(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一つの試薬が固相支持体に結合しており、反応の多くが前記固相-結合試薬上で起こり固相-結合反応生成物を生じさせ、前記反応生成物が前記固相支持体から切断されて切断生成物を生じさせる固相合成方法であって、前記固相-結合反応生成物とフッ化水素との反応によって、反応生成物が固相支持体から切断され、前記固相支持体とフッ化水素とが反応して揮発性化合物を生成し、前記揮発性化合物が揮発によって前記切断生成物から分離されること、ならびに、前記反応生成物の固相支持体からの切断および前記揮発性化合物の生成が単一の工程で行われること、を特徴とする前記固相合成方法。
【請求項２】
固相支持体がシリカである、請求項1に記載の固相合成方法。
【請求項３】
固相支持体がポリ(ベンジルエーテル)である、請求項1に記載の固相合成方法。
【請求項４】
固相支持体が式Ａ(式中、nは1から100,000より大きく、Xは反応生成物である)で表される、請求項3に記載の固相合成方法。
【化１】
0003607200.tif 000008
式Ａ
【請求項５】
固相支持体に結合している少なくとも一つの試薬がアミノ酸である、請求項1に記載の固相合成方法。
【請求項６】
切断生成物がペプチドである、請求項５に記載の固相合成方法。
【請求項７】
切断生成物がグリコペプチドである、請求項５に記載の固相合成方法。
【請求項８】
固相支持体に結合している少なくとも一つの試薬が糖類である、請求項1に記載の固相合成方法。
【請求項９】
切断生成物がオリゴ糖である、請求項８に記載の固相合成方法。
【請求項１０】
固相支持体に結合している少なくとも一つの試薬が複素環式化合物である、請求項1に記載の固相合成方法。
【請求項１１】
切断生成物が複素環式化合物である、請求項１０に記載の固相合成方法。
【請求項１２】
切断生成物を回収する工程をさらに含む、請求項1に記載の固相合成方法。
【請求項１３】
少なくとも一つの試薬が固相シリカ支持体に結合しており、反応の多くが前記固相-結合試薬上で起こり固相-結合反応生成物を生じさせ、前記反応生成物が固相支持体から切断されて切断生成物を生じさせる固相合成方法であって、前記シリカ固相支持体がHFと反応して揮発性化合物を生成し、前記揮発性化合物が揮発によって前記切断生成物から分離されることを特徴とする前記固相合成方法。
【請求項１４】
固相シリカ支持体に結合した少なくとも一つの試薬がアミノ酸である、請求項１３に記載の固相合成方法。
【請求項１５】
切断生成物がペプチドである、請求項１４に記載の固相合成方法。
【請求項１６】
固相シリカ支持体に結合した少なくとも一つの試薬が連結基によって前記支持体に結合している、請求項１３に記載の固相合成方法。
【請求項１７】
連結基が切断可能である、請求項１６に記載の固相合成方法。
【請求項１８】
切断可能な連結基がHFとの反応により揮発性化合物を生成する、請求項１７に記載の固相合成方法。
【請求項１９】
シリカ固体支持体がα-クロロベンジルC3-C5-アルキル-移植ガラスビーズと反応させられる、請求項１７に記載の固相合成方法。
【請求項２０】
連結基が非切断性である、請求項１６に記載の固相合成方法。
【請求項２１】
シリカ固体支持体がアミノ-C2-C6-アルキル-移植ガラスビーズである、請求項２０に記載の固相合成方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
技術分野
本発明は、固相合成、より詳細には、支持体からの合成された物質の切断の際に揮発可能な合成支持体上の固相合成に関する。
【０００２】
発明の背景
固相アプローチを用いる化合物調製は、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄによって１９６３年に初めて記述された［Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ， １９６３， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， ８５： ２１４９−２１５４］。ポリスチレン固相をペプチドの調製に使用するというこの最初の基本概念以来、異なる広範囲な固相支持体が使用されて来た（すなわち、ポリアミド［Ａｔｈｅｒｔｏｎら、１９７５， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， ９７： ６５８４−６５８５］、多孔性ガラス［Ｐａｒｒら、１９７４， Ｊｕｓｔｕｓ Ｌｉｅｂｉｇｓ Ａｎｎ． Ｃｈｅｍ．， ｐｐ． ６５５−６６６］および微小チップクォーツ［Ｆｏｄｏｒら、１９９１、Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２５１： ７６７−７７３］。これらは有用ではあるが、これらの固相支持体は全て最終切断工程を必要とし、その工程では、化合物（ペプチド、ペプチド疑似物、オリゴヌクレオチド、有機小分子、種々の複素環式化合物その他）が固相から切断され、次に、使用済みの固相支持体から分離される。
【０００３】
注目している化合物が固定化様式で使用することができる場合（すなわち、その化合物が最終用途および／または形態で残る場合）、残った固相支持体は問題でないかも知れず、実際、ある種のアッセイには有用かもしれない。しかしながら、大部分の場合、注目している化合物は溶液中で使用しなければならず、従って、固相支持体から分離しなければならない。固相物質の除去が、固相支持体からの所望の化合物の切断に続く分離工程（典型的には濾過または遠心による）で行なう必要がないならば、時間および／または費用の大きな節約が実現できるであろう。以下に開示される本発明は、所望の合成された物質からの使用済み固相支持体の分離という問題に対するひとつの解決法を提供する。
【０００４】
発明の概要
本発明は、固体支持体上の固相合成であって、所望の産物がその固体からの切断及び揮発に続いて取り残される固相合成を考慮している。従って、少なくとも一つの試薬が固相支持体に結合している固相合成法が考慮される。反応の多数は固相−結合試薬上で行なわれ、固相−結合反応生成物を形成し、反応生成物が固相支持体から切断され、切断生成物を形成する。このその他の点では標準的である本合成法における改良は、固相支持体が反応して、蒸留のような揮発によって切断産物から分離される揮発性化合物を形成することである。所望の切断生成物は好ましくは回収され、固体支持体は揮発のため存在しない。
特に好ましい固体支持体はシリカである。固体支持体からの生成物の切断および揮発性化合物の形成は典型的には単一の工程で行なわれるが、別々の工程を使用することもできる。
【０００５】
本発明は、幾つかの利点と優位性を有している。
ひとつの利点は、従来の固相合成で必要な通常の濾過工程が必要ないという点で、行なわれる反応における単純性である。
考慮されている方法の一つの優位性は、通常の使用済み固体支持体またはフィルター内の所望の生成物の捕捉によって起こり得る所望の生成物の損失が起こらないことである。
別の利点は、従来の固相合成において固体支持体からの切断後に必要とされる固体支持体から生成物を取り出すための通常の最終抽出工程がここでは必要とされないことである。
意図している発明の更なる利点および優位性は以下の開示によって当業者には明らかであろう。
【０００６】
（発明の詳細な記載）
以下に記載するような、ペプチド、ペプチド疑似物、グリコペプチド、オリゴヌクレオチド、有機小分子、または環式生成物の合成における通常の固相合成工程が行なわれる固相合成法が考慮されている。ここでの改良は、固相支持体を揮発によって所望の反応生成物から分離される揮発性物質へ変換することによる、固体支持体からの切断生成物の分離にあり、その結果、使用済み固相支持体からの所望の生成物の通常使用される濾過または抽出分離が不要となる。
従って、固相ペプチド合成を例にとると、側鎖−およびＮ−保護アミノ酸のような少なくとも一つの試薬が固体支持体に結合される。反応の多くはＮ−ｄｅ−保護のようなこの固相−結合試薬上で、他の側鎖−およびＮ−保護アミノ酸とのカップリング、および生じた生成物のＮ−ｄｅ−脱保護による固相−結合反応生成物の形成によって行なわれる。存在する一切の側鎖保護基は除去され、固体支持体と所望の生成物との間の結合は破壊されて切断生成物を生じさせる。揮発性化合物が使用済み固体支持体から形成される。ペプチド合成に関する好ましい実施態様において、ＨＦが存在する一切の側鎖保護基の除去に使用され、固体支持体からの生成物切断および使用済み固体支持体からの揮発性化合物の形成に使用される。
【０００７】
本明細書において、固相支持体上に形成され、それに結合している物質は「反応生成物」と称される。反応生成物はそれに結合した保護基を有していてもよく、あるいはそれらの保護基は除去することもできる。
「切断生成物」とは、固相支持体と反応生成物との間の結合を破壊すると得られる物質である。切断生成物は典型的には保護基を有しないがそうである必要は無い。加えて、切断生成物は典型的にはプロトン化しているが、プロトン化は切断生成物の定義的特徴ではない。
「使用済み固体支持体」とは、支持体から所望の反応生成物を切断した後に残存している材料である。以下で議論するように、固体支持体は好ましくは切断生成物の形成と同時に揮発性化合物に変換される。この好ましい態様では、通常使用済み固体支持体は存在しない。
【０００８】
例えば、多孔性ガラスはペプチド調製のための固体支持体として使用されており、所望の生成物の切断は固相−結合ペプチドとメタノールおよびトリエチルアミンとの反応によって行なわれる［Ｐａｒｒら、１９７４， Ｊｕｓｔｕｓ Ｌｉｅｂｉｇｓ Ａｎｎ． Ｃｈｅｍ．， ｐｐ．６５５−６６６］。Ｐａｒｒらが行なったような、支持体からの化合物の切断を行なう試薬の使用に続く、使用済み固体支持体の所望の化合物からの濾過に比較して、考慮している方法を用いると、これに反して、多孔性ガラスは液状または気体状フッ化水素によって揮発性四フッ化ケイ素［ＳｉＦ４， ｂｐ：−８６℃］に完全に転換することができる。四フッ化ケイ素は加温または真空にして分離することができる。考慮している方法を用いると、反応容器に所望の化合物が残り、多孔性ガラス支持体はＳｉＦ４として揮発している。
【０００９】
この発想は、個々の化合物または化合物混合物の生成、または、個々の化合物、一連の化合物の大量製造、または混合物のコンビナトリアルライブラリーの作成を非常に容易にする［Ｐｌｕｎｋｅｔｔら、１９９５， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．， ６０： ６００６−６００７； Ｈｏｕｇｈｔｅｎ， １９８５， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８２： ５１３１−５１３５； Ｈｏｕｇｈｔｅｎら、１９９１， Ｎａｔｕｒｅ， ３５４： ８４−８６； Ｐｉｎｉｌｌａら、１９９２， ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３： ９０１−９０５； Ｏｓｔｒｅｓｈ ら、１９９４， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９１： １１１３８−１１１４２； Ｄｏｏｌｅｙ ら．， １９９４， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２６６：２０１９−２０２２； および Ｅｉｃｈｌｅｒら、 １９９５， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｔｏｄａｙ １：１７４−１８０］。加えて、化合物の混合物について行なう場合、固相の分離工程（濾過または遠心）の際の化合物の部分損失の危険性が最小化される。
本発明は、そのような揮発可能固体支持体との関連でいわゆる非切断性リンカーの使用を考慮している。非切断性リンカーは切断生成物に結合したまま残るが、支持体からは切断されるリンカーである。この使用は、切断後、それ自体が注目し得る修飾化合物（リンカーに結合した化合物）または必要があれば更に修飾できる化合物につながる。
【００１０】
非切断性リンカーの例は、ペプチドのような物質を調製するための固体支持体としてのアミノ−Ｃ２−Ｃ６−アルキル−移植ガラスビーズを用いて調製できる。種々の孔サイズ、メッシュサイズおよび１グラムのガラスあたりの一級アミンμモル数（μｍｏｌ／ｇ）を有するアミノプロピルガラスビーズの例は、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， ＭＯから、窒素を１〜２ミリモル／ｇ含むと称するアミノプロピルシリカゲルとして商業的に入手可能である。
【００１１】
従って、アミノプロピル−移植ガラスビーズを使用して固体支持体結合ペプチドを形成し、続いてＨＦで処理することは、Ｃ−末端トリフルオロシリルプロピルアミド基（−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＳｉＦ３）を有するペプチドを提供する。トリフルオロシリルプロピルアミド基は容易に加水分解して、対応するケイ酸基［−ＣＯ−ＮＨ− ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓｉ（ＯＨ）３］を生じる。この化合物は、−Ｓｉ（ＯＨ）３を介した部分的または完全な重合化の後、注目しているペプチドに対する抗体の調製における免疫感作のためのコンジュゲートとして使用することができる。更に、そのような物質は注目しているペプチドまたは化合物に対して生成されたポリクローナル抗体のアフィニティー精製のために有用であり得る。ケイ素原子はそのような加水分解後も−Ｓｉ（ＯＨ）２Ｆ基または−Ｓｉ（ＯＨ）Ｆ２基として存在することもあり、これも重合化または他の反応に使用し得る。
【００１２】
アミノプロピル基に加えて、他の連結基も考慮される。例えば、Ｈｕｌｓ Ａｍｅｒｉｃａ， Ｉｎｃ．， Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ， ＮＪから入手可能な３−メルカプトプロピルトリメトキシシラン［ＨＳ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓｉ（ＯＣＨ３）３］は、多孔性ガラスビーズとカップリング可能であり、３−メルカプトプロピル−移植ガラス（チオレートガラス）を生じる。チオレートガラスとビス−Ｎ−ＢＯＣ−２−アミノエチルジスルフィドとの反応は脱保護の後に一級アミン−末端化ジスルフィドを生じる。一級アミンは通常の固相合成におけるペプチド合成に使用することができる。合成が終了したならば、反応生成物−結合ガラスの還元試薬による処理、および、次のＨＦ処理はＣ−末端アミドエチルメルカプト基を有するペプチドおよび固体支持体の揮発性残余物を生じる。アミドエチルメルカプト−末端化ペプチドは、予めｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドキシスクシンイミドエステル（ＩＣＮ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ．， Ｃｏｓｔａ Ｍｅｓａ， ＣＡ）またはスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ， Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｒｏｃｋｆｏｒｄ， ＩＬ）と反応させた抗原性担体分子と容易に反応させることができ、免疫原性コンジュゲートを形成させることができる。
【００１３】
ジスルフィド含有ＢＯＣ−保護連結基前駆体は標準的な技法によって調製することができる。例えば、２−アミノエチルジスルフィドは２分子の２−（ｔ−ブトキシカルボニル−オキシルミノ）−２−フェニルアセトニトリルまたはＮ−（ｔ−ブトキシ−カルボニルオキシ）フタルイミドまたは類似の試薬と反応させることができ、ビス−Ｎ−ＢＯＣ−２−アミノエチルジスルフィドを生じる。
いくつかの還元試薬はジスルフィド結合を破壊するために有用であることがよく知られている。この試薬の例には、水素化ホウ素ナトリウム、２−メルカプトエタノール、２−メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトールおよびジチオエリスリトールが含まれる。２〜３個の炭素原子を有するメルカプタン含有カルボン酸およびそれらのアルカリ金属塩およびアンモニウム塩も有用である。これらの試薬には、チオグリコール酸、チオ乳酸および３−メルカプトプロピオン酸が含まれる。塩の例には、チオグリコール酸ナトリウム、チオ乳酸カリウム、３−メルカプトプロピオン酸アンモニウムおよび（２−ヒドロキシエチル）−チオグリコール酸アンモニウムが含まれる。
【００１４】
切断生成物および固体支持体の両方から分離する切断性リンカーの使用も考慮されている。一つの切断性リンカーのグループはベンジル基及びケイ素を含む。特異的試薬で処理すると、そのような切断性リンカーは気体または、種々の有用な温度および圧力下で容易に揮発することのできる液体形態に転換することができる。そのような連結基は従って切断可能であって、ＨＦと固体支持体の反応に際して揮発性化合物を形成する。
例えば、Ｃｌ−ＣＨ２Ｃ６Ｈ４−（ＣＨ２）３−５−ＳｉＣｌ３， Ｃｌ−ＣＨ２Ｃ６Ｈ４−（ＣＨ２）３−５−Ｓｉ（ＣＨ３）Ｃｌ２， Ｃｌ−ＣＨ２Ｃ６Ｈ４−（ＣＨ２）３−５−Ｓｉ（ＣＨ３）２Ｃｌ， Ｃｌ−ＣＨ２Ｃ６Ｈ４−ＳｉＣｌ３および Ｃｌ−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４−Ｓｉ（ＯＣＨ３）３のようなリンカーはガラスビーズと（またはＳｉＯ２ベースのどんな化合物とでも）反応させることができ、α−クロロベンジルＣ３−Ｃ５−アルキル−移植ガラスビーズまたは、α−クロロベンジル−移植ガラスビーズをそれぞれ形成し、これらは支持体と１以上のシロキサン結合を含んでいる。α−クロロベンジルＣ３−Ｃ５−アルキルクロロシランおよびα−クロロベンジルクロロ−またはメトキシシランの例は、Ｈｕｌｓ Ａｍｅｒｉｃａ， Ｉｎｃ．， Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ， ＮＪから入手可能である。この移植ガラス支持体は次にクロロメチル基を介して保護されたアミノ酸、アミン、アルコールその他の広範囲の化合物と反応させることができ、ベンジルエーテル基を生じる。ｎ＝１であって１個のメチル基が環とケイ素原子との間に存在する場合、このリンカーは気体状または液体状フッ化水素処理により揮発性パラ（トリフルオロシリルメチル）ベンジルフルオリド（Ｆ−ＣＨ２Ｃ６Ｈ４−ＣＨ２−ＳｉＦ３）に転換することができる。
【００１５】
多孔性ガラスまたは他のシリカベースの固体支持体を例として使用したが、広範囲の重合性および／または他の固体材料を同様なやり方で使用することができることは考慮されている。このように、所望の固相合成された化合物はそれらの固相から切断され、一方、使用済み固体支持体は完全に分解されて揮発し、合成工程全体の明瞭な単純化を与える。
多数の例の一つとして、本発明は式Ａ（式中、ｎは１から１００，０００よりも大きく、Ｘはエステル、アミド、ウレタン、尿素、アミンまたは他の結合によって、または１，３，５−トリヒドロキシメチルベンゼンのような架橋剤を含む類似のポリマーによって支持体に結合している反応生成物）で表されるポリ（ベンジルエーテル）のような固相ポリマーの使用を考慮している。
【００１６】
【化２】
0003607200.tif 000002
式Ａ
【００１７】
強酸または酢酸パラジウム存在下の水素またはパラジウム金属水素触媒のような一群の還元剤によって切断すると、所望の化合物Ｘとポリマーの間の結合が切断されるだけでなく、固相ポリマー自体を形成する結合も切断される。切断試薬としてのフッ化水素の使用は１次生成物として式Ｂで表される揮発性化合物を生じる。
【００１８】
【化３】
0003607200.tif 000003
式Ｂ
【００１９】
考慮されているポリ（ベンジルエーテル）は良く知られた技法により調製することができる。例えば、１，４−ベンゼンジメタノールとｔ−ブトキシドのような適切な強塩基をａ，ａ’−ジクロロ−ｐ−キシレンのようなジハロトルエンとエチレングリコールジエチルまたはジメチルエーテルのような適切な溶媒中で反応させる。架橋剤は質量パーセントで０〜約１０％、より好ましくは約１〜約５％存在する。重合後、ハロメチル基をフェニル環に追加して反応生成物の結合のための更なる場所を提供することもできる。例えば、クロロメチル基を追加することができ、ポリマーとクロロメチルメチルエーテルとを塩化アルミニウムまたは類似のフリーデルクラフト触媒の存在下で反応させることによりクロロメチル化される。
【００２０】
前述したように、反応生成物は固体支持体から単一の工程で切断されることが好ましい。例えばペプチド合成においてフッ化水素が多孔性シリカ支持体と共に使用される場合、側鎖保護支持体−結合ペプチドへのＨＦの添加は脱保護、支持体からのペプチドの切断および使用済みシリカ支持体の揮発性化合物ＳｉＦ４への転換の全てを単一の工程で起こすことができるが、幾つかの異なる反応がこの単一の工程中に行なわれる。トリフルオロ酢酸が反応に使用される場合のように、側鎖脱保護を別個に行なうことも考慮されている。支持体からの反応生成物切断が、トリエチルアミン及びメタノールの使用、それに続くＨＦとの反応による切断生成物ペプチドおよびＳｉＦ４（次に揮発によって除去される）の形成のように、異なる工程で行なうことも考慮されている。
【００２１】
切断生成物は好ましくは直接回収されるが、更なる使用の前に通常はクロマトグラフ的に精製される。しかしながら、切断生成物を回収せずにあるいは更に精製せずに更に反応させることができることも考慮されている。
以下の実施例は更に説明するために提示されているものであり、本発明を限定するものではない。
【００２２】
実施例１：四フッ化ケイ素存在下におけるペプチドの安定性
ペプチドＪ２１−７（Ｈ−ＮＳＳＳＳＱＦＱＩＨＧＰＲ−ＯＨ；配列番号１）をＭｅｒｒｉｆｉｌｅｄレジン上でＳｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｐｅｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ， １９８５， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８２：５１３１−５１３５）と共に伝統的なペプチド化学（Ｂｏｃ化学）を用いて合成した。次に、ペプチドに対する四フッ化水素の無害性を確認するためにガラスビーズの存在下および非存在下で、フッ化水素によりペプチドを同時に側鎖脱保護しおよびレジンから切断した。この実験のために、商業的に入手可能な移植ガラスビーズの異なる２つの等級のものを使用した（アミノプロピルガラスビーズ、８０−１２０メッシュ、７７μｍｏｌ／ｇおよびアミノプロピルガラスビーズ、２００−４００メッシュ、１５２μｍｏｌ／ｇ、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）。結果を以下の表１に示した。
【００２３】
【表１】
表１．
0003607200.tif 000004
【００２４】
上記の表１に見られるように、ガラスビーズ単独をＨＦで処理した場合には、計量できる残渣は回収できなかった（表１，袋＃Ｍ２およびＭ５）。切断に際する袋の質量損失は正確に袋中のガラスビーズ＋ＨＦ感受性脱保護基の質量に一致した。ガラスビーズ存在下で切断した場合に、質量分析器（ＭＳ）および高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によるペプチドの修飾は観察されなかった（袋Ｍ４およびＭ７に比較した袋Ｍ９）。
【００２５】
実施例２：ガラスビーズ上で合成したペプチドの特徴分析
ペプチドＨ−ＹＧＧＦＬＲ−ＮＨ２（配列番号２）を２つの異なる等級のアミノプロピル移植ガラスビーズ上［アミノプロピルガラスビーズ  ８０−１２０メッシュ、７７μｍｏｌ／ｇ （Ａ）、および、アミノプロピルガラスビーズ  ２００−４００メッシュ、１５２μｍｏｌ／ｇ（Ｂ）］で、伝統的なペプチド化学（実施例１のようなＢｏｃ化学）を用いて、底にフリットフィルター（ｆｒｉｔｔｅｄ ｆｉｌｔｅｒ）を備えた小さな反応容器内で合成した。次にペプチドを液体フッ化水素によって側鎖脱保護および支持体からの切断を同時に行ない、これに伴ってＳｉＦ４が発生した。結果を以下の表２に示した。
【００２６】
【表２】
表２．
0003607200.tif 000005
【００２７】
粗材料のＨＰＬＣ追跡はどちらのロットについても同じピークの存在を示した。ＨＰＬＣで見られた主ピークの質量分光分析は分子量８３１．８５を示した。予想される分子量７１１に対して１２０．８５単位の相違は、最終産物としてのＨ−ＹＧＧＦＬＲ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓｉ（ＯＨ）３の構造の確証となるものであり、末端の−Ｓｉ（ＯＨ）２Ｆおよび−Ｓｉ（ＯＨ）Ｆ２も存在し得るが、トリフルオロシリル基の加水分解が起こったことを示している。
【００２８】
以上により、本発明の真の精神と範囲を逸脱することなく種々の修飾および改変が可能であることが分かるであろう。提示された特定の実施例に関連するいかなる限定も意図しておらず、そのように解してはならない。開示は添付の請求項の範囲内に含まれる、請求項改変によってカバーされることを意図している。
【配列表】
0003607200.tif 000006
0003607200.tif 000007