(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）の化合物：
【化１】
0003683911.tif 000014
ここでＢは次のグループの一つである：
【化２】
0003683911.tif 000015
ここで：
Ａは化学結合、−ＣＯ−、の中から選ばれ、−ＣＯ−は左側は複素環に連結した部分であり右側はアルキル鎖に連結されていることを示すように表現されている；
Ｒ1とＲ2は、同一か又は違っていて、互いに独立に水素原子、炭素原子１乃至４を有する直鎖又は分枝アルキル基を表わす；
ｎは０又は１である；
ｍは０と４の間より成りそして
Ｒは、ａ）アルコキシ及び炭素原子１乃至４を有する分枝又は直鎖アルキルから選ばれる一つ又はそれ以上のグループにより置換されているアリールオキシ；及び
ｂ）−Ｎ（Ｒ4）Ｒ5からなるグループから選ばれる：
ここで：
Ｒ4とＲ5は、同一か又は違っていて、互いに独立に以下の基を表わす：Ｈ、炭素原子１乃至４を有する直鎖又は分枝アルキル、ベンジルオキシカルボニル、メタンスルホニル、ベンジルオキシカルボニルグリシノイル；もしｍ＝ｎ＝０の時にはＲは−ＮＲ4Ｒ5とは異なる；
【化３】
0003683911.tif 000016
又は鏡像異性体、ジアステレオ異性体、Ｎ−オキシド、それらの製薬学的に受容できる酸の付いた附加塩。
【請求項２】
Ｂが（Ｂ１）かつＡが−ＣＯ−である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｂが（Ｂ１）かつＲが−ＮＲ4Ｒ5である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
以下より成るグループから選ばれた請求項３に記載の化合物：
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−｛４−［（３−ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロピオニル］−１−ピペラジニル｝−キナゾリン、
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−｛４−［（３−ベンジルオキシカルボニルアミノ）ブチリル］−１−ピペラジニル｝−キナゾリン、
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−［４−（３−アミノプロピオニル）−１−ピペラジニル］−キナゾリン
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−［４−（３−アミノブチリル）−１−ピペラジニル］−キナゾリン
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−｛４−［（４−メチルスルホニルアミノ）ブチリル］−１−ピペラジニル｝−キナゾリン、及び
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−｛４−［２−［２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−アセチル−アミノ］アセチル］−１−ピペラジニル｝−キナゾリン。
【請求項５】
Ｂが（Ｂ１）かつＲが置換されたアリールオキシである請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
以下より成るグループから選ばれた請求項５に記載の化合物：
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−｛４−［２−（２−メトキシフェノキシ）−２−メチルプロピオニル］−１−ピペラジニル｝−キナゾリン、
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−［４−（２−メトキシフェノキシアセチル）−１−ピペラジニル］−キナゾリン、
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−｛４−［（２−メトキシ−６−イソプロピルフェノキシ）アセチル］−１−ピペラジニル｝−キナゾリン、
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−｛４−［（２−イソプロピル−５−メチルフェノキシ）アセチル］−１−ピペラジニル｝−キナゾリン、
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−｛４−［２−（２−メトキシ−６−イソプロピルフェノキシ）プロピオニル］−１−ピペラジニル｝−キナゾリン、及び
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−［４−（２，６−ジメトキシフェノキシ）アセチル−１−ピペラジニル］−キナゾリン。
【請求項７】
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−｛４−［２−（２−メトキシ−６−イソプロピルフェノキシ）プロピオニル］−１−ピペラジニル｝−キナゾリンに相当する請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
以下より成るグループから選ばれた請求項１に記載の化合物：
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−（１，２，３，４−テトラヒドロベンゾ［ｆ］イソキノリン−２−イル）−キナゾリンに相当し、Ｂが（Ｂ３）である、
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−（４，４−ジフェニル−１−ピペラジニル）−キナゾリンに相当し、Ｂが（Ｂ４）である、及び
４−アミノ−６，７−ジメトキシ−２−［１−（３，４−ジメトキシベンジル）−６，７−ジメトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−２−イル］−キナゾリンに相当し、Ｂが（Ｂ５）である式（１）の化合物。
【請求項９】
薬学的に受容できる賦形剤、溶離剤又は担体と組み合わせた、有効成分として請求項１から８までの何れかに記載の化合物、又は鏡像異性体、ジアステレオ異性体、Ｎ−オキシド又は薬学的に受容できるそれらの塩類を含有する、動脈高血圧症、前立腺の良性肥大、高眼内圧及び過コレステリン血症から選ばれる疾病の治療用薬剤組成物。
【請求項１０】
式（ＩＩ）の２ハロキナゾリンと式（ＩＩＩ）のアミノ誘導体の縮合より成る、請求項１で定義された一般式（Ｉ）の化合物の調製法：
【化４】
0003683911.tif 000017
ここでＸはハロゲン原子である，
ＢＨ                    （ＩＩＩ）
ここでＢは、Ｒが−Ｎ（Ｒ4）Ｒ5（ここでＲ4とＲ5は、両方ともか又は独立に、Ｈ又はアルキル基）である時のＢ１の場合を除いて請求項１に定義したＢ１−Ｂ５の中のどれか一つである。
【請求項１１】
１２０℃と還流温度との間の温度で、高沸点の極性溶媒中で行われる、請求項１０に記載の製法。
【請求項１２】
請求項１で定義した如くＢがＢ１である場合、式（ＩＶ）のキナゾリン誘導体と：
【化５】
0003683911.tif 000018
式（Ｖ）のカルボキシル酸：
【化６】
0003683911.tif 000019
との、縮合剤の存在下での縮合による、あるいは、
上記酸の塩化物との、促進剤として作られた酸の受容体の存在下、縮合剤の存在下での縮合による式（Ｉ）の化合物の調製法：
ここで、Ｒ，Ｒ1，Ｒ2，ｎ及びｍは請求項１の定義のまま。
【請求項１３】
縮合剤がＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドで又促進剤が４−ジメチルアミノピリジンである請求項１２に記載の製法。
【請求項１４】
縮合剤がＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドで又促進剤が４−ジメチルアミノピリジンである請求項１２に記載の製法。
【請求項１５】
非プロトン性と塩素化溶媒の間で選ばれた溶媒中で行われる、請求項１２に記載の製法。
【請求項１６】
０°と１４０℃の間の温度で行われる、請求項１２に記載の製法。
【請求項１７】
Ｒが−ＮＲ4Ｒ5でＲ4とＲ5がＨの場合、強酸の存在下プロトン性溶媒中で、０°と４０℃の間の温度で、請求項１で定義の式（Ｉ）においてＲが−ＮＲ4Ｒ5でＲ4又はＲ5が−ＣＯＯＣＨ2Ｃ6Ｈ5である化合物の加水分解による請求項１で定義の式（Ｉ）の化合物の調製法。
【請求項１８】
溶媒が酢酸で、強酸が臭化水素酸である請求項１７に記載の製法。
【請求項１９】
Ｒがグループ−ＮＲ4Ｒ5でＲ4とＲ5がＨ及びメタンスルホニルグループの場合、０°と４０℃の間の温度で、塩基の存在下非プロトン性溶媒中で、請求項１で定義の式（Ｉ）においてＲが−ＮＲ4Ｒ5でＲ4＝Ｒ5＝Ｈである化合物のメタンスルホニル塩化物によるアシル化より成る、請求項１で主張する式（Ｉ）の化合物の調製法。
【請求項２０】
非プロトン溶媒がピリジンで塩基がトリエチルアミンである請求項１９に記載の製法
【請求項２１】
α−アドレナリン産生系の機能亢進に関する疾病の治療用の、請求項１から８までの何れかに記載の化合物。
【請求項２２】
動脈高血圧症、前立腺の良性肥大、高眼内圧及び過コレステリン血症から選ばれる傷害の治療用の請求項２１に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
本発明はα-拮抗活性を有する４-アミノ-６,７-ジメトキシキナゾリンの新しい誘導体、それらの異性体混合物、鏡像体、製薬学的に受容できる酸とそれらの付加塩又はそれらを含んでいる製薬学的組成物に関する。既知のキナゾリン誘導体、特にピペラジン群の構造よりなるものの間では、多くのものが全身系及び眼内共に抗高血圧又は低血圧の活性、及びコレステロールの生合成の調整活性も表わす。
例えばUS-3,511,836は抗高血圧作用を有するキナゾリン誘導体を記述している。特に記載化合物の中で１-（４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-キナゾリニル）-４-（２-フラニルカルボニル）ピペラジン（プラソジン）が実際にこの種の治療に用いられている。
US-4,026,894では構造的に上記に関連した別の化合物が述べられていて、その中では１-（４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-キナゾリニル）-４-［（テトラヒドロ-２-フラニル）-カルボニル）］ピペラジン（テラゾシン）が低血圧症の薬として又前立腺の良性肥大（ＢＰＨ）の治療に用いられる。
然し、上記化合物による治療法では、頭痛、眠気、無力感、嘔気、動悸のような、若干の好ましくない副作用が観察される。或場合には血圧の低下に関連した通常の症状、即ち目眩や頭のふらふらに伴う姿勢の効果も亦観察された。
そこで上記疾病に対して治療効果はあっても、著しい副作用の減少を示すような、物質の開発が未だに望まれている。
USP 5,110,927は、プラゾシン類似体が２−フェニルエチルカルボニル、フェノキシメチルカルボニル、２−ナフチルカルボニル又はフェニルメチルアミノカルボニルのグループだけでなく、フェニルアミノチオカルボニル、シンナモイル又はバイシクロオクタジエンカルボニル残基のような広い種類の置換基を持つピペラジニル環の４位置で置換されることを述べた。
GB-A-2,068,961及びEP-A-28031は抗高血圧の４−アミノ−６，７−ジメトキシ−キナゾリンが、置換されたピペラジニル又はホモピペラジニル環の２位置に置換され、又特に２−ピペラジニル−キナゾリンがフェニルアルキルカルボニル又はフェノキシアルキルカルボニル残基(GB-A-2,068,961)、又は任意に置換されたフェニルアミノカルボニル残基(EP-A-28031)とピペラジニル環の４位置で置換されることを公開した。
USP 4,062,844は抗高血圧の４−アミノ−２−（１−ピペラシジニル）−６，７−ジメトキシ−キナゾリンがフェニルカルボニル、アルキルオキシカルボニル、（置換されないフェノキシ）カルボニルのグループ又はジアルキルアミノカルボニルのグループのような、広範囲のグループとピペラジニル環の４位置で置換されることを報告した。他の既知の抗高血圧化合物は４−アミノ−６，７−ジメトキシ−キナゾリンが多くのＮ−メチルアミノアルキル残基、Ｎ−メチル−ジフェニル−４，４−ｎ−ブチルアミノグループ(FR-A-2,389,614)、又は４−（２−ヒドロキシ−２−フェニルアセチル）ピペラジン−１−イルのグループのようなヒドロキシアシルグループ(EP-A-225,866)とキナゾリン環の２位置で置換される。
それが今見出された、そしてそれが本発明の目的である、ピペラジン環の新しい誘導体の置換基を変えてα1-アドレナリン受容体への良好な親和力と既知の化合物と較べてより低い毒性を示すものが得られたことである。
本発明に従う化合物は一般式（Ｉ）を有する
0003683911.tif 000002
ここでＢは次の式のグループの一つを表わす：
0003683911.tif 000003
ここで：
Ａは化学結合、-ＣＯ-、-ＣＯＮＨ-、の中から選ばれる、それらは何れも左側は複素環に連結した部分であり右側はアルキル鎖に連結されていることを示すように表現されている；
Ｒ1とＲ2は、同一か又は違っていて、互いに独立に水素原子、炭素原子１乃至４を有する直鎖又は分枝アルキル基を表わす；
ｎは０又は１である；
ｍは０と４の間より成りそして
Ｒはアリール、ジアリールメチール、アロイル、アリール（ヒドロキシ）メチール、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシ基のグループを表わし、これらは以下の一つ又はそれ以上のグループにより置換されていないか又は置換可能である：アルコキシ、炭素原子１乃至４を有する分枝又は直鎖アルキル又は−ＣＯＮＨＲ3又は-Ｎ（Ｒ4）Ｒ5ここで：
Ｒ3はＨ、炭素原子１乃至４を有する直鎖又は分枝アルキル、アリール基である；
Ｒ4とＲ5は、同一か又は違っていて、互いに独立に以下の基を表わす：Ｈ、炭素原子１乃至４を有する直鎖又は分枝アルキル、ベンジルオキシカルボニル、メタンスルホニル、ベンジルオキシカルボニルグリシノイル；
0003683911.tif 000004
ここで
Alkは炭素原子１乃至３を有するアルキルを表わし又
Ｚはフェニール、ベンジドリル又は４（２-メトキシフェニール）-１-ピペラジニルである；
0003683911.tif 000005
0003683911.tif 000006
本発明は又鏡像体、ジアステレオマー、Ｎ-オキシド及び製薬学的に受容できる酸の付いたこれら化合物の附加塩も含む。
本発明に従う望ましい化合物は特に本請求項に記載したものである。
本発明の化合物は可能な治療活性を有する物質としての権利を示すために試験された。特にα1-アドレナリン受容体に関する拮抗活性が決定されたそしてその活性が生体の内外で共に存在することが証明された。毒性テストは好ましくない副作用の僅かの存在を示唆した。
更に、発明に従う幾つかの化合物では亜系α1Aとα1Dに関してα1B-アドレナリン産生亜系に良い選択性がある。
上記報告結果は、例えば動脈高血圧症、前立腺の良性肥大、高眼内圧及び過コレステリン血症のような、α-アドレナリン産生系の機能亢進に関する疾病の治療に斯かる化合物の潜在的用途を確認する。
それ故本発明の更なる形態は、薬学的に受容できる賦形剤、溶離剤又は担体と組み合わせた、活性成分が式（Ｉ）の化合物、又は鏡像異性体、ジアステレオ異性体、Ｎ−オキシド又は薬学的に受容できるそれらの塩類である薬剤組成物によって表現される。
本発明に従う化合物の合成
一般に式Ｉの化合物は式IIの２-ハロキナゾリンの縮合によって調製できる：
0003683911.tif 000007
ここでＸは式ＩＩＩのアミノ誘導体付のハロゲン原子である：
0003683911.tif 000008
ここでＢは、Ｒが-Ｎ（Ｒ4）Ｒ5（ここでＲ4とＲ5は、両方ともか又は独立に、Ｈ又はアルキル基）である時のＢ1の場合を除いて上に定義した上記Ｂ1-Ｂ5の中のどれか一つである。
上記縮合は実施例１,２,２１,２２及び２８-３３で示された如く１２０℃／還流下で高沸点を有する極性溶媒（例えばイソアミールアルコール、DMF）中で実行できる。ＢがＢ1を表わす化合物は式ＩＶのキナゾリン誘導体：
0003683911.tif 000009
と式Ｖのカルボキシル酸：
0003683911.tif 000010
との縮合によっても調製できる、ここでＲ,Ｒ1,Ｒ2,ｎ及びｍは上記定義と同じであるか又は例えば対応する塩化物のような酸の反応性誘導体付である。
上記縮合は実施例３-６,１１-１３,１５,１７,１８及び２３-２７で示された如く０℃／＋１４０℃で非プロトン性及び／又は塩素化溶媒（例えばDMF、CHCl3）中で縮合剤（例えばＮ,Ｎ'-ジシクロヘキシルカルボジイミド）と促進剤（例えば４-ジメチルアミノピリジン）の存在で実行される。酸の反応性誘導体が使用される時は、反応は０℃／＋８０℃で第三級アミン（例えばトリエチルアミン）又は形成された酸の他のアクセプターの存在で行われる。
例１０で示された、もう一つの調製法は式ＩＶのキナゾリン誘導体と式ＶＩのアミンとの反応であり：
0003683911.tif 000011
ここでＲ,Ｒ1,Ｒ2,ｎ及びｍは上記定義と同じであり、0°/+50℃で非プロトン性溶媒（例えばテトラヒドロフラン）中のＮ,Ｎ'-カルボニルジイミダゾールの存在下である。Ｒがアリール（ヒドロキシ）メチル類を表わすような化合物は0°/+40℃でプロトン性溶媒（例えば水又はメタノール）中で対応するアロイル誘導体と還元剤（例えばテトラヒドロ硼酸ナトリウム）との還元反応で調製できる（例１４と１６）。
Ｒが-Ｎ（Ｒ4）Ｒ5類（Ｒ4とＲ5は夫々Ｈ）であるような化合物はＲ4とＲ5がＣＯＯＣＨ2Ｃ6Ｈ5であるような対応する化合物の加水分解で調製できる。
例７又は８で示されたような反応は、T.W.Greene著の，Protective Groups in Organic Synthesis，p,335，Wiley Interscience（1991）で述べられた如く又はそこで述べられた他の方法に従って、0°/+40℃で強酸（例えば臭化水素酸）の存在下でプロトン性溶媒（例えば酢酸）中で行われる。
Ｒ4とＲ5が夫々Ｈとメタンスルホニル類であるような、Ｒが-Ｎ（Ｒ4）Ｒ5類の化合物はＲ4＝Ｒ5＝Ｈである対応化合物の塩化メタンスルホニルによるアシル化によって調製できる。（例９）の反応は0°/+40℃で塩基（例えばトリエチルアミン）の存在下非プロトン性溶媒（例えばピリジン）中で行われる。
中間体１-（２-フェノキシ-２-メチルプロピオニル）ピペラジン塩酸附加塩（中間体Ｉ）の詳細製法
95% ＥｔＯＨ 50mlとＨ2Ｏ 22ml中への無水ピペラジン 17.2gの溶液に対し、48% ＨＢｒ 3.37gを約10分間滴下してその後、室温で約40分間、ＴＨＦ 70ml中への（Bull．Soc．Chim．Fr．1956，776-783:に従って調製された）２-フェノキシ-２-メチルプロピオニル塩化物の9.93gの溶液。懸濁液は同じ温度で２時間攪拌されて３時間還流、ＴＨＦ 130mlで希釈、冷却、そして沈澱したピペラジン塩は濾過される。濾過物は蒸発乾涸され、残渣はＨ2Ｏ 120mlと2N ＨＣｌ 35mlで再懸濁されてＥｔ2Ｏで抽出される；水の相はconc.ＮａＯＨ 40mlで処理されＥｔ2Ｏ（4×50ml）で抽出される。乾燥したエーテル相は約3NのＥｔ2Ｏ中でＨＣｌで処理されるそして沈殿物は濾過で集められＥｔＯＨから晶出され5.98g（42%）の求める化合物を与える：
融点：236-238℃。
１-［２-メチル-２-（２-メトキシフェノキシ）プロピオニル］ピペラジン塩酸附加塩水和物（中間体ＩＩ）
50mlの無水ＣＨＣｌ3中への、Gazz．Chim．It．93，335-338に従って調製された、10.5gの２-（２-メトキシ-フェノキシ）-２-メチルプロピオン酸の沸騰溶液に対し20mlの無水ＣＨＣｌ3中への5.4mlのSOCl2の溶液が約30分間滴下されるそしてその溶液は2時間還流される。溶媒の乾燥蒸発により得られた残渣は、塩化２-フェノキシ-２-メチル-プロピオニルの代りに、中間体Ｉで述べた方法に従って求める化合物を調製するのに使われる。メチル-エチルケトンからの結晶化の後、6.3g（34%）の中間体ＩＩが得られた；融点95°-98℃。
２-メトキシ-６-イソプロピルフェノキシ酢酸（中間体ＩＩＩ）
しずく状の20gのNaOH，30mlのH2O，1.1gの塩化トリエチルベンジルアンモニウム、（Tetr．Lett．38，1397-1404（1982）に従って調製した）8.4gの２-イソプロピル-６-メトキシフェノール及び40mlのトルエンの混合液に対し、10mlのトルエン中への11.1mlのブロモ酢酸エチルの溶液が約１５分間室温で滴下される。
混合物は同じ温度で２時間激しく攪拌されその後60°-65℃で２時間置いて６.５時間還流する、この最後の段階の間10mlのトルエン中への6mlのブロモ酢酸エチルの溶液が加えられる。最後に混合液は250mlのH2Oで希釈される、水の相が分離されconc．HClで処理される；乳化された沈殿物はEt2O（3×50ml）で抽出される又有機相は水で洗滌される。もう一つの抽出は40mlの20%のNa2CO3で行われる又は僅かにアルカリ性の溶液はconc．HClで処理されEt2O（3×40ml）で抽出される。エーテル抽出物はプールされ溶媒は飛ばされて8g（72%）の求める化合物を与える；沸点：190℃／0.7mmHg。
２-（２-メトキシ-６-イソプロピルフェノキシ）プロピオン酸（中間体ＩＶ）
この化合物は中間体IIIで与えられた方法に従って、但しブロモ酢酸エチルの代りに２-ブロモプロピオン酸エチルを用いて、調製される。求める化合物は（収率81%で）分離される；沸点：165-170℃／0.7mmHg。
最終化合物の詳細製法
実施例  １
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-（４-ベンジル-１-ピペラジニル）-キナゾリン二塩酸附加塩ヘミ水和物
120mlのイソアミルアルコール中の4.8gの４-アミノ-２-クロロ-６,７-ジメトキシキナゾリン（J．Med．Chem．20，146-149（1977）に従って調製された）と4.2gのN-ベンジルピペラジン95%の混合液が４時間還流下で攪拌されその後冷却される。沈殿物は濾過により捕集されて150mlの水と150mlのCHCl3に懸濁され、その混合液は30% NaOHで処理される。有機相が分離される一方水の相はもう一度CHCl3（2×50ml）で抽出される；有機抽出物はプールされ、H2O（2×30ml）で洗滌され、無水Na2SO4上で乾燥されて溶媒は飛ばされる。残渣はCHCl3/MeOH 100:3で溶離するSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製されそして純粋ベースを含む部分はプールされ蒸発乾涸される。残渣はEtOHに溶解され溶液は塩が完全に沈澱するまでEtOH中で4N HClで処理される、それは濾過で捕集されMeCN/H2O 7:3から晶出され求める化合物2.6g（56%）を与える；融点：265-267℃。
実施例  ２
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-（４-ジフェニルメチル-１-ピペラジニル）-キナゾリン二塩酸附加塩ヘミ水和物
本化合物は例１に従って調製される、但しN-ベンジルピペラジンの代りに（J．Am．Chem．Soc．71，2731-2734（1949）に従って調製された）N-ジフェニルメチルピペラジンを用いて８時間還流下で加温する。濾過で捕集された粗製化合物は95% EtOHから晶出され、MeOHに溶解、希HClの添加で溶液は蒸発乾涸される。残渣はH2Oで煮沸され求める化合物を与える。収率：56%，融点：273-274℃。
実施例  ３
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-［４-（２,２-ジフェニルアセチル）-１-ピペラジニル］-キナゾリン塩酸附加塩  0.75H2O
（J．Med．Chem．20，146-149（1977）に従って調製された）2.9gの４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-（１-ピペラジニル）-キナゾリンが、60mlのCHCl3中の4.2gのジシクロヘキシルカルポジイミド97%と0.12gの４-ジメチルアミノピリジンの溶液に、室温で約１０分間少量づつ加えられる。混合液は同じ温度で１０分間攪拌され2.55gの２,２-酢酸ジフェニルが加えられ再び６時間攪拌される。溶媒の蒸発後に得られた残渣はCHCl3/MeOH 100:2で溶離するSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製される。純粋ベースを含む部分はプールされ、溶媒は蒸発させられ、残渣は温95% EtOHに溶解させられ溶液は約４ＮのEtOH中のHClで処理される。溶液の冷却により晶出した塩は濾過で捕集され90% EtOHから再結晶され3.2g（60%）の求める化合物を与える；融点：282-283℃。
実施例  ４
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-［４-（３,３-ジフェニルプロピオニル）-１-ピペラジニル］-キナゾリン塩酸附加塩
方法  ａ）
10mlの無水DMFへの7.92gの３,３-ジフェニルプロピオン酸の溶液が、20mlの無水DMF中への5.8gの４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-（１-ピペラジニル）-キナゾリン、8.42gの97%シクロヘキシルカルボジイミド及び0.37gの４-ジメチルアミノピリジンの懸濁液に、室温で約１５分間滴下される。こうして得られた透明な溶液は同じ温度で５時間攪拌され沈殿物が濾過されて作られる（ジシクロヘキシル尿素）。溶媒は真空で蒸発乾涸されその結果のガラス状の残渣は500ml Et2Oによる処理の後濾過される。粗製化合物はCHCl3/MeOH 100:2で溶離するSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製される。純粋塩基を含む部分はプールされ、溶媒は蒸発乾涸される、残渣は温EtOHに懸濁させられ懸濁液は完全に溶液になるまで約4NのEtOH中でHClで処理される。
冷却後晶出した塩は濾過で捕集されMeCN/H2O 8:2から再結晶化され5.9g（55%）の求める生成品を与える；融点：239-240℃。
方法  ｂ）
EtOHから遊離した30mlのCHCl3中への（Coll．Czech．Chem．Commun．25，736-742(1960)[CA 54,13055h(1960)]に従って調製された）4.4gの３,３-塩化ジフェニルプロピオニルの溶液が、50mlの無水DMF中への5.2gの４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-（１-ピペラジニル）-キナゾリン及び2.8ml Et3Nの溶液に、室温で約１５分間滴下される。
混合液は同じ温度で６時間攪拌される、溶媒は真空で蒸発乾涸される、残渣は150ml CHCl3に溶解されて溶液は2.5% NaHCO3とH2Oで洗滌されその後無水Na2SO4で乾燥される。上記方法ａ）と同じ工程が続けられて4.3g（43%）の求める化合物が得られる。
実施例  ５
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-｛４-［（３-ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロピオニル］-１-ピペラジニル｝-キナゾリン塩酸附加塩ヘミ水和物
この化合物は例３に従って調製されるが、但し２,２-酢酸ジフェニルの代りに３-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロピオン酸が用いられ５時間攪拌が続けられる。粗製化合物の精製はCH2Cl2/MeOH 100:5で溶離するSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより行われる。求める化合物は99% EtOHから晶出される。収率：63%，融点：166-168℃。
実施例  ６
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-｛４-［（４-ベンジルオキシカルボニルアミノ）ブチリル］-１-ピペラジニル｝-キナゾリン塩酸附加塩１.５Ｈ2Ｏ
この化合物は例５の記述と同様に調製されるが、但し３-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロピオン酸の代りに４-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）酪酸を用いる。求める化合物はEtOHから晶出される。収率：83%、融点：160-169℃。
実施例  ７
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-［４-（３-アミノプロピオニル）-１-ピペラジニル］-キナゾリン二臭化水素酸の附加塩１.７５Ｈ2Ｏ
AcOHへの30% HBrの溶液20mlが、20mlのAcOH中への（既知の方法で調製された）基本の形での4.95gの例５で調製された化合物の溶液に、約１０分間滴下される。混合液は同じ温度で２時間攪拌されてその後800ml EtO2で希釈される。濾過により捕集された沈殿物はEtOH/H2O 4.5:1から晶出され4.7g（85%）の求める化合物を与える；融点：217℃。
実施例  ８
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-［４-（４-アミノブチリル）-１-ピペラジニル］-キナゾリン二臭化水素酸の附加塩０.２５Ｈ2Ｏ
この化合物は例７に従って調製されるが、（既知の方法で調製された）その基本の形で例６で調製された化合物を用いる。粗製化合物はMeOHから晶出される；融点：272-274℃、収率：84%。
実施例  ９
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-｛４-［（４-メチルスルホニルアミノ）ブチリル］-１-ピペラジニル｝-キナゾリン塩酸附加塩
50mlの無水ピリジン中への5.3gの例８で調製した化合物の懸濁液に対し5.6mlのEt3Nが室温で滴下される、そして１５分後、2mlの塩化メタンスルホニルが同じ温度で約１０分間添加される。１時間の攪拌後、混合液は700ml Et2Oに注がれるそして濾過により捕集された沈殿物は250mlのH2Oに溶解されその溶液には炭酸ナトリウムが加えられる。粗製塩基はクロロホルムで抽出され、溶媒の蒸発により得られた残渣は250ml Et2Oでの処理の後濾過される。固形分はCH2Cl2/MeOH 100:5から100:10までの勾配で溶離するSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製される。純粋塩基を含む部分はプールされ、溶媒は蒸発して残渣は温EtOH99%に懸濁される；EtOHへの4N HClの添加が冷却により塩酸の附加塩を晶出させる事から透明な溶液を与える。95% EtOHからのもう一つの晶出は2.1g（43%）の求める化合物を与える：融点：231-233℃。
実施例  １０
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-｛４-［（２-ジメチルアミノエチル）アミノ-カルボニル］-１-ピペラジニル｝-キナゾリン二塩酸附加塩四水和物
30ml無水THF中への4.52gのN,N'-カルボニルジイミダゾールの懸濁液に対し、10ml無水THF中の2.48gのN,N-ジメチルエチレンジアミン97%の溶液が滴下される、室温で１５分の攪拌後、250ml無水CHCl3中への5.8gの４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-（１-ピペラジニル）キナゾリンの溶液がそこに約１５分間滴下される。混合液は同じ温度で２４時間攪拌され、2.3gのN,N'-カルボニルイミダゾールを加えて４８時間攪拌され、その後溶媒は蒸発乾涸される。油状の残渣は3N CHCl3/NH3 MeOH 100:10で溶離するSiO2カラムその後CHCl3/MeOH 100:10で溶離するAl2O3カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製される。純粋生成品を含む部分はプールされ、溶媒は蒸発され、残渣はEtOHに溶かされて溶液はEtOH中で4N HClで処理される。溶液は蒸発乾涸されて粗製塩酸附加塩はEtOH-AcOEt 2:1から晶出されて5.5g（50%）の求める化合物を与える；融点：206-210℃。
実施例  １１
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-｛４-［（２-ベンジルオキシカルボニルアミノ）-アセチル］-１-ピペラジニル｝-キナゾリン塩酸附加塩
この化合物は例５で述べたように調製されるが３-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロピオン酸の代りにＮ-ベンジルオキシカルボニルグリシンを用いて混合液を７時間攪拌する。
粗製化合物の精製はCHCl3/MeOH 100:3の混合液で溶離するSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより為される。求める化合物はEtOH/H2O 2:1から晶出される。収率：79%；融点：263-265℃。
実施例  １２
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-｛４-［２-［２-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）-アセチル-アミノ］アセチル］-１-ピペラジニル｝-キナゾリン塩酸附加塩ヘミ水和物
この化合物は例５に従って調製されるが３-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロピオン酸の代りにＮ-ベンジルオキシカルボニルアミノアセチルグリシン及び反応溶媒としてDMFを用いる。粗製化合物はCHCl3/MeO 100:5の混合液で溶離するSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製される。求める化合物はEtOH/H2O 2:1から晶出される。収率：60%；融点：246-248℃。
実施例  １３
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-［４-（２-ベンゾイルアセチル）-１-ピペラジニル］-キナゾリン
この化合物は例５に従って調製されるが３-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロピオン酸の代りに酢酸ベンゾイルを用いる。粗製化合物はCH2Cl2/MeOH 100:3の混合液で溶離するSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製される。求める化合物はCH3CNから晶出される。収率：60%；融点：214-215℃。
実施例  １４
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-［４-（３-ヒドロキシ-３-フェニルプロピオニル）-１-ピペラジニル］-キナゾリン
50ml MeOH中への例１３で調製された化合物3gの懸濁液に、0.2mlの30% NaOHを含む4mlの氷水中への0.43gの96% NaBH4の溶液を急速に添加して混合液は室温で８時間攪拌される。その後2g（5×0.4）のNaBH4を８時間で添加する。懸濁液は10mlのアセトンで希釈し、希塩酸で処理して、重炭酸ソーダの5%溶液で中和して真空で濃縮する。水懸濁液はH2Oで希釈しCHCl3で抽出する；有機相はH2Oで洗滌し、無水Na2SO4で乾燥して又、溶媒の蒸発により得られた残渣は、CH2Cl2／MeOH 100:5で溶離するSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製される。純粋部分をプールして溶媒を飛ばした後に得られる粗製化合物はEtOHから晶出され、2.34g（79%）の求める化合物が得られる；融点：222℃。
実施例  １５
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-｛４-［（３-ベンゾイル）プロピオニル］-１-ピペラジニル｝-キナゾリン塩酸附加塩水和物
この化合物は例５に従って調製されるが３-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロピオン酸の代りに３-ベンゾイルプロピオン酸が用いられる。粗生成品はCHCl3/MeOH 100:3で溶離するSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製される。求める化合物はCH3CN/H2O 63:35から晶出され温度>270度で融ける。収率：62%。
実施例  １６
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-［４-（４-フェニル-４-ヒドロキシブチリル）-１-ピペラジニル］-キナゾリンマレイン酸塩（１：１）
この化合物は例１４に従って調製されるが例１３で調製されたものの代りに例１５で調製された化合物が用いられる。粗生成品はCH2Cl2/MeOH 100:10によりカラムを溶離して精製される。求める化合物はEtOHからの晶出後67%の収率で得られる；融点：204-206℃。
実施例  １７
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-［４-（３-オキソ-３-アミノプロピオニル）-１-ピペラジニル］-キナゾリン塩酸の附加塩水和物
この化合物は例５で述べたように調製されるが３-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロピオン酸の代りに３-オキソ-３-アミノプロピオン酸が用いられ又反応溶媒として無水混合液CHCl3/DMF 6:4が用いられる。混合液は、２当量の３-オキソ-３-アミノプロピオン酸と２.５当量のN,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミドがぽつぽつと加えられている間、室温で９６時間攪拌される。粗生成品の精製はCH2Cl2/MeOH 100:20から100:50までの勾配でSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより行われる。求める化合物はEtOH 88%から晶出される。収率：23%；融点：241-243℃。
実施例  １８
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-［４-（２-エトキシカルボニルアセチル）-１-ピペラジニル］-キナゾリン塩酸の附加塩
この化合物は例５で述べたように調製されるが３-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロピオン酸の代りにマロン酸のモノエチルエステルが用いられ又反応溶媒として、CHCl3の代りにDMFが室温で３時間用いられる。粗生成品の精製はCH2Cl2/MeOH 100:3で溶離する。SiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより行われる。求める化合物はEtOH 80%から晶出される。収率：60%；融点：249-250℃。
実施例  １９
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-［４-（３-ｎ-ブチルアミノ-３-オキソプロピオニル）-１-ピペラジニル］-キナゾリン塩酸の附加塩
10ml DMSO中の例１８で調製された4gの化合物と30mlのｎ-ブチルアミンの混合液は密閉フラスコ中で２０時間140℃に加温される。溶液は真空で蒸発させられ、油状の残渣は200ml H2Oで処理されてCHCl3(3×50ml)で抽出される。有機相の蒸発により得られたガラス状の残渣は、40mlの95% EtOHに溶解されて、その溶液は10mlの0.3N KOHが添加されて３０分間還流して加温される。溶液の蒸発により得られた残渣はCHCl3/MeOHで100:3から100:10までの勾配で溶離するSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製される。純粋の化合物を含む部分の蒸発によって得られた、粗生成品は75ml EtOHに溶解させられ、その溶液は4N EtOH中でHClで酸性化されて塩酸附加塩が濾過によって捕集され、90% EtOHから晶出され、2.5g（53%）の求める化合物を与える；融点：260-262℃。
実施例  ２０
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-［４-（フェニルアミノカルボニルアセチル）-１-ピペラジニル］-キナゾリン塩酸の附加塩ヘミ水和物
6ml DMF中の4gの例１８で得られた化合物と14mlのアニリンの混合液が５.５時間155℃で加温される。得られた生成品はCHCl3/MeOH 100:3から100:4までの勾配で溶離することにより例１９で述べたように精製される。粗製の塩酸附加塩はDMF/H2O 1:1から晶出され1.54g（31%）の求める化合物を与える；融点：>270℃。
実施例  ２１
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-［４-（２-フェノキシ-２-メチルプロピオニル）-１-ピペラジニル］-キナゾリン塩酸の附加塩１.５Ｈ2Ｏ
この化合物は例２に従って調製されるがＮ-ジフェニルメチルピペラジンの代りに中間体Ｉが用いられ３時間還流を維持する。沈殿物は濾過され求める化合物を与えるためにイソプロパノールから晶出される。収率78%；融点：264℃。
実施例  ２２
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-｛４-［２-（２-メトキシフェノキシ）-２-メチルプロピオニル］-１-ピペラジニル｝-キナゾリン塩酸附加塩
この化合物は例１に述べたように調製されるがＮ-ベンジルピペラジンの代りに中間体ＩＩが用いられ、５時間還流して、溶離混合液として100:0から100:10までの勾配のAcOEt/MeOHを使用する。求める化合物は80%EtOHから晶出される。収率：57%；融点：288℃（dec.）。
実施例  ２３
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-［４-（２-メトキシフェノキシアセチル）-１-ピペラジニル］-キナゾリン塩酸の附加塩
この化合物は例３に述べたように調製されるが２,２-ジフェニル酢酸の代りに２-メトキシフェノキシ酢酸が用いられ５時間攪拌が維持される。カラム精製後に得られた残渣は、ジオキサンから晶出され、85% EtOH中に懸濁させられてEtOH中で約4NのHClで酸性化させられる。濾過により捕集された塩酸附加塩はH2O/DMF 2:1から晶出され求める化合物を与える。
収率61%；融点：263-265℃。
実施例  ２４
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-｛４-［（２-メトキシ-６-イソプロピルフェノキシ）アセチル］-１-ピペラジニル｝-キナゾリン塩酸附加塩
30ml CCl4中の6gの中間体ＩＩＩの沸騰溶液に対し、3.6mlのSOCl2が滴下されてその混合液は還流下２時間攪拌される。反応混合液の蒸発により得られた油状の残渣は、例４（方法ｂ）で述べられたような求める化合物を得るために、３,３-塩化ジフェニルプロピオニルの代りに４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-（１-ピペラジニル）キナゾリンと反応させられ、２時間攪拌される。精製は溶離混合液としてCH3/MeOH 100:3を用いたカラムクロマトグラフィーにより行われる。求める化合物はEtOHから晶出される。収率：45%；融点：252-254℃。
実施例  ２５
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-｛４-［（２-イソプロピル-５-メチルフェノキシ）アセチル］-１-ピペラジニル｝-キナゾリン塩酸附加塩０.２５Ｈ2Ｏ
この化合物は例５に従って調製されるが３-（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロピオン酸の代りに（Cesk．Farm．17，28-33（1968）［CA 69，67041g（1968）］に従って調製された）２-イソプロピル-５-メチルフェノキシ酢酸が用いられ５時間攪拌が維持される。求める化合物はEtOH 95%から晶出される。収率：80%；融点：251-253℃。
実施例  ２６
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-｛４-［２-（２-メトキシ-６-イソプロピルフェノキシ）プロピオニル］-１-ピペラジニル｝-キナゾリン塩酸附加塩
25ml CCl4中の4.8gの中間体ＩＶの沸騰溶液に対し、3mlのSOCl2が約１５分間滴下されてその混合液は３時間還流される。反応混合液の蒸発により得られた油状の残渣が、例４（方法ｂ）で述べられたような求める化合物を得るために、３,３-塩化ジフェニルプロピオニルの代りに用いられ２時間攪拌される。化合物は例２５に述べたように精製されそして求める化合物はEtOHから晶出される。収率：58%；融点：227-229℃。
実施例  ２７
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-［４-（２,６-ジメトキシフェノキシ）アセチル-１-ピペラジニル］-キナゾリン塩酸の附加塩０.２５Ｈ2Ｏ
この化合物は例５に従って調製されるが２,２-ジフェニル酢酸の代りに（GB-679,676に従って調製された）２,６-ジメトキシフェノキシ酢酸が用いられ又カラム溶離混合液としてCH3/MeOH 100:1を用いる。求める化合物はまず95% EtOHからその次にはDMFから晶出される。
収率：21%；融点：258-260℃。
実施例  ２８
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-（Ｎ-ベンジル-Ｎ-メチルアミノ）-キナゾリン塩酸附加塩
この化合物は例１に従って調製されるがＮ-ベンジルピペラジンの代りにＮ-メチルベンジルアミンが用いられ７時間還流が維持される。粗製塩基はEtOHからの晶出により精製され、それから沸騰EtOHに溶解されてその溶液はEtOH中にHClが加えられる。求める化合物は収率：62%；融点：261-262℃で得られる。
実施例  ２９
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-（Ｎ-メチル-３,３-ジフェニルプロピルアミノ）-キナゾリン塩酸附加塩
この化合物は例１に従って得られるがＮ-ベンジルピペラジンの代りに（DE-925,468に従って調製された）Ｎ-メチル-３,３-ジフェニルプロピルアミンが用いられ１２時間還流が維持される。粗製塩基の精製はCHCl3/MeOH 100:2を溶離剤として使用するSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより行われる。求める化合物は95% EtOHから晶出される。収率：29%；融点：258-259℃。
実施例  ３０
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-（１,２,３,４-テトラヒドロベンゾ［ｆ］イソキノリン-２-イル）-キナゾリン０.２５エタノール
この化合物は例１に従って調製されるがＮ-ベンジルピペラジンの代りに（Indian J．Chem．1974，113-116に従って調製された）１,２,３,４-テトラヒドロベンゾ［ｆ］イソキノリンが用いられ暗所で窒素中で９時間還流される。精製はCH2Cl2/NH3-MeOH 5Nの100:0.5から100:1.5までの勾配で溶離するSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより行われる。求める化合物は99% EtOH/H2Oから晶出される。収率：30%；融点：177-180℃。
実施例  ３１
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-｛Ｎ-メチル-Ｎ-｛３-［４-（２-メトキシフェニル）-１-ピペラジニル］プロピル｝アミノ｝-キナゾリン二塩酸附加塩二水和物
この化合物は例１に述べたように調製されるがＮ-ベンジルピペラジンの代りに（DE-2,143,730に従って調製された）Ｎ-メチル-３-［４-（２-メトキシフェニル）-１-ピペラジニル］-プロピルアミンが用いられ１２時間還流される。粗製塩基はCHCl3/NH3-MeOH約2N 100:3で溶離するSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製される。求める化合物は92% EtOHから晶出される。収率：60%；融点：208-210℃。
実施例  ３２
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-（４,４-ジフェニル-１-ピペラジニル）キナゾリン塩酸附加塩０.６５Ｈ2Ｏ
この化合物は例１で述べたように調製されるがＮ-ベンジルピペラジンの代りに［Arznein.-Forsch．34，233-240（1984）に従って調製された］４,４-ジフェニルピペリジンが用いられ８時間還流される。粗製塩基はDMF-H2O（3:1）から晶出によって精製される。求める化合物はDMF-H2O（1:1）から晶出される。
収率：61%；融点：>290℃。
実施例  ３３
４-アミノ-６,７-ジメトキシ-２-［１-（３,４-ジメトキシベンジル）-６,７-ジメトキシ-１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-２-イル］-キナゾリン塩酸の附加塩水和物
3.6gの４-アミノ-２-クロロ-６,７-ジメトキシ-キナゾリン、（Eur．J．Med．Chem．- Chim．Ter．9，233-238（1974）に従って調製された）5.15gの１,２,３,４-テトラヒドロパパベリン、2.16gの沃化カリ及び15mlの無水CMFの混合液が８時間120-125℃に攪拌加温される。その混合液は400ml H2Oに注がれて濾過により捕集された沈殿物は、CHCl3/MeOH 100:1で溶離するSiO2カラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製され純塩基を含む分画部はプールされて蒸発乾涸される。残渣はMeOHに溶解されその溶液は約3NのEt2O中のHClで塩の沈澱が完了するまで処理され、濾過されMeOHから晶出されて6.31g（70%）の求める化合物を与える；融点：226-230℃。
薬理学的データ
方法論
体重175-300gのスプラグドーリー♂ラット(Crl: CD' BR)、自発高血圧症の♂ラット、岡本系統、体重20-30gのアルビノスイス♀マウス[Crl:CD-1（ICR）BR]がイタリーのチャールス河から得られた。動物たちは実験の日まで22-24℃で飲食物への接近は自由だが明暗のサイクルは強制的に保たれて収容された。
激しい毒性
合成化合物の激しい毒性はアルビノスイス♀マウスで腹腔内及び経口投与の後で評価された。化合物の四つの対数尺度の投薬量が0.5%メトセルに溶解又は懸濁されて4マウス/薬のグループに10ml/kgを投薬した。死亡率は投薬後７日間記録された。データ解析：LD50値（半致死量）とそれらの信頼限界はワイルの方法［Biometrics，8，249，1952］に従って計算された。
受容体結合性の研究
次の受容体結合性の研究は、以下に報告する実験データだけでなく、α1-遮断抗体として本発明の化合物を確立した。
[3H]プラゾシン結合（α1-受容体）
ラットの大脳皮質はpH7.4で氷冷した50mMのTris-HCl緩衝剤の元の重量の50容で均質化された。均等質は48,000×gで10分間遠心分離され、そしてペレットは同じ容積の氷冷緩衝液に再懸濁された、二回以上遠心分離と再懸濁された。得られた最終ペレットはpH7.4で100容の50mM Tris-HCl緩衝液（0.1%アスコルビン酸と10μMパルギリンを含む）に再懸濁されたそしてテストされるべき置換化合物の5-10濃度の在不在で、0.35nM[3H]プラゾシンと共に25℃で３０分間培養された(1ml/サンプル)。2μMのプラゾシンの存在下では特別の結合性は決定されなかった。培養はブランドル細胞取入れ器を用いたウォットマンGF/Bフィルターによる急速濾過によって終結させられた又フィルターは3×3mlの氷冷緩衝液で洗滌された。フィルターに残った放射能は液体シンチレーション計数によって決定された。
クローン動物のα1アドレナリン受容体
ラットの脳α1D（以前はα1A/D）、シリアハムスターの平滑筋細胞線DDT1 MF-2 1B及び牛の脳α1A（以前はα1C）COS-7細胞（変異した猿の腎臓の上皮細胞）中の一時的なアドレナリン受容体の表現は以前に述べた如く行われた［S．Cotecchia et al.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 85，7159，1988; D.A．Schwinn et al.，J．Biol．Chem．265，8183，1990; J.W．Lomasney et al.，J．Biol．Chem．266，6365，1991］。COS-7細胞はダルベッコの改良したイーグルの培地(DMEM)で、25mMグルコーズ、10%の仔牛の血清、100単位/mlペニシリン及び100μg/mlストレプトマイシン硫酸塩を補給して、単層で育成された。フラスコから移された細胞は5mlの燐酸塩緩衝液(PBS)で２回洗滌され、pH7.4、5mMのEDTAと10μMのロイペプチンを含む2mlの5mM Tris-HClの中で解体し、超音波により溶解された。細胞溶解質は4℃で１５分間30000xgで小粒にされ、pH7.4，10mlの氷冷50mM Tris-HClで３回洗滌された。細胞膜は、pH7.4、10μMパルギリンと0.1%アスコルビン酸を含む50mM Tris-HCl中に再懸濁され、急速冷凍して-70℃で使用するまで保存された。
放射性リガンドの結合性検定
膜は、濃度範囲10-4から10-13Mに亘ってテストされるべき置換薬の在不在に於いて0.3-0.6nM[3H]プラゾシンと共に、pH7.4、10μMパルギリンと0.1%アスコルビン酸を含む50mM Tris-HCl中で培養された。培養量は0.22mlであった（α1B，α1A及びα1Dについて夫々35，35及び70μgプロテイン/サンプルである）。
100μMのフェントルアミンの存在下で明確な結合は決定されなかった。反応混合液は25℃で３０分間培養され、それから氷冷Tris-HClの添加及び0.2%ポリエチレンイミンで前処理されたブランドル細胞取入れ器を用いたウォットマンGF/B繊維フィルターによる急速濾過によって停止させられた。そこでフィルターは3×3mlの氷冷緩衝液で洗滌され、フィルターに残された放射能は40%の計数効能を持つ液体シンチレーションスペクトロメーターの10mlのフィルターカウント（パッカード製）で計数された。
データ解析
テストされた薬による放射性リガンドの明確な結合抑制はIC50値を推定するために非線形曲線適合プログラムAllfitを用いて解析された［A．De Lean et al.，Am．J．Physiol．235，カテーテルを入れた自発性高血圧症ラット（SH）の慢性覚醒における抗高血圧活性及び正常血圧の麻酔ラットにおける低血圧活性の推定］
SHラットはテストの少なくとも２４時間前に外科的に用意された。外科手術は軽い神経無痛覚又はバルビツール麻酔状態で行われた；右の頸動脈が露出され適当な寸法と材質のカテーテルが大動脈弓まで血管に導入された。カテーテルは適当な縫合糸で血管に連結され、動物の首の体外に運ばれる場所まで皮膚の下を走り、テスト中ケージの中の動物の自由運動を許す“自在継手”に連絡されている。カテーテルの端はポリグラフの前置増幅器に信号を送る圧力変換器に連結された。静脈内投薬のために上記のものと同様な第二カテーテルが左の頸動脈の血管に外科手術で導入され動脈カテーテルと同じく外部に運ばれた。両カテーテルは、圧力波の登録又は溶液の静脈内投与を妨げるであろう血液の凝固や血栓の形成を予防するために、適量の溶液で充たされる。投与の約３０分前に動脈圧が監視されたパラメーターの登録はテストの手順に従って投与後別々の時間に行われた。
正常圧のラットも、ペントバルビタールでの麻酔後、テストの時に外科的に用意された。適当なカテーテルが左の頸動脈と右の頸動脈に導入された。動脈カテーテルの端はポリグラフ前置増幅器に信号を送る圧力変換器に連結された。投与の約３０分前に動脈圧が監視されパラメーターの登録はテストの手順に従って別々の時間に、投与後行われた。
静脈内投与用に投与された量は0.5-1ml/kgであったが、一方経口投与用は5mg/kgであった。
データの評価：結果の表現に関する限り、圧力データは基準値に関する変化量のパーセンテージとして報告された。これらのデータに基づいて、効果の最大値で、DE25（拡張期の動脈圧の25%の低下をもたらす投薬量として）応答に対して一次回帰対数-投薬量により評価された。
例えば例１３で述べた化合物は正常圧ラットでの静脈内投与では56μg/kgのDE25又SHラットへの経口投与後では2.42mg/kgのDE25を示す。
結果
実施例で調製された化合物が上記報告の方法に従ってテストされ又通常の標準で得られた結果と比較された。
結果は以下に報告される：
-表１はα1（［3H］プラゾシン）受容体への親和力及びそれらの激しい毒性（DL50）に関する；
-表２はクローン受容体α1A，α1B，α1Dの亜系について示された親和力に関する。
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