(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式：
0003647451.tif 000020
（式中、ｎは１〜３の整数を示し;R1は直鎖または分枝鎖状のアルキル基、若しくはアラルキル基を示し;R2は直鎖または分枝鎖状のアルキル基を示し;R3およびR4は、それぞれ独立に水素原子若しくは直鎖または分枝鎖状のアルキル基を示し、R3およびR4がフェニル基上の隣接する位置に置換している場合には両者が一緒になってR3およびR4が置換するフェニル基上の２個の炭素原子とともにシクロアルキル環を形成していてもよく、該シクロアルキル環は置換基を有していてもよい）で示されるベンゾラクタム誘導体。
【請求項２】
R1が炭素数１〜12の直鎖または分枝鎖状アルキル基、あるいは低級アラルキル基であり;R2が炭素数１〜12の直鎖または分枝鎖状アルキル基であり;R3およびR4が、それぞれ独立に水素原子、若しくは炭素数１〜12の直鎖または分枝鎖状アルキル基であるか、あるいは両者が置換基を有することがある５〜７員環シクロアルキル環を形成する請求の範囲第１項に記載のベンゾラクタム誘導体。
【請求項３】
ｎが１または２であり、R1がイソプロピル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デカニル基、及びベンジル基からなる群から選ばれる基であり;R2がメチル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、およびｎ−デカニル基からなる群から選ばれる基であり、R3およびR4が、それぞれ独立に水素原子、若しくは炭素数１〜12の直鎖または分枝鎖状アルキル基であるか、あるいは両者が１以上の低級アルキル基により置換されていてもよい６員環シクロアルキル環を形成する請求の範囲第２項に記載のベンゾラクタム誘導体。
【請求項４】
R1がイソプロピル基、イソブチル基、またはｔ−ブチル基であり;R2がメチル基であり;R3およびR4が、それぞれ独立に水素原子、若しくは炭素数10の直鎖状アルキル基であるか、あるいは両者が１以上のメチル基により置換されていてもよい６員環シクロアルキル環を形成する請求の範囲第３項に記載のベンゾラクタム誘導体。
【請求項５】
下記の一般式：
0003647451.tif 000021
（式中、ｎは１〜３の整数を示し;R1は直鎖または分枝鎖状のアルキル基、若しくはアラルキル基を示し;R2は直鎖または分枝鎖状のアルキル基を示し;R3およびR4は、それぞれ独立に水素原子若しくは直鎖または分枝鎖状のアルキル基を示し、R3およびR4がフェニル基上の隣接する位置に置換している場合には両者が一緒になってR3およびR4が置換するフェニル基上の２個の炭素原子とともにシクロアルキル環を形成していてもよく、該シクロアルキル環は置換基を有していてもよい）で示されるベンゾラクタム誘導体有効成分として含む抗レトロウイルス剤。
【請求項６】
レトロウイルスがヒト後天性免疫不全症ウイルスである請求の範囲第５項に記載の抗レトロウイルス剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
この発明は、ベンゾラクタム誘導体に関する。さらに詳しくは、この発明は、抗ヒト後天性免疫不全症ウイルス活性を有し、エイズの予防および治療に有用なベンゾラクタム誘導体に関するものである。
背景技術
エイズ（AIDS:後天性免疫不全症候群）はレトロウイルスの１種であるヒト後天性免疫不全症ウイルス（HIV）の感染により発症する疾患である。ヒト後天性免疫不全症ウイルスの感染に対して有効な治療方法は未だ開発されておらず、エイズの蔓延が世界的に深刻な問題となっている。従来、レトロウイルスの逆転写を阻害する作用を有する抗レトロウイルス薬として、アジドデオキシチミヂン（AZT）、ダイデオキシイノシン（DDI）、およびダイデオキシシトシン（DDC）が開発され、エイズの治療に供されている。しかしながら、これらの薬剤は細胞毒性等の副作用が強いので臨床上の使用に制限があった。また、これらの薬剤に対して耐性を示す耐性株の出現も問題となっていた。このため、抗レトロウイルス活性が高く、副作用の少ない薬剤の開発が切望されている。
従って本発明は、レトロウイルスに対して優れた阻害活性を有し、細胞毒性等の副作用の少ない抗レトロウイルス剤として有用な新規物質を提供することを目的としている。
発明の開示
本発明者は、上記の課題を解決すべく鋭意努力した結果、本発明の新規ベンゾラクタム誘導体がレトロウイルスに対して優れた阻害活性を有し、かつ、細胞毒性等の副作用が少ないことを見出した。また、この誘導体がエイズ等の治療・予防に有用であることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明によれば、下記の一般式（Ｉ）：
0003647451.tif 000002
で示されるベンゾラクタム誘導体が提供される。
本発明の別の態様によれば、上記の一般式（Ｉ）で示されるベンゾラクタム誘導体を有効成分として含む抗レトロウイルス剤が提供される。
なお、本発明のベンゾラクタム誘導体は、フェニル環に直接結合した窒素原子（ベンゾラクタム環内の１位窒素）を環状構造中に含む点でジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイエティ（J.Am.Chem.Soc.,115,pp.3957−3965,1993年）に開示された化合物4a−ｃ及び化合物14aとは構造的に異なっている。また、上記の刊行物には、化合物4a−ｃ及び化合物14aが抗レトロウイルス作用を有することは開示されていない。
発明を実施するための最良の形態
上記一般式（Ｉ）中、ｎは１〜３の整数を示し、好ましくは１または２の整数を示す。R1は直鎖または分枝鎖状のアルキル基、若しくはアラルキル基を示す。アルキル基としては、例えば、炭素数１〜12の直鎖または分枝鎖状アルキル基を挙げることができ、好ましくは、イソプロピル基、イソブチル基、またはｔ−ブチル基等の低級アルキル基、あるいは炭素数８〜10のアルキル基、例えば、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、またはｎ−デカニル基を用いることができる。アラルキル基の例としては、例えばベンジル基またはフェネチル基等の低級アラルキル基を挙げることができる。R1が結合する炭素原子（ベンゾラクタム環内の２位炭素）は不斉炭素であり、R1は２種の立体配置をとりうる。上記一般式（Ｉ）で示される構造式において８〜10員の環構造を平面としてみた場合に、R1は紙面に対して上向き又は下向きの立体配置のいずれの配置をとっていてもよく、このような立体異性体はいずれも本発明の範囲に包含される。同様に、８〜10員環を構成するアミド基（−NH−CO−）の窒素原子に隣接し、かつ、ヒドロキシメチル基（−CH2OH）により置換された炭素原子（ベンゾラクタム環内の５位炭素）も不斉炭素である。従って、このヒドロキシメチル基は、上記一般式（Ｉ）で示される構造式において８〜10員の環構造を平面としてみた場合に、紙面に対して上向き又は下向きの立体配置のいずれの配置をとっていてもよく、このような異性体はいずれも本発明の範囲に包含される。また、このような異性体のいかなる混合物も本発明の範囲に包含される。なお、上記一般式（Ｉ）で示される構造式において、８〜10員の環構造を平面としてみた場合に、R1および５位炭素に結合した上記ヒドロキシメチル基が同一平面上にある化合物をepi−体ということがある。
R2は直鎖または分枝鎖状のアルキル基を示す。例えば、炭素数１〜12の直鎖あるいは分枝鎖状アルキル基を用いることができる。好ましくは、メチル基またはエチル基等の低級アルキル基であり、特に好ましくはメチル基である。また、R1がイソプロピル基、イソブチル基、またはｔ−ブチル基等の低級アルキル基であって、かつ、R3およびR4で示される置換基が共に水素原子であるか、あるいはそのいずれか又は両者が低級アルキル基である場合には、R2は、例えば炭素数８〜12のアルキル基であることが好ましい。このような基としては、例えば、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、またはｎ−デカニル基を挙げることができる。
R3およびR4は、それぞれ独立に、水素原子または直鎖あるいは分枝鎖状のアルキル基を示す。アルキル基としては、例えば、炭素数１〜12の直鎖または分枝鎖状アルキル基を挙げることができ、炭素数８〜12のアルキル基であることが好ましい。特に好ましくは、ｎ−デカニル基である。R3が炭素数８〜12のアルキル基である場合には、R4は水素原子であることが好ましい。この場合、R3が示す炭素数８〜12のアルキル基の置換位置は特に限定されないが、例えば、ベンゾラクタム環の１位窒素原子をフェニル環上のアミノ基としてみた場合に、該アミノ基に対してｍ−位およびｐ−位にR3が置換していることが好ましい。また、R3およびR4が共に水素原子である化合物も好ましい化合物である。
さらに、R3およびR4がフェニル基上の隣接する位置に置換している場合には、両者が一緒になってR3およびR4が置換するフェニル基上の２個の炭素原子とともにシクロアルキル環を形成していてもよい。該シクロアルキル環は、５〜７員環であることが好ましく、６員環であることが特に好ましい。また、該シクロアルキル環は１またはそれ以上の低級アルキル基によって置換されていてもよい。このような低級アルキル基としてはメチル基等を挙げることができる。例えば、シクロアルキル環を構成する炭素原子のうちフェニル環に隣接する２個の炭素原子上に４個のメチル基が置換していてもよい。
一般式（Ｉ）で示される本発明の化合物のうち、好ましい化合物としては、以下の表１および化学式に示す化合物を挙げることができるが、本発明はこれらの化合物に限定されることはない。
0003647451.tif 000003
0003647451.tif 000004
0003647451.tif 000005
本発明のベンゾラクタム誘導体の製造方法の１例を、上記一般式においてｎ＝1;R1＝−CH（CH3）2;R2＝−CH3;R3＝−ｎ−C10H21;R4＝Ｈ（BL−V8−310）の化合物、及びｎ＝2;R1＝−CH（CH3）2;R2＝−CH3;R3＝−ｎ−C10H21;R4＝Ｈ（BL−V9−310）の化合物についてスキームで示すが、本発明の化合物およびその製造方法はこれらの製造方法に限定されることはない。また、この化合物および他の化合物の製造方法は、実施例に詳細に説明されている。
スキーム中の反応条件は以下の通りである。
ａ）CH3CONHCH（COOC2H5）2,NaH/DMF;
ｂ）C9H19P+Ph3Br-,n−BuLi/THF;
ｃ）HCl/AcOH;d）SOCl2/EtOH;e）Boc2O/CH2Cl2;f）LiBH4/THF;
ｇ）H2,Pd−C/EtOH;h）HCOOH,AcOH;i）BH3/THF;
ｊ）ベンジルDL−α−ヒドロキシイソバレリレートのトリフレート,2,6−ルチジン/CH2Cl2;
ｋ）Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド,DCC/CH3CN;
ｌ）CF3COOH/CH2Cl2;m）aq.NaHCO3/CH3COOEt;
ｎ）OHCH2CH2OH,TsOH/トルエン;o）PPh3/トルエン;p）K2CO3/DMF;
ｑ）ピリジニウムｐ−トルエンスルホネート／アセトン,H2O
0003647451.tif 000006
本発明のベンゾラクタム誘導体は優れた抗レトロウイルス作用を有しており、かつ、細胞毒性等の副作用が低減されている。従って、本発明のベンゾラクタム誘導体を有効成分として含む抗レトロウイルス剤は、レトロウイルス感染症、例えばエイズの治療や予防に有用である。
本発明の抗レトロウイルス剤には、有効成分である式（Ｉ）の化合物をそのまま用いてもよいが、本発明の抗レトロウイルス剤をエイズ等の疾患の治療及び／又は予防の目的でヒト等の哺乳類動物に経口的あるいは非経口的に投与する場合には、有効成分である式（Ｉ）の化合物に対して薬理学的、製剤学的に許容しうる添加物を加えて製造された医薬組成物を投与することが好適である。このような医薬組成物は目的および用途に応じて当業者に適宜選択されるが、例えば、経口投与可能な医薬組成物の例としては、散剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、液剤、シロップ等を挙げることができ、非経口投与に適する医薬組成物の例としては、注射剤、点滴剤、外用剤、座剤、点鼻剤、点耳剤等を挙げることができる。
経口投与、あるいは経皮又は経粘膜投与に適する医薬組成物には、薬理学的、製剤学的に許容しうる添加物として、例えばブドウ糖、乳糖、Ｄ−マンニトール、デンプン、又は結晶セルロース等の賦形剤；カルボキシメチルセルロース、デンプン、又はカルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤又は崩壊補助剤；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、又はゼラチン等の結合剤；ステアリン酸マグネシウム又はタルク等の滑沢剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、白糖、ポリエチレングリコール又は酸化チタン等のコーティング剤；ワセリン、流動パラフィン、ポリエチレングリコール、ゼラチン、カオリン、グリセリン、精製水、又はハードファット等の基剤；フロン，ジエチルエーテル、又は圧縮ガス等の噴射剤；ポリアクリル酸ナトリウム、ポリビニルアルコール、メチルセルロース、ポリイソブチレン、ポリブテン等の粘着剤；木綿布又はプラスチックシート等の基布等の製剤用添加物を用いることができる。
注射あるいは点滴用に適する医薬組成物には、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール等の水性あるいは用時溶解型注射剤を構成しうる溶解剤又は溶解補助剤；ブドウ糖、塩化ナトリウム、Ｄ−マンニトール、グリセリン等の等張化剤；無機酸、有機酸、無機塩基又は有機塩基等のpH調節剤等の製剤用添加物を用いることができる。
本発明の抗レトロウイルス剤の投与量は、予防および治療の目的となるレトロウイルス感染症の種類や患者の年齢および症状等に応じて、当業者により適宜選択されうるが、一般には、成人１日あたり、0.1〜100mg程度である。
実施例
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されることはない。
実施例１  （±）−BL−V8−310、（±）−epi−BL−V8−310の合成
テレフタルアルデヒド25.0gを、水20ml及びエタノール80mlに懸濁し、Pd/C220mgを加えて水素（4.3l）を導入した。触媒を濾去し、濾液を濃縮してｐ−ヒドロキシメチルベンズアルデヒド25.2gを得た。生成物をトルエン100ml及び48％HBr50mlに溶解して２時間還流した。反応液を氷水中に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を水および飽和塩水で順次洗浄し、乾燥した後、溶媒を減圧留去した。ｎ−ヘキサンから再結晶して、無色針状晶37.5gを得た（収率:82％）。mp97.5−98.0℃。
元素分析:C8H7OBr  理論値  N:0.00％；  C:48.27％；  H:3.54％
実測値  N:0.00％；  C:48.19％；  H:3.49％
11.65gのKNO3を濃硫酸200mlに０℃で加え、１時間攪拌した。この溶液に上記のブロム体22.29gを０℃で加え、室温で４時間攪拌した。反応液を多量の氷水中に徐々に注ぎ塩化メチレンで抽出した。有機層を水、飽和重曹水、水、飽和食塩水の順に洗浄して乾燥した後、溶媒を留去した。残渣を酢酸エチル−ｎ−ヘキサンから再結晶して、無色針状晶20.14gを得た（収率:74％）。mp77.5−78.0℃。
元素分析:C8H4NOBr  理論値  N:5.74％  C:39.37％  H:2.48％
実測値  N:5.46％  C:39.53％  H:2.44％
500mlの三径フラスコに1.61gのNaHを入れ、ｎ−ヘキサンで三回洗浄した。ヘキサンを減圧除去し、アルゴンで置換した後、DMF50mlを加えてNaHを懸濁させた。マロン酸ジエチルアセトアミド9.00gをDMF40mlに溶解して０℃で加えた。気泡発生が終息した後、上記のニトロ体9.93gをDMF50mlに溶解して加え、室温で2.5時間攪拌した。DMFを減圧留去した後、残渣に2N HClを加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水及び飽和食塩水で洗浄し、MgSO4上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、淡黄色粉末14.95gを得た（収率:98％）。
高分解能マススペクトル:C17H20N2O8  理論値  380.1219
実測値  380.1217
ｎ−ノニルトリフェニルホスホニウムブロミド4.47gをTHF30mlに溶解し、アルゴンで置換した三径フラスコに入れた。溶液を０℃に冷却し、9.5mmolのｎ−ブチルリチウムを加えた。０℃で90分間攪拌した後、溶液を−78℃に冷却した。この溶液に上記の生成物2.18gのTHF溶液（10ml）を滴下混合した。該反応混合物を−78℃で90分間、さらに０℃で２時間反応させた後、少量の2N  HClを加えて反応を停止させた。THFを減圧留去した後、残渣に2N HClを加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水及び飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4上で乾燥させた後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：酢酸エチル/n−ヘキサン＝1:1）、目的物1.07gを得た（収率:56％）。
上記のオレフィン体4.42gを酢酸20ml及び濃塩酸10mlの混合物に溶解し７時間穏やかに還流した。溶媒を留去してタール状のアミノ酸を得た。エタノール50mlをドライアイス−アセトンで冷却し、−20℃以下に保ちながら塩化チオニル12gを徐々に滴下した。この反応液に上記のアミノ酸を加え、室温で一晩攪拌した。溶媒を減圧留去した後、残渣に飽和重曹水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和重曹水、水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した後溶媒を留去した。残渣を塩化メチレン100mlに溶解し、過剰のBoc2Oを加えて一晩放置した。この反応液を減圧濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した（溶媒：酢酸エチル/n−ヘキサン＝1:1）。
得られた化合物をTHF90mlに溶解して、LiBH41.42gを加えて室温で攪拌した。該反応溶液を減圧濃縮した後、氷水中に注意深く加えて抽出した。有機層を10％クエン酸水溶液、水、飽和食塩水の順で洗浄した後、MgSO4で乾燥し、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：酢酸エチル/n−ヘキサン＝1:1）、無色油状物2.32gを得た（収率:59％）。
上記ヒドロキシル体2.32gをエタノール20mlに溶解し、10％Pd/C200mgを加えて水素気流下で７時間攪拌した。触媒を濾去した後、濾液を濃縮した。残渣をｎ−ヘキサンから再結晶して無色柱状晶2.04gを得た（収率:94％）。mp72−73℃。
高分解能マススペクトル:C24H42N2O3  理論値  406.3195
実測値  406.3179
蟻酸1.21g及び無水酢酸2.60gの混合物を60−70℃で２時間加熱した。この反応液を０℃に冷却し、上記の還元生成物2.04gのTHF溶液（30ml）を加えて、室温で６時間攪拌した。溶媒を減圧留去した後、残渣に飽和重曹水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄してMgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付して精製し（溶媒：酢酸エチル/n−ヘキサン＝1:1）、淡黄色油状物の蟻酸エステル1.75gを得た（収率:90％）。
上記で得られた蟻酸エステル1.61gをTHF100mlに溶解した。この溶液に1.0M BH3のTHF溶液16mlを加えて、０℃で４時間攪拌した。少量の10％クエン酸水溶液を加えて過剰のBH3を分解した後、反応液を減圧濃縮した。残渣に10％クエン酸水溶液を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：酢酸エチル/n−ヘキサン＝1:2）により精製し、酢酸エチル/n−ヘキサンから再結晶して、無色柱状晶1.30gを得た（収率:89％）。mp72−73℃。
高分解能マススペクトル:C25H44N2O3  理論値  420.3352
実測値  420.3315
（±）−ベンジル３−メチル−２−トリフルオロメチルスルホニル−オキソブタノエートを、コーガン（Kogan）らの方法に従って（DL）−Valから合成した（Kogan,T.P.,Somers,T.C.,Venuti,M.C.,Tetrahedron,1990,6623）。上記の還元体1.27gをジクロロエタン30ml及び2,6−ルチジン1.05gの混合物に溶解し、トリフレート1.84gを加えて24時間還流した。得られた反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン／酢酸エチル＝20:3）で精製して、無色油状物1.62gを得た（収率:80％）。
上記の生成物949mgをメタノール120mlに溶解し、Pd/C145mgを加えて水素気流下で５時間攪拌した。Pd/Cを濾去した後、濾液を濃縮した。得られたカルボン酸及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド400mgをアセトニトリル20mlに溶解した。336mgのDCCのアセトニトリル溶液5mlをこの溶液に加え室温で攪拌した。溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチルに懸濁した。不溶物を濾取して濾液を濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し（溶媒：酢酸エチル／塩化メチレン＝1:5）、無色油状物917mgを得た（収率:96％）。
上記の化合物1.28gをCH3Cl35mlに溶解し、TFA18mlを０℃で加えて、さらに室温で２時間攪拌した。溶媒を減圧留去し、残渣を2lの酢酸エチルに溶解した。飽和重曹水120mlを加えて６時間還流した後、反応溶液を室温まで冷却して水層を除去した。有機層を少量の飽和食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：酢酸エチル）により精製し、（±）−BL−V8−310 394mg（収率:48％）、及び（±）−epi−BL−V8−310 359mg（収率:45％）を得た。
（±）−BL−V8−310:無色針状晶、mp107−108℃。
元素分析:C25H42N2O2  理論値  N:6.96％  C:74.58％  H:10.51％
実測値  N:7.14％  C:74.57％  H:10.68％
（±）−epi−BL−V8−310:無色フレーク、mp117−118℃。
元素分析:C25H42N2O2  理論値  N:6.96％  C:74.58％  H:10.51％
実測値  N:7.11％  C:74.33％  H:10.68％
実施例２  （−）−BL−V8−310、（−）−epi−BL−V8−310の合成
（＋）−ベンジル３−メチル−２−トリフルオロメチルスルホニル−オキソ−ブタノエートを、上記のコーガンらの方法に従って（Ｄ）−Valから合成した。実施例１と同様の方法によって還元体（C25H44N2O3）154mgからベンジル体205mgを製造し（収率:90％）、さらに（−）−BL−V8−310 55mg（収率:42％）及び（−）−epi−BL−V8−310 43mgを得た。
0003647451.tif 000007
実施例３  （＋）−BL−V8−310、（＋）−epi−BL−V8−310の合成
（−）−ベンジル３−メチル−２−トリフルオロメチルスルホニル−オキソ−ブタノエートを、上記のコーガンらの方法に従って（Ｌ）−Valから合成した。実施例１と同様の方法によって還元体（C25H44N2O3）168mgからベンジル体184mgを製造し（収率:75％）、さらに（＋）−BL−V8−310 52mg（収率:49％）及び（＋）−epi−BL−V8−310 51mg（収率:48％）を得た。
0003647451.tif 000008
実施例４  （±）−BL−V9−310、（±）−epi−BL−V9−310の合成
実施例１と同様の方法によって製造したニトロ体（C8H4NOBr）10.19g、1,2−エタンジオール7.41g及びｐ−トルエンスルホン酸10mgをトルエン100mlに溶解し、ディーン・スターク・トラップにより水を共沸除去しながら、3.5時間還流した。反応液を室温まで冷却し、酢酸エチルで希釈して、飽和重曹水、水、飽和食塩水の順で洗浄し、MgSO4で乾燥させた後に溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：塩化メチレン）により精製し、アセタール体11.64g（収率:97％）を得た。
このアセタール体6.90gをトルエン60mlに溶解し、トリフェニルホスフィン6.90gを加えて２日間加熱還流した。生成した沈澱を濾取し、少量のトルエンで洗浄して、白色粉末8.35g（収率:63％）を得た。mp230−235℃（分解）。
元素分析:C28H25NO4PBr  理論値  N:2.58％  C:61.10％  H:4.58％
実測値  N:2.40％  C:61.30％  H:4.57％
Ｎ−Boc−Ｏ−ｔ−ブチルセリンメチルエステル2.96gを無水トルエン140mlに溶解して−60℃に冷却した。1.5Mジイソブチルアルミニウムヒドリド16mlを徐々に滴下し、−60℃で１時間攪拌した。10％クエン酸水溶液30mlを加えた後、室温まで加温し、10％クエン酸水溶液100mlと混合した。水層を除去し、有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、MgSO4上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：酢酸エチル/n−ヘキサン＝1:1）により精製し、無色油状物2.03gを得た（収率:77％）。
上記の化合物7.49gをDMF50mlに溶解し、炭酸カリウム1.80gを加えて室温で1.5時間攪拌した。2.99gのOHC−CH（NHBoc）CH2OC（CH3）３をDMF20mlに溶解して加え、95℃で７時間反応させた。溶媒を減圧留去し、残渣に10％クエン酸水溶液を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、有機層をMgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：酢酸エチル/n−ヘキサン＝1:3）に付して精製し、cis−体1.91g及びtrans−体3.00gを得た（総収率:92％）。
cis−体：淡黄色針状晶、mp71−72℃
元素分析:C22H32N2O7  理論値  N:6.42％  C:60.54％  H:6.42％
実測値  N:6.33％  C:60.32％  H:6.33％
trans−体：淡黄色油状物
高分解能マススペクトル:C22H32N2O7  理論値  436.2210
実測値  436.2254
上記のケタール体（cis−体）2.85g及びピリジニウムｐ−トルエンスルホネート0.98gをアセトン40ml及び水3mlに溶解して15時間還流した。反応溶液を減圧濃縮し、残渣を水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：酢酸エチル/n−ヘキサン＝1:2）に付して精製し、ベンズアルデヒド体の淡黄色柱状晶（cis−体）2.03gを得た（収率:79％）。mp103−104℃。
元素分析:C20H28N2O6  理論値  N:7.19％  C:61.21％  H:7.19％
実測値  N:7.07％  C:61.22％  H:7.29％
上記と同様の方法によって、ケタール体（trans−体）3.00gからベンズアルデヒド体の淡黄色油状物（trans−体）1.78gを得た（収率:66％）。
高分解能マススペクトル:C20H28N2O6  理論値  392.1947
実測値  392.1956
実施例１と同様の方法によって、ｎ−ノニルトリフェニルホスホニウムブロミド1.97g及び上記のベンズアルデヒド体（cis−体）589mgから、デセニル体の淡黄色油状物［−CH＝CH−CH（NHBoc）−がcis−配置の化合物］758mgを得た（収率:48％）。同様に、ｎ−ノニルトリフェニルホスホニウムブロミド2.95g及び上記のベンズアルデヒド体（trans−体）1.78gを用いて、デセニル体の淡黄色油状物［−CH＝CH−CH（NHBoc）−がtrans−配置の化合物］1.10gを得た（収率:48％）。
実施例１と同様の方法によって、上記ノネニル体［−CH＝CH−CH（NHBoc）−がcis−配置の化合物］758mgから側鎖の２つの二重結合が還元された還元体の無色油状物613mgを得た（収率:84％）。
高分解能マススペクトル:C30H54N2O3  理論値  490.4134
実測値  490.4120
実施例１と同様の方法によって、上記還元体913mgからベンジル体の無色油状物1.20gを得た（収率:95％）。さらに、実施例１と同様の方法によって、上記ベンジル体1.40gからサクシニルイミド体の淡黄色油状物1.11gを製造し（収率:78％）、引き続き実施例１と同様の方法により、1.11gの上記サクシニルイミド体から（±）−BL−V9−310 134mg（収率:20％）及び（±）−epi−BL−V9−310 112mg（収率:17％）を得た。
（±）−BL−V9−310:無色油状物。
高分解能マススペクトル:C30H52N2O2  理論値  416.3402
実測値  416.3442
（±）−epi−BL−V9−310:無色針状晶、mp146.5℃。
元素分析:C30H52N2O2  理論値  N:6.72％  C:74.95％  H:10.64％
実測値  N:6.87％  C:75.02％  H:10.87％
実施例５  （±）−BL−V8、（±）−epi−BL−V8の合成
NaH5gをｎ−ヘキサンで洗浄してDMF100mlを加え、さらに、マロン酸ジエチルアセトアミド27gのDMF溶液（50ml）を加えた。さらに、ｏ−ニトロベンジルブロミド27gのDMF溶液（50ml）を０℃で加えて室温で一晩放置した。反応液を氷水中に注ぎ、沈澱を濾取して塩化メチレンに溶解した。脱水後、溶媒を留去し、残渣を塩化メチレン−ヘキサンから再結晶して、淡黄色針状晶31.1gを得た（収率:71％）。mp103−104℃。
元素分析:C16H20N2O7  理論値  N:7.95％  C:54.54％  H:5.72％
実測値  N:8.06％  C:54.66％  H:5.64％
上記の化合物30.5gを17.3g（５当量）NaOHの水溶液150ml中で70分間還流した後、冷却した。反応液に濃硫酸を加えて酸性とし、沈澱を濾取した。この沈澱物を少量の飽和食塩水で洗浄し、80℃で４時間減圧乾燥した。得られた脱エステル体を水100mlに懸濁して３時間還流した。その後、沈澱を濾取して飽和食塩水で洗浄し、80℃で６時間にわたりP2O5上で減圧乾燥した。無水エタノール100mlにSOCl223mlを−10℃で徐々に加え−10℃でさらに10分間放置した後、この溶液に上記のアミノ酸を固体のまま加えた。反応液を室温で１時間、さらに60℃で３時間攪拌した後、エタノールを60℃で減圧留去し、炭酸ナトリウムと水を加えて酢酸エチルで抽出した。酢酸エチルを留去して得られた残渣をエタノールに溶解し、活性炭で処理した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：塩化メチレン／酢酸エチル＝8:1）により精製してエステル体14.8gを得た（収率:61％）。mp72−74℃。
元素分析:C13H16N2O5  理論値  N:9.99％  C:55.71％  H:5.75％
実測値  N:9.99％  C:55.83％  H:5.70％
上記のエステル体14.5gを塩酸飽和エタノール200mlに溶解し、48時間還流した。エーテルを加えて冷却した後、生成した沈澱を濾取し、エーテルでよく洗浄して、アミノ脱保護体の無色針状晶（塩酸塩）12.3gを得た（収率:86％）。mp〜204℃（分解）。
上記の塩酸塩12gを水100mlに懸濁し、過剰量の炭酸水素ナトリウムを加えて、酢酸エチルで抽出した。MgSO4で乾燥した後40℃以下で留去し、遊離のアミノ体9.8gを得た。得られた生成物9.06gを水40ml及びジオキサン40mlの混合物に溶解し、炭酸水素ナトリウム8g（2.5当量）を加えた後、Boc−N310.9g（２当量）を加え、空冷管を取り付けて45−50℃で40時間攪拌した。この後、Boc−N35.4g（１当量）及び炭酸水素ナトリウム4g（１当量）を追加して反応を24時間継続した。反応液を減圧でほぼ乾固させ、水200mlを加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を0.5M炭酸水素ナトリウム水溶液、0.5Mクエン酸水溶液、水の順で洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。得られた残渣をベンゼンから再結晶して、アミノ基がBoc基で保護された化合物の淡黄色針状晶10.73gを得た（収率:83％）。mp97.5−99℃。
元素分析:C16H22N2O6  理論値  N:8.28％  C:56.80％  H:6.55％
実測値  N:8.40％  C:56.60％  H:6.56％
上記のBoc体10.5gをTHF150mlに溶解し、LiBH41.5gを０℃で加えて、０℃で１時間、さらに室温で３時間攪拌した。その後、水200mlを注意深く加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水で洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去してヒドロキシメチル体8.73gを得た（収率:96％）。mp105−106.5℃。
元素分析:C14H20N2O5  理論値  N:9.45％  C:56.75％  H:6.80％
実測値  N:9.24％  C:56.72％  H:6.80％
上記の化合物4.5gを酢酸エチル−１％H2O400mlに溶解して10％Pd/C2.5gを加え、水素を１気圧で添加して室温で２時間接触還元した。Pd/Cを濾去し、濾液を濃縮した。残渣をベンゼンから再結晶してアニリン体の無色葉状晶3.9gを得た（収率:96％）。mp130.5−131.5℃。
元素分析:C14H22N2O3  理論値  N:10.52％  C:63.14％  H:8.33％
実測値  N:10.34％  C:63.44％  H:8.17％
上記化合物3.6gをベンゼン80mlに溶解し、メチル２−オキソイソバレレート4.4g（2.5当量）を加えて、アルゴン下で24時間共沸還流した。メチル２−オキソイソベレレート1.76gを追加して、さらに18時間還流した。ベンゼン及びメチル２−オキソイソバレレートを減圧留去し、残渣をTHF120mlに溶解した。この溶液にNaBH3CN1.7g（２当量）を加えて、室温で一晩放置した。反応液を室温で20mlまで減圧濃縮し、水を加えた後、クエン酸酸性として２時間攪拌した。該溶液を塩化メチレンで抽出し、溶媒を留去した残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：酢酸エチル／ヘキサン＝1:3）で精製した。得られたイミノ体とエナミン体の混合物をメタノール300mlに溶解した。この溶液に10％Pd/C4gを加え、水素を１気圧で添加して室温で５時間接触還元した。ほぼ単一の還元生成物が得られたので、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：酢酸エチル／ヘキサン＝1:4）で精製し、無色液体4.13gを得た（収率:80％）。
上記還元体4.05gをメタノール50mlに溶解し、2N水酸化カリウム25ml（５当量）を加えて室温で24時間放置した。TLCで原料消失を確認し、メタノールを40℃で留去した。この溶液に10％クエン酸水溶液を加えて酸性とし、酢酸エチルで抽出して脱エステル体を得た。この生成物を直ちにCH3CN30mlに溶解してＮ−ヒドロキシスクシンイミド2.45g（２当量）を加え、溶液を０℃以下に冷却した。この溶液に、DCC3.29g（1.5当量）のCH3CN溶液（10ml）を加え、０℃で１時間、さらに室温で２時間放置した。CH3CNを留去して、残渣を酢酸エチルに溶解し、不溶のジシクロヘキシルウレアを濾去した。濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：酢酸エチル／ヘキサン＝1:1）で精製して無色液体4.09gを得た（収率:81％）。
上記化合物4.05gを塩化メチレン30mlに溶解し、０℃に冷却してCF3COOH30mlを加え、反応液をアルゴン置換して１時間放置した。CF3COOHを室温で減圧留去し、水80mlを加えて、過剰量（飽和程度）の炭酸水素ナトリウムを加えた。さらに、酢酸エチル80mlを加えて二層のまま攪拌し、１時間還流した。酢酸エチル層を分離し、水層をさらに２回酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせて溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：酢酸エチル／塩化メチレン＝4:1）で精製して、閉環したベンゾラクタム体の２種の異性体を得た（総収率:61％）。
異性体A:644mg、無色柱状晶、mp191−193℃。
元素分析:C14H20N2O2  理論値  N:11.28％  C:67.72％  H:8.12％
実測値  N:11.22％  C:67.81％  H:8.15％
異性体Ｂ（epi−体）:676mg、無色柱状晶、mp187.5−188.5℃。
元素分析:C14H20N2O2  理論値  N:11.28％  C:67.72％  H:8.12％
実測値  N:11.22％  C:67.81％  H:8.15％
上記の各異性体300mgをそれぞれメタノール10mlに溶解し、炭酸水素ナトリウム500mgを加え、さらにCH3I12mlを加えて85時間還流した。メタノール及びCH3Iを留去した後、残渣を水−クロロホルムに分配し、有機層を濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：酢酸エチル/n−ヘキサン＝3:1）で精製した。
（±）−BL−V8:206mg（収率:65％）、無色柱状晶、mp133−134℃。
元素分析:C15H22N2O2  理論値  N:10.68％  C:68.67％  H:8.45％
実測値  N:10.72％  C:68.61％  H:8.57％
（±）−epi−BL−V8:174mg（収率:55％）、無色針状晶、mp155−157℃。
元素分析:C15H22N2O2  理論値  N:10.68％  C:68.67％  H:8.45％
実測値  N:10.62％  C:68.68％  H:8.69％
実施例６  （±）−BL−V9、（±）−epi−BL−V9の合成
メチルｏ−ニトロフェニルアセテート11.3gをTHF30mlに溶解した。この溶液にLiBH43.0gのTHF懸濁液（20ml）を氷冷下で加えた。０℃で40分間、さらに室温で３時間攪拌した後、溶媒を留去して濃縮した。残渣を氷水中に注ぎ、塩化メチレンで抽出した。有機層を10％クエン酸水溶液、水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去して黄色油状物8.09gを得た（収率:84％）。
上記の化合物8.09gを塩化メチレン10mlに溶解し、−40℃に冷却した。この溶液にPBr35.8gを徐々に加えた後、室温で１時間攪拌した。この反応液を氷水600mlに注ぎ、塩化メチレンで抽出した。有機層を水、飽和重曹水、水、飽和食塩水の順に洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、淡黄色油状物5.52gを得た（収率:41％）。
NaH7.3gをｎ−ヘキサンで洗浄して減圧乾燥した。アルゴンで置換した後、DMF150mlを加えて攪拌し、ジエチルアセトアミドマロネート40.1gのDMF溶液（150ml）を徐々に加えて室温で30分間攪拌した。上記のブロム体39.1gのDMF溶液（50ml）をこの溶液に加え室温で20時間攪拌した。溶媒を減圧留去し、残渣に2N HClを加えて塩化メチレンで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した後、塩化メチレン−ｎ−ヘキサンから再結晶して、無色針状晶50.4gを得た（収率:81％）。mp75−76℃。
元素分析:C17H22NO7  理論値  N:7.57％  C:55.60％  H:6.06％
実測値  N:7.65％  C:55.73％  H:6.05％
上記の化合物5.16gを酢酸12ml及び濃塩酸10mlに溶解し、９時間還流した。反応液を氷水200ml中に注ぎ、塩化メチレン50mlで２回洗浄した。水層を減圧濃縮し、少量のエタノールで共沸して水分を除去した後、減圧乾燥した。無水エタノール15mlを−20℃に冷却し、液温を−20℃以下に保ちながら塩化チオニル6mlを滴下混合した。この溶液に上記のアミノ酸を加えて、室温で６時間攪拌した。溶媒を減圧留去し、残渣に飽和重曹水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣を塩化メチレン50mlに溶解し、Boc2O5.14gを加えて室温で36時間攪拌した。溶媒を減圧留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色油状物4.83gを得た（収率:97％）。
高分解能マススペクトル:C17H24N2O6  理論値  352.1634
実測値  352.1624
LiBH41.0gをTHF30mlに懸濁して０℃に冷却し、上記のBoc体4.83gのTHF溶液（20ml）を加えた。０℃で１時間、さらに室温で48時間攪拌した後、溶媒を留去した。残渣を氷水中に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を10％クエン酸水溶液、水、飽和食塩水の順に洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣を酢酸エチル−ｎ−ヘキサンから再結晶して、ヒドロキシメチル体の淡黄色針状晶2.67gを得た（収率:63％）。mp109℃。
元素分析:C15H22N2O5  理論値  N:9.03％  C:58.05％  H:7.14％
実測値  N:8.97％  C:58.27％  H:7.11％
上記の化合物2.9gをエタノール300mlに溶解し、Pd/C300mgを加えた。水素気流下で３時間攪拌した後、Pd/Cを濾去し、濾液を濃縮した。残渣をベンゼンから再結晶してアニリン体の無色針状晶2.57gを得た（収率:98％）。mp79−80℃。
高分解能マススペクトル:C15H24N2O3  理論値  280.1787
実測値  280.1760
上記の化合物2.57g及びメチル２−オキソイソバレレート2.49gをベンゼン30mlに溶解した。ディーン・スターク・トラップにより水を共沸留去しながら24時間還流した。溶媒を減圧留去し残渣をTHF30mlに溶解した。この溶液にNaBH3CH1.22gを加えて室温で14時間攪拌した。溶媒を減圧留去し、残渣を氷水中に注いで塩化メチレンで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去して油状物を得た。この生成物をエタノール150mlに溶解し、Pc/C230mgを加えて水素気流下で４時間攪拌した。Pd/Cを濾去し濾液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、縮合体1.92gを得た（収率:52％）。
上記の化合物1.72gをメタノール25mlに溶解し、2N KOH水溶液10mlを加えて室温で10時間攪拌した。溶媒を減圧留去し、得られた残渣に10％クエン酸水溶液を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水50mlで二回洗浄した後、MgSO4で乾燥し、溶媒を留去してカルボン酸化合物を得た。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド1.03gと上記のカルボン酸をアセトニトリル15mlに溶解し、０℃に冷却した。該溶液にDCC1.39gのアセトニトリル溶液（10ml）を加え、該反応混合物を０℃で20分間、さらに室温で２時間攪拌した。アセトニトリルを減圧留去し、残渣を酢酸エチルに溶解して不溶のジシクロヘキシルウレアを濾去した。濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製してスクシンイミド体1.61gを得た（収率:77％）。
上記の化合物1.61gを塩化メチレン30mlに溶解しトリフルオロ酢酸5mlを加えた。この溶液を室温で50分間攪拌した後、溶媒を減圧留去した。残渣を酢酸エチル1lで希釈し、飽和重曹水300mlを加えて68時間還流した。反応液を室温に冷却した後水層を除去した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、MgSO4で乾燥し、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー、及びプレパラティブ薄層クロマトグラフィーにより精製して、２種類の閉環体：異性体A108mg（収率:12％）及び異性体B158mg（収率:18％）を得た。
異性体A:無色柱状晶、mp147−148℃。
元素分析:C15H22N2O2  理論値  N:10.68％  C:68.67％  H:8.45％
実測値  N:10.98％  C:68.96％  H:8.50％
異性体Ｂ（epi−体）：無色針状晶、mp130−131℃。
元素分析:C15H22N2O2  理論値  N:10.68％  C:68.67％  H:8.45％
実測値  N:10.87％  C:68.37％  H:8.43％
上記の異性体A84mg、炭酸水素ナトリウム50mg、メタノール3ml、およびCH3I5mlの混合物を７日間還流した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、無色油状物の（±）−BL−V9 65mgを得た（収率:74％）。
高分解能マススペクトル:C16H24N2O2  理論値  276.1838
実測値  276.1825
（±）−BL−V9の合成と同様の方法によって、上記異性体Ｂ（epi−体）70mgから無色針状晶の（±）−epi−BL−V9 69mg（収率:93％）を得た。mp164−165℃。
元素分析:C16H24N2O2  理論値  N:9.84％  C:69.27％  H:8.83％
実測値  N:10.14％  C:69.53％  H:8.75％
実施例７  （±）−BL−V10、（±）−epi−BL−V10の合成
LiBH46.1gをTHF350mlに溶解し、２−ニトロ桂皮酸メチルエステル27.3gのTHF溶液（100ml）を加えて室温で22時間攪拌した。溶媒を減圧留去し、残渣に氷水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去して、二重結合とエステルが還元された無色油状物質15.2gを得た（収率:63.5％）。さらに、実施例６のブロム化工程と同様の方法によって、上記の還元体15.2gからブロム体の淡黄色油状物9.2g（収率:45％）を得、このブロム体9.23gから、マロン酸エステル付加物の淡黄色油状物9.99g（収率:69％）を得た。
高分解能マススペクトル:C18H24N2O7  理論値  380.1584
実測値  380.1546
実施例６と同様の方法によって脱炭酸およびBoc化を行い、上記のマロン酸エステル付加物9.99gからアミノ基がBocで保護されたアミノエステル体の淡黄色油状物7.7g（収率:80％）を得た。
高分解能マススペクトル:C18H26N2O6  理論値  366.1791
実測値  366.1762
上記の化合物4.71gをエタノール200mlに溶解し、Pd/C620mgを加え、水素気流下で４時間攪拌した。Pd/Cを濾去し濾液を濃縮した。残渣をTHF10mlに溶解した溶液を、無水酢酸5.52.g及び蟻酸3.16gを50−60℃で２時間加熱して製造した混合酸無水物に加えた。反応液を室温で4.5時間攪拌し、溶媒を減圧留去した。残渣に飽和重曹水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製してホルムアニリド体の無色油状物4.05gを得た（収率:87％）。
高分解能マススペクトル:C19H28N2O5  理論値  364.1998
実測値  364.1955
上記の化合物3.55gをTHF100mlに溶解して０℃に冷却し、1.0M BH3のTHF溶液20mlを加えて０℃で２時間攪拌した。反応液に10％クエン酸水溶液10mlを加えた後、溶媒を留去した。残渣に水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、メチルアニリン体の無色針状晶3.00gを得た（収率:88％）。
元素分析:C19H30N2O4  理論値  N:7.99％  C:65.12％  H:8.63％
実測値  N:7.99％  C:65.17％  H:8.65％
LiBH41.50gをTHF150mlを溶解して０℃に冷却し、上記の化合物6.84gのTHF溶液（50ml）を加えて、０℃で１時間、さらに室温で４時間攪拌した。溶媒を減圧留去し、残渣を氷水中に注いで塩化メチレンで抽出した。有機層を10％クエン酸水溶液、水、飽和食塩水の順に洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、ヒドロキシメチル体の無色針状晶5.99gを得た。mp100℃。
元素分析:C17H28N2O3  理論値  N:9.08％  C:66.20％  H:9.15％
実測値  N:8.99％  C:66.34％  H:9.25％
（±）−ベンジル３−メチル−２−トリフルオロメチルスルホニル−オキソブタノエートをコーガン（Kogan）らの方法に従って（DL）−Valから合成し（Kogan,T.P.,Somers,T.C.,Venuti,M.C.,Tetrahedron,1990,6623）、実施例１と同様にして上記の化合物3.37gに反応させて、淡黄色油状物質2.91g（収率:53％）を得た。さらに実施例１と同様の方法によって、接触還元とスクシンイミド化を行い、上記の化合物2.91gから、無色油状物2.05g（収率:77％）を得た。
上記の化合物2.05gを塩化メチレン10mlに溶解した後、トリフルオロ酢酸15mlを加えて、０℃で30分間、さらに室温で４時間攪拌した。溶媒を減圧留去した後、残渣を酢酸エチル1lで希釈し、飽和重曹水100mlを加えて、２日間加熱還流した。反応液を室温まで冷却した後、水層を除去した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、MgSO4で乾燥し、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、BL−V10及びepi−BL−V10の混合物436mgを得た。二つの異性体は以下の方法によりアセチル化を行って分離した。上記の混合物436mgをピリジン10ml及び無水酢酸2mlに溶解し、室温で２時間攪拌した。溶媒を減圧留去し、残渣に2N HClを加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄した後、MgSO4で乾燥し、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー、及びプレパラティブ薄層クロマトグラフィーにより精製して、異性体A206mg（収率:41％）、及び異性体Ｂ（epi−体）205mg（収率:41％）を得た。
異性体A:無色柱状晶、mp130.5−131.5℃。
元素分析:C19H28N2O3  理論値  N:8.43％  C:68.65％  H:8.49％
実測値  N:8.33％  C:68.47％  H:8.57％
異性体Ｂ（epi−体）：無色板状晶、mp102−102.5℃。
元素分析:C19H28N2O3  理論値  N:8.43％  C:68.65％  H:8.49％
実測値  N:8.62％  C:68.39％  H:8.70％
上記の異性体A53mgをメタノール6mlに溶解し、4N KOHを数滴加え、室温で100分間攪拌した。溶媒を減圧留去した後、残渣に2N塩酸を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄した後、MgSO4で乾燥し、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、酢酸エチル−ｎ−ヘキサンから再結晶して、無色板状晶の（±）−BL−V10 38mgを得た（収率:83％）。mp124−126℃。
元素分析:C17H26N2O2  理論値  N:9.65％  C:70.31％  H:9.02％
実測値  N:9.54％  C:70.20％  H:9.01％
（±）−BL−V10の合成と同様の方法によって、上記異性体B32mgから、無色針状晶の（±）−epi−BL−V10 21mg（収率:83％）を得た。mp157−158℃。
元素分析:C17H26N2O2  理論値  N:9.65％  C:70.31％  H:9.02％
実測値  N:9.61％  C:70.22％  H:9.31％
実施例８  （−）−BL−V8−210、（−）−epi−BL−V8−210の合成
２−ニトロ−５−メチル安息香酸20.2gを、塩化チオニル17.0g及び無水ベンゼン50mlに溶解し、加熱還流した。溶媒を減圧留去し、無水メタノールを加えて、８時間攪拌した。溶媒を減圧留去した後、残渣に2N HClを加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和重曹水、水、飽和食塩水の順に洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣を酢酸エチルから再結晶して、メチルエステル体の無色板状晶17.9gを得た（収率:82％）。mp75−77℃。
元素分析:C9H9NO4  理論値  N:7.18％  C:55.39％  H:4.65％
実測値  N:7.41％  C:55.20％  H:4.43％
上記のエステル体20.1gを酢酸120ml及び無水酢酸120mlの混合物に溶解し、−20℃に冷却した。−20℃に保ちながら、この溶液に濃硫酸40mlを滴下し、無水クロム酸30.4gを約2gずつ加えた。反応液を０℃で２時間、さらに室温で14時間攪拌した後、氷水中に注いだ。この混合物を酢酸エチルで抽出し、有機層を水、飽和食塩水の順に洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣を酢酸エチル−ｎ−ヘキサンから再結晶して、無色板状晶18.2gを得た（収率:78％）。mp196−199℃。
元素分析:C9H7NO6  理論値  N:6.22％  C:48.01％  H:3.13％
実測値  N:6.24％  C:47.89％  H:2.96％
上記の化合物22.6gをTHF450mlに溶解して０℃に冷却し、10.0M BH3SMe16.0mlを加えて室温で30分間攪拌した後、さらに５時間加熱還流した。反応溶液に少量のメタノールを加えて10分間還流した後、溶媒を留去した。残渣に飽和重曹水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。得られた残渣を酢酸エチル−ｎ−ヘキサンから再結晶してベンジルアルコール体の無色針状晶19.2gを得た（収率:91％）。mp52.5−53℃。
元素分析:C9H9NO5  理論値  N:6.63％  C:51.19％  H:4.30％
実測値  N:6.68％  C:51.34％  H:4.19％
上記の化合物15.5gを無水塩化メチレン250mlに溶解し、ピリジニウムクロロクロメート16.8g及びアルミナ21.1gを加えて18時間攪拌した。反応液を後処理した後、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製してベンズアルデヒド体の淡黄色板状晶14.4gを得た（収率:94％）。mp74.5−75℃。
元素分析:C9H7NO5  理論値  N:6.70％  C:51.68％  H:3.37％
実測値  N:6.74％  C:51.66％  H:3.25％
ｎ−ノニルトリフェニルホスホニウムブロミド45.8gをTHF800mlに溶解して０℃に冷却し、1.6M n−BuLi30mlを滴下混合して、０℃で40分間攪拌した。上記の化合物8.83gを加えて０℃で30分間、さらに室温で3.5時間攪拌した。少量の2N HClを加えた後、溶媒を減圧留去した。残渣に2N HClを加えて塩化メチレンで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：塩化メチレン/n−ヘキサン＝1:1）で精製し、デセニル体の淡黄色油状物11.3gを得た（収率:84％）。
LiBH42.7gをTHF500mlに溶解し、上記の化合物11.2gを加えて室温で16時間攪拌した。溶媒を減圧留去し、残渣に水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、10％クエン酸水溶液、水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：塩化メチレン／酢酸エチル＝10:1）により精製して、メチルエステルが還元されたヒドロキシメチル体の淡黄色油状物7.64gを得た（収率:82％）。
NaH1.20gをｎ−ヘキサンで洗浄して減圧乾燥し、アルゴンで置換した後、トルエン40mlを加えて懸濁させた。この懸濁液に上記の化合物0.64gのトルエン溶液（80ml）に加えた。さらに、ｐ−トルエンスルホニルクロライド5.75gのトルエン溶液（50ml）を加え、０℃で２時間攪拌した。反応液を10％クエン酸水溶液に注ぎ、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：塩化メチレン/n−ヘキサン＝1:1）により精製して、水酸基がトシル化された化合物の淡赤色油状物10.77gを得た（収率:92％）。
NaH1.15gをｎ−ヘキサンで洗浄して減圧乾燥した。アルゴンで置換した後、DMF150mlを加えて懸濁し、ジエチルアセトアミノマロネート6.67g加えて室温で30分間攪拌した。上記のトシル体10.77gのDMF溶液（100ml）を加えて室温で15.5時間攪拌した。反応液に少量の2N HClを加えた後、溶媒を減圧留去した。残渣に2N HClを加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した。溶媒を減圧留去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：塩化メチレン／酢酸エチル＝10:1）により精製して、マロン酸エステル付加物の淡黄色柱状晶9.12gを得た（収率:77％）。
元素分析:C26H38N2O7  理論値  N:5.71％  C:63.65％  H:7.81％
実測値  N:5.74％  C:63.44％  H:7.90％
上記化合物9.12gを酢酸20ml及び濃塩酸50mlの混合物に溶解し、24時間還流した後に溶媒を減圧留去してアミノ酸化合物を得た。無水エタノール100mlを−40℃に冷却し、−20℃以下に保ちながら塩化チオニル20.86gを滴下混合した。この混合物に上記のアミノ酸の無水エタノール溶液（40ml）を−40℃で加えた。反応液を−40℃で１時間、さらに室温で30時間攪拌した。溶媒を減圧留去した後、残渣に飽和重曹水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。得られた残渣を塩化メチレン200mlに溶解し、Boc2O5.04gを加えて室温で18時間攪拌した。溶媒を減圧留去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：塩化メチレン）により精製して、アミノ基がBoc基で保護されたエチルエステル体の淡黄色油状物8.10gを得た（収率:91％）。
LiBH41.28gをTHF150mlに懸濁して０℃に冷却し、上記の化合物8.10gのTHF溶液（50ml）を加えて０℃で１時間、さらに室温で17.5時間攪拌した。溶媒を減圧留去し、残渣に水を加えて塩化メチレンで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ヒドロキシメチル体の無色針状晶3.93gを得た（収率:49％）。mp91−93℃。
元素分析:C24H38N2O5  理論値  N:6.45％  C:66.33％  H:8.81％
実測値  N:6.49％  C:66.20％  H:8.76％
上記の化合物2.44gをメタノール200mlに溶解し、Pd/C240mgを加えて水素気流下で10時間攪拌した。Pd/Cを濾去し、濾液を濃縮した。残渣を酢酸エチル−ｎ−ヘキサンから再結晶して、側鎖の二重結合とニトロ基とが還元された還元体の無色柱状晶2.09gを得た（収率:92％）。mp115℃。
元素分析:C24H42N2O3  理論値  N:6.89％  C:70.89％  H:10.41％
実測値  N:6.82％  C:70.69％  H:10.19％
蟻酸1.22g及び無水酢酸2.66gの混合物を75−80℃で３時間攪拌した後、THF5mlを加えて０℃に冷却した。この混合酸無水物に上記の還元体1.99gのTHF溶液（30ml）を加えて、０℃で30分間、さらに室温で２時間攪拌した。溶媒を減圧留去し、残渣に飽和重曹水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：酢酸エチル/n−ヘキサン＝1:1）により精製して、ホルムアニリド体の無色針状晶1.97gを得た（収率:93％）。mp93℃。
元素分析:C25H42N2O4  理論値  N:6.45％  C:69.09％  H:9.74％
実測値  N:6.47％  C:68.81％  H:9.57％
上記化合物1.89gをTHF300mlに溶解して０℃に冷却し、1.0M BH3のTHF溶液19.0mlを加えて０℃で2.5時間攪拌した。反応液に10％クエン酸水溶液を加えた後、溶媒を減圧留去した。残渣に飽和重曹水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：酢酸エチル/n−ヘキサン＝1:1）により精製してメチルアニリン体の無色柱状晶1.82gを得た（収率:99％）。mp53−55℃
元素分析:C25H44N2O3  理論値  N:6.66％  C:71.39％  H:10.54％
実測値  N:6.67％  C:71.12％  H:10.45％
実施例１と同様にして（＋）−ベンジル３−メチル−２−トリフルオロメチルスルホニル−オキソブタノエート808mgを上記の化合物878mgに反応させて、無色油状物質1.095gを得た（収率:86％）。さらに、実施例１と同様の方法によって接触還元とスクシンイミド化を行い、上記の化合物1.09gから無色油状物質930mgを得た（収率:84％）。
実施例１と同様の方法により、上記の化合物930mgから、（−）−BL−V8−210 240mg（収率:40％）及び（−）−epi−BL−V8−210 231mg（収率:38％）を得た。
0003647451.tif 000009
実施例１と同様の方法により（−）−ベンジル３−メチル−２−トリフルオロメチルスルホニル−オキソブタノエート515mgを上記のメチルアニリン体701mgに反応させて無色油状物質849mgを得た（収率:83％）。さらに、実施例１と同様の方法によって接触還元とスクシンイミド化を行い、上記の化合物849mgから無色油状物688mgを得た（収率:80％）。
実施例１と同様の方法により、上記の化合物688mgから、（＋）−BL−V8−210 209mg（収率:47％）及び（＋）−epi−BL−V8−210 193mg（収率:43％）を得た。
0003647451.tif 000010
実施例９  （−）−BL−V8−N10、（＋）−epi−BL−V8−N10の合成
実施例５で製造したアニリン体（C14H22N2O3、mp130.5−131.5℃）1.37gを無水メタノール35mlに溶解した。この溶液にｎ−カプリンアルデヒド1.22g及びNaBH3CN0.55gを加えて、室温で３日間攪拌した。溶媒を減圧留去し、残渣に10％クエン酸水溶液を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：酢酸エチル/n−ヘキサン＝1:2）により精製してｎ−デカニル体の無色針状晶977mgを得た（収率:47％）。mp52−54℃
上記の化合物590mgを2,6−ルチジン3.0mlに溶解し、（＋）−ベンジル３−メチル−２−トリフルオロメチルスルホニル−オキソブタノエート550mgを加えて、110℃で５日間攪拌した。反応液を後処理した後、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して無色油状物質80mgを得（収率:10％）、さらに実施例１と同様の方法によって、上記の化合物160mgから無色油状物の（−）−epi−BL−V8−N10 53mg
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同様に、（−）−ベンジル３−メチル−２−トリフルオロメチルスルホニル−オキソブタノエート260mg及び上記のＮ−デカニル体605mgから無色油状物75mgを得（収率:9％）、実施例１と同様の方法により、上記の化合物132mgから、無色油状物の（＋）−epi−BL−V8−N10 36mg
0003647451.tif 000012
実施例10  （−）−BL−V8−C10、（−）−epi−BL−V8−C10の合成
実施例８のホルムアニリド体の製造方法に従って、実施例５で製造したアニリン体（C14H22N2O3、mp130.5−131.5℃）1.50gからホルムアニリド体の淡黄色油状物1.26gを得（収率:76％）、さらに実施例８の方法に従ってBH3により還元して、上記の化合物1.26gからメチルアニリン体の無色柱状晶950mgを得た（収率:79％）。mp102−104℃
元素分析:C15H24N2O3  理論値  N:9.99％  C:64.26％  H:8.63％
実測値  N:9.75％  C:64.22％  H:8.71％
金属ナトリウム6.70gを無水エタノール350mlに溶解し、ジエチルアセトアミノマロネート66.0gを加えた。この溶液を室温で30分間攪拌した後、ｎ−デシルブロミド68.95gを加えて室温で１時間攪拌した後、さらに１時間加熱還流した。溶媒を減圧留去し、残渣に2N塩酸を加えて塩化メチレンで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、マロン酸エステル付加物の無色不定形結晶99.1gを得た（収率:95％）。mp45−46℃。
元素分析:C19H35NO5  理論値  N:3.92％  C:63.84％  H:9.87％
実測値  N:4.10％  C:64.07％  H:9.97％
上記の化合物99.1gを酢酸120ml及び濃塩酸100mlに溶解し、6.5時間加熱還流した。反応液に水1lを加えて、4N水酸化ナトリウム水溶液で中和した。該溶液を十分に冷却した後、沈殿を濾取した。得られた沈殿物を少量の水、メタノール、エーテルで洗浄し、減圧乾燥して、無色粉末の（±）−−ｎ−デカニルグリシン53.8gを得た（収率:90％）。mp220℃（分解）
上記化合物51.1gを2N水酸化ナトリウム水溶液120mlに溶解し０℃に冷却した。クロロアセチルクロライド62gを2N水酸化ナトリウム水溶液200mlに溶解して、上記の溶液に０℃で２時間かけて滴下混合した。反応液に濃塩酸を加えてpH＝１〜２に調整し、沈殿を濾取した。得られた沈殿物を酢酸エチルに溶解し、水、飽和食塩水で順次洗浄し、Na2SO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をアセトン−ｎ−ヘキサンから再結晶してアシルアミノ体の無色針状晶20.5gを得た（収率:63％）。mp91℃。
元素分析:C14H26NO3Cl  理論値  N:4.84％  C:57.62％  H:8.98％
実測値  N:4.68％  C:57.91％  H:8.79％
上記アシルアミノ体22.56g及び水酸化ナトリウム3.44gを精製水800mlに溶解した。この溶液に3N塩酸を加えてpH7.27に調整し、さらに精製水2lを加えた。アスパルギラス・アミノ・アシラーゼ（Aspergillus amino acylase）（東京化成株式会社、日本国）3.58g及び塩化コバルト15mgをこの溶液に加えて、37℃で19時間静置した。反応液から沈殿を濾取し、減圧乾燥して、無色粉末の（Ｓ）−ｎ−デカニルグリシン8.22gを得た（収率:49％）。mp220℃。
上記の濾液を37℃でさらに22時間静置した後に濾過し、濾液を濃塩酸でpH1に調整して生じた沈殿を濾取した。沈殿を酢酸エチルに溶解し、2N塩酸、水、飽和食塩水の順に洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をアセトン−ｎ−ヘキサンから再結晶して、無色板状晶の（Ｒ）−ｎ−デカニルグリシンのアミノアシル体7.92gを得た（収率:35％）。mp79−80.5℃。
元素分析:C14H26NO3Cl  理論値  N:4.84％  C:57.62％  H:8.98％
実測値  N:4.79％  C:57.84％  H:9.15％
上記の（Ｒ）−アミノアシル体5.60gを3N塩酸100mlに懸濁し、4.5時間還流した。該反応液をアンモニア水で中和し、沈殿を濾取した。取られた沈殿物を少量の水、メタノール、酢酸エチルで洗浄し、減圧乾燥して、無色粉末の（Ｒ）−ｎ−デカニルグリシン4.74gを得た（収率:99％）。mp205℃（分解）。
（Ｒ）−ｎ−デカニルグリシン2.69gを2N硫酸100mlに溶解し、95℃に加熱した。これに、亜硝酸ナトリウム2.00gの水溶液（23ml）を約１時間かけて滴下混合し、さらに95℃で2.5時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥した後溶媒を留去した。残渣を無水ベンゼン50ml及びベンジルアルコール8.5mlに溶解し、塩化チオニル1.0mlを加えて、ディーン・スターク・トラップにより水を共沸留去しながら10時間還流した。さらに塩化チオニル1.0mlを加えて16時間還流した。溶媒を減圧留去し得られた残渣に飽和重曹水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を水、10％クエン酸水溶液、水、飽和食塩水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、（Ｒ）−ヒドロキシベンジルエステル体の無色油状物2.04gを得た
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上記の化合物1.17gを無水塩化メチレン20ml及び2,6−ルチジン0.95gに溶解して−40℃に冷却し、無水トリフレート1.92gを加えて−40℃で１時間攪拌した。反応液に水を加えて塩化メチレンで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：酢酸エチル/n−ヘキサン＝1:5）により精製して、（Ｒ）−トリフレート体の無色液体1.24gを得た
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実施例１の方法に準じて上記メチルアニリン体（mp102−104℃、C15H24N2O3）640mg及び上記（Ｒ）−トリフレート体978mgから無色油状物1.01gを得（収率:80％）、さらに実施例１と同様の方法により、上記の化合物1.01gから、（−）−BL−V8−C10 171mg（収率:27％）及び（−）−epi−BL−V8−C10 151mg（収率:24％）を得た。（−）−BL−V8−C10はＮ−トシル−Ｌ−バリンのエステル体に導いて光学的に純粋にした。（−）−epi−BL−V8−C10は同様な方法では光学的に純粋にすることができず、80％eeの光学純度であった。
0003647451.tif 000015
同様の方法により、（Ｓ）−ｎ−デカニルグリシン5.75gからヒドロキシベンジルエステル体の無色油状物1.96gを得た
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さらにこの化合物900mgから無色油状物質の（Ｓ）−トリフレート体991mgを得た
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実施例１に準じ、上記メチルアニリン体（mp102−104℃、C15H24N2O3）435mg及び上記トリフレート体770mgから無色油状物質651mgを得（収率:74％）、さらに実施例１と同様の方法によって上記化合物651mgから（＋）−BL−V8−C10 124mg（収率:30％）、および（＋）−epi−BL−V8−C10 110mg（収率:27％）を得た。（＋）−BL−V8−C10は（−）−BL−V8−C10と同様にして光学的に純粋にした。（＋）−epi−BL−V8−C10は80％eeの光学純度であった。
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実施例11  （±）−BL−V8−23Tの合成
2,5−ジクロロ−2,5−ジメチルヘキサン67.5g（0.369mol）を、乾燥トルエン200mlに溶解し、AlCl34.05g（30.4mmol）を砕いて少量ずつ加えた。２時間放置した後、該反応液を氷−５％HClに注ぎ、ヘキサンで抽出した。有機層を水、重炭酸ナトリウム水溶液、水で各２回ずつ洗浄し、MgSO4で乾燥して、溶媒を留去した。残渣を蒸留して、5,6,7,8−テトラヒドロ−2,5,5,8,8−ペンタメチルナフタレン70.42gを得た（収率:90％）。bp100℃（室温で固化）。
上記の化合物60gを酢酸240mlに溶解して氷冷し、硝酸30ml（２当量）及び硫酸63ml（４当量）を反応液温を10−15℃に保ちながら20分かけて加えた。反応液を室温に戻し、４時間攪拌した。氷冷下に冷水500mlを加え、析出した淡黄色沈殿を濾取して水でよく洗浄した。得られた沈殿物を塩化メチレンに溶解し、1N NaOH水溶液、水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥して溶媒を留去した。残渣をエタノールから再結晶して３−ニトロ体の無色葉状晶45.55gを得た（収率:62.1％）。mp150.5−152℃。
元素分析:C15H21NO2  理論値  N:5.66％  C:72.84％  H:8.56％
実測値  N:5.86％  C:73.08％  H:8.56％
上記化合物42gをCCl4400mlに溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド33.3g（1.10当量）を加えて懸濁し、さらにAIBN560mg（0.02当量）を加えて還流した。１時間後、AIBN560mg（0.02当量）を加えてさらに３時間還流した。反応液を冷却してｎ−ヘキサン600mlを加え、濾過して不溶物を除去し、濾液を濃縮した。残渣に少量のｎ−ヘキサンを加え、冷却して固化させた。得られた固体をｎ−ペンタンから再結晶し、さらにｎ−ヘキサンから２回再結晶して、ベンジルブロミド体の淡黄色針状晶23.2gを得た（収率:41.9％）。mp87.5−89℃。
元素分析:C15H20NO2Br  理論値  N:4.29％  C:55.23％  H:6.18％
実測値  N:4.16％  C:55.23％  H:6.29％
NaH2.8g（純度60％,1当量）をｎ−ヘキサンで洗浄し、DMF50mlを加えて懸濁させた。この懸濁液にマロン酸ジエチルアセトアミド15.3g（１当量）のDMF溶液（25ml）を加えた。続いて上記ベンジルブロミド体23gをDMF25mlに溶解して０℃で加え、室温で４時間攪拌した。反応液を氷水中に注いで塩化メチレンで抽出し、MgSO4で乾燥して、溶媒を留去した。塩化メチレン−ヘキサンから再結晶し、マロン酸ジエチルアセトアミド付加物の淡黄色柱状晶23.37gを得た（収率:71 9％）。mp132−133℃。
元素分析:C24H34N2O7  理論値  N:6.06％  C:62.32％  H:7.41％
実測値  N:6.16％  C:62.16％  H:7.40％
上記の化合物22.7gを10％NaOH水溶液100ml（５当量）中で75分間還流した後、氷冷した。反応液に濃塩酸を加えて酸性とし、十分に冷却して沈澱を濾取した。得られた沈澱物を少量の水で洗浄し、80℃で２時間にわたり減圧乾燥した。得られた脱エステル体を水55mlに懸濁し、３時間還流した。その後、沈澱を濾取して冷水で洗浄し、80−90℃で４時間減圧乾燥して脱炭酸体12.4gを得た。無水エタノール60ml中にSOCl210mlを−10℃で徐々に加え−10℃でさらに10分間攪拌した。この溶液に上記脱炭酸体12.4gを加え、室温で１時間、さらに60℃で３時間攪拌した。エタノールを60℃で減圧留去し、炭酸ナトリウムと水を加えて塩化メチレンで抽出した。有機層を濃縮し、得られた残渣をエタノールに溶解して活性炭で処理した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：塩化メチレン／酢酸エチル＝15:1）に付して精製した後、塩化メチレン−ｎ−ヘキサンから再結晶してエチルエステル体の淡黄色葉状晶10.01gを得た（収率:52.2％）。mp184.5−186℃。
元素分析:C21H30N2O5  理論値  N:7.17％  C:64.60％  H:7.74％
実測値  N:7.04％  C:64.43％  H:7.62％
上記の化合物9.87gを塩酸飽和エタノール110mlに溶解し、48時間還流した。塩酸−エタノールを減圧留去し、エタノール50mlを加えて留去し、さらにエタノール50mlを加えて留去した。残渣を水に溶解し、炭酸水素ナトリウムを加えて塩基性にした後、塩化メチレンで抽出した。MgSO4で乾燥して、溶媒を留去し、残渣をｎ−ヘキサンから再結晶してアミノ脱保護体の淡黄色針状晶7.44gを得た（収率:84.5％）。mp86−87℃。
元素分析:C19H28N2O4  理論値  N:8.04％  C:65.49％  H:8.10％
実測値  N:7.95％  C:65.62％  H:8.31％
上記のアミノエステル体7.35gをジオキサン40ml及び水20mlの混合液に溶解し、炭酸水素ナトリウム4.44g（2.5当量）を加えて攪拌した。この反応液にBoc−N36.04g（２当量）を加え45−50℃で40時間攪拌した。さらに、Boc−N33.02g（１当量）及び炭酸水素ナトリウム2.22g（1.25当量）を加えて、同温度で24時間攪拌を続けた。その後、反応液に水50mlを加え、減圧濃縮してジオキサンを除去した。残渣に水50mlを加えて油状の生成物を固化させた。生成物を濾取して水で十分に洗浄した後、塩化メチレンに溶解して、水、10％クエン酸水溶液、水で順次洗浄し、MgSO4で乾燥して溶媒を留去した。残渣をｎ−ヘキサンから再結晶し、Ｎ−Boc体の無色板状晶8.79gを得た（収率:92.9％）。mp131−132℃。
元素分析:C24H36N2O6  理論値  N:6.25％  C:64.26％  H:8.09％
実測値  N:6.23％  C:64.305  H:8.16％
上記の化合物8.65gをTHF70mlに溶解して０℃で攪拌し、LiBH41.0gのTHF溶液（30ml）を加えて０℃で１時間、さらに30℃で２時間攪拌した。反応液に水200mlを注意深く加え、塩化メチレンで抽出した。有機層を10％クエン酸水溶液、水の順に洗浄し、MgSO4で乾燥して溶媒を留去し、ヒドロキシメチル体の油状物6.60gを得た（収率:84.2％）。
上記の化合物3.3gを酢酸エチル−１％H2O500mlに溶解し、10％Pd/C2.0gを加えて水素を１気圧、室温で添加して４時間接触還元した。Pd/Cを濾去し、濾液を濃縮した。得られた残渣をｎ−ヘキサンから再結晶し、アニリン体の無色柱状晶2.77gを得た（収率:90.6％）。mp112.5−114℃。
元素分析:C22H36N2O3  理論値  N:7.44％  C:70.18％  H:9.64％
実測値  N:7.28％  C:70.26％  H:9.93％
上記の化合物3.05gをベンゼン40mlに溶解し、メチル２−オキソイソバレレート3.16g（３当量）を加えて、アルゴン下に24時間共沸還流した。ベンゼンおよびメチル２−オキソイソバレレートを減圧留去し、得られた残渣をTHF40mlに溶解した。この溶液にNaBH3CN1.0g（２当量）を加えて、室温で３時間放置した。40℃で反応液を10mlまで減圧濃縮した後、10％クエン酸水溶液100ml及び塩化メチレン50mlを加えて２時間攪拌した。この混合物を塩化メチレンで抽出し、有機層をMgSO4で乾燥して溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：塩化メチレン／酢酸エチル＝15:1）により精製してイミノ体とエナミン体の混合物を得た。この混合物をメタノール300mlに溶解し、10％Pd/C3.05gを加えて水素を１気圧、室温で添加して５時間接触還元した。Pd/Cを濾去した後、濾液を濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：塩化メチレン／酢酸エチル＝12:1）で精製して、異性体混合物2.95gを得た（収率:74.2％）。
上記の異性体混合物2.85gをメタノール48mlに溶解し、2N水酸化カリウム14.5ml（５当量）を加えて60℃で１時間攪拌した後、メタノールを40℃で減圧留去した。濃縮物に氷冷下で10％クエン酸水溶液を加えて酸性とし、酢酸エチルで抽出した後、溶媒を留去して脱エステル体を得た。この脱エステル体を直ちにCH3CN16mlに溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシニミド1.34g（２当量）を加えて、０℃に冷却した。この溶液にDCC1.80g（1.5当量）のCH3CN溶液（6ml）を加えて、０℃で１時間、さらに室温で２時間放置した。溶媒を留去して得られた残渣を酢酸エチルに溶解し、不溶物を濾過して除去した。濾液を濃縮して、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：塩化メチレン／酢酸エチル＝40:7）で精製し、活性エステルの異性体混合物を無色液体として得た（2.35g、収率:70.5％）。
上記の混合物2.30gを塩化メチレン15mlに溶解して０℃に冷却した後に、CF3COOH15mlを加え、アルゴン置換して１時間放置した。溶媒を室温で減圧留去し、残渣に水50mlを加えて、過剰量の炭酸水素ナトリウムを加えた。さらに酢酸エチル70mlを加えて１時間還流した。酢酸エチル層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせてMgSO4で乾燥し、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：塩化メチレン／酢酸エチル＝1:2）で精製して、２種の異性体を分離した（総収率:52.7％）。
異性体A:393mg、無色板状晶、mp215−216℃。
異性体Ｂ（epi−体）:364mg、無色板状晶、mp265−268℃。
上記異性体Ｂ（epi−体）150mgをメタノール5mlに溶解し、炭酸水素ナトリウム250mgを加え、さらにCH3I7.5mlを加えて44時間還流した。メタノール及びCH3Iを留去した後、残渣に水を加えてクロロホルムで抽出した。有機層を乾燥した後に溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：塩化メチレン／酢酸エチル＝3:2）で精製し、無色針状晶のepi−BL−V8−23T132.4mg（収率:84.7％）を得た。mp247−248℃。
元素分析:C23H36N2O2  理論値  N:7.52％  C:74.15％  H:9.74％
実測値  N:7.52％  C:74.08％  H:9.71％
上記異性体A200mgをメタノール7mlに溶解し、炭酸水素ナトリウム300mgを加え、さらにCH3I11mlを加えて、48時間還流した。メタノール及びCH3Iを留去した後、残渣に水を加えてクロロホルムで抽出した。有機層を乾燥した後に濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：塩化メチレン／酢酸エチル＝2:1）で精製し、無色針状晶のBL−V8−23T135.0mg（収率:65.0％）を得た。mp255−256℃。
元素分析:C23H36N2O2  理論値  N:7.52％  C:74.15％  H:9.74％
実測値  N:7.41％  C:74.43％  H:9.70％
試験例
実施例で得た本発明のベンゾラクタム誘導体の抗レトロウイルス活性および細胞毒性試験を行った。
（１）抗ウイルス活性
（Ａ）HIV（HIV−1IIIB株）持続感染ヒトＴ細胞株MOLT−4 clone8を10％牛胎児血清添加RPMI−1640培地で培養した後、上清を濾過してウイルスの力価を測定し−80℃で保存した。他方、被検化合物を上記の培養培地で所定の濃度になるように希釈して、96穴マイクロプレートに50μｌずつ分注した。続いて、MT−４細胞浮遊液を100μｌ（3.5×104細胞）ずつ分注し、さらに上記HIV含有上清を上記の培地で希釈して50μｌ（60 plaque forming unit）ずつ加えた。
（Ｂ）この96穴マイクロプレートを37℃の炭酸ガス培養器内で５日間培養した後、全てのウェルにMTT［３−（4,5−ジメチルチアゾール−２−イル）−2,5−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド,5mg/ml,PBS］を30μｌずつ加え、さらに１時間培養した。この時点で、生存している細胞はMTTを還元してフォルマザンを析出させた。すべてのウェルから培養上清を150μｌずつ取り除き、代わりに150μｌの溶解液（10％トリトンＸ−100および0.4％（V/V）HCl添加イソプロパノール）を加え、プレートミキサーで振とうしてフォルマザンを溶出した。溶出したフォルマザンをO.D.540nmで測定し、結果を対照と比較した。ウイルスによる細胞障害を50％抑制する化合物濃度をEC50（μg/ml）とした。なお、いずれも溶媒としてDMSOを用い、被検濃度を0.0001−10μg/mlとした。
（２）細胞毒性
上記の抗ウイルス活性試験の（Ａ）において、HIV含有上清（ウイルス液）の代わりに各ウェルに培養培地を50μｌずつ加え、（Ｂ）と同様に処理して被検化合物のMT−４細胞に対する毒性を調べた。各被検化合物による細胞毒性が50％である濃度をCC50（μg/ml）とした。結果を以下の表２に示す。
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産業上の利用可能性
本発明のベンゾラクタム誘導体は、抗レトロウイルス作用を有しており、細胞毒性等の副作用が低減されているので、レトロウイルス感染症、例えばエイズの治療や予防に有用である。