(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
非結晶性絹フィブロインを主成分とする絹タンパクの水溶液を用いて油性分を乳化させることを特徴とする乳化化粧料の製造方法。
【請求項２】
非結晶性絹フィブロインを主成分とする絹タンパクの水溶液を用いて油性分を乳化させることにより得られる乳化化粧料。
【請求項３】
非結晶性絹フィブロインを主成分とする絹タンパクの水性ゲルを用いて油性分を乳化させることを特徴とする乳化化粧料の製造方法。
【請求項４】
非結晶性絹フィブロインを主成分とする絹タンパクの水性ゲルを用いて油性分を乳化させることにより得られる乳化化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、蛋白質系乳化剤および該乳化剤を用いて乳化化粧料を製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、水と油性物質を乳化させて乳化化粧料を製造する際には、一般に乳化剤として陰イオン性、陽イオン性、両イオン性、非イオン性などの界面活性剤が用いられてきた。
しかし、合成界面活性剤は皮膚の表面組織を破壊し、体内に入って肝臓障害を起こす原因になることが指摘されて以来、研究開発の方向はより安全な天然由来の原料を用いた乳化剤を志向する方向に進んできている。
特に、天然由来の蛋白質系乳化剤は、安全性が高く、一般に皮膚の表面組織との親和性にも優れていることから、数多くの提案がなされている。
【０００３】
概して、蛋白質系乳化剤は合成界面活性剤に比べると乳化力が劣るために、その研究は、化学修飾（化学的変性処理）によってその乳化力を高める方向に傾注しており、その例として、以下のような開発例が挙げられる。
・炭素鎖長１４〜２４のアルキル基を有するアミノ酸アルキルエステル化タンパクからなる乳化剤（特開昭６０−１１２８００号公報）。
・親水性蛋白質分解物のカルボキシル末端にアミノ酸エステルのアミノ基がアミド結合してなる蛋白質系乳化剤（特開昭６０−１７５５３１号公報等）。
・レシチン−グルテン複合体またはレシチン−グロビン複合体からなる乳化剤（特開昭６３−２８３７３５号公報）。
・活性化した分枝状多糖類と蛋白質とを結合してなる機能性蛋白質を主成分とする乳化剤（特開平１−２３３３００号公報）
・蛋白質または該加水分解物とリン脂質との複合体からなる乳化剤（特開平５−７０３３２号公報）。
・リゾリン脂質、遊離脂肪酸および蛋白質とが結合した蛋白複合体からなる乳化剤（特開平５−５６７５１号公報）
・牛などの動物項靭帯に存在するエラスチンを蛋白分解酵素で処理して得られる加水分解物または該加水分解物の水溶液と、多価アルコールを混合して得られる界面活性剤相を乳化剤として用いる方法（特開平６−２７９２５４号公報）。
・豆類の蛋白質中のＩＩＳグロブリン塩基性サブユニットを４０％以上含有する乳化剤（特開平９−２３８３７号公報）。
・蛋白質とサポニンまたは胆汁酸との結合物からなる乳化剤（特開平１１−２１５９５６号公報）。
【０００４】
これらの開発例において使用されている原料蛋白質は、例えば大豆蛋白、小麦蛋白、などの植物性蛋白質、コラーゲン、ゼラチン、エラスチン、卵白アルブミン、血清アルブミン、卵黄レシチン、ミルクカゼイン、ミオシン、フィブリノーゲン等の動物性蛋白質が主なものである。
【０００５】
ところで最近、絹蛋白質が生体適合性に優れた物質であることから、その化粧品への利用が注目されるようになり、各種の絹蛋白質からなる化粧用素材が提案されている。
例えば、アミノ酸単位が２〜５０（平均分子量２００〜５０００）からなる水溶性シルクペプタイド（絹フィブロイン由来）をアミドカルボン酸型界面活性剤に配合して使用感等を改善した洗剤（特開平８−２０７９２号公報）、フィブロイン加水分解物を保湿剤として配合した液状化粧料（特開平６−１５７２３４号公報）、水溶性の絹フィブロイン加水分解物を配合して湯上がり感を改善した浴用剤（特開平５−７８２３２号公報）、コンディショニング剤として卵黄油とともに分子量１０００程度の水溶性の絹フィブロイン加水分解物を配合したシャンプー（特開平５−２５０２４号公報）、フィブロイン水溶液に二酸化炭素を添加し、その後にフィブロイン水溶液のｐＨを酸を添加して等電点付近にすることにより得た微小構造体を分散媒体中に分散してなるゲル化したクリーム状の保湿剤（特開平１０−２５１２９９）（この場合はフィブロイン水溶液のｐＨを酸で等電点付近にして、ゲル化することが目的で、フィブロイン水溶液を乳化剤として利用するものではない。）等の開発例が挙げられる。
しかし、これらはいずれも絹蛋白質を化粧料用の乳化剤として使用するものではない。
【０００６】
極く最近になって、絹蛋白質を界面活性剤として利用する発明が提案されている（特開平１１−２７６８７６号公報、特開２０００−７３０９０号公報）。  この発明は、繭や生糸から抽出したセリシンまたはセリシン分解物を有効成分とする界面活性剤であって、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品、家庭用洗
剤など広範囲の分野において利用することができるとされている。
【０００７】
ところで、一般に、蛋白質系乳化剤を用いて得られる乳化化粧料は、潤いのあるしっとりとした使用感を有するものの、手に取って実際に使用したときに、ボロボロ感があったり、延展性に乏しいなどの使用上での問題がある場合がしばしば見受けられる。
化粧品に使用する乳化剤としては、単に安全性や乳化力のみでなく、使用時の感触も重要な要素であるから、乳化化粧料の処方設計する際には、これらの点を十分に考慮して行う必要がある。
【０００８】
一方、本発明者らは、長年絹に関する研究を行ってきた中で、絹フィブロインにはヒトの細胞を生育促進する作用があることをつきとめ、これを創傷被覆材等に利用することを提案した（特開平９−１９２２１０号公報、特開平１１−２５３１５５号公報）。
その作用は、絹フィブロインを構成するフィブロインのＨ鎖とＬ鎖にあることを明らかにした（特開２００１−１６３８９９号公報、特願２００１−１８０１６９号）。
しかし、絹タンパクは細胞生育促進作用はあるものの、その水溶液またはそのゲル化物が乳化剤として利用できることは知られていなかった。
主な理由として、フィブロイン水溶液やそのゲル化物は攪拌などの強い剪断力のもとで繊維化しやすく、繊維化物（水不溶性の塊状物）が分離してくることによるものと考えられる。
【０００９】
【発明が解決しょうとする課題】
従来の蛋白質系乳化剤は、原料蛋白質を化学的処理（化学修飾）することにより、その乳化力等を改善して実用に供し得るものとしたものが主流であり、僅かに一定の成果を得ているものである。
しかし、化学修飾により原料蛋白質を改質する場合には、目的の蛋白質系乳化剤を得るために、種々の反応工程を経なければならず、特に、皮膚に影響を及ぼす未反応試薬を反応系から除去して不純物の含まれない純粋の乳化剤を得ることは非常に困難であるという問題点がある。
本発明は、このような課題を解決し、さらに、単に乳化力や使用感を改善するのみならず、乳化剤自体が皮膚細胞生育促進性を有する化粧用乳化剤を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明は上記観点からなされたものであり、格別の化学修飾を行うことなく得ることができる絹タンパク水溶液が、化粧料等の乳化剤として優れた特性を有することを見出したものである。
【００１１】
すなわち、本発明は、（１）、  非結晶性絹フィブロインを主成分とする絹タンパクの水溶液を用いて油性分を乳化させる乳化化粧料の製造方法に存する。
【００１２】
そして、（２）、  非結晶性絹フィブロインを主成分とする絹タンパクの水溶液を用いて油性分を乳化させることにより得られる乳化化粧料に存する。
【００１３】
そしてまた、（３）、  非結晶性絹フィブロインを主成分とする絹タンパクの水性ゲルを用いて油性分を乳化させる乳化化粧料の製造方法に存する。
【００１４】
そしてまた、（４）、非結晶性絹フィブロインを主成分とする絹タンパクの水性ゲルを用いて油性分を乳化させることにより得られる乳化化粧料に存する。
【００２１】
【発明の実施の形態】
本発明の非結晶性絹フィブロインを主成分とする絹タンパクの水溶液または非結晶性絹フィブロインを主成分とする絹タンパクの水性ゲルは、油性分と混合することにより、絹タンパクの水溶液またはその水性ゲル中の水と油性分とを均一に乳化させることができる。しかも、絹フィブロインが、皮膚細胞成育促進作用を有することから、乳化力や使用感を改善するとともに、乳化剤自体が皮膚細胞生育促進性を有する化粧用乳化剤を得ることができる。
【００２２】
本発明は、
１）蚕の吐糸した繭糸および繭糸の加工物である生糸、絹糸、絹織編物等の未精練物、半精練物、精練物等を原料とし、
２）これら原料を中性塩で溶解し、次いで水で透析し、
３）得られた絹タンパク水溶液を、
（ａ）そのまま乳化剤として利用するか、もしくは
（ｂ）絹タンパク水溶液を一旦、乾燥させて非結晶性絹物質を取得し、それを乳化剤として使用する際に、その乾燥非結晶性絹物質を水に溶解し、絹タンパク水溶液を再生して乳化剤として利用する、または
４）絹タンパク水溶液を４０〜１３０℃、好ましくは５０℃〜８０℃の雰囲気内で静置してゲル化させ、水性ゲルの状態で乳化剤として利用する、
という、実施の態様を含むものである。
このようにして調製された乳化剤を、化粧用油性分と、必要に応じて各種化粧用添加剤を添加し、混合攪拌する工程を経て、目的の乳液状ないしクリーム状の化粧用乳化物を得ることができるものである。
【００２３】
本発明の乳化剤を使用して製造することができる乳化化粧料または医薬部外品としては、例えば、清浄用化粧品（化粧石けん，洗顔料，シャンプー，リンス等）・頭髪化粧品（染毛料，頭髪用化粧品等）・基礎化粧品（一般クリーム・乳液，ひげそり用クリーム，化粧水・オーデコロン，ひげそり用ローション，化粧油，パック等）・メークアップ化粧品（ファンデーション，眉墨，アイクリーム・アイシャドウ・マスカラ等）・芳香化粧品（香水等）・日焼け・日焼け止め化粧品（日焼け・日焼け止めクリーム，日焼け・日焼け止めローション，日焼け・日焼け止めオイル等）・爪化粧品（爪クリーム等）・アイライナー化粧品（アイライナー等）・口唇化粧品（口紅・リップクリーム等）・口腔化粧品（歯みがき等）・入浴用化粧品（浴用化粧品等）等が挙げられる。
以下に本発明を実施する場合の詳細について説明する。
【００２４】
Ａ．原料
本発明の非結晶性絹フィブロインを主成分とする絹タンパクの原料物質は繭糸、生糸、絹糸織編物、絹糸（フィブロイン繊維）、それらの残糸またはそれらの未精練物、半精練物、精練物、およびそれらを原料とした繊維、粉末、フィルム等、家蚕および野蚕等の絹糸虫類が吐糸する蛋白質繊維物質すべてを対象とすることができる。
【００２５】
一般に蚕は体内の絹糸腺腔に絹を分泌し、この絹は液状絹と言われる。
液状絹はフィブロインとセリシンから成り（これらを絹タンパクという。）、液状フィブロインは分子量約３７万である（Tasiro Yutaka and Otsuki Eiichi, Journal of Cell Biology, Vol, 46, Pl(1970)）。
また分子量約３７万のフィブロインは分子量約３５万（Ｈ鎖）と約２．５万（Ｌ鎖）に分けられる。
【００２６】
蚕は営繭時に液状絹を吐糸して繭（繭糸と蛹で構成）を作る。
繭糸には中心部にフィブロイン、周囲にセリシンが存在し、存在比は（７０〜８０％フィブロイン）：２０〜３０％（セリシン）であることが知られている。生糸は繭糸を数本から数１０本集合して作られる。
生糸で織った織物を生織という。
繭糸、生糸又は生織からセリシンを除去する工程を精練といい、精練後の繊維が絹糸又はフィブロイン繊維である。
【００２７】
絹糸は、まず、養蚕農家で生産された繭を乾繭、煮繭後に繰糸して生糸を作製し、次いで、生糸又は生織の精練を行い、絹糸また絹織物とする。
これらの工程で生じる屑が残糸である。
乾繭は繭を１１５〜１２０℃の温度から５〜６時間かけて80℃程度の温度に徐々に下げて行う。煮繭では１００〜１０５℃の水蒸気及び熱水で１０分間処理される。
【００２８】
Ｂ．精練
精練方法としては、アルカリ性ナトリウム塩や石鹸を含む水溶液中で煮沸する場合（アルカリセッケン精練）が最も一般的な方法である。
その他、アルカリ性ナトリウム塩のみで精練する場合（アルカリ精練）、加圧熱水（例えば１２０℃の熱水）に浸漬して精練する場合（高圧精練）、酵素で精練する場合（酵素精練）等がある。
水のみで煮沸精練する場合もあるが、セリシンの残留が多く一般的ではない。
このような精練によって絹糸を得る。
ここで精練を行っていない場合は未精練、精練が完全でない場合は半精練といわれる。
【００２９】
半精練で得られた物も絹糸というが、フィブロイン繊維とはいわない。
ここでは９９％以上フィブロインである場合をフィブロイン繊維という。
原料を精練する時に用いるアルカリ水溶液としては、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、ケイ酸ナトリウム、メタケイ酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム等のアルカリ性ナトリウム塩の水溶液が挙げられる。
アルカリ精練の場合、炭酸ナトリウム水溶液は適度なバッファー効果があるため、特に、好ましい。
精練によって原料は脱セリシンされる。
【００３０】
本発明の乳化剤としての絹タンパクを得るには、精練によって絹糸とするだけでなく、原料を精練しなくてもよく、精練を途中で終えた未精練物であってもよい。  また、家蚕の突然変異体であるセリシン蚕の繭糸（セリシンからできている）を非結晶性フィブロインを主とする水溶液を作るときに添加してもよい。
セリシンは、構成単位が主にセリン（３−ヒドロキシアラニン）からなり、側鎖に親水性のメチロール基を有するセグメントから主として構成されている蛋白質であり、側鎖に非親水性基を多く含むフィブロインに比較し、保湿剤としての機能がより強いものと考えられる。
【００３１】
すなわち、フィブロインは、−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−の繰り返し単位から構成され、親水性基を有する−Ｓｅｒ−の単位当たりの非親水性基の構成が、−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−の５つの単位からなっていることから、親水親油バランス（ＨＬＢ値）が中間的な範囲にあり、０／Ｗ型の乳化物からＷ／Ｏ型の乳化物まで広い範囲で乳化物をつくるのに対し、親水性基を有する構成単位から主として形成されているセリシンの場合は、フィブロインに比較して乳化力よりも保湿機能が勝っているものと考えられる。
【００３２】
因みに、セリシンは、フィブロインより常に１５％だけ多くの吸湿性を有することが報告されている（片岡紘三、日本蚕糸学会誌「家蚕の吐糸中における液状絹および繭糸の含水率」５０巻、６号, P478〜483(1981)）。
セリシンが多少含まれている場合には、いわゆるずり (shear)による繊維化が抑えられ、また保湿性を高めることから、皮膚ケア素材としては効果的である場合がある。
【００３３】
Ｃ．絹タンパク水溶液の作成
精練のような加工工程で、絹はアルカリを含む高温高湿処理を受けるため、絹タンパクは分解して分子量が低下され易い。
絹タンパクは、酸、アルカリ、高温（特に湿熱）、光（特に紫外線、放射線）で分解し分子量を低下し易い。
中性塩による溶解の場合にも分子量を低下し易い。
絹タンパクの分子量低下は絹タンパクの細胞生育促進性の低下に関係しているので、極端な分子量低下は好ましくない。
本発明の乳化剤としての絹タンパクを得るには、上記の原料を以下のように溶解して得る。
【００３４】
非結晶性絹フィブロインを主成分とする絹タンパクの水溶液；
本発明において、絹タンパクのセリシン含量が約５０％未満の場合において絹フィブロインを主成分とする絹タンパクという。
絹の溶解剤である中性塩としては、例えば塩化カルシウム、銅エチレンジアミン、チオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸リチウム、臭化リチウム、硝酸マグネシウム等の中性塩が挙げられる。
当該中性塩においても飽和水溶液又は５０％〔重量(g)/容量（ｍＬ）〕飽和以上の濃度が好ましい。
【００３５】
絹を中性塩溶液に溶解する工程では、中性塩にメチルアルコール、エチルアルコール、プロピルアルコール等のアルコールを添加し、９４℃以下の温度で、望ましくは７５〜８５℃程度の温度で行うとよい。
この場合、攪拌することにより溶解を促進することができる。
溶解温度が低いと溶解しにくい。
溶解温度が高いと溶解し易いが、分子量低下が激しく起きる。
絹を中性塩で溶解した溶解液には、フィブロインあるいはフィブロインとセリシンの混合物、中性塩、アルコール等が含まれている。
この溶解液から、まず不溶物を除去し、次いで透析膜や透析装置を用いて分子量約５，０００以下の低分子物を除去する。
このような透析によって絹タンパク水溶液を得る。
この絹タンパク水溶液には、塩化カルシウムが０．００１〜０．１Ｍ程度残されていてもよい。
【００３６】
一方、水溶液における絹タンパクは高分子量であるほど震動や攪拌時のずり
(shear)により繊維化し易い。
繊維化物は水不溶性の塊状物となるので、化粧料としての使用感（手触り）を低下させる原因となる。
そのため、絹タンパクの分子量はある程度低下しているほうが好ましいが、乳化の方法や使用方法を緩やかにすることで繊維化が起こりにくくなることから、高分子量の絹タンパクが含まれていてもよい。
フィブロインは、平均分子量（重量平均）５，０００以上で乳化剤として作用する。
しかし、５，０００〜２０，０００では細胞生育作用はほとんど無い。
２万〜４万では細胞生育作用は少ないが、本発明の乳化剤として利用可能である。
細胞生育促進性の十分あるフィブロインの平均分子量としては、４万〜３７万である。
したがって、皮膚ケア用素材としては平均分子量６〜３０万の範囲のものが特に好ましい。
【００３７】
Ｄ．非結晶性絹フィブロインを主成分とする絹タンパクの水溶液
から非結晶性粉末もしくはフィルムを作成し、これを再び水に溶解させ、再度絹タンパク水溶液とする；
前述Ｃ. の水溶液を平滑な固体表面に流延し、乾燥させることにより製造される非結晶性絹フィルムを再度水に浸漬して絹水溶液を得ることもできる。
非結晶性絹タンパクはフィルムでなくても、粉末でもよい。
この場合は、絹タンパク水溶液をスプレードライ、凍結乾燥等によっても得られる。
【００３８】
本発明において、非結晶性絹フィブロインとは、結晶化度が１０％未満のものをいう（特開平１１−７０１６０号参照）。
絹セリシンが含まれていても、結晶化度１０％未満のものをいう。
結晶化度が１０％未満であれば、この絹タンパクを水に浸漬したとき、絹タンパクの一部が溶解し、一部が水を吸収して浮遊している状態でも、非常に軟らかく水性ゲルと同様であるため、乳化剤として作用する。
この場合は絹タンパク水溶液をそのまま乳化剤として使用する場合に比べ、更に乾燥・再溶解工程を経ることになり、工程数が多い点で不利ではある。
【００３９】
しかし、非結晶性絹は光を遮断した相対湿度約５０％以下での室内には、数年の長期保存も可能であること、また乾燥しているため軽く、長距離輸送には効果的であること等の利点がある。
絹タンパク水溶液は液状絹からも得ることができる。
例えば、蚕の絹糸腺の中部及び後部腺からゲル状の内容物（液状絹）を取り出し、水に溶解させることにより絹タンパク水溶液を得ることができる。
【００４０】
しかし、この方法は蚕を解剖して蚕体内から絹糸腺を取り出し、さらに絹糸腺腔から液状絹を取りださなければならない。
蚕１頭から得られる絹は最大で０．４ｇ程度であり、蚕体液や絹糸腺細胞等の不純物を含みやすいこと、及び絹を得るのに手間がかかること等により、工業的な生産方法にはならない。
本発明においては工業的に有利な生繭、乾繭もしくは煮繭した繭の繭層もしくは繭糸を、あるいは生糸、絹織物又はそれらの残糸等を材料として用いる。
【００４１】
Ｅ．絹タンパク水溶液による油性分の乳化
油性分としてはオリーブ油、椿油、アボガド油、カカオ油，サンフラワー油、パーシック油、パーム油、ヒマシ油等の植物性油やその他動物性油、さらにホホバ油、ミツロウ等のロウ類等、化粧品原料基準に収載されている油やロウ等の油性分を使用する。
油性分の種類によって乳化物の性状に大差がない。
【００４２】
絹タンパク水溶液の濃度と絹タンパク水溶液量に対する油性分の割合を適宜調整することにより目的とする化粧料を作成する。
絹タンパク水溶液と油性分を混合し、乳化させる方法としては攪拌法、すりまぜ法等があるが、いづれでもよい。
乳化用の機械は絹の濃度や油の割合によって使い分けることが望ましい。
乳化物の粘性は絹水溶液の濃度によって変わり、絹水溶液の濃度が薄いと絹タンパクによる細胞生育性が低い。
したがって、濃度は０．１％以上、好ましくは０．５％以上である。
【００４３】
一方、絹タンパク水溶液の濃度が高いと皮膚上での伸びが低下し、使用感が低下する。
従って、その濃度は１５％以下、好ましくは１０％以下がよい。
セリシンの割合が５０％を越えるとセリシンの性質が強くなり、ゲル化が起き易くなるために好ましくない。
より好ましくは３０％以下である。
乳化物は絹タンパク水溶液の濃度が低い（３％程度以下）場合は液状となるので、乳液として使える。
濃度が高くなる（３％程度以上）に従って、粘性を帯びクリームや軟膏として使える。
絹フイブロイン濃度が低いと細胞生育率が低いこと、絹タンパク水溶液の濃度が高いと伸びが低下することなどは、次に述べる水性ゲルの乳化の場合にも同様である。
【００４４】
Ｆ．絹タンパク水溶液のゲル化
ゲル化は、絹タンパク水溶液をそのまま放置することにより達成される。ゲル化は絹タンパク水溶液の濃度が高いほど速い。
濃度３％の場合、室温（２５℃±５℃）ではゲル化に一週間程度必要であり、室温以下に温度を下げるとゲル化時間は急激に長くなる。
絹フィブロイン水溶液を室温以上、特に４０℃以上に置くとゲル化は２日程度以内で起きる。さらに、オートクレーブ（１２０℃）を用いるとゲル化は１〜２時間程度で起きる。
５０〜８０℃の温度で静置してゲル化させることが好ましい。
【００４５】
絹タンパクの水性ゲルは、フィブロイン濃度が一定以上になると、フィブロイン鎖中の−Ｃ＝Ｏ−と−ＮＨ−とが、互いに近隣の他のフィブロイン分子との間で水素結合をつくり、緩く絡み合って三次元網目状を形成することにより現出するものと推定される。
この水性ゲルは、非常に脆い状態であるために、外力で容易にゲル状態は壊れる。
【００４６】
そこで、フィブロインを主成分とする含水率４．５％の絹タンパク水溶液の水性ゲルに油性分を入れないで攪拌し、遠心分離機で攪拌物を分離（８，０００ｒｐｍ、１０分）したところ、その上澄み液の絹タンパク濃度は、０．１〜２．０％であった。
上澄液を除いた沈殿物に、上澄み液の分の水を加え、再攪拌し（３０秒）、遠心分離（８，０００ｒｐｍ、１０分）したところ、上澄み液の絹タンパク水溶液の濃度は、同様に０．１〜２．０％であった。
このようなゲルの一部は攪拌によって、容易に水に溶解する性質があり、これを水性ゲルという。
このようにして得た絹タンパク水溶液またはその水性ゲルは油性分と混合するとき、乳化剤として作用する。
【００４７】
Ｇ．絹タンパク水性ゲルの乳化
乳化方法は、前記Ｅ．絹タンパク水溶液の場合と同じである。
ゲルにおける絹タンパクの濃度が６％程度以上になると、ゲルと油性分を混合し、これを攪拌しただけでは乳化しにくい。
濃度が濃くなるにつれて、攪拌時に水を添加すると乳化は容易となる。
水は絹タンパクと等量から２倍程度の量が必要である。
つまり、濃度１０％のゲル１００ｇには１０〜２０ｇの水を添加して攪拌するとよい。
絹タンパク水溶液による乳化の場合と比べて、絹タンパク水溶液をゲル化した後に乳化することは、ゲル化の工程が多く、工業的には不利である。
【００４８】
しかし、絹タンパクの水性ゲルにより乳化する場合には、絹タンパク水溶液の場合より油性分の割合が少なくても乳化することができるという利点がある。
すなわち、同じ含水率の場合、絹タンパク水溶液より水性ゲルを用いた方が油性分と絹フィブロインの割合を広範囲に変えることができるため、性質の違う乳化物を得ることができるという利点がある。
この理由は、絹タンパク水溶液のゲル化によって絹フィブロインは分子間でゆるく結合しているため、すべての絹フィブロイン鎖が油性分と結合しなくてもよいことによるものと推定される。
【００４９】
本発明の乳化化粧料には、本発明の作用・効果を損なわない範囲
で、必要に応じて、ｐＨ調整剤、防腐剤、増粘剤、保湿剤、殺菌剤、抗炎症剤、色素，香料、酸化防止剤、紫外線吸収剤、ビタミン、有機もしくは無機の粉体、アルコール、糖類等の化粧料に通常に使用される成分を適宜配合することができるこというまでもない。
【００５０】
【実施例１】
・絹タンパク水溶液による油性分の乳化
平成１３年春産の家蚕繭の繭層を、通常の方法で乾繭、煮繭、繰糸した生糸を原料とし、この生糸３００ｇを１２ｌの水と６ｇの炭酸ナトリウム中で４０分煮沸して精練した。
練減は２５．７％であり、フィブロインが９９％以上の絹糸を得たと考えられる。
この絹糸（１５０ｇ）を塩化カルシウム、エタノール、水のモル比１対２対８の割合の液（絹糸の１０倍量）で溶解した。
溶解は７５〜８０℃、６０分で行い、透析した。
【００５１】
透析は溶解液を透析膜〔三光純薬（株）、UC36-32-100〕に入れ、これを純水に浸漬して透析した。
透析後のフィブロインの電気泳動像ではフィブロインのＨ鎖はわずかに確認でるが、Ｌ鎖は確認でき、クロマトグラフィーによる重量平均分子量は約２４万であった。
また、透析後の絹タンパク水溶液の濃度は８．２％であった。
この濃度を純水で希釈し、８．２％の他に４．０％、２．０％、１．０％、０．２％の絹タンパク水溶液を作成した。
また、濃度８．２％の絹水溶液を透析膜に入れた状態で、５℃の室内で乾燥し、濃度１３．２％の絹水溶液を得た。
これらの濃度の違う絹タンパク水溶液にオリーブ油を加えて攪拌し（コーヒーミキサー、約２０秒）、乳化した。
【００５２】
攪拌後に乳化物を腕に０．１〜０．３ｇ量をのせ、約１００ｃｍ2 の広さに指を使ってよく伸ばし、塗布した。
皮膚に塗っているとき、乳化物の伸び易さ（展延性）および乳化物から小さな塊状物の出やすさ（ボロボロ感）から化粧料としての利用できる範囲を調べた。
その結果を図１に示す。
図１の横軸は絹タンパク水溶液のタンパク濃度（％）である。
縦軸は、油性分率＝１００×油性分（ｇ）／｛絹タンパク水溶液（ｇ）＋油性分（ｇ）｝を示す。
乳液またはクリームとして使える範囲は実線Ａで囲まれる部分、好ましくはＢで囲まれる部分である。
【００５３】
【実施例２】
・乾燥非結晶性絹タンパク（フィルムまたは粉末）からの絹タンパク水溶液からの乳化物
実施例１で作成した濃度４．０％の絹タンパク水溶液を２５℃、４０％ＲＨの室内のプラスチック板上に流し、送風しながら乾燥して絹フィルムを作成した。得られた非結晶性絹フィルムを、２０℃の水に浸漬し、溶解させて濃度が６．０％、４．０％、２．０％、１．０％の絹タンパク水溶液を作成した。
これらを実施例１と同様にオリーブ油を加え攪拌し、乳化させた。
得られた乳化物の化粧料として利用できる絹タンパク水溶液の濃度と油性分率の関係は、図１に示されと同様な結果となった。
【００５４】
【実施例３】
・絹タンパクの水性ゲルによる油性分の乳化
家蚕の繭層３００ｇを炭酸ナトリウム６ｇ、水１２ｌの沸騰液に浸漬し、１００分で精練した。
この絹糸１９５ｇを塩化カルシウム３９２ｇ、水５０８ｇ、エタノール３２５ｇの液に溶解した。
溶解の温度は７５〜８５℃、時間は３時間である。
【００５５】
透析は、はじめの２日間は水道水、その後は純水で２日間８回替えた。
絹水溶液の電気泳動像からフィブロインのＨ鎖は確認できない。
Ｌ鎖は明確には確認できず、ゲルクロマトグラフィーからは平均分子量は約６．５万であった。
この絹水溶液の濃度は１４．１％であった。
他に、濃度６．０％、３．０％、１．０％、０．２％を作成し、これらを７０℃に放置してゲル化させた。
得られた絹タンパクの水性ゲルにオリーブ油を加えて攪拌し（コーヒーミキ
サー、約３０秒間攪拌）、乳化させた。
【００５６】
得られた乳化物を腕に０．１〜０．３ｇの量をのせ、約１００ｃｍ２の広さに指を使ってよく伸ばし（２０〜２００ｃｍ／秒程度の速度、２０〜２００ｇ程度の荷重）、皮膚に塗布した。この時の乳化物の伸び易さ、および乳化物から小さな塊の出やすさ（ボロボロ感）を調べ、化粧料としての利用できる範囲を決定した。
その結果を図２に示す。
図２の横軸は絹タンパク水溶液のタンパク濃度（％）である。
縦軸は、油性分率＝１００×油性分（ｇ）／｛（絹タンパク水溶液（ｇ）＋油性分（ｇ）＋Ｗ（ｇ）｝を示す。
Ｗはゲル化物の濃度が濃いとき、攪拌時に加えた水の重量である。
乳液またはクリームとして使える範囲は実線Ａで囲まれる部分、好ましくはＢで囲まれる部分である。
【００５７】
【実施例４】
・絹タンパクの水性ゲルの作成：
家蚕の繭層３００ｇを炭酸ナトリウム６ｇ、水１２ｌの沸騰液（約１００℃）に浸漬し、７０分で精練した。
この絹糸１５０ｇを塩化カルシウム３９２ｇ、水５０８ｇ、エタノール３２５ｇの液に溶解した。
溶解の温度は７５〜８５℃、時間は２時間である。
透析は始め２日間は水道水、その後に純水で２日間８回にわたり取り替えた。
【００５８】
絹タンパク水溶液の電気泳動像からフィブロインのＨ鎖は確認できないが、Ｌ鎖はわずかに確認できた。
ゲルクロマトグラフィーによる平均分子量は約１３万であった。
得られた９．４１％濃度の絹タンパク水溶液を水で希釈し、他に３．１２％、０．２０％の絹タンパク水溶液を作成した。
これらの絹タンパク水溶液をビーカーに入れ、恒温室に置いてゲル化時間を調べた。
１２０℃についてはオートクレーブを用いた。
【００５９】
ゲル化の確認は、絹タンパク水溶液が乳白色になるので分かるが、ビーカーを傾けた時に絹タンパク水溶液がビーカーからこぼれない場合を基準とした。
しかし、絹タンパク水溶液の濃度が３％程度以下では、ゲルの状態は、非常にもろく、傾けただけでこぼれ落ちるので、この場合は、ゲルに含まれている気泡に注目し、ゲルを水平に対し１０〜３０°傾けても気泡が動かない時をゲル化点とした。
その結果を図３に示す。
絹タンパク水溶液は、５０〜８０℃の温度では約２〜４日でゲル化する。
ゲル化時間は、熱や攪拌等の剪断力を受けることによって短時間の方に変化する。
なお、ゲル化しやすいように疎水性物質（例えば、 ポリエチレングリコール，グリセリン等）を添加してもよい。
【００６０】
【比較例】
・セリシン水溶液による油性分の乳化
家蚕繭層（５．０ｇ）を数枚に分離し、これを４０倍量（２００ｇ）の８Ｍウレア水、８０℃に１５分浸漬し、よく攪拌した。
この精練による練減は２１．２％であった。
この精練液を５０倍量の純水で透析（２時間ごとに４回）した。
この液は透析終了後の濃度は０．２５％で、すでにゲル化していた。
ゲル化しているセリシンは昇温すればセリシン水溶液となる。
この液を煮沸し、煮沸時間を変えた。
このようにして得たセリシン濃度１．８５％、３．２４％、５．４８％の水溶液作成した。
濃度３．２４％、５．４８％の水溶液は煮沸中でも沈澱物が浮遊している。
これらのセリシン水溶液にオリーブ油を加え攪拌した。
攪拌によって乳化した乳化物を手に伸ばして手触りや伸びやすさから化粧品としての判定を行った。
【００６１】
その結果、濃度が６％未満の範囲においては、乳化物を得ることができたものの、フィブロインを主成分とする絹タンパク水溶液を用いた場合に比較し、使用時の温度が高いと軟らかく、温度が低いと硬くなり易い。
セリシン水溶液を乳化剤として使用する場合、その濃度は０．１％〜６％の範囲で使用可能であるが、好ましくは数０．１％〜４％、さらに好ましくは０．１％から２％である。
セリシン水溶液にフイブロインが混合される割合が大きくなるに従ってその濃度を高くすることができる。
【００６２】
【試験例】
・（試験例１）皮膚刺激性
本発明の乳化クリームと絹タンパク水溶液を使用していない他２社の化粧クリーム（各１点）について、皮膚刺激性に関するパッチテストを行った。
本発明の乳化クリームとして、実施例４の方法で得た絹タンパク濃度が４．５％の絹タンパクの水性ゲル（絹ゲル）を用いて、表１に示す化粧用素材および量割合でで混合し、攪拌して絹クリームとした。
【００６３】
これら３点について、女子１０名（アレルギーを持つ１０代１人、２０代4人、３０代３人、４０代２人）を対象としたパッチテストを行なった。
パッチテストではFinn-Chamberを用いて、腕の内側部に絹クリーム、Ａ社とＢ社のクリームを貼付し、４８時間後と７２時間後に皮膚反応を判定基準に従って判定（中川昌次郎：接触性皮膚炎の診寮・臨床免疫）した。
貼付後の４８時間後と７２時間後に、貼付した部分の肉眼観察で、刺激の程度を表２のように判定して、評点し、各試料の評点の合計を被験者数で割って１００倍に算出し、刺激指数として表３に示した。
表３から絹クリームには皮膚刺激性はみられないが、絹タンパクの入っていない他社のクリームには皮膚刺激性が見られた。
【００６４】
・（試験例２）
非結晶性絹フィブロインを主成分とする絹タンパクの細胞生育促進性
家蚕の繭層５．０ｇを２００ｍｌの８０℃、８Ｍウレア水に浸漬、攪拌して精練した。
精練時間は（１）２０分と（２）１０分で、それぞれの練減は（１）２５．８％、（２）２１．２％であった。
また、繭層５．０ｇを２００ｍｌの水で（３）３０分、（４）１５分煮沸精練した。
それぞれの練減は（３）１６．０％、（４）８．７％であった。
精練していない繭層を（５）とした。
（１）はほとんどのセリシンが除かれ、９９％以上がフィブロインと考えられる。
（１）〜（５）の絹タンパクにおけるセリシン含有量の値を得るため、これらを水１００ｍｌに炭酸ナトリウム０．０５ｇ入れた煮沸液に９０分浸漬し、充分に攪拌し、精練した。
精練後の重量減をセリシン量として計算した。
また、セリシン蚕繭層〔セリシン１００％とする（８）〕を家蚕繭層に添加して、セリシン割合５０．０％（６）、７５．０％（７）を作った。
【００６５】
絹の細胞培養容器へのコートは次のように行った。
これら（１）〜（８）の絹タンパク各０．０１ｇを９ＭＬｉＳＣＮ１．０ｍｌに溶解し、各溶解液を５０倍量の水で５回透析し、透析後の各絹タンパク０．００２５％溶液１ｍｌを細胞培養用のシャーレ（３５ｍｍφ、ファルコン）に入れ、風乾し、ＰＢＳ２ｍｌで３回洗ったのち再度風乾し、７０％エタノールで滅菌した。
【００６６】
細胞はクラボウ（株）から購入したヒト皮膚線維芽細胞を使用した。
培地はクラボウから購入した皮膚線維芽細胞増殖用低血清培地を使用した。
培養は絹タンパクをコートしたシャーレ１枚につき培地２ｍｌを入れ〜７万の細胞を接種して３日間培養した。
細胞数の測定はシャーレ１枚につきアラマブルー（ＩＷＡＫＩ）０．１ｍｌを入れ、３７℃で２時間後に５７０ｎｍ、６００ｎｍの吸光度から計算した色素の還元量を生育細胞数とした。
絹タンパクをコートしなかったシャーレを対照区（１００％）とし、絹タンパクをコートしたシャーレの細胞生育数を表４示した。
絹タンパクをコートした場合、セリシンの含有率の違いにかかわらず、いづれも対照区に対して細胞生育が優れていた。
【００６７】
・（試験例３）  フィブロインの分子量と細胞生育促進性
水１, ０００ｃｃ中に炭酸ソーダ０．５ｇを入れ、煮沸（１００℃）し、煮沸中に家蚕の繭層１０．０ｇを浸漬、攪拌して精練した。
精練時間は（１）５分、（２）２０分、（３）６０分、（４）１３０分、（５）１８０分とした。
それぞれの練減は（１）２２．３％、（２）２４．５％、（３）２５．１％、（４）２５．５％、（５）２６．２％であった。
（４）と（５）は９９％以上がフィブロインと考えられる。
これらの絹タンパクについて分子量（重量平均）と細胞生育性との関係を調べた。
平均分子量測定はゲルクロマトグラフィーカラムを用い、試料を８Ｍウレア/40ｍＭ Tris-H２SO４（ｐＨ８）で溶出し（０．６ｍｌ／ｍｉｎ）、２７５ｎｍでモニターした。
分子量測定用のカラムはSuperdex 200 Prep grade（ファルマシア）を使用した。
【００６８】
次に、（１）〜（５）の細胞生育性については次のように測定した。
まず、絹の細胞培養容器へのコートは次のように行った。
（１）〜（５）の絹タンパク各０．０１ｇを９Ｍ LiSCN１ｍｌに溶解し、各溶解液を５０倍量の水で４回透析し、絹タンパク水溶液とした。
これら各絹タンパクの０．００２５％溶液１ｍｌを細胞培養用のシャーレ（３５ｍｍφ、ファルコン）に入れ、風乾し、ＰＢＳ２ｍｌで３回洗ったのち再度風乾し、７０％エタノールで浸漬して滅菌した。
【００６９】
細胞はクラボウ（株）から購入したヒト皮膚線維芽細胞を使用した、培地はクラボウから購入した皮膚線維芽細胞増殖用低血清培地を使用した。
培養は絹タンパクをコートしたシャーレ１枚につき培地２ｍｌを入れ〜７万の細胞を接種して３日間培養した。
細胞数の測定はシャーレ１枚につき培地２ｍｌ、アラマブルー（IWAKI）０．１ｍｌを入れ、３７℃で２時間後に５７０ｎｍ、６００ｎｍの吸光度から計算した色素の還元量を生育細胞数とした。
絹タンパクをコートしなかったシャーレを対照区（１００％）とし、絹タンパクをコートしたシャーレの細胞生育数を図４に示した。
フィブロインの分子量が低下するにしたがって、細胞生育性も低下したが、フィブロインの分子量約４万以上では細胞生育促進性を有している。
【００７０】
以上、本発明を説明してきたが、本発明は上記実施形態にのみ限定されるものではなく、明細書記載の作用効果を得れる限り種々の変更例が可能である。
例えば、食品用（チョコレート乳化剤等）、医療用（軟膏等）、洗浄用（洗剤等）及びその他の分野への利用も可能なことはいうまでもない。
【００７１】
【発明の効果】
本発明の、非結晶性絹フィブロインを主成分とする絹タンパクの水溶液又は水性ゲルからなる化粧料用乳化剤は、単に乳化力や使用感を改善するのみならず、乳化剤自体が皮膚細胞生育促進性を有している。
そのために、この乳化剤を用いて油性分を乳化させて得られる乳化物は、広範囲の油─水組成の乳化化粧料に使用することができると共に、皮膚ケアの上で極めて優れている。
【００７２】
【表１】
0003659352.tif 000002
【００７３】
【表２】
0003659352.tif 000003
【００７４】
【表３】
0003659352.tif 000004
【００７５】
【表４】
0003659352.tif 000005
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、絹クリームにおける油性分と絹水溶液の濃度との関係を示す図である。
【図２】図２は、絹クリームにおける油性分と絹ゲルの濃度との関係を示す図である。
【図３】図３は、絹水溶液のにゲル化に関する濃度（％），温度（℃），時間（日）の関係を示す図である。
【図４】図４は、絹タンパク（重量）平均分子量と細胞生育率（％）を示す図である。
【図１】
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【図２】
0003659352.tif 000007
【図３】
0003659352.tif 000008
【図４】
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