(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
【化１】
0003638644.tif 000011
で表される化合物に、リパーゼ・２６６（名糖産業社製）、リパーゼ・ＱＬ（名糖産業社製）、リパーゼ・ＱＬＧ（名糖産業社製）、リパーゼ・ＡＹ「アマノ」３０（天野製薬社製）およびリパーゼ・ＭＹ（名糖産業社製）からなる群から選ばれる少なくとも１種の不斉加水分解能を有する酵素を水系溶媒中で作用させることにより該化合物を加水分解し、光学活性な式（２）
【化２】
0003638644.tif 000012
で表されるクロマン化合物とその対掌体のエステルである式（３）
【化３】
0003638644.tif 000013
で表される光学活性なクロマン化合物を得ることを特徴とする光学活性クロマン化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、医薬品、農薬の中間体となるクロマン化合物の光学活性体の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
光学活性なクロマン化合物の製造方法としては、式（４）の２−ヒドロキシエチルクロマン化合物を酵素により不斉加水分解するか、あるいは不斉アシル化することによって得る方法が知られている（特開平４−１９０７９５号公報）。
【０００３】
【化４】
0003638644.tif 000002
【０００４】
また、式（５）に示すカルボン酸を光学活性アミンを用いて、光学分割する方法も知られている（Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，ｖｏｌ．５９，２９０（１９７６））。
【０００５】
【化５】
0003638644.tif 000003
【０００６】
ところが、式（２）および式（３）で表されるクロマン化合物についてはその光学活性体自体および製造方法は知られていない。
【０００７】
【化６】
0003638644.tif 000004
【０００８】
【化７】
0003638644.tif 000005
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
発明の目的は、医薬品、農薬の中間体として重要な式（２）および式（３）で表されるクロマン化合物の光学活性体の製造方法を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題につき鋭意検討の結果、本発明に到達した。すなわち本発明は、式（１）
【００１１】
【化８】
0003638644.tif 000006
【００１２】
で表される化合物に、リパーゼ・２６６（名糖産業社製）、リパーゼ・ＱＬ（名糖産業社製）、リパーゼ・ＱＬＧ（名糖産業社製）、リパーゼ・ＡＹ「アマノ」３０（天野製薬社製）およびリパーゼ・ＭＹ（名糖産業社製）からなる群から選ばれる少なくとも１種の不斉加水分解能を有する酵素を水系溶媒中で作用させることにより該化合物を加水分解し、光学活性な式（２）
【００１３】
【化９】
0003638644.tif 000007
【００１４】
で表されるクロマン化合物とその対掌体のエステルである式（３）
【００１５】
【化１０】
0003638644.tif 000008
【００１６】
で表される光学活性なクロマン化合物を得ることを特徴とする光学活性クロマン化合物の製造方法に関する。
【００１７】
本反応により、反応原料である光学異性体のうちの一方のみが加水分解されて式（２）で表される光学活性なクロマン化合物となり、他方は未反応のまま式（３）で表される光学活性なクロマン化合物として残るので、両者の化合物を物性（極性等）の違いを利用して分離することで、目的とする光学活性クロマン化合物を得ることができる。
【００１８】
これらの式中、アラルキル基としてはベンジル基、フェネチル基等が挙げられ、アルカノイル基としてはアセチル基等が挙げられ、アロイル基としてはベンゾイル基等が挙げられる。
【００１９】
本発明において用いられる、式（１）で表わされる化合物を不斉加水分解する活性を有する酵素としては、リパーゼ・２６６（アルカリゲネス属由来、名糖産業社製）、リパーゼ・ＱＬ（アルカリゲネス属由来、名糖産業社製）、リパーゼ・ＱＬＧ（リパーゼ・ＱＬの固定化酵素、名糖産業社製）、リパーゼ・ＡＹ「アマノ」３０（キャンディダ属由来、天野製薬社製）およびリパーゼ・ＭＹ（キャンディダ属由来、名糖産業社製）が挙げられる。
【００２０】
本発明において反応原料として用いられる式（１）で表される化合物は、先に本発明者らの一部が特願平５−２６４１８６号で提案した方法にしたがって、式（６）で表されるフェノール化合物、
【００２１】
【化１１】
0003638644.tif 000009
【００２２】
ホルムアルデヒド類およびメタリルアルコールをジブチルアミンなどの第二級アミンおよび酢酸などの酸の存在下に反応させることによって式（７）で表されるクロマン骨格を有する化合物を得、次いで該化合物中の水酸基をアルカノイロキシ基又はアロイロキシ基に変換することにより容易に製造することができる。
【００２３】
【化１２】
0003638644.tif 000010
【００２４】
不斉加水分解反応は、水系溶媒中、式（１）で表される化合物と酵素とを混合して、撹拌または振とうし、温度は１０〜７０℃程度、ｐＨは５〜８付近で行われる。水系溶媒としては、基質の分散をよくするためにアセトン、アセトニトリル等の有機溶媒と水を混合したものを使用するのがよい。また、加水分解によって生じたカルボン酸から反応液のｐＨを一定に保つため、緩衝液の使用が好ましい。反応時間は、１時間から１週間程度である。基質濃度は反応液に対して０．１〜２０重量％、酵素量は基質の重量に対して０．１〜１００重量％で用いられる。
【００２５】
反応後の生成物および残存基質の単離、精製方法としては、反応液から酵素をろ別した後、溶媒抽出、減圧濃縮、シリカゲルクロマトグラフィー等の工程を経ることによって行うことができる。
【００２６】
【実施例】
以下に実施例を示す。
【００２７】
なお、実施例中の化合物の光学純度の分析は、光学活性体分離用カラムを装着した高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて行った。分析条件は以下の通りである。
【００２８】
カラム；CHIRALPAK AS  4.6 φmm×250 mm（ダイセル化学社製）
溶離液；ヘキサン：イソプロピルアルコール＝２０：１
流速  ；1.0 ml／分
検出  ；UV 254 nm
転化率については、前記条件で内標分析によって行った。収率については、生成物および、残存基質を単離、精製することによって求めた。
【００２９】
参考例
（１）６−アセトキシ−２−ヒドロキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマンの合成
特願平５−２６４１８６号の方法にしたがって反応を行った。
【００３０】
トリメチルヒドロキノン（以下、ＴＭＨＱと記す）３０４ｇとトリエチルアミン４８６ｇを塩化メチレン７００ｍｌに溶解し、無水酢酸４９１ｇを滴下した。１５℃で４時間撹拌した後、洗浄、減圧濃縮、再結晶を行い、ＴＭＨＱのジアセテート４６１ｇを得た。ＴＭＨＱのジアセテート４６１ｇと二亜硫酸ナトリウム２５ｇをメタノール１５００ｍｌに溶解し、２２重量％炭酸カリウム水溶液３１３ｇを滴下し、３５℃で１時間撹拌した。抽出、洗浄、減圧濃縮、再結晶を行い、ＴＭＨＱのモノアセテート３５４ｇを得た。ＴＭＨＱのモノアセテート５５ｇとパラホルムアルデヒド１．１当量、ジブチルアミン０．１当量、酢酸０．５当量、メタリルアルコール５当量をオートクレーブに入れ、１７０℃で加圧下４時間撹拌した。抽出、洗浄、減圧濃縮を行い、シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、６−アセトキシ−２−ヒドロキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン６７ｇを得た。
【００３１】
（２）６−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマンの合成
上記（１）で得た６−アセトキシ−２−ヒドロキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン３０ｇをメタノール６０ｇに溶解し、１０重量％水酸化ナトリウム水溶液５４ｇを滴下し、５０℃で３時間撹拌した。中和、抽出、洗浄、減圧濃縮を行った後、再結晶によって精製し、６−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン２２ｇを得た。
【００３２】
（３）６−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマンの合成
上記（２）で合成した６−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン１０ｇをジメチルフォルムアミド７０ｇに溶解し、水素化ナトリウム１当量を含むジメチルフォルムアミド懸濁液７０ｍｌ中に滴下した。室温で１時間攪拌した後、氷冷しながら塩化ベンジル５．４ｇを滴下し、室温に戻して３時間攪拌した。水３０ｍｌを添加して反応を終了し、酢酸エチルで抽出し、５％硫酸水、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、結晶１２．８ｇを得た。この結晶は、下記のＮＭＲの分析値を示し６−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマンと同定した。
【００３３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．２７（３Ｈ，ｓ），２．１４（３Ｈ，ｓ），２．２１（３Ｈ，ｓ），２．２５（３Ｈ，ｓ），２．６８（２Ｈ，ｔ），３．６６（２Ｈ，ｍ），４．７２（２Ｈ，ｓ），７．２〜７．６（５Ｈ，ｍ）
【００３４】
（４）６−ベンジルオキシ−２−アセトキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマンの合成
上記（３）で合成した６−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン５ｇをピリジン３０ｍｌに溶解し、１．５当量の塩化アセチルを滴下した後、室温で６時間撹拌した。酢酸エチルと５％硫酸水を加えて抽出を行い、酢酸エチル層を飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過を行い、減圧濃縮した。残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、結晶５．５９ｇを得た。この結晶は、下記のＮＭＲの分析値を示し、６−ベンジルオキシ−２−アセトキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマンと同定した。
【００３５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．３３（３Ｈ，ｓ），２．１２（６Ｈ，ｓ），２．２０（３Ｈ，ｓ），２．２５（３Ｈ，ｓ），２．６６（２Ｈ，ｔ），４．１５（２Ｈ，ｍ），４．７２（２Ｈ，ｓ），７．２〜７．６（５Ｈ，ｍ）
【００３６】
実施例１
６−ベンジルオキシ−２−アセトキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン１．５ｇをアセトニトリル５ｍｌに溶解し、燐酸カリウム緩衝液（ｐＨ）４５ｍｌを加え、リパーゼ・２６６  ０．５ｇを添加し、３７℃で３４時間撹拌した。酵素をろ別した後、酢酸エチルで抽出し、カラムクロマトグラフィーにて精製したところ、高極性物質と低極性物質の２種類が回収された。ＮＭＲで分析したところ、高極性物質は、以下のような分析値を示し、生成物６−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマンであることがわかった。
【００３７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．２７（３Ｈ，ｓ），２．１４（３Ｈ，ｓ），２．２１（３Ｈ，ｓ），２．２５（３Ｈ，ｓ），２．６８（２Ｈ，ｔ），３．６６（２Ｈ，ｍ），４．７２（２Ｈ，ｓ），７．２〜７．６（５Ｈ，ｍ）
また、低極性物質は、以下のような分析値を示し、残存基質６−ベンジルオキシ−２−アセトキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマンであることがわかった。
【００３８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．３３（３Ｈ，ｓ），２．１２（６Ｈ，ｓ），２．２０（３Ｈ，ｓ），２．２５（３Ｈ，ｓ），２．６６（２Ｈ，ｔ），４．１５（２Ｈ，ｍ），４．７２（２Ｈ，ｓ），７．２〜７．６（５Ｈ，ｍ）
ＨＰＬＣで分析したところ、転化率６９．４％、残存基質６−ベンジルオキシ−２−アセトキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマンの光学純度は３８．６％ｅｅで、生成物６−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマンの光学純度は７７．９％ｅｅであった。また、残存基質の収率は５４．７％、生成物の収率は４１．２％であった。
【００３９】
実施例２
６−ベンジルオキシ−２−アセトキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン０．２８ｇをアセトニトリル１ｍｌに溶解後、燐酸カリウム緩衝液（ｐＨ７）９ｍｌを加え、リパーゼ・ＭＹ  ０．２ｇを添加し、３７℃で５６時間攪拌した。生成物および残存基質を酢酸エチルで抽出し、ＨＰＬＣで分析したところ、転化率４１．７％、残存基質６−ベンジルオキシ−２−アセトキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマンの光学純度は１９．１％ｅｅ、生成物６−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマンの光学純度は２７．７％ｅｅであった。
【００４０】
実施例３
６−ベンジルオキシ−２−アセトキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン０．２８ｇをアセトニトリル１ｍｌに溶解後、燐酸カリウム緩衝液（ｐＨ７）９ｍｌを加え、リパーゼ・ＡＹ「アマノ」３０  ０．２ｇを添加し、３７℃で２７時間攪拌した。生成物および残存基質を酢酸エチルで抽出し、ＨＰＬＣで分析したところ、転化率５４．３％、残存基質６−ベンジルオキシ−２−アセトキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマンの光学純度は４４．９％ｅｅ、生成物６−ベンジルオキシ−２−ヒドロキシメチル−２，５，７，８−テトラメチルクロマンの光学純度は２４．０％ｅｅであった。
【００４１】
【発明の効果】
本発明によれば、医薬品、農薬の中間体となるクロマン化合物の光学活性体を効率よく製造することができる。