(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジヒドロアルテミシニンと、滅菌された中性の精製植物油からなり、ジヒドロアルテミシニンと植物油のｗ／ｗの比が、０．０２２〜０．０３３：１で存在する製剤。
【請求項２】
使用した精製植物油が、落花生油、又は茶油である請求項１記載の製剤。
【請求項３】
ジヒドロアルテミシニンがαおよびβの互変異性体の混合物であり、αとβの比はクロロホルム中で１：１、メタノール中で２：１である請求項１または２記載の製剤。
【請求項４】
粘性を有し且つ明黄色である請求項１乃至３のいずれかに記載の製剤。
【請求項５】
経口投与、直腸内投与、又は筋肉内投与型とされた請求項１乃至４のいずれかに記載の製剤。
【請求項６】
合併症を伴わないマラリア感染、重篤な合併症を伴う大脳マラリア感染及び／又は多剤耐性マラリア感染の治療用である請求項１乃至４のいずれかに記載の製剤。
【請求項７】
熱帯熱マラリア原虫、ネズミマラリア原虫、三日熱マラリア原虫感染の血中無性段階および有性段階の治療用である請求項１乃至４のいずれかに記載の製剤。
【請求項８】
合併症を伴わないネズミマラリア原虫、熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫感染の抑制用に経口投与型とされた請求項１乃至４のいずれかに記載の製剤。
【請求項９】
クロロキン耐性及び／又はハロファントリン耐性の三日熱マラリア原虫感染の抑制用に経口投与型とされた請求項１乃至４のいずれかに記載の製剤。
【請求項１０】
クロロキン、メフロキン、キニン、アミドキン及び／又はハロファントリンによって生じた多剤耐性ネズミマラリア原虫及び熱帯熱マラリア原虫感染の抑制用に経口投与型とされた請求項１乃至４のいずれかに記載の製剤。
【請求項１１】
四日熱マラリア原虫及び／又は卵型マラリア原虫感染の抑制用に経口投与型とされた請求項１乃至４のいずれかに記載の製剤。
【請求項１２】
合併症を伴わないマラリア感染、重篤な合併症を伴う大脳マラリア感染及び／又は多剤耐性マラリア感染の緊急治療用に直腸内投与型とした請求項１乃至４のいずれかに記載の製剤。
【請求項１３】
重篤な合併症を伴う及び／又は昏睡状態の大脳マラリア感染の緊急治療用に直腸内投与型とされた請求項１乃至４のいずれかに記載の製剤。
【請求項１４】
重篤な合併症を伴うマラリアに罹った子供の治療用に直腸内投与型とした請求項１乃至４のいずれかに記載の製剤。
【請求項１５】
重篤な昏睡状態のマラリア及び／又は大脳マラリアの患者の緊急救命治療用に直腸内投与型とされた請求項１乃至４のいずれかに記載の製剤。
【請求項１６】
重篤な合併症を伴うマラリア及び／又は大脳マラリアの患者の緊急救命治療用に筋肉内投与型とされた請求項１乃至４のいずれかに記載の製剤。
【請求項１７】
昏睡状態の患者の早期回復用に筋肉内投与型とされた請求項１乃至４のいずれかに記載の製剤。
【請求項１８】
合併症を伴わないマラリア感染、重篤な合併症を伴う大脳マラリア感染及び／又は多剤耐性マラリア感染の完治用に筋肉内投与型とされた請求項１乃至４のいずれかに記載の製剤。
【請求項１９】
広範囲のマラリア抑制に有用な製剤を製造する方法であって、(ａ)アルテミシニンからジヒドロアルテミシニンを調製し、（ｂ）７０〜９０℃で２〜４分間加熱することによって、滅菌された中性の精製植物油にジヒドロアルテミシニンを溶解し、（ｃ）室温で溶液を冷却し所望の製剤を得ることを特徴とする製剤の製造方法。
【請求項２０】
使用した精製植物油が落花生油、又は茶油である請求項１９記載の製剤の製造方法。
【請求項２１】
使用したジヒドロアルテミシニンが、溶媒中に溶けたαおよびβの互変異性体の混合物である請求項１９又は２０記載の製剤の製造方法。
【請求項２２】
ジヒドロアルテミシニンの溶媒中でのαとβの互変異性体の比は１：１又は２：１である請求項１９乃至２１のいずれかに記載の製剤の製造方法。
【請求項２３】
使用した溶媒がクロロホルム、又はメタノールである請求項１９乃至２２のいずれかに記載の製剤の製造方法。
【請求項２４】
ジヒドロアルテミシニンと植物油が、ｗ／ｗの比で０．０２２〜０．０３３：１で存在する請求項１９乃至２３のいずれかに記載の製剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、未合併症の／重篤な合併症の／大脳のおよび多剤耐性のマラリアの緊急処置および抑制のための、アルテミシニン誘導体（ジヒドロアルテミシニン）の製剤に関する。ジヒドロアルテミシニンは、アルテミシニンのラクトール誘導体（キンガオス（Qinghaosu））であり、植物青蒿(Artemisia annua)の主な抗マラリア性の成分である。
【０００２】
【発明の背景】
マラリアは、吸血原虫のプラスモジウム(Plasmodium)属によって引き起こされる。ヒトに感染するプラスモジウムの４種は、三日熱マラリア原虫(Plasmodium vivax)、四日熱マラリア原虫(P. malariae)、卵型マラリア原虫(P. ovale)および熱帯熱マラリア原虫(P. falciparum)であり、最後の１種は、患者を昏睡状態に陥らせ、そして最終的に死に導き得る、重篤な合併症および大脳マラリアを生じさせる原因となる。世界の多くの部分において、クロロキン、メフロキン、ハロファントリン、キニン、サルファドキシン＋ピリメタミンの組合せ、およびサルファメトピラジン＋ピリメタミンの組合せ（マラリア抑制のため選ばれるうちの信頼される薬物）に耐性である熱帯熱マラリア原虫の株が出現している。同様に、クロロキンに耐性の三日熱マラリア原虫感染は、様々な国において出現している。２億７０００万人より多くの人々がこの疾患を被り、そして１２００〜１７００万の死が毎年生じる。死亡率は、疾患への免疫の欠損のために特に感受性の強い５歳以下の子供の間でより高い。
【０００３】
重篤な合併症のマラリアは、生命を脅かす症状であり、昏睡状態の大脳マラリアの症例は、保護者による緊急の療法を必要とする。重篤な熱帯熱マラリア原虫感染は、農村地帯および都市地帯の両方において共通であり、ならびにこれらの症例の処置は、薬剤耐性の感染の問題出現のため困難になっている。昏睡状態の者は、一般に、７２時間を超えて生存せず、それゆえ緊急の抗マラリア薬物療法を必要とする。種々の抗マラリア剤の坐薬調製物は、農村地帯および主なヘルスケアセンターにおける緊急の処置として効果的に使用され得、そしてこれらは、遠隔地帯における熟練していない医療の働き手によってでさえ容易に投与され得る。アルテミシニンの直腸坐薬調製物が、危篤状態の病気および大脳合併症を含む重篤な症例における熱帯熱寄生虫血症の減少において強力な効果を有するという観察を陳述する、いくつかの報告が出版されている。
【０００４】
エンドぺルオキシド類は、薬物耐性の寄生虫、ならびに、緊急な処置が始められない限り致命的結末となる重篤なマラリア病および合併症の迅速な進行がもたらす二重の攻撃を対処し得る、抗マラリア薬の有望な部類である。アルテミシニンは、エンドぺルオキシド架橋（C-O-O-C）を含むセスキテルペンラクトンであり、そして抗マラリア薬物間で独特なものである。ジヒドロアルテミシニン（DHA）は、アルテミシニンの還元されたラクトール誘導体であり、そして半合成誘導体（アルテムエーテル、アルテエーテル、アルテスネート、およびアルテリネート）は、ラクトールのエーテル類またはエステル類である。一般に、これらの全ての誘導体に存在するエンドぺルオキシド類は、既存の抗マラリア薬よりもいくつかの利点を有する。これらの誘導体は、既存の抗マラリア薬物に対して交差耐性をほとんどまたは全く示さない。エンドぺルオキシド類は速く作用するものであり、他の利用可能な薬物よりも迅速に寄生虫の抹消血を浄化し、そして結局、広範な臨床学的試行にもかかわらず、エンドぺルオキシド類に対する耐性は未だ発生していない。薬物（アルテエーテル，アルテムエーテル）の興味深い特徴は、臨床学的に処方される用量での全身的な神経毒性の欠落である。
【０００５】
【先行技術】
ジヒドロアルテミシニン（DHA）は、アルテミシニンの最も単純な半合成誘導体であり、薬用植物の青蒿の主な抗マラリア性の成分である。これは、インビボおよびインビトロでかなりの活性を有し、そしてアルテミシニンよりも３．８〜５倍強力である。薬物耐性熱帯熱マラリア原虫培養物（W-2 インドシナ(Indo-China)およびD-6 シエール・ローン(Sierre Lone)株）に対するインビトロバイオアッセイにおいては、DHAの直接的抗マラリア活性が、アルテムエーテルおよびアルテエーテルβの活性よりも優れることを示した。しかし、水溶性に乏しいので、DHAは、経口調製物（錠剤）としてのみ処方されてきた。DHAは、油溶性であるアルテムエーテル（AM）およびアルテエーテル（AE）ならびに水溶性薬物のアルテスネート（AS）のような半合成誘導体を製造するために、もっぱら使用されてきた。
【０００６】
チャオ(Zhao)およびソン(Song)は、ヒトボランティアにおける経口ジヒドロアルテミシニン（DHA）およびキンガオス（QHS）錠剤の薬物動態学を比較し、そしてQHS（経口）と比較して非常に高いDHA（経口錠剤）の生物学的利用能を報告し、またQHS後の血清レベルは、経口DHA調製物のレベルのわずか１．６２〜１０．８％であった。経口投与について、DHAは、QHSに比較してはるかに優れた血液殺シゾント剤であることが報告された。クィ−グィ・リ(Qi-Gui Li)らは、ラットにおいて、アルテムエーテル、アルテエーテル、およびアルテスン酸（artesunic acid）と、ジヒドロアルテミシニン（DHA）との経口対生物作用性を比較し、そしてアルテムエーテル（381±113）、アルテエーテル（324±10）、およびアルテスン酸（208±25ng ml-1）と比較して、経口DHAによって最高の血漿濃度（769±218）が生じたことを結論づけた。さらに、血漿濃度時間曲線下の面積（ngh ml-1）は、アルテムエーテル（306±52）、アルテエーテル（298±68）、およびアルテスン酸（217±34）と比較して、経口DHAで最も高かった（615±56）。消失半減期（時間）は、アルテムエーテル（2.04±0.18）、アルテエーテル（1.79±0.47）、およびアルテスン酸（1.34±.26h）と比較して、DHAにおいてより長かった（4.94±0.73）。DHAは、アルテムエーテル（AM）、アルテエーテル（AE）、アルテスネート（AS）、およびアルテリン酸（artelinic acid）（AL）のような他のアルテミシニン誘導体の活性な代謝産物であることが報告された。
【０００７】
ベナキス(Benakis)らは、経口ジヒドロアルテミシニン錠剤を６人の未合併症の熱帯熱マラリア症例に投与し（１日あたりの投与量の半分に相当する60mgの用量）、そしてジヒドロアルテミシニンの最高時の血漿レベル（0.26〜0.71μg/ml）が、４人の被験体において１〜２時間の間で報告された。その後、血漿レベルは低下し、そして６時間で完全に排出された。DHAの消失半減期は、０．７１〜１．４５時間であり、薬物は２人の被験体において良好に許容されたが、４人の被験体は、軽度の頭痛、吐き気、または嘔吐を経験した。１人の被験体は、胃腸出血を示し、そして薬物（錠剤）投与の30分後に昏迷した。ベナキス(Benakis)らは、DHAの持続的放出形態の開発は、薬物の錠剤形態の有害な薬物反応を克服し得ることを示唆した。
【０００８】
ベナキス(Benakis)らはまた、経口アルテスネート投与後、生じた最大のジヒドロアルテミシニン血漿レベルは、親化合物のアルテスネート（これは、0.12±0.11μg/mlの最高時のレベルを記録した）のレベルに比較して非常に高い（0.57±0.18μg/ml）ということを報告している。DHAレベルが、アルテスネートのレベルに比較して５倍高いこと、およびDHAは、アルテスネート投与後の主な抗マラリア性の素因であることが強調され得る。さらに、アルテスネート型の抗マラリア剤について、薬物の非常に短い半減期のために、用量投与（３時間毎）が必要であることが指摘された。しかし、ベセル(Bethell)らは、DHAの最高時の血漿濃度において広範な変化を観察した。
【０００９】
アルテミシニン坐薬についての最初の研究は、熱帯熱マラリア原虫を抑制するために中国において行われた。坐薬処置は、熱クリアランス時間（15〜39時間）および寄生虫クリアランス時間（35〜52時間）によって示されるように、満足なものであることが見出された。アーノルド(Arnold)らは、アルテミシニン坐薬（56時間内に投与された2800mgの全薬物を含む）は、急性熱帯熱マラリア原虫感染を伴う症例において４１．８時間内の完全な寄生虫クリアランスを生じさせたが、毎日１５００ｍｇの用量で１４日間、キニン（経口）を受けた人は、寄生虫クリアランスのために６８．１時間を要したことを報告した。
【００１０】
ヒェン(Hien)らは、アルテミシニン（600〜2200mg）の坐薬が、子供において無性の熱帯熱マラリア原虫寄生虫を迅速に浄化たことを報告し、そしてこの薬物に伴う高い再発率の問題を確認した。坐薬は、強い寄生虫血症の発症を防止するための仮処置として使用され得た。研究において、１０〜１４mg/kgのアルテミシニンを受けた１０人の子供は、寄生虫血症の最初の95%のクリアランスを達成するために１８．９±４．７時間を要した。
【００１１】
アルテスネート坐薬（３日間にわたって投与される1600mg用量）は、ローアーレスワン(Looareesuwan)らによって評価され、および（200mg×３日間）は、キャウ(Kyaw)ら、1996による。これらの研究者らによれば、アルテスネート坐薬は、アルテスネートの経口錠剤によって達成されるスピードと同様に、素晴らしいスピード（16〜36時間）で完全な寄生虫クリアランスを達成する。大脳症状および衰えた知覚レベルを伴う患者は、一般に、良好な応答示し回復する。直腸坐薬は、昏睡状態の症例において完全な意識を取り戻すための時間によって示されるように、筋肉内注射アルテムエーテルよりも良好に、熱帯熱マラリア原虫症例の重篤な合併症を抑制し得た。
【００１２】
アルテミシニン坐薬処理された症例は、昏睡からの回復に２４（18〜30）時間要したが、一方アルテムエーテルは、４７（31〜63時間）時間を要した。直腸アルテミシニン坐薬の効力は、ヒェン(Hein)らによって報告されているように、昏睡状態の症例についての最も速い作用処置であると考えられる静脈内注射アルテスネートに等価であった。直腸製剤の開発は、早い吸収、高い生物学的利用能および血中の抗マラリア効果を行使するのに十分な有効な血漿レベルの点で、経口処置に対する良好な代替を提供する。
【００１３】
早い排出速度は、何の毒性も生じることなく、重篤な合併症の感染を抑制するために、初期に４時間毎の反復された直腸投与を許容する。直腸坐薬は、投与するのが簡単であり、室温での保存が容易であり、およびその投与には任意の特別な器具を必要とせず、そしてマラリアに関連する死亡率が高い発展途上国の至る所の農村のヘルスセンターでの緊急の薬物として投与され得る。
【００１４】
DHAの水溶性誘導体、すなわちアルテスン酸は、インビトロでマラリアに対して非常に有効であることが見出され、そしてインビボおよびインビトロで低い毒性をもたらした。アルテスネート（AS）は、アルテミシニンよりも３．２倍強力であり、またアルテムエーテルよりも毒性が低いが、これは、溶液中においては乏しい安定性を有し、そして用量は、投与前に迅速に調製されなくてはならない。ヒト、ウサギ、ラットおよびイヌにおいて得られた薬物動態学データは、アルテスン酸が、分散され、そしてウサギにおいて２〜４分間またイヌにおいて２７分間の消失半減期で、血漿エステラーゼによってDHAに加水分解されることを示唆した。その迅速且つ多量のDHAへの変換に起因して、アルテスン酸はDHAのプロドラッグとして考慮され得る。アルテスネートの薬物動態学活性は、投与されるものに起因するよりも代謝物（DHA）に起因する。
【００１５】
カーブワン、Ｊ．(Karbwang，J.)らは、熱帯熱マラリア原虫症例におけるアルテムエーテル（経口）の薬物動態学およびそのDHAへの変換を研究し、そしてDHAは、首尾よい処置の主な決定因子であると考えられると結論づけ、抗マラリア活性が血漿中のDHAレベルに対応したことを示唆する。DHA代謝物の血漿レベルは、感受性熱帯熱マラリア原虫感染を伴う患者においてほぼ３倍高かった。タイにおいて単離された熱帯熱マラリア原虫に対するアルテムエーテル対DHAの阻害活性の平均比は、６〜１２時間以内で１：２．９であり、血漿のアルテムエーテルレベルは速く減少したが、DHAレベルは依然としてより高かった。しかし、アルテムエーテルおよびアルテスネートは両方とも、室温での湿度、光および酸性条件により分解しやすい。pH７〜８でのナトリウムアルテスネートの水溶液は、1時間以内にDHAに加水分解する。
【００１６】
DHAは、インビボでのアルテムエーテル、アルテエーテルおよびアルテスン酸／アルテスネートの主な代謝物である。他のアルテミシニン誘導体に関連するマラリア再発の高い確率は、短い血漿半減期に少なくとも部分的に起因してきた。
【００１７】
健常な成人におけるアルテムエーテルの薬物動態学活性が、投与されたプロドラッグよりも代謝物DHAに起因することが報告された。主な代謝物DHAは、熱帯熱マラリア原虫に対する抗マラリア活性の点において親化合物よりも約３倍活性である。他の未同定の代謝物の抗マラリア活性への寄与はごくわずかであることが報告された。
【００１８】
ラットにおけるアルテエーテル（AE）、アルテムエーテル（AM）およびアルテスネート（AS）のDHAへのインビボの変換が３つの全ての投与の経路（経口、筋肉内注射および直腸）を介して比較され、そして変換速度は、ASでより早く、次いでAEおよびAMであった。ASのDHAへの高い変換は、ASおよびDHAが、P.bergeiのクロロキン感受性のおよびクロロキン耐性の株に対して同じインビトロ抗マラリア力を示すという事実によって説明され得る。AM、AEおよびASの投与後に得られるDHAレベルは、DHAでの筋肉内注射投与後の２．６％のレベルよりも低いが、DHAの高い抗マラリア活性は、おそらく、インビボでのこれらの薬物の全体の抗マラリア活性に有意に寄与する。
【００１９】
筋肉内および直腸内経路によって薬物を投与された健常な被験体におけるアルテムエーテルの生物学的利用能は、直腸内（ir）投与後にその活性な代謝物のジヒドロアルテミシニンの血漿プロフィールが、この経路が農村の熱帯地方において筋肉内経路の代替として評価されるべきであることを示唆したことを示した。その活性な代謝物ジヒドロアルテミシニンへのアルテスネートの変換は、その迅速なクリアランス速度のために、抗マラリア薬理学において独特である。
【００２０】
AMおよびAEの筋肉内注射生物活性利用能は、非常に低く、少なくとも筋肉内注射投与後の最初の８時間の間におけるこれら薬物の不完全な吸収を示唆する。一方、DHAの生物学的利用能は、他の油溶性薬物と水溶性薬物との間の中間である。アルテムエーテルの筋肉内注射および経口調製物の両方の比較的遅く且つ不完全な生物学的利用能は、これが重篤な合併症の熱帯熱マラリアについての前線処置であるので、いくらか懸念される。呼吸障害を付随する重篤なマラリア（大脳マラリア（CM））を伴う子供におけるアルテムエーテルの筋肉内注射の吸収は、遊走性であり、ある研究において５人のCM症例は、血漿のDHAレベルを示さなかったことが報告された。子供におけるアルテムエーテルの減じられる吸収を考慮して、子供のための有効な抗マラリア剤を開発する緊急の必要性がある。経口アルテムエーテルは、熱帯熱マラリア原虫症例において不完全な薬物吸収を経て、結果再発となることが報告されている。それゆえ、臨床研究者は、子供における重篤なマラリアの処置について静脈注射アルテスネート調製物でのアルテムエーテルの置換を提唱する。
【００２１】
筋肉内注射経路によるDHAの血漿レベルは３０時間にわたって持続され、そして殺寄生虫剤効果は、経口または直腸内経路に比較して非常に長い期間維持されたが（筋肉内注射経路におけるDHA活性、AUC ３４４５ n mlo l-1時間、一方経口経路は３８５５n mol-1時間、DHAに起因する活性は３０時間を超えて長引いたのに対して、経口用量は最大１０時間の有効レベルを提供した。
【００２２】
筋肉内注射製剤によって投与されたアルテミシニン、アルテエーテル、アルテリネート、アルテスネート、ならびに経口経路により投与されたアルテエーテルおよびDHAにおける初期の研究は、動物モデルにおいておよび熱帯熱マラリア原虫に対しての両方で、良好な配偶子致死活性を示した。これらの薬物は、マラリア伝達の阻止についての可能性を有する。
【００２３】
費用は、抗マラリア薬物の使用を決定するのにおいて重要な因子である。アルテミシニン由来の薬物は、いくつかの国において市販されているが、高い費用のために制限されている。例えば、現在経口アルテスネートは、メフロキンについての１．８５ドルおよびクロロキンのような薬物についての７０Ｃに比較して、処置あたり約５〜６ドルかかる。注射可能なアルテスネート、アルテムエーテルおよびアルテエーテルはさらに、処置当たり２ドル未満のキニン注射に比較して、より費用がかかる。
【００２４】
改善された吸収性、生物学的利用能、より長い持続時間についての高い血漿薬物濃度、ならびに多剤耐性のおよび重篤な合併症の／大脳のマラリアを処置するための費用有効性を有する、アルテミシニンまたはその半合成誘導体に基づく有効な新規の抗マラリア薬についての真の必要性が確かに存在する。
【００２５】
本発明の主な目的は、広範囲なマラリアを抑制するためのジヒドロアルテミシニンの製剤を開発することである。
【００２６】
本発明の別の目的は、未合併症のマラリア感染についての、ならびに多剤耐性のマラリアの抑制および重篤な合併症の大脳マラリア感染の緊急の処置についての、改善された安全な製剤を安価に開発することである。
【００２７】
本発明のさらに別の目的は、子供および成人の間のマラリアに関連する死亡を終止し得る製剤を開発することである。
【００２８】
【発明の要旨】
本発明は、両未合併症のマラリア症例の抑制のための、および重篤な合併症のおよび大脳のマラリア症例の緊急の処置のための、ならびに多剤耐性マラリアの処置のための、アルテミシニン誘導体の改善された製剤を開発することである。この製剤は、無菌の中性化精製油中にアルテミシニン誘導体の調製物を含み、それは成人および子供における速い作用性の血液殺シゾント活性を示し、また長期の貯蔵寿命を有する。異なる経路（直腸の、筋肉内の、および経口の）によって与えられる製剤の抗マラリア性プロフィールは、高い活性を確認した。
【００２９】
本発明について、私達は以下の理由のためにジヒドロアルテミシニンの製剤を開発することを選択した：この産物は、効力の点で、元来の分子であるアルテミシニンに優れる；ジヒドロアルテミシニンは、最も単純な１工程の、高収量のおよび経済的なアルテミシニンの半合成誘導体である；ジヒドロアルテミシニンはアルテムエーテル、アルテエーテル、アルテスン酸およびアルテリン酸（artelinic acid）の活性な代謝物であることが知られており、これらの薬物の抗マラリア活性を担う。
【００３０】
経口経路によって与えられる化合物の抗マラリア性プロフィールは、ジヒドロアルテミシニン製剤の高い活性によって確認されてきた。投与における経口経路は、村における、ならびに農村および都市地帯における処置のために重要である。経口投与は、MDRネズミマラリア(P. yoelii nigeriensis)に対して１００％の治癒率を与え、そしてその効力は、QHS（アルテミシニン）や初期の研究者らによって使用されたその他の誘導体よりも良好であり、非常に高い用量で最大５０〜９０％有効である。匹敵する抗マラリア効果が、安全なおよび低い用量のDHAで達成され得るのに対して、最大５．０ｇ用量のQHSの高い用量は５５％の治癒率を与え、最大７００ｍｇのアルテムエーテルは９０％の治癒率を与え、ならびに最大７５０ｍｇのアルテスネートは７０〜９０％の治癒率を与える。DHA製剤の安全性は、アルテムエーテルおよびアルテスネートよりも良好である。
【００３１】
投与の経路は、重篤な合併症の／大脳のマラリアの緊急の処置のために重要である。DHAの直腸製剤は、投与するのに簡単であり、保存が容易であり、またその投与には特別な器具をなんら必要としない。より高い効力を達成するために、最初の４〜６時間毎の薬物の反復される直腸投与は、何ら毒性を生じることなく重篤な合併症の感染を抑制する。
【００３２】
筋肉内DHA製剤は、重篤な合併症の熱帯熱マラリア原虫感染を抑制することにおいて有効である。筋肉内注射製剤は、静脈内注入装置を必要としない。ロフィリゼート（lophilizate）のアンプルおよび使用の前に混合されなくてはならない溶媒のアンプルの形態において利用可能である静脈内アルテスネートとは異なり、筋肉内DHAは使用するのが容易である。アルテスネートの調製溶液は、貯蔵においてきわめて安定しておらず、注入は迅速に行われなくてはならない。さらに、筋肉内注射製剤において不慮の過剰用量の危険性は、静脈内注射調製物よりも確かに低い。
【００３３】
リー(Li)らによれば、DHAを用いてラットにおいて達成される筋肉内注射経路による最大血漿濃度は、アルテエーテルおよびアルテムエーテルに比較して非常に高い（DHA 1579±443；AM 692±234およびAE 160±12.4）。薬物動態学の観点から、DHAの半減期は他のアルテミシニン誘導体の半減期よりも長い（DHA 4.44±0.27時間対AE 3.62±0.9時間対AM 1.78±0.80時間）。アルテミシニンおよびジヒドロアルテミシニンの細胞障害が、ジヒドロアルテミシニンのエーテル類およびエステル類と比較された場合、アルテムエーテル、アルテエーテル、アルテリン酸およびナトリウムアルテリネートよりも、ジヒドロアルテミシニンは有意に細胞障害性が低かったことがわかり得た。８時間以内のDHAの吸収率（%）は、８５．４±１２．１であり、これはAM（54.2±25.9）およびAE（34.0±9.6）よりも非常に高い。
【００３４】
0003686281.tif 000002
【００３５】
上述のアルテミシニン誘導体と対照的に、ジヒドロアルテミシニン（DHA）は、最も高い血漿濃度、RBCにおける最も高い結合能力、もっとも長い消失半減期および最も低い毒性を有するので、良好な抗マラリア剤候補であるようである。８時間におけるDHAの吸収は、他の薬物に比較して非常に高い。DHAはこれら全ての薬物の主な代謝物であり、そしてこれら薬物の抗マラリア活性は主な代謝物のDHAに起因する。DHAは、アルテムエーテルおよびアルテエーテルに比較して低い再発率を示した。それゆえ、ジヒドロアルテミシニンが合成され、そして増強された生物学的利用能を有する安定な製剤が、未合併症の／重篤な合併症の／大脳のマラリアおよび多剤耐性マラリア感染の抑制および緊急処置のために調製された。
【００３６】
従って、本発明は、広範囲のマラリアを抑制するためのジヒドロアルテミシニンの製剤を提供し、これは(ａ)公知の方法による、アルテミシニンからジヒドロアルテミシニンの調製と、（ｂ）７０〜９０℃で２〜４分間加熱することによって、滅菌された中性の精製植物油にジヒドロアルテミシニンを溶解することと、室温で溶液を冷却することとを含有し、所望の製剤を得る。
【００３７】
本発明はさらに、ジヒドロアルテミシニン錠剤での処置において見出される胃の悪影響、出血など、を示さない製剤を提供する。
【００３８】
本発明はさらに、アルテムエーテルおよびアルテエーテルから選択される他のアルテミシニン誘導体に比較して最大の生物学的利用能を提供する製剤を提供する。
【００３９】
本発明はさらに、８時間以内に８０％を超える化合物の吸収を有する製剤を提供し、これは他のアルテミシニン誘導体（アルテムエーテル、アルテエーテル）よりも非常に高い。
【００４０】
本発明の別の実施態様において、ジヒドロアルテミシニンおよび植物油は、．０２２〜．０３３：１ｗ／ｗの比で存在する。
【００４１】
本発明の実施態様において、調製のために使用される精製された植物油は、落花生油、ゴマ油、茶油などから選択される。
【００４２】
本発明の別の実施態様において、調製物において使用されるジヒドロアルテミシニンは、溶媒クロロホルム（１：１）およびメタノール（２：１）におけるおよびβの比率で、αおよびβ互変異体の混合物に出現する。
【００４３】
本発明の別の実施態様において、製剤に使用されるジヒドロアルテミシニンは以下の特徴を有する：融点：(１５３〜１５４℃)、分子量：２８４、分子式：Ｃ１５Ｈ２４Ｏ５。
【００４４】
本発明は、粘性の性質であり、および明黄色である製剤を提供する。
【００４５】
本発明はさらに、安全な、十分に許容性の、そしてその安全性においてアルテムエーテルおよびアルテスネートよりも良好である製剤を提供する。
【００４６】
本発明はさらに、少なくとも２年の貯蔵寿命を有する製剤を提供する。
【００４７】
本発明はさらに、この製剤の高い抗マラリア力を示して、マラリアに感染された赤血球において、正常な赤血球よりも２００〜３００倍多い蓄積する、製剤を提供する。
【００４８】
本発明はさらに、速い作用性であり、血液殺シゾント活性を有し、そして未合併症の、重篤な合併症の／大脳の、および多剤耐性のマラリア感染について有用である、製剤を提供する。
【００４９】
本発明はさらに、クロロキン、アミドキン、マパエリン、メフロキン、キニンおよびハロファントリンの高い経口用量に対して耐性である、多剤耐性ネズミマラリア原虫に対して効果的である、製剤を提供する。
【００５０】
本発明はさらに、プリマキンの安全な置換体であり、そして熱帯熱マラリア原虫および他のマラリア感染の伝達を阻止するために有用である製剤を提供する。
【００５１】
本発明はさらに、経口、直腸内、および筋肉内の経路を介して投与され得、そして配偶子致死効果を減少し得る製剤を提供する。
【００５２】
本発明は、プリマキンの投与と関連することが知られている毒性の有害な反マット（mat）ヘモグロビン型を有しない製剤を提供する。
【００５３】
本発明はさらに、熱帯熱マラリア原虫および三日熱マラリア原虫の両方の血液無性段階および血液有性段階に対して効果的である製剤を提供する。
【００５４】
本発明はさらに、未合併症の熱帯熱マラリア原虫および三日熱マラリア原虫感染の抑制のために、経口経路を介して使用され得る製剤を提供する。
【００５５】
本発明はさらに、クロロキン耐性およびハロファントリン耐性の三日熱マラリアの抑制のために、経口経路を介して使用され得る製剤を提供する。
【００５６】
本発明はさらに、クロロキン、メフロキン、キニン、アミドキン、およびハロフェントリンによって引き起こされる、多剤耐性の熱帯熱マラリア原虫感染の抑制のために、経口経路を介して使用され得る製剤を提供する。
【００５７】
本発明はさらに、四日熱マラリア原虫および卵型マラリア原虫感染の処置の制御のために、経口経路を介して使用され得る製剤を提供する。
【００５８】
本発明はさらに、マラリアの再発率を減少するために、３回の分割された用量（８時間毎）における、毎日の用量の投与による経口経路を介するマラリアの処置方法を提供する。
【００５９】
本発明はさらに、未合併症の、重篤な合併症の／大脳のおよび多剤耐性のマラリア感染の緊急の処置および抑制のために、直腸内経路を介して使用され得る製剤を提供する。
【００６０】
本発明はさらに、速く作用するために直腸坐薬として直腸内経路を介して使用され得る製剤を提供する。
【００６１】
本発明はさらに、重篤な、合併症のおよび昏睡状態の大脳のマラリア感染の迅速な処置のために直腸経路を介して使用され得る、疾患の進行を防止する製剤を提供する。
【００６２】
本発明はさらに、重篤な合併症のマラリアにおける子供の処置、ならびに死亡および疾患の重篤度の進行の防止のために、直腸経路を介して使用され得る製剤を提供する。
【００６３】
本発明はさらに、重篤な昏睡状態および大脳のマラリア症例の緊急のおよび生命を救う処置として、直腸経路を介して使用され得る製剤を提供する。
【００６４】
本発明はさらに、マラリア感染を抑制するために、８〜１２時間の間隔で２または３回の分割された用量において、毎日の製剤の投与により、直腸経路を介して使用され得る製剤を提供する。
【００６５】
本発明はさらに、重篤な合併症のおよび大脳のマラリアについての緊急の生命を救う処置として、筋肉内経路を介して使用され得る製剤を提供する。
【００６６】
本発明はさらに、昏睡状態の患者の速い回復のために、筋肉内経路を介して使用され得る製剤を提供する。
【００６７】
本発明はさらに、未合併症の、重篤な合併症の／大脳のマラリアおよび多剤耐性マラリア感染の完全な治癒のために、筋肉内経路を介して使用され得る、製剤を提供する。
【００６８】
本発明はさらに、マラリアの伝達を防止および阻止して患者における多剤耐性を止めるために、筋肉内経路を介して使用され得る製剤を提供する。
【００６９】
本発明はさらに、成人について、連続して５日間、２つに分割された用量で毎日注射することによって製剤を投与することによる、筋肉内経路を介してマラリアを処置する方法を提供する。用量は、子供および幼児については、対応して減少されうる。
【００７０】
本発明は、以下の実施例において詳細に記載される。しかし、本発明の範囲を制限するように解釈されるべきではない。
【００７１】
【実施例】
ジヒドロアルテミシニン（DHA）の化学、処方および抗マラリア性の評価：
【００７２】
ａ）アルテミシニンからのジヒドロアルテミシニンの調製
２５０mlのメタノール中のアルテミシニン(１０ｇ)を、氷浴において０℃に冷却した。攪拌した溶液に、４ｇのNaBH４を、30分間にわたって添加した。NaBH４の完全な添加後、反応混合物を１時間攪拌した。破砕した氷を、反応混合物に添加し、即座に沈殿を生じた。白色の沈殿を濾過し、そして冷水で洗浄した。沈殿を、CH２Cl２（２５０ml）に溶解し、そして無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶媒を、真空下エバポレートし、そしてエチルアセテート−ヘキサン（１：３）溶媒で残渣を再結晶化し、そして融点１５１〜１５３℃の純粋な結晶物質を生じた（９．１gm）。ジヒドロアルテミシニン（分子式：C１５H２４O５；分子量２８４）が、ヘミアセタールであること、および溶媒依存性の比率でαおよびβアノマーの混合物として存在することが見出された。ジヒドロアルテミシニンが結晶質である場合水酸基がβ位であるが、溶液中の場合、エピマーの混合物が形成される。ジヒドロアルテミシニンの１３CNMRにおけるαおよびβ異性体の比率は、CDCl３溶媒において(1：1)であること、およびCD３OD溶媒において(2：1)であることが見出された。物質は、スペクトル法（IR、１H NMR、１３C NMRおよび質量）および真性のサンプルによって特徴づけした。
【００７３】
ｂ)ジヒドロアルテミシニン（DHA）の処方：
ジヒドロアルテミシニン（DHA）２００gを、滅菌した精製中和化落花生油（１０ml）にとり、そして８０〜９０℃で温和に加熱することによって溶解し、そして溶液を室温で冷却した。製剤を使用するまで、室温で保存した。数ヶ月間、室温で安定であることが見出された。
【００７４】
(ｃ) 抗マラリア効果：
試験寄生虫：多剤耐性ネズミマラリア原虫。ネズミマラリア原虫は、高い経口用量のクロロキン（１２８mg/kg×４）、アモジアキン（１２８mg/kg×４）、メパエリン（１２８mg/kg×４）、メフロキン（１２８mg/kg×４）、キニン（４００mg/kg×４）およびハロファントリン（３２mg/kg×４）に耐性の多剤耐性株である。この寄生虫は、２０〜２５ｇのスイスマウスにおいて、100％の死亡を生じ、そしてマウスにとって非常に猛毒である。これは、熱帯熱マラリア原虫の圃場単離物において報告された耐性の範囲に類似する多剤耐性の広範な範囲を伴う急性の感染を生じるので、抗マラリア性の評価のための理想的な寄生虫である。
【００７５】
（ｉ）直腸経路による、ジヒドロ−アルテミシニン製剤の抗マラリア（血液殺シゾント剤）活性：
DHA製剤を、スイスマウス（２０ｇ）においてインビボで評価した。マウスを寄生虫（ネズミマラリア原虫の多剤耐性株）で腹腔内感染させ、そして感染したマウスを、連続して５〜７日間（０日以降）、中和化落花生油において調製されたDHA製剤の各マウス用量（直腸経路によって、０．２〜０．３mlの油）で処置した。より高い用量（１５および２０mg/kg）について、薬物は直腸経路により分割した用量で与えられた。マウスの尾血スミアを、ギームザ染色後、定期的に、感染後３０日まで試験した。３０日の観察までの寄生虫血症の完全な不在によって示されるように、直腸経路によって与えられるDHA製剤は、多剤耐性げっ歯類感染および重篤な／悪性の／致死のマラリアの感染に対して、治癒力のある効果を示した（表１）。
【００７６】
【表１】
0003686281.tif 000003
【００７７】
（ii）筋肉内経路による、ジヒドロ-アルテミシニン製剤の抗マラリア（血液殺シゾント剤）活性：
スイスマウス（２０±１g）ならびにベビーマウス（１２±１g）において、インビボで、DHA製剤を評価した。マウスを、寄生虫（ネズミマラリア原虫の多剤耐性株）で腹腔内感染し、そして感染したマウスが、連続して５日間（０、＋１、＋２、＋３、＋４日目）、DHA製剤の各マウス用量（０．２mlの油注射剤）で筋肉内に処置された。マウスの尾血スミアが、ギームザ染色後、定期的に、感染後３０日まで試験された。３０日の観察までの寄生虫血症の完全な不在によって示されるように、DHA製剤は、多剤耐性げっ歯類感染に対して、治癒力のある効果を示した（表２）。
【００７８】
筋肉内注射経路によって与えられたDHA製剤は、スイスマウスにとって非常に致死的である多剤耐性ネズミマラリア原虫マラリアを完全に抑制し得る。薬物DHAはまた、２０〜２５gの成人マウスおよびベビーマウス（１２±１g）において重篤な／悪性の／致死のマラリア感染を抑制することにおいて有用である。
【００７９】
【表２】
0003686281.tif 000004
【００８０】
(iii)  経口経路による、ジヒドロアルテミシニン製剤の抗マラリア（血液殺シゾント剤）活性：
スイスマウス（２０〜２５g）において、インビボで、DHA製剤を評価した。マウスを、寄生虫（ネズミマラリア原虫の多剤耐性株）で腹腔内感染し、そして感染したマウスを、連続して５日間（０日以後）、経口餌食によって、０．２５mlの各マウス用量（油中）で処置した。DHA製剤は、中和化滅菌落花生油中に調製される。処置したマウスの尾血スミアを、ギムーザ後、定期的に、寄生虫血症のパーセントを記録するために試験した。経口経路によって与えられるDHA製剤は、高用量のクロロキン、メフロキン、キニン、アモジアキン、メパクリンおよびハロファントリンなどに耐性な多剤耐性マラリア原虫に対して、治癒力のある効果を示した。３０mg/kg用量×５日間のDHA経口製剤は、ネズミマラリア原虫のMDR株に対して１００％の治癒力のある効果を示した（表３）。
【００８１】
【表３】
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【００８２】
改良されたジヒドロアルテミシニンの製剤−本特許の主な内容は、多くの利点を提供する。
１．油製剤としての産物ジヒドロアルテミシニンは、未合併症の／重篤な合併症の／大脳のおよび多剤耐性のマラリア感染を抑制し得る、速い作用の、血液殺シゾント剤である。
【００８３】
２．筋肉内注射および直腸経路によって与えられる製剤は、匹敵する分子静脈内注射アルテスネートの静脈内投与について一般に使用される、一定点滴のような器具が、利用可能でない農村地帯において、使用され得る。
【００８４】
３．直腸投与は、マラリア感染のきびしさを抑制するための推定の処置として、また昏睡状態のマラリアの症例の及び合併症の症例における大脳が巻き込まれることから死を防止する緊急の処置として、村における家族のメンバーによってまたは準医療活動者によって、シリンジまたはカテーテルを介して、反復して与えられ得る。
【００８５】
４．異なる経路による製剤の投与は、有効な抗マラリア薬の処置についての血漿薬物濃度を増加する。筋肉内注射投与製剤の高い効力が、合併症の症例、大脳の／重篤な／多剤耐性の症例を抑制するために与えられ得るからである。
【００８６】
５．筋肉内注射経路または経口に続いて直腸により与えられるDHA製剤は、より高いレベルの抗マラリア活性を発揮する。
【００８７】
６．クロロキンに感受性および耐性の三日熱マラリア原虫、ならびに四日熱マラリア原虫／卵型マラリア原虫の感染は、この製剤を用いることによりまた抑制され得、そして血液段階の寄生虫血症は、MDR感染に対するその高い効力のために、経口製剤によって未合併症の症例において効果的に抑制される。
【００８８】
７．DHAの油剤ベースの経口製剤は、DHA錠剤について報告されるような胃の有害な反応をなんら生じない。
【００８９】
８．この製剤は、アルテムエーテルおよびアルテスネート（iv）のような匹敵する親調製物よりも経済的に安価である。
【００９０】
９．LD５０の基準におけるこの化合物の安全性は、アルテエーテルに匹敵し、そしてアルテムエーテルおよびアルテスネートよりも良好である。
【００９１】
１０．製剤は、室温で長期間安定である。
【００９２】
１１．DHA製剤は、マラリア合併症に起因する子供および成人の両方の死を防止し得、ならびにそれらのより高い抗マラリア効力、生物学的利用能および血漿濃度によって、昏睡状態の進行を停止し得る。