(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式（Ｉ）
【化１】
0003621132.tif 000015
［ここで、
Ｒ１７及びＲ’１７  は、
・Ｒ１７とＲ’１７  が一緒になってケトンを形成するか、或いは
・Ｒ１７がヒドロキシル基又は多くとも１２個の炭素原子を含有するアシルオキシ基を表わしかつＲ’１７  が水素原子又は多くとも８個の炭素原子を含有するアルキル、アルケニル若しくはアルキニル基（これらの基のそれぞれは置換されていてもよい）を表わす
ようなものであり、
Ｒ３  は水素原子、多くとも８個の炭素原子を含有する直鎖状、分岐鎖状若しくは環状のアルキル基又は多くとも１２個の炭素原子を含有するアシル基を表わし、
Ｒ１  及びＲ２  は、同一であっても異なっていてもよく、水素原子、１〜８個の炭素原子を含有する直鎖状、分岐鎖状若しくは環状のアルキル基（置換されていてもよい）、多くとも１２個の炭素原子を含有するアシル基、又はアリール若しくはアラルキル基（これらの基のそれぞれは置換されていてもよく、アルキル基は多くとも６個の炭素原子を含有し、またアリール基は酸素、窒素及び硫黄原子のうちから選択される１個以上の複素原子を含有できる単環又は多環式基を表わす）を表わし、或いは
Ｒ１  は、多くとも８個の炭素原子を含有する直鎖状、分岐鎖状若しくは環状のアルキル基（置換されていてもよい）により又はアリール若しくはアラルキル基（これらの基のそれぞれは置換されていてもよく、アルキル基は多くとも６個の炭素原子を含有し、またアリール基は酸素、窒素及び硫黄原子のうちから選択される１個以上の複素原子を含有できる単環又は多環式基を表わす）により一置換されたカルバモイル基を表わし、かつ、Ｒ２  は水素原子を表わし、或いは
Ｒ１  とＲ２  はそれらが結合している窒素原子と共に５又は６員の飽和含窒素複素環（窒素、酸素及び硫黄原子のうちから選択される第二の複素原子を含有することでき、また１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基又はオキソ基により置換されていってもよい）を形成するか、或いは
Ｒ１  とＲ２  はジアルキルアミノメチレン基（アルキル基のそれぞれは１〜４個の炭素原子を含有する）を形成し、
ｎは多くとも１８に等しい整数を表わす］
の化合物並びにこれらの化合物の付加塩。
【請求項２】
次式（Ｉ’）
【化２】
0003621132.tif 000016
［ここで、
Ｒ１  及びＲ２  は、同一であっても異なっていてもよく、水素原子、１〜８個の炭素原子を含有する直鎖状、分岐鎖状若しくは環状のアルキル基（置換されていてもよい）、多くとも１２個の炭素原子を含有するアシル基又は置換されていてもよいフェニル基を表わし、或いは
Ｒ１  は、多くとも８個の炭素原子を含有する置換されていてもよい直鎖状、分岐鎖状若しくは環状のアルキル基により又は置換されていてもよいフェニル基により一置換されたカルバモイル基を表わし、かつ、Ｒ２  は水素原子を表わし、或いは
Ｒ１  とＲ２  はそれらが結合している窒素原子と共に次式
【化３】
0003621132.tif 000017
（ここで、ｎ’  は２又は３に等しい）
の型の環状尿素を形成し、或いは
Ｒ１  とＲ２  はジメチルミノメチレン基を形成し、
ｎは多くとも７に等しい整数を表わす］
の化合物並びにこれらの化合物の付加塩。
【請求項３】
Ｒ１７がヒドロキシル基を表わし、Ｒ’１７  が水素原子を表わす請求項１又は２記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
ｎが５又は６に等しい請求項１、２又は３記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項５】
Ｒ１  及びＲ２  が水素原子を表わす請求項１〜４のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
Ｒ１  及びＲ２  が多くとも８個の炭素原子を含有する直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基（１個以上のハロゲン原子により置換されていてもよい）を表わす請求項１〜４のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
Ｒ１  が水素原子を表わし、Ｒ２  が多くとも８個の炭素原子を含有する直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基を表わす請求項１〜４のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項８】
Ｒ１  が、１〜８個の炭素原子を含有する直鎖状、分岐鎖状若しくは環状のアルキル基により又はフェニル基（これらの基のそれぞれはハロゲン原子により置換されていてもよい）により一置換されたカルバモイル基を表わし、Ｒ２  が水素原子を表わす請求項１〜４のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項９】
化合物名が
・Ｎ−ブチル−５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］ペンタンスルホンアミド、
・Ｎ−ブチル−５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド、
・５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］−Ｎ−（２，２，３，３，４，４，４−ヘプタフルオルブチル）−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
のいずれかである請求項１記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１０】
請求項１記載の式（Ｉ）の化合物を製造するにあたり、次式（ＩＩ）
【化４】
0003621132.tif 000018
（ここで、フェノール官能基は要すれば保護されていてもよい）
の化合物に、
（Ａ）次式（ＩＩＩ）
Ｘ−（ＣＨ２  ）ｎ  −ＳＯ２  −ＮＲＡ  Ｒ’Ａ      （ＩＩＩ）
（ここで、Ｘはハロゲン原子を表わし、ｎは前記の意味を有し、ＲＡ  及びＲ’Ａは同一であっても異なっていてもよく、水素原子、置換されていてもよいアルキル基又は置換されていてもよいアリール若しくはアラルキル基を表わし（ただし、置換基ＲＡ  及びＲ’Ａの少なくとも１個は水素原子ではないものとする）、或いはＲＡ  及びＲ’Ａはそれらが結合している窒素原子と共に５又は６員の飽和含窒素複素環（窒素、酸素及び硫黄原子のうちから選択される第二の複素原子を含有することでき、また１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基により置換されていてもよい）を形成する）
のハロゲン化誘導体を作用させて次式（ＩＶ）
【化５】
0003621132.tif 000019
（ここで、ｎ、ＲＡ  及びＲ’Ａは前記と同じ意味を有する）
の化合物を得、この化合物に環Ａの芳香族化剤及び場合により３位のヒドロキシル基のアシル化剤を作用させて次式（ＩＡ  ）
【化６】
0003621132.tif 000020
（ここで、ｎ、ＲＡ  及びＲ’Ａは前記と同じ意味を有し、Ｒ３  は水素原子又はアシル基を表わす）
の化合物（この化合物はＲ１  ＝ＲＡ  及びＲ２  ＝Ｒ’Ａである式（Ｉ）の化合物に相当する）を得、次いで式（ＩＡ  ）の化合物に所望ならば及び必要ならば下記の反応：
・１７位のケトン官能基の還元
・１７位のケトン官能基に対する次式（Ｘ）
Ｍ−Ｒ’１７ａ      （Ｘ）
（ここで、Ｍは金属原子を表わし、Ｒ’１７ａはＲ’１７  と同じ意味（ただし、水素原子は除く）を有する）
の金属錯体の付加
・Ｒ１７がヒドロキシル基であるときの１７位の選択的アシル化
・３位のヒドロキシル基のアルキル化又はアシル化
・Ｒ３  がアシル官能基を表わすときのけん化
・場合により行なう酸又は塩基による塩形成
のうちの一つ又は二つ以上の反応を任意の順序で行なうか、或いは
（Ｂ）式（ＩＩ）の化合物に環Ａの芳香族化剤を作用させ、３位のヒドロキシル基の保護反応を行ない、次いで１１位のフェノールの保護基の選択的除去反応を行なって次式（Ｖ）
【化７】
0003621132.tif 000021
（ここで、ＲＰ  は保護基を表わす）
の化合物を得、この化合物に次式（ＩＩＩ’）
Ｘ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２−Ｎ＝ＣＨ−Ｎ（Ａｌｋ１）（Ａｌｋ２）        （ＩＩＩ’）
（ここで、Ｘはハロゲン原子を表わし、（Ａｌｋ１  ）及び（Ａｌｋ２  ）は１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基を表わし、ｎは多くとも１８に等しい）
の化合物を作用させ、次いで形成されたイミンの加水分解反応を行なって次式（ＶＩ）
【化８】
0003621132.tif 000022
（ここで、ｎ及びＲＰ  は前記と同じ意味を有する）
の化合物（この化合物は場合によりＲＰ  基の種類に応じて式（Ｉ）の化合物に相当し得る）を得、式（ＶＩ）の化合物に所望ならば及び必要ならば下記の反応：
・ＲＰ  保護基の除去反応
・１７位のケトン官能基の還元
・１７位のケトン官能基に対する前記のような次式（Ｘ）
Ｍ−Ｒ’１７ａ      （Ｘ）
の金属錯体の付加
・Ｒ１７がヒドロキシル基であるときの１７位の選択的アシル化
・３位のヒドロキシル基のアルキル化又はアシル化
・次式（ＶＩＩ）
ＲＢ  −Ｘ      （ＶＩＩ）
（ここで、ＲＢ  は置換されていてもよいアルキル基又はアシル基であり、Ｘはハロゲン原子を表わす）
のハロゲン化物の作用させて次式（ＩＢ  ）
【化９】
0003621132.tif 000023
（ここで、ｎ、Ｒ１７、Ｒ’１７  、Ｒ３  は請求項１で記載の通りである）
の化合物（この化合物はＲ１  ＝Ｈ及びＲ２  ＝ＲＢ  である式（Ｉ）の化合物に相当する）を得る反応
・次式（ＶＩＩＩ）
ＲＣ  −ＮＣＯ        （ＶＩＩＩ）
（ここで、ＲＣ  はアルキル、アリール又はアラルキル基（これらの基のそれぞれは置換されていてもよい）を表わす）
のイソシアネートを作用させて次式（ＩＣ  ）
【化１０】
0003621132.tif 000024
（ここで、ｎ、Ｒ１７、Ｒ’１７  、Ｒ３  は請求項１で記載の通りである）
の化合物（この化合物はＲ１  が一置換カルバモイル基を表わし、Ｒ２  が水素原子を表わす式（Ｉ）の化合物に相当する）の化合物を得る反応
・次式（ＩＸ）
（Ａｌｋ３Ｏ）（Ａｌｋ４Ｏ）ＣＨ−Ｎ（Ａｌｋ１）（Ａｌｋ２）        （ＩＸ）
（ここで、Ａｌｋ１  、Ａｌｋ２  、Ａｌｋ３  及びＡｌｋ４  は１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基を表わす）
の化合物を作用させて次式（ＩＤ  ）
【化１１】
0003621132.tif 000025
（ここで、ｎ、Ｒ１７、Ｒ’１７  、Ｒ３  は請求項１で記載の通りである）
の化合物（この化合物はＲ１  とＲ２  がジアルキルアミノメチレン基を表わす式（Ｉ）の化合物に相当する）を得る反応
・式（ＩＢ  ）の化合物に式（ＶＩＩ）のハロゲン化物を作用させることによりアルキル化又はアシル化して相当するジアルキル化、ジアシル化又はアルキルアシル化スルホンアミドを得る反応
・式（ＩＣ  ）の化合物においてＲＣ  が−（ＣＨ２  ）ｎ’−Ｈａｌ基（ここで、ｎ’’は２又は３に等しく、Ｈａｌはハロゲン原子を表わす）を表わすときはこの化合物を環化して式（Ｉ’Ｃ）の化合物（この化合物は、Ｒ１  とＲ２  がそれらが結合している窒素原子と共に次式
【化１２】
0003621132.tif 000026
の型の環状尿素を形成する式（Ｉ）の化合物に相当する）を得る反応
・場合により行なう酸又は塩基による塩形成
のうちの一つ又は二つ以上の反応を任意の順序で行なう
ことを特徴とする式（Ｉ）の化合物の製造法。
【請求項１１】
１７位に請求項１に記載のようなＲ１７及びＲ’１７  置換基を有する請求項１０に記載の式（ＩＩ）の化合物に相当する化合物を出発時に使用することを特徴とする請求項１０記載の式（Ｉ）の化合物の製造法。
【請求項１２】
請求項１〜８のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物又はそれらの製薬上許容できる付加塩よりなるホルモン依存性の癌又は良性乳房腫瘍の治療用薬剤。
【請求項１３】
請求項９記載の式（Ｉ）の化合物よりなるホルモン依存性の癌又は良性乳房腫瘍の治療用薬剤。
【請求項１４】
請求項１２又は１３記載の薬剤の少なくとも１種を活性成分として含有するホルモン依存性の癌又は良性乳房腫瘍の治療用製薬組成物。
【請求項１５】
新規な工業用化合物としての請求項１０に記載の一般式（ＩＶ）、（Ｖ）及び（ＶＩ）の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
この発明は、１１β位にフェノキシアルキルスルホンアミド又はフェノキシアルキルスルホニル尿素鎖を有する新規な１９−ノルステロイド、その製造法及び中間体、薬剤としての使用並びにそれらを含有する製薬組成物に関する。
【０００２】
【発明の概要】
しかして、本発明の主題は、次式（Ｉ）
【化１３】
0003621132.tif 000002
［ここで、
Ｒ１７及びＲ’１７  は、
・Ｒ１７とＲ’１７  が一緒になってケトンを形成するか、或いは
・Ｒ１７がヒドロキシル基又は多くとも１２個の炭素原子を含有するアシルオキシ基を表わしかつＲ’１７  が水素原子又は多くとも８個の炭素原子を含有するアルキル、アルケニル若しくはアルキニル基（これらの基のそれぞれは置換されていてもよい）を表わす
ようなものであり、
Ｒ３  は水素原子、多くとも８個の炭素原子を含有する直鎖状、分岐鎖状若しくは環状のアルキル基又は多くとも１２個の炭素原子を含有するアシル基を表わし、
Ｒ１  及びＲ２  は、同一であっても異なっていてもよく、水素原子、１〜８個の炭素原子を含有する直鎖状、分岐鎖状若しくは環状のアルキル基（置換されていてもよい）、多くとも１２個の炭素原子を含有するアシル基、又はアリール若しくはアラルキル基（これらの基のそれぞれは置換されていてもよく、アルキル基は多くとも６個の炭素原子を含有し、またアリール基は酸素、窒素及び硫黄原子のうちから選択される１個以上の複素原子を含有できる単環又は多環式基を表わす）を表わし、或いは
Ｒ１  は、多くとも８個の炭素原子を含有する直鎖状、分岐鎖状若しくは環状のアルキル基（置換されていてもよい）により又はアリール若しくはアラルキル基（これらの基のそれぞれは置換されていてもよく、アルキル基は多くとも６個の炭素原子を含有し、またアリール基は酸素、窒素及び硫黄原子のうちから選択される１個以上の複素原子を含有できる単環又は多環式基を表わす）により一置換されたカルバモイル基を表わし、かつ、Ｒ２  は水素原子を表わし、或いは
Ｒ１  とＲ２  はそれらが結合している窒素原子と共に５又は６員の飽和含窒素複素環（窒素、酸素及び硫黄原子のうちから選択される第二の複素原子を含有することでき、また１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基又はオキソ基により置換されていってもよい）を形成するか、或いは
Ｒ１  とＲ２  はジアルキルアミノメチレン基（アルキル基のそれぞれは１〜４個の炭素原子を含有する）を形成し、
ｎは多くとも１８に等しい整数を表わす］
の化合物並びにこれらの化合物の付加塩にある。
【０００３】
【発明の具体的な説明】
式（Ｉ）の化合物において、アシルオキシ基とは、特に、飽和又は不飽和の脂肪酸又はシクロ脂肪酸に相当する基、さらに詳しくは
・アルカン酸、例えば酢酸、プロピオン酸、酪酸若しくはイソ酪酸、吉草酸又はウンデシレン酸
・ヒドロキシルアルカン酸、例えばヒドロキシ酢酸
・シクロアルキルカルボン酸又はシクロアルキルアルカン酸、例えば、シクロプロピルカルボン酸、シクロペンチルカルボン酸又はシクロヘキシルカルボン酸、シクロペンチル酢酸、シクロヘキシル酢酸、シクロペンチルプロピオン酸又はシクロヘキシルプロピオン酸
・安息香酸、サリチル酸又はフェニルアルカン酸、例えばフェニル酢酸又はフェニルプロピオン酸
・アミノ酸、例えばジエチルアミノ酢酸又はアスパラギン酸
・ぎ酸又は塩形成されていてもよいジ酸、例えばブタンジ酸又はそのモノカリウム塩
の一つに対応する基を意味する。好ましくは、酢酸、プロピオン酸又は酪酸の誘導体である。
アシル基とは、前記のアシルオキシ基に対応する基を意味する。
【０００４】
アルキル基とは、下記の基：メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、２−メチルペンチル、２，３−ジメチルブチル、ｎ−ペンチル、２−メチルヘキシル、２，３−ジメチルペンチル、３，３−ジメチルペンチル、３−エチルペンチル、ｎ−オクチル、２，２−ジメチルヘキシル、３，３−ジメチルヘキシル、３−メチル−３−エチルペンチルなどの一つを意味する。これはメチル、エチル、プロエピル及びブチル基が好ましい。
シクロアルキル基とは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル又はシクロヘキシル基を意味することができる。それはシクロペンチル基が好ましい。
【０００５】
Ｒ’１７  がアルケニル基を表わすときは、それはビニル、プロペニル、イソプロペニル、アリル、２−メチルアリル、ブテニル又はイソブテニル基であってよい。それはビニル又はプロペニル基が好ましい。
Ｒ’１７  がアルキニル基を表わすときは、それはエチニル、プロピニル、プロパルギル、ブチリル又はイソブチリル基であってよい。好ましくはそれはエチニル又はプロピニルである。
【０００６】
アラルキル基中に含有され得る単環式又は多環式基とは、下記の基を意味する。
・炭素環式単環式基、例えばフェニル基
・複素環式単環式基、例えば、下記の基：チエニル、フリル、ピラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、チアゾリル、オキサゾリル、フラザニル、ピロリニル、イミダゾリニル、ピラゾリニル、チアゾリニル、トリアゾリル、テトラゾリル、並びにこれらの基が含有できる複素原子の位置異性体の一つ
・炭素環式縮合環よりなる基、例えば、ナフチル基又はフェナトレニル基
・複素環式縮合環よりなる基、例えば、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ナフト［２，３−ｂ］チエニル、チアントレニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサンチニイル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリル、インダゾリル、プリニル、キノリジニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、カルバゾリル、β−カルボリニル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、インドリニル、イソインドリニル、イミダゾピリジル、イミダゾピリミジニル、或いはまた前記のような複素環式単環系よりなる縮合多環式系、例えば、フロ［２，３−ｂ］ピロール又はチエノ［２，３−ｂ］フラン。
さらに詳しくは、下記の基：フェニル、２−フリルのようなフリル、２−イミダゾリルのようなイミダゾリル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジルのようなピリジル、２−ピリミジニルのようなピリミジニル、２−チアゾリルのようなチアゾリル、２−チアゾリニルのようなチアゾリニル、２−トリアゾリルのようなトリアゾリル、２−テトラゾリルのようなテトラゾリル、２−ベンゾイミダゾリルのようなベンゾイミダゾリル、２−ベンゾチアゾリルのようなベンゾチアゾリル、７−プリニルのようなプリニル又は４−キノリルのようなキノリル基。アラルキル基の例としては、特に、前記のアリール基の一つによって置換されたメチル又はエチル基が挙げられる。
【０００７】
５又は６員の飽和含窒素複素環（窒素、酸素又は硫黄原子のうちから選択される第二複素原子を含有することができ、アルキル基又はカルボニル基により置換されていてもよい）とは、好ましくはピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、チアモルホリン又はイミダゾリジノンを意味する。
【０００８】
前記の各種の基における置換基は、好ましくは下記の基よりなる群から選択される。
・ハロゲン、弗素、塩素、臭素及び沃素原子
・アミノ、アルキルアミノ、例えばメチルアミノ又はエチルアミノ、ジアルキルアミノ、例えばジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルエチルアミノ基（これらのジアルキルアミノ基のそれぞれは酸化された形であってよい）
・アミノアルキル、例えばアミノメチル又はアミノエチル
・ジアルキルアミノアルキル、例えばジメチルアミノメチル又はジメチルアミノエチル
・ジアルキルアミノアルキルオキシ、例えばジメチルアミノエチルオキシ
・ヒドロキシル
・遊離の、エステル化されたカルボキシ、すなわちアルコキシカルボニル、例えばメトキシカルボニル又はエトキシカルボニル、或いは例えばナトリウム又はカリウム原子により塩形成されたカルボキシ
・１〜８個の炭素原子を含有するアルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル（これらは１個以上のハロゲン原子により置換されていてもよい、例えばトリフルオルメチルのように弗素原子により置換されていてもよい）
・オキソ、シアノ、ニトロ又はホルミル
・アシル、例えばアセチル、プロピオニル、ブチリル又はベンゾイル
・アシルオキシ、例えばアセトキシ又は式−Ｏ−ＣＯ−（ＣＨ２  ）ｎ  ＣＯ２  Ｈ（ｎ＝１〜５）の基
・アルコキシ、例えばメトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、イソプロピルオキシ又はブチルオキシ
・アルキルチオ、例えばメチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ又はブチルチオ
・カルバモイル
・アルケニル、例えばビニル又はプロペニル
・アルキニル、例えばエチニル又はプロピニル
・アリール、例えばフェニル、フリル又はチエニル。
【０００９】
このような置換された基の例としては、例えば、１個以上のハロゲン原子、例えば弗素原子により置換されたアルキル基、例えば、トリフルオルメチル、トリフルオルブチル、ペンタフルオルプロピル、ペンタフルオルブチル、ペンタフルオルペンチル、ヘプタフルオルブチル又はノナフルオルブチル基、或いは塩素により置換されたアルキル基、例えば２−クロルエチル基が挙げられる。
また、例えば、１個以上のハロゲン原子、例えば塩素原子により置換されたアリール基、例えば４−クロルフェニル基が挙げられる。
【００１０】
当然であるが、本発明は、式（Ｉ）の化合物の塩類、例えば、式（Ｉ）の化合物がアミノ基を含有するときには下記の酸により形成される塩類、即ち、塩酸、臭化水素酸、沃化水素酸、硝酸、硫酸、りん酸、プロピオン酸、酢酸、ぎ酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、こはく酸、酒石酸、くえん酸、しゅう酸、グリオキシル酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、アルカンモノスルホン酸、例えばメタンスルホン酸、エタンスルホン酸、プロパンスルホン酸、アルカンジスルホン酸、例えばメタンジスルホン酸、α，β−エタンジスルホン酸、アリールモノスルホン酸、例えばベンゼンスルホン酸及びアリールジスルホン酸により形成された塩類、或いは式（Ｉ）の化合物が酸官能基を含有するときはアルカリ金属若しくはアルカリ土類金属により又は置換されていてもよいアンモニウムにより形成される塩類まで及ぶ。
【００１１】
さらに特定すれば、本発明の主題は、次式（Ｉ’）
【化１４】
0003621132.tif 000003
［ここで、
Ｒ１  及びＲ２  は、同一であっても異なっていてもよく、水素原子、１〜８個の炭素原子を含有する直鎖状、分岐鎖状若しくは環状のアルキル基（置換されていてもよい）、多くとも１２個の炭素原子を含有するアシル基又は置換されていてもよいフェニル基を表わし、或いは
Ｒ１  は、多くとも８個の炭素原子を含有する置換されていてもよい直鎖状、分岐鎖状若しくは環状のアルキル基により又は置換されていてもよいフェニル基により一置換されたカルバモイル基を表わし、かつ、Ｒ２  は水素原子を表わし、或いは
Ｒ１  とＲ２  はそれらが結合している窒素原子と共に次式
【化１５】
0003621132.tif 000004
（ここで、ｎ’  は２又は３に等しい）
の型の環状尿素を形成し、或いは
Ｒ１  とＲ２  はジメチルミノメチレン基を形成し、
ｎは多くとも７に等しい整数を表わす］
の化合物並びにこれらの化合物の付加塩に相当する前記の式（Ｉ）の化合物にある。
【００１２】
特に、本発明の主題は、Ｒ１７がヒドロキシル基を表わし、Ｒ’１７  が水素原子を表わす前記の式（Ｉ）の化合物にある。
また、本発明の主題は、ｎが５又は６に等しい前記の式（Ｉ）の化合物にある。
さらに、本発明の主題は、Ｒ１  及びＲ２  が水素原子を表わす前記の式（Ｉ）の化合物にある。
【００１３】
特に、本発明の主題は、Ｒ１  及びＲ２  が多くとも８個の炭素原子を含有する直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基（１個以上のハロゲン原子により置換されていてもよい）を表わす前記の式（Ｉ）の化合物にある。
【００１４】
また、本発明の主題は、Ｒ１  が水素原子を表わし、Ｒ２  が多くとも８個の炭素原子を含有する直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基を表わす前記の式（Ｉ）の化合物にある。
【００１５】
さらに詳しくは、本発明の主題は、Ｒ１  が、１〜８個の炭素原子を含有する直鎖状、分岐鎖状若しくは環状のアルキル基により又はフェニル基（これらの基のそれぞれはハロゲン原子により置換されていてもよい）により一置換されたカルバモイル基を表わし、Ｒ２  が水素原子を表わす前記の式（Ｉ）の化合物にある。
【００１６】
本発明のさらに特定の主題は、その化合物名が
・Ｎ−ブチル−５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］ペンタンスルホンアミド、
・Ｎ−ブチル−５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド、
・５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］−Ｎ−（２，２，３，３，４，４，４−ヘプタフルオルブチル）−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
のいずれかである前記の式（Ｉ）の化合物ある。
【００１７】
また、本発明の主題は、式（Ｉ）の化合物を製造するにあたり、次式（ＩＩ）
【化１６】
0003621132.tif 000005
（ここで、フェノール官能基は要すれば保護されていてもよい）
の化合物に、
（Ａ）次式（ＩＩＩ）
Ｘ−（ＣＨ２  ）ｎ  −ＳＯ２  −ＮＲＡ  Ｒ’Ａ      （ＩＩＩ）
（ここで、Ｘはハロゲン原子を表わし、ｎは前記の意味を有し、ＲＡ  及びＲ’Ａは同一であっても異なっていてもよく、水素原子、置換されていてもよいアルキル基又は置換されていてもよいアリール若しくはアラルキル基を表わし（ただし、置換基ＲＡ  及びＲ’Ａの少なくとも１個は水素原子ではないものとする）、或いはＲＡ  及びＲ’Ａはそれらが結合している窒素原子と共に５又は６員の飽和含窒素複素環（窒素、酸素及び硫黄原子のうちから選択される第二の複素原子を含有することでき、また１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基により置換されていてもよい）を形成する）
のハロゲン化誘導体を作用させて次式（ＩＶ）
【化１７】
0003621132.tif 000006
（ここで、ｎ、ＲＡ  及びＲ’Ａは前記と同じ意味を有する）
の化合物を得、この化合物に環Ａの芳香族化剤及び場合により３位のヒドロキシル基のアシル化剤を作用させて次式（ＩＡ  ）
【化１８】
0003621132.tif 000007
（ここで、ｎ、ＲＡ  及びＲ’Ａは前記と同じ意味を有し、Ｒ３  は水素原子又はアシル基を表わす）
の化合物（この化合物はＲ１  ＝ＲＡ  及びＲ２  ＝Ｒ’Ａである式（Ｉ）の化合物に相当する）を得、次いで式（ＩＡ  ）の化合物に所望ならば及び必要ならば下記の反応：
・１７位のケトン官能基の還元
・１７位のケトン官能基に対する次式（Ｘ）
Ｍ−Ｒ’１７ａ      （Ｘ）
（ここで、Ｍは金属原子を表わし、Ｒ’１７ａはＲ’１７  と同じ意味（ただし、水素原子は除く）を有する）
の金属錯体の付加
・Ｒ１７がヒドロキシル基であるときの１７位の選択的アシル化
・３位のヒドロキシル基のアルキル化又はアシル化
・Ｒ３  がアシル官能基を表わすときのけん化
・場合により行なう酸又は塩基による塩形成
のうちの一つ又は二つ以上の反応を任意の順序で行なうか、或いは
（Ｂ）式（ＩＩ）の化合物に環Ａの芳香族化剤を作用させ、３位のヒドロキシル基の保護反応を行ない、次いで１１位のフェノールの保護基の選択的除去反応を行なって次式（Ｖ）
【化１９】
0003621132.tif 000008
（ここで、ＲＰ  は保護基を表わす）
の化合物を得、この化合物に次式（ＩＩＩ’）
Ｘ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２−Ｎ＝ＣＨ−Ｎ（Ａｌｋ１）（Ａｌｋ２）        （ＩＩＩ’）
（ここで、Ｘはハロゲン原子を表わし、（Ａｌｋ１  ）及び（Ａｌｋ２  ）は１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基を表わし、ｎは多くとも１８に等しい）
の化合物を作用させ、次いで形成されたイミンの加水分解反応を行なって次式（ＶＩ）
【化２０】
0003621132.tif 000009
（ここで、ｎ及びＲＰ  は前記と同じ意味を有する）
の化合物（この化合物は場合によりＲＰ  基の種類に応じて式（Ｉ）の化合物に相当し得る）を得、式（ＶＩ）の化合物に所望ならば及び必要ならば下記の反応：
・ＲＰ  保護基の除去反応
・１７位のケトン官能基の還元
・１７位のケトン官能基に対する前記のような次式（Ｘ）
Ｍ−Ｒ’１７ａ      （Ｘ）
の金属錯体の付加
・Ｒ１７がヒドロキシル基であるときの１７位の選択的アシル化
・３位のヒドロキシル基のアルキル化又はアシル化
・次式（ＶＩＩ）
ＲＢ  −Ｘ      （ＶＩＩ）
（ここで、ＲＢ  は置換されていてもよいアルキル基又はアシル基であり、Ｘはハロゲン原子を表わす）
のハロゲン化物の作用させて次式（ＩＢ  ）
【化２１】
0003621132.tif 000010
（ここで、ｎ、Ｒ１７、Ｒ’１７  、Ｒ３  は上で記載の通りである）
の化合物（この化合物はＲ１  ＝Ｈ及びＲ２  ＝ＲＢ  である式（Ｉ）の化合物に相当する）を得る反応
・次式（ＶＩＩＩ）
ＲＣ  −ＮＣＯ        （ＶＩＩＩ）
（ここで、ＲＣ  はアルキル、アリール又はアラルキル基（これらの基のそれぞれは置換されていてもよい）を表わす）
のイソシアネートを作用させて次式（ＩＣ  ）
【化２２】
0003621132.tif 000011
（ここで、ｎ、Ｒ１７、Ｒ’１７  、Ｒ３  は上で記載の通りである）
の化合物（この化合物はＲ１  が一置換カルバモイル基を表わし、Ｒ２  が水素原子を表わす式（Ｉ）の化合物に相当する）の化合物を得る反応
・次式（ＩＸ）
（Ａｌｋ３Ｏ）（Ａｌｋ４Ｏ）ＣＨ−Ｎ（Ａｌｋ１）（Ａｌｋ２）        （ＩＸ）
（ここで、Ａｌｋ１  、Ａｌｋ２  、Ａｌｋ３  及びＡｌｋ４  は１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基を表わす）
の化合物を作用させて次式（ＩＤ  ）
【化２３】
0003621132.tif 000012
（ここで、ｎ、Ｒ１７、Ｒ’１７  、Ｒ３  は上で記載の通りである）
の化合物（この化合物はＲ１  とＲ２  がジアルキルアミノメチレン基を表わす式（Ｉ）の化合物に相当する）を得る反応
・式（ＩＢ  ）の化合物に式（ＶＩＩ）のハロゲン化物を作用させることによりアルキル化又はアシル化して相当するジアルキル化、ジアシル化又はアルキルアシル化スルホンアミドを得る反応
・式（ＩＣ  ）の化合物においてＲＣ  が−（ＣＨ２  ）ｎ’−Ｈａｌ基（ここで、ｎ’’は２又は３に等しく、Ｈａｌはハロゲン原子を表わす）を表わすときはこの化合物を環化して式（Ｉ’Ｃ）の化合物（この化合物は、Ｒ１  とＲ２  がそれらが結合している窒素原子と共に次式
【化２４】
0003621132.tif 000013
の型の環状尿素を形成する式（Ｉ）の化合物に相当する）を得る反応
・場合により行なう酸又は塩基による塩形成
のうちの一つ又は二つ以上の反応を任意の順序で行なう
ことを特徴とする式（Ｉ）の化合物の製造法にある。
【００１８】
Ｒ１  ＝ＲＡ  及びＲ２  ＝Ｒ’Ａである式（Ｉ）の化合物に相当する式（ＩＡ  ）  の化合物は、順次に
（ａ）式（ＩＩ）の化合物を水素化ナトリウムのような強塩基の存在下にジメチルホルムアミドのような中性の双極性溶媒中で式（ＩＩＩ）  の化合物と反応させ（これは、例えば、周囲温度で行われる）て式（ＩＶ）の中間体化合物を得、
（ｂ）この化合物を臭化アセチル−無水酢酸混合物のような芳香族化剤と反応させ、次いでけん化反応を例えばメタノール中の苛性カリ又はメタノール中の苛性ソーダの存在下に行う
ことによって得られる。
【００１９】
式（ＶＩ）の化合物は、順次に
（ａ）１１位のフェノールが保護されていてもよい式（ＩＩ）の化合物をメタノール中で水酸化パラジウム担持マグネシアのような芳香族化剤と反応させ、次いで例えばアセトン中で炭酸カリウムの存在下に塩化ベンゾイルの作用により３位のヒドロキシ官能基の保護反応を行い（これは例えば７時間還流させる）、続いて１１位のフェノール官能基の選択的脱保護反応を、例えば、メタノール中の苛性カリ又はメタノール中の苛性ソーダの存在下でのけん化反応によって行って式（Ｖ）の中間体化合物を得、
（ｂ）この化合物を水素化ナトリウムのような強塩基の存在下にジメチルホルムアミドのような中性の双極性溶媒中で式（ＩＩＩ’）の化合物と反応させ、
（ｃ）上記の工程で生成したイミンの酸加水分解剤、例えばメタノール−テトラヒドロフラン混合物中の塩酸と反応させる
ことによって得られる。
【００２０】
Ｒ１  ＝Ｈ及びＲ２  ＝ＲＢ  である式（Ｉ）の化合物に相当する式（ＩＢ  ）  の化合物は、式（ＶＩ）（ここで、ＯＲＰ  は例えばアラルキル基により保護されたヒドロキシル基である）の化合物を式（ＶＩＩ）  の化合物と反応させることによって得られる。この反応は例えば還流アセトン中で苛性ソーダの存在下に又は周囲温度でジメチルホルムアミド中で水素化ナトリウムの存在下に行われる。
第二のアルキル化又はアシル化は同じ操作条件で行うことができる。
【００２１】
Ｒ１  ＝Ｈ及びＲ２  ＝ＣＯＮＨ−ＲＣ  である式（Ｉ）の化合物に相当する式（ＩＣ  ）  の化合物は、式（ＶＩ）（ここで、３位のヒドロキシル官能基の保護基は除去され、１７位のケトン官能基は還元されている）の化合物を式（ＶＩＩＩ）の化合物と反応させることによって得られる。この反応は水素化ナトリウムのような強塩基の存在下にジメチルホルムアミドのような中性の双極性溶媒中で、例えば周囲温度で行われる。
ＲＣ  が（ＣＨ２  ）ｎ’−Ｈａｌ（ここで、ｎ’  は２又は３に等しい）型のものであるときは、環化反応は式（Ｉ’Ｃ）の化合物を得るためにその場で行われる（その際に媒体は非常に塩基性である）。
【００２２】
Ｒ１  及びＲ２  がジアルキルアミノメチレン基を形成する式（Ｉ）の化合物に相当する式（ＩＤ  ）  の化合物は、式（ＶＩ）（ここで、３位のヒドロキシル官能基の保護基は除去され、１７位のケトン官能基は還元されている）の化合物を式（ＩＸ）の化合物と反応させることによって得られる。反応は例えば周囲温度でジメチルホルムアミド中で行われる。
【００２３】
式（Ｉ）の化合物が１７位にケトン官能基を含有するときは、下記の化合物が得られる。
・例えば、メタノールのような中性溶媒中で水素化硼素ナトリウムのような還元剤を作用させることによって相当するヒドロキシル化１７β−化合物。
・ヨーロッパ特許ＥＰ第５７１１５に記載の方法に従って、例えばリチウム錯体のような式（Ｘ）の化合物を付加させることによって、Ｒ’１７  基（これは置換されていてもよいアルキル、アルケニル又はアルキニル基を表わす）を含有する相当する化合物。
Ｒ’１７  基が反応性の官能基により置換されているアルキル、アルケニル又はアルキニル基を表わす場合には、これは通常の方法により暫定的に保護し得ることが容易に理解されよう。
【００２４】
式（Ｉ）の化合物が３位にヒドロキシル化された基を有するときは、相当するアルキル化されたステロイドはアルキル化剤、例えば沃化アルキル又は硫酸メチルのような硫酸アルキルを作用させることにより得られ、また相当するアシル化されたステロイドは標準的なアシル化剤、例えば塩化アセチルのようなハロゲン化アシルを作用させることにより得られる。
式（Ｉ）の化合物が１７β位にヒドロキシル官能基を有するときは、相当するアシルオキシル化された１７β−ステロイドは選択的なアシル化剤、例えば、ピリジン中で無水酢酸を、場合により４−ジメチルアミノピリジンの存在下に作用させることにより、又は当業者に知られた任意の方法により得られる。
【００２５】
反応性官能基、例えばヒドロキシル官能基を保護するのに使用することができる保護基は、有機化学、特にペプチドの化学における通常の基から選択される。これらの基の限定的でないリスト並びにそれらに相当する除去方法は仏国特許第２４９９９９５号（これはここで引用することによって本願に含めるものとする）並びにグリーン及びウッツ著「有機合成における保護基」（１９９１年、ウイリー社）に見出される。
例えば、式（ＩＩ）の化合物の１１位のフェノールを保護するためにはアセチル、ベンゾイル又はｔ−ブチルジメチルシリル基が挙げられる。
さらに、例えば、式（Ｖ）及び式（ＶＩ）の化合物の３位のヒドロキシルを保護するためにはアセチル、ベンゾイル又はベンジル基が挙げられる。
【００２６】
例えば、ベンジル基による３位のヒドロキシルの保護反応は、水素化ナトリウムのような強塩基の存在下にジメチルホルムアミドのような中性の双極性溶媒中で周囲温度で塩化ベンジルを作用させることにより、又は炭酸カリウムのような弱塩基の存在下に還流アセトン中で臭化ベンジルを作用させることにより行うことができる。この保護は、加水分解又はけん化反応に対して抵抗性であるので有用である。
中間体化合物が保護された反応性官能基を含有するときは、相当する脱保護された化合物は、通常の試薬の作用により得られる。これらの試薬の限定的ではないリスト並びにそれらに相当する除去反応は仏国特許第２４９９９９５号（これはここで引用することによって本願に含めるものとする）並びにグリーン及びウッツ著「有機合成における保護基」（１９９１年、ウイリー社）に見出される。
【００２７】
まさに例示のために示せば、フェノールがアセチル基により保護されるときは、この保護基の除去反応は、アルコール媒体中での苛性カリのようなけん化剤を使用して行うことができよう。また、フェノールがｔ−ブチルジメチルシリル基により保護されるときは、この保護基の除去反応は塩酸のような加水分解剤を使用して行うことができよう。
３位のヒドロキシル基がベンジル基により保護されるときは、この保護基の除去反応は、好ましくは、例えば、パラジウム触媒担持活性炭の存在下に酢酸エチル／エタノール／酢酸混合物中で水素の作用による水添分解によって行われよう。
【００２８】
本発明の好ましい具体例においては、
・Ｘが好ましくは沃素原子である式（ＩＩＩ）  の化合物が使用され、
・Ｘが好ましくは沃素原子である式（ＩＩＩ’）の化合物が使用され、
・ＲＢ  がアルキル基である場合にはＸが好ましくは沃素原子であり、ＲＢ  がアシル基である場合にはＸが好ましくは塩素原子である式（ＶＩＩ）  の化合物が使用される。
【００２９】
さらに、本発明は、１７位に前記のようなＲ１７及びＲ’１７  置換基を含有する式（ＩＩ）の化合物に相当する化合物を出発時に使用することを特徴とする製造法まで及ぶ。
このような製造法を実施するにあたっては、Ｒ１７及びＲ’１７  基について既に述べたように、中間でＲ１７及びＲ’１７  基の保護が必要であろう。これらの保護は前記した通りである。前記の出発物質は、例えば、ヨーロッパ特許出願公告第０３８４４８２号から知られており、或いは本願に記載の方法により１７−オキソ化合物から製造することができる。
【００３０】
式（Ｉ）の化合物は有用な薬理学的性質を示す。
これらの化合物のホルモン受容体についての研究から、後記の実験結果によって示されたように、次のことがわかった。
・式（Ｉ）の化合物は、グルココルチコイド又は抗グルココルチコイド活性、黄体ホルモン様又は抗黄体ホルモン様活性、アンドロゲン又は抗アンドロゲン活性、抗ミネラロコルチコイド活性、エストロゲン又は抗エストロゲン活性を有する。
・式（Ｉ）の化合物は、特に顕著な抗エストロゲン活性及び抗増殖活性を有する。
【００３１】
これらの活性のために式（Ｉ）の化合物はグルココルチコイドの副作用を防止し治療するのに用いることができる。同様に、これらはグルココルチコイドの分泌過多による障害の防止と治療に、特に一般的な老化防止、具体的には高血圧、治癒の遅れ、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症、糖尿病、肥満症並びに免疫低下及び不眠症の防止治療を可能にする。
同様に、これらの化合物は、式（Ｉ）の化合物が親和性を有するホルモン受容体を発現させるある種の腫瘍の治療にも有用である。
抗黄体ホルモン様活性を有する式（Ｉ）の化合物は、新しい避妊薬の製造に、妊娠中絶剤として又は分娩誘発剤として使用することができる。
従って、これらの化合物は女性、より一般的には温血動物の雌の期間誘発剤として使用することができる。
【００３２】
従って、これらの化合物は黄体ホルモンが本質的な生理学的役割を果たしている期間中、即ち特に月経周期の黄体期、卵着床（即ち胎芽の着床）の時期に及び妊娠期間中に投与される。本発明に従う避妊方法の一つは、式（Ｉ）の化合物の少なくとも１種を、好ましくは月経周期の終了時の１〜５日間の間に女性に投与することからなる。この場合、この化合物は好ましくは経口で又は膣経路で投与されるが、非経口的に投与することもできる。また、これら化合物は鼻孔内経路で使用することもできる。
【００３３】
また、抗黄体ホルモン様活性を有する式（Ｉ）の化合物はホルモン異常に対して使用することもでき、さらにこれらはホルモン依存性の腫瘍の治療にも有用である。
これらの化合物はその下垂体の分泌に対する作用のために閉経期の人に使用することができる。
さらに、これらの化合物は、飼育動物、特に牛及び羊の発情期の同期化並びに若子の生み落としの同期化に使用することもできる。
また、これらの化合物は、犬又は猫のようなペットの繁殖性を制御するのに使用することもできる。
また、式（Ｉ）の化合物は黄体ホルモン様活性を示すこともあり、従って無月経、月経困難症及び黄体不全の治療に有用である。
【００３４】
抗アンドロゲン活性を有する式（Ｉ）の化合物は、前立腺の肥大及び癌、男性化、貧血、多毛症並びににきびの治療に使用することができる。これらはまた、雄用の避妊薬として使用することもできる。
また、エストロゲン活性を有する式（Ｉ）の化合物は、エストロゲン減少症に関連する障害、例えば無月経、月経困難症、反復流産及び月経前の障害の治療、並びに閉経期及び骨粗鬆症の治療に有用である。
式（Ｉ）の化合物は抗エストロゲン及び抗増殖活性のためにホルモン依存性の癌、例えば乳癌及びその転移の治療、並びに良性乳房腫瘍の治療に使用することができる。
【００３５】
従って、本発明の主題は薬剤としての式（Ｉ）の化合物並びにそれらの製薬上許容できる付加塩にある。
本発明の薬剤の中では、特に後記の実験の項に記載した化合物、特に例２、７及び８の化合物を挙げることができる。
有効な薬量は治療すべき症状及び投与経路に応じて変化する。例えば成人に対して経口投与する場合には、１日につき１ｍｇ〜１００ｍｇまで変化し得る。
本発明は、前記の少なくとも１種の薬剤を活性成分として含有する製薬組成物にも及ぶものである。
【００３６】
式（Ｉ）の化合物は、消化器経路、非経口又は局所経路（例えば皮膚経路）で用いられる。これらは単純な錠剤、糖衣錠剤、カプセル、顆粒、座薬、ペッサリー、注射用製剤、軟膏、クリーム、ゲル、丸剤、植込み薬、貼薬の形で処方することができる。これらは、標準的な方法に従って製造される。
活性成分は、これら製薬組成物に通常用いられる賦形剤又は補助剤、例えばタルク、アラビアゴム、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、ココアバター、水性又は非水性ビヒクル、動物性又は植物性の脂肪物質、パラフィン誘導体、グリコール類、各種の湿潤剤、分散剤又は乳化剤及び保存剤と共に配合することができる。
【００３７】
式（ＩＶ）、式（Ｖ）及び式（ＶＩ）の化合物は新規な中間体化合物であり、従って本発明の主題は、新規な中間体化合物、特に、本発明の製造法を実施するための中間体化合物としての式（ＩＶ）、式（Ｖ）及び式（ＶＩ）の化合物にある。
【００３８】
本発明の中間体化合物のうちでは、特にその製造を後記の実験の部に示すもの、特に下記の化合物が挙げられる。
・Ｎ−ブチル−５−［４−（３，１７−ジオキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−イル）フェノキシ］−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
・５−［４−（３，１７−ジオキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−イル）フェノキシ］−Ｎ−（２，２，３，３，４，４，４−ヘプタフルオルブチル）−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
・１１β−（４−ヒドロキシフェニル）−３−［（フェニルメチル）オキシ］エストラ−１，３，９（１０）−トリエン−１７−オン
・５−［４−［１７−オキソ−３−［（フェニルメチル）オキシ］エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル］フェノキシ］ペンタンスルホンアミド
【００３９】
本発明の製造法を実施するのに必要な式（ＩＩ）の化合物は、特に、ヨーロッパ特許出願第０３８４８４２号（実施例４３の製造）に記載されている。
式（ＩＩＩ）  及び式（ＩＩＩ’）の化合物の製造例は後記の実験の部にある。これらの化合物は一般に知られており、実験の部に記載の方法と類似の方法により製造される。
【００４０】
下記の実施例は本発明を例示するために示すものであって、それを何ら制限するものではない。
【００４１】
製造例１：Ｎ−［（ジメチルアミノ）メチレン］−５−ヨードペンタンスルホンアミド
工程Ａ：５−クロルペンタンスルホンアミド
２．５ｇの塩化５−クロルペンタンスルホニル（この製造はＢｕｌｌ．  Ｓｏｃ．  Ｃｈｉｍ．  Ｂｅｌｇ．  （１９６５），  ７４，  ２１  に記載）を３０ｍｌのテトラヒドロフランに溶解してなる溶液に２．５ｍｌの２８％水酸化アンモニウム水溶液を不活性ガス雰囲気下に０〜＋５℃で滴下する。温度を３℃から１６℃に上昇させ、周囲温度で２時間撹拌する。次いでテトラヒドロフランを減圧下に蒸発させ、残留物を水で溶解し、塩化メチレンで抽出し、水洗し、次いで塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発させる。２．０１ｇの所期化合物を得た。Ｍｐ＝６２℃。
ＩＲスペクトル：トリクロルメタン（ＣＨＣｌ３  ）
−ＮＨ２  ：３４４８ｃｍ−１、３３５２ｃｍ−１
−ＳＯ２  −：１３４４ｃｍ−１、１１５０ｃｍ−１
−ＮＨ２  ：１５４５ｃｍ−１
【００４２】
工程Ｂ：５−クロル−Ｎ−［（ジメチルアミノ）メチレン］ペンタンスルホンアミド
上記の工程で得た１．５ｇの化合物を８ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解してなる溶液に不活性ガス雰囲気下に１．２９ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタールを周囲温度で滴下する。溶液を周囲温度で３時間撹拌し、次いで１％硫酸水素ナトリウム水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、水洗し、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。１．８０９ｇの所期化合物を得た。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
−Ｎ＝ＣＨ−Ｎ＜：１６２９ｃｍ−１
−ＳＯ２  −：１３４９ｃｍ−１、１１１９ｃｍ−１
【００４３】
工程Ｃ：Ｎ−［（ジメチルアミノ）メチレン］−５−ヨードペンタンスルホンアミド
上記の工程で得た２．０９ｇの化合物を３１．５ｍｌのメチルエチルケトン（ＭＥＫ）に溶解してなる溶液に２．９８ｇの沃化ナトリウムを添加し、混合物を４時間還流させる。冷却した後、水を添加し、酢酸エチルで抽出し、抽出物を水洗し、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。２．６９ｇの所期化合物を得た。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
−Ｎ＝ＣＨ−Ｎ＜：１６２９ｃｍ−１
【００４４】
製造例２：Ｎ−ブチル−５−ヨード−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
工程Ａ：Ｎ−ブチル−５−クロル−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
４１０ｍｇの塩化５−クロルペンタンスルホニルを１０ｍｌの塩化メチレンに溶解してなる溶液に不活性ガス雰囲気下に０．４７ｍｌのＮ−ブチルメチルアミンを添加する。温度を１３℃から２６℃に上昇させ、次いで０〜５℃に冷却した後、０．５５ｍｌのトリエチルアミンを添加し、周囲温度で２時間撹拌する。次いで反応媒体を１Ｍ塩酸水溶液中に注ぎ、塩化メチレンで抽出し、水洗し、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。４８６ｍｇの所期化合物を得た。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
−ＳＯ２  −Ｎ＜：１３３４ｃｍ−１、１１４２ｃｍ−１
【００４５】
工程Ｂ：Ｎ−ブチル−５−ヨード−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
上記の工程で得た４４９ｍｇの化合物を４．５ｍｌのメチルエチルケトンに溶解してなる溶液に５２６ｍｇの沃化ナトリウムを添加し、４時間撹拌還流する。冷却した後、メチルエチルケトンを減圧下に蒸発させ、水を添加し、酢酸エチルで抽出し、抽出物を水洗し、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。５７２ｍｇの所期化合物を得た。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
−ＳＯ２  −Ｎ＜：１３３４ｃｍ−１、１１４１ｃｍ−１
【００４６】
製造例３：Ｎ−（２，２，３，３，４，４，４−ヘプタフルオルブチル）−５−ヨード−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
工程Ａ：５−クロル−Ｎ−（２，２，３，３，４，４，４−ヘプタフルオルブチル）−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
２００ｍｇの塩化５−クロルペンタンスルホニルを５ｍｌの塩化メチレンに溶解してなる溶液に５００ｍｇのＮ−（２，２，３，３，４，４，４−ヘプタフルオルブチル）−Ｎ−メチルアミン塩酸塩（ヨーロッパ特許出願第０３８４８４２号の実施例７５に従って製造）、次いで０〜５℃で０．５５ｍｌのトリエチルアミンを添加し、全体を周囲温度で２時間撹拌する。水を添加し、塩化メチレンで抽出し、抽出物を水洗し、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。３７８ｍｇの所期化合物を得た。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
−ＳＯ２  −Ｎ＜：１３５４ｃｍ−１、１３４１ｃｍ−１、１１４８ｃｍ−１
不純物Ｃ＝Ｏ：１７３０ｃｍ−１
【００４７】
工程Ｂ：Ｎ−（２，２，３，３，４，４，４−ヘプタフルオルブチル）−５−ヨード−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
上記工程で得た３５５ｍｇの化合物を３ｍｌのメチルエチルケトンに溶解してなる溶液に３００ｍｇの沃化ナトリウムを添加し、４時間撹拌還流する。溶媒を蒸発させた後、残留物を水で溶解し、酢酸エチルで抽出する。抽出物をチオ硫酸ナトリウム水溶液で、次いで塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、減圧下に蒸発乾固させる。４２５ｍｇの所期化合物を無色油状物として得た。これはゆっくりと結晶化する。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
Ｎ−ＳＯ２  −：１３５４ｃｍ−１、１３４１ｃｍ−１、１１４８ｃｍ−１
【００４８】
例１の製造例：１１β−（４−ヒドロキシフェニル）−３−［（フェニルメチル）オキシ］エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オン
工程Ａ：１１β−［４−（ベンゾイルオキシ）フェニル］エストラ−４，９−ジエン−３，１７−ジオン
８．７５８ｇの１１β−（４−ヒドロキシフェニル）エストラ−４，９−ジエン−３，１７−ジオン（ヨーロッパ特許出願第０３８４８４２号の実施例４３に従って製造）を９２ｍｌのアセトンと２７ｍｌの１Ｍ苛性ソーダ水溶液に溶解してなる溶液に不活性ガス雰囲気下に３ｍｌの塩化ベンゾイルを０〜＋５℃で滴下する。塩化ベンゾイルの導入終了時に安息香酸エステルの沈殿が観察された。懸濁液を氷浴内で１０分間撹拌し、次いで周囲温度で３０分間撹拌し、これを０．１Ｍ塩酸水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、抽出物を塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。１２．９８ｇの粗生成物を得た。これを塩化メチレン／イソプロピルエーテル混合物から結晶化する。９．９３ｇの所望化合物を得た。Ｍｐ＝１９６℃。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
１７位の＞Ｃ＝Ｏ  ＋  Ａｒ−Ｏ−ＣＯ−Ｐｈのケトン：１７３６ｃｍ−１（Ｆ）
共役ケトン：１６５９ｃｍ−１、１６０２ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５０５ｃｍ−１、１４９０ｃｍ−１
【００４９】
工程Ｂ：１１β−［４−（ベンゾイルオキシ）フェニル］−３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オン
上記の工程におけるようにして得た１０．０７ｇの化合物を１０４ｍｌのメタノールに溶解してなる溶液に１０．１ｇの２０％水酸化パラジウム担持酸化マグネシウムを添加する。全体を１時間３０分加熱還流する。冷却した後、懸濁液をろ過し、不溶性の触媒を塩化メチレン／メタノール混合物（５０／５０）で洗浄し、ろ液を減圧下に蒸発乾固させる。残留物（１０．７２ｇ）をシリカでクロマトグラフィーする（溶離剤：酢酸エチル／シクロヘキサン４０／６０）。７．７２ｇの所望化合物を得た。Ｍｐ＝２６５℃。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
ＯＨ：３５９９ｃｍ−１
＞Ｃ＝Ｏ：１７３３ｃｍ−１（Ｆ）、１６１１ｃｍ−１、１６０２ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５８５ｃｍ−１、１５０８ｃｍ−１
【００５０】
工程Ｃ：１１β−［４−（ベンゾイルオキシ）フェニル］−３−［（フェニルメチル）オキシ］エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オン
上記工程で得た６．４６２ｇの化合物を１１０ｍｌのアセトンに溶解してなる溶液に３．８２ｇの炭酸カリウム及び４．９ｍｌの臭化ベンジル（フルカ社、Ａ００７８３２３）を添加する。全体を７時間加熱還流し、次いで冷却した後、混合物を減圧下に蒸発乾固させる。残留物を酢酸エチルで溶解し、０．５Ｍ塩酸水溶液中に注ぐ。酢酸エチルで再抽出し、抽出物を塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。残留物（１２．２ｇ）をシリカでクロマトグラフィーする（溶離剤：酢酸エチル／シクロヘキサン２５／７５）。６．６８ｇの所望化合物を得た。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
＞Ｃ＝Ｏ：１７３４ｃｍ−１（複合）、１６０４−１６０８ｃｍ−１、１５８６ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５７６ｃｍ−１、１５０８ｃｍ−１、１５０１ｃｍ−１
【００５１】
工程Ｄ：１１β−（４−ヒドロキシフェニル）−３−［（フェニルメチル）オキシ］エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オン
上記の工程で得た６．６４ｇの化合物を８７．５ｍｌのメタノール及び８７．５ｍｌのテトラヒドロフランに溶解してなる溶液に１２ｍｌの２Ｍ苛性ソーダ水溶液を添加する。周囲温度で１時間撹拌し、次いで反応媒体を０．５Ｍ塩酸水溶液中に注ぐ。酢酸エチルで抽出し、抽出物を水洗し、次いで重炭酸ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、さらに塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。６．５２ｇの粗製の所期化合物を得た。これを塩化メチレンから結晶化する。４．６２ｇの所望化合物を得た。Ｍｐ＝２４０℃。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
−ＯＨ：３６００ｃｍ−１
＞Ｃ＝Ｏ：１７３３ｃｍ−１、１６１３ｃｍ−１、１５９４ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５７４ｃｍ−１、１５１３ｃｍ−１、１５００ｃｍ−１
【００５２】
例１：５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］ペンタンスルホンアミド
工程Ａ：Ｎ−［（ジメチルアミノ）メチレン］−５−［４−［１７−オキソ−３−［（フェニルメチル）オキシ］エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル］フェノキシ］ペンタンスルホンアミド
製造例１（工程Ｃ）で得た２．６７ｇの化合物を２４ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解してなる溶液を２５分間撹拌した後、例１の製造例の工程Ｄで得た２．２９ｇの化合物６９ｍｌのジメチルホルムアミドに添加してなる懸濁液に不活性ガス雰囲気下に添加し、次いで４０３ｍｇの５０％油中水素化ナトリウムを添加する。懸濁液を５０℃に加熱し、１０分間後に、溶液を得た。これをこの温度で１時間１５分撹拌し続ける。この溶液を周囲温度に冷却し、１％硫酸水素ナトリウム水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、抽出物をチオ硫酸ナトリウム飽和水溶液で、さらに塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。残留物（６．７５ｇ）をシリカでクロマトグラフィーする（溶離剤：酢酸エチル）。３．８２ｇの所望化合物を得た。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
１７位の＞Ｃ＝Ｏ：１７３３ｃｍ−１
−Ｎ＝ＣＨ−：１６２９ｃｍ−１、１６１１ｃｍ−１（肩）、１５７５ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５１２ｃｍ−１、１５００ｃｍ−１
−ＳＯ２  −：１３４９ｃｍ−１
【００５３】
工程Ｂ：５−［４−［１７−オキソ−３−［（フェニルメチル）オキシ］エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル］フェノキシ］ペンタンスルホンアミド
上記工程で得た３．８１８ｇの化合物を５９ｍｌのメタノールと２８ｍｌのテトラヒドロフランに加えてなる懸濁液に不活性ガス雰囲気下に１７．７ｍｌの２２度ボーメの純濃塩酸を添加する。全体を８０℃に１時間３０分加熱し、次いで冷却した後、これを重炭酸ナトリウム飽和水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、抽出物を塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。残留物（４．１５ｇ）をシリカでクロマトグラフィーする（溶離剤：酢酸エチル／シクロヘキサン６０／４０）。２．８９ｇの所望化合物を得た。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
−ＮＨ２  ：３４４４ｃｍ−１、３３５０ｃｍ−１
１７位の＞Ｃ＝Ｏ：１７３３ｃｍ−１、１６１０ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５８０ｃｍ−１
＋  −ＮＨ２  ：１５４５ｃｍ−１
【００５４】
工程Ｃ：５−［４−［１７β−ヒドロキシ−３−［（フェニルメチル）オキシ］エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル］フェノキシ］ペンタンスルホンアミド
上記工程で得た１．３６ｇの化合物を６ｍｌのメタノールと６ｍｌのテトラヒドロフランに溶解してなる溶液に不活性ガス雰囲気下に０〜＋５℃で１６９ｍｇの水素化硼素ナトリウムを添加する。０〜＋５℃で１時間撹拌した後、反応媒体を１Ｍ塩酸水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、抽出物を水洗し、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。１．２９９ｇの所期の粗生成物を得た。これを塩化メチレン／イソプロピルエーテル混合物から結晶化する。１．２９５ｇの所望化合物を得た。Ｍｐ＝１４６℃。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
−ＯＨ：３６０９ｃｍ−１
−ＮＨ２  ：３４４４ｃｍ−１、３３５３ｃｍ−１、１６０９ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５８０ｃｍ−１、１５１２ｃｍ−１、１５００ｃｍ−１
−ＮＨ２  ：１５４４ｃｍ−１
【００５５】
工程Ｄ：５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］ペンタンスルホンアミド
上記工程で得た１．２９５ｇの化合物を５０ｍｌのエタノールと５ｍｌの酢酸に溶解してなる溶液に１６１ｍｇの１０％パラジウム担持活性炭（タイプＥ１０Ｎ、デガッサ社）を添加し、次いで全体を１６４０ミリバールの水素圧下に２時間撹拌する。ろ過した後、メタノール／塩化メチレン混合物（１／１）で洗浄し、次いで減圧下に蒸発乾固させ、酢酸をトルエンにより連行させることにより追い出す。１．０４ｇの所期の粗生成物を得た。これをエタノールから結晶化する。７３６ｍｇの所望化合物を得た。Ｍｐ＝１７５℃。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
複雑な吸収ＯＨ／ＮＨ領域：１６１６ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５８０ｃｍ−１
＋  −ＮＨ２  ：１５１１ｃｍ−１
−ＳＯ２  ：１３３３ｃｍ−１、１１５３ｃｍ−１
【００５６】
例２：Ｎ−ブチル−５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］ペンタンスルホンアミド
工程Ａ：Ｎ−ブチル−５−［４−［１７−オキソ−３−［（フェニルメチル）オキシ］エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル］フェノキシ］ペンタンスルホンアミド
例１の工程Ｂで得た５００ｍｇの化合物を６．５ｍｌのアセトンと０．９６ｍｌの１Ｍ苛性ソーダ水溶液に溶解してなる溶液に不活性ガス雰囲気下に０．１８８ｍｌの１−ヨードブタンを添加する。５２時間還流撹拌し、次いで混合物を冷却してから減圧下にアセトンを蒸発させる。次いで残留物を酢酸エチルで溶解し、０．５Ｍ塩酸水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、抽出物を水洗し、次いでチオ硫酸ナトリウム飽和水溶液及び塩化ナトリウム飽和水溶液で順次に洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。６１２ｍｇの生成物を集め、これをシリカでクロマトグラフィーする（溶離剤：酢酸エチル／シクロヘキサン５０／５０）。このようにして、６８ｍｇの所望化合物を得た。Ｒｆ＝０．４０（酢酸エチル／シクロヘキサン５０／５０）。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
−ＮＨ−：約３４００ｃｍ−１
＞Ｃ＝Ｏ：１７３３ｃｍ−１、１６１０ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５７９ｃｍ−１、１５１１ｃｍ−１、１５１０ｃｍ−１
−ＳＯ２  −：１３２７ｃｍ−１＋１１４１ｃｍ−１
【００５７】
工程Ｂ：Ｎ−ブチル−５−［４−［１７β−ヒドロキシ−３−［（フェニルメチル）オキシ］エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル］フェノキシ］ペンタンスルホンアミド
上記工程で得た２９４ｍｇの化合物を１．３ｍｌのテトラヒドロフランと１．３ｍｌのメタノールに溶解して０〜＋５℃に冷却してなる溶液に不活性ガス雰囲気下に３３ｍｇの水素化硼素ナトリウムを添加する。０〜＋５℃で１時間撹拌した後、反応媒体を１Ｍ塩酸水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、抽出物を塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。３００ｍｇの生成物を集め、これをこれをシリカでクロマトグラフィーする（溶離剤：酢酸エチル／シクロヘキサン５０／５０）。このようにして、１９４ｍｇの所望化合物を集めた。Ｒｆ＝０．２５（酢酸エチル／シクロヘキサン５０／５０）。
【００５８】
工程Ｃ：Ｎ−ブチル−５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］ペンタンスルホンアミド
上記工程で得た１９４ｍｇの化合物を５ｍｌの酢酸エチル、５ｍｌのエタノール及び５ｍｌの酢酸に溶解してなる溶液に４４ｍｇの１０％パラジウム担持活性炭を添加し、次いで全体を１７００ミリバールの水素圧下に１５分間撹拌する。懸濁液をろ過した後、メタノール／塩化メチレン混合物（１／１）で洗浄し、次いでろ液を減圧下に蒸発乾固させ、酢酸をトルエンにより連行させることにより追い出し、減圧下に乾燥する。１７２ｍｇの生成物を得た。これをシリカでクロマトグラフィーする（溶離剤：塩化メチレン／イソプロパノール９６／４）。このようにして、１４２ｍｇの所望化合物を集めた。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
−ＯＨ：３６０１ｃｍ−１
−ＮＨ−：３４００ｃｍ−１、１６１０ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５８１ｃｍ−１、１５１２ｃｍ−１
−ＳＯ２  −：１３２７ｃｍ−１、１１４０ｃｍ−１
【００５９】
例３：５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］−Ｎ−［（ジメチルアミノ）メチレン］ペンタンスルホンアミド
例１の工程Ｄで得た２００ｍｇの化合物を１．５ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解してなる溶液に０．０６２ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタールを添加し、全体を周囲温度で１時間３０分撹拌する。反応媒体を１％硫酸水素ナトリウム水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、抽出物を水洗し、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。２２７ｍｇの生成物を集め、これをこれをシリカでクロマトグラフィーする（溶離剤：塩化メチレン／イソプロパノール９５／５）。このようにして、１６８ｍｇの所望化合物を集めた。
ＩＲスペクトル：（ＣＨＣｌ３  ）
−ＯＨ：３６０２ｃｍ−１
−Ｎ＝ＣＨ−：１６２９ｃｍ−１、１６１１ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５８０ｃｍ−１、１５１２ｃｍ−１
【００６０】
例４：Ｎ−ブチル−Ｎ’  −［５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］ペンチルスルホニル］尿素
例１の工程Ｄで得た２００ｍｇの化合物を２ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解してなる溶液に不活性ガス雰囲気下に２０ｍｇの水素化ナトリウムを添加し、周囲温度で１０分間撹拌した後、０．０４６ｍｌのイソシアン酸ブチルを添加する。周囲温度で１時間撹拌した後、反応媒体を１Ｍ塩酸水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、抽出物を塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。３１７ｍｇの生成物を集め、これをこれをシリカでクロマトグラフィーする（溶離剤：塩化メチレン／イソプロパノール９５／５）。このようにして、１４６ｍｇの所望化合物を集めた。
ＩＲスペクトル（ヌジョール）
ＯＨ／ＮＨ：約３３６０ｃｍ−１＋一般的な吸収
＞Ｃ＝Ｏ：１６７５ｃｍ−１、１６１０ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５７７ｃｍ−１
＋  アミド：１５４０ｃｍ−１、１５１０ｃｍ−１
−ＳＯ２  −：１３４０ｃｍ−１、１１４６ｃｍ−１
【００６１】
例５：Ｎ−（４−クロルフェニル）−Ｎ’  −［５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］ペンチルスルホニル］尿素
例１の工程Ｄで得た１８３ｍｇの化合物を２ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解してなる溶液に不活性ガス雰囲気下に２２ｍｇの５０％水素化ナトリウムを添加し、周囲温度で１０分間撹拌した後、７３ｍｇのイソシアン酸４−クロルフェニルを添加する。周囲温度で５時間撹拌した後、反応媒体を１Ｍ塩酸水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、抽出物を塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。２８９ｍｇの生成物を集め、これをこれをシリカでクロマトグラフィーする（溶離剤：塩化メチレン／イソプロパノール９２．５／７．５）。このようにして、８６ｍｇの所望化合物を集めた。
ＩＲスペクトル（ヌジョール）
複雑な吸収ＯＨ／ＮＨ
＞Ｃ＝Ｏ：約１６９８ｃｍ−１、１６０７ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５４０ｃｍ−１
＋  アミド：１５１１ｃｍ−１、１４９４ｃｍ−１
【００６２】
例６：１−［５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］ペンチルスルホニル］−２−イミダゾリジノン
例１の工程Ｄで得た２００ｍｇの化合物を２ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解してなる溶液に不活性ガス雰囲気下に２０ｍｇの５０％水素化ナトリウムを添加し、周囲温度で１０分間撹拌した後、０．０３５ｍｌのイソシアン酸２−クロルエチルを添加する。周囲温度で１時間３０分撹拌した後、反応媒体を１Ｍ塩酸水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、抽出物を水洗し、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。２７８ｍｇの生成物を集め、これをシリカでクロマトグラフィーする（溶離剤：酢酸エチル、次いで塩化メチレン／イソプロパノール９２．５／７．５）。このようにして、１０２ｍｇの所望化合物を集めた。
ＩＲスペクトル（ヌジョール）
一般的な吸収ＯＨ／ＮＨ領域
＞Ｃ＝Ｏ：１７２６ｃｍ−１、１６１２ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５８０ｃｍ−１、１５１０ｃｍ−１、１５０５ｃｍ−１（肩）
−ＳＯ２  −：１１５５ｃｍ−１
【００６３】
例７：Ｎ−ブチル−５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
工程Ａ：Ｎ−ブチル−５−［４−（３，１７−ジオキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−イル）フェノキシ］−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
５８ｍｇの５０％油中水素化ナトリウムを６ｍｌのジメチルホルムアミドに加えてなる懸濁液に不活性ガス雰囲気下に３６２．５ｍｇの１１β−（４−ヒドロキシフェニル）エストラ−４，９−ジエン−３，１７−ジオン（ヨーロッパ特許第３８４８４２号の実施例４３に記載のように製造）を添加し、周囲温度で３０分間撹拌した後、製造例２（工程Ｂ）で得た４１７ｍｇの化合物を１．５ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解してなる油液を添加する。温度をこの導入中に２３℃から２７℃に上昇させ、次いで４５分間撹拌する。反応媒体を１Ｍ塩酸水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、抽出物を水洗し、次いでチオ硫酸ナトリウム飽和溶液及び塩化ナトリウム飽和水溶液で続けて洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。残留物（８８３ｍｇ）をシリカでクロマトグラフィーする（溶離剤：酢酸エチル／シクロヘキサン６０／４０）。このようにして、４３３ｍｇの所望化合物を得た。
ＩＲスペクトル（ＣＨＣｌ３  ）
１７位の＞Ｃ＝Ｏ：１７３５ｃｍ−１
ジエノン：１６５８ｃｍ−１、１６０９ｃｍ−１
Ｃ＝Ｃ  ＋：１６００ｃｍ−１（肩）
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５８０ｃｍ−１、１５０９ｃｍ−１（強）、１３３３ｃｍ−１
−ＳＯ２  Ｎ＜：１１４０ｃｍ−１
【００６４】
工程Ｂ：Ｎ−ブチル−５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
（１）芳香族化
上記工程で得た４０４．５ｍｇの化合物を４ｍｌの塩化メチレンに溶解してなる溶液に不活性ガス雰囲気下に３２ｍｌの無水酢酸及び０．１６ｍｌの臭化アセチルを０〜＋５℃で添加する。この温度で１５分間撹拌し、次いで周囲温度で１時間１５分撹拌する。
（２）酢酸エステルのけん化
０〜＋５℃に冷却した反応混合物に０．３ｍｌのメタノールを添加し、１０分間撹拌させた後、周囲温度で減圧下に蒸発乾固させる。残留物を２．４ｍｌのメタノール及び２．４ｍｌのテトラヒドロフランにより溶解させ、０．４７ｍｌの苛性ソーダ液を添加する。次いで周囲温度で４５分間撹拌する。
（３）１７位のケトンの還元
０〜＋５℃に冷却した反応混合物に１３１ｍｇの水素化硼素ナトリウムを添加する。周囲温度で４５分間撹拌した後、反応媒体を１Ｍ塩酸水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、抽出物を水洗し、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で続けて洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。残留物（３９３ｍｇ）をシリカでクロマトグラフィーする（溶離剤：酢酸エチル／シクロヘキサン５０／５０）。このようにして、１９３ｍｇの所望化合物を得た。
ＩＲスペクトル（ＣＨＣｌ３  ）
−ＯＨ：３６００ｃｍ−１、１６１０ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５８１ｃｍ−１、１５１２ｃｍ−１
−ＳＯ２  Ｎ＜：１３３２ｃｍ−１、１１３８ｃｍ−１
【００６５】
例８：５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］−Ｎ−（２，２，３，３，４，４，４−ヘプタフルオルブチル）−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
工程Ａ：５−［４−（３，１７−ジオキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−イル）フェノキシ］−Ｎ−（２，２，３，３，４，４，４−ヘプタフルオルブチル）−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
２５５ｍｇの１１β−（４−ヒドロキシフェニル）エストラ−４，９−ジエン−３，１７−ジオン（ヨーロッパ特許第３８４８４２号の実施例４３に記載のように製造）を４．５ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解してなる溶液に４０ｍｌの５０％油中水素化ナトリウムを添加する。周囲温度で３０分間撹拌した後、製造例３（工程Ｂ）で得た４００ｍｇの化合物を添加し、周囲温度で４５分間撹拌する。反応媒体を１Ｍ塩酸水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、抽出物をチオ硫酸ナトリウム飽和溶液及び塩化ナトリウム飽和水溶液で続けて洗浄し、乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。残留物（６００ｍｇ）をシリカでクロマトグラフィーする（溶離剤：酢酸エチル／エッセンスＧ５５／４５）。３３５ｍｇの所望化合物を得た。
ＩＲスペクトル（ＣＨＣｌ３  ）
１７位の＞Ｃ＝Ｏ：１７３５ｃｍ−１
ジエノン：１６５８ｃｍ−１、１６０９ｃｍ−１
Ｃ＝Ｃ  ＋：１５８０ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５０９ｃｍ−１、１３４２ｃｍ−１
−ＳＯ２  Ｎ＜：１１４８ｃｍ−１
【００６６】
工程Ｂ：５−［４−（３，１７β−ジヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１１β−イル）フェノキシ］−Ｎ−（２，２，３，３，４，４，４−ヘプタフルオルブチル）−Ｎ−メチルペンタンスルホンアミド
（１）芳香族化
上記工程で得た４３０ｍｇの化合物を３．５ｍｌの塩化メチレンに溶解してなる溶液に不活性ガス雰囲気下に０．３５ｍｌの無水酢酸及び０．２０ｍｌの臭化アセチルを０〜＋５℃で添加し、周囲温度で４５分間撹拌する。
（２）酢酸エステルのけん化
０〜＋５℃に冷却した反応混合物に０．５ｍｌのメタノールを添加し、周囲温度で減圧下に蒸発乾固させる。残留物を３．５ｍｌのメタノールにより溶解させ、０．６ｍｌの苛性ソーダ液を添加する。
（３）１７位のケトンの還元
反応混合物に２２８ｍｇの水素化硼素ナトリウムを添加する。周囲温度で２０分間撹拌した後、２Ｎ塩酸によりｐＨ＝２まで酸性化し、次いで塩化メチレンで抽出し、抽出物を乾燥し、減圧下に蒸発乾固させる。残留物（４２９ｍｇ）をシリカでクロマトグラフィーする（溶離剤：酢酸エチル／エッセンスＧ４０／６０）。このようにして、２６６ｍｇの所望化合物を得た。Ｍｐ＝１３６〜１３８℃。
ＩＲスペクトル（ＣＨＣｌ３  ）
−ＯＨ：３６１５ｃｍ−１、１６１０ｃｍ−１
芳香族Ｃ＝Ｃ：１５８１ｃｍ−１、１５１２ｃｍ−１、１４９１ｃｍ−１
−ＳＯ２  Ｎ＜：１３４２ｃｍ−１、１１４８ｃｍ−１
【００６７】
製薬組成物
（１）下記の処方に相当する錠剤を調整した。
・例７の化合物：５０ｍｇ
・補助剤（タルク、でんぷん、ステアリン酸マグネシウム）：１錠１２０ｍｇとするに要する量
（２）下記の処方に相当する注射用懸濁液を調整した。
・例７の化合物：２５ｍｇ
・補助剤（分散水溶液：ベンジルアルコール、ポリソルベート８０、カルボキシメチルセルロース（ナトリウム塩）、塩化ナトリウム、水）：ボトル１本あたり１ｍｌの注射用製剤とするに必要な量
【００６８】
本発明の化合物の薬理学的研究
１．ホルモン受容体に対する本発明の化合物の活性の研究
研究にはラットの自然ホルモン受容体（ＡＲ）又は組換えヒト受容体（ＰＲ、ＧＲ及びＥＲ）が使用される。
【００６９】
ラットの前立腺のアンドロゲン受容体
体重１８０〜２００ｇのスプラグ・ドーリーＥＯＰＳ種の雄ラットを去勢する。去勢の２４時間後に動物を殺し、前立腺を取り出し、計量し、ポッター・テフロンガラスを用いてＴＳ緩衝溶液（１０ｍＭのトリス、０．２５Ｍのサッカロース、２ｍＭのＤＴＴ、２０ｍＭのＭｏＮａ、０．１ｍＭのＰＭＳＦ、ｐＨ７．４）中で（８ｍｌのＴＳにつき１ｇの組織）０℃においてホモジネートする。次いで、このホモジネート物を０℃において遠心分離する（２０９，０００Ｇで３０分間）。このようにして得られた上澄み液の所定量を、一定濃度（Ｔ）のトリチウム化テストステロンと共に、濃度を漸増させた未標識テストステロン（０〜１０００×１０−９Ｍ）又は被検化合物（１〜２５０００×１０−９Ｍ）の存在下で２４時間０℃においてインキュベートする。次いで、それぞれのインキュベート物について、結合したトリチウム化テストステロンの濃度（Ｂ）をデキストラン炭素による吸着法によって測定する。
【００７０】
ヒトプロゲステロン受容体
Ｎ．Ｒ．ウイーブ他により報告された一般的方法（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （１９９０），  Ｖｏｌ．２，  Ｎｏ．４，  １７３−１８８  ）に従って昆虫バキュロウイルス科細胞系において過剰発現させることによって組換えヒトプロゲステロン受容体を得る。この使用はヒトホルモン受容体、例えば、ヒトグルココルチコイド受容体について報告されている（Ｇ．スリニバサン他、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  （１９９０），  Ｖｏｌ．４，  Ｎｏ．２，  ２０９−２１６）。バキュロゴールド移入キット（ファーミンゲン、参照番号２１０００Ｋ）を使用して、ヒトプロゲステロン受容体をコードする領域を含有するＰ．カストナー他により報告されたｃＤＮＡフラグメント（Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ  （１９９０），  Ｖｏｌ．９，  Ｎｏ．５，  １６０３−１６１４）を装入し、相当する組換えウイルスを調製する。
前記の一般的方法に従って、上記のようにして得られた組換えウイルスを使用してＳＦ９昆虫細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１７１１）にプロゲステロン受容体を発現させる。
２×１０７  〜２．５×１０７  個のＳＦ９細胞を１７２ｃｍ２  の「フラコン」フラスコにおいて、１０％の胎児ウシ血清（ＦＣＳ）及び５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシンを補充したＴＮＭ−ＦＨ「シグマ」培地中で培養する。感染させ、次いで２７℃で４０〜４２時間インキュベートした後、細胞を１ｍｌの溶菌用緩衝液（１）中で冷凍−解凍サイクル（これは２回以上繰返す）により溶菌する。組換えヒトプロゲステロン受容体を含有する上澄み液は１ｍｌづつの量で液体窒素内に保存する。
上澄み液を使用時に０．１％のゼラチンを含有する緩衝溶液（１０ｍＭのトリス、０．２５Ｍのサッカロース、ＨＣｌ、ｐＨ７．４）により１／１０〜１／１００の希釈範囲に従って希釈し、次いで、一定の濃度（Ｔ）のトリチウム化１７α、２１−ジメチル−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−３，２０−ジオンと共に、濃度を漸増させた未標識のプロゲステロン（０〜２５００×１０−９Ｍ）又は未標識の被検化合物（１〜２５０００×１０−９Ｍ）の存在下に０℃で２４時間インキュベートする。次いで、結合したトリチウム化１７α、２１−ジメチル−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−３，２０−ジオンの濃度（Ｂ）を各インキュベートについてデキストラン炭素による吸着法によって測定する。
【００７１】
ヒトグルココルチコイド受容体
プロゲステロン受容体について前記した方法に従って、ヒトグルココルチコイド受容体をコードする領域を含有するＳ．Ｍ．ホレンベルグ他により報告されたｃＤＮＡフラグメント（Ｎａｔｕｒｅ  （１９８５），  Ｖｏｌ．，  Ｎｏ．１９／２６，  ６３５）を使用して組換えヒトグルココルチコイド受容体を含有するＳＦ９細胞の上澄み液を得る。
上澄み液を一定の濃度（Ｔ）のトリチウム化１１β，１７β−ジヒドロキシ−６，２１−ジメチルプレグナ−１，４，６−トリエン−２０−イン−３−オンと共に、濃度を漸増させた未標識のデキサメタゾン（０〜１０００×１０−９Ｍ）又は未標識の被検化合物（１〜２５０００×１０−９Ｍ）の存在下に０℃で２４時間インキュベートする。次いで、結合したトリチウム化１１β，１７β−ジヒドロキシ−６，２１−ジメチルプレグナ−１，４，６−トリエン−２０−イン−３−オンの濃度（Ｂ）を各インキュベートについてデキストラン炭素による吸着法によって測定する。
【００７２】
ヒトエストロゲン受容体
プロゲステロン受容体について前記した方法に従って、４００位にグリシンを有する野生型のヒトエストロゲン受容体をコードする領域を含有するＬ．トラ他によりＨＥＧＯ発現ベクターに報告されたｃＤＮＡフラグメントを使用して、組換えヒトエストロゲン受容体を含有するＳＦ９細胞の上澄み駅を得た。得られた細胞を溶菌用緩衝液（１）において溶菌する。
上澄み液を一定の濃度（Ｔ）のトリチウム化エストラジオールと共に、濃度を漸増させた未標識のエストラジオール（０〜１０００×１０−９Ｍ）又は未標識の被検化合物（１〜２５０００×１０−９Ｍ）の存在下に０℃で２４時間インキュベートする。次いで、結合したトリチウム化エストラジオールの濃度（Ｂ）を各インキュベートについてデキストラン炭素による吸着法によって測定する。
【００７３】
結果の表示及び計算方法
相対的結合親和性（ＲＢＡ）の計算
下記の２本の曲線を引く。
・未標識参照ホルモンの濃度の対数の関数としての結合トリチウム化ホルモンの％（Ｂ／Ｂ０）
・未標識被検化合物の濃度の対数の関数としての％（Ｂ／Ｂ０）
次に、下記の方程式
Ｉ５０＝１００（Ｂ０／Ｂ０＋Ｂｍｉｎ／Ｂ０）／２、即ち
Ｉ５０＝１００（１＋Ｂｍｉｎ／Ｂ０）／２＝５０（１＋Ｂｍｉｎ／Ｂ０）
の直線を決定する。
ここで、Ｂ０＝未標識物質の不存在下での結合トリチウム化ホルモンの濃度であり、
Ｂ＝濃度Ｘの未標識物質の存在下での結合トリチウム化ホルモンの濃度であり、
Ｂｍｉｎ＝大過剰（５００ｎＭ）のコールド参照ホルモンの存在下での結合トリチウム化ホルモンの濃度である。
直線Ｉ５０と曲線との交点から、未標識参照ホルモンの濃度（ＣＨ）及び受容体へのトリチウム化ホルモンの特異的結合を５０％まで抑止する未標識被検化合物の濃度（ＣＸ）を評価することができる。
被検化合物の相対的結合親和性（ＲＢＡ）は下記の方程式
ＲＢＡ＝１００・（ＣＨ）／（ＣＸ）
により決定される。
参照化合物であるエストラジオール、プロゲステロン、デキサメタゾン及びテストステロンのＲＢＡは、任意に１００に等しいとした。
得られた結果は下記の表１に示す通りであった。
【００７４】
【表１】
0003621132.tif 000014
【００７５】
結論
被検化合物、特に、例２及び８の化合物は、エストロゲン受容体に対して著しい親和性を有する。
例２、７及び８の化合物は、グルココルチコイド受容体及びプロゲステロン受容体に対して著しい親和性を有する。
溶菌用緩衝液
（１）：トリス−ＨＣｌ  ｐＨ８；２０ｍＭのＥＤＴＡ；０．５ｍＭのＤＴＴ；２ｍＭのグリセリン；２０％のＫＣｌ；４００ｍＭのＰＩＣ  １０／００
（２）燐酸カリウムｐＨ７．０；５０ｍＭのＤＴＴ；５ｍＭのグリセリン；２０％のモリブデン酸ナトリウム；２０ｍＭのＰＩＣ  １０／００
ここで、ＰＩＣはロイペプチン、ペプスタチンＡ、アプロチニン、アンチペイン、キモスタチンである。それぞれの最終濃度は２．５μｇ／ｍｌ。
【００７６】
２．ＭＣＦ−７ヒト乳房腫瘍細胞の増殖に対する本発明の化合物の抗増殖活性
試験の説明
ａ）細胞の培養
ＭＣＦ−７株を５％の胎児ウシ血清を含有する基本培地（後記の（１）を参照）中で５％のＣＯ２  を含有する湿った雰囲気下で３７℃において培養状態に保持した。ほぼ密集した細胞をトリプシン化（０．１％のトリプシン、０．０２％のＥＤＴＡ）によって採集し、次いで穏やかな遠心分離によって洗浄する。懸濁液状の細胞の試料をマラッセ（Ｍａｌａｓｓｅｚ）セルを使用して計数する。
ｂ）増殖の研究
細胞をフェノールレッドを含まない基本培地に、ステロイドを含まない５％のＦＣＳの存在下に再び懸濁させ、０．１ｎＭのエスタラジオール又は１０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦ＋１ｎｇ／ｍｌのＰＤＧＦによって刺激する。次いで、細胞をマルチウエル型プレート（２．５ｃｍ２  のウエル２４個）の各ウエルに１個当たり細胞５０，０００個の割合で接種する。接種の２４時間後（Ｄ０）に、被検化合物をエタノール溶液状で（エタノールの最終濃度は０．１％）を１０−１１  〜１０−６Ｍの濃度で上記培地に添加し、そして対照例のウエルには同じ濃度のエタノールを与えた。被検化合物を含む培地は４８時間毎に更新する。実験終了時（Ｄ７〜Ｄ９）に培地を抽出し、細胞をＤＮＡを評価するために２５０μｌのメタノールで即座に固定させた。
被検化合物の抗増殖活性は、ＤＮＡの増加を抑止する能力を対照例と対比させて評価される。
ｃ）ＤＮＡの測定
ＤＡＢＡ（３，５−ジアミノ安息香酸）を用いて蛍光法によってＤＮＡを測定する（後記の（２）を参照）。各ウエルに２００μｌのＤＡＢＡを添加する。次いで、プレートを５６℃において４５分間インキュベートし、次いで２ｍｌの１Ｎ・ＨＣｌを添加する。蛍光を蛍光計（励起波長４０８ｎｍ、放射波長５１０ｎｍ）によって測定する。
ウエル１個当たりのＤＮＡの量は、同じ条件下での子牛の胸腺からのＤＮＡ標準物質を処理することによって得られた基準尺度と対比させて評価される。
【００７７】
結果
ＥＧＦ＋ＰＤＧＦによって刺激されたＭＣＦ−７細胞の増殖を５０％まで抑止する被検化合物のｎＭで表わした濃度（ＩＣ５０）を前記の方法により決定した。
下記の結果が得られた。
例２の化合物：ＩＣ５０＝０．０１６ｎＭ
例７の化合物：ＩＣ５０＝０．０１５ｎＭ
例８の化合物：ＩＣ５０＝０．０２６ｎＭ
【００７８】
（１）基本培地は次のように調製した。
ＭＥＭ培地（最低必須培地）に以下のものを添加する。
・１％の非必須アミノ酸（ＧＩＢＣＯ）
・ペニ・ストレプト（１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、０．１ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシン）
・０．１％のフンギゾン
・２ｍＭのグルタミン
・２．２５ｍｇ／ｍｌの重炭酸ナトリウム
（２）プザス及びグッドマン  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｖｏｌ．８６，  ｐ．５０  （１９７８）  。