(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0003663382.tif 000042
［式中、
Ｒ1は、水素，ハロ，アルキル，シクロアルキル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，−（ＣＯ）Ｒ15，−ＮＲ13Ｒ14，−（ＣＨ2）rＲ16および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ8Ｒ9からなる群より選択され；
Ｒ2は、水素，ハロ，アルキル，トリハロメチル，ヒドロキシ，アルコキシ，シアノ，−ＮＲ13Ｒ14，−ＮＲ13Ｃ（Ｏ）Ｒ14，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15，アリール，ヘテロアリール，および−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ3は、水素，ハロゲン，アルキル，トリハロメチル，ヒドロキシ，アルコキシ，−（ＣＯ）Ｒ15，−ＮＲ13Ｒ14，アリール，ヘテロアリール，−ＮＲ13Ｓ（Ｏ）2Ｒ14，−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14，−ＮＲ13Ｃ（Ｏ）Ｒ14，−ＮＲ13Ｃ（Ｏ）ＯＲ14および−ＳＯ2Ｒ20（ここで、Ｒ20は、アルキル，アリール，アラルキル，ヘテロアリールおよびヘテロアラルキルである）からなる群より選択され；
Ｒ4は、水素，ハロゲン，アルキル，ヒドロキシ，アルコキシおよび−ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ5は、水素およびアルキルからなる群より選択され；
Ｒ6は−Ｃ（Ｏ）Ｒ10であり、ここで、Ｒ10は−ＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12であり、
Ｒ11は水素または低級未置換アルキルであり；
ｎは２または３であり；および
Ｒ12は−ＮＲ13Ｒ14または−Ｎ+（Ｏ）Ｒ13Ｒ14であり；
Ｒ7は、水素，アルキル，アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ8およびＲ9は、独立して、水素，アルキルおよびアリールからなる群より選択され；
Ｒ13およびＲ14は、独立して、水素，アルキル，ヒドロキシで置換された低級アルキル，アルキルアミノ，シアノアルキル，シクロアルキル，アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され；または
Ｒ13およびＲ14は、一緒になってヘテロシクロ基を形成してもよく；
Ｒ15は、水素，ヒドロキシ，アルコキシおよびアリールオキシからなる群より選択され；
Ｒ16は、ヒドロキシ，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15，−ＮＲ13Ｒ14および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；および
ｒは、１，２，３，または４である］
の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
【請求項２】
式中、
Ｒ6は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ10であり、Ｒ10は−ＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12であり、
Ｒ11は水素または低級未置換アルキルであり；
ｎは２または３であり；および
Ｒ12は−ＮＲ13Ｒ14であり、Ｒ13およびＲ14は独立して、未置換低級アルキルであり；および
Ｒ7は、水素，アルキル，アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択される、
請求項１記載の化合物または塩。
【請求項３】
Ｒ6が、Ｎ−（２−ジメチルアミノエチル）アミノカルボニル，Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）Ｎ−メチルアミノカルボニル，Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）アミノカルボニル，Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）アミノカルボニル，Ｎ−（２−エチルアミノエチル）アミノカルボニル，Ｎ−（３−エチルアミノプロピル）アミノカルボニル，またはＮ−（３−ジエチルアミノプロピル）アミノカルボニルである、請求項１記載の化合物または塩。
【請求項４】
Ｒ6がＮ−（２−ジエチルアミノエチル）アミノカルボニルまたはＮ−（２−エチルアミノエチル）アミノカルボニルである、請求項１記載の化合物または塩。
【請求項５】
化合物が、以下のいずれか
【化２】
0003663382.tif 000043
またはそのＬ−マレイン酸塩からなる群より選択される、請求項１記載の化合物または塩。
【請求項６】
式（Ｉ）：
【化３】
0003663382.tif 000044
［式中、
Ｒ1は水素であり；
Ｒ2はクロロ，フルオロ，またはブロモであり；
Ｒ3は水素であり；
Ｒ4は水素であり；
Ｒ5はメチルであり；
Ｒ6は−Ｃ（Ｏ）Ｒ10であり、Ｒ10は−ＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12であり、
Ｒ11は水素または低級未置換アルキルであり；
ｎは２または３であり；および
Ｒ12は−ＮＲ13Ｒ14であり、Ｒ13およびＲ14は、独立して、未置換低級アルキルであり；および
Ｒ7はメチルである］
の、請求項１記載の化合物または塩。
【請求項７】
Ｒ6は−ＣＯＲ10であり、Ｒ10は−ＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12であり、
Ｒ11は水素または低級未置換アルキルであり；
ｎは２または３であり；および
Ｒ12は−ＮＲ13Ｒ14であり、Ｒ13およびＲ14は、一緒になって、−（ＣＨ2）4−，−（ＣＨ2）5−，−（ＣＨ2）2−Ｏ−（ＣＨ2）2−および−（ＣＨ2）2Ｎ（ＣＨ3）（ＣＨ2）2−から選択される基を形成する、
請求項１記載の化合物または塩。
【請求項８】
Ｒ6が、３−ピロリジン−１−イルプロピルアミノカルボニル，３−モルホリン−４−イルプロピルアミノ−カルボニル，２−ピロリジン−１−イルエチルアミノ−カルボニル，２−モルホリン−４−イルエチルアミノカルボニル，２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル−アミノカルボニル，２−（３，５−ジメチルピペラジン−１−イル）エチル−アミノカルボニル，３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロピルアミノ−カルボニルまたは３−（３，５−ジメチルピペラジン−１−イル）プロピルアミノ−カルボニルである、請求項１記載の化合物または塩。
【請求項９】
Ｒ6は−ＣＯＲ10であり、Ｒ10は−ＮＲ13Ｒ14であり、Ｒ13は水素であり、Ｒ14は、ヒドロキシ，アリール，ヘテロ脂環式，ヘテロアリール，またはカルボキシで置換された低級アルキルである、請求項１記載の化合物または塩。
【請求項１０】
Ｒ6は−ＣＯＲ10であり、Ｒ10は−ＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12であり、
Ｒ11は、水素または低級未置換アルキルであり；
ｎは２または３であり；および
Ｒ12は−ＮＲ13Ｒ14であり、Ｒ13およびＲ14は一緒になって複素環を形成する、請求項１記載の化合物または塩。
【請求項１１】
Ｒ6は−ＣＯＲ10であり、Ｒ10は−ＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12であり、
Ｒ11は、水素または低級未置換アルキルであり；
ｎは２または３であり；および
Ｒ12は−ＮＲ13Ｒ14であり、Ｒ13およびＲ14は、一緒になって、環中にカルボニル基および１または２個の窒素原子を含む５，６または７原子の複素環を形成する、
請求項１記載の化合物または塩。
【請求項１２】
Ｒ6が、２−（３−オキソピペラジン−１−イル）エチルアミノカルボニル，２−（イミダゾリジン−１−イル−２−オン）エチルアミノカルボニル，２−（テトラヒドロピリミジン−１−イル−２−オン）エチルアミノカルボニル，２−（２−オキソピロリジン−１−イル）−エチルアミノカルボニル，３−（３−オキソピペラジン−１−イル）プロピルアミノカルボニル，３−（イミダゾリジン−１−イル−２−オン）プロピル−アミノカルボニル，３−（テトラヒドロピリミジン−１−イル−２−オン）−プロピルアミノカルボニル，または３−（２−オキソピロリジン−１−イル）プロピル−アミノカルボニルである、請求項１記載の化合物または塩。
【請求項１３】
式中、
Ｒ1は水素であり；
Ｒ2は水素，シアノ，フルオロ，クロロ，またはブロモであり；
Ｒ3はフェニルであり；および
Ｒ4は水素である、請求項１記載の化合物または塩。
【請求項１４】
式中、
Ｒ1は、水素，未置換低級アルキル，−Ｃ（Ｏ）ＮＲ8Ｒ9，未置換シクロアルキルまたはアリールであり；
Ｒ2は、水素，ハロ，低級アルコキシ，シアノ，アリールまたは−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14であり、Ｒ13は水素であり、Ｒ14は水素，アリールまたはアルキルであり；
Ｒ3は、水素，低級アルコキシ，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15，−ＮＲ13Ｃ（Ｏ）Ｒ14，アリール，およびヘテロアリールからなる群より選択され；および
Ｒ4は水素である、請求項１記載の化合物または塩。
【請求項１５】
Ｒ6は−ＣＯＲ10であり、Ｒ10は−ＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12であり、Ｒ12は、−Ｎ+（Ｏ-）Ｒ13Ｒ14であり、Ｒ13およびＲ14は、独立して、未置換低級アルキルからなる群より選択される、請求項１記載の化合物または塩。
【請求項１６】
Ｒ6が２−［Ｎ+（Ｏ-）（Ｃ2Ｈ5）2］エチル−アミノカルボニルである、請求項１記載の化合物または塩。
【請求項１７】
式中、
Ｒ5は、水素，またはメチルからなる群より選択され；および
Ｒ7は、メチル，水素またはフェニルからなる群より選択される、
請求項１記載の化合物または塩。
【請求項１８】
式中、
Ｒ1は水素であり；
Ｒ2は水素，シアノ，クロロ，フルオロ，またはブロモであり；
Ｒ3水素であり；および
Ｒ4は水素である、請求項１記載の化合物または塩。
【請求項１９】
式中、
Ｒ1は水素であり；
Ｒ2はシアノ，クロロ，フルオロ，またはブロモであり；
Ｒ3は水素であり；および
Ｒ4は水素である、
請求項１記載の化合物または塩。
【請求項２０】
化合物が、以下のいずれか：
【化４】
0003663382.tif 000045
またはそのトシル酸塩からなる群より選択される、請求項１記載の化合物または塩。
【請求項２１】
化合物が、以下のいずれか：
【化５】
0003663382.tif 000046
またはそのクエン酸塩からなる群より選択される、請求項１記載の化合物または塩。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
相互参照情報
本出願は，米国特許仮出願６０／１８２，７１０（２０００年２月１５日出願），６０／２１６，４２２（２０００年７月６日出願）および６０／２４３，５３２（２０００年１０月２７日出願）に基づく優先権を主張する。これらの開示はその全体を本明細書の一部としてここに引用する。
【０００２】
発明の背景
発明の分野
本発明は，蛋白質キナーゼ（"ＰＫ"）の活性を調節するある種の３−ピロール置換２−インドリノン化合物に関する。したがって，本発明の化合物は，異常なＰＫ活性に関連する疾患の治療に有用である。これらの化合物を含む医薬組成物，これらの化合物を含む医薬組成物を用いて疾病を治療する方法，およびこれらを製造する方法も開示される。
【０００３】
背景技術
以下は，背景情報としてのみ提供され，本発明に対する従来技術であると認めるものではない。
【０００４】
ＰＫは，蛋白質のチロシン，セリンおよびトレオニン残基上のヒドロキシ基のリン酸化を触媒する酵素である。この外観上は単純な活性の結果は圧倒的である。細胞成長，分化および増殖，すなわち，細胞生命のほぼすべての観点が種々の仕方でＰＫ活性に依存する。さらに，異常なＰＫ活性は，比較的生命を脅かさない疾患（例えば乾癬）から，非常に悪性の疾患（例えば神経膠細胞腫（脳癌））までの範囲の疾患の宿主と関連づけられてきた。
【０００５】
ＰＫは，慣用的に２種類に分類することができる：蛋白質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）およびセリン−トレオニンキナーゼ（ＳＴＫ）。
【０００６】
ＰＫ活性の主な観点の１つは，成長因子レセプターに対するその関与である。成長因子レセプターは細胞表面蛋白質である。成長因子リガンドが結合すると，成長因子レセプターは活性型に変換され，これが細胞膜の内表面上の蛋白質と相互作用する。この相互作用は，レセプターおよび他の蛋白質のチロシン残基のリン酸化を引き起こし，細胞内部で種々の細胞質シグナリング分子との複合体を形成する。次にこれらの複合体は多くの細胞性応答，例えば，細胞分裂（増殖），細胞分化，細胞成長，細胞外微細環境への代謝的効果の発現等を行う。さらに詳しい議論については，Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｕｌｌｒｉｃｈ，Ｎｅｕｒｏｎ，９：３０３−３９１，１９９２（本明細書において完全に記載されているように，図面を含め本明細書の一部としてここに引用する）を参照されたい。
【０００７】
レセプターチロシンキナーゼ（"ＲＴＫ"）は，ＰＫ活性を有する成長因子レセプターである。これらは，多様な生物学的活性を有する貫膜レセプターの大きなファミリーを含む。現在のところ，ＲＴＫの少なくとも１９個の異なるサブファミリーが同定されている。これらのサブファミリーの例は，"ＨＥＲ"ＲＴＫと称されるサブファミリーであり，これにはＥＧＦＲ（上皮成長因子レセプター），ＨＥＲ２，ＨＥＲ３およびＨＥＲ４が含まれる。これらのＲＴＫは，細胞外グリコシル化リガンド結合ドメイン，貫膜ドメイン，および蛋白質上のチロシン残基をリン酸化しうる細胞内細胞質触媒ドメインから構成される。
【０００８】
別のＲＴＫサブファミリーは，インスリンレセプター（ＩＲ），インスリン様成長因子Ｉレセプター（ＩＧＦ−１Ｒ）およびインスリンレセプター関連レセプター（ＩＲＲ）を含む。ＩＲおよびＩＧＦ−１Ｒはインスリン，ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−ＩＩと相互作用して，２つの完全に細胞外のグリコシル化されたαサブユニットと，細胞膜を横断しチロシンキナーゼドメインを含有する２つのβサブユニットのヘテロ４量体を形成する。
【０００９】
第３のＲＴＫサブファミリーは，血小板由来成長因子レセプター（"ＰＤＧＦＲ"）群と称され，これにはＰＤＧＦＲα，ＰＤＧＦＲβ，ＣＳＦＩＲ，ｃ−ｋｉｔおよびｃ−ｆｍｓが含まれる。これらのレセプターは，可変数のイムノグロビン様ループからなるグリコシル化された細胞外ドメイン，およびチロシンキナーゼドメインが関連のないアミノ酸配列により分断されている細胞内ドメインから構成される。
【００１０】
別の群は，そのＰＤＧＦＲサブファミリーとの類似性のため，しばしばＰＤＧＦＲサブファミリーに包摂される，胎児肝キナーゼ（"ｆｌｋ"）レセプターサブファミリーである。この群は，キナーゼ挿入ドメイン−レセプター胎児肝キナーゼ−１（ＫＤＲ／ＦＬＫ−１，ＶＥＧＦ−Ｒ２），ｆｌｋ−１Ｒ，ｆｌｋ−４およびｆｍｓ様チロシンキナーゼ１（ｆｌｔ−１）からなると考えられている。
【００１１】
チロシンキナーゼ成長因子レセプターファミリーの別のメンバーは，繊維芽細胞成長因子（"ＦＧＦ"）レセプターサブグループ群である。この群は，４つのレセプター，ＦＧＦＲ１−４，および７つのリガンド，ＦＧＦ１−７から構成される。まだあまり明確にされていないが，レセプターは，可変数のイムノグロビン様ループを含有するグリコシル化された細胞外ドメイン，およびチロシンキナーゼ配列が関係のないアミノ酸配列の領域により分断されている細胞内ドメインから構成されるようである。
【００１２】
チロシンキナーゼ成長因子レセプターファミリーのさらに別のメンバーは血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ"）レセプターサブグループである。ＶＥＧＦは，ＰＤＧＦに類似する二量体の糖蛋白質であるが，異なる生物学的機能およびインビボでの標的細胞特異性を有する。特に，ＶＥＧＦは，現在，脈管形成および新脈管形成において必須の役割を果たすと考えられている。
【００１３】
既知のＲＴＫサブファミリーのより完全なリストは，Ｐｌｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＤＮ＆Ｐ，７（６）：３３４−３３９（１９９４）（本明細書において完全に記載されているように，図面を含め本明細書の一部としてここに引用する）に記載されている。
【００１４】
ＲＴＫに加え，"非レセプターチロシンキナーゼ"または"細胞性チロシンキナーゼと称される，完全に細胞内のＰＴＫのファミリーが存在する。本明細書においては"ＣＴＫ"と略されるこの後者の定義を用いる。ＣＴＫは細胞外および貫膜ドメインを含有しない。現在のところ，１１個のサブファミリー（Ｓｒｃ，Ｆｒｋ，Ｂｔｋ，Ｃｓｋ，Ａｂｌ，Ｚａｐ７０，Ｆｅｓ，Ｆｐｓ，Ｆａｋ，ＪａｋおよびＡｃｋ）の２４個を越えるＣＴＫが同定されている。Ｓｒｃサブファミリーは，これまでのところ，ＣＴＫのもっとも大きい群であるようであり，Ｓｒｃ，Ｙｅｓ，Ｆｙｎ，Ｌｙｎ，Ｌｃｋ，Ｂｌｋ，Ｈｃｋ，ＦｇｒおよびＹｒｋを含む。ＣＴＫのより詳細な議論については，Ｂｏｌｅｎ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，８：２０２３−２０３１（１９９３）（本明細書において完全に記載されているように，図面を含め本明細書の一部としてここに引用する）を参照されたい。
【００１５】
セリン／トレオニンキナーゼもしくはＳＴＫは，ＣＴＫと同様に，主として細胞内にあるが，ＳＴＫタイプのレセプターキナーゼは少ない。ＳＴＫはもっとも一般的なサイトゾルキナーゼである。すなわち，細胞質オルガネラおよび細胞骨格以外の，細胞質のその部分でその機能を行うキナーゼである。サイトゾルは，細胞の中間代謝および生合成活性のほとんどが生ずる細胞中の領域である。例えば，蛋白質がリボソーム上で合成されるのはサイトゾル内である。
【００１６】
ＲＴＫ，ＣＴＫおよびＳＴＫはすべて，病原性状態，特に癌を含む状態の宿主であることが示唆されてきた。ＰＴＫと関連づけられてきた他の病原性状態には，限定されないが，乾癬，肝硬変，糖尿病，動脈硬化，新脈管形成，再狭窄，眼性疾患，慢性関節リウマチおよび他の炎症性疾患，自己免疫疾患等の免疫疾患，アテローム性動脈硬化等の心臓血管疾患，および種々の腎臓疾患が含まれる。
【００１７】
癌に関しては，腫瘍の発達を推進する過剰な細胞増殖を説明する主要な仮説の２つは，ＰＫにより制御されることが知られている機能に関連する。すなわち，悪性細胞成長は細胞分裂および／または分化を調節するメカニズムの故障に起因することが示唆されている。多数のプロトオンコジンの蛋白質産物は，細胞成長および分化を制御するシグナル伝達経路に関与することが示されている。これらのプロトオンコジンの蛋白質産物には，上で議論した，細胞外成長因子，貫膜成長因子ＰＴＫレセプター（ＲＴＫ），細胞質ＰＴＫ（ＣＴＫ）およびサイトゾルＳＴＫが含まれる。
【００１８】
ＰＫに関連する細胞活性と広範な種類のヒト疾患との間の見かけ上の連結の観点から，ＰＫ活性を調節する方法を同定しようとする試みに多大な努力が払われていることは驚くべきことではない。これらのいくつかには，実際の細胞プロセスに関与する分子を模倣する大きな分子を用いるバイオミメティック方法が含まれる（例えば，変異体リガンド（米国特許４，９６６，８４９）；可溶性レセプターおよび抗体（ＷＯ９４／１０２０２，Ｋｅｎｄａｌｌ  ａｎｄ  Ｔｈｏｍａｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９０：１０７０５−０９（１９９４），Ｋｉｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：８４１−８４４（１９９３））；ＲＮＡリガンド（Ｊｅｌｉｎｅｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３３：１０４５０−５６）；Ｔａｋａｎｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．Ｃｅｌｌ，４：３５８Ａ（１９９３）；Ｋｉｎｓｅｌｌａ，  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．１９９：５６６−６２（１９９２）；Ｗｒｉｇｈｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｈｙｓ．，１５２：４４８−５７）およびチロシンキナーゼ阻害剤（ＷＯ９４／０３４２７；ＷＯ９２／２１６６０；ＷＯ９１／１５４９５；ＷＯ９４／１４８０８；米国特許５，３３０，９９２；Ｍａｒｉａｎｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．３５：２２６８（１９９４））。
【００１９】
最近，ＰＫ阻害剤として作用する小分子を同定する試みがなされている。例えば，ビス単環，二環およびヘテロ環アリール化合物（ＰＣＴ  ＷＯ９２／２０６４２），ビニレンアザインドール誘導体（ＰＣＴ  ＷＯ９４／１４８０８）および１−シクロプロピル−４−ピリジルキノロン類（米国特許５，３３０，９９２）が，チロシンキナーゼ阻害剤として記載されている。スチリル化合物（米国特許５，２１７，９９９），スチリル置換ピリジル化合物（米国特許５，３０２，６０６），キナゾリン誘導体（欧州特許出願０５６６２６６Ａ１），セレナインドール類およびセレニド類（ＰＣＴ  ＷＯ９４／０３４２７），三環ポリヒドロキシル化合物（ＰＣＴ  ＷＯ９２／２１６６０）およびベンジルホスホン酸化合物（ＰＣＴ  ＷＯ９１／１５４９５）はすべて，癌の治療において有用なＰＴＫ阻害剤として記載されている。
【００２０】
発明の概要
本発明は，ＰＫ調節能力を示し，したがって異常なＰＫ活性に関連する疾患の治療に有用なある種の３−ピロール置換２−インドリノン化合物に関する。
【００２１】
したがって，１つの観点においては，本発明は，式（Ｉ）：
【化４】
0003663382.tif 000002
［式中，
Ｒ1は，水素，ハロ，アルキル，シクロアルキル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，−（ＣＯ）Ｒ15，−ＮＲ13Ｒ14，−（ＣＨ2）rＲ16および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ8Ｒ9からなる群より選択され；
Ｒ2は，水素，ハロ，アルキル，トリハロメチル，ヒドロキシ，アルコキシ，シアノ，−ＮＲ13Ｒ14，−ＮＲ13Ｃ（Ｏ）Ｒ14，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15，アリール，ヘテロアリール，−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14および−ＳＯ2Ｒ20（ここで，Ｒ20は，アルキル，アリール，アルアルキル，ヘテロアリールおよびヘテロアルアルキルである）からなる群より選択され；
Ｒ3は，水素，ハロゲン，アルキル，トリハロメチル，ヒドロキシ，アルコキシ，−（ＣＯ）Ｒ15，−ＮＲ13Ｒ14，アリール，ヘテロアリール，−ＮＲ13Ｓ（Ｏ）2Ｒ14，−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14，−ＮＲ13Ｃ（Ｏ）Ｒ14，−ＮＲ13Ｃ（Ｏ）ＯＲ14および−ＳＯ2Ｒ20（ここで，Ｒ20は，アルキル，アリール，アルアルキル，ヘテロアリールおよびヘテロアルアルキルである）からなる群より選択され；
Ｒ4は，水素，ハロゲン，アルキル，ヒドロキシ，アルコキシおよび−ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ5は，水素，アルキルおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ10からなる群より選択され；
Ｒ6は，水素，アルキルおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ10からなる群より選択され；
Ｒ7は，水素，アルキル，アリール，ヘテロアリール，−Ｃ（Ｏ）Ｒ17および−Ｃ（Ｏ）Ｒ10からなる群より選択され，またはＲ6およびＲ7は，一緒になって−（ＣＨ2）4−，−（ＣＨ2）5−および−（ＣＨ2）6−からなる群より選択される基を形成してもよく；ただし，Ｒ5，Ｒ6またはＲ7の少なくとも１つは−Ｃ（Ｏ）Ｒ10でなければならず；
Ｒ8およびＲ9は，独立して，水素，アルキルおよびアリールからなる群より選択され；
Ｒ10は，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，−Ｎ（Ｒ11）（ＣＨ2）nＲ12および−ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ11は，水素およびアルキルからなる群より選択され；
Ｒ12は，−ＮＲ13Ｒ14，ヒドロキシ，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15，アリール，ヘテロアリール，−Ｎ+（Ｏ-）Ｒ13Ｒ14，Ｎ（ＯＨ）Ｒ13，および−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒa（ここで，Ｒaは，未置換アルキル，ハロアルキル，またはアルアルキルである）からなる群より選択され；
Ｒ13およびＲ14は，独立して，水素，アルキル，シアノアルキル，シクロアルキル，アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され；または
Ｒ13およびＲ14は，一緒になって複素環基を形成してもよく；
Ｒ15は，水素，ヒドロキシ，アルコキシおよびアリールオキシからなる群より選択され；
Ｒ16は，ヒドロキシ，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15，−ＮＲ13Ｒ14および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ17は，アルキル，シクロアルキル，アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ20は，アルキル，アリール，アルアルキルまたはヘテロアリールであり；および
ｎおよびｒは，独立して，１，２，３，または４である］
の３−ピロール置換２−インドリノン，またはその薬学的に許容しうる塩に関する。
【００２２】
好ましくは，Ｒ1は，水素，ハロ，アルキル，シクロアルキル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15，−ＮＲ13Ｒ14−（ＣＨ2）rＲ16および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ8Ｒ9からなる群より選択され；
Ｒ2は，水素，ハロ，アルキル，トリハロメチル，ヒドロキシ，アルコキシ，−ＮＲ13Ｒ14，−ＮＲ13Ｃ（Ｏ）Ｒ14，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15，アリール，ヘテロアリール，および−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ3は，水素，ハロゲン，アルキル，トリハロメチル，ヒドロキシ，アルコキシ，−（ＣＯ）Ｒ15，−ＮＲ13Ｒ14，アリール，ヘテロアリール，−ＮＲ13Ｓ（Ｏ）2Ｒ14，−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14，−ＮＲ13Ｃ（Ｏ）Ｒ14，および−ＮＲ13Ｃ（Ｏ）ＯＲ14からなる群より選択され；
Ｒ4は，水素，ハロゲン，アルキル，ヒドロキシ，アルコキシおよび−ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ5は水素，アルキルおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ10からなる群より選択され；
Ｒ6は，水素，アルキルおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ10からなる群より選択され；
Ｒ7は，水素，アルキル，アリール，ヘテロアリール，−Ｃ（Ｏ）Ｒ17および−Ｃ（Ｏ）Ｒ10からなる群より選択され；
Ｒ6およびＲ7は，一緒になって−（ＣＨ2）4−，−（ＣＨ2）5−および−（ＣＨ2）6−からなる群より選択される基を形成してもよく；ただし，Ｒ5，Ｒ6またはＲ7の少なくとも１つは−Ｃ（Ｏ）Ｒ10でなければならず；
Ｒ8およびＲ9は，独立して，水素，アルキルおよびアリールからなる群より選択され；
Ｒ10はヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，−Ｎ（Ｒ11）（ＣＨ2）nＲ12および−ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ11は，水素およびアルキルからなる群より選択され；
Ｒ12は，−ＮＲ13Ｒ14，ヒドロキシ，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15，アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ13およびＲ14は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され；Ｒ13およびＲ14は，一緒になって−（ＣＨ2）4−，−（ＣＨ2）5−，−（ＣＨ2）2Ｏ（ＣＨ2）2−，および（ＣＨ2）2Ｎ（ＣＨ3）（ＣＨ2）2−からなる群より選択される基を形成してもよく；
Ｒ15は，水素，ヒドロキシ，アルコキシおよびアリールオキシからなる群より選択され；
Ｒ16は，ヒドロキシ，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15，−ＮＲ13Ｒ14および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ17は，アルキル，シクロアルキル，アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され；およびｎおよびｒは，独立して，１，２，３，または４である。
【００２３】
第２の観点においては，本発明は，式（Ｉ）の１またはそれ以上の化合物またはその薬学的に許容しうる塩および薬学的に許容しうる賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【００２４】
第３の観点においては，本発明は，生物，特にヒトにおいて，蛋白質キナーゼ，特に，レセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ），非レセプター蛋白質チロシンキナーゼ（ＣＴＫ）およびセリン／トレオニン蛋白質キナーゼ（ＳＴＫ）の異常な活性により媒介される疾病を治療する方法に関する。該方法は，前記生物に式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を投与することを含む。そのような疾病には，例として，限定されないが，癌，糖尿病，肝硬変，心臓血管疾病，例えばアテローム性動脈硬化症，新脈管形成，免疫学的疾病，例えば自己免疫疾病および腎臓疾病が含まれる。
【００２５】
第４の観点においては，本発明は，本発明の化合物を用いて，ＰＫ，特に，レセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ），非レセプター蛋白質チロシンキナーゼ（ＣＴＫ）およびセリン／トレオニン蛋白質キナーゼ（ＳＴＫ）の触媒活性を調節する方法に関し，該方法は，インビトロで行ってもインビボで行ってもよい。特に，その触媒活性が本発明の化合物により調節されるレセプター蛋白質キナーゼは，ＥＧＦ，ＨＥＲ２，ＨＥＲ３，ＨＥＲ４，ＩＲ，ＩＧＦ−１Ｒ，ＩＲＲ，ＰＤＧＦＲａ，ＰＤＧＦＲ，ＣＳＦＩＲ，Ｃ−Ｋｉｔ，Ｃ−ｆｍｓ，Ｆｌｋ−１Ｒ，Ｆｌｋ４，ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１，Ｆｌｔ−１，ＦＧＦＲ−１Ｒ，ＦＧＦＲ−２Ｒ，ＦＧＦＲ−３ＲおよびＦＧＦＲ−４Ｒからなる群より選択される。その触媒活性が本発明の化合物により調節される細胞性チロシンキナーゼは，Ｓｒｃ，Ｆｒｋ，Ｂｔｋ，Ｃｓｋ，Ａｂｌ，ＺＡＰ７０，Ｆｅｓ／Ｆｐｓ，Ｆａｋ，Ｊａｋ，Ａｃｋ，Ｙｅｓ，Ｆｙｎ，Ｌｙｎ，Ｌｃｋ，Ｂｌｋ，Ｈｃｋ，ＦｇｒおよびＹｒｋからなる群より選択される。その触媒活性が本発明の化合物により調節されるセリン−トレオニン蛋白質キナーゼは，ＣＤＫ２およびＲａｆからなる群より選択される。
【００２６】
第５の観点においては，本発明は，異常なＰＫ活性により媒介される疾病を治療するのに有用な医薬品の製造における，式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
【００２７】
第６の観点においては，本発明は，式（ＩＩ）：
【化５】
0003663382.tif 000003
［式中，
Ｒ5は，水素，アルキルおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ10からなる群より選択され；
Ｒ6は，水素，アルキルおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ10からなる群より選択され；
Ｒ7は，水素，アルキル，アリール，ヘテロアリール，−Ｃ（Ｏ）Ｒ17および−Ｃ（Ｏ）Ｒ10からなる群より選択され；
Ｒ6およびＲ7は，一緒になって−（ＣＨ2）4−，−（ＣＨ2）5−および−（ＣＨ2）6−からなる群より選択される基を形成してもよく；ただし，Ｒ5，Ｒ6またはＲ7の少なくとも１つは−Ｃ（Ｏ）Ｒ10でなければならず；
Ｒ10は，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，−Ｎ（Ｒ11）（ＣＨ2）ｎＲ12および−ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ11は，水素およびアルキルからなる群より選択され；
Ｒ12は，−ＮＲ13Ｒ14，ヒドロキシ，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15，アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ13およびＲ14は，独立して，水素，アルキル，シアノアルキル，シクロアルキル，アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され；またはＲ13およびＲ14は，一緒になって複素環基を形成してもよく；
Ｒ15は，水素，ヒドロキシ，アルコキシおよびアリールオキシからなる群より選択され；
Ｒ17は，アルキル，シクロアルキル，アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され；および
ｎは１，２，３，または４である］
の中間体に関する。
【００２８】
好ましくは，式ＩＩの化合物において，Ｒ5またはＲ6は−Ｃ（Ｏ）Ｒ10であり；
Ｒ6は，水素，およびアルキル，より好ましくは水素またはメチルからなる群より選択され；
Ｒ5は，水素，およびアルキルからなる群より選択され，より好ましくはＲ6が−ＣＯＲ10であるとき水素またはメチルであり；
Ｒ6は，水素，およびアルキルからなる群より選択され，より好ましくはＲ5が−ＣＯＲ10であるとき水素またはメチルであり；
Ｒ7は，水素，アルキル，およびアリールからなる群より選択され，より好ましくは水素，メチルまたはフェニルであり；
Ｒ10は，ヒドロキシ，アルコキシ，−Ｎ（Ｒ11）（ＣＨ2）nＲ12および−ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され，
Ｒ11は水素およびアルキルからなる群より選択され，より好ましくは水素またはメチルであり；
Ｒ12は−ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ13およびＲ14は，独立して，水素，またはアルキルからなる群より選択され；または，Ｒ13およびＲ14は，一緒になって複素環基を形成してもよく；および
ｎは１，２または３である。
【００２９】
上述の好ましい群において，中間体化合物のより好ましい群は，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ11，Ｒ12，Ｒ13またはＲ14が，独立して，以下の"好ましい態様"の節に記載される基であるものである。
【００３０】
第７の観点においては，本発明は，式（Ｉ）の化合物を製造する方法に関する。
【００３１】
最後に，本発明はまた，前記蛋白質キナーゼを発現する細胞を本発明の化合物または塩と接触させ，次にその影響について前記細胞をモニターすることにより，蛋白質キナーゼの触媒活性を調節する化学化合物を同定する方法に関する。
【００３２】
発明の詳細な説明
定義
特に記載しない限り，明細書および特許請求の範囲において用いられる以下の用語は，以下に議論される意味を有する。
【００３３】
"アルキル"とは，１−２０個の炭素原子を含む飽和脂肪族炭化水素を表す（本明細書において数値範囲，例えば"１−２０"と記載される場合，これはその基（この場合はアルキル基）が，１個の炭素原子，２個の炭素原子，３個の炭素原子，以下同様に，２０個までの炭素原子を含んでいてもよいことを意味する）。１−４個の炭素原子を含むアルキル基は，低級アルキル基と称される。前記低級アルキル基が置換基を有しない場合，これらは未置換低級アルキル基と称される。より好ましくは，アルキル基は，１−１０個の炭素原子を有する中程度のサイズのアルキル，例えば，メチル，エチル，プロピル，２−プロピル，ｎ−ブチル，イソブチル，ｔｅｒｔ−ブチル，ペンチル等である。最も好ましくは，これは１−４個の炭素原子を有する低級アルキル，例えば，メチル，エチル，プロピル，２−プロピル，ｎ−ブチル，イソブチル，またはｔｅｒｔ−ブチル等である。アルキル基は置換されていてもされていなくてもよい。置換されている場合，置換基は，好ましくは，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルコキシ，アリール（互いに独立して，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上の基，好ましくは１，２または３個の基で任意に置換されている），アリールオキシ（互いに独立して，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上の基，好ましくは１，２または３個の基で任意に置換されている），環中に１−３個の窒素原子を有し，環中の炭素が互いに独立して，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上の基，好ましくは１，２または３個の基で任意に置換されている６員のヘテロアリール，窒素，酸素およびイオウからなる群より選択される１−３個の複素原子を有し，基の炭素および窒素原子は，互いに独立して，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上の基，好ましくは１，２または３個の基で任意に置換されている５員のヘテロアリール，窒素，酸素およびイオウからなる群より選択される１−３個の複素原子を有し，基の炭素および窒素（存在する場合には）原子は互いに独立して，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上の基，好ましくは１，２または３個の基で任意に置換されている５員または６員のヘテロ脂環式基，メルカプト，（未置換低級アルキル）チオ，アリールチオ（互いに独立して，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上の基，好ましくは１，２または３個の基で任意に置換されている），シアノ，アシル，チオアシル，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，ニトロ，Ｎ−スルホンアミド，Ｓ−スルホンアミド，Ｒ18Ｓ（Ｏ）−，Ｒ18Ｓ（Ｏ）2−，−Ｃ（Ｏ）ＯＲ18，Ｒ18Ｃ（Ｏ）Ｏ−，および−ＮＲ18Ｒ19（ここで，Ｒ18およびＲ19は，独立して，水素，未置換低級アルキル，トリハロメチル，未置換（Ｃ3−Ｃ6）シクロアルキル，未置換低級アルケニル，未置換低級アルキニルおよびアリール（互いに独立して，ハロ，ヒ���ロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上の基，好ましくは１，２または３個の基で任意に置換されている）からなる群より選択される）からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の，より好ましくは１−３個の，さらにより好ましくは１または２個の置換基である。
【００３４】
好ましくは，アルキル基は，独立して，ヒドロキシ，窒素，酸素およびイオウからなる群より選択される１−３個の複素原子を有し，環中の炭素および窒素（存在する場合には）原子は，互いに独立して，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上の基，好ましくは１，２または３個の基で任意に置換されている５員または６員のヘテロ脂環式基，窒素，酸素およびイオウからなる群より選択される１−３個の複素原子を有し，基の炭素および窒素原子は互いに独立して，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上の基，好ましくは１，２または３個の基で任意に置換されている５員のヘテロアリール，環中に１−３個の窒素原子を有し，環中の炭素が互いに独立して，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上の基，好ましくは１，２または３個の基で任意に置換されている６員のヘテロアリール，または−ＮＲ18Ｒ19（ここで，Ｒ18およびＲ19は，独立して，水素，未置換低級アルキルからなる群より選択される）からなる群より選択される１または２個の置換基で置換されている。さらにより好ましくは，アルキル基は，互いに独立して，ヒドロキシ，ジメチルアミノ，エチルアミノ，ジエチルアミノ，ジプロピルアミノ，ピロリジノ，ピペリジノ，モルホリノ，ピペラジノ，４−低級アルキルピペラジノ，フェニル，イミダゾリル，ピリジニル，ピリダジニル，ピリミジニル，オキサゾリル，トリアジニル等の１または２個の置換基で置換されている。
【００３５】
"シクロアルキル"とは，３−８員の全炭素単環，全炭素５員／６員または６員／６員縮合二環または多環縮合環（"縮合"環系とは，系の各環が系の他の環と隣接する１対の炭素原子を互いに共有することを意味する）基を表し，ここで，１またはそれ以上の環は１またはそれ以上の二重結合を含んでいてもよいが，いずれの環も完全に共役したパイ電子系を有しない。
【００３６】
シクロアルキル基の例は，限定されないが，シクロプロパン，シクロブタン，シクロペンタン，シクロペンテン，シクロヘキサン，シクロヘキサジエン，アダマンタン，シクロヘプタン，シクロヘプタトリエン等である。シクロアルキル基は置換されていてもされていなくてもよい。置換されている場合，置換基は，好ましくは，未置換低級アルキル，トリハロアルキル，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルコキシ，アリール（互いに独立して，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上，好ましくは１または２個の基で任意に置換されている），アリールオキシ（互いに独立して，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上，好ましくは１または２個の基で任意に置換されている），環中に１−３個の窒素原子を有し，環中の炭素が互いに独立して，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上，好ましくは１または２個の基で任意に置換されている６員のヘテロアリール，窒素，酸素およびイオウからなる群より選択される１−３個の複素原子を有し，基の炭素および窒素原子が互いに独立して，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上，好ましくは１または２個の基で任意に置換されている５員のヘテロアリール，窒素，酸素およびイオウからなる群より選択される１−３個の複素原子を有し，基の炭素および窒素（存在する場合には）原子が互いに独立して，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上，好ましくは１または２個の基で任意に置換されている５員または６員のヘテロ脂環式基，メルカプト，（未置換低級アルキル）チオ，アリールチオ（互いに独立して，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルまたは未置換低級アルコキシ基の１またはそれ以上，好ましくは１または２個の基で任意に置換されている），シアノ，アシル，チオアシル，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，ニトロ，Ｎ−スルホンアミド，Ｓ−スルホンアミド，Ｒ18Ｓ（Ｏ）−，Ｒ18Ｓ（Ｏ）2−，−Ｃ（Ｏ）ＯＲ18，Ｒ18Ｃ（Ｏ）Ｏ−，および−ＮＲ18Ｒ19（上で定義したとおりである）からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の，より好ましくは１または２個の置換基である。
【００３７】
"アルケニル"基は，少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素二重結合から構成される，本明細書において定義される低級アルキル基を表す。代表的例には，限定されないが，エテニル，１−プロペニル，２−プロペニル，１−，２−，または３−ブテニル等が含まれる。
【００３８】
"アルキニル"基は，少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素三重結合から構成される，本明細書において定義される低級アルキル基を表す。代表的例には，限定されないが，エチニル，１−プロピニル，２−プロピニル，１−，２−，または３−ブチニル等が含まれる。
【００３９】
"アリール"とは，完全に共役したパイ電子系を有する，全炭素単環または縮合多環（すなわち，隣接する炭素原子対を共有する環）基を表す。アリール基の例としては，限定されないが，フェニル，ナフタレニルおよびアントラセニルが挙げられる。アリール基は置換されていてもされていなくてもよい。置換されている場合には，置換基は，好ましくは，未置換低級アルキル，トリハロアルキル，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルコキシ，メルカプト，（未置換低級アルキル）チオ，シアノ，アシル，チオアシル，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，ニトロ，Ｎ−スルホンアミド，Ｓ−スルホンアミド，Ｒ18Ｓ（Ｏ）−，Ｒ18Ｓ（Ｏ）2−ｔ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ18，Ｒ18Ｃ（Ｏ）Ｏ−，および−ＮＲ18Ｒ19（Ｒ18およびＲ19は上で定義したとおりである）からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の，より好ましくは１，２または３個，さらにより好ましくは１または２個の基である。好ましくは，アリール基は，ハロ，未置換低級アルキル，トリハロアルキル，ヒドロキシ，メルカプト，シアノ，Ｎ−アミド，モノまたはジアルキルアミノ，カルボキシ，またはＮ−スルホンアミドから独立して選択される１または２個の置換基で任意に置換されている。
【００４０】
"ヘテロアリール"とは，Ｎ，Ｏ，またはＳから選択される１，２または３個の環複素原子を含み，残りの環原子がＣであり，かつ，完全に共役したパイ電子系を有する，５−１２個の環原子の単環式または縮合環（すなわち，隣接する１対の原子を共有する複数の環）を表す。未置換ヘテロアリールの例には，限定されないが，ピロール，フラン，チオフェン，イミダゾール，オキサゾール，チアゾール，ピラゾール，ピリジン，ピリミジン，キノリン，イソキノリン，プリンおよびカルバゾールが含まれる。ヘテロアリール基は，置換されていてもされていなくてもよい。置換されている場合，置換基は，好ましくは，未置換低級アルキル，トリハロアルキル，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルコキシ，メルカプト，（未置換低級アルキル）チオ，シアノ，アシル，チオアシル，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，ニトロ，Ｎ−スルホンアミド，Ｓ−スルホンアミド，Ｒ18Ｓ（Ｏ）−，Ｒ18Ｓ（Ｏ）2−，−Ｃ（Ｏ）ＯＲ18，Ｒ18Ｃ（Ｏ）Ｏ−，および−ＮＲ18Ｒ19（Ｒ18およびＲ19は上で定義したとおりである）からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の，より好ましくは１，２または３個の，さらにより好ましくは１または２個の基である。好ましくは，ヘテロアリール基は，ハロ，未置換低級アルキル，トリハロアルキル，ヒドロキシ，メルカプト，シアノ，Ｎ−アミド，モノまたはジアルキルアミノ，カルボキシ，またはＮ−スルホンアミドから独立して選択される１または２個の置換基で任意に置換されている。
【００４１】
"ヘテロ脂環式"とは，５−９個の環原子を有し，１または２個の環原子がＮ，Ｏ，またはＳ（Ｏ）n（ｎは０−２の整数）から選択される複素原子であり，残りの環原子がＣである，単環または縮合環基を表す。環はさらに１またはそれ以上の二重結合を有していてもよい。しかし，環は完全に共役したパイ電子系を有しない。未置換ヘテロ脂環式基の例には，限定されないが，ピロリジノ，ピペリジノ，ピペラジノ，モルホリノ，チオモルホリノ，ホモピペラジノ等が含まれる。ヘテロ脂環式環は，置換されていてもされていなくてもよい。置換されている場合，置換基は，好ましくは，未置換低級アルキル，トリハロアルキル，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルコキシ，メルカプト，（未置換低級アルキル）チオ，シアノ，アシル，チオアシル，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，ニトロ，Ｎ−スルホンアミド，Ｓ−スルホンアミド，Ｒ18Ｓ（Ｏ）−，Ｒ18Ｓ（Ｏ）2−，−Ｃ（Ｏ）ＯＲ18，Ｒ18Ｃ（Ｏ）Ｏ−，および−ＮＲ18Ｒ19（Ｒ18およびＲ19は上で定義したとおりである）からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の，より好ましくは１，２または３個，さらにより好ましくは１または２個の基である。
【００４２】
好ましくは，ヘテロ脂環式基は，ハロ，未置換低級アルキル，トリハロアルキル，ヒドロキシ，メルカプト，シアノ，Ｎ−アミド，モノまたはジアルキルアミノ，カルボキシ，またはＮ−スルホンアミドから独立して選択される１または２個の置換基で任意に置換されている。
【００４３】
"複素環"とは，３−８個の環原子を有する飽和環状ラジカルを意味し，ここで，１または２個の環原子はＮ，Ｏ，またはＳ（Ｏ）n（ｎは０−２の整数である）から選択される複素原子であり，残りの環原子はＣであり，ここで，１または２個のＣ原子は任意にカルボニル基で置き換えられていてもよい。複素環は，独立して，任意に置換された低級アルキル（カルボキシまたはエステルから独立して選択される１または２個の置換基で置換されている），ハロアルキル，シアノアルキル，ハロ，ニトロ，シアノ，ヒドロキシ，アルコキシ，アミノ，モノアルキルアミノ，ジアルキルアミノ，アルアルキル，ヘテロアルアルキル，−ＣＯＲ（Ｒはアルキルである）またはＣＯＯＲ（Ｒは水素またはアルキルである）から選択される１，２または３個の置換基で任意に置換されていてもよい。より詳細には，複素環には，限定されないが，テトラヒドロピラニル，２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン，ピペリジノ，Ｎ−メチルピペリジン−３−イル，ピペラジノ，Ｎ−メチルピロリジン−３−イル，３−ピロリジノ，モルホリノ，チオモルホリノ，チオモルホリノ−１−オキシド，チオモルホリノ−１，１−ジオキシド，４−エチルオキシカルボニルピペラジノ，３−オキソピペラジノ，２−イミダゾリドン，２−ピロリジノン，２−オキソホモピペラジノ，テトラヒドロピリミジン−２−オン，およびその誘導体が含まれる。好ましくは，複素環基は，ハロ，未置換低級アルキル，カルボキシ，エステルヒドロキシ，モノまたはジアルキルアミノで置換されている低級アルキルから独立して選択される１または２個の置換基で任意に置換されていてもよい。
【００４４】
"ヒドロキシ"とは−ＯＨ基を表す。
【００４５】
"アルコキシ"とは，本明細書において定義される−Ｏ−（未置換アルキル）および−Ｏ−（未置換シクロアルキル）基の両方を表す。代表例には，限定されないが，例えば，メトキシ，エトキシ，プロポキシ，ブトキシ，シクロプロピルオキシ，シクロブチルオキシ，シクロペンチルオキシ，シクロヘキシルオキシ等が含まれる。
【００４６】
"アリールオキシ"とは，本明細書において定義される−Ｏ−アリールおよび−Ｏ−ヘテロアリール基の両方を表す。代表的例には，限定されないが，フェノキシ，ピリジニルオキシ，フラニルオキシ，チエニルオキシ，ピリミジニルオキシ，ピラジニルオキシ等，およびその誘導体が含まれる。
【００４７】
"メルカプト"とは，−ＳＨ基を表す。
【００４８】
"アルキルチオ"とは，−Ｓ−（未置換アルキル）および−Ｓ−（未置換シクロアルキル）基の両方を表す。代表的例には，限定されないが，例えば，メチルチオ，エチルチオ，プロピルチオ，ブチルチオ，シクロプロピルチオ，シクロブチルチオ，シクロペンチルチオ，シクロヘキシルチオ等が含まれる。
【００４９】
"アリールチオ"とは，本明細書において定義される−Ｓ−アリールおよび−Ｓ−ヘテロアリール基の両方を表す。代表的例には，限定されないが，フェニルチオ，ピリジニルチオ，フラニルチオ，チエニルチオ，ピリミジニルチオ等およびその誘導体が含まれる。
【００５０】
"アシル"とは，−Ｃ（Ｏ）−Ｒ"基を表し，ここで，Ｒ"は，水素，未置換低級アルキル，トリハロメチル，未置換シクロアルキル，未置換低級アルキル，トリハロメチル，未置換低級アルコキシ，ハロおよび−ＮＲ18Ｒ19基からなる群より選択される１またはそれ以上の，好ましくは１，２または３個の置換基で任意に置換されていてもよいアリール，未置換低級アルキル，トリハロアルキル，未置換低級アルコキシ，ハロおよび−ＮＲ18Ｒ19基からなる群より選択される１またはそれ以上の，好ましくは１，２または３個の置換基で任意に置換されていてもよいヘテロアリール（環炭素を介して結合），および未置換低級アルキル，トリハロアルキル，未置換低級アルコキシ，ハロおよび−ＮＲ18Ｒ19基からなる群より選択される１またはそれ以上の，好ましくは１，２または３個の置換基で任意に置換されていてもよいヘテロ脂環式（環炭素を介して結合）からなる群より選択される。代表的なアシル基には，限定されないが，アセチル，トリフルオロアセチル，ベンゾイル等が含まれる。
【００５１】
"アルデヒド"とは，Ｒ"が水素であるアシル基を表す。
【００５２】
"チオアシル"とは，−Ｃ（Ｓ）−Ｒ"基を表し，Ｒ"は本明細書において定義されるとおりである。
【００５３】
"エステル"基とは，−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒ"基を表し，Ｒ"は本明細書において定義されるとおりであるが，ただし，Ｒ"は水素ではありえない。
【００５４】
"アセチル"基とは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ3基を表す。
【００５５】
"ハロ"基は，フッ素，塩素，臭素またはヨウ素を表し，好ましくはフッ素または塩素を表す。
【００５６】
"トリハロメチル"基とは，−ＣＸ3基を表し，ここで，Ｘは，本明細書において定義されるハロ基である。
【００５７】
"トリハロメタンスルホニル"基とは，Ｘ3ＣＳ（＝Ｏ）2−基を表し，ここでＸは上で定義したとおりである。
【００５８】
"シアノ"基は−Ｃ≡Ｎ基を表す。
【００５９】
"メチレンジオキシ"とは，−ＯＣＨ2Ｏ−基を表し，ここで２つの酸素原子は隣接する炭素原子と結合している。
【００６０】
"エチレンジオキシ"基とは，−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｏ−を表し，ここで２つの酸素原子は隣接する炭素原子と結合している。
【００６１】
"Ｓ−スルホンアミド"とは，−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ18Ｒ19基を表し，Ｒ18およびＲ19は本明細書において定義されるとおりである。
【００６２】
"Ｎ−スルホンアミド"とは，−ＮＲ18Ｓ（Ｏ）2Ｒ19基を表し，Ｒ18およびＲ19は本明細書において定義されるとおりである。
【００６３】
"Ｏ−カルバミル"基とは，−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ18Ｒ19基を表し，Ｒ18およびＲ19は本明細書において定義されるとおりである。
【００６４】
"Ｎ−カルバミル"とは，Ｒ18ＯＣ（Ｏ）ＮＲ19−基を表し，Ｒ18およびＲ19は本明細書において定義されるとおりである。
【００６５】
"Ｏ−チオカルバミル"とは，−ＯＣ（Ｓ）ＮＲ18Ｒ19基を表し，Ｒ18およびＲ19は本明細書において定義されるとおりである。
【００６６】
"Ｎ−チオカルバミル"とは，Ｒ18ＯＣ（Ｓ）ＮＲ19−基を表し，Ｒ18およびＲ19は本明細書において定義されるとおりである。
【００６７】
"アミノ"とは，Ｒ18およびＲ19が両方とも水素である−ＮＲ18Ｒ19を表す。
【００６８】
"Ｃ−アミド"とは，−Ｃ（Ｏ）ＮＲ18Ｒ19基を表し，Ｒ18およびＲ19は本明細書において定義されるとおりである。
【００６９】
"Ｎ−アミド"とは，Ｒ18Ｃ（Ｏ）ＮＲ19−基を表し，Ｒ18およびＲ19は本明細書において定義されるとおりである。
【００７０】
"ニトロ"とは，−ＮＯ2基を表す。
【００７１】
"ハロアルキル"とは，１またはそれ以上の同じまたは異なるハロ原子で置換された上述した未置換アルキル，好ましくは未置換低級アルキルを意味し，例えば，−ＣＨ2Ｃｌ，−ＣＦ3，−ＣＨ2ＣＦ3，−ＣＨ2ＣＣｌ3等である。
【００７２】
"アルアルキル"とは，上で定義したアリール基で置換されている，上で定義した未置換アルキル，好ましくは未置換低級アルキルを意味し，例えば，−ＣＨ2フェニル，−（ＣＨ2）2フェニル，−（ＣＨ2）3フェニル，ＣＨ3ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2フェニル等，およびその誘導体である。
【００７３】
"ヘテロアルアルキル"基は，ヘテロアリール基で置換されている，上で定義した未置換アルキル，好ましくは未置換低級アルキルを意味し，例えば，−ＣＨ2ピリジニル，−（ＣＨ2）2ピリミジニル，−（ＣＨ2）3イミダゾリル等，およびその誘導体である。
【００７４】
"モノアルキルアミノ"とは，ラジカル−ＮＨＲ（Ｒは上で定義した未置換アルキルまたは未置換シクロアルキル基である）を意味し，例えば，メチルアミノ，（１−メチルエチル）アミノ，シクロヘキシルアミノ等である。
【００７５】
"ジアルキルアミノ"とは，ラジカル−ＮＲＲ（各Ｒは，独立して，上で定義した未置換アルキルまたは未置換シクロアルキル基である）を意味し，例えば，ジメチルアミノ，ジエチルアミノ，（１−メチルエチル）−エチルアミノ，シクロヘキシルメチルアミノ，シクロペンチルメチルアミノ等である。
【００７６】
"シアノアルキル"とは，１または２個のシアノ基で置換された，上で定義した未置換アルキル，好ましくは未置換低級アルキルを表す。
【００７７】
"任意"または"任意に"とは，その後に記載される事象または状況が生じてもよいが生じる必要はないこと，およびその記述がその事象または状況が生ずる場合と生じない場合とを含むことを意味する。例えば，"アルキル基で任意に置換されている複素環基"とは，アルキルが存在してもよいが存在する必要はないこと，およびその記述が複素環基がアルキル基で置換されている状況と複素環基がアルキル基で置換されていない状況とを含むことを意味する。
【００７８】
"２−インドリノン"，"インドリン−２−オン"および"２−オキシインドール"との用語は，化学構造：
【化６】
0003663382.tif 000004
を有する分子を表すために本明細書において互換的に用いられる。
【００７９】
"ピロール"との用語は，化学構造：
【化７】
0003663382.tif 000005
を有する分子を表す。
【００８０】
"ピロール置換２−インドリノン"および"３−ピロリデニル−２−インドリノン"との用語は，式（Ｉ）に示される一般構造を有する化学化合物を表すために互換的に用いられる。
【００８１】
同じ分子式を有するが，その原子の結合の種類または順序またはその原子の空間の配置が異なる化合物は，"異性体"と称される。その原子の空間の配置が異なる異性体は，"立体異性体"と称される。互いに鏡像ではない立体異性体は，"ジアステレオマー"と称され，互いに重ね合わせられない鏡像であるものは"エナンチオマー"と称される。化合物が不斉中心を有する場合，例えば，これが４つの異なる基と結合している場合，１対のエナンチオマーが可能である。エナンチオマーは，その不斉中心の絶対コンフィギュレーションにより特徴づけることができ，ＣａｈｎおよびＰｒｅｌｏｇのＲ−およびＳ−の順序規則により，または分子が偏光平面のまわりに回転して，右旋性または左旋性として（すなわち，それぞれ（＋）または（−）−異性体として）示されることにより記述される。キラル化合物は個々のエナンチオマーとして，またはそれらの混合物として存在しうる。同じ割合のエナンチオマーを含む混合物は"ラセミ混合物"と称される。
【００８２】
本発明の化合物は，１またはそれ以上の不斉中心を有するかもしれない。したがって，そのような化合物は，個々の（Ｒ）−または（Ｓ）−立体異性体として，またはそれらの混合物として製造することができる。例えば，式（Ｉ）の化合物のＲ6置換基が２−ヒドロキシエチルである場合，ヒドロキシ基が結合している炭素は不斉中心であり，したがって，式（Ｉ）の化合物は（Ｒ）−または（Ｓ）−立体異性体として存在しうる。特に記載しない限り，本明細書および特許請求の範囲における特定の化合物の記述または命名は，個々のエナンチオマーおよびその混合物（ラセミまたはそれ以外）の両方を含むことが意図される。立体異性体の立体化学の決定および分離の方法は当該技術分野においてよく知られている（"Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ"，４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９９２の第４節の考察を参照）。
【００８３】
式（Ｉ）の化合物は，互変異性および構造的異性の現象を示すかもしれない。例えば，本明細書に記載される化合物は，２−インドリノン成分をピロール成分につなぐ二重結合のまわりにＥまたはＺコンフィギュレーションをとることができるか，またはＥおよびＺの混合物でありうる。本発明は，ＲＴＫ，ＣＴＫおよび／またはＳＴＫ活性を調節する能力を有するすべての互変異性および構造的異性型およびそれらの混合物を包含し，特定の１つの互変異性および構造的異性型に限定されない。
【００８４】
"医薬組成物"とは，本明細書に記載される１またはそれ以上の化合物またはその生理学的に／薬学的に許容しうる塩またはプロドラッグと，他の化学成分，例えば，生理学的に／薬学的に許容しうる担体および賦形剤との混合物を表す。医薬組成物の目的は，化合物の生物への投与を容易にすることである。
【００８５】
式（Ｉ）の化合物はまたプロドラッグとしても作用することができる。"プロドラッグ"とは，インビボで親薬剤に変換される薬剤を表す。プロドラッグは，場合により，親薬剤より投与が容易であるかもしれないため，しばしば有用である。例えば，プロドラッグは経口投与により生物学的に利用可能であるが，親薬剤はそうではない。プロドラッグはまた，親薬剤よりも医薬組成物中で改良された溶解性を有するかもしれない。プロドラッグの例は，限定されないが，エステル（"プロドラッグ"）として投与されて，水溶性であることが移動に不利である細胞膜の通過を容易にし，次に，水溶性であることが有利である細胞内に入った後，代謝的に加水分解されて活性種のカルボン酸となるような，本発明の化合物であろう。
【００８６】
プロドラッグのさらに別の例は，短いポリペプチド，例えば，限定されないが，末端アミノ基を介して本発明の化合物のカルボキシ基に結合した２−１０アミノ酸のポリペプチドであり，ポリペプチドはインビボで加水分解されるかまたは代謝されて活性分子を放出する。式（Ｉ）の化合物のプロドラッグは本発明の範囲内である。
【００８７】
さらに，式（Ｉ）の化合物が生物，例えばヒトの体内で酵素により代謝されて，代謝産物を生成し，これが蛋白質キナーゼの活性を調節しうることが企図される。そのような代謝産物は本発明の範囲内である。
【００８８】
本明細書において用いる場合，"生理学的に／薬学的に許容しうる担体"とは，生物に有意な刺激を引き起こさず，投与された化合物の生物学的活性および特性を排除しない担体または希釈剤を表す。
【００８９】
"薬学的に許容しうる賦形剤"とは，医薬組成物に添加して化合物の投与をさらに容易にする不活性物質を表す。賦形剤の例には，限定されないが，炭酸カルシウム，リン酸カルシウム，種々の糖および各種のデンプン，セルロース誘導体，ゼラチン，植物油およびポリエチレングリコールが含まれる。
【００９０】
本明細書において用いる場合，"薬学的に許容しうる塩"との用語は，親化合物の生物学的効力および特性を保持している塩を表す。そのような塩には，以下のものが含まれる：（ｉ）親化合物の遊離塩基を，例えば塩酸，臭化水素酸，硝酸，リン酸，硫酸，および過塩素酸等の無機酸と，または酢酸，シュウ酸，（Ｄ）または（Ｌ）リンゴ酸，マレイン酸，メタンスルホン酸，エタンスルホン酸，ｐ−トルエンスルホン酸，サリチル酸，酒石酸，クエン酸，コハク酸またはマロン酸等の有機酸と，好ましくは，塩酸または（Ｌ）−リンゴ酸と反応させることにより得られる酸付加塩，例えば５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミドのＬ−リンゴ酸塩；または（２）親化合物中に存在する酸性プロトンが，金属イオン，例えば，アルカリ金属イオン，アルカリ土類金属イオン，またはアルミニウムイオンで置き換えられるか，または有機塩基，例えばエタノールアミン，ジエタノールアミン，トリエタノールアミン，トロメタミン，Ｎ−メチルグルカミン等と配位することにより形成される塩。
【００９１】
"ＰＫ"とは，レセプター蛋白質チロシンキナーゼ（ＲＴＫ），非レセプターまたは"細胞性"チロシンキナーゼ（ＣＴＫ）およびセリントレオニンキナーゼ（ＳＴＫ）を表す。
【００９２】
"方法"とは，所与の作業を遂行するための様式，手段，技術，および手順を表し，限定されないが，化学，薬理学，生物学，生化学，および医学的技術の従業者には周知の，あるいは既に該従業者によって既知の様式，手段，技術，および手順から容易に開発される様式，手段，技術，および手順を含む。
【００９３】
"調節"または"調節する"とは，ＲＴＫ，ＣＴＫおよびＳＴＫの触媒活性が変化することを表す。特に，調節するとはＲＴＫ，ＣＴＫおよびＳＴＫの触媒活性が活性化されることを表し，好ましくは，ＲＴＫ，ＣＴＫまたはＳＴＫが暴露される化合物または塩の濃度に依存してＲＴＫ，ＣＴＫおよびＳＴＫの触媒活性が活性化または阻害され，またはより好ましくは，ＲＴＫ，ＣＴＫおよびＳＴＫの触媒活性が阻害されることを表す。
【００９４】
"触媒活性"とは，ＲＴＫおよび／またはＣＴＫの直接的または間接的な影響下におけるチロシンのリン酸化の速度，またはＳＴＫの直接的または間接的な影響下におけるセリンおよびトレオニンのリン酸化の速度を表す。
【００９５】
"接触させる"とは，本発明の化合物と標的ＰＫとを，当該化合物がＰＫの触媒活性を直接に，すなわちキナーゼ自体と相互作用することによるか，または間接に，すなわち当該キナーゼの触媒活性が依存している別の分子と相互作用することにより，影響することが可能な様式で一緒に合わせることを表す。このような"接触させる"ことは，インビトロで，すなわち試験管，ペトリ皿等において行うことができる。試験管内では，接触させることは，化合物と目的とするＰＫのみが関与してもよく，あるいは全細胞が関与してもよい。細胞は培養皿中で維持または成長させ，その環境において化合物と接触させることができる。この文脈においては，特定の化合物がＰＫ関連疾患に影響を及ぼす能力，すなわち当該化合物のＩＣ50（以下に定義される）を，より複雑な生体を用いてのインビボでの使用を試みる前に測定することが可能である。生体の外の細胞については，ＰＫを当該化合物と接触させるための多様な方法が存在し，かつ当業者には周知であり，例えば，限定されないが，直接の細胞マイクロインジェクションおよび多数の貫膜担体技術を含む。
【００９６】
"インビトロ"とは，人工的環境，例えば，限定されないが，試験管または培養培地中で行われる手順を表す。
【００９７】
"インビボ"とは，生きている生物，例えば，限定されないが，マウス，ラットまたはウサギの中で行われる手順を表す。
【００９８】
"ＰＫ関連疾患"，"ＰＫ推進性疾患"，および"異常なＰＫ活性"とは，すべて不適切な，すなわち不完全な，あるいはより一般的には過剰な，ＰＫ触媒活性によって特徴づけられる状態を表し，ここで特定のＰＫはＲＴＫ，ＣＴＫ，またはＳＴＫでありうる。不適切な触媒活性は；（１）正常にはＰＫを発現しない細胞におけるＰＫの発現，（２）望ましくない細胞増殖，分化および／または成長に導くＰＫ発現の増加，または（３）細胞増殖，分化および／または成長の望ましくない減少に導くＰＫ発現の減少，のいずれかの結果として生じることができる。ＰＫの過剰な活性は，細胞増殖，分化および／または成長と相関しうる，特定のＰＫをコードしている遺伝子の増幅またはあるレベルのＰＫ活性の産生を表す（すなわち，ＰＫのレベルが増加すると，細胞性障害による１またはそれ以上の症状の激しさが増す）。低い活性は，もちろんその逆であり，ＰＫ活性のレベルが低下すると，細胞性障害による１またはそれ以上の症状の激しさが増加する。
【００９９】
"治療する"，"治療すること"または"治療"とは，ＰＫ媒介性細胞疾患および／またはその付随する症状を軽減または排除することを表す。特に癌に関しては，これらの用語は単に，癌に罹患した個体の予測生存率が増加するか，または疾病の１またはそれ以上の症状が軽減することを意味する。
【０１００】
"生物"との用語は少なくとも１つの細胞からなる任意の生きているものを表す。生物は，１つの真核生物細胞程度の単純なものであってもよく，ヒトを含む哺乳動物等の複雑なものであってもよい。
【０１０１】
"治療上有効量"とは，治療される疾患の１またはそれ以上の症状をある程度緩和するであろう，投与される化合物の量を表す。癌の治療に関しては，治療上有効量は，（１）腫瘍の大きさを減少させる，（２）腫瘍の転移を阻害する（すなわち速度をある程度減じる，好ましくは停止する），（３）腫瘍の成長をある程度阻害する（すなわち速度をある程度減じる，好ましくは停止する），および／または（４）癌に関連した１またはそれ以上の症状をある程度緩和する（または，好ましくは除去する）という効果を有する量を表す。
【０１０２】
"モニターする"とは，化合物を特定のＰＫを発現する細胞と接触させる影響を観察または検出することを意味する。観察されるまたは検出される影響は，細胞表現型の変化，ＰＫの触媒活性，またはＰＫと天然の結合パートナーとの相互作用の変化でありうる。そのような影響を観察または検出する手法は当該技術分野においてよく知られている。
【０１０３】
本発明の最後の観点において，上述の影響は，細胞表現型の変化または無変化，前記蛋白質キナーゼの触媒活性の変化または無変化，または前記蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの相互作用の変化または無変化から選択される。
【０１０４】
"細胞表現型"との用語は，細胞もしくは組織の外観または細胞もしくは組織の機能を表す。細胞表現型の例は，細胞サイズ，細胞増殖，細胞分化，細胞生存，アポトーシス，および栄養の取り込みおよび利用である。そのような細胞表現型の特徴は，当該技術分野においてよく知られる手法により容易に測定することができる。
【０１０５】
"天然の結合パートナー"とは，細胞内で特定のＰＫに結合するポリペプチドを表す。天然の結合パートナーは，ＰＫ媒介性シグナル伝達プロセスにおいてシグナルを伝播する役割を果たすことができる。天然の結合パートナーとＰＫとの相互作用の変化は，ＰＫ／天然の結合パートナー複合体の濃度の増加または減少として，およびその結果，ＰＫがシグナル伝達を媒介する能力の観察可能な変化として現れることができる。
【０１０６】
本発明の代表的化合物は以下の表Ｉに示される。
【０１０７】
【表１】
0003663382.tif 000006
【０１０８】
【表２】
0003663382.tif 000007
【０１０９】
【表３】
0003663382.tif 000008
【０１１０】
【表４】
0003663382.tif 000009
【０１１１】
【表５】
0003663382.tif 000010
【０１１２】
【表６】
0003663382.tif 000011
【０１１３】
【表７】
0003663382.tif 000012
【０１１４】
【表８】
0003663382.tif 000013
【０１１５】
【表９】
0003663382.tif 000014
【０１１６】
【表１０】
0003663382.tif 000015
【０１１７】
【表１１】
0003663382.tif 000016
【０１１８】
【表１２】
0003663382.tif 000017
【０１１９】
【表１３】
0003663382.tif 000018
【０１２０】
【表１４】
0003663382.tif 000019
【０１２１】
【表１５】
0003663382.tif 000020
【０１２２】
【表１６】
0003663382.tif 000021
【０１２３】
【表１７】
0003663382.tif 000022
【０１２４】
【表１８】
0003663382.tif 000023
【０１２５】
【表１９】
0003663382.tif 000024
【０１２６】
【表２０】
0003663382.tif 000025
【０１２７】
【表２１】
0003663382.tif 000026
【０１２８】
【表２２】
0003663382.tif 000027
【０１２９】
【表２３】
0003663382.tif 000028
【０１３０】
【表２４】
0003663382.tif 000029
【０１３１】
【表２５】
0003663382.tif 000030
【０１３２】
化合物番号は実施例の節の実施例番号に対応する。すなわち，表１の化合物１の合成は実施例１に記載される。表１に示される化合物は例示にすぎず，いかなる意味においても本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。
【０１３３】
好ましい態様
発明の概要においては最も広い定義が記載されるが，以下に記載される式（Ｉ）のある種の化合物が好ましい。
【０１３４】
（１）式（Ｉ）の化合物の好ましい群は，Ｒ1，Ｒ3，およびＲ4が水素であるものである。
【０１３５】
（２）式（Ｉ）の化合物の別の好ましい群は，Ｒ1，Ｒ2，およびＲ4が水素であるものである。
【０１３６】
（３）式（Ｉ）の化合物の別の好ましい群は，Ｒ1，Ｒ2，およびＲ3が水素であるものである。
【０１３７】
（４）式（Ｉ）の化合物の別の好ましい群は，Ｒ2，Ｒ3，およびＲ4が水素であるものである。
【０１３８】
（５）式（Ｉ）の化合物の別の好ましい群は，Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3およびＲ4が水素であるものである。
【０１３９】
（６）式（Ｉ）の化合物のさらに別の好ましい群は，Ｒ5，Ｒ6またはＲ7，好ましくはＲ5またはＲ6，より好ましくはＲ6が−ＣＯＲ10であるものであり，ここで，Ｒ10は−ＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12であり，ここで
Ｒ11は，水素または低級未置換アルキル，好ましくは水素またはメチルであり；
ｎは２，３または４，好ましくは２または３であり；および
Ｒ12は−ＮＲ13Ｒ14であり，ここでＲ13およびＲ14は，独立して，アルキル，より好ましくは低級未置換低級アルキルであり，またはＲ13およびＲ14は，一緒になって−（ＣＨ2）4−，−（ＣＨ2）5−，−（ＣＨ2）2−Ｏ−ＣＨ2）2−または−（ＣＨ2）2Ｎ（ＣＨ3）（ＣＨ2）2−から選択される基を形成し，好ましくはＲ13およびＲ14は，独立して，水素，メチル，エチルであり，または一緒になってモルホリン−４−イル，ピロリジン−１−イル，ピペラジン−１−イル，または４−メチルピペラジン−１−イルを形成する。
【０１４０】
より好ましくは，上述の（６）において，Ｒ5またはＲ6は，Ｎ−（２−ジメチルアミノエチル−）アミノカルボニル，Ｎ−（２−エチルアミノエチル）−Ｎ−メチルアミノカルボニル，Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）アミノカルボニル，Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）アミノカルボニル，Ｎ−（３−エチルアミノプロピル）アミノカルボニル，Ｎ−（３−ジエチルアミノプロピル）アミノカルボニル，３−ピロリジン−１−イルプロピルアミノカルボニル，３−モルホリン−４−イルプロピルアミノカルボニル，２−ピロリジン−１−イルエチルアミノカルボニル，２−モルホリン−４−イルエチルアミノカルボニル，２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチルアミノカルボニル，２−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロピルアミノカルボニル，２−（３，５−ジメチルピペラジン−１−イル）エチルアミノカルボニルまたは２−（３，５−ジメチルピペラジン−１−イル）プロピルアミノカルボニル，さらにより好ましくはＮ−（２−ジエチルアミノエチル）アミノカルボニルまたはＮ−（２−エチルアミノエチル）アミノカルボニルである。
【０１４１】
（７）式（Ｉ）の化合物のさらに別の好ましい群は，Ｒ5，Ｒ6またはＲ7，好ましくはＲ5またはＲ6，より好ましくはＲ6が−ＣＯＲ10であり，ここで，Ｒ10は−ＮＲ13Ｒ14であり，ここで，Ｒ13は水素であり，およびＲ14はアルキル，好ましくはヒドロキシまたはカルボキシで置換された低級アルキル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式であり，より好ましくはヒドロキシで置換されたメチル，エチル，プロピルまたはブチル，アリール，ヘテロ脂環式，例えば，ピペリジン，ピペラジン，モルホリン等，ヘテロアリール，またはカルボキシである。この群（７）のうちさらにより好ましくは，Ｒ5またはＲ6は，２−エトキシカルボニルメチル−アミノカルボニル，カルボキシメチルアミノカルボニル，３−ヒドロキシプロピル−アミノカルボニル，２−ヒドロキシエチルアミノカルボニル，３−トリアジン−１−イルプロピルアミノカルボニル，トリアジン−１−イルエチルアミノカルボニル，４−ヒドロキシフェニルエチルアミノカルボニル，３−イミダゾール−１−イルプロピルアミノカルボニル，ピリジン−４−イルメチルアミノカルボニル，２−ピリジン−２−イルエチルアミノカルボニルまたは２−イミダゾール−１−イルエチルアミノカルボニルである。
【０１４２】
（８）式（Ｉ）の化合物のさらに別の好ましい群は，Ｒ5，Ｒ6またはＲ7，好ましくはＲ5またはＲ6，より好ましくはＲ6が−ＣＯＲ10であり，ここでＲ10は−ＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12であり，ここで
Ｒ11は，水素またはアルキル，好ましくは水素またはメチルであり；
ｎは２，３または４，好ましくは２または３であり；および
Ｒ12は−ＮＲ13Ｒ14であり，ここで，Ｒ13およびＲ14は，一緒になってカルボニル基および１または２個の窒素原子を含む複素環，好ましくは５，６または７員の複素環を形成する。好ましくは，Ｒ5またはＲ6は，２−（３−エトキシカルボニルメチルピペラジン−１−イル）エチルアミノカルボニル，２−（３−オキソピペラジン−１−イル）エチルアミノカルボニル，２−（イミダゾリジン−１−イル−２−オン）エチルアミノカルボニル，２−（テトラヒドロピリミジン−１−イル−２−オン）エチルアミノカルボニル，２−（２−オキソピロリジン−１−イル）−エチルアミノカルボニル，３−（４−メチルピペラジン−１−イル）−プロピルアミノカルボニル，３−（３−エトキシカルボニルメチルピペラジン−１−イル）−プロピルアミノカルボニル，３−（３−オキソピペラジン−１−イル）プロピルアミノカルボニル，３−（イミダゾリジン−１−イル−２−オン）プロピルアミノカルボニル，３−（テトラヒドロピリミジン−１−イル−２−オン）−プロピルアミノカルボニル，３−（２−オキソピロリジン−１−イル）プロピルアミノカルボニル，２−（２−オキソホモピペリジン−１−イル）エチルアミノカルボニルまたは３−（２−オキソホモピペリジン−１−イル）プロピルアミノカルボニルである。
【０１４３】
（９）式（Ｉ）の化合物のさらに別の好ましい群は，Ｒ5，Ｒ6またはＲ7，好ましくはＲ5またはＲ6，より好ましくはＲ6は−ＣＯＲ10であり，ここで，
（ａ）Ｒ10は−ＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12であり，ここで
Ｒ11は水素またはアルキル，好ましくは水素またはメチルであり；
ｎは２，３または４，好ましくは２または３であり；および
Ｒ12は−ＮＲ13Ｒ14であり，ここで，Ｒ13は水素であり，およびＲ14はシアノアルキルまたは−ＮＨＣＯＲa（ここで，Ｒaはアルキルである）であり；または
（ｂ）Ｒ10は−ＮＲ13Ｒ14であり，ここでＲ13およびＲ14は一緒になって環中にカルボニル基を含まない複素環を形成する。好ましくは，Ｒ5またはＲ6は，２−（２−シアノエチルアミノ）エチルアミノカルボニル，２−（アセチルアミノ）−エチルアミノカルボニル，モルホリノカルボニル，ピペリジン−１−イルカルボニル，２−シアノメチルアミノエチルアミノカルボニルまたはピペリジン−１−イルカルボニルである。
【０１４４】
（１０）式（Ｉ）の化合物の別の好ましい群は，Ｒ5が−ＣＯＲ10であり，ここでＲ10は−ＮＲ13Ｒ14であり，ここで，Ｒ13は水素であり，およびＲ14はヒドロキシで置換された低級アルキル，ヒドロキシアルキルアミノ，カルボキシ，または−ＮＲ18Ｒ19（ここで，Ｒ18およびＲ19は，独立して，水素または低級未置換アルキルである）で置換された低級アルキルであり，より好ましくはＲ5は，２−［（ジエチルアミノ）−２−ヒドロキシエチル］アミノカルボニル，２−（Ｎ−エチル−Ｎ−２−ヒドロキシエチルアミノ）エチルアミノカルボニル，カルボキシメチルアミノ−カルボニル，または２−（２−ヒドロキシエチルアミノ）エチルアミノ−カルボニルである。
【０１４５】
（１１）式（Ｉ）の化合物のさらに別の好ましい群は，Ｒ6が−ＣＯＲ10であり，ここで，Ｒ10は−ＮＲ13Ｒ14であり，ここで，Ｒ13は水素であり，およびＲ14はヒドロキシで置換された低級アルキル，ヒドロキシアルキルアミノ，カルボキシ，または−ＮＲ18Ｒ19（ここで，Ｒ18およびＲ19は，独立して，水素または低級未置換アルキルである）で置換された低級アルキルであり；より好ましくは，Ｒ6は，［２−（ジエチルアミノ）−２−ヒドロキシ］エチルアミノカルボニル，２−（Ｎ−エチル−Ｎ−２−ヒドロキシエチル−アミノ）エチルアミノカルボニル，カルボキシメチルアミノカルボニル，または２−（２−ヒドロキシエチルアミノ）エチルアミノ−カルボニルである。
【０１４６】
（１２）式（Ｉ）の化合物のさらに別の好ましい群は，Ｒ5が−ＣＯＲ10であり，ここで，Ｒ10はＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12であり，ここで，Ｒ12は−Ｎ+（Ｏ-）ＮＲ13Ｒ14または−Ｎ（ＯＨ）Ｒ13であり，ここで，Ｒ13およびＲ14は，独立して，水素および未置換低級アルキルからなる群より選択され，好ましくは，Ｒ5は２−（Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ−エチルアミノ）−エチルアミノカルボニルまたは２−［Ｎ+（Ｏ-）（Ｃ2Ｈ5）2］エチル−アミノカルボニルである。
【０１４７】
（１３）式（Ｉ）の化合物のさらに別の好ましい群は，Ｒ6が−ＣＯＲ10であり，ここで，Ｒ10はＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12であり，ここでＲ12は−Ｎ+（Ｏ-）ＮＲ13Ｒ14または−Ｎ（ＯＨ）Ｒ13であり，ここで，Ｒ13およびＲ14は，独立して，水素および未置換低級アルキルからなる群より選択され，好ましくは，Ｒ6は，２−（Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ−エチルアミノ）エチルアミノカルボニルまたは２−［Ｎ+（Ｏ-）（Ｃ2Ｈ5）2］エチルアミノカルボニルである。
【０１４８】
（１４）上述の好ましい群（６）−（１３）において，Ｒ5が−ＣＯＲ10であるとき，化合物のより好ましい群は以下のとおりである：
Ｒ6は，水素およびアルキルからなる群より選択され，好ましくは，水素，メチル，エチル，イソプロピル，ｔｅｒｔ−ブチル，イソブチル，またはｎ−ブチルであり，より好ましくは水素またはメチルであり；および
Ｒ7は水素，アルキル，アリール，ヘテロアリール，および−Ｃ（Ｏ）Ｒ17（ここで，Ｒ17は，ヒドロキシ，アルキルまたはアリールである）からなる群より選択され，より好ましくは水素，メチル，エチル，イソプロピル，ｎ−，イソまたはｔｅｒｔ−ブチル，フェニル，ベンゾイル，アセチルまたはカルボキシであり，さらにより好ましくはメチル，水素またはフェニルである。
【０１４９】
（１５）上述の好ましい群（６）−（１３）において，Ｒ5が−ＣＯＲ10であるとき，化合物の別のより好ましい群は，Ｒ6およびＲ7が一緒になって−（ＣＨ2）4−を形成するものである。
【０１５０】
（１６）上述の好ましい群（６）−（１３）において，Ｒ6が−ＣＯＲ10であるとき，化合物のより好ましい群は，以下のとおりである：Ｒ5は，水素およびアルキルからなる群より選択され，好ましくは，水素，メチル，エチル，イソプロピル，ｔｅｒｔ−ブチル，イソブチル，またはｎ−ブチルであり，より好ましくは水素またはメチルであり；およびＲ7は，水素，アルキル，アリール，ヘテロアリール，および−Ｃ（Ｏ）Ｒ17（ここで，Ｒ17は，ヒドロキシ，アルキルまたはアリールである）からなる群より選択され，より好ましくは水素，メチル，エチル，イソプロピル，ｎ−，イソまたはｔｅｒｔ−ブチル，フェニル，ベンゾイル，アセチルまたはカルボキシであり，さらにより好ましくは，メチル，水素またはフェニルである。
【０１５１】
（１７）上述の好ましいおよびより好ましい群（６）−（１６）において，化合物のさらにより好ましい群は以下のとおりである：
Ｒ1は，水素，アルキル，−Ｃ（Ｏ）ＮＲ8Ｒ9，未置換シクロアルキルまたはアリールであり，好ましくは，水素，フェニル，３，４−ジメトキシフェニルアミノカルボニル，４−メトキシ−３−クロロフェニルアミノカルボニルであり，さらにより好ましくは水素またはメチルであり，最も好ましくは水素であり；
Ｒ2は，シアノ，水素，ハロ，低級アルコキシ，アリールまたはＳ（Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14であり，ここで，Ｒ13は水素であり，およびＲ14は，水素，アリールまたはアルキルであり，好ましくは，Ｒ2は，水素，クロロ，ブロモ，フルオロ，メトキシ，エトキシ，フェニル，ジメチルアミノスルホニル，３−クロロフェニル−アミノスルホニル，カルボキシ，メトキシ，アミノスルホニル，メチルアミノスルホニル，フェニルアミノスルホニル，ピリジン−３−イル−アミノスルホニル，ジメチルアミノスルホニル，イソプロピルアミノ−スルホニル，より好ましくは水素，フルオロ，またはブロモであり；
Ｒ3は，水素，低級アルコキシ，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15，ＮＲ13Ｃ（Ｏ）Ｒ14，アリール（好ましくは低級アルキル，ハロ，または低級アルコキシからなる群より選択される１または２個の置換基で任意に置換されていてもよいアリール），およびヘテロアリール（好ましくは，低級アルキル，ハロ，または低級アルコキシからなる群より選択される１または２個の置換基で任意に置換されていてもよいヘテロアリール）からなる群より選択され；好ましくは，水素，メトキシ，カルボキシ，フェニル，ピリジン−３−イル，３，４−ジクロロフェニル，２−メトキシ−５イソプロピルフェニル，４−ｎ−ブチルフェニル，３−イソプロピルフェニルであり，より好ましくは水素またはフェニルであり；および
Ｒ4は水素である。
【０１５２】
（１８）式（Ｉ）の化合物の別のより好ましい群は，以下のとおりである：
Ｒ1は，水素，アルキル，−Ｃ（Ｏ）ＮＲ8Ｒ9，未置換シクロアルキルまたはアリールであり，好ましくは，水素，３，４−ジメトキシフェニル−アミノカルボニル，４−メトキシ−３−クロロフェニルアミノカルボニルであり，さらにより好ましくは水素またはメチルであり，特に好ましくは水素であり；
Ｒ2は，シアノ，水素，ハロ，低級アルコキシ，アリールまたはＳ（Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14であり，ここで，Ｒ13は，水素であり，およびＲ14は，水素，アリールまたはアルキルであり，好ましくは，Ｒ2は，水素，クロロ，ブロモ，フルオロ，メトキシ，エトキシ，フェニル，ジメチルアミノスルホニル，３−クロロフェニル−アミノスルホニル，カルボキシ，メトキシ，アミノスルホニル，メチルアミノスルホニル，フェニルアミノスルホニル，ピリジン−３−イル−アミノスルホニル，ジメチルアミノスルホニル，イソプロピルアミノ−スルホニルであり，より好ましくは水素，フルオロ，またはブロモであり；
Ｒ3は，水素，低級アルコキシ，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15，−ＮＲ13Ｃ（Ｏ）Ｒ14，アリール（好ましくは，低級アルキル，ハロ，または低級アルコキシからなる群より選択される１または２個の置換基で任意に置換されていてもよいアリール），およびヘテロアリール（好ましくは，低級アルキル，ハロ，または低級アルコキシからなる群より選択される１または２個の置換基で任意に置換されていてもよいヘテロアリール）からなる群より選択され；好ましくは，水素，メトキシ，カルボキシ，フェニル，ピリジン−３−イル，３，４−ジクロロフェニル，２−メトキシ−５イソプロピルフェニル，４−ｎ−ブチルフェニル，３−イソプロピルフェニルであり，より好ましくは水素またはフェニルであり；および
Ｒ4は水素である。
【０１５３】
上述の好ましい群（１８）において，化合物のより好ましい群は以下のとおりである：
Ｒ5は，−ＣＯＲ10であり，ここで，Ｒ10は，発明の概要において定義されたとおりであり，好ましくは，−ＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12または−ＮＲ13Ｒ14（発明の概要において定義されたとおりである）であり；
Ｒ6は，水素およびアルキルからなる群より選択され，好ましくは，水素，メチル，エチル，イソプロピル，ｔｅｒｔ−ブチル，イソブチル，またはｎ−ブチルであり，より好ましくは水素またはメチルであり；および
Ｒ7は，水素，アルキル，アリール，ヘテロアリール，および−Ｃ（Ｏ）Ｒ17（ここで，Ｒ17は，ヒドロキシ，アルキルまたはアリールである）からなる群より選択され，より好ましくは，水素，メチル，エチル，イソプロピル，ｎ−，イソまたはｔｅｒｔ−ブチル，フェニル，ベンゾイル，アセチルまたはカルボキシであり，さらにより好ましくはメチル，水素またはフェニルである。
【０１５４】
上述の好ましい群（１８）において，化合物のさらに別の好ましい群は以下のとおりである：
Ｒ6は，−ＣＯＲ10であり，ここで，Ｒ10は発明の概要において定義されたとおりであり，好ましくは，−ＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12または−ＮＲ13Ｒ14（発明の概要において定義されたとおりである）であり；
Ｒ5は，水素およびアルキルからなる群より選択され，好ましくは，水素，メチル，エチル，イソプロピル，ｔｅｒｔ−ブチル，イソブチル，またはｎ−ブチルであり，より好ましくは水素またはメチルであり；および
Ｒ7は，水素，アルキル，アリール，ヘテロアリール，および−Ｃ（Ｏ）Ｒ17（ここで，Ｒ17は，ヒドロキシ，アルキルまたはアリールである）からなる群より選択され，より好ましくは，水素，メチル，エチル，イソプロピル，ｎ−，イソまたはｔｅｒｔ−ブチル，フェニル，ベンゾイル，アセチルまたはカルボキシであり，さらにより好ましくはメチル，水素またはフェニルである。
【０１５５】
（１９）式（Ｉ）の化合物の別のより好ましい群は以下のとおりである：
Ｒ1およびＲ4は水素であり；
Ｒ2は，水素，ハロ，低級アルコキシ，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15および−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ3は水素，低級アルコキシ，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15，−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14，アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され；
Ｒ5は−Ｃ（Ｏ）Ｒ10であり；
Ｒ6は，水素および低級アルキルからなる群より選択され；および
Ｒ7は，水素，低級アルキルおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ17からなる群より選択される。
【０１５６】
本発明の別の現在好ましい態様においては，（１５）に記載される構造を有する化合物において：
Ｒ10は，ヒドロキシ，低級アルコキシおよび−ＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12からなる群より選択され，ここで
ｎは２または３であり；
Ｒ11は，水素および低級アルキルからなる群より選択され；および
Ｒ12は，アリールおよび−ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択される。
【０１５７】
本発明のさらに別の現在好ましい態様においては，上の２つの段落に記載される構造を有する化合物において，Ｒ13およびＲ14は，独立して，水素，低級アルキルからなる群より選択されるか，または一緒になって，−（ＣＨ2）4−，−（ＣＨ2）5−，−（ＣＨ2）2Ｏ（ＣＨ2）2−または−（ＣＨ2）2Ｎ（ＣＨ3）（ＣＨ2）2−を形成する。
【０１５８】
（２０）本発明の別の現在好ましい態様は，以下の化合物である：
Ｒ1は，水素，低級アルキル，−（ＣＨ2）rＲ16および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ8Ｒ9からなる群より選択され；
Ｒ2は，水素，ハロゲン，アリールおよび−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ3は，水素，低級アルキル，低級アルコキシ，アリール，ヘテロアリールおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ15からなる群より選択され；
Ｒ4は水素であり；
Ｒ5は，水素および低級アルキルからなる群より選択され；
Ｒ6は−Ｃ（Ｏ）Ｒ10であり；
Ｒ7は，水素，低級アルキルおよびアリールからなる群より選択され；
Ｒ16は，ヒドロキシおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ15からなる群より選択され；および
ｒは２または３である。
【０１５９】
本発明の現在好ましい態様は，直前の段落に記載される構造を有する化合物において，Ｒ3は，低級アルキル，低級アルコキシおよびハロからなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよいアリールである。
【０１６０】
（２１）同様に，本発明の現在好ましい態様の化合物においては：
Ｒ1は，水素，低級アルキル，−（ＣＨ2）rＲ16および−Ｃ（Ｏ）ＮＲ8Ｒ9からなる群より選択され；
Ｒ2は，水素，ハロゲン，アリールおよび−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ3は，水素，低級アルキル，低級アルコキシ，アリール，ヘテロアリールおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ15からなる群より選択され；
Ｒ4は水素であり；
Ｒ5は，水素および低級アルキルからなる群より選択され；
Ｒ6は−Ｃ（Ｏ）Ｒ10であり；
Ｒ7は，水素，低級アルキルおよびアリールからなる群より選択され；
Ｒ16は，ヒドロキシおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ15からなる群より選択され；および
ｒは２または３であり，
Ｒ10は，ヒドロキシ，低級アルコキシ，−ＮＲ13Ｒ14および−ＮＲ11（ＣＨ2）nＲ12からなる群より選択され，ここで，ｎは，１，２または３であり，Ｒ11は水素であり，およびＲ12は，ヒドロキシ，低級アルコキシ，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15，ヘテロアリールおよび−ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択される。
【０１６１】
（２２）本発明のさらに別の現在好ましい態様は，直前の段落に記載される構造を有する化合物であって，Ｒ13およびＲ14は，独立して，水素，低級アルキル，ヘテロアリールからなる群より選択されるか，または一緒になって，−（ＣＨ2）4−，−（ＣＨ2）5−，−（ＣＨ2）2Ｏ（ＣＨ2）2−，または−（ＣＨ2）2Ｎ（ＣＨ3）（ＣＨ2）2−を形成する。
【０１６２】
（２３）本発明の別の現在好ましい態様の化合物においては，
Ｒ1は−Ｃ（Ｏ）ＮＲ8Ｒ9であり，ここで，Ｒ8は水素であり，およびＲ9はハロ，ヒドロキシおよび低級アルコキシからなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されているアリールであり；
Ｒ2は，水素，ハロゲン，アリールおよび−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ3は，水素，低級アルキル，低級アルコキシ，アリール，ヘテロアリールおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ15からなる群より選択され；
Ｒ4は水素であり；
Ｒ5は，水素および低級アルキルからなる群より選択され；
Ｒ6は−Ｃ（Ｏ）Ｒ10であり；
Ｒ7は，水素，低級アルキルおよびアリールからなる群より選択され；
Ｒ16は，ヒドロキシおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ15からなる群より選択され；および
ｒは２または３である。
【０１６３】
（２４）本発明のさらに別の現在好ましい態様の化合物においては，
Ｒ1は，水素および低級アルキルからなる群より選択され；
Ｒ2は，水素，ハロ，低級アルコキシ，アリール，−Ｃ（Ｏ）Ｒ15および−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14からなる群より選択され；
Ｒ3は水素，ハロ，アリール，ヘテロアリールおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ15からなる群より選択され；
Ｒ4は水素であり；
Ｒ5は−Ｃ（Ｏ）Ｒ10であり；および
Ｒ6およびＲ7は，一緒になって−（ＣＨ2）4−基を形成する。
【０１６４】
直前の段落に記載される構造を有する化合物において，現在好ましい態様においては，Ｒ1がヒドロキシ，アルコキシ，−ＮＲ13Ｒ14および−ＮＨ（ＣＨ2）nＮＲ13Ｒ14（ｎは２または３である）からなる群より選択される。
【０１６５】
本発明の現在好ましい態様においては，直前の２つの段落に記載される構造を有する化合物において，Ｒ13およびＲ14は，独立して，水素，低級アルキルからなる群より選択されるか，または一緒になって，−（ＣＨ2）4−，−（ＣＨ2）5−，−（ＣＨ2）2Ｏ（ＣＨ2）2−または−（ＣＨ2）2Ｎ（ＣＨ3）（ＣＨ2）2−を形成する。
【０１６６】
用途
その触媒活性が本発明の化合物により調節されるＰＫには，蛋白質チロシンキナーゼが含まれ，これには２つのタイプがある：レセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）および細胞性チロシンキナーゼ（ＣＴＫ），およびセリン−トレオニンキナーゼ（ＳＴＫ）である。ＲＴＫに媒介されるシグナル伝達は，特定の成長因子（リガンド）との細胞外相互作用により開始され，次にレセプターが二量化し，固有の蛋白質チロシンキナーゼ活性が過渡的に刺激され，リン酸化する。このことにより，内部シグナル伝達分子用の結合部位が形成され，種々の細胞質シグナリング分子との複合体の形成につながり，これは，適切な細胞応答（例えば，細胞分裂，細胞外微小環境に及ぼす代謝的効果等）を促進する。Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｕｌｌｒｉｃｈ，１９９２，Ｎｅｕｒｏｎ  ９：３０３−３９１を参照。
【０１６７】
成長因子レセプターのチロシンリン酸化部位がシグナリング分子のＳＨ２（ｓｒｃホモロジー）ドメインの高親和性結合部位として機能することが示されている（Ｆａｎｔｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃｅｌｌ  ６９：４１３−４２３，Ｓｏｎｇｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：２７７７−２７８５），Ｓｏｎｇｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ７２：７６７−７７８，およびＫｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５２：６６８−６７８）。ＲＴＫと会合するいくつかの細胞内基質蛋白質が同定されている。それらは二つの主要なグループに分けられる：（１）触媒ドメインを有する基質，および（２）そのようなドメインを欠くが，アダプターとして働き，触媒活性のある分子と会合する。Ｓｏｎｇｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．１９９３，Ｃｅｌｌ  ７２：７６７−７７８。レセプターとその基質のＳＨ２ドメインとの間の相互作用の特異性は，リン酸化されたチロシン残基を直接取囲んでいるアミノ酸残基によって決定される。ＳＨ２ドメインと，特定のレセプターのホスホチロシン残基を取り囲んでいるアミノ酸配列との間の結合親和性の差異は，それらの基質リン酸化のプロファイルに見られる差異と一致している。Ｓｏｎｇｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．１９９３，Ｃｅｌｌ  ７２：７６７−７７８。これらの知見は，各々のＲＴＫの機能が，その発現パターンならびにリガンド利用可能性によるのみならず，特定のレセプターによって活性化される下流の一連のシグナル伝達経路によっても決定されることを示唆している。したがって，リン酸化は特異的な成長因子レセプター，ならびに分化因子レセプターによってリクルートされる，シグナリング経路の選択性を決定する重要な段階を提供する。
【０１６８】
ＳＴＫは，本来細胞質ゾル性であり，しばしばＰＴＫ事象についての下流方向の応答として，細胞内部の生化学に影響を及ぼす。ＳＴＫは，細胞増殖に導くＤＮＡ合成とそれに続く細胞分裂とを開始する，シグナリング過程に関与することが示唆されている。
【０１６９】
したがって，ＰＫシグナル伝達は，種々の応答の中で特に，細胞増殖，分化，成長，および代謝をもたらす。異常な細胞増殖は，癌腫，肉腫，神経膠芽細胞腫，および血管腫等の新生物，白血病，乾癬，動脈硬化症，関節炎，および糖尿病性網膜炎，および制御されない新脈管形成および／または脈管形成に関連する他の疾患を含む，広い範囲の疾患および疾病という結果をもたらしうる。
【０１７０】
本発明の化合物がＰＫを阻害するメカニズムについての正確な理解は，本発明の実施のためには必要ではない。しかしながら，本発明においてはいかなる特定のメカニズムまたは理論にも束縛されるものではないが，化合物はＰＫの触媒領域のアミノ酸と相互作用すると考えられている。ＰＫは典型的には２葉構造を有しており，ＡＴＰは，ＰＫの中でアミノ酸が保存されている領域内の，２つの葉の間の裂け目に結合するように見える。ＰＫの阻害剤は，前記のＡＴＰがＰＫに結合するのと同じ普遍領域において，水素結合，ファン−デル−ワールス力，およびイオン相互作用等の非共有結合によって結合すると考えられる。さらに具体的には，本発明の化合物の２−インドリノン成分が，通常はＡＴＰのアデニン環によって占められる普遍区域に結合すると考えられている。このように，ある特定の分子の特定のＰＫに対する特異性は，２−インドリノンコア上の種々の置換基と，特定のＰＫに特異的なアミノ酸ドメインとの間の，付加的な相互作用の結果として生じるのであろう。すなわち，異なるインドリノン置換基が，特定のＰＫに対する優先的な結合に寄与するかもしれない。異なるＡＴＰ（または他のヌクレオチド）結合部位において活性のある化合物を選択する能力は，本発明の化合物を，そのような部位を有する任意の蛋白質を標的とするのに有用なものにする。したがって本明細書において開示される化合物は，かかる蛋白質についてのインビトロでのアッセイ用としての有用性を有すると同時に，かかる蛋白質との相互作用を通じてインビボでの治療効果を示すものでありうる。
【０１７１】
さらに，本発明の化合物は，多くの種類の固形腫瘍，例えば，限定されないが，癌腫，肉腫，例えばカポジ肉腫，赤芽球腫，神経膠芽細胞腫，髄膜腫，星状細胞腫，黒色腫および筋原細胞腫の治療に対する治療方法を提供する。非固形腫瘍癌，例えば白血病の治療又は予防もまた本発明により企図される。適応症には，限定されないが，脳癌，膀胱癌，卵巣癌，胃癌，膵臓癌，結腸癌，血液癌，肺癌および骨癌が含まれる。
【０１７２】
本明細書に記載される化合物がその予防，治療および研究に有用であろう，不適切なＰＫ活性に関連する疾患のタイプのさらなる例には，限定されないが，細胞増殖性疾患，繊維性疾患および代謝性疾患が含まれる。
【０１７３】
本発明により予防，治療またはさらに研究することができる細胞増殖性疾患には，癌，血管増殖性疾患およびメサンギウム細胞増殖性疾患が含まれる。
【０１７４】
血管増殖性疾患とは，異常な脈管形成（血管の形成）および新脈管形成（血管の拡散）に関連する疾患を表す。脈管形成および新脈管形成は胚発生，黄体形成，創傷治癒，および臓器再生等の種々の正常な生理学的過程において重要な役割を果たすが，それらはまた腫瘍を生かしておくために必要な新しい毛細血管をそれらが形成させる癌の発生においても中枢的な役割を演じる。血管増殖疾患の他の例は，新しい毛細血管が関節に侵入して軟骨を破壊する関節炎，および糖尿病性網膜炎のように，網膜内の新しい毛細血管が硝子体に侵入し，出血させ，さらに失明を引起す眼性疾患を含む。
【０１７５】
高い親和性をもってＶＥＧＦに結合する２つの構造的に関連するＲＴＫが同定されている：ｆｍｓ様チロシン１（ｆｉｔ−１）レセプター（Ｓｈｉｂｕｙａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，５：５１９−５２４；ＤｅＶｒｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５５：９８９−９９１）およびＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプター（ＶＥＧＦ−Ｒ２としても知られる）。血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）は，インビトロ内皮細胞成長促進活性を有する内皮細胞特異的有糸分裂促進物質であることが報告されている（Ｆｅｒｒａｒａ＆Ｈｅｎｚｅｌ，１９８９，Ｂｉｏｃｈｅｉｎ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１６１：８５１−８５８；Ｖａｉｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５：１９４６１−１９５６６）。米国特許出願０８／１９３，８２９，０８／０３８，５９６および０７／９７５，７５０に記載される情報は，ＶＥＧＦが内皮細胞増殖の原因となるのみならず，正常および病的な新脈管形成の主要な調節剤であることを強く示唆する。一般に，Ｋｌａｇｓｂｕｒｎ＆Ｓｏｋｅｒ，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３（１０）６９９−７０２；Ｈｏｕｃｋ，  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６７：２６０３１−２６０３７を参照。
【０１７６】
正常な脈管形成および新脈管形成は，種々の生理学的プロセス，例えば，胚発生，創傷治癒，臓器再生等の種々の生理学的過程，および排卵期の黄体における濾胞形成と妊娠後の胎盤の成長等の女性の生殖過程において重要な役割を果たしている（Ｆｏｌｋｍａｎ＆Ｓｈｉｎｇ，１９９２，Ｊ．ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍ．，２６７（１６）：１０９３１−３４）。制御されない脈管形成および／または新脈管形成は，糖尿病等の疾病ならびに成長が血管形成に依存する悪性固形腫瘍に関連づけられてきた（Ｋｌａｇｓｂｕｒｎ＆Ｓｏｋｅｒ，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３（１０）：６９９−７０２；Ｆｏｌｋｈａｍ，１９９１，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，８２：４−６；Ｗｅｉｄｎｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２４：１−５）。
【０１７７】
新脈管形成および脈管形成の間の内皮細胞増殖および移動におけるＶＥＧＦの推測される役割は，これらのプロセスにおけるＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターの重要な役割を示す。真性糖尿病（Ｆｏｌｋｍａｎ，１９８，ＸＩｔｈ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｏｆ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ（Ｖｅｒｓｔｒａｅｔａ，  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．），ｐｐ．５８３−５９６，ＬｅｕｖｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｅｕｖｅｎ）および関節炎等の疾病，ならびに悪性腫瘍成長は，制御されない新脈管形成により引き起こされうる。例えば，Ｆｏｌｋｍａｎ，１９７１，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２８５：１１８２−１１８６を参照。ＶＥＧＦが特異的に結合するレセプターは，そのようなプロセスにより引き起こされる異常な細胞成長が関与する脈管形成および／または新脈管形成，および種々の重症の疾病の制御および調節の重要かつ強力な治療標的である（Ｐｌｏｗｍａｎ，  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＤＮ＆Ｐ，７（６）：３３４−３３９）。より詳細には，血管新生におけるＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターの高度に特異的な役割のため，これは，血管の制御されない形成が関与する癌および他の疾病の治療に対する治療方法の選択すべき標的であろう。
【０１７８】
すなわち，本発明は，新脈管形成および／または脈管形成を阻害または促進するために，チロシンキナーゼシグナル伝達，例えばＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターシグナル伝達を制御および／または調節しうる化合物，すなわち，ＶＥＧＦ等のリガンドにより活性化されたときにＫＤＲ／ＦＬＫ−１により伝達されるシグナルを阻害，妨害または干渉する化合物を提供する。本発明の化合物はレセプターまたはチロシンキナーゼシグナル伝達経路に沿った他の成分で作用すると考えられるが，これらはまた，制御されない新脈管形成に起因する腫瘍細胞に直接作用することができる。
【０１７９】
一般的な"ｆｌｋ−１"レセプターの，ヒトおよびマウスの同等物の命名は異なるが，それらは多くの点において交換可能である。マウスのレセプターＦｌｋ−Ｉと，ヒトにおけるその同等物であるＫＤＲは，細胞内ドメインのうちの９３．４％の配列相同性を共有している。同様に，マウスＦｌｋ−１は，マウスＶＥＧＦと同じ親和性をもってヒトＶＥＧＦと結合し，したがっていずれの種に由来するリガンドによっても活性化される。Ｍｉｌｌａｕｅｒら，１９９３，Ｃｅｌｌ，７２：８３５−８４６；Ｑｕｉｎｎら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７５３３−７５３７。Ｆｌｋ−Ｉはまた，２９３細胞（ヒト胚性腎臓の線維芽細胞）において同時発現された場合，ヒトＲＴＫの基質（例えばＰＬＣ−γまたはｐ８５）と結合し，続いてチロシンをリン酸化する。
【０１８０】
したがって，Ｆｌｋ−１レセプターに依存したモデルは，ＫＤＲレセプターの理解に直接適用することができる。例えば，マウスのシグナル伝達経路を調節する化合物を同定する方法においてマウスＦｌｋ−１レセプターを使用することは，ヒトのシグナル伝達経路を調節するために用いることができる化合物，すなわちＫＤＲレセプターに関連した活性を調節する化合物の同定に直接適用することができる。すなわち，インビトロにおいてＫＤＲ／ＦＬＫ−１の阻害剤として同定された化学的化合物は，適当なインビボのモデルにおいて確認すことが可能である。インビボでのマウスおよびラット双方の動物モデルは，ＫＤＲ／ＦＬＫ−１に誘導されるシグナル伝達経路に作用する薬剤の，臨床上の潜在能力を調べるために優れた価値があることが証明されている。
【０１８１】
すなわち，本発明は，ＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターの酵素活性を変化させ，ＫＤＲ／ＦＬＫ−１により伝達されるシグナルを妨害することにより脈管形成および／または新脈管形成を制御，調節および／または阻害する化合物を提供する。すなわち，本発明は，多くの種類の固形腫瘍，例えば，限定されないが，神経膠芽細胞腫，黒色腫およびカポジ肉腫，および卵巣，肺，乳，前立腺，膵臓，結腸および類表皮癌腫を治療するための治療方法を提供する。さらに，データは，ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１媒介性シグナル伝達経路を阻害する化合物の投与はまた，血管腫，再狭窄，および糖尿病性網膜症の治療にも用いられることを示唆する。
【０１８２】
さらに，本発明は，他のレセプターが媒介する経路，例えば，ｆｌｔ−１レセプターを含む経路による脈管形成および新脈管形成の阻害に関する。
【０１８３】
ＲＴＫに媒介されるシグナル伝達は，特定の成長因子（リガンド）との細胞外相互作用により開始され，次にレセプターが二量化し，固有の蛋白質チロシンキナーゼ活性が過渡的に刺激され，自己リン酸化する。このことにより，内部シグナル伝達分子用の結合部位が形成され，種々の細胞質シグナリング分子との複合体の形成につながり，これは，適切な細胞応答（例えば，細胞分裂，細胞外微小環境に及ぼす代謝的効果等）を促進する。Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｕｌｌｒｉｃｈ，１９９２，Ｎｅｕｒｏｎ  ９：３０３−３９１を参照。
【０１８４】
ＫＤＲ／ＦＬＫ−１の細胞内領域と，ＰＤＧＦ−βレセプターの細胞内領域（５０．３％の相同性），および／または関連するｆｌｔ−１レセプターとの緊密な相同性は，重複したシグナル伝達経路の誘導を示している。例えばＰＤＧＦ−βレセプターについては，ｓｒｃファミリーのメンバー（Ｔｗａｍｌｅｙら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７６９６−７７００），ホスファチジルイノシトール−３’−キナーゼ（Ｈｕら，１９９２，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１２：９８１−９９０），ホスホリパーゼｃγ（Ｋａｓｈｉｓｈｉａｎ＆Ｃｏｏｐｅｒ，１９９３，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，４：４９−５１），ｒａｓ−ＧＴＰアーゼ活性化蛋白質（Ｋａｓｈｉｓｈｉａｎら，１９９２，ＥＭＢＯＪ．，１１：１３７３−１３８２），ＰＴＰ−ＩＤ／ｓｙｐ（Ｋａｚｕｌａｕｓｋａｓら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０９０：６９３９−６９４３），Ｇｒｂ２（Ａｒｖｉｄｓｓｏｎら，１９９４，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１４：６７１５−６７２６），およびアダプター分子ＳｈｃおよびＮｕｋ（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら，１９９３，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１３：６８８９−６８９６）が，異なる自己リン酸化部位に関与する領域に結合することが示されている。全般的には，Ｃｌａｅｓｓｏｎ−Ｗｅｌｓｈ，１９９４，Ｐｒｏｇ．Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｓ．，５：３７−５４参照のこと。したがって，ＫＤＲ／ＦＬＫ−１により活性化されるシグナル伝達経路は，ｒａｓ経路（Ｒｏｚａｋｉｓら，１９９２，Ｎａｔｕｒｅ，３６０：６８９−６９２），ＰＩ−３’−キナーゼ，ｓｒｃ介在性，およびｐｌｃγ介在性の経路を含むと考えられる。これらの経路の各々は，内皮細胞におけるＫＤＲ／ＦＬＫ−１の新脈管形成および／または脈管形成効果において，重大な役割を演じることができる。したがって本発明のまたさらなる特徴は，本文に述べた有機化合物を，新脈管形成および脈管形成を調節するべく用いることに関するが，それはかかる過程がこれらの経路によって調節されるためである。
【０１８５】
逆に，再狭窄などの，血管の収縮，狭窄，または閉鎖に関連した疾患にも関与することが示唆されており，本発明の方法により治療または予防することができる。
【０１８６】
繊維性疾患とは，細胞外マトリックスの異常な形成を表す。繊維性疾患の例には，肝硬変およびメサンギウム細胞増殖性疾患が含まれる。肝硬変は，肝臓瘢痕の形成を引き起こす細胞外マトリックスの組成の増加を特徴とする。肝臓瘢痕を引き起こす細胞外マトリックスの増加はまた，肝炎ウイルス等のウイルス感染に起因する。脂肪細胞は，肝硬変において主要な役割を果たすようである。示唆されている他の繊維性疾患には，アテローム性動脈硬化症が含まれる。
【０１８７】
メサンギウム細胞増殖疾患とは，メサンギウム細胞の異常な増殖により引き起こされる疾患を表す。メサンギウム増殖疾患には，種々のヒト腎臓疾病，例えば，糸球体腎炎，糖尿病性腎症，悪性腎硬化症，ならびに血栓性細小血管症候群，移植拒絶，および糸球体症が含まれる。ＲＴＫ  ＰＤＧＦ−Ｒは，メサンギウム細胞増殖の維持に関与することが示唆されている（Ｆｌｏｅｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ４３：４７Ｓ−５４Ｓ）。
【０１８８】
多くの癌は細胞増殖性疾患であり，先に記載されるように，ＰＫは細胞増殖性疾患と関連づけられてきた。すなわち，ＰＫ，例えば，ＲＴＫファミリーのメンバーが癌の発達と関連づけられてきたことも驚くべきことではない。ＥＧＦＲ（Ｔｕｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ６３：２２７−２３３，Ｔｏｒｐ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＡＰＭＩＳ  １００：７１３−７１９），ＨＥＲ２／ｎｅｕ（Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：７０７−７１２），およびＰＤＧＦ−Ｒ（Ｋｕｍａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，７：６２７−６３３）等のこれらのレセプターのいくつかは多くの腫瘍において過剰発現され，および／またはオートクリンループにより持続的に活性化される。事実，ほとんどの一般的かつ重症の癌においては，これらのレセプターの過剰発現（Ａｋｂａｓａｋ  ａｎｄ  Ｓｕｎｅｒ−Ａｋｂａｓａｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，１１１：１１９−１３３，Ｄｉｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｓ．６１：２４９−２７３，Ｋｏｒｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０，１３５２−１３６０），およびオートクリンループ（Ｌｅｅ  ａｎｄ  Ｄｏｎｏｇｈｕｅ，１９９２，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１８：１０５７−１０７０，Ｋｏｒｃ  ｅｔ  ａｌ．，前掲，Ａｋｂａｓａｋ  ａｎｄ  Ｓｕｎｅｒ−Ａｋｂａｓａｋ  ｅｔ  ａｌ．，前掲）が示されている。例えば，ＥＧＦＲは扁平上皮癌，星状細胞腫，神経芽細胞腫，頭頚部癌，肺癌，および膀胱癌と関連づけられている。ＨＥＲ２は乳，卵巣，胃，肺，膵臓，および膀胱の癌と関連づけられている。ＰＤＧＦ−Ｒは神経芽細胞腫，黒色腫，ならびに肺，卵巣および前立腺の癌と関連づけられている。ＲＴＫｃ−ｍｅｔはまた，悪性腫瘍形成と関連づけられている。例えば，ｃ−ｍｅｔは，他の癌の中でも特に，結腸直腸，甲状腺，膵臓，胃および造血細胞癌腫およびリンパ腫と関連づけられている。さらに，ｃ−ｍｅｔは白血病と結びつけられている。ｃ−ｍｅｔ遺伝子の過剰発現はまた，ホジキン病およびバーキット病を有する患者において検出されている。
【０１８９】
ＩＧＦ−ＩＲは，栄養上の支持およびＩＩ型糖尿病に関係づけられていることに加えて，いくつかの型の癌に関係づけられている。例えば，ＩＧＦ−Ｉはいくつかの型の腫瘍，例えばヒト乳癌の癌腫細胞（Ａｒｔｅａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４：１４１８−１４２３），および小細胞肺腫瘍（Ｍａｃａｕｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５０：２５１１−２５１７）のオートクリン成長刺激因子として示唆されている。さらに，ＩＧＦ−Ｉは神経系の正常な成長および分化に完全に関与しており，ヒトの神経膠腫のオートクリン刺激因子であるように見える。Ｓａｎｄｂｅｒｇ−Ｎｏｒｄｑｖｉｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：２４７５−２４７８。細胞増殖におけるＩＧＦ−ＩＲとそのリガンドの重要性は，培養されている多くの細胞型（線維芽細胞，上皮細胞，平滑筋細胞，Ｔリンパ球，骨髄性細胞，軟骨細胞，および骨芽細胞（骨髄の幹細胞）がＩＧＦ−Ｉによって成長するよう刺激されるという事実によってさらに支持される。Ｇｏｌｄｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｇｏｌｄｒｉｎｇ，１９９１，Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，１：３０１−３２６。ＢａｓｅｒｇａおよびＣｏｐｐｏｌａは，ＩＧＦ−ＩＲが形質転換の機構において中心的な役割を果たしていること，またそれ自体がヒトの広範囲の悪性腫瘍に対する治療的介入のための好ましい標的となり得ることを示唆している。Ｂａｓｅｒｇａ，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５：２４９−２５２，Ｂａｓｅｒｇａ，１９９４，Ｃｅｌｌ  ７９：９２７−９３９，Ｃｏｐｐｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１４：４５８８−４５９５。
【０１９０】
ＳＴＫは，特に乳癌を含む多くの型の癌に関与することが示唆されている（Ｃａｎｃｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，５４：５７１−７７（１９９３））。
【０１９１】
異常なＰＫ活性と疾病との関連性は，癌に限られない。例えば，ＲＴＫは，疾病，例えば，乾癬，糖尿病，子宮内膜症，新脈管形成，じゅく状斑の発達，アルツハイマー疾病，再狭窄，フォン・ヒッペル−リンダウ症候群，表皮過増殖および神経変性性疾病，加齢性黄斑変性および血管腫と関連づけられている。例えば，ＥＧＦＲは，角膜および皮膚の創傷治癒における関与が示唆されている。タイプＩＩ糖尿病においてインスリン−ＲおよびＩＧＦ−１Ｒの欠陥が示されている。特定のＲＴＫとその治療適応症との間のより完全な相関はＰｌｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＤＮ＆Ｐ７：３３４−３３９に記載されている。
【０１９２】
先に記載されているように，ＲＴＫのみならず，ＣＴＫ，例えば，限定されないが，ｓｒｃ，aｂ１，ｆｐｓ，ｙｅｓ，ｆｙｎ，ｌｙｎ，Ｉｃｋ，ｂｌｋ，ｈｃｋ，ｆｇｒおよびｙｒｋ（Ｂｏｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，６：３４０３−３４０９により概説）もまた，増殖および代謝性シグナル伝達経路に関与しており，したがって，本発明にかかる多くのＰＴＫ媒介性疾患に関与することが予測され，このことが実際に示されている。例えば，変異したｓｒｃ（ｖ−ｓｒｃ）は，トリにおいて発癌蛋白質（ｐｐ６０v-src）であることが示されている。さらに，その細胞性ホモログであるプロトオンコジンｐｐ６０c-srcは，多くのレセプターの発癌シグナルを伝達する。腫瘍におけるＥＧＦＲまたはＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現は，悪性細胞に特徴的であるが正常細胞では見られないｐｐ６０c-srcの構成的活性化につながる。一方，ｃ−ｓｒｃの発現に欠陥を有するマウスは大理石骨病的表現型を示し，このことは，ｃ−ｓｒｃが破骨細胞機能において鍵となるよう関与していること，および関連する疾患に関与している可能性を示唆する。
【０１９３】
同様に，Ｚａｐ７０は，自己免疫疾患に関連するかもしれないＴ−細胞シグナリングにおける関与が示唆されている。
【０１９４】
ＳＴＫは，炎症，自己免疫疾患，免疫応答，および過増殖疾患，例えば再狭窄，繊維症，乾癬，変形性関節症および慢性関節リウマチと関連づけられている。
【０１９５】
ＰＫはまた，胚着床における関与も示唆されている。すなわち，本発明の化合物は，そのような胚着床を防止する有効な方法を提供することができ，したがって，産児調節剤として有用であろう。本発明の化合物を用いて治療または予防しうるさらなる疾患は，免疫学的疾患，例えば自己免疫疾病，ＡＩＤＳおよび心臓血管疾患，例えばアテローム性動脈硬化症である。
【０１９６】
最後に，現在，ＲＴＫおよびＣＴＫの両方とも過剰免疫疾患に関与していることが疑われている。
【０１９７】
本発明の多数の例示的化合物がいくつかのＰＴＫに及ぼす影響の例は，以下の表２に示される。示される化合物およびデータは，いかなる意味においても本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。
【０１９８】
投与および医薬組成物
本発明の化合物またはその薬学的に許容しうる塩は，そのままでヒト患者に，または，上述の物質が適当な担体または賦形剤と混合されている医薬組成物中で投与することができる。薬剤の処方および投与の手法は，"Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，"ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ．，の最新版に見いだすことができる。
【０１９９】
本明細書において用いる場合，"投与する"または"投与"とは，本発明の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容しうる塩，または式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容しうる塩を含む医薬組成物を，ＰＫ関連疾患の予防または治療の目的で生物に輸送することを表す。
【０２００】
適当な投与経路には，限定されないが，経口，直腸内，経粘膜，または腸内投与，または筋肉内，皮下，骨髄内，鞘内，直接心室内，静脈内，硝子体内，腹腔内，鼻腔内，または眼内注射が含まれる。好ましい投与経路は経口および非経口である。
【０２０１】
あるいは，化合物は，全身的方法ではなく局所に，例えば化合物を固形癌内に直接，しばしばデポ剤または持続放出処方中で注射することにより投与してもよい。
【０２０２】
さらに，薬物はターゲティングされたドラッグデリバリーシステムにおいて，例えば腫瘍特異的抗体により被覆されたリポソーム中で投与してもよい。リポソームは腫瘍にターゲティングされ，選択的に取り込まれるであろう。
【０２０３】
本発明の医薬組成物は，当該技術分野においてよく知られる方法，例えば，慣用の混合，溶解，顆粒化，糖衣作成，研和，乳化，カプセル封入，捕捉，または凍結乾燥により製造することができる。
【０２０４】
本発明にしたがって使用するための医薬組成物は，活性化合物を薬剤として使用することができる製剤に加工することを容易にする賦形剤および補助剤を含む，１またはそれ以上の生理学的に許容しうる担体を用いて，慣用の方法で処方することができる。適切な処方は，選択される投与経路に依存する。
【０２０５】
注射用には，本発明の化合物を水性溶液，好ましくはハンクス溶液，リンゲル溶液，または生理的食塩緩衝液等の生理学的に適合性の緩衝液中で処方することができる。経粘膜投与用には，浸透すべき障壁に適した浸透剤が処方に用いられる。そのような浸透剤は当該技術分野において一般に知られている。
【０２０６】
経口投与のためには，活性化合物を当該技術分野においてよく知られる薬学的に許容しうる担体と混合することにより化合物を処方することができる。そのような担体は，本発明の化合物を，治療すべき患者による経口摂取のための錠剤，丸薬，糖衣剤，カプセル，液体，ゲル，シロップ，スラリー，懸濁液等として処方することを可能とする。経口で使用するための医薬製剤は，固体賦形剤を用いて，得られた混合物を任意にすりつぶし，所望の場合には適当な助剤を加えた後に，顆粒の混合物を加工して，錠剤または糖衣錠コアを得ることができる。適当な賦形剤には，特に，ラクトース，ショ糖，マンニトール，またはソルビトール等の糖類；トウモロコシデンプン，小麦デンプン，米デンプン，およびジャガイモデンプン等のセルロース製品，ゼラチン，トラガカントゴム，メチルセルロース，ヒドロキシプロピルメチルセルロース，カルボキシメチルセルロースナトリウム，および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等の増量剤などの賦形剤が含まれる。所望の場合には，架橋されたポリビニルピロリドン，寒天，またはアルギン酸またはその塩，例えばアルギン酸ナトリウム等の崩壊剤を加えてもよい。
【０２０７】
糖衣剤のコアは，適当なコーティングとともに供給される。この目的のためには，濃縮された糖溶液を用いることができる。これは，アラビアゴム，タルク，ポリビニルピロリドン，カルボポールゲル，ポリエチレングリコール，および／または二酸化チタン，ラッカー溶液，および適当な有機溶媒または溶媒混合物を任意に含むことができる。識別のため，あるいは活性化合物の用量の異なる組合せを特徴づけるため，染料または色素を錠剤または糖衣剤コーティングに添加してもよい。
【０２０８】
経口で使用することができる医薬組成物は，ゼラチンから作成されるプッシュフィットカプセル，ならびにゼラチンおよびグリセロール，ソルビトール等の可塑剤から作成される密封軟カプセルを含む。プッシュフィットカプセルは，活性成分を，ラクトース等の増量剤，デンプン等の結合剤，および／またはタルクおよびステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤，さらに任意に安定剤との混合物中に含むことができる。軟カプセルにおいては，活性化合物は脂肪油，流動パラフィン，または液体ポリエチレングリコール等の適当な液体中に溶解または懸濁することができる。これらの処方にはさらに安定剤を添加してもよい。
【０２０９】
用いることができる医薬組成物にはまた硬質ゼラチンカプセルが含まれる。非限定的例として，活性化合物カプセルの経口薬剤製品は，５０および２００ｍｇの用量強度（それぞれ処方コードＪ−０１１２４８−ＡＡ−００およびＪ−０１１２４８−ＡＡ−０１）である。２つの用量強度は同じ顆粒から作成し，異なるサイズの硬質ゼラチンカプセル，すなわち，５０ｍｇカプセル用にはサイズ３に，２００ｍｇカプセル用にはサイズ０に充填する。処方の組成は，例えば，表２に示したものであることができる。
【０２１０】
表２
【表２６】
0003663382.tif 000031
【０２１１】
カプセルは，褐色ガラスまたはプラスチック瓶中に包装して，活性な化合物を光から保護することができる。活性な化合物のカプセル処方を含む容器は調節された室温（１５−３０℃）で保存しなければならない。
【０２１２】
吸入による投与用には，本発明に従って用いられる化合物は，噴射剤，例えば，ジクロロジフルオロメタン，トリクロロフルオロメタン，ジクロロテトラフルオロエタン，二酸化炭素または他の適当な気体を用いて，加圧されたパックまたはネブライザーからエアーゾルスプレイの形状で便利に輸送される。加圧されたエアーゾルの場合，用量単位は計量された量を送達するべく備えられたバルブにより調節することができる。例えば吸入器または注入器において使用するためのゼラチン製のカプセルおよびカートリッジは，化合物の粉末混合物と，ラクトースまたはデンプン等の適当な粉末基剤とを含むよう処方することができる。
【０２１３】
化合物は，例えばボーラス注射または連続注入による非経口投与用に処方することができる。注射用の処方は，単位用量にて，例えばアンプルにて，あるいは添加された保存料と共に多用量容器中で提供することができる。組成物は油性または水性のベヒクル中で，懸濁液，溶液，または乳濁液等の形状をとることができ，懸濁剤，安定剤および／または分散剤等の製剤物質を含んでいてもよい。
【０２１４】
非経口投与用の薬剤処方は，水溶性の形態の活性化合物の水性溶液を含む。さらに，活性化合物の懸濁液は，親油性ベヒクル中に製造することができる。適切な親油性ベヒクルには，ゴマ油等の脂肪油，オレイン酸エチルまたはトリグリセリド等の合成脂肪酸エステル，またはリポソーム等を含む。水性の注射用懸濁液は，カルボキシメチルセルロースナトリウム，ソルビトール，またはデキストラン等の，懸濁液の粘度を増加させる物質を含んでいてもよい。任意に，懸濁液はまた，高度に濃縮された溶液の調製を可能にする，当該化合物の溶解性を増加させる適当な安定剤および／または薬剤を含んでいてもよい。
【０２１５】
あるいは，活性成分は粉体の形態であって，使用前に適当なベヒクル，例えば発熱物質を含まない滅菌水を用いて構成することができる。
【０２１６】
化合物はまた，例えばカカオバターまたは他のグリセリド等の慣用の坐剤基剤を用いて，坐剤または停留浣腸等の直腸用組成物に処方することができる。
【０２１７】
上述した処方に加えて，化合物はまたデポ製剤として処方することができる。そのような長時間作用性の処方は，埋込み（例えば皮下または筋肉内への）によるか，または筋肉内注射により投与することができる。本発明の化合物は，この投与経路用に，適当な高分子性または疎水性物質と共に（例えば許容される油剤中の乳濁液として），イオン交換樹脂と共に，溶けにくい塩等の溶けにくい誘導体として，処方することができる。
【０２１８】
本発明の疎水性化合物のための薬学的担体の非限定的例は，ベンジルアルコール，非極性界面活性剤，水混和性有機ポリマーおよび水性相を含む共溶媒系，例えばＶＰＤ共溶媒系である。ＶＰＤは，３％（ｗ／ｖ）ベンジルアルコール，８％（ｗ／ｖ）非極性界面活性剤ポリソルベート８０，および６５％（ｗ／ｖ）ポリエチレングリコール３００を純粋エタノール中に作成した溶液である。ＶＰＤ共溶媒系（ＶＰＤ：Ｄ５Ｗ）は，ＶＰＤを５％デキストロースの水溶液中に１：１で希釈したものである。この共溶媒系は疎水性化合物をよく溶解し，それ自体，全身投与に際して低い毒性を示す。本来，そのような共溶媒系の比率は，その溶解性および毒性特性を破壊することなく相当変化させることができる。さらに，共溶媒成分の同一性も変化させることができる。例えば，他の低毒性非極性界面活性剤をポリソルベート８０の代わりに用いることができ，ポリエチレングリコールの分画サイズは様々でありうる。他の生体適合性ポリマー，例えばポリビニルピロリドンをポリエチレングリコールの代わりに用いることができ，他の糖または多糖類をデキストロースの代わりに用いることができる。
【０２１９】
あるいは，疎水性の医薬化合物のための他の輸送系を用いてもよい。リポソームおよび乳剤は，疎水的薬剤のための輸送用ベヒクルまたは担体の例としてよく知られている。さらに，ある種の有機溶媒，例えばジメチルスルホキシドもまた用いることができるが，しばしば毒性がより高くなる。さらに，化合物は，持続放出系，例えば治療薬剤を含む固体疎水性ポリマーの準透過性マトリックスを用いて輸送することができる。種々の持続放出材料が確立されており，当業者にはよく知られている。持続放出カプセルはその化学的性質に応じて，数週間から１００日を越える期間，化合物を放出する。治療薬剤の化学的性質および生物学的安定性に応じて，さらに別の蛋白質安定化戦略を用いてもよい。
【０２２０】
本明細書に記載される医薬組成物は，適当な固体またはゲル相の担体または賦形剤を含んでいてもよい。そのような担体または賦形剤の例には，限定されないが，炭酸カルシウム，リン酸カルシウム，種々の糖，デンプン，セルロース誘導体，ゼラチン，およびポリエチレングリコールなどのポリマーが含まれる。
【０２２１】
本発明のＰＫ調節化合物の多くは，本発明の化合物が負にまたは正に荷電した種を形成する，生理学的に許容しうる塩として提供することができる。化合物が正に荷電した成分を形成する塩の例には，限定されないが，四級アンモニウム（本明細書において定義される），四級アンモニウム基の窒素原子が適切な酸と反応させた本発明の選択された化合物の窒素である塩，例えば，塩酸，硫酸，炭酸，乳酸，酒石酸，マレイン酸，コハク酸の塩が含まれる。本発明の化合物が負に荷電した種を形成している塩には，限定されないが，化合物中のカルボン酸基を適当な塩基（例えば水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ），水酸化カリウム（ＫＯＨ），水酸化カルシウム（Ｃａ（ＯＨ）2）等）と反応させることにより形成されるナトリウム，カリウム，カルシウムおよびマグネシウム塩が含まれる。
【０２２２】
本発明において使用するのに適した医薬組成物には，活性成分がその意図される目的，例えば，ＰＫ活性の調節またはＰＫ関連疾患の治療または予防を達成するのに有効な量で含まれている組成物が含まれる。より詳細には，治療上有効量とは，疾病の症状を予防，緩和または改善するのに，または治療している被験者の生存を長くするのに有効な化合物の量を意味する。
【０２２３】
治療上有効量の決定は，特に本明細書に提供される詳細な開示に鑑みて，十分に当業者の能力の範囲内である。
【０２２４】
本発明の方法において用いられる任意の化合物について，治療上有効な量または用量は，最初は細胞培養アッセイから見積もることができる。次に，動物モデルにおいて，培養細胞において決定されたＩＣ50（すなわちＰＫ活性の最大阻害の半分を達成する試験化合物の濃度）を含む循環濃度範囲を達成するような用量を処方することができる。次にそのような情報を用いてヒトにおける有用な用量をさらに正確に決定することができる。
【０２２５】
本明細書に記載される化合物の毒性および治療有効性は，培養細胞または実験動物における標準的な薬理学的方法により，例えば対象化合物についてＩＣ50およびＬＤ50（いずれも本明細書において議論される）を決定することにより，決定することができる。これらの培養細胞アッセイおよび動物研究から得られるデータは，ヒトにおいて用いるためのある範囲の投与量を処方するために用いることができる。投与量は，用いる投与形態および用いる投与経路により様々でありうる。正確な処方，投与経路，および投与量は，個々の医師が，患者の状態を考慮して選択することができる（例えば，Ｆｉｎｇｌ  ｅｔ  ａｌ．１９７５，"Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ"，Ｃｈ．１，ｐ．１を参照）。
【０２２６】
投与量および間隔は，個々に，活性成分がキナーゼ調節効果を維持するのに十分な血漿レベルを与えるよう調節することができる。このような血漿レベルは最小有効濃度（ＭＥＣ）と称される。ＭＥＣは，各化合物について異なるが，インビトロのデータ，例えば，本明細書に記載されるアッセイを用いて，キナーゼの５０−９０％の阻害を達成するのに必要な濃度から見積もることができる。ＭＥＣを達成するのに必要な投与量は，個々の特性および投与経路に依存するであろう。しかし，血漿濃度はＨＰＬＣアッセイまたはバイオアッセイを用いて決定することができる。
【０２２７】
投与間隔もまた，ＭＥＣ値を用いて決定することができる。化合物は，１０−９０％の時間，好ましくは３０−９０％の時間，最も好ましくは５０−９０％の時間，ＭＥＣより高い血漿レベルを維持する投与計画を用いて投与すべきである。
【０２２８】
現在のところ，式（Ｉ）の化合物の治療上有効量は，１日あたり約２５ｍｇ／ｍ2−１５００ｍｇ／ｍ2の範囲内でありうる。好ましくは約３ｍｇ／ｍ2／ｄａｙであり，さらにより好ましくは５０ｍｇ／ｑｍ  ｑｄであり，４００ｍｇ／ｑｄまでである。
【０２２９】
局所投与または選択的取り込みの場合には，薬剤の有効な局所濃度は血漿濃度とは関係ないであろう。当該技術分野において知られる他の方法を用いて，正確な投与量および間隔を決定することができる。
【０２３０】
投与される組成物の量は，もちろん，治療中の患者，苦痛の激しさ，投与方法，および担当医師の判断に依存するであろう。
【０２３１】
組成物は，所望の場合には，活性成分を含む１またはそれ以上の単位用量形を含んでいてもよいパックまたはディスペンサー装置，例えばＦＤＡに認可されたキット中で提供することができる。パックは，例えば，ブリスターパックなどの金属またはプラスチック箔を含むことができる。パックまたはディスペンサー装置には，投与の指示が添付されていてもよい。パックまたはディスペンサー装置はまた，薬剤の製造，使用，または販売を規制する政府機関によって規定された形式の，容器に付随した注意書が添付されていてもよく，その注意書はヒトまたは獣医学的投与用の化合物の形状の当該機関による承認を反映するものである。そのような注意書は，例えば米国食品医薬品局により処方箋調剤薬として承認されたラベルによるものか，または承認された製品に差込まれたものでもよい。適合した薬学的担体中に処方された，本発明の化合物を含む組成物もまた製造され，適当な容器内に配置され，さらに指示された状態の治療のためにラベルを付すことができる。ラベル上に示される適切な状態としては，腫瘍の治療，新脈管形成の阻害，線維症，糖尿病等の治療が挙げられる。
【０２３２】
本発明の１つの観点においては，上述した疾病および疾患の治療のために，本明細書に記載される化合物またはその塩またはプロドラッグを他の化学療法剤と組み合わせることができる。例えば，本発明の化合物，塩またはプロドラッグは，アルキル化剤，例えば，フルオロウラシル（５−ＦＵ）単独で，またはさらにロイコボリンと組み合わせて；または，他のアルキル化剤，例えば，限定されないが，他のピリミジン類似体，例えば，ＵＦＴ，カペシタビン，ゲムシタビンおよびシタラビン，アルキルスルホネート，例えばブルスファン（慢性顆粒球性白血病の治療に用いられる），イムプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン類，例えばベンゾデパ，カルボコン，メツレデパおよびウレデパ；エチレンイミン類およびメチルメラミン類，例えばアルトレタミン，トリエチレンメラミン，トリエチレンホスホルアミド，トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチロールメラミン，およびナイトロジェンマスタード類，例えばクロラムブシル（慢性リンパ性白血病，原発性マクログロブリン血症および非ホジキンリンパ腫の治療において用いられる），シクロホスファミド（ホジキン病，多発性骨髄腫，神経芽細胞腫，乳癌，卵巣癌，肺癌，ウイルムス腫瘍および横紋筋肉腫の治療において用いられる），エストラムスチン，イフォスファミド，ノベムブリチン，プレドニムスチンおよびウラシルマスタード（原発性血小板増加症，非ホジキンリンパ腫，ホジキン病および卵巣癌用）；およびトリアジン類，例えばダカルバジン（軟組織肉腫用）と組み合わせることができる。
【０２３３】
本発明の化合物，塩またはプロドラッグはまた，他の抗代謝化学療法剤，例えば，限定されないが，葉酸類似体（例えば，メトトレキセート（急性リンパ性白血病，絨毛癌腫，菌状息肉腫，乳癌，頭頸部癌および肺癌，骨形成性肉腫の治療に用いられる）およびプテロプテリン），プリン類似体，例えばメルカプトプリンおよびチオグアニン（急性顆粒球性白血病，急性リンパ性白血病および慢性顆粒球性白血病の治療に用いられる）と組み合わせて用いることができる。
【０２３４】
さらに，本発明の化合物，塩またはプロドラッグは，天然産物化学療法剤，例えば，限定されないが，ビンカアルカロイド（例えばビンブラスチン（乳癌および精巣癌に用いられる），ビンクリスチン，ビンデシン），エピポドフィロトキシン類（例えばエトポシド，テニポシド（両方とも精巣癌およびカポジ肉腫の治療に用いられる）），抗生物質化学療法剤（例えばダウノルビシン，ドキソルビシン，エピルビシン，マイトマイシン（胃癌，子宮頸癌，結腸癌，乳癌，膀胱癌および膵臓癌に用いられる），ダクチノマイシン，テモゾロミド，プリカマイシン，ブレオマイシン（皮膚癌，食道癌および尿生殖器管癌に用いられる）および酵素的化学療法剤，例えばＬ−アスパラギナーゼと組み合わせて用いることができる。
【０２３５】
上述に加えて，本発明の化合物，塩またはプロドラッグは，化学療法剤，例えば白金配位錯体（例えばシスプラチン），置換尿素（例えばヒドロウレア），メチルヒドラジン誘導体（例えばプロカルバジン），副腎皮質抑制剤（例えばミトーテン，アミノグルテチミド），ならびにホルモンおよびアンタゴニスト，例えばアドレノコルチコステロイド（例えばプレドニゾン），プロゲスチン（例えばヒドロキシプロゲステロンカプロネート），エストロゲン（例えばジエチルスチルベストロール），抗エストロゲン（例えばタモキシフェン）およびアンドロゲン（例えばテストステロンプロピオネート），およびアロマターゼ阻害剤（例えばアナストロゾール）と組み合わせて用いることができる。
【０２３６】
最後に，本発明の化合物の組み合わせは，ミトザントロンまたはパクリタキセルとの組み合わせにおいて，固形腫瘍癌または白血病，例えば，限定されないが，急性骨髄性（非リンパ球）白血病の治療に有効であることが企図される。
【０２３７】
一般的合成方法
以下の一般的方法論を用いて，本発明の化合物を製造することができる。適切に置換された２−オキシインドール（１当量），適切に置換されたアルデヒド（１．２当量）および塩基（０．１当量）を，溶媒（１−２ｍｌ／ｍｍｏｌ２−オキシインドール）中で混合し，次に混合物を約２から約１２時間加熱する。冷却した後，形成する沈澱物を濾過し，冷エタノールまたはエーテルで洗浄し，真空乾燥して，固体生成物を得る。沈澱物が形成しない場合には，反応混合物を濃縮し，残渣をジクロロメタン／エーテル中で砕き，得られる固体を濾過により回収し，乾燥する。生成物は任意にクロマトグラフィーによりさらに精製してもよい。
【０２３８】
塩基は有機塩基でも無機塩基でもよい。有機塩基を用いる場合には，好ましくはこれは窒素塩基である。有機窒素塩基の例には，限定されないが，ジイソプロピルアミン，トリメチルアミン，トリエチルアミン，アニリン，ピリジン，１，８−ジアザビシクロ［５．４．１］ウンデカ−７−エン，ピロリジンおよびピペリジンが含まれる。
【０２３９】
無機塩基の例としては，限定されないが，アンモニア，アルカリ金属またはアルカリ土類金属の水酸化物，リン酸塩，炭酸塩，重炭酸塩，酢酸塩，重硫酸塩およびアミドが挙げられる。アルカリ金属には，リチウム，ナトリウムおよびカリウムが含まれ，アルカリ土類金属にはカルシウム，マグネシウムおよびバリウムが含まれる。
【０２４０】
本発明の現在好ましい態様においては，溶媒がプロトン性溶媒，例えば水またはアルコールであるとき，塩基はアルカリ金属またはアルカリ土類の無機塩基，好ましくは，アルカリ金属またはアルカリ土類の水酸化物である。
【０２４１】
当業者には，有機合成の既知の一般原則と本明細書の記載の両方に基づいて，意図される反応にはいずれの塩基が最も適当であるかが明らかであろう。
【０２４２】
反応を実施する溶媒は，プロトン性溶媒であっても非プロトン性溶媒であってもよい。好ましくは，プロトン性溶媒である。"プロトン性溶媒"は，酸素または窒素原子に共有結合した水素原子を有する溶媒であり，これは水素原子をかなり酸性にし，このため水素結合を介して溶質と"共有"されることができる。プロトン性溶媒の例としては，水およびアルコールが挙げられるが，これらに限定されない。
【０２４３】
"非プロトン性溶媒"は，極性であっても非極性であってもよいが，いずれの場合も，酸性水素を含まず，したがって，溶質と水素結合を形成することができない。非極性非プロトン性溶媒の例としては，限定されないが，ペンタン，ヘキサン，ベンゼン，トルエン，塩化メチレンおよび四塩化炭素が挙げられる。極性非プロトン性溶媒の例は，クロロホルム，テトラヒドロフラン，ジメチルスルホキシドおよびジメチルホルムアミドである。
【０２４４】
本発明の現在好ましい態様においては，溶媒はプロトン性溶媒，好ましくは，水またはエタノール等のアルコールである。
【０２４５】
反応は，室温より高い温度で行う。温度は一般に約３０℃−約１５０℃，好ましくは，約８０℃−約１００℃，最も好ましくは約７５℃−約８５℃であり，これはおよそエタノールの沸点である。"約"とは，温度範囲が，好ましくは示される温度の１０℃以内，より好ましくは示される温度の５℃以内，最も好ましくは示される温度の２℃以内であることを意味する。すなわち，例えば，"約７５℃"とは，７５℃±１０℃，好ましくは７５℃±５℃，最も好ましくは７５℃±２℃である。
【０２４６】
２−オキシインドールおよびアルデヒドは，化学の技術分野でよく知られている技術を用いて容易に合成することができる。当業者には，本発明の化合物を形成する他の合成経路が利用可能であり，以下の記載は例示のためにのみ提供され，限定するものではないことが理解されるであろう
【０２４７】
実施例
以下の製造例および実施例は，当業者が本発明をより明確に理解し，これを実施することを可能とする。これらの実施例は，本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではなく，単に例示的なものであり，本発明の代表例である。
【０２４８】
合成実施例
方法Ａ：ピロールのホルミル化
ＰＯＣｌ3（１．１当量）を−１０℃でジメチルホルムアミド（３当量）に滴加し，次にジメチルホルムアミドに溶解した適当なピロールを加える。２時間撹拌した後，反応混合物をＨ2Ｏで希釈し，１０ＮＫＯＨでアルカリ性にしてｐＨ１１とする。形成する沈澱物を濾過により回収し，Ｈ2Ｏで洗浄し，真空オーブン中で乾燥して，所望のアルデヒドを得る。
【０２４９】
方法Ｂ：ピロールカルボン酸エステルのサポニン化
ＥｔＯＨ中のピロールカルボン酸エステルおよびＫＯＨ（２−４当量）の混合物を，薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により反応の完了が示されるまで還流する。冷却した反応混合物を１ＮＨＣｌで酸性にしてｐＨ３とする。形成する沈澱物を濾過により回収し，Ｈ2Ｏで洗浄し，真空オーブン中で乾燥して，所望のピロールカルボン酸を得る。
【０２５０】
方法Ｃ：アミド化
ジメチルホルムアミドに溶解したピロールカルボン酸の撹拌溶液（０．３Ｍ）に，１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）カルボジイミド（１．２当量），１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．２当量），およびトリエチルアミン（２当量）を加える。適当なアミンを加え（１当量），反応液をＴＬＣにより反応の完了が示されるまで撹拌する。次に酢酸エチルを反応混合物に加え，溶液を飽和ＮａＨＣＯ3およびブライン（過剰の塩を含む）で洗浄し，無水ＭｇＳＯ4で乾燥し，濃縮して，所望のアミドを得る。
【０２５１】
方法Ｄ：アルデヒドとカルボン酸置換基を含むオキシインドールとの縮合
エタノール中のオキシインドール（１当量），１当量のアルデヒドおよび１−３当量のピペリジン（またはピロリジン）の混合物（０．４Ｍ）を９０−１００℃でＴＬＣにより反応の完了が示されるまで撹拌する。次に混合物を濃縮し，残渣を２ＮＨＣｌで酸性にする。形成する沈澱物をＨ2ＯおよびＥｔＯＨで洗浄し，次に真空オーブン中で乾燥して，生成物を得る。
【０２５２】
方法Ｅ：アルデヒドとカルボン酸置換基を含まないオキシインドールとの縮合
エタノール中のオキシインドール（１当量），１当量のアルデヒドおよび１−３当量のピペリジン（またはピロリジン）の混合物（０．４Ｍ）を９０−１００℃で，ＴＬＣにより反応の完了が示されるまで撹拌する。混合物を室温に冷却し，形成する固体を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，生成物を得る。反応混合物を冷却したときに沈澱物が形成しない場合には，混合物を濃縮し，カラムクロマトグラフィーにより精製する。
【０２５３】
Ｃ．オキシインドール合成の実施例
以下の代表的オキシインドールの合成の実施例は，いかなる意味においても本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。本発明の化合物を作成するために用いるべき，示されるオキシインドールならびに他のオキシインドールを得る別の経路は，以下の開示に基づいて当業者には明らかとなるであろう。そのような合成およびオキシインドールは本発明の範囲および精神の範囲内である。
【０２５４】
５−アミノ−２−オキシインドール
５−ニトロ−２−オキシインドール（６．３ｇ）をメタノール中で１０％パラジウム担持炭素で水素化して，３．０ｇ（６０％収率）の表題化合物を白色固体として得た。
【０２５５】
５−ブロモ−２−オキシインドール
２０ｍＬアセトニトリル中の２−オキシインドール（１．３ｇ）を１０℃に冷却し，２．０ｇのＮ−ブロモスクシンイミドを撹拌しながらゆっくり加えた。反応液を−１０℃で１時間，０℃で２時間撹拌した。沈澱物を回収し，水で洗浄し，乾燥して，１．９ｇ（９０％収率）の表題化合物を得た。
【０２５６】
４−メチル−２−オキシインドール
２０ｍＬの乾燥エーテル中のジエチルオキサレート（３０ｍＬ）を撹拌しながら５０ｍＬの乾燥エーテルに懸濁した１９ｇのカリウムエトキシドに加えた。混合物を氷浴中で冷却し，２０ｍＬの乾燥エーテル中の２０ｍＬの３−ニトロ−ｏ−キシレンをゆっくり加えた。粘稠な暗赤色混合物を０．５時間加熱還流し，濃縮して暗赤色固体を得，これを１０％水酸化ナトリウムでほぼすべての固体が溶解するまで処理した。暗赤色混合物を３０％過酸化水素で赤色が黄色に変化するまで処理した。混合物を１０％水酸化ナトリウムと３０％過酸化水素で，暗赤色が存在しなくなるまで交互に処理した。固体を濾別し，濾液を６Ｎ塩酸で酸性にした。得られた沈澱物を真空濾過により回収し，水で洗浄し，真空下で乾燥して，９．８ｇ（４５％収率）の２−メチル−６−ニトロフェニル酢酸を灰白色固体として得た。固体をメタノール中で１０％パラジウム担持炭素で水素化して，９．０４ｇの表題化合物を白色固体として得た。
【０２５７】
７−ブロモ−５−クロロ−２−オキシインドール
５−クロロ−２−オキシインドール（１６．８ｇ）および１９．６ｇのＮ−ブロモスクシンイミドを１４０ｍＬのアセトニトリルに懸濁し，３時間還流した。２時間還流したとき，薄層クロマトグラフィー（シリカ，酢酸エチル）は５−クロロ−２−オキシインドールまたはＮ−ブロモスクシンイミド（Ｒｆ０．８），生成物（Ｒｆ０．８５）および第２の生成物（Ｒｆ０．９）を示し，この比率はさらに１時間の還流後も変化しなかった。混合物を１０℃に冷却し，沈澱物を真空濾過により回収し，２５ｍＬのエタノールで洗浄し，漏斗で２０分間吸引乾燥して，１４．１ｇの湿潤生成物を得た（５６％収率）。固体を２００ｍＬの変性エタノールに懸濁し，撹拌することによりスラリー洗浄し，１０分間還流した。混合物を氷浴中で１０℃に冷却した。固体生成物を真空濾過により回収し，２５ｍＬのエタノールで洗浄し，真空下で４０℃で乾燥して，１２．７ｇ（５１％収率）の７−ブロモ−５クロロ−２−オキシインドールを得た。
【０２５８】
５−フルオロ−２−オキシインドール
５−フルオロイサチン（８．２ｇ）を５０ｍＬのヒドラジン水和物に溶解し，１．０時間還流した。次に反応混合物を氷水に注加した。次に沈澱物を濾過し，水で洗浄し，真空オーブン中で乾燥して，表題化合物を得た。
【０２５９】
５−ニトロ−２−オキシインドール
２−オキシインドール（６．５ｇ）を２５ｍＬの濃硫酸に溶解し，混合物を−１０から−１５℃に保持し，ここに２．１ｍＬの発煙硝酸を滴加した。硝酸の滴加が終了した後，反応混合物を０℃で０．５時間撹拌し，氷水に注加した。沈澱物を濾過により回収し，水で洗浄し，５０％酢酸から結晶化した。結晶生成物を濾過し，水で洗浄し，真空下で乾燥して，６．３ｇ（７０％）の５−ニトロ−２−オキシインドールを得た。
【０２６０】
５−アミノスルホニル−２−オキシインドール
２７ｍＬのクロロスルホン酸を入れた１００ｍＬフラスコに，１３．３ｇの２−オキシインドールをゆっくり加えた。添加の間，反応温度を３０℃以下に保持した。添加後，反応混合物を室温で１．５時間撹拌し，６８℃で１時間加熱し，冷却し，水に注加した。沈澱物を水で洗浄し，真空オーブン中で乾燥して，１１．０ｇの５−クロロスルホニル−２−オキシインドール（５０％収率）を得，これをさらに精製することなく用いた。
【０２６１】
５−クロロスルホニル−２−オキシインドール（２．１ｇ）を１０ｍＬのエタノール中の１０ｍＬの水酸化アンモニウムに加え，室温で一夜撹拌した。混合物を濃縮し，固体を真空濾過により回収して，０．４ｇ（２０％収率）の表題化合物を灰白色固体として得た。
【０２６２】
５−イソプロピルアミノスルホニル−２−オキシインドール
２７ｍＬクロロスルホン酸を入れた１００ｍＬフラスコに，１３．３ｇの２−オキシインドールをゆっくり加えた。添加の間，反応温度を３０℃以下に保持した。反応混合物を室温で１．５時間撹拌し，６８℃に１時間加熱し，冷却し，水に注加した。形成した沈澱物を濾過し，水で洗浄し，真空オーブン中で乾燥して，１１．０ｇ（５０％）の５−クロロスルホニル−２−オキシインドールを得，これをさらに精製することなく用いた。
【０２６３】
５０ｍＬのジクロロメタン中の３ｇ５−クロロスルホニル−２−オキシインドール，１．１５ｇイソプロピルアミンおよび１．２ｍＬのピリジンの懸濁液を室温で４時間撹拌し，この間に白色固体が形成した。固体を真空濾過により回収し，熱エタノールでスラリー洗浄し，冷却し，真空濾過により回収し，真空下で４０℃で一夜乾燥して，１．５ｇ（４５％）の５−イソプロピルアミノスルホニル−２−オキシインドールを得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．６９（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．６３（ｄｄ，Ｊ＝２および８Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ−ＳＯ2−），６．９３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），３．５７（ｓ，２Ｈ），３．１４３．２３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−（ＣＨ3）2），０．９４（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＣＨ3）．
【０２６４】
５−フェニルアミノスルホニル−２−オキシインドール
ジクロロメタン（２０ｍｌ）中の５−クロロスルホニル−２−オキシインドール（１．６２ｇ，７ｍｍｏｌ），アニリン（０．７８２ｍＬ，８．４ｍｍｏｌ）およびピリジン（１ｍＬ）の懸濁液を室温で４時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し，１Ｎ塩酸（１６ｍＬ）で酸性にした。有機層を炭酸水素ナトリウムおよびブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮した。残渣をエタノール（３ｍＬ）で洗浄し，次にシリカゲルでクロマトグラフィーを行い，メタノール／ジクロロメタン１：９で溶出して，５−フェニルアミノスルホニル−２−オキシインドールを得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．７１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．１０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．５７−７．６１（ｍ，２Ｈ），７．１７−７．２２（ｍ，２Ｈ），７．０６７．０９（ｍ，２Ｈ），６．９７−７．０（ｍ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５２（ｓ，２Ｈ）．
【０２６５】
２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ピリジン−３−イルアミド
ピリジン（１５ｍＬ）中の５−クロロスルホニル−２−オキシインドール（３ｇ）および３−アミノピリジン（１．４６ｇ）の溶液を室温で一夜撹拌し，その間に褐色固体が存在していた。固体を濾過し，エタノールで洗浄し，真空下で乾燥して，１．４ｇ（３８％）の２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ピリジン−３−イルアミドを得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．７４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．３９（ｓ，１Ｈ，ＳＯ2ＮＨ），８．２７−８．２８（ｄ，１Ｈ），８．２１−８．２３（ｍ，１Ｈ），７．５９−７．６２（ｍ，２Ｈ），７．４４−７．６８（ｍ，１Ｈ），７．２４−７．２８（ｍ，１Ｈ），６．６９−６．７１（ｄ，１Ｈ），３．５４（ｓ，２Ｈ）．
ＭＳｍ／ｚ（ＡＰＣＩ＋）２９０．２．
【０２６６】
５−フェニルオキシインドール
５−ブロモ−２−オキシインドール（５ｇ，２３．５ｍｍｏｌ）を，１１０ｍＬトルエンおよび１１０ｍＬエタノールに，撹拌しわずかに加熱しながら溶解した。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．９ｇ，１．６ｍｍｏｌ），次に４０ｍＬ（８０ｍｍｏｌ）２Ｍ水性炭酸ナトリウムを加えた。この混合物にベンゼンボロン酸（３．７ｇ，３０．６ｍｍｏｌ）を加え，混合物を１００℃の油浴中で１２時間加熱した。反応液を冷却し，酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し，飽和炭酸水素ナトリウム（２００ｍＬ），水（２００ｍＬ），１ＮＨＣ１（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し，濃縮して，褐色固体を得た。ジクロロメタン中で砕いて，３．８ｇ（７７％）の５−フェニル−２−オキシインドールを褐色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝１．８および７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５ｔｏ７．３５（ｍ，５Ｈ），７．２９（ｍ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＯ）．
ＭＳｍ／ｚ２０９［Ｍ＋］．
【０２６７】
同様にして，以下のオキシインドールを製造することができる：
６−（３，５−ジクロロフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．４６（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．６４（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，２Ｈ），７．５７（ｍ，１Ｈ），７．２７（ｍ，２Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，１Ｈ），３．５（ｓ，２Ｈ）．ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ２７７／２７９［Ｍ］＋．
【０２６８】
６−（４−ブチルフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，３Ｈ），７．１７（ｄｄ，Ｊ＝１．５および７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），３．４８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＯ），２．６０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3），１．５７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．３２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），０．９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ3）．
【０２６９】
６−（５−イソプロピル−２−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．２９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．１６７．２１（ｍ，２Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９７−７．０１（ｍ，２Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．４７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＯ），２．８６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2），１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2）
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ２８１［Ｍ］＋．
【０２７０】
６−（４−エチルフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．５０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄｄ，Ｊ＝１．６＆７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），３．４８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＯ），２．６３（ｑ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＨ3），１．２０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ２３７［Ｍ］＋．
【０２７１】
６−（３−イソプロピルフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３７（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．４３（ｍ，１Ｈ），７．３５−７．３９（ｍ，１Ｈ），７．１７−７．２７（ｍ，３Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＯ），２．９５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2），１．２４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2）
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ２５１［Ｍ］＋．
【０２７２】
６−（２，４−ジメトキシフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．２８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．１７（ｍ，２Ｈ），６．９３（ｄｄ，Ｊ＝１．６＆７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），６．６３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．５８（ｄｄ，Ｊ＝２．４＆８．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．７４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．４５（ｓ，２Ｈ，ＣＨＯ）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ２６９［Ｍ］＋．
【０２７３】
６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．５１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．８１（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄｄ，Ｊ＝１．８および５．７Ｈｚ，１Ｈ），８（ｍ，１Ｈ），７．４５（ｄｄ，Ｊ＝５．７および９．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３（ｍ，２Ｈ），７．０５（ｓ，１Ｈ），３．５１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＯ）．
ＭＳｍ／ｚ２１０［Ｍ］＋．
【０２７４】
２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（３−クロロ−４−エトキシフェニル）−アミド
ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中の４−カルボキシ−２−オキシインドール（２００ｍｇ，１．１３ｍｍｏｌ）および３−クロロ−４−メトキシフェニルアミン（１７８ｍｇ，１．１３ｍｍｏｌ）の溶液に，室温で，ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ試薬，９９７ｍｇ，２．２６ｍｍｏｌ）を加え，次に４−ジメチルアミノピリジン（２０６ｍｇ，１．６９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で７２時間撹拌した。次に，反応液を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し，飽和炭酸水素ナトリウム（１００ｍＬ），水，２Ｎ塩酸（１００ｍＬ），水（３ｘ２００ｍＬ）およびブラインで洗浄した。次にこれを硫酸マグネシウムで乾燥し，濃縮した。残渣を酢酸エチル中で砕いて，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−アミドをピンク色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．５０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．１２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．９（ｓ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｄｄ，Ｊ＝２．５＆９Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ．＝９Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．６９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ３１６［Ｍ］＋．
【０２７５】
４−カルボキシ−２−オキシインドール
ヘキサン中のトリメチルシリルジアゾメタンの溶液（２Ｍ）を，２０ｍＬメタノール中の２．０１ｇの２−クロロ−３−カルボキシニトロベンゼンの溶液に室温で，さらにガスが発生しなくなるまで滴加した。次に酢酸を加えて，過剰のトリメチルシリルジアゾメタンを急冷した。反応混合物を真空下で蒸発させ，残渣をオーブン中で一夜乾燥した。得られた２−クロロ−３−メトキシカルボニルニトロベンゼンは，以下の反応において用いるのに十分に純粋であった。
【０２７６】
ジメチルマロネート（６．０ｍＬ）を１５ｍＬＤＭＳＯ中の２．１ｇの水素化ナトリウムの氷冷懸濁液に加えた。反応混合物を１００℃で１時間撹拌し，次に室温に冷却した。２−クロロ−３−メトキシカルボニルニトロベンゼン（２．１５ｇ）を一度に加え，混合物を１００℃で１．５時間加熱した。次に反応混合物を室温に冷却し，氷水に注加し，酸性にしてｐＨ５とし，酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮して，３．０ｇのジメチル２−メトキシカルボニル−６−ニトロフェニル−マロネートを得た。
【０２７７】
ジメチル２−メトキシカルボニル−６−ニトロフェニルマロネート（３．０ｇ）を５０ｍＬの６Ｎ塩酸中で一夜還流した。混合物を濃縮乾固し，２０ｍＬのエタノールおよび１．１ｇの塩化スズ（ＩＩ）を加え，混合物を２時間還流した。混合物をセライトを通して濾過し，濃縮し，シリカゲルで酢酸エチル：ヘキサン：酢酸を溶出液として用いてクロマトグラフィーを行って，０．６５ｇ（３７％）の４−カルボキシ−２−オキシインドールを白色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．９６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），１０．７４（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｓ，２Ｈ）．
【０２７８】
Ｄ．ピロール置換２−インドリノンの合成
実施例１
４−メチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸
４−メチル−２−ピロールカルボン酸エチルエステル（市販）を方法Ａを用いてホルミル化して，（７３％）の５−ホルミル−４−メチル−２−ピロールカルボン酸エチルエステルを得た。次にこれを方法Ｂを用いて加水分解して，５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（５８％）を得た。
【０２７９】
オキシインドール（１３３ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を方法Ｄを用いて５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（１５３ｍｇ）と縮合させて，２６８ｍｇ（１００％）の表題化合物を橙赤色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．８４（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１２．８４（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），１０．９８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．１８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
ＭＳ（ネガティブモード）２６６．８［Ｍ−１］＋．
【０２８０】
実施例２
４−メチル−５−（１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸
１−メチル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１４７ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を方法Ｄを用いて５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（１５３ｍｇ）と縮合させて，２５０ｍｇ（８６％）の表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．８２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１２．８８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，７．８３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．２６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０２−７．０９（ｍ，２Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
ＭＳｍ／ｚ２８３．０［Ｍ＋１］＋．
【０２８１】
実施例３
４−メチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
オキシインドール（１０５ｍｇ，０．７９ｍｍｏｌ）を方法Ｅを用いて５−ホルミル４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（１１０ｍｇ，０．６７ｍｍｏｌ）と縮合させて，１５３．２ｍｇ（８１％）の表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．９８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ，Ｈビニル），７．２（ｄｔ，Ｊ＝１．２＆７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄｔ，Ｊ＝１．２，７．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）．
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ２８３［Ｍ＋＋１］．
【０２８２】
実施例４
５−（５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステル
５−クロロ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（２．２２ｇ，１３．２ｍｍｏｌ）を方法Ｅを用いて５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステル（２．４３ｇ）と縮合させて，４．１ｇ（９４％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．９５（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．９８（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．１８（ｄｄ，Ｊ＝２．２＆８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），７．３４（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’），４．２７（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），２．３３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．２９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ３３０［Ｍ＋］．
【０２８３】
実施例５
５−（５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸
メタノール（２５ｍＬ）およびエタノール（２５ｍＬ）中の５−（５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステル（１．３ｇ，４ｍｍｏｌ）および水酸化カリウムの混合物を一夜加熱還流した。不溶性物質を濾過により除去し，混合物を６Ｎ塩酸で中性にして，０．８７６ｇの（７０％）表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．８０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１２．９０．（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），１１．０６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．０２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．８１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．２０（ｄｄ，Ｊ＝１．８＆８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），６．７２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’），２．３５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ３０２［Ｍ＋］．
【０２８４】
実施例６
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ピロリジン−１−イル−プロピル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（０．１６ｇ，０．７６ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ピロリジン−１−イルプロピル）アミド（０．２ｇ，方法Ｃにより製造）と縮合させて，６０ｍｇ（１７％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．４２（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），８．１２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．３０（ｄｄ，Ｊ＝１．８＆８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），６．７７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’），３．２２−３．３１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．３８−２．４３（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），２．３５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６２−１．７１（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５６および４５８［Ｍ＋−１およびＭ＋＋２］．
【０２８５】
実施例７
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ジエチルアミノ−プロピル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（０．１６ｇ，０．７５ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド（０．２ｇ，方法Ｃにより製造）と縮合させて，３０ｍｇ（８％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．４０（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），８．１２（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．３０（ｄｄ，Ｊ＝１．５＆８．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），６．７８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’），３．２３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．３８−２．４５（ｍ，６Ｈ，ＣＨ2＆Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2），２．３５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），０．９３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５８および４６０［Ｍ−ｌおよびＭ＋２］．
【０２８６】
実施例８
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（２１２ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド（エチルピロール−２−カルボキシレートから方法Ａ，Ｂ，次にＣにより製造）と縮合させて，１６２ｍｇ（３８％）の表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５３（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．３７（ｔ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．８９（ｍ，２Ｈ），７．３２（ｄｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｓ，１Ｈ），６．８０−６．８４（ｍ，２Ｈ），３．３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４５−２．５５（ｍ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2＆ＣＨ2）０９Ｓ（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４３０および４３２［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０２８７】
実施例９
５−（２−オキソ−６−フェニル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド
６−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（２０９ｍｇ，ｌｍｍｏｌ）を５−ホルミル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミドと縮合させて，１８２ｍｇ（４２％）の表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．３６（ｔ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．７７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．７３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４６（ｍ，２Ｈ），７．３２（ｍ，２Ｈ），７．１１（ｓ，１Ｈ），６．９６（ｍ，１Ｈ），６．８０（ｍ，１Ｈ），３．３１−３．３２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４６−２．５３（ｍ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2＆ＣＨ2），０．９６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４２８［Ｍ＋］．
【０２８８】
実施例１０
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）−メチル−アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（２１２ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）メチルアミドと縮合させて，２４６ｍｇ（５５％）の表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５４（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．９０（ｍ，２Ｈ），７．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．８＆８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８２−６．８５（ｍ，３Ｈ），３．５５（ｓ，ｂｒ，２Ｈ，ＣＨ2），３．２５（ｓ，ｂｒ，３Ｈ，ＮＣＨ3），２．５７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４５（ｍ，４Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2），０．９１（ｍ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４４４および４４６［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０２８９】
実施例１１
５−（２−オキソ−６−フェニル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）メチルアミド
６−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（２０９ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）メチルアミドと縮合させて，２７７ｍｇ（６３％）の表題化合物を得た。１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０４（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．７３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．４６（ｍ，２Ｈ），７．３３−７．３６（ｍ，２Ｈ），７．１１（ｓ，１Ｈ），６．８４（ｍ，１Ｈ），６．７８（ｍ，１Ｈ），３．５５（ｓ，ｂｒ，２Ｈ，ＣＨ2），３．２５（ｓ，ｂｒ，３Ｈ，ＮＣＨ3），２．５８（ｔ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４４（ｍ，４Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2），０．９２（ｍ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
【０２９０】
実施例１２
３−メチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド
オキシインドール（６６．５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を５−ホルミル３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド（３−ホルミル−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステルから方法Ｂ，次にＣにより製造）と縮合させて，３９ｍｇ（２１％）の表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．３４（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．８８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．６２−７．６７（ｍ，３Ｈ），７．１７（ｍ，１Ｈ），−６．９９（ｍ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．６３（ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１Ｈ），３．２６３．３２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４１−２．４８（ｍ，６Ｈ，ＣＨ2＆Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2），２．２９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），０．９３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ３８０［Ｍ＋］．
【０２９１】
実施例１３
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ジエチルアミノ−プロピル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１０６ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミドと縮合させて，３５ｍｇ（１５％）の表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．３５（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．００（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８９（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．８０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．７４（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．３１（ｄｄ，Ｊ＝１．９＆８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），６．８３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），６．６３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−３’），３．２６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４１−２．４８（ｍ，６Ｈ，ＣＨ2＆Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2），２．２９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），０．９３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５８および４６０［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］
【０２９２】
実施例１４
３−メチル−５−（２−オキソ−６−フェニル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド
６−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１０５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミドと縮合させて，６７．８（３０％）の表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．３７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．２３−７．７３（ｍ，１１Ｈ），３．２９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４１−２．４８（ｍ，６Ｈ，ＣＨ2＆Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2），２．２９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５６［Ｍ＋］．
【０２９３】
実施例１５
５−（５−メトキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ジエチルアミノ−プロピル）アミド
５−メトキシ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（８２．５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミドと縮合させて，８０ｍｇ（３９％）の表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．４５（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．７０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．６８−７．７０（ｍ，２Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７２−６．７９（ｍ，２Ｈ），６．６０（ｓ，１Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．２８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４１−２．４８（ｍ，６Ｈ，ＣＨ2＆Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2），２．２９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），０．９３（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
ＭＳｍ／ｚ４１０［Ｍ＋．
【０２９４】
実施例１６
５−（６−メトキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ジエチルアミノ−プロピル）アミド
６−メトキシ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（８２．５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミドと縮合させて，６３ｍｇ（３１％）の表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．２２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．８６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．３９−７．６３および６．３７−６．５５（ｍ，６Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４５（ｍ，６Ｈ，ＣＨ2＆Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2），２．２８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），０．９３（ｍ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
ＭＳｍ／ｚ４１０［Ｍ＋］．
【０２９５】
実施例１７
３−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−イソインドール−１−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド
４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−イソインドール−１−カルボン酸エチルエステル（Ｍａｙ，Ｄｏｎａｌｄ  Ａ．；Ｌａｓｈ，Ｔｉｍｏｔｈｙ  Ｄ．；Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９２，５７：１８，４８２０−４８２８）を方法Ａ，次にＢを用いてホルミル化して，３−ホルミル−４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−イソインドール−１−カルボン酸を得た。
【０２９６】
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１．４３ｇ，６．８ｍｍｏｌ）を３−ホルミル−４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−イソインドール−１−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド（１．９７ｇ）と縮合させて，２．２ｇ（６７％）の表題化合物を黄橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．４７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０（ｄ，１Ｈ，ＮＨ），７．７０（ｓ，１Ｈ，ＣＨ），７．２８（ｄｄ，Ｊ＝２．１および８．２Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．１６（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ），６．８（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），３．３（ｓ，２Ｈ，ＣＯＮＨ），２．５（ｍ，６Ｈ，３ｘＮＣＨ2），２．７８（ｂｒｍ，２Ｈ，ピロールＣＨ2），２．７２（ｂｒｍ，２Ｈ，ピロールＣＨ2），１．７（ｂｒｍ，４Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2），１．７４（ｂｒｓ，４Ｈ，ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2），０．９６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４８４および４８６［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０２９７】
実施例１８
３−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−イソインドール−１−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（２０ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）を３−ホルミル−４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−イソインドール−１−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド（３０ｍｇ）と縮合させて，３３ｍｇ（４６％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０（ｍ，１Ｈ，ＮＨ），７．６８（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．４（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．２９（ｄ，Ｊ＝１．９および８．５Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），６．８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），２．７（ｂｒｍ，４Ｈ，２ｘＮＣＨ2），２．４（ｍ，８Ｈ，４ｘＮＣＨ2），１．７（ｂｒｍ，４Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2），１．６（ｂｒｍ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2），０．９３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４９９および５０１［Ｍ＋およびＭ＋＋２］．
【０２９８】
実施例１９
３−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−イソインドール−１−カルボン酸（３−ピロリジン−１−イルプロピル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（８０ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）を３−ホルミル−４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−イソインドール−１−カルボン酸（３−ピロリジン−１−イルプロピル）アミド（１２０ｍｇ）と縮合させて，４３ｍｇ（２２％）の表題化合物を褐橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０（ｍ，１Ｈ，ＮＨ），７．６９（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．４９（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．２８（ｄ，Ｊ＝１．７および７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），６．８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），３．３（ｂｒｍ，２Ｈ，２ｘＮＣＨ2），２．８（ｍ，４Ｈ，２ｘピロールＣＨ2），２．５（ｂｒｍ，４Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2），１．６（ｂｒｍ，８Ｈ，２ｘピロールＣＨ2ＣＨ2，ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2およびＣＯＮＨＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４９７および４９９［Ｍ＋およびＭ＋＋２］．
【０２９９】
実施例２０
３−（２−オキソ−６−ピリジン−３−イル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−イソインドール−１−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド
６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（６０ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）を３−ホルミル−４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−イソインドール−１−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド（８０ｍｇ）と縮合させて，５０ｍｇ（３８％）の表題化合物を赤みがかった固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．９（ｄ，１Ｈ，ＮＨ），８．７（ｄｄ，１Ｈ，ＡｒＨ），８．１（ｄｄ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．９（ｄ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．６（ｓ，１Ｈ，ＣＨ），７．５（ｄｄ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．３（ｄｄ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．１（ｍ，２Ｈ，ＡｒＨ），３．３５（ｍ，２Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），２．８（ｍ，４Ｈ，２ｘピロールＣＨ2），２．５（ｂｒｍ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2およびＮＣＨ2），１．７５（ｂｒｓ，４Ｈ，２ｘピロールＣＨ2ＣＨ2），０．９（ｔ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４８４［Ｍ＋］．．
【０３００】
実施例２１
４−ベンゾイル−５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド
ジクロロエタン中の塩化ベンゾイル（１当量）および塩化アルミニウム（１当量）の混合物に０℃でエチル３，５−ジメチル−２−ピロールカルボキシレート（１当量）を加えた。混合物を８０℃で４時間撹拌した。次に混合物を酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）およびＨ2Ｏで抽出した。合わせた有機抽出物を飽和炭酸水素ナトリウムおよびブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮して，（５１％）の４−ベンゾイル−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸を得た。
【０３０１】
５０ｍＬのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）：酢酸（ＨＯＡｃ）：Ｈ2Ｏ１：１：１中の４−ベンゾイル−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステル（４．１３ｇ，１５．２ｍｍｏｌ）および硝酸セリウムアンモニウム（３３ｇ，４当量）の混合物を一夜還流した。次に反応混合物を冷却し，ＥｔＯＡｃで抽出し，次に炭酸ナトリウムで塩基性にしてｐＨ９とした。次に有機層をブラインで洗浄し，乾燥（ＭｇＳＯ4）し，濃縮し，カラムクロマトグラフィーを行って，３．２５ｇ（７５％）の４−ベンゾイル−５−ホルミル−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステルを黄色固体として得た。
【０３０２】
５−ブロモ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを方法Ｄを用いて４−ベンゾイル−５−ホルミル−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸と縮合させて，４−ベンゾイル−５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸を得た。
【０３０３】
次に上述のカルボン酸を方法Ｃを用いてＮ，Ｎ−ジエチル−１，３−プロパンジアミンとカップリングさせて，表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．９６（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．７６（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．６８（ｔ，１Ｈ），７．５６（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｓ，２Ｈ）７．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．６＆８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．３３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４２−２．４６（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），２．１０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）
ＭＳ電子衝撃ｍ／ｚ５６４［Ｍ＋＋１］．
【０３０４】
実施例２２
４−ベンゾイル−５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−モルホリン−４−イルプロピル）アミド
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．１０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．１４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．９２（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．７５（ｍ，２Ｈ），７．６９（ｔ，１Ｈ），７．５６（ｍ，２Ｈ），７．４２（ｍ，２Ｈ），７．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．９＆８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ６），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．５６（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），３．３３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．３５（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），２．１０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．７０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）
【０３０５】
実施例２３
４−ベンゾイル−３−メチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ピロリジン−１−イルプロピル）アミド
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．１８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．１４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０１（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．７４（ｍ，１Ｈ），７．６７（ｍ，１Ｈ），７．５５（ｍ，１Ｈ），７．３２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．１７（ｍ，１Ｈ），６．９２（ｍ，１Ｈ），３．３６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４４（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），２．１１（ｓ，３Ｈ，
ＣＨ3），１．６５−１．７５（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2）．
ＭＳ電子衝撃ｍ／ｚ４８２［Ｍ＋］．
【０３０６】
実施例２４
４−ベンゾイル−５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ピロリジン−１−イルプロピル）アミド
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．０１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．１８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．９８（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．７５（ｍ，２Ｈ），７．６８（ｍ，１Ｈ），７．５５（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｍ，２Ｈ），７．３３（ｄｄ，Ｊ＝２．０＆８．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ６），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．３４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４２−２．４７（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），２．０９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．７０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．６４（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
【０３０７】
実施例２５
４−ベンゾイル−３−メチル−５−（２−オキソ−６−フェニル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ピロリジン−１−イルプロピル）アミド
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．１５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．１６（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．９８（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．７７（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），７．６９（ｍ，１Ｈ），７．５３−７．６３（ｍ，４Ｈ），７．４４（ｍ，２Ｈ），７．３３−７．３７（ｍ，２Ｈ），７．２４（ｓ，２Ｈ），７．１２（ｓ，１Ｈ），３．３６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４３−２．４８（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），２．１２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．７４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．６９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳ電子衝撃ｍ／ｚ５５８［Ｍ＋］．
【０３０８】
実施例２６
４−ベンゾイル−５−（６−メトキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ピロリジン−１−イルプロピル）アミド
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．９９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．９３（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．７２（ｍ，２Ｈ），７．６５（ｍ，１Ｈ），７．５４（ｍ，２Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．０４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），６．５１（ｄｄ，Ｊ＝２．３＆８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５），６．４４（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．７４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．３５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４２−２．４６（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），２．１０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．７２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．６５（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳ電子衝撃ｍ／ｚ５１２［Ｍ＋］．
【０３０９】
実施例２７
４−ベンゾイル−５−（５−メトキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ピロリジン−１−イルプロピル）アミド
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．２４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．９７（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．７５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．６９（ｍ，１Ｈ），７．５６（ｍ，２Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），６．７９（ｍ，２Ｈ），６．６６（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．３４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４３−２．４８（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），２．１４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．７１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．６６（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳ電子衝撃ｍ／ｚ５１２［Ｍ＋］．
【０３１０】
実施例２８
４−ベンゾイル−５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ピロリジン−１−イルプロピル）アミド
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．２０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．１４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０３（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．７５（ｍ，２Ｈ），７．６８（ｍ，１Ｈ），７．５５（ｍ，２Ｈ），７．３８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．０８（ｍ，１Ｈ），７．０１（ｍ，１Ｈ），６．８７（ｍ，１Ｈ），３．３４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４２−２．４８（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），２．０９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．７０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．６５（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳ電子衝撃ｍ／ｚ５００［Ｍ＋］．
【０３１１】
実施例２９
４−アセチル−５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを４−アセチル−５−ホルミル−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド（４−アセチル−５−ホルミル−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸エチルエステルから方法Ｂ，次にＣにより製造）と縮合させて，表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．１９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．１９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１５（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），８．１１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．７２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．３８（ｄｄ，Ｊ＝１．８＆８．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ６），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．２７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3ＣＯ），２．４６（ｍ，９Ｈ，ＣＨ3＆３ｘＣＨ2），１．６４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），０．９３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
【０３１２】
実施例３０
４−アセチル−５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ピロリジン−１−イルプロピル）アミド
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１４’（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），８．１０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．７０（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝１．６＆８．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．３２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3ＣＯ），２．４４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３５−２．４８（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ3），１．６５−１．７１（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2）．
ＭＳｍ／ｚ４９９＆５０１［Ｍ＋］＆［Ｍ＋＋２］．
【０３１３】
実施例３１
４−アセチル−５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−モルホリン−４−イルプロピル）アミド
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．２０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．２６（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−ビニル＆ＣＯＮＨＣＨ2），７．７３（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．３８（ｄｄ，Ｊ＝１．５＆８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．５５（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），３．２６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3ＣＯ），２．４４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３５（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ3），１．６８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５１４＆５１６［Ｍ＋−１］＆［Ｍ＋＋１］．
【０３１４】
実施例３２
４−アセチル−５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（３−ヒドロキシプロピル）アミド
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．１７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．２５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），８．０３（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．７１（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｈ−４），７．３７（ｂｒｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），４．５１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＯＨ），３．５１（ｂｒｓ，２Ｈ，ＣＨ2），３．３６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3ＣＯ），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．７０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４４５＆４４７［Ｍ＋−１］＆［Ｍ＋＋１］．
【０３１５】
実施例３４
４−アセチル−５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イルエチル）アミド
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．１９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．１４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．８４（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．７１（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．３８（ｄｄ，Ｊ＝１．８＆８．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ６），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．５８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），３．４０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3ＣＯ），２．４９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４５（ｍ，ＣＨ3＆ＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５００＆５０２［Ｍ＋−１］＆［Ｍ＋＋１］．
【０３１６】
実施例３５
４−アセチル−５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．１７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．２３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．９１（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．７３（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．３９（ｄｄ，Ｊ＝１．９＆８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），６．８８（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．４０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．６２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3ＣＯ），２．４９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
【０３１７】
実施例３６
４−アセチル−５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−３−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸［２−（４−ヒドロキシフェニル）エチル］アミド
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．２１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．１８（ｓ，１Ｈ，ＯＨ），９．０９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０６−８．１０（ｍ，２Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），３．４２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．７２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3ＣＯ），２．３７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５０７＆５０９［Ｍ＋−１］＆［Ｍ＋＋１］．
【０３１８】
実施例３７
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２−イソプロピル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド
Ｈ2Ｏ中の２−アミノアセトフェノン塩酸（１当量），エチルイソブチルアセテート（１．２当量）および酢酸ナトリウム（２．４当量）の混合物を１００℃で１８時間撹拌し，次に室温に冷却した。水性層をデカントし，油状物を酢酸エチルに溶解した。次にこれを水およびブラインで洗浄し，乾燥して，（９３％）の２−イソプロピル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸エチルエステルを赤褐色油状物として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．２１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．１４７．２７（ｍ，５Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），３．６５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2），１．２２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2），１．０４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ２５７［Ｍ＋］．
【０３１９】
上述のピロールを方法Ａを用いてホルミル化して，（４１％）の５−ホルミル−２−イソプロピル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸エチルエステルを赤みがかった固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．３５（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），９．１４（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），７．３６（ｓ，５Ｈ），３．９６（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），３．７４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2），１．２９（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ２８５［Ｍ＋］．
【０３２０】
ピロールカルボン酸エステルを方法Ｂを用いて加水分解して，（５７％）の５−ホルミル−２−イソプロピル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸をベージュ色固体として得た。
１ＨＮＭＲ．（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．２８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），１２．０２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），９．１０（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），７．３５（ｓ，５Ｈ），３．８１（ｍ，１Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2），１．２８（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ２５７［Ｍ＋］．
【０３２１】
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１２０ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２−イソプロピル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド（方法Ｃにより製造）と縮合させて，１２０ｍｇ（７１％）の表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．２３（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．３８−７．５５（ｍ，７Ｈ，Ａｒ−Ｈ＆ＣＯＮＨＣＨ2），７．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．２６（ｄｄ，Ｊ＝１．８＆７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），３．３６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2），３．０７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．３４（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，４Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2），２．２２（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），１．４０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．３１（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2），０．８６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
ＭＳｍ／ｚ５６５．１［Ｍ＋＋１］．
【０３２２】
実施例３８
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２−イソプロピル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ピロリジン−１−イルプロピル）アミド
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２−イソプロピル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１２７ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）を３−ピロリジン−１−イル−プロピルアミン（４３ｍｇ，０．３３６ｍｍｏｌ）と縮合させて，１４０ｍｇ（６６％）の表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．４０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．３８７．４７（ｍ，７Ｈ），７．２３−７．２７（ｍ，２Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），３．３６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2），３．０８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．３０（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．２０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），１．６２（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．４２（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），１．３１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５６０および５６２［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０３２３】
実施例３９
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２−イソプロピル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（５７，ｇ．０．２７ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２−イソプロピル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド（１２０ｍｇ）と縮合させて，７８ｍｇ（５３％）の表題化合物を黄色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．２３（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０９（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．３８−７．５１（ｍ，６Ｈ），７．２５−７．２８（ｍ，２Ｈ），７．１９（ｔ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2），３．１１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．２８−２．３９（ｍ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2＆ＣＨ2，１．３１（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＣＨ（ＣＨ3）2），０．８５（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５４８および５５０［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０３２４】
実施例４０
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２−イソプロピル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロピル］アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（５３ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２−イソプロピル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロピル］アミド（３００ｍｇ）と縮合させて，６５ｍｇの表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．２２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．２３−７．５０（ｍ，９Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８：７Ｈｚ，１Ｈ），３．３７（ｍ，１Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2），３．０５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．２４（ｍ，８Ｈ，４ｘＣＨ2），２．１１（ｍ，５Ｈ，ＣＨ2＆ＣＨ3），１．４２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．３１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2）
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５８９および５９１［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０３２５】
実施例４１
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２−イソプロピル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１７０ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）を方法Ｄを用いて５−ホルミル−２−イソプロピル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２０５ｍｇ）と縮合させて，２１０ｍｇ（５８％）の表題化合物を黄色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．３１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．１６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．２６−７．４４（ｍ，７Ｈ），７．１１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｍ，１Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2），１．３４（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2）
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５２［Ｍ＋＋１］．
【０３２６】
実施例４２
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２−メチル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（４４ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２−メチル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド（７０ｍｇ，上述のイソプロピル類似体と同様にして製造）と縮合させて，０．０３ｇ（２７％）の表題化合物を黄色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．８７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．１１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．３６−７．５１（ｍ，６Ｈ），７．２６（ｄｄ，Ｊ＝１．８＆８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．０９（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），６．８３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），３．１７（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４８（ｍ，ＣＨ3），２．２９−２．３５（ｍ，６Ｈ，３ｘＮＣＨ2），１．５９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５１８および５２０［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］
【０３２７】
実施例４３
５−［６−（２−メトキシフェニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル］−２−メチル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド
６−（２−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（５０ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２−メチル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド（７０ｍｇ）と縮合させて，０．０４ｇ（３５％）の表題化合物を黄橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．８２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．４８（ｍ，２Ｈ），７．４３（ｍ，１Ｈ），７．３８（ｍ，２Ｈ），７．３２（ｍ，１Ｈ），７．２４（ｍ，２Ｈ），７．１６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．０８（ｍ，２Ｈ），７．０３（ｍ，１Ｈ），７．０（ｍ，２Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．１９（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４９（ｍ，ＣＨ3），２．３２−２．３８（ｍ，６Ｈ，３ｘＮＣＨ2），１．５９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５４６［Ｍ＋］．
【０３２８】
実施例４４
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２−メチル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（４６ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２−メチル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミド（６５ｍｇ）と縮合させて，６０ｍｇ（５５％）の表題化合物を黄色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．８６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０９（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．４７−７．４９（ｍ，２Ｈ），７．３８−７．４１（ｍ，４Ｈ），７．２６（ｄｄ，Ｊ＝２．２＆８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．０４（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），６．７７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．１５（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４８（ｍ，ＣＨ3），２．１６（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ，３ｘＮＣＨ2），２．０２（ｓ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ3）．
ＭＳｍ／ｚ４９３および４９４．８［Ｍ＋およびＭ＋＋２］．
【０３２９】
実施例４５
５−［６−（２−メトキシフェニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル］−２−メチル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミド
６−（２−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（５３ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２−メチル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミド（６５ｍｇ）と縮合させて，０．０５ｇ（４４％）の表題化合物を橙色ガムとして得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．８２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．３７−７．５２（ｍ，５Ｈ），７．３２（ｍ，１Ｈ），７．２２−７．２７（ｍ，２Ｈ），７．１６（ｓ，１Ｈ），７．０８（ｍ，２Ｈ），７．０３（ｍ，１Ｈ），７．０（ｍ，２Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．１５（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４９（ｍ，ＣＨ3），２．１６（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．０２（ｓ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ3）．
ＭＳｍ／ｚ５２１［Ｍ＋＋ｌ］
【０３３０】
実施例４６
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２−メチル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸エチルエステル
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（６０ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２−メチル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸エチルエステル（７５ｍｇ）と縮合させて，７８ｍｇ（６０％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．０１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．１３（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．４２−７．４６（ｍ，３Ｈ），７．２７−７．３４（ｍ，４Ｈ），７．１２（ｓ，１Ｈ），６．８４（ｄｄ，Ｊ＝２．２＆８．．３Ｈｚ，１Ｈ），３．９９−４．０３（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），２．６１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），０．９８−１．０３（ｍ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５０および４５２［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０３３１】
実施例４７
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２−メチル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（０．４７ｇ，２．２ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２−メチル−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−３カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド（０．７５ｇ）と縮合させて，０．１１ｇ（４２％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．８６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．４２７．４６（ｍ，３Ｈ），７．３７−７．５０（ｍ，７Ｈ），７．２４−７．２８（ｍ，２Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），３．０９（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３８（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，４Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3），２．２６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ2），１．４２（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），０．８７（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５３５．０および５３７［Ｍ＋およびＭ＋＋２］．
【０３３２】
実施例４８
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミド
ｔｅｒｔ−ブチル３−オキソブチレートおよび硝酸ナトリウム（１当量）の酢酸中の混合物を室温で撹拌して，ｔｅｒｔ−ブチル−２−ヒドロキシイミノ−３−オキソブチレートを得た。酢酸中のエチル−３−オキソブチレート（１当量），亜鉛粉（３．８当量）および粗ｔｅｒｔ−ブチル−２−ヒドロキシイミノ−３−オキソブチレートを６０℃で１時間撹拌した。反応混合物をＨ2Ｏに注加し，濾液を回収して，（６５％）２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−３，５−ジメチル−４−エトキシカルボニルピロールを得た。トリフルオロ酢酸中の２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−３，５−ジメチル−４−エトキシカルボニルピロールおよびトリエチルオルトホルメート（１．５当量）の混合物を１５℃で１時間撹拌した。反応液を濃縮し，残渣を精製して，（６４％）２，４−ジメチル−３−エトキシカルボニル−５−ホルミルピロールを黄色針状物として得た。２，４−ジメチル−３−エトキシカルボニル−５−ホルミルピロールを方法Ｂを用いて加水分解して，（９０％）５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸を得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２（ｂｒｓ，２Ｈ，ＮＨおよびＣＯ２Ｈ），９．５８（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），２．４４（ｓ，３Ｈ，Ｃｌ3），２．４０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
ＭＳｍ／ｚ２６７［Ｍ＋］．
【０３３３】
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（０．１７ｇ，０．８ｍｍｏｌ）を方法Ｂを用いて５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミド（０．２ｇ，方法Ｃにより製造）と縮合させて，０．３ｇ（８３％）の表題化合物を黄色固体として得た。１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９４（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．０７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．７５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．４４（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．２４（ｄｄ，Ｊ＝１．８＆８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．２６−３．３３（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３８（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．１８（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４３０および４３２［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０３３４】
実施例４９
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−６−フェニル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミド
６−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（０．１７ｇ，０．８ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミド（０．２ｇ）と縮合させて，０．１３ｇ（３６％）の表題化合物を黄橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５９（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９３（，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８５（ｄ，Ｊ＝７．９２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．６３−７．６５（ｍ，３Ｈ），７．４０−７．４７（ｍ，３Ｈ，），７．３２−７．３６（ｍ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．３０（ｄｄ，Ｊ＝１．６＆７．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５），７．１１（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．２８３．３４（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．１８（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４２８［Ｍ＋］．
【０３３５】
実施例５０
５−（５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミド
５−クロロ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（０．１ｇ，０．６ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミド（０．１５ｇ）と縮合させて，０．２２ｇ（９０％）の表題化合物を黄色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９８（，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．９６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．７５（ｓ，１Ｈ，Ｈビニル），７．５０（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．１２（ｄｄ，Ｊ＝２．０＆８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．２６−３．３１（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３６（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．１７（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ３８６［Ｍ＋］．
【０３３６】
実施例５１
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（０．１７ｇ，０．８ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド（０．２ｇ）と縮合させて，０．０９ｇ（２６％）の表題化合物を黄色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９８（，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．０９（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．７６（ｓ，１Ｈ，Ｈビニル），７．４２（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．２４（ｄｄ，Ｊ＝１．７＆８．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．２３−３．３２（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４６−２．５５（ｍ，６Ｈ，３ｘＮＣＨ2），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），０．９６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５８および４６０［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０３３７】
実施例５２
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（０．０９ｇ，０．４ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド（０．１ｇ）と縮合させて，０．１４ｇ（８１％）の表題化合物を黄橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，．ＮＨ），１０．９８（，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．０９（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．７６（ｓ，１Ｈ，Ｈビニル），７．５３（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．２４（ｄｄ，Ｊ＝１．９＆８．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），６．８１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．２９−３．３５（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．５４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４７（ｍ，．ＤＭＳＯ下），２．４２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６６−１．６９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５６および４５８［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０３３８】
実施例５３
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−イミダゾール−１−イルプロピル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（０．０９ｇ，０．４ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−イミダゾール−１−イルプロピル）アミド（０．１ｇ）と縮合させて，０．１ｇ（５９％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６３（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９９（，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．０９（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．７７（ｓ，１Ｈ，Ｈビニル），７．７１（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．６５（ｓ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．２５（ｄｄ，Ｊ＝２．２＆８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），７．２０（ｓ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），４．０２（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ2），３．１８（ｑ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．９３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４６７および４６９［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０３３９】
実施例５４
５−［６−（２−メトキシフェニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミド
６−（２−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（３０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミド（３０ｍｇ）と縮合させて，０．０６ｇ（１００％）の表題化合物を黄橙色ガムとして得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．８９（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｓ，１Ｈ，Ｈビニル），７．４６（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．２８−７．３５（ｍ，２Ｈ），６．９９−７．１１（ｍ，４Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．２７−３．３１（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３７（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．１８（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ3）2）．ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５８［Ｍ＋］．
【０３４０】
実施例５５
５−［６−（３−メトキシフェニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミド
６−（３−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（３０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミド（３０ｍｇ）と縮合させて，８ｍｇ（１４％）の表題化合物を黄橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５９（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｓ，１Ｈ，Ｈビニル），７．４２（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．３６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄｄ，Ｊ＝１．６＆７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄｄ，Ｊ＝２．８＆７．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．２１−３．３３（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３６−２．４０（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．１８（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５８［Ｍ＋）．
【０３４１】
実施例５６
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−５−フェニル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド
５−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（８０ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）を方法Ｂを用いて５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド（０．１ｇ）と縮合させて，７９ｍｇ（４６％）の表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９５（，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．１５（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．７１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４０−７．４７（ｍ，４Ｈ），７．３１（ｍ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），３．２−３．３１（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４６−２．５５（ｍ，６Ｈ，３ｘＮＣＨ2），２．４４（ｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），０．９６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５６［Ｍ＋］．
【０３４２】
実施例５７
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−５−フェニル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド
５−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（０．０４ｇ，０．２ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド（０．０４ｇ）と縮合させて，表題化合物を黄橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６５（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９６（，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．１５（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．７１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．４１−７．４６（ｍ，３Ｈ），７．３１（ｍ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｍ，４Ｈ，２ｘＮＣＨ2），３．３２（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．５５（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４７（ｍ，ＤＭＳＯ下），２．４３（ｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），１．６６（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５４［Ｍ＋］．
【０３４３】
実施例５８
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−５−フェニル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−イミダゾール−１−イルプロピル）アミド
５−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（８ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−イミダゾール−１−イルプロピル）アミド（１０ｍｇ）と縮合させて，１０ｍｇ（５９％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９６（，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．１６（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．６５−７．７２（ｍ，４Ｈ），７．４４（ｍ，３Ｈ），７．３１（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．２１（ｓ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），４．０２（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ2），３．１９（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），２．４４（ｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），９３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４６５［Ｍ＋］．
【０３４４】
実施例５９
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−６−フェニル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド
６−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（０．０８ｇ，０．４ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド（０．１ｇ）と縮合させて，６５ｍｇ（３８％）の表題化合物を黄色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９９（，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６２−７．６６（ｍ，３Ｈ），７．４０−７．４７（ｍ，３Ｈ），７．２８−７．３６（ｍ，２Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，’１Ｈ），３．２６（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４６−２．５５（ｍ，６Ｈ，３ｘＮＣＨ2），２．４４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５６［Ｍ＋］．
【０３４５】
実施例６０
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−６−フェニル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド
６−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（３０ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド（４０ｍｇ）と縮合させて，５．９ｍｇ（８．５％）の表題化合物を黄橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９９（，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６３−７．６６（ｍ，３Ｈ），７．５１（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．４５（ｍ，２Ｈ），７．２８−７．３６（ｍ，２Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｍ，６Ｈ，３ｘＮＣＨ2），２．５５（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６７（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５４［Ｍ＋］．
【０３４６】
実施例６１
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−６−フェニル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−イミダゾール−１−イルプロピル）アミド
６−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（８ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−イミダゾール−１−イルプロピル）アミド（１０ｍｇ）と縮合させて，７．３ｍｇ（４３％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９９（，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６２−７．７０（ｍ，５Ｈ），７．４５（ｍ，２．Ｈ），７．３５（ｍ，１Ｈ），７．３０（ｄｄ，Ｊ＝１．４＆８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ），４．０２（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．１９（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2ＣＨ2），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．９３（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４６５［Ｍ＋］．
【０３４７】
実施例６２
５−［６−（３，５−ジクロロフェニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド
６−（３，５−ジクロロフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（６４ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド（６０ｍｇ）と縮合させて，５３ｍｇ（４４％）の表題化合物を淡褐色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．６９−７．７１（ｍ，３Ｈ），７．５５（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．３７（ｍ，２Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．２７（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４８−２．５８（ｍ，６Ｈ，３ｘＮＣＨ2），２．４５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），０．９７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ，３ｘＮＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳｍ／ｚ５２６．９［Ｍ＋＋１］．
【０３４８】
実施例６３
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−６−ピリジン−３−イル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド
６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（４０ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド（５０ｍｇ）と縮合させて，２９ｍｇ（３３％）の表題化合物を淡橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０５（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．８６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ），８．５３（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｍ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．４０−７．４８（ｍ，２Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｓ，１Ｈ），３．２６（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４８−２．５５（ｍ，３ｘＮＣＨ2），２．４２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），０．９６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５７［Ｍ＋］．
【０３４９】
実施例６４
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−６−ピリジン−３−イル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド
６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（６０ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド（７５ｍｇ）と縮合させて，９０ｍｇ（７１％）の表題化合物を淡橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０５（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．８６（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），８．５４（ｄｄ，Ｊ＝１．５＆４．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｍ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．４４−７．５３（ｍ，２Ｈ），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝１．５＆８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３３（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４７−２．５７（ｍ，６Ｈ，３ｘＮＣＨ2），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６７（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）−ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４５５［Ｍ＋］．
【０３５０】
実施例６５
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−６−ピリジン−３−イル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジメチルアミノプロピル）アミド
６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（４２ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジメチルアミノプロピル）アミド（５０ｍｇ）と縮合させて，６７ｍｇ（７５％）の表題化合物を黄褐色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１１．００（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．８６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ），８．５４（ｓ，ｂｒ，１Ｈ），８．０４（ｍ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．６３（ｍ，１Ｈ），７．４５−７．４８（ｍ，１Ｈ），７．３５（ｄｄ，Ｊ＝１．７＆８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），３．２１−３．２７（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．２８（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．１４（ｓ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ3），１．６４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４４３［Ｍ＋］．
【０３５１】
実施例６６
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−５−フェニル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジメチルアミノプロピル）アミド
５−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（６７ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジメチルアミノプロピル）アミド（８１ｍｇ）と縮合させて，４０ｍｇ（２８％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｍ，２Ｈ），７．６２（ｍ，１Ｈ），７．４４（ｍ，３Ｈ），７．３２（ｍ，１Ｈ），６．９５（ｍ，１Ｈ），３．３３（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４３（ｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），２．２７（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．１３（ｓ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ3），１．６３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４４２［Ｍ＋］．
【０３５２】
実施例６７
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−５−フェニル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド
５−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１．５ｇ，７．１６ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド（２ｇ）と縮合させて，１．３ｇ（４０％）の表題化合物を黄橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１４（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．８（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．７（ｄｄ，Ｊ＝１．２および８．５Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．６（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．４（ｍ，３Ｈ，ＡｒＨ），７．３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），６．９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），３．２（ｍ，２Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），２．５（ｍ，１２Ｈ，３ｘＮＣＨ2および２ｘＣＨ3），１．６１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2），０．９３（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ，ＮＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４７０［Ｍ＋］．
【０３５３】
実施例６８
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−６−フェニル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド
６−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１．５ｇ，７．１６ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド（２ｇ）と縮合させて，１．９ｇ（５７％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．６（ｍ，４Ｈ，ＡｒＨ），７．４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．３（ｍ，２Ｈ），７．１（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），３．２（ｍ，２Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），２．５（ｍ，１２Ｈ，３ｘＮＣＨ2および２ｘＣＨ3），１．６１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2），０．９３（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ，ＮＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４７０［Ｍ＋］．
【０３５４】
実施例６９
３−［４−（３−ジエチルアミノプロピルカルバモイル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（３−クロロ−４−メトキシフェニル）アミド
２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（３−クロロ４−メトキシフェニル）アミド（１ｇ，３．１６ｍｍｏｌ）を５ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド（１ｇ，３．５８ｍｍｏｌ）と縮合させて，１．７ｇ（８５％）の表題化合物を黄橙色固体として得た。
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５７８．２［Ｍ＋］．
【０３５５】
実施例７０
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（０．５ｇ，２．３６ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド（０．５１ｇ）と縮合させて，０．８４ｇの表題化合物を赤橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０９（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．７（ｍ，４Ｈ），７．２（ｄｄ，Ｊ＝１．８および８．３Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），３．３（ｂｒｓ，４Ｈ，２ｘＮＣＨ2），３．２（ｍ，２Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），２．６（ｂｒｓ，２Ｈ，ＮＣＨ2および２ｘＣＨ3），２．４（ｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），１．６６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2），０．９８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ，ＮＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４７２および４７４［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０３５６】
実施例７１
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジイソプロピル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１００ｍｇ，０．４７ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジイソプロピル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド（１５０ｍｇ）と縮合させて，０．１５ｇ（６２％）の表題化合物を黄橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．９７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０９（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．８４（ｍ，１Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），７．２３（ｄｄ，Ｊ＝１．３および８．１Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），６．８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），３．５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ），３．３（ｍ，３Ｈ，ＣＨおよびＮＨＣＨ2），２．５（ｂｒｍ，６Ｈ，３ｘＮＣＨ2），１．２８（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），１．２３（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），０．９６（ｍ，６Ｈ，２ｘＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５１４および５１６［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０３５７】
実施例７２
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジイソプロピル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（９０ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジイソプロピル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ジエチルアミノプロピル）アミド（１４０ｍｇ）と縮合させて，５４ｍｇ（２５％）の表題化合物を赤褐色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．９８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０９（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，２Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．２３（ｄｄ，Ｊ＝１．７および８．１Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），３．５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ），３．２５（ｍ，２Ｈ，ＮＨＣＨ2），３．１５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ），２．７（ｂｒｓ，６Ｈ，３ｘＮＣＨ2），１．７（ｂｒｍ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2），１．２８（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），１．２４（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），１．０６（ｍ，６Ｈ，２ｘＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５２８および５３０［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０３５８】
実施例７３
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジイソプロピル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ピロリジン−１−イルプロピル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１３０ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジイソプロピル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３−ピロリジン−１−イルプロピル）アミド（１５０ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ）と縮合させて，３６ｍｇ（１５％）の表題化合物を褐橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．９８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１０（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，２Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．２３（ｄｄ，Ｊ＝１．６および７．６Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），６．８２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），３．５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ），３．２５（ｍ，２Ｈ，ＮＨＣＨ2），３．１５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ），２．７（ｂｒｓ，６Ｈ，３ｘＮＣＨ2），１．７（ｂｒｍ，６Ｈ，３ｘＮＣＨ2ＣＨ2），１．２８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），１．２４（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５２６および５２８［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０３５９】
実施例７４
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（ピリジン−４−イルメチル）アミド
５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１７０ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（ピリジン−４−イルメチル）アミド（２００ｍｇ）と縮合させて，１４ｍｇ（４％）の表題化合物を黄色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．５１（ｄｄ，Ｊ＝１．６＆４．３Ｈｚ，２Ｈ），８．２３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），８．１１（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈビニル），７．３１（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２５（ｄｄ，Ｊ＝１．９＆８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），４．４５（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ，ＮＣＨ2），２．４６（ｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩ．ｍ／ｚ４５０および４５２［Ｍ＋−１およびＭ＋＋１］．
【０３６０】
実施例７５
５−［６−（４−ブチルフェニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド
５−［６−（４−ブチルフェニル）］−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（５０ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド（５０ｍｇ）と縮合させて，７４ｍｇ（７６％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９３（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．５４（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），７．４６（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），７．２６（ｍ，３Ｈ），７．０９（ｓ，１Ｈ），３．３０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５２−２．６３（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．５８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．３４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），０．９１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５１０［Ｍ＋］．
【０３６１】
実施例７６
５−［６−（５−イソプロピル−２−メトキシフェニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド
６−（５−イソプロピル−２−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（５０ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イル−エチル）アミド（４５ｍｇ）と縮合させて，６７ｍｇ（７５％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．８２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．７７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．４５（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），７．０−７．１９（ｍ，５Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．３２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．８７（ｍ，１Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2），２．５６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．２１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2）．
ＭＳｍ／ｚ５２７．２［Ｍ＋＋１］．
【０３６２】
実施例７７
５−［６−（４−エチルフェニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド
６−（４−エチルフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（４５ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド（５０ｍｇ）と縮合させて，６０ｍｇ（６５％）の表題化合物を黄橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．５１−７．５６（ｍ，３Ｈ），７．２５−７．３０（ｍ，３Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．６３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＨ3），２．５５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６７（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．２０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４８２［Ｍ＋］．
【０３６３】
実施例７８
５−［６−（２，４−ジメトキシフェニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド
６−（２，４−ジメトキシフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（５１ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド（５０ｍｇ）と縮合させて，３０ｍｇ（３１％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．８６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．７５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７４９（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｍ，１Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），６．５８−６．６５（ｍ，２Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．７６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．３３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５０（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６７（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５１４［Ｍ＋］．
【０３６４】
実施例７９
５−［６−（３−イソプロピルフェニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド
６−（３−イソプロピルフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（４８ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド（５０ｍｇ）と縮合させて，５９ｍｇ（６３％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．２４−７．５５（ｍ，６Ｈ），７．１３（ｓ，１Ｈ），３．３４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．３０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2），２．６０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５０（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．７０（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．２７（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ（ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４９６［Ｍ＋］．
【０３６５】
実施例８０
５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド
５−フルオロ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（０．５４ｇ，３．８ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミドと縮合させて，０．８３ｇ（５５％）の表題化合物を黄緑色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．８３（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝２．５＆９．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｓ，１Ｈ，Ｈビニル），７．３７（ｔ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2ＣＨ2），６．９１（ｍ，１Ｈ），６．８１−６．８５（ｍ，１Ｈ），３．２７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５１（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），０．９６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ３９８［Ｍ＋］．
【０３６６】
実施例８０（別の合成法）
５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド
ヒドラジン水和物（５５％，３０００ｍＬ）および５−フルオロイサチン（３００ｇ）を１００℃に加熱した。追加の５−フルオロ−イサチン（５００ｇ）を撹拌しながら１２０分間かけて少しずつ加えた（１００ｇ）。混合物を１１０℃に加熱し，４時間撹拌した。混合物を室温に冷却し，固体を真空濾過により回収して，粗（２−アミノ５−フルオロ−フェニル）−酢酸ヒドラジド（７４８ｇ）を得た。ヒドラジドを水（７００ｍＬ）に懸濁し，混合物のｐＨを１２Ｎ塩酸で＜ｐＨ３に調節した。混合物を室温で１２時間撹拌した。固体を真空濾過により回収し，水で２回洗浄した。生成物を真空下で乾燥して，５−フルオロ１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（６００ｇ，７３％収率）を褐色粉体として得た。
１ＨＮＭＲ（ジメチルスルホキシド−ｄ６）δ３．４６（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2），６．７５，６．９５，７．０５（３ｘｍ，３Ｈ，芳香族），１０．３５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）．
ＭＳｍ／ｚ１５２［Ｍ＋１］．
【０３６７】
３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２，４−ジカルボン酸２−ｔｅｒｔ−ブチルエステル４−エチルエステル（２６００ｇ）およびエタノール（７８００ｍＬ）を１０Ｎ塩酸（３６５０ｍＬ）をゆっくり加えながら激しく撹拌した。温度は２５℃から３５℃に上昇し，ガスが発生し始めた。混合物を５４℃に暖め，さらに加熱しながら１時間撹拌し，このとき温度は６７℃であった。混合物を５℃に冷却し，３２Ｌの氷および水を撹拌しながらゆっくり加えた。固体を真空濾過により回収し，水で３回洗浄した。固体を恒量となるまで風乾して，２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸エチルエステル（１４１８ｇ，８７％収率）をピンク色がかった固体として得た。
１ＨＮＭＲ（ジメチルスルホキシド−ｄ６）δ２．１０，２．１３５（２ｘｓ，２ｘ３Ｈ，２ｘＣＨ3），４．１３（ｑ，２Ｈ，ＣＨ2），６．３７（ｓ，１Ｈ，ＣＨ），１０．８５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）．ＭＳｍ／ｚ１６７［Ｍ＋１］．
【０３６８】
ジメチルホルムアミド（３２２ｇ）およびジクロロメタン（３７００ｍＬ）を氷浴中で４℃に冷却し，オキシ塩化リン（６８４ｇ）を撹拌しながら加えた。固体２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸エチルエステル（６７０ｇ）を１５分間かけて少しずつゆっくり加えた。達した最高温度は１８℃であった。混合物を１時間加熱還流し，氷浴中で１０℃に冷却し，激しく撹拌しながら１．６Ｌの氷水を素早く加えた。温度は１５℃に上昇した。１０Ｎ塩酸（１．６Ｌ）を激しく撹拌しながら加えた。温度は２２℃に上昇した。混合物を３０分間放置し，層分離させた。温度は最高４０℃に達した。添加の間に温度が５５℃に達し，その温度で保持されるように，水性層を１０Ｎ水酸化カリウム（３．８Ｌ）でｐＨ１２−１３に調節した。添加が終了した後，混合物を１０℃に冷却し，１時間撹拌した。固体を真空濾過により回収し，水で４回洗浄して，５−ホルミル２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸エチルエステル（７７８ｇ，１００％収率）を黄色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．２５（ｔ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４４，２．４８（２ｘｓ，２ｘ３Ｈ，２ｘＣＨ3），４．１６（ｑ，２Ｈ，ＣＨ2），９．５９（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），１２．１５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ）．ＭＳｍ／ｚ１９５［Ｍ＋１］．
【０３６９】
５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸エチルエステル（８０６ｇ），水酸化カリウム（５４８ｇ），水（２４００ｍＬ）およびメタノール（３００ｍＬ）を撹拌しながら２時間還流し，次に８℃に冷却した。混合物をジクロロメタンで２回抽出した。温度を１５℃以下に維持しながら水性層を１０００ｍＬの１０Ｎ塩酸でｐＨ４に調節した。水を加えて撹拌を容易にした。固体を真空濾過により回収し，水で３回洗浄し，真空下で５０℃で乾燥して，５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（６４５ｇ，９３．５％収率）を黄色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．４０，２．４３（２ｘｓ，２ｘ３Ｈ，２ｘＣＨ3），９．５７（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），１２．０７（ｂｒｓ，２Ｈ，ＮＨ＋ＣＯＯＨ）．ＭＳｍ／ｚ１６８［Ｍ＋１］．
【０３７０】
５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１２０４ｇ）および６０２０ｍＬのジメチルホルムアミドを室温で撹拌し，その間に１−（３−ジメチル−アミノプロピル−３−エチルカルボジイミド塩酸（２０７１ｇ），ヒドロキシベンゾトリアゾール（１４６０ｇ），トリエチルアミン（２０１６ｍＬ）およびジエチルエチレンジアミン（１２１５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で２０時間撹拌した。混合物を３０００ｍＬの水，２０００ｍＬのブラインおよび３０００ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で希釈し，１０Ｎ水酸化ナトリウムｐＨを１０以上に調節した。混合物を各５０００ｍＬの１０％メタノール／ジクロロメタンで２回抽出し，抽出物を合わせ，無水硫酸マグネシウムで乾燥し，回転蒸発させて乾固した。混合物を１９５０ｍＬのトルエンで希釈し，再び回転蒸発させて乾固した。残渣を３：１ヘキサン：ジエチルエーテル（４０００ｍＬ）中で砕いた。固体を真空濾過により回収し，４００ｍＬの酢酸エチルで２回洗浄し，真空下で３４℃で２１時間乾燥して，５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（８１９ｇ，４３％収率）を淡褐色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（ジメチルスルホキシド−ｄ６）δ０．９６（ｔ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），２．３１，２．３８（２ｘｓ，２ｘＣＨ3），２．５１（ｍ，６Ｈ３ｘＣＨ2），３．２８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），７．３４（ｍ，１Ｈ，アミドＮＨ），９．５６（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），１１．８６（ｓ，１Ｈ，ピロールＮＨ）．ＭＳｍ／ｚ２６６［Ｍ＋１］．
【０３７１】
５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）−アミド（８０９ｇ），５−フルオロ−１，３−ジヒドロ−インドール
２−オン（４３８ｇ），エタノール（８０００ｍＬ）およびピロリジン（１３ｍＬ）を７８℃で３時間加熱した。混合物を室温に冷却し，固体を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄した。固体をエタノール（５９００ｍＬ）とともに７２℃で３０分間スラリー化した。混合物を室温に冷却した。固体を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，真空下で５４℃で１３０時間乾燥して，５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）−アミド（１０１３ｇ，８８％収率）を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（ジメチルスルホキシド−ｄ６）δ０．９８（ｔ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），２．４３，２．４４（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），２．５０（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），３．２８（ｑ，２Ｈ，ＣＨ2），６．８４，６．９２，７．４２，７．７１，７．５０（５ｘｍ，５Ｈ，芳香族，ビニル，ＣＯＮＨ），１０．８８（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），１３．６８（ｓ，１Ｈ，ピロールＮＨ）．ＭＳｍ／ｚ３９７［Ｍ−１］．
【０３７２】
実施例８１
３−［４−（２−ジエチルアミノエチルカルバモイル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸
２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸（８０ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミドと縮合させて，２１０ｍｇ（９２％）の表題化合物を黄橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝１．５＆８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４０−７．４２（ｍ，２Ｈ），３．２８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．８８（ｍ，Ｈピペリジン），２．５４（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），２．４４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．５６（ｍ，Ｈ−ピペリジン），０．９７（ｔ，Ｊ＝６．９８Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）−ＭＳｍ／ｚ４２４［Ｍ＋］．
【０３７３】
実施例８２
５−（５−ジメチルスルファモイル−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド
２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチルアミド（９０ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド（１００ｍｇ）と縮合させて，１００ｍｇ（５４％）の表題化合物を黄色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．３０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．２５（ｄ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．４８−７．５３（ｍ，２Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．６１（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ3）2），２．５６（ｔ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６７（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４８５［Ｍ＋］．
【０３７４】
実施例８３
５−［５−（３−クロロフェニルスルファモイル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド
２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（３−クロロフェニル）アミド（１２０ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド（１００ｍｇ）と縮合させて，１５０ｍｇ（６９％）の表題化合物を黄橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．２６（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．３０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．２６（ｄ，１Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ，Ｈビニル），７．５１−７．５７（ｍ，２Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｍ，１Ｈ），７．０７（ｍ，１Ｈ），７．０（ｍ，２Ｈ），３．４４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５７（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳｍ／ｚ５６８［Ｍ＋］．
【０３７５】
実施例８４
２，４−ジメチル−５−［２−オキソ−５−（ピリジン−３−イルスルファモイル）−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド
２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ピリジン−３−イルアミド（１１０ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）アミド（１００ｍｇ）と縮合させて，１５０ｍｇ（７４％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．２１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，２Ｈ），８．０４（ｍ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．４９−７．５４（ｍ，２Ｈ），７．４１（ｍ，１Ｈ），７．１４（ｍ，１Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），３．３３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５６（ｔ，Ｊ＝７．０６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４３（ｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），１．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳｍ／ｚ５３５［Ｍ＋］．
【０３７６】
実施例８５
３−［３，５−ジメチル−４−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−４−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン
４−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（７１ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）を３，５−ジメチル−４−（４−メチル−ピペラジン１−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，９０ｍｇ（５５％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１４．２５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．８８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．５７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．０３（ｍ，１Ｈ），６．７５−６．８２（ｍ，２Ｈ），４．８６（ｍ，１Ｈ，ＯＨ），３．７０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．０４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．２８（ｂｒｓ，７Ｈ），２．１９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．１８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
ＭＳｍ／ｚ（＋ｖｅ）４．０９．３［Ｍ＋］．
【０３７７】
実施例８６
３−［３，５−ジメチル−４−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸フェニルアミド
２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸フェニルアミド（１１０ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）を３，５−ジメチル−４−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（１００ｍｇ）と縮合させて，５０ｍｇ（２４％）の表題化合物を黄色固体として得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．２６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．０８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．２１（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝１．６＆８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｍ，２Ｈ），７．１０（ｍ，２Ｈ），６．９７（ｍ，２Ｈ），２．４９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．２８（ｍ，１０Ｈ，２ｘＣＨ3＆２ｘＣＨ2），２．１８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ５１９［Ｍ＋］．
【０３７８】
実施例８７
５−（５−ジメチルスルファモイル−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド
２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチルアミド（９０ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド（１００ｍｇ）と縮合させて，８０ｍｇ（４３％）の表題化合物を黄色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．３０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．２７（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝１．７＆８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2ＣＨ2），７．０７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），３．２６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．６０（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ3）2），２．５３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４５−２．５０（ｍ，１０Ｈ，２ｘＣＨ3＆Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2，０．９６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）ｔ
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４８７［Ｍ＋］．
【０３７９】
実施例８８
５−［５−（３−クロロフェニルスルファモイル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド
２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（３−クロロフェニル）アミド（１２０ｍｇ，３．８ｍｍｏｌ）を５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）アミド（１００ｍｇ）と縮合させて，８０ｍｇ（３７％）の表題化合物を黄色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．２４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．２９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．２５（ｄ，Ｊ＝１．８７Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．５２（ｄｄ，Ｊ＝１．８７＆８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2ＣＨ2），７．２２（ｔ，Ｊ＝８．０２Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｔ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｍ，１Ｈ），７．０（ｍ，２Ｈ），３．２７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４８−２．５７（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），２．４５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），４４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）
ＭＳｍ／ｚ５７０．１［Ｍ＋］．
【０３８０】
実施例９５
３−（２−オキソ−５−フェニル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−イソインドール−１−カルボン酸エチルエステル
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．７４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．００（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１３（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．７０（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝１．７＆８．０Ｈｚ，−１Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），７．３２（ｍ，１Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２６（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），２．７９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．７２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．７３（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．３０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４１２［Ｍ＋］．
【０３８１】
実施例９９
３−（２−オキソ−５−フェニルスルファモイル−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−イソインドール−１−カルボン酸エチルエステル
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．３３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．０７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．２４（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝１．８＆８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），６．９９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），２．８０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．７３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．７３（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．３０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４９１［Ｍ＋］．
【０３８２】
実施例１０９
３−［３−（モルホリン−４−カルボニル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−イソインドール−１−イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１２．７５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），１１．０８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．６２（ｄｄ，Ｊ＝１．４＆７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６５（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），３．５５（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．８１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）．１．７３（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４２１［Ｍ＋］．
【０３８３】
実施例１１２
５−ブロモ−３−［３−（ピロリジン−１−カルボニル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−イソインドール−１−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．００（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．２８（ｄｄ，Ｊ＝１．３＆８．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．５７（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．７９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．６５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．８８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．７１（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４３９＆４４１［Ｍ＋−１］＆［Ｍ＋＋１］．
【０３８４】
実施例１１４
３−（３−ジメチルカルバモイル−４，５，６，７−テトラヒドロ−２Ｈ−イソインドール−１−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１２．７２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），１１．０５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．６２（ｄｄ，Ｊ＝１．３＆７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），３．０３（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ3）2），２．８１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．７３（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ３７９［Ｍ＋］．
【０３８５】
実施例１１５
４−メチル−５−（５−メチルスルファモイル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５６（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．２４（ｄ，
Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．７４（ｄ，Ｊ＝２．９６Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄｄ，Ｊ＝１．５＆８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｂｒｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨ3），７．０３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），２．５７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ３６１［Ｍ＋］．
【０３８６】
実施例１１６
｛［４−メチル−５−（４−メチル−５−メチルスルファモイル−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル］−アミノ｝−酢酸エチルエステル
４−メチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸エチルエステル（ｌｉｔ．ｒｅｆ．Ｄ．Ｏ．Ｃｈｅｎｇ，Ｔ．Ｌ．Ｂｏｗｍａｎ  ａｎｄ  Ｅ．ＬｅＧｏｆｆ；Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍ．；１９７６；１３；１１４５−１１４７）を方法Ａを用いてホルミル化し，方法Ｂを用いて加水分解し，次にアミド化（方法Ｃ）して，［（５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル）−アミノ］−酢酸エチルエステルを得た。
【０３８７】
エタノール（２ｍＬ）中の４−メチル−５−メチルアミノスルホニル−２−オキシインドール（５０ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）を［（５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル）−アミノ］−酢酸エチルエステル（１００ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）と縮合させて，５０ｍｇ（５２％）の表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．５９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．２９（ｖ．ｂｒ．ｓ，１Ｈ，ＮＨ−ＣＯ），８．３３（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．８３（ｄ，Ｊ３．１１Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．７１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｂｒｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨ3），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１１（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），３．９２（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，ＧｌｙＣＨ2），２．８６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４２（ｄ，Ｊ＝４．７１Ｈｚ，３Ｈ，ＨＮＣＨ3），１．２０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳ−ＥＩｍ／ｚ４６０［Ｍ＋］．
【０３８８】
実施例１１７
｛［４−メチル−５−（５−メチルスルファモイル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル］−アミノ｝−酢酸エチルエステル
エタノール（５ｍＬ）中の５−メチルアミノスルホニル−２−オキシインドール（０．０６ｇ，０．２２ｍｍｏｌ），［（５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル）−アミノ］−酢酸エチルエステル（０．０７５ｇ，０．２７ｍｍｏｌ）およびピペリジン（２滴）の混合物を密封管中で９０℃で１２時間加熱した。冷却した後，沈澱物を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，ジクロロメタン／エーテル中で砕き，乾燥して，０．０３５ｇ（３６％）の表題化合物を黄色がかった褐色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１（ｖ．ｂｒ．ｓ，１Ｈ，ＮＨ−ＣＯ），８．３０（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），８．２５（ｄ，Ｊ１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．８４（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝１．９＆８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｂｒｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨ3），７．０４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１１（ｑ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ，３），３．９２（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，ＧｌｙＣＨ2），２．５５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４１（ｍ，３Ｈ，ＮＣＨ3），１．２０（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳｍ／ｚ４４６［Ｍ＋］．
【０３８９】
実施例１１８
｛［４−メチル−５−（５−メチルスルファモイル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル］−アミノ｝−酢酸
メタノール（１０ｍＬ）中の［（５−ホルミル−４−メチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル）−アミノ］−酢酸エチルエステル（０．１４２ｇ，０．５９ｍｍｏｌ）および１ＮＮａＯＨ（１．２ｍＬ）の混合物を室温で１時間撹拌した。反応液を濃縮し，残渣をエタノール（１２ｍＬ）中の５−メチルアミノスルホニル−２−オキシインドール（０．１３ｇ，０．４８ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１２ｍＬ）と縮合させて，０．１１ｇ（５２％）の表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．９８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１７（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄｄ，Ｊ＝２＆８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｍｏｎｂｒ．ｓ，２Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），３．４１（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2ＮＨ），２．５４（ｓ，３Ｈ，ピロール−ＣＨ3），２．３９（ｓ，３Ｈ，ＡｒＣＨ3）．
ＭＳｍ／ｚ４１７［Ｍ−１］＋．
【０３９０】
実施例１２０
５−メチル−２−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．７７（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１２．４９（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），１１．０７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．３９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．４３（ｄ，Ｊ＝７．４７Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｔ，Ｊ＝７．４７Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｔ，Ｊ＝７．４７Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝７．４７Ｈｚ，１Ｈ），６．４９（ｄ，Ｊ＝１．５３Ｈｚ，１Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
ＭＳｍ／ｚ２６９［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０３９１】
実施例１２１
５−メチル−２−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸エチルエステル
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．７９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．３１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．４５（ｄ，Ｊ＝７．５２Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｔ，Ｊ＝７．５２Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｔ，Ｊ＝７．５２Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝７．５２Ｈｚ，１Ｈ），６．５０（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．２６（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），２．３３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．３２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳｍ／ｚ２９７．１［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０３９２】
実施例１２２
２−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−５−メチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸エチルエステル
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．７２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．１６（ｓ，’１Ｈ，ＮＨ），８．２９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．５３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄｄ，Ｊ＝２．０＆８．０５Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｔ，Ｊ＝８．０５Ｈｚ，１Ｈ），６．５３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｑ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），２．３５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．３３（ｔ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．
ＭＳｍ／ｚ３７５＆３７７［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０３９３】
実施例１２３
２−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−５−メチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．７２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１２．５７（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），１１．１９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．３６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．５１（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄｄ，Ｊ＝１．４＆８．１７Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｔ，Ｊ＝８．１７Ｈｚ，１Ｈ），６．５２（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．
ＭＳｍ／ｚ３４７＆３４９［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０３９４】
実施例１２４
２−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−５−メチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）−アミド
ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中の２−ホルミル−５−メチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２５０ｍｇ，１．６３ｍｍｏｌ）の溶液に，１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（３７６ｍｇ，１．２当量），１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２６５ｍｇ，１．２当量），トリエチルアミン（０．４５ｍＬ，２当量）および１−（２−アミノエチル）ピロリジン（０．２３ｍＬ．１．１当量）を加えた。室温で一夜撹拌した後，反応液を飽和炭酸水素ナトリウムおよびブライン（過剰の塩を含む）で希釈し，ジクロロメタン中１０％メタノールで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮して，１３０ｍｇの２−ホルミル−５−メチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イル−エチル）アミドを得た。
【０３９５】
エタノール（２ｍＬ）中の５−ブロモ−２−オキシインドール（１０６ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ），２−ホルミル−５−メチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）−アミド（１２５ｍｇ，１当量）およびピペリジン（０．２ｍＬ）の混合物を密封管中で８０℃で１時間加熱し，次に冷却した。形成した沈澱物を真空濾過により回収し，エタノールおよび酢酸エチルで洗浄し，乾燥して，表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０６（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．５６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），８．１５（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．４８（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄｄ，Ｊ＝１．８＆７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．６０（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），３．３５（ｍ，２Ｈ，ＨＮＣＨ2ＣＨ2），２．５６（ｔ，Ｊ＝６．９１Ｈｚ，２Ｈ，ＨＮＣＨ2ＣＨ2），２．３５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６７（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．
ＭＳｍ／ｚ４４３／４４５［Ｍ＋およびＭ＋＋２］．
【０３９６】
実施例１２５
２−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−５−メチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）−アミド
ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中の２−ホルミル−５−メチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３２０ｍｇ，２．１ｍｍｏｌ）の溶液に，１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（４８３ｍｇ，１．２当量），１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（３４０ｍｇ，１．２当量），トリエチルアミン（０．５９ｍＬ，２当量）およびＮ，Ｎ−ジエチルエチレンジアミン（０．３２ｍＬ，１．１当量）を加えた。室温で一夜撹拌した後，反応液を飽和炭酸水素ナトリウムおよびブライン（過剰の塩を含む）で希釈し，ジクロロメタン中１０％メタノールで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮して，２−ホルミル−５−メチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）−アミドを得た。
【０３９７】
エタノール（２ｍＬ）中の５−ブロモ−２−オキシインドール（１０６ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ），２−ホルミル−５−メチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）−アミド（１２６ｍｇ，１当量）およびピペリジン（０．２ｍＬ）の混合物を密封管中で８０℃で１時間加熱し，次に冷却した。沈澱物を真空濾過により回収し，エタノールおよび酢酸エチルで洗浄し，乾燥して，表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．１１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．５４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），８．１（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2），７．４９（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄｄ，Ｊ＝２．２＆８．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），６．５８（ｄ，Ｊ＝２．２４Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｍ，２Ｈ，ＨＮＣＨ2ＣＨ2），２．５９（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），２．３６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），０．９９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
ＭＳｍ／ｚ４４５／４４７［Ｍ＋およびＭ＋＋２］．
【０３９８】
実施例１２６
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）−アミド
エタノール中の１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（２６６ｍｇ，２ｍｍｏｌ），５ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）−アミド（５３０ｍｇ，２ｍｍｏｌ）およびピペリジン（１滴）の混合物を９０℃で２時間加熱した。反応液を室温に冷却し，得られた沈澱物を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，４２２ｍｇ（５５％）の表題化合物を淡黄色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．４１（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ），７．１３（ｄｔ，Ｊ＝１．２＆７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄｔ，Ｊ＝１．２＆７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．２８（ｍ，２Ｈ），２．４８−２．５５（ｍ，６Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）．
ＭＳ＋ｖｅＡＰＣＩ３８１［Ｍ＋＋１］．
【０３９９】
実施例１２７
５−（５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド
エタノール中の５−クロロ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（３３５ｍｇ，２ｍｍｏｌ），５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）−アミド（５３０ｍｇ，２ｍｍｏｌ）およびピペリジン（１滴）の混合物を９０℃で２時間加熱した。反応液を室温に冷却し，得られた沈澱物を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，５６５ｍｇ（６８％）の表題化合物を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．９８（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ）７．７７（ｓ，１ＨＨ−ビニル），７．４４（ｔ，ＮＨ），７．１３（ｄｄ，Ｊ＝２，１＆８．４Ｈｚ，１Ｈ）６．８７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．２８（ｇ，２Ｈ），２．４８−２．５３（ｍ，６Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）
ＭＳ＋ｖｅＡＰＣＩ４１５［Ｍ＋＋１］．
【０４００】
実施例１２８
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−エチル）−アミド
１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イルエチル）−アミドと縮合させて，表題化合物を得た。
ＭＳ＋ｖｅＡＰＣＩ３７９［Ｍ＋＋１］．
【０４０１】
実施例１２９
５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−アミド
５−フルオロ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−アミドと縮合させて，表題化合物を得た。
ＭＳ＋ｖｅＡＰＣＩ３９７［Ｍ＋＋１］．
【０４０２】
スケールアップ方法：
５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（６１ｇ），５−フルオロ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（７９ｇ），エタノール（３００ｍＬ）およびピロリジン（３２ｍＬ）を４．５時間還流した。酢酸（２４ｍＬ）を混合物に加え，還流を３０分間続けた。混合物を室温に冷却し，固体を真空濾過により回収し，エタノールで２回洗浄した。固体を１２Ｎ塩酸（６．５ｍＬ）を含む４０％アセトン／水（４００ｍＬ）中で１３０分間撹拌した。固体を真空濾過により回収し，４０％アセトン／水で２回洗浄した。固体を真空下で乾燥して，５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（８６ｇ，７９％収率）を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（ジメチルスルホキシド−ｄ６）２．４８，２．５０（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），６．８０，６．８８，７．６８，７．７２（４ｘｍ，４Ｈ，芳香族およびビニル），１０．８８（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），１２．１２（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），１３．８２（ｓ，１Ｈ，ピロールＮＨ）．ＭＳｍ／ｚ２９９［Ｍ−１］．
【０４０３】
５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１００ｇ）およびジメチルホルムアミド（５００ｍＬ）を撹拌し，ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（２２１ｇ），１−（２−アミノエチル）ピロリジン（４５．６ｇ）およびトリエチルアミン（９３ｍＬ）を加えた。混合物を周囲温度で２時間撹拌した。固体生成物を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄した。固体をエタノール（５００ｍＬ）中で６４℃で１時間撹拌することによりスラリー洗浄し，室温に冷却した。固体を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，真空下で乾燥して，５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−アミド（１０１．５ｇ，７７％収率）を得た。
１ＨＮＭＲ（ジメチルスルホキシド−ｄ６）δ１．６０（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４０，２．４４（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），２．５０（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．５７，３．３５（２ｘｍ，４Ｈ，２ＸＣＨ2），７．５３，７．７０，７．７３，７．７６（４ｘｍ，４Ｈ，芳香族およびビニル），１０．８８（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），１３．６７（ｓ，１Ｈ，ピロールＮＨ）．ＭＳｍ／ｚ３９６［Ｍ＋１］．
【０４０４】
実施例１３０
５−（５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−アミド
５−クロロ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−アミドと縮合させて，表題化合物を得た。
ＭＳ＋ｖｅＡＰＣＩ４１３［Ｍ＋＋１］．
【０４０５】
実施例１３１
２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）−アミド
１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミドと縮合させて，表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．７８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｓ，１ＨＨ−ビニル），７．４８（ｔ，１Ｈ，ＮＨ），７．１３（ｄｔ，１Ｈ），６．９８（ｄｔ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｑ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３８（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），２．１９（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）
ＭＳ＋ｖｅＡＰＣＩ３５３［Ｍ＋＋１］．
【０４０６】
実施例１３２
５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミド
５−フルオロ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルアミノエチル）アミドと縮合させて，表題化合物を得た。
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．６８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．９０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．７６（ｄｄ，Ｊ＝２．４＆９．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｓ，１ＨＨ−ビニル），７．５１（ｔ，１Ｈ，ＮＨ），６．９３（ｍ，１Ｈ），６．８４（ｄｄ，Ｊ＝４．６＆８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｑ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ），２．４１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３８（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），２．１９（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2）
ＭＳ＋ｖｅＡＰＣＩ３７１［Ｍ＋＋１］．
【０４０７】
実施例１９３
５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−エチルアミノ−エチル）アミド
５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−エチルアミノ−エチル）−アミド（９９ｇ），エタノール（４００ｍＬ），５−フルオロ−２−オキシインドール（３２ｇ）およびピロリジン（１．５ｇ）を撹拌しながら３時間還流した。混合物を室温に冷却し，固体を真空濾過により回収した。固体をエタノール中で６０℃で撹拌し，室温に冷却し，真空濾過により回収した。生成物を真空下で乾燥して，５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−エチルアミノ−エチル）−アミド（７５ｇ，９５％収率）を得た。
１ＨＮＭＲ（ジメチルスルホキシド−ｄ６）δ１．０３（ｔ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４２，２．４４（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），２．５６（ｑ，２Ｈ，ＣＨ2），２．７０，３．３０（２ｘｔ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），６．８５，６．９２，７．５８，７．７２，７．７６（５ｘｍ，５Ｈ，芳香族，ビニルおよびＣＯＮＨ），１０．９０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），１３．６５（ｂｒｓ，１Ｈ，ピロールＮＨ）．
ＭＳｍ／ｚ３６９［Ｍ−ｌ］
【０４０８】
実施例１９５
５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチル−Ｎ−オキソアミノエチル）−アミド
方法Ａ：
氷浴中の５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノエチル）−アミド（５９８ｍｇ）およびジクロロメタン（６０ｍＬ）を３−クロロ過安息香酸（３３６ｍｇ）で処理し，混合物を室温で一夜撹拌した。溶媒を回転蒸発させ，残渣をメタノール（２０ｍＬ）に懸濁した。水酸化ナトリウム（２４０ｍｇ）を含有する水（２０ｍＬ）を加え，混合物を１時間撹拌した。沈澱物を真空濾過により回収し，５ｍＬの水で洗浄し，真空下で乾燥して，５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチル−Ｎ−オキソアミノ−エチル）−アミド（５１０ｍｇ，８２％収率）を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．７２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），９．８１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），７．７５（ｄｄ，１Ｈ，芳香族），７．７０（ｓ，１Ｈ，芳香族），６．９３（ｔｄ，１Ｈ，芳香族），．６．８４（ｍ，１Ｈ，芳香族），３．６３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．２９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．１４（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４７（ｓ，１Ｈ，ＣＨ3），２．４５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６４（ｔ，６Ｈ，２ｘＣＨ3）．ＭＳｍ／ｚ４１５［Ｍ＋１］．
【０４０９】
方法Ｂ：
５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）−アミド（１０ｇ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）に懸濁し，氷浴中で冷却した。３−クロロ過安息香酸（１３．１ｇ）を撹拌しながら加え，混合物を室温まで暖め，次に一夜撹拌した。混合物を回転蒸発させて乾固し，シリカゲルのカラムでクロマトグラフィーを行い，２０％メタノール／ジクロロメタンで抽出した。生成物を含む画分を合わせ，回転蒸発させて乾固して，５−ホルミル２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチル−Ｎ−オキソアミノ−エチル）−アミド（９ｇ，８３％収率）を得た。
【０４１０】
５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチル−Ｎ−オキソアミノ−エチル）−アミド（９ｇ），５−フルオロ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（（９ｇ，８３％収率）），およびピロリジン（（９ｇ，８３％収率（０．１ｇ）をエタノール（３０．ｍＬ）中で４時間還流した。混合物を氷浴中で冷却し，沈澱物を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄した。固体を酢酸エチル（３０ｍＬ）中で撹拌し，真空濾過により回収し，酢酸エチルで洗浄し，真空下で乾燥して，５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチル−Ｎ−オキソアミノ−エチル）−アミド（１０．３ｇ８０％収率）を橙色固体として得た。
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１３．７２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１１．０２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），９．８１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），７．７５（ｄｄ，１Ｈ，芳香族），７．７０（ｓ，１Ｈ，芳香族），６．９３（ｔｄ，１Ｈ，芳香族），６．８４（ｍ，１Ｈ，芳香族），３．６３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．２９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．１４（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４７（ｓ，１Ｈ，ＣＨ3），２．４５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６４（ｔ，６Ｈ，２ｘＣＨ3）．ＭＳｍ／ｚ４１５［Ｍ＋１］．
【０４１１】
実施例１９０
５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（ピリジン−１−イル）エチル］アミド
５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１２０ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）を，無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＥＤＣ，ＨＣｌ（９６ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ），無水１−ヒドロキシ−ベンズトリアゾール（６８ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ），およびＡｌｄｒｉｃｈから購入した２−（２−アミノエチルピリジンとともに室温で２−３日振盪した。反応混合物を１ＭＮａＨＣＯ3（１．５ｍｌ）で，次に８ｍｌの水で希釈した。沈澱した粗生成物を濾過により回収し，水で洗浄し，乾燥し，結晶化またはクロマトグラフィーにより精製して，５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（ピリジン−１−イル）−エチル］アミドを得た。
【０４１２】
実施例１８９
５−［５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（ピリジン−１−イル）エチル］アミド
先の実施例に記載されるように，ただし，５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸を５−［５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１２７ｍｇ）で置き換えて，５−［５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（ピリジン−１−イル）エチル］アミドを得た。
【０４１３】
実施例１９２
５−［５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（ピリジン−１−イル）エチル］アミド
上述の実施例１９０に記載されるように，ただし，５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸を５−［５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１４５ｍｇ）で置き換えて，５−［５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（ピリジン−１−イル）エチル］アミドを得た。
【０４１４】
実施例１９１
５−［２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（ピリジン−１−イル）エチル］アミド
上述の実施例１９０に記載されるように，ただし，５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデン−メチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸を５−［２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１１３ｍｇ）で置き換えて，５−［２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（ピリジン−１−イル）エチル］アミドを得た。
【０４１５】
実施例２０３
５−［５−シアノ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（ピリジン−１−イル）エチル］アミド
上述の実施例１９０に記載されるように，ただし，５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸を５−［５−シアノ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１２３ｍｇ）で置き換えて，５−［５−シアノ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（ピリジン−１−イル）エチル］アミドを得た。
【０４１６】
実施例１４２，１８６，１８７，１８８および２０４
上述の実施例１９０，１８９，１９１，１９２，および２０３に記載されるように，ただし，２−（２−アミノエチル）ピリジンを１−（２−アミノエチル）ピロリジン（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．から購入）で置き換えて，所望の化合物を得た。
【０４１７】
実施例１４３−１４７
上述の実施例１９０，１８９，１９１，１９２，および２０３に記載されるように，ただし，２−（２−アミノエチル）ピリジンを１−（２−アミノエチル）イミダゾーリン−２−オン（ジメチルカーボネートを密封フラスコ中でビス（２−アミノエチル）アミン（２当量）とともに１５０℃で３０分間加熱し，次に米国特許２６１３２１２（１９５０）（Ｒｏｈｍ＆ＨａａｓＣｏ．）に記載される方法により製造。粗生成物を溶出混合物クロロホルム−メタノール−水性アンモニア８０：２５：２を用いてシリカで精製した。）で置き換えて，所望の化合物を得た。
【０４１８】
実施例１４８−１５１および１８４
上述の実施例１９０，１８９，１９１，１９２，および２０３に記載されるように，ただし，２−（２−アミノエチル）ピリジンを４−（２−アミノエチル）ピペラジン−１−酢酸エチルエステル（以下のようにして製造：ピペラジン−１−酢酸エチルエステル（１１．２２ｇ）を酢酸エチル（２６０ｍＬ）中の炭酸カリウム（６．９ｇ）の存在下で０℃でヨードアセトニトリル（５．０ｍＬ）で処理した。ヨードアセトニトリルの添加が完了した後（４５分間），次に反応混合物を室温で１１時間撹拌した。反応混合物を濾過し，濾液を蒸発させた。残渣を，エタノール中で臭化コバルト（ＣｏＣｌ2および水素化ホウ素ナトリウムから製造）の存在下で室温で５０ｐｓｉで２日間水素化した。濾過，蒸発および溶出混合物クロロホルム−メタノール水性アンモニア８０：２５：２を用いるクロマトグラフィー精製により所望のアミン（３．３０６ｇ）を青白い黄色の油状物を得た。）で置き換えて，所望の化合物を得た。
【０４１９】
実施例１５２−１５３
上述の実施例１９０，１８９，１９１，１９２，および２０３に記載されるように，ただし，２−（２−アミノエチル）ピリジンを２−［（２−アミノエチルアミノ）］アセトニトリル（以下のようにして製造：エチルアルコール（８０ｍｌ）中のヨードアセトニトリル（５０ｍｍｏｌ）の溶液をエチルアルコール（６０ｍｌ）中のエチレンジアミン（１５０ｍｌ）の溶液に０℃で３０分間かけて加えた。さらに１時間０℃で撹拌を続け，次に室温で１４時間撹拌した。５５ｍｍｏｌの炭酸カリウムを加え，３０分間撹拌し，濾過し，濾液を室温で濃縮した。残渣を溶出混合物クロロホルム−メタノール−水性アンモニア８０：１５：１．５を用いてシリカで精製して，２−［（２−アミノエチルアミノ）］−アセトニトリル（３．５５０ｇ）を得，これを直ちに用いた）で置き換えて，所望の化合物を得た。
【０４２０】
実施例１５４−１５８
上述の実施例１９０，１８９，１９１，１９２，および２０３に記載されるように，ただし，２−（２−アミノエチル）ピリジンを１−（３−アミノプロピル）−アゼピン−２−オン（ＫｒａｆｔＡ．：Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．ＰｅｒｋｉｎＴｒａｎｓ．１，６，１９９９，７０５−１４に記載される方法にしたがって，ただし，ＤＢＵの加水分解は水酸化リチウムの存在下で１４５℃で手際よく実施した（１時間，５ｍｌのＤＢＵ，２ｍｌの水，４２０ｍｇの水酸化リチウム水和物）。粗生成物を溶出混合物クロロホルム−メタノール−水性アンモニア８０：４０：４を用いてシリカで精製して，１−（３−アミノプロピル）アゼピン−２−オン（４．９７３ｇ，８７％収率）を得た。）で置き換えて，所望の化合物を得た。
【０４２１】
実施例１３３−１３５，１５９および２００
上述の実施例１９０，１８９，１９１，１９２，および２０３に記載されるように，ただし，２−（２−アミノエチル）ピリジンをＮ−アセチルエチレンジアミン，（酢酸エチルとエチレンジアミン（１．５当量）との混合物を密封容器中で１６０℃で１時間加熱した。真空蒸留により，所望の生成物を５６％収率で得ることにより製造した。Ｎ−アセチルエチレンジアミンはＡｌｄｒｉｃｈからも入手可能である）で置き換えて，所望の化合物を得た。
【０４２２】
実施例１４６−１４０
上述の実施例１９０，１８９，１９１，１９２，および２０３に記載されるように，ただし，２−（２−アミノエチル）ピリジンを１−（３−アミノプロピル）−テトラヒドロ−ピリミジン−２−オン（１−（３−アミノプロピル）−アゼピン−２−オンと同様の方法で，ＫｒａｆｔＡ．：Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．ＰｅｒｋｉｎＴｒａｎｓ．１，６，１９９９，７０５−１４の方法にしたがって製造した。簡単には，１，３，４，６，７，８−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリミド［１，２ａ］ピリミジン（４．９３９ｇ），水酸化リチウム水和物（９１８ｍｇ）および２ｍｌの水を密封容器中で溶媒なしで１４５℃で１時間加熱した。粗生成物をシリカのカラムでクロロホルム−メタノール−水性アンモニア８０：４０：４で精製して，純粋なアミン（５．２６５ｇ，９４％収率）を得た）で置き換えた。
【０４２３】
実施例１４１，１６０−１６２および１８５
上述の実施例１９０，１８９，１９１，１９２，および２０３に記載されるように，ただし，２−（２−アミノエチル）ピリジンを１−（２−アミノエチル）−ピペラジン−２−オン（以下のように製造：塩化ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（２５ｍＬ，９７．７ｍｍｏｌ）をそのままで無水ジメチルアセトアミド（８０ｍＬ）中のＤＢＵ（１９．５ｍｌ，１３０ｍｍｏｌ）およびビス（２−アミノエチル）アミン（４．３２ｍＬ，４０ｍｍｏｌ）溶液に，水浴中で５分間以内に冷却した後，室温で滴加した。混合物を５時間撹拌した。ブロモ酢酸エチルエステル（６．７０ｍＬ，６０ｍｍｏｌ）を室温に冷却しながらそのまま加えた。反応液を２５分間撹拌し，次に高真空下で蒸発させた。残渣をメタノール（２００ｍｌ）に溶解し，ＫＨＣＯ3（ｌＯｇ）およびＫＦ（１２ｇ，２００ｍｍｏｌ）を加え，混合物を６０℃で５時間撹拌した。１０ｇのＮａ2ＣＯ3を加え，１０分間撹拌し，冷却し，濾過した。濾液を蒸発させた。残渣をヘキサン（２回，２５０ｍｌ）で抽出した。ヘキサン不溶性物質をエタノール（６０ｍｌ）に溶解し，濾過し，蒸発させた残渣をシリカのカラムでクロロホルム−メタノール−水性アンモニア８０：４０：４で溶出して，純粋なアミン（４．２４５ｇ，７４％収率）を得た）で置き換えて，所望の化合物を得た。
【０４２４】
実施例１６３−１６７
上述の実施例１９０，１８９，１９１，１９２，および２０３に記載されるように，ただし，２−（２−アミノエチル）ピリジンを３−［（２−アミノエチル）アミノ］プロピオニトリル（ＴＨＦ中のエチレンジアミン（１５０ｍｍｏｌ）およびアクリロニトリル（５０ｍｍｏｌ）から，Ｉｓｒａｅｌ，Ｍ．  ｅｔ  ａｌ：Ｊ．ＭｅｄＣｈｅｍ．７，１９６４，７１０−１６．に記載されるように，室温で製造して所望のアミン（４．２９４ｇ）を得た。）で置き換えて，所望の化合物を得た。
【０４２５】
実施例１６８
５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−エチル］−アミド
２０ｍＬ反応管中の５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（９０ｍｇ），ＤＭＦ（０．８ｍＬ）およびＴＥＡ（０．０８４ｍＬ）の黄色の濁った撹拌混合物にＢＯＰ試薬（１９９ｍｇ）を加えた。混合物は５分間で透明になった。２−（４−メチルピペラジン−ｌイル）エチルアミンｌ（５１ｍｇ）を透明な混合物に加えた。得られた溶液を室温で一夜撹拌した。反応系から黄色固体生成物が沈澱した。薄層クロマトグラフィー（１０％メタノール，塩化メチレン中）はすべての出発物質が生成物に変換されたことを示した。固体を真空濾過により単離し，エタノール（１ｍＬ）で１回洗浄した。固体をジエチルエーテル（２ｍＬ）中で２０分間超音波処理し，真空濾過により回収した。真空下で乾燥した後，５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（４−メチルピペラジン−１−イル−エチル）−アミド（７９ｍｇ，６２％収率）を得た。
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．１３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４０，２．４２（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），２．４１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４７（ｍ，８Ｈ，４ｘＣＨ2），３．３０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），６．８２（ｄｄ，Ｊ＝４．５，８．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｔｄ，２Ｊ＝２．４，３Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｄｄ，Ｊ＝２．８，９．６Ｈｚ，１Ｈ）（芳香族およびビニル），１０．８８（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），１３．６７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）．ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４２４．４（Ｍ−１）．
【０４２６】
実施例１６９
５−（５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（４−メチルピペラジン−１−イルエチル）−アミド
上述の実施例１６８の方法にしたがって，ただし５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸を５−［５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（９５ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）で置き換えて，５−（５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（４−メチルピペラジン−１−イルエチル）−アミド（７６ｍｇ，５８％）を得た。
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．１３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４１，２．４２（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），２．４２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４８（ｍ，８Ｈ，４ｘＣＨ2），３．３０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．ＯＨｚ，１Ｈ），７．１１（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．ＯＨｚ，１Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）（芳香族およびビニル），１０．９８（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），１３．６２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）．
ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４４０．２（Ｍ−１）．
【０４２７】
実施例１７０
５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（４−メチルピペラジン−１−イル−エチル）−アミド
上述の実施例１６８に記載される方法にしたがって，ただし５−（５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸を５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸で置き換えて，５−（５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（４−メチルピペラジン−１−イル−エチル）−アミド（３９ｍｇ，５４％）をＳＵ０１１６７０（５４ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）から得た。
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．１４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．４１，２．４２（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），２．４２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４８（ｍ，８Ｈ，４ｘＣＨ2），３．３１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．ＯＨｚ，１Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），８．０９（ｄ，Ｊ＝２．ＯＨｚ，１Ｈ）（芳香族およびビニル），１０．９９（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），１３．６１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）．ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４８６．６（Ｍ）．
【０４２８】
実施例１７２
５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（４−メチルピペラジン−１−イル−エチル）−アミド
上述の実施例１６８に記載される方法にしたがって，ただし５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸ＳＵ０１４９００を５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸で置き換えて，５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（４−メチルピペラジン−１−イル−エチル）−アミド，ＳＵ０１４９０３（１３６ｍｇ，８４％）をＳＵ０１２１２０（１１２．８ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）から得た。
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．１３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３９，２．４２（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），２．４２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４８（ｍ，８Ｈ，４ｘＣＨ2），３．３０（ｔ，２Ｈ，ＣＨ2），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．ＯＨｚ，１Ｈ），６．９６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）（芳香族およびビニル），１０．８８（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），１３．６１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）．ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４０６．６（Ｍ−１）．
【０４２９】
実施例１７１
５−［２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（３，５−ジメチルピペラジン−１−イル］エチル）アミド
２０ｍＬ反応管中の５−［２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１１２．８ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ），ＤＭＦ（０．５ｍＬ）およびトリエチルアミン（０．１１１ｍＬ）の撹拌した黄色の濁った混合物にＢＯＰ試薬（２６５ｍｇ）を加えた。混合物は５分以内に透明になった。２−（２，６−ジメチルピペラジン−１−イル）エチルアミン（６８．６ｍｇ）（Ｔａｐｉａ，Ｌ．Ａｌｏｎｓｏ−Ｃｉｒｅｓ，Ｐ．Ｌｏｐｅｚ−Ｔｕｄａｎｃａ，Ｒ．Ｍｏｓｑｕｅｒａ，Ｌ．Ｌａｂｅａｇａ，Ａ．Ｉｎｎｅｒａｒｉｔｙ，Ａ．Ｏｒｊａｌｅｓ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９９，４２，２８７０−２８８０を参照）を透明な混合物に加えた。得られた溶液を室温で一夜撹拌した。薄層クロマトグラフィー（１０％メタノール，塩化メチレン中）は，すべての出発物質が生成物に変換されたことを示した。反応混合物を蒸発乾固させ，次にフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2／ＣＨ3０Ｈ＝２０／１−１５／１）により精製し，次に再結晶して，５−［２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（３，５−ジメチルピペラジン−１−イル）エチル）アミド（８３ｍｇ，５０％収率）を得た。
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．１５，１．１６（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），１．９５（ｔ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４１，２．４７（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），２．５０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．０３（ｄ，Ｊ＝ｌＯＨｚ，２Ｈ），３．１９（ｍ，２Ｈ），３．３０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）（芳香族およびビニル），１０．８８（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），１３．６２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）．ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４２２．２（Ｍ＋１）．
【０４３０】
実施例１７３
５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（３，５−ジメチルピペラジン−１−イル）エチル）アミド
上述の実施例１６８に記載される方法にしたがって，所望の化合物を得た（６０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）。
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８９１，０．９０７（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），１．４９（ｔ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，２Ｈ），２．４０，２．４２（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），２．４１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．７４（ｍ，４Ｈ），３．３０（ｍ，２Ｈ），６．８２（ｄｄ，Ｊ＝４．５，８．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｔｄ，２Ｊ＝２．４，３Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｄｄ，Ｊ＝４．６，８．４Ｈｚ，１Ｈ）（芳香族およびビニル），１０．８８（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），１３．６５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）．ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４３８．４（Ｍ−１）．
【０４３１】
実施例１７４
５−［５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（３，５−ジメチルピペラジン−１−イル）エチル）アミド
上述の実施例１７１の方法にしたがって，５−［５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（６３ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）から所望の化合物（３１．２ｍｇ，３４％）を得た。
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．１５，１．１６（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），１．９５（ｔ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４０，２．４２（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），２．５０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．０３（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，２Ｈ），３．１９（ｍ，２Ｈ），３．３０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）（芳香族およびビニル），１０．９９（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），１３．６３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）．ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４５６．２（Ｍ＋１）．
【０４３２】
実施例１７５
５−［５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［２−（３，５−ジメチルピペラジン−１−イル）エチル）アミド
上述の実施例１７１に記載される方法にしたがって，５−［５−ブロモ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（７４ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）から所望の化合物（４０ｍｇ，４０％）を得た。
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．１５，１．１６（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），１．９５（ｔ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４０，２．４２（２ｘｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3），２．５０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），３．０３（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，２Ｈ），３．１９（ｍ，２Ｈ），３．３０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），
６．８１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝２．ＯＨｚ，１Ｈ）（芳香族およびビニル），１０．９９（ｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），１３．６２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）．ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４９８．４（Ｍ−１）．
【０４３３】
生物学的実施例
以下のアッセイを用いて，最適な程度の所望の活性を示す化合物を見いだす。
Ａ．アッセイ方法
以下のアッセイを用いて，活性のレベルおよび本発明の種々の化合物が１またはそれ以上のＰＫに及ぼす影響を決定することができる。任意のＰＫについて，当該技術分野においてよく知られる手法を用いて同じように同様のアッセイを設計することができる。
【０４３４】
本明細書に記載されるアッセイのいくつかは，ＥＬＩＳＡ（酵素結合イムノソルベントサンドイッチアッセイ）フォーマットで行う（Ｖｏｌｌｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，"Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ，"Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２ｄｅｄ．，Ｒｏｓｅ  ａｎｄ  Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，ｐｐ．３５９−３７１）。一般的方法は以下のとおりである：試験キナーゼを発現する（天然にまたは組換え的に）細胞に化合物を導入し，選択された時間が経過した後，試験キナーゼがレセプターである場合には，レセプターを活性化することが知られているリガンドを加える。細胞を溶解させ，溶解物を酵素的リン酸化反応の基質を認識する特定の抗体で予め被覆したＥＬＩＳＡプレートのウエルに移す。細胞溶解物の非基質成分を洗い流し，ホスホチロシンを特異的に認識する抗体で基質上のリン酸化の量を検出し，試験化合物と接触していない対照細胞と比較する。
【０４３５】
特定のＰＫについてのＥＬＩＳＡ実験を実施するための現在好ましいプロトコルを以下に記載する。しかし，他のＲＴＫ，ならびにＣＴＫおよびＳＴＫに対する化合物の活性を決定するためにこれらのプロトコルを適合させることは，十分に当業者の技術の範囲内である。本明細書に記載される他のアッセイは試験キナーゼの活性化に応答して作成されたＤＮＡの量を測定するものであり，これは増殖性応答の一般的尺度である。このアッセイの一般的方法は以下のとおりである：試験キナーゼを発現する（天然にまたは組換え的に）細胞に化合物を導入し，選択された時間が経過した後，試験キナーゼがレセプターである場合には，レセプターを活性化することが知られているリガンドを加える。少なくとも一夜インキュベートした後，ＤＮＡ標識試薬，例えば５−ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）またはＨ3−チミジンを加える。抗ＢｒｄＵ抗体を用いて，または放射活性を測定することにより標識ＤＮＡの量を検出し，試験化合物と接触していない対照細胞と比較する。
【０４３６】
ＧＳＴ−ＦＬＫ−１バイオアッセイ
このアッセイは，ポリ（ｇｌｕ，ｔｙｒ）ペプチドにおけるＧＳＴ−Ｆｌｋｌのチロシンキナーゼ活性を分析する。
【０４３７】
材料および試薬：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥＬＩＳＡプレート（ＣｏｒｎｉｎｇカタログＮｏ．５８０５−９６）．
２．ポリ（ｇｌｕ，ｔｙｒ）４：１，ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｅ（Ｓｉｇｍａカタログ＃Ｐ０２７５）．
３．ポリ（ｇｌｕ，ｔｙｒ）（ｐＥＹ）被覆アッセイプレートの調製：１００μｌＰＢＳ中の２μｇ／ウエルのポリ（ｇｌｕ，ｔｙｒ）（ｐＥＹ）を加え，室温で２時間保持するか，４℃で一夜保持する。プレートをよく覆って蒸発を防ぐ。
４．ＰＢＳ緩衝液：１Ｌにつき，０．２ｇＫＨ2ＰＯ4，１．１５ｇＮａ2ＨＰＯ4，０．２ｇＫＣｌおよび８ｇＮａＣｌを約９００ｍｌのｄＨ2Ｏ中で混合する。すべての試薬が溶解したとき，ＨＣｌでｐＨを７．２に調節する。ｄＨ2Ｏで総容量を１Ｌとする。
５．ＰＢＳＴ緩衝液：１ＬのＰＢＳ緩衝液に１．０ｍｌＴｗｅｅｎ２０を加える。
６．ＴＢＢ−ブロッキング緩衝液：１Ｌにつき，１．２１ｇＴＲＩＳ，８．７７ｇＮａＣｌ，１ｍｌＴＷＥＥＮ−２０を約９００ｍｌのｄＨ2Ｏ中で混合する。ＨＣｌでｐＨを７．２に調節する。１０ｇＢＳＡを加え，撹拌して溶解させる。ｄＨ2Ｏで総容量を１Ｌとする。濾過して粒子状物質を除去する。
７．１％ＢＳＡ，ＰＢＳ中：１ｘ作業溶液を作成するためには，１０ｇＢＳＡを約９９０ｍｌのＰＢＳ緩衝液に加え，撹拌して溶解させる。ＰＢＳ緩衝液で総容量を１Ｌに調節し，濾過して，粒子状物質を除去する。
８．５０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７．５．
９．ｓｆ９組換えバキュロウイルストランスフォーメーションから精製したＧＳＴ−Ｆｌｋｌｃｄ（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）。
１０．４％ＤＭＳＯ，ｄＨ2Ｏ中
１１．１０ｍＭＡＴＰ，ｄＨ2Ｏ中
１２．４０ｍＭＭｎＣｌ2
１３．キナーゼ希釈緩衝液（ＫＤＢ）：１０ｍｌＨｅｐｅｓ（ｐＨ７．５），１ｍｌ５ＭＮａＣｌ，４０μｌの１００ｍＭオルトバナジン酸ナトリウムおよび０．４ｍｌの５％ＢＳＡ（ｄＨ2Ｏ中）を８８．５６ｍｌのｄＨ2Ｏ中で混合する。
．１４．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ＃ＡＳ−７２０９２
１５．ＥＤＴＡ：１４．１２ｇエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を約７０ｍｌｄＨ2Ｏに混合する。ＥＤＴＡが溶解するまで１０ＮＮａＯＨを加える。ｐＨを８．０に調節する。ｄＨ2Ｏで総容量を１００ｍｌに調節する。
１６．１抗体希釈緩衝液：１０ｍｌのＰＢＳ緩衝液中５％ＢＳＡを８９．５ｍｌのＴＢＳＴと混合する。
１７．西洋ワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートした抗ホスホチロシンモノクローナル抗体（ＰＹ９９ＨＲＰ，Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）．
１８．２，２’−アジノビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−スルホン酸（ＡＢＴＳ，Ｍｏｓｓ，Ｃａｔ．Ｎｏ．ＡＢＳＴ）．
１９．１０％ＳＤＳ．
【０４３８】
方法：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥＬＩＳＡプレートを無菌ＰＢＳ中の２μｇのポリＥＹペプチドで，材料および試薬の工程３に記載されるように被覆する。
２．プレートを逆さにすることにより未結合液体をウエルから除去する。ＴＢＳＴで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体を除去する。
３．１００μｌの１％ＢＳＡ（ＰＢＳ中）を各ウエルに加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
４．工程２を繰り返す。
５．ウエルを５０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）（１５０μｌ／ウエル）に浸漬する。
６．試験化合物を９６−ウエルポリプロピレンプレート中でｄＨ2Ｏ／４％ＤＭＳＯで所望の最終アッセイ濃度の４倍に希釈する。
７．２５μｌの希釈試験化合物をＥＬＩＳＡプレートに加える。対照ウエルには，２５μｌのｄＨ2Ｏ／４％ＤＭＳＯを加える。
８．２５μｌの４０ｍＭＭｎＣｌ2および４ｘＡＴＰ（２μＭ）を各ウエルに加える。
９．２５μｌの０．５ＭＥＤＴＡを陰性対照ウエルに加える。
１０．ＧＳＴ−Ｆｌｋｌを０．００５μｇ（５ｎｇ）／ウエルでＫＤＢで希釈する。
１１．５０μｌの希釈酵素を各ウエルに加える。
１２．振盪しながら室温で１５分間インキュベートする。
１３．５０μｌの２５０ｍＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）を加えることにより反応を停止する。
１４．ＴＢＳＴで３回洗浄し，プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体を除去する。
１５．抗体希釈緩衝液中で１：５，０００に希釈した１００μｌ／ウエルの抗ホスホチロシンＨＲＰコンジュゲートを加える。振盪しながら室温で９０分間インキュベートする。
１６．工程１４と同様に洗浄する。
１７．１００μｌのｒｔＡＢＴＳ溶液を各ウエルに加える。
１８．振盪しながら１０−１５分間インキュベートする。泡を除去する。
１９．２０μｌの１０％ＳＤＳを各ウエルに加えることにより反応を停止する。
２０．ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ＥＬＩＳＡリーダーで，試験フィルタ４１０ｎＭ，参照フィルタ６３０ｎＭで結果を読む。
【０４３９】
ＰＹＫ２ＢＩＯアッセイ
このアッセイを用いて，ＥＬＩＳＡアッセイにおいて，ＨＡエピトープタグ付け全長ｐｙｋ２（ＦＬ．ｐｙｋ２−ＨＡ）のインビトロキナーゼ活性を測定する。
【０４４０】
材料および試薬：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥｌｉｓａプレート．
２．１２ＣＡ５モノクローナル抗ＨＡ抗体（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
３．ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水（Ｇｉｂｃｏカタログ＃４５０−１３００ＥＢ）
４．ＴＢＳＴ緩衝液：１Ｌにつき，８．７６６ｇＮａＣｌ，６．０５７ｇＴＲＩＳおよび１ｍｌの０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を約９００ｍｌｄＨ2Ｏ中で混合する。ｐＨを７．２に調節し，容量を１Ｌとする。
５．ブロッキング緩衝液：１Ｌにつき，１００ｇ１０％ＢＳＡ，１２．１ｇ１００ｍＭＴＲＩＳ，５８．４４ｇ１ＭＮａＣｌおよび１０ｍＬの１％ＴＷＥＥＮ２０を混合する。
６．ｓｆ９細胞溶解物からのＦＬ．ｐｙｋ２−ＨＡ（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）．
７．４％ＤＭＳＯ，ＭｉｌｌｉＱｕｅＨ2Ｏ中
８．１０ｍＭＡＴＰ，ｄＨ2Ｏ中
９．１ＭＭｎＣｌ2．
１０．１ＭＭｇＣｌ2．
１１．１Ｍジチオスレイトール（ＤＴＴ）．
１２．１０Ｘキナーゼ緩衝液リン酸化：５．０ｍｌ１ＭＨｅｐｅｓ（ｐＨ７．５），０．２ｍｌ１ＭＭｎＣｌ2，１．０ｍｌ１ＭＭｇＣｌ2，１．０ｍｌ１０％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を２．８ｍｌｄＨ2Ｏ中で混合する。使用直前に０．１ｍｌ１ＭＤＴＴを加える。
１３．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート．
１４．５００ｍＭＥＤＴＡ，ｄＨ2Ｏ中
１５．抗体希釈緩衝液：１００ｍＬにつき，１ｍＬ５％ＢＳＡ／ＰＢＳおよび１ｍＬ１０％Ｔｗｅｅｎ−２０を８８ｍＬＴＢＳ中で混合する。
１６．ＨＲＰ−コンジュゲート化抗ＰｔｙｒＰＹ９９），Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  ＢｉｏｔｅｃｈＣａｔ．Ｎｏ．ＳＣ−７０２０．
１７．ＡＢＴＳ，Ｍｏｓｓ，Ｃａｔ．Ｎｏ．ＡＢＳＴ−２０００．
１８．１０％ＳＤＳ．
【０４４１】
方法：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを１００μｌＰＢＳ中の０．５μｇ／ウエルの１２ＣＡ５抗ＨＡ抗体で被覆する。４℃で一夜保存する。
２．プレートを逆さにすることにより未結合ＨＡ抗体をウエルから除去する。プレートをｄＨ2Ｏで洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体を除去する。
３．１５０μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
４．プレートをＴＢＳ−Ｔで４回洗浄する。
５．溶解物をＰＢＳ中で希釈する（１．５μｇ溶解物／１００μｌＰＢＳ）。
６．１００μｌの希釈溶解物を各ウエルに加える。室温で１時間振盪する。
７．工程４と同様に洗浄する。
８．５０μｌの２Ｘキナーゼ緩衝液を捕捉ｐｙｋ２−ＨＡを含むＥＬＩＳＡプレートに加える。
９．２５μｌの４％ＤＭＳＯ中４００μＭ試験化合物を各ウエルに加える。対照ウエルには４％ＤＭＳＯのみを用いる。
１０．２５μｌの０．５ＭＥＤＴＡを陰性対照ウエルに加える。
１１．２５μｌの２０ｐＭＡＴＰをすべてのウエルに加える。振盪しながら１０分間インキュベートする。
１２．２５μｌの５００ｍＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）をすべてのウエルに加えることにより反応を停止する。
１３．工程４と同様に洗浄する。
１４．１００μｌのＨＲＰコンジュゲート化抗Ｐｔｙｒ（１：６０００に希釈，抗体希釈緩衝液中）を各ウエルに加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１５．プレートをＴＢＳＴで３回，ＰＢＳで１回洗浄する。
１６．１００μｌのＡＢＳＴ溶液を各ウエルに加える。
１７．必要ならば，２０μｌの１０％ＳＤＳを各ウエルに加えることにより発色反応を停止する。
１８．ＥＬＩＳＡリーダーで，試験フィルタ４１０ｎＭ，参照フィルタ６３０ｎＭでプレートを読む。
【０４４２】
ＦＧＦＲ１バイオアッセイ
このアッセイを用いて，ＥＬＩＳＡアッセイでＦＧＦ１−Ｒのインビトロキナーゼ活性を測定する。
【０４４３】
材料および試薬：
１．Ｃｏｓｔａｒ９６−ウエルＥｌｉｓａプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ＃３３６９）．
２．ポリ（Ｇｌｕ−Ｔｙｒ）（Ｓｉｇｍａカタログ＃Ｐ０２７５）．
３．ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏカタログ＃４５０−１３００ＥＢ）
４．５０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液溶液．
５．ブロッキング緩衝液（５％ＢＳＡ／ＰＢＳ）．
６．精製ＧＳＴ−ＦＧＦＲ１（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
７．キナーゼ希釈緩衝液：５００μｌの１ＭＨｅｐｅｓ（ＧＩＢＣＯ），２０μｌの５％ＢＳＡ／ＰＢＳ，１０μｌの１００ｍＭオルトバナジン酸ナトリウムおよび５０μｌの５ＭＮａＣｌを混合する。
８．１０ｍＭＡＴＰ
９．ＡＴＰ／ＭｎＣｌ2リン酸化ミックス：２０μｌのＡＴＰ，４００μｌの１ＭＭｎＣｌ2および９．５６ｍｌのｄＨ2Ｏを混合する。
１０．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ＃ＡＳ−７２０９２）．
１１．０．５ＭＥＤＴＡ．
１２．０．０５％ＴＢＳＴ
５００μｌのＴＷＥＥＮを１リットルのＴＢＳに加える。
１３．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン血清（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）．
１４．ヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ，カタログ＃ＡＬＩ０４０４）．
１５．ＡＢＴＳ溶液．
１６．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液．
【０４４４】
方法：
１．Ｃｏｓｔａｒ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを１μｇ／ウエルの１００μｌＰＢＳ中ポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）で被覆する。４℃で一夜保存する。
２．被覆したプレートをＰＢＳで１回洗浄する。
３．１５０μｌの５％ＢＳＡ／ＰＢＳブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
４．プレートをＰＢＳで２回，次に５０ｍＭＨｅｐｅｓで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体および泡を除去する。
５．２５μｌの０．４ｍＭ試験化合物（４％ＤＭＳＯ中），または４％ＤＭＳＯ単独（対照）をプレートに加える。
６．精製ＧＳＴ−ＦＧＦＲ１を希釈緩衝液（５μキナーゼ／５０μｌＫＤＢ／ウエル）で希釈する。
７．５０μｌの希釈キナーゼを各ウエルに加える。
８．２５μｌ／ウエルの新たに調製したＡＴＰ／Ｍｎ＋＋（０．４ｍｌ１ＭＭｎＣｌ2，４０μｌ１０ｍＭＡＴＰ，９．５６ｍｌｄＨ2Ｏ，新たに調製）を加えることによりキナーゼ反応を開始する
９．これは迅速なキナーゼ反応であり，ＡＴＰの添加と同様の様式で２５μｌの０．５ＭＥＤＴＡを加えることにより停止しなければならない。
１０．プレートを新たなＴＢＳＴで４回洗浄する。
１１．抗体希釈緩衝液を作成する：５０ｍｌにつき，５ｍｌの５％ＢＳＡ，２５０μｌの５％ミルクおよび５０μｌの１００ｍＭバナジン酸ナトリウムを混合し，０．０５％ＴＢＳＴで最終容量とする。
１２．１００μｌ／ウエルの抗ホスホチロシン（１：１００００希釈，ＡＤＢ中）を加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１３．工程１０と同様に洗浄する。
１４．１００μｌ／ウエルのＢｉｏｓｏｕｒｃｅヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（１：６０００希釈，ＡＤＢ中）を加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１５．工程１０と同様に洗浄し，次にＰＢＳで洗浄して泡および過剰のＴＷＥＥＮを除去する。
１６．１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。
１７．振盪しながら１０−２０分間インキュベートする。泡を除去する。
１８．ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００Ｅｌｉｓａリーダーで，試験フィルタ４１０ｎＭ，参照フィルタ６３０ｎＭでアッセイを読む。
【０４４５】
ＥＧＦＲバイオアッセイ
このアッセイを用いて，ＥＬＩＳＡアッセイにおいてＦＧＦ１−Ｒのインビトロキナーゼ活性を測定する。
【０４４６】
材料および試薬：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥｌｉｓａプレート．
２．ＳＵＭＯ１モノクローナル抗ＥＧＦＲ抗体（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）．
３．ＰＢＳ
４．ＴＢＳＴ緩衝液
５．ブロッキング緩衝液：１００ｍｌにつき，５．０ｇカーネーションインスタント無脂ミルクを１００ｍｌＰＢＳと混合する。
６．Ａ４３１細胞溶解物（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）．
７．ＴＢＳ緩衝液：
８．ＴＢＳ＋１０％ＤＭＳＯ：１Ｌにつき，１．５１４ｇＴＲＩＳ，２．１９２ｇＮａＣｌおよび２５ｍｌＤＭＳＯを混合物し，ｄＨ2Ｏで総容量１リットルとする。
９．ＡＴＰ（アデノシン−５’−三リン酸，ウマ筋肉，ＳｉｇｍａＣａｔ．Ｎｏ．Ａ−５３９４），１．０ｍＭ溶液，ｄＨ2Ｏ中。この試薬は，使用直前に作成し氷上に保持しなければならない。
１０．１．０ｍＭＭｎＣｌ2．
１１．ＡＴＰ／ＭｎＣｌ2リン酸化ミックス：１０ｍｌを作成するには，３００μｌの１ｍＭＡＴＰ，５００μｌのＭｎＣｌ2および９．２ｍｌのｄＨ2Ｏを混合する。使用直前に調製し，氷上に保持する。
１２．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート．
１３．ＥＤＴＡ．
１４．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン血清（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）．
１５．ヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（ＢｉｏｓｏｕｒｃｅＣａｔ．Ｎｏ．ＡＬＩ０４０４）．
１６．ＡＢＴＳ．
１７．３０％過酸化水素
１８．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2．
１９．０．２ＭＨＣｌ．
【０４４７】
方法：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートをウエルあたり１００μｌＰＢＳ中の０．５μｇのＳＵＭ０１で被覆する。４℃で一夜保存する。
２．プレートを逆さにして液体を除去することにより未結合ＳＵＭＯ１をウエルから除去する。ｄＨ2Ｏで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体を除去する。
３．１５０μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
４．プレートを脱イオン水で３回，次にＴＢＳＴで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体および泡を除去する。
５．溶解物をＰＢＳ中で希釈する（７μｇ溶解物／１００μｌＰＢＳ）。
６．１００μｌの希釈溶解物を各ウエルに加える。室温で１時間振盪する。
７．プレートを上述の４と同様に洗浄する。
８．１２０μｌのＴＢＳを捕捉ＥＧＦＲを含むＥＬＩＳＡプレートに加える。
９．試験化合物をＴＢＳ中に１：１０で希釈し，ウエル中に入れる。
１０．１３．５μｌの希釈試験化合物をＥＬＩＳＡプレートに入れる。対照ウエルには１０％ＤＭＳＯ中１３．５μｌのＴＢＳを加える。
１１．振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
１２．１５μｌのリン酸化ミックスを陰性対照ウエルを除くすべてのウエルに加える。最終ウエル容量は約１５０μｌであり，各ウエル中３μＭＡＴＰ／５ｍＭＭｎＣｌ2の最終濃度となるはずである。振盪しながら５分間インキュベートする。
１３．振盪しながら１６．５μｌのＥＤＴＡ溶液を加えることにより反応を停止させる。さらに１分間振盪する。
１４．脱イオン水で４回，ＴＢＳＴで２回洗浄する。
１５．ウエルあたり１００μｌの抗ホスホチロシン（１：３０００希釈，ＴＢＳＴ中）を加える。振盪しながら室温で３０−４５分間インキュベートする。
１６．上述の４と同様に洗浄する。
１７．１００μｌのＢｉｏｓｏｕｒｃｅヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（１：２０００希釈，ＴＢＳＴ中）を各ウエルに加える。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
１８．上述の４と同様に洗浄する。
１９．１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。
２０．振盪しながら５−１０分間インキュベートする。泡を除去する。
２１．必要ならば，１００μｌの０．２ＭＨＣｌ／ウエルを加えることにより反応を停止させる。
２２．ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ＥＬＩＳＡリーダーでアッセイを読む：試験フィルタ４１０ｎＭ，参照フィルタ６３０ｎＭ。
【０４４８】
ＰＤＧＦＲバイオアッセイ
このアッセイを用いて，ＥＬＩＳＡアッセイにおいてＦＧＦ１−Ｒのインビトロキナーゼ活性を測定する。
【０４４９】
材料および試薬：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥｌｉｓａプレート
２．２８Ｄ４Ｃ１０モノクローナル抗ＰＤＧＦＲ抗体（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）．
３．ＰＢＳ．
４．ＴＢＳＴ緩衝液．
５．ブロッキング緩衝液（ＥＧＦＲバイオアッセイと同じ）．
６．ＰＤＧＦＲ−発現ＮＩＨ３Ｔ３細胞溶解物（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）．
７．ＴＢＳ緩衝液．
８．ＴＢＳ＋１０％ＤＭＳＯ．
９．ＡＴＰ．
１０．ＭｎＣｌ2．
１１．キナーゼ緩衝液リン酸化ミックス：１０ｍｌにつき，２５０μｌ１ＭＴＲＩＳ，２００μｌ５ＭＮａＣｌ，１００μｌ１ＭＭｎＣｌ2および５０μｌ１００ｍＭＴｒｉｔｏｎＸ−１００を十分なｄＨ2Ｏ中で混合して，１０ｍｌとする。
１２．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート．
１３．ＥＤＴＡ．
１４．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン血清（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）．
１５．ヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（ＢｉｏｓｏｕｒｃｅＣａｔ．Ｎｏ．ＡＬＩ０４０４）．
１６．ＡＢＴＳ．
１７．過酸化水素，３０％溶液．
１８．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2．
１９．０．２ＭＨＣｌ．
【０４５０】
方法：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートをウエルあたり１００μｌのＰＢＳ中０．５μｇ２８Ｄ４Ｃ１０で被覆し，４℃で一夜保存する。
２．プレートを逆さにして液体を除去することにより未結合２８Ｄ４Ｃ１０をウエルから除去する。ｄＨ2Ｏで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体を除去する。
３．１５０μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
４．プレートを脱イオン水で３回，次にＴＢＳＴで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体および泡を除去する。
５．溶解物をＨＮＴＧ中で希釈する（１０μｇ溶解物／１００μｌＨＮＴＧ）．
６．１００μｌの希釈溶解物を各ウエルに加える。室温で６０分間振盪する。
７．プレートを工程４に記載されるように洗浄する。
８．８０μｌの作業キナーゼ緩衝液ミックスを捕捉ＰＤＧＦＲを含むＥＬＩＳＡプレートに加える。
９．試験化合物を９６−ウエルポリプロピレンプレート中でＴＢＳ中で１：１０に希釈する。
１０．１０μｌの希釈試験化合物をＥＬＩＳＡプレートに加える。対照ウエルには，１０μｌのＴＢＳ＋１０％ＤＭＳＯを加える。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
１１．１０μｌのＡＴＰを陰性対照ウエルを除くすべてのウエルに直接加える（最終ウエル容量は約１００μｌであり，各ウエルは２０μＭＡＴＰであるはずである）。振盪しながら３０分間インキュベートする。
１２．１０μｌのＥＤＴＡ溶液を各ウエルに加えることにより反応を停止する。
１３．脱イオン水で４回，ＴＢＳＴで２回洗浄する。
１４．ウエルあたり１００μｌの抗ホスホチロシン（１：３０００希釈，ＴＢＳＴ中）を加える。振盪しながら室温で３０−４５分間インキュベートする。
１５．工程４と同様に洗浄する。
１６．１００μｌのＢｉｏｓｏｕｒｃｅヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（１：２０００希釈，ＴＢＳＴ中）を各ウエルに加える。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
１７．工程４と同様に洗浄する。
１８．１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。
１９．振盪しながら１０−３０分間インキュベートする。泡を除去する。
２０．必要ならば，１００μｌ／ウエルの０．２ＭＨＣｌを加えることにより反応を停止させる。
２１．ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ＥＬＩＳＡリーダーで，試験フィルタ４１０ｎＭ，参照フィルタ６３０ｎＭでアッセイを読む。
【０４５１】
細胞性ＨＥＲ−２キナーゼアッセイ
このアッセイを用いて，全細胞におけるＨＥＲ−２キナーゼ活性をＥＬＩＳＡフォーマットで測定する。
【０４５２】
材料および試薬：
１．ＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯカタログ＃１１９６５−０９２）．
２．ウシ胎児血清（ＦＢＳ，ＧＩＢＣＯカタログ＃１６０００−０４４），水浴中で５６℃で３０分間熱不活性化する。
３．トリプシン（ＧＩＢＣＯカタログ＃２５２００−０５６）．
４．Ｌ−グルタミン（ＧＩＢＣＯカタログ＃２５０３０−０８１）
５．ＨＥＰＥＳ（ＧＩＢＣＯカタログ＃１５６３０−０８０）．
６．成長培地：５００ｍｌＤＭＥＭ，５５ｍｌ熱不活性化ＦＢＳ，１０ｍｌＨＥＰＥＳおよび５．５ｍｌＬ−グルタミンを混合する。
７．血清飢餓培地：５００ｍｌＤＭＥＭ，２．５ｍｌ熱不活性化ＦＢＳ，１０ｍｌＨＥＰＥＳおよび５．５ｍｌＬ−グルタミンを混合物する。
８．ＰＢＳ．
９．平底９６−ウエル組織培養マイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ＃２５８６０）．
１０．１５ｃｍ組織培養皿（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ＃０８７５７１４８）．
１１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥＬＩＳＡプレート．
１２．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート．
１３．Ｃｏｓｔａｒトランスファーカートリッジ，Ｔｒａｎｓｔａｒ９６（Ｃｏｓｔａｒカタログ＃７６１０）用
１４．ＳＵＭＯ１：モノクローナル抗ＥＧＦＲ抗体（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）．
１５．ＴＢＳＴ緩衝液．
１６．ブロッキング緩衝液：５％カーネーションインスタントミルク，ＰＢＳ中１７．ＥＧＦリガンド：ＥＧＦ−２０１，Ｓｈｉｎｋｏ  Ａｍｅｒｉｃａｎ，Ｊａｐａｎ．。粉体を１００μｌの１０ｍＭＨＣｌに懸濁する。１００μｌの１０ｍＭＮａＯＨを加える。８００μｌのＰＢＳを加え，エッペンドルフチューブに移し，使用するまで−２０℃で保存する。
１８．ＨＮＴＧ溶解緩衝液：保存５ＸＨＮＴＧ用には，２３．８３ｇＨｅｐｅｓ，４３．８３ｇＮａＣｌ，５００ｍｌグリセロールおよび１００ｍｌＴｒｉｔｏｎＸ−１００および十分なｄＨ2Ｏを混合して１Ｌの溶液とする。１ＸＨＮＴＧ＊用には，２ｍｌＨＮＴＧ，１００Ｌ０．１ＭＮａ3ＶＯ4，２５０μｌ０．２ＭＮａ4Ｐ2Ｏ7および１００μｌＥＤＴＡを混合する。
１９．ＥＤＴＡ．
２０．Ｎａ３ＶＯ４．保存溶液を作成するためには，１．８４ｇＮａ３ＶＯ４を９０ｍｌｄＨ2Ｏと混合する。ｐＨを１０に調節する。電子レンジで１分間沸騰させる（溶液は透明になる）。室温に冷却する。ｐＨを１０に調節する。ｐＨが１０で安定するまで加熱／冷却のサイクルを繰り返す。
２１．２００ｍＭＮａ４Ｐ２Ｏ７．
２２．ホスホチロシン特異的ウサギポリクローナル抗血清（抗Ｐｔｙｒ抗体，ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）．
２３．アフィニティー精製抗血清，ヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体，ペルオキシダーゼコンジュゲート（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅカタログ＃ＡＬＩ０４０４）．
２４．ＡＢＴＳ溶液．
２５．３０％過酸化水素溶液．
２６．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2．
２７．０．２ＭＨＣｌ．
【０４５３】
方法：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ中１．０μｇ／ウエルのＳＵＭ０１で被覆する。最終容量１００μｌ／ウエル。４℃で一夜保存する。
２．使用の日に，被覆緩衝液を除去し，プレートをｄＨ2Ｏで３回，ＴＢＳＴ緩衝液で１回洗浄する。このアッセイにおいては，特に記載しない限り，すべての洗浄はこのように行う。
３．１００μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。プレートを振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。使用直前にプレートを洗浄する。
４．このアッセイにはＥＧＦｒ／ＨＥＲ−２キメラ／３Ｔ３−Ｃ７細胞株を用いる。
５．８０−９０％コンフルエントの皿を選択する。トリプシン処理により細胞を回収し，１０００ｒｐｍで室温で５分間遠心分離する。
６．細胞を血清飢餓培地に懸濁し，トリパンブルーで計数する。９０％より高い生存度が必要である。細胞を血清飢餓培地に２，５００細胞／ウエルの密度で，９０μｌ／ウエルで９６ウエルマイクロタイタープレートに播種する。播種した細胞を３７℃，５％ＣＯ2で一夜インキュベートする。
７．播種の２日後にアッセイを開始する。
８．試験化合物を４％ＤＭＳＯに溶解する。次に試料をプレート上で直接血清飢餓ＤＭＥＭでさらに希釈する。典型的には，この希釈は１：１０またはそれより高い。次にすべてのウエルを細胞プレートにさらに１：１０希釈して加える（１０μｌの試料および培地を９０μｌの血清飢餓培地に加える。最終ＤＭＳＯ濃度は１％以下でなければならない。標準的連続希釈を用いてもよい。
９．５％ＣＯ2，３７℃で２時間インキュベートする。
１０．保存ＥＧＦ（１６．５μＭ）を暖めたＤＭＥＭで１５０ｎＭに希釈することによりＥＧＦリガンドを調製する。
１１．１００μｌ／ウエルに十分な量のＨＮＴＧ＊を新たに調製する。氷上に置く。
１２．試験化合物とともに２時間インキュベートした後，調製したＥＧＦリガンドを細胞に５０μｌ／ウエルで加える。最終濃度は５０ｎＭである。陽性対照ウエルには同量のＥＧＦを加える。陰性対照にはＥＧＦを加えない。３７℃で１０分間インキュベートする。
１３．試験化合物，ＥＧＦ，およびＤＭＥＭを除去する。細胞をＰＢＳで１回洗浄する。
１４．ＨＮＴＧ＊を細胞に１００μｌ／ウエルで移す。氷上に５分間置く。この間にブロッキング緩衝液をＥＬＩＳＡプレートから除去し，洗浄する。
１５．細胞をマイクロピペッターでプレートから掻き取り，ＨＮＴＧ＊溶解緩衝液を繰り返し吸引分配することにより細胞材料をホモジナイズする。溶解物を，被覆しブロッキングし洗浄したＥＬＩＳＡプレートに移す。あるいは，Ｃｏｓｔａｒトランスファーカートリッジを用いて溶解物をプレートに移す。
１６．振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１７．溶解物を除去し，洗浄する。新たに希釈した抗Ｐｔｙｒ抗体（１：３０００，ＴＢＳＴ中）をＥＬＩＳＡプレートに１００μｌ／ウエルで加える。
１８．振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
１９．抗Ｐｔｙｒ抗体を除去し，洗浄する。新たに希釈したＢＩＯＳＯＵＲＣＥ抗体をＥＬＩＳＡプレートに加える（１：８０００，ＴＢＳＴ中，１００μｌ／ウエル）。
２０．振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
２１．ＢＩＯＳＯＵＲＣＥ抗体を除去し，洗浄する。新たに調製したＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液をＥＬＩＳＡプレートに１００μｌ／ウエルで加える。
２２．振盪しながら５−１０分間インキュベートする。泡を除去する。
２３．１００μｌ／ウエルの０．２ＭＨＣｌを加えて反応を停止する。
２４．ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ＥＬＩＳＡリーダーで，試験フィルタセット４１０ｎＭおよび参照フィルタ６３０ｎＭでアッセイを読む。
【０４５４】
ＣＤＫ２／サイクリンＡアッセイ
このアッセイを用いて，シンチレーションプロキシミティーアッセイ（ＳＰＡ）におけるヒトｃｄｋ２／サイクリンＡのインビトロセリン／トレオニンキナーゼ活性を測定する。
【０４５５】
材料および試薬：
１．Ｗａｌｌａｃ９６−ウエルポリエチレンテレフタレート（ｆｌｅｘｉ）プレート（Ｗａｌｌａｃカタログ＃１４５０−４０１）．
２．Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｒｅｄｉｖｕｅ［γ33Ｐ］ＡＴＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍカタログ＃ＡＨ９９６８）．
３．Ａｍｅｒｓｈａｍストレプトアビジン被覆ポリビニルトルエンＳＰＡビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍカタログ＃ＲＰＮＱ０００７）。ビーズはＰＢＳ中でマグネシウムまたはカルシウムなしで２０ｍｇ／ｍｌで再構成しなければならない。
４．Ｓｆ９細胞から精製した活性化ｃｄｋ２／サイクリンＡ酵素複合体（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）．
５．ビオチニル化ペプチド基質（Ｄｅｂｔｉｄｅ）．ペプチドビオチン−Ｘ−ＰＫＴＰＫＫＡＫＫＬをｄＨ2Ｏに５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解する。
６．ペプチド／ＡＴＰ混合物：１０ｍｌにつき，９．９７９ｍｌｄＨ2Ｏ，０．００１２５ｍｌ"コールド"ＡＴＰ，０．０１０ｍｌＤｅｂｔｉｄｅおよび０．０１０ｍｌγ33Ｐ−ＡＴＰを混合する。ウエルあたり最終濃度は，０．５μＭ"コールド"ＡＴＰ，０．１μｇＤｅｂｔｉｄｅおよび０．２μＣｉγ33Ｐ−ＡＴＰである。
７．キナーゼ緩衝液：１０ｍｌにつき，８．８５ｍｌｄＨ2Ｏ，０．６２５ｍｌＴＲＩＳ（ｐＨ７．４），０．２５ｍｌ１ＭＭｇＣｌ2，０．２５ｍｌ１０％ＮＰ４０を混合し，使用直前に０．０２５ｍｌ１ＭＤＴＴを新たに加える。
８．１０ｍＭＡＴＰ，ｄＨ2Ｏ中
９．１ＭＴｒｉｓ，ＨＣｌでｐＨを７．４に調節する。
１０．１ＭＭｇＣｌ2．
１１．１ＭＤＴＴ．
１２．ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏカタログ＃１４１９０−１４４）．
１３．０．５ＭＥＤＴＡ．
１４．停止溶液：１０ｍｌにつき，９．２５ｍｌＰＢＳ，０．００５ｍｌ１００ｍＭＡＴＰ，０．１ｍｌ０．５ＭＥＤＴＡ，０．１ｍｌ１０％ＴｒｉｔｏｎＸ１００および１．２５ｍｌの２０ｍｇ／ｍｌＳＰＡビーズを混合する。
【０４５６】
方法：
１．試験化合物の溶液を５％ＤＭＳＯ中に所望の最終濃度の５倍で調製する。各ウエルに１０μｌを加える。陰性対照用には，１０μｌの５％ＤＭＳＯ飲みをウエルに加える。
２．５μｌのｃｄｋ２／サイクリンＡ溶液を２．１ｍｌ２ｘキナーゼ緩衝液で希釈する。
３．２０μｌの酵素を各ウエルに加える。
４．１０μｌの０．５ＭＥＤＴＡを陰性対照ウエルに加える。
５．キナーゼ反応を開始させるため，２０μｌのペプチド／ＡＴＰ混合物を各ウエルに加える。振盪せずに１時間インキュベートする。
６．２００μｌの停止溶液を各ウエルに加える。
７．少なくとも１０分間保持する。
８．プレートを約２３００ｒｐｍで３−５分間回転させる。
９．Ｔｒｉｌｕｘまたは類似のリーダーを用いてプレートを計数する。
【０４５７】
ＭＥＴトランスリン酸化アッセイ
このアッセイを用いて，基質のｍｅｔトランスリン酸化のアゴニスト／アンタゴニストを同定する手段として，ポリ（グルタミン酸：チロシン（４：１））基質のホスホチロシンレベルを測定する。
【０４５８】
材料および試薬：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥｌｉｓａプレート，Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ＃２５８０５−９６．
２．ポリ（ｇｌｕ，ｔｙｒ）４：１，Ｓｉｇｍａ，Ｃａｔ．Ｎｏ；Ｐ０２７５．
３．ＰＢＳ，Ｇｉｂｃｏカタログ＃４５０−１３００ＥＢ
４．５０ｍＭＨＥＰＥＳ
５．ブロッキング緩衝液：２５ｇのウシ血清アルブミン，ＳｉｇｍａＣａｔ．ＮｏＡ−７８８８，を５００ｍｌＰＢＳに溶解し，４μｍフィルターを通して濾過する。
６．Ｍｅｔキナーゼドメインを含む精製ＧＳＴ融合蛋白質，Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．
７．ＴＢＳＴ緩衝液．
８．１０％水性（ＭｉｌｌｉＱｕｅＨ2Ｏ）ＤＭＳＯ．
９．１０ｍＭ水性（ｄＨ2Ｏ）アデノシン−５’−三リン酸，ＳｉｇｍａＣａｔ．Ｎｏ．Ａ−５３９４．
１０．２Ｘキナーゼ希釈緩衝液：１００ｍｌにつき，１０ｍＬ１ＭＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５，０．４ｍＬ５％ＢＳＡ／ＰＢＳ，０．２ｍＬ０．１Ｍオルトバナジン酸ナトリウムおよび１ｍＬ５Ｍ塩化ナトリウムを８８．４ｍＬｄＨ2Ｏ中で混合する。
１１．４ＸＡＴＰ反応混合物：１０ｍＬにつき，０．４ｍＬ１Ｍ塩化マンガンおよび０．０２ｍＬ０．１ＭＡＴＰを９．５６ｍＬｄＨ2Ｏ中で混合する。
１２．４Ｘ陰性対照混合物：１０ｍＬにつき，０．４ｍＬ１Ｍ塩化マンガンを９．６ｍＬｄＨ2Ｏ中に混合する。
１３．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ＃Ｓ−７２０９２
１４．５００ｍＭＥＤＴＡ．
１５．抗体希釈緩衝液：１００ｍＬにつき，１０ｍＬ５％ＢＳＡ／ＰＢＳ，０．５ｍＬ５％カーネーションインスタントミルク，ＰＢＳ中，および０．１ｍＬ０．１Ｍオルトバナジン酸ナトリウムを８８．４ｍＬＴＢＳＴ中で混合する。
１６．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン抗体，Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．
１７．ヤギ抗ウサギ西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲート化抗体，Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ，Ｉｎｃ．
１８．ＡＢＴＳ溶液：１Ｌにつき，１９．２１ｇクエン酸，３５．４９ｇＮａ２ＨＰＯ4および５００ｍｇＡＢＴＳを十分なｄＨ2Ｏ中で混合し，１Ｌとする。
１９．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2：１５ｍＬＡＢＳＴ溶液と２μｌＨ2Ｏ2を使用の５分前に混合する。
２０．０．２ＭＨＣｌ
【０４５９】
方法：
１．ＥＬＩＳＡプレートを１００μｌＰＢＳ中２μｇのポリ（Ｇｌｕ−Ｔｙｒ）で被覆し，４℃で一夜保存する。
２．プレートを１５０μｌの５％ＢＳＡ／ＰＢＳで６０分間ブロッキングする。
３．プレートをＰＢＳで２回，５０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液，ｐＨ７．４で１回洗浄する。
４．５０μｌの希釈キナーゼをすべてのウエルに加える。
（精製キナーゼはキナーゼ希釈緩衝液中で希釈する。最終濃度は１０ｎｇ／ウエルとなるはずである）。
５．２５μｌの試験化合物（４％，ＤＭＳＯ中）または対照にはＤＭＳＯ単独（４％，ｄＨ2Ｏ中）をプレートに加える。
６．キナーゼ／化合物混合物を１５分間インキュベートする。
７．２５μｌの４０ｍＭＭｎＣｌ2を陰性対照ウエルに加える。
８．２５μｌのＡＴＰ／ＭｎＣｌ2混合物を他のすべてのウエル（陰性対照を除く）に加える。５分間インキュベートする。
９．２５μｌの５００ｍＭＥＤＴＡを加えて反応を停止させる。
１０．プレートをＴＢＳＴで３回洗浄する。
１１．抗体希釈緩衝液中で１：１０，０００に希釈した１００μｌのウサギポリクローナル抗Ｐｔｙｒを各ウエルに加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１２．プレートをＴＢＳＴで３回洗浄する。
１３．ＢｉｏｓｏｕｒｃｅＨＲＰコンジュゲート化抗ウサギ抗体を抗体．希釈緩衝液中に１：６，０００で希釈する。１００μｌ／ウエルを加え，振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１４．プレートをＰＢＳで１回洗浄する。
１５．１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。
１６．必要ならば，１００μｌ／ウエルの０．２ＭＨＣｌを加えることにより発色反応を停止させる。
１７．ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ｅｌｉｓａリーダーで，試験フィルタ４１０ｎＭ，参照フィルタ６３０ｎＭでプレートを読む。
【０４６０】
ＩＧＦ−１トランスリン酸化アッセイ
このアッセイを用いて，基質のｇｓｔ−ＩＧＦ−１トランスリン酸化のアゴニスト／アンタゴニストを同定するために，ポリ（グルタミン酸：チロシン）（４：１）中のホスホチロシンレベルを測定する。
【０４６１】
材料および試薬：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥｌｉｓａプレート．
２．ポリ（Ｇｌｕ−ｔｙｒ）（４：１），ＳｉｇｍａＣａｔ．Ｎｏ．Ｐ０２７５．
３．ＰＢＳ，Ｇｉｂｃｏカタログ＃４５０−１３００ＥＢ．
４．５０ｍＭＨＥＰＥＳ５．ＴＢＢブロッキング緩衝液：１Ｌにつき，１００ｇＢＳＡ，１２．１ｇＴＲＩＳ（ｐＨ７．５），５８．４４ｇ塩化ナトリウムおよび１０ｍＬ１％ＴＷＥＥＮ−２０を混合する。
６．ＩＧＦ−１キナーゼドメインを含む精製ＧＳＴ融合蛋白質（Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．）
７．ＴＢＳＴ緩衝液：１Ｌにつき，６．０５７ｇＴｒｉｓ，８．７６６ｇ塩化ナトリウムおよび０．５ｍｌＴＷＥＥＮ−２０を混合し，ｄＨ2Ｏで１リットルとする。
８．４％ＤＭＳＯ，Ｍｉｌｌｉ−ＱＨ2Ｏ中．
９．１０ｍＭＡＴＰ，ｄＨ2Ｏ中．
１０．２Ｘキナーゼ希釈緩衝液：１００ｍＬにつき，１０ｍＬ１ＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５），０．４ｍＬ５％ＢＳＡ，ｄＨ2Ｏ中，０．２ｍＬ０．１Ｍオルトバナジン酸ナトリウムおよび１ｍＬ５Ｍ塩化ナトリウムを混合し，ｄＨ2Ｏで１００ｍＬとする。
１１．４ＸＡＴＰ反応混合物：１０ｍＬにつき，０．４ｍＬ１ＭＭｎＣｌ2および０．００８ｍＬ０．０１ＭＡＴＰおよび９．５６ｍＬｄＨ2Ｏを混合する。
１２．４Ｘ陰性対照混合物：０．４ｍＬの１Ｍ塩化マンガンを９．６０ｍＬｄＨ2Ｏと混合する。
１３．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート．
１４．５００ｍＭＥＤＴＡ，ｄＨ2Ｏ中．
１５．抗体希釈緩衝液：１００ｍＬにつき，１０ｍＬ５％ＢＳＡ（ＰＢＳ中），０．５ｍＬ５％カーネーションインスタント無脂ミルク（ＰＢＳ中）および０．１ｍＬ０．１Ｍオルトバナジン酸ナトリウムを８８．４ｍＬＴＢＳＴと混合する。
１６．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン抗体，Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．
１７．ヤギ抗ウサギＨＲＰコンジュゲート化抗体，Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ．
１８．ＡＢＴＳ溶液．
２０．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2：使用の５分前に１５ｍＬＡＢＴＳを２μｌＨ2Ｏ2と混合する。
２１．０．２ＭＨＣｌｄＨ2Ｏ中．
【０４６２】
方法：
１．ＥＬＩＳＡプレートを２．０μｇ／ウエルのポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１（ＳｉｇｍａＰ０２７５）１００μｌＰＢＳで．被覆する。プレートを４℃で一夜保存する。
２．プレートをＰＢＳで１回洗浄する。
３．１００μｌのＴＢＢブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。プレートを振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
４．プレートをＰＢＳで１回，５０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液ｐＨ７．５で２回洗浄する。
５．２５μｌの４％ＤＭＳＯ中の試験化合物（１０ｍＭ試験化合物の１００％ＤＭＳＯ中の保存溶液をｄＨ2Ｏで希釈することにより得る）をプレートに加える。
６．１０．０ｎｇのｇｓｔ−ＩＧＦ−１キナーゼ（５０μｌキナーゼ希釈緩衝液中）をすべてのウエルに加える。
７．２５μｌの４ＸＡＴＰ反応混合物をすべての試験ウエルおよび陽性対照ウエルに加えることによりキナーゼ反応を開始させる。２５μｌの４Ｘ陰性対照混合物をすべての陰性対照ウエルに加える。振盪しながら室温で１０分間インキュベートする。
８．２５μｌの０．５ＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）をすべてのウエルに加える。
９．プレートをＴＢＳＴ緩衝液で４回洗浄する。
１０．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン抗血清を，１００μｌの抗体希釈緩衝液中１：１０，０００の希釈ですべてのウエルに加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１１．プレートを工程９と同様に洗浄する。
１２．１００μｌのＢｉｏｓｏｕｒｃｅ抗ウサギＨＲＰを抗体希釈緩衝液中１：１０，０００の希釈ですべてのウエルに加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１３．プレートを工程９と同様に洗浄し，さらにＰＢＳで１回洗浄して，泡および過剰のＴｗｅｅｎ−２０を減少させる。
１４．１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2を各ウエルに加えることにより発色させる。
１５．約５分後，試験フィルタ４１０ｎｍ，参照フィルタ６３０ｎｍでＥＬＩＳＡリーダーを読む。
【０４６３】
ＢＲＤＵ取り込みアッセイ
以下のアッセイは，選択されたレセプターを発現するよう遺伝子工学的に改変された細胞を使用して，ＤＮＡ中へのＢｒｄＵ取り込みを決定することにより，リガンド−誘導性ＤＮＡ合成の活性に及ぼす目的化合物の影響を評価する。
以下の材料，試薬および方法は，以下のＢｒｄＵ取り込みアッセイのそれぞれについて一般的である。特定のアッセイにおける変更は特に記載される。
【０４６４】
材料および試薬：
１．適当なリガンド．
２．工学的に改変した適当な細胞．
３．ＢｒｄＵ標識試薬：１０ｍＭ，ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）．
４．ＦｉｘＤｅｎａｔ：固定溶液（即使用可）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）．
５．抗−ＢｒｄＵ−ＰＯＤ：マウスモノクローナル抗体，ペルオキシダーゼとコンジュゲート化（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）．
６．ＴＭＢ基質溶液：テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）．
７．ＰＢＳ洗浄溶液：１ＸＰＢＳ，ｐＨ７．４．
８．アルブミン，ウシ（ＢＳＡ），画分Ｖ粉体（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）．
【０４６５】
一般的方法：
１．細胞を８０００細胞／ウエルで，１０％ＣＳ，２ｍＭＧｌｎ，ＤＭＥＭ中で９６ウエルプレートに播種する。細胞を３７℃で５％ＣＯ2で一夜インキュベートする。
２．２４時間後，細胞をＰＢＳで洗浄し，次に無血清培地（０％ＣＳＤＭＥＭ，０．１％ＢＳＡ）中で２４時間血清飢餓とする。
３．第３日に，適当なリガンドおよび試験化合物を細胞に同時に加える。陰性対照ウエルには無血清ＤＭＥＭ，０．１％ＢＳＡのみを加える。陽性対照細胞にはリガンドを加えるが試験化合物は加えない。試験化合物は，無血清ＤＭＥＭ中でリガンドとともに９６ウエルプレート中で調製し，連続希釈して７種類の試験濃度とする。
４．リガンド活性化の１８時間後，希釈ＢｒｄＵ標識試薬（１：１００，ＤＭＥＭ中，０．１％ＢＳＡ）を加え，細胞をＢｒｄＵ（最終濃度＝１０μＭ）とともに１．５時間インキュベートする。
５．標識試薬とともにインキュベートした後，デカントし逆さにしたプレートをペーパータオル上で軽くたたくことにより培地を除去する。ＦｉｘＤｅｎａｔ溶液を加え（５０μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器で室温で４５分間インキュベートする。
６．デカントし逆さにしたプレートをペーパータオル上で軽くたたくことによりＦｉｘＤｅｎａｔ溶液をよく除去する。ミルク（５％脱水ミルク，ＰＢＳ中，２００μｌ／ウエル）をブロッキング溶液としてを加え，プレートをプレート振盪器で室温で３０分間インキュベートする。
７．デカントすることによりブロッキング溶液を除去し，ウエルをＰＢＳで１回洗浄する。抗−ＢｒｄＵ−ＰＯＤ溶液（１：２００希釈，ＰＢＳ中，１％ＢＳＡ）を加え（５０μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器で室温で９０分間インキュベートする。
８．デカントし，ウエルをＰＢＳで５回すすぐことにより抗体コンジュゲートをよく除去し，プレートを逆さにし，ペーパータオル上で軽くたたくことにより乾燥する。
９．ＴＭＢ基質溶液を加え（１００μｌ／ウエル），プレート振盪器で室温で２０分間，発色が光学的検出に十分となるまでインキュベートする。
１０．試料の吸収をＤｙｎａｔｅｃｈＥＬＩＳＡプレートリーダーで４１０ｎｍで測定する（"デュアル波長"モード，参照波長として４９０ｎｍでフィルターを読む）。
【０４６６】
ＥＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．マウスＥＧＦ，２０１（ＴｏｙｏｂｏＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）．
２．３Ｔ３／ＥＧＦＲｃ７．
【０４６７】
ＥＧＦ−誘導性Ｈｅｒ−２−推進性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．マウスＥＧＦ，２０１（ＴｏｙｏｂｏＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）．
２．３Ｔ３／ＥＧＦｒ／Ｈｅｒ２／ＥＧＦｒ（ＥＧＦｒおよびＨｅｒ−２キナーゼドメイン）．
【０４６８】
ＥＧＦ−誘導性Ｈｅｒ−４−推進性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．マウスＥＧＦ，２０１（ＴｏｙｏｂｏＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）．
２．３Ｔ３／ＥＧＦｒ／Ｈｅｒ４／ＥＧＦｒ（ＥＧＦｒおよびＨｅｒ−４キナーゼドメイン）．
【０４６９】
ＰＤＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．ヒトＰＤＧＦＢ／Ｂ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）．
２．３Ｔ３／ＥＧＦＲｃ７．
【０４７０】
ＦＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．ヒトＦＧＦ２／ｂＦＧＦ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ，ＵＳＡ）．
２．３Ｔ３ｃ７／ＥＧＦｒ
【０４７１】
ＩＧＦ１−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．ヒト，組換え（Ｇ５１１，Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ）
２．３Ｔ３／ＩＧＦｌｒ．
【０４７２】
インスリン−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．インスリン，結晶，ウシ，亜鉛（１３００７，ＧｉｂｃｏＢＲＬ，ＵＳＡ）．
２．３Ｔ３／Ｈ２５．
【０４７３】
ＨＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．組換えヒトＨＧＦ（Ｃａｔ．Ｎｏ．２４９−ＨＧ，Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．ＵＳＡ）．
２．ＢｘＰＣ−３細胞（ＡＴＣＣＣＲＬ−１６８７）．
【０４７４】
方法：
１．細胞をＲＰＭＩ１０％ＦＢＳ中で９６ウエルプレートに９０００細胞／ウエルで播種する。細胞を３７℃で５％ＣＯ2中で一夜インキュベートする
２．２４時間後，細胞をＰＢＳで洗浄し，次に１００μｌの無血清培地（ＲＰＭＩ，０．１％ＢＳＡ）中で２４時間血清飢餓とする。
３．第３日に，リガンド（１μｇ／ｍｌでＲＰＭＩ，０．１％ＢＳＡ中で調製；最終ＨＧＦ濃度２００ｎｇ／ｍｌ）および試験化合物を含有する２５μｌを細胞に加える。陰性対照ウエルには２５μｌの無血清ＲＰＭＩ，０．１％ＢＳＡのみを加える。陽性対照細胞にはリガンド（ＨＧＦ）を加えるが試験化合物は加えない。試験化合物は，９６ウエルプレートで，リガンドを含む無血清ＲＰＭＩ中でその最終濃度の５倍で調製し，一連の希釈を作成して７種類の試験濃度とする。典型的には，試験化合物の最高最終濃度は１００μＭであり，１：３希釈を用いる（すなわち，最終試験化合物濃度範囲は０．１３７−１００μＭである）。
４．リガンド活性化の１８時間後，１２．５μｌの希釈ＢｒｄＵ標識試薬（１：１００，ＲＰＭＩ，０．１％ＢＳＡ）を各ウエルに加え，細胞をＢｒｄＵ（最終濃度は１０ｐＭ）とともに１時間インキュベートする。
５．一般的方法と同じ。
６．一般的方法と同じ。
７．デカントすることによりブロッキング溶液を除去し，ウエルをＰＢＳで１回洗浄する。抗−ＢｒｄＵ−ＰＯＤ溶液（１：１００希釈，ＰＢＳ中，１％ＢＳＡ）を加え（１００μｌ／ウエル），プレートを室温でプレート振盪器で９０分間インキュベートする。
８．一般的方法と同じ。
９．一般的方法と同じ。
１０．一般的方法と同じ。
【０４７５】
ＨＵＶ−ＥＣ−Ｃアッセイ
このアッセイを用いて，ＰＤＧＦ−Ｒ，ＦＧＦ−Ｒ，ＶＥＧＦ，ａＦＧＦまたはＦｌｋ−１／ＫＤＲ（これらはすべてＨＵＶ−ＥＣ細胞により天然に発現されている）に対する化合物の活性を測定する。
【０４７６】
第０日
１．  ＨＵＶ−ＥＣ−Ｃ細胞（ヒト臍静脈内皮細胞，（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ；カタログＮｏ．１７３０ＣＲＬ）を洗浄し，トリプシン処理する。ダルベッコリン酸緩衝化食塩水（Ｄ−ＰＢＳ；Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ；カタログＮｏ．１４１９０−０２９から入手）で２回，約１ｍｌ／１０ｃｍ2組織培養フラスコで洗浄する。非酵素細胞解離溶液（Ｓｉｇｍａ  化学  Ｃｏｍｐａｎｙ；カタログＮｏ．Ｃ−１５４４）中で０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡでトリプシン処理する。０．０５％トリプシンは，０．２５％トリプシン／１ｍＭＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ；カタログＮｏ．２５２００−０４９）を細胞解離溶液中で希釈することにより作成する。約１ｍｌ／２５−３０ｃｍ2組織培養フラスコで３７℃で約５分間トリプシン処理する。細胞をフラスコからはがした後，等量のアッセイ培地を加え，５０ｍｌ滅菌遠心分離管（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；カタログＮｏ．０５−５３９−６）に移す。
２．  ５０ｍｌ滅菌遠心分離管中にアッセイ培地を加えることにより，細胞を約３５ｍｌのアッセイ培地で洗浄し，約２００ｇで１０分間遠心分離し，上清を吸引し，３５ｍｌのＤ−ＰＢＳに再懸濁する。Ｄ−ＰＢＳでさらに２回洗浄し，細胞を約１ｍｌ／組織培養フラスコ１５ｃｍ2のアッセイ培地に再懸濁する。アッセイ培地は，Ｆ１２Ｋ培地（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ；カタログＮｏ．２１１２７−０１４）＋０．５％熱不活性化ウシ胎児血清からなる。Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（商標）（Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．）で細胞を計数し，アッセイ培地を細胞に加えて０．８−１．０ｘ１０5細胞／ｍｌの濃度とする。
３．  細胞を９６ウエル平底プレートに１００μｌ／ウエルまたは０．８−１．０ｘ１０4細胞／ウエルで加える；３７℃，５％ＣＯ2で約２４時間インキュベートする。
【０４７７】
第１日
１．  試験化合物の２倍滴定を別々の９６ウエルプレート中に作成する。一般に，５０μＭから０μＭまで。上述の第０日，工程２と同じアッセイ培地を用いる。滴定は，９０μｌ／ウエルの試験化合物を２００μＭ（４Ｘ最終ウエル濃度）で特定のプレートカラムの最上のウエルに加えることにより行う。試験化合物保存液濃度は通常ＤＭＳＯ中２０ｍＭであるため，２００μＭの薬剤濃度は２％ＤＭＳＯを含む。
したがって，ＤＭＳＯ濃度を一定に保持しながら薬剤を希釈するために，アッセイ培地中（Ｆ１２Ｋ＋０．５％ウシ胎児血清）２％ＤＭＳＯとした希釈剤を，試験化合物滴定の希釈剤として用いる。この希釈物をカラム中の残りのウエルに６０μｌ／ウエルで加える。カラムの最上ウエル中の１２０μｌの２００μＭ試験化合物希釈物から６０μｌを採取し，カラムの第２のウエル中の６０μｌと混合する。このウエルから６０μｌを採取し，カラム中の第３のウエル中の６０μｌと混合し，２倍滴定が完了するまでこれを続ける。最後から２番目のウエルが混合されたとき，このウエル中の１２０μｌの６０μｌを採取し，これを廃棄する。最後のウエルには薬剤非含有対照として６０μｌのＤＭＳＯ／培地希釈物を加える。以下のアッセイの，滴定する試験化合物の三重のウエルに十分な９つのカラムを作成する：（１）ＶＥＧＦ（Ｐｅｐｒｏ  Ｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．，から入手，カタログＮｏ．１００−２００，（２）内皮細胞成長因子（ＥＣＧＦ）（酸性繊維芽細胞成長因子またはａＦＧＦとしても知られる）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａから入手，カタログＮｏ．１４３９６００）；または（３）ヒトＰＤＧＦ  Ｂ／Ｂ（１２７６−９５６，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびアッセイ培地対照。ＥＣＧＦはヘパリンナトリウムを有する調製物として得た。
２．  ５０μｌ／ウエルの試験化合物希釈物を，第０日からのＨＵＶ−ＥＣ−Ｃ細胞０．８−１．０ｘ１０4細胞／１００μｌ／ウエルを含む９６ウエルアッセイプレートに移し，３７oＣ，５％ＣＯ2で約２時間インキュベートする。
３．  三重に，８０μｇ／ｍｌＶＥＧＦ，２０ｎｇ／ｍｌＥＣＧＦ，または各試験化合物の条件に対する培地対照を５０μｌ／ウエルで加える。試験化合物については，成長因子濃度は所望の最終濃度の４倍である。第０日，工程２からのアッセイ培地を用いて，成長因子の濃度を調節する。３７℃，５％ＣＯ2で約２４時間インキュベートする。各ウエルに５０μｌの試験化合物希釈物，５０μｌの成長因子または培地，および１００μｌの細胞を加え，総量２００μｌ／ウエルとする。すなわち，すべてをウエルに加えたとき，４倍濃度の試験化合物および成長因子は１倍となる。
【０４７８】
第２日
１．  3Ｈ−チミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ；カタログＮｏ．ＴＲＫ−６８６）を１μＣｉ／ウエル（ＲＰＭＩ培地＋１０％熱不活性化ウシ胎児血清中で調製した１００μＣｉ／ｍｌ溶液を１０μｌ／ウエル）で加え，３７℃，５％ＣＯ2で約２４時間インキュベートする。ＲＰＭＩはＧｉｂｃｏ  ＢＲＬから入手する，カタログＮｏ．１１８７５−０５１
第３日
１．  プレートを−２０℃で一夜凍結する。
第４日
１．  プレートを融解し，９６ウエルプレート回収器（Ｔｏｍｔｅｃ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ９６（登録商標））でフィルターマット（Ｗａｌｌａｃ；カタログＮｏ．１２０５−４０１）上に回収する；Ｗａｌｌａｃ  Ｂｅｔａｐｌａｔｅ（商標）液体シンチレーション計数機で計数する。
【０４７９】
表３は，本発明のいくつかの例示的化合物の生物学的試験の結果を示す。結果は，ＩＣ50，すなわち，試験化合物を加えていない対照におけるＰＴＫの活性と比較して標的ＰＫＴの活性の５０％の変化を引き起こす試験化合物のマイクロモル（μＭ）濃度で表和される。詳細には，示される結果は，標的ＰＴＫの活性の５０％の減少を引き起こすのに必要な試験化合物の濃度を示す。化合物を評価するために用いたまたは用いることができるバイオアッセイは以下に詳細に記載される。
【０４８０】
【表２７】
0003663382.tif 000032
【０４８１】
【表２８】
0003663382.tif 000033
【０４８２】
【表２９】
0003663382.tif 000034
【０４８３】
【表３０】
0003663382.tif 000035
【０４８４】
実施例３．インビボ動物モデル
Ａ．異種移植片動物モデル
ヒト腫瘍が無胸腺マウス（例えば，Ｂａｌｂ／ｃ，ｎｕ／ｎｕ）中で異種移植片として成長する能力は，ヒト腫瘍の治療に対する生物学的応答を研究するのに有用なインビボモデルを提供する。ヒト腫瘍の無胸腺マウスへの最初の成功的な異種移植（Ｒｙｇａａｒｄ  ａｎｄ  Ｐｏｖｌｓｅｎ，１９６９，Ａｃｔａ  Ｐａｔｈｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ．Ｓｃａｎｄ．７７：７５８−７６０）以来，多くの異なるヒト腫瘍細胞株（例えば，乳房，肺，尿生殖器，胃腸，頭頸部，神経膠芽細胞腫，骨，および悪性黒色腫）が移植され，ヌードマウス中での成長に成功してきた。以下のアッセイを用いて，本発明の種々の化合物の活性，特異性および効果のレベルを決定することができる。３種類の一般的アッセイ，すなわち細胞／触媒，細胞／生物学的およびインビボアッセイが化合物の評価に有用である。細胞／触媒アッセイの目的は，ＴＫが細胞中の既知の基質上のチロシンをリン酸化する能力に及ぼす化合物の影響を判定することである。細胞／生物学的アッセイの目的は，細胞中でＴＫにより刺激される生物学的応答に及ぼす化合物の影響を判定することである。インビボアッセイの目的は，特定の疾患，例えば癌の動物モデルにおける化合物の影響を判定することである。
【０４８５】
皮下異種移植片実験に適した細胞株としては，Ｃ６細胞（神経膠腫，ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ１０７），Ａ３７５細胞（黒色腫，ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１６１９），Ａ４３１細胞（類表皮癌腫，ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１５５５），Ｃａｌｕ６細胞（肺，ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ５６），ＰＣ３細胞（前立腺，ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１４３５），およびＥＧＦＲ，ＰＤＧＦＲ，ＩＧＦ−１Ｒまたは任意の他の試験キナーゼを過剰発現するように遺伝子工学処理されたＳＫＯＶ３ＴＰ５細胞およびＮＩＨ３Ｔ３繊維芽細胞が挙げられる。以下のプロトコルを用いて異種移植片実験を行うことができる。
【０４８６】
雌無胸腺マウス（ＢＡＬＢ／ｃ，ｎｕ／ｎｕ）はＳｉｍｏｎｓｅｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｇｉｌｒｏｙ，ＣＡ）から入手する。すべての動物は，クリーンルーム条件下で，マイクロアイソレーターケージでアルファドライ敷きわらで維持する。動物には，滅菌齧歯類食および水を任意に与える。
【０４８７】
細胞株は，適当な培地（例えば，ＭＥＭ，ＤＭＥＭ，Ｈａｍ'ｓＦ１０，またはＨａｍ'ｓＦ１２プラス５％−１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）および２ｍＭグルタミン（ＧＬＮ））中で成長させる。すべての細胞培養培地，グルタミン，およびウシ胎児血清は，特に断らない限り，Ｇｉｂｃｏ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）から購入する。すべての細胞は，９０−９５％空気および５−１０％ＣＯ2の湿潤環境下で３７℃で成長させる。すべての細胞株は，週に２回，定期的に継代し，Ｍｙｃｏｔｅｃｔ法（Ｇｉｂｃｏ）により判定して，マイコプラズマについては陰性である。
【０４８８】
細胞は，コンフルエント，またはそれに近い状態で，０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡで回収し，４５０ｘｇで１０分間ペレット化する。ペレットを滅菌ＰＢＳまたは培地（ＦＢＳなし）中に懸濁して特定の濃度とし，細胞をマウス（１群あたり，８−１０匹のマウス，２−１０ｘ１０6細胞／動物）の後側腹部内に移植する。腫瘍成長は，ベニエカリパスを用いて３−６週間にわたり測定する。腫瘍体積は，とくに記載のないかぎり，長さｘ幅ｘ高さの積として計算する。Ｐ値は，スチューデントｔ−テストを用いて計算する。５０−１００μｌの賦形剤（ＤＭＳＯ，またはＶＰＤ：Ｄ５Ｗ）中の試験化合物は，通常は移植後の第１日から初めて，異なる濃度でＩＰ注入により輸送することができる。
【０４８９】
Ｂ．腫瘍侵襲モデル
以下の腫瘍侵襲モデルが開発されており，ＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターを選択的に阻害すると同定された化合物の治療的価値および有効性を評価するために用いることができる。
【０４９０】
方法
８週齢のヌードマウス（雌）（Ｓｉｍｏｎｓｅｎ  Ｉｎｃ．）を実験動物として用いる。腫瘍細胞の移植は，層流フード内で行うことができる。麻酔用に，キシラジン／ケタミンカクテル（１００ｍｇ／ｋｇケタミンおよび５ｍｇ／ｋｇキシラジン）を腹膜内に投与する。中線切開を行って，腹腔を露出して（約１．５ｃｍの長さ），容量１００μｌの培地中の１０7個の腫瘍細胞を注入する。細胞は，膵臓の十二指腸葉または結腸の漿膜下に注入する。腹膜および筋肉を６−０絹連続縫糸により縫合し，皮膚は創傷クリップを用いて縫合する。動物は毎日観察する。
【０４９１】
分析
動物の全体的所見により２−６週間後，マウスを殺し，局所腫瘍の種々の臓器（肺，肝臓，脳，胃，脾臓，心臓，筋肉）への転移を調べ，分析する（腫瘍サイズ，侵襲の程度，免疫化学，およびインサイチオハイブリダイゼーション測定等）。
【０４９２】
Ｃ−ＫＩＴアッセイ
このアッセイを用いて，ｃ−ｋｉｔチロシンリン酸化のレベルを検出する。ＭＯＰＥ（ヒト急性骨髄性白血病）細胞を０．１％血清中で一夜血清飢餓とした。リガンド刺激の前に細胞を化合物で前処理した（血清飢餓と同時）。細胞を２５０ｎｇ／ｍｌｒｈ−ＳＣＦで１５分間刺激した。刺激後，細胞を溶解させ，抗−ｃ−ｋｉｔ抗体で免疫沈澱させた。ホスホチロシンおよび蛋白質レベルはウエスタンブロッティングにより決定した。
【０４９３】
ＭＴＴ増殖アッセイ
Ｍ０７Ｅ細胞を血清飢餓とし，リン酸化実験について記載したように，化合物で前処理した。細胞を１００μｌＲＰＭＩ＋１０％血清中で４Ｘ１０5細胞／ウエルで９６ウエル皿に播種した。ｒｈ−ＳＣＦ（１００ｎｇ／ｍＬ）を加え，プレートを４８時間インキュベートした。４８時間後，１０μｌの５ｍｇ／ｍｌＭＴＴ（臭化３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム）を加え，４時間インキュベートした。酸イソプロパノール（１００μｌのイソプロパノール中０．０４ＮＨＣｌ）を加え，波長５５０ｎｍで光学密度を測定した。
【０４９４】
アポトーシスアッセイ
Ｍ０７Ｅ細胞を１０％ＦＢＳ中でｒｈ−ＧＭ−ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍＬ）およびｒｈ−ＩＬ−３（１０ｎｇ／ｍＬ）とともに＋／−ＳＣＦおよび＋／−化合物でインキュベートした。試料は２４および４８時間にアッセイした。活性化カスパーゼ−３を測定するためには，試料をＰＢＳで洗浄し，氷冷７０％エタノールで透過性にした。次に，細胞をＰＥ−コンジュゲート化ポリクローナルウサギ抗活性カスパーゼ−３で染色し，ＦＡＣＳにより分析した。切断されたＰＡＲＰを測定するためには，試料を溶解させ，抗ＰＡＲＰ抗体を用いてウエスタンブロッティングにより分析した。
【０４９５】
追加のアッセイ
本発明の化合物を評価するために用いることができる追加のアッセイには，限定されないが，ｂｉｏ−ｆｌｋ−１アッセイ，全細胞におけるＥＧＦレセプター−ＨＥＲ２キメラレセプターアッセイ，ｂｉｏ−ｓｒｃアッセイ，ｂｉｏ−ｌｃｋアッセイおよびｒａｆのリン酸化機能を測定するアッセイが含まれる。これらのアッセイのそれぞれのプロトコルは，米国特許出願０９／０９９，８４２（図面を含め本明細書の一部としてここに引用する）に見いだすことができる。
【０４９６】
細胞毒性の測定
治療用化合物は，細胞毒性効果を示すよりもレセプターチロシンキナーゼ活性においてより強力でなければならない。化合物の有効性および細胞毒性の尺度は，治療指数，すなわち，ＩＣ50／ＬＤ50を決定することにより得ることができる。ＩＣ50（５０％の阻害を達成するのに必要な用量）は，本明細書に記載されるもの等の標準的な手法を用いて測定することができる。ＬＤ50（５０％の毒性をもたらす用量）もまた，放出されるＬＤＨの量を測定することにより（Ｋｏｒｚｅｎｉｅｗｓｋｉ  ａｎｄ  Ｃａｌｌｅｗａｅｒｔ，１９８３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，６４：３１３，Ｄｅｃｋｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｈｍａｎｎ−Ｍａｔｔｈｅｓ，１９８８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１１５：６１），または動物モデルにおける致死用量を測定することにより，標準的な手法により測定することができる（Ｍｏｓｓｍａｎ，１９８３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，６５：５５−６３）。より大きい治療指数を有する化合物が望ましい。治療指数は，２より高くあるべきであり，好ましくは少なくとも１０，より好ましくは少なくとも５０である。
【０４９７】
Ｂ．５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミドを用いる細胞アッセイの結果の例
生化学アッセイ（下記参照）において検出された５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）の効力を確認するために，前記化合物がリガンド依存性ＲＴＫリン酸化を阻害する能力を，Ｆｌｋ−１またはヒトＰＤＧＦＲβを過剰発現するよう遺伝子工学処理されたＮＩＨ−３Ｔ３マウス細胞を用いる細胞系アッセイにおいて評価した。５−（５−フルオロ−−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）は，ＶＥＧＦ依存性Ｆｌｋ−１チロシンリン酸化を約０．０３μＭのＩＣ50値で阻害した。この値は，生化学アッセイにおいて決定された５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）によるＦｌｋ−１の阻害のＫｉ値である０．００９μＭと同様である。このことは，５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）が細胞内に容易に侵入することを示す。５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）がＦｌｋ−１およびＰＤＧＦＲに対して同等の活性を有することを示す生化学データ（下記参照）と一致して，これが細胞において約０．０３μＭのＩＣ50でＰＤＧＦ依存性レセプターリン酸化を阻害することも見いだされた。５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）が幹細胞因子（ＳＣＦ）に結合する密接に関連するＲＴＫであるｃ−ｋｉｔを阻害する能力を，このレセプターを発現するＭ０７Ｅ細胞を用いて決定した。これらの細胞において，５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）は，０．０１−０．１μＭのＩＣ50値でＳＣＦ依存性ｃ−ｋｉｔリン酸化を阻害した。この化合物はまた，患者の末梢血から単離された急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の芽細胞においてＳＣＦ刺激ｃ−ｋｉｔリン酸化を阻害した。
【０４９８】
５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）が細胞においてリガンド依存性レセプターリン酸化を阻害する能力の試験に加えて，この化合物がインビトロで細胞のリガンド依存性増殖性応答に及ぼす影響も調べた（表４を参照）。これらの実験においては，一夜血清飢餓により静止させた細胞を，適当な有糸分裂促進性リガンドを加えたときにＤＮＡ合成を行うよう誘導した。表４に示されるように，５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）は，ＰＤＧＦＲβまたはＰＤＧＦＲαを過剰発現するＮＩＨ−３Ｔ３細胞のＰＤＧＦ−誘導性増殖を，それぞれ０．０３１および０．０６９μＭのＩＣ50値で，Ｍ０７Ｅ細胞のＳＣＦ−誘導性増殖を０．００７μＭのＩＣ50値で阻害した。
【０４９９】
表４
【表３１】
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【０５００】
表４に示されるように，５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）の生化学と細胞活性との間には一般的一致があり，このことは，この化合物が細胞膜を横切るという結論を支持する。さらに，細胞の応答は，示される標的に対する化合物８０の活性の結果であると結論づけることができる。これに対し，完全成長培地の存在下でインビトロで試験したとき，種々の腫瘍細胞の成長を阻害するには，実質的に高い濃度の５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）（＞１０μＭ）が必要であった（表５を参照）。このことは，この化合物が，リガンド依存性レセプターリン酸化および細胞増殖を阻害するのに必要な濃度では，これらの細胞の成長を直接阻害しなかったことを示す。
【０５０１】
表５
【表３２】
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【０５０２】
簡単には，表５に示される結果は，細胞を，完全成長培地中で一連の希釈の５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミドの存在下で４８時間インキュベートすることにより得た。成長期間の最後に，細胞の相対数を判定した。ＩＣ50値は，未処理細胞と比較して細胞の成長を５０％阻害した化合物の濃度として計算した。ＬＤ50値は，実験開始時と比較して細胞数の５０％の減少を引き起こす化合物の濃度として計算した。
【０５０３】
５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）の抗新脈管形成の効力を評価するための，より関連性の高い細胞系アッセイは，ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣｓ）を新脈管形成プロセスに重要な内皮細胞増殖のモデル系として用いるインビトロ有糸分裂促進アッセイである。このアッセイにおいては，血清飢餓ＨＵＶＥＣｓにＶＥＧＦまたはＦＧＦを加えることにより，ＤＮＡ合成の増加として測定される有糸分裂促進性応答を誘導する。これらの細胞においては，５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）は，４８時間アッセイの間にわたって化合物が存在した場合，ＶＥＧＦ−およびＦＧＦ−誘導性有糸分裂促進性応答を用量依存的様式で，それぞれ０．００４μＭおよび０．７μＭのＩＣ50値で阻害した。
【０５０４】
簡単には，上述の結果は，５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）の連続希釈の存在下で，有糸分裂促進的濃度のＶＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）またはＦＧＦ（３０ｎｇ／ｍｌ）とともに２４時間インキュベートした血清飢餓ＨＵＶＥＣを用いて得られた。続く２４時間の間のリガンドおよび阻害剤の存在下における有糸分裂促進性応答を，ブロモデオキシウリジンの細胞ＤＮＡへの取り込みに基づくＤＮＡ合成の測定により定量した。
【０５０５】
別の実験において，化合物８０は，ＥＲＫ１／２（ｐ４２／４４ＭＡＰキナーゼ）（Ｆｌｋ−１／ＫＤＲの初期下流標的）のＶＥＧＦ依存性リン酸化を用量依存的様式で阻害した。化合物８０の阻害的活性はまた，この系において長時間持続することが示された。すなわち，５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）を培地から除去し，マイクロモル濃度の化合物に短時間（２時間）暴露した後，４８時間もの長時間ＥＲＫ１／２のＶＥＧＦ依存性リン酸化を阻害した。
【０５０６】
ＶＥＧＦは内皮細胞の重要な生存因子であることが認識されている。５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）はＨＵＶＥＣｓのＶＥＧＦ依存性有糸分裂促進性応答を阻害するため，この化合物がＨＵＶＥＣ生存に及ぼす影響を調べた。これらの実験においては，カスパーゼ３の基質であるポリＡＤＰ−リボシルポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の切断をアポトーシスの読み出し情報として用いた。無血清条件で２４時間培養したＨＵＶＥＣｓは，２３ｋＤａＰＡＲＰ切断フラグメントの蓄積により検出して，実質的なレベルのＰＡＲＰ切断を示した。これはＶＥＧＦを細胞培地に加えると大きく妨害され，このことは，ＶＥＧＦがこのアッセイにおいて生存因子として作用することを示す。５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）は，ＫＤＲシグナリングを阻害することが示されている。したがって，５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）は，ＶＥＧＦ媒介性ＨＵＶＥＣ生存を用量依存的様式で阻害した。すなわち，これらのデータは，化合物８０がＶＥＧＦの存在下で培養内皮細胞のアポトーシスを誘導したことを示す。
【０５０７】
Ｃ．インビボ効力実験
ｉ．確立された腫瘍異種移植片に対する効力
５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）のインビボ効力を無胸腺マウスの後腹領域に移植したヒト腫瘍細胞を用いる皮下（ＳＣ）異種移植片モデルにおいて試験した。移植後，腫瘍を１００−５５０ｍｍ3のサイズまで確立させ，その後に化合物の経口処置を開始した。
【０５０８】
腫瘍が４００ｍｍ3のサイズに成長した後に処置を開始したとき，化合物８０の毎日経口投与は，Ａ４３１腫瘍成長の用量依存性阻害を引き起こした。腫瘍成長の統計学的に有意の（Ｐ＜０．０５）阻害は，４０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（７４％阻害）および８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（８４％阻害）の用量で見られた（表６を参照）。予備的実験においては，より高い用量（１６０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）の化合物は，確立されたＡ４３１腫瘍に対して８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの用量より高い有効性を示さなかった。さらに，１６０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの用量の化合物で処置したマウスは体重が減少し，このことは，より高い用量はよく許容されなかったことを示す。Ａ４３１腫瘍が１００ｍｍ3のサイズにしか達しなかった実験においても同様の結果が得られた（表５を参照）。この第２の実験においては，８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで２１日間処置した８匹の動物のうち６匹で腫瘍の完全な後退が生じた。これらの６匹の動物においては，処置終了後の１１０日間の観察期間の間，腫瘍は再成長しなかった。腫瘍が大きいサイズ（２０００−３０００ｍｍ3）まで再成長した２匹の動物においては化合物８０による第２ラウンドの処置に応答して腫瘍は退行した。重要なことには，すべての効力実験において，５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）は，１００日間異常連続投与した場合であっても，８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙでよく許容された。
【０５０９】
表６
【表３３】
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【０５１０】
簡単には，表６に示される結果は，無胸腺マウスの後腹領域の皮下に移植したＡ４３１細胞（０．５ｘ１０6細胞／マウス）を用いて得た。腫瘍が示された平均体積に達したときに，５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）を，Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ系ベヒクルまたはベヒクル対照とともに毎日経口投与を始めた。腫瘍はベニエカリパスを用いて測定し，腫瘍体積は長さｘ幅ｘ高さの積として計算した。Ｐ値は，実験の最終日に，化合物８０で処置した動物（ｎ＝８）の腫瘍のサイズをベヒクルで処置した動物（ｎ＝１６）のものとを，２−テイルスチューデントｔテストを用いて比較することにより計算した。
【０５１１】
種々の起源の確立されたヒト腫瘍に対する化合物８０の効力は，Ｃｏｌｏ２０５（結腸癌腫），ＳＦ７６３Ｔ（神経膠腫），およびＮＣＩ−Ｈ４６０（非小細胞肺癌腫）異種移植片（表７を参照）を用いて判定した。これらの実験は，５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）を８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで経口投与して行った。この用量は，有効であり，よく許容された。
【０５１２】
表７
【表３４】
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【０５１３】
上述した実験において，腫瘍が示されたサイズに達した後，化合物８０を１日１回８０ｍｇ／ｋｇでＣｒｅｍｏｐｈｏｒ系ベヒクルで投与した。実験の終了時にベヒクル処置対照群と比較したパーセント阻害を計算した。Ｐ値は，化合物で処置した動物の腫瘍のサイズをベヒクルで処置した動物の腫瘍のサイズとを，２−テイルスチューデントｔテストを用いて比較することにより計算した。
【０５１４】
５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物８０）は表７に示されるすべての腫瘍タイプの成長を阻害したが，異なる異種移植片モデルの応答には相違があった。
詳細には，ＮＣＩ−Ｈ４６０およびＳＦ７６３Ｔ腫瘍の成長は停止したか非常にゆっくりになったのに対し，Ｃｏｌｏ２０５腫瘍は，Ａ４３１腫瘍と同様に，５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミドで処置したときに退行した。
【０５１５】
異種移植片モデルの間での応答の相違の分子的基礎を決定するために，ＳＦ７６３Ｔ腫瘍を調べた。したがって，５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミドに対して応答性がより低かったＳＦ７６３Ｔ腫瘍を，免疫組織学的手法を用いて分子レベルで評価して，化合物による処置の影響を判定した。これらの実験をこの腫瘍タイプで最初に行ったのは，ＳＦ７６３Ｔ腫瘍が内皮細胞マーカーであるＣＤ３１を強く発現する微小血管で高度に血管新生が生じており，したがって，腫瘍微小血管密度（ＭＶＤ）の実験によりよく調べられるからである。ＳＦ７６３Ｔ腫瘍の免疫組織学的評価は，処置した動物からの腫瘍はベヒクル処置対照と比較してＭＶＤが減少していることを示し，これは，化合物８０の作用の抗新脈管形成メカニズムと一致する。ＭＶＤは化合物８０で処置した動物において２４．２±４．１であり，これに対して，ベヒクルのみで処置した動物においては３９．３±５．７であった。付随する腫瘍成長停止から予測されたように，化合物８０で処置した腫瘍においては腫瘍細胞増殖の明白な阻害が明らかであった。これらの腫瘍は，ベヒクル処置腫瘍の半分の有糸分裂指数を有していた（データ示さず）。ＭＶＤおよび腫瘍細胞増殖に及ぼす化合物８０の影響は，腫瘍が退行しない条件においても，化合物が十分な抗新脈管形成および抗腫瘍効果を有することを示す。
【０５１６】
化合物８０がインビボでＰＤＧＦＲリン酸化および続くシグナリングを阻害する能力を，高レベルのＰＤＧＦＲを発現するＳＦ７６３Ｔ腫瘍においても評価した。ＳＦ７６３Ｔ腫瘍を化合物８０で処理すると，確立されたＳＦ７６３Ｔ腫瘍において，ＰＤＧＦＲチロシンリン酸化が強く阻害された。化合物８０はまた，リン酸化（活性化）ホスホリパーゼＣガンマ（ＰＬＣ−γ）（ＰＤＧＦＲ活性化の下流中間指示体）のレベルを減少させた。これらのデータは，化合物８０の経口投与がインビボで腫瘍における標的（ＰＤＧＦＲ）活性に直接の効果を引き起こすことを示す。
【０５１７】
化合物８０がインビトロでＨＵＶＥＣにおいてＶＥＧＦ依存性シグナリングを阻害する能力が長期間持続する（下記参照）ことに基づいて，Ｃｏｌｏ２０５腫瘍モデルにおいて化合物を時々投与したときの化合物の効力を評価した。表８に示されるように，毎日投与したとき８０ｍｇ／ｋｇ（９１％阻害）および４０ｍｇ／ｋｇ（８４％阻害）は有効であったが，週２回投与したときには有効ではなかった。これに対し，より高い用量の化合物８０（１６０ｍｇ／ｋｇ）は，週２回投与したとき，確立されたＣｏｌｏ２０５腫瘍の成長を阻害した（５２％阻害）。このことは，この化合物がより高い用量で時々投与したときに効力を有することができることを示す。投与計画は当業者が過度な実験を行うことなく決定しうることに注意すべきである。
【０５１８】
表８
【表３５】
0003663382.tif 000040
【０５１９】
簡単には，表８に示される結果は，無胸腺マウスの後腹領域の皮下に移植されたＣｏｌｏ２０５細胞（０．５ｘ１０6細胞／マウス）を用いて得た。腫瘍が４００ｍｍ3に達したときに示されたスケジュールで化合物８０の経口投与を始めた。腫瘍はベニエカリパスを用いて測定し，腫瘍体積は長さｘ幅ｘ高さの積として計算した。Ｐ値は，実験の最終日に，化合物８０で処置した動物の腫瘍のサイズをベヒクルで処置した動物のものとを，２−テイル（ｔｗｏ−ｔａｉｌｅｄ）スチューデントｔテストを用いて比較することにより計算した。
【０５２０】
ｉｉ．散在性疾病のモデルにおける化合物８０の効力
新脈管形成は，固体原発性腫瘍の成長の維持を支えることに加えて，原発性腫瘍からの転移による散在性疾病の発達を支える必須の成分でもある。Ｂ１６Ｆｌマウス黒色腫肺転移増殖モデルにおいて，化合物８０が散在性疾病の発達に及ぼす影響を調べた。このモデルにおいては，無胸腺マウスの尾部静脈から静脈内接種したＢ１６−Ｆ１細胞が肺で転移増殖し，腫瘍を形成する。表８に示されるように，化合物８０を８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで経口投与すると，全肺重量の測定で評価して，肺におけるＢ１６−Ｆ１細胞の荷重が有効に減少した。これらのデータは，化合物８０がインビボで散在性疾病を阻害しうることを示す。
【０５２１】
表９
【表３６】
0003663382.tif 000041
【０５２２】
簡単には，表９に示される結果は，尾部静脈からＢ１６−Ｆ１腫瘍細胞（５ｘ１０5細胞／マウス）を接種した無胸腺マウスを用いて得られた。マウスは，化合物８０を８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（ｎ＝１０）またはベヒクル（ｎ＝１８）で，腫瘍細胞接種の後２４日間，毎日経口投与することにより処置した。処置期間の最後に，マウスを犠牲にし，肺を除去し，秤量した。化合物８０で処置した動物の肺重量を，ベヒクルのみで処置した動物の肺重量と比較することによりパーセント阻害を計算した。Ｐ値は，２テールスチューデントｔテストを用いて決定した。
【０５２３】
Ｄ．生物学的活性の例
本発明の化合物のインビトロ効力の例は表２に示される。
【０５２４】
結論
本発明の好ましい態様の化合物の薬物動力学的特性を調べる研究においては，単回用量の前記化合物の経口投与により，マウスにおいて高い経口生物学的利用性が得られることが示された。経口生物学的利用性が良好であり，薬物動力学が直線的であることは，本発明の好ましい態様の化合物が，望ましい薬物動力学的特性を有することを示す。
【０５２５】
さらに，本発明の好ましい態様の化合物は，別々のキナーゼドメイン，すなわち新脈管形成に関与するＲＴＫであるＦｌｋ−１／ＫＤＲ，および幹細胞因子（ＳＣＦ）のレセプターであってある種の血液癌に関与するＰＤＧＦＲ，およびＲＴＫｃ−ｋｉｔのチロシンキナーゼ活性の強力な阻害剤である。本発明の好ましい態様の化合物はまた，より高い濃度において，新脈管形成に関与する第３のＲＴＫであるＦＧＦＲ−１のチロシンキナーゼ活性を阻害する。その生化学活性と一致して，本発明の好ましい態様の化合物は，標的ＲＴＫのリガンド依存性チロシンリン酸化を阻害し，ＶＥＧＦまたはＦＧＦにより刺激されたヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣｓ）の，ＰＤＧＦで刺激されたＰＤＧＦＲ発現ＮＩＨ−３Ｔ３細胞の，およびＳＣＦで刺激されたＭ０７Ｅ急性骨髄性白血病細胞のインビトロ有糸分裂促進性応答を阻害する。これに対し，本発明の好ましい態様の化合物は，リガンド依存性有糸分裂促進性応答を阻害するのに必要な濃度の２−３桁高い濃度を除き，完全成長培地における腫瘍細胞の増殖を直接阻害しない。マウス異種移植片実験においては，本発明の好ましい態様の化合物は，延長された（＞１００日間）投与においてもよく許容された濃度で，種々の起源の樹立されたヒト腫瘍の成長を用量依存的様式で阻害した。８０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙにおいて，本発明の好ましい態様の化合物は，大きく確立されたＡ４３１およびＣｏｌｏ２０５腫瘍の後退を誘導し，ＳＦ７６３ＴおよびＮＣＩ−Ｈ４６０腫瘍において実質的な成長阻害または静止を引き起こした。ＳＦ７６３Ｔ腫瘍を有するマウスにおいては，本発明の好ましい態様の化合物は，微小血管密度，腫瘍におけるＰＤＧＦＲのリン酸化，および腫瘍細胞における有糸分裂指数の減少を引き起こした。この用量において，本発明の好ましい態様の化合物はまた，腫瘍転移のモデルにおいてＢ１６−Ｆ１腫瘍細胞による肺転移増殖を阻害した。治療計画実験は，本発明の好ましい態様の化合物は毎日投与したときに最も有効性が高いことを示した。本発明の好ましい態様の化合物の抗新脈管形成活性の直接の証拠は，ＳＦ７６３Ｔ腫瘍において検出され，ここでは微小血管密度が減少した。本発明の好ましい態様の化合物がＰＤＧＦＲリン酸化およびインビボシグナリングを阻害したという直接の証拠も，ＳＦ７６３Ｔ腫瘍において得られた。
【０５２６】
総合すると，これらのデータは，経口投与した本発明の好ましい態様の化合物が，新脈管形成および／またはｃ−ｋｉｔを介するシグナリングが疾病の病理に重要である固形腫瘍および血液悪性腫瘍等の癌を治療するための抗新脈管形成剤であるという概念を支持する。
【０５２７】
本発明の化合物，方法および医薬組成物が，ＰＫ活性を調節するのに有効であり，したがって，ＲＴＫ−，ＣＴＫ−，およびＳＴＫ−関連疾患に対する治療薬剤として有効であることが予測されることが理解されるであろう。
【０５２８】
当業者は，本発明は，その目的を実施し，記載される結果および利点，ならびに本明細書に固有のものを得るのによく適合していることを容易に理解するであろう。本明細書に記載される分子複合体および方法，手順，処理，分子，特定の化合物は，現在のところ好ましい態様の代表的なものであり，例示的なものであって，本発明の範囲を限定することを意図するものではない。当業者は，特許請求の範囲において定義される本発明の精神の中に包含される変更および他の用途をなすであろう。
【０５２９】
当業者は，本発明の範囲および精神から逸脱することなく，本明細書に開示される本発明に対して置換基の変更および改変をなすことができることを容易に理解するであろう。
【０５３０】
本明細書において言及されるすべての特許および刊行物は，本発明の属する技術分野の技術者のレベルを示す。すべての特許および刊行物は，それぞれの刊行物が特定的に個々に本明細書の一部としてここに引用されることと同じ程度に，本明細書の一部として引用される。
【０５３１】
本明細書に例示的に記載されている発明は，本明細書に特定的に開示されていない任意の要素または限定なしでも適切に実施することができる。すなわち，例えば，本明細書における各例において，"・・・を含む"，"・・・から本質的になる"および"・・・からなる"との用語は，他の２つのいずれかと置き換えることができる。本明細書において用いた用語および表現は，説明の用語として用いるものであり，限定ではない。そのような用語および表現の使用においては，示されかつ記載されている特徴またはその一部の等価物を排除することを意図するものではなく，特許請求の範囲に記載される本発明の範囲中で種々の変更が可能であることが理解される。すなわち，好ましい態様および任意の特徴により本発明を特定的に開示してきたが，当業者には本明細書に記載される概念の変更および変種が可能であり，そのような変更および変種も特許請求の範囲に定義される本発明の範囲内であると考えられることが理解されるべきである。
【０５３２】
さらに，発明の特徴および局面がマーカッシュグループの用語で記載されている場合，当業者は，本発明が，マーカッシュグループのメンバーの個々のメンバーまたはサブグループに関してもまた記載されていることを認識するであろう。例えば，Ｘが，臭素，塩素およびヨウ素からなる群より選択されるとして記載されている場合，Ｘが臭素である特許請求の範囲およびＸが臭素および塩素である特許請求の範囲も完全に記載されている。
【０５３３】
他の態様は特許請求の範囲の範囲内である。