(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
米ぬかと大豆ペプチドとを枯草菌で発酵させた後、精製処理して細胞賦活作用を有する皮膚外用剤原料を製造することを特徴とする細胞賦活用皮膚外用剤原料の製造方法。
【請求項２】
枯草菌が納豆菌（バチルス・ナットウ）である請求項１記載の細胞賦活用皮膚外用剤原料の製造方法。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の方法で製造した細胞賦活用皮膚外用剤原料を有効成分として含有することを特徴とする細胞賦活用皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、安全性が高く、皮膚の活性を高める細胞賦活用皮膚外用剤原料の製造方法及び細胞賦活用皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
一般に、皮膚外用剤に求められる効能は数多くあるが、その一つに細胞賦活作用がある。細胞を賦活することによって、創傷治癒、火傷などの改善、または、しもやけ、あかぎれ、肌荒れなどの予防効果がある。
これらの薬効成分として、従来より、アロエエキス、人参エキス、菌発酵代謝物などが利用されてきたが、充分な効果が必ずしも得られていない点に未だ課題がある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、上記従来の課題を解決するものであり、安全性が高く、皮膚の活性を高める細胞賦活用皮膚外用剤原料の製造方法及び細胞賦活用皮膚外用剤を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前記の課題を解決するために、鋭意検討した結果、より安全性の高い天然物由来の細胞賦活作用がある物質を得ることに成功し、本発明を完成するに至ったのである。
すなわち、本発明の細胞賦活用皮膚外用剤原料の製造方法は、米ぬかと大豆ペプチドとを枯草菌〔バチルス・ズブチリス(Bacillus subtilis)〕で発酵させた後、精製処理して細胞賦活作用を有する皮膚外用剤原料を製造することを特徴とする。
枯草菌は、納豆菌〔バチルス・ナットウ(Bacillus natto)〕であることが好ましい。
また、本発明の細胞賦活用皮膚外用剤は、上記の方法で製造した細胞賦活用皮膚外用剤原料を有効成分として含有することを特徴とする。
【０００５】
【作用】
本発明の製造方法では、天然物から得られる米ぬかと大豆ペプチドとを出発原料とし、しかも、入手も容易な枯草菌により発酵させた後、精製処理するものであるので、細胞賦活作用を有する皮膚外用剤原料を安全に且つ容易に製造することができることとなる。
上記製造方法で得られた原料は、発酵中に生成蓄積されるビタミン類、アミノ酸類などを含有することとなり、該ビタミン類、アミノ酸類などが総合的に且つ相乗的なものとなった結果、強い細胞賦活作用、他にも皮膚外用剤としての効用を与えるものと推察される（この点等については、更に実施例等で詳しく説明する）。
【０００６】
以下、本発明の内容を説明する。
本発明の細胞賦活用皮膚外用剤原料の製造方法は、米ぬかと大豆ペプチドとを枯草菌で発酵させた後、精製処理することにより細胞賦活作用を有する皮膚外用剤原料が製造される。
米ぬか、大豆ペプチドは、市販の米ぬか、大豆ペプチドを使用することができ、その配合割合は、米ぬか：大豆ペプチド１００：１〜１００：２０部程度用いられる。これらの範囲にある場合には菌の生育に最も好ましいものとなる。
発酵に用いる枯草菌（Bacillus subtilis）は、好気性胞子形成細菌の代表的種類であり、この枯草菌としては、安全性が保証されているものであれば特に限定されないが、入手の容易性、コスト的にみて、納豆菌（Bacillus natto）の使用が好ましい。
【０００７】
発酵させるのに、最適なｐＨや栄養条件等を得るためにグルコース等の糖類、炭酸水素ナトリウム等の塩類、プロテアーゼ等の酵素、水（精製水）等の添加も必要である。
本発明において精製処理は、上記発酵後の液を、圧搾し、ろ過することにより行われる。また、必要に応じて発酵後、圧搾し、ろ過し、次いで、活性炭等により脱臭・脱色処理、及び／又は、沈殿物の除去処理を行った後、再度ろ過することにより処理してもよい。
【０００８】
また、本発明の細胞賦活用皮膚外用剤は、上記の方法で製造した細胞賦活用皮膚外用剤原料を有効成分とするものであり、該皮膚外用剤原料と、他の皮膚外用剤用の配合剤とを配合することにより得られる。すなわち、この皮膚外用剤原料を他の皮膚外用剤用の配合剤、例えば、スクワラン、ホホバ油等の液状油、ミツロウ、セチルアルコール等の固体油、各種の活性剤、グリセリン、１，３ーブチレングリコール等の保湿剤や各種薬剤等を配合して様々な剤形の細胞賦活用皮膚外用剤、例えば、ローション、クリーム、乳液、パック等、目的に応じて種々の利用形態の細胞賦活用皮膚外用剤などに調製することができる。
【０００９】
【実施例】
以下に、本発明の細胞賦活用皮膚外用剤原料の製造例、実際の利用方法である実施例を記載するが、本発明はこれらの製造例及び実施例によって何ら限定されるものではない。
【００１０】
〔製造例１〕
米ぬか３．００ｋｇ、リン酸一水素ナトリウム１．００ｋｇ、大豆ペプチド０．４０ｋｇ、炭酸水素ナトリウム４．５０ｋｇ、グルコース０．５０ｋｇ、アルカリ性プロテアーゼ０．０１ｋｇ、精製水５０．００ｋｇを混合した後、ｐＨ８．８〜９．０に調整した培地で納豆菌（バチルス  ナットウ）を４２℃、４８時間培養した後、該培養液を、圧搾、ろ過、活性炭による脱色脱臭後、再度ろ過することによって皮膚外用剤原料を製造した。
【００１１】
〔実施例１（クリームの調製）〕
下記諸成分からなるＡとＢとをそれぞれ７０℃まで加温し、次いで、ＢにＡを撹拌しつつ徐々に加えた後、ゆっくりと撹拌しつつ３０℃まで冷却してクリームを調製した。
0003625501.tif 000002
【００１２】
〔細胞賦活試験〕
（試験方法）
２４ウェルマルチプレートにＦＧＭ培地１ｍｌを分注し、人正常繊維芽細胞を１万個播種して、２日間炭酸ガス培養器中で前培養した。
培地を除いた後、無血清ＭＥＭ培地１ｍｌで２回洗浄後、硫酸カナマイシン（１００ｍｇ／ｌ）のＦＢＭ培地（ホルモン未添加基本培地）１ｍｌを加え、２日間培養した後、培地を除きＦＢＭ培地（ホルモン未添加基本培地）で各濃度に調整した実施例１を加えて６日間培養した。この間、３日目と５日目に培地交換を行った。
【００１３】
ＭＴＴ〔３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム  ブロマイド〕溶液（５ｍｇ／ｍｌリン酸緩衝液）０．１ｍｌを加えて４時間培養後、２０％ドデシル硫酸ナトリウム０．０１Ｎ塩酸溶液１ｍｌを加えて色素を溶解し、５７０ｎｍの吸光度を測定した。対照として、実施例１を入れないもの（対照）、また、現在使用されている化粧品原料（胎盤抽出物、乳酸発酵代謝物）と比較した。その結果を下記表１に示す。なお、評価基準は、数値が大きい程、細胞賦活性が高いことを示し、対照を１として評価した。
【００１４】
【表１】
0003625501.tif 000003
【００１５】
上記表１の結果から明らかなように、製造例の原料は、現在使用されている化粧品原料（胎盤抽出物、乳酸発酵代謝物）よりも低濃度（１／２０）にもかかわらず、細胞賦活活性が高いことが判明した。
【００１６】
次に、上記実施例１で調製したクリームを使用して下記のテストを行った。
（使用テスト）
女性６名の顔面を左右に分け、一方に、実施例のクリームを、他方には比較例のクリームを毎日、１回以上使用してもらって、３カ月後に、、肌荒れ防止、肌のつや及び肌のはりについて評価した。なお、比較例は実施例より製造例を精製水に代えたものである（比較例）。
【００１７】
評価は、下記の評価基準により評価し、その結果をまとめたのが下記の表２である。
（評価基準）
実施例の方が非常によい          ３
実施例の方がかなりよい          ２
実施例の方がややよい              １
差がない                                      ０
比較例の方がややよい          −１
比較例の方がかなりよい      −２
比較例の方が非常によい      −３
【００１８】
【表２】
0003625501.tif 000004
【００１９】
上記使用テスト（表２）から明らかなように、本発明の皮膚外用剤（クリーム）は、肌荒れ防止、肌のつや及び肌のはりに有効であり、安全性が高く、皮膚の活性を高める効果を有することが判った。
【００２０】
【発明の効果】
本発明の製造方法では、天然物から得られる米ぬかと大豆ペプチドを出発原料とし、しかも、入手も容易な枯草菌により発酵させた後、精製処理することにより細胞賦活作用を有する皮膚外用剤原料が製造されることとなるので、大型の設備を必要とすることなく、安全に且つ容易に製造することができる。
本発明の細胞賦活用皮膚外用剤では、安全性が高く、皮膚の活性を高めることができ、非常に有用なものである。