(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
エビネ属植物からの圧搾物及び／又は抽出物を有効成分とする発毛・育毛剤及び抗アレルギー性皮膚外用剤としての用途を除く保湿効果と美白効果に優れる化粧料。
【請求項２】
エビネ属植物からの圧搾物が、エビネ属植物を圧搾して得た圧搾汁である請求項１に記載の化粧料。
【請求項３】
エビネ属植物からの抽出物が、エビネ属植物からのアルコール抽出液である請求項１に記載の化粧料。
【請求項４】
エビネ属植物からの抽出物が、エビネ属植物からのアルコール抽出液を酢酸エチルと水で分配抽出して得られる酢酸エチル移行部又は水相移行部である請求項１に記載の化粧料。
【請求項５】
エビネ属植物からの圧搾物及び／又は抽出物が、カラントサイドＡを含有している請求項１に記載の化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、化粧料、特に天然植物からの圧搾物及び／又は抽出物を有効成分とする保湿作用と美白作用に優れた化粧料に関するものである。
【０００２】
更に詳しくは、本発明は、エビネ属に属する植物（以下、エビネ属植物という。）からの圧搾物及び／又は抽出物を有効成分とする保湿作用と美白作用に優れた天然植物由来の安全性に富んだ化粧料に関するものである。
【０００３】
【従来の技術】
一般に、化粧料には保湿作用と美白作用が強く望まれている。
前記した化粧料に対する要求特性のうち、前者の保湿作用については明らかであるために説明を省略するが、後者の美白作用について、以下に説明する。
【０００４】
皮膚、特に顔面におけるシミ、ソバカス、日焼等による色素沈着は、皮膚に存在するタンパク質構成アミノ酸の一種であるチロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ，Ｃ9Ｈ11ＮＯ3）がチロシナーゼ（チロシン酸化酵素、ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）により酸化されて黒褐色のメラニンとなり、これが皮膚に沈着するために起るものである。
このため、化粧料や美白剤などにおいて、前記したメラニン生成に関与するチロシナーゼを阻害するチロシナーゼ活性阻害作用を有する成分を用いることが行なわれている。
【０００５】
この種の美白剤として、化学的な合成物質を有効成分とするものがあるが、これらはチロシナーゼ活性阻害作用が強いものの副作用などの安全性に問題があるものが多い。
このため、近年、前記した合成物質を使用する代わりに、皮膚に親しく安全で、しかもメラニン色素の生成抑制効果のある天然植物からの抽出物を有効成分とする美白剤が提案され始めている。
【０００６】
前記した天然植物から抽出物を有効成分とする美白剤として、例えば、カミツレ（特開平７−２０６６５７号）、カヤツリグサ（特開平６−６２１７６０号）、パンノキ（特開平８−２７７２２５号）、ウスベニタチアオイ（特開平８−３２５１３２号）などを利用するもの、あるいは複数の漢方生薬などを組み合わせたものを使用するもの（特開平６−１２８１３８号、特開平７−２７７９４４号、特開平８−９２０５５号、特開平８−９２０５６号、特開平８−２０８４５１号）、などが知られている。
【０００７】
しかしながら、今日まで有効性と安全性の両面で十分に満足し得る天然植物由来の美白剤等に有効な成分が見い出されていないのが現状である。
特に、美白作用に有効であるとともに化粧料として要求される保湿効果をも兼備する天然植物由来の成分が見い出されていないのが現状である。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
前記した従来技術の限界に鑑み、本発明者らは、化粧水や美白剤などの化粧料の有効成分として天然素材で古くから医療品などに使用され、かつ安全性の高い薬草類を中国、東南アジア、インド、アフリカ、南米などに求めて研究開発を進めている。
【０００９】
特に、本発明者らは、ラン科に属するエビネ（Ｃａｌａｕｔｈｅ  ｄｉｓｃｏｌｏｒ）が、わが国において広く分布していること、かつ未利用医薬用素材であることに注目し、エビネ成分の薬理特性について鋭意検討を進めている。
この過程で、本発明者らは、エビネ属植物から得られる圧搾汁や抽出エキスが美白作用（チロシナーゼ活性阻害作用）や保湿作用に極めて優れていることを見い出している。
【００１０】
本発明は、前記知見をベースにして完成されたものである。
本発明は、エビネ属植物由来の美白作用や保湿作用に優れた安全性の高い化粧料を提供することを目的とする。
なお、本発明者らは、エビネ属植物の有効利用に関して、先に特開平０５−２９４８１３号に発毛・育毛効果に優れる「発毛・育毛剤」を提案し、また、特願平０８−３３２６４２号（特開平１０−１３９６７６号）にアレルギー性疾患に対して優れる「抗アレルギー性皮膚外用組成物」を提案している。しかしながら、本発明の保湿効果と美白効果に優れる化粧料は、これら「発毛・育毛剤」や「抗アレルギー性皮膚外用組成物」と比較して全く用途が異なるものである。
【００１１】
本発明におい、「化粧料」という用語は、前記した説明及び以下の説明から明らかのように、化粧水、美白剤、化粧石鹸、クリームなど化粧に関する用途全体を包含するものである、と最広義に解釈されるべきである。別言すれば、本発明でいう「化粧料」は、基礎化粧品ということができるものである。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明を概説すれば、本発明は、エビネ属植物、典型的にはラン科に属するエビネ（Ｃａｌａｎｔｈｅ  ｄｉｓｃｏｌｏｒ）からの圧搾物及び／又は抽出物を有効成分とする発毛・育毛剤及び抗アレルギー性皮膚外用剤としての用途を除く保湿効果と美白効果に優れる化粧料に関するものである。
なお、本発明において、「圧搾物」及び「抽出物」という用語は、圧搾汁（液）や抽出液のみならず、これらを濃縮したものや精製したものなどを包含するものである、と最広義に解釈されるべきである。
【００１３】
以下、本発明の技術的構成及び実施態様について詳しく説明する。
【００１４】
前記したように、顔面などの皮膚におけるシミの発生は、タンパク質構成アミノ酸の一種であるチロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ，Ｃ9Ｈ11ＮＯ3）がチロシナーゼ（チロシン酸化酵素、ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）により酸化されて黒褐色のメラニンとなり、これが皮膚に沈着してシミとなるものである。
【００１５】
本発明は、前記したシミ発生のメカニズムを念頭に入れ、古い医書や本草書から美白効果を言及もしくは示唆する情報、あるいは民間伝承の情報を入取するとともに、成分検討から含有される類似成分を持つ植物などを入手し、チロシンからメラニンを合成する酵素チロシナーゼの阻害活性（以下、抗チロシナーゼ活性ともいう。）の強さを指標とする研究開発の中から生み出されたものである。
【００１６】
エビネ（Ｃａｌｏｎｔｈｅ  ｄｉｓｃｏｌｏｒ、ラン科）は、日本国内においても北海道西南部から九州まで広く分布しているが、国内で薬用とされた例は無い。
一方、中国では九子連環草という名前で、エビネ属植物、例えばＣ．ａｌｉｓｍｉｆｏｌｉａ，Ｃ．ｂｒｅｖｉｃｏｒｎｕ，Ｃ．ｄｅｌａｖａｙｉ，Ｃ．ｆｉｍｂｒｉａｔａ，Ｃ．ｈａｎｃｏｃｋｉｉ，Ｃ．ｍａｎｎｉｉ，Ｃ．ｔｒｉｃａｒｉｎａｔａ及びＣ．ｄｉｓｃｏｌｏｒなど多数の基源の異なる植物が生薬として皮膚疾患や痔病に外用されている。
【００１７】
本発明の化粧料は、前記エビネの全草部及び根茎部の圧搾物もしくは抽出物を有効成分として構成されるものである。
エネビ類は、変種が多く種々のものが知られているが、成分上の研究からこれら変種は美白効果において同様の効果を奏する。このため、本発明でいうエビネは、これら変種を含むものであると解されるべきである。
また、本発明において、エビネ類の採集時期は年間を通じて行ない得るものであり、採集時期は、特段に制約されるものではない。
【００１８】
エビネ属植物から得られる有効成分において、その抗チロシナーゼ活性は、後述の実施例で示されるようにエビネのアルコール抽出エキス、特にエビネ属植物からのアルコール抽出エキスを酢酸エチルと水で分配抽出した後の水相移行部に強くあらわれる。水相移行部含有物質を分析すると、インドール化合物の一種である下記化１で示されるカラントサイドＡの存在が認められる。なお、前記カラントサイドＡ単独は、抗チロシナーゼ活性が認められる物質である。
【００１９】
【化１】
0003681034.tif 000002
【００２０】
本発明の化粧料において、その出発材料となるエビネ属植物、即ち、ラン科のエビネ（Ｃａｌａｎｔｈｅ  ｄｉｓｃｏｌｏｒ）としては、次のものを例示することができる。
【００２１】
（１）．ジエビネ型：ジエビネ（Ｃ．ｄｉｓｃｏｌｏｒ）、キエビネ（Ｃ．ｓｉｅｂｏｌｄｉｉ）、キリシマエビネ（Ｃ．ａｒｉｓｔｕｌｉｆｅｒａ）、アマミエビネ（Ｃ．ａｍａｍｉａｎａ）、ニオイエビネ（Ｃ．ｉｚｕ−ｉｎｓｕｌａｒｉｓ）、サルメンエビネ（Ｃ．ｔｒｉｃａｒｉｎａｒａ）、トクノシマエビネ（Ｃ．ｔｏｋｕｎｏｓｈｉｍａｅｎｓｉｓ）、アリサンエビネ（Ｃ．ａｒｉｓａｎｅｎｓｉｓ）、ホソバナエビネ（Ｃ．ｈｒａｃｉｌｉｆｌｏｒａ）、ヒマラヤニオイエビネ（Ｃ．ｐｌａｎｔａｇｉｎｅａ）、クロロンウカ（Ｃ．ｃｈｌｏｒｏｌｅｕｃａ）、トガリバエビネ（Ｃ．ｃａｕｄａｔｉｉａｂｅｌｌａ）。
（２）．スズフリエビネ型：スズフリエビネ（Ｃ．ｌｉｕｋｉｕｅｎｓｉｓ）、タマザキエビネ（Ｃ．ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ）、テルクラ（Ｃ．ｐｕｌｃｈｒａ）。
（３）．タガネラン型：タガネラン（Ｃ．ｂｕｎｇｏａｎａ）、ホワイテアナ（Ｃ．ｗｈｉｔｅａｎａ）。
（４）．サクラジマエビネ型：サクラジマエビネ（Ｃ．ｏｂｌａｎｃｅｏｌａｔａ）、マンニイ（Ｃ．ｍａｎｎｉ）。
（５）．キソエビネ型：キソエビネ（Ｃ．ｓｈｌｅｃｈｔｅｒｉ）、アルピナ（Ｃ．ａｌｐｉｎａ）。
（６）．キンセイラン型：キンセイラン（Ｃ．ｎｉｐｐｏｎｉｃａ）。
（７）．ヒロハノカラン型：ヒロハノカラン（Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａ）。
（８）．アサヒエビネ型：アサヒエビネ（Ｃ．ｈａｔｔｏｒｉｉ）。
（９）．ナツエビネ型：ナツエビネ（Ｃ．ｒｅｆｌｅｘａ）。
（１０）．ツルラン型：ツルラン（Ｃ．ｆｕｒｃａｔａ）、オナガエビネ（Ｃ．ｌｏｎｇｉｃａｌｃａｒａｔａ）、オキナワエビネ（Ｃ．ｏｋｉｎａｗａｅｎｓｉｓ）、マスカ（Ｃ．ｍａｓｕｃａ）、マダガスカリエンシス（Ｃ．ｍａｄａｇａｓｃａｒｉｅｎｓｉｓ）、ナタンンシス（Ｃ．ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ）。
（１１）．トクサラン型：トクサラン（Ｃ．ｖｅｎｕｓｔａ）、シロトクサラン（Ｃ．ｌｏｎｇｉｐｅｓ）、ビロバ（Ｃ．ｂｉｌｏｂａ）。
（１２）．ベステイタ型：ベステイタ（Ｃ．ｖｅｓｔｉｔａ）、ロゼア（Ｃ．ｒｏｓｅａ）、エルメリ（Ｃ．ｅｌｍｅｒｉ）、ルベンス（Ｃ．ｒｕｂｅｎｓ）、カージオグロッサ（Ｃ．ｃａｒｄｉｏｇｌｏｓｓａ）。
【００２２】
本発明の化粧料の出発材料となる前記したエビネ属植物において、特にジエビネ（Ｃａｌａｎｔｈｅ  ｄｉｓｃｏｌｏｒ  Ｌｉｎｄｌ）、キエビネ（Ｃ．ｓｉｅｂｏｌｄｉｉ）、ナツエビネ（Ｃ．ｒｅｆｌｅｘａ）などが有効である。
【００２３】
本発明の化粧料は、前記したエビネ属植物（以下、単にエビネというとがある。）から得た圧搾物及び／又は抽出物を有効成分として構成されるものである。本発明において、前記エビネの花、根、茎、葉などの全草部及び根茎部が有効利用される。
【００２４】
エビネから圧搾物を製造するには、採集したエビネを水洗、水切りし、次いで粗切りした後、圧搾機（例えば、駒形製作所社製Ｍ−Ｉ型）にけかけて圧搾汁（液）を得るようにすればよい。
前記したプレスにより圧縮圧搾する方式により１ｋｇのエビネから約１２０ｍｌの圧搾汁（液）を得ることができる。なお、プレス圧縮圧力は、所望に設定すればよく、例えば５００〜５，０００ｋｇ／ｃｍ2程度に設定すればよい。
【００２５】
エビネから抽出物を製造するには、通常の溶媒抽出法に従えばよい。
抽出溶媒としては、水、含水アルコール、アルコールなどを使用することができる。
前記アルコールとは、低級アルキルアルコール、特に安全性の面からエチルアルコールが望ましい。エチルアルコールとしては純粋のエチルアルコールでもよいが、工業的には含水エチルアルコールが好適である。また、蒸留酒のような酒清を用いることもできる。
前記した含水エチルアルコールにおいて、そのアルコール濃度は、特に限定されないが、約３０〜９０％、望ましくは約４０〜７０％程度が実用的である。
【００２６】
エビネから抽出物を製造するには、採集した生の状態あるいは乾燥したエビネを粗切りし、水、含水アルコール、アルコールなどの溶媒で抽出すればよい。
【００２７】
例えば、エビネの地下茎などに付着した泥を落とし、全草を水洗する。次いで、カッター、ミキサーなどで粗切して、プレスにより圧縮搾汁する。
本発明は、前記したように、搾汁液そのものを使用することもできるが、搾汁液に対して２０〜９０％の含水エチルアルコールを約１：１（容量）の割合で混合し、溶媒抽出する。
【００２８】
あるいは、前記したと同様に泥を落とし水洗したエビネの全草をカッターで粗切し、次いでミキサーですりつぶし、搾汁することなしに、タンク内でエビネ約１０，０００ｇに対して約２０〜９０％エチルアルコール約２０，０００ｍｌを混合し、７〜１０日間冷暗所において密閉保存した後、固液分離し濾過してもよい。
前記した方法により得られる抽出液は、約１〜２週間、冷暗所において密封熟成することによりさらに効果的になる。
【００２９】
本発明の前記圧搾物及び／又は抽出物は、前記したように抗チロシナーゼ活性物質である前記化１で示されるカラントサイドＡを含有するものである。前記カラントサイドＡは、次のようにして単離することができる。
エビネの根茎を細切りした後、例えば、メタノールで熱時抽出し、メタノール抽出エキスを得る。得られたメタノール抽出エキスを酢酸エチルと水（１：１）で分配抽出する。次いで、水相移行部を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、水、メタノールで順次溶出し、メタノール溶出部を得る。更に、前記メタノール溶出部を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーで分画し、更に順相シリカゲルカラムガスクロマトグラフィーで分画する。次に、逆相高速液体クロマトグラフィーを用いて繰り返し分離することにより、カラントサイドＡを単離することができる。
【００３０】
前記カラントサイドＡは、単体として抗チロシナーゼ活性が認められる物質であり、本発明の化粧料における美白作用も前記カラントサイドＡに由来するものと認められる。
なお、本発明のエビネの圧搾物及び／又は抽出物において、後述する実施例が示すように、特にアルコール抽出エキスを酢酸エチルと水で分配抽出した際の水相移行部は、強い抗チロシナーゼ活性を示す。
本発明のエビネの圧搾物及び／又は抽出物は、前記した美白効果のほかに、保湿効果にも優れており、美白剤のほか、一般の化粧品、クリーム、乳液、石鹸としても添加、使用することができるため、基礎化粧料として特に有用なものである。
【００３１】
本発明の前記エビネ属植物からの圧搾物及び／又は抽出物は、一般に化粧料などに用いられる他の合成化学物質や植物抽出物質との反応性がなければ、これらを適宜混合して化粧料とすることができるものである。
また、本発明の前記エビネ属植物からの圧搾物及び／又は抽出物を有効成分とする化粧料は、その組成物の種類に応じて、例えばビタミン類には水溶性のものもあれば油溶性のものもあるが、使用動植物油との関係も含めて、溶媒には水（精製水）、温水、エチルアルコールまたはそれらの混合液を用いることができるものである。
【００３２】
【実施例】
以下、本発明を実施例により更に詳しく説明する。
なお、以下の実施例の説明は、
(1).エビネ属植物からの圧搾物及び／又は抽出物の有効成分の確認、
(2).エビネ属植物からの圧搾物及び／又は抽出物の美白効果（チロシナーゼ阻害活性）の評価（その１）、
(3).エビネ属植物からの圧搾物及び／又は抽出物の美白効果（チロシナーゼ阻害活性）の評価（その２）、
(4).エビネ属植物からの圧搾物及び／又は抽出物の皮膚一次刺激性試験、
(5).エビネ属植物からの圧搾物及び／又は抽出物由来の化粧水とその評価、
の順で行なうことにする。
【００３３】
（実施例１）
（１）．有効成分（カラントサイドＡ）の確認：
宮崎産エビネの新鮮根茎（７．５ｋｇ）を細切りした後、ＭｅＯＨ（１８リットル）で熱時抽出を計３回おこなった。ＭｅＯＨ抽出液３回分をあわせて減圧下溶媒留去し、ＭｅＯＨ抽出エキス（３３０ｇ，４．４％）を得た。このエビネＭｅＯＨ抽出エキス（３００ｇ）をＡｃＯＥｔ−Ｈ2Ｏ（１：１）で分配して、ＡｃＯＥｔ相移行部（７５ｇ，１．０％）、Ｈ2Ｏ相移行部（２２５ｇ，３．０％）を得た。
【００３４】
得られたＨ2Ｏ層移行部エキスを逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー［１．０ｋｇ，Ｈ2Ｏ→ＭｅＯＨ］で糖除去し、ＭｅＯＨ流出部エキス（１３ｇ，１．７％）を得た。このＭｅＯＨ流出部エキス１３ｇを順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー｛１．０ｋｇ，［ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ＝１０：１→３：１→１：１］→［ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝６５：３５：１０（下層）→６：４：１］→ＭｅＯＨ｝で分離し、Ｆｒ．１（１７０ｍｇ，０．００２３％）、Ｆｒ．２（４１ｍｇ，０．０００５％）、Ｆｒ．３（４８ｍｇ，０．０００６％）、Ｆｒ．４（２３４ｍｇ，０．００３１％）、Ｆｒ．５（４１００ｍｇ，０．０５５％）、Ｆｒ．６（２７００ｍｇ，０．０３６％）、Ｆｒ．７（２０００ｍｇ，０．０２７％）、Ｆｒ．８（４０００ｍｇ，０．０５３％）を得た。
【００３５】
次に、前記Ｆｒ．７（４３００ｍｇ．０．０５７％）を順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー［４０ｇ、ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝７：３：１：（下層）→６：４：１］で分画し、さらに逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）［カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｒ＆Ｄ  ＯＤＳ−５（２５０×２０ｍ、ｉ．ｄ．）、溶媒：ＭｅＣＮ−Ｈ2Ｏ（３０：７０，ｖ／ｖ），流速：９．０ｍｌ／ｍｉｎ］、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）［カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｒ＆Ｄ  ＯＤＳ−５（２５０×２０ｍｍ  ｉ．ｄ．），溶媒：ＭｅＯＨ−Ｈ2Ｏ（２５：７５，ｖ／ｖ），流速：９．０ｍｌ／ｍｉｎ］で繰り返し分離精製し、カラントサイドＡ（８１．９ｍｇ，０．００１１％）を得た。
【００３６】
カラントサイドＡは、前記化１に示す構造を有する淡黄色粉末のインドール配糖体であり、正の旋光性を示す。なお、参考までに主な分析結果を示すと、下記の通りである。
カラントサイドＡ：非晶粉末
旋光性：［α］D25＋１６４．０°（ｃ＝０．０１，ＭｅＯＨ）
高分解能ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）
次式計算値    Ｃ20Ｈ23ＮＯ11（Ｍ＋Ｈ）−：４５８．１６３８
実測値                                  ：４５８．１６５０
【００３７】
ＩＲ［ＫＢｒ，ｃｍ-2］：
３４９０，１６１８，１５５４，１４５８，１０２８
ＵＶ（ｃ＝０．０００６，ＭｅＯＨ，ｎｍ，ｌｏｇε）：
２８２（４．７），２２４（５．１）
【００３８】
Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ，５００ＭＨｚ，δ）：
４．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１"−Ｈ），
４．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１´ −Ｈ），
６．９７（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１．３，６．９，７．９Ｈｚ，５−Ｈ），
７．０７（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１．３，６．９，８．３Ｈｚ，６−Ｈ），
７．１５（１Ｈ，ｓ，２−Ｈ），
７．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．３，８．３Ｈｚ，７−Ｈ），
７．６７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．３，７．９Ｈｚ，４−Ｈ）．
【００３９】
13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ，１２５ＭＨｚ，δｃ）：
Ｃ−１                  Ｃ−２  １１２．２，
Ｃ−３    １３８．８，  Ｃ−４  １１８．６，
Ｃ−５    １１９．５，  Ｃ−６  １２２．８，
Ｃ−７    １１２．４，  Ｃ−８  １３５．４，
Ｃ−９    １２１．３，  Ｃ−１０
Ｃ−１´  １０５．４，  Ｃ−２´  ７５．０，
Ｃ−３´    ７７．９，  Ｃ−４    ７１．５，
Ｃ−５´    ７７．３，  Ｃ−６´  ６９．９，
Ｃ−１”  １０４．７，  Ｃ−２”  ７５．１，
Ｃ−３”    ７７．９，  Ｃ−４”  ７１．５，
Ｃ−５”    ７７．９，  Ｃ−６”  ６２．７．
【００４０】
Ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｍｏｄｅ  ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：
４８０（Ｍ＋Ｎａ）-
Ｎｅｇａｔｉｖｅ−ｍｏｄｅ  ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：
４５６（Ｍ−Ｈ）-
【００４１】
（実施例２）
（２）．美白効果（チロンシナーゼ阻害活性）の評価（その１）：
ＭａｓｏｎとＰｅｔｅｒｓｏｎの方法に準じて、美白効果について以下の通り実験した。
(i).被験液の調製
原料として宮崎県の山野に自生するエビネを使用した。
まず、前記エビネの地下茎などに付着した泥を洗い落し、全草を水洗した。次いで、ミキサーで破片にした。この破片１０，０００ｇを圧搾機（駒形製作所製Ｍ−１型）により圧縮搾汁し、搾汁液を得た。なお前記圧搾機（プレス機）の圧力条件は１，０００ｋｇ／ｃｍ2であった。
次に、被験液として前記圧搾汁をそのまま使用するケースと、前記圧搾汁に各種含水アルコールを加え、冷暗所で１０日間熟成して得たアルコール抽出液を使用するケース、とについて美白効果について調べた。
(ii).美白効果の試験
皮膚のシミ発生は、チロシンからＬ−ドーパーが合成され、これがチロシナーゼ（チロシン酸化酵素）の作用を受けて黒褐色のメラニンとなり、これが皮膚に沈着することにより発生するものである。
このため、美白作用の試験は、４０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＨ６．８）に対してエビネ圧搾汁及び各種濃度のアルコール抽出物（被験液）を添加し、これに基質としてＬ−ドーパー（最終濃度０．１ｍｇ／ｍｌ）を含む混合液（１．９ｍｌ）に０．２ｍｇ／ｍｌのチロシナーゼを０．１ｍｌ添加して、２５℃で３０分間反応させることにより行なった。反応後、４７５ｎｍの吸光度（Ｄ1）を測定した。
別に、Ｌ−ドーパー溶液を添加せずに同様な操作を行ない、吸光度（Ｄ2）を測定するとともに、更に被験液無添加におけるドーパークロムの生成量としての吸光度（Ｄ3）を測定した。
【００４２】
前記Ｄ1，Ｄ2，Ｄ3用い、かつ下式によりドーパークロム生成阻害率（阻害率％）を求め、チロシナーゼが阻害活性の指標とした。
阻害率（％）＝｛［Ｄ3−（Ｄ1−Ｄ2）］／Ｄ3｝×１００
結果を下記の表１に示す。
【００４３】
【表１】
0003681034.tif 000003
【００４４】
（実施例３）
（３）．美白効果（チロシナーゼ阻害活性）の評価（その２）：
前記と同様にして美白効果について、以下にように実験した。
被験液０．５ｍｌにＬ−ドーパー溶液（ＰＨ６．８，ＰＢＳ中、０．０３％）０．５ｍｌを加え、２５℃、１０分間インベキュートし、更にマッシュルーム由来のチロシナーゼ溶液（ＰＨ６．８，ＰＢＳ中０．２ｍｇ／ｍｌ）０．５ｍｌを添加し、２５℃、５分間インベキュートした。
そして、前記と同様に、Ｄ1，Ｄ2，Ｄ3を求め、ドーパクロム生成阻害率（阻害率％）を求めた。
【００４５】
前記被験液として、実施例１のエビネＭｅＯＨ抽出エキス（ＣＤＭ−ｅｘｔ）、同酢酸エチル相移行部（ＡｃＯＥｔ−ｐｈａｓｅ）、同水相移行部（Ｈ2Ｏ−ｐｈａｓｅ）、カラントサイドＡ（ＣＤＨ2）、及び対照群として陽性対照薬のコウジ酸（ｋｏｕｊｉｃ  ａｃｉｄ）を用いた。
結果を表２及び表３に示す。
なお、表２〜表３において、Ｏ．Ｄは光学的濃度、またＳ．Ｅ．は標準誤差のことである。
【００４６】
【表２】
0003681034.tif 000004
【００４７】
【表３】
0003681034.tif 000005
【００４８】
前記表１〜表３から明らかのように、エビネ圧搾汁（液）、エビネＭｅＯＨ抽出エキス、酢酸エチル相移行部、水相移行部は、ともに用量依存的に強い抗チロシナーゼ活性を示した。
陽性対照群のコウジ酸及びカラントサイドＡ単体も強い抗チロシナーゼ活性を示した。
なお、本発明のエビネＭｅＯＨ抽出エキスを酢酸エチルと水で分配抽出したものにおいて、抗チロシナーゼ活性有効成分は、水相移行部に多く存在することがわかる。
【００４９】
（実施例４）
（４）．皮膚一次刺激性試験：
外用として使用するエビネ抽出物の安全性について、モルモットを用いて皮膚刺激性の試験を行なった。
ハートレー系モルモットは雌性３００ｇ前後を６匹一群として用いた。試験前にエーテルで麻酔し背部を広く電気バリカンで剃毛し、更にシェーバーで剃毛した。除毛部を消毒用アルコールでよく拭き、図１に示すように試料の塗布部位の一方を注射針で格子状の傷を入れた。検体の抽出１０．５ｍｌを２．５×２５ｃｍの濾紙上に吸着させ、しっかりと防水フィルム（森下仁丹社製）で固定し、その上を伸縮粘着包帯で固定した。貼布後２４時間目にパッチをはがし、紅斑や浮腫の程度を観察した。ブランクはアルコールとした。
その結果、特に皮膚を刺激する反応は認められず、ブランクの場合と同様であった。
【００５０】
（実施例５）
次に、本発明のエビネ抽出物を利用した化粧水の代表的な配合例を示す。
【００５１】
（１）．化粧水（配合例１）：
全草エビネ３０％含有エタノール抽出液を使用した化粧水の第１配合例を下記に示す。なお、各成分の配合割合は、重量％である。
パントテン酸  ………………………………  ０．２５（重量％）
ニコチン酸アミド  …………………………  ０．１８
酢酸トコフェロール  ………………………  ０．８
塩酸ピリドキシン  …………………………  ０．１
エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム  …  ０．０８
全草エビネ３０％含有エタノール抽出液  …９．０
エタノール  …………………………………  ７．８５
精製水  ………………………………………  残量
【００５２】
（２）．化粧水（配合例２）
全草エビネ３０％含有エタノール抽出液を使用した化粧水の第２配合例を下記に示す。なお、各成分の使用量はグラム（ｇ）であり、かつ（      ）内は、当該成分を溶解するための溶剤とその使用量（ｍｌ）を示す。
パントテン酸ナトリウム  ……  ５．０（糖製水，６００ｍｌ）
ニコチン酸アミド  ……………  ３．６
胚芽油  …………………………  ８．０（無水エタノール，１００ｍｌ）
酢酸トコフェロール  …………１７．０
馬油  ……………………………１２．０（無水エタノール，１００ｍｌ）
アスコルビン酸  ………………１１．２（糖製水，６００ｍｌ）
グリコール酸  …………………  ２．０
ビタミンＢ６  …………………  ２．０（糖製水，３００ｍｌ）
エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム…０．１５（糖製水，３００ｍｌ）
全草エビネ３０％含有エタノール抽出液  …１８０．０
（注）溶媒合計は、糖製水１８００ｍｌ、無水アルコール２００ｍｌである。
【００５３】
（化粧水の評価テスト）
前記化粧水（配合例２）につてい５人に試用してもらい、美白効果及び保湿効果を中心に聴取した。結果を表４に示す。
【００５４】
【表４】
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【００５５】
被験者等によると、この化粧水を４〜５日続けると、美白効果に加え、毎朝翌朝でも肌がつるつるして保湿感の持続性に優れ、洗顔後でも一定の保湿性を維持できる、との感想が寄せられた。
【００５６】
【発明の効果】
本発明のエビネ属植物からの圧搾物及び／又は抽出物を有効成分とする化粧料は、強い抗チロシナーゼ活性を示すためメラニンの生成を効果的に抑制する優れた美白作用を有する。加えて、本発明の化粧料は、保湿効果にも優れている。
更に、本発明の化粧料は、天然物利用型であるため、安全性が極めて高い。
前記諸特性に優れる本発明の化粧料は、化粧水をはじめ、美白剤、乳液、クリーム、化粧石鹸などいろいろな用途に有用なものであり、別言すれば基礎化粧品として有用なものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】  皮膚一次刺激性試験におけるハートレー系モルモットに対する試料の皮膚塗布部位を示す模式図である。
【図１】
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