(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
0003651924.tif 000009
（式中、Ｘはハロゲン原子を表す。）
で示される４−ハロアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾールを一般式（２）
【化２】
0003651924.tif 000010
（式中、Ｘはハロゲン原子を表す。）
で示される（Ｒ）−４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールに不斉的に還元する能力があり、キャンディダ・インターメディア（Candida intermedia) 、キャンディダ・ケフィル（Candida kefyr)、キャンディダ・クルセイ（Candida krusei) 、キャンディダ・ピヌス（Candida pinus)、クリプトコッカス・アルビダス（Cryptococcus albidus) 、クリプトコッカス・テレウス(Cryptococcus terreus)、ピキア（Pichia）属、ロードトルラ・グラミニス（Rhodotorula graminis) 、サッカロマイセス・ウバルム（Saccharomyces uvarum）、及びトリコスポロン・クタネウム（Trichosporon cutaneum)に属する微生物群の中から選ばれた少なくとも１種の微生物に前記一般式（１）で示される４−ハロアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾールを接触せしめ、生成する一般式（２）で示される（Ｒ）−４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールを採取することを特徴とする（Ｒ）−４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、（Ｒ）−４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールの工業的に有利な製造方法に関し、更に詳しくは、一般式（１）
【０００２】
【化３】
0003651924.tif 000002
【０００３】
（式中、Ｘはハロゲン原子を表す。）
で示される４−ハロアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾールに微生物を接触せしめて、一般式（２）
【０００４】
【化４】
0003651924.tif 000003
【０００５】
（式中、Ｘはハロゲン原子を表す。）
で示される（Ｒ）−４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールを効率的に製造する方法に関するものである。
（Ｒ）−４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールは、種々の医薬品や生理活性物質の有用な中間体である。
【０００６】
【従来の技術】
４−ハロアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾールに微生物を接触せしめて、（Ｒ）−４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールを工業的に有利に製造する方法について示した特許、報告などを本発明者らは未だ見い出していない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、（Ｒ）−４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールの工業的製造を目的として種々検討を行った結果、４−ハロアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾールを不斉的に還元する微生物の存在を見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
即ち、本発明は、一般式（１）
【０００９】
【化５】
0003651924.tif 000004
【００１０】
（式中、Ｘはハロゲン原子を表す。）
で示される４−ハロアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾールを一般式（２）
【００１１】
【化６】
0003651924.tif 000005
【００１２】
（式中、Ｘはハロゲン原子を表す。）
で示される（Ｒ）−４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールに不斉的に還元する能力があり、キャンディダ・インターメディア（Candida intermedia) 、キャンディダ・ケフィル（Candida kefyr)、キャンディダ・クルセイ（Candida krusei) 、キャンディダ・ピヌス（Candida pinus)、クリプトコッカス・アルビダス（Cryptococcus albidus) 、クリプトコッカス・テレウス(Cryptococcus terreus)、ピキア（Pichia）属、ロードトルラ・グラミニス（Rhodotorula graminis) 、サッカロマイセス・ウバルム（Saccharomyces uvarum）、及びトリコスポロン・クタネウム（Trichosporon cutaneum)に属する微生物群の中から選ばれた少なくとも１種の微生物に前記一般式（１）で示される４−ハロアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾールを接触せしめ、生成する一般式（２）で示される（Ｒ）−４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールを採取することを特徴とする（Ｒ）−４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールの製造方法を内容とする。
【００１３】
本発明の基質として用いられる、上記一般式（１）で示される４−ハロアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾールの置換基の例としては、塩素又は臭素等のハロゲン基が挙げられる。４−ハロアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾールは公知の方法によって合成することができる。
例えば、一般式（３）
【００１４】
【化７】
0003651924.tif 000006
【００１５】
で示される４−ブロモアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾールは、マンフレッド・ライフエンらの方法（特開昭６２−２２６９７１参照）によって合成することができる。
【００１６】
本発明に使用される微生物は、以下に説明する方法によってスクリーニングすることができる。
例えば、グルコース４０ｇ、イーストエキス３ｇ、(NH4)2HPO4  １３ｇ、KH2PO4  ７ｇ、MgSO4.7H2O  ０．８ｇ、ZnSO4.7H2O  ７０mg、FeSO4.7H2O  ９０mg、CuSO4.5H2O  ５mg、MnSO4.4H2O  １０mg、NaCl  ０．１ｇ（１リットル当り）の組成からなるＡ培地５mlを大型試験管に入れ殺菌後、微生物を植え、３０℃で２日間振盪培養する。その後、菌体を遠心分離により集めグルコース３％含有０．１Ｍリン酸緩衝液（pH６．５）２mlに懸濁し、４−ハロアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾール０．５％を添加して試験管内で１日間３０℃で振盪する。その後、等量の酢酸エチルを加え抽出を行う。
生成した４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールの収率及び光学純度は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用い表１の如き条件で決定できる。
【００１７】
【表１】
0003651924.tif 000007
カラム：ダイセル化学工業株式会社  CHIRALPAK AS（0.46cm×25cm)
検出  ：２５４nm
【００１８】
本発明で使用される微生物としては、一般式（１）で示される４−ハロアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾールを不斉的に還元して、一般式（２）で示される（Ｒ）−４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールを生成させる能力を有する微生物であればいずれも使用しうる。例えば、キャンディダ（Candida ）属、クリプトコッカス（Cryptococcus）属、ピキア（Pichia）属、ロードトルラ（Rhodotorula ）属、サッカロマイセス（Saccharomyces ）属、トリコスポロン（Trichosporon）属に属する微生物が好ましく、これらは単独又は２種以上組み合わせて用いられる。
更に具体的には、例えばキャンディダ・インターメディア（Candida intermedia) 、キャンディダ・ケフィル（Candida kefyr)、キャンディダ・クルセイ（Candida krusei) 、キャンディダ・ピヌス（Candida pinus)、クリプトコッカス・アルビダス（Cryptococcus albidus) 、クリプトコッカス・テレウス（Cryptococcus terreus) 、ピキア・アノマラ（Pichia anomala) 、ピキア・ファリノサ（Pichia farinosa)、ピキア・メンブランアエファシエンス（Pichia membranaefaciens)、ロードトルラ・グラミニス（Rhodotorula graminis) 、サッカロマイセス・ウバルム（Saccharomyces uvarum) 、トリコスポロン・クタネウム（Trichosporon cutaneum)が挙げられる。
【００１９】
これらの微生物の培養には、通常これらの微生物が資化しうる栄養源であれば何でも使用しうる。例えばグルコース、シュークロース等の炭水化物、エタノール、グリセロール等のアルコール；パラフィン等の炭水化物、酢酸、プロピオン酸等の有機酸；大豆油等の炭素源又はこれらの混合物、酵母エキス、ペプトン、肉エキス、コーンスチープリカー、硫安、アンモニア等の含窒素無機有機栄養源；リン酸塩；マグネシウム、鉄、マンガン、カリ等の無機栄養源；及びビオチン、チアミン等のビタミン類を適宜配合した通常の培地が用いられる。培養方法としては栄養培地のpHを４．０〜９．５の範囲で、好気的に２０〜４０℃の範囲で１〜５日間培養するのが好ましい。
【００２０】
還元の方法としては、培養液をそのまま用いる方法、遠心分離等により菌体を分離し、これをリン酸緩衝液あるいは水等に再懸濁したものに４−ハロアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾールを添加し、反応させる方法等がある。この反応の際、グルコース、シュークロース等の炭素源をエネルギー源として添加してもよい。また菌体は生菌体のままでもよいし、アセトン処理、凍結乾燥等の処理を施したものでもよい。また、これらの菌体を担体に固定化して用いることもできる。４−ハロアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾールの添加は、そのまま、あるいは反応に影響を与えないように有機溶剤に溶解して反応最初から一括添加、あるいは分割添加してもよい。反応はpH４〜９の範囲で、１０〜６０℃の温度で１〜１２０時間攪拌下で行うのが好ましい。
【００２１】
反応によって生成した（Ｒ）−４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールの採取は、反応液から直接、あるいは菌体分離後、酢酸エチル、塩化メチレン等の溶剤で抽出し、脱水後、シリカゲルクロマトグラフィー等で精製すれば高純度の（Ｒ）−４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールが容易に得られる。
【００２２】
【実施例】
以下、本発明を実施例に基づいて具体的に示すが本発明は実施例のみに限定されるものではない。なお、以下の記載において「％」は特に断らないかぎり「重量％」を意味する。
【００２３】
実施例１
前記のＡ培地５mlを試験管に入れ殺菌後、表２に示す微生物をそれぞれ植菌し、３０℃で２日間好気的に振盪培養を行った。この培養液から菌体を遠心分離によって集め、３％グルコース含有０．１Ｍリン酸緩衝液（pH６．５）２mlに懸濁し、４−ブロモアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾール１０mgを添加して試験管内にて３０℃、２４時間振盪反応させた。反応後、反応液から等量の酢酸エチルで残留した４−ブロモアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾール及び生成した（Ｒ）−４−（２−ブロモ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールを抽出した。次に、酢酸エチル層を減圧下溶媒除去を行い、油状物質を得た。得られた混合物をＨＰＬＣにて分析したところ表２の結果を得た。
【００２４】
【表２】
0003651924.tif 000008
【００２７】
【発明の効果】
本発明によれば、４−ハロアセチル−２−トリフルオロメチルチアゾールに不斉的に還元を行う能力を有する微生物を作用させることにより、（Ｒ）−４−（２−ハロ−１−ヒドロキシエチル）−２−トリフルオロメチルチアゾールを工業的に有利に製造することができる。