(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
８,９-デヒドロエストロンのアルカリ金属塩。
【請求項２】
前記アルカリ金属が、ナトリウム、カリウムまたはリチウムである請求項１記載の化合物。
【請求項３】
８,９-デヒドロエストロンのアルカリ金属塩を製造する方法であって、８,９-デヒドロエストロンをアルカリ金属塩基で処理し、そのアルカリ金属塩を得ることからなる製造方法。
【請求項４】
前記アルカリ金属塩基が、水素化ナトリウム、水素化カリウムまたはｎ-ブチルリチウムである請求項３記載の方法。
【請求項５】
他のエストロン様ステロイドを含まない化合物として単離された８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルの医薬上許容される塩。
【請求項６】
前記医薬上許容される塩がアルカリ金属塩である請求項５記載の化合物。
【請求項７】
前記アルカリ金属が、ナトリウム、カリウムまたはリチウムである請求項６記載の化合物。
【請求項８】
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのカルシウム塩である請求項５記載の化合物。
【請求項９】
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのマグネシウム塩である請求項５記載の化合物。
【請求項１０】
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのアルミニウム塩である請求項５記載の化合物。
【請求項１１】
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのアルキルアミン塩であって、そのアミンのアルキル部分が１〜６個の炭素原子を有する請求項５記載の化合物。
【請求項１２】
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのエチルアミン塩である請求項１１記載の化合物。
【請求項１３】
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのジアルキルアミン塩であって、そのアミンのアルキル部分が１〜６個の炭素原子を有する請求項５記載の化合物。
【請求項１４】
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのジメチルアミン塩である請求項１３記載の化合物。
【請求項１５】
請求項５記載の医薬上許容される塩を製造する方法であって、８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルを、アルカリ金属水酸化物、アルカリ土類金属水酸化物、アミン、アンモニアまたは水酸化アンモニウムから選択される塩基で処理することからなる製造方法。
【請求項１６】
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのアルカリ金属塩の安定化された組成物であって、８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのアルカリ金属塩およびトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンからなる組成物。
【請求項１７】
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのアルカリ金属塩に対するトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンの割合が１：０.５〜０.５：１である請求項１６記載の組成物。
【請求項１８】
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのアルカリ金属塩の安定化された組成物を製造する方法であって、安定化量のトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンの存在下、極性の非プロトン溶媒中で、トリメチルアミン-三酸化硫黄を８,９-デヒドロエストロンのアルカリ金属塩と反応させることからなる製造方法。
【請求項１９】
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのアルカリ金属塩の安定化 された組成物の製造方法であって、極性の非プロトン溶媒中で、トリメチルアミン-三酸化硫黄を８,９-デヒドロエストロンのアルカリ金属塩と反応させ、その反応混合物に安定化量のトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンを添加し、８,９-デヒドロエストロンのアルカリ金属塩とトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンとの該安定な混合物を回収することからなる製造方法。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
プレマリン（Premarin▲Ｒ▼）などの実質的に純粋で低毒性の天然に存在するエストロゲン組成物の使用は、エストロゲン欠乏症の女性や他のホルモン関連疾患における更年期症候群、骨粗鬆症/骨減少症などの症状を緩和するための好ましい治療法となりつつある。天然に存在するエストロゲン組成物のエストロゲン成分は、一般に、エストロン、エキリン、エキレニン、β-エストラジオール、ジヒドロエキレニンおよびβ-ジヒドロエキレニンの硫酸エステルとして同定されている（米国特許第2,834,712号）。エストロゲン組成物は、通常、有機酸または無機酸のアルカリ金属塩によって、約６.５〜７.５の実質的に中性のｐＨに緩衝化、すなわち安定化されている。尿素もまた、安定化剤として用いられている（米国特許第3,608,077号）。合成の複合エストロゲンを安定化するための抗酸化剤の導入および加水分解を防止するためのトリス（Tris▲Ｒ▼）によるｐＨ調節の失敗が米国特許第4,154,820号に開示されている。
８,９-デヒドロエストロンは、９,１１不飽和への異性化によるエストロンの合成製造における中間体（米国特許第3,394,153号）として、および３-シクロペンチルオキシ-１７-エチニル誘導体の製造における中間体（実施例XXVIII、米国特許第3,649,621号）として有用な公知の化合物である。さらに、８,９-デヒドロエストロンは、エストロゲン活性を有し、血液中の脂質レベルを低下させることが知られている（実施例１１および１２；米国特許第3,391,169号）。
発明の説明
本発明によれば、８,９-デヒドロエストロン硫酸エステルの医薬上許容される塩の一群が提供される。本発明の医薬上許容される塩は、８,９-デヒドロエストロン硫酸エステルのアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、アルキルアミン塩およびジアルキルアミン塩である。アルカリ金属塩は、混合エステルの天然源に見い出される物質中に存在する他の複合エステルを含まないものである。さらに、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンと組み合わせた８,９-デヒドロエストロン硫酸エステルの安定化された塩が、心臓血管系疾患の治療における８,９-デヒドロエストロン硫酸エステル塩および８,９-デヒドロエストロン自体の使用と共に、提供される。
さらに、８,９-デヒドロエストロン硫酸エステルの塩およびそれらの安定化された組成物の製造方法が提供される。この製造方法は優れた生成物の制御を与える。本発明の方法は、ステロイドの硫酸化に際して一般に必要とされる方法、すなわち、ステロイドをアミン-三酸化硫黄錯体で処理した後、好ましくはヒドロキシル基含有溶媒中において、強アルカリ塩基で媒介されたカチオン交換樹脂で処理することによって実行される方法とは相違する。それらの報告されたステロイドの硫酸化法は、８,９-デヒドロエストロンの硫酸化には効果的でないことが証明された。ここに開示の方法は、まず８,９-デヒドロエストロンのアルカリ金属塩を製造した後、テトラヒドロフランなどの極性の非プロトン溶媒中において、温和な条件下、トリメチルアミン-三酸化硫黄で硫酸化することに基づいているが、その際、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを安定化剤として同時にまたは引き続いて添加する。８,９-デヒドロエストロンの最初の中間体の製造に採用されるアルカリ塩基は、好ましくは、水素化物形態のナトリウムまたはカリウムおよびｎ-ブチルリチウムとしてのリチウムである。
カルシウムカチオンまたはマグネシウムカチオンを含むアルカリ土類金属塩は、適当な塩基を用い、アルカリ金属塩の金属交換によって、直接的に、あるいは、弱酸性アンバーライト（Amberlite）交換体ＤＰ-１、ＩＲＣ-５０、ＩＲＣ-７６、ＣＧ-５０またはＩＲＰ-６４などのカチオン交換樹脂による交換を適当に繰り返すことによって、製造される。必要であれば、硫酸エステルのアルカリ金属塩を酢酸などの温和な酸で酸性化した後、ｎ-ブタノールなどのアルコールで抽出し、化学量論的な量の水酸化カルシウムまたは水酸化マグネシウム、水酸化アンモニウムまたは所望のアミンで中和すると、他の塩が得られる。アミン塩の場合、モノ-アルキルアミンは、１〜６個の炭素原子を有し、例えば、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、ブチルアミン、第三ブチルアミン、ヘキシルアミンなどが挙げられる。ジアルキルアミン塩は、各アルキル基に１〜６個の炭素原子を有し、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ジ（２-メチルペンチル）アミン、ジヘキシルアミンなどから製造される。
以下の実施例は、不活性な雰囲気下、約０℃で、テトラヒドロフラン中のＮａＨ、ＫＨまたはｎ-ブチルリチウムを用いた直接の金属化による８,９-デヒドロエストロンの塩の調製を例示するものである。アルカリ金属塩を含有する溶液は、硫酸化反応に直接用いられる。上記方法の様々な段階におけるトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの導入もまた、例示されている。実施例６および７は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの安定化への影響を例示している。
実施例１
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのナトリウム塩
窒素下、０℃で、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中における水素化ナトリウム（０.２４ｇ、１０ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中における８,９-デヒドロエストロン（２.６８ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。１０分後、冷却浴を取り外し、反応混合物を室温に戻した。これに、トリメチルアミン-三酸化硫黄錯体（１.３９ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加した。１０分間撹拌した後、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（１.７９ｇ、１５ｍｍｏｌ）を添加し、一晩撹拌し続けた。溶媒を留去し、残渣を水（１８０ｍＬ）中に取り、ジエチルエーテル（２×５０ｍＬ）で洗浄した。この水溶液を焼結ガラスフィルター（中位の多孔度）を用いて濾過し、濾液を凍結乾燥に供して、５.２ｇの固形物を得た。
分析プロフィール
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのナトリウム塩のＨＰＬＣ純度−９６.３％。
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのナトリウム塩の水溶液を酸性化して遊離の硫酸エステルを得た後、ｎ-ブタノールで抽出し、この酸を水酸化カルシウムで中和し、その生成物を凍結乾燥すると、８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのカルシウム塩が得られる。水酸化マグネシウムまたは水酸化アンモニウムを用いた同様の反応は、それぞれ、８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのマグネシウム塩および８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのアンモニウム塩を与える。
実施例２
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのナトリウム塩
窒素下、０℃で、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中における水素化ナトリウム（０.２４ｇ、１０ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中における８,９-デヒドロエストロン（２.６８ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。室温で３０分間撹拌した後、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（１.７９ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、さらに３０分後、トリメチルアミン-三酸化硫黄錯体（１.３９ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、この溶液を一晩撹拌した。溶媒を留去し、残渣を水（４０ｍＬ）中に取った。水層をジエチルエーテル（２×２０ｍＬ）で洗浄し、次いで凍結乾燥して、５.１ｇの固形物を得た。
分析プロフィール
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのナトリウム塩のＨＰＬＣ純度−９６.２％。
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのナトリウム塩の水溶液をアンバーライト（Amberlite）ＩＲＣ-５０のカラムに通過させると、遊離の硫酸エステルが酸として得られる。これをエチルアミンで処理すると、生成物の凍結乾燥によって、８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのエチルアミン塩が得られる。ジメチルアミンを用いれば、８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのジエチルアミン塩が得られる。
実施例３
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのナトリウム塩
窒素下、０℃で、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中における水素化ナトリウム（０.２４ｇ、１０ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中における８,９-デヒドロエストロン（２.６８ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物を室温に加温した後、３０分間撹拌し、トリメチルアミン-三酸化硫黄錯体（１.３９ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加した。一晩撹拌し続けた。溶媒を留去し、残渣を水（５０ｍＬ）中に取った。水層をジエチルエーテル（２×２０ｍＬ）で洗浄し、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（１.２１ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた清澄な溶液を凍結乾燥して、５.０４ｇの固形物を得た。
分析プロフィール
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのナトリウム塩のＨＰＬＣ純度−９６.２％。
実施例４
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのリチウム塩
窒素下、−７０℃で、テトラヒドロフラン（１４ｍＬ）中におけるトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（０.６３ｇ、５.２ｍｍｏｌ）および８,９-デヒドロエストロン（０.９４ｇ、３５ｍｍｏｌ）の混合物に、ｎ-ブチルリチウム（ヘキサン中の２.５Ｍ溶液、１.４ｍＬ）を添加した。この温度で１０分間撹拌した後、冷却浴を取り外した。０℃で、トリメチルアミン-三酸化硫黄錯体（０.４９ｇ、３.５ｍｍｏｌ）を添加した後、周囲温度に戻し、一晩撹拌し続けた。溶媒を留去し、残渣を水（１５０ｍＬ）中に取った。この水層をジエチルエーテル（３×３５ｍＬ）で洗浄し、凍結乾燥して、１.１１ｇの固形物を得た。
分析プロフィール
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのリチウム塩のＨＰＬＣ純度−９０.４％。
実施例５
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのカリウム塩
窒素下、０℃で、テトラヒドロフラン（１４ｍＬ）中における水素化カリウム（０.１４ｇ、３.５ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（０.６３ｇ、５.２ｍｍｏｌ）を添加した後、テトラヒドロフラン（１４ｍＬ）中における８,９-デヒドロエストロン（０.９４ｇ、３.５ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。１５分後、トリメチルアミン-三酸化硫黄錯体（０.４８ｇ、３.５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温に戻した後、追加量のテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）を添加し、一晩撹拌し続けた。溶媒を留去し、残渣を水（１５０ｍＬ）中に取った。この水層をジエチルエーテル（３×３５ｍＬ）で洗浄し、引き続いて凍結乾燥して、１.６３ｇの固形物を得た。
分析プロフィール
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのカリウム塩のＨＰＬＣ純度−９１.３％。
強い水酸化カルシウム溶液を溶離液として採用し、８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのカリウム塩の水溶液を、アンバーライト（Amberlite）ＩＲＰ-６４を含むイオン交換カラムに通過させると、８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのカルシウム塩が得られる。マグネシウム塩およびアンモニウム塩は同様にして得られる。
これらの手順から、本発明の方法が速やかに進行し、高純度の生成物を与えることがわかる。
実施例６
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのナトリウム塩
窒素下、０℃で、テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中におけるＮａＨ（０.５７ｇ、２４ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中における８,９-デヒドロエストロン（５.３６ｇ、２０ｍｍｏｌ）の溶液を１０分間かけて添加した。反応混合物を室温に加温し、トリメチルアミン-三酸化硫黄錯体（３.３４ｇ、２４ｍｍｏｌ）。撹拌を２４時間続けた。溶媒を留去し、乾燥固体をジエチルエーテルに再懸濁し、水（１００ｍＬ）で抽出した。水層を分離し、ジエチルエーテル（２×２０ｍＬ）で洗浄し、凍結乾燥して、５.６５ｇの固形物を得た。
分析プロフィール
８,９-デヒドロエストロン-３-モノ硫酸エステルのナトリウム塩のＨＰＬＣ強度−７３.８％。
８,９-デヒドロエストロン-３-モノ硫酸エステルのナトリウム塩のＨＰＬＣ強度−３３％（２週間後に再試験）。
実施例７
８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのナトリウム塩
窒素下、０℃で、テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中における水素化ナトリウム（０.７２ｇ、３０ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（５.３８ｇ、４４ｍｍｏｌ）を添加した後、テトラヒドロフラン（１１０ｍＬ）中における８,９-デヒドロエストロン（８.０４ｇ、３０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物を室温に戻した後、トリメチルアミン-三酸化硫黄錯体（４.２１ｇ、３０ｍｍｏｌ）を添加し、２４時間撹拌した。反応混合物を実施例６と同様に処理して、１５.２ｇの固形物を得た。
分析プロフィール
８,９-デヒドロエストロン-３-モノ硫酸エステルのナトリウム塩のＨＰＬＣ/ＧＣ強度−５５.８％。
８,９-デヒドロエストロン-３-モノ硫酸エステルのナトリウム塩のＨＰＬＣ強度−５５.３％（２週間後に再試験）。
トリス（ヒドロキシルアミン）アミノメタンのＨＰＬＣ強度−３０.９％。
スペクトル特性化
1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）−無矛盾
1Ｈ ＮＭＲはまた、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンに対する複合エストロゲンの割合が約１：１.５であることを示している。
実施例６から、安定化を行わなければ、硫酸エステルは急速に分解することがわかるが、実施例７に示すように、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンは加水分解からの保護を与える。ここで、硫酸エステルの強度は、２週間にわたって実質的に一定のままであった。それゆえ、このことは、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの不存在下で得た場合に比べて良好な生成物の制御を示している。安定化された生成物は、固体状態で、高純度の状態で単離され、医薬上のエストロゲン活性と共に、中性ｐＨまたはその付近における所望の水溶性を有する。
本発明化合物のエストロゲン活性は、それらをラットおよびマウスに、それぞれ７日間および３日間にわたって、経口的または非経口的（皮下）に投与し、賦形剤だけを与えた対照と比較した子宮の重量増加を測定することによって、確立された。これらの標準的な実験手順の結果を以下に示した。
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かくして、本発明の８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルの塩は、エストロゲン欠乏症の代償療法に有用なエストロゲンである。さらに、それらは、乳汁分泌の抑制や、流行性耳下腺炎性睾丸炎および老人性骨粗鬆症の予防および治療に有用である。獣医学的な目的上、本発明のステロイドは、発育不全の雌性動物、失禁、去勢した雌イヌの膣炎、陣痛微弱、子宮留膿症および停留胎膜の代替療法に有用である。さらに、本発明の化合物は、心臓血管を保護する性質を有し、アテローム性動脈硬化症の治療に有用である点で、特に興味深い。心臓血管を保護するこれら性質は、骨粗鬆症を予防するために閉経後の患者をエストロゲンで治療する場合や、男性でエストロゲン療法が必要な場合に、非常に重要である。
アテローム性動脈硬化症の治療は、一般に、抗高脂血症薬の投与、１０〜２０％の血圧低下、および食事療法や運動による高密度脂質の血中レベルの上昇による続発症（狭心症、心筋梗塞、不整脈、心不全、腎不全、卒中、末梢動脈閉塞、および関連の疾患状態）の低減に向けられる。これらの処置は、一般に、疾患状態の方向を逆転するよりはむしろ疾患状態の進行速度を遅くするように設計される。アテローム性動脈硬化症治療剤は、その疾患状態の治療に通常採用される他の医薬品、例えば、抗高脂血症剤、不整脈治療剤、β遮断薬などと共に投与される場合が多い。したがって、血液中の脂質を減少させる本発明化合物の性質は、アテローム性動脈硬化症の治療へのそれらの使用に付加的な利点を与える。
本発明の心臓血管保護因子によれば、アテローム性動脈硬化症を治療する方法が提供される。この治療方法は、８,９-デヒドロエストロン-３-硫酸エステルのアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、アルキルアミン塩またはジアルキルアミン塩のアテローム性動脈硬化治療量を、経口的にまたは非経口的に投与することからなる。ここで、上記アミンのアルキル基は１〜６個の炭素原子を含む。もちろん、８,９-デヒドロエストロン自体、上記硫酸エステル塩の推定上の代謝物またはインビボでの加水分解物は、エステル塩と同様の心臓血管保護効果を示し、所定の状況下で利用可能かつ使用可能であれば、それ自体を直接採用してもよい。このステロイドによって、動脈の表面領域の損傷および動脈のコレステロール含量を、用量に応じて有意に減少させることができる。
本発明のステロイドを温血動物のエストロゲン剤またはユニークな心臓血管保護剤として採用する場合、それらは単独または医薬上許容される担体と組み合わせて投与すればよい。この割合は、この化合物の溶解度や科学的性質、選択された投与経路および標準的な薬理学的治療によって決定される。例えば、それらは、デンプン、乳、糖、ある種の粘土などの賦形剤を含む錠剤やカプセル剤の形態で経口的に投与すればよい。それらはまた、着色剤や香味剤を含む液剤の形態で経口的に投与したり、非経口的に注射してもよい。非経口的投与の場合、それらは、他の溶質；例えば、液剤を等張性にするのに充分な生理食塩水またはグルコースを含む滅菌液剤の形態で用いればよい。
本発明の治療剤の投与量は、投与形態および選択された特定の化合物によって様々である。さらに、治療を受ける特定の患者によって様々である。一般に、治療は、その化合物の至適用量より実質的に少ないわずかな投与量から開始する。その後、かかる状況下における至適な効果が達成されるまで、投与量をわずかずつ増加させる。一般に、本発明の化合物は、有害または有毒な副作用を引き起こすことなく、一般に有効な結果を与える濃度レベルで、好ましくは１日に１キロあたり約０.０２ｍｃｇｍ.〜約５００ｍｃｇｍ.の範囲内にあるレベルで投与することが最も望ましい。ただし、上記のように、年齢、性別、体重、疾患状態の重篤度、予防法などに基づいて、変更が生じる。いずれにしても、所定の患者において所望の治療応答を達成するには、担当の医師による細かな観察および追跡調査が必要である。