(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
大豆、鳩麦、小麦胚芽及び米糠並びに茶を含む植物抗酸化組成物のＣ型肝炎及び慢性Ｃ型肝炎の消炎症剤であって、大豆、鳩麦、小麦胚芽及び米糠をそれぞれ独立に焙煎し、その後の粉砕、蒸煮、製麹、乾燥を経て得られた粉末をすべて混合した醗酵粉砕原料に、独立に焙煎し粉砕した油糧種子の粉砕物、独立に焙煎し粉砕した茶葉の粉末、独立に乾燥し粉砕した緑葉類の粉末及び独立に搾出した果実汁からなる混合粉砕物を添加して混合し、これを造粒してなり、かつ
前記油糧種子が胡麻であり、前記緑葉類が大根葉及びほうれん草の少なくとも一方であり、前記果実汁がレモン及び柚子の少なくとも一方の汁であり、かつ
前記大豆、鳩麦、小麦胚芽及び米糠の重量配合割合が２：１：１：２であり、かつ
前記醗酵粉砕原料の８５〜９０重量部に対し、前記茶葉及び緑葉類の粉末及び前記果実汁５〜１０重量部並びに前記油糧種子５重量部の割合で添加して混合することを特徴とする植物抗酸化組成物のＣ型肝炎及び慢性Ｃ型肝炎の消炎症剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は肝炎、慢性肝炎、肝硬変のような肝臓障害をおこしている人へ薬効のある薬効組成物、特にＣ型肝炎及び慢性Ｃ型肝炎の消炎症剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
酸化的ストレスは老化、動脈硬化症、癌、炎症病態、エイズ、放射線障害、虚血再灌流障害など多くの病態が関与している（文献１、文献リスト参照。以下、同じ。）。ウィルス性肝炎に酸化−抗酸化バランスの変化が関与していることが示唆されている。
＜慢性Ｃ型肝炎における酸化的ストレス＞
慢性Ｃ型肝炎では脂質および蛋白質の酸化が起こり、血清中のマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）やカルボニル蛋白質の量が上昇している（文献２〜５）。血漿中の抗酸化能を反映する総チオール量（ｔ−ＳＨ）が減少している（文献６〜８）。また、慢性Ｃ型肝炎における鉄の役割についてもいくつかの報告があり、肝の貯蔵鉄の上昇（文献９）、高フェリチン血症（文献１０）、瀉血による鉄の除去治療（文献１１〜１２）などが報告されている。肝炎患者の単球のマンガンＳＯＤの転写活性の上昇は酸化的ストレスに対する適応反応であるとされた（文献１３）。腫瘍壊死因子ＴＮＦ−αのようなサイトカイン（cytokine） はコンピテント細胞によってスーパーオキシドが産生され、その量は過剰に産生されることが知られている（文献１４）。
【０００３】
発明者らは慢性Ｃ型肝炎患者の血漿に染色体異常誘発性、たとえば染色体の傷害が見られることを示した（文献１５）。"染色体断裂因子"や"染色体異常誘発因子（以下、ＣＦともいう）"などの語は１９７０年代初期に放射線を浴びたヒトにこのような現象が見つかって以来、血漿中の活性を示すものとして生物学的用語として用いられている。染色体異常誘発活性は特異的な因子ではないが、染色体の傷害性のある血中の酸化物の混合物として表される。ＣＦは膜のリン脂質から遊離したアラキドン酸の過酸化物や、ＴＮＦ−αのようなサイトカインだけでなく、イノシン三リン酸や二リン酸などの通常見られない核酸が含まれる。このような成分の染色体傷害性は比較できる市販の標準物質を使ってそれぞれ確認された。ＣＦは内因性の染色体異常であり、それらの同定は外因性のクラストーゲン（染色体断裂物質）投与の研究で良く知られた細胞遺伝学的手技で行われる（文献１７）。
【０００４】
ＣＦ形成や染色体異常誘発効果はスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）によって通常抑制されるので、スーパーオキシドを介する染色体異常誘発が提唱されてきた（文献１８）。ＣＦテスト陽性はＨＩＶ感染患者だけでなく、リウマチ、進行性動脈硬化症、全身性紅斑性狼瘡（全身性エリテマトーデス）、クローン病、潰瘍性大腸炎、家族性地中海性熱、ベーチェット病などでも見られる（文献１９）。ＣＦは酸化ストレスの生体マーカであり、抗酸化剤の投与で消失する。
【０００５】
＜慢性Ｃ型肝炎におけるＣＦ形成＞
最近の報告（文献１５）では、慢性Ｃ型肝炎患者の２０人中１９人が染色体異常誘発因子が血漿に見いだされた。脂質過酸化の指標である血漿マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）の増加や血漿中抗酸化活性を反映する総チオール量（ｔ−ＳＨ）の減少といった他の生物学的指標もほとんどの患者で見られた。これらの３つの指標は２０人の正常人とは有意に異なっていた（危険率＜０．００１）。アミノトランシフェラーゼ（ＡＬＴ）はすべての患者で上昇していたが、ＡＬＴと酸化ストレスのマーカ（ＣＦ，ＭＤＡ，ｔ−ＳＨ）との相関は有意ではなかった。ＨＣＶ−ＲＮＡのコピー数は患者により非常にばらついていた。個々の結果においてウイルス量、染色体異常誘発活性、ＭＤＡ，ｔ−ＳＨおよびＡＬＴの間に相関関係はなかった。組織学的データ（Spearman rank-order test)との相関をみると、肝生検におけるＣＦと壊死炎症スコアに有意な相関がみられた（危険率＜０．０３）。ＣＦと繊維化に相関は見られなかった。反対に、ＭＤＡは繊維化と相関したが、壊死炎症とは相関しなかった。
【０００６】
培養系に添加されたＳＯＤの抗染色体異常効果のみならず、別の起源のＣＦが同じ血漿中に見いだされたという事実は肝炎患者のＣＦ成分に相同性があることを示唆する。慢性炎症病態の発明者らの前報告では、ＣＦ形成に単球が関与していることがわかった。少量のスーパーオキシドが単球−マクロファージからＣＦの染色体異常誘発成分のひとつであるＴＮＦ−αを遊離させる。いいかえれば、ＴＮＦはそれらの細胞を刺激し、さらにスーパーオキシドとＣＦを遊離させる。
このことは酸化ストレスの持続につながる（文献２０）。肝のクッパー細胞は生体内のマクロファージの大部分を占める。それらは、活性酸素やエイコサノイド、サイトカインなどさまざまなメディエーターを遊離することが知られている（文献２１）。クッパー細胞はおそらく慢性Ｃ型肝炎におけるＣＦの主な起源となっているであろう。貧食細胞のスーパーオキシド産生能は非感染性細胞より感染性細胞の方が約８倍高い（文献２２）。ＡＴＰの分解によるキサンチンおよびヒポキサンチンの増加に伴い、キサンチンオキシダーゼ活性の増加がウイルス感染組織のスーパーオキシド発生源と考えられている。発明者らはアデノシンをイノシンに不可逆的に脱アミノ化する酵素であるアデノシンデアミナーゼの著明な上昇も報告している。他のＣＦの染色体異常誘発成分であるイノシン三リン酸の形成はアデノシンデアミナーゼの上昇の結果であり、ウイルス性肝炎の患者で上昇している。
【０００７】
＜インターフェロン−αによる慢性Ｃ型肝炎の治療＞
ＩＦＮ治療は慢性Ｃ型肝炎の治療で通常行われているものである。一週間に三回３００〜５００万ユニットの用量のＩＦＮ−αを１２ヶ月治療すると、患者の約２０％でＨＣＶ−ＲＮＡのクリアランスが維持できた。２０人の患者のうち９人が血清ＡＬＴ値が正常化した（文献値は約４０％が正常化）。発明者らのデータはＡＬＴの正常化と酸化ストレスの生物学的指標の正常化と相関した。Higueras（文献５）はインターフェロン治療後患者の血漿中でＭＤＡの減少と血漿チオール量の増加を示した。酸化ストレスにおけるＩＦＮの効果は抗酸化剤やフリーラジカル消去作用ではなく抗炎症作用や抗ウイルス作用である。
【０００８】
＜慢性Ｃ型肝炎の抗酸化物質による治療＞
慢性Ｃ型肝炎の病態の進行におけるフリーラジカルの役割を考えると、慢性Ｃ型肝炎の患者は抗酸化剤やフリーラジカル消去剤で治療することで良くなる可能性がある。有望な報告として、Ｎ−アセチルシステインで治療したものがあるが、二重盲検臨床試験で確かめられたわけではなかった（文献２５）。高用量でのビタミンＥ（１２００ＩＵ／ｄａｙ×８週）はインターフェロンに感受性のあった６人の患者で伊東細胞の活性化やコラーゲン遺伝子発現を抑制した。しかしながら、この治療によって血清ＡＬＴ、ウイルス量、肝細胞炎症および繊維化は抑制しなかった（文献２６）。インターフェロンに感受性のあった別の患者では１２週間の８００ＩＵのＲＲＲ−α−トコフェノールが２３人中１１人が４６％までＡＬＴ量が減少した（文献２７）。抗酸化剤の有用性の評価はインターフェロン単独または併用においてさらに研究する価値がある。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
このように、従来より肝臓病その他にも各種消炎症剤が用いられてきた。慢性肝炎、肝硬変、肝癌というのは、続いて起こる病気であつてこの進行は従来の医療は勿論のこと、これを防ぐような方法は効率は悪いがインターフェロン（ＩＦＮ）以外無かった。しかしこれも肝炎又は初期の慢性肝炎以外殆ど効果が無かった。
【００１０】
肝臓の組織が改善されても、肝臓の増殖が速やかに行なわれなければ再び線維が生成し、その作用が無くなってしまう。肝臓は増殖力が旺盛ではあるが、これは一般の正常なものであって、慢性肝炎や特に肝硬変となったり、更に肝癌になればその増殖力は低下している。
本発明は、かかる事情に鑑みかかる問題を解決するためになされたものであり、本発明の目的は、日常の食事を取りながら毎日簡単に摂取出来る形態にした、生体内の高い抗酸化作用を有し胸やけをもたらすことなく容易に消化される生体抗酸化組成物からなるＣ型肝炎及び慢性Ｃ型肝炎の消炎症剤を提供することにある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
発明者は大豆、小麦、米胚芽、小麦胚芽、鳩麦、緑茶、ユズ、緑葉および麦芽などの発酵物の混合物がとくに低分子になるほど肝細胞増殖力を増す性質を持っていることを見出だしたのである。慢性肝炎から肝硬変への移行を抑制し、肝硬変では線維が減少してその間に肝細胞が増殖し肝機能がよくなってくるという画期的な作用をもっていることも見出したのである。
【００１２】
本発明者は長年わたる研究の結果、ある特定の発酵物の組成物を必須成分とする消炎症剤が薬効を奏することを見出し、本発明を完成するに到ったものである。本発明は、食用米麦類及び豆類並びに食用米麦類及び豆類の胚芽又は糠の発酵粉砕物からなる抗酸化組成物であって、複数種の食用米麦類及び豆類並びに食用米麦類及び豆類の胚芽又は糠をそれぞれ独立に焙煎し、焙煎したものを独立に粉砕し、粉砕したものを独立に蒸煮し、蒸煮したものを独立に製麹し、製麹したものにアルコールを独立に添加して発酵を停止し、発酵停止したものを独立に乾燥してアルコールを除去し、乾燥した粉末をすべて混合して第１の発酵粉砕原料を生成し、焙煎した食用種子類並びにビタミンＣ及びビタミンＣ誘導体を含有する植物体を独立に粉砕し、粉砕したものをすべて混合して第２の粉砕原料を生成し、第１及び第２の粉砕原料を混合し、これを造粒してなることを特徴とする。
【００１３】
本発明者は、得られた植物組成物が高い生体抗酸化作用（余剰活性酸素の消去作用と脂質の過酸化反応を阻止する作用）を有しかつ胸やけをもたらすことなく容易に消化されるすることを見いだした。本発明の自然の抗酸化組成物に用いられる食用米麦類及び豆類としては、米、小麦、大豆、とうもろこし、鳩麦、小豆等が例示される。なかでも大豆、鳩麦を用いることが好ましい。また、胚芽としては、これら食用米麦類及び豆類の胚芽が例示されるが、小麦胚芽、米糠等が好んで用いられる。なお、これらは複数種で用いているのが良い。
【００１４】
個々の食用米麦類及び豆類の好適な組合せとしては、大豆、鳩麦、小麦胚芽及び米糠が挙げられ、その使用量は、各々重量で２：１：１：２の配合割合が例示される。これらの原料はできるだけ高品質で新鮮なものを用いることが好ましい。特に、胚芽、中でも糠は酸化され易いので精米直後のものを用いることが好ましい。
【００１５】
本発明の製造の焙煎工程における焙煎とは、食用米麦類及び豆類等の原材料中の有効成分の重合を解き、低分子化するために必要な熱を、焦がさないような条件で与えることを指す。それぞれの焙煎温度は食用米麦類及び豆類の種類や加熱時間によって異なるが、８０〜９０℃で５〜６時間じっくり焙煎する。加熱方法も、種子や胚芽等の粒子の内層と外層の温度差が小さくなるように均一に加熱できるような手段を採用することが必要である。そのために遠赤外線による加熱、恒温槽による均一な加熱、流動床による加熱等が採用されるが、石や陶器などの釜又は容器を用いることが好ましい。
【００１６】
各食用米麦類及び豆類原料をそれぞれ焙煎したあと、粉砕工程で種類別に粉末にする。この場合、製麹工程で種麹と良く混合するための粉砕なので、必ずしも微粉末にする必要はない。粉砕工程の後、焙煎した粉末をそれぞれ蒸煮工程で蒸煮する。蒸煮は通常の方法によれば良いが、蒸煮しすぎないように注意する。蒸煮は、次の発酵を容易にするためであるが、蒸煮しすぎると発酵が進み過ぎるので、粉末に若干の湿り気を与える程度でよい。
【００１７】
蒸煮工程の後、発酵のため種麹を蒸煮した粉末に種付けする。ここで発酵とは、微生物により有機物を分解することを意味し、代謝物が単純な化合物になる場合のみを指すものではない。例えば、麹かびやイースト等による穏和な分解も包含し、むしろ好ましい。この発酵過程において麹かび等に含有されているアミラーゼやプロテアーゼ等の酵素作用により、蛋白質等の低分子化が進み、生体への浸透が容易となって抗酸化作用が強化される。
【００１８】
この製麹工程においては、蒸煮した粉末の種類ごとに種付けをする。種麹は粉末が良く、３種類ぐらい用意し、粉末の種類ごとに異なる種麹を充分に混ぜ合わせて行なうことが好ましい。種付けを終えた粉末を、容器（陶器又はプラスチック製）に移し、発酵させる。熟成温度は３５〜３６℃で最低３日から２週間を要する。気温や湿度によって日数は変動するので温度管理には充分な配慮をしなければならない。かかる熟成中に抗酸化性物質が生成される。
【００１９】
製麹工程の後、製麹したものにアルコールを独立に添加し撹拌して発酵を停止させる。発酵停止したものを独立に乾燥してアルコールを除去し、それぞれ麹原料を直ちに乾燥工程で乾燥する。乾燥は通常の乾燥器を用いるが、乾燥温度は１００℃以下で行なう。
乾燥後の麹原料をそれぞれ粉砕し、得られた各粉末を全量混合する。粉砕方法は限定されず、粉末をタイラー標準篩４００メッシュ程度の微粉末にすることが好ましい。微粉末にすることによって、これら生体の体内での成分吸収も向上する。このようにして第１混合物である発酵粉砕原料を得る。一方、混合して得られる発酵粉砕原料とは別に、食用種子類を焙煎して摺りつぶしたマッシュ状の粉砕物と、ビタミンＣ又はビタミンＣ誘導体を含有する植物体の粉砕物と、を混合攪拌した第２混合物を用意する。
【００２０】
ここで食用種子類としては、胡麻、大豆、とうもろこし、菜種等が挙げられるが、胡麻が最適である。これは胡麻には脂質の過酸化を抑制するビタミンＥが多く含まれているからである。これら食用種子類は前述した焙煎工程を経なければならない。また、ビタミンＣ又はビタミンＣ誘導体を含有する植物体としては緑茶葉、大根の若葉、レモン、柚子、ほうれん草等（以下、ビタミンＣ野菜と略す）が例示されるが、これらに限定されない。レモン、柚子などは果汁として用いられる。これらの中では緑茶葉が最も好ましいので、これに大根の若葉と柚子汁を加えたものを用いる。これにより食用種子類の酸化が防止される。これら緑茶葉及び大根の若葉を乾燥し、粉砕して用いるのが好ましい。とくに緑茶葉については、通常の加熱方法で炒りながら乾燥させ粉末にしていくが、タイラー標準篩５００メッシュを全量通過するように微粉末にして用いることが好ましい。
【００２１】
これらの食用種子類のマッシュ状の粉砕物及びビタミンＣ又はビタミンＣ誘導体を含有する植物体の粉砕物の各使用割合は、代表的な例を挙げれば、第１混合物である発酵粉砕原料の８５重量部に対しビタミンＣ野菜１０重量部、食用種子類５重量部、又は発酵粉砕原料の９０重量部に対しビタミンＣ野菜５重量部、食用種子類５重量部を用いる。
【００２２】
次に、前記の緑茶葉、胡麻、大根の若葉、柚子汁の第２混合物と、別途調製した第１混合物である前記発酵粉砕原料と混合し、充分攪拌する。この混合工程を終えた混合物が仕上げ原料粉となる。仕上げ原料粉には水分が１２％程度含まれており、そのままでは再発酵の恐れがあることや、生成物の化学反応に際する移送性を改善するために、原料粉を造粒工程にかける。造粒は、流動造粒乾燥機を用いて真空内乾燥を行いながら造粒する。こうしてはじめて抗酸化組成物が完成する。
【００２３】
【発明の実施の形態】
以下、本発明による実施例を図面を参照しつつ具体的に説明する。
＜抗酸化組成物からなるＣ型肝炎及び慢性Ｃ型肝炎の消炎症剤の調製＞
新鮮な大豆３０重量部、小麦胚芽１５重量部、鳩麦１５重量部及び精米直後の糠３０重量部を、図１のステップ１に示すようにそれぞれ個別に焙煎した。すなわち、大豆、小麦胚芽、鳩麦及び糠をそれぞれ恒温槽内において温度８０℃で５時間だけ均一に加熱した。その後これら種子を、図１のステップ２に示すように粉砕し粉末にした。
【００２４】
焙煎した粉末を、図１のステップ３に示すようにそれぞれ温度１１０〜１２０℃で３０分だけ蒸煮した。次に、麹かびを蒸煮した粉末に充分に混ぜ合わせて種付けした。種付けを終えた粉末を、陶器容器に移し、温度３５〜３６℃で２週間だけ、図１のステップ４の製麹工程にて発酵させた。
製麹後、図１のステップ５の工程にて製麹したものにアルコールを独立に添加し撹拌して発酵を停止させる。発酵停止したものを、図１のステップ６の工程にて独立に温度１００℃で乾燥してアルコールを除去する。乾燥後の麹原料をそれぞれタイラー標準篩４００メッシュ程度の微粉末に粉砕した。
【００２５】
図１のステップ７の工程にて、得られた各粉末を全量混合し、発酵粉砕原料（第１混合物）を得た。一方、発酵粉砕原料とは別に、図１のステップ８，９の工程にて、胡麻を焙煎して摺りつぶしマッシュ状のものを調製した。また、緑茶葉を図１のステップ１０，１１の工程にて、炒りながら乾燥し、タイラー標準篩５００メッシュ程度の微粉末を調製した。
【００２６】
さらに、大根の若葉を図１のステップ１２，１３の工程にて、炒りながら乾燥し、タイラー標準篩５００メッシュ程度の微粉末を調製した。柚子を図１のステップ１４の工程にて、圧搾して果汁を絞り柚子汁を調製した。これら胡麻マッシュ並び緑茶葉粉末と大根の若葉と柚子汁とを図１のステップ１５の工程にて全量混合し、第２混合物を得た。
【００２７】
これら第１及び第２混合物を、図１のステップ１６の工程にて、充分混合攪拌し原料粉を調製した。使用配合割合は、第１混合物の８５重量部に対し、ビタミンＣ野菜（緑茶葉粉末と大根の若葉と柚子汁）１０重量部、胡麻マッシュ５重量部を用いた。原料粉を図１のステップ１７の工程にて、造粒し抗酸化組成物を得た。
【００２８】
上記により得られた抗酸化組成物（以下、ＡＯＢと略す）の脂質過酸化抑制作用を動物実験により確認した。
（実験方法）動物はすべて雄性のＳＤラット（Sprague-Dawley rat）（体重：２００ｇ〜２２０ｇ）を用いた。
in vitro実験ではＡＯＢは０．５％ＣＭＣ懸濁液として用いた。また、ラット脳ホモジネートにおける脂質過酸化はＴＢＡ反応性物質（ＴＢＡＲＳ）を測定することによって指標とした。ex vivo実験においては、ラットを個別ケージで飼い、対照群には粉末の基本食のみを与え、ＡＯＢ群にはその基本食に１ｇ又は５ｇのＡＯＢを混ぜ、混餌飼料として与えた。これらのラットを１又は３日飼育し、その後血獎を採取してＥＳＲ法のサンプルとした。スピントラッピング剤としてDMPO（5,5-dimethyl-1-pyrroline-1-oxide）を用い、ＥＳＲ分光計（JEOL-JES-FR80：日本電子会社製)にてヒポキサンチン−キサンチンオキシダーゼ系によるスーパーオキシド生成系を用いてＡＯＢ懸濁液及び血獎中のスーパーオキシド消去作用を調べた。
【００２９】
その結果、ＥＳＲスピントラッピング法において、ＡＯＢ群はin vitro及びexvivo実験共に強いスーパーオキシド消去作用を示した。ＡＯＢ懸濁液におけるスーパーオキシドの５０％抑制量は４２μg/mlであった。また、１２倍稀釈した対照群の血獎はＳＯＤ活性に換算して0.152±0.017U/mlであったが、ＡＯＢをlg/day/ratで１日又は３日飼育した後のＡＯＢ群の血獎は0.233±0.01U/ml、0.280±0.042U/mlの活性を示した。同様に5g/day/ratで飼育したＡＯＢ群の血獎は0.233±0.016U/ml、0.280±0.042U/mlの活性を示した。さらに、ＡＯＢ群はラット脳ホモジネートの脂質過酸化を強く抑制し、その５０％抑制率は８μg/mlであった。
【００３０】
従って、フラボノイド類、タンニン、トコフェロール類、アスコルビン酸等を含むＡＯＢは大変強い抗酸化作用を有している。このＡＯＢの強い抗酸化作用はその中に含まれる成分の発酵により得られた物質の相加相乗作用によって現われ、従来のものより油分が極めて少ないので、酸化油による過酸化脂質の増加がないためと推定される。
【００３１】
発明者は、ＡＯＢ活性酸素抑制組成物が、植物油を含有していないので、唾液、胃液の分泌が少ない老人が摂取した場合、胃垂れて胸やけなく容易には消化されることを確認した。本発明による、複数種の食用米麦類及び豆類並びに食用米麦類及び豆類の胚芽又は糠をそれぞれ独立に焙煎し、その後の粉砕し、その後の蒸煮し、その後の製麹し、その後のアルコールによる発酵停止を経て乾燥した粉末をすべて混合した第１混合物に、粉砕された食用種子類及びビタミンＣ又はビタミンＣ誘導体を含有する植物体の粉砕物を添加して混合し、これを造粒してなる抗酸化組成物は、生体内の高い抗酸化作用を有し胸やけをもたらすことなく容易に消化される。
【００３２】
＜慢性Ｃ型肝炎のＡＯＢによる治療＞ＡＯＢは大豆、小麦、米胚芽、小麦胚芽、鳩麦、緑茶、ユズ、緑葉および麦芽などの発酵物である。ＡＯＢの成分は表１に示す。
【００３３】
【表１】
0003710365.tif 000002
ＡＯＢは日本食品分析センターで分析され、試験結果としてその成分リストを表２〜表６に示す。
【００３４】
【表２】
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【００３５】
【表３】
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【００３６】
【表４】
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【００３７】
【表５】
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【００３８】
【表６】
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【００３９】
高濃度存在するルチンに加え、ＡＯＢには、イソフラボンダイゼンやチロシンキナーゼの阻害剤や抗癌作用が良く知られたゲニステインが含まれている（文献２８）。大豆から抽出されたゲニステインは、ラット大腸の前癌病変形成をもっとも有効に阻止した（文献２９）。ゲニステインおよびダイゼンは培養系においてヒト肝細胞癌の増殖を抑制した（文献３０）。このことは中国や日本において大豆食品の消費が乳癌、大腸癌、前立腺癌が比較的少ない原因となっているのかもしれない（文献３１）。
【００４０】
ＡＯＢのスーパーオキシド消去作用はヒポキサンチン−キサンチンオキシダーゼのような化学的スーパーオキシド生成系をもちいて電子磁気共鳴装置で測定されている（文献３２）。細胞によって生成されるスーパーオキシド消去作用も刺激好中球によって示されている（文献３３）。ＡＯＢは非常に強い脂質過酸化反応やラット脳ホモジネートの自動酸化を阻害する（文献３４）。ＡＯＢの成分の抽出物のそれぞれの成分を試すとほとんど効果がなかった。脂質過酸化の抑制率はＡＯＢすべてで６４．６％に比し、緑茶が２．８％、小麦胚芽が６．６％であった。よって、ＡＯＢの強いスーパーオキシド消去作用は抗酸化性があることが知られている様々なフラボノイドやオリゴ成分、ビタミンなどの相乗効果であると考えられる。
【００４１】
ＡＯＢは高用量でわずかな下痢が見られる以外ほとんど副作用はない。それは慢性ストレスや疲労、病後の回復期、外科的処置や放射線治療、ヘビースモーカ、太陽光線照射後、激しい運動、老化に伴う傷害などで効果が確認されている。発明者はチェルノブイリ原爆事故を回復する労働者（整理人：リキデータ）にＡＯＢを投与して効果があることを報告した（文献３５）。これまで述べたように、ＣＦは放射線を浴びた人の血漿に見られた。２０人中１１人のリキデータを毎年チェックしているものがあるが、彼らは運び込まれた順に研究に加えられた。ＣＦテストの結果は採血後、抗酸化剤が与えられた時には判らなかったので、ＣＦ−陽性にも陰性のリキデータにも抗酸化剤が３×６ｇ、３ヶ月間与えられた。血漿中ＣＦ陽性リキデータの染色体異常誘発活性はほとんど正常に戻った（ｐ＜０．００１）。これは休薬しても１２ヶ月間続いていた。治療前に染色体異常誘発性のないリキデータの血漿の値は実際にはそのままであった。与えられたごく少数の場合や短期間の観察でリキデータの臨床的改善がみられなかった例があった。２０人のリキデータが月に２度薬を取りに病院を訪れるということは一般的な状態が良くなっていると理解できるであろう。実際、リキデータの大半が労働能力が改善されたと報告した。副作用は見られなかった。
【００４２】
これらの勇気づけられる結果が得られた後、慢性Ｃ型肝炎患者をＡＯＢで治療したときの酸化ストレスに及ぼす影響を検討した。ＡＯＢはリキデータの時と同様に３ヶ月間×６ｇ与えられた。ＡＯＢ投与群は同じ様相であり、外観も同じであるプラセボと比較された。患者の治療に関与していないヒトによってランダムに封筒にいれられ管理された。試験に参加した人すべてに書面による許可を得た。群分けの基準は臨床的、生化学的、特にＣ型肝炎ウイルスの陽性抗体を持っているか否かによって分けられた。肝生検が治療の前に行われた。除外した基準としてアルコール中毒、たばこ中毒、以前インターフェロン治療を受けたり他の抗酸化剤を飲んでいる人とした。
【００４３】
インターフェロン療法の場合、血漿中の酸化ストレスの３つのマーカ：ＣＦ−テスト、ＭＤＡ（八木法）、総ＳＨ量（エールマン法）を測定した。血液は治療前日に採血し、治療終了後休薬１日目および三ヶ月後に採血した。現在、それぞれ７人のＡＯＢとプラセボ（Placebo）投与群について終了している。これらの１４人のＣＦ，ＭＤＡ，ｔ−ＳＨ量，ＡＬＴ値に関して下記表７（ＡＯＢ及びPlaceboによる治療前後の酸化ストレス生体マーカ及びアラニンアミノトランシフェラーゼ の値）に示す。
【００４４】
【表７】
0003710365.tif 000008
【００４５】
ＡＯＢ投与群患者において、ＣＦは正常レベルに回復し、リキデータ群でも述べたように休薬後も正常であった。反対にプラセボ群は３ヶ月後の染色体異常誘発活性の減少はみられず、休薬後３ヶ月後も最初の値を示していた。
ＡＯＢ投与群患者において、ＭＤＡはプラセボ群よりＡＯＢ群の方が減少したが、ＣＦ値が下がった後も有意に高値を示した。
【００４６】
ＡＯＢ投与群患者において、血漿チオールはわずかに両群で上昇したが、正常に比較して低値のままであった（表７）。低ＳＨは肝が循環グルタチオンの主な源であるので、酸化障害というよりむしろ肝機能不全が反映する可能性が考えられる。
ＡＬＴ値の平均はＡＯＢ群で治療後有意に低くなり、個々の結果においても同様であった。これらは休薬後再び上昇する傾向にあった。実際、プラセボ群では変化しなかった。
【００４７】
表８はＡＯＢ群とＩＦＮ群を比較した結果である。
【００４８】
【表８】
0003710365.tif 000009
【００４９】
両群において、染色体異常誘発活性は低下したが、その減少はＩＦＮよりＡＯＢのほうが重要である。ＭＤＡの量は両群で減少したが、正常より高値であった。ＳＨも同様であり、上昇するもののまだ低値であった。ＡＬＴ量はＡＯＢ投与時にＩＦＮ群より高値であったが、ＩＦＮ群以上に回復した。この値は投与過程で正常に戻ることはなかった。肝生検およびＨＣＶ−ＲＮＡの結果についてはまだ検討中である。
【００５０】
更に、この臨床試験の他の２症例について述べる。
＜第１症例＞
患者Ｆ．Ｍ．１９９５年の終わりに慢性Ｃ型肝炎の診断、１９９７年３月に３×６ｇ、３ヶ月間、ＡＯＢ治療始める、その後、２×６ｇ、治療前、ＣＦテストは中等度の染色体異常誘発活性の上昇（＋８％）が見られた。ＡＬＴは１２１ＩＵ／Ｌ．１９９７年７月に正常になり、ＣＦは陰性、ＡＬＴは４９ＩＵ／Ｌに減少。患者はかなり良いと感じて、ＡＯＢを一日３ｇ続けることを決心。ＡＬＴは１９９８年１０月にも正常化し、正常値の３０ＩＵ／Ｌになる。１９９８年１０月患者はＡＯＢを休薬。１９９９年４月も正常値（ＡＬＴ２７ＩＵ／Ｌ，ＡＳＴ１８ＩＵ／Ｌ）。
【００５１】
治療開始時、ウイルス血症、９５０００ｃｏｐｉｅｓ／ｍｌ．１９９９年５月にウイルスＲＮＡ検出されず。患者は６ヶ月前の１９９８年１０月にＡＯＢを休薬していたので、この結果は"持続的効果があったもの"として分類。患者はインターフェロンも他の抗酸化剤も投与されていない。
＜第２症例＞
患者Ｐ．Ｌ．１９８８年定期検診で慢性Ｃ型肝炎と診断される。１９９５年に１０ヶ月のインターフェロン治療でかなりトランスアミラーゼは低下したが、ＨＣＶ−ＲＮＡウイルス血症は残る。治療は患者にとってあまり耐えられなかった、白血球減少症も１９９５年の終わりに治療をうち切った理由であった。１９９６年４月に患者は３ヶ月間のＡＯＢ治療（３×６ｇ）を開始した時、肝生検のデータは肝硬変をともなった慢性Ｃ型肝炎であることが示された（ Metavirのスコア、Ａ２Ｆ４，Ａ＝悪性度、Ｆ＝繊維化）。トランスアミナーゼは正常値の４〜５倍、ＣＦテストは高度陽性（＋１６％）。３ヶ月後、トランスアミナーゼは１５４ＩＵ／Ｌ，ＣＦテスト陰性。患者は１９９６年終わりまでＡＯＢを１日２×６ｇの用量で続け、その後１９９７年終わりまで２×３ｇを続けた。この間ＣＦテストは陰性のままであった（６つ正常）が、ＡＬＴが正常の３倍に上昇。患者の一般症状は改善し、インターフェロン治療の間はできなかった働くことが可能となった。画像診断による肝癌の疑いに加え、α−フェトプロテインの上昇が１９９７年１２月肝移植の決定が行われた。その時の肝機能はまだ満足いくものであった。患者は手術の日までＡＯＢを服用、肝癌の疑いのあった３つのゾーンが組織学的に検討された結果、悪性細胞はなく、診断は"再生"であった。
【００５２】
移植された肝臓はよく耐え、患者はコルチゾンやプログラフのような免疫抑制剤を投与された。ＡＯＢは手術日から休薬した。患者の一般症状は満足のいくものであった。しかしながら、移植後５ヶ月の１９９８年５月に肝炎再発、トランスアミナーゼは正常の６倍に上昇。ＣＦテストは強陽性（＋１８％）。肝生検は中等度の肝炎（Ａ２Ｆ０）を示した。患者の要望により、ＡＯＢが３ヶ月間一日３×６ｇ、さらに２×６ｇの用量で治療スケジュールに加えられた。ＣＦテストは２ヶ月後に陰性になり、ＡＬＴはゆっくり低下したが、約１００ＩＵ／Ｌの高値が続いた。移植後１年後の肝生検によると、Metavierのスコアは悪性度が０になり、繊維化がわずかに陽性のＡ０Ｆ１となった。患者は外国へたびたび旅行しカメラマンとして大変活動的で専門的な仕事をすることができている。ＡＯＢはこの症例では悪性化を阻止したが、肝の繊維化、硬変化には影響し得なかった。肝炎再発の急性期においては、ＡＯＢは炎症や壊死に作用した（Ａ２Ｆ０からＡ０Ｆ１へ）。
【００５３】
ＡＯＢからなる消炎症剤は慢性Ｃ型肝炎患者に有用な効果をもたらした。急性期および慢性期に、ＡＯＢはスーパーオキシド消去作用と抗酸化作用により壊死−炎症病変に影響する。ＡＯＢの早期の投与は繊維化や肝硬変への進行を防御するかもしれない。ＡＯＢの抗癌原生効果は肝癌の治療に大変興味深いところである。ＡＯＢが患者Ｊ．Ｍ．によって示されたように抗ウイルス効果があるかどうかはもう少し多くの患者と長期治療と観察を行わなければならない。
【００５４】
すでに述べたように、ＡＯＢの強いスーパーオキシド消去活性は様々な成分の相乗効果の結果である。抗酸化ビタミンやオリゴ成分がほんのわずかな量しか存在しないので、フラボノイドはもっとも活性の高いものの代表である。様々なフラボノイドがＡＯＢには存在する。それらの活性が分けて研究されていないのでそれぞれの同定されたフラボノイドは特許によって保護されるべきである。
【００５５】
インターフェロンに比較して、ＡＯＢは少なくとも効果的であり、患者の一般症状におけるＩＦＮの重篤な副作用を考えるとそれ以上の効果である。
ＮＡＣやビタミンＥなどの別の抗酸化物質は、効果がなく、ＡＯＢで得られたような良い結果は得られなかった。
（文献のリスト）
1)Sies,H. (ed): Oxidative stress. New York, Academic Press 1985。
【００５６】
2)Higueras V, Raya A, Rodrigo JM, Serra MA, Roma J, Romero FJ: Interferon decreases serum lipid peroxidation products of hepatitis C patients. Free Radic Biol Med 1994;16: 131-133。
3)De Maria N, Colantoni A, Fagiuoli S, Liu GJ, Rogers BK, Farinati F,Van Thiel DH, Floyd RA: Association between reactive oxygen species and disease acivity in chronic hepatitis C. Free Radic Biol Med 1996; 21:291-295。
【００５７】
4)Romero MJ, Bosch-Morell F, Romero B, Rodrigo JM, Serra MA, Romero FJ: Serum malondialdehyde: Posssible use for the clinical management of chronic hepatitis C patients. Free Radic Biol Med 1998; 25: 993-997。
5)Mutlu-Turkoglu, Ademoglu E, Turkoglu S, Badur S, Uysal M, Toker G: The effects of interferon alpha on serum lipid peroxidation and total thiol content in patients with chronic active hepatitis C. Res. Commun Mol Pathol Pharmacol 1997; 96: 357-361。
【００５８】
6)Beloqui 0, Prieto J, Suarez M, Gil B, Qian CH, Garcia N: N-acetyl cysteine in chronic hepatitis C: A pilote study. J.Interferon Res 1993; 13: 279-282。
7)Lim HL, Myers BM, Hamilton BA, Davis GL, Lau JYN: Plasma glutathione concentration in patients with chronic hepatitis C virus infection. J. Viral Hepat 1995; 2: 211-214。
【００５９】
8)Swietek K, Juszczyk J: Reduced glutathione in erythrocytes of patients with acute and chronic viral hepatitis. J.Viral Hepat. 1997; 4:139-141。
9)Farinati F, Cardin R, De Maria N, Della Libera G, Marafin C, Lecis E, Burra P, Floreani A, Cecchetto A, Naccarato R: Iron storage, lipid peroxidation and glutathione turnover in chronic anti-HCV positive hepatitis. J.Hepatol. 1995; 22: 449-456。
【００６０】
10)Takikawa T, Hayashi H, Nishimura N, Yano M: Serum levels of alanine aminotransferase and ferritin in male blood donors with antibody to hepatitis C virus. J. Gastroenterol. 1994; 29: 593-597。
11)Hayashi H, Takikawa T, Nishimura N, Yano M: Serum aminotransferase levels as an indicator of the effectiveness of venesection for chronic hepatitis C. J.Hepatol. 1995;22: 268-271。
【００６１】
12)Shedlofsky SI: Role of iron in the natural history and clinical course of hepatitits C disease. Hepatogastroenterol. 1998; 45: 349-355。
13)Larrea E, Beloqui 0, Munoz-Navas MA, Civeira MP, Prieto J: Superoxide dismutase in patients with chronic hepatitis C virus infection. Free Radic Biol Med 1998;24: 1235-1241。
【００６２】
14)Larrea E, Garcia N, Qian C, Civeira MP, Prieto J: Tumor necorsis factor alpha gene expression and the response to interferon in chronic hepaitis C. Hepatol. 1996; 23: 210-217。
15)Emerit I, Serejo F, Filipe P, Alaoui Youssefi A., Fernandes A, Costa A, Freitas J, Ramalho F, Baptista A, Carneiro de Moura M.Clastogenic factors as biomarkers of oxidative stress in chronic hepatitis C. Digestion 2000; 907: in press。
【００６３】
16)Goh K,Sumner H:Breaks in normal chromosomes. Are they induced by a transferable substance in the plasma of irradiated persons exposed to total-body irradiation?. Radiat. Res 1968;35: 171-181。
17)Emerit I:Reactive oxygen species, chromosome mutation and cancer:Possible role of clastogenic factors in carcinogenesis. Free Radic Biol Med 1994; 16: 99-109。
【００６４】
18)Emerit I, Garban F, Vassy J, Filipe P, Freitas J: Superoxide-mediated clastogenesis and anticlastogenic effects of exogenous superoxide dismutase.Proc Natl Acad Sci USA 1996;93: 12799-12804。
19)Emerit I: Clastogenic factors as biomarkers of oxidative stress. Their usefulness for evaluation of the efficacy of antioxidants. Cent Eur J Occup Environ Med 1998;4: 3-10。
【００６５】
20)Emerit I, Levy A, Camus JP: Monocyte-derived clastogenic factor in rheumatoid arthritis.Free Radic Biol Med 1989; 6: 245-250。
21) Jaeschke H, Bautista AP, Spolarics Z, Spitzer JJ: Superoxide generation by neutrophils and Kupffer cells during in vivo reperfusion after hepatic ischemia in rats. J Leukoc Biol 1992;52: 377-382。
【００６６】
22)Maeda H, Akaike T: Oxygen free radicals as pathogenic molecules in viral diseases. Proc Soc Exp Biol Med 1991; 198:721-727。
23)Ungerer JPJ, Oosthuizen HM, Bissbort SH, Vermaak WJH: Serum adenosine deaminase:isoenzymes and diagnostic application. Clin Chem 1992; 38:1322-1326。
【００６７】
24)Hoofnagle JH: Therapy of viral hepatitis.Digestion 1998;59: 563-578。
25)Bernhard MC, Junker E, Hettinger A, Lauterburg BH: Time course of total cysteine, glutathione and homocysteine in plasma of patients with chronic hepatitis Ctreated with interferon alpha and without supplementation with N-acetylcysteine. J Hepatol 1998; 28: 751-755。
【００６８】
26)Houglum K, Venkataramani A, Lyche K, Chojkier M: A pilot study of the effects of alpha-tocopherol on hepatic stellate cell activation in chronic hepatitis C. Gastroenterology 1997; 113:1069-1073。
27)von Herbay A, Stahl W, Niederau C, Sies H: Vitamin E improves the aminotransferase status of patients suffering from viral hepatitis C: A randomized, double-blind, placebo-controlled study.Free Radic Res 1997;27: 599-605。
【００６９】
28)Yanagihara K, Ito A, Toge T, Numoto M: Antoproliferative effects of isoflavones on human cancer cell lines established from the gastrointestinal tract. Cancer Res 1993;53: 5815-5821。
29)Pereira MA, Barnes LH, Rassman VL, Kellof GV, Steele VE: Use of azoxymethane-induced foci of aberrant crypts in rat colon to identify potential chemopreventive agents. Carcinogenesis 1994; 15:1049-1054。
【００７０】
30)Mousavi Y, Adlercreutz H: Genistein is an effective stimulator of sex hormone-binding globulin production in hepatocarcinoma human liver cancer cells and suppresses proliferation of these cells in culture. Steroids 1993; 58: 301-304。
31)Messina MJ, Persky V, Setchell KD, Barnes S: Soy intake and cancer risk: a review of the in vitro and in vivo data. Nutr Cancer 1994; 21:113-131。
【００７１】
32)Minamiyama Y, Yoshikawa T, Tanigawa T, Takahashi S, Naito Y, Ichikawa, Kondo M: Antioxidative effects of a processed grain food. J Nutr Sci Vitaminol 1994; 40: 467-477。
33)Hayama H, Hirai KI: Free radical production of human leukocytes and effects of antiinflammatory agents. J Kanazawa Med Univ 1993; 18: 277-282。
【００７２】
34)Komura E, Yamamoto Y, Niki E: Inhibition of lipid peroxidation by antioxidant biofactor. Vitamins 1993; 67: 455-518。
35)Emerit I, Oganesian N, Arutyunian R, Pogossian A, Sarkisian T, Cernjavski L, Levy A, Feingold J: Oxidative stress-related clastogenic factors in plasma from Chernobyl liquidators: protective effects of antioxidant plant phenols, vitamins and oligoelements. Mutat Res 1997; 377: 239-246。
【図面の簡単な説明】
【図１】 本発明によるＣ型肝炎及び慢性Ｃ型肝炎の消炎症剤を生成する方法のフローチャートを示す線図である。
【図１】
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