(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（１）で表わされるピペラジン誘導体又はその塩。
【化１】
0003638536.tif 000016
（式中、Ｘは酸素原子又は硫黄原子を、Ｒ1は水素原子を、Ｒ2は７−クロロ−４−キノリル基を示す）
【請求項２】
請求項１に記載のピペラジン誘導体又はその塩からなるクロロキン耐性マラリアに対する薬剤感受性回復剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規なピペラジン誘導体及びこれよりなる薬剤感受性回復剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、文化社会において、癌は循環器の疾病とともに死亡原因の上位を占め、社会の解決すべき重要な課題となっている。癌治療において、アドリアマイシン、マイトマイシン、シスプラチンなどの抗癌剤による化学療法は、放射線療法、外科療法と並んで重要な治療法となっているが、抗癌剤に対して耐性を示す株の出現によってその治療効果は著しく阻害されている。これら耐性癌に対してベラパルミルなどのカルシウム拮抗剤による感受性の回復が試みられているが、感受性の回復度合いが十分でないこと、副作用のため使用しうる用量が限定されていることなど実用的でない点が多い。
【０００３】
一方、病原微生物による感染症についても、抗病原微生物剤に対して耐性を獲得した耐性株の出現とその蔓延は、化学療法に大きな影を投げかけている。例えば、患者数一億人と推定されるマラリアについては、現在その約４０％がクロロキン耐性マラリアであるといわれている。これらに対してはメフロキンなどの新規マラリア剤による治療がなされているが、クロロキン耐性株はメフロキンにも交差耐性を示し、十分な治療効果は得られていない。また感受性の回復の試みもベラペミルなどのカルシウム拮抗剤にとどまり、実用の面からはほど遠い。わが国においても近ごろ新聞紙上を賑わしているＭＲＳＡ（メチシリン耐性ブドウ状球菌）、多剤耐性大腸菌、ペニシリン耐性スピロヘータなどの出現は、新規抗生物質の登場を待つのみで決定的な解決策はないため、感染症化学療法における大きな暗雲ともいえる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
上記の如く薬物耐性株の問題は、癌治療のみならず感染症治療においても人類が解決すべき重要な課題であり、癌あるいは病原微生物の薬物感受性を回復せしめる薬物を開発することは、治療法のないこれらの疾病に対して治療手段を提供するという意味で全人類的見地において意義深い。
【０００５】
従って、本発明は抗癌剤及び抗生物質や抗マラリア剤といった抗病原微生物剤に対する耐性を有する癌及び病原微生物の薬剤に対する感受性回復剤を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、かかる実状に鑑み鋭意研究を行った結果、特定のピペラジン誘導体が、耐性を獲得した癌の抗癌剤に対する感受性、及び黄色ブドウ状球菌、大腸菌、マラリア原虫、スピロヘータ等の病原微生物の抗生物質、抗原虫剤等の病原微生物剤に対する感受性を復帰せしめる作用を持つことを見いだし、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち本発明は、次の一般式（１）で表わされるピペラジン誘導体又はその
塩並びに該化合物からなる薬剤感受性回復剤に係るものである。
【０００８】
【化２】
0003638536.tif 000002
【０００９】
（式中、Ｘは酸素原子又は硫黄原子を、Ｒ1は水素原子を、Ｒ2は７−クロロ−４−キノリル基を示す）
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明の化合物（１）の性状は、置換基の種類及び数によって異なり、液状、アモルファス状又は結晶である。またその溶解性は、置換基により異なるが、概ねジメチルスルホキシド、クロロホルム、メタノール等の有機溶剤に溶け易く水に溶けにくい傾向にある。
【００１１】
本発明化合物（１）は、例えば以下の製造法１〜６に示す方法に従って容易に合成することができる。
【００１２】
製造法１
下記反応式に従って１−（ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプタン−１−イル）ピペラジン（２）に、ジメチルホルムアミド中でエピクロルヒドリン（３）及び水素化ナトリウム（４）を反応せしめてエポキシプロピル付加体（５）となし、次いでこれにエタノール中で化合物（６）を反応せしめることにより、本発明化合物（１）が得られる。
【００１３】
【化３】
0003638536.tif 000003
【００１４】
製造法２
下記反応式に従って、化合物（６）にエタノール中でエピクロルヒドリン（３）を反応させてクロロヒドロキシプロピル付加体（７）となし、これをアルカリの存在下に１−（ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプタン−１−イル）ピペラジン（２）と反応せしめることにより、本発明化合物（１）が得られる。
【００１５】
【化４】
0003638536.tif 000004
【００１６】
製造法３
下記反応式に従って、化合物（６）にエピクロルヒドリン（３）及び水素化ナトリウム（４）を反応させてエポキシプロピル付加体（８）となし、これを１−（ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプタン−１−イル）ピペラジン（２）と反応せしめることにより、本発明化合物（１）が得られる。
【００１７】
【化５】
0003638536.tif 000005
【００１８】
製造法４
下記反応式に従って、１−（ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘキサン−１−イル）ピペラジン（２）にエピクロルヒドリン（３）を反応させてクロロヒドロキシプロピル付加体（９）となし、これをアルカリの存在下に化合物（６）と反応させることにより本発明化合物（１）が得られる。
【００１９】
【化６】
0003638536.tif 000006
【００２０】
製造法５
下記反応式に従って、１−（ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプタン−１−イル）ピペラジン（２）にα−モノクロログリセロール（１０）をアルカリの存在下反応させてジヒドロキシプロピル付加体（１１）となし、これをアルカリの存在下低温でｐ−トルエンスルホニルクロライド（１２）と反応させて１級の水酸基のみをトシル化し、化合物（１３）を得る。次いでこれをアルカリの存在下に化合物（６）と反応せしめることにより本発明化合物（１）が得られる。
【００２１】
【化７】
0003638536.tif 000007
【００２２】
製造法６
下記反応式に従って、化合物（６）とα−モノクロログリセロール（１０）を反応させてジヒドロキシプロピル付加体（１４）となし、これをアルカリの存在下低温でｐ−トルエンスルホニルクロライド（１２）と反応させて１級の水酸基のみをトシル化し、モノトシルエステル（１５）を得る。次いでこれをアルカリの存在下に１−（ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプタン−１−イル）ピペラジン（２）と反応せしめることにより本発明化合物（１）が得られる。
【００２３】
【化８】
0003638536.tif 000008
【００２４】
このようにして得られる本発明化合物（１）は、後記実施例に示すように病原微生物及び癌の薬剤耐性株に対して優れた感受性回復作用を示し、かつ安全性も高いため、薬剤耐性に対する感受性回復剤として有用である。
【００２５】
本発明化合物（１）を薬剤耐性に対する感受性回復剤として使用する場合、その投与量は患者の年齢、体重、性別、投与方法、体調、病状等により異なるが、成人１日当たり経口投与の場合１０〜２０００mg、非経口投与の場合５〜１０００mgが適当である。
【００２６】
本発明の薬剤耐性に対する感受性回復剤は、通常の方法で錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、懸濁剤、注射剤、坐剤等の種々の剤形とすることができる。固型製剤の場合、化合物（１）に賦形剤、更に必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤、増量剤、被覆剤、糖衣剤などを加え、常法により錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、坐剤とすることができる。注射剤の場合、本発明化合物（１）を注射用生理食塩水等の水性担体に溶解、分散又は乳化して注射液とするか、又は用事溶解用の粉末とすることができる。注射剤の投与方法としては、静脈内投与、動脈内投与、門脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、病巣内直接投与が挙げられる。
【００２７】
本発明の感受性回復剤と共に用いられる抗病原微生物剤又は抗癌剤としては特に限定されず、臨床上用いられているものであればいずれでもよいが、例えば抗癌剤としてはアドリアマイシン、マイトマイシン、シスプラチン等が、抗病原微生物剤としてはキニーネ、クロロキン、メフロキン、プリマキン等の抗マラリア剤、ペニシリン、テトラサイクリン、セファロスポリン、クロラムフェニコール等の抗生物質が挙げられる。
【００２８】
また、これら抗病原微生物剤又は抗癌剤を本発明化合物（１）と共に製剤中に配合することもできる。
【００２９】
【実施例】
以下、実施例を挙げて更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３０】
実施例１
１−［４−（ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプタン−１−イル）−１−ピペラジニル］−３−（７−クロロ−４−キノリル）オキシプロパン−２−オール（化合物（ａ））の合成：
【００３１】
【化９】
0003638536.tif 000009
【００３２】
７−クロロ−４−ヒドロキシキノリン１．８ｇをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５０mlに溶かし、水素化ナトリウム（油性）０．４ｇを加えた。これにエピクロルヒドリン１０mlを加え、２４時間攪拌した後溶媒を留去しシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒  クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、７−クロロ−４−（２−エポキシプロピル）キノリン０．６ｇを得た。これをメタノール１００mlに溶解し、１−（ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプタン−１−イル）ピペラジン０．８５ｇを加え、室温で９６時間攪拌した。反応物を減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒  クロロホルム：メタノール＝９：１）で精製し、イソプロピルアルコールより再結晶して標記化合物０．４７ｇを得た。
1H-NMR δppm(CDCl3)：
2.30-2.70(m,11H), 2.75-2.86(m,2H), 3.91-4.08(m,3H),
4.12-4.26(m,3H), 6.74(d,1H), 7.05-7.21(m,8H), 7.37-7.47(dd,1H),
8.01(d,1H), 8.15(d,1H), 8.71(d,1H)
Mass：514(M+H)
元素分析：N 7.16％  C 69.68％  H 6.74％
【００３３】
実施例２
１−［４−（ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプタン−１−イル）−１−ピペラジニル］−３−（７−クロロ−４−キノリル）チオプロパン−２−オール（化合物（ｂ））の合成：
【００３４】
【化１０】
0003638536.tif 000010
【００３５】
１−（ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプタン−１−イル）ピペラジン３．０ｇを１００mlのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶かし、これに水素化ナトリウム０．４ｇを加え、続いてエピクロルヒドリン５mlを加え室温で４８時間攪拌した。溶媒留去後シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒  クロロホルム：メタノール＝９７：３）で精製し、７−クロロ−４−メルカプトキノリン０．５ｇを加え、メタノール１００mlに溶かして室温で２４時間攪拌した。溶媒留去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒  クロロホルム：メタノール＝９：１）で精製した後、エタノールより再結晶して標記化合物０．５４ｇを得た。
1H-NMR δppm(DMSO)：
2.12-2.51(m,8H), 2.62-2.81(m,2H), 3.09-3.22(m,1H),
3.78-4.09(m,5H), 6.88-7.21(m,8H), 7.55(d,1H), 7.62(dd,1H),
8.01(d,1H), 8.11(d,1H), 8.71(d,1H)
Mass：530(M+H)
元素分析：N 7.70％  C 70.42％  H 6.07％
【００３６】
実施例３  多剤耐性癌に対する感受性回復作用
チャイニーズハムスター由来の培養癌細胞ＡＵＸＢ１及びその多剤耐性化した細胞ＣＨRＣ５を用いてマイトマイシンに対する感受性回復作用の検定を行った。
１０％ＦＣＳを含むα−ＭＥＭ培地で２×１０4個／mlの濃度の細胞分散溶液を調整し、それを９６wellsのプレートに１００μｌ分注し、３７℃で１日培養した。
制癌剤として、マイトマイシンを最終濃度が１０-3〜１０-11Ｍになるように調整し、５０μｌ加えた。更に、本発明化合物又は陽性コントロールとしてのベラパミルを希釈して最終濃度が３×１０−６Ｍになるように調整し、５０μｌ加えた。
３７℃で３日間培養した後、ＰＢＳに溶解したＭＴＴ試薬（５mg／ml）を１０μｌ加え、３７℃で４時間放置した。培養液を除去し、ジメチルスルホキシド１００μｌを加えてよく混合し、５７０nmの吸光度を測定し生存率を求め、これよりＩＣ50を算出した。ＣＨRＣ５に対するマイトマイシンのＩＣ50値をＡＵＸＢ１に対するマイトマイシンのＩＣ50値で除した値を感受性回復作用の強さの指標とした。
この結果を表１に示す。表１により明らかなように、本発明化合物は、いずれもベラパミルよりも強い感受性回復作用を示した。
【００３７】
【表１】
0003638536.tif 000011
【００３８】
実施例４  ＭＲＳＡに対する薬剤感受性回復作用
実験的に黄色ブドウ状球菌にメチシリン耐性をもたせた実験変異株２株と、その親株及び臨床より分離されたメチシリン耐性黄色ブドウ状球菌臨床分離株３株について、本発明化合物の存在下及び非存在下での各種抗生物質のＭＩＣを測定することにより、本発明化合物のＭＲＳＡに対する薬剤感受性回復作用を検討した。
被験菌を感受性測定用ブイヨンに接種し、３７℃、２４時間前培養した後菌数が１０6個／mlになるように調整した菌液を、改良ミュラー・ヒントン培地に接種した。
本発明化合物をＤＭＳＯ １mlに溶解し、最終濃度が１００μｇ／mlになるように調整し、培地に加えた。ネガティブコントロールには１０％ＤＭＳＯのみを用いた。
各種抗生物質は最高濃度（最終濃度として）のものを調製し、２倍希釈で順次調整し、完全に菌の発育が阻止された最低濃度をもってＭＩＣとした。
判定は接種後４２℃、２４時間培養した後行った。
各種抗生物質の最高濃度は次のとおりとした。
メチシリン：８００μｇ／ml，セフメタゾール：１００μｇ／ml，エリスロマイシン：４００μｇ／ml，カナマイシン：４００μｇ／ml，フォスフォマイシン：４００μｇ／ml，ノルフロキサシン：４００μｇ／ml
この結果を表２〜４に示す。表２〜４から明らかなように、本発明化合物は、いずれも有意にＭＲＳＡの薬剤感受性を回復した。
【００３９】
【表２】
0003638536.tif 000012
【００４０】
【表３】
0003638536.tif 000013
【００４１】
【表４】
0003638536.tif 000014
【００４２】
実施例５  クロロキン耐性マラリアに対する感受性回復作用
実験的に作られたクロロキン耐性のネズミマラリア（Ｐｌ．Ｃｈａｂａｕｄｉ）を用い、田辺らの方法（Ｅｘｐ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．，７０，４１９−４２６，１９９０）に準じてクロロキン耐性マラリアに対する本発明化合物（ｌ）の感受性回復作用を検討した。即ち、ＩＣＲマウスに尾静脈より１０8個のマラリア原虫を注射して感染させた後、３日後より４日連続してクロロキン及び化合物（ｌ）を１０％ジメチルスルホキシド生理食塩水溶液に分散して皮下投与した。用量はクロロキンが３mg／kg／dayで化合物（ｌ）が５０mg／kg／dayであった。薬剤の濃度は全投与量が０．１mlになるように行った。クロロキンの対照群には、化合物（ｌ）の代わりに１０％ジメチルスルホキシド生理食塩水溶液を注射した。また、化合物（ｌ）の対照群にはクロロキンの代わりに１０％ジメチルスルホキシド生理食塩水溶液を投与した。実験対照群にはクロロキン及び化合物（ｌ）の代わりに１０％ジメチルスルホキシド生理食塩水溶液を投与した。薬物投与終了２４時間後に採血し、血中の全赤血球に対するマラリア感染赤血球の比を求めた。結果を表５に示す。この表からも明らかな様に、本発明化合物は有意にクロロキン耐性マラリア株のクロロキン感受性を回復せしめた。
【００４３】
【表５】
0003638536.tif 000015
【００４４】
【発明の効果】
本発明の薬剤耐性に対する感受性回復剤は、優れた感受性回復作用を示すため、多剤耐性癌、多剤耐性マラリア、ＭＲＳＡ等の生命を著しく脅かす疾病の治療に極めて有用であり、数億人に達すると思われるこれらの疾病の患者の治療において極めて有意義である。