(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）複数の鳥類卵を所定位置に並べ、
（ｂ）それぞれの卵の殻に開口部を形成し、
（ｃ）それぞれが検出器とその中にルーメンを持つ注射針を含む長い供給装置を、前記開口部を通し卵内に延ばし、
（ｄ）前記複数の卵の各内部より前記検出器情報を検出し、
（ｅ）前記注射針のルーメンを通し、前記複数の卵のそれぞれに物質を注射する工程を含む複数の鳥卵に注射を行う方法。
【請求項２】
前記検出工程が前記注射工程の前に実施される請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記検出工程が前記注射工程と同時に実施される請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記検出工程が前記注射工程の後に実施される請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記検出器が電気センサーである請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記卵の殻に第２電気センサーを接触させる工程を更に具備する請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記第２電気センサーが前記卵の内容物と容量結合している請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記検出器が光学センサーである請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記検出器が化学センサーである請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記検出器が温度センサーである請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記検出器が音響センサーである請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記検出器が圧センサーである請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記検出工程が、
前記卵より生物サンプルを引き抜き、
前記サンプルが引き抜かれた卵を特定し、
前記の引き抜かれた生物サンプルから情報を得、次に、
前記情報を、前記生物サンプルが引き抜かれた卵の特定に関連づけて記憶する工程を含む請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記情報を得た卵を特定し、次に、
前記情報を得た卵の特定に関連づけて前記情報を記憶する工程を更に含む請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
（ｆ）前記卵のそれぞれから前記長い供給装置を引き抜き、そして次に、
（ｇ） 工程（ａ）から（ｅ）を第２の複数卵を使い繰り返す工程を更に含む請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記鳥卵が生きている胚性鳥卵である請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
（ａ）複数の卵を所定の位置に配置し、
（ｂ）それぞれの卵の殻に開口部を形成し、
（ｃ）それぞれが検出器及びその中に尖端部とルーメンを持ち、前記ルーメンが尖端部に延びている注射針を含む長い供給装置を、各開口部を通し卵内に延ばし、
（ｄ）前記複数の卵の内部より検出器深度情報を検出し、次に、
（ｅ）対応する針深度情報に基づき各針の貫通深度を独立に制御し、それにより、前記針のルーメンと通して前記複数卵のそれぞれの内部にある前記針先部分の特定位置より物質を注射でき、又は生物材料を引き抜く工程を含む複数の鳥の卵の中の特定位置に物質を注射し、又はサンプルを引き抜くことに適した針尖端部の位置決定方法。
【請求項１８】
前記針尖端部が尿膜内に位置している請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記針尖端部が羊膜内に位置している請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記針尖端部が胚筋肉内に位置している請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記針尖端部が気室内に位置している請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記針尖端部が卵黄嚢内に位置している請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
前記針尖端部が胞胚葉内に位置している請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
注射される複数の鳥卵を配置するためのアラインメントアッセンブリーと、
前記アラインメントアッセンブリーに結合し、そして所定位置にある複数の鳥卵のそれぞれに注射する様に配置された複数の注射装置にあって、各注射装置が前記注射される物質が通るルーメンを持つ注射針を具備している複数の注射装置と、
前記卵の内部からの情報を検出する、前記各注射針に連動する検出器とを具備する複数の鳥卵に物質を注射する注射装置。
【請求項２５】
前記検出器が深度検出器を具備している請求項２４の注射装置。
【請求項２６】
前記注射針の貫通深度を制御する前記検出装置に連動する制御手段を更に含む請求項２５の装置。
【請求項２７】
前記検出器が電気センサーを具備している請求項２４の装置。
【請求項２８】
前記検出器が光学センサーを具備している請求項２４の装置。
【請求項２９】
前記検出器が化学センサーを具備している請求項２４の装置。
【請求項３０】
前記検出器が温度センサーを具備している請求項２４の装置。
【請求項３１】
前記検出器が音響センサーを具備している請求項２４の装置。
【請求項３２】
前記検出器が圧センサーを具備している請求項２４の装置。
【請求項３３】
前記検出器が、
前記卵より生物サンプルを引き抜くためのサンプリング手段と、
前記生物サンプルを引き抜かれた卵を特定する同定手段と、
前記生物サンプルから情報を得るための前記サンプル手段に連動した分析手段と、
前記生物サンプルを引き抜かれた卵の特定と関連づけて、前記情報を記録するための、前記分析手段及び前記同定手段と連動した記憶手段とを含む請求項２４に記載の装置。
【請求項３４】
注射される複数の鳥卵を配列させるためのアラインメントアッセンブリーと、
前記アラインメントアッセンブリーに結合し、そして所定位置にある複数の鳥卵のそれぞれに注射する様に配置された複数の注射装置にあって、各注射装置が前記注射される物質が通るルーメンを持つ注射針を具備している複数の注射装置と、
前記卵の内部からの針深度情報を検出するための、前記各注射針に結合し、そして連動する検出器と、
前記針のそれぞれの貫通深度を独立にコントロールするための、前記深度検出器のそれぞれに連動しているコントロール手段とを含む、複数の鳥卵内の特定位置に物質を注射する、又は生物材料を引き抜くことに適した針先位置決定のための装置。
【請求項３５】
前記深度検出器が前記針に接続した電気センサーを具備している請求項３４に記載の装置。
【請求項３６】
前記深度検出器が、前記各卵の外部との容量結合するように配置された第２電気センサーを更に具備している請求項３５に記載の装置。
【請求項３７】
前記深度検出器が圧センサーを具備している請求項３４に記載の装置。
【請求項３８】
前記深度検出器が音響センサーを具備している請求項３４に記載の装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【関連発明】
本出願は、１９９９年１月６日出願の米国先出願番号６０／１１４，９３３の利益を主張する。
【０００２】
【発明の分野】
本発明は、卵、特に生有胚鳥類卵の注射に関する方法及び装置に関する。
【０００３】
【発明の背景】
鳥類卵への物質の注射は、孵化後の死亡率の低下、増殖速度又はその結果であるニワトリのサイズの増加、そして胚の性別判定に影響をあたえることも含めた様々な理由から実施されている。同様にワクチンに利用するためのウイルス生産を目的として生卵にウイルスも注射されている。
【０００４】
卵内注射により有胚性の家禽卵に導入される物質の例としては、生培養ワクチン、抗生物質、ビタミン及び競合的排除媒体（例えば生きている複製中の生体）が含まれる。処理物質の具体例は、Sharmaらの米国特許第4,458,630号及びFredericksenらの米国特許第5,028,421号に記述されている。同様に、Sharmaらの米国特許第4,458,630号、Hebrankの米国特許第4,681,063号及びSheeksらの米国特許第5,158,038号も参照することができる。
【０００５】
卵内注射の利用では、注射位置は所望する結果及び利用される注射物質により変わる。Sharmaらの米国特許第4,458,630号には、羊膜又は卵黄嚢の何れかに規定される領域への注射が記載されている。公開PCT出願WO93/15185には、有胚卵の気室への注射が記述されている。PCT出願WO93/14629には、卵内に含まれる胚の筋肉組織への注射が記述されている。
【０００６】
Paulの米国特許第5,136,979号には、鳥類胚に適したモジュラーインジェクションシステムが記述されている。このシステムは、そこを通り抜け可能な開口部を持ち一般に水平に向けられているツーリングプレートを備え、注射装置がツーリングプレート内の開口部内に垂直に静止しており、注射装置下部はツーリングプレートの下方に下向きに存在し、注射装置の上部はツーリングプレートの位置、またはその上に静止しているツーリングプレートを含む。方法には、ツーリングプレート及びそれに不随して注射装置を上下させ、そして、プレートが下がり、静止状態にある注射装置の下部が注射される卵に当たると、注射装置が停止したままの状態で、ツーリングプレートは、注射装置がツーリングプレートから開放され、ツーリングプレートとは独立に平行方向に動くことができるまで、下方に進む。
【０００７】
Paulらの特許に記載されたこの装置は、生きた鳥類卵の高速商業注射に利用されており、産業界に広く受け入れられている。本装置の成功により、ワクチンの様な繊細な高価な物質の卵内注射が可能になった。しかし、鳥類細胞の内部区画の大きさや位置そして構造は元来多様であり、幾つかの卵が最適外の部位に注射されることがある。誤った方向の注射を少なくし、注射液の浪費を無くし、そして無効な注射を無くすために、より注射精度の向上が望まれている。注射精度の向上を達成するには、従来の自動化卵内注射法及び装置では達成できなかった、注射工程中の卵内部からの有用且つ即時的な情報が必要である。
【０００８】
【発明の要約】
本発明の第１の観点は複数の鳥類卵に注射する方法である。この方法では、（ａ）複数の鳥類卵を所定位置に並べ、（ｂ）それぞれの卵の殻に開口部を形成し、（ｃ）それぞれが検出器とその中にルーメンを持つ注射針を含む長い供給装置を、各開口部を通して卵内に延ばし、（ｄ）複数の卵のそれぞれの内部から検出情報を検出し、（ｅ）前記注射針のルーメンを通して複数の卵のそれぞれに物質を注射する。この注射は、羊膜、尿膜、胚、卵黄嚢、卵白等を含む何れかの好適位置に行われる。
【０００９】
検出された情報は、注射針の貫通深度を調節して注射位置をより正確に制御すること、注射針の動きを停止して貫通深度を調節すること、その後の卵選別のために卵の性を特定すること、及び非生卵への注射が必要なく且つ／又はその後に生卵を選別できる様にするために生卵と非生卵とを区別することを含む様々な目的に利用できるが、これに限定されるものではない。更に、胚発生の段階も決定できる。例えば、気室及び尿膜は胚の発生が進むほど大きくなり、そして気室は卵のその他の区画とは異なる電気的特性を持つようになる。従って、胚発生の段階は電極と使い気室の大きさの様な特性を測定することで決定することができる。
【００１０】
本方法は、更に次の工程、すなわち、（ｆ）各卵より供給装置を引き抜く工程と、（ｇ）第２の複数の卵について段階（ａ）から（ｅ）を繰り返すことで大量の卵に自動的に注射し、同時に情報を検出するのに適した迅速、高速な手段を提供する工程を含んでも良い。
【００１１】
本発明の第２の観点は、複数の鳥類卵について物質の注射に適した位置に針先を正確に位置せしめる、又は複数の卵からサンプルを引き抜く方法である。この方法では、（ａ）複数の卵を所定の位置に配置し、（ｂ）それぞれの卵の殻に開口部を形成し、（ｃ）それぞれが検出器及びその中に尖端部とルーメンを持ち、前記ルーメンが尖端部に延びている注射針を含む長い供給装置を、各開口部を通し卵内に延ばし、（ｄ）前記複数の卵の内部より検出器深度情報を検出し、次に（ｅ）対応する針深度情報に基づき各針の貫通深度を独立に制御するようにしている。それにより、前記針のルーメンと通し複数の卵のそれぞれの内部にある針先部分の特定位置より物質が注射でき、又は生物材料を引き抜くことができる。
【００１２】
本発明の第３の観点は、複数の鳥類卵に物質を注射し、かつ注射された卵の内部より有益情報を検出するのに適した装置である。この装置は、注射される複数の鳥類卵を配置するためのアラインメントアッセンブリーを含む。複数の注射装置がアラインメントに結合しており、注射装置は所定の位置にある複数の鳥類卵のそれぞれに注射できる様に配置されている。検出器は、複数の卵それぞれの内部より情報を検出できるよう、注射針のそれぞれと連動する。
【００１３】
発明の第４の観点は、複数の鳥卵の特定部位に物質を注入できるよう、又は生体物質を引き抜くために、針先を位置決めするための装置である。この装置は、注射される複数の鳥類卵を配置するためのアラインメントアッセンブリーを含む。複数の注射装置が、アラインメントに結合し、所定の位置にある複数の鳥類卵のそれぞれに注射できる様に配置されており、各注射装置は、そこを通り物質が注射され、又は材料が引き抜かれるルーメンを持つ針を含む。位置検出器は、前記卵の内部からの針位置情報を検出するために、前記の各注射針に接続され、または連動している。コントローラーは、各針の貫通深度を独立に調節するために、各位置検出器と連動している。
【００１４】
本発明の上記した及びその他の目的及び観点は、図面と以下記載する明細書により詳細に説明される。
【００１５】
【好適実施態様の詳細な説明】
以下、本発明について、好適な実施態様が示された添付図面を参照しながら、詳述する。
【００１６】
以下記す様に本発明は、特にその開示全体がここに参照され取り込まれているPaulらの米国特許第5,136,979号に開示されている様な高速装置に於ける、複数の卵への注射又は物質の引き出しに適合している。
【００１７】
本発明は、卵、特に鳥又は鳥類の卵、より具体的には、ニワトリ、シチメンチョウ、カモ、ガチョウ、ウズラ、キジ又はダチョウの様な家禽類卵に実施される。これらの卵は、生きたたまごであり、即ち生きた鳥類胚を含む卵である。この生卵は、初期胚発生及び後期胚発生を含む何れかの胚発生段階にある。更に、その中での増殖ワクチン培養の様な適当な目的に関しては、本発明により非生細胞が注射されるだろう。
【００１８】
本発明により、ワクチン、ホルモン、増殖促進作用物質、競合的排除媒体の様な共生培養体、抗生物質、遺伝子転移ベクターを含む異種核酸、色素の様なマーカー等を含む物質が注射されるが、これらに限定されない。
【００１９】
物質は、胚の腹膜内、筋肉内又は皮下、卵黄嚢又は柄、胚の肝臓又は肺、気室、尿膜嚢、羊水、卵白、胞胚葉等を含むいずれかの好適区画に注射されるだろう。同様に、生物学的物質又はサンプルは、これら区画のいずれかより引き抜かれるか、又は発明が卵からの物質の引き抜きに用いられる場合の物質である。
【００２０】
検出段階のタイミングは、検出される方法又は機構の具体的な目的、及び注射される物質又は引き抜かれるサンプルの特性に依存するだろう。
【００２１】
電気センサー、光学センサー、化学センサー、温度センサー、音響センサー、圧センサー（特に胚筋肉の検出に好適）、又は物理的あるいは化学的パラメータの検出に適した何れかの装置は、本発明実施に於いて検出手段又は検出器として役立つ。検出器又はセンサーは、注射針の外側壁に接続されているか、又は電気センサーの場合及び針が絶縁性又はポリマー性材料以外の伝導性金属材料から形成されている場合には、針の側壁自体が検出器として機能し、これに好適回路が接続されるだろう。検出器は、非伝導性の針に附属した、又は伝導性針の絶縁部に附属した１又は２本（あるいはそれ以上）の電極であろう。卵解剖内の深度又は位置を検知する目的、異常卵（即ち排除される卵）と正常卵とを区別する目的及びその他各種目的に関し、それらが卵を排除すべきか否かに関する有益な指示、又は達成すべき特定深度又は位置の有益な指示を提供する限りに於いて、様々な物理的又は化学的パラメータが検知あるいは検出されるだろう。
【００２２】
ここで用いる卵内の“位置”とは、この卵内にある各種解剖学的区画（気室、卵黄嚢、尿膜、羊水、卵白、鳥胚、胞胚葉）又は鳥胚自体の各種組織（例えば筋肉）を意味する。
【００２３】
センサーは針の尖端部、又はその側壁の所定位置及び／又は針先より離れて配置されるだろう。
【００２４】
バイオセンサーは、本発明の実施に利用される。各種バイオセンサーが既知である。例えば、米国特許第5,804,453号、第5,770,369号、5,496,701号、4,682,895号、第5,646,039号、第5,587,128号及び第4,786,396号を参照することができる（その開示された内容は参照され、ここに取り込まれている）。
【００２５】
電気検出器を利用する場合、第１電極と連動する第２電極を提供することが望ましい。２本の電極を利用する場合、これら電極は共に注射針に接続されているか、１本が注射針に接続され、もう１本は別個に卵殻の同一開口部から挿入されるだろう。好適な実施態様では、第２電極は卵外面に接している。電気シグナルは、２本の電極を通過し、２電極間の伝導の有無が検知されるだろう。第２電極が単純に卵外面に接している場合、シグナルは、第２電極が容量的に卵内部含有物と結合する様な交流シグナルであることが好ましい。好ましくは、各卵（又は複数の卵を含む平面）は、電気検出器を用い検出される前に、伝導性材料の頂部に置かれる（例えば伝導性ポリウレタン発泡体に関する米国特許第5,591,482号を参照）。
【００２６】
電気検出器を用いて尿膜の様な液体充填区画の位置を感知する場合、電気検出器は、プローブの液体区画への浸入を感知し、震度検出器として役立つ（用語“震度検出器”はここでは“位置検出器”を包含する）。本発明の実施態様の一つでは、検出器及び／又は結合する注射針の運動は、検出器及び／又は針が区画に入る時停止される。この様式では、注射針は尿膜を貫通した直後に停止し、羊膜の貫通を防ぐことができる。
【００２７】
電気検出器は、完全回路の形成、及び回路の完成又は回路内の電流の測定に基づく。例えば、この回路は、金属針中の伝導、針先から塩を含む尿膜液内への伝導、尿膜と羊膜を分離する薄膜を通した尿膜と羊膜間の容量結合、羊膜から卵殻を通り卵殻上の伝導性パッドに至る容量結合、及び更に全回路を通る交流(AC)シグナルの流れを検知する逆行回路を含むだろう。図１は、この回路と電流の検知を示しており、そして電気的検知システムの概略は図４に示されており、共に以下詳細に論ずる。
【００２８】
実施態様の一つでは、空気シリンダーはゆっくりと検出器及び結合する注射針を卵内に押し込む。液内への浸入は、伝導度をモニタリングすることで検知される。回路の完成は、針先が羊膜又は尿膜内に浸入したとき検出される。所望部位への浸入が検知されると、空気シリンダーの両側より排気され、動きが停止する。動きの停止は、ピストンと空気シリンダーのシールの摩擦に基づく。好ましくは、空気シリンダーの両側は、卵の分画からの針の戻しによる背圧を防止するために排気される。シリンダー摩擦のブレーキ作用の代わりとして、又は補助するために電磁ブレーキが利用できるだろう。検出器が注射に適した所望卵区画の検知に利用され、そして注射針が検出器と同一の垂直位置に並置されていない場合、適当な区画の検知と注射針の動きの停止との間の遅れを利用し、注射針を検知した区画内に完全に浸入させることができる。
【００２９】
光学センサーは、ファイバー光学繊維を含み、そして注射針の外壁部分に接続されるだろう。光源は、針と同時に卵内に挿入される第２ファイバー光学繊維を通じ供給されるだろう。生卵と死亡卵は異なる光伝達特性又は熱特性を持つことから、光伝導又は伝達特性を利用することで卵の生存を決定することができるだろう。光は、また生理学的測定、疾患測定、又は性判定のための色マーカーも検出するだろう。
【００３０】
図６Ａ及び６Ｂを参照すると、本発明の一実施態様による光学検出器100が図示されている。２本の細い（直径約0.001インチないし0.004インチ）の光学繊維101、102は、注射針29の側部に結合されている。光学繊維101、102は、光が針29の尖端部29aの方向に放出され、又は受け取られる様に配置される。光源103は、可視又は赤外光を１繊維101（発光繊維）内に送り込み、針先29aの正面にある卵の領域を照らす。第２繊維102（可視繊維）は、針先29aの正面にある卵の領域より集光する。集められた光は、可視繊維102により光検出器104に運ばれる。光検出器104は、受け取った光の強度に比例し電気シグナルを提供する。大気中では、発光繊維101からの光の極一部だけが針29の側方に散乱し、可視繊維102により受け取られることから、電気シグナルは低い。針先29及び繊維101、102が卵内の膜に接近すると、発光繊維101からの光はより強く可視繊維102に反射される。繊維101、102が膜に接する直前、発光繊維101からの光はもはや可視繊維102に反射されなくなるため、シグナルレベルは急激に低下する。繊維101、102の端部が膜を貫通すると、光レベルは透明な羊水、不透明な赤色の卵、不透明な筋肉又は黄色の卵黄への浸入に応じて再度変化するだろう。
【００３１】
更に、図６Ａ及び６Ｂに例示された光学検出器の配置を膜の貫通のシグナル、又は針から膜までの距離の測定に利用できる。図6Cは膜までの距離を示す光強度曲線105例を示している。光強度はY軸106に沿ってプロットされ、針先から膜までの距離はX軸107に沿ってプロットされる。例示の如く、光強度は針が膜に接近すると増加し、膜を貫通する直前に突然減少する。
【００３２】
化学センサーは、バイオセンサー分野の当業者に知られる様々な様式の何れかの形で提供される。例えば、化学センサーは、ベクトンディッキンソンマイクロバイオロジーシステム、コッケイスビル、メリーランド、米国（Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeysville, Maryland USA)社より入手できるBBL(r)リポゾーム技術を通じ、又は米国特許第4,703,017号及び第4,743,560号に記載の如くに提供される。これらアッセイの結果は、構成部品が注射針上に取り付けられた場合には、上記の如くにファイバー光学繊維を利用した測定によって決定されるだろう。その他の化学アッセイは電気化学検出により実施されるだろう。この様なセンサーは、例えば卵内の背の性判定及び卵内の潜在的微生物感染の検出に利用されるだろう。
【００３３】
化学センサーは注射針に取り付けられたpHセンサーであり、pH測定は潜在的微生物汚染、死卵と生卵との区別等に利用されるだろう。各種陰イオン又は陽イオン種を検出するイオン特異的電極も以下論じる様に利用されるだろう。イオン及びpHプローブは、卵の各種領域及び区画内に存在している生体液の化学の差より、卵内の分画間の移動を検知する。
【００３４】
温度センサーは、その温度に基づいて、死卵と生卵を区別するのに、又は卵を性別に分類するのに利用されるだろう。
【００３５】
音響センサーは、受動的または能動的センサー（即ち卵の外部に接触したトランスジューサーの様な音響シグナル源と結合したもの）として利用でき、深度を決定し、死卵と生卵を区別すること等ができる。
【００３６】
位置又は深度センサーは、各種技術の何れかにより実行することができる。気室膜との電気的接触を利用し、卵の所定区画、例えば気室膜下所定深度に対する針の貫通をコントロールし、より正確に尿膜内、胚内、羊膜又は羊水中等に注射することができる。あるいは、深度は圧センサーにより検知され、卵内の区画から区画（気室から尿膜；液体分画から筋肉組織へ等）への針移動中の圧変化を評価することもできる。センサーの位置を検知する好適方法の一つは、センサー周囲の卵媒体によりセンサー上に及ぼされる圧を測定する。例えばセンサー内に配置された出口装置周辺の媒体中に気体又は液体を放出するのに必要な圧は、注射針又はガスあるいは液体が充填された中空チューブを用いて測定できる。出口装置が気体充填分画（例えば気室）から液体充填分画に移動すると、必要とされる排出圧は上昇し、そして出口装置が液体充填分画から固体組織（例えば胚の筋組織）に移動すると再度上昇する。圧の変化は、卵外側に配置された圧測定装置によって測定できる。
【００３７】
少量の液体を針先端より押すのに必要な圧は、針先端周囲の物質のタイプを指示できる。筋肉内に液体を押し出すのに必要な圧は、尿膜又は羊膜、あるいは気体中に液を押し出すのに必要な圧に比べ大きい。本発明の実施態様による、針周辺の媒体中に少量の液体（例えば蒸留水）111を押し出すために配置された圧検出器110は図７に図示されている。例示の如く、圧トランスジューサー112は針入口29bに接続しており、一定量の液体が容積式ポンプ114により放出される。液体のパルスが、ポンプ116によるワクチン115の放出前に針29が筋肉内に存在するか決定する。
【００３８】
本発明の別の実施態様による針圧29周囲の媒体中に少量の液体を分注するために配置された検出器120は、図８に示されている。少量の液体（例えば５ないし10μl）は、循環容積式ポンプ122により針29の内及び外に循環される。このポンプは、好ましくは弾性チューブを圧するソレノイド又はカム駆動型プレートである。あるいは、サイクル式置換型ピストンが利用される。チューブ124は、弾性体であり、針先端29a周囲の液体（又は気体）より針29内への液体引き戻しにより、それ自体再充填される。
【００３９】
図７又は８に例示の実施態様を用いる場合、針が羊膜内にある間液体は極めて僅かな圧により針先端内外を動く。この圧の増加が筋肉内への浸入を特定する。
【００４０】
光センサーは外部光源又は針により運ばれる光源と組合せ利用され、針が気室の様な空気充填区画にあるのか、羊膜又は尿膜の様な液充填区画にあるのか、又は筋肉や胚自体の内蔵の様な組織区画にあるのか区別することができる。
【００４１】
センサーは、卵の細菌汚染又は大腸菌、サルモネラ菌、又はリステリアモノサイトゲネス汚染の様な卵の微生物汚染の検出に適した診断センサーであろう。診断センサーは、好適な手段、典型的には化学センサー又はバイオセンサーにより実施されるだろう。汚染卵の検出は、その後の非汚染卵から汚染卵の選別のためのシグナルの作動に利用されるだろう。
【００４２】
複数のセンサーが針に連結されるだろう。例えば、卵の微生物汚染を検出することが望まれる場合、又は卵を性別に選別することが望まれる場合には、所望条件に対しより正確な指示を提供するために２種類又は異なるタイプのデータが提供されることが有益であろう。例えば、pHセンサー及び温度センサーの組合せ、又はその何れか一つのセンサーが光学センサーと組み合わされるだろう（例えば、卵白の様な液の透明性を簡便に検出するために用いる光学センサーと）。
【００４３】
検出工程は、その後の分析が実施される処理システム内に、卵から生物サンプルが引き抜かれることで実施される。例えば、液体サンプルは引き抜かれ、分析されて、少量の液体の加工に関し利用可能な分析システム（例えば、サンプルが液体処理ラインから空気ギャップで隔てられている）と同様の方法でそこから所望情報を得るだろう。この様な例では、それぞれの生物サンプルが引き抜かれる卵を特定する方法が、例えば卵数及びそれぞれの卵の相対位置を計測し、ハードウエアー、スフとウエアー、又はハードウエアー及びソフトウエアーの組合せを、それが所望する形（例えば特定の卵を排除すること、又は排除された卵の質又はその他パラメータに関する情報の大規模データベースを提供すること）で用いられるまで、短時間又は長時間情報をサンプリングし及び選別する時間と共に提供することにより供与する必要がある。イオンセンサーにより検出された尿膜液組成に関する情報は、胚の真の齢の指示、孵化までに必要な時間の推定、インキュベーションシステムの運転評価等に利用できる。
【００４４】
本発明は、注射された卵に関する大量の情報を記録し、保存する方法を提供することが認識されるだろう。例えば、品質管理プログラムに利用できる、又は卵の事前処理の改良、あるいは選択的繁殖プログラムの変更に利用できる集団データを得ることができる。この様な例では、注射された卵の同一性、卵のバッチの中にある特定の固体として同一性ではなくむしろ特定の卵バッチの同一性に結びつく。
【００４５】
複数の卵に同時に注射をすることに関する本発明の好適な実施態様は、図１−４に例示されている。
【００４６】
図２−３に示す如く、装置10は、卵を運搬する平板15、静止基部16、及び既知技術によりその中にルーメン又は針の様な液体供給手段を持つ複数の一般的な注射供与装置、又はヘッド25を含む。平板15は、複数の卵20を本質的に直立した位置に固定する。平板15は、卵20の所定域が外部からアクセスできるように配置されている。装置の基部16に向かって注射装置25が進む時、卵は平板15により、それらの各端部が対応する注射装置の一つに対し適当に整列する様に固定されている。ここで用いる場合の“ルーメン”とは、チューブの空所又は内部開放空間であり、注射筒又は針により提供することができる。処理物質の供給に適したルーメンは、針内部、又は針と外部ガイド又は筒部との間にあるだろう。複数ルーメンは単一針内に形成され、針上の異なる位置に配置された出口を持つだろう。
【００４７】
複数の注射装置25のそれぞれが第１及び第２端部26、27を持つ。装置25は、周知である第１伸長位置と第２後退位置を有する。注射装置25が伸長する場合、第１端部26は、外部卵殻の所定域に接触し、そこで停止する様に配置されている。注射しない場合、注射装置25は、卵及び静止基部16より所定距離離れた静止位置まで後退する。あるいは、基部16は、注射供給装置又は注射供給針29に対し適当な位置にある卵まで縦軸方向に滑動することもできる（図５参照）。図１に示す様に、注射供給装置の第２端部27は、処理物質チャンバーからのチューブを受け取る様形成されている第１及び第２入口28a、28bを含んでいる。次に、処理物質は、内部針のルーメン及び内部針とガイドパンチの間の空間の様な別供給経路に沿って針内を運ばれる。好適な実施態様では、１経路に沿っては単一物質のみ注射され、消毒液（例えばクロリン液）は既知技術により外部ルーメンを運ばれる。
【００４８】
図１に示す如く、卵内への化合物供給に関する卵内注射ヘッド25は、反対側の頂41及び底43端部とその中に形成された縦軸方向に長い装置を持つ本体部材40、及び前記装置内に配置された供給装置を含む。この装置は、滑動して本体部に接続でき、且つ咬合の緩衝及び注射ヘッドが降りてくる間卵を所定位置に固定するためのスプリング42を含んでいる卵設置部材又は卵捕捉部材を端部26に含む。既知技術により、外部ガイドが卵殻の貫通のために備えられることが好ましく、周知技術により針が外部ガイドを越えて延び、卵の所望区画内に入れられる。
【００４９】
空気ライン51、52は、通常の方法による注射針の卵内への進行、又は後退のために供給される（図１及び５参照）。注射針と電気的に接触しているアース53、及びプランジャーアッセンブリー55により、卵と電気的に接触するよう運ばれる地面から絶縁されている電気ライン54を供給することで、卵に対する注射針の電気的接触を検知することができる。更に、卵の各種区画内への注射針の位置も、伝導度、抵抗、容量等の変化より検知することができる。好適な実施態様では、電力供給60を変化させることで（具体的には100kHz６vをピークサイン曲線に）、ライン54を介して卵を通る電流の容量性結合を達成する。
【００５０】
図１の好適実施態様では、深度情報は電流閾値モニター62により電流感知レジスター61を介して検知され、停止ツーリングシグナル63が提供される。図４により詳細に描写されている電流閾値モニター62は、電流シグナル増幅部71、電流整流及び平均化部分72、及び閾値検出部分73を含むが、いずれも既知技術によりレジスター74、オペレーショナルアンプ75、コンデンサ76、ダイオード77等より組み立てることができ、電源（未表示）より電力供給を受けることができる。停止ツーリングシグナルは、図５に示す空気方向制御バルブ80に供給できる。供給ライン81に沿ってされた圧は次に、圧をライン61、52又は排気ライン85、86を通る様に振り向けることで針下降位置82、停止位置83及び針上昇位置84の３カ所の位置に分配することができる。
【００５１】
上記は本発明の例示であり、それを限定するものではない。発明はそこに含まれるクレームの等価体を含む以下のクレームにより規定される。
【図面の簡単な説明】
【図１】  卵液内の針の貫通を決定し、針の穿孔運動を停止する信号をもたらすための装置の概略図である。
【図２】  発明の実施に有用な多注射ヘッド装置の側面図である。
【図３】  図２の多注射ヘッド装置の透視図である。
【図４】  図１の装置を実施に適した検出、整流、平均化及びしきい回路の略図である。
【図５】  注射針を上下し、何れかの中間位置に保持できる空気式方向制御バルブの概略図である。運動は十分ゆっくりとしており、正確な停止シグナルが可能である（ストップシグナル供与前の移動程度を予想することにより、より迅速な運動を取り扱うことができる）。
【図６Ａ】  本発明の実施態様の一つによる光学的検出器を例示する図である。
【図６Ｂ】  図６Ａの光学的件手記の側方正面図である。
【図６Ｃ】  膜までの距離を表す例示的な光強度曲線を描写する図である。
【図７】  本発明の実施態様の一つによる、針周辺媒体中に少量の液体を分注する様配置された圧検出器の略図である。
【図８】  本発明の別の実施態様による、針周辺媒体中に少量の液体を分注する様配置された圧検出器の略図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ−６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７】
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【図８】
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