(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式〔Ｉ〕で表されるペプチドを有効成分として含有することを特徴とする胃潰瘍治療剤。
【化１】
0003707936.tif 000007
【請求項２】
下記式〔Ｉ〕で表されるペプチドを有効成分として含有することを特徴とする十二指腸潰瘍治療剤。
【化２】
0003707936.tif 000008
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、胃潰瘍治療剤及び十二指腸潰瘍治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
消化管潰瘍は、胃潰瘍、十二指腸潰瘍及び吻合部潰瘍などの総称であり、胃又は十二指腸などの粘膜下層以下に及ぶ部分的な粘膜欠損と定義される。消化管潰瘍の発症機序としては、一般にバランス説が受け入れられている。すなわち、消化管内部では、酸やペプシンなどの攻撃因子と、粘膜、重炭酸、粘膜血流などの防御因子のバランスが維持されているが、何らかの原因によってこのバランスが崩れ、攻撃因子の作用が防御因子の作用を上回ったときに潰瘍が生じると考えられている（鈴木ら、検査と技術、２３巻、７号、４６６〜４７２頁、１９９５年）。本疾患は、一般的に持続性の痛みを伴い、患者に多大な苦痛をもたらす上、一度発症すると、治癒後も再発を繰り返して慢性化することが多い。
【０００３】
胃潰瘍及び十二指腸潰瘍の治療薬としては、制酸薬（重曹、炭酸カルシウム、水酸化アルミニウム、水酸化マグネシウムなど）、Ｈ２レセプターアンタゴニスト（シメチジン、ラニチジン、ファモチジンなど）、プロトンポンプインヒビター（オメプラゾール等）及びスクラルファートなどが用いられる。これらの薬剤は、上記バランス説における、ある攻撃因子を減弱又はある防御因子を増強し、その結果、生体の自然治癒力が発揮され効果を現す。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、潰瘍部位のより積極的治癒のために、粘膜細胞の増殖促進など、生体の自然治癒力を直接高める薬剤の開発が期待されている。本発明の目的は、上記の点に鑑み、より有用性の高い消化管潰瘍治療物質及び胃潰瘍及び十二指腸潰瘍消化管潰瘍治療剤を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明の胃潰瘍治療剤は、下記式〔Ｉ〕で表されるペプチドを有効成分として含有する。
【化３】
0003707936.tif 000002
【０００６】
本発明の十二指腸潰瘍治療剤は、下記式〔Ｉ〕で表されるペプチドを有効成分として含有する。
【化４】
0003707936.tif 000003
【０００７】
本発明で用いられる上記ペプチド（以下、本発明胃潰瘍及び十二指腸潰瘍消化管潰瘍治療物質という）は、ストレプトマイセス属に属する該ペプチド生産菌株、例えば、放線菌ストレプトマイセス・ノビリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｎｏｂｉｌｉｓ、以下「Ｓ．ノビリス」と略記する）を培養し、得られた培養液または同液の乾固物もしくは培養菌体から有機溶剤によって抽出された抽出物を、各種カラムクロマトグラフィーに付し、目的物を含むカラムクロマトグラフィー画分を再結晶処理することにより得られる。
【０００８】
本発明胃潰瘍及び十二指腸潰瘍消化管潰瘍治療物質を生産する放線菌Ｓ．ノビリスは、公的保存機関から入手可能であり、たとえば理化学研究所の保存菌（ＪＣＭ４２７４）（これは米国においてＡＴＣＣ１９２５２およびオランダにおいてＣＢＳ１９８．６５としても保存）などの菌が使用できる。
【０００９】
本発明胃潰瘍及び十二指腸潰瘍消化管潰瘍治療物質を得る方法は、例えば、本発明者らが先に国際出願したＷＯ９６／１２７３２号公報に記載の方法によって得られる。
【００１０】
本発明胃潰瘍及び十二指腸潰瘍消化管潰瘍治療物質は、強力な肉芽形成促進作用を有することから、胃潰瘍及び十二指腸潰瘍消化管潰瘍の治癒を促進するものと考えられる。
【００１１】
本発明胃潰瘍及び十二指腸潰瘍消化管潰瘍治療物質を有効成分として含有する本発明の胃潰瘍治療剤又は十二指腸潰瘍治療剤は、通常は、上記の物質を製剤用担体と混合して製剤組成物の形態とする方法により製造される。担体としては、剤型に応じた薬剤を調製するために、通常、使用される充填剤、崩壊剤、増量剤、結合剤、着色剤、矯味矯臭剤、ｐＨ調整剤、可溶化剤、懸濁化剤、緩衝剤、安定化剤、保存剤、付質剤、表面活性剤、滑沢剤、賦形剤などが例示される。また、適当な溶剤を選定することにより、上記の物質を液剤として使用することもできる。
【００１２】
本発明胃潰瘍及び十二指腸潰瘍消化管潰瘍治療物質を用いて製剤化される胃潰瘍治療剤又は十二指腸潰瘍治療剤の投与単位形態としては、上記のような液剤のほか、錠剤、丸剤、散剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、細粒剤、シロップ剤、トローチ剤、パップ剤、リニメント剤、硬膏剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤など）、貼付剤、軟膏剤、ゼリー剤などが例示される。
【００１３】
胃潰瘍治療剤又は十二指腸潰瘍治療剤中に含有される本発明胃潰瘍及び十二指腸潰瘍消化管潰瘍治療物質の量は、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、好ましくは胃潰瘍治療剤又は十二指腸潰瘍治療剤中に１０−７〜１０重量％の範囲である。
【００１４】
本発明の胃潰瘍治療剤及び十二指腸潰瘍治療剤は、その使用に際し各種形態に応じた方法で投与される。例えば、注射剤の場合には静脈内、筋肉内、皮内もしくは皮下投与され、錠剤、丸剤、飲用液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤およびカプセル剤の場合には経口投与され、坐剤の場合には直腸内投与され、外用剤の場合には、これを皮膚もしくは粘膜などの所要部位に直接貼付または塗布される。
【００１５】
本発明の胃潰瘍治療剤及び十二指腸潰瘍治療剤の投与量は、使用目的、症状などにより適宜選択されるが、通常は、１日当たり本発明胃潰瘍及び十二指腸潰瘍消化管潰瘍治療物質として１０ｎｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ程度の範囲である。また、胃潰瘍及び十二指腸潰瘍消化管潰瘍治療剤を１〜４回／日に分けて投与することももちろん差し支えない。
【００１６】
【発明の実施の形態】
本発明の実施例を説明する。
実施例１
理化学研究所から入手した放線菌Ｓ．ノビリス（ＪＣＭ４２７４）を、酵母エキス０．２％（ｗ／ｖ）添加澱粉・アンモニウム培地５０ｍｌを含む５００ｍｌ容坂口スラスコ５本で、２６℃、１５０ｒｐｍ、１２０時間振盪培養（前々培養）した。続いて同培地１２リットルを含む２０リットル容ジャーファメンターに前々培養菌液２４０ｍｌを接種し、２６℃、４１０ｒｐｍ、通気量４リットル／分で２４時間培養（前培養）した。さらに澱粉・アンモニウム培地（蒸留水１００ｍｌ中に可溶性澱粉を１ｇ、リン酸水素二カリウムを０．０５ｇ、塩化アンモニウムを０．０５ｇ含む）１４０リットルを含む２００リットル容ジャーファメンターに、前培養菌液１２リットルを接種し、２６℃、２４時間種培養した。
【００１７】
さらに澱粉・アンモニウム培地１４００リットルを含む２０００リットル容タンクに、種培養菌液１４０リットルを接種し、２６℃、１４０ｒｐｍ、通気量７００リットル／分、ｐＨ７．５で７日間培養した。
【００１８】
培養終了後、濾過により菌体を濾別した。このようにして得られた菌体６．３４ｋｇ（湿重量）のうち、菌体１ｋｇ（湿重量）にジクロロメタン３リットルを加え、室温で１５時間攪拌後、菌体を濾別し、菌体抽出液を得た。菌体については、同操作を３回繰り返した。得られた菌体抽出液を濃縮後、シリカゲル担体１２０ｇに吸着させた。本吸着シリカゲル担体をシリカゲルカラムにより精製した。
【００１９】
シリカゲル担体８００ｇを充填した径８．０ｃｍのカラムに上記抽出物吸着担体約１２０ｇをチャージし、シリカゲルカラムを作成した。このシリカゲルカラムを下記の条件を用いて精製を行なった。溶出溶剤として、ａ）ヘキサン：酢酸エチル＝４：６を４リットル、ｂ）酢酸エチルを３．５リットル、ｃ）メタノールを２リットルを、この順に流速５００ｍｌ／時間で流した。分画は、溶剤組成を変更する毎に行い、特に酢酸エチルの溶出画分は５００ｍｌずつ分画した（従って、酢酸エチルについては、溶出画分数は合計７画分となる）。
【００２０】
上記の各溶出画分について、それぞれ、ＯＤＳ−８０ＴＭ、内径４．６ｍｍ×長さ２５．０ｃｍの東ソー社製のカラムを用いたＨＰＬＣ（日立社製、ポンプＬ−６０００、Ｌ−６２００、検出器Ｌ−３０００、カラムオーブン６５５Ａ−５２）によって、検出波長２１０ｎｍ、カラム温度４０℃、流速１ｍｌ／分の条件で、溶離液として水：アセトニトリル＝３：７を用いて、純度を確認した。
【００２１】
上記のＨＰＬＣによる純度確認において、リテンションタイムが１２〜１５分で溶出され
るピーク面積が、全溶出ピーク面積の８０％以上を占めることが確認されたシリカゲルカラム溶出画分を合わせ、同一画分とした。本画分を濃縮乾固後、メタノール−ジクロロメタン系を用いて繰り返し再結晶を行い、柱状結晶３．５ｇを得た。
【００２２】
この物質の構造は、種々の機器分析データよりＷＯ９６／１２７３２号公報に記載された物質と同一であり、式〔Ｉ〕であると決定した。
【００２３】
構造分析データ
上記で得られた物質の機器分析データを以下に示す。
【００２４】
１．ＭＳ
・ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝９１３．６（Ｍ＋Ｈ−Ｈ２  Ｏ）＋  ，
９３１．６（Ｍ＋Ｈ）＋  ，
９５３．６（Ｍ＋Ｎａ）＋  
・ＨＲＦＡＢ−ＭＳ
Ｆｏｕｎｄ  ：  ｍ／ｚ＝９１３．５０７９（Ｍ＋Ｈ−Ｈ２  Ｏ）＋  ，
ｍ／ｚ＝９１３，９５３，９３１
（９１３がメイン，９３１は非常に小さい）
Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  ：  Ｃ４５Ｈ６９Ｎ８  Ｏ１２
ｍ／ｚ＝９１３．５０５３
【００２５】
２．ＩＲ
ＩＲ：  ３，４００ｃｍ−１：−ＯＨ，  −ＮＨ，
２，９００ｃｍ−１：アルキル基，
１，７５０ｃｍ−１：−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−，
１，６５０ｃｍ−１：−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−
【００２６】
３．アミノ酸分析
加水分解物としてＤ−セリン、Ｌ−アラニンおよびＤ−Ｎ−メチル−フェニルアラニンが認められた。
【００２７】
試験例１
Ｓａｔｏｈの方法（Ｓａｔｏｈ  Ｈ．，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐａｈａｒｍａｃｏｌ．１９９７；７３：５９−７１）に準じて、ラット酢酸潰瘍モデルを作成した。すなわち、体重２００〜２５０ｇのＳＤ系雄性ラットを、エーテル麻酔下で開腹し、２０重量％酢酸（ナカライテスク社製）水溶液２０μｌを胃粘膜下に注入して酢酸潰瘍を誘発した後、切開部を縫合した。反応誘発の２日後から、１日２回１４日間、上記で得られた本発明胃潰瘍消化管潰瘍治療物質を０．５重量％カルボキシメチルセルロースナトリウム水溶液に懸濁して１ｍｇ／ｍｌとしたものを、５ｍｌ／ｋｇ（本発明胃潰瘍消化管潰瘍治療物質として５ｍｇ／ｋｇ）ずつ経口投与した。コントロール群のラットには、０．５重量％カルボキシメチルセルロースナトリウム水溶液のみを同様に投与した。なお、本試験には各群２０匹のラットを用いた。
【００２８】
薬剤の最終投与の２４時間後に、ラットを剖検し、胃を摘出して胃潰瘍の有無を調べ、潰瘍のあるものについては潰瘍面積および潰瘍スコア（０：ほぼ正常、１：びらん、２：中程度の潰瘍、３：穿孔）を測定した。この結果を表１に示した。
【００２９】
【表１】
0003707936.tif 000004
【００３０】
本発明の胃潰瘍治療剤を投与した群では、コントロール群に比べて、胃潰瘍のある個体数が明らかに少なく、また潰瘍面積および潰瘍スコアも明らかに抑制されていた。すなわち、本発明の胃潰瘍治療剤は、胃潰瘍治癒促進作用を有する。
【００３１】
試験例２
Ｓｚａｂｏの方法（Ｓｚａｂｏ  Ｓ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １９７８；９３：２７３−２７６）に準じて、ラットシステアミン潰瘍モデルを作成した。すなわち、体重２００〜２５０ｇのＳＤ系雄性ラットを用い、システアミン塩酸塩（ナカライテスク社製）水溶液（５０ｍｇ／ｍｌ）を５ｍｌ／ｋｇ（システアミン塩酸塩として２５０ｍｇ／ｋｇ）ずつ、４時間ごとに合計３回経口投与して、システアミン潰瘍を誘発した。システアミンの初回投与から２、６、１０、２４および３２時間後に、上記で得られた本発明胃潰瘍及び十二指腸潰瘍消化管潰瘍治療物質を０．５重量％カルボキシメチルセルロースナトリウム水溶液に懸濁して１ｍｇ／ｍｌとしたものを、５ｍｌ／ｋｇ（本発明胃潰瘍及び十二指腸潰瘍消化管潰瘍治療物質として５ｍｇ／ｋｇ）ずつ経口投与した。コントロール群のラットには、０．５重量％カルボキシメチルセルロースナトリウム水溶液のみを同様に投与した。なお、本試験には各群５匹のラットを用いた。
【００３２】
誘発の４８時間後に、ラットを剖検し、胃および十二指腸を摘出して胃潰瘍及び十二指腸潰瘍の有無を調べ、潰瘍のあるものについては潰瘍の面積を測定した。この結果を表２に示した。
【００３３】
【表２】
0003707936.tif 000005
【００３４】
本発明の胃潰瘍治療剤及び十二指腸潰瘍治療剤を投与した群では、コントロール群に比べて、胃潰瘍及び十二指腸潰瘍のある個体数が明らかに少なく、また潰瘍面積も明らかに小さかった。すなわち、本発明の胃潰瘍治療剤及び十二指腸潰瘍治療剤は、胃潰瘍及び十二指腸潰瘍治癒促進作用を有する。
【００３５】
試験例３
加藤らの方法（薬理と治療、２６巻、５号、７８７〜７９５頁、１９９８年）に準じて、
ラットインドメタシン誘発胃粘膜障害モデルを作成した。すなわち、体重２００〜２５０ｇのルイス系雄性ラットを２４時間絶食後、上記で得られた本発明胃潰瘍消化管潰瘍治療物質を０．５重量％カルボキシメチルセルロースナトリウム水溶液に懸濁して１ｍｇ／ｍｌとしたものを、５ｍｌ／ｋｇ（本発明胃潰瘍消化管潰瘍治療物質として５ｍｇ／ｋｇ）ずつ経口投与した。コントロール群のラットには、０．５重量％カルボキシメチルセルロースナトリウム水溶液のみを同様に投与した。
その３０分後に、インドメタシンを０．５重量％カルボキシメチルセルロースナトリウム水溶液に懸濁して５ｍｇ／ｍｌとしたものを、５ｍｌ／ｋｇ（インドメタシンとして２５ｍｇ／ｋｇ）ずつ経口投与して胃粘膜障害を誘発した。なお、本試験には各群８匹のラットを用いた。
【００３６】
インドメタシン投与の４時間後に、ラットを剖検し、胃を摘出して胃潰瘍の有無を調べ、潰瘍のあるものについては潰瘍の面積を測定した。この結果を表３に示した。
【００３７】
【表３】
0003707936.tif 000006
【００３８】
本発明の胃潰瘍治療剤を投与した群では、コントロール群に比べて、胃潰瘍のある個体数が明らかに少なく、また潰瘍面積も明らかに抑制されていた。すなわち、本発明の胃潰瘍消化管潰瘍治療剤は、胃潰瘍消化管潰瘍治癒促進作用を有する。
【００３９】
【発明の効果】
【００４０】
本発明の胃潰瘍治療剤及び十二指腸潰瘍治療剤の構成は、上述のとおりであり、請求項１記載のペプチドを有効成分として含有するので、本発明は、より有用性の高い胃潰瘍治療剤及び十二指腸潰瘍治療剤を提供する。