(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
精製形態の式：
【化１】
0003718521.tif 000008
［式中、
Ｒ”は水素原子またはエチル基である］
で表されるグループＡ成分のストレプトグラミン類。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ストレプトグラミン類（ｓｔｒｅｐｔｏｇｒａｍｉｎｓ）のグループＢ成分（マイナー成分）からなる精製形態のストレプトグラミン類に関する。
【背景技術】
【０００２】
公知ストレプトグラミン類の中で、ストレプトミセス・プリスチナエスピラリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐｒｉｓｔｉｎａｅｓｐｉｒａｌｉｓ）が産生する天然源の抗菌剤であるプリスチナマイシン（ｐｒｉｓｔｉｎａｍｙｃｉｎ）（ＲＰ  ７２９３）が初めて１９５５年に単離された。Ｐｙｏｓｔａｃｉｎｅ（商標）の名前で市販されているプリスチナマイシンは主にプリスチナマイシンＩＡとプリスチナマイシンＩＩＡを含んでいる。
【０００３】
ストレプトグラミン種の他の抗菌剤、即ちバージニアマイシン（ｖｉｒｇｉｎｉａｍｙｃｉｎ）がストレプトミセス・バージニア（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｖｉｒｇｉｎｉａｅ）、ＡＴＣＣ  １３１６１から調製された（非特許文献１参照。）。バージニアマイシン（Ｓｔａｐｈｙｌｏｍｙｃｉｎｅ（商標））は主にファクターＳとファクターＭ１を含んでいる。
【０００４】
ストレプトグラミン類に属する抗生物質８９９を構成している抗生物質、即ちファクターＳとファクターＭ１を含んでいる薬学組成物が開示された（特許文献１参照。）。
【０００５】
また、アクネの治療でストレプトグラミン類のグループＡとグループＢ成分を用いることが開示されている（例えば、特許文献２参照。）。
【０００６】
天然源のストレプトグラミン種を含んでいる抗菌剤は、２つのグループの成分、即ちグループＢ成分とグループＡ成分の混合物を含んでおり、各グループは、それ自身が有する抗菌活性を示す。これらの２つのグループの成分で構成されている組み合わせは相乗作用を生じ、その結果として、増強された静菌および殺菌活性が得られると共に活性スペクトルが広がることが示された（非特許文献２、非特許文献３および非特許文献４参照。）。また、別のストレプトグラミン類のグループＡとＢ成分が記述されている（非特許文献５参照。）。さらにまた、天然のプリスチナマイシン、並びにそれを構成している異なる成分も記述されている（非特許文献６参照。）。
【０００７】
ストレプトグラミン類の精製された組み合わせを製造する全ての試みは、一定して、その活性および相乗作用の原因と考えられているグループＡ主要成分［即ちプリスチナマイシンＩＩＡ（ＰＩＩＡ）］を伴うものである。いくつかの研究で得られた結論は、更に、より良好な相乗性をももたらすこの成分の重要性を指摘している（特許文献３参照。）。
【０００８】
しかしながら、これらの試みは成功しておらず、その理由の一部は産業上の製造が困難であることであるが、主な理由は、精製されたプリスチナマイシンＩＩＡは結晶性を示す生成物であるが、これを医薬品の活性成分として用いるにはこれが示す生物学的利用能はあまりにも低すぎることが確認されたことである。
【０００９】
上記製品を産業的に製造することに関する観点から見て、今までのところ、登録に関していくつかの国の法的要求を満足させるに充分な程精製された形態のものを予備スケールで得ることはできておらず、そして充分な程一定した再現性を示す品質を有するバッチを製造することはできていなかった。
【００１０】
例えば、産業バッチの天然プリスチナマイシンは、精製した後でも２０％に到達し得る量の不純物を含んでいる。精製を行う試みは今までのところ一定して失敗に終わっており、極めて頻繁に、これらのグループの成分の１つが分解を生じていた、と言うのは、これらは不安定な生成物であり、これが理由で、数多くの操作でその環構造の開環が生じるか或はグループＡ成分の脱水が生じるからである。その結果として、長年に渡り、純度改良の達成は不可能であると考えられていた。１９８８年でもまだ精製は困難であると考えられていた（非特許文献７参照。）。１９８８年にもまた同様に、Ｎ．Ｋ．  ＳＨＡＲＭＡおよびＭ．Ｊ．Ｏ．  ＡＮＴＥＵＮＩＳにより、分析の目的でバージニアマイシン成分を分離および精製するのは可能であるが、直面する困難さから、これらの製品を産業的に製造することは考えられないと言った発表が行われた（非特許文献８参照。）。
【００１１】
このような状況から、プリスチナマイシン（Ｐｙｏｓｔａｃｉｎｅ（商標））の商品化は特定の国、例えばフランスおよびベルギーに限られていた。同じことがバージニアマイシン（Ｓｔａｐｈｙｌｏｍｙｃｉｎｅ（商標））にも当てはまり、ヒト用薬剤としては限られた数の国でのみ商品化されており、同様に、ミカマイシン（ｍｉｋａｍｙｃｉｎ）の商品化（日本に限られている）も停止させられた。このように、いくつかの団体は、グラム陽性球菌が原因となるひどい感染（特にメチシリン耐性ブドウ球菌が原因となる感染）または性伝染病で効力のある有効性を示す治療が受けられないでいた。
【００１２】
抗菌分野では、ある種の抗生物質を投与した後、アレルギーまたは耐性が進展し得ることは開業医によく知られている（非特許文献９参照。）。特に病院環境下では、耐性を示す黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）株が数多く知られている。この理由で、治療すべき特別な場合の患者治療に適合させ得るように、化学的に異なる幅広い範囲の種類の抗菌剤を病院内に確保することは、医者にとって極めて有効である。特別な種類の市販抗菌剤が失敗に終わった時の結果は非常に重大であるか、或は劇的でさえあり得る、と言うのは、他の種類の抗生物質が合わない患者に治療を受けさせることができなくなり得るからである。
【００１３】
このように、精製に対して行われてきた試みは常に、ストレプトグラミン類の少量成分を除去する方向であり、これらは必須でないと見なされており、そして多くの場合、不純物であると見なされてきた。
【００１４】
天然のストレプトグラミン類のグループ成分Ａの中で、プリスチナマイシンＩＩＢ（ＰＩＩＢ）は少量成分であり、天然プリスチナマイシン内におけるそれの重量比は１０％未満であり、そしてしばしば、バージニアマイシン内では約８％であり、約６％の場合ですらある。
【特許文献１】米国特許第３，３２５，３５９号明細書
【特許文献２】フランス特許出願公開第２，６１９，００８号明細書
【特許文献３】ヨーロッパ特許出願公開第５０６，５６１号明細書（２頁）参照
【非特許文献１】Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、５、６３２（１９５５）
【非特許文献２】Ｓｔｒｅｐｔｏｇｒａｍｉｎｅ  ａｌｓ  Ｍｏｄｅｌｓｙｓｔｅｍｅ  ｆｕｅｒ  ｄｅｎ  Ｋａｔｉｏｎｅｎｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｄｕｒｃｈ  Ｍｅｍｂｒａｎｅｎ、Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ  ｚｕｒ  Ｅｒｌａｎｇｕｎｇ  ｄｅｓ  Ｄｏｋｔｏｒｇｒａｄｅｓ  ｄｅｒ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｓｃｈ−Ｎａｔｕｒｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｌｉｃｈｅｎ  Ｆａｃｃｕｌｔａｅｔ  ｄｅｒ  Ｇｅｏｒｇ−Ａｕｇｕｓｔ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｅｔ  ｚｕ  Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ、Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ  １９７９
【非特許文献３】Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ＩＩＩ、５２１（１９７５）
【非特許文献４】Ｃ．  Ｃｏｃｉｔｏ著「バージニアマイシン科の抗生物質、相乗成分含有阻害剤」
【非特許文献５】Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、１４５−９８（１９７９）
【非特許文献６】Ｊ．Ｐｒｅｕｄ’Ｈｏｍｍｅ、Ｐ．ＴａｒｒｉｄｅｃおよびＡ．Ｂｅｌｌｏｃ、Ｂｕｌｌ．Ｓｏｃ．Ｃｈｉｍ．Ｆｒ．、２、５８５（１９６８）
【非特許文献７】Ｊ．ｏｆ  Ｌｉｑ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、１１（１１）、２３６７（１９８８）
【非特許文献８】Ｂｕｌｌ．Ｓｏｃ．Ｃｈｉｍ．Ｂｅｌｇ．９７（３）１９３（１９８８）
【非特許文献９】Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３２４（９）、６０１（１９９１）
【発明の開示】
【００１５】
共結晶物（ｃｏｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｅ）、共沈物または微粉砕された物理的混合物の形態における、一般式：
【００１６】
【化１】
0003718521.tif 000002
【００１７】
［式中、
Ａ１が一般式：
【００１８】
【化２】
0003718521.tif 000003
【００１９】
（ここで、
Ｒ’は、水素原子またはヒドロキシル基であり、そして
Ｙは、水素原子、メチルアミノ基またはジメチルアミノ基である）
で表される基であり、
Ｒがエチル基であるか、或はＲ’が水素原子を表す時Ｒがまたメチル基を表してもよく、そして
Ｒ１およびＲ２が各々水素原子を表すか、或はまた
Ａ１が式：
【００２０】
【化３】
0003718521.tif 000004
【００２１】
で表される基であり、
Ｒがイソブチル基であり、そして
Ｒ１がヒドロキシル基でありそしてＲ２がメチル基である］
で表される１種以上のグループＢ成分と、一般式：
【００２２】
【化４】
0003718521.tif 000005
【００２３】
［式中、
Ｒ”は、水素原子またはメチルもしくはエチル基である］
で表される１種以上のグループＡ「少量」成分と、を含んでいる組み合わせは、インビボにおけるそれの生物学的（即ち抗菌）活性を考慮すると特に有利であることをここに見出し、これが本発明の主題を形成している。
【００２４】
本発明では、上記の様な組み合わせ作成するのに好都合な、従来は不純物として単離されることなく廃棄されていたグループＡに属するストレプトグラミン類の精製形態にある物質が提供される：
精製形態の式：
【００２５】
【化５】
0003718521.tif 000006
【００２６】
［式中、
Ｒ”は水素原子またはエチル基である］
で表されるグループＡ成分のストレプトグラミン類。
＜発明の更なる説明＞
本発明に従う組み合わせはインビボで生物学的作用を示し、この作用は、相当する天然産物（例えば天然のバージニアマイシンまたは天然のプリスチナマイシン）のそれよりもそしてグループＡ主要成分を伴う組み合わせのそれよりも際だって大きい。更に、満足される生物学的利用能を示す新規な組み合わせを提供し、これらは大規模に製造される。
【００２７】
従って、良好なレベルの活性を示すことで自然と含まれている不純物が６％未満である、精製された、生物学的利用能を示す形態の最終製品を利用することが可能になる。
【００２８】
Ｒ”がエチル基である一般式（ＩＩ）で表される生成物［以後プリスチナマイシンＩＩＦ（ＰＩＩＦ）と呼ぶ］、およびＲ”が水素原子である一般式（ＩＩ）で表される生成物［以後プリスチナマイシンＩＩＧ（ＰＩＩＧ）と呼ぶ］は、新規な生成物であり、これらは、非常に少ないストレプトグラミン成分であり、天然産物バッチにおけるこれの割合は０．５重量％未満である。
【００２９】
本発明に従う組み合わせは、有利に、これらの成分を１０：９０から９０：１０（重量）の比率、好適には２０：８０から８０：２０の比率で用いて調製される。これらは、粉末の物理的混合物の形態であってもよいか、或は本発明の１つの面に従い、共沈形態であるか、或は本発明のさらなる面に従い、以下に詳述する如き共結晶形態であってもよい。
【００３０】
本発明はまた、一般式（Ｉ）で表される少なくとも１種のグループＢ成分と一般式（ＩＩ）で表される少なくとも１種のグループＡ成分とを共結晶化させた組み合わせから成る精製された形態を提供する。
【００３１】
この共結晶化は、１モルの一般式（Ｉ）で表される成分（類）と２モルの一般式（ＩＩ）で表されるグループＡ成分（類）とから成る一定した化学量論で生じる［この化学量論は、成分Ａが一般式（Ｉ）（ここで、Ａ１は構造（Ｉａ）で表される）で表される生成物である場合、約４３−４４：５７−５６の相対的重量比に相当している］。
【００３２】
本発明の共結晶化させた組み合わせは、改良されたインビボ活性と共に良好な生物学的利用能も示す精製された安定な抗菌剤としてか、或は一般式（ＩＩ）で表される少量成分のストレプトグラミン類を精製する手段として用いられ得る。
【００３３】
一般式（ＩＩ）で表されるグループＡ成分を結晶化で精製するのは今まで不可能であった。その結果として、今までは、精製された一般式（ＩＩ）で表されるグループＡ生成物の製造方法で知られていたのはクロマトグラフィーのみであり、これらの生成物を多量に単離するに適した他の精製手段は全く知られていなかった。
【００３４】
上に定義した共結晶化組み合わせを通して処理することにより、一般式（ＩＩ）で表されるグループＡ成分が純粋な形態で入手可能であることをここに見出した。ケトン（例えば、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンなど）、エステル（例えば、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、酢酸イソブチルなど）、塩化溶媒（例えば、塩化メチレン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタンなど）、またはニトリル（例えばアセトニトリルなど）などの有機溶媒の中に溶解させた、一般式（ＩＩ）に相当するグループＡ少量成分が少なくとも３０％入っている粗混合物に、一般式（Ｉ）で定義されるグループＢ成分を添加することで、上に定義した比率で共結晶化する化合物が得られる。導入する一般式（Ｉ）で表される化合物の量は、この生成物の残存濃度（共結晶化後）がその媒体内でそれが示す溶解度未満であるように適当に選択される。また、一般式（ＩＩ）で表される生成物および一般式（Ｉ）で表される生成物に関する、その初期媒体が有する個々の含有量における変動は、その得られる共結晶化化合物の修飾をもたらすものではないと理解される。例えばメチルイソブチルケトンまたはジクロロエタンなどの溶媒に溶解させそして酸媒体（例えば、硫酸、塩酸など）内で処理した、このようにして得られる共結晶化組み合わせを、例えばヘキサンの如き溶媒でその有機相を処理することにより、グループＢ成分が入っていない精製されたグループＡ少量成分を得ることができる。
【００３５】
更に、この共結晶化組み合わせは、安定性が大きく増強されることと純度が高くなることの利点を与え、最も詳細には、産業化が容易であると言った利点を与える。
【００３６】
この方法はまた、ストレプトグラミン類の天然グループＢ成分の修飾された誘導体との共結晶物の製造にも適合し得る。これらの共結晶物もまた本発明の範囲内である。同様に、上記共結晶物から精製形態の一般式（ＩＩ）で表される少量成分を製造することも本発明の範囲内である。
【００３７】
本発明の好適な態様は、含まれている不純物が６％未満、好適には３％未満である、プリスチナマイシンＩＢ［上に定義するように、Ａ１が、Ｙがメチルアミノ基でありそしてＲ’が水素原子である一般式（Ｉａ）で表される基を表し、そしてＲがエチル基である時］か、バージニアマイシンＳ１［上に定義するように、Ａ１が、ＹとＲ’が水素原子である一般式（Ｉａ）で表される基を表し、そしてＲがエチル基である時］か、或はバージニアマイシンＳ１とバージニアマイシンＳ４の混合物［上に定義するように、Ａ１が、バージニアマイシンＳ１と同様に定義され、そしてＲがメチル基である時］と、プリスチナマイシンＩＩＢ［上に定義するように、Ｒ”がメチルである一般式（ＩＩ）で表される］との組み合わせである。
【００３８】
本発明の別の好適な態様は、約１：２の一定したモル比の相対的比率でグループＢ成分とＡ成分を含んでいる、一般式（Ｉ）で定義されるストレプトグラミン類のグループＢ成分と一般式（ＩＩ）で表されるグループＡ成分との組み合わせを含んでいる。
【００３９】
本発明の特徴に従い、例えば上に定義した如き共結晶化させた化合物を製造することにより、一般式（Ｉ）で表されるストレプトグラミン類の少なくとも１種のグループＢ成分と一般式（ＩＩ）で表される少なくとも１種のグループＡ成分との新規な組み合わせが入手可能である。異なる比率の組み合わせを得ることが望まれている場合、このようにして共結晶化させた化合物と、一般式（Ｉ）で表される成分の少なくとも１種とか、或は一般式（ＩＩ）で表される少なくとも１種のグループＡ成分とを（これらの成分は予め精製されている）、所望の比率を得るに適当な量で一緒にするか、或は一般式（ＩＩ）で表されるグループＡ成分（或は上記成分の混合物）を該共結晶物から精製した後、一般式（Ｉ）で表される１種以上のグループＢ成分と所望比率で混合してもよい。また、本発明に従う組み合わせは、グループＢ成分（類）および一般式（ＩＩ）で表されるグループＡ成分をその相当する天然ストレプトグラミンからこれらの成分の各々を精製することで単離した後、上に定義した如き所望比率でその精製した成分を混合することによって製造され得る。
【００４０】
また、メチルイソブチルケトンの中か或はアセトンまたは塩化メチレンの中に入っている一般式（Ｉ）で表される成分と一般式（ＩＩ）で表される成分の溶液［或はまた、共結晶物と、一般式（Ｉ）で表される成分か或は一般式（ＩＩ）で表される成分の１種とが入っている溶液］を用い、この溶液を、例えばヘキサンまたはシクロヘキサンの中か或は水の中に注ぎ込んで、本発明に従う組み合わせを所望比率で共沈させてもよい。
【００４１】
グループＡ成分とＢ成分の製造および分離は、Ｊ．Ｐｒｅｕｄ’ｈｏｍｍｅ他、Ｂｕｌｌ．Ｓｏｃ．Ｃｈｉｍ．Ｆｒ．、２巻、５８５（１９６８）、Ａｎｔｉｂｉｏｔ．＆  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．、５、６３２（１９５５）または７、６０６（１９５７）、Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．Ｓｙｍ．、２°Ｂｒｕｓｓｅｌｓ、１８１（１９６２）、Ａｎｔｉｂｉｏｔ．Ａｎｎ．、７２８  ７８４（１９５４−５５）、米国特許第３，２９９，０４７号または「Ｓｔｒｅｐｔｏｇｒａｍｉｎｅ  ａｌｓ  Ｍｏｄｅｌｓｙｓｔｅｍｅ  ｆｕｅｒ  ｄｅｎ  Ｋａｔｉｏｎｅｎｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｄｕｒｃｈ  Ｍｅｍｂｒａｎｅｎ、Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ  ｚｕｒ  Ｅｒｌａｎｇｕｎｇ  ｄｅｓ  Ｄｏｋｔｏｒｇｒａｄｅｓ  ｄｅｒ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｓｃｈ−Ｎａｔｕｒｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｌｉｃｈｅｎ  Ｆａｃｃｕｌｔａｅｔ  ｄｅｒ  Ｇｅｏｒｇ−Ａｕｇｕｓｔ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｅｔ  ｚｕ  Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ、Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ  １９７９」に記述されている方法かまたはそれの類似法に従うか、或は以下の実施例の中に記述するように、発酵させた後、この発酵媒体からその構成成分を単離することによって行われる。特に、プリスチナマイシンの場合、グループＡ成分とＢ成分の分離は、酢酸塩（例えば、酢酸エチルなど）の如き有機溶媒の中に粗ストレプトグラミンを懸濁させた後、この粗グループＡ成分を濾過もしくは遠心分離し、そして酸性の水系媒体中でグループＢ成分を抽出し、続いて塩化エチレン媒体中で再抽出することによって行われ得る。グループＡ成分とＢ成分の分離はまた、メチルイソブチルケトンの中に入っている粗ストレプトグラミンの溶液を酸抽出した後、この水相からグループＢ成分を抽出することでこれを単離し、そしてその有機相から沈澱させることでグループＡ成分の単離を行うことによっても行われ得る。
【００４２】
分離を行った後の、ストレプトグラミン類のグループＢ成分の精製は、エタノール、メタノールまたはイソプロパノールの如きアルコール中か、酢酸エステル（例えば、酢酸イソプロピルまたは酢酸ブチルなど）中か、ケトン（例えば、メチルエチルケトンなど）中か、或はアセトニトリル中で結晶化させるか、或はクロマトグラフィーにかけることによって行われ得る。一般式（ＩＩ）で表されるグループＡ成分の精製は、クロマトグラフィーを用い、アセトニトリル／水混合物で溶離させることによって行われ得る。
【００４３】
また、それぞれ一般式（ＩＩ）および（Ｉ）で表されるグループＡ成分およびＢ成分の製造は、フランス特許出願公開第２，６８９，５１８号に記述されている如く、下記の段階：
−  第一段階（任意）、即ちストレプトグラミン類を産生する非選択的微生物に対する変異誘発、および
−  第二段階、即ち選択的微生物の選択、
に従う個々の発酵によって行われる。
【００４４】
これらの非選択的微生物は一般に放線菌属および菌・カビである。本方法で用いられ得る出発微生物は、特に、プリスチナマイシン、バージニアマイシン、マイカマイシン、オストレオグリシン（ｏｓｔｒｅｏｇｒｙｃｉｎ）、ビリドグリセイン（ｖｉｒｉｄｏｇｒｉｓｅｉｎ）、ベルナマイシン（ｖｅｒｎａｍｙｃｉｎ）およびエタマイシン（ｅｔａｍｙｃｉｎ）を含む群から選択されるストレプトグラミンの非選択産生体である微生物である。例として、用いられ得るいくつかの非選択的微生物を以下の表に挙げる。
【００４５】
微生物                                      抗生物質
菌・カビ
ミクロモノスポラ種（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ  ｓｐ．）  ベルナマイシン
ストレプトミセス属
Ｓ．アルボレクツス（Ｓ．ａｌｂｏｒｅｃｔｕｓ）              バージニアマイシン
Ｓ．グリセウス（Ｓ．ｇｒｉｓｅｕｓ）（ＮＲＲＬ２４２６）    ビリドグリセイン
Ｓ．ラヴェンジュラエ（Ｓ．ｒａｖｅｎｄｕｌａｅ）            エタマイシン
Ｓ．ロイデンシス（Ｓ．ｌｏｉｄｅｎｓｉｓ）
（ＡＴＣＣ１１４１５）                                      べルナマイシン
Ｓ．ミタカエンシス（Ｓ．ｍｉｔａｋａｅｎｓｉｓ）
（ＡＴＣＣ１５２９７）                                      マイカマイシン
Ｓ．オストレオグリセウス（Ｓ．ｏｓｔｒｅｏｇｒｉｓｅｕｓ）
（ＡＴＣＣ２７４５５）                                      オストレオグリシン
Ｓ．プリスチナエスピラリス（Ｓ．ｐｒｉｓｔｉｎａｅｓｐｉｒａｌｉｓ）
（ＡＴＣＣ２５４８６）                                      プリスチナマイシン
Ｓ．バージニア（ＡＴＣＣ１３１６１）                        バージニアマイシン
放線菌属（ＡＣＴＩＮＯＭＹＣＥＳ）
Ａ．ダグヘスタニクス（Ａ．ｄａｇｈｅｓｔａｎｉｃｕｓ）      エタマイシン
より特別には、この製造は、ストレプトミセス・アルボレクツス、ストレプトミセス・ミタカエンシス、ストレプトミセス・プリスチナエスピラリス、ストレプトミセス・オストレオグリセウスおよびストレプトミセス・バージニアから選択される微生物を用いて実施される。
【００４６】
この製造の第一段階は、これらの非選択的微生物を修飾して、それが示す抗生物質産生能力を上昇させ、そして／またはストレプトグラミン類の２つの成分の一方のみを合成させるようにする。これは、遺伝子修飾（生合成経路に関与している酵素のための構造遺伝子の変異か、或は例えば上記構造遺伝子の発現を可能にする配列の変異）によるか、或は生化学的修飾（翻訳後機構の修飾、フィードバック阻害機構の損傷など）によって入手可能である。下記の如き種々の変異誘発手段が用いられる：
−  物理剤：Ｘ線、紫外線などか；或は
−  化学剤：アルキル化剤、例えば、メタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（Ｄｅｌｉｃ他、  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｒｅｓ．  ９  （１９７０）１６７−１８２）または４−ニトロキノリンの１−オキサイド（ＮＱＯ）など；二アルキル化剤；挿入剤などか、或は
−  ＤＮＡ、特にトランスポゾン、組み込みプラスミド、ファージまたはプロファージの中に変異挿入する何らかのシステムか、或はまた
−  プロトプラスト融合（Ｃｏｈｅｎ、Ｎａｔｕｒｅ  ２６８（１９７７）１７１−１７４）。
【００４７】
これらの手段（単独もしくは組み合わせ）は、胞子または発芽後もしくは発芽中の胞子形態の非選択的微生物に適用され得るか、或は菌糸に適用され得る。この製造では、ストレプトグラミン類の１成分を選択的に産生し得る微生物を非選択的微生物から得ることを可能にする操作（ランダムにか或は直接に）が用いられ得る。
【００４８】
この製造の第二段階は、選択的微生物の同定および単離に関するものである。この段階は、特に微生物に関する選択性を試験する手段を用いて実施され得る。ストレプトグラミン類のグループＡ成分またはグループＢ成分に特異的感受性を示す種々の微生物が存在しており、例えば特にグループＢ成分に感受性を示す、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）（ＡＴＣＣ６６３３）、バチルス・サーキュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）（Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏ．Ｓｅｒ．Ａ  ＸＩＩＩ（１）（１９６０）６２）またはＣ．キセロシス（Ｃ  ｘｅｒｏｓｉｓ）（Ｗａｔａｎａｂｅ、上記引用文献）など、そして特にグループＡ成分に感受性示す、ストレプトコッカス・アガラクチアエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）Ｂ９６（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．１０（５）（１９７６）７９５）、ミクロコッカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｔｅｕｓ）（Ｐｒｉｋｒｙｌｏｖａ、上記引用文献）またはサルシナ・ルテア（Ｓａｒｃｉｎａ  ｌｕｔｅａ）（ＡＴＣＣ３４１）が存在している。ストレプトグラミン類の両成分に感受性を示す微生物の中に、これらの２つの成分に一方に耐性を示すに適した遺伝子を挿入することによって、ストレプトグラミン類の１つの成分に特異的に感受性を示す人工微生物を調製することも可能である。これらの遺伝子のいくつかがクローン化されており（Ｌｅ  Ｇｏｆｆｉｃ他、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏ．ＸＸＸ（８）、６６５（１９７７）；Ｌｅ  Ｇｏｆｆｉｃ他、Ａｎｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｓｔ．Ｐａｓｔｅｕｒ  １２８Ｂ、４７１（１９７７）；Ｓｏｌｈ他  Ｐａｔｈ．Ｂｉｏｌ．３２（５）、３６２（１９８４））、標準的な分子生物学技術を用いて上記遺伝子を異なる微生物の中に導入する。この選択段階はまた、成分ＡまたはＢに特異的な抗体を用いたＥＬＩＳＡ試験を用いるか、或はまた分析技術、例えばクロマトグラフィー（液クロ、薄層クロマトグラフィーなど）を用いて行われ得る。微生物に関する選択性を試験する場合、更に、クロマトグラフィーアッセイを用いてその選択率を確認するのが好適である。
【００４９】
従って、本発明に従い、新規な精製形態のストレプトグラミンを産業規模で得ることがここに可能になり、ここで、この組成物の不純物レベル、明確さおよび一定性は登録に関する法的必要条件に従っており、そして更に、これは改良されたインビボ活性と生物学的利用能を示すと共にその毒性はより低い。従って、この新規な組み合わせは、数多くの国におけるこの種類の抗菌剤を用いた許容される治療の不足を補い得るものである。
【００５０】
一般式（Ｉ）で表されるストレプトグラミン類のグループＢ成分と一般式（ＩＩ）で表されるストレプトグラミン類のグループＡ成分との新規な組み合わせは、特にグラム陽性微生物に対して特に有利なインビボ活性を示す。インビボにおいて、マウスに３０から５０ｍｇ／ｋｇ用量で経口投与するとスタフィロコッカス・アウレウス  ＩＰ  ８２０３に対して活性を示すことが示された。
【００５１】
例として、マウスの実験的スタフィロコッカス・アウレウスＩＰ  ８２０３感染における一般式（Ｉ）と（ＩＩ）で表される成分のいくつかの組み合わせが示す経口ＣＤ５０を以下に示す。
【００５２】
メチルイソブチルケトンまたはアセトンの中に入っている一般式（Ｉ）と（ＩＩ）で表される成分の溶液を用い、ヘキサン中で共沈させることによって、以下の表Ｉ中の試験組み合わせを調製する。
【００５３】
表Ｉ
生成物（Ｉ）／生成物（ＩＩ）組み合わせ      ＣＤ５０（ｍｇ／ｋｇ）ｐ．ｏ．
ＰＩ（実施例１）ＰＩＩＢ（実施例１８）
１０：９０                                      ４４
２０：８０                                      ３２
３０：７０                                      ３０
７０：３０                                      ３０
８０：２０                                      ３０
９０：１０                                      ５０
以下の表ＩＩに示す組み合わせは、実施例の中に記述するように調製した共結晶化生成物である。
【００５４】
表ＩＩ
共結晶化生成物（Ｉ）／生成物（ＩＩ）        ＣＤ５０（ｍｇ／ｋｇ）ｐ．ｏ．
組み合わせ
ＰＩ／ＰＩＩＢ（実施例９）                                  ３８
ＰＩＡ／ＰＩＩＢ（実施例１１）                              ２８
ＰＩＢ／ＰＩＩＢ（実施例１２）                              ３２
ＰＩＣ／ＰＩＩＢ（実施例１３）                              ３６
ＰＩＤ／ＰＩＩＢ（実施例１４）                              ５０
ファクターＳ／ＰＩＩＢ（実施例１５）                        ３２
ファクターＳ１／ＰＩＩＢ（実施例１６）                      ５０
ファクターＳ／ＰＩＩＦ（実施例１７）                        ５０
以下の表ＩＩＩに記述する組み合わせを、粉末の物理的混合物の形態で調製する。
【００５５】
表ＩＩＩ
生成物（Ｉ）／生成物（ＩＩ）組み合わせ      ＣＤ５０（ｍｇ／ｋｇ）ｐ．ｏ．
ＰＩＡ（実施例１）／ＰＩＩＢ（実施例１８）
３０：７０                                                  ３６
ＰＩＡ（実施例１）／ＰＩＩＢ（実施例１８）
５０：５０                                                  ４０
ファクターＳ（実施例５）／ＰＩＩＢ（実施例１８）
３０：７０                                                  ４４
更に、この新規な組み合わせは毒性を示さない、即ちマウスに１５０ｍｇ／ｋｇ用量で経口投与した時（２回投与）、毒性の兆候それ自身が現れない。
【００５６】
本発明の別の特徴に従い、一般式（ＩＩ）で表される成分を精製する手段としてその共結晶化組み合わせを用い、ケトン（例えばメチルイソブチルケトンなど）の中に入っているこの共結晶化化合物の溶液を酸抽出した後、この有機相から沈澱させることでグループＡ成分を抽出して単離することによって、一般式（ＩＩ）で表される成分を精製することができる。
【００５７】
以下に示す実施例は本発明を説明するものである。これらの実施例におけるアッセイ値を重量％で示す。
【００５８】
グループＢ成分の分離および精製
【実施例１】
【００５９】
２１０リットルの酢酸エチルの中に、３０ｋｇの粗プリスチナマイシン［プリスチナマイシンＩＡ（ＰＩＡ）：２０．７％、プリスチナマイシンＩＢ（ＰＩＢ）：３．９％、プリスチナマイシンＩＣ（ＰＩＣ）：０．６％、プリスチナマイシンＩＤ（ＰＩＤ）：０．３％、プリスチナマイシンＩＩＢ（ＰＩＩＢ）：８％、プリスチナマイシンＩＩＡ（ＰＩＩＡ）：４５％、プリスチナマイシンＩＩＦ（ＰＩＩＦ）：＜０．５％（分析されず）、プリスチナマイシンＩＩＧ（ＰＩＩＧ）：０．５％（分析されず）］を懸濁させた後、室温で１５時間撹拌する。この懸濁液を濾過し、この酢酸エチル濾液を集めて、２０リットルの１Ｎ硫酸で抽出した後、２０リットルの蒸留水で抽出する。これらの水相を一緒にして、１５リットルの酢酸エチルで６回洗浄した後、１０％の重炭酸ナトリウム溶液を３０リットル添加することでｐＨを７に調整し、そして３０リットルの塩化メチレンで３回抽出する。これらの塩化メチレン相を一緒にした後、１０リットルの蒸留水で洗浄する。次に、この塩化メチレンを蒸留除去して、５０リットルのエタノールで置き換える。次に、この混合物を０．８ｋｇのＬ３Ｓ炭と一緒に還流下で３０分間処理する。濾過し、５リットルのエタノールで２回洗浄した後、この混合物を１５時間かけて１０℃にまで冷却する。１０℃で１時間保持した後、この懸濁液を濾過し、そして７リットルのエタノールで３回洗浄する。この固体を減圧下４０℃で乾燥させた後、精製されたプリスチナマイシンＩ（以後ＰＩと呼ぶ）が５．７ｋｇ得られる。
アッセイ値：９６．８％（ＰＩＡ：８１．１％、ＰＩＢ：１２％、ＰＩＣ：２．６％、ＰＩＤ：１．１％）；
ＰＩＡに関する収率：７４％。
【００６０】
精製したＰＩの１５００ｇを９リットルの１，２−ジクロロエタンで取り上げた後、１．５当量の無水コハク酸と０．０１５当量のジメチルアミノピリジンを加える。この溶液を２０℃で１週間保持した後、シリカ（２０−４５μｍ）が１０ｋｇ入っているカラム［カラム高さ：１ｍ；直径：２０ｃｍ］の上に入れる。１，２−ジクロロエタン／メタノールの混合物を１８リットル／時の流量で６時間貫流させることで溶離を行い、このクロマトグラフィーにかけている間、このメタノール（水含有量５％）のパーセントを０から４％に上昇させる。２．４リットルの画分が４７個回収された。
【００６１】
画分５から１５をプールし、その１，２−ジクロロエタンを蒸発除去して、５リットルのエタノールで置き換える。結晶化後、９９．８％のアッセイ値でＰＩＡが３６５ｇ得られる。
【実施例２】
【００６２】
実施例１に記述したクロマトグラフィー実験で得られる画分３６から３９をプールし、その１，２−ジクロロエタンを蒸発除去することで、固体が２１０ｇ得られる。この固体の４０ｇを、１０Ｎの塩酸を８ｃｍ３加えた水８リットルで取り上げる。９０℃で３時間後、この溶液を炭酸水素ナトリウムでｐＨ６．５に中和する。この溶液を１リットルの酢酸エチルで３回抽出した後、この抽出液を０．２リットルの水で２回洗浄する。炭で処理した後、この酢酸エチルを蒸発除去して、６００ｃｍ３のエタノールで置き換える。再結晶後、９７％のアッセイ値でＰＩＢが２０ｇ得られる。
【実施例３】
【００６３】
実施例１に記述したクロマトグラフィー実験で得られる画分２２から２６をプールし、その１，２−ジクロロエタンを蒸発除去することで、固体が１３９ｇ得られる。この固体を、最小量の１，２−ジクロロエタンで取り上げて、シリカカラムの上に入れる。１，２−ジクロロエタン／メタノールの混合物を１８リットル／時の流量で６時間貫流させることで溶離を行い、このクロマトグラフィーにかけている間、このメタノール（水含有量５％）のパーセントを０から５％に上昇させる。２．４リットルの画分が４８個回収された。画分３８から４３を蒸発させた後、その固体を３００ｃｍ３のエタノールで取り上げる。再結晶化後、ＰＩＣを４０％含んでいるＰＩが２２ｇ得られる。連続してシリカ（２０−４５μｍ）使用クロマトグラフィー実験で塩化メチレン／メタノール（９８：２体積）溶離剤を用いて貫流させることにより、固体が５ｇ入手可能であり、この固体をメチルイソブチルケトンと一緒に激しく撹拌しそしてエタノール中で再結晶した後の、ＰＩＣに関するそれのアッセイ値は９５％である。
【実施例４】
【００６４】
上の実施例１に記述したようにして得られるＰＩの１０００ｇを最小量のクロロホルムの中に溶解させた後、シリカ（２０−４５μｍ）が入っているカラムを用いた連続分別で精製する。メタノールを２から５％含有させたクロロホルムで溶離させた後、１つの生成物が得られ、これを濃縮乾固する。次に、Ｄｉａｉｏｎ（商標）樹脂が入っているカラムに２回連続してアセトニトリル／水（６０：４０体積）混合物を貫流させることによって、この生成物の精製を行う。これらの画分をクロマトグラフィーで監視する。ＰＩＤが入っている画分をプールして濃縮乾固する。これによって、ＰＩＤに関するアッセイ値が６０％の生成物が約３ｇ得られる。メチルイソブチルケトン／アセトン／蟻酸（４０：２：４０体積）の溶媒混合物を用いた向流クロマトグラフィーによりさらなる精製を行う。ＰＩＤが入っている画分を濃縮乾固することにより、ＰＩＤに関するアッセイ値が９５％の固体が１ｇ入手可能である。
【実施例５】
【００６５】
４００ｇのＳｔａｐｈｙｌｏｍｙｃｉｎｅ（商標）（錠剤形態−初期組成：バージニアマイシンＳ１（Ｓ１）：３．４％、バージニアマイシンＳ４（Ｓ４）：０．９％）を４リットルの水の中に入れる。
【００６６】
これらの錠剤を２０℃で１５分間撹拌することによって崩壊させる。１リットルの塩化メチレンを加えた後、１時間撹拌を継続する。次に、沈降させた後、この塩化メチレン相を分離し、濾過した後、体積が５リットルの撹拌しているヘキサンの中に３０分間かけて流し込む。１時間撹拌した後、この懸濁液を濾過し、そして固体を集めて、２５０ｃｍ３のヘキサンで３回洗浄する。乾燥後、５２ｇの固体が回収され、これを３７０ｃｍ３の酢酸エチルの中に懸濁させる。この懸濁液を２０℃で１８時間、連続して２回激しく撹拌する。各撹拌処理に相当する濾液を取り出して乾燥させた後、８５０ｃｍ３のメタノールの中に還流下で溶解させる。この温度を１６時間かけて徐々に−２０℃にまで降下させた後、固体を濾過で集め、そして少量のメタノールで洗浄する。この固体を減圧下３５℃で乾燥させた後、ファクターＳ（バージニアマイシンＳ）が９ｇ得られる。
アッセイ値：９６％（Ｓ１：７５．４％、Ｓ４：２０．６％）
ファクターＳ１（バージニアマイシンＳ１）に関する収率：５０％。
【実施例６】
【００６７】
上の実施例５に記述したようにして得られるファクターＳの１ｇをアセトニトリルの中に１２５ｍｇ／ｃｍ３の比率で溶解させ、その２ｃｍ３体積を、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ  ５Ｃ８（商標）カラム（高さ２５ｃｍ、外部直径２．５４ｃｍ）使用クロマトグラフィーに注入し、そして水／アセトニトリル（６０：４０体積）混合物を７．５ｃｍ３／分の流量で溶離させることを４回行うことにより精製を行う。ファクターＳ１が入っているものを集め、その体積は各場合共１２０ｃｍ３であり、これは全体で４８０ｃｍ３に相当している。このクロマトグラフィー操作を４回繰り返すことで、ファクターＳの１ｇ全体を処理する。このようにして、ファクターＳ１が入っているものを集め、その体積は約５００ｃｍ３である。ロータリーエバポレーターを用いてアセトニトリルを除去する。この水相を５０ｃｍ３のジクロロメタンで３回抽出する。これらの塩化メチレン相を一緒にし、５０ｃｍ３の蒸留水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した後、濾過する。ロータリーエバポレーターを用い減圧（５ｍｍの水銀）下でジクロロメタンを除去する。このようにしてアッセイ値が９９．６％のファクターＳ１が０．６７ｇ得られる。
粗グループＡ成分の製造
【実施例７】
【００６８】
５０リットルのメチルイソブチルケトンの中に、５００ｇの粗プリスチナマイシン［プリスチナマイシンＩＡ（ＰＩＡ）：２０．７％、プリスチナマイシンＩＢ（ＰＩＢ）：３．９％、プリスチナマイシンＩＣ（ＰＩＣ）：０．６％、プリスチナマイシンＩＤ（ＰＩＤ）：０．３％、プリスチナマイシンＩＩＢ（ＰＩＩＢ）：８％、プリスチナマイシンＩＩＡ（ＰＩＩＡ）：４５％］を溶解させる。この溶液を、２．５リットルの水と２．５リットルの１Ｎ硫酸で構成されている水相で５回抽出した後、１０リットルの水で３回洗浄する。次に、このメチルイソブチルケトンを、３５ｇ／リットル入っている炭酸水素ナトリウム水溶液７．５リットルで処理した後、５リットルの水で洗浄する。各場合共、この水相をその有機相と混合し、沈降させた後、その水相を分離する。
【００６９】
この得られる有機相を７５０ｇのアルミナに接触させ、濾過し、濃縮することで体積を約４リットルにした後、５倍体積のヘキサンで取り上げる。この得られる沈澱物を濾別した後、乾燥させる。生成物が３００ｇ得られ、この生成物を１リットルのイソプロパノールの中に懸濁させる。５５℃で４５分間撹拌した後、この懸濁液を４℃で濾過する。これらの濾過母液を濃縮乾固し、そしてこの残渣を５００ｃｍ３のメチルイソブチルケトンで取り上げ、この中に５倍体積のヘキサンを注ぎ込む。この沈澱物を濾別し、ヘキサンで洗浄した後、減圧下４０℃で乾燥させる。ＰＩＩＢを３６％そしてＰＩＩＡを６％含んでいるがＰＩＡはもはや含んでいない粗ＰＩＩＢが６９ｇ得られる。
【実施例８】
【００７０】
上の実施例７に記述したようにして得られる粗ＰＩＩＢの６０ｇを、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ  ５Ｃ８（商標）カラム（カラム直径５ｃｍ、高さ３０ｃｍ）使用クロマトグラフィーにかけ、水／アセトニトリル（６０：４０体積）溶離剤を用いた貫流を数回行うことで精製する。このようにしてプリスチナマイシンＩＩＦ（ＰＩＩＦ）が２５０ｍｇ得られる。
共結晶化させた生成物の製造
以下に示す実施例において、この共結晶化させた生成物が示すＸ線回折スペクトルは、グループＢ成分が入っている同じ溶媒の中でこの成分を単独に結晶化させたものが示すスペクトルとは異なっていることが示された。
【実施例９】
【００７１】
上の実施例７で得られた粗ＰＩＩＢを１９０ｃｍ３のアセトンの中に溶解させた。精製ＰＩ（ＰＩＡ：８１．１％、ＰＩＢ：１２％、ＰＩＣ：２．６％、ＰＩＤ：１．１％）の３３ｇを加える。２０℃で１７時間撹拌した後、懸濁液が得られ、これを４℃で濾過する。この生成物を洗浄した後、乾燥させる。アセトン１リットル中１００ｇの濃度で再結晶させた後、ＰＩＩＢ＋ＰＩＩＦ＋ＰＩＩＧに関するアッセイ値が５５％でありＰＩＡ＋ＰＩＢ＋ＰＩＣ＋ＰＩＤに関するアッセイ値が４３％である白色結晶が１０ｇ得られる。
【実施例１０】
【００７２】
以下の実施例１８に記述する如く得られる精製ＰＩＩＢの２５０ｍｇを１７ｃｍ３の酢酸エチルの中に溶解させる。精製ＰＩ（ＰＩＡ：８１．１％、ＰＩＢ：１２％、ＰＩＣ：２．６％、ＰＩＤ：１．１％）の３００ｍｇを加える。２０℃で２０時間撹拌し、濾過し、洗浄し、乾燥させた後、白色結晶が１２５ｍｇ得られる。
ＰＩＩＢ＋ＰＩＩＦ＋ＰＩＩＧに関するアッセイ値：５６％［これのＰＩＩＢは５４％］
ＰＩＡ＋ＰＩＢ＋ＰＩＣ＋ＰＩＤに関するアッセイ値：４３％。
【実施例１１】
【００７３】
以下の実施例１８に記述する如く得られる純粋なＰＩＩＢの５６０ｍｇを５ｃｍ３のアセトンの中に溶解させる。ＰＩＡ（アッセイ値９９．８％）の４８０ｍｇを加える。２０℃で２０時間撹拌した後、この懸濁液を濾過する。１ｃｍ３のアセトンで洗浄し、減圧下（＜１ｋＰａ）４０℃で３０時間乾燥させた後、白色結晶が５９０ｍｇ得られる。
ＰＩＩＢ＋ＰＩＩＦ＋ＰＩＩＧに関するアッセイ値：５６％［これのＰＩＩＢは５４％］
ＰＩＡに関するアッセイ値：４３％。
【００７４】
上記結晶化で得られる母液を採取し、更に５６０ｍｇの量でＰＩＩＢを加える。この時点のＰＩＩＢ／ＰＩＡ質量比は約４である。２０時間撹拌し、濾過し、洗浄し、乾燥した後、１回目の収穫で得られる結晶が示すそれと同じ純度および組成を有する結晶が１９５ｍｇ得られる。
【実施例１２】
【００７５】
ＰＩＡを４８０ｍｇのＰＩＢ（アッセイ値９７％）で置き換える以外は上の実施例１１に記述した操作を用いて、ＰＩＩＢ＋ＰＩＩＦ＋ＰＩＩＧに関するアッセイ値が５６％（これのＰＩＩＢは５４％）でありＰＩＢに関するアッセイ値が４３％である白色結晶が８２０ｍｇ得られる。
【実施例１３】
【００７６】
４ｃｍ３のアセトンの中に入っている６８０ｍｇのＰＩＩＢと５８０ｍｇのＰＩＣ（アッセイ値９５％）を用いる以外は上の実施例１１に記述した操作を用いて、ＰＩＩＢ＋ＰＩＩＦ＋ＰＩＩＧに関するアッセイ値が５７％（これのＰＩＩＢは５５％）でありＰＩに関するアッセイ値が４２％（これの３７％はＰＩＣ）である白色結晶が３１５ｍｇ得られる。
【実施例１４】
【００７７】
ＰＩＡを４８０ｍｇのＰＩＤ（アッセイ値９５％）で置き換える以外は上の実施例１１に記述した操作を用いて、ＰＩＩＢ＋ＰＩＩＦ＋ＰＩＩＧに関するアッセイ値が５５％（これのＰＩＩＢは５３％）でありＰＩＤに関するアッセイ値が３９％である白色結晶が４７５ｍｇ得られる。
【実施例１５】
【００７８】
４ｃｍ３のアセトンの中に入っている４５０ｍｇのＰＩＩＢと３８０ｍｇのファクターＳ（Ｓ１：７５．４％、Ｓ４：２０．６％）を用いる以外は上の実施例１１に記述した操作を用いて、ＰＩＩＢ＋ＰＩＩＦ＋ＰＩＩＧに関するアッセイ値が５８％（これのＰＩＩＢは５６％）でありファクターＳに関するアッセイ値が４１％（これの３７％はＳ１）である白色結晶が５５０ｍｇ得られる。
【実施例１６】
【００７９】
ＰＩＡを４８０ｍｇのファクターＳ１で置き換える以外は上の実施例１１に記述した操作を用いて、ＰＩＩＢ＋ＰＩＩＦ＋ＰＩＩＧに関するアッセイ値が５８％（これのＰＩＩＢは５４％）でありファクターＳ１に関するアッセイ値が４１％である白色結晶が７５０ｍｇ得られる。
【実施例１７】
【００８０】
２ｃｍ３のアセトンの中に入っている２２４ｍｇのＰＩＩＦと１９２ｍｇのファクターＳを用いる以外は上の実施例１１に記述した操作を用いて、ＰＩＩＦに関するアッセイ値が５５％でありファクターＳに関するアッセイ値が３９％（これのファクターＳ１：３１％、ファクターＳ４：５％）である白色結晶が２２０ｍｇ得られる。
実施例９から１７の生成物が示すＸ線回折図
以下の表ＩＶに、主要なラインの相対的強度を示す。コバルト対陰極が備わっているＰｈｉｌｌｉｐｓ  ＰＷ１７００回折計を用いてＸ線回折図を得る。１５．８Åラインに標準値１００を割り当てる。連続背景を差し引いた後のライン高を測定することによって相対的値を見積もる。
【００８１】
【表１】
0003718521.tif 000007
【００８２】
これらのＸ線回折図は、その共結晶化生成物にかかわりなく同様である（主要ラインの平面間間隔には有意な差がない）。
グループＡ成分の精製
【実施例１８】
【００８３】
実施例９で得られる生成物の９．３ｇを４９０ｃｍ３のメチルイソブチルケトンの中に溶解させる。この溶液を３７０ｃｍ３の０．５Ｎ硫酸水溶液で２回抽出した後、１５０ｃｍ３の水で２回洗浄する。この有機相を濃縮してその体積を約８０ｃｍ３にした後、５倍体積のヘキサンの中に注ぎ込む。その得られる沈澱物を洗浄し、濾別した後、乾燥させる。次に、このメチルイソブチルケトンを除去する目的で、アセトン１リットル当たり１００ｇの濃度になるようにその沈澱物を取り上げ、１０倍体積のヘキサンの中に注ぎ込み、洗浄した後、乾燥させる。精製されたＰＩＩＢが含まれているがもはやＰＩは含まれていない生成物が３．５ｇ得られる。
ＰＩＩＢ＋ＰＩＩＦ＋ＰＩＩＧに関するアッセイ値：約９５％（これの９２％はＰＩＩＢ）。
【００８４】
本発明はまた、純粋な形態か、或は適合性を示す薬学的に許容され得る１種以上の希釈剤またはアジュバントの存在下で、一般式（ＩＩ）で表されるグループＡ成分との組み合わせでストレプトグラミン類の少なくとも１種のグループＢ成分が含まれている新規な精製ストレプトグラミン組み合わせを活性生成物として含んでいる、人または獣医用薬剤として用いられ得る薬学組成物も提供する。これらの組成物は経口もしくは局所的に用いられ得る。これらは、粉末の物理的混合物か、共沈物か、或は共結晶物の形態で本発明に従う組み合わせを含んでいてもよい。
【００８５】
経口投与用組成物としては、錠剤、硬質ゼラチンカプセル、ピル、粉剤、凍結乾燥剤または粒剤が用いられ得る。これらの組成物では、本発明に従う活性生成物と、１種以上の不活性希釈剤もしくはアジュバント、例えばスクロース、ラクトースまたは澱粉などとを混合してもよい。これらの組成物はまた、希釈剤以外の物質、例えばステアリン酸マグネシウムの如き潤滑剤などを含んでいてもよい。
【００８６】
局所投与用組成物は例えばクリーム、軟膏またはローションなどであってもよい。
【００８７】
人または獣医学的治療において、本発明に従う組成物は特に細菌を源とする感染、特にグラム陽性球菌が原因となるひどい感染：スタフィロコッカス感染（特にメチリシン耐性スタフィロコッカスが原因となる感染）、ストレプトコッカス感染（特にペニシリン耐性およびマクロライド耐性肺炎球菌に対する）の治療で有効性を示し、そしてこれらはまた、ヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、モラクセラ・カタルハリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、トラコーマクラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、マイコプラスマ・ホミニス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｏｍｉｎｉｓ）、肺炎マイコプラスマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびウレアプラスマ・ウレアリチクム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）が原因となる感染の治療で特に有効である。
【００８８】
本発明に従う組成物は、上方および下方の呼吸感染の治療（例えば肺感染の治療）、皮膚感染の治療、骨または関節感染の長期治療、歯科および尿器外科における心内膜炎の治療または予防、性伝染病の治療、そしてまたエイズで生じる日和見的な細菌および寄生虫感染の治療、並びに免疫抑制患者におけるスタフィロコッカスの危険性の予防で用いられ得る。
【００８９】
一般的に言って、医者は、年令、体重、感染度合、および治療すべき被験者に独特な他の因子に従って、最も適切であると見なされる投薬量を決定するであろう。一般に、成人に経口投与する場合の用量は、日に２から３回の服用で０．４から３．５ｇの活性生成物である。
【００９０】
以下に示す例は本発明に従う組成物を説明するものである。
＜例Ａ＞
通常の技術に従って、本共結晶化ＰＩＢ／ＰＩＩＢ組み合わせが２５０ｍｇ用量入っている不透明な硬質ゼラチンカプセルを調製する。
＜例Ｂ＞
通常の技術に従って、本共結晶化ファクターＳ／ＰＩＩＢ組み合わせが２５０ｍｇ用量入っている不透明な硬質ゼラチンカプセルを調製する。
＜例Ｃ＞
通常の技術に従って、活性生成物が３８４ｍｇ用量入っている下記の組成を有する錠剤を調製する。
−  ＰＩＢ／ＰＩＩＢ（４５％／５５％）                    ３８４ｍｇ
−  ヒドロキシプロピルメチルセルロース                      ２５ｍｇ
−  ステアリン酸マグネシウム                                ３５ｍｇ
−  コロイド状シリカ                                        １４ｍｇ
−  澱粉                                              ｑｓ７００ｍｇ
＜例Ｄ＞
通常の技術に従って、活性生成物が３８４ｍｇ用量入っている下記の組成を有する錠剤を調製する。
−  ファクターＳ／ＰＩＩＢ（４５％／５５％）              ３８４ｍｇ
−  ヒドロキシプロピルメチルセルロース                      ２５ｍｇ
−  ステアリン酸マグネシウム                                ３５ｍｇ
−  コロイド状シリカ                                        １４ｍｇ
−  澱粉                                              ｑｓ７００ｍｇ