(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体にヨウ素酸またはその塩、トリンダー試薬、およびカップラーを添加し、液体中のアスコルビン酸の還元力によりヨウ素酸またはその塩からヨウ素を遊離させ、該ヨウ素によりトリンダー試薬とカップラーを酸化縮合させて発色させることを特徴とする、液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法。
【請求項２】
トリンダー試薬が、  ナフトール、５−メチル−１−ナフトール、１−ナフトール−３，６−ジスルホン酸、ｏ−メトキシフェノール、ジメチルアニリン、ジエチルアニリン、Ｎ  −エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−メトキシアニリンから選ばれるいずれか一種であることを特徴とする請求項１記載の液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法。
【請求項３】
カップラーが４−アミノアンチピリンであることを特徴とする請求項１または２記載の液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法。
【請求項４】
液体のｐＨを４．０〜８．０とすることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか１項記載の液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法。
【請求項５】
液体のｐＨを５．５〜６．５とすることを特徴とする請求項１乃至４のいずれか１項記載の液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法。
【請求項６】
液体が、体液であることを特徴とする請求項１乃至５のいずれか１項記載の液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法。
【請求項７】
酸化発色反応を利用する分析において、予め、請求項１乃至６のいずれか１項記載の液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法を用いて、被検体である液体中のアスコルビン酸濃度を測定することを特徴とする酸化発色反応におけるアスコルビン酸によるバックグラウンド測定方法。
【請求項８】
ヨウ素酸またはその塩と、トリンダー試薬と、カップラーと、液体のｐＨを調整する緩衝剤とを含有することを特徴とする液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片。
【請求項９】
ヨウ素酸またはその塩と、トリンダー試薬と、カップラーと、液体のｐＨを調整する緩衝剤とを多孔性マトリクス内に乾燥状態で含有することを特徴とする液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片。
【請求項１０】
トリンダー試薬が、  ナフトール、５−メチル−１−ナフトール、１−ナフトール−３，６−ジスルホン酸、ｏ−メトキシフェノール、ジメチルアニリン、ジエチルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−メトキシアニリンから選ばれるいずれか一種であることを特徴とする請求項８または９記載の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片。
【請求項１１】
カップラーが４−アミノアンチピリンであることを特徴とする請求項８乃至１０のいずれか１項記載の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片。
【請求項１２】
緩衝剤が液体のｐＨを４．０〜８．０にすることができる緩衡剤であることを特徴とする請求項８乃至１１のいずれか１項記載の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片。
【請求項１３】
緩衝剤が液体のｐＨを５．５〜６．５にすることができる緩衡剤であることを特徴とする請求項８乃至１２のいずれか１項記載の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片。
【請求項１４】
液体が、体液であることを特徴とする請求項８乃至１３のいずれか１項記載の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片。
【請求項１５】
酸化発色反応を利用する分析において、予め、請求項８乃至１４のいずれか１項記載の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片を用いて、被検体である液体中のアスコルビン酸濃度を測定することを特徴とする酸化発色反応におけるアスコルビン酸によるバックグラウンド測定方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、液体、特に血液・尿等といった体液中のアスコルビン酸濃度の新規な測定方法と、その測定方法を利用した乾式の試験片に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ビタミンＣ、即ちアスコルビン酸（以降ＡｓＡと略することもある）は、体内では重要なビタミンであり、欠乏した場合には壊血病になることはよく知られている。ＡｓＡは、人の体内では生合成されないため、一般に新鮮な野菜や果物から摂取しているが、近年では、ビタミン多量摂取健康法に対する関心が高まり、錠剤等から例えば一日に１０００ｍｇ以上など必要以上に摂取する傾向が高くなってきた。また、各種飲料や食物中にも健康増進や保存剤の目的で積極的に添加され、通常の生活をしていても過剰量を摂取しがちである。
摂取されたＡｓＡは腸管を通して吸収されるが、水溶性であるために必要分以外は尿中に排出され、上記のような理由により血液や尿などの体液中のＡｓＡ濃度の高いケースが多くなっている。
【０００３】
一方、血液、尿などの体液中の特定の成分は疾病の診療時に有効な判定材料となることから、臨床検査の分野においては、体液中の目的成分（例えばグルコース）の濃度を測定することは重要な手段となっている。これらの濃度測定は酸化発色反応を利用し、発色後の反射率等を測定することによって行うことが多い。ところが体液中のＡｓＡは還元能力を有するため、酸化発色反応など化学反応を用いた各種成分測定において、しばしば誤差要因となる。例えば、ペルオキシターゼ過酸化水素系を用いる酸化酵素反応を利用する酸化発色反応においては、ＡｓＡ等の体液中に存在する還元物質により過酸化水素が消費され、負の誤差を与えることが知られている。このような反応を利用した検査においては、ＡｓＡの妨害により定量値が少なめに示され、陽性であっても陰性と判断される恐れがある。上記のように、近年では血液や尿などの体液中のＡｓＡ濃度の高いケースが多いため、特にＡｓＡによる妨害が顕著となってきている。
【０００４】
そこでＡｓＡの悪影響を回避又は低減するための対策として、ＡｓＡをあらかじめ前処理する工夫や、測定と同時に処理するといった工夫を行なっているが、前処理方法では時間と手間がかかり、また、同時処理方法では目的成分の測定前に瞬時に処理する必要がある上に、目的成分の反応と競合反応となることが多く、完全な影響回避は困難である。
【０００５】
ここで、目的成分の判定前に何らかの方法でＡｓＡ濃度が判れば、目的成分の反応が影響をどの程度受けるかが予め判り、ＡｓＡの悪影響をあらかじめ考慮した判定が出来る。つまり、ＡｓＡの濃度を簡単に知ることは、ＡｓＡの値が所定値以上かどうかを知るだけでも偽陰性の発生を未然に防ぐことができ有効であり、成分測定結果の信頼性を後々確認する上でも、大きな意味がある。
さて、現在知られているＡｓＡ濃度の測定方法としては、インドフェノール法、ジクロロフェノールインドフェノール法、メチレングリーン法、ジニトロフェニルヒドラジン法、２ニトロメトキシアニリン法、高速液体クロマトグラフィー法等があるが、疾病の診療等の現場で用いるには大きな設備や、煩雑な手間を要する測定方法は実用的でない。
【０００６】
一般的で簡便なＡｓＡ濃度の測定方法としては、ジクロロフェノールインドフェノール法、メチレングリーン法といった色素を用いる方法があるが、いずれもＡｓＡの還元力を利用して元来有色である指示薬を脱色させるものであり、溶液系であっても、指示薬の量で測定域の上限が決まってしまい、広範囲のＡｓＡ濃度を知るには適さない。これらの方法では一般に０〜５０ｍｇ／ｄｌの範囲内が限界で、５０ｍｇ／ｄｌを越えると指示薬の色が完全に脱色され測定が不可能となる。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記問題点を鑑み、液体、特に血液・尿などの体液中のＡｓＡ濃度を簡単に測定し、しかも、広範囲なＡｓＡ濃度を測定可能にする方法を提供するものである。また、さらに検査試薬の保存安定性や取り扱いの点から、緊急時や検体数の多い時に有用である、液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片を提供するものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明は、液体にヨウ素酸またはその塩、トリンダー試薬、およびカップラーを添加し、液体中のアスコルビン酸の還元力によりヨウ素酸またはその塩からヨウ素を遊離させ、該ヨウ素によりトリンダー試薬とカップラーを酸化縮合させて発色させることを特徴とする、液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法を提供するものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明の作用は、液体中のアスコルビン酸がヨウ素酸またはその塩と反応してヨウ素が遊離し、該ヨウ素の酸化力がトリンダー試薬とカップラーの酸化縮合を引き起こして発色するものである。
【００１０】
具体的には、例えばアスコルビン酸による濃度標準液を作成し、上記測定法により発色の度合いを測定して、検量線を作成し、次に被検体である液体中のアスコルビン酸による発色の度合いを同様に測定して、検量線より被検体である液体中のアスコルビン酸の濃度を求める等の方法が用いられる。
発色の度合いの測定方法としては、反射率や吸光度の測定や、比色測定等が挙げられる。
【００１１】
この現象は、後述するようにアスコルビン酸に対し特異的なものであるため、例えば、ペルオキシターゼ過酸化水素系を用いる酸化酵素反応を利用する酸化発色反応のようなアスコルビン酸が妨害要因となる反応系において、予め、本発明の測定法により、被検体である液体（以下被検液とすることもある。）中のアスコルビン酸濃度を測定しておくことにより、酸化発色反応におけるアスコルビン酸による妨害度合いを考慮したバックグラウンド測定方法として応用することもできる。
【００１２】
本発明の液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法の測定対象となる液体としては特に限定はされないが、血液、尿等の体液に対して特に有効である。
【００１３】
本発明の液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法で使用するトリンダー試薬としては、特に限定はされず、目的とする発色の程度や色に応じ適宜選定すれば良いが、好ましくはナフトール、５−メチル−１−ナフトール、１−ナフト−ル−３，６−ジスルホン酸、ｏ−メトキシフェノール、ジメチルアニリン、ジエチルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−メトキシアニリンから選ばれるいずれか一種であるのが好ましい。
【００１４】
本発明に使用するカップラーは、トリンダー試薬と酸化縮合して呈色するものであれば特に限定はされず、好ましくは４−アミノアンチピリンが良い。
【００１５】
本発明において、適切な発色を得るためには被検液のｐＨが大きく影響する。好ましくは被検液のｐＨが４．０〜８．０となるよう調整するのが良く、さらに好ましくは、ｐＨ５．６〜６．５であるのが良い。ｐＨが低すぎると、アスコルビン酸の存在なしにヨウ素酸またはその塩からヨウ素が遊離しやすくなり、発色の誤差が生じる。また、ｐＨが高すぎると、ヨウ素酸またはその塩からのヨウ素の遊離が起らなくなり、発色反応が生じない。
【００１６】
本発明において、ヨウ素酸の塩としては、特に限定はされず、アンモニウム塩、カリウム塩、コバルト塩、ナトリウム塩、リチウム塩等が挙げられる。
【００１７】
被検液のｐＨを上記範囲内に調整するための緩衝剤としては、ｐＨを上記範囲内に調整することが可能であって本発明の作用を阻害しないものであれば、特に限定はされず、目的とするｐＨの範囲等に応じて適宜選択すれば良く、例えばＡＤＡ−水酸化ナトリウム緩衝液、ＭＥＳ−水酸化ナトリウム緩衝液、クエン酸−水酸化ナトリウム緩衝液等が挙げられる。
【００１８】
本発明の液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法は、液体中のアスコルビン酸がヨウ素酸またはその塩と反応してヨウ素が遊離し、該ヨウ素の酸化力がトリンダー試薬とカップラーの酸化縮合を引き起こして着色するものであるから、体液中に存在するＡｓＡ以外の還元性物質、例えば、尿酸１ナトリウム、シュウ酸、グルコース等が混在している場合、これらの物質がＡｓＡと同様に、ヨウ素の遊離を引き起こし、呈色に誤差を生じる可能性が考えられるが、試験例に示されるように、それら他の還元性物質の干渉・影響は全く確認されず、問題はない。特に体液中には存在せず、ＡｓＡよりも還元能力の高い、没食子酸（３、４、５−トリオキシ安息香酸）の存在下であっても干渉・影響は全く確認されないことから、本発明の測定方法は液体中のアスコルビン酸濃度の測定に対し、特異的に用いることができる。
【００１９】
本発明の液体中のアスコルビン酸濃度の測定法の応用として、ヨウ素酸またはその塩と、トリンダー試薬と、カップラーと、被検液のｐＨを調整する緩衝剤とを含有する試験片とし、該試験片上に測定対象の液体によって液層を生じさせ、該試験片上で反応を行わせるようにしても良い。
【００２０】
本発明の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片の上記各成分を含有する試薬層の形成方法は特に限定はされないが、好ましくは適当な溶媒に溶解し、多孔性マトリックスに含浸、乾燥して形成するのがよい。
【００２１】
多孔性マトリックスとしては、濾紙、布、メンブレンフィルター等が挙げられるが、特に限定はされない。
【００２２】
試薬層の形成時には、溶媒に、溶液の含浸性を良くするための界面活性剤や、試薬の溶解性を良くするための可溶化剤等の添加剤を加えてもよい。
【００２３】
本発明の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片に各成分を含有させる方法は、常法による。即ち、それぞれ所望の量が含有されるよう、可溶な溶媒に溶解して溶液とし、該溶液を多孔性マトリックスに含浸後、乾燥すれば良い。
【００２４】
各成分は、２以上の成分を同一の溶媒に溶解して含浸してもよいし、それぞれ異なる溶媒に溶解し順次含浸・乾燥を繰り返してもよい。また、同種の溶媒に、別々に溶解し順次含浸・乾燥を繰り返してもよい。さらに、２以上の成分を同一の溶媒に同時に溶解してもよいし、順次添加して溶解してもよい。また、互いに溶解する異なる溶媒に別々に溶解後、混合して溶液とし、含浸しても良い。
【００２５】
各成分を溶解する溶媒は、該成分を溶解し、本発明の作用を阻害しないものであれば特に限定はされず、水、エタノール等が挙げられる。
【００２６】
乾燥方法は、常法により、自然乾燥、温風オーブン等により行う。また、  乾燥工程の前に、ローラー等で多孔性マトリックスを圧迫し、該多孔性マトリックス表面上の余分な溶液を除去してもよい。
【００２７】
本発明の試験片の試薬層は、試薬成分等をバインダーと共に適当な溶媒に溶解し、成膜して形成してもよい。
【００２８】
使用するバインダーとしては、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、エチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン，ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコールなどの親水性高分子が好適である。これらの親水性高分子を用いる場合、溶媒は水性媒体、特に水である。
【００２９】
成膜方法は、常法による。支持体の上にコーティング、乾燥させて成膜してもよいし、平面上に塗布、展開し、乾燥ののち剥離させてフィルム状にしてもよい。
【００３０】
バインダーを使用する場合、溶媒に緩衝剤や、試薬の溶解性、溶液の塗布性を良くするための界面活性剤等の添加剤を加えてもよい。
【００３１】
本発明の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片が、支持体も含め２層以上の構成となる場合、積層方法は常法による。すなわちバインダーを使用する場合は、グラビアロール、グラビアコーター等任意のコーティング法を用いて積層する。
【００３２】
本発明の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片に含有される各成分の割合は、各成分の種類、試験片の使用目的、使用形態および使用方法等によって適宜変化させる。
【００３３】
ヨウ素酸またはその塩、トリンダー試薬、カップラーの各成分は、本発明の試験片の使用時に対象となる液体によって形成される液層中で、測定対象のＡｓＡと充分反応する量を含んでいる必要がある。また、被検液のｐＨを調整する緩衝剤の量は、本発明の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片の使用時における被検液の量に応じて決定するのが好ましい。好ましくは、試験片上に形成された液層における液体のｐＨが４．０〜８．０、さらに好ましくはｐＨが５．５〜６．５となるようにするのが良い。
【００３４】
本発明の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片は、実際の分析において取り扱いが容易なように、支持体を有していてもよい。支持体は、液層を保持するために液体不透性であるのが好ましく、ポリエチレンテレフタレート等のプラスティックフィルム、不透性の紙、金属箔等が挙げられる。発色反応の測定を支持体側から行う場合は、支持体は透明でなければならない。
【００３５】
本発明の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片は、実際の分析において取り扱いが容易なように、最上層に保護層を設けてもよい。保護層は、液体透過性、もしくは液体溶解性であれば、特に限定はされないが、親水性で透明であるのが好ましい。
【００３６】
本発明の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片が、支持体、保護層を含め、２層以上の構成となる場合、積層方法は常法による。即ち、バインダーを使用するもしくは樹脂材で構成される層は、グラビアロール等の任意のコーティング方法を用い、濾紙等の多孔性マトリックスに溶液を含浸する層は、含浸後湿潤状態でラミネートする、あるいは含浸・乾燥後、接着剤等を用いて積層する等の方法が挙げられる。
【００３７】
本発明の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片は、各層を積層した後、適当な大きさ、例えば５ｍｍ  ×  ５ｍｍ程度に裁断し、さらにベースフィルムに両面テープ、接着剤等で固定してもよい。ベースフィルムの材質はポリエチレンテレフタレート等が挙げられるが、特に限定はされない。また、ベースフィルムの形状も特に限定はされないが、ストリップ状の形状が好ましい。
【００３８】
各層を積層した後、適当な大きさ、例えば５ｍｍ  ×  ７ｍｍ程度にカットし、更にベースフィルムに両面テープ、接着剤などで固定してもよい。ベースフィルムの材質はポリエチレンテレフタレート等が挙げられるが、特に限定はされない。また、ベースフィルムの形状も特に限定はされないが、ストリップ状の形状が好ましい。
【００３９】
試薬層、または保護層等の厚さは、必要に応じて適宜定めれば良いが、好ましくは試薬層の厚さがウェット厚１００〜  ３００ミクロンであるのが良い。
以下に、本発明を効果を試験例及び実施例を用いて説明するが、本発明はこれに限られるものではない。
【００４０】
試験例
試験例１ＡｓＡ濃度の測定（液系）
ＡｓＡ濃度が０〜５００ｍｇ／ｄｌとなるよう調整された健常人の尿それぞれ
１ｍｌを試料として用い、これに
１Ｍ    ヨウ素酸ナトリウム水溶液                                  ０．１ｍｌ
１Ｍ  １−ナフトール−３，  ６−ジスルホン酸２ナトリウム水溶液        ０．１ｍｌ
１Ｍ  ４−アミノアンチピリン水溶液                                ０．１ｍｌ
０．２Ｍ  ＡＤＡ−水酸化ナトリウム緩衡液（ｐＨ６．０）                ８．７ｍｌ
（ヨウ素酸ナトリウム、４−アミノアンチピリン、水酸化ナトリウム；  （株）ナカライテスク製
１−ナフトール−３，  ６−ジスルホン酸２ナトリウム；（株）和光純薬製
ＡＤＡ；（株）同仁化学製）
を加えて攪拌し、２分後に発色の状態を５６０ｎｍでの吸光度測定によって行った。吸光度測定には、分光光度計（（株）島津製作所製ＵＶ−２２００）を用いた。この結果を表１に、また表１の結果より得られる検量線を図１に示す。表１より、ＡｓＡ濃度の違いにより、発色に差が現われ、０〜５００ｍｇ／ｄｌという幅広いレンジで差を検出できることが分かる。
【００４１】
【表１】
0003723828.tif 000002
【００４２】
試験例２ＡｓＡ濃度の定量
ＡｓＡ濃度が未知の尿１ｍｌを試料として用い、これを試験例１と同様にして、    ２分後に発色の状態を試験例１と同様に５６０ｎｍでの吸光度測定によって行ったところ、吸光度は０．０７４％であった。図１よりＡｓＡ濃度は、５６ｍｇ／ｄｌと推定される。比較対照として、ジクロロフェノールインドフェノール法により上記試料のＡｓＡ濃度を測定したところ、５３ｍｇ／ｄｌであった。従って、本発明の測定方法は、従来のＡｓＡ濃度の測定方法と同等の検出感度を持ち、従ってＡｓＡ濃度の簡便な測定に有利であることが分かる。
【００４３】
【表２】
0003723828.tif 000003
【００４４】
試験例３  試験片によるＡｓＡ濃度の測定
ＡｓＡ濃度が０〜５００ｍｇ／ｄｌとなるよう調整された健常人の尿それぞれ１ｍｌを試料として用い、実施例１の試験片に試料溶液を１秒間含浸させて２分後に発色の状態を５６０ｎｍでの反射率測定によって行った。反射率測定には、色差計Σ９０（（株）日本電色製）を用いた。この結果を表３に、また表３の結果より得られる検量線を図２に示す。表３より試験片としても溶液系と同様にＡｓＡ濃度の違いを検出できることが分かる。
【００４５】
【表３】
0003723828.tif 000004
【００４６】
試験例４他の還元物資による妨害の測定
本発明の測定方法のＡｓＡに対する特異性を確認するために、妨害要因となる可能性があるシュウ酸、グルコース、没食子酸の各物質を表４記載の各濃度となるように調整した健常人の尿をそれぞれ試料とし、試験例３と同様に試験片に試料溶液を含浸させて２分後に発色の状態を試験例３と同様に５６０ｎｍでの反射率測定によって行った。また、尿酸１ナトリウムは、尿中に通常含まれており溶解度が小さいことから、表４記載の各濃度となるように調整した水溶液とし、同様の測定を行った。この結果を表４に示す。
【００４７】
【表４】
0003723828.tif 000005
表４からわかるように、反射率の各物質の各濃度が変化しても反射率は変化せず、即ち、ＡｓＡ以外の物質には反応を示さないことがわかる。従って、本発明の測定法はＡｓＡにたいしてのみ特異性を有することも確認できる。
【００４８】
【実施例】
実施例１
試験片に各成分を含浸させるため、各成分を以下のような溶液とした
第１溶液
０．２Ｍ  ＡＤＡ−水酸化ナトリウム緩衡液（ｐＨ６．０）                １００ｍｌ
（ＡＤＡ：（株）同仁化学製、水酸化ナトリウム：（株）ナカライテスク製）
ヨウ素酸ナトリウム（（株）ナカライテスク製）                    ２ｇ
１−ナフトール−３，６ジスルホン酸２ナトリウム（（株）和光純薬製）  ２ｇ
第２溶液
エタノール（（株）ナカライテスク製）                          １００ｍｌ
４−アミノアンチピリン（（株）ナカライテスク製）                  ２ｇ
第１溶液を３０×２０ｃｍの濾紙（ワットマン社製  ３ＭＭＣＨＲ）に含浸させた後、すばやく７０℃乾燥炉に入れて１５分間乾燥させた。さらに、その濾紙に第２溶液を含浸させ、同条件で１０分間乾燥させ、これを５ｍｍ×５ｍｍに裁断した。これを、厚さ２５０μｍ、面積５ｍｍ×７０ｍｍの白色ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルムの先端に両面テープによって貼り付け、試験片を作成した。
【００４９】
【発明の効果】
本発明の液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法によれば、水溶液中のＡｓＡ濃度が簡便な処方で良好に測定でき、しかも、広範囲なＡｓＡ濃度を測定可能とすることができる。特本発明の液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法はトリンダー試薬を選択することにより、自由に発色の度合いを選択することができ、広範囲なＡｓＡ濃度を測定を可能にしている。
【００５０】
また、本発明の作用はアスコルビン酸に対し特異的なものであるため、例えば、ペルオキシターゼ過酸化水素系を用いる酸化酵素反応を利用する酸化発色反応のようなアスコルビン酸が妨害要因となる反応系において、予め、本発明の液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法を用いて、被検体である液体中のアスコルビン酸濃度を測定することにより、酸化発色反応におけるアスコルビン酸の影響を補正するためのバックグラウンド測定に利用することができる。即ち、酸化発色反応において目的成分が影響をどの程度受けるかが予め判り、ＡｓＡの悪影響をあらかじめ考慮した判定が出来る。
【００５１】
さらに、本発明の液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法を応用し、測定のための各成分を多孔性マトリクス内等に乾燥状態で含有させる試験片とすることにより、保存安定性や取り扱い性が格段に向上し、緊急時や検体数の多い時に有用である。また、トリンダー試薬の選択によっては目視試験も可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＡｓＡ濃度の異なる水溶液を試料とし、本発明の液体中のアスコルビン酸濃度の測定方法により５６０ｎｍにおける波長での吸光度を測定した結果から得られる検量線を示す図である。
【図２】ＡｓＡ濃度の異なる水溶液を試料とし、本発明の液体中のアスコルビン酸濃度測定用試験片により５６０ｎｍにおける波長での反射率を測定した結果から得られる検量線を示す図である。
【図１】
0003723828.tif 000006
【図２】
0003723828.tif 000007