(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶性カシス抽出物（但し、黒スグリ種子油を除く）を有効成分とするメイラード反応阻害剤（但し、皮膚外用剤を除く）。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、メイラード阻害剤、ヒスタミン遊離抑制剤、活性酸素生成抑制剤、過酸化脂質生成抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、特開平７−１６５５３０号公報や特開平８−３４７２２号公報の実施例などに見られるように、カシスの和名である黒スグリの（種子）油を配合した製剤は公知である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、これらの公報には、水溶性のカシス抽出物がメイラード反応抑制効果、抗炎症効果、活性酸素生成抑制効果、過酸化脂質生成抑制効果に優れた効果を示すことは何ら記載されていない。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明人らは、カシスがコショウの仲間であり何らかの生理活性が期待できると考え、水溶性のカシス抽出物の生理活性効果について鋭意検討を行ったところ、予想通り種々の優れた効果、例えばメイラード反応抑制効果、抗炎症効果、活性酸素生成抑制効果、過酸化脂質生成抑制効果に優れた性能を示すことを見出した。特にメイラード反応抑制効果については、既知の植物抽出エキスの中でも最も効果的な部類に属する性能を有していることを見出した。
【０００５】
すなわち、第１の本発明は、水溶性カシス抽出物（但し、黒スグリ種子油を除く）を有効成分とするメイラード反応阻害剤（但し、皮膚外用剤を除く）である。
【０００６】
第２の本発明は、水溶性カシス抽出物（但し、黒スグリ種子油を除く）を有効成分とするヒスタミン遊離抑制剤（但し、皮膚外用剤を除く）である。
【０００７】
第３の本発明は、水溶性カシス抽出物（但し、黒スグリ種子油を除く）を有効成分とする活性酸素生成抑制剤（但し、皮膚外用剤を除く）である。
【０００８】
第４の本発明は、水溶性カシス抽出物（但し、黒スグリ種子油を除く）を有効成分とする過酸化脂質生成抑制剤（但し、皮膚外用剤を除く）である。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明で用いるカシスとは、日本名で黒スグリ、学名でRibes  ｎｉｇｒｕｍの植物である。本発明では、カシスの実、花、種子、葉、茎、根などいずれの部位を使用しても構わないが、市場で流通しており、入手が容易である実、種子を利用することが好ましい。例えば食品用流通ではクロフサスグリ、アカスグリ、キスグリなどの名称で流通しているものが入手が容易なため好ましい。
【００１０】
本発明で用いるカシス抽出物は水溶性のものを用いる。従って、黒スグリ種子油のような油性成分は除外される。カシスの抽出溶媒としては、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、それらの混合溶媒などの親水性溶媒が挙げられ、これらの溶媒を用いて抽出され、抽出後に活性炭等で精製処理を施してもよい。本発明では抽出した溶媒を含む液状のもの、または溶媒を除いた純分、または純分を溶媒に溶解した液として使用される。本発明で用いる水溶性カシス抽出物の製造例を以下に示す。（１）乾燥カシス（黒フサスグリ）を１０倍量の５０体積％１，３−ブチレングリコール中に浸漬し、１週間放置した後、ろ過を行った。この溶液の蒸発残分を測定し、等量の活性炭を用いて処理し、カシス抽出液を得る。（２）乾燥カシス（黒フサスグリ）を１０倍量の５０体積％エチルアルコール中に浸漬し、１週間放置した後、ろ過を行った。この溶液の蒸発残分を測定し、等量の活性炭を用いて処理し、カシス抽出液を得る。（３）乾燥カシス（黒フサスグリ）を１０倍量の精製水中に浸漬し、１週間放置した後、ろ過、活性炭処理、メンブランフィルター滅菌を行いカシス抽出液を得る。
【００１１】
上記の水溶性のカシス抽出物は、メラニン生成抑制効果以外に、メイラード反応阻害効果、ヒスタミン遊離抑制効果、活性酸素生成抑制効果、過酸化脂質生成抑制効果、特にメイラード反応阻害効果を有するので、皮膚外用剤以外の健康食品、食品、経口を含む医薬品などの種々の用途に利用が期待できる。すなわち、皮膚の老化や皺、老化による皮膚のくすみ、内臓などの老化を予防・改善するメイラード反応阻害剤、アレルギー、かゆみ、炎症を予防・改善するヒスタミン遊離抑制剤、皮膚や内臓などの老化を予防・改善する活性酸素生成抑制剤や過酸化脂質生成抑制剤として使用が可能である。
【００１２】
【実施例】
以下、本発明を具体的に説明する。
【００１３】
（ａ）メイラード反応阻害効果（その１）
（１）カシス抽出液サンプルの作製
カシス（乾燥クロフサスグリ）を１０倍量の５０体積％１，３−ブチレングリコール水溶液中で１週間浸漬した後、ろ過滅菌し試料とした。尚、蒸発残分は３．９質量％であった。
（２）メイラード反応阻害活性の測定方法
試料５０μｌに１００ｍＭリン酸水素ナトリウム２５０μｌ、２Ｍグルコース５０μｌ、４ｍｇ／ｍｌ牛血清アルブミン１００μｌ、水５０μｌを加え、６０℃にて３０時間反応させた。反応終了後４℃で冷却し、攪拌した後、容器に１００μｌとり、ここにトリクロロ酢酸溶液１０μｌ加える。攪拌後、４℃、１５０００ｒｐｍ、４分間の条件で冷却遠心し、上清を吸引除去し、アルカリ性リン酸緩衝液４００μｌで溶解した。２００μｌを蛍光測定用９６穴白色プレートに移し蛍光プレートリーダー励起波長３６０ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍで蛍光を測定した。また、サンプル自体の蛍光の吸収率を測定し、その値を補正してメイラード反応阻害率を求めた。
阻害率としては、１００−［（（試料−ブランク）／（陽性対照ブランク））×１００］−補正値で計算される。
（３）測定結果
表１に結果を示す。本サンプルは良好なメイラード反応阻害活性を示した。
【００１４】
0003643038.tif 000002
【００１５】
（ｂ）メイラード反応阻害効果（その２）
メイラード反応の最終生成物質の１つであるペントシジンの生成抑制活性の測定
（１）カシス抽出液サンプルの作製
カシス（乾燥クロフサスグリ）を１０倍量の５０体積％エタノール水溶液中で１週間浸漬した後、ろ過し（蒸発残分３．６質量％）、蒸発残分と等量の活性炭で処理した。
（２）ペントシジンの生成抑制活性の測定
試料溶液５０μｌに５００ｍＭリボース、５００ｍＭリジン、５００ｍＭアルギニン、１００ｍＭリン酸水素ナトリウム（ｐＨ７．４）、精製水を各９０μｌ加え、６０℃で２４時間保持した。ついで反応溶媒１００μｌに精製水４００μｌを加え、高速液体クロマトグラフィーにてペントシジンの生成抑制活性を測定した。尚、陽性対象としては５０体積％エタノール水溶液を用いた。
（３）測定結果
表２に結果を示す。本サンプルは大変良好なペントシジン生成抑制効果を示した。
【００１６】
0003643038.tif 000003
【００１７】
（ｃ）ヒスタミン遊離抑制効果
久保らの論文（薬学雑誌、１１０、１、１９９０）などに従い、メイラード反応阻害効果の測定における（１）で作製した試料を用いてヒスタミン遊離抑制効果の測定を行った。
［測定結果］
本サンプルのヒスタミン遊離抑制率は４．５％であり、弱いヒスタミン遊離抑制効果を示した。
【００１８】
（ｄ）メラニン生合成抑制効果
培養Ｂ１６マウスメラノーマ細胞のメラニン生成に与える影響を調べた。（美白効果）
（１）カシス抽出液サンプルの作製
カシス（乾燥クロフサスグリ）を１０倍量の５０体積％エタノール水溶液中で１週間浸漬した後、ろ過し、試料を作製した。（蒸発残分３．６質量％）
（２）メラニン生合成抑制効果の測定
常法に基づいて試験を行った。比較対照として５０体積％エタノール水溶液とアルブチンを用い、試験濃度は固形分計算で２５ｐｐｍで実施した。測定は４２０ｎｍの吸光度を使用した。
（３）測定結果
表３に結果を示す。本サンプルは弱い美白効果を示した。また、試験濃度における本サンプルの細胞生育阻害作用は認められなかった。
【００１９】
0003643038.tif 000004
【００２０】
（ｅ）スーパーオキサイドアニオンラジカル抑制効果
キサンチン−キサンチンオキシダーゼ系で発生するスーパーオキサイドアニオンラジカル（活性酸素の一種）の抑制効果を調べた。
（１）カシス抽出液サンプル
試料はメラニン生合成抑制効果の測定で作成したものと同じものを用いた。
（２）スーパーオキサイドアニオンラジカル抑制効果の測定
常法（ＮＢＴ法）に従い、反応液の５６０ｎｍにおける吸光度（Ｏ．Ｄ．）から抑制率を測定した。尚、抑制率の計算方法としては、下記式を用いた。また、対照としては試料の代わりに溶媒を用いたものを使用した。
還元抑制率（％）＝［１−（試料のＯ．Ｄ．値−ブランク（試料）のＯ．Ｄ．値）／（試料のＯ．Ｄ．値−ブランク（対照）のＯ．Ｄ．値）］×１００
（３）測定結果
本サンプルのスーパーオキサイドアニオンラジカルの抑制率は７５％で、高い抑制効果を示していた。
【００２１】
（ｆ）過酸化脂質生成抑制効果
紫外線によるリノレン酸の過酸化に対する抑制効果をＴＢＡ法にて測定した。
（１）カシス抽出液サンプルの作製
試料はメラニン生合成抑制効果の測定で作成したものと同じものを用いた。
（２）過酸化脂質生成抑制効果の測定
０．１％リノレン酸を溶解する０．８％ラウリル硫酸ナトリウム溶液４．９ｍＬを９ｍＬの容器にとり、試料溶液０．１ｍｌを加え、攪拌した後、紫外線を１時間照射した。（尚、照射条件は東芝製ＦＬ２０ＳＥランプとＦＬ２０ＳＢＬランプを距離１５ｃｍで照射した。）この溶液１ｍｌを４．５％ＢＨＴ０．０２ｍｌ入り遠沈管にとり、０．６７％チオバルビツール酸・１５％酢酸水溶液１ｍｌを加え、９５℃で１時間加熱した。冷却後１５％メチルアルコール含有ｎ−ブチルアルコール溶液４ｍｌを加え、よく振った後、２０００ｒｐｍで遠心分離し、ｎ−ブチルアルコール層の５３２ｎｍにおける吸光度を測定し、過酸化脂質量とした。さらに、紫外線を照射しないものを作成し、紫外線照射したものとの差を過酸化脂質生成量とした。過酸化脂質生成抑制率は、試料の代わりに溶媒のみを添加した場合の過酸化脂質生成量を１００とし、試料添加時の過酸化脂質生成量との割合から算出した。
（３）測定結果
本サンプルの過酸化脂質生成抑制は２７％でやや弱い抑制効果を示していた。
【００２２】
【発明の効果】
以上のことから、本発明は、黒スグリ種子油を除く水溶性カシス抽出物がメイラード反応抑制効果、ヒスタミン遊離抑制効果、活性酸素抑制効果、過酸化脂質生成抑制効果を有することは明らかである。