(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分が天然品であるアミノ酸と還元糖との反応によって得られたメラノイジンであることを特徴とする肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤。
【請求項２】
有効成分が天然品であるぺプチッドと還元糖との反応によって得られたメラノイジンであることを特徴とする肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤。
【請求項３】
有効成分が天然品である蛋白質と還元糖との反応によって得られたメラノイジンであることを特徴とする肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、アレルギー反応に起因した疾患を予防しあるいは治療する用に供するための、肥満細胞からのヒスタミンの遊離を抑制するいわゆる肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
肥満細胞は、生体組織に広く分布しており、種々の起炎刺激によってセロトニン、ロイコトリエン、ヒスタミン等の起炎物質が肥満細胞から遊離される。このようなヒスタミン等が肥満細胞から遊離されると、血管透過性亢進、平滑筋萎縮、粘液分泌亢進等のいわゆるアレルギー反応が起こる。このようなアレルギー反応を抑制するためには、脱顆粒によるヒスタミンの肥満細胞からの遊離を抑制する必要がある。
【０００３】
従来、上記ヒスタミン等の遊離を抑制し、アレルギー反応による疾患を治療するために、化学合成品である抗ヒスタミン剤が治療薬として適用されてきた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上記化学合成品からなる抗ヒスタミン剤は、ヒスタミン等の遊離抑制性や即効性については相当の効果が認められるものの、眠気やめまい、さらには吐き気を催させるような副作用が存在し、特に薬物に敏感に反応するアレルギー体質の人には化学合成品からなる抗ヒスタミン剤は適用し難いという問題点を有していた。
【０００５】
本発明は、上記のような問題点を解決するためになされたものであり、副作用がなく穏やかであり、かつ相当のヒスタミン等の遊離抑制作用を有する肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤を提供することを目的としている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明の請求項１記載の肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤は、有効成分が天然品であるアミノ酸と還元糖との反応によって得られたメラノイジンであることを特徴とするものである。
【０００７】
本発明の請求項２記載の肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤は、有効成分が天然品であるぺプチッドと還元糖との反応によって得られたメラノイジンであることを特徴とするものである。
【０００８】
本発明の請求項３記載の肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤は、有効成分が天然品である蛋白質と還元糖との反応によって得られたメラノイジンであることを特徴とするものである。
【０００９】
【作用】
上記請求項１記載の肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤によれば、有効成分がアミノ酸と還元糖との反応によって得られたメラノイジンであるため、このメラノイジンが本来的に備えている肥満細胞ヒスタミン遊離抑制作用によって、肥満細胞からのヒスタミンの遊離を有効に抑止する。そして、このメラノイジンの原料が天然品であるアミノ酸および還元糖であるため副作用はない。
【００１０】
上記請求項２記載の肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤によれば、有効成分がぺプチッドと還元糖との反応によって得られたメラノイジンであるため、このメラノイジンが本来的に備えている肥満細胞ヒスタミン遊離抑制作用によって、肥満細胞からのヒスタミンの遊離を有効に抑止する。そして、このメラノイジンの原料が天然品であるぺプチッドおよび還元糖であるため副作用はない。
【００１１】
上記請求項３記載の肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤によれば、有効成分が蛋白質と還元糖との反応によって得られたメラノイジンであるため、このメラノイジンが本来的に備えている肥満細胞ヒスタミン遊離抑制作用によって、肥満細胞からのヒスタミンの遊離を有効に抑止する。そして、このメラノイジンの原料が天然品である蛋白質および還元糖であるため副作用はない。
【００１２】
【実施例】
以下本発明の肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤について実施例を基に詳細に説明する。まず、本発明の完成に寄与した背景について述べる。我が国に古来から伝わる味噌や醤油等の発酵食品が健康食品として見直され、現在世界的に有用視されるにいたっているが、発明者らはこの味噌や醤油の中に、肥満細胞からのヒスタミン等の起炎物質の遊離を抑制する有用な成分が含まれているのではないかと着目した。そして、味噌や醤油等の発酵食品の特徴として、元の原料食品の色が濃い茶色に変色する褐変が挙げられ、従ってこの褐変を起こさせる物質に健康食品としての要素が含まれているはずであるとの考えの基に鋭意研究を進めた。
【００１３】
つまり、食品の褐変は、食品の発酵過程で起こる、アミノ基と還元糖との非酵素的なアミノ・カルボニル反応であるいわゆるメイラード反応によるものであり、この反応によってメラノイジンという褐変物質が生成するのである。こメラノイジンには、酸化による腐敗を防止する抗酸化活性や、化学物質の遺伝的変異誘発作用を抑止する変異原性抑制作用等が存在するといわれており、この点が発酵食品の貯蔵性に有効に利用されているのである。しかしながら、メラノイジンの詳細な生理作用については未知な点が多く、今後の研究に大いに期待されるところである。
【００１４】
そして、本発明者等は鋭意研究の結果、上記のようなメラノイジンに肥満細胞からヒスタミン等の起炎物質が遊離するのを抑止する作用が存在することが見出したのである。そして、このようなメラノイジンは、アミノ化合物とカルボニル化合物とを適切な反応条件下で化合させることによって容易に製造することができることをも見出した。
【００１５】
本発明においては、上記アミノ化合物としては、グリシン、アラニン、トリプトファン、アスパラギン酸等のアミノ酸、および絹フィブロイン、大豆蛋白、小麦蛋白、カゼイン、ゼラチン、羊毛ケラチン、コンキオリン蛋白等の蛋白質や上記それぞれのぺプチッドが好適に使用可能である。
【００１６】
また、上記カルボニル化合物としては、グルコース、フルクトース、ガラクトース等のアルデヒド基またはケトン基をもつ還元性能を備えた還元糖が好適に使用される。
【００１７】
そして、上記各種の原料に係るメラノイジンは、所定量の上記アミノ化合物と上記還元糖とを混合し、この混合物を所定の精製水に溶解せしめて水溶液をつくり、この水溶液の水素イオン濃度をｐＨ５〜ｐＨ１０、好ましくはｐＨ７．０〜ｐＨ９．０に調整し、このｐＨ調整後の水溶液を３０℃〜１００℃に調整して、水溶液中のアミノ化合物とカルボニル化合物とを反応させ、合成樹脂製の吸着剤「アンバーライトＸＡＤ−２」にメラノイジンを吸着させ、その後吸着したメラノイジンをエタノールによって脱着させ、目的のメラノイジンを製造することができる。１００℃近辺のときには数時間だけ反応させるようにすることが多い。工業的規模では、反応温度を上記範囲内で適切に選択し、５時間〜１０時間に設定することが好ましい。
【００１８】
上記「アンバーライトＸＡＤ−２」の使用によって、それを使用しない場合よりもより濃縮したメラノイジンを得ることができる。また、このような吸着処理を行ったメラノイジンと、吸着処理を行わないメラノイジンとの脱顆粒抑制作用について、それぞれ同一濃度の試料を用いて比較試験を行った。試験結果を比較したところ、「アンバーライトＸＡＤ−２」を用いた吸着操作を行ったものの方が脱顆粒抑制作用が大きいことが確認された。
【００１９】
さらに、「アンバーライトＸＡＤ−２」を用いて吸着操作を行えば、不純物や副生成物が当初から除去された状態でメラノイジンを得ることが可能になり、その結果得られたメラノイジンの副作用を最小限に抑えることが可能になる。
【００２０】
上記ｐＨ調整のためには、アルカリ源としての水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム等や、酸源としての塩酸等が好適に用いられる。
【００２１】
そして、上記好ましい範囲内の水素イオン濃度および反応温度が設定されると、所定の反応時間でアミノ化合物とカルボニル化合物との反応が良好に行われ、高収率でメラノイジンを得ることが可能になる。なお、いかなるｐＨ条件および温度条件においても１時間以内では良好に反応は行われない。また、６０日間以上反応させることは生産性の面で不利である。
【００２２】
上記反応の進行によって本発明に係るヒスタミン遊離抑制剤が得られる。そして、上記反応が開始されるまでは、アミノ化合物と還元糖との混合物が溶解した水溶液であったものが、メラノイジンの水溶液（反応液）に変化している。これを真空乾燥等の任意の乾燥手法を適用して乾燥粉末としてメラノイジンを取り出してもよい。さらに、必要であれば限外濾過によって分子量２００００以上のものを分取するようにすることも可能である。
【００２３】
このようにして得られた粉末状のメラノイジンを、任意の濃度の水溶液にすればスプレー剤としての肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤が得られ、ポリエチレングリコール等の軟膏基剤に混入することによって外用薬として軟膏状のヒスタミン遊離抑制剤が得られ、所定の増量剤を添加して成形することにより錠剤としての内服用の肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤が得られ、粉末状のものをそのまま用いれば粉剤としての内服用の肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤とすることができる。
【００２４】
以下、メラノイジンの具体的な製造法について具体的に説明する。
【００２５】
（１）グルコースとグリシンとによるメラノイジンの製造
２ｍｏｌのグルコースと２ｍｏｌのグリシンとを、０．２ｍｏｌの炭酸ナトリウムが溶解された１０００ｍｌの精製水に溶解して水溶液をつくる。その後希塩酸で水溶液をｐＨ８．４に調整し、反応温度を１００℃に保持して６時間反応させことにより反応液中にメラノイジンが得られる。
【００２６】
（２）グルコースとトリプトファンとによるメラノイジンの製造
２ｍｏｌのグルコースと２ｍｏｌのトリプトファンとを、０．２ｍｏｌの炭酸ナトリウムが溶解された１０００ｍｌの精製水に溶解して水溶液をつくる。その後希塩酸で水溶液をｐＨ８．４に調整し、反応温度を１００℃に保持して６時間反応させことにより反応液中にメラノイジンが生成する。この生成した液中のメラノイジンを上記「アンバーライトＸＡＤ−２」に吸着させ、エタノールで溶離、脱着することによってメラノイジンを得る。そして、この実施例においては、上記溶離、脱着したメラノイジンを含む液を対象として限外濾過を行い、分子量２００００以上のメラノイジンを取り出した。
【００２７】
（３）フルクトースとグリシンとによるメラノイジンの製造
２ｍｏｌのフルクトースと２ｍｏｌのグリシンとを、０．２ｍｏｌの炭酸ナトリウムが溶解された１０００ｍｌの精製水に溶解して水溶液をつくる。その後希塩酸で水溶液をｐＨ８．４に調整し、反応温度を１００℃に保持して６時間反応させことにより反応液中にメラノイジンが生成する。この生成した液中のメラノイジンを上記「アンバーライトＸＡＤ−２」に吸着させ、エタノールで溶離、脱着することによってメラノイジンを得る。そして、この実施例においては、上記溶離、脱着したメラノイジンを含む液を対象として限外濾過を行い、６時間反応させることにより上記溶液中にメラノイジンが得られる。この実施例においても反応液を対象として限外濾過を行い、分子量２００００以上のメラノイジンを取り出した。
【００２８】
（４）グルコースとアスパラギン酸とによるメラノイジンの製造
２ｍｏｌのグルコースと２ｍｏｌのアスパラギン酸とを、０．２ｍｏｌの炭酸ナトリウムが溶解された１０００ｍｌの精製水に溶解して水溶液をつくる。その後希塩酸で水溶液をｐＨ８．４に調整し、反応温度を１００℃に保持して６時間反応させことにより反応液中にメラノイジンが生成する。この生成した液中のメラノイジンを上記「アンバーライトＸＡＤ−２」に吸着させ、エタノールで溶離、脱着することによってメラノイジンが得られた。
【００２９】
（５）小麦ぺプチッドとグルコースとによるメラノイジンの製造
平均分子量が５０００の小麦ぺプチッド５ｇと、０．５ｍｏｌのグルコースとを、０．５ｍｏｌの炭酸水素ナトリウムが溶解された１０００ｍｌの精製水に溶解して水溶液をつくる。その後希塩酸で水溶液をｐＨ７．４に調整し、反応温度を１００℃に保持して６時間反応させることにより反応液中にメラノイジンが得られる。
【００３０】
（６）大豆ぺプチッドとグルコースとによるメラノイジンの製造
平均分子量が５０００の大豆ぺプチッド５ｇと、０．５ｍｏｌのグルコースとを、０．５ｍｏｌの炭酸水素ナトリウムが溶解された１０００ｍｌの精製水に溶解して水溶液をつくる。その後希塩酸で水溶液をｐＨ７．４に調整し、反応温度を１００℃に保持して６時間反応させることにより反応液中にメラノイジンが生成する。この生成した液中のメラノイジンを上記「アンバーライトＸＡＤ−２」に吸着させ、エタノールで溶離、脱着することによってメラノイジンが得られた。
【００３１】
（７）絹フイブロイン蛋白質とグルコースとによるメラノイジンの製造
５ｇの絹フイブロイン蛋白質と、０．５ｍｏｌのグルコースとを、０．５ｍｏｌの炭酸水素ナトリウムが溶解された１０００ｍｌの精製水に溶解して水溶液をつくる。その後希塩酸で水溶液をｐＨ７．４に調整し、反応温度を１００℃に保持して６時間反応させることにより反応液中にメラノイジンが得られる。
【００３２】
（８）真珠コンキオリン蛋白質とグルコースとによるメラノイジンの製造
５ｇの真珠コンキオリン蛋白質と、０．５ｍｏｌのグルコースとを、０．５ｍｏｌの炭酸水素ナトリウムが溶解された１０００ｍｌの精製水に溶解して水溶液をつくる。その後希塩酸で水溶液をｐＨ７．４に調整し、反応温度を１００℃に保持して６時間反応させることにより反応液中にメラノイジンを得ることができる。
【００３３】
（９）羊毛ケラチン蛋白質とグルコースとによるメラノイジンの製造
５ｇの羊毛ケラチン蛋白質と、０．５ｍｏｌのグルコースとを、０．５ｍｏｌの炭酸水素ナトリウムが溶解された１０００ｍｌの精製水に溶解して水溶液をつくる。その後希塩酸で水溶液をｐＨ７．４に調整し、反応温度を１００℃に保持して６時間反応させることにより反応液中にメラノイジンが生成する。この生成した液中のメラノイジンを上記「アンバーライトＸＡＤ−２」に吸着させ、エタノールで溶離、脱着することによってメラノイジンが得られた。
【００３４】
（１０）カゼイン蛋白質とグルコースとによるメラノイジンの製造
５ｇのカゼイン蛋白質と、０．５ｍｏｌのグルコースとを、０．５ｍｏｌの炭酸水素ナトリウムが溶解された１０００ｍｌの精製水に溶解して水溶液をつくる。その後希塩酸で水溶液をｐＨ７．４に調整し、反応温度を１００℃に保持して６時間反応させることにより反応液中にメラノイジンが生成する。この生成した液中のメラノイジンを上記「アンバーライトＸＡＤ−２」に吸着させ、エタノールで溶離、脱着することによってメラノイジンが得られた。
【００３５】
（試験例）
本発明に係る肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤は、肥満細胞内における脱顆粒を抑制し、その結果肥満細胞からのヒスタミン等の遊離が有効に抑止されることによって、花粉症、食物アレルギーあるいはじん麻疹等のアレルギー症状の予防および治療に有効である。
【００３６】
そこで、上記予防および治療に有効であることを確認するために、以下の試験を実施した。この試験は、ヒスタミン遊離剤として広く使用されているコンパウンド４８／８０による肥満細胞からのヒスタミン遊離を、本発明に係るヒスタミン遊離抑制剤がどの程度抑えることができるかによって効果を確認するものである。
【００３７】
この試験について以下詳細に説明する。
体重１５０ｇ〜２５０ｇのウイスター系の雄性ラットを脱血致死させ、その腹腔内に２％のタイロード液を注入し、軽く腹部マッサージを施してから開腹して腹腔内の浸出細胞を採取した。
【００３８】
また、胸腔についても同様の操作を施して胸腔浸出細胞を採取した。これらの両浸出細胞を合わせて、４℃において１００Ｇ（重力の加速度の１００倍の加速度）で１０分間遠心分離し、沈殿した細胞を採取した。この沈殿細胞に、２％の牛胎児血清を含むタイロード液に２２．５％（Ｗ／Ｖ）になるように溶解したメトリズアミドを重層し、この重層物を室温において３５０Ｇで再度遠心分離し、沈殿した肥満細胞を採取した。このようにして取り出された肥満細胞を、２％の牛胎児血清を含むタイロード液中に１０００００個／ｍｌの濃度になるように懸濁させ、肥満細胞の浮遊液を得た。このような操作を行って９０〜９５％純度の肥満細胞を浮遊液の形で上記ラットから採取した。
【００３９】
上記肥満細胞浮遊液１ｍｌに、最終濃度が１ｍｇ／ｍｌになるように本発明に係るヒスタミン抑制剤が含まれたタイロード液０．１ｍｌを添加し、３７℃で１０分間前処理を行った。その後この浮遊液に予め３７℃に加温してあるコンパウンド４８／８０溶液を肥満細胞の最終濃度が１μｇ／ｍｌになるように０．１ｍｌ添加し、３７℃で１５分間反応させ、氷冷後４℃、１００Ｇで１０分間遠心分離して上澄と沈渣とに分離した。
【００４０】
このような試験操作を、上記（１）〜（１０）に示した１０種類の本発明に係るヒスタミン抑制剤のそれぞれを用いて行った。そして、それぞれの抑止剤についての上澄と沈渣とのヒスタミン量をＳｈｏｒｅ，Ｐ．Ａ等の方法（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒａｐ．１２７，１８２，１９５９）に準じて蛍光分析法によって測定し、ヒスタミン遊離率およびヒスタミン遊離抑制率を算出した。計算式は以下の通りである。
【００４１】
ヒスタミン遊離率（％）＝｛（肥満細胞から遊離されたヒスタミン量）／（肥満細胞内の全ヒスタミン量）｝×１００
ヒスタミン遊離抑制率（％）＝［｛１−（Ａ−Ｃ）｝／（Ｂ−Ｃ）］×１００
但し、上記式において、Ａは本発明に係るヒスタミン遊離抑制剤と刺激剤とを添加したときのヒスタミン遊離率、Ｂは本発明に係るヒスタミン遊離抑制剤のみを添加したときのヒスタミン遊離率、Ｃは本発明に係るヒスタミン遊離抑制剤および刺激剤の双方を添加しなかったときのヒスタミン遊離率である。
【００４２】
それぞれのヒスタミン遊離抑制剤のヒスタミン遊離抑制率を表１に示す。
【００４３】
【表１】
0003651921.tif 000002
【００４４】
この表に示すように、肥満細胞浮遊液に肥満細胞遊離抑制剤を添加し、コンパウンド４８／８０溶液を最終濃度が１μｇになるように添加したときのヒスタミン遊離抑制率は３５％〜７０％であり、確実に肥満細胞からのヒスタミンの遊離を抑止していることを確認することができた。
【００４５】
因に、この実験においては、比較例として本発明に係るヒスタミン遊離抑制剤を添加せず、コンパウンド４８／８０溶液のみを、最終濃度が１μｇ／ｍｌになるように添加したときのヒスタミン遊離率を測定したが、ヒスタミン遊離率は８１．２％であり、本発明のヒスタミン遊離抑制率３５％〜７０％が、如何にヒスタミン遊離抑止効果として大きな数字であるかが判る。
【００４６】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明の肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤は、有効成分が、アミノ酸、ぺプチッドおよび蛋白質のうちのいずれかと還元糖との反応によって得られたメラノイジンであり、このようなメラノイジンは上記効果確認試験の結果で判るように、肥満細胞からヒスタミンが遊離するのを抑止する効果が顕著である。また、このようなメラノイジンは、原料がいずれも天然品であるアミノ酸、ぺプチッドあるいは蛋白質であるため、従来適用されていた化学合成品に比較して副作用が全く存在せず、薬効はあるが副作用の薬害によって適用がし難いというような不都合は存在せず、安心して適用することができる。
【００４７】
そして、本発明の肥満細胞ヒスタミン遊離抑制剤の適用者は、上記試験結果で判るように、優れたヒスタミン遊離抑制効果によって、アレルギー反応が生ぜず、アレルギー反応に起因する疾患を有効に抑止し、かつ治療することが可能になる等極めて有用である。