(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストを投与することによって神経障害の治療を受ける患者の反応をモニターする方法であって、
(a)ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストによる初回治療の前に患者から採取した第一の生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーの量を決定する段階；
(b)ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストによる初回治療の後に患者から採取した少なくとも一つの第二の生体試料中のバイオマーカーの量を決定する段階；および
(c)第二の生体試料中のバイオマーカーの量を第一の生体試料中のバイオマーカーの量と比較する段階を含み；
第一の生体試料中のバイオマーカーの量と比較して、第二の生体試料中のバイオマーカーの量に検出可能な低下が認められる場合、患者がＮＭＤＡ受容体アンタゴニストによる治療に対して正の反応することが示される方法。
【請求項２】
神経障害が、脳虚血、脳梗塞、頭部外傷、挫傷、脊髄損傷、クモ膜下出血、脳出血、動脈瘤出血、心筋梗塞、低酸素症、無酸素症、外科手術、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、HIV関連神経変性、小脳変性、発作、および運動失調からなる群より選択される状態もしくは疾患であるか、または前述の群より選択される状態、疾患、もしくは事象によって引き起こされる、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
神経障害が、脳虚血、脳梗塞、頭部外傷、または脊髄損傷である、請求項2に記載の方法。
【請求項４】
バイオマーカーが、S-100b、ニューロン特異的エノラーゼ(NSE)、神経膠線維酸性タンパク質(GFAP)、タウ(tau)タンパク質、ハプトグロビン、脳クレアチンキナーゼ、イソプロスタン、ミエリン塩基性タンパク質(MBP)、またはトロンボモジュリンからなる群より選択される、請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
バイオマーカーがS-100bまたはNSEである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
生体試料中のバイオマーカーの量が、ELISA、RIA、磁気共鳴分光法、HPLC、または質量分析法によって決定される、請求項1から請求項５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストを投与することによって神経障害の治療を受ける患者の反応をモニターする方法であって、
(a)ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストによる初回治療の前に患者から採取した第一の生体試料中のＳ１００ｂの量を決定する段階；
(b)ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストによる初回治療の後に患者から採取した少なくとも一つの第二の生体試料中のＳ１００ｂの量を決定する段階；および
(c)第二の生体試料中のＳ１００ｂの量を第一の生体試料中のＳ１００ｂの量と比較する段階を含み；
第一の生体試料中のＳ１００ｂの量と比較して、第二の生体試料中のＳ１００ｂの量に検出可能な低下が認められる場合、患者がＮＭＤＡ受容体アンタゴニストによる治療に対して正の反応することが示される方法。
【請求項８】
ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストを投与することによって神経障害に罹患した患者を治療する改良された方法であって、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストの有効量が患者に投与されているか否かを決定するために、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストによる治療の間に1回または複数の時点で患者から採取した生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーのレベルをモニターする段階を含む方法。
【請求項９】
患者がＮＭＤＡ受容体アンタゴニストによる治療から恩典を得るか否かを特定する方法であって、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストによる初回治療の前に患者から採取した生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーの量が、所定の最小閾値を超えているか否かを決定する段階を含み、患者から採取した生体試料中のバイオマーカーの量が最小閾値を超えていれば、該患者が神経障害に罹患した患者であると一次的に特定される方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、中枢神経系、特に、神経障害を治療または予防する方法に関する。より具体的には、本発明は、神経障害に罹患した患者、または神経障害に罹患するリスクを有する患者の神経保護治療の有効性をモニターおよび評価する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
頭部外傷、脳卒中、またはその他の神経障害を示す患者における神経障害の実際の程度は、病初では不明であることが多い。神経障害の程度は軽度から重度にまで及び、如何なる個々の患者の予後も同様に良好から不良までの範囲に及びうる。グラスゴー昏睡尺度のような神経障害を決定する従来の方法は主観的測定であり、神経障害の真の程度の評価能は限られていると考えられる。
【０００３】
神経障害のより正確な評価を得るために、関心対象は生物マーカーへと向けられた。特に興味深い生物マーカーはS-100bである。「S-100」は分子量10,500の、αおよびβと呼ばれる2つのサブユニットからなる二量体のカルシウム結合タンパク質の混合物を意味する。非特許文献1を参照のこと。3つのイソ型が知られている。S-100a(αβ)は、グリア細胞およびメラノサイトに認められる。S-100b(ββ)は、中枢神経系および末梢神経系のグリア細胞およびシュワン細胞に高濃度で存在するほか、ランゲルハンス細胞および下垂体前葉細胞に存在する。脳においてS-100タンパク質の5％を占めるS-100a0(αα)は、神経系の外、すなわち遅筋、心臓、および腎臓に存在する。S-100タンパク質の生物機能はまだ理解されていない。
【０００４】
末梢血にS-100タンパク質が現れることは、神経障害と血液脳関門の透過性の増加の双方を示すように思われ、一般的に脳障害のマーカーとして考えられている(例えば、下記の特許文献1および非特許文献2〜14を参照のこと)。
【０００５】
脳脊髄液(CSF)または血清中のS-100bレベルの上昇は、脳卒中、クモ膜下出血、様々な神経疾患、軽度または重度の頭部外傷後の患者において、および循環停止または心肺バイパス手術後の神経合併症を示す心手術患者において認められる。
【０００６】
脳損傷のもう一つのおそらく有用なマーカーは、ニューロン特異的エノラーゼ(NSE)であり、これはニューロンおよび神経内分泌細胞の細胞質を起源とする二量体の糖分解酵素である。脳損傷のもう一つのおそらく有用なマーカーは、タウ(tau)タンパク質であり、これは神経軸索において微小管と相互作用する細胞内タンパク質である。
【０００７】
患者からの血液試料を分析して、脳卒中について選択された少なくとも4つのマーカー、すなわちミエリン塩基性タンパク質(MBP)、S-100タンパク質、NSE、およびトロンボモジュリンのような脳内皮膜タンパク質のレベルを決定することを含む、患者が有する脳卒中の型を区別する方法が、2001年5月22日にジャコウスキー(Jackowski)に付与された特許(特許文献2)に記載されている。
【０００８】
【特許文献１】
米国特許第4,654,313号明細書
【特許文献２】
米国特許第6,235,489 B1号明細書
【非特許文献１】
ミスラー(Missler)、「Stroke」、1997年、第28巻、第10号、p1956-1960
【非特許文献２】
アウレル(Aurell)ら、「Stroke」、1991年、 第22巻、p.1254〜1258
【非特許文献３】
キム(Kim)ら、「Stroke」、1996年、第27巻、第9号、p.1553〜1557
【非特許文献４】
ウェスタビー(Westaby)ら、「Ann. Thorac. Surg.」、1996年、第61巻、p.88〜92
【非特許文献５】
ファスベンダー(Fassbender)ら、「J. Neurol. Sci.」、1997年、第148巻、p.101〜105
【非特許文献６】
インゲブリグトセン(Ingebrigtsen)ら、「J. Clin. Neurosci.」、1997年、第4巻、第1号、p.29〜33
【非特許文献７】
ブトナー(Buttner)ら、「Stroke」、1997年、 第28巻、第10号、p.1961〜1965
【非特許文献８】
アブラハ(Abraha)ら、「Ann. Clin. Biochem.」、1997年、第34巻、p.366〜370
【非特許文献９】
ローゼン(Rosen)ら、「Stroke」、1998年、第29巻、第2号、p.473〜477
【非特許文献１０】
ハーマン(Herrmann)ら、「Restor. Neurol. Neurosci.」、1999年、第14巻、p.109〜114
【非特許文献１１】
ラーベ(Raabe)ら、「Neurosurgery」、1999年、第45巻、第3号、p.477〜483
【非特許文献１２】
ビュンダーリッヒ(Wunderlich)ら、「Stroke」、1999年、第30巻、第6号、p.1190〜1195
【非特許文献１３】
ハーマン(Hermann)ら、「Stroke」、2000年、第31巻、p.2670〜2677
【非特許文献１４】
ハーマン(Herrmann)ら、「J. Neurotrauma」、2000年、第17巻、p.113〜122
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
頭部外傷または他のいくつかの型の神経損傷を示す患者、または何らかの理由により神経障害に罹患するリスクを有する患者における神経保護治療を最適化するためには、神経保護治療に対する患者の反応をモニターできることが重要である。従って、本発明は神経保護治療をモニターする方法を提供することを課題とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明は、神経保護物質を投与することによって神経障害の治療を受ける患者の反応をモニターする方法であって、(a)神経保護物質による初回治療の前に患者から採取した第一の生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーの量を決定する段階；(b)神経保護物質による初回治療の後に患者から採取した少なくとも一つの第二の生体試料中のバイオマーカーの量を決定する段階；および(c)第二の生体試料中のバイオマーカーの量を第一の生体試料中のバイオマーカーの量と比較する段階を含み、第一の生体試料中のバイオマーカーの量と比較して、第二の生体試料中のバイオマーカーの量に検出可能な低下が認められる場合、患者が神経保護物質による治療に対して正に反応することが示される方法を提供する。または、神経保護物質による治療に対する正の反応は、神経保護物質による治療に反応した第二の生体試料またはその後の生体試料中のバイオマーカーレベルの減少速度の増加、または増加速度の減少に基づいて示すことができる。
【００１１】
本発明はさらに、神経保護物質を投与することによって神経障害に罹患した患者を治療する改良された方法であって、神経保護物質の有効量が患者に投与されたか否かを決定するために、神経保護物質による治療の間に1回またはそれ以上の時点で患者から採取した生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーのレベルをモニターする段階を含む方法を提供する。このモニタリング方法の結果に応じて、神経保護物質の用量を調節することができる。
【００１２】
本発明はさらに、神経保護物質を投与することによって神経障害に罹患した患者を治療する改良された方法であって、神経保護物質による治療の神経保護にとって十分な期間が終了したか否かを決定するために、神経保護物質による治療の間に1回またはそれ以上の時点で患者から採取した生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーのレベルをモニターする段階を含む方法を提供する。治療の終了は、神経障害が起こる以前のレベルまで、またはそうでなければ所定の最大閾値レベルより低いレベルまでバイオマーカーのレベルが減少することによって示してもよい。
【００１３】
本発明はさらに、神経保護物質を投与することによって神経障害に罹患した患者を治療する改良された方法であって、神経保護物質による治療を再開する必要があるか否かを決定するために、神経保護物質治療が終了した後に1回またはそれ以上の時点で患者から採取した生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーのレベルをモニターする段階を含む方法を提供する。治療を再開する必要性は、例えば、神経保護物質による治療期間の終了後まもなくバイオマーカーレベルが「急上昇」した場合のような、バイオマーカーレベルが所定の最小閾値レベルよりも上昇することによって示してもよい。
【００１４】
本発明はさらに、患者が神経保護物質による治療から恩典を得るか否かを特定する方法であって、神経保護物質による初回治療の前に患者から採取した生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーの量が、所定の最小閾値を超えているか否かを決定する段階を含み、患者から採取した生体試料中のバイオマーカーの量が最小閾値を超えていれば、患者が神経障害に罹患した患者であると一次的に特定される方法を提供する。本方法はさらに、神経保護物質による初回治療の前に患者から採取した生体試料中のバイオマーカーの量が、所定の最大閾値を超えているか否かを決定する段階を含んでもよく、患者から採取した生体試料中のバイオマーカーの量が最大閾値を超えていれば、神経障害に罹患した患者は、神経保護物質による治療から実質的な恩典を得る可能性が低い患者であると二次的に同定される方法も提供する。
【００１５】
本発明に係る方法においては、（１）神経保護物質を投与することによって神経障害の治療を受ける患者の反応をモニターする方法であって、(a)神経保護物質による初回治療の前に患者から採取した第一の生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーの量を決定する段階；(b)神経保護物質による初回治療の後に患者から採取した少なくとも一つの第二の生体試料中のバイオマーカーの量を決定する段階；および(c)第二の生体試料中のバイオマーカーの量を第一の生体試料中のバイオマーカーの量と比較する段階を含み；第一の生体試料中のバイオマーカーの量と比較して、第二の生体試料中のバイオマーカーの量に検出可能な低下が認められる場合、患者が神経保護物質による治療に対して正の反応することが示される方法であることを特徴とする。
【００１６】
また、本発明に係る方法においては、（２）神経障害が、脳虚血、脳梗塞、頭部外傷、挫傷、脊髄損傷、クモ膜下出血、脳出血、動脈瘤出血、心筋梗塞、低酸素症、無酸素症、外科手術、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、HIV関連神経変性、小脳変性、発作、および運動失調からなる群より選択される状態もしくは疾患であるか、または前述の群より選択される状態、疾患、もしくは事象によって引き起こされる、上記(1)に記載の方法であることを特徴とする。
【００１７】
また、本発明に係る方法においては、（３）神経障害が、脳虚血、脳梗塞、頭部外傷、または脊髄損傷である、上記(2)に記載の方法であることを特徴とする。
【００１８】
また、本発明に係る方法においては、（４）バイオマーカーが、S-100b、ニューロン特異的エノラーゼ(NSE)、神経膠線維酸性タンパク質(GFAP)、タウ(tau)タンパク質、ハプトグロビン、脳クレアチンキナーゼ、イソプロスタン、ミエリン塩基性タンパク質(MBP)、またはトロンボモジュリンからなる群より選択される、上記(1)に記載の方法であることを特徴とする。
【００１９】
また、本発明に係る方法においては、（５）バイオマーカーがS-100bまたはNSEである、上記(4)に記載の方法であることを特徴とする。
【００２０】
また、本発明に係る方法においては、（６）神経保護物質が、興奮性アミノ酸受容体アンタゴニスト、代謝型グルタミン酸受容体アンタゴニスト、GABA受容体アンタゴニスト；NAALDアーゼ酵素阻害剤、カルパイン阻害剤、p38マイトジェン活性化プロテインキナーゼ(MAPK)阻害剤、エストロゲン鏡像異性体または誘導体、酸化窒素産生の調節物質、カルモジュリン阻害剤、アデノシン受容体調節物質、プリン受容体アンタゴニスト、プロサポシン受容体活性刺激物質、および合成酸素担体からなる群より選択される、上記(1)に記載の方法であることを特徴とする。
【００２１】
また、本発明に係る方法においては、（７）神経保護物質がNMDA受容体アンタゴニストである、上記(6)に記載の方法であることを特徴とする。
【００２２】
また、本発明に係る方法においては、（８）生体試料中のバイオマーカーの量が、ELISA、RIA、磁気共鳴分光法、HPLC、または質量分析法によって決定される、上記(1)に記載の方法であることを特徴とする。
【００２３】
また、本発明に係る方法においては、（９）神経保護物質を投与することによって神経障害に罹患した患者を治療する改良された方法であって、神経保護物質の有効量が患者に投与されているか否かを決定するために、神経保護物質による治療の間に1回または複数の時点で患者から採取した生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーのレベルをモニターする段階を含む方法であることを特徴とする。
【００２４】
また、本発明に係る方法においては、（１０）患者が神経保護物質による治療から恩典を得るか否かを特定する方法であって、神経保護物質による初回治療の前に患者から採取した生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーの量が、所定の最小閾値を超えているか否かを決定する段階を含み、患者から採取した生体試料中のバイオマーカーの量が最小閾値を超えていれば、該患者が神経障害に罹患した患者であると一次的に特定される方法であることを特徴とする。
【００２５】
【発明の実施の形態】
本発明は、神経保護物質治療に対する患者の反応をモニターする方法を提供する。これらの方法は、(i)神経保護物質による治療の間の患者の反応を追跡するため；(ii)治療のために選択された特異的神経保護物質が治療を受ける患者および障害に対して適当であるか否かを決定するため；(iii)投与される神経保護物質の用量が、治療を受ける患者および障害に対して適当であるか否かを決定するため；(iv)投与される神経保護物質の型および/または量が治療期間中に変更する必要があるか否かを決定するため；(v)治療を終了する時期を決定するため；および(vi)終了した治療を再開する必要があるか否かを決定するため。これらの方法はまた、患者が神経保護物質による治療から恩典を得るか否かを特定するためにも有用である。
【００２６】
本発明の方法は、哺乳類被験者、好ましくはヒト患者が神経障害を発症していた状況、発症中である状況、または発症すると予想される状況(例えば、外科手術手順の前)において有用であり、神経障害は、被験者から得ることができる生体試料中の特定の測定可能なバイオマーカー量の変化によってモニターされうる。神経障害が起こりうると予想される場合、例えば切迫した外科手術手順が原因で起こる可能性がある場合、モニタリングを行って、バイオマーカーレベルが所定の許容レベルまたは「正常な」手術前のレベルに減少した時期を決定することができる。
【００２７】
当技術分野において公知であるように、患者によっては、例えば、チトクロームP450(例えば、CYP2D6)による代謝が変化した結果として、いくつかの型の神経保護物質の代謝能が低下する。本発明の方法は、したがって、これらの患者の治療用量をモニターし、且つ調節するために特に有用となる可能性がある。
【００２８】
本発明の方法は、ヒト以外の霊長類、イヌもしくはネコのようなペット動物、またはウマのような他の動物における神経障害をモニターするため、または神経障害の治療をモニターするためにも有用である。
【００２９】
本明細書において用いられるように、「神経障害」には、CNSへの血液、酸素、もしくはブドウ糖の供給が部分的もしくは完全に障害されたことによる任意の状態、疾患、もしくは事象によって引き起こされた任意の神経障害、またはCNSに対する外傷的損傷によって引き起こされた任意の神経障害が含まれる。そのような状態、疾患、または事象の非制限的な例には、当技術分野で公知である脳虚血、脳梗塞、脳血管攣縮、外傷性頭部損傷、外傷性脊髄損傷、出血(クモ膜下出血、脳出血、または動脈瘤出血)、窒息(例えば周産期仮死)、心停止、心筋梗塞、低酸素症、または無酸素症(例えば、溺水、窒息、外科手術手順時に投与した麻酔、肺手術、心臓バイパス、または心肺装置の使用)、低血糖症、再潅流損傷、進行性の病態(例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、多発性硬化症、HIV関連神経変性または小脳変性)、発作、神経膠芽腫、多発性神経炎、水頭症、脳炎、髄膜炎、癲癇、および精神統合失調症などが含まれる。
【００３０】
本発明の方法は、神経障害が脳虚血または外傷性の頭部もしくは脊髄損傷によって引き起こされる場合に特に有用である。本発明の方法はまた、神経障害が低酸素症または無酸素症によって引き起こされる場合に特に有用であると考えられる。本明細書において用いられる低酸素症は、組織中の酸素レベルが正常レベルより低下している状態として定義される。低酸素症は、正常な血流が中断する、血液の正常な酸素付加を障害する、または血液における組織への正常な酸素輸送能を障害する如何なる事象も含む、多様な状況が原因で起こりうる。非制限的な態様において、低酸素症は、虚血、出血(例えば、クモ膜下出血、脳出血、または動脈瘤出血)、心筋梗塞もしくは心停止、溺水、外科手術手順時に投与した麻酔、心肺装置の使用、または肺機能不全によって引き起こされうる。肺機能不全は、肺気腫、タバコの喫煙、慢性気管支炎、喘息、感染物質、肺炎などによって引き起こされうる。「無酸素症」という用語はしばしば、「低酸素症」という用語と互換的に用いられるが、一般的に組織における酸素のより大きな減少および完全な枯渇を意味する。
【００３１】
本発明の方法はまた、例えば冠動脈バイパス移植片(CABG)、または例えば血管造影もしくは血管形成術のような他の心臓手術を含むがこれらに限定されることはない、開心手術、または肺手術等のような外科手術手順の結果として神経障害が発症した場合または発症する可能性がある場合にも特に有用である。例えば、短期間または長期間の認識欠損がCABG後の患者において報告されている(マッカン(McKhann)ら、1998、Ann. Thorac. Surg. 63：510〜5)。一つの研究において、8個の認識ドメイン(単語記憶、視覚記憶、言語、集中、血管収縮、精神運動速度、運動速度、および実行機能)に低下を示さなかったのは患者の12％に過ぎなかった。
【００３２】
神経障害は、神経機能の障害を検出する当技術分野で公知の多様な診断試験によって同定してもよい。そのような神経学的試験の例には、グラスゴーアウトカムスケール(Glasgow Outcome Scale、GOS)、グラスゴーコーマスケール(Glasgow Coma Scale、GCS)、能力障害関連スケール(Disability Rating Scale、DRS)およびNIH卒中スケール(NIH Stroke Scale、NIHSS)が含まれ、これらは公知の方法を用いて行うことができる。神経障害を検出するその他の方法には、CATスキャンおよび頭蓋内圧の測定が含まれる。
【００３３】
神経保護物質は、(i)既に発症した神経障害を治療するため；(ii)CNSへの血液、酸素、もしくはブドウ糖の供給の部分的もしくは完全な障害、または外傷性損傷後にしばしば起こる生化学反応および細胞反応の一連のカスケードの際に引き起こされるさらなる神経障害を予防するため；または(iii)例えば、これから行われる外科手術手順が原因で発症する可能性がある将来の神経障害を予防するための予防的治療として、患者に投与することができる。
【００３４】
本発明は、神経障害の特異的バイオマーカーの同定と、神経保護物質による治療の有効性をその治療に反応する一つまたは複数のバイオマーカーのレベルの変化を追跡することによってモニターできるという知見とに基づいている。本発明の方法における有用なバイオマーカーは、障害を受けていない組織または細胞に存在し、神経損傷もしくは傷害を受けた場合に、CNSの組織もしくは細胞から、生体試料を患者から得ることができる生体組織もしくは体液(例えば脳脊髄液(CSF))中へ、または血液脳関門を超えて循環系もしくリンパ系または唾液のような非CNS組織へ放出もしくは分泌される分子、または尿もしくは便として排泄される分子となりうる。あるいは、バイオマーカーは、神経損傷または傷害に反応して新規に産生され、CSF、または循環系もしくはリンパ系などの非CNS組織のように、生体試料を患者から得ることができる生体組織もしくは体液に蓄積する分子、または尿中に排泄される分子となりうる。
【００３５】
好ましいバイオマーカーは、生体試料中のバイオマーカーの有無および/または量が、(i)神経障害の程度および/または現在の進行状況のいずれかと相関しうる；(ii)患者の予後を予想するために用いることができる；(iii)適当な神経保護治療を選択するために用いることができる；または(iv)神経保護治療の有効性および進行をモニターするために用いることができるような、標準的な生化学的アッセイ法を用いて、生体試料中で検出および定量することができる任意の生体分子である。
【００３６】
一つの態様において、バイオマーカーはS-100タンパク質ファミリーのメンバーである。より好ましい態様において、バイオマーカーはS-100b(ββ)またはS-100a(αβ)であり、最も好ましくはS-100b(ββ)である(例えば、ミスラー(Missler)ら、1997、上記；アウレル(Aurell)ら、1991、上記；キム(Kim)ら、1996、上記；ウェスタビー(Westaby)ら、1996、上記；ファスベンダー(Fassbender)ら、1997、上記；インゲブリグトセン(Ingebrigtsen)ら、1997、上記；ブトナー(Buttner)ら、1997、上記；アブラハ(Abraha)ら、1997、上記；ローゼン(Rosen)ら、1998、上記；ハーマン(Herrmann)ら、1999、上記；ラーベ(Raabe)ら、1999、上記；ビュンダーリッヒ(Wunderlich)ら、1999、上記；ハーマン(Herrmann)ら、2000、Stroke 31：2670〜2677；ハーマン(Herrmann)ら、2000、J. Neurotrauma 17：113〜122；1987年3月31日にハートマン(Hartman)に付与された米国特許第4,654,313号；および国際公開公報第00/52476号を参照のこと)。
【００３７】
もう一つの態様において、バイオマーカーは、ニューロン特異的エノラーゼ(NSE)である(例えば、ミスラー(Missler)ら、1997、上記；ファスベンダー(Fassbender)ら、1997、上記；ハーマン(Herrmann)ら、1999、上記；ビュンダーリッヒ(Wunderlich)ら、1999、上記；ハーマン(Herrmann)ら、2000、J. Neurotrauma 17：113〜122；および国際公開公報第00/52476号を参照のこと)。
【００３８】
もう一つの態様において、バイオマーカーは神経膠線維酸性タンパク質(GFAP)である(例えば、アウレル(Aurell)ら、1991、上記；ハーマン(Herrmann)ら、2000、Stroke 31：2670〜2677を参照のこと)。
【００３９】
もう一つの態様において、バイオマーカーはタウタンパク質である(例えば、1999年9月10日に公開されたシンシナチ大学(University of Cincinnati)による国際公開公報第99/45393号を参照のこと)。
【００４０】
もう一つの態様において、バイオマーカーはハプトグロビンである(例えば、1995年7月4日にメリル(Merril)らに付与された米国特許第5,429,947号；1978年8月1日にイシイ(Ishii)に付与された米国特許第4,103,687号を参照のこと)。
【００４１】
もう一つの態様において、バイオマーカーはグルタメートである。グルタメートは脳に非常に豊富に存在する興奮性神経伝達物質である。重度の頭部損傷後、局所的な細胞内グルタメート濃度が急速に増加して、興奮性の細胞死に至ると考えられている。重度の頭部損傷後のCSFに現れるグルタメート濃度は、受けた神経障害の程度を反映すると考えられる。
【００４２】
もう一つの態様において、バイオマーカーはクレアチニンキナーゼである(例えば、1998年10月6日にアオヤマ(Aoyama)らに付与された米国特許第5,817,467号を参照のこと)。
【００４３】
もう一つの態様において、バイオマーカーはF2-イソプロスタンである(例えば、1999年4月6日にモロウ(Morrow)らに付与された米国特許第5,891,622号を参照のこと)。
【００４４】
もう一つの態様において、バイオマーカーはミエリン塩基性タンパク質(MBP)またはトロンボモジュリンである(例えば、国際公開公報00/52476号を参照のこと)。
【００４５】
本発明の方法を行う場合、単一のバイオマーカー、または2つもしくはそれ以上の異なるバイオマーカーのパネル(例えばS-100bとNSEの双方)のいずれかのレベルをアッセイすることができる。一つより多くのバイオマーカーによるアッセイ法は、神経障害の程度を決定する精度、または神経保護治療に対する患者の反応をモニターする精度を増加させるために役立つ可能性がある。複数のバイオマーカーの測定は、同一の生体試料中、または同一患者から採取した異なる生体試料中のいずれかで異なるバイオマーカーをアッセイすることによって行うことができる。
【００４６】
このように、本発明は、神経保護物質を投与することによって神経障害の治療を受ける患者の反応をモニターする方法であって、(a)神経保護物質による初回治療の前に患者から採取した第一の生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーの量を決定する段階；(b)神経保護物質による初回治療の後に患者から採取した少なくとも一つの第二の生体試料中のバイオマーカーの量を決定する段階；および(c)第二の生体試料中のバイオマーカーの量を第一の生体試料中のバイオマーカーの量と比較する段階を含み；第一の生体試料中に存在するバイオマーカーの量と比較して、第二の生体試料および/またはその後の任意の生体試料中に存在するバイオマーカーの量が検出可能に減少するか、または増加を防止もしくは遅らせる場合に、患者が神経保護物質による治療に対して正に反応することが示される方法を提供する。または、第二の生体試料またはその後の生体試料中のバイオマーカーの量が、例えば初回の神経障害に対する反応が収まるにつれて、神経保護物質による治療を行わなくとも自然に減少する傾向がある場合、神経保護物質による治療に対する正の反応は、比較可能な時間経過において神経保護物質による治療を行わない場合(すなわち、対照生体試料)に起こると予想されるバイオマーカーの量の減少速度と比較して、第二の生体試料もしくはその後の生体試料中に存在するバイオマーカー量の減少速度が検出可能に増加することによって示すことができる。
【００４７】
対照的に、第一の生体試料中のバイオマーカーの量と比較して第二の生体試料またはその後の生体試料中のバイオマーカーの量が減少しない場合(例えば、総量に検出可能な変化がない、または増加する)、患者が神経保護物質による治療に対して正に反応しないことを示す可能性がある。または、適当な状況において、比較可能な時間経過において対照生体試料に起こると予想されるバイオマーカーの量の減少速度と比較して、第二の生体試料もしくはその後の生体試料中に存在するバイオマーカーの量の減少速度が増加しなければ、患者が神経保護物質による治療に対して正に反応しないことを示す可能性がある。
【００４８】
好ましい態様において、バイオマーカーは、S-100bのようなS-100タンパク質ファミリーのメンバーである。もう一つの好ましい態様において、バイオマーカーはNSEである。もう一つの好ましい態様において、バイオマーカーはタウタンパク質である。もう一つの好ましい態様において、バイオマーカーはハプトグロビンである。
【００４９】
本発明の方法は、少なくとも2つの生体試料を異なる時点で患者から採取する必要がある。第一の試料は典型的に、例えば、診察室での最初の診察時に、または外傷性頭部もしくは脊髄損傷により病院の救急室で、または卒中のような神経事象の発生が疑われる場合に対応して、神経保護物質による初回治療の前に得られる。神経保護物質による治療を開始した後に、好ましくは第二の試料を得て、好ましくはその後の如何なる試料も得る。この方法において、バイオマーカーは、(i)バイオマーカーの量が減少しているか否か；(ii)バイオマーカーの量の減少速度が増加しているか否か；または(iii)バイオマーカーの量が安定しているか否かを決定するためにモニターし、これらはそのいずれも特定の状況に応じて神経保護物質治療に対して患者が正に反応することを示す可能性がある。バイオマーカーが正常レベルを超えて上昇したままである場合、またはバイオマーカーレベルの減少速度が十分には大きくない場合、神経保護物質治療は、例えば、用量もしくは治療回数を増加させることによって、または投与する神経保護物質をより有効な物質に変更することによって、または治療に用いる神経保護物質を一つもしくは複数の他の神経保護物質もしくは療法と組み合わせることによって、またはそれらを併用することによって、より積極的なプロトコールに変更することができる。
【００５０】
本発明はさらに、神経保護物質を投与することによって神経障害に罹患した患者を治療する改良された方法であって、神経保護物質の有効量が患者に投与されているか否かを決定するために、神経保護物質による治療の間に1回またはそれ以上の時点で患者から採取した生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーのレベルをモニターする段階を含む方法を提供する。神経保護物質の投与に反応して、生体試料中のバイオマーカーレベルが検出可能に減少する場合、またはこれまでに認められたバイオマーカーのレベルの増加速度が検出可能に遅くなる、減少する、もしくは逆転する場合、またはこれまでに認められたバイオマーカーレベルの減少速度が増加する場合、「神経保護物質の有効量」が患者に投与されている。
【００５１】
本発明はさらに、神経保護物質を投与することによって神経障害に罹患した患者を治療する改良された方法であって、神経保護物質による治療の神経保護にとって十分な期間が終了したか否かを決定するために、神経保護物質による治療の間に1回またはそれ以上の時点で患者から採取した生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーのレベルをモニターする段階を含む方法を提供する。好ましい態様において、バイオマーカーレベルが、神経障害の指標として設定された最大閾値レベル未満に検出可能に減少すれば、「神経保護物質による治療の神経保護にとって十分な時間経過が終了した」。例えば、生体試料中のバイオマーカーレベルが、実質的な期間最大閾値レベル未満、例えばS-100bの血清レベルが実質的な期間0.2 μg/L未満、またはNSEの血清レベルが10 ng/L未満のままであれば、「神経保護物質の有効量」が投与されている。実質的な期間の例には、24時間を超える期間、48時間を超える期間、72時間を超える期間、または120時間を超える期間が含まれる。
【００５２】
好ましい態様において、「最大閾値レベル」は、現在または最近の神経障害の結果としてバイオマーカーレベルの増加を経験していない患者において通常認められる任意の特定のバイオマーカーの上限レベルである。例えば、健康で如何なる神経変性疾患または状態も現在経験していない正常被験者は典型的に、S-100bの最大閾値血清レベルが約0.2 μg/Lであり、このレベル以上であれば、神経障害を示す傾向があると考えられる。例えば、被験者が、治療される特定の外傷事象に加えて他の神経変性疾患または状態に罹患している場合、S-100bの「正常」最大閾値血清レベルは0.2 μg/Lより高くなりうるが、これは、主治医が決定することができ、考慮されるべきである。
【００５３】
本発明はさらに、神経保護物質を投与することによって神経障害に罹患した患者を治療する改良された方法であって、神経保護物質による治療を再開する必要があるか否かを決定するために、神経保護物質治療が終了した後に1回またはそれ以上の時点で患者から採取した生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーのレベルをモニターする段階を含む方法を提供する。神経保護物質による治療を再開する必要性は、典型的に、神経保護物質による治療を減少または終了した後、患者から採取した生体試料中のバイオマーカーレベルが「急上昇」する場合、またはそうでなければ閾値レベルを超えて上昇し始めたことが検出可能である場合に示される。そのような閾値レベルは、神経損傷の指標として設定した最大閾値レベルとなりうるか、または例えば、神経保護物質による初回治療の前もしくは初回治療の間に、または外科手術手順の前に、その患者から採取した生体試料中で測定したこれまでのバイオマーカーレベルに基づいて決定するように、特定の患者にとって独自のレベルとなりうる。
【００５４】
バイオマーカーの量を決定する生体試料の型は、それがいつ何処で合成されたか、バイオマーカーが組織の何処で貯蔵されるか、そしてどの生体組織または体液にそれが放出されるかまたはそうでなければ蓄積されるかなどの、特定のバイオマーカーのような多様な要因に依存すると考えられる。一般的に、生体試料は、血液、血清、または血漿のような血液成分、脳脊髄液(CSF)、唾液、および尿からなる群より選択されると考えられる。好ましい態様において、生体試料は、血液、血清、血漿またはCSFであり、最も好ましくは、血液、血清、または血漿である。一つより多くのマーカーを分析する場合、分析は患者から得られた同一の生体試料または異なる生体試料について実施することができる。
【００５５】
生体試料中の一つまたは複数のバイオマーカーの量は、当技術分野で現在既知の標準的な技術、または今後開発される標準的な技術を用いて決定することができる。例えば、それぞれのバイオマーカーは当技術分野で公知のバイオマーカー特異的抗体および免疫学的方法を用いてアッセイすることができる。ラジオイムノアッセイ法、サンドイッチ酵素結合イムノアッセイ法、競合的結合アッセイ法、同種アッセイ法、および異種アッセイ法を含む任意の適当なイムノアッセイ方法を用いることができる。または、一つまたは複数のバイオマーカーの量は、磁気共鳴分光法、HPLC、または質量分光法のような他の技術を用いて決定することもできる。いずれにせよ、選択したアッセイ方法は、健康な患者において認められる正常範囲から、神経障害を示す上昇したレベルまでの濃度範囲で、特定のバイオマーカーを測定できるために十分な感度を有さなければならない。アッセイ法は、例えば、マイクロタイタープレート様式において、当技術分野で公知の自動イムノアッセイアナライザを用いることを含む、様々な様式で実施することができる。
【００５６】
生体試料中のS-100bレベルは、ミスラー(Missler)ら、1997、上記；アウレル(Aurell)ら、1991、上記；キム(Kim)ら、1996、上記；ウェスタビー(Westaby)ら、1996、上記；ファスベンダー(Fassbender)ら、1997、上記；インゲブリグトセン(Ingebrigtsen)ら、1997、上記；ブトナー(Buttner)ら、1997、上記；アブラハ(Abraha)ら、1997、上記；ローゼン(Rosen)ら、1998、上記；ハーマン(Herrmann)ら、1999、上記；ラーベ(Raabe)ら、1999、上記；ビュンダーリッヒ(Wunderlich)ら、1999、上記；ハーマン(Herrmann)ら、2000、Stroke 31：2670〜2677；ハーマン(Herrmann)ら、2000、J. Neurotrauma 17：113〜122；1987年3月31日にハートマン(Hartman)に付与された米国特許第4,654,313号；または国際公開公報第00/52476号に記載される任意の技術を用いて決定することができる。典型的に、健康な男女では、血清中のS-100bレベルは約0.15〜約0.20 μg/L未満であり、CSF中のレベルは約5.0 μg/L未満である(95パーセンタイル)。本明細書において用いられるように、「約」という用語は、特に述べた数値±10％を意味する。S-100bの血液または血清レベルが約0.20 μg/Lを超え、且つCSFレベルが約5.0 μg/Lを超える場合には、通常、神経障害の発生を示し、S-100bレベルが高くなれば神経障害のレベルの増加と相関するが、患者が異なればこれらの値に変動があることを許容しなければならない。
【００５７】
S-100bのレベルは、Byk-Sangtec Diagnostica GmbH & Co.(ディーツェンバッハ、ドイツ)から販売されているキットのような、市販の免疫放射線測定アッセイキットまたは発光測定イムノアッセイキットを用いて、患者の血液またはCSFのような生体試料中で測定することができ、このキットは市販のLIAISON(登録商標)Sangtec(登録商標)S-100アッセイ系を用いる二部位免疫発光測定サンドイッチアッセイ法に基づいている。このアッセイ系において、常磁性粒子を、異なるエピトープに対する2つの抗S-100bモノクローナル抗体によってコーティングして、イソルミノール誘導体で標識した抗S-100bモノクローナル二次抗体を検出抗体として提供する。常磁性粒子、アッセイ緩衝液、および生体試料をまずインキュベートして、未結合の物質を洗浄サイクルによって除去する。検出抗体を加えて、二度目のインキュベーションの後、未結合の検出抗体を第二の洗浄サイクルによって除去する。その後、化学発光反応を活性化する開始試薬を加えて、先に加えた試薬によって誘導された化学発光反応によってS-100b濃度を決定する。光のシグナルは相対光単位(RLUs)において測定し、これは試料中のS-100bタンパク質の量と正比例する。LIAISON(登録商標)S-100アッセイ系の検出限界は0.02 μg/Lであり(平均値±3標準偏差)、測定範囲は約0.02 μg/L〜約30 μg/Lである。LIAISON(登録商標)S-100アッセイ系は、製造元によって提供された説明書に従って凍結乾燥試薬を用いて較正することができる。
【００５８】
生体試料中のNSEレベルは、ミスラー(Missler)ら、1997、上記；ファスベンダー(Fassbender)ら、1997、上記；ハーマン(Herrmann)ら、1999、上記；ビュンダーリッヒ(Wunderlich)ら、1999、上記；またはハーマン(Herrmann)ら、2000、J. Neurotrauma 17：113〜122；または国際公開公報第00/52476号に記載される任意の技術を用いて決定することができる。典型的に、健康な男女では、血清中のNSEレベルは約10〜12.5μg/L未満であり、CSF中では約20 μg/L未満(95パーセンタイル)である。本明細書において用いられるように、「約」という用語は、特に述べた数値±10％を意味する。NSEの血液または血漿レベルが約12.5 μg/Lを超え、且つCSFレベルが約20 μg/Lを超える場合には、通常、神経障害の発生を示し、NSEレベルが高くなれば神経障害のレベルの増加と相関するが、患者が異なればこれらの値に変動があることを許容しなければならない。
【００５９】
NSEレベルは、例えばLIAISON(登録商標)NSEのような、Byk-Sangtec Diagnostica GmbH & Co.(ディーツェンバッハ、ドイツ)から販売されている市販の免疫放射測定アッセイキットまたは発光測定イムノアッセイキットを用いて、患者の血液またはCSFの生体試料中で測定することができ、このキットはトレーサー抗体と固定抗体が患者の試料中に存在するNSEおよび標準物質と同時に反応する二部位免疫発光測定サンドイッチアッセイ法である。インキュベーション後、過剰量のトレーサーを洗浄サイクルによって除去する。その後、開始試薬を加える。NSE濃度は、誘発試薬によって誘導された化学発光反応によって決定する。光のシグナルは相対光単位(RLUs)において測定し、これは試料中のNSEの量と正比例する。LIAISON(登録商標)NSEアッセイ系の検出限界は0.04 μg/Lであり(平均値±2標準偏差)、測定範囲は約0.04 μg/L〜約200 μg/Lである。LIAISON(登録商標)NSE S-100アッセイ系は、製造元によって提供された説明書に従って凍結乾燥試薬を用いて較正することができる。
【００６０】
生体試料中のタウタンパク質のレベルは、国際公開公報99/45393号に記載される任意の技術を用いて決定することができる。典型的に、40歳未満の健康な男女では、CSF中のタウタンパク質レベルは約200 pg/ml未満である。本明細書において用いられるように、「約」という用語は、特に述べた数値±10％を意味する。タウタンパク質のCSFレベルが約200 pg/mLを超える場合には、通常、神経障害の発生を示し、タウタンパク質のレベルが高くなれば神経障害のレベルの増加と相関するが、患者が異なれば、また40歳以上の患者ではこれらの値に変動があることを許容しなければならない。
【００６１】
生体試料中のタウタンパク質を測定するために特異的なイムノアッセイキットおよび試薬は、例えばベルギー、ツウィナールデのInnogenetics N.V.から販売されている。例えば、CSF中のタウタンパク質レベルは、酵素イムノアッセイ形式を用いるInnotest(商標)hTAU抗原キットを用いて決定することができ、この場合試験試料を、異なるエピトープを認識する一対のビオチン結合タウ特異的モノクローナル抗体と共にインキュベートする。ストレプトアビジン結合西洋ワサビペルオキシダーゼをビオチンに結合させると、基質および色原体の存在下で発色産物を生成し、色の強度は、試料中のタウタンパク質濃度と比例する。Innotest(商標)hTAU抗原キット試験の検出限界は59.3 pg/ml(平均値±4標準偏差)であり、測定範囲は約50 pg/ml〜約1200 pg/mlである。Innotest(商標)hTAU抗原キット試験の結果は、製造元によって提供された説明書に従って凍結乾燥試薬を用いて較正することができる。
【００６２】
生体試料中のGFAPレベルは、アウレル(Aurell)ら、1991、上記；またはハーマンら(Herrmann、2000、Stroke 31：2670〜2677)に記載の任意の技術を用いて決定することができる。生体試料中のGFAPを測定するために特異的なイムノアッセイキットおよび試薬は、例えばベルギー、ツウィナールデのInnogenetics N.V.から販売されている。典型的に、健康な男女では、CSF中のGFAPレベルは約0.4 μg/L未満である。本明細書において用いられるように、「約」という用語は、特に述べた数値±10％を意味する。GFAPのCSFレベルが約0.4μg/Lを超える場合には、通常、神経障害の発生を示し、GFAPのレベルが高くなれば神経障害のレベルの増加と相関するが、患者が異なればこれらの値に変動があることを許容しなければならない。
【００６３】
生体試料中のグルタメートレベルは、標準的なアミノ酸分析技術またはその改変技術を用いて決定することができる。例えば、グルタメートレベルは、Waters CorporationのAddQ-Tagアミノ酸分析キット(Waters Corporation、ミルフォード、マサチューセッツ州)の改変技術を用いて、CSF中でモニターしてもよい。試料中の一級アミンまたは二級アミンを、6-アミノキノリル-N-ヒドロキシスクシニミジルカルバメート(AQC)との反応によって安定な蛍光誘導体に変換する。これらの蛍光アミン誘導体の逆相分離を最適化すると、他の如何なる誘導体の分割にもかかわらず、低い保持時間を有する高度に分割された誘導体化グルタメートのピークが得られる。典型的に、健康な男女では、CSF中のグルタメートレベルは約2.0 μM未満である。本明細書において用いられるように、「約」という用語は、特に述べた数値±10％を意味する。グルタメートのCSFレベルが約2μMを超える場合には、通常、神経障害の発生を示し、グルタメートのレベルが高くなれば神経障害のレベルの増加と相関するが、患者が異なればこれらの値に変動があることを許容しなければならない。
【００６４】
生体試料中のクレアチニンキナーゼレベルは、米国特許第5,817,467号に記載の任意の技術を用いて決定することができる。
【００６５】
生体試料中のイソプロスタンレベルは、米国特許第5,891,622号に記載の任意の技術を用いて決定することができる。
【００６６】
生体試料中のミエリン塩基性タンパク質(MBP)またはトロンボモジュリンのような脳内皮膜タンパク質のレベルは、米国特許第6,235,489号に記載の任意の技術を用いて決定することができる。
【００６７】
本明細書において用いられるように、「生体試料中のバイオマーカーの閾値量」とは、生体試料中の特定のバイオマーカーの量または濃度を意味し、このバイオマーカーの量は、全ての重要な局面において患者と類似しているが、特定の神経障害に現在罹患していない対照被験者から得た生体試料中に通常存在すると予想される量より統計学的に有意に高い。特定の閾値量は、特定のバイオマーカーに依存する。例えば、S-100bの場合、神経障害に罹患していない明らかに健康な個体では、典型的に、血清レベルが約0.2 μg/L未満であり、CSFレベルが約5.0 μg/L未満である。NSEに関して、神経障害に罹患していない明らかに健康な個体では、典型的に、血清レベルが約10〜約12.5 μg/L未満であり、CSFレベルが約20 μg/L未満である。GFAPに関して、神経障害に罹患していない明らかに健康な個体では、典型的に、CSFレベルが約0.4 μg/L未満である。タウタンパク質に関して、神経障害に罹患していない明らかに健康な個体では、典型的に、CSFレベルが約200 pg/ml未満である。例えば、CSFにおいて、神経障害に罹患していない年齢60歳未満の明らかに健康な個体のタウタンパク質レベルは、約119.4 pg/ml未満である傾向があり、神経障害に罹患していない年齢60歳以上の個体では、タウタンパク質レベルは約171.1 pg/L未満である傾向がある。ハプトグロビンに関して、神経障害に罹患していない明らかに健康な個体では、CSF中に検出可能なレベルが示されない。CSF中にハプトグロビンが検出されれば、血液脳関門の不全を意味する可能性がある。神経障害を示す閾値レベルは、これらの如何なる正常レベルより統計学的に有意に高い値であると考えられる。
【００６８】
本発明の方法に従って用いられる神経保護物質は、放置するとCNSの任意の組織または細胞に対する障害、特にニューロン、グリア細胞、または内皮細胞、および血液脳関門の完全性に対する障害を起こす原因となるような状態、疾患、または事象から、そのような組織または細胞の完全性および機能を保護する、またはそれらに対する障害を治療することが可能な、任意の神経保護性の薬学的に許容される塩もしくは溶媒和化合物、または任意の神経保護性の薬学的組成物を含む、任意の化学化合物である。そのような神経保護物質は、放置するとそのような組織または細胞に、そのような状態、疾患、または事象によって引き起こされる損傷を予防、軽減、または治療するために有用である。または、神経保護物質は、放置すると神経障害のリスクが増大するような状態、疾患、または事象に応答して患者に投与される低体温治療などの神経保護治療であってもよく、この療法は放置すると生じるような損傷から、CNSの組織および細胞の完全性および機能を保護することが意図される。
【００６９】
本発明の方法に従って用いられる神経保護物質は、現在公知の、または将来開発されるいかなる方法または機序によっても神経保護を提供することができる。例えば、神経保護は、神経保護に対して有効量の下記の型の任意の物質を、単独または組み合わせて投与することによって提供されうる：NMDA受容体アンタゴニスト、AMPA受容体アンタゴニスト、およびカイニン酸受容体アンタゴニストなどの興奮性アミノ酸受容体アンタゴニスト；代謝型グルタミン酸受容体アゴニストもしくはアンタゴニスト；GABA受容体アンタゴニスト；NAALDアーゼ酵素阻害剤；カルパイン阻害剤；p38マイトジェン活性化プロテインキナーゼ(MAPK)阻害剤；エストロゲン鏡像異性体および誘導体；酸化窒素産生の調節物質；カルモジュリン阻害剤；アデノシン受容体調節物質；プリン受容体アンタゴニスト；好中球阻害因子(NIF)；血栓溶解剤様の組織プラスミノゲンアクチベーターもしくはストレプトキナーゼ；プロサポシン受容体活性刺激物質；または合成酸素担体など。
【００７０】
神経保護物質ならびにそれらの製造および使用法について、非限定的な例が下記の文書などに提供されている：1987年9月1日にウィック(Wick)らに付与された米国特許第4,690,931号；1993年2月9日にチェナード(Chenard)に付与された米国特許第5,185,343号；1993年12月21日にチェナードに付与された米国特許第5,272,160号；1994年4月26日にチェナードに付与された米国特許第5,306,723号；1994年8月16日にチェナードに付与された米国特許第5,338,754号；1994年10月18日にバトラー(Butler)に付与された米国特許第5,356,905号；1994年12月13日にクゴラ(Cugola)らに付与された米国特許第5,373,018号；1995年2月21日にチェナードに付与された米国特許第5,391,742号；1995年10月3日にチェナードに付与された米国特許第5,455,250号；1995年10月3日にリプトン(Lipton)に付与された米国特許第5,455,279号；1996年4月23日にクゴラらに付与された米国特許第5,510,367号；1996年5月7日にウェーバー(Weber)らに付与された米国特許第5,514,680号；1996年6月18日にチェナードに付与された米国特許第5,527,912号；1997年3月4日にテリオールト(Theriault)に付与された米国特許第5,607,973号；1997年4月15日にカイ(Cai)らに付与された米国特許第5,620,978号；1997年4月15日にウェーバーらに付与された米国特許第5,620,979号；1997年4月22日にウェーバーらに付与された米国特許第5,622,952号；1997年5月20日にカイらに付与された米国特許第5,631,373号；1997年8月5日にチェナードに付与された米国特許第5,654,302号；1997年8月26日にホー(Ho)らに付与された米国特許第5,661,033号；1997年8月26日にシラサキ(Shirasaki)らに付与された米国特許第5,661,150号；1998年1月20日にチェナードに付与された米国特許第5,710,168号；1998年2月10日にサンズ(Sands)に付与された米国特許第5,716,961号；1998年3月17日にコザチュク(Kozachuk)に付与された米国特許第5,728,728号；1998年4月28日にバトラーらに付与された米国特許第5,744,483号；1998年6月16日にオルニー(Olney)に付与された米国特許第5,767,130号；1998年9月1日にケアナ(Keana)らに付与された米国特許第5,801,183号；1998年10月20日にスラッシャー(Slusher)らに付与された米国特許第5,824,662号；1998年10月27日にサンデージ-ジュニア(Sandage Jr.)らに付与された米国特許第5,827,832号；1998年11月10日にオルニーに付与された米国特許第5,834,465号；1998年12月29日にマセチーニ(Maccecchini)に付与された米国特許第5,854,217号；1999年1月26日にカイらに付与された米国特許第5,863,916号；1999年3月9日にハインツ(Heinz)らに付与された米国特許第5,880,138号；1999年3月30日にアラニン(Alanine)らに付与された米国特許第5,889,026号；1999年5月11日にオルニーらに付与された米国特許第5,902,815号；1999年5月25日にマーフィ(Murphy)に付与された米国特許第5,906,996号；1999年7月20日にオルニーに付与された米国特許第5,925,634号；1999年8月10日にサゲン(Sagen)に付与された米国特許第5,935,606号；1999年8月17日にランドフィールド(Landfield)に付与された米国特許第5,939,407号；1999年8月17日にバラルディ(Baraldi)に付与された米国特許第5,939,432号；1999年9月14日にアラニンらに付与された米国特許第5,952,344号；1999年9月14日にフォーゲル(Fogel)に付与された米国特許第5,952,389号；1999年9月28日にオルニーらに付与された米国特許第5,958,919号；1999年11月2日にカイらに付与された米国特許第5,977,107号；1999年12月21日にスラッシャーらに付与された米国特許第6,004,946号；1999年12月28日にアンディーノ(Andino)らに付与された米国特許第6,008,233号；2000年1月11日にイェ(Ye)らに付与された米国特許第6,013,672号；2000年1月18日にアラニンらに付与された米国特許第6,015,824号；2000年2月22日にアッカーマン(Ackermann)らに付与された米国特許第6,028,080号；2000年3月7日にゴールド(Gold)らに付与された米国特許第6,034,134号；2000年4月4日にチェナードらに付与された米国特許第6,046,213号；2000年4月11日にバラルディに付与された米国特許第6,048,865号；2000年5月16日にマランゴス(Marangos)らに付与された米国特許第6,063,819号；2000年7月4日にファーブ(Farb)に付与された米国特許第6,083,941号；2000年8月1日にコーンバーグ(Kornberg)らに付与された米国特許第6,096,744号；2000年8月29日にマセチーニに付与された米国特許第6,110,894号；2000年9月26日にビッゲ(Bigge)らに付与された米国特許第6,124,317号；2000年9月26日にビッゲらに付与された米国特許第6,124,323号；2000年10月10日にビッゲらに付与された米国特許第6,130,234号；2000年11月14日にカイらに付与された米国特許第6,147,075号；2000年11月28日にアラニンらに付与された米国特許第6,153,624号；2000年12月12日にマイヤーホッフ(Meyerhoff)らに付与された米国特許第6,159,958号；2001年1月9日にマッケイブ(McCabe)らに付与された米国特許第6,172,041号；2001年1月30日にリアオ(Liao)に付与された米国特許第6,180,597号；2001年3月6日にフレッチャー(Fletcher)らに付与された米国特許第6,197,788号；および2001年4月17日にビッゲらに付与された米国特許第6,218,404号。
【００７１】
神経保護物質ならびにそれらの製造および使用法について、さらなる非限定的な例が下記の文書などにも提供されている：1986年11月20日に公開されたSynthelaboによるEP 0 202 164 A1号；1994年12月4日に公開されたThe Wellcome Foundation Ltd.によるEP 0 459 830 A1号；1995年4月19日に公開されたF. Hoffmann-La Roche AGによるEP 0 648 744 A1号；1998年2月18日に公開されたF. Hoffmann-La Roche AGによるEP 0 824 098 A1号；および1998年6月10日に公開されたF. Hoffmann-La Roche AGによるEP 0 846 683 A1号；1990年11月29日に公開されたPfizer Inc.による国際公開公報第90/14088号；1992年10月29日に公開されたPfizer Inc.による国際公開公報第92/18502号；1996年2月29日に公開されたPfizer Inc.による国際公開公報第96/06081号；1996年11月28日に公開されたPfizer Inc.による国際公開公報第96/37226号；1997年2月27日に公開されたPfizer Inc.による国際公開公報第97/07098号；1997年7月3日に公開されたオレゴン州による国際公開公報第97/23202号；1997年7月3日に公開されたWarner-Lambert Co.による国際公開公報第97/23214号；1997年7月3日に公開されたWarner-Lambert Co.による国際公開公報第97/23215号；1997年7月3日に公開されたWarner-Lambert Co.による国際公開公報第97/23216号；1997年7月3日に公開されたWarner-Lambert Co.による国際公開公報第97/23458号；1997年9月12日に公開されたF. Hoffmann-La Roche AGによる国際公開公報第97/32581号；1997年9月12日に公開されたFujisawa Pharm. Co.による国際公開公報第97/32858号；1997年12月11日に公開されたThe Univ. Of Edingburghによる国際公開公報第97/46877号；1998年1月29日に公開されたNeurotrauma Therapeutics, Inc.による国際公開公報第98/03191号；1998年5月7日に公開されたMerck Patent GMBHによる国際公開公報第98/18793号；1999年5月6日に公開されたAlliance Pharmaceutical Corp.による国際公開公報第99/21541号；1999年5月27日に公開されたKlinikum der Albert-Ludwigs-Universitat Freiburgによる国際公開公報第99/25683号；1999年6月24日に公開されたCerebrus Ltd.による国際公開公報第99/31051号；1999年7月9日に公開されたGuildford Pharmaceuticals Inc.による国際公開公報第99/33849号；1999年9月10日に公開されたMerck Sharp & Dohme Ltd.による国際公開公報第99/44610号；1999年9月10日に公開されたMerck Sharp & Dohme Ltd.による国際公開公報第99/44640号；1999年10月14日に公開されたAdvanced Medicine, Inc.による国際公開公報第99/51565号；2000年3月2日に公開されたThe Johns Hopkins University School of Medicineによる国際公開公報第00/11204号；2000年3月9日に公開されたGlaxo Group Ltd.による国際公開公報第00/12488号；2000年3月16日に公開されたMyelos Corporationによる国際公開公報第00/14113号；2000年4月6日に公開されたMitsubishi Chem. Corp.による国際公開公報第00/18758号；2000年5月4日に公開されたIkonomidouによる国際公開公報第00/24395号；2000年7月27日に公開されたDuringによる国際公開公報第00/43039号；2000年8月3日に公開されたVernalis Research Ltd.による国際公開公報第00/44371号；2000年8月31日に公開されたKeepらによる国際公開公報第00/50058号；2000年9月8日に公開されたNPS Pharmaceuticals Inc.による国際公開公報第00/51586号；2000年9月28日に公開されたBrigham and Women's Hospital, Inc.による国際公開公報第00/56403号；2000年9月28日に公開されたSumitomo Pharmaceuticals Co. Ltd.による国際公開公報第00/56711号；2000年10月5日に公開されたReisbergらによる国際公開公報第00/57879号；2000年10月19日に公開されたEli Lillyによる国際公開公報第00/61126号；2000年10月26日に公開されたUAB Res. Foundationによる国���公開公報第00/62771号；2000年11月2日に公開されたGeorgetown Universityによる国際公開公報第00/64911号；2000年11月16日に公開されたMerck & Co., Inc.による国際公開公報第00/67751号；2000年11月16日に公開されたMerck & Co., Inc.による国際公開公報第00/67755号；2000年11月30日に公開されたAbbott Laboratoriesによる国際公開公報第00/71534号；2000年12月14日に公開されたF. Hoffmann-La Roche AGによる国際公開公報第00/75109号；2001年1月11日に公開されたLiptonによる国際公開公報第01/01986号；2001年1月11日に公開されたFujisawa Pharmaceutical Co. Ltd.による国際公開公報第01/02387号；2001年1月11日に公開されたNeurocrine Biosciences, Inc.による国際公開公報第01/02566号；2001年1月25日に公開されたC.N.R.S.による国際公開公報第01/05404号；2001年1月25日に公開されたAstrazeneca ABによる国際公開公報第01/05790号；2001年1月25日に公開されたMcGill Universityによる国際公開公報第01/05963号；2001年2月1日に公開されたVernalis Research Ltd.による国際公開公報第01/07022号；2001年2月1日に公開されたVernalis Research Ltd.による国際公開公報第01/07043号；2001年2月8日に公開されたImperial College of Sci., Tech. and Med.による国際公開公報第01/08692号；および2001年2月15日に公開されたUniv. Florida Res. Foundation, Inc.による国際公開公報第01/10430号。
【００７２】
好ましい態様において、神経保護物質はNMDA受容体アンタゴニストであり、より好ましくはNR2B選択的NMDAアンタゴニストである。そのようなアンタゴニストの例が、チェナード(Chenard)およびメニチ(Menniti)、1999、Curr. Pharm. Design 5:381〜404に記載されており、この開示は全体が参照として本明細書に組み込まれ、CP-101,606、イフェンプロジルおよびエリプロジル(eliprodil)などが記載されている。
【００７３】
本発明の方法において用いることができるNR2B選択的NMDAアンタゴニストには下記の式Iの化合物：
【化１】
0003666866.tif 000002
またはその薬学的に許容される酸付加塩または溶媒和化合物が含まれ、
式中、
(a)R2およびR5が別々である場合、R1、R2、R3およびR4はそれぞれ独立に水素、(C1〜C6)アルキル、ハロ、CF3、OH、もしくはOR7であり、かつR5はメチルもしくはエチルであるか；または
(b)R2およびR5が一体となる場合、R2およびR5はクロマン-4-オール環を形成する
【化２】
0003666866.tif 000003
であり、かつR1、R3およびR4はそれぞれ独立に水素、(C1〜C6)アルキル、ハロ、CF3、OH、もしくはOR7であり；
R6は
【化３】
0003666866.tif 000004
【化４】
0003666866.tif 000005
または
【化５】
0003666866.tif 000006
であり；
R7はメチル、エチル、イソプロピル、またはn-プロピルであり；
R8は(C1〜C6)アルキル、ハロ、およびCF3からなる群より独立に選択される3つまでの置換基で選択的に置換されたフェニルであり；
XはO、Sまたは(CH2)nであり；かつ
nは0、1、2、または3である。
【００７４】
用いることができる式Iの具体的な化合物は下記のとおりである：
(1S，2S)-1-(4-ヒドロキシフェニル)-2-(4-ヒドロキシ-4-フェニルピペリジン-1-イル)-1-プロパノール；
(1S，2S)-1-(4-ヒドロキシ-3-メトキシフェニル)-2-(4-ヒドロキシ-4-フェニルピペリジノ)-1-プロパノール；
(3R，4S)-3-(4-(4-フルオロフェニル)-4-ヒドロキシピペリジン-1-イル)-クロマン-4，7-ジオール；
(1R＊，2R＊)-1-(4-ヒドロキシ-3-メトキシフェニル)-2-(4-(4-フルオロフェニル)-4-ヒドロキシピペリジン-1-イル)-プロパン-1-オール；
その鏡像異性体；ならびに
前述の化合物およびそれらの鏡像異性体の薬学的に許容される塩。
【００７５】
式Iの化合物は下記のとおりに調製することができる。R2およびR5が一体となってクロマン-4-オール環を形成し、かつR1、R3、およびR4が水素である式Iの化合物は、1994年10月18日にバトラーに付与された米国特許第5,356,905号に記載および引用されている一つまたは複数の合成法によって調製することができ、前述の開示は参照として本明細書に組み入れられる。R2およびR5が別々であり、かつR1、R2、R3およびR4が水素である式Iの化合物は、1993年2月9日にチェナードに付与された米国特許第5,185,343号；1993年12月21日にチェナードに付与された米国特許第5,272,160号；および1994年8月16日にチェナードに付与された米国特許第5,338,754号に記載および引用されている一つまたは複数の合成法によって調製することができ、前述の開示はすべてその全体が参照として本明細書に組み入れられる。式Iの化合物はまた、2000年4月4日にチェナードらに付与された米国特許第6,046,213号；1998年4月28日にバトラーらに付与された米国特許第5,744,483号；1999年12月28日にアンディーノらに付与された米国特許第6,008,233号；1996年11月28日に公開されたPfizer Inc.による国際公開公報第96/37226号；および1996年2月29日に公開されたPfizer Inc.による国際公開公報第96/06081号に記載および引用されている一つまたは複数の合成法によっても調製することができる。本明細書において引用されている米国特許、公開出願、および引用科学刊行物はすべて、その全体が参照として本明細書に組み入れられる。
【００７６】
CP-101,606と呼ばれている好ましい化合物、(1S，2S)-1-(4-ヒドロキシフェニル)-2-(4-ヒドロキシ-4-フェニルピペリジン-1-イル)-1-プロパノール((1S，2S)遊離塩基)、およびその酒石酸塩は、先に参照した米国特許第5,272,160号に記載のとおりに調製することができる。(1S，2S)遊離塩基および対応する(1R，2R)鏡像異性体を生成するための、ラセミ体1-(4-ヒドロキシフェニル)-2-(4-ヒドロキシ-4-フェニルピペリジン-1-イル)-1-プロパノールの分割は、先に参照した米国特許第6,008,233号に記載のとおりに実施することができる。
【００７７】
(1S，2S)遊離塩基の無水メシレートは、先に参照した米国特許第5,272,160号に記載のとおりに調製することができる。(1S，2S)遊離塩基の無水メシレートは、相対湿度81％の環境で平衡化すると、(1S，2S)鏡像異性体のメシレート塩3水和物に変換されることになる。
【００７８】
(1S，2S)-1-(4-ヒドロキシフェニル)-2-(4-ヒドロキシ-4-フェニルピペリジン-1-イル)-1-プロパノールのメシレート塩3水和物は、米国特許第6,008,233号に記載のとおり、(1S，2S)遊離塩基から調製することができる。
【００７９】
もう一つの好ましい化合物、(3R，4S)-3-(4-(4-フルオロフェニル)-4-ヒドロキシ-ピペリジン-1-イル］-クロマン-4，7-ジオール((3R，4S)クロマノール)は、先に参照した米国特許第5,356,905号および米国特許第5,744,483号に記載のとおりに調製することができる。(3R，4S)クロマノールの合成に必要とされる出発物質および試薬は市販されているか、または文献に記載の合成法に従って容易に得ることができる。
【００８０】
イフェンプロジルの構造は式IIとして以下に示しており、米国特許第3,509,164号に記載のものと同様の方法によって調製することができる。エリプロジルの構造は式IIIとして以下に示しており、米国特許第4,690,931号に記載のものと同様の方法によって調製することができる。
【化６】
0003666866.tif 000007
【化７】
0003666866.tif 000008
【００８１】
本発明の実施において有用なNR2Bサブユニット選択的NMDA受容体アンタゴニストは、薬学的に許容される塩の形態で用いることもできる。「薬学的に許容される塩」という表現は、塩酸塩、臭化水素塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、リン酸水素塩、リン酸2水素塩、酢酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩(メシレート)、およびp-トルエンスルホン酸塩(トシレート)などの塩が含まれるが、これらに限定されることはないと意図される。本発明の方法に従って用いられる化合物の酸付加塩は、塩基型を適当な酸と反応させることによって容易に調製される。塩が1塩基酸の塩(例えば、塩酸塩、臭化水素塩、p-トルエンスルホン酸塩、酢酸塩)、2塩基酸の水素型(例えば、硫酸水素塩、コハク酸塩)、または3塩基酸の2水素型(例えば、リン酸2水素塩、クエン酸塩)である場合、少なくとも1モル当量、通常は1モル過剰の酸を用いる。しかし、硫酸塩、ヘミコハク酸塩、リン酸水素塩、またはリン酸塩などの塩が望ましい場合、適当で正確な化学当量の酸が一般に用いられると考えられる。遊離塩基および酸は通常は共溶媒中で混合され、そこから所望の塩が沈殿するか、または沈殿しない場合には、濃縮および/または非溶媒の添加によって単離することができる。
【００８２】
NR2Bサブユニット選択的NMDA受容体アンタゴニストである任意の他の化合物を、その薬学的に許容される塩を含めて、本発明の方法において用いることができる。本発明に従って用いることができる、NR2Bサブユニット選択性を有するNMDA受容体アンタゴニストには、例えば、米国特許第6,046,213号；米国特許第5,185,343号；米国特許第5,272,160号；米国特許第5,338,754号；米国特許第5,356,905号；米国特許第6,046,213号；米国特許第5,744,483号；米国特許第6,008,233号；国際公開公報第96/37226号；および国際公開公報第96/06081号に記載のものが含まれる。本発明に従って用いることができる、他のNR2Bサブユニット選択的NMDA受容体アンタゴニストは、国際公開公報第97/32581号；国際公開公報第98/18793号；国際公開公報第97/23202号；EP 0 824 098 A1号；EP 0 846 683 A1号；および1998年11月26日に公開されたDE 19739331号に記載されている。
【００８３】
本発明の方法に従って用いることができる、NR2B NMDA受容体サブユニットに選択的に結合することが示されている他の化合物は、上記のイフェンプロジル、エリプロジル(米国特許第4,690,931号に記載)、ならびに国際公開公報第97/23458号；国際公開公報第97/23216号；国際公開公報第97/23215号；および国際公開公報第97/23214号に記載の化合物である。
【００８４】
NR2Bサブユニットに特異的に結合することにより、NR2Bサブユニットを含むNMDA受容体に選択的に拮抗する化合物は、NR1AサブユニットおよびNR2Bサブユニットで同時トランスフェクションされた組換えアフリカツメガエル卵母細胞におけるNMDA誘導電流の阻害について、化合物をスクリーニングすることにより決定することができる(例えば、モニヤー(Monyer)ら、Science、1992、256：1217〜1221参照)。NR2Bサブユニットを含む組換え細胞における電流を阻害する化合物活性を、NR1サブユニットならびにNR2A、NR2C、およびNR2Dサブユニットを発現する組換えアフリカツメガエル卵母細胞におけるNMDA誘導電流を阻害する活性と比較することができる(上記のチェナードおよびメニチ参照)。
【００８５】
本発明の目的のために、化合物がNR2Bサブユニット選択性を有するか否かを予想することができる一つの一般法は、［3H］放射性標識ラセミ体CP-101,606(これは［3H］(+)-(1S，2S)-1-(4-ヒドロキシ-フェニル)-2-(4-ヒドロキシ-4-フェニルピペリジノ)-1-プロパノールを含む；例えば、米国特許第6,046,213号参照)を用いる標準競合結合アッセイ法である。ラセミ体［3H］CP-101,606とNR2Bサブユニットへとの結合阻害に関して、化合物のIC50が約5μM未満であれば、化合物は本明細書の目的のためのNR2Bサブユニット選択性を有する。そのようなアッセイ法の例は下記のとおりである。
【００８６】
NR2Bサブユニット結合アッセイ法の例
NR2Bサブユニット含有NMDA受容体に対する化合物の選択性は、上記のチェナードおよびメニチに記載のとおり、ラットの前脳におけるラセミ体［3H］CP-101,606結合部位への親和性として定義することができる。この親和性は下記の放射性リガンド結合アッセイ法において評価される。選択的化合物は、好ましくは約≦5μMのIC50で、ラット前脳膜からラセミ体［3H］CP-101,606の特異的結合を置換するものである。
【００８７】
ラセミ体［3H］(+)-(1S，2S)-1-(4-ヒドロキシ-フェニル)-2-(4-ヒドロキシ-4-フェニルピペリジノ)-1-プロパノールとラット前脳膜との結合は、メニチらによって記載されたとおりに測定される(CP-101,606、「前脳ニューロンに選択的な強力神経保護物質(a potent neuroprotectant selective for forebrain neurons)」、European Journal of Pharmacology、1997、331：117〜126)。成体雄CDラットの前脳を0.32Mショ糖中、4℃でホモジナイズする。粗核ペレットを1,000×gで10分間遠心沈分離することによって除去し、上清を17,000×gで25分間遠心分離する。得られたペレットを5mMトリス酢酸(pH7.4)に4℃で10分間再懸濁し、細胞性粒子を溶解して、再度17,000×gで遠心分離する。得られたペレットをトリス酢酸中で2回洗浄し、10mgタンパク質/mlで再懸濁し、使用まで-20℃で保存する。
【００８８】
結合アッセイ法のために、膜を解凍し、ホモジナイズし、50mMトリスHCl(pH7.4)で0.5mgタンパク質/mlとなるように希釈する。被検化合物を様々な濃度で加え、その後、ラセミ体［3H］CP-101,606を加える(比放射能42.8Ci/mmol、最終濃度5nM)。振盪水浴中、30℃で20分間インキュベートした後、試料をMB-48Rセル-ハーベスター(MB-48R Cell Harvester)(Brandel Research and Development Laboratories、メリーランド州ゲイザースバーグ)を用いてワットマンGFBグラスファイバーフィルター上でろ過する。フィルターを氷冷トリスHCl緩衝液で10秒間洗浄し、フィルター上にトラップされた放射能を液体シンチレーション分光法により測定する。非特異的結合を、100μMのラセミ体CP-101,606を含む平行インキュベーションで決定する。特異的結合は全体の結合から非特異的結合を減じたものとして定義される。
【００８９】
患者に投与され、「有効量」を構成する神経保護物質の量は一般に、様々な因子の中でも特に患者の性別、体重、年齢、および全身の健康状態、ならびに患者が治療を受ける事象または状態の型および重症度を含む、患者の具体的状況に依存することになる。神経保護物質の有効量は、典型的には、主治医がそのような情報を特定の薬剤に関する臨床試験結果および公開されている報告と組み合わせて用いることによって決定されると考えられる。例えば、NR2B選択的NMDAアンタゴニストの有効量は、約0.02mg/kg/日から約10mg/kg/日の範囲となる。当然のことながら、治療を受ける特定の患者の具体的状況、ならびに投与される具体的な神経保護物質に応じて、この範囲外の用量が必要とされることもあり、これらは主治医が特定の状況を考慮して決定することができる。
【００９０】
神経保護物質は一般には、当技術分野において公知のとおり、薬学的に許容される担体または希釈剤をさらに含む薬学的組成物の形態で投与されると考えられる。そのような組成物は一般に、投与方式に適した固体または液体溶媒または希釈剤を用いる従来の様式で製剤化される。経口投与のためには、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、およびリン酸2カルシウムなどの賦形剤を、デンプン、好ましくはジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、および特定の複合ケイ酸塩などの様々な崩壊剤、ならびにポリビニルピロリドン、ショ糖、ゼラチン、およびアカシアなどの結合剤と共に含む錠剤を用いることができる。加えて、錠剤化のためには、これらに限定されることはないが、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、およびタルクなどの滑沢剤が非常に有用であることが多い。弾性軟カプセルおよびゼラチン硬カプセルの充填剤としても、同様の型の固体組成物を用いることができる。これに関連する好ましい物質には、例えばラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールも含まれる。経口投与のために水性懸濁剤および/またはエリキシル剤が望まれる場合、必須の活性成分を様々な甘味または着香料、着色料、または色素、ならびに望ましい場合には乳化剤および/または懸濁化剤や、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリンおよびその様々な組み合わせなどの希釈剤と組み合わせることもできる。
【００９１】
非経口投与のためには、本発明の方法において用いられる神経保護化合物の溶液を、標準技術に従って製剤化する。例えば、ゴマ油もしくは落花生油のいずれか、または水性プロピレングリコール中の神経保護化合物の溶液を用いることができる。水性溶液は必要に応じて適当に緩衝化させなければならず、液体希釈剤をまず等張化する。これらの水性溶液は、静脈内注射に適している。油性溶液は、関節内、筋肉内、および皮下注射に適している。これらすべての溶液の無菌条件下での調製は、当業者には公知の標準的な製薬技術によって容易に達成される。
【００９２】
本発明は、患者が神経保護物質による治療から恩典を得るか否かを特定する方法であって、神経保護物質による初回治療の前に患者から採取した生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーの量が、所定の最小閾値を超えているか否かを決定する段階を含み、患者から採取した生体試料中のバイオマーカーの量が最小閾値を超えていれば、その患者は実質的に神経障害に罹患した患者であると一次的に特定される方法をさらに提供する。例えば、S-100bについて、そのような最小閾値は、特にS-100bのレベルが少なくとも24時間その値以上で維持される場合には、血清1L中約0.2μgでありうる。しかし、前述のとおり、この値は個々の患者の状態に応じて変動すると考えられる。
【００９３】
本方法は、神経保護物質による初回治療の前に患者から採取した生体試料中の少なくとも一つのバイオマーカーの量が、所定の最大閾値を超えているか否かを決定する段階も含み、患者から採取した生体試料中のバイオマーカーの量が最大閾値を超えていれば、その神経障害に罹患した患者は、予想される転帰が不良であると考えられるような重度の神経障害に罹患した患者であると二次的に特定される。例えば、S-100bについて、そのようなレベルは血清1L中約1.5から2.0μgであり得て、好ましくは少なくとも24時間そのレベル以上で維持される。
【００９４】
本方法は、神経保護物質による治療から実質的に恩典を受けうる患者を、そのような治療から全く恩典を受けないというわけではないにしても、ほんのわずかであると考えられる患者から識別するのを助けるために、神経障害の可能性を有する患者をスクリーニングする方法として有用であると思われる。
【００９５】
下記の実施例は例示のみを目的として示されたものであって、本発明の範囲を制限することを意図するものではない。
【００９６】
【実施例】
実施例1．神経障害の治療を受ける患者の反応のモニタリング
重度の挫傷型頭部外傷に罹患した患者の血清中のS-100bレベルを測定した。患者198名の第一群では、CP-101,606の72時間一定注入による治療を行った。患者202名の第二群では、代わりにプラセボの一定注入を行った。注入後120時間までの様々な時点で、患者から血清試料を採取した(図1)。S-100bレベルを、Byk-Sangtec Diagnostica GmbH & Co.(ディーツェンバッハ、ドイツ)から市販されているルミノメトリックイムノアッセイキットを用いて定量した。
【００９７】
二つの群におけるS-100bレベルを図1に示す。S-100bレベルは、プラセボ群に比べて、CP-101,606を投与した患者で著しく低下した。
【００９８】
実施例2．卒中患者のモニタリング
虚血性卒中に罹患した患者から、基準時、傷害後1日、2日、3日、4日、4.5日、7日、30日、および90日の時点で血漿試料を採取した。全血漿試料でS100Bを測定し、全濃度(μg/L)と、30日および90日のNIHSS(米国立衛生研究所卒中スケール、National Institude of Health Stroke Scale)および拡散強調MRIで測定した梗塞量を含む臨床転帰尺度との相関性を調べた。72時間のS100Bレベルと90日のNIHSSとの間の関係を調べるために、ロジスティック回帰分析を実施した。モデルはNIHSS基準スコアに対して補正を行った。データより、72時間のS100Bレベルを示す患者では、NIHSSスコアが低い傾向にあることが判明した。実際の梗塞量(標準化拡散強調MRIによって評価した)と72時間の血漿S100Bレベルとの間の相関分析も行った。拡散強調MRI画像は基準時および卒中傷害後48時間に獲得した。ロジスティック変換した標準化値(基準値/48時間)を、ロジスティック変換した72時間のS100B値と比較した。全般に、72時間の血漿S100B値は1、DW-MRIで測定した梗塞量に相関していた。
【００９９】
上記で引用されたすべての特許、特許出願、および刊行物は、その全体が参照として本明細書に組み入れられる。
【０１００】
本発明は、本明細書に記載の特定の態様によって範囲が限定されることはなく、特定の態様は本発明の個々の局面を単に例示することが意図され、機能的に同等な方法および成分は本発明の範囲内である。実際、本明細書において示され、記載されているもの以外にも、当業者には、前述の説明から本発明の様々な改変が明らかであると思われる。そのような改変は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
【０１０１】
【発明の効果】
本発明により、神経保護治療をモニターする方法が提供された。
【図面の簡単な説明】
【図１】  頭部打撲損傷に罹患した患者二群から採取した血清試料中のS-100bレベルのモニタリングを示すデータを図示する。第一の群は神経保護物質CP-101,606による治療を受け、第二の群はプラセボによる治療を受けた。
【図１】
0003666866.tif 000009