(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式（１）
【化１】
0003688846.tif 000010
で表されるメルカプトプロピオンアミド誘導体又はその塩を有効成分とする金属依存型エラスチン分解酵素阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は皮膚老化予防剤に関し、さらに詳細には皮膚の老化によって生じるしわ、たるみの発生やはりの減少などの外観変化を防止又は改善することのできる皮膚老化予防剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚が老化することにより生じる外観変化の代表例としては、しわ、たるみの発生、はりの減少、色素沈着、色調変化などがある。このうち、色素沈着については、研究が進み、各種の美白剤が開発され、市販されている。
【０００３】
ところで、しわ、たるみの発生、はりの減少などの皮膚の形態的変化については、充分に研究が進んでいるとはいえないのが現状である。例えばコラーゲンを配合した化粧料が用いられているが、充分なしわ発生防止効果は得られていない。
【０００４】
しわなどの発生については、特に紫外線との関連性が強いとされており、紫外線照射により生じた皮膚の老化を光老化と称して、種々研究されている。しかし、未だ紫外線吸収剤又は紫外線防禦剤に代わる化粧料が開発されていないのが現状である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の目的はしわに代表される皮膚の老化によって生じる症状を予防又は改善することのできる薬剤又は化粧料を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
そこで、本発明者らは、皮膚の老化と真皮の変化、特に皮膚の老化とエラスチンとの関係に着目し、種々検討してきたところ、従来、皮膚の老化によって真皮のエラスチンは顕著に増加する〔例えば、J. Inrest. Dermatol., 82：587-590(1984)、同91：158-161(1988)、同103：182-186(1994)〕といわれていることから、エラスチンを減少させることがしわの防止につながると考えられてきた。一方、エラスチン分解酵素としては通常好中球由来のものが用いられていおり、該好中球由来エラスチン分解酵素に対する阻害剤を用いた実験では、しわの形成に対する防止効果はまったく認められなかった。そこで、この点に関し研究した結果、エラスチン分解酵素にはセリンプロテアーゼに属するものと金属プロテアーゼに属するものとがあるが、そのうち、金属依存型のエラスチン分解酵素に対する阻害剤を投与した場合にのみしわの発生が有意に防止できることを見出した。そしてさらに研究を続けた結果、下記のメルカプトプロピオンアミド誘導体が優れた金属依存型エラスチン分解酵素阻害作用を有し、かつしわやたるみなどの皮膚の老化に伴なう変化を有効に予防し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、次の式（１）
【０００８】
【化２】
0003688846.tif 000002
【００１０】
で表されるメルカプトプロピオンアミド誘導体又はその塩を有効成分とする金属依存型エラスチン分解酵素阻害剤を提供するものである。
【００１１】
【発明の実施の形態】
式（１）で表されるメルカプトプロピオンアミド誘導体は、例えば特開昭５７−２４３５４号公報に記載の如く、それ自体公知の化合物であるが、これらのメルカプトプロピオン酸誘導体に哺乳類コラゲナーゼ抑制作用があることが知られているが、金属依存型エラスチン分解酵素阻害作用があることは全く知られていない。
【００１８】
メルカプトプロピオンアミド誘導体（１）の塩としては塩酸塩、硫酸塩等の無機酸塩、酢酸塩等の有機酸塩が挙げられる。またメルカプトプロピオンアミド誘導体（１）は、水和物としてはも使用できる。
【００１９】
これらのメルカプトプロピオンアミド誘導体（１）は、例えば特開昭５７−２４３５４号公報に記載の方法によって製造することができる。
【００２０】
メルカプトプロピオンアミド誘導体（１）は、優れた金属依存型エラスチン分解酵素阻害作用を有し、皮膚老化予防剤として有用である。
【００２１】
本発明の皮膚老化予防剤は、皮膚の老化により生じる形態的変化、例えばしわ、たるみの発生やはりの減少に対して予防又は改善作用を有するが、特にしわに対する予防又は改善作用が優れている。
【００２２】
本発明皮膚老化予防剤の投与形態としては皮膚外用剤、経口剤などが挙げられるが、皮膚外用剤とするのが好ましい。皮膚外用剤とする場合のメルカプトプロピオンアミド誘導体（１）又はその塩の配合量は、特に制限されないが、全組成に対し０．００００１〜１０重量％、特に０．０００１〜５重量％とするのが好ましい。
【００２３】
本発明皮膚老化予防剤には、メルカプトプロピオンアミド誘導体（１）又はその塩以外に紫外線吸収剤、紫外線防禦剤、コラーゲン、保湿剤、抗炎症剤、抗酸化剤等の成分を配合することができるが、特に紫外線吸収剤及び／又は紫外線防禦剤を配合するのが好ましい。
【００２４】
ここで、紫外線吸収剤としては、ｐ−メトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル等が挙げられる。紫外線防禦剤としては、酸化チタン、酸化亜鉛等が挙げられる。保湿剤としては、ヒアルロン酸、セラミド類等が挙げられる。また抗炎症剤としては、アラントイン、グリチルリチン等が挙げられる。
【００２５】
これらの紫外線吸収剤、紫外線防禦剤、コラーゲン、保湿剤、抗炎症剤、抗酸化剤等は、本発明の皮膚老化予防剤中に０．００１〜９９重量％、特に０．００１〜５０重量％配合するのが好ましい。
【００２６】
本発明の皮膚老化予防剤の具体的な剤型としては、クリーム、軟膏、ゲル、ローション、溶液、パック、ファンデーション等が挙げられ、これらの剤型とするにあたって各種油剤、界面活性剤、ゲル化剤、防腐剤、酸化防止剤、溶剤、アルコール、キレート剤、増粘剤、色素、香料、水等を配合することができる。
【００２７】
【実施例】
次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２８】
実施例１    培養ヒト線維芽細胞のエラスターゼ活性抑制試験
大日本製薬社より市販されている正常ヒト線維芽細胞は１０％牛胎児血清を含むＤＭＥ培地で継代培養し、本試験に供した。ラバーポリスマンを用いてシャーレからはがした細胞は、生理食塩水中に浮遊させ、低速の遠心分離器を使って細胞を集め、生理食塩水で、３回洗浄した。細胞は０．１％  トリトン  Ｘ−１００／０．２Ｍ  トリス−塩酸緩衝液（pH８．０）に浮遊させ、超音波破砕し、酵素液とした。
酵素活性測定の基質には１２５mM  Ｎ−スクシニル  Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ｐ−ニトロアニリドを用い、酵素液＋サンプル１００μｌに１μｌ添加し、３７℃で１時間反応させ、５μｌの酢酸を加えて反応を停止させた。生成したニトロアニリン量は分光光度計で、４０５nmにおける吸光度を測定し、求めた。
サンプル濃度を変えて、酵素活性抑制率をプロットし、５０％抑制濃度（ＩＣ50）を求めた。結果を表１に示す。
【００２９】
【表１】
0003688846.tif 000003
【００３０】
【化３】
0003688846.tif 000004
【００３１】
表１から明らかなように好中球由来のセリンプロテアーゼ型エラスターゼ阻害剤として知られている化合物２は、金属依存型エラスターゼであるヒト線維芽細胞由来の酵素に対しては抑制作用を示さなかった。これに対し、化合物１は金属依存型エラスターゼを強力に抑制した。
【００３２】
実施例２  ヘアレスマウスによるしわ形成抑制試験
ヘアレスマウス（ＨＲ／ＩＣＲ，実験開始時６週齢）の背部に、健康線用ランプ（東芝製、ＳＥ２０）で、１回の照射量が１ＭＥＤ以下となるように調節してＵＶ−Ｂ光の照射を行い、直後にサンプルを含む８０％エタノール溶液を１００μｌを塗布した。この作業を２０週間にわたって行った。照射エネルギー量はＵＶ−Ｒａｄｉｏｍｅｔｅｒ（ＴＯＫＹＯＯＰＴＩＣＡＬ社製、ＵＶＲ−３０５／３６５Ｄ）を用いて測定した。また、コントロールとして８０％エタノールのみを塗布したものをサンプルと同様に試験した。試験終了後、形成されたしわの度数を肉眼により下記の基準（しわ指数）で評価した。結果を表２に示す。
【００３３】
＜しわ指数＞
０：しわが無形成
１：しわがかすかに形成
２：しわが微量形成
３：しわが若干形成
４：しわが強固に形成
【００３４】
【表２】
0003688846.tif 000005
【００３５】
表２から明らかなように、化合物２はしわ形成抑制作用を示さなかったが、化合物１は優れたしわ形成抑制作用を示した。
【００３６】
次に、メルカプトプロピオンアミド誘導体（１）を配合した、皮膚老化防止用の外用剤の処方例を示す。
【００３７】
0003688846.tif 000006
【００３８】
0003688846.tif 000007
【００３９】
0003688846.tif 000008
【００４０】
0003688846.tif 000009
【００４１】
【発明の効果】
本発明によれば、しわ、たるみの発生、はりの減少などの皮膚の老化に伴なう形態的変化を防止又は改善することができる。