(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
培地として、ベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）を０．０１〜０．３ｍｇ／Ｌ、あるいはＢＡＰ０．０１〜０．３ｍｇ／Ｌとともにインドール酪酸（ＩＢＡ）を０．００２ｍｇ／Ｌ含有するＢ５培地、又はそのＢ５培地の改変培地を用いて、Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木の茎頂を培養して、定芽及び／不定芽を多数有する多芽体を誘導、増殖させ更に多芽体から大量のシュートを生産し、
次いでシュートを、発根培地として、植物成長調節物質無添加、あるいはＢＡＰ０．０１〜０．３ｍｇ／ＬとともにＩＢＡを０．００２ｍｇ／Ｌを含有するＢ５培地、又はそのＢ５培地の改変培地を用いて、発根培地に移植して発根させ、植物体を再生する、
ことを特徴とするＧｍｅｌｉｎａ属樹木の大量増殖法。
【請求項２】
Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木の苗木あるいは成木から茎頂を用いる請求項１に記載の大量増殖法。
【請求項３】
Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木がＧｍｅｌｉｎａ  ａｒｂｏｒｅａＲｏｘｂである請求項１または２に記載の大量増殖法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木、特にＧｍｅｌｉｎａ属に属するＧｍｅｌｉｎａ  ａｒｂｏｒｅａ  ＲOXB.の組織培養による大量増殖法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木は、世界の熱帯地域（インド、東南アジア）における主要造林木であり、その材は建築材、彫刻材、パルプ、ファイバーボード、合板等に、樹皮、根、果実は薬用として用いられる早生樹である。近年、組織培養技術の発達により、遺伝子資源の保存を目的として、組織培養を用いた優良品種の保存が多くの樹木で行われてきており、Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木においても優良品種の保存等に組織培養技術の利用が期待されている。また、一般に有用老齢木の増殖を試みる際には、挿し木等の既存法を用いることができず、精鋭樹の増殖は困難とされている。
近年、幾つかの研究グループによって、これらの問題点の解決を目的として、Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木における組織培養技術の研究がなされているが、成功例は今日まで２例のみである（Ｊ．Ｃ．Ｙａｎｇ，Ｇ．Ｙ．Ｔｓａｙ，Ｊ．Ｄ．Ｃｈｕｎｇ，Ｚ．Ｚ．Ｃｈｅｎ（１９９２）  Ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎｏｆ  Ｇｍｅｌｉｎａ  ａｒｂｏｒｅａ  Ｒ．，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆｔｈｅ  ＳＡＢＲＡＯ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ２９：２１３−２１８，及びＣｒｉｚａｌｄｏ，Ｅ．Ｎ．（１９８０）Ｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  ｆａｓｔ−ｇｒｏｗｉｎｇ  ｔｒｅｅｓ，Ｓｙｌｖａｔｒｏｐ  ５（２）；１２３−１３７）。
しかしながら、これらの方法は、無菌条件下で発芽させた幼植物体を材料に用いており、フェノール性物質を多く含む成木から採取した材料からの幼植物体の再生及び大量増殖を達成することはできない。したがって、成木からの効率的な培養方法の開発が望まれている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木、特にＧｍｅｌｉｎａ  ａｒｂｏｒｅａ  ＲOXB.のクローン苗の大量生産を可能にする大量増殖法を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木の苗木、あるいは成木を用いて、大量生産を可能にする大量増殖法を開発することを目的として鋭意研究した結果、Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木の茎頂を培養して、多数の定芽及び／又は不定芽を有する多芽体を誘導し、更にこの多芽体を効率よく増殖させることに成功した。特に、多芽体を誘導させるために用いる培地と多芽体を増殖させるために用いる培地に、ベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）、あるいはインドール酢酸（ＩＢＡ）とＢＡＰを添加することにより、効率よく多芽体を誘導し、かつ増殖することができ、かつ増殖させた多芽体から効率よくシュート伸長を促すことができることを見出した。増殖したシュートを植物成長調節物質を添加しない培地、あるいはＢＡＰ、あるいはＢＡＰとＩＢＡを添加した培地で培養することにより、更なるシュート伸長及び発根が可能になることを見出し本発明を完成した。
即ち、本発明は、
Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木の茎頂を培養して、定芽及び／又は不定芽を多数有する多芽体を誘導、増殖させ更に多芽体から大量のシュートを生産し、
次いでシュートを発根培地に移植して発根させ、植物体を再生する、
ことを特徴とするＧｍｅｌｉｎａ属樹木の大量増殖法である。
【０００５】
本発明によれば、Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木の苗木及び成木の茎頂から多芽体を誘導、増殖させ、次いで得られた多芽体からシュートを伸長させ、これを発根させることにより、大量の幼植物体を効率よく生産することができる。
本発明で対象とするＧｍｅｌｉｎａ属としては、より具体的には、Ｇｍｅｌｉｎａ  ａｒｂｏｒｅａ  ＲOXB.を例示することができる。
本発明で用いる培養材料としては、Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木の苗木及び成木から採取した茎頂が用いられる。採取した茎頂は、通常の方法に従って、エタノール及び次亜塩素酸ナトリウム、あるいは過酸化水素水、あるいは塩化水銀（昇汞水）で表面殺菌を行い、滅菌水で洗浄後、培地中で培養する。
培養に用いる基本培地としては、無機成分及び炭素源を必須成分とし、その他植物成長調節物質、ビタミン、アミノ酸を含有する培地が用いられる。無機成分としては、窒素、燐、カリウム、ナトリウム、カルシウム、硫黄、鉄、マンガン、亜鉛、沃素、硼素、モリブデン、塩素、コバルト等の元素を含む無機化合物が用いられる。炭素源としては、炭水化物、例えばしょ糖又はブドウ糖が用いられる。植物成長調節物質としては、オーキシン、サイトカイニンを用いられる。オーキシンとしては、例えば３−インドール酪酸（ＩＢＡ）、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）等が挙げられ、サイトカイニンとしては、例えばベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）、カイネチン、ゼアチン、４−フェニルウレア（４ＰＵ）等が挙げられる。ビタミンとしては、例えばチアミン、ピリドキシン、ニコチン酸等が挙げられる。アミノ酸としては、例えばグリシン、グルタミン酸、リジン等が挙げられる。
【０００６】
実際に培養する際に用いられる培地としては、植物組織培養に用いられる培地、例えばＭＳ培地（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ，Ｔ．（１９６２），Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｌａｎｔ．１５：４７３−４９７）、Ｂ５培地（Ｇａｍｂｏｒｇ，Ｏ．Ｌ．（１９６８），Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．５０：１５１−１５８）、ＷＰ培地（Ｌｌｏｙｄ，Ｇ．（１９８１），Ｉｎｔ．Ｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｐ．Ｓｏｃ．３０：４２１−４２７）、ＢＴＭ培地（Ｃｈａｌｕｐａ，Ｖ．（１９８４）Ｂｉｏｌｏｇｉａ  Ｐｌｎｔ．（ｐｒａｈａ）２６：３７４−３７７）等が挙げられる。特に、Ｂ５培地及びその改変培地が好ましい。定芽、不定芽の誘導及びそれらの成長、多芽体からのシュート伸長を促進するため、ＢＡＰを０．０１〜０．３ｍｇ／ｌ、あるいはＢＡＰ０．０１〜０．３ｍｇ／ｌとＩＢＡを０．００２ｍｇ／ｌ程度含有するＢ５培地又はその改変培地を用いることが好ましい。
【０００７】
次いで、伸長したシュートを分割、あるいは分割せずに発根培地に移植することにより、シュートを更に伸長させ、かつ発根させることができる。
発根培地としては、前記の無機成分及び炭素源、ビタミン、アミノ酸等を含有し、植物成長調節物質無添加、あるいはＢＡＰ０．０１〜０．３ｍｇ／ｌとＩＢＡ０．００２ｍｇ／ｌ程度を含有する培地が好ましい。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明の組織培養によるＧｍｅｌｉｎａ属樹木の大量増殖法の好ましい実施の形態の一つとしては、先ずＧｍｅｌｉｎａ  ａｒｂｏｒｅａ  ＲOXB の成木から茎頂を採取し、ＩＢＡを０．００２ｍｇ／ｌ及びＢＡＰを０．０１〜０．３ｍｇ／ｌ添加した改変Ｂ５培地で培養して、定芽及び／又は不定芽を多数有する多芽体を誘導、増殖させ更に多芽体から大量のシュートを生産させる。次いで得られたシュートを、ＢＡＰ０．０１〜０．３ｍｇ／ｌとＩＢＡ０．０２ｍｇ／ｌ添加した改変Ｂ５培地である発根培地に移植して発根させ、植物体を効率良く再生することができる。
【０００９】
【発明の効果】
本発明によれば、Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木の苗木、あるいは成木から採取した材料から、Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木の無菌幼植物体、苗及び挿し穂を、試験管内で短期間に大量に生産することができ、Ｇｍｅｌｉｎａ属樹木の苗の大量生産の可能性が高くなる。
【００１０】
【実施例】
以下、本発明を実施例により更に詳細に説明する。
Ｇｍｅｌｉｎａ  ａｒｂｏｒｅａ  ＲOXB.苗木（高さ０．２〜０．５ｍ）及び成木（６．０〜１０．０ｍ）から材料を採取した。
（１）材料の殺菌
Ｇｍｅｌｉｎａ  ａｒｂｏｒｅａ  ＲOXB.の苗木及び成木から頂芽を採取し、７０％エタノール中で３０秒、２％次亜塩素酸ナトリウム中で６分間表面殺菌を行い、滅菌水で数回洗浄後、滅菌濾紙上で風乾した。風乾後、光学顕微鏡下で頂芽の外皮を取り除き、茎頂を摘出し、寒天培地で培養した。その結果、苗木、成木から採取した材料の生存率は、苗木から採取した材料の方が若干良好であったが、本発明の方法によれは、苗木、あるいは成木から採取した材料どちらも用いることができた。
表１に、苗木及び成木から採取した茎頂の生存率を比較したデータを示す。
【００１１】
【表１】
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【００１２】
（２）多芽体の誘導、増殖及びシュート伸長
培地としては、改変Ｂ５培地（全培地成分を半分量にしたＢ５培地）にしょ糖２０ｇ／ｌ、ゲルライト３．４ｇ／ｌ及び植物成長調節物質としてＩＢＡを０．００２ｍｇ／ｌ、ＢＡＰを０．０１〜０．３ｍｇ／ｌ添加し、ｐＨを５．７に調整後、殺菌して用いた。培養温度は２６±２℃とし、１日当たり１６時間蛍光灯（３，０００〜５，０００ｌｕｘ）照明とした。培養２〜３ケ月後に多芽体が誘導された。特に、ＩＢＡ０．００２ｍｇ／ｌとＢＡＰ０．０３ｍｇ／ｌを添加することが効果的であり、材料による大きな差は、見られなかった（図１，３）。
（３）発根
（２）で得られた大量のシュートを一本ずつに切り分け、発根培地に移植した。培地には、植物成長調節物質を添加しない改変Ｂ５培地、あるいはＢＡＰ０．０１〜０．３ｍｇ／ｌとＩＢＡを０．００２ｍｇ／ｌ添加した改変Ｂ５培地（前記（２）と同じ）をｐＨ５．７に調整し、殺菌して用いた。培養温度は、２６±２℃とし、１日当たり１６時間蛍光灯（３，０００〜５，０００ｌｕｘ）照明とした。その結果、培養１〜２カ月後には、３３．３％の個体で発根が観察され、同時に３〜１０ｃｍのシュートを伸長、２〜８枚の新葉を展開させることができ、特に、植物成長調節物質を添加しない培地、あるいはＢＡＰ０．０１〜０．０３ｍｇ／ｌｍｇ／ｌとＩＢＡ０．００２ｍｇ／ｌを添加することが効果的であり、材料による大きな差は見られなかった（図２，４）。
【図面の簡単な説明】
【図１】苗木由来の材料を用いた場合の多芽体の誘導におけるＩＢＡとＢＡＰ濃度の影響を示すグラフである。
【図２】苗木由来の材料を用いた場合の発根に対するＩＢＡとＢＡＰの影響を示すグラフである。
【図３】成木由来の材料を用いた場合の多芽体の誘導におけるＩＢＡとＢＡＰ濃度の影響を示すグラフである。
【図４】成木由来の材料を用いた場合の発根に対するＩＢＡとＢＡＰの影響を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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