(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
有底の管体と、該管体の口部を閉鎖するゴム栓と、管体の内部に収容された血液分離剤、および、該血液分離剤に近接して収容された円筒状スリーブを含んでなり、該スリーブは、先端と基端を有し、先端で血液分離剤と近接しており、先端側の肉厚が、内径が先端方向にテーパ状に拡径されることにより、薄肉に形成されるとともに、内壁にしぼが形成されて抗凝固剤が塗布されており、前記管体に血液が充填され遠心分離された時に血液分離剤がスリーブの内壁に沿って移動可能である、核酸増幅用採血管。
【請求項２】
スリーブの先端の肉厚が０．８ｍｍ以下である請求項１に記載の核酸増幅用採血管。
【請求項３】
スリーブ内壁のしぼの深さが７０μｍ以下である請求項１または２に記載の核酸増幅用採血管。
【請求項４】
スリーブが赤血球より重い比重の合成樹脂で形成されてなる請求項１〜３のいずれかに記載の核酸増幅用採血管。
【請求項５】
抗凝固剤がエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のアルカリ金属塩、ヘパリンのアルカリ金属塩、クエン酸ナトリウムの群から選ばれる１つである請求項１〜４のいずれかに記載の核酸増幅用採血管。
【請求項６】
抗凝固剤がＥＤＴＡのアルカリ金属塩である請求項５に記載の核酸増幅用採血管。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は血液分離剤入り核酸増幅用採血管に関し、より詳しくは、採血管に正確かつ容易に抗凝固剤を充填することができ、採取された血液への抗凝固剤の溶解性の改良された、核酸増幅に適した血液分離剤入り採血管に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、血液生化学検査に際して、採取された全血の核酸を増幅し、その増幅産物から標的核酸を検出して、例えばエイズや肝炎、結核、コレラなどの病気の診断や、遺伝子病などの診断が行われるようになった。全血から分離された血漿中には微量のＤＮＡが含まれているが、この血漿中ＤＮＡを利用する場合、抗凝固剤の溶解性が悪いと微小クロットが発生することがあるため、採血管には正確な量の抗凝固剤を溶解し易い状態で充填する必要がある。
【０００３】
そこで、血液試料への抗凝固剤の溶解性が改良され、採血した血液試料中にクロットが発生することのない採血管として、水を溶剤として噴霧塗布法によりＥＤＴＡ−３Ｋを内表面に塗布した後、溶剤を除去したものが提案されている（特許第２６９０２６１号公報）。
しかしながら、このものは、抗凝固剤の溶解性が改良されたとはいうものの、塗布層の厚みにバラツキが生じるため、必ずしも万全のものではなく、また、塗布量の正確性に関しても充分なものではない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は上記の事情に鑑みてなされたもので、抗凝固剤の溶解性が充分に改良され、正確な量の抗凝固剤を塗布することのできる血液分離剤入り血液凝固管を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記の課題に鑑みて鋭意検討の結果、管体に円筒状スリーブを収容し、このスリーブの内壁に抗凝固剤を塗布するようにすることにより、容易かつ経済的に正確な量の抗凝固剤を均一に塗布することができることを見出し、本発明に到達した。すなわち、本発明は、有底の管体と、該管体の口部を閉鎖するゴム栓と、管体の内部に収容された血液分離剤、および、該血液分離剤に近接して収容された円筒状スリーブを含んでなり、該スリーブは、先端と基端を有し、先端で血液分離剤と近接しており、先端側の肉厚が、内径が先端方向にテーパ状に拡径されることにより、薄肉に形成されるとともに、内壁にしぼが形成されて抗凝固剤が塗布されており、前記管体に血液が充填され遠心分離された時に血液分離剤がスリーブの内壁に沿って移動可能である、核酸増幅用採血管である。
ここで、遠心分離時の血液分離剤のスムーズな移動のために、スリーブ先端の肉厚は０．８ｍｍ以下であるのが好ましい。また、スリーブ内壁のしぼの深さは７０μｍ以下が好ましい。スリーブは遠心分離時に底部に位置するように赤血球より重い比重の合成樹脂で形成されるのが好ましい。また、抗凝固剤はエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のアルカリ金属塩、ヘパリンのアルカリ金属塩、クエン酸ナトリウムの群から選ばれる１つであるのが好ましく、特にＥＤＴＡのアルカリ金属塩が好ましい。
【０００６】
【発明の実施の形態】
次に本発明の実施例について図面に基づいて説明する。
図１は本発明の一実施例を示す説明図であり、図２は図１に示すスリーブの縦断面図である。
本発明の核酸増幅用採血管は、図１に示すように、有底の管体１と、この管体１の口部を閉鎖するゴム栓２と、管体１の内部に収容された血液分離剤４、および、この血液分離剤４に近接して収容された円筒状スリーブ３を含んでなる。スリーブ３は先端３１と基端３２を有し、先端３１が血液分離剤４に近接している。スリーブ３は、先端側の内径が先端方向にテーパ状に拡径されることにより、その肉厚が薄肉に形成されており、しぼ３３の形成されたスリーブ３の内壁（図１の斜線部分に対応する内壁部分）には抗凝固剤が塗布されている。そして、管体１に血液が充填され遠心分離された時に、血液分離剤４がスリーブ３の内壁に沿って移動可能になっている。
【０００７】
スリーブ３は赤血球より重い比重の合成樹脂の、例えばＡＢＳ樹脂やポリスチレン、ポリエステル、ポリアミド、ポリカーボネート等で円筒状に形成されており、基端３２の肉厚は通常１．０〜１．５ｍｍであり、その外径は管体１の内径よりやや小さく、図２に示すように、管体１への挿着を容易にするために先端３１側が若干細くなっている。スリーブ３の内壁には塗布された血液分離剤４の剥離を防ぐためにしぼ３３が形成されており、そのしぼ３３の形成された内壁には抗凝固剤が塗布されている。抗凝固剤としては、例えばＥＤＴＡのアルカリ金属塩、ヘパリンのアルカリ金属塩、クエン酸ナトリウム等が採用されるが、血液への溶解性が良いことからＥＤＴＡのアルカリ金属塩、例えばＥＤＴＡ−２Ｋ、ＥＤＴＡ−３Ｋ、ＥＤＴＡ−２Ｎａが好ましい。抗凝固剤の塗布に際しては、抗凝固剤がスリーブ３に付着し難いので、ゼラチンをバインダーとして使用する必要がある。内壁表面のしぼ３３の深さは７０μｍ以下が好ましく、特に１０〜７０μｍが好ましい。しぼが無いと抗凝固剤の付着が悪く、しぼの深さが７０μｍを超えると抗凝固剤の溶解が悪くなる。スリーブ３は血液分離剤４の移動性を良くするために、先端３１側の部分は内径が先端方向にテーパ状に拡径されており、その肉厚が薄肉になっている。先端３１の肉厚は０．８ｍｍ以下が好ましい。
【０００８】
スリーブ３は、これを血液分離剤４に接触させると気泡が発生するので、その先端３１が血液分離剤４から少し離れた位置にくるように血液分離剤４に近接して配置される。管体１に収容される血液分離剤４としては、限定されるものではないが、チキソトロピー性を有する、例えばシリコーンやα−オレフィン−マレイン酸エステル、ポリエステル系重合体、アクリル系重合体、塩素化ポリプデン、シクロペンタジエン樹脂、シクロペンタジエン樹脂に水酸基、エステル基、エーテル基、エポシキ基等を導入した変性シクロペンタジエン樹脂を主成分とするもの等を採用することができる。管体１に血液が充填されると、血液分離剤４はスリーブ３の内壁に沿って移動して血液を上層の血漿と下層の赤血球とに分離する。尚、この時、スリーブ３内壁のしぼ３３をスリーブ３の長手方向に縦溝状に形成すると血液分離剤４の移動が若干スムーズになることが確認されている。
【０００９】
〔実験例１〕
表１に示す核酸増幅用採血管をそれぞれ６本用意し、それぞれに健常者６名から真空採血された全血５ｍｌを充填して、所要時間５〜６秒の間隔で核酸増幅用採血管を５回転倒して血液と抗凝固剤を混和した後、１３００Ｇ×５分の遠心を行い、遠心分離後の血液の状態（分離剤の反転性、分離剤の隔壁強度、部材に対する分離剤の付着、フィブリンの析出）を目視で確認したところ、表２に示すような結果が得られた。尚、スリーブの内壁に塗布される抗凝固剤としてはＥＤＴＡ−２Ｋ（和光純薬工業（株）製）を用い、塗布量は８．０ｍｇ／管（血液１ｍｌ当り１．６ｍｇ）であった。
表から本発明のスリーブを挿入した核酸増幅用採血管が、良好な血液状態に維持されていることがわかる。また、スリーブ内壁のしぼ３３の好ましい深さは１０〜７０μｍの範囲であることがわかる。
【００１０】
【表１】
0003704982.tif 000002
【００１１】
【表２】
0003704982.tif 000003
【００１２】
〔実験例２〕
表１の実施例１〜５に示す核酸増幅用採血管をそれぞれ３本用意し、それぞれに健常者３名から真空採血された全血５ｍｌを充填し、これに予め用意しておいたＤＮＡ片を添加し、所要時間５〜６秒の間隔で核酸増幅用採血管を５回転倒して血液と抗凝固剤を混和した後、１３００Ｇ×５分の遠心を行い、遠心分離後の血液から血漿のみを採取して、Ａｍｐ  Ｄｉｒｅｃｔ（商品名；（株）島津製作所製）を使用してＰＣＲでＤＮＡの増幅を行った。ＰＣＲ産物をポリアクリルアミド・ゲルで電気泳動後、エチジウム・ブロマイドで染色し、その結果をデンシトグラフで確認したところ、全てのサンプルについて２０９ｂｐの目的のバンドを確認することができた。
【００１３】
【発明の効果】
以上説明してきたことから明らかなように、本発明の核酸増幅用採血管を採用することにより、血液試験に際して、抗凝固剤の溶解性が充分に改良され、正確な量の抗凝固剤を塗布することのできる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明の一実施例を示す説明図である。
【図２】  図１に示すスリーブの縦断面図である。
【符号の説明】
１  管体
２  ゴム栓
３  スリーブ
３１  先端
３２  基端
３３  しぼ
４  血液分離剤
【図１】
0003704982.tif 000004
【図２】
0003704982.tif 000005