(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
採取された原料細胞液を貯留する手段１と、赤血球は通過し白血球は捕捉するフィルター手段２と、該フィルター手段２より流出した赤血球含有液を貯留する手段３とがそれぞれ第１及び第２のチューブを介して直列に接続されており、前記フィルター手段下流の第２のチューブ７から分岐した第３のチューブ８に接続する回収液貯留部４と、前記フィルター手段上流の第１のチューブ６から分岐した第４のチューブ９に接続する白血球回収部５を具備し、且つ第２と第３のチューブの分岐点には前記回収液貯留部４からフィルター手段２の方向のみへ流通せしめるための手段を、第１と第４のチューブの分岐点には前記フィルター手段２から前記白血球回収部５の方向のみへ流通せしめるための手段を有することを特徴とする赤血球除去システム。
【請求項２】
回収液貯留部４から第１のチューブ６へ連結する、前記フィルター手段２のリンス用チューブ１０を有する請求項１記載の赤血球除去システム。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は骨髄あるいは末梢血などの、赤血球と造血幹細胞及び／または造血前駆細胞を含む細胞集団から、赤血球を除去するシステムに関する。
【０００２】
【従来の技術】
現在、白血病などの造血器腫瘍及び固形癌の化学療法における主たる副作用である造血障害に対して、骨髄移植法あるいは、末梢血を用いる末梢血幹細胞移植療法が行われている。周知の通り、これら移植療法における同種移植を行う際はドナーとレシピエント（患者）間のＨＬＡ（白血球の血液型）の一致が最も重要であるため、ＡＢＯ血液型（赤血球の血液型）の違いはドナー骨髄または末梢血から赤血球を除去することで解決している。従来、赤血球を除去する手段として遠心分離器により、移植に必要とされる造血幹細胞及び／または造血前駆細胞を含む白血球分画（更に詳しくは単核球分画）と赤血球分画に分離する方法が行われている。特に効果的に赤血球と単核球を分離したい場合は密度勾配遠心法と呼ばれる比重液（例えば、ファルマシア社製Ｆｉｃｏｌｌ）を用いた遠心方法を行うが、その操作過程は比重液に細胞浮遊液を重層する際に決して液面を乱してはならない等熟練を要し煩雑である。しかも、比重液を用いるためコスト高である。特開昭６１−８４５５７号公報、特開平２−１３４５６４号公報等で操作の煩雑さを解決すべく、多くの試みがなされているが、いまだ簡便で低コスト且つ短時間で骨髄から赤血球を除去する技術はない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、遠心分離器や特殊な試薬を用いることなく、簡便で低コストで短時間で操作でき、且つ無菌操作ができる赤血球除去システムを提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
図１は、本発明の赤血球除去システムの概略図である。
本発明は、採取された原料細胞液を貯留する手段１と、赤血球は通過し白血球は捕捉するフィルター手段２と、該フィルター手段２より流出した赤血球含有液を貯留する手段３とがそれぞれ第１及び第２のチューブを介して直列に接続されており、前記フィルター手段下流の第２のチューブ７から分岐した第３のチューブ８に接続する回収液貯留部４と、前記フィルター手段上流の第１のチューブ６から分岐した第４のチューブ９に接続する白血球回収部５を具備し、且つ第２と第３のチューブの分岐点には前記回収液貯留部４からフィルター手段２の方向のみへ流通せしめるための手段を、第１と第４のチューブの分岐点には前記フィルター手段２から前記白血球回収液部５の方向のみへ流通せしめるための手段を有することを特徴とする赤血球除去システムに関する。更に、白血球回収前に該フィルター手段をリンスせしめるための手段を有する赤血球除去システムに関する。
本発明に用いるフィルター手段としてはナイロンウール、ポリエステル不織布、ハイドロキシアパタイトビーズ、スポンジ状高分子化合物などがあげられるがこれらに限定されるものではなく、白血球を捕捉した後、その白血球回収ができる素材であればよい。但し、同種骨髄移植における合併症の原因細胞除去、あるいは自家骨髄移植における癌細胞除去を目的とした細胞分離分野で分離効率を上げるため赤血球とともに血小板も除去されることが望まれる場合には、本発明のフィルター手段に血小板を通過させるコーティング処理等で表面電荷を調整する。本発明で言う第２と第３及び第１と第４のそれぞれのチューブ分岐点に有する一方向へ流通せしめるための手段としては三方活栓、デュアルチェックバルブ、クランプ等が挙げられるが三方活栓を用いるのが望ましい。
更に、回収溶液貯留部４には、フィルター手段に捕捉された白血球を回収するための回収液を入れている。該回収液としては生理食塩水、ＨＢＳＳ（ハンクス液）、Ｄ−ＰＢＳ（ダルベッコーリン酸緩衝液）などの緩衝液にヒト血清アルブミンなどのタンパクあるいは抗凝固剤を必要に応じて添加したものが用いられる。
また、本発明で用いる原料細胞液とは赤血球、造血幹細胞及び／または造血前駆細胞を含む液体であり、骨髄、末梢血、臍帯血あるいはこれらを遠心分離器により粗分離したものが挙げられる。今後、幹細胞増幅法を利用して少量の造血幹細胞を培養し移植する技術の発展とともに、赤血球除去の有無性は一層高まるものと考えられる。
【０００５】
【実施例１】
本発明の実施態様の１例を図面により説明する。１は原料細胞が入った容器（通常、血液バッグ）であり第１のチューブ６と接続している。４は回収液の入っているバッグであり、ここから白血球除去フィルター２に回収液を供給する。第３のチューブ８はフィルター手段２に回収液を供給するチューブで第２のチューブ７に連結している。なお、第３のチューブの途中にはクランプ１４が、また、第３のチューブ８と第２のチューブ７の分岐点には三方活栓１２がある。チューブ１０はリンス液をフィルター手段２に導入するチューブであり、第１のチューブ６からＹ字管等により分岐している。チューブ１０の途中にはクランプ１３がある。第１のチューブ６にクランプ１６、メッシュ入りトラップ１５があるものが望ましい。第４のチューブ９は回収細胞液を白血球回収部５に導入するためのものである。第１のチューブ６と第４のチューブ９の分岐点には三方活栓１１がある。フィルター手段２は、赤血球は（血小板を除去したい場合は血小板も）通過するが、白血球は捕捉するフィルターである。それぞれの１、３、４、５の手段に用いるバッグは、スパイクあるいは無菌接続器でチューブと接続可能となっている。
次に使用方法を説明する。まず、常法により採取された骨髄、末梢血バフィーコート、臍帯血等を予め血液バック１に入れておく。この時、クランプ１３は「閉」、三方活栓１１はチューブ９の方向が「閉」、三方活栓１２はチューブ８の方向が「閉」の状態にする。血液バック１内の細胞液は、第１のチューブ６を通じて白血球除去フィルター２に導入される。そこで白血球は捕捉され、赤血球、血小板は通過し第２のチューブ７から排液バッグ３に回収される。なお、フィルター２に残存する若干の赤血球を洗流するためにクランプ１３を「開」にし、回収バッグ４からチューブ１０、第１のチューブ６、白血球除去フィルター２、第２のチューブの順に回収液を排液バック３に流す。次に、クランプ１３を「閉」にし、三方活栓１２の第２のチューブ７（排液バッグ側）の方向が「閉」、三方活栓１１の第１のチューブ６（血液バッグ側）の方向が「閉」となるようにする。そして回収液バッグ４を強く押し潰すことにより、回収液を白血球除去フィルター２に導入し、該フィルターに捕捉された白血球を押し出し、第４のチューブ９を通して白血球回収バッグ５に流す。
白血球回収バッグ５に回収された細胞液は、このまま、あるいは濃縮操作により体積を減らしてから患者に輸注したり、凍害保護剤の添加等の必要な作業を加え冷凍保存を行い大量療法後に解凍して患者に輸注するといったように利用される。
【０００６】
【発明の効果】
本発明によれば、遠心分離器や特殊な試薬を用いない、簡便で低コストで短時間で操作でき、且つ無菌操作ができる赤血球除去システムを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の「赤血球除去システム」の概略図である。
【符号の説明】
１  血液バッグ
２  白血球除去フィルター
３  排液バッグ
４  回収液バッグ
５  白血球回収バッグ
６  第１のチューブ
７  第２のチューブ
８  第３のチューブ
９  第４のチューブ
１０  フィルターリンス用チューブ
１１，１２  三方活栓
１３  クランプ
１４  クランプ
１５  メッシュ入りトラップ
１６  クランプ
【図１】
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