(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リン酸四カルシウム粒子（Ａ）、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）、酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）、及び水を主成分とする液体又は水系ペーストを混合する歯牙石灰化剤の製造方法であって、
リン酸四カルシウム粒子（Ａ）、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）及び酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）を含む粉体をボールミル又はライカイ機で予め混合し、該粉体と水を主成分とする液体又は水系ペーストとを混合して、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）１００重量部に対してリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を０．５〜５０重量部配合し、歯牙石灰化剤の全量１００重量部に対するリン酸四カルシウム粒子（Ａ）の配合量を１〜８０重量部とし、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）と酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）の配合割合（Ａ／Ｃ）をモル比で４０／６０〜６０／４０とすることを特徴とする歯牙石灰化剤の製造方法。
【請求項２】
リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）がリン酸一水素二ナトリウム及び／又はリン酸二水素一ナトリウムである請求項１記載の歯牙石灰化剤の製造方法。
【請求項３】
酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）が、無水リン酸一水素カルシウム［ＣａＨＰＯ４］粒子、無水リン酸二水素カルシウム［Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２］粒子、リン酸三カルシウム［Ｃａ３（ＰＯ４）２］粒子、非晶性リン酸カルシウム［Ｃａ３（ＰＯ４）２・ｘＨ２Ｏ］粒子、酸性ピロリン酸カルシウム[ＣａＨ２Ｐ２Ｏ７]粒子、リン酸一水素カルシウム２水和物［ＣａＨＰＯ４・２Ｈ２Ｏ］粒子、及びリン酸二水素カルシウム１水和物［Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２・Ｈ２Ｏ］粒子からなる群から選択される少なくとも１種である請求項１又は２記載の歯牙石灰化剤の製造方法。
【請求項４】
更にフッ素化合物（Ｄ）を含有する請求項１〜３のいずれか記載の歯牙石灰化剤の製造方法。
【請求項５】
フッ素化合物（Ｄ）がフッ化ナトリウムである請求項４記載の歯牙石灰化剤の製造方法。
【請求項６】
リン酸四カルシウム粒子（Ａ）の平均粒径が０．５〜４０μｍである請求項１〜５のいずれか記載の歯牙石灰化剤の製造方法。
【請求項７】
リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）の平均粒径が０．５〜２０μｍである請求項１〜６のいずれか記載の歯牙石灰化剤の製造方法。
【請求項８】
酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）の平均粒径が０．１〜７μｍである請求項１〜７のいずれか記載の歯牙石灰化剤の製造方法。
【請求項９】
更に平均粒径が０．００２〜２μｍであるシリカ又は金属酸化物から選択される粒子（Ｅ）を含有する請求項１〜８のいずれか記載の歯牙石灰化剤の製造方法。
【請求項１０】
該歯牙石灰化剤０．０５ｇを２５℃の純水２００ｇに投入して懸濁液を調製した際に、投入から１０分後における該懸濁液の遊離アルカリ金属イオン濃度が０．２〜１００ｍｇ／Ｌであることを特徴とする請求項１〜９のいずれか記載の歯牙石灰化剤の製造方法。
【請求項１１】
遊離アルカリ金属イオン濃度の平均値をｄとしたときの標準偏差σがσ≦０．３ｄを満たす請求項１０記載の歯牙石灰化剤の製造方法。
【請求項１２】
アルカリ金属イオンがナトリウムイオンである請求項１０又は１１記載の歯牙石灰化剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、歯牙表面を石灰化させる歯牙石灰化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
８０歳になっても２０本以上自分の歯を保とうとする、いわゆる８０２０運動（口腔衛生の向上、歯質の保存（ＭＩ：Ｍｉｎｉｍａｌ  Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ））に伴い、う蝕に罹患する前の初期う蝕の段階で石灰化を行い健全な歯質に戻す石灰化治療が近年脚光を浴びている。この観点から、有効成分としてフッ素やカルシウム可溶化剤（ＣＰＰ−ＡＣＰ；Casein Phosphopeptide-Amorphous Calcium Phosphate、ＰＯｓ−Ｃａ（登録商標）；リン酸化オリゴ糖カルシウム）が配合された機能性ガム、歯磨材、歯面処理材が各社より発売されている。しかしながら、フッ素は歯の耐酸性を向上させて、歯質のミネラル分を強化する機能があるとされているが、大量に摂取することによる副作用の問題があった。また、カルシウム可溶化剤を配合した材料は歯質付近に高濃度のミネラル分を供給できる反面、可溶性が高いためミネラル分の沈着能力は低いという問題もあった。
【０００３】
一方、硬化性を有するリン酸カルシウム組成物として、リン酸四カルシウム（以下「ＴＴＣＰ」と略記することがある）と無水リン酸一水素カルシウム（以下「ＤＣＰＡ」と略記することがある）とを組み合わせたリン酸カルシウムセメント（以下「ＣＰＣ」と略記することがある）が知られており、生体内や口腔内において生体吸収性のヒドロキシアパタイト（以下「ＨＡｐ」と略記することがある；Ｃａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２）へ徐々に転化し、さらに形態を保ったままで生体硬組織と一体化し得るとされている。
【０００４】
例えば、特許第３０１７５３６号公報（特許文献１）には、リン酸四カルシウムとリン酸水素カルシウム無水物を含むリン酸カルシウム組成物が水の存在下で反応してヒドロキシアパタイトを生成することが記載されている。こうして得られたヒドロキシアパタイトは、生体硬組織と接触することによって骨へと徐々に置換することが可能であり、また、上記リン酸カルシウム組成物は石灰化能を有するため、石灰化剤としても使用できるとされている。一方、上記リン酸カルシウム組成物を迅速に硬化させる目的で、リン酸一水素二ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）等のリン酸のアルカリ金属塩を加えることが記載されている。しかしながら、石灰化の効果を向上させる目的でリン酸のアルカリ金属塩を添加することについては記載も示唆もされていなかった。
【０００５】
また、特開平１−１６３１２７号公報（特許文献２）には、リン酸四カルシウム、Ｃａ／Ｐモル比が１．６７未満のリン酸カルシウム、及び増粘剤よりなる知覚過敏症治癒用組成物について記載されている。これによれば、歯牙の知覚過敏部位へ塗布して所定時間保持することにより、知覚過敏を著しく軽減させることができるとされている。知覚過敏が著しく低減する理由として、該組成物の水等との練和物中から溶出したカルシウムイオンやリン酸イオンが象牙細管へ拡散浸透して、この象牙細管中でヒドロキシアパタイトが析出沈積することにより外界からの機械的刺激、熱刺激、及び化学的刺激を遮断するためとされている。一方、上記知覚過敏症治癒用組成物に、水との練和性やペースト粘度の調節のために、ヒドロキシアパタイト、フッ化カルシウム、酸化チタン、水酸化カルシウム、リン酸ナトリウム、リン酸アンモニウム、アルミナ、シリカ等の他の成分を添加してもよいことが記載されている。しかしながら、石灰化の効果を向上させる目的でリン酸のアルカリ金属塩を添加することについては記載も示唆もされていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第３０１７５３６号公報
【特許文献２】特開平１−１６３１２７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は上記課題を解決するためになされたものであり、石灰化効果の高い歯牙石灰化剤を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題は、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）、酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）、及び水を主成分とする液体又は水系ペーストを混合する歯牙石灰化剤の製造方法であって、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）及び酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）を含む粉体をボールミル又はライカイ機で予め混合し、該粉体と水を主成分とする液体又は水系ペーストとを混合して、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）１００重量部に対してリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を０．５〜５０重量部配合し、歯牙石灰化剤の全量１００重量部に対するリン酸四カルシウム粒子（Ａ）の配合量を１〜８０重量部とし、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）と酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）の配合割合（Ａ／Ｃ）をモル比で４０／６０〜６０／４０とすることを特徴とする歯牙石灰化剤の製造方法を提供することによって解決される。
【０００９】
このとき、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）がリン酸一水素二ナトリウム及び／又はリン酸二水素一ナトリウムであることが好適である。酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）が、無水リン酸一水素カルシウム［ＣａＨＰＯ４］粒子、無水リン酸二水素カルシウム［Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２］粒子、リン酸三カルシウム［Ｃａ３（ＰＯ４）２］粒子、非晶性リン酸カルシウム［Ｃａ３（ＰＯ４）２・ｘＨ２Ｏ］粒子、酸性ピロリン酸カルシウム[ＣａＨ２Ｐ２Ｏ７]粒子、リン酸一水素カルシウム２水和物［ＣａＨＰＯ４・２Ｈ２Ｏ］粒子、及びリン酸二水素カルシウム１水和物［Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２・Ｈ２Ｏ］粒子からなる群から選択される少なくとも１種であることが好適である。更にフッ素化合物（Ｄ）を含有することが好適であり、フッ素化合物（Ｄ）がフッ化ナトリウムであることが好適である。リン酸四カルシウム粒子（Ａ）の平均粒径が０．５〜４０μｍであることが好適であり、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）の平均粒径が０．５〜２０μｍであることが好適である。酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）の平均粒径が０．１〜７μｍであることが好適であり、更に平均粒径が０．００２〜２μｍであるシリカ又は金属酸化物から選択される粒子（Ｅ）を含有することが好適である。
【００１０】
また、このとき、該歯牙石灰化剤０．０５ｇを２５℃の純水２００ｇに投入して懸濁液を調製した際に、投入から１０分後における該懸濁液の遊離アルカリ金属イオン濃度が０．２〜１００ｍｇ／Ｌであることが好適であり、遊離アルカリ金属イオン濃度の平均値をｄとしたときの標準偏差σがσ≦０．３ｄを満たすことが好適であり、アルカリ金属イオンがナトリウムイオンであることが好適である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、石灰化効果の高い歯牙石灰化剤が提供され、特にエナメル質表面に対する石灰化効果の高い歯牙石灰化剤が提供される。このことにより、初期う蝕の段階での治療が可能となるばかりでなく、健全歯質、特に健全エナメル質を更に強化することが可能となり、う蝕を予防する材料を提供することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】比較例６において、エナメル質表層に作製した脱灰エナメル質（脱灰部分）のコンタクトマイクロラジオグラム像である。
【図２】比較例６において、エナメル質表層に作製した脱灰エナメル質を歯牙石灰化剤により石灰化したエナメル質（石灰化部分）のコンタクトマイクロラジオグラム像である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の歯牙石灰化剤は、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）、及びリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を含有するものである。ここで、本発明で用いられる用語の「歯牙」には、「エナメル質」及び「象牙質」の両方が含まれる。リン酸四カルシウム粒子（Ａ）を含む組成物を水の存在下で混合するとヒドロキシアパタイトへ徐々に転化する。本発明者により、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）、及びリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を一定量含有する歯牙石灰化剤を用いることにより、石灰化効果が高く、特にエナメル質表面に対する石灰化効果が高いことが明らかとなった。この理由については必ずしも明らかではないが、以下のようなメカニズムが推定される。
【００１４】
すなわち、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）、及びリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を一定量含有する歯牙石灰化剤を水の存在下で調製して用いた際に、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）が溶解して得られるカルシウムイオンと、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）が溶解して得られるリン酸イオンとが反応してエネルギー的に安定なＨＡｐが析出するようである。その結果、エナメル質表面が石灰化されて該エナメル質表面のミネラル成分が回復されるようである。このことにより、初期う蝕の段階での治療が可能となる。ここで本発明者は、上記効果を奏するにはカルシウムイオンとリン酸イオンとが供給される速度のバランスが重要であると推察しており、また、カルシウムイオンを供給する化合物及びリン酸イオンを供給する化合物の溶解度が低い場合や極端に高い場合には、ＨＡｐの析出が良好ではないことを確認している。したがって、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）とリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を一定量含有することで、カルシウムイオンとリン酸イオンとの供給バランスが適切となる本発明の構成を採用する意義が大きい。
【００１５】
本発明は、歯牙石灰化剤の全量１００重量部に対してリン酸四カルシウム粒子（Ａ）を１〜８０重量部含む。リン酸四カルシウム粒子（Ａ）の含有量が１重量部未満の場合、ＨＡｐの析出が阻害されて石灰化効果が得られないおそれがあり、５重量部以上であることが好ましく、１０重量部以上であることがより好ましく、２０重量部以上であることが更に好ましい。一方、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）の含有量が８０重量部を超える場合、ＨＡｐの析出が阻害されて石灰化効果が得られないおそれがあり、７５重量部以下であることが好ましく、７０重量部以下であることがより好ましく、６０重量部以下であることが更に好ましい。
【００１６】
本発明で使用されるリン酸四カルシウム［Ｃａ４（ＰＯ４）２Ｏ］粒子（Ａ）の製造方法は特に限定されない。市販されているリン酸四カルシウム粒子をそのまま用いてもよいし、適宜粉砕して粒径を整えて使用してもよい。粉砕方法としては、後に説明する酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）の粉砕方法と同様の方法を採用できる。
【００１７】
本発明で用いられるリン酸四カルシウム粒子（Ａ）の平均粒径は、０．５〜４０μｍであることが好ましい。平均粒径が０．５μｍ未満の場合、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）の溶解が過度になることにより水溶液中のｐＨが高くなりヒドロキシアパタイトの析出が円滑でなくなることで、石灰化効果が得られないおそれがある。リン酸四カルシウム粒子（Ａ）の平均粒径は、より好適には５μｍ以上であり、更に好適には１０μｍ以上である。一方、平均粒径が４０μｍを超える場合、液剤との混合により得られるペーストが十分な粘性を示さないなどペースト性状が好ましくないおそれがある。また、ペースト練和時のざらつき感が大きくなり操作性が損なわれる、あるいは練和に用いられるスタティックミキサーからのペーストの取り出しが困難となるおそれもある。リン酸四カルシウム粒子（Ａ）の平均粒径は、３５μｍ以下であることがより好ましく、３０μｍ以下であることが更に好ましい。ここで、本発明で使用するリン酸四カルシウム粒子（Ａ）の平均粒径とは、レーザー回折式粒度分布測定装置を用いて測定し、算出したものである。
【００１８】
本発明の歯牙石灰化剤は、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）１００重量部に対してリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を０．５〜５０重量部含むものである。このように、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）に加えてリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を一定量含有することにより、石灰化効果が高く、特にエナメル質表面に対する石灰化効果が高い歯牙石灰化剤を提供することができる。リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）の含有量が０．５重量部未満の場合、ＨＡｐの析出が阻害されて石灰化効果が得られないおそれがあり、１重量部以上であることが好ましく、２重量部以上であることがより好ましい。一方、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）の含有量が５０重量部を超える場合、ＨＡｐの析出が阻害されて石灰化効果が得られないおそれがあり、４０重量部以下であることが好ましく、３０重量部以下であることがより好ましく、２５重量部以下であることが更に好ましい。
【００１９】
本発明で用いられるリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）としては特に限定されず、リン酸一水素二ナトリウム、リン酸一水素二カリウム、リン酸二水素一リチウム、リン酸二水素一ナトリウム、リン酸二水素一カリウム、リン酸三ナトリウム、リン酸三カリウム等が挙げられ、これらのうちの１種又は２種以上が用いられる。中でも、安全性や純度の高い原料が容易に入手できる観点から、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）がリン酸一水素二ナトリウム及び／又はリン酸二水素一ナトリウムであることが好ましい。また、安全性の観点から、本発明で用いられるリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）におけるアルカリ金属イオンがナトリウムイオンであることが好ましい。
【００２０】
本発明で用いられるリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）の平均粒径が０．５〜２０μｍであることが好ましい。リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）の平均粒径が０．５μｍ未満の場合、凝集が顕著となることで液剤又は粉剤中に均一に分散させることが困難となることから、水の存在下で調製した本発明の歯牙石灰化剤から放出されるリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）由来のリン酸イオンの歯牙に対する供給が不足し、カルシウムイオンとの供給バランスが崩れることで石灰化率が低下するとともにエナメル質硬度の向上効果が低下するおそれがあり、１μｍ以上であることがより好ましい。一方、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）の平均粒径が２０μｍを超える場合、水の存在下で調製した本発明の歯牙石灰化剤から放出されるリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）由来のリン酸イオンの歯牙に対する供給が不足し、カルシウムイオンとの供給バランスが崩れることで石灰化率が低下するとともにエナメル質硬度の向上効果が低下してしまうおそれがある。リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）の平均粒径は１５μｍ以下であることがより好ましく、１０μｍ以下であることが更に好ましい。
【００２１】
本発明の歯牙石灰化剤は、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）及びリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）に加えて、更に酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）を含有することが好ましい。このことにより、石灰化効果をより高めることが可能となる。本発明者は、この理由について、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）及びリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）に加えて溶解度の低い酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）を含有することにより、ペースト塗布後にカルシウムイオンとリン酸イオンをより長時間供給できるだけでなく、供給バランスがより適切となるためと推察している。
【００２２】
本発明で用いられる酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）としては特に限定されず、無水リン酸一水素カルシウム［ＣａＨＰＯ４］粒子、無水リン酸二水素カルシウム［Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２］粒子、リン酸三カルシウム［Ｃａ３（ＰＯ４）２］粒子、非晶性リン酸カルシウム［Ｃａ３（ＰＯ４）２・ｘＨ２Ｏ］粒子、酸性ピロリン酸カルシウム[ＣａＨ２Ｐ２Ｏ７]粒子、リン酸一水素カルシウム２水和物［ＣａＨＰＯ４・２Ｈ２Ｏ］粒子、及びリン酸二水素カルシウム１水和物［Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２・Ｈ２Ｏ］粒子からなる群から選択される少なくとも１種であることが好ましい。これらの中でも、無水リン酸一水素カルシウム［ＣａＨＰＯ４］粒子、無水リン酸二水素カルシウム［Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２］粒子、リン酸一水素カルシウム２水和物［ＣａＨＰＯ４・２Ｈ２Ｏ］粒子、及びリン酸二水素カルシウム１水和物［Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２・Ｈ２Ｏ］粒子からなる群から選択される少なくとも１種がより好適に使用され、特に無水リン酸一水素カルシウム［ＣａＨＰＯ４］粒子、及び無水リン酸二水素カルシウム［Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２］粒子からなる群から選択される少なくとも１種が更に好適に使用される。
【００２３】
本発明で用いられる酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）の平均粒径は、０．１〜７μｍであることが好ましい。平均粒径が０．１μｍ未満の場合、液剤への溶解が過多となるためカルシウムイオンとリン酸イオンの供給バランスが崩れるだけでなく、液剤との混合により得られるペーストの粘度が高くなり過ぎるおそれがあり、より好適には０．３μｍ以上である。一方、平均粒径が７μｍを超える場合、酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）が液剤へ溶解しにくくなるためリン酸四カルシウム粒子（Ａ）の溶解が過度となるおそれがある。その結果、カルシウムイオンとリン酸イオンの供給バランスが崩れることに加え、水溶液のｐＨが高くなることでヒドロキシアパタイトの析出が円滑でなくなり、石灰化効果が低下するおそれがある。酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）の平均粒径は、より好適には３μｍ以下である。酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）の平均粒径は、上記リン酸四カルシウム粒子（Ａ）の平均粒径と同様にして算出される。
【００２４】
このような平均粒径を有する酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）の製造方法は特に限定されず、市販品を入手できるのであればそれを使用してもよいが、市販品を更に粉砕することが好ましい場合が多い。その場合、ボールミル、ライカイ機、ジェットミルなどの粉砕装置を使用することができる。また、酸性リン酸カルシウム原料粉体をアルコールなどの液体の媒体と共にライカイ機、ボールミル等を用いて粉砕してスラリーを調製し、得られたスラリーを乾燥させることにより酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）を得ることもできる。このときの粉砕装置としては、ボールミルを用いることが好ましく、そのポット及びボールの材質としては、好適にはアルミナやジルコニアが採用される。
【００２５】
ここで、酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）の平均粒径に比べてリン酸四カルシウム粒子（Ａ）の平均粒径を大きくすることによって、両者の溶解度のバランスが適切となり、水溶液のｐＨを中性付近に維持することが可能となる。その結果、ヒドロキシアパタイトの析出が円滑となり、石灰化効果を向上させることができる。具体的には（Ａ）の平均粒径を（Ｃ）の平均粒径の２倍以上とすることがより好ましく、４倍以上とすることがさらに好ましく、７倍以上とすることが特に好ましい。一方、（Ａ）の平均粒径を（Ｃ）の平均粒径の３５倍以下とすることがより好ましく、３０倍以下とすることが更に好ましく、２５倍以下とすることが特に好ましい。
【００２６】
リン酸四カルシウム粒子（Ａ）と酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）の配合割合（Ａ／Ｃ）は特に限定されず、モル比で４０／６０〜６０／４０の範囲となるような配合割合で使用されることが好ましい。このことにより、石灰化効果の高い本発明の歯牙石灰化剤を得ることができる。上記配合割合（Ａ／Ｃ）は、より好適には４５／５５〜５５／４５であり、実質的に５０／５０であることが最適である。
【００２７】
本発明の歯牙石灰化剤は、更にフッ素化合物（Ｄ）を含有することが好ましい。このことにより、歯質に耐酸性を付与させるとともに石灰化を促進させることが可能となる。本発明で用いられるフッ素化合物（Ｄ）としては特に限定されず、フッ化ナトリウム、フッ化カリウム、フッ化アンモニウム、フッ化リチウム、フッ化セシウム、フッ化マグネシウム、フッ化カルシウム、フッ化ストロンチウム、フッ化ストロンチウム、フッ化バリウム、フッ化銅、フッ化ジルコニウム、フッ化アルミニウム、フッ化スズ、モノフルオロリン酸ナトリウム、モノフルオロリン酸カリウム、フッ化水素酸、フッ化チタンナトリウム、フッ化チタンカリウム、ヘキシルアミンハイドロフルオライド、ラウリルアミンハイドロフルオライド、グリシンハイドロフルオライド、アラニンハイドロフルオライド、フルオロシラン類、フッ化ジアミン銀等が挙げられる。中でも石灰化促進効果の観点からフッ化ナトリウム、モノフルオロリン酸ナトリウム、フッ化スズが好適に用いられる。フッ素化合物（Ｄ）の使用量は特に限定されず、歯牙石灰化剤の全量１００重量部に対してフッ素化合物（Ｄ）の換算フッ化物イオンを０．０１〜３重量部含むことが好ましい。フッ素化合物（Ｄ）の換算フッ化物イオンの使用量が０．０１重量部未満の場合、石灰化を促進する効果が低下するおそれがあり、０．０５重量部以上であることがより好ましい。一方、フッ素化合物（Ｄ）の換算フッ化物イオンの使用量が３重量部を超える場合、安全性が損なわれるおそれがあり、１重量部以下であることがより好ましい。
【００２８】
本発明の歯牙石灰化剤は、本発明の効果を阻害しない範囲でリン酸四カルシウム粒子（Ａ）、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）、酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）及びフッ素化合物（Ｄ）以外の成分を含有しても構わない。例えば、必要に応じて増粘剤を配合することができる。増粘剤の具体例としては、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸、ポリスチレンスルホン酸、ポリスチレンスルホン酸塩、ポリグルタミン酸、ポリグルタミン酸塩、ポリアスパラギン酸、ポリアスパラギン酸塩、ポリＬリジン、ポリＬリジン塩、セルロース以外のデンプン、アルギン酸、アルギン酸塩、カラジーナン、グアーガム、キタンサンガム、セルロースガム、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸塩、ペクチン、ペクチン塩、キチン、キトサン等の多糖類、アルギン酸プロピレングリコールエステル等の酸性多糖類エステル、またコラーゲン、ゼラチン及びこれらの誘導体などのタンパク質類等の高分子などから選択される１つ又は２つ以上が挙げられるが、水への溶解性及び粘性の面からはカルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸、アルギン酸塩、キトサン、ポリグルタミン酸、ポリグルタミン酸塩から選択される少なくとも１つが好ましい。増粘剤は、粉体に配合してもよいし液剤に配合してもよく、また混合中のペーストに配合してもよい。
【００２９】
また、必要に応じてシリカ、金属酸化物等に代表される無機フィラー、グリセリン、エチレングリコール、プロピレングリコール、ジグリセリン等の多価アルコール、キシリトール、ソルビトール、エリスリトール等の糖アルコール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール等のポリエーテル、アスパルテーム、アセスルファムカリウム、カンゾウ抽出液、サッカリン、サッカリンナトリウム等の人工甘味料などを加えてもよい。これらの中でも、本発明の歯牙石灰化剤は、無機フィラーを含有することが好ましく、平均粒径が０．００２〜２μｍであるシリカ又は金属酸化物から選択される粒子（Ｅ）を含有することがより好ましく、平均粒径が０．００２〜２μｍであるシリカ粒子（Ｅ）を含有することが更に好ましい。
【００３０】
更に、薬理学的に許容できるあらゆる薬剤等を配合することができる。セチルピリジニウムクロリド等に代表される抗菌剤、消毒剤、抗癌剤、抗生物質、アクトシン、ＰＥＧ１などの血行改善薬、ｂＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＢＭＰなどの増殖因子、骨芽細胞、象牙芽細胞、さらに未分化な骨髄由来幹細胞、胚性幹（ＥＳ）細胞、線維芽細胞等の分化細胞を遺伝子導入により脱分化・作製した人工多能性幹（ｉＰＳ：ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ  Ｓｔｅｍ）細胞ならびにこれらを分化させた細胞など硬組織形成を促進させる細胞などを配合させることができる。
【００３１】
本発明の歯牙石灰化剤は、該歯牙石灰化剤０．０５ｇを２５℃の純水２００ｇに投入して懸濁液を調製した際に、投入から１０分後における該懸濁液の遊離アルカリ金属イオン濃度が０．２〜１００ｍｇ／Ｌであることが好ましい。前記遊離アルカリ金属イオン濃度がこのような範囲にあることで、石灰化率並びにエナメル質硬度の向上効果が良好な歯牙石灰化剤が得られる利点を有する。前記遊離アルカリ金属イオン濃度が０．２ｍｇ／Ｌ未満の場合、アルカリ金属イオンと共に供給されるリン酸イオンが不足することから歯牙へのイオンの供給バランスが崩れ、ヒドロキシアパタイトへの転化が円滑でなくなり、石灰化率並びにエナメル質硬度の向上効果が良好な歯牙石灰化剤が得られないおそれがあり、０．５ｍｇ／Ｌ以上であることがより好ましく、１ｍｇ／Ｌ以上であることが一層好ましい。一方、前記遊離アルカリ金属イオン濃度が１００ｍｇ／Ｌを超える場合、アルカリ金属イオンと共に供給されるリン酸イオンが過多となることから歯牙へのイオンの供給バランスが崩れ、ヒドロキシアパタイトへの転化が円滑でなくなり、石灰化率並びにエナメル質硬度の向上効果が良好な歯牙石灰化剤が得られないだけでなく、過剰のナトリウムイオンがヒドロキシアパタイトへの転化を阻害するおそれがあり、５０ｍｇ／Ｌ以下であることがより好ましく、３０ｍｇ／Ｌ以下であることが一層好ましい。遊離アルカリ金属イオンの測定方法は任意の方法を選択できる。懸濁液の上清を採取し、ＩＣＰ発光分光分析装置あるいはイオンクロマトグラフィーにより測定を行うことも可能であるし、懸濁液中にアルカリ金属イオン濃度に応答する電極を直接浸漬する測定方法を用いても良い。
【００３２】
また、本発明の象牙質石灰化剤は、前記遊離アルカリ金属イオン濃度の平均値をｄとしたときの標準偏差σがσ≦０．３ｄを満たすこと、すなわち、標準偏差σを前記遊離アルカリ金属イオン濃度の平均値ｄで割った値（σ／ｄ）が０．３以下であることが好ましい。このことにより、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）の均一性が良好となり、更に石灰化率が良好でエナメル質硬度の向上効果が良好な歯牙石灰化剤が得られる利点を有する。この理由については必ずしも明らかではないが、以下のようなメカニズムが推定される。すなわち、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）の均一性が良好でない場合、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）が凝集しており、水に溶解しにくい状態になっていることから水の存在下で調製した本発明の歯牙石灰化剤から放出されるリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）由来のリン酸イオンの歯牙に対する供給が不足し、カルシウムイオンとの供給バランスが崩れることで石灰化率が低下するとともにエナメル質硬度の向上効果が低下してしまうと考えられる。
【００３３】
本発明では、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）及びリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を含有する粉体と、水を主成分とする液体又は水系ペーストとを混合することにより、ペースト状の歯牙石灰化剤を得ることができる。水を含むこのペースト状の歯牙石灰化剤は、直ちにＨＡｐに転化する反応が起こり始めるため、医療現場で使用する直前に混合して調製することが好ましい。混合操作としては特に限定されず、手混合、スタティックミキサーを用いた混合等が好ましく採用される。ここで、本発明者はリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）の含有量が適切な範囲にあると石灰化効果が高いことを確認している。しかしながら、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）の水に対する溶解度がそれ程高くないため、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を粉体で加える上記混合方法が好ましく採用される。
【００３４】
こうして得られた歯牙石灰化剤は、エナメル質表面に塗布等することにより好適に使用される。ここで、水を主成分とする液体とは、純水であっても、水を主成分とし他の成分を含有する液体であってもよく、また、水を主成分とする水系ペーストとは、水を主成分とし他の成分を含有するペースト状の液体を示す。他の成分としては特に限定されず、上述の酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）、グリセリン、エチレングリコール、プロピレングリコール、ジグリセリン等の多価アルコール、キシリトール、ソルビトール、エリスリトール等の糖アルコール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール等のポリエーテルなどが例示される。他の成分として酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）を含む場合、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）及びリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を含む粉体又は非水系ペーストに、水を主成分とし酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）を含む液体又は水系ペーストを加えて混合する方法も好ましく採用される。
【００３５】
また、本発明では、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）を含む粉体又は非水系ペーストに、水を主成分としリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を含む液体又は水系ペーストを加えて混合することによってもペースト状の歯牙石灰化剤を得ることができる。ここで、水の存在下ではリン酸四カルシウム粒子（Ａ）が溶解して徐々にＨＡｐに転化する反応が起こるため、水を主成分とする液体又は水系ペーストとリン酸四カルシウム粒子（Ａ）とを予め混合して保存しておくことができない。したがって、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）を含む粉体又は水以外の他の溶媒を主成分とする非水系ペーストと、水を主成分としリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を含む液体又は水系ペーストとを混合する方法が好適に採用され、使用直前に混合して調製する際の操作が簡便である利点も有する。また、非水系ペーストに使用される水以外の溶媒としては特に限定されず、例えば、グリセリン、エチレングリコール、プロピレングリコール、ジグリセリン等の多価アルコール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール等のポリエーテルなどが例示される。
【００３６】
また、本発明において、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）及びリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を含む粉体、又はリン酸四カルシウム粒子（Ａ）、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）及び酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）を含む粉体を予め混合することが好ましい。このことにより、石灰化率が良好となる利点を有する。特に、本発明の歯牙石灰化剤をエナメル質表面に対して用いた場合、石灰化された後のエナメル質硬度が向上する利点を有する。ここで、前記混合の際には、ジェットミル、ライカイ機、ボールミル、高速回転ミル、遊星ミル、ハイブリダイザー、メカノフュージョン又は混合押出し機から選択される少なくとも１種を用いることが好ましい。石灰化率をより高める観点から、ボールミル、ライカイ機、高速回転ミル、ジェットミルから選択される少なくとも１種を用いることが好ましい。
【００３７】
本発明の歯牙石灰化剤は、歯面処理材、歯磨材、又はチューイングガムの各種用途に好ましく用いられる。水の存在下ではリン酸四カルシウム粒子（Ａ）が溶解して徐々にＨＡｐに転化する反応が起こるため、歯磨材やチューイングガムなどのように使用時に適宜水分が供給されるような態様であってもよいし、歯面処理材などのように使用直前に液剤と適宜混合するような態様であってもよい。したがって、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）及びリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を含む粉体又は非水系ペーストと、水を主成分とする液体又は水系ペーストとからなる歯牙石灰化剤キットであることが本発明の実施態様の一つである。また、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）及び酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）を含む粉体又は非水系ペーストと、水を主成分とする液体又は水系ペーストとからなる歯牙石灰化剤キットであることが本発明の実施態様の一つである。また、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）を含む粉体又は非水系ペーストと、水を主成分としリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を含む液体又は水系ペーストとからなる歯牙石灰化剤キットであることが本発明の実施態様の一つである。また、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）を含む粉体又は非水系ペーストと、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を含む粉体又は非水系ペーストと、水を主成分とする液体又は水系ペーストとからなる歯牙石灰化剤キットであることが本発明の実施態様の一つである。また、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）及びリン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を含む粉体又は非水系ペーストと、水を主成分とし酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）を含む液体又は水系ペーストとからなる歯牙石灰化剤キットであることが本発明の実施態様の一つである。また、リン酸四カルシウム粒子（Ａ）を含む粉体又は非水系ペーストと、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）を含む粉体又は非水系ペーストと、酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）を含む粉体又は非水系ペーストと、水を主成分とする液体又は水系ペーストとからなる歯牙石灰化剤キットであることも本発明の実施態様の一つである。また、こうして用いられる本発明の歯牙石灰化剤は、エナメル質表面に対する石灰化効果が高く、歯牙石灰化剤からなるエナメル質石灰化剤が本発明の好適な実施態様である。
【実施例】
【００３８】
以下、実施例を用いて本発明を更に具体的に説明する。本実施例においてリン酸四カルシウム粒子（Ａ）、リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）粒子、酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）及びフッ化ナトリウム（Ｄ）粒子の平均粒径は、レーザー回折式粒度分布測定装置（株式会社島津製作所製「ＳＡＬＤ−２１００型」）を用いて測定し、測定の結果から算出されるメディアン径を平均粒径とした。
【００３９】
［石灰化用牛歯の調製］
健全牛歯切歯の頬側中央を＃８０，＃１０００研磨紙を用いて回転研磨機により研磨し、エナメル質を露出させた。この牛歯研磨面をさらにラッピングフィルム（＃１２００，＃３０００，＃８０００，住友スリーエム社製）を用いて研磨し、平滑とした。この研磨エナメル質部分に歯に対して縦軸方向及び横軸方向に各７ｍｍ試験部分の窓を残し（以下、「エナメル質窓」と称する）、周りをマニキュアでマスキングし、１時間風乾した。この牛歯を、Ｒｅｙｎｏｌｄｓら（E. C. Reynolds, J. Dent. Res., 76(9), 1587-1595.）の手法に準じて人工脱灰液（０．１ｍｏｌ／Ｌ乳酸、０．５ｇ／Ｌヒドロキシアパタイト、２０ｇ／Ｌポリアクリル酸（Ｍｗ：２５０ｋＤａ）、ＮａＯＨ適量、ｐＨ４．８）中に５日間浸漬して脱灰を行った。人工脱灰液は毎日交換した。脱灰エナメル質窓の半分をマニキュアでマスキングし、１時間風乾することで石灰化に用いる牛歯を調製した。
【００４０】
［擬似唾液の調製］
塩化ナトリウム（８．７７ｇ，１５０ｍｍｏｌ）、リン酸二水素カリウム（１２２ｍｇ，０．９ｍｍｏｌ）、塩化カルシウム（１６６ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）、Ｈｅｐｅｓ（４．７７ｇ，２０ ｍｍｏｌ）をそれぞれ秤量皿に量り取り、約８００ｍｌの蒸留水を入れた２０００ｍｌビーカーに攪拌下に順次加えた。溶質が完全に溶解したことを確認した後、この溶液の酸性度をｐＨメータ（Ｆ５５、堀場製作所）で測定しながら、１０％水酸化ナトリウム水溶液を滴下し、ｐＨ７．０とした。次にこの溶液を１０００ｍｌメスフラスコに加えてメスアップし、擬似唾液１０００ｍｌを得た。
【００４１】
比較例６
［歯牙石灰化剤の調製］
（１）リン酸四カルシウム粒子（Ａ）の調製
本実施例で使用するリン酸四カルシウム粒子（Ａ１）（平均粒径２３．１μｍ）は、以下の通り調製した粗リン酸四カルシウムを粉砕することにより得た。市販の無水リン酸一水素カルシウム粒子（Product No. 1430, J.T.Baker Chemical Co., NJ）及び炭酸カルシウム（Product No. 1288, J.T.Baker Chemical Co., NJ）を等モルとなる様に水中に加え、１時間撹拌した後、ろ過・乾燥することで得られたケーキ状の等モル混合物を電気炉（ＦＵＳ７３２ＰＢ，アドバンテック東洋(株)製）中で１５００℃、２４時間加熱し、その後デシケータ中で室温まで冷却することでリン酸四カルシウム塊を調製した。さらに、乳鉢中で荒く砕き、その後篩がけを行うことで微粉ならびにリン酸四カルシウム塊を除き、０．５〜３ｍｍの範囲に粒度を整え、粗リン酸四カルシウムを得た。この粗リン酸四カルシウム１００ｇ、及び直径が２０ｍｍのジルコニアボール２００ｇを４００ｍｌのアルミナ製粉砕ポット（株式会社ニッカトー製「Ｔｙｐｅ  Ａ−３  ＨＤポットミル」）中に加え、１５０ｒｐｍの回転速度で１５時間粉砕することでリン酸四カルシウム粒子（Ａ１）を得た。
【００４２】
（２）リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）粒子の調製
リン酸のアルカリ金属塩（Ｂ）粒子の一例として本実施例で使用するリン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子（平均粒径１．７μｍ）は、市販のリン酸一水素二ナトリウム粒子（和光純薬工業株式会社製）５０ｇ、９５％エタノール（和光純薬工業株式会社製「Ｅｔｈａｎｏｌ（９５）」）２４０ｇ、及び直径が１０ｍｍのジルコニアボール４８０ｇを１０００ｍｌのアルミナ製粉砕ポット（株式会社ニッカトー製「ＨＤ−Ｂ−１０４  ポットミル」）中に加え、１５００ｒｐｍの回転速度で５時間湿式振動粉砕を行うことで得られたスラリーを、ロータリーエバポレータでエタノールを留去した後、６０℃で６時間真空乾燥することで得た。
【００４３】
（３）酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）の調製
酸性リン酸カルシウム粒子（Ｃ）の一例として本実施例で使用する無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）（平均粒径１．１μｍ）は、市販の無水リン酸一水素カルシウム粒子（Product No. 1430, J.T.Baker Chemical Co., NJ、平均粒径１０．２μｍ）５０ｇ、９５％エタノール（和光純薬工業株式会社製「Ｅｔｈａｎｏｌ（９５）」）２４０ｇ、及び直径が１０ｍｍのジルコニアボール４８０ｇを１０００ｍｌのアルミナ製粉砕ポット（株式会社ニッカトー製「ＨＤ−Ｂ−１０４  ポットミル」）中に加え、１５００ｒｐｍの回転速度で１５時間湿式振動粉砕を行うことで得られたスラリーを、ロータリーエバポレータでエタノールを留去した後、６０℃で６時間真空乾燥することで得た。
【００４４】
（４）歯牙石灰化剤用の粉剤の調製
上記で得たリン酸四カルシウム粒子（Ａ１）２６．２ｇ、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子５ｇ、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）９．８ｇ及び特開平２−２５８６０２号公報に開示の方法で微粒子化したフッ化ナトリウム（Ｄ）粒子（平均粒径０．７μｍ）０．２１ｇを高速回転ミル（アズワン株式会社製「ＳＭ−１」）中に加え、１０００ｒｐｍの回転速度で３分間混合することで歯牙石灰化剤用の粉剤を得た。このように混合されて得られる粉剤の調製方法を「方法１」とした。
【００４５】
（５）歯牙石灰化剤用の液状ペーストの調製
グリセリン（和光純薬工業株式会社製）１０００ｇ、プロピレングリコール（和光純薬工業株式会社製）５００ｇ、キシリトール（和光純薬工業株式会社製）５００ｇ、ポリエチレングリコール（マクロゴール４００、三洋化成工業株式会社製）３００ｇ、セチルピリジニウムクロリド１水和物（和光純薬工業株式会社製）５ｇ、シリカ粒子（Ｅ）（デグサ社製「ＡＥＲＯＳＩＬ  １３０」、平均粒径：０．０１６μｍ）４００ｇ及び蒸留水１１７４ｇをユニバーサルミキサー（株式会社パウレックス製）中で乳化分散させることで歯牙石灰化剤用の液状ペーストを得た。
【００４６】
（６）歯牙石灰化剤の調製
上記（４）で得た粉剤０．４１ｇを精秤し、これに上記（５）で得た液状ペースト０．５９ｇを加え混合することで歯牙石灰化剤を調製した。歯牙石灰化剤の組成を表１にまとめて示す。
【００４７】
［アルカリ金属イオン濃度の測定］
マグネティックスターラー上で２５℃の純水２００ｇを攪拌させている中に、上記象牙質石灰化剤用の粉剤０．０５ｇを投入した。粉剤投入後１０分時点で撹拌を停止し、上清を採取し、メンブレンフィルターでろ過した後にＩＣＰ発光分光分析装置（ＩＲＩＳ  ＡＰ、日本ジャーレルアッシュ株式会社製）を用いて粉剤スラリーの遊離ナトリウムイオン濃度を測定した（ｎ＝５０）。比較例６における粉剤のナトリウムイオン濃度の平均値（ｄ）は１０．４ｍｇ／Ｌであり、ナトリウムイオン濃度の標準偏差（σ）を（ｄ）で除した数値（σ／ｄ）は０．０６であった。得られた結果を表１にまとめて示す。
【００４８】
［石灰化試験］
上記で調製した石灰化用牛歯を蒸留水に浸漬し、３０分間静置した後、エナメル質窓に対してペースト状の歯牙石灰化剤を塗布し、３７℃、１００%RH条件下で３０分間インキュベートし、石灰化を行った。その後、歯牙石灰化剤を蒸留水で洗い流した後、擬似唾液中３７℃で保存した。歯牙石灰化剤塗布は１日毎に実施し、連続して７回実施した。歯牙石灰化剤の塗布・除去作業時間以外は常時擬似唾液中に浸漬した。また、擬似唾液は毎日交換した（ｎ＝５）。
【００４９】
［形態学的評価］
（１）エポキシ樹脂の調製
エポキシ樹脂の調製はＬｕｆｔ法に準じて行い、エポキシ樹脂、硬化剤を均一に混合した後、加速剤を添加する方法を用いた。１００ｍｌディスポカップに、ルベアック８１２（エポキシ樹脂、ナカライテスク株式会社製）４１ｍｌ、ルベアックＭＮＡ（硬化剤、ナカライテスク株式会社製）３１ｍｌ、ルベアックＤＤＳＡ（硬化剤、ナカライテスク株式会社製）１０ｍｌをそれぞれディスポシリンジを用いて量り取りディスポカップに加え、１０分間攪拌した。これにディスポシリンジで量り取ったルベアックＤＭＰ−３０（加速剤、ナカライテスク株式会社製）１．２ｍｌを攪拌しながら徐々に滴下し、添加後さらに１０分間攪拌することで調製した。
【００５０】
（２）ＣＭＲ撮影用サンプルの作製
擬似唾液から石灰化牛歯を取り出し、水洗した後、バイアル中の７０％エタノール水溶液中に浸漬した。浸漬後、直ちにバイアルをデシケータ内に移し、１０分間減圧条件下に置いた。この後、バイアルをデシケータから取り出し、低速攪拌機（ＴＲ−１１８，ＡＳ−ＯＮＥ社製）に取り付け、約４ｒｐｍの回転速度で１時間攪拌した。同様の操作を、８０％エタノール水溶液、９０％エタノール水溶液、９９％エタノール水溶液、１００％エタノール（２回）を用いて行い、２回目の１００％エタノールにはそのまま１晩浸漬した。翌日、プロピレンオキサイドとエタノールの１：１混合溶媒、プロピレンオキサイド１００％（２回）についても順次同様の作業を行い、２回目のプロピレンオキサイドにそのまま１晩浸漬した。さらに、エポキシ樹脂：プロピレンオキサイド＝１：１混合溶液、エポキシ樹脂：プロピレンオキサイド＝４：１混合溶液、エポキシ樹脂１００％（２回）についても同様の作業を行った。これらについては浸漬時間を２時間とした。最後にエポキシ樹脂を入れたポリ容器に牛歯サンプルを入れ、４５℃にて１日間、６０℃にて２日間硬化反応を行った。硬化終了後、ポリエチレン製容器とともに精密低速切断機（ＢＵＥＨＬＥＲ、ＩＳＯＭＥＴ１０００）により脱灰面に対して垂直方向に切断し、試験部分の断面を含む厚さ約１ｍｍの切片を得た。この切片をラッピングフィルム（＃１２００，＃３０００，＃８０００，住友スリーエム社製）を用いて研磨し、切片厚さを８０〜１００μｍとすることでＣＭＲ（Ｃｏｎｔａｃｔ  Ｍｉｃｒｏ  Ｒａｄｉｏｇｒａｐｈｙ；軟Ｘ線顕微鏡像）撮影用サンプルとした（ｎ＝５）。
【００５１】
（３）ＣＭＲ撮影
ＣＭＲ撮影およびフィルム現像はすべて暗室中において行った。ＣＭＲ撮影には、ＣＭＲ−２(ソフテックス株式会社製)を使用した。上記で得たＣＭＲ撮影用サンプルを専用フィルム（Ｋｏｄａｃ  ｓｐｅｃｉａｌ  Ｈｏｌｏｇｒａｐｈｉｃ，Ｋｏｄａｃ社製）上に密着させた状態で置き、管電圧１５ｋＶ、管電流２．６ｍＡ、Ｘ線照射時間３０分の条件で各サンプルの軟Ｘ線透過像を撮影した。現像は現像液（Ｄ−１９，Ｋｏｄａｃ社製）、定着液（ＧＢＸ，Ｋｏｄａｃ社製）を用い、現像液に５分間浸漬した後３０秒間水洗し、定着液に５分間浸漬した後１分間水洗、乾燥させ、軟Ｘ線写真フィルムを得た。得られた軟Ｘ線写真の透過像を光学顕微鏡（ＢＸ５１，オリンパス製）で対物レンズ４０倍にて観察し、透過像を光学顕微鏡に接続したＣＣＤカメラ（Ｐｒｏ６００ＥＳ，Ｐｉｘｅｒａ製）を用いて写真画像データとして得た。得られた画像を画像解析コンピュータソフトＳｃｉｏｎ  Ｉｍａｇｅβ４．０３（Ｓｃｉｏｎ社製）を用いて解析した。脱灰部分と石灰化部分のフィルム濃度（グレイ値）をエナメル表層から一定深さ位置（約３０μｍ）で測定し、脱灰部分のフィルム濃度を０％、エナメル質表面から更に深部の未脱灰部分のフィルム濃度を１００％としたときの換算値（％）により石灰化率を算出した。比較例６の歯牙石灰化剤により石灰化した脱灰エナメル質の石灰化率は７１．６％であった。
【００５２】
［石灰化部のビッカース硬度測定］
（１）ビッカース硬度測定用サンプルの作製
上記ＣＭＲ用サンプル調製の際に得られた精密低速切断機により横断的に切断した切片（厚さ１ｍｍ）の両面をラッピングフィルム（＃３０００，＃８０００，住友スリーエム社製）を用いて研磨することで厚さが９００μｍの硬度測定用サンプルを調製した（ｎ＝５）。
【００５３】
（２）ビッカース硬度測定
ビッカース硬度測定には、ミツトヨ製のマイクロビッカース硬度試験機（ＭｉｃｒｏＷｉＺｈａｒｄ）を用い、０．０１ｋｇｆの試験力、負荷４秒・保持１０秒・除荷４秒の試験時間、１００倍での傷観察の各条件でビッカース硬度測定を実施した。健全な牛歯エナメル質のビッカース硬度は３７７ＨＶ、マニキュアでマスキングし脱灰を保持した脱灰エナメル質の表面から３０μｍ深さのビッカース硬度は１２２ＨＶであった。比較例６の歯牙石灰化剤により石灰化した脱灰エナメル質の表面から３０μｍ深さ部分のビッカース硬度は３１４ＨＶであった。
【００５４】
比較例７
比較例６において、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）を用いず、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表１に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００５５】
比較例８
比較例６において、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子を粉剤に加えて調製する代わりに液状ペーストに加えて調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表１に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００５６】
比較例９
比較例６において、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子の使用量を０．２重量部とし、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表１に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００５７】
比較例１０
比較例６において、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子５重量部を粉剤に加えて調製する代わりに、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子０．２重量部を液状ペーストに加え、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表１に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００５８】
比較例１１
比較例６において、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子の使用量を１２重量部とし、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表１に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００５９】
比較例１２
比較例６において、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子５重量部を粉剤に加えて調製する代わりに、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子１２重量部を液状ペーストに加え、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表１に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００６０】
比較例１３
比較例６において、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子の使用量を１．２重量部とし、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表１に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００６１】
比較例１４
比較例６において、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子の使用量を２．４重量部とし、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表１に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００６２】
比較例１５
比較例６において、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子の使用量を７．２重量部とし、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表１に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００６３】
比較例１６
比較例６において、リン酸四カルシウム粒子（Ａ１）の使用量を７３．５重量部、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子の使用量を１４重量部とし、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）、グリセリン、プロピレングリコール、キシリトール、ポリエチレングリコール及びシリカ粒子（Ｅ）を用いず、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表１に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００６４】
比較例１７
比較例６において、リン酸四カルシウム粒子（Ａ１）の使用量を４９重量部、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子の使用量を９．３重量部とし、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）、グリセリン、プロピレングリコール、キシリトール、ポリエチレングリコール及びシリカ粒子（Ｅ）を用いず、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表１に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００６５】
比較例１８
比較例６において、リン酸四カルシウム粒子（Ａ１）の使用量を２．６２重量部、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）の使用量を０．９８重量部とし、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子５重量部を粉剤に加えて調製する代わりに、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子０．５重量部を液状ペーストに加え、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表１に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００６６】
比較例１９
比較例６において、リン酸四カルシウム粒子（Ａ１）の使用量を２．６２重量部、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子の使用量を０．５重量部とし、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）の使用量を０．９８重量部とし、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表１に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００６７】
比較例２０
比較例６において、リン酸四カルシウム粒子（Ａ１）の使用量を５．２４重量部、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子の使用量を１重量部とし、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）の使用量を１．９６重量部とし、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表１に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００６８】
比較例２１
比較例６において、リン酸四カルシウム粒子（Ａ１）の使用量を１３．１重量部、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子の使用量を２．５重量部とし、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）の使用量を４．９重量部とし、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００６９】
比較例２２
比較例６において、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子を５重量部用いる代わりに、リン酸二水素一ナトリウム（Ｂ）粒子を５重量部用いた以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００７０】
比較例２３
比較例６において、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子５重量部を粉剤に加えて調製する代わりに、リン酸二水素一ナトリウム（Ｂ）粒子５重量部を液状ペーストに加え、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００７１】
比較例２４
比較例６において、フッ化ナトリウム（Ｄ）粒子を用いず、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００７２】
比較例２５
比較例６において、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）を９．８重量部用いる代わりに、リン酸一水素カルシウム２水和物粒子（Ｃ）（平均粒径１．２μｍ）を１２．３重量部用い、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。ここで、上記リン酸一水素カルシウム２水和物粒子（Ｃ）（平均粒径１．２μｍ）は、市販のリン酸一水素カルシウム２水和物粒子（和光純薬工業株式会社製、平均粒径１９μｍ）を用い、比較例６における無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）を調製する方法と同様に調製することにより得た。
【００７３】
比較例２６
比較例６において、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）を９．８重量部用いる代わりに、無水リン酸二水素カルシウム粒子（Ｃ）（平均粒径１．１μｍ）を１６．７重量部用い、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。ここで、上記無水リン酸二水素カルシウム粒子（Ｃ）（平均粒径１．１μｍ）は、市販の無水リン酸二水素カルシウム粒子（和光純薬工業株式会社製、平均粒径１８μｍ）を用い、比較例６における無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）を調製する方法と同様に調製することにより得た。
【００７４】
比較例２７
比較例６において、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）を９．８重量部用いる代わりに、酸性ピロリン酸カルシウム粒子（Ｃ）（平均粒径１．０μｍ）を１５．４重量部用い、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。ここで、上記酸性ピロリン酸カルシウム粒子（Ｃ）（平均粒径１．０μｍ）は、市販の酸性ピロリン酸カルシウム粒子（太平化学産業株式会社製、平均粒径１３μｍ）を用い、比較例６における無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）を調製する方法と同様に調製することにより得た。
【００７５】
比較例２８
比較例６において、リン酸四カルシウム粒子（Ａ１）の使用量を１８．４重量部、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子の使用量を３．５重量部とし、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００７６】
比較例２９
比較例６において、粉剤及び液状ペーストを調製する代わりに、リン酸四カルシウム粒子（Ａ１）２６．２重量部、フッ化ナトリウム（Ｄ）粒子０．２１重量部、シリカ粒子（Ｅ）０．５重量部、グリセリン１８．０９重量部及びプロピレングリコール５重量部を用いて調製した非水系ペーストと、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子５重量部、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）９．８重量部、キシリトール５重量部、ポリエチレングリコール３重量部、セチルピリジニウムクロリド１水和物０．０５重量部、シリカ粒子（Ｅ）３．５重量部及び残部を精製水で調製した水系ペーストとを混合することで歯牙石灰化剤を調製し、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表３に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００７７】
実施例２５
比較例６において、高速回転ミルを用いて粉剤を調製した方法１の代わりに、それぞれ同量のリン酸四カルシウム粒子（Ａ１）、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）及びフッ化ナトリウム（Ｄ）粒子を１０ｍｍのジルコニアボール２００ｇとともに４００ｍｌのアルミナ製粉砕ポット（株式会社ニッカトー製「Ｔｙｐｅ  Ａ−３  ＨＤポットミル」）中に加え、２００ｒｐｍの回転速度で３０分間混合することで粉剤を得た。このように混合されて得られる粉剤の調製方法を「方法２」とした。次いで、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００７８】
実施例２６
比較例６において、高速回転ミルを用いて粉剤を調製した方法１の代わりに、それぞれ同量のリン酸四カルシウム粒子（Ａ１）、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）及びフッ化ナトリウム（Ｄ）粒子をライカイ機（自動乳鉢、アズワン株式会社製「ＡＮＭ−２００」）中に加え、乳鉢を６ｒｐｍ、乳棒を１００ｒｐｍの回転速度で５時間混合することで粉剤を得た。このように混合されて得られる粉剤の調製方法を「方法３」とした。次いで、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００７９】
比較例３０
比較例６において、高速回転ミルを用いて粉剤を調製した方法１の代わりに、それぞれ同量のリン酸四カルシウム粒子（Ａ１）、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）及びフッ化ナトリウム（Ｄ）粒子をジルコニアボールを加えずに４００ｍｌのアルミナ製粉砕ポット（株式会社ニッカトー製「Ｔｙｐｅ  Ａ−３  ＨＤポットミル」）中に加え、１５００ｒｐｍの回転速度で３０分間混合することで粉剤を得た。このように混合されて得られる粉剤の調製方法を「方法４」とした。次いで、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００８０】
比較例１
比較例６において、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子の使用量を０．１重量部とし、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００８１】
比較例２
比較例６において、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子５重量部を粉剤に加えて調製する代わりに、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子０．１重量部を液状ペーストに加え、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００８２】
比較例３
比較例６において、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子の使用量を１４重量部とし、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００８３】
比較例４
比較例６において、リン酸四カルシウム粒子（Ａ１）の使用量を８１．３重量部、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子の使用量を１５．５重量部とし、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）、グリセリン、プロピレングリコール、キシリトール、ポリエチレングリコール及びシリカ粒子（Ｅ）を用いず、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００８４】
比較例５
比較例６において、リン酸四カルシウム粒子（Ａ１）の使用量０．８７重量部、リン酸一水素二ナトリウム（Ｂ）粒子の使用量を０．１７重量部とし、無水リン酸一水素カルシウム粒子（Ｃ１）の使用量を０．３３重量部とし、残部を精製水で調製した以外は、比較例６と同様にして歯牙石灰化剤を調製し、アルカリ金属イオン濃度の測定、形態学的評価、及びビッカース硬度測定を行った。用いた歯牙石灰化剤の組成を表２に、得られた評価結果を表４にまとめて示す。
【００８５】
【表１】
0005501346.tif 000002
【００８６】
【表２】
0005501346.tif 000003
【００８７】
【表３】
0005501346.tif 000004
【００８８】
【表４】
0005501346.tif 000005
【符号の説明】
【００８９】
１  エナメル質脱灰部分
２  エナメル質深部未脱灰部分
３  エナメル質石灰化部分
【図１】
0005501346.tif 000006
【図２】
0005501346.tif 000007