(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
シュードザイマ・ルグローサ（Pseudozyma rugulosa）に属するアルコールオキシダーゼ生産菌を培養し、培養物から採取された以下の性質を有するアルコールオキシダーゼ。
(1) 作用
アルコールを脱水素することにより酸化し、アルデヒドと過酸化水素を生成する。
(2) 基質特異性
炭素数5〜18のn-アルキルアルコールに作用し、特にn-ドデカノールに強く作用するが、炭素数1〜4及び炭素数19以上のn-アルキルアルコールに作用しない。その他trans-2-ウンデセノール、trans-2-ドデセノール及びtrans-2-トリデセノールに強く作用する。
(3) 作用温度及び至適温度
少なくとも10〜50℃で作用し、至適温度は約33℃である。
(4) 温度安定性
pH7.0、20分間の処理条件で50℃まで60％以上安定である。
(5) 作用pH及び至適pH
少なくともpH4〜10で作用し、至適pHは約7である。
(6) pH安定性
25℃、2時間の処理条件でpH5.5〜10の範囲で60％以上安定である。
(7) 失活
100℃、10分間の加熱処理により100％失活する。
(8) 金属イオンの影響
Hg2+及びAg+によって阻害される。
(9) 阻害剤
ウッドワード試薬Ｋ（N-エチル-5-フェニルイソオキサゾリウム-3′-スルホネート）によって阻害される。
(10) 分子量
分子量は、ゲル濾過法では約62,000Da、ソディウムドデシル硫酸−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法では約64,000Daである。
【請求項２】
シュードザイマ・ルグローサ（Pseudozyma rugulosa）PB-12と命名され、FERM P-14020として寄託された微生物の菌体から得られたものである請求項１記載のアルコールオキシダーゼ。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のアルコールオキシダーゼをアルコール類に作用させることを特徴とするアルデヒド類の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規なアルコールオキシダーゼ、及びこれを利用して、香料、食品添加物等として有用なアルデヒド類を製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
長鎖のアルデヒドを初めとした各種アルデヒド類には特有の香気を有するものが多く、香料や食品添加物として利用されている。しかし、その工業的な製造は困難な場合が多く、特に炭素鎖長が10以上の長鎖アルデヒド類については工業的製法は確立されておらず、植物からの抽出などによって製造されているのが現状である。
【０００３】
近年では、酵素反応を利用してアルデヒドを製造する試みがなされている。アルカンやアルキルアルコール類を微生物が代謝する際には分子末端が酸化を受け、アルデヒド体を経ることが多く、この反応に関与する酵素を使用すればアルデヒドの製造が可能である。例えば、比較的短鎖のアルデヒド類や芳香族アルデヒド類の製造には、メタノール酵母やリグニン分解菌の産するアルコールオキシダーゼを用いた各種アルデヒド類の製造研究がなされている（Sheldon J. B. D. et al., Ann. NY. Acad. Sci., 542, 428-433; Muheim A. et al., J. Biotechnol., 13, 159-167, 1990； Asada Y. et al., Tech. Bull. Fac. Agr. Kagawa Univ., 47, 61-70, 1995）。しかしながら、このメタノールオキシダーゼは一般に炭素鎖長５までのアルコールに作用し、これ以上長鎖のものには十分に作用せず、長鎖アルデヒドの製造には適していない。
【０００４】
一方、長鎖アルコールに作用する酵素として、キャンディダ（Candida）属に属する酵母が生産するアルコールオキシダーゼが知られているが、該菌株が生産する酵素は光感受性が高く、その取り扱いが極めて困難であることが報告されている（Dickinson F. M. et al., Biochem. J., 282, 325-331, 1992）。このような長鎖アルコールに作用するアルコールオキシダーゼは真菌類に存在することが報告されている（Kemp G. D. et al., Appl. Microbiol. Biotechnol., 40, 873-875(1994)）が、該酵素の精製を初めとして十分な研究は未だなされていないのが現状である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明は、微生物の産生する酵素を用いて、穏和な条件下で各種アルデヒド類、特に長鎖アルデヒド及び芳香族アルデヒドを製造する方法、並びにこれらの反応に利用可能な酵素を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
かかる実情において本発明者らは鋭意研究を行った結果、シュードザイマ属に属する微生物の産生する酵素が長鎖アルコール、芳香族アルコール等に作用し、脱水素によりアルデヒド類を生成することを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち本発明は、シュードザイマ・ルグローサ（Pseudozyma rugulosa）に属するアルコールオキシダーゼ生産菌を培養し、培養物から採取された以下の性質を有するアルコールオキシダーゼ、及び該酵素をアルコール類に作用させることを特徴とするアルデヒド類の製造方法を提供するものである。
【０００８】
(1)  作用
アルコールを脱水素することにより酸化し、アルデヒドと過酸化水素を生成する。
【０００９】
(2)  基質特異性
炭素数５〜18のn-アルキルアルコールに作用し、特にn-ドデカノールに強く作用するが、炭素数１〜４及び炭素数19以上のn-アルキルアルコールに作用しない。その他trans-2-ウンデセノール、trans-2-ドデセノール及びtrans-2-トリデセノールに強く作用する。
【００１０】
(3)  作用温度及び至適温度
少なくとも10〜50℃で作用し、至適温度は約33℃である
【００１１】
(4)  温度安定性
pH7.0、20分間の処理条件で50℃まで60％以上安定である。
【００１２】
(5)  作用pH及び至適pH
少なくともpH４〜10で作用し、至適pHは約７である。
【００１３】
(6)  pH安定性
25℃、２時間の処理条件でpH5.5〜10の範囲で60％以上安定である。
【００１４】
(7)  失活
100℃、10分間の加熱処理により100％失活する。
【００１５】
(8)  金属イオンの影響
Hg2+及びAg+によって阻害される。
【００１６】
(9)  阻害剤
ウッドワード試薬Ｋ（N-エチル-5-フェニルイソオキサゾリウム-3′-スルホネート）によって阻害される。
【００１７】
(10)  分子量
分子量は、ゲル濾過法では約62,000Da、ソディウムドデシル硫酸−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法では約64,000Daである。
【００１８】
【発明の実施の形態】
本発明のアルコールオキシダーゼは、シュードザイマ・ルグローサ（Pseudozyma rugulosa）に属するアルコールオキシダーゼ生産菌を培養し、その培養物から採取することにより得られる。かかる微生物の具体例としては、n-アルカン資化性菌であるシュードザイマ・ルグローサ（Pseudozyma rugulosa）PB-12株（FERM P-14020）が挙げられる。本微生物は、n-アルカンを単一炭素源として生育可能な菌株である。
【００１９】
次に、シュードザイマ・ルグローサ PB-12株の菌学的性質を示す。
【００２０】
(a)  培養的・形態的性質
(1) MY液体培地
栄養細胞    25℃、３日間培養で2.2〜3.1×7.6〜16.2μmの伸長形
増殖形式    多極出芽
皮膜の形成  認める（小島嶼を形成）。
沈澱の形成  認める。
濁    り    認める。
ガス産生    認めない。
(2) MY寒天培地
栄養細胞    25℃、３日間培養で2.3〜3.0×8.2〜18.5μmの伸長形
増殖形式    多極出芽
(3) ポテトデキストロース寒天培地
偽菌糸      認める。
菌  糸      認める。
【００２１】
(b)  胞子の形成
(1) 有性胞子
(イ)子嚢胞子の形成
ゴロドコワ寒天培地、酢酸ナトリウム寒天培地、麦芽寒天培地及びV-8寒天培地での子嚢胞子の形成は認められない。
(ロ)担子胞子の形成
MY寒天培地での担子胞子の形成は認められない。
(2) 射出胞子の形成    MY寒天培地での射出胞子の形成は認められない。
【００２２】
(c)  生理学的・化学分類学的性質
(1) 最適生育条件
(イ)温度  28〜30℃
(ロ)pH    5.0〜5.5
(2) 生育の範囲
(イ)温度  ５〜38℃
(ロ)pH    2.5〜11.0
(3) 硝酸塩の資化                      ＋
(4) 脂肪の分解                        ＋
(5) 尿素の分解                        ＋
(6) ジアゾニウムブルーＢの呈色反応    ＋
(7) ゼラチンの液化                    ＋
(8) NaCl添加YM液体培地での生育
(イ) 12％                          ＋
(ロ) 14％                          −
(9) カロチノイドの生成                −
(10)顕著な有機酸の生成                −
(11)デンプン様物質の生成              −
(12)ビタミンの要求性                  ＋
(13)炭素源の利用性
炭素源                  資化性        発酵性
D-アラビノース            ＋
L-アラビノース            ＋
D-リボース                ＋
D-キシロース              ＋
D-グルコース              ＋            −
D-マンノース              ＋
D-ガラクトース            ＋            −
L-ラムノース              ＋
D-フラクトース            ＋
L-ソルボース              ＋
麦芽糖                    ＋            −
ショ糖                    ＋            −
乳糖                      ＋            −
メリビオース              ＋
セロビオース              ＋
トレハロース              ＋
ラフィノース              ＋            −
メレチトース              ＋
α-メチル-D-グルコシド     ＋
アルブチン                ＋
デキストリン              ＋
デンプン                  ＋
イヌリン                  −
エタノール                ＋
アドニトール              ＋
エリスリトール            ＋
イノシトール              ＋
D-マンニトール            ＋
D-ソルビトール            ＋
ズルシトール              −
D-グルコン酸塩            ＋
グリセリン                ＋
DL-乳酸塩               微  弱
コハク酸塩              微  弱
クエン酸塩              微  弱
(14) DNAの塩基組成（GC含量）          59（モル％）
(15) キノン系                         Q-10
【００２３】
(d)  PDA、OA、MEA各培地での生育状態
【００２４】
【表１】
0003729946.tif 000002
【００２５】
これらの菌学的性質を、長谷川武治編著：「微生物の分類と同定（上）」改訂版(1985)学会出版センター； 飯塚廣、後藤昭二著：「酵母の分類同定法」第２版(1973)東京大学出版会； N. J. W. Kreger-van RIJ: "The yeasts"(1984)； G. S. De Hoog, M. T. Smith and A. C. M. Weijman: "The expanding realm of yeast-like fungi", Studies in Mycology, No.30(1978)等に照して検討した結果、上記菌株はウスティラゴ属に属すると同定されたが、同属に属する公知の菌株に該当しないことから、これを新菌株と同定し、ウスティラゴ sp. CRP-12と命名し、FERM P-14020として工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託した。しかしながら、その後の研究、オランダのCENTRAALBUREAU VOOR SCHIMMELCULTURESの見解やBOEKHOUT T.: "Pseudozyma Bandoni emend. BOEKHOUT, A GENUS FOR YEAST-LIKE ANAMORPHS OF USTILAGINALES", J. Gen. Appl. Microbiol., 41, 359-366(1995)などにより、当該菌株は、ウスティラゴ属よりもシュードザイマ属の方がより適合すると思われることから、現在ではシュードザイマ・ルグローサ PB-12とその命名を変更している。
【００２６】
上記の菌株を用いて、本発明のアルコールオキシダーゼを得るには、培地に菌株を接種し、常法に従って培養した後、該菌体から酵素を採取すればよい。
【００２７】
上記菌株の増殖培養のために使用される培地としては、該菌株が十分に増殖し得るものであればよく、炭素源としてグルコース等の糖類あるいはエタノール等のアルコール類を用いることが好ましく、n-ヘキサデカン等のn-パラフィンを用いるのが更に好ましい。また、窒素源としては、硫安、塩安等のアンモニア態窒素化合物、硝酸ナトリウム等の硝酸態窒素化合物等の無機窒素源、尿素、ポリペプトン、酵母エキス等の有機窒素化合物等を使用すればよい。更に、無機塩類等の微量成分等を適宜添加することが望ましい。
【００２８】
培養は、10〜40℃で好気条件にて行えばよく、培地のpHは４〜９とすることが好ましい。
【００２９】
培養後、培養液を遠心分離機などにより集菌し、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、トリス−塩酸緩衝液等の適当な緩衝液中に再懸濁を行う。これをフレンチプレス、ホモジナイザー、ダイノミル、超音波破砕等の適当な手法により菌体を破砕し、粗酵素液を得る。この粗酵素液は、このままアルコール類の酸化反応に供することが可能であるが、塩析、溶媒抽出、カラムクロマトグラフィー、電気泳動等、酵素の精製に通常用いられる手法により更に精製を行って反応に供することもできる。
【００３０】
ただし、シュードザイマ・ルグローサ PB-12株の生産するアルコールオキシダーゼは膜結合型の酵素であるため、精製に際しては可溶化処理が必要となるが、可溶化は一般的な界面活性剤等を用いた処理によりすることができる。また、菌体破砕後、特段の精製を行わずに反応に供する場合は、細胞内プロテアーゼ等の作用による酵素の失活を防ぐ目的で、PMSF（フェニルメタンスルホニルフルオライド）等の一般的なプロテアーゼ阻害剤を添加することができる。
【００３１】
このようにして得られた酵素液は、上記と同様の適当な緩衝液中で基質であるアルコール類と混合し、反応を行わせることにより、アルデヒド類を製造することができる。
【００３２】
反応に用いられるアルコール類としては、n-デカノール、n-ウンデカノール、n-ドデカノール、n-トリデカノール等の炭素数５〜18の直鎖一級飽和アルコール、trans-2-ウンデセノール、trans-2-ドデセノール、trans-2-トリデセノール等の炭素数５〜18の直鎖一級不飽和アルコール、並びに2-ナフタレンメタノール、2-(ナフチル)エタノール、ベンジルアルコール、2-(4-メトキシフェニル)エタノール、3-フェニル-2-プロペン-1-オール（シンナミルアルコール）等の芳香族アルコールなどが挙げられる。
【００３３】
これらの基質の多くは水に難溶であるため、基質の添加に際しては、反応系にアセトン、ジメチルスルフォキシド、ピリジン等の水溶性有機溶媒を添加するか、又はこれらの水溶性有機溶媒に基質を溶解させた後に反応系に混合することができる。
【００３４】
反応温度は、10〜40℃、特に20〜35℃が好ましく、反応pHは、4.0〜9.0、特に6.5〜8.0が好ましい。また反応時間は、用いる酵素や基質の量により異なるが、反応中、基質の減少量や生成物の蓄積量を測定することにより、適宜決定することができる。また、シュードザイマ・ルグローサ PB-12株が生産するアルコールオキシダーゼの場合、反応に伴い酸素を吸収し、過酸化水素を放出することから、反応系内の溶存酸素濃度の減少や過酸化水素の生成から反応の進行を把握することもできる。
【００３５】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３６】
なお、以下の実施例において、酵素の活性の測定は、以下のようにして行った。
10mM 4-アミノアンチピリン水溶液を0.2ml、100mMフェノール水溶液を0.2ml、60U/mlペルオキシダーゼ水溶液を0.1ml、及び酵素溶液10μlを混合し、50mMトリス−塩酸緩衝液（pH7.5）を用いて全容を２mlとした。これに、アセトンに50mMの濃度となるよう溶解したn-ドデカノールを40μl添加し、30℃にて５分間インキュベートした。この際に505nmにおける吸光度を経時的に測定し、生成するキノン系色素の分子吸光係数（5.16×103M-1cm-1）から１分間に生成する過酸化水素量をμmol単位で求め、これを酵素活性単位（Ｕ：ユニット）とした。
【００３７】
実施例１
Ａ．酵素標品の取得
供試菌として、Pseudozyma rugulosa PB-12株を用い、n-ヘキサデカンを単一炭素源として、25℃、72時間培養し、菌体を遠心分離により取得した。集菌後、50mM トリス−塩酸緩衝液にて洗浄後、同緩衝液に再懸濁した。これをボールミルにて菌体破砕を行い、遠心分離処理により、無細胞抽出液を取得した。
更に無細胞抽出液より超遠心分離操作により、不溶性画分と可溶性画分に分画したところ、アルコールオキシダーゼ活性は不溶性画分に認められた。不溶性画分を再度同緩衝液に懸濁し、終濃度が60mMとなるようにMEGA-8（n-オクタノイル-N-メチルグルカミド）を添加し、可溶化を行った。再度超遠心分離操作を行ったところ、アルコールオキシダーゼ活性は、可溶化画分に認められた。本画分に30％飽和濃度になるように硫酸アンモニウムを添加し、同様に、１％コール酸ナトリウムと30％硫酸アンモニウムを溶解した50mM トリス−塩酸緩衝液にて平衡化したButyl Toyopearl 650M（東ソー社製）に吸着させた。これを30％→０％の硫酸アンモニウム・リニアグラジエントにより溶出させ、アルコールオキシダーゼ活性画分を取得した。
活性画分を10mM CHAPS（3-[(3-クロルアミドプロピル)ジメチルアンモニオ]プロパンスルホン酸；以下同じ）を含む10mM MES-NaOH緩衝液（pH6.5）に透析を行い、同緩衝液にて平衡化を行ったSP Sepharose（ファルマシア・バイオテク社製）カラムクロマトグラフィーを行った。アルコールオキシダーゼ活性は非吸着画分に認められたため、これを集めて活性画分とした。10mM CHAPSを含む50mM トリス−塩酸緩衝液（pH7.5）に透析後、同緩衝液にて平衡化したDEAE（ジエチルアミノエチル） Sephacel（ファルマシア・バイオテク社製）カラムクロマトグラフィーを行った。アルコールオキシダーゼ活性は、非吸着画分に認められたため、これを集めて活性画分とした。
これに30％硫酸アンモニウムを添加し、１％コール酸ナトリウムを含む50mM トリス−塩酸緩衝液（pH7.5）にて平衡化したPhenyl Sepharose 6FF（ファルマシア・バイオテク社製）に吸着させた。30％→０％硫酸アンモニウム・リニアグラジエントによりクロマトグラフを行い、アルコールオキシダーゼ活性画分を得た。活性画分を5mM CHAPSと100mM NaClを含むトリス−塩酸緩衝液（pH7.5）にて平衡化したSuperose 12HR（ファルマシア・バイオテク社製）ゲル濾過を行った。アルコールオキシダーゼ活性を集めて一部をSDS-電気泳動により純度検定を行ったところ、単一なバンド１本が認められ、純粋なアルコールオキシダーゼ標品が得られた。
【００３８】
Ｂ．酵素学的諸性質
(1)  作用pH及び至適pH
Ａで得た酵素標品をそれぞれpH4.0〜10.0に調整した50mM GTA緩衝液〔それぞれ50mMのβ,β′-ジメチルグルタル酸、トリス(ヒドロキシメチルアミノ)メタン及び2-アミノ-2-メチル-1,3-プロパンジオールを含む〕に透析し、30℃にて活性を測定したところ、少なくともpH４〜10で作用し、至適pHは約７であった（図１）。
【００３９】
(2)  作用温度及び至適温度
Ａで得た酵素標品を10〜60℃の各温度でアルコールオキシダーゼ活性を測定したところ、少なくとも10〜50℃で作用し、至適温度は約33℃であった（図２）。
【００４０】
(3)  pH安定性
Ａで得た酵素標品をそれぞれpH4.0〜10.0に調整した50mM GTA緩衝液に透析し、25℃にて２時間インキュベートを行った。その後、30℃、50mM トリス−塩酸緩衝液（pH7.5）中にて残存活性を測定した。この結果、本酵素はpH5.5〜10の範囲で60％以上安定であった（図３）。
【００４１】
(4)  温度安定性
Ａで得た酵素標品をpH7.0に調整した50mM GTA緩衝液に透析し、０℃〜55℃の各温度にて20分間、インキュベートを行った。氷冷後、30℃にて残存活性を測定した。この結果、本酵素は50℃まで60％以上安定であった（図４）。また、100℃にて10分間、同様にインキュベートを行ったところ、完全に失活した。
【００４２】
(5)  分子量
ファルマシア・バイオテク社製Superose 12HR 10/30カラムを用いたゲル濾過法により、標準として、カタラーゼ（ウシ肝臓）、アルドラーゼ（ウサギ筋肉）、アルコールデヒドロゲナーゼ（酵母）、ラクトースデヒドロゲナーゼ（ニワトリ心臓）、アルブミン（ウシ血清）、エノラーゼ（酵母）、アルブミン（卵白）、キモトリプシノーゲンＡ（ウシ膵臓）、ミオグロビン（ウマ）及びチトクロムＣ（ウマ心臓）を用い、Ａで得た酵素標品の分子量を測定したところ、62,000Daであった。
また、MWマーカーキット（Low，バイオラッド社製）〔標準：ホスホリラーゼＢ（ウサギ筋肉），血清アルブミン（ウシ），卵白アルブミン（ニワトリ），カルボニックアンヒドラーゼ（ウシ），トリプシンインヒビター（ダイズ），リゾチーム（ニワトリ卵白）〕を用いて12.5％SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動から得られた分子量は64,000Daであった。
これらのことから、本酵素は分子量62,000〜64,000Daの単量体であることが明らかになった。
【００４３】
(6)  飽和アルコールに対する活性
Ａで得た酵素標品に、30℃、pH7.5、50mM トリス−塩酸緩衝液中で、Ｃ1（メタノール）〜Ｃ20の直鎖第一級飽和アルコールを基質として反応させたところ、図５に示すように、Ｃ5（n-ペンタノール）〜Ｃ18（n-オクタデカノール）に作用し、Ｃ12（n-ドデカノール）に最も強く作用した。
【００４４】
(7)  不飽和アルコールに対する活性
Ａで得た酵素標品に、30℃、pH7.5、50mM トリス−塩酸緩衝液中で、各種不飽和アルコールを反応させたところ、trans-2-ウンデセノール、trans-2-ドデセノール及びtrans-2-トリデセノールに強く作用し、またオレイルアルコールにも作用した（表２）。
【００４５】
【表２】
0003729946.tif 000003
【００４６】
(8)  芳香族アルコールに対する活性
Ａで得た酵素標品に、30℃、pH7.5、50mM トリス−塩酸緩衝液中で、各種芳香族アルコールを反応させた。この結果を表３に示す。
【００４７】
【表３】
0003729946.tif 000004
【００４８】
(9)  溶媒の影響
Ａで得た酵素標品を50mM トリス−塩酸緩衝液（pH7.5）に溶解し、更に10％、20％、30％（v/v）のDMSO及びアセトンを添加した。その結果、本酵素はアセトンの添加により活性の低下が認められたが、DMSOに対しては安定であった。
【００４９】
(10)  金属イオンの影響
各種金属イオンが0.1mM又は１mMになるように添加した50mMトリス−塩酸緩衝液（pH7.5）に、Ａで得た酵素標品を添加し、30℃で５分間インキュベートした。金属塩無添加系で同様に処理した酵素活性を100％として、処理群の残存活性を求めたところ本酵素の活性は、Hg2+及びAg+によって阻害された（表４）。
【００５０】
【表４】
0003729946.tif 000005
【００５１】
(11)  阻害剤の影響
50mMトリス−塩酸緩衝液（pH7.5）に各種化合物を所定濃度になるように加え、本酵素を加え、30℃で５分間インキュベートした後、残存活性を測定したところ、本酵素の活性は、ウッドワード試薬Ｋ（N-エチル-5-フェニルイソオキサゾリウム-3′-スルホネート）によって阻害された（表５）。
【００５２】
【表５】
0003729946.tif 000006
【００５３】
実施例２
実施例１のＡに記載した方法に従い、Pseudozyma rugulosa PB-12株を培養し、無細胞抽出液を取得した。この無細胞抽出液10mlを試験管に採り、アセトンに溶解した100mM n-ドデカノールを1.5ml添加し、30℃で15分間反応を行った。反応は内径18mmの試験管を用い振とう条件下で行った。反応後、等量のn-ヘキサンにより抽出を行い、得られたn-ヘキサンのGC分析を行った結果、4.8mMのn-ドデカナールの生成が認められた。
【００５４】
実施例３
実施例１のＡに記載した方法に従い、Pseudozyma rugulosa PB-12株を培養し、同様に酵素標品を取得した。得られた酵素標品（10U）を10mM CHAPSを含む50mMトリス−塩酸緩衝液（pH7.5）に添加し、全容を10mMとした。これにアセトンに溶解した100mM n-ドデカノールを２ml添加し、30℃で15分間反応を行った。反応は内径18mmの試験管を用い振とう条件下で行った。反応後、等量のn-ヘキサンにより抽出を行い、得られたn-ヘキサンのGC分析を行った結果、10.8mMのn-ドデカナールの生成が認められた。
【００５５】
実施例４
反応に用いる基質として、n-ドデカノールの代わりに50mM 3-フェニル-2-プロペン-1-オール（シンナミルアルコール）0.5mlを用いる以外は実施例３と同様に反応を行った結果、0.2mMの3-フェニル-2-プロペン-1-アール（シンナミルアルデヒド）の生成が認められた。
【００５６】
【発明の効果】
本発明のアルコールオキシダーゼを利用すれば、穏和な条件下で各種アルデヒド類、特に長鎖アルデヒド及び芳香族アルデヒドを製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明のアルコールオキシダーゼのpH−活性曲線を示す図である。
【図２】本発明のアルコールオキシダーゼの温度−活性曲線を示す図である。
【図３】本発明のアルコールオキシダーゼのpH安定性を示す図である。
【図４】本発明のアルコールオキシダーゼの温度安定性を示す図である。
【図５】本発明のアルコールオキシダーゼの直鎖第一級飽和アルコールに対する活性を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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