(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
天然レシチンからの抽出により、または部分的もしくは完全に合成により得られた荷電燐脂質である、負または正に荷電したグリセリルエステルを表面に有する、実質的に水不溶性の生物学的活性ペプチドを含む粒子であって、当該ペプチドがシクロスポリン類から選択されたものであり、当該ペプチド：当該エステルの重量比が３０：１〜５０：１である粒子。
【請求項２】
ペプチドが最大で４０マイクログラム／mlの水溶性を有するシクロスポリンである、請求項１記載の粒子。
【請求項３】
ペプチドがシクロスポリンＡである、請求項１または２記載の粒子。
【請求項４】
ペプチドがシクロスポリンＧである、請求項１または２記載の粒子。
【請求項５】
ペプチドが[３’−デスオキシ−３’−オキソ−ＭeＢmt]1−[Ｖal]2−シクロスポリンである、請求項１または２記載の粒子。
【請求項６】
ペプチドが[Ｏ−２−ヒドロキシエチル−Ｄ−Ｓer]8−シクロスポリンである、請求項１または２記載の粒子。
【請求項７】
０．０１モルＫＣl水溶液中で−１．５〜−１００または＋１．５〜＋１００ミリボルトのゼータポテンシャルを有する、請求項１〜６のいずれか１項記載の粒子。
【請求項８】
グリセリルエステルがホスファチジル−グリセロール、ホスファチジルーイノシトール、ホスファチジル−セリンまたはホスファチジン酸もしくはその塩である、請求項１〜７のいずれか１項記載の粒子。
【請求項９】
液体媒質中で０．１〜１０マイクロメートルの平均粒径を有する、請求項１〜８のいずれか１項記載の粒子。
【請求項１０】
直径が大きくとも０．３マイクロメートルである、請求項９記載の粒子。
【請求項１１】
ポリマー性または交叉結合壁、核またはマトリックス材料を含まない、請求項１〜１０のいずれか１項記載の粒子。
【請求項１２】
治療的処置用組成物の製造に使用される、請求項１〜１１のいずれか１項記載の粒子。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項記載の粒子を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
活性物質として水に非常に溶けにくい生物学的活性ペプチドを含む粒子を含有する医薬組成物であって、当該ペプチドはシクロスポリン類から選択されたものであり、当該粒子はポリマー性または交叉結合核、壁またはマトリックス材料を含まないが、０．０１モルＫＣl水溶液中で−１．５〜−１００または＋１．５〜＋１００ミリボルトのゼータポテンシャルをそれに付与する静電気安定剤として負または正に荷電したグリセリンエステルを担っており、上記ペプチド：上記安定剤の重量比が３０：１〜５０：１であり、液体媒質中で０．１〜１０マイクロメートルの粒径を有するものである組成物。
【請求項１５】
活性物質として水に非常に溶けにくい、シクロスポリン類から選択された生物学的活性ペプチドを、０．０１モルＫＣl水溶液中で−１．５〜−１００ミリボルトのゼータポテンシャルを付与する静電気燐脂質安定剤と共に含み、上記ペプチド：上記安定剤の重量比が１０：１〜６０：１であり、液体媒質中で０．１〜１０マイクロメートルの粒径を有するコロイド粒子を含む、医薬組成物。
【請求項１６】
液体媒質に分散した、１ml当たり０．０１マイクログラム〜２０mgのペプチドを含む、請求項１４または１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
噴霧乾燥に適した担体を有する、請求項１３〜１６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１８】
糖または糖アルコールを含む、請求項１７記載の組成物。
【請求項１９】
界面活性剤を含む、請求項１３〜１８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２０】
界面活性剤がポロキサマーである、請求項１９記載の組成物。
【請求項２１】
粉末形態である、請求項１３〜２０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２２】
懸濁液、錠剤、カプセル、飲用液、散剤、軟膏、クリーム、ゲルまたは座剤形態である、請求項２０または２１記載の組成物。
【請求項２３】
肺適用される散剤形態である、請求項１３〜２１のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項２４】
水での肺吸入溶液として使用される、請求項１６〜２０のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項２５】
経口適用形態である、請求項１６〜２０のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項２６】
(a)活性物質として生物学的活性ペプチドであって、シクロスポリン類から選択されたもの１〜１００mg／mlと負または正に荷電したグリセリルエステルを含む有機溶液と、(b)水性媒質とを、上記ペプチド：上記エステルの重量比が３０：１〜５０：１となるように混合することを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか１項記載の粒子の製造方法。
【請求項２７】
液体(a)および(b)の別々の流れの連続混合を使用する、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
スタティックミキサー中での連続混合を用いる、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
生成した粒子を噴霧乾燥により回収する、請求項２６〜２８のいずれか１項記載の方法。
【請求項３０】
担体を使用する、請求項２６〜２９のいずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
本発明は、水中に分散させた時に凝結に対して静電気的に保護される、例えばコロイドを生成する、生物学的に活性な物質の粒子、およびそれを含む医薬組成物に関するものである。
生物学的に活性な物質とは、薬剤として医薬品に用い得る、または例えば殺虫剤として農業に用い得る、活性物質、即ち薬理学的に活性な物質を包含すると理解される。したがって「生物学的組成物」という語は、農業に使用される組成物をも包含する。しかしながら、本発明は特に医薬用途のための医薬組成物に関するものである。
粒子を分散させた時に生成するコロイドは、一般に１および１００００ｎｍ（０．００１ないし１０μｍ）の間の粒子径を持つことができる。本発明に係る組成物中のコロイド粒子は、アモルファス型の活性物質によってのみ構成されると信じられる。大きさが小さい、特に２μｍより小さい粒子は、最も微細な毛細血管を遮断する危険なく薬物のコロイド粒子を静脈内に適用可能にする。
この微細に分散した状態は大きな表面積に付随しているため、コロイド状態自体は一般に不安定で崩壊し易いものとみなされている。コロイド系は、凝結、例えば凝集、フロキュレーションまたは結晶化によって、分散媒における表面積を減少させようとする。これを防止するためには安定剤の添加が必要である。基本的には、二つの知られている安定化の原則がある。第一は立体的安定化である。ポリマーの分子は粒子表面に吸着し、分散媒中に到達するそれらの鎖によって凝集またはフロキュレーションを防止する。第二の原則は、正または負に荷電している粒子、および結果としてもたらされる粒子相互の反発に基づいている。安定剤は荷電しており、且つ粒子の親油性表面上への吸着に好適な親油性基を有している。粒子表面において優勢な電位は技術的測定には利用しにくいため、いわゆるゼータ電位が、例えば、静電気的に安定化した粒子の安定性を示すのに用いられる周知の特性となった。静電気的に安定化された粒子のゼータ電位は、その境界表面において優勢な電位であって、溶液中の電解質イオンがそこまで運ばれ、またはそれらが熱移動によってそこから除去される、該粒子から一定の距離にある層に対応すると考えることができる。
ゼータ電位は、例えば本明細書の実施例３に記載されるように、常法によって測定することができる。
本発明は、ある態様において、表面に荷電グリセリルエステルを持ち、活性物質：エステルの重量比が１：１ないし４００：１である、実質上水不溶性の生物活性物質の粒子を提供する。
別の態様において、本発明は、極めて僅かにしか水に溶解しない生物学的活性物質の粒子を含む、医薬組成物を提供する。この粒子は、ポリマーのまたは架橋した核、壁またはマトリックス材料を含まないが、静電気的安定剤として負または正に荷電したグリセリルエステルを担っている。この安定剤は、０．０１モルＫＣｌ水溶液中において、−１．５ないし−１００または＋１．５ないし＋１００ｍＶのゼータ電位を該粒子に付与する。上記粒子は、活性物質：安定剤の重量比が１：１ないし４００：１であり、液体媒質中で測定した直径が１ｎｍないし１０μｍである。
さらに本発明は、本発明に係る粒子の製造方法を提供する。該方法は、ａ）１ないし１００ｍｇ／ｍｌの薬理学的に活性な物質およびグリセリルエステルまたは静電気的安定剤を含有する有機溶液と、ｂ）水性媒質とを、活性物質とエステルまたは安定剤の重量比が上記の比に対応するように混合することからなる。
さらに別の態様において本発明は、本発明に係る医薬組成物の製造方法であって、第一段階で該粒子を製造し、その後、得られたコロイド粒子を分離する、製造方法を提供する。
該グリセリルエステルは、好ましくは有機および無機酸部分を有する。有機酸部分は好ましくは脂肪酸である。無機酸部分は好ましくは多塩基酸、例えば燐酸から誘導される。さらに、該グリセリルエステルは、アミノ基、例えばアミノアルコールエステル基、またはヒドロキシ基、例えばグリセロールを有することができる。
上記有機酸部分は、グリセリルエステルの親油性部分である。上記無機酸部分は、塩型ならば、このグリセリルエステル分子に負の電荷を与えることができる。アミノ部分が存在し、四級化されているならば、このグリセリルエステル分子に正電荷を与えることができる。グリセリルエステルの好ましい群は負および正に荷電した燐脂質である。
生物学的活性物質は、好ましくは医薬に使用し得るものである。好ましくは、それらの水溶性は、水１０００部（容量）につき物質１部（重量）（＝室温下で０．１％または１ｍｇ／ｍｌ）より小さい。このような物質は、ＵＳＰ  ＸＸＩＩ（１９９０）によると、ごく僅かに（微かに）溶けると分類される。水溶性は、好ましくは少なくとも水１００００部（容量）につき物質１部（重量）（＝０．０１％または０．１ｍｇ／ｍｌ）である。
活性物質は、広範囲の化学物質の群のいずれかに属し得る。活性物質の一例はイミダゾール類である。別な例はＦＫ５０６である。この化合物は、メルク・インデクス、１１版、付表Ａ５に記載されている。ＦＫ５０６の類似体もまた一般に知られている。活性物質は、好ましくは極めて溶けにくいペプチド、特に環状ペプチド、例えばシクロスポリン構造を有するもの、例えばシクロスポリン類、特に最大限４００μｇ／ｍｌ（水）、とりわけ最大限４０μｇ／ｍｌ（水）の水溶性を有するものである。シクロスポリン類は既知の薬理活性物質の一群を含み、これはそれらの医学的用途と共に文献中に詳細に述べられている［例えばＧＢ２２２７７０Ａ号（その内容は引用して本明細書の一部とする）を参照されたい］。好ましいシクロスポリン類は、シクロスポリンＡ（＝シクロスポリン）、シクロスポリンＧ（実施例３を参照されたい）、シクロスポリンＤおよび実施例３に述べられているその他のシクロスポリン類である。
以下の記載は、特にコロイド粒子の安定化に関する本発明の背景である：
「コロイド化学におけるゼータ電位」、ロバート・Ｊ．ハンター、アカデミック・プレス、１９８１によれば、過剰吸着したヨウ化物または銀イオンのために負または正の初期電荷を有するコロイド状ヨウ化銀粒子は、ドデシルピリジニウムブロミドのような正に荷電した界面活性物質による約＋９０ｍＶまでのゼータ電位（２４５頁）、またはドデシル硫酸ナトリウムのような負に荷電した界面活性物質による約−２００ｍＶまでのゼータ電位（３１１頁）を獲得する。しかしながら、これらの生成物は生物学的組成物であるとは考えられない。ヨウ化銀は薬理活性物質としては使用されず、また、使用される界面活性物質は、例えばそれらの強い溶血性および毒理学的問題の故に薬物治療における薬学的目的には適当でない。
ＵＳ−ＰＳ４,８２６,６８９号に、薬理学的に活性な物質のようなコロイド粒子が凝結するのを防止するためには、ゼータ電位の閾値が超えられなければならないことが偶然記載されているが、この閾値の数値は記載されていない。
英国特許出願ＧＢ２２０００４８号は、コロイド薬物粒子の静脈内適用が可能であることを開示している。注射は直ちに薬理作用を誘発し、これは活性物質の溶液による作用に相当する。この出願によれば、液体、例えば水性媒質中に再懸濁できる、活性物質、例えばシクロスポリンＡの、安定な、乾燥した、立体的に安定化されたコロイド薬物粒子が生成可能であるためには、クエン酸のような釈解剤(peptizer)、およびゼラチンのようなポリマー安定剤、およびマンニトールのような担体を添加するのが好ましい。負の荷電の故に有効な釈解剤であるクエン酸は、親油性薬物粒子に吸収されるには小さすぎる親油性部分を有しており、そのため静電気的安定剤として機能するとは考えられない。ところがクエン酸は、使用されるゼラチンがその等電点を有し、静電気的安定化をもたらすことができない範囲にまで溶液のｐＨを変える。特に、大量のシクロスポリンＡコロイド粒子の静脈内適用を行なう場合、必要な量のクエン酸が放出されて血液の緩衝能を超え、その結果血液のｐＨ値は酸性側に動く。この理由により、クエン酸のような釈解剤は使わずに済ますのが有利であろう。さらに、大量のゼラチンが必要であり得る。
本発明に係る粒子はいかなる種類の釈解剤も必要としない。なぜなら、これらは、静電気的安定剤としての負または正に荷電したグリセリルエステル、例えばレシチンの最少限の添加によって安定化され、且つ、上記特許明細書に記載される安定化力より高い安定化力を有するからである。これらは特に、荷電した燐脂質、例えば天然レシチンまたはレシチンの画分によって安定化される。したがって、これらの物質は静電気的安定剤の群に属する。一般に、それらの荷電成分のみが粒子の安定化に寄与する。この事は、高純度の非荷電レシチン成分を使用すると、不充分な安定化の結果直ちにフロキュレーションが起こるという事実によって立証される。
活性物質／賦形剤の比率が全く異なっているため、同じようにレシチンを含有するリポソームから、本発明に係る粒子を識別することができる。リポソームの活性物質：賦形剤の比が多くとも１：２（＝０．５：１）であるのに対して、本発明に係るコロイド粒子の安定化にホスファチジルグリセリンを使用する場合、活性物質：賦形剤の比は１：１、例えば５０：１で充分である。この相違は、リポソームの場合、燐脂質は脂質二重層を構築するために使用され、これが比較的大量のレシチンを必要とするという事実にある。これに対して本発明に係る粒子の燐脂質は、例えば表面の単分子層に吸着され、それ故、粒子の安定化のためにより少ないレシチン分子で充分なのである。
本発明に係る粒子およびナノ粒子の大きさは、同じ程度の大きさである。知られるように、後者は修飾されたポリマーマトリックスによって成り、またはポリマー被覆を有しているという点で、これらを互いに識別することができる。ナノ粒子中の活性物質は、ポリマーマトリックスに分子が分散されているか、または活性物質もしくはその溶液が、好ましくは水不溶性のポリマーもしくは架橋壁材料に含まれているかいずれかである。ナノ粒子の静脈内適用の目的は、リポソームがそうであるように、普通、コロイド担体からの活性物質の放出を遅延させることである。ナノ粒子またはリポソームの静脈内注射の後、それらは徐々に身体の或る領域、即ち網内系（ＲＥＳ）へと取り込まれる。該粒子の被覆を身体にとって異物であると確認するマクロファージがこの工程を司る。したがって、活性物質は体内でコロイド担体と同じやり方で分配され、活性物質の溶液としては分配されない。この事は、特にナノ粒子の使用におけるかなりの妨げにつながる。これとは対照的に、本発明に係るコロイド粒子が静脈内注射される場合、不溶性であると考えられている物質でも幾らかの残余溶解性を有するという事実により、これらは意外にも活性物質の溶液と同じ方法で分配され、その結果、一定量がコロイド溶液として血中に注射されるとき、これは分配され分子分散として溶解する。
本発明の好ましい態様は、ポリマーまたは架橋した壁またはマトリックス材料を含まない、活性物質：安定剤の重量比が１：１ないし２００：１である、静電気的に安定化された粒子を有する組成物である。該薬物粒子の直径は、好ましくは最大１、特に最大０．３、とりわけ最大０．２μｍである。
本発明は特に、シクロスポリンもしくはＦＫ５０６またはそれらの類似体のような極めて水に溶けにくい生物活性物質の粒子を、負または正に荷電した天然または合成燐脂質、特に天然レシチンからなる静電気的安定剤と共に有する医薬組成物を提供するものである。このようなレシチンは、植物由来のもの、例えばダイズ、ナタネまたはヒマワリの種子に由来するものであってよく、または動物性の供給源、例えば卵もしくは脳内物質に由来するものであってよい。コロイド粒子は、部分的にもしくは全て合成の燐脂質、またはそれら燐脂質の混合物、またはそれら燐脂質と天然レシチンとの混合物によって静電気的に安定化することができる。コロイド粒子の安定化のためには、上記の安定剤は、負または正に荷電した燐脂質の少なくとも一部を含む。
ＰＣＴ出願ＷＯ８８／０６４３８号の実施例３によれば、極めて水に溶けにくい活性物質シクロスポリンＡのコロイド粒子が、安定剤と共に、活性物質：安定剤＝２：１の重量比、および約１．０μｍの直径で製造される。無水エタノールおよびポリエチレングリコール４００に入れたシクロスポリンおよび安定剤の溶液を、水を含むデキストロース中に注射すると、安定化されたコロイド粒子の懸濁液が得られる。しかしながら、ホスファチジルコリンからなる安定剤は静電気的安定化活性を持たない。何故なら、これは双性イオンであり、よって本発明に係るミリボルト範囲のゼータ電位を与えるような寄与を何等提供しないからである。この安定剤は、多少の荷電した不溶性燐脂質を含んでいる。既述の有機溶液にこれを溶解できるようにするために、安定剤を脱塩する。これは、その荷電部分が可溶性の遊離酸もしくは塩基に変換され、その電荷が取り去られることを意味する（上記文献の１４頁２８−３２行を参照されたい）。このシクロスポリン懸濁液の粒子径の分布はそれほど好ましいものではない。４０μｍに達する直径の粒子が幾らか見いだされており、これは静脈内適用には大きすぎる。係る適用のためには、上限として５−７μｍまでの粒子のみが安全であると考えられる。
ＥＰ０,３９１,３６９Ａ２号によれば、シクロスポリンのような薬理活性物質の水中油エマルジョンが形成される。このエマルジョンの油小滴は、親油性活性物質を溶解状態で含む。小滴表面の燐脂質は、小滴の凝結に対してエマルジョンを安定化する。燐脂質は静電気的に荷電することができ、存在する他の電荷担体によって、その電荷が油小滴に移動し、これがゼータ電位として測定される。しかしながら、この油小滴はコロイド型の活性物質を含有していない。このエマルジョンの不利な点は、本発明に係るコロイド薬物化合物粒子に比較して、油およびその他の賦形剤の割合が高いことである。許容し得る緩い構成の（例えば分散可能な）スプレードライ生成物は、油が存在するため不可能である。
本発明に係る粒子のための一つの静電気的安定剤は、好ましくは、双性イオン燐脂質とは別に、例えば３ないし６０％、特に５ないし３５％、とりわけ１０ないし２５％（重量）の正または好ましくは負に荷電した燐脂質、例えばホスファチジル−グリセロール、ホスファチジル−イノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジル酸およびそれらの塩を含む天然レシチンである。とりわけこの安定剤はさらに、燐脂質、例えば天然レシチンからの抽出により得られる、ならびに部分的または完全合成により得られる、負に荷電した燐脂質であってもよい。前に述べたように、安定剤に対する活性物質の重量比は、好ましくは１：１および２００：１の間であるが、特に１０：１および６０：１の間、中でも３０：１および５０：１の間である。
ＰＣＴ出願ＷＯ８８／０６４３８号に開示される粒子は、実施例４において、活性物質：安定剤の重量比が１：１未満、例えば１：２であり、故に本発明に係る重量比の範囲外にある。１５頁３−８行によると、活性物質：安定剤の重量比は、単純なコロイド粒子が存在するかリポソームが存在するかを識別する重要な因子であって、その限界が１：１の比である。この限界より低いとそれらはリポソームとして存在する。したがってこの実施例４の粒子はリポソームである。安定剤は、脱塩された卵ホスファチド、即ち主に双性イオンのホスファチジルコリンで構成され、これは上記のように、本発明に係るミリボルト範囲の静電気的に安定化された粒子を提供しない。本発明に係る粒子のための好ましい安定剤は、ホスファチジル−グリセロールのような負に荷電した純物質であって、これは、極めて少量を用いた場合、粒子を安定化することができ、驚くべき事に、天然の薬学上許容し得るレシチンより小さな粒子径を作り出す。一般に本発明に係る粒子は、意外にも立体的に安定化した粒子より小さな直径をもたらす。さらに、上記の純物質は、より高いゼータ電位を生み出し、したがって粒子のより大きな反発をもたらし、よって天然レシチンと比べ安定性が改善される。分析的観点からは、これら純粋な燐脂質は、最終製剤中の活性物質の分解の検出を単純にする、明確に識別される物質であると考えられる。天然レシチンは幾つかの物質から成り立っており、これが少量の分解生成物の確認を困難にする。
コロイド粒子も同様に本発明の一部を形成し、これは好ましくは、液体媒質１ｍｌ当り０．０１μｇないし２０ｍｇ、特に６ｍｇまで、とりわけ５ｍｇのシクロスポリンもしくはＦＫ５０６またはその類似体という濃度を有する。粒子の溶液を含む医薬組成物は、好ましくは水性媒質中で製造される。自体既知であるように、この粒子は遠心または濾過によって分離できるが、次いで稠密な再懸濁しにくい固体を形成し得る。この理由により、この粒子は、凍結乾燥または特にスプレードライによって、再懸濁可能な形態で取得することが有利である。
立体的安定剤よりは好ましいが、静電気的安定剤は、コロイド分散液の濃縮の間、例えば凍結乾燥またはスプレードライの間、安定性を付与するには不充分であるかも知れない。何故なら、粒子間の距離が非常に短いのでファンデルワールス引力が働き始めるかも知れないからである。したがって、液体の蒸発の間、粒子を離しておく担体を使用するのが好ましい。好ましい態様において、分散媒はこの担体を１ないし２０、特に４０ないし６％（重量）含有する。
本発明の好ましい態様は、上に定義される安定剤の一つにより静電気的に安定化された粒子、およびスプレードライのための基剤としての役割を有する担体、を伴う医薬組成物を包含する。これらの担体は常套的担体、例えばＧＢ−ＰＳ１５１６３４８号に記載されるような担体であってよい。好適な担体は、それらの凝結を防止し、それによりそれらを安定化するために、濃縮工程の間コロイド薬物化合物の粒子を離しておくことのできる全ての担体、例えばデキストラン、サッカロース、マンニトール、グリシン、乳糖、ポリビニルピロリドンを包含する。担体は好ましくは糖または糖アルコールである。
最終乾燥生成物における担体の湿潤化を改善するために、界面活性剤を添加することができる。
ＵＳ−ＰＳ４,８２６,６８９号によれば、薬理学的に活性な物質のコロイド粒子の凝結を防止するための立体的安定剤として、ポロキサマーを使用する。ポロキサマーは、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体である。これらは親水性であるため、これらの生成物は疎水性粒子に親水性を与えるための界面活性剤として使用することもできる。インターナショナル・ジャーナル・オブ・ファーマシューティクス２９巻（１９８６）５３−６５頁によれば、ポリスチレン核および６００ｎｍの直径を持ち、卵レシチンにより部分的には静電気的にそして部分的には立体的に、またはポロキサマーにより立体的に安定化され、または、それらの表面に分泌免疫グロブリンＡ（ＳＩｇＡ）分子をロードしている、放射性標識されたミクロ粒子を、ウサギに注射して、体内臓器へのこれらの分布およびマクロファージによるこれらの排除を研究する。これと対照的に、本発明は、ポリマー核材料の安定化または活性物質の分子のローディングには関係しない。その代わりに、固体の生物活性物質粒子が安定化される。
スプレードライの間に、該粒子は、得られる粉末粒子表面の疎水化を受けることができる。即ち、好ましくは湿潤化を促進する界面活性物質を、スプレー溶液に添加する。この物質は界面活性剤、例えばポリオキシエチル化したヒマシ油、または特にポロキサマー型のポリマー界面活性剤であってよい。ポロキサマーは、恐らくは静電気的安定剤の（部分的）排除によって、またはコロイド粒子上での静電気的安定剤の（部分的）スクリーニングによって、濃度に応じたゼータ電位の低下をもたらす。静電気的安定剤により発生した最小で−１０または＋１０ｍＶのゼータ電位はこうしてそれぞれ−１．５または＋１．５ｍＶに低下させることができる。水性分散媒中の界面活性物質の濃度は特に０．００１ないし１、特に０．０１ないし０．１、とりわけ０．０３％（重量）である。
本発明に係る生物学的組成物は常法によって生成させることができる。これらは好ましくは本発明方法に従って生成され、その場合、ａ）１ないし２００ｍｇ／ｍｌの濃度の活性物質、例えばシクロスポリンもしくはＦＫ５０６またはそれらの類似体、および静電気的安定剤を含有する有機溶液、例えばエタノール、ならびにｂ）担体および界面活性物質を含有し得る水性分散媒、という別個の流れの液体を合し、得られるコロイド分散系において、安定剤に対する活性物質の重量比、または媒質に対する担体および界面活性物質の重量比が上記の範囲に相当するようにする。このように、二つの液体をできるだけ速やかに混合し、この結果安定剤が粒子の周りの境界表面に拡散するようにさせることによって、コロイド粒子を形成させる。安定剤として天然レシチンを使用することにより、コロイド粒子の表面は迅速に安定化され、これは、時間と共に殆ど変化しない−１０ｍＶ未満のゼータ電位が測定され次第検出することができる。しかしながら、純粋な負に荷電した燐脂質が使用されるならば、そのゼータ電位は、一日後に不変の値が得られるまで、より負の値へと変化する（実施例３を参照されたい）。別個の液体の流れは、好ましくは連続的攪拌によって、特にスタティックミキサー(static mixer)中で合する。スタティックミキサーは、流れのホモジナイズまたは混合を達成する管系中に組み込まれる、可動部分の無い整流装置を含んでいてよい。この原理を例えば液体の混合に使用する。
スタティックミキサー中で形成されたコロイド粒子の凍結乾燥は、しばしば、コロイド溶液に再構成した後の粒子径の変化を導く。中でも、スプレードライにより製造する場合、本発明に係る静電気的に安定化されたコロイド粒子が、立体的に安定化されたコロイド粒子よりも保存において安定とすることができるという事は、新規且つ驚くべき事である。それによりもたらされる高温および短い乾燥時間は、粒子径の変化を最小限とする。保存において安定であり、且つこの方法により製造された乾燥粉末は、再懸濁して元の粒子径を与えることができ、これは平均して、再構成された立体的に安定化された粒子より小さい。
したがって、本発明はさらに、スプレードライされた静電気的に安定化された粒子を伴う医薬組成物を提供する。
この医薬組成物は、薬用賦形剤、例えば該粒子の製造に使用されるものの外に薬用賦形剤を含有し得る。係る担体は、後の実施例に開示されるような崩壊剤、潤滑剤などを包含し得る。
例えばシクロスポリンを含むスプレードライ型において、担体に対する活性物質の重量比は好ましくは１：５ないし１：２００、特に１：１０ないし１：４０、とりわけ１：２０である。
同様に、本発明は、スタティックミキサー中で形成された後、スプレードライによって粉末型に変換される、静電気的に安定化されたコロイド粒子を有する医薬組成物を提供する。
特に本発明は、乾燥状態で測定された粉末の平均粒子径が１ないし５００μｍ、特に３ないし５０μｍであり、含まれるコロイド粒子の平均粒子径が０．１ないし１０、好ましくは０．１５ないし０．５μｍである、粉末型の、例えばシクロスポリン類、ＦＫ５０６またはその類似体の、スプレードライされた、静電気的に安定化されたコロイド粒子を含む医薬組成物を提供する。
静電気的な粒子を含有する医薬組成物は、本発明によれば、医薬として使用される。
したがって本発明は、該粒子を含有する、例えばカプセル剤、錠剤、飲料水、懸濁液、散剤、軟膏、ゲル、クリームまたは座剤の剤型の医薬組成物を提供する。スプレードライ粉末は、特に再懸濁後に、飲料水、肺への吸入液または非経口適用用液体として使用することができる。粉末の剤型では、該粒子は鼻または肺への適用に使用することができる。
このスプレードライされた粉末は、薬用賦形剤と共に、カプセルに充填し、または圧縮して錠剤とすることができ、しかる後経口適用に、または肺への適用のためにも使用できるカプセル剤として好適となる。本発明に係る座剤に加工される場合、この粉末は直腸に適用することができる。
本発明に係る組成物は、生物学、例えば医学的適応のために、含有される活性物質が、標準的な生物学的試験、例えば臨床およびバイオアベイラビリティー試験によって示される、例えば治療的に有効な用量において、有用である。
驚くべき事に、本発明に係る静電気的に安定化されたシクロスポリン粒子を含有する経口用組成物において、活性物質のバイオアベイラビリティーが向上することが確立された。バイオアベイラビリティーの向上と、投与後のシクロスポリン血中濃度の迅速な上昇とを伴う経口用組成物が、実施例４、５および６の組成物である。
したがって本発明はさらに、それを必要とする対象に薬理学的に活性な物質を投与する方法であって、該対象に本発明に係る医薬組成物の有効量を投与することからなる方法をも提供する。
さらに本発明は、ａ）免疫抑制剤としての使用のため、または自己免疫疾患もしくは炎症状態もしくは自己免疫成分を有する疾患もしくは寄生虫感染もしくは攻撃の処置のための、シクロスポリンを含有する、本発明に係る医薬組成物、および、ｂ）それを対象とする対象において、免疫抑制を行なう、または、自己免疫疾患の処置もしくは炎症状態もしくは自己免疫成分を有する疾患もしくは寄生虫感染もしくは攻撃の処置のための、方法であって、該対象に本発明に係る医薬組成物の有効量を投与することからなる方法、を提供する。
以下の実施例において本発明に係る粒子を製造し使用する。
実施例１
静電気的に安定した薬剤化合物粒子を有する医薬組成物の連続生産および用途
１．溶液の製造
a．水溶液：
７５のエチレンオキシおよび３０のプロピレンオキシ基を含むポロキサマー１８８(プルロニクスＦ−６８(商標))０．３gおよび乳糖１００．０gを蒸留水に溶かして１リットルとし、孔サイズ０．２マイクロメーターの滅菌フィルターを通して滅菌タンクへ移し入れる。
b．有機溶液：
３．００gのシクロスポリンＡおよび０．０６gのパルミトイル−オレイル−ホスファチジル−グリセロールを、６０mlの無水エタノールに溶かし、孔サイズ０．２マイクロメーターの滅菌フィルターを通して滅菌タンクへ移し入れる。
２．コロイド状薬剤化合物粒子の製造
図１は、シクロスポリンＡのコロイド粒子の連続生産および乾燥を示す。
水溶液および有機溶液を入れたタンクを、滅菌ホースにより計量ポンプへ別々に連結する。溶液は、滅菌ホースを通して２つのポンプによりスタティックミキサー(スルツァー、１０ミキシングエレメント、各エレメントの直径３．４mm)へ供給される。他のミキサー、例えばケニックスのミキサーも使用され得る。水溶液を、９．４ml／分の速度でスタティックミキサーを通してくみ出す。有機溶液を、０．６ml／分の速度で第１ミキシングエレメントの前に直接水相へ同軸注入する。スタティックミキサーにおいて、２種の液体を合わせ、激しく混合すると、その結果シクロスポリンＡのコロイド粒子が形成される。
レーザービーム散乱法によって測定されたコロイド粒子の粒子サイズは８０ナノメーターであり、標準偏差は１５nmである。
３．コロイド状薬剤粒子の乾燥
図１で説明されている通り、生成したシクロスポリンＡのコロイド粒子は、噴霧乾燥機(ナイロ)の乾燥塔に吊り下げられた２コンポーネントノズルへオンラインで供給される。１．５バールのスプレー気圧で、コロイド状薬剤化合物粒子のゾルを微細小滴に分散させ、１５０℃の空気供給温度で乾燥する。給気は、入り口にある０．２マイクロメーター滅菌フィルターを通して乾燥機へ導入される。乾燥形態の分離は、サイクロンで行なわれる。ここの空気温度はまだ約７５℃である。出ていく空気はブロワーを通して除去される。生成した粉末の平均粒子サイズは３８マイクロメーターである。シクロスポリンＡ粉末の含有率は、粉末１g当たり２９．８mgである。
４．コロイド状薬剤化合物粒子の乾燥形態の適用
コロイド粒子の乾燥形態はガラス瓶へ充填され得、水を加えた後、再びコロイド系が生成され、粒子サイズは１２０ナノメーターおよび標準偏差は６５ナノメーターである。シクロスポリンＡのこれらの再分散コロイド粒子は、非経口的、例えば静脈内経路により投与される。
別の適用例には、次のものがある。
−所望によりさらに別の賦形剤を用いて、カプセルへ充填または錠剤に圧縮成形。
−コロイド状薬剤化合物粒子の直接使用または再分散、続いて飲用液として使用。これらの形態は経口適用に適している。
−吸入器へ充填、続いて鼻または肺に適用。また、水に再分散およびネブライザーによる肺適用も可能である。
−軟膏基剤またはクリーム製剤に混入、続いて皮膚に適用。
−座薬基剤に混入、続いて直腸適用。
実施例２
インビボ試験におけるコロイド粒子含有医薬組成物の使用
静脈内適用後の生物体におけるシクロスポリンＡのコロイド粒子の分布状態を、ラットへの静脈内適用後における、等張性グルコース溶液により希釈した、市販のシクロスポリンＡ注入用濃厚液(サンディムン)(ＫＺＩ)の場合と比較した。この試験の場合、検出は、放射性標識活性物質を用いて行なわれた。全器官において、本発明によるシクロスポリンＡのコロイド粒子の分布は、ＫＺＩ溶液の場合に対応している。これは、コロイド粒子が、ナノ粒子(例えばポリメタクリレートまたはポリシアノアクリレートの粒子)とは対照的に、ある種の器官では蓄積されないが、活性物質のミセル溶液として分布していることを示している。
図２および３は、器官の摘出および溶解後「液体シンチレーション計数法」により測定された、体の様々な器官における、市販ＫＺＩ溶液およびシクロスポリンの新規コロイド粒子の静脈内投与後のシクロスポリンＡの分布を示す。放射性標識活性物質の分布を５分、１、２４および４８時間後に測定した。図で与えられた詳細はＦ値である。Ｆ値は、器官または血液１g当たりの濃度を体重１g当たりに適用された用量で割ったものとして定義される。
市販注入用濃厚液(ＫＺＩ)の分布と比較したシクロスポリンＡのコロイド粒子のラット体における分布パターン。
シクロスポリンＡのコロイド粒子：
１２．０１mgの非標識シクロスポリンＡおよび０．３４５ｍｇの[3Ｈ]−シクロスポリンＡおよび０．０３４５mgのホスホリポン８０を、０．２５mlの無水エタノールに溶かす。例えばエッペンドルフ・バリペッテを用いて、この器官溶液を、撹はんしながら４．２mlの水溶液(９４．７gの蒸留水に５．０gのマンニトールを溶解)へ混入させる。コロイド粒子が生成される。最終容量は４．４５mlである。
シクロスポリンＡ−ＫＺＩ：
１２．５７mgのシクロスポリンＡおよび０．３３１mgの[3Ｈ]−シクロスポリンＡを、磁気撹はん装置において２３３．９mgのＫＺＩ媒質(６５０．０mgのクレモフォーＥＬ(ＢＡＳＦ)＝ポリ−(３５)オキシエチル化ひまし油)に溶かし、２７８．０mgの無水エタノールを混合すると、粘ちょう性溶液が生じる。この溶液を等張性グルコース溶液により希釈すると、４．２mlの最終容量が得られる。
上記２製剤各々０．３mlを、雄ＫfmＷＩＳＴラットの大腿静脈に適用する。重量約２００gでは、これは、４．５mgシクロスポリンＡ／kg（体重）の常用平均量に相当する。全長オートラジオグラフィー用の動物を除き(この場合、放射能量は体重１kg当たり２０００マイクロキュリーに達した)、放射線量は２００マイクロキュリー／kgであった。全長オートラジオグラフィーを用いて、時間当たり１動物により０．０８、１、２４および４８時間後の身体における２製剤の分布パターンを測定した。さらに、２ラットの群を用いた「液体シンチレーション計数法」により溶解後に、個々の器官における放射能の分布パターンを測定した。
実施例３：
ゼータポテンシャル測定
ゼータサイザーIII(マルバーン・カンパニー、マルバーン、イギリス国)により全ゼータポテンシャル測定を行った。活性物質の濃度は１mg／mlであった。使用された分散媒質は、満足すべき伝導性を与える０．０１モル塩化カリウム溶液であった。測定条件は次の通りであった。
測定セル：ＡＺ４、マルバーン・カンパニー、マルバーン、イギリス国
電解質：０．０１モル塩化カリウム溶液
温度：２５℃
ボルト数：１２０Ｖ
測定角度：９０°
活性物質：含有率１mg／ml
コロイド状薬剤化合物粒子のゼータポテンシャルおよび粒子サイズ
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粒子は、実施例１記載の方法と同様にして製造された。
生産の進行に応じてゼータポテンシャルは一般に上昇する。２４時間生産後、一定値に達する。純粋な負荷電燐脂質によるゼータポテンシャルの増加は、分子の非荷電部分を有する燐脂質混合物の場合よりも大きい。
正荷電燐脂質分子の場合、ゼータポテンシャルは正である。従って、ゼータポテンシャルの絶対値(すなわち、ポテンシャルの負または正記号を考慮に入れない)は決定的である。コロイド粒子の表面における負および正安定剤分子の混合物は、静電気的表面電荷の(部分的)中和を誘導し、ゼータポテンシャルを絶対値に落ち着かせ得る。しかしながら、混合物のポテンシャルが１．５〜１００ミリボルトの絶対範囲内にある場合、混合物は本発明によるものである。
コロイド薬剤化合物粒子のゼータポテンシャルに対するポロキサマー１８８の影響。
薬剤濃度は１mg／mlであった。様々な濃度のポロキサマー溶液を分散媒質として使用した(各々０．０１モル塩化カリウムにより伝導性は保証されている)。７５エチレンオキシおよび３０プロピレンオキシ基を含むポロキサマー１８８(例、プルロニク(商標)Ｆ−６８)。
ゼータポテンシャルおよび粒子サイズ
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既に述べた通り、ポロキサマーを加えると、噴霧乾燥した静電気的に安定させたコロイド粒子の細分散性は改善される。ポロキサマーをもたない粒子との比較結果は、幾分大きいポロキサマー含有粒子が形成されるが、溶解状態では、それらの直径が小さいがため充分安全に静脈内適用され得ることを示す。
錠剤形態の医薬組成物の例
実施例４
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実施例５
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ＰＯＰＧにより安定したシクロスポリン粒子は、実施例１に従い製造された。
水性出発溶液では、ポロキサマーをポリソルベート８０(０．１％)により置き換えた。ラクトース濃度は７．５％であった。
有機出発溶液では、シクロスポリンおよびＰＯＰＧは、１０：１の重量比で存在した。溶媒はエタノールの水溶液であった(容量の６０％)。
コロイド粒子を製造するため、水性および有機溶液を実施例１による割合で混合した。
噴霧乾燥製品を崩壊剤と混合し、乾燥粉末用コンパクターで濃縮した。製造されたか粒を滑沢剤および所望によりアエロジルと混合し、錠剤に圧縮成形した(長円形２２．８×９．０mm)。
イヌ試験
体重１２kg前後の６匹のビーグル犬を使用した。薬剤投与の２０時間前、食物を撤収したが、動物には実験開始まで自由に水に接近させた。
早朝(午前８時頃)、実施例５の用量形態を動物に経口投与し、次いでＮaＣl０．９％溶液を与えた。投与の３時間後、再び動物には水および食物へ自由に接近させた。
薬剤の経口投与の−１５分、３０分、１、１．５、２、３、４、６、８および２４時間後に２mlの血液試料(またはブランク試料用に５ml)をしょう側皮静脈(前腕)から採取し、ＥＤＴＡを含む５mlプラスチック管に集めた。
動物試験の全血試料を、インクスター社のサンディムン放射線免疫検定キットにより分析した。蒸留器の水、ミネソタ５５０８２、１９５１ノースウエスタン・アベニュー、アメリカ合衆国、非特異的モノクローナル抗体(これはまた薬剤代謝物を検出する)を使用。
試験結果は図４にプロットされており、１０８７の０〜２４時間における曲線下領域(ＡＵＣ024)(＝生物学的利用能)を示す。
すなわち、本発明は、特に、その表面にコロイド安定剤を有し、活性物質：安定剤重量比が１：１〜４００：１であり、液体媒質中で測定された平均粒子直径が１ナノメーター〜１０マイクロメーターであり、体重１２kgのビーグル犬に５０mgの量の活性物質を経口投与した場合に、濃度をng／mlで測定すると生物学的利用能(＝ＡＵＣ024)が１１５００以下である、シクロスポリンＧの粒子を含む医薬組成物を提供する。
実施例６
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実施例７
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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