(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）：
【化１】
0003626366.tif 000009
〔式中、Ｒ1 は水素又は（Ｃ1 −Ｃ6 ）アルキルであり；そして
Ｙは水素、フルオロ、クロロ、トリフルオロメチル、（Ｃ1 −Ｃ6 ）アルコキシ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ及び（Ｃ1 −Ｃ6 ）アルキルから独立して選択された、追加の結合を支持することができるフェニル環のいづれかの炭素原子上の置換基である〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるその塩。
【請求項２】
前記Ｙが水素、フルオロ又はクロロである請求項１記載の化合物。
【請求項３】
前記Ｙが４−フルオロ又は４−クロロである請求項１記載の化合物。
【請求項４】
前記Ｒ1 が水素である請求項１記載の化合物。
【請求項５】
前記Ｒ1 が水素である請求項３記載の化合物。
【請求項６】
前記化合物が、
３−〔〔４−（４−フルオロフェノキシ）ベンゼンスルホニル〕−（１−ヒドロキシ−カルバモイルシクロブチル）アミノ〕プロピオン酸エチルエステル、及び
３−〔〔４−（４−フルオロフェノキシ）ベンゼンスルホニル〕−（１−ヒドロキシ−カルバモイルシクロブチル）アミノ〕プロピオン酸から成る群から選択される請求項１記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、シクロブチル−アリールオキシアリールスルホニルアミノヒドロキサム酸誘導体、及び医薬組成物及び治療方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
本発明の化合物は、亜鉛メタロエンドペプチダーゼ、特に、メチンシン（ｍｅｔｚｉｎｃｉｎ  ）のマトリックスメタロプロティナーゼ（ＭＭＰ又はマトリキシンとも呼ばれる）及びレプロリシン（アダミルシンとしても知られている）サブファミリーに属する酵素類のインヒビターである（Ｒａｗｌｉｎｇｓ，  など．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，  ２４８，  １８３−２２８  （１９９５）  及びＳｔｏｃｋｅｒ，など．，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ４，  ８２３−８４０  （１９９５））。
【０００３】
酵素のＭＭＰサブファミリーは現在、１７種のメンバー（ＭＭＰ−１，ＭＭＰ−２，ＭＭＰ−３，ＭＭＰ−７，ＭＭＰ−８，ＭＭＰ−９，ＭＭＰ−１０，ＭＭＰ−１１，ＭＭＰ−１２，ＭＭＰ−１３，ＭＭＰ−１４，ＭＭＰ−１５，ＭＭＰ−１６，ＭＭＰ−１７，ＭＭＰ−１８，ＭＭＰ−１９，ＭＭＰ−２０）を含む。ＭＭＰは、細胞外マトリックスタンパク質のターンオーバーの調節におけるそれらの役割について最とも良く知られており、そして正常な生理学的過程、たとえば生殖、増殖及び分化においてそれ自体重要な役割を演じる。
【０００４】
さらに、ＭＭＰは、異常な結合組織ターンオーバーが生じる多くの病理学的情況において発現される。たとえば、ＭＭＰ−１３、すなわち分解ＩＩ型コラーゲン（軟骨における主要コラーゲン）での可能性ある活性を有する酵素が、変形性関節症軟骨に過剰発現されることが示されている（Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，  など．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  ９７，  ７６１  （１９９６））。他のＭＭＰ（ＭＭＰ−２，ＭＭＰ−３，ＭＭＰ−８，ＭＭＰ−９，ＭＭＰ１２）はまた、変形性関節症軟骨においても過剰発現され、そしてそれらのＭＭＰのいくつか又はすべての阻害は関節疾患、たとえば変形性関節炎又はリウマチ様関節炎に典型的な軟骨の喪失促進を抑制し又は阻止することが予測される。
【０００５】
哺乳類レプロリシンは、ＡＤＡＭ（ジスインテグリン及びメタロプロティナーゼ）としても知られており（Ｗｏｌｆｂｅｒｇ，  など．，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  １３１，  ２７５−２７８  （１９９５））、そしてメタロプロティナーゼ様ドメインの他にジスインテグリンドメインを含む。今日までに、２３種の異なったＡＤＡＭが同定されている。
【０００６】
腫瘍壊死因子−α転換酵素（ＴＡＣＥ）としても知られているＡＤＡＭ−１７は、最ともよく知られたＡＤＡＭである。ＡＤＡＭ−１７（ＴＡＣＥ）は、細胞結合された腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α、カケクチンとしても知られている）の分解を担当する。ＴＮＦ−αは、多くの感染性疾患及び自己免疫疾患に関与することが認識されている（Ｗ．Ｆｒｉｅｒｓ，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，  ２８５，  １９９  （１９９１））。さらに、ＴＮＦ−αは、敗血症及び敗血性ショックに見られる炎症応答の主要媒介体であることが示されている（Ｓｐｏｏｎｅｒ，など．，  Ｃｌｉａｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｐｏｔｈｏｌｏｇｙ，  ６２  Ｓ１１  （１９９２））。
【０００７】
２種の形のＴＮＦ−α、すなわち相対分子質量２６，０００（２６ｋＤ）のＩＩ型メンブランタンパク質及び特定のタンパク質分解により細胞結合タンパク質から生成される可溶性１７ｋＤ形が存在する。ＴＮＦ−αの可溶性１７ｋＤ形は、細胞から放され、そしてＴＮＦ−αの有害な効果に関係している。ＴＮＦ−αのこの形はまた、合成の部位とは異なる部位でも作用することができる。従って、ＴＡＣＥのインヒビターが、可溶性ＴＮＦ−αの形成を阻害し、そしてその可溶性因子の有害な効果を妨げる。
【０００８】
本発明の選択した化合物は、アグレカナーゼ、すなわち軟骨アグレカンの分解において重要な酵素、の有力なインヒビターである。アグレカナーゼはまた、ＡＤＡＭであるとも思われる。軟骨マトリックスからのアグレカンの損失は、関節疾患、たとえば変形性関節炎及びリウマチ様関節炎の進行における重要な要因であり、そしてアグレカナーゼの阻害は、それらの疾患における軟骨の損失を遅らせ、又は阻止することが予測される。
【０００９】
病理学的情況において発現を示す他のＡＤＡＭは、ＡＤＡＭ  ＴＳ−１（Ｋｕｎｏ，  など．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２７３，  ５５６−５６２  （１９９７））、及びＡＤＡＭ１０，１２及び１５（Ｗｕ，  など．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍ．，  ２３５，  ４３７−４４２  （１９９７））を包含する。ＡＤＡＭの発現、生理学的基質及び疾病関連性の知識が増大するにつれて、この種類の酵素の阻害の役割の十分な有意性が高く評価されるであろう。
【００１０】
ＭＭＰ及び／又はＡＤＡＭの阻害が治療効果を付与するであろう疾病は次のものを包含する：関節炎（たとえば、変形性関節炎及びリウマチ様関節炎）、炎症性腸疾患、クローン病、気腫、急性呼吸困難症候群、ぜん息、慢性閉塞性疾患、アルツハイマー病、器官移植片毒性、悪液質、アレルギー反応、アレルギー性接触過敏症、癌（たとえば固形腫瘍癌、たとえば結腸癌、乳癌、肺癌及び前立腺癌、及び造血悪性、たとえば白血病及びリンパ腫）、組織潰瘍、再狭窄、歯周病、表皮水疱症、骨粗鬆症、人工関節移植片の弛緩、アテローム硬化症（たとえばアテローム硬化性局面破裂）、大動脈瘤（たとえば腹部大動脈瘤及び脳大動脈瘤）、うっ血性心不全、心筋梗塞、発作、大脳虚血、頭外傷、脊髄損傷、神経変性疾患（急性及び慢性）、自己免疫疾患、ハンチントン病、パーキンソン病、片頭痛、うつ病、末梢神経障害、痛み、大脳アミロイド血管障害、ヌートロピック又は認識増強、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、接眼レンズ脈管形成、角膜損傷、黄斑変性、異常創傷治癒、熱傷、糖尿病、腫瘍浸潤、腫瘍増殖、腫瘍転移、角膜瘢痕、強膜炎、ＡＩＤＳ、敗血症、敗血性ショック、及びメタロプロティナーゼ又はＡＤＡＭ発現により特徴づけられる他の疾病。
【００１１】
本発明はまた、哺乳類、特にヒトにおける上記疾病の治療への本発明の化合物の使用方法、及びそれらのために有用な医薬組成物にも関する。
ＭＭＰ及びＡＤＡＭの種々の組合せが、異なった病理学的情況において発現されることが理解される。個々のＡＤＡＭ及び／又はＭＭＰに対して特定の選択性を有するそれ自体のインヒビターが、個々の疾病のために選択され得る。たとえば、リウマチ様関節炎は、過剰ＴＮＦレベル及び関節マトリックス構成成分の損失により特徴づけられる炎症性関節疾患である。この場合、ＴＡＣＥ及びアグレカナーゼ並びにＭＭＰ、たとえばＭＭＰ−１３を阻害する化合物が好ましい治療であり得る。対照的に、低い炎症性の関節疾患、たとえば変形性関節炎においては、マトリックス変性ＭＭＰ、たとえばＭＭＰ−１３（但し、ＴＡＣＥではない）を阻害する化合物が好ましい。
【００１２】
本発明者はまた、異なったメタロプロティナーゼ活性を有するインヒビターを設計することが可能であることも発見した。特に、たとえば、本発明者はＭＭＰ−１よりも優先的にマトリックスメタロプロティナーゼ−１３（ＭＭＰ−１３）を選択的に阻害する分子を設計することができた。
【００１３】
マトリックスメタロプロティナーゼインヒビターは、文献においてよく知られている。特に、１９９６年１０月２４日に公開されたＰＣＴ公開ＷＯ９６／３３１７２号は、ＭＭＰインヒビターとして有用である環状アリールスルホニルアミノヒドロキサム酸に言及している。アメリカ特許第５，６７２，６１５号、ＰＣＴ公開ＷＯ９７／２０８２４号、ＰＣＴ公開ＷＯ９８／０８８２５号、ＰＣＴ公開ＷＯ９８／２７０６９号及びＰＣＴ公開ＷＯ９８／３４９１８号（１９９８年８月１３日に公開された）（“アリールスルホニルヒドロキサム酸誘導体”の標題）は、ＭＭＰインヒビターとして有用である環状ヒドロキサム酸をすべて言及する。それぞれ、１９９６年３月７日及び１９９８年２月２６日に公開されたＰＣＴ公開ＷＯ９６／２７５８３号及びＷＯ９８／０７６９７号は、アリールスルホニルヒドロキサム酸を言及する。１９９８年１月２９日に公開されたＰＣＴ公開ＷＯ９８／０３５１６号は、ＭＭＰ活性を有するホスフィネートを言及する。
【００１４】
“Ｎ−ヒドロキシ−ｂ−スルホニルプロピオンアミド誘導体”と称する、１９９８年８月１３日に公開されたＰＣＴ公開ＷＯ９８／３４９１５号は、有用なＭＭＰインヒビターとしてプロピオニルヒドロキサミドを言及する。“アリールスルホニルアミノヒドロキサム酸誘導体”と称する、１９９８年８月６日に公開されたＰＣＴ公開ＷＯ９８／３３７６８号は、Ｎ−置換されていないアリールスルホニルアミノヒドロキサム酸を言及する。“環状スルホン誘導体”と称する、１９９８年７月１６日に公開されたＰＣＴ公開ＷＯ９８／３０５６６号は、ＭＭＰインヒビターとして環状スルホンヒドロキサム酸に言及する。１９９７年８月８日に出願されたアメリカ特許出願６０／５５２０８号は、ＭＭＰインヒビターとしてビアリールヒドロキサム酸に言及する。
【００１５】
“アリールオキシアリールスルホニルアミノヒドロキサム酸誘導体”と称する、１９９７年８月８日に出願されたアメリカ特許出願６０／５５２０７号は、ＭＭＰインヒビターとしてアリールオキシアリールスルホニルヒドロキサム酸に言及する。“変形性関節炎及び他のＭＭＰ介在疾患の治療のためへのＭＭＰ−１３選択インヒビターの使用”と称する、１９９７年１０月２４日に出願されたアメリカ特許出願６０／６２７６６号は、炎症及び他の疾患を処理するためへのＭＭＰ−１３選択インヒビターの使用に言及する。１９９７年１２月１９日に出願されたアメリカ特許出願６０／６８２６１号は、脈管形成及び他の疾患を処理するためへのＭＭＰインヒビターの使用に言及する。上記に引用された出版物及び出願の個々は、そのすべてを引用により本明細書に組込まれる。
【００１６】
発明の要約
本発明は、下記式（Ｉ）：
【化２】
0003626366.tif 000002
【００１７】
〔式中、Ｒ１  は水素又は（Ｃ１  −Ｃ６  ）アルキルであり；そして
Ｙは水素、フルオロ、クロロ、トリフルオロメチル、（Ｃ１  −Ｃ６  ）アルコキシ、トルフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ及び（Ｃ１  −Ｃ６  ）アルキルから独立して選択された、追加の結合を支持することができるフェニル環のいづれかの炭素原子上の置換基、好ましくは、フェニル環上の１又は２個の置換基（より好ましくは、１つの置換基、最とも好ましくは４−位での１つの置換基）である〕で表わされる化合物、又は医薬的に許容できるその塩に関する。
【００１８】
【発明の実施の形態】
用語“アルキル”とは、本明細書において使用される場合、特にことわらない限り、直鎖、枝分れ、又は環状成分、又はそれらの組合せを有する飽和一価炭化水素基を包含する。
用語“アルコキシ”とは、本明細書において使用される場合、“アルキル”が上記に定義されるＯ−アルキル基を包含する。
【００１９】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容できる酸付加塩にも関する。本発明の前述の塩基性化合物の医薬的に許容できる酸付加塩を調製するために使用される酸は、非毒性酸付加塩、すなわち医薬的に許容できるアニオンを含む塩、たとえば塩酸塩、臭酸塩、ヨウ酸塩、硝酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酸クエン酸塩、酒石酸塩、酒石酸水素塩、琥珀酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、糖酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩及びパモエート〔すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート）〕塩を形成する酸である。
【００２０】
本発明はまた、式（Ｉ）の塩基付加塩にも関する。性質的に酸性である式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容できる塩基塩を調製するための試薬として使用され得る化学的塩基は、そのような化合物と非毒性塩基塩を形成する塩基である。そのような非毒性塩基塩は、そのような薬理学的に許容できるカチオン、たとえばアルカリ金属カチオン（たとえば、カリウム及びナトリウム）及びアルカリ土類金属カチオン（たとえばカルシウム及びマグネシウム）に由来する塩、アンモニウム又は水溶性アミン付加塩、たとえばＮ−メチルグルカミン−（メグルミン）、及び医薬的に許容できる有機アミンの低級アルカノールアンモニウム及び他の塩基塩であるが、但しそれらだけには限定されない。
【００２１】
式（Ｉ）の化合物は、キラル中心を有することができ、そして従って、異なった鏡像異性体形で存在することができる。本発明は、式（Ｉ）の化合物の光学異性体及び立体異性体、及びそれらの混合物に関する。
本発明は、また式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物、及び式（Ｉ）の化合物のプロドラッグを投与することを含んで成る治療又は予防方法を包含する。遊離アミノ、アミド、ヒドロキシ又はカルボキシル基を有する式（Ｉ）の化合物は、プロドラッグに転換され得る。
【００２２】
プロドラッグは、式（Ｉ）の化合物の遊離アミノ、ヒドロキシ又はカルボン酸基にペプチド結合を通して共有結合された、アミノ酸残基、又は複数（たとえば、２，３、又は４個）のアミノ酸残基のポリペプチド鎖を有する化合物を包含する。アミノ酸残基は、３文字の記号により通常示される２０個の天然に存在するアミノ酸を含み、そしてまた、４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリシン、デモシン、イソデモシン、３−メチルヒスチジン、ノルバリン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、シトルリン、ホモシステイン、ホモセリン、オルニチン及びメチオニンスルホンを包含する。プロドラッグはまた、カルボニル炭素プロドラッグ側鎖を通して式（Ｉ）の上記置換基に共有結合された、カーボネート、カルバメート、アミド及びアルキルエステルを含む化合物を包含する。プロドラッグはまた、ヒドロキサム酸及びカルボニル成分が、一緒に取られる場合、下記式：
【００２３】
【化３】
0003626366.tif 000003
【００２４】
〔式中、Ｙは、式（Ｉ）において定義された通りであり、そしてＵ及びＶは独立して、カルボニル、メチレン、ＳＯ２  又はＳＯ３  であり、そしてｂは１〜３の整数であり、ここで個々のメチレン基はヒドロキシにより置換されていてもよい〕で表わされる化合物を形成する式（Ｉ）の化合物を包含する。
式（Ｉ）の好ましい化合物は、Ｙが水素、フルオロ、又はクロロ、好ましくは４−クルオロ又は４−クロロである化合物を包含する。
【００２５】
式（Ｉ）の他の好ましい化合物は、Ｒ１  が水素である化合物を包含する。
式（Ｉ）の特定の好ましい化合物は、次のものを包含する：
３−〔〔４−（４−フルオロフェノキシ）ベンゼンスルホニル〕−（１−ヒドロキシ−カルバモイルシクロブチル）アミノ〕プロピオン酸エチルエステル；及び
３−〔〔４−（４−フルオロフェノキシ）ベンゼンスルホニル〕−（１−ヒドロキシ−カルバモイルシクロブチル）アミノ〕プロピオン酸。
【００２６】
式（Ｉ）の他の化合物は、次のものを包含する：
１−〔（１−ヒドロキシカルバモイルシクロブチル）−（４−フェノキシベンゼンスルホニル）アミノ〕プロピオン酸；
３−〔〔４−（４−クロロフェノキシ）ベンゼンスルホニル〕−（１−ヒドロキシカルバモイルシクロブチル）アミノ〕プロピオン酸；
３−〔（１−ヒドロキシカルバモイルシクロブチル）−（４−フェノキシベンゼンスルホニル）アミノ〕プロピオン酸エチルエステル；及び
３−〔〔４−（４−クロロフェノキシ）ベンゼンスルホニル〕−（１−ヒドロキシカルバモイルシクロブチル）アミノ〕プロピオン酸エチルエステル。
【００２７】
本発明はまた、哺乳類、たとえばヒトにおける、関節炎（たとえば、変形性関節炎及びリウマチ様関節炎）、炎症性腸疾患、クローン病、気腫、慢性閉塞性疾患、アルツハイマー病、器官移植片毒性、悪液質、アレルギー反応、アレルギー性接触過敏症、癌、組織潰瘍、再狭窄、歯周病、表皮水疱症、骨粗鬆症、人工関節移植片の弛緩、アテローム硬化症（たとえばアテローム硬化性局面破裂）、大動脈瘤（たとえば腹部大動脈瘤及び脳大動脈瘤）、うっ血性心不全、心筋梗塞、発作、大脳虚血、頭外傷、脊髄損傷、神経変性疾患（急性及び慢性）、自己免疫疾患、ハンチントン病、パーキンソン病、片頭痛、うつ病、末梢神経障害、痛み、大脳アミロイド血管障害、ヌートロピック又は認識増強、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、接眼レンズ脈管形成、角膜損傷、黄斑変性、異常創傷治癒、熱傷、糖尿病、腫瘍浸潤、腫瘍増殖、腫瘍転移、角膜瘢痕、強膜炎、ＡＩＤＳ、敗血症、敗血性ショック、及びメタロプロティナーゼ活性により特徴づけられる他の疾病、並びに哺乳類レプロリシン活性により特徴づけられる他の疾病から成る群から選択された病状の治療において効果的な量の式（Ｉ）の化合物又は医薬的に許容できるその塩、及び医薬的に許容できるキャリヤーを含んで成る、前記病状の処理のための医薬組成物にも関する。
【００２８】
本発明はまた、有効量の式（Ｉ）の化合物又は医薬的に許容できるその塩を含んで成る、哺乳類、たとえばヒトにおける、（ａ）マトリックスメタロプロティナーゼ又はマトリックス変性に関与する他のメタロプロティナーゼ、又は（ｂ）哺乳類レプロリシン（たとえばアグレカナーゼ又はＡＤＡＭのＴＳ−１，１０，１２，１５及び１７、最とも好ましくはＡＤＡＭ−１７）の阻害のための医薬組成物にも関する。
【００２９】
本発明はまた、哺乳類、たとえばヒトにおける、関節炎（たとえば、変形性関節炎及びリウマチ様関節炎）、炎症性腸疾患、クローン病、気腫、慢性閉塞性疾患、アルツハイマー病、器官移植片毒性、悪液質、アレルギー反応、アレルギー性接触過敏症、癌、組織潰瘍、再狭窄、歯周病、表皮水疱症、骨粗鬆症、人工関節移植片の弛緩、アテローム硬化症（たとえばアテローム硬化性局面破裂）、大動脈瘤（たとえば腹部大動脈瘤及び脳大動脈瘤）、うっ血性心不全、心筋梗塞、発作、大脳虚血、頭外傷、脊髄損傷、神経変性疾患（急性及び慢性）、自己免疫疾患、ハンチントン病、パーキンソン病、片頭痛、うつ病、末梢神経障害、痛み、大脳アミロイド血管障害、ヌートロピック又は認識増強、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、接眼レンズ脈管形成、角膜損傷、黄斑変性、異常創傷治癒、熱傷、糖尿病、腫瘍浸潤、腫瘍増殖、腫瘍転移、角膜瘢痕、強膜炎、ＡＩＤＳ、敗血症、敗血性ショック、及びメタロプロティナーゼ活性により特徴づけられる他の疾病、並びに哺乳類レプロリシン活性により特徴づけられる他の疾病から成る群から選択された病状を治療するために効果的な量の式（Ｉ）の化合物又は医薬的に許容できるその塩を前記哺乳類に投与することを含んで成る、前記病状を処理するための方法にも関する。
【００３０】
本発明はまた、有効量の式（Ｉ）の化合物又は医薬的に許容できるその塩を哺乳類、たとえばヒトに投与することを含んで成る、前記哺乳類における、（ａ）マトリックスメタロプロティナーゼ又はマトリックス変性に関与する他のメタロプロティナーゼ、又は（ｂ）哺乳類レプロリシン（たとえばアグレカナーゼ又はＡＤＡＭのＴＳ−１，１０，１２，１５及び１７、好ましくはＡＤＡＭ−１７）の阻害のための方法にも関する。
【００３１】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物のプロドラッグを含む医薬組成物を包含する。本発明はまた、式（Ｉ）の化合物のプロドラッグを投与することを含んで成る、マトリックスメタロプロティナーゼの阻害又は哺乳類レプロリシンの阻害により治療され又は予防され得る障害の治療又は予防方法も包含する。遊離アミノ、アミド、ヒドロキシ又はカルボキシル基を有する式（Ｉ）の化合物は、プロドラッグに転換され得る。プロドラッグは、式（Ｉ）の化合物の遊離アミノ、ヒドロキシ又はカルボン酸基にペプチド結合を通して共有結合された、アミノ酸残基、又は複数（たとえば、２，３、又は４個）のアミノ酸残基のポリペプチド鎖を有する化合物を包含する。
【００３２】
アミノ酸残基は、３文字の記号により通常示される２０個の天然に存在するアミノ酸を含み、そしてまた、４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリシン、デモシン、イソデモシン、３−メチルヒスチジン、ノルバリン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、シトルリン、ホモシステイン、ホモセリン、オルニチン及びメチオニンスルホンを包含する。プロドラッグはまた、カルボニル炭素プロドラッグ側鎖を通して式（Ｉ）の上記置換基に共有結合された、カーボネート、カルバメート、アミド及びアルキルエステルを含む化合物を包含する。
【００３３】
当業者は、本発明の化合物が種々の疾病の治療において有用であることを高く評価するであろう。当業者はまた、特定の疾病の治療に本発明の化合物を用いる場合、本発明の化合物はその疾病のために使用される種々の存在する治療剤と組合され得ることも高く評価するであろう。
リウマチ様関節炎の処理のためには、本発明の化合物は、剤、たとえばＴＮＦ−αインヒビター、たとえば抗−ＴＮＦモノクローナル抗体及びＴＮＦ受容体免疫グロブリン分子（たとえばＥｎｂｒｅｌ登録商標）、低用量メトトレキセート、レフニミド、ヒドロキシクロロキン、ｄ−ペニシラミン、アウラノフィン又は非経口もしくは経口金と共に組合され得る。
【００３４】
本発明の化合物はまた、変形性関節炎の治療のために存在する治療剤と組合わせても使用され得る。組合せて使用される適切な剤は、標準的非ステロイド抗炎症剤（この後、ＮＳＡＩＤと称す）、たとえばピロキシカム、ジクロフェナク、プロピオン酸類、たとえばナプロキセン、フルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン及びイブプロフェン、フェナメート、たとえばメフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アパゾン、ピラゾロン類、たとえばフェニルブタゾン、サリチル酸類、たとえばアスピリン、ＣＯＸ−２インヒビター、たとえばセレコキシブ及びロフェコキシブ、鎮痛剤及び関節内治療剤、たとえばコルチコステロイド、及びヒアルロン酸、たとえばヒアルガン及びシンビクスを包含する。
【００３５】
本発明の化合物はまた、抗癌剤、たとえばエンドスタチン及びアンジオスタチン又は細胞毒性薬物、たとえばアドリアマイシン、ダウノマイシン、シス−プラチン、エトポシド、タキソール、タキソテレ及びアルカロイド、たとえばビンクリスチン、及び抗代謝物、たとえばメトトレキサートと組合しても使用され得る。
本発明の化合物はまた、心臓血管剤、たとえばカルシウムチャネル遮断薬、脂質低下剤、たとえばスタチン、フィブレート、β−遮断薬、Ａｃｅインヒビター、アンジオテンシン−２受容体アンタゴニスト及び血小板凝集インヒビターと組合せても使用され得る。
【００３６】
本発明の化合物はまた、ＣＮＳ剤、たとえば抗うつ剤（たとえばセルトラリン）、抗−パーキンソン薬剤（たとえばデプレニル、Ｌ−ドーパ、レクィップ（ｒｅｑｕｉｐ）、ミラテックス、ＭＡＯＢインヒビター、たとえばセレジン及びラサギリン、ｃｏｍＰインヒビター、たとえばＴａｓｍａｒ、Ａ−２インヒビター、ドパミン再摂取インヒビター、ＮＭＤＡアンタゴニスト、ニコチンアゴニスト、ドパミンアゴニスト、及び神経酸化窒素シンターゼのインヒビター）、及び抗−アルツハイマー薬剤、たとえばＡｒｉｃｅｐｔ、タクリン、ＣＯＸ−２インヒビター、プロペントフィリン（ｐｒｏｐｅｎｔｏｆｙｌｌｉｎｅ  ）又はメトロフォネートと組合しても使用され得る。
本発明の化合物はまた、骨粗鬆症剤、たとえばドロロキシフェン又はフォソマックス、及び免疫抑制剤、たとえばＦＫ−５０６及びラパマイシンと組合しても使用され得る。
【００３７】
発明の特定の記載
次の反応スキムは、本発明の化合物の調製を示す。特にことわらない限り、反応スキム及び議論におけるＹ及びＲ１  は、上記で定義された通りである。
【００３８】
【化４】
0003626366.tif 000004
【００３９】
【化５】
0003626366.tif 000005
【００４０】
スキム１は、式（Ｉ）の化合物の製造に関する。スキム１を参照すれば、式（Ｉ）の化合物は、Ｒ１６ヒドロキシルアミン保護基（ここで、Ｒ１６はベンゼンである）の除去により式（ＩＩ）の化合物から製造される。ヒドロキシルアミン保護基の除去は、約２０℃〜約２５℃の温度、すなわち室温で、約１〜５時間、好ましくは約３時間、極性溶媒において、硫酸バリウム上パラジウム触媒を用いて、ベンジル保護基の水添分解により実施される。
【００４１】
Ｒ１６がベンジルである式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ  ）の化合物の活性化、続く、ベンジルヒドロキシルアミンとの反応により式（ＩＩＩ  ）の化合物から製造される。式（ＩＩＩ  ）の化合物は、室温で、極性溶媒中で、塩基の存在下での（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートによる処理により活性化される。前記反応は、約１５分〜約４時間、好ましくは約１時間、実施される。
【００４２】
式（ＩＩＩ  ）に由来する活性化された化合物は、ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩との反応により式（ＩＩ）の化合物に現場転換される。そのベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩との反応は、約１時間〜約５日間、好ましくは約１６時間、約４０℃〜約８０℃、好ましくは約６０℃の温度で実施される。適切な塩基は、Ｎ−メチルモルホリン又はジイソプロピルエチルアミン、好ましくはジイソプロピルエチルアミンを包含する。適切な溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド又はＮ−メチルピロリジン−２−オン、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを包含する。
【００４３】
式（ＩＩＩ  ）の化合物は、溶媒、たとえばメタノール又はエタノール中で炭素上パラジウムを用いて、約３０分〜約４８時間、好ましくは１６時間、約２０℃〜約２５℃の温度、すなわち室温で水添分解することによって、Ｒ１６保護基の除去及び側鎖二重結合の還元により、Ｒ１６がベンジルである式（ＩＶ）の化合物から製造される。
【００４４】
Ｒ１６がベンジルである式（ＩＶ）のアリールスルホニルアミノ化合物は、塩基、たとえば炭酸カリウム、炭酸セシウム、カリウムヘキサメチルジシルアジド、水素化ナトリウム又はテトラブチルアンモニウムフルオリド、好ましくは炭酸セシウムの存在下で、式ＨＣ≡Ｃ−ＣＯ２  Ｒ１  （ここでＲ１  は（Ｃ１  −Ｃ６  ）アルキルである）の化合物との反応により、式（Ｖ）のその対応する化合物から製造される。その反応は、極性溶媒、たとえばジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリジン−２−オン又はｔ−ブタノールにおいて、室温で、約２〜４８時間、好ましくは約１８時間、撹拌される。
【００４５】
Ｒ１６がベンジルである式（Ｖ）の化合物は、塩基、たとえばトリエチルアミン、及び極性溶媒、たとえばテトラヒドロフラン、１，２−ジメトキシエタン、ジメチルホルムアミド、ジオキサン、水又はアセトニトリル、好ましくはジエチルホルムアミドの存在下で、下記式（ＩＸ）：
【００４６】
【化６】
0003626366.tif 000006
【００４７】
で表わされるアリールスルホン酸化合物の反応的機能誘導体との反応により、式（ＶＩ）のその対応する化合物から製造される。その反応混合物は、室温で、約１０分〜約２４時間、好ましくは約６０分間、撹拌される。
式（ＶＩ）の化合物は、極性溶媒、たとえばＤＭＦ中で、室温で、金属アジ化物、たとえばアジ化ナトリウムによる処理、続いて、そのようにして形成された式（ＶＩＩ  ）の中間体アジ化物の、少なくとも１当量の鉱酸、たとえば塩酸を含むアルコール溶媒中でのパラジウム上での水添分解による還元により、式（ＶＩＩＩ）の化合物から製造され得る。式（ＶＩ）のＲ１６基は、１当量のｐ−トルエンスルホン酸の存在下で、トルエン中、過剰量の所望するＲ１６ＯＨアルコールと共に式（ＶＩ）の化合物を還流することによって他のＲ１６基に転換され得る。
式（ＶＩＩＩ）及び（ＩＸ）の化合物は、市販されており、又は当業者によく知られている方法により製造され得る。
【００４８】
本発明の酸性化合物の医薬的に許容できる塩は、塩基により形成される塩、すなわちカチオン性塩、たとえばアルカリ及びアルカリ土類塩、たとえばナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、及びアンモニウム塩、たとえばアンモニウム、トリメチル−アンモニウム、ジエチルアンモニウム及びトリス−（ヒドロキシメチル）−メチルアンモニウム塩である。
同様に、酸付加塩、たとえば鉱酸、有機カルボン酸及び有機スルホン酸、たとえば塩酸、メタンスルホン酸、マレイン酸の酸付加塩はまた、塩基性基、たとえばピリジル、すなわち構造体の構成成分部分により提供される。
【００４９】
性質的に塩基性である式Ｉの化合物は、種々の無機及び有機酸と広範囲の種類の異なった塩を形成することができる。そのような塩は動物への投与のために医薬的に許容できるべきではあるが、医薬的に許容できない塩として反応混合物から式（Ｉ）の化合物をまず単離し、そして次に、アルカリ試薬による処理により遊離塩基化合物に前記後者を単純に転換し、そしてその後、前記遊離塩基を医薬的に許容できる酸付加塩に転換することが、実際問題としてしばしば所望される。本発明の塩基性化合物の酸付加塩は、水性溶媒における、又は適切な有機溶媒、たとえばメタノール又はエタノール中実質的に等量の選択された鉱又は有機酸により塩基性化合物を処理することによって容易に調製される。溶媒の注意しての蒸発に基づいて、所望する固体塩が得られる。
【００５０】
本発明の塩基性化合物の医薬的に許容できる酸付加塩を製造するために使用される酸は、非毒性酸付加塩、すなわち薬理学的に許容できるアニオンを含む塩、たとえば塩酸塩、臭酸塩、ヨウ酸塩、硝酸塩、硫酸塩又は硫酸水素塩、リン酸塩又は酸リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩又は酸クエン酸塩、酒石酸又は酒石酸水素塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、糖酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、及びパモ酸塩〔すなわち、１，１’−メチレン−ビス（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート）〕塩を形成する酸である。
【００５１】
天然においてまた酸性である、たとえばＲ３  が水素である式（Ｉ）のそれらの化合物は、種々の薬理学的に許容できるカチオンと共に塩基性塩を形成することができる。そのような塩の例は、アルカリ金属又はアルカリ土類金属塩及び特に、ナトリウム及びカリウム塩を包含する。それらの塩は従来の技法によりすべて調製される。本発明の医薬的に許容できる塩基性塩を調製するための試薬として使用される化学塩基は、本明細書に記載される式（Ｉ）の酸性化合物により非毒性塩基性塩を形成する塩基である。
【００５２】
それらの非毒性塩基性塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウム、等のような薬理学的に許容できるカチオンに由来する塩を包含する。それらの塩は、所望する薬理学的に許容できるカチオンを含む水溶液によりその対応する酸性化合物を処理し、そして次に、その得られる溶液を、好ましくは減圧下で蒸発乾燥せしめることによって容易に調製され得る。他方では、それらはまた、酸性化合物及び所望するアルカリ金属アルコキシドの低級アルコール溶液を一緒に混合し、そして次に、その得られる溶液を、前記と同じ態様で蒸発乾燥せしめることによっても調製され得る。いづれの場合でも、計算量の試薬が、反応の完全性及び最大の生成物収率を確保するために好ましくは使用される。
【００５３】
マトリックスメタロプロティナーゼ、好ましくは２，９又は１３、最とも好ましくはＭＭＰ−１３を阻害し、そして続いて、マトリックスメタロプロティナーゼ阻害により特徴づけられる疾病を治療するためにそれらの有効性を示す、式（Ｉ）の化合物又はそれらの医薬的に許容できる塩（この後また、本発明のＭＭＰ−１３選択化合物として言及される）の能力が、次のインビトロアッセイ試験により示される。
【００５４】
生物学的アッセイ
ヒトコラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）の阻害
ヒト組換えコラゲナーゼを次の割合でトリプシンにより活性化する：１０μｇのトリプシン／１００μｇのコラゲナーゼ。前記トリプシン及びコラゲナーゼを、室温１０分間インキュベートし、次に、５倍過剰（５０μｇ／１０μｇトリプシン）量の大豆トリプシンインヒビターを添加する。
【００５５】
インヒビターの１０ｍＭの原液を、ジメチルスルホキシドにおいて製造し、そして次に次のスキムを用いて希釈する：
１０ｍＭ→１２０μＭ→１２μＭ→１．２μＭ→０．１２μＭ。
次に、個々の濃度の希釈溶液２５μｌを、９６ウェルマイクロフルオレプレートの適切なウェルに三重反復して添加する。インヒビターの最終濃度は、酵素及び基質の添加の後、１：４の希釈度であろう。陽性対照（酵素；インヒビターを含まない）をウェルＤ１−Ｄ６に設定し、そしてブランク（酵素を含まない；インヒビターを含まない）をウェルＤ７−Ｄ１２に設定する。
【００５６】
コラゲナーゼを４００ｎｇ／ｍｌに希釈し、そして次に、２５ｍｌをマイクロフルオレプレートの適切なウェルに添加する。アッセイにおけるコラゲナーゼの最終濃度は、１００ｎｇ／ｍｌである。
基質（ＤＮＰ−Ｐｒｏ−Ｃｈａ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｍｅ）−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＮＭＡ）−ＮＨ２）  を、ジメチルスルホキシド中５ｍＭの原液として製造し、そして次に、アッセイ緩衝液により２０ｍＭに希釈する。このアッセイを、１０μＭの最終濃を付与するためにマイクロフルオレプレートのウェル当たり５０μｌの基質の添加により開始する。
螢光読取り（３６０ｎｍの励起、４６０ｎｍの発光）を時間０で取り、そして次に、２０分間隔で取った。アッセイは、３時間の典型的アッセイ時間、室温で実施される。
【００５７】
次に、螢光対時間を、ブランク、及びコラーゲン含有サンプルの両者に関してプロットする（三重反復測定からのデータが平均される）。良好なシグナルを提供し（ブランク）、そして曲線の直線部分上に存在する（通常、１２０分当たり）時点を選択し、ＩＣ５０値を測定する。ゼロ点を、個々の濃度での個々の化合物についてのブランクとして使用し、そしてそれらの値を、１２０分のデータから引き算する。データを、インヒビター濃度対％対照（インヒビターの螢光／コラーゲンのみの螢光×１００）としてプロットする。ＩＣ５０を、対照の５０％であるシグナルを付与するインヒビターの濃度から測定する。
ＩＣ５０が＜０．０３であることが報告される場合、インヒビターは、０．３μＭ、０．０３μＭ、０．００３μＭ及び０．０００３μＭの濃度でアッセイされる。
【００５８】
ＭＭＰ−１３のインヒビター
ヒト組換えＭＭＰ−１３を、２ｍＭのＡＰＭＡ（ｐ−アミノフェニル酢酸第二水銀）により３７℃で１．５時間、活性化し、そしてアッセイ緩衝液（５０ｍＭのトリス、ｐＨ７．５、２００μＭの塩化ナトリウム、５ｍＭの塩化カルシウム、２０μＭの塩化亜鉛、０．０２％のｂｒｉｊ）により４００μｇ／ｍｌに希釈する。希釈された酵素２５μｌを、９６ウェルのマイクロフルオレプレートのウェル当たりに添加する。次に、酵素を、１００ｍｇ／ｍｌのアッセイにおける最終濃度を付与するために、インヒビター及び基質の添加により１：４の比で希釈する。
【００５９】
インヒビターの１０ｍＭ原液を、ジメチルスルホキシドにおいて製造し、そして次に、ヒトコラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）の阻害のためにインヒビター希釈スキムによりアッセイ緩衝液に希釈し；個々の濃度の希釈溶液２５μｌをマイクロフルオレプレートに三重反復して添加する。アッセイにおけるその最終濃度は、３０μＭ，３μＭ，０．３μＭ及び０．０３μＭである。
基質（Ｄｎｐ−Ｐｒｏ−Ｃｈａ−Ｇｌｙ−Ｇｙｓ（Ｍｅ）−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＮＭＡ）−ＮＨ２）  を、ヒトコラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）の阻害のために調製し、そしてその５０ｍｌを個々のウェルに添加し、１０μＭの最終アッセイ濃度を付与する。螢光読取り（３６０ｎｍの励起；４５０ｎｍの発光）を、時間０で、及び１時間、５分ごとに取る。
【００６０】
陽性対照は、酵素及び基質から成り、そしてインヒビターを含まず、そしてブランクは基質のみから成る。
ＩＣ５０を、ヒトコラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）の阻害により測定する。ＩＣ５０が０．０３μＭよりも低いことが報告される場合、インヒビターを、０．３μＭ，０．０３μＭ，０．００３μＭ及び０．０００３μＭの最終濃度でアッセイする。
【００６１】
本発明の化合物は、マトリックスメタロプロティナーゼ１（コラゲナーゼ１）に比較して、マトリックスメタロプロティナーゼ−１３（コラゲナーゼ３）に対して驚くべき選択的活性を有する。特に、式（Ｉ）の化合物は、マトリックスメタロプロティナーゼ−１（コラゲナーゼ１）よりもマトリックスメタロプロティナーゼ−１３（コラゲナーゼ３）に対して１００倍以上、選択的であり得、そしてマトリックスメタロプロティナーゼ−１３（コラゲナーゼ３）に対して１０ｎＭ以下のＩＣ５０を有する。表１は、本発明の化合物がＭＭＰ−１３阻害に対して予測できない選択性を有することを示す。
【００６２】
【表１】
0003626366.tif 000007
【００６３】
ゲラチナーゼ（ＭＭＰ−２）の阻害
ヒト組換えの７２ｋＤゲラチナーゼ（ＭＭＰ−２、ゲラチナーゼＡ）を、１ｍＭのｐ−アミノフェニル−酢酸第２水銀（０．２ＮのＮａＯＨ中、新しく調製された１００ｍＭの原液からの）により、４℃で１６〜１８時間、軽く揺り動かしながら活性化する。
インヒビターの１０ｍＭのジメチルスルホキシド原液を、次のスキムを用いて、アッセイ緩衝液（５０ｍＭのトリス、ｐＨ７．５、２００ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ２  、２０μＭのＺｎＣｌ２  及び０．０２％のＢＲＩＪ−３５（体積／体積））に連続的に希釈する：
１０ｍＭ→１２０μＭ→１２μＭ→１．２μＭ→０．１２μＭ。
【００６４】
さらなる希釈は、必要な場合、この同じスキムに従って行なわれる。個々の化合物について最少４種のインヒビター濃度を、個々のアッセイにおいて用いる。次に、個々の濃度の原液２５μｌを、黒の９６ウェルＵ−底マイクロフルオレプレートのウェルに三重反復して添加する。最終アッセイ体積が１００μｌである場合、インヒビターの最終濃度は、さらなる１：４希釈度（すなわち３０μＭ→３μＭ→０．３μＭ→０．０３μＭ、等）の結果である。ブランク（酵素を含まない；インヒビターを含まない）及び陽性酵素対照（酵素を含む；インヒビターを含まない）をまた、三重反復して調製する。
【００６５】
活性化された酵素をアッセイ緩衝液において１００ｎｇ／ｍｌに希釈し、ウェル当たり２５μｌをマイクロプレートの適切なウェルに添加する。アッセイにおける最終酵素濃度は２５ｎｇ／ｍｌ（０．３×ｎＭ）である。
基質（Ｍｃａ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｄｐａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−ＮＨ２）の３ｍＭのジメチルスルホキシド原液を、アッセイ緩衝液に希釈し、２０μＭにする。アッセイを、５０μｌの希釈された基質の添加により開始し、１０μＭの基質の最終アッセイ濃度を得る。時間ゼロで、螢光読取り（３２０ｎｍの励起；３９０ｎｍの発光）をすぐに取り、そして続く読取りを、９０単位での増加を有するＰｅｒ  Ｓｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｙｔｏ  Ｆｌｕｏｒ  Ｍｕｌｔｉ−Ｗｅｌｌ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ  により室温で１５分ごとに行なう。
【００６６】
酵素及びブランクの螢光の平均値を、時間に対してプロットする。この曲線の直線部分上の初期時点を、ＩＣ５０測定のために選択する。個々の希釈度での個々の化合物についてのゼロ時点を後の時点から引き算し、そして次に、データを酵素対照の％として表わす（インヒビター螢光／陽性酵素対照の螢光×１００）。データを、インヒビター濃度対酵素対照の％としてプロットする。ＩＣ５０は、陽性酵素対照の５０％であるシグナルを付与するインヒビターの濃度として定義される。
【００６７】
ストロメリシン活性（ＭＭＰ−３）の阻害
ヒト組換えストロメリシン（ＭＭＰ−３、ストロメリシン−１）を、２ｍＭのｐ−アミノフェニル−酢酸第２水銀（０．２ＮのＮａＯＨ中、新しく調製された１００ｍＭの原液からの）により、３７℃で２０〜２２時間、活性化する。
インヒビターの１０ｍＭのジメチルスルホキシド原液を、次のスキムを用いて、アッセイ緩衝液（５０ｍＭのトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＣａＣｌ２  、及び０．０５％のＢＲＩＪ−３５（体積／体積）に連続的に希釈する：
１０ｍＭ→１２０μＭ→１２μＭ→１．２μＭ→０．１２μＭ。
【００６８】
さらなる希釈は、必要な場合、この同じスキムに従って行なわれる。個々の化合物についで最少４種のインヒビター濃度を、個々のアッセイにおいて用いる。次に、個々の濃度の原液２５μｌを、黒の９６ウェルＵ−底マイクロフルオレプレートのウェルに三重反復して添加する。最終アッセイ体積が１００μｌである場合、インヒビターの最終濃度は、さらなる１：４希釈度（すなわち３０μＭ→３μＭ→０．３μＭ→０．０３μＭ、等）の結果である。ブランク（酵素を含まない；インヒビターを含まない）及び陽性酵素対照（酵素を含む；インヒビターを含まない）をまた、三重反復して調製する。
【００６９】
活性化された酵素をアッセイ緩衝液において２００ｎｇ／ｍｌに希釈し、ウェル当たり２５μｌをマイクロプレートの適切なウェルに添加する。アッセイにおける最終酵素濃度は５０ｎｇ／ｍｌ（０．８７５ｎＭ）である。
基質（Ｍｃａ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｎｖａ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ（Ｄｎｐ）−ＮＨ２）  の１０ｍＭのジメチルスルホキシド原液を、アッセイ緩衝液に希釈し、６μＭにする。アッセイを、５０μｌの希釈された基質の添加により開始し、３μＭの基質の最終アッセイ濃度を得る。時間ゼロで、螢光読取り（３２０ｎｍの励起；３９０ｎｍの発光）をすぐに取り、そして続く読取りを、９０単位での増加を有するＰｅｒ  Ｓｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｙｔｏ  Ｆｌｕｏｒ  Ｍｕｌｔｉ−Ｗｅｌｌ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ  により室温で１５分ごとに行なう。
【００７０】
酵素及びブランクの螢光の平均値を、時間に対してプロットする。この曲線の直線部分上の初期時点を、ＩＣ５０測定のために選択する。個々の希釈度での個々の化合物についてのゼロ時点を後の時点から引き算し、そして次に、データを酵素対照の％として表わす（インヒビター螢光／陽性酵素対照の螢光×１００）。データを、インヒビター濃度対酵素対照の％としてプロットする。ＩＣ５０は、陽性酵素対照の５０％であるシグナルを付与するインヒビターの濃度として定義される。
他方では、ストロメルシン活性の阻害は、ヒトコラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）の阻害におけるのと類似する条件下で、Ｍｃａ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｎｖａ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ（Ｄｎｐ）−ＮＨ２（３μＭ）を用いてアッセイされ得る。
【００７１】
ヒトストロメルシンを、２ｍＭのＡＰＭＡ（ｐ−アミノフェニル酢酸第二水銀）により３７℃で２０〜２４時間、活性化し、そして５０ｎｇ／ｍｌのアッセイにおける最終濃度を得るために希釈する。インヒビターをヒトコラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）に関して希釈し、３０μＭ，３μＭ，０．３μＭ及び０．０３μＭのアッセイにおける最終濃度を付与する。
【００７２】
螢光読取り（３２０ｎｍでの励起；３９０ｎｍでの発光）をゼロ時で取り、そして次に、１５分間隔で３時間、取る。
ＩＣ５０を、ヒトコラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）の阻害により測定する。ＩＣ５０が０．０３μＭ以下であることが報告される場合、インヒビターは０．０３μＭ，０．００３μＭ，０．０００３μＭ及び０．００００３μＭの最終濃度でアッセイされる。
ＩＣ５０値を、コラゲナーゼについてと同じ態様で測定した。
【００７３】
ＴＮＦ生成の阻害
ＴＮＦの生成を阻害し、そして続いて、ＴＮＦの生成に関与する疾病を処理するためにそれらの有効性を示す、本発明の化合物又は医薬的に許容できるその塩の能力を、次のインビトロアッセイにより示す：
ヒト単核細胞を、一段階Ｆｉｃｏｌｌ−ｈｙｐａｑｕｅ分離技法を用いて、抗−凝集されたヒト血液から単離した。単核細胞を、二価のカチオンを有するハンクス液（ＨＢＳＳ）により３度洗浄し、そして１％  ＢＳＡを含むＨＢＳＳにおいて２×１０６  ／ｍｌの密度に再懸濁した。Ａｂｂｏｔｔ  Ｃｅｌｌ  Ｄｙｎ３５００  分析機を用いて測定された示差計数は、単球がそれらの調製物において合計細胞の１７〜２４％の範囲であることを示した。
【００７４】
細胞懸濁液１８０μｌを、平底９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）中に等分した。化合物及びＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌの最終濃度）の添加は、２００μｌの最終体積を付与した。すべての条件は、三重反復して実施された。湿潤されたＣＯ２  インキュベーターにおける３７℃での４時間のインキュベーションの後、プレートを除き、そして遠心分離し（約２５０×ｇで１０分間）、そして上清液を除き、そしてＲ＆Ｄ  ＥＬＩＳＡキットを用いてＴＮＦ−αについてアッセイした。
【００７５】
可溶性ＴＮＦ−α生成の阻害
ＴＮＦ−αの細胞開放性を阻害し、そして続いて、可溶性ＴＮＦ−αの無調節に関与する疾病を処理するためにそれらの有効性を示す、本発明の化合物又は医薬的に許容できるその塩の能力を、次のインビトロアッセイにより示す：
【００７６】
組換えＴＮＦ−α転換酵素活性の評価のための方法
組換えＴＡＣＥの発現
ＴＡＣＥのシグナル配列、プレプロドメイン、プロドメイン及び触媒ドメインをコードするＤＮＡフラグメント（アミノ酸１〜４７３）は、鋳型としてヒト肺ｃＤＮＡライブラリーを用いてポリメラーゼ鎖反応により増幅され得る。次に、増幅されたフラグメントを、ｐＦａｓｔ  Ｂａｃベクター中にクローン化する。挿入体のＤＮＡ配列を、両鎖のために確かめる。Ｅ．コリＤＨ１０ＢａｃにおけるｐＦａｓｔ  Ｂａｃを用いて調製されたバクミド（ｂａｃｍｉｄ）をＳＦ９昆虫細胞中にトランスフェクトする。次に、ウィルス粒子を、Ｐ１，Ｐ２，Ｐ３段階に増幅する。Ｐ３ウィルスを、Ｓｆ９及び高い５種の昆虫細胞中に感染し、そして２７℃で４８時間、増殖する。培地を集め、そしてアッセイ及びさらなる精製のために使用する。
【００７７】
螢光消光基質の調製
モデルペプチド用ＴＮＦ−α基質（ＬＹ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（ＣＴＭＲ）−Ａｒｇ（ＬＹ＝ルシファーイエロー；ＣＴＭＲ＝カルボキシテトラメチルロダミン））を調製し、そして濃度を、Ｇｅｏｇｈｅｇａｎ，  ＫＦ．“Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ  ａｎ  ｕｎｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｔｏ  ａｎ  ｅｎｅｒｇｙ−ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｆｏｒ  ａ  ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，”Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  ７，  ３８５−３９１  （１９９５）  の方法に従って、５０ｎｍ（Ｅ５６０  ；６０，０００Ｍ−１ＣＭ−１）での吸光度により評価する。このペプチドは、ＴＡＣＥによりインビボで切断されるプロ−ＴＮＦ上に切断部位を包含する。
【００７８】
組換えＴＡＣＥの発現
ＴＡＣＥのシグナル配列、プレプロドメイン、プロドメイン及び触媒ドメインをコードするＤＮＡフラグメント（アミノ酸１〜４７３）は、鋳型としてヒト肺ｃＤＮＡライブラリーを用いてポリメラーゼ鎖反応により増幅され得る。次に、増幅されたフラグメントを、ｐＦａｓｔ  Ｂａｃベクター中にクローン化する。挿入体のＤＮＡ配列を、両鎖のために確かめる。Ｅ．コリＤＨ１０ＢａｃにおけるｐＦａｓｔ  Ｂａｃを用いて調製されたバクミド（ｂａｃｍｉｄ）をＳＦ９昆虫細胞中にトランスフェクトする。次に、ウィルス粒子を、Ｐ１，Ｐ２，Ｐ３段階に増幅する。Ｐ３ウィルスを、Ｓｆ９及び高い５種の昆虫細胞中に感染し、そして２７℃で４８時間、増殖する。培地を集め、そしてアッセイ及びさらなる精製のために使用する。
【００７９】
酵素反応
９６ウェルプレート（Ｄｙｎａｔｅｃｋ）において実施される反応は、７０μｌの緩衝溶液（２５ｍＭのＨｅｐｅｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５、及び２０μＭのＺｎＣｌ２  ）、１００μＭの螢光消光された基質１０μｌ、試験化合物のＤＭＳＯ（５％）溶液１０μｌ、及び合計体積１００μｌにおいて、６０分で５０％の切断を引き起こすであろう量のγ−ＴＡＣＥ酵素から成る。アラニンとバリンとの間のアミド結合での酵素切断特異性を、ＨＰＬＣ及び質量分光計により証かめる。切断の初期速度を、５３０ｎｍ（４０９ｎｍでの励起）での螢光の上昇速度を３０分間にわたって測定することによってモニターする。この実験は、１）基質のバックグラウンド螢光のために；２）十分に切断された基質の螢光のために；３）試験化合物を含む溶液からの螢光の消光又は増強のために調節される。
【００８０】
データは次の通りにして分析される。非−試験化合物含有“対照”反応からの速度が、１００％の値を確立するために平均化された。試験化合物の存在下での反応速度を、化合物の不在下での反応速度に比較し、そして“非−試験化合物含有対照の％”として表にした。結果は、“対照の％”対化合物濃度の対数としてプロットされ、そして最大点の半分又はＩＣ５０値を決定する。
本発明のすべての化合物は、１μＭよりも低い、好ましくは５０ｎＭよりも低いＩＣ５０を有する。本発明の最とも好ましい化合物は、上記ＴＡＣＥアッセイにおいてよりもγ−ＭＭＰ−１に対して少なくとも１００倍、効果的である。
【００８１】
ヒト単球アッセイ
ヒト単核細胞を、一段階Ｆｉｃｏｌｌ−ｈｙｐａｇｕｅ分離技法を用いて、抗−凝集されたヒト血液から単離した。単核細胞を、二価のカチオンを有するハンクス液（ＨＢＳＳ）により３度洗浄し、そして１％ＢＳＡを含むＨＢＳＳにおいて２×１０６  ／ｍｌの密度に再懸濁した。Ａｂｂｏｔｔ  Ｃｅｌｌ  Ｄｙｎ３５００  分析機を用いて測定された示差計数は、単球がそれらの調製物において合計細胞の１７〜２４％の範囲であることを示した。
【００８２】
細胞懸濁液１８０μｌを、平底９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）中に等分した。化合物及びＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌの最終濃度）の添加は、２００μｌの最終体積を付与した。すべての条件は、三重反復して実施された。湿潤されたＣＯ２  インキュベーターにおける３７℃での４時間のインキュベーションの後、プレートを除き、そして遠心分離し（約２５０×ｇで１０分間）、そして上清液を除き、そしてＲ＆Ｄ  ＥＬＩＳＡキットを用いてＴＮＦ−αについてアッセイした。
【００８３】
アグレカナーゼアッセイ
関節軟骨からのブタ一次軟骨細胞を、連続的なトリプシン及びコラゲナーゼ消化、続く一晩のコラゲナーゼ消化により単離し、そしてタイプＩコラーゲン被覆されたプレートに５μＣｉ／ｍｌの３５Ｓ（１０００Ｃｉ／ｍモル）を有する４８ウェルプレート中に、２×１０５  個の細胞／プレートでプレートする。細胞を、５％  ＣＯ２  の雰囲気下で、３７℃で、それらのプロテオグリカンマトリックス中へのラベルの組込みを可能にする（約１週間）。
【００８４】
アッセイを開始する前の夜、軟骨細胞単層を、ＤＭＥＭ／１％  ＰＳＦ／Ｇにより２度洗浄し、そして次に、新鮮なＤＭＥＭ／１％  ＦＢＳにおいて一晩のインキュベーションを可能にする。
次の朝、軟骨細胞を、ＤＭＥＭ／１％  ＰＳＦ／Ｇにより１度洗浄する。最終洗浄は、希釈溶液を製造しながら、インキュベーション内におけるプレート上への配置を可能にする。
培地及び希釈溶液は、下記表２に記載のようにして製造され得る。
【００８５】
【表２】
0003626366.tif 000008
【００８６】
プレートをラベルし、そしてプレートの内部の２４ウェルのみを使用する。１つのプレート上の、いくつかのカラムを、ＩＬ−１（薬物を含まない）及び対照（ＩＬ−１を含まない；薬物を含まない）として企画する。それらの対照カラムを、３５Ｓ−プロテオグリカン放出をモニターするために定期的に計数する。対照及びＩＬ−１培地をウェルに添加し（４５０μｌ）、次に、アッセイを開始するために化合物（５０μｌ）を添加する。プレートを、５％のＣＯ２  雰囲気下で３７℃でインキュベートする。
【００８７】
培地サンプルの液体シンチレーション計数（ＬＳＣ）により評価される場合、４０〜５０％の放出（ＩＬ−１培地からのＣＰＭが対照培地のＣＰＭの４〜５倍である場合）で、アッセイを終結する（９〜１２時間）。培地をすべてのウェルから除き、そしてシンチレーション管に入れる。シンチレートを添加し、そして放射能計数を獲得する（ＬＳＣ）。細胞層を溶解するために、５００μｌのパパイン消化緩衝液（０．２Ｍのトリス、ｐＨ７．０、５ｍＭのＥＤＴＡ、５ｍＭのＤＴＴ及び１ｍｇ／ｍｌのパパイン）を個々のウェルに添加する。消化溶液を有するプレートを６０℃で一晩インキュベートする。次の日、細胞層をプレートから除き、そしてシンチレーション管に配置する。次に、シンチレートを添加し、そしてサンプルを計数する（ＬＳＣ）。
【００８８】
個々のウェルに存在する合計計数からの放出された計数の百分率を測定する。三重反復の平均を、個々のウェルから引き算された対照バックグラウンドにより行なう。化合物阻害の百分率は、０％阻害（合計計数の１００％）としてＩＬ−１サンプルに基づかれている。
マトリックスメタロプロティナーゼ−１３の阻害又は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の生成のためにヒトへの投与のためには、種々の常用の経路、たとえば経口、非経口及び局部的経路が使用され得る。一般的に、活性化合物は、約０．１〜２５ｍｇ／処理される対象の体重／日、好ましくは約０．３〜５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で経口又は非経口投与されるであろう。しかしながら、投与量におけるいくらかの変動が、処理される対象の状態に依存して必然的に生じるであろう。投与を担当する個人は、いづれかにせよ、個々の対象のための適切な用量を決定するであろう。
【００８９】
本発明の化合物は、広範囲の種類の異なった投与形で投与され得、一般的には、本発明の治療的に有効な化合物は、約５．０重量％〜約７０重量％の範囲の濃度レベルでそのような投与形に存在する。
経口投与のためには、種々の賦形剤、たとえば微結晶性セルロース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸二カルシウム及びグリシンを含む錠剤が、種々の崩壊剤、たとえばスターム（及び好ましくは、トウモロコシ、ジャガイモ又はタピオカのスターチ）、アルギン酸、及び一定の複合シリケート、並びに顆粒化結合剤、たとえばポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチン及びアカシアと一緒に使用され得る。
【００９０】
さらに、滑剤、たとえばステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム及びタルクは、しばしば、錠剤化目的のためにひじょうに有用である。類似する型の固体組成物は、ゼラチンカプセルにおいて充填剤といても使用され得；これに関する好ましい材料はまた、ラクトース又は乳糖、及び高分子量ポリエチレングリコールを包含する。種々の懸濁液及び／又はエリキシルが経口投与のために所望される場合、活性成分は種々の甘味剤又は風味剤、着色剤又は色素、及び所望には、乳化及び／又は懸濁剤、並びに希釈剤、たとえば水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン及びそれらの種々組合せと共に組合され得る。
【００９１】
非経口投与（筋肉内、腹腔内、皮下及び静脈内使用）のためには、活性成分の滅菌した注射用溶液が通常調製される。ゴマ又はピーナッツ油又は水性プロピレングリコールのいづれかにおける本発明の治療化合物の溶液が使用され得る。水溶液は、必要なら、好ましくは８以上のｐＨで適切に調節され、そして緩衝化され得、そして液体希釈剤がまず、等張性にされるべきである。それらの水溶液は、静脈内注射目的のために適切である。油状溶液は、関節内、筋肉内及び皮下注射目的のために適切である。滅菌条件下でのそれらのすべての溶液の調製は、当業者によく知られている標準的医薬技法により容易に達成される。
【００９２】
局部眼内投与のためには、影響された眼への直接的な適用が、眼薬、エアゾール、ゲル又は軟膏として配合物の形で使用され得、又はコラーゲン（たとえばポリ−２−ヒドロキシエチルメタクリレート及びそのコポリマー）、又は親水性ポリマーシールド中に導入され得る。前記材料はまた、コンタクトレンズとして、局所用レザバーを通して、又は結膜下配合物としても適用され得る。
【００９３】
眼窩内投与のためには、活性成分の滅菌注射用溶液が通常、調製される。水溶液又は懸濁液（１０ミクロン以下の粒度）での本発明の治療用化合物の溶液が使用され得る。水溶液は必要なら、好ましくは５〜８のｐＨで適切に調節され、そして緩衝されるべきであり、そして液体希釈剤が最初に等張にされるべきである。少量のポリマー、たとえばセルロースポリマー、デキストラン、ポリエチレングリコール、又はアルギン酸が、粘度又は持効性を高めるために添加され得る。それらの溶液は、眼窩内注射目的のために適切である。
【００９４】
滅菌条件下でのそれらのすべての溶液の調製は、当業者に良く知られている標準の医薬技法により容易に達成される。動物の場合、化合物は、約０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日、好都合には０．２〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の投与レベルで、一回の用量又は３回に分けて、眼窩内投与され得る。
本発明の活性化合物はまた、直腸用組成物、たとえば従来の坐剤基剤、たとえばココアバター又は他のグリセリドを含む、坐剤又は停留浣腸にも配合され得る。
【００９５】
鼻腔内投与又は吸入による投与のためには、本発明の活性化合物は、患者により押しつぶされ又はポンピングされるポンプ噴霧容器から溶液又は懸濁液の形で、又は適切な推進剤、たとえばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適切なガスを含む加圧された容器又はネブライザーからのエアゾール噴霧物として便利には供給される。加圧されたエアゾールの場合、投与量単位は、計量された量を供給するための弁を供給することによって決定され得る。加圧された容器又はネブライザーは、活性化合物の溶液又は懸濁液を含むことができる。吸入器又は粉吹き器への使用のためのカプセル及びカートリッジ（たとえばゼラチンから製造される）は、本発明の化合物及び適切な粉末基剤、たとえばラクトース又はスターチの粉末混合物を含んで配合され得る。
【００９６】
次の例は、本発明の化合物の製造を例示する。融点は補正されていない。ＮＭＲデータは、ｐｐｍ  （δ）で報告され、そしてサンプル溶媒（特にことわらない限り、重水素ジメチルスルホキシド）からの重水素ロックシグナルに基準を参照される。市販の試薬は、さらなる精製を行なわないで利用された。ＴＨＦは、テトラヒドロフランを意味する。ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを意味する。クロマトグラフィーは、３２〜６３ｍｍのシリカゲルを用いて実施され、そして窒素圧力（フラッシュクロマトグラフィー）条件下で実行されるカラムクロマトグラフィーを意味する。室温又は周囲温度は、２０〜２５℃を意味する。すべての非水性反応は、便利さのために及び収量を最大にするために窒素雰囲気下で行なわれた。減圧下での濃度は、回転蒸留器が使用されたことを意味する。
【００９７】
【実施例】
例１
３−〔〔４−（４−フルオロフェノキシ）フェニルスルホニル〕−１−〔（Ｎ−ヒドロキシカルバモイル−シクロブチル〕アミノ〕プロピオン酸
Ａ）エチル１−アジドシクロブタン−１−カルボキシレート：
フラスコに、エチル１−ブロモシクロブタン−１−カルボキシレート（５．０ｇ，２５ｍモル）、ジメチルホルムアミド（１２０ｍｌ）及びアジ化ナトリウム（２．４３ｇ，３７．５ｍモル）を添加した。室温で２時間、撹拌した後、反応物をエーテルに取り、そして水（３×１５０ｍｌ）により洗浄した。有機層を除去し、そして硫酸マグネシウム上で乾燥せしめた。乾燥試薬を真空濾過により除き、そして溶媒を回転蒸発器により除去し、無色の液体を得た（３．６９ｇ、収率８７％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３  ）δ１．２９（ｔ，３Ｈ），２．００（ｍ，２Ｈ），２．２５（ｍ，２Ｈ），２．５５（ｍ，２Ｈ），４．２２（ｑ，２Ｈ）；ＩＲ（ｎｅａｔ）２１０９ｃｍ−１。
【００９８】
Ｂ）エチル１−アミノシクロブタン−１−カルボキシレート塩酸塩：
エチル１−アジドシクロブタン−１−カルボキシレート（１５．９８ｇ，９４ｍモル）を、４０ｐｓｉ  で室温で、エタノール（２５０ｍｌ）中、濃塩酸（８ｍｌ）により、炭素（２ｇ）上５％パラジウム上で水素化した。約３時間後、触媒を真空濾過により除去し、そして溶媒を回転蒸発器により除去し、白色固体を得た（１６．５２ｇ、収率９７％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３  ）δ１．３４（ｔ，３Ｈ），２．１５（ｍ，１Ｈ），２．３０（ｍ，１Ｈ），２．７０（ｍ，２Ｈ），２．８０（ｍ，２Ｈ），４．３０（ｑ，２Ｈ），９．０５（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）。
【００９９】
Ｃ）ベンジル１−アミノシクロブタン−１−カルボキシレートトシレート：
フラスコに、エチル１−アミノシクロブタン−１−カルボキシレート塩酸塩（４．９７ｇ，２９．６ｍモル）、ｐ−トルエンスルホン酸（６．２７ｇ，３３ｍモル）、ベンジルアルコール（８３ｍｌ）及びトルエン（１３８ｍｌ）を添加した。その反応物をＤｅａｎ−Ｓｔａｒｋトラップにより２日間、還流した。室温に冷却した後、溶媒を回転蒸発器により除去した。残留物をエーテルに取り、そしてフリーザーに一晩置いた。得られる白色固体を集め、そして乾燥せしめた（５．２７ｇ、収率９３％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３  ）δ１．９０（ｍ，２Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｍ，２Ｈ），２．５５（ｍ，２Ｈ），５．１０（ｓ，２Ｈ），７．０５（ｄ，２Ｈ），７．２５（ｂｒ  ｓ，５Ｈ），７．７０（ｄ，２Ｈ），８．５０（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）；大気圧化学イオン化質量スペクトル：２０６（Ｍ＋  ＋１）。
【０１００】
Ｄ）ベンジル１−〔４−（４−フルオロフェノキシ）フェニルスルホニルアミノ〕シクロブタン−１−カルボキシレート：
ベンジル１−アミノシクロブタン−１−カルボキシレートトシレート（２７．６０ｇ，７０ｍモル）を、塩化メチレンに取り、そして過剰の飽和炭酸水素ナトリウム溶液により洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥せしめた。乾燥試薬を真空濾過により除去し、そして溶媒を回転蒸発器により除去した。残留物に、４（４−フルオロフェノキシ）フェニルスルホニルクロリド（２０．１０ｇ，７０ｍモル）、トリエチルアミン（８．４８ｇ，１１．６ｍｌ，８４ｍモル）及びジメチルホルムアミド（１５０ｍｌ）を添加し、そしてその反応物を室温で一晩、撹拌した。
【０１０１】
反応物をエーテルにより希釈し、そして１Ｎの塩酸（３×１５０ｍｌ）、水（２×２００ｍｌ）及び飽和ブライン（１×１５０ｍｌ）により洗浄した。有機層を分離し、そして硫酸マグネシウム上で乾燥せしめた。乾燥試薬を真空濾過により除去し、そして溶媒を回転蒸発器により除去し、薄い褐色の固体を得た（２４．４５ｇ）。第２収穫物を、塩化メチレンにより乾燥試薬を十分に洗浄することによって得、蒸発の後、白色固体を得た（４．２ｇ，９０％の全体の収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３  ）δ１．９５（ｍ，２Ｈ），２．４５（ｍ，２Ｈ），５．００（ｓ，２Ｈ），６．９５（ｍ，２Ｈ），７．００（ｍ，２Ｈ），７．０５（ｍ，２Ｈ），７．２５（ｂｒ  ｓ，３Ｈ），７．３０（ｍ，２Ｈ），７．３５（ｍ，２Ｈ），７．７５（ｄ，２Ｈ）；大気圧化学イオン化質量スペクトル：４５６（Ｍ＋  ＋１）。
【０１０２】
Ｅ）シス及びトランスベンジル１−〔Ｎ−（２−エトキシカルボニルエテニル）Ｎ−〔４−（４−フルオロフェノキシ）フェニルスルホニル〕−アミノ〕−シクロブタン−１−カルボキシレート：
フラスコに、ベンジル１−〔４（４−フルオロフェノキシ）フェニルスルホニルアミノ〕シクロブタン−１−カルボキシレート（１０．０ｇ，２２ｍモル）、ｔ−ＢｕＯＨ（７５ｍｌ）、炭酸セシウム（７．１６ｇ，２２ｍモル）及びエチルプロピオレート（４．３１ｇ，４４ｍモル、４．４５ｍｌ，ｄ＝０．９６８）を添加した。
【０１０３】
約１時間の撹拌の後、反応は暗赤色に変わった。室温での５時間の撹拌の後、反応物をトルエンにより希釈し、そして炭酸セシウムを真空濾過により濾過した。濾液を水及びブラインにより洗浄し、そして硫酸マグネシウム上で乾燥せしめた。乾燥試薬を真空濾過により除去し、そして溶媒を回転蒸発器により除去し、赤レンガ色の油状物を得た。これをクロマトグラフィー処理し、（５０ｍｍのカラム；１５％  ＥｔＯＡｃ：８５％ヘキサン）、黄色の油状物を得た（５．１２ｇ、収率４２％）。第２部分を、混合された画分を再びクロマトグラフィー処理することによって得た（黄色の油状物２．７２ｇ；収率２２％；合計収率６４％）。
常圧化学イオン化マススペクトル：５５４（Ｍ＋  ＋１）
【０１０４】
Ｆ）１−〔Ｎ−（２−エトキシカルボニルエチル）−Ｎ−〔４−（４−フルオロフェノキシ）フェニルスルホニル〕アミノ〕シクロブタン−１−カルボン酸：
シス及びトランスベンジル１−〔Ｎ−（２−エトキシカルボニルエテニル）−Ｎ−〔４−（４−フルオロフェノキシ）−フェニルスルホニル〕アミノ〕シクロブタン−１−カルボシレートの混合物（１１．５７ｇ，２０．９ｍモル）を、４０ｐｓｉ  で室温で約２４時間、エタノール（５００ｍｌ）において炭素上１０％パラジウム上で水素化した。触媒を真空濾過により除去し、そして濾液を約２日間、炭素上１０％パラジウム（８ｇ）上で、上記のようにして水素化した。触媒を真空濾過により除去し、そして溶媒を回転蒸発器により除去し、濃い黄色の油状物を得た（４．４８ｇ、収率４６％）。
【０１０５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３  ）δ１．２４（ｔ，３Ｈ），１．８０（ｍ，１Ｈ），２．１０（ｍ，１Ｈ），２．４５（ｍ，２Ｈ），２．６０（ｍ，２Ｈ），２．７５（ｍ，２Ｈ），３．５５（ｍ，２Ｈ），４．１２（ｑ，２Ｈ），７．００（ｄ，２Ｈ），７．１０（ｍ，４Ｈ），７．８０（ｄ，２Ｈ）；大気圧化学イオン化質量スペクトル：４５６（Ｍ＋  ＋１）；ＨＰＬＣ（Ｃ１８  Ｎｏｖａ  Ｐａｋ，３０％〜９０％アセトニトリル／水グラジエント）１８．６分。
【０１０６】
Ｇ）エチル３−〔１−〔（Ｎ−ベンジルオキシカルバモイル）シクロブチル〕−〔４−（４−フルオロフェノキシ）フェニルスルホニル〕アミノ〕プロピオネート：
フラスコに、１−〔Ｎ−（２−エトキシカルボニルエチル）−Ｎ−〔４−（４−フルオロフェノキシ）フェニルスルホニル〕アミノ〕シクロブタン−１−カルボン酸（４．４８ｇ，９．６ｍモル）、ＢＯＰ（４．６４ｇ，１０．５ｍモル）、ジイソプロピルエチルアミン（１．３７ｇ，１０．５ｍモル＝１．８ｍｌ  ＠ｄ＝０．７４２）及びＤＭＦ（５０ｍｌ）を添加した。反応物を約３時間、室温で撹拌した。
【０１０７】
この混合物に、ジイソプロピルエチルアミン（２．４９ｇ，１９．２ｍモル、３．３５ｍｌ）及びＯ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩（１．９８ｇ，１２．４８ｍモル）を添加した。室温で一晩撹拌した後、反応物をエーテルに取り、そして１Ｎの塩酸（３×１５０ｍｌ）、水（３×１００ｍｌ）及びブライン（１×２００ｍｌ）により洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥せしめ、濾過し、そして濾液を濃縮した。残留物をクロマトグラフィー処理し（２０％酢酸エチル：８０％ヘキサン）、無色の油状物を得た（４．８２ｇ、収率８８％）。
【０１０８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３  ）δ１．２３（ｔ，３Ｈ），１．６０（ｍ，１Ｈ），１．８０（ｍ，１Ｈ），２．２０（ｍ，２Ｈ），２．５５（ｍ，４Ｈ），３．４５（ｍ，２Ｈ），４．０８（ｑ，２Ｈ），４．９７（ｓ，２Ｈ），７．００（ｄ，２Ｈ），７．１０（ｍ，４Ｈ），７．２５（ｍ，３Ｈ），７．３５（ｍ，２Ｈ），７．７５（ｄ，２Ｈ），９．７０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）；大気圧化学イオン化質量スペクトル：５７１（Ｍ＋  ＋１）。
【０１０９】
Ｈ）エチル３−〔〔４−（４−フルオロフェノキシ）フェニルスルホニル〕−１−〔（Ｎ−ヒドロキシカルバモイル）−シクロブチル〕アミノ〕プロピオネート：
エチル３−〔１−〔（Ｎ−ベンジルオキシカルバモイル）シクロブチル〕−〔４−（４−フルオロフェノキシ）フェニルスルホニル〕アミノ〕プロピオネート（４．８ｇ，８．４ｍモル）を、４０ｐｓｉ  で室温で約２．５時間、エタノール／酢酸エチル（１：４）（７０ｍｌ）中、硫酸バリウム上５％パラジウム（２．５ｇ）上で水素化した。触媒を真空濾過により除去し、そして溶媒を回転蒸発器により除去し、白色発泡体を得た（３．６４ｇ、収率９０％）。
【０１１０】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．１４（ｔ，３Ｈ），１．６５（ｍ，２Ｈ），２．４０（ｍ，４Ｈ），２．６５（ｍ，２Ｈ），３．４０（ｍ，２Ｈ），４．００（ｑ，２Ｈ），７．０５（ｄ，２Ｈ），７．２０（ｍ，２Ｈ），７．２５（ｍ，２Ｈ），７．７５（ｄ，２Ｈ），８．９０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），１０．７０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）；大気圧化学イオン化質量スペクトル：４８１（Ｍ＋  ＋１）。
【０１１１】
Ｉ）３−〔〔４−（４−フルオロフェノキシ）フェニルスルホニル〕−１−〔（Ｎ−ヒドロキシカルバモイル）シクロブチル〕アミノ〕プロピオン酸：
フラスコに、エチル３−〔〔４−（４−フルオロフェノキシ）フェニルスルホニル〕−１−〔（Ｎ−ヒドロキシカルバモイル）−シクロブチル〕アミノ〕プロピオネート（３．６４ｇ，７．６ｍモル）、エタノール（５０ｍｌ）及び水酸化リチウム水和物（１．５９ｇ，３８ｍモル）を添加した。室温で一晩撹拌した後、溶媒を回転蒸発器により除去した。残留物を酢酸エチルに取り、そして水（２×２００ｍｌ）及び１Ｎの塩酸（２×２００ｍｌ）により洗浄した。有機層を除去し、そして硫酸マグネシウム上で乾燥せしめた。乾燥試薬を真空濾過により除去し、そして溶媒を回転蒸発器により除去し、白色固体を得た（３．３７ｇ、収率９８％）。これをヘキサン／酢酸エチルから再結晶化し、白色結晶を得た（２．２３ｇ、収率６５％、ｍｐ＝１６８〜１６９℃）。
【０１１２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．６０（ｍ，２Ｈ），２．３５（ｍ，４Ｈ），２．５５（ｍ，２Ｈ），３．３５（ｍ，２Ｈ），７．００（ｄ，２Ｈ），７．２０（ｍ，２Ｈ），７．２５（ｍ，２Ｈ），７．７５（ｄ，２Ｈ），８．８５（ｓ，１Ｈ），１０．６５（ｓ，１Ｈ），１２．２５（ｓ，１Ｈ）；大気圧化学イオン化質量スペクトル：４５３（Ｍ＋  ＋１）；ＨＰＬＣ（Ｃ１８  ＮｏｖａＰａｋ，３０％〜９０％のアセトニトリル／水グラジエント）９．９分；計算値：Ｃ，５３．０９：Ｈ，４．６８：Ｎ，６．１９；実測値：Ｃ，５３．４０：Ｈ，４．６８：Ｎ，６．２０。