(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
腹膜透析液であって、浸透圧剤として、
４００乃至９００ダルトンの平均分子量を有する０．２５乃至４．０％（ｗ／ｖ）のポリペプチドと、
グルコースと
を含む腹膜透析液。
【請求項２】
前記液が、
１２０．００乃至１５０．００（ｍＥｑ／Ｌ）のナトリウムと、そして
８０．０乃至１１０．００（ｍＥｑ／Ｌ）の塩素イオンと
を含むものである、請求項１の腹膜透析液。
【請求項３】
請求項１に記載の腹膜透析液であって、浸透圧剤として
０．２５乃至４．０％（ｗ／ｖ）のポリペプチドと、
０．５％乃至４．０％（ｗ／ｖ）のグルコースと、
を含む腹膜浸透液であって、
該液が、ナトリウム、塩素イオン、乳酸塩、重炭酸塩、カルシウムおよびマグネシウムのそれぞれを含むものである、腹膜浸透液。
【請求項４】
前記液が、
０乃至４５．００（ｍＥｑ／Ｌ）の乳酸塩と、
０乃至４５．００（ｍＥｑ／Ｌ）の重炭酸塩と、
０乃至４．００（ｍＥｑ／Ｌ）のカルシウムと、そして
０乃至４．００（ｍＥｑ／Ｌ）のマグネシウムと、
を含むものである、請求項２の腹膜透析液。
【請求項５】
前記液のｐＨが６．０乃至７．４である、請求項１の腹膜透析液。
【請求項６】
腹膜浸透液であって、該腹膜浸透液が浸透圧剤として、
０．２５乃至４．０％（ｗ／ｖ）のポリペプチドであって、該ポリペプチドの分子量平均が４００乃至９００ダルトンである、ポリペプチド、および
０．５％乃至４．０％（ｗ／ｖ）のグルコース
を含む、腹膜浸透液。
【請求項７】
前記ポリペプチドが合成ペプチドである、請求項１の腹膜透析液。
【請求項８】
前記合成ペプチドが２乃至１５アミノ酸長のものである、請求項７の腹膜透析液。
【請求項９】
前記合成ペプチドが４乃至１０アミノ酸長のものである、請求項７の腹膜透析液。
【請求項１０】
浸透圧的に活性な剤としてポリペプチド混合物を浸透圧的に有効な量に含む腹膜透析液であって、該ポリペプチド混合物が、
０．１０％以下の、１２００より大きい分子量を有するポリペプチドと、
２５％以下の、４００より小さい分子量を有するポリペプチドとを含み、そして
該ポリペプチド混合物の分子量平均が４００乃至９００ダルトンの範囲内にあるものである、腹膜透析液。
【請求項１１】
前記ポリペプチドが、必須アミノ酸として４０％以上を含むものである、請求項１０の腹膜透析液。
【請求項１２】
前記液が、５ｐｐｍ未満の総重金属を供給するものである、請求項１０の腹膜透析液。
【請求項１３】
前記液が、５００ｐｐｂ未満のアルミニウムを供給するものである、請求項１０の腹膜透析液。
【請求項１４】
前記液中の前記ポリペプチドが、５０ｍｇ／ｇ未満のナトリウムを供給するものである、請求項１０の腹膜透析液。
【請求項１５】
前記液中の前記ポリペプチドが、１０ｍｇ／ｇ未満の塩素イオンを供給するものである、請求項１０の腹膜透析液。
【請求項１６】
前記液中の前記ポリペプチドが、０．２ｍｇ／ｇ未満のカリウムを供給するものである、請求項１０の腹膜透析液。
【請求項１７】
前記液中の前記ポリペプチドが、１ｍｇ／ｇ未満のマグネシウムを供給するものである、請求項１０の腹膜透析液。
【請求項１８】
前記液中の前記ポリペプチドが、１ｍｇ／ｇ未満のカルシウムを供給するものである、請求項１０の腹膜透析液。
【請求項１９】
前記液中の前記ポリペプチドが、１ｍｇ／ｇ未満のリンを供給するものである、請求項１０の腹膜透析液。
【請求項２０】
前記液中の前記ポリペプチドが、５ｍｇ／ｇ未満の乳糖を供給するものである、請求項１０の腹膜透析液。
【請求項２１】
追加の浸透圧剤を含む、請求項１０の腹膜透析液。
【請求項２２】
前記液が浸透圧剤としてグルコースを含むものである、請求項１０の腹膜透析液。
【請求項２３】
前記ポリペプチドが前記液の０．２５乃至４．０％（ｗ／ｖ）を構成するものである、請求項１０の腹膜透析液。
【請求項２４】
前記液のｐＨが６．０乃至７．４である、請求項１０の腹膜透析液。
【請求項２５】
前記ポリペプチドが合成ポリペプチドである、請求項１０の腹膜透析液。
【請求項２６】
前記合成ペプチドが２乃至１５アミノ酸長のものである、請求項２５の腹膜透析液。
【請求項２７】
前記合成ペプチドが４乃至１０アミノ酸長のものである、請求項２５の腹膜透析液。
【請求項２８】
患者への注入の前に混合されるよう設計された２部分よりなる腹膜透析液であって、
１．０乃至８％（ｗ／ｖ）のグルコースを含有し且つ４．０乃至５．５のｐＨを有する、第１の構造内に収容された第１の部分と、
０．５乃至８．０％（ｗ／ｖ）のポリペプチドを含有し且つ６．０乃至７．５のｐＨを有する、第２の構造内に収容された第２の部分と、を含み、
該ポリペプチドの分子量平均が４００乃至９００ダルトンであり、そして
該第１の部分と該第２の部分とが混合されたとき下記：
１２０乃至１５０（ｍＥｑ／Ｌ）のナトリウム、
８０乃至１１０．００（ｍＥｑ／Ｌ）の塩素イオン、
０．０乃至５．０（ｍＥｑ／Ｌ）の乳酸塩、
０．０乃至４５．０（ｍＥｑ／Ｌ）の重炭酸塩、
０．０乃至４．０（ｍＥｑ／Ｌ）のカルシウム、及び
０．０乃至４．０（ｍＥｑ／Ｌ）のマグネシウム
が提供されるよう、該成分の十分量を該第１又は第２の構造内のいずれかに含む、腹膜透析液。
【請求項２９】
前記第１及び第２の構造が、単一の容器の２つの別個のチャンバーである、請求項２８の２部分よりなる腹膜透析液。
【請求項３０】
前記第１の部分と前記第２の部分との混合物を含む、得られる溶液のｐＨが、６．０乃至７．４である、請求項２８の２部分よりなる腹膜透析液。
【請求項３１】
前記ポリペプチドが、
０．１０％以下の、１２００より大きい分子量を有するポリペプチドと、
２５％以下の、４００より小さい分子量を有するポリペプチドとを含み、そして
該ポリペプチドの分子量平均が４００乃至９００ダルトンの範囲内にあるものである、請求項２８の２部分よりなる腹膜透析液。
【請求項３２】
前記ポリペプチドが合成ポリペプチドを含むものである、請求項２８の２部分よりなる腹膜透析液。
【請求項３３】
前記合成ポリペプチドが２乃至１５アミノ酸長のものである、請求項２８の２部分よりなる腹膜透析液。
【請求項３４】
４乃至１０のアミノ酸長の合成ポリペプチドとグルコースとを浸透圧剤として含み、該ポリペプチドの分子量平均が４００乃至９００ダルトンである、腹膜透析液。
【請求項３５】
前記合成ポリペプチドが前記溶液の０．２５％乃至４．０％（ｗ／ｖ）を構成するものである、請求項３４の腹膜透析液。
【請求項３６】
前記合成ポリペプチドが必須アミノ酸と非必須アミノ酸と含むものである、請求項３４の腹膜透析液。
【請求項３７】
前記グルコースが前記溶液の０．５乃至４．０％（ｗ／ｖ）を構成するものである、請求項３４の腹膜透析液。
【請求項３８】
前記合成ポリペプチドが、
０．１０％以下の、１２００より大きい分子量を有するポリペプチドと、
２５％以下の、４００より小さい分子量を有するポリペプチドとを含み、そして
該ポリペプチドの分子量平均が４００乃至９００ダルトンの範囲内にあるものである、請求項３４の腹膜透析液。
【請求項３９】
少なくとも２つの浸透圧剤の１つとして、下記のアミノ酸組成：
0003676362.tif 000014
を有するポリペプチドを含み、そしてポリペプチドの１ｇ当たり５０乃至１５０ｍｇのバリン及び１５乃至３０ｍｇのトリプトファンを含むものであり、
該ポリペプチドの分子量平均が４００乃至９００ダルトンである、腹膜透析液であって、
該液は、浸透圧剤としてグルコースを含むものである、腹膜透析液。
【請求項４０】
グルコースに対するポリペプチドの比率が重量で０．３乃至２である、請求項３９の腹膜透析液。
【請求項４１】
０．２５乃至４．０％（ｗ／ｖ）のポリペプチドを含み、該ポリペプチドの分子量平均が４００乃至９００ダルトンである、腹腔内薬物放出溶液であって、
該液は、浸透圧剤としてグルコースを含むものである、腹腔内薬物放出溶液。
【請求項４２】
前記ポリペプチドが、
０．１０％以下の、１２００より大きい分子量を有するポリペプチドと、
２５％以下の、４００より小さい分子量を有するポリペプチドとを含む、請求項４１の腹腔内薬物放出溶液。
【請求項４３】
腹膜透析液であって、浸透圧剤として、
４００乃至９００ダルトンの平均分子量を有する合成ポリペプチド混合物
を含み、該浸透圧剤は、グルコースを含む、腹膜浸透液。
【請求項４４】
前記液が、
１２０．００乃至１５０．００（ｍＥｑ／Ｌ）のナトリウムと、
８０．０乃至１１０．０（ｍＥｑ／Ｌ）の塩素イオンと
を含む、請求項４３に記載の腹膜浸透液。
【請求項４５】
前記液が、ナトリウム、塩素イオン、乳酸塩、重炭酸塩、カルシウム及びマグネシウムのそれぞれを含む、請求項４３に記載の腹膜浸透液。
【請求項４６】
前記液が、
０乃至４５．００（ｍＥｑ／Ｌ）の乳酸塩、
０乃至４５．００（ｍＥｑ／Ｌ）の重炭酸塩、
０乃至４５．００（ｍＥｑ／Ｌ）のカルシウム、および
０乃至４５．００（ｍＥｑ／Ｌ）のマグネシウム
を含む、請求項４３に記載の腹膜浸透液。
【請求項４７】
前記液のｐＨが、６．０乃至７．４である、請求項４３に記載の腹膜透析液。
【請求項４８】
前記合成ペプチドが、２乃至１５アミノ酸長である、請求項４３に記載の腹膜透析液。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、一般的には腹膜透析に関する。より具体的には、本発明は、ポリペプチドを含有する改良された腹膜透析液に関する。
腎臓がもはや十分機能しない点にまで腎機能が低下している患者を支持するために、透析を使用することが知られている。２つの主要な透析方法が利用されている。すなわち、血液透析及び腹膜透析である。
血液透析においては、患者の血液を人工腎臓透析機器に通す。機器内の膜が、血液を清浄化するための人工腎臓として働く。それは特別の機器類を必要とする体外処置であるため、血液透析には、一定の固有の欠点がある。
血液透析に関連したこの欠点を克服するために、腹膜透析が開発された。腹膜透析は、半透膜として患者自身の腹膜を利用する。腹膜は、多数の血管及び毛細血管のために、天然の半透膜として働くことのできる、体腔の膜状の内張りである。
腹膜透析においては、透析液は、カテーテルを利用して腹腔内へ導入される。十分な時間の後、透析液と血液との間での溶質の交換が達成される。液体の除去は、血液からの水の流出を許容するよう、血液から透析液へ向かう適当な浸透圧勾配を与えることによって達成される。これは適正な酸−塩基、電解質及び液体のバランスが血液に戻ることを許容し、そして透析液は、該カテーテルを通して体腔から単に排液される。
腹膜透析には多くの利点があるが、直面している困難の一つは、適当な浸透圧剤を含有した透析液を提供することである。必要なのは、十分な浸透圧勾配が達成されることである。浸透圧剤は、腹膜を横切って透析液中へと水及び毒性物質の輸送を起こすに必要な浸透圧勾配を維持するために、透析液中において使用されている。
適当な浸透圧剤は、少なくとも２つの基準を満たすことが必要である。第１に、それは、無毒且つ実質的に生物学上不活性である必要がある。しかしながら、該剤は、代謝可能でなければならない。加えて、該剤は、腹膜を迅速に横切って血中へ移行してはならない。これら両基準を満たすことにより、これは、最大の限外濾過勾配の維持を許容し、そしてまた毒性や血液中の望ましくない物質の蓄積の防止もするであろう。
現在用いられている物質のいずれも、透析液中の浸透圧剤としての該基準を完全には満足しない。現在、最も広く用いられている浸透圧剤はグルコースである。グルコースは相当に安全で且つもし血中に入っても容易に代謝される。しかしながら、グルコースに関する問題の一つは、それが透析液から血液に容易に取り込まれることである。グルコースが腹膜を非常に速やかに横切るため、浸透圧勾配は、注入の２乃至３時間以内に消耗されてしまう。これは、限外濾過の方向の逆転を引き起こし得、そして、交換のために許容された時間の最後の頃には、水が透析液から再吸収されることを引き起こす。
グルコースに関する別の懸念の一つは、それが血液に非常に迅速に取り込まれるため、それが患者のエネルギー摂取のうちの大きな割合を占め得ることである。このことは非糖尿病患者に有意な影響を与えない一方、耐糖能が既に損なわれている患者には、重大な代謝上の負荷となり得る。グルコースはまた、高血糖症及び肥満症に関する問題を引起し得る。
更には、グルコースに関する一つの問題は、透析液の調製に関するものである。典型的には、透析液は、他の医療製品と同様に、加熱滅菌される。残念なことに、生理学的ｐＨにおけるグルコースの加熱滅菌は、グルコースのカラメル化を引き起こす。この問題を埋め合わせるため、透析液のｐＨを５〜5.5の範囲内に調整することが知られている。この低いｐＨでは、グルコースは加熱されたときにカラメル化しない。しかしながら、この低いｐＨは、透析液の流入に際して幾らかの患者によって経験される痛みの原因であり得、そして他の問題を引き起こし得、例えば腹膜のホスト防衛に影響を与えうると信じられている。
上記の懸念の幾つかを扱うため、グルコースの代替物として多くの物質が提案されてきた。しかしながら、それら提案された何れの材料にも、グルコースの十分な代替物であると証明されたものはなかった。
例えば、デキストラン、ポリアニオン、及びグルコースポリマーが、グルコースの代替物として提案されてきた。それらの大きな分子量のため、腹膜を横切って血中へ移行するそれらの拡散は、最小限になるであろうと信じられている。しかし、これらの材料の単位質量当たりの低い浸透圧活性は、これらが有効であるためには透析液中におけるこれらの材料の濃度(w/v)が一層高いことを必要にする。加えて、遅い代謝を伴った、（主としてリンパ系を介した）これらの濃度の全身吸収は、これらの剤の長期安全性について重大な懸念を引き起こす。
小さい分子量の物質もまた開発されてきた。これらの物質には、グリセロール、ソルビトール、キシリトール、及び果糖が含まれる。しかしながら、これらの物質は、グルコースに優る何ら実質的な利点を与えない一方で、多くの安全上の懸念を引き起こすと信じられている。
アミノ酸は、腹膜透析液におけるグルコースの魅力ある代替物のように思われる。短期の研究が、それらが十分耐え得るものであることを示している。しかしながら、それらの小さな分子量のために、それらは腹膜を介して極めて素早く輸送され、浸透圧勾配の急速な喪失をもたらす。加えて、アミノ酸の急速な取込みは、かなりの窒素負荷につながり、アミノ酸の使用を１日当たり１又は２回の交換に限定する。
最近、ポリペプチドが、浸透圧剤の有力な一群として開発されてきた。ポリペプチドは、腹膜を横切る輸送が遅く従って透析液と血液との間の浸透圧勾配をより長く維持するであろう、と信じられている。
Gilchrist等の米国特許第4,906,616号及びKleinのヨーロッパ特許第0218900号は、腹膜透析液における浸透圧剤としてポリペプチドを提示している。これらの特許の各々は、ポリペプチドによるグルコースの置換を論じており、ポリペプチドは、開示された処方において利用されている唯一の浸透圧剤である。
Gilchrist等においては、ポリペプチドの大部分は、1100又はより大きな分子量を有している。実際、該ペプチドの約50％は、18個を超えるアミノ酸残基を有している。該ポリペプチドは、使用されている唯一の浸透圧剤である（例えば、第４欄第33〜35行を参照のこと）。
Kleinにおいては、該ポリペプチドは、高品質のタンパク質の酵素加水分解より得られた、300乃至2000ダルトンの間の、主張されている実質的部分を含む、比較的小さい分子量のペプチドの混合物である。該ポリペプチドは、使用されている唯一の浸透圧剤である。更に、ポリペプチドの該混合物が150乃至1500の重量等量内に入り且つ該ポリペプチドの分子量が300乃至2000ダルトンの間にある限り、該ポリペプチド混合物は、Kleinの必要には十分である。
本出願中、以下の実施例において詳細に提示されているように、Klein及びGilchrist等によって提案されたポリペプチド溶液は、臨床的有用性が非常に限定されている。より大きいサイズではあるが、これらのポリペプチド組成物は、アミノ酸のように腹膜から極めて素早く吸収される。これは尿毒症の症状をもたらす。加えて、これらの材料は、アレルギー反応を生ずる潜在的可能性を有するポリペプチドを含む。これは、使用されている該ポリペプチドのサイズのためである。
従って、改良された腹膜透析液への需要がある。
発明の要約
本発明は、改良された透析液を提供する。該改良された透析液は、グルコースのような追加の浸透圧剤に加えて浸透圧剤として特別のポリペプチドの使用を提供する。
この目的のため、本発明は、一具体例においては、約0.25乃至約4.0％(w/v)のポリペプチドと約0.5％乃至約4.0％(w/v)のグルコースとを浸透圧剤として含んでなる腹膜透析液を提供する。
一具体例においては、該腹膜透析液は、約120.00乃至150.00(mEq/L)のナトリウム、約80.0乃至約110.00(mEq/L)の塩素イオン、０乃至約45.00(mEq/L)の乳酸塩、０乃至約45.00(mEq/L)の重炭酸塩、０乃至約4.00(mEq/L)のカルシウム、及び０乃至約4.00(mEq/L)のマグネシウムを含む。好ましくは、該溶液のｐＨは、約6.0乃至約7.4である。
一具体例においては、該ポリペプチドは合成のペプチドである。
一具体例においては、本発明は、浸透圧的に有効な量の浸透圧的に活性な剤としてポリペプチド混合物を含んでなる腹膜透析液を提供する。該ポリペプチド混合物は、約0.10％以下の、1200より大きい分子量を有するポリペプチド、約25％以下の、400未満の分子量を有するポリペプチドを含んでなり、そしてポリペプチド混合物の平均分子量が約400乃至900ダルトンの範囲内のものである。
一具体例においては、該腹膜透析液は、約５ｐｐｍ未満の総重金属、及び約500ｐｐｂ未満のアルミニウムを与える。加えて、該ペプチドは、約50mg/g未満のナトリウム、約10mg/g未満の塩素イオン、約0.2mg/g未満のカリウム、約１mg/g未満のマグネシウム、約１mg/g未満のカルシウム、約１mg/g未満のリン、及び約５mg/g未満の乳糖を含む必要がある。
一具体例においては、患者への注入前に混合されるよう設計された、２部分よりなる腹膜透析液が提供される。該２部分よりなる溶液は、約1.0％乃至約８％(w/v)のグルコースを含み約4.0乃至約5.5のｐＨを有する、第１の構造内に収容された第１の部分と、約0.5乃至約8.0％(w/v)のポリペプチドを含み約6.0乃至約7.5のｐＨを有する、第２の構造内に収容された第２の部分とを含んでなり、且つ、該第１又は第２の構造の何れかの中に、０乃至約300(mEq/L)のナトリウム、0.0乃至約250.00(mEq/L)の塩素イオン、0.0乃至約100.0(mEq/L)の乳酸塩、0.0乃至約100.0(mEq/L)の重炭酸塩、0.0乃至約10.0(mEq/L)のカルシウム、及び0.0乃至約10.0(mEq/L)のマグネシウムを含む。
本発明はまた、栄養的に有効な溶液を提供するアミノ酸組成を有するポリペプチドの使用をも提供する。
一具体例においては、本発明はまた、腹膜へ薬物を放出するための溶液をも提供する。
本発明の一利点は、改良された腹膜透析液を提供することである。
更には、本発明の一利点は、腹膜透析液において使用するための改良された浸透圧剤を提供することである。
本発明の更なる一利点は、改良された腹膜透析液を作るための合成のポリペプチドの使用を提供することである。
更には、本発明の一利点は、注入の痛みを減らすのに役立つよう、生理学的ｐＨにある腹膜透析液つくり出す能力を提供することである。
更には、本発明の一利点は、マクロファージの貪食機能を回復するよう、生理学的ｐＨと共に、低下された浸透圧を有することである。加えて、本発明の一利点は、該溶液中におけるグルコースの使用、及びグルコースの分解産物を減少させるためのｐＨ4.0乃至5.5におけるその滅菌を許容することである。
尚も更には、本発明の一利点は、限外濾過プロフィールを改善するために、一層高い重量平均分子量の浸透圧剤を提供することである。
本発明の別の一の利点は、腎臓患者の栄養状態を改善するために、透析液を通じてバランスのとれたポリペプチド（タンパク質源）及びグルコース（エネルギー源）の補充を提供することである。
更には、本発明の一利点は、注入液量を増加させ、それによって浸透圧剤のモル濃度の減少の結果としての小さい溶質クリアランスを高める能力を提供することである。
更には、本発明の一利点は、腹腔内薬物放出のための溶液を提供することである。
本発明の更なる特徴及び利点は、現在好ましい具体例についての詳細な記述中に記述されており、およびこれと図面とから明らかであろう。
図面の簡単な記述
図１〜３は、実施例１において試験したペプチド混合物についての分子量分布をグラフにより図解する。
図４は、実施例１についての液量プロフィールをグラフにより図解する。
図５は、実施例１のグルコース及びペプチドの吸収をグラフにより図解する。
現在好ましい具体例についての詳細な記述
本発明は、腹膜透析及び腹腔内薬物放出において使用するための、十分に規定された特性（例えば、分子量分布、アミノ酸組成、純度等）を有するポリペプチドを含有する、改良された腹膜透析液を提供する。該ポリペプチドは、好ましくは、グルコース、ポリグルコース、アミノ、酸及びグリセロールのような、別の浸透圧剤と共に使用される。
以下に詳細に提示されているように、十分に規定されたポリペプチドを選択しそしてこれを追加の浸透圧剤と共に利用することにより、ポリペプチド単独及びグルコース単独の場合の欠点を、克服することができる。この目的のため、好ましくは、約0.25％乃至約４％(w/v)のポリペプチド及び約0.5％乃至約４％(w/v)のグルコースが、本発明に従って浸透圧剤として使用される。
一具体例においては、該ポリペプチドは、高生物値タンパク質の酵素又は酸加水分解により得られる。これらのタンパク質は、ミルク、卵、ジャガイモ又は大豆から得ることができる。該ポリペプチドは、酵素的若しくは化学的加水分解、透析、限外濾過、イオン交換、溶媒分画、クロマトグラフィー、又は他の関連した分離技術を用いて、調製することができる。
例えば、乳清は、トリプシンのような蛋白分解酵素で加水分解することができる。本発明の、以下に提示されている好ましい分子量画分が、次いで限外濾過及び透析を用いて分離される。イオン交換吸収を用いることによって、イオン及び重金属は、除去することができる。そのようなポリペプチドを調製するために、当該分野で知られているような種々の方法を使用することができる。
該ポリペプチドは、一具体例においては、合成ポリペプチドであることができる。合成ポリペプチドの使用は、タンパク質の加水分解により得られるポリペプチドに比して一層良好に規定された特性を有し、そして不純物の一層少ないペプチドを提供することを許容する。
本発明の溶液を判定するために、Klein溶液を試験した。具体的には、免疫原性及び限外濾過及び吸収について評価した。従って、以下の実験が行われた。
実施例１
この試験の目的は、透析液におけるグルコースに代わる浸透圧剤としての、重量平均分子量及び数平均分子量において相違する、Kleinにおいて開示されているペプチドを評価することである。これらの実験は、腎臓無麻酔ラットモデルにおいて実施した。
以下のペプチド粉末はE. Klein（University of Louisville）より受け取った。
0003676362.tif 000002
上記調製物の各々における高レベルのエンドトキシン（＞500EU/ml）の存在のため、「清浄化」操作が次の通りに実施された。すなわち、各ペプチド調製物の７％溶液を、黒い粒子を除去するために遠心した。次いで、エンドトキシンを除去するために、各溶液を0.2μｍフィルターを通過させて、予め洗浄したFresenius F-60透析装置内へ入れた。ペプチド溶液の一回の通過の後、該透析装置を滅菌水ですすいだ。該ペプチド溶液を、脱パイロージェンした皿に移して凍結乾燥した。これら３つのペプチド調製物を、エンドトキシンについて再分析した。結果は、発熱性応答レベルである0.5EU/mlより低いことを示した。
該ペプチドからのエンドトキシンの除去の後、分子量及び平均プロフィールは、F-60透析装置の通過の後、高分子量ペプチドの喪失のため変化していた。最終的な結果は、以下に示されている。
0003676362.tif 000003
各ペプチド混合物の分子量分布は、図１〜３に示されている。
表１に要約されているように、ペプチド粉末を、Dianeal▲Ｒ▼PD-2の電解質組成に合致するよう処方した。
0003676362.tif 000004
ラットは、Metafaneの吸入により麻酔した。ラットの腹部は毛を剃った。透析液（90ｍｌ／ｋｇ）を、23Ｇ針を用いて腹腔内注射した。該透析液は、１μＣｉの14Ｃデキストランを希釈マーカーとして含有した。
ラットは、回復するに任せ、自由に水を摂取させた。
透析液サンプル（0.2ｍｌ）が、滞留時間中、0.5、１、２及び４時間において採取された。
４時間の滞留時間の最後に、尾動脈を介して１ｍｌの血液サンプルが採取され、血漿が分離されて凍結された。ラットは、溶液の尾静脈注射により安楽死させた。
正中線切開により腹腔を開き、透析液を収集して液量を記録した。
この実験操作は、下記の通りに実施した。
ラット（各群ｎ＝６）に、次の透析液の一つをランダムに投与した：1.5％グルコースDIANEAL▲Ｒ▼、2.5％グルコースDIANEAL▲Ｒ▼、ペプチドRun132、ペプチドRun138、又はペプチドRun140。
分析：  14Ｃデキストラン―全ての透析液サンプル。全ての透析サンプル及び全てのｔ＝４時間の血漿サンプルの浸透圧。各ペプチドRunを含有する全ての透析サンプル中の、前及び４時間のアミノ酸。ペプチド群の幾つかのラットについての0.5、１及び２時間のRunサンプル。
グルコース―DIANEAL群における全ての前及び４時間透析サンプル。
該実験の液量プロフィールは、図４に示されている。ｔ＝０と居住の最後との間の液量は、14Ｃデキストランの消失について一定の速度を仮定して、14Ｃデキストラン濃度に基づいている。
透析液サンプルは、遊離のアミノ酸を生成するための加水分解の後、アミノ酸について分析された。これらの分析は、グルコースに比較して、交換の間に吸収されたペプチドのパーセントを算出するために用いられた。結果は、図５に示されている。
これらの実験は、ペプチドを含有する透析液が、グルコースについて見られるのと類似であるがしかし一層低い初期浸透圧を有する限外濾過プロフィールを生み出すことができることを実証している。
加えて、これらの実験は、４時間におけるペプチドの腹膜吸収が約50〜60％であることを実証している。
実施例２
Dianeal▲Ｒ▼中2.5％グルコース(w/v)、Dianeal▲Ｒ▼中1.5％(w/v)グルコース中1.0％乳清タンパク質加水分解物（Kleinに従った）(w/v)、及びDianeal▲Ｒ▼中1.5％(w/v)グルコース中3.0％乳清タンパク質加水分解物（Kleinに従った）(w/v)を用いて、刺激性スクリーニングを実施した。各材料につき２匹の動物について、２つの部位が選ばれて毛を剃られた。各動物は、それぞれの無希釈の材料0.105ｍＬの２つの皮内注射を受けた。
陽性対照刺激性スクリーニング試験もまた、同じ仕方で、0.9％滅菌食塩水中１％w/v濃度のスルファチアゾールによって実施された。全ての部位は、注射後24及び48時間における紅斑及び浮腫について採点された。３つの試験材料全てが無刺激性であることが示されたことから、それらは、無希釈で、最終試験の８日目及び22日目（惹起相）に投与された。陽性対照動物は、８日目の皮内注射で滅菌水中スルファチアゾールの５％w/v懸濁液を投与され、22日目の惹起操作としては、0.9％の滅菌食塩水中１％w/v懸濁液として投与された。
試験は、試験又は陽性対照材料当たり、10匹の試験動物及び４匹の無処置対照動物を用いて行った。１日目に、各試験群の動物は、滅菌水中１：１の比率のFreund's完全アジュバント、それぞれの試験材料、及びFreund's完全アジュバント中１：１の比率のそれぞれの試験材料の、0.05ｍＬの皮内注射を２つ受けた。
陽性対照群については、動物は、滅菌水中１：１の比率のFreund's完全アジュバント、滅菌水中スルファチアゾールの５％w/v懸濁液、及びFreund's完全アジュバント中スルファチアゾールの５％w/v懸濁液、の0.05ｍＬの皮内注射を２つ受けた。
７日目に、３つの試験群及び陽性対照群の全ての動物が、流動パラフィン中の10％ｗ／ｗラウリル硫酸ナトリウムの、１日目の皮内注射の毛を剃った領域への局所適用により前処置を受けた。８日目に、最初の皮内注射の直ぐ後ろに位置する２か所の別個の領域に、それぞれの試験又は陽性対照材料が、0.05ｍＬの量にて皮内注射された。
全ての試験材料は、無希釈で投与され、陽性対照は、滅菌水中スルファチアゾールの５％w/v懸濁液として投与された。全ての無処置対照動物は、誘導相の間は処置されなかった。
８日目の皮内注射に続く後の２週間は、それぞれ試験及び無処置対照群の動物は、惹起皮内注射を受けた。それぞれの動物の毛を剃った右の脇腹上の一部位へ、それぞれの無希釈の試験材料が、0.05ｍＬの量で皮内注射された。陽性対照動物は、滅菌0.9％食塩水中スルファチアゾールの１％w/v懸濁液で処置された。各部位は、注射後24、48及び72時間に紅斑及び浮腫について検査された。
Dianeal▲Ｒ▼中2.5％グルコース(w/v)で処置された動物においては、惹起時に皮膚反応は観察されなかった。皮膚感作応答は、Dianeal▲Ｒ▼中1.5％のグルコース(w/v)中1.0％及び2.0％の乳清タンパク質加水分解物(w/v)で処置を受けた試験動物、及び陽性対照材料で処置を受けた動物において観察された。それぞれの無処置対照動物においては、皮膚反応は観察されなかった。
得られた結果に基づいて、これらの材料は、以下に掲げたように分類される。
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材料（実施例２）
識  別
これらの材料は、以下のように識別され記述された。
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貯蔵及び保持
試験材料は冷蔵保存した。陽性対照材料は室温で保存した。
試験動物
若い雄性白色モルモット〔Hra:(DH)SPF〕を入手し、温度及び湿度の管理された部屋において網床のステンレススチールケージ内に個別に維持し、Purina Mills, Inc.のCertified Guinea Pig Chow▲Ｒ▼5026及び水への連続的なアクセスを与え、少なくとも７日の馴化期間の間維持した。所定の環境条件からの変動があったならばそれらは記録され、試験結果には影響を与えないものとみなされた。食餌及び水には、試験の結果に干渉し又は影響したような汚染物は存在しないと期待された。
群分け
354乃至562ｇの64匹の健康な、馴化させた雄性白色モルモットが、この試験のためにランダムに選ばれた。それらの動物は、個別に収容され動物番号および対応する耳タッグによって識別された。それらの動物は、次の群に分けられた。
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手順（実施例２）
試験材料調製
試験材料である1.0％WPH及び3.0％WPHは、滅菌ガラスバイアル中に入った状態で供給され、1.5％のグルコースを含んだ100ｍＬのDianeal▲Ｒ▼PD-1によって復元された。混合及び小分けは、無菌技術を用いて、静止した空気条件のフード下において実施した。移し替えセットを用いて、Dianeal▲Ｒ▼バッグポートをスパイクし、その隔壁をアルコールで拭い、該試験材料バイアルに針を挿入した。溶液がバイアルへ流入するのを許容するよう、移し替えセットクランプを開いた。次いでバイアルから針を引抜き、粉末を溶液に溶解させるためにバイアルを回すように振った。この操作は、「無希釈」の試験材料を構成する。2.5％のグルコース溶液は、入手された状態で投与された。
刺激スクリーニング
刺激スクリーニングの目的は、各無希釈の試験材料が無刺激性で誘導及び惹起処置のために使用し得ることを示すことであった。材料当たり２匹の動物の各々の２つの部位が選ばれ毛を剃られた。各動物は、それぞれの無希釈の材料0.05ｍＬの２つの皮内投与を受けた。陽性対照刺激スクリーニングもまた、滅菌0.9％食塩水中１％w/v濃度のスルファチアゾールを用いて同じ仕方で実施した。全ての部位を、紅斑及び浮腫について注射後24及び48時間に採点した。
該刺激スクリーニングより得られた結果に基づいて、材料である2.5％グルコース、1.0％WPH、及び3.0％WPHは、８日目の皮内注射及び22日目の惹起操作のために、無希釈で投与した。陽性対照動物は、８日目の皮内投与のためには滅菌水中スルファチアゾールの５％w/v懸濁液を投与され、22日目の惹起操作のためには0.9％食塩水中の１％w/v懸濁液を投与された。
最終試験−誘導相
皮内注射（１日目）    試験及び陽性対照群の各動物の肩領域にわたる４ｃｍ×６ｃｍの領域が正中線に沿って毛を刈られた。２ｃｍ×４ｃｍの領域の輪郭内に６個の皮内注射（以下のように正中線の各側に１列の３個の注射）が行われた。
部位Ａ及びＢ
第５、７、９、及び11群  −  滅菌水中の１：１の比率のFreund's完全アジュバントの0.05ｍＬ
部位Ｃ及びＤ
第５、７、及び９群  −  それぞれの無希釈の試験材料の0.05ｍＬ
第11群  −  滅菌水中のスルファチアゾールの５％w/v懸濁液の0.05ｍＬ
部位Ｅ及びＦ
群５、７、及び９  −  Freund's完全アジュバント中１：１希釈としてのそれぞれの試験材料のの0.05ｍＬ
群11  −  １：１のFreund's完全アジュバント／水溶液中のスルファチアゾールの５％w/v懸濁液の0.05ｍＬ
ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）前処置（７日目）
最初の皮内注射の１週後に、試験群動物及び陽性対照動物の全ての注射部位が短く剃られ、流動パラフィン中SLSの10％w/vの混合物が、ガラス棒により該皮膚へ擦り込まれた。
皮内注射（８日目）    それぞれの試験及び陽性対照（滅菌水中のスルファチアゾールの５％w/v懸濁液）材料が、最初の皮内注射部位の直ぐ後ろに位置する別個の２つの領域に、0.05ｍＬの量で皮内注射された。
無処置対照動物は、該試験の誘導相の間は処置されなかった。
惹起相
８日目の皮内注射の２週後に、全ての試験及び無処置対照（それまで処置されていない）群は、惹起注射を受けた。全ての試験及び無処置対照群は、それぞれの無希釈の材料によって処置された。陽性対照及び無処置陽性対照動物は、滅菌0.9％食塩水中のスルファチアゾールの１％w/v懸濁液による処置を受けた。以前と同様に剃ることによって、右の脇腹の5.0ｃｍ×5.0ｃｍの領域から毛が除去された。それぞれの試験又は陽性対照材料が、それぞれの各動物の右の脇腹の１つの部位に、0.05ｍＬの液量で皮内注射された。約21時間後、該試験部位を短く剃った。
観  察
惹起注射の24時間後、試験部位は、紅斑及び浮腫について検査された。これらの部位は、如何なる弱い、ゆっくりと発現する反応をも検出するために、注射後48及び72時間に再び検査された。発赤は、アレルギー反応の最小の基準を構成するものであった。強く感作された動物は、硬化した腫脹を伴った明瞭な発赤を呈した。この反応は、次のスケールに従って採点した。
０＝無反応
１＝散在性の弱い発赤
２＝中等度の且つ瀰慢性の発赤
３＝強い発赤及び腫脹
動物は臨床的兆候につき、試験を通して毎日観察された。個々の体重は、処置の開始直前、試験を通して週１回の間隔で、そして実験相の終了の時に記録された。
血液収集
実験の終了時に、第５、７、及び９群の全ての動物を、二酸化炭素で麻酔した。心臓穿刺により約４〜５ｍＬの全血を収集した。
考察（実施例２）
一般的挙動及び外観
全ての群の全ての動物は、試験を通して正常に見えた。試験の第１週の間に52ｇの減少を呈した3.0％WPHで処置された第９群の１匹の試験動物（E17259）、試験の第２週の間に62ｇの減少のあった第９群の別の１匹の動物（E17229）、及び試験第３週の間に76ｇの減少のあった第11群の１匹の陽性対照動物（E17221）を例外として、試験を通して如何なる動物においても、体重増加に対して何ら有意な影響（有意＝前の体重からの10％を超える減少）はなかった。
結論（実施例２）
得られた結果に基づいて、試験された材料は、次の通りに分類されると考えられる。
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上記の実施例（実施例１及び２）は、Klein及び／又はGilchrist等において提示されているようなポリペプチド混合物のみの使用が、腹膜透析液においては臨床上許容できないことを実証した。
Kleinのポリペプチド組成物が2.5％のグルコース溶液に等価な吸収を得るためには、少なくとも5.5％のポリペプチド溶液が必要である。しかしながら、実施例１は、該ポリペプチドの吸収は、少なくとも50％乃至60％であることを実証している。もしもポリペプチド（透析液中少なくとも５％の濃度の）が各交換において使用されるならば、患者は、１日当たり少なくとも200ｇのアミノ酸を摂取することになろう。24時間当たり40ｇを超えるアミノ酸の腹膜吸収は、透析患者に尿毒症を引き起こすということが判明した。
従って、該ポリペプチドの吸収特性のため、好ましくは、Kleinのようなポリペプチド溶液は僅か１乃至２％濃度で使用しなければならないと、判断された。しかしながら、そのような濃度においては、そのポリペプチドは十分な浸透圧剤を提供しない。また、尿毒症の問題を管理するためには低い方の分子量のペプチドの割合を管理する必要がある、ということも判明した。
実施例２は、Kleinのポリペプチドは、免疫原性につき潜在的能力を有することを実証している。その問題は、Kleinのペプチドにおいて1200を超える分子量を有するものの比率が余りに大きいという事実から派生している。
従って、本発明に従えば、ポリペプチドは、0.5乃至４の濃度において使用されるグルコースのような浸透圧剤と共に、0.25乃至４の濃度において使用される。該ポリペプチドは、400乃至900ダルトンの平均分子量を有する。1200より大きい分子量を有するポリペプチドが0.10％を超えてはならないということも、また見いだされた。これは、免疫的応答の危険性を最小限にする。加えて、400より下の分子量を有するポリペプチドが25％を超えてはならない。これは、Kleinにおいて提案された溶液について起こるであろう尿毒症の問題を防止する。
比較的低い分子量のペプチドは容易に吸収されるということを認識しなければならない。１％のポリペプチド溶液については、もしも該溶液が400より下の分子量のポリペプチドを25％を超えて含むならば、40ｇより多くのアミノ酸が患者によって吸収されて尿毒症を引き起こすであろう。従って、本発明によれば、400未満の分子量を有するポリペプチドは、25％又はこれより下に限定される。
ポリペプチドは、タンパク質栄養不良を矯正するために、透析液中に単独で又は栄養補給物質としてのアミノ酸と共に用いられることができる。
好ましくは、一具体例においては、本発明において用いられるポリペプチドは、次のアミノ酸プロフィールを含む。
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この混合物に、ペプチド１ｇ当たり50乃至150ｍｇのバリン及び15乃至30ｍｇのトリプトファンが添加される。この組成は、患者へ、改善された栄養的利益を提供する。
バランスのとれた栄養溶液を提供するために、好ましくは、溶液中におけるグルコースに対するポリペプチドの比率は、重量で0.3乃至２である。
例として、そして限定としてでなく、本透析溶液は、ポリペプチド及びグルコースに加えて：
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を含んでなるものでなければならない。
使用されるペプチドに対して、それらは：
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を含んでなるものでなければならない。
本ポリペプチド透析液は、単一バッグ又は２つの別個の容器内に処方化されることができる。一具体例においては、本ポリペプチドは、追加の浸透圧剤としてのグリセロールと共に、単一のバッグ処方化されることができる。
一具体例においては、本発明は、２つの別個のユニットに収容され次いで使用前に混合されるものである腹膜透析液を提供する。これらのユニットは、２つの別個の容器であることもでき、又はそれらは単一のバッグの２つのチャンバーであることもできる。
例として、そして限定としてでなく、別個のチャンバーに収容された該組成物は、次の通りであることができる。
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好ましくは、チャンバー１にはグルコースのみが収容されている。一具体例においては、乳酸塩は、グルコースと共にチャンバー１に収容されている。
これら２つのチャンバーの内容物は、患者の腹腔内へ注入される前に混合される。組み合わされた溶液は、次の組成を有する。
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先に述べたように、本発明に従えば、合成ペプチドもまた利用することができる。合成ペプチドは、タンパク質の加水分解によって得られるペプチドに比して、一層良好に規定された特性を提供し、且つ、不純物の含有が一層少ない。合成ペプチドは、約２乃至約15アミノ酸長でなければならない。好ましくは、該合成ペプチドは、長さにおいて４乃至約10個のアミノ酸を含んでなる。
本発明によれば、該溶液は、腹腔内薬物放出のために使用することができる。ペプチドの該サイズのために、該液体を腹腔内に保持することができ、こうして、食塩水及びグルコースの場合に経験される速過ぎる吸収という問題を回避することができる。
ここに記述した現在好ましい具体例に対する種々の変更及び修正が当業者に明らかであるろうことが、理解されなければならない。そのような変更及び修正は、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく且つ伴う利点を損なうことなく行うことができる。従って、そのような変更及び修正は、添付の請求の範囲に包含されることが意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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