(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
殺生物物質２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン塩酸塩及び５−ブロモ−５−ニトロ−１，３−ジオキサンを含有する水溶液中に保存されたカラム材料。
【請求項２】
水溶液が２０：８０〜８０：２０の割合で殺生物物質２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン塩酸塩と５−ブロモ−５−ニトロ−１，３−ジオキサンとを含有する、請求項１記載のカラム材料。
【請求項３】
水溶液が０．００１〜０．３％（ｗ／ｖ）の活性濃度で殺生物物質２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン塩酸塩と５−ブロモ−５−ニトロ−１，３−ジオキサンとを含有する、請求項１または２記載のカラム材料。
【請求項４】
殺生物物質２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン塩酸塩及び５−ブロモ−５−ニトロ−１，３−ジオキサンを含有する水溶液を、カラム材料を保存するために使用する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、カラム材料を水溶液中で保存するためのメチルイソチアゾロンとブロモニトロジオキサンとの混合物の使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】
水溶液中のカラム材料は、主に蛋白、核酸及び炭水化物のような水溶性の有機化合物を分離するために使用される。これらの化合物は微生物の成長を増進させる。水溶液で洗うことにより出来るだけカラム材料から有機化合物の残渣を除去するための努力がなされているが、これはしばしば完壁には達成されない。このように汚染されたカラム材料は多くの異なった微生物にとり理想的な栄養物質であり、このため２〜３日ですでに強力な微生物混入物を観察し得る。
【０００３】
カラム材料の微生物の混入は、しばしば大変高価である原料の再利用に悪い影響を与える。これは、劣った分離効率及び／又は流速度、微生物の代謝産物によるカラム材料の汚染、例えば蛋白及び核酸の分解物の崩壊のような分離すべき物質に対する損傷といった形態で表われ、或る場合にはカラム材料それ自体さえも微生物の混入により化学的な影響を受けることがありうる。それゆえ、カラム材料における微生物成長は、通常、例えばアルコール又は高度に濃縮された塩溶液といった殺生物性溶剤を分離材料に添加することにより防止される。微生物の成長を防止するための他の既知の方法は、ｐＨ値を強アルカリ性（＞１２）又は強酸性（＜２）のいずれかの値に調節すること、又はアジ化ナトリウムを添加することである（Ｂ．ワッドワース（Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ）、Ｖａｒｉａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍ．Ａｐｐｌ．第１１／３巻、第１０頁（１９７７））。
【０００４】
しかしながら、微生物の成長を防止するための全ての既知の方法は、固有の不利益を有する。かかる有機溶剤は高い濃度で添加されなければならない（約１５〜３０ｖ／ｖ％）。加えて、これら有機溶剤のいくつかは分解が困難であり、それゆえこれらは環境を汚染する。加えて、有機溶剤の不利益は、これらがある種のカラム材料を破壊することである。高い塩濃度は、カラム材料上に望ましくない結晶をもたらす。さらに、塩容量は、洗浄の間にかなり環境を汚染する。高い又は低いｐＨ値での保存は有害であり、多くのカラム材料は耐えることができない。アジ化ナトリウムは極めて毒性であり、かつ変異誘発性である（ブーフベルガー（Ｂｕｃｈｂｅｒｇｅｒ）及びキールマイアー（Ｋｉｅｒｍｅｉｅｒ）、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．２５、１５１４〜１５１５頁、（１９７９）；工業用原料の危険な特性の報告（Ｄａｎｇｅｒｏｕｓ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｒｅｐｏｒｔ）、第１０１６巻、第６５〜７６頁（１９９０））。さらに、アジ化ナトリウムは、重金属と高度に爆発性の複合物を形成しうる。そして、アジ化ナトリウムの微生物効率はｐＨに依存し、かつ基本的には弱く、微生物はアジ化ナトリウムを利用することすらできる（抵抗性）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
それゆえ、本発明の課題は水溶液中でカラム材料を保存する際の上述の不利益を除去することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上記課題は、極めて低い濃度でさえも微生物の混入からカラム材料を効果的に保護できる、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン塩酸塩（メチルイソチアゾロン）及び５−ブロモ−５−ニトロ−１，３−ジオキサン（ブロモニトロジオキサン）の組合せ物（混合物）により達成される。また、この混合物は微生物ですでに強度に汚染されたカラム材料に効果的に使用することができ、２〜３日以内に微生物を有意義に減少させることができる。
【０００７】
本発明の混合物は、好適にはメチルイソチアゾロン及びブロモニトロジオキサンのほぼ等容量のものから成る。しかしながら、メチルイソチアゾロン及びブロモニトロジオキサンが２０：８０〜８０：２０の割合である混合物も微生物の成長を阻止する。二成分から成る混合物は、それらを少なくとも０．００１％（ｗ／ｖ）の濃度でカラム材料の水溶液に添加するとき、微生物の成長を抑制する。約０．０５％〜０．３％（ｗ／ｖ）の濃度が好適に使用される。０．１％（ｗ／ｖ）のメチルイソチアゾロン／ブロモニトロジオキサンの１：１混合物が、カラム材料における微生物の成長を阻止するために特に有利である。さらに、この殺生物性混合物は長時間（何ケ月ないし何年）に亙り効果的であり、実際に非毒性であり、容易に分解でき、即ち環境的に許容でき、これはカラム材料を破壊することなく、また、単に洗浄するだけでこれらから容易に分離しうる。
【０００８】
本発明の殺生物性混合物は、化学的に異なるカラム材料を保存するために適当である。原則として、例えばセファロース、セファデックス、アガロース、アクリルゲル、ポリスチレン、ケイ酸塩にもとづくゲル等の水性系において分離するのに適切なすべての物質が考慮されうる。これに関連して、ポリマーが親和性のリガンド又は担体荷電でコーティングされているか否かは重要でない。
【０００９】
更に、本発明の殺生物剤の組合せ物は、すでに微生物で強力に汚染された（約１０6〜１０8微生物／ｍｌ）カラム材料の微生物侵入を減少させるため、及び２〜３日で（２日後、２８℃）微生物の数を有意義に減少させるために使用され、ある場合には微生物を全く有しないものが達成され得る。
【００１０】
２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン塩酸塩及び５−ブロモ−５−ニトロ−１，３−ジオキサンはすでに久しく知られており、種々の会社から購入できる（例えば、ベーリンガーマンハイム社、ＭＩＴ又はブロモニトロジオキサン、ブロニドックス（Ｂｒｏｎｉｄｏｘ）Ｋという商品名である。）。これらの物質は特に、化粧品及び或る種の技術的製造物において高度に効果的な殺生物剤として使用される（“Ｐｒａｘｉｓ  ｄｅｒ  Ｓｔｅｒｉｌｉｓａｔｉｏｎ、Ｄｅｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ−Ｋｏｎｓｅｒｖｉｅｒｕｎｇ”、カールハインツ  ヴァルホイサー（Ｋａｒｌ−Ｈｅｉｎｚ  Ｗａｌｌｈａｅｕｓｓｅｒ）、第４版、Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｖｅｒｌａｇ  Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ／ニューヨーク、第４４５及び５３４頁、１９８８を参照）。さらに、これらの化合物の組合せ物及び診断試験における保存剤としてのその使用は既知である（ヨーロッパ特許第４６７３３７号）。
【００１１】
メチルイソチアゾロン及びブロモニトロジオキサンから成るこの混合物が水溶液中におけるカラム材料に対してすぐれた殺生物作用を有しているという事実は驚くべきことである。というのは、診断剤における慣用の溶液に比較して、例えば殺生物剤の効果を低下させるカラム材料中で吸着作用を生じさせることができるからである。このような殺生物効果を有する他の既知の物質は微生物の数を減少させない。
【００１２】
本発明は、以下に具体的に示される：
【００１３】
【実施例】
例：
微生物が混入したカラム材料に対する本発明の殺生物性混合物の効果について使用される殺生物性混合物：メチルイソチアゾロン／ブロモニトロジオキサン（９ｇＭＩＴ及び１０ｇブロニドックスＫ／１００ｍｌエタノール、９６％）
微生物が混入した試料：
１）  Ｇ−ゲル
２）  蛋白Ａ−セファロース（室温で水中に６０時間保存）
３）  蛋白Ａ−セファロース（室温で１０ｍＭのＫ−リン酸緩衝液ｐＨ７．５に６０時間保存）
４）  ＤＥＡＥ−セファロース
５）  Ｑ−セファロース
６）  ２０ｍＭリン酸緩衝液、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０５％アジ化ナトリウム中で固定されたストレプトアビジン
前処理：
試料１）、４）及び５）をそれぞれ０．７５ｇずつ計量し、３ｍｌの滅菌した０．８５％の食塩溶液に懸濁し、他の試料と同様に更に処理した。
【００１４】
試料３）は４＋１の割合で希釈しなければならなかった、というのは他の方法ではピペットできないからである。
【００１５】
それぞれの初期力価は、これらを各々３個の１ｍｌに分割する前に（３個の殺生物性混合物溶液を試験するため）、標準の１個の栄養寒天上に置き、２８℃で培養することにより準備した試料中で測定した。
【００１６】
殺生物性混合物は、０．０１〜０．０４及び０．１％（ｗ／ｖ）の最終濃度で分割した試料中に添加し、２８℃で培養し、作用させ、残留する微生物の力価は引き続き上述のようにして測定した。
【００１７】
【表１】
0003710153.tif 000002