(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）に示される化合物及び／又はその塩からなるメラニン生成阻害剤。
【化１】
0003650147.tif 000009
ただし、式（Ｉ）中、Ｒは短鎖長アルキル基を表す。
【請求項２】
前記一般式（Ｉ）に示される化合物が、２'，６'−ジヒドロキシ−４'−メトキシ−３'−（３''−メチル−６''−メチルエチル−２''−シクロヘキセニル）カルコンであることを特徴とする請求項１記載のメラニン生成阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、メラニン生成阻害剤及び皮膚外用剤に関し、詳しくは、優れたメラニン生成阻害効果を有すると共に安全なメラニン生成阻害剤、及び皮膚の色素沈着改善効果に優れた皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
白く美しい肌を持つことは多くの女性の願望であった。赤ん坊の時は白くつややかであった肌も、年を経るに従って、あるいは、紫外線などの影響によって、次第に色素沈着がかさみ、その美しさを失ってしまう。この様な色素沈着は、色素細胞中で生合成された酵素であるチロシナーゼにより、チロシンからドーパ、ドーパからドーパキノンに変化し、ついで５，６−ジヒドロキシインドール等の中間体を経てメラニンが生成されて起こるものとされている。
【０００３】
この様な観点から、色素沈着を抑制させる手段として、グルタチオン等の含硫化合物やハイドロキノン誘導体等によりチロシナーゼの活性を阻害する手段や、過酸化水素水やアスコルビン酸及びその誘導体により生成したメラニンを漂白する手段が知られていた。しかしながら、これまでに開発されてきた上記作用を有する物質は、分解や化学変化等に起因する着色、変臭等の安定性上の問題や、不可逆的な白班の発生やかぶれ等皮膚に好ましくない反応を引き起こしたりするという安全性上の問題が少なくなかった。すなわち、実使用に耐えるメラニン生成阻害剤は現在のところまだ得られていないのが現状である。
【０００４】
一方、クスノキ科植物に含有する成分として知られる一般式（Ｉ）に表される化合物及び／又はその塩についてメラニン生成阻害作用があることは知られておらず、これらを皮膚外用剤に含有させて、色素沈着の改善に用いたという報告もない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、この様な状況を踏まえてなされたものであり、安全性及びメラニン生成阻害作用に優れたメラニン生成阻害剤及びこれを含有する皮膚の色素沈着改善効果に優れた皮膚外用剤を提供することを課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために、安全性が高いとされている薬用植物を収集し、これらの植物体から種々の物質を単離し、得られた多くの化合物についてメラニン生成阻害作用を指標にスクリーニングを重ねた結果、一般式（Ｉ）に表される化合物及び／又はその塩が優れたメラニン生成阻害作用を有することを見出し本発明を完成させた。
【０００７】
すなわち、本発明は下記一般式（Ｉ）に示される化合物及び／又はその塩からなるメラニン生成阻害剤及びこれを含有する皮膚外用剤である。
【０００８】
【化２】
0003650147.tif 000002
【０００９】
ただし、式（Ｉ）中、Ｒは短鎖長アルキル基を表す。
以下、本発明について詳細に説明する。
【００１０】
＜１＞本発明のメラニン生成阻害剤
本発明のメラニン生成阻害剤は、上記一般式（Ｉ）に表される化合物及び／又はその塩からなる。ここで一般式（Ｉ）中、Ｒは短鎖長のアルキル基を表すが、このアルキル基は、炭素数１〜４のアルキル基であることが好ましく、より好ましくはメチル基である。
【００１１】
上記一般式（Ｉ）に示される化合物は、クスノキ科の植物に広く分布していることが知られている。例えば、一般式（Ｉ）で表される化合物のうち、Ｒがメチル基である化合物、すなわち２'，６'−ジヒドロキシ−４'−メトキシ−３'−（３''−メチル−６''−メチルエチル−２''−シクロヘキセニル）カルコンは、クスノキ科の植物であるクロモジの樹皮に含まれていることが知られており、一般式（Ｉ）で表される化合物の中でも特にメラニン生成阻害作用が強く、且つ、容易に単離できる化合物であるので、本発明において最も好ましい化合物といえる。
【００１２】
クスノキ科の植物より一般式（Ｉ）で表される化合物を得るには、例えば、クスノキ科植物の樹皮、幹、葉等を有機溶媒で抽出した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーやＯＤＳ等の担体を用いたカラムクロマトグラフィーで通常の精製を行い単離する方法をとればよい。また、抽出の前処理として、必要に応じてクスノキ科植物の樹皮、幹、葉等に乾燥、裁断、粉砕等の処理を加えることも可能である。
【００１３】
抽出は室温で行ってもよいし、加熱しながら行ってもよい。抽出温度が室温の場合には、例えば、クスノキ科植物の樹皮を細かく裁断したものに２〜２０倍量の溶媒を加え、数日間浸漬すればよいし、加熱下で抽出するのであれば、同様にして数時間浸漬すればよい。また、浸漬と同時に撹拌を行えば、抽出の効率を上げることができる。抽出は、バッチ式で行っても、連続式で行ってもよい。
【００１４】
抽出に用いる有機溶媒としては、エタノール、メタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、酢酸エチル、ギ酸エチル等のエステル類、塩化メチレン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、アセトニトリル等のニトリル類を好ましく挙げることができ、これらの有機溶媒の１種を単独で用いても、又は２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１５】
本発明のメラニン生成阻害剤には、上記のようにして得られる一般式（Ｉ）で表される化合物の他に、この化合物の塩を用いることもできる。この場合、一般式（Ｉ）で表される化合物及びその塩の１種を単独で用いても、または２種以上を混合して用いてもよい。
【００１６】
この様な塩としては、一般式（Ｉ）で表される化合物と無機、有機の塩基、例えば、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属の水酸化物、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属の水酸化物、アンモニア、トリエチルアミン、トリエタノールアミン等のアミン類、アルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸などを等量作用して得られる塩を挙げることができる。
【００１７】
＜２＞本発明の皮膚外用剤
本発明の皮膚外用剤は、皮膚の色素沈着改善作用を有する成分として上記メラニン生成阻害剤の１種または２種以上を配合したものである。配合量は、外用剤全量に対して０．０００１〜１０重量％であることが好ましい。配合量が０．０００１重量％未満では色素沈着改善の効果が十分でないことがあり、また、１０重量％を越えても効果が頭打ちであり経済的に好ましくない。更に、メラニン生成阻害剤の配合量を０．０１〜１重量％とすると、色素沈着改善の効果に優れる上に経済的にも有利なことから、より好ましい配合量は外用剤全量に対して０．０１〜１重量％である。
【００１８】
本発明の皮膚外用剤の剤型は、特に限定されるものではなく、例えば、ローション、乳液、クリーム、水性ゲル、オイルゲル、軟膏等の通常、皮膚外用剤として用いられているものが挙げられる。これらの皮膚外用剤は、上記一般式（Ｉ）で表される化合物及び／又はその塩からなるメラニン生成阻害剤を配合する以外は、通常の皮膚外用剤と同様の方法で製造することができる。
【００１９】
また、本発明の皮膚外用剤には、上記メラニン生成阻害剤以外に、通常、皮膚外用剤に適用されるワセリン、スクワラン等のような炭化水素類、ホホバ油、カルナウバワックス等のようなエステル類、オリーブ油、牛脂の様なトリグリセライド類、セタノール、ステアリルアルコール等のような高級アルコール類、ステアリン酸、オレイン酸等のような高級脂肪酸類、グリセリン、プロピレングリコール等の多価アルコール類、ポリエチレングリコール等の保湿剤、脂肪酸モノグリセライド、ポオキシエチレン硬化ヒマシ油等のノニオン界面活性剤、ラウリル硫酸ナトリウム、アルキルスルホコハク酸エステル等のアニオン界面活性剤、４級アルキルアミン塩等のカチオン界面活性剤、アルキルベタイン等の両性界面活性剤、エタノール、プロパノール等の低級アルコール類、アラビアゴム、カルボキシビニルポリマー等の増粘剤、パラベン、グルコン酸クロルヘキシジン等の防腐剤、タルク、シリカゲル、酸化チタンの様な粉体類、トコフェロール、ブチルヒドロキシトルエン等の抗酸化剤、パラアミノ安息香酸誘導体、ベンゾフェノン誘導体等の紫外線吸収剤、クエン酸塩、酢酸塩等のｐＨ調整剤、香料、色素等、ヒアルロン酸、胎盤抽出物、朝鮮人参エキス、ステロール配糖体等の各種目的に応じた薬効成分などが適宜選択されて配合される。
【００２０】
更に、本発明の皮膚外用剤には、上記一般式（Ｉ）で表される化合物及び／又はその塩以外のメラニン生成阻害剤、例えば、グルタチオン誘導体等の含硫化合物、アスコルビン酸誘導体、ハイドロキノン誘導体等を配合してもかまわない。
【００２１】
【実施例】
以下、本発明の実施例を説明する。まず、はじめに本発明のメラニン生成阻害剤の実施例について説明する。
【００２２】
【実施例１】
２'，６'−ジヒドロキシ−４'−メトキシ−３'−（３''−メチル−６''−メチルエチル−２''−シクロヘキセニル）カルコン
クスノキ科クロモジの樹皮１．７ｇを細かく裁断した後、５０％エタノール水溶液２Ｌを加えて２時間の加熱還流を行った。還流終了後、濾過により抽出液から不溶物を除去し、得られた濾液を減圧濃縮して溶媒を除去し濃縮物とした。この濃縮物を水１Ｌとブタノール１Ｌの混合液に加え液液抽出した。その後、この混合液からブタノール層だけを取り出し、これを減圧濃縮した。
【００２３】
得られた濃縮液を、ダイアイオンＨＰ−２０を担体としたカラムクロマトグラフィー（水→５０％エタノール水溶液）、次いでシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１％メタノール含有クロロホルム）、最後に分取用ＯＤＳカラムを用いた逆相高速液体クロマトグラフィーにかけて順次精製を重ね、４７０ｍｇの２'，６'−ジヒドロキシ−４'−メトキシ−３'−（３''−メチル−６''−メチルエチル−２''−シクロヘキセニル）カルコンを得た。これをそのままメラニン生成阻害剤とした。
【００２４】
＜本発明のメラニン生成阻害剤の評価＞
上記実施例１で得られたメラニン生成阻害剤について、メラニン生成阻害作用及び安全性に関する評価を行った。
【００２５】
（１）メラニン生成阻害作用
対数増殖期にあるメラノーマＢ−１６細胞をトリプシン処理した後、ＦＢＳ（ウシ胎仔血清）含有ＭＥＭ培地に１．５×１０3個／ｍＬの濃度となるように加え、メラノーマＢ−１６細胞のＦＢＳ含有ＭＥＭ培地懸濁液を作製した。
【００２６】
この懸濁液を４本の培養ボトルに１０ｍＬづつ分注し、３７℃、５％ＣＯ2濃度のＣＯ2インキュベーターに入れて２日間培養した。その後、３本の培養ボトルには、上記実施例１で得られたメラニン生成阻害剤を加えた時の濃度が表１に示す各種濃度になる量だけ含有する１０％ＤＭＳＯ（ジメチルスルフォキシド）ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地溶液５ｍＬづつを加え、残りの１本にはコントロールとして１０％ＤＭＳＯ（ジメチルスルフォキシド）ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地５ｍＬを加え、上記培養と同様の条件（３７℃、５％ＣＯ2）で２日間培養を続けた。
【００２７】
その後、各培養ボトルに１５ｍＬのＦＢＳ含有ＭＥＭ培地を加え、更に、上記と同様に、３本にはメラニン生成阻害剤含有（含有量は上記と同量）１０％ＤＭＳＯ（ジメチルスルフォキシド）ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地５ｍＬを加え、コントロールには１０％ＤＭＳＯ（ジメチルスルフォキシド）ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地５ｍＬを加え、同様の条件（３７℃、５％ＣＯ2）で、更に２日間培養した。
【００２８】
培養終了後、各培養ボトルについて、培地を除去し、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で洗浄した後、トリプシン処理して細胞を培養ボトルから剥離させ細胞懸濁液とし、この細胞懸濁液から遠心分離により細胞を回収した。得られた細胞の細胞数及びメラニン色素沈着の度合いを以下の基準で肉眼観察して、細胞毒性とメラニン生成阻害作用を評価した。
【００２９】
［細胞毒性の評価基準］
＋：コントロールと比べ細胞数がかなり少なく、細胞毒性あり
±：コントロールと比べ細胞数は僅かに少ないが、細胞毒性の判定は困難
−：コントロールと比べ細胞数にほとんど差がなく、細胞毒性は認められない
【００３０】
［メラニン生成阻害作用の評価基準］
＋：コントロ−ルに比べ明らかに白色化されており、メラニン生成阻害作用あり
±：コントロールより僅かに白色化されており、メラニン生成阻害作用を僅かに認める
−：コントロールとほぼ同等であり、メラニン生成阻害作用を認めない
結果を表１に示す。
【００３１】
【表１】
0003650147.tif 000003
【００３２】
この結果より、本発明のメラニン生成阻害剤は、メラニン生成阻害作用に優れていること、更に、安全性にも優れていることがわかる。
【００３３】
（２）安全性（局所毒性）試験
６匹のハートレー系白色種モルモット（雄性、体重３００〜３７０ｇ）の背部に２×２ｃｍの大きさに剃毛した部位を２つづつ作成した後、その一方の剃毛部位に実施例１で得られたメラニン生成阻害剤の１％エタノール溶液を０．０５ｍｌ／日づつ５日間連続投与した。また、もう一方の剃毛部位には何も投与しなかった。投与開始後６日目に無投与部位を対照に、以下に示すドレーズ基準を用いてメラニン生成阻害剤投与部位の皮膚反応を判定した。
【００３４】
＋＋：  浮腫を伴う反応
＋  ：  陽性反応
±  ：  疑陽性反応
−  ：  無反応
【００３５】
結果は、何れのモルモットのメラニン生成阻害剤投与部位も無反応であり、本発明のメラニン生成阻害剤が安全性に優れていることがわかる。
次に、上記実施例で得られたメラニン生成阻害剤を配合した本発明の皮膚外用剤の実施例について説明する。なお、以下に用いる配合量は全て重量部とする。
【００３６】
【実施例２】
化粧水
表２に示す成分を秤込み、室温で撹拌溶解し化粧水を得た。また同様にして本発明のメラニン生成阻害剤の替わりにアスコルビン酸を配合した比較例の化粧水を製造した。
【００３７】
【表２】
0003650147.tif 000004
【００３８】
【実施例３】
化粧水
表３に示す成分を秤込み、室温で撹拌溶解し化粧水を得た。
【００３９】
【表３】
0003650147.tif 000005
【００４０】
【実施例４】
クリーム
表４に示すＡ成分、Ｂ成分をそれぞれ８０℃で加熱溶解し、Ａ成分にＢ成分を徐々に加え乳化し冷却してクリームを得た。
【００４１】
【表４】
0003650147.tif 000006
【００４２】
【実施例５】
プレストパウダー
表５に示すＡ成分をヘンシェルミキサーに秤込み、低速回転で混合しながらＢ成分を徐々に加え、更に、高速回転することでＡ成分にＢ成分をコーティングした。得られた固形成分を１ｍｍφの丸穴スクリーンを装着したパルベライザーで粉砕した後、金型に詰め加圧成形してサンケア用のプレストパウダーを得た。
【００４３】
【表５】
0003650147.tif 000007
【００４４】
＜本発明の皮膚外用剤の評価＞
上記実施例２及び比較例１で得られた化粧水を用いて実使用試験を行い、本発明の皮膚外用剤の色素沈着改善作用に関する評価を行った。
【００４５】
シミ、ソバカスに悩む女性２０名をパネラーとして選出し、この２０名を任意に１０名づつ２つのグループに分けた。この一方のグループには実施例２の化粧水を、もう一方のグループには比較例１の化粧水を、通常の方法に準じて２週間連続して使用してもらい、使用開始から２週間後に、シミ、ソバカスの改善度をアンケートにより答えてもらった。結果を表６に示す。
【００４６】
【表６】
0003650147.tif 000008
【００４７】
この結果から、従来より美白剤として用いられているアスコルビン酸を配合した比較例の化粧水に比べ、本発明のメラニン生成阻害剤が配合された化粧水は、優れた皮膚の色素沈着改善作用を有することがわかる。更に、上記実使用試験において、パネラーの皮膚に炎症やヒリヒリ感等の好ましくない皮膚反応は全く見られず、本発明のメラニン生成阻害剤及び皮膚外用剤が安全性に優れていることが明白である。
【００４８】
【発明の効果】
本発明のメラニン生成阻害剤は安全性、メラニン生成阻害作用に優れている。また、このメラニン生成阻害剤を含有する本発明の皮膚外用剤は、長期連続使用が可能であると共に、皮膚の色素沈着改善作用に優れる。