(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における糖尿病または肥満症を治療するための、プテロシン化合物の有効量を含む、医薬組成物であって、
前記プテロシン化合物が、化合物１、４、５、７、１７、５２、６３、および７２〜７４：
【化１】
0005640019.tif 000018
0005640019.tif 000019
（式中、
４ｃｏｕ−ｇｌｕは、４−Ｏ−ｐ−クマロイル−Ｄ−グルコース
３ｇｌｕは、３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド、および
６−ｃｏｕ−ｇｌｕは、６−Ｏ−ｐ−クマロイル−Ｄ−グルコース
を示す）
のいずれか一つである、医薬組成物。
【請求項２】
経口投与または注射投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記被験体が肥満である、請求項１−２のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記プテロシン化合物が単離されたプテロシン化合物である、請求項１−３のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記プテロシン化合物が、コバノイシカグマ科またはイノモトソウ科のワラビから製造されたシダ類産物に存在する、請求項１−４のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記ワラビが、ツルカグマ（Ｄｅｎｎｓｔａｅｄｔｉａ  ｓｃａｎｄｅｎｓ）、ユノミネシダ（Ｈｉｓｔｉｏｐｔｅｒｉｓ  ｉｎｃｉｓａ）、ウスバオオイシカグマ（Ｍｉｃｒｏｌｅｐｉａ  ｓｐｅｌｕｎｃａｅ）、ワラビ（Ｐｔｅｒｉｄｉｕｍ  ａｑｕｉｌｉｎｕｍ  ｖａｒ． ｌａｔｉｕｓｃｕｌｕｍ）、ランダイワラビ（Ｐｔｅｒｉｄｉｕｍ  ｒｅｖｏｌｕｔｕｍ）、イワヒメワラビ（Ｈｙｐｏｌｅｐｉｓ  ｐｕｎｃｔａｔａ）、 ミズワラビ（Ｃｅｒａｔｏｐｔｅｒｉｓ  ｔｈａｌｉｃｔｒｏｉｄｅｓ）、ハチジョウシダ（Ｐｔｅｒｉｓ  ｆａｕｒｉｅｉ）、オオアマクサシダ（Ｐｔｅｒｉｓ  ｄｉｍｉｄｉａｔａ）、ホコシダ（Ｐｔｅｒｉｓ  ｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓ）を含む群から選択される、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記被験体の血清脂質またはコレステロールの濃度を低下するのに十分である、請求項１−６いずれか一項記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２００９年１月２６日に出願された米国仮特許出願第６１／１４７，３８２号に基づく優先権を主張し、その内容は完全に本明細書で参照により組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
プテロシン化合物は蕨に存在するセスキテルペノイドである。この族の一部は抗新生物活性を有することがこれまでに示されている（例：日本特許第６３１４６８３９Ａ２号、Ｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ．１９７８、２６：２３４６、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２００８、１３：２５５）。
【０００３】
糖尿病は、糖質代謝の疾病であり、血糖レベルが異常に高いことが特徴である。糖尿病には、非インスリン依存性または成人発症型の２型と、インスリン依存性または若年発症型の１型の２つの異なる型がある。
【０００４】
２型糖尿病は通常成人に発生し、肥満症と高い関連性がある。２型糖尿病患者は食事を管理する必要があり、減量と運動が奨励される。患者はインスリン感受性を高める、または膵臓に刺激を与えてインスリンを放出させるために薬を服用する。現在２型糖尿病向けの薬には、スルホニル尿素、メグリチニド、ビグアニド、チアゾリンジオン、α−グルコシダーゼ阻害薬が含まれるが、これらには例えば副作用や高率の二次無効など、数々の制限がある。一方、１型糖尿病患者は彼らの年齢及び身長に対して太り過ぎではなく、若年齢で急激な発症が見られる。１型糖尿病患者はその生涯にわたってインスリンを注射で投与し続ける必要がある。インスリンの経口投与について研究が多く行われているが、現在市販されているインスリンの経口投薬はない。
【０００５】
結果として、好ましくは副作用が少なく、経口投与が可能な糖尿病（１型と２型）及び肥満症の治療のための別の薬剤が必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】日本特許第６３１４６８３９Ａ２号明細書
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ．１９７８、２６：２３４６
【非特許文献２】Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２００８、１３：２５５
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、複数のプテロシン化合物が抗糖尿病及び抗肥満症活性を有するという予期せぬ発見に基づいている。
【０００９】
従って、一様態において、本発明は、治療を必要とする被験体に式（Ｉ）
【化１】
0005640019.tif 000002
で表されるプテロシン化合物の有効量を投与することを含み、式（Ｉ）中、各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が独立に、Ｈ、ＯＲａ、アミノ基、ハロゲン基、アルコキシカルボニル基、アルキルチオ基、アルキルアミノ基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、−（Ｇ）ｘ、−Ｏ−（Ｇ）ｘまたはＲｂ−Ｏ−（Ｇ）ｘ、であり、各Ｒａ及びＲｂが独立に、Ｈ、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基、またはヘテロアリール基であり、Ｇが単糖残基であり、ｘが１から４の整数であり、各Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８が独立に、Ｈ、ＯＲｃ、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、ハロゲン基、アルコキシカルボニル基、アルキルチオ基、アルキルアミノ基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、−（Ｇ）ｘ、−Ｏ−（Ｇ）ｘ、またはＲｄ−Ｏ−（Ｇ）ｘであり、各ＲｃとＲｄがＨ、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基、またはヘテロアリール基であり、またはＲ５、Ｒ６、及びそれらが結合している２個の炭素原子が共同で選択的に１、２または３個のヘテロ原子を含む３〜８員環を形成し、またはＲ６、Ｒ７、及びそれらが結合している２個の炭素原子が共同で選択的に１、２または３個のヘテロ原子を含む３〜８員環を形成し、またはＲ７、Ｒ８、及びそれらが結合している２個の炭素原子が共同で選択的に１、２または３個のヘテロ原子を含む３〜８員環を形成し、ＸがＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、Ｓ（Ｏ）、COH、Ｃ（ＲｅＲｅ'）、またはＣ（ＮＲｆ）であり、各Ｒｅ及びＲｅ'が、独立に、Ｈ、アルキル基、またはシアノ基であり、ＲｆがＨ、ＯＲａ、アミノ基、ハロゲン基、アルコキシカルボニル基、アルキルチオ基、アルキルアミノ基、アルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であることを特徴とする、糖尿病（１型または２型）の治療方法を提供する。
【００１０】
また、任意の前記プテロシン化合物の糖尿病治療のための用途、及び糖尿病治療のための薬剤製造の用途も本発明の範囲内である。
【００１１】
別の一様態において、本発明は、治療を必要とする被験体に前記式（Ｉ）で表されるプテロシン化合物の有効量を投与することを含む肥満症の治療方法を提供する。
【００１２】
また、任意の前記プテロシン化合物の肥満症治療のための用途、及び肥満症治療のための薬剤製造の用途も本発明の範囲内である。
【００１３】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細を以下の説明に示す。本発明の他の特徴及び利点は、以下のいくつかの実施形態の詳細な説明及び添付の特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【００１４】
本発明を説明する目的で、以下に本発明の現在の好まれる実施例を図面に示す。しかしながら、本発明がそれらの好まれる実施例に限定されないことは理解されなければならない。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】化合物１の経口投与（１００ｍｇ／ｋｇ／日）による１４日間の治療を受けたストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘導糖尿病マウスのグルコース負荷試験結果である（例３）。＊ｐ＜０．０５は対照群と比較した統計的有意性を表す。
【図２】異なる濃度の化合物１で処理されたＣ2Ｃ12筋芽細胞のインスリン感受性試験の結果である（例４）。*ｐ＜０．０５は対照群と比較した統計的有意性を表す。
【図３】異なる濃度の化合物１で処理されたＣ2Ｃ12筋芽細胞のグルコース消費／取り込み試験の結果である（例５）。＊ｐ＜０．０５は対照群と比較した統計的有意性を表す。
【図４】化合物１の経口投与（１００ｍｇ／ｋｇ／日）による１４日間の治療を受けたＳＴＺ誘発糖尿病マウスの４型グルコース輸送体（Ｇｌｕｔ４）発現試験の結果である（例６）。＊ｐ＜０．０５は対照群と比較した統計的有意性を表し、＃ｐ＜０．０５はＳＴＺ誘発糖尿病マウスと比較した統計的有意性を表す。
【図５】化合物１の経口投与（１００ｍｇ／ｋｇ／日）による１４日間の治療を受けたＳＴＺ誘発糖尿病マウスのホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）試験の結果である（例７）。＊ｐ＜０．０５は対照群と比較した統計的有意性を表す。
【図６】化合物１の経口投与（１００ｍｇ／ｋｇ／日）による２８日間の治療を受けたｄｂ／ｄｂマウスのグルコース負荷試験結果である（例８）。
【図７】化合物１の注射投与（３０ｍｇ／ｋｇ／日）による２１日間の治療を受けたｄｂ／ｄｂマウスのグルコース負荷試験結果である（例８）。
【図８】化合物１の注射投与（３０ｍｇ／ｋｇ／日）による２８日間の治療を受けたｄｂ／ｄｂマウスのグルコース負荷試験結果である（例８）。
【図９】化合物１の経口投与（１００ｍｇ／ｋｇ／日）による２８日間の治療を受けたＳＴＺ誘発糖尿病マウスのＨｂＡｌＣ（ヘモグロビンＡ１Ｃ）試験結果である（例９）。＊ｐ＜０．０５は対照群と比較した統計的有意性を表し、＃ｐ＜０．０５はＳＴＺ誘発糖尿病マウスと比較した統計的有意性を表す。
【図１０】化合物１の経口投与（１００ｍｇ／ｋｇ／日）による２８日間の治療を受けたＳＴＺ誘発糖尿病マウスのＨＯＭＡ−ＩＲ（インスリン抵抗性のホメオスタシスモデル評価）試験結果である（例１０）。＊ｐ＜０．０５は対照群と比較した統計的有意性を表し、＃ｐ＜０．０５はＳＴＺ誘発糖尿病マウスと比較した統計的有意性を表す。
【図１１Ａ】異なる濃度の化合物１で処理されたＣ2Ｃ12筋芽細胞のＡＭＰ活性化タンパク質キナーゼ（ＡＭＰＫ）リン酸化試験結果である（例１１）。
【図１１Ｂ】異なる濃度の化合物１で処理されたＣ2Ｃ12筋芽細胞のアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）リン酸化試験結果である（例１１）。
【図１２Ａ】高脂肪食（ＨＦＤ）マウスの血中脂質／コレステロール試験結果を示す。＊ｐ＜０．０５は対照群と比較した統計的有意性を表し、＃ｐ＜０．０５はＨＦＤマウスと比較した統計的有意性を表す。
【図１２Ｂ】高比重リポ蛋白（ＨＤＬ）コレステロール／総コレステロール及び低比重リポ蛋白（ＬＤＬ）コレステロール／総コレステロールの比率の結果を示す。＊ｐ＜０．０５は対照群と比較した統計的有意性を表し、＃ｐ＜０．０５はＨＦＤマウスと比較した統計的有意性を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
別段の定めがない限り、本明細書において使用される技術用語および科学用語は、本発明にふさわしい当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。ここで言及するすべての引例は、出典を明記することによりその開示内容を本願明細書の一部とする。
【００１７】
本明細書では、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかに示す場合を除き、複数形も含むものとする。従って、例えば、「ａ  ｓａｌｔ」はその複数形及び当業者の知るところであるその均等物も含む。
【００１８】
一態様において、本発明は、必要とする被験体に式（Ｉ）
【化２】
0005640019.tif 000003
で表されるプテロシン化合物の有効量を投与することを含み、式（Ｉ）中、各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４が、独立に、Ｈ、ＯＲａ、アミノ基、ハロゲン基、アルコキシカルボニル基、アルキルチオ基、アルキルアミノ基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、−（Ｇ）ｘ、−Ｏ−（Ｇ）ｘまたはＲｂ−Ｏ−（Ｇ）ｘであり、各Ｒａ及びＲｂが独立にＨ、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基、またはヘテロアリール基であり、Ｇが単糖残基であり、ｘが１から４の整数であり、各Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８が、独立に、Ｈ、ＯＲｃ、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、ハロゲン基、アルコキシカルボニル基、アルキルチオ基、アルキルアミノ基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、−（Ｇ）ｘ、−Ｏ−（Ｇ）ｘ、またはＲｄ−Ｏ−（Ｇ）ｘであり、各Ｒｃ及びＲｄがＨ、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基、またはヘテロアリール基であり、またはＲ５、Ｒ６、及びそれらが結合している２個の炭素原子が共同で選択的に１、２または３個のヘテロ原子を含む３〜８員環を形成し、またはＲ６、Ｒ７、及びそれらが結合している２個の炭素原子が共同で選択的に１、２または３個のヘテロ原子を含む３〜８員環を形成し、またはＲ７、Ｒ８、及びそれらが結合している２個の炭素原子が共同で選択的に１、２または３個のヘテロ原子を含む３〜８員環を形成し、ＸがＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、Ｓ（Ｏ）、COH、Ｃ（ＲｅＲｅ'）、またはＣ（ＮＲｆ）であり、各Ｒｅ及びＲｅ'が、独立に、Ｈ、アルキル基、またはシアノ基であり、ＲｆがＨ、ＯＲａ、アミノ基、ハロゲン基、アルコキシカルボニル基、アルキルチオ基、アルキルアミノ基、アルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であることを特徴とする、糖尿病の治療方法を提供する。
【００１９】
用語「アルキル基」とは、別段の記載がない限り、１〜２０の炭素原子（例：Ｃ１〜Ｃ８）を含む直鎖若しくは分岐鎖の一価炭化水素を指す。アルキル基の例には、メチル基、エチル基、n−プロピル基、i−プロピル基、n−ブチル基、i−ブチル基、t−ブチル基が含まれるが、これらに限らない。用語「アルキレン基」とは、１〜２０の炭素原子（例：Ｃ１〜Ｃ８）を含む直鎖若しくは分岐鎖の二価炭化水素を指す。アルキレン基の例には、メチレン基及びエチレン基が含まれるが、これらに限らない。用語「アルケニル基」とは、２〜２０の炭素原子（例：Ｃ２〜Ｃ１０）と１つ以上の二重結合を含む直鎖若しくは分岐鎖の一価または二価の炭化水素を指す。アルケニル基の例には、エテニル基、プロペニル基、プロペニレン基、アリル基、１,４−ブタジエニル基が含まれるが、これらに限らない。用語「アルキニル基」とは、２〜２０の炭素原子（例：Ｃ２〜Ｃ１０）及び１つ以上の三重結合を含む直鎖若しくは分岐鎖の一価または二価の炭化水素を指す。アルキニル基の例には、エチニル基、エチニレン基、１−プロピニル基、１−及び２−ブチニル基及び１−メチル−２−ブチニル基が含まれるが、これらに限らない。用語「アルコキシカルボニル基」とは、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ基を指し、そのうちＲが、Ｈ、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクロアルキル基、ヘテロシクロアルケニル基、アリール基、またはヘテロアリール基とすることができる。用語「アミノ基」とは、ＮH2、アルキルアミノ基、またはアリールアミノ基を指す。用語「アルキルアミノ基」、及び「アルキルチオ基」とは、−Ｎ（Ｒ）−アルキル基及び−Ｓ（Ｒ）−アルキル基をそれぞれ指し、そのうちＲが、Ｈ、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクロアルキル基、ヘテロシクロアルケニル基、アリール基、またはヘテロアリール基とすることができる。用語「アミド基」とは、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ’基を指し、そのうち各Ｒ及びＲ’が、独立に、Ｈ、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクロアルキル基、ヘテロシクロアルケニル基、アリール基、またはヘテロアリール基とすることができる。
【００２０】
用語「シクロアルキル基」とは、３〜３０の炭素原子（例：Ｃ３〜Ｃ１２）を有する一価または二価の飽和炭化水素環系を指す。シクロアルキル基の例には、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、１,４−シクロヘキシレン基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、アダマンティンが含まれるが、これらに限らない。用語「ヘテロシクロアルキル基」とは、１個以上のヘテロ原子（Ｏ、Ｎ、Ｓ、またはＳｅなど）を有する、一価または二価の非芳香族５〜８員単環系、８〜１２員二環系または１１〜１４員三環系を指す。ヘテロシクロアルキル基の例には、ピペラジニル基、ピロリジニル基、ジオキサニル基、モルフォニリル基、テトラヒドロフラニル基が含まれるが、これらに限らない。
【００２１】
用語「アリール基」とは、一価の６−炭素単環式、１０−炭素二環式、１４−炭素三環式芳香族環系を指す。アリール基の例には、フェニル基、ナフチル基、アントラセニル基が含まれるが、これらに限らない。用語「ヘテロアリール基」とは、１個以上のヘテロ原子（Ｏ、Ｎ、Ｓ、またはＳｅなど）を有する、一価の芳香族５〜８員単環系、８〜１２員二環系、または１１〜１４員三環系を指す。ヘテロアリール基の例には、ピリジル基、フリル基、イミダゾリル基、ベンズイミダゾリル基、ピリミジニル基、チエニル基、キノリニル基、インドリル基、チアゾリル基が含まれる。用語「単糖残基」とは、グリコシド（エーテル）結合を通してともに結合された糖を指し、生物学的分子の構造的に異なるクラスである。これら化合物の構造的多様性は、多くの異なる糖及び多糖中のグルクロン酸など糖誘導体から生じ、グルコース残基とアラビノースに限られず、各糖が糖環の異なるいくつかの位置を通してほかの糖に共有結合される。加えて、グリコシド結合は糖の立体化学のためαまたはβ配置を持つことができ、両方の結合タイプが同一分子に存在することができる。
【００２２】
別段の記載がない限り、本明細書でいうアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシカルボニル基、アミノ基、アルキルアミノ基、アルキルチオ基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基は、置換若しくは非置換両方の部分を含む。用語「置換」とは、１つ以上の置換基（同じまたは異なるものとできる）を指し、それぞれが水素原子を置換する。置換基の例には、ハロゲン基（例：Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ヒドロキシル基、アミノ基、シアノ基、ニトロ基、メルカプト基、アルコキシカルボニル基、アミド基、カルボキシ基、アルカンスルホニル基、アルキルカルボニル基、カルバミド基、カルバミル基、カルボキシル基、チオウレイド基、チオシアナート基、スルホンアミド基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルキルオキシ基、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基、ヘテロシクリルアルキル基が含まれるが、これらに限らず、そのうち、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルキルオキシ基、アリール基、ヘテロアリール基、ヘテロアリールオキシ基、アルキルアミノ基、アリールアミノ基、オキソ基（Ｏ＝）、チオキソ基（Ｓ＝）、チオ基、シリル基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、アシルアミノ基、アミノアシル基、アミノチオアシル基（ａｍｉｎｏｔｈｉｏａｃｙｌ）、アミジノ基、チオウレイド基、チオシアナート基、スルホンアミド基、グアニジン基、ウレイド基、アシル基、チオアシル基、カルバミル基（−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２）、カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボン酸エステル、そのうちアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルキルオキシカルボニル基、アリール基、ヘテロアリール基、シクリル基、ヘテロシクリル基がさらに置換され得る。またシクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクロアルキル基、ヘテロシクロアルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基は相互に縮環され得る。置換基は合成の過程において保護基とすることができる。ここで言う「保護基」とは、プロセス工程中に不要な反応をする官能性を保護または遮蔽するために用いられる基または部分を指す。保護基はその工程で反応を防止するが、その後取り除いて本来の官能性を現すことができる。保護基の例には、トリメチルシリル基（ＴＥＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル基（ｔＢｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル基（ＣＢＺ）、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）が含まれるが、これらに限らない。
【００２３】
本発明でいうプテロシン化合物は、その化合物自体と、該当する場合、その塩、プロドラッグ、溶媒化合物を含む。例えば塩は、プテロシン化合物上でアニオンと正に荷電した基（例：アミノ基）間で形成され得る。適したアニオンには、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硫酸塩、硝酸塩、燐酸塩、クエン酸塩、ホン酸ナトリウム、トリフルオロ酢酸塩、酢酸塩、リンゴ酸、トシラート、酒石酸塩、フマル酸塩、グルタミン酸塩、グルクロン酸、乳酸塩、グルタル酸、マレイン酸塩が含まれる。同様に、塩はプテロシン化合物上でカチオンと負に荷電した基（例：カルボキシレート基）間でも形成され得る。適したカチオンには、ナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、およびテトラメチルアンモニウムイオンなどのアンモニウムカチオンが含まれる。前記プテロシン化合物はまた、 第四窒素原子を含むそれらの塩も含む。プロドラッグの例には、エステル及び被験体への投与に際して活性プテロシン化合物を提供できるその他製薬学的に許容される化合物が含まれる。溶媒化合物とは、活性プテロシン化合物と製薬学的に許容される溶媒間で形成される複合剤をさす。製薬学的に許容される溶媒には水、エタノール、イソプロパノール、酢酸エチル、酢酸、エタノールアミンが含まれる。
【００２４】
一実施例において、ＸはＣ（Ｏ）またはＣＨ２であり、特にＣ（Ｏ）である。
【００２５】
別の一実施例において、各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は、独立に、Ｈ、ＯＲａ、−（Ｇ）ｘ、−Ｏ−（Ｇ）ｘ、Ｒｂ−Ｏ−（Ｇ）ｘまたはアルキル基であり、それらはＨ、アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、または保護基として選択的にハロゲン基、ＣＯＯＲｇ、ＯＲｇ、Ｒｇで置換される。
【００２６】
さらに別の一実施例において、各Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は、独立に、Ｈ、ＯＲｃ、−（Ｇ）ｘ、−Ｏ−（Ｇ）ｘ、Ｒｄ−Ｏ−（Ｇ）ｘ、またはアルキル基であり、それらはＨ、アルキル基、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、または保護基として選択的にハロゲン基、ＣＯＯＲｇ、ＯＲｇ、Ｒｇで置換される。
【００２７】
具体的には、表１に本発明の式（Ｉ）のプテロシン化合物の例を示す。
【表１−１】
0005640019.tif 000004
【表１−２】
0005640019.tif 000005
【表１−３】
0005640019.tif 000006
化合物７６〜８４は以下の実施例１で説明されるとおり、それぞれ合成化合物３〜１１を指す。
ｇｌｕ：グルコース、ａｒａ：アラビノース 
４ｃｏｕ−ｇｌｕ：４−Ｏ−ｐ−クマロイル−Ｄ−グルコース
３ｇｌｕ：３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド
６ｃｏｕ−ｇｌｕ：６−Ｏ−ｐ−クマロイル−Ｄ−グルコース
*炭素は式で示されたものと同じ。
【００２８】
より具体的に、本発明の式（Ｉ）のプテロシン化合物は、化合物１、４、５、７、１０、１２、１５、１７、２８、６３、７１〜７５である。
【００２９】
さらにより具体的に、以下に本発明の特定のプテロシン化合物の構造を示す。
【表２−１】
0005640019.tif 000007
【００３０】
本発明で使用されるプテロシン化合物は、分離形式、すなわち、合成法により作製された、または天然源（例えば、コバノイシカグマ科やイノモトソウ科などの蕨）から濃縮されたものとすることができる。これら植物の例には、ツルカグマ（Ｄｅｎｎｓｔａｅｄｔｉａ  ｓｃａｎｄｅｎｓ）、ユノミネシダ（Ｈｉｓｔｉｏｐｔｅｒｉｓ  ｉｎｃｉｓａ）、ウスバオオイシカグマ（Ｍｉｃｒｏｌｅｐｉａ  ｓｐｅｌｕｎｃａｅ）、ワラビ（Ｐｔｅｒｉｄｉｕｍ  ａｑｕｉｌｉｎｕｍ  ｖａｒ．ｌａｔｉｕｓｃｕｌｕｍ）、ランダイワラビ（Ｐｔｅｒｉｄｉｕｍ  ｒｅｖｏｌｕｔｕｍ）、イワヒメワラビ（Ｈｙｐｏｌｅｐｉｓ  ｐｕｎｃｔａｔａ）、ミズワラビ（Ｃｅｒａｔｏｐｔｅｒｉｓ  ｔｈａｌｉｃｔｒｏｉｄｅｓ）、ハチジョウシダ（Ｐｔｅｒｉｓ  ｆａｕｒｉｅｉ）、オオアマクサシダ（Ｐｔｅｒｉｓ  ｄｉｍｉｄｉａｔａ）、ホコシダ（Ｐｔｅｒｉｓ  ｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓ）が含まれるが、これらに限らない。これらの植物は、台湾台北縣烏来郷や、台北市大屯山で見つけることができる。例えば、本発明のプテロシン化合物の一部（例：化合物１、７、２８、７１）は天然産物であり、従って天然源から分離することができる。分離されたプテロシン化合物とは、乾燥重量で少なくとも４０％の化合物を含む作製物を指す。分離された化合物の純度は例えばカラムクロマトグラフィ、質量分析法、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、ＮＭＲ、またはその他適切な方法で測定することができる。
【００３１】
これら化合物を単離する方法は先行技術で既知となっていある。例えば、Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ． Ｒｅｓ、 ２００４、１８、５７３、Ｓｈｅｒｉｄａｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄ．、１９９９、６５、２７１、Ｎａｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９８９、２１５、１７３、Ｍｕｒａｋａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ、１９７６、２４、２２４１、Ｋｕｒａｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ、１９８５、３３、２３０５を参照することができる。また、これら化合物は化学合成でも作製することができる。非天然のプテロシン化合物は、天然のものから変換されたか（例えば、Ｂａｎｅｒｊｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９７４、１５、１３６９、Ｈａｙａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９９１、３３、２５０９、ＭｃＭｏｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．  Ｏｒｇ．Ｃhem．、１９９２、５７、６８７６を参照）、または先行技術において既知の方法で新たに合成されたかのいずれかであり得る。
【００３２】
望ましいプテロシン化合物の合成に有用な合成化学変換及び基び保護（保護と脱保護）方法は、例えば、Ｒ． Ｌａｒｏｃｋ、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ、ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）、Ｔ．Ｗ． ＧｒｅｅｎｅとＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第三版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９９）、Ｌ． ＦｉｅｓｅｒとＭ． Ｆｉｅｓｅｒ、Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’s  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９４）、Ｌ． Ｐａｑｕｅｔｔｅ、ｅｄ．、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９５）及びそれ以降のエディションで説明されている。
【００３３】
合成されたプテロシン化合物は適切な溶媒での反応混合物から分離することができ、かつ選択的に、さらにフラッシュカラムクロマトグラフィ、高速液体クロマトグラフィ、結晶化法またはその他適した方法で純化される。
【００３４】
ここでいうプテロシン化合物は、非芳香族二重結合及び１個以上の不斉中心を含むことができ、従って、ラセミ化合物及びラセミ混合物、単独の鏡像異性体、個別のジアステレオマ、ジアステレオマ混合物、シスまたはトランス異性体の形態で発生することができる。そのような異性体のすべての形態が企図される。
【００３５】
本発明のプテロシン化合物は、コバノイシカグマ科やイノモトソウ科などのワラビから作製されたシダ類産物にも存在することがある。これら植物の一部の例には、ツルカグマ（Ｄｅｎｎｓｔａｅｄｔｉａ  ｓｃａｎｄｅｎｓ）、ユノミネシダ（Ｈｉｓｔｉｏｐｔｅｒｉｓ  ｉｎｃｉｓａ）、ウスバオオイシカグマ（Ｍｉｃｒｏｌｅｐｉａ  ｓｐｅｌｕｎｃａｅ）、ワラビ（Ｐｔｅｒｉｄｉｕｍ  ａｑｕｉｌｉｎｕｍ  ｖａｒ． ｌａｔｉｕｓｃｕｌｕｍ）、ランダイワラビ（Ｐｔｅｒｉｄｉｕｍ  ｒｅｖｏｌｕｔｕｍ）、イワヒメワラビ（Ｈｙｐｏｌｅｐｉｓ  ｐｕｎｃｔａｔａ）、ミズワラビ（Ｃｅｒａｔｏｐｔｅｒｉｓ  ｔｈａｌｉｃｔｒｏｉｄｅｓ）、ハチジョウシダ（Ｐｔｅｒｉｓ  ｆａｕｒｉｅｉ）、オオアマクサシダ（Ｐｔｅｒｉｓ  ｄｉｍｉｄｉａｔａ）、ホコシダ（Ｐｔｅｒｉｓ  ｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓ）が含まれるが、これらに限らない。ここでいうシダ類産物とは、少なくとも１つの上述の品種そのもの、その葉や花、根、種、茎、果実などの部分、またはそれらの汁、粉末、顆粒、抽出物、スライス、濃縮物、沈殿物など変形態様からの産物を指す。具体的に、前記シダ類産物は新鮮な植物全体からのものである。
【００３６】
ここでいうワラビのシダ類産物は、当業者の一般的に知るところである任意の標準的な方法または技法で作製することができる。本発明によるシダ抽出物の作製の一例を以下で説明する。
【００３７】
（シダ抽出物の作製）
カラムクロマトグラフィは、Ｄｉａｉｏｎ  ＨＰ  ２０（１００〜２００メッシュ、三菱化成工業）、ＭＣＩ−ｇｅｌ  ＣＨＰ  ２０Ｐ（７５〜１５０μｍ、三菱化成工業）、Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  Ｃ１８−ＯＰＮ（７５μｍ、Ｎａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅ， Ｉｎｃ．）、シリカゲル板（６０Ｆ−２５４、Ｍｅｒｋ）上のＴＬＣ（薄層クロマトグラフィ）、及び熱に対する可視化剤として用いる１０％硫酸溶液を利用して実施することができる。新鮮な植物全体が室温でメタノール（×３、各２日間）を用いて抽出される。真空内で４５℃で溶液を蒸発させた後、残留物が得られる。この残留物を蒸留水に溶解させてからｎ−ヘキサンと酢酸エチルで抽出を行い、ｎ−ヘキサン可溶性画分、酢酸エチル可溶性画分、及び水可溶性画分を得る。有機可溶性画分は、水−メタノール、エタノールのポリデキストランゲル（Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０）、高多孔性ポリスチレンゲル（Ｄｉａｉｏｎ  ＨＰ−２０、ＭＣＩ  ＣＨＰ−２０Ｐ）ゲルカラムクロマトグラフィ（ＣＣ）で溶出、またはｎ−ヘキサン、ベンゼン、ジクロロメタン、メタノール溶剤システムのシリカゲルＣＣで純化される。純化された化合物の構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）及び質量スペクトル（ＭＳ）のスペクトル解析及び物理データにより確認することができる。
【００３８】
本発明によれば、式（Ｉ）のプテロシン化合物は１型と２型を含む糖尿病の治療に有効である。
【００３９】
ここで用語「１型糖尿病」、「若年発症型糖尿病」または「インスリン依存性糖尿病」は、膵臓が作るインスリンが少なすぎる、またはないことによって特徴付けられる疾病を指す。１型糖尿病に苦しむ患者は、生存にインスリンが必要である。インスリンがないと、患者は急性ケトアシドーシスや昏睡など、重度の代謝性合併症を発症する。
【００４０】
ここで用語「２型糖尿病」、「成人発症型糖尿病」または「非インスリン依存性糖尿病」とはインスリンが利用可能であるにも関わらずグルコース産生が過多となり、グルコースクリアランスが不十分なため血中グルコース濃度が高すぎるままとなることで特徴付けられる疾病を指す。
【００４１】
「被験体」とは特に、本発明の治療を必要とするヒトなどの哺乳動物であるが、コンパニオンアニマル（犬や猫など）、畜産動物（牛、羊、豚、馬など）、または実験動物（ねずみ、マウス、モルモットなど）としてもよい。一実施例において、前記被験体は肥満である。
【００４２】
用語「治療」とは、特定の疾患または病気の予防、または特定の疾患または病気に関連付けられる症状の緩和及び（または）前述の症状の防止または排除を含む。例えば、ここでいう用語「糖尿病の治療」とは、通常グルコース濃度の低下、インスリン感受性の改善、またはグルコース消費量の増加を指す。
【００４３】
ここでいう「有効量」とは、単独でまたは１つ以上のほかの活性剤との組み合わせで前記被験体に治療効果を生じるために必要な、各活性剤の量を指す。有効量は、当業者であれば既知であるように、投与経路、付形剤の使用、及びほかの共用される活性剤によって異なる。本発明の一実施例において、プテロシン化合物は１０〜２５０ｍｇ／ｋｇの量で経口投与され、好ましくは２５〜２００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは５０〜１５０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは約１００ｍｇ／ｋｇの量である。本発明の別の一実施例において、プテロシン化合物は５〜１５０ｍｇ／ｋｇの量で皮下注射、腹腔内注射、筋肉注射、または静脈注射により投与され、好ましくは１０〜１００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは２０〜８０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは約３０ｍｇ／ｋｇの量である。
【００４４】
上述の治療を行うため、ここで説明する１つ以上のプテロシン化合物を製薬学的に許容される担体と混合し、製薬学的組成物を形成することができる。「許容される」とは、担体が組成物の活性成分と適合性があり（かつ好ましくは活性成分を安定化し）、治療を受ける前記被験体に有害でないことを意味する。シクロデキストリン（抽出物の１つ以上の活性化合物と、特定のより可溶性の高い錯体を形成する）などの溶解剤は、活性化合物の送達のための製薬学的付形剤として利用することができる。ほかの担体の例には、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、ラウリル硫酸ナトリウム、Ｄ＆Ｃ黄色１０号が含まれる。
【００４５】
前記製薬学的組成物は、吸入噴霧、または埋め込みリザーバーにより、経口、非経口で投与することができる。ここでの用語「非経口」とは、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、病巣内、頭蓋内の注射または注入法を含む。
【００４６】
適した分散剤や湿潤剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０など）と懸濁化剤を使用して、当業者に既知の技法に従い、滅菌注射用組成物（例：水性または油性懸濁液）を配合することができる。前記滅菌注射用製剤は、無毒の非経口で許容可能な希釈剤または溶剤内の滅菌注射用溶液または懸濁液とすることもでき、例えば、１,３−ブタンジオール内の溶液としてもよい。許容可能な溶媒及び溶剤のうち採用できるものはマンニトール、水、リンガー溶液、生理食塩液である。さらに、無菌の固定油が溶剤または懸濁化剤として従来使用されている（例えば、合成のモノグリセリドやジグリセリド）。オレイン酸やそのグリセリド誘導体などの脂肪酸、及び特にポリオキシエチル化されたオリーブオイルやヒマシ油など天然の製薬学的に許容される油も、注射用製剤の配合に有用である。これらの油剤または懸濁液は長鎖アルコール希釈剤または分散剤、あるいはカルボキシメチル基セルロースまたは類似の分散剤を含むこともできる。
【００４７】
経口用組成物は、錠剤、カプセル、乳濁液と水性懸濁液、分散剤、溶剤が含まれるがこれらに限らない、任意の経口で許容可能な剤形とすることができる。錠剤に一般的に使用される担体には、乳糖とコーンスターチが含まれる。ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤も通常錠剤に添加される。カプセルの形態での経口投与に有用な希釈剤には、乳糖と乾燥コーンスターチが含まれる。水性懸濁液または乳濁液が経口投与されるとき、活性成分は乳化剤または懸濁化剤を組み合わせた油相内に懸濁または溶解させることができる。希望に応じて、特定の甘味料、香料、着色料を添加してもよい。
【００４８】
製剤処方の分野で既知の技法に従い、吸入性組成物を配合することができ、ベンジルアルコールまたはその他適した防腐剤、生物学的利用を向上するための吸収促進剤、フッ化炭素、及び（または）その他当技術分野で周知の溶解補助剤または分散剤を用いた生理食塩水中の溶剤として配合することができる。
【００４９】
本発明はまた、前述の式（Ｉ）のプテロシン化合物が抗肥満症活性を示すという予期せぬ発見に基づいている。
【００５０】
従って、本発明はさらに、治療を必要とする被験体に本発明による式（Ｉ）のプテロシン化合物の有効量を投与することを含むことを特徴とする、肥満症の治療方法を提供する。
【００５１】
具体的に、本発明の方法は、被験体の血清脂質（例：トリグリセリド）またはコレステロール濃度を低下させることができる。
【００５２】
適した試験管内試験を使用して、糖尿病及び肥満症の治療のためのプテロシン化合物の薬効を初歩的に評価することができる。前記化合物はさらに糖尿病及び肥満症の治療のためのその薬効について生体内検査を行うことができる。例えば、前記化合物は、糖尿病または肥満症を患った動物（例：化学薬品、または遺伝子変異、あるいは糖尿病または肥満症を患うように高脂肪食品で誘導された動物モデル）に投与して、その治療効果を評価することができる。その結果に基づき、適切な用量範囲及び投与経路を判定することもできる。
【００５３】
更なる推敲なしに、上述の説明が本発明を実施可能にしていると考えられる。従って、以下の具体的な実施例は、説明の目的のために挙げられたものであり、いかなるようにも本明細書の開示の残り部分を限定するものではない。引用された全ての文献は、その全体が、本明細書に参考として組み込まれる。本明細書中で引用する特許を含むすべての文献は、その全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【実施例１】
【００５４】
（化合物１の合成）
６−ブロモ−５，７−ジメチル−１−インダノン（３）
【化３】
0005640019.tif 000008
ＣＨ２Ｃ１２（８０ｍＬ）中のＡｌＣｌ３（２０.２g、１５１.３ミリモル）と３−クロロプロピオニルクロリド（１６.５g、１２９.７ミリモル）の撹拌溶液中に、０℃で滴下漏斗を用い４０ｍＬのＣＨ２Ｃ１２とブロモキシレン（２０.０g、１０８.１ミリモル）が滴下により追加された。反応混合物が室温まで加熱され、さらに１２時間撹拌された。反応混合物が氷（２００g）と５０ｍＬの塩酸（純）で冷却され、１５分間撹拌された。その後粗反応混合物が酢酸エチル（３００ｍＬx２ｍＬ）で抽出され、水（４００ｍＬ）、食塩水（５００ｍＬ）で洗浄された後、乾燥され（Ｎａ２ＳＯ４）、真空内で濃縮された。
【００５５】
その後この粗化合物が純Ｈ２ＳＯ４（１６５ｍＬ）に追加され、９０℃で１時間撹拌された。反応混合物が室温に戻った後、氷（４００g）で冷却された。粗反応混合物が酢酸エチル（４００ｍＬx２ｍＬ）で抽出され、水（５００ｍＬ）、食塩水（５００ｍＬ）で洗浄された後、乾燥され（Ｎａ２ＳＯ４）、真空内で濃縮された。粗産物がシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル、１２:１、ｖ／ｖ）により純化され、純の固体の化合物３（１０.１ｇ、３９.１％）が得られた。
【００５６】
６−ブロモ−５，７−ジメチル−１−オキソ−インダン−２−カルボン酸エチルエステル（４）
【化４】
0005640019.tif 000009
炭酸ジエチル（３０.５ｍＬ、２５１.０４ミリモル）をトルエン（１００ｍＬ）中の水素化ナトリウムの６０％分散剤（３.０１ｇ、１２５.５ミリモル）に加え、得られた溶液が機械的に撹拌され、還流された。トルエン（５０ｍＬ）中の１−インダノン（１０.０g、４１.８ミリモル）が還流溶液に３時間以上かけてゆっくりと追加された。滴下漏斗がベンゼン（２０ｍＬ）で洗浄され、反応混合物がさらに０.５時間還流された。反応混合物が飽和水溶液のＮＨ４Ｃｌにゆっくりと加えられた。水の層が酢酸エチルを用いて３回抽出され、混合酢酸エチル抽出物が水で洗浄された後、乾燥され（Ｎａ２ＳＯ４）、溶剤が真空内で除去された。粗産物がシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル、１５:１、ｖ／ｖ）により純化され、純の固体の化合物４（１１.５ｇ、８８.４％）が得られた。
【００５７】
６−ブロモ−２，５，７−トリメチル−１−オキソ−インダン−２−カルボン酸エチルエステル（５）
【化５】
0005640019.tif 000010
乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）内の化合物４（５.０ｇ、１６.１ミリモル）の撹拌溶液に固体水素化ナトリウム（０.８５ｇ、３５.４ ミリモル）の６０％分散剤が滴下漏斗でいくつかの部分に分けて０℃で加えられた。反応混合物が室温まで加熱され、さらに１時間撹拌された。その後ＭｅI（２.０ｍＬ、３２.１５ミリモル）がアルゴン雰囲気下で０℃で滴下により加えられた。反応混合物が室温まで加熱され、５時間撹拌された。反応混合物が飽和水溶液のＮＨ４Ｃｌ溶液で０℃で冷却され、１５分間撹拌された。その後粗反応混合物が酢酸エチル（１００ｍＬx２ｍＬ）で抽出され、水（１００ ｍＬ）、食塩水（１００ ｍＬ）で洗浄された後、乾燥され（Ｎａ２ＳＯ４）、真空内で濃縮された。シリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル、１５:１、ｖ／ｖ）により純化され、純の化合物５（４.５ｇ、８６.５％）が得られた。
【００５８】
２，５，７−トリメチル−１−オキソ−６−ビニル−インダン−２−カルボン酸エチルエステル（６）
【化６】
0005640019.tif 000011
ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（９:１）（３ｍＬ）内のカリウムビニルトリフルオロボラート（０.１８６ｇ、１.３８ミリモル）、ＰｄＣｌ２（０.０３３ｇ、０.１８ミリモル）、ＰＰｈ３（０.０７３ｇ、０.２７ミリモル）、ＣＳ２ＣＯ３（１.２ｇ、３.６９ミリモル）、化合物５（０.３ｇ、０.９２ミリモル）の溶液が、８５℃でアルゴン雰囲気下で密閉チューブ内で加熱された。反応混合物が８５℃で４８時間撹拌され、その後室温に冷却されて、Ｈ２Ｏ（６ｍＬ）で希釈され、続いて酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出されて乾燥され（Ｎａ２ＳＯ４）、真空内で濃縮された。カラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２、石油エーテル溶離剤内２〜４％ＥｔＯＡｃ）により純化され、純の化合物６（０.２３ｇ、９２％）が得られた。
【００５９】
２−ヒドロキシメチル−２，５，７−トリメチル−６−ビニル−インダン-１−オール （７）
【化７】
0005640019.tif 000012
乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）内の化合物６（１.３ｇ、４.７７mmol）の撹拌溶液にＬＡＨ（０.２１２ｇ、５.７３mmol）が−７８℃でアルゴン雰囲気下で加えられ、反応混合物が３時間撹拌された後、反応混合物が０℃まで加熱され、酢酸エチル（３０ｍＬ）で０℃に冷却された。反応混合物が室温に戻された後、２Ｍ酒石酸カリウムナトリウム溶剤で抽出され、食塩水（２０ｍＬ）で洗浄された後乾燥され（Ｎａ２ＳＯ４）、真空内で濃縮された。カラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２、石油エーテル溶離剤内１５〜２０％ＥｔＯＡｃ）により純化され、純の化合物 （０.８８ｇ、８０ ％）がガムシロップとして得られた。
【００６０】
２.５.７-トリメチル-２−トリエチルシラニルオキシメチル−６−ビニル−インダン−１−オール（８）
【化８】
0005640019.tif 000013
乾燥ＣＨ２Ｃ１２内の出発物質７（０.８５ｇ、３.６６ミリモル）の撹拌溶液にイミダゾール（０.５ｇ、７.３２ミリモル）とＴＥＳＣ１（０.６ｍＬ、３.６６ミリモル）が０℃でアルゴン雰囲気下で順に加えられ、反応混合物が同じ温度で６時間撹拌された。その後反応混合物がＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈され、ＣＨ２Ｃ１２（５０ｍＬ）、食塩水（２５ｍＬ）で抽出された後、乾燥され（Ｎａ２ＳＯ４）、真空内で濃縮された。カラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２、石油エーテル溶離剤内５〜１０％ＥｔＯＡｃ）により純化され、純の化合物８（０.８５ｇ、８８ ％）がシロップとして得られた。
【００６１】
６−（２−ヒドロキシ−エチル）−２，５，７−トリメチル−２−トリエチルシラニルオキシメチル−インダン−１−オール（９）
【化９】
0005640019.tif 000014
乾燥ＴＨＦ内の化合物８（０.８５ｇ、２.４５ミリモル）撹拌溶液に（Ｃｙ）２ＢＨ（０.８７ｇ、４.９１ミリモル）が０℃でアルゴン雰囲気下でゆっくりと加えられた。反応混合物が室温まで加熱され、１２時間撹拌された。反応混合物が２Ｎ  ＮａＯＨ（６ｍＬ）とＨ２Ｏ２（３ｍＬ）で０℃で冷却され、４時間撹拌された。その後粗反応混合物が酢酸エチル（４０ｍＬ）で抽出され、水（１０ｍＬ）、食塩水（１０ｍＬ）で洗浄された後、乾燥され（Ｎａ２ＳＯ４）、真空内で濃縮された。カラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２、石油エーテル溶離剤内８〜１０％ＥｔＯＡｃ）により純化され、純の化合物９（０.７２ｇ、８１％）がガムシロップとして得られた。
【００６２】
２，５，７-トリメチル-２−トリエチルシラニルオキシメチル−６−（２−トリイソプロピルシラニルオキシ−エチル）−インダン−１−オール（１０）
【化１０】
0005640019.tif 000015
乾燥ＣＨ２Ｃ１２内の出発物質９（０.７ｇ、１.９２ミリモル）の撹拌溶液にイミダゾール（０.２６２ｇ、３.８４ミリモル）とＴＩＰＳＣ１（０.４５ｍＬ、２.１１ミリモル）が０℃でアルゴン雰囲気下で順に加えられた。反応混合物が室温まで加熱され、室温で３時間撹拌された。その後反応混合物がＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈され、ＣＨ２Ｃ１２（３０ｍＬ）、食塩水（１０ｍＬ）で抽出されて、乾燥され（Ｎａ２ＳＯ４）、真空内で濃縮された。カラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２、石油エーテル溶離剤内２〜４％ＥｔＯＡｃ）により純化され、純の化合物１０（０.８２ｇ、８２％）が得られた。
【００６３】
２，５，７−トリメチル−２−トリエチルシラニルオキシメチル−６−（２−トリイソプロピルシラニルオキシ−エチル）−インダン−１−オン（１１）
【化１１】
0005640019.tif 000016
乾燥ＣＨ２Ｃ１２内の化合物１０（０.８ｇ、１.５４ミリモル）の撹拌溶液にＰＤＣ（１.１５ｇ、３.０７ミリモル）が０℃でアルゴン雰囲気下で加えられた。反応混合物が室温まで加熱され、室温で４時間撹拌された。反応混合物が真空内で濃縮された。粗産物がカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２、石油エーテル溶離剤内１〜３％ＥｔＯＡｃ）により純化され、純の化合物９（０.６４ｇ、８１％）が無色シロップとして得られた。
【００６４】
６−（２−ヒドロキシ−エチル）−２−ヒドロキシメチル−２，５，７−トリメチル−インダン−１−オン （１２）
【化１２】
0005640019.tif 000017
乾燥ＴＨＦ内の化合物１１（０.６４ｇ、１.２３ミリモル）の撹拌溶液にＴＨＦ（０.６５ｇ、２.４７ミリモル）内のフッ化テトラｎ−ブチルアンモニウムが０℃で加えられ、室温で３時間撹拌された。その後反応混合物がＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈され、酢酸エチル（３０ｍＬ）、食塩水（１０ｍＬ）で抽出された後、乾燥され（Ｎａ２ＳＯ４）、真空内で濃縮された。カラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２、石油エーテル溶離剤内１５〜２０％ＥｔＯＡｃ）により純化され、純の化合物１２（０.２６ｇ、８５％）が得られた。
【実施例２】
【００６５】
（植物抽出）
イワヒメワラビ（Ｈｙｐｏｌｅｐｉｓ  ｐｕｎｃｔａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｍｅｔｔ.）
イワヒメワラビ（Ｈｙｐｏｌｅｐｉｓ  ｐｕｎｃｔａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｍｅｔｔ.）が台湾台北縣烏来郷から採集された。イワヒメワラビ（Ｈｙｐｏｌｅｐｉｓ  ｐｕｎｃｔａｔａ）の新鮮な植物全体（１１ｋｇ）がＭｅＯＨ（２０Ｌ）で室温で３回抽出されて、ＭｅＯＨ抽出物を得、さらにｎ−ヘキサン可溶性画分とＨ２Ｏ可溶性画分を得るためにそれをｎ−ヘキサン−Ｈ２Ｏ（１:１）（１.５Ｌｘ３）間で分離した。Ｈ２Ｏ可溶性画分をＥｔＯＡｃ−Ｈ２Ｏ（１:１）（１.５Ｌｘ３）間で分離し、ＥｔＯＡｃ可溶性画分とＨ２Ｏ可溶性画分を得た。ＥｔＯＡｃ可溶性画分がＤｉａｉｏｎ  ＨＰ−２０ゲルカラムクロマトグラフィ（ＣＣ）で処理され、Ｈ２Ｏで溶離され、ＭｅＯＨが徐々に増加されて、フラクション１〜４を産生した。フラクション２がＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０ＣＣで処理され、９５％ＥｔＯＨで溶離され、フラクション２−１〜２−２が形成された。フラクション２−１がＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０ＣＣで純化され（Ｈ２Ｏ→ＭｅＯＨ）、フラクション２−１−１〜２−１−３が取得された。フラクション２−１−２がＭＣＩゲルＣＨＰ−２０Ｐ  ＣＣで純化され（Ｈ２Ｏ→ＭｅＯＨ）、プテロシンＡ（１２８ｍｇ）が取得された。フラクション３がシリカゲルＣＣで処理され、徐々にＣＨ２Ｃ１２とＭｅＯＨで溶離されて、３−１〜３−５フラクションが得られた。フラクション３−２がシリカゲルＣＣで処理され、ＣＨ２Ｃ１２−ＭｅＯＨ（９:１）で展開されて、プテロシンＺ（７９０ｍｇ）が得られた。フラクション３−４がシリカゲルＣＣで処理され、ＥｔＯＡｃ−ｎ−ヘキサン（４:１）で溶離されて、プテロシンI（２４ｍｇ）が得られた。フラクション４がＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０ゲルＣＣで処理され、ＭｅＯＨで溶離されて、２つのフラクションが形成された。フラクション４−１がＭＣＩ  ＣＨＰ−２０ＰゲルＣＣ（Ｈ２Ｏ→ＭｅＯＨ）と、ＥｔＯＡ−ｎ−ヘキサン（７:３）でのシリカゲルＣＣで純化され、プテロシンＤ（２０ｍｇ）が得られた。
【００６６】
ランダイワラビ（Ｐｔｅｒｉｄｉｕｍ  ｒｅｖｏｔｕｌｕｍ（ＢＩ.）Ｎａｋａｉ） 
ランダイワラビ（Ｐｔｅｒｉｄｉｕｍ  ｒｅｖｏｔｕｌｕｍ（ＢＩ.）Ｎａｋａｉ）が台北市大屯山から採集された。室温で、ランダイワラビ（Ｐｔｅｒｉｄｉｕｍ  ｒｅｖｏｔｕｌｕｍ（ＢＩ.）Ｎａｋａｉ）（２０ｋｇ）の新鮮な植物全体がＭｅＯＨ（２０Ｌｘ３）で抽出され、ＭｅＯＨ抽出物を得、有機溶剤を蒸発させた後その抽出物に対してＣｅｌｉｔｅ  ＣＣを行い、ｎ−ヘキサン、ＣＨ２Ｃ１２、ＭｅＯＨで溶離して３つのフラクションを得た。ＣＨ２Ｃ１２可溶性画分がＭＣＩ  ＣＨＰ−２０ＰゲルＣＣで処理され、Ｈ２ＯとＭｅＯＨ（１:１→０:１）で溶離されて、３つのフラクションが得られた。フラクション１がシリカゲルＣＣにより純化され、ＣＨ２Ｃ１２とＭｅＯＨ（１４:１）で溶離されて、フラクション１−１〜１−３が得られた。フラクション１−１がシリカゲルＣＣ（ｎ−ヘキサン−ＥｔＯＡｃ＝１：２）とＯＤＳゲルＣＣ（ＣＨ３ＣＮ−Ｈ２Ｏ＝２０：８０→３０：７０）で処理され、（２Ｓ）−プテロシンＡ（２３８ｍｇ）、（３Ｒ）−プテロシンＤ（３８ｍｇ）、（２Ｒ）−プテロシンＮ（２１ｍｇ）、（２Ｒ、３Ｒ）−プテロシンＬ（１７９ｍｇ）、（２Ｒ）−プテロシンＧ（７３ｍｇ）が得られた。フラクション１−２がシリカゲルＣＣにより純化されてｎ−ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（１:２）で溶離され、かつＯＤＳゲルＣＣで純化されてＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ（１:９）で溶離され、（３Ｒ）−プテロシンＸ（２.２ｍｇ）と（２）−ヒドロキシプテロシンＣ（４.３ｍｇ）が産生された。フラクション２がシリカゲルＣＣ（ｎ−ヘキサン−ＥｔＯＡｃ＝l：２）とＨＰＬＣ−シリカ（１０μｍ、ｎ−ヘキサン−ＥｔＯＡｃ＝２：１→１：２）で処理され、（２Ｓ、３Ｓ）−プテロシンＣ（１６２ｍｇ）と（２Ｒ、３Ｓ）−プテロシンＣ（１３ｍｇ）が得られた。
【００６７】
その他品種
ツルカグマ（Ｄｅｎｎｓｔａｅｄｔｉａ  ｓｃａｎｄｅｎｓ）、ユノミネシダ（Ｈｉｓｔｉｏｐｔｅｒｉｓ  ｉｎｃｉｓａ）、ウスバオオイシカグマ（Ｍｉｃｒｏｌｅｐｉａ  ｓｐｅｌｕｎｃａｅ）、ワラビ（Ｐｔｅｒｉｄｉｕｍ  ａｑｕｉｌｉｎｕｍ  ｖａｒ． ｌａｔｉｕｓｃｕｌｕｍ）、ミズワラビ（Ｃｅｒａｔｏｐｔｅｒｉｓ  ｔｈａｌｉｃｔｒｏｉｄｅｓ）、ハチジョウシダ（Ｐｔｅｒｉｓ  ｆａｕｒｉｅｉ）、オオアマクサシダ（Ｐｔｅｒｉｓ  ｄｉｍｉｄｉａｔａ）、ホコシダ（Ｐｔｅｒｉｓ  ｅｎｓｉｆｏｒｍｉｓ）を含むワラビのほかの品種の植物全体が上述のように抽出され、少なくともプテロシンＡ、プテロシンＩ、プテロシンＺを含むことが確認された（データを示さない）。
【実施例３】
【００６８】
（１型糖尿病マウスにおけるグルコース負荷試験）
ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘発糖尿病マウスに化合物１（５０ｍｇ／ｋｇ）が経口投与された。ＳＴＺ誘発糖尿病マウスは１型糖尿病（インスリン依存性）の周知のマウスモデルである。例えばＬｉｕ  ＩＭ， ｅｔ  ａｌ．、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００１；３０７：８１〜８４を参照。
【００６９】
２時間後、正常なマウス、ＳＴＺ誘発糖尿病マウス、前述の化合物１での治療を受けたＳＴＺマウスにグルコース負荷試験を実施した。簡単に言うと、すべてのマウスに１ｇ／ｋｇのグルコースが経口投与され、３０、６０、９０、１２０、１５０分後にこれらマウスの血糖値が測定された。正常なマウスとＳＴＺ糖尿病マウスにおいて、グルコースの摂取３０分後に血糖値が上昇した。驚くべきことに、化合物１での治療を受けたＳＴＺ糖尿病マウスにおいて、グルコースの摂取３０分後に血糖値は若干上昇したのみであり、グルコースの摂取６０分後には大幅に低下した。
【００７０】
また別に、ＳＴＺ誘発糖尿病マウスに化合物１の経口投与（１００ｍｇ／ｋｇ）による１４日間の治療を実施した。これらマウスには２ｇ／ｋｇの用量でグルコースが経口投与された。グルコース投与の１５、４５、７５、１０５分後にマウスの血糖値が測定された。図１に結果を示す。
【００７１】
得られた結果によると、健康な対照マウス、ＳＴＺ誘発糖尿病マウス、そして化合物１での治療を受けたＳＴＺ誘発糖尿病マウスはグルコース投与１５分後に血糖値が上昇したことが示された。検査した時間中ＳＴＺ誘発糖尿病マウスの血糖値は高いままであったが、化合物１での治療を受けたＳＴＺ誘発糖尿病マウスはグルコース投与の４５分後に大幅に血糖値が低下した。これらの治療を受けたマウスの血糖値は、健康な対照マウスの血糖値に近かった。従って、ここで得られた結果は化合物１がＳＴＺ誘発糖尿病マウスの血糖値を大幅に低下させたことを示す。この試験では、表１に記載された化合物７、７２、７３、７４を含む本発明のほかのプテロシン化合物も同じ効果を示した。
【００７２】
特に、化合物の投与後にマウスで観察された血液試験と病理評価において、異常な結果などの副作用は見られなかった（データは表示しない）。
【実施例４】
【００７３】
（インスリン感受性試験）
分化したＣ２Ｃ1２筋芽細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ：ＡＴＣＣ）を使用して、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｖｏｌ．３９、Ｎｏ．２、２２２〜２２９、２００７に記載された方法に基づき、インスリン感受性試験が実施された。簡単に言うと、インスリン１００ｎＭが存在する中で、細胞が異なる濃度の化合物１と共に培養され、その後グルコース摂取が測定された。ＡＭＰＫ活性化剤ＡＩＣＡＲ（５−アミノ−４−カルボキサミドイミダゾールリボチド５'−リン酸、１μｍ）が陽性対照として使用された。図２に結果を示す。
【００７４】
従って、ここで得られた結果は、化合物１がＣ２Ｃ12筋芽細胞におけるインスリン感受性を大幅に改善することを示している。この試験では、表１に記載された化合物７、７２、７３、７４を含む本発明のほかのプテロシン化合物も同じ効果を示すことが確認された。
【実施例５】
【００７５】
（グルコース消費／取り込み試験）
分化したＣ２Ｃ1２筋芽細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ：ＡＴＣＣ）を使用して、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｖｏｌ．３９、Ｎｏ．２、２２２〜２２９、２００７に記載された方法に基づき、グルコース消費／取り込み試験が実施された。簡単に言うと、Ｃ２Ｃ1２細胞が０．５μＣｉ［１４Ｃ］２−ＤＧで２０分間前処理された後、化合物と１時間培養され、放射能によりグルコース摂取量が判定された。値はすべて３回の実験の平均値の標準誤差で表される。図３に結果を示す。
【００７６】
従って、ここで得られた結果は、化合物１がＣ２Ｃ1２筋芽細胞におけるグルコース消費量／摂取量を大幅に増強することを示している。この試験では、表１に記載された化合物５、７、１７、６３、７２、７３、７４を含む本発明のほかのプテロシン化合物も同じ効果を示すことが確認された。
【実施例６】
【００７７】
（４型グルコース輸送体（Ｇｌｕｔ４）発現試験）
ＧＬＵＴ４は、インスリン誘発グルコース摂取において正常な血糖値を維持するために重要な役割を担っている。この研究では、ＳＴＺ誘発糖尿病マウスに化合物１の経口投与（１００ｍｇ／ｋｇ）による１４日間の治療を行った。その後正常なマウス、ＳＴＺ誘発糖尿病マウス、前述の化合物１での治療を受けたＳＴＺマウスについて、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ． １９９６；３１３（Ｐｔ 1）：１３３〜１４０に記載された方法に基づき、ヒラメ筋におけるＧＬＵＴ４発現が分析された。簡単に言うと、実験期間の終わりに、動物をジエチルエーテル麻酔下での瀉血により致死させた。各動物からヒラメ筋が摘出され、計量された。ヒラメ筋は細胞溶解バッファで均質化され、遠心分離された後、ウェスタンブロット分析によりＧＬＵＴ４タンパク質発現が測定された。図４に結果を示す。
【００７８】
従って、ここで得られた結果は、化合物１がＳＴＺ誘発糖尿病マウスにおけるヒラメ筋の細胞膜へのＧＬＵＴ４（４型グルコース輸送体、インスリンにより調整されるグルコース輸送体）の再配分を大幅に助けたことを示している。表１に記載された化合物５、７、７２、７３、７４を含む本発明のほかのプテロシン化合物も同じ効果を示した。結果は、本発明のプテロシン化合物がＧＬＵＴ４を活性化させ、その結果糖尿病マウスの血糖を低下させることができる可能性を示唆している。
【実施例７】
【００７９】
（ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）試験）
ＰＥＰＣＫは肝臓におけるグルコース新生をコントロールする重要な酵素であることが周知である。この研究では、ＳＴＺ誘発糖尿病マウスに化合物１の経口投与（１００ｍｇ／ｋｇ）による１４日間の治療を行い、その後正常なマウス、ＳＴＺ誘発糖尿病マウス、そして上述の化合物１での治療を受けたＳＴＺマウスに対してＢｕｌｌｅｔｉｎ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９７９；８７：５６８〜５７１に記載された方法に基づき肝臓におけるＰＥＰＣＫ  ｍＲＮＡ発現の分析を行った。簡単に言うと、実験期間の終わりに、動物をジエチルエーテル麻酔下での瀉血により致死させた。各動物から肝臓が摘出され、計量された。肝臓のホモジェネートが作製され、ＲＴ−ＰＣＲ分析によってＰＥＰＣＫ  ｍＲＮＡ発現が判定された。図５に結果を示す。
【００８０】
従って、ここで得られた結果は、化合物１がＳＴＺ誘発マウスの肝臓におけるＰＥＰＣＫ  ｍＲＮＡの過剰発現を大幅に阻害したことを示している。表１に記載された化合物７と７３を含む本発明のほかのプテロシン化合物も同じ効果を示した。
【実施例８】
【００８１】
（２型糖尿病マウスにおけるグルコース負荷試験）
インスリン抵抗性Ｃ５７ＢＬ／６J−Ｌｅｐｒｄｂ／Ｌｅｐｒｄｂ（以下、ｄｂ／ｄｂ）マウスは、２型糖尿病の周知のマウスモデルである。例えばＭｅｔａｂｏｌｉｓｍ． ２０００；４９：２２〜３１を参照できる。この研究では、ｄｂ／ｄｂマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に化合物１（１００ｍｇ／ｋｇ／日）が２８日間経口投与された、または化合物１（３０ｍｇ／ｋｇ／日）が腹腔内（ｉ．ｐ．）注射で２１日間または２８日間投与された。２時間後、正常なマウス、ｄｂ／ｄｂマウス、化合物１での治療を受けたｄｂ／ｄｂマウスに対して実施例１と同じグルコース負荷試験が実施された。図６から図８に結果を示す。
【００８２】
得られた結果は、化合物１はｄｂ／ｄｂマウスにおける耐糖能異常を大幅に改善したことを示している。
【実施例９】
【００８３】
（２型糖尿病マウスにおけるＨｂＡlＣ（ヘモグロビンＡ１Ｃ）試験）
血流中でグルコースはヘモグロビンに結合してヘモグロビンＡ１ＣまたはＨｂＡ１Ｃと呼ばれる「糖化ヘモグロビン」分子を形成する。血中のグルコースが増えると、血中のヘモグロビンＡ１ＣまたはＨｂＡ１Ｃが増える。ＨｂＡ１Ｃ試験は現在、糖尿病が管理下にあるか確認するための一般的な方法の１つである。例えばＤｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ.２００１；２４：４６５〜４７１を参照できる。
【００８４】
この研究では、ｄｂ／ｄｂマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に２８日間化合物１（１００ｍｇ／ｋｇ／日）が経口投与された。その後、正常なマウス、ｄｂ／ｄｂマウス、そして化合物１での治療を受けたｄｂ／ｄｂマウスに対してＨｂＡ１Ｃ試験が実施され、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．２００５;７７:１３９１〜４０３に記載された方法に基づいて行われた。簡単に言うと、実験期間の終わりに、動物をジエチルエーテル麻酔下での瀉血により致死させた。遠心分離により血液から血漿が分離された。血中のＨｂＡ１Ｃが標準の方法により測定された。図９に結果を示す。
【００８５】
得られた結果は、化合物１がｄｂ／ｄｂマウスにおけるＨｂＡ１Ｃレベルを大幅に減少させたことを示している。
【実施例１０】
【００８６】
（２型糖尿病マウスにおけるＨＯＭＡ−ＩＲ（インスリン抵抗性のホメオスタシスモデル評価）試験）
ＨＯＭＡ−ＩＲは生体内インスリン感受性の代理指標として開発された空腹時血漿ブドウ糖と空腹時血漿インスリンの濃度に基づく実験数式：インスリン抵抗性に対するＨＯＭＡ値：（ＨＯＭＡ−ＩＲ）＝空腹時インスリン（μＵ／ｍＬ）ｘ空腹時ブドウ糖（ミリモル／ｌ）／２２.５により表される。例えば、Ｂｉｏｌ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ． ２００７；３０：２１９６〜２２００を参照できる。
【００８７】
この研究では、ｄｂ／ｄｂマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に化合物１（１００ｍｇ／ｋｇ／日）が２８日間経口投与された。その後、正常なマウス、ｄｂ／ｄｂマウス、化合物１での治療を受けたｄｂ／ｄｂマウスに対してＢｉｏｌ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ． ２００７；３０：２１９６〜２２００に記載された方法に基づきＨＯＭＡ−ＩＲ試験が行われた。簡単に言うと、マウスインスリン酵素免疫試験ＥＬＩＳＡキットを使用して血漿インスリン濃度が測定された。ホメオスタシスモデルアセスメント（ＨＯＭＡ）法によりインスリン抵抗性が判定された。図１０に結果を示す。
【００８８】
得られた結果によると、化合物１はｄｂ／ｄｂマウスにおけるＨＯＭＡ−ＩＲレベルを大幅に減少したことが示されている。この試験では、表１に記載された化合物７と７３を含む本発明のほかのプテロシン化合物も同じ効果を示した。
【実施例１１】
【００８９】
（ＡＭＰＫリン酸化試験）
ＡＭＰ活性化タンパク質キナーゼ（ＡＭＰＫ）はエネルギー代謝の重要な指標であり、低ＡＭＰ／ＡＴＰ比、運動、酸欠、栄養不足によって活性化される。Ｔｈｒ１７２のリン酸化はＡＭＰＫの活性化につながり、それがアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ、ＨＭＧ  ＣｏＡリダクターゼ、ＧＬＵＴ−４、グルコース−６ホスファターゼ、ＰＥＰＣＫを含む下流のエフェクタを活性化させ、脂肪酸β−酸化作用、コレステロール合成、グルコース輸送、グルコース新生をそれぞれ調整する。従って、ＡＭＰＫはメタボリック症候群及び２型糖尿病の分子標的とみなすことができる。
【００９０】
この研究では、分化したＣ2Ｃ12筋芽細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ：ＡＴＣＣ）を使用して、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｖｏｌ．３９、Ｎｏ．２、２２２〜２２９、２００７に記載された方法に基づき、ＡＭＰＫリン酸化試験が行われた。簡単に言うと、細胞は実施例１と同じように培養され、異なる濃度の化合物１（０、１、３、１０、３０μｍ）と３７℃で１時間インキュベートされた後、溶解された。細胞溶解物がリン酸化ＡＭＰＫ特異抗体で免疫検出された。 類似のＡＭＰＫ強度によって各レーンの同負荷が示された。ＡＭＰＫ活性化剤ＡＩＣＡＲ（５−アミノ−４−カルボキサミドイミダゾールリボチド５'−リン酸、１ｍM）が陽性対照として使用された。図１１Ａ に結果を示す。
【００９１】
従って、ここで得られた結果は、化合物１とＣ2Ｃ12筋芽細胞の培養がＡＭＰＫα−サブユニットのリン酸化をＴｈｒ１７２で用量依存的に増加したことを示している。この試験では、表１に記載された化合物１、４、７、５２、７２、７３、７４を含む本発明のほかのプテロシン化合物も同じ効果を示した。
【００９２】
化合物１によるＡＭＰＫの活性化は、その下流基質、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼのＳｅｒ７９でのリン酸化増加に関連付けられる（図１１Ｂ参照）。アセチルＣｏＡカルボキシラーゼのリン酸化と不活性化は脂肪酸β−酸化作用の増加につながる可能性がある。
【００９３】
総合すると、これらの初歩的な結果は、本発明の化合物がＡＭＰＫを活性化し、それがさらに糖質（実施例４で説明したグルコース消費／取り込み試験を参照）及び脂肪酸の代謝（下の実施例１２を参照）のインスリン調節を調整することを示唆しており、本発明の化合物は潜在的な抗糖尿病及び抗肥満症の薬剤とみなすことができる。
【実施例１２】
【００９４】
（血中脂質/コレステロール試験）
２型糖尿病モデルとしての高脂肪食（ＨＦＤ）マウスが以前Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５３（Ｓｕｐｐｌ．３）：Ｓ２１５〜Ｓ２１９、２００４に記載された方法に基づき作製された。この研究では、マウスに８週間にわたって高脂肪食（ＴｅｓｔＤｉｅｔ、米国インディアナ州リッチモンド；脂肪含量６０％ｋｃａｌ）を食べさせ、２型糖尿病を誘発させた。ＨＦＤマウスは化合物１の経口投与（１００ｍｇ／ｋｇ）による２８日間の治療を受けた後、正常なマウス、ＨＦＤマウス、化合物１での治療を受けたＨＦＤマウスの総コレステロール、トリグリセリド、高比重リポ蛋白（ＨＤＬ）コレステロール、低比重リポ蛋白（ＬＤＬ）コレステロールを含む、血清脂質レベルがＥＬＩＳＡキットにより分析された。図１２Ａに結果を示す。図１２ＢにＨＤＬコレステロール／総コレステロール及びＬＤＬコレステロール／総コレステロールの割合を示す。
【００９５】
従って得られた結果は、ＨＦＤマウスにおいて化合物１が血清脂質を大幅に減少し、抗肥満症の効果を発揮することを示している。
【００９６】
（その他の例）
本明細書で開示されたすべての特徴は任意の組み合わせで組み合わせることができる。本明細書で開示された各特徴は、同じ、同等、または類似の目的を達する別の特徴で置き換えることが可能である。したがって、別段の記載がある場合を除き、開示された各特徴は単に同等または類似の特徴の包括的な例である。
【００９７】
上述の説明から、当業者であれば本発明の基本的な特徴を容易に知ることができ、本発明の要旨と範囲から逸脱することなく、多様な用途や条件に合わせて本発明の多様な変更や改変が可能である。したがって、その他の実施例も請求の範囲に含まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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