(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式：
（Ａｉｂ8,35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2
の化合物、又はその製剤的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
本発明は、グルカゴン様ペプチド−１のペプチド類似体、その製剤的に許容される塩、哺乳動物を治療するためにそのような類似体を使用する方法、及びそのために有用な前記類似体を含んでなる医薬組成物に向けられている。
【０００２】
グルカゴン様ペプチド−１（７−３６）アミド（ＧＬＰ−１）は、グルカゴン前駆体のプレプログルカゴンの組織特異的な翻訳後プロセシングにより腸のＬ細胞において合成され（Varndell, J. M., et al., J. Histochem Cytochem, 1985: 33: 1080-6）、食事に反応して循環中へ放出される。ＧＬＰ−１の血漿濃度は、約１５ピコモル／Ｌの絶食レベルから４０ピコモル／Ｌのピーク食後レベルへ上昇する。血漿インスリンの増加は、血漿グルコース濃度における一定の上昇について、グルコースを静脈内投与した場合に比較して経口投与したほうが約３倍大きいことが示されている（Kreymann, B., et al., Lancet 1987: 2, 1300-4）。このインクレチン（incretin）効果として知られるインスリン放出の食事による増強は主に体液性のものであり、ＧＬＰ−１はヒトにおいて最も強力な生理学的インクレチンであると今日考えられている。インスリン放出作用だけでなく、ＧＬＰ−１はグルカゴンの分泌を抑制し、胃の空洞化を遅らせ（Wettergren A., et al., Dig Dis Sci 1993: 38: 665-73）、末梢のグルコース処理を高める可能性がある（D'Alessio, D. A. et al., J. Clin Invest 1994: 93: 2293-6）。
【０００３】
１９９４年、ＧＬＰ−１の単回皮下（ｓ／ｃ）投与によりインスリン非依存型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）の患者において食後のグルコースレベルが完全に正常化され得るという観察事実から、ＧＬＰ−１の治療薬としての可能性が示唆された（Gutniak, M. K., et al., Diabetes Care 1994: 17: 1039-44）。この効果は、インスリン放出の増加とグルカゴン分泌の減少の両方により介在されると考えられた。さらに、ＧＬＰ−１を静脈内注入すると、ＮＩＤＤＭ患者において食後の胃の空洞化を遅らせることが示された（Williams, B., et al., J. Clin Endo Metab 1996: 81: 327-32）。スルホニル尿素と異なり、ＧＬＰ−１のインスリン放出促進作用は血漿グルコース濃度に依存している（Holz, G. G. 4th, et al., Nature 1993: 361: 362-5）。つまり、低い血漿グルコース濃度ではＧＬＰ−１介在性のインスリン放出がないために、重篤な低血糖症を招かないのである。この複合的な作用により、ＧＬＰ−１は、ＮＩＤＤＭを治療するために現在使用されている他の薬剤に対する独自の潜在的な治療優位性を有している。
【０００４】
数多くの研究は、健常被検者へ与えたとき、ＧＬＰ−１がインスリン及びグルカゴンの濃度だけでなく血糖レベルにも強力に影響を及ぼすこと（Orskov, C, Diabetologia 35: 701-711, 1992; Holst, J. J., et al., Potential of GLP-1 in diabetes management in Glucagon III, Handbook of Experimental Pharmacology, Lefevbre PJ, Ed. Berlin, Springer Verlag, 1996, p. 311-326）、及びこの効果がグルコース依存的である（Kreymann, B., et al., Lancet ii: 1300-1304, 1987; Weir, G. C., et al., Diabetes 38: 338-342, 1989）ことを示した。さらに、それはまた糖尿病を有する患者にも有効であり（Gutniak, M., N. Engl J Med 226: 1316-1322, 1992; Nathan, D. M., et al., Diabetes Care 15: 270-276, 1992）、２型糖尿病の被検者において血糖レベルを正常化し（Nauck, M. A., et al., Diabetologia 36: 741-744, 1993）、１型患者において血糖コントロールを改善し（Creutzfeldt, W. O., et al., Diabetes Care 19: 580-586, 1996）、治療薬としてのその使用の可能性を高めている。
【０００５】
しかしながら、ＧＬＰ−１は代謝的に不安定であり、in vivo での血漿半減期（ｔ1/2）は１〜２分にすぎない。外から投与したＧＬＰ−１も急速に分解される（Deacon, C. F., et al., Diabetes 44: 1126-1131, 1995）。この代謝不安定性はネーティブなＧＬＰ−１の治療薬としての可能性を制限する。従って、ネーティブなＧＬＰ−１より活性であるか又はより代謝的に安定であるＧＬＰ−１類似体に対するニーズが存在するのである。
発明の要約
１つの側面では、本発明は、式（Ｉ）の化合物
（Ｒ2Ｒ3）−Ａ7−Ａ8−Ａ9−Ａ10−Ａ11−Ａ12−Ａ13−Ａ14−Ａ15−Ａ16−Ａ17−Ａ18−Ａ19−Ａ20−Ａ21−Ａ22−Ａ23−Ａ24−Ａ25−Ａ26−Ａ27−Ａ28−Ａ29−Ａ30−Ａ31−Ａ32−Ａ33−Ａ34−Ａ35−Ａ36−Ａ37−Ａ38−Ａ39−Ｒ1                    （Ｉ）
［式中：
Ａ7はＬ−Ｈｉｓ、Ｕｒａ、Ｐａａ、Ｐｔａ、Ａｍｐ、Ｔｍａ−Ｈｉｓ、ｄｅｓ−アミノ−Ｈｉｓであるか又は削除され；
Ａ8はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃｃ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ａｌａ又はＮ−Ｍｅ−Ｇｌｙであり；
Ａ9はＧｌｕ、Ｎ−Ｍｅ−Ｇｌｕ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｓｐ又はＡｓｐであり；
Ａ10はＧｌｙ、Ａｃｃ、β−Ａｌａ又はＡｉｂであり；
Ａ11はＴｈｒ又はＳｅｒであり；
Ａ12はＰｈｅ、Ａｃｃ、Ａｉｃ、Ａｉｂ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ、β−Ｎａｌ、Ｃｈａ、Ｔｒｐ又はＸ1−Ｐｈｅであり；
Ａ13はＴｈｒ又はＳｅｒであり；
Ａ14はＳｅｒ又はＡｉｂであり；
Ａ15はＡｓｐ又はＧｌｕであり；
Ａ16はＶａｌ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｌｅ、Ｎｌｅ、Ａｂｕ、Ａｌａ又はＣｈａであり；
Ａ17はＳｅｒ又はＴｈｒであり；
Ａ18はＳｅｒ又はＴｈｒであり；
Ａ19はＴｙｒ、Ｃｈａ、Ｐｈｅ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ、Ａｃｃ、β−Ｎａｌ又はＸ1−Ｐｈｅであり；
Ａ20はＬｅｕ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｎｌｅ、Ｉｌｅ、Ｃｈａ、Ｔｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ又はＸ1−Ｐｈｅであり；
Ａ21はＧｌｕ又はＡｓｐであり；
Ａ22はＧｌｙ、Ａｃｃ、β−Ａｌａ、Ｇｌｕ又はＡｉｂであり；
Ａ23はＧｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ又はＧｌｕであり；
Ａ24はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｖａｌ、Ａｂｕ、Ｔｌｅ又はＡｃｃであり；
Ａ25はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｖａｌ、Ａｂｕ、Ｔｌｅ、Ａｃｃ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）又はＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）e−Ｘ3）−Ｃ（Ｏ）であり；
Ａ26はＬｙｓ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）又はＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）e−Ｘ3）−Ｃ（Ｏ）であり；
Ａ27はＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ又はＬｙｓであり；
Ａ28はＰｈｅ、Ｐａｌ、β−Ｎａｌ、Ｘ1−Ｐｈｅ、Ａｉｃ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｃｈａ又はＴｒｐであり；
Ａ29はＩｌｅ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｃｈａ、Ｔｌｅ、Ｖａｌ、Ａｂｕ、Ａｌａ又はＰｈｅであり；
Ａ30はＡｌａ、Ａｉｂ又はＡｃｃであり；
Ａ31はＴｒｐ、β−Ｎａｌ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ、Ｐｈｅ、Ａｃｃ、Ａｉｂ又はＣｈａであり；
Ａ32はＬｅｕ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｎｌｅ、Ｉｌｅ、Ｃｈａ、Ｔｌｅ、Ｐｈｅ、Ｘ1−Ｐｈｅ又はＡｌａであり；
Ａ33はＶａｌ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｌｅ、Ｎｌｅ、Ｃｈａ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ａｂｕ、Ｌｙｓ又はＸ1−Ｐｈｅであり；
Ａ34はＬｙｓ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）又はＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）e−Ｘ3）−Ｃ（Ｏ）であり；
Ａ35はＧｌｙ、β−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｇａｂａ、Ａｖａ、ＨＮ−（ＣＨ2）m−Ｃ（Ｏ）、Ａｉｂ、Ａｃｃ又はＤ−アミノ酸であり；
Ａ36はＬ−又はＤ−Ａｒｇ、Ｄ−又はＬ−Ｌｙｓ、Ｄ−又はＬ−ｈＡｒｇ、Ｄ−又はＬ−Ｏｒｎ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）e−Ｘ3）−Ｃ（Ｏ）であるか又は削除され；
Ａ37はＧｌｙ、β−Ａｌａ、Ｇａｂａ、Ａｖａ、Ａｉｂ、Ａｃｃ、Ａｄｏ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｕｎ、Ａｅｃ、ＨＮ−（ＣＨ2）m−Ｃ（Ｏ）、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）、Ｄ−アミノ酸であるか又は削除され；
Ａ38はＤ−又はＬ−Ｌｙｓ、Ｄ−又はＬ−Ａｒｇ、Ｄ−又はＬ−ｈＡｒｇ、Ｄ−又はＬ−Ｏｒｎ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）e−Ｘ3）−Ｃ（Ｏ）、Ａｖａ、Ａｄｏ、Ａｅｃであるか又は削除され；
Ａ39はＤ−又はＬ−Ｌｙｓ、Ｄ−又はＬ−Ａｒｇ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）、Ａｖａ、Ａｄｏ又はＡｅｃであり；
Ｘ1は、それぞれの出現につき、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＯＨ及びハロからなる群から独立して選択され；
Ｒ1はＯＨ、ＮＨ2、（Ｃ1−Ｃ30）アルコキシ又はＮＨ−Ｘ2−ＣＨ2−Ｚ0であり｛ここでＸ2は（Ｃ1−Ｃ12）炭化水素部分であり、Ｚ0はＨ、ＯＨ、ＣＯ2Ｈ又はＣＯＮＨ2である｝；
Ｘ3は
【０００６】
【化２９】
0003702181.tif 000002
【０００７】
【化３０】
0003702181.tif 000003
又は−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＲ12であり｛ここで、Ｘ4は、それぞれの出現につき独立して、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−又は−ＣＨ2−であり、及びｆは、それぞれの出現につき独立して、１から２９を含む整数である｝；
Ｒ2及びＲ3のそれぞれは、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、（Ｃ2−Ｃ30）アルケニル、フェニル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ナフチル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ2−Ｃ30）アルケニル、ヒドロキシフェニル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、及びヒドロキシナフチル（Ｃ1−Ｃ30）アルキルからなる群から独立して選択されるか；又はＲ2及びＲ3の１つは
【０００８】
【化３１】
0003702181.tif 000004
（Ｃ1−Ｃ30）アシル、（Ｃ1−Ｃ30）アルキルスルホニル、Ｃ（Ｏ）Ｘ5、
【０００９】
【化３２】
0003702181.tif 000005
又は
【００１０】
【化３３】
0003702181.tif 000006
であり｛ここで、ＹはＨ、ＯＨ又はＮＨ2であり；ｒは０〜４であり；ｑは０〜４であり；及びＸ5は（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、（Ｃ2−Ｃ30）アルケニル、フェニル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ナフチル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ2−Ｃ30）アルケニル、ヒドロキシフェニル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル又はヒドロキシナフチル（Ｃ1−Ｃ30）アルキルである｝；
ｅは、それぞれの出現につき独立して、１から４を含む整数であり；
ｍは、それぞれの出現につき独立して、５から２４を含む整数であり；
ｎは、それぞれの出現につき独立して、１から５を含む整数であり；
Ｒ10及びＲ11のそれぞれは、それぞれの出現につき独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、（Ｃ1−Ｃ30）アシル、（Ｃ1−Ｃ30）アルキルスルホニル、−Ｃ（（ＮＨ）（ＮＨ2））又は
【００１１】
【化３４】
0003702181.tif 000007
であり；及び
Ｒ12及びＲ13のそれぞれは、それぞれの出現につき独立して、（Ｃ1−Ｃ30）アルキルである；
但し：
Ａ7がＵｒａ、Ｐａａ又はＰｔａである場合、Ｒ2及びＲ3は削除され；
Ｒ10が（Ｃ1−Ｃ30）アシル、（Ｃ1−Ｃ30）アルキルスルホニル、−Ｃ（（ＮＨ）（ＮＨ2））又は
【００１２】
【化３５】
0003702181.tif 000008
である場合、Ｒ11はＨ又は（Ｃ1−Ｃ30）アルキルであり；
（ｉ）式（Ｉ）の化合物の少なくとも１つのアミノ酸は、ｈＧＬＰ−１（７−３６，−３７又は−３８）ＮＨ2又はｈＧＬＰ−１（７−３６、−３７又は−３８）ＯＨのネーティブ配列と同じではなく；
（ｉｉ）式（Ｉ）の化合物は、１つの位置がＡｌａにより置換されたｈＧＬＰ−１（７−３６，−３７又は−３８）ＮＨ2又はｈＧＬＰ−１（７−３６、−３７又は−３８）ＯＨの類似体ではなく；
（ｉｉｉ）式（Ｉ）の化合物は、（Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ38）ｈＧＬＰ−１（７−３８）−Ｅ、（Ｌｙｓ26（Ｎε−アルカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６，−３７又は−３８）−Ｅ、（Ｌｙｓ34（Ｎε−アルカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６，−３７又は−３８）−Ｅ、（Ｌｙｓ26,34−ビス（Ｎε−アルカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６，−３７又は−３８）−Ｅ、（Ａｒｇ26，Ｌｙｓ34（Ｎε−アルカノイル））ｈＧＬＰ−１（８−３６，−３７又は−３８）−Ｅ、（Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−アルカノイル）ｈＧＬＰ−１（７−３６，−３７又は−３８）−Ｅ又は（Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ38（Ｎε−アルカノイル）ｈＧＬＰ−１（７−３８）−Ｅではなく（ここでＥは−ＯＨ又は−ＮＨ2である）；
（ｉｖ）式（Ｉ）の化合物はＺ1−ｈＧＬＰ−１（７−３６，−３７又は−３８）−ＯＨ又はＺ1−ｈＧＬＰ−１（７−３６，−３７又は−３８）−ＮＨ2ではなく｛ここでＺ1は以下の群から選択される：
（ａ）（Ａｒｇ26），（Ａｒｇ34），（Ａｒｇ26,34），（Ｌｙｓ36），（Ａｒｇ26，Ｌｙｓ36），（Ａｒｇ34，Ｌｙｓ36），（Ｄ−Ｌｙｓ36），（Ａｒｇ36），（Ｄ−Ａｒｇ36），（Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36）又は（Ａｒｇ26,36，Ｌｙｓ34）；
（ｂ）（Ａｓｐ21）；
（ｃ）（Ａｉｂ8），（Ｄ−Ａｌａ8）及び（Ａｓｐ9）のうち少なくとも１つ；及び
（ｄ）（Ｔｙｒ7），（Ｎ−アシル−Ｈｉｓ7），（Ｎ−アルキル−Ｈｉｓ7），（Ｎ−アシル−Ｄ−Ｈｉｓ7）又は（Ｎ−アルキル−Ｄ−Ｈｉｓ7）｝；
（ｖ）式（Ｉ）の化合物は群（ａ）〜（ｄ）に列挙した置換基のいずれか２つの組み合わせではなく；及び
（ｖｉ）式（Ｉ）の化合物は（Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ8）ｈＧＬＰ−１（８−３６又は−３７）、（Ｇｌｕ15）ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）、（Ａｓｐ21）ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）又は（Ｐｈｅ31）ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）ではない］、又はその製剤的に許容される塩に向けられている。
【００１３】
直前に述べた化合物群の好ましい化合物の群は、Ａ11がＴｈｒであり；Ａ13がＴｈｒであり；Ａ15がＡｓｐであり；Ａ17がＳｅｒであり；Ａ18がＳｅｒ又はＬｙｓであり；Ａ21がＧｌｕであり；Ａ23がＧｌｎ又はＧｌｕであり；Ａ27がＧｌｕ、Ｌｅｕ、Ａｉｂ又はＬｙｓであり；及びＡ31がＴｒｐ、Ｐｈｅ又はβ−Ｎａｌである化合物、又はその製剤的に許容される塩である。
【００１４】
直前の化合物群の好ましい化合物の群は、Ａ9がＧｌｕ、Ｎ−Ｍｅ−Ｇｌｕ又はＮ−Ｍｅ−Ａｓｐであり；Ａ12がＰｈｅ、Ａｃｃ、β−Ｎａｌ又はＡｉｃであり；Ａ16がＶａｌ、Ａｃｃ又はＡｉｂであり；Ａ19がＴｙｒ又はβ−Ｎａｌであり；Ａ20がＬｅｕ、Ａｃｃ又はＣｈａであり；Ａ24がＡｌａ、Ａｉｂ又はＡｃｃであり；Ａ25がＡｌａ、Ａｉｂ、Ａｃｃ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）又はＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）e−Ｘ3）−Ｃ（Ｏ）であり；Ａ28がＰｈｅ又はβ−Ｎａｌであり；Ａ29がＩｌｅ又はＡｃｃであり；Ａ30がＡｌａ又はＡｉｂであり；Ａ32がＬｅｕ、Ａｃｃ又はＣｈａであり；及びＡ33がＶａｌ、Ｌｙｓ又はＡｃｃである化合物、又はその製剤的に許容される塩である。
【００１５】
直前の化合物群の好ましい化合物の群は、Ａ8がＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ａｌａ又はＮ−Ｍｅ−Ｇｌｙであり；Ａ10がＧｌｙであり；Ａ12がＰｈｅ、β−Ｎａｌ、Ａ６ｃ又はＡ５ｃであり；Ａ16がＶａｌ、Ａ６ｃ又はＡ５ｃであり；Ａ20がＬｅｕ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ又はＣｈａであり；Ａ22がＧｌｙ、β−Ａｌａ、Ｇｌｕ又はＡｉｂであり；Ａ24がＡｌａ又はＡｉｂであり；Ａ29がＩｌｅ、Ａ６ｃ又はＡ５ｃであり；Ａ32がＬｅｕ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ又はＣｈａであり；Ａ33がＶａｌ、Ｌｙｓ、Ａ６ｃ又はＡ５ｃであり；Ａ35がＡｉｂ、β−Ａｌａ、Ａｄｏ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ、Ｄ−Ａｒｇ又はＧｌｙであり；及びＡ37がＧｌｙ、Ａｉｂ、β−Ａｌａ、Ａｄｏ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｖａ、Ａｓｐ、Ａｕｎ、Ｄ−Ａｓｐ、Ｄ−Ａｒｇ、Ａｅｃ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）であるか又は削除されている化合物、又はその製剤的に許容される塩である。
【００１６】
直前の化合物群の好ましい化合物の群は、Ｘ4がそれぞれの出現につき−Ｃ（Ｏ）−であり；及びＲ1がＯＨ又はＮＨ2である化合物、又はその製剤的に許容される塩である。
【００１７】
直前の化合物群の好ましい化合物の群又はその製剤的に許容される塩では、Ｒ2がＨであり、Ｒ3が（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、（Ｃ2−Ｃ30）アルケニル、（Ｃ1−Ｃ30）アシル、（Ｃ1−Ｃ30）アルキルスルホニル、
【００１８】
【化３６】
0003702181.tif 000009
【００１９】
【化３７】
0003702181.tif 000010
又は
【００２０】
【化３８】
0003702181.tif 000011
である。
【００２１】
式（Ｉ）の好ましい化合物は、Ａ8がＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ａｌａ又はＮ−Ｍｅ−Ｇｌｙであり；Ａ10がＧｌｙであり；Ａ12がＰｈｅ、β−Ｎａｌ、Ａ６ｃ又はＡ５ｃであり；Ａ16がＶａｌ、Ａ６ｃ又はＡ５ｃであり；Ａ20がＬｅｕ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ又はＣｈａであり；Ａ22がＧｌｙ、β−Ａｌａ、Ｇｌｕ又はＡｉｂであり；Ａ24がＡｌａ又はＡｉｂであり；Ａ29がＩｌｅ、Ａ６ｃ又はＡ５ｃであり；Ａ32がＬｅｕ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ又はＣｈａであり；Ａ33がＶａｌ、Ｌｙｓ、Ａ６ｃ又はＡ５ｃであり；Ａ35がＡｉｂ、β−Ａｌａ、Ａｄｏ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ、Ｄ−Ａｒｇ又はＧｌｙであり；及びＡ37がＧｌｙ、Ａｉｂ、β−Ａｌａ、Ａｄｏ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｖａ、Ａｓｐ、Ａｕｎ、Ｄ−Ａｓｐ、Ｄ−Ａｒｇ、Ａｅｃ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）であるか又は削除されていて；Ｘ4がそれぞれの出現につき−Ｃ（Ｏ）−であり；ｅがそれぞれの出現につき独立して１又は２であり；Ｒ1がＯＨ又はＮＨ2であり；Ｒ10が（Ｃ1−Ｃ30）アシル、（Ｃ1−Ｃ30）アルキルスルホニル、又は
【００２２】
【化３９】
0003702181.tif 000012
であり、及びＲ11がＨである化合物、又はその製剤的に許容される塩である。
【００２３】
直前の化合物群でより好ましいのは、Ｒ10が（Ｃ4−Ｃ20）アシル、（Ｃ4−Ｃ20）アルキルスルホニル又は
【００２４】
【化４０】
0003702181.tif 000013
である化合物、又はその製剤的に許容される塩である。
【００２５】
式（Ｉ）のより好ましい化合物は、以下の式である前記化合物、又はその製剤的に許容される塩である：
（Ａｉｂ8,35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、
（（Ｎα−ＨＥＰＥＳ−Ｈｉｓ）7，Ａｉｂ8,35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、
（（Ｎα−ＨＥＰＡ−Ｈｉｓ）7，Ａｉｂ8,35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、
（Ａｉｂ8，β−Ａｌａ35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、
（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、
（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26，Ｌｙｓ34（Ｎε−テトラデカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、
（Ａｉｂ8,35,37，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ38（Ｎε−テトラデカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３８）ＮＨ2、
（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−デカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、
（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−ドデカンスルホニル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、
（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−２−（４−テトラデシル−１−ピペラジン）−アセチル）））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、
（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ａｓｐ36（１−（４−テトラデシル−ピペラジン）））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、
（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ａｓｐ36（１−テトラデシルアミノ））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、
（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル），β−Ａｌａ37）ｈＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨ又は
（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＯＨ。
【００２６】
直前の化合物群の中でより好ましいのは以下の式である化合物、又はその製剤的に許容される塩である：
（Ａｉｂ8,35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、
（Ａｉｂ8，β−Ａｌａ35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、
（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26，Ｌｙｓ34（Ｎε−テトラデカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、
（Ａｉｂ8,35,37，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ38（Ｎε−テトラデカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３８）ＮＨ2、
（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−デカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2、又は
（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル），β−Ａｌａ37）ｈＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨ。
【００２７】
式（Ｉ）のもう１つのより好ましい化合物は、以下の式である前記化合物であるか、又はその製剤的に許容される塩である：
【００２８】
【化４１】
0003702181.tif 000014
【００２９】
【化４２】
0003702181.tif 000015
式（Ｉ）のもう１つのより好ましい化合物は、以下にある本発明の開示の実施例部分に特に列挙されている化合物群のそれぞれであるか、又はその製剤的に許容される塩である。
【００３０】
もう１つの側面では、本発明は、上記に定義したような式（Ｉ）の化合物又はその製剤的に許容される塩の有効量と製剤的に許容される担体又は希釈剤を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００３１】
さらにもう１つの側面では、本発明は、ＧＬＰ−１受容体からの作動効果をそれが必要とされる被検者において誘導する、上記に定義したような式（Ｉ）の化合物又はその製剤的に許容される塩の有効量を前記被検者へ投与することを含む方法を提供する。
【００３２】
さらなる側面では、本発明は、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、肥満、グルカゴノーマ、気道の分泌障害、代謝性障害、関節炎、骨粗鬆症、中枢神経系疾患、再狭窄、神経変性疾患、腎不全、うっ血性心不全、ネフローゼ症候群、肝硬変、肺浮腫、高血圧、及び食物摂取の低減が所望される障害からなる群から選択される疾患を治療が必要とされる被検者において治療する、上記に定義したような式（Ｉ）の化合物又はその製剤的に許容される塩の有効量を前記被検者へ投与することを含む方法を提供する。直前の方法の好ましい方法では、治療される疾患はＩ型糖尿病又はＩＩ型糖尿病である。
【００３３】
Ｎ末端アミノ酸を例外とし、本明細書に開示されるアミノ酸のあらゆる略号（例、Ａｌａ）は、−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ）−ＣＯ−の構造を表し、ここでＲはアミノ酸の側鎖である（例えば、ＡｌａではＣＨ3）。Ｎ末端アミノ酸では、略号は（Ｒ2Ｒ3）−Ｎ−ＣＨ（Ｒ）−ＣＯ−の構造を表し、ここでＲはアミノ酸の側鎖であり、Ｒ2及びＲ3は上記の定義通りであるが、Ａ7がＵｒａ、Ｐａａ又はＰｔａである場合、Ｕｒａ、Ｐａａ及びＰｔａがここではｄｅｓ−アミノ酸と考えられるので、Ｒ2とＲ3は存在しない。Ａｍｐ、β−Ｎａｌ、Ｎｌｅ、Ｃｈａ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ及びＡｉｂは、それぞれ、以下のα−アミノ酸の略号である：４−アミノ−フェニルアラニン、β−（２−ナフチル）アラニン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、β−（３−ピリジニル）アラニン、β−（４−ピリジニル）アラニン及びα−アミノイソ酪酸。他のアミノ酸の定義は以下の通りである：Ｕｒａはウロカン酸；Ｐｔａは（４−ピリジルチオ）酢酸；Ｐａａはｔｒａｎｓ−３−（３−ピリジル）アクリル酸；Ｔｍａ−ＨｉｓはＮ，Ｎ−テトラメチルアミジノ−ヒスチジン；Ｎ−Ｍｅ−ＡｌａはＮ−メチル−アラニン；Ｎ−Ｍｅ−ＧｌｙはＮ−メチル−グリシン；Ｎ−Ｍｅ−ＧｌｕはＮ−メチル−グルタミン酸；Ｔｌｅはｔｅｒｔ−ブチルグリシン；Ａｂｕはα−アミノ酪酸；Ｔｂａはｔｅｒｔ−ブチルアラニン；Ｏｒｎはオルニチン；Ａｉｂはα−アミノイソ酪酸；β−Ａｌａはβ−アラニン；Ｇａｂａはγ−アミノ酪酸；Ａｖａは５−アミノ吉草酸；Ａｄｏは１２−アミノドデカン酸；Ａｉｃは２−アミノインダン−２−カルボン酸；Ａｕｎは１１−アミノウンデカン酸；及びＡｅｃは、以下の構造式
【００３４】
【化４３】
0003702181.tif 000016
により表される、４−（２−アミノエチル）−１−カルボキシメチルピペラジンである。
【００３５】
Ａｃｃが意味するものは、１−アミノ−１−シクロプロパンカルボン酸（Ａ３ｃ）；１−アミノ−１−シクロブタンカルボン酸（Ａ４ｃ）；１−アミノ−１−シクロペンタンカルボン酸（Ａ５ｃ）；１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸（Ａ６ｃ）；１−アミノ−１−シクロヘプタンカルボン酸（Ａ７ｃ）；１−アミノ−１−シクロオクタンカルボン酸（Ａ８ｃ）；及び１−アミノ−１−シクロノナンカルボン酸（Ａ９ｃ）の群から選択されるアミノ酸である。上記の式では、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシフェニルアルキル、及びヒドロキシナフチルアルキルは、１〜４個のヒドロキシ置換基を含有し得る。ＣＯＸ5は−Ｃ＝Ｏ・Ｘ5を表す。−Ｃ＝Ｏ・Ｘ5の例には、限定しないが、アセチル及びフェニルプロピオニルが含まれる。
【００３６】
Ｌｙｓ（Ｎε−アルカノイル）が意味するものは以下の構造により表される：
【００３７】
【化４４】
0003702181.tif 000017
Ｌｙｓ（Ｎε−アルキルスルホニル）が意味するものは以下の構造により表される：
【００３８】
【化４５】
0003702181.tif 000018
Ｌｙｓ（Ｎε−（２−（４−アルキル−１−ピペラジン）−アセチル））が意味するものは以下の構造により表される：
【００３９】
【化４６】
0003702181.tif 000019
Ａｓｐ（１−（４−アルキル−ピペラジン））が意味するものは以下の構造により表される：
【００４０】
【化４７】
0003702181.tif 000020
Ａｓｐ（１−アルキルアミノ）が意味するものは以下の構造により表される：
【００４１】
【化４８】
0003702181.tif 000021
Ｌｙｓ（Ｎε−Ａｅｃ−アルカノイル）が意味するものは以下の構造により表される：
【００４２】
【化４９】
0003702181.tif 000022
上述した諸構造におけるｎの変数は１〜３０である。Ｌｙｓ（Ｎε−ａｃｅ−アルカノイル）が意味するものは以下の構造により表される：
【００４３】
【化５０】
0003702181.tif 000023
本明細書に使用される他の略号の完全な名称は以下の通りである：Ｂｏｃ＝ｔ−ブチルオキシカルボニル、ＨＦ＝フッ化水素、Ｆｍ＝ホルミル、Ｘａｎ＝キサンチル、Ｂｚｌ＝ベンジル、Ｔｏｓ＝トシル、ＤＮＰ＝２，４−ジニトロフェニル、ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド、ＤＣＭ＝ジクロロメタン、ＨＢＴＵ＝２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロリン酸、ＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン、ＨＯＡｃ＝酢酸、ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸、２ＣｌＺ＝２−クロロベンジルオキシカルボニル、２ＢｒＺ＝２−ブロモベンジルオキシカルボニル、ＯｃＨｅｘ＝Ｏ−シクロヘキシル、Ｆｍｏｃ＝９−フルオレニルメトキシカルボニル、ＨＯＢｔ＝Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、及びＰＡＭ樹脂＝４−ヒドロキシメチルフェニルアセトアミドメチル樹脂。
【００４４】
「ハロ」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを含む。
「（Ｃ1−Ｃ30）炭化水素部分」という用語は、アルキル、アルケニル及びアルキニルを含み、アルケニル及びアルキニルの場合はＣ2−Ｃ30である。
【００４５】
本発明のペプチドはまた、本明細書では別の形式により、天然の配列から置換されたアミノ酸を最初の括弧のなかに配置して、例えば（Ａ５ｃ8）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2と示される（例えば、ｈＧＬＰ−１のＡｌａ8に対するＡ５ｃ8）。略号ＧＬＰ−１はグルカゴン様ペプチド−１を意味する；ｈＧＬＰ−１はヒトグルカゴン様ペプチド−１を意味する。括弧内の数字はこのペプチドに存在するアミノ酸の位数を意味する（例えば、ｈＧＬＰ−１（７−３６）はヒトＧＬＰ−１のペプチド配列のアミノ酸７位〜３６位である。ｈＧＬＰ−１（７−３７）の配列が Mojsov, S., Int. J. Peptide Protein Res., 40, 1992, pp. 333-342 に挙げられている。ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2における「ＮＨ2」の明示はこのペプチドのＣ末端がアミド化されていることを示す。ｈＧＬＰ−１（７−３６）はＣ末端がフリーの酸であることを示す。ｈＧＬＰ−１（７−３８）では、３７位及び３８位の残基は、それぞれ、Ｇｌｙ及びＡｒｇである。
【００４６】
発明の詳細な説明
本発明のペプチドは標準的な固相ペプチド合成により製造し得る。例えば、Stewart, J. M., et al., Solid Phase Synthesis (Pierce Chemical Co., 2d ed. 1984) を参照のこと。上記一般式の置換基Ｒ2及びＲ3は、当技術分野で知られている標準法により、Ｎ末端アミノ酸のフリーアミンに付けることが可能である。例えば、アルキル基、例えば（Ｃ1−Ｃ30）アルキルは、還元的アルキル化を使用して付けることができる。ヒドロキシアルキル基、例えば（Ｃ1−Ｃ30）ヒドロキシアルキルも、フリーのヒドロキシル基がｔ−ブチルエステルで保護されている還元的アルキル化を使用して付けることができる。アシル基、例えばＣＯＥ1は、処理済の樹脂を３モル当量のフリー酸及びジイソプロピルカルボジイミドとともに塩化メチレンにおいて１時間混合することにより、フリーの酸、例えばＥ1ＣＯＯＨをＮ末端アミノ酸のフリーアミンへカップリングさせることによって付けることができる。フリーの酸がフリーのヒドロキシ基を含有する場合（例えば、ｐ−ヒドロキシフェニルプロピオン酸）、このカップリングはさらに３モル当量のＨＯＢＴとともに実施されるべきである。
【００４７】
Ｒ1がＮＨ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＮＨ2（即ち、Ｚ0＝ＣＯＮＨ2）である場合、ペプチドの合成はＢｏｃ−ＨＮ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨをＭＢＨＡ樹脂へカップルさせることから始まる。Ｒ1がＮＨ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨ（即ち、Ｚ0＝ＣＯＯＨ）である場合、ペプチドの合成はＢｏｃ−ＨＮ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨをＰＡＭ樹脂へカップルさせることから始まる。この特定の工程では、４モル当量のＢｏｃ−ＨＮ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨ、ＨＢＴＵ及びＨＯＢｔと１０モル当量のＤＩＥＡが使用される。カップリング時間は約８時間である。
【００４８】
保護化アミノ酸、１−（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−アミノ）−１−シクロヘキサン−カルボン酸（Ｂｏｃ−Ａ６ｃ−ＯＨ）を以下のように合成した。１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸（Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ，Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ピッツバーグ、ＰＡ）１９．１ｇ（０．１３３モル）をジオキサン２００ｍｌ及び水１００ｍｌに溶かした。それへ２Ｎ  ＮａＯＨ  ６７ｍｌを加えた。この溶液を氷水浴に冷やした。ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート３２．０ｇ（０．１４７モル）をこの溶液へ加えた。この反応混合液を室温で一晩撹拌した。次いで、減圧下でジオキサンを除去した。この残存した水溶液へ酢酸エチル２００ｍｌを加えた。この混合液を氷水浴に冷やした。４Ｎ  ＨＣｌを加えることによって、水層のｐＨを約３へ調整した。有機層を分離した。水層を酢酸エチル（１ｘ１００ｍｌ）で抽出した。２つの有機層を一緒にし、水（２ｘ１５０ｍｌ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮乾固させた。酢酸エチル／ヘキサンにおいて残渣を再結晶させた。純生成物９．２ｇを得た。収率２９％。
【００４９】
Ｂｏｃ−Ａ５ｃ−ＯＨはＢｏｃ−Ａ６ｃ−ＯＨに類似したやり方で合成した。他の保護化Ａｃｃアミノ酸も、本明細書の教示により可能なように、類似したやり方で当業者により製造し得る。
【００５０】
Ａ５ｃ、Ａ６ｃ及び／又はＡｉｂを含有する本発明のＧＬＰ−１類似体の合成においては、上記の残基群とその直後に述べた残基につき、カップリング時間は２時間である。（Ｔｍａ−Ｈｉｓ7）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2の合成については、最終のカップリング反応において、ＨＢＴＵ（２ミリモル）及びＤＩＥＡ（１．０ｍｌ）／ＤＭＦ  ４ｍｌを使用して、ペプチド−樹脂のＮ末端フリーアミンと反応させるが、このカップリング時間は約２時間である。
【００５１】
上記一般式の置換基Ｒ2及びＲ3は、当技術分野で知られている標準法により、Ｎ末端アミノ酸のフリーアミンに付けることが可能である。例えば、アルキル基、例えば（Ｃ1−Ｃ30）アルキルは、還元的アルキル化を使用して付けることができる。ヒドロキシアルキル基、例えば（Ｃ1−Ｃ30）ヒドロキシアルキルも、フリーのヒドロキシル基がｔ−ブチルエステルで保護されている還元的アルキル化を使用して付けることができる。アシル基、例えばＣＯＸ1は、処理済の樹脂を３モル当量のフリー酸及びジイソプロピルカルボジイミドとともに塩化メチレンにおいて１時間混合することにより、フリーの酸、例えばＸ1ＣＯＯＨをＮ末端アミノ酸のフリーアミンへカップリングさせることによって付けることができる。フリーの酸がフリーのヒドロキシ基を含有する場合（例えば、ｐ−ヒドロキシフェニルプロピオン酸）、このカップリングはさらに３モル当量のＨＯＢＴとともに実施されるべきである。
【００５２】
本発明の化合物は、以下の方法により、ＧＬＰ−１受容体に結合する化合物としての活性について試験し得る。
【００５３】
細胞培養：
ＧＬＰ−１受容体を発現する、ＲＩＮ  ５Ｆ  ラットインスリノーマ細胞（ＡＴＣＣ−＃  ＣＲＬ−２０５８，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，マナッサス、ＶＡ）を、１０％胎仔血清含有ダルベッコ改良イーグル培地（ＤＭＥＭ）で培養し、５％  ＣＯ2／９５％空気の加湿気体において約３７℃に維持した。
【００５４】
放射リガンド結合：
放射リガンド結合試験のために、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  Ｐｏｌｙｔｒｏｎ（ウェストベリー、ＮＹ）（目盛６にセット、１５秒）を用いて、氷冷５０ｍＭ  トリス−ＨＣｌ  ２０ｍｌにおいてＲＩＮ細胞を均質化することにより膜を調製した。このホモジェネートを遠心分離（３９，０００ｇ／１０分）により２回洗浄し、最終ペレットを、２．５ｍＭ  ＭｇＣｌ2，バシトラシン（シグマケミカル、セントルイス、ＭＯ）０．１ｍｇ／ｍｌ、及び０．１％  ＢＳＡを含有する５０ｍＭ  トリス−ＨＣｌに再懸濁させた。アッセイでは、０．０５ｎＭ（125Ｉ）ＧＬＰ−１（７−３６）（〜２２００Ｃｉ／ミリモル、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ、ボストン、ＭＡ）とともに、非標識の競合試験ペプチド０．０５ｍｌとともにか、又は含まずに、アリコート（０．４ｍｌ）をインキュベートした。１００分のインキュベーション（２５℃）後に、０．５％ポリエチレンイミンに前もって浸漬しておいたＧＦ／Ｃフィルター（Ｂｒａｎｄｅｌ，ゲイサースブルグ、ＭＤ）を通す高速濾過により、結合した（125Ｉ）ＧＬＰ−１（７−３６）をフリーのものから分離した。次いで、氷冷した５０ｍＭトリス−ＨＣｌのアリコート５ｍｌを用いてこのフィルターを３回洗浄し、フィルター上にトラップされた結合放射活性をガンマ分析計（Ｗａｌｌａｃ  ＬＫＢ，ゲイサースブルグ、ＭＤ）により計数した。［全（125Ｉ）ＧＬＰ−１（７−３６）結合］から［ＧＬＰ−１（７−３６）（Ｂａｃｈｅｍ，トーランス、ＣＡ）１０００ｎＭ存在下での結合］を差引いたものを特異的な結合と定義した。
【００５５】
本発明のペプチドは製剤的に許容される塩の形態で提供され得る。そのような塩の例には、限定しないが、有機酸（例、酢酸、乳酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸又はパモン酸）、無機酸（例、塩酸、硫酸、又はリン酸）及びポリマーの酸（例、タンニン酸、カルボキシメチルセルロース、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、又はポリ乳酸−グリコール酸のコポリマー）とともに形成されるものが含まれる。本発明のペプチドの塩を製造する典型的な方法は当技術分野でよく知られていて、塩交換の標準法により達成し得る。従って、本発明のペプチドのＴＦＡ塩（ＴＦＡ塩は、緩衝溶液含有ＴＦＡで溶出させる調製用ＨＰＬＣを使用することによってペプチドの精製から生じる）は、少量の０．２５Ｎ酢酸水溶液にこのペプチドを溶かすことによって酢酸塩のような別の塩へ変換することができる。生成した溶液を半調製用ＨＰＬＣカラム（Ｚｏｒｂａｘ，３００ＳＢ，Ｃ−８）にかける。このカラムを（１）０．１Ｎ酢酸アンモニウム水溶液、０．５時間（２）０．２５Ｎ酢酸水溶液、０．５時間、及び（３）線形勾配（２０％〜１００％のＢ溶液、３０分）、流速４ｍｌ／分（Ａ溶液：０．２５Ｎ酢酸水溶液；Ｂ溶液：０．２５Ｎ酢酸のアセトニトリル／水、８０：２０溶液）で溶出させる。ペプチドを含有する分画を回収し、凍結乾燥させる。
【００５６】
当業者によく知られているように、ＧＬＰ−１の既知の使用と潜在的な使用は様々で、多岐に渡っている（Todd, J. F. et al., Clinical Science, 1998, 95, pp. 325-329; 及び Todd, J. F. et al., European Journal of Clinical Investigation, 1997, 27 pp. 533-536 を参照のこと）。従って、作動効果を誘導する目的のために本発明の化合物を投与すると、ＧＬＰ−１そのものと同じ効果及び使用を有し得る。こういったＧＬＰ−１の様々な使用は以下のように要約し得る：Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、肥満、グルカゴノーマ、気道の分泌障害、代謝性障害、関節炎、骨粗鬆症、中枢神経系疾患、再狭窄、神経変性疾患、腎不全、うっ血性心不全、ネフローゼ症候群、肝硬変、肺浮腫、高血圧、及び食物摂取の低減が所望される障害の治療。被検者から拮抗効果を誘導する本発明のＧＬＰ−１類似体は、以下を治療するために使用し得る：低血糖症、及び胃切除又は小腸切除に関連した吸収不全症候群。
【００５７】
従って、本発明は、製剤的に許容される担体とともに有効成分として式（Ｉ）の化合物群の少なくとも１つを含んでなる医薬組成物を、その範囲内に包含する。
【００５８】
本発明の組成物にある有効成分の用量は変化し得るが、有効成分の量は好適な剤形が得られるようなものであることが必要である。選択される投与量は、所望される治療効果、投与経路、及び治療期間に依存する。一般に、本発明の諸活性に有効な投与量は、１ｘ１０-7〜２００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは１ｘ１０-4〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にあり、これは単回用量として投与し得るか又は数回投与へ分割し得る。
【００５９】
本発明の化合物は、経口、腸管外（例、筋肉内、腹腔内、静脈内又は皮下注射、又は埋め込み）、鼻、膣、直腸、舌下又は局所の投与経路により投与され、製剤的に許容される担体と製剤化されてそれぞれの投与経路に適した剤形を提供し得る。
【００６０】
経口投与用の固体剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉末及び顆粒剤が含まれる。そのような固体剤形では、活性化合物が、スクロース、ラクトース又はデンプンのような少なくとも１種の製剤的に許容される不活性な担体とともに混和される。そのような剤形は、普通の方法として、そのような不活性希釈剤以外の追加物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤も含み得る。カプセル剤、錠剤及び丸剤の場合、剤形は緩衝剤を含む場合がある。錠剤と丸剤は、さらに腸溶コーティング剤とともに製造し得る。
【００６１】
経口投与用の液体剤形には、当技術分野で通常使用される水のような不活性希釈剤を含有する、製剤的に許容される乳液、溶液、懸濁液、シロップ、エリキシル液が含まれる。そのような不活性希釈剤とは別に、組成物は、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味剤、フレーバー及び芳香剤のようなアジュバントを包含し得る。
【００６２】
本発明による腸管外投与の調製物には、滅菌の水溶液又は非水溶液、懸濁液又は乳液が含まれる。非水性の溶媒又は担体の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油やトウモロコシ油のような植物油、ゼラチン、及びオレイン酸エチルのような注射可能な有機エステルである。そのような剤形はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤のようなアジュバントを含有し得る。それらは、例えば、細菌保持フィルターを通した濾過、滅菌剤を組成物へ取込むこと、組成物に照射すること、又は組成物を加熱することによって滅菌し得る。それらはまた、使用直前に滅菌水か又は他の無菌媒体に溶かし得る無菌の固体組成物の形態でも製造し得る。
【００６３】
直腸又は膣に投与する組成物は、好ましくは、有効成分に加えて、ココア脂や坐剤用ワックスのような賦形剤を含有し得る坐剤である。
鼻内又は舌下に投与する組成物もまた当技術分野でよく知られている標準的な賦形剤とともに製造される。
【００６４】
さらに、本発明の化合物は、以下の特許及び特許出願に記載されたような徐放性組成物において投与し得る。米国特許第５，６７２，６５９号は、生物活性剤及びポリエステルを含んでなる徐放性組成物を教示する。米国特許第５，５９５，７６０号は、ゲル化し得る形態に生物活性剤を含んでなる徐放性組成物を教示する。１９９７年９月９日に出願された米国特許出願第０８／９２９，３６３号は、生物活性剤及びキトサンを含んでなる高分子性の徐放性組成物を教示する。１９９６年１１月１日に出願された米国特許出願第０８／７４０，７７８号は、生物活性剤及びシクロデキストリンを含んでなる徐放性組成物を教示する。１９９８年１月２９日に出願された米国特許出願第０９／０１５，３９４号は、生物活性剤の吸収可能な徐放性組成物を教示する。１９９８年７月２３日に出願された米国特許出願第０９／１２１，６５３号は、ペプチドのような治療薬を含んでなるミクロ粒子を水中油型の方法で製造する方法を教示する。１９９８年８月１０日に出願された米国特許出願第０９／１３１，４７２号は、ペプチドのような治療薬とリン酸化したポリマーを含んでなる複合体を教示する。１９９８年１１月２日に出願された米国特許出願第０９／１８４，４１３号は、ペプチドのような治療薬と重合化しないラクトンを担うポリマーを含んでなる複合体を教示する。上述の特許及び出願は参照により本明細書に組込まれている。
【００６５】
特に断らなければ、本明細書に使用されるあらゆる技術及び科学の用語は、本発明が属する当技術分野の当業者により普通に理解されるのと同じ意味を有する。また、上記に述べたあらゆる出版物、特許出願、特許及び他の文献は、参照により本明細書に組込まれている。
【００６６】
以下の実施例では本発明のペプチドを製造する合成法について説明するが、この方法は当業者のよく知るところである。当業者に知られている他の方法もある。この実施例は説明のために提供されるのであって、本発明の範囲を決して制限するためのものではない。
【００６７】
Ｂｏｃ−β−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＨ及びＢｏｃ−Ｄ−Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ）は、Ｎｏｖａ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，サンディエゴ、カリフォルニアから購入した。Ｂｏｃ−Ａｕｎ−ＯＨは、Ｂａｃｈｅｍ，Ｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｒｕｓｓｉａ，ＰＡから購入した。Ｂｏｃ−Ａｖａ−ＯＨ及びＢｏｃ−Ａｄｏ−ＯＨは、Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｗｏｏｄ  Ｄａｌｅ，ＩＬから購入した。Ｂｏｃ−Ｎａｌ−ＯＨは、Ｓｙｎｔｈｅｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，アルバニー、ＯＲから購入した。
【００６８】
【実施例】
実施例１：（Ａｉｂ8,35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2
加速化されたＢｏｃ−ケミストリー固相ペプチド合成を実行するように改良されたＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（フォスターシティ、ＣＡ）モデル  ４３０Ａペプチド合成機において表題ペプチドを合成した。Schnolzer, et al., Int. J. Peptide Protein Res., 90: 180 (1992) を参照のこと。０．９１ミリモル／ｇの置換基を有する４−メチルベンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）樹脂（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ，ベルモント、ＣＡ）を使用した。以下の側鎖保護を有するＢｏｃアミノ酸（Ｂａｃｈｅｍ，ＣＡ，トーランス、ＣＡ；Ｎｏｖａ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ラジョラ、ＣＡ）を使用した：Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（２ＢｒＺ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（２ＣｌＺ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｃＨｅｘ）−ＯＨ及びＢｏｃ−Ｔｒｐ（Ｆｍ）−ＯＨ。合成は０．２０ミリモルのスケールで実行した。Ｂｏｃ基は、１００％  ＴＦＡ、２ｘ１分の処理で除去した。Ｂｏｃアミノ酸（２．５ミリモル）をＨＢＴＵ（２．０ミリモル）及びＤＩＥＡ（１．０ｍＬ）／ＤＭＦ  ４ｍＬでプレ活性化し、ペプチド−樹脂ＴＦＡ塩の先行中和をせずにカップルさせた。カップリング時間は５分であったが、Ｂｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨ残基と以下の残基、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（２ＣｌＺ）−ＯＨ及びＢｏｃ−Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−ＯＨではカップリング時間を２時間とした。
【００６９】
ペプチド鎖の組立て終了時に、２０％メルカプトエタノール／１０％  ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で２ｘ３０分間樹脂を処理し、Ｈｉｓ側鎖上のＤＮＰ基を除去した。次いで、１００％  ＴＦＡ、２ｘ２分の処理によりＮ末端Ｂｏｃ基を除去した。ペプチド−樹脂を１０％  ＤＩＥＡ／ＤＭＦで中和（１ｘ１分）した後に、１５％エタノールアミン／１５％水／７０％  ＤＭＦの溶液で２ｘ３０分処理することにより、Ｔｒｐの側鎖上のホルミル基を除去した。このペプチド−樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄し、減圧下で乾燥させた。アニソール１ｍＬ及びジチオスレイトール（２４ｍｇ）を含有するＨＦ  １０ｍＬにおいて、０℃で７５分間このペプチド−樹脂を撹拌することによって、最後の開裂を実施した。窒素流によりＨＦを除去した。残渣をエーテル（６ｘ１０ｍＬ）で洗浄し、４Ｎ  ＨＯＡｃ（６ｘ１０ｍＬ）で抽出した。
【００７０】
水性抽出液中のペプチド混合物を、逆相ＶＹＤＡＣ（登録商標）Ｃ18カラム（Ｎｅｓｔ  Ｇｒｏｕｐ，Ｓｏｕｔｈｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）を使用する調製用逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で精製した。流速１０ｍＬ／分の線形勾配液（２０％〜５０％の溶液Ｂ、１０５分）を用いてカラムを溶出させた（溶液Ａ＝０．１％  ＴＦＡを含有する水；溶液Ｂ＝０．１％  ＴＦＡ含有アセトニトリル）。分画を回収し、分析用ＨＰＬＣで検査した。純生成物を含有する分画を一緒にし、凍結乾燥させて、白色の固形物１３５ｍｇを得た。分析用ＨＰＬＣ分析に基づけば、純度は９８．６％であった。エレクトロ−スプレイ質量分析（ＭＳ（ＥＳ））は、分子量３３３９．７を示した（計算の分子量：３３３９．７に一致した）。
【００７１】
実施例２：（（Ｎα−ＨＥＰＥＳ−Ｈｉｓ）7，Ａｉｂ8,35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2
表題化合物（ＨＥＰＥＳは（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジン−エタンスルホン酸）である）は、以下のように合成し得る：実施例１の方法によりＭＢＨＡ樹脂（０．２０ミリモル）上でペプチド（Ａｉｂ8,35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2を組立てた後に、このペプチド−樹脂を１００％  ＴＦＡ（２ｘ２分）で処理し、ＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄する。次いで、１０％  ＤＩＥＡ／ＤＭＦ、２分間でこの樹脂を中和する。ＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄した後、２−クロロ−１−エタンスルホニルクロリド（０．２３ミリモル）及びＤＩＥＡ（０．７ミリモル）／ＤＭＦでこの樹脂を約１時間処理する。ＤＭＦ及びＤＣＭで樹脂を洗浄し、２−ヒドロキシエチルピペラジン１．２ミリモルで約２時間処理する。この樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄し、種々の試薬（（１）２０％メルカプトエタノール／１０％  ＤＩＥＡ／ＤＭＦ、及び（２）１５％エタノールアミン／１５％水／７０％  ＤＭＦ）で処理し、上記のように、ペプチドの樹脂からの最終的なＨＦ開裂の前に、Ｈｉｓ側鎖上のＤＮＰ基とＴｒｐ側鎖上のホルミル基を除去する。
【００７２】
実施例３：（（Ｎα−ＨＥＰＡ−Ｈｉｓ）7，Ａｉｂ8,35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2
表題化合物（ＨＥＰＡは（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジン−アセチル）である）は、（（Ｎα−ＨＥＰＥＳ−Ｈｉｓ）7，Ａｉｂ8,35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2を合成する実施例２に記載の方法により実質的に合成し得る。ただし、２−クロロ−１−エタンスルホニルクロリドの代わりに２−ブロモ無水酢酸を使用する。
【００７３】
実施例４：（Ａｉｂ8，β−Ａｌａ35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2
表題化合物は、適切な保護化アミノ酸を使用して、実質的に実施例１に記載の方法により合成した。ＭＳ（ＥＳ）は、分子量３３２５．７を示した（計算分子量＝３３２５．８）。純度＝９９％、収量＝８５ｍｇ。
【００７４】
本発明の他の化合物の合成は、上記実施例１の（Ａｉｂ8,35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2の合成についての記載と実質的に同じやり方で達成し得るが、所望のペプチドに応じて適切な保護化アミノ酸を使用する。
【００７５】
実施例５：（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2
使用するＢｏｃアミノ酸は、実施例１に記載した（Ａｉｂ8,35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2の合成の場合と同じであったが、この実施例ではＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨを使用した。最初のアミノ酸残基をシェーカー上で手動により樹脂へカップルさせた。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ  ２．５ミリモルを０．５Ｎ  ＨＢＴＵ／ＤＭＦ  ４ｍＬに溶かした。この溶液へＤＩＥＡ  １ｍＬを加えた。この混合液を約２分間振盪した。次いで、この溶液へＭＢＨＡ樹脂（置換基＝０．９１ミリモル／ｇ）０．２ミリモルを加えた。この混合液を約１時間振盪した。ＤＭＦでこの樹脂を洗浄し、１００％  ＴＦＡで２ｘ２分処理してＢｏｃ保護基を除去した。樹脂をＤＭＦで洗浄した。ミリスチン酸（２．５ミリモル）をＨＢＴＵ（２．０ミリモル）及びＤＩＥＡ（１．０ｍＬ）／ＤＭＦ  ４ｍＬで２分間プレ活性化し、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−樹脂にカップルさせた。カップリング時間は約１時間であった。ＤＭＦで樹脂を洗浄し、２５％ピペリジン／ＤＭＦで２ｘ２０分処理してＦｍｏｃ保護基を除去した。樹脂をＤＭＦで洗浄し、ペプチド合成機の反応槽へ移した。ペプチドの合成及び精製法についての以下の工程は、実施例１の（Ａｉｂ8,35）ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2の合成工程と同じであった。表題化合物４３．１ｍｇを白色の固形物として得た。分析用ＨＰＬＣ分析に基づけば、純度は９８％であった。エレクトロ−スプレイ質量分析は分子量：３５７７．７を示し、計算の分子量：３５７８．７に一致していた。
【００７６】
実施例６〜８
実施例６〜８は、適切な保護化アミノ酸と、実施例５で使用したミリスチン酸に代わる適切な酸を使用して、実質的に実施例５に記載の方法により合成した。
実施例６：（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26，Ｌｙｓ34（Ｎε−テトラデカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2；収量＝８９．６ｍｇ；ＭＳ（ＥＳ）＝３５７７．２，計算分子量＝３５７８．７；純度９６％。
実施例７：（Ａｉｂ8,35,37，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ38（Ｎε−テトラデカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３８）ＮＨ2；収量＝６３．３ｍｇ；ＭＳ（ＥＳ）＝３８１８．７，計算分子量＝３８１９．５；純度９６％。
実施例８：（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−デカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2；収量＝５７．４ｍｇ；ＭＳ（ＥＳ）＝３５２１．５，計算分子量＝３５２２．７；純度９８％；酸＝デカン酸
【００７７】
Ｌｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基を含有する本発明の他の化合物の合成は、実施例５：（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2について記載の方法に類似したやり方で実行し得る。このペプチドのＬｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基にＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨアミノ酸を使用し、Ｌｙｓの残基にはＢｏｃ−Ｌｙｓ（２ＣｌＺ）−ＯＨアミノ酸を使用する。Ｌｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基がＣ末端でない場合、Ｌｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基の直前にあるペプチドフラグメントがペプチド合成機の樹脂上で最初に組立てられる。所望のアルカノイルに対応する適切な酸（例、オクタン酸、デカン酸、ラウリル酸及びパルミチン酸）は、アルドリッチケミカル社、ミルウォーキー、ＷＩ，ＵＳＡから購入し得る。
【００７８】
実施例９：（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−ドデカンスルホニル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2
この合成に使用されるＢｏｃアミノ酸は実施例５の合成に使用されるものと同じである。最初のアミノ酸残基をシェーカー上で手動により樹脂へカップルさせる。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ  ２．５ミリモルを０．５Ｎ  ＨＢＴＵ／ＤＭＦ  ４ｍＬに溶かす。この溶液へＤＩＥＡ  １ｍＬを加える。この混合液を約２分間振盪する。次いで、この溶液へＭＢＨＡ樹脂（置換基＝０．９１ミリモル／ｇ）０．２ミリモルを加える。この混合液を約１時間振盪する。ＤＭＦで樹脂を洗浄し、１００％  ＴＦＡで２ｘ２分処理してＢｏｃ保護基を除去する。この樹脂をＤＭＦで洗浄し、それにＤＭＦ  ４ｍＬ及びＤＩＥＡ  １ｍＬに溶かした１−ドデカンスルホニルクロリドの０．２５ミリモルを加える。この混合液を約２時間振盪する。ＤＭＦで樹脂を洗浄し、２５％ピペリジン／ＤＭＦで２ｘ２０分処理してＦｍｏｃ保護基を除去する。樹脂をＤＭＦで洗浄し、ペプチド合成機の反応槽へ移す。ペプチドの残りの合成及び精製法は、実施例１に記載のものと同じである。
【００７９】
Ｌｙｓ（Ｎε−アルキルスルホニル）残基を含有する本発明の他の化合物の合成は、実施例９に記載の方法に類似したやり方で実行し得る。このペプチドのＬｙｓ（Ｎε−アルキルスルホニル）残基にＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨアミノ酸を使用し、Ｌｙｓの残基にはＢｏｃ−Ｌｙｓ（２ＣｌＺ）−ＯＨアミノ酸を使用する。Ｌｙｓ（Ｎε−アルキルスルホニル）残基がＣ末端でない場合、Ｌｙｓ（Ｎε−アルキルスルホニル）残基の直前にあるペプチドフラグメントがペプチド合成機の樹脂上で最初に組立てられる。適切なアルキルスルホニルクロリド（例、１−オクタンスルホニルクロリド、１−デカンスルホニルクロリド、１−ドデカンスルホニルクロリド、１−ヘキサデカンスルホニルクロリド及び１−オクタデシルスルホニルクロリド）は、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｉｎｃ．，ウィンダム、ＮＨ，ＵＳＡから入手し得る。
【００８０】
実施例１０：（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−２−（４−テトラデシル−１−ピペラジン）−アセチル）））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2
この実施例に使用されるＢｏｃアミノ酸は実施例５の合成に使用されるものと同じである。最初のアミノ酸残基をシェーカー上で手動により樹脂へカップルさせる。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ  ２．５ミリモルを０．５Ｎ  ＨＢＴＵ／ＤＭＦ  ４ｍＬに溶かす。この溶液へＤＩＥＡ  １ｍＬを加える。この混合液を約２分間振盪する。次いで、この溶液へＭＢＨＡ樹脂（置換基＝０．９１ミリモル／ｇ）０．２ミリモルを加える。この混合液を約１時間振盪する。ＤＭＦでこの樹脂を洗浄し、１００％  ＴＦＡで２ｘ２分処理してＢｏｃ保護基を除去する。ＤＭＦでこの樹脂を洗浄する。２−ブロモ酢酸（２．５ミリモル）をＨＢＴＵ（２．０ミリモル）及びＤＩＥＡ（１ｍＬ）／ＤＭＦ  ４ｍＬで約２分間プレ活性化し、樹脂へ加える。この混合液を約１０分振盪し、ＤＭＦで洗浄する。次いで、この樹脂をピペラジン１．２ミリモル／ＤＭＦ  ４ｍＬで約２時間処理する。樹脂をＤＭＦで洗浄し、１−ヨードテトラデカン２ミリモルで約４時間処理する。ＤＭＦで洗浄した後、無水酢酸（３ミリモル）及びＤＩＥＡ（１ｍＬ）／ＤＭＦ  ４ｍＬで樹脂を約０．５時間処理する。この樹脂をＤＭＦで洗浄し、２５％ピペリジン／ＤＭＦで２ｘ２０分処理する。樹脂をＤＭＦで洗浄し、ペプチド合成機の反応槽へ移し、反応を続ける。ペプチドの残りの合成及び精製法は、実施例１に記載のものと同じである。
【００８１】
Ｌｙｓ（Ｎε−（２−（４−アルキル−１−ピペラジン）−アセチル））残基を含有する本発明の他の化合物の合成は、実施例１０の合成に記載の方法に類似したやり方で実行される。このペプチドのＬｙｓ（Ｎε−（２−（４−アルキル−１−ピペラジン）−アセチル））残基にＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨアミノ酸を使用し、Ｌｙｓの残基にはＢｏｃ−Ｌｙｓ（２ＣｌＺ）−ＯＨアミノ酸を使用する。アルキル化の工程では、Ｌｙｓ（Ｎε−（２−（４−アルキル−１−ピペラジン）−アセチル））の残基に対応するヨードアルカンを使用する。Ｌｙｓ（Ｎε−（２−（４−アルキル−１−ピペラジン）−アセチル））残基がＣ末端でない場合、Ｌｙｓ（Ｎε−（２−（４−アルキル−１−ピペラジン）−アセチル））残基の直前にあるペプチドフラグメントがペプチド合成機の樹脂上で最初に組立てられる。
【００８２】
実施例１１：（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ａｓｐ36（１−（４−テトラデシル−ピペラジン）））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2
この実施例に使用されるＢｏｃアミノ酸は実施例５の合成に使用されるアミノ酸と同じであるが、３６位にはＦｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ−ｔＢｕ）−ＯＨを使用する。最初のアミノ酸残基をシェーカー上で手動により樹脂へカップルさせる。Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ−ｔＢｕ）−ＯＨ  ２．５ミリモルを０．５Ｎ  ＨＢＴＵ／ＤＭＦ  ４ｍＬに溶かす。この溶液へＤＩＥＡ  １ｍＬを加える。この混合液を約２分間振盪する。次いで、この溶液へＭＢＨＡ樹脂（置換基＝０．９１ミリモル／ｇ）０．２ミリモルを加える。この混合液を約１時間振盪する。ＤＭＦで樹脂を洗浄し、１００％  ＴＦＡで２ｘ１５分処理してｔＢｕ保護基を除去する。この樹脂をＤＭＦで洗浄し、ＨＢＴＵ（０．６ミリモル）及びＤＩＥＡ（１ｍＬ）／ＤＭＦ  ４ｍＬで約１５分処理する。この反応混合液へピペラジン０．６ミリモルを加え、この混合液を約１時間振盪する。ＤＭＦで樹脂を洗浄し、１−ヨードテトラデカン３ミリモルで約４時間処理する。ＤＭＦで洗浄した後、無水酢酸（３ミリモル）及びＤＩＥＡ（１ｍＬ）／ＤＭＦ  ４ｍＬで樹脂を約０．５時間処理する。この樹脂をＤＭＦで洗浄し、２５％ピペリジン／ＤＭＦで２ｘ２０分処理し、Ｆｍｏｃ保護基を除去する。樹脂をＤＭＦで洗浄し、ペプチド合成機の反応槽へ移し、反応を続ける。ペプチドの残りの合成及び精製法は、実施例１に記載のものと同じである。
【００８３】
Ａｓｐ（１−（４−アルキルピペラジン）又はＧｌｕ（１−（４−アルキルピペラジン）残基を含んでなる本発明の他の化合物の合成は、実施例１１の合成について記載した方法に類似したやり方で実行される。このペプチドのＡｓｐ（１−（４−アルキルピペラジン）又はＧｌｕ（１−（４−アルキルピペラジン）残基にＦｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ−ｔＢｕ）−ＯＨ又はＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ−ｔＢｕ）−ＯＨアミノ酸を使用し、Ａｓｐ又はＧｌｕの残基にはＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ）−ＯＨ又はＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｃＨｅｘ）−ＯＨアミノ酸を使用する。アルキル化の工程では、Ｌｙｓ（Ｎε−（２−（４−アルキル−１−ピペラジン）−アセチル））の残基に対応するヨードアルカンを使用する。Ａｓｐ（１−（４−アルキルピペラジン））又はＧｌｕ（１−（４−アルキルピペラジン））残基がＣ末端でない場合、Ａｓｐ（１−（４−アルキルピペラジン））又はＧｌｕ（１−（４−アルキルピペラジン））残基の直前にあるペプチドフラグメントがペプチド合成機の樹脂上で最初に組立てられる。
【００８４】
実施例１２：（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ａｓｐ36（１−テトラデシルアミノ））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2
この実施例に使用されるＢｏｃアミノ酸は実施例５に使用されるものと同じである。最初のアミノ酸残基をシェーカー上で手動により樹脂へカップルさせる。Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ−ｔＢｕ）−ＯＨ  ２．５ミリモルを０．５Ｎ  ＨＢＴＵ／ＤＭＦ  ４ｍＬに溶かす。この溶液へＤＩＥＡ  １ｍＬを加える。この混合液を約２分間振盪する。次いで、この溶液へＭＢＨＡ樹脂（置換基＝０．９１ミリモル／ｇ）０．２ミリモルを加える。この混合液を約１時間振盪する。ＤＭＦでこの樹脂を洗浄し、１００％  ＴＦＡで２ｘ１５分処理してｔ−Ｂｕ保護基を除去する。樹脂をＤＭＦで洗浄し、ＨＢＴＵ（０．６ミリモル）及びＤＩＥＡ（１ｍＬ）／ＤＭＦ  ４ｍＬで約１５分処理する。この反応混合液へ１−テトラデカンアミン  ０．６ミリモルを加え、この混合液を約１時間振盪する。ＤＭＦで樹脂を洗浄し、２５％ピペリジン／ＤＭＦで２ｘ２０分処理し、Ｆｍｏｃ保護基を除去する。樹脂をＤＭＦで洗浄し、ペプチド合成機の反応槽へ移し、反応を続ける。この実施例のペプチドに関する残りの合成及び精製法は、実施例１の合成に記載のものと同じである。
【００８５】
Ａｓｐ（１−アルキルアミノ）又はＧｌｕ（１−アルキルアミノ）残基を含有する本発明の他の化合物の合成は、実施例１２の合成に記載したものと類似したやり方で実行される。このペプチドのＡｓｐ（１−アルキルアミノ）又はＧｌｕ（１−アルキルアミノ）残基に、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ−ｔＢｕ）−ＯＨ又はＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ−ｔＢｕ）−ＯＨアミノ酸をそれぞれ使用し、Ａｓｐ又はＧｌｕの残基にはＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ）−ＯＨ又はＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｃＨｅｘ）−ＯＨアミノ酸をそれぞれ使用する。Ａｓｐ（１−アルキルアミノ）又はＧｌｕ（１−アルキルアミノ）残基がＣ末端でない場合、Ａｓｐ（１−アルキルアミノ）又はＧｌｕ（１−アルキルアミノ）残基の直前にあるペプチドフラグメントがペプチド合成機の樹脂上で最初に組立てられる。
【００８６】
実施例１３：（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル），β−Ａｌａ37）ｈＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨ
使用するＢｏｃアミノ酸は、（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（実施例５）の合成に使用されるものと同じである。Ｂｏｃ−β−Ａｌａ−ＰＡＭ樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，サンディエゴ、カリフォルニア、置換基＝０．７４ミリモル／ｇ）２７０ｍｇを使用した。シェーカー上で１００％  ＴＦＡを初めに２ｘ２分用いてＢｏｃ−β−Ａｌａ−ＰＡＭ樹脂上のＢｏｃ保護基を脱保護化した。残りの合成及び精製法は実施例５のそれと同じであった。表題ペプチド８３．０ｍｇを白色の固形物として得た。分析用ＨＰＬＣ分析に基づけば、純度は９９％であった。エレクトロ−スプレイ質量分析は分子量：３６５０．５を示し、計算の分子量：３６５０．８に一致していた。
【００８７】
実施例１４：（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＯＨ
使用するＢｏｃアミノ酸は、（Ａｉｂ8,35，Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（実施例５）の合成に使用されるものと同じである。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（２．５ミリモル）をＨＢＴＵ（２．０ミリモル）、ＨＯＢｔ（２．０ミリモル）及びＤＩＥＡ（２．５ｍｌ）／ＤＭＦ（４ｍｌ）で約２分間プレ活性化する。このアミノ酸を、シェーカー上、手動でＰＡＭ樹脂（Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ，Ｗｏｏｄ  Ｄａｌｅ，ＩＬ；置換基＝０．８５ミリモル／ｇ）へカップルさせる。カップリング時間は約８時間である。残りの合成及び精製法は実施例５のそれと同じである。エレクトロ−スプレイ質量分析は分子量：３５７９．１５を示し、計算の分子量：３５７９．５に一致していた。
【００８８】
Ｌｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基を含有する本発明の他の類似体、ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＯＨ、ｈＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨ及びｈＧＬＰ−１（７−３８）ＯＨの合成は、実施例１４の合成に記載した方法と類似したやり方で実行し得る。このペプチドのＬｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基にＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨアミノ酸を使用し、Ｌｙｓの残基にはＢｏｃ−Ｌｙｓ（２ＣｌＺ）−ＯＨアミノ酸を使用する。
【００８９】
実施例３６６：（Ａｉｂ8，β−Ａｌａ35，Ａｅｃ37）ｈＧＬＰ−１（７−３７）ＮＨ2
反応槽中のＭＢＨＡ樹脂（０．２ミリモル、置換基＝０．９１ミリモル／ｇ）、Ｆｍｏｃ−Ａｅｃ−ＯＨ（０．４０ｇ，０．８２９ミリモル）、ＨＢＴＵ（１．５ｍＬ，０．５Ｍ／ＤＭＦ）及びＤＩＥＡ（０．５ｍＬ）混合液をシェーカー上で４時間室温で振盪した。次いで、この樹脂をＤＭＦで洗浄し、２５％  ピペリジン／ＤＭＦで２ｘ２０分処理した。ＤＭＦ及びＤＣＭでこの樹脂を洗浄し、ペプチド合成機の反応槽へ移し、実施例１に記載の方法により残りのペプチドの組立てを続けた。精製法も実施例１に記載のものと同じであった。エレクトロ−スプレイ質量分析は分子量：３４９４．８を示し、計算の分子量：３４９４．９９に一致していた。純度  ９３％；収量  ７９．１ｍｇ。
【００９０】
実施例３６７：（Ａｉｂ8，β−Ａｌａ35，Ａｅｃ38）ｈＧＬＰ−１（７−３８）ＮＨ2
実施例３６７は、実質的に実施例３６６に記載の方法により合成した。ＭＳ（ＥＳ）＝３５５１．７、計算分子量＝３５５２．０４；純度  ９７％；収量  ９７．４ｍｇ。
【００９１】
実施例３６８：（Ａｉｂ8，β−Ａｌａ35，Ａｅｃ37,38）ｈＧＬＰ−１（７−３８）ＮＨ2
反応槽中のＭＢＨＡ樹脂（０．２ミリモル、置換基＝０．９１ミリモル／ｇ）、Ｆｍｏｃ−Ａｅｃ−ＯＨ（０．２８９ｇ，０．６ミリモル）、ＨＢＴＵ（１．１２ｍＬ，０．５Ｍ／ＤＭＦ）及びＤＩＥＡ（０．４ｍＬ）混合液をシェーカー上で２時間室温で振盪した。次いで、この樹脂をＤＭＦで洗浄し、３０％  ピペリジン／ＤＭＦで２ｘ１５分処理した。ＤＭＦでこの樹脂を洗浄した。この反応槽へＦｍｏｃ−Ａｅｃ−ＯＨ（０．２８９ｇ，０．６ミリモル）、ＨＢＴＵ（１．１２ｍＬ，０．５Ｍ／ＤＭＦ）及びＤＩＥＡ（０．４ｍＬ）を加えた。この混合液を室温で２時間振盪した。この樹脂をＤＭＦで洗浄し、３０％  ピぺリジン／ＤＭＦで２ｘ１５分処理した。ＤＭＦ及びＤＣＭで樹脂を洗浄し、ペプチド合成機の反応槽へ移し、実施例１に記載の方法により残りのペプチドの組立てを続けた。精製法も実施例１に記載のものと同じであった。エレクトロ−スプレイ質量分析は分子量：３６６３．９を示し、計算の分子量：３６６４．２６に一致していた。純度  １００％；収量  ７５．３ｍｇ。
【００９２】
実施例３６９：（Ａｉｂ8，Ａｒｇ26,34，β−Ａｌａ35，Ｌｙｓ36（Ｎε−Ａｅｃ−デカノイル））ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2
反応槽中のＭＢＨＡ樹脂（０．２ミリモル、置換基＝０．９１ミリモル／ｇ）、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ（１．１７ｇ，２．５ミリモル）、ＨＢＴＵ（４ｍＬ，０．５Ｍ／ＤＭＦ）及びＤＩＥＡ（１ｍＬ）混合液をシェーカー上で１０分間室温で振盪した。この樹脂をＤＭＦで洗浄し、２５％  ピペリジン／ＤＭＦで２ｘ１５分処理した。ＤＭＦでこの樹脂を洗浄した。この反応槽へＦｍｏｃ−Ａｅｃ−ＯＨ（０．２８９ｇ，０．６ミリモル）、ＨＢＴＵ（１．１２ｍＬ，０．５Ｍ／ＤＭＦ）及びＤＩＥＡ（０．４ｍＬ）を加えた。この混合液を室温で１０分間振盪した。この樹脂をＤＭＦで洗浄し、３０％  ピぺリジン／ＤＭＦで２ｘ１５分処理した。ＤＭＦで樹脂を洗浄し、デカン酸（４３１ｍｇ，２．５ミリモル）、ＨＢＴＵ（４ｍＬ，０．５Ｍ／ＤＭＦ）及びＤＩＥＡ（１ｍＬ）の混合液で１０分処理した。この樹脂をＤＭＦで洗浄し、１００％  ＴＦＡで２ｘ２分処理した。ＤＭＦ及びＤＣＭで樹脂を洗浄し、ペプチド合成機の反応槽へ移し、実施例１に記載の方法により残りのペプチドの組立てを続けた。精製法も実施例１に記載したものと同じであった。エレクトロ−スプレイ質量分析は分子量：３６７７．０を示し、計算の分子量：３６７７．２５に一致していた。純度  ９７．６％；収量  ４４．８ｍｇ。
【００９３】
以下の実施例は、上記の適切な方法により合成し得る。
【００９４】
【化５１】
0003702181.tif 000024
【００９５】
【化５２】
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【００９６】
【化５３】
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【００９７】
【化５４】
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【００９８】
【化５５】
0003702181.tif 000028
【００９９】
【化５６】
0003702181.tif 000029
【０１００】
【化５７】
0003702181.tif 000030
【０１０１】
【化５８】
0003702181.tif 000031
【０１０２】
【化５９】
0003702181.tif 000032
【０１０３】
【化６０】
0003702181.tif 000033
【０１０４】
【化６１】
0003702181.tif 000034
【０１０５】
【化６２】
0003702181.tif 000035
【０１０６】
【化６３】
0003702181.tif 000036
【０１０７】
【化６４】
0003702181.tif 000037
【０１０８】
【化６５】
0003702181.tif 000038
本明細書に例示した化合物の代表的なサンプルについての物理データを表１に示す。
【０１０９】
【表１】
0003702181.tif 000039
【０１１０】
【表２】
0003702181.tif 000040