(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
２−アミノ−３−（β−Ｄ−グルコピラノシロキシ）−γ−オキソベンゼンブタノイックアシッド。
【請求項２】
２−アミノ−３−（β−Ｄ−グルコピラノシロキシ）−γ−オキソベンゼンブタノイックアシッドを有効成分とする紫外線吸収剤。
【請求項３】
２−アミノ−３−（β−Ｄ−グルコピラノシロキシ）−γ−オキソベンゼンブタノイックアシッドを有効成分とする紫外線散乱剤。
【請求項４】
２−アミノ−３−（β−Ｄ−グルコピラノシロキシ）−γ−オキソベンゼンブタノイックアシッドを有効成分とするアルドースリダクターゼ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は新規な配糖体に関し、さらに詳細には長波長域及び短波長域の紫外線に対し優れた吸収能、散乱能及びアルドースリダクターゼ阻害作用を有し、医薬品等の配合成分として有用な新規配糖体に関する。
【０００２】
【従来の技術】
紫外線は皮膚に炎症を起こしたり、発癌させるなど種々の影響を及ぼし、また皮膚の老化には紫外線、乾燥等の外的要因が大きく影響すると言われている。そのため、紫外線の皮膚への影響を防ぐ医薬品等が知られている。また、皮膚の紫外線による日焼け、シミ、ソバカス等の発生を防止するための医薬品等が広く知られている。
【０００３】
従来、紫外線の皮膚への影響を防ぐには、紫外線吸収剤が使用されている。この従来の紫外線吸収剤は、サンタン波長といわれる長波長紫外線（ＵＶ−Ａ：波長約３２０〜４００ｎｍ）を主に吸収する紫外線吸収剤と、サンバーン波長といわれる中波長紫外線（ＵＶ−Ｂ：波長約２８０〜３２０ｎｍ）を主に吸収する紫外線吸収剤と、短波長紫外線（ＵＶ−Ｃ：波長約２８０ｎｍ以下）を吸収する紫外線吸収剤とに大別される。
【０００４】
このうち、ＵＶ−Ｂ吸収剤は古くから数多くの化合物が開発されているが、ＵＶ−Ａが皮膚の真皮にまで到達し、皮膚の黒化作用を有し、シミ、ソバカス等の発生や増悪の因子となっていることが判明しているにもかかわらず、ＵＶ−Ａ吸収剤として充分満足できる化合物が未だ開発されていない。更に、ＵＶ−Ｃはそのほとんどがオゾン層で吸収されることから従来あまり注目されていなかったが、発癌作用があることから、近年、そのＵＶ−Ｃ吸収剤の開発が望まれている。
【０００５】
また、従来の紫外線吸収剤は紫外線吸収能を有するが、紫外線のエネルギーを吸収するため高エネルギー状態となり、不安定であったり、生体に対して悪影響を及ぼす場合が多かった。そこで、人体に対して悪影響を及ぼす紫外線を吸収し、そのエネルギーを安全な可視光として散乱し得る化合物の開発が望まれていた。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は上記の事情に鑑みなされたものであって、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、或いはアルドースリダクターゼ阻害剤として医薬品等に配合できる成分を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、常に紫外線に曝されている眼、特にその水晶体に着目し、水晶体には紫外線に対し保護作用を有する物質が存在すると考え、この保護作用に有効に働いている物質を哺乳類の水晶体より抽出すべく研究した結果、ヒト水晶体中の水溶性画分より抽出した配糖体が優れたＵＶ−Ａ吸収能及びＵＶ−Ｃ吸収能を有すること、またＵＶ−Ａ及びＵＶ−Ｃを吸収して人体に無害な蛍光として可視域に散乱する作用を有すること、更にはアルドースリダクターゼ阻害作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明は、２−アミノ−３−（β−Ｄ−グルコピラノシロキシ）−γ−オキソベンゼンブタノイックアシッドを提供するものである。また、本発明は２−アミノ−３−（β−Ｄ−グルコピラノシロキシ）−γ−オキソベンゼンブタノイックアシッドを有効成分とする紫外線吸収剤、紫外線散乱剤又はアルドースリダクターゼ阻害剤を提供するものである。
【０００９】
本発明の２−アミノ−３−（β−Ｄ−グルコピラノシロキシ）−γ−オキソベンゼンブタノイックアシッドは、次式（Ｉ）で表わされ、新規な配糖体化合物である。
【００１０】
【化１】
0003704627.tif 000002
【００１１】
本発明の２−アミノ−３−（β−Ｄ−グルコピラノシロキシ）−γ−オキソベンゼンブタノイックアシッドは、化学的に安定であり、医薬品の配合成分として有用である。
上記本発明化合物はヒト及び霊長類の水晶体から抽出することができ、また化学的又は酵素的合成法により製造することもできる。ヒト及び霊長類の水晶体より抽出するには、例えばExp.Eye Res.，14,53〜57(1972)の記載に従い、水晶体を１０重量倍の水で摩砕したホモジネートを高速遠心分離することにより水可溶性画分と水不溶性画分とに分離する。得られた水可溶性画分を透析後、低分子量画分を含んだ透析外液をゲル濾過、次いで逆相高速液体クロマトグラフィーで精製することにより行なわれる。
【００１２】
本発明化合物の紫外線に対する性質を説明する。
図３は本発明化合物の紫外線吸収スペクトルを示した図である。この図３から明らかなように、本発明化合物は２６０ｎｍ及び３６０ｎｍ付近に最大吸収ピークを有する。したがって、本発明化合物は紫外線吸収剤、特にＵＶ−Ａ及びＵＶ−Ｃの吸収剤として有用であることがわかる。
また、図４は本発明化合物に対する励起光及びその結果発生する蛍光スペクトルを示した図である。この図４から明らかなように、本発明化合物は２６０ｎｍ及び３６０ｎｍ付近の光で励起すると、人体に無害な４８０ｎｍに蛍光を発する。そのため、本発明化合物は紫外線散乱剤として有用であることがわかる。
【００１３】
次に、本発明化合物のアルドースリダクターゼ阻害効果の検討結果を示す。
１）アルドースリダクターゼの調製
仔牛水晶体を蒸留水にてホモジナイズし、遠心分離して水不溶性画分を除去した。遠心分離後得られた上清液に飽和硫安を添加し、５０％飽和とした。遠心分離後さらに硫安を添加し、７５％飽和とした後遠心分離し、その結果得られた沈澱をＮａ−Ｋ−リン酸バッファー（ｐＨ６．８、５ｍＭメルカプトエタノール含有）で回収した。同バッファーで透析した後、Ｂｉｏ−Ｇｅｌ  Ａ−５ｍにてゲル瀘過を行ないアルドースリダクターゼを調製した。
２）アルドースリダクターゼ阻害効果の検討
上記調製した０．３４unit／ｍｇプロティンのアルドースリダクターゼ２００μｌ（０．２４unit）と、１ｍＭのＮＡＤＰＨと１０ｍＭのＤＬ−グリセリルアルデヒド及び試料を最終濃度がそれぞれ０．１ｍＭ，１ｍＭ及び２×１０~5Ｍになるように、０．１ＭのＮａ−Ｋ−リン酸バッファー（ｐＨ６．８、５ｍＭメルカプトエタノール、０．２Ｍリチウムサルフェート含有）に溶かし、ＮＡＤＰＨによる３４０ｎｍの吸光度の減少を測定した。試料としては本発明化合物を用い、また試料のかわりに蒸留水を添加した場合をブランクとした。その結果は表１のとおりであった。
【００１４】
【表１】
0003704627.tif 000003
【００１５】
すなわち、本発明化合物はブランクに対し１９．２％の阻害効果を示した。本発明化合物はこのようにアルドースリダクターゼ阻害効果があるので、糖尿病由来の白内障用医薬品の配合成分として有用である。
【００１６】
本発明化合物は、直接皮膚等に塗布して紫外線吸収剤、紫外線散乱剤として使用することもできるが、医療品等に通常使用される成分、基剤等とともに混合して使用することもできる。医療品等に配合する場合、その配合量は特に制限されないが、０．０００１〜５０重量％程度が好ましい。
【００１７】
【実施例】
次に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれら実施例に何ら限定されるものではない。
【００１８】
実施例１．
（１）本発明化合物（Ｉ）の抽出
白内障患者から得たヒト水晶体５０個に１０重量倍の水を加え、水で冷しながらガラスホモジナイザーでホモジナイズした。ホモジネートを２７，０００×ｇで６０分間冷却下に高速遠心分離し、上清液（水可溶性画分）を得た。得られた水可溶性画分を透析して、低分子量画分を含む透析外液を得る。この透析外液を濃縮し、更に最終濃度で２．８％になるように酢酸を加え、遠心分離して不溶成分を除去した後、その上清液を２．８％酢酸溶液で平衡化したトヨパール  ＨＷ−４０  スーパーファインカラム（２．２×４０ｃｍ）でゲル濾過した。流速３０ｍｌ／時、移動相２．８％酢酸の条件で１フラクション当り５ｍｌずつ分取し、フラクションＮｏ．６７〜７６（３６０ｎｍの吸収）画分を採取した（図１）。
この画分を、更に逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で精製した。ＨＰＬＣ条件は、Senshu Pak ODS-1151-ss  column(4.50×150mm)で、流速１ｍｌ／分、対イオンとして０．１％トリフルオロ酢酸又は０．１％ヘプタフルオロ酪酸を含有するアセトニトリルの０〜１９．６％直線濃度勾配で行ない、２４分処理した。約２０分の保持時間の画分を採取して精製し、目的とする蛍光物質（３６０ｎｍで励起したときに４８０ｎｍの蛍光を発生する物質）を得た（図２）。
得られた蛍光物質の紫外線吸収スペクトルを図３に、また２６０ｎｍ又は３６０ｎｍの光で励起した場合に発生する蛍光の強度を図４に示す。この螢光物質すなわち本発明化合物（Ｉ）は、２６０ｎｍ及び３６０ｎｍに最大吸収を有し、２６０ｎｍ及び３６０ｎｍの光で励起すると４８０ｎｍに蛍光を生ずることが判明した。
【００１９】
（２）本発明化合物（Ｉ）の構造確認
（ａ）上記抽出した化合物（Ｉ）をNature,230,393〜394(1971)記載の方法によりβ−グルコシダーゼ処理し、その分解物を同定したところ、この化合物（Ｉ）はβ−グルコシダーゼにより加水分解し、Ｄ−グルコースを遊離することが判明した。一方、Ｄ−グルコースと結合していた化合物は発蛍光団であり、化合物（Ｉ）は当該発蛍光団とＤ−グルコースが、Ｏ−β−グルコシド結合で結合していることが確認された。
【００２０】
（ｂ）上記抽出した化合物（Ｉ）のマススペクトル分析を行なった。化合物（Ｉ）をJEOL HX 110/110 tandem mass spectrophotometerによりＦＡＢマススペクトル（Ｍ＋１）測定した。サンプルは５％酢酸に溶解し、マトリックスとしてグリセロール、チオグリセロール及びｐ−ニトロベンジルアルコール１：１：１（容量比）を用いて分析した。イオン化は、キセノン原子１０ｋＶビームにより行なった。ＦＡＢ  ＣＡＤ  ＭＳ／ＭＳ分析（collisionary activated dissociation tandem mass spectrometry）により生じさせたスペクトルは、一定のＢ／Ｅで走査するJEOL DA 5000 data system-generated linked scanを用いて得た。（Ｍ＋１）は、３７２．０８６１であり、この化合物は分子量が３７１であることを示している。また、この化合物のフラグメントパターンを図５に示す。
【００２１】
（ｃ）化合物（Ｉ）のＮＭＲスペクトル分析を行ない、その1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを測定した。機種はVARIAN VXR-500S  spectrometerであり、外部標準として３−（トリメチルシリル）プロピオン酸ナトリウムを用い、Ｄ2Ｏ中３０℃で５００ＭＨｚで測定した（図６及び図７）。
そのスペクトルでは、７．７５及び７．３６ｐｐｍに二重線が、また６．８６ｐｐｍに三重線が観察された。そして、それぞれの二重線は、ＣＯＳＹ（correlation spectroscopy）実験により明らかなように、６．８６ｐｐｍとカップリングしている。このことはこの立体配置は、３つの隣接した芳香族プロトンの存在を示している（図８及び図１０）。
また、２．７７ｐｐｍと３．４１ｐｐｍに三重線が観察され、そして、それらはＣＯＳＹ実験より明らかなようにお互いにカップリングしている。ＮＯＥＳＹ（nuclear overhauser effect spectroscopy）では、３．４１ｐｐｍに於ける三重線と７．７５ｐｐｍに於ける二重線との間にクロスピークが見られるので、ベンゼン環の１位には、−ＣＨ2−ＣＨ2−基の存在が確認された（図９及び図１０）。
【００２２】
ＮＯＥＳＹによる実験で、５．０６ｐｐｍに於けるアノメリック  プロトンが７．３６ｐｐｍに於けるプロトンと接近していることがわかり、ベンゼン環の３位にグルコースの存在を示している。また、アノメリック  プロトンのカップリング常数は、Ｊ＝７．５Ｈｚを示していることからグルコースは、β−配座をしているということができる。また、13Ｃ−ＮＭＲを、VARIAN GEMIN-300 spectrometerを用いて３００ＭＨｚ、３０℃、Ｄ2Ｏの条件で確認したところ、ベンゼン環のカーボンは１４７．７，１４４．０，１２８．８，１２３．４，１２１．８，１１８．８ｐｐｍにその応答を示し、３−ヒドロキシキヌレニン−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドのカーボン１４７．６，１４４．５，１２８．６，１２３．７，１２０．９，１１８．６ｐｐｍと類似していることがわかった。また、カルボキシル基（δＣ  １８１．４）とカルボニル基（δＣ  ２０６．２）に応答を示すピークも得られた。
以上の結果から、上記の抽出した化合物（Ｉ）が２−アミノ−３−（β−Ｄ−グルコピラノシロキシ）−γ−オキソベンゼンブタノイックアシッド〔前記式（Ｉ）〕であることがわかる。
【００２３】
【発明の効果】
本発明化合物は，２６０ｎｍ付近のＵＶ−Ｃ及び３６０ｎｍのＵＶ−Ａを強く吸収し、これらの有害な紫外線によるエネルギーを無害な蛍光として散乱することから、紫外線吸収剤及び紫外線散乱剤として有用であり、さらにアルドースリダクターゼの阻害剤として有用でもあるため、医薬品などの配合成分として利用できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例における遠心分離した上清液のゲル濾過パターンを示す図である。
【図２】実施例における逆相高速液体クロマトグラフパターンを示す図である。
【図３】実施例で得た本発明化合物の紫外線吸収スペクトルを示す図である。
【図４】実施例で得た本発明化合物に対する励起光、及びその結果発生する蛍光スペクトルを示す図である。
【図５】実施例で得た本発明化合物のＦＡＢ−マススペクトルにおけるフラグメントパターンを示す図である。
【図６】実施例で得た本発明化合物の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図７】図６の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一部拡大図である。
【図８】実施例で得た本発明化合物のＣＯＳＹスペクトルを示す図である。
【図９】実施例で得た本発明化合物のＮＯＥＳＹスペクトルを示す図である。
【図１０】実施例で得た本発明化合物のＮＭＲの帰属を示す図である。
【図１】
0003704627.tif 000004
【図２】
0003704627.tif 000005
【図３】
0003704627.tif 000006
【図４】
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【図５】
0003704627.tif 000008
【図６】
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【図７】
0003704627.tif 000010
【図８】
0003704627.tif 000011
【図９】
0003704627.tif 000012
【図１０】
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