトグラフィー(TLC)で分析して、それによりモノ-L-アスパルチルクロリンe6のスポット(Rf値: 0.71)の有無を調べた。このTLCでモノ-L-アスパルチルクロリンe6のスポットを反応液が示さなくなった時点で反応を停止した。反応終了後の暗緑色の反応液を3N塩酸でpH2.5〜3.5に調整すると、暗緑色の沈殿が析出した。遠心分離によりモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体よりなる沈殿を採取した。
【００５８】
精製のために、上記の沈殿を1/15Mの燐酸緩衝液(pH7.5)の少量に溶解した。得られた溶液を、固定相としてオクタデシル基結合型シリカゲル(ODS)〔500g、コスモシル75C18(ナカライテスク社製品)〕を用い且つ移動相として10%メタノールを含む水を用いる逆相カラムクロマトグラフィーにかけた。カラムからの溶出液を、２ml−分画で集めた。モノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体のみを含有すると認められた画分を、合併して減圧下に濃縮すると、メタノールが除去された。ここで得られた濃縮液を3N塩酸でpH2.5〜3.5に調整すると、暗緑色の沈殿が析出した。析出した沈殿を濾取し、さらに50%アセトン水で洗浄した。洗浄された沈殿を遠心分離にかけて脱水した。得られた暗緑色固体を減圧乾燥して、モノ-L-アスパルチルクロリンe6の金錯体を暗緑色の無晶質粉末として得た（収量：約450mg）。この暗緑色粉末状物質は明確な融点を示さずに270℃で分解した。
【００５９】
薄層プレートとしてベーカーSi-C18（J.T.Baker社製品）を用い且つ展開溶媒としてメタノール-1/15M燐酸緩衝液(pH7.0)(＝4:1)を用いる薄層クロマトグラフィー(TLC)にかけると、上記の暗緑色の無晶質粉末として得たモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体は、0.77のRf値を与えた。
【００６０】
更に、得られた上記の金錯体物質を、紫外線吸収スペクトル、赤外線吸収スペクトル、マススペクトル、1H-NMRスペクトル、元素分析および原子吸光分析について調べた。測定されたマススペクトル図を添付図面の第３図に示す。各種の測定の結果を下記に示す。
【００６１】
UVスペクトル  λmax：621nm(O.D.=0.109)，384nm (O.D.=0.331),（但し測定濃度は４μg/mlである）。
【００６２】
マススペクトル分析  m/z：906
元素分析
理論値(C38H38AuN5O9として)：
C 50.4%，H 4.2%，N 7.7%，灰分 21.8%
実測値：   C 49.6%，H 4.6%，N 7.5%，灰分 20.7%
原子吸光による金の分析：
理論値(C38H38AuN5O9として)：21.8%、実測値：17.4%
1H-NMRスペクトル：モノ-L-アスパルチルクロリンe6は、1H-NMRスペクトルにおいて特徴的に−1.8ppm付近でクロリン環NHに由来するプロトンシグナルを示すが、本金錯体物質ではそのプロトンシグナルが消失していた。このことから、金錯体が形成していることが確認された。
【００６３】
さらに、マススペクトル分析でm/zの測定値が906 (M+H)+と理論値であること及び元素分析の測定値が上記の値であることから見ると、モノ-L-アスパルチルクロリンe6分子から３個の水素原子が除かれ且つ１個の金原子が導入された分子組成を、本実施例で得たモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体が有すると認められた。従って、本実施例で得られた暗緑色粉末状物質のモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体は、分子式（経験式）：C38H38AuN5O9を有すると認められ、また前記の式(Ia-1)の構造式で表されると認められる。
【００６４】
実施例２  モノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体のナトリウム塩の調製
実施例１で得られたモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体の100mgを脱イオン水に懸濁した。得られた水性懸濁液に1N-NaOHの計算量を添加して撹拌した。溶解した後に、得られた反応液を濃縮乾固した。これによって、暗緑色の無晶質粉末としてモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体のナトリウム塩を得た（収量約110mg）。
【００６５】
ここで得た上記の金錯体ナトリウム塩の赤外線吸収スペクトルおよびマススペクトルを測定した。測定した赤外線吸収スペクトル図を添付図面の第２図に示し、またその測定したマススペクトル図を添付図面の第４図に示す。
【００６６】
第４図のマススペクトル図から、本実施例で得られた上記の金錯体ナトリウム塩には、マススペクトル分析で972のm/z値が認められる。
【００６７】
また、添付図面の第２図を第１図と比較すると、第２図に示されたモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体ナトリウム塩のIRスペクトルのパターンが第１図に示されたモノ-L-アスパルチルクロリンe6四ナトリウム塩のIRスペクトルのパターンと類似していることが認められ、従ってクロリン骨格の構造が本実施例２で得た金錯体ナトリウム塩で保持されていると確認された。
【００６８】
試験例１
Ｘ線撮影による腫瘍組織の探知と治療
体重16〜20ｇの雄性Balb/cマウス（１群５匹）の腹部にMKSA細胞を接種して固形腹水癌を腹部に形成させた。その担癌マウスの尾静脈から0.01〜0.04mgの投与量でモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体のナトリウム塩（前記の実施例２の生成物）を生理食塩水溶液の形で投与した。この投与後の１時間から３時間目に、ネンブタールでマウスを麻酔した。波長0.153ÅのＸ線を含むＸ線ビームをマウス体外からマウス腹部に適当な時間照射した。
【００６９】
マウス腹部を貫通したＸ線をＸ線フィルムに感光させてＸ線画像を作成した。固形癌の鮮明に造影されたＸ線画像が容易に得られて、固形癌のＸ線画像から固形癌を容易に探知し、また固形癌の組織を診断できた。
【００７０】
Ｘ線照射から１週間後に、マウスを解剖、検査したが、固形癌の寸法はＸ線撮影時のそれに比べて有意に縮小していたことが認められた。これによって、マウスに投与されたクロリンe6誘導体金錯体がＸ線照射時に腹水癌細胞に対して殺細胞作用を及ぼしたことが見出された。
【００７１】
試験例2
X線撮影による動脈硬化症病変部の探知と治療
体重約4ｋｇの高コレステロール血症ウサギにモノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ６金錯体のナトリウム塩（実施例2の生成物）を、8mgの投与量で耳静脈より投与した。投与後の1時間目に、前記ウサギをネンブタールで麻酔した。金のK殻電子吸収に合わせた波長0.153ÅのX線を含むX線ビームで前記ウサギ全身を適当な時間照射した。前記ウサギを貫通したX線をX線フィルムに感光させて血管のX線画像を作成した。動脈の動脈硬化病変部（血管のアテローム粥状硬化層）の鮮明なX線画像が得られて、動脈硬化症病変部が容易に探知できた。
【００７２】
X線照射から1週間後に、前記ウサギを解剖して検査したが、動脈硬化症病変部の寸法は、X線照射時に比べて明らかに縮小したことが認められた。
【００７３】
試験例３
人肺ガン由来のPC-10細胞の移植により生じた固形癌を背部に有したヌードマウスを、試験例１で用いた腹水癌マウスの代りに用いて試験例１の方法を反復した。固形癌の鮮明なＸ線画像をＸ線フィルム上に作成できた。
【００７４】
[産業上の利用可能性]
以上説明したように、本発明によると、クロリンe6誘導体の新規なＸ線遮断性金錯体が得られた。各種の腫瘍組織又は体内の動脈硬化症病変部に該金錯体は特異的に蓄積でき、Ｘ線照射により腫瘍または動脈硬化症病変部の鮮やかなＸ線画像を提供できる。
【００７５】
本発明によって得られたクロリンe6誘導体の新規なＸ線遮断性金錯体またはその塩は、腫瘍、固形癌または動脈硬化症病変部をＸ線撮影またはＸ線照射により探知、診断および治療するのに有用である。また、クロリンe6誘導体のＸ線遮断性白金錯体も生成できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】第１図は、モノ-L-アスパルチルクロリンe6四ナトリウム塩の赤外線吸収スペクトル（KBr法で測定）の図である。
【図２】第２図は、実施例２で得られたモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体のナトリウム塩の赤外線吸収スペクトル（KBr法で測定）の図である。
【図３】第３図は、実施例１で得られたモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体のマススペクトルを示す。
【図４】第４図は、実施例２で得られたモノ-L-アスパルチルクロリンe6金錯体のナトリウム塩のマススペクトルを示す。
【図１】
0003692298.tif 000013
【図２】
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【図３】
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【図４】
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