(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）  コラーゲンをペプシンとともにインキユベートする工程、
（ｉｉ）  ペプシンとインキユベートされたコラーゲンを溶媒に溶解する工程、
（ｉｉｉ）  溶解されたコラーゲンを型に移し、その型をインキユベートすることにより膜を得る工程、
（ｉｖ）  該膜を所望の膜厚が得られるまで圧縮する工程、
（ｖ）  コラーゲンの原繊維が相互に架橋されてマトリックスを形成する条件下で、該圧縮された膜を還元糖と反応させる工程、
（ｖｉ）  該マトリックスを臨界点乾燥にかける工程、
を含んでなるコラーゲンからコラーゲンマトリックスの製造方法。
【請求項２】
工程（ｖ）後であって、臨界点乾燥前に、該マトリックスを脱水する工程をさらに含む請求項１記載の方法。
【請求項３】
該溶媒が酢酸である請求項１記載の方法。
【請求項４】
該還元糖が、下記式Ｉ又はＩＩで表される化合物である請求項１記載の方法：
【化１】
0003618411.tif 000007
上式中、
Ｒ1はＨ又は低級アルキルもしくはアルキレン、アミノ酸、ペプチド、サッカリド、プリンもしくはピリミジン塩基、リン酸化プリンもしくはピリミド塩基であり、
ｎは２〜９の整数であり、
ｐ及びｑはそれぞれ独立して０〜８の整数であり、但しｐ及びｑは合計が少なくとも２であり、８以下である。
【請求項５】
還元糖がジオース、トリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース、セプトース、オクトース、ナノース又はデコースである請求項４記載の方法。
【請求項６】
還元糖がグリセロース、トレオース、エリトロース、リクソース、キシロース、アラビノース、リボース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース及びタロースから成る群より選ばれる請求項５記載の方法。
【請求項７】
還元糖がリボースである請求項６記載の方法。
【請求項８】
還元糖が１種又はそれ以上の抗微生物剤又は抗炎症剤、あるいは組織誘導性を有する因子で強化されており、該薬剤又は因子がマトリックス中に固定される請求項１記載の方法。
【請求項９】
該脱水工程がマトリックスをアルコール溶液と接触させることによって実施される請求項２記載の方法。
【請求項１０】
コラーゲンからのコラーゲンマトリックスの製造方法により得られるコラーゲンマトリックスであって、該方法が下記の
（ｉ）  コラーゲンをペプシンとともにインキユベートする工程、
（ｉｉ）  ペプシンとインキユベートされたコラーゲンを溶媒に溶解する工程、
（ｉｉｉ）  溶解されたコラーゲンを型に移し、その型をインキユベートすることにより膜を得る工程、
（ｉｖ）  該膜を所望の膜厚が得られるまで圧縮する工程、
（ｖ）  コラーゲンの原繊維が相互に架橋されてマトリックスを形成する条件下で、該圧縮された膜を還元糖と反応させる工程、
（ｖｉ）  該マトリックスを臨界点乾燥にかける工程、
を含んでなるものである、コラーゲンマトリックス。
【請求項１１】
該方法が、工程（ｖ）後であって、臨界点乾燥前に、該マトリックスを脱水する工程をさらに含むものである請求項１０記載のコラーゲンマトリックス。
【請求項１２】
体内埋植可能な装置の形態にある請求項１１記載のマトリックス。
【請求項１３】
装置が誘導組織再生のためのコラーゲンをベースにした膜障壁である請求項１２記載のマトリックス。
【請求項１４】
体内埋植可能な装置の形態にある請求項１０記載のマトリックス。
【請求項１５】
装置が誘導組織再生のためのコラーゲンをベースにした膜である請求項１４記載のマトリックス。
【請求項１６】
誘導組織再生のための膜障壁及び空間保持材として使用するための基体を含んでなり、該膜障壁が請求項１３のコラーゲンをベースにした膜障壁であり、そして該空間保持材がヒアルロン酸である、誘導組織再生で使用するためのキット。
【請求項１７】
空間保持材が、殺バクテリア剤、抗炎症薬及び組織再生誘導性を有する因子より成る群からの１種以上の添加物で濃厚化されている請求項１６記載のキット。
【請求項１８】
空間保持材が、コラーゲン、フィブリン、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸及びケラタン硫酸より成る群から選ばれる物質で濃厚化されている請求項１６記載のキット。
【請求項１９】
空間保持材が、殺バクテリア剤、抗炎症薬及び組織再生誘導性を有する因子より成る群の１種以上である添加物で濃厚化されている請求項１８記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の分野】
本発明は新規なコラーゲン−ベースマトリックス及びこのマトリックスを含む装置に関する。そのような装置の特定の例は、誘導（ｇｕｉｄｅｄ）組織再生（ＧＴＲ）で有用なコラーゲン−ベースシートであり、それを本明細書で“ＧＴＲ膜”と呼ぶ。
【０００２】
本発明のＧＴＲ膜の特定の用途は、歯科医術における歯根組織の誘導組織再生のための用途である。
【０００３】
本発明はマトリックスの製造法にも関する。
【０００４】
【従来の技術】
誘導組織再生は、疾患又は外傷により破壊された組織又は臓器の形態及び機能を復元又は再生することを目的とする外科手術法である。組織再生の場合、再生する組織は、破壊された健康な組織が以前に占めていたと同一の部位及び空間に再集合（ｒｅｐｏｐｕｌａｔｅ）しなければならない。さらに再生部位における種々の再生組織の間の形態学的及び機能的関係を復元するために、冒された部位の再集合及び続く再集合細胞の分化は、秩序のある協調的過程でなければならない。
【０００５】
ＧＴＲの方法は、冒された部位の秩序のある協調的な再集合を組織の再生により可能にすることを目的とする。この目的のために、再生組織及び再生過程に介在し得る組織の間に障壁が置かれる。障壁は、冒された部位が正しい組織により再集合され、再生組織が成熟に達するまで適所に保持される。
【０００６】
膜障壁は現在、主に歯科医術において、歯根疾患又は外傷により破壊された歯根組織の再生のＧＴＲのために用いられている。一般に非分解性材料から作られた膜及び分解性材料から作られた膜の２種類の膜が用いられている。
【０００７】
コラーゲンは十分に決定された三重らせん立体配置を有するタンパク質の一族である。これらのタンパク質の中でコラーゲンＩ型が最も多く存在し、体のタンパク質の約２５％及び結合組織のタンパク質の約８０％を構成する。コラーゲンＩ型は重合して繊維及び束の集合体を形成する。コラーゲンは、分解及び合成により体内で常に再構成されている。コラーゲンＩ型は特異的な酵素−コラーゲナーゼによってのみ分解され、いずれの非特異的タンパク質分解に対しても耐性である。
【０００８】
コラーゲンは弱い抗原であり、その抗原性のほとんどは分子の非らせん末端にある。これらの末端はペプシンなどの酵素により除去することができる。その弱い抗原性及びその分解に対する相対的耐性が、コラーゲンを体内埋植可能な装置の構築材料としての優れた候補としている。
【０００９】
Ｉ型コラーゲンの分子溶液は、このタンパク質の豊富な結合組織から調製することができ、次いで分子コラーゲンを原繊維に再集合させることができ、次いでそれを組み合わせてコラーゲンマトリックスを形成することができる。コラーゲンマトリックスは試験管内で成形し、多数の体内埋植可能な装置、例えばコラーゲンシート、コラーゲン管などにすることができる。
【００１０】
体内埋植可能な装置の形成に用いられる場合、コラーゲンマトリックスは長期間その一体性を保持しなければならない。コラーゲン原繊維の分解に対する耐性は、分子間架橋の数を増加させることにより向上させることができる。アルデヒド固定液及びイミドなどの数種の試薬ならびに放射線照射などの処理がこの目的の達成のために用いられてきた。そのような処理の主な欠点は毒性及び架橋の程度を正確に制御できないことである。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は誘導組織再生のための膜又は管などの体内埋植可能な装置で用いるために適したコラーゲンマトリックスの提供である。
【００１２】
本発明の別の目的は、そのようなマトリックスの製造法の提供である。
【００１３】
本発明のさらに別の目的は誘導組織再生法において有用な成分を含むキットの提供である。
【００１４】
本発明のさらに別の目的は、誘導組織再生（ＧＴＲ）の方法の提供である。
【００１５】
本発明のさらに別の目的は、ＧＴＲ法で用いるための空間保持材の提供である。
【００１６】
【課題を解決するための手段】
本発明に従えば、コラーゲンを還元糖と反応させることによりコラーゲンを架橋することを用い、コラーゲンをコラーゲン分解（ｃｏｌｌａｇｅｎｏｌｙｔｉｃ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）に対して耐性とすることができることが見いだされた。かくして本発明に従い、長期間体内で実質的に無損傷に保たれることができ、かくして種々のコラーゲン−ベース体内埋植可能装置の構築材料として有用な架橋コラーゲンマトリックスが提供される。
【００１７】
本発明は、その第１の特徴に従い、その分子又は細繊維が架橋剤により互いに架橋されているコラーゲン原繊維を含み、架橋剤が還元糖又は還元糖誘導体を含むコラーゲンマトリックスを提供する。
【００１８】
本発明はさらに、コラーゲンを還元剤と反応させ、それによりコラーゲンの原繊維が互いに架橋されることを含むコラーゲンマトリックスの製造法を提供する。製造に続いてコラーゲンマトリックスを例えばアルコール溶液中で脱水し、次いで臨界点乾燥するのが好ましい。
【００１９】
該架橋剤はアルデヒド単糖又はα−炭素が水溶液中でアルデヒド又はケトンの状態で存在する単糖誘導体であることができる。
【００２０】
該架橋剤は次式Ｉ又はＩＩ：
【００２１】
【化２】
0003618411.tif 000002
【００２２】
［式中、
Ｒ１はＨ又は低級アルキルもしくはアルキレン、アミノ酸、ペプチド、サッカリド、プリンもしくはピリミジン塩基、リン酸化プリンもしくはピリミド塩基であり、
ｎは２〜９の整数であり、
ｐ及びｑはそれぞれ独立して０〜８の整数であり、但しｐ及びｑは合計が少なくとも２であり、８以下である］
の１つにより示される化合物であることができる。
【００２３】
還元糖はコラーゲン分子のアミノ酸のα又はεアミノ基とシッフ塩基を形成することができる。シッフ塩基は以下の反応式によりアマドリ転位を行い、ケトアミン生成物を形成する：
【００２４】
【化３】
0003618411.tif 000003
【００２５】
【化４】
0003618411.tif 000004
【００２６】
次いで２つの隣接するケトアミン基が縮合して適した分子間又は分子内架橋を形成する。
【００２７】
架橋剤がリボースである場合、ペントシジン（ｐｅｎｔｏｓｉｄｉｎｅ）基を介した安定な架橋を以下の反応式により形成することができる（次式において“Ａ”は第１のコラーゲン分子を示し、“Ｂ”は第２のコラーゲン分子を示す）：
【００２８】
【化５】
0003618411.tif 000005
【００２９】
該還元剤の例はグリセロース、トレオース、エリトロース、リクソース、キシロース、アラビノース、リボース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロースあるいは他のジオース、トリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース、セプトース、オクトース、ナノース又はデコースである。
【００３０】
生体内の場合のコラーゲンマトリックスの分解速度は、マトリックス中のコラーゲン分子間の架橋の程度により制御することができる。これは今度はマトリックスの製造の間の糖の濃度、温度、及びコラーゲンが糖に暴露されている時間の長さにより制御することができる。
【００３１】
マトリックスはある種の治療効果を有する種々の薬剤を含むことができ、それは該糖類によりマトリックス内に固定される。マトリックスが本来の場所にある場合、これらの薬剤はマトリックスが徐々に分解する間に徐々に放出される。これらの薬剤には抗微生物剤、抗炎症剤、組織再生誘導性を有する因子などが含まれる。
【００３２】
抗微生物剤の例はペニシリン、セファロスポリン、テトラサイクリン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシンなどの抗生物質、スルホンアミド及びミコナゾールなどの殺菌薬である。
【００３３】
抗炎症剤の例はコルチゾン、その合成誘導体又はいずれかの合成抗炎症薬である。
【００３４】
組織誘導性を有する因子の例は、繊維芽細胞成長因子、血小板由来増殖因子、トランスフォーミング成長因子、セメント質成長因子、インスリン様成長因子などの成長因子、骨形態形成タンパク質などの分化因子、付着因子（ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｆａｃｔｏｒ）（これらは糖類による、又はそのコラーゲンに結合する自然の能力を利用することによる架橋を用いてもマトリックスに結合することができる）である。
【００３５】
本発明のコラーゲンマトリックスは、ＧＴＲのための膜障壁として作用するシート、コラーゲン−ベース管を含む複数の体内埋植装置の製造に、神経又は血管再生などのために有用である。
【００３６】
本発明の障壁膜は典型的に厚さが０．０５ｍｍ〜２ｍｍの範囲である。膜の寸法は約０．５ｃｍ２〜４００ｃｍ２の範囲、又はそれ以上であろう。
【００３７】
本発明のコラーゲン膜はいずれの非特異的タンパク質分解に対しても耐性である。それらはコラーゲナーゼにより、上記ですでに指摘した通り架橋の量により制御することができる速度で分解される。
【００３８】
本発明の１つの実施態様に従うと、コラーゲンマトリックスは空間−保持材料（“空間保持材”）と組み合わせて用いることができる。空間保持材は再生細胞が移動し、再集合できる空間を保持するためにいくつかの方法において用いられる。例えば腫瘍が骨から切り出された場合などのいくつかの場合、そのような空間は自然に起こる。例えば種々の歯根又は骨の障害などの他の場合、そのような空間は利用できない。そのような場合、障壁と再生組織の間に充填材料を挿入することが必要である。空間保持材の例は（ｉ）ヒアルロナン（ヒアルロン酸）、（ｉｉ）石灰化凍結乾燥骨、（ｉｉｉ）除タンパク骨、（ｉｖ）合成ヒドロキシアパタイト、（ｖ）（ｉｉ）〜（ｉｖ）で挙げたもの以外のオステオカルシン又はビトロネクチンの濃厚な結晶性材料、及び（ｖｉ）熱処理脱石灰化骨である（（ｉｉ）、（ｉｉｉ）及び（ｖｉ）の骨由来物質はヒト起源のものが好ましい）。上記のいずれかの空間保持材の組み合わせ、特にヒアルロナンと１つ又はそれ以上の他の空間保持材の組み合わせも可能である。
【００３９】
おそらく凍結乾燥された形態で与えられるのが好ましいヒアルロナンは、グルクロン酸及びＮ−アセチルグルコサミンの繰り返し単位から成る多糖である。それはその抽出源に依存して数千〜数百万ダルトンの範囲の分子量を有する。ヒアルロナンは発育中及び治癒中の組織において自然に発現され、大量の水を結合する能力を有する。これらの性質がヒアルロナンをＧＴＲにおいて本発明の膜と組み合わせて空間保持材として用いることを可能にしている。
【００４０】
石灰化骨、除タンパク骨（７００℃で骨を灰化することにより製造された天然のヒドロキシアパタイトである）又は合成ヒドロキシアパタイトをオステオカルシン及びビトロネクチン［オステオカルシンは骨タンパク質であり、ヒドロキシアパタイト（骨の鉱質成分）に結合し、石灰化された表面にオステオクラスト（骨再吸収細胞）を誘引すると思われる。ビチロネクチンは付着タンパク質であり、石灰化された骨の表面へのオステオクラストの付着を容易にする］と組み合わせて用いることは新規であり、治癒部位におけるオステオクラストの補充を強化すると思われる。これは今度はこれらの空間保持材の再吸収を強化し、再生組織によるその置換を容易にする。
【００４１】
脱石灰化骨（例えば凍結乾燥）の熱処理は、骨マトリックスのコラーゲン性成分を変性させ、非特異的タンパク質分解により骨マトリックスが分解するようにする。これは今度は空間保持材の分解を強化し、再生組織によるその置換を容易にする。特にこの用途のためのそのような熱処理調製は新規である。
【００４２】
再生部位の寸法、形態及び位置に依存して種々の用途のために、空間保持材を１種又はそれ以上の上記の殺バクテリア剤、抗炎症剤及び組織誘導因子で濃厚にすることができ、及び／又は空間保持材マトリックスの形の保持を助けるための物質、例えばコラーゲン、フィブリン、フィブロネクチン、オステオネクチン、オステオポンチン、テナシン、トロンボシポンジンから成る群より選ばれる１種又はそれ以上のマトリックスタンパク質、及び／又はヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸及び他の多くで濃厚にすることができる。
【００４３】
本発明により提供されるこれらは上記の新規な空間保持材である。
【００４４】
本発明は本発明のコラーゲン膜を含むＧＴＲで用いるためのキットも提供する。本発明の実施態様に従うと、キットは空間保持材も含む。コラーゲン膜ならびにヒアルロナンは１種又はそれ以上の上記の添加物を含むことができる。
【００４５】
以下において、特定の実施態様を説明することにより、及び本発明の枠内で行われたいくつかの実験を記載する実施例により本発明をさらに例示し、添付の図面にも言及する。
【００４６】
【特定の実施態様の詳細な説明】
コラーゲン膜の製造
Ｉ型コラーゲンは牛の皮膚、腱、胎盤又は人の胎盤からそれ自体既知の通りにペプシン化により得ることができる。精製ペプシン化Ｉ型コラーゲンの分子溶液（１〜１０ｍｇ／ｍｌ）を０．０５Ｍの酢酸中に溶解し、４℃に保持し、０．１ＭのＮａＯＨと混合し、次いで適した型中に注ぎ、２０〜３７℃の範囲の温度で２４時間インキュベートする。製造されるマトリックスを次いでピストンで圧縮し、それにより必要な厚さの膜が得られるまで水を絞り出す。次いで膜をリボースの溶液（０．０５Ｍ〜１Ｍの範囲の濃度を有する）中で、酵素分解に対する膜の必要な耐性に依存して６時間〜２４日間、あるいはいくつかの場合はそれ以上の期間インキュベートする。
【００４７】
必要ならリボース溶液を殺バクテリア剤及び殺菌薬、抗炎症薬、分裂促進剤及び分化剤などの薬剤で濃厚にすることができる。
【００４８】
必要な変更を加え、類似の方法で管などの膜以外の装置をコラーゲンマトリックスから製造することができる。
【００４９】
次いでコラーゲン装置を乾燥し、滅菌する。この目的のために、コラーゲン装置は空気中で、又はアルコール溶液（３０％〜１００％）に浸漬することにより脱水することができる。脱水された装置を次いで、例えば二酸化炭素（ＣＯ２）中又はフレオンなどの他の気体中で、臨界点乾燥機において、例えば約４１℃及び約８０〜９０バールの圧力で臨界点乾燥する。この方法は装置を滅菌し、それらを完全に乾燥させ、その保存寿命を延長するのに有効であることが見いだされた。この方法はこれらのコラーゲン装置のコラーゲン分解に対する耐性に影響を与えない。さらにそのような方法は装置の三次元的形態を保存する。
【００５０】
異なる分解速度で分解する部分を有する膜を製造するために、より長期間分解に耐えるように設計された部分をリボース溶液と接触させる。必要な時間の後、膜全体をリボース溶液と共にインキュベートする。
【００５１】
例えば長方形の１つの短辺から反対側への方向に分解速度の勾配を有する（１つの短辺が高い分解速度を有し、他の辺が低い分解速度を有する）長方形の膜を製造するために、以下の方法をとることができる：
膜を湿度が１００％の大気中に保持しながら、２つの短辺の１つに隣接する長方形の膜の部分を、あらかじめ決められた時間リボース溶液に浸す。その後隣接する部分を徐々にリボース溶液に、あらかじめ決められた時間、浸漬する。かくして最末端がリボース溶液に残留するのは最短時間であり、かくして最も分解を受け易い部分となる。
【００５２】
空間保持材
（ａ）凍結乾燥ヒアルロナン
人、牛又は鳥類源から得たヒアルロナンを、上記の因子の１つで濃厚にした、又は濃厚にしない水溶液中に溶解し、次いで凍結乾燥する。本発明に従い、皮膚に埋植された濃厚凍結乾燥ヒアルロナンは水を吸収し、膨潤し、ゼラチン性稠度となり、かくして空間保持材の目的に役立つために適していることが見いだされた。
【００５３】
（ｂ）骨生成物又はヒドロキシアパタイト生成物
１ｇの石灰化凍結−乾燥骨、除タンパク骨又は合成ヒドロキシアパタイトを最高１５ｍｇのオステオカルシン及び／又は１０ｍｇのビトロネクチンを含む溶液と混合し、次いで混合物を凍結乾燥する。
【００５４】
脱石灰化凍結乾燥骨の粒子を乾燥雰囲気中又は苛性アルカリ溶液中で５０℃〜１００℃の範囲の温度に５分〜２４０分の範囲の時間、加熱する。熱処理を水溶液中で行う場合、熱処理に続いて脱石灰化骨を再度凍結乾燥する。本発明に従い、試験管内におけるトリプシンによる脱石灰化骨の分解の速度と熱の温度の間に比例関係があることが見いだされた。
【００５５】
（ｃ）コラーゲンと一緒の空間保持材の利用
コラーゲン障壁と組み合わせて用いられる空間保持材は上記の材料のそれぞれ、又はそれらの組み合わせから成る。例えば空間保持材は熱処理脱石灰化凍結乾燥骨及び／又はオステオカルシン  ビトロネクチンで処理した除タンパク骨の粒子を含むヒアルロナンの凍結乾燥マトリックスから成ることができる。そのような材料の製造のために、熱処理脱石灰化凍結乾燥骨及び濃厚除タンパク骨をヒアルロナンの溶液と混合し、次いで混合物を凍結乾燥する。
【００５６】
【実施例】
実施例Ｉ：
試験管内分解
トリチウムで放射性標識されたコラーゲン原繊維をリボースを含む、又は含まないＰＢＳ溶液中でインキュベートした。溶液中のコラーゲン原繊維の量は３μｇ／ｍｌであり、リボースの濃度は０．２Ｍであった。溶液中におけるコラーゲン原繊維のインキュベーションは３７℃の温度で行い、１〜１６日の範囲の期間であった。
【００５７】
このインキュベーションに続き、かくして形成されたコラーゲンマトリックスをコラーゲナーゼと共に（重量により１：１０のコラーゲン：コラーゲナーゼ）１、２又は４時間インキュベートした。このインキュベーションに続き、溶液を遠心し、後のコラーゲンマトリックスから成る残存放射性の量を決定した。放射性カウントの結果を図１に示す。わかる通り、ＰＢＳ中におけるコラーゲン原繊維のインキュベーションに続いてコラーゲナーゼで処理した後にマトリックス中に残存する放射性（図１における（ｂ））は４０％以下であった。これに対し、リボース溶液中で６日間より長期間インキュベーションした後に形成されたマトリックス中に残存する放射性の量（図１）は約８５〜９０％であった。
【００５８】
これは、コラーゲン分子を互いに架橋させるリボース溶液中のインキュベーションの後に形成されたコラーゲンマトリックスが、コラーゲナーゼによる特異的な分解に対して他のマトリックスよりずっと耐性が高かったことを明らかに示している。
【００５９】
実施例ＩＩ：
生体内分解
（ａ）放射性標識コラーゲンを含むそれぞれ１００μｇのコラーゲンマトリックスを、実施例１に記載の方法と類似の方法で１、３及び９日間リボースで処理した。次いでマトリックスを、ラットの大腿に作られた標準孔（約１ｘ３ｍｍ）を介して体内埋植した。体内埋植の後０、７、１４及び２１日の時点で動物を犠牲にし、各孔に残された放射性の量を決定した。各時点に７匹の動物を犠牲にした。
【００６０】
放射性を測定し、それを製造されたコラーゲンマトリックスに存在する放射性と比較することにより、分解速度を決定することができた。それは試料が、１、３及び９日間リボースで処理した試料に関してそれぞれ１日当たり３％、２％及び０．５％の速度で分解することを示した。
【００６１】
（ｂ）実施例１における通りに製造した約０．５ｘ１ｃｍの寸法の膜を、上記の通りにリボースで９日間処理した後に犬及び人の歯肉の下に埋植した。組織学的方法を用い、犬において膜が完全に分解するのに約４カ月かかることが見いだされた。人において行われた再入法（ｒｅ−ｅｎｔｒｙ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）を用い、膜が完全に分解し、消失するのに約６カ月かかることが測定された。膜が本来の場所にそのような長期間保持されるという事実が誘導組織再生にそれを用いることを容易にする。
【００６２】
実施例ＩＩＩ：
動物実験
上記の通りに製造したコラーゲン膜を用い、犬の小臼歯の頬側に作られた実験的歯根欠損を処置した。コラーゲン膜で処置した４カ月後の処置部位の組織学的試験は、欠損寸法の９０％の再生を明らかにした。
【００６３】
本発明の主たる特徴及び態様は以下の通りである。
【００６４】
１．（ｉ）  コラーゲンをペプシンとともにインキユベートする工程、
（ｉｉ）  ペプシンとインキユベートされたコラーゲンを溶媒に溶解する工程、
（ｉｉｉ）  溶解されたコラーゲンを型に移し、その型をインキユベートすることにより膜を得る工程、
（ｉｖ）  該膜を所望の膜厚が得られるまで圧縮する工程、
（ｖ）  コラーゲンの原繊維が相互に架橋されてマトリックスを形成する条件下で、該圧縮された膜を還元糖と反応させる工程、
（ｖｉ）  該マトリックスを臨界点乾燥にかける工程、
を含んでなるコラーゲンからコラーゲンマトリックスの製造方法。
２．工程（ｖ）後であって、臨界点乾燥前に、該マトリックスを脱水する工程をさらに含む上記１記載の方法。
３．該溶媒が酢酸である請求項１記載の方法。
【００６５】
４．該還元糖が、下記式Ｉ又はＩＩで表される化合物である上記１記載の方法：
【００６６】
【化６】
0003618411.tif 000006
【００６７】
［式中、
Ｒ１はＨ又は低級アルキルもしくはアルキレン、アミノ酸、ペプチド、サッカリド、プリンもしくはピリミジン塩基、リン酸化プリンもしくはピリミド塩基であり、
ｎは２〜９の整数であり、
ｐ及びｑはそれぞれ独立して０〜８の整数であり、但しｐ及びｑは合計が少なくとも２であり、８以下である］
の１つにより示される化合物である上記１項に記載のコラーゲンマトリックス。
【００６８】
５．還元糖がジオース、トリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース、セプトース、オクトース、ナノース又はデコースである上記４記載の方法。
【００６９】
６．還元糖がグリセロース、トレオース、エリトロース、リクソース、キシロース、アラビノース、リボース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース及びタロースから成る群より選ばれる上記５記載の方法。
【００７０】
７．還元糖がリボースである上記６記載の方法。
８．還元糖が１種又はそれ以上の抗微生物剤又は抗炎症剤、あるいは組織誘導性を有する因子で強化されており、該薬剤又は因子がマトリックス中に固定される上記１記載の方法。
【００７１】
９．該脱水工程がマトリックスをアルコール溶液と接触させることによって実施される上記２記載の方法。
【００７２】
１０．コラーゲンからのコラーゲンマトリックスの製造方法により得られるコラーゲンマトリックスであって、該方法が下記の
（ｉ）  コラーゲンをペプシンとともにインキユベートする工程、
（ｉｉ）  ペプシンとインキユベートされたコラーゲンを溶媒に溶解する工
程、
（ｉｉｉ）  溶解されたコラーゲンを型に移し、その型をインキユベートすることにより膜を得る工程、
（ｉｖ）  該膜を所望の膜厚が得られるまで圧縮する工程、
（ｖ）  コラーゲンの原繊維が相互に架橋されてマトリックスを形成する条件下で、該圧縮された膜を還元糖と反応させる工程、及び
（ｖｉ）  該マトリックスを臨界点乾燥にかける工程、
を含んでなるものである、コラーゲンマトリックス。
【００７３】
１１．該方法が、工程（ｖ）後であって、臨界点乾燥前に、該マトリックスを脱水する工程をさらに含むものである上記１０記載のコラーゲンマトリックス。
１２．体内埋植可能な装置の形態にある上記１１記載のマトリックス。
１３．装置が誘導組織再生のためのコラーゲンをベースにした膜障壁である上記１２記載のマトリックス。
【００７４】
１４．体内埋植可能な装置の形態にある上記１０記載のマトリックス。
【００７５】
１５．装置が誘導組織再生のためのコラーゲンをベースにした膜である上記１４記載のマトリックス。
【００７６】
１６．誘導組織再生のための膜障壁及び空間保持材として使用するための基体を含んでなり、該膜障壁が請求項１３のコラーゲンをベースにした膜障壁であり、そして該空間保持材がヒアルロン酸である、誘導組織再生で使用するためのキット。
【００７７】
１７． 空間保持材が、殺バクテリア剤、抗炎症薬及び組織再生誘導性を有する因子より成る群からの１種以上の添加物で濃厚化されている上記１６記載のキット。
【００７８】
１８．空間保持材が、コラーゲン、フィブリン、ヘパリン硫酸、デルマタン硫酸及びケラタン硫酸より成る群から選ばれる物質で濃厚化されている上記１６記載のキット。
【００７９】
１９．空間保持材が、殺バクテリア剤、抗炎症薬及び組織再生誘導性を有する因子より成る群の１種以上である添加物で濃厚化されている上記１８記載のキット。
【図面の簡単な説明】
【図１】コラーゲナーゼによる分解の後のトリチウム−標識コラーゲンマトリックスの残留放射性を測定した実験の結果を示す。トリチウムで標識したコラーゲン原繊維をＰＢＳ中にリボースを含む溶液（ａ）、又はリボースを含まないＰＢＳ溶液（ｂ）中で１〜１６日の範囲の期間インキュベートした。このインキュベーションの後、形成されたコラーゲンマトリックスをコラーゲナーゼで１時間処理した。コラーゲナーゼ処理の後にマトリックス中に残留した放射性の量を合計に対するパーセンテージとして図のグラフに示す。９日間及びそれより長期間リボース中でインキュベートしたマトリックスは本質的にコラーゲン分解に対して耐性である。
【図１】
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