(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
シリカゲルに多糖誘導体が塗布により担持された液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用充填剤において、
前記充填剤中の多糖誘導体の担持量が３０〜３５重量％であり、
前記充填剤をスラリー充填法によりカラム管に充填した液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用カラムを用い、下記条件の液体クロマトグラフィー法によりＴＳの溶出時間〔t(TS)（min.）〕を測定し、下記式（Ｉ）から算出されるＴＳ係数が０．６９６から０．９２６の範囲であることを特徴とする液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用充填剤。
＜液体クロマトグラフィーの分析条件＞
移動相：ｎ−ヘキサン／２−プロパノール＝９／１（v/v）
流速：１．０ml／min
温度：２５℃
検出：２１０nm
打込みＴＳ濃度：５．０mg／ml（移動相）
ＴＳ打込み量：１０μＬ
ＴＳ係数＝［Vc−[t(TS)−t(blank)］×FR］／[t(TS)−t(blank)］×FR （Ｉ）
［式中、Vc（cm3）：カラム体積
FR（ml／min.）：流速
t(TS)(min.）：Tetrakis(trimethylsilyl)silane(=TS)の溶出時間
t(blank)(min.)：カラムを接続しない状態でのTSの溶出時間を示す。］
【請求項２】
シリカゲルが粒径１μm〜３００μmで、平均孔径５０Å〜５００００Åのものであり、多糖誘導体がセルロース又はアミロースのエステル誘導体あるいはカルバメート誘導体である請求項１記載の液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用充填剤。
【請求項３】
光学純度測定を目的に使用される分析用カラムに供される充填剤である請求項１記載の液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用充填剤。
【請求項４】
光学活性体取得を目的とする単カラム方式の分取に使用される分取用カラムに供される充填剤である請求項１記載の液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用充填剤。
【請求項５】
連続式液体クロマトグラフィーの分取用カラムに供される充填剤である請求項１記載の液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用充填剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用充填剤を用いたものであることを特徴とする液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用カラム。
【請求項７】
シリカゲルが粒径１μm〜３００μmで、平均孔径５０Å〜５００００Åのものであり、多糖誘導体がセルロース又はアミロースのエステル誘導体あるいはカルバメート誘導体である請求項６記載の液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用カラム。
【請求項８】
光学純度測定を目的に使用される分析用カラムである請求項６記載の液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用カラム。
【請求項９】
光学活性体取得を目的とする単カラム方式の分取に使用される分取用カラムである請求項６記載の液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用カラム。
【請求項１０】
連続式液体クロマトグラフィーの分取用カラムである請求項６記載の液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用カラム。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は光学異性体の分離、特に液体クロマトグラフィー法による光学異性体の分離に用いられる充填剤及びカラムに関するものであり、特に医薬品、食品、農薬、香料等の分析において、幅広いキラル化合物を、高い分離係数をもって光学分割する光学異性体分析技術に関するものである。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
有機化合物には物理的、化学的性質、例えば沸点、融点、溶解度といった物性が全く同一であるが、生理活性に差がみられる光学異性体が多く存在する。生体はＬ−アミノ酸からなるタンパク質で構成されており、これらタンパク質が構築する高次の不斉空間による有機化合物の認識の差が生理活性の差として発現する。医薬品の場合では生体内の特定の受容体との結合のし易さによる薬理活性の違いがよく研究されており、光学異性体の間で薬効、毒性の点で顕著な差が見られるケースが良く知られている。このため厚生省は医薬品製造指針においては「当該薬物がラセミ体である場合には、それぞれの異性体について、吸収、分布、代謝、排泄動態を検討しておくことが望ましい」と記載している。
【０００３】
先に述べたように光学異性体の物理的、化学的性質、例えば沸点、融点、溶解度といった物性は全く同一であるために、通常の分離手段では分析が行えないため、幅広い種類の光学異性体を簡便に、かつ精度良く分析する技術の研究が精力的に行われた。そしてこれら要求に応える分析手法として高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による光学分割法、特にＨＰＬＣ用キラルカラムによる光学分割方法が進歩した。ここで言うキラルカラムとは不斉識別剤そのもの、あるいは不斉識別剤を適当な担体上に担持させたキラル固定相が使用されている。例えば光学活性ポリメタクリル酸トリフェニルメチル（特開昭５７−１５０４３２号公報参照）、セルロースあるいはアミロース誘導体（Ｙ．Ｏｋａｍｏｔｏ，  Ｍ．Ｋａｗａｓｈｉｍａ  ａｎｄ  ｋ．Ｈａｔａｄａ，  Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，  １０６，  ５３３７，  １９８４）、タンパクであるオボムコイド（特開昭６３−３０７８２９号公報）等が開発されている。
【０００４】
これら多くのＨＰＬＣ用キラル固定相の中でも、セルロースあるいはアミロース誘導体をシリカゲル上に担持させた光学分割用カラムは、極めて幅広い化合物に対し、高い不斉識別能を有することが知られており、さらに近年では、こういったＨＰＬＣ用キラル固定相と疑似移動床法を組み合わせた工業規模での光学活性体液体クロマト法分取の検討が進められている（Ｐｈｒａｍ  Ｔｅｃｈ  Ｊａｐａｎ，  ｖｏｌ．１２，  ４３（１９９６））。
【０００５】
こういった背景のもと、クロマト分取生産性を向上させるために、目的化合物に対して、切れの良い分離を与えるキラル固定相がますます求められており、高いクロマト効率を得る工夫が種々に凝らされている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、多糖誘導体を不斉識別剤とした光学異性体分離用充填剤に関して鋭意研究を行った結果、本発明に達した。
【０００７】
即ち本発明は、シリカゲルに多糖誘導体が塗布により担持された液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用充填剤において、
前記充填剤中の多糖誘導体の担持量が３０〜３５重量％であり、
前記充填剤をスラリー充填法によりカラム管に充填した液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用カラムを用い、下記条件の液体クロマトグラフィー法によりＴＳの溶出時間〔t(TS)（min.）〕を測定し、下記式（Ｉ）から算出されるＴＳ係数が０．６９６から０．９２６の範囲であることを特徴とする液体クロマトグラフィー用光学異性体分離用充填剤、並びにこれを充填したカラムを提供するものである。
＜液体クロマトグラフィーの分析条件＞
移動相：ｎ−ヘキサン／２−プロパノール＝９／１（v/v）
流速：１．０ml／min
温度：２５℃
検出：２１０nm
打込みＴＳ濃度：５．０mg／ml（移動相）
ＴＳ打込み量：１０μＬ
【０００８】
0003635002.tif 000002
［式中、Ｖｃ（ｃｍ３）：カラム体積
ＦＲ（ｍｌ／ｍｉｎ．）：流速
ｔ（ＴＳ）（ｍｉｎ．）：Ｔｅｔｒａｋｉｓ（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ）ｓｉｌａｎｅ（＝ＴＳ）の溶出時間
ｔ（ｂｌａｎｋ）（ｍｉｎ．）：カラムを接続しない状態でのＴＳの溶出時間を示す。］
【０００９】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。
【００１０】
本発明に用いられる多糖誘導体は、多糖と、その水酸基と反応しうる官能基を有する化合物とを反応させることにより得られる。
【００１１】
本発明に用いられる多糖としては合成多糖、天然多糖及び天然物変成多糖のいずれかを問わず、光学活性であればいかなるものでもよいが、好ましくは結合様式の規則性の高いものが望ましい。例示すればβ−１，４−グルカン（セルロース）、α−１，４−グルカン（アミロース、アミロペクチン）、α−１，６−グルカン（デキストラン）、β−１，６−グルカン（ブスツラン）、β−１，３−グルカン（例えばカードラン、シゾフィラン等）、α−１，３−グルカン、β−１，２−グルカン（Ｃｒｏｗｎ  Ｇａｌｌ多糖）、β−１，４−ガラクタン、β−１，４−マンナン、α−１，６−マンナン、β−１，２−フラクタン（イヌリン）、β−２，６−フラクタン（レバン）、β−１，４−キシラン、β−１，３−キシラン、β−１，４−キトサン、α−１，４−Ｎ−アセチルキトサン（キチン）、プルラン、アガロース、アルギン酸等であり、アミロースを含有する澱粉も含まれる。これらの中では、高純度の多糖を容易に入手できるセルロース、アミロース、β−１，４−キシラン、β−１，４−キトサン、キチン、β−１，４−マンナン、イヌリン、カードラン等が好ましく、特にセルロース、アミロースが好ましい。
【００１２】
これら多糖の数平均重合度（１分子中に含まれるピラノースあるいはフラノース環の平均数）は５以上、好ましくは１０以上であり、特に上限はないが、１０００以下であることが取り扱いの容易さの点で望ましい。
【００１３】
また水酸基と反応しうる官能基を有する化合物としてはイソシアン酸誘導体、カルボン酸、エステル、酸ハロゲン化物、酸アミド化合物、ハロゲン化合物、アルデヒド、アルコールあるいはその他脱離基を有する化合物であればいかなるものでもよく、これらの脂肪族、脂環族、芳香族、ヘテロ芳香族化合物を用いることができる。本発明に用いられる多糖誘導体として特に好ましいのは、１グルコースユニットあたり０．１個以上のウレタン結合又はエステル結合を有する多糖のカルバメート誘導体あるいはエステル誘導体である。
【００１４】
本発明の多糖誘導体担持充填剤とは、担体上に塗布させた多糖誘導体を原料に用い、担体と塗布された多糖誘導体間の化学結合、担体上の多糖誘導体同士の化学結合、第三成分を使用した化学結合、担体上の多糖誘導体への光照射、γ線などの放射線照射、マイクロ波などの電磁波照射などによって引き起こされる反応、ラジカル開始剤などを用いるラジカル反応などによって、さらなる化学結合を形成せしめることで、より強固な固定化を施された充填剤も含まれる。さらに担体上に塗布させた多糖誘導体を用いず、直接に多糖、もしくは多糖誘導体とシリカゲルなどの担体を化学結合させる方法で作製される多糖誘導体担持充填剤も含まれる。また、多糖誘導体担持充填剤を主たる構成要素とする光学異性体分離用充填剤とは、上述の多糖誘導体担持充填剤と他種の光学異性体分離用充填剤もしくは例えばオクタデシル表面処理されたシリカゲルなどの光学異性体分離用でない充填剤との混合物を言う。
【００１５】
本発明に用いられる担体としては、多孔質有機担体又は多孔質無機担体が挙げられ、好ましくは多孔質無機担体である。多孔質有機担体として適当なものは、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリアクリレート等からなる高分子物質であり、多孔質無機担体として適当なものは、シリカ、アルミナ、マグネシア、ガラス、カオリン、酸化チタン、ケイ酸塩、ヒドロキシアパタイトなどである。特に好ましい担体はシリカゲルであり、シリカゲルの粒径は０．１μｍ〜１０ｍｍ、好ましくは１μｍ〜３００μｍであり、平均孔径は１０Å〜１００μｍ、好ましくは５０Å〜５００００Åである。表面は残存シラノールの影響を排除するために表面処理が施されていることが望ましいが、全く表面処理が施されていなくても問題ない。
【００１６】
本発明においてＴＳ係数算出にあたっては、カラムを液体クロマトグラフ装置に接続した状態と接続しない状態におけるテトラキス（トリメチルシリル）シラン（以下ＴＳという）の溶出時間を測定し、得られた溶出時間を用い、上記式（Ｉ）で定義されるＴＳ係数を算出する。この測定の際に用いられる分析装置はＨＰＬＣ装置であり、使用される検出器としてはＴＳの溶出が確認できるＲＩ検出器、ＵＶ検出器などがあるが、特にはＵＶ検出器を用い波長２１０ｎｍで検出することが好ましい。
【００１７】
分析条件としては順相条件、すなわち疎水性溶剤を主たる構成要素とする移動相条件にて実施する。具体的にはｎ−ヘキサン／２−プロパノール＝９／１（ｖ／ｖ）の組成比の移動相である。また分析温度は室温（２５℃）であり、流速はカラム体積Ｖｃ（ｃｍ３）の４分の１〜９分の１、特に４．１５分の１、すなわち［Ｖｃ×（１／４．１５）］ｍｌ／ｍｉｎ．が好ましい。さらにＴＳの打込み量は、移動相にＴＳを５．０ｍｇ／ｍｌ濃度で溶解させたＴＳ溶液をカラム体積の３００分の１〜６００分の１の体積量、特に４１５分の１の体積量、すなわち［Ｖｃ×（１／４１５）］ｍｌ打込むことが望ましい。
【００１８】
本発明においては、上記のようにして算出されたＴＳ係数が０．２５から１．０の範囲であることが必要であり、この範囲をはずれると良好な分離性能を得ることができない。
【００１９】
本発明の充填剤は、ガスクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、超臨界クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動などのクロマトグラフィー法及び膜分離による光学異性体分離に用いるのが一般的であるが、特に液体クロマトグラフィー法に応用するのが好ましい。
【００２０】
更に本発明の充填剤は、主として光学純度測定を目的に使用される液体クロマトグラフィーの分析用カラム、数ｍｇ〜数ｋｇの光学活性体取得を目的とする単カラム方式の液体クロマトグラフィーの分取用カラム、擬似移動床方式に代表される連続式液体クロマトグラフィーの分取用カラム等に好ましく使用される。
【００２１】
【実施例】
以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００２２】
参考例１
ＴＳ係数＝０．５２７のアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）担持光学異性体分離用充填剤の作製方法
(1)  シリカゲル表面処理
多孔質シリカゲル（粒径２０μm、平均細孔径１３００Å）を公知の方法により、３−アミノプロピルトリエトキシシランと反応させることによりアミノプロピルシラン処理（ＡＰＳ処理）を施した。得られたＡＰＳ処理シリカゲルを３，５−ジメチルフェニルイソシアネートと反応することで、カルバモイル表面処理が施されたシリカゲルを得た。
【００２３】
(2)  アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）の合成
窒素雰囲気下、アミロース１０．０ｇを乾燥ピリジン３６０ml中、３，５−ジメチルフェニルイソシアネート８２．２ｇ（３当量）とピリジン還流温度下、６０時間加熱攪拌を行った後、メタノール６．０Ｌに注ぎ込んだ。析出した固体はグラスフィルターで濾取し、メタノールで数回の洗浄後、真空乾燥（８０℃、５時間）を行った。その結果、若干黄色がかった白色固体３５．３ｇ（９５％）が得られた。
【００２４】
(3)  アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）のシリカゲルへの担持
上記(2)で得たアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）１０ｇを酢酸エチル１００mlに溶解させ、このポリマードープの半量を均一に(1)のシリカゲル４０ｇに塗布した。塗布後、酢酸エチルを５０℃、１２０Torrの条件で２０分間の減圧乾燥を行い、さらに残り半量を同様に均一塗布後、先と同じ条件（５０℃、１２０Torr）で２０分間の減圧乾燥を行うことで、目的のアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）担持型充填剤を得た。
【００２５】
(4)  作製充填剤からのＨＰＬＣ用充填カラム作製
(3)で作製したアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）をシリカゲル上に担持した分離剤を充填剤として用い、長さ２５cm、内径０．４６cmのステンレス製カラムにスラリー充填法で充填し、光学異性体用分離カラムを作製した。
【００２６】
実施例１
ＴＳ係数＝０．９２６のアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）担持光学異性体分離用充填剤の作製方法
(1)  シリカゲル表面処理
参考例１の(1)と同じく、多孔質シリカゲル（粒径２０μm、平均細孔径１３００Å）にカルバモイル表面処理を施した。
【００２７】
(2)  アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）の合成
参考例１の(2)と同様の手法により、アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）を作製した。
【００２８】
(3)  アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）のシリカゲルへの担持
上記(2)で得たアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）５２．５ｇを酢酸エチル４８９mlに溶解させ、このポリマードープの１／４量を均一に(1)のシリカゲル９７．５ｇに塗布した。塗布後、酢酸エチルを５０℃、１２０Torrの条件で１５分間の減圧乾燥を行い、さらに１／４量を同様に均一塗布後、先と同じ条件（５０℃、１２０Torr）で１５分間の減圧乾燥を行った。引続き１／４量を均一塗布後、同条件（５０℃、１２０Torr）で４５分間の減圧乾燥し、最後に残り１／４量を均一塗布後、同条件（５０℃、１２０Torr）で４５分間の減圧乾燥することで、目的のアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）担持型充填剤を得た。
【００２９】
(4)  作製充填剤からのＨＰＬＣ用充填カラム作製
(3)で作製したアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）をシリカゲル上に担持した分離剤を充填剤として用い、長さ２５cm、内径０．４６cmのステンレス製カラムにスラリー充填法で充填し、光学異性体用分離カラムを作製した。
【００３０】
参考例２
ＴＳ係数＝０．２８６のアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）担持光学異性体分離用充填剤の作製方法
(1)  シリカゲル表面処理
参考例１の(1)と同じく、多孔質シリカゲル（粒径２０μm、平均細孔径１３００Å）にカルバモイル表面処理を施した。
【００３１】
(2)  アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）の合成
参考例１の(2)と同様の手法により、アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）を作製した。
【００３２】
(3)  アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）のシリカゲルへの担持
上記(2)で得たアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）１．２５ｇを酢酸エチル１２．５mlに溶解させ、このポリマードープの全量を均一に(1)のシリカゲル１１．２５ｇに塗布した。塗布後、酢酸エチルを５０℃、１２０Torrの条件で１５分間の減圧乾燥を行うことで、目的のアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）担持型充填剤を得た。
【００３３】
(4)  作製充填剤からのＨＰＬＣ用充填カラム作製
(3)で作製したアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）をシリカゲル上に担持した分離剤を充填剤として用い、長さ２５cm、内径０．４６cmのステンレス製カラムにスラリー充填法で充填し、光学異性体用分離カラムを作製した。
【００３４】
実施例２
ＴＳ係数＝０．６９６のアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）担持光学異性体分離用充填剤の作製方法
(1)  シリカゲル表面処理
参考例１の(1)と同じく、多孔質シリカゲル（粒径２０μm、平均細孔径１３００Å）にカルバモイル表面処理を施した。
【００３５】
(2)  アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）の合成
参考例１の(2)と同様の手法により、アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）を作製した。
【００３６】
(3)  アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）のシリカゲルへの担持
上記(2)で得たアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）５０．２５ｇを酢酸エチル４３７．２mlに溶解させ、このポリマードープの１／３量を均一に(1)のシリカゲル１１７．２５ｇに塗布した。塗布後、酢酸エチルを５０℃、１２０Torrの条件で１５分間の減圧乾燥を行った。引続きポリマードープの１／３量を同様に塗布後、酢酸エチルを同条件にて１５分間の減圧乾燥し、残り１／３量を均一塗布後、酢酸エチルを２５分間の減圧乾燥により減圧留去を行うことで、目的のアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）担持型充填剤を得た。
【００３７】
(4)  作製充填剤からのＨＰＬＣ用充填カラム作製
(3)で作製したアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）をシリカゲル上に担持した分離剤を充填剤として用い、長さ２５cm、内径０．４６cmのステンレス製カラムにスラリー充填法で充填し、光学異性体用分離カラムを作製した。
【００３８】
参考例３
ＴＳ係数＝０．３７９のアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）担持光学異性体分離用充填剤の作製方法
(1)  シリカゲル表面処理
参考例１の(1)と同じく、多孔質シリカゲル（粒径２０μm、平均細孔径１３００Å）にカルバモイル表面処理を施した。
【００３９】
(2)  アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）の合成
参考例１の(2)と同様の手法により、アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）を作製した。
【００４０】
(3)  アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）のシリカゲルへの担持
上記(2)で得たアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）２７．０ｇを酢酸エチル２７０mlに溶解させ、このポリマードープの１／２量を均一に(1)のシリカゲル１５３．０ｇに塗布した。塗布後、酢酸エチルを５０℃、１２０Torrの条件で１５分間の減圧乾燥を行った。引続きポリマードープの１／２量を同様に塗布後、酢酸エチルを同条件にて１５分間の減圧乾燥、目的のアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）担持型充填剤を得た。
【００４１】
(4)  作製充填剤からのＨＰＬＣ用充填カラム作製
(3)で作製したアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）をシリカゲル上に担持した分離剤を充填剤として用い、長さ２５cm、内径０．４６cmのステンレス製カラムにスラリー充填法で充填し、光学異性体用分離カラムを作製した。
【００４２】
比較例１
ＴＳ係数＝１．０５０のアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）担持光学異性体分離用充填剤の作製方法
(1)  シリカゲル表面処理
参考例１の(1)と同じく、多孔質シリカゲル（粒径２０μm、平均細孔径１３００Å）にカルバモイル表面処理を施した。
【００４３】
(2)  アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）の合成
参考例１の(2)と同様の手法により、アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）を作製した。
【００４４】
(3)  アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）のシリカゲルへの担持
上記(2)で得たアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）２．５ｇを酢酸エチル１８．７５mlに溶解させ、このポリマードープの１／４量を均一に(1)のシリカゲル３．７５ｇに塗布した。塗布後、酢酸エチルを５０℃、１２０Torrの条件で１５分間の減圧乾燥を行った。引続きポリマードープの１／４量を同様に塗布後、酢酸エチルを同条件にて３０分間の減圧乾燥を行った。さらに、ポリマードープの１／４量を同様に塗布後、酢酸エチルを同条件にて３０分間の減圧乾燥を行い、残り１／４量のポリマードープを同様に塗布後、酢酸エチルを同条件にて６０分間の減圧乾燥を行うことで、目的のアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）担持型充填剤を得た。
【００４５】
(4)  作製充填剤からのＨＰＬＣ用充填カラム作製
(3)で作製したアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）をシリカゲル上に担持した分離剤を充填剤として用い、長さ２５cm、内径０．４６cmのステンレス製カラムにスラリー充填法で充填し、光学異性体用分離カラムを作製した。
【００４６】
比較例２
ＴＳ係数＝０．２４０のアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）担持光学異性体分離用充填剤の作製方法
(1)  シリカゲル表面処理
参考例１の(1)と同じく、多孔質シリカゲル（粒径２０μm、平均細孔径１３００Å）にカルバモイル表面処理を施した。
【００４７】
(2)  アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）の合成
参考例１の(2)と同様の手法により、アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）を作製した。
【００４８】
(3)  アミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）のシリカゲルへの担持
上記(2)で得たアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）１２５．０ｇを酢酸エチル１２５０mlに溶解させ、このポリマードープの全量を均一に(1)のシリカゲル２３７５．０ｇに塗布した。塗布後、酢酸エチルを５０℃、１２０Torrの条件で１０．５分間の減圧乾燥を行うことで、目的のアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）担持型充填剤を得た。
【００４９】
(4)  作製充填剤からのＨＰＬＣ用充填カラム作製
(3)で作製したアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）をシリカゲル上に担持した分離剤を充填剤として用い、長さ２５cm、内径０．４６cmのステンレス製カラムにスラリー充填法で充填し、光学異性体用分離カラムを作製した。
【００５０】
応用例
参考例１〜３、実施例１、２及び比較例１〜２において作製したアミロース  トリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）をシリカゲル上に担持した充填剤を充填したＨＰＬＣ用光学異性体分離用カラムを用い、下記条件の液体クロマトグラフィー法によりＴＳの溶出時間［t(TS)(min.)］を測定し、下記の計算式によってＴＳ係数を算出した。結果を表１に示す。
＜液体クロマトグラフィーの分析条件＞
移動相：ｎ−ヘキサン／２−プロパノール＝９／１（ｖ／ｖ）
流速：１．０ml／min.
温度：２５℃
検出：２１０nm
打込みＴＳ濃度：５．０mg／ml（移動相）
ＴＳ打込み量：１０μＬ
＜ＴＳ係数計算式＞
Vc：0.23×0.23×3.14×25＝4.15cm3、FR：1.0ml／min.、t(blank)：0.16min.
ＴＳ係数＝［4.15−[t(TS)−0.16］×1.0］／[t(TS)−0.16］×1.0
さらに参考例１〜３、実施例１、２及び比較例１〜２において作製したＨＰＬＣ用光学異性体分離用カラムを用い、ラセミ体である下記式で表される化合物１〜４の光学分割を行い、下記式により、各光学活性体の分離の程度を示す指標である分離度Ｒｓ値を算出した。その結果も表１に示す。
【００５１】
【化１】
0003635002.tif 000003
【００５２】
Ｒｓ＝２（ｔ１−ｔ２）／（Ｗ１＋Ｗ２）
（ここで、ｔ１，ｔ２は各光学異性体の溶出時間、Ｗ１，Ｗ２は光学異性体ピークのピーク幅を示す。）
【００５３】
【表１】
0003635002.tif 000004
【００５４】
また充填剤のＴＳ係数と化合物１のＲｓ値との関係を図１に、充填剤のＴＳ係数と化合物２〜４のＲｓ値との関係を図２に示した。
【００５５】
以上の結果から、ＴＳ係数が０．２５から１．０の範囲にある充填剤は、光学異性体の分離性能が良好であることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【図１】充填剤のＴＳ係数と化合物１のＲｓ値との関係を示す図である。
【図２】充填剤のＴＳ係数と化合物２〜４のＲｓ値との関係を示す図である。
【図１】
0003635002.tif 000005
【図２】
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