(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式
【化１】
0003688337.tif 000008
〔式中、Ｒ1 、Ｒ2 およびＲ3 はＯＨまたは−Ｏ−アシル基、（−Ｏ−アセチル基）を示す〕で表されるピリピロペン誘導体。
【請求項２】
基Ｒ1 、Ｒ2 およびＲ3 が下記の式で表される置換基の組合せ（但し、１７位、１８位の炭素結合は単結合または二重結合を示す）を有する化合物よりなる群から選ばれた化合物である請求項１に記載のピリピロペン誘導体。
【化２】
0003688337.tif 000009
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明はピリピロペン誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、いくつかの高脂血症治療のための薬物が知られている。高脂血症の治療薬としては、（１）コレステロールの生合成阻害、（２）コレステロールの吸収阻害、（３）コレステロールの異化促進、（４）リポ蛋白の合成の抑制などの作用を有する薬物が知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
近年、食生活の向上に伴い成人の高脂血症や動脈硬化などコレステロール蓄積に起因する症状が現代病として問題視されている。高脂血症は、動脈硬化の進行を促進する因子のひとつとして知られており、血中コレステロールを低下させることで虚血性心疾患の減少をもたらすことができる。又、高脂血症になると心筋硬塞の発症率も高くなるなど高脂血症、特に高コレステロール血症のより有効で安全な治療薬の出現が望まれている。
【０００４】
コレステロールはアシルコエンザイムＡからアシル基転移によりコレステロールエステルとなり、細胞内および血中リポ蛋白に蓄積される。このアシル基転移反応を触媒する酵素がアシルコエンザイムＡコレステロールアシル転移酵素であり、コレステロールの腸管からの吸収および冠動脈における泡沫細胞の形成に深く係わっている。
【０００５】
従って、アシルコエンザイムＡコレステロールアシル転移酵素を阻害する物質は、かかる疾病に有効であることが推定される。かかる実情において、アシルコエンザイムＡコレステロールアシル転移酵素阻害活性を有する物質を提供することは、高脂血症やそれに基く動脈硬化などの成人病の治療上有用なことである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、微生物の生産する代謝産物につて研究を続けた結果、新たな土壌から分離したＦＯ−１２８９菌株の培養物中にアシルコエンザイムＡコレステロール転移酵素阻害活性を有する物質が産生されることを見出した。次いで、該培養物からアシルコエンザイムＡコレステロールアシル転移酵素阻害活性物質を分離、精製した結果、後記の理化学的性質を有する各物質を得た。これらの物質は従来全く知られていないことから、本物質をピリピロペン（ＦＯ−１２８９物質）と命名した。（特開平６−１８４１５８号）
【０００７】
本発明者らは、このピリピロペンのアシルコエンザイムＡコレステロールアシル転移酵素阻害活性（以下、ＡＣＡＴ阻害活性という）をより高めることを目的としてピリピロペンの種々の誘導体を合成した。
本発明はかかる知見に基いて完成されたものであって、下記式で表されるピリピロペン誘導体を提供するものである。
【０００８】
【化３】
0003688337.tif 000002
〔式中、Ｒ1 、Ｒ2 およびＲ3 はＯＨまたは−Ｏ−アシル基、（−Ｏ−アセチル基）を示す〕。
【０００９】
更に、本発明は基Ｒ1 、Ｒ2 およびＲ3 が下記式で表される置換基の組合せ（但し、１７位、１８位の炭素結合は単結合または二重結合を示す）を有する化合物よりなる群から選ばれた化合物である。
【００１０】
【化４】
0003688337.tif 000003
【００１１】
本発明のピリピロペン誘導体は上記の式に示されるように、ピリピロペン骨格を脱ニコチン酸化し、更に所望により７位をアシル化した化合物である。
脱ニコチン酸化、アシル化等の反応は例えば以下により行うことができる。
尚、本発明のピリピロペン誘導体の原料物質であるピリピロペンＡは特開平６−１８４１５８号記載の方法に従って製造される。
【００１２】
脱ニコチン酸（脱ピリジン脱ピロン）化：
溶媒：含水アルコール
試薬：ナトリウムメトキシドの求核試薬あるいは塩基
反応温度：室温（冷却あるいは加熱条件もありえる）
【００１３】
水酸基のアシル化
酸無水物あるいは酸クロライドと塩基を用いてアシル化を行う通常の方法、あるいはカルボン酸と縮合させる通常の方法により行われる。
酸無水物あるいは酸クロライドを用いたアシル化
溶媒：ピリジン、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン等
反応温度：室温（冷却あるいは加熱条件もありえる）
塩基：ピリジン、トリエチルアミン等。さらにジメチルアミノピリジンを必要により加えることもある。
【００１４】
カルボン酸との縮合反応によるアシル化
溶媒：ジクロロメタン（その他の無水系の溶媒、例えばクロロホルム）
反応温度：室温（冷却あるいは加熱条件もありえる）
縮合剤：ジサイクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オコソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィニッククロライド等
塩基：ジメチルアミノピリジン、トリエチルアミン等
【００１５】
以上のようにして得られた化合物は、例えばシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィーにより精製し、目的化合物を純品として得ることができる。
【００１６】
以上、各方法により得られた化合物の物理化学的性質ならびに生物学的性質を以下に示す。なお、生物学的性質としては、以下に述べるｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性測定法による、ラット由来アシルコエンザイムＡコレステロールアシル転移酵素に対する阻害作用を５０％阻害値（ＩＣ50）で示す。
【００１７】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性測定法：
ラット由来アシルコエンザイムＡコレステロールアシル転移酵素に対する阻害作用：
アシルコエンザイムＡコレステロールアシル転移酵素活性に対する影響は供田等の方法（ザ・ジャーナル・オブ・アンティバイオティックス、４５巻、１６２６ページ、１９９２年）に従い、ラット肝ミクロソーム画分より調製した粗酵素を用い、１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中３００μＭ牛血清アルブミン、３０μＭ［１−14Ｃ］オレオイル−ＣｏＡ（０．０２μＣｉ）、３０μＭコレステロール（３０分の１重量のトリトンＷＲ−１３３９で溶解させたもの）を添加して全量２００μｌとし、３７℃で３０分間反応させ、クロロホルム：メタノール（１：２）混合液で反応を停止させる。
【００１８】
次いで総脂質をホルシュらの方法（ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２２６巻、４９７ページ、１９５７年）で抽出後、ＴＬＣ（キーゼルゲルＧＦ254 、展開溶媒として石油エーテル：ジエチルエーテル：酢酸＝９０：１０：１）で各脂質を分離後、コレステロールエステル画分に取り込まれた放射活性をＲＩスキャナー（アンビス社製）で分析し、アシルコエンザイムＡコレステロールアシル転移酵素活性を測定した。本酵素活性を５０％阻害する濃度を算定した。その結果を以下に示す。
【００１９】
【化５】
0003688337.tif 000004
〔式中、Ｒ1 、Ｒ2 およびＲ3 はＯＨまたは−Ｏ−アシル基、（−Ｏ−アセチル基）を示す〕。
【００２０】
0003688337.tif 000005
【００２１】
次に本発明のピリピロペン誘導体の質量分析データについて以下に述べる。
化合物番号    組成式      分子量          測定値              理論値
ＰＲ−１１５  C20H30O7    382.453    FAB(+)   383.2073(M+1)  383.2069
ＰＲ−１１６  C24H34O9    466.527    FAB(+)   467.2280(M+1)  467.2281
ＰＲ−１３８  C26H36O10   508.564    FAB(+)   509.2386(M+1)  509.2386
ＰＲ−１３９  C26H38O10   510.580    FAB(+)   511.2551(M+1)  511.2543
【００２２】
次に、本発明ピリピロペン誘導体の核磁気共鳴スペクトル（ 1Ｈ−ＮＭＲ）および質量分析（ＭＳ）を表１に示す。
【００２３】
【表１】
0003688337.tif 000006
0003688337.tif 000007
【００２４】
【発明の効果】
以上のように、本発明のピリピロペン誘導体はアシルコエンザイムＡコレステロールに対して著しい阻害活性を示すことから、ヒトのコレステロール蓄積に起因する疾病の予防および治療に有用である。
【００２５】
次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらにより制限されるものではないことは言うまでもない。
参考例１
ピリピロペンＡ６４ｍｇを９５％アセトン水溶液４２ｍl に溶解し、Ｊｏｎｅｓ試薬（３Ｍクロム酸−硫酸水溶液）０．５ｍl を加え、室温で２時間攪拌した後に、イソプロパノール０．１ｍl を加えた。沈澱をろ別し、濾液からアセトンを留去した後に酢酸エチルで抽出し、水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去して粗生成物を得た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール（５０：１）混合溶媒）にて精製し、化合物の無色粉末を６４ｍｇ得た。
【００２６】
実施例１
化合物ＰＲ−１１５
参考例１で得た化合物の無色粉末６６ｍｇを６７％メタノール水溶液１５ｍl に溶解し、ナトリウムメトキシド２６ｍｇを加え、室温で４時間攪拌後にメタノールを留去し、これをＯＤＳカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：５０〜１００％メタノール水溶液）にて精製し、目的化合物ＰＲ−１１５の無色粉末を２８ｍｇ得た。（収率６４％）
【００２７】
実施例２
化合物ＰＲ−１１６
実施例１で得た化合物の無色粉末６６ｍｇを５０％メタノール水溶液１ｍl に溶解し、ナトリウムメトキシド１４ｍｇを加え、室温で１５時間攪拌後にメタノールを留去し、これをＨＰ−２０カラムクロマトグラフィーで脱塩して得た粗生成物を分取薄層シリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール（１０：１）混合溶媒）にて精製して、目的化合物ＰＲ−１１４の無色粉末を１．２ｍｇ得た。（収率４％）
【００２８】
実施例３
化合物ＰＲ−１３８
実施例２で得た化合物の無色粉末６ｍｇをジクロロメタン１ｍl に溶解し、無水酢酸４０μl およびトリエチルアミン２０μl を加え攪拌し、水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去して粗生成物を得た。これを分取薄層シリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール（２０：１）混合溶媒）にて精製して、目的化合物ＰＲ−１３８の無色粉末を６．８ｍｇ得た。（収率８５％）
【００２９】
実施例４
化合物ＰＲ−１３９
実施例３で得た化合物の無色粉末１０ｍｇをジメチルスホキシド１ｍl に溶解し、ナトリウムボロハイドライド８ｍｇを加え、室温で１時間攪拌後ジクロロメタンを加え、実施例３と同様に処理をして、目的化合物ＰＲ−１３９の無色粉末を６．８ｍｇ得た。（収率６８％）