(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0003725600.tif 000055
の化合物および（または）式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容し得る塩および（または）式（Ｉ）の化合物の立体異性体。
上記式において、
基Ｒ1、Ｒ2およびＲ3の少なくとも２個は存在し、そして相互に独立して、
（１）  ＯＨ、
（２）  （Ｃ1〜Ｃ12）−アルコキシ、
（３）  −Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ12）−アルキル−ＣＯＯＨ、
（４）  −Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ12）−アルキル−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ12）−アルキル、
（５）  （Ｃ3〜Ｃ12）−シクロアルコキシ、
（６）  （Ｃ3〜Ｃ6）−アルケニルオキシ、
（７）  （Ｃ5〜Ｃ7）−シクロアルキル−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシ、
（８）  異種原子がＮ、Ｓおよび（または）Ｏであるヘテロアリール−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシ、
（９）  異種原子がＮ、Ｓおよび（または）Ｏであり、ヘテロシクロアルキル基が置換されていないかまたは（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルにより１〜３回置換されておりそしてヘテロシクロアルキル基が５または６員を有しているヘテロシクロアルキル−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシ、
（１０）  フェニル−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシ、
（１１）  ハロメチルまたは（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシにより１〜３回置換されたベンジルオキシ、
（１２）  （Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシにより１〜３回置換されたフェノキシであり、
（１３）  芳香族環上の２個の直接隣接した炭素原子上の置換分である基Ｒ1、Ｒ2また
はＲ3の２個は芳香族環上のメチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成していてもよく、
（１４）  式II、IIIまたはIV
【化２】
0003725600.tif 000056
（式中、Ｒ8は、（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルまたは水素原子である）の基、または
（１５）  式Ｖ
【化３】
0003725600.tif 000057
（式中、Ｒ1′は（１）〜（１２）からのＲ1に対して定義した通りでありそして(Ｃ−Ａ−Ｃ）、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は以下に定義する通りである）の基であり、
Ｒ5は、
（１）  ＣＮ、
（２）  ＣＨ2ＮＨＲ9（式中、Ｒ9は水素原子または−Ｃ(Ｏ)−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルである）、または
（３）  式VI
（VI）  −Ｃ(＝Ｏ)−Ｏ−Ｒ10
〔式中、Ｒ10は(１）水素原子、(２）置換されていないかまたは１〜４個の2.1 −ＣＯＯＨ、2.2 −Ｃ(Ｏ)−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルまたは2.3
【化４】
0003725600.tif 000058
（式中、Ｒは2.3.1 水素原子、2.3.2 （Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルであるかまたは2.3.3 それが結合している窒素原子と一緒になってモルホリン環を形成する）により置換されている（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルまたは（３）トリアルキルシリルである〕であり、
Ｒ6およびＲ7は、相互に独立して、
（１）  水素原子または
（２）  （Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルであり、
（Ｃ−Ａ−Ｃ）は、
１）  （ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝Ｃ）、
２）  （ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ）、
３）  （ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ）、
４）  （−ＣＨ2−ＣＨ）または
５）  （−ＣＨ＝Ｃ）であり、そして
但し、基Ｒ5がＣＮ基である場合は、基Ｒ1、Ｒ2またはＲ3の１個まではヒドロキシル基であり、または基Ｒ10が水素原子である場合は、基Ｒ1、Ｒ2またはＲ3のいずれもヒドロキシル基でなく、または基Ｒ10がメチル、エチルまたはｔ−ブチルである場合は、基Ｒ1、Ｒ2またはＲ3はメトキシでなくそして化合物
【化５】
0003725600.tif 000059
は除く。
【請求項２】
基Ｒ1、Ｒ2およびＲ3の少なくとも２個が存在し、そして相互に独立して、
（１）  ＯＨ、
（２）  （Ｃ1〜Ｃ6）−アルコキシ、
（３）  −Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル−ＣＯＯＨ、
（４）  −Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、
（５）  （Ｃ5〜Ｃ7）−シクロアルコキシ、
（６）  （Ｃ3〜Ｃ6）−アルケニルオキシ、
（７）  （Ｃ5〜Ｃ7）−シクロアルキル−（Ｃ1〜Ｃ2）−アルコキシ、
（８）  異種原子がＮおよび（または）Ｏであるヘテロアリール−（Ｃ1〜Ｃ2）−アルコキシ、
（９）  異種原子がＮおよび（または）Ｏであり、ヘテロシクロアルキル基が置換されていないかまたは（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルにより１〜３回置換されており、そしてヘテロシクロアルキル基が５または６員を有しているヘテロシクロアルキル−（Ｃ1〜Ｃ2）−アルコキシ、
（１０）  フェニル−（Ｃ1〜Ｃ2）−アルコキシ、
（１１）  ハロメチルまたは（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシにより１〜３回置換されたベンジルオキシ、
（１２）  （Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシにより１〜３回置換されたフェノキシであり、
（１３）  基Ｒ1、Ｒ2またはＲ3の２個は、両方式（II）
(II）      −Ｏ−Ｃ(＝Ｏ)−Ｒ8
（式中、Ｒ8は（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルである）の基であり、そして
Ｒ5が、
（１）  ＣＮ、
（２）  ＣＨ2ＮＨＲ9（式中、Ｒ9は水素原子または−Ｃ(Ｏ)−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルである）、または
（３）  式VI
(VI）      −Ｃ(＝Ｏ)−Ｏ−Ｒ10
〔式中、Ｒ10は、
（１）  水素原子、
（２）  置換されていないかまたは１個の（１）−ＣＯＯＨ、（２）−Ｃ(Ｏ)−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルまたは（３）
【化６】
0003725600.tif 000060
（式中、Ｒは（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルである）により置換されている（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、または
（３）  トリアルキルシリルである〕であり、
Ｒ6およびＲ7が相互に独立して、水素原子または（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルであり、
（Ｃ−Ａ−Ｃ）が、
（１）  （−ＣＨ2ＣＨ）または
（２）  （−ＣＨ＝Ｃ）である式Ｉの化合物。
【請求項３】
Ｒ1がメトキシであり、
Ｒ2がメトキシまたはベンジルオキシであり、
Ｒ3がメトキシまたはベンジルオキシであり、そして
Ｒ5が、
（１）  ＣＮ、
（２）  ＣＨ2ＮＨＲ9（式中、Ｒ9は水素原子または−Ｃ(Ｏ)−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルである）、または
（３）  式VI〔式中、Ｒ10は(1)水素原子または(2) (1)−ＣＯＯＨ、(2)
【化７】
0003725600.tif 000061
（式中、Ｒは水素原子および（または)(Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルである）により置換された（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルである〕の基であり、
Ｒ6およびＲ7が水素原子または（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルであり、そして
(Ｃ−Ａ−Ｃ)が(−ＣＨ＝Ｃ）である請求項１または２記載の式Ｉの化合物。
【請求項４】
Ｒ1が水素原子であり、
Ｒ2およびＲ3が両方メトキシであり、
Ｒ5が式VI（式中、Ｒ10は水素原子またはイソプロピルである）の基であり、
Ｒ6およびＲ7が、両方エチルまたはメチルであり、そして
（Ｃ−Ａ−Ｃ）が（−ＣＨ2−ＣＨ）基である請求項１〜３の何れかの項記載の式Ｉの化合物。
【請求項５】
Ｒ1が水素原子であり、
Ｒ2およびＲ3が両方ベンジルオキシであり、
Ｒ5が式VI（式中、Ｒ10は水素原子またはイソプロピルである）の基であり、
Ｒ6およびＲ7がメチルまたはエチルであり、そして
（Ｃ−Ａ−Ｃ）が（−ＣＨ＝Ｃ）基である請求項１〜４の何れかの項記載の式Ｉの化合物。
【請求項６】
式（Ｉ）
【化８】
0003725600.tif 000062
｛式中、
基Ｒ1、Ｒ2およびＲ3の少なくとも２個は存在し、そして相互に独立して、
（１）  ＯＨ、
（２）  （Ｃ1〜Ｃ12）−アルコキシ、
（３）  −Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ12）−アルキル−ＣＯＯＨ、
（４）  −Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ12）−アルキル−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ12）−アルキル、
（５）  （Ｃ3〜Ｃ12）−シクロアルコキシ、
（６）  （Ｃ3〜Ｃ6）−アルケニルオキシ、
（７）  （Ｃ5〜Ｃ7）−シクロアルキル−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシ、
（８）  異種原子がＮ、Ｓおよび（または）Ｏであるヘテロアリール−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシ、
（９）  異種原子がＮ、Ｓおよび（または）Ｏであり、ヘテロシクロアルキル基が置換されていないかまたは（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルにより１〜３回置換されており、そしてヘテロシクロアルキル基が５または６員を有するヘテロシクロアルキル−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシ、
（１０）  フェニル−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシ、
（１１）  ハロメチルまたは（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシにより１〜３回置換されたベンジルオキシ、
（１２）  （Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシにより１〜３回置換されたフェノキシであり、
（１３）  芳香族環の２個の直接隣接した炭素原子上の置換分である基Ｒ1、Ｒ2またはＲ3の２個は、芳香族環上のメチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し、
（１４）  式II、IIIまたはIV
【化９】
0003725600.tif 000063
（式中、Ｒ8は（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルまたは水素原子である）の基、
（１５）  式Ｖ
【化１０】
0003725600.tif 000064
（式中、Ｒ1′は、（１）〜（１２）からのＲ1に対して定義した通りでありそして（Ｃ−Ａ−Ｃ）、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は以下に定義する通りである）の基であり、または
（１６）  Ｒ1およびＲ7は、式Ｉａ
【化１１】
0003725600.tif 000065
（式中、Ｒ2およびＲ3は上述した通りでありそしてＲ5およびＲ6は以下に定義する通りである）の化合物を形成し、または
（１７）  Ｒ1およびＲ5は、式Ｉｂ
【化１２】
0003725600.tif 000066
（式中、Ｒ2およびＲ3は上述した通りでありそしてＲ6およびＲ7は以下に定義する通りである）の化合物を形成し、
Ｒ5は、
（１）  ＣＮ、
（２）  ＣＨ2ＮＨＲ9（式中、Ｒ9は、水素原子または−Ｃ(Ｏ)−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルである）または
（３）  式VI
（VI）      −Ｃ(＝Ｏ)−Ｏ−Ｒ10
〔式中、Ｒ10は、
（１）  水素原子、
（２）  置換されていないかまたは１〜４個の2.1 −ＣＯＯＨ、2.2 −Ｃ(Ｏ)−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ3）アルキルまたは2.3
【化１３】
0003725600.tif 000067
（式中、Ｒは、2.3.1 水素原子、2.3.2 （Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルであるかまたは2.3.3 それが結合している窒素原子と一緒になってモルホリン環を形成する）により置換されている（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、または
（３）  トリアルキルシリルである〕であり、
Ｒ6およびＲ7は、相互に独立して、
（１）  水素原子または
（２）  （Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルであり、そして
（Ｃ−Ａ−Ｃ）は、
１）  （ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ）、
２）  （ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ）、
３）  （ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ）、
４）  （ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ）、
５）  （−ＣＨ2−ＣＨ）、
６）  （−ＣＨ＝Ｃ）
である｝
（ただし、式（Ｉ）において、（Ｃ−Ａ−Ｃ）が（−ＣＨ＝Ｃ）であり、Ｒ5がＣＮであり、Ｒ6とＲ7が同一でかつエチルであり、Ｒ1とＲ2が共に−ＯＨあって（Ｃ−Ａ−Ｃ）に対しメタおよびパラ位に結合し、そしてＲ3が水素原子である化合物は除く）
の化合物および（または）式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容し得る塩および（または）式（Ｉ）の化合物の立体異性体の少なくとも１種の化合物の有効量を含有する医薬。
【請求項７】
変形性関節疾患、軟骨損傷を伴うリウマチ性疾患、例えばリウマチ様関節炎、関節外傷および関節の延長された非可動化の結果としての軟骨融解、炎症、敗血症性ショック、損傷された白血球粘着による疾患、癌壊死因子αの上昇した濃度により起る疾患、例えば悪液質またはクローン病の治療および予防用の医薬を製造するための請求項１〜５の何れかの項記載の式Ｉの少なくとも１種の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
変形性関節症は、機能の損傷または完全な関節強直を招く炎症性エピソードおよび進行性軟骨機能障害を有する変形性関節疾患である。現在まで、付随する炎症およびこの疾患に関連した疼痛の状態は治療することができるけれども、進行性軟骨損傷（breakdown）を中止または治療することができることが証明されている利用可能な医薬はない。変形性関節症に対する既知の治療剤の例は、硫酸化グルコサミノグリカンの混合物（Current Therapeutic Research, 40, 6 (1986) 1034）または非ステロイド性抗炎症薬剤であるが、これらは軟骨の喪失を中止することができない。変形性関節症および関節炎の病因はまだ詳細に明らかにされていないけれども、コンドロサイト（chondrocytes）（軟骨細胞）が基質の増加した喪失に決定的に関与しそしてこの基質の主な構成成分のうち特にプロテオグリカン（ＰＧ）が酵素分解をうける第一のものであるということが確実なものとして考えられている。
【０００２】
すなわち、変形性関節症を治療するために有望な医薬は、その作用のプロフィルのために、コンドロサイトにおけるプロテオグリカン合成を刺激しそしてさらに、軟骨損傷の病理学的に増加した速度に反作用するものである。さらに、プロテオグリカンの分解は、基質メタロプロティナーゼを阻害することによってまたはさもなければ反応性酵素遊離基を不活性化することによって減少させることができる。
関節炎の治療に対する他の方法は、関節炎におけるサブスタンスＰの増加された濃度である。サブスタンスＰ（ＳＰ）は、中枢神経系および末梢神経系の両方において広く分布している神経ペプチドである（Pernow, Pharmacological Reviews 35：85-141, 1983）。関節炎におけるＳＰの作用および重要性は、１９８４年から知られている（J. Levine等，Science 226：547-549, 1984）。関節におけるＳＰ濃度と関節炎の程度との間には明らかに相関性がある。
【０００３】
本発明による式Ｉの化合物は、軟骨におけるプロテオグリカン合成を刺激し、病理学的に増加した酵素軟骨損傷を抑制しそして酸素遊離基により誘発される軟骨破壊を有効に減少するということが見出された。さらに、本発明による化合物は、サブスタンスＰの作用に拮抗するということが見出された。
ホスホノ酢酸誘導体は、次の文献に記載されている。Pollers-Wieer C 等，Tetrahedron 37：4321-4326, 1981；Magnus P等，J. Am. Chem. Soc. 107：4984-4988, 1985；Chenault J. およびDupin J., Synth. Commun, 14：1059-1065, 1984。ホスホノ酢酸誘導体の血管拡張作用は、文献Nippon Shinyako Co. Ltd., Jpn. Kokai Tokyo Koho 41およびそれ以下、１９８４に記載されている。
【０００４】
本発明は、式（Ｉ）
【化１８】
0003725600.tif 000002
の化合物および（または）式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容し得る塩および（または）式（Ｉ）の化合物の立体異性体に関するものである。
【０００５】
上記式において、
基Ｒ1、Ｒ2およびＲ3の少なくとも２個は、存在しそして相互に独立して、
（１）  ＯＨ、
（２）  （Ｃ1〜Ｃ12）−アルコキシ、
（３）  −Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ12）−アルキル−ＣＯＯＨ、
（４）  −Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ12）−アルキル−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ12）−アルキル、
（５）  （Ｃ3〜Ｃ12）−シクロアルコキシ、
（６）  （Ｃ3〜Ｃ6）−アルケニルオキシ、
（７）  （Ｃ5〜Ｃ7）−シクロアルキル−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシ、
（８）  異種原子がＮ、Ｓおよび（または）Ｏであるヘテロアリール−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシ、
（９）  異種原子がＮ、Ｓおよび（または）Ｏであり、ヘテロシクロアルキル基が置換されていないかまたは（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルにより１〜３回置換されておりそしてヘテロシクロアルキル基が５または６員を有しているヘテロシクロアルキル−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシ、
（１０）  フェニル−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシ、
（１１）  ハロメチルまたは（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシにより１〜３回置換されたベンジルオキシ、
（１２）  （Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシにより１〜３回置換されたフェノキシであり、
（１３）  芳香族環上の２個の直接隣接した炭素原子上の置換分である基Ｒ1、Ｒ2またはＲ3の２個は芳香族環上のメチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成していてもよく、
（１４）  式II、IIIまたはIV
【化１９】
0003725600.tif 000003
（式中、Ｒ8は、（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルまたは水素原子である）の基、
（１５）  式Ｖ
【化２０】
0003725600.tif 000004
(式中、Ｒ1′は(１)〜(１２)からのＲ1に対して定義した通りでありそして(Ｃ−Ａ−Ｃ)、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は以下に定義する通りである)の基であり、または
【０００６】
（１６）  Ｒ1およびＲ7は、共有結合でありそして結果として式Ｉａ
【化２１】
0003725600.tif 000005
（式中、Ｒ2およびＲ3は上述した通りでありそしてＲ5およびＲ6は以下に定義する通りである）の化合物を形成していてもよく、または、
【０００７】
（１７）  Ｒ1およびＲ5は共有結合でありそして結果として式Ｉｂ
【化２２】
0003725600.tif 000006
（式中、Ｒ2およびＲ3は上述した通りでありそしてＲ6およびＲ7は後述する通りである）の化合物を形成していてもよく、そして
Ｒ5は、
（１）  ＣＮ、
（２）  ＣＨ2ＮＨＲ9（式中、Ｒ9は水素原子または−Ｃ(Ｏ)−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルである）、または
（３）  式VI
（VI）      −Ｃ(＝Ｏ)−Ｏ−Ｒ10
〔式中、Ｒ10は（１）水素原子、（２）置換されていないかまたは１〜４個の2.1 −ＣＯＯＨ、2.2 −Ｃ(Ｏ)−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルまたは2.3
【化２３】
0003725600.tif 000007
（式中、Ｒは2.3.1 水素原子、2.3.2（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルであるかまたは2.2.3 それが結合している窒素原子と一緒になってモルホリン環を形成する）により置換されている（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルまたは（３）トリアルキルシリルである〕であり、
【０００８】
Ｒ6およびＲ7は、相互に独立して、
（１）  水素原子または
（２）  （Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルであり、
（Ｃ−Ａ−Ｃ）は、
１）  （ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝Ｃ）、
２）  （ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ）、
３）  （ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ）、
４）  （−ＣＨ2−ＣＨ）または
５）  （−ＣＨ＝Ｃ）であり、そして
但し、基Ｒ5がＣＮ基である場合は、基Ｒ1、Ｒ2またはＲ3の１個まではヒドロキシル基であり、または基Ｒ10が水素原子である場合は、基Ｒ1、Ｒ2またはＲ3のいずれもヒドロキシル基でなく、または基Ｒ10がメチル、エチルまたはｔ−ブチルである場合は、基Ｒ1、Ｒ2またはＲ3はメトキシでなくそして化合物
【化２４】
0003725600.tif 000008
は除く。
【０００９】
基Ｒ1、Ｒ2およびＲ3の少なくとも２個が、存在しそして相互に独立して、
（１）  ＯＨ、
（２）  （Ｃ1〜Ｃ6）−アルコキシ、
（３）  −Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル−ＣＯＯＨ、
（４）  −Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、
（５）  （Ｃ5〜Ｃ7）−シクロアルコキシ、
（６）  （Ｃ3〜Ｃ6）−アルケニルオキシ、
（７）  （Ｃ5〜Ｃ7）−シクロアルキル−（Ｃ1〜Ｃ2）−アルコキシ、
（８）  異種原子がＮおよび（または）Ｏであるヘテロアリール−（Ｃ1〜Ｃ2）−アルコキシ、
（９）  異種原子がＮおよび（または）Ｏであり、ヘテロシクロアルキル基が置換されていないかまたは（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルにより１〜３回置換されており、そしてヘテロシクロアルキル基が５または６員を有しているヘテロシクロアルキル−（Ｃ1〜Ｃ2）−アルコキシ、
（１０）  フェニル−（Ｃ1〜Ｃ2）−アルコキシ、
（１１）  ハロメチルまたは（Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシにより１〜３回置換されたベンジルオキシ、
（１２）  （Ｃ1〜Ｃ3）−アルコキシにより１〜３回置換されたフェノキシであり、
（１３）  基Ｒ1、Ｒ2またはＲ3の２個は、両方式（II）
（II）      −Ｏ−Ｃ(＝Ｏ)−Ｒ8
（式中、Ｒ8は（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルである）の基であってもよく、そして
【００１０】
Ｒ5が、
（１）  ＣＮ、
（２）  ＣＨ2ＮＨＲ9（式中、Ｒ9は水素原子または−Ｃ(Ｏ)−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルである）、または
（３）  式VI
（VI）      −Ｃ(＝Ｏ)−Ｏ−Ｒ10
〔式中、Ｒ10は、
（１）  水素原子、
（２）  置換されていないかまたは１個の（１）−ＣＯＯＨ、（２）−Ｃ(Ｏ)−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルまたは（３）
【化２５】
0003725600.tif 000009
（式中、Ｒは（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルである）により置換されている（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、または
（３）  トリアルキルシリルである〕であり、
【００１１】
Ｒ6およびＲ7が相互に独立して、水素原子または（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルであり、
（Ｃ−Ａ−Ｃ）が、
（１）  （−ＣＨ2ＣＨ）または
（２）  （−ＣＨ＝Ｃ）である式Ｉの化合物が好ましい。
【００１２】
Ｒ1がメトキシであり、
Ｒ2がメトキシまたはベンジルオキシであり、
Ｒ3がメトキシまたはベンジルオキシであり、そして
Ｒ5が、
（１）  ＣＮ、
（２）  ＣＨ2ＮＨＲ9（式中、Ｒ9は水素原子または−Ｃ(Ｏ)−（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルである）、または
（３）  式VI〔式中、Ｒ10は(１)水素原子または(２)(１)−ＣＯＯＨ、(２)
【化２６】
0003725600.tif 000010
（式中、Ｒは水素原子および（または)(Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルである）により置換された（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルである〕の基であり、
Ｒ6およびＲ7が水素原子または（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルであり、そして
（Ｃ−Ａ−Ｃ）が（−ＣＨ＝Ｃ）である式Ｉの化合物が特に好ましい。
【００１３】
さらに、
Ｒ1が水素原子であり、
Ｒ2およびＲ3が両方メトキシであり、
Ｒ5が式VI（式中、Ｒ10は水素原子またはイソプロピルである）の基であり、
Ｒ6およびＲ7が、両方エチルまたはメチルであり、そして
（Ｃ−Ａ−Ｃ）が（−ＣＨ2−ＣＨ）基である式Ｉの化合物が好ましい。
【００１４】
Ｒ1が水素原子であり、
Ｒ2およびＲ3が両方ベンジルオキシであり、
Ｒ5が式VI（式中、Ｒ10は水素原子またはイソプロピルである）の基であり、
Ｒ6およびＲ7がメチルまたはエチルであり、そして
(Ｃ−Ａ−Ｃ)が(−ＣＨ＝Ｃ）基である式Ｉの化合物が非常に特に好ましい。
【００１５】
アルキルおよびアルコキシなる用語は、炭素鎖が直鎖状または分枝鎖状である基を意味する。シクロアルキル基の環状アルキル基は、特に５〜７員の単環状基、例えばシクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルである。ヘテロアリールアルコキシ基のヘテロアリール基は、特にピリジルおよびチエニルのような基である。ヘテロシクロアルキルアルコキシ基のヘテロシクロアルキル基は、特にピペリジニルおよびモルホリニルのような基である。ハロメチル基におけるハロゲンは、弗素、塩素、臭素または沃素である。
“芳香族環の２個の直接隣接した炭素原子上の置換分である基Ｒ1、Ｒ2またはＲ3の２個が一緒になって芳香族環上のメチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成する”という定義は、例えば１,３−ジオキソレンまたは１,４−ジオキサン−２−エン基を包含する。
【００１６】
さらに、本発明は、式Ｉの化合物を製造する方法に関するものであって、一つの実施化は、
（ａ）  テトラヒドロフランおよび四塩化チタンの存在下においてまたはテトラヒドロフランおよび式IX
（IX）    （Ｒ11)3ＴｉＣｌ
（式中、Ｒ11は−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルである）のオルトチタントリエステルの存在下において、式VII
【化２７】
0003725600.tif 000011
（式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は式Ｉにおいて定義した通りでありそして（Ｃ−Ｂ−Ｃ）は共有結合、（−ＣＨ＝ＣＨ−）、（−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2）、（−ＣＨ2−ＣＨ2）または（−ＣＨ2−）である）の化合物を式VIII
【化２８】
0003725600.tif 000012
（式中、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、式Ｉにおいて定義した通りである）の化合物とまたは式VIIIの化合物の塩と反応させ、または
【００１７】
（ｂ）  方法（ａ）により製造されたそしてその化学構造のためにエナンチオマーまたは立体異性体形態で存在する式Ｉの化合物を、エナンチオマー的に純粋な酸または塩基との塩形成、キラル固定相上のクロマトグラフィーまたはアミノ酸のようなキラルエナンチオマー的に純粋な化合物を使用した誘導化、この方法で得られたジアステレオマーの分離およびキラル補助基の除去によって純粋なエナンチオマーに分別するかまたはクロマトグラフィーによって立体異性体を分別し、または
（ｃ）  （ａ）において製造された式Ｉ（式中、Ｒ1、Ｒ2またはＲ3の少なくとも１個は式IIまたはIIIの基である）の化合物を、相当するフェノールに加水分解し、または
（ｄ）  方法（ｃ）の反応を重炭酸ナトリウムの存在下で実施し、
（ｅ）  方法（ａ）で製造された式Ｉ（Ｒ5は式VIの基でありそして（または）Ｒ1、Ｒ2またはＲ3の少なくとも１個は基−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ12）−アルキル−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ12）−アルキルである）の化合物を、カルボン酸に加水分解し、または
（ｆ）  方法（ｅ）の反応を、エタノール性水酸化カリウム溶液または塩酸溶液の存在下において実施し、または
（ｇ）  （ａ）で製造されたそして１個または２個の二重結合を含有する式Ｉの化合物を（α）水素およびＰｄ／Ｃ触媒またはラネーニッケルまたは（β）水素化硼素ナトリウムで水素添加し、または
【００１８】
（ｈ）  (ａ)で製造された式Ｉのモノアルキルまたはジアルキルホスホネートをホスホン酸モノエステルまたはホスホン酸に加水分解し、ホスホン酸エステルの開裂をジクロロメタン中ブロモトリメチルシランの存在下で実施し、または
（ｉ）  方法(ａ)、(ｂ)、(ｃ)、(ｅ)、(ｇ)、(ｈ)、(ｋ)または（ｌ）により製造された式Ｉの化合物を遊離形態で単離するか、または、酸性または塩基性基が存在する場合はそれを生理学的に許容し得る結晶性塩に変換し、または
（ｋ）  式Ｉ（基Ｒ1、Ｒ2またはＲ3の少なくとも１個のヒドロキシル基である）の化合物を、水素化ナトリウムで処理した後またはアセトニトリル、ジメチルホルムアミドまたは環状ケトン中において炭酸カリウムの存在下で式XI
（XI）      Ｘ−Ｒ13
（式中、Ｘはハロゲンまたは場合によっては置換されているフェニルスルホニルオキシでありそしてＲ13は式Ｉにおける（１）〜（１２）のＲ1に対して定義した通りである）の化合物と、または必要に応じてピリジンのような窒素塩基による触媒作用を使用してＲ13ＣＯＣｌまたはＲ13−Ｃ(＝Ｏ)−Ｏ−Ｃ(＝Ｏ)−Ｒ13（式中、Ｒ13は、式XIにおいて定義した通りである）と反応させて相当するフェノールエーテルまたはフェノールエステルを得、
【００１９】
（ｌ）  方法（ａ）により製造された式Ｉ（式中、Ｒ5はＣＮである）の化合物を（ｇ）（α）に記載した方法により水素およびＰｄ／Ｃ触媒またはラネーニッケルの存在下において水素添加し、または
（ｍ）  方法（ｌ）により得られたアミノ化合物を（Ｃ1〜Ｃ3）−アルキルカルボン酸無水物と反応させて相当するカルボキサミドを得、または
（ｎ）  方法（ａ）により製造された式Ｉ（式中Ｒ5は−ＣＯＯＨである）の化合物をエステル化により相当するカルボン酸エステルに変換し、そしてこの場合、カルボン酸を塩化オキザリルでカルボニルクロライドに変換しそして後者をＲ10−ＯＨと反応させることからなる。
【００２０】
本発明は、また医薬的に適当なそして生理学的に許容し得るベヒクル、添加剤および（または）他の活性物質および補助物質と一緒に式（Ｉ）
【化２９】
0003725600.tif 000013
（式中、基Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、Ｒ6、（Ｃ−Ａ−Ｃ）およびＲ7は式Ｉにおいて定義された通りでありそしてただし書の条件を含む）の化合物および（または）式Ｉの化合物の生理学的に許容し得る塩および（または）必要に応じて式Ｉの化合物の立体異性体の少なくとも１種の化合物の有効含量を有する医薬に関するものである。
【００２１】
本発明による化合物は、その薬理学的性質のために、変形性関節疾患、軟骨損傷を伴うリウマチ性疾患、例えば慢性リウマチ様関節炎、関節外傷および関節の延長された非可動化の結果としての軟骨融解、炎症、敗血症性ショック、損傷された白血球粘着による疾患、癌壊死因子αの上昇した濃度により起る疾患、例えば悪液質またはクローン病の治療および予防に顕著に適している。
変形性関節疾患の例は、変形性関節症、軟骨損傷を伴う他のリウマチ性疾患、リウマチ様関節炎、関節外傷後、例えば半月または膝蓋骨損傷または破裂靭帯後の軟骨融解または関節の延長した非可動化に関連した軟骨融解である。
本発明による医薬は、経口的に、筋肉内的に、関節周囲的に、関節内的に、静脈内的に、腹腔内的に、皮下的にまたは直腸的に投与することができる。
【００２２】
本発明は、また、式Ｉの少なくとも１種の化合物を、医薬的に適当なそして生理学的に許容し得るベヒクルおよび必要に応じて、他の適当な活性物質、添加剤または補助物質を使用して、適当な投与形態に変換することからなる医薬の製造方法に関するものである。
適当な固体または液状の医薬の例は、普通の助剤、例えばベヒクル、崩壊剤、結合剤、被覆剤、膨潤剤、滑走剤、または滑沢剤、風味料、甘味剤および可溶化剤を使用して製造される顆粒、粉末、被覆錠剤、錠剤、(ミクロ)カプセル、坐剤、シロップ、溶液、懸濁液、乳濁液、滴下剤または注射用溶液および活性物質の徐放性製品である。あげることのできる補助物質は、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンニトールおよび他の糖類、タルク、ラクトアルブミン、ゼラチン、殿粉、セルロースおよびその誘導体、動物および植物油、例えば魚肝油、ヒマワリ油、落花生油または胡麻油、ポリエチレングリコールおよび溶剤、例えば滅菌水および一価または多価アルコール、例えばグリセロールである。
【００２３】
医薬は、好ましくは、それぞれの単位が活性成分として本発明による式Ｉの化合物の特定の投与量を含有する投与単位として製造しそして投与される。錠剤、カプセル、被覆錠剤または坐剤のような固体の投与単位の場合においては、この投与量は約１０００mgまで、好ましくは約５０〜３００mgにすることができそしてアンプル形態中の注射用溶液に対しては、それは約３００mgまで、好ましくは約１０〜１００mgである。
体重約７０kgの成人患者の治療に対する一日当りの投与量は、式Ｉの化合物の効能によって、活性物質約２０〜１０００mg、好ましくは約１００〜５００mgである。しかしながら、ある情況においては、より高いまたはより低い一日当りの投与量も適当である。一日当りの投与量は、一個の投与単位またはさもなければ数個のより小さな投与単位の形態における一回の投与によってまたは分割した投与量を特定の間隔で多数回投与することによって投与することができる。
【００２４】
以下に記載する化合物の構造は、すべて、元素分析、質量スペクトル、ＩＲおよび（または）1Ｈ−ＮＭＲスペクトルによって証明した。ＮＭＲスペクトルは、Varian Associates Inc. Gemini 200(200MHz)機器で得られた。
化学シフトは、δ値（ppm〔１００万部当りの部数〕、テトラメチルシランからの低フィールドシフト）で表わす。Ｅ／Ｚ立体異性体比を測定するＨＰＬＣ条件は、以下の通りである：
分析カラム：LichroCARTR 125-4 LichroSperR 100RP-18、末端キャップ化５μm（Merck 1.508.0001）、１.５ml／分；溶離剤Ａ＝アセトニトリル；溶離剤Ｂ＝０.１モル燐酸。良好な分離は、線形勾配を使用して得ることができる。この目的に対して、溶剤含量は、０〜１０分の過程にわたってＡｍ％からＡｎ％に増加し次いで５分Ａｎ％の溶剤含量を使用してアイソクラチック溶離する。Ｒ値〔％〕は、適切な保持時間ｔ〔分〕を有するステレオマーの含量を示す。ＵＶ（２５４nm）検出。シリカゲルプレート（シリカゲル６０Ｆ254スペシャル０.２５mm，Riedel-de Haen AG, Seelze）を、薄層クロマトグラフィーに対して使用する。
【００２５】
“減圧下における蒸発”は、回転蒸発器（Buechi RE 140）を使用して、装置の製造業者により推奨された条件下で実施する。カラムクロマトグラフィーは、シリカゲル６０（粒子の大きさ４０〜６３μｍ、Merck）上で実施する。
記載した収量は、最適のものではない。実施例番号の後の括弧内の数字は、表１における相当する化合物の番号を示す。
【００２６】
実施例１（６２）
３−（３,４−ジベンジルオキシフェニル）−２−（ジエトキシホスフィニル）プロペン酸イソプロピル（Ｅステレオマー）
クロロチタニウムトリイソプロポキシド〔（ＣＨ3)2ＣＨＯ〕3ＴｉＣｌ（８.１ml；０.０３４モル）を、０℃でテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）５０mlに滴加しそして撹拌し、次いでそれぞれテトラヒドロフラン１２.５ml中の３,４−ジベンジルオキシベンズアルデヒド（８ｇ；０.０１５７モル）の溶液およびホスホノ酢酸トリエチル（３.５２ｇ；０.０１５７モル）の溶液を加える。さらに撹拌（３０分）した後、ＴＨＦ（２５ml）中のＮ−メチルモルホリン（５.５６ml；０.０５モル）の溶液を０℃で滴加する。室温に加温した後、撹拌を１０時間つづける。それから、水（４０ml）を加えそして沈殿した二酸化チタンを吸引漏斗により除去する。濾液を、毎回ジエチルエーテル７５mlで３回抽出する。合した有機相をＮａ2ＳＯ4上で乾燥しそして減圧下で蒸発する。残留油を６０℃の温度および０.０２mmHgの圧力下でクーゲルロール装置中で乾燥する。淡黄色の油を得た。収量：６ｇ（理論値の７１％）。
Ｅステレオマーの含量：≧９３％
HPLC：ｍ＝ｎ＝20；Ｒ＝94.2；ｔ＝12.34
1H-NMR：(CDCl3中；200 MHz): δ=8.0(d; ＜0.1H; J=43Hz), 7.2(m; 14H), 5.15(m; 5H), 4.15(m; 4H), 1.36(t; 6H), 1.24(d; 6H)
C30H35O7P（分子量(MW)＝538.58ｇ/モル）に対する元素分析値：
計算値  Ｃ 66.90  Ｈ 6.56  Ｐ 5.75
実測値  Ｃ 67.46  Ｈ 6.72  Ｐ 5.58
【００２７】
実施例２（５７）
３−（３,４−ジアセトキシフェニル）−２−（ジエトキシホスフィニル）プロペン酸エチル
乾燥ジクロロメタン１６ml中の四塩化チタン（７.７４ml；０.０７０６モル）の溶液を、湿気を排除しそしてはげしく撹拌しながら、無水のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１００mlに０℃で開始して滴加する。発熱反応を１５℃で進行させる。再び０℃に冷却した後、３,４−ジアセトキシベンズアルデヒド（８ｇ；０.０３５モル；E PascuおよびL. V. Vargha, Ber. dtsch. Chem. Ges., 59: 2717, 1926）およびホスホノ酢酸トリエチル（７.３８ｇ；０.０３５モル）を加える。それから、３０分後に、０℃に能率よく冷却しながら、無水のテトラヒドロフラン３０ml中の乾燥Ｎ−メチルモルホリン（１４.４ml；０.１３１モル）の溶液を加える。混合物を徐々に（３時間）室温に到達させそして一夜より長くなく少なくとも３０分放置する。水（４０ml）による加水分解、吸引濾過およびジエチルエーテルとともに振盪することによる濾液の反復抽出によって処理する。合した有機相を飽和ブラインで洗浄しそして硫酸ナトリウム上で乾燥する。減圧濃縮後に油を得そしてシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（溶離剤とし酢酸エチルおよびジクロロメタンを使用）する。これにより淡色の油を得た。
収量：８.９ｇ（理論値の５８.９％）
Ｅステレオマーの含量：≧９６％（ＨＰＬＣおよびＮＭＲデータによる、以下参照）。
HPLC: ｍ＝25; ｎ＝40; Ｒ＝96.03; ｔ＝6.21
1H-NMR: (CDCl3中; 200 MHz): δ=8.1(d; ＜0.1H; J=43Hz), 7.55(d; 1H; J=24Hz), 7.25(m; 3H), 4.20(m; 6H), 2.3(s; 6H), 1.39(t; 6H), 1.24(t; 3H)
C19H25O9P(MW＝428.37ｇ/モル)に対する元素分析値：
計算値  Ｃ 53.28  Ｈ 5.89  Ｐ 7.23
実測値  Ｃ 52.70  Ｈ 5.62  Ｐ 7.60
【００２８】
実施例３（４７）
２−（ジエトキシホスフィニル）−３−（３,４−ジヒドロキシフェニル）プロペン酸エチル
実施例２からの３−（３,４−ジアセトキシフェニル）−２−（ジエトキシホスフィニル）プロペン酸エチル（３ｇ；０.００７モル）を、保護ガス下で室温で１０時間飽和重炭酸ナトリウム溶液６０mlと一緒に撹拌する。混合物を５Ｎ塩酸で酸性にしそしてジクロロメタンと一緒に振盪することによって抽出する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥しそして減圧下で蒸発する。残留物を、６０℃の温度および０.０２mmHgの圧力下でクーゲルロール装置中で乾燥する。これによって褐色の油を得た。収量：１.９ｇ（理論値の８０％）。
C15H21O7P(MW＝344.30ｇ／モル）に対する元素分析値：
計算値  Ｃ 52.33  Ｈ 6.16  Ｐ 8.99
実測値  Ｃ 52.17  Ｈ 6.67  Ｐ 9.23
【００２９】
実施例４（２９）
２−（ジエトキシホスフィニル）−３−（３,４−ジメトキシフェニル）プロピオン酸
２−（ジエトキシホスフィニル）−３−（３,４−ジメトキシフェニル）プロピオン酸イソプロピル（０.５１ｇ；０.００１３モル；表１、Ｎｏ.６０）を、室温で１０時間、１Ｍ水酸化カリウム溶液５mlおよびエタノール５ml中で撹拌する。混合物を、５Ｎ塩酸で酸性にし、エタノールの大部分を減圧蒸発により除去しそして残留物を、水１０mlでうすめそして毎回ジクロロメタン５mlを使用して数回振盪することによって抽出する。合した有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥しそして減圧下で蒸発する。残った残留物を、６０℃の温度および０.０２mmHgの圧力下でクーゲルロール装置中で乾燥する。これによって淡色の粘稠油を得た。収量：０.３５ｇ（理論値の７８％）。
MS (EI) m/z 347 (M＋H+)；(C15H23O7P；MW＝346.32ｇ／モル）
【００３０】
実施例５（６１）
３−（３,４−ジアセトキシフェニル）−２−（ジエトキシホスフィニル）プロピオン酸エチル（ラセミ体）
実施例２からの３−（３,４−ジアセトキシフェニル）−２−（ジエトキシホスフィニル）プロペン酸エチル（４.２ｇ；０.００９８モル）を、３.４５バールの初期圧下でパール水素添加装置中で１０％Ｐｄ／Ｃ触媒０.５ｇ上で無水のエタノール２００ml中で、水素吸収が終るまで水素添加する。触媒を濾去しそして濾液を減圧下で蒸発する。残留物を、酢酸エチルを使用してシリカゲル上でクロマトグラフィー処理することができる。６０℃の温度および０.０２mmHgの圧力下でクーゲルロール装置中で乾燥して淡黄の油を得た。収量：３.２ｇ（理論値の７６％）。
MS (CI) m/z 431；(C19H27O9P；MW＝430.39ｇ／モル）
【００３１】
実施例６（２２）
３−（３,４−ジベンジルオキシフェニル）−２−（ジエトキシホスフィニル）プロピオン酸イソプロピル
氷水１０ml中の水素化硼素ナトリウム（０.０９５ｇ；０.００２５モル）の溶液を、０℃のエタノール７０ml中の実施例１からの３−(３,４−ジベンジルオキシフェニル）−２−(ジエトキシホスフィニル）プロペン酸イソプロピル（２.５ｇ；０.００４６モル)の溶液に滴加する。室温に加温した後、撹拌を２時間つづける。反応混合物を、５Ｎ塩酸で酸性にしそしてジクロロメタン（毎回１５ml）で数回抽出する。合した有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥しそして減圧下で蒸発する。残った淡色の油を、薄層クロマトグラフィー(ＳｉＯ2；ＣＨ2Ｃｌ2：ＥｔＯＡｃ＝７：３）により精製する。収量：１.８ｇ（理論値の７２.４％）。
MS (EI) m/z 541；(C30H37O7P；MW＝540.59ｇ／モル）
【００３２】
実施例７（５１）
２−（３,４−ジベンジルオキシベンジリデン）−イソプロポキシカルボニルメタンホスホン酸水素アンモニウム
実施例１からの３−（３,４−ジベンジルオキシフェニル）−２−（ジエトキシホスフィニル）プロペン酸イソプロピル（２ｇ；０.００３７モル）を、室温で３日間、ジクロロメタン（７０ml）中でブロモトリメチルシラン（０.５２ml；０.００４モル）と一緒に撹拌する。反応を完了させるために、ブロモトリメチルシラン（０.５２ml；０.００４モル）を再び加えそして撹拌を室温で６時間つづける。アンモニア化エタノールを加えそしてそれから、混合物を減圧下で蒸発する。部分的に結晶性の残留物をイソプロパノールで分散する。沈殿を濾過により除去しそして母液を回転蒸発器中で減圧下で約1/2の容量に濃縮する。形成した沈殿を濾過しそして乾燥して融点１８７〜１８８℃の固体の物質を得る。収量：１ｇ（理論値の５４％）。
MS (FAB)、(M＋Na+) m/z 505.2；C26H27O7P＋Na+；(MW＝505.41ｇ／モル）
NMR(200 MHz, DMSO): δ=7.2〜7.5(m; 10H), 6.8〜7.1(m; 4H), 5.08(d; 4H; J=16.7Hz), 4.95(m; 1H), 1.15(d; 6H; J=6.2Hz)
【００３３】
実施例８（８）
３−〔３,５−ジメトキシ−４−（４−メトキシベンジルオキシ）フェニル〕−２−（ジメトキシホスフィニル）プロペン酸イソプロピル
３−（３,５−ジメトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−２−（ジメトキシホスフィニル）プロペン酸イソプロピル（４ｇ；０.０１モル；表１、Ｎｏ.１０）を、アセトニトリル６０mlに溶解しそして炭酸カリウム（４.４５ｇ；０.０３２モル）および４−メトキシベンジルクロライド（１.４ml；０.０１１モル）を加えそして混合物を初期に室温で８時間撹拌する。反応を完了するために、４−メトキシベンジルクロライド０.７mlを加え次いで４時間撹拌し、その後薄層クロマトグラフィーの結果は、反応が完了したことを示す。炭酸カリウムを濾過により除去した後の濾液を減圧下で蒸発乾固しそして残留物をクロマトグラフィー処理（ＳｉＯ2；ＣＨ2Ｃｌ2：ＡｃＯＥｔ＝８：２）する。これによって徐々に結晶化する油が得られた。この油は、固化したときに、６８〜６９℃の融点を有す。収量：４.４ｇ（理論値の８８.９％）。
C24H31O9P(MW＝494.48ｇ／モル）に対する元素分析値：
計算値  Ｃ 58.30  Ｈ 6.33  Ｐ 6.26
実測値  Ｃ 58.10  Ｈ 6.70  Ｐ 6.30
【００３４】
実施例９（７２）
２−（ジメトキシホスフィニル）−３−（３−ヘキシルオキシ−４−メトキシフェニル）プロペン酸イソプロピル
２−（ジメトキシホスフィニル）−３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）プロペン酸イソプロピル（２ｇ；０.００５８モル；表１、Ｎｏ.２６）、１−ブロモヘキサン（０.８５ml；０.００６モル）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）３０mlおよび炭酸カリウム（粉末、０.８９ｇ；０.００６５モル）を、混合しそして室温で６時間撹拌する。無機塩を除去した後の濾液を、減圧下で蒸発する。ＤＭＦを、７０℃／０.０２mmHgでクーゲルロール装置中で得られた油状残留物から除去しそしてそれから、溶離剤としてジクロロメタン：酢酸エチル（８：２）混合物を使用してシリカゲル上でクロマトグラフィー処理する。これによって淡色の油が得られた。収量：３.６ｇ（理論値の７２.５％）。
C21H33O7P(MW＝428.47ｇ／モル）に対する元素分析値：
計算値  Ｃ 58.87  Ｈ 7.78  Ｐ 7.23
実測値  Ｃ 58.5   Ｈ 7.7   Ｐ 7.0
HPLC：ｍ＝20、ｎ＝60、Ｒ＝96.67、ｔ＝11.549
NMR(200 MHz, CDCl3)：δ=8.1(d；＜0.1H; J=42Hz), 7.53(d; 1H; J=23Hz), 6.8〜7.3(m; 4H), 5.2(sept；1H), 3.6〜4.1(m；12H), 1.2〜2.0(m；15H）
【００３５】
実施例１０（３７および３８）
Ｚ−およびＥ−２−（ジエトキシホスフィニル）−３−（３,４−ジメトキシフェニル）アクリロニトリル
実施例１におけるように、テトラヒドロフラン３００ml中で、３,４−ジメトキシベンズアルデヒド（２１ｇ；０.１２３モル）を、シアノメタンホスホン酸ジエチル（２２.３２ｇ；０.１２３モル）、クロロチタニウムトリイソプロポキシド（６１.５ml；０.２６モル）およびＮ−メチルモルホリン（２８ml；０.２５モル）と反応させそして処理する。溶離剤ジクロロメタン／酢酸エチル（２：１）を使用してシリカゲル上でクロマトグラフィー処理することによって、実質的に純粋なフラクションとして２種のステレオマー形態の標記化合物を分離することができる。
（１）  Ｚステレオマー（２.６ｇ）：
C15H20NO5P(MW＝325.30ｇ／モル）に対する元素分析値：
計算値  Ｃ 55.38  Ｈ 6.21  Ｎ 4.31  Ｐ 9.52
実測値  Ｃ 55.77  Ｈ 6.54  Ｎ 4.51  Ｐ 9.27
HPLC：ｍ＝５、ｎ＝50、Ｒ＝81.72、ｔ＝10.904
NMR(200 MHz, CDCl3): δ=6.8〜8.0(m, 4H, 包含：7.80(d; 1H; J=40Hz))，4.1〜4.3(m; 4H), 4.95(s; 6H), 1.3(t; 6H)
（２）  ステレオマー混合物（１９ｇ）
（３）  Ｅステレオマー（４.５ｇ）：
C15H20NO5P(MW＝325.30ｇ／モル）に対する元素分析値：
計算値  Ｃ 55.38  Ｈ 6.21  Ｎ 4.31  Ｐ 9.52
実測値  Ｃ 55.53  Ｈ 6.56  Ｎ 4.41  Ｐ 9.57
HPLC：ｍ＝５、ｎ＝50、Ｒ＝98.83、ｔ＝11.549
NMR(200 MHz, CDCl3)：δ=7.90(d; 1H; J=21Hz), 6.8〜7.8(m, 3H), 4.1〜4.4(m; 4H), 3.9(s; 6H), 1.4(t; 6H)
【００３６】
実施例１１（１９）
｛２−アセチルアミノ−１−〔（３,４−ジメトキシフェニル）メチル〕エチル｝ホスホン酸ジエチル
２−（ジエトキシホスフィニル）−３−（３,４−ジメトキシフェニル）アクリロニトリル（表１、Ｎｏｓ.３７／３８；ステレオマー混合物；４ｇ；０.０１２３モル）を、無水酢酸（１００ml）に溶解しそして３.４５バールの初期圧下でラネーニツケル触媒（０.６ｇ）および酢酸ナトリウム（無水；１.２ｇ；０.０１５モル）の存在下においてパール水素添加装置中で、水素吸収が完了するまで水素添加する。酢酸ナトリウムおよび触媒を濾去しそして濾液を減圧下（３０ミリバール）で蒸発する。残留物を、シリカゲル上でクロマトグラフィー処理（溶離剤：酢酸エチル：エタノール ９：１）する。これによって、１.４ｇ（理論値の３０.５％）の純粋なフラクションとして標記化合物を得た。
MS (ES) m/z 374 (M＋H+)；C17H28NO6P；(MW＝373.39ｇ／モル）
【００３７】
実施例１２（４５）
３−（３,４−ジアセトキシフェニル）−２−（ジエトキシホスフィニル）プロピオニトリル
３−（３,４−ジアセトキシフェニル）−２−（ジエトキシホスフィニル）アクリロニトリル（表１、Ｎｏ.５６；２.５ｇ；０.００６６モル）を、３.４５バールの初期圧下でパール水素添加装置中で１０％Ｐｄ／Ｃ触媒０.５ｇ上で無水酢酸１００ml中で、水素吸収が完了するまで（１６時間）水素添加する。８時間経過した後に、さらに触媒０.３ｇを加える。最後に、触媒を濾去しそして濾液を減圧下で蒸発する。残留物を、溶離剤として溶剤混合物ジクロロメタン：酢酸エチル（７：３）を使用してシリカゲル上でクロマトグラフィー処理する。これによって、１.７ｇ（理論値の６７.７％）の収量で淡色の油として標記化合物を得た。
MS (EI) m/z 384 (M＋H+)；C17H22NO7P；(MW＝383.34ｇ／モル）。
【００３８】
実施例１３（６）
１,４−ビス−｛〔５−（２−ジメトキシホスフィニル−２−イソプロポキシカルボニルエテニル）−２−メトキシフェノキシ〕メチル｝ベンゼン
３−ヒドロキシ−４−メトキシベンズアルデヒド（３ｇ；０.０１９７モル）、α,α′−ジブロモ−ｐ−キシレン（２.３ｇ；０.００９モル）および粉末炭酸カリウム（４ｇ；０.０３モル）を、アセトニトリル（２０ml）中で室温で６時間撹拌する。それから、反応混合物を濾過する。減圧下における蒸発後の濾液中に小量の生成物が見出される。フィルター上の残留物を水に溶解しそしてジクロロメタンと一緒に数回振盪することによって抽出する。合した有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥しそして最後に６０℃および０.０３ミリバールで減圧下で蒸発する。これによって、融点１８０〜１８１℃の白色結晶の形態で１,４−ビス−〔（５−ホルミル−２−メトキシフェノキシ）メチル〕ベンゼン（２.２ｇ；理論値の５４.９％）を得た。
1H-NMR(CDCl3中，200 MHz)：δ=9.81(s; 2H), 6.9〜7.6(m; 10H), 5.19(s; 4H), 3.96(s; 6H)
【００３９】
クロロチタニウムトリイソプロポキシド（１.６ml；０.００９８４モル）を、０℃でテトラヒドロフラン（７５ml）に滴加する。それから、同じ温度で、乾燥テトラヒドロフラン１０ml中の上述したようにして得られた１,４−ビス−〔（５−ホルミル−２−メトキシフェノキシ）−メチル〕−ベンゼン（２ｇ；０.００４９２モル）の溶液およびホスホノ酢酸トリメチル（１.６ml；０.００９８４モル）の溶液を、アルゴン雰囲気下で滴加する。０℃で３０分撹拌した後、テトラヒドロフラン（５ml）中のＮ−メチルモルホリン（２.２ml；０.０１９６モル）の溶液を加える。反応混合物を室温に加温しそしてさらに８時間撹拌する。それから、水（２０ml）を加える。沈殿した塩を吸引濾去しそして濾液を、ジエチルエーテルと一緒に数回振盪することによって抽出する。有機相を合し、硫酸ナトリウム上で乾燥しそして減圧下で蒸発する。得られた黄色の油をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（溶離剤：酢酸エチル）する。これによって、淡色の油の形態で１.５ｇ（理論値の３８.６％）の収量で純粋なフラクションとして標記化合物を得た。
MS (FAB) m/z 791.3 (M＋H+)；C38H48O14P2；(MW＝790.75ｇ／モル）
HPLC：ｍ＝40、ｎ＝80、Ｒ＝49.33、ｔ＝8.717
【００４０】
実施例１４（５および４）
１,４−ビス−｛〔５−（２−ジエトキシホスフィニル−２−シアノエテニル）−２−メトキシフェノキシ〕メチル｝ベンゼン（および副生成物として：３−〔３−（ブロモメチル）ベンジルオキシ）−４−メトキシフェニル〕−２−（ジエトキシホスフィニル）アクリロニトリル）
２−（ジエトキシホスフィニル）−３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）アクリロニトリル（表１、Ｎｏ.７７；６ｇ；０.０１９モル）、α,α′−ジブロモ−ｐ−キシレン（２.５ｇ；０.００９６モル）、炭酸カリウム（１.４５ｇ；０.０１１モル）、触媒としての沃化カリウムの数個の結晶およびアセトニトリル（６０ml）を、実施例８と同様にして、室温で一緒に撹拌（４日）する。それから、さらに炭酸カリウム（１.３ｇ；０.００９モル）を加えそして撹拌を５０℃で１日つづける。濾過後、濾液を減圧下で蒸発しそして残留物をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（溶離剤：ジクロロメタン：酢酸エチル；石油エーテル、６：２：２）する。集めた最初の純粋なフラクションは、０.７ｇ（理論値の７.３５％）の量の融点９０〜１０７℃を有する３−〔３−（ブロモメチル）ベンジルオキシ）−４−メトキシフェニル〕−２−（ジエトキシホスフィニル）アクリロニトリル（表１、Ｎｏ.４）である。
MS (ES) m/z 494.3 (M＋H+)；C22H25BrNO5P；(MW＝494.33ｇ／モル）
HPLC：ｍ＝40、ｎ＝80、Ｒ＝81.37、ｔ＝6.853
初期のニトリルの少量の溶離後、２.７ｇ（理論値の３８.６％）の収量で融点１６６〜１６９℃を有する他の純粋なフラクションとして標記化合物を得た。
C36H42N2O10P2(MW＝724.69ｇ／モル）に対する元素分析値：
計算値  Ｃ 59.67  Ｈ 5.85  Ｎ 3.87  Ｐ 8.55
実測値  Ｃ 60.0   Ｈ 5.7   Ｎ 3.9   Ｐ 8.1
HPLC：ｍ＝40、ｎ＝80、Ｒ＝88.27、ｔ＝8.635
【００４１】
実施例１５（３３および３４）
２−（ジエトキシホスフィニル）−３−（３,４−ジメトキシフェニル）プロピルアミン（Ｉ）および２−（ジエトキシホスフィニル）−３−（３,４−ジメトキシフェニル）プロピオノニトリル（II）
ＥおよびＺステレオマーの混合物としての２−（ジエトキシホスフィニル）−３−（３,４−ジメトキシフェニル）アクリロニトリル（表１、Ｎｏｓ. ３７および３８；４ｇ；０.０１２モル）を、３.４５バールの初期圧下バール水素添加装置中で１０％Ｐｄ／Ｃ触媒０.６ｇ上でエタノール１００ml中で、水素吸収が完了するまで水素添加する。触媒を濾去しそして濾液を減圧下で蒸発する。残留物を、酢酸エチル／ジクロロメタン（９：１）を使用してシリカゲル上でクロマトグラフィー処理する。得られた純粋なフラクションは、標記化合物Ｉ ０.７ｇ（理論値の１７.２％）
〔C15H26NO5P(MW＝331.35ｇ／モル）の元素分析値：
計算値  Ｃ 54.37  Ｈ 7.93  Ｎ 4.23
実測値  Ｃ 54.6   Ｈ 7.4   Ｎ 4.1
IR(KBr)：2240cm-1における帯なし〕
および同様に油状物として標記化合物II １.１５ｇ（理論値の２８.６％）
〔C15H22NO5P(MW＝327.32ｇ／モル）に対する元素分析値：
計算値  Ｃ 55.04  Ｈ 6.79  Ｎ 4.28
実測値  Ｃ 54.6   Ｈ 7.0   Ｎ 4.5
MS (EI) m/z 328 (M＋H+) IR(KBr)：なかんずく2240cm-1〕である。
【００４２】
実施例１６（６７）
３−（３,４−ジベンジルオキシフェニル）−２−（ジメトキシホスフィニル）プロペン酸
クロロチタニウムトリイソプロポキシド〔（ＣＨ3)2ＣＨＯ〕3ＴｉＣｌ（１５ml；０.０６３モル）を、２℃に冷却したテトラヒドロフラン（無水、９５ml）に加えそして温度の増加が１０℃を超えない方法で、アルゴン雰囲気下に維持する。これに、初期に２℃そして５℃の終りに到る、テトラヒドロフラン中のカルボキシメチルホスホン酸ジメチル（２.６ｇ；０.０１５５モル）の溶液を滴加する。このようにする代りに、粉末またはＴＨＦ中の懸濁液としてカルボキシメチルホスホン酸ジメチルのナトリウムまたはカリウム塩を加えることもできる。反応混合物の不均質は、それから、次の試薬の添加前に撹拌時間を３倍にすることが、好都合であることを意味する。１０分撹拌した後、同様に２℃で３,４−ジベンジルオキシベンズアルデヒド（５ｇ；０.０１６モル）の溶液を加えそして混合物をこの温度でさらに３０分撹拌する。それから、２℃でＮ−メチルモルホリンを加えそして混合物を約３時間にわたって室温に到達させる。１５時間放置した後、それを５Ｎ塩酸で酸性にしてｐＨ２〜３にしそしてジエチルエーテルと一緒に数回振盪することによって抽出する。合したエーテル溶液を減圧下で濃縮し、ジクロロメタンにとりそして残留する水から分離する。硫酸ナトリウム上で乾燥しそして減圧下で蒸発した後、油状残留物をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（３.５：６：０.５の酢酸エチル／ジクロロメタン／氷酢酸で溶離）する。これによって、４.６ｇ（理論値の６２.６％）の収量で粘稠な油として標記化合物を得た。
MS (FAB) m/z 469.2 (M＋H+)；C25H25O7P；(MW＝468.45ｇ／モル）
HPLC：ｍ＝20、ｎ＝80、Ｒ＝85.70、ｔ＝12.888
【００４３】
実施例１７（７９）
３−（３,４−ジベンジルオキシフェニル）−２−（ジエトキシホスフィニル）プロペン酸イソプロピル（Ｚステレオマー）
テトラヒドロフラン１５ml中のホスホノ酢酸トリエチル（２.１ｇ；０.０００９４モル）の溶液を、アルゴン雰囲気下室温でテトラヒドロフラン７０ml中の水素化ナトリウム（０.２３ｇ；０.００９４モル）の懸濁液に滴加しそして透明な溶液が得られるまで撹拌する。それから、反応溶液を１時間還流下で加熱し、−７８℃に冷却しそしてクロロチタニウムトリイソプロポキシド（２.２５ml；０.００９４モル）を滴加する。混合物を室温に到達させそしてそれから１.５時間撹拌する。３,４−ジベンジルオキシベンズアルデヒド（３ｇ；０.００９４モル）を、テトラヒドロフラン１５mlに溶解しそして上記混合物に滴加する。反応混合物を４時間撹拌しそしてそれから希塩酸に注加しそしてジエチルエーテルで数回抽出する。合した有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥しそして減圧下で蒸発する。油状残留物を、６０℃／０.０２mmHgでクーゲルロール装置中で乾燥する。次に、ジクロロメタン／酢酸エチル（４：１）を使用してシリカゲル上でクロマトグラフィー処理して２つの主なフラクションを得た。
（１）  淡色の油０.１ｇ（主としてＥステレオマー、表１、Ｎｏ.６２）
（２）  淡色の油として標記化合物２ｇ（理論値の３９.５％）
C30H35O7P(MW＝538.58ｇ／モル）に対する元素分析値：
計算値  Ｃ 60.90  Ｈ 6.54  Ｐ 5.75
実測値  Ｃ 66.3   Ｈ 6.3   Ｐ 5.5
HPLC：ｍ＝50、ｎ＝80、Ｒ＝90.34、ｔ＝5.152
NMR(200 MHz, CDCl3)：δ=8.0(d; 0.9H; J=40Hz), 6.7〜7.6(m; ＞13H EステレオマーおよびCDCl3の量を包含), 5.05〜5.25(m; 5H), 3.9〜4.3(m; 4H), 1.1〜1.4(m; 12H)
【００４４】
実施例１８（９３）
３−（３−アセトキシ−４−メトキシフェニル）−２−（ジメトキシホスフィニル）プロペン酸イソプロピル
２−（ジメトキシホスフィニル）−３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）プロペン酸イソプロピル（表１、Ｎｏ.２６；２ｇ；０.００５８モル）を、無水酢酸１５ml中で、ピリジン２滴と一緒に、はじめに１０℃で１０分そしてそれから、室温で６時間撹拌する。水１５mlを撹拌しながら加えて過剰の無水酢酸を加水分解する。反応混合物を、ジクロロメタンと一緒に数回振盪することによって抽出する。合した有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥しそして減圧下で蒸発する。残留油を６０℃／０.０２mmHgでクーゲルロール装置中で乾燥する。これによって１.７ｇ（理論値の７５.９％）を得た。
MS (DCl) m/z 495.2 (M＋H+)
HPLC：ｍ＝５、ｎ＝50、Ｒ＝92.00、ｔ＝11.417
【００４５】
実施例１９（９４）
３−（４−ジエトキシホスフィニルメトキシ−３−メトキシフェニル）−２−（ジメトキシホスフィニル）プロペン酸イソプロピル
２−（ジメトキシホスフィニル）−３−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）プロペン酸イソプロピル（表１、Ｎｏ.６９；２ｇ；０.００５８モル）および水素化ナトリウム（０.１４４ｇ；０.００６モル）を、ジメチルスルホキシド１０ml中で室温で２０分撹拌する。それから、ジメチルスルホキシド１０ml中の４−クロロフェニルスルホニルオキシメチルホスホン酸ジエチル〔Org. Synth., 64: 80, 1985〕（２.２３ｇ；０.００６５モル）の溶液を加える。反応混合物を室温で１０時間撹拌しそしてそれから減圧下で蒸発する。残留油を、酢酸エチル：エタノール（９.５：０.５）を使用してシリカゲル上でクロマトグラフィー処理する。淡色の油０.４ｇ（理論値の１６％）を得た。
MS (DCl) m/z 495.2 (M＋H+)
HPLC：ｍ＝５、ｎ＝50、Ｒ＝94.21、ｔ＝11.346
【００４６】
実施例２０
３−（４−カルボキシメトキシ−３−メトキシフェニル）−２−（ジメトキシホスフィニル）プロペン酸イソプロピル（Ｅステレオマー）
３−（４−第３ブトキシカルボニルメトキシ−３−メトキシフェニル）−２−（ジメトキシホスフィニル）プロペン酸イソプロピル（表１、Ｎｏ.９１；０.５ｇ；０.０１１モル）を、５Ｎ塩酸１０ml中で６０℃で４時間撹拌しそしてそれから室温に冷却する。沈殿した結晶を吸引濾去し、水で数回洗浄しそして乾燥する。これによって、融点１５６〜１５８℃の生成物０.２７ｇ（理論値の６１.５％）を得た。
MS (FAB) m/z 403.2 (M＋H+)
HPLC：ｍ＝15、ｎ＝70、Ｒ＝92.44、ｔ＝6.677
【００４７】
実施例２１（１１０）
３−（３,４−ジメトキシフェニル）−２−（ジメトキシホスフィニル）プロペン酸２−（４−モルホリニル）エチル
３−（３,４−ジメトキシフェニル）−２−（ジメトキシホスフィニル）プロペン酸（表１、Ｎｏ.１０７；２.３ｇ；０.００６９モル）を、トルエン（３０ml）に懸濁しそしてトルエン２ml中の塩化オキザリル（０.６ml；０.００７モル）の溶液を加え次いでジメチルホルムアミド３滴を加える。カルボン酸は溶解する。それから、混合物を２時間撹拌しそして減圧下で蒸発する。得られた黄色の油は、とりわけ１７７５cm-1でＩＲ帯を示しそしてさらに粗生成物として反応させる。収量：２.２ｇ（粗製）。この方法で得られたカルボニルクロライドを、アセトニトリル７０mlに溶解し、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）モルホリンを加えそして混合物を１０時間撹拌する。反応溶液を減圧下で蒸発する。残留物をジクロロメタン５０mlに溶解しそして飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄する。硫酸ナトリウム上で乾燥しそして減圧下で蒸発した後、残留油を、シリカゲル上でクロマトグラフィー処理（酢酸エチル：エタノール＝８：２）することによって精製する。これによって、粘稠な油０.６ｇ（理論値の２０％）を得た。
MS (FAB) m/z 430.2 (M＋H+)
HPLC：ｍ＝０、ｎ＝70、Ｒ＝84.02、ｔ＝7.107
【００４８】
【表１】
0003725600.tif 000014
【００４９】
【表２】
0003725600.tif 000015
【００５０】
【表３】
0003725600.tif 000016
【００５１】
【表４】
0003725600.tif 000017
【００５２】
【表５】
0003725600.tif 000018
【００５３】
【表６】
0003725600.tif 000019
【００５４】
【表７】
0003725600.tif 000020
【００５５】
【表８】
0003725600.tif 000021
【００５６】
【表９】
0003725600.tif 000022
【００５７】
【表１０】
0003725600.tif 000023
【００５８】
【表１１】
0003725600.tif 000024
【００５９】
【表１２】
0003725600.tif 000025
【００６０】
【表１３】
0003725600.tif 000026
【００６１】
【表１４】
0003725600.tif 000027
【００６２】
【表１５】
0003725600.tif 000028
【００６３】
【表１６】
0003725600.tif 000029
【００６４】
【表１７】
0003725600.tif 000030
【００６５】
【表１８】
0003725600.tif 000031
【００６６】
【表１９】
0003725600.tif 000032
【００６７】
【表２０】
0003725600.tif 000033
【００６８】
【表２１】
0003725600.tif 000034
【００６９】
【表２２】
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【００７０】
【表２３】
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【００７１】
【表２４】
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【００７２】
【表２５】
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【００７３】
【表２６】
0003725600.tif 000039
【００７４】
【表２７】
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【００７５】
【表２８】
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【００７６】
【表２９】
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【００７７】
【表３０】
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【００７８】
【表３１】
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【００７９】
【表３２】
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【００８０】
【表３３】
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【００８１】
【表３４】
0003725600.tif 000047
【００８２】
薬理学的試験
１．軟骨融解における効能、コンドロサイト培養における試験
細胞：ヒアリン軟骨を、新らたに屠殺した牛の足関節から取出し、基質をプロナーゼ（Boehringer Mannheim）およびコラゲナーゼ（Sigma）で分解しそしてコンドロサイトを、１ウエル当り４×１０6の細胞密度で２４−ウエル皿中の１％低融解アガロース中で平板培養する。
培地：完全培地は、Fl2 HAM（Biochrom KG、 Berlin）および１０％のウシ胎仔血清（Boehringer Mannheim）を含有し、試験物質を培地に溶解し、通常１０-5Ｍの濃度で加えそして培地を変更する毎に新らたに加える。
【００８３】
試験操作：処理は、主培養の第３日〜第１０日において行いそして９日目にＮａ235ＳＯ4の２０μCi／ml（７.４×１０5 Bq）を培地に２４時間加える。プロテオグリカンを８Ｍ塩化グアニジウムでそしてプロティナーゼ阻害剤（Sigma）の存在下で４℃で２４時間振盪して、アガロース層から抽出する。遠心分離後の上澄液を、ＰＤ １０RセフアデックスＧ２５カラム上で遊離および結合したサルフェートに分離する。これらの活性度は、β−シンチレーションカウンターにおいてアリコートに対して測定する。
【００８４】
分析：コンドロサイトによる基質生産に対するパラメーターは、１分当りの崩壊数（cpm）でサルフェート結合として測定される合成プロテオグリカンの量である。平均は、それぞれのグループにおいて４つのウエルに対して計算する。これを、インターロイキンＩ（ＩＬ−Ｉ）で処理した比較対照に対する平均で割りそして基質合成の刺激に対しては１より大、物質の作用による基質合成の阻害に対しては１より小そして基質合成が変化しないときは１に等しい刺激因子を与える。使用した標準は、商標名アルトロダール（Artrodar）としてイタリーにおいて変形性関節症の治療に使用されているジアセレインである。
結果：結果は、表２に示す通りである。
【００８５】
【表３５】
0003725600.tif 000048
【００８６】
２．基質メタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の阻害
本発明による化合物は、蛋白分解酵素、いわゆる基質メタロプロテアーゼに対して顕著な阻害作用を示す。当業者に知られているこれらの酵素は完全な軟骨基質の蛋白分解に決定的に関与するので、このことは非常に重要なことである。
【００８７】
細胞培養：ウサギのシノビオサイト（synoviocyte）（HIG-82；ATCC, Rockville, Maryland, USA）を、ペニシリン１００Ｕ／mlおよびストレプトマイシン１００μｇ／mlと一緒に１０％のウシ胎仔血清（Sigma, Deisenhofen, Germany, Catalog No. F-2442）を含有する栄養培地Ｆ１２ ＨＡＭ（Sigma，Deisenhofen，Germany，Catalog No. N-6760）中で培養する。集密的な細胞増殖後に、０.３マイクロモル／リットルのホルボール １２−ミリステート １３−アセテートを添加することによって、ＭＭＰ発現を無血清Ｆ１２ ＨＡＭ培地中で誘発する。３７℃で２０時間培養した後上澄液を除去する。
【００８８】
ＭＭＰの活性化：上澄液をトリプシン（５μｇ／ml）で活性化する。３７℃で１５分後に、１ミリモル／リットルのフェニルメチルスルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）を加えそしてさらに１０分培養することによって活性化を中止する。混合物の全容量は、２１０μｌである。
【００８９】
ＭＭＰ活性の測定（C.G. Knight等：FEBS Lett. 296: 263, 1992）：上述した上澄液２０μｌを、緩衝液（０.１Ｍ Tris／ＨＣｌ pH７.５；０.１Ｍ ＮａＣｌ；０.０１Ｍ ＣａＣｌ2；０.０５％ Brij）で希釈（１：１０）しそしてその２４０μｌと混合する。試験物質を表に示した濃度（表参照）で加える。１５分培養した後、２０μモル／リットルの蛍光物質〔（７−メトキシクマリン−４−イル）アセチル−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−〔３−（２,４−ジニトロフェニル）−Ｌ−２,３−ジアミノプロピオニル〕−Ａｌａ−Ａｒｇ−ＮＨ2（Bachem, Heidelberg, Germany, Catalog No. M-1895）〕を加えることによって反応を開始する。３０分後に、１０ミリモル／リットルのＥＤＴＡを加えることによって反応を中止する。混合物の全容量は、３２０μｌである。測定されるパラメーターは、λem：３２８nmおよびλex：３９３nmにおける蛍光強度である。試験物質の可能な固有の蛍光を考慮に入れるために、基質を使用しない平行測定からの蛍光強度を、基質を使用した測定から差引く。工程は、すべて２０℃で行われる。阻害剤なしの比較対照実験においては、０％の阻害に相当する蛍光を使用する。一方、蛍光の完全な反応停止は、１００％の阻害を意味する。結果：結果は表３に示される通りである。
【００９０】
【表３６】
0003725600.tif 000049
【００９１】
【表３７】
0003725600.tif 000050
【００９２】
３．ミクロソームの脂質過酸化の阻害
酸化的分解プロセスは、また、かなりな程度、軟骨基質の望ましくない分解に関与する。本発明による化合物は、生物学的酸化プロセスに対して強力な阻害作用を示しそしてそれ故に、特に酸化的軟骨損傷を阻害するのに適している。
【００９３】
ラットの肝臓ミクロソームの獲得：工程は、すべて０℃で実施する。ラットからの肝臓を０.９％ＮａＣｌ溶液で十分にすすいですべてのヘモグロビンを除去する。肝臓を小片に切断しそしてそれから、ポッター中において、１０mM Tris／ＨＣｌ pH ７.４；２５０mMスクロース（肝臓１ｇ当り緩衝液１０ml）で処理する。最初の遠心分離を、６００×ｇで５分行って細胞頽廃物を除去する。それから上澄液を１２０００×ｇで１０分遠心分離しそして固体のＣａＣｌ2（１１７.６mg／１００ml）で８mMの濃度に調節する。２５０００×ｇで遠心分離（１５分）することによってミクロソームペレットを得る。このペレットを同じ容量の緩衝液（１０mM Tris／ＨＣｌ pH７.４；１５０mM ＫＣｌ）中で均質化しそして再び２５０００×ｇで１５分遠心分離する。
【００９４】
ラットの肝臓ミクロソームによる過酸化：試験混合物は、緩衝液（２５０mM Tris／ＨＣｌ pH６.６；７５０mM ＫＣｌ）に溶解したミクロソーム（１００mg／ml）（上記参照）２０μｌ、５０mM ＭｇＣｌ2 １０μｌ、２００mMイソクエン酸１０μｌ、４mM ＮＡＤＰ（水中の３.０２８mg／ml）１０μｌ、２５mMニアシンアミド１０μｌ、イソシトレートデヒドロゲナーゼ（Boehringer, １：１００に希釈）１０μｌおよび水または試験物質の２０μｌからなる。反応は、０.２５mM ＦｅＳＯ4 １０μｌで開始する。インキュベーションは、１０分継続しそして３７℃で行う。それは、氷冷した２０％トリクロロ酢酸５００μｌで中止する。形成したマロンアルデヒドを、０.６７％チオバルビツール酸５００μｌを加えそして９０℃で３０分インキュベートすることによって、ピンク色に着色した化合物に変換し、これを５３２nmで光度計中で測定する。試験物質なしの比較対照混合物中の吸光を０％の阻害とする。一方、シグナルの完全な消失は、１００％の阻害を意味する。結果：結果は表４に示す通りである。
【００９５】
【表３８】
0003725600.tif 000051
【００９６】
４．ヒトの単核細胞からのインターロイキン（例えばＩＬ−１β）の放出
本発明による化合物は、ヒトの細胞からのインターロイキンの放出に対して強力な阻害作用を有している。インターロイキンは軟骨基質の望ましくない分解を誘発するので、このことは大きな薬理的に重要なことである。
ヒトの血液からの単核細胞の獲得：３.８％クエン酸ナトリウム溶液１mlで安定化したヒトの血液１０mlを、ＰＭ １６（Serva, Heidelberg）１０mlでうすめそしてLymphoprep（Dr. Molter GmbH, Heidelberg）１５mlの下層を導入する。試料を４００×ｇ（Minifuge 2 Heraeus, Osterode）で室温で４０分遠心分離する。単核細胞は、Lymphoprep／血漿境界上に白色のリングとして目に見える。このリングを、注意深く注射器で除去し、同じ容量のＰＭ １６でうすめそして４００×ｇで１０分遠心分離する。沈殿を、ＲＰＭＩ １６４０（＋ Ｌ−グルタミン３００mg／リットル、Gibco, Eggenstein）〜１０mlで洗浄する。細胞を、ＲＰＭＩ １６４０（＋グルタミン３００mg／リットル、＋２５mM ＨＥＰＥＳ、＋ストレプトマイシン１００μｇ／ml、＋ペニシリン１００μｇ／ml）〜１mlに懸濁した後、細胞密度をJT Coulter Counter（Coulter Diagnostics）で測定しそして５・１０6／mlに調節する。得られた細胞の９０％はリンパ球でありそして１０％は単球である。
【００９７】
インターロイキン−１βの放出の阻害：単核細胞２３０μｌを、試験物質（ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）／水＝1/10中１０μＭ）１０μｌおよびリポ多糖溶液（Salmonella abortus equi起源、Sigma, Deisenhofen, ５００μｇを試験を開始する前にＤＭＳＯ １mlに溶解しそして水で希釈（1/10）する）１０μｌを使用して、３７℃、５％ＣＯ2で２０〜２２時間インキュベートする。試料を氷浴中で０℃に冷却しそしてSigma遠心分離機で遠心分離する〔２分；１分当り２０００回転（rpm）〕。上澄液のアリコートを、商業的に入手できるＥＬＩＳＡ（Biermann, Bad Nauheim）を使用して測定する。結果：結果は、表５に示す通りである。
【００９８】
【表３９】
0003725600.tif 000052
活性物質は、１０μモル／リットルの濃度で試験した。ＩＬ−１β放出をそれぞれの場合において測定した。
【００９９】
５．分離したモルモット気管の収縮のアンタゴニストとしての効能
本発明による化合物は、器官の種々な部分（この場合においては、分離したモルモットの気管）の収縮のアンタゴニストとして使用される。使用したアゴニストは、ＫＣｌ、ＰＧＦ2α、カルシウムイオノホアＡ２３１８７およびサブスタンスＰである。
【０１００】
(ａ)  ＫＣｌ
一般に非特異的作用を有する生成物は、すべてのアゴニストに関して鎮痙作用を示す。ＫＣｌ−誘発収縮は、主として物理的に、すなわち外側媒質におけるＫ+濃度を増加しそして細胞の静止電位を変化することによって生ずるので、ＫＣｌは非特異的の受容体−依存性の収縮の代表的なものである。
(ｂ)  ＰＧＦ2αは、それ自身の受容体を経てその収縮作用を示す。このシクロオキシゲナーゼ生成物によって誘発される収縮の阻害は、受容体におけるまたは下流シグナル経路の競合拮抗作用によってのみ可能である。
(ｃ)  カルシウムイオノホアＡ２３１８７（Calbiochem, Bad Soden）は、カルシウムイオンの増加した取込みによって、細胞におけるすべてのカルシウム−依存性シグナルカスケートの活性化を起こす。特にリポキシゲナーゼ阻害剤および一般に抗炎症活性を有する物質は、このモデルにおいて作用を示す。
(ｄ)  サブスタンスＰ
免疫系および神経系の間の伝達物質としてのサブスタンスＰは、平滑筋に対して収縮作用を示す。拮抗作用は、一方においては特異的受容体アンタゴニストによってそして他方においては下流シグナル経路の阻害によって可能である。直接的または間接的に環状ヌクレオチドの細胞内濃度を増加する生成物は、特にこの場合において鎮痙性を示す。
【０１０１】
器官の部分の標本および試験操作：
モルモットを笑気による致死麻酔により犠牲にする。気管をその全体の長さにおいて切り離しそして１５の個々の軟骨リングに切断する。それぞれの場合において、５個のリングを一緒に連結させて鎖を形成させそして器官浴中において３ｇの予備荷重下に固定する。４５分の平衡期間の後に、収縮をアゴニストで誘発する。アンタゴニスト（試験生成物）の累積添加を、最高のプラトー（plateau）において行う。評価を、最高収縮を基にした強度の変化％として行う。試験は、３７℃で実施しそして使用した生理学的栄養溶液は、改変Krebs-Henseleit溶液であって、これに９５容量％のＯ2および５容量％のＣＯ2を通気して泡立たせる。
【０１０２】
試験動物：アルビノモルモット（１０２）、体重：２００〜３００ｇの雄または雌。
器官浴（栄養溶液）の組成：
改変Krebs-Henseleit溶液           アゴニストＫＣｌ、ＰＧＦ2αに対して
およびカルシウムイオノホア        アゴニストＳＰに対して
二重蒸留水１リットルに対して      二重蒸留水１リットルに対して
ＮａＣｌ        ６.９ｇ            ＮａＣｌ        ７.９ｇ
ＫＨ2ＰＯ4      ０.１４ｇ          ＫＨ2ＰＯ4      ０.１８ｇ
ＮａＨＣＯ3     ２.１ｇ            ＮａＨＣＯ3     １.３７ｇ
グルコース      ２.０ｇ            グルコース      １.５３ｇ
ＫＣｌ          ０.３５ｇ          ＫＣｌ          ０.２５ｇ
ＣａＣｌ2       ０.２８ｇ          ＣａＣｌ2       ０.２７ｇ
ＭｇＳＯ4       ０.１４ｇ
【０１０３】
ベヒクル：二重蒸留水、エタノールまたはイソプロパノール
投与：器官浴に対して行う。
投与回数：累積的、ＳＰに対しては１回の投与
結果：本発明による化合物は、ＫＣｌ、プロスタグランジンＰＧＦ2α、カルシウムイオノホア（Ａ２３１８７）およびサブスタンスＰに関して拮抗作用を示す。結果は、表６に示す通りである。
【０１０４】
【表４０】
0003725600.tif 000053
すべての数値に対する単位は、μｇ／mlでありそしてこれらは、ＥＤ50範囲に相当する拡張をもたらすのに必要な本発明による試験化合物（表１参照）の濃度範囲に関するものである。
【０１０５】
６．モルモットの肺の分離された細片の収縮のアンタゴニストとしての効能
試験は、薬理学的試験５に記載した試験と同じ原理に基づく。しかしながら、この場合においては、肺の細片を使用する。
器官の部分の標本および試験操作：
モルモットを笑気による麻酔下で犠牲にする。全体の肺路を気管から出発して切断する。肺の葉を円形に切断するして幅３mmの細片を得る。上部葉の細片を分裂して全体で約等しい大きさの６つの細片を得る。細片は、器官浴中で４ｇの予備荷重下にサスペンドする。改変Krebs-Henseleit溶液を栄養溶液として使用する。血小板活性化因子（ＰＡＦ）をアゴニストとして使用する場合は、この溶液の組成は、薬理学的試験５におけるアゴニストＳＰに対する組成に相当する。アゴニストＫＣｌ（薬理学的試験５）の場合におけるようなKrebs-Henseleit溶液が、アゴニストＬＴＤ4に対して使用される。９５容量％のＯ2、５容量％のＣＯ2を浴に通じて泡立たせそして浴温は３７℃である。試験は、１、３、６および１０μｇ／mlの投与レベルで治療的／累積的方法で実施する。
試験動物、器官浴、ベヒクル、投与方法は、薬理試験５に対して記載したものに相当する。
結果：本発明による化合物は、ロイコトリエンＤ4（ＬＴＤ4）および膜脂質血小板活性化因子に関して拮抗作用を示す。結果は、表７に記載する通りである。
【０１０６】
【表４１】
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すべての数値に対する単位は、μｇ／mlでありそしてこれらは、ＩＣ50値に相当する収縮をもたらすのに必要な本発明による化合物（表１参照）の濃度範囲に関するものである。
【０１０７】
７．アジュバント関節炎
検査は、ＥＰＯ ４３２ ７４０に記載されているように実施した。１kg当り化合物３８の１２.６mgを１８日間１日につき２回ウィスタールイス（Wister-Lewis）ラットに投与した後、未処理の比較対照群に比較して足容量増加の９８％阻害がみられた。
【０１０８】
８．ＲＡＷ ２６４.７細胞からの癌壊死因子α（ＴＮＦα）およびサブスタンスＰの放出
培地：ＤＭＥＭ＋１０％ＦＣＳ＋ペニシリン／ストレプトマイシン（５０Ｕ／５０μｇ／ml）
培養条件：３７℃、１０％ ＣＯ2
培養皿：２４−ウエル皿
−それぞれの場合において、１０6細胞／ml／ウエルを２４時間培養する。
−試験物質１０μｌ（＝試験において、二重蒸留水に溶解した１００μＭ）の添加
−１時間インキュベーション
−Ｅ．コリーからのリポ多糖（ＬＰＳ）５０μｌ（＝試験において、培地に溶解した１０pg／ml）の添加
−２.５時間および２４時間インキュベーション
癌壊死因子αは、Genzyme（Ruesselsheim, Germany）からのFactortest ＸマウスＴＮＦα ＥＬＩＳＡキット（オーダーNo．８０−２８０２−００）を使用して測定した。
【０１０９】
化合物３７は、２.５時間のインキュベーション後未処理の比較対照に比較してＴＮＦα形成の５５％の阻害を示す。化合物３８は、４時間のインキュベーション後、１６％の阻害を示す。
サブスタンスＰの放出は、細胞をＬＰＳ ５０mgにより４時間刺激する以外は、ＴＮＦαに対して記載したように行った。サブスタンスＰは、Peninsula Laboratories（Belmont, USA）からのサブスタンスＰ ＲＩＡ試験キット試験No.ＲＩＫ−７４５１を使用して測定した。
未処理の細胞はサブスタンスＰ ２０pg／mlを生産するが、化合物３７および３８は、サブスタンスＰ生産を１００％阻害する。
【０１１０】
９．ホスホジエステラーゼIII活性の阻害
この試験は、T. SAEKI, I. SAITOの方法（Biochem. Pharm. 46, No.5 (1986), 833〜839頁）によって、Boehringer Mannheim（Mannheim, Germany）のホスホジエステラーゼ（オーダーNo.１０８２４３）を使用して実施した。
化合物３７の１００μＭは、試験において酵素活性の３９％の阻害を示す。