(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
採取対象である皮膚に貼り付けられた後に剥離された、粘着剤が少なくとも片面に塗布されたディスクの粘着部を、透明な材質であって、且つ少なくとも片面に粘着剤を塗布してある標本用材料の粘着部に貼付して剥離し、皮膚より剥離した皮膚の被観察検体を標本用材料に転写することを特徴とする、皮膚の観察用の標本の作成方法であって、
前記ディスクは、ライニングされていても良い厚紙、ポリ塩化ビニル板、またはポリエチレンテレフタレート、アクリル酸エステル、メタクリル酸エステル、セルロイド、アセチルセルロースもしくはこれらの複合材料の薄板の少なくとも片面に粘着剤を塗布してなるディスクである、標本の作成方法。
【請求項２】
前記ディスクは、ポリエチレンをライニングした厚紙、乃至はポリエチレンテレフタレート薄板の少なくとも片面に粘着剤を塗布してなるディスクであることを特徴とする、請求項１に記載の皮膚の観察用の標本の作成方法。
【請求項３】
皮膚の被観察検体に角層が含まれることを特徴とする、請求項１又は２に記載の皮膚の観察用の標本の作成方法。
【請求項４】
採取用の粘着剤を少なくとも片面に塗布したディスクの粘着剤の粘着力が標本用材料に塗布された粘着剤の粘着力より小さいことを特徴とする、請求項１乃至３のいずれか一項に記載の皮膚の観察用の標本の作成方法。
【請求項５】
透明であって粘着剤が塗布されている検体保持部を有する標本用材料と、少なくとも片面に粘着剤が塗布された皮膚検体採集用のディスクからなる、皮膚の観察用の標本作成用のキットであって、
前記ディスクは、ライニングされていても良い厚紙、ポリ塩化ビニル板、又はポリエチレンテレフタレート、アクリル酸エステル、メタクリル酸エステル、セルロイド、アセチルセルロースもしくはこれらの複合材料の薄板の少なくとも片面に粘着剤を塗布してなるディスクである、標本作成用のキット。
【請求項６】
標本用材料の検体保持部に塗布されている粘着剤の粘着性が皮膚検体採集用のディスク
に塗布されている粘着剤より強いことを特徴とする、請求項５に記載の皮膚の観察用の標本作成用のキット。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術範囲】
本発明は、肌の診断・分析・鑑別などに有用な、角層などの皮膚の観察用の標本の作成方法及びその作成に有用な当該標本の作成キットに関する。
【０００２】
【従来の技術】
角層などの皮膚の顕微鏡観察用の標本は、その皮膚を有する生体の皮膚状態を知る上で非常に重要である。この為、これらの標本の作成の仕方が工夫されてきており、例えば、粘着剤を塗布したフィルムなどで角層を採取しこのものをスライドグラスに転写した後フィルムを除去したり、粘着剤付き透明フィルムを皮膚に貼付しこのフィルムを直接染色し標本を作成したり、実体顕微鏡下皮膚を観察したりすることが行われていた。又、粘着テープを皮膚に貼付し、これを別の粘着テープ上に転写し、この転写物を角層標本とする方法も行われていた。この様にして得られた皮膚情報は、生体がヒトであれば化粧料の選択のカウンセリング用の標本作りなどに応用されており、この様な皮膚情報により適切な化粧料選択が可能になっていることは、昨今のデパートの化粧品売場のカウンターへ出向いてみれば一目瞭然である。しかしながら、かかる皮膚標本の作成は、何れの方法によっても、その検体採取より、標本作成、観察終了までに多大な時間と人手を要する問題があった。この理由としては、前者においては、フィルム除去作業に有機溶媒による軟化を用いるため、多大な時間と人手が必要なこと、標本の中の情報が多すぎるため、これを整理して正確に鑑別するためには知識と経験を要すること等が欠点として挙げられ、フィルムの直接染色や粘着テープからの転写物の染色においては、採取と転写の際の貼付効率の問題より綺麗な一層の角層標本が得られにくいこと或いは皮膚角質細胞が採取側の粘着剤に多く残ってしまうこと、この角質細胞を観察することが不可能であること等の問題点が挙げられる。これらを省力化することは速やかに且つ安価で正確に皮膚情報を提供できるという点で好ましいことであり、この様な技術の出現が待たれていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明はこの様な状況下行われたものであり、生体の皮膚の情報を省力化して速やかに入手する手段を提供することを課題とする。
【０００４】
【課題の解決手段】
本発明者らは上記実状に鑑み、生体の皮膚の情報を省力化して速やかに入手する手段を求めて、次の２つの面からのアプローチを行った。
１）従来の検体の採取方法を、もっと有益な情報が得易くする様に改善すること。即ち、従来の方法では不必要な情報までもが混在したサンプルであったため、その情報の解析に手間取ったと考えられ、この不要な情報を除去することにつとめる。
２）染色等組み合わせの仕方や方法を改良することにより時間の短縮と省力化につとめる。
この結果、粘着剤を塗布したディスクを採取対象の皮膚に貼付した後、剥離し、当該粘着部を、透明な材質であって、且つ少なくとも片面に粘着剤を塗布してある標本用材料の粘着部に貼付して剥離し、皮膚より剥離した皮膚の被観察検体を標本用材料に転写することにより、１）の時間の短縮と省力化が可能となり、結果得たサンプルが驚くべきことに、従来のサンプリングでは到底染色し得なかった標本でも、２）で検討した時間短縮・省力化条件であっても染色しうる上、綺麗な一層のサンプルであるため観察も容易で適切に行えることを見いだし発明を完成させるに至った。更に、本発明に於いては、使用したディスクも、それから角質細胞を転写した粘着剤を塗布した検体保持体自身も観察用の標本として使用できるというメリットもある。以下、本発明について実施の形態を中心に詳細に説明を加える。
【０００５】
【発明の実施の形態】
（１）本発明の標本の作成法
本発明の標本の作成法は、粘着剤を少なくとも片面に塗布したディスクの粘着部を採取対象の皮膚に貼付した後、剥離し、当該粘着部を、透明な材質であって、且つ少なくとも片面に粘着剤を塗布してある標本用材料の粘着部に貼付して剥離し、皮膚より剥離した皮膚の被観察検体を標本用材料に転写することを特徴とする。ここで、ディスクとは、多少の変形性を有しながらも通常の応力に対しては形態維持性を発揮する薄板材料であって、角のない形状、即ち、円形や楕円形等の形状をした材料を意味する。ここで転写とは、本発明に於いては、角層などのサンプルの一部又は全部の物理的な移動を意味する。この様な作業を行うことにより、綺麗な一層の角層サンプルを採取することができる。角層を一層にすることにより、従来法では重なり合っていて多重の角層の透視像しか見られなかったものが、角質細胞一個一個を明瞭に観察しうる様になった。又、薄い角質細胞一層のサンプルであるため、色黒やシミ等の原因となるメラニン分布の不全も如述に感知しうる。更に、染色についても従来のサンプリング法に比較して容易に染色しうる。従って、観察・細胞などの鑑別の精度を上げ、標本作成時間を大幅に短縮することが可能になった。又、透明な材質であって粘着剤の塗布してある標本用材料の粘着部を採集対象の皮膚に塗布して剥離させ、標本用材料上に付着した皮膚の標本に粘着剤を少なくとも片面に塗布したフィルムを貼付して剥離させることにより、余分な皮膚標本を除去しサンプルとする方法も上述の方法と同様に観察・細胞などの鑑別の精度を上げ、標本作成時間を大幅に短縮することができ、この方法も本発明の技術範囲に属するが、後操作での鑑別の容易さと正確さの点で最初に述べた、粘着剤を少なくとも片面に塗布した標本用材料の粘着部を採取対象の皮膚に貼付した後、剥離し、当該粘着部を、透明な材質であって、且つ少なくとも片面に粘着剤を塗布してあるディスクの粘着部に貼付して剥離し、皮膚より剥離した皮膚の被観察検体を標本用材料に転写する方法の方が好ましい。即ち、本発明の標本の作成方法は大まかには次の二種に表される。
１）粘着剤を少なくとも片面に塗布したディスクの粘着部を採取対象の皮膚に貼付した後、剥離し、当該粘着部を、透明な材質であって、且つ少なくとも片面に粘着剤を塗布してある標本用材料の粘着部に貼付して剥離し、皮膚より剥離した皮膚の被観察検体を標本用材料に転写する方法（第一法）
２）透明な材質であって粘着剤の塗布してある標本用材料の粘着部を採集対象の皮膚に塗布して剥離させ、標本用材料上に付着した皮膚の標本に粘着剤を少なくとも片面に塗布したフィルムを貼付して剥離させることにより、余分な皮膚標本を除去しサンプルとする方法（第二法）
本発明の標本作成方法で作成された標本は、皮膚の余分な部分がない綺麗な一層の角層サンプルであるので、従来のサンプリング法で作成された標本よりも染色性がよいので、従来の染色液の１／１０程度の濃度で充分染色する事ができ、この様な染色方法と共に使用するのが好ましい。又、本発明では下記に示すような使用機材を組み合わせてキットとすることもできる。本発明のキットとしては、透明であって粘着剤が塗布されている検体保持部を有する標本用材料と少なくとも片面に粘着剤が塗布された皮膚検体採集用のディスクからなる、皮膚の観察用の標本作成用のキット及び透明であって粘着剤が塗布されている検体保持部を有する標本用材料と少なくとも片面に粘着剤が塗布された粘着剤塗布フィルムからなる、皮膚の観察用の標本作成用のキットが好ましく例示できる。本発明の標本作成方法及びキットは皮膚の内、角層の標本を作成するのに特に好適である。
【０００６】
（２）本発明の標本作成方法で使用する機材
以下に、第一法で用いる機材の説明をする。
（粘着剤を少なくとも片面に塗布したディスク）
使用できるディスクの要件としては、柔軟性を有しながらも形態維持性を有し、粘着剤の一様な塗布が可能であることである。第一法では、このディスクは皮膚サンプルの採取のみに使用されるので、ディスク自体に透明性は要求されない。勿論透明であることも可能であるが、皮膚のサンプリングが効率よく行えるように柔軟性を有しながらも形態維持性を有していることが大切である。これは押しつけて皮膚を多少変形させて角層を採取することにより、一層になった角層を採取することが出来る。又、皮膚から容易に剥離できる程度の強度を備えていることも必要である。この様なディスク材料としては、例えば、ライニングされていても良い厚紙、ポリ塩化ビニル板、ポリエチレンテレフタレート、アクリル酸エステル、メタクリル酸エステル、セルロイドやアセチルセルロースなどのセルロース誘導体などの高分子薄板、これらの複合材料等が好適に例示できる。この中で好ましいものは、コストの面からポリエチレンをライニングした厚紙乃至はポリエチレンテレフタレート薄板である。又、粘着剤としては、通常皮膚に対する粘着剤として使用されているものであれば特段の限定なく使用することが可能であり、例えば、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、ポリビニルアセタール、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリビニルエーテル、アクリル系、天然、ＳＢＲ系、ＮＢＲ系、ブタジエン−ビニルピリジン系、ブチル系、再生、シアノアクリレート系及びクロロプレン系等のゴムとその誘導体、トラガカントガム、アラビアガム等の多糖類の粘着剤等が好ましく例示できる。これら粘着剤を塗布したディスクは、粘着部をシリコーン含浸紙等の剥離紙でカバーし、埃などで粘着力が低下することを防ぐこともできる。又、形状としては貼付した際に刺激を発生させにくい、角のないものが好ましい。具体的には、円や楕円の形状が好ましく例示できる。更に、剥離用の小突起を有することが、使用性の面で好ましい。
（標本用材料）
透明な材質であって、且つ少なくとも片面に粘着剤を塗布してある標本用材料としては、ポリプロピレンなどの構造材料の中央部に穴を設け、ここに粘着剤を一様に塗布した透明フィルムを貼付するタイプのもの、透明の板状の材料の中に粘着剤を塗布し、皮膚材料を転写する部分を設けたタイプのもの等が例示できる。かかるフィルムや透明板の材料としては、透明性が要求され、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリエステル、ポリアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸エステル、テトロン等が好ましく例示できる。これらの内では、テトロンが柔軟性と形態維持性のバランスから特に好ましい。又、中央に穴を設けた構造材料の材料としては、ガラス、木材、ポリ塩化ビニルやポリスチレン、ポリプロピレンなどの高分子材料が好適に例示できる。これらは透明である必要はないが透明であっても良い。かかるフィルムや透明板に塗布する粘着剤としては、例えば、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、ポリビニルアセタール、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリビニルエーテル、アクリル系、天然、ＳＢＲ系、ＮＢＲ系、ブタジエン−ビニルピリジン系、ブチル系、再生、シアノアクリレート系及びクロロプレン系等のゴムとその誘導体、トラガカントガム、アラビアガム等の多糖類の粘着剤等が好ましく例示できる。これらは塗布する際に、使用した溶剤がフィルム材料や透明板を損なわないように注意する必要がある。又、粘着剤塗布部にはシリコーン含浸紙等の剥離紙でカバーを行い、埃などで粘着力が低下することを防ぐこともできる。本標本用材料の粘着剤の粘着力は上記皮膚サンプル採集用フィルムの粘着力より強いことが必要である。
【０００７】
以下に、第二法に使用する機材について説明を加える。
（標本用材料）
透明な材質であって、且つ少なくとも片面に粘着剤を塗布してある標本用材料としては、ポリプロピレンなどの構造材料の中央部に穴を設け、ここに粘着剤を一様に塗布した透明フィルムを貼付するタイプのもの、透明の板状の材料の中に粘着剤を塗布し、皮膚材料を採取する部分を設けたタイプのもの等が例示できる。かかるフィルムや透明板の材料としては、透明性と皮膚サンプルの採集適性が要求され、多少の柔軟性が必要であり、テトロン、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリエステル、ポリアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸エステル等が好ましく例示できる。これらの内では、透明性、柔軟性、形態維持性のバランスからテトロンが特に好ましい。又、中央に穴を設けた構造材料の材料としては、ガラス、木材、ポリ塩化ビニルやポリスチレン、ポリプロピレンなどの高分子材料が好適に例示できる。これらは透明である必要はないが透明であっても良い。かかるフィルムや透明板に塗布する粘着剤としては、例えば、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、ポリビニルアセタール、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリビニルエーテル、アクリル系、天然、ＳＢＲ系、ＮＢＲ系、ブタジエン−ビニルピリジン系、ブチル系、再生、シアノアクリレート系及びクロロプレン系等のゴムとその誘導体、トラガカントガム、アラビアガム等の多糖類の粘着剤等が好ましく例示できる。使用勝手からは、透明な柔軟な粘着剤塗布フィルムを単独で皮膚サンプルの採集に用い、これを中央部に穴を設けた構造材料に貼付固定し、粘着剤付きのフィルムで不要な皮膚サンプルを貼付除去するのが好ましい。これらは塗布する際に、使用した溶剤がフィルム材料や透明板を損なわないように注意する必要がある。又、粘着剤塗布部にはシリコーン含浸紙等の剥離紙でカバーを行い、埃などで粘着力が低下することを防ぐこともできる。
（粘着剤塗布フィルム）
使用できるフィルムの要件としては、柔軟性を有し、粘着剤の一様な塗布が可能であることである。第二法では、このフィルムは皮膚サンプルの余分な部分の除去のみに使用されるので、フィルム自体に透明性は要求されない。勿論透明であることも可能であるが、皮膚のサンプルの調整が効率よく行えるように、標本用材料の粘着部と密着できるよう、柔軟性を有していることが大切である。又、皮膚サンプルを除去しすぎないよう適度の粘着力であること、即ち、標本用材料の粘着力よりやや弱い粘着力であることも必要である。この様なフィルム材料としては、例えば、ライニングされていても良い不織布、紙又は布、ポリエステル、ポリエチレンテレフタレート、アクリル酸エステル、メタクリル酸エステルなどの高分子フィルム、これらの複合材料等が好適に例示できる。この中で好ましいものは、コストの面からポリエチレンをライニングした紙である。又、粘着剤としては、通常粘着剤として使用されているものであれば特段の限定なく使用することが可能であり、例えば、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、ポリビニルアセタール、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリビニルエーテル、アクリル系、天然、ＳＢＲ系、ＮＢＲ系、ブタジエン−ビニルピリジン系、ブチル系、再生、シアノアクリレート系及びクロロプレン系等のゴムとその誘導体、トラガカントガム、アラビアガム等の多糖類の粘着剤等が好ましく例示できる。これら粘着剤を塗布したフィルムは、粘着部をシリコーン含浸紙等の剥離紙でカバーし、埃などで粘着力が低下することを防ぐこともできる。
【０００８】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明がこれら実施例にのみ限定を受けないことは言うまでもない。
【０００９】
＜実施例１＞
実施例１の実施に先立ち次のものを用意した。
１．図１に示す如く中央に切除部（穴）２を設け、透明粘着剤３を片面全面に塗布した透明テープ４を貼付した標本用材料１（この透明テープ４としては住友スリーエム製のテピアテープを使用した。標本用材料はポリプロピレン製）。
２．皮膚サンプル採集用ディスクとして、両面テープ（幅１インチ）を長さ２．５ｃｍに切ったものをポリエチレンテレフタレートに貼付し、これを直径１．５ｃｍのパンチで打ち抜きディスクを得た。
上記材料を用い、まず、このディスクを頬に貼付し２回指で圧迫した後、剥離させ、このディスクの粘着部を透明テープ４を貼付した標本用材料１の切除部に粘着部が現れている透明テープ４の粘着部に貼付して剥離させ、透明テープ上に皮膚サンプルを転写し、標本を得た。この標本は、０．５％の硝酸銀水溶液にアンモニア水を滴下しｐＨを１０に調整した銀染色液を用い、４５℃１０分間処理し銀染色した後、３回水洗し０．８％ゲンチアナバイオレット液で１０分処理した。この標本を水洗、乾燥させ、透明シリコーン剤を染色済みの部分を覆うように流し込みカバーグラスをのせてサンプルとした。この顕微鏡写真を図２に示す。
比較例１として、テピアテープを頬に貼付して皮膚サンプルを採取し、これを中央に切除部を設けた標本用材料に貼付して実施例と同様に染色を行い、比較例１とした。この顕微鏡写真を図３に示す。
比較例２として、テピアテープを頬に貼付して皮膚サンプルを採取し、これを中央に切除部を設けた標本用材料に粘着テープを張り付けたものの粘着テープ上に貼付して転写し、従来法に従い染色を行い、比較例２とした。即ち、５％硝酸銀水溶液にアンモニア水を加えてｐＨを１０に調整し、これに室温で１昼夜浸漬し、銀染色を行い、水洗を１０回繰り返した。その後、１０％ゲンチアナバイオレット液に１０分間浸漬し、水洗した後、透明シリコーンを充填しカバーグラスをおき標本を得た。この顕微鏡写真を図４に示す。
これら図２〜４から判るように、本発明の標本作成方法によって作成された標本は短時間で鮮明にメラニンを染色しうる。更に、顕微鏡像も解析しやすい。これは細胞や染色の重なりによって顕微鏡像の解析が妨げられないためである。更に、染色時間も１４時間から６０分に大幅に短縮できた。
【００１０】
＜比較例３＞比較例３の実施に先立ち次のものを用意した。
１．図５に示す如く中央に切除部（穴）６を設けた標本用材料５（ポリプロピレン製）。
２．皮膚サンプル採集用ディスクとして、住友スリーエム製のテピアテープ。
３．皮膚サンプルの調整テープとして、住友スリーエム製サージカルテープ（幅１インチ）を長さ２．５ｃｍに切ったもの。
頬にテピアテープを貼付し、指で２回圧迫して剥離させた。これを切除部６を塞ぐように標本用材料５に貼付した。このテピアテープの粘着部にサージカルテープを貼付し剥離させる作業を２回行い、標本を得た。この標本は、０．５％の硝酸銀水溶液にアンモニア水を滴下しｐＨを１０に調整した銀染色液を用い、４５℃１０分間処理し銀染色した後、３回水洗し０．８％ゲンチアナバイオレット液で１０分処理した。この標本を水洗、乾燥させ、透明シリコーン剤を染色済みの部分を覆うように流し込みカバーグラスをのせてサンプルとした。このものは実施例１には及ばないが極めて鮮明な顕微鏡標本であった。
【００１１】
＜比較例４＞比較例４の実施に先立ち次のものを用意した。
１．図６に示す如く、中央に粘着剤８を塗布した粘着剤塗布部９を設けた標本用材料７（ポリエチレンテレフタレート製、粘着剤はポリアクリル酸エステル）。
２．皮膚サンプルの調整テープとしての住友スリーエム製サージカルテープ（幅１インチ）を長さ２．５ｃｍに切ったもの。
標本用材料７の粘着剤塗布部分９を頬に押しつけ剥離させ、これの粘着部にサージカルテープを貼付して剥がしこの作業を２回行った。標本用材料を実施例２と同様に染色したところ、やはり実施例１には及ばないが鮮明な標本が得られた。
【００１２】
【発明の効果】
本発明によれば、生体の皮膚の情報を省力化して速やかに入手する手段を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  実施例１で用いる標本用材料を示す図である。
【図２】  実施例１で作成した標本の顕微鏡写真である。（図面代用写真）
【図３】  比較例１で作成した標本の顕微鏡写真である。（図面代用写真）
【図４】  比較例２で作成した標本の顕微鏡写真である。（図面代用写真）
【図５】  実施例２で用いる標本用材料を示す図である。
【図６】  実施例３で用いる標本用材料を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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