(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
紅豆杉植物体またはその処理物とテコマ・イペ植物体またはその処理物を含有する抗腫瘍剤。
【請求項２】
当該テコマ・イペ植物体が、その靭皮部分であることを特徴とする請求項１記載の抗腫瘍剤。
【請求項３】
当該紅豆杉植物体が３０メッシュパスの粒径以下の粒子に細断され、当該テコマ・イペ植物体が３０メッシュパスの粒径以下の粒子に細断され、熱水抽出して服用されることを特徴とする請求項１乃至２いずれか記載の抗腫瘍剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、紅豆杉とテコマ・イペを含有する抗腫瘍剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
紅豆杉（タキサス・ユンナネンシス(Taxus yunnanensis)）は、中国の雲南省などの高山に生育する樹木である。紅豆杉はタキサンのジテルペノイドに富んでいて、抗腫瘍作用を持つタキソール(Taxol)を始め、数十種類もの抗腫瘍活性成分が含まれていることが確認されている。また紅豆杉は高い抗酸化作用を有していることが明らかにされていて、自己免疫疾患に薬効のあることが報告されている。
このような紅豆杉の薬効に注目し、体力増進や各種疾患の予防などを目的に、紅豆杉を主原料とした食品（例えば特開平１０−１２０５８２、特開２０００−２３６８３５）が知られている。
【０００３】
一方、テコマ・イペはノウゼンカズラ科に属する樹木である。近年テコマ・イペからフラノナフトキノン誘導体（以下文献１に沿ってＦＮＱと記載する）が単離され、その抗腫瘍活性が報告（特開平９−２３５２８０）されている。（文献１  Hirai K, Koyama J, Pan J ら．：Furanonaphthoquinone analogs possessing preferential antitumor activity compared to normal cells. Cancer Detection and Prevention 23: 539-550, 1999）またその発癌抑制活性（特開平６−１４５１６２）も報告されているが、この点に関しては疑義がある。
【０００４】
一時、同植物から分離された類似のＮＦＤは正常細胞が腫瘍細胞に移行する際のプロモーション段階に作用し、プロモーターＴＰＡに対する抗プロモーターとしての機能を有するとされたが、実際はマウスのパピローマ（皮膚の良性腫瘍）出現を３０％抑制したのに過ぎず（特開平６−１４５１６２）、人癌の発生を抑制した証拠はなんら得られていない。また発癌剤４ＮＱＯによるマウスの肺腫瘍の発生を抑制したとされたが、そのデータは４ＮＱＯ自体の発癌作用を全く抑制しておらず、賦活剤として入れたグリセリンの効果を抑えたに過ぎないことが明らかに示されている。このグリセリンの作用そのものも解明されていないうえ、同記載の肺腫瘍は良性のマウス肺腺腫（アデノーマ）であり、人癌の発生を抑制する証拠にはならない。
【０００５】
さらに同特許公開公報は同植物木部に含まれるラパコールを抗プロモーター活性を有する成分としているが、ラパコールは米国ＮＣＩによって、腎毒性を有する物質であり抗腫瘍作用はないと結論されており、（文献２  Second Opinion Lapacho and the Cancer Controversy. Rostrum Communicatios社, バンクーバー、ｐ．１５２、１９８５）テコマ・イペの薬理効果を示すべきデータにはなり得ない。しかも、今日動物癌細胞に関する実験データを人癌細胞には適用できないとする考え方が一般的であり、既に米国ＮＣＩをはじめ我が国の抗腫瘍剤開発には、人癌細胞を用いた試験をするのが常識である（文献３  特集・制がん剤の分子標的スクリーニング成績．癌と化学療法  ２７巻３月号ｐｐ．１-１９２）
プロモーターＴＰＡはプロテインキナーゼＣのプロモーター作用を介して発癌やＮＡＤＰＨオキシダーゼ（細胞膜の活性化の指標）の活性化を行うものであるが、ＦＮＱはＴＰＡによるＮＡＤＰＨオキシダーゼの活性化を全く抑制しない。従って、公知のＮＦＤが正常細胞から悪性腫瘍の発生を防止する証拠はまったくない。これらのことから、テコマ・イペの化学成分は、ヒト悪性腫瘍細胞に対する抗腫瘍活性を有するが、発癌予防効果はないと結論される。
【０００６】
また、テコマ・イペからイリドイド誘導体が単離され、その抗自己免疫疾患薬効が報告（特開２００１−９７９３１）されている。また、このようなテコマ・イペの薬効に注目し、テコマ・イペの樹皮抽出物を凍結乾燥し粉砕した食品（特開平９−２５２７５３）が知られている。
【０００７】
次に細胞（正常細胞と腫瘍細胞を含む）周期について説明する。細胞周期は、M期（有糸分裂）、G１期（DNA合成に先立つ期間）、S期（DNA合成期）、G２期（DNA合成と有糸分裂の間の期間）に分けられている。G１の後期にある制限点を通過すると、細胞は周期を一巡する。
続いてミトコンドリアについて説明する。ミトコンドリアは細胞を構成する細胞内小器官の一つであり、細胞の生存に必要なエネルギーを作り出している。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
抗腫瘍剤は現在約６０種のうち４０数種が臨床に使用されていて、そのうちの数種類を併用することもできるが、化学構造や作用機序などが互いに干渉する薬剤を併用すると効果がなかったり副作用を起こしたりなど、配合禁忌を起こすこともある。
【０００９】
一方、腫瘍細胞の細胞周期に関して、そのM期とS期の両期を阻害すれば効果的に腫瘍を抑制できる。また、腫瘍細胞は増殖するために多くのエネルギーを必要とするため、腫瘍細胞のミトコンドリアが活発な代謝をしてエネルギーを供給している。このミトコンドリアを破壊すれば、さらに効果的に腫瘍を抑制できる。
【００１１】
そこで、本発明は、紅豆杉とテコマ・イペを単独で用いる効能よりも両者の相乗的な効能を発揮できる新規な抗腫瘍剤医薬組成物を提供することを課題とする。
【００１２】
本発明の他の課題は、紅豆杉とテコマ・イペの有用成分を同時に、かつそのまま飲用可能な液体として抽出可能な、紅豆杉とテコマ・イペの抗腫瘍剤を提供することにある。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
これらの課題を解決するため、請求項１の発明は、紅豆杉植物体またはその処理物とテコマ・イペ植物体またはその処理物を含有する抗腫瘍剤である。請求項２の発明は、当該テコマ・イペ植物体が、その靭皮部分であることを特徴とする請求項１記載の抗腫瘍剤である。請求項３の発明は、当該紅豆杉植物体が３０メッシュパスの粒径以下の粒子に細断され、当該テコマ・イペ植物体が３０メッシュパスの粒径以下の粒子に細断され、熱水抽出して服用されることを特徴とする請求項１乃至２いずれか記載の抗腫瘍剤である。
【００１５】
【作用】
請求項１乃至２記載の発明にかかる抗腫瘍剤は、紅豆杉とテコマ・イペを含有することを特徴とする。紅豆杉の主要な薬効成分であるテルペン類やリグナン類と、テコマ・イペの主要な薬効成分であるＦＮＱやイリドイド誘導体は、配合禁忌がなく、紅豆杉の効能とテコマ・イペの効能をそれぞれ生かして、効果的な抗腫瘍剤とすることができる。また、紅豆杉、テコマ・イペ共に単離した成分や化学合成成分でなく植物体に含まれるほぼ全ての成分を医薬に供するので、本抗腫瘍剤はこれらの両植物体に含まれる「気」を十分に活用できる。請求項３にかかる発明は、紅豆杉とテコマ・イペを細断したものであり、熱水抽出し抽出液を服用するものである。
【００１６】
紅豆杉の抗腫瘍細胞作用機序は腫瘍細胞の細胞骨格を形成する微小管に結合し、細胞分裂を阻害するものである。すなわち紅豆杉は腫瘍細胞の細胞周期のM期に作用する。一方、テコマ・イペの抗腫瘍細胞作用機序は主として悪性腫瘍細胞のミトコンドリアの阻害である。すなわちテコマ・イペは腫瘍細胞の細胞周期のS期に作用する。よって本発明にかかる抗腫瘍剤は腫瘍細胞の細胞周期のM期とS期を共に阻害することができる。
【００１７】
さらにテコマ・イペは悪性腫瘍細胞ミトコンドリアそのものを破壊することができる。
（文献４  Pan J, Hirai K, Simamura E, Koyama J ら: Mitochondrialdamage by a new antitumor agent furanonaphthoquinone derivative in human cervical cancer HeLa cells. J. Electron Microscopy 46: 181-187, 1997 文献５  Pan J, Koyama J, Matayoshi A and Hirai K: Structural injury of osteosarcoma mitochondria by a novel antitumour agent, 2-methylfuranonaphtoquinone. J. Electron Microscopy 48:449-454, 1999 文献６  Pan J, Simamura E, Koyama J, Shimada H and Hirai K. : Induced apoptosis and necrosis by 2-methylfuranonaphtoquinone in human cervical cancer HeLa cells. Cancer Detection and Prevention 24: 266-274, 2000）
【００１９】
【発明の実施の形態】
本発明において、紅豆杉とは、中国では赤柏松、紫杉、紫金杉の別名でも呼ばれる樹木をいう。また、テコマ・イペとは学名テコマイペマルト（Tecoma ipe Mart. ex K. Shum.）の植物であって、アルゼンチン、パラグアイ、ブラジルではラパチョ（Lapacho）、パウダルコ（Pau d’arco）、パロデアルコ（Palo de arco）、イペロッショ（Ipe-roxo）、イペローザ（Ipe-rosa）などと呼ばれる樹木をいう。
【００２０】
本発明において、抗腫瘍剤とは、固形腫瘍、血液腫瘍、肉腫などのあらゆる悪性腫瘍に対して有効に作用し、これを治癒、軽減せしめると共に、これらの悪性腫瘍の発生を防止する薬剤を意味する。
【００２１】
ところで、人体は正常に機能していれば、腫瘍細胞などの形質転換された細胞を免疫作用で取り除くことができる。
紅豆杉は免疫力を高める漢方薬であることが知られていて、前記の悪性腫瘍の発生を防止する作用がある。また、最近の研究から、テコマ・イペから単離されたＦＮＱは、腫瘍細胞のミトコンドリアを破壊すること（前記文献４、５、６）が明らかにされた。
【００２２】
本発明の医薬品は自己免疫疾患薬としての薬効を持つ。自己免疫疾患とは慢性関節リウマチ、糖尿病、関節症、呼吸器障害、ブドウ膜炎、膠原病、全身性エリテマトージス、ベーチェット病、膜性腎症などを含むものである。紅豆杉は自己免疫疾患の漢方薬として知られており、またテコマ・イペから単離されたイリドイド誘導体は自己免疫疾患薬としての生理活性を有している。
【００２３】
本発明にかかる医薬組成物又は食品組成物に用いる紅豆杉植物体とは、紅豆杉の葉、樹皮、材部、芯部、根などをいう。なかでも、樹皮と材部（合わせて木部という）を用いることが好ましい。一方、テコマ・イペ植物体とは、テコマ・イペの葉、樹皮、材部、芯部、根などをいう。なかでも靭皮を用いることが好ましい。
【００２４】
本発明において、メッシュ(mesh)とは、一辺１インチ（２５．４ｍｍ）の中の篩の目の数をいう。したがって３０メッシュパスとは、１インチ平方の中に３０の篩穴を有する篩を通過する粒子の大きさをいう。また、３０メッシュパスの粒径以下の粒径とは、３０メッシュを通過する粒径、４０メッシュを通過する粒径、５０メッシュを通過する粒径などを包含するものである。以上の植物体細断物のメッシュパス粒径は、水分量５％から１５％程度の乾燥状態で測定するものである。
【００２５】
紅豆杉とテコマ・イペの配合割合は、重量比で紅豆杉／テコマ・イペが通常９５／５〜５／９５、好ましくは８０／２０〜２０／８０、より好ましくは７０／３０〜３０／７０、さらに好ましくは６０／４０〜４０／６０、もっとも好ましくは５５／４５〜４５／５５である。ここで重量比とは、材料の乾燥重量を比較するものであり、通常植物体を水分量５％から１５％程度の乾燥状態として、かつ、比較対象材料の水分量を同一％にして比較するものである（以下の重量比も同様な乾燥状態で比較するものである）。
【００２６】
本発明にかかる組成物は医薬、食品として単独で用いることができ、また他の薬効成分、香料、甘味料等を添加して用いることができる。他の薬効成分（同時に香料、甘味料としても作用する成分も含む）としては、プロポリスエキス、葦茎、烏梅、けんじつ（おにばすの実）、棗、大棗、枸杞子、金橄欖、百合、甘草、紅花、温州蜜柑成熟果皮、干姜、肉桂、薔薇、山査子、蓮葉、夷草種子、甘茶蔓、柚皮、西洋人参、霊芝、陳皮などがあげられる。これらを加える場合は１つ又は複数の材料を、重量比で０〜７５％と紅豆杉とテコマ・イペの混合物１００〜２５％と混合することが好ましい。
【００２７】
本医薬組成物の投与量は、通常、患者の体重、疾患の性質及び状態に依存して変化するが、好ましくは、一人あたり、紅豆杉植物体とテコマ・イペ植物体の合計値（植物体処理物の場合には処理材料植物体の合計値）で通常１グラム〜５０グラム／日であり、より好ましくは１０〜３０グラム／日である。また、本食品組成物および健康茶の摂取量は、一人あたり、両者の植物体の合計値（植物体処理物の場合には処理材料植物体の合計値）で通常０．５〜５グラム／日、好ましくは１〜５グラム／日、より好ましくは２〜５グラム／日であるが、その上限は医薬組成物として投与される場合の上限程度まで増やしても差し支えない。以上の重量は水分量５％から１５％の乾燥状態で計量するものである。
【００２８】
紅豆杉とテコマ・イペはその材料を個別に水、熱水、メタノール、エタノール、その他の溶媒、CO2などの超臨界流体でエキス分を抽出し、溶媒を除いたそれぞれのエキスを配合することができる。また、紅豆杉とテコマ・イペの混合材料を前記の溶媒又は超臨界流体で抽出することにより混合エキスを得ることができる。さらにまた両者を木屑状にして熱水抽出して抽出液の形態で、医薬、食品として服用することができる。
【００２９】
前記のエキス分は経口、非経口、又は経皮投与することができる。
投与に適した形態は、例えば錠剤もしくは被覆錠、カプセル、溶液、シロップ、粉末、座薬を包含する。錠剤は、上記エキスをフリーズドドライ製法により粉末化し、例えば乳糖、ブドウ糖、ショ糖、マンニットなどの賦形剤；コーンスターチ、アルギン酸などの崩壊剤；スターチ、ゼラチンなどの結合剤；ステアリン酸マクネシウム、タルクなどの滑沢剤；および／またはカルボキシメチルセルロース、セルロースアセテートフタレート、ポリビニルアルコールなどの遅延放出を与える剤を混合することにより製造できる。錠剤はいくつかの層からなっていてもよい。
【００３０】
被覆錠は錠剤と同様にして製造した芯を錠剤被覆に通常用いられる物質、例えばコリドン(collidone)、シェラック(shellac)、アラビアゴム、タルク、二酸化チタン、ショ糖などで被覆することにより製造できる。遅延放出を得るべく芯はいくつかの層からなっていてもよく、また錠剤についての上記賦形剤を用いることができる。
【００３１】
本発明にかかる医薬、食品組成物を液剤、シロップの剤型にするには、前記エキスまたはその粉末に、水、エリスリトール、キシリトール、マンニトール、ショ糖、トレハロース、マルトース、フラクトース、ソルビット、蜂蜜などの糖類、パラベンなどの防腐剤、各種香料、着色料、大豆油などの油類を適宜添加、混合して調製することができる。
医薬、食品組成物を含有するカプセルは、前記エキスをゼラチンカプセルに封入し、または前記エキス粉末と例えばラクトース、ソルビトールなどの不活性担体を混合し、混合物をゼラチンカプセルに封入、またはゼラチン膜で被包成形することで製造することができる。
【００３２】
本発明にかかる紅豆杉とテコマ・イペの植物体またはその処理物は、例えばパン、麺、菓子（例えば、ビスケット）などの原料として、例えば小麦粉に混合して用いることができる。ここで植物体を用いる場合には、微粉末、例えば１００〜１５０メッシュパスの粒子径の粒子とすることが好ましい。
【００３３】
本発明にかかる紅豆杉とテコマ・イペを含有する医薬または健康茶の熱水抽出に費やす時間は、通常２分〜１０分間、好ましくは２分〜７分間、より好ましくは、３分〜６分間、最も好ましくは４分〜５分間である。また、室温の水に医薬組成物または健康茶を入れてから加熱して、前記の時間沸騰状態を保ち抽出することができ、また、熱水に医薬組成物または健康茶を入れて前記の時間沸騰状態を保ち抽出することもできる。紅豆杉の粉砕物から抽出される成分はその抽出温度により異なることが知られており、常温の水に医薬組成物または健康茶をいれてその後加熱抽出するほうが望ましい。
【００３４】
テコマ・イペについては、従来木屑状の茶から成分を熱水抽出するためには、３０分から１時間の時間が必要と考えられてきた。一方、紅豆杉を３０メッシュパスに細断した健康茶はその成分の抽出に熱湯で約２分〜１０分間を費やすことが好ましいことが知られている。
本発明の紅豆杉とテコマ・イペの混合医薬組成物または健康茶は、紅豆杉の細断物（通常３０メッシュパスの粒径以下の粒子、より好ましくは４０メッシュパスの粒径以下の粒子、さらに好ましくは３０〜１００メッシュパスの粒径の粒子）と、テコマ・イペの細断物（通常３０メッシュパスの粒径以下の粒子、より好ましくは４０メッシュパスの粒径以下の粒子、さらに好ましくは３０〜１００メッシュパスの粒径の粒子）を混合したものである。テコマ・イペを上記の範囲に細断すると、紅豆杉とテコマ・イペ混合組成物からの成分の熱水抽出が同一時間、かつ比較的短時間（約２分〜１０分間）で可能となる。
【００３５】
【実施例】
以下に実施例・実験例・臨床観察例により、本発明にかかる紅豆杉とテコマ・イペを含有する組成物をさらに説明する。この発明の実施例などに記載されている部材の寸法、材質、形状、服用量などは、とくに特定的な記載のない限りは、この発明の範囲をそれらのみに限定する趣旨のものではなく、単なる説明例にすぎない。
【００３６】
１．健康茶の実施例
紅豆杉の木部を粉砕機で粉砕し、３０メッシュパスの木屑状細断物を得た。次に、細断物の水分が１０％になるまで陰干しした。また、テコマ・イペの靭皮を粉砕機で粉砕し、３０メッシュパスの木屑状細断物を得た。次に、細断物の水分が１０％になるまで陰干しした。
その後、両者を等しい重量で混合し、滅菌処理して２ｇ〜２．２ｇに小分けしてティーバックに入れて取り扱いの便ならしめた。
上記、紅豆杉とテコマ・イペ健康茶ティーバックは、水０．５〜２リットル(L)を加えて、熱水煮沸による５分間の抽出の後、抽出液を適温にして飲用に供した。
【００３７】
２．テコマ・イペ細断物からの有効成分の抽出実験
テコマ・イペ樹木の靭皮部を４０メッシュパスの粒子に細断し、当該粉末５gを７５mlの水に懸濁し５分間、１０分間、３０分間沸騰加熱した。その後１０分間放置した後、ひだ付き濾紙で濾過し、水層をそれぞれ１００ml、５０mlの酢酸エチルエステルで抽出し、２つの抽出液を混合し、１０gの無水硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルエステルを減圧留去した。その残渣にメタノール２mlを加えて溶かし、その１０μｌを薄層クロマトグラム板（thin layer chromatography（１０x１０cm、Kieselgel 60 F254, MERCK））にスポットし、展開（クロロホルム：メタノール＝５０：１）した。Rf値＝0.31 の黄色スポット（ＦＮＱが含まれる）をデンシトメータ（DUAL-WAVELENGTH  FLYING-SPOT  SCANNER  CS-9000）株式会社島津製作所（京都）製を使用して、波長４１０ｎｍで定量した。
各スポットは、クロマトグラム上のピークとして表わされるので、そのピーク面積の測定結果を表１に示した。表１中の面積値は、前記３様の煮沸時間につき、各々３回の抽出を行い、測定した平均値を示した。
【表１】
0003693171.tif 000002
【００３８】
以上の測定結果より、テコマ・イペを細断すれば、テコマ・イペの主用な有効成分であるフラノナフトキノン類は、５分間の熱水煮沸でほぼ抽出され、その後は抽出時間を延長してもその抽出量は変わらないことが明らかとなった。
【００３９】
３．紅豆杉とテコマ・イペ組成物の抗腫瘍性実験
（１）紅豆杉エキスの調整
紅豆杉は、株式会社紅豆杉から入手した。
乾燥したタキサス・ユンナネンシス(Taxus yunnanensis) の粉砕された木部(３００g)をメタノール中６時間還流して抽出し（３回）、メタノールを留去してエキス（７２．５g）を得る。これをクロロホルム、酢酸エチルエステル、n-ブタノールで順次抽出し、クロロホルム可溶部（０.５９g）、酢酸エチルエステル可溶部(５２g)、n-ブタノール可溶部（６.２g）を得た。
【００４０】
（２）テコマエキスの調整
テコマ・イペは、エルバラティーナ社（ブラジル国パラナ州）から入手した。乾燥したテコマ・イペ・マルトTecoma ipe Mart.（タベブイア・インペティギノーサ(Tabebuia impetiginosa)またはタベブイア・アベラネダエ(Tabebuia avellanedae)と同一）の粉砕された靭皮（２００g）をソックスレー抽出器のろ紙筒に入れ、クロロホルム２Lで１昼夜抽出を行った。クロロホルムを減圧留去し、残さ２．５gを得た。これをプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（PTLC）を用いて分離する。０．５mmのシリカゲル薄層板を用い、展開溶媒としてクロロホルム：メタノール（１００：１）で展開し、Ｒｆ＝０．２８の黄色部分を取った。この分画には５-ヒドロキシ−２−(1−ヒドロキシエチル)ナフト[２,３−ｂ]フラン−４,９−ジオン（5-hydroxy-2-(1-hydroxyethyl)naphtho[2,3-b]furan-4,9-dione）（以下（１）という）と８−ヒドロキシ−２−(1−ヒドロキシエチル)ナフト[２,３−ｂ]フラン-４,９-ジオン(8-hydroxy-2-(1-hydroxyethyl)naphtho[2,3-b]furan-4,9-dione)（以下（２）という）と２−(１−ヒドロキシエチル)ナフト[２,３−ｂ]フラン−４,９−ジオン(2-(1-hydroxyethyl)naphtho[2,3-b]furan-4,9-dione)（以下（３）という）が含まれる。
【００４１】
この黄色混合物をさらにエーテル：ベンゼン＝１：１の展開溶媒を用いて、PTLCを行い、Rf＝０．４の黄色部分を分取した。ここには（１）と（２）が含まれる。これを以下の条件に従い高速液体クロマトグラフィーで精製した。Zorbax ODSカラム(内径４.６ mm、長さ２５０ mm)（Agilent Technologies(USA)製）、流量１．０ｍＬ／ｍｉｎ、当初ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ＝１０／９０、３０分後ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ＝４０／６０の直線グラジエント溶出法により分離した。（１）のピーク（溶出時間：２８．３分）と、（２）のピーク（溶出時間：２８．７分）を分取した。参考までに（３）のピークの溶出時間は２３．７分であった。（１）と（２）の混合物として、４mgを得た。これを最も抗腫瘍活性の高いテコマエキスとして用いた。
【００４２】
（３）合成テコマ成分誘導体の合成
テコマ・イペから抽出される成分の誘導体の中で、とくに正常細胞に対する毒性が腫瘍細胞の１０分の１と低く抗がん活性が高い２-メチルナフト[２,３-b]フラン-４,９-ジオン (2-methylnaphtho[2,3-b]furan-4,9-dione)誘導体（ＦＮＱ１０１）を化学合成し、試験に供した。対象化合物は、特開平９-２３５２８０号公報に記載されており、その第３頁第１７段落中の実施例１に記載された方法によって合成した。すなわち２−ヒドロキシ−３−（２−プロペニル）−１、４−ナフトキノンを環化して、カラムクロマトグラフィーで精製した。
【００４３】
（４）抗腫瘍活性の試験
（４Ａ）試験材料
培養ヒト悪性腫瘍細胞：継代維持された子宮頚腫瘍HeLa細胞を用いた。この細胞は系統が樹立されており、米国Flow Lab社から入手した。１０％牛胎仔血清を含むDMEM培地を用い３７℃、５％ＣＯ2存在下に培養した。
【００４４】
（４Ｂ）試験方法
抗腫瘍活性試験：９６穴マイクロプレート上のマイクロウエルで各細胞を培養し、細胞が落着く２４時間後にDMSO溶媒に適宜溶解した試験物質を添加し、７２時間後の細胞増殖を調べた。
細胞増殖測定：各プレートのマイクロウエル内の細胞を経時的にグルタルアルデヒドにて固定し、クリスタルバイオレット染色した。細胞増殖は、タイターテックユニスキャンＩＩ（大日本製薬社製）を用い５９０ｎｍの吸光度で測定した。
抗腫瘍性効果の判定：抗腫瘍性（がん細胞毒性）効果は、７２時間後、細胞増殖を５０％阻害（ＩＣ50値）する試験物質の濃度で表わした。
【００４５】
（５）紅豆杉エキスの抗腫瘍活性
紅豆杉エキスの抗腫瘍活性（培養７２時間目の５０％細胞増殖阻害毒性：ＩＣ50値）は表２のとおりであった。
【表２】
0003693171.tif 000003
【００４６】
この結果、抗腫瘍活性が０.３２mg/mLと最も高い酢酸エチルエステル可溶部を紅豆杉エキスとして以下の実験に用いた。また紅豆杉エキスの抗腫瘍活性には、Ａ５４９細胞とＨｅＬａ細胞との間に約８倍の差があるので、感受性の高いＨｅＬａ細胞を併用試験に用いることにした。
【００４７】
（６）テコマエキスの抗腫瘍活性
テコマエキスの抗腫瘍活性（培養７２時間目の５０％細胞増殖阻害毒性：ＩＣ50値）は表３のとおりであった。
【表３】
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【００４８】
この結果、テコマエキスには、正常ヒト細胞との間に約５倍の選択的抗腫瘍活性がある。Ａ５４９細胞とＨｅＬａ細胞との間には差がなかった。
【００４９】
（７）合成テコマ成分誘導体の抗腫瘍活性
合成テコマ成分誘導体の抗腫瘍活性（培養７２時間目の５０％細胞増殖阻害毒性：ＩＣ50値）は次のとおりである。
【表４】
0003693171.tif 000005
【００５０】
この結果、合成テコマ成分誘導体には、正常ヒト細胞との間に約１０倍の選択的抗腫瘍活性があった。Ａ５４９細胞とＨｅＬａ細胞との間には差がなかった。
【００５１】
（８）紅豆杉エキスと合成テコマ成分誘導体併用による抗腫瘍活性増強効果
（８Ａ）試験方法
抗腫瘍活性試験：９６穴マイクロプレート上のマイクロウエルでＨｅＬａ細胞を培養し、細胞が落着く２４時間後にＤＭＳＯ溶媒に適宜溶解した紅豆杉エキスを添加し、すべてのウエルに０．４mg/mLの合成テコマ成分誘導体を添加した（この濃度は単独で３５％増殖を抑制した）７２時間後の細胞増殖を調べた。
抗腫瘍活性効果の判定：抗腫瘍性効果は、７２時間後細胞増殖を５０％阻害（ＩＣ50値）する試験物質の濃度で表わした。
【００５２】
（８Ｂ）試験
紅豆杉エキスと合成テコマ成分誘導体併用による抗腫瘍活性増強効果は表５のとおりであった。
【表５】
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【００５３】
この結果、合成テコマ成分誘導体が併用されることによって、紅豆杉の抗腫瘍活性は３６％乃至４４％増強した。
【００５４】
（９）紅豆杉エキスとテコマエキス併用による腫瘍細胞生存率の低下
試験方法：径３cmのプラスティック細胞培養ディッシュ５枚でＨｅＬａ細胞を培養し、細胞が落着く２４時間後にＤＭＳＯ溶媒に溶解した紅豆杉エキス（酢酸エチルエステル可溶部）とテコマエキスを添加して培養した。７２時間後にトリパンブルーを１分間添加して死滅した細胞を染色分別し、倒立型顕微鏡に設置したＣＣＤカメラを用いて細胞の画像をコンピューターにて解析し生存細胞数を算出した。
【００５５】
紅豆杉エキスとテコマエキス併用による腫瘍細胞生存率は表６のとおりであった。
【表６】
0003693171.tif 000007
【００５６】
この結果、紅豆杉エキスとテコマエキスを併用することによって、抗腫瘍活性はさらに２倍増加して生存率が低下した。
【００５７】
４．臨床観察例
本例は世田谷ＮＴＴ病院での、女性乳癌患者（６３歳）である。右乳房を切除したが、右肺に転移し、また、全体に拡がった。右肺は呼吸不能となり、左肺野と肝臓に２ｃｍ大の転移が数個ある。副作用のためにアドリアマイシン、５−ＦＵ等の治療を断念して、平成１４年３月に緩和ケア病棟に転院した。その後、テコマ・イペと紅豆杉を１対１に混合した茶を毎日１０ｇ三回（計３０ｇ／日）熱水抽出して２月間服用したところ、体調が良く、また、転移巣の成長が抑えられている。身体所見が良いので、ハーセプチン投与を開始した。
【００５８】
【発明の効果】
請求項１又は２にかかる抗腫瘍剤は抗腫瘍剤としての薬効を有する。請求項３にかかる抗腫瘍剤は手軽に服用可能なものである。請求項１、２、３にかかる抗腫瘍剤は腫瘍細胞に選択的に作用する選択性にすぐれた薬効を有する。
【００５９】
請求項３にかかる抗腫瘍剤は紅豆杉とテコマ・イペの有用成分を熱水抽出により同時に抽出可能となる。またこれらの有用成分を短時間で熱水抽出可能となる。よって日常生活で手軽に飲用可能な抗腫瘍剤が得られる。