(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
HIV−１感染症を予防または治療するための組成物であって、
（ａ）式：
0003655636.tif 000039
［式中、X1とX2は独立的にＯまたはＳであり；
Ｑは−CH＝NO−C1-4アルキル、−COO−C1-7アルキル、または−COO−C3-7シクロアルキルであり；
R1はハロゲンであり；
R2は水素、またはC1−C4アルキルである］
で示される第１のHIV−１  逆転写酵素阻害剤化合物と；
（ｂ）（ａ）の第１のHIV−１  逆転写酵素阻害剤化合物によって選択される同じHIV−１  突然変異菌株（単数又は複数）を選択しない第２の非ヌクレオシドHIV−１逆転写酵素阻害剤化合物であって、TSAO−m3T（１−［2',5'−ビス−Ｏ−（tert−ブチルジメチルシリル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−３−Ｎ−メチルチミン−3'−スピロ−5"−（4"−アミノ−1",2"−オキサチオール  2",2"−ジオキシド）;BHAP  Ｕ−88204（Ｎ−イソプロピル−２−［４−（２−ケトインドリル）−１−ピペラジニル］−３−ピリジンアミン）；ピリジノン  Ｌ−697,661（３−｛［（4,7−ジクロロ−1,3−ベンゾオキサゾル−２−イル）メチル］アミノ｝−５−エチル−６−メチルピリジン−２（1H）−オン）;BHAP  U90512（１−［（５−メタンスルフォアミノ−1H−インドール−２−イル）−カルボニル］−４−［３−（イソプロピルアミノ）−２−ピリジニル］−ピペラジン）；ネバピラン（11−シクロプロピル−5,11−ジヒドロ−４−メチル−6H−ジピリド［3,2−b:2',3'−ｅ］［1,4］ジアゼピン−６−オン；およびMKC−442（６−ベンジル−１−（エトキシメチル）−５−イソプロピル−ウラシル）からなる群から選ばれる第２のHIV−１逆転写酵素阻害剤との
治療有効量を含む、HIV−１感染症を予防または治療するための組成物。
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明はHIV−１感染症を予防又は治療するための組成物に関する。さらに詳しくは、本発明は有効成分として、HIV−１逆転写酵素阻害性ヘテロサイクリルカルブ（オクス／チオ）アニリド化合物と、HIV−１逆転写酵素阻害性ヘテロサイクリルカルブ（オクス／チオ）アニリド化合物によって選択される同じHIV−１突然変異菌株（単数又は複数）を選択しない、例えば、2',5'−ビス−Ｏ−（tert−ブチルジメチルシリル）−3'−スピロ−5"−（4"−アミノ−1",2"−オキサチオール−2",2"−ジオキシド）（TSAO）誘導体のような第2HIV−１逆転写酵素（RT）阻害剤化合物と、任意に、第3HIV逆転写酵素阻害剤とを含む、HIV−１感染症を予防及び／又は治療するための組成物に関する。本発明はまた、患者におけるHIV−１感染症を予防又は治療するための方法であって、患者にHIV−１  RT阻害性ヘテロサイクリルカルブ（オクス／チオ）アニリド化合物と、HIV−１  RT阻害性ヘテロサイクリルカルブ（オクス／チオ）アニリド化合物によって選択される同じHIV−１突然変異菌株（単数又は複数）を選択しない第2HIV−１  RT阻害剤化合物と、任意に、第3HIV  RT阻害剤化合物との有効量を投与することを含む方法にも関する。
発明の背景
種々な化合物がインビトロにおけるヒト免疫不全ウイルス１型（HIV−１）の阻害剤として述べられており、これらの化合物は例えばネビラピン、ピリジノン、TIBO、BHAP、TSAO及びキノキサリンのような、ウイルスによってコードされる逆転写酵素（RT）を標的とする。HIV−１に対するこれらの化合物の選択性はHIV−１  RTとの非常に特異的な相互作用による。
細胞培養物及びAIDS患者における数種類のHIV−１特異性RT阻害剤に耐性なHIV−１菌株の迅速な発生が、クリニックにおいてこれらの阻害剤のさらなる開発への関心を惹起している。しかし、ある種のHIV−１特異性RT阻害剤に対するHIV−１耐性が、他のHIV−１特異性RT阻害剤に対する交差耐性を必ずしも意味しない。実際に、HIV−１特異性RT阻害剤が、それらのRTに異なるアミノ酸置換を含有するHIV−１突然変異菌株に対しては異なる活性を示すことが実証されている。例えば、それらのRTに100Leu→Ile突然変異を含有するHIV−１菌株はTIBO  R82913とR82150とに耐性であるが、ネビラピンとTSAO誘導体のTSAO−Ｔ及びTSAO−m3Tとには耐性ではない。また、それらのRTに138Glu→Lys突然変異を含有するHIV−１菌株はTSAO誘導体に耐性であるが、例えばBHAPやネビラピンのような、他のHIV−１特異性RT阻害剤には耐性ではない。これとは対照的に、HIV−１菌株のRTにおける181Tyr→Cys突然変異は、この突然変異ウイルスを、米国特許第5,268,239号に述べられているある一定のオキサチインカルボキサアニリド誘導体類を除いて、現在までに述べられている実際に全てのHIV−１特異性RT阻害剤に対して耐性にさせる。例えば、Balzarini等,J.Virology,67（９）:5353〜5359（1993）（“Balzarini I"）及びBalzarini等,Virology,192:246〜253（1993）（“Balzarini II"）を参照のこと。
ウイルス耐性を除去するために種々なHIV−１  RT阻害剤を組み合わせる試みがなされているが成功していない。例えば、Balzarini Iを参照のこと。
したがって、薬物耐性のHIV−１菌株の発生を阻害又は抑制することができるある一定のHIV  RT阻害剤化合物の組合せを含む組成物を提供することが本発明の目的である。
ある一定のHIV  RT阻害剤化合物のこの組合せを投与することによって、HIV−１感染症を防止又は治療する方法を提供することも本発明の目的である。
発明の概要
本発明はHIV−１感染症を予防又は治療するための組成物であって、
（ａ）式：
0003655636.tif 000002
［式中、X1とX2は独立的にＯまたはＳであり；
0003655636.tif 000003
又はCOYR5であり；
ＹはＯ又はＳであり；
R1は水素、ハロゲン、C1−C4アルキル、C1−C4アルコキシ、C3−C4アルケニルオキシ、C3−C4アルキニルオキシ、モノ−、ジ−又はトリ−ハロメチル、トリフルオロメトキシ、C1−C4アルキルチオ、C3−C4分枝アルキルチオ、ニトロ又はシアノであり；
R2は水素、C1−C4アルキル又はハロゲンであり；
R3は水素又はC1−C4アルキルであり；
R4はC3−C6アルキル、C3−C6アルケニル、C3−C6アルキニル、C1−C8ハロアルキル、C1−C8アルコキシアルキル、C1−C8アルキルチオアルキル、C1−C8ヒドロキシアルキル、C1−C8アシルオキシアルキル、C1−C8アロイルオキシアルキル、C1−C8カルボキシアルキル、C1−C8アルキルカルボキシアルキル、C6−C12アリールカルボキシアルキル、C1−C8アミノアルキル、C1−C8アルキルアミノアルキル、C1−C8ジアルキルアミノアルキル、C1−C8トリアルキルシリルアルキル（これらの基において上記アルキル部分の各々は直鎖又は分枝鎖のいずれでもよい）;C3−C8シクロアルキル、フェニル、（C1−C6アルキル）フェニル、C7−C12アリールアルキル、C7−C12アルカリールアルキル又はヘテロサイクリルアルキルであり、これらの基において複素環式部分はモルホリニル、ピペリジニル、ピロリジニル、ピペラジニル、オキシラニル、オキセタニル、フラニル、テトラヒドロピラニル又はテトラヒドロフラニルであり；
R5は（ｉ）１個以上のC1−C4アルキル、好ましくは１個若しくは２個のメチルによって任意に置換された、フェニル又はC3−C7シクロアルキル；又は
（ii）
0003655636.tif 000004
（式中、R6は水素又は線状、分枝若しくは環状のC1−C6アルキル、C1−C6ヒドロキシアルキル、C2−C6アルケニル、C2−C6ヒドロキシアルケニル、C2−C6アルキニル、C2−C6ヒドロキシアルキニル、C1−C6モノ−、ジ−若しくはトリ−ハロアルキル或いはC1−C6チオアルキルであり;R7とR8は独立的に水素又は線状、分枝若しくは環状のC1−C6アルキル、C1−C6ヒドロキシアルキル、C2−C6アルケニル、C2−C6ヒドロキシアルケニル、C2−C6アルキニル、C2−C6ヒドロキシアルキニル、C1−C6モノ−、ジ−若しくはトリ−ハロアルキル或いはC1−C6チオアルキルである）である］
で示される第1HIV−１  RT阻害剤化合物と；
（ｂ）（ａ）の第1HIV−１  RT阻害剤化合物によって選択される同じHIV−１突然変異菌株（単数又は複数）を選択しない第2HIV−１  RT阻害剤化合物と；
（ｃ）任意の、第3HIV  RT阻害剤化合物と
の治療有効量を含む組成物に関する。
本発明は患者におけるHIV−１感染症を予防又は治療するための方法であって、患者に別々に又は組合せて、上記（ａ）の第1HIV−１  RT阻害剤化合物と、（ａ）の第1HIV−１  RT阻害剤化合物によって選択される同じHIV−１突然変異菌株（単数又は複数）を選択しない第2HIV−１  RT阻害剤化合物と、任意の、第3HIV  RT阻害剤化合物との有効量を投与することを含む方法にも関する。
発明の詳細な説明
“HIV−１  RT阻害剤化合物”なる用語は、HIV−１の逆転写酵素の機能を妨害することによってHIV−１の複製を阻害する任意の化合物を意味する。
“HIV  RT阻害剤化合物”なる用語は、HIVの逆転写酵素の機能を妨害することによって、例えばHIV−１又はHIV−２のような、HIVの任意の種類又は菌株の複製を阻害する任意の化合物を意味する。
本発明の目的のために、“HIV−１突然変異菌株（単数又は複数）を選択する”とは、特定のHIV−１  RT阻害剤化合物に耐性である突然変異HIV−１菌株（単数又は複数）を意味する。
特定のHIV−１  RT阻害剤化合物が如何なるHIV−１突然変異菌株（単数又は複数）を選択するかを判定するために、Balzarini I及びBalzarini IIに述べられている方法を用いることができる。
本発明の組成物に第2HIV−１  RT阻害剤化合物として有用な化合物は、式Ｉの第1HIV−１  RT阻害剤化合物と同じHIV−１突然変異菌株（単数又は複数）を選択しない任意のRT阻害剤化合物であることができる。このようなHIV−１  RT阻害剤化合物は知られており、例えば、米国特許出願第07/939,410号（1992年９月３日出願）、Camarasa等,J.Med.Chem.35（15）:2721〜2727（1992）及びPerez−Perez等,J.Med.Chem.35（16）:2988〜2995（1992）に述べられているTSAO誘導体；例えば、Merluzzi等,Science,250:1411〜1413（1990）のネビラピンのような、ジビリドジアゼピノン類；例えばGoldman等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88,6863〜6867（1991）に述べられている３−｛［（4,7−ジクロロ−1,3−ベンゾオキサゾル−２−イル）メチル］アミノ｝−５−エチル−６−メチルピリジン−２（1H）−オン（Ｌ−697,661）のような、ピリジノン誘導体；例えば、Kleim等,Antimicrob.Agents Chemother.37,1659〜1664（1993）に述べられているキノキサリンＳ−2720のようなキノキサリン；例えばRomero等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:8806〜8810（1991）に述べられている、Ｎ−イソプロピル−２−［４−（２−ケトインドリル）−１−ピペラジニル］−３−ピリジンアミン（BHAP  Ｕ−88204）のような、ビス（ヘテロアリール）ピペラジン（BHAP）誘導体；例えば、Pauwels等,Nature,343:470〜474（1990）に述べられている、（＋）−Ｓ−4,5,6,7−テトラヒドロ−９−クロロ−５−メチル−６−（３−メチル−２−ブテニル−イミダゾ［4,5,1−jk］［1,4］−ベンゾジアゼピン−２（1H）−チオン（R82913）のような、テトラヒドロイミダゾ［4,5,1−jk］［（1,4）−ベンゾジアゼピン−２（1H）−オン及び−チオン（TIBO）誘導体；例えば、Kashman等,J.Med.Chem.35,2735〜2743（1992）に述べられている、カラノリドＡのようなクマリン誘導体；例えば、McMahon等,Antimicrobial.Agents Chemother.37,754〜760（1993）に述べられている、ニトロフェニルフェニルスルホン（NPPS）のような、ジアリールスルホン；例えば、Pauwels等,Proc.Natl.Acad.Sci.（USA），90,1711〜1715（1993）に述べられている、R89439のような、アニリドフェニルアセトアミド（アルファ−APA）；例えば、Zhang等,HIV薬物耐性に関する第２回国際研究会（６月３〜５日，オランダ,Noordwisk）の要約集（1993）No.30に述べられている、LY300046・HClのような、フェネチルチアゾールチオウレア誘導体（PETT）;1−［（２−ヒドロキシエトキシ）メチル］−６−（フェニルチオ）チミン（HEPT）誘導体,Baba等,Biochem.Biophys.Res.Comm.165,1375〜1381（1989）を包含する。
（ｃ）の任意の第3HIV  RT阻害剤化合物は、第1HIV−１  RT阻害剤化合物又は第2HIV−１  RT阻害剤化合物以外の任意のHIV  RT阻害剤化合物であることができる。このようなHIV  RT阻害剤化合物は知られており、例えば、第2HIV−１  RT阻害剤化合物として有用であるとして上述したようなHIV−１  RT阻害剤化合物又は例えばジドブジン（AZT）、ジダノシン（ddI）、ザルシタビン（ddC）、（−）−2'−デオキシ−3'−チアシチジン（3TC）、D4T、PMEA等のような、HIV−１とHIV−２とを識別しないHIV逆転写酵素阻害剤のような化合物を包含する。好ましくは、（ｃ）の任意のHIV  RT阻害剤化合物は、第1HIV−１  RT阻害剤化合物又は第2HIV−１  RT阻害剤化合物と同じHIV−１突然変異菌株（単数又は複数）を選択しないHIV  RT阻害剤化合物、例えば、第1HIV−１  RT阻害剤化合物又は第2HIV−１  RT阻害剤化合物と同じHIV−１突然変異菌株（（単数又は複数）を選択しない第3HIV−１  RT阻害剤化合物である。
好ましくは、本発明はHIV−１感染症を予防又は治療するための組成物であって、
（ａ）式：
0003655636.tif 000005
［式中、
X1はＯ又はＳ、好ましくはＯであり；
X2はＯ又はＳ、好ましくはＳであり；
Ｑは
0003655636.tif 000006
又は好ましくはCOYR5であり；
ＹはＯ又はＳ、好ましくはＯであり；
R1は水素、ハロゲン、C1−C4アルキル、C1−C4アルコキシ、C3−C4アルケニルオキシ、C3−C4アルキニルオキシ、モノ−、ジ−若しくはトリ−ハロメチル、トリフルオロメトキシ、C1−C4アルキルチオ、C3−C4分枝アルキルチオ、ニトロ又はシアノであり、好ましくは水素、ハロゲン又はC1−C4アルキルであり、より好ましくはハロゲンであり；
R2は水素、C1−C4アルキル又はハロゲンであり、好ましくは水素又はC1−C4アルキル、より好ましくは水素、メチル又はエチルであり；
R3は水素又はC1−C4アルキルであり；
R4はC3−C6アルキル、C3−C6アルケニル、C3−C6アルキニル、C1−C8ハロアルキル、C1−C8アルコキシアルキル、C1−C8アルキルチオアルキル、C1−C8ヒドロキシアルキル、C1−C8アシルオキシアルキル、C1−C8アロイルオキシアルキル、C1−C8カルボキシアルキル、C1−C8アルキルカルボキシアルキル、C6−C12アリールカルボキシアルキル、C1−C8アミノアルキル、C1−C8アルキルアミノアルキル、C1−C8ジアルキルアミノアルキル、C1−C8トリアルキルシリルアルキル（これらの基において上記アルキル部分の各々は直鎖又は分枝鎖のいずれでもよい）;C3−C8シクロアルキル、フェニル、（C1−C6アルキル）フェニル、C7−C12アリールアルキル、C7−C12アルカリールアルキル又はヘテロサイクリルアルキル（これらの基において複素環式部分はモルホリニル、ピペリジニル、ピロリジニル、ピペラジニル、オキシラニル、オキセタニル、フラニル、テトラヒドロピラニル又はテトラヒドロフラニルである）であり、好ましくは、C3−C6アルキル、C3−C6アルケニル、C3−C6アルキニル、C1−C8ハロアルキル、（C1−C8アルキル）チオ（C1−C8アルキル）、C3−C8シクロアルキル又はフェニルであり；
R5は
（ｉ）１個以上のC1−C4アルキル、好ましくは１個若しくは２個のメチルによって任意に置換された、フェニル又はC3−C7シクロアルキル；又は
（ii）
0003655636.tif 000007
（式中、R6は水素又は線状、分枝若しくは環状のC1−C6アルキル、C1−C6ヒドロキシアルキル、C2−C6アルケニル、C2−C6ヒドロキシアルケニル、C2−C6アルキニル、C2−C6ヒドロキシアルキニル、C1−C6モノ−、ジ−若しくはトリ−ハロアルキル或いはC1−C6チオアルキルであり、好ましくはC3−C6アルキル、C1−C6モノ−、ジ−若しくはトリ−ハロアルキル又はC1−C6チオアルキルであり；
R7とR8は独立的に水素又は線状、分枝若しくは環状のC1−C6アルキル、C1−C6ヒドロキシアルキル、C2−C6アルケニル、C2−C6ヒドロキシアルケニル、C2−C6アルキニル、C2−C6ヒドロキシアルキニル、C1−C6モノ−、ジ−若しくはトリ−ハロアルキル或いはC1−C6チオアルキルであり、好ましくは、水素又はC1−C4アルキルであり、より好ましくは水素である）
である］
で示される第1HIV−１  RT阻害剤化合物と；
（ｂ）式：
0003655636.tif 000008
［式中、Ｂは
（ｉ）式：
0003655636.tif 000009
で示されるピリミジン、好ましくは
式：
0003655636.tif 000010
（式中、X2は水素、C1−C4アルキル、C2−C4アルケニル、C2−C4アルキニル、ハロゲン、シアノ、チオシアノ、ヒドロキシメチル、C1−C2ハロアルキル、ニトロ又はアミノであり、好ましくは水素又はC1−C4アルキルであり；
X3は水素、C1−C4アルキル、C2−C4アルケニル又はC2−C4アルキニルであり、好ましくは水素又はC1−C4アルキルであり；
X4はOH、SH、NH2、NHCH3、Ｎ（CH3）２又はNHCOCH3であり、好ましくはNH2、NHCH3又はＮ（CH3）２である）
で示されるピリミジン；
（ii）式：
0003655636.tif 000011
で示されるプリン、又は好ましくは
式：
0003655636.tif 000012
で示されるプリン
（上記式中、X5はＨ又は、好ましくは、C1−C4アルキルであり；
X6はＨ、OH、ハロゲン、NH2、NHCH3又はＮ（CH3）２である）；
又は
（iii）式：
0003655636.tif 000013
（式中、X7とX8は、それぞれ独立的に、水素、C1−C4アルキル、C1−C4ハロアルキル、トリメチルシリル、アセチル、C1−C6アルコキシカルボニル、C1−C6アルキルカルボニル、CONH2、CONHCH3、CON（CH3）２であり、好ましくはNH2、NHCH3又はＮ（CH3）２である）
で示されるトリアゾール
であり；
R1'はアミノ、C1−C4アミノアルキル、C2−C4アミノアルケニル又はC2−C4アミノアルキニルであり、好ましくはアミノ又はC1−C4アミノアルキルであり；
R2'とR3'はそれぞれ独立的に、同じ又は異なる、フェニル又はC1−C4線状若しくは分枝アルキルによって三置換されたシリルである］
で示される第2HIV−１  RT阻害剤化合物と；
（ｃ）（ａ）の第1HIV−１  RT阻害剤化合物又は（ｂ）の第2HIV−１  RT阻害剤化合物によって選択される同じHIV−１突然変異菌株（単数又は複数）を選択しない、任意の、第3HIV  RT阻害剤化合物と
の治療有効量を含む組成物に関する。
より好ましくは、本発明はHIV−１感染症を予防又は治療するための組成物であって、
（ａ）式：
0003655636.tif 000014
［式中、
Ｑは
0003655636.tif 000015
又はCOYR5であり；
ＹはＯであり；
R1は水素、ハロゲン又はC1−C4アルキルであり；
R2は水素又はC1−C4アルキルであり；
R3は水素又はC1−C4アルキルであり；
R4はC3−C6アルキル、C3−C6アルケニル、C3−C6アルキニル、C1−C8ハロアルキル又は（C1−C8アルキル）チオ（C1−C8アルキル）であり、これらの基において上記アルキル部分の各々は直鎖又は分枝鎖のいずれでもよい;C3−C8シクロアルキル又はフェニルであり；
R5は
（ｉ）１個又は２個のメチルによって任意に置換された、フェニル又はC3−C7シクロアルキル；又は
（ii）
0003655636.tif 000016
（式中、R6は水素又は線状、分枝若しくは環状のC1−C6アルキル、C1−C6ヒドロキシアルキル、C2−C6アルケニル、C2−C6ヒドロキシアルケニル、C2−C6アルキニル、C2−C6ヒドロキシアルキニル、C1−C6モノ−、ジ−若しくはトリ−ハロアルキル或いはC1−C6チオアルキルであり;R7とR8は水素又は線状、分枝若しくは環状のC1−C4アルキルである）
である］
で示される第1HIV−１  RT阻害剤化合物と；
（ｂ）式：
0003655636.tif 000017
［式中、Ｂは
（ｉ）式：
0003655636.tif 000018
（式中、
X2は水素又はC1−C4アルキルであり；
X3は水素又はC1−C4アルキルであり；
X4はNH2、NHCH3又はＮ（CH3）２である）
で示されるピリミジン；
（ii）式：
0003655636.tif 000019
（式中、X5はC1−C4アルキルである）
で示されるプリン；又は
（iii）式：
0003655636.tif 000020
（式中、X7とX8は、それぞれ独立的に、水素、C1−C4アルキル、C1−C4ハロアルキル、トリメチルシリル、アセチル、C1−C6アルコキシカルボニル、C1−C6アルキルカルボニル、CONH2、CONHCH3、CON（CH3）２であり、好ましくはNH2、NHCH3又はＮ（CH3）２である）
で示されるトリアゾール
であり；
R1'はアミノ又はC1−C4アミノアルキルであり；
R2'とR3'はそれぞれ独立的に、同じ又は異なる、フェニル又はC1−C4線状若しくは分枝アルキルによって三置換されたシリルである］
で示される第2HIV−１  RT阻害剤化合物と；
（ｃ）（ａ）の第1HIV−１  RT阻害剤化合物又は（ｂ）の第2HIV−１  RT阻害剤化合物によって選択される同じHIV−１突然変異菌株（単数又は複数）を選択しない、任意の、第3HIV  RT阻害剤化合物と
の治療有効量を含む組成物に関する。
最も好ましくは、本発明はHIV−１感染症を予防又は治療するための組成物であって、
（ａ）式：
0003655636.tif 000021
［式中、
R2は水素、メチル又はエチルであり；
R5は
（ｉ）フェニル又はC3−C7シクロアルキル；又は
（ii）
0003655636.tif 000022
（式中、R6は水素又は線状、分枝若しくは環状のC3−C6アルキル、C1−C6モノ−、ジ−若しくはトリ−ハロアルキル或いはC1−C6チオアルキルであり;R7とR8は水素である）
である］
で示される第1HIV−１  RT阻害剤化合物と；
（ｂ）式：
0003655636.tif 000023
［式中、Ｂは
（ｉ）式：
0003655636.tif 000024
（式中、
X2は水素又はC1−C4アルキルであり；
X3は水素又はC1−C4アルキルである）
で示されるピリミジン；
（ii）式：
0003655636.tif 000025
（式中、X5はC1−C4アルキルである）
で示されるプリン；又は
（iii）式：
0003655636.tif 000026
（式中、X7とX8は、それぞれ独立的に、NH2、NHCH3又はＮ（CH3）２である）
で示されるトリアゾール
であり；
R1'はアミノ又はC1−C4アミノアルキルであり；
R2'とR3'はそれぞれ独立的に、同じ又は異なる、フェニル又はC1−C4線状若しくは分枝アルキルによって三置換されたシリルである］
で示される第2HIV−１  RT阻害剤化合物と；
（ｃ）（ａ）の第1HIV−１  RT阻害剤化合物又は（ｂ）の第2HIV−１  RT阻害剤化合物によって選択される同じHIV−１突然変異菌株（単数又は複数）を選択しない、任意の、第3HIV  RT阻害剤化合物と
の治療有効量を含む組成物に関する。
本発明の組成物において第1HIV−１  RT阻害剤化合物として有用な式Ｉ化合物は、例えば、米国特許第5,268,389号に述べられているように製造することができる。本発明の組成物において第2HIV−１  RT阻害剤化合物として有用なTSAO化合物は、例えばヨーロッパ特許出願公開第0530407号に述べられているように製造することができる。
本発明の組成物は、慣用的な無毒性で薬剤学的に受容されるキャリヤー、アジュバンド及びビヒクルを含有する投与量単位配合物（dosage unit formulation）として経口的に、非経口的に、舌下に、吸入スプレーによって若しくは直腸から、又は局所に投与されることができる。適当なキャリヤー、アジュバンド及びビヒクルは、例えばRemington's Pharmaceutical Sciences,第16版,Mack Publishing Company,ペンシルバニア州，イーストン（1980）のような、標準的な薬剤学テキストに見い出されることができる。
キャリヤーと混合されて単一投与形を製造することができる有効成分の治療有効量は、治療されるホストの年齢及び状態と特定の投与形式とに依存して変動する。一般に、本発明の組成物の有効成分は、最も望ましくは、有害又は有毒な副作用を生じることなく、抗ウイルス的に効果的な結果を一般に与える濃度レベルで投与される。
本発明の組成物中の第1HIV−１  RT阻害剤化合物の第2HIV−１  RT阻害剤化合物に対する比は、選択された第1HIV−１  RT阻害剤化合物及び第2HIV−１  RT阻害剤化合物と、HIV−１感染症の症状及び／又は重症度とに依存して変化することができるが、通常は、重量で約1:100から約100:1まで、好ましくは重量で約1:5から約5:1までである。任意の第3HIV  RT阻害剤化合物を含む本発明の組成物では、組成物中の第3HIV  RT阻害剤化合物の％量は、HIV−１感染症の症状及び／又は重症度とに依存して及び選択された第3HIV  RT阻害剤化合物に依存して変化することができるが、通常は、全組成物の約１重量％〜約99重量％、好ましくは約20重量％〜約80重量％である。
第1HIV−１  RT阻害剤化合物と、第2HIV−１  RT阻害剤化合物と、選択された場合の第3HIV  RT阻害剤化合物とは、全ての成分を含む組成物として患者に投与することができる、又は成分を別々に患者に投与することもできる。例えば、第1HIV−１  RT阻害剤化合物を最初に患者に投与し、次に第2HIV−１  RT阻害剤化合物を患者に投与し、その後に、選択した場合に、第3HIV  RT阻害剤化合物を投与することができる。或いは、例えば、第2HIV−１  RT阻害剤化合物を最初に患者に投与し、次に第1HIV−１  RT阻害剤化合物を、その後に、選択した場合の第3HIV  RT阻害剤化合物を投与することができる。又は、例えば、選択した場合の第3HIV  RT阻害剤化合物を最初に患者に投与し、次に第1HIV−１  RT阻害剤化合物と第2HIV−１  RT阻害剤化合物とを投与することができる。又は、第1HIV−１  RT阻害剤化合物と第2HIV−１  RT阻害剤化合物とを組成物として患者に投与し、次に第3HIV  RT阻害剤を投与することができる。又は、第1HIV−１  RT阻害剤化合物と第3HIV  RT阻害剤化合物とを組成物として患者に投与し、次に第2HIV−１  RT阻害剤化合物を投与することができる。又は、第2HIV−１  RT阻害剤化合物と第3HIV  RT阻害剤化合物とを最初に患者に投与し、次に第1HIV−１  RT阻害剤化合物を投与する等を行うことができる。
本発明の組成物の有効成分は唯一の有効薬剤として投与することができるが、有効成分を、本発明の組成物の有効成分の活性に有害でない、又は有効成分とのその組合せが治療されるホストに有害な影響を与えない１種類以上の他の薬剤と組合せて用いることもできる。
本発明を例示するために、下記実施例を提供する。
実施例
材料と方法
試験化合物
TSAO誘導体［１−［2',5'−ビス−Ｏ−（tert−ブチルジメチルシリル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−３−Ｎ−メチルチミン−3'−スピロ−5"−（4"−アミノ−1",2"−オキサチオール2",2"−ジオキシド（TSAO−m3T）をPerez−Perez等の上記文献に述べられているように合成した。TIBO  R82913はZhang Hao（National Institutes of Health,メリーランド州,Bethesda）から提供されたか、又はPharmatech International Inc.（ニュージャージー州，ウェストオレンジ）から入手した。ネビラピン（BI−RG−587）とピリジノンＬ−697,661とは、それぞれ、Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals,Inc.（コネチカット州，リッジフィールド）とMerck,Sharp ＆ Dohme（ペンシルバニア州，ウェストポイント）とから提供された。BHAP  Ｕ−88204（Ｎ−イソプロピル−２−［４−（２−ケトインドリル）−１−ピペラジニル］−３−ピリジンアミン）はThe Upjohn Company（ミシガン州，カラマズー）から入手し、BHAP  Ｕ−90152はHoechst AG（ドイツ，フランクフルト）から入手した。MCK−442は福島医科大学（日本，福島）から提供された。化合物Ｉ、II、III、IV及びＶ（下記表Ａに要約）は米国特許第5,268,389号に述べられている方法を用いて調製した。
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BHAP  Ｕ−90152は下記構造を有する：
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MCK−442は下記構造を有する：
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細胞とウイルス
CEM細胞はAmerican Tissue Cell Culture Collection（メリーランド州，ロックビル）から入手した。HIV−１（IIIB）は最初は持続的に（persistently）HIV−１感染したH9細胞の培養上澄みから得られ、R.C.GalloとM.Popovic（National Institutes of Health,メリーランド州,Bethesda）から提供された。
単独薬物又は組合せとして投与されたHIV−１特異性RT阻害剤に耐性なHIV−１（IIIB）突然変異菌株の選択
HIV−１（IIIB）に対して、25cm2培養フラスコ（Falcon;Becton Dickinson）中の数種類の一定濃度の試験化合物の存在下の5ml  CEM細胞培養物（4x105細胞/ml）中で２〜３回継代させて、突然変異HIV−１菌株を製造した。この培養培地は10％ウシ胎児血清と、2mM  Ｌ−グルタミンと、0.075％NaHCO3とを含有するRPMI  1640から成るものであった。初期感染の多重度はCCID50（50％細胞培養物感染用量）の約1000倍であった。継代は３〜４日毎に、0.5〜1.0mlの感染培養上澄みを5mlの4x105未感染CEM細胞/ml含有懸濁液に加えることによっておこなった。細胞培養物中のウイルス急増のパラメータとしてシンシチウム形成を用いた。薬物組合せ実験では、単独薬物実験での２つの最低濃度として用いた濃度と同じ初期濃度で化合物を一緒にした。
CEM細胞培養における試験化合物に対する幾つかのHIV−１突然変異菌株の感受性
CEM細胞を培養培地1mlにつき250,000細胞で懸濁させ、野生型HIV−１（IIIB）又は突然変異HIV−１菌株によって100倍の50％細胞培養感染用量/mlで感染させた。次に、100μｌの感染済み細胞懸濁液を、試験化合物の適当な希釈物（100μｌ）を含有する200μｌマイクロタイタープレート孔に加えた。37℃において４日間インキュベーションした後に、細胞培養物をシンシチウム形成に関して調べた。50％有効濃度（EC50）をHIV−１誘導シンシチウム形成を50％阻害するために必要な化合物濃度として測定した。
ポリメラーゼ連鎖反応分析のための突然変異HIV−１感染CEM細胞培養物の調製と突然変異HIV−１菌株のポル遺伝子の配列決定
用いた方法はBalzarini  Ｉ上記文献と、Balzarini等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6952〜6956（1993）（“Balzarini  III"）とに述べられている。RTアミノ酸50〜270をカバーする727bpフラグメントを与えるように、オリゴヌクレオチドを選択した。プロウイルスDNAの増殖（35サイクル）を、100μｌの最終量での10mM  Tris・HCl（pH8.8）、50mM  KCl、1.5mM  MgCl2、0.1％Triton  Ｘ−100、2.5単位の熱安定性DNAポリメラーゼ（Dyna Zyme,Finnzymes Inc.）及び15μＭの各プライマー中で1x105細胞からの抽出によっておこなった。第１プライマーセット（5'−GTAGAATTCTGTTGACTCAGATTGG及び5'−TTCTGCCAGTTCTAGCTCTGCTTCT）はプロウイルス逆転写酵素遺伝子の900bp生成物を生じた。第1PCRからの反応の1/10を次に鋳型として新規な35サイクルPCRに、アミノ酸50〜270をカバーする727bp逆転写酵素フラグメントを与える第２プライマーセット（5'−CCTGAAAATCCATACAATACTCCAGTATTTG及び5'−AGTGCTTTGGTTCCTCTAAGGAGTTTAC）と共に転移させた。この第２セットのオリゴヌクレオチドは第１セットのオリゴヌクレオチドから内部的にDNA合成を開始させ、それによって、第1PCRから特異的な生成物を増殖させたが、非特異的な生成物はもはや増殖されなかった。PCR生成物を１％アガロースゲル上で目視可能にした。
逆転写酵素分析
反応混合物は（50μｌ）は、50mM  Tris・HCl,pH7.8と、5mMジチオトレイトールと、300mMグルタチオンと、500μＭ  EDTAと、150mM  KClと、5mM  MgCl2と、1.25μｇとウシ血清アルブミンと、一定（fixed）濃度の標識済み基質［2,8−3H］dGTP（2.95μM,2μCi）と、一定濃度の鋳型／プライマー，ポリ（Ｃ）・オリゴ（dG）（0.1mM）と、0.06％のTriton X−100と、５μｌの阻害剤溶液（種々な濃度（５倍希釈）の試験化合物を含有）と、５μｌのRT標本とを含有した。この反応混合物を37℃において30分間インキュベートし、この時点で100μｌのウシ胸腺DNA（150μg/ml）と、2mlのNa4P2O7（1M  HCl中0.1M）と、2mlのトリクロロ酢酸（10％,v/v）とを加えた。この溶液を氷上に30分間維持し、その後に、酸に不溶な物質を洗浄し、放射能に関して分析した。試験化合物のIC50を、ウイルス粒子誘導RT活性を50％阻害した化合物濃度として測定した。
結果
化合物Ｉ、II、III、IV及びＶの抗ウイルス活性スペクトル
化合物Ｉ、II、III、IV及びＶはCEM細胞中のHIV−１（IIIB）複製を顕著に阻害することが判明した。これらの50％阻害濃度は0.004〜0.05μg/mlの範囲内であった。野生型HIV−１に対して最も活性な化合物Ｉ、II、III、IV及びＶの阻害活性はHIV−１特異性RT阻害剤ネビラピン、BHAP、ピリジノン、TIBO及びTSAO−m3Tの阻害活性よりも優れていた（表１）。しかし、後者のHIV−１特異性RT阻害剤とは顕著な対照をなして、化合物Ｉ、II、III、IV及びＶはCEM細胞中のピリジノン耐性RT/181−Cys  HIV−１突然変異体の細胞変性効果（cytopathicity）をかなり大きく阻害することが判明した。一般に、RT/181−Cys突然変異ウイルスに対する化合物Ｉ、II、III、IV及びＶの活性は、他のHIV−１特異性RT阻害剤の活性に比べて少なくとも１桁〜２桁大きかった。
また、それらのRTに138Glu→Lysと106Val→Ala突然変異を含む他の突然変異HIV−１菌株に対する化合物Ｉ、II、III、IV及びＶの抗ウイルス力価（antiviral potency）は、他の化合物に関して認められたよりも少なくとも10倍〜50倍大きく顕著であった。化合物Ｉ、II、III、IV及びＶはRT/100−Ile突然変異ウイルス菌株とRT/103−Asn突然変異ウイルス菌株とに対しては、野生型ウイルスに対するよりも活性ではなかった。しかも、これらの抗ウイルス力価はまだng/mlの範囲内であり、これは１μg/mlに近接するか又は１μg/mlよりもさらに顕著に大きいEC50を有する他のHIV−１特異性RT阻害剤に比べて低かった（表１）。
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HIV−１  RTに対する化合物Ｉ、II、IV及びＶの阻害効果
化合物Ｉ、III、IV及びＶを組換えHIV−１  RTに対するそれらの阻害効果に関して評価した。これらは、鋳型プライマーとしてのポリ（Ｃ）・オリゴ（dG）と放射能標識済み基質としての2.95μＭ［2,8−3H］dGTPとを用いて、HIV−１  RTの非常に強力な阻害剤であると判明した。これらのIC50値は一定して0.018〜0.077μg/mlの範囲内であった。ネビラピン、ピリジノン、BHAP及びTIBOでは高いIC50値が認められ、HIV−１  RTに対するTSAO−m3TのIC50は化合物Ｉ、II、IV及びＶのIC50値よりもさらに20倍〜50倍大きかった（表２）。
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ノックアウト濃度
化合物Ｉ、II、III、IV及びＶと、BHAP  U88204及びネビラピンをもHIV−１（IIIB）感染CEM細胞に0.1、0.5及び2.5μg/mlの初期濃度で加えた。実験の全期間（10継代培養又は35日間）を通して、薬物濃度を一定に維持した。次に、薬物を細胞培養物から取り出し、細胞をさらに少なくとも５回追加継代培養した。最低濃度（即ち、0.1μg/ml）の化合物Ｉ、II、III及びIVの存在下ではウイルスのみが発生した。化合物Ｖは0.5μg/mlにおいて遅くウイルスを急増させた（表３）。これに反して、0.1及び0.5μg/mlのBHAPと0.1、0.5及び2.5μg/mlのネビラピンの阻害効果に対して耐性なウイルスが同様な実験条件下の感染細胞培養物中で発生した。したがって、化合物Ｉ、II、III、IV及びＶはHIV−１感染細胞培養物中でのウイルス急増をBHAP又はネビラピンよりもそれぞれ、少なくとも５倍〜25倍大きく効果的に防止することができた（表３）。第10回目の継代培養において、UR誘導体によるHIV−１誘導細胞変性を完全に防止したHIV−１感染CEM細胞培養物は、検出可能なp24を生成せず、プロウイルスDNAを有さなかった。また、試験化合物を取り出し、試験化合物の不存在下で細胞をさらに継代培養した後に、ウイルスは発生しなかった。それ故、HIV−１感染細胞培養物が他のHIV−１特異性RT阻害剤よりも顕著に低い濃度の化合物Ｉ、II、III、IV及びＶの存在下で培養した場合に、ウイルスを有さないと結論することができる。
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化合物Ｉ、II、III、IV及びＶによる治療下で発生した突然変異HIV−１菌株の特徴付け
化合物Ｉ、II、III、IV及びＶによる及び化合物Ａ及びＢ（以下で定義する）による治療下で発生した７種類の突然変異HIV−１菌株のRT遺伝子をそれらのRTにおける可能な突然変異に関して特徴付けた。突然変異はアミノ酸位置100、101、103及び138において認められた。興味深いことには、３種類の新規な突然変異が発見された。突然変異HIV−1/IV菌株はコドン103の第２塩基のトランスバージョン（Ａ→Ｃ）のために、103Lys→Thr突然変異を含有した。化合物ＢはRTのアミノ酸位置101における新規な突然変異、即ち、Glu（GAA）によるLys（AAA）の置換を選択した。0.1μg/mlで用いた場合に、化合物ＶはそのRTに二重突然変異、即ち、101−Lys→Ileと141−Gly→Gluを含有するウイルスを選択した（表４）。
化合物Ａの構造は
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である。
化合物Ｂの構造は
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である。
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化合物Ｉ、II、III、IV、Ｖ、Ａ及びＢによる治療下で発生した他の突然変異ウイルスは、それらのRTにおける位置100、101、103及び138にアミノ酸変化を含有し、これらの変化は,TIBO  R82150、TIBO  R82913、BHAP  U88204、ピリジノンＬ−697,661及びTSAO誘導体を包含する他のHIV−１特異性RT阻害剤に関して既に報告されている。BHAP及びネビラピン治療下で発生したウイルスは、それらのRTに181  Tyr→Cysと106  Val→Ala突然変異をそれぞれ含有した。
他のHIV−１特異性RT阻害剤に対する突然変異HIV−１菌株の感受性／耐性
そのRTに新規な101  Lys→Glu突然変異を含有する突然変異体HIV−1/Bは特殊な耐性パターンを示した。化合物Ｉ並びに全ての他のHIV−１特異性阻害剤はこのウイルス菌株に対して少なくとも２桁〜３桁低い効果を示した（EC50:≧１μg/ml）。しかし、ピリジノンＬ−697,661はこの突然変異ウイルス菌株に対して顕著な阻害効力を保有した（EC50:0.035μg/ml）（表５）。それらのRTに103  Lys→Asn突然変異を含有する３種類の突然変異HIV−１菌株はHIV−１特異性阻害剤に対するそれらの感受性スペクトルにおいて顕著に異なった。例えば、TIBO、BHAP,ネビラピン、ピリジノン及びMKC−442はHIV−1/V（0.5）に対するよりもHIV−1/III（0.1）に対して10倍〜30倍大きく阻害性であった。化合物Ｉ、II及びIVはHIV−1/III（0.1）よりもHIV−1/V（0.5）に対して３倍〜５倍低く阻害性であるに過ぎなかった、然るにTSAO−m3Tは両方のウイルス突然変異体に対して同様に阻害性であった。第3RT/103−Asn突然変異ウイルス菌株［HIV−1/I（0.1）］は、HIV−１特異性RT阻害剤に対して、他のRT/103−Asn突然変異ウイルスの両方の間の中間である耐性／感受性スペクトルを示した。二重（101  Lys→Ile＋141  Gly→Glu）突然変異を含有するHIV−1/V（0.1）菌株は、ピリジノン、TSAO−m3T、MKC−442と、化合物II及びIIIさえも包含する数種類の化合物に対して顕著な感受性を保有した。
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最後に、そのRTの位置103に新規なThr突然変異を含有するHIV−1/IV（0.1）突然変異菌株は、1.1〜2.75μg/mlのEC50においてのみこの突然変異ウイルスを阻害したネビラピン、TIBO  R82913、化合物III及び化合物Ｖを除いた、大抵のHIV−１特異性阻害剤に対してng/ml範囲での感受性を保有した。
化合物IV、TSAO−m3T及び／又はBHAP  U90152による２種及び３種薬物組合せ治療
化合物IV、BHAP及びTSAO−m3TをHIV−１感染CEM細胞培養物に0.04、0.10及び0.25μg/ml（化合物IVとBHAP）又は1.0、2.5及び5.0μg/ml（TSAO−m3T）で加えた。さらに、化合物IV、BHAP及びTSAO−m3Tの種々な２種薬物組合せと３種薬物組合せとを、これらの阻害剤を単独薬物実験に用いたときのそれらの最低（0.04μg/ml）又は中間（0.1μg/ml）濃度で組合せて実施した。我々の実験条件下で、検討した全ての濃度での単独薬物療法下では突然変異ウイルスが発生した。ある一定の条件下で、実験の開始後７〜11日間程で迅速にウイルスが発生した。ウイルス急増はせいぜい14日目まで（BHAPとTSAOの高濃度において）又は21日目まで（化合物IVの高濃度において）遅延することができたに過ぎなかった（表６）。
しかし、化合物IVとTSAO−m3Tとをそれらの最低濃度（即ち、化合物IVの0.04μg/mlとTSAO−m3Tの1.0μg/ml）で組合せた場合には、HIV−１誘導細胞変性の最初の兆候は感染後18日目に出現し、0.04μg/mlの化合物IVと2.5μg/mlのTSAO−m3Tとの組合せはウイルス急増を感染後28日間、即ち、両方の薬物を単独薬物として同濃度で又は2.5倍（TSAO−m3T）高い又は６倍（化合物IV）高い濃度で細胞培養物に加えた場合よりも非常に長い期間、遅延させた（表６）。
化合物IV（0.1μg/ml）とTSAO−m3T（1.0又は2.5μg/ml）との組合せによっては、ウイルス急増はさらに遅延された。これらの実験条件下で、ウイルスは13継代培養（感染後46日目）まで完全に抑制された。次に、培養物をさらに10継代培養（感染後77日目）のために試験化合物の不存在下でさらに継代培養した場合には、ウイルス誘導細胞変性は明示されず、培養物はウイルス抗原（p24）陰性であると実証された。この場合にも、化合物IV又はTSAO−m3Tを2.5倍〜５倍の高濃度で単独薬物として用いた場合には、ウイルスは細胞培養において14日間〜25日間のみ抑制されることができたに過ぎなかった。したがって、化合物IVとTSAO−m3Tとの組合せは突然変異ウイルス急増の顕著な遅延又は完全な防止さえ生じたが、これは化合物を個別に同濃度又は2.5〜５倍の高濃度でさえ用いた場合には得られなかったことである。化合物IVとTSAO−m3TとBHAPとの３種組合せはさらにいっそう顕著な効果を生じた。この３種薬物組合せは、低濃度で加えた場合にも、耐性ウイルスの発生をかなり遅延させる（39日目、46日目又は56日目まで）又は防止することさえできた［77日目（第22継代培養）までウイルス急増は生じなかった］が、単独薬物の最高濃度はウイルス急増を14〜21日目まで防止することができたに過ぎなかった（表６）。化合物IVを0.1μg/mlで組合せた３種薬物組合せの全てはHIV−１感染CEM細胞からウイルスを除去することができた。実際に、これらの培養物はPCRによって実証されるようにプロウイルスを含まず、p24を生じず、第13継代後に、試験化合物の不存在下で、非感染CEM細胞と区別できない速度で増殖した。
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