(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１の化合物
【化１】
0005490811.tif 000012
［式１中、
Ｒ１はＣＨ３であり、
Ｒ２はＣＨ３、−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ４、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ４または−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−Ｒ４（式中、ｎは１、２、３もしくは４であり、Ｒ４はＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３もしくはＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３である。）であり、
Ｒ３は水素、フェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２Ｏ−またはフェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−であるか、
或いは
Ｒ１およびＲ２は水素であり、
Ｒ３はフェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２Ｏ−またはフェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−である。］
または薬学的に許容可能なその酸付加塩。
【請求項２】
Ｒ１はＣＨ３であり、
Ｒ２はＣＨ３、−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ４、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ４または−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−Ｒ４（式中、ｎは１、２、３もしくは４であり、Ｒ４はＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３もしくはＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３である。）であり、
Ｒ３は水素である、
請求項１に記載の式１の化合物。
【請求項３】
Ｒ１はＣＨ３であり、
Ｒ２はＣＨ３であり、
Ｒ３は水素である、
請求項１に記載の式１の化合物。
【請求項４】
Ｒ１およびＲ２は水素であり、
Ｒ３はフェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２Ｏ−またはフェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−である、
請求項１に記載の式１の化合物。
【請求項５】
Ｒ１およびＲ２は水素であり、
Ｒ３はフェニル環のメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２Ｏ−である、
請求項１に記載の式１の化合物。
【請求項６】
請求項１から請求項５のいずれかに記載の式１の化合物または薬学的に許容可能なその酸付加塩を含む医薬組成物。
【請求項７】
スタチン、フィブラート、ナイアシンおよびエゼチミブから選択される化合物をさらに含む、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
アポＡ１の低血漿中濃度によって引き起こされる疾病を治療または予防するための、請求項１から請求項５のいずれかに記載の式１の化合物または薬学的に許容可能なその酸付加塩。
【請求項９】
疾病がアテローム性動脈硬化疾患である、請求項８に記載の化合物または薬学的に許容可能なその酸付加塩。
【請求項１０】
疾病が心筋梗塞または脳卒中である、請求項８に記載の化合物または薬学的に許容可能なその酸付加塩。
【請求項１１】
疾病がアルツハイマー病である、請求項８に記載の化合物または薬学的に許容可能なその酸付加塩。
【請求項１２】
請求項１から請求項５のいずれかに記載の式１の化合物を有効成分とする、血漿中アポＡ１濃度を増加させる薬剤。
【請求項１３】
アテローム性動脈硬化疾患またはアルツハイマー病の治療または予防に有効である、請求項１２に記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規チエノトリアゾロジアゼピン誘導体、ならびに冠動脈性疾患およびアルツハイマー病の治療に有用な医薬製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
米国特許第４，１５５，９１３号には、いくつものチエノトリアゾロジアゼピン、それらの合成、医薬組成物、ならびに抗痙攣薬、鎮静剤、筋弛緩薬、精神安定剤、および抗不安薬としての使用が記載されている。
【０００３】
米国特許第５，８５４，２３８号には、１つのそのようなチエノトリアゾロジアゼピンである化合物９−メチル−４−フェニル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］−ｓ−トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］−ジアゼピンが、血漿アポリポタンパク質Ａ１（アポＡ１）を増加させる活性があることが記載されている。アポＡ１は血漿の高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の主要なタンパク質成分である。ＨＤＬおよびアポＡ１の血漿中濃度が低いことは、アテローム性動脈硬化疾患の結果としての心筋梗塞、脳卒中、および足梗塞の発症の増加と関連があることが知られている。したがって上記の化合物は、そのようなアテローム性動脈硬化疾患の治療および予防において有用である。
【０００４】
米国特許第６，４４４，６６４号には、既知の血小板活性化因子（ＰＡＦ）拮抗活性を有するある種のベンゾおよびチエノトリアゾロジアゼピン誘導体もアポＡ１の合成の増進をもたらし、アテローム性動脈硬化疾患の治療法または予防法において有用であることが記載されている。
【０００５】
アルツハイマー病の患者はアポＡ１の濃度が低いため（Ｍｅｒｃｈｅｄ Ａ．、Ｘｉａ Ｙ．、Ｖｉｓｖｉｋｉｓ Ｓ．、Ｓｅｒｏｔ Ｊ．Ｍ．、およびＳｉｅｓｔ Ｇ．、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ ２１巻（１号）：２７〜３０頁、２０００年）、アポＡ１の合成を亢進させる上記のジアゼピンは、アルツハイマー病の治療にも有用となり得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第４，１５５，９１３号
【特許文献２】米国特許第５，８５４，２３８号
【特許文献３】米国特許第６，４４４，６６４号
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、式１の新規チエノトリアゾロジアゼピン誘導体
【化１】
0005490811.tif 000002
［式１中、
Ｒ１はＣＨ３であり、
Ｒ２はＣＨ３、−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ４、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ４または−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−Ｒ４（式中、ｎは１、２、３もしくは４であり、Ｒ４はＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３もしくはＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３である。）であり、
Ｒ３は水素、フェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２Ｏ−またはフェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−であるか、
或いは、
Ｒ１およびＲ２は水素であり、
Ｒ３はフェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２Ｏ−またはフェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−である。］
または薬学的に許容可能なその酸付加塩に関する。
【０００８】
さらに本発明は、上記で定義される式１の化合物を含有する医薬組成物、心筋梗塞や脳卒中などのアテローム性動脈硬化疾患およびアルツハイマー病を治療および予防する方法におけるこれらの化合物の使用、ならびに心筋梗塞や脳卒中などのアテローム性動脈硬化疾患およびアルツハイマー病を治療および予防するための医薬品の製造におけるこれらの化合物の使用に関する。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、式１の化合物
【化２】
0005490811.tif 000003
［式１中、
Ｒ１はＣＨ３であり、
Ｒ２はＣＨ３、−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ４、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ４または−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−Ｒ４（式中、ｎは１、２、３もしくは４であり、Ｒ４はＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３もしくはＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３である。）であり、
Ｒ３は水素、フェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２Ｏ−またはフェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−であるか、
或いは、
Ｒ１およびＲ２は水素であり、
Ｒ３はフェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２Ｏ−またはフェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−である。］
または薬学的に許容可能なその酸付加塩に関する。
【００１０】
上記で定義される式１の化合物は、そのすべての結晶形を含むと理解される。
【００１１】
Ｒ１がＣＨ３であり、Ｒ２が−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ４、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ４または−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−Ｒ４である式１の化合物において、Ｒ１およびＲ２と結合している環炭素原子は非対称に置換され、立体異性体が形成される。そのような化合物については、ラセミ化合物ならびに（Ｓ）および（Ｒ）の両鏡像異性体が、式１の対応する化合物の定義に含まれると理解される。
【００１２】
式１の化合物ならびに薬学的に許容可能なその酸付加塩は、アテローム性動脈硬化疾患、特に心筋梗塞および脳卒中、ならびにアルツハイマー病の治療および予防において有用である。
【００１３】
アポＡ１が増加することによりアテローム性動脈硬化症およびその臨床的な影響が低減することは、十分に実証された臨床的メカニズムである。アポＡ１はＨＤＬ粒子に巻き付き、プラークからコレステロールを除去する際にそれらの機能を支援する。アポＡ１の投与は、人間において動脈硬化性プラークを安定化させ、減少させることが示されている。反対に、アポＡ１の欠乏はアテローム性動脈硬化症の進行と関連している。
【００１４】
本発明に係る化合物は、肝臓を刺激してより多くのアポＡ１を生成させる。自己のアポＡ１生成を増加させるというこの治療手法により、ペプチド、例えば、アポＡ１増加によるアテローム性動脈硬化症の治療として現在検討されている、組換え型アポＡ１治療薬に付随する可能性のある、免疫合併症が避けられる。
【００１５】
本発明に係る化合物はジアゼピンの部分的な構造を有するが、それらはベンゾジアゼピン受容体結合活性が完全に欠落している。したがって本発明に係る化合物はベンゾジアゼピンによって引き起こされる、眠気などの望ましくない副作用を示さない。
【００１６】
本発明に係る化合物は、ＷＥＢ２０８６（アパファント）のような密接に関連するチエノトリアゾロジアゼピンについて見られる血小板活性化因子（ＰＡＦ）拮抗活性も完全に欠落している。
【００１７】
式１において、Ｒ１はＣＨ３であり、Ｒ２はＣＨ３、−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ４、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ４または−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−Ｒ４（式中、ｎは１、２、３もしくは４であり、Ｒ４はＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３もしくはＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３である。）であり、Ｒ３は水素である化合物が好ましい。そのような化合物において、Ｒ２はＣＨ３であるか、またはＲ２は−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ４であり、ｎは１もしくは２であり、Ｒ４はＣＨ３である化合物、特にＲ２がＣＨ３であるそのような化合物が最も好ましい。
【００１８】
式１において、Ｒ１およびＲ２は水素であり、Ｒ３はフェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２Ｏ−またはフェニル環のオルト／メタ位もしくはメタ／パラ位に結合した−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−である化合物、特にＲ３が−ＯＣＨ２Ｏ−であるそのような化合物が好ましい。好ましくは、このメチレンジオキシ置換基はフェニル環のメタ／パラ位に結合している。
【００１９】
最も好ましいのは、実施例における化合物である。
【００２０】
式１の化合物は、薬学的に許容可能な有機酸および無機酸と共に酸付加塩を形成する。本発明の目的に適した酸としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、ギ酸、酢酸、フマル酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸、１０−カンファースルホン酸などを挙げることができる。単離または精製のために、薬学的に許容不可の塩、例えばピクリン酸または過塩素酸との塩を用いることも可能である。
【００２１】
本発明は、上記の化合物の任意の水和物、溶媒和物、または特定の結晶形、およびそれらの薬学的に許容可能な塩に関し、不斉炭素原子を有する対応する化合物のラセミ体または（Ｓ）および（Ｒ）鏡像異性体に関すると理解される。
【００２２】
式１の新規化合物は、様々な合成経路、例えば米国特許第４，１５５，９１３号に詳細に記載された合成経路に従って調製することができる。
【００２３】
１つのそのような方法において、式１の化合物は、式２の化合物（式中、置換基Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は上記の意味を有する）と酢酸ヒドラジドまたはヒドラジン、続いて酢酸オルトエステルとを反応させ、式１の化合物中に存在するジアゼピン環にアニールしたメチル置換ｓ−トリアゾール環を生じることによって調製することができる。
【化３】
0005490811.tif 000004
【００２４】
式２のチオジアゼピノンは、対応するジアゼピノン（すなわち式２において＝Ｓが＝Ｏで置き換えられているもの）から、ローソン（Ｌａｗｅｓｓｏｎ）試薬との反応によって、またはアミドをチオアミドへ変換させる他の同等の方法によって得ることができる。そのようなジアゼピノンは、式３（Ｒ３は上記の意味を有する）の化合物の環化によって得ることができる。
【化４】
0005490811.tif 000005
【００２５】
式３の化合物を、アミノ官能基において、適切に置換したハロアセチルクロリドでアシル化し、次いでアジ化ナトリウムと反応させ、アジド官能基を還元してアミノ官能基とし、次いで環化するか、またはハロアセチル化化合物をアンモニア生成試薬の存在下で直接環化するか、または式３の化合物を、α−アミノ酸誘導体Ｈ２ＮＣＲ１Ｒ２ＣＯＸ（式中、Ｒ１およびＲ２は上記の意味を有し、Ｘはエステル残基、特に活性化エステルの残基である）と反応させるか、もしくはアミノ基を適切に保護したα−アミノ酸塩化物と反応させ、次いで脱保護して環化反応を行うことにより、＝Ｓが＝Ｏで置き換えられた式２の化合物を得てもよい。式３の化合物は既知であるか、または既知の製造方法により得ることができる。
【００２６】
或いは、式１の化合物は、置換基Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が上記の意味を有する式４の化合物の環化反応によって調製することができる。
【化５】
0005490811.tif 000006
【００２７】
そのような式４の中間体は、式３の化合物を酢酸オルトエステルと、次いでヒドラジンと、最後にα−アミノ酸誘導体Ｈ２ＮＣＲ１Ｒ２ＣＯＸ（式中、Ｒ１およびＲ２は上記の意味を有し、α−アミノ官能基は適切に保護された形態であり、ＣＯＸは活性化カルボン酸官能基を意味する）と反応させることにより得ることができる。そのようなアミノ保護基、およびカルボキシル官能基を活性化する方法は、当技術分野において周知である。
【００２８】
本発明はまた新規の中間体に関し、特に式２、式３または式４の中間体に関し、式中、置換基は式１について定義された意味を有する。
【００２９】
本発明はまた、式１の化合物およびそれらの薬学的に許容可能な酸付加塩を有効成分として含み、特に上記で挙げた疾患の治療において使用することができる、医薬組成物に関する。経鼻、口腔、直腸または特に経口投与などの、腸内投与用の組成物が好ましい。組成物は、有効成分を単独で含むか、あるいは好ましくは薬学的に許容可能な担体と共に含む。医薬組成物は、錠剤、糖衣錠、カプセル、顆粒、薬用ドロップ、チューインガム、座薬、溶液、懸濁液、乳液などの形態であってもよく、当技術分野で公知の標準的な手順に従って調製される。
【００３０】
薬学的に許容可能な担体は、例えば、マンノース、乳糖、果糖、グルコース、スクロースまたはショ糖などの糖類、マンニトール、キシリトールまたはソルビトールなどの糖アルコール、デンプン（例えば、トウモロコシ、コムギ、コメまたはジャガイモデンプンなど）、セルロース調製物（例えば微結晶性セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース（ヒプロロース）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ヒプロメロース）またはカルボキシメチルセルロースナトリウム）、グアーガム、カラギーナン、またはアカシアゴムである。さらに考えられる固体の担体としては、リン酸マグネシウムまたはリン酸カルシウム（例えばリン酸三カルシウムまたはリン酸水素カルシウム）、二酸化ケイ素、ケイ酸塩（例えばケイ酸マグネシウムアルミニウムまたはケイ酸カルシウム）および二酸化チタンである。
【００３１】
適切なさらなる担体は、特に充填剤としては、例えば、担体として上記に挙げた糖類、糖アルコール、セルロース調製物および／またはリン酸塩やケイ酸塩、二酸化ケイ素ならびに二酸化チタンなど、結合剤としては、例えば、デンプン（例えばトウモロコシ、コムギ、コメまたはジャガイモデンプン）、グアーガム、ゼラチン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、セラック、トラガカント、キサンタンまたはポリビニルピロリドンなど、崩壊剤としては、例えば、既述のデンプン、さらにカルボキシメチルデンプンナトリウム、カルボキシメチルデンプンカルシウムおよびデンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン（クロスポビドン）、クロスカルメロース、アルギン酸またはその塩（アルギン酸ナトリウムなど）、ならびにコロイド状二酸化ケイ素などである。さらに賦形剤としては、特に流動調整剤および潤滑剤を挙げることができ、例えばケイ酸、タルク、ステアリン酸またはその塩（ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛またはステアリン酸カルシウムなど）、モノステアリン酸グリセリン、パルミトステアリン酸グリセリンおよび／またはポリエチレングリコールやその誘導体である。
【００３２】
染料や顔料を、例えば識別のために、あるいは有効成分の異なる用量を表示するために、錠剤、顆粒、薬用ドロップまたはチューインガムに添加してもよい。
【００３３】
経口投与用の医薬組成物としてはまた、ゼラチンからなる硬カプセル、ならびにさらにゼラチンおよび可塑剤（グリセリンまたはソルビトールなど）からなる密封軟カプセルを挙げることができる。カプセルは、顆粒の形態の有効成分を、例えばコーンスターチなどの充填剤、結合剤および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの流動促進剤、あるいは任意選択により安定剤と混合して含有してもよい。
【００３４】
経口投与用の医薬組成物としてはまた、遅延錠剤やカプセルなどの遅延剤形、フィルム錠および腸溶性錠剤を挙げることができる。そのような特別な医薬経口組成物は当技術分野における標準的手順によるものである。遅延錠剤としては、例えば、ポリメタクリラートおよびポリメタクリラートコポリマー、ポリアクリラート−ポリメタクリラートコポリマー、または関連の樹脂性ポリマーなどのポリマー成分を含んでいてもよい。フィルム錠は、例えばエチルセルロースやヒドロキシプロピルメチルセルロースで被覆することにより得ることができる。適切な腸溶性コーティングとしては、例えば、エチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、セラック、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルセルロース、ならびにポリメタクリラートおよびポリメタクリラートコポリマーである。
【００３５】
直腸投与に適した医薬組成物は、例えば有効成分と座薬基剤との組み合わせからなる座薬である。適切な座薬基剤としては、例えば、天然または合成トリグリセリド、パラフィン系炭化水素、ポリエチレングリコールもしくは高級アルカノールである。
【００３６】
本発明の医薬組成物は、それ自体既知の方法で、例えば、従来の混合、顆粒化、溶解、あるいは凍結乾燥の各方法によって調製される。
【００３７】
有効成分の用量は、治療しようとする疾患、種、その年齢、体重、個別の病状、個別の薬物動態データおよび投与の方式によって決まる。用量は個別の要件に従うが、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの用量が好ましい。薬剤を非経口形態で投与する場合、０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量が好ましい。適切な医薬剤形として、１〜１０００ｍｇの式１の有効成分を含有することができる。
【００３８】
本発明は、アポＡ１の低血漿中濃度によって引き起こされる疾病を治療および予防するための上記の式１の化合物、ならびにアポＡ１の低血漿中濃度によって引き起こされる疾病を治療および予防する医薬品を製造するための式１の化合物の使用に関する。そのような疾病の例は、心筋梗塞および脳卒中などの上記のアテローム性動脈硬化疾患、ならびにアルツハイマー病である。
【００３９】
さらなる態様において、本発明は、上記の式１の化合物を１つまたは複数の治療上有益な物質と共に含有する、血漿中アポＡ１濃度増強剤に関する。これらの他の治療上有益な物質は、好ましくはアテローム性動脈硬化疾患の治療および予防に効果的であることが知られている化合物、例えばスタチン、フィブラート、ナイアシン、あるいはエゼチミブである。
【００４０】
別の態様において本発明は、哺乳類、特に人間における血漿中アポＡ１濃度を増加させる方法に関し、当該方法は有効量の本発明の化合物をそれを必要とする患者に投与するステップを含み、本発明はさらに、心筋梗塞および脳卒中などのアテローム性動脈硬化疾患、またはアルツハイマー病を患っている哺乳類、特に人間を治療する方法に関し、当該方法は有効量の本発明の化合物をそれを必要とする患者に投与するステップを含む。
【００４１】
さらなる態様において本発明は、アテローム性動脈硬化疾患に罹患する危険性を有するがそのような疾患を患っていない患者において、心筋梗塞および脳卒中などのアテローム性動脈硬化疾患を予防する方法に関し、この方法は有効量の本発明の化合物をそれを必要とする患者に投与するステップを含む。
【００４２】
さらに本発明は、アルツハイマー病に罹患する危険性を有するがそのような疾患を患っていない患者において、アルツハイマー病を予防する方法に関し、この方法は有効量の本発明の化合物をそれを必要とする患者に投与するステップを含む。
【００４３】
下記の実施例は、本発明をさらに例示するために提示するものである。
【実施例】
【００４４】
［実施例１］３−ベンゾイル−２−（２−ブロモ−２−メチルプロパノイルアミノ）−チオフェン
２−アミノ−３−ベンゾイル−チオフェン（Ｒ３が水素である式３の化合物）１．０ｇを、２−ブロモ−２−メチルプロパノイルブロミドでアシル化し、１．４９ｇ（８６％）の標題化合物を得た。
【００４５】
［実施例２］２−（２−アミノ−２−メチルプロパノイルアミノ）−３−ベンゾイル−チオフェン
実施例１の化合物３．４ｇを、アジ化ナトリウムと共にエタノール中で還流下にて沸騰させた。粗製アジドを亜鉛および塩化アンモニウムにより沸騰エタノール中で直接還元して、６５％の標題化合物を得た。
【００４６】
［実施例３］１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−５−フェニル−２Ｈ−チエノ［２，３−ｅ］−１，４−ジアゼピン−２−オン
実施例２の化合物５５ｍｇを、酢酸を含有するエタノール中で還流しながら沸騰させた。環化された標題化合物が収率４８％で得られた。
【００４７】
［実施例４］１，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−５−フェニル−２Ｈ−チエノ［２，３−ｅ］−１，４−ジアゼピン−２−チオン
実施例３の化合物５０ｍｇを、五硫化二リン（Ｐ２Ｓ５）および重炭酸ナトリウムと共にジエチレングリコールジメチルエーテル（ジグリム）中で８０℃にて加熱して、４９ｍｇ（９２％）のチオン（Ｒ１＝Ｒ２＝メチル基、Ｒ３＝水素である式２の化合物）を得た。
【００４８】
［実施例５］６，６−ジメチル−４−フェニル−９−メチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］−ｓ−トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン（式５）
【化６】
0005490811.tif 000007
実施例４から得られた、テトラヒドロフラン中のチオン４９ｍｇを、ヒドラジン水溶液と共に室温で撹拌した。得られる化合物をエタノール中でオルト酢酸トリエチルと混合し、５０℃に加熱した。１５ｍｇ（２８％）の式５の標題化合物１５ｍｇ（２８％）をフラッシュクロマトグラフィーにより単離した。
【００４９】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：１．２８（６Ｈ，ｓ，２ＣＨ３）、２．７４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、６．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＡｒＨ）、７．５（６Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
ＬＣ（カラム  ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  １５０ｍｍ×４．６ｍｍ、５μ；Ｉｎｊ．Ｖｏｌ．１０μＬ、３０℃、流速１．４ｍＬ／分、Ａ：０．０５％ ＴＦ水溶液  ／Ｂ：０．０５％ ＴＦＡアセトニトリル溶液  ／勾配  ５％Ｂ〜９５％Ｂを８分）：保持時間４．４２分、純度９９．３％
ＭＳ：Ｍ＋Ｈ＋  ｍ／ｚ  計算値３０９．４１、実測値３０８．９５
【００５０】
［実施例６］３，４−メチレンジオキシ−α−シアノアセトフェノン
メチル３，４−メチレンジオキシベンゾアートを、ナトリウムメタノラートの存在下で９０℃でアセトニトリルと縮合させて、シアノアセトフェノンを収率７０％で得た。
【００５１】
［実施例７］２−アミノ−３−（３’，４’−メチレンジオキシベンゾイル）−チオフェン
実施例６の３，４−メチレンジオキシ−α−シアノアセトフェノンと２，５−ジヒドロキシ−１，４−ジチアン（クロラールおよび水硫化ナトリウムから得られる）とを、メタノール中にてトリエチルアミンの存在下で、温度を５℃から５０℃までゆっくりと上昇させながら反応させた。標題化合物（メタ／パラ位のＲ３がメチレンジオキシである式３の化合物）をフラッシュクロマトグラフィーにより単離した。
【００５２】
［実施例８］２−ブロモアセチルアミノ−３−（３’，４’−メチレンジオキシベンゾイル）−チオフェン
実施例７から得られたアミノケトン３．９ｇを、ブロモアセチルクロリドと共にジクロロメタン中で室温にて撹拌して、標題化合物４．３ｇ（８６％）を得た。
【００５３】
［実施例９］５−（３’，４’−メチレンジオキシフェニル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−チエノ［２，３−ｅ］−１，４−ジアゼピン−２−オン
実施例８で得られた、塩化メチレン中のブロモアセチルアミノケトン４．３ｇを、還流させながらアンモニア水溶液で処理した。粗製アミン（５．５ｇ）を、エタノール中の２．５当量の酢酸と共に還流させることにより環化した。粗生成物（８ｇ）をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物３．１Ｇ（７７％）を得た。
【００５４】
［実施例１０］５−（３’，４’−メチレンジオキシフェニル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−チエノ［２，３−ｅ］−１，４−ジアゼピン−２−チオン
実施例９の化合物とローソン試薬（２，４−ビス−（ｐ−メトキシフェニル）−１，３−ジチアホスフェタン−２，４−ジスルフィド）とを、ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＴ）中で７５℃にて３．５時間加熱して、７６％の標題のチオン（Ｒ１＝Ｒ２＝水素、Ｒ３はメタ／パラ位のメチレンジオキシである式２の化合物）を得た。
【００５５】
［実施例１１］４−（３’，４’−メチレンジオキシフェニル）−９−メチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］−ｓ−トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン（式６）
【化７】
0005490811.tif 000008
実施例１０の化合物および酢酸ヒドラジドをジエチレングリコールジメチルエーテル（ジグリム）中で１１０℃までゆっくりと加熱し、気体発生が見られなくなるまでこの温度で数分間維持する。得られる式６の標題化合物をエバポレーションにかけ、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、収率４０％で単離する。
【００５６】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：２．７２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、６．０１（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ２Ｏ）、６．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＡｒＨ）、７．０６（３Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）、７．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＡｒＨ）。
ＬＣ（カラム  ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  １５０ｍｍ×４．６ｍｍ、５μ；Ｉｎｊ．Ｖｏｌ．１０μＬ、３０℃、流速１．４ｍＬ／分、Ａ：０．０５％ ＴＦ水溶液  ／Ｂ：０．０５％ ＴＦＡアセトニトリル溶液  ／勾配  ５％Ｂ〜９５％Ｂを８分）：保持時間４．０１分、純度９９．４％
ＭＳ：Ｍ＋Ｈ＋  ｍ／ｚ  計算値３２５．３７、実測値３２４．９０
【００５７】
［実施例１２］９−メチル−４−フェニル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］−ｓ−トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン（式７）
【化８】
0005490811.tif 000009
比較の目的で用いられる式７の標題化合物（Ｒｏ−１１−１４６４としても知られる）を、米国特許第４，１５５，９１３号の実施例２の記載に従って合成した。
【００５８】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：２．７３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）、６．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＡｒＨ）、７．５（６Ｈ，ｍ，ＡｒＨ）。
ＬＣ（カラム  ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  １５０ｍｍ×４．６ｍｍ、５μ；Ｉｎｊ．Ｖｏｌ．１０μＬ、３０℃、流速１．４ｍＬ／分、Ａ：０．０５％ ＴＦ水溶液  ／Ｂ：０．０５％ ＴＦＡアセトニトリル溶液  ／勾配  ５％Ｂ〜９５％Ｂを８分）：保持時間４．１６分、純度＞９９．９％  
ＭＳ：Ｍ＋Ｈ＋  ｍ／ｚ  計算値２８１．３６、実測値２８１．００
【００５９】
［実施例１３］ヒト肝細胞によるアポＡ１分泌
米国特許第６，４４４，６６４号に記載の手順に従い、ドナーから得られ、移植に使用できなかった肝臓片からヒト肝細胞を単離した。細胞を培養皿に生細胞数１．５×１０５／ｃｍ２の濃度で播種し、最初の２４時間は、１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＦＣＳ）、２ｍｍｏｌ／ＬのＬ−グルタミン、２０ｍＵ／ｍＬのインスリン（１３５ｎｍｏｌ／Ｌ）、５０ｎｍｏｌ／Ｌのデキサメタゾン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンおよび１００μｇ／ｍＬカナマイシンを添加したウィリアムズＥ培地１．５ｍＬ／１０ｃｍ２中で、３７℃にて、５％ＣＯ２／９５％空気雰囲気で維持培養した。１４〜１６時間後、前記培地と同じ培地を用いて非接着細胞を皿から洗浄除去した。播種から２４時間後、インスリン濃度を１３５ｎｍｏｌ／Ｌではなく１０ｎｍｏｌ／Ｌとした以外は前記培地と同じである培地１ｍＬ中で、化合物とのインキュベーションを開始した。
【００６０】
ヒト肝細胞を、１００μＭ、３０μＭ、１０μＭ、および３μＭの濃度の式５、式６および式７の化合物（ＤＭＳＯ中に溶解、ＤＭＳＯの最終濃度は０．１％ｖ／ｖを超えない）で処理し、２４時間インキュベートした。すべての試料およびコントロールのＤＭＳＯ濃度は０．１％であった。コントロールのウェルにはＤＭＳＯ（０．１％ｖ／ｖ）のみを入れた。細胞上の培地を除去し、新しい化合物を含む新しい培地で置き換え、２４時間インキュベートした。次いで再び培地を除去し、新しい化合物を含む新しい培地で置き換え、さらに２４時間インキュベートした。次いで上澄みを細胞から回収し、ＨＲＰ結合ヤギ抗アポＡ１抗体およびＴＭＢ／ペルオキシダーゼ基質発色剤を含む市販のＥＬＩＳＡ（ＡｌｅｒＣＨＥＫ（商標））を用いて、アポＡ１の濃度を決定した。上澄みは、キット中に備えられている洗浄用緩衝液で１：４に希釈した。
【００６１】
最後のインキュベーションの後、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、ＢＣＡ（ビシンコニン酸）試薬を各ウェルに加えて、標準的方法に従って細胞総タンパク質を定量した。
【００６２】
表１：ヒト肝細胞におけるアポＡ１分泌の刺激
【表１】
0005490811.tif 000010
【００６３】
コントロール細胞（ＤＭＳＯのみでインキュベートしたもの）は、６６±９ｎｇ／ｍｇ細胞タンパク質（８ウェルの平均±ＳＥＭ）のアポＡ１分泌を示した。要約すれば、式６の化合物および特に式５の化合物は、３μＭもの低い濃度であってもヒト肝細胞においてコントロールのレベルを超えてアポＡ１の分泌を刺激し、この濃度では式７の化合物（比較化合物）の方が明らかに活性が低かった。
【００６４】
［実施例１４］中枢ベンゾジアゼピン受容体（ＢＺＤ）への結合
本発明の化合物の中枢ベンゾジアゼピン受容体（ＢＺＤ）への親和性は、Ｒ．Ｃ．Ｓｐｅｔｈら、Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．２４巻：３５１〜３５８頁（１９７９年）に記載のように、０．４ｎＭ［３Ｈ］フルニトラゼパムのラット大脳皮質膜への結合量および参照用リガンドジアゼパムと比較したときの本発明に係る化合物によるフルニトラゼパムの置換量を、４℃で６０分間決定することにより測定した。このアッセイにおけるジアゼパムのＩＣ５０は１６ｎＭである。
【００６５】
受容体への特異的結合量は、全結合量と、過剰の非標識リガンド（ジアゼパム）の存在下で決定される非特異的結合量との間の差として定義される。結果は、式５、式６および式７の化合物の存在下で得られる、コントロールの特異的結合量に対するパーセント（（測定された特異的結合量／コントロールの特異的結合量）×１００）として表される。
【００６６】
各実験において、アッセイの適性を評価するために、それぞれの参照用化合物を式５、式６および式７の化合物と同時に試験するとともに、それをいくつかの濃度で試験した（ＩＣ５０値の決定のため）。
【００６７】
表２：ラット脳ＢＺＤ受容体への特異的結合量
【表２】
0005490811.tif 000011
【００６８】
要約すると、式５および式６の化合物は、ベンゾジアゼピン受容体への有意の親和性を示さないものの、式７の化合物（比較化合物）は中程度の親和性を示し、およそ５×１０−７のＩＣ５０を有する標識リガンドを置換する。