(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビフィドバクテリウム属細菌から選ばれる１種又は２種以上の微生物を大豆抽出液に作用させて得られる発酵生成物から有機溶媒抽出した発酵大豆抽出物を含有する皮膚外用剤。
【請求項２】
有機溶媒が、炭素数１〜１３の一価又は多価アルコールである請求項１記載の皮膚外用剤。
【請求項３】
化粧料である請求項１又は２記載の皮膚外用剤。
【請求項４】
皮膚老化防止用化粧料又は肌荒れ改善用化粧料である請求項１又は２記載の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、肌荒れ改善効果及び皮膚老化防止効果等に優れる皮膚外用剤及び化粧料に関するものである。
背景技術
従来、大豆抽出液、又はこの一種である豆乳を化粧料に用いた例はすでにいくつか報告されており、美白効果があるとされている。また、これらのうち豆乳の発酵生成物（以下、「発酵豆乳」という）を化粧料に用いたものとして、リゾープス属の微生物を作用させたもの（特開平１−１０２０１１号公報）及び乳酸菌を作用させたもの（特開平３−１２７７１３号）が挙げられる。
しかし、これらの発酵豆乳が、加齢や紫外線による皮膚の老化によって発生するしわや肌荒れを改善するという報告はない。
従って本発明の目的は、このようなしわや肌荒れを改善しうる皮膚外用剤を提供することにある。
発明の開示
斯かる実状に鑑み本発明者は、鋭意研究を行った結果、意外なことにビフィドバクテリウム属細菌を大豆抽出液に作用させて得られる発酵生成物から有機溶媒で抽出すれば、しわや肌荒れを改善し得る発酵大豆抽出物が得られることを見出し本発明を完成した。
すなわち本発明は、ビフィドバクテリウム属細菌から選ばれる１種又は２種以上の微生物を大豆抽出液に作用させて得られる発酵生成物から有機溶媒抽出した発酵大豆抽出物を含有する皮膚外用剤を提供するものである。
【図面の簡単な説明】
図１は、発酵豆乳抽出物のしわ形成に及ぼす効果を示す図である〔＊：発酵豆乳に比較して有意(p<0.05，n=5)〕。図２は、発酵豆乳抽出物の皮溝、皮丘数の減少に及ぼす効果を示す図である〔＊：発酵豆乳に比較して有意(p<0.05，n=5)〕。図３は、発酵豆乳抽出物の皮膚中のヒアルロン酸含量に及ぼす効果を示す図である〔数値はMean±SD(n=3 or 6)，＊(p<0.05)と**(p<0.01)はコントロール（50％エタノール）に対し有意〕。
発明を実施するための最良の形態
本発明の皮膚外用剤に用いる発酵大豆抽出物は、ビフィドバクテリウム属細菌を大豆抽出液に作用させて得られた発酵生成物から有機溶媒で抽出したものであり、ここで用いる大豆抽出液としては、大豆の水抽出液である豆乳が特に好ましい。
従って、豆乳から本発明の皮膚外用剤を製造する工程の一例を次に挙げる。
（１）豆乳の製造（工程１）
本発明で用いる豆乳はいかなる方法で製造されたものであってもよいが、例えば、原料となる大豆を水につけた後、熱水又は０．５〜１．０重量％の炭酸ナトリウムを含む熱水を添加して磨砕後、おからを取り除き、更に加熱殺菌することにより製造することができる。通常、固形分１０％程度のものを用いる。
ここで、本発明において用いられる豆乳の原料となる大豆は、特に制限はないが油脂を含有した丸大豆、脱皮大豆、又はフレーク大豆等を原料としたものが好ましく、特に脱皮大豆を原料としたものが好ましい。
また、かかる豆乳には、必要に応じて、製造後、次の工程である微生物処理のために、ショ糖、ブドウ糖、果糖、転化糖等の食品に用いられる糖や、肉エキス、酵母エキス、ペプトン、ペプチド等の微生物の増殖に必要な栄養素を添加してもよく、微生物の至適pHに調整するために豆乳にクエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、乳酸、酢酸等の食品に用いられる酸を添加してもよい。
（２）大豆の発酵（工程２）
前記工程１で製造した豆乳に微生物を作用させる方法は特に限定されず、例えば、培養した微生物の菌液を上記豆乳に接種した後、その微生物に適した温度（ビフィドバクテリウム属細菌は通常２０〜３９℃）、時間、条件を適宜決定して発酵を行えばよく、攪拌培養又は静置培養のいずれであってもよい。なお、発酵は、菌株を複数種組み合わせた混合発酵であってもよいし、菌株を複数種組み合わせた連続発酵であってもよい。
大豆抽出液に作用させるビフィドバクテリウム属細菌に属する微生物としては、特に限定されず、例えば、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・アドレッセンティス、ビフィドバクテリウム・インファンティス等が挙げられ、これらは１種でも２種以上を混合して用いてもよい。また、これらの微生物と共に、ラクトバチルス属、ストレプトコッカス属、ラクトコッカス属、エンテロコッカス属等の乳酸菌で発酵させ、これらの発酵生成物を利用してもよい。
（３）発酵生成物の抽出（工程３）
工程２で得られた発酵生成物を抽出する有機溶媒は特に限定されず、炭素数１〜１３の一価又は多価アルコール、ヘキサン、ベンゼン、アセトン、酢酸エチル、ジメチルスルフォキシド、エーテル等が挙げられ、具体的には、メタノール、エタノール等の低級アルコール（一価アルコール）、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、イソプレングリコール、グリセリン等の多価アルコールが挙げられる。発酵生成物を有機溶媒で抽出することにより、しわや肌荒れを改善し、皮膚のヒアルロン酸含量を高める成分が得られる。
しかし、発酵生成物を抽出する溶媒の種類によって、しわ、肌荒れ防止の有効成分や臭気の原因成分（揮発成分）の抽出量が異なる。すなわち、分子量が小さかったり、水酸基が１つしか有しないものを溶媒として用いると、不快な香りのする揮発成分をより多く抽出してしまい、化粧品等の素材として用いる際の価値が低下してしまう。一方、分子量が大きいものを溶媒として用いると、有効成分の抽出量がやや減ってしまい、また、化粧品等に配合した場合べたつき感が生じてしまうこともある。
このため、抽出溶媒としては、炭素数３〜１３の多価アルコールが好ましく、これを用いれば不快な香りが少なく使用感の良いものが得られる。このような多価アルコールとして、具体的には、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、イソプレングリコール等が挙げられ、これらは単独又は組み合わせて用いることができる。ここで、多価アルコールとは同一分子内に水酸基が２個以上有するアルコールであり、いかなる方法で製造されたものであっても使用することができる。
これらの有機溶媒を用いて抽出を行う際には、発酵生成物１重量部に対し、０．０１〜１００重量部の有機溶媒を添加した後、濾過あるいは遠心分離を行い高極性物質を除去する。抽出温度は、４℃から各々の単独あるいは混合溶媒の沸点までのいずれであってもよく、また、抽出時間は１５分〜４８時間程度の範囲内とするのが好ましい。
こうして得られた発酵生成物抽出物を皮膚外用剤として用いる場合には、そのまま溶液として用いてもよいが、更に遠心分離、濾過等の手段により不溶物を除去した溶液として、減圧乾固、加熱乾固、風乾等の手段で濃縮した溶液あるいは固形物として、又は水、アルコール等で希釈した溶液としても使用可能である。その際使用量は、抽出物の固形分濃度で０．００５〜５０重量％、特に０．０１〜１０重量％が好ましい。０．００５重量％未満では十分な肌荒れ改善効果を得られない場合があり、５０重量％を超えるとやや豆乳由来の豆臭が感じられてしまうためである。
本発明の皮膚外用剤としては、治療用外用剤、化粧料があり、このうち化粧料が好ましく、特に皮膚老化防止用化粧料又は肌荒れ改善用化粧料が好ましい。
本発明の化粧料は、更にヒアルロン酸等のムコ多糖類、グリセリン、豆乳に乳酸菌を接種して得られた培養液、乳成分の乳酸菌培養液、ピロリドンカルボン酸、α−ヒドロキシ酸、トリメチルグリシン等の保湿成分を配合することにより保湿効果を高めることができる。これらの保湿成分のうちヒアルロン酸が特に好ましい。
また、本発明の化粧料には、本発明の効果を妨げない範囲で公知の化粧料成分、例えば水、アルコール類、油成分、界面活性剤、水溶性高分子、ビタミン類、防腐剤、香料、色素等を配合することができる。
本発明の化粧料は、常法により製造することができ、化粧水、乳液、保湿クリーム、クレンジングクリーム、マッサージクリーム、洗顔クリーム、パック、美容液等種々の形態とすることができる。
実施例
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１
大豆を水洗し、水に一夜浸漬して充分に吸水させ４倍量の水を加えミキサーでペースト状に粉砕した。これを１００℃で３０分間加熱して冷却後、濾過して豆乳を得た。得られた豆乳を１００℃、９０分間蒸気滅菌して発酵用素豆乳を調製した。前培養したビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＦＥＲＭ  Ｐ−１５４８８株の菌液をこれに接種した後、３７℃、２４時間静置培養して発酵豆乳を得た。
こうして得られた発酵豆乳１００mlにエタノールもしくは１，３−ブチレングリコール３００mlを添加して室温にて２４時間攪拌した後、９０００rpmで３０分間遠心分離することによって生じた沈澱物を除去した。更に、発酵豆乳エタノール抽出液は、減圧乾固した後、得られた抽出物（２．３ｇ）を１００mlの５０％エタノールに溶解し、塗布サンプルとした。
実施例２
大豆を水洗し、水に一夜浸漬して充分に吸収させ、４倍量の水を加えミキサーでペースト状に粉砕した。これを１００℃で３０分間加熱して冷却後、濾過して豆乳を得た。
更に、得られた豆乳を１００℃、９０分間蒸気滅菌して発酵用素豆乳を調製した。前培養したビフィドバクテリウム・ブレーベ  ＦＥＲＭ  Ｐ−１５４８８株の菌液をこれに接種した後、３７℃、２４時間静置培養して発酵豆乳を得た。
こうして得られた豆乳、発酵豆乳１００mlにエタノール１００mlを添加し、実施例１と同様に攪拌、遠心分離して豆乳、発酵豆乳の抽出物を調製し、塗布サンプルとした。
試験例１
実施例１で得られた発酵豆乳エタノール抽出物及び発酵豆乳（未抽出物）をサンプルとし、これらの皮膚表面形態改善効果を検討した。Ｋｉｓｓらの方法（Photochem．Photobiol．53，109．1991）に従って紫外線を照射したヘアレスマウス皮膚にサンプルを１０μｌ／cm2 連日塗布し、４週間後にしわを画像解析を用いて定量し、測定した全体の皮膚面積に占めるしわ部分の面積の増加率を求めた。結果を図１に示す。
図１より本発明の発酵豆乳の抽出物は、コントロール群（サンプル無塗布）や未抽出物塗布群に比較して優れたしわの改善効果を有しており、皮膚老化防止剤として有用であることがわかる。
同様の試験を１，３−ブチレングリコール抽出物でも実施したが、エタノール抽出の場合とほとんど同じ結果が得られた。
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試験例２
試験例１と同様のサンプルを同様のマウスに塗布してキメ（皮溝・皮丘）の数を画像解析にて定量し、紫外線照射によって減少した皮溝・皮丘数を示した。結果を図２に示す。
図２より発酵豆乳エタノール抽出物は、コントロール群（サンプル無塗布）や未抽出物塗布群に比較して優れたキメの改善効果を有しており、肌荒れ改善化粧料として有用であることがわかる。
同様の試験を１，３−ブチレングリコール抽出物でも実施したが、エタノール抽出の場合とほとんど同じ結果が得られた。
試験例３
種々の有機溶媒による発酵豆乳液の抽出成分の香りと得られた有効成分の使用感に及ぼす影響を検討した。
発酵豆乳液に表２に示す各種溶媒を同量混合し一夜放置後濾過し、その香りを官能評価し、有効成分の分析を行った。香りの官能評価は１０名の評価員にそれぞれサンプルをランダムにブラインドテストして行い、表１の評価基準にのっとり、絶対評価してもらい平均値を算出した。使用感の官能評価も１０名の評価員にそれぞれのサンプルをランダムにブラインドテストして行い、表１に示した評価基準にのっとり、絶対評価してもらい平均値を算出した。なお発酵豆乳を比較品として用いた。
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表２の結果より発酵豆乳は、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール及びグリセリンを用いて抽出したとき、香り及び使用感の評価が優れていることがわかった。
試験例４
ヘアレスマウス皮膚に実施例２で調製した発酵豆乳のエタノール抽出物及び豆乳のエタノール抽出物（いずれも固形物濃度１．７重量％）を２週間、１００μｌ／５cm3 ／匹に塗布し、ヘアレスマウス皮膚のヒアルロン酸含量に及ぼす影響を検討した。コントロールを５０％エタノール溶液とし、サンプルとして、５０重量％（希釈は５０％エタノールで行った）、１００重量％の発酵豆乳抽出物、及び１００重量％豆乳抽出物を用いた。最終塗布２４時間後に皮膚を採取し、橋爪らの方法（日本油化学会誌46，985-989，1997）で皮膚からヒアルロン酸画分を調製し、ビオチン標識ヒアルロン酸結合性タンパク（生化学工業）を用いたＥＬＩＳＡ法（Fosang，A．J.，et al，Matrix，10，306-313，1990）でヒアルロン酸を定量した。
その結果、発酵豆乳抽出物を塗布した場合、有意にヒアルロン酸含量が増加することが示された（図３）。ヒアルロン酸の増加により、皮膚のしなやかさや弾力性が向上するものと考えられる。
なお、同様の試験を実施例１で調製した１，３−ブチレングリコール抽出物でも実施したが、エタノール抽出物の場合とほとんど同じ結果が得られた。
実施例３
下記組成の化粧水を常法により製造した。
発酵豆乳エタノール抽出物（実施例１にて製造）                  １．０重量％
エタノール                                                  １０．０重量％
１，３−ブチレングリコール                                    ２．０重量％
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（５０Ｅ．Ｏ．）                ０．０５重量％
パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１重量％
香料                                                          ０．１重量％
精製水                                                        残部
得られた化粧水は肌あれ改善作用に優れ、且つさっぱりとした使用感のものであった。また、保存安定性も良好であった。
実施例４
下記組成の乳液を常法により製造した。
発酵豆乳エタノール抽出物（実施例１にて製造）                  １．０重量％
ステアリン酸                                                  ２．０重量％
流動パラフィン                                                ６．０重量％
スクワラン                                                    ２．０重量％
ソルビタンモノステアレート                                    １．５重量％
ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）  ２．０重量％
パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．０５重量％
１，３−ブチレングリコール                                    １．０重量％
香料                                                          ０．１５重量％
精製水                                                        残部
得られた乳液はしわ改善作用に優れ、しっとりとした使用感のものであった。また保存安定性にも優れていた。
実施例５
下記組成のクリームを常法により製造した。
発酵豆乳エタノール抽出物（実施例１にて製造）                  １．０重量％
流動パラフィン                                              ２３．０重量％
ワセリン                                                      ７．０重量％
ベヘニルアルコール                                            １．０重量％
ステアリン酸                                                  ２．０重量％
ミツロウ                                                      ２．０重量％
ソルビタンモノステアレート                                    １．５重量％
ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）  ２．５重量％
パラオキシ安息香酸ブチル                                      ０．０５重量％
１，３−ブチレングリコール                                    ３．０重量％
パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１重量％
香料                                                          ０．１５重量％
精製水                                                        残部
得られたクリームはしわ改善作用に優れ、使用感も良好であった。また保存安定性にも優れていた。
実施例６
下記組成の軟膏を常法により製造した。
発酵豆乳エタノール抽出物（実施例１にて製造）                  ５．０重量％
日本薬局方親水軟膏                                          ９５．０重量％
本軟膏を一日２回しわの部位に塗布（２mg／cm2）したところ、優れたしわ改善作用がみられ、また、保存安定性も良好であった。
産業上の利用可能性
本発明の皮膚外用剤及び化粧料は、しわ改善、肌荒れ改善効果に優れるため、皮膚老化防止剤又は肌荒れ改善剤として有用である。また特定の多価アルコールで抽出した発酵大豆抽出物は、香り、使用感にも優れる皮膚外用剤とすることができる。
【図１】
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【図３】
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