(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式を有する化合物、及びその塩。
0003647860.tif 000057
（式中、
0003647860.tif 000058
ＹはＨ、OR11、SR11、Ｎ（R11）２、NR11N（R11）２、ハロゲン原子、NO2、CN、
0003647860.tif 000059
0003647860.tif 000060
アルキル、アリール、シクロアルキル、アルキニル、アルケニルまたは複素環基であり、これらの夫々は置換されていてもよく、または置換されていなくてもよく、
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、及びR8（これらは同じであってもよく、または異なっていてもよい）は夫々独立にＨ、ハロゲン原子、NO2、CN、OR13、SR13、Ｎ（R13）２、
0003647860.tif 000061
アルキル、アリール、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、またはヘテロアルキル、複素環、ヘテロアルケニルもしくはヘテロアルキニル基であり、これらの夫々は置換されていてもよく、または置換されていなくてもよく、
R9はＨ、
0003647860.tif 000062
アルキル、シクロアルキル、アリール、アルケニル、アルキニルまたは複素環基であり、これらの夫々は置換されていてもよく、または置換されていなくてもよく、
R10、R11及びR13（これらは同じであってもよく、または異なっていてもよい）は夫々独立にＨまたはアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたは複素環基であり、これらの夫々は置換されていてもよく、または置換されていなくてもよく、
R12はＨ、Ｎ（R11）２、OR11、SR11、NR11N（R11）２、OR14N（R11）２、またはアルキル、シクロアルキル、アリール、アルケニル、アルキニルまたは複素環基であり、これらの夫々は置換されていてもよく、または置換されていなくてもよく、かつ
R14はアルキレン基である）
【請求項２】
式：
0003647860.tif 000063
（式中、Ｘ、Ｙ、R4及びR6は請求の範囲第１項に定義されたとおりである）
を有する請求の範囲第１項に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘが
0003647860.tif 000064
ＹがＨまたは
0003647860.tif 000065
R4がＨまたはアルキル基であり、かつ
R6がＨ、ハロゲン原子またはOR13であり、
R10、R12及びR13が請求の範囲第１項に定義されたとおりである請求の範囲第２項に記載の化合物。
【請求項４】
R10がアルキルまたは置換アルキルである請求の範囲第３項に記載の化合物。
【請求項５】
ＹがＨまたは
0003647860.tif 000066
R12がＮ（R11）２、OR11またはOR14N（R11）２であり、かつR11がＨまたはアルキル基もしくはシクロアルキル基である請求の範囲第３項に記載の化合物。
【請求項６】
ＹがＨまたは
0003647860.tif 000067
R12がＮ（R11）２、OR11またはOR14N（R11）２であり、かつR11がＨまたはアルキル基もしくはシクロアルキル基である請求の範囲第４項に記載の化合物。
【請求項７】
R10がアルキルであり、Ｙが
0003647860.tif 000068
R12がOR11またはOR14N（R11）２であり、かつR11がアルキルである請求の範囲第６項に記載の化合物。
【請求項８】
R10がメチルであり、R12がOR11であり、R11がメチルであり、R4がメチルであり、かつR6がＨである請求の範囲第７項に記載の化合物。
【請求項９】
R10がメチルであり、R12がOR11であり、R11がイソアミルであり、R4がＨであり、かつR6がＨである請求の範囲第７項に記載の化合物。
【請求項１０】
R10がメチルであり、R12がOR11であり、R11がｎ−オクチルであり、R4がＨであり、かつR6がＨである請求の範囲第７項に記載の化合物。
【請求項１１】
医薬上許される担体及び請求の範囲第１項に記載の化合物またはその医薬上許される塩を含むことを特徴とする癌治療用医薬組成物。
【請求項１２】
化合物が式：
0003647860.tif 000069
（式中、Ｘ、Ｙ、R4及びR6は請求の範囲第１項に定義されたとおりである）
を有する請求の範囲第11項に記載の組成物。
【請求項１３】
Ｘが
0003647860.tif 000070
ＹがＨまたは
0003647860.tif 000071
R4がＨまたはアルキル基であり、かつ
R6がＨ、ハロゲン原子またはOR13であり、
R10、R12及びR13が請求の範囲第１項に定義されたとおりである請求の範囲第12項に記載の組成物。
【請求項１４】
R10がアルキルまたは置換アルキルである請求の範囲第13項に記載の組成物。
【請求項１５】
ＹがＨまたは
0003647860.tif 000072
R12がＮ（R11）２、OR11またはOR14N（R11）２であり、かつR11がＨまたはアルキル基もしくはシクロアルキル基である請求の範囲第13項に記載の組成物。
【請求項１６】
ＹがＨまたは
0003647860.tif 000073
R12がＮ（R11）２、OR11またはOR14N（R11）２であり、かつR11がＨまたはアルキル基もしくはシクロアルキル基である請求の範囲第14項に記載の組成物。
【請求項１７】
R10がアルキルであり、Ｙが
0003647860.tif 000074
R12がOR11またはOR14N（R11）２であり、かつR11がアルキルである請求の範囲第16項に記載の組成物。
【請求項１８】
R10がメチルであり、R12がOR11であり、R11がメチルであり、R4がメチルであり、かつR6がＨである請求の範囲第17項に記載の組成物。
【請求項１９】
R10がメチルであり、R12がOR11であり、R11がイソアミルであり、R4がＨであり、かつR6がＨである請求の範囲第17項に記載の組成物。
【請求項２０】
R10がメチルであり、R12がOR11であり、R11がｎ−オクチルであり、R4がＨであり、かつR6がＨである請求の範囲第17項に記載の組成物。
【請求項２１】
下記の式：
0003647860.tif 000075
を有するアルデヒドを下記の式：
0003647860.tif 000076
を有するトリプトファン類縁体と反応させることを特徴とする、下記の式：
0003647860.tif 000077
を有するラベンダマイシン類縁体の調製方法。
（式中、
0003647860.tif 000078
0003647860.tif 000079
ＹはＨ、OR11、SR11、Ｎ（R11）２、NR11N（R11）２、ハロゲン原子、NO2、CN、
0003647860.tif 000080
アルキル、アリール、シクロアルキル、アルキニル、アルケニルまたは複素環基であり、これらの夫々は置換されていてもよく、または置換されていなくてもよく、
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、及びR8（これらは同じであってもよく、または異なっていてもよい）は夫々独立にＨ、ハロゲン原子、NO2、CN、OR13、SR13、Ｎ（R13）２、
0003647860.tif 000081
0003647860.tif 000082
アルキル、アリール、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、またはヘテロアルキル、複素環、ヘテロアルケニルもしくはヘテロアルキニル基であり、これらの夫々は置換されていてもよく、または置換されていなくてもよく、
R9はＨ、
0003647860.tif 000083
アルキル、シクロアルキル、アリール、アルケニル、アルキニルまたは複素環基であり、これらの夫々は置換されていてもよく、または置換されていなくてもよく、
R10、R11及びR13（これらは同じであってもよく、または異なっていてもよい）は夫々独立にＨまたはアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたは複素環基であり、これらの夫々は置換されていてもよく、または置換されていなくてもよく、
R12はＨ、Ｎ（R11）２、OR11、SR11、NR11N（R11）２、OR14N（R11）２、またはアルキル、シクロアルキル、アリール、アルケニル、アルキニルまたは複素環基であり、これらの夫々は置換されていてもよく、または置換されていなくてもよく、かつ
R14はアルキレン基である）
【請求項２２】
アルデヒドが下記の式：
0003647860.tif 000084
を有し、かつトリプトファン類縁体が下記の式：
0003647860.tif 000085
（式中、Ｘ、Ｙ、R4及びR6は請求の範囲第21項に定義されたとおりである）
を有する請求の範囲第21項に記載の方法。
【請求項２３】
下記の式を有する化合物及びその塩。
0003647860.tif 000086
（式中、Ｘは、
0003647860.tif 000087
であり、R1、R2及びR3は同じであっても異なっていても良く、それぞれ、独立に、Ｈ、ハロゲン原子、NO2、CN、OR13、SR13、Ｎ（R13）２、
0003647860.tif 000088
又は、アルキル、アリール、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル又はヘテロアルキル、複素環、ヘテロアルケニル又はヘテロアルキニル基であり、それぞれは置換されていても良く又は置換されていなくても良く、R10及びR13は、同じであっても異なっていても良く、それぞれ、独立に、Ｈ、又はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール又は複素環基であり、それぞれは置換されていても良く又は置換されていなくても良く、且つ、Ｚは、CH3又はCHOである）。
【請求項２４】
Ｘが、
0003647860.tif 000089
であり、R1、R2及びR3が、それぞれＨである、請求の範囲第23項に記載の化合物。
【請求項２５】
R10が、アルキル又は置換アルキルである、請求の範囲第24項に記載の化合物。
【請求項２６】
R10が、CH3、ClCH2、（CH3）2CH又はCH3（CH2）２である、請求の範囲第25項に記載の化合物。
【請求項２７】
R10が、CH3（CH2）２である、請求の範囲第26項に記載の化合物。
【請求項２８】
医薬上許される担体及び請求の範囲23項に記載の化合物又はその医薬上許される塩を含むことを特徴とする癌治療用医薬組成物。
【請求項２９】
Ｘが、
0003647860.tif 000090
であり、R1がＨであり、R2がＨであり、且つR3がＨである、請求の範囲第28項に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
R10が、アルキル又は置換アルキルである、請求の範囲第29項に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
R10が、CH3、ClCH2、（CH3）2CH又はCH3（CH2）２である、請求の範囲第30項に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
R10が、CH3（CH2）２である、請求の範囲第31項に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
下記の式：
0003647860.tif 000091
を有する１−シリルオキシ−アザジエンを、下記の式：
0003647860.tif 000092
を有するブロモキノンと反応させることを特徴とする、下記の式：
0003647860.tif 000093
を有するキノリンジオンの調製方法。
（式中、Ｘは、
0003647860.tif 000094
であり、そして、R1、R2及びR3は同じであっても異なっていても良く、それぞれ、独立に、Ｈ、ハロゲン原子、NO2、CN、OR13、SR13、Ｎ（R13）２、
0003647860.tif 000095
又は、アルキル、アリール、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル又はヘテロアルキル、複素環、ヘテロアルケニル又はヘテロアルキニル基であり、それぞれは置換されていても良く又は置換されていなくても良く、R10及びR13は請求の範囲第１項に定義されたとおりである。）
【発明の詳細な説明】
本発明は一部政府の支持（NIH助成金１−R15−CA54517及び１−R15−GM37491）によりなされた。政府は本発明に或る種の権利を有する。
発明の背景
ラベンダマイシン（Ａ）はドイル及び共同研究者らによりストレプトミセス・ラベンデュラエ（Streptomyces lavendulae）の？酵ブロースから単離された。Dyleら,Tetrahedron Letters,22,4595（1981）及びGouldら,Fortschr.Chem.Org.Naturst.,41,77（1982）を参照のこと。ラベンダマイシンは広いスペクトルの抗腫瘍活性、抗菌活性及び抗ウイルス活性を有する。例えば、Shibataら,J.Antibiot.,33,1231（1980）;Balitzら,J.Antibiot.,35,259（1982）;Bogerら,J.Med.Chem.,30,1918（1987）を参照のこと。
ラベンダマイシンメチルエステル（Ｂ）がまた知られている。それはラベンダマイシンのエステル化により調製し得る。Dyleら,Tetrahedron Letters,22,4595（1981）。ラベンダマイシンメチルエステルの最初の全合成がケンデ及びエベチノにより1984年に報告された。Kendeら,Tetrahedron Letters,25,923（1984）及びKendeら,Heterocycles,21,91（1984）。彼らは置換キナルジン酸とβ−メチルトリプトファンメチルエステルのビシュラー−ナピーラルスキイ縮合、続いて環化及びＡ環の官能化によりラベンダマイシンメチルエステルの合成を行った。ボーガー及び彼の共同研究者らは官能化されたアミノアルデヒドとβ−カルボリンのフリードランダー縮合、続いてその他の変換によりラベンダマイシンメチルエステルを合成した。Bogerら,J.Org.Chem.,50,5790（1985）。ラベンダマイシンメチルエステルの正規の合成がHibinoら,Heterocycles,23,261（1985）及びRaoら,Ttrahedron,42,5065（1986）に報告されていた。ラベンダマイシン合成の最近の総説につき、Rao,抗生物質の化学合成の最近の進歩,497−531（Lukacsら編集,1990）を参照のこと。
ヒビノのグループは、Hibinoら,Heterocycles,20,1957（1983）にデメチルラベンダマイシンメチルエステル（Ｃ）の合成を報告していた。ヒビノのグループは８−ベンジルオキシキノリン−２−アルデヒドとトリプトファンメチルエステルのピクテット−スペングラー型環化、続いて８−ヒドロキシキノリン中間体を得るための芳香族化及び水素化によりデメチルラベンダマイシンメチルエステルを合成した。この中間体を臭素化して5,7−ジブロモ−８−ヒドロキシキノリンを得た。5,7−ジブロモ−８−ヒドロキシキノリンを酸化して７−ブロモキノリンキノンを得、そして臭素をアジ化ナトリウムで置換し、続いてアジドを亜硫酸水素ナトリウムで還元して、デメチルラベンダマイシンメチルエステルを得た。
ピクテット−スペングラー型環化に基くこの合成スキームはまたヒビノのグループにより上記のラベンダマイシンメチルエステルの正規の合成に使用された。ヒビノらは、ラベンダマイシンエチルエステルがこの同じ合成スキームを使用して調製し得ることを示す。Hibinoら,Heterocycles,23,261（1985）を参照のこと。
更に、ピクテット−スペングラー環化アプローチは、デスアミノデスメチルラベンダマイシンメチルエステル（Ｄ）及び８種のその他のラベンダマイシン類縁体を合成するのにヒビノのグループにより使用されていた。ヒビノら,Chem.Pharm.Bull.,34,1376（1986）を参照のこと。この文献は、ラベンダマイシン類縁体の相対的な突然変異誘発の効力が置換基（例えば、メチル及び／または臭素）の性質により著しく影響されたこと、かつ3'位にメチル基を有するラベンダマイシン類縁体が更に突然変異誘発性であったことを報告する。
ラベンダマイシン及び類縁体Ｂ−Ｄの構造が以下に示される。
0003647860.tif 000002
ラベンダマイシンの全合成を目的とする予備研究中に、ラオらはラベンダマイシンの２種の追加の類縁体（Ｅ）及び（Ｆ）を合成した。Raoら,Indian J.Chem.,23B,496（1984）を参照のこと。ラベンダマイシン類縁体Ｅ−Ｆの構造が以下に示される。
0003647860.tif 000003
ラベンダマイシンはストレプトニグリン（Ｇ）に構造が似ている。また、ストレプトニグリンは抗腫瘍活性、抗菌活性及び抗ウイルス活性の広いスペクトルを有する。Balitzら,J.Antibiot.,35,259（1982）;Raoら,J.Am.Chem.Soc.,85,2532（1986）;Bogerら,J.Med.Chem.,30,1918（1987）。特別な例外として、ラベンダマイシンは、その活性の観察されたスペクトルにおいてストレプトニグリンよりも効力が劣るが、それに匹敵することがわかった。Balitzら、J.Antibiot.,35,259（1982）を参照のこと。ストレプトニグリンの構造が以下に示される。
0003647860.tif 000004
ストレプトニグリン及び幾つかのストレプトニグリン誘導体が合成されていた。Driscollら,Cancer Chemother.Rep.（パート２）,4,1（1974）（４種のストレプトニグリン誘導体及び２位、６位及び７位に種々の置換基を有するストレプトニグリンの幾つかのキノリンキノン類縁体を含む1500種のキノン）;Rao,Cancer Chemother.Rep.（パート２）,4,11（1974）（ストレプトニグリン誘導体及びこれらのAB環類縁体及びABC環類縁体）;Kendeら,Tetrahedron Lett.,4775（1978）（完全なストレプトニグリン炭素骨格を有するが、Ｃ環及びＤ環に異なる置換基を有する４環式アミノキノン）;Bashaら,J.Am.Chem.Soc.,102,3962（1980）（ストレプトニグリン）;Kendeら,J.Am.Chem.Soc.,103,1271（1981）（ストレプトニグリン）;Weinrebら,J.Am.Chem.Soc.,104,536−44（1982）（ストレプトニグリン）;Panekら,Diss.Abs.Int'l,46,1176B（1985）（ストレプトニグリン）;Miyasakaら,J.Chem.Soc.Perkin Trans.,1,479（1986）（ストレプトニグリン2'−アミド誘導体；また、ストレプトミセス・グリセウス（Streptomyces griseus）の高収率の微生物合成により得られた７−位アミドを記載している）;Tolstikovら,J.Antibiot.,45,1020（1992）（ストレプトニグリンの2'−アミド，アミノ−ジカルボン酸誘導体及びアミノ糖誘導体）;Tolstikovら,J.Antibiot.,45,1002（1992）（2'−デカルボキシ−2'−アミノストレプトニグリン）;Preobrazhenskayaら,J.Antibiot.,45,227（1992）（ストレプトニグリンからのストレプトニグロン、ストレプトニグリン及びストレプトニグロン8'−アルキルエーテル、並びにその他のストレプトニグリン誘導体及びストレプトニグロン誘導体）；米国特許第3,372,090号（ストレプトニグリンのエステル誘導体、2'−アミド誘導体、2'−ヒドラジド誘導体、エーテル誘導体、ジヒドロ誘導体、デスアミノ誘導体及びアセチル誘導体（Ｏ−アセチル誘導体、Ｎ−アセチル誘導体、テトラアセチル誘導体）；米国特許第3,804,947号（イソプロピリデンアザストレプトニグリン、ストレプトニグリンモノオキシム誘導体並びにこれらのエステル誘導体及びその他の誘導体）；及び日本特許第61−280490号（ストレプトニグリン2'−アミド）を参照のこと。
幾つかの2'−位ストレプトニグリン誘導体の生物活性が研究されていた。これらの誘導体として、2'−エステル誘導体、2'−アミド誘導体、2'−ヒドラジド、及び2'−アミノ酸誘導体が挙げられる。ストレプトニグリンの生物活性に関する置換基の効果は、置換基及び研究されている活性の型に応じて変化した。Riversら,Cancer Chemotherapy Rep.,46,17（1965）;Harrisら,Cancer,18,49（1965）;Kremerら,Biochem.Pharmacol.,15,1111（1966）;Kaungら,Cancer,23,1280（1969）;Inouyeら,J.Antibiot.,38,1429（1985）;Okadaら,J.Antibiot.,39,306（1986）;Inouyeら,J.Antibiot.,39,550（1986）;Okadaら,J.Antibiot.,40,230（1987）;Takeら,J.Antibiot.,42,968（1989）;Tolstikovら,J.Antibiot.,45,1020（1992）を参照のこと。
ストレプトニグリン、ストレプトニグリンメチルエステル及びイソプロピリデンアザストレプトニグリンの生物学的性質が比較されていた。Kremerら,Cancer Chemother.Rep.,51,19（1967）;Mizuno,Biochem.Pharmacol.,16,933（1967）;ChaubeらCancer Chemother.Rep.（パート１）,53,23（1969）及びChirigosら,Cancer Chemother.Rep.（パート１）,57,305（1973）を参照のこと。再度、置換基の効果は、研究されている活性に応じて変化した。
ストレプトニグリン、ストレプトニグリンメチルエステル及びストレプトニグリン8'−アルキルエーテルの抗菌活性が研究されていた。Preobrazhenskayaら,J.Antibiot.,45,227（1992）を参照のこと。8'−アルキルエーテルはストレプトニグリンメチルエステルよりわずかに大きな抗菌活性を示したが、ストレプトニグリンよりも劣っていた。
ストレプトニグリンの天然産類縁体である10'−デスメトキシストレプトニグリンが発見された。米国特許第5,158,960号;Liuら,J.Antibiot.,45,454−57（1992）。10'−デスメトキシストレプトニグリンの他に、米国特許第5,158,960号明細書は10'−デスメトキシストレプトニグリンの塩、エステル及びアミドを開示している。例示のエステル及びアミドは、2'−カルボキシルをエステル化することにより、またはその2'−位でアミド基を形成することにより調製されたものである。10'−デスメトキシストレプトニグリンは、抗癌活性、抗菌活性、特に、広いスペクトルの抗菌活性を有することがわかった。米国特許第5,158,960号;Liuら,J.Antibiot.,45,454−57（1992）。また、それはras癌遺伝子p21タンパク質のファルネシル化の抑制に関するアッセイにおいてストレプトニグリンよりも３倍活性であることがわかった。米国特許第5,158,960号は、10'−デスメトキシストレプトニグリンがras癌遺伝子p21タンパク質のファルネシル化を抑制するので、腫瘍細胞中のras癌遺伝子の腫瘍形成効果を阻止することが予測し得ることを教示している。
欧州特許出願第185,979号明細書は、ストレプトニグリンの６位のメトキシ基に代えてヒドロキシル基を有する別の天然産ストレプトニグリン類縁体を開示している。この化合物はストレプトニグリンよりわずかに小さい抗腫瘍活性を示すが、極めて低い細胞毒性を示すと報告されている。また、この欧州特許出願明細書は６位のヒドロキシルを使用することにより合成された誘導体を開示している。
ストレプトニグリンの第三の天然産類縁体はストレプトニグロンである。Herltら,J.Antibiot.,38,516（1985）。また、ストレプトニグロンはストレプトニグリンから合成され、ストレプトニグロン8'−アルキルエーテル及びその他のストレプトニグロン誘導体が調製された。Preobrazhenskayaら,J.Antibiot.,45,227（1992）。また、ストレプトニグロンの類縁体であると考えられる2'−デカルボキシ−2'−アミノストレプトニグリンが合成されていた。Tolstikovら,J.Antibiot.,45,1002（1992）。ストレプトニグロン及びその誘導体は一般にストレプトニグリンより不活性であり、または極めて小さい活性であることがわかった。Herltら,J.Antibiot.,38,516（1985）;Preobrazhenskayaら,J.Antibiot.,45,227（1992）;Tolstikovら,J.Antibiot.,45,1002（1992）を参照のこと。
最後に、幾つかのストレプトニグリン部分構造及びラベンダマイシン部分構造が合成され、それらの生物活性がストレプトニグリン及びラベンダマイシンの最小の強力な薬作用発生団を決定しようと試みて研究されていた。Driscollら,Cancer Chemother.Rep.（パート２）,4,1（1974）（２位、６位及び７位に種々の置換基を有するストレプトニグリンの幾つかのキノリンキノン類縁体を含む1500種のキノン；また、４種のストレプトニグリン誘導体）;Rao,Cancer Chemother.Rep.（パート２）,4,11（1974）（ストレプトニグリン誘導体並びにこれらのAB環類縁体及びABC環類縁体）;Rao,J.Heterocyclic Chem.,12,725（1975）（２−フェニル−および2,2−ピリジル−キノリン−5,8−ジオン）;Rao,J.Heterocyclic Chem.,14,653（1977）（ストレプトニグリン及びこれらの誘導体のABC環部分）;Lownら,Can.J.Chem.,54,2563（1976）（２−（ｏ−ニトロフェニル）−及び２−（ｏ−アミノフェニル）−5,8−キノリンジオン）;Lownら,Can.J.Biochem.,54,446（1976）（ストレプトニグリンに関連した置換5,8−キノリンキノン）;Liaoら,J.Heterocyclic Chem.,13,1283（1976）（ストレプトニグリンのCD環部分）;Raoら,J.Heterocyclic Chem.,16,1241（1979）（ストレプトニグリン及び類縁体のABC環部分）;Shaikhら,Diss.Abs.Inter.,44,1464B（1983）（ストレプトニグリンに関連した2,3−二置換−1,4−ナフタレンジオン、6,7−二置換5,8−キノリン、イソキノリン、キノキソリン、キナゾリン、フタラジンジオン、及び２−（ｏ−ニトロフェニル）−6,7−二置換−5,8−キノリンジオン）;Bogerら,J.Org.Chem.,50,5782（1985）（ラベンダマイシンのAB環部分及びCDE環部分）;Panekら,Diss.Abs.Inter.,46,1176B（1985）（ストレプトニグリン及びラベンダマイシン炭素骨格）;Renaultら,J.Am.Chem.Soc.,104,1715（1985）（5,8−キナゾリンジオン）;Shaikhら,J.Med.Chem.,29,1329（1986）（ストレプトニグリンのAB環系に関連した一連のアザ及びジアザ二環式キノン）;Bogerら,Heterocycles,24,1067（1986）（ストレプトニグリン及びラベンダマイシンAB環系）;Inouyeら,J.Antibiot.,40,105（1987）（６−メトキシ−5,8−ジヒドロキノリン−5,8−ジオン及び６−メトキシ−７−メチル−5,8−ジヒドロキノリン−5,8−ジオン）;Bogerら,J.Med.Chem.,30,1918（1987）（AB環、ABC環、CD環及びCDE環並びにこれらの誘導体を含む種々のストレプトニグリン及びラベンダマイシンの部分構造が説明されている）;Takeら,J.Antibiot.,40,679（1987）（キノリンキノン、７−イソキノリンキノン、インドールキノン）;Yasudaら,J.Antibiot.,24,1253（1987）（７−アミノ−２−（2'−ピリジル）キノリン−5,8−キノン−6'−カルボン酸）;Beach,Diss.Abs.Inter.,49,3204−Ｂ（ストレプトニグリンイソキノリン類縁体）;Kitaharaら,Chem.Pharm.Bull.,38,2841（1990）（８−アミノ−5,6−キノリンジオン）;Raoら,J.Med.Chem.,34,1871（1991）（ストレプトニグリンイソキノリン類縁体）を参照のこと。
Rao,Cancer Chemother.Rep.（パート２）,4,11（1974）が特に重要である。この文献は、幾つかのストレプトニグリン誘導体及びAB環類縁体の活性の研究の結果を報告し、これらがストレプトニグリンの最小の強力な薬作用発生団に関する構造（Ｈ）を提案するように著者らを導いた。
0003647860.tif 000005
Ｈの三環式類縁体（ストレプトニグリンのABC環に相当する）が合成され、活性であることがわかった。この文献に報告された重要な結果は、OHまたはOCH3によるストレプトニグリンの７位のアミノ官能基の置換が活性の損失をもたらし、また７位のアミン基の還元的アセチル化またはメチル化により生成されたストレプトニグリン誘導体が不活性であったことである。一連のアルコールによるストレプトニグリンのカルボキシルのエステル化は、報告によればかなりの活性を示すエステルを生じた。
完全に複雑なストレプトニグリンCD環系及びラベンダマイシンCDE環系だけでなく、幾つかの関連した合成構造は、報告によれば抗菌アッセイ及び細胞毒性アッセイにおいて不活性と判明した。Bogerら,J.Med.Chem.,30,1918（1987）を参照のこと。しかしながら、ストレプトニグリン及びラベンダマイシンのAB環類縁体及びABC環類縁体のいずれもがストレプトニグリンに匹敵する細胞毒性活性、抗菌活性または抗腫瘍活性を有しないと報告されていた。Driscollら,Cancer Chemother.Rep.パート2,4,1（1974）を参照のこと。これはストレプトニグリンの活性におけるCD環の役割を示唆する。Kendeら,Tetrahedron Lett.,48,4775（1978）を参照のこと。
また、下記の文献がストレプトニグリン及びラベンダマイシンの部分構造の合成を記載しているが、得られる化合物の活性を説明していない。Liaoら,Angew.Chem.Intern.Edit.,6,82（1967）（ストレプトニグリンのAB環部分）;Raoら,J.Heterocyclic Chem.,12,731（1975）（ストレプトニグリンＣ環前駆体）;Liaoら,J.Heterocyclic Chem.,13,1063（1976）（ストレプトニグリン及び２−メチル同族体のAB環部分）;Hibinoら,J.Org.Chem.,42,232（1977）（ストレプトニグリンのAB環部分）;Wittekら,J.Org.Chem.,44,870（1979）（ストレプトニグリンのCD環部分）;Bogerら,Tetrahedron Lett.,25,3175（1984）（ラベンダマイシンのCDE環部分）;Erickson,Diss.Abs.Inter.,49,747−Ｂ（1988）（４−アミノアントラニル酸、７−アミノキナルジン酸、７−アミノ−５−ヒドロキシキナルジン酸）;Molinaら,Tetrahedron Lett.,33,2891（1992）（１−置換−β−カルボリン）。
発明の要約
本発明は下記の式（Ｉ）を有するラベンダマイシン類縁体を提供する。
0003647860.tif 000006
（式中、
0003647860.tif 000007
ＹはＨ、OR11、SR11、Ｎ（R11）２、NR11N（R11）２、ハロゲン原子、NO2、CN、
0003647860.tif 000008
0003647860.tif 000009
アルキル、アリール、シクロアルキル、アルキニル、アルケニル、または複素環基であり、これらの夫々は置換されていてもよく、または置換されていなくてもよく、
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7及びR8（これらは同じであってもよく、または異なっていてもよい）は夫々独立にＨ、ハロゲン原子、NO2、CN、OR13、SR13、Ｎ（R13）２、
0003647860.tif 000010
アルキル、アリール、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、複素環、ヘテロアルケニルまたはヘテロアルキニル基であり、これらの夫々は置換されていてもよく、または置換されていなくてもよく、
R9はＨ、
0003647860.tif 000011
アルキル、シクロアルキル、アリール、アルケニル、アルキニルまたは複素環基であり、これらの夫々は置換されていてもよく、または置換されていなくてもよく、
R10、R11及びR13（これらは同じであってもよく、または異なっていてもよい）は夫々独立にＨまたはアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたは複素環基であり、これらの夫々は置換されていてもよく、または置換されていなくてもよく、
R12はＨ、Ｎ（R11）２、OR11、SR11、NR11N（R11）２、OR14N（R11）２、またはアルキル、シクロアルキル、アリール、アルケニル、アルキニルまたは複素環基であり、これらの夫々は置換されていてもよく、または置換されていなくてもよく、かつ
R14はアルキレン基である）
及びこれらのラベンダマイシン類縁体の塩。
また、本発明は、下記の式（Ｋ）
0003647860.tif 000012
を有するアルデヒドを式（Ｌ）
0003647860.tif 000013
（式中、Ｘ、Ｙ及びR1〜R9は先に定義されたとおりである）
のトリプトファン類縁体と反応させることを特徴とするこれらのラベンダマイシン類縁体の調製方法を提供する。
本発明の化合物は抗腫瘍活性及び抗微生物活性（抗菌活性、抗ウイルス活性及び抗寄生虫活性）を有する。特に、或る種の本発明の化合物はrasK腫瘍細胞に対し予測されない選択的な活性を有する。
それ故、本発明は、有効量の本発明のラベンダマイシン類縁体またはその医薬上許される塩を動物に投与することを特徴とする腫瘍を有し、または微生物感染症を患っている動物の治療方法を提供する。また、本発明は、医薬上許される担体と組み合わせてラベンダマイシン類縁体、またはその医薬上許される塩を含むことを特徴とする医薬組成物を提供する。
最後に、本発明は、微生物を本発明のラベンダマイシン類縁体、またはその塩と接触させることを特徴とする微生物の増殖の抑制方法を提供する。例えば、本発明の化合物は液体に添加されてそれらの中の微生物増殖を抑制し得る。また、これらの化合物は表面における微生物増殖を抑制するのに有益な消毒薬製剤に製剤化し得る。
現在好ましい実施態様の詳細な説明
本発明のラベンダマイシン類縁体は上記の一般式Ｉを有する。式Ｉの置換基Ｘ、Ｙ及びR1〜R9の定義において、下記の用語は下記の意味を有する。
“アルキル”は１〜20個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖アルキル基を表す。アルキル基として、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ｎ−ペンチル、２−メチルブチル、2,2−ジメチルプロピル、イソアミル、ｎ−ヘキシル、２−メチルペンチル、2,2−ジメチルブチル、ｎ−ヘプチル、２−メチルヘキシル、ｎ−オクチル、等が挙げられる。
“アリール”は５個または６個の炭素原子の少なくとも一つの芳香族環を含む基を表す。アリール基として、フェニル、トリル、ビフェニル、ナフチル、等が挙げられる。
“シクロアルキル”は３〜８個の炭素原子を有する脂肪族環を表す。シクロアルキル基として、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、等が挙げられる。
“アルケニル”は、１〜20個の炭素原子及び少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を含む直鎖または分岐鎖アルキル基を表す。アルケニル基として、ビニル、アリル、1,1−ジメチルアリル、等が挙げられる。
“アルキニル”は、１〜20個の炭素原子及び少なくとも一つの炭素−炭素三重結合を含む直鎖または分岐鎖アルキル基を表す。アルキニル基として、エチニル、プロペニル、等が挙げられる。
“アルキレン”は、１〜20個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖アルキレン基を表す。アルキレン基として、メチレン、エチレン、プロピレン、等が挙げられる。
“ヘテロアルキル”は、酸素、硫黄及び窒素から選ばれた１個以上のヘテロ原子を含むアルキルを表す。
“複素環”は、酸素、硫黄及び窒素から選ばれた１個以上のヘテロ原子を含むシクロアルキルまたはアリールを表す。複素環基として、チエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、等が挙げられる。
“ヘテロアルケニル”は、酸素、硫黄及び窒素から選ばれた１個以上のヘテロ原子を含むアルケニルを表す。
“ヘテロアルキニル”は、酸素、硫黄及び窒素から選ばれた１個以上のヘテロ原子を含むアルキニルを表す。
アルキル基、アリール基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ヘテロアルキル基、複素環基、ヘテロアルケニル基及びヘテロアルキニル基は置換されていなくてもよく、または１個以上の置換基で置換されていてもよい。適当な置換基として、RX、NH2、RXNH、（RX）2N、CN、N3、NO2、OH、ハロゲン（Cl、Br、Ｆ、Ｉ）、SH、RXS、RXSO2、RXSO、RXO、COOH、COORXCORX、CHO、及びCON（RX）２が挙げられ、式中、RXはアルキル、シクロアルキル、アリール、アルケニル、アルキニルまたは複素環基である。好ましい置換基はハロゲン原子である。
本発明の好ましいラベンダマイシン類縁体は式（Ｊ）
0003647860.tif 000014
（式中、Ｘ、Ｙ、R4及びR6は先に定義されたとおりである）
を有する類縁体である。
0003647860.tif 000015
R4がＨまたはアルキルであり、かつ
R6がＨ、ハロゲン原子またはOR13である式Ｊ（式中、R10、R12及びR13は先に定義されたとおりである）のラベンダマイシン類縁体が更に好ましい。R10はアルキルまたは置換アルキルであることが好ましい。Ｙは
0003647860.tif 000016
であることが好ましく、Ｙがこのように定義される場合、R12はＮ（R11）２、OR11またはOR14N（R11）２であることが好ましい。R12がこのように定義される場合、R11はＨまたはアルキルもしくはシクロアルキルであることが好ましい。R11がアルキルである場合、それは２〜20個の炭素原子を含むことが好ましく、４〜20個の炭素原子を含むことが最も好ましい。
本発明の或る種のラベンダマイシン類縁体は、塩基性官能基、例えば、アミノまたはアルキルアミノを含んでいてもよく、こうして、医薬上許される酸と医薬上許される塩を生成することができる。これらの場合において“医薬上許される塩”という用語は、本発明の化合物の比較的無毒性の無機酸付加塩及び有機酸付加塩を表す。これらの塩は、本発明の精製された化合物をその遊離塩基形態で適当な有機酸または無機酸と反応させ、こうして生成された塩を単離することにより調製し得る。代表的な塩として、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリル酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシレート、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフタレン酸塩、メシレート、グルコヘプトネート、ラクトビオネート、及びラウリルスルホン酸塩等が挙げられる。塩基性官能基を含むラベンダマイシンのその他の塩は非治療用に使用し得る。
その他の場合において、本発明の化合物は一つ以上の酸性官能基を含んでいてもよく、こうして、医薬上許される塩基と医薬上許される塩を生成することができる。これらの場合において“医薬上許される塩”という用語は、本発明の化合物の比較的無毒性の無機塩基付加塩及び有機塩基付加塩を表す。これらの塩は、精製された化合物をその遊離酸形態で適当な塩基、例えば、医薬上許される金属陽イオンの水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩、アンモニア、または医薬上許される有機の一級、二級もしくは三級のアミンと反応させることにより調製し得る。代表的なアルカリ塩またはアルカリ土類塩として、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、及びアルミニウム塩等が挙げられる。塩基付加塩の生成に有益な代表的な有機アミンとして、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン等が挙げられる。酸性官能基を含むラベンダマイシン類縁体のその他の塩は非治療用に使用し得る。
本発明のラベンダマイシン類縁体Ｉは効率の良い操作により合成されてもよく、その最終工程は式Ｋ
0003647860.tif 000017
のトリプトファン類縁体との下記の式（Ｌ）
0003647860.tif 000018
（式中、Ｘ、Ｙ及びR1〜R9は先に定義されたとおりである）
のアルデヒドのピクテット−スペングラー縮合である。下記の式１を参照のこと。
0003647860.tif 000019
典型的な反応は溶媒中の等モル量のＫ及びＬの組み合わせを伴う。好適な溶媒として、芳香族炭化水素、例えば、キシレン、トルエン、メシチレン、及びアニソールが挙げられる。反応が完結するまで、反応体が加熱される。一般に、温度は約60℃以上であり、また反応は完結に達するまで約１時間以上を要するであろう。ラベンダマイシン類縁体は、（１）反応混合物を冷却し、（２）その溶液を濃縮し、次いで冷却し、または（３）濃縮そしてラベンダマイシン類縁体が可溶性ではないその他の溶媒による処理により固体の形態で得られる。このような溶媒として、酢酸エチル、ペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル、ジエチルエーテル、及びアセトンが挙げられる。
アルデヒドＫは、還流ジオキサン−H2O中の相当する２−メチル−キノリン−5,8−ジオン（Ｍ）の二酸化セレン酸化により調製し得る。
0003647860.tif 000020
２−メチルキノリン−5,8−ジオン（Ｍ）は、24時間にわたる還流クロロベンゼン中のブロモキノン（Ｏ）との１−シリルオキシ−アザジエン（Ｎ）のディールス−アルダー縮合により調製し得る。下記の式２を参照のこと。ブロモキノン（Ｏ）はKellyら,J.Org.Chem.,48,3849（1983）（実施例27を参照のこと）に記載された方法に従って調製し得る。
0003647860.tif 000021
アザジエンＮは、モレキュラーシーブの存在下の室温で48時間にわたるジクロロメタン中のシリルオキシアミン（Ｐ）とケトン（Ｑ）の反応により調製し得る。
0003647860.tif 000022
また、２−メチルキノリン−5,8−ジオンＭの幾つかは氷酢酸中の重クロム酸カリウムによる相当するアシルアミド化合物（Ｒ）の酸化により調製し得る。下記の式４を参照のこと。
0003647860.tif 000023
アシルアミド化合物Ｒは、パラジウム／カーボンの存在下の分子状水素による5,7−ジニトロ−８−ヒドロキシ−２−メチルキノリン（Ｓ）の還元、続いて所望の酸無水物（Ｔ）による処理により調製し得る。式５を参照のこと。
0003647860.tif 000024
本発明の方法に使用するのに適したトリプトファン及びその類縁体は市販されており、または当業界で知られている方法によりつくることができる。例えば、トリプトファン類縁体35、38、42及び43（表VIを参照のこと）がそれらの塩形態で市販されている。また、本発明の実施に有益な下記のトリプトファン類縁体がセントルイス、MOにあるシグマ・ケミカル社から市販されている。Ｎ−ｔ−BOC−Ｌ−トリプトファンｐ−ニトロフェニルエステル;N−CBZ−Ｌ−トリプトファンｐ−ニトロフェニルエステル;DL−トリプトファンアミド塩酸塩;L−トリプトファンベンジルエステル塩酸塩;DL−トリプトファンブチルエステル塩酸塩;DL−トリプトファンエチルエステル塩酸塩;L−トリプトファンエチルエステル;D−トリプトファンメチルエステル塩酸塩;L−トリプトファンメチルエステル;DL−トリプトファンオクチルエステル塩酸塩;5−メトキシ−DL−トリプトファン;5−フルオロトリプトアミン塩酸塩;6−フルオロトリプトアミン;DL−４−フルオロトリプトファン;5−フルオロ−DL−トリプトファン;6−フルオロ−DL−トリプトファン;5−ヒドロキシ−Ｄ−トリプトファン;5−ヒドロキシ−DL−トリプトファン;5−ヒドロキシ−Ｌ−トリプトファン;5−ヒドロキシ−DL−トリプトファンエチルエステル塩酸塩。その他のトリプトファン類縁体がその他の源から入手でき、または当業界で知られている方法によりつくることができる。
例えば、トリプトファンエステルは、トリプトファンまたは適当に官能化されたトリプトファンをアルコールと反応させて所望のエステルを得ることにより調製し得る。下記の式６を参照のこと。
0003647860.tif 000025
アルキルアミノアルキルエステルはトリプトファン（または適当に官能化されたトリプトファン類縁体）のアミンを保護し、次いで保護されたトリプトファンをMatao Kanaokaら,J.Phar.Soc.of Japan,95,231（1975）に記載されたようにして適当なアルキルアミノアルキルハライドと反応させることにより調製し得る。下記の式７を参照のこと。
0003647860.tif 000026
三級アルコールのトリプトファンエステルは、式８に示されるように、Rosowskyら,J.Med.Chem.,24,1450（1981）の方法により調製し得る。
0003647860.tif 000027
（式中、RXはアルキルであり、夫々のRXは同じであってもよく、また異なっていてもよい）
トリプトファンアリールエステルは、式９に示されるように、Castroら,Synthesis,413（1977）の方法及びRosowskyら,J.Med.Chem.,24,1450（1981）の方法により調製し得る。
0003647860.tif 000028
最後に、トリプトファンエステル及びアミドは、例えば、水酸化アンモニウムによる市販の塩の中和、続いて抽出により調製し得る。
上記の本発明のラベンダマイシン類縁体の調製方法の他に、ラベンダマイシン類縁体はまた適当に官能化されたトリプトファンＬとの適当に官能化されたキノリン−２−カルボン酸（Ｕ）のビシャー−ナピエルスキー縮合により調製し得る。この方法は、Kendeら,Tetrahedron Letters,25,923（1984）に記載された方法に似ている。
0003647860.tif 000029
本発明のラベンダマイシン類縁体は抗腫瘍薬、抗菌薬、抗ウイルス薬及び抗寄生虫薬として有益である。例えば、それらはグラム陽性バクテリア及びグラム陰性バクテリアの両方、例えば、属スタフィロコッカス（例えば、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus））、ストレプトコッカス（例えば、ストレプトコッカス・アガラクチン（Streptococcus agalactine）及びストレプトコッカス・ファエカリス（Streptococcus faecalis））、ミクロコッカス（例えば、ミクロコッカス・ルテウス（Micrococcus luteus））、バチルス（例えば、バチルス・スブチリス（Bacillus subtilis））、リステレラ（例えば、リステレラ・モノサイトゲネス（Listerella monocytogenes））、エシェリキア（例えば、エシェリキア・コリ（Escherichia coli））、クレブシエラ（例えば、クレブシエラ・ニューモニアエ（Klebsiella pneumoniae））、プロテウス（例えば、プロテウス・ミラビリス（Proteus mirabilis）及びプロテウス・ブルガリス（Proteus vulgaris））、サルモネラ（例えば、サルモネラ・チフォサ（Salmonella typhosa））、シゲラ（例えば、シゲラ・ソンネイ（Shigella sonnei））、エンテロバクター（例えば、エンテロバクター・アエロゲネス（Enterobacter aerogenes））、セラチア（例えば、セラチア・マルセセンス（Serratia marcescens））、シュードモナス（例えば、シュードモナス・アエルギノサ（Pseudomonas aeruginosa））、アシネトバクター（例えば、アシネトバクター・アニトラツス（Acinetobacter anitratus））、ノカルジア（例えば、ノカルジア・オートトロフィカ（Nocardia autotrophica））、及びミコバクテリウム（例えば、ミコバクテリウム・フォーツイタム（Mycobacterium fortuitum））のバクテリアにより引き起こされるバクテリア感染症を治療するのに使用し得る。
また、本発明のラベンダマイシン類縁体は抗ウイルス活性を有する。例えば、それらはレトロウイルス科（例えば、HIV−１、HIV−２、HTLV−１及びHTLV−II）、ヘルペスウイルス科（例えば、単純ヘルペスウイルス、水痘帯状疱疹ヘルペスウイルス、エプシュタイン−バーウイルス、及びヘルペス・ゲニタリア）、ヘパドナウイルス科（例えば、Ｂ型肝炎）、ピコルナウイルス科（例えば、Ａ型肝炎ウイルス及びポリオウイルス）、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス、オルソミクソウイルス科（例えば、インフルエンザウイルス）、ポックスウイルス科（例えば、痘瘡ウイルス及びワクシニアウイルス）、フラビウイルス科（例えば、黄熱病ウイルス）、ルビウイルス科（例えば、風疹ウイルス）、パラミクソウイルス科（例えば、はしかウイルス、パラインフルエンザウイルス、おたふくかぜウイルス及びイヌジステンバーウイルス）、ラブドウイルス科（例えば、狂犬病ウイルス）、パボバウイルス科、及びアデノウイルス科により引き起こされるウイルス感染症を治療するのに使用し得る。
また、ラベンダマイシン類縁体は寄生虫感染症を治療するのに使用し得る。このような感染症として、アメーバ、ジアルジア、バセシア、バランチジウム、エイメリオリナ、エントアメーバ、ヒストモナス、ナエグレリア、ノセマ、プラスモジウム、トキソプラスマ、及びトリパノソーマにより引き起こされる感染症が挙げられる。
また、ラベンダマイシン類縁体は抗腫瘍活性を有する。それらは、卵巣腫瘍、結腸腫瘍、乳腫瘍、子宮腫瘍、食道腫瘍、グリア芽細胞腫、神経芽細胞腫、胃腫瘍、腎臓腫瘍、皮膚腫瘍、肺腫瘍、膵臓腫瘍、精上皮腫、メラノーマ、膀胱腫瘍、甲状腺腫瘍、脊髄腫瘍及びリンパ系腫瘍を含む種々の腫瘍を治療するのに使用し得る。それらは充実性腫瘍及び悪性腫瘍に対し特に有効であることがわかった。
特に、本発明の或る種のラベンダマイシン類縁体は予測されないことにrasK腫瘍細胞に対し選択的に活性であることがわかった。“選択的に活性”は、これらのラベンダマイシン類縁体が正常な細胞よりもrasK腫瘍細胞に対し細胞毒性であることを意味する。実施例47は、どのラベンダマイシン類縁体がrasK腫瘍細胞に対し選択的に活性であるのかを測定する方法を記載している。その他の方法が当業界で知られている。
rasK腫瘍細胞に対し選択的に活性であることがわかった本発明のラベンダマイシン類縁体は、
0003647860.tif 000030
R10がアルキルであり、
Ｙが
0003647860.tif 000031
R12がOR11またはOR14N（R11）２であり、
R11がアルキルであり、
R4がＨまたはアルキルであり、かつ
R6がＨである式Ｊの化合物である。
これらの化合物のうちの３種がrasK腫瘍細胞に対し予測されない程高度に選択的な活性を示すことがわかった。それらは、
0003647860.tif 000032
R12がOR11であり、
R11がメチル、イソアミル、またはｎ−オクチルであり、
R11がメチルである場合に、R4がCH3であり、またR11がイソアミルまたはｎ−オクチルである場合に、R4がＨであり、かつ
R6がＨである式Ｊの化合物である。
rasK癌遺伝子は、膵臓癌の90％、結腸癌の60％及び乳癌の30％を含む多数のヒト充実性腫瘍の原因と関連していた。本発明の前に、悪性表現型がrasK癌遺伝子により維持される充実性腫瘍を有する患者を治療するのに利用できる有効な薬剤はなかった。
本発明のバクテリア感染症、ウイルス感染症及び寄生虫感染症の治療は、感染の軽減だけでなく、排除の両方を含む。腫瘍の治療として、腫瘍のサイズの維持または減少または腫瘍の排除が挙げられる。
微生物（バクテリア、ウイルスまたは寄生虫）感染症を患い、または腫瘍を有する動物を治療するために、有効量の本発明のラベンダマイシン類縁体、またはその医薬上許される塩が、動物に投与される。本発明に従って治療できる動物として、哺乳類、例えば、イヌ、ネコ、その他の家畜、及びヒトが挙げられる。
微生物感染症または癌を患っている動物を治療するために、有効量のラベンダマイシン類縁体、またはその医薬上許される塩が、動物に投与される。有効な投薬形態、投与の様式及び投薬量は、実験により決定され、このような決定をすることは当業者の技能内にある。投薬量は使用される特別なラベンダマイシン類縁体の活性、微生物感染症または腫瘍の重度、投与の経路、ラベンダマイシン類縁体の排出の速度、治療の期間、動物に投与されるその他の薬剤の同一性、動物の年齢、サイズ及び種、等の医療技術及び獣医学技術に公知の因子により変化することが当業者により理解される。一般に、本発明の化合物の好適な毎日の投薬量は、治療効果を生じるのに有効な最低投薬量である化合物の量であろう。例示の毎日の投薬量は、薬1mg/kg/日から約3g/kg/日まで、好ましくは約10mg/kg/日から500mg/kg/日までの範囲内の投薬量である。しかしながら、合計の毎日の投薬量は、ゾンデ医療判定の範囲内で担当医師または獣医により決定されるであろう。所望により、ラベンダマイシン類縁体、またはその医薬上許される塩の有効な毎日の投薬量は、日中に適当な間隔で別々に投与される２回、３回、４回、５回、６回またはそれ以上のサブ投薬量として投与し得る。
本発明の化合物は、口投与及び舌下投与を含む、粉末、軟膏またはドロップによるように、経口投与、鼻内投与、直腸投与、膣内投与、非経口投与、槽内投与及び局所投与を含む好適な投与の経路により治療のために動物患者に投与し得る。好ましい投与の経路は経口及び非経口である。
本発明の化合物は単独で投与されることが可能であるが、化合物を医薬製剤（組成物）として投与することが好ましい。本発明の医薬組成物は、一種以上の医薬上許される担体、そして必要により、一種以上のその他の化合物、薬剤またはその他の物質と混合して、活性成分として一種以上の本発明の化合物を含む。夫々の担体は、製剤のその他の成分と適合性であるという意味で“許される”必要があり、かつ患者に有害であってはならない。
本発明の医薬製剤として、経口投与、鼻内投与、局所投与（口投与及び舌下投与を含む）、直腸投与、膣内投与及び／または非経口投与に適した製剤が挙げられる。選択された投与の経路にもかかわらず、本発明の化合物は当業者に知られている通常の方法により医薬上許される投薬形態に製剤化される。
活性成分（単一投薬形態を製造するために担体物質と組み合わせられるラベンダマイシン類縁体またはその医薬上許される塩）の量は、治療される宿主、投与の特別な様式及び上記のその他の因子の全てに応じて変化するであろう。単一投薬形態を製造するために担体物質と組み合わせられる活性成分の量は、一般に治療効果を生じるのに有効な最低投薬量である化合物の量であろう。
医薬製剤または組成物の調製方法は、本発明の化合物を担体、そして必要により、一種以上の補助成分と混在させる工程を含む。一般に、製剤は、本発明の化合物を液体担体、もしくは微細な固体担体、またはその両方と均一かつ緊密に混在させ、次いで、必要により、その製品を成形することにより調製される。
経口投与に適した本発明の製剤は、カプセル、カシェ剤、ピル、錠剤、ロゼンジ（香辛料入りのベース、通常、蔗糖及びアカシアまたはトラガカントを使用する）、粉末、グラニュールの形態であってもよく、または水性もしくは非水性の液体中の溶液もしくは懸濁液として、または水中油もしくは油中水の液体エマルションとして、またはエリキシル剤もしくはシロップとして、またはサブロー錠剤（不活性ベース、例えば、ゼラチン及びグリセリン、または蔗糖及びアカシアを使用する）及び／または口洗浄液としてであってもよく、夫々が活性成分として所定量の本発明の化合物を含む。また、本発明の化合物は巨丸剤、舐剤またはペーストとして投与されてもよい。
経口投与のための本発明の固体投薬形態（カプセル、錠剤、ピル、糖剤、粉末、グラニュール等）において、活性成分（本発明のラベンダマイシン類縁体またはその医薬上許される塩）が一種以上の医薬上許される担体、例えば、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウム、及び／または下記の物質のいずれかと混合される。（１）充填剤または増量剤、例えば、澱粉、ラクトース、蔗糖、グルコース、マンニトール、及び／またはケイ酸、（２）バインダー、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、蔗糖及び／またはアカシア、（３）保湿剤、例えば、グリセロール、（４）崩壊剤、例えば、アガー−アガー、炭酸カルシウム、ジャガイモ澱粉またはタピオカ澱粉、アルギニン酸、或る種のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム、（５）溶解遅延剤、例えば、パラフィン、（６）吸収促進剤、例えば、四級アンモニウム化合物、（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコール及びグリセロールモノステアレート、（８）吸着剤、例えば、カオリン及びベントナイトクレー、（９）滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ウラリル硫酸ナトリウム、及びこれらの混合物、並びに（10）着色剤。カプセル、錠剤及びピルの場合、医薬組成物はまた緩衝剤を含んでいてもよい。また、同様の型の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖の如き賦形剤だけでなく、高分子量のポリエチレングリコール等を使用して軟質及び硬質の充填ゼラチンカプセル中に充填剤として使用されてもよい。
錠剤は、必要により一種以上の補助成分を使用して、圧縮または成形により製造し得る。圧縮錠剤は、バインダー（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、ナトリウム澱粉グリコレートまたは架橋されたナトリウムカルボキシメチルセルロース）、表面活性剤または分散剤を使用して調製し得る。成形錠剤は、適当な機械中で不活性液体希釈剤で湿らされた粉末化合物の混合物を成形することにより製造し得る。
本発明の医薬組成物の錠剤、及びその他の固体投薬形態、例えば、糖剤、カプセル、ピル及びグラニュールは、必要により、刻まれてもよく、または被覆物及びシェル、例えば、腸被覆物及び医薬製剤化技術に公知のその他の被覆物で調製されてもよい。また、それらは、例えば、所望の放出プロフィールを与えるための種々の比率のヒドロキシプロピルメチルセルロース、その他のポリマーマトリックス、リポソーム及び／または微小球を使用して、その中の活性成分の遅い放出または調節された放出を与えるように製剤化されてもよい。それらは、例えば、バクテリア保持フィルターによる濾過により滅菌されてもよい。また、これらの組成物は、必要により、不透明剤を含んでいてもよく、またそれらが、必要により、遅延様式で、胃腸道の或る部分中で一種以上の活性成分のみを放出し、または優先的に放出するような組成のものであってもよい。使用し得る埋封組成物の例として、ポリマー物質及びワックスが挙げられる。また、活性成分はマイクロカプセルにされた形態であってもよい。
本発明の化合物の経口投与のための液体投与形態として、医薬上許されるエマルション、ミクロエマルション、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシル剤が挙げられる。活性成分（本発明のラベンダマイシン類縁体、またはその医薬上許される塩）の他に、液体投与形態は、当業界で普通に使用される不活性希釈剤、例えば、水またはその他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ひまし油及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル、並びにこれらの混合物を含んでいてもよい。
不活性希釈剤の他に、経口組成物はまたアジュバント、例えば、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味料、香辛料、着色剤、芳香剤及び防腐剤を含んでいてもよい。
懸濁液は、活性化合物の他に、懸濁剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、アガー−アガー及びトラガカント、並びにこれらの混合物を含んでいてもよい。
直腸投与または膣内投与のための本発明の医薬組成物の製剤は座薬として提供されてもよく、これは本発明の一種以上の化合物を、例えば、ココアバター、ポリエチレングリコール、座薬ワックスまたはサリチレートを含む一種以上の好適な非刺激性賦形剤または担体と混合することにより調製されてもよく、これは室温で固体であるが、体温で液体であり、それ故、直腸または膣腔中で融解し、活性化合物を放出するであろう。また、膣内投与に適した本発明の製剤として、当業界で適当であることが知られているような担体を含むペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたは噴霧製剤が挙げられる。
本発明の化合物の局所投与または経皮投与のための投薬形態として、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ及び吸入剤が挙げられる。活性化合物は滅菌条件下で医薬上許される担体、及び必要とされ得る緩衝剤、または噴霧剤と混合されてもよい。
軟膏、ペースト、クリーム及びゲルは、本発明の活性化合物の他に、賦形剤、例えば、動物脂肪及び植物脂肪、油、ワックス、パラフィン、澱粉、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク及び酸化亜鉛、またはこれらの混合物を含んでいてもよい。
粉末及びスプレーは、本発明の化合物の他に、賦形剤、例えば、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム及びポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物を含んでいてもよい。スプレーは、通例の噴射剤、例えば、クロロフルオロ炭化水素及び揮発性未置換炭化水素、例えば、ブタン及びプロパンを更に含むことができる。
経皮パッチは、生体への本発明の化合物の調節された放出を与えるという追加された利点を有する。このような投薬形態は、本発明の化合物を適当な媒体、例えば、弾性マトリックス物質に溶解、分散またはそれ以外に混入することにより製造し得る。また、吸収促進剤が皮膚を横切る化合物のフラックスを増大するのに使用し得る。このフラックスの速度は、速度調節膜を用意し、または化合物をポリマーマトリックスもしくはゲルに分散させることにより調節し得る。
非経口投与に適した本発明の医薬組成物は、一種以上の医薬上許される滅菌等張性の水溶液または非水性溶液、分散液、懸濁液またはエマルション、または滅菌粉末（これは使用直前に滅菌注射液または分散液に再生し得る）と組み合わせて本発明の一種以上の化合物を含み、これらは酸化防止剤、緩衝剤、製剤を目的とされるレシピエントの血液で等張性にする溶質または懸濁剤もしくは増粘剤を含んでいてもよい。
本発明の医薬組成物中に使用し得る好適な水性担体及び非水性担体の例として、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、等）、及びこれらの適当な混合物、植物油、例えば、オリーブ油、及び注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルが挙げられる。適当な流動性は、例えば、被覆材、例えば、レシチンの使用により、分散液の場合には必要とされる粒子サイズの維持により、また表面活性剤の使用により維持し得る。
また、これらの組成物は、アジュバント、例えば、湿潤剤、乳化剤及び分散剤を含んでいてもよい。また、等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウム、等を組成物に入れることが望ましいことがある。加えて、注射可能な医薬形態の延長された吸収が、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの混入によりもたらされることがある。
或る場合に、薬剤の効果を持続するために、皮下注射または筋肉内注射からの薬剤の吸収を遅くすることが望ましい。これは、不十分な水溶解性を有する結晶性または無定形物質の懸濁液の使用により達成し得る。その時、薬剤の吸収の速度は、その溶解の速度に依存し、これは、順に、結晶サイズ及び結晶形態に依存し得る。また、非経口投与された薬剤形態の遅延吸収が、薬剤を油ビヒクルに溶解または懸濁することにより達成される。
注射可能なデポー剤形態は、生分解性ポリマー、例えば、ポリラクチド−ポリグリコリド中で薬剤のマイクロカプセルマトリックスを形成することにより製造される。薬剤とポリマーの比、及び使用される特別なポリマーの性質に応じて、薬剤放出の速度が調節し得る。その他の生分解性ポリマーの例として、ポリ（オルトエステル）及びポリ（酸無水物）が挙げられる。また、注射可能なデポー剤製剤は、薬剤を生体組織と適合性であるリポソームまたはミクロエマルションに閉じ込めることにより調製される。注射可能な物質は、例えば、バクテリア保持フィルターによる濾過により滅菌し得る。
製剤は、ユニット投薬または多投薬のシールされた容器、例えば、アンプル及びバイアル中で提供されてもよく、また使用直前に滅菌液体担体、例えば、注射用の水の添加のみを必要とする凍結乾燥状態で貯蔵されてもよい。即時調合注射液及び懸濁液は、上記の型の滅菌粉末、グラニュール及び錠剤から調製し得る。
また、本発明の医薬組成物は、下記の投与に適した製剤を含む獣医薬製剤の形態で使用し得る。（１）経口投与、例えば、飲薬（水性または非水性の溶液または懸濁液）、錠剤、巨丸剤、粉末、グラニュールまたは飼料原料との混合用のペレット、舌への適用のためのペースト、（２）非経口投与、例えば、滅菌溶液または懸濁液としての、例えば、皮下注射、筋肉内注射または静脈内注射による非経口投与、または適当な場合には、懸濁液または溶液が動物の乳房にその乳首を経て導入されるような乳房内注射による非経口投与、（３）例えば、皮膚に適用されるクリーム、軟膏またはスプレーとしての局所適用、または（４）例えば、ペッサリー、クリームまたはフォームとしての膣内投与。
また、本発明のラベンダマイシン類縁体は、微生物の増殖を抑制するのに有益な抗微生物（抗菌、抗ウイルス、抗寄生虫）薬剤として使用し得る。本明細書に使用される“増殖の抑制”は、微生物の死滅を含む。例えば、本発明の化合物は生存している宿主の表面または外部の媒体中に存在する微生物の増殖を抑制するのに使用し得る。それ故、本発明は、微生物を抑制に有効な量の本発明のラベンダマイシン類縁体、またはその塩と接触させる工程を含むことを特徴とするバクテリア、ウイルスまたは寄生虫の増殖の抑制方法を提供する。こうして、本発明の化合物は、例えば、表面処理のための消毒薬として、または微生物増殖を受け易い種々の固体媒体及び液体媒体の防腐剤として使用し得る。このような使用のためのラベンダマイシン類縁体の有効量は、当業者に知られている方法により実験により決定し得る。
実施例
実施例１〜46:ラベンダマイシン類縁体の合成
実施例１〜46は22のラベンダマイシン類縁体の合成を記載する。下記の全般の操作を実施例１〜46に使用した。融点（未修正）はトーマス・フーバー毛管装置で測定され、℃である。赤外（IR）スペクトルをニコレット5ZDX分光光度計で得た。プロトン磁気共鳴（1H NMR）スペクトルを、内部標準物質としてテトラメチルシラン（TMS）を用いてCDCl3またはDMSO−d6中でバリアン・ジェミニ200分光光度計で得た。質量スペクトル（MS）を、バキュメトリクス（vacummetrics）固体プローブまたはクラトスMS50を取り付けたヒューレット−パッカード5980A装置で得た。元素分析をミッドウェスト・ミクロラブズ社により行った。
実施例１〜22:７−Ｎ−アシルラベンダマイシンの合成
調製された22のラベンダマイシンは式Ｊを有する。
0003647860.tif 000033
（式中、
0003647860.tif 000034
R10がアルキルまたは置換アルキルであり、
ＹがＨまたは
0003647860.tif 000035
R4がＨまたはアルキルであり、
R6がＨ、ハロゲン原子またはOR13であり、
R12がＮ（R11）２、OR11またはOR14N（R11）２であり、
R11がＨ、アルキルまたはシクロアルキルであり、
R13がアルキルであり、かつ
R14がアルキレンである）
表Ｉはラベンダマイシン類縁体のリストを含み、夫々の類縁体につき置換基を明記する。
ラベンダマイシン類縁体を、上記のようにして（上記の式１を参照のこと）適当に官能化されたアルデヒドＫを適当に官能化されたトリプトファン類縁体Ｌと反応させることにより調製した。22のラベンダマイシン類縁体に関する反応条件及び収率を表Ｉにリストし、類縁体のうちの11種をつくるのに使用した操作を以下に詳しく記載する。表IIは22の類縁体に関する1H NMR値、MS値及び高分解能MS（HRMS）値を示す。
７−Ｎ−アセチルラベンダマイシンメチルエステル（化合物１、表Ｉ）
アルゴン雰囲気下のアルデヒド23（実施例23に記載されたようにして調製した）（12.02mg、0.05ミリモル）及びトリプトファンエステル39（Behforouzら,J.Heterocycl.Chem.,25,1627（1988）に記載されたようにして調製した；下記の実施例39を参照のこと）（11.6mg、0.05ミリモル）及び乾燥キシレン（16mL）の攪拌混合物を徐々に沸騰まで加熱し（３時間）、次いで19時間還流させた。その溶液を5mLまで濃縮し、次いで冷却した。７−Ｎ−アセチルラベンダマイシンメチルエステルの純粋なオレンジ色の結晶を濾過した。17.8mg、78.4％の収量を得た。融点（mp）は300℃より高かった。IR（KBr）3473（br）、3310、3121、1728、1708、1680、1645、1588、1504、1398、1335、1307、1229、1124、738cm-1;
1H NMR（CDCl3）δ2.38（s,3,COCH3）,3.19（s,3,ArCH3）,4.07（s,3,CO2CH3）,7.39（t,1,J＝8Hz,H−11'）,7.65（t,1,J＝8Hz,H−10'）,7.74（d.1,J＝8Hz,H−9'）,8.00（s,1,H−６）,8.35（d,1,J＝8Hz,H−12'）,8.41（br s,1,CONH）,8.5（d,1,J＝7Hz,H−３）,9.1（d,1,J＝7.5Hz,H−４）;11.85（br s,1,NH）;MS m/e（相対強さ）454（M+,68）,396（14）,394（25）,352（17）,106（36）,91（100）,77（14）,54（14）;HRMS,m/e C25H18N4O5としての計算値454.1277、実測値454.1277。
７−Ｎ−アセチルデメチルラベンダマイシン（化合物２、表Ｉ）
Ｌ−トリプトファン（20.4mg、0.1ミリモル）及びアニソールを攪拌し、60〜70℃の油浴中で加熱した。次いで、７−Ｎ−アセトアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（23）（実施例23に記載されたようにして調製した）（24.4mg、0.1ミリモル）及びアニソール20mlの混合物を１時間の期間にわたって滴下して添加した。その混合物を油浴中で120℃で23.5時間加熱し、回転蒸発させて乾燥させた。残渣をシリコンゲルカラム（4gのシリカゲル、カラム13cm X 10cm）でクロマトグラフィーにかけ、CH2Cl2（50ml）、メタノール:CH2Cl2（2.5:100、100ml）で溶離してオレンジ色の結晶（0.6mg、収率1.4％）を得た。
７−Ｎ−クロロアセチルラベンダマイシンメチルエステル（化合物７、表Ｉ）
還流冷却器、アルゴン充填気球及び磁気バーを取り付けた40mlの丸底フラスコ中で、７−クロロアセトアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（24）（実施例24に記載されたようにして調製した）（0.0278g、0.10ミリモル）、β−メチルトリプトファンメチルエステル（39）（Behforouzら,J.Heterocycl.Chem.,25,1627（1988）に記載されたようにして調製した；下記の実施例39を参照のこと）（0.0232g、0.10ミリモル）及び乾燥蒸留キシレン40mlを３時間の期間にわたって135℃に徐々に加熱した。その混合物をこの温度で更に16時間加熱した。明褐色の沈殿が最高温度で生成し始めた。反応の完結をTLCにより監視した。その混合物を熱時濾過して沈殿した不純物を除去し、濾液を冷却し、オレンジ−赤色の固体の生成をもたらした。この固体を濾過し、回収し、真空下で乾燥させた。生成物の収量は0.0226g（46％）であった。mp＞300℃;1H NMR（DMSO−d6）δ3.08（3H,s,ArCH3）,3,97（3H,s,COCH3）,4.64（2H,s,C−7NHCO CH2Cl）,7.42（1H,dd,J＝8.4Hz,J＝8.4Hz,C−11'H）,7.69（1H,dd,J＝8.4Hz,J＝8.4Hz,C−10'H）,7.71（1H,d,J＝8.4Hz,C−9'H）,7.75（1H,s,C−6H）,8.40（1H,d,J＝8.4Hz,C−12'H）,8.50（1H,d,J＝8.4Hz,C−3H）,8.64（1H,d,J＝8.4Hz,C−4H）,10.58（1H,br s,C−7NH）,11.94（1H,br s,NH）;IR（KBr）Vmax3342,3106,3010,2950,1679,1652,1589,1507,1492,1339,1307,742cm-1;電子衝撃MS（EIMS）,m/e（相対強さ）488/490（M+,2.25/1,16）,454（96）,412（ベース）,394（36）,380（20）,352（88）,335（29）;HRMS,m/e C25H17ClN4O5としての計算値488.088748、実測値488.087100。
７−Ｎ−クロロアセチルデメチルラベンダマイシンイソアミルエステル（化合物９、表Ｉ）
還流冷却器、流動しているアルゴン及び磁気バーを取り付けた100mlの三口丸底フラスコ中で、７−クロロアセトアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（24）（実施例24に記載されたようにして調製した）（0.0500g、0.18ミリモル）、Ｌ−トリプトファンイソアミルエステル（37）（実施例37に記載されたようにして調製した）（0.0490g、0.18ミリモル）、及び乾燥された蒸留キシレン75mlを５時間の期間にわたって76℃に徐々に加熱した。明るい着色沈殿の生成の最初の検出後に、その混合物を熱時濾過した。濾液を減圧で約10mlまで濃縮した。濾液を冷蔵庫に一夜貯蔵し、その間にかなりの量の暗オレンジ−褐色の固体が生成した。これを濾過し、冷酢酸エチルで洗浄して粗生成物25.5mg（27％の収率）を得た。濾液を更に濃縮し、冷却すると、生成物更に15mgを得た。（収率16％、全収率43％）:mp.280−284℃;1H NMR（CDCl3）δ1.05（6H,d,J＝6.3Hz,（CH3）２）,1.76−1.95（3H,m,COOCH2CH2CH）,4.29（2H,s,C−7NHCOCH2Cl）,4.52（2H,t,J＝6.8Hz,COOCH2）,7.39（1H,dd,J＝8.0Hz,J＝8.0Hz,C−11'H）,7.66（1H,dd,J＝8.0Hz,J＝8.0Hz,C−10'H）,7.78（1H,d,J＝8.0Hz,C−9'H）,7.95（1H,s,C−6H）,8.23（1H,d,J＝8.0Hz,C−12'H）,8.54（1H,d,J＝8.3Hz,C−3H）,8.93（1H,s,C−3'H）,9.18（1H,d,J＝8.3Hz,C−4H）,9.56（1H,br s,C−7NH）,11.76（1H,br s,NH）;IR（KBr）Vmax3336,2957,2929,2908,2871,1713,1680,1651,1588,1520,1337,1308,1265,1219,1119,738cm-1;EIMS,m/e（相対強さ）530/532（M+,2.4/1,45）,496（58）,480（６）,454（39）,416（83）,382（95）,366（15）,340（ベース）;HRMS,m/e C28H23ClN4O5としての計算値530.135698、実測値530.135781
７−Ｎ−クロロアセチルデメチルラベンダマイシンオクチルエステル（化合物10、表Ｉ）
還流冷却器、流動しているアルゴン及び磁気バーを取り付けた50mlの三口丸底フラスコ中で、７−クロロアセトアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（24）（実施例24に記載されたようにして調製した）（0.0279g、0.10ミリモル）、Ｌ−トリプトファンオクチルエステル（38）（実施例38に記載されたようにして調製した）（0.0316g、0.10ミリモル）、及び乾燥された蒸留キシレン32mlを６時間の期間にわたって100℃に徐々に加熱した。この温度を更に2.5時間保った。最後の３時間中に、褐色の沈殿が生成した。その混合物のTLCは主要スポットが所望の生成物であることを示した。その混合物を熱時濾過して沈殿した不純物を除去し、濾液を回転蒸発させて乾燥させて暗赤色の固体0.0301gを得、1H NMRはそれが粗生成物であることを示した（53％の収率）。粗生成物を酢酸エチルによる再結晶により更に精製した。mp215−217℃;1H NMR（CDCl3）δ0.88（3H,t,J＝6.8Hz,（CH2）７CH3））,1.23−1.70（10'H,（CH2）5CH3））,1.84−1.95（2H,m,COOCH2CH2）,4.29（2H,s,C−7NHCOCH2Cl）,4.48（2H,t,J＝6.8Hz,COOCH2）,7.39（1H,dd,J＝7.6Hz,J＝7.6Hz,C−11'H）,7.66（1H,dd,J＝7.6Hz,J＝7.6Hz,C−10'H）,7.79（1H,d,J＝7.6Hz,C−9'H）,7.97（1H,s,C−6H）,8.24（1H,d,J＝7.6Hz,Hz,C−12'H）,8.56（1H,d,J＝8.4Hz,C−3H）,8.95（1H,s,C−3'H）,9.21（1H,d,J＝8.4Hz,C−4H）,9.58（1H,br s,C−7NH）,11.79（1H,br s,NH）;IR（KBr）Vmax3331,2955,2926,2854,1708,1680,1652,1588,1519,1337,1307,1264,1219,738cm-1;EIMS,m/e（相対強さ）573（M+,1）,538（10）,496（35）,382（53）,366（30）,340（ベース）;HRMS,m/e C35H40ClN4O7S2としての計算値727.202696、実測値727.200500
７−Ｎ−ブチリルラベンダマイシンメチルエステル（化合物11、表Ｉ）
還流冷却器、アルゴン充填気球及び磁気バーを取り付けた25mlの丸底フラスコ中で、７−ブチルアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（26）（実施例26に記載されたようにして調製した）（0.0272g、0.10ミリモル）、β−メチルトリプトファンメチルエステル（39）（実施例39に記載されたようにして調製した）（0.0232g、0.10ミリモル）及び乾燥された蒸留シキレン30mlを３時間の期間にわたって130℃に徐々に加熱した。この温度を更に16時間保ち、その間にわずかな量の明褐色の沈殿が生成した。反応の完結をTLCにより監視した。その混合物を熱時濾過して沈殿を除去した。次いで濾液を減圧で結晶化の点まで濃縮し、次いで冷却した。オレンジ−赤色の固体を濾過し、次いで真空下で乾燥させた。固体の重量は0.0210g（44％の収率）であった。mp270−273℃;1H NMR（CDCl3）δ1.06（3H,t,J＝7.6Hz,C−7NHCOCH2CH2CH3）,1.75−1.90（2H,m,C−7NHCOCH2CH2CH3）,2.52（2H,t,J＝7.6Hz,C−7NHCOCH2CH2CH3）,3.16（3H,s,Ar−CH3）,4.07（3H,s,COCH3）,7.36（1H,dd,J＝8.0Hz,J＝8.0Hz,C−11'H）,7.63（1H,dd,J＝8.0Hz,J＝8.0Hz,C−10'H）,7.70（1H,d,J＝8.0Hz,C−9'H）,7.92（1H,s,C−6H）,8.31（1H,d,J＝8.0Hz,C−12'H）,8.34（1H,br s,C−7NH）,8.41（1H,d,J＝8.3Hz,C−3H）,9.01（1H,d,J＝8.3Hz,C−4H）,11.76（1H,br s,NH）;IR（KBr）Vmax3316,3199,2959,2933,2874,1724,1710,1679,1646,1586,1501,1335,1307,1227cm-1;EIMS,m/e（相対強さ）482（M+,ベース）,466（11）,450（13）,422（32）,380（９）,352（35）,HRMS,m/e C27H22N4O5としての計算値482.159020、実測値482.160385
７−Ｎ−ブチリルデメチルラベンダマイシンイソアミルエステル（化合物13、表Ｉ）
還流冷却器、流動しているアルゴン及び磁気バーを取り付けた50mlの三口丸底フラスコ中で、７−ブチルアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（26）（実施例26に記載されたようにして調製した）（0.0279g、0.10ミリモル）、Ｌ−トリプトファンイソアミルエステル（37）（実施例37に記載されたようにして調製した）（0.0274g、0.10ミリモル）、及び乾燥された蒸留キシレン30mlを４時間の期間にわたって徐々に加熱して還流させた。この温度を更に17時間保った。少量のオレンジ−褐色の固体を生成した。反応の完結をTLCにより監視した。その混合物を熱時濾過して沈殿（これは生成物ではない）を除去した。濾液を減圧で約2mlまで濃縮した。冷却すると、この溶液は明るいオレンジ色の沈殿を生じ、これは0.0166gの重量であった（収率32％）。母液を蒸発させ、乾燥させて追加の量の粗生成物を得、これは0.0198gの重量であり（収率38％）、70％の全収率を得た。mp234−235℃;1H NMR（CDCl3）δ1.04（6H,d,J＝6.8Hz,（CH3）２）,1.06（3H,t,J＝7.4Hz,C−7NHCOCH2CH2CH3）,1.75−1.95（5H,m,C−7NHCOCH2CH2,COOCH2CH2CH,2.53（2H,t,J＝7.4Hz,C−7NHCO CH2）,4.52（2H,t,J＝6.8Hz,COOCH2）,7.39（1H,dd,J＝7.8Hz,J＝7.8Hz,C−11'H）,7.66（1H,dd,J＝7.8Hz,J＝7.8Hz,C−10'H）,7.74（1H,d,J＝7.8Hz,C−9'H）,7.99（1H,s,C−6H）,8.24（1H,d,J＝7.8Hz,C−12'H）,8.41（1H,br s,C−7NH）,8.55（1H,d,J＝8.4Hz,C−3'H）,8.94（1H,s,C−3'H）,9.18（1H,d,J＝8.4Hz,C−4H）,11.80（1H,br s,NH）；
IR（KBr）Vmax3369,3346,3313,2960,2935,2873,1728,1715,1700,1681,1646,1587,1494,1335,1307,1261,1221,1119,739cm-1;EIMS,m/e（相対強さ）524（69）,454（６）,410（ベース）,394（５）,340（22）;HRMS,m/e C30H28N4O5としての計算値524.205970、実測値524.207494
７−Ｎ−ブチリルデメチルラベンダマイシンオクチルエステル（化合物14、表Ｉ）
環流冷却器、流動しているアルゴン及び磁気バーを取り付けた50mlの三口丸底フラスコ中で、７−Ｎ−ブチルアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（26）（実施例26に記載されたようにして調製した）（0.0230g、0.085ミリモル）、Ｌ−トリプトファンオクチルエステル（38）（実施例38に記載されたようにして調製した）（0.0270g、0.085ミリモル）、及び乾燥された蒸留キシレン30mlを５時間の期間にわたって85℃に徐々に加熱した。この温度を更に16時間保った。この期間中に、少量の暗色の固体が現れた。反応の完結をTLCにより監視した。その混合物を熱時濾過して沈殿した不純物を除去し、濾液を回転蒸発させ、乾燥させて暗赤色の固体0.0386gを得、1H NMRはこれが粗生成物であることを示した（80％の収率）。粗生成物を酢酸エチルによる再結晶により更に精製した。mp166−171℃;1H NMR（CDCl3）δ0.86（3H,t,J＝6.8Hz,（CH2）７CH3）,1.06（3H,t,J＝7.3Hz,C−7NHCOCH2CH2CH3）,1.20−1.60（10'h,（CH2）5CH3）,1.65−1.95（4H,m,C−7NHCOCH2CH2,COOCH2CH2）,2.53（2H,t,J＝7.3Hz,C−7NHCOCH2）,4.47（2H,t,J＝6.8Hz,COOCH2）,7.36（1H,dd,J＝8.0Hz,J＝8.0Hz,C−11'H）,7.63（1H,dd,J＝8.0Hz,J＝8.0Hz,C−10'H）,7.65（1H,d,J＝8.0Hz,C−9'H）,7.93（1H,s,C−6H）,8.19（1H,d,J＝8.0Hz,C−12'H）,8.35（1H,br s,C−7NH）,8.44（1H,d,J＝8.4Hz,C−3H）,8.87（1H,s,C−3'H）,9.08（1H,d,J＝8.4Hz,C−4H）,11.67（1H,br s,NH）;IR（KBr）Vmax3317,2957,2926,2855,1728,1704,1679,1646,1587,1504,1333,1307,1260,1222,1118,739cm-1;EIMS,m/e（相対強さ）566（M+,14）,550（45）,534（15）,496（６）,120（12）,394（ベース）,378（22）,340（17）;HRMS,m/e C33H34N4O5としての計算値566.252921、実測値566.251991
７−Ｎ−アセチルデメチルラベンダマイシンカルボキサミド（化合物16、表Ｉ）
７−Ｎ−アセトアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（23）（実施例23に記載されたようにして調製した）（42.3mg、0.15ミリモル）、Ｌ−トリプトファンアミド（43）（実施例43に記載されたようにして調製した）（30.44mg、0.015ミリモル）及びアニソール（60ml）を油浴中で2.5時間の期間にわたって室温から160℃まで徐々に加熱し、次いで160℃に14時間保った。その反応混合物を３時間にわたって冷蔵庫中で冷却した。次いでそれを濾過してレモンイエローの固体を得た。固体をヘキサンで洗浄し、乾燥させて39.6mg、収率62％を得た。
７−Ｎ−アセチルデメチルラベンダマイシンメチルエステル（化合物16、表Ｉ）
７−Ｎ−アセトアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（23）（実施例23に記載されたようにして調製した）（44.8mg、0.2ミリモル）、Ｌ−トリプトファンメチルエステル（35）（実施例35に記載されたようにして調製した）（43.6mg、0.2ミリモル）、乾燥キシレン（90ml）を混合した。その混合物を油浴中で攪拌し、３時間の期間にわたって室温から140℃まで、そして20時間の期間にわたって140℃から154℃まで徐々に加熱した。その反応混合物を室温に冷却して黄色の固体53mg（収率60％）を得た。
７−Ｎ−アセチルラベンダマイシンイソアミルエステル（化合物18、表Ｉ）
７−アセトアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（23）（実施例23に記載されたようにして調製した）（44.8mg、0.2ミリモル）、β−メチルトリプトファンイソアミルエステル（36）（実施例36に記載されたようにして調製した）（57.6mg、0.2ミリモル）及び乾燥キシレン64mlを油浴中で攪拌し、３時間の期間にわたって室温から140℃まで徐々に加熱し、次いで１時間にわたって140℃に保った。熱い反応混合物を濾過してオレンジ色の固体を得た。濾液が冷却後に更に生成物を生じた。生成物の得られた合計重量は60.2mg、収率59％であった。
７−Ｎ−アセチルラベンダマイシンN,N−ジメチルアミノエチルエステル（化合物19、表Ｉ）
７−アセトアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（23）（実施例23に記載されたようにして調製した）（317mg、0.13ミリモル）を乾燥アニソール16mlに溶解し、80℃に加熱した。β−メチルトリプトファンN,N−ジメチルアミノエチルエステル（41）（実施例41に記載されたようにして調製した）（37.5mg、0.13ミリモル）を攪拌しながら添加し、攪拌混合物を5.5時間にわたって100℃で加熱した。その反応混合物を室温に冷却し、固体を濾過した。濾液を真空下で蒸留し、乾燥させた。酢酸エチル（3ml）を添加し、その混合物を攪拌した。濾過して、オレンジ色の固体24.5mg（36％の収率）を得た。
７−Ｎ−アセチルデメチルラベンダマイシンイソアミルエステル（化合物20、表Ｉ）
７−アセトアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（23）（実施例23に記載されたようにして調製した）（244mg、0.1ミリモル）、Ｌ−トリプトファンイソアミルエステル（37）（実施例37に記載されたようにして調製した）（239mg、１ミリモル）及びキシレン（64ml）を混合した。その混合物を油浴中で攪拌し、１時間の期間にわたって室温から110℃まで、次いで３時間の期間にわたって110℃から140℃まで徐々に加熱した。熱い反応混合物を濾過して褐色の不純物を除去した。濾液を真空下で蒸発させた。残渣を酢酸エチル／ヘキサンで処理してオレンジ色の固体（213mg、収率42％）を得た。
７−Ｎ−アセチルデメチルラベンダマイシンｎ−オクチルエステル（化合物21、表Ｉ）
７−アセトアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（23）（実施例23に記載されたようにして調製した）（44.8mg、0.2ミリモル）、Ｌ−トリプトファンＮ−オクチルエステル（38）（実施例38に記載されたようにして調製した）（63.2mg、0.2ミリモル）及び乾燥キシレン64mlを油浴中で攪拌し、３時間の期間にわたって室温から150℃まで徐々に加熱し、次いで２時間にわたって150℃に保った。熱い混合物を濾過し、褐色の固体を回収した。濾液から酢酸エチル及びヘキサンで処理して更に褐色の固体を得た（合計収量51mg、48％）。
７−Ｎ−アセチルデメチルラベンダマイシンN,N−ジメチルアミノエチルエステル（化合物22、表Ｉ）
７−アセトアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（23）（実施例23に記載されたようにして調製した）（12.2mg、0.05ミリモル）、Ｌ−トリプトファンN,N−ジメチルアミノエチルエステル（40）（実施例40に記載されたようにして調製した）（14mg、0.05ミリモル）及びアニソール18mlを27時間にわたって100℃で加熱した。その混合物を室温に冷却し、濾過して不純物を除去した。濾液を減圧で蒸発させ、得られる残渣をCHCl3 6mlに溶解し、アルミナによる薄層クロマトグラフィーにより精製した。純粋なオレンジ色の固体（5mg、収率20％）を得た。
0003647860.tif 000036
0003647860.tif 000037
0003647860.tif 000038
0003647860.tif 000039
0003647860.tif 000040
実施例23−26:キノリンジオンアルデヒドの調製
実施例１〜22のラベンダマイシン類縁体を調製するための出発物質として、式Ｋの７−Ｎ−アシル−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオンが挙げられる。
0003647860.tif 000041
（式中、
0003647860.tif 000042
R10はアルキルまたは置換アルキルであり、
R1はＨであり、
R2はＨであり、かつ
R3はＨである）
これらのアルデヒドを、上記のように還流ジオキサン−H2O中の相当する７−Ｎ−アシル−２−メチルキノリン−5,8−ジオンの二酸化セレン酸化により調製した。表IIIは、この方法により調製された４種のこのようなアルデヒド並びにこれらのアルデヒドに関する反応時間、収率、1H NMR、MS及び元素分析をリストする。これらのアルデヒドのうちの３種を合成するのに使用した操作を、以下に詳しく記載する。
７−アセトアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（化合物23、表III）
乾燥ジオキサン（3.5mL）及び水（0.13mL）中の７−アセトアミド−２−メチルキノリン−5,8−ジオン（27）（実施例27に記載されたようにして調製した）（230mg、１ミリモル）、二酸化セレン（139mg、1.25ミリモル）の混合物を攪拌し、アルゴン雰囲気下で９時間にわたって還流させた。SeO2の99.9+％の新しいグレード（アルドリッチ）を使用した。ジオキサンを精製し、Perrinら，実験薬品の精製（パーガモン・プレス1980）に記載された操作に従って蒸留した。ジオキサン（7mL）を添加し、10分間還流させ、次いで熱時濾過した。濾紙の残渣を、ジクロロメタン20mLを含む反応フラスコに添加し、５分間還流させ、濾過した。このプロセスをもう４回繰り返した。濾液を合わせ、蒸発させて黄色の固体222mg（収率91％）を得、これは７−アセトアミド−２−メチルキノリン−5,8−ジオン（23）であった。昇華により得られた分析試料（150−180℃/0.5mm）:mp225℃分解;IR（KBr）3346,3085,1721,1687,1652,1609,1504,1328,1216,1124,1068,885cm-1;1H NMR（CDCl3）δ2.33（S,3,COCH3）,8.05（s,1,H−６）,8.31（d,1,J＝8Hz,H−３）,8.43（br s,1,NH）,8.62（d,1,J＝8Hz,H−４）,10.29（s,1,CHO）;MS m/e（相対強さ）244（M+,81）,216（19）,202（51）,175（37）,174（21）,97（19）,85（20）,71（30）,68（18）,57（34）,43（100）元素分析C12H8N2O4としての計算値:C,59.02;H,3.30;N,11.47;実測値:C,58.99;H,3.38;N,10.91
７−クロロアセトアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（化合物24、表III）
磁気バー、水冷還流冷却器、及びアルゴン充填気球を取り付けた25mlの丸底フラスコ中で、７−クロロアセトアミド−２−メチルキノリン−5,8−ジオン（28）（実施例28に記載されたようにして調製した）（0.529g、２ミリモル）、二酸化セレン（0.255g、2.3ミリモル）、乾燥した蒸留1,4−ジオキサン12ml、及び水0.25mlを攪拌し、２時間の期間にわたって徐々に加熱して還流させた。その反応をTLCにより監視し、完結させた（29.5時間）。セレンを沈降させ、上澄み溶液をピペットで除き、濾過した。1,4−ジオキサン（10ml）を残渣に添加し、攪拌し、５分間還流させた。全混合物を濾過し、セレンをジクロロメタン（10ml）で洗浄した。全ての濾液を合わせ、４℃で一夜貯蔵した。冷却混合物からの固体の沈殿を濾過して粗生成物0.0985g（収率18％）を得た。これを酢酸エチル／ジクロロメタンによる再結晶により精製した。最初の残っている濾液をジクロロメタン50mlで希釈し、３％の重炭酸ナトリウム（2x50ml）で洗浄した。次いで水層をジクロロメタン（2x20ml）で抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、回転蒸発させて暗いオレンジ色の固体を得た。生成物を一夜にわたって真空下に乾燥させ、生成物0.2941gを得た（収率52％、全収率70％）。この生成物をフラッシュクロマトグラフィー及び酢酸エチル／ジクロロメタンによる再結晶により更に精製することができた。mp190−192℃;1H NMR（CDCl3）δ4.26（2H,s,C−7NHCOCH2Cl）,8.04（1H,s,C−6H）,8.33（1H,d,J＝8.1Hz,C−3H）,8.62（1H,d,J＝8.1Hz,C−4H）,9.54（1H,br.s,C−7NH）,10.28（1H,s,C−2CHO）;IR（KBr）vmax3310,3089,2950,2852,1731,1720,1678,1644,1521,1118cm-1;EIMS,m/e（相対強さ）278/280（M+,2.7/1,95）,243（33）,229（33）,215（55）,202（ベース）,175（61）,146（17）;HRMS,m/e C14H9ClN2O3としての計算値278.009435、実測値278.008764;分析C14H9ClN2O3としての計算値C,51.72;H,2.53;Cl,12.72;N,10.05;実測値C,51.81;H,2.9;Cl,12.79;N,9.86
７−ブチルアミド−２−ホルミルキノリン−5,8−ジオン（化合物26、表III）
磁気バー、水冷還流冷却器、及びアルゴン充填気球を取り付けた25mlの丸底フラスコ中で、７−ブチルアミド−２−メチルキノリン−5,8−ジオン（30）（実施例30に記載されたよにして調製した）（0.516g、２ミリモル）、二酸化セレン（0.255g、2.3ミリモル）、乾燥した蒸留1,4−ジオキサン12ml、及び水0.25mlを攪拌し、２時間の期間にわたって徐々に加熱して還流させた。その反応をTLCにより監視し、33.5時間後に完結していることがわかった。金属セレンを沈降させ、上澄み溶液をピペットで除き、濾過した。1,4−ジオキサン（10ml）を残渣に添加し、攪拌し、５分間還流させた。全混合物を濾過し、セレンをジクロロメタン（10ml）で洗浄した。全ての濾液を合わせ、４℃で一夜貯蔵した。この溶液をジクロロメタン50mlで希釈し、３％の重炭酸ナトリウム溶液（2x50ml）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、回転蒸発させて淡黄色の生成物を得た。固体を一夜にわたって真空下に乾燥させ、0.356gの重量であった（収率65％）。生成物を酢酸エチルで再結晶した。mp208−210℃;1H NMR（CDCl3）δ1.02（3H,t,J＝7.4Hz,C−7NHCOCH2CH2CH3）,1.70−1.89（2H,m,7NHCOCH2CH2CH3）,2.52（2H,t,J＝7.4Hz,7NHCOCH2CH2CH3）,8.06（1H,s,C−6H）,8.31（1H,d,J＝8.0Hz,C−3H）,8.39（1H,br.s,C−7NH）,8.61（1H,d,J＝8.0Hz,C−4H）,10.28（1H,s,C−2CHO）;IR（KBr）vmax3299,3081,2966,2935,2876,1723,1694,1638,1606,1505cm-1;EIMS,m/e（相対強さ）272（54）,202（36）,175（９）;HRMS,m/e C14H12N2O4としての計算値272.079707、実測値272.078696;分析C14H12N2O4としての計算値C,61.76;H,4.44;N,10.29;実測値C,61.31;H,4.36;N,9.94
0003647860.tif 000043
実施例27〜30:７−アセトアミド−２−メチルキノリン−5,8−ジオンの調製
実施例23〜26において出発物質として使用した７−Ｎ−アシル−２−メチルキノリン−5,8−ジオンは式Ｍの化合物である。
0003647860.tif 000044
（式中、
0003647860.tif 000045
R10はアルキルまたは置換アルキルであり、
R1はＨであり、
R2はＨであり、かつ
R3はＨである）
それらを二つの方法の一つにより調製した：（１）上記の式４に示されるような氷酢酸中の重クロム酸カリウムによる相当するアシルアミド化合物の酸化、または（２）上記の式２に示されるような２−アセトアミド−６−ブロモベンゾキノンとの１−シリルオキシ−アザジアンのディールス−アルダー縮合。表IVは４種の７−Ｎ−アシル−２−メチルキノリン−5,8−ジオン、それらの収率％、融点、元素分析、1H NMR及びMSをリストする。下記の操作が、これらのキノリンジオンの調製に使用した詳細な操作である。
７−アセトアミド−２−メチルキノリン−5,8−ジオン（化合物27、表IV）
この化合物を、氷酢酸中の重クロム酸カリウムによる相当するアシルアミドの酸化により調製した。1000mlの三角フラスコ中に、氷酢酸240ml、及び5,7−ジアセトアミド−２−メチル−８−アセトキシキノリン（31）（実施例31に記載されたようにして調製した）（6.3g、2.0ミリモル）を添加した。得られる懸濁液に、水200ml中の重クロム酸カリウム（17.64g）の溶液を添加した。この黒色の溶液を20〜24時間にわたって室温で磁気攪拌した。次いでその溶液を水900mlに注ぎ、ジクロロメタン（5x200ml）で抽出した。有機抽出液を飽和塩溶液中５％の炭酸ナトリウムの溶液（3x300ml）で洗浄した。有機層を一夜にわたって無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムを濾別し、溶液を蒸発させてオレンジ／黄色の固体を残した。固体の７−アセトアミド−２−メチルキノリン−5,8−ジオン（27）を真空下で一夜乾燥させた。生成物2.6gを収率56％で得た。
７−アセトアミド−２−メチルキノリン−5,8−ジオン（27）
また、７−アセトアミド−２−メチルキノリン−5,8−ジオン（27）を、２−アセトアミド−６−ブロモベンゾキノンとの１−シリルオキシ−アザジエンのディールス−アルダー縮合により調製した。そのアザジエンを、上記の式２に示されるようなモレキュラーシーブの存在下のｔ−ブチルジメチルシリルオキシアミンとのメチルビニルケトンの反応により調製した。乾燥モレキュラーシーブ4A゜5.7gを含む乾燥した50mLの丸底フラスコ中に、乾燥ジクロロメタン10mL中の新たに蒸留されたメチルビニルケトン1.4g（0.02モル）を入れた。次いで乾燥ジクロロメタン5mL中のＯ（tert−ブチルジメチルシリル）ヒドロキシルアミン（アルドリッチ）の溶液を添加した。その混合物をアルゴン雰囲気下で48時間にわたって室温で攪拌し、次いで濾別した。減圧で溶液を蒸発させ、残渣を分別蒸留してアザジエン2.04g（収率51％、bp67−71℃/8mm）を得た。核磁気共鳴分光測定は生成物がE/Z混合物（7:3）であることを示し、これをそのまま次の反応に使用した。主要異性体の分析試料を、溶媒として石油エーテルそして次に石油エーテル＋酢酸エチル（200:1）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより得た。IR（液膜）2959,2931,2860,1630,1581,1462,1363,1251,1061,983,948,871,836,808,787,674cm-1;1H NMR（CDCl3）δ0.15（s,6,Si（CH3）２）,0.91（s,9,C（CH3）３）,1.95（s,3,C−2CH3）,5.35−5.57（m,2,＝CH2）,6.38−6.52（m,1,＝CH）;MS,m/e（相対強さ）199（M+,0.3）,142（100）,75（68）,68（97）,42（20）；元素分析C10H21NOSiとしての計算値:C,60.24;H,10.62;N,7.03;実測値:C,60.22;H,10.56;N,7.10
次いで７−アセトアミド−２−メチルキノリン−5,8−ジオン（27）を調製した。乾燥クロロベンゼン28mL中のブロモキノン（317mg、1.3ミリモル）、１−（tert−ブチルジメチルシリルオキシ）−２−メチル−１−アザ−1,3−ブタジエン（130mg、0.65ミリモル）の溶液をアルゴン雰囲気下で22時間還流させた。クロロベンゼン（10mL）を添加し、更に２時間還流させた。その反応混合物を冷却し、次いでシリカゲルカラム（2x9.5cm）に入れた。そのカラムを酢酸エチル／石油エーテル（2:1）、EtOAc次にEtOHで溶離した。溶媒を除去し、ベンゼンを添加し、加熱し、濾過した。濾液を蒸発させて黄色の固体（27）99mg（収率66％）を得た。クロロホルムで再結晶した分析試料はmp217℃（分解）を示した;IR（KBr）3339,1750,1714,1679,1651,1609,1588,1510,1370,1314,1222,1131,744,519cm-1;1H NMR（CDCl3）δ2.30（s,3,COCH3）,2.75（s,3,ArCH3）,7.55（d,1,J＝8Hz,H−３）,7.909（s,1,H−６）,8.29（d,1,J＝8Hz,h−４）,8.38（br s,1,NH）;MS,m/e（相対強さ）230（M+,69）,188（81）,161（100）,132（20）,93（15）,43（31）分析C12H10N2O3としての計算値:C,62.61:H,4.38;N,12.17;実測値:C,62.52;H,4.28;N,11.93
７−クロロアセトアミド−２−メチルキノリン−5,8−ジオン（化合物28、表IV）
この化合物を、氷酢酸中の重クロム酸カリウムによる相当するアシルアミドの酸化により調製した。磁気バーを取り付けた500mlの丸底フラスコ中に、5,7−ビス（クロロアセトアミド）−８−ヒドロキシ−２−メチルキノリン（32）（実施例32に記載されたようにして調製した）（3.42g、0.01モル）を氷酢酸122ml中で懸濁させた。水115ml中の重クロム酸カリウム（8.8g、0.03モル）の溶液を添加し、得られる暗色の溶液を室温で一夜攪拌した。その溶液をジクロロメタン（12x50ml）で抽出した。有機抽出液を３％の重炭酸ナトリウム溶液（200ml）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、回転蒸発させて明るい黄色の固体を得た。真空乾燥後、ほぼ純粋の生成物は1.56g（収率59％）の重量であった。生成物を酢酸エチルで再結晶した。mp196−200℃（分解）;1H NMR（CDCl3）δ2.76（3H,s,C−2CH3）,4.23（2H,s,C−7NHCOCH2Cl）,7.56（1H,d,J＝8.1Hz,C−3H）,7.89（1H,s,C−6H）,8.30（1H,d,J＝8.1Hz,C−4H）,9.48（1H,br.s,C−7NH）;IR（KBr）vmax3299,3078,2948,1712,1683,1641,1614,1588,1515,1398,1384,1323,1130cm-1;EIMS,（相対強さ）264/266（M+,2.9/1,67）229（62）,215（74）,201（43）,188（86）,161（ベース）,132（21）;HRMS,m/eC14H9ClN2O3としての計算値264.030170、実測値264.029824;分析C14H9ClN2O3としての計算値:C,54.46;H,3.43;Cl,13.40;N,10,58;実測値:C,54.19;H,3.37;Cl,13.29;N,10.36
７−ブチルアセトアミド−２−メチルキノリン−5,8−ジオン（化合物30、表IV）
この化合物を、氷酢酸中の重クロム酸カリウムによる相当するアシルアミドの酸化により調製した。磁気バーを取り付けた500mlの丸底フラスコ中に、5,7−ジブチルアミド−８−ブチルオキシ−２−メチルキノリン（34）（実施例31〜34に記載されたようにして調製した）（3.29g、8.25ミリモル）を氷酢酸122ml中で懸濁させた。水115ml中の重クロム酸カリウム（8.8g、0.03モル）の溶液を添加し、攪拌した。その攪拌懸濁液は溶解し始めたが、２時間後に、多くの固体が沈殿し続けた。ジクロロメタン（70ml）を添加して溶解を促進した。得られる２相溶液混合物を室温で一夜攪拌した。２相溶液混合物をジクロロメタン（12x50ml）で抽出した。有機抽出液を３％の重炭酸ナトリウム溶液（200ml）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、回転蒸発させてオレンジ−黄色の固体を得た。真空乾燥後、その固体は1.65g（収率77％）の重量であった。生成物を酢酸エチルで再結晶した。mp188−189℃;1H NMR（CDCl3）δ1.00（3H,t,J＝7.4Hz,C−7NHCOCH2CH2CH3）,1.69−1.82（2H,m,C−7NHCOCH2CH2CH3）,2.48（2H,t,J＝7.4Hz,C−7NHCOCH2CH2CH3）,2.74（3H,s,C−2CH3）,7.53（1H,d,J＝8.0Hz,C−3H）,7.90（1H,s,C−6H）,8.28（1H,d,J＝8.0Hz,C−4H）,8.36（1H,br.s,C−7NH）;IR（KBr）vmax3338,3275,2964,2935,2875,1711,1682,1654,1644,1615,1588,1502,1323,1310,1133cm-1;IEMS,m/e（相対強さ）258（81）,215（７）,188（ベース）,161（66）;HRMS,m/e C14H14N2O3としての計算値258.100442、実測値258.100227;分析C14H14N2O3としての計算値C,65.11;H,5.46;N,10.85;実測値C,65.22;H,5.51;N,10.01
0003647860.tif 000046
実施例31〜34:5,7−ジアシルアミド−８−アセトキシ−２−メチルキノリンの調製
実施例27〜30の７−Ｎ−アシル−２−メチルキノリン−5,8−ジオンの調製の出発物質として使用したこれらの化合物を、上記の式５に示されるようなパラジウム／木炭（Pd/C）の存在下の分子状水素による5,7−ジニトロ−８−ヒドロキシ−２−メチルキノリンの還元、続いて所望の酸無水物による処理により調製した。表Ｖは、この方法により調製された４種の２−メチルキノリン、それらの収率％、融点、元素分析、1H NMR及びMSをリストする。下記の操作を使用してこれらの化合物を調製した。また、5,7−ジニトロ−８−ヒドロキシ−２−メチルキノリンの調製を記載する。この化合物を文献の方法に従って調製した。
5,7−ジアセトアミド−２−メチル−８−アセトキシキノリン（化合物31、表Ｖ）の調製
500mlの水素化ボトル中に、5,7−ジニトロ−８−ヒドロキシ−２−メチルキノリン（47）（下記のように調製）（6.03g、24.2ミリモル）、水（100ml）、及び濃HCl（13ml）を添加した。この懸濁液に、５％のPd/C（2.00g）を触媒として添加した。この混合物を一夜にわたって、即ち、水素が最早吸収されなくなるまで40psiで水素化した。この反応は約４時間を要する。
次いで得られる溶液を慎重に真空濾過してPd/Cを除去した。濾紙にあるPd/Cをを水ですすがないように注意されたい。これは濃度感受性である溶液を希釈するであろう。濾液はせいぜい130mlになるべきである。
濾液を500mlのビーカーに移した。濾液に、亜硫酸ナトリウム（2.85g）、酢酸ナトリウム（3.58g）、及び無水酢酸（2.5ml）を、マグネチックスターラーを使用して攪拌しながら添加した。一般に、沈殿は生成しなかった。30分後に、同じ量の上記の３種の化合物を再度添加した。無水酢酸（7.5ml）の添加はオレンジ／白色の沈殿を生成させた。沈殿が生成しない場合、溶媒を減圧で除去し、少量の溶液が得られるまで加熱するように注意されたい。少量（その操作に必要とされる量のほぼ1/4）の３種の化合物（亜硫酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、及び無水酢酸）を添加し、次いで15分待つ。次に無水酢酸5mlを添加し、その混合物を激しく攪拌する。10分間にわたって激しく攪拌しながら、少量の亜硫酸ナトリウム及び酢酸ナトリウムを添加する。攪拌を停止し、混合物を放置し、次いで沈殿が生成すべきである。しなしながら、この問題は、正確に記載された指示された操作に従うことにより回避される。次いでその混合物を真空濾過し、沈殿を水（3x100ml）で３回洗浄した。このプロセスは沈殿からオレンジ色を洗い去り、濾紙に白色の固体を残した。濾液をその容積の1/4まで蒸発させた。生成した沈殿を上記のように濾過し、洗浄した。沈殿が最早生成されなくなるまで、濾液を酢酸ナトリウム及び無水酢酸で再度処理した（無水酢酸の添加は一般に沈殿を更に生成させるものであることに注意されたい）。全ての洗浄された沈殿を合わせ、フードの下で、または真空ポンプで一夜乾燥させた。収率は80％であった（生成物6.05g、mp255℃）。
5,7−ビス（クロロアセトアミド）−８−ヒドロキシ−２−メチルキノリン（化合物32、表Ｖ）
500mlの肉厚の水素化ボトル中で、８−ヒドロキシ−２−メチル−5,7−ジニトロキノリン（47）（5.25g、0.021モル）及び５％のPd/C（1.75g）を水90ml及び濃HCl 9ml中で懸濁させた。この混合物を30psiの水素のもとに20時間振とうした。触媒を濾別し、5,7−ジアミノ−８−ヒドロキシ−２−メチルキノリンの二塩酸塩を含む暗赤色の溶液を、磁気バーを取り付けた250mlの丸底フラスコに入れた。この攪拌溶液に、亜硫酸ナトリウム（12g）、酢酸ナトリウム（16g）、及び無水クロロ酢酸（65g）を出来るだけ素早く連続して添加した。熱が発生し、軽度に着色されたわずかな沈殿の形成が起こった。15分間の攪拌後に、沈殿が溶解した。追加量（5g）の無水クロロ酢酸を添加し、その反応混合物を１時間攪拌した。沈殿が現れるまで、その溶液を減圧で濃縮した。この混合物を、氷−水100mlを含む400mlのビーカーに注ぎ、５分間攪拌した。その混合物を真空濾過し、生成物を冷エタノールで洗浄し、真空下で乾燥させ、回収した（2.14g）。濾液は、一夜放置すると、追加量（1.47g）の生成物を生じた。生成物の全量は3.61g（収率50％）であった。生成物をエタノール及び水で再結晶した。mp194−196℃（分解）;1H NMR（DMSO−d6）δ2.71（3H,s,C−2CH3）,4.37（2H,s,COCH2Cl）,4.44（2H,s,COCH2Cl）,7.43（1H,d,J＝8.8Hz,C−3H）,8.15（1H,d,J＝8.8Hz,C−4H）,8.16（1H,s,C−6H）,9.89（1H,br s,NH）,10.18（1H,br s,NH）;IR（KBr）vmax3392,3361,3262,3005,2950,1680,1660,1646,1557,1523,1580,1456,1416cm-1;EIMS,m/e（相対強さ）341/343（M+,1.5/1,52）,305（60）,292（ベース）,264（28）,250（７）,228（60）,214（10）,200（12）,188（70）,173（11）,160（17）;HRMS,m/e C14H13Cl2N3O3としての計算値341.033397、実測値341.033888;分析C12H13Cl2N3O3としての計算値C,49.14;H,3.83;Cl,20.72;N,12.28;実測値C,49.24;H,3.89;Cl,20.43;N,12.16
5,7−ジブチルアミド−８−ブチルオキシ−２−メチルキノリン（化合物34、表Ｖ）
500mlの肉厚の水素化ボトル中で、８−ヒドロキシ−２−メチル−5,7−ジニトロキノリン（47）（5.0g、0.02モル）及び５％のPd/C（1.5g）を100ml及び濃HCl 12ml中で懸濁させた。この混合物を30psiの水素のもとに15時間振とうした。触媒を濾別し、5,7−ジアミノ−８−ヒドロキシ−２−メチルキノリンの二塩酸塩を含む暗赤色の溶液を、磁気バーを取り付けた250mlの丸底フラスコに入れた。この攪拌溶液に、亜硫酸ナトリウム（12g）、酢酸ナトリウム（16g）、及び無水酪酸（65ml）を出来るだけ素早く連続して添加した。３時間の期間にわたって生成し続けた濃白色の沈殿を濾過し、水洗した。真空乾燥後、生成物は7.4g（収率93％）の重量であった。メタノール−水による再結晶はブチレートの加水分解をもたらすので、分析を粗生成物につき行った。mp195−205℃（分解）;1H NMR（DMSO−d6）δ0.92（3H,t,J＝8.0Hz,NHCOCH2CH2CH3）,0.96（3H,t,J＝8.0Hz,NHCOCH2CH2CH3）,1.08（3H,t,J＝8.0Hz,OCOCH2CH2CH3）,1.52−1.72（4H,m,2NHCOCH2CH2CH3）,1.73−1.89（2H,m,OCOCH2CH2CH3）,2.30−2.40（4H,m,2NHCOCH2CH2CH3）,2.58（3H,s,C−2CH3）,2.70（2H,t,J＝8.0Hz,OCOCH2CH2CH3）,7.37（1H,d,J＝8.8Hz,C−3H）,8.21（1H,d,J＝8.8Hz,C−4H）,8.24（1H,s,C−6H）,9.65（1H,br s,C−5NH）,9.94（1H,br s,C−7NH）;IR（KBr）vmax3343,3258,2964,2935,2874,1738,1693,1656,1630,1541,1505cm-1
８−ヒドロキシ−２−メチル−5,7−ジニトロキノリン（化合物47）
化合物47を、Bogerら,J.Org.Chem.,50,5782（1985）に記載された方法に従って調製した。磁気バーを取り付けた500mlの三角フラスコに、濃硝酸−硫酸の70％（v/v）溶液300mlを入れた。その溶液を攪拌し、氷浴中で冷却した。この攪拌され、冷却された溶液に、８−ヒドロキシ−２−メチルキノリン（30.0g、0.188モル）を10分間の期間にわたって少しずつ添加した。８−ヒドロキシ−２−メチルキノリンの添加後に、褐色のガスが発生した。その混合物を氷浴中で２時間にわたって絶えず攪拌した。次いでその混合物を、氷水（1:2、氷：水）1200mlを含む２リットルのビーカーに注ぎ、ガラス棒で激しく攪拌した。明黄色の沈殿を真空濾過し、エタノール（300ml）で洗浄し、次いでエチルエーテル（2x300ml）で洗浄した。得られる８−ヒドロキシ−２−メチル−5,7−ジニトロキノリンを一夜にわたって空気乾燥させ、次いで真空下で24時間にわたって更に乾燥させた。黄色の固体は28.1g（収率60％）の重量であった。mp295−300℃;1H NMR（DMSO−d6）δ2.93（3H,s,C−2CH3）,8.13（1H,d,J＝9.1Hz,C−3H）,9.20（1H,s,C−6H）,9.65（1H,d,J＝9.1Hz,C−4H）;IR（KBr）vmax3067,1593,1527,1336,1320,1299,1259cm-1
0003647860.tif 000047
実施例35〜46:トリプトファン類縁体の調製
ラベンダマイシン類縁体１〜22の合成に使用したトリプトファン類縁体を表VIにリストする。それらは式Ｌを有する。
0003647860.tif 000048
（式中、R5、R7、R8及びR9はＨであり、かつR4、R6及びＹは下記の表VIに示されるとおりである）
トリプトファンエステル36、37、及び44〜46（表VIを参照のこと）を、上記の式６に示されたようにして合成した。トリプトファンエステル40〜41（表VIを参照のこと）を、上記の式７に示されたようにして合成した。トリプトファン類縁体の全ての合成に使用した操作を、以下に記載する。
トリプトファンエステル36、37、及び44〜46（表VI）
トリプトファン（またはβ−メチルトリプトファン）（3g、0.015モル）及び乾燥HCl飽和イソアミルアルコール（またはその他のアルコール）（180ml）を24時間にわたって攪拌し、還流させた。その反応混合物を回転蒸発させて白色の結晶塩を得た。それをエーテルで洗浄した後、その塩を酢酸エチル25ml中の14％のNH4OHで中和した。次いで、それを水洗し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。最後に、それを回転蒸発させて無色の油（または結晶）33.21g（収率80〜90％）を得た。
トリプトファンエステル40及び41（表VI）
（１）カルボベンゾキシ−トリプトファン（またはカルボベンゾキシ−β−メチルトリプトファン）
トリプトファン（4.1g、0.02モル）（またはβ−メチルトリプトファン）、NaOH（2N、10ml）、水（20ml）、ベンジルクロロホルメート（3.4g、0.02モル、トルエン2.2ml中）の混合物を氷浴中で攪拌した。NaOH（4N）更に5mlを20分間にわたって滴下して添加し、更に10分間攪拌した。その混合物を塩酸でコンゴレッドまで酸性にし、濾過し、冷水で洗浄し、乾燥させて生成物5.86g（収率87％）を得た。Ｎ−CBZ−β−メチルトリプトファンを収率93％で生成した。
（２）Ｎ−CBZ−トリプトファン（またはＮ−CBZ−β−メチルトリプトファン）N,N−ジメチルエチルアミノエチルエステル
Ｎ−CBZ−トリプトファン（3.384g、0.01モル）（またはＮ−CBZ−β−メチルトリプトファン）、N,N−ジメチルアミノエチルクロリド（2.1Nのベンゼン溶液、6ml）、酢酸エチル（20ml）を攪拌し、加熱した。トリエチルアミン（1.4ml）を滴下して添加し、次いでその混合物を５時間還流させ、濾過した。濾液を水中の飽和NaCl、水中５％のNaHCO3及び飽和NaClで洗浄し、無水MgSO4で乾燥させ、回転蒸発させてスポンジ状のゲル1.76g（収率43％）を得た。Ｎ−CBZ−β−メチルトリプトファン−N,N−ジメチルエチルアミノエチルエステルを収率81％で生成した。
（３）トリプトファン（またはβ−メチルトリプトファン）N,N−ジメチルエチルアミノエチルエステル
ギ酸アンモニウム（125mg）及びＮ−CBZ−トリプトファン−N,N−ジメチルエチルアミノエチルエステル（205mg、0.5ミリモル）（またはＮ−CBZ−β−メチルトリプトファン−N,N−ジメチルエチルアミノエチルエステル）、DMF（5ml）、10％のPd/C（100mg）の混合物をアルゴン雰囲気下で室温で30分間攪拌し、次いで濾過した。濾液を回転蒸発させて油を得た。クロロホルム（10ml）を油に添加し、再度濾過した。濾液を回転蒸発させて乾燥させ、酢酸エチル（25ml）に溶解し、飽和NaCl溶液3x5mlで洗浄し、無水MgSO4で乾燥させ、真空で蒸発させて油状生成物101mg（収率74％）を得た。β−メチルトリプトファンN,N−ジメチルエチルアミノエチルエステルを収率68％で生成した。
トリプトファン類縁体35、38、42及び43（表VI）
これらの化合物は塩酸塩として市販されている。それらを14％の水酸化アンモニウムによる中和、続いて酢酸エチルによる抽出により遊離アミンに変換した。
トリプトファンエステル39（表VI）
この化合物を、Behforouzら,J.Heterocycl.Chem.,25,1627（1988）に記載されたようにしてつくった。
0003647860.tif 000049
実施例47:試験管内の細胞毒性
ラベンダマイシン類縁体の幾つかの試験管内の細胞毒性を、下記の方法に従って５種の細胞型のパネルに対して測定した。また、二三のジオンを細胞毒性につき試験した。
A.細胞系及び培養条件
正常なラット腎臓上皮（NRKE）細胞［De Larcoら,J.Cell Physiol.,94,335（1978）］及びルイス肺癌細胞［Suguiraら,Cancer（Phila.）,5,382（1952）］の保存培養物をアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ATCC、ロックビル、MD）から得た。細胞系の両方を抗生物質を含まない培地［10％のウシ胎児血清を補給したダルベッコ高グルコースMEM］中で増殖させた。ルイス肺細胞系及びNRKE細胞系の細胞数を５回の継代により増加させ、細胞系を液体窒素中に貯蔵した。全て通常の操作［Freshney,動物細胞の培養：基本技術のマニュアル、６頁、216−225（第２編、1987）］に従う。これらの低温保存細胞を下記のアッセイに使用した。全ての細胞系を、通常の細胞培養方法［Freshney,動物細胞の培養：基本技術のマニュアル、127頁（第２編、1987）］を使用して増殖させた。全ての細胞培養操作を金の蛍光のもとに行って光酸化による損傷を防止した。
B.形質転換細胞の選択及び癌遺伝子トランスフェクション
rasK癌遺伝子、rasN癌遺伝子、及びrasH癌遺伝子により形質転換されたNRKE細胞をパネルに使用した。NRKE細胞と較べて最小の偏差表現型を有する形質転換体のみを使用した。この表現型を有する形質転換体は低い癌遺伝子コピー数及び形質転換されなかったNRKE細胞と同じ試験管内の増殖特性を有する。これらの基準を、化合物が細胞分裂の速度に基く抗増殖活性ではなく抗腫瘍活性につき評価されるように選択した。
ras癌遺伝子形質転換NRKE細胞を、以下のようにして調製した。形質転換ヒトrasH遺伝子を含むプラスミドpUCEJ6.6（no.41028）、形質転換ヒトrasN遺伝子を含むpNRsac（no.41031）、ｖ−rasK遺伝子を含むpKSma（no.41048）、及びRSVneo遺伝子をATCCから入手した。NRKE細胞に、通常のリン酸カルシウム同時沈殿方法及びネオマイシン耐性選択方法［Davisら，分子生物学における基本的な方法,285（1985）］を使用して癌遺伝子＋RSVneo遺伝子を同時移入した。トランスフェクション及びＧ−418抗生物質（シグマ・ケミカル社、セントルイス、MO）による選択の約14日後に、コロニーをリングクローニング操作［Freshney,動物細胞の培養：基本技術のマニュアル（第２編、1987）］により単離した。クローンを、Ｇ−418を含む培地中の４回の継代によるそれらの細胞数の増加後に液体窒素中で貯蔵した。約50のクローンを、下記の試験管内の細胞毒性試験及び生体内の抗腫瘍試験におけるそれらの使用につき幾つかの基準により評価した。クローンを選択するのに使用した基準は以下のとおりであった。（１）クローンは親NRKE細胞と同じ増殖速度を有するべきであり、（２）クローンの増殖速度は反復継代（例えば、100の継代培養まで）で安定でなければならず、かつ（３）それらは免疫不全マウスにおいて催腫瘍性でなければならない。基準１及び２は、示差細胞毒アッセイが一般の抗増殖活性ではなく抗腫瘍活性を有する化合物につき選択することを確実にするのに重要である。癌遺伝子コピー数を、通常のサザンブロッティング操作［分子生物学における現行のプロトコル、２章、Frederick M.Ausuhelら編集、1987−1992］を使用して測定した。細胞増殖特性を、通常の方法（Freshney,動物細胞の培養：基本技術のマニュアル、227−244頁（第２編、1987）］を使用して評価した。
ｖ−rasK遺伝子により形質転換されたクローンK/1−NRKE、ヒトrasH遺伝子により形質転換されたH/1.2−NRKE、及びヒトrasN遺伝子により形質転換されたN/4.2−NRKEを試験管内の細胞毒性及び生体内の抗腫瘍試験に選択した。これらのクローンは、安定に組込まれている３〜４の癌遺伝子コピーを有する。これらの細胞の試験管内の倍加時間は24時間であり、これはNRKE細胞と同じである。
C.試験管内の細胞毒性アッセイ
化合物を、癌遺伝子に基く示差細胞毒性アッセイにより抗腫瘍活性につきスクリーニングした。このアッセイにより、形質転換されなかった親上皮細胞に対する化合物の作用に対して癌遺伝子形質転換細胞に対する化合物の細胞毒性作用を測定した。化合物の評価につき、ルイス肺癌腫をマウス基準腫瘍として使用した。この腫瘍は新規な癌細胞破壊物質のスクリーンに普通使用される。示差細胞毒アッセイは、癌遺伝子タンパク質と直接相互作用する化合物を同定できるが、更に重要なことに、それはまた癌遺伝子により活性化または誘導される生化学的経路を妨害する化合物を見出すことができる。両方の場合の抑制作用が形質転換細胞に特異性であり得る。
簡単に言えば、示差細胞毒アッセイに使用した操作は以下のとおりである。細胞懸濁液を、通常の方法［Freshney,動物細胞の培養：基本技術のマニュアル、132頁］を使用してトリプシン解離により調製し、50の細胞を12ウェル培養皿の夫々のウェルに接種した。３回反復試験ウェルのグループを培地対照グループ、薬剤ビヒクル−対照グループ及び薬剤処理グループに分けた。接種１日後に、培地をビヒクルまたは薬剤を含む培地と交換し、培養物を更に５日間インキュベートした。
ビヒクルまたは薬剤への暴露後に、培養物を洗浄し、固定し、マロリー染色の改良［Richardsonら,Stain Technol.,35,313（1960）により染色した。コロニー数及びコロニー面積をアーテックモデル982画像分析装置（アーテック・システム社、ファーミントン、N.Y.）で測定した。化合物の細胞致死作用を、Puck及びMarcus,J.Exp.Med.,103,653（1956）により最初に記載されたようにしてコロニー数から測定した。コロニー面積をコロニー数につき基準化し、化合物が細胞増殖抑制作用を有するかどうかを測定するのに使用した。50％の細胞死滅を生じる濃度（LC50）を測定し、細胞毒性の示差インデックスを、正常な上皮細胞に関するLC50値を腫瘍細胞に関するLC50値で割ることにより求めた。示差インデックス値を使用して、化合物が腫瘍細胞に対して有する選択的な毒性の量を測定した。全てのデータ分析を、VAX 8300コンピューターでSASソフトウェア［SASユーザーガイド：統計（バージョン５編、SASインスティテュート社、カリー、N.C.1985）］を使用して行った。
0003647860.tif 000050
0003647860.tif 000051
表VII中、試験した化合物は下記の式を有する。
0003647860.tif 000052
化合物１、23及び27を、実施例１、23及び27に記載されたようにして調製した。化合物49及び52を式２に従って調製した。化合物48を23の酸化により得た。酸の存在下のメタノールによる27の処理は53を生じ、また酸の存在下のテトラヒドロフランによる27の処理は54を生じた。化合物50、51及び55を、夫々49、23及び１の酸加水分解により得た。
表VIII及びIX中、試験した化合物は下記の式を有する。
0003647860.tif 000053
0003647860.tif 000054
0003647860.tif 000055
表VIIIに示されるように、ラベンダマイシン類縁体１及び17〜22は全て試験した一種以上の腫瘍細胞に毒性であった。また、ラベンダマイシン類縁体は一般にrasK癌遺伝子を有する細胞に対し選択的な細胞毒性を示した（表VIII及びIXを参照のこと）。特に、ラベンダマイシン類縁体１、20、及び21は、正常な形質転換されなかった細胞と較べてrasK癌遺伝子を有する腫瘍細胞に対し予測されなかった高度に選択的な毒性（夫々、９倍、18倍、及び132倍）を示した。比較により、従来技術の化合物ラベンダマイシンメチルエステル55は0.5の選択的な毒性を有する（表XI）。
実施例48:腫瘍に対する生体内の活性
Ｎ−アセチルラベンダマイシンメチルエステル（１）、Ｎ−アセチルデメチルラベンダマイシンイソアミルエステル（20）及びＮ−アセチルデメチルラベンダマイシンｎ−オクチルエステル（21）及びシクロフォスファミド（CY）（基準）の抗腫瘍活性をヌードマウス中の異種移殖体として増殖されたK/1−NRKE腫瘍（rasK形質転換NRKE細胞）に対して評価した。
1.マウス
雌のCD1 nu/nuヌードマウス及び雌のC57B1/6マウスをチャールズ・リバーズ社から入手した。動物をミクロイソレーター上部で覆われたプラスチックのシューボックス型ケージ中に収容した。全ての動物飼料、水、敷わら及びケージを滅菌した。動物に水（pH3.0）及びプリナ（Purina）マウス食を随時与えた。全ての動物操作を100％排気の垂直層流のHEPAフィルター付きフード中で滅菌作用により行った。一貫した腫瘍増殖を維持するために、生後４〜６週のマウスのみを使用した。
2.腫瘍移殖及び測定
上記の実施例47に記載されたようにしてNRKE細胞の癌遺伝子トランスフェクションにより得られた形質転換細胞を雌のCD1 nu/nuマウス中で異種移植腫瘍として増殖させた。継代７により試験管内で増殖された形質転換細胞を使用して異種移植体を樹立した。ルイス肺癌腫を、Merrimanら,Cancer Research,49,4509−4516（1989）に既に記載されたようにしてC57B1/6マウス中で同系腫瘍として増殖させた。腫瘍を第一乳腺から約1cmに1x106の細胞の皮下移植により開始した。移植後、マウスを無秩序化し、グループ当たり10匹のマウスの治療グループに分けた。腫瘍移植１日後に開始して、次の項目に記載されたようにしてマウスに８日間にわたって毎日薬剤をIP投薬した。10日目に、腫瘍塊を下記の楕円体積式によりTamayko及びReynolds,Cancer Chemother.Pharmacol.,24,148−154（1989）に記載されたようにして測定した。
Mg腫瘍＝1/2（長さｘ幅ｘ高さ）
腫瘍増殖の抑制％を、ビヒクル処理動物に関する塊に対する薬剤処理動物に関する腫瘍塊の比から計算した。全ての動物を処理の開始時及び終了時に計量して腫瘍増殖の抑制が重量損失のためであるかどうかを測定した。
腺癌が1x106の細胞の皮下移植の約３日後に雌のCD1 nu/nuヌードマウス中で発生される。これらの腫瘍は24時間の倍加時間で増殖する。対照的に、腫瘍は108の親NRKE細胞の皮下移植の１年後までにヌードマウス中で発生されない。
3.薬剤治療
CYを等張食塩水に溶解し、20及び21をトウモロコシ油に溶解し、また１をダルベッコ食塩加リン酸緩衝液中10％のエマルフォー620に溶解した。１はこのビヒクルに難溶性であったことが注目されるべきである。腫瘍移植の１日後に開始して、薬剤を表Ｘに示された投薬量で腹腔内（IP）投与した。CY並びに化合物20及び21を８日間にわたって毎日１回投与した。化合物１を低い投薬レベルで毎日３回投与し、動物を７日間にわたって治療した。10日目に、腫瘍塊、腫瘍増殖の抑制％、及び重量変化を測定した。
4.結果
表Ｘに示された結果は、３種のラベンダマイシン類縁体１、20及び21が生体内で優れた腫瘍増殖抑制を生じたことを示す。その他の研究者らは、ラベンダマイシン及び関連化合物の100mg/kg/日の投薬量が致死性であることを見出したが、化合物１、20及び21は300mg/kg/日までの投薬量でさえも殆ど毒性を示さず、または全く毒性を示さなかった。化合物20により誘導された重量損失はイソアミル基の存在のためであるかもしれず、また等しい数の炭素を有する基によるこの基の置換はわずかな毒性を低下し得る。化合物１及び21は毒性を示さなかったので、それより多い投薬レベルの使用は、殆ど無毒性または無毒性で腫瘍の抑制を増大し得る。
0003647860.tif 000056