(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
９−シス−レチノイン酸またはその薬学的に許容し得る塩もしくは薬学的に許容し得る加水分解性エステル、および治療的に不活性な、薬学的に許容し得る担体を含有する医薬組成物であって、
前悪性もしくは前癌性の上皮病変を治療するための、
前悪性もしくは前癌性の上皮腫瘍を治療するための、
口腔内の白斑症を治療するための、または
胸部、頸、前立腺、結腸、膀胱、食道、胃、喉頭もしくは口の上皮腫瘍を治療するための組成物。
【請求項２】
経口投与に適している請求項１記載の組成物。
【請求項３】
局所投与に適している請求項１記載の組成物。
【請求項４】
９−シス−レチノイン酸またはその薬学的に許容し得る塩もしくは薬学的に許容し得る加水分解性エステルを、一回の投与用量において１〜５０mg含有する、請求項２記載の組成物。
【請求項５】
９−シス−レチノイン酸またはその薬学的に許容し得る塩もしくは薬学的に許容し得る加水分解性エステルが、０．０１〜０．１５重量％の量で存在する、請求項３記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩およびその薬学的に許容し得る加水分解性エステルを含有する新規な医薬組成物に関するものである。
【０００２】
さらに、本発明は医薬として使用するための９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩およびその薬学的に許容し得る加水分解性エステルに関するものである。
【０００３】
他の見地においては、本発明は以下に記載するような医療に適用される医薬の製造における９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩およびその薬学的に許容し得る加水分解性エステルの使用に関するものである。
【０００４】
本発明によって、９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩またはその薬学的に許容し得る加水分解性エステルは、上皮病変に関して、抗過形成、抗化生、抗新形成の、腫瘍予防性および腫瘍治療性を有し、レチノイド類（ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ  ）に関連して毒性または他の不利な影響は限定されていることが見出された。上記性質を含む病理学的疾患の治療は、９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩またはその薬学的に許容し得る加水分解性エステルを全身的にまたは局所的に投与することにより効果的に治療できるということが見出された。
【０００５】
本発明の一実施態様によれば、９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩またはその薬学的に許容し得る加水分解性エステルは、前悪性の上皮病変、すなわち前癌性の病変を有する哺乳動物に投与した場合、これらの病変の進行を遅延させる。これらの化合物はこれらの前悪性または前癌性病変の細胞生長および分化を抑制しそして細胞修復をもたらす。これにより、これらの病変の上皮癌への進行が防止される。
【０００６】
これらの病変の癌への進行を遅延させるための前悪性または前癌性上皮病変の治療において、９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩またはその薬学的に許容し得る加水分解性エステルは、これらの病変の進行を遅延させるのに有効な量で、これらの病変に侵された患者に経口的または局所的に投与される。これらの投与量は病変の量と大きさおよび患者の必要性により決定される。
【０００７】
９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩またはその薬学的に許容し得る加水分解性エステルは、特に胸部、頸、前立腺、皮膚、結腸、膀胱、食道、胃、喉頭、肺または口腔の上皮の前悪性または前癌性病変の治療に有効である。好適な実施態様によれば、これらの化合物は種々な白斑症、特に口および舌の白斑症の前悪性または前癌性病変ならびに胸部の前癌性または前悪性の病変を治療するために利用することができる。
【０００８】
本発明の他の実施態様によれば、９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩またはその薬学的に許容し得る加水分解性エステルは、上皮起点の癌または腫瘍を治療してこれらの腫瘍の進行を遅延するために利用することができる。これらの化合物の抗癌特性または抗腫瘍特性によって、これらの化合物による腫瘍の治療は、これらの腫瘍の大きさおよび数の両方を後退させる。抗腫瘍剤としてのこれらの化合物の利用において、これらの化合物は特に胸部、頸、前立腺、皮膚、結腸、膀胱、食道、胃、喉頭、肺また口の腫瘍の進行を遅延させるのに有効である。９−シス−レチノイン酸は前悪性または前癌性病変を有する患者の治療に関して上述した方法で患者に投与することができる。
【０００９】
上述した治療にあたっては、９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩またはその薬学的に許容し得る加水分解性エステルは、９−シス−レチノイン酸および該化合物と適合し得、かつ薬学的に許容し得る担体を含有する組成物として、全身的または局所的に投与される。このような組成物の製造においては、通常の薬学的に許容し得る担体はどのようなものでも利用することができる。薬剤が経口的に投与される場合は、それは規則的な時間的間隔で、好都合には食事時間にまたは１日１回投与される。この化合物は局所的に投与される場合および経口的に投与される場合には、比較的非毒性であることが確証された。
【００１０】
９−シス−レチノイン酸で有効に治療される前悪性および前癌性上皮病変または腫瘍を含む疾患の例は、例えば、口、舌、咽頭および喉頭の粘膜の光線性角化症、ヒ素性角化症、色素性乾皮症、Ｂｏｗｅｎ  氏病、白斑症、化生症、異形成症および乳頭腫、化生症および異形成症のような気管支粘膜の前癌生変化（特にヘビースモーカーおよびアスベストおよび／またはウラニウムを取扱う人々にしばしばみられる）、子宮頸の異形成症および白斑症、外陰部ジストロフィー、膀胱の前癌変化、例えば膀胱の化生症、異形成症、乳頭腫ならびに腸管路のポリープである。９−シス−レチノイン酸により有効に治療される上皮起点の半悪性または悪性の腫瘍または癌の例は、胸部腫瘍、頸および前立腺腫瘍、皮膚腫瘍、例えば基底細胞癌、膀胱腫瘍、例えば表面膀胱癌、結腸腫瘍、食道腫瘍、胃腫瘍、喉頭腫瘍および肺腫瘍である。
【００１１】
上皮性の前癌性病変および悪性腫瘍の治療は、９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩またはその薬学的に許容し得る加水分解性エステルを、単独でまたは手術、放射線療法、ホルモン療法または標準的な化学療法（細胞増殖抑制剤および細胞毒性剤）または生物学的応答変性剤（インターフェロン類、インターロイキン類または他のサイトカイン類）による治療と組み合わせて使用して行うことができる。
【００１２】
さらに、本発明によって、患者の皮膚に局所的に適用された９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩および加水分解性エステルは、光損傷に係わる症状を修復するということが見出された。このために、太陽光線に露出することにより損傷された患者の皮膚に９−シス−レチノイン酸を局所的に適用することによって、しわ形成、弾力線維症および早期老化の影響を修復して、皮膚の外観を改善し得る。
【００１３】
９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩および加水分解性エステルは、局所投与により皮膚損傷の修復を促進し、なめらかなそして若年の外観を有する皮膚を与えることができる。
【００１４】
また、本発明によって、９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩またはその薬学的に許容し得る加水分解性エステルは、経口的または局所的に患者に投与された場合、皮脂分泌を減少させるということが見出された。それ故に、皮脂分泌の減少および座瘡病変を緩解するように作用するこれらの化合物の投与は、座瘡、油性頭髪および油性頭皮のような病気を抑制する手段を提供する。このような方法において、座瘡または油性頭皮および頭髪のような過剰な皮脂分泌により起る病気に対する予防またはこれらの病気の治療に、これらの化合物の投与を行うことができる。
【００１５】
皮脂生成および／または分泌の阻害は、座瘡のような病気の治療および／または予防に有効であるということは知られている。増大した皮脂分泌は、ふけ、油性皮膚、油性頭髪、白色面皰および黒色面皰を含む脂漏症のような皮膚病学的疾患を生じさせる。
【００１６】
本発明によれば、９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩およびその薬学的に許容し得る加水分解性エステルの局所的および経口的投与は、炎症性および非炎症性のようなすべての形態の座瘡の治療に有効である。
【００１７】
さらに本発明の他の見地において、９−シス−レチノイン酸、その薬学的に許容し得る塩またはその薬学的に許容し得る加水分解性エステルは、乾癬の患者に経口的または局所的に投与した場合、それは乾癬の治療に有効であるということが見出された。これらの化合物の投与は、病気である乾癬の皮膚での影響を減少させる。
【００１８】
薬学的に許容し得る塩は、薬学的に許容し得る製剤として、９−シス−レチノイン酸に対して化学的に許容し得、かつヒト患者に適用できるどのような塩も包含する。このような通常の薬学的に許容し得る何れの塩も利用することができる。利用し得る通常の塩は、例えば、アルカリ金属塩、例えばナトリウムまたはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えばカルシウムまたはマグネシウム塩、およびアンモニウムまたはアルキルアンモニウム塩を包含する塩基塩である。
【００１９】
本発明によれば、９−シス−レチノイン酸は、その薬学的に許容し得る加水分解性エステルの形態で投与することができる。薬学的に許容し得る加水分解性エステルの何れもが、本発明の組成物および方法に使用することができる。エステルは、例えば、ベンジル（ＯＢｚｌ）または低級アルキル、ハロゲン、ニトロにより置換されたベンジルのような芳香族エステル；低級アルキル、例えばｔ−ブチルエステル；シクロペンチル、シクロヘキシルもしくはシクロヘプチルエステル；または９−フルオレニルメチルエステルである。
【００２０】
本発明によれば、９−シス−レチノイン酸またはその薬学的に許容し得る塩またはその薬学的に許容し得る加水分解性エステルは、薬学的に許容し得る経口的または局所的組成物として与えることができる。本発明のこれらの医薬組成物は、該９−シス−レチノイン酸またはその薬学的に許容し得る塩またはその薬学的に許容し得る加水分解性エステルを適合し得る薬学的に許容し得る担体物質と一緒に含有する。何れの通常の担体物質も利用することができる。担体物質は、経口投与に適した有機または無機の不活性担体物質であることができる。適当な担体は、水、ゼラチン、アラビヤゴム、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、タルク、植物油、ポリアルキレングリコール、ワセリンなどを包含する。さらに、この医薬製剤は他の薬学的に活性な活性剤を含有することができる。さらにこの医薬配合に許容されている実施例にしたがって、風味剤、防腐剤、安定剤、乳化剤、緩衝剤などのさらなる添加剤を加えることができる。
【００２１】
この医薬製剤は、（ａ）錠剤、カプセル、ピル、粉末、顆粒などのような経口投与に適した固体形態および（ｂ）溶液、懸濁液、軟膏、クリーム、ゲル、微小粉末、エーロゾルなどのような局所投与に適した製剤を包含する通常のどのような形態でも製造することができる。この医薬製剤は滅菌することができ、そして／または防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧を変化する塩および／または緩衝剤のような補助剤を含有することができる。
【００２２】
皮膚に対する局所投与のために、上述した化合物は、好ましくは軟膏、チンキ、クリーム、ゲル、溶液、ローション、スプレー、懸濁液、シャンプー、頭髪ソープ、香水などとして製造される。事実、頭皮また皮膚に適用するために利用される通常のどのような組成物も、本発明により利用することができる。本発明の活性成分を含有する組成物を適用する好ましい方法は、ゲル、ローションおよびクリームの形態である。皮膚に局所的に投与するための医薬製剤は、上述した活性成分を、このような製剤に慣用的に使用される非毒性の治療的に不活性な固体または液体の担体と混合することによって製造することができる。これらの製剤は組成物の全重量を基にして活性成分の少なくとも約０．０１重量％を含有しなければならない。活性成分である９−シス−レチノイン酸は比較的非毒性でありそして非刺激性であるので、それは、０．１５％を超える量で局所組成物に使用することができる。これらの製剤は組成物の全重量を基にして、活性成分の約０．０１〜０．１５重量％を含有することが好ましい。また、これらの製剤を皮膚に１日１回または２回適用することが好ましい。これらの製剤は患者の必要性により適用することができる。本発明の実施において、活性成分は水溶液またはエチルアルコールのようなアルコール溶液として適用することができる。
【００２３】
上述した局所用製剤の製造において、局所用製剤の医薬配合の技術において通常の保存剤、増粘剤、香料などのような添加剤を使用することができる。さらに、通常の抗酸化剤または通常の抗酸化剤の混合物を、上述した活性成分を含有する局所用製剤に混入させることができる。これらの製剤に利用することのできる通常の抗酸化剤は、Ｎ−メチル−α−トコフェロールアミン、トコフェロール、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、エトキシクイン（ｅｔｈｏｘｙｑｕｉｎ）など含む。本発明により使用される活性成分を含有するクリーム−基材の医薬処方は、脂肪酸アルコール、半固体の石油炭化水素、１，２−エチレングリコールおよび乳化剤を含む水性懸濁剤からなる。
【００２４】
本発明による活性成分を含有する軟膏処方は、半固体の石油炭化水素と活性物質の溶剤分散液からなる。本発明に使用される活性成分を含有するクリーム組成物は、好ましくは、湿潤剤、粘度安定剤および水の水相、脂肪酸アルコール、半固体の石油炭化水素および乳化剤の油相ならびに安定剤−緩衝剤水溶液中に分散された活性成分を含有する相から形成された乳濁液からなる。安定剤を局所用製剤に加えることができる。通常のどのような安定剤も本発明により利用することができる。油相において、脂肪酸アルコール成分は安定剤として作用する。これらの脂肪酸アルコール成分は、少なくとも約１４個の炭素原子の飽和長鎖脂肪酸の還元により誘導される。また、一般に頭髪の局所用製剤に利用されている通常の香料およびローションを、本発明により利用することができる。さらに、必要に応じて、通常の乳化剤を本発明の局所用製剤に利用することができる。
【００２５】
好ましい経口投与形態は、錠剤、硬質もしくは軟質ゼラチン、メチルセルロースまたは消化管路中で容易に溶解する他の適当な材料のカプセルからなる。本発明により企図される経口投与用量は、処方医師により決定され、個々の患者の必要性により変化する。しかしながら、一般に、患者の体重１ｋｇ当り約０．０１ｍｇ〜約３ｍｇ、好ましくは患者の体重１ｋｇ当り約０．０２５ｍｇ〜約１．５ｍｇの１日当りの投与量が使用される。この投与用量は患者の必要性により医師により決定された投与計画にしたがって、決めることができる。
【００２６】
明細書中に列挙した治療的に活性な物質を経口単位投与形態に混入することは、経腸投与のための所望のどのような量であっても、同様に本発明の範囲内にある。しかしながら、一回の投与用量が適当な治療的に不活性な充填剤および稀釈剤と一緒に活性物質約１ｍｇ〜約５０ｍｇを含有するような方法で、本発明の活性物質を含有する製剤を処方することが好ましい。特に、このような投与用量を軟膏ゼラチンカプセルおよび錠剤に混入することが望ましい。
【００２７】
本発明による使用における９−シス−レチノイン酸の効能は、以下に記載する試験モデルにおいて証明することができる。
【００２８】
【実施例】
Ａ．ヒトの腫瘍細胞系および実験腫瘍における９−シス−レチノイン酸の抗腫瘍効果
ヒトの形質転換された上皮細胞系の生長および増殖に対する阻害作用
９−シス−レチノイン酸を、ヒトの腫瘍細胞系ＳＣＣ１５（舌の扁平上皮癌）およびＡ４３１（外陰の扁平上皮癌）に対して試験した。増殖は糸粒体酵素活性によりＭＴＴ染料［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド］を還元する生菌細胞の能力により測定した［Ｍｏｓｍａｎｎ  Ｔ．，  Ｒａｐｉｄ  Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ：  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｓｓａｙｓ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５：  ５５−６３，  １９８３  ］。
【００２９】
0003631259.tif 000002
【００３０】
３・１０−７Ｍ  の濃度の９−シス−レチノイン酸は、増殖を４６％、そしてＩＦＮαと組み合わされて増殖を８０％阻害した。
【００３１】
0003631259.tif 000003
【００３２】
３・１０−７Ｍ  の濃度の９−シス−レチノイン酸は、増殖を６４％、そしてＩＦＮαと組み合わされて増殖を７７％阻害した。
【００３３】
９−シス−レチノイン酸は試験した２種のヒトの上皮癌細胞系に対して著しい生長阻害作用を示した。
【００３４】
さらに、他の形質転換された細胞系に対する９−シス−レチノイン酸の効果について調査した。増殖分析を、ウイルス含有細胞系に対して行なった。ヒトの乳頭腫ウイルス１６（ＨＰＶ１６）を含有する形質転換されたケラチノサイト細胞系であるＳＫｖ−ｌ  １を、４回反復での２つの実験において、９−シス−レチノイン酸による増殖の阻害に関して試験した。５・１０４  細胞／ウエルをイーグル培地中の平板培養で２日間培養した。１０−６Ｍ  の濃度におけるレチノイドおよび相当するＤＭＳＯ比較対照での、培養前および培養後にヘモサイトメーターによる直接的な細胞計数を行なった。生長阻害は比較対照に比較した％で表わした。
【００３５】
結果：１０−６Ｍ  の濃度の９−シス−レチノイン酸は、ヒトの形質転換されたケラチノサイトＳＫｖ−ｌ  １の増殖を有意に３２．４％（ｐ＜０．００１）阻害した。
【００３６】
Ｂ．腫瘍細胞誘導脈管形成における９−シス−レチノイン酸の効果
腫瘍の制限のない生長が脈管形成（ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）に依存するということは、確立されている。腫瘍細胞集団の増大は、腫瘍上に集中する新規な毛細管の増加によって先行されなければならない。それ故に、脈管形成を阻害することによって、腫瘍生長は阻害される［Ｆｏｌｋｍａｎ  Ｊ．，  Ｈｏｗ  ｉｓ  ｂｌｏｏｄ  ｖｅｓｓｅｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｔｉｓｓｕｅ？  Ｇ．Ｈ．Ａ．  Ｃｌｏｗｅｓ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ａｗａｒｄ  Ｌｅｃｔｕｒｅ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４６：  ４６７−４７３，  １９８６；  Ｓｉｄｋｙ  ＹＡ  およびＢｏｒｄｅｎ  ＥＣ．，  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ：  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｔｕｍｏｒ−ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４７：  ５１５５−５１６１，  １９８７］  。
【００３７】
脈管形成分析は、すでに記載されている［Ｓｉｄｋｙ  ＹＡおよびＡｕｅｒｂａｃｈ  Ｒ．，  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ；  Ａ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ａｓｓａｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｒａｆｔ−ｖｓ−ｈｏｓｔ  ｒｅａｃｔｉｏｎ．  Ｊ  ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １４１：  １０８４−１１００，  １９７５．  Ｍａｊｅｗｓｋｉ  Ｓら．，Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｙ  ｓｙｓｔｅｍｉｃａｌｌｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｐｒｏｔａｍｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ３３：  ８３１−８３３，  １９８４］。９−シス−レチノイン酸の試験において、２つの分析法を使用した。第１の分析法においては、レチノイドを試験管内において細胞系に加え、次いでその細胞をマウスに注射した。第２の分析法においては、マウスに生体内的にレチノイドを腹腔内的に注射し、次に腫瘍細胞系を皮内的に注射した。
【００３８】
方法：２種の腫瘍形成細胞系ＳＫｖ−ｅ  ２およびＨｅＬａならびに非腫瘍形成細胞系ＳＫｖ−ｅ  １の細胞を、１０−７Ｍ  の濃度の９−シス−レチノイン酸と一緒に試験管内で４８時間予備培養し、次いで細胞計数し、ＴＣ１９９培地中で洗浄した。細胞濃度を、培地０．１ｍｌ当り生菌細胞２・１０５  に調節し、レチノイド処理しないでＸ線照射したＢａｌｂ／ｃマウスに皮内的に注射した。比較対照動物には、ＤＭＳＯを使用して予備培養した腫瘍細胞を注射した。上述した方法により脈管形成効果を測定した。
【００３９】
結果
（ａ）Ｂａｌｂ／ｃマウスにおける細胞系ＳＫｖ−ｅ  ２（腫瘍形成）、ＨｅＬａ（腫瘍形成）およびＳＫｖ−ｅ  １（非腫瘍形成）の脈管形成能力における９−シス−レチノイン酸を使用した試験管内予備培養での効果
0003631259.tif 000004
【００４０】
２種の腫瘍形成細胞系により誘導される新血管の形成に対する９−シス−レチノイン酸の阻害効果に対して、９−シス−レチノイン酸は非腫瘍形成細胞系により誘導される脈管形成を阻害しなかった。
【００４１】
（ｂ）Ｂａｌｂ／ｃマウスを生体内的に９−シス−レチノイン酸で予備処理することによる細胞誘導脈管形成効果の阻害
0003631259.tif 000005
【００４２】
３種の腫瘍形成細胞系の細胞で注射した場合、９−シス−レチノイン酸で処理したマウスは、新血管形成の阻害を示した。非腫瘍形成細胞系を使用した場合は、抗脈管形成効果はなかった。
【００４３】
９−シス−レチノイン酸は試験管内および生体内で腫瘍細胞系により誘導される新血管の形成を阻害した。新血管形成は腫瘍生長に対するあらかじめ必要な条件であるので、９−シス−レチノイン酸は増殖および／または分化の誘導の阻害を経て直接的な抗腫瘍作用によって効くのみでなく、抗脈管形成効果によって作用するので間接的に腫瘍生長を阻害する。
【００４４】
Ｃ．マウスでの化学的に誘導された皮膚乳頭腫における９−シス−レチノイン酸の効果
皮膚、呼吸、消化および尿管ならびに乳腺の化学的に誘導された腫瘍に対するレチノイドの予防的および治療的作用は、よく知られている［Ｂｏｌｌａｇ  Ｗ．  およびＨａｒｔｍａｎｎ  ＨＲ．，  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｗｉｔｈ  ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ  ｉｎ  ａｎｉｍａｌ  ａｎｄ  ｍａｎ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｒｖｅｙｓ  ２：  ２９３−３１４，  １９８３］  。９−シス−レチノイン酸はマウスの確立された皮膚乳頭腫に対して著しい治療効果を有し、これらの上皮腫瘍を後退させた。乳頭腫試験はレチノイドの抗腫瘍スクリーニングのための標準試験である。
【００４５】
結果
投与量            １匹のマウス当り乳頭腫直径の平均総計における変化％
ｍｇ／ｋｇ  腹腔内
比較対照                ＋２３．５±２．１
９−シス−レチノイン酸
４００                −４３．３±２．４    ｐ＜０．０００５
２００                −２４．８±４．５    ｐ＜０．０００５
【００４６】
９−シス−レチノイン酸はマウスの確立された化学的に誘導された皮膚乳頭腫に対して実質的な治療的抗腫瘍効果を有し、この上皮腫瘍を後退させた。
【００４７】
Ｄ．抗乾癬活性における９−シス−レチノイン酸の効果
抗乾癬活性はパラグラフＣにおいて引用した試験モデルにおいて、マウスの化学的に誘導された皮膚乳頭腫を後退させる能力によって測定することができる。乳頭腫試験はレチノイドの抗乾癬効果のための標準試験である［Ｔｅｅｌｍａｎｎ  Ｋ．  およびＢｏｌｌａｇ  Ｗ．，  Ｔｈｅ  ｒｅｌｅｖａｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｐａｐｉｌｌｏｍａ  ｔｅｓｔ  ａｓ  ａ  ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎｏｉｄ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ，    Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  １８０：  ３０−３５，  １９９０］  。
【００４８】
パラグラフＣに示されたデータから理解することができるように、９−シス−レチノイン酸はヒトにおける抗乾癬活性を予測するこのモデルにおいて著しい治療効果を示した。
【００４９】
Ｅ．座瘡および皮脂抑制における９−シス−レチノイン酸の活性
座瘡の病因は多要因的であって、過剰な皮脂分泌、過角化および細菌集落形成が、その病理学において重要な役割を果す。
【００５０】
抗座瘡活性に対する測定手段として、次の２つのモデルを使用した。
【００５１】
１．ヒトの皮脂細胞の増殖分析が、座瘡がヒトで臨床的に試験された化合物とつよく関連していることを証明している（Ｄｏｒａｎ  Ｔ．Ｉ．およびＳｈａｐｉｒｓ  Ｓ．Ｓ．  Ｒｅｔｉｎｏｉｄ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｓｅｂｏｃｙｔｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．    Ｉｎ”Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ，  Ｐａｒｔ  Ｂ．  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”．    Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌｕｍｅ  １９０．  Ｅｄ．  Ｌ．  Ｐａｃｋｅｒ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  ３３４−３３８，１９９０］  。
【００５２】
２．リノマウス（ｒｈｉｎｏ  ｍｏｕｓｅ）  抗角化分析も、また、抗座瘡活性の測定手段として使用されている［Ｍｅｚｉｃｋ  Ｊ．Ａ．，  Ｂｈａｔｉａ  Ｍ．Ｃ．およびＣａｐｅｔｏｌａ  Ｒ．Ｊ．，  Ｔｏｐｉｃａｌ  ａｎｄ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ  ｏｎ  ｈｏｒｎ−ｆｉｌｌｅｄ  ｕｔｒｉｃｕｌｕｓ  ｓｉｚｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｈｉｎｏ  ｍｏｕｓｅ．    Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｔｏ  ｑｕａｎｔｉｆｙ  ”ａｎｔｉｋｅｒａｔｉｎｉｚｉｎｇ”  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ．    Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ８３，  １１０−１１３，  １９８４．ならびに  Ｍｅｚｉｃｋ  Ｊ．Ａ．，  Ｂｈａｔｉａ  Ｍ．Ｃ．，  Ｓｈｅａ  Ｌ．Ｍ．，  Ｔｈｏｒｎｅ  Ｅ．Ｇ．  およびＣａｐｅｔｏｌａ  Ｒ．Ｊ．，  Ａｎｔｉ−ａｃｎｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｒｈｉｎｏ−ｍｏｕｓｅ．    Ｉｎ：  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，  Ｍａｉｂａｃｋ  ａｎｄ  Ｌｏｗｅ  （ｅｄｓ），  Ｋａｒｇｅｒ  （Ｂａｓｅｌ），  ｖｏｌｕｍｅ  ２，  ５９−６３，  １９８５］。
【００５３】
１．皮脂細胞の増殖
Ｉ．方法
皮脂細胞を、成人のヒトの皮脂腺から単離し、化粧外科手術中に除去された顔面皮膚から誘導し、そしてマウス３Ｔ３線維芽細胞の層上で培養した［Ｄｏｒａｎ  Ｔ．Ｉ．，  Ｂａｆｆ  Ｒ．，  Ｊａｃｏｂｓ  Ｐ．およびＰａｃｉａ  Ｅ．，  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｓｅｂａｃｅｏｕｓ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｉｏ．  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ９６，  ３４１−３４８，  １９９１  ］。細胞を試験化合物なしに培地中で平面培養し、次いで初期の平面培養の２４−４８時間の後に、新鮮な培地中に試験化合物を与えた。培養物を４８時間毎に試験化合物を含有する新鮮な培地に与えた。収穫の日に、培養物をＰＢＳ中の０．０３％ＥＤＴＡですすいで３Ｔ３線維芽細胞のみを除去し、次いでトリプシン０．０５％／ＥＤＴＡ０．０３％中で培養した。細胞を懸濁し、はげしく混合して単一の細胞懸濁液を調製し、そしてヘモサイトメーター中で計数した。結果は、稀釈剤でのみ処理した比較対照培養物と比較して、皮脂細胞の増殖を５０％（ＩＣ５０）まで阻害するのに必要な化合物の量（μＭ）として測定した。
【００５４】
ＩＩ．結果
９−シス−レチノイン酸は試験管内で０．１μＭ  のＩＣ５０値を有し、ヒトの皮脂細胞の増殖の抑制に活性であった。
【００５５】
２．リノマウス卵形のうの減少および抗角化分析
Ｉ．方法
６〜８週令の雌のリノマウス（ｈｒｈｒｈｒｈｒ）をＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得た。１群当り６匹の動物を使用した。化合物は、化合物をアセトンに溶解することにより調製した。試験化合物をミクロピペットでマウスの背に塗布した。試験物質１００μｌ  を連続して３週間の間５日間毎日塗布した。マウスにＣＯ２  を吸入させて殺した。背から皮弁を切断し、そして組織学的検査に使用した。真皮から分離した表皮を、金網の組織学的カセット中におき、７０％、８０％、９５％、１００％エタノールおよびキシレン中においてそれぞれ２時間脱水した。皮膚試料をキシレン浴から除去しそしてガラス製の顕微鏡スライド上においた。最終像系を使用する像分析を使用して、卵形のう平均面積を測定した。１匹のマウス当りほぼ１５０の卵形のうを分析した。
【００５６】
0003631259.tif 000006
【００５７】
ｐ値は、すべて、ベヒクル処理したグループに対する化合物処理したグループの比較に対して＜０．００１である。Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−検定は、統計学的測定に対して行なった。
９−シス−レチノイン酸はこの抗角化および抗座瘡分析において活性であった。
【００５８】
Ｆ．９−シス−レチノイン酸による尋常性座瘡患者の治療における臨床データ１５〜４８才（平均年令２７才）の８人の患者（男性２名および女性６名）を、１〜３ケ月の間９−シス−レチノイン酸で治療した。８人の患者のうち、２人は１ケ月間、２人は２ケ月間そして４人は３ケ月間治療した。５人の患者は面皰であり、７人の患者は丘疹であり、６人の患者は濃疱でありそして１人の患者は結節であった。７人の患者は顔面にのみ病変を有し、１人の患者は顔面および背部に病変を有していた。９−シス−レチノイン酸を次の処方、すなわち、エタノール−プロピレングリコール（５０／５０）中の活性化合物０．０１％の溶液処方で与えた。この溶液を座瘡病変が存在する部位に毎夕１日１回塗布した。
【００５９】
病変（面皰、丘疹、濃疱および結節）を、基準線および治療の１、２および３ケ月後に別々に計数した。基準線の計数からの全病変の計数の減少％をすべての患者に対して測定し、平均値を計算した。結果は次の通りである：１ケ月後、全病変計数（８人の患者）は平均４８％まで減少し、２ケ月後、病変計数（６人の患者）は７２％まで減少し、３ケ月後、病変（４人の患者）は７７％まで減少した。皮膚の刺激に特に注意した。２人の患者において、治療の初期に、僅かな紅斑および僅かな鱗屑が観察された。これらは、連続した治療にもかかわらず、一時的であり、１〜２週間以内に消失した。患者は、これらの副作用に注意が引かれることは殆どなかった。
【００６０】
９−シス−レチノイン酸による座瘡の治療は、すべてのトランスまたは１３−シス−レチノイン酸により達成される結果に匹敵する非常に良好な結果を与えた。有利な局所治療に必要な薬剤濃度は、０．０１％であり、同じ治療結果を達成するのに、０．０５％の濃度が必要であるすべてのトランス−レチノイン酸または１３−シス−レチノイン酸の濃度より著しく低い。さらに、９−シス−レチノイン酸の治療的に有効な濃度では、副作用はすべてのトランスまたは１３−シス−レチノイン酸より実質的に少ない。
【００６１】
Ｇ．光損傷における９−シス−レチノイン酸の活性
Ｉ．方法
無毛のマウスにＵＶＢ照射し、その後に９−シス−レチノイン酸で局所的に処理して皮膚損傷の修復を行った。
【００６２】
照射および処理した領域の皮膚の修復の程度を組織学的に評価した。修復は表皮から圧縮エラスチンにのびる正常な真皮の外観により定義した。修復の程度はこの帯域の幅に反映されている。
【００６３】
この方法は以下に記載されている：Ｂｒｙｃｅ  Ｇ．Ｆ．，  Ｂｏｇｄａｎ  Ｎ．Ｊ．，および  Ｂｒｏｗｎ  Ｃ．Ｃ，  Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄｓ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｔｈｅ  ｒｅｐａｉｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｅｒｍａｌ  ｄａｍａｇｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｅｆｆａｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｗｒｉｎｋｌｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＵＶＢ−ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ  ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｏｕｓｅ．    Ｊ．  Ｍｕｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  ９１，  １７５−１８０，  １９８８  。
【００６４】
0003631259.tif 000007
【００６５】
Ｈ．急性毒性
急性毒性はＦｕｅｌｌｉｎｓｄｏｒｆ    白マウスで測定した。９−シス−レチノイン酸をなたね油に懸濁し、そして１回の投与量で腹腔内的に投与した。マウスの１０％、５０％および９０％の致死投与量（ＬＤ）を１回の投与量で適用後、２４時間、１０日および２０日後に記録した。それぞれの群に対して１０匹のマウスを使用した。
【００６６】
0003631259.tif 000008
【００６７】
以下の例は、本発明により与えられる９−シス−レチノイン酸を含有する医薬製剤を例示する。９−シス−レチノイン酸は、（Ｅ，Ｚ，Ｅ，Ｅ）−３，７−ジメチル−９−［２，６，６−トリメチル−１−シクロヘキセン−１−イル］−２，４，６，８−ノナテトラエン酸と称することもできる。
【００６８】
0003631259.tif 000009
【００６９】
0003631259.tif 000010
【００７０】
0003631259.tif 000011
【００７１】
例４
軟質ゼラチンカプセルに対する充填混合物
９−シス−レチノイン酸  ５．００−５０．００ｍｇ
油＊                            １−  ３部
ワックス混合物＊＊              １−  ５部
充填容量                      １−  ６ミニム（ｍｉｎｉｍ）
＊    天然植物油、例えば大豆油、落花生油および人工グリセライド
＊＊  天然および人工ワックスの組成物または部分的水和化脂肪。
【００７２】
例５
１．活性物質２０ｍｇを含有する硬質ゼラチンカプセル
組成：１個のカプセルは次の成分を含有する。
９−シス−レチノイン酸                    ２０．０ｍｇ
ゼラチンブルーム３０                      ７０．０ｍｇ
マルトデキストリンＭＤ０５              １０８．０ｍｇ
ｄｌ−α−トコフェロール                      ２．０ｍｇ
アスコルビン酸ナトリウム                  １０．０ｍｇ
微結晶性セルロース                        ４８．０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                    ２．０ｍｇ
（カプセル含有重量）                    ２６０．０ｍｇ
【００７３】
操作：
活性成分を、ゼラチン、マルトデキストリン、ｄｌ−α−トコフェロールおよびアスコルビン酸ナトリウムの溶液中で湿潤ミル処理した。
【００７４】
湿潤ミル処理した懸濁液を、噴霧乾燥した。
【００７５】
噴霧乾燥した粉末を、微結晶性セルロースおよびステアリン酸マグネシウムと混合した。
【００７６】
この混合物のそれぞれ２６０ｍｇを、適当の大きさおよび色の硬質ゼラチンカプセルに充填した。
【００７７】
例６
２．活性物質２０ｍｇを含有する錠剤
組成：
錠剤核：
９−シス−レチノイン酸                    ２０．０ｍｇ
無水のラクトース                        １３０．５ｍｇ
微結晶性セルロース                        ８０．０ｍｇ
ｄｌ−α−トコフェロール                      ２．０ｍｇ
アスコルビン酸ナトリウム                  １０．０ｍｇ
ポリビニルピロリドンＫ３０                  ５．０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                    ２．５ｍｇ
（核重量）                              ２５０．０ｍｇ
フィルム被覆：
９ヒドロキシプロピルメチルセルロース        ３．５ｍｇ
ポリエチレングリコール６０００              ０．８ｍｇ
タルク                                      １．３ｍｇ
酸化鉄、黄色                                ０．８ｍｇ
二酸化チタン                                ０．８ｍｇ
（フィルムの重量）                          ７．４ｍｇ
【００７８】
操作：
９−シス−レチノイン酸を無水のラクトースおよび微結晶性セルロースと混合した。
【００７９】
この混合物を、ポリビニルピロリドン、ｄｌ−α−トコフェロールおよびアスコルビン酸ナトリウムの溶液／分散液とともに水中で顆粒化した。
【００８０】
この顆粒物質をステアリン酸マグネシウムと混合し、そしてその後２５０ｍｇの重量を有する核として圧縮した。
【００８１】
この核を上述した組成の溶液／懸濁液でフィルム被覆した。
【００８２】
例７
活性物質５０ｍｇを含有するサツシエ（Ｓａｃｈｅｔ）
組成：
９−シス−レチノイン酸                      ５０．０ｍｇ
ラクトース（微粉末）                      ９９０．０ｍｇ
微結晶性セルロース                    １，４００．０ｍｇ
ナトリウムカルボキシメチルセルロース        １４．０ｍｇ
ｄｌ−α−トコフェロール                        ５．０ｍｇ
アスコルビン酸ナトリウム                    ２０．０ｍｇ
ポリビニルピロリドンＫ３０                  １０．０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                    １０．０ｍｇ
風味剤                                        １．０ｍｇ
（サツシエの充填重量）                ２，５００．０ｍｇ
【００８３】
操作：
９−シス−レチノイン酸をラクトース、微結晶性セルロースおよびナトリウムカルボキシメチルセルロースと混合した。
【００８４】
この混合物をポリビニルピロリドン、ｄｌ−α−トコフェロールおよびアスコルビン酸ナトリウムの溶液／分散液とともに水中で顆粒化した。
【００８５】
この顆粒をステアリン酸マグネシウムおよび風味剤と混合した。
【００８６】
それを適当な大きさのサツシエ中に充填した。