(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
バリンを有効成分として含有し、かつバリン以外のアミノ酸を有効成分として全く含まないことを特徴とする肝再生治療剤。
【請求項２】
バリンがＬ−バリンである請求項１記載の肝再生治療剤。
【請求項３】
輸液製剤である請求項１または２記載の肝再生治療剤。
【請求項４】
バリン濃度が０．５〜１０．０％である請求項１〜３のいずれかに記載の肝再生治療剤。
【請求項５】
バリン濃度が０．５〜５．０％である請求項４記載の肝再生治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は分岐鎖状アミノ酸であるバリンを有効成分として含有することを特徴とする肝再生治療剤、詳しくは、肝障害・肝炎・肝硬変等により、肝臓を切除した後等の肝細胞を再生させる作用を有するバリン含有製剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、肝細胞再生作用を有する因子や薬剤は知られている。例えば、Ａｒｃｈｉｖｅ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１６，２２６−２３１（１９９３）には、肝の部分切除後に１％重量の甲状腺乾燥粉末を含んだ食餌を与え続けると、肝の部分切除後７日目から肝の重量が対照と比べて有意に増加することが記載されている。
【０００３】
また、Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２４７，１７５７−１７６６（１９７２）には、トリヨードチロニン（Ｔ３）、アミノ酸混液、グルカゴン、ヘパリンの混合液で肝臓にＤＮＡ合成がおこると報告されている。
【０００４】
さらに成熟ラット初代培養肝細胞の増殖因子として、７０％部分肝切除後２４時間のラット血清より精製され、ＨＧＦ（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ  ＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ）あるいはヘパトトロピン（Ｈｅｐａｔｏｔｒｏｐｉｎ）と命名されたことがＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，１２２，１４５０−１４５９（１９８４）に記載されている。
【０００５】
また、インスリンとグルカゴンが肝再生に重要な因子であることが、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，１３，２８１−２９３（１９７５）に記載され、わが国では沖田等がＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｉａ  Ｊａｐａｎ．，１４，４５３（１９７９）で劇症肝炎にインスリン・グルカゴン療法を応用して以来、臨床例に汎用されている。
【０００６】
他方、分岐鎖アミノ酸であるバリン、イソロイシン、ロイシンによる肝性脳症や敗血症性脳症の改善あるいは侵襲時の蛋白節約効果が報告され、アミノ酸液としてヘパトアミン（登録商標）、ヘパン（登録商標）、アミノレバン（登録商標）、アミパレン（登録商標）、アミゼート（登録商標）およびアミニック（登録商標）が市販されている。しかしながら、バリンが肝細胞再生作用を有することは全く知られていない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
近年、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）は、ラットおよびヒトより精製され、ｃＤＮＡのクローニングにも成功し、初代培養肝細胞増殖作用、肝障害に伴う血中ＨＧＦ活性の上昇やＨＧＦｍＲＮＡの発現誘導の結果等から将来臨床応用されることが期待されるが、実用化には至っていない。
【０００８】
現在、日本で肝再生効果を有するとされる唯一の治療はグルカゴン・インスリン療法（ＧＩ療法）である。しかしながら、欧米においてこのＧＩ療法はいまだその有効性が認められるまでには至っていない。
【０００９】
本発明は軽度から重度の肝障害を伴う肝疾患に対し、安全で肝再生効果の強い薬剤を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、上記目的を達成するため、ラットを用いた実験により、通常用いられている高カロリー輸液にバリンを添加し、バリン濃度を増加させ、それに伴う肝再生重量を測定し、病理組織学的検索等について、詳細に検討した。その結果、バリンが顕著に肝再生を起こすことを見出し、本発明を完成した。
【００１１】
本発明で用いられるバリンは市販品、合成品、その他製法に関係なく使用されうる。またＤ体、Ｌ体およびＤＬ体のいずれも使用可能である。
【００１２】
本発明で用いられるバリンを肝再生治療剤として使用する場合は、通常、静脈内投与で行うのが好ましいが、他に経口投与、経腸投与等でも可能である。また、本発明で用いるバリンはこれのみを含む製剤として単独で用いることもできるが、好ましくは高カロリー輸液剤のような輸液製剤と併用して用いるか若しくは輸液製剤に添加して用いるのがよい。
【００１３】
投与剤型としては、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、粉末剤、散剤、座剤等が考えられる。このような剤型を調製するためには医薬上許容しうる液体または固体状の適当な賦形剤、充填剤、増量剤、溶剤、乳化剤、滑沢剤、風味補正剤、香料、染料、緩衝物質等の補助剤を加えて行うのが好ましい。
【００１４】
本発明の肝再生治療剤は、肝炎をはじめ、肝硬変、肝癌等で肝臓を切除した患者に用いられ、その投与量は患者の性別、体型、体質、年齢および症状や用いる剤型により異なるが、末梢静脈や中心静脈からアミノ酸輸液製剤として投与する場合はバリンの濃度が０．５〜５．０％、輸液に加えるアンプル剤としては１．０〜１０．０％、その他、経口投与および経腸投与の懸濁剤、乳剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、粉末剤、散剤、座剤等としては、５．０〜１００％の範囲で適宜選択できる。
【００１５】
尚、本発明においてバリンの濃度を表す％は、バリンが液体状の場合はｗ／ｖ％を、またバリンが固体状の場合はｗ／ｗ％を意味する。
【００１６】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明する。
【００１７】
【実施例１】
バリン増量による７０％部分肝切除ラットの肝再生に及ぼす効果
８〜９週齢の２５０ｇ前後のＤｏｎｒｙｕ系雄性ラット（１群５〜７匹）を用い、エーテル麻酔下で中心静脈にカテーテルを挿入・留置したあと、開腹し肝臓を約７０％切除し、７０％部分肝切除モデルラットを作成した。カテーテルは皮下トンネルを通して両肩甲骨間に抜き、Ｈａｒｎｅｓｓ装着後、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｃｏｉｌを経て、Ｓｗｉｖｅｌに接続した。ラットを代謝ケージに移し、乳酸リンゲル液（ラクテック［登録商標、大塚製薬株式会社製］）で輸液馴化後、３日間あるいは５日間、ｎｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｌｏｎｙ換算で２２０ｋｃａｌ／ｋｇ／ｄａｙ、ポンプによる投与速度を２５０ｍｌ／ｋｇ／ｄａｙに設定して、以下に示す高カロリー輸液を持続投与した。すなわち、１００％群（対照群）として１０％総合アミノ酸製剤（モリプロン［登録商標、森下ルセル株式会社製］）にグルコース、電解質、微量金属、ビタミンを加えた高カロリー輸液（バリン濃度＝２．２５ｇ／ｌ）を、０％群は上記対照輸液からバリンのみを欠如させた輸液（バリン濃度＝０ｇ／ｌ）を、２００％群は対照輸液に、Ｌ−バリン（日本薬局方）を添加した輸液（バリン濃度＝４．５０ｇ／ｌ）を、４００％群は対照輸液にＬ−バリン（日本薬局方）を添加した輸液（バリン濃度＝９．００ｇ／ｌ）を持続投与する群に分けて実験を行った。
【００１８】
輸液投与終了後は体重を測定し、エーテル麻酔下で開腹し、腹大動脈より全採血後剖検し、肝臓を採取し重量を測定した。また肝重量と体重測定結果から肝体重比を求めた。さらに肝臓はホルマリン固定し、ヘマトキシリン・エオジン重染色標本にて病理組織学的検査を行った。尚、測定結果は平均値±標準偏差（ｍｅａｎ±ＳＤ）で表し、統計学的処理はＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ  Ｔ  ｔｅｓｔにてｐ＜０．０５を有意差ありとした。肝重量と肝体重比の結果を表１に示す。
【００１９】
【表１】
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肝重量は３日間投与において対照群の５．６±０．３ｇに比し、２００％群の６．８±０．３ｇおよび４００％群の７．５±０．３ｇはともに有意（ｐ＜０．０１）に高値を示し、また５日間投与においても、対照群の６．１±０．３ｇに比べて、２００％群の７．６±０．３ｇおよび４００％群の８．６±０．３ｇがともに有意（ｐ＜０．０１）に高値を示した。
【００２０】
さらに肝体重比においても、３日間投与で対照群の２．３±０．２％に比し、２００％群の２．６±０．２％が有意（ｐ＜０．０５）に、４００％群の２．９±０．１％も有意（ｐ＜０．０１）に高く、また５日間投与では対照群の２．３±０．１％に比べて、２００％群の２．９±０．２％および４００％群の３．１±０．１％がともに有意（ｐ＜０．０１）に高値を示した。
【００２１】
肝臓の病理組織学的検査では、０％群において肝細胞のグリコーゲン野拡張と空胞形成が顕著であったが、その他の群では全例異常は認められず、正常な形態像を示した。
【００２２】
【実施例２】
前脂肪細胞の増殖におけるバリンの影響
Ｃ３Ｈ系雌性マウス皮膚由来の前脂肪細胞を用い、バリンの細胞増殖におよぼす影響を調べた。前脂肪細胞を１×１０4個／ｗｅｌｌ、２．５×１０4個／ｗｅｌｌで９６穴平底プレートに培養し、バリン濃度を８０ｍｇ／ｌ、１６０ｍｇ／ｌ、３２０ｍｇ／ｌとし、3Ｈチミジンをパルスし、シンチレーションカウンターにてチミジンの取り込みを測定した。培地はＲＰＭＩ１６４０を用いた。結果を表２に示す。
【００２３】
【表２】
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表２から明かなように、バリン濃度の増加に伴い、チミジンの取り込みの増加が認められた。
【００２４】
【実施例３】
初代培養肝細胞の増殖におけるバリンの効果
８〜９週齢の２５０ｇ前後のＤｏｎｒｙｕ系雄性ラットを用い、エーテル麻酔下で開腹し、肝臓を７０％切除した。３日後、麻酔下でラット肝臓をコラーゲンで潅流し、遊離した肝細胞を採取した。肝細胞を２×１０4 個／ｗｅｌｌで、コラーゲンでコートした９２穴平底プレートに播種した。バリン濃度を５０ｍｇ／ｌ、１００ｍｇ／ｌ、２００ｍｇ／ｌとし、３６時間培養後、 3Ｈチミジンをパルスし、シンチレーションカウンターにて、チミジンの取り込みを測定した。培地はＷｉｌｌｉａｍｓ  Ｍｅｄｉａ  Ｅを用い、１０％ＦＣＳ、１０-6Ｍ・ｄｅｘａｍｅｔｈａｚｏｎｅ、１０-7Ｍ・ｉｎｓｕｌｉｎとした。チミジン取り込みの結果を表３に示す。
【００２５】
【表３】
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表３から明かなように、バリン濃度の増加に伴い、初代培養肝細胞のチミジンの取り込みの増加が認められ、バリンによる培養肝細胞増殖への効果が認められた。
【００２６】
【発明の効果】
本発明の肝再生治療剤は、肝炎、脂肪肝および薬剤性肝障害における肝障害に対し、肝再生を促し、正常な肝機能を回復する効果がある。胆嚢癌、肝癌、転移性肝癌等により肝切除を施行した患者に、早期に肝再生を誘導し、速やかに術後回復を可能にする。この作用は高カロリー輸液剤と併用して用いることにより、さらに高められ、慢性肝炎や肝硬変患者の肝切除においても、速やかな肝再生を示し、安全な手術、早期術後回復を可能にする。