(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
茶葉サポニン類を抗アレルギー薬効成分として含有することを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項２】
茶葉サポニン類を抗炎症薬効成分として含有することを特徴とする抗炎症剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は茶葉サポニン類を薬効成分として含有する薬剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
日本農芸化学会誌４０（１）８（１９６６）および同４３（１１）７５０（１９６９）には、茶葉から茶葉サポニン類を結晶として単離し、この茶葉サポニン類が数種類のサポニン類の混合物であり、化学的にはトリテルペノイド系サポニンであり、茶種子からのサポニン類とは異なることが報告されている。
【０００３】
Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌ  Ｆｏｌｓｈ、１８  １４６６（１９６８）には、茶種子サポニン類についての比較的詳しい研究が報告されており、茶種子サポニン類の生理活性として抗炎症作用のあることが記載されている。
また、前出の日本農芸化学会誌４０（１）８（１９６６）には、茶葉サポニン類を構成するサポニンと有機酸についての報告がなされている。茶を９７％メタノールで抽出し、エーテルを加えて生じた沈澱を乾燥後水に溶解し、茶葉サポニン類を得たことが記載されている。
【０００４】
特開昭６０−１２３４２４号公報には、半発酵茶の葉などを脂溶性有機溶媒で脱脂し、得られた原料茶を温水で膨潤させ、低級脂肪族アルコールで抽出し、１００℃以下の温度で減圧下に溶媒を留去させ、得られたエキスを水とｎ−ブタノールで分配処理し、ブタノール層から溶媒を留去せしめるかあるいは該エキスを水に溶かしポリスチレン系樹脂に吸着させ、低級脂肪族アルコールで溶出させ、そして溶媒を留去して茶葉サポニンを製造する方法およびかくして得た茶葉サポニンを主成分として含む保健剤が開示されている。
特開昭５９−２２４６６８号公報には、茶サポニンにα−グリコシル基を結合せしめたα−グリコシル茶サポニンを含有する飲食物が開示されている。
特開平２−６９４０６号公報には、茶種子に含まれるサポニンをミミズの糞塚防止剤として使用することが開示されている。
特開平４−１４５０２８号公報には、茶サポニンを配合してなるアルコール吸着抑制剤が開示されている。
特開平１−４０４９４号公報には、モントプレチア（Ｃｒｏｃｏｓｍｉａ  ｃｒｏｃｏｓｍａｅｐｌｏｒａ）の球根のメタノール抽出物から得られたサポニンを含有する強心剤が開示されている。
また、特開平１−２４２５９５号公報には、野木瓜［アケビ科（Ｌａｒｄｉｚａｂａｌ  ａｃｅａｅ）Ｓｔａｕｎｔｏｎｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ］の主幹、分岐、茶および全植物のエタノール抽出物から得られたサポニンが肝細胞保護作用を有することが開示されている。
【０００５】
一方、従来茶葉サポニンが抗アレルギー作用を有することは知られていない。アレルギー反応は、関与する細胞や抗体の種類によってＩ〜ＩＶ型に分類されるが、その中でも発生頻度の高いのがＩ型で、最近増加している花粉症や気管支喘息はこれに含まれる。Ｉ型アレルギー反応では、生体が抗原に感作されてＩｇＥ抗体が産生され、再び抗原が侵入すると、肥満細胞や好塩基球に結合したＩｇＥ抗体と反応し、ヒスタミンやロイコトリエン、血小板活性化因子などの様々なケミカルメディエーターがこれらの細胞から放出され、アレルギー症状が発現される。抗アレルギー剤は、これらのケミカルメディエーターの合成、放出、作用を抑制してアレルギー症状を緩和するものである。様々なケミカルメディエーターの中でも、ロイコトリエンは気管支喘息等のアレルギー性疾患において重要な役割を果たしており、この拮抗剤が有力な抗アレルギー剤になり得るとして注目を浴びている。
【０００６】
【本発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、茶葉サポニンが抗アレルギー作用および抗炎症作用を発現するという事実の発見に基づいて、天然物、特に食品成分由来の、安全性の高い茶葉サポニンを含有する抗アレルギー剤および抗炎症剤を提供することにある。
本発明のさらに他の目的および利点は以下の説明から明かとなろう。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
茶葉サポニン類については、単離するのに煩雑な操作が必要なため、その生理活性についてはほとんど知られていない。本発明者は、従来法より簡便に茶葉サポニン類を分離する方法を究明し、これより製造された茶葉サポニン類が顕著な抗炎症作用、およびロイコトリエン拮抗作用を有することを見いだして、本発明を完成するに至った。
【０００８】
本発明によれば、本発明で用いられる茶葉サポニン類は、（１）茶葉そのまま、あるいは茶葉を蒸熱したものを準備し、
（２）有機溶剤で処理して脱脂した後含水低級アルコールで抽出するか、あるいは含水低級アルコールで抽出した後有機溶剤で処理して脱脂し、
（３）カテキン類を除去し、次いで
（４）クロマトグラフィーに付して茶葉サポニン類を分離し取得する
ことによって製造される。
【０００９】
上記方法では、工程（１）において、先ず茶（Tea sinennsis L）の葉すなわち茶葉を準備する。茶葉は、摘採後そのままあるいは摘採後直ちに蒸熱し、必要により次いで乾燥して準備される。
【００１０】
工程（２）では、工程（１）で準備した茶葉を有機溶剤と含水低級アルコールによって処理する。すなわち、有機溶剤によって茶葉を脱脂し、含水低級アルコールで茶葉サポニン類を抽出する。茶葉を有機溶剤で脱脂したのち含水低級アルコールで抽出するかあるいは逆に茶葉を含水低級アルコールで抽出したのち有機溶剤で脱脂してもよい。有機溶剤としては、例えばシクロヘキサン等が好適に使用される。また、含水低級アルコールの低級アルコールとしては、炭素数１〜２の低級アルコールが好ましく、とりわけメタノールが好適に使用される。含水低級アルコールの含水率は３〜１０重量％が好ましい。
茶葉を有機溶剤で脱脂する際には、温度１０〜４０℃、時間２〜２４時間が好ましい。その後の含水低級アルコールによる抽出は、温度１０℃〜沸点以下、時間２〜２４時間の条件で実施するのが好ましい。
一方、茶葉を先ず含水低級アルコールで抽出する場合には、温度１０℃〜沸点以下、時間２〜２４時間の条件が好ましく採用される。次いで、含水低級アルコール抽出物を有機溶剤で脱脂する際には、まずアルコールを減圧留去し、次いで水に分散して、温度１０〜４０℃、時間２〜２４時間処理するのが好ましい。
上記脱脂および抽出の操作は１回あるいは２回以上複数回行うことができる。
【００１１】
工程（３）では、工程（２）で得られた抽出物から、好ましくはそれを減圧乾固して水に溶解したものから、カテキン類を除去する。カテキン類の除去は不溶性ビニルピロリドンで処理する方法や公知の方法によって実施することができる。  不溶性ポリビニルピロリドンによる処理は、工程（２）で得られた抽出物の固形分の水溶液について実施するのが好ましい。処理は回分式および連続式のいずれによって行うこともできる。
不溶性ポリビニルピロリドンによる処理は、好ましくは温度１０〜４０℃の温度で実施される。
カテキン類は不溶性ポリビニルピロリドンに吸着されて除去される。
【００１２】
また、公知の方法としては、抽出物の水溶液に茶葉サポニン不溶の有機溶媒例えば酢酸エチル、メチルイソブチルケトン、アセトンなどを添加し、カテキン類を抽出する方法、あるいはヒドロキシプロピル化デキストランゲルまたは親水性ビニルポリマーゲルを充填したカラムクロマトグラフィーに付してカテキン類を吸着させて除去する方法が挙げられる。茶葉サポニンは水及び５〜１５％のメタノール又はエタノールで溶出される。
カテキン類の除去は上記方法の単独又は組合せて実施することができる。
【００１３】
次いで、工程（４）において、カテキン類を除去された水溶液は、クロマトグラフィーに付される。好ましくは、クロマトグラフィーに付す前に、カテキン類除去された水溶液を水飽和ブタノールで抽出し、水飽和ブタノール層を分離し、それからブタノールを留去して、工程（４）のための水溶液を準備する。
【００１４】
クロマトグラフィーはシリカゲルカラムクロマトグラフィー、浸水型逆相充填剤カラムクロマトグラフィーおよび合成吸着剤カラムクロマトグラフィーよりなる群から選らばれる１つ又は２つ以上の組合せであることができる。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーでは、クロロホルム／メタノール／水の混液例えばこの順の容積比が２〜３／１／０．１〜０．２の混液で溶出するのが好ましい。
また、浸水型逆相充填剤カラムクロマトグラフィーおよび合成吸着剤カラムクロマトグラフィーでは、水、メタノールまたはこれらの任意の割合の混液で溶出するのが好ましい。就中／水から水／メタノール、メタノールへと順次濃度を変えて溶出するのが好ましい。
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）でサポニンを検出してサポニン分画を集めることにより、茶葉サポニン類を得る。かくして得られた茶葉サポニン類は淡黄色〜淡褐色の粉末で、水、メタノールに易溶、エタノールに難溶、含水エタノールに可溶、アセトンに不溶である。
【００１５】
一般に、サポニンは溶血性を示すものが多いが、上記方法により得られた茶葉サポニン類は、５０μｇ／ｍｌの濃度においても溶血性を示さないことが、本発明者の研究により明かとなった。
また、本発明者の研究によれば、さらに、上記方法により得られた茶葉サポニン類は優れた抗アレルギー作用（ロイコトリエン括抗作用）および抗炎症作用を示すことも明らかとされた。
それ故、本発明によれば、茶葉サポニン類を抗アレルギー薬効成分として含有することを特徴とする抗アレルギー剤、並びに茶葉サポニン類を抗炎症薬効成分として含有することを特徴とする抗炎症剤が提供される。
【００１６】
本発明の抗アレルギー剤並ませびに抗炎症剤（以下、本発明の薬剤という）は、例えば錠剤、カプセル剤の如き経口投与に適した剤形；軟膏、湿布剤の如く経皮投与に適した剤形；エアゾル、溶液の如き吸入投与しスプレーに適した剤形、無菌水溶液の如き非経口投与（注射）に適した剤形；肛門、膣、直腸等に投与するに適した坐剤の形態で使用される。好ましくは経口又は局所投与される。
【００１７】
本発明の薬剤は、茶葉サポニンを薬効成分として含有する他に、必要に応じ、薬学的にまたは獣医学的に許容される希釈剤または担体を含有することができる。
本発明の薬剤は、好ましくは、希釈剤または担体を含有する。薬剤組成物を基準として、好ましいくは約０．１〜９９．５重量％、さらに好ましくは約０．５〜９５重量％の茶葉サポニン類を含有する。
また、本発明の薬剤は、必要により、薬学的にまたは獣医学的に活性な他の薬効成分を含有することができる。
【００１８】
本発明の薬剤の投与量は、治療する症状の種類と程度および個人差（年令、性別、感受性等）によって、変えるのが望ましい。
本発明の薬剤の投与量は、茶葉サポニンとして、１日当り、成人１人当り、例えば経口内投与では、好ましくは１０〜２，０００ｍｇである。
本発明の薬剤の投与は、１日１回あるいは１日数回に分けて行うことができる。
【００１９】
【実施例】
参考例１（茶葉サポニンの製造）
蒸熱した茶葉３ｋｇ（湿重量）を９７％メタノール１２リットルにて室温で抽出し、抽出液を減圧乾固して水に分散して、脂溶成分をシクロヘキサンで抽出除去した。さらに不溶性ポリビニルピロリドン（商品名：ポリクラーＡＴ）で処理し、カテキン類を除去した。これに水飽和ブタノールを加えて分配し、ブタノール層を減圧乾固した後、水に溶解した。これを浸水型逆相充填剤（商品名：COSMOSIL C18-OPN（ナカライテスク）を充填したオープンカラムクロマトグラフィーにかけて、０〜１００％のメタノールで溶出した。薄層クロマトグラフィーでサポニンを検出し、サポニン分画を集め、再度クロマトグラフィーにかけ、茶葉サポニン混合物１.２８ｇを得た。
【００２０】
得られた茶葉サポニンは、淡黄色〜淡褐色の粉末で、水、メタノールに易溶であり、薄層クロマトグラフィー（ブタノール／酢酸／水＝４／１／１．５で展開、１％硫酸セリウム／１０％硫酸を噴霧、加熱して発色）では単一のスポットを与えた。
【００２１】
実施例１（抗アレルギー作用）
モルモットより摘出した回腸をマグヌス管（２０ｍｌ容、タイロード液の設定温度：３０℃）に懸垂し、９５％Ｏ2＋５％ＣＯ2混合ガス通気下で、０.５ｇの張力を負荷した生理用変位計（ＴＤ−１１１１、日本光電工業（株））を介してその張力を測定した。回腸標本の収縮性の有無は、アセチルコリン（最終濃度 ６.８×１０-7Ｍ）を添加して確認し、一定の収縮を示す標本を実験に用いた。ロイコトリエンＤ4に対する拮抗作用はロイコトリエンＤ4（最終濃度 １×１０-6Ｍ）を標本に添加する１０分前に、検体を標本に添加し、収縮の抑制をみることにより調べた。対照には蒸留水を用い、検体には参考例１で製造した茶葉サポニン類の水溶液を用い、最終濃度が２、１０および５０μｇ／ｍｌになるよう標本に添加した。標本の収縮率及び検体の抑制率は以下の式により求めた。
【００２２】
【数１】
0003623247.tif 000002
【００２３】
結果を表１に示す。
【００２４】
【表１】
0003623247.tif 000003
【００２５】
茶葉サポニン類は２、１０および５０μｇ／ｍｌの濃度において、ロイコトリエンＤ４による収縮をそれぞれ１８．０％、４３．２％および７７．１％抑制し、抗アレルギー剤として有用であることが示された。
【００２６】
実施例２（抗炎症作用）
カラゲニン浮腫
ラット（雄、４週令）１０匹を１群とし、対照群には０.２５％メチルセルロース液を５ｍｌ／ｋｇの用量で経口投与し、試験群では参考例１で製造した茶葉サポニン類を５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇおよび２００ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与した。１時間後に０.１％カラゲニン溶液を０.１ｍｌずつ右足蹠足に皮下注射した。２時間経過してから足の容積を測定し、浮腫率をカラゲン処理前の値から算出した。結果は、対照群の浮腫率が２４.２±１.８％（標準偏差）に対し、５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ及び２００ｍｇ／ｋｇの用量で茶葉サポニンを投与した群では、浮腫率は２１.２±２.４％、１８.２±２.１（％）及び１４.４±１.７（％）であり、用量依存的に浮腫が抑制された。特に、１００ｍｇ／ｋｇおよび２００ｍｇ／ｋｇの投与群ではそれぞれ危険率５％及び１％で有意差が認められた。
【００２７】
アラキドン酸による炎症
マウス（雄、２６〜２８ｇ）３匹を用い、左耳にエタノールを１０μｌ、右耳に参考例１で製造した茶葉サポニン類のエタノール溶液２ｍｇ／ｍｌを１０μｌ塗布した。３０分後にアラキドン酸のエタノール溶液２００ｍｇ／ｍｌを１０μｌ、両耳に塗布した。さらに３０分経過後、両耳の重量を測定した。対照の左耳が５６.６±３.１（標準誤差）であるのに対し、茶葉サポニンを塗布した右耳は４９.２±１.０で、茶葉サポニンは、アラキドン酸による炎症を抑制することが示された。
【００２８】
【発明の効果】
本発明によれば、抗炎症作用、ロイコトリエン拮抗作用を示し、溶血性を示さない等安全性が高く、炎症性疾患、アレルギー性疾患の治療と予防に有用である茶葉サポニン類を含有する抗アレルギー剤および抗炎症剤を提供することができる。