(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリガラクツロン酸、その塩またはそのエステルを有効成分として含有する花粉に起因するアレルギー性疾患の予防または治療剤。
【請求項２】
ポリガラクツロン酸が、Ｄ−ガラクツロン酸がα１→４結合しているペクチン酸である請求項１記載のアレルギー性疾患の予防または治療剤。
【請求項３】
花粉が、スギ花粉である請求項２記載のアレルギー性疾患の予防または治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明はアレルギー性疾患予防及び治療剤に関し、詳細には感作細胞表面上におけるアレルゲンとＩｇＥとの架橋構造の形成を阻害することによりアレルギー性疾患を予防及び治療する医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
現在、種々のアレルギー性疾患が注目を集めているが、アレルギー症状を引き起こす原因物質はアレルゲンと呼ばれる。スギ、ヒノキ、シラカバ、ブタクサ、ホソムギなどの花粉は空中に飛散して、花粉症を引き起こす花粉アレルゲンである。これらの花粉アレルゲンによって引き起こされるアレルギーはＩ型アレルギーと呼ばれ、ＩｇＥ抗体がＩ型アレルギー発症に重要な役割を演じている。
【０００３】
これらの花粉アレルゲンの中で重大な社会問題となっているスギは、目の痛みや充血等のアレルギー性結膜炎、くしゃみや鼻詰まり、鼻水等の鼻アレルギーの症状を呈し、その数は一千万人とも言われている。
【０００４】
Ｉ型アレルギーの発症機序は、大きく次の３段階に分けられる。
第１段階：ヒト体内に侵入したアレルゲンはマクロファージなどの抗原提示細胞に取り込まれ分解されてペプチドとなる。このペプチドの一部（Ｔ細胞が認識するエピトープ）は自己のＭＨＣタンパクと複合体を形成し、Ｔ細胞にその抗原性を伝え、Ｔ細胞を活性化する。活性化されたＴ細胞は種々のサイトカインを放出し、これらのサイトカインはＢ細胞に作用してＢ細胞の分化、増殖を促し、アレルゲン特異的なＩｇＥ抗体を産生する。産生されたＩｇＥ抗体は標的細胞である皮膚、粘膜に存在する肥満細胞や末梢血に存在する好塩基球の細胞表面に存在するＩｇＥレセプターに結合して感作状態が成立する。
【０００５】
第２段階：再び侵入したアレルゲンは感作状態の細胞表面で２分子以上のＩｇＥ抗体と結合し、アレルゲンを介して架橋構造を形成する。この架橋構造の形成が引き金となって肥満細胞や好塩基球に多量含まれるヒスタミン、ロイコトリエン等の化学伝達物質が遊離する。
【０００６】
第３段階：遊離したこれらの化学伝達物質は平滑筋の収縮や毛細血管透過性の増加をもたらし、前記の種々のアレルギー症状を発症する。
【０００７】
現在Ｉ型アレルギーの抗アレルギー剤として臨床に用いられているのは、ほとんどが前記の第２あるいは第３段階を作用点とした薬剤であり、それらはいずれも抗原非特異的な薬剤であり、特定のアレルギー反応により生ずる症状のみを抑制するものではない。
【０００８】
スギ花粉の主要アレルゲンには２種の全く異なるタンパクがあり、それぞれＣｒｙ ｊI 、Ｃｒｙ ｊIIと呼ばれる。Ｃｒｙ ｊIとＣｒｙ ｊIIに対しての１４５名のスギ花粉症患者血清の反応性は、１３４名（９２．４％）がＣｒｙ ｊI及びＣｒｙ ｊIIの両者に反応し、Ｃｒｙ ｊIのみに反応した患者が６名（４．
１％）、Ｃｒｙ ｊIIのみに反応した患者が５名（３．４％）であった（１９９３年第４３回日本アレルギー学会、橋本ら、日獣大、予研、国立相模原病院、林原生化研）。つまり、スギ花粉症の発症には、Ｃｒｙ ｊI及びＣｒｙ ｊIIのどちらも重要であることが示された。
【０００９】
Ｃｒｙ ｊIのｃＤＮＡは既に本発明者らによりクローニングされ、その推定全アミノ酸配列が明らかにされた〔Ｓｏｎｅ  Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９，６１９−６２５（１９９４）〕。その結果、Ｃｒｙ ｊIはＥｒｗｉｎｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ由来のペクテートリアーゼ  Ａ及びＥとそれぞれ３９％、３７％の部分的な配列が一致しており、更にＥｒｗｉｎｉａ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ由来のペクテートリアーゼ  Ａ及びＢとそれぞれ２４％、２８％の部分的な配列が一致していた。更にスギ花粉から精製したＣｒｙ ｊIがペクテートリアーゼ活性を持つことが報告された〔谷口美文  他、アレルギー、１９９２年、３月号、３０４頁〕。また、欧米、特に北米で発症頻度の高い花粉アレルギーの原因物質であるブタクサの花粉アレルゲンであるＡｍｂ ａI及びＡｍｂ ａIIがトマト由来のペクテートリアーゼのアミノ酸配列に類似しているという報告がある〔Ｇｒｉｆｆｉｔｈ  Ｉ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｐｐｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９６，２９６−３０４，１９９１〕。これらのことから北米での主要アレルギーの原因物質であるブタクサ花粉アレルゲンと日本での主要アレルギーの原因物質であるスギ花粉アレルゲンにおいて、ペクテートリアーゼの酵素活性を持つアレルゲンという共通点が存在することになる。事実、Ｃｒｙ ｊIの２種のｃＤＮＡクローンと報告されているブタクサのＡｍｂ ａI.1 とＡｍｂ ａIIの２種のアミノ酸配列を比較すると４６−４８％の一致が認められる〔Ｓｏｎｅ
Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９，６１９−６２５（１９９４）〕。
【００１０】
一方、Ｃｒｙ ｊIIのｃＤＮＡも本発明者らがクローニングし、推定全アミノ酸配列を明らかにした（特願平５−２７６７７３号）。このＣｒｙ ｊIIは、図１〜４に示すようにアボガド、トマト、とうもろこし由来のポリガラクツロナーゼにそれぞれ４３％、４０％、３４％の部分配列の一致が認められ、そしてスギ花粉から精製したＣｒｙ ｊIIがポリガラクツロナーゼ活性を持つことが報告された〔黒瀬真弓  他、第６回日本アレルギー学会春季臨床大会、アレルギー、１９９４年、２月号、３６０頁〕。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
このように種々の花粉症のアレルゲンの構造が遺伝子レベルで解明されつつあるが、未だ当該アレルゲンと抗体との反応を抗原特異的に阻害する抗アレルギー剤の開発はなされていない。
従って、本発明の目的はアレルゲンの構造や機能に基づき、抗原特異的にアレルゲンと抗体との反応を阻害し、安全性と有効性に優れたアレルギー性疾患予防及び治療剤を提供することにある。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
そこで本発明者は、アレルギー患者ＩｇＥ抗体とアレルゲンとの結合反応を阻害する物質を探索すべく検討した結果、ペクテートリアーゼ及びポリガラクツロナーゼの共通の基質であるポリガラクツロン酸、その塩及びそのエステルがこの結合反応を阻害し、感作細胞からの化学伝達物質の遊離を抑制することから、アレルギー性疾患の予防及び治療に有用であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち、本発明は、ポリガラクツロン酸、その塩又はそのエステルを有効成分として含有する花粉に起因するアレルギー性疾患の予防または治療剤を提供するものである。
【００１４】
本発明に用いられるポリガラクツロン酸は、ガラクツロン酸残基からなるポリウロン酸であれば特に制限されないが、天然に存在するＤ−ガラクツロン酸がαｌ→４結合しているペクチン酸が好ましい。またポリガラクツロン酸の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、有機アミン塩等が挙げられる。また、エステルとしてはメチルエステル、エチルエステルなどのアルキルエステルが挙げられる。更に、これらポリガラクツロン酸、その塩及びそのエステルいずれの場合も天然のペクチンやペクチン酸を分解して低分子量化したもの、例えばガラクツロン酸の２量体や３量体等のオリゴマーでもよい。
【００１５】
これらのポリガラクツロン酸類は花粉アレルギー患者の静脈血より得た好塩基球画分に花粉アレルゲンを作用させて生じるヒスタミンの遊離を強力に阻害することから、例えばスギ、ヒノキ、シラカバ、ブタクサ、ホソムギ等の花粉症の予防及び治療に有用である。また、ペクチン等は既に食物繊維等として食品に使用されており安全性は確立している。
【００１６】
本発明の予防及び治療剤は、前記有効成分を単独又は必要に応じて当該有効成分に賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、被覆剤、乳化剤、懸濁化剤、溶剤、安定化剤、吸収助剤、軟膏基剤等を適宜添加し、常法により経口投与用、注射投与用、直腸内投与用、外用などの剤形に製剤化することによって得られる。
【００１７】
経口投与用の製剤としては、顆粒、錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、液剤、乳剤、懸濁剤等が；注射投与用の製剤としては、静脈内注射、筋肉内注射、皮下注射、点滴注射用の製剤などが；直腸内投与用の製剤としては、坐薬軟カプセル等が；外用としては、軟膏剤、ローション剤、リニメント剤等が好ましい。その他、点眼液、点耳液とすることもできる。
【００１８】
本発明の予防及び治療剤の投与量は投与方法、症状、体重などによっても異なるが、通常１〜１０００mg／日が好ましい。
【００１９】
【実施例】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に何ら限定されるものではない。
【００２０】
実施例１
ファルマシア社製診断薬のスギアレルゲン（ｔ１７）に対して陽性（ＲＡＳＴ値３）であるスギ花粉症患者の静脈血を、ヘパリン加注射筒で採血し、ヒスタミン測定用ヒスタミンキット“栄研”（栄研化学株式会社製）付属の遊離試験用緩衝液で２倍に希釈した。９６穴Ｖ底マイクロプレートにこれを５０μl 入れた。ポリガラクツロン酸（ＳＩＧＭＡ社製）を最終濃度３．４、１mg／ml、３４０、１００、３０μg ／mlとなるように燐酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に溶解し、これらを１００μl ずつプレートに加えた。更にスギ花粉アレルゲンＣｒｙ ｊIを最終濃度５０μg ／mlとなるように５０μl ずつマイクロプレートに入れ（Ｃｒｙ ｊIを加えないコントロール系の場合はＰＢＳのみ加えた。）、３７℃３０分間反応させ、マイクロプレートを遠心してその上清５０μl を取り、これをヒスタミンキット“栄研”で測定した。
【００２１】
この結果を図５に示した。Ｃｒｙ ｊI非存在下ではポリガラクツロン酸濃度に関係なくヒスタミンの遊離はほとんど認められなかった。これに対してＣｒｙ ｊIが５０μg ／ml存在下では、ポリガラクツロン酸濃度に依存してヒスタミン遊離が阻害され、３．４mg／ml濃度で３０μg ／ml濃度に比べ９４％の阻害を示した。３４０μg ／mlのポリガラクツロン酸濃度で約５０％の阻害を示した。一方、ポリガラクツロン酸濃度３．４及び１mg／mlでは、スギ花粉アレルゲンＣｒｙ ｊI存在下及び非存在下でも赤血球の溶血が認められたが、この濃度以下の溶液では溶血が認められなかった。しかし、ヒスタミンを主に遊離する好塩基球を含む白血球は細胞の形態変化が認められないことや、Ｃｒｙ ｊI非存在下でもこれらの高濃度のポリガラクツロン酸が存在してもヒスタミンの遊離が認められないことから本試験には影響を与えなかった。おそらく赤血球の溶血は高濃度のポリガラクツロン酸溶液がゲル化を生じることから、浸透圧に対する感受性が高いものと考えられる。
【００２２】
【発明の効果】
種々のアレルギー性疾患、特に花粉症に対し抗原特異的で、安全に各種症状を予防又は治療することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】Ｃｒｙ ｊIIのアミノ酸配列とアボガド、トマト及びとうもろこし由来のポリガラクツロナーゼのアミノ酸配列との相同性を示す図の一部である。
【図２】Ｃｒｙ ｊIIのアミノ酸配列とアボガド、トマト及びとうもろこし由来のポリガラクツロナーゼのアミノ酸配列との相同性を示す図の一部である。
【図３】Ｃｒｙ ｊIIのアミノ酸配列とアボガド、トマト及びとうもろこし由来のポリガラクツロナーゼのアミノ酸配列との相同性を示す図の一部である。
【図４】Ｃｒｙ ｊIIのアミノ酸配列とアボガド、トマト及びとうもろこし由来のポリガラクツロナーゼのアミノ酸配列との相同性を示す図の一部である。
【図５】抗原抗体反応によるスギ花粉症患者好塩基球からのヒスタミンに対するポリガラクツロン酸の阻害効果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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