(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ、すなわち
シクロ−（Ａｒｇ−Ａ−Ａｓｐ−Ｒ1−Ｒ2）    Ｉ
［式中、
Ａは、ＧｌｙまたはＡｌａであり；
Ｒ1は、２−カルボキシ−８−アミノ−４−チアピペロリジン−９−オン（Ｂｔｄ）、ｏ−アミノメチル−ｏ′カルボキシビフェニル（Ｂｉｐｈ）、２−アミノメチル−５−カルボキシメチル−チオフェン（Ａｃｔ）、または６−アミノヘキサン酸（Ａｈａ）残基、あるいは
２−（１、７−ジアザスピロ−［４，４］ノナン−７−イル）−４−メチルペンタン酸（（Ｓ，Ｓ）スピロ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ）、または２−（３−アミノ−１−ピロリド−２−オニル）−４−メチルペンタン酸（（Ｓ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕまたは（Ｒ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕ）残基であり、それぞれの場合、該残基は、ペプチド結合を介して結合しており；そして
Ｒ2は、存在しないか、あるいはＶａｌである］
のシクロペプチドおよび生理学的に容認し得るそれらの塩。
【請求項２】
（ａ）シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕ）
（ｂ）シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｒ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕ）
（ｃ）シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ，Ｓ）スピロ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ）
（ｄ）シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｃｔ）
（ｅ）シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ）
（ｆ）シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｈａ）
（ｇ）シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）
（ｈ）シクロ−（Ａｒｇ−Ｄ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）
【請求項３】
請求項１に記載の一般式Ｉの化合物の光学的対掌体またはジアステレオマー。
【請求項４】
請求項１に記載の一般式Ｉのシクロペプチドまたはその塩の一つの調製法であって、
一般式ＩＩ、すなわち
Ｈ−Ｚ−ＯＨ      ＩＩ
［式中、
Ｚは、−Ａｒｇ−Ａ−Ａｓｐ−Ｒ1−Ｒ2−
−Ａ−Ａｓｐ−Ｒ1−Ｒ2−Ａｒｇ−
−Ａｓｐ−Ｒ1−Ｒ2−Ａｒｇ−Ａ−
−Ｒ1−Ｒ2−Ａｒｇ−Ａ−Ａｓｐ−  または
−Ｒ2−Ａｒｇ−Ａ−Ａｓｐ−Ｒ1−であり、
なお、Ａ、Ｒ1、Ｒ2は、それぞれ、請求項１に記載の一般式Ｉの対応するＡ、Ｒ1、Ｒ2と同じものである］
の直鎖状ペプチドを、環化剤で処理することにより、該一般式Ｉのシクロペプチド化合物を得る工程；ならびに、
必要に応じて、さらに、前記工程で得られる塩基性または酸性化合物を、酸または塩基により処理して、その塩の一つに変換する工程を含む
ことを特徴とする調製法。
【請求項５】
請求項１に記載の一般式Ｉのシクロペプチドまたはその塩の一つの調製法であって、
該シクロペプチド上の官能基に対して、除去可能な基による保護を有する、その官能基誘導体を、加溶媒分解剤または水素添加分解剤を用いて処理して、該除去可能な基を遊離させることにより、該一般式Ｉのシクロペプチド化合物を得る工程；ならびに、
必要に応じて、さらに、前記工程で得られる塩基性または酸性化合物を、酸または塩基により処理して、その塩の一つに変換する工程を含む
ことを特徴とする調製法。
【請求項６】
請求項１に記載の一般式Ｉの化合物を、アフィニティーカラムクロマトグラフィーのための固定化リガンドの製造のために使用する方法。
【請求項７】
請求項１に記載の一般式Ｉの化合物を、アフィニティークロマトグラフィーによるインテグリンの精製のために使用する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、一般式Ｉ、すなわち
シクロ−（Ａｒｇ−Ａ−Ａｓｐ−Ｒ1−Ｒ2）    Ｉ
［式中、
Ａは、ＧｌｙまたはＡｌａであり、
Ｒ1は、２−カルボキシ−８−アミノ−４−チアピペロリジン−９−オン（Ｂｔｄ）、ｏ−アミノメチル−ｏ′カルボキシビフェニル（Ｂｉｐｈ）、２−アミノメチル−５−カルボキシメチル−チオフェン（Ａｃｔ）または６−アミノヘキサン酸基（Ａｈａ）または２−（１、７−ジアザスピロ−［４、４］ノナン−７−イル）−４−メチルペンタン酸（（Ｓ、Ｓ）スピロ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ）または２−（３−アミノ−１−ピロリド−２−オニル）−４−メチルペンタン酸基（（Ｓ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕまたは（Ｒ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕ）であり、それぞれの場合、残基はペプチド結合を介して結合しており、そしてＲ2は、存在しないかＶａｌである］
の新規のシクロペプチドおよび生理学的に容認し得るそれらの塩に関する。
【０００２】
【従来の技術】
同様の化合物は、Pharmazie 40(8)、 532-535、 （1985）から公知である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、有用な性質を有する新規の化合物、とくに医薬物の製造のために用いることができる新規の化合物を見出だすことであった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
一般式Ｉの化合物およびそれらの塩がきわめて有用な性質を有することが見出だされた。これらはとくにインテグリン阻害剤として作用し、その場合はとくにβ3−またはβ5−インテグリン受容体のリガンドとの相互作用を阻害する。化合物はインテグリンαVβ1、αVβ3、αVβ5、αVβ6およびαIIbβ3の場合にとくに有効である。この作用は、J. W. Smith et al、 J. Biol. Chem. 265、 12267-12271、 （1990）に記載の方法によって示すことができる。これに加えて、抗炎症性効果がある。これらのすべての作用は、文献から公知の方法を用いて示すことができる。
【０００５】
本化合物は、ヒトおよび動物用医薬物における活性化合物として、とくに循環系疾患、血栓症、心筋梗塞、動脈硬化症、炎症、癲癇、狭心症、腫瘍疾患、骨溶解性疾患、とくに骨粗鬆症、および血管形成術後の脈管生成および再狭窄の予防および治療のために用いることができる。さらに、これらは創傷治癒の経過改善に用いられる。
【０００６】
化合物はさらに、例えば細菌、黴、酵母またはウイルスなどによって引き起こされる感染症を防ぐ抗微生物および抗ウイルス活性化合物として適している。したがって、物質は好ましくは、生物上で感染が起きる場合で、生物材料、インプラント、カテーテルまたは心臓ペースメーカーなどの外因性物質が用いられる場合、共存する抗微生物活性化合物として投与することができる。したがってまた、消毒剤としても作用する。
【０００７】
上記および下記のアミノ酸残基の略号は、次のようなアミノ酸の残基を表す。
Ａｃｔ            ２−アミノメチルチオフェン−５−酢酸
Ａｈａ            ６−アミノヘキサン酸
Ａｌａ            アラニン
Ａｓｎ            アスパラギン
Ａｓｐ            アスパラギン酸
Ａｓｐ（ＯＲ）    アスパラギン酸（β−エステル）
Ａｒｇ            アルギニン
Ｂｉｐｈ          ｏ−アミノメチルビフェニル−ｏ′−カルボン酸
Ｂｔｄ            ８−アミノ−４−チアピペロリジン−９−オン−２−カルボン酸
Ｃｙｓ            システイン
Ｇｌｎ            グルタミン
Ｇｌｕ            グルタミン酸
Ｇｌｙ            グリシン
Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕ    ２−（３−アミノ−１−ピロリド−２−オニル）−４−メチルペンタン酸
Ｈｉｓ            ヒスチジン
Ｉｌｅ            イソロイシン
Ｌｅｕ            ロイシン
Ｌｙｓ            リジン
Ｍｅｔ            メチオニン
Ｎｌｅ            ノルロイシン
Ｏｒｎ            オルニチン
Ｐｈｅ            フェニルアラニン
Ｐｒｏ            プロリン
ｓｐｉｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ    ２−（１、７−ジアザスピロ［４、４］−６−オキソノナン−７−イル）−４−メチルペンタン酸
Ｓｅｒ            セリン
Ｔｈｒ            スレオニン
Ｔｒｐ            トリプトファン
Ｔｙｒ            チロシン
Ｖａｌ            バリン
さらに、下記に用いられる略号は次の意味を有する。
【０００８】
ＢＯＣ            ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＣＢＺ            ベンジルオキシカルボニル
ＤＣＣＩ          ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＭＦ            ジメチルホルムアミド
ＥＤＣＩ          塩酸Ｎ−エチル−Ｎ′−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
Ｅｔ              エチル
ＦＭＯＣ          ９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＯＢｔ          １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
Ｍｅ              メチル
Ｍｔｒ            ４−メトキシ−２、３、６−トリメチルフェニル−スルホニル
ＯＢｕｔ          ｔｅｒｔ−ブトキシ
ＯＭｅ            メトキシ
ＯＥｔ            エトキシ
ＰＯＡ            フェノキシアセチル
ＴＢＴＵ          テトラフルオロホウ酸２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１、１、３、３−テトラ−メチルウロニウム
ＴＦＡ            トリフルオロ酢酸
上記のアミノ酸がいくつかの光学的対掌体のかたちで生じ得る場合には、これらのかたちの全てさらにそれらの混合物（例えばＤＬ型）が、上記および下記において例えば一般式Ｉの化合物の成分として含まれる。例えば一般式Ｉの成分としてのアミノ酸は、さらに自体公知の適当な保護基とともに提供されてもよい。本発明はさらに、請求項１に記載の一般式Ｉの化合物またはその塩の一つの調製法に関し、加溶媒分解剤または水素添加分解剤を用いて処理することによってその官能基誘導体の一つからそれを遊離させること、
または一般式ＩＩ、すなわち
Ｈ−Ｚ−ＯＨ                            ＩＩ
［式中、
Ｚは、−Ａｒｇ−Ａ−Ａｓｐ−Ｒ1−Ｒ2−
−Ａ−Ａｓｐ−Ｒ1−Ｒ2−Ａｒｇ−
−Ａｓｐ−Ｒ1−Ｒ2−Ａｒｇ−Ａ−
−Ｒ1−Ｒ2−Ａｒｇ−Ａ−Ａｓｐ−または
−Ｒ2−Ａｒｇ−Ａ−Ａｓｐ−Ｒ1−である］
のペプチドまたはそのようなペプチドの反応性誘導体を環化剤で処理すること、
および／または一般式Ｉの塩基または酸化合物を酸または塩基を用いる処理によってその塩の一つに変換することを特徴とする。
【０００９】
上記及び下記のＡ、Ｒ1、Ｒ2およびＺ基は、とくに記述がなければ一般式ＩおよびＩＩにおける意味を有する。
【００１０】
（Ｓ、Ｓ）ｓｐｉｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ基は、２−（１、７−ジアザスピロ［４、４］−６−オキソノナン−７−イル）−メチルペンタン酸基であり、次の構造
【００１１】
【化１】
0003711154.tif 000002
を有し、
一方、（Ｓ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕまたは（Ｒ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕ基は、３（Ｓ）−または３（Ｒ）−２−（３−アミノ−１−ピロリド−２−オニル）−４−メチルペンタン酸基であり、次の構造
【００１２】
【化２】
0003711154.tif 000003
を有する。
【００１３】
Ｂｉｐｈは、ｏ−アミノメチルビフェニル−ｏ′−カルボン酸基であり、Ｂｉｐｈ１およびＢｉｐｈ２は可能なアトロプ異性体である。
【００１４】
Ｒ1基についてもＲ2基と同様に、前に定義されたすべてが同じであることが好ましい。すなわち、本発明はまたシクロペンタおよびテトラペプチドに関する。
Ａは好ましくはＧｌｙであるがまた、Ａｌａ、とくにＤＡｌａでもよい。
【００１５】
一般式Ｉの化合物およびまたそれらの調製のための出発材料は、他に、文献（例えば、Houben-Weyl、 Methoden der organischen Chemie (Method of Organic Chemistry) Georg-Thieme-Verlag、 Stuttgartなどの標準書）に記載の公知の方法によって、とくに上記反応に適している公知の反応条件下で調製される。これに関連して、ここでは詳述されない公知の変法もまた用いることができる。
【００１６】
（Ｒ）−および（Ｓ）−型におけるペプチド成分Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕは、R.M. Freidinger et al.、 J. Org. Chem. 47、 104、 （1982）の方法によって調製することができる。成分ｓｐｉｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕは、例えばP. Ward et al.、 J. Med. Chem. 33、 1848-、 （1990）の方法と同様にして調製することができ、Ｂｔｄの合成は、 U. Nagai et al.、 Tetrahedron 49、 3577-3592、 （1993）によって可能である。
【００１７】
必要であれば、出発材料をまた反応混合物からそれらを分離することなくその場でただちにさらに反応させて、一般式Ｉの化合物を得ることができる。
【００１８】
一般式Ｉの化合物は、加溶媒分解、とくに加水分解、または水素添加分解によってそれらの官能基誘導体からそれらを遊離することによって得ることができる。
【００１９】
加溶媒分解または水素添加分解のための好ましい出発材料は、一つまたはそれ以上の遊離のアミノ基および／または水酸基の代わりに対応する保護されたアミノ基および／または水酸基を含むものであり、好ましくは、Ｎ原子に結合したＨ原子の代わりにアミノ保護基を含むものであり、例えば、一般式Ｉに対応するが、ＮＨ2基の代わりにＮＨＲ′基（式中、Ｒ′はアミノ保護基、例えばＢＯＣまたはＣＢＺである）を含むものである。
【００２０】
加えて、好ましい出発材料は、水酸基のＨ原子の代わりに水酸保護基を有するもの、例えば、一般式Ｉに対応するがヒドロキシフェニル基の代わりにＲ″Ｏ−フェニル基（式中、Ｒ″は水酸保護基である）を含むものである。
【００２１】
いくつかの同一または異なる保護アミノ基および／または水酸基が出発材料の分子中に存在することが可能である。存在する保護基が互いに異なる場合には、多くの場合それらは選択的に除去できる。
【００２２】
「アミノ保護基」とは、アミノ基を化学反応から保護（ブロック）することができるが、分子の他の位置で所望の化学反応を行った後に容易に除去され得る一般に公知の基を意味する。とくに、このような基の代表例としては、置換されないまたは置換されたアシル、アリール、アラルコキシメチルまたはアラルキル基がある。所望の反応（または反応列）の後にアミノ保護基は除去されるので、それらの性質および大きさはとくに重要ではない。しかし、１〜２０個、とくに１〜８個の炭素原子を有するものが好ましい。用語「アシル基」は、本発明の方法においては最も広い意味で用いられる。これには、脂肪族、アル脂肪族、芳香族または複素環カルボン酸またはスルホン酸、とくにアルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、とくにアラルコキシカルボニル基に由来するアシル基が含まれる。この型のアシル基の例としては、アセチル、プロピオニルまたはブチリルなどのアルカノイル、フェニルアセチルなどのアラルカノイル、ベンゾイルまたはトリルなどのアロイル、ＰＯＡなどのアリールオキシアルカノイル、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、２、２、２−トリクロロエトキシカルボニル、ＢＯＣおよび２−ヨードエトキシカルボニルなどのアルコキシカルボニル、ＣＢＺ（「カルボベンゾキシ」）、４−メトキシベンジルオキシカルボニルおよびＦＭＯＣなどのアラルキルオキシカルボニルおよびＭｔｒなどのアリールスルホニルなどがあげられる。好ましいアミノ保護基は、ＢＯＣおよびＭｔｒ、それにＣＢＺ、ＦＭＯＣ、ベンジルおよびアセチルである。
【００２３】
用語「水酸保護基」もまた、水酸基を化学反応から保護するために適する基であるが、分子の他の位置で所望の化学反応を行った後に容易に除去し得る一般に公知の基を表す。この型の基の代表例としては、上記の置換されないまたは置換されたアリール、アラルキルまたはアシル基、さらにまたアルキル基がある。所望の化学反応または反応列の後にこれらもまた除去されるので、水酸保護基の性質および大きさはとくに重要ではない。１〜２０個、とくに１〜１０個のＣ原子を有する基が好ましい。水酸保護基の例としては、ベンジル、ｐ−ニトロベンゾイル、ｐ−トルエンスルホニル、ｔｅｒｔ−ブチルおよびアセチルがあり、ベンジルおよびｔｅｒｔ−ブチルがとくに好ましい。アスパラギン酸およびグルタミン酸中のＣＯＯＨ基は、好ましくはそれらのｔｅｒｔ−ブチルエステル（例えばＡｓｐ（ＯＢｕｔ））のかたちで保護される。
【００２４】
出発材料として用いられる一般式Ｉの化合物の官能基誘導体は、例えば上記の標準的文献および特許明細書に記載のアミノ酸およびペプチド合成の通常法、例えばメリフィールドの固相法（B.F. Gysin and R.B. Merrifield、 J. Am. Chem. Soc.、 94、 3102-、 （1972））によって調製することができる。A. JonczykおよびJ. Meienhofer（Peptides、 Proc. 8th Am. Pept. Symp. 73-77、 （1983）、 V.J. Hruby and D. H. Rich編、Pierce Co. Rockford）によって記述されているフローリアクター中でのＦＭＯＣ法による合成はとくに有利である。
【００２５】
一般式Ｉの化合物のそれらの官能基誘導体からの遊離は、用いる保護基によって異なるが、例えば、強酸、好ましくはＴＦＡまたは過塩素酸、あるいはまた塩酸または硫酸などの他の強無機酸、トリクロル酢酸などの強有機カルボン酸またはベンゼン−またはｐ−トルエンスルホン酸などのスルホン酸を用いて行われる。追加の不活性溶媒を存在させることは可能であるが、常に必要ではない。適当な不活性溶媒には、好ましくは有機溶媒、例えば酢酸などのカルボン酸、テトラヒドロフランまたはジオキサンなどのエーテル、ＤＭＦなどのアミド、ジクロロメタンなどのハロゲン化炭化水素、そしてまたメタノール、エタノールまたはイソプロパノールおよびまた水がある。
【００２６】
加えて、上記溶媒の混合物もまた適当である。ＴＦＡは好ましくはさらに溶媒を添加することなく過剰の状態で用いられる、過塩素酸は酢酸と７０％過塩素酸の混合物（９：１）のかたちで好ましく用いられる。切断のための反応温度は好ましくは約０〜約５０℃、さらに好ましくは１５〜３０℃（室温）である。
【００２７】
ＢＯＣ、ＯＢｕｔおよびＭｔｒ基は、例えば好ましくはジクロロメタン中でＴＦＡを用いて、またはジオキサン中で約３〜５ＮのＨＣｌを用いて１５〜３０℃で除去することができる。ＦＭＯＣ基の除去は、例えばジメチルアミン、ジエチルアミン、モルホリンまたはピペリジンなどの二級アミンの約５〜５０％のＤＭＦ溶液を用いて１５〜３０℃で行うことができる。
【００２８】
水素添加分解によって除去できる保護基（例えば、ＣＢＺまたはベンジル）は、例えば、触媒の存在下で（例えばパラジウムなどの貴金属触媒を用いて好ましくは炭素などの担体上で）水素を用いる処理によって除去することができる。この場合、適当な溶媒は上記の触媒、とくに例えば、メタノールまたはエタノールなどのアルコールまたはＤＭＦなどのアミドなどである。水素添加分解は、通常、約０〜１００℃の温度で約１〜２００バールの圧力下で、好ましくは２０〜３０℃で１〜１０バールで行う。ＣＢＺ基の水素添加分解は、メタノール中の５〜１０％Ｐｄ−Ｃ上で、またはギ酸アンモニウム（Ｈ2の代わりに）を用いてメタノール／ＤＭＦ中のＰｄ−Ｃ上で２０〜３０℃で容易に行われる。
【００２９】
一般式Ｉのの化合物はまた、ペプチド合成の条件下で一般式ＩＩを環化することによって得ることができる。この場合、反応は好ましくは、例えばHouben-Weyl（前出、１５／ＩＩ巻、1〜806、 （1974））に記載のペプチド合成の通常の方法によって行われる。
【００３０】
反応は、好ましくは、ＤＣＣＩまたはＥＤＣＩなどのカルボジイミド、そしてまたプロパンホスホン酸無水物（Angew. Chem. 92、 129、 （1980）を参照）、アジ化ジフェニルホスホリルまたは２−エトキシ−Ｎ−エトキシカルボニル−１、２−ジヒドロキノリンなどの脱水剤の存在下で、例えばジクロロメタンなどのハロゲン化炭化水素、テトラヒドロフランまたはジオキサンなどのエーテル、ＤＭＦまたはジメチルアセトアミドなどのアミド、アセトニトリルなどのニトリルなどの不活性溶媒またはこれら溶媒の混合物中で、約−１０〜４０℃、好ましくは０〜３０℃の温度で行う。分子間ペプチド結合の前に分子内環化を促進するために、希釈溶液を用いることが好ましい（希釈律）。
【００３１】
ＩＩの代わりに、これら物質の適当な反応性誘導体を反応に用いることも可能である。これには例えば反応性基が保護基によって中間的にブロックされているものがある。アミノ酸誘導体ＩＩは、例えば、ＨＯＢｔまたはＮ−ヒドロキシスクシンイミドの添加によって好ましくはその場で形成されるそれらの活性化エステルのかたちで用いることができる。
【００３２】
通常、一般式ＩＩの出発物質は新規である。これらは公知の方法で、例えばペプチド合成および保護基除去のための上記の方法などによって調製することができる。
【００３３】
通常、例えばＢＯＣ−Ｚ−ＯＭｅまたはＢＯＣ−Ｚ−ＯＥｔなどの一般式Ｒ′−Ｚ−ＯＲ″の保護ペンタペプチドエステルが先ず合成されるが、これは最初に加水分解されて例えばＢＯＣ−Ｚ−ＯＨなどの一般式Ｒ′−Ｚ−ＯＨの酸が得られる。保護基Ｒ′がこれらから除去され、これによって一般式Ｈ−Ｚ−ＯＨ（ＩＩ）の遊離のペプチドが得られる。
【００３４】
一般式Ｉの塩基は、酸を用いて適当な酸付加塩に変換することができる。この反応に適する酸は、とくに生理学的に容認し得る塩を生ずるものである。例えば、用い得る無機酸としては硫酸、硝酸、塩酸または臭化水素酸などのハロゲン化水素酸、オルト燐酸などの燐酸およびスルファミン酸などがあり、さらにまた有機酸、とくに、脂肪族、脂環式、アル脂肪族、芳香族または複素環式一塩基または多塩基カルボン酸、スルホン酸または硫酸、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、ピバリン酸、ジエチル酢酸、マロン酸、コハク酸、ピメリン酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、安息香酸、サリチル酸、２−または３−フェニルプロピオン酸、クエン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、イソニコチン酸、メタンまたはエタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンモノおよびジスルホン酸およびラウリル硫酸などがあげられる。例えばピクリン酸塩など生理学的に受け入れできない酸との塩を、一般式Ｉの化合物の分離および／または精製に用いることができる。
【００３５】
一方、一般式Ｉの酸を、生理学的に容認し得るその金属またはアンモニウム塩の一つに塩基との反応によって変換することができる。この場合、とくに適する塩は、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムおよびアンモニウム塩、そしてまた、置換されたアンモニウム塩、例えばジメチル−、ジエチル−またはジイソピロピルアンモニウム塩、モノエタノール−、ジエタノール−またはトリエタノールアンモニウム塩、シクロヘキシル−またはジシクロヘキシルアンモニウム塩、ジベンジルエチレンジアンモニウム塩、さらに例えばＮ−メチル−Ｄ−グルカミンまたはアルギニンまたはリジンとの塩である。
【００３６】
一般式Ｉの新規の化合物および生理学的に容認し得るそれらの塩は、少なくとも一つの賦形剤または補助剤とともに、必要であれば、一つまたはそれ以上の追加の活性化合物とともに、適切な投薬成形物にそれらを組み入れることによって、薬剤調製物の製造に用いることができる。このようにして得られる調製物は、ヒト用または動物用医薬物として用いることができる。賦形剤として適する物質は、経腸的（例えば経口または経直腸）、非経腸的（例えば静脈注射）またはは局所的（例えば、局所、経皮、点眼または鼻腔）投与または吸入スプレーのかたちによる投与に適しており、かつ新規の化合物と反応しない有機または無機物質であって、例えば、水または等張生理食塩水、低級アルコール、植物油、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコール、三酢酸グリセリンおよび他の脂肪酸グリセリド、ゼラチン、大豆レシチン、乳糖またはデンプンなどの炭水化物、ステアリン酸マグネシウム、タルク、セルロースおよびペトロラタムなどがあげられる。経口投与にはとくに、錠剤、被覆錠剤、カプセル、シロップ、ジュースまたはドロップなどがあり、胃液抵抗性被覆またはカプセル外皮を有する薄膜被覆錠剤およびカプセルがとくに有用である。座薬は経直腸投与に用いられ、一方、非経腸的投与には溶液、好ましくは油性または水性溶液、さらに懸濁液、乳濁液またはインプラントが用いられる。適当な局所的投与型の例としては溶液があり、これは例えば点眼剤のかたちでも用いられ、さらに懸濁液、乳濁液、クリーム、軟膏または圧迫ガーゼなどがあげられる。吸入スプレーとしての投与には、プロペラントガスまたはプロペラントガス混合物（例えばＣＯ2またはクロロフルオロ炭化水素）中に溶解または懸濁させた活性物質を含むスプレーを用いることができる。この場合、活性物質は微細化したかたちで用いられ、エタノールなどの生理学的に許容し得る一つまたはそれ以上の追加の溶媒を存在させてもよい。吸入溶液は、従来の吸入器を用いて投与することができる。新規の化合物はまた凍結乾燥することができ、得られる凍結乾燥物は、例えば注射用調製物の製造に用いられる。注射液は、ボーラスとしてまたは連続輸液（例えば静脈内、筋肉内、皮下または包膜内）として用いることができる。上記の調製物は、滅菌ができ、そして／または、保存剤、安定剤および／または湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響する塩、緩衝性物質、着色剤および／または芳香剤などの補助剤を含んでもよい。必要であれば、これらは、例えば一つまたはそれ以上のビタミンなどの、一つまたはそれ以上の他の活性物質を含んでもよい。
【００３７】
本発明による物質は、通常、市販の他の公知のペプチドと同様に、とくにＵＳ−Ａ−４、４７２、３０５に記載の化合物と同様にして、好ましくは用量単位当り約０．０５〜５００ｍｇ、とくに０．５〜１００ｍｇが投与できる。日用量は、好ましくは約０．０１〜２ｍｇ／ｋｇ体重である。しかし、それぞれの患者の特定の用量は、多様な因子、例えば、用いられる特定の化合物の活性、年齢、体重、一般的健康状態、性別、食餌、投与時間および経路、排泄回数、併用薬剤および治療対象の特定疾患の軽重などによって異なる。非経腸投与が好ましい。
【００３８】
加えて、一般式Ｉの新規の化合物は純正インテグリンの調製のためのアフィニティークロマトグラフィー用のカラムの調製のためのインテグリンリガンドとして用いることができる。
【００３９】
リガンド、すなわち一般式Ｉのペプチド誘導体は、この場合、アンカー作用基を介してポリマー支持体に共有結合される。
【００４０】
適当なポリマー支持体材料は、ペプチド化学で自体公知のポリマー固体相であって好ましくは親水性を有するもので、例えばセルロース、セファロース（１５５３Ｈ（登録商標））またはセファデックスなどの架橋多糖類、アクリルアミド、ポリエチレングリコールを基にしたポリマーまたはテンタケル（登録商標）ポリマーである。
【００４１】
ポリマー支持体と結合する適当なアンカー作用基は、好ましくは２〜１２個のＣ原子を有する直鎖状のアルキレン鎖であり、その一端は直接にポリマーと結合しており、もう一端は例えばヒドロキシル、アミノ、メルカプト、マレイミドまたは−ＣＯＯＨなどの官能基を有し、それぞれのペプチドの作用基側鎖との結合に適している。
【００４２】
この場合、ペプチドを直接に、または同様に第二のアンカー作用基を介してポリマーのアンカーに結合させることができる。
【００４３】
さらに、一般式Ｉのペプチドの成分であるアミノ酸残基のあるものは、ＳＨ、ＯＨ、ＮＨ2またはＣＯＯＨ基などを介してポリマーのアンカーとのアンカレッジとして使用できるように側鎖を修飾することができる。
【００４４】
側鎖を直接にアンカー作用基として用いることができるアミノ酸残基の例としては、ＡｒｇまたはＡｓｐがあげられる。
【００４５】
遊離のＮＨ2基を介して結合することができるアンカーの例としては、−ＣＯ−ＣnＨ2n−ＮＨ2、−ＣＯ−ＣnＨ2n−ＯＨ、−ＣＯ−ＣnＨ2n−ＳＨまたは−ＣＯ−ＣnＨ2n−ＣＯＯＨ（ｎ＝２〜１２）があり、アルキレン鎖の長さは重要ではなく、この鎖の全部または一部を、例えば適当なアリールまたはアルキルアリール基で置換することも可能である。
【００４６】
遊離の酸基に結合できるＣ−末端アンカーの例としては、−Ｏ−ＣnＨ2n−ＳＨ、−Ｏ−ＣnＨ2n−ＯＨ、−Ｏ−ＣnＨ2n−ＮＨ2、−Ｏ−ＣnＨ2n−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣnＨ2n−ＳＨ、−ＮＨ−ＣnＨ2n−ＯＨ、−ＮＨ−ＣnＨ2n−ＮＨ2または−ＮＨ−ＣnＨ2n−ＣＯＯＨ（ｎおよびアルキレン鎖はともに上記の通りである）がある。
【００４７】
インテグリンの精製のためのアフィニティークロマトグラフィーの材料の調製は、一般式Ｉの化合物の調製の部分で既に概略を記したアミノ酸の縮合のための従来の自体公知の条件下で行われる。
【００４８】
チオールを含むアンカーの場合には、マレイミド誘導体へのミハエル（Ｍｉｃｈａｅｌ）添加またはポリマー結合チオールを用いるジスルフィド形成などの付加反応が用いられる。
【００４９】
上記および下記において、全ての温度は摂氏で示される。以下の実施例において、「通常の精製」とは、必要であれば水を加え、混合物を中和して、エーテルまたはジクロロメタンで抽出して、有機相を分離して、硫酸ナトリウム上で乾燥して、濾過して、蒸発して、シリカゲル上でのクロマトグラフィーおよび／または結晶化によって精製することを意味する。ＲＴは、次のようなシステムＡまたはＢのＨＰＬＣにおける保持時間（分）を表す。システムＡ：Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ（登録商標）ＲＰセレクトＢ（２５０×４、５μｍ）、展開溶液は０．３％ＴＦＡ水溶液、０〜８０容量％イソプロプロパノールを勾配をつけて１ｍｌ／分の流速で５０分間行う。システムＢ：Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ（登録商標）ＲＰ１８（２５０×４、５μｍ）、展開溶液はＡ液は０．１％ＴＦＡ水溶液、Ｂ液は０．１％ＴＦＡのアセトニトリル／水（９：１）溶液でＢ液を２０〜９０％に勾配をつけて１ｍｌ／分の速度で５０分間行う。検出を２１５ｎｍで行う。Ｍ+＝高速原子衝撃（ＦＡＢ）法によって得られるマススペクトル中の分子ピーク。表示される分子量は、計算値よりも１質量単位増加したものである。
【００５０】
【実施例】
［実施例１］
０．４ｇのＨ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−ＯＮａ［例えば、ＦＭＯＣ−Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｏ−Ｗａｎｇ（−Ｏ−Ｗａｎｇは修正メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）法において用いられる４−オキシメチルフェノキシメチルポリスチレン樹脂の基である）から、ＦＭＯＣ基のピペリジン／ＤＭＦを用いての除去および樹脂のＴＦＡ／ＣＨ2Ｃｌ2（１：１）を用いての除去によって得られる］のＤＭＦ溶液１５ｍｌを８５ｍｌのジクロロメタンを用いて希釈して、５０ｍｇのＮａＨＣＯ3を用いて処理する。ドライアイス／アセトン混合物中で冷却した後、４０μｌのアジ化ジフェニルホスホリルを加える。室温で１６時間放置した後、溶液を濃縮する。濃縮物を濾過（イソプロパノール／水（８：２）中でのセファデックスＧ１０カラム）してから、ＨＰＬＣを用いて通常の方法で精製する。シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ）が得られる。
【００５１】
同様にして、対応する鎖状ペプチドの環化によって次のようなペプチドが得られる。
【００５２】
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕ）
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｒ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕ）
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ、Ｓ）ｓｐｉｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ）
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｉｐｈ１）
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｉｐｈ２）
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｃｔ）
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−ＤＡｌａ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｈａ）
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−ＤＡｌａ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ）
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−ＤＡｌａ−Ａｓｐ−（Ｓ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕ）
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−ＤＡｌａ−Ａｓｐ−（Ｒ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕ）
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−ＤＡｌａ−Ａｓｐ−（Ｓ、Ｓ）ｓｐｉｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ）
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−ＤＡｌａ−Ａｓｐ−Ｂｉｐｈ１）
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−ＤＡｌａ−Ａｓｐ−Ｂｉｐｈ２）
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−ＤＡｌａ−Ａｓｐ−Ａｃｔ）
［実施例２］
０．２８ｇのシクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ）［実施例１による環化によって得られる］の８．４ｍｌのＴＦＡ、１．７ｍｌのジクロロメタンおよび０．９ｍｌのチオフェノール溶液を室温で４時間放置して、次いで濃縮して、水で希釈した後に凍結乾燥する。セファデックスＧ１０（酢酸／水１：１）上のゲル濾過および上記の条件下での調製用ＨＰＬＣによる続いての精製によって、シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ）が得られる。ＲＴ＝１３．２、Ｍ+５２７。
【００５３】
同様にして次のようなペプチドが得られる。
【００５４】
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕ）から
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕ）（ＲＴ＝４．８、Ｍ+５２５）が、
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｒ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕ）から
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｒ）Ｇｌｙ［ＡＮＣ−２］−Ｌｅｕ）（ＲＴ＝６．３、Ｍ+５２５）が、
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ、Ｓ）ｓｐｉｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ）から
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（Ｓ、Ｓ）ｓｐｉｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ）（ＲＴ＝１４．６、Ｍ+５６５）が、
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｉｐｈ１）から
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｉｐｈ１）（ＲＴ＝２０．７、Ｍ+５３８）が、
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｉｐｈ２）から
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｉｐｈ２）（ＲＴ＝２０．８、Ｍ+５３８）が
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｃｔ）から
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｃｔ）（ＲＴ＝１４．３、Ｍ+５４７）が
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）から
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）が
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−ＤＡｌａ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）から
シクロ−（Ａｒｇ−ＤＡｌａ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）が
シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｈａ）から
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｈａ）がそれぞれ得られる。
［実施例３］
８０ｍｇのシクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ）を０．０１ＭのＨＣｌに５〜６回溶解して、各溶解後に凍結乾燥する。続いてのＨＰＬＣによる精製によって、シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ）×ＨＣｌが得られる。
同様にして次のペプチドが得られる。
【００５５】
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｈａ）から
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｈａ）×ＨＣｌが、
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）から
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）×ＨＣｌが、
シクロ−（Ａｒｇ−ＤＡｌａ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）から
シクロ−（Ａｒｇ−ＤＡｌａ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）×ＨＣｌが、
シクロ−（Ａｒｇ−ＤＡｌａ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）から酢酸との処理によって
シクロ−（Ａｒｇ−ＤＡｌａ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）×Ｈ3Ｃ−ＣＯＯＨが、
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｈａ）から０．０１Ｎ硝酸との処理によって
シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｈａ）×ＨＮＯ3がそれぞれ得られる。［実施例４］
アフィニティー相を調製するために、０．９ｇのＣｌ−（ＣＨ2）3−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ2）3ポリマー［Ｃｌ−（ＣＨ2）3−ＣＯＯＨとＨ2Ｎ−（ＣＨ2）3ポリマーとの縮合によって得られる］を１０ｍｌの０．１Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７）に懸濁させて、１当量のシクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＯＮａ）−Ｂｔｄを４℃で加える。反応混合物を４時間攪拌して同時に室温まで温度を上げて、固体残渣を濾過して、それぞれ１０ｍｌの緩衝液（ｐＨ７）を用いて２回洗浄して、次いでそれぞれ１０ｍｌの水で３回洗浄する。シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（Ｏ（ＣＨ2）3−ＣＯＮＨ−（ＣＨ2）3ポリマー）−Ｂｔｄ）が得られる。
［実施例５］
実施例２と同様にして、シクロ−（Ａｒｇ（Ｍｔｒ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（−Ｏ−（ＣＨ2）3−ＣＯＮＨ−（ＣＨ2）3−ポリマー）−Ｂｔｄ）から出発してＭｔｒ基を除去することによって、シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（Ｏ−（ＣＨ2）3−ＣＯＮＨ−（ＣＨ2）3ポリマー）−Ｂｔｄ）が得られる。
［実施例６］
実施例４と同様にして、ポリマー−Ｏ（ＣＨ2）3−ＮＨ2［市販物］とシクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｉｐｈ１）との縮合によってポリマー相のシクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（ＮＨ−（ＣＨ2）3−Ｏ−ポリマー）−Ｂｉｐｈ１）が得られる。
【００５６】
同様にして、シクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）とＨ2Ｎ（ＣＨ2）3−Ｏ−ポリマーとの縮合によってシクロ−（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−（ＮＨ−（ＣＨ2）3−Ｏ−ポリマー）−Ｂｔｄ−Ｖａｌ）が得られる。
【００５７】
以下の実施例は、薬剤調製物に関する。
［実施例Ａ］：注射液小瓶
１００ｇの一般式Ｉのシクロペプチドおよび５ｇの燐酸水素二ナトリウムを３リットルの再蒸留水に溶解して、これを２Ｎ塩酸を用いてｐＨ６．５に調整して、濾過滅菌して、注射薬用小瓶に充填して、滅菌条件下で凍結乾燥して、小瓶を滅菌状態で密閉する。各注射液小瓶は５ｍｇの活性化合物を含む。
［実施例Ｂ］：座薬
２０ｇの一般式Ｉの活性化合物と１００ｇの大豆レシチンおよび１４００ｇのカカオバターの混合物を融解して、鋳型に注いで放冷する。各座薬は２０ｍｇの活性化合物を含む。
［実施例Ｃ］：溶液
１ｇの一般式Ｉの活性化合物、９．３８ｇのＮａＨ2ＰＯ4ｘ２Ｈ2Ｏ、２８．４８ｇのＮａ2ＨＰＯ4ｘ１２Ｈ2Ｏおよび０．１ｇの塩化ベンザルコニウムを９４０ｍｌの再蒸留水に溶解して溶液を調製する。溶液のｐＨを６．８に調整して、全量を１リットルにして、照射滅菌する。この溶液は点眼薬として使用できる。
［実施例Ｄ］：軟膏
５００ｍｇの一般式Ｉの活性化合物を９９．５ｇのペトロラタムと無菌条件下で混合する。
［実施例Ｅ」：錠剤
１００ｇの一般式Ｉのシクロペプチド、１ｋｇの乳糖、６００ｇの微結晶セルロース、６００ｇのトウモロコシ澱粉、１００ｇのポリビニルピロリドン、８０ｇのタルクおよび１０ｇのステアリン酸マグネシウムの混合物を通常の方法で錠剤に圧縮して、各錠剤が１０ｍｇの活性化合物を含むように調製する。
［実施例Ｆ］：被覆錠剤
実施例Ｅと同様にして錠剤を成形して、次いで通常の方法でショ糖、トウモロコシ澱粉、タルク、トラガカントゴムおよび着色物質の被覆物を用いて被覆する。
［実施例Ｇ］：カプセル
硬質ゼラチンカプセルに一般式Ｉの活性化合物を通常の方法で充填して、各カプセルが５ｍｇの活性化合物を含むように調製する。
［実施例Ｈ］：吸入スプレー
１４ｇの一般式Ｉの活性化合物を１０リットルの等張ＮａＣｌ溶液に溶解して、溶液をポンプ機能を備えた市販のスプレー容器に充填する。溶液は口または鼻中にスプレーすることができる。１スプレー量（約０．１ｍｌ）は約０．１４ｍｇの用量に対応する。