(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
株ＥＭＣＣ−００７７（ＮＲＲＬ  Ｂ−２１０９０）、株ＥＭＣＣ−００７８（ＮＲＲＬ  Ｂ−２１０９１）、株ＥＭＣＣ−００７９（ＮＲＲＬ  Ｂ−２１０９２）、株ＥＭＣＣ−００８０（ＮＲＲＬ  Ｂ−２１０９３）および株ＥＭＣＣ−００８１（ＮＲＲＬ  Ｂ−２１０９４）からなる群より選択され、
以下の構造を有する物質を生産する能力を有するバチルス・チューリンギエンシス株。
0003720360.tif 000024
【請求項２】
請求項１において定義されたバチルス・チューリンギエンシス株を培養することを含む、請求項１において定義された物質を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明は、バチルスチューリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）の新規株であって、この株の本質的に全ての殺虫活性がこの株の発酵上清中に存在する新規株に関する。この株は、鞘翅目の害虫に対する活性を有し、かつバチルス関連殺虫剤の殺虫活性を増強する物質を産生する。本発明は、さらに、前記物質及び殺虫剤担体、又は前記物質及びバチルス関連殺虫剤、化学殺虫剤及び／又は殺虫特性を有するウイルスを含む殺虫剤組成物並びにこの殺虫剤組成物を害虫の駆除に用いる方法に関する。
発明の背景
食糧、織物及び様々な栽培植物を含む、世界の商業上重要な農作物の多くの部分が、毎年、害虫発生により失われ、数百万ドルの損害を生じている。このような害虫を駆除する試みに、様々な戦略が用いられている。
戦略の１つは、広スペクトルの殺虫剤、すなわち、広範囲の活性を有する化学殺虫剤を用いることである。しかしながら、このような化学殺虫剤の使用には多くの不都合な点がある。特に、それらの広スペクトルの活性のために、これらの殺虫剤は、有益な昆虫及び害虫の寄生生物のような非標的生物を殺してしまう可能性がある。加えて、これらの化学殺虫剤はしばしば動物及び人間にとって毒性であり、標的昆虫は、このような物質に繰り返し晒されると、しばしば耐性を身に付ける。
別の戦略は、作物に対する昆虫、カビ及び雑草の加害の抑制に天然の病原体を用いる、生物殺虫剤の使用に関与している。生物殺虫剤は、害虫に対して毒性の物質である毒素を産生する細菌を含む。生物殺虫剤は、一般に、化学殺虫剤よりも、全体的には非標的生物及び環境に対して有害ではない。
最も広く用いられている生物殺虫剤は、バチルスチューリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）（Ｂ．ｔ．）である。Ｂ．ｔ．は、広範に分布する、棒状で、好気性の胞子形成微生物である。その胞子形成サイクルの期間中、Ｂ．ｔ．は、昆虫の幼虫を殺す、結晶δ−エンドトキシンとして知られる蛋白質を産生する。したがって、Ｂ．ｔ．は農薬として非常に有用である。
幾つかの株、例えば、バチルスチューリンギエンシス・クルスタキ亜種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｋｕｒｓｔａｋｉ）及びバチルスチューリンギエンシス・アイザワイ亜種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ  ｓｕｂｓｐ．  ａｉｚａｗａｉ）は、鱗翅目に特異的であることが見出されている。バチルスチューリンギエンシス・イスラエレンシス亜種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｉｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ）は、双翅目に特異的であることが見出されている（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ、米国特許４，１６６，１１２号）。他の株、例えば、バチルスチューリンギエンシス・テネブリオニス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｔｅｎｅｂｒｉｏｎｉｓ）（Ｋｒｉｅｇら、１９８９、米国特許４，７６６，２０３号）は、鞘翅目に特異的であることが見出されている。他の鞘翅目に毒性のバチルスチューリンギエンシス株の単離が１９８６年に報告された（Ｈｅｒｎｎｓｔａｄｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．４，  ３０５−３０８，  １９８６、米国特許４，７６４，３７２号、１９８８）。“バチルスチューリンギエンシス・サン・ディエゴ亜種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｓａｎ  ｄｉｅｇｏ）”、Ｍ−７と呼ばれるこの株は、ＮＲＲＬ  Ｂ−１５９３９の登録番号でノーザン・リージョナル・リサーチ・ラボラトリー（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、ＵＳＡに寄託されている。しかしながら、‘３７２号特許の譲受人であるマイコジェン社（Ｍｙｃｏｇｅｎ，  Ｃｏｒｐ．）は、バチルスチューリンギエンシス・サン・ディエゴ亜種がバチルスチューリンギエンシス・テネブリオニス亜種であることを公式に認めている。さらに、‘３７２号特許はノボ・ノルディクスＡ／Ｓ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ）に譲渡されている。加えて、鱗翅目及び鞘翅目に対して毒性のＢ．ｔ．株が開示されている（ＰＣＴ出願ＷＯ９０／１３６５１）。ＰＣＴ出願ＷＯ９０／１３６５１に開示される毒素は８１ｋｄの分子量を有している。
その胞子形状サイクルの期間中、Ｂ．ｔ．は、２７−１４０ｋｄの範囲をとる分子量を有し、その摂取に際して昆虫の幼虫を殺す、結晶δ−エンドトキシン（類）として知られる結晶形態の蛋白質（類）を産生する。毒性活性は、所定のＢ．ｔ．株における１以上のそのようなδ−エンドトキシンに存在し得る。ほとんどのδ−エンドトキシンは、標的昆虫中腸において蛋白分解的により小さい毒性（切り詰められた）ポリペプチドに転移するプロ毒素である
0003720360.tif 000002
これらのδ−エンドトキシン類はｃｒｙ（結晶蛋白質）遺伝子によってコードされる。ｃｒｙ遺伝子は、構造類似性及び殺虫特異性に基づいて、６つのクラスと幾つかのサブクラスに分けられている。主なクラスは、鱗翅目特異的（ｃｒｙＩ）；鱗翅目及び双翅目特異的（ｃｒｙＩＩ）；鞘翅目特異的（ｃｒｙＩＩＩ）；双翅目特異的（ｃｒｙＩＶ）
0003720360.tif 000003
鞘翅目及び鱗翅目特異的（Ｔａｉｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ６：  １２１１−１２１７によってｃｒｙＶと呼ばれる）；及び（Ｆｅｉｔｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：  ２７１−２７５によってｃｒｙＶ及びｃｒｙＶＩと呼ばれる）線虫特異的遺伝子である。δ−エンドトキシン類は組換えＤＮＡ法によって製造されている。組換えＤＮＡ法によって製造されるδ−エンドトキシン類は、結晶形態であるかもしれないし、そうではないかもしれない。
Ｂ．ｔ．δ−エンドトキシンはアルカリ性ｐＨを除いて水に不溶性であり、ほとんど常にプラスミドがコードするものである。バチルスチューリンギエンシスの幾つかの株は、単独で殺虫性を有する、β−エキソトキシンもしくはスリンギエンシン（ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｎ）として知られる、熱安定性殺虫性アデニン−ヌクレオチド類似体を産生することが示されている（Ｓｅｂｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｎ  Ｈ．  Ｄ．  Ｂｕｒｇｅｓ  （ｅｄ．），  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  Ｐｅｓｔｓ  ａｎｄ  Ｐｌａｎｔ  Ｄｅｓｅａｓｅｓ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ｐ．  ２４９−２８１，  １９８１）。β−エキソトキシンは、幾つかのバチルスチューリンギエンシス培養物の上清中に見出されている。これは７８９の分子量を有し、アデノシン、グルコース、及びアラル酸を含んでなる
0003720360.tif 000004
そのホスト範囲には、イエバエ（Ｍｕｓｃａ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）、マメストラ・コンフィグラタ・ウォーカー（Ｍａｍｅｓｔｒａ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔａ  Ｗａｌｋｅｒ）、テトラニカス・ウルティカエ（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ  ｕｒｔｉｃａｅ）、ドロソフィラ・メラノガスター（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）、及びテトラニカス・チンナバリヌス（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ  ｃｉｎｎａｂａｒｉｎｕｓ）が含まれるが、これらに限定されるものではない。β−エキソトキシンの毒性は、ＡＴＰとの競合によるＤＮＡ指向性ＲＮＡポリメラーゼの阻害によるものと考えられている。β−エキソトキシンは５つのバチルスチューリンギエンシス（Ｂ．ｔ．）株中のＣｒｙプラスミドによってコードされ、β−エキソトキシンをＩ型又はＩＩ型β−エキソトキシンに分類し得ることが示されている（Ｌｅｖｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０，  Ｊ．  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．  １７２：  ３１７２−３１７９）。β−エキソトキシンＩ型は、Ｂ．ｔ．チューリンギエンシス亜種（Ｂ．ｔ．  ｓｕｂｓｐ．  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）血清型１、Ｂ．ｔ．トルウォルチ亜種（Ｂ．ｔ．  ｓｕｂｓｐ．  ｔｏｌｗｏｒｔｈｉ）血清型９、及びＢ．ｔ．ダルムスタディエンシス（Ｂ．ｔ．  ｓｕｂｓｐ．  ｄａｒｍｓｔａｄｉｅｎｓｉｓ）血清型１０によって産生されることが見出された。β−エキソトキシンＩＩ型は、Ｂ．ｔ．モリソニ亜種（Ｂ．ｔ．  ｓｕｂｓｐ．  ｍｏｒｒｉｓｏｎｉ）血清型８ａｂによって産生されることが見出され、これはＬｅｐｔｉｎｏｔａｒｓａ  ｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔａ（コロラドハムシ）に対して活性である。Ｂ．ｔ．から単離されている他の水溶性物質には、イエバエの幼虫に対して毒性であるα−エキソトキシン
0003720360.tif 000005
レシチナーゼ類、キチナーゼ類及びプロテアーゼ類を含む様々な蛋白分解酵素であり、その効果がβ−エキソトキシン又はδ−エンドトキシンと組み合わせてのみ現れるγ−エキソトキシン類（Ｆｏｒｓｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９７６，  Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ：  Ｉｔｓ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｑｕａｌｉｔｙ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｏｆ  Ｃａｎａｄａ，  ＮＲＣ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｑｕａｌｉｔｙ，  Ｓｕｂｃｏｍｍｉｔｔｅｅｓ  ｏｎ  Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｈｅｎｏｍｅｎａ）；β−エキソトキシンに類似する構造を有し、レプチノタルサ・デセムリネアタに対しても活性であるσエキソトキシン（Ａｒｇａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｊ．  Ｅｎｔｏｍｏｌ．  Ｓｃｉ．  ２６：  ２０６−２１３）；及び無水スリンギエンシン（Ｃｏｌｌ．  Ｃｚｅｃｈｏｓｌｏｖａｋ  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏｍｍ．  ４０，  １７７５，  １９７５）が含まれる。
ＷＯ９４／０９６３０は、バチルスチューリンギエンシス・クルスタキ変種及びバチルスチューリンギエンシス・アイザワイ変種の活性を増強させる水溶性物質を開示する。
Ｓｔｏｎａｒｄら（１９９４，  Ｉｎ  Ｎａｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｐｅｓｔ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  Ａｇｅｎｔｓ，  Ｐａｕｌ  Ａ．  Ｍａｎｎ，  Ｒｏｂｅｒｔ  Ｍ．  Ｈｏｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ，  ｅｄｓ．，  ＡＣＳ，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃ．，  ｐｐ．２５−３６）は、下記構造を有するディアブロチシン類（ｄｉａｂｒｏｔｉｃｉｎｓ）を開示している。
0003720360.tif 000006
１Ｒ、Ｒ1、Ｒ2＝Ｈ、Ｒ3＝ＯＨ  ディアブロチシンＡ
２Ｒ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3＝Ｈ  ディアブロチシンＢ
ディアブロチシン類は枯草菌から単離されたものであり、ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ  ｕｎｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａ）、レプチノタルサ・デセムリネアタ、アンソムス・グランディス・ボーマン（Ａｎｔｈｏｍｕｓ  ｇｒａｎｄｉｓ  Ｂｏｈｅｍａｎ）、蚊の幼虫、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、及びミクロコッカス・ルテア（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｔｅａ）に対する活性は有するが、ヨーロッパ・トウモロコシ穿孔虫（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｃｏｒｎ  ｂｏｒｅｒ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、枯草菌、及び緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対する活性は有していない。他の害虫に対する活性は、Ｓｔｏｎａｒｄらには開示されていなかった。ディアブロチシンＡもまた、Ｂ．セレウス（Ｂ．  ｃｅｒｅｕｓ）の発酵ブロスから単離された。
当該技術分野では、高い致死率のＢ．ｔ．製剤の実現を求める努力がなされている。その手段には、高い致死率を有する新規の株の探査、現存する株の加工処理、及びＢ．ｔ．胞子及び／又は結晶を新規の殺虫剤担体又は化学殺虫剤と組み合わせることによるより効果的な製剤の設計が含まれている。
公知のＢ．ｔ．製剤の殺虫活性を改善することが本発明の目的である。
また、公知の殺虫生成物の新規用途を見出すことに加えて、殺虫剤の殺虫活性を増強することも本発明の目的である。
バチルスチューリンギエンシスの新規の株を単離して、所定の害虫に対するより広いスペクトルを有する生物殺虫剤が存在するように新規物質を生成することが有利である。
発明の要約
本発明は、新規バチルスチューリンギエンシス株であって、前記株の実質的に全ての殺虫活性が前記株の発酵上清に存在する新規バチルスチューリンギエンシス株に関する。本発明のバチルスチューリンギエンシス株の発酵により得られる結晶蛋白質及び胞子は、いかなる殺虫活性をも有していない。特定の態様において、この株は、ＮＲＲＬ  Ｂ−２１０９０の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００７７、もしくはＥＭＣＣ−００７７と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、ＮＲＲＬ  Ｂ−２１０９１の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００７８、もしくはＥＭＣＣ−００７８と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、ＮＲＲＬ  Ｂ−２１０９２の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００７９、もしくはＥＭＣＣ−００７９と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、ＮＲＲＬ  Ｂ−２１０９３の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００８０、もしくはＥＭＣＣ−００８０と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、及びＮＲＲＬ  Ｂ−２１０９４の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００８１、もしくはＥＭＣＣ−００８１と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体からなる群より選択される。
甲虫目の害虫に対する殺虫活性を有し、害虫に対する異なるバチルス関連殺虫剤と共に、例えば、増強物質もしくは相乗作用物質として作用する物質が、前記株の発酵上清から得られる。好ましい態様において、この物質は、レプチノタルサ・テキサナ（Ｌｅｐｔｉｎｏｔａｒｓａ  ｔｅｘａｎａ）について全物質１ｇ当り活性成分１２６μｇのＬＣ50（ＬＣ50は害虫の５０％を殺すのに必要とされる所定の殺虫物質の濃度である）を有する。前記株の発酵物のペレットのＬＣ50は、生物検定による検定で、活性成分約３０００μｇ超／全物質のｇである。
別の態様において、前記物質は、甲中目の昆虫に対する殺虫活性を有する。最も具体的な態様において、前記物質は、甲中目のＩｐｓ  カリグラフス（Ｉｐｓ  ｃａｌｌｉｇｒａｐｈｕｓ）、ポピリア・ジャポニクス（Ｐｏｐｉｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、エピラクナ・バリバスチス（Ｅｐｉｌａｃｈｎａ  ｖａｒｉｖａｓｔｉｓ）、レプチノタルサ・デセムリネアタ、及びデンドロクトヌス・フロンタリス（Ｄｅｎｄｒｏｃｔｏｎｕｓ  ｆｒｏｎｔａｌｉｓ）種の害虫に対する驚くべき活性に加えて、ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ、レプチノタルサ・テキサナ、アンソムス・グランディア種の害虫に対する殺虫活性を有している。
特定の態様においては、前記物質は、害虫に対するバチルスチューリンギエンシス結晶δ−エンドトキシン（類）の殺虫活性を増強する。具体的な態様においては、前記物質は、甲虫目の害虫に対するバチルスチューリンギエンシス・テネブリオニス亜種の殺虫活性を増強する。
ここで定義されるところでは、“バチルス関連殺虫剤”はバチルス（例えば、バチルスチューリンギエンシス又は枯草菌）株又は胞子である。また、バチルス関連殺虫剤は、バチルスから誘導される物質、例えば、害虫に対する活性を有し、もしくは害虫を殺す蛋白質又はそれらの断片；植物を保護する物質、例えば、摂取阻害物質；又は、害虫に対する活性を有し、もしくは害虫を殺すバチルス蛋白質又はそれらの断片（例えば、チューリンギエンシスバチルスδ−エンドトキシン）をコードするバチルス遺伝子を発現することが可能な微生物及び許容し得る担体（組成物についての次の項を参照）であってもよい。害虫は、例えば、昆虫、線虫、ダニ又は巻き貝であってもよい。害虫に対する活性を有し、もしくは害虫を殺すバチルス蛋白質又はそれらの断片をコードするバチルス遺伝子を発現することが可能な微生物は、フィロプレーン（植物の葉の表面）及び／又は根城（植物の根を取り巻く土壌）及び／又は水性環境に生息しており、特定の環境（作物及び他の昆虫の生息環境）において野性型微生物とうまく競合することが可能であり、害虫に対する活性を有し、もしくは害虫を殺すバチルス蛋白質又はそれらの断片をコードするバチルス遺伝子の安定な維持と発現を提供する。そのような微生物の例には、細菌、例えば、バチルス、シュードモナス、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）、ロドシュードモナス（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、メチロフィリウス（Ｍｅｔｈｙｌｏｐｈｉｌｉｕｓ）、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、アセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、アルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）、アゾトバクター（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ）、ロイコノストク（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）、及びクロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）属、藻類、例えば、サイアノフィセアエ（Ｃｙａｎｏｐｈｙｃｅａｅ）、プロクロノフィセアエ（Ｐｒｏｃｈｌｏｎｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）、ロドフィセアエ（Ｒｈｏｄｏｐｈｙｃｅａｅ）、ディノフィセアエ（Ｄｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ）、クリソフィセアエ（Ｃｈｒｙｓｏｐｈｙｃｅａｅ）、プリムネシオフィセアエ（Ｐｒｙｍｎｅｓｉｏｐｈｙｃｅａｅ）、キサントフィセアエ（Ｘａｎｔｈｏｐｈｙｃｅａｅ）、ラフィドフィセアエ（Ｒａｐｈｉｄｏｐｈｙｃｅａｅ）、バチラリオフィセアエ（Ｂａｃｉｌｌａｒｉｏｐｈｙｃｅａｅ）、ユースチグマトフィセアエ（Ｅｕｓｔｉｇｍａｔｏｐｈｙｃｅａｅ）、クリプトフィセアエ（Ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｅａｅ）、ユーグレノフィセアエ（Ｅｕｇｌｅｎｏｐｈｙｃｅａｅ）、プラシノフィセアエ（Ｐｒａｓｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ）、及びクロロフィセラ（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）科、及び真菌、特に酵母、例えば、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、クルイベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅ���ｏｍｙｃｅｓ）、スポロボロミセス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ）、ロドロルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）、及びオーレオバシジウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属が含まれるが、これらに限定されるものではない。
ここで定義されるところでは、“殺虫活性”は、害虫を殺し、もしくは害虫の成長を阻止し、もしくは害虫の襲撃から植物を保護することによる害虫に対する活性の量を示す。
さらに、本発明は、前記物質及びバチルス関連殺虫剤を含有する殺虫剤素生物及びこの殺虫剤組成物の害虫の駆除への使用に関する。
さらに、本発明は、“実質的に純粋な”本発明の物質を得る方法であって、
（ａ）バチルスチューリンギエンシス株を適切な成長培地で培養し、
（ｂ）（ａ）の上清を回収し、かつ
（ｃ）工程（ｂ）の上清をカラムクロマトグラフィーにかけて物質を精製する、
ことを包含する方法を指向する。
ここで定義されるところでは、“実質的に純粋な”物質は、５％未満の汚染物質、例えば、δ−エンドトキシン蛋白質を含む物質を意味する。
【図面の簡単な説明】
これら、もしくは他の本発明の特徴、側面及び利点は、以下の記述、添付の請求の範囲、及び添付の図面に関してより理解されるようになるであろう。ここで、
図１は、構造Ｉを得るための合成反応図を示し、
図２は、誘導体Ａ及びＢの構造を示し、
図３は、レプチノタルサ・デセムリネアタに対するＩａ／Ｉｂ及びＮＯＶＯＤＯＲTM相乗作用の効力を示す。
発明の詳細な説明
物質の獲得
この物質は、ＮＲＲＬ  Ｂ−２１０９０の識別特徴を有するＢ．ｔ．株ＥＭＣＣ−００７７、もしくはＥＭＣＣ−００７７と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、ＮＲＲＬ  Ｂ−２１０９１の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００７８、もしくはＥＭＣＣ−００７８と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、ＮＲＲＬ  Ｂ−２１０９２の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００７９、もしくはＥＭＣＣ−００７９と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、ＮＲＲＬ  Ｂ−２１０９３の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００８０、もしくはＥＭＣＣ−００８０と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体、及びＮＲＲＬ  Ｂ−２１０９４の識別特徴を有するＥＭＣＣ−００８１、もしくはＥＭＣＣ−００８１と同じ特性を実質的に有するそれらの変異体を含み、しかしこれらに限定されるものではない、バチルスチューリンギエンシス発酵物の上清から得ることができる。
この物質は甲虫目の害虫に対する活性を有し、バチルス関連殺虫剤と共に、例えば、増強物質又は相乗作用物質として作用する。具体的な態様において、この物質は下記構造（Ｉ）を有する。
0003720360.tif 000007
ここで、
Ｒ1は、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ1-10）、アルキル（Ｃ1-10）エステル、アリール（例えば、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、ハロベンゾイル）エステル、ハロゲン、Ｃ1-5アルコキシ、又は、アラニル、バリニル、ロイシニル、イソロイシニル、フェニルアラニル、グリシニル及びフェニルグリシニルを含み、しかしこれらに限定されるものではないアミノ酸であり、
Ｒ2は、アルキル（Ｃ1-10）であり、
Ｒ3は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ1-10）、アルキル（Ｃ1-10）エステル、アリール（例えば、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、ハロベンゾイル）エステル、ハロゲン、Ｃ1-5アルコキシ、メチルアミン、ジメチルアミン、チオニル、メチルチオニル、シアノ、又は、これらのリン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、炭酸塩及び硝酸塩を含み、しかしこれらに限定されるものではないそれらの塩であり、
Ｒ4は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ1-10）、アルキル（Ｃ1-10）エステル、アリール（例えば、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、ハロベンゾイル）エステル、ハロゲン、Ｃ1-5アルコキシ、又は、これらのリン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、炭酸塩及び硝酸塩を含み、しかしこれらに限定されるものではないそれらの塩であり、
Ｒ5は、水素、メトキシ、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ1-10）、アルキル（Ｃ1-10）エステル、アリール（例えば、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、ハロベンゾイル）エステル、ハロゲン又はＣ1-5アルコキシであり、
Ｒ6は、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ1-10）、アルキル、エステル、ハロゲン又はＣ1-5アルコキシであり、
Ｒ7は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ1-10）、アルキル（Ｃ1-10）エステル、アリール（例えば、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、ハロベンゾイル）エステル、ハロゲン、Ｃ1-5アルコキシ、又は、これらのリン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、炭酸塩及び硝酸塩を含み、しかしこれらに限定されるものではないそれらの塩であり、
Ｒ8は、水素、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ1-10）、アルキル（Ｃ1-10）エステル、アリール（例えば、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、ハロベンゾイル）エステル、ハロゲン、Ｃ1-5アルコキシ、メチルアミン、ジメチルアミン、チオニル、メチルチオニル、シアノ、又は、これらのリン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、炭酸塩及び硝酸塩を含み、しかしこれらに限定されるものではないそれらの塩であり、
Ｒ9は、アルキル（Ｃ1-10）であり、かつ
Ｒ10は、アミノ、ヒドロキシ、アルキル（Ｃ1-10）、アルキル（Ｃ1-10）エステル、アリール（例えば、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、ハロベンゾイル）エステル、ハロゲン、Ｃ1-5アルコキシ、又は、アラニル、バリニル、ロイシニル、イソロイシニル、フェニルアラニル、グリシニル、及びフェニルグリシニルを含み、しかしこれらに限定されるものではないアミノ酸である。
ピラジン窒素は、アルキル（Ｃ1-10）、アルキル（Ｃ1-10）エステル、アリール（例えば、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロベンゾイル、ハロベンゾイル）エステル、又は酸素で任意に置換することが可能である。
本発明が、ラセミ化合物に加えて、構造Ｉの化合物の立体異性体形態の各々まで広がることは理解されるようになる。
最も具体的な態様において、この物質は構造Ｉａ（以下、“Ｉａ”と呼ぶ）又は構造Ｉｂ（以下、“Ｉｂ”と呼ぶ）を有する。
0003720360.tif 000008
バチルスチューリンギエンシスは、当該技術分野において周知の培地及び発酵技術（例えば、Ｒｏｇｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，  １９６９，  Ｊ．  Ｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ  Ｐａｔｈ．  １４：  １２２−１２９；Ｄｕｌｍａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９７１，  Ｊ．  Ｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ  Ｐａｔｈ．  １８：  ３５３−３５８；Ｄｕｌｍａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  Ｐｅｓｔｓ  ａｎｄ  Ｐｌａｎｔ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，  Ｈ．  Ｄ．  Ｂｕｒｇｅｓ，  ｅｄ．  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎ．Ｙ．，  １９８０を参照）を用いて培養することができる。発酵サイクルが終了すると、当該技術分野において周知の手段、例えば、遠心及び／又は限外濾過によってＢ．ｔ．胞子及び結晶を発酵ブロスから分離することにより上清を回収することができる。前記物質はこの上清中に含まれており、当該技術分野において周知の手段、例えば、限外濾過、蒸発、及び噴霧乾燥によって回収することが可能である。
代わりに、当該技術分野において周知の手順を用いる化学合成により、本発明の物質を得ることもできる。
構造Ｉを得るため、多くの反応、例えば、α−アミノカルボニル化合物の自発縮合により、適当な置換及び保護基を有する簡素なピラジン環を形成することができる。ジヒドロピラジン中間体が形成されるが、酸素で容易にピラジンまで酸化される。この方法による単一のα−アミノカルボニル化合物の二量体化は単一のピラジンを誘導するのに対して、２つの異なるα−アミノカルボニル化合物を用いる反応が３種類の生成物を誘導する；前記物質は、クロマトグラフィー分離により単離される（図１を参照）。後者の反応は、環の各側部に異なる置換基を有するピラジン類の合成を可能にする。
この物質の精製は、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティ、及びサイズ排除カラムクロマトグラフィー）、電気泳動法、示差溶解度、抽出、又は当該技術分野において周知の標準技術（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，  ｅｄｓ．  Ｊ−Ｃ．  Ｊａｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｒｓ  Ｒｙｄｅｎ，  ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８９を参照）を含み、しかしこれらに限定されるものではない様々な手順により行うことができる。
前記物質の活性は、人工的栄養素取り込み（ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  ｄｉｅｔ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、人為的栄養素被覆（ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  ｄｉｅｔ  ｏｖｅｒｌａｙ）、リーフ・ペインティング（ｌｅａｆ  ｐａｉｎｔｉｎｇ）、リーフ・ディップ（ｌｅａｆ  ｄｉｐ）及びフォリアー・スプレー（ｆｏｌｉａｒ  ｓｐｒａｙ）のような、当該技術分野において周知の手順を用いて生物検定することができる。このような生物検定の具体的な例が以下の例の項にある。
前記物質を含有する組成物
前記物質は、単独で；前に定義されるようにバチルス株、胞子、害虫に対する活性を有し、もしくは害虫を殺す蛋白質又はそれらの断片であるバチルス関連殺虫剤、及び、任意に、殺虫剤組成物に許容し得る担体と共に処方し、例えば、懸濁液、溶液、エマルジョン、パウダー、分散性顆粒、湿潤性粉末、乳濁製濃縮物、エアロゾルもしくは含浸顆粒とすることができる。このようなバチルス株の例には、バチルスチューリンギエンシス・クルスタキ亜種（アボット・ラボラトリーズ社（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．）からＤＩＰＥＬTM、サンド（Ｓａｎｄｏｚ）からＪＡＶＥＬＩＮTM、ノボ・ノルディクスＡ／Ｓ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ  Ａ／Ｓ）からＢＩＯＢＩＴTM、ノボ・ノルディクスＡ／ＳからＦＯＲＡＹTM、マイコジェン（Ｍｙｃｏｇｅｎ）からＭＶＰTM、ノボ・ノルディクスＡ／ＳからＢＡＣＴＯＳＰＥＩＮＥTM、及びサンドからＴＨＵＲＩＣＩＤＥTMとして市販されている）；バチルスチューリンギエンシス・アイザワイ亜種（ノボ・ノルディクスＡ／ＳからＦＬＯＲＢＡＣTM、及びアボット・ラボラトリーズ社からＸＥＮＴＡＲＩTMとして市販されている）；バチルスチューリンギエンシス・テネブリオニス亜種（ノボ・ノルディクスＡ／ＳからＮＯＶＯＤＯＲTM、サンドからＴＲＩＤＥＮＴTM、マイコジェンからＭ−ＴＲＡＫTM及びＭ−ＯＮＥTMとして市販されている）；バチルスチューリンギエンシス・イスラエレンシス亜種（ノボ・ノルディクスＡ／ＳからＢＡＣＴＩＭＯＳTMもしくはＳＫＥＥＴＡＬTMのいずれか、サンドからＴＥＫＮＡＲTM、及びアボット・ラボラトリーズ社からＶＥＣＴＯＢＡＣTMとして市販されている）；バチルス・スファエリクス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）（ノボ・ノルディクスＡ／ＳからＳＰＨＥＲＩＭＯＳTMとして市販されている）；バチルスチューリンギエンシス・クルスタキ／テネブリオニス（エコジェン（Ｅｃｏｇｅｎ）からＦＯＩＬTMとして市販されている）；バチルスチューリンギエンシス・クルスタキ／アイザワイ（エコジェンからＣＯＮＤＯＲTM及びチバ−ガイギー（Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ）からＡＧＲＥＥTMとして市販されている）；及びバチルスチューリンギエンシス・クルスタキ／クルスタキ（エコジェンからＣＵＴＬＡＳＳTMとして市販されている）が含まれるが、これらに限定されるものではない。バチルス関連蛋白質は、ＣｒｙＩ、ＣｒｙＩＩ、ＣｒｙＩＩＩ、ＣｒｙＩＶ、ＣｒｙＶ、及びＣｒｙＶＩを含み、しかしこれらに限定されるものではない群から選択することができる。
また、前記物質は他の因子、又は、エキソトキシン及び／又は１９９３年７月２０日に出願された連続番号０８／０９５，２４０の出願に開示される増強因子を含み、しかしこれらに限定されるものではないバチルス上清の上清から得られる物質と共に処方することもできる。この出願は、参照することによりここに組み込まれる。任意に、この製剤は、バチルス関連殺虫剤、化学殺虫剤及び／又は殺虫特性を有するウイルス並びに許容し得る担体を含んでいてもよい。
特定の態様において、前記組成物の成分は相乗作用的に作用し得る。結果として、前記組成物は、個々の成分の各々を用いて達成することができるものよりも高い効力を有し得る。相乗作用はまた、個々の成分の各々に必要とされるものよりも低用量及び／又は低頻度用量で、同等もしくはより高い効力で現れ得る。あるいは、前記物質はバチルス関連殺虫剤を増強するように作用する。
前記物質及びバチルス関連殺虫剤を含有する組成物において、前記物質はＬＴＵあたり約０．００１ないし３００ｇの量で存在する。ここで定義されるにあたり、“ＬＴＵ”は生物検定によって決定されるレプチノタルサ・テキサナ単位である。この生物検定は、レプチノタルサ・テキサナ又は他の害虫を標準試験生物として用いて、サンプルを標準バチルス基準物質と比較する。効力は、基準標準ＬＣ50を割り、次いで基準標準効力を乗じることにより決定される。
別の態様において、組成物は、実質的に純粋な形態の前記物質又は乾燥、濃縮、もしくは液体形態にあるバチルス由来の上清、及びその例が以下に開示されている適切な殺虫剤担体を含んでいてもよい。この組成物は、植物、例えば、トランスジェニック植物に別々に適用することができる。具体的には、この組成物は、予めバチルスチューリンギエンシス遺伝子を有する植物に適用することができる。別の態様においては、組成物は予めバチルスチューリンギエンシス組成物に晒した組成物に適用することができる。前記物質は、この組成物中に、約０．００１％ないし約６０％（Ｗ／Ｗ）の濃度で存在する。
上に開示される組成物は、表面活性剤、不活性担体、保存剤、湿潤剤、摂食刺激剤、誘引剤、カプセル化剤、結合剤、乳化剤、染料、Ｕ．Ｖ．保護剤、緩衝剤、流動剤、又は生成物の取り扱い及び特定の標的害虫への適用を容易にする他の成分を添加することによっても得ることができる。
適切な表面活性剤には、アニオン性化合物、例えば、長鎖脂肪酸の金属カルボン酸塩のようなカルボン酸塩；Ｎ−アシルサルコシネート；脂肪アルコールエトキシレートとリン酸のモノもしくはジエステル又はそのようなエステルの塩；ドデシル硫酸ナトリウム、オクタデシル硫酸ナトリウムもしくはセチル硫酸ナトリウムのような脂肪アルコール硫酸塩；エトキシル化アルキルフェノール硫酸塩；スルホン酸リグニン；石油スルホネート；アルキルベンゼンスルホネートもしくは低級アルキルナフタレンスルホネート、例えばブチルナフタレンスルホネート、のようなアルキルアリールスルホネート；スルホン化ナフタレン−ホルムアルデヒド縮合物の塩；スルホン化フェノール−ホルムアルデヒド縮合物の塩；又は、スルホン酸アミド、例えばオレイン酸とＮ−メチルタウリンとのスルホン化縮合生成生物、又はジアルキルスルホスクシネート、例えばスルホン酸ナトリウムもしくはジオクチルスクシネート、のようなより複雑なスルホン酸塩が含まれるが、これらに限定されるものではない。非イオン性剤には、脂肪酸エステル、脂肪アルコール、脂肪酸アミド又は脂肪アルキル−もしくはアルケニル−置換フェノールとエチレンオキシド、多価アルコールエステルの脂肪エステル、例えばソルビタン脂肪酸エステル、との縮合生成生物、そのようなエステルとエチレンオキシドとの縮合生成生物、例えばポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル、エチレンオキシドとプロピレンオキシドとのブロック共重合体、２，４，７，９−テトラエチル−５−デシン−４，７−ジオールのようなアセチレン性グリコール、又はエトキシル化アセチレン性グリコールが含まれるが、これらに限定されるものではない。カチオン性界面活性剤の例には、例えば、酢酸塩、ナフテン酸塩もしくはオレイン酸塩としての脂肪族モノ−、ジ−もしくはポリアミン；ポリオキシエチレンアルキルアミンのアミンオキシドのような酸素含有アミン；カルボン酸とジ−もしくはポリアミンとの縮合によって調製されるアミド結合アミン；又は第四アンモニウム塩が含まれる。
不活性物質の例には、カオリン、マイカ、石膏、肥料、フィロケイ酸塩、炭酸塩、硫酸塩もしくはリン酸塩のような無機物；糖、デンプン、もしくはシクロデキストリンのような有機物；又は樹木産生物、石炭、トウモロコシ穂軸粉末、コメ外皮、落花生外皮及びウォールナッツ殻のような植物材料が含まれるが、これらに限定されるものではない。
本発明の組成物は、直接的な適用に適した形態をとることができ、又は適用の前に適切な量の水もしくは他の希釈液で希釈することが必要な濃縮物もしくは一次組成物とすることが可能である。殺虫濃度は、特定の処方の性質、特に、それが濃縮されているのか、あるいは直接用いるものかのいずれであるかに応じて変化する。組成物は、１ないし９８重量％の固体もしくは液体不活性担体、及び０ないし５０％、好ましくは０．１％ないし５０％の表面活性剤を含む。これらの組成物は、市販品について表示される割合で、好ましくは、乾燥形態の場合にはエーカー当たり約０．０１ポンドないし５．０ポンド、液体形態の場合にはエーカー当たり約０．０１パイントないし２５パイントで施される。
さらなる態様において、バチルス関連殺虫剤及び／又は物質を、予備処理がバチルス関連殺虫剤又は物質に対して有害ではない限りにおいて、処方に先立って処理し、標的害虫の環境に適用された場合の殺虫活性を長期化することが可能である。このような処理は、その処理が組成物の特性に有害な作用を及ぼさない限りにおいて、化学的及び／又は物理的手段によるものであってよい。化学試薬の例には、ハロゲン化剤；ホルムアルデヒド及びグルタルアルデヒドのようなアルデヒド類；塩化ゼフィラン（ｚｅｐｈｉｒａｎ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）のような抗感染剤；イソプロパノール及びエタノールのようなアルコール類；ブアン固定液及びヘリー固定液のような組織固定剤が含まれるが、これらに限定されるものではない（例えば、Ｈｕｍａｓｏｎ，  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  Ｗ．  Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，  １９６７を参照）。
本発明の組成物は、害虫が植物上に出現し始めた時期に、あるいは害虫が出現する以前に予防手段として、例えば、噴霧又は振りかけることにより植物に直接適用することが可能である。本発明の範囲内にある保護される植物には、観賞用植物の他に、穀類（小麦、大麦、ライ麦、カラス麦、コメ、モロコシ属植物及び関連作物）、ビート類（サトウダイコン及び飼料ビート）、核果、梨果及び軟果（リンゴ、ナシ、プラム、モモ、アーモンド、サクランボ、イチゴ、キイチゴ、及びセイヨウヤブイチゴ）、マメ科植物（アルファルファ、インゲン属マメ、レンズマメ、エンドウマメ、大豆）、油植物（セイヨウアブラナ、カラシ、ケシ、オリーブ、ヒマワリ、ココナッツ、ヒマシ油植物、カカオマメ、アメリカホドイモ）、キュウリ植物（キュウリ、ナタウリ、メロン）、繊維植物（綿、アマ、大麻、インド麻）、柑橘類果物（ミカン、レモン、グレープフルーツ、マンダリン）、野菜（ホウレンソウ、レタス、アスパラガス、キャベツ及び他のブラシカ種（ｂｒａｓｓｉｃａｅ）植物、ニンジン、タマネギ、トマト、ジャガイモ）、クスノキ科植物（アボガド、肉桂、クスノキ）、落葉樹及び針葉樹（例えば、リンデン、セイヨウイチイ、オーク、オールダー、ポプラ、カバ、モミ、カラマツ、マツ）、又はトウモロコシ、芝生、タバコ、ナッツ、コーヒー、サトウキビ、茶、ブドウ、ホップ、バナナ及び天然ゴム植物のような植物が含まれるが、これらに限定されるものではない。この物質は、葉への適用、畝間への適用、散布顆粒での適用、“レイ−バイ（ｌａｙ−ｂｙ）”での適用、又は土壌ドレンチでの適用により適用することができる。一般に、植物成長の早期段階において害虫をうまく駆除することが重要である。これは、この時期が植物が最も深刻な損害を受け得る段階であるためである。スプレー及び粉末は、それが必要であると思われるならば、他の殺虫剤を都合よく含むことが可能である。好ましい態様において、本発明の組成物は植物に直接適用される。
本発明の組成物は、甲虫目の害虫、例えば、レプチノタルサ種（例えば、レプチノタルサ・テキサナ、レプチノタルサ・デセムリネアタ）、ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ、デンドロクトヌス・フロンタリス、アントモムス・グランディス（Ａｎｔｈｏｎｏｍｕｓ  ｇｒａｎｄｉｓ）、アカントセリデス・オブテクツス（Ａｃａｎｔｈｏｓｃｅｌｉｄｅｓ  ｏｂｔｅｃｔｕｓ）、カロソブルクス・チネンシス（Ｃａｌｌｏｓｏｂｒｕｃｈｕｓ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、エピラクナ・バリベスチス（Ｅｐｉｌａｃｈｎａ  ｖａｒｉｖｅｓｔｉｓ）、ピルハルタ・ルテオラ（Ｐｙｒｒｈａｌｔａ  ｌｕｔｅｏｌａ）、シラス・ホルミカリウス・エレガンツルス（Ｃｙｌａｓ  ｆｏｒｍｉｃａｒｉｕｓ  ｅｌｅｇａｎｔｕｌｕｓ）、リストロノツス・オレゴネンシス（Ｌｉｓｔｒｏｎｏｔｕｓ  ｏｒｅｇｏｎｅｎｓｉｓ）、シトフィルス種、シクロセファラ・ボレアリス（Ｃｙｃｌｏｃｅｐｈａｌａ  ｂｏｒｅａｌｉｓ）、シクロセファラ・イマクラタ（Ｃｙｃｌｏｃｅｐｈａｌａ  ｉｍｍａｃｕｌａｔａ）、パロルス・ラトゼブルギ（Ｐａｌｏｒｕｓ  ｒａｔｚｅｂｕｒｇｉ）、テネブリオ・モリトル（Ｔｅｎｅｂｒｉｏ  ｍｏｌｉｔｏｒ）、テネブリオ・オブスクルス（Ｔｅｎｅｂｒｉｏ  ｏｂｓｃｕｒｕｓ）、トリボリウム・カスタネウム（Ｔｒｉｂｏｌｉｕｍ  ｃａｓｔａｎｅｕｍ）、トリボリウム・コンフスム（Ｔｒｉｂｏｌｉｕｍ  ｃｏｎｆｕｓｕｍ）、トリボリウス・デストラクトル（Ｔｒｉｂｏｌｉｕｓ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｏｒ）に対して有効であり得る。また、本発明の組成物は、鱗翅目の害虫、例えば、アクロイア・グリセラ（Ａｃｈｒｏｉａ  ｇｒｉｓｅｌｌａ）、アクレリス・グロベラナ（Ａｃｌｅｒｉｓ  ｇｌｏｖｅｒａｎａ）、アクレリス・バリアナ（Ａｃｌｅｒｉｓ  ｖａｒｉａｎａ）、アドキソフィエス・オラナ（Ａｄｏｘｏｐｈｙｅｓ  ｏｒａｎａ）、アグロチス・イプシロン（Ａｇｒｏｔｉｓ  ｉｐｓｉｌｏｎ）、アラバマ・アルギラセア（Ａｌａｂａｍａ  ａｒｇｉｌｌａｃｅａ）、アルソフィラ・ポメタリア（Ａｌｓｏｐｈｉｌａ  ｐｏｍｅｔａｒｉａ）、アミエロイス・トランシテラ（Ａｍｙｅｌｏｉｓ  ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａ）、アナガスタ・クエニエラ（Ａｎａｇａｓｔａ  ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａ）、アナルシア・リネアテラ（Ａｎａｒｓｉａ  ｌｉｎｅａｔｅｌｌａ）、アニソタ・セナトリア（Ａｎｉｓｏｔａ  ｓｅｎａｔｏｒｉａ）、アンテラエア・ペルニイ（Ａｎｔｈｅｒａｅａ  ｐｅｒｎｙｉ）、アンチカルシア・ゲマタリス（Ａｎｔｉｃａｒｓｉａ  ｇｅｍｍａｔａｌｉｓ）、アルキプス種（Ａｒｃｈｉｐｓ  ｓｐ．）、アルギロタエニア種（Ａｒｇｙｒｏｔａｅｎｉａ  ｓｐ．）、アテチス・ミンダラ（Ａｔｈｅｔｉｓ  ｍｉｎｄａｒａ）、ボンビクス・モリ（Ｂｏｍｂｙｘ  ｍｏｒｉ）、ブックラトリックス・ツルベリエラ（Ｂｕｃｃｕｌａｔｒｉｘ  ｔｈｕｒｂｅｒｉｅｌｌａ）、カドラ・カウテラ（Ｃａｄｒａ  ｃａｕｔｅｌｌａ）、コリストネウラ種（Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ  ｓｐ．）、コルキス・ホスペス（Ｃｏｃｈｙｌｌｓ  ｈｏｓｐｅｓ）、コリアス・ユーリテメ（Ｃｏｌｉａｓ  ｅｕｒｙｔｈｅｍｅ）、コルシラ・セファロニカ（Ｃｏｒｃｙｒａ  ｃｅｐｈａｌｏｎｉｃａ）、シディア・ラチフェレアヌス（Ｃｙｄｉａ  ｌａｔｉｆｅｒｒｅａｎｕｓ）、シディア・ポモネラ（Ｃｙｄｉａ  ｐｏｍｏｎｅｌｌａ）、ダタナ・インテゲリマ（Ｄａｔａｎａ  ｉｎｔｅｇｅｒｒｉｍａ）、デンドロリムス・シベリクス（Ｄｎｄｒｏｌｉｕｍｕｓ  ｓｉｂｅｒｉｃｕｓ）、デスミア・フネラリス（Ｄｅｓｍｉａ  ｆｕｎｅｒａｌｉｓ）、ディアファニア・ヒアリナタ（Ｄｉａｐｈａｎｉａ  ｈｙａｌｉｎａｔａ）、ディアファニア・ニチダリス（Ｄｉａｐｈａｎｉａ  ｎｉｔｉｄａｌｉｓ）、ディアトラエア・グランディオセラ（Ｄｉａｔｒａｅａ  ｇｒａｎｄｉｏｓｅｌｌａ）、ディアトラエア・サッカラリス（Ｄｉａｔｒａｅａ  ｓａｃｃｈａｒａｌｉｓ）、エノモス・サブシグナリア（Ｅｎｎｏｍｏｓ  ｓｕｂｓｉｇｎａｒｉａ）、エオリューマ・ロフチニ（Ｅｏｒｅｕｍａ  ｌｏｆｔｉｎｉ）、エフェスチア・エルテラ（Ｅｐｈｅｓｔｉａ  ｅｌｕｔｅｌｌａ）、エラニス・チラリア（Ｅｒａｎｎｉｓ  ｔｉｌａｒｉａ）、エスチグメネ・アクレア（Ｅｓｔｉｇｍｅｎｅ  ａｃｒｅａ）、ユーリア・サルブリコラ（Ｅｕｌｉａ  ｓａｌｕｂｒｉｃｏｌａ）、ユーポコエリア・アムビグエラ（Ｅｕｐｏｃｏｅｌｌｉａ  ａｍｂｉｇｕｅｌｌａ）、ユーポエシリア・アムビグエラ（Ｅｕｐｏｅｃｉｌｉａ  ａｍｂｉｇｕｅｌｌａ）、ユープロクチス・クリソルホエア（Ｅｕｐｒｏｃｔｉｓ  ｃｈｒｙｓｏｒｒｈｏｅａ）、ユーキソア・メソリア（Ｅｕｘｏａ  ｍｅｓｓｏｒｉａ）、ガレリア・メロネラ（Ｇａｌｌｅｒｉａ  ｍｅｌｌｏｎｅｌｌａ）、グラホリタ・モレスタ（Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ  ｍｏｌｅｓｔａ）、ハリシナ・アメリカナ（Ｈａｒｒｉｓｉｎａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）、ヘリコベルパ・サブフレキサ（Ｈｒｌｉｃｏｖｅｒｐａ  ｓｕｂｆｌｅｘａ）、ヘリコベルパ・ゼア（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ  ｚｅａ）、ヘリオチス・ビレセンス（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ）、ヘミリューカ・オリビアエ（Ｈｅｍｉｌｅｕｃａ  ｏｌｉｖｉａｅ）、ホモエオソマ・エレクテルム（Ｈｏｍｏｅｏｓｏｍａ  ｅｌｅｃｔｅｌｌｕｍ）、ヒファントリア・クネア（Ｈｙｐｈａｎｔｒｉａ  ｃｕｎｅａ）、ケイフェリア・リコペルシセラ（Ｋｅｉｆｅｒｉａ  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｅｌｌａ）、ラムブジナ・フィセラリア・フィセラリア（Ｌａｍｂｄｉｎａ  ｆｉｓｃｅｌｌａｒｉａ  ｆｉｓｃｅｌｌａｒｉａ）、ラムブジナ・フィセアリア・ルグブロサ（Ｌａｍｂｄｉｎａ  ｆｉｓｃｅｌｌａｒｉａ  ｌｕｇｕｂｒｏｓａ）、リューコマ・サリシス（Ｌｅｕｃｏｍａ  ｓａｌｉｃｉｓ）、ロベシア・ボトラナ（Ｌｏｂｅｓｉａ  ｂｏｔｒａｎａ）、ロキソステゲ・スチクチカリス（Ｌｏｘｏｓｔｅｇｅ  ｓｔｉｃｔｉｃａｌｉｓ）、リマントリア・ディスパル（Ｌｙｍａｎｔｒｉａ  ｄｉｓｐａｒ）、マカラ・チルシサリス（Ｍａｃａｌｌａ  ｔｈｙｒｓｉｓａｌｉｓ）、マラコソマ種（Ｍａｌａｃｏｓｏｍａ  ｓｐ．）、マメストラ・ブラシカエ（Ｍａｍｅｓｔｒａ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、マメストラ・コンフィギュラタ（Ｍａｍｅｓｔｒａ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔａ）、マンデュカ・クインクエマクラタ（Ｍａｎｄｕｃａ  ｑｕｉｎｑｕｅｍａｃｕｌａｔａ）、マンデュカ・セクスタ（Ｍａｎｄｕｃａ  ｓｅｘ���ａ）、マルカ・テスツラリス（Ｍａｒｕｃａ  ｔｅｓｔｕｌａｌｉｓ）、メランクラ・ピクタ（Ｍｅｌａｎｃｈｒａ  ｐｉｃｔａ）、オペロフテラ・ブルマタ（Ｏｐｅｒｏｐｈｔｅｒａ  ｂｒｕｍａｔａ）、オルギア種（Ｏｒｇｙｉａ  ｓｐ．）、オストリニア・ヌビラリス（Ｏｓｔｒｉｎｉａ  ｎｕｂｉｌａｒｉｓ）、パレアクリタ・ベルナタ（Ｐａｌｅａｃｒｉｔａ  ｖｅｒｎａｔａ）、パピリオ・クレスフォンテス（Ｐａｐｉｌｉｏ  ｃｒｅｓｐｈｏｎｔｅｓ）、ペクチノフォラ・ゴシピエラ（Ｐｅｃｔｉｎｏｐｈｏｒａ  ｇｏｓｓｙｐｉｅｌｌａ）、フルガニジア・カリフォルニカ（Ｐｈｒｙｇａｎｉｄｉａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）、フィロノリクテル・ブランカルデラ（Ｐｈｙｌｌｏｎｏｒｙｃｔｅｒ  ｂｌａｎｃａｒｄｅｌｌａ）、ピエリス・ナピ（Ｐｉｅｒｉｓ  ｎａｐｉ）、ピリス・ラパエ（Ｐｉｅｒｉｓ  ｒａｐａｅ）、プラチペナ・スカブラ（Ｐｌａｔｈｙｐｅｎａ  ｓｃａｂｒａ）、プラチノタ・フロウエンダナ（Ｐｌａｔｙｎｏｔａ  ｆｌｏｕｅｎｄａｎａ）、プラチノタ・スツルタナ（Ｐｌａｔｙｎｏｔａ  ｓｔｕｌｔａｎａ）、プラチプチリア・カルデュイダクチラ（Ｐｌａｔｙｐｔｉｌｉａ  ｃａｒｄｕｉｄａｃｔｙｌａ）、プロディア・インテルプンクテラ（Ｐｌｏｄｉａ  ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ）、プルテラ・キシロステラ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ  ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）、ポンチア・プロトディセ（Ｐｏｎｔｉａ  ｐｒｏｔｏｄｉｃｅ）、シュードダレチア・ウニプンクタ（Ｐｓｅｕｄａｌｅｔｉａ  ｕｎｉｐｕｎｃｔａ）、シュードプラシア・インクルデンス（Ｐｓｅｕｄｏｐｌａｓｉａ  ｉｎｃｌｕｄｅｎｓ）、サブロデス・アエグロタタ（Ｓａｂｕｌｏｄｅｓ  ａｅｇｒｏｔａｔａ）、シズラ・コンシンナ（Ｓｃｈｉｚｕｒａ  ｃｏｎｃｉｎｎａ）、シトトロガ・セレアレラ（Ｓｉｔｏｔｒｏｇａ  ｃｅｒｅａｌｅｌｌａ）、スピロノタ・オセラナ（Ｓｐｉｌｏｎｏｔａ  ｏｃｅｌｌａｎａ）、スポドプテラ種（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｓｐ．）、タウルンストポエア・ピチオカムパ（Ｔｈａｕｒｎｓｔｏｐｏｅａ  ｐｉｔｙｏｃａｍｐａ）、チオネラ・ビセリラ（Ｔｉｎｅｏｌａ  ｂｉｓｓｅｌｌｉｅｌｌａ）、トリコプルシア・ニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ）、ウデア・ルビガリス（Ｕｄｅａ  ｒｕｂｉｇａｌｉｓ）、キシロミゲス・クリアリス（Ｘｙｌｏｍｙｇｅｓ  ｃｕｒｉａｌｉｓ）、イポノミュータ・パデラ（Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ  ｐａｄｅｌｌａ）；双翅目の害虫、例えば、アエデス種（Ａｅｄｅｓ  ｓｐ．）、アンデス・ビッタツス（Ａｎｄｅｓ  ｖｉｔｔａｔｕｓ）、アナストレファ・ルデンス（Ａｎａｓｔｒｅｐｈａ  ｌｕｄｅｎｓ）、アナストレファ・サスペンサ（Ａｎａｓｔｒｅｐｈａ  ｓｕｓｐｅｎｓａ）、アノフェレス・バルベリ（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｂａｒｂｅｒｉ）、アノフェレス・クアロシマクラツス（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｑｕａｄｒｉｍａｃｕｌａｔｕｓ）、アルミゲレス・スバルバツス（Ａｒｍｉｇｅｒｅｓ  ｓｕｂａｌｂａｔｕｓ）、カリフォラ・スチギア（Ｃａｌｌｉｐｈｏｒａ  ｓｔｙｇｉａ）、カリフォラ・ビシナ（Ｃａｌｌｉｐｈｏｒａ  ｖｉｃｉｎａ）、セラチチス・カピタタ（Ｃｅｒａｔｉｔｉｓ  ｃａｐｉｔａｔａ）、チロノムス���テンタンス（Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ  ｔｅｎｔａｎｓ）、クリソミア・ルフィファシエス（Ｃｈｒｙｓｏｍｙａ  ｒｕｆｉｆａｃｉｅｓ）、コクリオミイア・マセラリア（Ｃｏｃｈｌｉｏｍｙｉａ  ｍａｃｅｌｌａｒｉａ）、クレックス種（Ｃｕｌｅｘ  ｓｐ．）、クリセタ・イノルナタ（Ｃｕｌｉｓｅｔａ  ｉｎｏｒｎａｔａ）、ダクス・オレアエ（Ｄａｃｕｓ  ｏｌｅａｅ）、デリア・アンチグア（Ｄｅｌｉａ  ａｎｔｉｇｕａ）、デリア・プラツラ（Ｄｅｌｉａ  ｐｌａｔｕｒａ）、デリア・ラディクム（Ｄｅｌｉａ  ｒａｄｉｃｕｍ）、ドロソフィラ・メラノガスタ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）、ユーペオデス・コロラエ（Ｅｕｐｅｏｄｅｓ  ｃｏｒｏｌｌａｅ）、グロシナ・アウステニ（Ｇｌｏｓｓｉｎａ  ａｕｓｔｅｎｉ）、グロシナ・ブレビパルピス（Ｇｌｏｓｓｉｎａ  ｂｒｅｖｉｐａｌｐｉｓ）、グロシナ・フシペス（Ｇｌｏｓｓｉｎａ  ｆｕｓｃｉｐｅｓ）、グロシナ・モルシタンス・セントラリス（Ｇｌｏｓｓｉｎａ  ｍｏｒｓｉｔａｎｓ  ｃｅｎｔｒａｌｉｓ）、グロシナ・モリスタンス・モルシタンス（Ｇｌｏｓｓｉｎａ  ｍｏｒｉｓｔａｎｓ  ｍｏｒｓｉｔａｎｓ）、グロシナ・モリスタンス・サブモルシタンス（Ｇｌｏｓｓｉｎａ  ｍｏｒｉｓｔａｎｓ  ｓｕｂｍｏｒｓｉｔａｎｓ）、グロシナ・パリディペス（Ｇｌｏｓｓｉｎａ  ｐａｌｌｉｄｉｐｅｓ）、グロシナ・パルパリス・ガムビエンシス（Ｇｌｏｓｓｉｎａ  ｐａｌｐａｌｉｓ  ｇａｍｂｉｅｎｓｉｓ）、グロシナ・パルパリス・パルパリス（Ｇｌｏｓｓｉｎａ  ｐａｌｐａｌｉｓ  ｐａｌｐａｌｉｓ）、グロシナ・タチノイデス（Ｇｌｏｓｓｉｎａ  ｔａｃｈｉｎｏｉｄｅｓ）、ハエマゴガス・エクイヌス（Ｈａｅｍａｇｏｇｕｓ  ｅｑｕｉｎｕｓ）、ハエマトビウス・イリタンス（Ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｓ  ｉｒｒｉｔａｎｓ）、ハイポデルマ・ボビス（Ｈｙｐｏｄｅｒｍａ  ｂｏｖｉｓ）、ハイドデルマ・リネアツム（Ｈｙｄｏｄｅｒｍａ  ｌｉｎｅａｔｕｍ）、リューコピス・ニナエ（Ｌｅｕｃｏｐｉｓ  ｎｉｎａｅ）、ルシリア・クプリナ（Ｌｕｃｉｌｉａ  ｃｕｐｒｉｎａ）、ルシリア・セリカタ（Ｌｕｃｉｌｉａ  ｓｅｒｉｃａｔａ）、ルツォミイア・ロングルパイピス（Ｌｕｔｚｏｍｙｉａ  ｌｏｎｇｌｐａｉｐｉｓ）、ルツォミイア・シャアンノニ（Ｌｕｔｚｏｍｙｉａ  ｓｈａｎｎｏｎｉ）、リコリエラ・マリ（Ｌｙｃｏｒｉｅｌｌａ  ｍａｌｉ）、マイエチオラ・デストラクトル（Ｍａｙｅｔｉｏｌａ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｏｒ）、ムスカ・アウツムナリス（Ｍｕｓｃａ  ａｕｔｕｍｎａｌｉｓ）、ムスカ・ドメスチカ（Ｍｕｓｃａ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）、ネオベリエリア種（Ｎｅｏｂｅｌｌｉｅｒｉａ  ｓｐ．）、ネフロトマ・スツラリス（Ｎｅｐｈｒｏｔｏｍａ  ｓｕｔｕｒａｌｉｓ）、オフィラ・アエネセンス（Ｏｐｈｙｒａ  ａｅｎｅｓｃｅｎｓ）、ファエニシア・セリカタ（Ｐｈａｅｎｉｃｉａ  ｓｅｒｉｃａｔａ）、フレボトムス種（Ｐｈｌｅｂｏｔｏｍｕｓ  ｓｐ．）、フォルミア・レギナ（Ｐｈｏｒｍｉａ  ｒｅｇｉｎａ）、サベセス・シアネウス（Ｓａｂｅｔｈｅｓ  ｃｙａｎｅｕｓ）、サルコファガ・ブラタ（Ｓａｒｃｏｐｈａｇａ  ｂｕｌｌａｔａ）、スカトファガ・ステルコラリア（Ｓｃａｔｏｐｈａｇａ  ｓｔｅｒｃｏｒａｒｉａ）、ストマキシス・カルシトランス（Ｓｔｏｍａｘｙｓ  ｃａｌｃｉｔｒａｎｓ）、トキソリンキテス・アムボイネンシス（Ｔｏｘｏｒｈｙｎｃｈｉｔｅｓ  ａｍｂｏｉｎｅｎｓｉｓ）、トリプテロイデス・バムブサ（Ｔｒｉｐｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｂａｍｂｕｓａ）；ダニ、例えば、オリゴニクス・プラテンシス（Ｏｌｉｇｏｎｙｃｈｕｓ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓ）、パノニクス・ウルミ（Ｐａｎｏｎｙｃｈｕｓ  ｕｌｍｉ）、テトラニクス・ウルチカエ（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ  ｕｒｔｉｃａｅ）；膜翅目の害虫、例えば、イリドミルメックス・ヒューミリス（Ｉｒｉｄｏｍｙｒｍｅｘ  ｈｙｍｉｌｉｓ）、ソレノプシス・インビクタ（Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ  ｉｎｖｉｃｔａ）；シロアリ目の害虫、例えば、レチクリテルメス・ヘスペルス（Ｒｅｔｉｃｕｌｉｔｅｒｍｅｓ  ｈｅｓｐｅｒｕｓ）、レチクリテルメス・フラビペス（Ｒｅｔｉｃｕｌｉｔｅｒｍｅｓ  ｆｌａｖｉｐｅｓ）、コプトテルメス・フォルモサヌス（Ｃｏｐｔｏｔｅｒｍｅｓ  ｆｏｒｍｏｓａｎｕｓ）、ズーテルモプシス・アングスチコリス（Ｚｏｏｔｅｒｍｏｐｓｉｓ  ａｎｇｕｓｔｉｃｏｌｌｉｓ）、ネオテルメス・コンネクスス（Ｎｅｏｔｅｒｍｅｓ  ｃｏｎｎｅｘｕｓ）、インシシテルメス・ミノア（Ｉｎｃｉｓｉｔｅｒｍｅｓ  ｍｉｎｏｒ）、インシシテルメス・イムミグランス（Ｉｎｃｉｓｉｔｅｒｍｅｓ  ｉｍｍｉｇｒａｎｓ）；隠翅目の害虫、例えば、セラトフィルス・ガリナエ（Ｃｅｒａｔｏｐｈｙｌｌｕｓ  ｇａｌｌｉｎａｅ）、セラトフィルス・ニガ（Ｃｅｒａｔｏｐｈｙｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ノソサイルス・ファシアツス（Ｎｏｓｏｐｓｙｌｌｕｓ  ｆａｓｃｉａｔｕｓ）、レプトサイラ・セグニス（Ｌｅｐｔｏｐｓｙｌｌａ  ｓｅｇｎｉｓ）、クテノセファリデス・カニス（Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓ  ｃａｎｉｓ）、クテノセファルデス・フェリス（Ｃｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｌｄｅｓ  ｆｅｌｉｓ）、エキクノファガ・ガリナセア（Ｅｃｈｉｃｎｏｐｈａｇａ  ｇａｌｌｉｎａｃｅａ）、プレックス・イリタンス（Ｐｕｌｅｘ  ｉｒｒｉｔａｎｓ）、ゼノサイラ・ケオピス（Ｘｅｎｏｐｓｙｌｌａ  ｃｈｅｏｐｉｓ）、ゼノサイラ・ベキサビリス（Ｘｅｎｏｐｓｙｌｌａ  ｖｅｘａｂｉｌｉｓ）、ツンガ・ペネトランス（Ｔｕｎｇａ  ｐｅｎｅｔｒａｎｓ）；及びタイレンチダ目（Ｔｙｌｅｎｃｈｉｄａ）の害虫、例えば、メロディドギネ・インコグニタ（Ｍｅｌｏｄｉｄｏｇｙｎｅ  ｉｎｃｏｇｅｎｉｔａ）、プラチレンクス・ペネトランス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｐｅｎｅｔｒａｎｓ）を含み、しかしこれらに限定されるものではない害虫に対しても有効であり得る。
以下の実施例は、限定としてではなく、説明として提示される。
実施例
例１：様々なＢ．ｔ．単離体の培養
栄養ブロス寒天スラントに維持されているＥＭＣＣ−００７７、ＥＭＣＣ−００７８、ＥＭＣＣ−００７９、ＥＭＣＣ−００８０及びＥＭＣＣ−００８１の継代培養物を、以下の組成の培地５０ｍｌを収容する２５０ｍｌバッフル装備振とうフラスコへの接種に用いる。
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１０Ｎ  ＮａＯＨを用いて、培地のｐＨを７．０に調整する。
接種後、振とうフラスコを３０℃で、ロータリー・シェーカー上において２５０ｒｐｍで７２時間インキュベートする。全培養ブロスをディアブロチカ・ウンデシムプンクタタに対する試験に用いる。
例２：様々なＢ．ｔ．単離体に由来する全培養ブロスにおけるディアブロチカ・ウンデシウムプンクタタ活性
上記発酵より得られる全培養ブロスの２．５ｍｌを振とうフラスコから取り、５０ｍｌポリプロピレン生物検定管に移す。ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタの餌を各管に添加して最終容積２５ｍｌとする。次いで、この餌と被験物質とを激しく混合し、生物検定のため生物検定トレイに分配する。ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタの卵３ないし６個を、この“餌”の表面に塗り付ける。この生物検定トレイ上にマイラーを伸ばし、このトレイを光周期なしで２８℃でインキュベートする。７日目に評価を行う。インキュベーション後７日目に致死率を評価する。ＳＳ７＝ＳＳ７と同じ日の生きている対照幼虫を４とし、これと比較した場合の７日目の致死幼虫のサイズ。ＳＳ７＝３、ＳＳ７＝２、及びＳＳ７＝１は、それぞれ、４である生きている対照幼虫の７５％、５０％及び２５％としての幼虫のサイズを表す。
結果を下記表１に示す。これらの結果は、試験した５種類の株の全てにおいて、致死率が１００％であったことを示している。さらに、致死幼虫は、生きている対照幼虫のサイズの１２．５％であった。
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例３：ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ活性の位置決定
ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ活性がδ−エンドトキシン／胞子もしくは上清に関連するのかどうかを試験するため、ＥＭＣＣ−００７７、ＥＭＣＣ−００８１及びＮＢ１２５（バチルス同一条件下で成長したチューリンギエンシス・テネブリオニス亜種）に由来する全培養ブロスの２．５ｍｌをソルバール（Ｓｏｒｖａｌｌ）ＲＣ−５Ｂ遠心機において１５，０００ｒｐｍで（ソルバールＳＳ３４ローター）１５分間遠心し、上清及びペレットを分離する。結晶δ−エンドトキシン類及び胞子はペレット中に回収される。ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ−活性Ｂ．ｔ．単離体ＥＭＣＣ−００７７によって産生されるδ−エンドトキシン類は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる測定で、６６ｋＤ、２９ｋＤ及び１２ｋＤの分子量を有する。ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ−活性Ｂ．ｔ．単離体ＥＭＣＣ−００７８によって産生されるδ−エンドトキシン類は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる測定で、１５３ｋＤ、７７ｋＤ、６７ｋＤ、６１ｋＤ、５０ｋＤ、４２ｋＤ、３４ｋＤ、３０ｋＤ、２４ｋＤの分子量を有する。ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ−活性Ｂ．ｔ．単離体ＥＭＣＣ−００７９によって産生されるδ−エンドトキシン類は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる測定で、１３５−１４５ｋＤの分子量を有する。ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ−活性Ｂ．ｔ．単離体ＥＭＣＣ−００８０によって産生されるδ−エンドトキシン類は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる測定で、９４ｋＤ及び４０ｋＤの分子量を有する。ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ−活性Ｂ．ｔ．単離体ＥＭＣＣ−００８１によって産生されるδ−エンドトキシン類は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる測定で、１２９ｋＤ及び３２ｋＤの分子量を有する。
上記遠心により得られる上清（２．５ｍｌ）の各々を５０ｍｌポリプロピレン生物検定管に移す。次いで、ペレットを無菌の蒸留水２．５ｍｌに再懸濁させ、別の５０ｍｌポリプロピレン生物検定管に移す。次に、ディアブロチカ・ウンデシムプンクタタの餌を、上清もしくは再懸濁ペレットを有する生物検定管に添加して、最終容量を２５ｍｌとする。生物検定の残りの工程は上に記述されるものと同じである。評価もまた、上の記述と同じである。
表２に見られる結果は、ＥＭＣＣ−００７７、ＥＭＣＣ−００８０及びＥＭＣＣ−００８１に由来するディアブロチカ・ウンデシウムプンクタタ活性は、公知のバチルスチューリンギエンシス・テネブリオニス亜種に由来する低いディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ活性がペレット（胞子及び結晶）中に濃縮されているのに対して、上清の全てに依存することを示している。
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例４：レプチノタルサ・テキサナに対する活性
０．２μ膜を通して濾過した後、例１から得られたＥＭＣＣ−００８０の上清を甲虫活性についての検定に用いた。
濾過した上清を、２０ＧＰＡ（エーカー当たりのガロン）でナスの葉に塗布した。希釈率は０、１：１、１：４、１：８（上清：脱イオン水、Ｖ／Ｖ）である。
レプチノタルサ・テキサナの幼虫を、標準プロトコルに従い、処理した葉に晒した。植物の各々に２０匹のレプチノタルサ・テキサナの幼虫を乗せた。
下記表３にまとめられる結果は、ＥＭＣＣ−００８０の濾過上清がレプチノタルサ・テキサナに対して活性であることを示している。
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例５：ＥＭＣＣ−００８０及びＮＯＶＯＤＯＲTMの相乗効果
前出の表３に示される結果は、ＥＭＣＣ−００８０の上清は１：８希釈（Ｖ／Ｖ）単独では活性でないことを示している。しかしながら、ナスの葉を１．２５％もしくは２．５％の１０×濃縮ＥＭＣＣ−００８０上清及びｍｌ当たり２００μｇのＮＯＶＯＤＯＲTM（ノボ・ノルディクスＡ／Ｓ、バグスバエルド、デンマーク）で処理した場合には、ＮＯＶＯＤＯＲTMのＬＣ50およびＬＣ90の鋭い下降によって立証されるように、相乗効果が得られる。データは下記表４にある。
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例６：Ｂ．ｔ．株ＥＭＣＣ−００８０によって産生される甲虫−活性物質の精製
Ｂ．ｔ，株ＥＭＣＣ−００８０を、リットル当たりのグラムで表示される以下の組成を有する培地において、３０℃で２４時間、ｐＨ７．０で成長させる。
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細胞及び他の不溶物を遠心によりＢ．ｔ．株ＥＭＣＣ−００８０の全培養ブロスから除去した後、得られた上清をセライト及び０．２μ膜を通して濾過する。その後、得られた透過物を蒸発により１０倍に濃縮する。
４工程の精製手順を用いて、１０×濃縮透過物からの甲虫−活性物質の精製を達成する。精製の間、以下に記述されるディアブロチカ・ウンデシムプンクタタ表面生物検定により活性を監視し、例８に記述されるキャピラリー電気泳動により純度を決定する。全てのクロマトグラフィー工程では２２６ｎｍでの検出が用いられる。
具体的には、表面生物検定は以下の通り行われる。１０×濃縮透過物のサンプルを、ウェル当たり２００μｌの固化人工昆虫餌を収容するマイクロタイタープレートの個々のウェルに塗布した後、風乾する。２ないし４匹のディアブロチカ・ウンデシムプンクタタの幼虫（コーン・ルートワーム、ＣＲＷ）を各ウェルに絵筆で静かに置く。次いで、このマイクロタイタープレートを空気交換のための穴を打ち抜いたマイラーで密封し、３０℃、湿度８０％でインキュベートする。致死率の評価を５日目に行う。
第１工程において、まず、１０×濃縮透過物をファルマシアＳＰセファデックス▲Ｒ▼Ｃ−２５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＳＰ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ▲Ｒ▼Ｃ−２５）（カチオン交換）カラムクロマトグラフィー（５×３０ｃｍ）で精製する。１０×濃縮透過物の４５０ｍｌサンプルを脱イオン水で１８リットルに希釈し、ｐＨ５．０の２０ｍＭ酢酸アンモニウムで予備平衡化したカラムにかける。このカラムを、ｐＨ５．０の酢酸アンモニウムバッファ５．０リットルの２０ｍＭから０．５Ｍの連続勾配を用いて、毎分１８ｍｌで溶出する。１０ｍｌの画分を集め、生物検定を行い、純度について試験する。活性画分をプールし（約１５０ｍｌ）、凍結乾燥し、脱イオン水に再溶解して元の容積の約１／５にする。。
第２工程において、第１工程からの２５ｍｌサンプルを、脱イオン水で予備平衡化したバイオラッド（ＢｉｏＲａｄ）Ｐ２（超微細）サイズ排除カラム（５×１００ｃｍ）にかける。このカラムを、脱イオン水を用いて、毎分１ｍｌの流速で溶出する。１０ｍｌの画分を集め、生物検定を行い、キャピラリー電気泳動により純度について試験する。活性画分をプールする（約４００ｍｌ）。
第３工程において、第２工程からの４００ｍｌプールを脱イオン水で１６リットルに希釈する。この溶液を、ｐＨ５．０の２０ｍＭ酢酸アンモニウムバッファで予備平衡化したファルマシアＳセファロース▲Ｒ▼ファースト・フロー（強カチオン交換）カラム（５×３０ｃｍ）にかける。このカラムを、ｐＨ５．０の酢酸アンモニウムバッファの２０ｍＭから０．５Ｍの連続勾配を用いて、毎分１７ｍｌの流速で溶出する。２０ｍｌの画分を集め、生物検定を行い、純度について試験する。活性画分をプールし（約２５０ｍｌ）、次いで、揮発性酢酸アンモニウムバッファを除去するため凍結乾燥して乾燥させる。
第４工程において、第３工程からの凍結乾燥プールを脱イオン水４００ｍｌに溶解する。この溶液を、ｐＨ４．０の２０ｍＭギ酸アンモニウムバッファで予備平衡化したバイオラッド・ケレックス▲Ｒ▼１００（Ｃｈｅｌｅｘ▲Ｒ▼１００）カラム（０．９×３０ｃｍ）にかける。このカラムを、ｐＨ４．０のギ酸アンモニウムバッファ２．４リットルの０．０２→０．１→０．２→０．３５→０．５→１．０Ｍの段階勾配を用いて、毎分５ｍｌの流速で溶出する。２０ｍｌの画分を集め、生物検定を行い、純度について試験する。活性画分をプールし（約３００ｍｌ）、次いで、揮発性ギ酸アンモニウムバッファを除去するため凍結乾燥して乾燥させる。
キャピラリー電気泳動は、２種類の化合物、Ｉａ及びＩｂ、を含む精製甲虫−活性物質を示す。
例７：甲虫−活性物質の構造解明
化合物Ｉａ及びＩｂの構造を、それらのアセチル化誘導体について収集した分光データから解明する。
Ｉａ及びＩｂの混合物１１４ｍｇを、ピリジン５．０ｍｌ中において、無水酢酸５．０ｍｌ及び触媒としての４−ジメチルアミノピリジンの結晶を用いて、室温で２４時間アセチル化した後、半調製用ＲＰ−Ｃ18ＨＰＬＣで精製する。２５μｌ中５ｍｇのサンプルをカラムにかけ、８０％水−２０％アセトニトリルを用いて、毎分４ｍｌで溶出する。２５４ｎｍで検出を行う。
精製から、誘導体Ａ及び誘導体Ｂと呼ばれる２種類のアセチル化誘導体が得られる。誘導体Ａ及びＢの構造を図４に示す。
誘導体Ａについて収集されたＮＭＲ分光データは、１４個の炭素と１７個のプロトンの存在を示す。しかしながら、質量分光データは、６５２の分子量とＣ28Ｈ40Ｎ6Ｏ12の式を示唆する（精密質量、６５３．２８０１、ＭＨ＋、算出６５３．２７８２）。したがって、この化合物は、シグナルの半分のみがＮＭＲによって観察される対称性であると決定される。
幾つかのスピン系がＮＭＲで観察される。環中の全ての炭素及び側鎖の第１炭素（Ｃ−７）への長レンジ・カップリングを示す、８．６ｐｐｍでの高域プロトン・シングレット（Ｈ−３及びＨ−６）により、２及び５位で置換されている中心ピラジン環が示される。炭素原子３個の側鎖は７及び８位の両者でアセチル化されており、９位にメチレンを有する。炭素９はエステルのカルボニルへの長レンジ相関を有することが見出され、このエステルはアミノ基でアセチル化されているアラニンの一部であると決定される。
誘導体Ｂの構造は、位置の１つが誘導体Ａとは異なる。誘導体Ｂの側鎖の１つにおいて、Ｃ−７炭素はもはやアセチル化されておらず、もしくは酸素に結合しておらず、メチレンであることが見出だされる。他の側鎖は誘導体Ａと同じである。このわずか１個の酸素の相違は、また、質量分光データにおいても観察される。誘導体Ｂについて、精密質量５９５．２７２２（ＭＨ＋、算出５９５．２７２７）の質量分光データが得られ、これは式Ｃ26Ｈ38Ｎ6Ｏ10を示す。誘導体Ａ及びＢの光学密度は以下の通りである：誘導体Ａ［α］D27＝−６．９℃及び誘導体Ｂ［α」D27＝＋３２℃。脱カップリング実験、ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ及びＨＭＢＣに基づいて、1Ｈ及び13Ｃ  ＮＭＲデータの完全な割り当てを作成する。この割り当ては表５にある。
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化合物Ｉａ及びＩｂに対する質量分光データから、４００及び３８４の２種類の分子イオンが得られる。このデータから、化合物Ｉａの式がＣ16Ｈ28Ｎ6Ｏ6であり、化合物Ｉｂの式がＣ16Ｈ28Ｎ6Ｏ5であることが決定される。誘導体Ａ及び誘導体ＢのＮＭＲデータをＩａ及びＩｂの混合物のＮＭＲデータと比較することにより、Ｉａ及びＩｂの構造が決定される。Ｉａ及びＩｂの構造を以下に示す。
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化合物Ｉａ及びＩｂ並びにそれらのアセチル化誘導体の特性を以下にまとめる。
誘導体Ａ：
分子量：６５２
実験式：Ｃ28Ｈ40Ｎ6Ｏ12
ＵＶ（ＭｅＯＨ）：２７５，３１０ｎｍ
ＭＳ（ＦＡＢ）：（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚ  ６５３．２８０１、算出６５３．２７８２
誘導体Ｂ：
分子量：５９４
実験式：Ｃ26Ｈ38Ｎ6Ｏ10
ＵＶ（ＭｅＯＨ）：２７５，３１０ｎｍ
ＭＳ（ＦＡＢ）：（Ｍ＋Ｈ）ｍ／ｚ  ５９５．２７２２、算出５９５．２７２７
Ｉａ：
分子量：４００
実験式：Ｃ16Ｈ28Ｎ6Ｏ6
ＵＶ（Ｈ2Ｏ）：２７５，３１０ｎｍ
ＭＳ（ＦＡＢ）：（Ｍ＋Ｈ）４０１
Ｉｂ：
分子量：３８４
実験式：Ｃ16Ｈ28Ｎ6Ｏ5
ＵＶ（Ｈ2Ｏ）：２７５、３１０ｎｍ
ＭＳ（ＦＡＢ）：（Ｍ＋Ｈ）３８５
例８：発酵ブロス中の化合物Ｉａ及びＩｂの定量
Ｂ．ｔ．株ＥＭＣＣ−００８０を例１に記述される通りに成長させる。発酵ブロス中の化合物Ｉａ及びＩｂの濃度をキャピラリー電気泳動によって決定する。
具体的には、非コートキャピラリー（５０μｍ×５０ｃｍ）、ｐＨ２．５の０．１Ｍリン酸塩、２０ｋＶの電圧、陽性から陰性の極性、及び２００ｎｍでの検出を備えるバイオラッド・バイオフォーカス３０００キャピラリー・エレクトロホレシス・システム（Ｂｉｏｆｏｃｕｓ  ３０００  Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ）を定量に用いる。サンプル容量は、５ｐｓｉ秒の注入で、３０μｌである。分析時間は１０分間であり、甲虫−活性化合物ＩａおよびＩｂがそれぞれ６．０及び５．９分に溶出する。
代わりに、非コートキャピラリー（５０μｍ×４７ｃｍ）、ｐＨ２．５の０．１Ｍリン酸バッファ、２０ＫＶの電圧、陽性から陰性の極性、及び２００ｎｍでの検出を備えるベックマンＰ／ＡＣＥ２１００キャピラリー・エレクトロホレシス・システム（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｐ／ＡＣＥ  ２１００  Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ）を定量に用いる。サンプル容量は、１０秒圧注で、３０μｌである。分析時間は１０分間であり、甲虫−活性化合物Ｉａ及びＩｂがそれぞれ７．０及び６．７分に溶出する。
細胞及び他の不溶物を、遠心並びにセライト及び０．２膜を通す濾過によりＢ．ｔ，株ＥＭＣＣ−００８０の全培養ブロスから除去する。得られた上清を上述のキャピラリー電気泳動によって分析する。結果は、甲虫−活性化合物Ｉａ及びＩｂが、各々、培養ブロスのリットル当たり約９０ｍｇのレベルで存在することを示した。
例９：化合物Ｉａ及びＩｂの効力決定
化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物（約１：１Ｗ／Ｗ）の相対効力を、レプチノタルサ・テキサナを試験昆虫として用い、バチルスチューリンギエンシス・テネブリオニス亜種の内部標準調製品に関する致死率と比較して決定した。
レプチノタルサ・テキサナに対する化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物の効力を決定するため、葉での生物検定を行う。葉での生物検定を行うため、被験物質及び標準を５０ｍｌ遠心管に秤量し、０．１％ツィーン▲Ｒ▼（Ｔｗｅｅｎ▲Ｒ▼）２０を含有する脱イオン水に懸濁させる。バチルスチューリンギエンシス・テネブリオニス亜種標準１，２００ｍｇを秤量し、１２，０００μｇ／ｇの最終濃度を得るように懸濁させる。被験サンプル（すなわち、ＮＯＶＯＤＯＲTM並びに化合物Ｉａ及びＩｂを含むＮＯＶＯＤＯＲTM）を同様の方法で処理する。これは、率を見出す生物検定が、与えられた投薬量が適切な数の妥当なデータ点を生じるには多すぎるか、もしくは少なすぎることを示す場合は除く。このような場合には、貯蔵溶液に添加される希釈液の量を変更することにより、最初の貯蔵溶液の濃度を増大もしくは減少させる。次いで、バーチス・ホモジナイザー（Ｖｉｒｔｉｓ  Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ）を用いて各サンプルを３０秒間ホモジナイズし、ブラウンソニック（Ｂｒａｕｎｓｏｎｉｃ）１５１０超音波ホモジナイザーを用いて１００ワットで２０秒間超音波処理する。その後、これらの貯蔵溶液の各々を、ハミルトン・マイクロラボ１０００（Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｍｙｃｒｏｌａｂ  １０００）を用いて希釈し、全量１６ｍｌ中３，０００、２，０００、１３３３、８５７、５４５、３６４、及び２４５μｇ／ｍｌからなる７つの連続希釈液を得る。これらの１６ｍｌ溶液の各々を、エーカー当たり２０ガロンの散布に目盛りを合わせたデブリエス・リニア・トラック噴霧器（Ｄｅｖｒｉｅｓ  Ｌｉｎｅａｒ  Ｔｒａｃｋ  ｓｐｒａｙｅｒ）を用いて、約２８８平方インチのナスの葉に塗布する。対照葉には１６ｍｌの脱イオン水を噴霧する。葉を風乾した後、５匹の第２齢レプチノタルサ・テキサナ幼虫を収容する１オンス透明プラスチックカップの縁に置く。次に、葉の上に厚紙の蓋を置いて押し付け、４ｃｍの葉の円盤を切断してそれをカップの内部に密封する。その後、このカップを逆さにし、幼虫を葉の処理表面上に落とす。７つの連続希釈の各々について８個のカップを調製する。これらのカップを紐で結び、ラベルを貼り、棚に置いて、３０℃、相対湿度６５％で３日間インキュベートする。これらの５６個の実験カップ及び８個の対照カップが１つの生物検定を構成する。
３日後、昆虫の致死率を評価する。各々のカップに強い衝撃を加え、動かない幼虫を死んだものとして数える。致死パーセントを算出し、このデータを平行プロビット解析により分析する。ＬＣ50、ＬＣ90、回帰線の傾き、変動係数、及び効力を見積もる。
効力を決定するため、化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物を希釈し、生物検定を行い、２０，０００ＬＴＵ／グラム（レプチノタルサ・テキサナ単位／グラム）の効力が割り当てられているバチルスチューリンギエンシス・テネブリオニス亜種標準と比較する。
効力の結果を下記表６に示す。これは、化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物（１：１ｗ／ｗ）が、活性成分のｇ当たり７５，５５５ＬＴＵの効力及びｍｌ当たり７０μｇのＬＣ50を有することを示している（ｍｌ当たり金活性成分１．８ｍｇ）。
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例１０：化合物Ｉａ及びＩｂを用いるバチルスチューリンギエンシス・テネブリオニス亜種結晶δ−エンドトキシンの強化
バチルスチューリンギエンシス・テネブリオニス亜種に由来する結晶δ−エンドトキシンのレプチノタルサ・テキサナに対する殺虫活性を強化する化合物Ｉａ及びＩｂの能力を、化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物をＮＯＶＯＤＯＲTMに添加し、平行プロビット解析によりＬＣ50を測定することにより決定した。
ＮＯＶＯＤＯＲTMに化合物Ｉａ及びＩｂを添加することにより得られる強化のレベルを決定するため、例９に記述される通りに、葉での生物検定をレプチノタルサ・テキサナに対して行う。化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物をＮＯＶＯＤＯＲTMに添加する。ハミルトン・マイクロラボ１０００を用いて溶液を連続的に希釈し、ＮＯＶＯＤＯＲTMを１０００．０、６６６．７、４４４．４、２８５．７、１８１．８、１２１．２、及び８０．０μｇ／ｇ含有する貯蔵溶液を得る。Ｉａ及びＩｂの混合物の２つの異なる希釈液を調製する。これにより、それぞれ、７２．０、４８．０、３２．０、２０．６，１３．１、８．７、及び５．８μｇ／ｇ（１０００μｇ／ｇのＮＯＶＯＤＯＲTMに対して２．５％ｖ／ｖ）並びに３６．０、２４．０、１６．０、１０．３、６．５、４．４、及び２．９μｇ／ｇ（１０００μｇ／ｇのＮＯＶＯＤＯＲTMに対して１．２５％）を含む７つの連続希釈が得られる。（化合物Ｉａ及びＩｂを含まない）純粋サンプル及び基準物質を同様に調製する。一対の純粋サンプルのＬＣ50を強化されたＬＣ50値で割り、化合物Ｉａ及びＩｂの混合物に関連するＬＣ50の減少倍率を得る。
結果を下記表７に示す。これらは、化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物が、レプチノタルサ・テキサナに対するＮＯＶＯＤＯＲTMの殺虫活性を強化することを示している。
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例１１：甲虫Ｉｐｓカリグラフス及びデンドロクトヌス・フロンタリスに対する化合物Ｉａ及びＩｂの混合物の活性
化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物の毒性を、甲虫Ｉｐｓカリグラフス及びデンドロクトヌス・フロンタリスに対して決定する。化合物Ｉａ及びＩｂの粗製溶液（ｍｌ当たり活性成分１．８ｍｇ）３ｍｌを凍結乾燥したテーダマツの師管部５ｇ及び蒸留水７ｍｌに添加する。対照餌を水１０ｍｌで調製する。餌を３つのペトリ皿に分け、５ないし１０匹の成体になりたてのＩｐｓ又は羽化したばかりの成体デンドロクトヌス甲虫を各皿に置く。処理餌の３つの異なるバッチ及び対照餌に１０ないし２０匹の昆虫を充てる。これらのペトリ皿を暗所において２５℃でインキュベートし、餌の上に置いて４、７及び１０−１２日後に死んだ昆虫の数を数える。提示されるデータは、各昆虫種について２もしくは３回繰り返された別個の研究の平均である。
Ｉｐｓカリグラフスについての結果を下記表８に示す。これらの結果は、化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物が殺虫性であることを示している。
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デンドロクトヌス・フロンタリス生物検定の結果を下記表９に示す。これらの結果は、化合物Ｉａ及びＩｂの混合物が殺虫性であることを示している。
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例１２：ポピリア・ジャポニカ（マメコガネ）に対する活性
化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物を、第３齢ポピリア・ジャポニカに対する殺虫活性について試験する。ホソムギの根（１１日齢）を化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物（ｍｌ当たり１．８ｇのＩａ及びＩｂ）に浸漬し、部分的に乾燥させる。１匹の第３齢ポピリア・ジャポニカの幼虫を、幾らかの処理根を収容する缶に入れる。２４時間後、この根及び幼虫をウースター・シルト・ローム（Ｗｏｏｓｔｅｒ  ｓｉｌｔ  ｌｏａｍ）で覆う。対照根を水に浸漬し、非処理対照を第１日にローム中に直接入れた幼虫で構成する。缶を暗所において２５℃でインキュベートし、７、１０、２１、２８及び３６日後に死んだ幼虫の数を調べて、対照相関致死率を報告する｛（対照生存−処理生存）／対照生存）×１００％｝。各処理に対して、総数で２５匹の幼虫を用いる。表１０に示されるように、その結果は、化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物が第３齢ポピリア・ジャポニカに対して有効であることを示している。
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例１３：エピラクナ・バリベスチス（メキシカン・ビーン・ビートル）に対する活性
化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物（ｍｌ当たり１．８ｍｇ）を、第３齢エピラクナ・バリベシス幼虫に対する殺虫活性について試験する。籠に入れたエピラクナ・バリベシス成虫のコロニーを、バーピーのブッシュ・ライマメ（Ｂｕｒｐｅｅ′ｓ  ｂｕｓｈ  ｌｉｍａ  ｂｅａｎｓ）で、グロース・チャンバー内において、１６：８の光周期、８０℃、相対湿度５０％で維持する。卵塊を採取し、湿らせた綿芯及びライマメの葉を収容するペトリ皿で孵化させる。２日後、第２齢幼虫を集め、葉浸漬生物検定に用いる。生物検定を行うため、マメの葉を収穫し、４ｍｌの水を収容する園芸用管のゴム隔壁を通して単一の葉の葉柄を突き刺す。次いで、これらの葉を、化合物Ｉａ及びＩｂを含有する粗製物質の０−１２％ｖ／ｖの範囲の連続希釈液に浸漬する。一度葉を乾燥させ、８−１０匹の第２齢幼虫を各葉の上にのせる。昆虫、葉、及び園芸用管を２２オンス紙コップ内に入れ、微細な網で覆う。これらのコップを、甲虫コロニーの飼育に用いた同じグロース・チャンバー内に保持する。２日毎にグロース・チャンバーからコップを取り出し、幼虫の個体数を調べ、葉を新しい処理葉と取り替える。８日後に試験を終了する。
表１１に示される結果は、化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物がエピラクナ・バリベシス幼虫に対して活性であることを示している。
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例１４：レプチノタルサ・デセムリネアタ（コロラドハムシ）に対する圃場試験
レプチノタルサ・デセムリネアタに対して、ジャガイモ（カタディン（Ｋａｔａｈｄｉｎ）種）における駆除についての試験を、エーカー当たり５０、１００、１５０、及び３００ｇ適用される化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物をエーカー当たり０．５及び１．０クォート適用されるＮＯＶＯＤＯＲTMと組み合わせて用いて、並びにエーカー当たり０．５、１．０、及び２．０クォート単独で適用されるＮＯＶＯＤＯＲTMを用いて行う。列当たり３個のスプレー・システムズＴＸＶＸ−１２（Ｓｐｒａｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＴＸＶＸ−１２）中空コーン・ノズルを備え、３ｍｐｈ及び５６ｐｓｉで３２ＧＰＡの散布に目盛りを合わされた背負いＣＯ2噴霧器を用いて、７日間隔で２回処理を行う。各処理を、無作為に設計された、２列（３４インチ間隔）×２５フィートの区画に対して４回繰り返す。区画当たり５０フィートの列を越えて葉を分布させることなく、レプチノタルサ・デセムリネアタ成虫及び幼虫を計数する。
図３に示される結果は、化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物がＮＯＶＯＤＯＲTMとの有意の相乗活性をジャガイモに対して及ぼすことを示している。エーカー当たり５０ｇの化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物では１３％の駆除が観察されるのに対して、エーカー当たり０．５クォートのＮＯＶＯＤＯＲTMでは２１％の駆除が観察される。しかしながら、ＮＯＶＯＤＯＲTMと化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物との両者をこれらの割合で一緒に適用すると、駆除パーセントは８１％に増加する。同様に、０．５クォートのＮＯＶＯＤＯＲTMで２１％の駆除が見られるのに対して、エーカー当たり１００ｇの化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物では２８％の駆除が得られるが、ＮＯＶＯＤＯＲTMと化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物との両者をこれらの割合で一緒に適用すると、駆除パーセントは８１％に増加する。さらに、エーカー当たり５０ｇの化合物Ｉａ及びＩｂの粗製混合物とエーカー当たり１．０クォートのＮＯＶＯＤＯＲTMとを一緒に適用すると、駆除パーセントは８８％に増加する。
微生物の寄託
バチルスチューリンギエンシスの以下の株が、ブダペスト条約に従い、アグリカルチャラル・リサーチ・サービス・パテント・カルチャー・コレクション・ノーザン・リージョン・リサーチ・センター（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ）（ＮＲＲＬ）、１８１５  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｔｒｅｅｔ、Ｐｅｏｒｉａ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ、６１６０４、ＵＳＡに寄託されている。
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これらの株は、この特許出願の継続中に、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．１４及び３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１２２の下で権利を与えることが特許商標局長官によって決定された者が、この株を利用することが可能であることを保証する状態で寄託されている。この寄託は、各寄託株の実質的に純粋な培養物を代表する。この寄託は、この出願の対抗出願またはその継続出願が出願されている国における外国特許法に必要とされる場合には利用可能である。しかしながら、この寄託の利用可能性が、政府活動によって認可される特許権を逸脱して本発明の実施の権利を与えるものではないことは理解されるべきである。
ここに記述され、請求される発明は、ここに記述される具体的な態様によって範囲が限定されるものではない。これは、これらの態様が、この発明の幾つかの側面を説明することを意図するためである。実際、ここに示され、記述されるものに加えて、この発明の様々な変形が、上述の記載から当該分野における熟練者に明らかになるであろう。そのような変形もまた、添付の請求の範囲内にあることが意図されている。
様々な参考文献がここに引用されており、それらの開示は、それら全体として、参照することにより組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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