(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一つのノイラミニダーゼ結合２，３−デヒドロ−シアリン酸誘導体（２）に該シアリン酸誘導体（２）のＣ７位を介して結合した高分子を含む高分子化合物であって、
0003691075.tif 000020
（式中、Ｒはアジド基、非置換もしくは置換グアニジン基、または非置換もしくは置換アミノ基を表し、
Ｒ2はＣＯＣＨ3、ＣＯＣＦ3、ＳＯ2ＣＨ3またはＳＯ2ＣＦ3を表し、
ＷはＯ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ、Ｏ（Ｃ＝Ｓ）ＮＨ、ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨまたはＮＨ（Ｃ＝Ｓ）ＮＨを表す）、
上記シアリン酸誘導体がインフルエンザウイルスノイラミニダーゼの活性部位に結合するがノイラミニダーゼによって切断されない高分子化合物。
【請求項２】
高分子の骨格による立体障害をシアリン酸誘導体が受けないようにスペーサーもしくはリンカー基を介してシアリン酸誘導体が上記高分子に結合してなる、請求項１記載の高分子化合物。
【請求項３】
シアリン酸誘導体が阻害定数（ＩＣ50）１０-6Ｍ以下でインフルエンザウイルスノイラミニダーゼを阻害する、請求項１または２記載の高分子化合物。
【請求項４】
シアリン酸誘導体が、シアリン酸構造の７位を介して官能化された化合物（Ｉ）
0003691075.tif 000021
である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の高分子化合物。
【請求項５】
次式（ＩＩ）：
（Ｘ−Ｙ）n−Ｍ−（Ｚ）m        （ＩＩ）
［式中、Ｘはスペーサー基Ｙを介して７位で高分子Ｍに連結しているノイラミニダーゼ結合２，３−デヒドロシアリン酸誘導体（２）
0003691075.tif 000022
であり、かつＺは高分子上の任意の追加的置換基であり、
スペーサーＹはＷ基に結合し、かつ
Ｒはアジド基、非置換もしくは置換グアニジン基、または非置換もしくは置換アミノ基を示し；
Ｒ2はＣＯＣＨ3、ＣＯＣＦ3、ＳＯ2ＣＨ3またはＳＯ2ＣＦ3を示し；
ＷはＯ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ、Ｏ（Ｃ＝Ｓ）ＮＨ、ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨまたはＮＨ（Ｃ＝Ｓ）ＮＨを表しかつＮＨを通じて基Ｙに結合しており；
ｍは０から１０００の整数であり；かつ
ｎは１から１０００の整数であり、このスペーサー基Ｙは炭素、窒素、酸素および硫黄から選択された１０００原子までの、任意に置換された鎖であり；
高分子Ｍは共有結合もしくは非共有結合でスペーサー基Ｙに連結した、分子量１０4から１０7までの合成もしくは天然ポリマー、蛋白、抗体または酵素である］
にて表される、請求項１から３のいずれか一項記載の高分子化合物。
【請求項６】
Ｚが、血球凝集素を結合する２−結合シアリン酸誘導体である、請求項５記載の高分子化合物。
【請求項７】
Ｚが、ビオチンまたは蛍光分子である、請求項５記載の高分子化合物。
【請求項８】
Ｚがセイヨウワサビ（ＨＲＰ）またはアルカリホスファターゼ（ＡＰ）から選択される、検出アッセイに使用するのに適した酵素である、請求項５記載の高分子化合物。
【請求項９】
ＺがＮＨ2、ＳＨ、ＣＯ2Ｈ、ＣＨＯまたはＣＨ＝ＣＨ2からなる群から選択される、表面に上記高分子Ｍを結合させるのに適した末端官能性を有する基である、請求項５記載の高分子化合物。
【請求項１０】
スペーサー基Ｙが、オリゴ糖、多糖、ポリエチレングリコール単位、および末端アミノ基を有する化合物であってアミノアルキル基、（ポリ）アミノ酸、線状ペプチドおよびアミノジアルキル尿素から選択される基を有する化合物からなる群から選択される、請求項５から９のいずれか一項記載の高分子化合物。
【請求項１１】
Ｙが、アミノアルキル基、（ポリ）アミノ基、線状ペプチドまたはアミノジアルキル尿素を表す、請求項１０記載の高分子化合物。
【請求項１２】
高分子Ｍが、蛋白、酵素、抗体、水溶性合成ポリマー、多糖およびポリアミノ酸からなる群から選択される、請求項５から１１のいずれか一項記載の高分子化合物。
【請求項１３】
高分子Ｍが、血清アルブミン（ＢＳＡ）、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アビジン、ストレプトアビジンまたはノイトロアビジン、および免疫グロブリンからなる群から選択される、請求項５から１１のいずれか一項記載の高分子化合物。
【請求項１４】
高分子Ｍが多糖、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール、ポリ尿素、ポリ酸、ポリエステル、ポリアミドおよびＮ−（２−ヒドロキシ−プロピル）メタクリルアミド（ＨＭＰＡ）からなる群から選択される、請求項５から１１のいずれか一項記載の高分子化合物。
【請求項１５】
Ｒが、メチル、エチル、アリル、アミノ、シアノまたはニトロ基で置換されたグアニジノまたはアミノ基である、請求項１から１４のいずれか一項記載の高分子化合物。
【請求項１６】
Ｘが式（２）の化合物であり、式中のＲがグアニジンであり、Ｒ2がアセチルであり、Ｗが基Ｏ（＝ＣＯ）ＮＨであり、スペーサーＹが６から６０の炭素、窒素および酸素原子からなる鎖である、請求項５記載の高分子化合物。
【請求項１７】
インフルエンザウイルスノイラミニダーゼの活性部位に特異的に結合し得る、請求項１から１６のいずれか一項記載の化合物に、該ウイルスを含むと疑がわれる試料を露出する工程を含む、インフルエンザウイルスの検出方法。
【請求項１８】
上記化合物が共有結合または非特異的結合により表面に結合し、かつこの場合のスペーサー基Ｙは、ノイラミニダーゼ結合単位Ｘが高分子Ｍの表面にさらされてウイルス粒子へと接近できるのに十分な長さを有する、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
選択的捕獲アッセイ、選択的検出アッセイ、または選択的捕獲−選択的検出の組み合わせアッセイである、請求項１７または１８記載の方法。
【請求項２０】
請求項１から５、９、１０および１４から１６のいずれか一項記載の化合物または医薬として容認できるそれらの誘導体を、医薬として容認できる担体と共に含むインフルエンザＡまたはインフルエンザＢの治療用医薬組成物であって、ノイラミニダーゼに対するこの化合物のＩＤ50が５μｇ/ｍｌ未満である組成物。
【請求項２１】
この化合物が請求項４記載の化合物である、請求項２０記載の組成物。
【請求項２２】
一種または２種以上の追加的治療活性剤をさらに含む、請求項２０または２１記載の組成物。
【請求項２３】
追加的治療活性剤が抗ウイルス剤である、請求項２２記載の組成物。
【請求項２４】
請求項１から５、９、１０および１４から１６のいずれか一項記載の化合物、または医薬として容認できるそれらの誘導体を含む、ヒトを包含する哺乳類におけるインフルエンザ感染の治療剤であって、ノイラミニダーゼに対する上記化合物のＩＤ50が５μｇ／ｍｌ未満である治療剤。
【請求項２５】
インフルエンザウイルス感染の治療用医薬を製造するための、請求項１から５、９、１０および１４から１６のいずれか一項記載の化合物の使用であって、この化合物のノイラミニダーゼに対するＩＤ50が５μｇ／ｍｌ未満であり、上記化合物および医薬的に許容される担体を混合して医薬用処方物の形態とする使用。
【発明の詳細な説明】
本発明は新規部類の化学的化合物およびそれらの医薬としての使用に関するものである。特に本発明は新規高分子体、それらの調製法、それらの医薬処方および抗インフルエンザ剤としてのそれらの使用に関する。また本発明はすべての型のインフルエンザＡおよびＢウイルスの検出に使用できる新規診断法も提供する。
発明の背景
インフルエンザＡおよびＢウイルスは急性呼吸器疾患の主原因であり、米国のみで年間推定３０−５０（百万）の感染を起こす。インフルエンザＡは1919年の”Spanish Flu”等の主要な流行性疫病の原因であり数百万人がこれにより死亡した。インフルエンザは制御困難な疾病として留まり、著しい罹病率を示し、これによる死亡率は老年もしくは衰弱患者における２次感染によるところが大きい。抗原性のシフトもしくはドリフトによりワクチン類は絶えず時代遅れとなり、したがって免疫化は感染防止の有効性約７０％に過ぎない。取締当局により認可されたインフルエンザ治療薬はアマンチジンおよびリマンチジンのみであり、これらはインフルエンザＢに対して無効で、また重い副作用を示すことが知られている。
多くのウイルスおよび細菌感染はインフルエンザ様の症状を示すことがある。呼吸器ウイルスの迅速な同定は、病気初期に最も適切な治療法の採用を医者をして可能ならしめる。例えば抗細菌治療法の採用や子供・老年者の入院に就いての決断は、正確な早期診断が可能にする。
臨床材料中のウイルス同定を目的とする実験室的試験法は広く採用され、かつ各種の異なった検出法が利用できる。Marcel Dekker 1992, Ed E. H. Lennetteによる教科書”Laboratory Diagnosis of Viral Infections”はインフルエンザウイルスを包含する広範囲のウイルスに利用される方法を一般的に論議している。
インフルエンザＡおよびＢの診断用には多数の試験法が利用できる。インフルエンザウイルスを同定する伝統的方法は細胞培養法の採用であり、この方法は高度に鋭敏で特異的である。残念乍らインフルエンザウイルスの培養、単離および同定に必要な時間は２日から１０日の範囲であり、したがって適切な治療法を医者に手引きするには事実上役立たない。インフルエンザウイルス感染は通常は自己制限性であるから、治療を有効ならしめるには診断は迅速であらねばならない。
インフルエンザ検出用細胞培養法に加えて、最近ではインフルエンザＡに対して特異的な迅速直接試験法が幾つか利用できるようになった。このように、モノクロナール免疫蛍光アッセイ（ＩＦＡ）が報告され（Spada, B. らのJ. Virol. Method, 1991 33 305）、かつ少なくとも一種の迅速酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）が利用できる（Ryan-Poirier, K. A. らのJ. Clin. Microbiol., 1992 30 1072）。インフルエンザＡ用のこれらの迅速検出法に類似した多数の方法が報告されている；例えばLeonardi, G. P. らのJ. Clin. Microbiol., 1994 32 70参照、この著者らは治療開始に間に合うウイルス同定および感染制御対策の両方を可能ならしめ、かつ社会に蔓延中のインフルエンザ株の抗原性構成をモニターするために、培養単離と併用した直接標本試験を推奨している。
ＩＦＡ法は労力を必要とし、多くの技術的経験を要し、しばしば解釈困難な結果を招く。他方、ＥＩＡ（Directigen FLU-A；Becton Dickinson Microbiology Systems）法は誤った陽性結果を高水準で与えるので、このアッセイは直接免疫蛍光試験に追加して、またはその代替として試験室のみで採用すべきことが推奨されている（Waner, J. L. らのJ. Clin. Microbiol., 1991 29 479）。
最近利用可能なインフルエンザ用迅速アッセイに伴う上記問題点はもとより、ある種のこれらの方法には他の基本的な欠陥がある。第１に、利用可能ないずれのアッセイもインフルエンザＢの検出ができず、このことは採用すべき治療法の型について負の試験結果でさえも医者に疑念を抱かせることを意味する。第２に、ある種の迅速免疫アッセイ法がインフルエンザＡ蛋白の一つに対する抗体の使用に依存しているならば、抗原性蛋白構造におけるドリフトまたはシフトを受けたウイルス新株の検出ついては重大な問題になりかねない。インフルエンザＡはこの種の変化を経験するその性行で悪名高い。
インフルエンザウイルスの迅速アッセイの他の型は一連の特許明細書に記載がある（例えば、Liav, A.らのPCT  特許出願第92/12256号）。この方法には、インフルエンザノイラミニダーゼ酵素に対する色素源基質の使用が包含される。換言すればこのアッセイは、特有のシアリン酸（sialic acid）・色素複合体分子をインフルエンザノイラミニダーゼが切断する際に形成する色素の可視化に依存する。この技法はウイルスノイラミニダーゼおよび酵素の他の形態の存在の間、特に細菌ノイラミニダ−ゼの存在の間を容易には区別し得ないので、この方法の特異性には限界があるように見える。ウイルスノイラミニダーゼの活性は比較的緩慢なので、この方法の感度は低い。
インフルエンザＡおよびＢは二つの主要な表面糖蛋白質、ヘマグルチニン（ＨＡ）および酵素ノイラミニダーゼ（ＮＡ）を有し、これら両方共に感染には必須である。ＨＡはウイルスが細胞へ取り付くのに必要であり、一方、ＮＡは細胞表面からのウイルスの放出に必要であると信じられる。通常約６００の三量体ＨＡおよび約５０コピー数のＮＡ四量体単位が各ウイルス粒子表面に存在する。したがって抗インフルエンザ薬剤研究ではＨＡおよびＮＡの両方は格好の潜在的標的であるが、今日までこれらの部位のいずれかに作用する抗インフルエンザ薬は臨床用として入手できない。
インフルエンザウイルス血球凝集素は糖蛋白質および糖脂質を含む細胞表面受容体上のシアリン酸に結合し、これにより細胞へのウイルスの取り付きおよび引き続く感染のプロセスを開始する。ウイルス粒子の細胞膜への結合の強さはインフルエンザＨＡの多重コピーと細胞表面上の多重シアリン酸基との間の相互作用に依存するようにみえる。
多価相互作用についての上記概念を利用して、ヘマグルチニン阻害剤として作用する２種またはそれを超す種類のシアリン酸誘導体を含む高分子体（macromolecules）の合成を幾人かの研究者が報告している。ある種の強力なＨＡ阻害剤が発見されてはいるが、これらの多価高分子体のいずれもがin vivoではインフルエンザ感染を阻止するようには見られない。Whitesidersおよび共同研究者による最近の報告（J. Amer., Chem. Soc., 1996 118 3789-3800; J. Medicinal Chem., 1995 38 4179-4190）は、インフルエンザ血球凝集素阻害剤の設計にこのアプローチを利用した各種努力の成果を要約している。
幾つかのＮＡの既知阻害剤があり、それらの大半は２−デオキシ−２，３−ジデヒドロ−Ｎ−アセチルノイラミン酸（ＤＡＮＡ）（MeindlらのVirology, 1974 58 457-63）等の、この酵素の天然基質であるノイラミン酸の間近な類似体である。国際特許出願第ＷＯ 91/16320号公報には、インフルエンザＡおよびＢノイラミニダーゼに対してin vitroおよびin vivo両方で極めて活性なＤＡＮＡ類似体の記載がある。これらの化合物の一つ（化合物Ｉ、ＧＣ１６７または４−グアニジノ−ノイ（Ｎｅｕ）５Ａｃ２エン（ｅｎ）と呼称）は臨床試験中であり、インフルエンザ治療に有望視される（Hayden, F. G. らのJ. Amer. Med. Assoc., 1996 275 295）。
0003691075.tif 000002
一層最近では、ノイラミニダーゼ阻害活性を有する芳香族化合物がLuoらの米国特許第5,453,533号および同第5,512,596号公報（Gilead Sciences, Inc.）に記載され、また化合物（Ｉ）特に炭素６で側鎖がエーテル結合した化合物の類似体が国際特許出願ＷＯ 96/26933号（Gilead Sciences, Inc.）およびC. KimらのJ. Amer. Chem. Soc., 1997 119 681に記載されている。
化合物（Ｉ）のより単純で一層強力な類似体を幾人かの研究者が発見すべく試みたが、今日までの報告（例えば、Bamford M. J., J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 1995, 1181）では化合物（Ｉ）の構造、特にグリセロール側鎖におけるいかなる変更でもノイラミニダーゼ結合性を低減させるらしいことを示す。加えて、ＨＡの状況とは対照的に、ノイラミニダーゼの既知高分子阻害剤もしくは既知ポリマー阻害剤のいずれかであるようには見えない。シアリン酸含有ポリマーはRoyらの米国特許第5,192,661号およびBovinらの米国特許第5,571,836号公報中に記載があるが、これらの化合物は抗原としての使用または血球凝集素のバインダーとしての利用目的に設計された合成ポリシアロシドであった。
発明の要約
第１の局面において本発明は、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼの活性部位に結合する一種または２種以上の分子を付着した高分子化合物を提供する。；これらの分子はここでは”ノイラミニダーゼバインダー”と呼称する。好ましくは、このノイラミニダーゼバインダーはスペーサーもしくはリンカー基を介して上記分子に取り付けられるので、ノイラミニダーゼバインダーは高分子骨格による立体障害は受けない。このノイラミニダーゼバインダーは酵素により切断されない限り、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼの活性部位に結合する任意の薬剤でありうる。この結合は非可逆的である必要はないが、結合基はＩＣ50が好ましくは１０-6Ｍまたはそれ未満の高結合親和性を有するべきである。
本発明は特に新規部類の化学的化合物、およびインフルエンザＡおよびＢの治療と検出のための治療薬および診断薬としてのそれらの使用に関する。一層詳細には本発明は、インフルエンザＡまたはＢのノイロミニダーゼに結合し、かつ任意に表面にその化合物を結合させ得る官能性も保有し、または検出可能標識としても利用できるノイラミン酸（シアリン酸）誘導体を結合した高分子体に関する。
予想外にも発明者らは、化合物（Ｉ）がそのシアリン酸構造の７位を通じて官能化されると、大きな合成もしくは天然ポリマーにこれが結合してインフルエンザＡおよびＢノイラミニダーゼを抑制し、かつインフルエンザ感染を抑制または阻害し得る複合体を与えうることを見いだした。化合物（Ｉ）のインフルエンザノイラミニダーゼ結合性を破壊するよりも寧ろ、多数の上記化合物およびその類似化合物は適当なスペーサーによりそれらの７位置を通じて各種高分子と連結する際には、シアリン酸基当りの平均的結合が実質的に低減しないことを発明者らは見いだした。かくしてノイラミニダーゼへの結合を通じて、この高分子体はウイルスに固く結合し、かつおそらくその複合体の大きさと立体効果に起因してインフルエンザビリオンの感染性が低減する。このような高分子化合物は選択的にイフルエンザウイルスに結合すると同時に、表面または検出可能連結基に結合し得る両方の能力を通じてインフルエンザＡおよびＢウイルスを検出するのにも利用できる。
本発明高分子化合物の生物学的活性および本発明診断法は、双方ともにインフルエンザウイルスノイラミニダーゼの活性部位に特異的に結合し得る、上記高分子体上のリガンドの利用に基づいており、または臨床標本中のインフルエンザウイルスを同定するための結合薬および／または検出薬としてのこの種化合物の官能化誘導体上のリガンドの利用に基づいている。ここえの”ノイラミニダーゼバインダー”なる用語は、以下これら化合物およびそれらの官能化誘導体を指す。本発明方法および化合物は非特異的にインフルエンザウイルスノイラミニダーゼに結合する化合物の存在または不在下のいずれでも機能できる。
好ましい実施態様において本発明は、式（ＩＩ）：
（Ｘ−Ｙ）n−Ｍ−（Ｚ）m          （ＩＩ）
［式中、Ｘはスペーサー基Ｙを介して７位で高分子Ｍに結合したノイラミニダーゼ結合２，３−デヒドロシアリン酸誘導体（２）であり、Ｚはこの高分子上の任意の追加的置換基である］
にて表される化合物を提供する。
ノイラミニダーゼ結合部分Ｘは、式（２）
0003691075.tif 000003
［式中、スペーサーＹはＷ基に結合し、かつ
Ｒはアジド基、非置換もしくは置換グアニジノ基、または非置換もしくは置換アミノ基を示し；
Ｒ2はＣＯＣＨ3、ＣＯＣＦ3、ＳＯ2ＣＨ3またはＳＯ2ＣＦ3を示し；
ＷはＯ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ、Ｏ（Ｃ＝Ｓ）ＮＨ、ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨまたはＮＨ（Ｃ＝Ｓ）ＮＨを表しかつＮＨを通して基Ｙに結合しており；
ｍは０から１０００の整数であり；かつ
ｎは１から１０００］の整数である］
にて表されるシアリン酸誘導体である。
スペーサー基Ｙは炭素、窒素、酸素および硫黄から選択された１０００原子までの任意に置換された鎖である。
高分子Ｍは分子量１０4から１０7までの合成もしくは天然ポリマー、蛋白、抗体、または酵素である。
Ｙ基は一般的には高分子Ｍに共有結合で連結されるが、例えばＭがアビジンであり、かつＹが末端ビオチン基を有する場合には非共有結合を通じても結合し得る。
第２の任意置換基Ｚは、２−結合シアリン酸誘導体等の血球凝集素を結び付ける基、またはビオチンもしくは蛍光分子等の検出可能標識として作用し得る基であってよく、または抗体結合ハプテンであってもよい。この任意置換基Ｚはインフルエンザの検出を可能にするのに使用できるセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）またはアルカリ性ホスフアターゼ（ＡＰ）であってもよい。これとは別に、この基ＺはＮＨ2、ＳＨ、ＣＯ2Ｈ、ＣＨＯ、またはＣＨ＝ＣＨ2等の、一定表面に高分子を結合するのに適した末端官能性（functionality）を有する基であってもよい。
他の好ましい実施態様では本発明は、式（ＩＩＡ）：
（Ｘ’−Ｙ）n−Ｍ−（Ｚ）m        （ＩＩＡ）
［式中、Ｘ’は式（２ａ）
0003691075.tif 000004
にて表され、エーテル側腕を通じて連結するノイラミニダーゼ結合シクロヘキセニル誘導体であり、
Ｒ、Ｒ2、Ｙ、ｎおよびｍは式（２）で定義したものであり、かつ
Ｒ1およびＷ’は一種または２種以上のハロゲン原子またはアルコキシ、ハロアルコキシまたは任意に置換されたアリール基により任意に置換された親油性Ｃ1−Ｃ12アルキルもしくはアルキレン基である］
にて表されるノイラミニダーゼバインダーを提供する。
適切なスペーサー基Ｙの例中には、アミノアルキル基、（ポリ）アミノ酸、直鎖ペプチド、オリゴ糖類および多糖類、ポリエチレングリコール単位、およびアミノ−ジアルキル尿素が包含されるが、これらのみには限定されず、これらのいずれもが単独または組み合わせで使用できる。典型的にはスペーサー基Ｙは高分子Ｍ上にアミドもしくはシッフ塩基結合形成に用いる末端アミノ基を有する。
グアニジノもしくはアミノ基Ｒの適切な置換基の例には、メチル、エチル、アリル、アミノ、シアノまたはニトロが包含される。
適切な高分子体Ｍの例中には、蛋白、酵素、抗体、ポリアクリル酸およびポリアクリルアミド等の水溶性合成ポリマー、多糖類およびポリアミノ酸が包含される。診断用に特に適する高分子体の例には、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アビジン、およびストレプトアビジンもしくはノイトロアビジン（neutravidin）等の関連蛋白、ならびに免疫グロブリンが包含される。
インフルエンザ治療に使用される場合の本発明化合物の使用に特に適する高分子体の例には、多糖類、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール、ポリ尿素、ポリ酸、ポリエステル、ポリアミドおよびＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリルアミド（ＨＭＰＡ）等の各種共重合体等の合成ポリマーが包含され、これらはヒトへの投与に対して安全であることが知られている。当業者においては他の医薬として容認されるポリマーにも気づくはずである。
本発明化合物の好ましい一群はＸが式（２）で表されるＧＧ１６７誘導体である［式中、Ｒはグアニジン、Ｒ2はアセチル、Ｗは基Ｏ（＝ＣＯ）ＮＨ、スペーサーＹは６から６０の炭素、窒素および酸素原子から作られた鎖である］化合物（ＩＩ）を含む。
式（ＩＩ）で表される高分子体はインフルエンザＡおよびＢノイラミニダーゼの阻害剤であり、抗インフルエンザ活性を有する。かくして本発明の第２の局面では、本発明化合物好ましくは式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＡ）の化合物を、または医薬として容認できるそれらの誘導体を、医薬として許容できる担体と共に含む、インフルエンザＡまたはインフルエンザＢ治療のための医薬組成物が提供される。
第３の局面によれば、本発明化合物好ましくは式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＡ）の化合物または医薬として容認し得るそれらの誘導体の有効量を、インフルエンザ感染の治療を必要とする哺乳類に投与する工程を包含する、ヒトを含めた哺乳類のインフルエンザ感染の治療方法が提供される。
第４の局面によればインフルエンザウイルス感染の治療薬製造用への本発明化合物の使用、好ましくは式（ＩＩ）または式（ＩＩＡ）化合物の使用が提供される。
本発明化合物は他の治療薬例えば他の抗感染剤、特に他の抗ウイルス剤との組み合わせでも使用できる。したがって本発明のさらなる局面では、一種または２種以上の更なる治療活性剤、特に抗ウイルス剤との併用における本発明化合物好ましくは式（ＩＩ）もしくは式（ＩＩＡ）の化合物、または医薬として容認し得るそれらの塩もしくはそれらの誘導体を、医薬として容認できる担体と共に含有する医薬組成物が提供される。
本発明の他の局面では、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼの活性部位に特異的に結合し得る本発明化合物に、インフルエンザウイルスを含むものと疑がわれる試料を露出する工程を包含する、インフルエンザウイルス検出法が提供される。
本発明方法はインフルエンザＡおよびインフルエンザＢのすべての型に適用されうる。
インフルエンザ検出の場合、本発明化合物（ＩＩ）は共有結合または非特異的結合のいずれでも、表面に結合することが可能である。スペーサー基Ｙは、ノイラミニダーゼ結合単位Ｘが高分子体Ｍの表面に露出し、かつウイルス粒子へと接近し得るに十分に長くあるべきである。
インフルエンザ検出の場合の本発明方法は、式（ＩＩ）化合物を用いた選択的捕獲、これによるウイルスの濃縮、引き続く便利な従来型方法のいずれかを採用するウイルス検出法を利用する；この検出法は固有の選択性を有する必要はない。例えばバインダー（ＩＩ）は膜もしくはポリマー等の支持材料に付着することができ、したがって試料を支持体を通じてまたは支持体上方に通過させるとウイルス粒子が選択的に捕獲および濃縮される。したがって本発明の好ましい一実施態様では、基Ｚは表面に結合し得る官能性において終結する。好ましい多くの官能価が業界で知られている。
これとは別に、選択的検出アプローチも採用できる；試料中のウイルス粒子は例えば非特異的に捕獲され、次いでバインダーがウイルス粒子表面のインフルエンザノイラミニダーゼに選択的に付着するような条件下で、検出可能標識Ｚを含む高分子ノイラミニダーゼバインダー（ＩＩ）に露出される。この検出可能標識を次いで従来型方法のいずれかを用いて検出する。いくつかの検出システムでは、例えば表面のスポットもしくは線の限られた領域中に試料を集中すると便利である。これは各種の方法で遂行できる；例えば試料をフィルターもしくは他の支持材料上に懸濁もしくは非選択的に捕獲し、次いで上記のような標識バインダーに露出してもよい。
これとは別の他の局面で本発明は、選択捕獲および選択検出の組み合わせを利用して簡単で感受性のインフルエンザウイルスの２段検出法を提供することができる。これは通常のインフルエンザウイルス粒子がウイルス球表面上に広がる約１００ノイラミニダーゼ分子を有するという事実を利用したものであり（White, D.0., Curr. Top. Microbiol. Immunol., 1974 63 1-48）、したがって一種以上のバインダーに同時に取り付くことができる。
このように、ノイラミニダーゼバインダー化合物（ＩＩ）は例えば多孔性膜の一定長さに亙った狭いバンドとして支持体に結合することができる。次いで試験試料を膜の他の端部に施して結合化合物のバンドをわたって流れさせる。試料中のいずれのインフルエンザウイルス粒子もこの膜結合化合物（ＩＩ）によりトラップされ、かくして狭いバンド中に保持される。試験の第２段階では、他のノイラミニダーゼバインダー（ＩＩ）に取り付けられた検出可能標識を、結合したインフルエンザウイルス粒子のバンドを横切って膜を通じて流す。インフルエンザウイルスの存在は、結合化合物の部位における膜中の、観察し得る変化により判る。本発明方法および化合物は、とりわけMillerらの米国特許第5418135号公報に記載があるBiostar型光学免疫検定プラットホーム（Biostar Optical Immunoassay）（OAI）を用いて利用するのに適することが意図される。
極めて多数の適切な検出システム、例えばビオチン−ストレプトアビジン、セイヨウワサビペルオキシダーゼもしくはアルカリ性ホスフォターゼ等の酵素システム、蛍光システム、化学発光システム、コロイド金、放射性標識および凝集システムが業界では知られている。本発明化合物（ＩＩ）で被覆したコロイド金は特に便利な検出可能標識になることが考えられる。同様に、高分子体Ｍがセイヨウワサビペルオキシダーゼである場合の本発明化合物は、インフルエンザの手近な検出の場合に理想的であることが期待される。当業者においては適切な検出システムを容易に選択し、かつ通常のトライ・アンド・エラー実験を用いて検出条件を容易に最適化できるはずである。
式（ＩＩ）の本発明化合物および医薬として容認し得るそれらの塩ならびに誘導体は次に記載のような各種方法により調製できる。次に概説した調製方法は本発明の他の局面を形成する。
発明の具体的説明
次の非制限的実施例のみを参照しながら本発明を詳細に説明する。
本発明化合物の例中には式（３）の化合物が包含され、式中Ｍは次の表１に掲げた蛋白の一つである。
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本発明化合物のさらなる例中には式（４）の化合物が包含され、式中Ｍは蛋白アビジンであり、これは基Ｘ−Ｙに非共有結合で結び付き、また下表２に掲げたリガンドＺに共有結合で結び付けられている。
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Ｍが合成ポリマーである場合の本発明化合物のさらなる例中には、下表３に示すような式（５）の化合物が包含され、ここでのシアリン酸基（２）上の置換基はＲ2＝Ａｃ、Ｒ＝グアニジンおよびＷはＯＣＯＮＨである。
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Ｍがデキストラン骨格（分子量５００，０００）である場合の本発明化合物のさらなる例中には、表４に示すような式（６）で表される化合物が包含され、ここでのノイラミニダーゼ結合基（２）上の置換基はＲ2＝Ａｃ、Ｒ＝グアニジンおよびＷはＯＣＯＮＨである。式（６）中の整数ｎ、ｍおよびｐはデキストラン骨格中のグルコース単位の百分率を与え、このグルコース単位は特定基により置換され、すなわちｎ、ｍおよびｐの合計が１００にならない場合の残部デキストラン骨格は非置換グルコース単位からなる。このデキストラン骨格の各単位に結び付く各種リガンドに対して３つの可能な結合点があることにも注目すべきである。
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本発明化合物のさらなる例中には高分子Ｍがデキストランまたはポリアクリル酸骨格である場合の化合物が包含され、ここでのシアリン酸基（２）上での置換基はＲ2＝Ａｃ、Ｒ＝グアニジンおよびＷはＯＣＯＮＨであり、かつこの場合の追加置換基Ｚは例えばベンジル基、ビオチン分子またはフルオレセイン含有基である。
ここでの治療についての言及は確定した感染症または症状の治療はもとより、予防にも及ぶことを当業者は認識するはずである。治療は感染に先立ち、または感染時に開始し、ウイルスが最早呼吸管に存在しなくなるまで継続するのが好ましい。本発明化合物の適切な用量は一般的には０．１から１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲、好ましくは０．２から２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。
適切な治療を日に１−４回行い、感染後３−７日間継続する。望ましい用量は１回で投与するか、または適宜の間隔を置いて分割投与してもよい。
治療薬として用いる場合、本発明化合物は原料化学物質として与えることもできるが、医薬処方として活性成分を与えるのが一般的には好ましい。したがって本発明は、一種または２種以上の医薬として容認できる担体、および任意に他の治療用および／または予防用薬剤との併用における、式（ＩＩ）の化合物または容認し得るその塩もしくは誘導体を含む医薬用処方を提供する。医薬用処方中には、経口、鼻腔もしくは局所投与、または呼吸管中への吸入もしくは吹き込みに適する形状が包含される。適当な場合の上記処方は別個の投薬単位で便利に提供でき、また薬剤業界で周知のいずれの方法によっても調製できる。
一般的には本発明化合物は、溶液もしくは懸濁物もしくは乾燥粉末の形態で投与できる。本発明方法に従って呼吸管へ投与する際には、上記ノイラミニダーゼ阻害剤は、呼吸管への投与の場合に当分野で採用するいずれかの方法および処方により投与できる。
溶液および懸濁物は一般的には水性であり、例えば水単独または水および生理学的に容認される共溶媒（例えばエタノール、プロピレングリコール、ｐｅｇ４００等のポリエチレングリコール）から調製される。かかる溶液もしくは懸濁液は、他の賦形剤例えば保存料（塩化ベンザルコニウムなど）、溶解剤／界面活性剤（ポリソルベート（例えばTween 80）等）、緩衝剤、等張力調整剤（例えば塩化ナトリウム）、吸収増進剤および粘度増進剤を追加的に含有できる。懸濁物は懸濁剤（例えば微晶質セルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース）を追加的に含有してもよい。
溶液または懸濁物は在来型手段、例えばドロッパー、ピペットまたはスプレー使用の手段で鼻腔に施す。処方は１回服用または多重服用形で提供できる。スプレーは例えば計量型噴霧スプレーポンプの手段により遂行できる。呼吸管中への投与もエーロゾル処方の手段で遂行でき、この場合の化合物はクロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）または他の適当な気体等の適切な推進剤を用いた加圧パック中に提供される。
別法として上記化合物は乾燥粉末の形態、例えばラクトース、澱粉、澱粉誘導体およびポリビニルピロリドン等適切な基剤中における上記化合物の粉末混合物のミックス形態で提供されてもよい。結果的には上記粉末は鼻腔中でゲルを形成するはずである。鼻腔内投与を包含する呼吸管への投与を意図した処方では、一般には上記化合物は例えば５ミクロン程度またはそれ未満の小粒子径を有している。かかる粒子径は業界既知の手法で得られる。
本発明化合物は数工程で調製され、第１部は一般に式Ｘ−Ｙ（式中ＸおよびＹは上記したと同じ）で表されるノイラミニダーゼ結合シアリン酸誘導体の合成である。
７位に適切な官能性を有するシアリン酸誘導体（２）の合成法は英国特許出願第9516276.4号および国際特許出願ＰＣＴ／ＡＵ 97/00190号公報に記載がある。
適切なシアリン酸誘導体Ｘ−Ｙの例を下表５に示すが、式中Ｒ2、ＲおよびＷは上記したように部分Ｘ上の置換基である。
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本発明化合物の調製のための第２の部分は、高分子Ｍにノイラミニダーゼ結合単位Ｘ−Ｙを結び付ける工程を包含する。蛋白型の高分子Ｍに単位Ｘ−Ｙを共有結合で取り付ける場合の複合化は、周知の標準クロスカップリング法（例えばS. S. Wongの”Chemistry of Protein Conjugation and Cross-Linking”CRC Press, 1991; G. T. Hermansonの”Bioconjugate Techniques”Academic Press, 1996）を用いて一般的に実施できる。
合成ポリマーの場合は、適切な活性化された置換基を有する予備形成ポリマー骨格に単位Ｘ−Ｙを付け足してもよい。例えば基Ｙが末端アミノ官能性を有するならば、これはポリアクリレート骨格上の活性化されたエステル置換基と反応できる。これとは別に、末端オレフイン等の適切な重合可能置換基を有する単位Ｘ−Ｙは重合または好ましくは他のオレフインと共重合して、高分子骨格を形成し得る。例えば（R. RoyのTrends in Glycoscience and Glycotechnology, 1996 8 79-99; N. V. BovinおよびH. J. GabiusらのChem. Soc. Reviews., 1995 413参照）。
実施例１ ＧＧ１６７−ウシ血清アルブミン−ビオチン複合体（３ａ）の調製
（ａ）    ５−アセトアミド−７−（６’−（６”−アミノカプロイル）アミノヘキシル）−カルバモイルオキシ−４−グアニジノ−２，３，４，５−テトラデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−ノン−２−エノピラノソン酸（enopyranosonoic acid）（２ｂ）（７−（６−アミノカプロイル）アミノ−ヘキシルカルバモオイルオキシ−ＧＧ１６７）の調製。
アセトン（２．５ｍｌ）、水（１００μｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（４μｌ、３６μｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２１μｌ、１４７μｍｏｌ）の混合物中に６−（ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）カプロン酸（３４ｍｇ、１４７μｍｏｌ）を溶解した。この溶液を−１２℃に冷却し、次いでイソブチルクロロホルメート（２１μｌ、１６１μｍｏｌ）を添加した。この溶液を１２分間撹拌した。
トリエチルアミン（４０μｌ、２８７μｍｏｌ）を含む水／アセトン（１：１、２ｍｌ）中にメチル５−アセトアミド−７−（６’−アミノヘキシル）−カルバモイルオキシ−４−グアニジノ−８，９−モノカルボニルジオキシ−２，３，４，５−テトラデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−ノン−２−エノピラノソネートトリフルオロ酢酸塩（７９ｍｇ、９２μｍｏｌ）を溶解した。この塩基性溶液を０℃に冷却し、前記反応混合物中に一度に添加した。この混合物を室温まで温め、４時間撹拌した。
減圧下に溶媒を除去した。粗生成物をメタノール／水（１：１、４ｍｌ）中に取り上げ、次いでトリエチルアミン（１ｍｌ）を加えた。アルゴン中、溶液を一夜撹拌した。溶媒を回転蒸発器で除き、残渣をメタノール中に溶解し、シリカゲル（１．５ｇ）上に吸着させた。酢酸エチル／イソプロパノール／水（１００／７５／２５）を用いて溶離するシリカゲル（１０ｇ）上でのクロマトグラフイーにかけると、生成物（５３ｍｇ、７７μｍｏｌ、８４％）を与えた。
1H n.m.r.（CD3OD, 200 MHz）δ5.67 (d, J 2.6 Hz, 1H); 5.03 (m, 1H); 4.62 (m, 1H); 4.49 (m, 1H); 4.23 (m, 1H); 4.12 (m, 1H); 3.77 (m, 1H); 3.62 (m, 1H); 3.12(m, 6H); 2.22 (t, J 8Hz, 2H); 2.0 (s, 3H); 1.5 (m, 23H).
ｔ−Boc保護糖を酢酸エチル／トルエン中に溶解し、蒸発・乾燥させた。この物質をトリフルオロ酢酸（３ｍｌ）中に溶解し、アルゴン雰囲気中、室温で１時間撹拌した。減圧下に溶媒を除き、残りのトリフルオロ酢酸を先ずジクロロメタン、次いで３回分の水／メタノールを用いた共蒸発により除去した。次いで試料を水中に溶解し、濾過し、凍結乾燥するとtris TFA塩としての生成物（１４１ｍｇ、１５２μｍｏｌ）を与えた。
質量スペクトル（FAB）：588（M+1）
1H n.m.r.（CD3OD, 300 MHz）δ5.92 (d, J 2.6 Hz, 1H); 5.01 (m, 1H); 4.60 (dd, J 10, 3 Hz, 1H); 4.44 (dd, 9, 3 Hz, 1H); 4.23 (m, 1H); 4.05 (m, 1H); 3.67 (dd, 13, 4 Hz, 1H); 3.52 (dd, 13, 7 Hz, 1H); 3.16 (m, 5H); 2.96 (t, 8Hz, 2H); 2.25 (t, 8Hz, 2H); 2.00 (s, 3H); 1.7-1.3 (m, 14H).
（ｂ）    ＧＧ１６７誘導体（２ｂ）およびウシ血清アルブミン−（６−アミノカプロイルビオチン）8間の複合体の調製
蛋白カップリング緩衝液：０．１Ｎ  ＮａＨＣＯ3／０．２Ｍ  ＮａＣｌ
透析緩衝液：２０ｍＭ  ＫＨ2ＰＯ4／０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．５
ＢＳＡ−（カプロイル−ビオチン）8（３ｍｇ、４３ｎｍｏｌ、Pierce）を上記カップリング緩衝液（７．５ｍｌ）中に溶解し、３０分間緩やかに撹拌した。
Bis-（Ｎ−ヒドロキシスルホスクシン酸イミド）スベレート(suberate)（１２ｍｇ、２１μｍｏｌ Pierce）をカップリング緩衝液（１ｍｌ）中に溶解し、カップリング緩衝液（１．５ｍｌ）中で実施例１（ａ）（１９．５ｍｇ、２１μｍｏｌ）からの化合物（２ｂ）の塩基性溶液に直接添加した。７．５分間撹拌して反応を進行させた。誘導されたＧＧ１６７溶液中に次いでＢＳＡ−ビオチン溶液を適下し、混合物を室温で１．５時間撹拌した。この溶液を凍結乾燥し、水（３．０ｍｌ）中に溶解し、透析緩衝液（３×１．５Ｌ、セルロースチユーブ、１２，０００ＭＷカットオフ）に対して透析した。
混合物を凍結乾燥し，水（２．５ｍｌ）中に取り上げ、ＰＤ−１０カラム（Pharmacia）上で脱塩し、次いで凍結乾燥すると生成物（３ａ）（２．５ｍｇ）を与えた。
糖取り込み（蛋白分子当り３０ＧＧ１６７単位）の算定はグアニジン基に対する比色分析アッセイに準拠した（Sakaguchi反応、Can. J. Chem., 1958 36 1541参照）。
実施例２ ウシ血清γグロブリン−（６−アミノカプロイルビオチン）18−（ＧＧ１６７−７−カルバメート−１，６−ジアミノヘキサン−６−アミノカプロン酸アミド−スベリン酸アミド）60（３ｂ）の調製
ウシγグロブリン（３ｍｇ、２０ｎｍｏｌ、Sigma）をカップリング緩衝液（１ｍｌ）中に溶解し、３０分間撹拌した。
カップリング緩衝液中のＮ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−Ｎ−ビオチニル−６−アミノカプロエート（１．８ｍＭ、２８０μｌ、０．５μｍｏｌ）をこの蛋白溶液中に加え、室温で１時間撹拌して反応させた。
次いで反応混合物をカップリング緩衝液で７．５ｍｌに希釈し、実施例１（ｂ）と同一条件下に実施例１（ａ）からのＧＧ１６７−７−カルバメート−１，６−ジアミノヘキサン−６−アミノカプロン酸アミドおよびビス（ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル）スベレートと反応させた。
凍結乾燥させたγ−グロブリン複合体（３ｂ）の収量は２．５ｍｇであった。
実施例３ 化合物２ｃとセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）との間の複合体３ｆの調製
よく確立した過ヨウ素酸酸化法（例えばG.T. Hermansonの”Bioconjugate Techniques”Academic Press, 1996 472参照）に従って化合物２ｃをＨＲＰに結合させて化合物３ｆを得た。
ＨＲＰ（ＩＶ−Ａ型、Sigma Aldrich P-6782、５ｍｇ、１１４ｎｍｏｌ）を酢酸ナトリウム／塩化ナトリウム緩衝液（５ｍＭ／１５０ｍＭ、ｐＨ４．５、５００μｌ）中に溶解した。新しく調製した過ヨウ素酸ナトリウム溶液（酢酸ナトリウム／塩化ナトリウム緩衝溶液中８８ｍＭ、５０μｌ、４．４ｍｍｏｌ）をこれに添加し、次いで暗室温中２０分放置して反応させた。この混合物を、予め酢酸ナトリウム緩衝液（５ｍＭ、ｐＨ４．５）を用いて予備的に平衡させたＰＤ−１０カラム（Pharmacia Biotech, Sephadex G-25）を用いたクロマトグラフイーにかけ、溶離物を凍結乾燥した。
化合物２ｃ（３．９ｍｇ、３．７５μｍｏｌ）を含む炭酸ナトリウム緩衝液（０．２Ｍ、ｐＨ９．５、１ｍｌ）中に、酸化されたＨＲＰを４℃で溶解し、４℃で一夜放置して反応させた。ナトリウムシアノボロハイドライド（１Ｎ  ＮａＯＨ中５Ｍ、１０μｌ、５０μｍｏｌ）を添加し、４℃で一夜放置して反応させた。エタノールアミン溶液（１Ｍ、ｐＨ９．５、５０μｌ、５０μｍｏｌ）を添加し、室温で３０分間放置して反応させ、次いで蒸留水で予め平衡化したＰＤ−１０カラムを用いてクロマトグラフイーにかけた。溶離物を凍結乾燥すると、薄褐色粉末としてのＨＲＰ−化合物２ｃ複合体を与えた。
実施例４ 蛋白−ＧＧ１６７複合体３ｃ、３ｄおよび３ｇ−３ｊの調製
化合物３ｃ、３ｄおよび３ｇ−３ｊは、ビス（Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミド）スベレートを用いて化合物２ｃまたは２ｇのいずれかを用いて適当な蛋白を結合し、次いで実施例１の（ｂ）項記載と同一方法により調製した。
実施例５ アビジンおよびＧＧ１６７−ビオチン複合体間のビオチニル化複合体（４ｄ）の調製
（ａ）    Ｂｏｃ−保護テトラ（６−アミノカプロン酸）を用い、実施例１に記載したと類似の方法に従って、５−アセトアミド−７−（６’−（６”−（６’”−ビオチニルアミノカプロイル）−トリアミノカプロイル）アミノヘキシル）−カルバモイルオキシ−４−グアニジノ−２，３，４，５−テトラデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−ノン−２−エノピラノソン酸（２ｅ）を調製した。
（ｂ）    水（５００μｌ）中の化合物（２ｅ）（０．５ｍｇ、０．４３４μｍｏｌ）の溶液中にアビジン（３ｍｇ、０．０４４５μｍｏｌ）を室温で２時間かけて溶解した。スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド−カプロイルアミノ−ビオチン（Pierce #21335）（１０００μｇ、１．７９８μｍｏｌ）および炭酸水素ナトリウム（１０００μｇ、１１．９μｍｏｌ）の水（２４０μｌ）溶液を上記生成溶液中に加えた。全混合物を室温で４５分間放置し、次いで透析管（分子量カットオフ１２，０００）中に置いた。各場合４５分の浸漬時間で５０ｍＭ  ＮａＨＣＯ3溶液（４×２５０ｍｌ）および水（８×２５０ｍｌ）に対して引き続いて管を透析した。室温で一夜、水（５００ｍｌ）に対して最終的に管を透析した。透析管からの生成溶液のｐＨを炭酸水素ナトリウムを用いて６．５−７．０に調整し、次いで凍結乾燥すると標題複合体（４ｃ）（３ｍｇ、８９％）が白色固体として得られた。この複合体は四つのアビジン結合部位を介して結合した四つのＧＧ１６７−ビオチシン分子、および次いで約８から１０の共有結合ビオチンリガンドで置換されたアビジン骨格を含む。この複合体の図式を図１に示し、ここでＡはアビジン、Ｂはビオチン、およびＳはＧＧ１６７糖分子を示す。
実施例６ 各種ＧＧ１６７−リガンドで置換されたポリアクリルアミド（５ａ）−（５ｅ）の調製
（ａ）    Ferrutiらの記載（Polymer, 1972, 13, 462頁）に従って（Ｎ−（アクリロイルオキシ）スクシンイミドからポリ（Ｎ−（アクリロイルオキシ）スクシンイミド）（ｐＮＡＳ）を調製した。このｐＮＡＳの1Ｈｎ．ｍ．ｒ．スペクトルおよび赤外スペクトルは文献中に以前に報告されたものと矛盾しなかった。このｐＮＡＳバッチの試料を濃アンモニアで数時間室温処理してポリアクリルアミドに転化したところ、透析ポリアクリルアミドの分子量は粘度測定を用いて約５０，０００であることが判った。
（ｂ）    化合物（５ｃ）の場合について次に輪郭を示した一般的方法に従って、ポリアクリルアミド（５ａ）−（５ｅ）を取り込んだ各種ＧＧ１６７誘導体をｐＮＡＳの一バッチから調製した。
化合物（２ｆ）（３．８ｍｇ、６．２μｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍｌ）溶液中にｐＮＡＳ（１０ｍｇ、ＮＡＳの５９μｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、０．５ｍｌ）溶液中を撹拌しながら室温で添加した。トリエチルアミン（１０μｌ、７０μｍｏｌ）を添加し、この透明溶液を室温で一夜撹拌し、次いで６５℃で５時間加熱し、室温で再度一夜撹拌した。希釈アンモニア水溶液（６ｍｌ、３％溶液）を反応混合物に加え、透明溶液を室温で２４時間放置した。減圧下に反応混合物を蒸発・乾固し、残渣を水（３ｍｌ）中に溶解し、透析管（ＭＷカットオフ１２，０００）中に置き、水（５００ｍｌ、ｐＨ６）に対して２４時間透析した。この溶液を凍結乾燥すると白色固体（５ｍｇ）としてのＧＧ１６７含有ポリアクリルアミド（５ｃ）を与えた。1Ｈｎ．ｍ．ｒ．スペクトル（３００ＭＨｚ）は次の広い信号を示した：（Ｄ2Ｏ）δ5.7, 4.4-4.6, 4.1, 3.3-3.7, 3.0, 2.0-2.5, 1.9, 1.1-1.8。上記ポリマーおよびスペーサー鎖（δ1.0-3.2、1.9におけるＮ−アセチルピークを引いた）の場合の積算（integral）をシアリン酸プロトン（δ5.7-3.2）の場合の積算と比較すると、ＧＧ１６７単位の取り込みの程度は約１０％であると見積もられた。
実施例７ ＧＧ１６７リガンドおよびビオチンリガンド両方を有するポリアクリルアミド５１の調製
ｐＮＡＳ（１７０ｍｇ、１ｍｍｏｌのＮＡＳ）（ＭＷ約５０，０００）のＤＭＦ（３ｍｌ）溶液を室温で撹拌し、化合物２ａ（ＴＦＡ塩、３０ｍｇ、５０μｍｏｌ）およびＮ−６−アミノヘキシル−ビオチンアミド（７ｍｇ、２０μｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍｌ）溶液を添加した。トリエチルアミン（５μｌ）を加え、反応混合物を２０°で２４時間撹拌した。希釈アンモニア（２０ｍｌ、５０％）をこの混合物中に加え、さらに２４時間撹拌した。反応混合物を蒸発・乾燥し、残渣を水（１０ｍｌ）に溶解し、２日間水中で透析（１×４リットル、ＭＷカットオフ１２，０００のチューブ）した。Sakaguchiグアニジン色試験では、管中に残留した液体から陽性結果が得られたが、最終透析水の濃縮試料からは得られなかった。透析管からの液体を凍結乾燥させるとクリーム綿毛様固体（７１ｍｇ）としての５１を与えた。ポリマー上のリガンドの程度はＮＭＲ積算により推定したが、出発アミンのほぼ完全な取り込みとは矛盾しなかった。
実施例８ ＧＧ１６７含有ポリアクリルアミド５ｉ、５ｋ、５ｍおび５ｎの調製
ＧＧ１６７誘導体（２ａまたは２ｃ）、およびベンジルアミン、Ｎ−６−アミノヘキシル−フルオレセインまたはアミノエタンチオールのいずれかの適当な混合物とｐＮＡＳとを実施例７記載と類似の手法に従って反応させ、化合物５ｉ、５ｋ、５ｍおび５ｎのそれぞれを調製した。化合物５ｉおよび５ｋ（および化合物５ｈおよび５ｊ）の調製に対しては、一層高分子量（＞２００Ｋｄ）のｐＮＡＳを使用した。
実施例９ 多重ＧＧ１６７（７−オキシカルバモイルヘキシルアミノカルボニルオキシ−４−グアニジノ−ノイ（Ｎｅｕ）５Ａｃ２エン（ｅｎ））（３．５ｍｏｌ％）およびＮ−ベンジルカルバモイルオキシ（１６．８ｍｏｌ％）置換基を有するデキストラン（ＭＷ５００ｋＤａ）の調製
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デキストラン（ＭＷ５００，０００）［１００ｍｇ、０．６１７ｍｍｏｌ（単位ＭＷ１６２基準）］のＤＭＳＯ（５ｍｌ）溶液中にｐ−ニトロフエニルクロロホルメート（５１０ｍｇ、２．５３ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（３０９ｍｇ、２．５３ｍｍｏｌ）を加えた。先ず室温で１時間、次いで３５−４０℃で３時間、この混合物をアルゴン雰囲気中で撹拌した。ピリジン（５ｍｌ）中のベンジルアミン（１２．５ｍｇ、０．１１７ｍｍｏｌ）および４−ジメチルチルアミノピリジン（４０ｍｇ、０．３２７ｍｍｏｌ）の溶液と上記生成溶液とを併合した。アルゴン雰囲気下に反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次いで高減圧下に蒸発・乾固させた。残渣を２％炭酸カリウム溶液（２５ｍｌ）中で５０℃で３時間撹拌し、透明溶液を生成させ、次いでこの溶液のｐＨを３Ｍ  ＨＣｌで７に調製した。生成溶液を室温で３日間、水に対して透析し、凍結乾燥すると1Ｈｎ．ｍ．ｒ．（Ｄ2Ｏ）で示されるオキシカルバモイルメチレンベンゼン１６．８モル％を含む白色固体としてのベンジル化デキストラン（９５ｍｇ、８３．４％）を与えた。
ベンジル化デキストラン（５ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（０．２５ｍｌ）溶液中にｐ−ニトロフエニルクロロホルメート（１２．８ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（７．８ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液をアルゴン下に室温で１時間、次いで３５−４０℃で３時間撹拌した。その後、これをピリジン（０．２５ｍｌ）およびＤＭＳＯ（０．２５ｍｌ）の混合物中の化合物２ａ（０．５ｍｇ、０．００１０５ｍｍｏｌ）溶液と併合した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次いで高減圧下に蒸発・乾燥させた。残渣を１％炭酸カリウム溶液（５ｍｌ）中で激しく４．５時間撹拌すると透明溶液が得られた。次いで溶液のｐＨを３Ｍ  ＨＣｌで７．５に調整し、室温で２４時間水に対して透析し、最後に凍結乾燥すると白色固体としての標題ポリマー（４．５ｍｇ、８２％）を与えた。1Ｈ−ｎ．ｍ．ｒ．（Ｄ2Ｏ）によれば、担体の１００グルコース単位当り化合物２ａの３．５分子およびベンジルアミンの１６．８分子を保持するポリマーであることを示した。このポリマーのＭＷは６２３ＫＤａと見積もられ、７−アミノヘキシルアミノカルボニルオキシ−４−グアニジノ−ノイ５Ａｃ２エンの１単位に対する平均分子量は５７７０であった。
実施例１０ 多価ＧＧ１６７（７−オキシアセトアミドヘキシルアミノカルボニルオキシ−４−グアニジノ−ノイ５Ａｃ２エン）（３モル％）、Ｎ−ベンジルアセトアミド−２−オキシ（１７モル％）および２−オキシアセテート（２０％）のデキストラン／５００ＫＤａ上での調製
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氷浴中のデキストラン（ＭＷ５００，０００）［５０ｍｇ、０．３０８ｍｍｏｌ（単位ＭＷ１６２基準）水（０．３ｍｌ）溶液中に水酸化カリウム（１３８ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）水（０．１ｍｌ）溶液を加えた。この混合物を０−５℃で２０分間撹拌し、次いでクロロ酢酸（１０２ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）を添加した。生成混合物を７０−８０℃で２０分間、次いで室温で２時間撹拌した。反応混合物をメタノール（２５ｍｌ）で希釈し、濾過により白色沈殿を捕集し、新鮮なメタノール（２５ｍｌ）で完全に洗浄し、乾燥した。全操作をさらに一度繰り返すと、タイトレーションで決定されるように約４０モル％のオキシ酢酸カリウム塩を含む白色固体としての生成物を与える。
この酢酸ポリマー（１０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）水（０．４ｍｌ）溶液中に、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸塩（１６ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）およびスルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１７．４ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２０分撹拌し、次いでベンジルアミン（１２．８ｍｇ，０．１１８ｍｍｏｌ）のメタノール（０．２ｍｌ）溶液を併合した。生成混合物を室温で３時間撹拌し、減圧下に濃縮して乾燥させた。残渣をＮａＨＣＯ3（５０ｍｇ）含有水（１０ｍｌ）中で５０℃で撹拌して透明溶液を生成させ、この溶液を３日間水に対して透析し、凍結乾燥すると1Ｈｎ．ｍ．ｒ．で示されるように１７モル％オキシアセトアミドメチレンベンゼンを含む白色固体としての生成物（９ｍｇ、８６％）を与えた。
このポリマー（５ｍｇ、０．０２３９ｍｍｏｌ）の水（０．２ｍｌ）溶液中に、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸塩（８ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）およびスルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（８．７ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２０分間撹拌し、次いでピリジン（０．１ｍｌ）中の化合物２ａ（１ｍｇ、０．００２１ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（３ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）の溶液と併合した。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次いで蒸発・乾固させた。残渣を１％ＮａＨＣＯ3溶液（５ｍｌ）中で撹拌し、透明溶液を形成させた。水中での２４時間の透析後、溶液を凍結乾燥すると白色固体としての標題ポリマーが得られた（４．５ｇ、８４％）。
酸タイトレーションおよび1Ｈ−ｎ．ｍ．ｒ．（Ｄ2Ｏ）によれば、担体の１００グルコース単位当りベンジルアミン１７モル％、ＧＧ１６７（７−アミノヘキシルアミノカルボニルオキシ−４−グアニジノ−ノイ５Ａｃ２エン）３モル％、および酢酸塩２０モル％を上記ポリマーが保有することを示した。このポリマーのＭＷは６８３ＫＤａであり、一つの重合体７−アミノ−ヘキシルアミノ−カルボニルオキシ−４−グアニジノ−ノイ５Ａｃ２エンに対する平均ＭＷは７４２０と見積もられた。
実施例１１ 重合体多価７−｛６’−｛６”−［６’”−（６””−（６’””−アミノカプロイル）−アミノカプロイル）−アミノカプロイル］−アミノカプロイル｝−アミノヘキシル｝−カルバモイルオキシ−４−グアニジノ−ノイ５Ａｃ２エン（１４モル％）の酸化デキストラン／５００ｋＤａ上での調製
水（０．４ｍｌ）中のデキストラン（ＭＷ５００，０００）［２０ｍｇ、０．１２３ｍｍｏｌ（単位ＭＷ１６２基準）］溶液中に、氷浴温度で過ヨウ素酸ナトリウム（１５．６ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）水（０．４ｍｌ）溶液を滴下した。反応混合物を５℃で２時間、次いで室温で２時間撹拌した。生成混合物を水（１．２ｍｌ）で希釈し、Sephadex G-25（１０ｍｌ）カラムを通過させた。カラムを水（３ｍｌ）で溶離した。溶出液を凍結乾燥すると白色固体としての部分酸化デキストラン（１８ｍｇ、９０％）を与えた。
上記酸化デキストラン（３ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）水（０．６ｍｌ）溶液中に、炭酸水素ナトリウム（１５ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ）および化合物２ｃ・ＴＦＡ塩（６ｍｇ、０．００５７ｍｍｏｌ）を加えた。全混合物を室温で１時間攪拌し次いで氷浴温度で撹拌した。ナトリウムシアノボロヒドリド（１００ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）をこの冷混合物中に分割添加した。氷浴温度で反応混合物を１時間撹拌、５℃で１６時間放置し、次いでナトリウムシアノボロヒドリド（１００ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）でさらに処理し、５℃で１時間、室温で２時間撹拌し、最後に水に対して２４時間透析し、凍結乾燥すると白色固体としての標題ポリマー（３ｍｇ）を与えた。
1Ｈ−ｎ．ｍ．ｒ．（Ｄ2Ｏ）によれば、部分酸化デキストラン分子当り７−｛６’−｛６”−［６’”−（６””−（６’””−アミノカプロイル）−アミノカプロイル）−アミノカプロイル］−アミノカプロイル｝−アミノヘキシル｝−カルバモイル−オキシ−４−グアニジノ−ノイ５Ａｃ２エン（化合物２ｃ）約４３０分子を上記ポリマーが保有することを示した。したがって上記ポリマーのＭＷは８６０ＫＤａと見積もられ、４−グアニジノ−ノイ５Ａｃ２エンの各単位に対する平均ＭＷは２，０００と見積もられた。
実施例１２ 重合体多価７−スベラモイル−ヘキシル−カルバモイルオキシ−４−グアニジノ−ノイ５Ａｃ２エン（５モル％）のポリリシン／７０−１５０ｋＤａ上での調製
７−アミノヘキシル−カルバモイルオキシ−４−グアニジノ−ノイ５Ａｃ２エン（化合物２ａ、６．４ｍｇ、０．０１３５ｍｍｏｌ）およびジスクシンイミジルスベレート（５ｍｇ、０．０１３５ｍｍｏｌ）のピリジン（０．１ｍｌ）とＤＭＦ（０．１ｍｌ）混合物中の溶液を３０℃で３時間撹拌し、高減圧下に蒸発乾燥した。残渣をエーテル（１０ｍｌ×３）中に取り上げ、乾燥し活性化エステルを得た。次いでこれを水（０．４ｍｌ）、ＤＭＳＯ（０．２５ｍｌ）、ＤＭＦ（０．６ｍｌ）、およびピリジン（０．４ｍｌ）の混合物中のポリリシン・ＨＢｒ塩（ＭＷ７０，０００−１５０，０００）（１０ｍｇ、０．０４８５ｍｍｏｌ）溶液と併合した。生成混合物を室温で１０時間撹拌し、次いで水に対して７２時間透析した。透析物を水（１０ｍｌ）で希釈し、５０℃に加熱し、次いで濾過した。濾液を凍結乾燥すると白色固体としての標題ポリマー（５ｍｇ）を与えた。
1Ｈ−ｎｍｒ（Ｄ2Ｏ）によれば、担体の１００リシン単位当り７−スベラモイル−ヘキシルカルバモイルオキシ−４−グアニジノ−ノイ５Ａｃ２エンの５分子を上記ポリマーが保有していることを示した。したがって一つの重合体４−グアニジノ−ノイ５Ａｃ２エンに対する平均分子量は５１４０であった。
実施例１３ 重合体多価７−｛２’−［２”−（２”’−アミノエトキシ）−エトキシ］−エチル｝−カルバモイルオキシ−４−グアニジノ−ノイ５Ａｃ２エン（３．２モル％）のポリグルタミン酸／５０〜１００ｋＤａ上での調製
１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド・塩酸塩（９．６ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）およびＮ−ヒドロキシスルホスクシンイミド（１０．９ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）をポリグルタミン酸ナトリウム塩（ＭＷ５０，０００〜１００，０００）（１０ｍｇ、０．０６５７ｍｍｏｌ）水（０．６ｍｌ）溶液中に添加した。混合物を室温で２５分間撹拌し、次いで水（０．１ｍｌ）およびピリジン（０．１ｍｌ）中の７−｛２’−［２”−（２”’−アミノエトキシ）−エトキシ］−エチル｝−カルバモイルオキシ−４−グアニジノ−ノイ５Ａｃ２エン・ＴＦＡ塩（化合物２ｄ、４．１ｍｇ、０．００８１ｍｍｏｌ）溶液と併合した。生成混合物を室温で２時間撹拌し、次いで水に対して３日間透析し、最後に凍結乾燥すると白色固体としての標題ポリマー（９．５ｍｇ）を与えた。
1Ｈ−ｎｍｒ（Ｄ2Ｏ）によれば、担体の１００グルタミン酸単位当り７−｛２’−［２”−（２”’−アミノエトキシ）−エトキシ］−エチル｝−カルバモイルオキシ−４−グアニジノ−ノイ５Ａｃ２エンの３．２分子を上記ポリマーが保有していることを示した。一つの重合体４−グアニジノ−ノイ５Ａｃ２エンに対する平均分子量は５２５０であった。
実施例１４ 化合物２ｃおよびセイヨウワサビペルオキシダーゼと複合化したＮ−ヒドロキシエチルポリアクリルアミドの調製
ＤＭＦ（１ｍｌ）中のｐＮＡＳ（実施例６のｂ項参照）（２０ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌのＮＡＳ）溶液中に化合物（２ｃ）ＴＦＡ塩（６ｍｇ、０．００５７ｍｍｏｌ）を添加した。トリエチルアミン（２０μｌ）をこの透明溶液に加え、室温で３日間撹拌した。上記反応混合物の半分を水（４ｍｌ）中のセイヨウワサビペルオキシダーゼ（１７ｍｇ）溶液に加え、混合物を数日間４℃で放置した。エタノールアミン（１０％水溶液の０．５ｍｌ）をこの混合物中に加え、残部のポリアクリレート活性化エステルを冷却した。２時間後に反応混合物を水に対して３日間透析し、次いで透析物を凍結乾燥すると綿毛状の淡褐色粉末としての重合複合体を与えた。
実施例１５ インフルエンザウイルスノイラミニダーゼへの本発明化合物の結合の測定
２種のインフルエンザＡウイルスおよび一種のインフルエンザＢウイルスを試験に用いて全ウイルスインフルエンザノイラミニダーゼへの上記化合物の結合能力を試験した。インフルエンザＡのreassortantsはＡ／ＮＷＳ／３４−tern／Australia/G70C/75（Ｈ1 Ｎ9）またはＡ／ＮＷＳ／Tokyo／３／６７／Ｈ1 Ｈ2のいずれかであり、インフルエンザＢ株はＢ／Victoria／０２／８７であった。文献記載の手法（Potier, M.らのAnal. Biochem., 1979 94 287）に従ってノイラミニダーゼアッセイを行い、測定した阻害定数（ＩＣ50）を表６に要約する。
この高分子に対する阻害定数は、付着ＧＧ１６７誘導体の単位当りの分子量、例えばアクリルアミド単位の１０％に結合したＧＧ１６７由来分子を有するポリアクリルアミド５ｃの単位当りの分子量に基づいて計算したが、分子量１２９３であると決定された。
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実施例１６ 化合物Ｎｏ．４ｄを用いたＥＬＩＳＡ板上でのインフルエンザウイルスの検出
リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中のＮＷＳ／Ｇ７０ＣインフルエンザＡウイルス約１×１０8ｐｆｕ／ｍｌのウイルス溶液（５０μｌ）を９６−ウエルＥＬＩＳＡ（Dynatech）板のウエル中に直接加え、４℃で一夜放置してウイルスを結合させた。洗浄後、板を標準法に従ってＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０を用いてブロックし、次いで化合物Ｎｏ．４ｄの連続希薄液をＧＧ１６７単位の１μＭ濃度から始めて１０-10Ｍへと低下させてＥＬＩＳＡ板列の一つに加えた。対照として、ビオチン化モノクローナル抗ノイラミニダーゼＮＣ１０抗体（L. C. Gruen, J. Immunological Methods, 1994 168 91）の連続希釈液をＥＬＩＳＡ板の他の列に加えた。１時間保温後、この板を洗浄して未結合化合物を除き、次いで色素原物質としてＡＢＴＳ（Sigma）および約３０分保温を用いてストレプトアビジン−ＨＲＰＯ（Boehringer-Mannheim）を用いてウイルスを検出した。
約１０-9Ｍを上回る化合物Ｎｏ．４ｄの濃度はウイルスの検出を許容し、かつ化合物濃度の増加と並行して一層強度が高められた信号が観察された。このようにウエル当り約５×１０6ウイルス粒子が化合物Ｎｏ．４ｄを用いて容易に検出できた。ビオチン化抗体対照は類似レベルの信号を与えた。
実施例１７ インフルエンザウイルスと化合物Ｎｏ．３ａとの間の複合体の捕獲と検出
ＧＧ１６７−ビオチン誘導体を用いてウイルス粒子を被覆するために、ＮＷＳ／Ｇ７０ＣインフルエンザＡウイルス（１×１０8ｐｆｕ／ｍｌ）の溶液１０μｌをＥＬＩＳＡ板の別個の列のウエル中に各種濃度の化合物３ａを用いて１時間予備保温した。１μＭ濃度のＧＧ１６７単位から始めて０．００００１μＭまでの化合物Ｎｏ．３ａの半ｌｏｇ10希釈液を用いた。次いで予めアビジンで被覆したＥＬＩＳＡ板へウイルス−化合物複合体を移し、１時間保温して捕獲させた。この板をＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０中で洗浄し、捕獲ウイルスを標準手法に従ってウイルス血球凝集素に対するポリクローナルウサギ抗体を用いて検出した。
化合物Ｎｏ．３ａを０．１μＭ濃度で用いた場合に最良の結果が得られ、１０6ｐｆｕでのウイルスの検出を明らかに可能にした。一層の高濃度におけるこの化合物は、遊離の化合物Ｎｏ．３ａがアビジン部位の幾らかを多分ブロックするために、この信号は弱くなるが、一方、全てのウイルス粒子に完全に結合するには不十分な化合物の存在に多分起因して、一層の低濃度（＜０．００１μＭ）では検出信号は同様に弱くなる。
実施例１８ ストレプトアビジン−セイヨウワサビペルオキシダーゼを用いたインフルエンザウイルス−ＧＧ１６７−蛋白−ビオチン複合体の直接検出
実施例１７の記載と同じ手法に従い化合物４ｄを用い、抗赤血球凝集素抗体の代わりに、ストレプトアビジン−セイヨウワサビペルオキシダーゼを用いた結合ウイルスの直接検出を同様に観察した。
実施例１９ 本発明高分子体によるインフルエンザ血球凝集阻止
文献記録（例えばJ. Amer. Chem. Soc., 1997, 119 4103およびその引例参照）の標準法に従って、インフルエンザ株Ｘ−３１（Ｈ3 Ｎ2）、Ｇ７０ＣおよびＴｏｋｙｏ  Ａの血球凝集阻止（ＨＡＩ）能力を試験した。マイクロタイター板１２ウエルにわたって２倍連続希釈したＰＢＳ中の重合体ＧＧ１６７複合体の溶液を用いて上記ＨＡＩアッセイを遂行した。ＰＢＳ中４ＨＡ単位に希釈したウイルス懸濁液をウエル中に加えた。４℃で２時間後、チキン赤血球の０．５％懸濁液を各ウエルに加えた。４℃で１時間後、赤血球の凝集を妨げた阻害剤の最低濃度を測定した。結果を表７に要約する。
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実施例２０      本発明高分子体によるインフルエンザウイルス複製の抑制
文献（例えばWatanabeらのJ. Virological Methods, 1994, 48, 257）記載の標準法に従って、インフルエンザＡウイルスの複製抑制能力を試験した。このアッセイはＭＤＣＫ細胞を用いて行い、結果を表８に示す。半対数曲線フィッティングの場合の回帰分析プログラムを用いて計算した、細胞変性効果を５０％［ＩＤ50（μｇ／ｍｌ）］により抑制する最低化合物濃度としての結果を示す。結果によれば、高分子に付着したＧＧ１６７誘導体を有する全ての高分子体は、それら自体の非置換骨格よりもインフルエンザウイルスに対して一層活性であることを示す。この結果はまた、重合体化合物の多くが単純単量体リガンド（化合物２ｃ）よりも一層活性であり、ＧＧ１６７単位のモル濃度基準で計算した場合には特にそうであることを示す。各化合物の治療指数は最低細胞毒薬剤濃度（ＭＴＣ）をＩＤ50で除して計算した。
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明確さおよび理解の目的で本発明の詳細について記載してきたが、ここに記載の実施態様と方法について本明細書記載の発明概念範囲から逸脱すること無く各種の修飾および変更をなし得るであろうことは当業者には明瞭なはずである。
本明細書において文献を掲げたが、この引用によりこれらの文献を本明細書中に包含する。