(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
実質的に細胞性タンパク質不含の、および最大寸法が０．１μｍ〜５μｍであり且つ表面上にリン脂質又は界面活性剤を有する粒子の形の結晶性ポリマーであって、ポリエステル及びポリアミドからなる群より選択される結晶性ポリマーを含むポリマー組成物であって、該ポリマーが、５０，０００を越える分子量Ｍｗを有し且つ周囲温度で０．１日より大の結晶化半減期を有する上記ポリマー組成物。
【請求項２】
前記ポリエステルが、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリカプロラクトン及びポリラクチドからなる群より選択される、請求項１に記載のポリマー組成物。
【請求項３】
結晶性ポリマーが３０％を越える結晶化度を生じることができる請求項１又は２に記載のポリマー組成物。
【請求項４】
界面活性剤またはリン脂質が粒子表面の５０％またはそれ以上を被覆している請求項１〜３のいずれか１項に記載のポリマー組成物。
【請求項５】
組成物が水性ラテックス又は個々の粒子若しくは粗い凝集物の流動性粉末の状態である請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリマー組成物。
【請求項６】
結晶化半減期が少なくとも１日である請求項１〜５のいずれか１項に記載のポリマー組成物。
【請求項７】
ポリマーが生分解性であるかまたは少なくとも１種類の生分解性ポリマーを含む請求項１〜６のいずれか１項に記載のポリマー組成物。
【請求項８】
ポリマーが、ポリヒドロキシアルカノエートである請求項１〜７のいずれか１項に記載のポリマー組成物。
【請求項９】
ポリマーが、ポリヒドロキシブチレートまたはポリヒドロキシブチレート−コバレレートコポリマーである請求項８に記載のポリマー組成物。
【請求項１０】
界面活性剤が非イオン性であり且つＣ9〜20アルキル−エトキシレート、芳香族エトキシレートおよびエチレンオキシドとプロピレンオキシドとのブロックコポリマーから選択される請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリマー組成物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のポリマー組成物の製造法であって、該ポリマーを含む微生物細胞を溶解し、そして界面活性剤またはリン脂質の存在下で酸化剤を用いてポリマー表面から非ポリマー細胞物質を除去することを含む上記方法。
【請求項１２】
界面活性剤またはリン脂質の存在下においてポリマーを酸化剤で処理する前に、非ポリマー細胞物質を、タンパク質分解酵素および／または界面活性剤を用いてポリマーから分離する請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
酸化剤が過酸化水素である請求項１１または請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のポリマー組成物の製造法であって、
（ａ）該ポリマーを、水への溶解度が低い溶媒中に溶解させ；
（ｂ）得られた溶液を界面活性剤またはリン脂質の水溶液中に乳化させ；そして
（ｃ）得られたエマルジョン分散相から溶媒を除去する
工程による上記方法。
【請求項１５】
溶媒が揮発性化合物であり、そして工程（ｃ）を、少なくともその臨界ミセル濃度のまたはある種の揮発性化合物の受容によってその濃度を達成する少なくとも１種類の両親媒性物質の水溶液とエマルジョンを接触させることによって行う請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記物質が、親水性部分不存在下において融点が１００℃未満であると考えられる疎水性部分を有する界面活性剤である請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
界面活性剤が陽イオンであり、その親水性部分がトリＣ1〜Ｃ4アルキルアンモニウムであり、そしてその疎水性部分が１２〜２０個の炭素原子を有する請求項１４または請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
接触が膜を介する請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
エマルジョン分散相が、膜を通過することができない種を溶液中に含む請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
膜がセルロースから製造され且つ１０，０００〜２０，０００Ｄａの範囲の分画分子量を有する請求項１８または請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
化合物が、大気圧において８５℃以下で沸騰する請求項１５〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
化合物が、炭化水素またはハロゲン化炭化水素である請求項１５〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
請求項１〜１０のいずれか１項に定義の粒子状ポリマーまたは請求項１５〜２２のいずれか１項に記載の方法によって製造される粒子状ポリマーを閉じこめて、それらの相互の付着および／または結晶化を引き起こすことによる造形品の製造法。
【請求項２４】
請求項１〜１０のいずれか１項に定義の粒子の形の結晶性ポリマーまたは請求項１５〜２２のいずれか１項に記載の方法によって製造される粒子の形の結晶性ポリマーから製造された造形品。
【請求項２５】
造形品を製造するために用いる、請求項１〜１０のいずれか１項に定義のポリマー組成物または請求項１５〜２２のいずれか１項に記載の方法によって製造されるポリマー組成物。
【発明の詳細な説明】
本発明は、ポリマー組成物、特に、非晶または不完全な結晶状態で安定な結晶性ポリマーおよびこのようなポリマー組成物の製造法に関する。
結晶性ポリマーを加工する場合、しばしば、非晶または不完全な結晶状態でそれを保持しながら特定の作業を行なうことが望ましい。これはポリマーを溶融し且つ冷却することによって、または存在する可塑剤を有することによって、若しくはそれを溶液として用いることによって行なうことができるが、ポリマーが貯蔵された場合および加工の開始時に、或いは最後にも非晶または不完全な結晶でありうるならば好都合であろう。
一つのこのようなポリマーであるポリヒドロキシブチレート（ＰＨＢ）は、ある種の微生物細胞中でそれを生産する微視的粒子の形である場合、個別の単独粒子における均一な核形成現象および粒子の相互単離が希であるために、非晶質であり且つ長期間非晶質の状態にあることが示唆された（サンダース（Ｓａｎｄｅｒｓ）ら、細菌性ポリヒドロキシアルカノエートに関する国際シンポジウム、ゲッティンゲン大学、１９９２年６月１〜５日；デ・コーニング（ｄｅ  Ｋｏｎｉｎｇ）ら、Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ１９９２，３３（１５），３２９２〜３２９４）。この挙動についての可能な説明は、天然顆粒または粒子が極めて小さいことであり、最大直径がアルカリゲネス・オイトロフス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｅｕｔｒｏｐｈｕｓ）では約０．２５μｍまたは巨大菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）では０．７μｍに達する。ある与えられた顆粒中の均一な核形成の予想頻度（ｆ）は、１０-8件／秒またはそれ未満の程度で極めて低い。最も控目に設定した仮定（顆粒直径１μｍ、核形成速度３０件ｍｍ-3秒-1）において、非晶質顆粒ＰＨＢの予想半減期は４．４ｘ１０7秒すなわち５１０日である。より現実的な仮定（顆粒直径０．２５μｍ、３０℃での核形成速度２．５件ｍｍ-3秒-1）を用いると、予想半減期は約３．４ｘ１０10秒であり、１０００年を越える。対照的に、ポリマーが細胞から採取される場合、天然粒子コーティングは除去され、粒子は衝突し、そしておそらくは融合するようになり、均一な核形成またはより頻繁な均一核形成が起こる可能性が開かれ、そして急速な結晶化が続いて起こる。したがって、大部分のＰＨＢ試料は、周囲温度において通常１時間未満で５０％またはそれ以上の程度まで急速に結晶化する。
ある種の状況において、ポリマーを製造または採取した後に、ポリマーの非晶性を長時間維持しうることが望まれる。同様に、結晶化したポリマーを復活させ且つそれを使用準備ができるまで非晶または不完全な結晶状態で維持することは望ましいことがある。本出願人は、ポリマーが小粒子の形で維持されていて、各粒子が界面活性剤またはリン脂質で被覆されている場合に、そのポリマーの非晶または不完全な結晶状態をかなり長期間維持することが可能であることを発見した。
したがって、本発明により、最大寸法が０．１〜５μｍであり且つ表面上に、分子量が２０００未満の糖基剤界面活性剤以外の界面活性剤またはリン脂質を有する粒子の形の結晶性ポリマーを含む、実質的に細胞性タンパク質不含のポリマー組成物であって、該ポリマーが、５００００を越える分子量ｍwを有し且つ周囲温度で０．１日より大の結晶化半減期を有する上記ポリマー組成物を提供する。
ポリマーは、特に、比較的高水準の、例えば３０％を越える、特に５０〜９０％の結晶化度を有することができるものである。このようなポリマーは、生物学的にまたは合成によって製造することができる。
適当な生物学的に製造されたポリマーは、典型的に、式Ｉ
−Ｏ−ＣmＨn−ＣＯ−          Ｉ
［式中、ｍは１〜１３の範囲であり且つｎは２ｍまたは（ｍが少なくとも２である場合）２ｍ−２である］
の単位を有する少なくとも1種類の生物学的に製造されたポリヒドロキシアルカノエート（ＰＨＡ）を含む。典型的に、ＣmＨnは、ポリマー鎖中に２〜５個の炭素原子および（もしあるならば）側鎖中に残部を含む。極めて適当なポリエステルにおいて、ｍは３または４であり且つｎは２ｍであり、そして特に、酸素の隣の炭素上にＣ1およびＣ2側鎖それぞれと一緒に共重合されたｍ＝３およびｍ＝４の単位が存在する。具体的なポリエステルは、ｍ＝３単位が優勢であり、特に、このような単位を少なくとも７０モル％含み、残りはｍ＝４の単位である。ポリマーの分子量は、特に１０００００を越えて、例えば最大２ｘ１０6までである。
ｍ＝３単位のみを含む式（Ｉ）のポリエステルはＰＨＢであり、ｍ＝３およびｍ＝４単位を含むポリエステルは、ポリヒドロキシ−ブチレート−コバレレート（ＰＨＢＶ）のコポリマーである。ＰＨＢＶは、好ましくは、ｍ＝４単位を４〜２０％含む。ポリエステルは、更に、ｍの値が異なる２種類またはそれ以上のＰＨＡの配合物でありうる。具体的な例は、
（ａ）２〜５モル％の単位がｍ＝４を有し、残りはｍ＝３である式Ｉ単位から本質的に成るポリマー；および
（ｂ）５〜３０モル％の単位がｍ＝４を有し、残りはｍ＝３である式Ｉ単位から本質的に成るポリマー
を含む。このような配合物中のポリマーの比率は、好ましくは、４〜２０モル％の範囲の平均ｍ＝４含量を与えるようにある。
ポリヒドロキシアルカノエートは、特に、微生物が正常な増殖中にポリヒドロキシアルカノエートを蓄積するかまたは細胞増殖に不可欠な１種類若しくはそれ以上の栄養素不存在下の培養によってそれが引き起こされる微生物学的過程からの発酵生成物でありうる。微生物は、野生型若しくは突然変異型であってよいしまたはそれを導く必要な遺伝物質を有していてよい。或いは、必要な遺伝物質は、微生物学的方法を行なうための真核生物によって隠されていてよい。
適当な微生物学的方法の例は以下、
ｍ＝３またはｍ＝一部分３、一部分４の式Ｉ物質について：欧州特許出願第６９４９７号明細書（アルカリゲネス・オイトロフス）；
ｍ＝３の式Ｉ物質について：米国特許第４１０１５３３号明細書（Ａ．オイトロフス）、欧州特許出願第１４４０１７号明細書（Ａ．ラトゥス（ｌａｔｕｓ））；
ｍ＝７〜１３の式Ｉ物質について：欧州特許出願第０３９２６８７号明細書（各種シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ））である。
このような方法において、ポリマーは、発酵生産物細胞から有機溶媒によって抽出することができるし、または水性経路を用いて細胞性タンパク質材料を分解して、ポリマーの微視的粒子を残すことができる。特殊な最終用途のために、細胞性タンパク質を一部分または全部、ポリマーと一緒に残すことができるが、好ましくは、細胞分解を行なう。抽出のための有用な方法は、欧州特許第０１４５２３３号明細書に与えられている。
或いは、ＰＨＡは、当該技術分野において知られている化学的方法によって合成することができる。ＰＨＢは、ブロームベルゲン（Ｂｌｏｅｍｂｅｒｇｅｎ），Ｓおよびホルデン（Ｈｏｌｄｅｎ），Ｄ．Ａ．、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．１９８９年，２２巻，１６５６〜１６６３頁にしたがって製造することができる。ＰＨＢＶは、ブロームベルゲン、ホルデン、ブルーム（Ｂｌｕｈｍ）、ハマー（Ｈａｍｅｒ）およびマルシェソールト（Ｍａｒｃｈｅｓｓａｕｌｔ）、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．１９８９年，２２巻，１６６３〜１６６９頁にしたがって製造することができる。
本発明は、結晶化可能な合成ポリマー、特に、
ａ．ポリエステル、例えば、頭−尾ポリエステルまたは（好ましくは）実質的に化学量両論的な頭−頭尾−尾ポリエステル；
ｂ．アルコール若しくはフェノール反応性のみまたはアシル反応性のみを有するポリエステル；
ｃ．潜在的なアシル化可能またはエステル化可能基を有する他のポリマー、例えば、ポリアミド
に対しても応用しうる。
このようなポリマーは、単独で、上記のような１種類またはそれ以上の微生物学的に誘導されたポリマーと組合せてまたは一緒に用いることができる。適当な合成ポリマーの例は、合成ポリエステル、特に、ポリカプロラクトン、ポリラクチドおよびＰＣＴ出願ＷＯ９２／０９６５４号明細書に記載されたようなポリマー、具体的には、ジカルボン酸またはその誘導体およびジオールの組合せを含むこのようなポリエステルである。マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、フマル酸、２、２−ジメチルグルタル酸、スベリン酸、１，３−シクロペンタンジカルボン酸、１，４−ジシクロヘキサン−ジカルボン酸、１，３−シクロヘキサンジカルボン酸、ジグリコール酸、イタコン酸、マレイン酸、２，５−ノルボルナンジカルボン酸、１，４−テレフタル酸、１，３−テレフタル酸から成る群より選択されるジカルボン酸およびそれらのエステル生成誘導体並びにそれらの組合せと、エチレングリコール、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−プロパンジオール、２，２−ジメチル−１，３−プロパンジオール、１，３−ブタンジオール、１，４−ブタンジオール、１，５−ペンタンジオール、１，６−ヘキサンジオール、２，２−トリメチル−１，６−ヘキサンジオール、チオジエタノール、１，３−シクロヘキサンジメタノール、１，４−シクロヘキサンジメタノール、２，２，４，４−テトラメチル−１，３−シクロブタンジオール、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール、ジ−、トリ−、テトラ−プロピレングリコールから成る群より選択されるジオールおよびそれらの組合せ。
単独でかまたは本明細書中で挙げたポリマーのいずれかと組合せて挙げることができる他の結晶性ポリマーは、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリブテン、ポリスチレン、ポリ（クロロトリフルオロエチレン）、ポリオキシメチレン、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（テトラメチレンオキシド）、ポリ（プロピレンオキシド）、ポリ（セバシン酸デアメチレン）、ポリ（テレフタル酸デアメチレン）、ナイロン、ｐ−エチレン、ｐ−（プロペン）、ｐ−（１−ブテン）、ｐ−（スチレン）、ｐ−（クロロトリフルオロ−エチレン）、ｐ−（イソプレン）、ｐ−（メチレンオキシド）、ｐ−（エチレンオキシド）、ｐ−（プロピレンオキシド）、ポリカーボネート、ポリビニルアルコール、セルロースおよび酢酸セルロースまたは酪酸セルロース、ポリペプチドおよびタンパク質、ポリメタクリル酸メチルである。
好ましいポリマー組成物は生分解性であるかまたは少なくとも１種類の生分解性ポリマーを含み且つ少なくとも部分的に生分解可能である。
ポリマー中にまたはと一緒に、他の物質（すなわち、添加剤）が存在しうるが、但し、それらは結晶化を促進しないし、それによって粒状ポリマーの結晶化半減期を室温で０．１日未満まで減少させないという条件付きである。特に、１種類またはそれ以上の可塑剤が存在しうる。可塑剤対ポリマーの比率は、組成物の目的の用途に依る。２〜４０ｐｈｒ  ｗ／ｗの範囲は大部分の適当な用途を包含する。製品を効果的に剛性にさせるが脆性にさせないために、５〜２０、特に６〜２０ｐｈｒ  ｗ／ｗの範囲が概して適当である。
これらのポリマーのために、既知の可塑剤はいずれも適当であり、本発明に引き続いてこれらのポリマーを可塑化することが分かった任意の可塑剤が本明細書中で用いるのに適当であろう。適当な可塑剤の例は、
（ａ）多塩基酸の高沸点エステル、例えば、フタル酸エステル、イソフタル酸エステル、クエン酸エステル、フマル酸エステル、グルタル酸エステル、リン酸エステルまたは亜リン酸エステル。エステル化残基は、例えば、Ｃ1〜Ｃ12アルキル、同アリールまたは同アラルキルであってよい。具体的な例は、フタル酸ジオクチル、同ジヘプチルおよび同デシル並びにグルタル酸ジアルキルアルキレンオキシド（プラスタル（Ｐｌａｓｔｈａｌｌ）７０５０）であり；
（ｂ）多価アルコールの高沸点エステルおよび部分エステル、特に、グリコール、ポリグリコールおよびグリセロール。エステルの酸誘導残基は、典型的に、２〜１０個の炭素原子を有する。例は、トリアセチン、ジアセチンおよび二安息香酸グリセリルであり；
（ｃ）芳香族スルホンアミド、例えば、パラトルエンスルホンアミドである。
特に好ましい可塑剤は、その分子中に少なくとも３個のエステル基を有する二重エステル化ヒドロキシカルボン酸である。「二重エステル化」とは、ヒドロキシカルボン酸の少なくとも若干のヒドロキシ基がカルボン酸によってエステル化されていて且つその少なくとも若干のカルボキシ基がアルコールまたはフェノールによってエステル化されていることを意味する。好ましくは、エステルが誘導されるヒドロキシカルボン酸は少なくとも、脂肪族または環状脂肪族である。その主鎖構造は（すなわち、カルボキシ基は別として）、好ましくは２〜６個の炭素原子を有する。それは、好ましくは、２〜４個のカルボキシ基および１〜３個のヒドロキシ基を有し；好ましくは、カルボキシ基の数はヒドロキシ基の数より多い。このような可塑剤の例は、エスタフレクス（Ｅｓｔａｆｌｅｘ）*（クエン酸アセチルトリ−ｎ−ブチル）である。（*は、商標を示す）。
ポリマー組成物は、ポリマー加工において一般的に用いられる任意の他の添加剤、例えば、顔料、粒状若しくは繊維状若しくは板状充填剤または補強剤および核剤、特に窒化ホウ素、タルク、塩化アンモニウムまたはＤＺＢ／Ｚｎステアレートを含むことができる。
核剤が存在する場合、それは、好ましくは、０．２〜２ｐｈｒの範囲の量である。
本発明において、ＰＨＡの小粒子は、好ましくは、０．１〜３μｍ、特に０．１〜２．０μｍである。
技術的に好都合な結晶化半減期のための寸法範囲はポリマー間で異なる。上記に定義の微生物学的に製造されたポリエステルの場合、このようなポリエステルはより遅く結晶化するので、ｍの値が高いほど、粒子寸法は大きくありうる。ポリマーの具体的な最終用途に規定された結晶化半減期に適するように粒子寸法範囲を選択することは実用的である。
粒状ポリマーの周囲温度での結晶化半減期は、少なくとも０．１日、具体的には少なくとも１日、好ましくは少なくとも１週間（７日間）、特に６か月（１６８日間）またはそれ以上である。
貯蔵の際、それらは、結晶化を促進する媒体、例えば、大気不純物または放射線に晒されるべきではない。
粒子は、任意の形状でありうるが、好ましくは、核形成減少をもたらす偶発的破壊を避けるようにアスペクト比が最大２までの適当な球形である。
ポリマーが微生物学的に製造される場合、それは、粒子表面に対して界面活性剤が近付けるように十分に細胞性物質不含であるべきである。任意の細胞壁物質が存在する場合、それを少なくとも部分的に破壊することができる。
界面活性剤またはリン脂質は、粒子表面の少なくとも５０％を被覆する密充填吸収層を形成すべきである。好ましくは、それは表面の少なくとも８０％を被覆し、最も望ましくは、それは完全な層を形成する。
界面活性剤またはリン脂質で被覆されたポリマーは、不完全にまたは完全に結晶化したポリマーを得、そしてポリマーの非晶性を回復する溶媒中に該ポリマーを溶解させた後、乳化によって界面活性剤またはリン脂質で被覆された粒子を形成することにより製造することができる。
したがって、第二の態様において本発明は、ポリマー組成物を製造する方法であって、
（ａ）該ポリマーを、水への溶解度が低い溶媒中に溶解させ；
（ｂ）得られた溶液を界面活性剤またはリン脂質の水溶液中に乳化させ；そして
（ｃ）得られたエマルジョン分散相から溶媒を除去する
工程による上記方法を提供する。
界面活性剤は、陰イオン、陽イオン、非イオン、双性イオンでありうるしまたは２種類以上の親水性基を含むことができる。極めて適当に、それは陽イオンまたは陰イオンであり、好ましくは、その親水性部分は第四アンモニウム、例えば、トリＣ1〜Ｃ4アルキルアンモニウムである。界面活性剤の疎水性部分は、好ましくは、少なくとも８個、特に１２〜２０個の炭素原子を含む。或いは、界面活性剤は、エトキシレート、例えば、７〜１６個の炭素および最大１００個までのエトキシレート単位を有するアルキルエトキシレート、またはエチレンオキシドおよびプロピレンオキシドのブロックコポリマー若しくはノニルフェニルエトキシレートであってよい。極めて適当に、界面活性剤は、特に、ポリマーが生分解性である場合、直鎖状アルキル基である。適当な界面活性剤としては、臭化ドデシル−トリメチルアンモニウム、臭化テトラデシルトリメチルアンモニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、臭化セチルジメチル−エチルアンモニウム、臭化ベンジルジメチルドデシルアンモニウム、臭化ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウム、臭化ベンジルジメチル−ヘキサデシルアンモニウム、塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化メチルベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム、ドデシル硫酸ナトリウム、ナトリウムサルコシル（Ｓａｒｋｏｓｙｌ）（ＴＭ）、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、ナトリウムコレート、ナトリウムデオキシコレート、ラウリン酸ナトリウム、ミリスチン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、モノパルミチン酸ナトリウムがある。この群の界面活性剤の内で好ましいのは、臭化セチルトリメチルアンモニウム、デオキシ塩素酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、ナトリウムサルコシルおよびジオクチルスルホコハク酸ナトリウムである。（サルコシルは商標名である）。
リン脂質は、適当に、天然に存在するかまたは人口的リン脂質である。リン脂質は、以下の群、すなわち、ホスファチジル−コリン（たとえば、大豆ホスファチジル−コリン）、ホスファチジル−エタノールアミン、ホスファチジル−グリセロール、ジホスファチジル−グリセロール、ホスファチジル−セリン、ホスファチジル−トレオニン、ホスファチジル−イニシトール、ホスファチジル−グリセロールリン酸、ホスファチジル−（ｎ−メチル）エタノールアミン、ホスファチジル−（ｎ−ジメチル）エタノールアミン、ホスファチジン酸、ホスファチジル−（ミオ）イノシトール、ホスファチジル−（ミオ）イノシトール−４−リン酸、ホスファチジル−（ミオ）イノシトール−４，５−リン酸、ホスファチジル−（ミオ）イノシトールジモシド、ホスファチダルグリセロールのｏ−アミノ酸エステルおよびホスホグリセリドから選択することかができる。
界面活性剤またはリン脂質の含量は、少なくとも、粒子の少なくとも半分の表面上に界面活性剤またはリン脂質の密充填吸収層を形成するのに十分な量である。好ましくは、それは、完全な層を形成するのに十分な量であり、例えば、最大１００％まで過剰に存在してよい。しかしながら、界面活性剤は、ポリマーのいくつかの次の用途において望ましくない不純物でありうるので、その量を最小限にすることは好ましい。
ポリマー溶液の乳化は、適当な手段によって、例えば、機械的撹拌または音波処理によって行なわれることができる。高圧ホモジナイゼーションは、粒状ポリマーの寸法を調節するのに有用である。
溶媒が実質的に水に不溶性である場合、溶媒を除去する容易さは、その蒸気圧に依存すると考えられ、したがって、好ましくは、その沸点は１２０℃以下、好ましくは８５℃以下である。ＰＨＡに適当な溶媒は、炭化水素およびハロゲン化炭化水素、例えば、クロロホルム、塩化メチレンまたは１，２−ジクロロエタンである。適当な溶媒は具体的なポリマー系に依る。ポリマーが微生物学的ポリエステルである場合、溶媒はクロロホルムまたは塩化メチレンであるのが好ましい。作業手順は、このような溶媒およびそれらを含む組成物を安全に取り扱うための予防措置を含むべきである。
溶媒中のポリマー濃度は、溶媒を除去した後に必要なポリマー粒度に適するように選択することができる。ポリマー粒度も、エマルジョン分散相の粒度の調節によって調節しうる。界面活性剤は、前記に定義の通りであるのが好ましい。その濃度は、１〜１００、特に２〜５０ｍＭであるのが適当である。
エマルジョンからの溶媒の除去は、任意の適当な手段、エマルジョンを空気中において例えば７０℃まで加熱する、エマルジョンに例えば窒素ガスを通気する、エマルジョンのロータリーエバポレーションまたは広い表面積から室温蒸発によって例えば２４時間溶媒を単純に除去することによることができる。ポリマーの加熱を伴うこのような作業は、ポリマーの結晶化がより急速である温度を避けるように、減圧で実施するのが好ましい。溶媒および水の揮発性にほとんど差がない場合、濃度の過度の上昇を防止するために補充水をエマルジョンに加えてよい。揮発性が適当につり合った場合、エマルジョン全体を自然乾燥させて流動性乾燥ポリマー粒子を生じることができる。
溶媒除去の別の手段は、溶媒透過性であるが、それによって溶解または膨潤しない膜を介する透析による。適当な膜はセルロースから製造され；他の親水性または水湿潤性膜材料を用いることができる。膜のエマルジョン（「内部」）とは別の側（「外部」）に、溶媒のフガシチー（ｆｕｇａｃｉｔｙ）が小さい任意の好都合な流体媒質が存在しうる。例えば、流体は、空気などの気体または溶媒が可溶性である有機液体であってよい。極めて適当な流体は、界面活性剤を含み且つ溶媒を乳化することができる水溶液である。
この方法は、化合物が、水への溶解度は制限されているが、両親媒性物質のミセルの疎水性部分に可溶性であるので作業可能であると考えられる。その物質の濃度は、少なくともその臨界ミセル濃度であるべきでありまたは若干の化合物の受容によってその濃度を達成すべきである。
両親媒性物質は、水が水溶液の連続相を形成するように、中程度〜高い親水性親油性バランス（ＨＬＢ）を有するべきである。しかしながら、化合物の連続吸収によってエマルジョンが油中水へ転化されるように比較的低いＨＬＢを用いることは本発明の範囲内である。
適当な両親媒性物質界面活性剤は、例えば、乳化剤、分散剤、洗浄剤および湿潤剤である。これらの作用に特に価値がない他のものも、該方法に適当でありうる。薬剤の親水性部分は、陰イオン、陽イオン若しくは非イオンでありうるしまたはこのような機能を２種類以上有することができる。疎水性部分は、脂肪族、芳香族またはポリマー性でありうるしまたはこのような種類を２種類以上有することができる。それは、好ましくは、化合物のミセル中での溶解性を容易に確保するように、親水性部分不存在において融点が１００℃未満、特に５０℃未満である基である。極めて適当に、界面活性剤は陽イオンであり、好ましくはその親水性部分は第四アンモニウム、例えば、トリＣ1〜Ｃ4アルキルアンモニウムである。界面活性剤の疎水性部分は、好ましくは、少なくとも８個、特に１２〜２０個の炭素原子を含む。極めて適当に、それは直鎖状アルキル基である。
水溶液中の疎水性、すなわち溶解性物質の濃度は、ミセル中に乳化した非揮発性液体を与えることによって増加させることができる。
両親媒性物質は、低またはゼロの発泡性を有するべきである。所望ならば、消泡剤、例えば、シリコーンまたはＣ4〜Ｃ12アルコールが存在してよい。
流体相と水溶液との接触は、任意の慣用的な手段、例えば、その流体が気体である場合、プレート若しくはランダムパッキンを含む噴霧塔、降下フィルムコンタクターまたは抜き取り表面コンタクターによって行なうことができる。その流体が気体である場合、そして更に、特にそれが液体である場合、接触は膜を介することができる。
膜を介する好ましい接触法において、流体相は、好ましくは、少なくとも１種類の両親媒性物質の水溶液中化合物のエマルジョンである。膜の両側の両親媒性物質は、当然ながら望ましくない相互作用をすべきではなく；例えば、一方の側に陽イオンおよびもう一方の側に陰イオンを有するのは概して望ましくない。エマルジョン分散相は、最初は、実施例１に記載のような膜を介して透過できないポリマーなどの種の溶液でありうる。
膜は、親水性または水湿潤性であるべきである。適当に、それはセルロースから製造され、１００００〜２００００Ｄａの範囲の分画分子量を有することができる。
このような系において化合物は両方向に通過することができ、実際に、関与するそれぞれの種の化学ポテンシャルにしたがって一方が一方向に、もう一方が反対方向に通過しうると考えられるので、本発明は、第二の態様において、水への溶解性が制限された化合物を、該化合物を透過しうる膜を介して一方の両親媒性水溶液からもう一方へ移動させる方法を提供する。
該方法は、特に、大気圧において好ましくは１２０℃以下、特に８５℃以下で沸騰する揮発性化合物、例えば、炭水化物およびハロゲン化炭水化物に対して応用可能である。
外部界面活性剤は、内部界面活性剤との反応の妨げになるべきではない。例えば、内部界面活性剤が陽イオンである場合、外部界面活性剤は陰イオンであるべきではない。外部界面活性剤は、好ましくは、その臨界ミセル濃度以上である。それは、溶媒が可溶性である乳化低揮発性液を含むことができる。外部流体が液体である場合、外部流体が十分な希釈能力を提供しうるので、乳化ポリマー溶液の溶媒は比較的非揮発性でありうる。
膜を介する溶媒除去のための作業条件は、選択性および速度の要件に適するように選択される。一つの好ましい設定条件において、膜は１００００〜２００００Ｄａの分画分子量を有し（界面活性剤を通過させるであろう）、そして外部流体は内部と同じ界面活性剤濃度を有する。同様に、ポリマーラテックス中の界面活性剤濃度を増加させるかまたは減少させることができる。より低い分画分子量を有する膜を用いると、外部および内部界面活性剤濃度を等しくさせる必要がほとんどない。
溶媒除去のもう一つの方法において、エマルジョン分散相および連続相間の溶媒の分配を逆にするように選択された別の液体を加える。
好ましくは、該方法は、１０〜５０℃の範囲の温度で行なわれる。
界面活性剤またはリン脂質で被覆されたポリマーの小粒子（本明細書中において粒状ポリマーとも称する）を含むポリマー組成物を製造する別の方法は、微生物学的生産過程の採取段階の際に粒子を生成することである。ポリマーが、微生物細胞中に蓄積されている微生物学的に生産されたポリエステルである場合、粒状ポリマーは、細胞物質を界面活性剤で少なくとも部分的に置き換えることによって製造することができる。これは、ポリマーが不完全に結晶性であるならば、ポリエステル粒子を細胞から回収する際の任意の好都合な段階で行なうことができる。
粒状ポリマーは、ＰＨＡについて知られている大量製造工程中に製造することができる。欧州特許出願第０１４５２３３号明細書は、ＰＨＢポリマーを含む微生物細胞の水性懸濁液にタンパク質分解酵素消化および／または界面活性剤消化を施して、非ポリマー細胞物質を可溶化する方法を開示している。消化前または中であるが任意のタンパク質分解酵素消化工程の前に、懸濁液を少なくとも８０℃まで加熱して、他の状況においてＰＨＢ含有残基の懸濁液からの分離を妨げる核酸を変性させる。この方法の好ましい態様において、非ポリマー細胞物質の可溶化後に、残留物質を過酸化水素で処理する。細胞に界面活性剤消化を施した場合、界面活性剤は、過酸化水素処理の前に除去される。欧州特許出願第０１４５２３３号明細書の開示は本明細書中に包含される。
本発明の方法において、大量製造法の過酸化水素工程の際に界面活性剤を追加することにより、界面活性剤で被覆された小粒子のラテックスが得られる。所望ならば、シリコーンまたはＣ4〜Ｃ12アルコールなどの消泡剤が存在していてよい。
したがって、本発明のもう一つの態様により、各粒子が少なくとも部分的に界面活性剤またはリン脂質で被覆されている小粒子の形の結晶性ポリマーを含むポリマー組成物の製造法であって、結晶性ポリマーを含む微生物細胞を溶解し、そして界面活性剤またはリン脂質存在下において酸化剤を用いてポリマー表面から非ポリマー細胞物質を除去することを含む上記方法を提供する。
酸化剤は、非ポリマー細胞物質を除去しうるかまたは可溶化しうる任意の酸化剤でありうる。好ましくは、酸化剤は過酸化物、例えば、過酸化水素である。
この製造法の結果は、粒状ポリマーを非晶または不完全な結晶状態で少なくとも０．１日、好ましくは１日、特に１週間、そして具体的には６か月間またはそれ以上貯蔵するのに用いることができるラテックスである。
或いは、ラテックスは通常の方法で噴霧乾燥させることができる。
任意の方法によって製造された粒状ポリマーに、噴霧乾燥または自然乾燥などの乾燥法を施した場合、界面活性剤コーティングが破壊されることがあり、ポリマーの結晶化が始まるかもしれない。しかしながら、本発明の粒状ポリマーのもう一つの利点は、被覆された粒子の結晶化速度が、通常の方法によって製造されたポリマーと比較して有意に遅いことである。これは、通常、製造後急速に高水準の結晶化度を示すポリマーに特に有用である。不完全に結晶性であり且つ少なくとも部分的に界面活性剤またはリン脂質で被覆されているこのような粒子は、その結晶化半減期が周囲温度で０．１日より大である場合、本発明の範囲内である。
この製造法を用いてポリマーの噴霧乾燥粒子を製造することは、ポリマーの大量製造において、界面活性剤コーティングが小粒子の凝集を止め、具体的にはプラントでの遠心分離を促進する懸濁レオロジーを与えるというもう一つの利点を有する。しかしながら、ラテックスは、この形で貯蔵できるし、しかも作業者に好都合な時にいつでも噴霧乾燥できる。
大量製造法において界面活性剤被覆粒子の水性ラテックスを製造するのに用いるための界面活性剤は、前述の界面活性剤またはリン脂質のいずれかでありうる。界面活性剤は、好ましくは、非イオン界面活性剤であり、そして好ましくはアルキル基中に９〜２０個の炭素、特に１６個の炭素原子および７〜１００個、好ましくは２０個のエトキシレート単位を有するアルキルエトキシレート；芳香族エトキシレート、例えば、ノニルフェニルエトキシレート；一般式
Ｈ-（ＯＣＨ2ＣＨ2）a-（ＯＣＨ（ＣＨ3）-ＣＨ2）-（ＯＣＨ2ＣＨ2）a-ＯＨ
を有するエチレンおよびプロピレンオキシドのブロックコポリマーから成る群より選択されるのが好ましい。
粒子を製造するためのどの方法を用いても、故意にでもそうでなくても製造された結晶性粒子はいずれも、例えば１０００〜５０００ｇでの穏やかな遠心分離によって非晶または不完全な結晶性粒子から分離することができる。続いて、所望ならば、非晶または不完全な結晶性粒子（前記結晶性粒子よりも低密度である）を、例えば５０００〜１０００００ｇでのより強力な遠心分離によって濃縮するかまたは分離することができる。
したがって、小粒子の形のポリマーは、個々の粒子の流動性粉末としてまたは荒い凝集物として製造することができる。このような凝集物は、好ましくは、それらの中の粒子間で核形成現象が伝達されないように凝集が制限されているかまたは塊状結晶化を制限するほど十分に小さい。
このような粉末の製造は、核形成現象および結果としての結晶化を避けるように特別な注意を必要とするので、好ましくは、粒状ポリマーを、ポリマーが実質的に不溶性である液体中の分散液の形で製造する。
したがって、本発明の好ましい態様として、好ましくは１〜５０重量％、特に５〜２０重量％のポリマーを含むポリマーの水性ラテックスを提供する。
粒状ポリマーは、造形品を成形する通常の方法、例えば、射出成形、圧縮成形、ファイバーまたはフィルムの押出、異形の押出、ガス流紡糸、粘着紡糸、支持体上への溶融塗布、支持体上へのラテックス塗布、揮発性溶媒中溶液の造形のいずれにおいても用いることができる。このような方法において、粒状ポリマーは効果的に閉じ込められ且つ融合して、ポリマー構造、すなわち、造形品を形成する。
このような方法によって製造された製品の例としては、特に包装用のフィルム、コーテッド製品（例えば、紙、板紙、不織布）、ファイバー、不織布、押出ネット、身辺衛生用品、ボトルおよび飲料容器、農業および園芸用フィルムおよび容器、徐放性または制御放出顆粒装置、オストミーバッグ（ｏｓｔｏｍｙ  ｂａｇｓ）がある。或いは、粒状ポリマーは接着剤として用いることができる。
したがって、本発明は、もう一つの態様において、第一の態様によるポリマー粒子を閉じ込め、そして適当に、それらを相互に付着および／または結晶化させることによってポリマー構造を製造する方法を提供する。
所望ならば、粒子はポリマーのための溶媒を含むことができるし、本発明の第二の態様の方法によって製造された場合、工程（ｃ）での不完全な溶媒除去をおそらく伴って工程（ｂ）で生成されたエマルジョンとして適用しうる。これによって、多数の加工工程が減少する。
特に好ましい方法の例は、このようなポリマー粒子の水性ラテックスを固体表面上に塗布した後、おそらくはその表面に対する付着を伴って相互に付着および結晶化させることを含む。極めて好都合に、この方法は、ポリマー粒子をラテックスの状態で用いる。固体表面は、特に、織布または不織布、特に紙または板紙である。
本発明のもう一つの実施態様において、１種類またはそれ以上の活性成分、例えば、薬剤または土壌化学薬品は、製造の際にポリマーの小粒子中に配合することができるであろう。このような活性成分を含む粒状ポリマーは、制御放出若しくは徐放性顆粒若しくは装置を成形するのに用いることができるし、或いは水性懸濁液の注射若しくは摂取によって直接的にまたは水性懸濁液の表面塗布によって用いることができるであろう。
実施例１
非晶ＰＨＢ粒子の製造
細胞物質の酵素的分解に続いて噴霧乾燥、融解および急冷によってアルカリゲネス・オイトロフスから得られるポリ（Ｒ−３−ヒドロキシブチレート）ホモポリマー（ＰＨＢ）（Ｍw６６６０００およびＭn２０６０００（ＧＰＣによる）の式Ｉ、ＣmＨn＝−ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2−）を、クロロホルム中５％ｗ／ｖで溶解させた。溶液を、２０容量の臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）溶液中１〜５０ｍＭの範囲の各種濃度で、２０℃において２０ｋＨｚで最大２０分間まで音波処理した。５ｍＭ  ＣＴＡＢ中で得られたエマルジョンを、３回取替える水性ＣＴＡＢ（５ｍＭ）に対して、分画分子量が１２０００〜１４０００Ｄａのセルロース膜を用いて２４〜４８時間透析した。この時間の最後に、残留するポリマーは、凝固性を示さない極めて微細な部分的に半透明の粒子のラテックスの状態の溶液中に分散した。粒子は、透過型電子顕微鏡において非複屈折の０．１〜０．３ミクロン直径のほぼ球として見える。
分散ポリマーの試料を、８０００ｇおよび３３，０００ｇでそれぞれ３０分間２回の遠心分離によって分離した。非晶粒子をＤ2Ｏ中に再懸濁させ、溶液状態13Ｃ−ＮＭＲ分光分析法（下記の注記を参照されたい）によって検査した。粒子は、５０〜９０℃の範囲の温度で鋭いスペクトル線を示したが、クロロホルムの痕跡は示されなかった。結晶性ポリマーおよび溶融液から急冷されたポリマーの対照試料はシグナルを生じなかった。製造された粒子のＮＭＲスペクトルは、全細胞中のポリマー粒子のそれと一致した。スペクトルは、ポリマーが極めて非晶質であることを示し、シグナル強度は全細胞中のポリマー粒子について見られたものと同様である。
スクロース密度カラムを用いて、粒子の相対密度を推定した。非晶ＰＨＢの理論密度は１．１７６である。結晶性ＰＨＢ対照出発物質の密度は１．２５であった。製造された粒子は密度１．１５〜１．１８であった。主として、粒子は非晶質であると考えられた。
注記：この高分解能溶液型13Ｃ−ＮＭＲ分光分析法において、比較的鋭いＰＨＢ共鳴は、１０7ｓ-1程度の周波数での局所的な分子運動の存在に依る。これらの運動はエラストマーにおいて存在するが、結晶性または非晶質不動固体には存在しない。したがって、ＰＨＢ不動固体はＰＨＢ共鳴を示さない。エラストマーおよびこのような固体の混合物は若干の強度減損を示すが、見掛けの線幅は変化しないと考えられる。分子運動性の全般的であるが一部分の減損は線幅の広がりを示すが、強度は損なわれないと考えられる。
実施例１の方法を、下記の表１に挙げた溶媒を用いて製造した。粒子の結晶性含量を＋または＋＋として与え、但し、＋は結晶性４０％未満を意味し、＋＋は結晶性１０％未満を意味する。（以下、商標名を星印*で示す）。
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実施例２
顆粒安定性実験
ＰＨＢのクロロホルム（１．５ｍｌ）中５％（ｗ／ｖ）溶液および臭化セチルトリメチルアンモニウムの５０ｍＭ水溶液（ＣＴＡＢ、３０ｍｌ）を、周波数２０ｋＨｚで出力２００Ｗを用いる２０秒間の超音波処理によって乳化した。エマルジョンを撹拌しながら７５℃で３５分間加熱して有機溶媒を除去した。人口非晶ＰＨＢ粒子を、８０００ｇおよび３３，０００ｇでそれぞれ３０分間２回の遠心分離によって集めた。各回の遠心分離からのペレットをＤ2Ｏ  ０．２５ｍｌ中に再懸濁させ且つ合わせた。約１０％固形分の濃縮顆粒懸濁液を、Ｃ6Ｄ6含有ガラス細管と一緒にＮＭＲ試験管中に密封した。試料を３０℃の一定温度で維持し、そして13Ｃ−ＮＭＲによって定期的に検査した。ＮＭＲスペクトルをブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）ＡＭ４００  ＮＭＲ分光計において１００．６ＭＨｚで、獲得時間０．２７９秒間、再循環時間５秒間、指数線幅広がり因子２０Ｈｚおよび２００遷移／スペトクルを用いて７０℃で記録した。極めて鋭いＰＨＢ共鳴が観察され、高運動性非晶物質を示した。ＮＭＲ線強度は、（表２においてベンゼンピーク＝１０．０が与えられる）３か月を越える期間にわたってほとんど変化がなく、安定な非晶質エマルジョンを実証する。
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実施例３
コーテッドフィルム実験
ＰＨＢのクロロホルム（１０ｍｌ）中５％（ｗ／ｖ）溶液および臭化セチルトリメチルアンモニウムの２０ｍＭ水溶液（ＣＴＡＢ、２００ｍｌ）を、周波数２０ｋＨｚで出力２００Ｗを用いる３分間の超音波処理によって乳化した。エマルジョンを撹拌しながら７５℃で６５分間加熱して有機溶媒を除去した。人口非晶ＰＨＢ粒子を、８０００ｇで３０分間の遠心分離によって集めた。界面活性剤で被覆された非晶粒子を、ガラスＸ線スライドに対してペーストとして塗布し（約１ｍｍ厚みフィルム）、そして直ちに広角Ｘ線散乱（ＷＡＸＳ）によって分析した。次に、フィルムを周囲温度で自然乾燥させ、そして一晩放置後、更に３６日間放置後にＷＡＸＳによって再度分析した。３６日後、フィルムを真空中において１２５℃で８時間加熱した後、ＷＡＸＳによって再度分析した。試料のＸ線結晶化度の値を表３に示す。
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結果は、コーティングの自然乾燥が、中間水準の結晶化度までの結晶化を開始させたことを示し、それは、３６日後の結果によって実証された結晶化度の１０％上昇によって示されるように比較的安定である。通常の射出成形ＰＨＢについては、最大１時間までの成形後時間中に５５％までの結晶化度が示され、それが１０日間の間に６３％より大まで増加する。本発明の方法は、自然乾燥界面活性剤被覆粒子の結晶化速度を遅らせ、それらは、ポリマーが更に大きい柔軟性を有するという潜在的な利点を伴って、中間水準の結晶化度で安定化する。
より高い水準の結晶化度は、被覆試料を加熱することによって達成することができる。このようなポリマーの結晶状態を一連の穏やかな処理によって調節する能力は、環境破壊性の溶媒を含まない水性ラテックスからのポリマーコーティングの製造において有意に適用しうると考えられる。
実施例４
種々のポリマーの密度決定
３種類のポリマーの粒子試料を製造した。ポリマーは、
１．ＰＨＢホモポリマー；
２．ＰＨＢホモポリマーおよびＰＨＢＶコポリマー（２８％ＨＶ）の５０／５０混合物；
３．ＰＨＢＶコポリマー含有（２８％ＨＶ）であった。
粒子は、５％ｗ／ｖのポリマー溶液を得、その溶液を、５０ｍＭ水性ドデシル硫酸ナトリウム（３０ｍＬ）と一緒に氷水浴上において２０ｋＨｚ（出力２００Ｗ）で１分間音波処理することによって製造された。得られたエマルジョンを、７５℃の油浴中の開放フラスコ中で撹拌しながら１時間加熱した。人口粒子は、懸濁液を８，０００ｇで３０分間（２０℃）遠心分離し、上澄みを３３，０００ｇで４５分間（２０℃）再遠心分離することによって集められた。各回からのペレットを水０．２５ｍｌ中に再懸濁させ、二つの懸濁液を合わせた。
次に、各試料からの人工粒子の密度分布を、ニコデンツ（Ｎｙｃｏｄｅｎｚ）*勾配を用いて分析した（ニコデンツ*＝５−（Ｎ−２，３−ジヒドロキシプロピルアセトアミド）２，４，６−トリヨード−Ｎ，Ｎ′−ビス（２，３−ジヒドロキシプロピル）イソフタルイミド）。５種類のニコデンツ*水溶液（３０／３５／４０／４５／５０％ｗ／ｖ）を、密封可能な超遠心管中のアリコート２５ｍｌ中に増加密度の順に重層した。人工顆粒懸濁液（１００μｌ）を各勾配の上部に入れた後、管を密封し、そして４５分間水平にして勾配を直線状にした。次に、勾配を１１０，００ｇ（２０℃）で２時間遠心分離した。顆粒バンドの密度は、屈折率測定法により、式
ｐ（ｇ／ｃｍ3）＝３．２４２ｎ20℃−３．３２３（２０℃で）を用いて決定された。
結果：
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試料２において、それぞれＰＨＢおよびＰＨＢＶ（２８％ＨＶ）の５０／５０配合物を含む個々の粒子は、ニコデンツ*勾配において中間密度の１本の鋭いバンドを生じた。対照的に、ＰＨＢ粒子およびＰＨＢＶ（２８％ＨＶ）粒子の単純な混合物（試料４）は、２種類のポリマーの既知の非晶質密度に対応する２本の鋭い且つ容易に分解可能なバンドを生じた。
これは、界面活性剤被覆粒子が、異なる構造および非晶質密度を有するポリマーの混合物から製造された場合、成分の十分な混合は、中間の非晶質密度を有する得られた粒子によって達成することができることを示している。
実施例５
界面活性剤被覆粒子の結晶化
ポリマー配合物から製造された粒子の結晶化挙動を研究した。２．５％ｗ／ｖ  ＰＨＢおよび２．５％ｗ／ｖ  ＰＨＢＶ（２８％ＨＶ）を１０ｍｌ含むクロロホルム溶液を、２０ｍＭ水性臭化セチルトリメチルアンモニウム（２００ｍｌ）と一緒に氷水浴上において２０ｋＨｚ、出力２００Ｗで３分間音波処理した。得られたエマルジョンを大型ビーカーに移し、サーモスタット制御熱板を用いて７５℃で１時間維持した。人工粒子を８，０００ｇで３０分間（２０℃）の遠心分離によって集め、Ｘ線回折スライドに移した。広角Ｘ線散乱（ＷＡＸＳ）パターンを数時間にわたる規則的な間隔で集め、同時に試料を自然乾燥させた。最後の測定の終りに（試料製造後５．５時間）、試料質量を蒸発によって４４％まで減少させた。次に、試料を１２５℃で１００分間アニーリングし、そしてＷＡＸＳパターンを再度測定した。結果は以下のようであった。
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実施例６
脂質被覆非晶粒子の製造
脂質で被覆された人工粒子は、洗浄剤−ミセル化リン脂質を用いて界面活性剤被覆粒子の表面コーティングを置き換えることによって製造された。大豆ホスファチジル−コリン（シグマ（Ｓｉｇｍａ）Ｐ５６３８、１０〜２０％ホスファチジル−コリンを含むＩＩ−Ｓ型、残りは他のリン脂質）を、エイタン（Ｅｙｔａｎ），Ｇ．Ｄ．、「リポソームによる膜機能の再構成（Ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）」、Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂ４１６巻（エルセビア・バイオメディカル（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ）、１９８２年）の方法によって精製し、そして約３３３ｍｇ／ｍｌ（ＢＨＴ防腐剤０．１ｍｇ／ｍｌ）のクロロホルム溶液として−２０℃で貯蔵した。この溶液の２．４ｍｌ部分を、乾燥窒素流を用いて厚肉ガラス試験管中で蒸発させた。ジエチルエーテル（５ｍｌ）を加え、試料を再度窒素で乾燥させた。次に、脂質を真空中で数時間乾燥させて、黄色ガム７６７ｍｇを生じた。５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ８．０）緩衝液中のナトリウムコレート（２％ｗ／ｖ）溶液を製造し、そして１８．４ｍｌをガムに加えた。試料を氷水浴上において２０ｋＨｚ（出力５０Ｗ）で５分間音波処理した。生成物は、大豆脂質４０ｍｇ／ｌを含む透明な黄色均一懸濁液であった。
人工粒子は、ナトリウムコレートを界面活性剤として用いる一般的な方法によって製造された。ＰＨＢのクロロホルム（２０ｍｌ）中５％ｗ／ｖ溶液を、５０ｍＭ水性ナトリウムコレート（２００ｍｌ）と一緒に氷水浴上において２０ｋＨｚ（出力２００Ｗ）で３分間音波処理した。操作を１回繰り返して、総量４４０ｍｌのエマルジョンを生成し、これを大型ビーカーに移し、そしてサーモスタット制御熱板を用いて７５℃で１時間維持した。得られた人工粒子懸濁液から２０ｍｌずつ９つ取り、粒子を集めるために遠心分離した。各試料を最初に８，０００ｇで３０分間（２０℃）遠心分離した後、３３，０００ｇで４５分間（２０℃）再度遠心分離した。試料１（対照）からのペレットをＤ2Ｏ（各０．２５ｍｌ）中に再懸濁させ、混合し、そして保存した。
残りの試料それぞれの２回の遠心分離によるペレットを、緩衝液（５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ８．０）中の種々の量のナトリウムコレート（２％ｗ／ｖ）で希釈された大豆脂質懸濁液を含む緩衝液中に再懸濁させた。二つの再懸濁ペレットを各試料用に混合して試料０．５ｍｌを与え、続いてそれを透析して界面活性剤を除去した。試料をセルロース透析バッグに移し、そしてアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）ＸＡＤ−２樹脂２５ｇ／ｌを含む緩衝液（５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ８．０）に対して室温で徹底的に透析した。13Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、全部の試料について内部標準としてｄ6−ベンゼン細管を用いて得られた（前記の条件）。大豆脂質を加えることによって保護された非晶粒子の百分率は、ＮＭＲスペクトルにおけるメチル共鳴強度と、対照試料のそれとを比較することによって推定された。結果を表５に示す。
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実施例７
大量製造法による人工粒子の製造
欧州特許第１４５２３３号明細書の方法によって製造されたプレ過酸化物材料１５０ｍｌを、２５０ｍｌコニカルフラスコ２個それぞれに入れた。シンペロニク（Ｓｙｎｐｅｒｏｎｉｃ）*Ａ５０の１．５ｇを一方のフラスコに加えた。次に、フラスコを８０℃の振とう水浴中に入れ且つ撹拌した。フラスコを水浴の温度に達しさせ、ｐＨを水酸化アンモニウム（１８％溶液）で７．０に調整した。１０６．５容量の過酸化水素９．０ｍｌを各フラスコに加えた。フラスコを水浴中に１０時間放置し、その間中、更に水酸化アンモニウム（１８％溶液）を定期的に加えることによってｐＨを維持した。いったん反応が完了したら、試料を冷却し、分析を行なった。粒度は、マルバーン・マスター・サイザー（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｓｉｚｅｒ）ＭＳ２０によって測定され、粒子密度はＣｓＣｌ密度勾配を用いて測定された。アナラー（Ａｎａｌａｒ）ＣｓＣｌ（ＢＤＨから入手可能）を用いて、１５％、２０％、２５％および２８％ｗ／ｖのＣｓＣｌを含む脱イオン水中ＣｓＣｌ溶液を調製した。各ＣｓＣｌ溶液２ｍｌを、パスツールピペットを用いて増加密度の順に遠心管中に入れた。この方法において、溶液は、後の溶液を加えた時に乱されてはならない。数滴の試料懸濁液を、調製された勾配の上部にパスツールピペットを用いて加えた。勾配を４０００ｒｐｍで１０分間回転させた。
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界面活性剤不存在において、過酸化物が粒子表面から不純物を除去すると、広範囲にわたる凝集が起こる。これは、粒子の完全な結晶化によって生じた粒子密度の増加に関係している。界面活性剤存在下において、凝集は完全に除去され、それらの単分散寸法が１μｍでとどまっている粒子は、したがって、粒子の更に低い密度によって判断されるように、主として、非晶質の状態のままである。
この実施例を、以下の界面活性剤を用いて繰り返し、極めて類似の結果を得た。シンペロニク*Ａ７、シンペロニク*Ａ１１、シンペロニク*Ａ２０、シンペロニク*９１ＡＴ（いずれもＩＣＩから入手可能）、ベロール（Ｂｅｒｏｌ）０８（ベロールから入手可能）、ジェネポル（Ｇｅｎｅｐｏｌ）Ｔ−５００（ヘクスト（Ｈｏｅｃｈｓｔ）から入手可能）、シンペロニク*ＰＥ／Ｆ８８、シンペロニク*ＰＥ／Ｆ１０８、シンペロニク*ＮＰ３０（ＩＣＩから入手可能）、ＰＥ６８００（ＢＡＳＦから入手可能）、アトラス（Ａｔｌａｓ）Ｇ２５４１（ＩＣＩから入手可能）。