(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
日本人を被験者とし、そのビタミンＤレセプター遺伝子のイントロン８におけるＡｐａＩ  ＲＦＬＰを解析することを特徴とする、ビタミンＤ３製剤による骨粗鬆症または乾癬の治療効果を予測する方法。
【請求項２】
日本人を被験者とし、そのビタミンＤレセプター遺伝子のイントロン８におけるＡｐａＩ  ＲＦＬＰを解析することを特徴とする、アルファカルシドール製剤による骨粗鬆症の治療効果を予測する方法。
【請求項３】
日本人を被験者とし、そのビタミンＤレセプター遺伝子のイントロン８におけるＡｐａＩ  ＲＦＬＰを解析することを特徴とする、タカルシトール製剤による乾癬の治療効果を予測する方法。
【請求項４】
ビタミンＤレセプター遺伝子のイントロン８におけるＡｐａＩ  ＲＦＬＰの解析方法が、制限酵素ＡｐａＩで切断されない遺伝子型Ａおよび同部位において切断される遺伝子型ａとの組合せで決定される遺伝子多型ＡＡ、Ａａ、およびａａのいずれであるかを判定するものである、請求項１から３のいずれかに記載の予測方法。
【請求項５】
ビタミンＤレセプター遺伝子のイントロン８におけるＡｐａＩ  ＲＦＬＰの解析方法が、ＡｐａＩ  ＲＦＬＰ部位より５’−端側に存在する少なくとも１５塩基からなるオリゴヌクレオチドと、３’−端側に存在する少なくとも１５塩基からなるオリゴヌクレオチドとをプライマーとして遺伝子断片を増幅し、それを制限酵素ＡｐａＩで消化し、反応生成物を電気泳動にかけてその泳動像から遺伝子多型を判断するものである、請求項１から４のいずれかに記載の予測方法。
【請求項６】
アルファカルシドール製剤による骨粗鬆症の治療効果を予測する方法であって、遺伝子型Ａａおよびａａを薬剤感受性型、ＡＡを薬剤低感受性型と分類する請求項４または５に記載の予測方法。
【請求項７】
さらに遺伝子型ａａを薬剤高感受性型と分類する請求項６に記載の予測方法。
【請求項８】
タカルシトール製剤による乾癬の治療効果を予測する方法であって、遺伝子型ａａを薬剤高感受性型と分類する請求項４または５に記載の予測方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ビタミンＤレセプターの遺伝子多型を測定することにより、ビタミンＤ３製剤に対する感受性を予測する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、西洋医学においては、疾患や患者の症状に応じて薬の投与がなされていたが、患者個人個人における、薬に対する反応性の違いに関しては“体質”として片付けられ、個人個人の薬剤感受性（薬剤反応性）に応じた薬剤投与をすることは困難であった。
【０００３】
疾患やその治療法がますます複雑になっている現在、治療による薬剤感受性の判定と患者個人個人の体質に応じた適切な薬の投与は、治療を有効に行うためにもますます必要になってきている。
【０００４】
近年、遺伝子解析の進歩に伴い、薬剤に対する個人個人の反応性の違いが、ある遺伝子型によって分類されるという報告がいくつかなされた。
【０００５】
Carmena R.らは、家族性高コレステロール血症患者におけるlovastatin（ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤）の治療効果がアポリポプロテインＥ（ＡｐｏＥ）の遺伝子型によって異なることを報告した（Metabolism Vol. ４２，No. ７，ｐ８９５（１９９３））。
【０００６】
また、Watanabe J. らは、インスリン非依存型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）の高コレステロール血症患者に対するプラバスタチン（ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤）の効果がアポリポプロテインＥ（ＡｐｏＥ）の遺伝子型によって異なることを報告した（Diabetes Res Clin Pract Vol.２０，No. １，ｐ２１（１９９３））。
【０００７】
さらに、Okuguchi F. らも、インスリン非依存型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）の高脂血症患者に対するプラバスタチン（ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤）の効果がアポリポプロテインＥ（ＡｐｏＥ）の遺伝子型によって異なることを報告した（J Jpn Atheroscler Soc Col.２２，No. ３，ｐ１２４（１９９４））。
【０００８】
しかし、ビタミンＤ類薬剤のビタミンＤ内分泌系関与疾患患者に対する治療における薬剤感受性に関する報告はこれまでになされていない。
【０００９】
ビタミンＤ製剤は、現在多くの疾患の治療に用いられている。その作用は大きく２つに分類され、１つはＣａ代謝の調節、そしてもう１つは免疫調節である。
【００１０】
前者に関連する疾患として、骨軟化症、クル症、腎性骨異栄養症、骨粗鬆症等がある。また、後者に関する疾患として乾癬、アトピー、癌、自己免疫疾患等が挙げられる。
【００１１】
しかしながら、現在のところビタミンＤの薬剤を用いて前述の各疾患を治療する際に事前に薬剤感受性を判定する手段は報告されていない。ビタミンＤの治療は長期を要するため、高感受性の患者、低感受性の患者を分類しうれば、無用の治療を避けることができるので、治療前の効果判定は非常に有用である。
【００１２】
ビタミンＤ類に応答する遺伝子の転写調節因子として同定されているビタミンＤ受容体（ビタミンＤレセプター）に関しては、ビタミンＤ類に対する応答能とビタミンＤレセプター遺伝子多型Ｂｓｍ−１との関係が Morrison N. A. らによって報告されている（ＷＯ９４／０３６３３）。上記報告では、ビタミンＤ類（カルシトリオール）に対する応答性を血中オステオカルシンの短期間（〜１２日間）での変化によりみており、ビタミンＤ類を投与すると血中オステオカルシン濃度が高くなるといっている。一方 Morrison N. A. らの報告（Proc. Natl. Acad.Sci. USA ８９，ｐ６６６５（１９９２）及びNature３６７，ｐ２８４（１９９４））によると血中オステオカルシン濃度が高い群が骨密度の低い群になっている。このことは、ビタミンＤ類（カルシトリオール）を投与したときに血中オステオカルシン濃度がより上昇する群が骨密度が高い群であるというＷＯ９４／０３６３３の報告と合わせて考えた場合、以下のような矛盾が生じる。つまり、骨密度の高い群はビタミンＤ類（カルシトリオール）を投与することにより血中オステオカルシン濃度が骨密度の低い群に近づくということになってしまう。このように、真の薬剤治療感受性の判定方法に関しては、不明であった。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】
上記観点から、本発明者らはビタミンＤ類の薬剤感受性を判定することを可能とする最適の遺伝子型多型の分類方式を見出すべく研究し、驚くべきことにＡｐａＩ切断によるＡ−ａ型分類がビタミンＤ類の薬剤感受性の判定に有用であることを見出し、本発明に到達した。
【００１４】
【課題を解決するための手段】
本発明は、日本人を被験者とし、そのビタミンＤレセプター遺伝子のイントロン８におけるＡｐａＩ  ＲＦＬＰを解析することを特徴とする、ビタミンＤ３製剤による骨粗鬆症または乾癬の治療効果を予測する方法である。
【００１５】
また、本発明はビタミンＤレセプター遺伝子のイントロン８におけるＡｐａＩ  ＲＦＬＰ部位を含む遺伝子断片のＰＣＲ増幅に用いることができる、フォワードプライマーおよびリバースプライマーからなるプライマーペアである。
【００１６】
さらに、本発明は上記プライマーペア、耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ、および制限酵素ＡｐａＩを含んでなる遺伝子型測定キットである。
【００１７】
【発明の実施の形態】
本発明は、日本人を被験者とし、そのビタミンＤレセプター遺伝子のイントロン８におけるＡｐａＩ  ＲＦＬＰを解析することを特徴とする、ビタミンＤ３製剤による骨粗鬆症または乾癬の治療効果を予測する方法である。
【００１８】
本発明の対象薬剤および対象疾患の例としては、アルファカルシドール製剤による骨粗鬆症の治療や、タカルシトール製剤による乾癬の治療が挙げられる。
【００１９】
また、ビタミンＤレセプター遺伝子のイントロン８におけるＡｐａＩ  ＲＦＬＰの解析方法としては、制限酵素ＡｐａＩで切断されない遺伝子型をＡ型と、同部位において切断される遺伝子型をａ型とし、それら組合せで決定される遺伝子多型ＡＡ、Ａａ、およびａａのいずれであるかを判定する手法を挙げることができる。
【００２０】
また、ビタミンＤレセプター遺伝子のイントロン８におけるＡｐａＩ  ＲＦＬＰの解析方法の一例としては、ＡｐａＩ  ＲＦＬＰ部位より５’−端側に存在する少なくとも１５塩基からなるオリゴヌクレオチドと、３’−端側に存在する少なくとも１５塩基からなるオリゴヌクレオチドとをプライマーとして遺伝子断片を増幅し、それを制限酵素ＡｐａＩで消化し、反応生成物を電気泳動にかけてその泳動像から遺伝子多型を判断する方法が挙げられる。
【００２１】
ここで、アルファカルシドール製剤による骨粗鬆症の治療効果を予測する場合には、遺伝子型Ａａおよびａａを薬剤感受性型と分類し、ＡＡを薬剤低感受性型と分類する。なかでも遺伝子型ａａが薬剤高感受性型である。
【００２２】
また、タカルシトール製剤による乾癬の治療効果を予測する場合には、遺伝子型ａａを薬剤高感受性型と分類する。
【００２３】
一方、ビタミンＤレセプター遺伝子のイントロン８におけるＡｐａＩ  ＲＦＬＰ部位を含む遺伝子断片のＰＣＲ増幅に用いることができる本発明のプライマーペアは、当該遺伝子の配列は既知であることから、当業者であればＰＣＲに関する技術常識に基づいて容易に設計、調製することができる。
【００２４】
また、本発明の遺伝子型測定キットには、例えば反応緩衝液をさらに含んでいてもよい。
【００２５】
本発明に用いるビタミンＤレセプター（ＶＤＲ）のゲノムＤＮＡは第１２番染色体上にあることがわかっているが、本発明においてはＤＮＡ増幅法を用いるので、第１２番染色体上にあるかどうかは直接発明の実施に関係しない。ＶＤＲゲノムＤＮＡの観察しようとする領域を含む増幅領域の端部に特異的なプライマーを塩基配列のデータから設計することができ、それによりＶＤＲゲノムＤＮＡが第１２番染色体にあるかどうかを知らなくても特異的に増幅できるからである。
【００２６】
ゲノムＤＮＡのエクソン７、エクソン８およびエクソン９の塩基配列は、Andrew R.Baker et. al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol.８５，pp３２９４〜３２９８，May,１９８８で開示されており、エクソン８とエクソン９間のイントロン部にはＢｓｍＩおよびＡｐａＩの切断部位の存在する遺伝子型が存在することが判っている。したがって、該イントロン部のＡｐａＩの制限酵素部位を含有するようなＤＮＡ断片が得られるようにプライマーを形成し、遺伝子増幅を行う。
【００２７】
上記プライマーは少なくとも１５塩基の長さ、好ましくは少なくとも２０塩基の長さのオリゴヌクレオチドである。
【００２８】
ゲノムＤＮＡの遺伝子多型測定を行う生体試料の採取源には特に限定はないが、血球成分が採取しやすく、これで十分である。
【００２９】
以下、本発明における遺伝子多型測定に用いることができる標準的なＤＮＡ抽出操作、遺伝子増幅操作、制限酵素切断操作および電気泳動操作、並びに骨密度の測定法の一例について説明する。
（１）ゲノムＤＮＡを用いた多型分析
（ａ）標準的ＤＮＡ抽出操作
１．全血０．５ｍｌ（２Ｎａ−ＥＤＴＡ抗凝固剤使用）を１．５ｍｌ容のマイクロ遠心管に入れる。
２．溶解液を０．５ｍｌ加えて、チューブを数回軽く、逆さにして液を混ぜる。
（下記の混合操作はこれに従う）
溶解液例：１×ＳＳＣ（１リットル中にＮａＣｌ  １７５．３ｇ、クエン酸ナトリウム８８．２ｇを含む１０Ｍ  ＮａＯＨでｐＨ７．０に調製した２０×ＳＳＣを２０倍に稀釈したもの）
３．遠心（１０，０００ｇ、２０秒、４℃）した後、黒っぽいペレットが流出しないように上清を除く。
４．溶解液を１ｍｌ加えて、マイクロチューブミキサーにて攪拌する（ＭＴ−３６０では、スピード７、３０秒）
５．遠心（１０，０００ｇ、２０秒、４℃）した後、上清を除く。
６．ステップ４〜５を１回繰り返す。
７．酵素反応液２００μｌとタンパク分解酵素１０μｌを加えて混合する。
【００３０】
酵素反応液例：０．０４Ｍ  ＤＴＴ（ジチオスレイトール）、０．２Ｍ  ＮａＯＡｃ（酢酸ナトリウム）および０．４％ＳＤＳの混合液
蛋白分解酵素液例：１０ｍｇ／ｍｌプロティナーゼＫ（Proteinase K）
８．３７℃で１時間保温する（途中２〜３回軽く振り混ぜる）。
９．ヨウ化ナトリウム溶液を３００μｌ加えて混合する。
１０．イソプロピルアルコールを０．５ｍｌ加えて、白い線状のＤＮＡが完全に見えてくるまで混合する。
１１．遠心（１０，０００ｇ、１０分、室温）した後、上清をゆっくり除く。容器を濾紙の上に逆さに置く等の方法で、器壁に残った溶液を充分に除く。
１２．洗浄液（Ａ）を１ｍｌ加えて混合する。沈澱が器壁から剥がれる程度に十分混合する。
【００３１】
洗浄液（Ａ）例：７０％ＥｔＯＨ
１３．遠心（１０，０００ｇ、５分間、室温）後上清を除く。
１４．洗浄液（Ｂ）を１ｍｌ加えて混合する。沈澱が器壁から剥がれる程度に充分混合する。
【００３２】
洗浄液（Ｂ）例：８０％ＥｔＯＨ
１５．遠心（１０，０００ｇ、５分間、室温）後上清を除く。
１６．ＤＮＡ沈澱を軽く減圧乾燥する。（乾燥しすぎるとＤＮＡが溶けにくいので、乾燥時間は３分間以内にする。）
（ｂ）標準的遺伝子増幅操作
遺伝子増幅法についてはいくつかの原理が知られているが、ここではポリメレース・チェイン・リアクション法（ＰＣＲ法）を標準的なものとして記載する。
【００３３】
反応液組成：５０ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ９．０、２５℃）、０．１％  ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、１．５ｍＭ  ＭｇＣｌ2 、０．２ｍＭ  ｄＮＴＰｓ、１５μＭフォワードプライマー（Forward Primer）、１５μＭリバースプライマー（Riverse Primer）、１ｍｇ／ＬゲノムＤＮＡ、１ユニット  ＴａｑＤＮＡポリメラーゼ、全容積５０μｌ
反応サイクル：９４℃、１分；６４℃、１分；７２℃、１分を１サイクルとし、４０サイクル実施。
【００３４】
ＡｐａＩ切断用プライマーとしては、オリゴヌクレオチド（１）としてエクソン７にハイブリダイズする下記プライマーＡ（３０塩基）とオリゴヌクレオチド（２）としてエクソン９にハイブリダイズする下記プライマーＢ（３０塩基）を用いる。
【００３５】
ＡｐａＩ用プライマー：
プライマーＡ：５’−ＣＡＡＣＣＡＡＧＡＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣＣＧＣＧＴＣＡＧＴＧＡ−３’
プライマーＢ：５’−ＡＡＧＧＧＧＴＴＡＧＧＴＴＧＧＡＣＡＧＧＡＧＡＧＡＧＡＡＴＧ−３’
（ｃ）標準的制限酵素切断操作
ＡｐａＩ用反応液組成：１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）：７ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ  ＮａＣｌ、７ｍＭ  ２−メルカプトエタノール、１００μｇ／ｍｌ  ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）
ＡｐａＩを１０ユニット／２０μｌ反応液の濃度で加え、３７℃、３時間インキュベートする。
【００３６】
（ｄ）標準的電気泳動操作
電気泳動用緩衝液は、０．５×ＴＢＥである。但し、５×ＴＢＥは１リットル中Ｔｒｉｓベース５４ｇ、ホウ酸２７．５ｇおよびＥＤＴＡ  １ｍＭを含有し、ｐＨ８．０に調整してある。上記緩衝液を用いて、１％アガロースゲル［Seakem GTA Agarose（FMC Bio Products）使用］（０．５μｇ／ｍｌのエチジウムブロマイド含有）を使用して、電圧１００Ｖで３０分間泳動する。その後ＵＶランプでＤＮＡのバンドを観察する。
【００３７】
プライマーＡ、プライマーＢを用いて増幅したＤＮＡフラグメントをＡｐａＩにより切断した断片の場合、電気泳動により、２．１Ｋｂにバンドが表れる場合を遺伝子型ＡＡ、０．４７Ｋｂと１．６３Ｋｂにバンドが表れる遺伝子型をａａ、３本一緒に表われる場合を遺伝子型Ａａと判定できる。
（２）骨密度の測定方法
骨密度の測定は、ＤＥＸＡ（Dual Energy X-ray Absorptiometry）法に基づいて、腰椎骨について行う。ＤＥＸＡ法に用いる装置として、例えばＤＰＸ−Ｌ［Lunar Rad. Co.（Madison,WI）］を用いて行う。
【００３８】
なおビタミンＤ３製剤としては、以下のものが例示される。
カルシポトリオール（Calcipotriol）
２２−オキサカルシトリオール（oxacalcitriol）
１，２３，２５（ＯＨ）３−２４−オキソＤ３
１α，２５Ｒ，２６（ＯＨ）３−２２−エンＤ３
１α，２５（ＯＨ）２−２０−エピ−２２−オキサ−２４,２６,２７−トリホモ（trihomo）Ｄ３
１α，２５（ＯＨ）２−２２,２４−ジエン−２４,２６,２７−トリホモ（trihomo）Ｄ３１α，２５（ＯＨ）２−１６−エン−２３−インＤ３
２β−（３−ヒドロキシプロポキシ）−１α，２５（ＯＨ）２Ｄ３
１α，２５（ＯＨ）２−２３,２４−ジノル−２２,２５−インター−ｍ−フェニレン−Ｄ３
１α，２５（ＯＨ）２−２２−エン−Ｄ３
１α，２５（ＯＨ）２Ｄ３
１α，２５（ＯＨ）２−２６，２７−Ｆ６−Ｄ３
１α，２５（ＯＨ）２Ｄ３−２４,２４,２４,２６,２６,２６,２７,２７,２７−ｄ８
１α，２３Ｓ，２５（ＯＨ）３Ｄ３
１α，２４Ｒ，２５（ＯＨ）３Ｄ３
２５（ＯＨ）−２３−イン−Ｄ３
２５（ＯＨ）−２６，２７−Ｆ６−２３−イン−Ｄ３
２４Ｒ，２５（ＯＨ）２Ｄ３
２５（ＯＨ）−１６−エン−２３−イン−Ｄ３
２４−ノル−１α，２５（ＯＨ）２Ｄ３
１α，１１β，２５（ＯＨ）３Ｄ３
ビタミンＤ３
２５（ＯＨ）Ｄ３
１α（ＯＨ）Ｄ３
１α，２４Ｓ（ＯＨ）2 −２２−エン−２６，２７−デヒドロ−Ｄ３
９（１１）−デヒドロ−１α，２５（ＯＨ）２Ｄ３
１１β−メトキシ−１α，２５（ＯＨ）２Ｄ３
１α（ＯＨ）２５−オキソ−２６,２７−ジメチル−２５−ホスファ−２６,２７−ジオキサ−Ｄ３
２２（ｍ−ヒドロキシフェニル）−２３,２４,２５,２６,２７−ペンタノル−１α（ＯＨ）Ｄ３
２２−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−２３,２４,２５,２６,２７−ペンタノル−１α（ＯＨ）Ｄ３
２５Ｓ，２６（ＯＨ）２Ｄ３
１α，２５Ｓ，２６（ＯＨ）３Ｄ３
１α，２５（ＯＨ）２−１６−エン−２３−イン−２６，２７−Ｆ６−Ｄ３
２５（ＯＨ）−１６−エン−２３−イン−２６，２７−Ｆ６−Ｄ３
１α，２５（ＯＨ）２−２４ａ−ホモ−Ｄ３
１α，２５（ＯＨ）２−２４ａ−ジホモ−Ｄ３
２２−オキサ−１α，２５（ＯＨ）２Ｄ３
２２（ｍ（ジメチルヒドロキシメチル）フェニル）−ペンタノル−１α(ＯＨ)２Ｄ３
１α，２５（ＯＨ）２−２３−エン−Ｄ３
２５（ＯＨ）−２３−エン−Ｄ３
１α，２５（ＯＨ）２−１６，２３−ジエン−Ｄ３
１４−エピ−１α，２５（ＯＨ）２Ｄ３
１４−エピ−１α，２５（ＯＨ）２プレ−Ｄ３
１β，２５（ＯＨ）２−３−エピ−Ｄ３
１α，２５（ＯＨ）２−３−エピ−Ｄ３
１β，２５（ＯＨ）２Ｄ３
１α，２５（ＯＨ）２−１６−エン−Ｄ３
２５（ＯＨ）−１６−エン−Ｄ３
２５（ＯＨ）−１６，２３−ジエン−Ｄ３
（２２Ｓ）−１α，２５（ＯＨ）２−２２，２３−ジエン−Ｄ３
（２２Ｒ）−１α，２５（ＯＨ）２−２２，２３−ジエン−Ｄ３
１４−エピ−２５（ＯＨ）Ｄ３
１４−エピ−２５（ＯＨ）−プレ−Ｄ３
α−Ｆｅ（ＣＯ）３−２５（ＯＨ）−５，６−トランス−Ｄ３
α−Ｆｅ（ＣＯ）３−２５（ＯＨ）Ｄ３
β−Ｆｅ（ＣＯ）３−２５（ＯＨ）Ｄ３
β−Ｆｅ（ＣＯ）３−２５（ＯＨ）−５，６−トランス−Ｄ３
Ｃｏ2 （ＣＯ）６−１α，２５（ＯＨ）２−６，７−デヒドロ−プレ−Ｄ３
１α，２５（ＯＨ）２−トランス−タキステロール（tachysterol）
１α，２４Ｓ（ＯＨ）２Ｄ３
１α，２４Ｒ（ＯＨ）２Ｄ３
１α，２５Ｓ，２６（ＯＨ）３−２２−エン−Ｄ３
１α，２５（ＯＨ）２−２３−イン−Ｄ３
１α−Ｆ−２５（ＯＨ）−１６−エン−２３−イン−２６，２７−Ｆ６−Ｄ３
【００３９】
【実施例】
［実施例１］
日本人乾癬患者８名について標準的操作法に従い各人の遺伝子を判定した。なお、比較のために制限酵素ＡｐａＩの代わりに制限酵素ＢｓｍＩを用いて、Ｂ−ｂ型分類もおこなった。ＢｓｍＩによる切断操作の反応液組成は５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ（ｐＨ７．９）であり、ＢｓｍＩを５ユニット／２０μ１反応液の濃度で添加し、６５℃で３時間インキュベートする。
【００４０】
該遺伝子型と感受性（高感受性、低感受性）との相関は以下の通りである。
【００４１】
なお薬剤感受性については、乾癬患者の疾患皮膚部位に１，２４Ｒ（ＯＨ）２Ｄ３製剤（ボンアルファ（登録商標）、帝人製、一般名：タカルシトール）を塗布し、著効を示したもの（２週間内で治癒）を高感受性、そうでないものを低感受性とした。
【００４２】
【表１】
0003629298.tif 000002
【００４３】
上記結果はＡ−ａ遺伝子型分類によりビタミンＤ類薬剤に対する低感受性群を特異性１００％、感度８３．３％で予測できることを示す。なお、ＡＡは低感受性であった。
【００４４】
【表２】
0003629298.tif 000003
【００４５】
上記結果はカイ２乗ｐ値からも判定されるようにＢｓｍ遺伝子型分類が有用でないことを示している。
【００４６】
［実施例２］
日本人骨粗鬆症患者２２例において、カルシウム製剤を投与し（２００ｍｇ／日）、１年後の骨密度を初期骨密度と比較し、骨密度が上昇したもの（ＢＭＤ１年後／ＢＭＤ初期＞１）を高感受性、骨密度が下降（ＢＭＤ１年後／ＢＭＤ初期≦１）したものを低感受性とした。同時に、上記患者から採血を行い、各人の遺伝子型を判定した。なお、比較のために制限酵素Ａｐａｌの代わりに制限酵素ＢｓｍＩを用いて、Ｂ−ｂ型分類もおこなった。ＢｓｍＩによる切断操作の反応液組成は５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、  １０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ（ｐＨ７．９）であり、ＢｓｍＩを５ユニット／２０μ１反応液の濃度で添加し、６５℃で３時間インキュベートする。
【００４７】
該遺伝子型と高感受性の割合との相関は以下の通りである。
【００４８】
【表３】
0003629298.tif 000004
【００４９】
上記結果は、Ａ−ａ遺伝子型分類により薬剤感受性を判定するに際し、カルシウム製剤を用いた骨粗鬆症の治療において遺伝型ａが増加するにつれ、高感受性の割合は増加しており、以上の結果から遺伝型ａが高感受性であることを明らかに示している。
【００５０】
なお、Ｂ−ｂ遺伝型分類（ＢＢ、Ｂｂ、ｂｂ）において、高感受性の割合はＢＢでは出現せず、さらにＢｂ、ｂｂでも高感受性の割合は増加しておらず、この結果よりＢｓｍ遺伝子型分類は有用でないことが明らかである。
【００５１】
［実施例３］
無作為に選んだ日本人骨粗鬆症患者３１名を対象として、１α，２５（ＯＨ）２Ｄ３製剤（ワンアルファ（登録商標）、帝人製、一般名：アルファカルシドール）を経口投与（０．５〜１．０μｇ／ｄａｙ）し、３〜６ケ月後の骨密度（ＢＭＤ）を初期の骨密度と比較し、骨密度の変化率（ＢＭＤ（治療後）／ＢＭＤ（治療前））を求めた。また、同時に採血を行い、各人のビタミンＤレセプターのＡｐａＩ遺伝子型を判定した。
【００５２】
なお、比較のため、非投与群３３名についても、骨密度測定、遺伝子型解析を行った。
【００５３】
ＡｐａＩ遺伝子型と、骨密度増加群、減少群の割合との関係を図１に示す。
【００５４】
上記結果は、ビタミンＤレセプターのＡｐａＩ遺伝子分類により、薬剤感受性を判定するに際し、ビタミンＤ類の経口投与による骨粗鬆症治療において、Ａａ型およびａａ型の骨密度上昇群が約７５％であり、ビタミンＤ薬剤感受性群であることを示している（図１）。すなわち、上記遺伝子型の患者の中に高感受性患者の数が多いこと（高頻度）を示している。
【００５５】
また、ビタミンＤレセプターのＡｐａＩ遺伝子分類により、薬剤感受性を判定するに際し、ビタミンＤ類の経口投与による骨粗鬆症治療において、ａａ型の骨密度上昇率が高く、高感受性であることを示している（図２）。これは、感受性の強さについてこの遺伝子型の患者は高いことを示している。
【図面の簡単な説明】
【図１】遺伝子型と高薬剤感受性者の頻度との関係を表す図である。
【図２】遺伝子型と薬剤感受性の程度との関係を表す図である。
【図１】
0003629298.tif 000005
【図２】
0003629298.tif 000006