(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
生分解性高分子が溶解された２種以上の油相に薬物をそれぞれ溶解又は分散させて２種以上の１次油相又はエマルジョンを製造する段階と、
製造された２種以上の１次油相又はエマルジョンを１種の水相に同時に又は連続的に分散させる段階と、
薬物が分散された微粒球から有機溶媒を除去して薬物封入微粒子を製造する段階とを含むことを特徴とする、多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法。
【請求項２】
１次油相又はエマルジョンを１種の水相に分散させる手段として、２種以上の１次油相又はエマルジョンを同時に又は連続的に１種の水相に分散させるか、１次エマルジョン(DP 1)を水相に分散させた後、水相の物理的又は化学的要素を変化させた後、つぎの１次エマルジョン(DP 2)を分散させることを特徴とする、請求項１に記載の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法。
【請求項３】
水相の物理的又は化学的要素を変化させる手段として、ミキサーの速度を１００rpm〜５，０００rpm、水相の量は１次エマルジョン又は油相の２０倍〜１，０００倍、水相に含有された乳化剤はポリソルベート(polysorbate)又はポリビニールアルコールで、１％〜１０％、添加剤はゼラチン(gelatin)、カルボキシルメチルセルロース(carboxylmethyl cellurose)、又はカルシウム(calcium)で、０．１％〜５％、温度は５℃〜４０℃に調節して分散させることを特徴とする、請求項２に記載の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法。
【請求項４】
１次油相又はエマルジョンを製造する手段として、水溶液に薬物を溶解させた薬物含有水溶液を生分解性高分子の含有された有機溶媒に分散させて１次エマルジョンを形成した後、これを水相に分散させる二重乳化蒸発法(W/O/W)、又は有機溶媒又は有機溶媒の混合物に薬物と生分解性高分子を一緒に溶解させた後、これを水相に分散させる単一乳化蒸発法(O/W)で製造することを特徴とする、請求項１に記載の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法。
【請求項５】
生分解性高分子が、ポリラクチド高分子、ポリグリコライド高分子、ラクチドとグリコライドの高分子共重合体、又はこれらの混合体を含むことを特徴とする、請求項１に記載の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法。
【請求項６】
生分解性高分子が、酢酸セルロース、酢酸セルロースプロピオネート、セルロースブチラート、セルロースプロピオネート、セルロースバラレート、クマロンインデンポリマー(cumaroneindene polymer)、 ジブチルアミノヒドロキシプロピルエーテル、エチルセルロース、エチレン−ビニールアセテート共重合体、グリセロールジステアレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタラート、２−メチル−５−ビニールピリジンメタクリラート−メタクリル酸共重合体、ポリアミノ酸、ポリアンハイドリド、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリブタジエン、ポリエステル、ポリヒドロキシブチリン酸、ポリメチルメタクリラート、ポリメタクリル酸エステル、ポリオルトエステル、ポリプロピレン、多糖類、ポリスチレン、ポリビニールアセタルジエチルアミノアセテート、ポリビニールアセテート、ポリビニールアルコール、ボリビニールブチラール、ポリビニールフォーマル、蛋白質、塩化ビニール−プロピレン−酢酸ビニール共重合体、塩化ビニール−酢酸ビニール共重合体、ワックス類、高分子脂肪酸類から選択されるどの１種以上を含むことを特徴とする、請求項１に記載の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法。
【請求項７】
薬物が、生理活性ペプチド及び蛋白質、抗癌剤、抗生剤、解熱剤、鎮痛剤、抗炎症剤、去痰剤、鎮静剤、筋肉弛緩剤、癲癇治療剤、抗潰瘍剤、抗憂鬱症剤、抗アレルギー剤、強心剤、抗不整脈剤、血管拡張剤、低血圧性利尿剤、糖尿病治療剤、過脂質血症治療剤、抗凝固剤、溶血剤、抗結核剤、ホルモン、麻酔拮抗剤、骨吸収抑制剤、骨形成促進剤及び血管形成抑制剤を含む薬物で、これら薬物が塩の形態になっているものを含むことを特徴とする、請求項１に記載の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法。
【請求項８】
１次油相において、薬物の含量が１％〜５０％、高分子の濃度は５％〜５０％であることを特徴とする、請求項１に記載の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法。
【請求項９】
薬物が酢酸ゴセレリン(goserelin acetate)、酢酸ナファレリン(nafarelin acetate)、酢酸ブセレリン(buserelin acetate)及び酢酸ロイプロレリン(Leuprolelin acetate)を含むことを特徴とする、請求項１〜７のいずれかに記載の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法。
【請求項１０】
生分解性高分子が、ラクチドとグリコライドのモル比が４５：５５〜５５：４５であり、重量平均分子量が６，０００〜１０，０００及び２５，０００〜３５，０００である高分子を同時に又は順次水相に分散させることにより、長期間持続的に薬物を放出することを特徴とする、請求項１〜５のいずれかに記載の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は生分解性高分子からなる担体に薬物を封入し持続的に薬物の放出を調節し得る微粒球の製造方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
従来の徐放型薬物伝達系(DDS; Drug Delivery System)製剤の一般的な製造方法としては、コアセルベーション法(coacervation)、乳濁液相分離法又は噴霧乾燥によるカプセル化及び有機又は水相中の溶媒蒸発法などが知られている。このような方法のなかでも水相中溶媒蒸発法が最も多く使用されており、これは大きく乳化蒸発法(W/O/W; Water/Oil/Water)と単一乳化蒸発法(O/W; Oil/Water)とに分類される。
【０００３】
一般に、ペプチド又は蛋白質のような水溶性薬物の封入に主として使用されるＷ／Ｏ／Ｗ法は、水溶液に薬物を溶解して製造した薬物含有水溶液を生分解性高分子を含有する有機溶媒に分散させて１次エマルジョンを形成(water in oil)した後、これを水相に分散させる方法である。また、脂溶性薬物の封入に主として使用されるＯ／Ｗ法は、有機溶媒又は有機溶媒の混合物に薬物と生分解性高分子を共に溶解(oil)させた後、これを水相に分散させる方法である。両方法は共に、有機溶媒相の高分子が水相に分散される過程で、有機溶媒が抽出又は蒸発などにより除去されて、高分子の溶解度が減少することにより、固形化され、その結果、微粒球を形成することになる。一般に、Ｗ／Ｏ／Ｗ法により製造された微粒球は、Ｏ／Ｗ法により製造された微粒球に比べて多孔性が増加するので、表面積が大きくなって、薬物の初期放出速度が相対的に高いという特徴がある。
【０００４】
持続的な薬物放出の期間を決定する代表的な要素は、高分子の化学的組成、分子量、親水性、有機溶媒の組成、乳化剤又は添加剤の種類及び濃度によって決定される。このなかで最も重要な要素は、高分子の化学的組成、分子量及び親水性などである。例えば、ラクチドとグリコライドのモル比が異なる形態に構成される共重合体であるポリラクチド−コ−グリコライド(polylactide-co-glycolides, PLGA)高分子の場合、ラクチドのモル比とその分子量が増加するほどに分解速度が遅くなる。したがって、もっと長い期間、薬物の持続的放出のための微粒球を製造するためには、ラクチドの含量が相対的にもっと多いか、分子量がもっと大きい高分子を使用する。しかし、もっと長い期間にわたって分解される高分子は、初期又は中間のどの部分で放出が殆ど行われないなどの問題点を有する。
【０００５】
したがって、１種の高分子のみでは要求期間の間(例えば、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月など)持続的に薬物を放出し得る徐放性微粒子を製造することには多くの努力と時間が要求される。したがって、従来の製造方法は、分解速度の速い高分子と分解速度の遅い高分子を混合し、これに薬物を封入する方法に研究が進行されているが、このように製造された微粒球からの薬物の放出速度は、混合された個々の高分子に封入された微粒球から放出される薬物の量から正確に予測することができない。その理由としては、特性の異なる２種以上の高分子が１個の微粒球上に存在し、生体内での分解速度が速い高分子から由来した分解産物の影響により、分解速度の遅い高分子の分解が単独で存在する場合より速くなる傾向がある。その結果、薬物の生体内放出速度も分解速度の速い高分子の影響を受けることになり、それぞれの高分子に封入された薬物の放出速度の平均値とは違う結果をもたらすことになる。
【０００６】
このような欠点を克服するために、薬物を分解速度の異なる２種以上の高分子にそれぞれ封入させて得た微粒球を適正比で混合して、所望期間、薬物が持続的に放出される微粒球(米国特許第４，８９７，２６８号)を得る方法があるが、このような方法では、１種の剤形の商品化のために、２以上の微粒球を製造する工程上の困難性があり、経済的にも非効率である。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
従って本発明の課題は、従来技術における欠点がなく、簡単な操作により、所望の期間、持続的に薬物を放出し得る徐放出性製剤であって、しかも従来法に比べ、放出期間の予測が容易な徐放出性製剤を製造することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前記の課題を解決すべく鋭意研究を重ねる中で、多重エマルジョン法を採用することにより、前記課題を解決する徐放出性製剤を製造できることを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は生分解性高分子が溶解された２種以上の油相に薬物をそれぞれ溶解又は分散させて２種以上の１次油相又はエマルジョンを製造する段階と、
製造された２種以上の１次油相又はエマルジョンを１種の水相に同時に又は連続的に分散させる段階と、
薬物が分散された微粒球から有機溶媒を除去して薬物封入微粒子を製造する段階とを含むことを特徴とする、多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法に関する。
【０００９】
また本発明は、１次油相又はエマルジョンを１種の水相に分散させる手段として、２種以上の１次油相又はエマルジョンを同時に又は連続的に１種の水相に分散させるか、１次エマルジョン(DP 1)を水相に分散させた後、水相の物理的又は化学的要素を変化させた後、つぎの１次エマルジョン(DP 2)を分散させることを特徴とする、前記の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法に関する。
【００１０】
さらに本発明は、水相の物理的又は化学的要素を変化させる手段として、ミキサーの速度を１００rpm〜５，０００rpm、水相の量は１次エマルジョン又は油相の２０倍〜１，０００倍、水相に含有された乳化剤はポリソルベート(polysorbate)又はポリビニールアルコールで、１％〜１０％、添加剤はゼラチン(gelatin)、カルボキシルメチルセルロース(carboxylmethyl cellurose)、又はカルシウム(calcium)で、０．１％〜５％、温度は５℃〜４０℃に調節して分散させることを特徴とする、前記の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法に関する。
【００１１】
また本発明は、１次油相又はエマルジョンを製造する手段として、水溶液に薬物を溶解させた薬物含有水溶液を生分解性高分子の含有された有機溶媒に分散させて１次エマルジョンを形成した後、これを水相に分散させる二重乳化蒸発法(W/O/W)、又は有機溶媒又は有機溶媒の混合物に薬物と生分解性高分子を一緒に溶解させた後、これを水相に分散させる単一乳化蒸発法(O/W)で製造することを特徴とする、前記の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法に関する。
さらに本発明は、生分解性高分子が、ポリラクチド高分子、ポリグリコライド高分子、ラクチドとグリコライドの高分子共重合体、又はこれらの混合体を含むことを特徴とする、前記の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法に関する。
また本発明は、生分解性高分子が、ラクチドとグリコライドのモル比が４５：５５〜５５：４５であり、重量平均分子量が６，０００〜１０，０００及び２５，０００〜３５，０００である高分子を同時に又は順次水相に分散させることにより、長期間持続的に薬物を放出することを特徴とする、前記の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法に関する。
【００１２】
また本発明は、生分解性高分子が、酢酸セルロース、酢酸セルロースプロピオネート、セルロースブチラート、セルロースプロピオネート、セルロースバラレート、クマロンインデンポリマー(cumaroneindene polymer)、 ジブチルアミノヒドロキシプロピルエーテル、エチルセルロース、エチレン−ビニールアセテート共重合体、グリセロールジステアレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタラート、２−メチル−５−ビニールピリジンメタクリラート−メタクリル酸共重合体、ポリアミノ酸、ポリアンハイドリド、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリブタジエン、ポリエステル、ポリヒドロキシブチリン酸、ポリメチルメタクリラート、ポリメタクリル酸エステル、ポリオルトエステル、ポリプロピレン、多糖類、ポリスチレン、ポリビニールアセタルジエチルアミノアセテート、ポリビニールアセテート、ポリビニールアルコール、ボリビニールブチラール、ポリビニールフォーマル、蛋白質、塩化ビニール−プロピレン−酢酸ビニール共重合体、塩化ビニール−酢酸ビニール共重合体、ワックス類、高分子脂肪酸類から選択されるどの１種以上を含むことを特徴とする、前記の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法に関する。
【００１３】
さらに本発明は、薬物が、生理活性ペプチド及び蛋白質、抗癌剤、抗生剤、解熱剤、鎮痛剤、抗炎症剤、去痰剤、鎮静剤、筋肉弛緩剤、癲癇治療剤、抗潰瘍剤、抗憂鬱症剤、抗アレルギー剤、強心剤、抗不整脈剤、血管拡張剤、低血圧性利尿剤、糖尿病治療剤、過脂質血症治療剤、抗凝固剤、溶血剤、抗結核剤、ホルモン、麻酔拮抗剤、骨吸収抑制剤、骨形成促進剤及び血管形成抑制剤を含む薬物で、これら薬物が塩の形態になっているものを含むことを特徴とする、前記の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法に関する。
【００１４】
また本発明は、１次油相又はエマルジョンにおいて、薬物の含量は１％〜５０％、高分子の濃度は５％〜５０％であることを特徴とする、前記の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法に関する。
さらに本発明は、薬物が酢酸ゴセレリン(goserelin acetate)、酢酸ナファレリン(nafarelin acetate)、酢酸ブセレリン(buserelin acetate)及び酢酸ロイプロレリン(Leuprolelin acetate)を含むことを特徴とする、前記の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法に関する。
【００１５】
また本発明は、生分解性高分子が、ラクチドとグリコライドのモル比が４５：５５〜５５：４５であり、重量平均分子量が６，０００〜１０，０００及び２５，０００〜３５，０００である高分子を同時に又は順次水相に分散させることにより、長期間持続的に薬物を放出することを特徴とする、前記の多重エマルジョン法による徐放出性微粒球の製造方法に関する。
【００１６】
本発明は、一定期間持続的に薬物を放出し得る徐放出性製剤の製造方法であり、従来の高分子混合法により製造された方法に比べて放出期間を易しく調節することができ、特に、全体放出期間を変化させなく、初期放出量を調節することができる。本発明は、適当な高分子の組成、分子量又は溶媒の組成及び濃度、添加剤などを１次油相又はエマルジョン段階でそれぞれ多様に調節することにより、１工程で徐放出性製剤を製造する方法で、その製造過程は次の３段階と要約できる。
(第１段階)薬物及び生分解性高分子の種類、組成又は濃度のうち、２種以上の物理的又は化学的性質の異なる１次油相又はエマルジョン(Oil又はwater in oil)を製造する。
(第２段階)製造された２種以上の１次油相又はエマルジョンを１種の水相に分散させる。
(第３段階)分散された微粒球から有機溶媒を除去して微粒子を得る。
前記第２段階において、２種以上の１次油相又はエマルジョンを１種の水相に分散させる方法をより具体的に説明すると、２種以上の１次油相又はエマルジョンを同時又は連続的に１種の水相に分散させるか、第１の１次エマルジョンを水相に分散させた後、水相の物理的又は化学的要素を変換させた後、第２の１次エマルジョンを分散させることができる。ここで、“水相の物理的又は化学的要素の変化”とは、ミキサーの速度又は水相の量、水相に含有された乳化剤、添加剤の濃度、温度などを意味する。
【００１７】
【発明の実施の形態】
以下に本発明の実施の形態について詳細に説明する。
本発明に使用できる生分解性高分子化合物としては、酢酸セルロース(cellulose acetate)、酢酸セルロースプロピオネート(cellulose acetate propionate)、セルロースブチラート(cellulose butyrate)、セルロースプロピオネート(cellulose propionate)、セルロースバラレート(cellulose valerate)、クマロンインデンポリマー(cumaroneindene polymer)、 ジブチルアミノヒドロキシプロピルエーテル(dibutylaminohydroxypropyl ether)、エチルセルロース(ethyl cellulose)、エチレン−ビニールアセテート(ethylene-vinylacetate)共重合体、グリセロールジステアレート(glycerol distearate)、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタラート(hydroxypropylmethyl cellulose phthalate)、２−メチル−５−ビニールピリジンメタクリラート−メタクリル酸(2-methyl-5-vinylpyridine methacrylate-methacrylic acid)共重合体、
【００１８】
ポリアミノ酸 (polyamino acids)、ポリアンハイドリド(polyanhydrides)、ポリカプロラクトン(polycaprolactone)、ポリカーボネート(polycarbonate)、ポリブタジエン(polybutadiene)、ポリエステル(polyesters)、ポリヒドロキシブチリン酸(polyhydroxybutyric acid)、ポリメチルメタクリラート(polymethyl methacrylate)、ポリメタクリル酸エステル(polymethacrylic acid ester)、ポリオルトエステル(polyorthoesters)、ポリプロピレン(polypropylene)、多糖類(alginic acid, chitin, chitosan, chondroitin, dextrin, dextran, hyaluronic acid, heparin, keratan sulfate, starch)、ポリスチレン(polystyrene)、ポリビニールアセタルジエチルアミノアセテート(polyvinyl acetal dietylamino acetate)、ポリビニールアセテート(polyvinyl acetate)、
【００１９】
ポリビニールアルコール(polyvinyl alcohol)、ボリビニールブチラール(polyvinyl butyral)、ポリビニールフォーマル(polyvinyl formal)、蛋白質(albumin, casein, collagen, fibrin, fibrinogen, gelatin, hemoglobin, transfferin, zein)、塩化ビニール−プロピレン−酢酸ビニール (vinylchloride-propylene-vinylacetate)共重合体、塩化ビニール−酢酸ビニール共重合体 (vinylchloride -vinylacetate polymer)、ワックス類(beef tallow, whale wax, bees wax, paraffin wax, castor wax)、高分子脂肪酸類(myristic, palmitic, stearic, behenic acids)などがある。前記高分子のなかでも、更に好ましくは、ポリラクチド(polylactides)、ポリグリコライド(polyglycolides)、これらの共重合体であるポリラクチド−コ−グリコライド(polylactide-co-glycolides, PLGA)などの脂肪族ポリエステル系が使用できる。
【００２０】
前記生分解性高分子のうち、ＰＬＧＡを例として本発明をより詳細に説明する。ＰＬＧＡは生体内で最終的に乳酸(lactic acid)とグリコール酸(glycolic acid)の単量体に分解されるので、生体適合性が認められた物質で、無害であることがよく知られており、米国ＦＤＡから許可された物質で、既に前立腺癌の治療剤として使用されるＬＨＲＨ同族体と小児矮小症患者に投与される人間成長ホルモンの持続性薬物放出剤形として使用されている。ＰＬＧＡは、単量体である乳酸とグリコール酸の比、分子量、親水性などの物理的特性によって、多様な種類が存在し、これらはそれぞれ生体内で短くは２週から長くは数ヶ月の期間にわたって分解される特性を有する。
【００２１】
本発明による微粒球の製造方法のうち、第１段階において、２種以上の１次油相又はエマルジョンを製造する例として、第１の１次油相は、薬物と生体分解速度が比較的短いＰＬＧＡ、つまり単量体比が５０：５０、又は親水性の高いＰＬＧＡ(例えば、末端にカルボキシ残基を含有するＰＬＧＡ：RG502H,RG503H など)、又は分子量の小さいＰＬＧＡを有機溶媒に溶解させて製造し、第２の１次油相は薬物と生体分解速度が比較的長いＰＬＧＡ、つまり単量体比が７５：２５、又は親水性が低いＰＬＧＡ(例えば、末端のカルボキシル基がドデシル基などで置換されたＰＬＧＡ：RG502, RG503 など)、又は分子量の大きいＰＬＧＡを有機溶媒に溶解させることにより製造することができる。薬物が水溶性である場合には、前述した事項のうち、薬物を水溶液に溶解させ、それぞれの高分子が溶解された油相にエマルジョン状態に分散させることにより、２以上の１次エマルジョンを製造することができる。
【００２２】
更にほかの例としては、それぞれの１次油相又はエマルジョンを製造するとき、生分解性高分子は同一物質を使用するが、薬物の種類は相違し得る。具体的に、ＬＨＲＨ(Leutenizing Hormone Releasing Hormone)の同族体を、例えば、第１の１次油相では、ＬＨＲＨ同族体のなかで拮抗物質(antagonist)の１種を溶解させ、第２の１次油相では、ＬＨＲＨ同族体のなかで作用物質(agonist)の１種を溶解させることにより、２種の相違した１次油相を製造することができる。また、高分子の種類又は薬物の種類が互いに異なる２種を使用しなくても、１種の薬物と１種の高分子によっても物理的又は化学的性質の異なる２種以上の油相又はエマルジョンを製造することができる。例えば、２種の１次油相又はエマルジョンにおいて、薬物又は高分子の重量比、有機溶媒に対する薬物又は高分子の重量比、使用される有機溶媒の比(有機溶媒の混合物を使用する場合)、水溶液と有機溶媒の比(水溶性薬物の場合、つまりＷ／Ｏ／Ｗ法)などを異なるように調節することで可能なものである。
【００２３】
このような媒介変数の差により製造された微粒球は構造形態学的に互いに異なる特性を有し、一般に、薬物の放出速度も互いに異なる。例えば、通常、高分子の有機溶媒に対する重量比が増加すると１次油相又はエマルジョンの粘度が増加して薬物の封入率が増加し、微粒球の大きさも相対的に大きくなる。更にほかの例として、通常、薬物が水溶性である場合、薬物の含有率が高くなると生体内放出速度が増加し、脂溶性の場合、薬物の含有率が高くなると、放出速度が減少する傾向を示す。有機溶媒の混合物を使用する場合にも、それぞれの有機溶媒の水に対する溶解度又は沸点などの差により２次水相に分散されたエマルジョンでの有機溶媒の抽出又は蒸発速度が互いに異なるため、その結果、微粒球の特性が変化し、薬物の放出速度も影響を受けることになるものである。
【００２４】
本発明による微粒球の製造方法において、第２段階で製造された２種以上の１次油相又はエマルジョンを１種の水相に分散させる方法の具体的な例を挙げると次のようである。最も簡単な例としては、１種の水相に２種以上の１次油相又はエマルジョンを同時に分散させる方法、又は第１の１次油相又はエマルジョンを分散させ、直ちに第２の１次油相又はエマルジョンを分散させる方法である。通常、このような方法においては、水相の量を十分に使用することにより、全ての１次油相又はエマルジョンに存在する有機溶媒を十分に抽出又は蒸発させることができなければならない。
【００２５】
これとは異なり、第１の１次油相又はエマルジョンを水相に分散させた後、“水相の物理化学的要素”を変換させた後、第２の１次油相又はエマルジョンを水相に分散させる方法も使用できる。“水相の物理化学的要素”とは、前述したように、ミキサーの速度又は水相の量、水相に含有された乳化剤、添加剤の濃度、温度などを意味するもので、これらの変化による微粒球の特性変化を説明するとつぎのようである。
【００２６】
一般に、ミキサーの速度が増加するにしたがってエマルジョンの大きさが小さくなり、これにより微粒球の大きさも小さくなる。水相の量が増加すると、エマルジョンからの有機溶媒の抽出速度も速くなって、生分解性高分子の固形化が早く起こり、微粒球の大きさも大きくなる。水相の温度は有機溶媒の蒸発速度に影響を及ぼすので、温度が高くなるほどに蒸発速度が速くなる。生分解性高分子の固形化速度、微粒子の大きさなどによって、究極的には薬物の放出速度も影響を受けることになる。
【００２７】
したがって、第１の１次油相又はエマルジョンを分散させた後、水相の量を増加させるか、温度を高くして、有機溶媒をどの程度除去すると、第２の１次油相又はエマルジョンに存在する有機溶媒を十分に抽出し得ることになるものである。したがって、２種以上の１次油相又はエマルジョンを１種の水相に分散させる際、それぞれの１次油相又はエマルジョンに存在する有機溶媒の種類、量などを考慮し、かつ水相の量又は温度なども顧慮して微粒球を製造すべきである。
本発明に提供し得る薬物としては、生理活性ペプチド及び蛋白質、抗癌剤、抗生剤、解熱剤、鎮痛剤、抗炎症剤、去痰剤、鎮静剤、筋肉弛緩剤、癲癇治療剤、抗潰瘍剤、抗憂鬱症剤、抗アレルギー剤、強心剤、抗不整脈剤、血管拡張剤、低血圧性利尿剤、糖尿病治療剤、過脂質血症治療剤、抗凝固剤、溶血剤、抗結核剤、ホルモン、麻酔拮抗剤、骨吸収抑制剤、骨形成促進剤及び血管形成抑制剤を含む。
【００２８】
生理活性ペプチドと蛋白質は２種以上のアミノ酸で、分子量が約２００〜１００，０００であり、これらペプチド及び蛋白質薬物の例としては、人間成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン放出ペプチド、インターフェロン、コロニー刺激因子、インタールキン、マクロファージ活性因子、マクロファージペプチド、Ｂ細胞因子、Ｔ細胞因子、蛋白質Ａ、アレルギー抑制因子、細胞怪死糖蛋白質、免疫毒素、リンホトキシン、腫瘍抑制因子、転移成長因子、アルファ−１アンチトリプシン、アルブミンとその断片ポリペプチド、アポリポ蛋白質−Ｅ、エリスロポイエチン、因子VII、因子VIII、因子IV、プラズミノゲン活性因子、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、蛋白質Ｃ、Ｃ−反応性蛋白質、レニン抑制剤、コラゲナーゼ抑制剤、スーパーオキサイドディスムターゼ、血小板由来成長因子、表皮成長因子、カチリジ誘導因子、結合組織活性因子、濾胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、黄体形成ホルモン放出ホルモン、神経成長因子、パラチオイドホルモン、レラキシン、シクレチン、ゾマトメジン、インシュリン−類似成長因子、アドレノコルチコトロフィックホルモン、グルカゴン、コロシストキニン、膵臓ポリペプチド、ガストリン放出ペプチド、コルチコトロピン放出因子、チロイド刺激ホルモン、各種ウィルス、バクテリア、毒素などに対する単一クローン性又はポリクローン性抗体、各種ウィルス由来ワクチン抗原などを含む。
【００２９】
抗癌剤の例としては、ブレオマイシン(bleomycin)、メトトレキサート(methotrexate)、アクチノマイシンＤ(actinomycin D)、マイトマイシンＣ(mitomycin C)、ビンブラスチン硫酸塩(binblastin sulfate)、ビンクリスチン硫酸塩(bincrystin sulfate)、ダウノルビシン(daunorubicin)、アドリアマイシン(adriamycin)、ネオカルチノスタチン(neocartinostatin)、シトシンアラビノシド(cytosinearabinoside)、フルオロウラシル(fluorouracil)、テトラヒドロフリル−５−フルオロウラシル(tetrahydrofuryl-5-fluorouracil)、クレスチン(krestin)、ピシバニル(Picibanil)、レンチナン(lentinan)、レバミゾール(levamisole)、ベスタチン(bestatin)、アジメキソン(azimexon)、グリシリジン(glycyrrhizin)、ポリル類(polyI:C, polyA:U, polyICLC)などがある。
【００３０】
抗生剤の例としては、ゲンタマイシン(gentamicin)、ジベカシン(dibekacin)、カネンドマイシン(kanendomycin)、リビドマイシン(lividomycin)、トブラマイシン(tobramycin)、アミカシン(amikacin)、フラジオマイシン(fradiomycin)、シソマイシン(sisomycin)、テトラサイクリン塩酸塩(tetracycline hydrochloride)、オキシテトラサイクリン塩酸塩(oxytetracycline hydrochloride)、ロリテトラサイクリン(rolitetracycline)、ドキシサイクリン塩酸塩(doxycycline hydrochloride)、アンピシリン(ampicillin)、ピペラシリン(piperacillin)、チカルシリン(ticarcillin)、セファロシン(cefalothin)、セファロリジン(cefaloridine)、セフォチアム(cefotiam)、セフスロジン(cefsulodin)、セフメノキシム(cefmenoxime)、セフメタゾanalgesール(cefmetazole)、セファゾリン(cefazolin)、セフォタキシム(cefotaxime)、セフォペラゾン(cefoperazon)、セフチゾキシム(ceftizoxime)、モキサラクタム(mochisalactam)、チエナマイシン(thienamycin)、スルファゼシン(sulfazecin)及びアズトレオナム(aztreonam)などがある。
【００３１】
解熱剤の例としては、アナルジージク(analgesics)とサリチン酸を含有する抗炎症剤(anti-inflammatory agents include salicylic acid)、スルピリン(sulpyrine)、フルフェナム酸(flufenamic acid)、ジクロフェナク(diclofenac)、インドメタシン(indomethacin)、モルヒネ(morphine)、ペチジン塩酸塩(pethidine hydrochloride)、レボルファノールタートラート(levorphanol tartrate)及びオキシモルホン(oxymorphone)などがある。
【００３２】
鎮痛剤の例としては、エフェドリン塩酸塩(ephedrine hydrochloride)、メチルエフェドリン塩酸塩(methylephedrine hydrochloride)、ノスカピン塩酸塩(noscapine hydrochloride)、コデイン燐酸塩(codeine phosphate)、ジヒドロコデイン燐酸塩(dihydrocodeine phosphate)、アロクラミド塩酸塩(allocramide hydrochloride)、クロフェダノール塩酸塩(clofedanol hydrochloride)、ピコペリダミン塩酸塩(picoperidamine hydrochloride)、クロペラスチン(chloperastine)、プロトキロール塩酸塩(protokylol hydrochloride)、イソプロテレノール塩酸塩(isoproterenol hydrochloride)、スルブタモール硫酸塩(sulbutamol sulfate)及びテルブタリン硫酸塩(terbutaline sulfate)などがある。
【００３３】
鎮静剤の例としては、クロルプロマジン(chlorpromazine)、プロクロルペラジン(prochlorperazine)、トリフルチオペラジン(trifltioperazine)、アトロピン硫酸塩(atropine sulfate)及びメチルスコポラミンブロミド(methylscopolamine
ｂｒｏｍｉｄｅ）などがある。
筋肉弛緩剤の例としては、プリジノールメタンスルフォナート(pridinol methanesulfonate)、塩化ツボクラリン(tubocurarine chloride)及びパンクロニウムブロミド(pancuronium bromide)などがある。
抗癲癇剤の例としては、フェニトイン含有アンチピレプチック(antiepileptics include phenytoin)、エトスクシミド(ethosuximide)、アセタゾールアミドソジウムクロルジアゼポキシド(acetazolamide sodium chlordiazepoxide)などがある。
【００３４】
抗潰瘍剤の例としては、メトクロプラミド(metoclopramide)とヒスチジン塩酸塩(histidine hydrochloride)などがある。
抗憂鬱症剤の例としては、イミプラミン(imipramine)、クロミプラミン(clomipramine)、ノキシプチリン(noxiptiline)及びフェネルジン硫酸塩(phenerdine sulfate)などがある。
抗アレルギー剤の例としては、ジフェンヒドラミン塩酸塩(diphenhydramine hydrochloride)、クロルフェニラミンマレアート(chlorpheniramine maleate)、トリペレナミン塩酸塩(tripelenamine hydrochloride)、メスジラジン塩酸塩(methdilazine hydrochloride)、クレミゾール塩酸塩(clemizole hydrochloride)、ジフェニルピラリン塩酸塩(diphenylpyraline hydrochloride)及びメトキシフェナミン塩酸塩(methoxyphenamine hydrochloride)などがある。
【００３５】
強心剤の例としては、トランス−パイオキソカンファー(trans-paioxocamphor)、テオピロール(theophyllol)、アミノフィリン(aminophylline)とエチレフリン塩酸塩(etilefrine hydrochloride)などがある。
抗不整脈剤の例としては、プロプラノール(propranol)、アルプレノロール(alprenolol)、ブフェトロール(bufetolol)及びオキソプレノロール(oxoprenolol)などがある。
血管拡張剤の例としては、オキシフェドリン塩酸塩(oxyfedrine hydrochloride)、ジルチアゼム(diltiazem)、トラゾリン塩酸塩(tolazoline hydrochloride)、ヘキソベンジン(hexobendine)及びバメタン硫酸塩(bamethan sulfate)などがある。
【００３６】
低血圧性利尿剤の例としては、ヘキサメトニウムブロミド(hexamethonium bromide)、ペントリーウム(pentolinium)、メカミラミン塩酸塩(mecamylamine hydrochloride)、エカラジン塩酸塩(ecarazine hydrochloride)及びクロニジン(clonidine)などがある。
糖尿病治療剤の例としては、グリミジンソジウム(glymidine sodium)、グリピジド(glipizide)、フェンホルミン塩酸塩(fenformin hydrochloride)、ブホルミン塩酸塩(buformin hydrochloride)及びメトホルミン(metformin)などがある。過脂質血症治療剤の例としては、プラバスタチンソジウム(pravastatin sodium)、シンバスタチン(simvastatin)、クリノフィブレート(clinofibrate)、クロフィブレート(clofibrate)、シンフィブレート(simfibrate)及びベザフィフレート(bezafibrate)などがある。
【００３７】
抗凝固剤の例としては、ヘパリンソジウム(heparin sodium)などがあり、溶血剤の例としては、トロンボプラスチン(thromboplastin)、トロンビン(thrombin)、メナジオン塩(menadione sodium hydrogen sulfite)、アセトメナフトン(acetomenaphthone)、トラネキサム酸(tranexamic acid)、カルバゾクロム硫酸塩(carbazochrome sodium sulfonate)及びアドレクロム塩(adrenochrome monoaminoguanidine methanesulfonate)がある。
【００３８】
抗結核剤の例としては、イソニアジド(isoniazid)、エタンブトール(ethambutol)及びパラ−アミノサリチル酸(p-aminosalicylic acid)などがある。
ホルモンの例としては、プレドニゾロン及び塩(predonizolone, predonizolone sodium phosphate)、デキサメタゾン硫酸塩(dexamethasone sodium sulfate)、ベータメタゾン燐酸塩(betamethasone sodium phosphate)、ヘキセストロール燐酸塩(hexestrol phosphate)、ヘキセストロール酢酸塩(hexestrol acetate)及びメチマゾール(methimazole)がある。
【００３９】
麻酔拮抗剤の例としては、 レバロルファンタートラート(levallorphan tartrate)、ナノルフィン塩酸塩(nalorphine hydrochloride)及びナロキソン塩酸塩(naloxone hydrochloride)があり、骨吸収抑制剤の例としては、 イプリフラボン(ipriflavone)などがあり、骨形成促進剤の例としては、ポリペプチド類(polypeptides、例えば BMP, PTH, TGF-beta 及び IGF-1)などがある。
血管形成抑制剤の例としては、ステロイド(steroid)、フマギリン(fumagillin)及びフマギロール(fumagillol)誘導体がある。
【００４０】
生理活性薬物は薬理的に適用可能な塩の形態(例えば、生理活性薬物がアミン基のような塩基性基を持っている場合、塩酸、硫酸、硝酸のような無機酸から製造された塩及び炭酸、琥珀酸から製造された有機酸、生理活性薬物がカルボキシル基のような酸性基をもっている場合、ナトリウム、カリウムのような無機塩により形成された塩、３エチルアミン、アルギニンのような塩基性有機化合物から形成された塩)からなり得る。
【００４１】
【実施例】
本発明をつぎの実施例に基づいてより詳細に説明するが、これら実施例が本発明の技術的範囲を限定するものではない。
(実施例１)二重エマルジョン法によるブリリアントブルー含有微粒球／ローダミン含有微粒球(1:1)混合体の製造
ブリリアントブルー(Brilliant Blue)０．１ｇをメタノール１．５ｇに溶解した後、ＲＧ５０２H(Boehringer Ingelheim製)０．５ｇをメチレンクロライド２．０ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョン(DP1)を製造した。ローダミン(Rhodamin B)０．１ｇをメタノール１．５ｇに溶解した後、ＲＧ５０２Ｈ０．５ｇをメチレンクロライド２．０ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョン(DP2)を製造した。製造された１次エマルジョン(DP1)と１次エマルジョン(DP2)を順次、予め２５℃に調節された０．５％ポリビニールアルコールを含有する２５０mlの蒸留水溶液に３，５００rpmのホモゲナイザーで分散させた。ホモゲナイザーの速度を３，０００rpmに調節し、１５分間エマルジョンを形成した後、４０℃に温度を上昇させ、１時間有機溶媒を蒸発除去して、固形化された微粒球を製造した。図１ａはこれの光学顕微鏡写真である。
【００４２】
(比較例１)
Ａ：ブリリアントブルー含有微粒球の製造
ブリリアントブルー０．２ｇをメタノール３ｇに溶解した後、ＲＧ５０２Ｈ １ｇをメチレンクロライド２．０ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョンを製造した。製造された１次エマルジョンを、予め２５℃に調節された０．５％ポリビニールアルコールを含有する２５０mlの蒸留水溶液に３５００rpmのホモゲナイザーで分散させた。ホモゲナイザーの速度を３，０００rpmに調節し、１５分間エマルジョンを形成した後、４０℃に温度を上昇させ、１時間有機溶媒を蒸発除去して、固形化された微粒球を製造した。図１ｂはこれの光学顕微鏡写真である。
【００４３】
Ｂ：ローダミン含有微粒球の製造
ローダミン０．２ｇをメタノール３ｇに溶解した後、ＲＧ５０２Ｈ １ｇをメチレンクロライド２．０ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョンを製造した。製造された１次エマルジョンを、予め２５℃に調節された０．５％ポリビニールアルコールを含有する２５０mlの蒸留水溶液に３，５００rpmのホモゲナイザーで分散させた。ホモゲナイザーの速度を３，０００rpmに調節し、１５分間エマルジョンを形成した後、４０℃に温度を上昇させ、１時間有機溶媒を蒸発除去して、固形化された微粒球を製造した。図１ｃはこれの光学顕微鏡写真である。
【００４４】
Ｃ：高分子混合法によるブリリアントブルー／ローダミン(1:1)含有微粒球の製造
ブリリアントブルー０．１ｇとローダミン０．１ｇをメタノール３ｇに溶解した後、ＲＧ５０２Ｈ １ｇをメチレンクロライド２．０ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョンを製造した。製造された１次エマルジョンを、予め２５℃に調節された０．５％ポリビニールアルコールを含有する２５０mlの蒸留水溶液に３，５００rpmのホモゲナイザーで分散させた。ホモゲナイザーの速度を３，０００rpmに調節し、１５分間エマルジョンを形成した後、４０℃に温度を上昇させ、１時間有機溶媒を蒸発除去して、固形化された微粒球を製造した。図１ｄはこれの光学顕微鏡写真である。
【００４５】
実施例１、比較例１Ａ、比較例１Ｂ及び比較例１Ｃにより製造された微粒子に対する光学顕微鏡写真を図１ａ、図１ｂ、図１ｃ、図１ｄにそれぞれ示した。実施例１により製造された微粒子は、比較例１のＡとＢにより製造された微粒子が１：１で混合されている形態を取っていることを知り得る反面、比較例１Ｃの高分子混合法により製造された微粒子の場合は２色が混合された形態を取っている。
【００４６】
(実施例２)最小２８日持続的な放出のための酢酸ロイプロレリン含有生分解性微粒球の製造
Ａ型：酢酸ロイプロレリン(leuprolelin acetate)６２．５mgをメタノール０．２８ｇに溶解した後、ラクチドとグリコライドが５０：５０で、平均分子量が８，６００であるＰＬＧＡ(RG502H, Boehringer Ingelheim)０．４３８ｇをメチレンクロライド１．１２５ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョン(DP1)を製造した。酢酸ロイプロレリン６２．５mgをメタノール０．３７ｇに溶解した後、ラクチドとグリコライドが５０：５０で、平均分子量が３３，０００であるＰＬＧＡ(RG503H, Boehringer Ingelheim)０．４３８ｇをメチレンクロライド１．３１３ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョン(DP2)を製造した。製造された１次エマルジョン(DP1)と１次エマルジョン(DP2)を順次、予め２５℃に調節された０．３％ポリビニールアルコールを含有する２５０mlの蒸留水溶液に３，５００rpmのホモゲナイザーで分散させた。ホモゲナイザーの速度を３，０００rpmに調節し、１５分間エマルジョンを形成した後、４０℃に温度を上昇させ、２時間有機溶媒を蒸発除去して、固形化された微粒球を製造した。
【００４７】
本発明により製造された微粒球の走査電子顕微鏡写真を図２ａ(100倍拡大)及び図２ｂ(800倍拡大)に示した。図２ｂの拡大された写真の右側に見える微粒球は多孔性を有するもので、ＤＰ１により５０２Ｈ高分子から由来したものであり、左側は非多孔性を有するもので、ＤＰ２の５０３Ｈから由来したものであることが確実に区分される。
Ｂ型：酢酸ロイプロレリン(leuprolelin acetate)７５mgをメタノール０．２７ｇに溶解した後、ＲＧ５０２Ｈ ０．４２５ｇをメチレンクロライド１．９０３ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョン(DP1)を製造した。酢酸ロイプロレリン７５mgをメタノール０．３６ｇに溶解した後、ＲＧ５０３Ｈ ０．４２５ｇをメチレンクロライド１．２７５ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョン(DP2)を製造した。以下、実施例２のＡ型と同様に行って微粒球を製造した。
【００４８】
(比較例２)
Ａ：酢酸ロイプロレリンを含有するＲＧ５０２Ｈ微粒球の製造
酢酸ロイプロレリン６２．５mgをメタノール０．２８ｇに溶解した後、ＲＧ５０２Ｈ ０．４３８ｇをメチレンクロライド１．１２５ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョンを製造した。製造された１次エマルジョンを、予め２５℃に調節された０．３％ポリビニールアルコールを含有する１２５mlの蒸留水溶液に３，５００rpmのホモゲナイザーで分散させた。以後は実施例２のＡ型と同様に行って微粒球を製造した。
【００４９】
Ｂ：酢酸ロイプロレリンを含有するＲＧ５０３Ｈ微粒球の製造
酢酸ロイプロレリン６２．５mgをメタノール０．３７ｇに溶解した後、ＲＧ５０３Ｈ ０．４３８ｇをメチレンクロライド１．３１３ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョンを製造した。製造された１次エマルジョンを、予め２５℃に調節された０．３％ポリビニールアルコールを含有する１２５mlの蒸留水溶液に３，５００rpmのホモゲナイザーで分散させた。以後は実施例２のＡ型と同様に行って微粒球を製造した。
【００５０】
Ｃ：酢酸ロイプロレリンを含有するＲＧ５０２Ｈ／ＲＧ５０３Ｈ(1:1)微粒球の製造
酢酸ロイプロレリン１２５mgをメタノール０．６５ｇに溶解した後、ＲＧ５０２Ｈ ０．４３８ｇとＲＧ５０３Ｈ ０．４３８ｇがメチレンクロライド２．４３８ｇに一緒に溶解された高分子溶液に分散して１次エマルジョンを製造した。製造された１次エマルジョンを、予め２５℃に調節された０．３％ポリビニールアルコールを含有する２５０mlの蒸留水溶液に３，５００rpmのホモゲナイザーで分散させた。以後は実施例２のＡ型と同様に行って微粒球を製造した。
【００５１】
(試験例１)Ｉｎ ｖｉｔｒｏ薬物放出試験
本発明の実施例２と比較例２で製造された微粒球と、対照群として市中に流通されているロイプリン(Leuplin;日本国タケダ社製)とに対して in vitro放出試験を比較するために、つぎのように実施した。それぞれ５mgの凍結乾燥された微粒球をそれぞれ０．０３３Ｍ燐酸塩緩衝液(pH 7.0)が入っている３５個の試験管に分散させた後、３７℃で放出した。試験日は０．２５、１、４、７、１４、２１、２８日とし、各試験日に、５個の試験管から試料を採取した後、遠心分離して得た微粒球をメチレンクロライド／アセテート緩衝液(1:1, v/v)で抽出して、アセテート層に移行されたロイプロリドの量をＨＰＬＣにより決定した。この際に、分析条件は０．１％３フッ素化アセト酸を含有する２８％アセトニトリル水溶液を移動相として２８０nmで流速１．０ml/minで測定して図３に示した。
【００５２】
(試験例２)ロイプロレリンの血中濃度試験
実施例２で製造された微粒球と対照群として市中に流通されているロイプリン(日本国タケダ社製)とを比較するために、ネズミに投与した後、時間経過による血中濃度の変化を測定した。試験に使用された動物は、１０匹のＳＤ系雄性白ネズミが使用された。実施例２の微粒球とロイプリンをそれぞれ５匹のネズミに筋肉注射で投与した。投与量はネズミ当たり０．９mgとし、投与後、血中濃度を、１、３、７、１４、２１、２８、３５日に尻尾静脈から採取した血液から測定して図４に示した。
【００５３】
(試験例３)テストステロンの血中濃度試験
実施例２で製造された微粒球と流通されているロイプリン(日本国タケダ社製)とを比較するために、ネズミに投与した後、時間経過による血中濃度の変化を測定した。試験に使用された動物は、１０匹のＳＤ系雄性白ネズミが使用された。実施例２の微粒球とロイプリンをそれぞれ５匹のネズミに筋肉注射で投与した。投与量は体重１kg当たり３mgとし、投与後、血中濃度を、０．２５、１、３、７、１４、２１、２８、３５日に尻尾静脈から採取した血液から測定して図４に示した。
【００５４】
(実施例３)最小２ヶ月持続的な放出のためのアドリアマイシン含有生分解性微粒球の製造
アドリアマイシン(adriamycin)２０mgをメタノール０．５６３ｇに溶解した後、ＲＧ５０２Ｈ ０．８７５ｇをメチレンクロライド２．２５３ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョン(DP1)を製造した。アドリアマイシン１５mgをメタノール０．７３５ｇに溶解した後、ラクチドとグリコライドのモル比が５０：５０で、平均分子量が１４，５００であるＰＬＧＡ(RG502, Boehringer Ingelheim)０．８７５ｇをメチレンクロライド２．６２４ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョン(DP2)を製造した。
製造された１次エマルジョンＤＰ１とＤＰ２を同時に、予め２５℃に調節された０．３％ポリビニールアルコールを含有する５００mlの蒸留水溶液に３，５００rpmのホモゲナイザーで分散させた。以後は実施例２のＡ型と同様に行って微粒球を製造した。
【００５５】
(実施例４)最小３ヶ月持続的な放出のための酢酸ロイプロレリン含有生分解性微粒球の製造
Ａ型：酢酸ロイプロレリン６２．５mgをメタノール０．２８２ｇに溶解した後、ＲＧ５０２Ｈ ０．４３８ｇをメチレンクロライド１．２１７ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョン(DP1)を製造した。酢酸ロイプロレリン１８７．５mgをメタノール０．４９２ｇに溶解した後、平均分子量が１５，０００であるポリラクチド(PLA0015,日本国Wako社製)１．３ｇをメチレンクロライド１．９７ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョン(DP2)を製造した。製造された１次エマルジョンＤＰ１とＤＰ２を順次、予め２５℃に調節された０．３％ポリビニールアルコールを含有する５００mlの蒸留水溶液に３，５００rpmのホモゲナイザーで分散させた。以後は実施例２のＡ型と同様に行って微粒球を製造した。
【００５６】
Ｂ型：酢酸ロイプロレリン１２５mgをメタノール０．３２８ｇに溶解した後、ＰＬＡ００１５ ０．８７５ｇをメチレンクロライド１．３ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョンを製造した。製造された１次エマルジョン１／２を取り、予め１０℃に調節された０．１％ポリビニールアルコールを含有する１２５mlの蒸留水溶液に３，５００rpmのホモゲナイザーで分散させた。０．３％ポリビニールアルコールを含有する１２５mlの蒸留水溶液を徐々に加えた後、温度を２５℃に調節し、残りの１次エマルジョンを分散させた。以後は実施例２のＡ型と同様に行って微粒球を製造した。
【００５７】
(実施例５)最小４ヶ月持続的な放出のための酢酸ロイプロレリン含有生分解性微粒球の製造
酢酸ロイプロレリン６２．５mgをメタノール０．２８２ｇに溶解した後、ＲＧ５０２Ｈ ０．４３８ｇをメチレンクロライド１．１２７ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョン(DP1)を製造した。酢酸ロイプロレリン１８７．５mgをメタノール０．４９２ｇに溶解した後、ラクチドとグリコライドのモル比が５０：５０で、分子量が１４，５００であるＰＬＧＡ(RG 502, Boehringer Ingelheim)１．３ｇをメチレンクロライド１．９７ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョン(DP2)を製造した。製造された１次エマルジョンＤＰ１及びＤＰ２を順次、予め２５℃に調節された０．３％ポリビニールアルコールを含有する５００mlの蒸留水溶液に３，５００rpmのホモゲナイザーで分散させた。以後は実施例２のＡ型と同様に行って微粒球を製造した。
【００５８】
(実施例６)最小６ヶ月持続的な放出のための酢酸ロイプロレリン含有生分解性微粒球の製造
酢酸ロイプロレリン１２５mgをメタノール０．３２８ｇに溶解した後、ＰＬＡ００１５ ０．８７５ｇをメチレンクロライド１．３１３ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョン(DP1)を製造した。酢酸ロイプロレリン１２５mgをメタノール０．７３５ｇに溶解した後、ラクチドとグリコライドのモル比が８５：１５で、分子量が２２０，０００であるＰＬＧＡ(RG858, Boehringer Ingelheim)０．８７５ｇをメチレンクロライド２．６２４ｇに溶解した高分子溶液に分散して１次エマルジョン(DP2)を製造した。製造された１次エマルジョンＤＰ１及びＤＰ２を順次、予め２５℃に調節された０．３％ポリビニールアルコールを含有する５００mlの蒸留水溶液に３，５００rpmのホモゲナイザーで分散させた。以後は実施例２のＡ型と同様に行って微粒球を製造した。
【００５９】
(実施例７)高分子の種類が異なる生分解性微粒球の製造
実施例２Ａにしたがって、つぎのように生分解性高分子を取り替えて１次エマルジョンを形成して微粒球を製造した。
【００６０】
【表１】
0003641418.tif 000002
本発明は、以上の実施例、実験例、適用例から、つぎの表のように物理的又は化学的要素の異なる２種以上の１次エマルジョンを一定比で組合して所望期間持続的な放出を誘導し得る微粒子を製造することができる。つぎの表は高分子(分子量、親水性、高分子／有機溶媒、共重合体)、薬物、添加剤によるエマルジョンを単独で製造するときと理論的に組合するときの特徴を整理した。
【００６１】
【表２】
0003641418.tif 000003
１)ラクチド−グリコライド共重合体の場合
２)Ｎａ＋及びＣａ＋＋などの塩、クエン酸(citric acid)、酒石酸(tartaric acid)などの酸類及びアミノ酸である。
【００６２】
前記において、組合は多様にでき、例えば、分子量の大きいもの、分子量の小さいもの、高分子と有機溶媒の比を変えたもの、添加剤を加えたものから４種の１次エマルジョンを製造し、水相に同時に又は順次分散させることにより、適当な期間の徐放性微粒球を製造することができる。
【００６３】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明は、単一工程により多様な薬物放出特性を有する微粒子の混合体を製造することにより、それぞれの放出特性がそのまま維持できる。したがって、各工程により製造された微粒子の薬物放出特性から理論的な組合により一定期間効果的に持続的な放出を誘導し得る微粒子製剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１ａ】本発明の実施例１で製造された微粒球の光学顕微鏡写真である。
【図１ｂ】比較例１Ａで製造された微粒球の光学顕微鏡写真である。
【図１ｃ】比較例１Ｂで製造された微粒球の光学顕微鏡写真である。
【図１ｄ】比較例１Ｃで製造された微粒球の光学顕微鏡写真である。
【図２ａ】本発明の実施例２Ａで製造された微粒球の１００倍電子顕微鏡写真である。
【図２ｂ】本発明の実施例２Ａで製造された微粒球の８００倍電子顕微鏡写真である。
【図３】本発明の実施例２と比較例２で製造された微粒球及びロイプリン製品のin vitro放出試験結果を示す図表である(−□−：ロイプリン、−△−：比較例２Ａ、−○−：実施例２Ａ、−▽−：比較例２Ｂ、−◇−：実施例２Ｂ)
【図４】本発明の実施例２で製造された微粒球及びロイプリン製品のin vivo放出試験結果を示す図表である(−□−：ロイプリン、−△−：比較例２Ｂ、−○−：実施例２Ａ)
【図５】本発明の実施例２で製造された微粒球及びロイプリン製品によるin vivoテストステロン抑制結果を示す図表である(−○−：対照群、−□−：ロイプリン、−△−：実施例２Ａ、−▽−実施例２Ｂ)
【図１ａ】
0003641418.tif 000004
【図１ｂ】
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【図１ｃ】
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【図１ｄ】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図３】
0003641418.tif 000010
【図４】
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【図５】
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