(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
クジンの植物体をメタノール抽出し、減圧乾固し、塩化メチレンと水で液液抽出を行って水層成分を除き、塩化メチレン層を減圧乾固して得られるエッセンスからなる、Ｐ関連遺伝子発現抑制剤。
【請求項２】
クジンの植物体をメタノール抽出し、減圧乾固し、塩化メチレンと水で液液抽出を行って水層成分を除き、塩化メチレン層を減圧乾固してエッセンスを得ることを特徴とする、クジンのエッセンスからなるＰ関連遺伝子発現抑制剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術範囲】
本発明は、Ｐ関連遺伝子に起因する、老人性シミ等の色素異常の改善・予防に好適な、Ｐ関連遺伝子発現抑制剤及びそれを含有する化粧料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
色白の美しい肌は、古来より全人が希望してきたことであり、この様な肌を得るために数々の努力が為されてきた。この中で、色の白さ、言い換えれば色の黒さの原因が、メラノサイトで生成されるメラニンであることが明らかにされた。このメラニンの量の多少により、肌の色が黒くなったり白くなったりすることも解明された。このメラニンの生合成には、チロシナーゼやチロシナーゼ関連蛋白質群と呼ばれる蛋白が関与していることも既に知られていることである。又、この様な酵素等の働きを阻害し色白を具現化するための素材や化粧料が開発され、かなりの程度は色を白くすることが可能になってきた。しかしながら、色黒とメラニンの生合成の関係についてこれらからでは説明しきれない因子が残っており、又、色黒について、その種類によってメラニンの生合成の関係因子が異なっていることもおぼろげながら知られるようになってきた。更に、上記のメカニズムによるメラニン生成阻害剤やそれを含有する化粧料では対処できない色黒も存在することは確かである。この様な色黒として、老人性シミ等が例示できる。
【０００３】
一方、本発明で言うＰ関連遺伝子とは、マウスにおいて第７遺伝子上に発見されたピンクアイド・ダイリューション（Pink-eyed dilution）遺伝子、人に於けるＰ遺伝子などマウスのピンクアイド・ダイリューション（Pink-eyed dilution）遺伝子と極めて相同性の高い、各種動物の遺伝子の総称を意味する。これらのＰ関連遺伝子はメラニン生成にかかわっていることが知られている。この内、ピンクアイド・ダイリューション（Pink-eyed dilution）遺伝子とＰ遺伝子については、その塩基配列も多くの部分が明らかになっている。更にこの遺伝子を組み込んだベクターも既に知られている。しかし具体的な色素異常の種類とこの遺伝子の因果関係について論じた報告は極めて少ない。更に、Ｐ関連遺伝子を抑制する物質については、知られている情報は更に少ない。
【０００４】
一方、クジンのエッセンスについて、これを含有する化粧料が美白作用を有することは既に知られていることであるが、このものがＰ関連遺伝子の発現を抑制すること及びＰ関連遺伝子の発現に起因する老人性シミ等のメラニン生成異常の改善・予防に好適であることは全く知られていなかった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は老人性シミ等の従来の技術で克服が難しかったメラニン生成異常のメカニズムを明らかにし、この様な色素異常症の予防・改善に好適な手段を提供することを課題とする。
【０００６】
【課題の解決手段】
この様な状況を踏まえて、本発明者らは鋭意研究努力を重ねた結果、老人性のシミに於いて、Ｐ関連遺伝子の発現昂進が見られることを見いだした。更に検討を重ねた結果、Ｐ関連遺伝子の発現をクジンのエッセンスが抑制することを見いだした。更に、このクジンのエッセンスがＰ関連遺伝子の発現を抑制することにより、老人性のシミを改善することを見いだし、発明を完成させるに至った。以下、本発明について発明の実施の形態を中心に更に詳細に説明を加える。
【０００７】
【発明の実施の形態】
（１）本発明のＰ関連遺伝子発現抑制剤
本発明のＰ関連遺伝子発現抑制剤は、クジンのエッセンスからなる。本発明で言うエッセンスとは、植物体それ自身、植物体を乾燥・細切・粉砕などした加工物、植物体の一部又は全部或いは加工物に溶媒を加え、抽出した抽出物とその溶媒除去物、抽出物やその溶媒除去物をカラムクロマトグラフィーや液液抽出等で精製した精製物等が例示できる。この中で特に好ましいものは抽出物、抽出物の溶媒除去物、精製物である。この場合、溶媒抽出は、水、メタノールや１，３−ブタンジオール等のアルコール、アセトンやメチルエチルケトン等のケトン類、酢酸エチルや蟻酸メチル等のエステル類、クロロホルムや塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素類、アセトニトリル等のニトリル類、ジエチルエーテルやテトラヒドロフラン等のエーテル類から選ばれる１種乃至は２種以上を植物体或いはその加工物に対して１〜２０倍量を加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬すればよい。浸漬後は、濾過などにより不溶物を取り除き、必要に応じて減圧濃縮や凍結乾燥をして溶媒を除去すればよい。かかる抽出の好ましい溶媒は、極性溶媒であり、特にアルコール類を含むものが好ましい。これは、有効成分がこの様な溶媒に抽出されやすいからである。又、植物体の使用部位としては特段の限定は受けないが、地下部が特に好ましい。これはこれらの部分にＰ関連遺伝子の発現を抑制する物質が特に多く含まれているからである。かくして得られたクジンのエッセンスは、Ｐ関連遺伝子の発現の抑制効果に優れるため、Ｐ関連遺伝子発現抑制剤としてＰ関連遺伝子に起因するメラニン生成の異常の改善・予防に大変有用である。
【０００８】
（２）本発明の化粧料
本発明の化粧料は、上記Ｐ関連遺伝子発現抑制剤を含有し、Ｐ関連遺伝子に起因するメラニン生成異常の改善・予防に好適であることを特徴とする。本発明の化粧料に於ける、Ｐ関連遺伝子発現抑制剤の好ましい含有量は、０．０１〜１０重量％であり、更に好ましくは、０．０５〜５重量％である。これは少なすぎると、効果が期待できない場合があり、多すぎても効果が頭打ちになるからである。本発明の化粧料に於いて、上記Ｐ関連遺伝子発現抑制剤以外に、通常化粧料で通常使用される任意成分を含有することができる。かかる任意成分としては、例えば、ワセリンやマイクロクリスタリンワックス等のような炭化水素類、ホホバ油やゲイロウ等のエステル類、牛脂、オリーブ油等のトリグリセライド類、セタノール、オレイルアルコール等の高級アルコール類、ステアリン酸、オレイン酸等の脂肪酸、グリセリンや１，３−ブタンジオール等の多価アルコール類、非イオン界面活性剤、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、エタノール、カーボポール等の増粘剤、防腐剤、紫外線吸収剤、抗酸化剤、色素、粉体類、ビタミンＣとその誘導体やアルブチン等の美白物質、メラニン産生阻害剤等が例示できる。これらの任意成分の内、特に好ましいものは、従来から知られている、ビタミンＣとその誘導体やアルブチン等の美白物質やメラニン産生阻害剤である。これは、本発明のＰ関連遺伝子発現抑制剤とともにこの様な物質を使用することにより相乗効果を得ることができるからである。本発明の化粧料は、例えば、老人性シミのように、Ｐ関連遺伝子が関連するメラニン産生異常に対して、Ｐ関連遺伝子の発現を抑制し、メラニン産生を抑え、かかるメラニン産生異常を改善し、或いは症状が更に悪化するのを予防する作用を有する。本発明の化粧料の適用方法は、従来の美白化粧料に準じて適用することができ、例えば、０．１〜０．５ｇを一日数回塗布すればよい。
【０００９】
【実施例】
以下に実施例を挙げて更に詳細に本発明について説明を加えるが、本発明がかかる実施例にのみ限定を受けないことは言うまでもない。
【００１０】
＜実施例１＞
クジンの地下部を１ｋｇ集め、これに１０ｌのメタノールを加え、５日間室温で浸漬しておき、濾過により不溶物を除去し、減圧乾固し、塩化メチレンと水で液液抽出を行い塩化メチレン層を取り、減圧乾固し、本発明のＰ関連遺伝子発現抑制剤１を４１ｇ得た。
【００１１】
＜実施例２＞
プラスチック培養フラスコ（２５ｃｍ2）に１０％ＦＢＳ加イーグルの最少培地に９×１０4個のマウスメラノーマＢ−１６細胞を播種し５％炭酸ガス加、３７℃の条件で２４時間培養し、Ｐ関連遺伝子発現抑制剤１をＤＭＳＯにとかし、終濃度１×１０-3（Ｗ／Ｖ）％になるように加え更に２日間培養した。この時、ＤＭＳＯの濃度は０．２％を越えないように留意した。対照例はＤＭＳＯとした。培養終了後、燐酸緩衝生理食塩水で洗浄した後、トリプシン処理をして細胞を剥離させ、遠心分離で集め、燐酸緩衝生理食塩水で洗浄し、ＴＲＩ−ＲＥＡＧＥＮＴを加え細胞を溶解した。この細胞溶解液１ｍｌあたり１００μｌのクロロホルムを加え、遠心分離し、水層を取り５００μｌのイソプロパノールを加え、攪拌し、遠心分離してＲＮＡを沈殿させた。上澄みを捨て、７５％のエタノールでペレットを洗浄し、３００μｌのフォルマゾール（ＦＯＲＭＡＺＯＬ、モレキュラー・リサーチ・センター製）にペレットを溶かし、分光光度によりＲＮＡの濃度を測定し、調整した。この液を用いてノーザンブロッティングを行い、Ｐ関連遺伝子を検出した。この時、プローブとしては、ピンクアイド・ダイリューション遺伝子を用いた。即ち、この溶解液を用い、１レーンあたり８μｇのＲＮＡをホルムアルデヒド法にて、アガロースゲル電気泳動を行いキャピラリー法によりナイロンメンブランに転写した。紫外線照射によりＲＮＡをメンブランに固定した後、ホルムアミド５０％を含有するプレハイブリダイゼーション液（シグマ社製）にて数時間４２℃にてプレハイブリダイゼーションを行った。プレハイブリダイゼーション液を交換した後、ランダムプライマー法にてラベルしたプローブを加え、１晩４２℃でハイブリダイゼーションを行い、２×ＳＳＰＥ０．１％ＳＤＳ、４２℃で一回洗浄した後、メンブランに残った放射活性を測定しながら、ＳＳＰＥの濃度を下げ、放射活性が適当なところで洗浄をやめ、Ｘ線フィルムを用いてオートラジオグラフィーによりバンドを検出した。このノーザンブロッティングの結果を図１に示す。この図より、本発明のＰ関連遺伝子発現抑制剤１は、対照に比し著しくＰ関連遺伝子の発現を抑制していることがわかる。
【００１２】
＜実施例３＞
以下に示す処方に従って、本発明の化粧料を作製した。即ち、処方成分を室温で攪拌溶解し、本発明の化粧料である化粧水を得た。
Ｐ関連遺伝子発現抑制剤１                           １    重量部
ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油             ０．５重量部
エタノール                                       １０    重量部
グリセリン                                         ５    重量部
水                                               ８３．５重量部
【００１３】
＜実施例４＞
以下に示す処方に従って、本発明の化粧料を作製した。即ち、処方成分を室温で攪拌溶解し、本発明の化粧料である化粧水を得た。
Ｐ関連遺伝子発現抑制剤１                           ０．１重量部
ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油             ０．５重量部
エタノール                                       １０    重量部
グリセリン                                         ５    重量部
水                                               ８４．４重量部
【００１４】
＜実施例５＞
以下に示す処方に従って、本発明のクリームを作製した。即ち、イの成分を良く混練りした後、８０℃に加熱し、ロ、ハを予め８０℃に予熱しておき、イにロを加え希釈し、これにハを徐々に加え乳化し、攪拌冷却しクリームを得た。
イ
トリグリセリンジイソステアレート                   ５    重量部
マルチトール７０％水溶液                           ５    重量部
グリセリン                                         ３    重量部
１，３−ブタンジオール                             ５    重量部
Ｐ関連遺伝子発現抑制剤１                           ０．７重量部
メチルパラベン                                     ０．２重量部
ブチルパラベン                                     ０．１重量部
ロ
流動パラフィン                                   １５    重量部
マイクロクリスタリンワックス                       ３    重量部
ネオペンチルグリコールジイソオクタネート           ５    重量部
カルナウバワックス                                 ２    重量部
ハ
水                                               ５６    重量部
【００１５】
＜実施例６＞
上記実施例３〜５の化粧料を用いて、老人性シミに悩む人を対象に使用テストを行った。即ち、老人性シミに悩む人６３名を１群７人、全９群に分け、実施例３〜５の化粧料、実施例３〜５の化粧料のＰ関連遺伝子発現抑制剤１をアルブチンに置き換えた比較例１〜３の化粧料、実施例３〜５の化粧料のＰ関連遺伝子発現抑制剤１を水に置き換えた対照例１〜３の化粧料をそれぞれ２カ月使用してもらい、老人性シミの改善度を＋＋：殆ど消失、＋：明らかに減少、±：やや減少、−：不変の基準で判定してもらった。結果を表１に示す。これより、本発明のＰ関連遺伝子発現抑制剤を含有する化粧料は、Ｐ関連遺伝子の発現を抑制するが故に老人性シミを改善する作用に優れることがわかる。
【００１６】
【表１】
0003650697.tif 000002
【００１７】
【発明の効果】
本発明によれば、老人性シミ等の従来の技術で克服が難しかったメラニン生成異常のメカニズムを明らかにし、この様な色素異常症の予防・改善に好適な手段を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明のＰ関連遺伝子発現抑制剤１のノーザンブロットを示す図である。
【図１】
0003650697.tif 000003