(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の理化学的性質を有する生理活性物質Ｋ９３−０７１１
Ｉ−１及びＩ−２。
［１］生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１
（１）性状    ：淡黄色油
（２）元素組成：Ｃ22Ｈ27Ｏ4 Ｎ（高分解能高速原子衝撃（ＦＡＢ）マススペクトルによる）
（３）分子量  ：３６９（高速原子衝撃（ＦＡＢ）マススペクトルによる）
（４）紫外・可視部吸収スペクトル：メタノール中で測定した紫外部吸収スペクトルは、２９９（ｌｏｇε  ３．２８）、２４５（ｌｏｇε  ４．２６）、２０７（ｌｏｇε  ４．３８）ｎｍ付近に特徴的な吸収極大を示す
（５）赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム法で測定した赤外線吸収スペクトルは、３３９０、２９２７、１７４１、１６９５、１６０３、１４８７、１３８１、１２８１、７５６ｃｍ-1に吸収帯を有する
（６）比旋光度［α］D 24＋４４．４°（ｃ．０．３，ＭｅＯＨ）
（７）溶剤に対する溶解性：アセトン、酢酸エチル、エチルエーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、クロロホルム及びベンゼンに可溶、水に難溶
（８） 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した 1Ｈ−シフト（Ｊ値）は、７．１９（１Ｈ，ｍ）、７．１９（１Ｈ，ｍ）、６．７５（１Ｈ，ｔｄ，７．３，０．５）、６．６３（１Ｈ，ｄ，８．０）、４．９３（１Ｈ，ｓ）、３．８４（１Ｈ，ｍ）、３．１４（１Ｈ，ｍ）、３．６９（１Ｈ，ｄ，１４．２）、３．４５（１Ｈ，ｄ，１４．２）、２．３３（１Ｈ，ｄｄ，１２．０，９．０）、２．１７（１Ｈ，ｄｄｄ，１２．０，５．０，１．５）、１．９２（２Ｈ，ｍ）、２．３８（１Ｈ，ｍ）、２．３６（１Ｈ，ｍ）、１．１９（２Ｈ，ｍ）、１．１２（３Ｈ，ｓ）、０．７６（３Ｈ，ｔ，７．０）、２．００（３Ｈ，ｓ）
（９）13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した13Ｃ−シフトは、２０６．４（ｓ）、２０６．３（ｓ）、１５７．７（ｓ）、１５６．６（ｓ）、１５０．５（ｓ）、１３０．５（ｄ）、１２９．５（ｓ）、１２３．５（ｄ）、１１９．１（ｄ）、１０８．０（ｄ）、１０６．２（ｄ）、８８．０（ｓ）、６６．６（ｔ）、５３．７（ｔ）、５０．６（ｓ）、４１．１（ｔ）、２９．９（ｔ）、２３．５（ｔ）、２２．７（ｔ）、１７．３（ｑ）、１３．８（ｑ）、９．４（ｑ）
（１０）呈色反応：硫酸、エールリッヒ、ヨウ素に陽性
［２］生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−２
（１）性状    ：淡黄色油
（２）元素組成：Ｃ22Ｈ27Ｏ4 Ｎ（高分解能高速原子衝撃（ＦＡＢ）マススペクトルによる）
（３）分子量  ：３６９（高速原子衝撃（ＦＡＢ）マススペクトルによる）
（４）紫外・可視部吸収スペクトル：メタノール中で測定した紫外部吸収スペクトルは、３０４（ｌｏｇε  ３．２８）、２４６（ｌｏｇε  ４．２９）、２０８（ｌｏｇε  ４．４０）ｎｍ付近に特徴的な吸収極大を示す
（５）赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム法で測定した赤外線吸収スペクトルは、３４１０、２９２７、１７３８、１６９３、１５９７、１４８９、１３８０、１２８２、７５６ｃｍ-1に吸収帯を有する
（６）比旋光度［α］D 24＋２５．６°（ｃ．０．３、ＭｅＯＨ）
（７）溶剤に対する溶解性：アセトン、酢酸エチル、エチルエーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、クロロホルム及びベンゼンに可溶、水に難溶
（８） 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した 1Ｈ−シフト（Ｊ値）は、７．１９（１Ｈ，ｍ）、７．１９（１Ｈ，ｍ）、６．７４（１Ｈ，ｔｄ，７．２，１．０）、６．６２（１Ｈ，ｄ，８．０）、４．９２（１Ｈ，ｓ）、３．８５（１Ｈ，ｄｄｄ，１２．０，７．９，１．５）、３．１７（１Ｈ，ｄｄｄ，１２．０，９．２，５．０）、３．６９（１Ｈ，ｄ，１４．９）、３．４９（１Ｈ，ｄ，１４．９）、２．３３（１Ｈ，ｄｄｄ，１２．０，７．９，１．５）、２．１９（１Ｈ，ｄ，１２．０，９．２，１．５）、１．３９（２Ｈ，ｍ）、２．４６（１Ｈ，ｍ）、２．３７（１Ｈ，ｍ）、１．２５（２Ｈ，ｍ）、１．１２（３Ｈ，ｓ）、０．８６（３Ｈ，ｔ，７．１）、１．９４（３Ｈ，ｓ）
（９）13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中で測定した13Ｃ−シフトは、２０６．６（ｓ）、２０５．９（ｓ）、１６０．３（ｓ）、１５３．７（ｓ）、１５０．４（ｓ）、１３０．５（ｄ）、１２９．４（ｓ）、１２３．５（ｄ）、１１８．９（ｄ）、１０７．８（ｄ）、１０５．０（ｄ）、８７．９（ｓ）、６６．８（ｔ）、５２．１（ｔ）、５０．５（ｓ）、４１．２（ｔ）、２９．５（ｔ）、２４．０（ｔ）、２２．９（ｔ）、１７．５（ｑ）、１３．８（ｑ）、９．１（ｑ）
（１０）呈色反応：硫酸、エールリッヒ、ヨウ素に陽性
【請求項２】
ストレプトマイセス属に属する請求項１に記載の生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を生産する能力を有する微生物を培地に培養して培養物中に生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を蓄積せしめ、該培養物から生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を採取することを特徴とする新規な生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２の製造法。
【請求項３】
ストレプトマイセス属に属し、請求項１に記載の生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を生産する能力を有する微生物が、ストレプトマイセス  エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）Ｋ９３−０７１１（ＦＥＲＭ  ＢＰ−５７６４）である請求項２記載の製造法。
【請求項４】
ストレプトマイセス属に属し、請求項１に記載の生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を生産する能力を有するストレプトマイセス  エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）Ｋ９３−０７１１（ＦＥＲＭ  ＢＰ−５７６４）。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は新規な生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２、並びに微生物生産菌の培養によって産生され、マウス骨髄細胞由来のＩＬ−６依存性ＭＨ−６０（以下、ＭＨ−６０と呼称する）細胞の増殖を抑制する生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２の製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
癌治療の方法は、主として外科療法、放射線療法、化学療法に大別される。今日におけるこれらの方法の技術の向上あるいは新たな制癌剤の開発により、癌の治療率は５０％ほどにも達している。特に胃癌や子宮癌などは集団検診や定期検診等も整備されてきており、死亡率は減少している一方、最近、食生活や生活習慣の変化あるいは高齢化により、肺癌、肝臓癌、大腸癌、前立腺癌などが増加しているのが現状である。これらの癌は悪性化を伴う傾向があり、悪液質を引き起こす。しかしながら、癌性悪液質に対する有効な化学療法剤は未だ開発されていない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
このように、癌の治療率が５０％を越えた現在、患者のクオリティ・オブ・ライフ（Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ；以下、ＱＯＬと呼称する）の重要性が注目されている。例えば、癌性悪液質は癌患者にしばしば見られる恒常性機能障害（代謝系、内分泌系、免疫系等の異常）であり、体重減少、脂肪筋組織重量減少、高カルシウム血症等の症状が観察される。
【０００４】
悪液質は患者のＱＯＬを低下せしめ、生存期間の短縮、再発率の上昇、抗癌剤に対する応答性の低下等を引き起こし、患者の予後を不良にする。そこで、治療は勿論のこと、術後の再発や予後不良を防止するため、癌悪液質改善作用を持った化学療法剤の開発が強く望まれていた。
【０００５】
このような癌性悪液質を引き起こす本体は未だ不明であるが、しかし最近において、サイトカインの一つであるインターロイキン−６（以下、ＩＬ−６と呼称する）の過剰産生が深く関与していることが報告されている。従って、過剰に産生されたＩＬ−６の作用を阻害する、或いは産生を抑制する化合物は、癌性悪液質を改善する作用を持つと考えられる。
【０００６】
本発明はＩＬ−６活性阻害と言う新たな作用機序を有する新規物質であるＫ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を提供するものである。更に本発明は、ストレプトマイセス属に属する生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を生産する能力を有する微生物を培地に培養して培養物中に生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を蓄積せしめ、該培養物から生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を採取することを特徴とする新規な生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２の製造法を提供するものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
そこで本発明者らは、新規な生理活性物質の探索を目的として種々の土壌から菌株を分離し、その生産する代謝産物について研究を続けた結果、新たに採取された土壌から分離した菌株Ｋ９３−０７１１の培養物中に、ＭＨ−６０細胞の増殖を抑制する物質が産生されることを見出し、次いで、培養物から該有効物質を分離、精製し、その理化学的性質を有する物質は、他に見当たらないことから、この物質をＫ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２と呼称することにした。
【０００８】
本発明はかかる知見に基づいて完成されたものであり、本発明の生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を生産するために使用される菌株としては、例えば本発明者らが土壌から分離したストレプトマイセス  エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）Ｋ９３−０７１１株は、本発明に最も有効に使用される菌株の一例であって、本菌株の菌学的性状を示すと下記の通りである。
【０００９】
Ｉ．形態的性質
栄養菌糸は各種寒天培地上で良く発達し、分断が観察されない。気菌糸はオートミール寒天培地、グリセロール・アスパラギン寒天培地等で豊富に着生し、白色から灰色を呈する。顕微鏡下の観察では、気菌糸は直線状を呈し、２０ケ以上の胞子の連鎖が認められる。胞子の形は円柱状であり、その大きさは１．４×０．７μｍである。胞子の表面は平滑である。菌核、胞子のう及び遊走子は見出されない。
【００１０】
II．各種培地上での培養性状
イー・ビー・シャーリング（Ｅ．Ｂ．Ｓｈｉｒｌｉｎｇ）とデー・ゴットリーブ（Ｄ．Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）の方法（インターナショナル・ジャーナル・オブ・システマティック・バクテリオロジー、第１６巻、第３１３頁、１９６６年）によって調べた本生産菌の培養性状を下記の表１に示す。
【００１１】
色調は標準色として、カラー・ハーモニー・マニュアル第４版（コンテナー・コーポレーション・オブ・アメリカ・シカゴ、１９５８年）を用いて決定し、色標名とともに括弧内にそのコードを併せて記した。以下は特記しない限り、２７℃、２週間目の各培地における観察の結果である。
【００１２】
【表１】
0003641050.tif 000002
0003641050.tif 000003
0003641050.tif 000004
【００１３】
III ．生理学的諸性質
（１）メラニン色素の生成
（イ）チロシン寒天                              陰性
（ロ）ペプトン・イースト鉄寒天                  陰性
（ハ）トリプトン・イースト液                    陰性
（２）チロシナーゼ反応                              陰性
（３）硫化水素の生産                                陰性
（４）硝酸塩の還元                                  陽性
【００１４】
（５）ゼラチンの液化（２１〜２３℃）                陽性
（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）
（６）スターチの加水分解                            陽性
（７）脱脂乳の凝固（３７℃）                        陰性
（８）脱脂乳のペプトン化（３７℃）                  陽性
（９）生育温度範囲                                １５〜３９℃
（１０）炭素源の利用性（プリーダム・ゴトリーブ寒天培地）
利用する；グルコース、アラビノース、キシロース、ラムノース
（１１）セルロースの分解                              陰性
【００１５】
ＩＶ．細胞壁組成
細胞壁のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。
以上、本菌の菌学的性状を要約すると次のとおりである。細胞壁中のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。栄養菌糸は各種寒天培地上でよく発達し、分断が観察された。気菌糸の形態は直線状で長い胞子鎖を形成する。胞子の表面は平滑である。培養上の諸性質としては、栄養菌糸はブラウン系の色調を呈し、気菌糸はホワイト〜グレイ系の色調を呈する。
【００１６】
可溶性色素は、チロシン寒天とペプトン・酵母エキス鉄寒天でブラウン系の色素を僅かに産生する。これらの結果から、本菌株はストレプトマイセス属に属する一菌種と判断され、本菌株をストレプトマイセス  エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）Ｋ９３−０７１１と命名した。本菌株は、ストレプトマイセス  エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）Ｋ９３−０７１１として独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに寄託されている。受託番号はＦＥＲＭ  ＢＰ−５７６４である。
【００１７】
本発明の好ましい菌株として、Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２生産菌について説明したが、放線菌の一般的性状としての菌学上の性状はきわめて変異し易く、一定したものではなく、自然的にあるいは通常行われる紫外線照射、Ｘ線照射または変異誘導体剤、例えばＮ−メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルホネートなどを用いる人工的変異手段により変異することは周知の事実であり、このような人工的変異株は勿論、自然変異株も含め、ストレプトマイセス属に属し、Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を生産する能力を有する菌株は，すべて本発明に使用することができる。
【００１８】
本発明においては、先ずストレプトマイセス属に属するＫ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２生産菌が、適当な培地に培養される。本菌の培養においては、通常の放線菌の培養方法が一般に適用される。培地としては微生物が同化し得る炭素源、消化し得る窒素源、さらに必要に応じ無機塩などを含有させた栄養培地が用いられる。
【００１９】
上記の同化し得る炭素源としては、ブドウ糖、糖密、澱粉、デキストリン、セルロース、コーン・スティープ・リカー、グリセリン、有機酸などが単独または組み合わせて用いられる。消化し得る窒素源としては、例えば市販されているペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・スティープ・リカー、綿実粉、カゼイン、大豆蛋白分解物、アミノ酸、尿素などの有機窒素源、硝酸塩、アンモニウム塩などの無機窒素化合物が単独または組み合わせて用いられる。
【００２０】
更に、必要に応じてナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩などの無機塩類が添加される。更に、培地には、必要に応じて、本菌の生育やＫ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２の生産を促進する微量栄養素、発育促進物質、前駆物質を適当に添加してもよい。
【００２１】
培養は通常振とうまたは通気攪拌培養などの好気的条件下で行うのがよい。工業的には深部通気攪拌培養が好ましい。培地のｐＨは中性付近で培養を行うのが好ましい。培養温度は２０〜３７℃でも行い得るが、通常は２４〜３０℃、好ましくは２７℃付近に保つのがよい。培養時間は、液体培養の場合、通常３〜６日培養を行うと、本化合物類が生成蓄積される。好ましくは培養中の蓄積量が最大に達したときに培養を終了すればよい。
【００２２】
これらの培養組成、培地の液性、培養温度、攪拌速度、通気量などの培養条件は使用する菌株の種類や外部の条件などに応じて好ましい結果が得られるように適宜調節、選択されることはいうまでもない。液体培養において発泡があるときは、シリコン油、植物油、界面活性剤などの消泡剤を適宜使用してもよい。
【００２３】
このようにして得られた培養物中に蓄積された抗生物質は培養濾液または培養菌体中に含まれているので、培養濾液を必要に応じて濾過補助剤、例えばセライト、ハイフロースーパーセル等を加えて濾過するか、または遠心分離して培養濾液と菌体とに分離し、培養濾液と菌体との有機溶媒抽出物を濃縮したものの混合物からＫ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を採取するのが有利である。
【００２４】
また、培養濾液及び菌体を分離しないで、そのまま非親水性有機溶媒により抽出することができる。また、Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２の含有量が培養濾液と菌体のどちらかに極端に多いときはその多いほうから抽出してもよい。培養菌体からＫ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を分離精製するためには、通常、培養濾液と菌体の有機溶媒抽出物を濃縮した物の混合物またはそれぞれを非浸水性溶媒、例えば酢酸エチル、クロロホルムで抽出することにより、Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２が有機溶媒に転溶される。
【００２５】
このようにして得られた有機溶媒層は、必要に応じ種々の脱水剤、たとえば無水硫酸ナトリウム、ビーズゲルなどを加えて脱水された後、減圧下で有機溶媒が留去される。この濃縮操作においてＫ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２は、安定な物質であるが、通常、加熱温度を５０℃以下となるように行うことが好ましい。残渣にヘキサン、石油エーテルなどの有機溶媒を加えてＫ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を沈澱させることができる。
【００２６】
得られた沈澱物は数回ヘキサンなどで洗浄後、吸引濾過または遠心分離によりＫ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２の粗製物を採取することができる。この粗製物をさらに精製するためには、Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２と混雑物との溶解度の差や混じり合わない二液相関の分配の差や各種吸着担体に対する吸着力の差を利用した多くの手段が可能であるが、特にクロマトグラフィーはＫ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２の精製に有効な方法である。
【００２７】
Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２の精製に有効なクロマトグラフィーとしては、シリカゲル、アルミナ、活性炭セルロース、ヒドロキシアパタイトＨＰ−２０などの吸着樹脂などによる吸着クロマトグラフィー、シラン化シリカゲル、オクタデシルシラン化シリカゲルなどを用いる逆相分配クロマトグラフィー、セファデックスＬＨ−２０、トヨパール（商品名、東ソー社製）などを用いる分子ふるいにもとずくゲル濾過クロマトグラフィーなどがを用いるイオン交換クロマトグラフイーなどが挙げられる。
【００２８】
Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２は、これらのクロマトグラフィーや電気泳動、向流分配、限外濾過などの手段を、単独あるいは任意の順序にて組み合わせ、または反復して用いることにより、分離精製することができる。例えば上記の粗製物を少量のクロロホルムに溶かし、シリカゲルに吸着させ、クロロホルム−アセトン系混合溶液を用いてカラムクロマトグラフィーを行い、その活性画分を減圧濃縮後、少量のメタノールに溶かし、これをメタノールで分子ふるいにもとずくゲル濾過クロマトグラフィーを行うことによりＫ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を分離精製することができる。
【００２９】
次に、本発明Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２の理化学的性質および生物学的性質について以下に述べる。
理化学的性質
【００３０】
Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１
（１）性状    ：淡黄色油
（２）元素組成：Ｃ22Ｈ27Ｏ4 Ｎ（高分解能高速原子衝撃（ＦＡＢ）マススペクトルによる）
（３）比旋光度：〔α〕D 24＋４４．４°（ｃ．０．３，ＭｅＯＨ）
（４）分子量  ：３６９（高速原子衝撃（ＦＡＢ）マススペクトルによる）
（５）高分解能スペクトル：
ＦＡＢ−ＭＳ  ３７０（Ｍ＋Ｈ）+ 
【００３１】
（６）紫外・可視部吸収スペクトル：メタノール中で測定した紫外・可視吸収スペクトルは図１に示すとおりであり、２９９（ｌｏｇε  ３．２８）、２４５（ｌｏｇε  ４．２６）、２０７（ｌｏｇε  ４．３８）ｎｍ付近に特徴的な吸収極大を示す
（７）赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム法で測定した赤外線吸収スペクトルは図２に示すとおりであり、３３９０、２９２７、１７４１、１６９５、１６０３、１４８７、１３８１、１２８１、７５６ｃｍ-1に吸収帯を有する
【００３２】
（８）溶剤に対する溶解性：アセトン、酢酸エチル、エチルエーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、クロロホルム及びベンゼンに可溶であり、水に難溶である
（９）呈色反応：硫酸、エールリッヒ、ヨウ素に陽性
（１０）核磁気共鳴スペクトル：バリアン  ジャパン（Ｖａｒｉａｎ  Ｊａｐａｎ）社製、ＸＬ−４００型ＮＭＲスペクトロメータを用いて測定した 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（重クロロホルム溶液中、４００ＭＨｚ）および13Ｃ−ＮＭＲスペクトル（重クロロホルム溶液中、１００．５８ＭＨｚ）はそれぞれ図３及び図４に示すとおりである。また、水素および炭素の化学シフトは下記表２に示す通りである。
【００３３】
【表２】
0003641050.tif 000005
【００３４】
Ｋ９３−０７１１  Ｉ−２
（１）性状    ：淡黄色油
（２）元素組成：Ｃ22Ｈ27Ｏ4 Ｎ（高分解能高速原子衝撃（ＦＡＢ）マススペクトルによる）
（３）比旋光度：〔α〕D 24＋２５．６°（ｃ．０．３，ＭｅＯＨ）
（４）分子量  ：３６９（高速原子衝撃（ＦＡＢ）マススペクトルによる）
（５）紫外・可視部吸収スペクトル：メタノール中で測定した紫外・可視吸収スペクトルは図５に示すとおりであり、２０８（ｌｏｇε  ４．４０）、２４６（ｌｏｇε  ４．２９）、３０４（ｌｏｇε  ３．２８）ｎｍ付近に特徴的な吸収極大を示す
【００３５】
（６）赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム法で測定した赤外線吸収スペクトルは図６に示すとおりであり、３４１０、２９２７、１７３８、１６９３、１５９７、１４８９、１３８０、１２８２、７５６ｃｍ-1に吸収帯を有する
（７）高分解能マススペクトル
ＦＡＢ−ＭＳ  ３７０（Ｍ＋Ｈ）+ 
（８）溶剤に対する溶解性：アセトン、酢酸エチル、エチルエーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、クロロホルム及びベンゼンに可溶であり、水に難溶である
（９）呈色反応：硫酸、エールリッヒ、ヨウ素に陽性
【００３６】
（１０）核磁気共鳴スペクトル：バリアン  ジャパン（Ｖａｒｉａｎ  Ｊａｐａｎ）社製、ＸＬ−４００型ＮＭＲスペクトロメータを用いて測定した 1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（重クロロホルム溶液中、１００．５８ＭＨｚ）および13Ｃ−ＮＭＲスペクトル（重クロロホルム溶液中、４００ＭＨｚ）はそれぞれ図７及び図８に示すとおりである。また、水素および炭素の化学シフトは下記表３に示す通りである。
【００３７】
【表３】
0003641050.tif 000006
0003641050.tif 000007
【００３８】
生物学的性質
ＭＨ−６０細胞によるＩＬ−６活性修飾作用の評価
ＩＬ−６依存性増殖能を有するマウス骨髄由来ＭＨ−６０．ＢＳＦ２（以下、ＭＨ−６０と呼称する）を用い、０．２Ｕ／ｍl のＩＬ−６に対する細胞増殖活性を指標としてＩＬ−６修飾活性を試験した。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ  １６４０培地に懸濁したＭＨ−６０細胞の５×１０3 ／１００μl 個を９６穴のマイクロプレートの各穴に播き、次いで、各濃度のＫ９３−０７１１  Ｉ−１およびＩ−２  ５μl を加え、更に０．２Ｕ／ｍl のＩＬ−６溶液１００μl を添加し、ＣＯ2 インキュベーター内で３７℃で７２時間培養する。
【００３９】
次いで、ＭＴＴ法〔３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ〕により細胞を染色し、測定波長４９２ｎｍ、対照波長６３０ｎｍで比色定量し、細胞増殖率を算定した。また、クローニングによって株化したＩＬ−６非依存性増殖能を有するＭＨ−６０細胞に対する細胞増殖率も同時に測定した。その結果は表４および表５に示すとおりである。
【００４０】
【表４】
0003641050.tif 000008
【００４１】
【表５】
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【００４２】
【発明の効果】
以上の如く、表４および表５の結果から明らかなように、本発明の生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２はともにＩＬ−６作用を選択的に抑制することが認められた。したがって、ＩＬ−６が深く関与すると考えられる疾患、例えば癌性悪液質の改善、あるいは多発性骨髄腫や関節リウマチなどの疾患等に対しての効果が期待される。
【００４３】
【実施例】
次に、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれのみに限定されるものではない。
試験管（φ２×２０ｃｍ）にグルコース０．１％、澱粉２．４％、ペプトン０．３％、酵母エキス０．５％、肉エキス０．３％、炭酸カルシウム０．４％を含む液体培地（ｐＨ７．０）１０ｍｌを滅菌し、これに澱粉１．０％、ＮＺアミン０．３％、酵母エキス０．１％、肉エキス０．１％、炭酸カルシウム０．３％、寒天１．０％を含む寒天斜面培地上に２７℃、６日間培養したストレプトマイセス・エスピーＫ９３−０７１１（ＦＥＲＭ  ＢＰ−５７６４）の斜面培養から一白金耳を接種し、毎分２２０回転するロータリーシェーカーで２７℃、７２時間振とう培養して種母を得た。次に、５００ｍｌ容三角フラスコに試験管と同様の液体培地（ｐＨ７．０）１００ｍｌを滅菌し、これに先に得た種母を２ｍｌ（２％）無菌的に移植した。
【００４４】
１００リットル容ジャーファーメンターに澱粉２．４％、グルコース０．１％、ペプトン０．３％、酵母エキス０．５％、肉エキス０．３％、炭酸カルシウム０．４％、セカード（１００メッシュ）０．５％、微量金属の適量を含む培地７０リットルを仕込み、滅菌した後、上記の方法で得られた種母１４００ｍl （２％）を無菌的に移植し、２７℃、８日間通気攪拌培養して培養液約７０リットルを得た。この培養液に酢酸エチル４０リットルを加えて充分攪拌した後、遠心分離により酢酸エチル抽出液を分離した。
【００４５】
この酢酸エチル層をロータリーエバポレーターにて濃縮し、１１．５ｇの粗エキスを得た。この粗エキスについて、あらかじめクロロホルムで充填された内径８０ｍｍ、長さ２６０ｍｍのシリカゲル（７０〜２３０メッシュ、メルク社製）カラムに吸着せしめ、クロロホルム１リットルで洗浄した後、クロロホルム−メタノール（１００：１）混合溶媒で溶出することにより、Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１及びＩ−２を含む活性画分を７１７．７ｍｇ得た。
【００４６】
さらにこの活性画分を少量のメターノールに溶解し、高速液体クロマトグラフイー（センシューパック・ペガシル、内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ）にかけ、５０％アセトニトリル−Ｈ2 Ｏ溶液を移動相として分取することにより、Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１を１１．８ｍｇ、Ｋ９３−０７１１  Ｉ−２を２０．８ｍｇの純品をそれぞれ得た。
【００４７】
【文献】
１．Gideon Strassmann, Yoshihiro Masui, Richard Chizzonite, and Miranda     Fong, "Mechanism of Experimental Cancer Cachexia. Local Involvement     of IL-1 in Colon-26 Tumor", The Journal of Immunology, 150, 2341-234    5 (1993).
２．Gideon Strassmann, Miranda Fong, John S. Kenney, and Chaim O. Jacob,    "Evidence for the Involvement of Interleukin 6 in Experimental    Cancer Cachexia", Journal of Clinical Investigation, 89, 1681-1684    (1992).
３．R. S. Kerbel, "Expression of Multi-cytokine Resistance and Multi-     growth Factor Independence in Advanced Stage Metastatic Cancer",      American Journal of Pathology, 141, 519-524 (1992).
４．Gideon Strassmann, Chaim O. Jacob, Rovert Evans, Dawson Beall, and      Miranda Fong, "Mechanism of Experimental Cancer Cachexia.     Interaction between Mononuclear Phagocytes and Colon-26 Carcinoma     and Its Relevance to IL-6-Mediated Cancer Cachexia", The Journal of     Immunology, 148, 3674-3678 (1992).
【図面の簡単な説明】
【図１】生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１の紫外線吸収スペクトル（メタノール中）である。
【図２】生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１の赤外線吸収スペクトル（臭化カリウム法）である。
【図３】生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１の 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中、４００ＭＨｚ）である。
【図４】生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−１の13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中、１００．５８ＭＨｚ）である。
【図５】生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−２の紫外線吸収スペクトル（メタノール中）である。
【図６】生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−２の赤外線吸収スペクトル（臭化カリウム法）である。
【図７】生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−２の 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中、４００ＭＨｚ）である。
【図８】生理活性物質Ｋ９３−０７１１  Ｉ−２の13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中、１００．５８ＭＨｚ）である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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