(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）ニコチン酸，ニコチン酸誘導体、ニコチニックアルコールおよびニコチニックアルコール塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物と、（Ｂ）Ｌ−セリン，パルミチン酸およびパルミチン酸塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物とを含有することを特徴とするセラミド合成促進剤。
【請求項２】
（Ａ）が、下記一般式（１）、（２）、（３）または（４）で表されるニコチン酸誘導体である請求項１記載のセラミド合成促進剤。
【化１】
0003645082.tif 000011
【化２】
0003645082.tif 000012
【化３】
0003645082.tif 000013
【化４】
0003645082.tif 000014
【請求項３】
（Ａ）が、下記一般式（５）で表されるニコチニックアルコール塩である請求項１記載のセラミド合成促進剤。
【化５】
0003645082.tif 000015
【請求項４】
（Ａ）がメチルニコチン酸，エチルニコチン酸，ベンジルニコチン酸，ニコチンアミド，クエン酸ニカメタート，ニコチン酸トコフェロールおよび酒石酸ニコチニックアルコールからなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物である請求項１記載のセラミド合成促進剤。
【請求項５】
（Ａ）ニコチン酸，ニコチン酸誘導体、ニコチニックアルコールおよびニコチニックアルコール塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物と、（Ｂ）Ｌ−セリン，パルミチン酸およびパルミチン酸塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物とを含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、皮膚表皮層内部で細胞自身のセラミド合成を活発化させ、皮膚バリアー機能を改善することにより、荒れ肌改善及び各種皮膚疾患の改善に期待されるセラミド合成促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
脂質の一種であるセラミドは、生体内で大部分を占めるグリセロ脂質に比べて量的には少ないが、重要な生理的役割を持つ事が最近知られてきている。ヒトを始めとする哺乳類の生体分布においても生理的に要となっている場所にあるが、中でも脳、肝臓、皮膚などに蓄積されている事が知られている。
【０００３】
皮膚では特に表皮角質層にセラミドが集積しているが、これは表皮細胞によって合成分泌され、細胞間に独特のラメラ構造を形成している細胞間脂質の主成分となっている（Lukas Landmann  ：Anat.Embryol. １７８, １−３, １９８８）。角質層は、皮膚の保湿能や生体の物理的保護を始めとする一連の生理的役割、いわゆるバリアー機能を持っているが、細胞間脂質はこのバリアー機能の実体であり、生命維持において最も重要な役割の一つを担っている（芋川玄爾：香粧会誌、１（４）、２５０−２５３、１９９１）。この意味から、皮膚セラミドは生体防御の要の物質の１つになっていると言える。
【０００４】
肌荒れや乾燥肌、また各種皮膚疾患では、この角質層の健全な形成が妨げられ、バリアー機能低下の起きている事が数多く報告されている。具体的な例としては、皮膚表面の加齢に伴う表皮層のターンオーバーの低下、あるいは光や温度、気象条件などの外的要因によって生じる肌荒れや乾燥肌があげられる。これはバリアー機能の低下が生じ、本来皮膚が有している保水能力の低下と水分蒸散量の増加が生じた結果誘発されると考えられている（赤崎秀一ほか：日皮会誌、９８（１）、４１−５１、１９８８）。
【０００５】
また皮膚疾患のなかで、アトピー性皮膚炎では患者の炎症部のみならず非炎症部でもバリアー機能の低下や崩壊が見られ、患者皮膚中セラミドの全般的な、あるいは特定の種類の含量低下が報告されている（川島真：香粧会誌、１５（４）、２６１ー２６２、１９９１）。
【０００６】
このほか乾癬でも患者皮膚中のセラミド量の変動が報告されており（StefaniaMotta ほか：  Arch.Dermatol.１３０, ４５２−４５６、１９９４）、この場合もこの変動がバリアー崩壊と関係していると考えられる。
【０００７】
このような皮膚バリアーの低下や崩壊からくる皮膚の疾患や不全に対しては、従来、保湿成分の投与で皮膚の乾燥状態を防ぎ潤いを持たせることや、抗炎症剤による湿疹の抑制が試みられてきた。しかし、これらの方法は、角質表面の水分あるいは保湿成分の一部を補給する為にその効果が一時的なものに留まり、皮膚内部に充分な潤いを持続的に与える事ができなかったり（武村俊之：ファルマシア、２８、１、１９９２）、一時的な炎症を抑えても効果の持続性や副作用に問題のあることが多かった。
【０００８】
これに対し、最近バリアー構成主要成分であるセラミドの外部補給で皮膚の改善治療を試みる事も行われ、肌荒れ状態やアトピー性皮膚炎に有効な事も報告された（檜垣祐子ほか：アレルギーの臨床、１３（１２）、２６−２８、１９９３）。
【０００９】
しかしながら、この方法は効果の出現が早いと思われる半面、従来から用いられていた保湿剤などと同様、効果の持続性の点で不十分であり、皮膚の状態によっては経皮吸収の低下で効果発現が不十分になるなどの欠点も考えられる。
【００１０】
一方、ニコチン酸とその誘導体が皮膚の血行促進効果を持つことは従来知られており（J.S.C.English ほか：British Journal of Dermatology, １１６，３４１−３４９，１９８７）、また表皮細胞のセラミド合成を促進することは特開平９−２９５２号公報に記載されている。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
従って本発明の目的とするところは、これらの状況より、皮膚表層内部で表皮細胞自身のセラミド合成を活発化させ皮膚バリアー機能の回復を通し、荒れ肌改善及び各種皮膚疾患の治療に、より持続的な効果が期待されるセラミド合成促進剤および皮膚外用剤を提供するにある。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
かかる事情に鑑み、本発明者等は、表皮細胞自身のセラミド合成を促進させる事を意図し、培養表皮細胞での探索を鋭意検討してきた結果、ニコチン酸，ニコチン酸誘導体、ニコチニックアルコールおよびニコチニックアルコール塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物と、Ｌ−セリン，パルミチン酸およびパルミチン酸塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物との組み合わせが有効なセラミド合成促進作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち、本発明は（Ａ）ニコチン酸，ニコチン酸誘導体、ニコチニックアルコールおよびニコチニックアルコール塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物と、（Ｂ）Ｌ−セリン，パルミチン酸およびパルミチン酸塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物とを含有することを特徴とするセラミド合成促進剤および皮膚外用剤に関するものである。
【００１４】
本発明に用いられるニコチン酸誘導体としては、例えば下記一般式（１）、（２）、（３）または（４）で表される化合物等が挙げられる。これらのニコチン酸誘導体は合成品または天然から抽出されたものでも良く、具体的にはメチルニコチン酸，エチルニコチン酸，ベンジルニコチン酸，ニコチンアミド，クエン酸ニカメタート，ニコチン酸トコフェロール，キノリン酸，ピリジン３，５−ジカルボン酸，ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸およびニコチン酸モノヌクレオチド等が挙げられる。
【００１５】
【化６】
0003645082.tif 000002
【００１６】
【化７】
0003645082.tif 000003
【００１７】
【化８】
0003645082.tif 000004
【００１８】
【化９】
0003645082.tif 000005
【００１９】
本発明に用いられるニコチニックアルコール塩としては例えば下記一般式（５）で表される化合物等が挙げられる。合成品のほか天然から抽出されたものでも良く、具体的には酒石酸ニコチニックアルコール等が挙げられる。
【００２０】
【化１０】
0003645082.tif 000006
【００２１】
本発明に用いられる（Ａ）成分は、セラミド合成促進剤の総量に対し、０．００００１〜５重量％が好ましい。０．００００１重量％未満では本発明の効果が得られない場合があり、５重量％を超えて配合しても、配合量に見合った効果が得られない場合がある。
【００２２】
本発明に用いられる（Ｂ）成分のＬ−セリン，パルミチン酸及びパルミチン酸塩としては合成品のほか天然から抽出されたものでも良い。配合量としては、セラミド合成促進剤の総量に対し、０．００１〜１０重量％が好ましい。０．００１重量％未満では本発明の効果が得られない場合があり、１０重量％を超えて配合しても、配合量に見合った効果が得られない場合がある。
【００２３】
本発明のセラミド合成促進剤は、適当な賦形剤，担体，希釈剤を用いて、液剤，カプセル剤，顆粒剤，散剤，軟膏剤，貼付剤，注射剤，坐剤，入浴剤等の剤形とすることができ、またゲル，クリーム，スプレー剤，貼付剤，ローション，パック類，乳液，パウダー等の剤形が挙げられる。
【００２４】
また本発明のセラミド合成促進剤は、本発明の効果を損なわない範囲で、通常、化粧品や医薬品，医薬部外品，食品等に使用されるものを配合することが可能であり、用途、剤形に応じて適宜選択され、特に限定されるものではない。例えばワセリン，スクワラン等の炭化水素、ステアリルアルコール等の高級アルコール、ミリスチン酸イソプロピル等の高級脂肪酸低級アルキルエステル、ラノリン酸等の動物性油脂、グリセリン，プロピレングリコール等の多価アルコール、グリセリン脂肪酸エステル，モノステアリン酸ポリエチレングリコール，ポリエチレンアルキルエーテルリン酸等の界面活性剤、パラオキシ安息香酸メチル，パラオキシ安息香酸ブチル等の防腐剤、蝋、樹脂、各種香料、各種色素、クエン酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、乳酸等の各種有機酸や無機酸及びそれらの塩、水、及びエタノール等が挙げられる。
【００２５】
上記のセラミド合成促進剤は、医薬品、医薬部外品、化粧料などの皮膚外用剤として好適に用いることができる。
【００２６】
【実施例】
以下、実施例により詳細に説明する。実施例に先立ち、セラミド合成促進試験について述べる。
【００２７】
試験例１（セラミド合成促進試験）（ニコチンアミドとセリンの組み合わせ）
１）方法
（ａ）培養表皮細胞
ヒト正常表皮角化細胞は市販されているもの（Cryopreserved Human Keratinocytes(cells)：カスケード社製）を用いた。
【００２８】
（ｂ）細胞培養用培地
培地としてはＭＣＤＢ１５３ＨＡＡ（和光純薬社製）、又増殖因子としてこれに添加するＢＰＥ（牛脳下垂体）（クラボウ社製）を用いた。
【００２９】
（ｃ）Ｈｅｐｅｓ緩衝液の調製
Ｈｅｐｅｓ７．１５g 、グルコース１．８g 、塩化カリウム０．２２g 、塩化ナトリウム７．７g 、リン酸水素二ナトリウム・１２水和物０．２７g を精製水に溶解し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨ７．４に調製後、１ｌにメスアップした。
【００３０】
（ｄ）細胞培養
正常ヒト表皮細胞の細胞数をＭＣＤＢ１５３ＨＡＡ培地にて１×１０4 個／ｍｌに調製し、６０ｍｍコラーゲンコートプレート（ファルコン社製）に３ｍｌずつ播種し、９５％空気（Ｖ／Ｖ）−５％（Ｖ／Ｖ）炭酸ガスの雰囲気下、３７℃で４日間静置培養した。
【００３１】
培養上清を吸引除去し、各薬剤溶液（ニコチンアミド，Ｌ−セリン）を添加したＭＣＤＢ１５３ＨＡＡ培地を３ｍｌずつ各ディッシュに加えた。このディッシュを９５％空気（Ｖ／Ｖ）−５％（Ｖ／Ｖ）炭酸ガスの雰囲気下、３７℃で６日間静置培養した。
【００３２】
６日目に０. ５μＣｉの［14Ｃ］セリン（アメリカンラジオラベルドケミカルズ社製）を培地に添加して、培養を２日間更に行った。培養後、以下のごとく細胞を処理した。
【００３３】
（ｅ）脂質の抽出
培地上澄を吸引除去し、２ｍｌのＨｅｐｅｓ緩衝液で２回洗浄した後、細胞をセルスクレーパー（住友べ一クライト社製）でディッシュからかきとった。これを１. ６ｍｌのＨｅｐｅｓ緩衝液に懸濁し、４ｍｌのメタノールと２ｍｌのクロロホルムを加え混合する。２０分間室温で静置した後、１. ６ｍｌのクロロホルムと１. ６ｍｌのＨｅｐｅｓ緩衝液を更に加え、よく撹拌後３０００ｒｐｍ２０分間の遠心分離を行った。その後クロロホルム層をとり、脂質画分を得た。クロロホルムを減圧遠心濃縮機により除き、１ｍｌのベンゼンに再溶解した。
【００３４】
（ｆ）イアトロビーズカラムを用いたセラミド画分の単離
ベンゼンに溶解した脂質試料を、イアトロビーズ６ＲＳ−８０６０（イアトロン社製）を充填したカラムに供し、ベンゼン−酢酸エチル（４：１）溶液で洗浄した後、酢酸エチル１ｍｌにて溶出させることにより、セラミド画分を得た。
【００３５】
（ｇ）［14Ｃ］ラベルされたセラミドの放射活性測定
上記セラミド画分に取り込まれた放射活性を、液体シンチレーションカウンター（ＳＣ３１、Ａｌｏｋａ社製）にて測定し、合成されたセラミド量を測定した。
【００３６】
（２）結果
ニコチンアミドとＬ−セリンの組み合わせは表１に示した様に、すべてセラミド産生促進効果が見られた。なお、表１の相対合成比率はニコチンアミド０μＭ，Ｌ−セリン０．５μＭの組み合わせを１００として示した。
【００３７】
【表１】
0003645082.tif 000007
【００３８】
試験例２（セラミド合成促進試験）（ニコチンアミドとパルミチン酸ナトリウムの組み合わせ）
（１）方法
方法は試験例１に従い、Ｌ−セリンの代わりにパルミチン酸ナトリウムを用いた。
【００３９】
（２）結果
ニコチンアミドとパルミチン酸ナトリウムの組み合わせは表２に示した様に、すべてセラミド産生促進効果が見られた。
【００４０】
【表２】
0003645082.tif 000008
【００４１】
試料１〜４
ニコチンアミド（東京化成社製）（試料１）、ニコチン酸（東京化成社製）（試料２）、クエン酸ニカメタート（シグマ社製）（試料３）、酒石酸ニコチニックアルコール［酒石酸及びニコチニックアルコール（和光社製）より特開平８−２１７６２３号公報記載の方法に準じて調製］（試料４）、各０. ５ｇを蒸留水１００ｍｌに溶解し、濾過穴径０. ２２μｍの膜（ミリポア社製）で濾過して各水溶液を得た。
【００４２】
試料５〜８
メチルニコチン酸（東京化成社製）（試料５）、エチルニコチン酸（東京化成社製）（試料６）、ベンジルニコチン酸（東京化成社製）（試料７）、ニコチン酸トコフェロール（シグマ社製）（試料８）各０. ５ｇを、水に溶け易いよう一旦エタノールに溶解し、ついで蒸留水を加えて１００ｍｌにし、濾過穴径０. ２２μｍの膜（ミリポア社製）で濾過して各水溶液を得た。
【００４３】
実施例１〜３
下記親水性成分を湯浴で８０℃に加温し、混合した下記親油性成分に攪拌しながら徐々に加えた。次に、ホモゲナイザーで攪拌して、各成分を充分乳化分散させた後、攪拌しながら徐々に冷却し、軟膏を得た。
【００４４】
【表３】
0003645082.tif 000009
【００４５】
実施例４〜１２
試料１の水溶液の代わりに試料２のニコチン酸水溶液（実施例４〜６）、試料３のクエン酸ニカメタート水溶液（実施例７〜９）、試料４の酒石酸ニコチニックアルコール水溶液（実施例１０〜１２）をそれぞれ用いた以外は実施例１と同様な方法で、それぞれの軟膏を得た。
【００４６】
実施例１３〜２４
試料１の水溶液の代わりに試料５のメチルニコチン酸水溶液（実施例１３〜１５）、試料６のエチルニコチン酸水溶液（実施例１６〜１８）、試料７のベンジルニコチン酸水溶液（実施例１９〜２１）、試料８のニコチン酸トコフェロール水溶液（実施例２２〜２４）をそれぞれを用いた以外は実施例１と同様な方法で、それぞれの軟膏を得た。
【００４７】
実施例２５〜２７
試料１の水溶液１ｍｌを以下の組成物に加えて、常法により１００g のローションを得た。
【００４８】
【表４】
0003645082.tif 000010
【００４９】
実施例２８〜３６
試料１の水溶液の代わりに試料２のニコチン酸水溶液（実施例２８〜３０）、試料３のクエン酸ニカメタート水溶液（実施例３１〜３３）、試料４の酒石酸ニコチニックアルコール水溶液（実施例３４〜３６）を用いた以外は実施例２５と同様な方法で、それぞれのローションを得た。
【００５０】
実施例３７〜４８
試料１の水溶液の代わりに、試料５のメチルニコチン酸水溶液（実施例３７〜３９）、試料６のエチルニコチン酸水溶液（実施例４０〜４２）、試料７のベンジルニコチン酸水溶液（実施例４３〜４５）、試料８のニコチン酸トコフェロール水溶液（実施例４６〜４８）のそれぞれ用いた以外は実施例２５と同様な方法で、それぞれのローションを得た。
【００５１】
【発明の効果】
以上の如く、本発明により、荒れ肌改善及び皮膚バリアー崩壊を伴う皮膚疾患、例えばアトピー性皮膚炎、乾癬等の治療改善に期待されるセラミド合成促進剤を提供できることは明らかである。