(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
口唇の荒れを評価する方法であって、口唇表面の角質層の表面細胞を採取し、採取した細胞の表面形態を体表面側及びその裏側から観察して評価することを特徴とする方法。
【請求項２】
口唇が、赤唇縁である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
採取した細胞の表面形態を電子顕微鏡で観察する、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
採取した細胞の裏側の微絨毛様突起及び体表面側の穴状構造を観察する、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項記載の方法により測定した口唇の荒れを指標とする、化粧品の選択方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、口唇の荒れを評価する方法、及び該方法を利用した口唇の荒れを改善するための化粧品の選択方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
口唇は、口腔粘膜から皮膚に至る移行帯を形成しており、健康な状態では、その表面は乾燥しておらず、やわらかく、きめが整っている。そして口唇は、その角質層が非常に薄い、水分が蒸発しやすい、皮脂の分泌がないといった、有毛部皮膚、つまり通常の皮膚とは異なる性質を有しているため、通常の皮膚と比べて非常に荒れやすく、荒れてしまうとその表面は、異常に落屑したり、乾燥し、硬くなってしまう。一方、口唇部の荒れの発生のメカニズムについては、口唇の表面の皺の形態や、口唇の皮膚生理機能（角質水分量、柔軟性、不全角化質量など）と、荒れとの関連性が検討されてはいる（日本香粧品科学会誌Vol. 18, No. 3, 133-138, 1994；日本香粧品科学会誌Vol. 20, No. 4, 265-269, 1996）ものの、まだ不明な点が多い。また、口唇の荒れと口唇の組織学的構造との関連についてもほとんど解明されておらず、口唇の荒れを具体的に評価する方法についても、外観から荒れの程度を判断する程度であり、的確な評価方法が得られるには至っていない。加えて荒れの症状を細かく判断するには経験に基いた医学的専門的知識が必要である。
【０００３】
更に、口唇の荒れに対しては、口唇に特に有効な処置法、有効な化粧品などは開発されておらず、皮膚の他の部分と同様に、水分蒸散を遮断する油分や、保湿成分を配合したリップクリーム、口紅などを適用する程度の処置しか行なわれていなかったが、最近になって、口唇の保護を目的とした、ジグリセリンイソパルミチン酸エステルセバシン酸縮合物を配合した油性基剤が開発された程度である（FRAGRANCE JOURNAL 1994-2, 31-37）。しかし、このような処置によっては、荒れた口唇は、一時的には改善されても、正常な状態にまで回復させることは困難であった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
上記の理由から、医学的専門的知識がなくても口唇の荒れを正確に評価し、それによって荒れの程度に合った口唇の荒れを改善するための化粧品などを的確に選択する手段が求められていた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本願発明者は、口唇の荒れと角質細胞の表面形態との関連性に着目し、上記の目的を達成すべく鋭意研究を行なった。その結果、口唇部の粘膜部、赤唇縁、皮膚部ではその表面形態が異なること；一般に唇と呼ばれている赤唇縁の角質細胞の裏側には、正常な状態では、微絨毛様突起が多く存在し、角質細胞の表側、つまり体表面側には、それに対応した穴状の構造がある、つまり角質細胞が凸凹状である一方、荒れた状態の口唇の角質細胞では、裏面及び体表面側においてはそれぞれ微絨毛様突起と穴状構造が認められるが、いずれにおいても比較的平坦な細胞が正常時よりも多く観察されることを発見し、この知見を口唇の荒れの測定に応用することにより本発明を完成するに至った。
【０００６】
本発明は、口唇の荒れを測定する方法であって、口唇表面の角質層の表面細胞を採取し、採取した細胞の表面形態を体表面側及びその裏側から観察して評価することを特徴とする方法に関する。本発明はまた、該方法により測定した口唇の荒れを指標とする化粧品の選択方法にも関する。以下、本発明について詳細に説明する。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明の方法について、以下どのように実施するのか具体的に説明する。
（１）口唇角質層の表面側細胞の採取
本発明の方法において、口唇表面の角質層の表面細胞を被験者から採取するには、粘着面を有する角質細胞採取用シートを被測定者の口唇に付着させ、指で粘着面をしっかり口唇に圧着させてからシートを口唇からはがすことにより表面細胞を口唇表面から剥離し、角質細胞採取用シートの粘着面に付着させる。
【０００８】
ここで用いる角質細胞採取用シートは、２枚のシートが接着剤層を介して接着されたもの（図１及び２）であり、このようなシートとしては、角質細胞を採取するための粘着力があるものであればどのようなものも使用することができる。例えば、プラスチックなどの材質のシートを用いることができる。また接着剤としては、剥離強度及びプローブタック強度を考慮して、ゴム系ポリマー、アクリル系ポリマー、ビニル系ポリマー、シリコーン系ポリマーなどに適宜粘着付与剤、軟化剤などを配合した感圧性接着剤を好ましく用いることができる。なかでもアクリル酸エステルとアクリル酸などを共重合したアクリル系感圧性接着剤が、角質細胞の剥離状態及び接着剤の安定性の点から特に好ましく使用することができる。このような接着剤を用い、２枚のシートの間に通常１２〜１３μmの接着剤層を形成して２枚のシートを接着する。このように接着剤層を形成したシートの接着強度は、約２００〜３００g/１０mm巾、プローブタック強度は約２００〜４５０g/５mmφであるのが望ましい。なお、この接着強度及びプローブタック強度は、特開平９−２４０２５号に記載の方法で測定することができる。
【０００９】
角質細胞採取用シートの厚さは、接着された全体の厚みが１５０〜２５０μm程度であることが好ましく、通常は、上側のシートの厚みが５０〜１２５μm、下側のシートの厚みが７５〜１２５μm程度のものであればよい。またシートの大きさは、口唇の縦方向すべての細胞を採取できる大きさであればよいが、使いやすさの観点から、通常、巾２０〜３０mm、長さ６０〜８０mmの長方形のものであればよい。
【００１０】
この上側のシートの一部には、直径約１５〜２０mmの円形の切欠部が形成されており、この切欠部に切欠部と同じ大きさの円形の、シートと同じ素材からなる切欠片が付着されている。この切欠片は、切欠部にごく弱くしか付着しておらず、口唇表面の角質細胞を採取する際には、この切欠片を角質細胞採取用シートからはがし、露出した下側のシート部を口唇表面に押し付け、指で押圧し、ついではがすことによって、角質細胞を口唇から剥離して角質細胞採取用シートに付着させることができる。なお、上側シートの切欠部は、特に円形でなくても、だ円形、正方形、長方形など、シートの切欠部を指で口唇に押しつけ、指先でぐるっと円を描くように押圧しやすい形状であればよい。この角質細胞採取用シートとしては、特開平９−２４０２５号又は日本化粧品技術者会誌３２巻１号３３〜４２頁（１９９８年）に開示されたもの（素肌チェッカー、登録商標）と同じ物を使用することができる。あるいは、市販のセロハンテープ（例えばニチバン製）も使用することができる。
【００１１】
（２）採取した細胞の表面形態を体表面側及びその裏側から観察する
次に角質細胞採取用シートに付着させた口唇部の角質細胞を、走査型電子顕微鏡で観察する。上記のように角質細胞を付着させた角質細胞採取用シートには、角質細胞の表側、つまり体表面側の部分がシートに接着され、角質細胞の裏側が露出して接着されているため、角質細胞の表側の部分は、このままでは観察できない。そのため、表側の部分も同様に観察するために、角質細胞採取用シートを１／２に分割し、一方については角質細胞を採取シートからはがして別のシートに転写することにより、表側の部分を露出させる。
【００１２】
具体的には、ポリエチレンテレフタレートなどの材質の透明なシート（例えば市販されている、厚さ：約０．１mmのＯＨＰ用シートを用いることができる）に軟質塩化ビニル用樹脂（ビニル用ボンド、コニシ株式会社）を薄く塗布して膜を形成させ、これに１／２に分割した採取シートの角質細胞付着面を密着させる。その状態で常温でエタノールに１０分間、ついでキシレン中に２時間浸漬した後、採取シートを除去し、更に１時間キシレンに浸漬し、風乾させることにより、透明なシートに角質細胞の体表面側を露出させた状態で付着させた試料を得る。
【００１３】
上記で得た、角質細胞の裏側を露出させた状態で付着させた採取シート、及び角質細胞の体表面側を露出させた状態で付着させた透明なシートを、電子顕微鏡用試料台に両面テープで固定し、白金パラジウム蒸着を施し、走査形電子顕微鏡で角質細胞の表面を、微絨毛様突起及びそれに対応する穴状構造の状態について観察する。白金パラジウム蒸着には、例えばイオンスパッターＥ−１０３０（日立製作所）を用いることができ、走査型電子顕微鏡としては、例えば走査形電子顕微鏡（Ｓ−４２００、日立製作所）を好ましく使用することができる。
【００１４】
（３）口唇の荒れを評価する
走査形電子顕微鏡による角質細胞の微絨毛様突起の観察結果を、各種状態の口唇の角質細胞の微絨毛様突起を示す電顕写真（図３）の４段階のいずれに該当するかを判定し、その結果から、被験者の口唇が、以下に示す荒れグレードＡ〜Ｄのいずれに該当するかを評価する。
【００１５】
【表１】
0003730154.tif 000002
【００１６】
本発明の方法により得られたこの評価結果に基づいて、口唇の荒れのグレードに合わせて、口唇の荒れの処置用化粧品を選択することができる。
本発明の方法により得られた評価結果に基づいて化粧品を選択するに当たっては、グレードＢ又はＣのような、細胞の微絨毛様突起及び穴状構造による凹凸が小さいと診断された場合には、保湿効果を高める成分（ヒマワリ油など）を配合した化粧品を選択し、グレードＤのような微絨毛様突起及び穴状構造の存在しない細胞が多く観察される場合には、角質細胞をスムーズに剥離させるような成分（例えばＡＨＡなど）を配合した化粧品を選択することができる。このような化粧品としては、リップクリーム、口紅、美容液などの口唇用化粧品を挙げることができる。
【００１７】
このように口唇の荒れのグレードに適した成分を含む化粧品を用いることにより、荒れの改善、予防のための的確な処置を行なうことができる。
【００１８】
なお、口唇の荒れを評価するに際しては、口唇の角質水分量、口唇の柔軟性、剥離角層量も測定して参考とすることができる。
【００１９】
口唇の角質水分量を測定するには、電気伝導度により角質水分含有量を測定するための３．５MHz高周波電気伝導度測定装置（Ｓｋｉｃｏｎ−２００、ＩＢＳ社製）を用いて、下口唇中央部の角質水分量を測定する。同一部位を５回測定し、最大値、最小値を除く平均値を角質水分量とすることができる。本方法で測定した角質水分量の正常な口唇の平均値は、約２０〜７０μsである（気温２４℃、湿度５０％の場合）。
【００２０】
口唇の柔軟性を測定するには、減圧下で直径２mmの吸引口を口唇に押し当てた後、引っ張って、皮膚がどれだけ伸びるかを測定する装置であるキュートメーター（ＳＥＭ５７５、Courage and Khazaka社製）を用い、減圧度３００mbar、５秒間の負圧付加時の皮膚伸長度を柔軟性とする。キュートメーターで測定した柔軟性を示す正常な口唇の平均値は、約０．２〜０．４mmである（気温２４℃、湿度５０％の場合）。
【００２１】
剥離角層量を定量するには、前述の角質細胞採取用シートで角質細胞を採取し、その画像をフィルムスキャナー（Ｌｓ３５００、Nikon Co., Ltd.）で取り込み、画像解析装置（Nexus6800, Nexus Co., Ltd.）により剥離角層量を解析する。本方法で測定した剥離角層量の正常値は、約５００〜３５００である（気温２４℃、湿度５０％の場合）。なお剥離角質量を測定するために角質細胞採取用シートを用いる際には、特開平９−１３１３２３号に記載されているような押圧器具を用いて一定圧（２００g/cm2）にて３秒間押圧した後にシートを剥離する。
【００２２】
上述したようにして、本発明においては、口唇と一般皮膚とは異なる細胞表面形態を有することが解明され、口唇と角質層は本質的に異なり、荒れの発生メカニズムも異なることが示され、その結果、口唇の荒れに対するケアには一般の皮膚のケアを代用することはできず、荒れの程度に応じて口唇にあったケア法を考える必要があることが判明したことに基づいて、本発明の方法は完成された。したがって、本発明の方法により、口唇特有の荒れの程度を的確に把握することが可能となり、荒れの程度に応じたケア法を選択することが可能である。また従来の口唇表面の乾燥、落屑等の外観による荒れ所見からでは、口唇表面の状態しか判断できず、口唇に潤いを与えるといった表面的なケア法しか提案することができなかった。しかし本発明の方法によっては、口唇内部（角質層）の状態を把握することができるため、内部の状態を見ながらのケア、あるいは内部からのケアを、例えば荒れの予防の段階から提案することができる。したがって、本発明の方法により、従来の外観から口唇の荒れを評価する方法よりもより的確に口唇の荒れを評価することができ、荒れに適した成分を配合した化粧品をより的確に選択することができる。
【００２３】
【実施例】
以下に、試験例、実施例により本願発明を詳細に説明する。
試験例１
健康な成人男子（２７〜５６才）３５人について、その口唇部の角質細胞を採取して、角質細胞の形態を観察するとともに、皮膚生理機能を測定した。
角質細胞の採取
口唇部の角質細胞は、角質細胞採取用シート（素材：ポリエステル、幅：２５mm、長さ：７０mm、上側シートの厚さ：１００μm、下側シートの厚さ：１２５μm、接着剤：アクリル酸エステルとアクリル酸を共重合させたアクリル系感圧性接着剤、接着剤層の厚さ：１２〜１３μm、切欠部の直径：１８mm）を用い、口唇部に一定圧で接着させて細胞を剥離して採取した。
剥離角層量の測定
剥離した角質細胞量を定量するために、フィルムスキャナー（Ｌｓ３５００、Nikon Co., Ltd.）で角質細胞採取用シートの画像を取り込み、画像解析装置（Nexus6800, Nexus Co., Ltd.）により剥離角層量を解析した。取り込みの大きさについては、口唇の大きさには個人差があるので細胞付着部位を任意でとりこんだ。
電顕試料作成及び観察
角質細胞採取用シートを１／２に分割し、角質細胞の体表面側を露出させた試料を作成するために、分割した一方の角質細胞採取用シートをポリエチレンテレフタレートシートに転写した。転写に際しては、あらかじめ軟質塩化ビニル用樹脂（ビニル用ボンド、コニシ株式会社）を薄く塗布し、膜を形成させておいたポリエチレンテレフタレートシート（市販されているＯＨＰ用シート、幅：２５mm、長さ：７０mm、厚さ：０．１mm）を分割した角質細胞採取用シートに密着させ、その状態で常温でエタノールに１０分間、ついでキシレン中に２時間浸漬した後、角質細胞採取用シートを除去し、更にキシレン中に１時間浸漬し、その後風乾させて、角質細胞の体表面側を露出させた試料を得た。得られた角質細胞の体表面側を露出させた試料、及び角質細胞の裏側を露出させた試料、つまり分割したもう一方の角質細胞採取用シートを、電子顕微鏡用試料台に両面テープで固定し、白金パラジウム蒸着（イオンスパッターＥ−１０３０、日立製作所）を施し、走査型電子顕微鏡（Ｓ−４２００、日立製作所製）で観察した（観察条件：倍率２０００〜３０００倍、加速電圧５．０kV、W.D.＝１５mm）。
口唇の荒れの外観に基づく判定
被験者の口唇の荒れの程度を、外観に基づいて以下の基準により判定した。
【００２４】
【表２】
0003730154.tif 000003
【００２５】
角質水分量測定
角質水分量を測定するには、電気伝導度により角質水分含有量を測定するための３．５MHz高周波電気伝導度測定装置（Ｓｋｉｃｏｎ−２００、ＩＢＳ社製）を用いて、下口唇中央部の角質水分量を測定した。同一部位を５回測定し、最大値、最小値を除く平均値を角質水分量とした。
【００２６】
柔軟性の測定
口唇の柔軟性を測定するには、減圧下で直径２mmの吸引口を口唇に押し当てた後、引っ張って、皮膚がどれだけ伸びるかを測定する装置であるキュートメーター（ＳＥＭ５７５、Courage and Khazaka社製）を用い、減圧度３００mbar、５秒間の負圧付加時の皮膚伸長度を柔軟性とした。
【００２７】
結果
外観に基づいて口唇が正常であると判断された被験者（外観に基づく荒れグレード０）の口唇の各部位の角質細胞の裏面の電顕写真を図４に示す。ａは、口唇の粘膜部、ｂは、赤唇縁、ｃは、赤唇縁皮膚境界部、ｄは、皮膚部である。粘膜部には、扁平な細胞が観察されたが、赤唇縁、つまり唇といわれている部位では、大きな微絨毛様突起が全面に観察され、このような形態は赤唇縁のほとんどの細胞で観察された。赤唇縁皮膚境界部、皮膚部になると、はっきりした突起は少なくなり、つぶれたような突起やなだらかな凸凹が観察された。
【００２８】
また、外観に基づいて口唇が正常であると判断された被験者の赤唇縁の角質細胞の裏側（ａ）及び体表面側（ｂ）の電顕写真を図５に示す。写真から明らかなように、正常な赤唇縁の角質細胞の裏側（ａ）では、微絨毛様突起が多く存在するとともに、赤唇縁の角質細胞の体表面側（ｂ）にも微絨毛様突起に対応した穴状の構造が観察された。
【００２９】
一方、外観に基づいて荒れていると判断された被験者（外観に基づく荒れグレード２）の赤唇縁の角質細胞の電顕写真を、図６に示す。乾燥や落屑が観察された赤唇縁では、微絨毛様突起とそれに対応する穴状構造を有する細胞が観察された一方、角質細胞の裏側（ａ）、体表面側（ｂ）のいずれにおいても比較的平坦な細胞が多く観察された。
【００３０】
上記の結果から、正常な赤唇縁の角質細胞の裏側には微絨毛様突起が多く存在し、表側にはそれに対応して穴状構造があるが、荒れた赤唇縁の角質細胞では、平坦な細胞が多く出現することが示された。
【００３１】
また上記の方法により測定した被験者の口唇の角質水分量及び柔軟性と、外観に基づく口唇の荒れグレードとの相関を図７及び８に示す。図から明らかなように、微絨毛様突起が多く存在する、荒れのない正常な口唇では、角質の水分量が高く、柔軟性も高い一方、平坦な細胞が多く出現する荒れた口唇では、角質水分量が低く、柔軟性も低かった。
【００３２】
上記の方法により剥離して角質細胞採取用シートに付着した剥離角層量を画像解析により計測した結果である剥離角層量と外観に基づく口唇の荒れグレードの相関を図９に示す。画像解析によると、外観により正常な口唇からは、均一に角質細胞が剥離される一方、荒れた口唇ほどそこから剥離する角質量は少ない傾向にあった。
【００３３】
これらのことより、荒れた口唇では、古い角質細胞がスムーズに剥離せず口唇表面に残存する傾向にあり、更に剥離角層量が少ないことから、荒れた口唇部では角層の剥離接着異常が起きていると考えられた。更に、角質細胞がスムーズに剥離しにくくなった角質層では水分含有量も低く、柔軟性も低下していることから、角層機能が低下し、カサカサした硬い口唇になっていると考えられ、このような口唇の処置法として、角質細胞の剥離を促進することの重要性も考えられた。
【００３４】
試験例２
赤唇縁の角質細胞の裏面に存在する微絨毛様突起と口唇の外観に基づく荒れとの関係を検討するために、試験例１の被験者から得た角質細胞１００個を電子顕微鏡で観察して、各細胞の微絨毛様突起の有無の程度を前記の図３の写真のいずれに該当するかをカウントした。各細胞の微絨毛様突起の有無の程度と、試験例１に記載した外観に基づく口唇の荒れグレードとの相関を図１０に示した。
【００３５】
この結果からも、外観では荒れのない群では、平坦な細胞が少なく、微絨毛様突起を有する細胞が多く分布するのに対し、荒れた外観の口唇ほど、微絨毛様突起の少ない平坦な細胞が多く出現し、微絨毛様突起が多い細胞は減少する傾向にあることが示された。
【００３６】
試験例１及び２の結果より、外観に基づく口唇の荒れグレードが、口唇の角質細胞の微絨毛様突起の有無と関連を有することが示され、これにより本願発明の方法により口唇の角質細胞の微絨毛様突起の有無を測定することが、口唇の荒れを示す指標として利用することができることが示された。
【図面の簡単な説明】
【図１】角質細胞採取用シートの断面図を示す。
【図２】角質細胞採取用シートの使用態様を示す。
【図３】微絨毛様突起の状態を判定するための各種状態の口唇の角質細胞の電顕写真を示す。
【図４】正常であると判断された被験者の口唇の各部位の角質細胞の裏面の電顕写真を示す。
【図５】正常であると判断された被験者の赤唇縁の角質細胞の裏側（ａ）及び体表面側（ｂ）の電顕写真を示す。
【図６】荒れていると判断された被験者の赤唇縁の角質細胞の裏側（ａ）及び体表面側（ｂ）の電顕写真を示す。
【図７】被験者の口唇の角質水分量と、外観に基づく口唇の荒れグレードとの相関を示す。
【図８】被験者の口唇の柔軟性と、外観に基づく口唇の荒れグレードとの相関を示す。
【図９】剥離して角質細胞採取用シートに付着した剥離角質量と、外観に基づく口唇の荒れグレードとの相関を示す。
【図１０】微絨毛様突起の有無の程度と、外観に基づく口唇の荒れグレードとの相関を示す。
【符号の説明】
１０  角質細胞採取シート
１１  上側シート
１２  下側シート
１３  接着剤層
１４  切欠片
１５  切欠部
【図１】
0003730154.tif 000004
【図２】
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【図３】
0003730154.tif 000006
【図４】
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【図５】
0003730154.tif 000008
【図６】
0003730154.tif 000009
【図７】
0003730154.tif 000010
【図８】
0003730154.tif 000011
【図９】
0003730154.tif 000012
【図１０】
0003730154.tif 000013