(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビフィドバクテリウム・ロンガムＮｏ．７（ＦＥＲＭ  Ｐ−１３６１０）の菌体を有効成分とする潰瘍性大腸炎治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、潰瘍性大腸炎の治療及び再発防止に効果的な医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
潰瘍性大腸炎（Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ）は、大腸の炎症性腸疾患（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ）の代表的な疾患であり、厚生省難病指定の一つとしてその病態解明に多くの努力がなされているが未だその原因は明らかではない。本疾患は大腸の粘膜及び粘膜下層にび爛や潰瘍を形成し、これによって腸内細菌叢も異常を呈していると考えられ、これらの細菌による感染、遺伝因子及び免疫学的諸機能などが複雑に作用しあっているものと思われる。
【０００３】
従って、本疾患の病因は、胃・十二指腸潰瘍のそれとは決定的に異なり、それ故に現在行われている薬物療法も胃・十二指腸潰瘍とは異なっている。胃・十二指腸潰瘍には、Ｈ２受容体拮抗薬やプロトンポンプ阻害剤が現在使用されており、優れた治癒成績が得られている。そのため胃・十二指腸潰瘍の外科的手術も以前に比べ激減している。
【０００４】
一方、潰瘍性大腸炎の薬物療法については、従来よりサラゾピリン（一般名Ｓａｌｉｃｙｌａｚｏｓｕｌｆａｐｙｒｉｄｉｎｅ）が用いられてきたが、厚生省特定疾患潰瘍性大腸炎班による薬物療法指針によれば、サラゾピリン単独療法よりプレドニゾロン注腸療法を早期に併用することが肝要であるとされている〔厚生省特定疾患消化吸収障害調査研究班、昭和５８年業績集、１９８４、ｐ．１１〕。
【０００５】
しかし、これらの薬物療法によっても、未だ完全に治療することは困難で、医学的にも「治癒」という用語を用いることができず、欧米及び我が国では「一時的に症状が良くなった状態」の意味で、「寛解（Ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ）」という言葉が用いられている。
【０００６】
更に、プレドニゾロンは、１９６０年代から繁用されるようになったが、副作用としてプレドニゾロン抵抗性の潰瘍性大腸炎の症例が見られるようになった。この他にもプレドニゾロンの副作用は多数くあるが、そのうち重要なものの一つとして、感染を助長することが挙げられる。即ち、外来病原菌の腸内増殖を亢進させるというものである。
このように、サラゾピリンやプレドニゾロンでは寛解は得られるが治癒は出来ず、やがて再発を繰り返し、高頻度に大腸癌が発症する（岡安勲、藤原睦憲他：潰瘍性大腸炎に伴う大腸癌発生、胃と腸、２８巻：１７１、１９９３）という欠点を有していた。
【０００７】
最近、ウリナスタチン（多田正大他：難治性潰瘍性大腸炎の新しい治療の試み、大腸肛門誌、４２：５７８、１９８９）、魚油のエイコサペンタエン酸（Ｓａｌｏｍｏｎ  Ｐ．ｅｔ  ａｌ．：Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｌｉｔｉｓ  ｗｉｔｈ  ｆｉｓｈ  ｏｉｌ  ｎ−３−ω−ｆａｔｔｙａｃｉｄ−ａｎ  ｏｐｅｎ  ｔｒｉａｌ−．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１２：１５７，１９９０）などが潰瘍性大腸炎に有効との報告もあるが、確立した治療法ではない。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の目的は、安全であり、従来にない全く新しい作用機序をもった潰瘍性大腸炎治療剤を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、斯かる実情に鑑み、デキストラン硫酸ナトリウムによって誘発される潰瘍性大腸炎モデルマウスを用いて種々の物質の投与効果を調べた。このモデルは、その臨床症状、病理組織像が極めて人間の潰瘍性大腸炎に似ているのみならず、腸内細菌叢も人間の場合の如く、嫌気性菌が減少していることが特徴である。但し本実験モデルは胃潰瘍や十二指腸潰瘍は生じない。この実験モデルを用いて、鋭意研究を行った結果、ビフィズス菌の菌体が、潰瘍性大腸炎の予防及び治療に極めて有効であり、かつ副作用が少ないことを見出し、本発明を完成した。
【００１０】
即ち、本発明は、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮｏ．７（ＦＥＲＭ  Ｐ−１３６１０）の菌体を有効成分とする潰瘍性大腸炎治療剤を提供するものである。
【００１１】
本発明の潰瘍性大腸炎治療剤の有効成分であるビフィズス菌の菌体は生菌でも死菌でもよいが、生菌の方が望ましい。本発明では、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮｏ．７（工業技術院生命工学工業技術研究所委託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１３６１０）が用いられる。
【００１２】
本発明の潰瘍性大腸炎治療剤の有効成分であるビフィズス菌の菌体は次のようにして製造される。
ビフィズス菌は栄養要求性が高く、かつ嫌気性菌であることから、本菌を工業的に培養する際は、乳成分若しくはその加水分解物、糖類（乳糖など）、酵母エキス等を含有する培地を用いて、炭酸ガスを通気しながら嫌気的に培養する必要がある。培養中は水酸化ナトリウム等で中和し、ｐＨを６．２近傍に維持する。得られた培養物は遠心分離若しくは膜処理等を行って濃縮した後、−８０℃で凍結するか、或いは凍結乾燥して保存する。この際、ビフィズス菌の生菌を必要としない場合は、濃縮液を噴霧乾燥、真空乾燥等を行ってもよい。
【００１３】
本発明の潰瘍性大腸炎治療剤の有効成分であるビフィズス菌は以下に列記するように、古くから、ヒトや動物の腸内細菌として健康維持に極めて重要な働きをしていることが判明しており、またそれらの作用機序についても明らかにされている〔光岡知足：腸内菌の世界、叢分社（１９８０）〕。
【００１４】
（１）発癌物質など有害物質の生成を抑制する。
（２）病原菌の腸管感染を防ぐ。
（３）腸内有害菌の増殖を押さえる。
（４）ビタミンの合成（ビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｂ１２、Ｋ）。
（５）消化・吸収を助ける。
（６）免疫能を高める。
【００１５】
また、ビフィズス菌の菌体が抗潰瘍剤として有用であることが知られている（特開平４−５２３６号公報）。しかしながら、この抗潰瘍剤は、有効性試験に潰瘍モデルとして、ラットの酢酸誘発胃潰瘍モデルやアルコール性ストレス胃潰瘍モデルを使用しており、胃・十二指腸潰瘍等の消化性潰瘍を対象とした抗潰瘍剤である。前述のように消化性潰瘍と潰瘍性大腸炎とはその病因が全く異なるものであり、従来ビフィズス菌と潰瘍性大腸炎との関係を示唆した文献は存在しない。
【００１６】
本発明の潰瘍性大腸炎治療剤は、その有効成分がビフィズス菌の菌体であり、前記の理由でその安全性は確立されているのでそのまま経口投与してもよいが、必要に応じて当該菌体に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、被覆剤、乳化剤、分散剤、溶剤、安定化剤などを適宜添加して、錠剤、顆粒剤、散剤、粉末剤、カプセル剤等に製剤して使用してもよい。成人１日当たりの投与量は、生菌で１×１０６  個以上、特に１×１０８  〜１×１０１３個に相当する量の菌体を投与するのが好ましいが、症状により適宜増減可能である。
【００１７】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１８】
実施例１
ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）Ｎｏ．７を、カゼインの加水分解物３．０％、ラクトース４．０％、酵母エキス０．５％を含む培地で炭酸ガスを通気しながら３７℃で約１５時間培養した。培養中は水酸化ナトリウム等で中和し、培地のｐＨを約６．２に維持する。次に、本培養液を遠心分離又は膜処理等を行い、約１０倍に濃縮する。本濃縮物の組成は、蛋白質１９％、ラクトース１１％、酢酸６％、乳酸７％、灰分１３％、ガラクトース７％、水分３２％、その他５％であった。
【００１９】
本濃縮物を５ｍｌ容のプラスチック製アンプルに分注後、ディープフリーザー（−８０℃）に保存し、本発明の潰瘍性大腸炎治療剤を得た。
【００２０】
試験例１
デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）により誘発される潰瘍性大腸炎モデルマウス〔Ｏｋａｙａｓｕ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．：Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｍｅｔｈｏｄ
ｉｎ  ｔｈｅ  Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｌｉａｂｌｅ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｃｕｔｅ  ａｎｄ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｖｌｃｅｒａｔｉｖｅ  Ｃｏｌｉｔｉｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，９８：６９４−７０２（１９９０）〕を用いて、次の４群にて実施例１で得られたＢ．ｌｏｎｇｕｍの凍結菌体の投与効果を下記試験方法により調べた。
【００２１】
Ａ群：水＋培地（Ｎ＝９）
Ｂ群：水＋Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ  Ｎｏ．７（Ｎ＝９）
Ｃ群：ＤＳＳ＋培地（Ｎ＝１２）
Ｄ群：ＤＳＳ＋Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ  Ｎｏ．７（Ｎ＝１０）
【００２２】
試験方法：
ＣＢＡ／Ｊ  ＮＣｒｊ９週令ＳＰＦ雌性マウスに、３％ＤＳＳ水溶液を７日間自由に飲水させた。
Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ  Ｎｏ．７は、生菌（３．９×１０１１ｃｆｕ  ）、死菌（＜１０ｃｆｕ  ）及び培地を、それぞれ７日間毎日、一定時刻に胃ゾンデにて、０．２ｍｌ／匹の用量を経口投与した。
投与期間中に体重測定、便鮮血反応、飲水量の測定を行った。最終投与翌日に血清検査、大腸の長さの測定及び病理組織学的検査を行った。病理組織学的検査結果は、炎症の強さに従って下記に示す５段階スコア（Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  Ｓｃｏｒｅ）で示した。
【００２３】
０：正常
１：好中球を含む炎症細胞の局所的な粘膜内浸潤
２：炎症細胞浸潤による粘膜腺管の消失或いは陰窩膿瘍
３：粘膜膿瘍
４：粘膜膿瘍が標本上１ｍｍ以上の長さで連続している
結果を表１及び表２に示す（いずれも生菌）。
【００２４】
【表１】
0003623977.tif 000002
【００２５】
【表２】
0003623977.tif 000003
【００２６】
表１及び表２から明らかなように、Ｃ群とＤ群において、Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ
Ｎｏ．７菌体投与群では、非投与群に比較して大腸の長さは有意（ｐ＜０．０１）に長く、即ち炎症の繰り返しや程度が低く、更に病理組織学的にも、潰瘍性大腸炎に特徴的な陰窩膿瘍頻度が有意（ｐ＜０．０５）に低く、粘膜固有層への炎症性細胞浸潤の程度も有意（ｐ＜０．０５）に少ない。
【００２７】
試験例２
潰瘍性大腸炎患者の糞便では病期・重症度の如何に拘わらず、又、未治療或いはサラゾピリン投与例の何れの場合にも、健常人のそれと比較して全患者共通して総菌数及び嫌気性菌、特にＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍが著しく減少することが報告されている〔（１）弁野義己、光岡知足：ＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＢｏｗｅｌ  Ｄｉｓｅａｓｅにおける腸内細菌叢の特徴、最新医学３８巻：１４７６、１９８３、（２）下山孝、他：ＩＢＤに対する治療による腸内細菌の変動、最新医学３８巻：１４８２、１９８３、（３）中谷林太郎、他：潰瘍性大腸炎の細菌叢：サラゾピリン及び抗生物質非投与例ならびに大腸切除例における検討、最新医学３８巻：２４６１、１９８３）。このような事実に基づき、ＤＳＳにより誘発された潰瘍性大腸炎モデルマウスに、Ｂ．ｌｏｎｇｕｍの菌体（生菌）を投与した際の腸内フローラの変動について検索した。
【００２８】
Ａ群：水＋培地（Ｎ＝５）
Ｂ群：水＋Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ  Ｎｏ．７（Ｎ＝５）
Ｃ群：ＤＳＳ＋培地（Ｎ＝９）
Ｄ群：ＤＳＳ＋Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ  Ｎｏ．７（Ｎ＝１０）
【００２９】
ＣＢＡ／Ｊマウス（♀、成獣）を用い、個体識別のためにマーキングし、群飼い飼育した。被検物質（水、培地、ＤＳＳ、Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ  Ｎｏ．７）は７日間連続投与した。ＤＳＳは３％水溶液で自由摂取させ、Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ  Ｎｏ．７はその凍結菌体約３．９×１０１１ｃｆｕ  を胃ゾンデを用いて７日間毎日強制経口投与した。対照に用いた水と培地も各々同様に投与した。結果を表３に示す。
【００３０】
【表３】
0003623977.tif 000004
【００３１】
被検物質の投与前にはフローラの検索に用いた全てのマウスの糞便中にＢ．ｌｏｎｇｕｍ  Ｎｏ．７は検出されなかったが、被検物質投与後では、Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ  Ｎｏ．７投与群のＢ群（健常マウス）で平均１０８ｃｆｕ／ｇ、Ｄ群（ＤＳＳ投与群）で１０７ｃｆｕ／ｇレベルでそれぞれＢ．ｌｏｎｇｕｍ  Ｎｏ．７が検出された。即ち、投与したＢ．ｌｏｎｇｕｍ  Ｎｏ．７菌は生存しており、総菌数の減少は全く見られず、又Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍの減少を、コントロール群に比して最小限にとどめている。つまり多量のＢ．ｌｏｎｇｕｍ  Ｎｏ．７菌を経口投与しても腸内では菌交代現象を起こすことなく、他の腸内細菌叢とバランス良く共生していることが判明した。
【００３２】
【発明の効果】
本発明の潰瘍性大腸炎治療剤は、大量経口摂取しても安全なビフィズス菌の菌体を有効成分としており、腸内細菌叢を改善し、宿主の健康に有利に作用する従来にない、全く新しい作用機序をもった潰瘍性大腸炎治療剤で、安全性と治療効果及び再発防止に優れている。更にサラゾピリンやプレドニゾロンとの併用も可能で、これら薬剤との集学的治療が理論的に期待できる。