(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
Ｚ3[ＣＯ−Ａｌｋ1−Ｓｐ1−Ａｒ−Ｓｐ2−Ａｌｋ2−Ｃ(Ｚ1)＝Ｚ2]m
上式中、
Ｚ3は、モノ−およびポリクローナル抗体、それらの抗原認識性断片、および化学的もしくは遺伝子的に操作してあるそれらの等価物、ならびに成長因子、および化学的もしくは遺伝子的に操作してあるそれらの等価物から選択される蛋白質であり、かつ、この蛋白質への共有結合はｍ個のリシン側鎖との反応から形成されるアミドであり、
Ａｌｋ2は、結合であり、
Ａｌｋ1は、分岐状もしくは非分岐状の（Ｃ1−Ｃ10）アルキレン鎖であり、
Ｓｐ1は、結合もしくは−Ｏ−であり、
Ａｒは、場合によって、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ′、もしくはＣＯＮＨＲ'の内の一つ、二つ、もしくは三つの基で置換されていてもよい１,２−、１,３−、もしくは１,４−フェニレンであるか、または１,２−、１,３−、１,４−，１,５−、１,６−、１,７−、１,８−、２,３−、２,６−、もしくは２,７−ナフチリデンであり、かつ、各ナフチリデンは、場合によって、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ′、もしくはＣＯＮＨＲ′の内の一つ、二つ、三つ、もしくは四つの基で置換されていてもよく、
Ｒ′は、場合によって、−ＯＨ、（Ｃ1−Ｃ4）アルコキシ、ハロゲン、（Ｃ1−Ｃ3）ジアルキルアミノ、もしくは（Ｃ1−Ｃ3）トリアルキルアンモニウム−Ａ-［ここで、Ａ-は塩を完成させる薬剤学的に許容されるアニオンである］の内の一つもしくは二つの基により置換されていてもよい分岐状もしくは非分岐状の（Ｃ1−Ｃ5）鎖であり、
Ｓｐ2は、結合であり、
Ｚ1は、Ｈもしくは（Ｃ1−Ｃ5）アルキルであり、
Ｚ2は、Ｑ−Ｓｐ−Ｓ−Ｓ−Ｗであり、ここで、Ｗは、
【化２】
0003650165.tif 000038
であり、
Ｒ1は、
【化３】
0003650165.tif 000039
、もしくはＣＨ3であり、
Ｒ2は、
【化４】
0003650165.tif 000040
、もしくはＨであり、
Ｒ3は、
【化５】
0003650165.tif 000041
、もしくはＨであり、
Ｒ4は、
【化６】
0003650165.tif 000042
、もしくはＨであり、
Ｒ6もしくはＲ7は、Ｈ、もしくは
【化７】
0003650165.tif 000043
であり、
Ｒ5は、−ＣＨ3、−Ｃ2Ｈ5、もしくは−ＣＨ(ＣＨ3)2であり、
Ｘは、ヨウ素、もしくは臭素原子であり、
Ｒ5′は、水素、もしくは基ＲＣＯであり、ここで、Ｒは、水素または分岐状もしくは非分岐状の（Ｃ1−Ｃ10）アルキル基であり、
Ｓｐは、直鎖状もしくは分岐鎖状の二価の（Ｃ1−Ｃ18）基であり、かつ、Ｓｐは、低級（Ｃ1−Ｃ5）ジアルキルアミノ、低級（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、もしくはヒドロキシによりさらに置換されていてもよく、
Ｑは、＝ＮＨＮＣＯ−、＝ＮＨＮＣＳ−、＝ＮＨＮＣＯＮＨ−、＝ＮＨＮＣＳＮＨ−、もしくは＝ＮＨＯ−であり、そして
ｍは、約０.１から１５までの数である、
で表される細胞障害性薬剤複合体。
【請求項２】
Ａｒが、場合により、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ′、もしくはＣＯＮＨＲ′［ここで、Ｒ′は請求項１で定義したとおりである］の内の一つ、二つ、もしくは三つの基で置換されていてもよい１,２−、１,３−、もしくは１,４−フェニレンである請求項１に記載の細胞障害性薬剤複合体。
【請求項３】
Ｚ2がＱ−Ｓｐ−Ｓ−Ｓ−Ｗであり、ここで、Ｗが
【化８】
0003650165.tif 000044
であり、Ｒ1が
【化９】
0003650165.tif 000045
であり、Ｒ2が
【化１０】
0003650165.tif 000046
もしくはＨであり、Ｒ4が
【化１１】
0003650165.tif 000047
もしくはＨであり、Ｒ5、Ｘ、Ｒ5′、ＲおよびＳｐが請求項１で定義したとおりであり、そしてＱが＝ＮＨＮＣＯ−である請求項２に記載の細胞障害性薬剤複合体。
【請求項４】
Ｓｐ1が−Ｏ−もしくは結合であり、Ａｌｋ1が（Ｃ1−Ｃ6）アルキレンであり、Ａｒが、場合により、（Ｃ1−Ｃ3）アルキル、（Ｃ1−Ｃ3）アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ′もしくはＣＯＮＨＲ′［ここで、Ｒ′は請求項１で定義したとおりである］の内の一つ、もしくは二つの基で置換されていてもよい１,３−もしくは１,４−フェニレンであり、そしてＺ1が（Ｃ1−Ｃ3）アルキルである請求項３に記載の細胞障害性薬剤複合体。
【請求項５】
（ａ）  Ｚ3がＣＤ３３抗原を認識するモノクローナル抗体、ポリ上皮ムチン抗原を認識するモノクローナル抗体、結腸癌細胞上に存在する糖蛋白質抗原を認識するモノクローナル抗体、または活性化されておりかつ機能的に成熟したＴ細胞および異常に活性化された白血病細胞からなる群より選ばれる細胞上に見いだされるＩＬ２レセプターを認識するモノクローナル抗体であり、そして
（ｂ）  Ｚ2がカリケアマイシン−γ−ジメチルヒドラジドもしくはカリケアマイシンＮ−アセチル−γ−ジメチルヒドラジドである請求項４に記載の細胞障害性薬剤複合体。
【請求項６】
Ｚ3が抗体ｈ−もしくはｍ−Ｐ６７.６、ｈ−もしくはｍ−ＣＴ−Ｍ−０１、ｈ−もしくはｍ−Ａ３３、または抗−Ｔａｃであり、Ｚ2がカリケアマイシン−γ−ジメチルヒドラジドまたはカリケアマイシンＮ−アセチル−γ−ジメチルヒドラジドである請求項４に記載の細胞障害性薬剤複合体。
【請求項７】
Ｚ3が抗体ｈ−Ｐ６７.６であり、Ｚ2がカリケアマイシンＮ−アセチル−γ−ジメチルヒドラジドであり、Ｓｐ1が−Ｏ−であり、Ａｌｋ1がＣ3アルキレンであり、Ａｒが１,４−フェニレンであり、そしてＺ1がＣ1アルキルである請求項６に記載の細胞障害性薬剤複合体。
【請求項８】
式
Ｚ3[ＣＯ−Ａｌｋ1−Ｓｐ1−Ａｒ−Ｓｐ2−Ａｌｋ2−Ｃ(Ｚ1)＝Ｚ2］
上式中、
Ｚ3は、ハロゲン、ヒドロキシ、ＯＭ［ここで、Ｍは塩を完成させる金属である］、−Ｎ3、
【化１２】
0003650165.tif 000048
であり、
Ａｌｋ2は、結合であり、
Ａｌｋ1は、分岐状もしくは非分岐状の（Ｃ1−Ｃ10）アルキレン鎖であり、
Ｓｐ1は、結合、もしくは−Ｏ−であり、
Ａｒは、場合によって、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ′、もしくはＣＯＮＨＲ′の内の一つ、二つ、もしくは三つの基で置換されていてもよい１,２−、１,３−、もしくは１,４−フェニレンであるか、または１,２−、１,３−、１,４−，１,５−、１,６−、１,７−、１,８−、２,３−、２,６−、もしくは２,７−ナフチリデンであり、かつ、各ナフチリデンは、場合によって、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ′、もしくはＣＯＮＨＲ′の内の一つ、二つ、三つ、もしくは四つの基で置換されていてもよく、
Ｒ′は、場合によって、−ＯＨ、（Ｃ1−Ｃ4）アルコキシ、ハロゲン、（Ｃ1−Ｃ3）ジアルキルアミノ、もしくは（Ｃ1−Ｃ3）トリアルキルアンモニウム−Ａ-［ここで、Ａ-は塩を完成している薬剤学的に許容されるアニオンである］の内の一つもしくは二つの基により置換されていてもよい分岐状もしくは非分岐状の（Ｃ1−Ｃ5）鎖であり、
Ｓｐ2は、結合であり、
Ｚ1は、Ｈもしくは（Ｃ1−Ｃ5）アルキルであり、
Ｚ2は、Ｑ−Ｓｐ−Ｓ−Ｓ−Ｗであり、ここで、Ｗは、
【化１４】
0003650165.tif 000049
であり、
Ｒ1は、
【化１５】
0003650165.tif 000050
、もしくはＣＨ3であり、
Ｒ2は、
【化１６】
0003650165.tif 000051
、もしくはＨであり、
Ｒ3は、
【化１７】
0003650165.tif 000052
、もしくはＨであり、
Ｒ4は、
【化１８】
0003650165.tif 000053
、もしくはＨであり、
Ｒ6もしくはＲ7は、Ｈ、もしくは
【化１９】
0003650165.tif 000054
であり、
Ｒ5は、−ＣＨ3、−Ｃ2Ｈ5、もしくは−ＣＨ(ＣＨ3)2であり、
Ｘは、ヨウ素、もしくは臭素原子であり、
Ｒ5′は、水素、もしくは基ＲＣＯであり、ここで、Ｒは、水素または分岐状もしくは非分岐状の（Ｃ1−Ｃ10）アルキル基であり、
Ｓｐは、直鎖状もしくは分岐鎖状の二価の（Ｃ1−Ｃ18）基であり、かつ、Ｓｐは、低級（Ｃ1−Ｃ5）ジアルキルアミノ、低級（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、もしくはヒドロキシによりさらに置換されていてもよく、
Ｑは、＝ＮＨＮＣＯ−、＝ＮＨＮＣＳ−、＝ＮＨＮＣＯＮＨ−、＝ＮＨＮＣＳＮＨ−もしくは＝ＮＯ−である、
で表される化合物。
【請求項９】
Ｚ3がヒドロキシ、
【化２０】
0003650165.tif 000055
である請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ａｒが、場合によって、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ′、もしくはＣＯＮＨＲ′の内の一つ、二つ、もしくは三つの基で置換されていてもよい１,２−、１,３−、もしくは１,４−フェニレンであり、ここで、Ｒ′は請求項８で定義したとおりである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｚ2が、Ｑ−Ｓｐ−Ｓ−Ｓ−Ｗであり、ここで、Ｗが、
【化２１】
0003650165.tif 000056
であり、Ｒ1が
【化２２】
0003650165.tif 000057
であり、Ｒ2が
【化２３】
0003650165.tif 000058
もしくはＨであり、Ｒ4が
【化２４】
0003650165.tif 000059
もしくはＨであり、Ｒ5、Ｘ、Ｒ5′、Ｒ、およびＳｐは請求項１で定義したとおりであり、そして
Ｑは＝ＮＨＮＣＯ−である、
請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｓｐ1が、−Ｏ−もしくは結合であり、Ａｌｋ1が、（Ｃ1−Ｃ6）アルキレンであり、Ａｒが、場合によって、（Ｃ1−Ｃ3）アルキル、（Ｃ1−Ｃ3）アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ′、もしくはＣＯＮＨＲ′の内の一つ、もしくは二つの基で置換されていてもよい１,３−、もしくは１,４−フェニレンであり、ここで、Ｒ′が請求項１で定義したとおりであり、そしてＺ1が、（Ｃ1−Ｃ3）アルキルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｚ2がカリケアマイシン−γ−ジメチルヒドラジドもしくはカリケアマイシンＮ−アセチル−γ−ジメチルヒドラジドである請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｚ2がカリケアマイシンＮ−アセチル−γ−ジメチルヒドラジドであり、Ｓｐ1が−Ｏ−であり、Ａｌｋ1がＣ3アルキレンであり、
Ａｒが１,４−フェニレンであり、そしてＺ1がＣ1アルキルである請求項１３にに記載の化合物。
【請求項１５】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の複合体の細胞増殖阻害有効量および非経口投与可能な媒体を含んでなる細胞の増殖を阻害するための薬剤学的組成物。
【請求項１６】
約１００ｍＭの塩化ナトリウムと約１００ｍＭのスクロースを含有するｐＨ約７.４の約５ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液中に溶解した、請求項１〜７のいずれか一項に記載の複合体の約１ｍｇ／ｍＬ溶液を凍結乾燥することにより得られる該複合体を含んでなる細胞の増殖を阻害するための凍結乾燥された薬学的組成物。
【請求項１７】
式
Ｚ3[ＣＯ−Ａｌｋ1−Ｓｐ1−Ａｒ−Ｓｐ2−Ａｌｋ2−Ｃ(Ｚ1)＝Ｚ2]m
［式中、
Ｚ3はモノクローナルおよびポリクローナル抗体、ならびにそれらの抗原認識性断片およびそれらの化学的もしくは遺伝子的に操作された等価物から選ばれる蛋白質であり、
Ａｌｋ2は、結合であり、
Ａｌｋ1は、分岐状もしくは非分岐状の（Ｃ1−Ｃ10）アルキ  レン鎖であり、
Ｓｐ1は、結合もしくは−Ｏ−であり、
Ａｒは、場合によって、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、−ＣＯＯＲ′、もしくは−ＣＯＮＨＲ′の内の一つ、二つ、もしくは三つの基で置換されていてもよい１,２−、１,３−、もしくは１,４−フェニレンであるか、または１,２−、１,３−、１,４−，１,５−、１,６−、１,７−、１,８−、２,３−、２,６−、もしくは２,７−ナフチリデンであり、かつ、各ナフチリデンは、場合によって、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ′、もしくはＣＯＮＨＲ′の内の一つ、二つ、三つ、もしくは四つの基で置換されていてもよく、
Ｒ′は、場合によって、−ＯＨ、（Ｃ1−Ｃ4）アルコキシ、ハロゲン、（Ｃ1−Ｃ3）ジアルキルアミノ、もしくは（Ｃ1−Ｃ3）トリアルキルアンモニウム−Ａ-［ここで、Ａ-は塩を完成させる薬学的に許容されるアニオンである］の内の一つもしくは二つの基により置換されていてもよい分岐状もしくは非分岐状の（Ｃ1−Ｃ5）鎖であり、
Ｓｐ2は、結合であり、
Ｚ1は、Ｈもしくは（Ｃ1−Ｃ5）アルキルであり、
Ｚ2は、Ｑ−Ｓｐ−Ｓ−Ｓ−Ｗであり、ここでＷは
【化３４】
0003650165.tif 000060
であり、Ｒ1は
【化３５】
0003650165.tif 000061
もしくはＣＨ3であり、Ｒ2は
【化３６】
0003650165.tif 000062
もしくはＨであり、Ｒ3は
【化３７】
0003650165.tif 000063
もしくはＨであり、Ｒ4は
【化３８】
0003650165.tif 000064
もしくはＨであり、Ｒ6もしくはＲ7はＨもしくは
【化３９】
0003650165.tif 000065
であり、
Ｒ5は、−ＣＨ3、−Ｃ2Ｈ5、もしくは−ＣＨ(ＣＨ3)2であり、
Ｘは、ヨウ素、もしくは臭素原子であり、
Ｒ5′は、水素、もしくは基ＲＣＯであり、ここで、Ｒは、水素、または分岐状もしくは非分岐状の（Ｃ1−Ｃ10）アルキル基であり、
Ｓｐは、直鎖状もしくは分岐鎖状の二価の（Ｃ1−Ｃ18）基であり、かつ、Ｓｐは、低級（Ｃ1−Ｃ5）ジアルキルアミノ、低級（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、もしくはヒドロキシにより、さらに置換されていてもよく、
Ｑは、＝ＮＨＮＣＯ−、＝ＮＨＮＣＳ−、＝ＮＨＮＣＯＮＨ−、＝ＮＨＮＣＳＮＨ−、もしくは＝ＮＯ−であり、そして
ｍは、約０.１から１５までの数である］
で表される標的に向けられる誘導体の製造方法であって、式
Ｚ3′ＣＯ−Ａｌｋ1−Ｓｐ1−Ａｒ−Ｓｐ2−Ａｌｋ2−Ｃ(Ｚ1)＝Ｚ2
［式中、Ａｌｋ1、Ｓｐ1、Ａｒ、Ｓｐ2、Ａｌｋ2、Ｚ1およびＺ2は上記に定義したとおりであり、そしてＺ3′は
【化４０】
0003650165.tif 000066
である］の化合物を、担体Ｚ3（ここで、Ｚ3はモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体、ならびにそれらの抗原認識性断片およびそれらの化学的もしくは遺伝子的に操作された等価物から選ばれる蛋白質である）とｐＨ６.５〜９.０の水性緩衝液中で、４℃〜４０℃の温度で１〜４８時間反応させ、前記に定義される式
Ｚ3[ＣＯ−Ａｌｋ1−Ｓｐ1−Ａｒ−Ｓｐ2−Ａｌｋ2−Ｃ(Ｚ1)＝Ｚ2]m
の標的に向けられる誘導体を生成する、ことを特徴とする方法。
【請求項１８】
（ａ）  Ｈ2Ｚ2を式
ＨＯＣＯ−Ａｌｋ1−Ｓｐ1−Ａｒ−Ｓｐ2−Ａｌｋ2−Ｃ(Ｚ1)＝０
（ここで、Ａｌｋ1およびＡｌｋ2、Ｓｐ1、ｎ、Ｒ′、Ｓｐ2、Ｚ1およびＡｒは請求項１７で定義したとおりである）の化合物と約１００℃未満の沸点を有するアルコール溶媒中、約５％の酢酸もしくはカルボン酸触媒の存在下で、約２０℃〜７０℃において約１〜２４時間反応させて、式
ＨＯＣＯ−Ａｌｋ1−Ｓｐ1−Ａｒ−Ｓｐ2−Ａｌｋ2−Ｃ(Ｚ1)＝Ｚ2
（式中、Ａｌｋ1、Ｓｐ1、Ａｒ、Ｓｐ2、Ａｌｋ2、Ｚ1およびＺ2は請求項１７に定義したとおりである）の中間体を生成し、
（ｂ）  工程（ａ）の中間体を単離し、そして
（ｃ）  工程（ｂ）の単離された中間体をＮ−ヒドロキシスクシンイミド、２,３,５,６−テトラフルオロフェノール、ペンタフルオロフェノール、４−ニトロフェノール、２,４−ジニトロフェノールもしくはＮ−ヒドロキシスルホスクシンイミドと、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ、もしくは他のカルボジイミドの存在下において、アセトニトリル、もしくは５−５０％のＤＭＦを含むアセトニトリルのような不活性有機溶媒中で反応させることにより、式
Ｚ3′ＣＯ−Ａｌｋ1−Ｓｐ1−Ａｒ−Ｓｐ2−Ａｌｋ2−Ｃ(Ｚ1)＝Ｚ2
の化合物を、生成する請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ａｒが、場合によって、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ′、もしくはＣＯＮＨＲ′の内の一つ、二つ、もしくは三つの基で置換されていてもよい１,２−、１,３−、もしくは１,４−フェニレンである、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｚ3蛋白質についての共有結合がＺ3蛋白質のリシン側鎖の反応から形成されるアミド結合である請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２１】
Ｚ2がＱ−Ｓｐ−Ｓ−Ｓ−Ｗであり、そしてＷが
【化４１】
0003650165.tif 000067
であり、Ｒ1が
【化４２】
0003650165.tif 000068
であり、Ｒ2が
【化４３】
0003650165.tif 000069
もしくはＨであり、Ｒ4が
【化４４】
0003650165.tif 000070
もしくはＨであり、Ｒ5、Ｘ、Ｒ5′、ＲおよびＳｐが請求項１７に定義されたとおりであり、そしてＱが＝ＮＨＮＣＯ−である、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２２】
工程（ａ）のアルコール溶媒がメタノールであり、工程（ａ）のカルボン酸触媒が５％酢酸であり、工程（ｂ）の単離された中間体が工程（ｃ）において、アセトニトリル中ＥＤＣＩの存在下でＮ−ヒドロキシスクシンイミドと反応せしめられ、そして水性緩衝溶液がｐＨ７.４〜８.０のリン酸塩緩衝液である請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
Ｚ1が（Ｃ1−Ｃ5）アルキルである請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
Ａｒが、場合によって、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ′、もしくはＣＯＮＨＲ′の内の一つ、二つ、もしくは三つの基で置換されていてもよい１,２−、１,３−、もしくは１,４−フェニレンである請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
Ｓｐ1が−Ｏ−であり、Ａｌｋ1がＣ4アルキレンであり、Ａｒが１,４−フェニレンであり、そしてＺ1がＣ1アルキルである請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
Ｚ3が抗体ｈ−Ｐ６７.６、ｈ−ＣＴ−Ｍ−０１、ｍ−ＣＴ−Ｍ−０１、ｈ−Ａ３３、ｍ−Ａ３３もしくは抗Ｔａｃである請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
Ｚ2がカリケアマイシン−γ−ジメチルヒドラジドもしくはカリケアマイシンＮ−アセチル−γ−ジメチルヒドラジドである請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
Ｚ3が抗体ｈ−ＣＴ−Ｍ−０１もしくは抗体ｈ−Ｐ６７.６であり、そしてＺ2がカリケアマイシンＮ−アセチル−γ−ジメチルヒドラジドである請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
哺乳動物における望ましくない細胞の増殖の制御に使用するための請求項１〜７のいずれか一項に記載の複合体。
【請求項３０】
望ましくない細胞が癌細胞である請求項２９に記載の使用のための化合物。
【請求項３１】
哺乳動物における望ましくない細胞の増殖を制御するための医薬製剤の製造における請求項１〜７のいずれか一項に記載の複合体の使用。
【請求項３２】
望ましくない細胞が癌細胞である請求項３１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
発明の要約
本発明は、有効な抗腫瘍抗生物質であるカリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）一族およびそれらの誘導体のジスルフィドアナログ、ならびにエスペラマイシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）のような関連抗腫瘍抗生物質からの類似アナログから製造される担体−薬剤複合体を開示する。この担体は、腫瘍細胞のような望しくない細胞集団を標的とする、抗体、成長因子、もしくはステロイドであることができる。完全な蛋白質担体、ならびにそれらの抗原認識性断片、および化学的もしくは遺伝子的に操作してあるそれらの等価物は、それらの複合体のターゲッティング用部分に役立つ。本発明は、これらの複合体の合成に必要な化合物、担体−薬剤複合体の適切な薬剤学的組成物、およびそれらの利用法を含む。
【０００２】
より具体的には、本発明のある態様は、式
Ｚ3[ＣＯ−Ａｌｋ1−Ｓｐ1−Ａｒ−Ｓｐ2−Ａｌｋ2−Ｃ(Ｚ1)＝Ｚ2]m
［式中、
Ｚ3は、モノ−およびポリクローナル抗体、それらの抗原認識性断片、および化学的もしくは遺伝子的に操作してあるそれらの等価物、ならびに成長因子、および化学的もしくは遺伝子的に操作してあるそれらの等価物から選択される蛋白質であり、かつ、この蛋白質への共有結合はｍ個のリシン側鎖との反応から形成されるアミドであり、
Ａｌｋ2は、結合であり、
Ａｌｋ1は、分岐状もしくは非分岐状の（Ｃ1−Ｃ10）アルキレン鎖であり、
Ｓｐ1は、結合もしくは−Ｏ−であり、
Ａｒは、場合によって、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ′、もしくはＣＯＮＨＲ'の内の一つ、二つ、もしくは三つの基で置換されていてもよい１,２−、１,３−、もしくは１,４−フェニレンであるか、または１,２−、１,３−、１,４−，１,５−、１,６−、１,７−、１,８−、２,３−、２,６−、もしくは２,７−ナフチリデンであり、かつ、各ナフチリデンは、場合によって、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ′、もしくはＣＯＮＨＲ′の内の一つ、二つ、三つ、もしくは四つの基で置換されていてもよく、
【０００３】
Ｒ′は、場合によって、−ＯＨ、（Ｃ1−Ｃ4）アルコキシ、ハロゲン、（Ｃ1−Ｃ3）ジアルキルアミノ、もしくは（Ｃ1−Ｃ3）トリアルキルアンモニウム−Ａ-［ここで、Ａ-は塩を完成させる薬剤学的に許容されるアニオンである］の内の一つもしくは二つの基により置換されていてもよい分岐状もしくは非分岐状の（Ｃ1−Ｃ5）鎖であり、
Ｓｐ2は、結合であり、
Ｚ1は、Ｈもしくは（Ｃ1−Ｃ5）アルキルであり、
Ｚ2は、Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗであり、ここで、Ｗは、
【０００４】
【化４６】
0003650165.tif 000002
であり、
Ｒ1は、
【０００５】
【化４７】
0003650165.tif 000003
、もしくはＣＨ3であり、
Ｒ2は、
【０００６】
【化４８】
0003650165.tif 000004
、もしくはＨであり、
Ｒ3は、
【０００７】
【化４９】
0003650165.tif 000005
、もしくはＨであり、
Ｒ4は、
【０００８】
【化５０】
0003650165.tif 000006
、もしくはＨであり、
Ｒ6もしくはＲ7は、Ｈ、もしくは
【０００９】
【化５１】
0003650165.tif 000007
であり、
Ｒ5は、−ＣＨ3、−Ｃ2Ｈ5、もしくは−ＣＨ(ＣＨ3)2であり、
Ｘは、ヨウ素、もしくは臭素原子であり、
Ｒ5′は、水素、もしくは基ＲＣＯであり、ここで、Ｒは、水素または分岐状もしくは非分岐状の（Ｃ1−Ｃ10）アルキル基であり、
Ｓｐは、直鎖状もしくは分岐鎖状の二価の（Ｃ1−Ｃ18）基であり、かつ、Ｓｐは、低級（Ｃ1−Ｃ5）ジアルキルアミノ、低級（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、もしくはヒドロキシによりさらに置換されていてもよく、
Ｑは、＝ＮＨＮＣＯ−、＝ＮＨＮＣＳ−、＝ＮＨＮＣＯＮＨ−、＝ＮＨＮＣＳＮＨ−、もしくは＝ＮＨＯ−であり、そして
ｍは、約０.１から１５までの数である］の細胞障害性薬剤複合体を含み、かつ抗腫瘍剤としてのその複合体の利用を含む。
【００１０】
本発明の第二の態様は、式
Ｚ3[ＣＯ−Ａｌｋ1−Ｓｐ1−Ａｒ−Ｓｐ2−Ａｌｋ2−Ｃ(Ｚ1)＝Ｚ2]m
［式中、Ｚ1、Ｚ2、Ａｌｋ1、Ｓｐ1、Ａｒ、Ｓｐ2、およびＡｌｋ2はこれまでに特定されるものであり、
Ｚ3は、ハロゲン、ヒドロキシ、ＯＭ｛この場合、Ｍは塩を完成させる金属である｝、−Ｎ3、
【００１１】
【化５２】
0003650165.tif 000008
であり、そして
ｍは、１である］
の、複合体を形成するための中間体として有用な改変済みの薬剤に関連する。
【００１２】
本発明の第三の態様は、前記細胞障害性薬剤複合体の製造方法に関する。
【００１３】
さらなる本発明の態様は、前記細胞障害性薬剤複合体の抗腫瘍剤としての利用に関する。
【００１４】
さらなる本発明の態様は、前記細胞障害性薬剤複合体の哺乳動物における望ましくない細胞の増殖を制御するための使用に関する。
【００１５】
【従来の技術】
発明の背景
モノクローナル抗体の産生のための方法の開発が１９７０年代に公開されたため（Ｇ．ＫｏｅｈｌｅｒおよびＣ．Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、”Ｎａｔｕｒｅ”２５６、４９５（１９７５））、腫瘍に対する抗腫瘍剤の選択的ターゲッティングを達成するためにこれらの蛋白質を使用する数々の試みがなされてきた（例えば、Ｙ．ＧｈｏｓｅおよびＡ．Ｈ．Ｂｌａｉｒ、”ＣＲＣ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ”３、２６３（１９８７）、Ｇ．Ａ．Ｋｏｐｐｅｌ、”Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．”１，１３（１９９０）、およびＪ．ＵｐｅｓｌａｃｉｓおよびＬ．Ｈｉｎｍａｎ、”Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．”２３、１５１（１９８８）、を参照せよ）。この分野においては絶え間ない進歩が遂げられているものの、ほとんどの古典的な抗腫瘍剤は抗体複合体として産生されており、これらは数々の理由により比較的有効性が低いものとなってしまっている。この有効性の低さについては、中でもその薬剤が作用部位において効率よく放出されないことが原因となってその化学療法剤の効力が失われ、そしてその利用性が乏しいものになってしまっていることが理由となっている。
【００１６】
包括的にはカリケアマイシンすなわちＬＬ−Ｅ３３２８８複合体として知られる有効な抗細菌および抗腫瘍剤の一族が、米国特許第４，９７０，１９８号（１９９０）において記載および特許請求されている。それらの薬剤の内で最も有効なものはγ1Iと表示され、これは本明細書では単にガンマーとして引用される。これらの化合物のジヒドロ誘導体は米国特許第５，０３７，６５１号（１９９１）において記載され、そしてＮ−アシル化誘導体は米国特許第５，０７９，２３３号８１９９２）において記載される。本発明においても有用な関連化合物にはエスペラマイシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）があり、これは、米国特許第４，６７５，１８７号（１９８７）、第４，５３９，２０３号、第４，５５５，１６２号、および欧州特許第２８９，０３０号において記載および特許請求される。これらの化合物全ては適切なチオールと反応してジスルフィドを形成することができ、同時にヒドラジドもしくは類似の求核基のような官応基を誘導するメチルトリスルフィドを含む。カリケアマイシンとのこのような反応の例は米国特許第５，０５３，３９４号に示されており、この特許は更にカリケアマイシンのターゲッティング用形態も開示している。既述の特許引用文献中の全情報は、引用することにより本明細書に取り込まれる。担体分子との複合体の合成に役立つ２つの化合物が米国特許第５，０５３，３９４号に開示および特許請求されており、それらを表１に示す。
【００１７】
【化５５】
0003650165.tif 000009
Ｒ5’＝Ｈ    ガンマー  ジメチル  ヒドラジド
Ｒ5’＝Ａｃ  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジド
米国特許第５，０５３，３９４号には、ステロイド、成長因子、抗体、抗体断片、およびそれらの遺伝子的もしくは酵素的に操作してある等価物が担体分子として含まれており、今後これらを単数で、もしくは担体としての一群として引用する。担体の本質的な特性は、所望されない細胞株に関連する抗原もしくはレセプターを認識する能力である。担体の例は米国特許第５，０５３，３９４号に示されており、そしてこのような担体も本発明に適する。抗体である担体はほとんど全ての哺乳類種（例えば、マウス、ヒト、イヌ等）から取得することができ、そして種々の方法（例えば、ハイブリドーマを介するマウス抗体、形質転換マウスからのハイブリドーマを介するヒト抗体等）により作成することができる。
【００１８】
本明細書において実例として挙げる担体の具体例は、Ｗａｌｄｍａｎ社の抗体Ｐ６７．６、Ａ３３、ＣＴ−Ｍ−０１、および「抗−Ｔａｃ」抗体である。これらの抗体は本明細書においては適切である限り２つの形態、すなわち「ｍ」により表示されるマウス形態（例えば、ｍ−Ｐ６７．６）、および「ｈ」により表示される遺伝子的に操作されたヒューマナイズド形態（例えば、ｈ−Ｐ６７．６）で用いられる。ヒューマナイゼーションについての基本的な方法は、米国特許第５，２２５，５３９号（１９９３）におけるＷｉｎｔｅｒ、および国際公開第９１／０９９６７号（１９９１）におけるＡｄａｉｒにより開示されている。ｍ−Ｐ６７．６は、Ｉ．Ｄ．Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．、”Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．”７９、１１５３（１９８７）において開示されており、そしてＣＤ３３抗原を認識し、これは特定のヒト骨髄性腫瘍、具体的には急性非リンパ性白血病に効果がある。
【００１９】
チャート１およびチャート２は、本発明の利用に特に適するある特別なｈ−Ｐ６７．６の可変領域のＤＮＡコーディング配列および予想アミノ酸配列を示す。この抗体についてのフレームワークは、Ｇｏｔｔｌｉｅｂ  ｅｔ  ａｌ．、”Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：９，３１１５および３１６１（１９７０）に示されるヒトＩｇＧ4についてのＥＵフレームワークである。この抗体は国際公開第９１／０９９６７号に記載される一般方法を用いて調製した。チャートを参照すると、合成された重複オリゴヌクレオチド（Ｏｌｉｇｏ  Ｌ１からＬ８まで）が二重下線で示されており、そしてＰＣＲ組み立て法（国際公開第９２／０１０５９号を参照せよ）をこれらの配列に適用してある。この蛋白質のＣＤＲ領域を一重下線で表示してあり、そしてマウス配列から取得した他のアミノ酸を二重下線で示してある。この配列を切り出してプラスミド内に挿入するために用いた制限部位を配列の開始地点および終了地点に示してある。重鎖の可変部分をプラスミドｐＭＲＲ１４（国際公開第９３／０６２３１号）内にクローン化させてｐＡＬ６３と表示されるプラスミド（チャート３）を取得し、そして軽鎖の可変部分をプラスミドｐＭＲＲ１５（チャート４）内にクローン化させてｐＡＬ６０（チャート５）を取得した。プラスミドｐＭＲＲ１４とｐＭＲＲ１５とは各々重鎖および軽鎖の不変領域を含み、そしてそのためｐＡＬ６３とｐＡＬ６０とはｐ６７．６の重鎖および軽鎖の全配列を含んでいた。これらのプラスミドをＣＨＯ−Ｌ７６１細胞内にコトランスフェクトさせてｈ−Ｐ６７．６産生株を作成し、この株からｈ−６７．６を標準法により精製した。得られるｈ−Ｐ６７．６は、免疫親和性の約５０％が失われるようにさせた状態でマウス抗体と競合させながらＨＬ６０細胞に結合させた。この結合を、可溶性ＣＤ３３抗原を用いて予めインキュベートすることにより阻害した。
【００２０】
抗体ｍ−ＣＴ−Ｍ−０１は欧州特許第８６４０１４８２．４／０２０８６１５号において開示されており、そして多くのヒト充実性腫瘍、具体的には乳癌、肺癌、および卵巣腫瘍に存在するポリ上皮ムチン（ｐｏｌｙｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｕｃｉｎ）（ＰＥＭ）抗原を認識する。この抗体のヒューマナイズド版、すなわちｈ−ＣＴ−Ｍ−０１が国際公開第９３／０６２３１号（１９９３）に記載されている。抗体ｍ−Ａ３３は米国特許出願第３２７，７６５号、第６７３，１５３号、および第６７１，１３２号に開示されており、そしてこれは結腸癌細胞上に存在する糖蛋白質抗原を認識するマウス抗体である。この抗体のヒューマナイズド版、すなわちｈ−Ａ３３が米国特許出願第９，３１５，２４９．４号に開示されている。抗−Ｔａｃは、Ｔ．Ａ．Ｗａｌｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．、”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．”１２６、１３９３（１９８１）において開示されており、そしてこれは異常な様式で活性化された白血病細胞を初めとする、活性化されておりかつ機能的に成熟したＴ細胞に見いだされるＩＬ−２レセプターとの反応性を示すマウス抗体である。
【００２１】
米国特許第５，０５３，３９４号に開示される複合体の２つの基本タイプは、米国特許第４，６７１，９６８号に教示される方法を用いてその抗体のリシン残基に結合させるものと酸化済み炭水化物残基に結合するものである。米国特許第５．０５３．３９４号において開示されるリシン結合により、正常な生理学的条件下での加水分解に対する安定性を示す複合体が産生される。炭水化物を基にする複合体はヒドラジドもしくは類似誘導体からのヒドラゾンの形成を必要とし、この複合体は所定の条件下においては加水分解に対する不安定性を示し、そしてこのことが多くの場合においては利点となっている。複合体が標的細胞内に吸収された時点で薬剤を放出させるには幾らかの不安定性が必要となることがよくあるが、時期早尚な状態で抗体から薬剤が放出されるのを回避させるには所定の度合いの安定性が重要となる。しかしながら、炭水化物を基にするこれらの複合体には数々の欠点が存在する。第一に、この抗体の炭水化物残基からアルデヒドを作成するには過ヨウ素酸塩を用いる必要がある。抗体にはシステイン、シスチン、メチオニン、トリプトファン、もしくはチロシン残基が含まれており、これらは抗体が正常に機能するのに必要なものである。しかしながら、同じこれらのアミノ酸が過ヨウ素酸酸化に対して感受性を示すことがあり、そしてこの抗体の抗原結合部位の一部分であるか、あるいはその抗原結合部位付近にある構造的に重要な領域のいずれかであるアミノ酸に対してこのような酸化が生じる場合には、その抗体の免疫親和性は有意に減少する可能性がある。複合体形成に炭水化物を使用することの第二の欠点は、天然の糖およびヒドラジド誘導体から生じるヒドラゾンおよび関連構造の可変性である。ヒドラゾンの局部構造が異なることが原因でヒドラゾンが異なる速度の加水分解を受けるばかりでなく、水和種、ピペラジンなどのような他の構造も生じる可能性がある。いずれの複合体も至適活性にとって安定性が強すぎるかあるいは不安定性が強すぎるかのいずれかである構造を含むこともある。
【００２２】
【発明が解決しようとする課題】
他のあまり有効でない種類の抗癌剤を用いる、炭水化物を基にする複合体とリシンを基にする複合体の幾つかの特性を組み合わせる方法の限られた例が存在する。Ｃｕｌｌｉｎａｎは米国特許第５，００６，６５２号および第５，０９４，８４９号において、カルボン酸およびアルデヒドもしくはケト機能性の両方を有する特定の二官能性化合物を、抗体のリシンとビンカ（Ｖｉｎｃａ）アルカロイドのヒドラジド誘導体との間のスペーサーとして使用することができることを教示している一方で、Ｊｏｈｎｓｏｎは米国特許第５，０２８，６９７号および第５，１４４，０１２号において、メトトレキサートアナログについての類似技術を教示している。Ｓｉｎａｍ  ｅｔ  ａｌ．も国際公開第９０／０３４０１号において類似構築物を開示している。これらのいずれの場合も、メチルトリスルフィド抗腫瘍抗生物質、具体的にはカリケアマイシンもしくはエスペラマイシンの複合体を調製するのにこの方法が有用であることは証明してはいない。引用した特許はいずれも、ビンカアルカロイド、メトトレキサートアナログ、もしくは他の薬剤のいずれかを用いて作成したこれらの構築物が、リシンを基にするもしくは炭水化物を基にする複合体を用いて作成した複合体と比較して、その生物学的特性が勝っているということは記載していない。
【００２３】
【課題を解決するための手段】
本発明は、改善型リンカー系を用いて作成した有効なメチルトリスルフィド抗腫瘍抗生物質から製造した一連の複合体について記載するが、この改善型リンカー系によっては、多くの場合において他の方法により作成された同一薬剤の複合体よりも生物学的にかなり優れた複合体が製造される。
【００２４】
発明の詳細な既述
本発明の複合体は、メチルトリスルフィド含有性抗腫瘍抗生物質から調製されるある薬剤の誘導体、具体的にはヒドラジドおよび関連求核試薬に添加することができるリンカーを使用する。このリンカーはシッフ塩基、具体的にはヒドラゾンの形成のために一方の末端のカルボニル基、および他方の末端のカルボン酸を必要とする。このカルボン酸を活性化し、そしてその後に抗体もしくは他のターゲッティング用蛋白質のリシン、あるいは所望されない細胞集団を標的とする能力について選択されてきた他のターゲッティング用薬剤のアミン、アルコール、もしくは他の適切な求核基と反応させることができる。抗体という点では、これらの構築物はリシンを基にする複合体と炭水化物を基にする複合体の両方の成分を含んでいるが、これらの構築物は既に開示されている構築物の欠点を克服するばかりでなく、加水分解安定性／不安定性の至適量に合わせた「設計を行う」ためにそのリンカーの構造を変化させることによる微細調節を行うことができるという追加利点をも有する。このことにより、標的細胞に対する最大毒性をもたらし、同時に標的でない細胞には最低毒性をもたらすことが可能になる。このヒドラゾンの至適安定性／不安定性は、薬剤とターゲッティング剤との各組み合わせについて同一である必要はない。
【００２５】
本明細書に記載される複合体の構築法により、活性の喪失を伴わなず、炭水化物を基にする複合体と比較すると予期せぬほど安定であるメチルトリスルフィド抗腫瘍抗生物質の複合体が作成される。幾つかの事例においてはこれらの複合体は、炭水化物を基にする方法により作成された類似複合体と比較すると効力が１００倍高く、そしてその上非標的細胞株に対する細胞障害性が減少している。このことにより、標的細胞株と非標的細胞株との間の最高１０，０００倍までの選択性を有する複合体が生じる。
【００２６】
これらの複合体の構築に必要なリンカーは、以下に示す式
Ｚ3[ＣＯ−Ａｌｋ1−Ｓｐ1−Ａｒ−Ｓｐ2−Ａｌｋ2−Ｃ(Ｚ1)＝Ｚ2]m
により表すことができる。
【００２７】
Ａｌｋ1およびＡｌｋ2は独立に、ある結合、あるいは分岐状もしくは非分岐状の（Ｃ1−Ｃ10）アルキレン鎖である。Ｓｐ1は、ある結合、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−ＮＲ’−、−Ｎ（ＣＨ2ＣＨ2）2Ｎ−、もしくは−Ｘ−Ａｒ’−Ｙ−（ＣＨ2）n−Ｚであり、この式中、ｎは０から５までの整数であり、Ｘ、Ｙ、およびＺは独立に、ある結合、−ＮＲ’−、−Ｓ−、もしくは−Ｏ−であり、そしてＡｒ’は、（Ｃ1−Ｃ5）アルキル、（Ｃ1−Ｃ4）アルコキシ、（Ｃ1−Ｃ4）チオアルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ’、ＣＯＮＨＲ’、Ｏ（ＣＨ2）nＣＯＯＲ’、Ｓ（ＣＨ2）nＣＯＯＲ’、Ｏ（ＣＨ2）nＣＯＮＨＲ’、もしくはＳ（ＣＨ2）nＣＯＮＨＲ’［式中、ｎはこれまでに特定されるものである］の内の一つ、二つ、もしくは三つの基により場合によっては置換される１，２−、１，３−、もしくは１，４−フェニレンであり、ただしＡｌｋ1がある結合であるときはＳｐ1がある結合になる。Ｒ’は、−ＯＨ、（Ｃ1−Ｃ4）アルコキシ、（Ｃ1−Ｃ4）チオアルコキシ、ハロゲン、ニトロ、（Ｃ1−Ｃ3）ジアルキルアミノ、もしくは（Ｃ1−Ｃ3）トリアルキルアンモニウム−Ａ-［この場合、Ａ-は塩を完成する薬剤学的に許容されるアニオンである］の内の一つもしくは二つの基により場合によっては置換される分岐状もしくは非分岐状の（Ｃ1−Ｃ5）鎖である。Ｓｐ2は、ある結合、−Ｓ−、もしくは−Ｏ−であり、ただしＡｌｋ2がある結合であるときはＳｐ2がある結合になる。Ｚ3はヒドロキシル基であり、そしてｍは１である。
【００２８】
基Ａｌｋ1、Ｓｐ1、Ａｌｋ2、およびＳｐ2の組み合わせ、ならびに以下に論じる基Ａｒは、カルボン酸からのカルボニル基のスペーシングを考慮した上でのものである。その上、Ａｌｋ1およびＳｐ1はカルボキシル基が活性化される際およびその後の両方に、カルボキシル基の反応性に影響を与えることがある。Ａｌｋ2とＳｐ2とが一緒になってある結合を形成する場合には、Ｓｐ1基も、リンカーの他方の末端のカルボニル基の反応性、およびそのカルボニル上での反応により形成される産物の安定性に影響を与える。基Ｒ’を使用してこれらの化合物の溶解性および他の生理化学的特性に影響を与えることが可能である。Ａｌｋ1についての好ましい態様は（Ｃ2−Ｃ5）アルキルであり、そしてＳｐ1については酸素原子である。基Ａｌｋ2とＳｐ2とが一緒になる場合についての好ましい態様は、ある結合である。
【００２９】
先に示される構造を参考にすると、基Ｚ2は酸素原子である。基Ｚ1は、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ5）アルキル、あるいは（Ｃ1−Ｃ5）アルキル、（Ｃ1−Ｃ4）アルコキシ、（Ｃ1−Ｃ4）チオアルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ’、ＣＯＮＨＲ’、Ｏ（ＣＨ2）nＣＯＯＲ’、Ｓ（ＣＨ2）nＣＯＯＲ’、Ｏ（ＣＨ2）nＣＯＮＨＲ’、もしくはＳ（ＣＨ2）nＣＯＮＨＲ’［式中、ｎおよびＲ’はこれまでに特定されるものである］の内の一つ、二つ、もしくは三つの基で場合によっては置換されるフェニルである。基Ｚ1はカルボニル基の反応性、およびそのカルボニルでの反応により形成される生成物の安定性に顕著な影響を及ぼす。Ｚ1がアリールであり、かつその生成物が例えばヒドラゾンである場合には、そのヒドラゾンは比較的安定であり、一方でＺ1が水素である場合には、中程度のレベルの安定性が得られ、そしてＺ1が（Ｃ1−Ｃ6）アルキルである場合には、比較的安定性の低いヒドラゾンが形成される。先に記載したように、安定性は抗体から薬剤が時期尚早な状態で放出されるのを回避するのに重要であるが、複合体がいったん標的細胞内に吸収された際の薬剤の放出を可能にするためには幾分かの不安定性が必要である。Ｚ1基についての好ましい態様は（Ｃ1−Ｃ3）である。
【００３０】
基Ａｒは、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、（Ｃ1−Ｃ4）チオアルコキシ、ハロゲン、ニトロ、ＣＯＯＲ’、ＣＯＮＨＲ’、Ｏ（ＣＨ2）nＣＯＯＲ’、Ｓ（ＣＨ2）nＣＯＯＲ’、Ｏ（ＣＨ2）nＣＯＮＨＲ’、もしくはＳ（ＣＨ2）nＣＯＮＨＲ’［式中、ｎおよびＲ’はこれまでに特定されるものである］の内の一つ、二つ、もしくは三つの基で場合によっては置換される１，２−、１，３−、もしくは１，４−フェニレンであるか、あるいは１，２−、１，３−、１，４−、１，５−、１，６−、１，７−、１，８−、２，３−、２，６−、もしくは２，７−ナフチリデンであるか、あるいは
【００３１】
【化５６】
0003650165.tif 000010
［この場合、Ｓｐ1はフェノチアジンの窒素にのみ連結している結合である］であり、これら各々は、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、（Ｃ1−Ｃ4）チオアルコキシ、ハロゲン、ニトロ、またはＣＯＯＲ’、ＣＯＮＨＲ’、Ｏ（ＣＨ2）nＣＯＯＲ’、Ｓ（ＣＨ2）nＣＯＯＲ’、Ｏ（ＣＨ2）nＣＯＮＨＲ’、もしくはＳ（ＣＨ2）nＣＯＮＨＲ’［式中、ｎおよびＲ’はこれまでに特定されるものである］の内の一つ、二つ、三つ、もしくは四つの基で場合によっては置換される。
【００３２】
Ａｒの選択は、Ａｌｋ2とＳｐ2とが一緒になってある結合を形成する場合には、カルボニルから得られる生成物の安定性に重要な影響を及ぼす。Ｓｐ1とＳｐ2との相対的な位置、およびＡｒ上の追加置換基の存在の両方を用いて、カルボニルから形成される生成物の加水分解の際の挙動を微細に調節することができる。Ａｒについての好ましい態様は、１，２−、１，３−、もしくは１，４−フェニレン、あるいは１，２−、１，３−、１，４−、１，５−、１，６−、１，７−、１，８−、２，３−、２，６−、もしくは２，７−ナフチリデンである。
【００３３】
本発明において有用なリンカーの具体例の構造は、以下に記載するようなものである。
【００３４】
【化５７】
0003650165.tif 000011
【００３５】
【化５８】
0003650165.tif 000012
【００３６】
【化５９】
0003650165.tif 000013
【００３７】
【化６０】
0003650165.tif 000014
これらのリンカーのより単純なものの内の幾つかのみ、すなわちリンカー１、２、３、１９、２３、２４、および３３を市販品として入手することができる。リンカー２０は、登録番号第５０８４−４５−７号としてＣｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ社によりリストされている。７、８、１０、１３、１４、１５、１６、１７、２０、２１、２５、２８、３０、および３１のような、それらの構造の一部分としてアリールエーテルを含む多くのリンカーは、フェノール性ケトンを４−ブロモ酪酸エチルのような求電子試薬と炭酸カリウムのような適切な塩基を用いてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような適切な溶媒中でアルキル化させ、そしてその後にそのエステルを、例えばメタノール水溶液中の水酸化ナトリウムもしくは炭酸カリウムのようなものでの加水分解により、要求されるカルボン酸へと転化させることにより作成することができる。この手法は、５、６、９、１１、１８、もしくは２７のようなリンカーについて用いることもでき、この場合カルボニルはオレフィンもしくはアルコールのようなものでマスクさせた形態で製造の初期段階を通過させる。その後にカルボニルを、それぞれオゾンもしくはクロロクロム酸ピリジニウムでの酸化により実施例に記載される要領で後から産生することができる。この方法は、より反応性の高いカルボニルが最終リンカーに存在する場合には特に貴重である。
【００３８】
必要であらば、要求されるカルボン酸を、リンカー２６の製造におけるのと同じ要領でのマスク形態で導入することができる。この場合には、フェノールを５−ブロモ−１−ペンテンでアルキル化させ、そしてこの酸を、オゾンとの反応、およびその後のクロロクロム酸ピリジニウムとの反応により遊離させる。２２もしくは３２のようなリンカーは、適切な第二級アミン（各々ピペラジンもしくはフェノチアジン誘導体）を適切な求電子試薬でアルキル化させ、そしてその後に既述の手法に類似する要領で、後の段階で要求されるカルボン酸を露出させることにより作成することができる。リンカー１２は、対応するケイ皮酸塩を水素で還元することにより作成した。この反応によっては比較的不純な生成物が取得されるものの、この粗生成混合物は要求されるヒドラゾンへの転化に役立つものであり、いずれの副生成物もアルデヒド基を含んでいないことがその理由である。リンカー３３、３４、３５、もしくは３６のような、より精巧な置換基を有する構造は、例えばエステルを適切な求核試薬と反応させるか、あるいはヨウ化メチルのような求電子試薬でアミンを第四級にすることによりより単純な構造から作成することができる。
【００３９】
先に特定されるリンカーを用いて以下に記載する複合体を形成することができる。
【００４０】
【化６１】
0003650165.tif 000015
スキーム１
先のスキーム１を参考にすると、構造Ａのリンカー［式中、Ｚ1、Ａｌｋ1、Ｓｐ1、Ａｒ、Ｓｐ2、およびＡｌｋ2はこれまでに特定されるものである］を、構造Ｗ−ＳＳ−Ｓｐ−Ｑの化合物［これ自体はメチルトリチオ抗腫瘍抗生物質から取得され、そして式中、Ｗは、
【００４１】
【化６２】
0003650165.tif 000016
であり、
Ｒ1は、
【００４２】
【化６３】
0003650165.tif 000017
、もしくはＣＨ3であり、
Ｒ2は、
【００４３】
【化６４】
0003650165.tif 000018
、もしくはＨであり、
Ｒ3は、
【００４４】
【化６５】
0003650165.tif 000019
、もしくはＨであり、
Ｒ4は、
【００４５】
【化６６】
0003650165.tif 000020
、もしくはＨであり、
Ｒ6もしくはＲ7は、Ｈ、もしくは
【００４６】
【化６７】
0003650165.tif 000021
であり、
Ｒ5は、−ＣＨ3、−Ｃ2Ｈ5、もしくは−ＣＨ（ＣＨ3）2であり、Ｘは、ヨウ素、もしくは臭素原子であり、Ｒ5’は、水素、もしくは基ＲＣＯであり、この式中、Ｒは、水素、分岐状もしくは非分岐状の（Ｃ1−Ｃ10）アルキルもしくは（Ｃ1−Ｃ10）アルキレン基、（Ｃ6−Ｃ11）アリール基、（Ｃ6−Ｃ11）アリール−アルキル（Ｃ1−Ｃ5）基、あるいはヘテロアリールもしくはヘテロアリール−アルキル（Ｃ1−Ｃ5）基であり、この場合、ヘテロアリールは、２−もしくは３−フリル、２−もしくは３−チエニル、２−もしくは３−（Ｎ−メチルピロリル）、２−、３−、もしくは４−ピリジル、２−、４−、もしくは５−（Ｎ−メチルイミダゾリル）、２−、４−、もしくは５−オキサゾリル、２−、３−、５−、もしくは６−ピリミジニル、２−、３−、４−、５−、６−、７−、もしくは８−キノリル、あるいは１−、３−、４−、５−、６−、７−、もしくは８−イソキノリルとして特定され、全てのアリールおよびヘテロアリールは場合によっては一つもしくは複数のヒドロキシ、アミノ、カルボキシ、ハロ、ニトロ、低級（Ｃ1−Ｃ3）アルコキシ、もしくは低級（Ｃ1−Ｃ5）チオアルコキシ基により置換され、
Ｓｐは、直鎖状もしくは分岐鎖状の二価もしくは三価の（Ｃ1−Ｃ18）基、二価もしくは三価のアリールもしくはヘテロアリール基、二価もしくは三価の（Ｃ3−Ｃ18）シクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキル基、二価もしくは三価のアリール−もしくはヘテロアリール−アルキル（Ｃ1−Ｃ18）基、二価もしくは三価のシクロアルキル−もしくはヘテロシクロアルキル−アルキル（Ｃ1−Ｃ18）基、あるいは二価もしくは三価の（Ｃ2−Ｃ18）不飽和アルキル基であり、この場合、ヘテロアリールは、フリル、チエニル、Ｎ−メチルピロリル、ピリジニル、Ｎ−メチルイミダゾリル、オキサゾリル、ピリミジニル、キノリル、イソキノリル、Ｎ−メチルカルバゾイル、アミノクマリニル、もしくはフェナジニルであり、かつＳｐが三価の基である場合には、Ｓｐは、低級（Ｃ1−Ｃ5）ジアルキルアミノ、低級（Ｃ1−Ｃ5）アルコキシ、ヒドロキシ、もしくは低級（Ｃ1−Ｃ5）アルキルチオ基により置換されることがあり、そして
Ｑは、Ｈ2ＮＨＮＣＯ−、Ｈ2ＮＨＮＣＳ−、Ｈ2ＮＨＮＣＯＮＨ−、Ｈ2ＮＨＮＣＳＮＨ−、もしくはＨ2ＮＯ−である］と縮合させて構造Ｂ［式中、Ｚ1、Ａｌｋ1、Ｓｐ1、Ａｒ、Ｓｐ2、およびＡｌｋ2はこれまでに特定されるものであり、式中、ＳｐおよびＷは先に特定されるものであり、Ｑは、＝ＮＨＮＣＯ−、＝ＮＨＮＣＳ−、＝ＮＨＮＣＯＮＨ−、＝ＮＨＮＣＳＮＨ−、もしくは＝ＮＯ−であり、そしてＺ3は−ＯＨである］を生じる。
【００４７】
縮合は最も適合性の高い有機溶媒中で実施するが、これはメタノールもしくはエタノールのようなアルコール性溶媒中で特に効率がよい。この縮合反応は、酸により触媒作用がもたらされる。リンカー自体のカルボン酸は多くの場合においてこの反応の触媒作用を行うのに十分なものであるが、約５％の酢酸のような適合性酸触媒を添加すると多くの場合反応速度の改善の手助けとなる。この反応の温度は、おおよその室温からその溶媒の還流温度までであることができる。生成物は、揮発性溶媒を除去し、そしてその混合物を、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社から入手することができる改変型シリカゲルであるＢｉｏＳｉｌ  Ａのような適切な媒質上でのクロマトグラフィーにより精製することにより純粋形態で単離される。構造Ｂの生成物、およびこれらの化合物の更に進んだ変換からの生成物は、Ｑとして特定される位置では簡単に内部変換することができるシンおよびアンチ異性体として存在し、そしてこれらの生成物は、これらの化合物を調査する際の溶媒およびｐＨの厳密な条件に依存して異なる水和形態を取ることがあるということを理解すべきである。このような様々な物理学的形態も、本発明の範囲内に含まれる。
【００４８】
次には構造Ｂ（Ｚ3＝−ＯＨ）のカルボン酸を、これらの中間体と担体分子との複合体形成の準備として活性化エステルへと転化させる。このような転化によりＺ3（構造Ｂ）が、ハロゲン、−Ｎ3、
【００４９】
【化６８】
0003650165.tif 000022
へと転化される。
【００５０】
例えば、構造Ｂ（Ｚ3＝−ＯＨ）のカルボキシル形態と、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドもしくは１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドの塩酸塩、およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド、あるいは適合性である他のカルボキシル活性化基のようなカップリング剤との、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、もしくはアセトニトリルのような不活性溶媒中での反応により、これまでに既述したＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルのような活性エステルの形成が誘導される。これらの活性エステルは、揮発性溶媒の除去、およびＢｉｏＳｉｌ  Ａのような適切な媒質上でのクロマトグラフィーにより純粋形態で単離することができる。別法では、カップリング反応をポリマー性のカルボン酸で静止させ、濾過し、そして有機溶媒を除去し、そしてこの粗生成物を更に精製することなくこれ以降の段階に使用することができる。この生成物は、
【００５１】
【化６９】
0003650165.tif 000023
の場合のように活性エステルの取り扱いが困難である際には特に有用である。
【００５２】
本発明の複合体の作成における最終段階は、活性化エステル（構造Ｃ）とターゲッティング用分子との、スキーム１に示される反応を必要とする。この反応により構造Ｄの化合物が得られるが、式中、Ｚ1、Ｚ2、Ａｌｋ1、Ｓｐ1、Ａｒ、Ｓｐ2、およびＡｌｋ2はこれまでに特定されるものであり、ｍは０．１から１５までであり、そしてＺ3は、成長因子、またはモノ−もしくはポリクローナル抗体のような蛋白質、それらの抗原認識性断片、あるいは化学的もしくは遺伝子的に操作してあるそれらの等価物、あるいはステロイドであり、この場合、蛋白質への共有結合は、「ｍ」のリシン側鎖との反応により形成されるアミドであり、そしてステロイドへの共有結合はアミドもしくはエステルである。
【００５３】
この複合体形成反応は、僅かながら塩基性を示すｐＨ（ｐＨ〜７．４−８．５）のホウ酸、リン酸、もしくはＨＥＰＥＳのような様々な適切な緩衝液中で実施することができる。その後、この最終構築物を、ゲル排除クロマトグラフィーのような適切な方法により精製して未結合の薬剤および凝集物を除去して、単量体の複合体を取得することができる。この一連の段階により、本発明の実施例の項目にその詳細が記載される方法Ａが構成されている。
【００５４】
スキーム２において示される、スキーム１の複合体を構築するための別法も企画されている。
【００５５】
【化７０】
0003650165.tif 000024
スキーム２
例えば、リンカー（既述の構造Ａ）を活性エステルに変換し、そしてまずターゲッティング用分子と反応させてから薬剤と反応させることができる。このような操作により構造Ａが構造Ｅ［式中、Ｚ1、Ａｌｋ1、Ｓｐ1、Ａｒ、Ｓｐ2、およびＡｌｋ2はこれまでに特定されるものであり、Ｚ2は酸素原子であり、そしてＺ3は、ハロゲン、−Ｎ3、
【００５６】
【化７１】
0003650165.tif 000025
である］に変換される。
【００５７】
その後この活性化エステルを担体と反応させて構造Ｆを製造するが、式中、Ｚ1、Ａｌｋ1、Ｓｐ1、Ａｒ、Ｓｐ2、およびＡｌｋ2はこれまでに特定されるものであり、Ｚ2は酸素原子であり、ｍは約１から約１０までであり、そしてＺ3は、モノ−もしくはポリクローナル抗体、それらの抗原認識性断片、および化学的もしくは遺伝子的に操作してあるそれらの等価物、ならびに成長因子、および化学的もしくは遺伝子的に操作してあるこれらの等価物から選択されるある蛋白質［この場合、蛋白質への共有結合は「ｍ」のリシン側鎖との反応により形成されるアミドである］、あるいはステロイド［この場合、ステロイドへの共有結合はアミドもしくはエステルである］である。
【００５８】
いったんターゲッティング用分子をリンカーで修飾させたら、これを構造Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗの化合物［この化合物自体はメチルトリチオ抗腫瘍抗生物質から取得し、そして式中、ＷおよびＳｐはこれまでに特定されるものであり、そしてＱは、Ｈ2ＮＨＮＣＯ−、Ｈ2ＮＨＮＣＳ−、Ｈ2ＮＨＮＣＯＮＨ−、Ｈ2ＮＨＮＣＳＮＨ−、もしくはＨ2ＮＯ−である］と反応させて構造Ｄの化合物（上述）を製造することができる。
【００５９】
スキーム２におけるこのような一連の段階により、本発明の実施例の項目における方法Ｂが構成されている。類似する抗体−カルボニル構築物が、既述の米国特許第５，１４４，０１２号において記載されている。本明細書に実例として挙げられる大部分のリンカーは新規のものであり、かつより広範囲の種類の構造およびそのためのより広範囲の安定性が実証されているという利点を提供する。具体例として、本発明にとっては新規のものであるアセトフェノンリンカーにより薬剤の加水分解的放出特性がより良好である複合体が作成され、そしてこの複合体は、本明細書において示される抗体例と共に使用する場合にその有効性が一層高くなる。具体的には、カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ヒドラジドと縮合させた４−ホルミルベンゼンプロピオン酸もしくは４−アセチルベンゼン酪酸を用いてｈ−Ｐ６７．６から製造した２つの複合体（これら２つの複合体は、図１の構造３の内、それぞれがＺ1＝−ＨおよびＺ1＝−ＣＨ3を有することのみが異なるに過ぎない）は、それぞれインビトロでのＩＣ50が１．０および０．０１２ｎｇ／ｍＬであり、そして特異性係数がそれぞれ９５０および２６，０００である。アセトフェノンを基にするリンカーはこの事例においては優れているように思えるが、いずれかの特定のターゲッティング剤−薬剤複合体についてどのリンカーが優れているかを予測することは必ずしも簡単ではない。
【００６０】
生物学的特徴
複合体の生物学的特性の評定には、以下に示す方法を用いての、未修飾抗体と比較する場合の標的細胞株上の抗原を認識する能力の測定、およびそれらの選択性および細胞障害性効果の決定が含まれる。
【００６１】
免疫親和性アッセイ
複合体の相対的免疫親和性を、固定数の細胞に対する結合について、様々な濃度のテスト複合体を125Ｉ−ボルトン  ハンター（Ｂｏｌｔｏｎ  Ｈｕｎｔｅｒ）試薬でラベル化した同一抗体の固定量と競合させる競合的結合アッセイにおいて決定する。ｍ−もしくはｈ−Ｐ６７．６については、ＨＥＬ  ９２．１．７ヒト赤白血病細胞［ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｉｔｏｎ）ＴＩＢ  １８０］を１０7細胞／ｍＬで用い、一方でＣＴ−Ｍ−０１については細胞株Ａ２７８０ＤＤＰ（Ｅ．Ｍ．Ｎｅｗｍａｎ、ｅｔ  ａｌ．、”Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．”３７、４４３（１９８８））を用い、そしてｍ−もしくはｈ−Ａ３３については細胞株ＣＯＬＯ  ２０５（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２２２）を用いる。標的細胞に対するラベル化抗体の結合の５０％阻害を取得するのに必要なテスト複合体の濃度を、５０％阻害に必要なネガティブ抗体の対照用調製物の濃度と比較する。
【００６２】
アッセイ用試料を培地中で〜３００μｇ蛋白質／ｍＬに調節し、そして各々の６重試験用の４倍希釈液を、各試料の合計７つの濃度について培地（５％の熱不活化ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ−１６４０）中で調製する。対照抗体を同様の方法で希釈する。各希釈物の０．０５ｍＬの分注を１２×７５ｍｍのプラスチック製試験管に移し、そして０．０５ｍＬの４μｇ／ｍＬのラベル化対照抗体を添加する。この試験管を混合させ、そして４℃で冷却する。その後０．１ｍＬの冷却済み細胞懸濁液を各試験管に添加する。すべての試験管を再度混合させ、そして４℃で１時間インキュベートする。
【００６３】
最大結合および非特異的結合を決定するための対照が各アッセイに含まれている。最大結合は、０．０５ｍＬの培地、０．０５ｍＬの125Ｉ−抗体、および０．１ｍＬの細胞を混合することにより決定し、一方で非特異的結合は、０．０５ｍＬの５００μｇ／ｍＬの未処理抗体、０．０５ｍＬのヨウ化抗体、および０．１ｍＬの細胞を混合することにより決定する。
【００６４】
インキュベーションの終了時点で細胞を、各回毎に３ｍＬの冷ＰＢＳを用いる遠心および再懸濁により２度洗浄する。この細胞を０．５ｍＬのＰＢＳに再懸濁し、清浄な試験管に移し、そして放射活性をガンマー計測器で決定する。
【００６５】
結合のパーセント阻害は以下に示す等式により算出する。
【００６６】
【式１】
0003650165.tif 000026
パーセント阻害値を試料濃度に対してプロットし、そして得られる曲線から結合の５０％阻害を生じる試料濃度を内挿する。その後、各々のテスト済み複合体の相対的免疫親和性を以下に示すように決定する。
【００６７】
相対的免疫親和性＝ＩＣ50（対照）÷ＩＣ50（試料）
インビトロでの細胞障害性アッセイ
細胞障害性活性は、様々な濃度のテスト複合体を抗原−陽性細胞および抗原−陰性細胞と共に１時間インキュベートし、そして３日間培養するインビトロでのパルスアッセイにおいて決定する。生存率は、培養最後の２４時間の間の［3Ｈ］チミジン取り込みにより評定する。効力測定の際、［3Ｈ］チミジン取り込みを５０％阻害するのに必要なテスト複合体の濃度（ＩＣ50）を滴定曲線から決定する。特異性は、Ｐ６７．６、Ａ３３、およびｍ−ＣＴ−Ｍ−０１について抗原−陽性細胞および抗原−陰性細胞のＩＣ50値を比較することにより決定するか、あるいは同一薬剤と、ｈ−ＣＴ−Ｍ−０１複合体についてはターゲッティング用でない抗体Ｐ６７．６との複合体、または抗−Ｔａｃ複合体についてはＭＯＰＣ−２１との複合体を用いることにより決定する。ＭＯＰＣ−２１（Ｆ．Ｍｅｌｃｈｅｒｓ、”Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．”１１９、７６５（１９７０））は、正常な状態で生じていて生理学的に適合する抗原はいずれも認識しない抗体である。
【００６８】
Ｐ６７．６については、抗原−陽性のＨＬ−６０ヒト前骨髄球白血病細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２４０）および抗原−陰性のＲａｊｉヒトバーキット（Ｂｕｒｋｉｔｔ）白血病細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ８６）を用い、一方でＡ３３については、抗原−陽性のＣＯＬＯ  ２０５細胞、および抗原−陰性のＲａｊｉ細胞を用い、そしてｈ−ＣＴ−Ｍ−０１については、ＺＲ−７５−１細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １５００）を用いる。ｍ−ＣＴ−Ｍ−０１については、抗原−陽性のＡ２７８０ＤＤＰ細胞および抗原−陰性のＲａｊｉ細胞を用い、そしてｈ−ＣＴ−Ｍ−０１については、ＺＲ−７５−１細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １５００）を用いる。細胞を遠心により回収し、計数し、そして〜１０6／ｍＬの細胞濃度で新鮮な培地（ＲＰＭＩ−１６４０＋５％の熱不活化ウシ胎児血清＋抗生物質）中に再懸濁させる。
【００６９】
アッセイ用の試料を培地中で〜１μｇ／ｍＬの薬剤等量に調節し、そして各々の試料の５重試験用の１０倍希釈液を、各試料の総計６つの濃度について培地中で調製する。その上各試料セットと共に、培地対照、ならびに薬剤対照としてのカリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマーが含まれている。０．１ｍＬの細胞懸濁液の分注を０．１ｍＬの試料を含む１７×１００ｍｍのプラスチック製試験管に添加し、一方で別の一連の試験管を各細胞株用に調製する。これらの試験管の蓋を緩く締め、そして空気中５％ＣＯ2の湿度雰囲気下、３７℃で１時間インキュベートする。インキュベーション終了時には細胞を、各回毎に８ｍＬの培地を用いて遠心および再懸濁により２回洗浄する。細胞ペレットを１ｍＬの培地中に再懸濁させ、そして９６−ウエルのマイクロタイタープレートで０．２ｍＬ／ウエルでの３重試験用にプレート培養を行う。このプレートを先の要領で３７℃で２日間インキュベートする。その後、０．１ｍＬの培地を各ウエルから取り除き、０．１μＣｉの［3Ｈ］チミジンを含む０．１ｍＬの新鮮な培地に入れ替える。プレートをインキュベーターに戻してもう一日間インキュベートする。プレートを凍結および解凍させ、そして細胞をグラスファイバー製のフィルターマット上に回収する。取り込まれた［3Ｈ］チミジンの量を液体シンチレーション係数法により決定する。
【００７０】
各試料の希釈液の３重試験用培養物の測定済みｃｐｍの平均値を割り出し、そして［3Ｈ］チミジン取り込みのパーセント阻害を以下に示す等式［式中、阻害なし、および最大阻害についての値は、それぞれ培地対照およびカリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマーの最高濃度から取得する］により算出する。
【００７１】
【式２】
0003650165.tif 000027
パーセント阻害値を試料濃度に対してプロットし、そして得られる曲線から［3Ｈ］チミジン取り込みの５０％阻害を生じる試料濃度（ＩＣ50）を内挿する。Ｐ６７．６、Ａ３３、およびｍ−ＣＴ−Ｍ−０１複合体については、抗原−陽性細胞についての具体的な複合体の特異性を、標的細胞に対するＩＣ50への非標的細胞に対するＩＣ50の比率をとることにより算出する。同一の比率を遊離の薬剤について算出する。その後その薬剤に対する２つの細胞株の特異性の固有の違いを修正するために、各試料の特異性係数を以下に示すように算出する。
【００７２】
【式３】
0003650165.tif 000028
抗−Ｔａｃもしくはｈ−ＣＴ−Ｍ−０１の複合体については以下に示すように、特異性係数をターゲッティング用でない複合体とターゲッティング用複合体についてのＩＣ50の比率として算出する。
【００７３】
【式４】
0003650165.tif 000029
インビボでの抗腫瘍アッセイ
ヒト腫瘍（〜１０7−１０8細胞、もしくは充実性腫瘍の５−８．２ｍｍ3の断片）を無胸腺マウス（ヌードマウス）に皮下移植し、そしてテスト試料を、テスト群当たり５匹のマウスおよび食塩水対照群当たり１０匹のマウスを用い、腫瘍移植後２−３日目に開始するｑ４日×３というスケジュールでの複数用量レベルで腹膜内（ｉｐ）に接種する。腫瘍の容積は、Ｆｏｗｌｅｒ社のウルトラＣＡＬＩＩ電子カリパスを用いて腫瘍移植後最高４２日まで毎週腫瘍の長さおよび幅を測定し、そして式：ｍｇ腫瘍＝｛長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）｝／２、を用いて評定する。腫瘍成長阻害は、未処理対照と比較しての処理済み動物の平均腫瘍容積の比率として算出し、そして「％  Ｔ／Ｃ」として表現する。（０％  Ｔ／Ｃは、検出可能な腫瘍が存在しないことを示す。全ての対照動物は簡単に測定することができる腫瘍を常時生じている）。
【００７４】
コロニー形成のエックスビボでの阻害
Ｐ６７．６複合体については、ＣＤ−３３陽性であるヒト白血病の骨髄細胞を、２ｎｇ／ｍＬの薬剤等価物の存在下でプレート培養する。形成されるコロニー数を計数し、そしてＣＤ−３３抗原を認識しないｈ−ＣＴ−Ｍ−０１複合体からなる対照に対するパーセンテージとして記録する。記録された全てのデータは、白血球細胞が良好な抗原発現を示しかつこのような一般的な種類の治療に対して良好な反応を示す一人の患者からの骨髄を用いて作成した。
【００７５】
抗−Ｔａｃについては、ＣＭＬ患者からの抹消血をテストした。様々な造血系統の細胞についての前駆体細胞は、メチルセルロースのような半固形マトリックス上で骨髄細胞および血液細胞を培養し、そして成熟分化を遂げた細胞を含むコロニーの形成を観察することにより検出することができる。増殖して顆粒球もしくはマクロマージ、あるいはその両方のコロニーを形成し、そして顆粒球−マクロファージについてのコロニー形成性単位（ＣＦＵ−ＧＭ）と称される前駆体細胞が存在する。幾つかのＣＦＵ−ＧＭは７日以内にコロニーを形成し（Ｄ７  ＣＦＵ−ＧＭ）、幾つかのものはコロニー形成に１４日を必要とする（Ｄ１４  ＣＦＵ−ＧＭ）［Ｎ．Ｊａｃｏｂｓｅｎ、ｅｔ  ａｌ．、”Ｂｌｏｏｄ”５２：２２１、（１９７８）、およびＦｅｒｒｅｒｏ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ”８０：４１１４、（１９８３）］。抗−Ｔａｃで処理した血液細胞についてのＤ１４  ＣＦＵ−ＧＭの増殖の阻害を、ターゲッティング用でないＭＯＰＣ  ２１複合体で処理したものと比較した。Ｄ１４ＣＦＵ−ＧＭコロニー数を試料濃度に対してプロットし、そして得られる曲線からＤ１４  ＣＦＵ−ＧＭコロニー増殖の５０％阻害を生じる試料濃度を内挿する。特異性は、ターゲッティング用複合体のＩＣ50に対するターゲッティング用でない複合体のＩＣ50の比率により測定する。正常な血液はＣＦＵ−ＧＭコロニーを生じず、そして正常な骨髄のＤ１４  ＣＦＵ−ＧＭコロニーは抗−Ｔａｃ複合体によっては阻害されない。
【００７６】
本発明は更に、以下に示す非制限的製造物および実施例に関して記載する。（製造物には本発明に有用な化合物の合成法を記載されるが、その方法については既知の従来の技術が存在する。実施例には本発明にとって有用であり、かつ新規である化合物の合成法が記載される。）
構造Ａの合成（スキーム１およびスキーム２）
実施例１、化合物５
４−（２−オキソエトキシ）ベンゼンプロピオン酸
４−ヒドロキシベンゼンプロピオン酸（５００ｍｇ、３．１ミリモル）を、９１０ｍｇ（７．５２ミリモル）の臭化アリルと、実施例２に記載するのと同一の方法により反応させて６１０ｍｇ（８２％）の２−プロペニル−４−（２−プロペニルオキシ）−ベンゼンプロピオン酸エステルを無色油状物として取得する。この生成物は、更に精製を加えることなく次の反応に利用する。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＩＲ（neat）３４５０，１７４０，１６５０，１６１０，１５１０ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ（低分解能））ｍ／ｅ ２４７（Ｍ＋Ｈ）、２２９，２１５，１８７，１７５。Ｃ15Ｈ18Ｏ3についての質量分析（計算値）：Ｃ、７３.１５；Ｈ、７．３７；（実測値）Ｃ、７３．０９；Ｈ、６．７４。
【００７７】
２−プロペニル−４−（２−プロペニルオキシ）ベンゼンプロピオン酸エステル（２７１ｍｇ、１．１ミリモル）を０．１４ｍＬ（１．３８ミリモル）の１０Ｍ水酸化ナトリウム溶液で、実施例２について記載したのと同一の方法に従って処理して１９６ｍｇ（８６％）の４−（２−プロペニルオキシ）ベンゼンプロピオン酸を白色粉末として取得する。この生成物は、更に精製を加えることなく次の反応に利用する。融点８８−８９℃。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＩＲ（ＫＢｒ）３２００，１７２０，１７００，１６１０ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ（低分解能））ｍ／ｅ ２０７（Ｍ＋Ｈ）、１８９，１７５，１４７。Ｃ12Ｈ14Ｏ3についての質量分析（計算値）：Ｃ、６９．８９；Ｈ、６．８４；（実測値）Ｃ、６９．８７；Ｈ、６．６８。
【００７８】
４−（２−プロペニルオキシ）ベンゼンプロピオン酸（１２０ｍｇ、０．５８ミリモル）をオゾンで、実施例２について記載したのと同一の方法により処理して１００ｍｇ（８２％）の４−（２−オキシエトキシ）ベンゼンプロピオン酸を白色粉末として取得する。融点９５−１００℃。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＩＲ（ＫＢｒ）３４００，１７４０，１７２０，１６１０ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ（低分解能））ｍ／ｅ ２０７，１９１，１７９，１６５，１４９。
【００７９】
実施例２、化合物６
３−（２−オキシエトキシ）安息香酸
４ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の１．０ｇ（７．２４ミリモル）の３−ヒドロキシ−安息香酸、３．０ｇ（２５．３ミリモル）の臭化アリル、および５ｇ（３６．２ミリモル）の炭酸カリウムの混合物を室温で１２時間撹拌する。この混合物を２０ｍＬのエーテルで希釈し、そして２０ｍＬの水で５回洗浄する。その後有機層を２０ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液と２０ｍＬの飽和塩酸ナトリウム溶液で連続的に洗浄する。有機層を分離し、そして硫酸マグネシウムに通して脱水させる。この混合物を濾過し、そして有機溶液を減圧下で濃縮して１．４ｇ（８８％）の３−（２−プロペニルオキシ）安息香酸の２−プロペニルエステルを無色透明の油状物として取得する。この生成物は、更に精製を加えることなく次の反応に利用する。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＩＲ（ＫＢｒ）１７２０，１６５０，１６００ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ（低分解能））ｍ／ｅ ２１９（Ｍ＋Ｈ）、２０３，１７５，１６１。Ｃ13Ｈ14Ｏ3についての質量分析（計算値）：Ｃ、７１．５４；Ｈ、６．４７；（実測値）Ｃ、７０．３１；Ｈ、５．９７。                    。
９ｍＬのメタノール／水（３：２）中の９１７ｍｇ（４．２ミリモル）の３−（２−プロペニルオキシ）安息香酸の２−プロペニルエステルの溶液を室温において、０．５３ｍＬ（５．２５ミリモル）の１０Ｍ  水酸化ナトリウム溶液で処理する。この溶液を１時間撹拌させ、その後に５ｍＬの１０％硫酸水素ナトリウム溶液で酸性化させ、そして２５ｍＬの酢酸エチルで抽出する。有機層を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムに通して脱水させ、そして減圧下で濃縮して７３２ｍｇ（９７％）の３−（２−プロペニルオキシ）安息香酸を白色粉末として取得する。この生成物は、更に精製を加えることなく次の反応に利用する。融点７８−７９℃。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＩＲ（ＫＢｒ）３０００，１６９０，１６２０。１５９０ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ（低分解能））ｍ／ｅ １７９（Ｍ＋Ｈ）、１６１，１３５。Ｃ10Ｈ10Ｏ3についての質量分析（計算値）：Ｃ、６７．４１；Ｈ、５．６６；（実測値）Ｃ、６７.３７；Ｈ、５.５９。
【００８０】
５ｍＬの塩化メチレン中の３００ｍｇ（１．６８ミリモル）の３−（２−プロペニルオキシ）安息香酸の溶液を−７８℃に冷却する。青色が持続するようになるまでガラス管を通して気体を泡立たせながらこの溶液中にオゾンを導入する。その後アルゴン気流でこの溶液を除去し、そして１ｍＬの硫化メチルを添加する。この溶液を２０ｍＬのエーテルで希釈し、そして水で洗浄する。有機層を分離し、そして硫酸マグネシウムに通し、その後に減圧下で濃縮して２８３ｍｇ（９３％）の３−（２−オキソエトキシ）安息香酸を無色の油状物として取得する。この生成物は、更に精製を加えることなく次の反応に利用する。融点１２０−１３０℃。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＩＲ（ＫＢｒ）３４００，３０００，１６８０，１５９０ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ（低分解能））ｍ／ｅ １８１（Ｍ＋Ｈ）、１６３，１３９，１１９。
【００８１】
製造物３、化合物７
４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸
１．８０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の０．９０ｇ（６．６１ミリモル）の４’−ヒドロキシアセトフェノン、および１．９３ｇ（９．９２ミリモル）の４−ブロンモ酪酸エチルの溶液を４８時間、２．７４ｇ（１９．８ミリモル）の炭酸カリウムおよび０．１１０ｇ（０．６６ミリモル）のヨウ化カリウムと共に脱水条件下で撹拌する。その後この反応混合物を減圧下で蒸発させ、そして残渣をエーテルと水との間で分配する。有機相を分離し、水で２度洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水させ、濾過し、そして減圧下で濃縮して茶色固体を取得する。これを暖めたエーテル−ヘキサン混合物から再結晶させる。薄茶色の結晶を空気乾燥させると０．８４ｇ（５１％）の４−（４−アセチルフェノキシ）−酪酸のエチルエステルが生じる。融点５９−６１℃。ＩＲ（ＫＢｒ）１７４０，１６７０ｃｍ-1。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ２５１.１２８５△＝−０.２ｍｍμ（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ14Ｈ18Ｏ4についての質量分析（計算値）：Ｃ、６７．１８；Ｈ、７．２５；Ｏ、２５.５７；（実測値）Ｃ、６７．１６；Ｈ、７．１６；Ｏ、２５．６８。
【００８２】
０．２５ｇ（１．００ミリモル）の４−（４−アセチルフェノキシ）−酪酸のエチルエステル（実施例１）の試料を撹拌しながら１５ｍＬのメタノール／水（３：２）中に溶解する。その後、０．２１ｇ（１．５０ミリモル）の炭酸カリウムを添加し、そしてこの反応物をアルゴン雰囲気下で１８時間撹拌する。次にこの反応混合物を引圧下で蒸発させ、そして残渣を２０ｍＬの０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液中に溶解する。この塩基性溶液をエーテルで洗浄し、水相を硫酸水素ナトリウムの添加により酸性化させ、そして得られる混合物を酢酸エチルで抽出する。その後この溶液を硫酸マグネシウムで脱水させ、濾過し、そして蒸発させると乳白色固体が生じる。これを、等量のエーテルを添加しながら酢酸エチルから結晶化させる。この操作により０．１８ｇ（８０％）の４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸を明薄茶色結晶として取得する。融点１４８−５０℃。ＩＲ（ＫＢｒ）１７３０，１６５０ｃｍ-1。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ２２３.０９７４△＝−０．４ｍｍμ（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ12Ｈ14Ｏ4についての質量分析（計算値）：Ｃ、６４．８５；Ｈ、６．３５；Ｏ、２８．８０；（実測値）Ｃ、６４．６１；Ｈ、６．３６；Ｏ、２９．０３。
【００８３】
製造物４、化合物８
４−（３−ホルミルフェノキシ）酪酸
３−ヒドロキシベンズアルデヒド（９００ｍｇ、７．３７ミリモル）を２．１６ｇ（１１．０５ミリモル）の４−ブロモ酪酸エチル、３．０６ｇ（２２．１１ミリモル）の炭酸カリウム、および触媒量（１１０ｍｇ、０．７４ミリモル）のヨウ化カリウムで、製造物３におけるものと同一の条件下で処理して黄色油状物を取得する。ヘキサン／酢酸エチル（１０：１）を用いるフラッシュクロマトグラフィーによる精製により、１．６１ｇの４−（３−ホルミルフェノキシ）酪酸のエチルエステルを薄黄色油状物として取得する。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＩＲ（neat）１７３０，１７００，１６００，１５８０ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ（低分解能））ｍ／ｅ ２３７（Ｍ＋Ｈ）、１９１，１１５。
【００８４】
３８５ｇ（１．６３ミリモル）の４−（３−ホルミルフェノキシ）酪酸のエチルエステルおよび８５０ｍｇ（６．１５ミリモル）の炭酸カリウムの溶液を６ｍＬのメタノール／水（３：２）中、室温で８時間撹拌する。その後この溶液を減圧下で濃縮する。残渣を１０ｍＬの０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液中に溶解し、そして２０ｍＬのエーテルで洗浄する。水層を分離し、そして飽和塩酸ナトリウム溶液で洗浄し、そして酢酸エチルで抽出する。有機層を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、その後硫酸マグネシウムに通して脱水する。その後この混合物を濾過し、そして減圧下で濃縮して３１５ｍｇの４−（３−ホルミルフェノキシ）酪酸を白色固体として取得する。この生成物は、更に精製を加えることなく次の反応に利用する。融点６２−６３℃。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＩＲ（ＫＢｒ）３４００，３０００，１７００，１６９０，１５９０ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ（低分解能）） ｍ／ｅ ２０９（Ｍ＋Ｈ）、１９１，１２３。
【００８５】
製造物５、化合物９
４−（４−ホルミルフェノキシ）酪酸
４−ヒドロキシベンジルアルコール（１ｇ、８．０６ミリモル）を１．７３ｇ（８．８６ミリモル）の４−ブロモ酪酸エチル、３．３４ｇ（２４．２ミリモル）の炭酸カリウム、および触媒量（１２０ｍｇ、０．８１ミリモル）のヨウ化ナトリウムで、製造物３に記載するのと同一条件下で処理して１．７３ｇの４−［４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ］酪酸のエチルエステルを薄茶色油状物（９０％）として取得する。この生成物は、更に精製を加えることなく次の反応に利用する。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＩＲ（neat）３４００，１７３０，１６１０，１５８０，１５１０ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｅ ２３８，２２１，１１５。
【００８６】
２３０ｍｇ（０．９７ミリモル）の４−［４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ］酪酸のエチルエステル、６２４．２ｍｇ（２．９ミリモル）のクロロクロム酸ピリジニウム、および触媒量の４Å分子篩の混合物を２ｍＬの塩化メチレン中、室温で３時間撹拌する。この混合物を２０ｍＬのエーテルで希釈し、濾過し、そして減圧下で濃縮して１７５ｍｇ（７６％）の薄黄色油状物を取得する。この油状物（１５０ｍｇ、０．６４ミリモル）を２．３ｍＬのメタノール／水（３：２）中に溶解し、そして３０７ｍｇ（２．２２ミリモル）の炭酸カリウムで、実施例４について記載した方法に従って処理して１００ｍｇ（７５％）の４−（４−ホルミルフェノキシ）酪酸を白色粉末として取得する。この生成物は、更に精製を加えることなく次の反応に利用する。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＩＲ（ＫＢｒ）３０００，１７４０，１６６０ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ（低分解能））ｍ／ｅ ２０９（Ｍ＋Ｈ）、１９１，１２３。
【００８７】
製造物６、化合物１０
４−（４−アセチル−２−メチルフェノキシ）酪酸
製造物３の方法を利用して、２．００ｇ（１３．３２ミリモル）の４−ヒドロキシ−３−メチルアセトフェノンを４−ブロモ酪酸エチルでアルキル化する。これにより３．４５ｇ（９８％）の４−（４−アセチル−２−メチルフェノキシ）酪酸のエチルエステルを、引圧下、７５℃で乾燥させた後に金色油状物として取得する。ＩＲ（neat）１７４０，１６７５ｃｍ-1。1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ２６５（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ15Ｈ20Ｏ4についての質量分析（計算値）：Ｃ、６８．１６：Ｈ、７．６３；Ｏ、２４．２１；（実測値）Ｃ、６７．９２；Ｈ、７．４４；Ｏ、２４．６４。  製造物３の方法に従って、２．５０ｇ（９．４６ミリモル）の４−（４−アセチル−２−メチルフェノキシ）酪酸のエチルエステルをけん化させて所望の化合物を固体として取得する。これを酢酸エチル／エーテルから再結晶させると１．３２ｇ（５９％）の４−（４−アセチル−２−メチルフェノキシ）酪酸が白色結晶として生じる。融点１１４−１６℃。ＩＲ（ＫＢｒ）１７３０，１６５０ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ２３７（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ13Ｈ16Ｏ4についての質量分析（計算値）：Ｃ、６６．０８；Ｈ、６．８３；Ｏ、２７．０９；（実測値）Ｃ、６５．８８；Ｈ、６．９２；Ｏ、２７．２０。
【００８８】
製造物７、化合物１１
４−（４−ホルミル−２−メトキシフェノキシ）酪酸
４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジルアルコール（１ｇ、６．４６ミリモル）を、１．７３ｇ（７．１３ミリモル）の４−ブロモ酪酸エチル、２．６９ｇ（１９．４６ミリモル）の炭酸カリウム、および触媒量（９７．２２ｍｇ、０．６５ミリモル）のヨウ化ナトリウムで、製造物３に記載される要領で処理して８２１ｍｇの４−［４−（ヒドロキシメチル）−２−メトキシフェノキ］酪酸のエチルエステルを薄茶色油状物（４７％）として取得する。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＩＲ（neat）３５００，１７３０，１６２０，１６００ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ（低分解能））ｍ／ｅ ２６９（Ｍ＋Ｈ）、２５１，２２３，１９５。
【００８９】
４−［４−（ヒドロキシメチル）−２−メトキシフェノキ］酪酸のエチルエステル（４３１ｍｇ、１．６１ミリモル）を１．０ｇ（４．８ミリモル）のクロロクロム酸ピリジニウムで、実施例５に記載される方法により処理して２８０ｍｇ（６５％）の４−（４−ホルミル−２−メトキシフェノキシ）酪酸のエチルエステルを無色油状物として取得する。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＩＲ（neat）１７３０，１６９０，１６００，１５８０ｃｍ-1。
【００９０】
４−（４−ホルミル−２−メトキシフェノキシ）酪酸のエチルエステル（２４０ｍｇ、０．９０ミリモル）を３ｍＬのメタノール／水（３：２）中に溶解し、そして４３５ｍｇ（３．１５ミリモル）の炭酸カリウムで、実施例４について記載した方法に従って処理して１２５ｍｇ（５８％）の４−（４−ホルミル−２−メトキシフェノキシ）酪酸を白色粉末として取得する。融点１４３−１４８℃。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＩＲ（ＫＢｒ）３５７５，３５００，１７２０，１７００，１６８０，１６００，１５８５ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ（低分解能））ｍ／ｅ ２３９（Ｍ＋Ｈ）、２２１，２０７，１５３。
【００９１】
製造物８、化合物１２
４−ホルミルベンゼンプロピオン酸
１０ｍＬのメタノール中の２５３ｍｇ（１．４４ミリモル）の４−ホルミルケイ皮酸および３２．６１ｍｇの酸化プラチナの混合物を室温で一晩、風船により供給される水素雰囲気下で撹拌する。この混合物をシーライトを通して濾過し、そして減圧下で濃縮する。残渣を０．１Ｎの水酸化ナトリウム溶液に溶解し、そしてエーテルで洗浄する。その後水層を酸性化させ、そして生成物を酢酸エチルで抽出する。有機層を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、そして硫酸マグネシウムに通して脱水させる。溶媒を減圧下で除去して、４−ホルミルフェニルプロピオン酸と他の還元生成物との分離不可能な混合物を取得する。この混合物は、性質決定を行うもしくは更に精製を加えることなく次の反応に利用する。
【００９２】
製造物９、化合物１３
４−（２，３−ジメトキシ−５−ホルミルフェノキシ）酪酸
製造物３の方法を利用して、３．３０ｇ（１８．４１ミリモル）の３，４−ジメトキシ−５−ヒドロキシベンズアルデヒドを４−ブロモ酪酸エチルでアルキル化させる。４−（２，３−ジメトキシ−５−ホルミルフェノキシ）酪酸のエチルエステルを、６０℃での高引圧下で乾燥させた後に黄橙色油状物として取得する（５．４５ｇ、１００％）。ＩＲ（neat）１７３５，１６９０ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ２９７（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ15Ｈ20Ｏ6についての質量分析（計算値）：Ｃ、６０．８０；Ｈ、６．８０；Ｏ、３２．４０；（実測値）Ｃ、６０．５１；Ｈ、６．８６；Ｏ、３２．６３。
【００９３】
製造物３の方法に従い、４．７０ｇ（１５．８６ミリモル）の４−（２，３−ジメトキシ−５−ホルミルフェノキシ）酪酸のエチルエステルの試料をけん化させて所望の化合物をクリーム色固体として取得する。これを酢酸エチル／エーテルから再結晶させると３．６５ｇ（８６％）の４−（２，３−ジメトキシ−５−ホルミルフェノキシ）酪酸が乳白色結晶として生じる。融点９０−９２℃。ＩＲ（ＫＢｒ）１７１０，１６９０ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ２６９（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ13Ｈ16Ｏ6についての質量分析（計算値）：Ｃ、５８．２０；Ｈ、６．０１；Ｏ、３５．７９；（実測値）Ｃ、５８．１０；Ｈ、６．０９；Ｏ、３５．８１。
【００９４】
製造物１０、化合物１４
４−（４−アセチル−２，６−ジメトキシフェノキシ）酪酸
製造物３の方法を利用して、２．６１ｇ（１３．３２ミリモル）の４−アセチル−２，６−ジメトキシフェノールを４−ブロモ酪酸エチルで処理する。このことにより、−７０℃での高引圧下で乾燥させた後に茶色油状物として所望の生成物を取得する。これをシリカゲルのカラムでクロマトグラフにかけ、そしてエーテル／ヘキサンの１：１混合物で溶出させると０．４０ｇ（１０％）の４−（４−アセチル−２，６−ジメトキシフェノキシ）酪酸のエチルエステルが無色油状物として生じる。ＩＲ（neat）１７３５，１６７５ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ３１１.１４８９△＝＋０．６ｍｍμ（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ16Ｈ22Ｏ6についての質量分析（計算値）：Ｃ、６１．９２；Ｈ、７．１４；Ｏ、３０．９４；（実測値）Ｃ、６１．４８；Ｈ、７．０４；Ｏ、３１．４８。
【００９５】
製造物３の方法に従い、０．１７９ｇ（０．５７７ミリモル）の４−（４−アセチル−２，６−ジメトキシフェノキシ）−酪酸のエチルエステルを炭酸カリウムで処理して乳白色固体を取得する。酢酸エチル／エキサンからの再結晶により４−（４−アセチル−２，６−ジメトキシフェノキシ）酪酸を白色結晶として取得する（０．１４ｇ、８８％）。融点１２２−２４℃。ＩＲ（ＫＢｒ）１７３５，１６６０ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は、所望の生成物と一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ２８３（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ14Ｈ18Ｏ6についての質量分析（計算値）：Ｃ、５９．５７；Ｈ、６．４３；Ｏ、３４．０１；（実測値）Ｃ、５９．３４；Ｈ、６．４０；Ｏ、３４．２６。
【００９６】
製造物１１、化合物１５
４−（４−アセチル−２−メトキシフェノキシ）酪酸
製造物３の方法を利用して、２．２１ｇ（１３．３２ミリモル）の４−ヒドロキシ−３−メトキシアセトフェノンをアルキル化して固体を取得する。これを製造物３の要領で再結晶させると３．２３ｇ（８６％）の４−（４−アセチル−２−メトキシフェノキシ）酪酸のエチルエステルが白色結晶として生じる。融点５３−５５℃。ＩＲ（ＫＢｒ）１７４５，１６７５ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ２８１（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ15Ｈ20Ｏ5についての質量分析値（計算値）：Ｃ、６４．２７；Ｈ、７．１９；Ｏ、２８．５４、（実測値）Ｃ、６４．２６；Ｈ、７．０５；Ｏ、２８．６９。
【００９７】
製造物３の方法に従い、２．７４ｇ（９．７８ミリモル）の４−（４−アセチルー２−メトキシフェノキシ）酪酸のエチルエステルをけん化する。これにより、酢酸エチルから再結晶した後に４−（４−アセチル−２−メトキシフェノキシ）酪酸を乳白色結晶として取得する（１．６１ｇ、８７％）。融点１６１−６３℃。ＩＲ（ＫＢｒ）１７２０，１６７０ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ２５３（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ13Ｈ16Ｏ5についての質量分析値（計算値）：Ｃ、６１．９０；Ｈ、６．３９；Ｏ、３１．７１、（実測値）Ｃ、６１．７５；Ｈ、６．３７；Ｏ、３１．８８。
【００９８】
製造物１２、化合物１６
４−［４−（３−オキソブチル）フェノキシ］酪酸
４−ヒドロキシベンジルアセトン（２ｇ、１２．１８ミリモル）を、２ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２．６１ｇ（１３．４ミリモル）の４−ブロモ酪酸エチル、５．０５ｇ（３６．５ミリモル）の炭酸カリウム、および触媒量（１８２ｍｇ、１．２２ミリモル）のヨウ化ナトリウムで、製造物３に記載の要領で処理して２．７３ｇの４−［４−（３−オキソブチル）フェノキシ］酪酸のエチルエステルを薄茶色油状物として取得する（８９％）。融点３２−３４℃。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＩＲ（neat）１７３０，１７２０，１６１０，１５８０，１５１０ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ（低分解能））ｍ／ｅ ２７９（Ｍ＋Ｈ）、２３３，２２１。Ｃ16Ｈ22Ｏ4についての質量分析値（計算値）：Ｃ、６９．０４；Ｈ、７．９７、（実測値）Ｃ、６８．３３；Ｈ、７．６８。
【００９９】
４−［４−（３−オキソブチル）フェノキシ］酪酸のエチルエステル（７１６ｇ、２．５７ミリモル）を５ｍＬのメタノール／水（３：２）中に溶解し、そして１．２４ｇ（９．０ミリモル）の炭酸カリウムで、実施例４について記載の方法に従って処理して３８５ｍｇ（６０％）の４−［４−（３−オキソブチル）フェノキシ］酪酸を白色粉末として取得する。融点９７−９９℃。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＩＲ（neat）１７３０，１７００，１６２０，１５２０ｃｍ-1。Ｃ14Ｈ18Ｏ4についての質量分析値（計算値）：Ｃ、６７．１８；Ｈ、７．２５、（実測値）Ｃ、６６．５５；Ｈ、７．０９。
【０１００】
実施例１３、化合物１７
４−（２−アセチル−５−メトキシフェノキシ）酪酸
製造物３の方法に従い、２．２１ｇ（１３．３２ミリモル）の２−ヒドロキシ−４−メトキシアセトフェノンをアルキル化させ、そして前述のように処理すると３．４０ｇ（９１％）の４−（２−アセチル−５−メトキシフェノキシ）酪酸のエチルエステルが黄色油状物として生じる。ＩＲ（neat)１７４０，１６６５ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ２８１（Ｍ+；Ｈ）。Ｃ15Ｈ20Ｏ5についての質量分析値（計算値）：Ｃ、６４．２７；Ｈ；７．１９；Ｏ、２８．５４、（実測値）Ｃ、６４．０６；Ｈ、７．２４；Ｏ、２８．７０。
【０１０１】
製造物３の方法を利用して、２．５０ｇ（８．９２ミリモル）の４−（２−アセチル−５−メトキシフェノキシ）酪酸のエチルエステルを炭酸カリウムで処理して白色固体を取得する。これを酢酸エチル／エーテルから再結晶すると１．６１ｇ（７１％）の４−（２−アセチル−５−メトキシフェノキシ）酪酸が無色結晶として生じる。融点１２７−２９℃。ＩＲ（ＫＢｒ）１７２０，１６５５ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ２５３（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ13Ｈ16Ｏ5についての質量分析値（計算値）：Ｃ、６１．９０；Ｈ、６．３９；Ｏ、３１．７１、（実測値）Ｃ、６１．８２；Ｈ、６．３７；Ｏ、３１．８１。
【０１０２】
製造物１４、化合物１８
４−［４−（３−オキソプロピル）フェノキシ］酪酸
製造物３の方法に従い、２．８０ｇ（１８．４１ミリモル）の３−（４−ヒドロキシフェニル−１−プロパノール）を４−ブロモ酪酸エチルでアルキル化する。この生成物を高引圧下、７０℃で乾燥させると４．７０ｇ（９６％）の４−［４−（３−ヒドロキシプロピル）フェノキシ］酪酸のエチルエステルが無色油状物として生じる。ＩＲ（neat）３４００（ｂｒ.），１７３５ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（Ｃｌ）ｍ／ｅ ２６７（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ15Ｈ22Ｏ4についての質量分析値（計算値）：Ｃ、６７．６５；Ｈ、８．３３；Ｏ、２４．０３、（実測値）Ｃ、６７．４０；Ｈ、８．２０；Ｏ、２４．３８。                                            。
【０１０３】
製造物３の方法に従い、４．１３ｇ（１５．５１ミリモル）の４−［４−（３−ヒドロキシプロピル）フェノキシ］酪酸のエチルエステルを炭酸カリウムでけん化して固体を取得する。これを酢酸エチル−ヘキサン混合物から再結晶させて２．４５ｇ（６６％）の４−［４−（３−ヒドロキシプロピル）フェノキシ］酪酸を白色結晶として取得する。融点９２−９４℃。ＩＲ（ＫＢｒ）３４２０（ｂｒ.）、１７１０ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（Ｃｌ）ｍ／ｅ ２３９（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ13Ｈ18Ｏ4についての質量分析値（計算値）：Ｃ、６５．５３；Ｈ、７．６１；Ｏ、２６．８６、（実測値）Ｃ、６５．７５；Ｈ、７．８７；Ｏ、２６．３８。
【０１０４】
１．１９ｇ（５．００ミリモル）の４−［４−（３−ヒドロキシプロピル）フェノキシ］酪酸の試料を撹拌しながら２５０ｍＬの二塩化エメチレン中に溶解する。次に、３．７７ｇ（１７．４９ミリモル）のクロロクロム酸ピリジニウムを添加し、その混合物を４時間撹拌し、そしてその後シーライトパッドを通して濾過する。その後この反応混合物を等量のエーテルで希釈して塩を沈殿析出させる。その後この混合物をシリカゲルパッドを通して濾過し、そして濾液を蒸発させて茶色固体を取得する。この固体をエーテル−ヘキサン混合物から再結晶させて、０．２１ｇ（１８％）の４−［４−（３−オキソプロピル）フェノキシ］酪酸を乳白色結晶として取得する。融点１００−０３℃。ＩＲ（ＫＢｒ）１７１５ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｅ ２３７（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ13Ｈ16Ｏ4についての質量分析値（計算値）：Ｃ、６６．０９；Ｈ、６．８３；Ｏ、２７．０９、（実測値）Ｃ、６５．９１；Ｈ、６．７２；Ｏ、２７．３５。
【０１０５】
実施例１５、化合物２０
４−［（２−アセチル−１−ナフタレニル）オキシ］酪酸
３．４２ｇ（１８．３７ミリモル）の１−ヒドロキシ−２−アセトナフトンの試料を製造物３に従ってアルキル化する。この粗生成物を６０℃の高引圧下で乾燥させて５．２１ｇ（９４％）の４−［（２−アセチル−１−ナフタレニル）−オキシ］酪酸のエチルエステルを金色液体として取得する。ＩＲ（neat）１７３０，１６６５ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ３０１（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ18Ｈ20Ｏ4についての質量分析値（計算値）：Ｃ、７１．９８；Ｈ、６．７１；Ｏ、２１．３１、（実測値）Ｃ、７２．１１；Ｈ、６．５８；Ｏ、２１．３１。
【０１０６】
製造物３の方法を利用して、２．８４ｇ（９．４６ミリモル）の４−［（２−アセチル−１−ナフタレニル）オキシ］酪酸のエチルエステルをけん化する。この粗生成物を酢酸エチル／エーテルから再結晶させて１．１５ｇ（４５％）の４−［（２−アセチル−１−ナフタレニル）オキシ］酪酸を金色結晶として取得する。融点１０４−０６℃。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＩＲ（ＫＢｒ）１７２０，１６４０ｃｍ-1。Ｃ16Ｈ16Ｏ4についての質量分析値（計算値）：Ｃ、７０．５８；Ｈ、５．９２；Ｏ、２３．５０、（実測値）Ｃ、７０．４０；Ｈ、５．８９；Ｏ、２３．７１。
【０１０７】
製造物１６、化合物２１
４−［４−（４−フルオロベンゾイル）フェノキシ］酪酸
製造物３の方法に従い、３．９８ｇ（１８．４１ミリモル）の４−フルオロ−４’−ヒドロキシベンゾフェノンを４−ブロモ酪酸エチルでアルキル化する。この黄色固体粗生成物をエーテルから再結晶させて２．９７ｇ（４９％）の４−［４−（４−フルオロベンゾイル）フェノキシ］酪酸のエチルエステルを白色結晶として取得する。融点５７−５９℃。ＩＲ（ＫＢｒ）１７３５，１６４５ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ３１１（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ19Ｈ19Ｏ4Ｆについての質量分析値（計算値）：Ｃ、６９．０８；Ｈ、５．８０；Ｆ、５．７５；Ｏ、１９．３７、（実測値）Ｃ、６９．０９；Ｈ、５．６２；Ｆ、５．９５；Ｏ、１９．３４。
【０１０８】
製造物３の方法を利用して、０．４８ｇ（１．４５ミリモル）の４−［４−フルオロベンゾイル）フェノキシ］酪酸のエチルエステルをけん化する。この白色固体粗生成物をエーテル−ヘキサン混合物から再結晶すると０．１６ｇ（３６％）の４−［４−（４−フルオロベンゾイル）フェノキシ］−酪酸が白色結晶として生じる。融点１０９−１１１℃。ＩＲ（ＫＢｒ）１７３５，１７００，１６４０ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ３０３（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ17Ｈ15Ｏ4Ｆについての質量分析値（計算値）：Ｃ、６７．５４；Ｈ、５．００；Ｆ、６．２８；Ｏ、２１．１８、（実測値）Ｃ、６７．２８；Ｈ、４．８９；Ｆ；６．４１；Ｏ、２１．４２。
【０１０９】
実施例１７、化合物２２
４−（４−アセチルフェニル）−１−ピペラジン吉草酸
４’−ピペラジノアセトフェノン（１０２ｍｇ）を１ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中に溶解する。５−ブロモ吉草酸メチル（０．０７７ｍＬ）および炭酸カリウム（６９ｍｇ）を添加した後、この混合物を室温で６５時間撹拌する。ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）は、出発物質が残存せずに単一生成物のスポットを示すはずである。この反応溶液を引圧下で蒸発させる。残渣を塩化メチレンに溶かし、水で２度洗浄し、そして硫酸ナトリウムに通して脱水させる。残渣を塩化メチレンに溶かし、水で２度洗浄し、そして硫酸ナトリウムに通して脱水する。溶媒の蒸発により１３７ｍｇの４−（４−アセチルフェニル）−１−ピペラジン吉草酸のメチルエステルを黄色結晶として取得し、この1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）スペクトルは指定構造に一致する。
【０１１０】
４−（４−アセチルフェニル）−１−ピペラジン吉草酸のメチルエステル（１５．３ｍｇ）を０．１ｍＬの水酸化カリウム溶液に懸濁させる（３３．２ｍｇ／ｍＬ）。１００℃で１５０分間加熱した後には出発物質は完全に溶解し、そしてＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）により出発物質が存在していないことが示される。０．２Ｎ  ＨＣｌの添加によりその反応溶液をｐＨ４に酸性化させた後、この水溶液を塩化メチレンで抽出する。有機層を乾燥するまで蒸発させた後、残渣を塩化メチレンに溶解し、そして濾過する。有機層の蒸発により７ｍｇの４−（４−アセチルフェニル）−１−ピペラジン吉草酸を白色固体として取得する。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）スペクトルは指定構造に一致する。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ３０５（Ｍ+＋Ｈ）、３２７（Ｍ+＋Ｎａ）、３４８（Ｍ+＋２Ｎａ−Ｈ）。
【０１１１】
製造物１８、化合物２５
４−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）酪酸
製造物３の方法に従い、２．８８ｇ（１８．４１ミリモル）の３−クロロ−４−ヒドロキシベンンズアルデヒドを既述の要領でアルキル化する。これにより４．６５ｇ（９３％）の４−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）酪酸のエチルエステルを橙色油状物として取得する。ＩＲ（neat）１７３０，１６８５ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｅ ２７１（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ13Ｈ15Ｏ4Ｃｌについての質量分析値（計算値）：Ｃ、５７．６８；Ｈ、５．５８；Ｃｌ、１３．１０；Ｏ、２３．６４、（実測値）Ｃ、５８．０５；Ｈ、５．３７；Ｃｌ、１２．４３；Ｏ、２４．１５。
【０１１２】
製造物３の方法に従い、３．５２ｇ（１３．００ミリモル）の４−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）酪酸のエチルエステルをけん化して白色固体を取得する。これを酢酸エチルから再結晶させて１．７８ｇ（５６％）の４−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）酪酸を白色結晶として生じる。融点１２８−３１℃。ＩＲ（ＫＢｒ）１７３０，１６５０ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｅ ２４３（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ11Ｈ11Ｏ4Ｃｌについての質量分析値（計算値）：Ｃ、５４．４５；Ｈ、４．５７；Ｃｌ、１４．６１；Ｏ、２６．３７、（実測値）Ｃ、５４．６１；Ｈ、４．７０；Ｃｌ、１４．２５；Ｏ、２６．４２。
【０１１３】
実施例１９、化合物２６
５−アセチル−２−（３−カルボキシプロポキシ）安息香酸のメチルエステル
脱水条件下で、３．５８ｇ（１８．４１ミリモル）の５−アセチルサリチル酸のメチルエステルを２５ｍＬの無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解する。この溶液に３．０７ｇ（２０．５８ミリモル）の５−ブロモ−１−ペンテン、６．８３ｇ（２０．５８ミリモル）の炭酸カリウム、および０．２４６ｇ（１．６５ミリモル）のヨウ化カリウムを添加し、そしてこの反応混合物を周囲の温度で２４時間撹拌する。別の５−ブロモペンテンをもう一回分この反応物に添加し、その後に先の他の２つの試薬をもう半回分ずつ添加し、そして撹拌を７２時間継続させる。その後この混合物を７０℃の高引圧下で蒸発させる。残渣をエーテル／水の間で分配し、そして有機相を分離し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、そして引圧下で蒸発させると４．６０ｇ（９５％）の５−アセチル−２−（４−ペンテニルオキシ）安息香酸のメチルエステルが黄色液体として生じる。ＩＲ（neat）１７３５，１７１０，１６８０ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ２６３（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ15Ｈ18Ｏ4についての質量分析値（計算値）：Ｃ、６８．６９；Ｈ、６．９２；Ｏ、２４．４０、（実測値）Ｃ、６８．６０；Ｈ、６．９２；Ｏ、２４．４６。
【０１１４】
０．２０３ｇ（０．７７５ミリモル）の５−アセチル−２−（４−ペンテニルオキシ）安息香酸のメチルエステルの試料をアルゴン雰囲気下で５ｍＬの二塩化メチレンに溶解し、そして撹拌しながらドライアイス−アセトン槽中で−７８℃に冷却する。次に、この溶液が明青色に変化するまでオゾンガスを１０分間通す。その後０．５ｍＬの硫化ジメチルを添加して反応を静止させ、そして室温で２時間暖める。その後この混合物を高引圧下で蒸発させるとアルデヒド粗生成物が油状物として生じ、これを「そのまま」第二段階に使用する。これを５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、そして１．０２ｇ（２．７１ミリモル）の二塩酸ピリジニウムを添加する。この反応混合物を密封し、そして２０時間放置する。次に、これを５０ｍＬの水に注ぎ入れ、エーテルで抽出し、そして有機相を再度水で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水させ、濾過し、そして蒸発させて油状結晶を取得する。これらを酢酸エチルとヘキサンとの混合物から再結晶させて０．１０９ｇ（５０％）の５−アセチル−２−（３−カルボキシプロポキシ）安息香酸のメチルエステルを白色結晶として取得する。融点１１１−１１３℃。ＩＲ（ＫＢｒ）１７２５，１６４５ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ２８１（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ14Ｈ16Ｏ6についての質量分析値（計算値）：Ｃ、６０．００；Ｈ、５．７５；Ｏ、３４．２５、（実測値）Ｃ、５９．９６；Ｈ、５．７５；Ｏ、３４．２７。
【０１１５】
製造物２０、化合物２７
４−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキシ）酪酸
４−ヒドロキシ−３−ニトロベンジルアルコール（１ｇ、５．９１ミリモル）を１．４４ｇ（７．３９ミリモル）の４−ブロモ酪酸エチル、２．８６ｇ（２０．６９ミリモル）の炭酸カリウム、および触媒量（８８ｍｇ、０．５９ミリモル）のヨウ化ナトリウムで、製造物３に記載する要領で処理して１．４５ｇの４−［４−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェノキシ］酪酸のエチルエステルを薄黄色油状物として取得する（８６％）。1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＩＲ（neat）３４００，１７３０，１７１０，１６３０，１５８０ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｅ ２８４（Ｍ＋Ｈ）、２３８。Ｃ13Ｈ17Ｏ6Ｎについての質量分析値（計算値）：Ｃ、５５．１２；Ｈ、６．０５、（実測値）Ｃ、５５．３６；Ｈ、６．０３。
【０１１６】
４−［４−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェノキシ］酪酸のエチルエステル（３００ｍｇ、１．０６ミリモル）を、７９９ｍｇ（３．７１ミリモル）のクロロクロム酸ピリジニウムで、実施例５に記載の方法により処理して１８８ｍｇ（６３％）の４−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキシ）酪酸のエチルエステルを無色油状物として取得する。1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＩＲ（neat）１７３０，１７００，１６１０，１５７０ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｅ ２８２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１１７】
４−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキシ）酪酸のエチルエステル（１３５ｍｇ、０．４８ミリモル）を３ｍＬのメタノール／水（３：２）に溶解し、そして２３２ｍｇ（１．６８ミリモル）の炭酸カリウムで、実施例４について記載する方法に従って処理して８４ｍｇ（６９％）の４−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキシ）酪酸を黄色粉末として取得する。融点１３６−１３９℃。1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＩＲ（ＫＢｒ）３４００，１７３０，１７００，１６５０，１６００，１５７０ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｅ ２５４，２３６，２２４，２０８，１９６，１６８。
【０１１８】
実施例２１、化合物２８
４−［２−［［（４−アセチルフェニル）アミノ］メチル］−６−メトキシフェノキシ］酪酸
４’−（２−ヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミノ）アセトフェノン（５００ｍｇ、１．８４ミリモル）を６２９ｍｇ（３．２２ミリモル）の４−ブロモ酪酸エチル、７６４ｍｇ（５．５３ミリモル）の炭酸カリウム、および触媒量（１８２ｍｇ、１．２２ミリモル）のヨウ化ナトリウムで、製造物３に記載の要領で処理して６８０ｍｇの４−［２−［［（４−アセチルフェニル）アミノ］メチル］−６−メトキシフェノキシ］酪酸のエチルエステルを薄茶色油状物として取得する。1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＩＲ（neat）３４００，１７３０，１６６０，１６００ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｅ ３８６（Ｍ＋Ｈ）、１１５。Ｃ22Ｈ27Ｏ5Ｎについての質量分析値（計算値）：Ｃ、６８．５５；Ｈ、７．０６；Ｎ、３．６３、（実測値）Ｃ、６８．２７；Ｈ、６．８１；Ｎ、３．５４。
【０１１９】
４−［２−［［（４−アセチルフェニル）アミノ］メチル］−６−メトキシフェノキシ］酪酸のエチルエステル（２５０ｍｇ、０．６５ミリモル）を５ｍＬのメタノール／水（３：２）に溶解し、そして３１３ｍｇ（２．２７ミリモル）の炭酸カリウムで、実施例４について記載の方法に従って処理して１６６ｍｇ（７１％）の４−［２−［［（４−アセチルフェニル）アミノ］メチル］−６−メトキシフェノキシ］酪酸を赤色固体として取得する。融点８５−９５℃。1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＩＲ（ＫＢｒ）３４００，１７２０，１６３０，１５８０ｃｍ-1。Ｃ20Ｈ23Ｏ5ＮＮａについてのＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｅ（計算値）：３８０.１４７３、（実測値）３８０.１４８２。３５８（Ｍ＋Ｈ）、２３３，２２３，２２１，１３６。
【０１２０】
実施例２２、化合物２９
５−アセチル−２−（３−カルボキシプロポキシ）−安息香酸の１−（３−ブロモプロピル）エステル
３６ｍＬの二塩化メチレン中の０．７４４ｇ（３．００ミリモル）の５−アセチル−２−（４−ペンテニルオキシ）−安息香酸（実施例１９）の溶液に対して、アルゴン雰囲気下で撹拌しながら１．６７ｇ（１２．０ミリモル）の３−ブロモプロパノールを添加する。この後に０．９１２ｇ（９．０ミリモル）のトリエチルアミンおよび１．６６ｇ（３．７５ミリモル）のヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムを添加し、そしてこの反応物を２０時間撹拌する。その後この混合物を６５℃の高引圧下で蒸発させる。残渣をエーテルと水との間で分配し、エーテル相を更に２度水で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水させ、濾過し、そして蒸発させるとガム状物が生じる。これをシリカゲルのカラムでクロマトグラフにかけ、そして酢酸エチル／ヘキサン（１：２）で溶出させて０．８０ｇ（７２％）の５−アセチル−２−（４−ペンテニルオキシ）−安息香酸の１−（３−ブロモプロピル）エステルを無色油状物として取得する。ＩＲ（neat）１７３０，１７００，１６８０ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ３６９（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ17Ｈ21Ｏ4Ｂｒについての質量分析値（計算値）：Ｃ、５５．３０；Ｈ、５．７３；Ｏ、１７．３３；Ｂｒ２１．６４、（実測値）Ｃ、５５．３４；Ｈ、５．４４；Ｏ、１７．３４；Ｂｒ２１．８８。
【０１２１】
実施例１９の方法に従い、０．３７７ｇ（１．０２ミリモル）の５−アセチル−２−（４−ペンテニルオキシ）−安息香酸の１−（３−ブロモプロピル）エステルをオゾン化し、そしてその後に二クロム酸ピリジニウムで更に酸化させて部分的に結晶化している無色ガム状物を取得するこれを、等量の酢酸エチルとヘキサンとの混合物から再結晶させると０．２７７ｇ（７０％）の５−アセチル−２−（３−カルボキシプロポキシ）−安息香酸の１−（３−ブロモプロピル）エステルが白色結晶として生じる。融点１０３−０５℃。ＩＲ（ＫＢｒ）１７３０，１６４５ｃｍ-1。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は表題生成物に一致している。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｅ ３８９（Ｍ+＋Ｈ）。Ｃ16Ｈ19Ｏ6Ｂｒについての質量分析値（計算値）：Ｃ、４９．６３；Ｈ、４．９５；Ｏ、２４．７９；Ｂｒ、２０．６３、（実測値）Ｃ、４９．９０；Ｈ、４．７５；Ｏ、２４．９４；Ｂｒ、２０．３９。
【０１２２】
実施例２３、化合物３０
４−（４−アセチル−３−フルオロフェノキシ）酪酸
５ｍＬのＤＭＳＯ中の２−フルオロ−４−メトキシアセトフェノンの溶液を７３０ｍｇ（１５ミリモル）のシアン化ナトリウムの存在下で１００℃で撹拌して暗色粘性スラッジを取得する。この混合物を冷却させ、その後５０ｍＬの氷水に注ぎ入れ、そして６Ｎ  ＨＣｌ水溶液で酸性化する。この酸性溶液を酢酸エチル（５０ｍＬ×２）で抽出し、そして有機層を合わせ、そして水で洗浄する。その後この有機層を１．０Ｎの水酸化ナトリウム水溶液で２度抽出する。塩基性の層をエーテルで１度洗浄し、その後固体の硫酸水素ナトリウムで酸性化し、そして酢酸エチルで２度抽出する。この酢酸エチル層を合わせ、その後１０％の硫酸水素ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムに通して脱水させ、そして周囲の温度で減圧下で濃縮して１４３ｍｇ（３１％）の油状物を取得する。
【０１２３】
先に単離した油状物を１ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、そして２０５ｍｇ（１．０５ミリモル）の４−ブロモ酪酸エチル、４．０７ｇ（２．９５ミリモル）の炭酸カリウム、および触媒量（１．２６ｍｇ、０．００８ミリモル）のヨウ化ナトリウムで、製造物３に記載の方法に従って処理して３９ｇの４−（４−アセチル−３−フルオロフェノキシ）酪酸のエチルエステルを明茶色油状物として取得する（１７％）。1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。Ｃ14Ｈ18Ｏ4ＦについてのＭＳ（ＣＩ（低分解能））ｍ／ｅ（計算値）：２６９.１１８９、（実測値）２６９.１１９１。
【０１２４】
４−（４−アセチル−３−フルオロフェノキシ）酪酸のエチルエステル（２０ｍｇ、０．０７４５ミリモル）を１ｍＬのメタノール／水（３：２）中に溶解し、そして３０．９１ｍｇ（０．２２ミリモル）の炭酸カリウムで、実施例４について記載の方法に従って処理して１４ｍｇ（８２％）の４−（４−アセチル−３−フルオロフェノキシ）酪酸を白色粉末として取得する。融点１１０−１１１℃。1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＩＲ（ＫＢｒ）１７１０，１６７０，１６１０ｃｍ-1。Ｃ12Ｈ13Ｏ4ＦＮａについてのＭＳ（ＣＩ（低分解能））ｍ／ｅ（計算値）：２６３.０６９５、（実測値）２６３.０６９９。
【０１２５】
実施例２４、化合物３１
（２−アセチルフェノキシ）酪酸
２−アセチルフェノール（１ｇ、７．３４ミリモル）を、１．７９ｇ（９．１８ミリモル）の４−ブロモ酪酸エチル、３．５５ｇ（２５．７１ミリモル）の炭酸カリウム、および触媒量（１１ｍｇ、０．０７ミリモル）のヨウ化ナトリウムで、製造物３に記載の要領で処理して１．８４ｇの（２−アセチルフェノキシ）−酪酸のエチルエステルを明黄色油状物として取得する（これは放置すると固化する）。融点４３−４５℃。1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＩＲ（neat）１７３０，１６６０，１６００ｃｍ-1。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｅ２５１（Ｍ＋Ｈ）、２３２，２０５。
【０１２６】
（２−アセチルフェノキシ）−酪酸のエチルエステル（５００ｍｇ、２．００ミリモル）を３ｍＬのメタノール／水（３：２）に溶解し、そして８２８ｍｇ（５．９９ミリモル）の炭酸カリウムで、実施例４について記載する方法に従って処理して４１２ｍｇ（９３％）の（２−アセチルフェノキシ）−酪酸を白色粉末として取得する。1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＩＲ（ＫＢｒ）１７１０，１６７０，１５９０ｃｍ-1。Ｃ12Ｈ15Ｏ4ＮについてのＭＳ  ｍ／ｅ（計算値）：２２３.０９７０、（実測値）２２３.０９７１。
【０１２７】
実施例２５、化合物３２
２−アセチル−１０Ｈ−フェノチアジン−１０−ヘキサノイック酸
８ｍＬのテトラヒドロフラン中の５００ｍｇ（２．０７ミリモル）の２−アセチルフェノチアジンの溶液を−７８℃に冷却し、そしてトルエン中の４．１４ｍＬ（２．０７ミリモル）のカリウム  ビス（トリメチルシリル）アミドの０．５Ｍ溶液を添加する。５分後に、２ｍＬのテトラヒドロフラン中の［（６−ブロモヘキシル）オキシ］−（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシランの溶液を添加し、そしてこの反応物を室温に暖める。この混合物を２５ｍＬの酢酸エチルで希釈し、そして１０％の硫酸水素ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、その後硫酸マグネシウムに通して脱水し、そして減圧下で濃縮して暗色残渣を取得する。フラッシュクロマトグラフィー（３：１  ヘキサン／酢酸エチル）により３１８ｍｇ（３３％）の１−［１０−［６−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］ヘキシル］−１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル］エタノンを暗色油状物として取得する。1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＩＲ（neat）１６８０，１６００，１５６０ｃｍ-1。Ｃ26Ｈ37ＮＯ2ＳＳｉについてのＭＳ  ｍ／ｅ（計算値）：４５５.２３１４、（実測値）４５５.２３１２。
【０１２８】
０．６ｍＬのテトラヒドロフラン中の１５０ｍｇ（０．３３ミリモル）の１−［１０−［６−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］ヘキシル］−１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル］エタノンの溶液を、テトラヒドロフラン中の０．４１ｍＬ（０．４１ミリモル）の１Ｍ  フッ化テトラブチルアンモニウムで処理する。この反応物を室温で３時間撹拌し、その後２０ｍＬの酢酸エチルで希釈する。有機層を１０％の硫酸水素ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、その後硫酸マグネシウムに通して脱水させ、そして減圧下で濃縮して１１４ｍｇの１−［１０−（６−ヒドロキシヘキシル）−１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル］エタノンを暗色油状物として取得する。1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＩＲ（neat）３４００，１６８０，１５９０，１５６０ｃｍ-1。Ｃ20Ｈ23ＮＯ2ＳについてのＭＳ  ｍ／ｅ（計算値）３４１.１４４９、（実測値）３４１.１４５６。
【０１２９】
０．１６ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の４１ｍｇ（０．１２ミリモル）の１−［１０−（６−ヒドロキシヘキシル）−１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル］エタノンの溶液を、１５８ｍｇ（０．４２ミリモル）の二クロム酸ピリジニウムで処理し、そして室温で１２時間撹拌する。この混合物をエーテルで希釈し。そして１００ｍＬのエーテルを用いながらシーライトのパッドを通して濾過する。この濾液を、１０％の硫酸水素ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、その後硫酸マグネシウムに通して脱水させ、そして減圧下で濃縮して１０ｍｇ（２３％）の２−アセチル−１０Ｈ−フェノチアジン−１０−ヘキサン酸を暗色残渣として取得する。1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｅ ３２３（Ｍ+＋Ｈ）。
【０１３０】
実施例２６、化合物３４
５−アセチル−２−（３−カルボキシプロポキシ）−Ｎ−（２−ジメチルアミノエチル）−ベンズアミド
０．１４０ｇ（０．５０ミリモル）の５−アセチル−２−（３−カルボキシプロポキシ）−安息香酸のメチルエステル（実施例１９）の試料をスチーム槽で、５．４９ｍＬ（５０．０ミリモル）のＮ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミンと共に脱水条件下で５時間加熱する。この混合物を２０時間周囲の温度に冷まし、そして５５℃の引圧下で蒸発させる。得られる茶色ガム状物をエーテルで粉砕し、そして残存する残渣を水に溶かし、そして塩酸で酸性化する。その後これを酢酸エチルで抽出し、そしてこの水溶液を引圧下で蒸発させるとガム状物が生じる。次に、これを暖めたクロロホルムで粉砕し、そしてこの溶液を蒸発させて茶色ガム状物を取得する。これを精製用シリカゲルプレート上でのクロマトグラフにかけ、このプレートをメタノールに対するクロロホルムの９／１の混合物で溶出する。生成物のバンドをこのプレートから切り出し、先の溶媒混合物で粉砕し、濾過し、そして蒸発させると０．０２５ｇ（１５％）の５−アセチル−２−（３−カルボキシプロポキシ）−Ｎ−（２−ジメチルアミノエチル）−ベンズアミドが明茶色ガム状物として生じる。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ３３７.１７５３△＝＋０．９ｍｍμ（Ｍ+＋Ｈ）、３５９（Ｍ+＋Ｎａ）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）は所望の生成物に一致している。
【０１３１】
実施例２７、化合物３５
５−アセチル−２−（３−カルボキシプロポキシ）−Ｎ−（２−トリメチルアミノエチル）−ベンズアミド（内部塩）
２ｍＬのメタノールおよび８ｍＬのｐＨ８．６のリン酸緩衝液中の１００ｍｇの５−アセチル−２−（３−カルボキシプロポキシ）−Ｎ−（２−ジメチルアミノエチル）−ベンズアミドに０．５ｍＬの硫酸ジメチルを添加する。この反応物のｐＨを３０分毎モニターし、そして〜８．５のｐＨに戻す必要がある場合には０．１Ｎの水酸化ナトリウムを添加する。４時間後にこの溶媒を引圧下で除去し、そして生成物をクロロホルム中のメタノール濃度勾配液を用いるＢｉｏＳｉｌＡで精製して塩化５−アセチル−２−（３−カルボメトキシプロポキシ）−Ｎ−（２−トリメチルアミノエチル）−ベンズアミドを取得し、これを引き続き次の段階に使用する。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：８．６ｐｐｍ（１Ｈ，ｄ）、８．１ｐｐｍ（１Ｈ，ｄｄ）、７．１ｐｐｍ（１Ｈ，ｄ）、４．３ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ）、４．０ｐｐｍ（２Ｈ，ｂｒ ｔ）、３．９ｐｐｍ（２Ｈ，ｂｒ ｓ）、３．７ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ）、３．７ｐｐｍ（１Ｈ，ｔ）、３．３ｐｐｍ（９Ｈ，ｓ）、２．１ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ）、２．１ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ）、２．３ｐｐｍ（２Ｈ，ｍ）。
【０１３２】
先の生成物を２ｍＬのテトラヒドロフラン中に溶解し、そして過剰量の１Ｎ水酸化ナトリウムを用いて周囲の温度で１６時間処理する。有機共溶媒を引圧下で除去し、そして残存する水溶液を１Ｎ  ＨＣｌで約５のｐＨに酸性化する。その後この溶液を引圧下で蒸発させてガラス状物を取得するが、これは放置すると結晶化する。得られる５−アセチル−２−（３−カルボキシプロポキシ）−Ｎ−（２−トリメチルアミノエチル）ベンズアミド（内部塩または分子内塩）は、更に精製することなく使用することができる。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ ３５１（Ｍ+＋Ｈ）。
【０１３３】
実施例２８、化合物３６
５−アセチル−２−［Ｎ−（２−ジメチルアミノエチル）−３−カルボキシアミドプロポキシ］安息香酸（内部塩）
１０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の１．１６ｇの５−アセチルサリチル酸のメチルエステルに、１ｇのクロロ酢酸のメチルエステルおよび１．２ｇの炭酸カリウムを添加する。この混合物を周囲の温度で１６時間撹拌した後、この反応物を濾過し、酢酸エチルで希釈し、そして水で一度、食塩水で二度洗浄する。酢酸エチルを硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、そして蒸発させて５−アセチル−２−（カルボキシメトキシ）安息香酸を粗生成物として取得する。−１５℃でのメタノールからの結晶化により０．６ｇの白色結晶を取得する。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：８．５ｐｐｍ（１Ｈ，ｄ）、８．１ｐｐｍ（１Ｈ，ｄｄ）、６．９ｐｐｍ（１Ｈ，ｄ）、４．８ｐｐｍ（２Ｈ，ｓ）、４．０ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ）、３．８ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ）、２．６ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ）。
【０１３４】
４５０ｍｇの先の生成物を１ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン中で、周囲の温度で１６時間撹拌する。その後この反応物を酢酸エチルおよび水で希釈する。水層を酢酸エチルで５回抽出し、そして様々な抽出物からの酢酸エチルを合わせ、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、そして蒸発させて３８０ｍｇの５−アセチル−２−［Ｎ−（２−ジメチルアミノエチル）−３−カルボキシアミド−プロポキシ］安息香酸のメチルエステルを、これ以降の利用について十分な純度を示す黄色がかった油状物として取得する。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：８．６ｐｐｍ（１Ｈ，ｄ）、８．２ｐｐｍ（１Ｈ，ｄｄ）、８．１ｐｐｍ（１Ｈ，ｂｒ t）、７．０ｐｐｍ（１Ｈ，ｄ）、４．７ｐｐｍ（２Ｈ，ｓ）、４．０ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ）、３．５ｐｐｍ（２Ｈ，ｑ）、２．７ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ）、２．６ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ）、２．３ｐｐｍ（６Ｈ，ｓ）。
【０１３５】
１５ｍＬのメタノールおよび５ｍＬのクロロホルム中の２８０ｍｇの先の化合物に１ｍＬのヨウ化メチルを添加する。周囲の温度に３時間放置した後、揮発性成分を除去する。1Ｈ−ＮＭＲにより、所望のヨウ化５−アセチル−２−［Ｎ−（２−トリメチルアミノエチル）−３−カルボキシアミドプロポキシ］安息香酸のメチルエステルの存在が示される。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3＋ＣＤ3ＯＤ）：８．８ｐｐｍ（１Ｈ，ｂｒ，ｔ）、８．６ｐｐｍ（１Ｈ，ｄ）、８．２ｐｐｍ（１Ｈ，ｄｄ）、７．１ｐｐｍ（１Ｈ，ｄ）、４．７ｐｐｍ（２Ｈ，ｓ）、４．０ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ）、３．９ｐｐｍ（２Ｈ，ｑ）、３．８ｐｐｍ（２Ｈ，ｔ）、３．４（９Ｈ，ｓ）、２．６ｐｐｍ（３Ｈ，ｓ）。
【０１３６】
先の化合物を〜５ｍＬのメタノール中に溶解する。５等量の水酸化ナトリウムを、水中の５Ｎ溶液として添加する。周囲の温度に５時間放置した後、希釈したＨＣｌでｐＨを〜７．５に調節し、そして揮発性成分を引圧下で除去して５−アセチル−２−［Ｎ−（２−トリメチルアミノエチル）−３−カルボキシアミドプロポキシ］安息香酸（内部塩）を含む粗生成物を取得する。ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｅ３２３（Ｍ+＋Ｈ）。
【０１３７】
構造Ｂの合成法（スキーム１）
一般法
薬剤−ヒドラジド誘導体（Ｑ−Ｓｐ−ＳＳ−Ｗ、式中、Ｑ＝Ｈ2ＮＨＮ−）を、〜３−１０等量のカルボニルリンカー、および〜１−１０％の酢酸もしくは他の適切な酸触媒を含むアルコールもしくは他の適合性有機溶媒中に溶解する。最少量の溶媒を用いると反応がより速くなる。無水条件を用いると、縮合が平衡反応となるため最高の結果がもたらされる。ＨＰＬＣもしくは別法としてＴＬＣにより反応が完結したことが示されるまで、〜２０−６０℃の温度でこの反応を進行させる。この反応には、リンカーおよび特異的反応条件に依存して、数時間から一日もしくはそれを上回る日数が必要である。溶媒を減圧下で除去し、そして粗生成物を、ＢｉｏＳｉｌ−Ａのような適切なシリカゲル上で、クロロホルムもしくは酢酸エチルのいずれか中の０−２０％メタノールの濃度勾配液のような適切な溶媒系を用いて精製する。生成物は構造段階用には十分な純度を示す。
【０１３８】
実施例２９
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−ホルミルフェノキシ酢酸（１）
ＨＰＬＣ保持時間：４．４分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６４１（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２９１および３０５ｎｍ（酢酸エステル）、
1Ｈ−ＮＭＲ：図Ｉを参照せよ。
【０１３９】
製造物３０
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−ホルミル安息香酸（２）
ＨＰＬＣ保持時間：５．２分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６１１（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２９２および３０２ｎｍ（エタノール）、
1Ｈ−ＮＭＲ：図ＩＩを参照せよ。
【０１４０】
製造物３１
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−ホルミル−３−メトキシフェノキシ酢酸（３）
ＨＰＬＣ保持時間：４．７分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６７１（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８２、２９１、および３２５ｎｍ（エタノール）、
1Ｈ−ＮＭＲ：図ＩＩＩを参照せよ。
【０１４１】
製造物３２
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた６−ホルミル−２−ナフトエ酸（４）
ＨＰＬＣ保持時間：６．１分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６６１（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２５７、２６７、２７７、３１３、および３２１ｎｍ（エタノール）、
1Ｈ−ＮＭＲ：図ＩＶを参照せよ。
【０１４２】
製造物３３
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（２−オキソエトキシ）ベンゼンプロピオン酸（５）
ＨＰＬＣ保持時間：６．０分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６６９（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：なし。
【０１４３】
製造物３４
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた３−（２−オキソエトキシ）安息香酸（６）
ＨＰＬＣ保持時間：５．５分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６４１（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：なし。
【０１４４】
製造物３５
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸（７）
ＨＰＬＣ保持時間：６．４分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６８３（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８５ｎｍ（エタノール）、
1Ｈ−ＮＭＲ：図Ｖを参照せよ。
【０１４５】
製造物３６
カリケアマイシン  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸（７）
ＨＰＬＣ保持時間：６．２分、
最大ＵＶ吸収：２８５ｎｍ（エタノール）。
【０１４６】
製造物３７
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（３−ホルミルフェノキシ）酪酸（８）
ＨＰＬＣ保持時間：６．３分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６６９（Ｍ＋Ｈ）。
【０１４７】
製造物３８
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（４−ホルミルフェノキシ）酪酸（９）
ＨＰＬＣ保持時間：６．１分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６６９（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２９１ｎｍ（エタノール）、
1Ｈ−ＮＭＲ：図ＶＩＩを参照せよ。
【０１４８】
製造物３９
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（４−アセチル−２−メチルフェノキシ）酪酸（１０）
ＨＰＬＣ保持時間：６．８分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６９７（Ｍ＋Ｈ）。
【０１４９】
実施例４０
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（４−ホルミル−２−メトキシフェノキシ）酪酸（１１）
ＨＰＬＣ保持時間：５．５分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６９９（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８４、３００、および３１６ｎｍ（アセトニトリル）。
【０１５０】
実施例４１
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−ホルミルベンゼンプロピオン酸（１２）
ＨＰＬＣ保持時間：５．６分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６３９（Ｍ＋Ｈ）。
【０１５１】
実施例４２
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（２，３−ジメトキシ−５−ホルミルフェノキシ）酪酸（１３）
ＨＰＬＣ保持時間：５．８分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７２９（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：３０２ｎｍ（エタノール）。
【０１５２】
実施例４３
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（４−アセチル−２，６−ジメトキシフェノキシ）酪酸（１４）
ＨＰＬＣ保持時間：６．０分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７４３（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８７ｎｍ（エタノール）。
【０１５３】
実施例４４
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（４−アセチル−２−メトキシフェノキシ）酪酸（１５）
ＨＰＬＣ保持時間：６．１分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７１３（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８４ｎｍ（エタノール）。
【０１５４】
実施例４５
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−［４−（３−オキシブチル）フェノキシ］酪酸（１６）
ＨＰＬＣ保持時間：６．６分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６１１（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：なし。
【０１５５】
実施例４６
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（２−アセチル−５−メトキシフェノキシ）酪酸（１７）
ＨＰＬＣ保持時間：６．５分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７１３（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：なし。
【０１５６】
実施例４７
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−［４−（３−オキソプロピル）フェノキシ］酪酸（１８）
ＨＰＬＣ保持時間：９．８分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６９７（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：なし。
【０１５７】
実施例４８
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−アセチルベンゼン酪酸（１９）
ＨＰＬＣ保持時間：６．４分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６６７（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８１ｎｍ（エタノール）。
【０１５８】
実施例４９
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−［（２−アセチル−１−ナフタレニル）オキシ］酪酸（２０）
ＨＰＬＣ保持時間：７．８分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７３３（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：なし。
【０１５９】
実施例５０
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−［４−（４−フルオロベンゾイル）フェノキシ］酪酸（２１）
ＨＰＬＣ保持時間：８．４分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７６３（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８４ｎｍ（エタノール）。
【０１６０】
実施例５１
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（４−アセチルフェニル）−１−ピペラジンペンタノイック酸（２２）
ＨＰＬＣ保持時間：５．０分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６４１（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：３２２ｎｍ（エタノール）。
【０１６１】
実施例５２
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた１１−（４−アセチルフェノキシ）ウンデカノイック酸（２３）
ＨＰＬＣ保持時間：４．８分（６５％アセトニトリル−定組成）、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７８１（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８６ｎｍ（エタノール）。
【０１６２】
実施例５３
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた５−［（４−アセチルフェニル）アミノ］−５−オキソペンタノイック酸（２４）
ＨＰＬＣ保持時間：５．２分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７１０（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２９５ｎｍ（エタノール）。
【０１６３】
実施例５４
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）酪酸（２５）
ＨＰＬＣ保持時間：６．５分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７０４（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２９２ｎｍ（エタノール）。
【０１６４】
実施例５５
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた５−アセチル−２−（３−カルボキシプロポキシ）安息香酸（２６）のメチルエステル
ＨＰＬＣ保持時間：６．１分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７４１（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８５ｎｍ（エタノール）。
【０１６５】
実施例５６
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキシ）酪酸（２７）
ＨＰＬＣ保持時間：６．２分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７４１（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２９４ｎｍ（エタノール）。
【０１６６】
実施例５７
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−［２−［［（４−アセチルフェニル）アミノ］メチル］−６−メトキシフェノキシ］酪酸（２８）
ＨＰＬＣ保持時間：７．７分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１８１８（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：３２３ｎｍ（エタノール）。
【０１６７】
実施例５８
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（４−アセチル−３−フルオロフェノキシ）酪酸（３０）
ＨＰＬＣ保持時間：６．１分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７０１（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２７３ｎｍ（エタノール）。
【０１６８】
実施例５９
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−（２−アセチルフェノキシ）酪酸（３１）
ＨＰＬＣ保持時間：６．１分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６８３（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：なし。
【０１６９】
実施例６０
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた２−アセチル−１０Ｈ−フェノチアジン−１０−ヘキサノイック酸（３２）
ＨＰＬＣ保持時間：６．２分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１８３３（Ｍ＋ＮＨ4）、
最大ＵＶ吸収：２８１ｎｍ、３５６ｎｍには強力なショルダー（ＣＨ3ＣＮ)。
【０１７０】
実施例６１
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させた４−アセチルフェニル酢酸（３３）
ＨＰＬＣ保持時間：５．０分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１６３９（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８１ｎｍ（アセトニトリル）。
【０１７１】
構造Ｃの合成法（スキーム１）
一般法
先に取得されたカルボン酸−ヒドラゾンは、それらを、アセトニトリル、もしくは可溶性をよりよくするために１０−２０％のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドもしくはテトラヒドロフランを含むアセトニトリルのような適切な溶媒中に溶解し、そして〜２−５等量のＮ−ヒドロキシスクシンイミドおよび〜２−１０等量の塩酸塩としての１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣＩ）を添加することによりＯＳｕエステル（Ｚ3＝Ｎ−スクシンイミジルオキシ）に転化する。ＨＰＬＣもしくは別法のＴＬＣにより測定した際に反応完了が示されるまで（これは通常１−８時間である）、周囲の温度でこの反応を進行させる。その後、溶媒を除去し、そして粗生成物を、ＢｉｏＳｉｌ−Ａのような適切なシリカゲルで、クロロホルムもしくは酢酸エチルのいずれかの中の０−２０％エタノールの濃度勾配液のような適切な溶媒系を用いて精製する。その後、生成物は、複合体形成段階にとっては十分な純度を示す。
【０１７２】
実施例６２
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−ホルミルフェノキシ酢酸（１）
ＨＰＬＣ保持時間：６．５分。
【０１７３】
実施例６３
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−ホルミル安息香酸（２）
ＨＰＬＣ保持時間：６．６分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７０８（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：３１０ｎｍ（アセトニトリル）。
【０１７４】
実施例６４
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−ホルミル−３−メトキシフェノキシ酢酸（３）
ＨＰＬＣ保持時間：７．０分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７６８（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２７９、２８８、および３２０ｎｍ（アセトニトリル）。
【０１７５】
実施例６５
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた６−ホルミル−２−ナフトエ酸(４)ＨＰＬＣ保持時間：７．４分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７５８（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２７２、および３２３ｎｍ（エタノール）。
【０１７６】
実施例６６
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（２−オキソエトキシ）ベンゼンプロピオン酸（５）
ＨＰＬＣ保持時間：７．１分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７６６（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：なし。
【０１７７】
実施例６７
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた３−（２−オキソエトキシ）安息香酸（６）
ＨＰＬＣ保持時間：７．７分、
最大ＵＶ吸収：なし。
【０１７８】
実施例６８Ａ
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸（７）
ＨＰＬＣ保持時間：７．５分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７８０（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８３ｎｍ（アセトニトリル）、
1Ｈ−ＮＭＲ：図ＶＩを参照せよ。
【０１７９】
実施例６８Ｂ
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドの（１−ヒドロキシ−２，５−ジオキソ−３−ピロリジンスルホン酸、一ナトリウム塩）エステル（すなわち「スルホネート−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド」とのエステル）と縮合させた４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸（７）
ＨＰＬＣ保持時間：５．２分、
最大ＵＶ吸収：２７８ｎｍ（エタノール）。
【０１８０】
実施例６９
カリケアマイシン  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸（７）
ＨＰＬＣ保持時間：７．６分、
最大ＵＶ吸収：２８３ｎｍ（アセトニトリル）。
【０１８１】
実施例７０
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（３−ホルミルフェノキシ）酪酸（８）
ＨＰＬＣ保持時間：７．４分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７６６（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８３ｎｍ（アセトニトリル）。
【０１８２】
実施例７１
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（４−ホルミルフェノキシ）酪酸（９）
ＨＰＬＣ保持時間：７．０分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７６６（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８９ｎｍ（アセトニトリル）。
【０１８３】
実施例７２
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（４−アセチル−２−メチルフェノキシ）酪酸（１０）
ＨＰＬＣ保持時間：８．２分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７９４（Ｍ＋Ｈ）。
【０１８４】
実施例７３
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（４−ホルミル−２−メトキシフェノキシ）酪酸（１１）
ＨＰＬＣ保持時間：６．６分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７９６（Ｍ＋Ｈ）。
【０１８５】
実施例７４
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−ホルミルベンゼンプロピオン酸（１２）
ＨＰＬＣ保持時間：６．７分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７３６（Ｍ＋Ｈ）。
【０１８６】
実施例７５
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（２，３−ジメトキシ−５−ホルミルフェノキシ）酪酸（１３）
ＨＰＬＣ保持時間：６．７分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１８２６（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２９８ｎｍ（エタノール）。
【０１８７】
実施例７６
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（４−アセチル−２，６−ジメトキシフェノキシ）酪酸（１４）
ＨＰＬＣ保持時間：７．７分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１８４０（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８６ｎｍ（アセトニトリル）。
【０１８８】
実施例７７
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（４−アセチル−２−メトキシフェノキシ）酪酸（１５）
ＨＰＬＣ保持時間：７．２分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１８１０（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８４ｎｍ（アセトニトリル）。
【０１８９】
実施例７８
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−［４−（３−オキソブチル）フェノキシ］酪酸（１６）
ＨＰＬＣ保持時間：７．９分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１８０８（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：なし。
【０１９０】
実施例７９
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（２−アセチル−５−メトキシフェノキシ）酪酸（１７）
ＨＰＬＣ保持時間：７．４分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１８１０（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：なし。
【０１９１】
実施例８０
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−［４−（３−オキソプロピル）フェノキシ］酪酸（１８）
ＨＰＬＣ保持時間：１３．１分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７９４（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：なし。
【０１９２】
実施例８１
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−アセチルベンゼン酪酸（１９）
ＨＰＬＣ保持時間：７．７分。
【０１９３】
実施例８２
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−［（２−アセチル−１−ナフタレニル）オキシ］酪酸（２０）
ＨＰＬＣ保持時間：９．４分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１８３０（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：なし。
【０１９４】
実施例８３
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−［４−（４−フルオロベンゾイル）フェノキシ］酪酸（２１）
ＨＰＬＣ保持時間：９．３分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１８６０（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８４ｎｍ（エタノール）。
【０１９５】
実施例８４
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（４−アセチルフェニル）−１−ピペラジンペンタノイック酸（２２）
ＨＰＬＣ保持時間：６．３分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１８６３（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：３０６ｎｍ（１：１  アセトニトリル／クロロホルム）。
【０１９６】
実施例８５
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた１１−（４−アセチルフェノキシ）ウンデカノイック酸（２３）
ＨＰＬＣ保持時間：１５．５分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１８７８（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８４ｎｍ（エタノール）。
【０１９７】
実施例８６
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた５−［（４−アセチルフェニル）アミノ］−５−オキソペンタノイック酸（２４）
ＨＰＬＣ保持時間：６．２分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１８０７（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２９２ｎｍ（アセトニトリル）。
【０１９８】
実施例８７
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）酪酸（２５）
ＨＰＬＣ保持時間：７．５分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１８００（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２９０ｎｍ（アセトニトリル）。
【０１９９】
実施例８８
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた５−アセチル−２−（３−カルボキシプロポキシ）安息香酸（２６）のメチルエステル
ＨＰＬＣ保持時間：７．２分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１８３８（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８４ｎｍ（アセトニトリル）。
【０２００】
実施例８９
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキシ）酪酸（２７）
ＨＰＬＣ保持時間：７．１分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１８１１（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２９３ｎｍ（エタノール）。
【０２０１】
実施例９０
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−［２−［［（４−アセチルフェニル）アミノ］メチル］−６−メトキシフェノキシ）酪酸（２８）
ＨＰＬＣ保持時間：９．２分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１９１６（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：３０９ｎｍ（アセトニトリル）。
【０２０２】
実施例９１
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（４−アセチル−３−フルオロフェノキシ）酪酸（３０）
ＨＰＬＣ保持時間：８．２分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７９８（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２７０ｎｍ（エタノール）。
【０２０３】
実施例９２
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−（２−アセチルフェノキシ）酪酸（３１）
ＨＰＬＣ保持時間：８．１分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７８０（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：なし。
【０２０４】
実施例９３
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた２−アセチル−１０Ｈ−フェノチアジン−１０−ヘキサノイック酸（３２）
ＨＰＬＣ保持時間：８．３分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１９３０（Ｍ＋ＮＨ4）、
最大ＵＶ吸収：２８１ｎｍ（アセトニトリル）。
【０２０５】
実施例９４
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させた４−アセチルフェニル酢酸（３３）
ＨＰＬＣ保持時間：７．２分、
ＦＡＢ  ＭＳ：１７３６（Ｍ＋Ｈ）、
最大ＵＶ吸収：２８０ｎｍ（アセトニトリル）。
【０２０６】
構造Ｄの合成法（方法Ａ−スキーム１）
一般法
先に得られた活性化エステルを、ジメチルホルムアミドのような適切な有機溶媒に溶解し、そして有機共溶媒の濃度が〜１０−３０％になり、かつ〜２−１０等量の活性エステルを抗体のモル当たりに使用するように、ｐＨ７．４のリン酸（５０ｍＭ、１００ｍＭ塩）のような適切な緩衝液中の〜１−１５ｍｇ／ｍＬの抗体溶液にこれを添加する。複合体形成反応を周囲の温度で〜４−２４時間進行させる。この溶液を、必要に応じて半透膜の利用により濃縮し、そしてＳｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ−２００ゲルのような標準サイズの排除クロマトグラフィーにより精製する。単量体分画をひとまとめにし、そして抗体上の薬剤の積載量を、抗体については２８０ｎｍで、そしてカリケアマイシン  ヒドラゾンについては３３３ｎｍもしくは他の適切な波長でのＵＶ−ＶＩＳ吸光度により評定する。
【０２０７】
構造Ｅの合成法（スキーム２）
一般法
スペーサーのカルボン酸をＯＳｕエステル（Ｚ3＝Ｎ−スクシンイミジルオキシ）として、それらを１０−２０％のジメチルホルムアミドを含むテトラヒドロフランのような適切な溶媒中に溶解し、そして〜２−３等量のＮ−ヒドロキシスクシンイミドおよび〜２−５等量の塩酸塩としての１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣＩ）を添加することにより活性化する。ＴＬＣにより評定する際に反応の終結が示されるまで（これは通常１−８時間である）、周囲の温度でこの反応を進行させる。その後溶媒を除去し、そして粗生成物をＢｉｏＳｉｌ−Ａのような適切なシリカゲルで、クロロホルム中の０−５％メタノールの濃度勾配液のような適切な溶媒系を使用して精製する。生成物は一般的には、酢酸エチル−ヘキサンの混合物もしくは他の適切な溶媒からの再結晶により更に精製する。
【０２０８】
以下に示す調製物は、先の方法により作成した。
【０２０９】
（ＳｕＯＨ＝Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）
調製物９５
４−ホルミルフェノキシ酢酸（１）のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル
ＣＩ ＭＳ：２７８（ＭＨ+）、ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3＋Ｄ6−ＤＭＳＯ）：９．９ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ，ＣＨ＝Ｏ）、７．９および７．１（各２Ｈ，ｄ，ＡｒＨ）、５．２（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ2）、２．９（４Ｈ，ｓ，ＣＨ2ＣＨ2）。
【０２１０】
調製物９６
４−ホルミル−３−メトキシフェノキシ酢酸（３）のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル
ＣＩ ＭＳ：３０８（ＭＨ+）、ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：１０．３ｐｐｍ（１Ｈ，ｓ，ＣＨ＝Ｏ）、７．８（１Ｈ，ｄ，ＡｒＨ）、６．６（１Ｈ，ｄｔ，ＡｒＨ）、６．５５（１Ｈ，ｄ，ＡｒＨ）、５．１（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ2）、３．９５（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）、２．９（４Ｈ，ｓ，ＣＨ2ＣＨ2）。
【０２１１】
調製物９７
４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸（７）のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル
ＣＩ ＭＳ：３２０（ＭＨ+）、ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：７．９および７．０（各２Ｈ，ｄ，ＡｒＨ）、４．２（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ2）、２．９（６Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨ2＋Ｏ＝ＣＣＨ2）、２．６（３Ｈ，ｓ，Ｏ＝ＣＣＨ3）、２．３（２Ｈ，ｍ，ＣＨ2）。
【０２１２】
構造Ｆの合成法（スキーム２）
一般法
先に得られた活性化エステルを、Ｎ，Ｎ−ジエチルホルムアミドのような適切な有機溶媒により溶解し、そして有機共溶媒の濃度が〜１０−２５％になり、かつ〜２−２０等量の活性エステルを抗体のモル当たりに使用するように、ｐＨ７．４のリン酸（５０ｍＭ、１００ｍＭ塩）のような適切な緩衝液中の〜１−１５ｍｇ／ｍＬの抗体溶液にこれを添加する。複合体形成反応を周囲の温度で〜４−２４時間進行させる。緩衝液を交換し、そして有機共溶媒および副産物を、ｐＨ５．５の酢酸塩緩衝液（２５ｍＭの酢酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ）を用いるＰＤ−１０のような脱塩カラムの利用により除去する。この溶液を必要に応じて半透膜の利用により濃縮し、そしてこの生成物を更に精製を加えることなくこれ以降の段階に使用する。抗体当たりに取り込まれたカルボニル基数は、通常、用いるＯＳｕエステルの等量数の約半分であり、そして所望であらば、ｐ−ニトロフェニルヒドラジンもしくは他の同等な方法を利用することにより更に詳しく定量することができる。
【０２１３】
構造Ｄの合成法（方法Ｂ−スキーム２）
一般法
薬剤のヒドラジン誘導体を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような適切な有機溶媒により溶解し、そして有機共溶媒の濃度が〜１０−２５％になりかつ〜２−１５等量のヒドラジドを抗体のモル当たりに使用するように、ｐＨ    の酢酸塩（５０ｍＭ、１００ｍＭ塩）のような適切な緩衝液中〜１−１５ｍｇ／ｍＬの前段階からの抗体−リンカー複合体（構造Ｆ）の溶液にこれを添加する。複合体形成反応を周囲の温度で〜４−２４時間進行させる。緩衝液を交換し、そして有機共溶媒および副産物を、ｐＨ７．４の緩衝液（５０ｍＭのリン酸、１００ｍＭのＮａＣｌ）を用いるＰＤ−１０のような脱塩カラムの利用により除去する。この溶液を必要に応じて半透膜の利用により濃縮し、そしてＳｅｐｈａｃｒｙｌ  Ｓ−２００ゲルのような標準サイズの排除クロマトグラフィーにより精製する。単量体分画をひとまとめにし、そして抗体上の薬剤の積載量を、抗体については２８０ｎｍで、そしてカリケアマイシン  ヒドラゾンについては３３３ｎｍもしくは他の適切な波長でのＵＶ−ＶＩＳ吸光度により評定する。
【０２１４】
実施例９８（方法ＡおよびＢ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−ホルミルフェノキシ酢酸（１）の複合体
積載量：１．０Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．６５、
インビトロでのＩＣ50：０．２３ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：１，６００、
インビボ：２９％Ｔ／Ｃ（２μｇ×３回投与−−５／５生存−２８日）、
エックスビボ：９５％阻害。
【０２１５】
実施例９９（方法ＡおよびＢ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−ホルミルフェノキシ酢酸（１）の複合体
積載量：１．５Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．７７、
インビトロでのＩＣ50：０．０６８ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：３，６００、
エックスビボ：９０％阻害。
【０２１６】
実施例１００（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−ＣＴ−Ｍ−０１と縮合させた４−ホルミルフェノキシ酢酸（１）の複合体
積載量：２．０Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．８４、
インビトロでのＩＣ50：１．５ｎｇ／ｍＬ、    特異性係数：５９。
【０２１７】
実施例１０１（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−ホルミル安息香酸（２）の複合体
積載量：４．８Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．９９、
インビトロでのＩＣ50：４．８ｎｇ／ｍＬ、    特異性係数：＞１２５、
エックスビボ：６３％阻害。
【０２１８】
実施例１０２（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−ホルミル安息香酸（２）の複合体
積載量：４．０Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．０５、
インビトロでのＩＣ50：４．０ｎｇ／ｍＬ、    特異性係数：＞１２５。
【０２１９】
実施例１０３（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−ＣＴ−Ｍ−０１と縮合させた４−ホルミル安息香酸（２）の複合体
積載量：２．３Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．９０、
インビトロでのＩＣ50：５．６ｎｇ／ｍＬ、    特異性係数：３２。
【０２２０】
実施例１０４（方法ＡおよびＢ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−ホルミル−３−メトキシフェノキシ酢酸（３）の複合体
積載量：０．８Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．８１、
インビトロでのＩＣ50：０．３０ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：３７５。
【０２２１】
実施例１０５（方法ＡおよびＢ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−ホルミル−３−メトキシフェノキシ酢酸（３）の複合体
積載量：０．９Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．７６、
インビトロでのＩＣ50：０．１２ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：１，２００、
エックスビボ：９０％阻害。
【０２２２】
実施例１０６（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−ＣＴ−Ｍ−０１と縮合させた４−ホルミル−３−メトキシフェノキシ酢酸（３）の複合体
積載量：２．１Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．８８、
インビトロでのＩＣ50：５．６ｎｇ／ｍＬ、    特異性係数：１２。
【０２２３】
実施例１０７（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた６−ホルミル−２−ナフトエ酸（４）の複合体
積載量：２．０Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．７３、
インビトロでのＩＣ50：０．０４７ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：６７５。
【０２２４】
実施例１０８（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（２−オキソエトキシ）ベンゼンプロピオン酸（５）の複合体
積載量：１．１Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．０９、
インビトロでのＩＣ50：２．２２ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：１２５。
【０２２５】
実施例１０９（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（２−オキソエトキシ）ベンゼンプロピオン酸（５）の複合体
積載量：０．６Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．１１、
インビトロでのＩＣ50：０．４５ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：２００、
エックスビボ：７１％阻害。
【０２２６】
実施例１１０（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた３−（２−オキソエトキシ）安息香酸（６）の複合体
積載量：１．３Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．１９、
インビトロでのＩＣ50：０．６９ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：１００。
【０２２７】
実施例１１１（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた３−（２−オキソエトキシ）安息香酸（６）の複合体
積載量：０．８Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．９１、
インビトロでのＩＣ50：０．３２ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：１７５。
【０２２８】
実施例１１２（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸（７）の複合体
0003650165.tif 000030
【０２２９】
実施例１１３（方法Ａ）
カリケアマイシン  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸（７）の複合体
積載量：３．２Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．７８、
インビトロでのＩＣ50：０．００１ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：１０，０００。
【０２３０】
実施例１１４（方法ＡもしくはＢ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸（７）の複合体
0003650165.tif 000031
【０２３１】
実施例１１５（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−ＣＴ−Ｍ−０１と縮合させた４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸（７）の複合体
積載量：３．４Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：未決定、
インビトロでのＩＣ50：０．０４８ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：６，２００。
【０２３２】
実施例１１６（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ａ３３と縮合させた４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸（７）の複合体
0003650165.tif 000032
【０２３３】
実施例１１７（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ａ３３と縮合させた４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸（７）の複合体
積載量：１．８Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．１３、
インビトロでのＩＣ50：４．０３ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：０．９６。
【０２３４】
実施例１１８（方法Ａ）
カリケアマイシン  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ａ３３と縮合させた４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸（７）の複合体
積載量：２．８Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．９１、
インビトロでのＩＣ50：３．５５ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：２．６。
【０２３５】
実施例１１９（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよび抗−Ｔａｃと縮合させた４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸（７）の複合体
積載量：２．１Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：未決定、
インビトロでのＩＣ50：０．００４ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：２５０、
エックスビボでのＩＣ50：１．０ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：１００。
【０２３６】
実施例１２０（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（３−ホルミルフェノキシ）酪酸（８）の複合体
積載量：１．７Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．００、
インビトロでのＩＣ50：０．３８ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：１，７００。
【０２３７】
実施例１２１（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−ホルミルフェノキシ）酪酸（９）の複合体
0003650165.tif 000033
【０２３８】
実施例１２２（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−ホルミルフェノキシ）酪酸（９）の複合体
0003650165.tif 000034
【０２３９】
実施例１２３（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−アセチル−２−メチルフェノキシ）酪酸（１０）の複合体
積載量：３．５Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．１６、
インビトロでのＩＣ50：０．４５ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：２，９００。
【０２４０】
実施例１２４（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−アセチル−２−メチルフェノキシ）酪酸（１０）の複合体
積載量：１．６Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．０７、
インビトロでのＩＣ50：０．０４１ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：５，１００。
【０２４１】
実施例１２５（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−ホルミル−２−メトキシフェノキシ）酪酸（１１）の複合体
積載量：２．６Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．７３、
インビトロでのＩＣ50：３．８ｎｇ／ｍＬ、    特異性係数：５７５。
【０２４２】
実施例１２６（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−ホルミル−２−メトキシフェノキシ）酪酸（１１）の複合体
積載量：１．９Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．２２、
インビトロでのＩＣ50：０．１３ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：１，８００。
【０２４３】
実施例１２７（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−ホルミルベンゼンプロピオン酸（１２）の複合体
積載量：２．５Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．７３、
インビトロでのＩＣ50：１．０ｎｇ／ｍＬ、    特異性係数：９５０。
【０２４４】
実施例１２８（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−ホルミルベンゼンプロピオン酸（１２）の複合体
積載量：１．６Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．７３、
インビトロでのＩＣ50：０．１２ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：２，０００。
【０２４５】
実施例１２９（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（２，３−ジメトキシ−５−ホルミルフェノキシ）酪酸（１３）の複合体
積載量：１．０Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．１６、
インビトロでのＩＣ50：１．１ｎｇ／ｍＬ、    特異性係数：＞３７５。
【０２４６】
実施例１３０（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（２，３−ジメトキシ−５−ホルミルフェノキシ）酪酸（１３）の複合体
積載量：１．８Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．０８、
インビトロでのＩＣ50：０．０６２ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：＞９，８００。
【０２４７】
実施例１３１（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−アセチル−２，６−ジメトキシフェノキシ）酪酸（１４）の複合体
積載量：２．６Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．０７、
インビトロでのＩＣ50：０．２４ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：＞１，７００。
【０２４８】
実施例１３２（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−アセチル−２，６−ジメトキシフェノキシ）酪酸（１４）の複合体
積載量：１．７Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．１８、
インビトロでのＩＣ50：０．０１５ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：＞４０，５００。
【０２４９】
実施例１３３（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−アセチル−２−メトキシフェノキシ）酪酸（１５）の複合体
積載量：２．３Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．７８、
インビトロでのＩＣ50：０．２３ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：８７５。
【０２５０】
実施例１３４（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−アセチル−２−メトキシフェノキシ）酪酸（１５）の複合体
積載量：１．７Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．８０、
インビトロでのＩＣ50：０．０２９ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：１３，５００。
【０２５１】
実施例１３５（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−［４−（３−オキソブチル）フェノキシ］酪酸（１６）の複合体
積載量：０．５Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：未決定、
インビトロでのＩＣ50：９ｎｇ／ｍＬ、        特異性係数：２。
【０２５２】
実施例１３６（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（２−アセチル−５−メトキシフェノキシ）酪酸（１７）の複合体
積載量：２．３Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．９８、
インビトロでのＩＣ50：０．０８８ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：１，１００。
【０２５３】
実施例１３７（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（２−アセチル−５−メトキシフェノキシ）酪酸（１７）の複合体
積載量：１．６Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．２０、
インビトロでのＩＣ50：０．００９８ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：２１，５００。
【０２５４】
実施例１３８（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−［４−（３−オキソプロピル）フェノキシ］酪酸（１８）の複合体
積載量：１．０Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．８０、
インビトロでのＩＣ50：１．１ｎｇ／ｍＬ、    特異性係数：８０。
【０２５５】
実施例１３９（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−［４−（３−オキソプロピル）フェノキシ］酪酸（１８）の複合体
積載量：０．６Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．２１、
インビトロでのＩＣ50：０．６２ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：９０。
【０２５６】
実施例１４０（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−アセチルベンゼン酪酸（１９）の複合体
0003650165.tif 000035
【０２５７】
実施例１４１（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−アセチルベンゼン酪酸（１９）の複合体
0003650165.tif 000036
【０２５８】
実施例１４２（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−［（２−アセチル−１−ナフタレニル）オキシ］酪酸（２０）の複合体
0003650165.tif 000037
【０２５９】
実施例１４３（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた４−［（２−アセチル−１−ナフタレニル）オキシ］酪酸（２０）の複合体
積載量：１．８Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．６６、
インビトロでのＩＣ50：０．００６７ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：１０５，０００。
【０２６０】
実施例１４４（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−［４−（４−フルオロベンゾイル）フェノキシ］酪酸（２１）の複合体
積載量：２．５Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．６７、
インビトロでのＩＣ50：９９ｎｇ／ｍＬ、      特異性係数：３。
【０２６１】
実施例１４５（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−［４−（４−フルオロベンゾイル）フェノキシ］酪酸（２１）の複合体
積載量：１．８Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．７６、
インビトロでのＩＣ50：６３ｎｇ／ｍＬ、      特異性係数：９。
【０２６２】
実施例１４６（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−アセチルフェニル）−１−ピペラジンペンタノイック酸（２２）の複合体
積載量：０．１Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．９８、
インビトロでのＩＣ50：１２ｎｇ／ｍＬ、      特異性係数：２。
【０２６３】
実施例１４７（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた１１−（４−アセチルフェノキシ）ウンデカノイック酸（２３）の複合体
積載量：０．５Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．８０、
インビトロでのＩＣ50：０．４３ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：１７５。
【０２６４】
実施例１４８（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた１１−（４−アセチルフェノキシ）ウンデカノイック酸（２３）の複合体
積載量：０．４Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．１６、
インビトロでのＩＣ50：０．４７ｎｇ／ｍＬ、  特異性係数：１２５。
【０２６５】
実施例１４９（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｍ−Ｐ６７．６と縮合させた５−［（４−アセチルフェノキシ）アミノ］−５−オキソペンタノイック酸（２４）の複合体
積載量：２．０Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．７３、
インビトロでのＩＣ50：＜０．００５ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：＞１，２００。
【０２６６】
実施例１５０（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（２−クロロ−４−ホルミルフェノキシ）酪酸（２５）の複合体
積載量：２．０Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．３１、
インビトロでのＩＣ50：０．００７１ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：１，５００。
【０２６７】
実施例１５１（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた５−アセチル−２−（３−カルボキシプロポキシ）安息香酸（２６）の複合体
積載量：２．０Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．７９、
インビトロでのＩＣ50：＜０．００５ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：＜９，６００。
【０２６８】
実施例１５２（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキシ）酪酸（２７）の複合体
積載量：１．５Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．３、
インビトロでのＩＣ50：０．０２３ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：＞４，５００。
【０２６９】
実施例１５３（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−［２−［［（４−アセチルフェニル）アミノ］メチル］−６−メトキシフェノキシ］酪酸（２８）の複合体
積載量：２．０Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．８５、
インビトロでのＩＣ50：＜０．００５ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：＞５，０００。
【０２７０】
実施例１５４（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（４−アセチル−３−フルオロフェノキシ）酪酸（３０）の複合体
積載量：１．５Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．０１、
インビトロでのＩＣ50：０．００５ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：４，８００。
【０２７１】
実施例１５５（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−（２−アセチルフェノキシ）酪酸（３１）の複合体
積載量：１．５Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．９５、
インビトロでのＩＣ50：＜０．００５ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：＞７．０００。
【０２７２】
実施例１５６（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた２−アセチル−１０Ｈ−フェノチアジン−１０−ヘキサノイック酸（３２）の複合体
積載量：１．５Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：１．２５、
インビトロでのＩＣ50：０．０２１ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：２，３００。
【０２７３】
実施例１５７（方法Ａ）
カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドおよびｈ−Ｐ６７．６と縮合させた４−アセチルフェニル酢酸（３３）の複合体
積載量：１．４Ｍ／Ｍ、                      相対的親和性：０．９１、
インビトロでのＩＣ50：＜０．００５ｎｇ／ｍＬ、特異性係数：４，７００。
【０２７４】
記載される複合体は望ましくない細胞の増殖の阻害に役立ち、このことは本発明の重要な一部分となっている。従って本発明はまた、薬剤学的組成物、最も好ましくは温血動物の体内への注入に適する非経口的組成物をも含む。このような組成物は、薬品化学において共通に用いられる方法により製剤される。これらの複合体は、生理学的食塩水溶液および安全に非経口的投与を行うことができる他の水溶液のような生理学的に許容される液体中に許容される状態で可溶化する。
【０２７５】
非経口投与のための生成物は、使用直前の再構成のための固体、好ましくは凍結乾燥形態で製剤および分散させられていることがよくある。このような製剤は本発明の組成物に役立つ。それらの製剤法は薬品化学者によりよく理解されており、一般的にはそれらの製剤は、等張性を付与するための無機塩と、再構成の際に乾燥調剤を迅速に溶解させるためのスクロースのような分散剤との混合物を含む。このような製剤は、超純水もしくは生理学的に許容される緩衝液を用いてその薬剤に基づく既知の濃度に再構成する。
【０２７６】
本発明の複合体の至適用量および投与スケジュールは患者の症状を考慮した上で主治医が決定する必要がある。
【０２７７】
当然のことながら、細胞障害性の薬剤は、分割用量の形態で、しかも各一連の投与の間に数日もしくは数週間の間隔を空けて投与するのが常となっている。これらの複合体は広い用量範囲にわたって効力を示し、そして一週間当たりの用量は、通常約１から約１０，０００μｇ／ｍ2までの薬剤、より好ましくは約１０から約２００μｇ／ｍ2までの薬剤の範囲内に含まれるであろう。
【図面の簡単な説明】
【図１】ｈ−Ｐ６７．６軽鎖についてのＤＮＡおよびアミノ酸配列。
【図２】  ｈ−Ｐ６７．６重鎖についてのＤＮＡおよびアミノ酸配列。
【図３】  ｈ−Ｐ６７．６重鎖発現用プラスミドを表す制限酵素地図。
【図４】  ｈ−Ｐ６７．６重鎖の挿入用プラスミドを表す制限酵素地図。
【図５】ｈ−Ｐ６７．６軽鎖発現用プラスミドを表す制限酵素地図。
【図６】カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させてある４−ホルミルフェノキシ酢酸の陽子磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【図７】カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させてある４−ホルミル安息香酸酸の陽子磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【図８】カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させてある４−ホルミル−３−メトキシフェノキシ酢酸の陽子磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【図９】カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させてある６−ホルミル−２−ナフトエ酸の陽子磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【図１０】カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させてある４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸の陽子磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【図１１】カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと縮合させてある４−（４−アセチルフェノキシ）酪酸の陽子磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【図１２】カリケアマイシン  Ｎ−アセチル  ガンマー  ジメチル  ヒドラジドと縮合させてある４−（４−ホルミルフェノキシ）酪酸の陽子磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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