(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
0003675863.tif 000007
を有する７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のＺ／Ｅ混合物中の７−アミノ−３−［（Ｅ）−２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸を、７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のＺ／Ｅ混合物のアミン塩を結晶化させ、該アミン塩を７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸に変換することによって枯渇させる方法。
【請求項２】
式Ｉ
【化２】
0003675863.tif 000008
を有する７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のＺ／Ｅ混合物中の７−アミノ−３−［（Ｅ）−２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸を枯渇させる方法であって、該方法は、
ａ）  ７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のＺ／Ｅ混合物のアミン塩を結晶化させ、該アミン塩を７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸に変換する工程、及び
ｂ）  ７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のＺ／Ｅ混合物をクロマトグラフィーに掛ける工程、を含む前記方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のＺ／Ｅ混合物中のＥ異性体を枯渇もしくは個別分離する際に、
α）前記式ＩのＺ／Ｅ混合物を式
ＮＲ１Ｒ２Ｒ３
〔式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は互いに同じであるかまたは異なっていて、互いに独立に水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、置換されていないかもしくは置換されたベンジル、またはＣ４〜Ｃ８シクロアルキルであるか、またはＲ１及びＲ２は窒素原子と共に、この窒素原子以外にも１個もしくは２個のヘテロ原子を有し得る五または六員複素環を構成し、Ｒ３は前記に規定したとおりのものである〕のアミンと反応させて、式ＩＩ
【化３】
0003675863.tif 000009
〔式中Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は先に規定したとおりのものである〕の化合物を、式ＩＩの化合物のＺ異性体及びＥ異性体を異なる程度に溶解させ得る溶媒または溶媒混合物中で生成させるか、または
β）  式ＩＩの化合物を溶媒または溶媒混合物に溶解または懸濁させて式ＩＩの異性体の溶解度積を調節し、
式ＩＩのＺ異性体、またはＥ異性体含量の低い式ＩＩの化合物を単離後に酸によって式Ｉａ
【化４】
0003675863.tif 000010
の化合物、またはＥ異性体含量の低い式Ｉの化合物に変換することを特徴とする前記方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、式Ｉ
【０００２】
【化５】
0003675863.tif 000002
【０００３】
を有するＺ／Ｅ（シス／トランス）７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸中のＥ（トランス）異性体を枯渇させる方法に係わる。
【０００４】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
Ｚ配置がグラム陰性菌に対するセファロスポリン最終生成物の有利な諸特性を決定する特徴を示すことは周知である。従って、最も好ましい有効性を達成するには、Ｅ異性体含量が可能なかぎり低い活性化合物が望ましい。
【０００５】
上記抗生物質またはその中間体を製造する合成方法では、Ｚ異性体がＥ異性体と混合して得られる。
【０００６】
ヨーロッパ特許第０  ４２０  ６０８号の実施例３７には、７−β−フェニルアセトアミド−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸−４−メトキシベンジルエステルの製造が開示されている。そこに掲げてある1 Ｈ−ＮＭＲデータによれば、得られた生成物はＺ異性体とＥ異性体との混合物である。異性体混合物は所望の活性化合物を製造する間維持される。
【０００７】
Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，  Ｖｏｌ．ＸＬＩＩＩ，  Ｎｏ．８，  ｐｐ．１０４７−１０５０（１９９０）によれば、７−β−フェニルアセトアミド−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸−４−メトキシベンジルエステルが４．７／１のＺ／Ｅ比で得られている。このような段階の異性体は分離しにくいことが指摘されており、従って、分離はより後段で、フェニルアセチル基を除去し、活性物質の側鎖を保護して再アシル化し、保護基を除去した後に行なわれる。
【０００８】
Ｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．  ３９（９），  ｐｐ．２４３３−２４３６（１９９１）には、７−β−フェニルアセチル−３−［２−（４−メチル−５−チアゾール）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸−４−メトキシベンジルエステルの純粋なＺ異性体を、得られたＺ／Ｅ異性体混合物を結晶化してＥ異性体の一部を分離し、その後ベンゼン及び酢酸エチルを用いるシリカゲル上でのクロマトグラフィーを行なうことにより製造することが記載されている。クロマトグラフィーに用いた溶媒混合物及びクロマトグラフィー材を再生するのは困難であり、またベンゼンはその発癌性ゆえに、もはや用いられるべきでない溶媒である。
【０００９】
ヨーロッパ特許第０  ２３６  ２３１号の参照例１によれば、類似のベンズヒドリルエステルが純粋なＺ形態で得られるが、それもクロマトグラフィーステップの溶離液としてベンゼン／酢酸エチルを用いた場合のみである。ヨーロッパ特許第０  １７５  ６１０号の参照例１には、７−フェノキシアセトアミド−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸ベンズヒドリルエステルの純粋なＺ異性体を同様方法で分離することが述べられている。
【００１０】
ヨーロッパ特許第５９７  ４２９号に開示された、式Ｉの化合物を製造する別の方法は、次の反応図式に従って実施される。
【００１１】
【化６】
0003675863.tif 000003
【００１２】
上記図式中、Ｒはシリル保護基であり、Ｘは−Ｐ+ （Ｒ4 ）3 Ｉ- または−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ4 ）2 であり、Ｘ+ は−Ｐ+ （Ｒ4 ）3 または−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ4 ）2 Ｙである。Ｒ4 は低級アルキル基またはアリール基であり、Ｙはアルカリ系列由来のカチオンであるか、または有機塩基のプロトン化形態である。式Ｉの化合物の、Ｅ含量約２０％以上のＺ／Ｅ混合物とその製造とが述べられている。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明の一構成において本願出願人は、驚くべきことに、式Ｉａ
【００１４】
【化７】
0003675863.tif 000004
【００１５】
〔式中、Ｃ＝Ｃ結合上の水素原子はシス配置を有する〕を有する７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のＺ（シス）異性体、または例えばＺ異性体含量の高いＺ／Ｅ混合物をきわめて有効な広い抗菌スペクトルをもつ抗生物質、例えば式
【００１６】
【化１】
0003675863.tif 000005
【００１７】
のセフジトレンピボキシル（ｃｅｆｄｉｔｏｒｅｎ  ｐｉｖｏｘｉｌ）の製造で中心的な中間化合物として用い得ることを発見した。
【００１８】
別の構成では本願出願人は、４位及び７位が未保護であって所与のＥ含量を有する７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のＺ／Ｅ混合物を、アミン塩を経てかまたはクロマトグラフィーによってＥ含量のより低い７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸に変換し得るという驚くべき事実も発見した。
【００１９】
従って、本発明はその一構成において、７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のＺ／Ｅ混合物中の７−アミノ−３−［（Ｅ）２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸を
ａ）  前記Ｚ／Ｅ混合物のアミン塩を結晶化させて該アミン塩を７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸に変換することによって、または
ｂ）  前記Ｚ／Ｅ混合物をクロマトグラフィーに掛けることによって
枯渇させる単純でかつ効率的な方法を提供する。
【００２０】
この方法は、例えばＥ異性体とＺ異性体とを少なくとも部分的に分離し、及び／またはＺ／Ｅ混合物のＥ異性体含量を低め、即ちＺ／Ｅ混合物中のＥ異性体を枯渇させて例えばＺ含量を高めたり純粋なＺ異性体をもたらしたりする分離方法であり得る。
【００２１】
上記方法ａ）は次のように実施し得る。
【００２２】
プロトン性または非プロトン性溶媒中でアミン塩を生成する。式Ｉの化合物をアミン、有機溶媒または有機溶媒混合物、及び場合によっては水と混合して溶液または懸濁液を得る。適当な有機溶媒は、アルコール、例えばメタノール、エタノール、プロパノールもしくはブタノール；  ケトン、例えばアセトンもしくはメチルエチルケトン；  アミド、例えばジメチルホルムアミド；  エステル、例えば酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル；  ニトリル、例えばアセトニトリル；  またはこれらの溶媒の混合物などであり、場合によっては水が存在しても良く、特に適当なのは、例えばアセトン；  アセトンと水；  メタノール；メタノールとアセトンである。混合物は、場合によっては更に別の溶媒または溶媒混合物、即ち以後“カウンター溶媒”と呼称する、式ＩＩの化合物のＺ異性体が溶解しにくい溶媒または溶媒混合物で稀釈し得る。カウンター溶媒とは例えば、アミドを除いた上記溶媒にエーテル、例えばｔ−ブチルメチルエーテル、ジエチルエーテル、テトラビドロフラン及びこれらの溶媒の混合物を加えた諸溶媒である。カウンター溶媒としても用い得る溶媒を用いるのが好都合である。
【００２３】
方法ａ）は、次のように実施することも可能である。
【００２４】
７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のアミン塩のＺ／Ｅ混合物を溶媒または溶媒混合物に溶解または懸濁させ、場合によってはＺ／Ｅ混合物の溶解力（溶解度積）を上述のカウンター溶媒の添加によって再調節する。用い得る溶媒及びカウンター溶媒は上記と同じである。やはり、カウンター溶媒としても用い得る溶媒を用いることが好都合である。
【００２５】
溶媒は、そのＥ異性体含量が出発物質として用いる７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のＺ／Ｅ混合物のものより低い７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のアミン塩が晶出するように選択し得る。
【００２６】
本発明の方法に有用なアミンは、例えば式ＩＩＩ
ＮＲ1 Ｒ2 Ｒ3                       ＩＩＩ
〔式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 は互いに同じであるかまたは異なっていて、互いに独立に水素、Ｃ1 〜Ｃ8 アルキル、置換されていないかもしくは置換されたベンジル、またはＣ4 〜Ｃ8 シクロアルキルであるが、またはＲ1 及びＲ2 は窒素原子と共に、この窒素原子以外にも１個もしくは２個のヘテロ原子を有し得る五または六員複素環を構成し、Ｒ3 は前記に規定したとおりのものである〕のアミン、例えばｔ−ブチルアミン、ベンジルアミン、ジベンジルアミン、ジシクロヘキシルアミン、ｔ−オクチルアミン（即ち２，４，４−トリメチルペンチル−２−アミン）などで、特にｔ−ブチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、ｔ−オクチルアミンである。
【００２７】
ベンジルアミンまたはジベンジルアミンを用いる場合、ベンジル基は置換せずにおいても、また反応条件下に不活性である基によって置換してもよい。ベンジル基の置換に用い得る基は、Ｃ1 〜Ｃ8 アルキル、Ｃ1 〜Ｃ8 アルコキシルまたはアルキルチオ、ハロゲン、ニトロ、スルホキシルなどである。
【００２８】
Ｒ1 及びＲ2 が窒素原子と共に、場合によっては更に１個または２個のヘテロ原子を有する五または六員複素環を構成する場合、前記ヘテロ原子は例えば窒素、酸素または硫黄原子である。このような複素環には、モルホリン、Ｎ−メチル−モルホリン、オキサゾリジンまたはチアゾリジンなどが有る。
【００２９】
上記式ＩＩＩのアミンは、例えば化学量論量でか、または精製するべき化合物に対して過剰な量で用いる。
【００３０】
本発明によるアミン塩は酸での処理によって容易に、Ｅ含量の低下した式Ｉの化合物にか、または式Ｉａを有する純粋なＺ化合物に変換できる。この変換は、アミン塩を水に溶解または懸濁させ、例えば塩酸、リン酸または硫酸などの酸の添加により酸性化することによって行ない得る。遊離するアミンは、場合によっては最初のアルカリ性段階で抽出により除去し得、あるいはまたアルコールやケトンなどの有機溶媒の添加により溶解状態に維持し得る。生じた式Ｉまたは式Ｉａの結晶質化合物は後で濾別して乾燥する。
【００３１】
方法ａ）には幾つかの利点が有る。アミン塩は容易に沈澱及び結晶化する。方法ａ）は、セファロスポリンの製造においてＥ含量の高い、及び／または、例えば方法ｂ）で早期溶離画分から得られるような副産物を含有する式ＩのＺ／Ｅ混合物に適用すれば特に有利であり、Ｅ含量の低い高純度の生成物が得られる。この方法には総収率を向上させるという利点も有る。方法ａ）は、場合によっては所望のＺ／Ｅ比を実現するべく繰り返して実施し得る。
【００３２】
７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のアミン塩、特に式ＩＩ
【００３３】
【化９】
0003675863.tif 000006
【００３４】
〔式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 は先に規定したとおりのものである〕の化合物で、なかでもそのＣ＝Ｃ結合上の水素原子がシス配置を有するものは新規であり、本発明の一部を成す。上記のようなアミン塩は、７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のＺ／Ｅ混合物の分離を驚くほど容易にする。
【００３５】
方法ｂ）は次のように実施し得る。
【００３６】
式Ｉの化合物を、例えばアンモニアなどの塩基か塩酸などの無機酸の添加により水などに溶解させてクロマトグラフィー、例えば吸着クロマトグラフィーに掛ける。吸着剤には、例えばＨＰ−２０、ＨＰ−２１もしくはＳＰ  ２０７（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ社）、ＸＡＤ−１１８０、ＸＡＤ−１６００もしくはＸＡＤ−１６（例えばＲｏｈｍ−Ｈａａｓ社）、またはＡｍｂｅｒｃｈｒｏｍ  ＣＧ−１６１（Ｔｏｓｏ−Ｈａａｓ社）として販売されているようなイオン交換樹脂などの吸着媒樹脂、特にＸＡＤ−１６００及びＡｍｂｅｒｃｈｒｏｍ  ＣＧ−１６１や、例えばＮｏｒｉｔ  ＣＧ−１、ＳＸ−ｐｌｕｓ、Ｃ−ｇｒａｎｕｌａｒまたはＣｅｃａｒｂｏｎ  ＧＡＣ  ４０として販売されているような活性炭が含まれる。溶離は水を用いてか、または溶媒と水との混合物を用いて行なう。溶媒は、例えばメタノール、エタノール及びイソプロパノールなどのアルコールかまたはアセトンなどのケトンであり得、特にアルコールであり得る。この方法ｂ）において、Ｅ異性体はＺ異性体より良く吸着し、即ちＺ異性体より溶離に時間が掛かる。従って、最初に溶離される画分は主にＺ異性体を含有し、一方最後の画分は主にＥ異性体を含有する。ｐＨ値を式Ｉの化合物の等電点に近い値、即ち２．５〜４．５、特に３．０〜３．７に調節することによって所望の生成物を得る。結晶化が生起し得る。特にいずれの画分同士を組み合わせるかによって、きわめて少量のＥ異性体しか含有しない生成物が得られたり、比較的大量のＥ異性体を含有する生成物が得られたりする。いずれにせよ、本発明の方法によって得られる生成物のＥ異性体含量は出発Ｚ／Ｅ混合物の含量より低い。吸着剤の量は、特に所望の溶解速度と、式Ｉの出発化合物のＺ／Ｅ比とに応じて決まる。
【００３７】
方法ｂ）は、非常に単純で、経済的で、かつ環境的に許容可能な方法を提示する。溶離は水と、場合によってはアルコールとで行ない得るが、アルコールは環境的に許容可能な溶媒である。吸着剤は、例えば水またはアルコールで洗浄すれば再生可能である。アルコールと水との混合物も容易に再生できる。設備は単純である。勾配溶離や段階的溶離、及びｐＨの変更は必要ない。
【００３８】
方法ａ）とｂ）とは好ましく組み合わせることができる。
【００３９】
上述の２方法により説明したようにして、例えば８６：１４以下、９１：９以下、９２：８以下、９６：４以下、または９８：２以下といった比率で様々な量のＺ／Ｅ異性体を含有し、その際Ｅ異性体は 1Ｈ−ＮＭＲなどによって検出不能である低Ｅ含量の式Ｉ化合物またはそのアミン塩を製造し得、例えば検出不能な量のＥ異性体しか含有しない式Ｉａ及び式ＩＩの化合物を製造し得る。本発明の方法で出発物質として用いる式Ｉの化合物は任意のＺ／Ｅ比を有し得るが、その際Ｚ異性体もＥ異性体も少なくとも検出可能な量で含有する。方法ａ）及びｂ）は工業的規模に適する。
【００４０】
Ｅ異性体含量の高い式Ｉ化合物のＺ／Ｅ混合物は公知方法で製造し得る。
【００４１】
式Ｉａの化合物、及びＥ異性体含量が１５％以下である式Ｉの化合物は新規であり、本発明の一部を成す。
【００４２】
Ｅ含量の低い式Ｉの化合物、及び式Ｉａの化合物は、セフジトレンピボキシル、及び３位に同じ置換パターンを有する類似の活性化合物の製造用の理想的な出発物質である。７位及び４位が異なるきわめて様々な誘導体（カルボン酸）の製造も可能であり、それらの誘導体を本発明により純粋形態で製造することは非常に簡単かつ経済的に行なえる。
【００４３】
樹脂の詳細は、例えば製造パンフレット類から公知である。
【００４４】
【実施例】
本発明を詳細に説明する以下の実施例において、温度は総て摂氏で示す。標準的な 1Ｈ−ＮＭＲとしてトリメチルシリルプロピオン酸−ｄ4 を用いる。
【００４５】
実施例１
（Ｚ／Ｅ）７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸中の７−アミノ−３−［（Ｅ）−２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸の、ジシクロヘキシルアンモニウム塩を用いての枯渇
ａ）  Ｅ含量約１４％（ 1Ｈ−ＮＭＲ）の（Ｚ／Ｅ）７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸３ｇを、６ｍｌの水と１５ｍｌのアセトンとの混合物に添加する。得られた懸濁液を３０°に加熱する。２．０４ｍｌのジシクロヘキシルアミンを添加し、混合物を、実質的に透明な溶液が得られるまで攪拌する。熱を除去し、数個の種晶を添加し、得られた懸濁液を室温で１５分間攪拌する。２１ｍｌのアセトンを１５分掛けて滴下し加え、その後反応混合物を氷浴中に２時間置く。ジシクロヘキシルアンモニウム塩を吸引漏斗によって単離し、総量２０ｍｌのアセトンで洗浄し、真空下に一晩乾燥する。
【００４６】
Ｅ含量（ 1Ｈ−ＮＭＲ）：  約９％。
【００４７】
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）：  １．１３〜１．３４（ｍ，１０Ｈ，シクロヘキシル）；  １．６５〜１．６９（ｍ，２Ｈ，シクロヘキシル）；  １．８２（ｓ，広幅，４Ｈ，シクロヘキシル）；  ２．０４（ｍ，広幅，４Ｈ，シクロヘキシル）；  ２．３９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ，Ｚ）；  ２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ，Ｅ）；  ３．２〜３．３（ｍ，２Ｈ，シクロヘキシル）；  ３．３２，３．５７（ＡＢｑ，Ｊ＝１８．３Ｈｚ，２Ｈ，ＳＣＨ2 ，Ｚ）；  ３．６８，３．８４（ＡＢｑ，Ｊ＝１７．３Ｈｚ，２Ｈ，ＳＣＨ2 ，Ｅ）；  ４．８０〜５．２２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−７，Ｚ及びＥ）；  ４．８１（ｓ，広幅，ＨＯＤ）；  ６．３２，６．６４（ＡＢｑ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ，Ｚ）；  ６．８６，７．０５（ＡＢｑ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ，Ｅ）；  ８．７４（ｓ，１Ｈ，ＣＨ＝Ｎ，Ｅ）；  ８．７８（ｓ，１Ｈ，ＣＨ＝Ｎ，Ｚ）。
【００４８】
上記ａ）で得られたジシクロヘキシルアンモニウム塩２ｇを約３０°において６０ｍｌの水に溶解させ、ｐＨ値を、稀硫酸を用いて徐々に調節して３．５とする。次に、懸濁液を氷冷しながら３０分間攪拌する。その後、晶出した遊離酸を吸引漏斗によって濾別し、水及びアセトンで洗浄し、乾燥する。
【００４９】
Ｅ含量（ 1Ｈ−ＮＭＲ）：  約９％。
【００５０】
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ／Ｋ2 ＣＯ3 ）：  ２．３８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ，Ｚ）；２．４２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ，Ｅ）；  ３．３２，３．５７（ＡＢｑ，Ｊ＝１８Ｈｚ，３Ｈ，ＳＣＨ2 ，Ｚ）；  ３．６７，３．８２（ＡＢｑ，Ｊ＝１７Ｈｚ，３Ｈ，ＳＣＨ2 ，Ｅ）；  ４．８１（ｓ，広幅，ＨＯＤ）；  ５．１〜５．５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−７，Ｚ＋Ｅ）；  ６．３１，６．６４（ＡＢｑ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ，Ｚ）；  ６．８３，７．０２（ＡＢｑ，Ｊ＝１６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ，Ｅ）；  ８．７２（ｓ，１Ｈ，Ｓ−ＣＨ＝Ｎ，Ｅ）；８．７７（ｓ，１Ｈ，Ｓ−ＣＨ＝Ｎ，Ｚ）。
【００５１】
ｂ）  Ｅ含量約９％の（Ｚ／Ｅ）７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸１ｇを、２ｍｌの水と５ｍｌのアセトンとの混合物に添加する。０．６８ｍｌのジシクロヘキシルアミンを添加する。実質的に透明な溶液が得られ、この溶液から晶出が起こる。懸濁液を室温で１５分間放置し、その後１５分間攪拌してから７ｍｌのアセトンをゆっくり添加する。次に氷浴中で２時間冷却した後、ジシクロヘキシルアンモニウム塩を単離し、５ｍｌのアセトンで洗浄し、乾燥する。
【００５２】
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）：  １．１３〜１．３４（１０Ｈ，シクロヘキシル）；１．６５〜１．６９（２Ｈ，シクロヘキシル）；  １．８２（ｓ，広幅，４Ｈ，シクロヘキシル）；  ２．０４（ｓ，広幅，４Ｈ，シクロヘキシル）；  ２．３９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ）；  ３．２〜３．３（ｍ，２Ｈ，シクロヘキシル）；３．３２，３．５７（ＡＢｑ，Ｊ＝１８．３Ｈｚ，２Ｈ，ＳＣＨ2 ）；  ４．８０（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ，β−ラクタム）；  ４．８１（ｓ，広幅，ＨＯＤ）；  ５．２１（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ，β−ラクタム）；  ６．３２，６．６４（ＡＢｑ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ）；  ８．７８（ｓ，１Ｈ，ＣＨ＝Ｎ）。
【００５３】
Ｅ含量（ 1Ｈ−ＮＭＲ）：  検出不能。
【００５４】
上記ｂ）によって得られたジシクロヘキシルアンモニウム塩０．８ｇを３０°において３０ｍｌの水に溶解させる。得られた混合物を攪拌下に稀硫酸でｐＨ３．５に酸性化し、氷浴中に３０分間置いた後晶析物を単離する。生成物（遊離酸）を水及びアセトンで洗浄し、乾燥する。
【００５５】
融点：  ＞２００°（分解）。
【００５６】
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ／Ｋ2 ＣＯ3 ）：  ２．３８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ）；  ３．３２，３．５７（ＡＢｑ，Ｊ＝１８．３Ｈｚ，２Ｈ，ＳＣＨ2 ）；  ４．８０（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ，β−ラクタム）；  ４．８１（ｓ，広幅，ＨＯＤ）；  ５．２１（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ，β−ラクタム）；  ６．３１，６．６４（ＡＢｑ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ）；  ８．７７（ｓ，１Ｈ，ＳＣＨ＝Ｎ）。
【００５７】
Ｅ含量（ 1Ｈ−ＮＭＲ）：  検出不能。
【００５８】
実施例２
（Ｚ／Ｅ）７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸中の７−アミノ−３−［（Ｅ）−２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸の、ｔ−オクチルアンモニウム塩を用いての枯渇
Ｅ含量約１３％（ 1Ｈ−ＮＭＲ）の（Ｚ／Ｅ）７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸６ｇを、１２ｍｌの水と３０ｍｌのアセトンとの混合物に添加する。得られた懸濁液を３０°に加熱する。３．４ｍｌのｔ−オクチルアミンを添加し、混合物を室温で３０分間攪拌する。４２ｍｌのアセトンを１５分掛けて滴下し加え、その後反応混合物を氷浴中に２時間置く。ｔ−オクチルアンモニウム塩を吸引漏斗によって単離し、総量２０ｍｌのアセトンで洗浄し、真空下に一晩乾燥する。
【００５９】
融点：  １９５〜１９９°（分解）。
【００６０】
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）：  １．０５［ｓ，９Ｈ，Ｃ（ＣＨ3 ）3 ，ｔ−オクチル］；  １．４５［ｓ，６Ｈ，Ｃ（ＣＨ3 ）2 ，ｔ−オクチル］；  １．６８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2 ，ｔ−オクチル）；  ２．２４（ｓ，ＣＨ3 ，アセトン）；  ２．４０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ）；  ３．３４，３．６０（ＡＢｑ，Ｊ＝１８．１Ｈｚ，２Ｈ，ＳＣＨ2 ）；  ４．８０（ＨＯＤ下，１Ｈ，β−ラクタム）；  ４．８１（ｓ，広幅，ＨＯＤ）；  ５．２２（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ，β−ラクタム）；  ６．３３，６．６７（ＡＢｑ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ）；  ８．７９（ｓ，１Ｈ，ＣＨ＝Ｎ）。
【００６１】
Ｅ含量（ 1Ｈ−ＮＭＲ）：  検出不能。
【００６２】
上述のようにして得られたｔ−オクチルアンモニウム塩６ｇを室温において１８０ｍｌの水及び約１００ｍｌのメタノールと混合し、溶液が得られるまで攪拌する。ｐＨ値を稀硫酸で徐々に調節して３．５とする。次に、懸濁液を氷冷しながら３０分間攪拌する。晶出した遊離酸を吸引漏斗によって濾別し、水及びアセトンで洗浄し、乾燥する。
【００６３】
1Ｈ−ＮＭＲ：  実施例１のａ）と同様。
【００６４】
Ｅ含量（ 1Ｈ−ＮＭＲ）：  検出不能。
【００６５】
実施例３
（Ｚ／Ｅ）７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸中の７−アミノ−３−［（Ｅ）−２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸の、ｔ−ブチルアンモニウム塩を用いての枯渇
Ｅ含量約２５％（1 Ｈ−ＮＭＲ）の（Ｚ／Ｅ）７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸０．５ｇを、１ｍｌの水と５ｍｌのアセトンとの混合物に添加する。０．２ｇのｔ−ブチルアミンを添加して透明な溶液を得、この溶液を室温で３０分間攪拌する。１０ｍｌのアセトンを添加し、その後反応混合物を氷浴中に２時間置く。ｔ−ブチルアンモニウム塩を吸引漏斗によって単離し、総量５ｍｌのアセトンで洗浄し、真空下に一晩乾燥する。
【００６６】
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）：  １．３４［ｓ，９Ｈ，Ｃ（ＣＨ3 ）3 ，ｔ−ブチル］；  ２．３５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 ，Ｚ及びＥ）；  ３．３０，３．５４（ＡＢｑ，Ｊ＝１８．１Ｈｚ，２Ｈ，ＳＣＨ2 ，Ｚ）；  ３．６，３．８（ＡＢｑ，２Ｈ，ＳＣＨ2 ，Ｅ）；  ４．７８（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ，β−ラクタム，Ｚ）；  ４．８１（ｓ，広幅，ＨＯＤ）；  ５．１（ｄ，１Ｈ，β−ラクタム，Ｅ）；  ５．１８（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ，β−ラクタム，Ｚ）；  ６．２８，６．６１（ＡＢｑ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ，Ｚ）；  ６．８，７．０（ＡＢｑ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ，Ｅ）；  ８．７（ｓ，１Ｈ，ＣＨ＝Ｎ，Ｅ）；  ８．７４（ｓ，１Ｈ，ＣＨ＝Ｎ，Ｚ）。
【００６７】
Ｅ含量（ 1Ｈ−ＮＭＲ）：  約４％。
【００６８】
実施例４
（Ｚ／Ｅ）７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸中の７−アミノ−３−［（Ｅ）−２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のクロマトグラフィーによる枯渇
Ｅ含量約２３％（ 1Ｈ−ＮＭＲ）の（Ｚ／Ｅ）７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸１０ｇを１００ｍｌの水及び２５ｍｌのアセトン中に懸濁させ、氷冷しながら塩酸水溶液でｐＨ０．８に酸性化する。不透明な溶液を３ｇの活性炭で濾過し、その後活性炭を、数滴の塩酸を含有する水１０ｍｌで洗浄する。溶出液のｐＨ値を２Ｎ  ＮａＯＨで徐々に調節して３．５とし、生成物を沈澱させる。その後１時間、混合物を氷冷しながら攪拌する。沈澱した遊離酸を濾別し、水及びアセトンで洗浄し、乾燥する。
【００６９】
Ｅ含量（ 1Ｈ−ＮＭＲ）：  約１４％。
【００７０】
実施例５
（Ｚ／Ｅ）７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸中の７−アミノ−３−［（Ｅ）−２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸のクロマトグラフィーによる枯渇
Ｅ含量約２４％（ 1Ｈ−ＮＭＲ）の（Ｚ／Ｅ）７−アミノ−３−［２−（４−メチル−５−チアゾリル）ビニル］−３−セフェム−４−カルボン酸１ｇを１０ｍｌの水及び少量のアンモニア（ｐＨ８）と混合する。得られた溶液を、１００ｍｌのＡｍｂｅｒｃｈｒｏｍ（登録商標）  ＣＧ−１６１を満たしたカラム上に移し、水に加えた２体積％のイソプロパノールで溶離する。Ｅ異性体を４％未満しか含有しない画分を集め、蒸発によって体積が約３０ｍｌとなるまで濃縮し、塩酸でｐＨ３に調節する。混合物を氷浴中で１時間攪拌し、析出物（遊離酸）を濾別し、水で洗浄し、乾燥する。
【００７１】
Ｅ含量（1 Ｈ−ＮＭＲ）：  約２％。