(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
魚類腸管から採取することができ、抗魚病細菌性を有するサッカロミセス・エグジギュース。
【請求項２】
サッカロミセス・エグジギュース  ＮＳ−１（ＦＥＲＭ  Ｐ−１４５５２）。
【請求項３】
請求項１または２記載のサッカロミセス・エグジギュースの生菌体を含有する養魚飼料。
【請求項４】
請求項１または２記載のサッカロミセス・エグジギュースの生菌体および糖類を含有する養魚飼料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は魚類腸管内の魚病細菌の増殖を抑制する酵母、並びにこの酵母を含有する養魚飼料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、２００海里規制による漁場の制限および天然資源の涸渇に伴い、栽培漁業、養殖漁業が盛んになってきており、これに伴い、稚仔魚生産用飼料、成魚育成用配合飼料についての多くの研究がなされている。
【０００３】
養魚飼料としては、近年、従来のイワシなどの生餌に代えて、魚粉を主体とした配合飼料が使用されるようになってきた。しかしながら、この配合飼料を投与したのみでは、稚仔魚の餌付きおよび嗜好性の点に問題があり、これを解決するために、最近、ビール酵母やパルプ廃液酵母を配合することが行われているが、これによっても、まだ充分に満足できる効果は得られていない。
さらに近年養殖魚において細菌性、ウイルス性および寄生虫性疾病が多発しており、魚病被害をいかにして軽減するかが大きな問題となっている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明は、魚類の嗜好性を高め、しかも生存率を高めることのできる養魚飼料を提供することを目的とするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
斯かる実情において、本発明者は鋭意研究を行った結果、本発明者によって、鹿児島市の養鱒場に棲息するニジマスの腸管内から分離した酵母が、魚類腸管内の魚病細菌の増殖を抑制すること、従って、これを養魚飼料に配合すると、魚類の生存率が著しく向上すること、さらに、この酵母と糖類を併用して配合すると当該効果がさらに増大することを見出し、本発明を完成した。
【０００６】
すなわち、本発明は、後述の特性を有する新規な酵母並びにこの酵母またはこの酵母と糖類を含有する養魚飼料を提供するものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明の酵母は、ニジマス等の魚類腸管から採取することのできるもので、次のような菌学的性質を有する。
【０００８】
（ａ）各培地における生育状態
（１）バレイショ片寒天培地
栄養細胞の大きさ：３〜５μm
型態：やや丸いだ円形
増殖の形式：出芽
（２）ＺＡＧ培地〔ポリペプトン５．００ｇ、酵母エキス１．００ｇ、ブトウ糖２０．００ｇ、寒天１５．００ｇ、１／６人工海水（ＮａＣｌ  ３０．０ｇ、ＫＣｌ  ０．７ｇ、ＭｇＣｌ2 ・６Ｈ2Ｏ  １０．８ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2Ｏ  ５．４ｇ、ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2Ｏ  １．０ｇ、脱イオン水１０００ml）、pH７．６、１２０℃で２０分間高圧滅菌〕
白色コロニーを形成し、胞子形成は見られない。
【０００９】
（ｂ）子のう胞子の形成：Ｖ−８培地〔Ｖ−８ジュース（米国キャンベル・スープ・カンパニー・インコーポレーション社製，野菜ジュース）３５０mlおよび蒸留水１０mlにパン酵母５ｇを入れて攪拌し、これに、寒天１４ｇを蒸留水３４０mlに溶解したものを加えて混和し、斜面培地とする（pH６．８）〕で、１〜２個の球形ないしだ円形の子のう胞子を形成する。
（ｃ）射出胞子の形成：麦芽エキス寒天培地、ＹＭ寒天培地で、射出胞子を形成しない。
（ｄ）生理的性質
（１）至適生育条件：pH７〜８、温度２５〜３３℃。
（２）生育の範囲：pH２〜９、温度７〜３４℃。
（３）硝酸塩の同化：−
（４）脂肪の分解：−
（５）尿素の分解：−
（６）ゼラチンの液化：＋
（７）塩化ナトリウム濃度：最適０〜０．５％、最高７％。
（８）カロチノイドの生成：−
（９）顕著な有機酸の生成：＋
（10）デンプン様物質の生成：−
（11）ビタミンの要求性：ビオチン要求
【００１０】
（ｅ）同化性の有無
Ｄ−グルコース（＋）発酵、Ｄ−マンノース（＋）、Ｄ−ガラクトース（＋）発酵、Ｄ−フラクトース（＋）、麦芽糖（−）非発酵、ショ糖（＋）発酵、乳糖（−）非発酵、メリビオース（−）、セロビオース（−）、トレハロース（＋）、ラフィノース（＋）、α−メチル−Ｄ−グルコシド（−）、可溶性デンプン（−）、イヌリン（＋）、イノシット（−）、Ｄ−マンニット（−）。
【００１１】
以上の菌学的性質を、Ｎ．Ｊ．Ｗ．Ｋｒｅｇｅｒ−ｖａｎ  Ｒｉｊ：“ＴｈｅＹｅａｓｔｓ”（１９８４）Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｂ．Ｖ．およびＪ．Ａ．Ｂａｒｎｅｔｔ，Ｒ．Ｗ．Ｐａｙｎｅ  ａｎｄ  Ｄ．Ｙａｒｒｏｗ：“Ｙｅａｓｔｓ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ”２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９０）Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓを参照して検索した結果、本菌はサッカロミセス・エグジギュース（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｅｘｉｇｕｕｓ）と同定されたが、本菌は従来既知のサッカロミセス・エグジギュース  ＩＦＯ  １１６９と表１に示す違いを有する。
【００１２】
【表１】
0003723611.tif 000002
【００１３】
従って、本菌は新規な酵母であると判定し、サッカロミセス・エグジギュースＮＳ−１（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｅｘｉｇｕｕｓ  ＮＳ−１）と命名し、工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ  Ｐ−１４５５２として寄託した。
【００１４】
本発明の酵母は、例えばニジマスを放血殺し、開腹して腸内容物を絞り出し、生理食塩水で１０倍段階希釈し、酵母菌培養用寒天平板培地に塗抹し、２５〜３３℃で４８〜７２時間培養して、酵母菌を検出することにより採取することができる。この酵母は、ブドウ糖等の糖分を含む液体または固形培地で、２５〜３３℃にて培養することにより増殖することができる。
【００１５】
本発明の酵母は、次の試験例１に示すように、魚病細菌の増殖を抑制する作用を有する。
【００１６】
試験例１
本発明酵母単独、魚病細菌エトワジェラ・タルダ（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａｔａｒｄａ；以下Ｅ．ｔａｒｄａと略す。）単独および両者をそれぞれ液体培地（ＺＡＧ培地成分から寒天を除いたもの）に接種し、２８℃で培養し、菌数の推移を経時的に測定した。その結果は図１に示すとおりであり、本発明酵母の存在において魚病細菌の増殖は顕著に抑制された。
【００１７】
このように、本発明の酵母は魚病細菌の増殖を抑制する作用を有するので、これを養魚飼料に生菌体として添加して摂餌させることにより魚病の発生を防止・抑制し、魚類の生存率を向上させることができる。なお、従来の酵母は蛋白源等の栄養源として配合されているもので、主に死菌体として添加されていたものである。
【００１８】
本発明酵母は何れの養魚飼料にも添加することができる。斯かる飼料としては、イワシ、アジ、サバ、サンマ等の魚肉をそのままあるいは凍結して与える生餌、これらの生餌にブラウンミールやホワイトミール等の魚粉や粘結剤を加えてなるモイストペレット、各種動植物タンパクを原料とするドライペレットやエクスパンデッドペレットなどの配合飼料があり、これにビタミン、無機塩類等を添加してさらに栄養価を高めるのが好ましい。斯かる養魚飼料への本発明酵母生菌体の添加量は、飼料１ｇ当りに酵母１０3〜１０7個を含むようにするのが好ましい。
【００１９】
また、この酵母と併用される糖類としては、ブドウ糖、マンノース、ガラクトース、果糖等の単糖類、ショ糖、麦芽糖、乳糖等の二糖類、デンプン、グリコーゲン、デキストラン、イヌリン、マンナン等の多糖類を挙げることができるが、特に上記単糖類、二糖類が好ましい。そして、これらの糖類は飼料中０．１〜２％、特に０．３〜１％になるように配合するのが好ましい。
【００２０】
本発明の飼料は成育状況に応じて１匹当り１日に魚類の体重の１〜２０％となるよう与えるのが好ましい。
【００２１】
【実施例】
次に実施例を挙げて説明する。
【００２２】
実施例１
平均体重６０ｇのニジマスをそれぞれ２０尾ずつの試験区および対照区とした。試験区には、ＸＰ飼料（日清製粉株式会社製）６０ｇに本発明酵母の生菌体（ＦＥＲＭ  Ｐ−１４５５２）を生理食塩水に懸濁させた液（１回目は１０7ＣＦＵ／ml、２回目は１０8ＣＦＵ／ml）１０mlを吸着させたものを、また対照区には、上記懸濁液を吸着させない同ＸＰ飼料を毎日給餌した。
ニジマスに麻酔をかけ、遠心集菌したレンサ球菌エンテロコッカス・セリオリシダ  野外分離株（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｅｒｉｏｌｉｃｉｄａ  野外分離株）の菌液（１０6 ＣＦＵ／ml）１mlをカニューレ法により強制経口投与した。その投与前、投与直後およびその後２４時間毎に２尾ずつサンプリングし、腸管内容物中のレンサ球菌数（試験区については酵母菌数も）の推移を測定した。
その結果は図２に示すとおりであり、本発明酵母の生菌体を与えた試験区は対照区に比較し、腸管内のレンサ球菌数は４８時間早く検出限界以下に達した。
【００２３】
実施例２
平均体重５５ｇのマダイをそれぞれ５０尾ずつの試験区および対照区とした。試験区には、海産種苗用飼料「おとひめ３号」（日清製粉株式会社製）１５０ｇに本発明酵母の生菌体（ＦＥＲＭ  Ｐ−１４５５２）を生理食塩水に懸濁させた液（１0 7ＣＦＵ／ml）１０mlとレンサ球菌（実施例１と同じ）の菌液（１０5ＣＦＵ／ml）１０mlを吸着させたものを、また対照区には、同量のレンサ球菌のみを吸着させた同海産種苗用飼料を１日（３回）給餌し、その後は正常の上記海産種苗用飼料を給餌した。
上記菌液吸着飼料の１回目の給餌から１２、２４、３６、４８時間目および３、４、７および８日目に各区２尾ずつサンプリングし、腸管内容物中のレンサ球菌数（試験区については酵母菌数も）の推移を測定した。その結果は図３に示すとおりである。尚数値は２尾の平均値で示した。
【００２４】
実施例３
平均体重８０ｇのヒラメをそれぞれ５０尾ずつの試験区および対照区とした。試験区には、海産種苗用飼料「おとひめ４号」（日清製粉株式会社製）２００ｇに本発明酵母の生菌体（ＦＥＲＭ  Ｐ−１４５５２）を生理食塩水に懸濁させた液（１０4ＣＦＵ／ml）１０mlとレンサ球菌（実施例１と同じ）の菌液（１０8ＣＦＵ／ml）１０mlを吸着させたものを、また対照区には、同量のレンサ球菌のみを吸着させた同海産種苗用飼料を１日（３回）給餌し、その後は正常の上記海産種苗用飼料を給餌した。これについて実施例２と同様にして腸管内容物中のレンサ球菌数および酵母菌数を測定し、その結果を図４に示した。また、上記の酵母およびレンサ球菌を吸着した飼料を毎日１３日間給餌したときの結果は図５に示すとおりである。
【００２５】
実施例４
平均体重１８０ｇのモジャコをそれぞれ６０尾ずつの試験区および対照区とした。試験区および対照区の両方にレンサ球菌（実施例１と同じ）の菌液（１０5ＣＦＵ／ml）２０mlを吸着させたモジャコ用飼料「うみさち４号」（日清製粉株式会社製）３００ｇを４日間給餌し、その後、試験区には本発明酵母の生菌体（ＦＥＲＭ  Ｐ−１４５５２）を生理食塩水に懸濁させた液（１０5ＣＦＵ／ml）２０mlを吸着させた同モジャコ用飼料を、対照区には酵母無吸着の同モジャコ用飼料を給餌した。これについて実施例２と同様にして腸管内容物中のレンサ球菌数および酵母菌数を測定し、その結果を図６に示した。
【００２６】
実施例５
平均体重１２５ｇのハマチをそれぞれ２５尾ずつの２区を準備した。第１区には、おとひめ５号（日清製粉株式会社製）１５０ｇに本発明酵母の生菌体（ＦＥＲＭ  Ｐ−１４５５２）を生理食塩水に懸濁させた液（１０7ＣＦＵ／ml）１０mlおよび１０％ブドウ糖溶液１０mlを吸着させたものを試験開始日のみ、それ以降は上記ブドウ糖溶液のみを吸着させたものを毎日給餌した。一方、第２区には、おとひめ５号（日清製粉株式会社製）１５０ｇに本発明酵母の生菌体（ＦＥＲＭ  Ｐ−１４５５２）を生理食塩水に懸濁させた液（１０7ＣＦＵ／ml）１０mlのみを吸着させたものを試験開始日のみ、それ以降はいずれも吸着させないものを毎日給餌した。
試験開始より１２時間後、２４時間後、２日後、３日後（第２区のみ）および６日後（第１区のみ）に各区３尾ずつサンプリングし、腸管内容物中の酵母菌数の推移を測定した。その結果は第７図に示すとおりである。尚、数値は３尾の平均値で示した。
【００２７】
実施例６
平均体重１４８ｇのハマチをそれぞれ２０尾ずつの２区を準備した。第１区には、おとひめ５号（日清製粉株式会社製）１５０ｇに本発明酵母の生菌体（ＦＥＲＭ  Ｐ−１４５５２）を生理食塩水に懸濁させた液（１０7ＣＦＵ／ml）１０mlおよび１０％ブドウ糖溶液１０mlを吸着させたものを毎日給餌した。一方、第２区には、おとひめ５号（日清製粉株式会社製）１５０ｇに本発明酵母の生菌体（ＦＥＲＭ  Ｐ−１４５５２）を生理食塩水に懸濁させた液（１０7ＣＦＵ／ml）１０mlのみを吸着させたものを９日間毎日給餌した。
試験開始より６時間後、２４時間後、２日後、３日後、５日後、７日後および９日後に各区２尾ずつサンプリングし、腸管内容物中の酵母菌数の推移を測定した。その結果は第８図に示すとおりである。尚、数値は２尾の平均値で示した。
【００２８】
実施例７
平均体重６４２ｇのハマチをそれぞれ２０尾ずつの２区を準備した。第１区には、おとひめ７号（日清製粉株式会社製）４００ｇに本発明酵母の生菌体（ＦＥＲＭ  Ｐ−１４５５２）を生理食塩水に懸濁させた液（１０7ＣＦＵ／ml）２０ml、レンサ球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｅｒｉｏｌｉｃｉｄａ）を生理食塩水に懸濁させた液（１０5ＣＦＵ／ml）２０mlおよび１０％ブドウ糖溶液２０mlを吸着させたものを毎日給餌した。一方、第２区には、おとひめ７号（日清製粉株式会社製）４００ｇに本発明酵母の生菌体（ＦＥＲＭ  Ｐ−１４５５２）を生理食塩水に懸濁させた液（１０7ＣＦＵ／ml）２０mlおよびレンサ球菌（Ｅ．ｓｅｒｉｏｌｉｃｉｄａ）を生理食塩水に懸濁させた液（１０5ＣＦＵ／ml）２０mlを吸着させたものを８日間毎日給餌した。
試験開始より６時間後、２４時間後、２日後、３日後、４日後、６日後および８日後に各区２尾ずつサンプリングし、腸管内容物中のレンサ球菌数の推移を測定した。その結果を第９図に示す。尚、数値は２尾の平均値で示した。
【００２９】
実施例８
平均体重１５０ｇのウナギをそれぞれ７０尾ずつ３区を準備した。第１区には、ウナギニューハウス（日清製粉株式会社製）２００ｇに水２００ml、Ａ−オイル（日清製粉株式会社製）２０ml、本発明酵母の生菌体（ＦＥＲＭ  Ｐ−１４５５２）を生理食塩水に懸濁させた液（１０7ＣＦＵ／ml）１０mlおよび１０％ショ糖溶液１０mlを加え混合して練り餌を製造し、この練り餌を試験開始日に給餌した。それ以降は、ウナギニューハウス（日清製粉株式会社製）２００ｇに水２００ml、Ａ−オイル（日清製粉株式会社製）２０mlおよび１０％ショ糖溶液１０mlを加え混合して製造した練り餌を毎日給餌した。第２区は、１０％ショ糖溶液に代えて１０％果糖溶液を加えたほかは、第１区と同様に給餌した。第３区は、１０％ショ糖溶液を加えなかったほかは、第１区と同様に給餌した。
試験開始より６時間後、２４時間後、２日後、３日後、および４日後に各区２尾ずつサンプリングし、腸管内容物中の酵母菌数の推移を測定した。その結果を第１０図に示す。尚、数値は２尾の平均値で示した。
【００３０】
【発明の効果】
本発明の酵母は魚病細菌の増殖を抑制する作用を有し、この酵母またはこれと糖類を併用して添加した魚類飼料を与えると魚病の発生を防止・抑制し、養魚の生存率を向上させることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明酵母単独、Ｅ．ｔａｒｄａ単独および両者を液体培地中で培養したときの、各菌の菌数の経時的変化を示す。
【図２】レンサ球菌を投与したニジマスに酵母配合飼料を給餌したときのニジマス腸管内容物中のレンサ球菌数の経時的変化を示す。
【図３】レンサ球菌を投与したマダイに酵母配合飼料を１日給餌したときのマダイ腸管内容物中のレンサ球菌数の経時的変化を示す。
【図４】レンサ球菌を投与したヒラメに酵母配合飼料を１日給餌したときのヒラメ腸管内容物中のレンサ球菌数の経時的変化を示す。
【図５】レンサ球菌と本発明酵母を吸着した飼料をヒラメに１３日間給餌したときのヒラメ腸管内容物中のレンサ球菌数の経時的変化を示す。
【図６】レンサ球菌を投与したモジャコに酵母配合飼料を給餌したときのモジャコ腸管内容物中のレンサ球菌数の経時的変化を示す。
【図７】ハマチに酵母単独または酵母とブドウ糖を配合した飼料を１日給餌したときのハマチ腸管内容物中の酵母菌数の推移を示す。
【図８】ハマチに酵母単独または酵母とブドウ糖を配合した飼料を９日間給餌したときのハマチ腸管内容物中の酵母菌数の推移を示す。
【図９】レンサ球菌を投与したハマチに酵母単独または酵母とブドウ糖を配合した飼料を８日間給餌したときのハマチ腸管内容物中のレンサ球菌数の推移を示す。
【図１０】ハマチに酵母単独または酵母とショ糖もしくは果糖を配合した飼料を１日給餌したときのハマチ腸管内容物中の酵母菌数の推移を示す。
【図１】
0003723611.tif 000003
【図２】
0003723611.tif 000004
【図３】
0003723611.tif 000005
【図４】
0003723611.tif 000006
【図５】
0003723611.tif 000007
【図６】
0003723611.tif 000008
【図７】
0003723611.tif 000009
【図８】
0003723611.tif 000010
【図９】
0003723611.tif 000011
【図１０】
0003723611.tif 000012