(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
栗の葉、栗のいがの溶媒抽出物を含むヒアルロニダーゼ阻害剤
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は他の目的の医薬品等として多年内用され、安全性が保証された植物の抽出物を用いて、皮膚の潤滑性、柔軟性を保ち、老化を防ぐヒアルロン酸を分解するヒアルロニダーゼの活性を抑制して、皮膚の小ジワやかさつきを防ぐヒアルロニダーゼ阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
栗は北海道西南部から九州及び朝鮮半島に分布する落葉高木で堅実は広く食用とされ、その葉は栗葉と、またそのいがは栗毛毬と呼ばれ、うるしかぶれ、あせも、やけどなどに外用される。
琵琶は中国中南部の原産と言われ、日本では関東以西に広く分布その葉は琵琶葉と言い、健胃、下痢止め、利尿、鎮咳などに利用されている。
また、特開昭６２−６７０２８号には細胞賦活作用や損傷治癒作用が知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、皮膚に適用して安全であると共に、ヒアルロニダーゼ阻害作用が強い原料を提供することである。
【０００４】
【課題を解決する手段】
本発明者らは、前記の課題を解決するため、すでに多年にわたって食用に供され、人体に対する安全性が確認されている植物をスクリーニングして調べ、ヒアルロニダーゼ阻害剤として利用価値のあるものを検討した。
その結果、栗の葉、栗いが、琵琶葉が非常にヒアルロニダーゼ阻害作用が強い原料であることを見出した。
【０００５】
すなわち、本発明は、栗の葉、栗いが、琵琶葉の溶媒抽出物を含むヒアルロニダーゼ阻害剤である。
【０００６】
栗の葉、栗いが、琵琶葉の利用方法としては、水或いは親水性有機溶媒例えば、エタノール、メタノール、アセトン等で抽出する。しかしながら、化粧品原料の抽出であるから、水或いはエタノール或いはこれの混合溶媒での抽出が好ましいのは当然である。
また、場合によっては、グリセリン、１，３ブチレングリコール、プロピレングリコール等の多価アルコール又は多価アルコールと水の混液も抽出に利用できる。
またさらに凍結乾燥して粉体として利用することも利用方法によっては有効である。
【０００７】
この物質を他の化粧品原料例えばスクワラン、ホホバ油等の液状油、ミツロウ、セチルアルコール等の固体油、各種の活性剤、グリセリン、１，３ブチレングリコール等の保湿剤や各種薬剤等を添加してさまざまな剤形の化粧料を調整することができる。例えばローション、クリーム、乳液、パック等で目的に応じて利用形態を考えればよい。
【０００８】
ヒアルロニダーゼは、生体中に広く分布し、皮膚にも存在する酵素で、その名の通りヒアルロン酸を分解する。ヒアルロン酸はβ−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミンとβ−Ｄ−グルクロン酸が交互に結合した直鎖状の高分子多糖で、コンドロイチン硫酸などとともに哺乳動物の結合組織に広く存在するグリコサミノグルカンの一種である。
結合組織内でのヒアルロン酸の機能として、細胞間隙に水を保持し、また組織内にジェリー状のマトリックスを形成して細胞を保持したり、皮膚の潤滑性と柔軟性を保ち、外力（機械的障害）および細菌感染を防止していると考えられている。皮膚のヒアルロン酸は齢をとるにつれて減少し、その結果小ジワやかさつきなどの老化をもたらすといわれている。
【０００９】
従って、これを分解するヒアルロニダーゼの活性を抑制することは、製剤に使用されているヒアルロン酸の安定性や、皮膚に塗布した後の製剤のヒアルロン酸及び皮膚に存在していたヒアルロン酸の安定に寄与すると考えられる。
また、ヒアルロニダーゼは炎症酵素としても知られ、活性抑制することは炎症を抑え、また、アレルギーにも抑制的に働くことが知られている。
【００１０】
【実施例】
以下に実際の利用方法である実施例を記載するが、本発明はこの実施例によって何ら限定されるものではない。
本発明で使用した栗の葉、栗のいがの抽出物の実施例を次に示す。
【００１１】
実施例１
栗の葉１０ｇに精製水３００ｍｌを加えて３時間加熱する。これを濾過後凍結乾燥した。
【００１２】
実施例２
栗いが１０ｇに精製水３００ｍｌを加えて３時間加熱する。これを濾過後凍結乾燥した。
【００１３】
実施例３
栗いが１０ｇにエタノール３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これをエバポレート後、濾過後凍結乾燥した。
【００１４】
実施例４
栗いが（乾燥品）を１０ｇに精製水３００ｍｌを加えて３時間加熱する。これを濾過後凍結乾燥した。
【００１５】
実施例５
琵琶葉１０ｇに蒸留酒（アルコール３５％）３００ｍｌを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これをエバポレート後、濾過後凍結乾燥した。
【００１６】
実施例６  ローション
オリーブ油                                                    ０．５
実施例１                                                      ０．５
ホリオキシエチレン（２０Ｅ．０）ソルヒタンモノステアレート    ２．０
ホリオキシエチレン（６０Ｅ．０）硬化ヒマシ油                  ２．０
エタノール                                                  １０．０
１．０％ヒアルロン酸ナトリウム水溶液                          ５．０
精製水                                                      ８０．０
【００１７】
実施例７  クリーム
Ａ  スクワラン                                                ２０．０
オリーブ油                                                  ２．０
ミンク油                                                    １．０
ホホバ油                                                    ５．０
ミツロウ                                                    ５．０
セトステアリルアルコール                                    ２．０
グリセリンモノステアレート                                  １．０
ソルビタンモノステアレート                                  ２．０
実施例２                                                    １．０
Ｂ  精製水                                                    ４７．９
ホリオキシエチレン（２０Ｅ．０）ソルヒタンモノステアレート  ２．０
ホリオキシエチレン（６０Ｅ．０）硬化ヒマシ油                １．０
グリセリン                                                  ５．０
１．０％ヒアルロン酸ナトリウム水溶液                        ５．０
パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．１
ＡとＢをそれぞれ計量し、７０℃まで加温し、ＢにＡを撹拌しつつ徐々に加えたのち、ゆっくり撹拌しつつ３０℃まで冷却した。
【００１８】
実施例−８は実施例−６の実施例１の抽出物を実施例３の抽出物に変え作成したもの
【００１９】
実施例−９は実施例−７の実施例２の抽出物を実施例４の抽出物に変え作成したもの
【００２０】
実施例−１０は実施例−６の実施例１の抽出物を実施例５の抽出物に変え作成したもの
【００２１】
（ヒアルロニダーゼ活性抑制試験）
（試験方法）
０．４％ヒアルロン酸ナトリウム０．１Ｍ（ｐＨ６．０）リン酸緩衝溶液を６ｇはかりとり、３７℃の恒温水槽で５分間放置後、前記実施例（凍結乾燥品）の０．１ｗｔ／ｖ％水溶液（溶解しにくい場合はエタノールを加えて溶解したのち精製水を加えて、エバポレートし、エタノールを除去したのち、０．１ｗｔ／ｖ％になるように調製した）１．０ｍｌを加え撹拌し０．０１％ヒアルロニダーゼ（シグマ社製  牛睾丸製、タイプＩ−Ｓ）０．１Ｍ（ｐＨ６．０）リン酸緩衝溶液を１ｍｌ加えて直ちに撹拌し、６  を３７℃の恒温水槽に入れたオストワルド粘度計に入れた。
これを１分後、５分後、１０分後、２０分後、４０分後に粘度を測定した。
対照として、上記試料液のかわりに純水を加え同様に測定した。
この試験では試料の終濃度は０．０１２５％となる。
１分後の粘度を１００として、結果を指数で表１〜７に示す。
【００２２】
【表１】
0003667376.tif 000002
【００２３】
【表２】
0003667376.tif 000003
【００２４】
使用テスト
女性６名づつの顔面を左右に分け、一方を実施例、もう一方を比較例として毎日、１回以上使用してもらって、３月後、アンケートした。なお、比較例は実施例６、７よりそれぞれ実施例１、２を水にかえたものである。（比較例１，２）なお、１２名を２班にわけ、下記の試料を使って実験した。
0003667376.tif 000004
【００２５】
判定基準は以下のようでアンケートの結果をまとめたのが以下の表である。
実施例の方が非常によい    ３
実施例の方がかなりよい    ２
実施例の方がややよい      １
差がない                  ０
比較例の方がややよい    −１
比較例の方がかなりよい  −２
比較例の方が非常によい  −３
【００２６】
0003667376.tif 000005
0003667376.tif 000006
【００２７】
【効果】
本発明の抽出物としての効果は、ヒアルロニダーゼの活性抑制作用である。ヒアルロニダーゼは、生体中に広く分布し、皮膚にも存在する酵素で、その名の通りヒアルロン酸を分解する。ヒアルロン酸はβ−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミンとβ−Ｄ−グルクロン酸が交互に結合した直鎖状の高分子多糖で、コンドロイチン硫酸などとともに噛乳動物の結合組織に広く存在するグリコサミノグルカンの一種である。
結合組織内でのヒアルロン酸の機能として、細胞間隙に水を保持し、また組織内にジェリー状のマトリックスを形成して細胞を保持したり、皮膚の潤滑性と柔軟性を保ち、外力（機械的障害）および細菌感染を防止していると考えられている。皮膚のヒアルロン酸は齢をとるにつれて減少し、その結果小ジワやかさつきなどの老化をもたらすといわれている。
従って、これを分解するヒアルロニダーゼの活性を抑制することは、製剤に使用されているヒアルロン酸の安定性や、皮膚に塗布した後の製剤のヒアルロン酸及び皮膚に存在していたヒアルロン酸の安定に寄与すると考えられる。また、ヒアルロニダーゼは炎症酵素としても知られ、活性抑制することは炎症を抑え、また、アレルギーにも抑制的に働くことが知られている。