(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）０．００１〜１０％の、レチノール及びレチニルエステルの中から選択された化合物、
（ｂ）０．００１〜１０％のジメチルイミダゾリジノン、及び
（ｃ）化粧品に許容可能な賦形剤
を含有するスキンコンディショニング用組成物。
【請求項２】
レチニルエステルがレチニルパルミテート、レチニルアセテート、レチニルプロピオネート、及びこれらの混合物の中から選択されることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
成分（ａ）対成分（ｂ）の比が６０：１から１：１６０であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、スキンケア用組成物に係わる。
【０００２】
【従来の技術】
レチノール（ビタミンＡ）は、ヒトの体内で天然に産する内在性化合物であり、正常な表皮細胞分化に不可欠である。天然及び合成のビタミンＡ誘導体は様々な皮膚障害の治療に幅広く用いられ、皮膚修復または再生薬として用いられている。レチノイン酸は様々な皮膚状態、例えばアクネ、皺、乾癬、老人斑及び変色の治療に用いられている。例えばＡ．  Ｖａｈｌｑｕｉｓｔ等，  Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，  Ｖｏｌ．９４，  ｐｐ．４９６−４９８，  Ｄ．  Ｂ．  Ｈｏｌｌａｎｄ  ＆  Ｗ．  Ｊ．  Ｃｕｎｌｉｆｆｅ，  １９９０；  Ｃ．  Ｎ．  Ｅｌｌｉｓ等，  “Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｒｅｔｉｎｏｌｓ  ｉｎ  Ｓｋｉｎ，”  Ｖｏｌ．３，  ｐｐ．２４９−２５２，  Ｖａｓｅｌ，  Ｋａｒｇｅｒ，  １９８９；  Ｎ．  Ｊ．  Ｌｏｗｅ等，  “Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｒｅｔｉｎｏｌｓ  ｉｎ  Ｓｋｉｎ，”  Ｖｏｌ．３，  ｐｐ．２４０−２４８，  Ｖａｓｅｌ，  Ｋａｒｇｅｒ，  １９８９；国際特許出願公開第９３／１９７４３号を参照されたい。レチノール、並びにレチニルアセテート及びレチニルパルミテートなどのレチニルエステルはレチノイン酸よりも配合／安定化が容易である。残念なことに、レチノール及びレチニルエステルは、皮膚への効用（ｓｋｉｎ  ｂｅｎｅｆｉｔｓ）を発揮する点ではレチノイン酸ほど有効でない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、皮膚に対してレチノイン酸含有組成物に類似の有効性を具えたレチノールまたはレチニルエステル含有組成物を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明は、レチノールまたはレチニルエステルとジメチルイミダゾリジノンとの或る種の組み合わせがケラチノサイトの増殖及び分化において相乗的改善をもたらすという発見に一部基づく。レチノールまたはレチニルエステルと組み合わせたジメチルイミダゾリジノンの作用はレチノイン酸の作用に類似していた。即ち、脂肪酸アミドとレチノールまたはレチニルエステルとの混合物はレチノイン酸に匹敵するが、レチノイン酸より用いやすい。
【０００５】
ジメチルイミダゾリジノンは化粧品において、細菌汚染の排除に広く用いられている。しかし、ジメチルイミダゾリジノンとレチノールまたはレチニルエステルとの相乗効果を挙げる組み合わせに基づくスキンコンディショニング用組成物は、当分野で開示されていない。先に挙げた参考文献の中で、有効なレチノイン酸代替物の必要性を指摘しているものは無い。
【０００６】
本発明は、
（ａ）０．００１〜１０％の、レチノールまたはレチニルエステル、
（ｂ）０．００１〜１０％のジメチルイミダゾリジノン、及び
（ｃ）化粧品に許容可能な賦形剤
を含有するスキンコンディショニング用組成物を包含する。
【０００７】
本明細書中に用いた‘コンディショニング’という語は、乾燥肌、光で傷んだ（ｐｈｏｔｏｄａｍａｇｅｄ）肌、皺の発生、老人斑及び老化した肌の予防及び治療、角質層の柔軟性の向上、並びに皮膚の質全般の向上を意味する。本発明の組成物は、皮膚落屑及び表皮分化の改善に用い得る。
【０００８】
本発明の組成物中にジメチルイミダゾリジノンが存在することによってレチノールまたはレチニルエステルの効能が実質的に改善され、即ちジメチルイミダゾリジノンはレチノールまたはレチニルエステルの、細胞の増殖及び分化に影響する能力を実質的に高める。ジメチルイミダゾリジノンは、単独で用いられた場合は皮膚への効用を改善する作用を全く、またはほとんど有せず、皮膚への効用が実質的に改善されるのはジメチルイミダゾリジノンをレチノールまたはレチニルエステルと組み合わせた場合のみである。要するに、本発明は、レチノールまたはレチニルエステルとジメチルイミダゾリジノンとの相乗的な相互作用の発見に少なくとも部分的に基づいている。
【０００９】
レチノールまたはレチニルエステル含有組成物にジメチルイミダゾリジノンを含有させることによって、当該組成物の効能を実質的に改善できる。あるいは他の場合には、ジメチルイミダゾリジノンを含有する組成物により低レベルのレチノールまたはレチニルエステルを含有させ、それによってジメチルイミダゾリジノンを含有しない類似組成物の効能に劣らない効能を実現することも可能である。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明の組成物は、第一の必須成分として、レチノール及びレチニルエステルの中から選択された化合物を含有する。‘レチノール’という語はレチノールの次の異性体を包含する：  全トランス−レチノール、１３−シス−レチノール、１１−シス−レチノール、９−シス−レチノール、３，４−ジデヒドロ−レチノール。好ましい異性体は全トランス−レチノール、１３−シス−レチノール、３，４−ジデヒドロ−レチノール、９−シス−レチノールである。最も好ましいのは全トランス−レチノールであり、なぜならこの物質は市販されているので容易に入手できるからである。
【００１１】
レチニルエステルはレチノールのエステルである。‘レチノール’については上段に規定した。本発明に用いるのに適したレチニルエステルはレチノールのＣ1〜Ｃ30エステル、好ましくはＣ2〜Ｃ20エステルであり、最も好ましいのはＣ2、Ｃ3及びＣ16エステルで、なぜならこれらのエステルは比較的普通に入手可能だからである。レチニルエステルの例には、レチニルパルミテート、レチニルホルメート、レチニルアセテート、レチニルプロピオネート、レチニルブチレート、レチニルバレレート、レチニルイソバレレート、レチニルヘキサノエート、レチニルヘプタノエート、レチニルオクタノエート、レチニルノナノエート、レチニルデカノエート、レチニルウンデカノエート、レチニルラウレート、レチニルトリデカノエート、レチニルミリステート、レチニルペンタデカノエート、レチニルヘプタデカノエート、レチニルステアレート、レチニルイソステアレート、レチニルノナデカノエート、レチニルアラキドネート、レチニルベヘネート、レチニルリノレエート、レチニルオレエートが非限定的に含まれる。
【００１２】
本発明に用いるうえで好ましいエステルはレチニルパルミテート、レチニルアセテート及びレチニルプロピオネートの中から選択され、なぜならこれらのエステルはきわめて大量に市販されており、従ってきわめて安価であるからである。
【００１３】
レチノールまたはレチニルエステルは本発明の組成物中に、０．００１〜１０％、好ましくは０．０１〜１％、最も好ましくは０．０１〜０．５％の量で用いることが適当である。
【００１４】
本発明の組成物の第二の必須成分はジメチルイミダゾリジノンである。この物質は、次の式
【００１５】
【化１】
0003696332.tif 000002
【００１６】
を有する。ジメチルイミダゾリジノンは本発明の組成物に、０．００１〜１０％、好ましくは０．０１〜１％、最も好ましくは０．１〜０．５％の量で含有させることが適当である。
【００１７】
本発明の組成物中のレチノールまたはレチニルエステル対ジメチルイミダゾリジノンの比は通常５００：１から１：５００、好ましくは６０：１から１：１６０である。
【００１８】
任意に用いる、皮膚への効用を有する物質及び化粧品用添加物
油または油性物質を乳化剤と共に存在させれば、主に用いる乳化剤の平均親水親油バランス（ＨＬＢ）に従って油中水型エマルションまたは水中油型エマルションを用意することができる。
【００１９】
本発明の化粧品組成物中には様々な種類の活性成分を存在させ得る。活性成分は、皮膚への効用を有する物質で皮膚緩和薬以外のもの、及び単に組成物の物理特性を改善するだけではない成分と定義される。このような範疇には入らないが、活性成分の一般的な例に日焼け防止剤及び日焼け剤が有る。
【００２０】
日焼け防止剤には、紫外線の遮断に通常用いられる物質が含まれる。例となる化合物は、ＰＡＢＡ、シンナメート及びサリチレートの誘導体である。例えば、オクチルメトキシシンナメート及び（オキシベンゾンとしても知られる）２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンが用いられ得る。オクチルメトキシシンナメート及び２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンは、商標“Ｐａｒｓｏｌ  ＭＣＸ”及び“Ｂｅｎｚｏｐｈｅｎｏｎｅ−３”の下にそれぞれ市販されている。エマルション中に用いる日焼け防止剤の正確な量は、太陽の紫外線からの保護の実現したい程度に応じて様々となり得る。
【００２１】
別の好ましい任意成分が、必須脂肪酸（ＥＦＡ）、即ちあらゆる細胞の形質膜形成に必須である脂肪酸の中から選択され、ケラチノサイトではＥＦＡの欠乏は細胞を過増殖性（ｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ）とする。この現象はＥＦＡの補充によって是正される。ＥＦＡはまた、表皮の脂質生合成を促進し、表皮の遮断層（ｂａｒｒｉｅｒ）形成のための脂質を用意する。必須脂肪酸は好ましくは、リノール酸、γ−リノレン酸、ホモ−γ−リノレン酸、ｃｏｌｕｍｂｉｎｉｃ  ａｃｉｄ、エイコサ−（ｎ−６，９，１３）−トリエン酸、アラキドン酸、ｔｉｍｎｏｄｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、ヘキサン酸、及びこれらの混合物の中から選択される。
【００２２】
本発明の化粧品組成物にはしばしば、皮膚緩和薬を含有させる。その際、皮膚緩和薬のレベルは組成物全体の０．５〜５０重量％、好ましくは５〜３０重量％とすることが適当であり得る。皮膚緩和薬は、エステル、脂肪酸及び脂肪アルコール、ポリオール並びに炭化水素といった通常の化学物質の範疇に分類できる。
【００２３】
エステルはモノまたはジエステルであり得る。許容可能な脂肪酸ジエステルの例には、ジブチルアジペート、ジエチルセバケート、ジイソプロピルジメレート（ｄｉｍｅｒａｔｅ）及びジオクチルスクシネートが含まれる。許容可能な分枝鎖脂肪酸エステルは、２−エチル−ヘキシルミリステート、イソプロピルステアレート及びイソステアリルパルミテートなどである。許容可能な三塩基酸エステルにはトリイソプロピルトリリノレエート及びトリラウリルシトレートが含まれる。許容可能な直鎖脂肪酸エステルは、ラウリルパルミテート、ミリスチルラクテート、オレイルユールケート（ｅｕｒｃａｔｅ）及びステアリルオレエートなどである。好ましいエステルには、ココ−カプリレート／カプレート（ココ−カプリレートとココ−カプレートとのブレンド）、プロピレングリコールミリスチルエーテルアセテート、ジイソプロピルアジペート及びセチルオクタノエートが含まれる。
【００２４】
適当な脂肪アルコール及び脂肪酸には、１０〜２０個の炭素原子を有する化合物が含まれる。特に好ましいのは、セチルアルコール及び酸、ミリスチルアルコール及び酸、パルミチルアルコール及び酸、並びにステアリルアルコール及び酸などの化合物である。
【００２５】
皮膚緩和薬として機能し得るポリオールには、直鎖及び分枝鎖アルキルポリヒドロキシル化合物などが有る。例えば、プロピレングリコール、ソルビトール及びグリセリンが好ましい。ポリプロピレングリコール及びポリエチレングリコールなどの重合性ポリオールも有用であり得る。ブチレングリコール及びプロピレングリコールも浸透促進薬として特に好ましい。
【００２６】
皮膚緩和薬として機能し得る炭化水素は、例えば炭素原子１２〜３０個ほどの炭素鎖を有する炭化水素である。特定例には鉱油、石油ゼリー、スクアレン及びイソパラフィンが含まれる。
【００２７】
本発明の化粧品組成物に含有させる更に別の範疇の機能成分に増粘剤が有る。増粘剤は普通組成物の０．１〜２０重量％ほど、好ましくは０．５〜１０重量％ほどの量で存在させる。増粘剤の例には、Ｂ．  Ｆ．  Ｇｏｏｄｒｉｃｈ  Ｃｏｍｐａｎｙから商標“Ｃａｒｂｏｐｏｌ”の下に入手可能な架橋ポリアクリレート材料が有る。キサンタン、カラゲナン、ゼラチン、カラヤ、ペクチン及びイナゴマメゴムなどのゴム質も用い得る。場合によっては増粘機能は、シリコーンや皮膚緩和薬としても機能する物質によって達成可能である。例えば、１０ｃＳｔを越えるシリコーンゴム、及びグリセロールステアレートなどのエステルはそのような二重機能を有する。
【００２８】
本発明の化粧品組成物には粉末を含有させ得る。この粉末には、白亜、タルク、フラー土、カオリン、澱粉、スメクタイトクレー、化学的に改質したケイ酸アルミニウムマグネシウム、有機改質したモンモリロナイトクレー、水和ケイ酸アルミニウム、薫蒸（ｆｕｍｅｄ）シリカ、アルミニウム澱粉オクテニルスクシネート、及びこれらの混合物が含まれる。
【００２９】
本発明の化粧品組成物には他の微量添加成分も含有させ得る。そのような成分には着色剤、不透明化剤及び香料が含まれ得る。これらの物質の量は組成物の０．００１〜２０重量％ほどとし得る。
【００３０】
組成物の用途
本発明による組成物は主として、ヒトの皮膚に局所適用する製品、特にスキンコンディショニング及びスムーシング剤、及び皺寄った、または老化した皮膚の出現を予防または低減する薬剤として企図されている。
【００３１】
使用の際には、少量、例えば１〜５ｍｌの組成物を適当な容器またはアプリケーターから皮膚の露出域に適用し、必要であればその後手や指、または適当な装置を用いて皮膚上へ展延し、及び／または皮膚に擦り込む。
【００３２】
製品形態及び包装
本発明の皮膚及び／または毛髪局所処理用組成物は、４，０００〜１０，０００ｍＰａｓの粘度を有するローションか、１０，０００〜２０，０００ｍＰａｓの粘度を有する流動クリームもしくはゲルか、または２０，０００〜１００，０００ｍＰａｓもしくはそれ以上の粘度を有するクリームの形態に調製できる。本発明の組成物は、その粘度及び消費者による所期の使用に適した容器で包装可能である。例えば、ローション剤及び流動クリーム剤はカプセル、瓶、ロールボールアプリケーター、噴射剤使用の噴霧装置、または指での操作に適したポンプを具備した容器で包装し得る。上記第三の形態のクリーム剤とした組成物は、単にカプセル、無変形瓶、チューブなどの絞り出し容器、または蓋付きの広口瓶に入れて貯蔵し得る。
【００３３】
従って本発明は、本明細書に定義した化粧品に許容可能な組成物を収容した密閉容器も提供する。
【００３４】
【実施例】
本発明を、次の特定の実施例によって更に詳述する。
【００３５】
物質及び方法
細胞培養
新生児の包皮からトリプシン処理によって単離したヒトケラチノサイトを、分裂ケラチノサイトコロニー確認のために照射３Ｔ３マウス線維芽細胞を存在させたダルベッコ改良イーグル（ＤＭＥ）Ｈａｍｓ  Ｆ１２（１：１）培地／１０％ウシ胎児血清中で増殖させた。細胞を上記条件下にその第二代まで増殖させ、後の使用に備えて凍結状態に維持した。凍結した第二代ケラチノサイトを解凍し、上記培地中に播種して５日間増殖させ、その後０．１５ｍＭ  Ｃａを含有させた、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡから入手したＭＣＤＢ  １５３主体の無血清培地であるケラチノサイト増殖培地（ＫＧＭ）か、または０．０９ｍＭ  Ｃａを含有させた、ＧＩＢＣＯから入手したケラチノサイト無血清培地（ＫＳＦＭ）に移した。細胞が８０〜９０％集密となった７日目、細胞をトリプシン処理して、様々な実験のために無血清培地に播種した。
【００３６】
チミジンアッセイ
3Ｈ−チミジン取り込み及びケラチノサイト増殖
培養したケラチノサイトによる3Ｈ−チミジンの取り込みを、ケラチノサイト増殖の評価基準として用いた。チミジンは、動物界における遺伝情報の普遍的なライブラリーであるＤＮＡのモノマー単位である４種のデオキシヌクレオシドのうちの一つである。ケラチノサイトのような体細胞ではその細胞分裂の前に、当該細胞の完全なゲノムが複製される。このことは細胞による大量ＤＮＡ合成を意味し、２個の娘細胞の両方が遺伝物質の同等コピーを受け取ることを可能にする。細胞分裂に備えてＤＮＡを合成中のケラチノサイトの培地に3Ｈ−チミジンを添加すると、標識したヌクレオシドが新たに合成されるＤＮＡに取り込まれる。細胞集団内への3Ｈ−チミジンの取り込みの程度は前記細胞集団によるＤＮＡ合成の量に比例し、従って該集団の細胞増殖の指標となる。
【００３７】
（上述のように培養した）ケラチノサイトを２４ウェルプレートに、ウェル１個分の１ｍｌの培地中に４０，０００細胞存在する密度で播種した。４日間、または細胞が６０〜７０％集密となるまでインキュベートした後、培地を交換した。培地交換の２４時間後、ウェルに試験化合物を添加し（三重に操作）、その４時間後に５０μｌの培地中の１μＣｉの3Ｈ−チミジンを各ウェル毎に添加した。細胞を更に２４時間インキュベートした。細胞から培地を除去し、これに１０％氷冷トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を添加し、プレートを氷上で３０分間インキュベートした。細胞を５％  ＴＣＡで５回洗浄し、５００μｌの０．１Ｍ  ＮａＯＨに少なくとも１時間（普通一晩）掛けて溶解させた。調製物を０．１Ｍ  ＨＣｌで中和し、５０μｌの細胞調製物を用いて総タンパク質含量を測定した。ＤＮＡの3Ｈからの毎分壊変（ＤＰＭ）を、９００μｌの細胞調製物の液体シンチレーション計数によって測定した。チミジン取り込み結果を、タンパク質１μｇ当たりのＤＰＭとして表わした。
【００３８】
トランスグルタミナーゼアッセイ
トランスグルタミナーゼアッセイ及びケラチノサイト分化
表皮における末端分化の過程の間に、細胞外側構造の内側面上に角化エンベロープ（ＣＥ）として知られる１５ｎｍ厚のタンパク質層が形成される。ＣＥはＮε−（γ−グルタミル）リシンイソジペプチド結合の形成によって互いに架橋された多くの個別タンパク質から成り、前記結合の形成は表皮において発現される少なくとも２種の異なるトランスグルタミナーゼ（ＴＧアーゼ）の作用によって触媒される。ＴＧアーゼＩは表皮の分化した層、特に顆粒層において大量に発現されるが、未分化の基底表皮には存在しない。即ち、ＴＧアーゼＩは表皮ケラチノサイト分化の有用なマーカーであり、ＴＧアーゼＩレベルが高いほど分化が進行していることを示す。ＴＧアーゼＩ抗体を用いる、ＥＬＩＳＡに基づくＴＧアーゼＩアッセイによって、後述する実施例で培養したケラチノサイトの分化状態を評価した。
【００３９】
（先に述べたように培養した）ケラチノサイトを９６ウェルプレートに、ウェル１個分の２００μｌの培地中に３，０００細胞存在する密度で播種した。４日間インキュベートした後、培地を、試験化合物を含有させた培地に交換した（試験１回当たり６回繰り返し）。細胞を更に７２時間培養し、その後培地を吸引除去し、プレートを−７０℃で貯蔵した。プレートを冷凍庫から取り出し、細胞をＰＢＳで洗浄した。１００μｌの滅菌水を添加し、細胞を、−７０℃で凍結させ、その後解凍することによってフリーズフラクチャーした。細胞をＰＢＳ／３％ＢＳＡ（洗浄緩衝液；  ウシ血清アルブミン）存在下に室温（Ｒ／Ｔ）で１時間インキュベートし、その後洗浄緩衝液の新しいアリコートで濯いだ。細胞を、Ａｍｅｒｓｈａｍ（マウス）から得た抗ヒトトランスグルタミナーゼモノクローナル一次抗体（ＩｇＧ）を洗浄緩衝液で１：３００に稀釈したもの５０μｌと共に３７℃で１時間インキュベートし、その後洗浄緩衝液で２回濯いだ。次に細胞を、洗浄緩衝液で１：２００に稀釈した二次抗体（Ｆｅｂフラグメント；  Ａｍｅｒｓｈａｍから得、ペルオキシダーゼと結合させた抗マウスＩｇＧ）５０μｌと共に３７℃で１時間インキュベートし、その後洗浄緩衝液で２回濯いだ。細胞を闇中（アルミホイル下）で基質溶液（ｐＨ５．０の０．１Ｍシトレート緩衝液１０ｍｌ中に４ｍｇのｏ−フェニレンジアミン及び３．３μｌの３０％  Ｈ2Ｏ2）と共にＲ／Ｔで５分間インキュベートした。５０μｌの４Ｎ  Ｈ2ＳＯ4を添加して反応を停止させた。試料の吸光度をプレートリーダーで、４９２ｎｍにおいて読み取った。六つの繰り返しのうち四つを上記両抗体で処理し、二つを二次抗体のみで処理（即ち酵素結合抗体のバックグラウンド結合を測定）した。各処理から得られた読み取り値からバックグラウンド値を減算し、上記両抗体に曝露した繰り返しに関して平均の±  ｓ．ｄ．を決定することによりＴＧアーゼレベルを測定した。
【００４０】
ＤＮＡアッセイ
細胞処理後に検出されるＴＧアーゼ−１のレベルは細胞数によって影響される恐れが有り、即ち細胞数が大きいほど検出されるＴＧアーゼ−１のレベルは高くなる。ＴＧアーゼ−１のレベルを同一ウェル内の細胞のＤＮＡ含量に対して正規化し、このようにして細胞数の相違に起因する変動を排除した。ＤＮＡ定量はケラチノサイト細胞数を含めた細胞数の特に有用な指標であり、なぜなら各細胞は事実上同等のゲノムを有し、従って同量のＤＮＡを有するからである。従って、１個のウェルの細胞の総ＤＮＡ含量は当該ウェルの細胞数に正比例する。ＤＮＡの定量を用いてＴＧアーゼデータを細胞数に対して正規化した。
【００４１】
ケラチノサイトを９６ウェルプレートに、ウェル１個分の２００μｌの培地中に３，０００細胞存在する密度で播種した。４日間インキュベートした後、培地を、試験化合物を含有させた培地に交換した（試験１回当たり６回繰り返し）。細胞を更に７２時間培養し、その後培地を吸引除去し、プレートを−７０℃で少なくとも１．５時間貯蔵した。プレートを冷凍庫から取り出し、細胞を冷エタノール／アセトン１：１溶液で３０分かけて固定した。１００μｌ／ウェルのＨｏｅｃｈｓｔ染料（最終濃度１００μｇ／ｍｌ）を添加し、これを１５分間インキュベートし、被覆し、その後蛍光定量計（ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｅｒ；  ｅｘ．  ３６０ｎｍ及びｅｍ．  ４６０ｎｍ）の示度を読み取った。染料溶液を除去し、ウェルをＴＧアーゼアッセイに備えてＰＢＳで濯いだ。
【００４２】
実施例１
レチノイン酸はケラチノサイトの分化状態を変化させることにおいてレチノールよりも有効である
Ａ．  レチノイン酸及びレチノールを様々な濃度で添加した２４時間後に可溶性タンパク質１μｇ当たりの3Ｈ−チミジン取り込みへの影響を調べた。結果を表１Ａに示す。
【００４３】
【表１】
0003696332.tif 000003
【００４４】
試験した全濃度、即ち２．５×１０-7Ｍ、２．５×１０-8Ｍ及び２．５×１０-9Ｍのレチノイン酸はケラチノサイト増殖を、エタノール対照並びに濃度２．５×１０-7Ｍ、２．５×１０-8Ｍ及び２．５×１０-9Ｍのレチノールのいずれで処理した場合よりもはるかに増大させ、この増大は用量に応じていた。このような結果は、レチノイン酸が上皮増殖に対してレチノールより大きい刺激作用を有することに合致する。
【００４５】
Ｂ．  レチノイン酸及びレチノール添加後に、細胞のＤＮＡ含量に対して正規化したトランスグルタミナーゼレベルへの影響を調べた。結果を表１Ｂに示す。
【００４６】
【表２】
0003696332.tif 000004
【００４７】
試験した全濃度、即ち２．５×１０-7Ｍ、２．５×１０-8Ｍ及び２．５×１０-9Ｍのレチノイン酸はケラチノサイトのＴＧアーゼレベルを、エタノール対照で処理した場合より低下させ、かつ対応する濃度２．５×１０-7Ｍ、２．５×１０-8Ｍ及び２．５×１０-9Ｍのレチノールのいずれで処理した場合よりもはるかに大幅に低下させた。トランスグルタミナーゼレベルの低下はレチノイン酸でもレチノールでも用量に応じていた。このような結果は、レチノイン酸が上皮分化に対してレチノールより大きい抑制作用を有することに合致する。
【００４８】
実施例２
ジメチルイミダゾリジノンとレチノールとは相乗的にケラチノサイト増殖を促進する
Ａ．  試験化合物を添加した２４時間後に可溶性タンパク質１μｇ当たりの3Ｈ−チミジン取り込みへの影響を調べた。結果を表２Ａに示す。
【００４９】
【表３】
0003696332.tif 000005
【００５０】
２．５×１０-8Ｍのレチノイン酸はケラチノサイトのチミジン取り込みをエタノール対照で処理した場合より２８％増大させ、また２．５×１０-8Ｍのレチノールで処理した場合と比べても著しく増大させた。１０-9Ｍのジメチルイミダゾリジノンは、それ自体はケラチノサイト増殖に影響しなかった。しかし、２．５×１０-8Ｍのレチノールと１０-9Ｍのジメチルイミダゾリジノンとの組み合わせはケラチノサイト増殖を、エタノール対照（２０％増）及び２．５×１０-8Ｍのレチノール対照（２３％増）のいずれで処理した場合よりもはるかに増大させた。即ち、ジメチルイミダゾリジノンとレチノールとは相乗的に作用して、ケラチノサイト増殖をレチノイン酸の刺激作用に近似するレベルまで増大させる。
【００５１】
実施例３
レチノール及びジメチルイミダゾリジノンがもたらすケラチノサイト増殖の相乗的増大はＲＨＯ対ジメチルイミダゾリジノン比が６０：１から１：１６０の時最も有効に実現する
レチノールの効用を高めるのに最も有効なレチノール対ジメチルイミダゾリジノン比の範囲を決定するべく、レチノール及びリノレアミド−ＤＥＡを異なる量比で添加した２４時間後に可溶性タンパク質１μｇ当たりの3Ｈ−チミジン取り込みへの影響を調べた。得られた結果を、（レチノールと）等モル濃度のレチノイン酸の影響、並びにそれぞれ単独で用いたレチノール及びジメチルイミダゾリジノンの影響と比較した。結果を表３Ａに示す。
【００５２】
【表４】
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【００５３】
レチノイン酸での処理を正対照として行なったところ、試験した全濃度、即ち２．５×１０-7Ｍ、２．５×１０-8Ｍ及び２．５×１０-9Ｍのレチノイン酸はケラチノサイト増殖を、エタノール対照並びに濃度２．５×１０-7Ｍ、２．５×１０-8Ｍ及び２．５×１０-9Ｍのレチノールのいずれで処理した場合よりもはるかに増大させた。レチノール濃度を２．５×１０-7Ｍ、２．５×１０-8Ｍ及び２．５×１０-9Ｍとし、ジメチルイミダゾリジノン濃度を１０-6〜１０-9Ｍとしたレチノールとリノレアミドとの５種の組み合わせを試験した。従って、レチノール対ジメチルイミダゾリジノン比は表３Ｂに示したように６０：１から１：１６０であった。表３Ｂに示した相乗的増大はＲＯＨ＋ジメチルイミダゾリジノン処理がもたらしたチミジン取り込みの、対照で処理した場合を１００％とした時のパーセンテージに等しく、ＲＯＨ単独処理の影響とジメチルイミダゾリジノン単独処理の影響とを併せたものを上回る。上記５種の組み合わせはいずれも、可溶性タンパク質１μｇ当たりの3Ｈ−チミジン取り込みの相乗的増大を示した。増大した細胞増殖は統計的に有意であった。傾向は明らかであり、レチノールとジメチルイミダゾリジノンとの少なくとも６０：１から１：１６０の比での組み合わせはケラチノサイトの細胞増殖を相乗的に増大させる。
【００５４】
【表５】
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【００５５】
実施例４
ジメチルイミダゾリジノンとレチニルパルミテートとは相乗的にケラチノサイト増殖を促進する
Ａ．  試験化合物を添加した２４時間後に可溶性タンパク質１μｇ当たりの3Ｈ−チミジン取り込みへの影響を調べた。結果を表４Ａに示す。
【００５６】
【表６】
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【００５７】
２．５×１０-8Ｍのレチノイン酸はケラチノサイトのチミジン取り込みをエタノール対照で処理した場合より６％増大させ、また２．５×１０-8Ｍのレチニルパルミテートで処理した場合と比べても増大させた。１０-7Ｍのジメチルイミダゾリジノンは、それ自体はケラチノサイト増殖に影響しなかった。しかし、２．５×１０-8Ｍのレチニルパルミテートと１０-7Ｍのジメチルイミダゾリジノンとの組み合わせはケラチノサイト増殖を、エタノール対照（１０％増）及び２．５×１０-8Ｍのレチニルパルミテート対照（１３％増）のいずれで処理した場合よりもはるかに増大させた。即ち、ジメチルイミダゾリジノンとレチニルパルミテートとは相乗的に作用して、ケラチノサイト増殖を増大させる。
【００５８】
Ｂ．  レチニルパルミテート及びジメチルイミダゾリジノンでの処理に応答するＴＧ１への影響を調べた。結果を表４Ｂに示す。
【００５９】
【表７】
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【００６０】
ケラチノサイトのＴＧ１レベルの抑制には２．５×１０-8Ｍのレチノイン酸での処理が最も有効であった（対照レベルの１５％にまで抑制）。２．５×１０-8Ｍのレチニルパルミテートも上記ＴＧ１レベルを対照レベルの７９％に抑制したが、レチノイン酸ほど有効ではなかった。１０-8Ｍのジメチルイミダゾリジノンは、それ自体はケラチノサイトのＴＧ１レベルに影響しなかった。しかし、２．５×１０-8Ｍのレチニルパルミテートと１０-8Ｍのジメチルイミダゾリジノンとの組み合わせはケラチノサイトのＴＧ１レベルを対照レベルの５７％に抑制した。即ち、ジメチルイミダゾリジノンとレチニルパルミテートとは相乗的に作用して、ケラチノサイト分化をレチノイン酸が抑制するのと同程度に抑制する。
【００６１】
実施例１〜４ではレチノイン酸を正対照及び基準化合物として用い、分析する他の化合物をそれと比較した。レチノイン酸は、用量に応じて皮膚ケラチノサイトのチミジン取り込みを増大させ、かつトランスグルタミナーゼＩレベルを低下させた。換言すれば、レチノイン酸はケラチノサイト増殖を増大させ、ケラチノサイト分化を減少させた。レチノールまたはレチニルパルミテートは、ケラチノサイト分化の抑制ではレチノイン酸よりはるかに有効でなく、ケラチノサイト増殖の増大では全く無効であった。
【００６２】
レチノールまたはレチニルパルミテートを、それ自体にはほとんど、または全く効用が無いジメチルイミダゾリジノンと組み合わせることによって、レチノールまたはレチニルパルミテートが培養ケラチノサイトに及ぼす作用をレチノイン酸の作用に近いレベルまで引き上げることができる。
【００６３】
ジメチルイミダゾリジノンは、レチノールまたはレチニルパルミテートと相乗的に作用してケラチノサイト増殖を増大させると共にケラチノサイト分化を減少させ、レチノイン酸の作用に類似の作用を実現する。
【００６４】
実施例５
この実施例には、本発明の組成物を含有する高内相油中水型エマルションを示す。
【００６５】
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【００６６】
実施例６
この実施例には、本発明の組成物を含有する水中油型クリーム剤を示す。
【００６７】
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【００６８】
Alfol 16RDはセチルアルコール。
【００６９】
実施例７
この実施例には、本発明の組成物を含有するアルコール性ローションを示す。
【００７０】
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実施例８
この実施例には、本発明の組成物を含有する別のアルコール性ローションを示す。
【００７１】
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実施例９
この実施例には、本発明の組成物を含有するサンケア用クリーム剤を示す。
【００７２】
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実施例１０
この実施例には、本発明の組み合わせを含有する非水性スキンケア用組成物を示す。
【００７３】
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1;  GECから入手可能な分子量50,000以上、25℃での粘度10,000cSt以上のジメチルシリコーンポリマー。
【００７４】
2;  Dow Corning Corp.から入手可能なジメチルシロキサン環状ペンタマー。
【００７５】
3;  Dow Corning Corp.から入手可能なジメチルシロキサンテトラマー。