(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記のアミノ酸配列：ｐＧｌｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｓｎを有するノナペプチド又はその薬学的に許容し得る塩を有効成分として含有することを特徴とする、造血系・血液成分の生体への投与の際に併用し、それらの宿主への生着を確実にし、移植・輸血の治療効果を高め、かつそれに伴う副作用を減らすための予防・治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【技術分野】
本発明は、人間用又は動物用の新規な医薬に関するものであり、さらに詳しく言えば、造血系細胞、即ち骨髄、胸腺、リンパ組織の細胞、末梢血幹細胞、臍帯血幹細胞および血液、あるいはそれらの個々の成分を体内に移植あるいは輸血する、医療・治療処置において、本来目的とするその治療効果を高め、かつそれに伴う副反応・副作用を抑制・阻止することを目的とする薬剤に関する。
【０００２】
【背景技術】
造血系の異常・不全な患者には、骨髄、胸腺、リンパ組織の細胞、末梢血幹細胞、臍帯血幹細胞あるいはそれらの個々の成分の移植が行われる。一方、癌、腫瘍、白血病、リンパ腫等の治療に化学療法剤の大量投与あるいは放射線の大量照射が行われる。これら腫瘍細胞の徹底的除去のあとには、骨髄等の再建が必須である。癌患者自身の骨髄、末梢血幹細胞を前もって体外に取り出し、凍結保存しておき、骨髄破壊的な癌治療実施後、骨髄、末梢血幹細胞をその患者本人にもどす方法が自家骨髄移植、自家末梢血幹細胞移植である。
【０００３】
一方腫瘍細胞を化学療法、放射線療法等により骨髄破壊的に叩き、根絶した後、ドナーである親・兄弟・同胞、他人の骨髄を移植するのが他家（まれに同系）骨髄移植である。このようにして移植された骨髄は宿主の造血系や免疫系を再構築する。
【０００４】
この移植医療において、骨髄、末梢血幹細胞、臍帯血幹細胞の移植細胞数を充分確保することが重要である。また移植した骨髄、胸腺、リンパ組織の細胞が宿主において確実に生着すること、即ち宿主対移植片反応［ＨＶＧＲ］などの拒絶反応を抑えること、さらには移植片対宿主疾患（反応）［ＧＶＨＤ（Ｒ）］を顕著に起こさないこと、そして必要な免疫系を早期に回復させる手段を講じて、感染症などにより移植患者を早期に死亡に至らしめないことが重要である。
【０００５】
しかしながら、急性ＧＶＨＤあるいは慢性ＧＶＨＤにより、折角の骨髄移植の医療後に、早期にあるいは晩発的に死亡する患者が数多く存在する現状であり、かかる状況に対し、適切、有効な医療対策を行うことが求められている。また骨髄移植医療においては、提供される骨髄を、広く量的に確保することは緊急問題であるところ、骨髄バンクの設立などの対策も講じられつつあるとはいえ、需要量に対し極めて不充分な現状にある。
【０００６】
一方、白血病患者への骨髄移植後のＧＶＨＤがたとえばサイクロスポリンＡとメソトレキセートとの併用などにより、比較的効果的に予防されることが知られているが、それは同時に、ＧＶＨＲによる白血病の再発の抑制効果（ＧＶＬ）が抑えられることにもつながる。そこでＧＶＨＤを抑制し、しかもＧＶＬも持続・維持する、あるいはＧＶＬを抑制しない程度にＧＶＨＤを効果的に抑制するような、骨髄等の移植医療に際し、支持的に用いられうる予防・治療剤を開発することは意義のあることである。
【０００７】
他方輸血医療においても、輸血後ＧＶＨＤが少なからず発生し、輸血後に、死亡する患者は少なくなく、これも解決を要する問題とされている。
【０００８】
【発明の開示】
本発明者は、骨髄提供者から１回に採取・提供される骨髄細胞の量をふやせる方法、採取する骨髄細胞数を減らしても同程度の移植の効果を達成・維持しうる方法の開発につき検討を続け、このような目的に適合するような薬剤を、生体に本来存在し、生体防御能を有する物質の中に求め、安全性の高い天然由来の各種ペプチド類につき、骨髄移植および輸血などの医療において、その医療効果を高め、ＧＶＨＤのような副作用を減らしうる予防・治療剤、また免疫系の再構築などを通して感染症などによる早期死亡を食い止めうる予防・治療剤として有用な物質を鋭意探索した。
【０００９】
その結果、血清胸腺因子（Ｆａｃｔｅｕｒ  ｔｈｙｍｉｑｕｅ  ｓｅｒｉｑｕｅ：ＦＴＳ）として知られるノナペプチドおよびその誘導体又はそれらの塩類又はそれら各化合物と金属との結合物をマウス、ラット、モルモット等に投与することにより、骨髄移植時の移植に要するドナーから採取する骨髄細胞数を大幅に減らしても、同等の移植の成績を達成できることを見出した。また骨髄を移植したマウス、ラット等、および脾臓細胞、血液あるいはその白血球成分（リンパ球等）を輸血・移入したマウス、ラット等に惹起・発生するＧＶＨＤが、ＦＴＳノナペプチドの投与により抑制されることを見出した。
【００１０】
またマウスの白血病の発症がＦＴＳの投与により抑制されることを見出した。本発明はかかる知見に基づいてなされたものであり、骨髄および血液あるいは、造血幹細胞あるいはリンパ球など、それらの個々の成分を生体に移植あるいは輸血する医療において、それらの宿主への生着を確実にし、その目的とする治療効果を高め、好ましからぬＧＶＨＤなどの副反応・副作用を減少・抑制するための予防・治療剤、また免疫系の再構築などを通して感染症などによる早期死亡を食い止めるための予防・治療剤を提供するものである。
【００１１】
先に、ＦＴＳとして知られるノナペプチドを有効成分とする多発性硬化症、ギラン・バレー症候群、炎症性神経炎、多発性神経炎などや他の免疫性脱髄疾患などの免疫不全を伴う各種疾患の治療剤および老化防止、細胞賦活、老人病予防・治療のための薬剤は知られているが、（特開昭５８−５２２２５、特開平１−３１６３２８）、ＦＴＳノナペプチドが、造血系・血液成分の生体への投与の際に併用し、それらの宿主への生着を確実にし、移植・輸血の治療効果を高め、かつそれに伴う副作用を減らしうるという事実・知見は、従来技術からは全く予期し得ないことであり、本発明者らによって初めて見出されたことである。
【００１２】
かくして本発明は、下記のアミノ酸配列：
ｐＧｌｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｓｎを有するノナペプチド又はそのＣ末端のアスパラギンのカルボキシル基におけるエステル又はアミド又はそれら各化合物の薬学的に許容し得る塩又はそれら各化合物と金属との結合物を有効成分として含有することを特徴とする、造血系・血液成分の生体への投与の際に併用し、それらの宿主への生着を確実にし、移植・輸血の治療効果を高め、かつそれに伴う副作用を減らすことを目的とする予防・治療剤を提供するものである。
【００１３】
本発明において使用される前記のノナペプチドは公知物質であって、通常ペプチド合成に慣用されている液相又は固相におけるペプチド合成法例えば、特開昭５４−１６４２５号公報、ＵＳＰ４，３０１，０６５記載の方法により、困難なく製造することができる。あるいはまた、このノナペプチドは、遺伝子工学的方法、細胞工学的方法によっても調製することができる。
【００１４】
本発明において使用される前記のノナペプチドのＣ末端のアスパラギンのカルボキシル基におけるエステルは、薬学的に許容し得るカルボン酸のエステル類であり、
【００１５】
その例としては、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、イソプロピルエステル、ｎ−ブチルエステル、イソブチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、ｎ−ペンチルエステル、イソペンチルエステル、ネオペンチルエステル、ｔｅｒｔ−ペンチルエステル、ｎ−ヘキシルエステル、ｓｅｃ−ヘキシルエステル、ヘプチルエステル、オクチルエステル、ｓｅｃ−オクチルエステル、ｔｅｒｔ−オクチルエステル、ノニルエステル、デシルエステル、ウンデシルエステル、ドデシルエステル、トリデシルエステル、テトラデシルエステル、ヘキサデシルエステル、オクタデシルエステル、ノナデシルエステル、エイコシルエステル、
【００１６】
シクロペンチルエステル、シクロヘキシルエステル、シクロヘプチルエステル、シクロオクチルエステル、アリルエステル、イソプロペニルエステル、ベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−クロルベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−フルオルベンシルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−ブロムベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−ヨードベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−メチルベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−エチルベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−イソプロピルベンジルエステル、シンナミルエステル、アミノエチルエステル、
【００１７】
ｏ−、ｍ−、又はｐ−アミノベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−ニトロベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−メトキシベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−エトキシベンジルエステル、ｏ−、ｍ−、又はｐ−アミノフエネチルエステル、α−フルフリルエステル、α−チエニルメチルエステル、α−ピリジルメチルエステル、α−ピリジルエチルエステル、ピペリジノメチルエステル、α−ビペリジルメチルエステル、モルホリノエチルエステル、α−モルホリニルメチルエステルなどがあげられる。
【００１８】
また、本発明において使用される前記のノナペプチドのＣ末端のアスパラギンのカルボキシル基におけるアミドは、薬学的に許容し得るカルボン酸のアミド類であり、
【００１９】
その例としては、アミド、メチルアミド、エチルアミド、プロピルアミド、イソプロピルアミド、ｎ−ブチルアミド、イソブチルアミド、ｔｅｒｔ−ブチルアミド、ｎ−ペンチルアミド、イソペンチルアミド、ネオペンチルアミド、ｔｅｒｔ−ペンチルアミド、ｎ−ヘキシルアミド、ｓｅｃ−ヘキシルアミド、ヘプチルアミド、オクチルアミド、ｓｅｃ−オクチルアミド、ｔｅｒｔ−オクチルアミド、ノニルアミド、デシルアミド、ウンデシルアミド、ドデシルアミド、トリデシルアミド、テトラデシルアミド、ヘキサデシルアミド、オクタデシルアミド、ノナデシルアミド、エイコシルアミド、
【００２０】
シクロペンチルアミド、シクロヘキシルアミド、シクロヘプチルアミド、シクロオクチルアミド、アリルアミド、イソプロペニルアミド、ベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−クロルベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−フルオルベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−ブロムベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−ヨードベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−メチルベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−エチルベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−イソプロピルベンジルアミド、シンナミルアミド、アミノエチルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−アミノベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−ニトロベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−メトキシベンジルアミド、ｏ−、ｍ−、又はｐ−エトキシベンジルアミド、
【００２１】
ｏ−、ｍ−、又はｐ−アミノフエネチルアミド、α−フルフリルアミド、α−チエニルメチルアミド、α−ピリジルメチルアミド、α−ピリジルエチルアミド、ピペリジノメチルアミド、α−ピペリジルメチルアミド、モルホリノエチルアミド、α−モルホリニルメチルアミド、メトキシカルボニル−（α−メルカプトメチル）メチルアミド、エトキシカルボニル−（α−メルカプトメチル）メチルアミドなどがあげられる。
【００２２】
また、前述の薬学的に許容し得る塩としては、前記のノナペプチドのアミノ基における酸付加塩およびカルボキシル基における塩基塩があげられる。酸付加塩としては、有機酸又は無機酸との各塩があげられ、それらの例としては、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、トリフルオロ酢酸、酒石酸、フマル酸、りんご酸、マレイン酸、しゅう酸、ナフトエ酸などのカルボン酸との塩、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸などのスルホン酸との塩、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸との塩、があげられる。
【００２３】
上記の塩基塩としては、無機塩基との塩すなわち、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、あるいは有機塩基との塩すなわち、アミンとの塩があげられ、それらの例としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアミン塩、エタノールアミン塩、トリス塩、ジシクロヘキシルアミン塩などがあげられる。
【００２４】
前記の各化合物と金属との結合物における金属としては亜鉛、鉄、マグネシウム、コバルト、ニッケル、クロム、金、ゲルマニウム、ガリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウム、銅、マンガン、セレンなどの１価、２価、３価又は４価の金属が例示される。
【００２５】
本発明に係わる造血系・血液成分の生体への投与の際に併用し、その治療効果を高め、かつ副作用を減らすことを目的とする予防・治療剤は、その剤型に応じて通常慣用の製剤手段を用いて調製される。すなわち、上記のノナペプチドならびにそのエステル又はアミド誘導体もしくはそれらの塩類又はそれら各化合物と金属との結合物から選ばれた有効成分物質を、適宜、薬学的に許容し得る担体、賦形剤、希釈剤などを用いて、適当な剤型に調製する。剤型は外用、経口投与、非経口投与等々の投与経路に適した種種の剤型とするこがができる。
【００２６】
本発明に係わる造血系・血液成分の生体への投与の際に併用し、その治療効果を高め、かつ副作用を減らすことを目的とする予防・治療剤の効果は下記の如き試験により確認されている。
【００２７】
すなわち、マウス、ラット、ハムスター、スナネズミ、モルモット等哺乳動物を用い、これら動物に対し、致死量の放射線を照射するか、あるいは各用量、致死量の抗癌剤等を投与して、これら動物の骨髄の機能を障害し、ついで予め上記のノナペプチドの所定量を連日あるいは隔日に一定期間、腹腔内注射、皮下注、筋注、静注、経口などの各種の投与ルートで同種同系の動物に投与し、対照として同様に生食を同種同系の動物に投与し、しかる後それぞれ採取した骨髄細胞を、上記の骨髄障害動物に移入し、その骨髄、脾コロニー形成数等の造血系に対する効果や延命効果を比較検討した。
【００２８】
また骨髄を移植し合わせて脾臓細胞を移入するか、あるいは骨髄のみ、脾臓細胞のみ、リンパ球のみを移入してＧＶＨＤを惹起せしめたマウス、ラット等に、上記のノナペプチドの所定量をＧＶＨＤ発症に先立って、あるいは発症直後から、連日あるいは隔日に、所定の期間、腹腔内注射、皮下注、筋注、静注、経口などの各種の投与ルートで投与し、対照群とノナペプチド投与群との間の血液、尿検査値、各臓器の重量測定値、各リンパ節の重量測定値、体重測定値さらには生存率、各臓器の傷害の病理所見などを比較・観察した。
【００２９】
本発明に係わる薬剤における有効成分物質の毒性を検討するため、マウスに対し、有効成分物質ノナペプチド１００ｍｇ／ｋｇを連日１４日間皮下投与したが外見的に何ら異常は見られなかった。また、ラットに対し、有効成分物質３０ｍｇ／ｋｇ連日２１日間、皮下投与したが、外見的にも血清生化学的にも、また病理解剖を行った結果でも、何ら異常は見られなかった。このように、本発明に係わる薬剤は、きわめて毒性の少ない安全な薬剤であり、長期間投与することが可能である。
【００３０】
本発明に係わる薬剤を投与することができる対象動物としては、例えばヒト及びウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、イヌ、ネコなどの家畜、ライオン、ゾウ、キリン、クマ、ゴリラ、サル、チンパンジーなどの動物園等で飼育されている哺乳類動物、マウス、ラット、ハムスター、スナネズミ、モルモットほか各種の実験動物、ニワトリ、七面鳥などの家禽類、ペット用の鳥類、爬虫類、両棲類、魚類などがあげられる。
【００３１】
その投与量はこれら動物の体重１ｋｇあたり通常、０．１μｇ／５００ｍｇ／日で、これらは、例えば、１日１回〜６回に分割投与してもよく、また投与対象者の年齢、病状などにより適宜投与量を増減することができる。その投与経路は特に限定されないが、静脈内、筋肉内、皮内、皮下に注射投与することもできる。また軟膏剤を調製することにより、眼部、口腔内、鼻腔内、皮膚などに塗布することができ、坐薬やゼリー剤、点眼剤、点鼻剤、鼻口腔吸収剤、エアロゾル剤、噴霧剤、局所留置ペレット剤、経口剤などとして投与することもできる。有効成分物質の生体内での急速な分解あるいは不活性化を阻止するために、有効成分物質を適当な製剤成分、たとえば、アルコール性、レシチンなどの油性、脂肪性の生理的に無害な固体または液体材料あるいはそれらの懸濁物リポソームなどを用いて製剤とし長時間活性が持続する製剤とすることもできる。
【００３２】
本発明に係わる薬剤は、他の薬剤、たとえば免疫抑制剤、免疫調節剤また免疫賦活剤等のｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｍｏｄｉｆｉｅｒや、各種のＧ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、エリスロポエチン、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＬＩＦなどの造血因子や、ムロクタシン、化学療法剤などとともに投与することができ、また、これらを製剤中に添加し、合剤として投与し、臨床効果を高めることができる。
【００３３】
以下に実施例および実験例を記載し、本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれら各例によって限定されるものではない。なお、例中の記載において、前記のノナペプチドを便宜上、ＦＴＳと略記する。
【００３４】
【実施例】
実施例１  注射用バイアル製剤
ＦＴＳ・ＣＨ３ＣＯＯＨ・２Ｈ２Ｏ（三井製薬工業社製）１ｍｇを蒸留水に溶解し、除菌濾過し、バイアル内に充填し、凍結乾燥した。
【００３５】
実施例２  注射用アンプル製剤
ＦＴＳ・ＣＨ３ＣＯＯＨ・２Ｈ２Ｏ（三井製薬工業社製）５ｍｇを生理食塩水に溶解し、除菌濾過し、アンプル内に充填した。
【００３６】
実施例３  皮下注射用注射剤
ＦＴＳ・ＣＨ３ＣＯＯＨ・２Ｈ２Ｏ（三井製薬工業社製）を単位投与量あたり２ｍｇを２％カルボキシメチルセルロースＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）溶液中に懸濁し、大豆ホスフアチドからなるＬｉｐｏｍａｌ（ＨｕｈｔａｍａｋｉＯｙ／Ｌｅｉｒａｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社製）あるいは静脈用水中油型乳濁液であるＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（Ｃｕｔｔｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）と混合した。Ｌｉｐｏｍａｌを用いる場合は、ＦＴＳ溶解ＰＢＳ溶解とＬｉｐｏｍａｌは等量ずつ混ぜ合わせた。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄを用いる場合は、ＦＴＳ溶解ＰＢＳ溶液２．５ｍｌ、Ｔｗｅｅｎ  ８０  （Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社製）０．１ｍｌ及びＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ  ４．６ｍｌを混ぜ合わせた。
【００３７】
実施例４  リポソーム製剤
リポソーム製剤には、電荷の異なる３種類があり、それらが、更に構造上から、４種類に分類される。
電荷は中性、陽性、陰性の３種であり、構造的には多重層リポソーム（ＭＬＶ、ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）、小さな一枚膜リポソーム（ＳＵＶ、Ｓｍａｌｌ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）、および大きな一枚膜リポソーム（ＬＵＶ、ｌａｒｇｅ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）、更にＬＵＶに近似の構造を有しながら数枚膜のもの（ＲＥＶ、ｒｅｖｅｒｓｅ−ｐｈａｓｅ  ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ  ｖｅｓｉｃｌｅ）の４種類が知られている。
【００３８】
▲１▼  ＦＴＳ封入中性電荷リポソーム
ホスフアチジルコリン類、スフインゴミエリン等のリン脂質、およびコレステロールのクロロホルム溶液をモル比２：１、４：１、あるいは１：１となるように混合し、一旦溶媒を減圧留去したものに、脂質量に対し１／１００〜１／１０００当量のＦＴＳのＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）溶液を添加し、Ｖｏｒｔｅｘ  ｍｉｘｅｒにて十分混和すると、ＭＬＶが得られた。
更に、リン脂質の相転移温度（Ｔｃ）以上で超音波処理することによりＳＵＶが得られた。
【００３９】
得られたＳＵＶに塩化カルシウム水溶液を加え、３７℃で１時間インキュベートして融合させた後、ＥＤＴＡを添加し、３７℃で３０分間インキュベートしてＣａ＋＋を除くと、ＬＵＶが得られた。
ＲＥＶは以下の通りにして調製される。すなわち脂質のクロロホルム溶液から溶媒を減圧留去した後、ジエチルエーテルを適当量加えて充分に溶解したものに、ＦＴＳのＰＢＳ溶液を加え、超音波処理すると均一な単相の溶液となった。得られた溶液を室温にて減圧濃縮した後、ＰＢＳ溶液を加え、Ｖｏｒｔｅｘ  ｍｉｘｅｒにて充分に混和すると、ＲＥＶが得られた。
【００４０】
▲２▼  ＦＴＳ封入陽性電荷リポソーム
脂質の構成成分が異なるだけで、調製方法は上記中性電荷リポソームの場合と同様である。
ホスフアチジルコリン類、スフインゴミエリン等のリン脂質、コレステロール、およびステアリルアミン等の陽性電荷の高級脂肪族アミンをモル比で７：２：１又は４：１：１で混合して、脂質成分とし、同様の方法でＦＴＳを封入した。
【００４１】
▲３▼  ＦＴＳ封入陰性電荷リポソーム
ホスフアチジルコリン類、スフインゴミエリン等のリン脂質、コレステロールおよびジセチルホスフエート、スルフアチド等の陰性電荷の高級脂肪族エステル等をモル比で７：２：１又は４：１：１で混合して、脂質成分とし、同様の方法でＦＴＳを封入した。
【００４２】
実施例５  軟膏剤
ＦＴＳ・ＣＨ３ＣＯＯＨ・２Ｈ２Ｏ（三井製薬工業社製）２ｍｇを精製水に溶解した。次に白色ワセリン２５ｇ、ステアリルアルコール２０ｇ、ＨＣＯ−６０４ｇおよびモノステアリン酸グリセリン１ｇをとり、混和して予め調製したプロピレングリコール１２ｇ、パラオキシ安息香酸メチル０．１ｇ、パラオキシ安息香酸プロピル０．１ｇの水溶液（ＦＴＳ含有）を加えて充分に混和し、乳液とした後、冷却して固化するまで混和操作を続けて調製した。
【００４３】
実施例６  坐剤
ＦＴＳ・ＣＨ３ＣＯＯＨ・２Ｈ２Ｏ（三井製薬工業社製）１０ｍｇを予め加温したハードファットに分散し、全量を２ｇとした。
【００４４】
実施例７  経鼻用カプセル剤
ＦＴＳ０．０５ｍｇを無菌条件下で２９．９５ｍｇのミグリオル８１２中性油（ダイナマイトノーベル社製）に溶解した。この溶液を常用の単位投与用投与器に充填し、これを使用前に駆動カプセルに装着した。
【００４５】
実施例８  点鼻剤
蒸留水に以下の量のリン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、塩化ナトリウム及びＥＤＴＡ−ジナトリウム塩を室温にて溶解した。この溶液にＦＴＳを溶解し、メンブランフィルターにより濾過した。
ＦＴＳ・ＣＨ３ＣＯＯＨ・２Ｈ２Ｏ                      ０．１０ｍｇ
リン酸一水素ナトリウム・２Ｈ２Ｏ                      ０．３０ｍｇ
リン酸二水素ナトリウム・１２Ｈ２Ｏ                  １０．１０ｍｇ
塩化ベンザルコニウム                                  ０．１０ｍｇ
エチレンジアミン四酢酸−ジナトリウム塩（ＥＤＴＡ）    ０．５０ｍｇ
塩化ナトリウム                                        ４．５０ｍｇ
蒸留水                                            ９８７．６０ｍｇ
ｐＨ値                                              ５．０±０．３
【００４６】
実施例９  経鼻用スプレー製剤
ＦＴＳ・ＣＨ３ＣＯＯＨ・２Ｈ２Ｏ（三井製薬工業社製）２ｍｇをヒドロキシプロピルセルロース又はヒドロキシプロピルメチルセルロースに懸濁し、噴霧製剤機にてスプレー用剤とした。
以下に、本発明の薬剤に関する薬理実験、毒性実験の例を掲げる。
【００４７】
【実験例】
実験例１
Ｉａ抗原の異なるＣ５７ＢＬ／６（Ｂ６）マウスとＢ６．Ｃ−Ｂ−２ｂｍ１２（ｂｍ１２）マウスとを用意した。Ｂ６マウスの脾細胞からナイロンウールカラム法によって非付着性のＴ細胞を得た。その１〜２×１０７個を（ｂｍ１２×Ｂ６）Ｆ１マウスに１週間隔で２回移入し、ＧＶＨＲを惹起させた。ＧＶＨＲが起こっていることは脾指数（脾重量（ｍｇ）÷マウス体重（ｇ））の増加によって知ることができる。
【００４８】
これらマウスを２群に分け、第１群にはＦＴＳ物質生食溶液を、細胞移入２日前から連日１４日間（屠殺の２日前まで）５００μｇ／ｋｇ体重、０．１ｍｌ／１０ｇ体重になるようにｉ．ｐ．投与した。第２群には同様にして、生食のみを投与し、マウスはそれぞれ最初の細胞移入から１４日目に屠殺した。
【００４９】
ついで肝の一部をホルマリン固定し、常法によってヘマトキシリン−エオジン（ＨＥ）染色を施した。これを光学顕微鏡下で病理学的検索を行い、病変の程度をスコア化した。第２群のマウスでは、脾腫をきたし、肝小葉間胆管や中心静脈門脈域に細胞浸潤と肉芽腫がみられ、また慢性非化膿性破壊性胆管炎（Ｃｈｏｒｏｎｉｃ  ｎｏｎ−ｓｕｐｐｒａｔｉｖｅ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ，ＣＮＳＤＣ）が認められた。スコアは４００倍で検鏡した時、細胞浸潤の程度が１００個以下の細胞浸潤を１とし、１００−４００個を２とし、４００個以上を３とした。ＣＮＳＤＣと肉芽腫に関しては、スコア化が困難なために、ある（＋）か、なし（−）かで表した。ＦＴＳ物質を投与することにより、細胞浸潤の程度は明らかに弱くなっており、また肉芽腫の形成も弱い個体が多かった（４／６）。このようにＦＴＳ物質はＧＶＨＲを抑制し、またＧＶＨＲが引き金となる自己免疫疾患様病態を抑えることが明らかにされた。
【００５０】
実験例２
６週令Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウスにＢａｌｂＣマウスの骨髄細胞１０７個および５×１０６個の脾臓細胞を静脈内投与してＧＶＨＤを惹起させ、経時的に治療群にはＦＴＳ物質０．１〜３０μｇの各用量を、また対照群には生食を皮下投与していった。対照群が次第に体重減少し、毛羽立ってゆき、１０日目でほぼ全例死亡したのに対し、ＦＴＳ物質投与群は、１０日目までの体重減少が抑制され、次第に体重増加に転じ、３０日後まで延命した。
【００５１】
実験例３
（Ｃ５７Ｂ１／６×ＤＢＡ／２）Ｆ１マウスに１×１０６の脾臓細胞を静脈内投与して急性ＧＶＨＤモデルを作成した。６日目から９日目にかけて宿主のγδ型腸管上皮間リンパ球が増加し、１２日目になると減少した。ドナーの腸管上皮間リンパ球は９日目から出現した。このドナーＴリンパ球の腸管上皮間への浸潤によるＧＶＨＤの消化器病変等により、宿主マウスは１４〜１６日目にほぼ死亡した。この経過をたどる宿主マウスにＦＴＳ物質を０．１〜５０μｇの各用量を投与していったところ、腸管上皮障害が軽減、あるいは遅延して発生し、またマウスの死亡も遅延し、死亡率が低下した。
【００５２】
実験例４
４週令（ＤＡ×Ｌｅｗｉｓ）Ｆ１ラット足蹠にＤＡ系ラットリンパ球１×１０５個を皮下注射し、４、５および７日後に膝窩リンパ節の重量を測定してＧＶＨＲを測定した。ＦＴＳ物質を種々の投与スケジュールで０．１〜５０μｇの各用量を投与していったところ、４、５日後の対照群の各個体の膝窩リンパ節の重量が、３ｍｇから４５ｍｇの範囲に分布し、７日後の重量が８ｍｇから８５ｍｇまでの間に分布したのに対して、ＦＴＳ物質投与群の重量が抑制されていることがわかった。
【００５３】
実験例５
コロニーフォーミングユニットアッセイ／脾臓（ｃｏｌｏｎｙ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｕｎｉｔ−ｓｐｌｅｅｎ  ａｓｓａｙ）により、ＦＴＳ物質の骨髄細胞のコロニー形成能に対する促進効果を、Ｇ−ＣＳＦ（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｃｏｌｏｎｙ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）のそれと比較して検討した。９週令雌性Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウスを１群４匹ずつ、３群に分けた。第１群（ＦＴＳ＋ＣＹ群）のマウスには、実験第０日から８日まで５０μｇのＦＴＳ物質を１日１回皮下投与し、第３日にシクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ，ＣＹ）を２００ｍｇ／ｋｇ皮下投与した。
【００５４】
第２群（Ｇ−ＣＳＦ＋ＣＹ群）のマウスには、０日から８日まで２μｇのＧ−ＣＳＦを１日１回皮下投与し、第３日にＣＹを２００ｍｇ／ｋｇ皮下投与した。第３群（ＣＹ群）のマウスには、第１群、第２群同様に、第３日にＣＹを２００ｍｇ／ｋｇ皮下投与した。第８日に、各群の４匹のマウスの骨髄細胞を採取し、群ごとにプールした。他方、骨髄細胞の移植を受けるレシピエントマウスを用意した。７週令雌性Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウス１５匹に９．５ＧｙのＸ線の全身照射を行い、３群に分けた。
【００５５】
２４時間後に１群５匹の３群の各レシピエントマウスそれぞれに対応して、上記のように集めた３群の骨髄細胞を１×１０５ずつ移入した。骨髄移植の７日後に、各マウスを屠殺し、脾臓を採取した。脾臓の固定後、各マウスのＣＦＵ−ｓ数を測定したところ、ＦＴＳ＋ＣＹ群は８５±１９、Ｇ−ＣＳＦ＋ＣＹ群は１０２±３４、ＣＹ群は１７±１２であり、ＣＹ群と他の２群との間にはｐ＜０．００５で有意差があったが、ＦＴＳ＋ＣＹ群とＧ−ＣＳＦ＋ＣＹ群との間には統計学的有意差は見られなかった。この実験結果はＦＴＳ物質の骨髄細胞のコロニー形成能に対する効果が、Ｇ−ＣＳＦのそれと比べて遜色ないものであることを示すものである。
【００５６】
実験例６
９週令雄性Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウスを２群に分け、第１群にはＦＴＳ物質１０μｇを１日１回、計７日間皮下注射した。第２群には生理食塩水を同様に投与した。そしてそれぞれの群のマウスから骨髄細胞を採取し、それぞれプールした。別に用意した同系マウスに８００Ｒ放射線を照射し、２４時間後に、上記のように採取した、ＦＴＳ物質投与群あるいは生食投与群の骨髄細胞を１０匹１群のマウスのそれぞれの群に、１匹あたり１．２５×１０３、２．５×１０３、５×１０３、１×１０４および１×１０５個、尾静脈より移入した。
【００５７】
１０日後のマウスの生存率を調べると、１．２５×１０３、２．５×１０３、５×１０３、１×１０４、１×１０５個の移入量に対して、生食投与群骨髄細胞の移入群では、それぞれ０％、１０％、２０％、３０％、１００％であったのに対して、ＦＴＳ物質投与群骨髄細胞の移入群では、それぞれ４０％、６０％、７０％、１００％、１００％であった。５０％生存を与える、生食投与群骨髄細胞移入群の細胞数が、１．９５×１０４個であるのに対して、ＦＴＳ物質投与群骨髄細胞移入群の細胞数は１．７５×１０３と算定され、ＦＴＳ物質前投与マウスの骨髄細胞は、生食前投与マウスの１１倍の骨髄生着・生存維持活性があることがわかり、このことにより、ＦＴＳ物質を前投与しておくと骨髄細胞の移植のための採取量は１１分の１ですむということが認識される。
【００５８】
これ故、骨髄移植、末梢血幹細胞移植など造血幹細胞移植療法において、造血幹細胞を提供するドナーに予めＦＴＳ物質を投与しておくことは、造血幹細胞の数や機能を増強するのに有効であることが予想される。ドナーからの１回の造血幹細胞数の採取量も減らすことが可能となる。
【００５９】
実験例７  毒性試験
ｄｄｙ系５週令雄性マウス１群５匹に、ＦＴＳ物質５０ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇをそれぞれ連日１４日間、皮下投与したが、何ら毒性は見られなかった。
【００６０】
実験例８  毒性試験
５週令のウイスターラット１群１０匹に、ＦＴＳ物質３０ｍｇ／ｋｇを連日２１日間、皮下投与したが、何ら毒性は見られなかった。
以上述べたように、骨髄移植、造血幹細胞移植、輪血などの医療が頻繁に行われている今日、造血系・血液成分の生体への投与の際に併用し、それらの宿主への生着を確実にし、移植・輸血の治療効果を高め、かつそれに伴う副作用を減らし、死亡例を減らすことを目的とする予防・治療剤の提供が待望されているが、そのような薬剤は殆どないと言われている。
【００６１】
しかるに本発明に係わる薬剤は、直接的に、あるいは間接的に種々の作用を通して生体防御系を活性化して、上記の目的を達成する優れた予防・治療効果をもたらす点で画期的なものである。また、本発明において使用するノナペプチド（ＦＴＳ）は動物由来のペプチドであり天然物質であるので、類似のアミノ酸配列を持つＦＴＳ類縁体（アナローグ）と異なり、生体においても全く無害であり、抗原性、アナフラキシーショックなどの問題も存在しない。従って、本発明に係わる薬剤は、安全かつ有用な人間用、動物用の医薬として使用することができる。