(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
多価二重特異性抗体Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３であって、その抗体は二対のポリペプチド鎖を含み、前記の二対のそれぞれの対は少なくとも１つの重‐軽鎖結合によって軽鎖に結合した重鎖を含み、各軽鎖は配列番号２０４に記載したアミノ酸配列を含み、および各重鎖は配列番号２２６に記載したアミノ酸配列を含む、前記抗体。
【請求項２】
前記少なくとも１つの結合のうちの少なくとも１つがジスルフィド結合である、請求項１に記載の多価二重特異性抗体。
【請求項３】
注射または点滴に適切である薬学的に許容可能な担体中の、請求項１に記載の多価二重特異性抗体。
【請求項４】
多価二重特異性抗体Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８であって、その抗体は二対のポリペプチド鎖を含み、前記の二対のそれぞれの対は少なくとも１つの重‐軽鎖結合によって軽鎖に結合した重鎖を含み、各軽鎖は配列番号２０４に記載したアミノ酸配列を含み、および各重鎖は配列番号２２２に記載したアミノ酸配列を含む、前記抗体。
【請求項５】
前記少なくとも１つの結合のうちの少なくとも１つがジスルフィド結合である、請求項４に記載の多価二重特異性抗体。
【請求項６】
注射または点滴に適切である薬学的に許容可能な担体中の、請求項４に記載の多価二重特異性抗体。
【請求項７】
多価二重特異性抗体Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８であって、その抗体は二対のポリペプチド鎖を含み、前記の二対のそれぞれの対は少なくとも１つの重‐軽鎖結合によって軽鎖に結合した重鎖を含み、各軽鎖は配列番号２６２に記載したアミノ酸配列を含み、および各重鎖は配列番号２８４に記載したアミノ酸配列を含む、前記抗体。
【請求項８】
前記少なくとも１つの結合のうちの少なくとも１つがジスルフィド結合である、請求項７に記載の多価二重特異性抗体。
【請求項９】
注射または点滴に適切である薬学的に許容可能な担体中の、請求項７に記載の多価二重特異性抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は２０１１年４月１９日に提出された米国特許仮出願第６１／４７７，０８９号、２０１１年９月２６日に提出された米国特許仮出願第６１／５３９，２９７号、２０１１年１１月１０日に提出された米国特許仮出願６１／５５８，１９２号、および２０１２年４月２日に提出された米国特許仮出願第６１／６１９，２４４号の優先権を主張する。許される場合は、前述の出願は、ありとあらゆる目的のために、それぞれその全体が参照により組み込まれる。
【０００２】
配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ形式でＥＦＳウェッブを介して提出された、その全体が参照によりここに組み込まれる配列表を含む。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０１２年４月５日に作成され、１１４１ＰＣ０１．ｔｘｔという名称であり、サイズは９５０，６１１バイトである。
【背景技術】
【０００３】
腫瘍細胞は細胞の増殖を刺激する成長因子とサイトカインの受容体を発現する。そのような受容体に対する抗体は、成長因子とサイトカインが介在する細胞増殖の刺激を遮断するのに効果的であり得、そして、それによって腫瘍細胞増殖と腫瘍成長を阻害することができる。癌細胞上の受容体を標的とする市販の治療用抗体には、例えば、乳癌の治療のためにＨＥＲ２受容体（ＥｒｂＢ２とも知られる）を標的とするトラスツズマブ、および大腸癌と頭頸部癌の治療のために上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ；ＨＥＲ１またはＥｒｂＢ１としても知られる）を標的とするセツキシマブが挙げられる。
【０００４】
癌を治療する我々の能力はモノクローナル抗体によって大いに進歩してきたが、多くの患者が単一特異性治療に適切に応答していないことが臨床研究によって示されている。これは部分的には癌の多重遺伝性の性質に起因し、その性質では、癌細胞は増殖のために複数の、多くの場合、重複する経路に依存している。一度に複数の成長経路および生存経路を遮断することができる二重特異性または多重特異性抗体は、癌の成長を阻止するという課題により良く合致する可能性を有し、そして、実際にそれらの多くで臨床開発が進んでいる。しかしながら、二重特異性抗体の設計と最適化において考慮することが必要である可変要素が非常に増えるため、ならびに、二重特異性抗体の天然の抗体との構造上の違いのため、二重特異性抗体の設計は、非常に難しい課題となっている。
【０００５】
トラスツズマブ、セツキシマブ、ベバシズマブとパニツムマブなどのモノクローナル抗体は臨床において非常に改善された患者予後を有し、そして、２００を超える治療用モノクローナル抗体が現在臨床開発中である。しかしながら、単一の癌遺伝子によって引き起こされる腫瘍は一般的ではなく、治療は多くの場合、耐性機構の活性化を引き起こし、それはまた次に標的治療介入を必要とすることが明らかになっている。例えば、トラスツズマブ耐性の複数の前臨床モデルでは、ＩＧＦ‐１Ｒの阻害によってトラスツズマブへの感受性が回復する。標的薬剤の組合せが臨床において試みられているが、それらはこれまでに限定的な臨床上の成功を収めただけであり、組み合わせた薬剤は手が出ないほど高価となり得る。複数の成長因子経路によって引き起こされる耐性または腫瘍のどちらかのために、複数の標的を阻害する必要性が二重特異性抗体への関心を高めている。現時点で開発されている二重特異性抗体は経験的に設計されたものであるのが典型的である。さらに、これらの二重特異性抗体の薬学的特質はほとんど常にモノクローナル抗体の薬学的特質よりも劣っていた。これらの要因が二重特異性抗癌治療法の開発に主要な課題をもたらす。複数の癌生存経路を標的とすることに由来する重要な付加的な利益は、最適の特性を有する二重特異性抗体を特定し、そして、設計するための先行作業から得ることができる。これには、最適な標的方法と設計仕様を特定するためのコンピュータシミュレーション、これらの特性を有する阻害剤の設計、および治療仮説の実験検証からなる反復アプローチが必要とされる。我々は、この工学上のフレームワークを２つのカテゴリー、例えば、ＩｇＧ様二重特異性抗体において確固たる薬学的特質を有する適切な分子形式の選択、および最良の標的と最適な治療設計特性を特定するためのコンピュータシミュレーション（図８）に分ける。
【０００６】
抗体の主要な利点の１つは、実質的にどのような細胞外標的にも強固に結合するそれらの能力である。この特質は抗体可変領域（ＶＲ）の２つの性質、すなわち６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）からなる大平面、および抗体は同時に２つの分子を標的とすることができる２つの結合アームを有しているという事実、によってもたらされる。二重特異性抗体では、抗体の１つのアームが一度細胞外標的に結合すると、第２のアームが原形質膜上の狭い領域（約１００オングストローム）に限定され、したがって、細胞表面の近傍に濃縮されるので、二重の標的結合によって親和性がより強くなる。このことが、分散によって制限されない、ずっと速い二次結合事象を引き起こす。二次結合事象の促進が招かれる。親和性と結合活性の両方は、前者はインシリコ親和性成熟により改善され得、後者は追加の標的アームを細胞表面上に存在する同一の、または異なる抗原向けに改変することにより増強され得るので、合理的に改変可能な特質である。それらの結合能に加えて、抗体はそれらのＦｃドメインによって仲介される複数のエフェクター機能、すなわちヒトにおいて賦活化性ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ／ｃ、ＦｃγＲＩＩＩａおよび阻害性ＦｃγＲＩＩｂ受容体との相互作用によって決定される抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および抗体依存性細胞性貪食（ＡＤＣＰ）、補体系の構成要素への抗体の結合によって引き起こされる補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、および新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）による能動的再利用によって仲介される長半減期を有することがある。これらの機能の全ては抗癌治療の有効性を最適化するために調整され得、そして、これらの機能の全ては有利に二重特異性タンパク質に保持され得る。
【０００７】
ＩｇＧ抗体の可変重鎖（ＶＨ）ドメインおよび可変軽鎖（ＶＬ）ドメインから構成される可変断片（Ｆｖ）は、完全な抗原結合性を示す最小の抗体断片である。これらの可変ドメインは首尾よく融合されて単鎖構築物（ｓｃＦｖ）になり得るが、親和性は、多くの場合、全体を保つ天然抗体と比較して低下する。現在の二重特異性形式の大部分は、ＩｇＧ重鎖またはＩｇＧ軽鎖のＮ末端またはＣ末端に低複雑度リンカーを介して結合している１つ、またはいくつかのｓｃＦｖモジュールを特徴とする。別の二重特異性抗体形式は二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ‐Ｉｇ）である。ＤＶＤ‐Ｉｇは、短リンカーによって第一ＩｇＧ重鎖のＮ末端に結合した第二ＶＨドメインを有する第一ＩｇＧ重鎖、および第一ＩｇＧ軽鎖のＮ末端に同様に結合した第二ＶＬドメインを有する第一ＩｇＧ軽鎖からなる。第二ＶＨ／ＶＬドメインは１つの抗原への特異性を有する対を形成し、第一ＶＨ／ＶＬは異なる抗原への特異性を有する別の結合部位を形成する。
【０００８】
ＩｇＧ様抗体の二価形式は１つの潜在的な限界を有する。それらは細胞表面抗原を架橋し得、その細胞表面抗原のうちのいくつかは二量体化によって活性化され、制御されていない状態で望ましくないシグナル伝達事象を引き起こす。この課題に対処するため、調整可能な一価二重特異性抗体形式が開発された。非対称的な「ノブ・アンド・ホール」をＦｃ断片に組み込むことにより作製された単一アーム抗ｃ‐Ｍｅｔ治療用抗体であるＭｅｔＭａｂは膵臓癌のモデルにおいて有効であることが示されており、そして、複数の臨床試験で調査されているところである。この「ノブ・アンド・ホール」形式は最近、拡大適用されてＥＧＦＲを標的とする抗体断片を組み込み、ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ１とｃ‐Ｍｅｔ／ＨＧＦＲを標的とする機能的に一価の二重特異性タンパク質を生じている。Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎらは、相補的に帯電した表面をＦｃ断片に設計することによる「ノブ・アンド・ホール」コンセプトの別の実施について説明している。Ｄａｖｉｓらは、異種複合性一価抗体を形成するためにヒトＩｇＧとＩｇＡに由来する断片を含有する非対称的なＦｃを用いた「ＳＥＥＤ」アプローチについて説明している。最後に、Ｂｏｓｔｒｏｍらは、高い親和性でＨＥＲ２かＶＥＧＦのどちらかに結合することができる二官能性Ｆａｂ断片を構築するための新規の工学アプローチについて説明している。正準的な抗体分子において組み合わされると、これらのＦａｂ断片は、細胞環境と成長因子の濃度に依存して異なる結合価でＨＥＲ２またはＶＥＧＦと結合する。
【０００９】
二重特異性抗体の設計の別の重要な要素は薬学的特質の最適化である。臨床的に有用であるためには、治療用タンパク質は安定であり、長期にわたって可溶性のままであり、そして堅固な製造プロファイルを持たなくてはならない。二重特異性抗体は通常モノクローナル抗体よりも安定ではなく、最初は開発のために適切な薬学的特質を持たない場合がある。それらは分子工学により、下流の製剤活動により、または、最も一般的に実施されているように、それらの両方のアプローチの組合せにより安定化され得る。
【００１０】
小分子薬候補の化学製造と規制上の不利益の最小化が重要であることが長らく認識されており、薬品の類似性を予想する規則が提唱されている。多くのグループが、非標準的ジスルフィドまたは非対合システイン、余分のグリコシル化部位、チロシン硫酸化モチーフ、溶媒接近可能メチオニン、アスパラギン脱アミド化モチーフ、および酸切断部位などの好ましくない配列特徴を評価することによる、ＩｇＧ系タンパク質の適合性を評価するための概念的に同様のアプローチを用いている。余分なグリコシル化部位とアスパラギン脱アミド化部位は天然の抗体配列の極めて一般的な特徴である。実際に、２０％を超える重鎖の可変ドメインがグリコシル化されており、５％を超える生殖系列の遺伝子がアスパラギン‐グリシン脱アミド化モチーフを含有する。抗体の脱アミド化率は、構造的に拘束されているループはスクシンイミド中間体を効率的に形成せず、したがって、安定であることを示唆する、Ｒｏｂｉｎｓｏｎによって提唱された方法を用いて信頼できるように評価され得る。
【００１１】
正準的なＮ結合グリコシル化モチーフ（ＮＸＳおよびＮＸＴ；Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸である）は抗体配列中に容易に検出することができるが、Ｏ結合部位は、それらも薬学的特質に負に影響する場合があるという点で不利益であるのだが、より認識が困難である。最近、抗体軽鎖の可変ドメインのいくつかのＯ結合修飾が、主に高ＧＳ配列モチーフの近傍に報告されている。構造情報に基づく設計、集中的ライブラリースクリーニングおよび酵母ディスプレイを含む、発見段階で候補タンパク質の親和性と安定性を改善するための多くのアプローチが存在し、したがって、我々は、初期の概念実証的なタンパク質に潜在的に存在する恐れがある不利益を取り除くことが有益であることを理解する。
【００１２】
凝集および免疫原性などの他の不利益は工学的観点からより困難である。両者とも多面的な特質であるばかりか、小規模の生化学および生物物理試験でそれらを適切に評価することが非常に難しくもあり、それ故、それらは開発後期に初めて検出される傾向がある。ほぼ間違いなく、抗体の免疫原性を低下させる最良のアプローチはヒト化によるものである。このアプローチは臨床において十分に容認されている多数のヒト化抗体によって広く検証されている。最近、提唱されている「スーパーヒト化」アプローチはヒト生殖系列の配列をＣＤＲに導入して「完全ヒト」抗体を生じさせる。このアプローチは、ＣＤＲ中の各アミノ酸が（「アミノ酸」）、抗原結合へのその貢献度を決定するために突然変異形成されることを必要とする。その結果生じる抗体は免疫原性が低いことがある。配列に基づく特徴の他に、抗体と抗体様タンパク質の免疫原性はそれらの凝集安定性に依存し得る。興味深いことに、ｓｃＦｖなどの抗体モジュールでの「ヒト性」と安定性は知識集約型アプローチによって共に改変され得る。
【００１３】
タンパク質抗体の溶解度の改変は、その特質はいくつかの物理化学的パラメータからなる複合物でもあるので、別の手ごわい作業である。それにもかかわらず、不溶性と取り組む多数の方法が提唱されている。Ｐｅｐｉｎｓｋｙらはモノクローナル抗体の溶解度を高めるために糖鎖工学、アイソタイプスイッチ、および構造情報に基づく突然変異形成を用いた。Ｃｈｅｎｎａｍｓｅｔｔｙらは表面凝集傾向と呼ばれるパラメータを計算するための分子動態シミュレーションに依存する、凝集に関して安定性の改善への不偏の取り組みについて説明しており、そして、彼らは、抗体の凝集しやすい領域に安定化するようなアミノ酸を導入するためにこの技法を適用した。興味深いことに、彼らの抗体の分析では、凝集しやすい領域は、多くの場合、Ｆｃ受容体または抗原への結合性を付与する機能的に重要な領域と同じ場所に位置し、それ故、容易に除去することができない。
【００１４】
抗体における分子機能と薬学的特質の間のそのような結合は一般的である。二重特異性抗体の配列のより大きい部分でさえも機能的に重要な領域に位置しているので、そのことが二重特異性抗体の最適化を著しく複雑なものとし得る。したがって、改変の成功を可能にするために、重要な分子機能と最適な設計特性を特定することが重要である。
【００１５】
最良の目標および最適な治療デザイン特性を特定するためのコンピュータシミュレーション
コンピュータシミュレーションは、研究室と診療所の両方で、薬品開発で判断を導くために有用なツールである。集団薬物動態モデリングは、投薬スケジュール設定と臨床試験設計を最適化するためのモデルの使用についての成熟例である。既知の目標を用いる治療法について、設計プロセスのずっと早い段階でコンピュータシミュレーションを活用することができる。多重ハイスループット定量的タンパク質測定技術の発達により、細胞内シグナル伝達ネットワーク内で起こる複雑な動態の観察が可能になった。これらのデータにより、癌などの疾患に関連がある生物システムの機構的行動を捉えるネットワークモデルの作製が可能になる。ネットワークモデリングを介して可能性がある治療法をシミュレートすることにより、より効果的な治療法を加速度的に設計し、設計パラメータをより正確に予測することができる。
【００１６】
伝統的に、標的療法のための医薬の選択は、多量の分子的、生物学的、および生理学的データから選択される既知の対象を用いて始まる。しかしながら、よく研究されており、よく目標とされている生物システムにおいても、経路またはネットワークモデルのシミュレーションによって支援される場合がある、新しい発見の機会がある。
【００１７】
したがって、癌を治療するためのその他の治療アプローチ、特に、改変されて優れた生物物理的特性および治療特性を有する多重特異性抗体系タンパク質は、得ることが難しいが、現行の抗体療法の限界を克服し、他の利益を提供するために必要とされる。
【発明の概要】
【００１８】
本明細書は多価二重特異性抗体（ＰＢＡ）を提供し、その抗体は二対のポリペプチド鎖を含むタンパク質であり、前記二対のそれぞれの対は少なくとも１つの重‐軽鎖結合によって軽鎖に結合した重鎖を含み、その抗体中で（ａ）それぞれの対は少なくとも１つの抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位および少なくとも１つの抗ＥｒＢ３結合部位を含み、ならびに（ｂ）それぞれの対はＰＢＡの重鎖のＮ末端部分とＰＢＡの軽鎖のＮ末端部分を含む第１結合部位、およびＰＢＡの重鎖によって全体が含まれるＣ末端ｓｃＦｖである第２の結合部位を含み、そのＣ末端ｓｃＦｖはｓｃＦｖリンカーによって軽鎖ＶＲに結合した重鎖ＶＲを含有し、ならびに前記抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位は、ＰＢＡの重鎖によって含まれる重鎖免疫グロブリン（ＨＣ  Ｉｇ）定常領域（ＣＲ）を介して抗ＥｒｂＢ３結合部位に結合し、そして、前記の二対はそれぞれの対のＨＣ  Ｉｇ  ＣＲの間で少なくとも１つの結合によって結合される。好ましい実施形態では、前記抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位は、（ａ）配列番号１、配列番号８〜３１および配列番号３８４〜３８５からなる群より選択される配列番号の（に示される）アミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する重鎖のＶＨＣＤＲ１（アミノ酸数２６〜３５）、ＶＨＣＤＲ２（アミノ酸数５１〜６６）、およびＶＨＣＤＲ３（アミノ酸数９９〜１１１）を包含する３つのＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）からなるセット、または（ｂ）配列番号３０２を含むＶＨＣＤＲ１、配列番号３０３を含むＶＨＣＤＲ２および配列番号３０４を含むＶＨＣＤＲ３を包含する３つのＶＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）からなるセット、のどちらかを含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、ならびに（ｃ）配列番号２〜３、配列番号３２〜１３３、および配列番号３８６〜３８７からなる群より選択される配列番号のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する軽鎖のＶＬＣＤＲ１（アミノ酸数２４〜３４）、ＶＬＣＤＲ２（アミノ酸数５０〜５６）およびＶＬＣＤＲ３（アミノ酸数８９〜９７）を包含する３つのＶＬＣＤＲからなるセット、または（ｄ）配列番号３０５を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号３０６を含むＶＬＣＤＲ２および配列番号３０７もしくは配列番号３０８を含むＶＬＣＤＲ３を包含する３つのＶＬＣＤＲからなるセット、のどちらかを含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み、ならびに各ＣＤＲはアミノ末端とカルボキシ末端をさらに含み、各ＣＤＲセットの前記ＣＤＲは対応する重鎖または軽鎖においてアミノ末端からカルボキシ末端までＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の線形順序で配置され、または、前記ＰＢＡは（ｉ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＳＦモジュールと抗ＥｒｂＢ３  Ｃ８モジュールの両方を含むことはない、または（ｉｉ）ＳＦモジュールまたはＣ８モジュールのＣＤＲまたはＦＲとそれぞれ１つ以上のアミノ酸において異なる少なくとも１つのＣＤＲまたはＦＲを含むことを条件として、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３の配列は不定のアミノ酸を含み、その不定のアミノ酸は図１中の対応する位置に示される任意のアミノ酸を独立して表し、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３の配列は不定のアミノ酸を含み、その不定のアミノ酸は図２中に対応する位置に示される任意のアミノ酸を��立して表す。ある特定の実施形態では、前記抗ＥｒｂＢ３結合部位は、（ｅ）配列番号４〜５、配列番号１３４〜１６５、および配列番号３８８からなる群より選択される配列番号のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する重鎖のＶＨＣＤＲ１（アミノ酸数２６〜３５）、ＶＨＣＤＲ２（アミノ酸数５１〜６６）およびＶＨＣＤＲ３（アミノ酸数９９〜１１１）を包含する３つのＶＨＣＤＲからなるセット、または（ｆ）配列番号３０９を含むＶＨＣＤＲ１、配列番号３１０を含むＶＨＣＤＲ２および配列番号３１１を含むＶＨＣＤＲ３を包含する３つのＶＨＣＤＲからなるセット、のどちらかを含むＶＨドメイン、ならびに（ｇ）配列番号６〜７および配列番号１６６〜２００からなる群より選択される配列番号のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する軽鎖のＶＬＣＤＲ１（アミノ酸数２３〜３３）、ＶＬＣＤＲ２（アミノ酸数４９〜５５）およびＶＬＣＤＲ３（アミノ酸数８８〜９８）を包含する３つのＶＬＣＤＲからなるセットを含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｈ）配列番号３１２を含むＶＬＣＤＲ１、配列番号３１３を含むＶＬＣＤＲ２および配列番号３１４もしくは配列番号３１５を含むＶＬＣＤＲ３を包含する３つのＶＬＣＤＲからなるセットを含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、のどちらかを含み、ならびに各ＣＤＲはアミノ末端とカルボキシ末端をさらに含み、各ＣＤＲセットの前記ＣＤＲは前記抗体においてアミノ末端からカルボキシ末端までＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の線形順序で配置され、または、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３の配列は不定のアミノ酸を含み、その不定のアミノ酸は図３中の対応する位置に示される任意のアミノ酸を独立して表し、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３の配列は不定のアミノ酸を含みその不定のアミノ酸は図４中の対応する位置に示される任意のアミノ酸を独立して表し、その場合、前記ＰＢＡは（ｉ）配列番号３５を含む軽鎖と配列番号１１を含む重鎖を包含する抗ＩＧＦ‐１Ｒモジュールおよびｂ）配列番号１７５を含む軽鎖と配列番号１４５を含む重鎖を包含する抗ＥｒｂＢ３  Ｃ８モジュールの両方を含むことはない。ある特定の実施形態では、前記抗ＩＧＦ‐１ＲのＶＬＣＤＲ３は配列番号３０８を含む、または、前記抗ＥｒｂＢ３のＶＬＣＤＲ３は配列番号３１５を含む。ある特定の実施形態では、前記の二対のポリペプチド鎖は基本的に同じ配列である。ＨＣ  Ｉｇ  ＣＲの間の少なくとも１つの結合のうちの少なくともはジスルフィド結合であり、そして、ジスルフィド結合もしくはファンデアワールス結合であり得る、または、前記の少なくとも１つの重‐軽鎖結合のうちの少なくとも１つはジスルフィド結合であり、そして、ジスルフィド結合もしくはファンデアワールス結合であり得る。ある特定の実施形態では、前記抗ＥｒｂＢ３結合部位はＣ末端ｓｃＦｖであり、ある特定の実施形態では、前記抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位は前記Ｃ末端ｓｃＦｖである。ＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位、ＨＣＩｇＣＲおよび抗ＥｒｂＢ３結合部位がその対の重鎖を構成することができ、その重鎖が単一の連続ポリペプチド鎖によって構成される。
【００１９】
ＰＢＡは（ｉ）１μＭ以下、もしくは１００ｎＭ以下、もしくは１０ｎＭ以下、もしくは１ｎＭ以下の濃度で腫瘍細胞の増殖をインビトロで阻害することができ、またはｉｉ）ｐＥｒｂＢ３およびｐＩＧＦ‐１Ｒのどちらか、または両方のリン酸化の阻害によって示される、１０ｎＭ以下もしくは１ｎＭ以下もしくは１００ｐＭ以下のＩＣ５０、または最大阻害の少なくとも７０％もしくは少なくとも８０％もしくは少なくとも９０％のパーセント阻害でヘレグリン誘導性シグナル伝達およびＩＧＦ１誘導性シグナル伝達のどちらか、もしくは両方を阻害することができる。増殖阻害はＤＵ１４５培養細胞でのＣＴＧアッセイによって測定され得る。シグナル伝達の阻害は、ＢｘＰＣ‐３培養細胞で１５分間の８０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ‐１および２０ｎｇ／ｍｌのヘレグリンを用いる刺激の後に決定され得る。
【００２０】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各ＨＣ  Ｉｇ  ＣＲは他方の対のＣＨ３ドメインとの結合を仲介するＣＨ３ドメインを含む。それぞれのＨＣ  Ｉｇ  ＣＲはＣＨ２ドメイン、ヒンジ部およびＣＨ１ドメインを含むこともできる。ある特定の実施形態では、ＰＢＡのＣＨ１ドメインはそのＣ末端でヒンジ部のＮ末端に結合し、そのヒンジ部はそのＣ末端でＣＨ２ドメインのＮ末端に結合し、そのＣＨ２ドメインはそのＣ末端でＣＨ３ドメインのＮ末端に結合する。
【００２１】
それぞれの第１結合部位は第１ＶＨドメインを含むことができ、ＰＢＡの各ＣＨ１ドメインはそのＮ末端で第１ＶＨドメインのＣ末端に結合することができる。ＰＢＡの各ＣＨ３ドメインはそのＣ末端でｓｃＦｖのＮ末端に結合することができる。ＰＢＡの各ＣＨ３ドメインはそのＣ末端で連結リンカーのＮ末端に結合することができ、その連結リンカーはそのＣ末端で前記ｓｃＦｖのＮ末端に結合する。それぞれの軽鎖は第１ＶＨドメインと結合して前記第１結合部位を形成する第１ＶＬドメインを含むことができる。それぞれの第１ＶＬドメインはそのＣ末端でＣＬドメインのＮ末端に結合することができる。それぞれの第１結合部位は抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位でありえ、それぞれのｓｃＦｖは抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖであり得る。それぞれの第１結合部位は抗ＥｒｂＢ３結合部位であり得、それぞれのｓｃＦｖは抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖであり得る。ＰＢＡのＨＣ  Ｉｇ  ＣＲはＩｇＧのＣＲ、例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２のＣＲであり得る。
【００２２】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。
【００２３】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１���６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。
【００２４】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、ならびに（ａ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｂ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｃ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｄ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｅ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｆ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｇ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｈ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｉ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｊ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬ���ＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｋ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。
【００２５】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、ならびに（ａ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｂ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｃ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｄ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｅ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｆ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｇ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｈ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｉ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｊ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬ���ＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｋ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。
【００２６】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、ならびに（ａ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｂ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｃ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｄ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｅ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｆ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｇ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｈ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｉ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｊ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、Ｖ���ＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｋ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。
【００２７】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、ならびに（ａ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｂ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｃ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｄ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｅ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｆ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｇ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｈ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｉ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｊ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、Ｖ���ＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。
【００２８】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、ならびに（ａ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｂ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｃ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｄ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｅ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｆ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｇ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｈ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｉ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｊ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬ���ＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｋ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。
【００２９】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、ならびに（ａ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｂ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｃ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｄ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｅ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｆ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｇ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｈ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｉ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｊ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、Ｖ���ＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｋ）そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。
【００３０】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位は配列番号１の配列を含むＶＨドメインを包含し、その配列は不定のアミノ酸を含み、その不定のアミノ酸は図１中の対応する位置に示される任意のアミノ酸を独立して表す、および／または、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位は配列番号２（もしくは３）の配列を含むＶＬドメインを包含し、その配列は不定のアミノ酸を含み、その不定のアミノ酸は図２中の対応する位置に示される任意のアミノ酸を独立して表す。
【００３１】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３結合部位は配列番号４（もしくは５）の配列を含むＶＨドメインを包含し、その配列は不定のアミノ酸を含み、その不定のアミノ酸は図３中の対応する位置に示される任意のアミノ酸を独立して表す、および／または、ＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３結合部位は配列番号６（もしくは７）の配列を含むＶＬドメインを包含し、その配列は不定のアミノ酸を含み、その不定のアミノ酸は図４中の対応する位置に示される任意のアミノ酸を独立して表す。
【００３２】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位は配列番号１の配列を含むＶＨドメインおよび配列番号２（または３）の配列を含むＶＬドメインを包含し、ならびにそのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３結合部位は配列番号４（または５）の配列を含むＶＨドメインおよび配列番号６（または７）の配列を含むＶＬドメインを包含する。
【００３３】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位は、Ｘ１はＴではなく、Ｘ２はＶではなく、Ｘ６はＲではなく、Ｘ８はＤではなく、もしくはＸ１０はＩではない配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、もしくは配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含し、またはＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３結合部位は配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインもしくは配列番号７の配列を含むＶＬドメインを包含する。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位は、Ｘ１はＴではなく、Ｘ２はＶではなく、Ｘ６はＲではなく、Ｘ８はＤではなく、もしくはＸ１０はＩではない配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、配列番号３の配列を含むＶＬドメインを包含し、ならびに、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３結合部位は配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号７の配列を含むＶＬドメインを包含する。
【００３４】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位は、配列番号８〜３１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび／もしくは配列番号３２〜１３３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含し、ならびに／または各抗ＥｒｂＢ３結合部位は、配列番号１３４〜１６５からなる群より選択されるＶＨアミノ酸配列および／もしくは配列番号１６６〜２００からなる群より選択されるＶＬアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、（ａ）各第１ＶＨドメインは配列番号８〜３１を含む群から選択されるアミノ酸配列を含み、各第１ＶＬドメインは配列番号３２〜１３３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、各第２ＶＨドメインは配列番号１３４〜１６５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、および各第２ＶＬドメインは配列番号１６６〜２００を含む群から選択されるアミノ酸配列を含み、または（ｂ）各第１ＶＨドメインは配列番号１３４〜１６５を含む群から選択されるアミノ酸配列を含み、各第１ＶＬドメインは配列番号１６６〜２００からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、各第２ＶＨドメインは配列番号８〜３１を含む群から選択されるアミノ酸配列を含み、および各第２ＶＬドメインは配列番号３２〜１３３を含む群から選択されるアミノ酸配列からなる。
【００３５】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインは配列番号８のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインは配列番号３２のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインは配列番号９のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインは配列番号３３のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインは配列番号１０のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインは配列番号３４のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインは配列番号１１のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインは配列番号３５のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインは配列番号８のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインは配列番号３３のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインは配列番号１０のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインは配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
【００３６】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６６のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６７のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６８のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６９のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７０のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７１のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４０のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７２のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４１のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７３のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４２のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７４のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４３のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７５のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６９のアミノ酸配列を含む。
【００３７】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインは配列番号８のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインは配列番号３２のアミノ酸配列を含み、ならびに（ａ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６６のアミノ酸配列を含む、または（ｂ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６７のアミノ酸配列を含む、または（ｃ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６８のアミノ酸配列を含む、または（ｄ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６９のアミノ酸配列を含む、または（ｅ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７０のアミノ酸配列を含む、または（ｆ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７１のアミノ酸配列を含む、または（ｇ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４０のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７２のアミノ酸配列を含む、または（ｈ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４１のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７３のアミノ酸配列を含む、または（ｉ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４２のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７４のアミノ酸配列を含む、または（ｊ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４３のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７５のアミノ酸配列を含む、または（ｋ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６９のアミノ酸配列を含む。
【００３８】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインは配列番号９のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインは配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ならびに（ａ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６６のアミノ酸配列を含む、または（ｂ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６７のアミノ酸配列を含む、または（ｃ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６８のアミノ酸配列を含む、または（ｄ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６９のアミノ酸配列を含む、または（ｅ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７０のアミノ酸配列を含む、または（ｆ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７１のアミノ酸配列を含む、または（ｇ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４０のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７２のアミノ酸配列を含む、または（ｈ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４１のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７３のアミノ酸配列を含む、または（ｉ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４２のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７４のアミノ酸配列を含む、または（ｊ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４３のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７５のアミノ酸配列を含む、または（ｋ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６９のアミノ酸配列を含む。
【００３９】
ある特定の実施形態では、各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインは配列番号１０のアミノ酸配列を含み、各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインは配列番号３４のアミノ酸配列を含み、ならびに（ａ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６６のアミノ酸配列を含む、または（ｂ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６７のアミノ酸配列を含む、または（ｃ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６８のアミノ酸配列を含む、または（ｄ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６９のアミノ酸配列を含む、または（ｅ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７０のアミノ酸配列を含む、または（ｆ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７１のアミノ酸配列を含む、または（ｇ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４０のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７２のアミノ酸配列を含む、または（ｈ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４１のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７３のアミノ酸配列を含む、または（ｉ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４２のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７４のアミノ酸配列を含む、または（ｊ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４３のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７５のアミノ酸配列を含む、または（ｋ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６９のアミノ酸配列を含む。
【００４０】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインは配列番号１１のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインは配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ならびに（ａ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６６のアミノ酸配列を含む、または（ｂ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６７のアミノ酸配列を含む、または（ｃ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６８のアミノ酸配列を含む、または（ｄ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６９のアミノ酸配列を含む、または（ｅ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７０のアミノ酸配列を含む、または（ｆ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７１のアミノ酸配列を含む、または（ｇ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４０のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７２のアミノ酸配列を含む、または（ｈ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４１のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７３のアミノ酸配列を含む、または（ｉ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４２のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７４のアミノ酸配列を含む、または（ｊ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６９のアミノ酸配列を含む。
【００４１】
ある特定の実施形態では、そのＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインは配列番号８のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインは配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ならびに（ａ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６６のアミノ酸配列を含む、または（ｂ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６７のアミノ酸配列を含む、または（ｃ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６８のアミノ酸配列を含む、または（ｄ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６９のアミノ酸配列を含む、または（ｅ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７０のアミノ酸配列を含む、または（ｆ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７１のアミノ酸配列を含む、または（ｇ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４０のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７２のアミノ酸配列を含む、または（ｈ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４１のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７３のアミノ酸配列を含む、または（ｉ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４２のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７４のアミノ酸配列を含む、または（ｊ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４３のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７５のアミノ酸配列を含む、または（ｋ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６９のアミノ酸配列を含む。
【００４２】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインは配列番号１０のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインは配列番号３２のアミノ酸配列を含み、ならびに（ａ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６６のアミノ酸配列を含む、または（ｂ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６７のアミノ酸配列を含む、または（ｃ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６８のアミノ酸配列を含む、または（ｄ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６９のアミノ酸配列を含む、または（ｅ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７０のアミノ酸配列を含む、または（ｆ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７１のアミノ酸配列を含む、または（ｇ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４０のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７２のアミノ酸配列を含む、または（ｈ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４１のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７３のアミノ酸配列を含む、または（ｉ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４２のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７４のアミノ酸配列を含む、または（ｊ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１４３のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１７５のアミノ酸配列を含む、または（ｋ）そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインは配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡの各抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインは配列番号１６９のアミノ酸配列を含む。
【００４３】
ある特定の実施形態では、（ａ）ＰＢＡの各重鎖は、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）、ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）、Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）、Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）、Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに／もしくはそのＰＢＡの各軽鎖は、ＳＦκ軽鎖（配列番号２０２）、Ｐ４κ軽鎖（配列番号２０４）、Ｍ７８κ軽鎖（配列番号２０６）、およびＭ５７κ軽鎖（配列番号２０８）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、または（ｂ）ＰＢＡの各重鎖は、Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）、Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）、Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）、Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）、Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）、Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）、Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）、Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）、Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）、Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）を含む群から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに／もしくはそのＰＢＡの各軽鎖は、Ｐ１λ軽鎖（配列番号２５８）、Ｍ２７λ軽鎖（配列番号２６０）、Ｍ７λ軽鎖（配列番号２６２）、Ｂ７２λ軽鎖（配列番号２６４）およびＢ６０λ軽鎖（配列番号２６６）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００４４】
ある特定の実施形態では、（ａ）ＰＢＡの各重鎖は、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）、ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）、Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）、Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）、Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも１つのアミノ酸付加、欠失もしくは置換において異なるアミノ酸配列を含み、ならびにそのＰＢＡの各軽鎖は、ＳＦκ軽鎖（配列番号２０２）、Ｐ４κ軽鎖（配列番号２０４）、Ｍ７８κ軽鎖（配列番号２０６）、およびＭ５７κ軽鎖（配列番号２０８）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、または（ｂ）ＰＢＡの各重鎖は、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）、ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）、Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）、Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）、Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、ならびにそのＰＢＡの各軽鎖は、ＳＦκ軽鎖（配列番号２０２）、Ｐ４κ軽鎖（配列番号２０４）、Ｍ７８κ軽鎖（配列番号２０６）、およびＭ５７κ軽鎖（配列番号２０８）からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも１つのアミノ酸付加、欠失もしくは置換において異なるアミノ酸配列を含む、または（ｃ）ＰＢＡの各重鎖は、Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）、Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）、Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配��番号２７８）、Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）、Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）、Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）、Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）、Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）、Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）、Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）を含む群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも１つのアミノ酸付加、欠失もしくは置換において異なるアミノ酸配列を含み、ならびにそのＰＢＡの各軽鎖は、Ｐ１λ軽鎖（配列番号２５８）、Ｍ２７λ軽鎖（配列番号２６０）、Ｍ７λ軽鎖（配列番号２６２）、Ｂ７２λ軽鎖（配列番号２６４）およびＢ６０λ軽鎖（配列番号２６６）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、または（ｄ）ＰＢＡの各重鎖は、Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）、Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）、Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）、Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）、Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）、Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）、Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）、Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）、Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）、Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）を含む群から選択されるアミノ酸配列を含み、ならびにそのＰＢＡの各軽鎖は、Ｐ１λ軽鎖（配列番号２５８）、Ｍ２７λ軽鎖（配列番号２６０）、Ｍ７λ軽鎖（配列番号２６２）、Ｂ７２λ軽鎖（配列番号２６４）およびＢ６０λ軽鎖（配列番号２６６）からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも１つのアミノ酸付加、欠失もしくは置換において異なるアミノ酸配列を含み、そのＰＢＡは１６Ｆと少なくとも１つのアミノ酸、ＣＤＲまたは可変ドメインにおいて異なる。
【００４５】
ある特定の実施形態では、（ａ）ＰＢＡの各重鎖は、少なくとも１つの結合によって他方の重鎖に結合し、次のアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、もしくは次のアミノ酸配列のうちの１つと１〜３０個のアミノ酸置換、欠失および／もしくは付加において異なるアミノ酸配列を含み：ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）、ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）、Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）、Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）、Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）、ならびに（ｂ）そのＰＢＡの各軽鎖は、少なくとも１つの結合によって（ａ）の１つの重鎖に結合し、次のアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、もしくは次のアミノ酸配列のうちの１つと１〜３０個のアミノ酸置換、欠失および／もしくは付加において異なるアミノ酸配列を含む：ＳＦκ軽鎖（配列番号２０２）、Ｐ４κ軽鎖（配列番号２０４）、Ｍ７８κ軽鎖（配列番号２０６）、およびＭ５７κ軽鎖（配列番号２０８）、または（ｃ）ＰＢＡの各重鎖は、少なくとも１つの結合によって他方の重鎖に結合し、次のアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、もしくは次のアミノ酸配列のうちの１つと１〜３０個のアミノ酸置換、欠失および／もしくは付加において異なるアミノ酸配列を含み：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）、Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）、Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）、Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）、Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）、Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）、Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）、Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）およびＢ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）、Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）、ならびに（ｄ）そのＰＢＡの各軽鎖は、少なくとも１つの結合によって（ｃ）の１つの重鎖に結合し、を含み次のアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列、もしくは次のア���ノ酸配列のうちの１つと１〜３０個のアミノ酸置換、欠失および／もしくは付加において異なるアミノ酸配列を含む：Ｐ１λ軽鎖（配列番号２５８）、Ｍ２７λ軽鎖（配列番号２６０）、Ｍ７λ軽鎖（配列番号２６２）、Ｂ７２λ軽鎖（配列番号２６４）およびＢ６０λ軽鎖（配列番号２６６）。
【００４６】
ある特定の実施形態では、（ａ）ＰＢＡの各重鎖は、次のアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列、もしくは次のアミノ酸配列のうちの１つと１〜１０個のアミノ酸置換、欠失および／もしくは付加において異なるアミノ酸配列を含み：ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）、ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）、Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）、Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）、Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）、ならびに（ｂ）そのＰＢＡの各軽鎖は、次のアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列、もしくは次のアミノ酸配列のうちの１つと１〜１０個のアミノ酸置換、欠失および／もしくは付加において異なるアミノ酸配列を含む：ＳＦκ軽鎖（配列番号２０２）、Ｐ４κ軽鎖（配列番号２０４）、Ｍ７８κ軽鎖（配列番号２０６）、およびＭ５７κ軽鎖（配列番号２０８）、または（ｃ）ＰＢＡの各重鎖は、次のアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列、もしくは次のアミノ酸配列のうちの１つと１〜１０個のアミノ酸置換、欠失および／もしくは付加において異なるアミノ酸配列を含み：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）、Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）、Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）、Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）、Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）、Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）、Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）、Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）およびＢ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）、Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）ならびに（ｄ）そのＰＢＡの各軽鎖は、次のアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列、もしくは次のアミノ酸配列のうちの１つと１〜１０個のアミノ酸置換、欠失および／もしくは付加において異なるアミノ酸配列を含む：Ｐ１λ軽鎖（配列番号２５８）、Ｍ２７λ軽鎖（配列番号２６０）、Ｍ７λ軽鎖（配列番号２６２）、Ｂ７２λ軽鎖（配列��号２６４）、Ｂ６０λ軽鎖（配列番号２６６）。
【００４７】
例となるＰＢＡには次のものが挙げられる：（ａ）それぞれ配列番号２１２の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０２の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＳＦ−Ｇ１−Ｐ１  ＰＢＡ、（ｂ）それぞれ配列番号２１４の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０２の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３  ＰＢＡ、（ｃ）それぞれ配列番号２１６の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０２の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７  ＰＢＡ、（ｄ）それぞれ配列番号２１８の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０２の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＳＦ−Ｇ１−Ｐ６  ＰＢＡ、（ｅ）それぞれ配列番号２２０の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０２の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９  ＰＢＡ、（ｆ）それぞれ配列番号２２２の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０４の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＰ４−Ｇ１−Ｃ８  ＰＢＡ（ｇ）それぞれ配列番号２２４の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０４の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＰ４−Ｇ１−Ｐ１  ＰＢＡ、（ｈ）それぞれ配列番号２２６の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０４の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３  ＰＢＡ、（ｉ）それぞれ配列番号２２８の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０４の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＰ４−Ｇ１−Ｍ２７  ＰＢＡ、（ｊ）それぞれ配列番号２３０の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０４の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＰ４−Ｇ１−Ｐ６  ＰＢＡ、（ｈ）それぞれ配列番号２３２の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０４の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＰ４−Ｇ１−Ｂ６９  ＰＢＡ、（ｉ）それぞれ配列番号２３４の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０６の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ７８−Ｇ１−Ｃ８  ＰＢＡ、（ｊ）それぞれ配列番号２３６の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０６の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ７８−Ｇ１−Ｐ１  ＰＢＡ、（ｋ）それぞれ配列番号２３８の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０６の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ７８−Ｇ１−Ｍ１．３  ＰＢＡ、（ｌ）それぞれ配列番号２４０の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０６の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ７８−Ｇ１−Ｍ２７  ＰＢＡ、（ｍ）それぞれ配列番号２４２の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０６の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ７８−Ｇ１−Ｐ６  ＰＢＡ、（ｎ）それぞれ配列番号２４４の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０６の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ７８−Ｇ１−Ｂ６９  ＰＢＡ、（ｏ）それぞれ��列番号２４６の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０８の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ５７−Ｇ１−Ｃ８  ＰＢＡ、（ｐ）それぞれ配列番号２４８の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０８の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ５７−Ｇ１−Ｐ１  ＰＢＡ、（ｒ）それぞれ配列番号２５０の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０８の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ５７−Ｇ１−Ｍ１．３  ＰＢＡ、（ｓ）それぞれ配列番号２５２の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０８の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ５７−Ｇ１−Ｍ２７  ＰＢＡ、（ｔ）それぞれ配列番号２５４の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０８の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ５７−Ｇ１−Ｐ６  ＰＢＡ、（ｕ）それぞれ配列番号２５６の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０８の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９  ＰＢＡ、（ｖ）それぞれ配列番号２６８の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２５８の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＰ１−Ｇ１−Ｐ４  ＰＢＡ、（ｗ）それぞれ配列番号２７０の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２５８の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＰ１−Ｇ１−Ｍ５７  ＰＢＡ、（ｘ）それぞれ配列番号２７２の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２５８の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＰ１−Ｇ１−Ｍ７８  ＰＢＡ、（ｙ）それぞれ配列番号２７４の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６０の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ２７−Ｇ１−Ｐ４  ＰＢＡ、（ｚ）それぞれ配列番号２７６の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６０の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ２７−Ｇ１−Ｍ５７  ＰＢＡ、（ａａ）それぞれ配列番号２７８の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６０の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ２７−Ｇ１−Ｍ７８  ＰＢＡ、（ａｂ）それぞれ配列番号２８０の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６２の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ７−Ｇ１−Ｐ４  ＰＢＡ、（ａｃ）それぞれ配列番号２８２の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６２の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ７−Ｇ１−Ｍ５７  ＰＢＡ、（ａｄ）それぞれ配列番号２８４の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６２の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＭ７−Ｇ１−Ｍ７８  ＰＢＡ、（ａｅ）それぞれ配列番号２８６の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６４の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＢ７２−Ｇ１−Ｐ４  ＰＢＡ、（ａｆ）それぞれ配列番号２８８の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６４の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＢ７２−Ｇ１−Ｍ５７  ＰＢＡ、（ａｇ）それぞれ配列番号２９０の重鎖アミノ酸配列���含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６４の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＢ７２−Ｇ１−Ｍ７８  ＰＢＡ、（ａｈ）それぞれ配列番号２９２の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６６の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＢ６０−Ｇ１−Ｐ４  ＰＢＡ、（ａｉ）それぞれ配列番号２９４の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６６の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＢ６０−Ｇ１−Ｍ５７  ＰＢＡ、ならびに（ａｊ）それぞれ配列番号２９６の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６６の軽鎖配列を含む２本の軽鎖を包含するＢ６０−Ｇ１−Ｍ７８  ＰＢＡ。
【００４８】
本明細書は単一特異性抗体もまた提供する。ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒモノクローナル抗体は、図５Ａの配列番号２０２において点線で下線を引くことにより示されているＳＦκ軽鎖のＶＬＣＤＲ１配列、ＶＬＣＤＲ２配列およびＶＬＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序で含む第１の配列を含み、抗体は、図５Ａの配列番号２１０においてそれぞれ最初の３つの点線で下線を引かれた配列により示されているＳＦ重鎖のＶＨＣＤＲ１配列、ＶＨＣＤＲ２配列およびＶＨＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序で含む第２の配列をさらに含み、その抗体では前記第１配列と第２の配列が重複しない。ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒモノクローナル抗体は、図５Ａの配列番号２０４において点線で下線を引くことにより示されているＰ４κ軽鎖のＶＬＣＤＲ１配列、ＶＬＣＤＲ２配列およびＶＬＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序で含み、抗体は、図５Ａの配列番号２２２においてそれぞれ最初の３つの点線で下線を引かれた配列により示されているＰ４重鎖のＶＨＣＤＲ１配列、ＶＨＣＤＲ２配列およびＶＨＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序でさらに含む。ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒモノクローナル抗体は、図５Ａの配列番号２０６において点線で下線を引くことにより示されているＭ７８κ軽鎖のＶＬＣＤＲ１配列、ＶＬＣＤＲ２配列およびＶＬＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序で含み、抗体は、図５Ａの配列番号２３４においてそれぞれ最初の３つの点線で下線を引かれた配列により示されているＭ７８重鎖のＶＨＣＤＲ１配列、ＶＨＣＤＲ２配列およびＶＨＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序でさらに含む。ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒモノクローナル抗体は、図５Ａの配列番号２０８において点線で下線を引くことにより示されているＭ５７κ軽鎖のＶＬＣＤＲ１配列、ＶＬＣＤＲ２配列およびＶＬＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序で含み、抗体は、図５Ａの配列番号２４６においてそれぞれ最初の３つの点線で下線を引かれた配列により示されているＭ５７重鎖のＶＨＣＤＲ１配列、ＶＨＣＤＲ２配列およびＶＨＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序でさらに含む。
【００４９】
ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３を含む３つのＶＨＣＤＲからなるセットを包含するＶＨドメイン、および／またはＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３を含む３つのＶＬＣＤＲからなるセットを包含するＶＬドメインを含み、ＣＤＲはそれぞれ配列番号３０２、３０３、３０４、３０５、３０６および３０７の配列を含み、ならびに各ＣＤＲはアミノ末端とカルボキシ末端をさらに含み、各ＣＤＲセットの前記ＣＤＲは前記抗体においてアミノ末端からカルボキシ末端までＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の線形順序で配置され、その場合、ＣＤＲは不定のアミノ酸を含み、その不定のアミノ酸は図１中（ＶＨ）または図２中（ＶＬ）の対応する位置に示される任意のアミノ酸を独立して表し、そして、前記抗体はＳＦモジュールを含まない。ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３はそれぞれ配列番号３０２、３０３、３０４、３０５、３０６および３０８の配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＨＣＤＲ１ドメイン、ＶＨＣＤＲ２ドメインおよびＶＨＣＤＲ３ドメインは配列番号８〜１０および１２〜３１のうちのいずれか１つの対応するアミノ酸配列を含み、その抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＬＣＤＲ１ドメイン、ＶＬＣＤＲ２ドメインおよびＶＬＣＤＲ３ドメインは配列番号３２〜３４および３６〜１３３のうちのいずれか１つの対応するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、（ａ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｂ）その抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｃ）その抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｄ）その抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｅ）その抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む、または（ｆ）その抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号３２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。
【００５０】
ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＨドメインは配列番号１のアミノ酸配列を含み、その配列は不定のアミノ酸を含み、その不定のアミノ酸は図１中の対応する位置に示される任意のアミノ酸を独立して表し、その抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＬドメインは配列番号２（または３）のアミノ酸配列を含み、その配列は不定のアミノ酸を含み、その不定のアミノ酸は図２中の対応する位置に示される任意のアミノ酸を独立して表す、またはその抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＨドメインは配列番号１のアミノ酸配列を含み、その抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＬドメインは配列番号２もしくは３のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＨドメインは配列番号８〜１０および１２〜３１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、そのＶＬドメインは配列番号３２〜３４および３６〜１３３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００５１】
ある特定の実施形態では、（ａ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＨドメインは、配列番号８〜１０および１２〜３１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、もしくは１〜３０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含み、ならびに／または（ｂ）その抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＬドメインは、配列番号３２〜３４および３６〜１３３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、もしくは１〜３０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、（ａ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のＶＨドメインは、配列番号８〜１０および１２〜３１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、もしくは１〜１０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含み、ならびに／または（ｂ）前記ＶＬドメインは、配列番号３２〜３４および３６〜１３３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、もしくは１〜１０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含む。
【００５２】
抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体はＩｇＧ１抗体、例えば、単離ＩｇＧ１抗体および／またはモノクローナルＩｇＧ１抗体であり得る。
【００５３】
ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体は、それぞれの対が重鎖と軽鎖を含む二対のポリペプチド鎖を含むタンパク質であり、その中で（ａ）それぞれの重鎖は配列番号３５９、３６０もしくは３６１のアミノ酸配列を含み、および／または（ｂ）それぞれの軽鎖は配列番号２０４、２０６もしくは２０８のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体は、それぞれの対が重鎖と軽鎖を含む二対のポリペプチド鎖を含むタンパク質であり、その中で（ａ）それぞれの重鎖は、配列番号３５９、３６０もしくは３６１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、もしくは１〜３０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含み、および／または（ｂ）それぞれの軽鎖は、配列番号２０４、２０６もしくは２０８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、もしくは１〜３０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、（ａ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体の各重鎖は、配列番号３５９、３６０もしくは３６１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、もしくは１〜１０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含み、および／または（ｂ）それぞれの軽鎖は、配列番号２０４、２０６もしくは２０８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、もしくは１〜１０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含む。
【００５４】
例となる抗体には（ａ）それぞれ配列番号３５９の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０４の軽鎖アミノ酸配列を含む２本の軽鎖を包含する抗ＩＧＦ‐Ｒ１モノクローナルＩｇＧ１抗体Ｐ４、（ｂ）それぞれ配列番号３６０の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０６の軽鎖アミノ酸配列を含む２本の軽鎖を包含する抗ＩＧＦ‐Ｒ１モノクローナルＩｇＧ１抗体Ｍ７８、（ｃ）それぞれ配列番号３６１の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０８の軽鎖アミノ酸配列を含む２本の軽鎖を包含する抗ＩＧＦ‐Ｒ１モノクローナルＩｇＧ１抗体Ｍ５７、（ｄ）それぞれ配列番号３６１の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０６の軽鎖アミノ酸配列を含む２本の軽鎖を包含する抗ＩＧＦ‐Ｒ１モノクローナルＩｇＧ１抗体Ｍ５７／Ｍ７８、ならびに（ｅ）それぞれ配列番号３５９の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２０８の軽鎖アミノ酸配列を含む２本の軽鎖を包含する抗ＩＧＦ‐Ｒ１モノクローナルＩｇＧ１抗体Ｐ４／Ｍ５７が挙げられる。
【００５５】
抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体は１つ以上のさらなる結合部位、例えば、抗ＥｒｂＢ３結合部位を含み得る。
【００５６】
抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体、例えば、モノクローナル抗ＥｒｂＢ３抗体もまた提供される。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３は、図５Ｂの配列番号２５８において点線で下線を引くことにより示されているＰ１λ軽鎖のＶＬＣＤＲ１配列、ＶＬＣＤＲ２配列およびＶＬＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序で含み、抗体は、図５Ｂの配列番号２６８においてそれぞれ最初の３つの点線で下線を引かれた配列により示されているＰ１重鎖のＶＨＣＤＲ１配列、ＶＨＣＤＲ２配列およびＶＨＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序でさらに含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体は、図５Ｂの配列番号２６０において点線で下線を引くことにより示されているＭ２７λ軽鎖のＶＬＣＤＲ１配列、ＶＬＣＤＲ２配列およびＶＬＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序で含み、抗体は、図５Ｂの配列番号２７４においてそれぞれ最初の３つの点線で下線を引かれた配列により示されているＭ２７重鎖のＶＨＣＤＲ１配列、ＶＨＣＤＲ２配列およびＶＨＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序でさらに含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体は、図５Ｂの配列番号２６２において点線で下線を引くことにより示されているＭ７λ軽鎖のＶＬＣＤＲ１配列、ＶＬＣＤＲ２配列およびＶＬＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序で含み、抗体は、図５Ｂの配列番号２８０においてそれぞれ最初の３つの点線で下線を引かれた配列により示されているＭ７重鎖のＶＨＣＤＲ１配列、ＶＨＣＤＲ２配列およびＶＨＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序でさらに含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体は、図５Ｂの配列番号２６４において点線で下線を引くことにより示されているＢ７２λ軽鎖のＶＬＣＤＲ１配列、ＶＬＣＤＲ２配列およびＶＬＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序で含み、抗体は、図５Ｂの配列番号２８６においてそれぞれ最初の３つの点線で下線を引かれた配列により示されているＢ７２重鎖のＶＨＣＤＲ１配列、ＶＨＣＤＲ２配列およびＶＨＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序でさらに含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体は、図５Ｂの配列番号２６６において点線で下線を引くことにより示されているＢ６０λ軽鎖のＶＬＣＤＲ１配列、ＶＬＣＤＲ２配列およびＶＬＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序で含み、抗体は、図５Ｂの配列番号２９２においてそれぞれ最初の３つの点線で下線を引かれた配列により示されているＢ６０重鎖のＶＨＣＤＲ１配列、ＶＨＣＤＲ２配列およびＶＨＣＤＲ３配列をアミノ末端からカルボキシ末端へこの順序でさらに含む。
【００５７】
ある特定の実施形態では、ヒトＥｒｂＢ３に特異的に結合する単離抗ＥｒｂＢ３抗体は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３を含む３つのＶＨＣＤＲからなるセットを包含するＶＨドメイン、および／またはＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３を含む３つのＶＬＣＤＲからなるセットを包含するＶＬドメインを含み、ＣＤＲはそれぞれ配列番号３０９、３１０、３１１、３１２、３１３および３１４の配列を含み、ならびに各ＣＤＲはアミノ末端およびカルボキシ末端をさらに含み、各ＣＤＲセットの前記ＣＤＲは前記抗体においてアミノ末端からカルボキシ末端までＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の線形順序で配置され、その場合、ＣＤＲは不定のアミノ酸を含み、その不定のアミノ酸は図３中（ＶＨ）または図４中（ＶＬ）の対応する位置に示される任意のアミノ酸を独立して表し、ならびに前記抗体はＣ８モジュールを含まない。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３はそれぞれ配列番号３０９、３１０、３１１、３１２、３１３および３１５の配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨＣＤＲ１ドメイン、ＶＨＣＤＲ２ドメインおよびＶＨＣＤＲ３ドメインは配列番号１３４〜１４２および１４４〜１６５のうちのいずれか１つの対応するアミノ酸配列を含み、その抗体のＶＬＣＤＲ１ドメイン、ＶＬＣＤＲ２ドメインおよびＶＬＣＤＲ３ドメインは配列番号１６６〜１７４および１７６〜２００のうちのいずれか１つの対応するアミノ酸配列を含む。
【００５８】
ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３５の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３配列番号１３６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３７の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３８の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、その抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４０の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４１の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７３の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１４２の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１７４の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３は配列番号１３６の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含み、その抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３は配列番号１６９の対応するＣＤＲのアミノ酸配列を含む。
【００５９】
ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨドメインは配列番号４（または５）のアミノ酸配列を含み、その配列は不定のアミノ酸を含み、その不定のアミノ酸は図３中の対応する位置に示される任意のアミノ酸を独立して表す、および／またはその抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＬドメインは配列番号６（または７）のアミノ酸配列を含み、その配列は不定のアミノ酸を含み、その不定のアミノ酸は図４中の対応する位置に示される任意のアミノ酸を独立して表す。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨドメインは配列番号１３４〜１４２および１４４〜１６５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、ならびに／またはその抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＬドメインは配列番号１６６〜１７４および１７６〜２００からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
【００６０】
ある特定の実施形態では、（ａ）抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨドメインは、配列番号１３４〜１４２および１４４〜１６５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、もしくは１〜３０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含み、ならびに／または（ｂ）その抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＬドメインは、配列番号１６６〜１７４および１７６〜２００のうちのいずれか１つのアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、もしくは１〜３０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、（ａ）抗ＥｒｂＢ３抗体のＶＨドメインは、配列番号１３４〜１４２および１４４〜１６５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、もしくは１〜１０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含み、および／または（ｂ）前記ＶＬドメインは、配列番号１６６〜１７４および１７６〜２００のうちのいずれか１つのアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、もしくは１〜１０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含む。
【００６１】
抗ＥｒｂＢ３抗体はＩｇＧ１抗体、例えば、単離モノクローナルＩｇＧ１抗体であり得る。
【００６２】
ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体は、それぞれの対が重鎖と軽鎖を含む二対のポリペプチド鎖を含むタンパク質であり、その中で（ａ）それぞれの重鎖は配列番号３６２、３６３、３６４、３６５もしくは３６６のアミノ酸配列を含み、および／または（ｂ）それぞれの軽鎖は配列番号２５８、２６０、２６２、２６４もしくは２６６のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体は、それぞれの対が重鎖と軽鎖を含む二対のポリペプチド鎖を含むタンパク質であり、その中で（ａ）それぞれの重鎖は、配列番号３６２、３６３、３６４、３６５もしくは３６６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、もしくは１〜３０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含み、および／または（ｂ）それぞれの軽鎖は、配列番号２５８、２６０、２６２、２６４もしくは２６６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、もしくは１〜３０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３抗体は、それぞれの対が重鎖と軽鎖を含む二対のポリペプチド鎖を含むタンパク質であり、その中で（ａ）それぞれの重鎖は、配列番号３６２、３６３、３６４、３６５もしくは３６６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、もしくは１〜１０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含み、および（ｂ）それぞれの軽鎖は、配列番号２５８、２６０、２６２、２６４もしくは２６６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、もしくは１〜１０個のアミノ酸アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含む。
【００６３】
抗ＥｒｂＢ３抗体は１つ以上の他の結合部位、例えば、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位を含み得る。
【００６４】
例となる抗ＥｒｂＢ３抗体には（ａ）それぞれ配列番号３６２の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２５８の軽鎖アミノ酸配列を含む２本の軽鎖を包含する抗ＥｒｂＢ３モノクローナルＩｇＧ１抗体Ｐ１、（ｂ）それぞれ配列番号３６３の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６０の軽鎖アミノ酸配列を含む２本の軽鎖を包含する抗ＥｒｂＢ３モノクローナルＩｇＧ１抗体Ｍ２７、（ｃ）それぞれ配列番号３６４の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６２の軽鎖アミノ酸配列を含む２本の軽鎖を包含する抗ＥｒｂＢ３モノクローナルＩｇＧ１抗体Ｍ７、（ｄ）それぞれ配列番号３６５の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６４の軽鎖アミノ酸配列を含む２本の軽鎖を包含する抗ＥｒｂＢ３モノクローナルＩｇＧ１抗体Ｂ７２、（ｅ）それぞれ配列番号３６６の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６６の軽鎖アミノ酸配列を含む２本の軽鎖を包含する抗ＥｒｂＢ３モノクローナルＩｇＧ１抗体Ｂ６０、ならびに（ｆ）それぞれ配列番号３６３の重鎖アミノ酸配列を含む２本の重鎖、および、それぞれ配列番号２６２の軽鎖アミノ酸配列を含む２本の軽鎖を包含する抗ＥｒｂＢ３モノクローナルＩｇＧ１抗体Ｍ２７／Ｍ７が挙げられる。
【００６５】
ｓｃＦｖもまた提供され、そのｓｃＦｖはモノクローナルｓｃＦｖであり得る。例となるｓｃＦｖには（ａ）配列番号３６７のアミノ酸配列を含む抗ＩＧＦ‐Ｒ１  ｓｃＦｖ抗体Ｐ４、（ｂ）配列番号３６８のアミノ酸配列を含む抗ＩＧＦ‐Ｒ１  ｓｃＦｖ抗体Ｍ５７、（ｃ）配列番号３６９のアミノ酸配列を含む抗ＩＧＦ‐Ｒ１  ｓｃＦｖ抗体Ｍ７８、（ｄ）配列番号３７０のアミノ酸配列を含む抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖ抗体Ｃ８、（ｅ）配列番号３７１のアミノ酸配列を含む抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖ抗体Ｐ１、（ｆ）配列番号３７２のアミノ酸配列を含む抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖ抗体Ｍ１．３、（ｇ）配列番号３７３のアミノ酸配列を含む抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖ抗体Ｍ２７、（ｈ）配列番号３７４のアミノ酸配列を含む抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖ抗体Ｐ６、および（ｉ）配列番号３７５のアミノ酸配列を含む抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖ抗体Ｂ６９が挙げられる。
【００６６】
ＰＢＡ、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体、または抗ＥｒｂＢ３抗体、および薬学的に許容可能な担体を含む組成物も提供される。抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体を含む組成物は抗ＥｒｂＢ３抗体をさらに含み得る。抗ＥｒｂＢ３抗体を含む組成物は抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体をさらに含み得る。
【００６７】
核酸分子、例えば、本明細書において示されるように、少なくとも１つのコード配列、抗体またはその鎖をコードする少なくとも１つのコード配列を含む核酸分子も提供される。その核酸分子はプロモーターヌクレオチド配列とエンハンサーヌクレオチド配列のどちらか、または両方を含むことができ、そのヌクレオチド配列は少なくとも１つのコード配列に機能するように結合し、抗体の発現を促進または増強する。ベクター、例えば、本明細書において提供される１つ以上の核酸分子を含むベクター、ならびに本明細書において提供される１つ以上のベクターを含む宿主細胞も包含される。本明細書において提供されるＰＢＡ、抗ＩＧＦ‐１抗体または抗ＥｒｂＢ３抗体を作製するための方法であって、本明細書において提供される抗体（例えば、ＰＢＡ）またはその鎖をコードする１つ以上の核酸を含む細胞をそのＰＢＡ、抗ＩＧＦ‐１抗体または抗ＥｒｂＢ３抗体の発現に適切な条件下で培養することを含む方法も提供される。癌を有する対象を治療するための方法であって、本明細書において提供される１つ以上の抗体またはＰＢＡまたは組成物の治療上有効量をその対象に投与することを含む方法がさらに提供される。
【００６８】
本明細書は抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＰＢＡもまた提供し、そのＰＢＡはカニクイザルにおいて、５ｍｇ／ｋｇ以上の用量で静脈内投与されると、少なくとも４５時間の半減期を有する。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、マウスまたはカニクイザルである生物において、同じエピトープに結合する、抗原結合特異性の方向がｆａｂの特異性とｓｃｆｖの特異性の間で逆転している別の多価二重特異性抗体の同じ生物における半減期よりも統計学的に長い（例えば、５０％、２倍、またはそれ以上）半減期を有する。
【００６９】
ＰＢＡはヘレグリン誘導性ｐＡＫＴシグナル伝達を細胞、例えば、癌細胞において少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％抑制し得る。ＰＢＡはＩＧＦ‐１誘導性ｐＡＫＴシグナル伝達を細胞、例えば、癌細胞において少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％抑制し得る。ＰＢＡはインスリン誘導性ｐＡＫＴシグナル伝達を細胞、例えば、癌細胞において少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％抑制し得る。ＰＢＡはＩＧＦ‐２誘導性ｐＡＫＴシグナル伝達を細胞、例えば、癌細胞において少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％％、９７％、９８％、９９％または１００％抑制し得る。
【００７０】
ＰＢＡは、そのＰＢＡと同じＩＧＦ‐１Ｒ上のエピトープに結合する単一特異性抗ＩＧＦ‐１ＲＡｂ＃Ａまたは単一特異性抗ＩＧＦ‐１ＲＡｂよりも大幅に、インビボまたはインビトロで腫瘍細胞におけるｍＴＯＲ活性化（リン酸化）を阻害することができる。ＰＢＡは、そのＰＢＡと同じＩＧＦ‐１Ｒ上のエピトープに結合する単一特異性抗ＩＧＦ‐１ＲＡｂ＃Ａまたは単一特異性抗ＩＧＦ‐１ＲＡｂよりも大幅に、インビボまたはインビトロで腫瘍細胞におけるｍＴＯＲタンパク質のレベルを低下させることができる。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、そのＰＢＡと同じＩＧＦ‐１Ｒ上のエピトープに結合する単一特異性抗ＩＧＦ‐１ＲＡｂ＃Ａまたは単一特異性抗ＩＧＦ‐１ＲＡｂと比較して、インビボまたはインビトロで腫瘍細胞におけるｍＴＯＲ活性化またはｍＴＯＲタンパク質のレベルを少なくとも５０％、または２倍、３倍、４倍、または５倍、または５倍超だけ低下させる。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは等モル量の抗ＩＧＦ‐１ＲＩｇＧよりもｎｕ／ｎｕマウスのヒト異種移植片モデルにおける腫瘍増殖の阻害に効果的である。いくつかの実施形態では、その異種移植片モデルはヒトＤＵ１４５細胞異種移植片、ＢｘＰＣ‐３細胞異種移植片、ＳＫ‐ＥＳ‐１細胞異種移植片、またはＣａｋｉ‐１細胞異種移植片を含む。別の実施形態では、多価二重特異性抗体は、等モル量の抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧと混合された等モル量の抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧの組合せよりもｎｕ／ｎｕマウスのヒト異種移植片モデルにおける腫瘍増殖の阻害に効果的である。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１Ａ】Ａ〜Ｂは、例となるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨ配列（配列番号８〜３１および３８４〜３８５、トップからボトムまで連続的に番号付け）、およびそれに派生するコンセンサス配列（配列番号１）の配列比較である。ＣＤＲに下線を引き、ＣＤＲの配列番号を角括弧内の数字としてそのＣＤＲの上部に記した（例えば、「［Ｓ．３０２］」）。
【図１Ｂ】Ａ〜Ｂは、例となるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨ配列（配列番号８〜３１および３８４〜３８５、トップからボトムまで連続的に番号付け）、およびそれに派生するコンセンサス配列（配列番号１）の配列比較である。ＣＤＲに下線を引き、ＣＤＲの配列番号を角括弧内の数字としてそのＣＤＲの上部に記した（例えば、「［Ｓ．３０２］」）。
【図２Ａ】Ａ〜Ｅは、例となるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬ配列（配列番号３２〜１３３および３８６−３８７、トップからボトムまで連続的に番号付け）、およびそれに由来する２つのコンセンサス配列（配列番号２および３）の配列比較である。配列番号２は１６ＦのＶＬドメインを含むが、配列番号３は含まない。ＣＤＲに下線を引き、ＣＤＲの配列番号を角括弧内の数字としてそのＣＤＲの上部に記した。
【図２Ｂ】Ａ〜Ｅは、例となるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬ配列（配列番号３２〜１３３および３８６−３８７、トップからボトムまで連続的に番号付け）、およびそれに由来する２つのコンセンサス配列（配列番号２および３）の配列比較である。配列番号２は１６ＦのＶＬドメインを含むが、配列番号３は含まない。ＣＤＲに下線を引き、ＣＤＲの配列番号を角括弧内の数字としてそのＣＤＲの上部に記した。
【図２Ｃ】Ａ〜Ｅは、例となるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬ配列（配列番号３２〜１３３および３８６−３８７、トップからボトムまで連続的に番号付け）、およびそれに由来する２つのコンセンサス配列（配列番号２および３）の配列比較である。配列番号２は１６ＦのＶＬドメインを含むが、配列番号３は含まない。ＣＤＲに下線を引き、ＣＤＲの配列番号を角括弧内の数字としてそのＣＤＲの上部に記した。
【図２Ｄ】Ａ〜Ｅは、例となるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬ配列（配列番号３２〜１３３および３８６−３８７、トップからボトムまで連続的に番号付け）、およびそれに由来する２つのコンセンサス配列（配列番号２および３）の配列比較である。配列番号２は１６ＦのＶＬドメインを含むが、配列番号３は含まない。ＣＤＲに下線を引き、ＣＤＲの配列番号を角括弧内の数字としてそのＣＤＲの上部に記した。
【図２Ｅ】Ａ〜Ｅは、例となるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬ配列（配列番号３２〜１３３および３８６−３８７、トップからボトムまで連続的に番号付け）、およびそれに由来する２つのコンセンサス配列（配列番号２および３）の配列比較である。配列番号２は１６ＦのＶＬドメインを含むが、配列番号３は含まない。ＣＤＲに下線を引き、ＣＤＲの配列番号を角括弧内の数字としてそのＣＤＲの上部に記した。
【図３Ａ】Ａ〜Ｂは、例となるＥｒｂＢ３  ＶＨ配列（配列番号１３４〜１６５および３８８、トップからボトムまで連続的に番号付け）、およびそれに由来するコンセンサス配列（配列番号４および５）の配列比較である。配列番号４は１６ＦのＶＬドメインを含むが、配列番号５は含まない。ＣＤＲに下線を引き、ＣＤＲの配列番号を角括弧内の数字としてそのＣＤＲの上部に記した。
【図３Ｂ】Ａ〜Ｂは、例となるＥｒｂＢ３  ＶＨ配列（配列番号１３４〜１６５および３８８、トップからボトムまで連続的に番号付け）、およびそれに由来するコンセンサス配列（配列番号４および５）の配列比較である。配列番号４は１６ＦのＶＬドメインを含むが、配列番号５は含まない。ＣＤＲに下線を引き、ＣＤＲの配列番号を角括弧内の数字としてそのＣＤＲの上部に記した。
【図４Ａ】Ａ〜Ｂは、例となるＥｒｂＢ３  ＶＬ配列（配列番号：１６６〜２００、トップからボトムまで連続的に番号付け）、およびそれに由来する２つのコンセンサス配列（配列番号６および７）の配列比較である。配列番号６は１６ＦのＶＬドメインを含むが、配列番号７は含まない。ＣＤＲに下線を引き、ＣＤＲの配列番号を弧内の数字としてそのＣＤＲの上部に記した。
【図４Ｂ】Ａ〜Ｂは、例となるＥｒｂＢ３  ＶＬ配列（配列番号：１６６〜２００、トップからボトムまで連続的に番号付け）、およびそれに由来する２つのコンセンサス配列（配列番号６および７）の配列比較である。配列番号６は１６ＦのＶＬドメインを含むが、配列番号７は含まない。ＣＤＲに下線を引き、ＣＤＲの配列番号を弧内の数字としてそのＣＤＲの上部に記した。
【図５Ａ−１】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ａ−２】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ａ−３】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ａ−４】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ａ−５】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ａ−６】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ａ−７】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ａ−８】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ａ−９】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ａ−１０】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線���引いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ｂ−１】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ｂ−２】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ｂ−３】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ｂ−４】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ｂ−５】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ｂ−６】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ｂ−７】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図５Ｂ−８】例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３（図５Ａ）および抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒ（図５Ｂ）多価二重特異性抗体の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列。  図５Ａは、以下の抗ＩＧＦ‐１Ｒ−ＩｇＧ１−抗ＥｒｂＢ３ハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ−配列番号２１０）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１２）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１４）；ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１６）；ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１８）；ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２２０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２４）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６）；Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２８）；Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２３０）；Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３４）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３６）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３８）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２４０）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４２）；Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４４）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４６）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４８）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２５０）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５２）；Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５６）。  図５Ｂは、以下の抗ＥｒｂＢ３−ＩｇＧ１−抗ＩＧＦ‐１Ｒハイブリッド重鎖のアミノ酸配列を示す：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６８）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７０）；Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７２）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７４）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７６）；Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７８）；Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８０）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８２）；Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８６）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８８）；Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９０）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９２）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９４）；Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９６）；Ｂ６０−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５５）およびＭ７−Ｇ２−Ｍ７８（配列番号３５７）。  図５Ａおよび図５Ｂのこれらのハイブリッド重鎖はそれぞれ、３つの命名されたモジュールを含み、それぞれはそのモジュール構成に従って命名され（図８参照）、左側に、第一の名称であるアミノ末端モジュール、中央に、第二の名称である中央モジュール（通常、図５Ａおよび図５Ｂにて配列が記されている多価二重特異性抗体では、図示されているように、Ｇ１またはＧ２）、そして左側に、第三の名称であるカルボキシ末端モジュールがある。各第一アミノ末端モジュールは、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖ＶＲを含み、それぞれは点線の下線で示される。各第二中央モジュールは、Ｇ１またはＧ２と命名され、ＩｇＧ１  ＣＲを含み、多価二重特異性抗体において抗原結合部位を形成しない。ヒンジである、Ｇ１またはＧ２モジュール配列のＣＨ部分２およびＣＨ３部分に、一本線の下線を���いた。ＣＨ１部分はＡＳＴＫ（配列番号３９２）から開始される。Ｇ１モジュールを第三のモジュールと連結するＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列に、二本線の下線を引いた。各第三カルボキシ末端モジュールはこのＧｌｙ−Ｓｅｒリンカー配列の右側にあり、左から右に向かってＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む重鎖ＶＲ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ  ｓｃＦｖリンカー（二重波線の下線）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む軽鎖ＶＲを含むｓｃＦｖを含む。  各アミノ末端またはカルボキシ末端重鎖モジュールの結合特異性は、図５Ａまたは図５Ｂの対応するように命名された軽鎖と同じである。  図５Ａは、以下の成熟抗ＩＧＦ−Ｒ１κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）のアミノ酸（「アミノ酸」）配列を示す。  図５Ｂは、以下の成熟抗ＥｒｂＢ３λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）のアミノ酸配列を示す。  図５Ａおよび図５Ｂの各軽鎖は、左から右に向かって、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３（それぞれ、点線の下線）を含む。ＣＬドメインは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインでは「ＲＴＶＡＡ」（配列番号３９３）から、および抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインでは「ＱＰＫＡＡ」（配列番号３９４）から始まる。  図５Ａおよび図５Ｂの重鎖および軽鎖を含む完全な多価二重特異性抗体を形成するために、各重鎖は、その重鎖のアミノ末端モジュールの名称を共有する軽鎖と共発現される。得られた多価二重特異性抗体はそれぞれ、ＩｇＧ抗体（天然ＩｇＧ抗体と同様に、２つの本質的に同一の抗原結合部位を含む）の形態をとり、そのＩｇＧの２つの重鎖それぞれのカルボキシ末端にはｓｃＦｖが付随している。
【図６Ａ】例となる、６Ａ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ１抗体、および６Ｂ）抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ１抗体の重鎖のアミノ酸配列；ならびに６Ｃ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖ、および６Ｄ）抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖのアミノ酸配列。
【図６Ｂ−１】例となる、６Ａ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ１抗体、および６Ｂ）抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ１抗体の重鎖のアミノ酸配列；ならびに６Ｃ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖ、および６Ｄ）抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖのアミノ酸配列。
【図６Ｂ−２】例となる、６Ａ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ１抗体、および６Ｂ）抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ１抗体の重鎖のアミノ酸配列；ならびに６Ｃ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖ、および６Ｄ）抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖのアミノ酸配列。
【図６Ｃ】例となる、６Ａ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ１抗体、および６Ｂ）抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ１抗体の重鎖のアミノ酸配列；ならびに６Ｃ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖ、および６Ｄ）抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖのアミノ酸配列。
【図６Ｄ−１】例となる、６Ａ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ１抗体、および６Ｂ）抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ１抗体の重鎖のアミノ酸配列；ならびに６Ｃ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖ、および６Ｄ）抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖのアミノ酸配列。
【図６Ｄ−２】例となる、６Ａ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ１抗体、および６Ｂ）抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ１抗体の重鎖のアミノ酸配列；ならびに６Ｃ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖ、および６Ｄ）抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖのアミノ酸配列。
【図７Ａ】ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（１６Ｆ）の重鎖（７Ａ）および軽鎖（７Ｂ）のアミノ酸配列であり、それぞれ成熟抗体には存在しないリーダー配列を有している。重鎖アミノ酸配列（配列番号３００）は、ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２１０）のアミノ酸配列にＮ末端リーダー配列を追加したものである。軽鎖アミノ酸配列（配列番号２９８）は、ＳＦκ軽鎖（配列番号２０２）のアミノ酸配列にＮ末端リーダー配列を追加したものである。リーダー配列には太字の下線が引かれており；それぞれ上部に示される、点線の下線が引かれた配列はＣＤＲであり；リンカー（ヒンジ、連結リンカーおよびｓｃＦｖリンカー）はそれらの太字の配列の上部に示され、各々のＣＨ３アミノ酸残基のＥ３５６およびＭ３５８は太字になっている（これらは以下の通りに置換されている可能性があるアミノ酸である：Ｅ３５６ＤおよびＭ３５８Ｌ）。図７ＡにおけるＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＶＨおよびＶＬドメイン、ならびに図７ＢにおけるＣＬドメインのアイデンティティは、各ドメインの上部に示されており、それぞれの開始点は直角を有する矢印で示されている。
【図７Ｂ】ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（１６Ｆ）の重鎖（７Ａ）および軽鎖（７Ｂ）のアミノ酸配列であり、それぞれ成熟抗体には存在しないリーダー配列を有している。重鎖アミノ酸配列（配列番号３００）は、ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２１０）のアミノ酸配列にＮ末端リーダー配列を追加したものである。軽鎖アミノ酸配列（配列番号２９８）は、ＳＦκ軽鎖（配列番号２０２）のアミノ酸配列にＮ末端リーダー配列を追加したものである。リーダー配列には太字の下線が引かれており；それぞれ上部に示される、点線の下線が引かれた配列はＣＤＲであり；リンカー（ヒンジ、連結リンカーおよびｓｃＦｖリンカー）はそれらの太字の配列の上部に示され、各々のＣＨ３アミノ酸残基のＥ３５６およびＭ３５８は太字になっている（これらは以下の通りに置換されている可能性があるアミノ酸である：Ｅ３５６ＤおよびＭ３５８Ｌ）。図７ＡにおけるＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＶＨおよびＶＬドメイン、ならびに図７ＢにおけるＣＬドメインのアイデンティティは、各ドメインの上部に示されており、それぞれの開始点は直角を有する矢印で示されている。
【図８】Ｉｇ様四価二重特異性抗体のモジュールの誘導を示す概略図。結合ドメイン（「Ｎ末端モジュール」および「Ｃ末端モジュール」）が由来する抗体は、モノクローナル抗体１およびモノクローナル抗体２と標識されている。図およびモジュールは概念的な性質のものであり、そのような二重特異性抗体を作成するために連結される実際のＤＮＡ断片はモジュールの境界と一致していない場合があるが、最終的な結果物は本質的に示されている通りのものである。さらに、モノクローナル抗体１およびモノクローナル抗体２は、示されているようなＩｇＧ型でなくてもよく、例えば、一方または両方とも、ｓｃＦｖであってもよい。ｓｃＦｖは、Ｎ末端モジュールの源として使用される場合、ｓｃＦｖリンカーをコードするＤＮＡ配列を除去して、重鎖および軽鎖のポリペプチド鎖それぞれに含まれるＶＨ領域およびＶＬ領域を得ることにより、ｓｃＦｖ型からＦｖ型に変換される。
【図９Ａ】ＥｒｂＢネットワークのシミュレーションにより、最適なＥｒｂＢ３治療薬の設計が予想される。（９Ａ）  図解して示されるＥｒｂＢネットワークの複雑性：リガンド結合、受容体二量体化、受容体輸送および細胞内シグナル伝達はそれぞれ、質量作用に基づく動態モデルに捕捉された。（９Ｂ）  ＥｒｂＢネットワークにおける各タンパク質のシミュレーションされた攪乱は、ヘレグリン刺激下またはベータセルリン刺激下での、各タンパク質に対する、下流シグナルであるリン酸化Ａｋｔの感受性を特定するために使用された。ヘレグリン（９Ｃ）刺激下またはベータセルリン（９Ｄ）刺激下での抗ＥｒｂＢ３抗体に対するＡｋｔの用量反応性が、解離速度の変動を介して、種々の親和結合定数について調べられた。各グラフに列挙されたＫｄの上から下への順番は、各グラフにおける曲線の左から右への順番に対応している。
【図９Ｂ】ＥｒｂＢネットワークのシミュレーションにより、最適なＥｒｂＢ３治療薬の設計が予想される。（９Ａ）  図解して示されるＥｒｂＢネットワークの複雑性：リガンド結合、受容体二量体化、受容体輸送および細胞内シグナル伝達はそれぞれ、質量作用に基づく動態モデルに捕捉された。（９Ｂ）  ＥｒｂＢネットワークにおける各タンパク質のシミュレーションされた攪乱は、ヘレグリン刺激下またはベータセルリン刺激下での、各タンパク質に対する、下流シグナルであるリン酸化Ａｋｔの感受性を特定するために使用された。ヘレグリン（９Ｃ）刺激下またはベータセルリン（９Ｄ）刺激下での抗ＥｒｂＢ３抗体に対するＡｋｔの用量反応性が、解離速度の変動を介して、種々の親和結合定数について調べられた。各グラフに列挙されたＫｄの上から下への順番は、各グラフにおける曲線の左から右への順番に対応している。
【図９Ｃ】ＥｒｂＢネットワークのシミュレーションにより、最適なＥｒｂＢ３治療薬の設計が予想される。（９Ａ）  図解して示されるＥｒｂＢネットワークの複雑性：リガンド結合、受容体二量体化、受容体輸送および細胞内シグナル伝達はそれぞれ、質量作用に基づく動態モデルに捕捉された。（９Ｂ）  ＥｒｂＢネットワークにおける各タンパク質のシミュレーションされた攪乱は、ヘレグリン刺激下またはベータセルリン刺激下での、各タンパク質に対する、下流シグナルであるリン酸化Ａｋｔの感受性を特定するために使用された。ヘレグリン（９Ｃ）刺激下またはベータセルリン（９Ｄ）刺激下での抗ＥｒｂＢ３抗体に対するＡｋｔの用量反応性が、解離速度の変動を介して、種々の親和結合定数について調べられた。各グラフに列挙されたＫｄの上から下への順番は、各グラフにおける曲線の左から右への順番に対応している。
【図９Ｄ】ＥｒｂＢネットワークのシミュレーションにより、最適なＥｒｂＢ３治療薬の設計が予想される。（９Ａ）  図解して示されるＥｒｂＢネットワークの複雑性：リガンド結合、受容体二量体化、受容体輸送および細胞内シグナル伝達はそれぞれ、質量作用に基づく動態モデルに捕捉された。（９Ｂ）  ＥｒｂＢネットワークにおける各タンパク質のシミュレーションされた攪乱は、ヘレグリン刺激下またはベータセルリン刺激下での、各タンパク質に対する、下流シグナルであるリン酸化Ａｋｔの感受性を特定するために使用された。ヘレグリン（９Ｃ）刺激下またはベータセルリン（９Ｄ）刺激下での抗ＥｒｂＢ３抗体に対するＡｋｔの用量反応性が、解離速度の変動を介して、種々の親和結合定数について調べられた。各グラフに列挙されたＫｄの上から下への順番は、各グラフにおける曲線の左から右への順番に対応している。
【図１０Ａ】２つの経路を同時に阻害する二重特異性抗体の能力は、相対的な受容体レベルに依存することが予測される。計算によりシミュレートされた、（Ａ）ＩＧＦ‐１Ｒ、（Ｂ）ＥｒｂＢ３、および（Ｃ）共通の下流シグナル経路要素であるＡｋｔ（Ａｋｔキナーゼ）の活性レベルに対する二重特異性抗体の作用を、各受容体を他に対し３つの異なるモル比で発現する細胞について、計算によりシミュレートした。各グラフ中の３本の曲線は、それらの各右側末端がグラフのボーダー（boarder）と交わる相対位置により特定することができる。左端ｘ軸／最底部ｙ軸交差曲線＝ＩＧＦ‐１ＲがＥｒｂＢ３よりも１０倍より多いというシミュレーション、中央交差曲線＝ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３が同レベルというシミュレーション、右端ｘ軸／最上部ｙ軸交差曲線＝ＥｒｂＢ３がＩＧＦ‐１Ｒよりも１０倍より多いというシミュレーション。ＩＧＦ‐１Ｒに対する二重特異性抗体のより低い親和性のため、ＩＧＦ‐１Ｒ阻害の作用強度は、ＥｒｂＢ３レベルが減少すると減少し、このことは、結合活性の影響を示している。ＩＧＦ‐１Ｒを強力に阻害できないことは、ｐＡｋｔ阻害能の減少につながる（右）。ＥｒｂＢ３に対する二重特異性のより強力な親和性のため、ＥｒｂＢ３阻害能はＩＧＦ‐１Ｒのレベルに影響されない。
【図１０Ｂ】２つの経路を同時に阻害する二重特異性抗体の能力は、相対的な受容体レベルに依存することが予測される。計算によりシミュレートされた、（Ａ）ＩＧＦ‐１Ｒ、（Ｂ）ＥｒｂＢ３、および（Ｃ）共通の下流シグナル経路要素であるＡｋｔ（Ａｋｔキナーゼ）の活性レベルに対する二重特異性抗体の作用を、各受容体を他に対し３つの異なるモル比で発現する細胞について、計算によりシミュレートした。各グラフ中の３本の曲線は、それらの各右側末端がグラフのボーダー（boarder）と交わる相対位置により特定することができる。左端ｘ軸／最底部ｙ軸交差曲線＝ＩＧＦ‐１ＲがＥｒｂＢ３よりも１０倍より多いというシミュレーション、中央交差曲線＝ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３が同レベルというシミュレーション、右端ｘ軸／最上部ｙ軸交差曲線＝ＥｒｂＢ３がＩＧＦ‐１Ｒよりも１０倍より多いというシミュレーション。ＩＧＦ‐１Ｒに対する二重特異性抗体のより低い親和性のため、ＩＧＦ‐１Ｒ阻害の作用強度は、ＥｒｂＢ３レベルが減少すると減少し、このことは、結合活性の影響を示している。ＩＧＦ‐１Ｒを強力に阻害できないことは、ｐＡｋｔ阻害能の減少につながる（右）。ＥｒｂＢ３に対する二重特異性のより強力な親和性のため、ＥｒｂＢ３阻害能はＩＧＦ‐１Ｒのレベルに影響されない。
【図１０Ｃ】２つの経路を同時に阻害する二重特異性抗体の能力は、相対的な受容体レベルに依存することが予測される。計算によりシミュレートされた、（Ａ）ＩＧＦ‐１Ｒ、（Ｂ）ＥｒｂＢ３、および（Ｃ）共通の下流シグナル経路要素であるＡｋｔ（Ａｋｔキナーゼ）の活性レベルに対する二重特異性抗体の作用を、各受容体を他に対し３つの異なるモル比で発現する細胞について、計算によりシミュレートした。各グラフ中の３本の曲線は、それらの各右側末端がグラフのボーダー（boarder）と交わる相対位置により特定することができる。左端ｘ軸／最底部ｙ軸交差曲線＝ＩＧＦ‐１ＲがＥｒｂＢ３よりも１０倍より多いというシミュレーション、中央交差曲線＝ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３が同レベルというシミュレーション、右端ｘ軸／最上部ｙ軸交差曲線＝ＥｒｂＢ３がＩＧＦ‐１Ｒよりも１０倍より多いというシミュレーション。ＩＧＦ‐１Ｒに対する二重特異性抗体のより低い親和性のため、ＩＧＦ‐１Ｒ阻害の作用強度は、ＥｒｂＢ３レベルが減少すると減少し、このことは、結合活性の影響を示している。ＩＧＦ‐１Ｒを強力に阻害できないことは、ｐＡｋｔ阻害能の減少につながる（右）。ＥｒｂＢ３に対する二重特異性のより強力な親和性のため、ＥｒｂＢ３阻害能はＩＧＦ‐１Ｒのレベルに影響されない。
【図１１Ａ】共有結合的酵母ディスプレイによるｓｃＦｖの親和性および安定性の同時最適化。（１１Ａ）  蛍光標識細胞分取で測定された、可溶性ＧＦＲ２（ＥｒｂＢ３）−Ｆｃに対する、熱暴露による単離後に酵母ディスプレイされたｓｃＦｖモジュールの親和性。（１１Ｂ）  酵母表面に共有結合した最適化ｓｃＦｖモジュールに対する熱暴露アッセイにより、それらのより高い熱安定性が確認される。６５℃、５分間の熱ストレス後に残るＥｒｂＢ３−Ｆｃに対する残留結合活性を、蛍光標識細胞分取で測定した。ＭＦＩは、平均蛍光強度である。
【図１１Ｂ】共有結合的酵母ディスプレイによるｓｃＦｖの親和性および安定性の同時最適化。（１１Ａ）  蛍光標識細胞分取で測定された、可溶性ＧＦＲ２（ＥｒｂＢ３）−Ｆｃに対する、熱暴露による単離後に酵母ディスプレイされたｓｃＦｖモジュールの親和性。（１１Ｂ）  酵母表面に共有結合した最適化ｓｃＦｖモジュールに対する熱暴露アッセイにより、それらのより高い熱安定性が確認される。６５℃、５分間の熱ストレス後に残るＥｒｂＢ３−Ｆｃに対する残留結合活性を、蛍光標識細胞分取で測定した。ＭＦＩは、平均蛍光強度である。
【図１２Ａ】血清中の安定性を推定するために、示差走査型蛍光を利用することができる。（１２Ａ）  示差走査型蛍光定量法による、顕微鏡レベルの安定性の測定。（１２Ｂ）  マウス血清中３７℃で３日間インキュベートの前（１００％）および後の結合活性の割合により測定された、顕微鏡レベルの安定性。概念を実証するための（proof-of-concept）二重特異性タンパク質は、微視的性質（Ａ）および巨視的性質（Ｂ）の両方において、安定化類似体と比較して、より劣る安定性を示す。
【図１２Ｂ】血清中の安定性を推定するために、示差走査型蛍光を利用することができる。（１２Ａ）  示差走査型蛍光定量法による、顕微鏡レベルの安定性の測定。（１２Ｂ）  マウス血清中３７℃で３日間インキュベートの前（１００％）および後の結合活性の割合により測定された、顕微鏡レベルの安定性。概念を実証するための（proof-of-concept）二重特異性タンパク質は、微視的性質（Ａ）および巨視的性質（Ｂ）の両方において、安定化類似体と比較して、より劣る安定性を示す。
【図１３】最適化した二重特異性抗体は、概念を実証するための二重特異性抗体と比較して、より強力な細胞結合を示す。ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３の両方を発現するＢｘＰＣ‐３細胞への結合を、蛍光標識細胞分取で測定した。
【図１４Ａ】ＡＤＲｒ細胞およびＭＣＦ７細胞への結合。（１４Ａ）  ＡＤＲｒ細胞への結合。この図および下記の図１４Ｂ、１８、１９、２０Ａおよび２０Ｂで使用される場合、「モジュール２−２１のＩｇＧ」とは、ＩＬＥ‐１２におけるものと同じ抗ＥｒｂＢ３  ＶＲを有する抗ＥｒｂＢ３抗体を意味する。「モジュール２−３のＩｇＧ」とは、ＥＬＩ-７およびＩＬＥ‐１０におけるものと同じ抗ＥｒｂＢ３  ＶＲを有する抗ＥｒｂＢ３抗体を意味する。「モジュール５−７のＩｇＧ」とは、ＥＬＩ-７、ＩＬＥ‐１０およびＩＬＥ‐１２におけるものと同じ抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＲを有する抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体を意味する。（１４Ｂ）  ＭＣ７  細胞への結合。
【図１４Ｂ】ＡＤＲｒ細胞およびＭＣＦ７細胞への結合。（１４Ａ）  ＡＤＲｒ細胞への結合。この図および下記の図１４Ｂ、１８、１９、２０Ａおよび２０Ｂで使用される場合、「モジュール２−２１のＩｇＧ」とは、ＩＬＥ‐１２におけるものと同じ抗ＥｒｂＢ３  ＶＲを有する抗ＥｒｂＢ３抗体を意味する。「モジュール２−３のＩｇＧ」とは、ＥＬＩ-７およびＩＬＥ‐１０におけるものと同じ抗ＥｒｂＢ３  ＶＲを有する抗ＥｒｂＢ３抗体を意味する。「モジュール５−７のＩｇＧ」とは、ＥＬＩ-７、ＩＬＥ‐１０およびＩＬＥ‐１２におけるものと同じ抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＲを有する抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体を意味する。（１４Ｂ）  ＭＣ７  細胞への結合。
【図１５】ＩＬＥ‐７およびＥＬＩ-７によるｐＡＫＴ阻害。
【図１６】ＤＵ１４５細胞の増殖に対するＥＬＩ-７の作用（ＣＴＧアッセイにより測定）。ＲＬＵは相対発光量である。
【図１７】ＣＴＧアッセイにより測定された、ＥＬＩ-７によるＢｘＰＣ‐３細胞増殖の阻害。
【図１８】異種移植片の腫瘍増殖曲線。ＩｇＧ抗体の説明は、図１４Ａのレ凡例に記される。
【図１９】ＢｘＰＣ‐３の、４１日目における、異種移植片の最終腫瘍体積。
【図２０Ａ】異種移植片の腫瘍増殖速度およびサイズ。（２０Ａ）  ＤＵ１４５腫瘍増殖曲線。（２０Ｂ）  ３６日目におけるＤＵ１４５腫瘍体積。
【図２０Ｂ】異種移植片の腫瘍増殖速度およびサイズ。（２０Ａ）  ＤＵ１４５腫瘍増殖曲線。（２０Ｂ）  ３６日目におけるＤＵ１４５腫瘍体積。
【図２１】多価二重特異性抗体は、ＥｒｂＢ３およびＩＧＦ‐１Ｒの広範な受容体レベルの全体に渡って、シグナル伝達を阻害する。ＥＬＩ-７は、ＩＧＦ１ＲおよびＥｒｂＢ３の広範な受容体レベルを含有するよう改変されたＢｘＰＣ‐３細胞株全てにおいて、ｐＡｋｔの阻害を示す。「ＢｘＰＣ‐３−対照」は、ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３のレベルを変化させていないＢｘＰＣ‐３細胞を指す。「ＢｘＰＣ‐３−ＩＧＦ１Ｒ−改変１」は、ＩＧＦ‐１Ｒレベルが３７％だけ減少しているＢｘＰＣ‐３細胞を指す。「ＢｘＰＣ‐３−ＥｒｂＢ３−改変１」は、ＥｒｂＢ３レベルが４８％まで減少しているＢｘＰＣ‐３細胞を指す。「ＢｘＰＣ‐３−ＥｒｂＢ３−改変２」は、ＥｒｂＢ３レベルが８８％まで減少しているＢｘＰＣ‐３細胞を指す。
【図２２】ＢｃＰＣ３細胞における、１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）「再改変二重特異性抗体」およびＥＬＩ-７「元の二重特異性抗体」によるｐＩＧＦ‐１Ｒレベルの減少。
【図２３Ａ】ＢｘＰＣ‐３細胞における、１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ（シクスツムマブ（cixutumumab）；配列番号３２４＋配列番号３２５）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）、または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによる、（２３Ａ）ＩＧＦ１Ｒ、（２３Ｂ）ＥｒｂＢ３、および（２３Ｃ）ＡＫＴのリン酸化の阻害、ならびにＤＵ１４５細胞における、１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ（シクスツムマブ；配列番号３２４＋配列番号３２５）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）、または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによる、（２３Ｄ）ＩＧＦ１Ｒ、（２３Ｅ）ＥｒｂＢ３、および（２３Ｆ）ＡＫＴのリン酸化の阻害。
【図２３Ｂ】ＢｘＰＣ‐３細胞における、１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ（シクスツムマブ（cixutumumab）；配列番号３２４＋配列番号３２５）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）、または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによる、（２３Ａ）ＩＧＦ１Ｒ、（２３Ｂ）ＥｒｂＢ３、および（２３Ｃ）ＡＫＴのリン酸化の阻害、ならびにＤＵ１４５細胞における、１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ（シクスツムマブ；配列番号３２４＋配列番号３２５）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）、または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによる、（２３Ｄ）ＩＧＦ１Ｒ、（２３Ｅ）ＥｒｂＢ３、および（２３Ｆ）ＡＫＴのリン酸化の阻害。
【図２３Ｃ】ＢｘＰＣ‐３細胞における、１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ（シクスツムマブ（cixutumumab）；配列番号３２４＋配列番号３２５）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）、または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによる、（２３Ａ）ＩＧＦ１Ｒ、（２３Ｂ）ＥｒｂＢ３、および（２３Ｃ）ＡＫＴのリン酸化の阻害、ならびにＤＵ１４５細胞における、１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ（シクスツムマブ；配列番号３２４＋配列番号３２５）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）、または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによる、（２３Ｄ）ＩＧＦ１Ｒ、（２３Ｅ）ＥｒｂＢ３、および（２３Ｆ）ＡＫＴのリン酸化の阻害。
【図２３Ｄ】ＢｘＰＣ‐３細胞における、１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ（シクスツムマブ（cixutumumab）；配列番号３２４＋配列番号３２５）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）、または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによる、（２３Ａ）ＩＧＦ１Ｒ、（２３Ｂ）ＥｒｂＢ３、および（２３Ｃ）ＡＫＴのリン酸化の阻害、ならびにＤＵ１４５細胞における、１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ（シクスツムマブ；配列番号３２４＋配列番号３２５）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）、または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによる、（２３Ｄ）ＩＧＦ１Ｒ、（２３Ｅ）ＥｒｂＢ３、および（２３Ｆ）ＡＫＴのリン酸化の阻害。
【図２３Ｅ】ＢｘＰＣ‐３細胞における、１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ（シクスツムマブ（cixutumumab）；配列番号３２４＋配列番号３２５）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）、または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによる、（２３Ａ）ＩＧＦ１Ｒ、（２３Ｂ）ＥｒｂＢ３、および（２３Ｃ）ＡＫＴのリン酸化の阻害、ならびにＤＵ１４５細胞における、１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ（シクスツムマブ；配列番号３２４＋配列番号３２５）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）、または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによる、（２３Ｄ）ＩＧＦ１Ｒ、（２３Ｅ）ＥｒｂＢ３、および（２３Ｆ）ＡＫＴのリン酸化の阻害。
【図２３Ｆ】ＢｘＰＣ‐３細胞における、１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ（シクスツムマブ（cixutumumab）；配列番号３２４＋配列番号３２５）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）、または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによる、（２３Ａ）ＩＧＦ１Ｒ、（２３Ｂ）ＥｒｂＢ３、および（２３Ｃ）ＡＫＴのリン酸化の阻害、ならびにＤＵ１４５細胞における、１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ（シクスツムマブ；配列番号３２４＋配列番号３２５）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）、または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによる、（２３Ｄ）ＩＧＦ１Ｒ、（２３Ｅ）ＥｒｂＢ３、および（２３Ｆ）ＡＫＴのリン酸化の阻害。
【図２４Ａ】１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）によるシグナル伝達阻害（図２４Ａ〜図２４Ｃ）、および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ（ganitumab）；配列番号３２７＋配列番号３２８）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによるシグナル伝達阻害の比較（図２４Ｄ〜図２４Ｆ）。ＩＧＦ１Ｒのリン酸化の阻害は最上段のグラフに示され（図２４Ａおよび図２４Ｄ）、ＥｒｂＢ３のリン酸化の阻害は中段のグラフに示され（図２４Ｂおよび図２４Ｅ）、ＡＫＴのリン酸化の阻害は最下段のグラフに示され（図２４Ｃおよび図２４Ｆ）；全て、ＢｘＰＣ‐３細胞におけるものである。
【図２４Ｂ】１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）によるシグナル伝達阻害（図２４Ａ〜図２４Ｃ）、および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ（ganitumab）；配列番号３２７＋配列番号３２８）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによるシグナル伝達阻害の比較（図２４Ｄ〜図２４Ｆ）。ＩＧＦ１Ｒのリン酸化の阻害は最上段のグラフに示され（図２４Ａおよび図２４Ｄ）、ＥｒｂＢ３のリン酸化の阻害は中段のグラフに示され（図２４Ｂおよび図２４Ｅ）、ＡＫＴのリン酸化の阻害は最下段のグラフに示され（図２４Ｃおよび図２４Ｆ）；全て、ＢｘＰＣ‐３細胞におけるものである。
【図２４Ｃ】１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）によるシグナル伝達阻害（図２４Ａ〜図２４Ｃ）、および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ（ganitumab）；配列番号３２７＋配列番号３２８）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによるシグナル伝達阻害の比較（図２４Ｄ〜図２４Ｆ）。ＩＧＦ１Ｒのリン酸化の阻害は最上段のグラフに示され（図２４Ａおよび図２４Ｄ）、ＥｒｂＢ３のリン酸化の阻害は中段のグラフに示され（図２４Ｂおよび図２４Ｅ）、ＡＫＴのリン酸化の阻害は最下段のグラフに示され（図２４Ｃおよび図２４Ｆ）；全て、ＢｘＰＣ‐３細胞におけるものである。
【図２４Ｄ】１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）によるシグナル伝達阻害（図２４Ａ〜図２４Ｃ）、および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ（ganitumab）；配列番号３２７＋配列番号３２８）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによるシグナル伝達阻害の比較（図２４Ｄ〜図２４Ｆ）。ＩＧＦ１Ｒのリン酸化の阻害は最上段のグラフに示され（図２４Ａおよび図２４Ｄ）、ＥｒｂＢ３のリン酸化の阻害は中段のグラフに示され（図２４Ｂおよび図２４Ｅ）、ＡＫＴのリン酸化の阻害は最下段のグラフに示され（図２４Ｃおよび図２４Ｆ）；全て、ＢｘＰＣ‐３細胞におけるものである。
【図２４Ｅ】１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）によるシグナル伝達阻害（図２４Ａ〜図２４Ｃ）、および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ（ganitumab）；配列番号３２７＋配列番号３２８）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによるシグナル伝達阻害の比較（図２４Ｄ〜図２４Ｆ）。ＩＧＦ１Ｒのリン酸化の阻害は最上段のグラフに示され（図２４Ａおよび図２４Ｄ）、ＥｒｂＢ３のリン酸化の阻害は中段のグラフに示され（図２４Ｂおよび図２４Ｅ）、ＡＫＴのリン酸化の阻害は最下段のグラフに示され（図２４Ｃおよび図２４Ｆ）；全て、ＢｘＰＣ‐３細胞におけるものである。
【図２４Ｆ】１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）によるシグナル伝達阻害（図２４Ａ〜図２４Ｃ）、および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ（ganitumab）；配列番号３２７＋配列番号３２８）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａによるシグナル伝達阻害の比較（図２４Ｄ〜図２４Ｆ）。ＩＧＦ１Ｒのリン酸化の阻害は最上段のグラフに示され（図２４Ａおよび図２４Ｄ）、ＥｒｂＢ３のリン酸化の阻害は中段のグラフに示され（図２４Ｂおよび図２４Ｅ）、ＡＫＴのリン酸化の阻害は最下段のグラフに示され（図２４Ｃおよび図２４Ｆ）；全て、ＢｘＰＣ‐３細胞におけるものである。
【図２５】二重特異性抗体はＢｘＰＣ‐３細胞に対し強力な結合性を示す。ＦＡＣＳ測定による、ＢｘＰＣ‐３細胞と共に表示の抗体をインキュベートした後に作製された結合曲線。
【図２６】二重特異性抗体は、組換えＥｒｂＢ３タンパク質に対し強力な結合性を示す。ＥｒｂＢ３−Ｈｉｓ−コートプレート中で表示の抗体をインキュベートした後に作製された結合曲線、および結合した抗体レベルのＥＬＩＳＡ測定。
【図２７Ａ】二重特異性抗体は、二重経路シグナル伝達の強力な阻害を示す。図で示される通りの、ｐＩＧＦ１Ｒ（図２７Ａ）、ｐＥｒｂＢ３（図２７Ｂ）、およびｐＡＫＴ（図２７Ｃ）の生成のＢｘＰＣ‐３シグナル阻害。
【図２７Ｂ】二重特異性抗体は、二重経路シグナル伝達の強力な阻害を示す。図で示される通りの、ｐＩＧＦ１Ｒ（図２７Ａ）、ｐＥｒｂＢ３（図２７Ｂ）、およびｐＡＫＴ（図２７Ｃ）の生成のＢｘＰＣ‐３シグナル阻害。
【図２７Ｃ】二重特異性抗体は、二重経路シグナル伝達の強力な阻害を示す。図で示される通りの、ｐＩＧＦ１Ｒ（図２７Ａ）、ｐＥｒｂＢ３（図２７Ｂ）、およびｐＡＫＴ（図２７Ｃ）の生成のＢｘＰＣ‐３シグナル阻害。
【図２８】３７℃、７２時間の血清中での、表示の二重特異性抗体の安定性の割合（％）。
【図２９Ａ】ＦＡＣＳにより測定された、ＢｘＰＣ‐３細胞に対する、種々の二重特異性抗体（図示）の結合。（２９Ａ）において、Ｍ２７／Ｍ７−ＩｇＧ−Ｐ４、Ｍ２７／Ｍ７−ＩｇＧ−Ｍ５７、およびＭ２７／Ｍ７−ＩｇＧ−Ｍ７８二重特異性抗体のＮ末端モジュールは、Ｍ２７重鎖およびＭ７軽鎖を含有している。
【図２９Ｂ】ＦＡＣＳにより測定された、ＢｘＰＣ‐３細胞に対する、種々の二重特異性抗体（図示）の結合。（２９Ａ）において、Ｍ２７／Ｍ７−ＩｇＧ−Ｐ４、Ｍ２７／Ｍ７−ＩｇＧ−Ｍ５７、およびＭ２７／Ｍ７−ＩｇＧ−Ｍ７８二重特異性抗体のＮ末端モジュールは、Ｍ２７重鎖およびＭ７軽鎖を含有している。
【図２９Ｃ】ＦＡＣＳにより測定された、ＢｘＰＣ‐３細胞に対する、種々の二重特異性抗体（図示）の結合。（２９Ａ）において、Ｍ２７／Ｍ７−ＩｇＧ−Ｐ４、Ｍ２７／Ｍ７−ＩｇＧ−Ｍ５７、およびＭ２７／Ｍ７−ＩｇＧ−Ｍ７８二重特異性抗体のＮ末端モジュールは、Ｍ２７重鎖およびＭ７軽鎖を含有している。
【図２９Ｄ】ＦＡＣＳにより測定された、ＢｘＰＣ‐３細胞に対する、種々の二重特異性抗体（図示）の結合。（２９Ａ）において、Ｍ２７／Ｍ７−ＩｇＧ−Ｐ４、Ｍ２７／Ｍ７−ＩｇＧ−Ｍ５７、およびＭ２７／Ｍ７−ＩｇＧ−Ｍ７８二重特異性抗体のＮ末端モジュールは、Ｍ２７重鎖およびＭ７軽鎖を含有している。
【図３０Ａ】ｐＩＧＦ１Ｒレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３０Ｂ】ｐＩＧＦ１Ｒレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３０Ｃ】ｐＩＧＦ１Ｒレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３０Ｄ】ｐＩＧＦ１Ｒレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３０Ｅ】ｐＩＧＦ１Ｒレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３０Ｆ】ｐＩＧＦ１Ｒレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３０Ｇ】ｐＩＧＦ１Ｒレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３０Ｈ】ｐＩＧＦ１Ｒレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３０Ｉ】ｐＩＧＦ１Ｒレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３１Ａ】ｐＥｒｂＢ３レベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３１Ｂ】ｐＥｒｂＢ３レベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３１Ｃ】ｐＥｒｂＢ３レベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３１Ｄ】ｐＥｒｂＢ３レベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３１Ｅ】ｐＥｒｂＢ３レベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３１Ｆ】ｐＥｒｂＢ３レベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３１Ｇ】ｐＥｒｂＢ３レベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３１Ｈ】ｐＥｒｂＢ３レベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３１Ｉ】ｐＥｒｂＢ３レベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３１Ｊ】ｐＥｒｂＢ３レベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３１Ｋ】ｐＥｒｂＢ３レベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３２Ａ】ｐＡＫＴレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３２Ｂ】ｐＡＫＴレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３２Ｃ】ｐＡＫＴレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３２Ｄ】ｐＡＫＴレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３２Ｅ】ｐＡＫＴレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３２Ｆ】ｐＡＫＴレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３２Ｇ】ｐＡＫＴレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３２Ｈ】ｐＡＫＴレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３２Ｉ】ｐＡＫＴレベルの変化により測定された、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ。
【図３３Ａ】Ａ〜Ｄは、ｐＩＧＦ１Ｒレベルの変化によって測定された、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）の組み合わせと比較した場合の、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータを示す。
【図３３Ｂ】Ａ〜Ｄは、ｐＩＧＦ１Ｒレベルの変化によって測定された、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）の組み合わせと比較した場合の、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータを示す。
【図３３Ｃ】Ａ〜Ｄは、ｐＩＧＦ１Ｒレベルの変化によって測定された、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）の組み合わせと比較した場合の、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータを示す。
【図３３Ｄ】Ａ〜Ｄは、ｐＩＧＦ１Ｒレベルの変化によって測定された、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）の組み合わせと比較した場合の、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータを示す。
【図３４Ａ】Ａ〜Ｄは、ｐＥｒｂＢ３レベルの変化によって測定された、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）の組み合わせと比較した場合の、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータを示す。
【図３４Ｂ】Ａ〜Ｄは、ｐＥｒｂＢ３レベルの変化によって測定された、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）の組み合わせと比較した場合の、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータを示す。
【図３４Ｃ】Ａ〜Ｄは、ｐＥｒｂＢ３レベルの変化によって測定された、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）の組み合わせと比較した場合の、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータを示す。
【図３４Ｄ】Ａ〜Ｄは、ｐＥｒｂＢ３レベルの変化によって測定された、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）の組み合わせと比較した場合の、種々の二重特異性抗体（図示）についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータを示す。
【図３５Ａ】Ａ〜Ｄは、ｐＡＫＴレベルの変化によって測定された、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）の組み合わせと比較した場合の、種々の二重特異性抗体についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ示す。
【図３５Ｂ】Ａ〜Ｄは、ｐＡＫＴレベルの変化によって測定された、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）の組み合わせと比較した場合の、種々の二重特異性抗体についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ示す。
【図３５Ｃ】Ａ〜Ｄは、ｐＡＫＴレベルの変化によって測定された、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）の組み合わせと比較した場合の、種々の二重特異性抗体についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ示す。
【図３５Ｄ】Ａ〜Ｄは、ｐＡＫＴレベルの変化によって測定された、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）の組み合わせと比較した場合の、種々の二重特異性抗体についての、ＢｘＰＣ‐３シグナル阻害のデータ示す。
【図３６Ａ】Ａ〜Ｂは、３７℃、５日間のマウス血清中での、種々の二重特異性抗体（図示）についての、正規化した安定性を示す。
【図３６Ｂ】Ａ〜Ｂは、３７℃、５日間のマウス血清中での、種々の二重特異性抗体（図示）についての、正規化した安定性を示す。
【図３７Ａ】本明細書における開示に従って多価二重特異性抗体に組み込まれ得る、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体の重鎖、軽鎖およびｓｃＦｖの公開されたアミノ酸配列。
【図３７Ｂ】本明細書における開示に従って多価二重特異性抗体に組み込まれ得る、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体の重鎖、軽鎖およびｓｃＦｖの公開されたアミノ酸配列。
【図３７Ｃ】本明細書における開示に従って多価二重特異性抗体に組み込まれ得る、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体の重鎖、軽鎖およびｓｃＦｖの公開されたアミノ酸配列。
【図３８Ａ】本明細書における開示に従って多価二重特異性抗体に組み込まれるべき、抗ＥｒｂＢ３抗体の重鎖、軽鎖およびｓｃＦｖの公開されたアミノ酸配列。
【図３８Ｂ】本明細書における開示に従って多価二重特異性抗体に組み込まれるべき、抗ＥｒｂＢ３抗体の重鎖、軽鎖およびｓｃＦｖの公開されたアミノ酸配列。
【図３８Ｃ】本明細書における開示に従って多価二重特異性抗体に組み込まれるべき、抗ＥｒｂＢ３抗体の重鎖、軽鎖およびｓｃＦｖの公開されたアミノ酸配列。
【図３８Ｄ】本明細書における開示に従って多価二重特異性抗体に組み込まれるべき、抗ＥｒｂＢ３抗体の重鎖、軽鎖およびｓｃＦｖの公開されたアミノ酸配列。
【図３９Ａ】Ａ〜Ｂは、ＡＫＴのリン酸化の阻害によって測定された、ＰＢＡ無し（「ＩＧＦ１＋ＨＲＧ」）；誘導物質およびＰＢＡ無し（「Ｔｘ無し」）；抗ＥＧＦ１Ｒモノクローナル抗体単独；抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体単独；および抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３の組み合わせと比較した場合の、ＰＢＡの（Ａ）Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（「Ｍ７−Ｍ７８」）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（「Ｐ４−Ｍ１．３」）、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（「Ｐ４−Ｃ８」）および（Ｂ）ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（「ＳＦ−Ｃ８」）による、ＤＵ１４５細胞におけるＩＧＦ１およびヘレグリン（ＨＲＧ）シグナル伝達の阻害を示す。Ｃ〜Ｄは、ＢｘＰＣ‐３細胞においてである以外はＡ〜Ｂのものと同様に得られた阻害データを示す。この図ならびに図４０〜４４および図５１における抗ＩＧＦ１Ｒおよび抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体は、それぞれ、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）および抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）である。
【図３９Ｂ】Ａ〜Ｂは、ＡＫＴのリン酸化の阻害によって測定された、ＰＢＡ無し（「ＩＧＦ１＋ＨＲＧ」）；誘導物質およびＰＢＡ無し（「Ｔｘ無し」）；抗ＥＧＦ１Ｒモノクローナル抗体単独；抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体単独；および抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３の組み合わせと比較した場合の、ＰＢＡの（Ａ）Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（「Ｍ７−Ｍ７８」）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（「Ｐ４−Ｍ１．３」）、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（「Ｐ４−Ｃ８」）および（Ｂ）ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（「ＳＦ−Ｃ８」）による、ＤＵ１４５細胞におけるＩＧＦ１およびヘレグリン（ＨＲＧ）シグナル伝達の阻害を示す。Ｃ〜Ｄは、ＢｘＰＣ‐３細胞においてである以外はＡ〜Ｂのものと同様に得られた阻害データを示す。この図ならびに図４０〜４４および図５１における抗ＩＧＦ１Ｒおよび抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体は、それぞれ、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）および抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）である。
【図３９Ｃ】Ａ〜Ｂは、ＡＫＴのリン酸化の阻害によって測定された、ＰＢＡ無し（「ＩＧＦ１＋ＨＲＧ」）；誘導物質およびＰＢＡ無し（「Ｔｘ無し」）；抗ＥＧＦ１Ｒモノクローナル抗体単独；抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体単独；および抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３の組み合わせと比較した場合の、ＰＢＡの（Ａ）Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（「Ｍ７−Ｍ７８」）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（「Ｐ４−Ｍ１．３」）、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（「Ｐ４−Ｃ８」）および（Ｂ）ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（「ＳＦ−Ｃ８」）による、ＤＵ１４５細胞におけるＩＧＦ１およびヘレグリン（ＨＲＧ）シグナル伝達の阻害を示す。Ｃ〜Ｄは、ＢｘＰＣ‐３細胞においてである以外はＡ〜Ｂのものと同様に得られた阻害データを示す。この図ならびに図４０〜４４および図５１における抗ＩＧＦ１Ｒおよび抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体は、それぞれ、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）および抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）である。
【図３９Ｄ】Ａ〜Ｂは、ＡＫＴのリン酸化の阻害によって測定された、ＰＢＡ無し（「ＩＧＦ１＋ＨＲＧ」）；誘導物質およびＰＢＡ無し（「Ｔｘ無し」）；抗ＥＧＦ１Ｒモノクローナル抗体単独；抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体単独；および抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３の組み合わせと比較した場合の、ＰＢＡの（Ａ）Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（「Ｍ７−Ｍ７８」）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（「Ｐ４−Ｍ１．３」）、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（「Ｐ４−Ｃ８」）および（Ｂ）ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（「ＳＦ−Ｃ８」）による、ＤＵ１４５細胞におけるＩＧＦ１およびヘレグリン（ＨＲＧ）シグナル伝達の阻害を示す。Ｃ〜Ｄは、ＢｘＰＣ‐３細胞においてである以外はＡ〜Ｂのものと同様に得られた阻害データを示す。この図ならびに図４０〜４４および図５１における抗ＩＧＦ１Ｒおよび抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体は、それぞれ、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）および抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）である。
【図４０Ａ】Ａ〜Ｃは、ＡＫＴのリン酸化の阻害により測定された、（Ａ〜Ｄ）野生型レベルのＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３；（Ｂ〜Ｅ）約５０％だけ減少したレベルのＩＧＦ‐１Ｒ；または（Ｃ〜Ｆ）約５０％だけ減少したレベルのＥｒｂＢ３を有するＢｘＰＣ‐３細胞における、ＩＧＦ１およびヘレグリン（ＨＲＧ）誘導シグナル伝達の、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８による阻害を示す。
【図４０Ｂ】Ａ〜Ｃは、ＡＫＴのリン酸化の阻害により測定された、（Ａ〜Ｄ）野生型レベルのＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３；（Ｂ〜Ｅ）約５０％だけ減少したレベルのＩＧＦ‐１Ｒ；または（Ｃ〜Ｆ）約５０％だけ減少したレベルのＥｒｂＢ３を有するＢｘＰＣ‐３細胞における、ＩＧＦ１およびヘレグリン（ＨＲＧ）誘導シグナル伝達の、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８による阻害を示す。
【図４０Ｃ】Ａ〜Ｃは、ＡＫＴのリン酸化の阻害により測定された、（Ａ〜Ｄ）野生型レベルのＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３；（Ｂ〜Ｅ）約５０％だけ減少したレベルのＩＧＦ‐１Ｒ；または（Ｃ〜Ｆ）約５０％だけ減少したレベルのＥｒｂＢ３を有するＢｘＰＣ‐３細胞における、ＩＧＦ１およびヘレグリン（ＨＲＧ）誘導シグナル伝達の、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８による阻害を示す。
【図４０Ｄ】Ａ〜Ｃは、ＡＫＴのリン酸化の阻害により測定された、（Ａ〜Ｄ）野生型レベルのＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３；（Ｂ〜Ｅ）約５０％だけ減少したレベルのＩＧＦ‐１Ｒ；または（Ｃ〜Ｆ）約５０％だけ減少したレベルのＥｒｂＢ３を有するＢｘＰＣ‐３細胞における、ＩＧＦ１およびヘレグリン（ＨＲＧ）誘導シグナル伝達の、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８による阻害を示す。
【図４０Ｅ】Ａ〜Ｃは、ＡＫＴのリン酸化の阻害により測定された、（Ａ〜Ｄ）野生型レベルのＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３；（Ｂ〜Ｅ）約５０％だけ減少したレベルのＩＧＦ‐１Ｒ；または（Ｃ〜Ｆ）約５０％だけ減少したレベルのＥｒｂＢ３を有するＢｘＰＣ‐３細胞における、ＩＧＦ１およびヘレグリン（ＨＲＧ）誘導シグナル伝達の、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８による阻害を示す。
【図４０Ｆ】Ａ〜Ｃは、ＡＫＴのリン酸化の阻害により測定された、（Ａ〜Ｄ）野生型レベルのＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３；（Ｂ〜Ｅ）約５０％だけ減少したレベルのＩＧＦ‐１Ｒ；または（Ｃ〜Ｆ）約５０％だけ減少したレベルのＥｒｂＢ３を有するＢｘＰＣ‐３細胞における、ＩＧＦ１およびヘレグリン（ＨＲＧ）誘導シグナル伝達の、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８による阻害を示す。
【図４１Ａ】Ａ〜Ｄは、ＡＫＴのリン酸化の阻害により測定された、ＢｘＰＣ‐３細胞における、（Ａ〜Ｂ）４０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１、または（Ｃ〜Ｄ）４００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１により誘導されるシグナル伝達の、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８による阻害を示す。
【図４１Ｂ】Ａ〜Ｄは、ＡＫＴのリン酸化の阻害により測定された、ＢｘＰＣ‐３細胞における、（Ａ〜Ｂ）４０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１、または（Ｃ〜Ｄ）４００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１により誘導されるシグナル伝達の、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８による阻害を示す。
【図４１Ｃ】Ａ〜Ｄは、ＡＫＴのリン酸化の阻害により測定された、ＢｘＰＣ‐３細胞における、（Ａ〜Ｂ）４０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１、または（Ｃ〜Ｄ）４００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１により誘導されるシグナル伝達の、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８による阻害を示す。
【図４１Ｄ】Ａ〜Ｄは、ＡＫＴのリン酸化の阻害により測定された、ＢｘＰＣ‐３細胞における、（Ａ〜Ｂ）４０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１、または（Ｃ〜Ｄ）４００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１により誘導されるシグナル伝達の、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８による阻害を示す。
【図４２Ａ】Ａ〜Ｄは、ＡＫＴのリン酸化の阻害により測定された、ＢｘＰＣ‐３細胞における、（Ａ〜Ｂ）２０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１、または（Ｃ〜Ｄ）２００ｎｇ／ｍｌのヘレグリン（ＨＲＧ）により誘導されるシグナル伝達の、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８による阻害を示す。
【図４２Ｂ】Ａ〜Ｄは、ＡＫＴのリン酸化の阻害により測定された、ＢｘＰＣ‐３細胞における、（Ａ〜Ｂ）２０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１、または（Ｃ〜Ｄ）２００ｎｇ／ｍｌのヘレグリン（ＨＲＧ）により誘導されるシグナル伝達の、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８による阻害を示す。
【図４２Ｃ】Ａ〜Ｄは、ＡＫＴのリン酸化の阻害により測定された、ＢｘＰＣ‐３細胞における、（Ａ〜Ｂ）２０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１、または（Ｃ〜Ｄ）２００ｎｇ／ｍｌのヘレグリン（ＨＲＧ）により誘導されるシグナル伝達の、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８による阻害を示す。
【図４２Ｄ】Ａ〜Ｄは、ＡＫＴのリン酸化の阻害により測定された、ＢｘＰＣ‐３細胞における、（Ａ〜Ｂ）２０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１、または（Ｃ〜Ｄ）２００ｎｇ／ｍｌのヘレグリン（ＨＲＧ）により誘導されるシグナル伝達の、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８による阻害を示す。
【図４３Ａ】Ａ〜Ｂは、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８と共に１５分間のインキュベートした後（Ａ）、または前記ＰＢＡと共に２４時間インキュベートした後（Ｂ）の、Ａ５４９細胞における基底シグナル伝達の阻害を示す。Ｃ〜Ｄは、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８と共に１５分間のインキュベートした後（Ｃ）、または前記ＰＢＡと共に２４時間インキュベートした後（Ｄ）の、ＢｓＰＣ‐３細胞における基底シグナル伝達の阻害を示す。シグナル伝達は全て、ｐＡＫＴレベルを測定することにより決定される。
【図４３Ｂ】Ａ〜Ｂは、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８と共に１５分間のインキュベートした後（Ａ）、または前記ＰＢＡと共に２４時間インキュベートした後（Ｂ）の、Ａ５４９細胞における基底シグナル伝達の阻害を示す。Ｃ〜Ｄは、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８と共に１５分間のインキュベートした後（Ｃ）、または前記ＰＢＡと共に２４時間インキュベートした後（Ｄ）の、ＢｓＰＣ‐３細胞における基底シグナル伝達の阻害を示す。シグナル伝達は全て、ｐＡＫＴレベルを測定することにより決定される。
【図４３Ｃ】Ａ〜Ｂは、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８と共に１５分間のインキュベートした後（Ａ）、または前記ＰＢＡと共に２４時間インキュベートした後（Ｂ）の、Ａ５４９細胞における基底シグナル伝達の阻害を示す。Ｃ〜Ｄは、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８と共に１５分間のインキュベートした後（Ｃ）、または前記ＰＢＡと共に２４時間インキュベートした後（Ｄ）の、ＢｓＰＣ‐３細胞における基底シグナル伝達の阻害を示す。シグナル伝達は全て、ｐＡＫＴレベルを測定することにより決定される。
【図４３Ｄ】Ａ〜Ｂは、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８と共に１５分間のインキュベートした後（Ａ）、または前記ＰＢＡと共に２４時間インキュベートした後（Ｂ）の、Ａ５４９細胞における基底シグナル伝達の阻害を示す。Ｃ〜Ｄは、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｃ８およびＳＦ−Ｃ８と共に１５分間のインキュベートした後（Ｃ）、または前記ＰＢＡと共に２４時間インキュベートした後（Ｄ）の、ＢｓＰＣ‐３細胞における基底シグナル伝達の阻害を示す。シグナル伝達は全て、ｐＡＫＴレベルを測定することにより決定される。
【図４４Ａ】Ｐ４−Ｇ１−Ｃ３またはＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３での処理の２４時間後の、Ａ５４９細胞（図４４Ａ）およびＢｘＰＣ‐３細胞（図４４Ｂ）における全ＩＧＦ１Ｒレベル。
【図４４Ｂ】Ｐ４−Ｇ１−Ｃ３またはＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３での処理の２４時間後の、Ａ５４９細胞（図４４Ａ）およびＢｘＰＣ‐３細胞（図４４Ｂ）における全ＩＧＦ１Ｒレベル。
【図４５】血清飢餓培養された（「スターブ」）、あるいは単独またはＰＢＡのＰ４−Ｍ１．３もしくはＰ４−Ｃ８存在下で、ＩＧＦ１もしくはＩＧＦ２で処理された、ＤＵ１４５またはＭＩＡ  ＰａＣａ−２（高ＩＲ）細胞における、ｐＩＧＦ１Ｒ、ｐＡＫｔ、およびβアクチンのタンパク質レベルを示すウエスタンブロット。
【図４６】血清飢餓培養された（「スターブ」）、またはＩＧＦ１；Ｐ４−Ｍ１．３存在下のＩＧＦ１；インスリン、もしくはＰ４−Ｍ１．３存在下のインスリンで処理された、ＤＵ１４５細胞における、ｐＩＧＦ１Ｒ、ｐＡＫｔ、およびβアクチンのタンパク質レベルを示すウエスタンブロット。
【図４７】リガンドの非存在下（レーン１〜３）、またはＩＧＦ１およびヘレグリンの存在下で（ＨＲＧ）（レーン４〜６）、ならびにＰＢＡの非存在下、またはＰＢＡのＭ７−７８もしくはＰ４−Ｃ８の存在下で培養された、ＢｘＰＣ‐３細胞における、ＩＧＦ１Ｒ、ｐＩＧＦ１Ｒ、ＥｒｂＢ３、ｐＥｒｂＢ３、ｐＡｋｔおよびβアクチンのタンパク質レベルを示すウエスタンブロット。
【図４８Ａ】Ａ〜Ｆは、マウスまたはカニクイザル血清中で、０日間または５日間のインキュベーション後に存在した、（Ａ〜Ｂ）Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８；（Ｃ〜Ｄ）Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３；（Ｅ〜Ｆ）Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８の量を示す。Ｇ〜Ｈは、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ｇ）またはＥｒｂＢ３（Ｈ）でコートされたプレートにおけるヒト血清中、０日または６日後に存在した、Ｐ４Ｇ１−Ｍ１．３の量を示す。
【図４８Ｂ】Ａ〜Ｆは、マウスまたはカニクイザル血清中で、０日間または５日間のインキュベーション後に存在した、（Ａ〜Ｂ）Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８；（Ｃ〜Ｄ）Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３；（Ｅ〜Ｆ）Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８の量を示す。Ｇ〜Ｈは、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ｇ）またはＥｒｂＢ３（Ｈ）でコートされたプレートにおけるヒト血清中、０日または６日後に存在した、Ｐ４Ｇ１−Ｍ１．３の量を示す。
【図４８Ｃ】Ａ〜Ｆは、マウスまたはカニクイザル血清中で、０日間または５日間のインキュベーション後に存在した、（Ａ〜Ｂ）Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８；（Ｃ〜Ｄ）Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３；（Ｅ〜Ｆ）Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８の量を示す。Ｇ〜Ｈは、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ｇ）またはＥｒｂＢ３（Ｈ）でコートされたプレートにおけるヒト血清中、０日または６日後に存在した、Ｐ４Ｇ１−Ｍ１．３の量を示す。
【図４８Ｄ】Ａ〜Ｆは、マウスまたはカニクイザル血清中で、０日間または５日間のインキュベーション後に存在した、（Ａ〜Ｂ）Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８；（Ｃ〜Ｄ）Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３；（Ｅ〜Ｆ）Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８の量を示す。Ｇ〜Ｈは、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ｇ）またはＥｒｂＢ３（Ｈ）でコートされたプレートにおけるヒト血清中、０日または６日後に存在した、Ｐ４Ｇ１−Ｍ１．３の量を示す。
【図４８Ｅ】Ａ〜Ｆは、マウスまたはカニクイザル血清中で、０日間または５日間のインキュベーション後に存在した、（Ａ〜Ｂ）Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８；（Ｃ〜Ｄ）Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３；（Ｅ〜Ｆ）Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８の量を示す。Ｇ〜Ｈは、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ｇ）またはＥｒｂＢ３（Ｈ）でコートされたプレートにおけるヒト血清中、０日または６日後に存在した、Ｐ４Ｇ１−Ｍ１．３の量を示す。
【図４８Ｆ】Ａ〜Ｆは、マウスまたはカニクイザル血清中で、０日間または５日間のインキュベーション後に存在した、（Ａ〜Ｂ）Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８；（Ｃ〜Ｄ）Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３；（Ｅ〜Ｆ）Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８の量を示す。Ｇ〜Ｈは、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ｇ）またはＥｒｂＢ３（Ｈ）でコートされたプレートにおけるヒト血清中、０日または６日後に存在した、Ｐ４Ｇ１−Ｍ１．３の量を示す。
【図４８Ｇ】Ａ〜Ｆは、マウスまたはカニクイザル血清中で、０日間または５日間のインキュベーション後に存在した、（Ａ〜Ｂ）Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８；（Ｃ〜Ｄ）Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３；（Ｅ〜Ｆ）Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８の量を示す。Ｇ〜Ｈは、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ｇ）またはＥｒｂＢ３（Ｈ）でコートされたプレートにおけるヒト血清中、０日または６日後に存在した、Ｐ４Ｇ１−Ｍ１．３の量を示す。
【図４８Ｈ】Ａ〜Ｆは、マウスまたはカニクイザル血清中で、０日間または５日間のインキュベーション後に存在した、（Ａ〜Ｂ）Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８；（Ｃ〜Ｄ）Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３；（Ｅ〜Ｆ）Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８の量を示す。Ｇ〜Ｈは、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ｇ）またはＥｒｂＢ３（Ｈ）でコートされたプレートにおけるヒト血清中、０日または６日後に存在した、Ｐ４Ｇ１−Ｍ１．３の量を示す。
【図４９Ａ】Ａ〜Ｆは、ＰＢＡのＰ４−Ｃ８（Ａ、Ｄ）、Ｐ４−Ｍ１．３（Ｂ、Ｅ）およびＭ７−Ｍ７８（Ｃ、Ｆ）の、（Ａ〜Ｃ）ヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルＥｒｂＢ３、ならびに（Ｄ〜Ｆ）ヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルＥＧＦ‐１Ｒに対する結合のレベルを示す。Ｍ７−Ｍ７８のラットおよびカニクイザルＩＧＦ‐１Ｒに対する結合は示していない。
【図４９Ｂ】Ａ〜Ｆは、ＰＢＡのＰ４−Ｃ８（Ａ、Ｄ）、Ｐ４−Ｍ１．３（Ｂ、Ｅ）およびＭ７−Ｍ７８（Ｃ、Ｆ）の、（Ａ〜Ｃ）ヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルＥｒｂＢ３、ならびに（Ｄ〜Ｆ）ヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルＥＧＦ‐１Ｒに対する結合のレベルを示す。Ｍ７−Ｍ７８のラットおよびカニクイザルＩＧＦ‐１Ｒに対する結合は示していない。
【図４９Ｃ】Ａ〜Ｆは、ＰＢＡのＰ４−Ｃ８（Ａ、Ｄ）、Ｐ４−Ｍ１．３（Ｂ、Ｅ）およびＭ７−Ｍ７８（Ｃ、Ｆ）の、（Ａ〜Ｃ）ヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルＥｒｂＢ３、ならびに（Ｄ〜Ｆ）ヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルＥＧＦ‐１Ｒに対する結合のレベルを示す。Ｍ７−Ｍ７８のラットおよびカニクイザルＩＧＦ‐１Ｒに対する結合は示していない。
【図４９Ｄ】Ａ〜Ｆは、ＰＢＡのＰ４−Ｃ８（Ａ、Ｄ）、Ｐ４−Ｍ１．３（Ｂ、Ｅ）およびＭ７−Ｍ７８（Ｃ、Ｆ）の、（Ａ〜Ｃ）ヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルＥｒｂＢ３、ならびに（Ｄ〜Ｆ）ヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルＥＧＦ‐１Ｒに対する結合のレベルを示す。Ｍ７−Ｍ７８のラットおよびカニクイザルＩＧＦ‐１Ｒに対する結合は示していない。
【図４９Ｅ】Ａ〜Ｆは、ＰＢＡのＰ４−Ｃ８（Ａ、Ｄ）、Ｐ４−Ｍ１．３（Ｂ、Ｅ）およびＭ７−Ｍ７８（Ｃ、Ｆ）の、（Ａ〜Ｃ）ヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルＥｒｂＢ３、ならびに（Ｄ〜Ｆ）ヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルＥＧＦ‐１Ｒに対する結合のレベルを示す。Ｍ７−Ｍ７８のラットおよびカニクイザルＩＧＦ‐１Ｒに対する結合は示していない。
【図４９Ｆ】Ａ〜Ｆは、ＰＢＡのＰ４−Ｃ８（Ａ、Ｄ）、Ｐ４−Ｍ１．３（Ｂ、Ｅ）およびＭ７−Ｍ７８（Ｃ、Ｆ）の、（Ａ〜Ｃ）ヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルＥｒｂＢ３、ならびに（Ｄ〜Ｆ）ヒト、マウス、ラットおよびカニクイザルＥＧＦ‐１Ｒに対する結合のレベルを示す。Ｍ７−Ｍ７８のラットおよびカニクイザルＩＧＦ‐１Ｒに対する結合は示していない。
【図５０Ａ】Ａ〜Ｂは、プレートに結合しているＩＧＦ‐１Ｒから（Ａ）ＩＧＦ１および（Ｂ）ＩＧＦ２を脱離するのに必要な、ＰＢＡのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３の濃度を示す。
【図５０Ｂ】Ａ〜Ｂは、プレートに結合しているＩＧＦ‐１Ｒから（Ａ）ＩＧＦ１および（Ｂ）ＩＧＦ２を脱離するのに必要な、ＰＢＡのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３の濃度を示す。
【図５１Ａ】Ａ〜Ｆは、ＩＧＦ‐１＋ＨＲＧまたはＩＧＦ‐１＋ＨＲＧ＋Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３で処理されたＢｘＰＣ‐３細胞における、インビトロでの経時、リン酸化ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）、リン酸化ＥｒｂＢ３（Ｂ）、リン酸化Ａｋｔ（Ｃ）、リン酸化ＥＲＫ（ｐ４４／ｐ４２、Ｄ）、リン酸化ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８、Ｅ）、およびリン酸化Ｓ６（Ｓｅｒ２３５／２３６、Ｆ）の（ｎｇ）／全タンパク質（ｍｇ）を示す。
【図５１Ｂ】Ａ〜Ｆは、ＩＧＦ‐１＋ＨＲＧまたはＩＧＦ‐１＋ＨＲＧ＋Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３で処理されたＢｘＰＣ‐３細胞における、インビトロでの経時、リン酸化ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）、リン酸化ＥｒｂＢ３（Ｂ）、リン酸化Ａｋｔ（Ｃ）、リン酸化ＥＲＫ（ｐ４４／ｐ４２、Ｄ）、リン酸化ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８、Ｅ）、およびリン酸化Ｓ６（Ｓｅｒ２３５／２３６、Ｆ）の（ｎｇ）／全タンパク質（ｍｇ）を示す。
【図５１Ｃ】Ａ〜Ｆは、ＩＧＦ‐１＋ＨＲＧまたはＩＧＦ‐１＋ＨＲＧ＋Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３で処理されたＢｘＰＣ‐３細胞における、インビトロでの経時、リン酸化ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）、リン酸化ＥｒｂＢ３（Ｂ）、リン酸化Ａｋｔ（Ｃ）、リン酸化ＥＲＫ（ｐ４４／ｐ４２、Ｄ）、リン酸化ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８、Ｅ）、およびリン酸化Ｓ６（Ｓｅｒ２３５／２３６、Ｆ）の（ｎｇ）／全タンパク質（ｍｇ）を示す。
【図５１Ｄ】Ａ〜Ｆは、ＩＧＦ‐１＋ＨＲＧまたはＩＧＦ‐１＋ＨＲＧ＋Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３で処理されたＢｘＰＣ‐３細胞における、インビトロでの経時、リン酸化ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）、リン酸化ＥｒｂＢ３（Ｂ）、リン酸化Ａｋｔ（Ｃ）、リン酸化ＥＲＫ（ｐ４４／ｐ４２、Ｄ）、リン酸化ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８、Ｅ）、およびリン酸化Ｓ６（Ｓｅｒ２３５／２３６、Ｆ）の（ｎｇ）／全タンパク質（ｍｇ）を示す。
【図５１Ｅ】Ａ〜Ｆは、ＩＧＦ‐１＋ＨＲＧまたはＩＧＦ‐１＋ＨＲＧ＋Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３で処理されたＢｘＰＣ‐３細胞における、インビトロでの経時、リン酸化ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）、リン酸化ＥｒｂＢ３（Ｂ）、リン酸化Ａｋｔ（Ｃ）、リン酸化ＥＲＫ（ｐ４４／ｐ４２、Ｄ）、リン酸化ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８、Ｅ）、およびリン酸化Ｓ６（Ｓｅｒ２３５／２３６、Ｆ）の（ｎｇ）／全タンパク質（ｍｇ）を示す。
【図５１Ｆ】Ａ〜Ｆは、ＩＧＦ‐１＋ＨＲＧまたはＩＧＦ‐１＋ＨＲＧ＋Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３で処理されたＢｘＰＣ‐３細胞における、インビトロでの経時、リン酸化ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）、リン酸化ＥｒｂＢ３（Ｂ）、リン酸化Ａｋｔ（Ｃ）、リン酸化ＥＲＫ（ｐ４４／ｐ４２、Ｄ）、リン酸化ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８、Ｅ）、およびリン酸化Ｓ６（Ｓｅｒ２３５／２３６、Ｆ）の（ｎｇ）／全タンパク質（ｍｇ）を示す。
【図５２】血清、ＩＧＦ１、ＩＧＦ１およびＰ４Ｍ１．３（Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３）、ＩＧＦ２、ＩＧＦ２およびＰ４Ｍ１．３（Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３）、インスリン、ならびにインスリンおよびＰ４Ｍ１．３（Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３）で処理された、ＢｘＰＣ‐３細胞およびＡ６７３細胞における、ｐＩＧＦ１Ｒ、ｐＡＫＴおよびβアクチンのレベル。
【図５３Ａ】Ａ〜Ｂは、ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＢｘＰＣ‐３腫瘍における、ｍＴＯＲ（Ａ）およびリン酸化ｍＴＯＲ（「ｐｍＴＯＲ」）（Ｂ）のレベルを示す。
【図５３Ｂ】Ａ〜Ｂは、ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＢｘＰＣ‐３腫瘍における、ｍＴＯＲ（Ａ）およびリン酸化ｍＴＯＲ（「ｐｍＴＯＲ」）（Ｂ）のレベルを示す。
【図５４Ａ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ、およびｍＴＯＲ阻害剤であるエベロリムスのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＣａｋｉ‐１腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびインスリン受容体（Ｂ）、ＥｒｂＢ３（Ｃ）およびＥＧＦＲ（Ｄ）、Ｓ４７３残基でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｓ４７３」）（Ｅ）およびＴ３０８でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｔ３０８」）（Ｆ）、リン酸化Ｆｏｘ０１およびＦｏｘ０３ａ（「リン酸化Ｆｏｘ０１（Ｔｈｒ２４）／Ｆｏｘ０３ａ（Ｔｈｒ３２）」）、Ｓ２４４８残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｈ）およびＳ２４８１残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｉ）、およびＳ２３５／２３６残基でリン酸化したＳ６（Ｊ）およびＳ２４０／２４４残基でリン酸化したＳ６（Ｋ）、「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」および「ｐＳ６  Ｓ２４０／２４４」））のレベル。
【図５４Ｂ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ、およびｍＴＯＲ阻害剤であるエベロリムスのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＣａｋｉ‐１腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびインスリン受容体（Ｂ）、ＥｒｂＢ３（Ｃ）およびＥＧＦＲ（Ｄ）、Ｓ４７３残基でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｓ４７３」）（Ｅ）およびＴ３０８でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｔ３０８」）（Ｆ）、リン酸化Ｆｏｘ０１およびＦｏｘ０３ａ（「リン酸化Ｆｏｘ０１（Ｔｈｒ２４）／Ｆｏｘ０３ａ（Ｔｈｒ３２）」）、Ｓ２４４８残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｈ）およびＳ２４８１残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｉ）、およびＳ２３５／２３６残基でリン酸化したＳ６（Ｊ）およびＳ２４０／２４４残基でリン酸化したＳ６（Ｋ）、「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」および「ｐＳ６  Ｓ２４０／２４４」））のレベル。
【図５４Ｃ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ、およびｍＴＯＲ阻害剤であるエベロリムスのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＣａｋｉ‐１腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびインスリン受容体（Ｂ）、ＥｒｂＢ３（Ｃ）およびＥＧＦＲ（Ｄ）、Ｓ４７３残基でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｓ４７３」）（Ｅ）およびＴ３０８でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｔ３０８」）（Ｆ）、リン酸化Ｆｏｘ０１およびＦｏｘ０３ａ（「リン酸化Ｆｏｘ０１（Ｔｈｒ２４）／Ｆｏｘ０３ａ（Ｔｈｒ３２）」）、Ｓ２４４８残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｈ）およびＳ２４８１残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｉ）、およびＳ２３５／２３６残基でリン酸化したＳ６（Ｊ）およびＳ２４０／２４４残基でリン酸化したＳ６（Ｋ）、「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」および「ｐＳ６  Ｓ２４０／２４４」））のレベル。
【図５４Ｄ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ、およびｍＴＯＲ阻害剤であるエベロリムスのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＣａｋｉ‐１腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびインスリン受容体（Ｂ）、ＥｒｂＢ３（Ｃ）およびＥＧＦＲ（Ｄ）、Ｓ４７３残基でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｓ４７３」）（Ｅ）およびＴ３０８でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｔ３０８」）（Ｆ）、リン酸化Ｆｏｘ０１およびＦｏｘ０３ａ（「リン酸化Ｆｏｘ０１（Ｔｈｒ２４）／Ｆｏｘ０３ａ（Ｔｈｒ３２）」）、Ｓ２４４８残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｈ）およびＳ２４８１残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｉ）、およびＳ２３５／２３６残基でリン酸化したＳ６（Ｊ）およびＳ２４０／２４４残基でリン酸化したＳ６（Ｋ）、「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」および「ｐＳ６  Ｓ２４０／２４４」））のレベル。
【図５４Ｅ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ、およびｍＴＯＲ阻害剤であるエベロリムスのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＣａｋｉ‐１腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびインスリン受容体（Ｂ）、ＥｒｂＢ３（Ｃ）およびＥＧＦＲ（Ｄ）、Ｓ４７３残基でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｓ４７３」）（Ｅ）およびＴ３０８でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｔ３０８」）（Ｆ）、リン酸化Ｆｏｘ０１およびＦｏｘ０３ａ（「リン酸化Ｆｏｘ０１（Ｔｈｒ２４）／Ｆｏｘ０３ａ（Ｔｈｒ３２）」）、Ｓ２４４８残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｈ）およびＳ２４８１残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｉ）、およびＳ２３５／２３６残基でリン酸化したＳ６（Ｊ）およびＳ２４０／２４４残基でリン酸化したＳ６（Ｋ）、「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」および「ｐＳ６  Ｓ２４０／２４４」））のレベル。
【図５４Ｆ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ、およびｍＴＯＲ阻害剤であるエベロリムスのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＣａｋｉ‐１腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびインスリン受容体（Ｂ）、ＥｒｂＢ３（Ｃ）およびＥＧＦＲ（Ｄ）、Ｓ４７３残基でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｓ４７３」）（Ｅ）およびＴ３０８でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｔ３０８」）（Ｆ）、リン酸化Ｆｏｘ０１およびＦｏｘ０３ａ（「リン酸化Ｆｏｘ０１（Ｔｈｒ２４）／Ｆｏｘ０３ａ（Ｔｈｒ３２）」）、Ｓ２４４８残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｈ）およびＳ２４８１残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｉ）、およびＳ２３５／２３６残基でリン酸化したＳ６（Ｊ）およびＳ２４０／２４４残基でリン酸化したＳ６（Ｋ）、「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」および「ｐＳ６  Ｓ２４０／２４４」））のレベル。
【図５４Ｇ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ、およびｍＴＯＲ阻害剤であるエベロリムスのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＣａｋｉ‐１腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびインスリン受容体（Ｂ）、ＥｒｂＢ３（Ｃ）およびＥＧＦＲ（Ｄ）、Ｓ４７３残基でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｓ４７３」）（Ｅ）およびＴ３０８でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｔ３０８」）（Ｆ）、リン酸化Ｆｏｘ０１およびＦｏｘ０３ａ（「リン酸化Ｆｏｘ０１（Ｔｈｒ２４）／Ｆｏｘ０３ａ（Ｔｈｒ３２）」）、Ｓ２４４８残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｈ）およびＳ２４８１残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｉ）、およびＳ２３５／２３６残基でリン酸化したＳ６（Ｊ）およびＳ２４０／２４４残基でリン酸化したＳ６（Ｋ）、「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」および「ｐＳ６  Ｓ２４０／２４４」））のレベル。
【図５４Ｈ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ、およびｍＴＯＲ阻害剤であるエベロリムスのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＣａｋｉ‐１腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびインスリン受容体（Ｂ）、ＥｒｂＢ３（Ｃ）およびＥＧＦＲ（Ｄ）、Ｓ４７３残基でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｓ４７３」）（Ｅ）およびＴ３０８でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｔ３０８」）（Ｆ）、リン酸化Ｆｏｘ０１およびＦｏｘ０３ａ（「リン酸化Ｆｏｘ０１（Ｔｈｒ２４）／Ｆｏｘ０３ａ（Ｔｈｒ３２）」）、Ｓ２４４８残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｈ）およびＳ２４８１残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｉ）、およびＳ２３５／２３６残基でリン酸化したＳ６（Ｊ）およびＳ２４０／２４４残基でリン酸化したＳ６（Ｋ）、「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」および「ｐＳ６  Ｓ２４０／２４４」））のレベル。
【図５４Ｉ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ、およびｍＴＯＲ阻害剤であるエベロリムスのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＣａｋｉ‐１腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびインスリン受容体（Ｂ）、ＥｒｂＢ３（Ｃ）およびＥＧＦＲ（Ｄ）、Ｓ４７３残基でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｓ４７３」）（Ｅ）およびＴ３０８でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｔ３０８」）（Ｆ）、リン酸化Ｆｏｘ０１およびＦｏｘ０３ａ（「リン酸化Ｆｏｘ０１（Ｔｈｒ２４）／Ｆｏｘ０３ａ（Ｔｈｒ３２）」）、Ｓ２４４８残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｈ）およびＳ２４８１残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｉ）、およびＳ２３５／２３６残基でリン酸化したＳ６（Ｊ）およびＳ２４０／２４４残基でリン酸化したＳ６（Ｋ）、「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」および「ｐＳ６  Ｓ２４０／２４４」））のレベル。
【図５４Ｊ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ、およびｍＴＯＲ阻害剤であるエベロリムスのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＣａｋｉ‐１腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびインスリン受容体（Ｂ）、ＥｒｂＢ３（Ｃ）およびＥＧＦＲ（Ｄ）、Ｓ４７３残基でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｓ４７３」）（Ｅ）およびＴ３０８でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｔ３０８」）（Ｆ）、リン酸化Ｆｏｘ０１およびＦｏｘ０３ａ（「リン酸化Ｆｏｘ０１（Ｔｈｒ２４）／Ｆｏｘ０３ａ（Ｔｈｒ３２）」）、Ｓ２４４８残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｈ）およびＳ２４８１残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｉ）、およびＳ２３５／２３６残基でリン酸化したＳ６（Ｊ）およびＳ２４０／２４４残基でリン酸化したＳ６（Ｋ）、「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」および「ｐＳ６  Ｓ２４０／２４４」））のレベル。
【図５４Ｋ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ、およびｍＴＯＲ阻害剤であるエベロリムスのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＣａｋｉ‐１腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびインスリン受容体（Ｂ）、ＥｒｂＢ３（Ｃ）およびＥＧＦＲ（Ｄ）、Ｓ４７３残基でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｓ４７３」）（Ｅ）およびＴ３０８でリン酸化したＡＫＴ（「ｐＡＫＴ  Ｔ３０８」）（Ｆ）、リン酸化Ｆｏｘ０１およびＦｏｘ０３ａ（「リン酸化Ｆｏｘ０１（Ｔｈｒ２４）／Ｆｏｘ０３ａ（Ｔｈｒ３２）」）、Ｓ２４４８残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｈ）およびＳ２４８１残基でリン酸化したｍＴＯＲ（Ｉ）、およびＳ２３５／２３６残基でリン酸化したＳ６（Ｊ）およびＳ２４０／２４４残基でリン酸化したＳ６（Ｋ）、「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」および「ｐＳ６  Ｓ２４０／２４４」））のレベル。
【図５５Ａ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＢｘＰＣ‐３腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびＥｒｂＢ３（Ｂ）、リン酸化ＥＧＦＲ（「ｐＥＧＦＲ」）（Ｃ）、およびリン酸化ｍＴＯＲ（「ｐｍＴＯＲ  Ｓ２４４８」）（Ｄ）およびリン酸化Ｓ６（「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」）（Ｅ）のレベル。
【図５５Ｂ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＢｘＰＣ‐３腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびＥｒｂＢ３（Ｂ）、リン酸化ＥＧＦＲ（「ｐＥＧＦＲ」）（Ｃ）、およびリン酸化ｍＴＯＲ（「ｐｍＴＯＲ  Ｓ２４４８」）（Ｄ）およびリン酸化Ｓ６（「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」）（Ｅ）のレベル。
【図５５Ｃ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＢｘＰＣ‐３腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびＥｒｂＢ３（Ｂ）、リン酸化ＥＧＦＲ（「ｐＥＧＦＲ」）（Ｃ）、およびリン酸化ｍＴＯＲ（「ｐｍＴＯＲ  Ｓ２４４８」）（Ｄ）およびリン酸化Ｓ６（「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」）（Ｅ）のレベル。
【図５５Ｄ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＢｘＰＣ‐３腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびＥｒｂＢ３（Ｂ）、リン酸化ＥＧＦＲ（「ｐＥＧＦＲ」）（Ｃ）、およびリン酸化ｍＴＯＲ（「ｐｍＴＯＲ  Ｓ２４４８」）（Ｄ）およびリン酸化Ｓ６（「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」）（Ｅ）のレベル。
【図５５Ｅ】ＰＢＳ、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａのうちの１種を注射されたマウスの、研究終了時のＢｘＰＣ‐３腫瘍における、ＩＧＦ‐１Ｒ（Ａ）およびＥｒｂＢ３（Ｂ）、リン酸化ＥＧＦＲ（「ｐＥＧＦＲ」）（Ｃ）、およびリン酸化ｍＴＯＲ（「ｐｍＴＯＲ  Ｓ２４４８」）（Ｄ）およびリン酸化Ｓ６（「ｐＳ６  Ｓ２３５／２３６」）（Ｅ）のレベル。
【図５６Ａ】プレートがＩＧＦ‐１Ｒ−Ｈｉｓでコートされ、連続希釈したＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３がウェルに添加されたＥＬＩＳＡアッセイにおける、ＩＧＦ‐１（「ＩＧＦ１」、左パネル）（Ａ）およびＩＧＦ−２（「ＩＧＦ２」、右パネル）（Ｂ）のレベル。
【図５６Ｂ】プレートがＩＧＦ‐１Ｒ−Ｈｉｓでコートされ、連続希釈したＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３がウェルに添加されたＥＬＩＳＡアッセイにおける、ＩＧＦ‐１（「ＩＧＦ１」、左パネル）（Ａ）およびＩＧＦ−２（「ＩＧＦ２」、右パネル）（Ｂ）のレベル。
【図５７Ａ】Ａ〜Ｄは、ＤＵ１４５（Ａ）、ＢｘＰＣ‐３（Ｂ）、ＳＫ−ＥＳ−１（Ｃ）、およびＣａｋｉ‐１（Ｄ）異種移植モデルにおける、経時的な平均腫瘍体積を示す。ＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、または１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８（Ａ）、ＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、３７５μｇの抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）、２２５μｇの抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）、または７５μｇの抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）（Ｂ）、ＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、または１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３（Ｃ）、またはＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、等暴露投与量の（equal  exposure  dosing）抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３、または等モル投与量の（equimolar  dosing）抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３（Ｄ）のうちの１種を、マウスに注射した。
【図５７Ｂ】Ａ〜Ｄは、ＤＵ１４５（Ａ）、ＢｘＰＣ‐３（Ｂ）、ＳＫ−ＥＳ−１（Ｃ）、およびＣａｋｉ‐１（Ｄ）異種移植モデルにおける、経時的な平均腫瘍体積を示す。ＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、または１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８（Ａ）、ＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、３７５μｇの抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）、２２５μｇの抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）、または７５μｇの抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）（Ｂ）、ＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、または１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３（Ｃ）、またはＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、等暴露投与量の（equal  exposure  dosing）抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３、または等モル投与量の（equimolar  dosing）抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３（Ｄ）のうちの１種を、マウスに注射した。
【図５７Ｃ】Ａ〜Ｄは、ＤＵ１４５（Ａ）、ＢｘＰＣ‐３（Ｂ）、ＳＫ−ＥＳ−１（Ｃ）、およびＣａｋｉ‐１（Ｄ）異種移植モデルにおける、経時的な平均腫瘍体積を示す。ＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、または１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８（Ａ）、ＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、３７５μｇの抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）、２２５μｇの抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）、または７５μｇの抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）（Ｂ）、ＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、または１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３（Ｃ）、またはＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、等暴露投与量の（equal  exposure  dosing）抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３、または等モル投与量の（equimolar  dosing）抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３（Ｄ）のうちの１種を、マウスに注射した。
【図５７Ｄ】Ａ〜Ｄは、ＤＵ１４５（Ａ）、ＢｘＰＣ‐３（Ｂ）、ＳＫ−ＥＳ−１（Ｃ）、およびＣａｋｉ‐１（Ｄ）異種移植モデルにおける、経時的な平均腫瘍体積を示す。ＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、または１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８（Ａ）、ＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、３７５μｇの抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）、２２５μｇの抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）、または７５μｇの抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）（Ｂ）、ＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、または１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３（Ｃ）、またはＰＢＳ、５００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、３００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、１００μｇのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３、等暴露投与量の（equal  exposure  dosing）抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３、または等モル投与量の（equimolar  dosing）抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３（Ｄ）のうちの１種を、マウスに注射した。
【図５８】標的媒介薬物動態モデルの、Ｍ１．３−Ｇ１−Ｐ４を注射されたマウス由来のマウス血液から得られた実験データへの当てはめ。実線は５００μｇの投与量を与えられたマウスの当てはめであり、点線は１００μｇの投与量を与えられたマウスの当てはめである。
【発明を実施するための形態】
【００７２】
配列の簡単な説明
本明細書において言及され、配列表に記載されるアミノ酸配列は以下に見出される。
配列番号１は例となるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨ配列に由来するアミノ酸コンセンサス配列である。
配列番号２は例となるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬ配列に由来するアミノ酸コンセンサス配列である。
配列番号３は例となるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬ配列に由来するアミノ酸コンセンサス配列であり、そのコンセンサス配列は、１６ＦのＩＧＦ‐１Ｒ結合部位のＶＬ配列を除外する。
配列番号４は例となるＥｒｂＢ３  ＶＨ配列に由来するアミノ酸コンセンサス配列である。
配列番号５は例となるＥｒｂＢ３  ＶＨ配列に由来するアミノ酸コンセンサス配列であり、そのコンセンサス配列は、１６ＦのＥｒｂＢ３結合部位のＶＨを除外する。
配列番号６は例となるＥｒｂＢ３  ＶＬ配列に由来するアミノ酸コンセンサス配列である。
配列番号７は例となるＥｒｂＢ３  ＶＬ配列に由来するアミノ酸コンセンサス配列であり、そのコンセンサス配列は、１６ＦのＥｒｂＢ３結合部位のＶＬ配列を除外する。
配列番号８〜３１は図１のＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨアミノ酸配列である。
配列番号３２〜１３３は図２のＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬアミノ酸配列である。
配列番号１３４〜１６５は図３のＥｒｂＢ３  ＶＨアミノ酸配列である。
配列番号１６６〜２００は図４のＥｒｂＢ３  ＶＬアミノ酸配列である。
配列番号２０１〜２５６は、図５Ａにおいて提供される抗ＩＧＦ‐１Ｒ／抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ１（ｓｃＦｖ）２の成熟型軽鎖および重鎖のヌクレオチド配列（奇数番号）およびアミノ酸配列（偶数番号）であり、その配列番号は以下のとおりである。κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０１および２０２）、Ｐ４（配列番号２０３および２０４）、Ｍ７８（配列番号２０５および２０６）、およびＭ５７（配列番号２０７および２０８）。重鎖ｓｃＦｖ融合体（ハイブリッド）：ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（すなわち、１６Ｆ；配列番号２０９および２１０）、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２１１および２１２）、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２１３および２１４）、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２１５および２１６）、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２１７および２１８）、ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２１９および２２０）、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２１および２２２）、Ｐ４−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２２３および２２４）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２５および２２６）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２２７および２２８）、Ｐ４−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２２９および２３０）、Ｐ４−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２３１および２３２）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２３３および２３４）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２３５および２３６）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２３７および２３８）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２３９および２４０）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２４１および２４２）、Ｍ７８−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２４３および２４４）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２４５および２４６）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ１（配列番号２４７および２４８）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２４９および２５０）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｍ２７（配列番号２５１および２５２）、Ｍ５７−Ｇ１−Ｐ６（配列番号２５３および２５４）およびＭ５７−Ｇ１−Ｂ６９（配列番号２５５および２５６）。
配列番号２５７〜２９６は、図５Ｂにおいて提供される抗ＥｒｂＢ３／抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ１（ｓｃＦｖ）２の成熟型軽鎖および重鎖のヌクレオチド配列（奇数番号）およびアミノ酸配列（偶数番号）であり、その配列番号は以下のとおりである。λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５７および２５８）、Ｍ２７（配列番号２５９および２６０）、Ｍ７（配列番号２６１および２６２）、Ｂ７２（配列番号２６３および２６４）、およびＢ６０（配列番号２６５および２６６）。重鎖ｓｃＦｖ融合体（ハイブリッド）：Ｐ１−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２６７および２６８）、Ｐ１−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２６９および２７０）、Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７１および２７２）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７３および２７４）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２７５および２７６）、Ｍ２７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２７７および２７８）、Ｍ７−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２７９および２８０）、Ｍ７−Ｇ１−Ｍ５７（（配列番号２８１および２８２）、Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８３および２８４）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２８５および２８６）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２８７および２８８）、Ｂ７２−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８９および２９０）、Ｂ６０−Ｇ１−Ｐ４（配列番号２９１および２９２）、Ｂ６０−Ｇ１−Ｍ５７（配列番号２９３および２９４）、およびＢ６０−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２９５および２９６）。
配列番号２９７および２９８は、図７Ｂに示されるシグナル配列を有する１６Ｆの軽鎖のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列である。
配列番号２９９および３００は、図７Ａに示されるシグナル配列を有する１６Ｆの重鎖のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列である。
配列番号３０１は、ＣＨ３ドメインのＣ末端とリンカーＳＬＳＬＳＰＧＫＧＧＧＧＳのＮ末端の間にリシンが挿入された、例となる重鎖ドメインの一部分である（配列番号３０１、付加的なリシンに下線が引かれている）。
配列番号３０２〜３０４はそれぞれ抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨＣＤＲ１ドメイン、ＶＨＣＤＲ２ドメインおよびＶＨＣＤＲ３ドメインのコンセンサス配列であり、それらは配列番号１のＶＨコンセンサス配列のＣＤＲ配列であり、そして、図１に示される。
配列番号３０５〜３０７はそれぞれ抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３のコンセンサス配列であり、それらは配列番号２のＶＬコンセンサス配列のＣＤＲ配列であり、そして、図２に示される。
配列番号３０８は抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬＣＤＲ３のコンセンサス配列であり、配列番号３のＶＬコンセンサス配列のＣＤＲ３配列であり、そして図２に示される。
配列番号２０９〜３１１はそれぞれ抗ＥｒｂＢ３  ＶＨＣＤＲ１ドメイン、ＶＨＣＤＲ２ドメインおよびＶＨＣＤＲ３ドメインのコンセンサス配列であり、それらは配列番号４のＶＨコンセンサス配列のＣＤＲ配列であり、そして図３に示される。
配列番号３１２〜３１４はそれぞれ抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ１ドメイン、ＶＬＣＤＲ２ドメインおよびＶＬＣＤＲ３ドメインのコンセンサス配列であり、それらは配列番号６のＶＬコンセンサス配列のＣＤＲ配列であり、そして図４に示される。
配列番号３１５は抗ＥｒｂＢ３  ＶＬＣＤＲ３のコンセンサス配列であり、それは配列番号７のＶＬコンセンサス配列のＣＤＲ３配列であり、そして図４に示される。
配列番号３１６は抗ＥｒｂＢ３／抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ２四価二重特異性タンパク質ＥＬＩ−７の重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号３１７は抗ＥｒｂＢ３／抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ２四価二重特異性タンパク質ＥＬＩ−７の軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号３１８は抗ＩＧＦ‐１Ｒ／抗ＥｒｂＢ３四価二重特異性タンパク質ＩＬＥ−１０の重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号３１９は抗ＩＧＦ‐１Ｒ／抗ＥｒｂＢ３四価二重特異性タンパク質ＩＬＥ−１２の重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号３２０は抗ＩＧＦ‐１Ｒ／抗ＥｒｂＢ３四価二重特異性タンパク質ＩＬＥ−１０およびＩＬＥ−１２の軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号３２１〜３３５は表１の抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体に由来するＦａｂ重鎖（Ｆａｂ  ＨＣ）、Ｆａｂ軽鎖（Ｆａｂ  ＬＣ）およびｓｃＦｖのアミノ酸配列であり、それらの配列は図３７の配列である。
【００７３】
【表１】
0005588086.tif 000002
配列番号３３６〜３５３は表２の抗ＥｒｂＢ３抗体に由来するＦａｂ重鎖（Ｆａｂ  ＨＣ）、Ｆａｂ軽鎖（Ｆａｂ  ＬＣ）およびｓｃＦｖのアミノ酸配列であり、それらの配列は図３８の配列である。
【００７４】
【表２】
0005588086.tif 000003
配列番号３５４および３５５は図５Ｂに示されるＢ６０−ＩｇＧ２−Ｍ７８多価二重特異性抗体のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列である。
配列番号３５６および３５７は図５Ｂに示されるＭ７−ＩｇＧ２−Ｍ７８多価二重特異性抗体のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列である。
配列番号３５８〜３６０は図６Ａに示されるＳＦ、Ｐ４、Ｍ７８、およびＭ５７抗ＩＧＦ‐１ＲＩｇＧ１モノクローナル抗体の重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号３６２〜３６６は図６Ｂに示されるＰ１、Ｍ２７、Ｍ７、Ｂ７２、およびＢ６０抗ＥｒｂＢ３ＩｇＧ１モノクローナル抗体の重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号３６７〜３６９は図６Ｃに示されるＰ４、Ｍ５７、およびＭ７８抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖモノクローナル抗体のアミノ酸配列である。
配列番号３７０〜３７５は図６Ｄに示されるＣ８、Ｐ１、Ｍ１．３、Ｍ２７、Ｐ６、およびＢ６９抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖモノクローナル抗体のアミノ酸配列である。
配列番号３７６〜３７９はそれぞれＰ４Ｍ−Ｇ１−Ｍ１．３、Ｐ４Ｍ−Ｇ１−Ｃ８、Ｐ３３Ｍ−Ｇ１−Ｍ１．３、およびＰ３３Ｍ−Ｇ１−Ｃ８という重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号３８０および３８１はそれぞれＰ３３Ｍ  κ軽鎖およびＰ４Ｍ  κ軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号３８２および３８３はそれぞれ抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖ  Ｍ７６および抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖ  Ｐ６Ｌのアミノ酸配列である。結合部位Ｍ７６のＶＨドメインおよびＶＬドメインはそれぞれ配列番号３１および１３３のアミノ酸配列からなる。
配列番号３８４および３８５はそれぞれ抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位モジュールであるＰ４ＭおよびＰ３３ＭのＶＨドメインのアミノ酸配列である。
配列番号３８６および３８７はそれぞれ抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位モジュールであるＰ４ＭおよびＰ３３ＭのＶＬドメインのアミノ酸配列である。
配列番号３８８は抗ＥｒｂＢ３結合部位モジュールＰ６ＬのＶＨドメインのアミノ酸である。ＶＬドメインは配列番号１７３アミノ酸配列からなる。
配列番号３８９および３９０はそれぞれ抗ＩＧＦ‐１Ｒ重鎖であるＰ４Ｍ−Ｇ１−Ｐ６ＬおよびＰ３３Ｍ−Ｇ１−Ｐ６Ｌのアミノ酸配列である。
配列番号３９１は抗ＥｒｂＢ３重鎖Ｐ１−Ｇ１−Ｍ７６のアミノ酸配列である。
配列番号３９２は図５Ａおよび５Ｂのハイブリッド重鎖のＣＨ１部分の開始部のアミノ酸配列である。
配列番号３９３および３９４はそれぞれ図５Ａおよび５Ｂの軽鎖の抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインおよびＥｒｂＢ３  ＶＬドメイン内のＣＬドメインの開始部のアミノ酸配列である。
配列番号３９５〜４０２は例となるＧｌｙ‐Ｓｅｒポリペプチドリンカーのアミノ酸配列である。
配列番号４０３はヘキサヒスチジンタグのアミノ酸配列である。
配列番号４０４はＩｇＧ２定常ドメイン（ＣＨ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域を含む）のアミノ酸配列である。
配列番号４０５〜４０８はそれぞれ、リーダー配列（それぞれの配列のＮ末端の１９個のアミノ酸）を含む、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１重鎖、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７重鎖、Ｍ５７−Ｇ１−Ｃ８重鎖、Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８重鎖の重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号４０９はリーダー配列を含む、Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８重鎖のヌクレオチド配列である。配列番号４１０〜４１１はそれぞれ、リーダー配列（そのアミノ酸配列のＮ末端の１９個のアミノ酸）を含む、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３重鎖のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列である。
配列番号４１２〜４１３はそれぞれ、リーダー配列（そのアミノ酸配列のＮ末端の１９個のアミノ酸）を含む、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８重鎖のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列である。
配列番号４１４〜４１５はそれぞれ、リーダー配列（そのアミノ酸配列のＮ末端の２１個のアミノ酸）を含む、Ｍ７λ軽鎖のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列である。
配列番号４１６〜４１７はそれぞれ、リーダー配列（そのアミノ酸配列のＮ末端の２０個のアミノ酸）を含む、Ｐ４κ軽鎖のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列である。
配列番号４１８はヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域（その配列のＣ末端の２３１個のアミノ酸）を有するＩｇＧ１モジュールのアミノ酸配列である。
配列番号４１９〜４２４はそれぞれＰ４Ｍ−Ｇ１−Ｍ１．３、Ｐ４Ｍ−Ｇ１−Ｃ８、Ｐ４Ｍ−Ｇ１−Ｐ６Ｌ、Ｐ３３Ｍ−Ｇ１−Ｍ１．３、Ｐ３３Ｍ−Ｇ１−Ｃ８、およびＰ３３Ｍ−Ｇ１−Ｐ６Ｌという重鎖のヌクレオチド配列である。
配列番号４２５はＰ１−Ｇ１−Ｍ７６抗ＥｒｂＢ３‐Ｇ１／抗ＥＧＦ‐１Ｒ二重特異性抗体のヌクレオチド配列である。
配列番号４２６および４２７はそれぞれＰ３３Ｍ  κ軽鎖およびＰ４Ｍ  κ軽鎖のヌクレオチド配列である。
配列番号４２８はＭ７６抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖのヌクレオチド配列である。
配列番号４２９はＰ６Ｌ抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖのヌクレオチド配列である。
【００７５】
詳細な説明
ＩＧＦ‐１ＲまたはＥｒｂＢ３に特異的に結合する新規の単一特異性抗体が本明細書にて提供される。そのような抗体にはＩｇＧ抗体およびｓｃＦｖ抗体が含まれる。さらに、ヒトＩＧＦ‐１ＲおよびヒトＥｒｂＢ３に特異的に結合する二重特異性抗体（例えば、多価二重特異性抗体（「ＰＢＡ」））が提供される。これらのタンパク質は、ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３の一方または両方を介した腫瘍の細胞増殖およびシグナル伝達の強力な阻害剤である。これらのタンパク質は、細胞増殖性疾患（例えば、癌）を治療するために使用することができる。
【００７６】
定義
明細書、実施例、および添付の特許請求の範囲で使用されるある用語および句の意味を、便宜のために以下に記す。
【００７７】
「薬剤」とは、活性分子、例えば、治療用タンパク質、例えば、薬品を意味する。
【００７８】
「アミノ酸置換」とは、あるタンパク質中のある特定のアミノ酸（「アミノ酸」）の、別のアミノ酸との置換である。置換は、下記に定義するような、保存的置換であってもよい。
【００７９】
「抗ＥｒｂＢ３結合部位」とは、ヒトＥｒｂＢ３に特異的に結合する結合部位を意味する。
【００８０】
「抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位」とは、ヒトＩＧＦ‐１Ｒに特異的に結合する結合部位を意味する。
【００８１】
「抗原結合部位」とは、抗体のＶＨドメインおよび／またはＶＬドメイン、または少なくとも１つのそのＣＤＲを含む結合部位を意味する。例えば、抗原結合部位は、ＶＨＣＤＲ３を、単独で、またはＶＨＣＤＲ２と一緒に、所望によりＶＨＣＤＲ１と一緒に、含むか、本質的にそれらから成るか、またはそれらから成り得る。ある実施形態では、抗原結合部位は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、それらは同一のポリペプチド上、または２つの異なるポリペプチド上に存在する場合がある（例えば、ＶＨドメインが重鎖上に存在し、ＶＬドメインが軽鎖上に存在する）。
【００８２】
抗体の「抗原結合部位」とは、抗原（例えば、ＩＧＦ‐１ＲまたはＥｒｂＢ３）に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つ以上の断片を意味する。抗体の抗原結合機能が完全長抗体の断片によって保持され得ることが示されている。抗体の「抗原結合部位」という用語の中に包含される結合断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインから成る一価の断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域にてジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインから成るＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の一本の腕のＶＬおよびＶＨドメインから成るＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインから成るｄＡｂ断片；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、ＶＬおよびＶＨはＦｖ断片の２つのドメインであるが、ＶＬおよびＶＨは別々な遺伝子にコードされており、それらは組換え法を用いる合成リンカーによって連結することができ、それにより、ＶＬおよびＶＨは一本のタンパク質鎖として生成され、そこで、ＶＬおよびＶＨ領域は対を成し、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる一価のタンパク質を形成する（米国特許第５，８９２，０１９号参照）。そのような一本鎖抗体も、抗体の「抗原結合部位」という用語の中に包含されることが意図されている。ダイアボディなどの一本鎖抗体の他の形態も包含される。ダイアボディは、ＶＨおよびＶＬドメインが一本のポリペプチド鎖上に発現されている二価の二重特異性抗体であるが、使われているリンカーが同一鎖上での２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎることから、それらのドメインは別の鎖の相補的ドメインとの対合を強制され、２つの抗原結合部位が形成される。
【００８３】
「結合親和性」とは、結合性相互作用の強さを意味し、実際の結合親和性および見かけの結合親和性の両方が含まれる。実際の結合親和性は、会合速度の解離速度に対する比である。見かけの親和性には、例えば、多価相互作用により生じる結合活性が含まれ得る。解離定数（Ｋｄ）は、典型的には、結合親和性の逆数であり、表面プラズモン共鳴アッセイ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ３０００機器（ＧＥヘルスケア社）で、例えば、組換えＥｒｂＢ３を分析物とし、抗ＥｒｂＢ３抗体をリガンドとして使用して決定される）または細胞結合アッセイを用いて好都合に測定することができ、各アッセイは、米国特許第７，８４６，４４０号の実施例３に記載されている。
【００８４】
「結合部分」、「結合ドメイン」、または「結合部位」とは、抗体の標的分子（すなわち抗原）への特異的結合を仲介するのに直接的に関わっている、結合ポリペプチドの、または、指定される場合は、その重鎖もしくは軽鎖の、部分、領域、または部位を意味する。結合ドメインの例としては、抗原結合部位、リガンドの受容体結合ドメイン、受容体のリガンド結合ドメイン、または酵素ドメインが挙げられる。好ましい実施形態では、結合ドメインは、抗原結合部位（例えば、可変重（ＶＨ）鎖配列および可変軽（ＶＬ）鎖配列を含む、または、代替的フレームワーク領域（例えば、１つ以上のアミノ酸置換を所望により含むヒトフレームワーク領域）の中に配置された抗体由来の６つのＣＤＲを含むか、またはそれらから成る。ある実施形態では、結合部位は、ＶＨまたはＶＬ鎖配列のみから本質に成っている場合がある。結合部位は、完全に１つの種から由来していてもよく、例えば、１つの種の生殖系列配列に由来する配列のみを有する。例えば、結合部位は、ヒト（すなわち、ヒト由来）、マウス、またはラットであってもよい。結合部位は、ヒト化されていてもよい（すなわち、ＣＤＲがある種由来であり、フレームワーク（ＦＲ）が別の種由来である）。例えば、結合部位は、マウス抗体由来のＣＤＲおよびヒト由来のＦＲを有していてもよい。あるヒト化結合部位は、ドナー抗体のＣＤＲにＣＤＲをより似せるための変異を、１つ以上のＣＤＲ中に含む。あるヒト化抗体は、１つ以上のＦＲ中にも変異を含み得る。一般的に、結合部位における変異は、結合部位のその標的抗原への結合親和性を強化し、および／または、結合部位を安定化させて、例えば、その半減期を延長し得る。
【００８５】
「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」とは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方のＶＲ内に存在する、非連続抗原結合部位を意味する。これらの特定領域については、Kabat  et  al.,  J.  Biol.  Chem.  252,  6609-6616  (1977)およびKabat  et  al.,  Sequences  of  protein  of  immunological  interest.  (1991)、およびChothia  et  al.,  J.  Mol.  Biol.  196:901-917  (1987)、およびMacCallum  et  al.,  J.  Mol.  Biol.  262:732-745  (1996)にて説明がなされており、そこでの定義には、互いを比較した場合の重複したまたは一部のアミノ酸残基が含まれる。上記の各参考文献により定義されるＣＤＲを含むアミノ酸残基を比較のために記す。本明細書で使用される場合、そして別段の指定が無い限り、「ＣＤＲ」は、Ｋａｂａｔにより定義されたものである。
【００８６】
【表３】
0005588086.tif 000004
【００８７】
「ＣＨ１ドメイン」とは、ＶＨドメインとヒンジの間に位置する、重鎖の免疫グロブリン定常領域である。ＣＨ１ドメインは、ＥＵナンバリングで１１８〜２１５位にまたがる。ＣＨ１ドメインは、所望の生物学的特性を有する限りは、自然発生のＣＨ１ドメインであっても、１つ以上のアミノ酸が置換、付加または欠如している自然発生のＣＨ１ドメインであってもよい。所望の生物活性は、自然発生の配列と比較して、天然の生物活性であっても、増強された生物活性であっても、低減された生物活性であってもよい。
【００８８】
「ＣＨ２ドメイン」とは、ヒンジとＣＨ３ドメインの間に位置する、重鎖の免疫グロブリン定常領域である。ＣＨ２ドメインはＥＵナンバリングで２３１〜３４０位にまたがる。ＣＨ２ドメインは、所望の生物学的特性を有する限りは、自然発生のＣＨ２ドメインであっても、１つ以上のアミノ酸が置換、付加または欠如している自然発生のＣＨ２ドメインであってもよい。所望の生物活性は、自然発生の配列と比較して、天然の生物活性であっても、増強された生物活性であっても、低減された生物活性であってもよい。
【００８９】
「ＣＨ３ドメイン」とは、ＣＨ２ドメインのＣ末端側に位置する、重鎖の免疫グロブリン定常領域であり、ＣＨ２ドメインのＮ末端からおよそ１１０残基に渡り、例えば、３４１〜４４６ｂ位（ＥＵナンバリング）の辺りである。ＣＨ３ドメインは、所望の生物学的特性を有する限りは、自然発生のＣＨ３ドメインであっても、１つ以上のアミノ酸（「アミノ酸」）が置換、付加または欠如している自然発生のＣＨ３ドメインであってもよい。所望の生物活性は、自然発生の配列と比較して、天然の生物活性であっても、増強された生物活性であっても、低減された生物活性であってもよい。ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端のリジンを含んでいてもいなくてもよい。
【００９０】
「ＣＨ４ドメイン」とは、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体におけるＣＨ３ドメインのＣ末端側に位置する、重鎖の免疫グロブリン定常領域である。ＣＨ４ドメインは、所望の生物学的特性を有する限りは、自然発生のＣＨ４ドメインであっても、１つ以上のアミノ酸が置換、付加または欠如している自然発生のＣＨ４ドメインであってもよい。所望の生物活性は、自然発生の配列と比較して、天然の生物活性であっても、増強された生物活性であっても、低減された生物活性であってもよい。
【００９１】
「ＣＬドメイン」とは、ＶＨドメインのＣ末端側に位置する、軽鎖の免疫グロブリン定常領域である。ＣＬドメインはＫａｂａｔナンバリングで１０７Ａ〜２１６位の辺りにまたがる。ＣＬドメインは、所望の生物学的特性を有する限りは、自然発生のＣＬドメインであっても、１つ以上のアミノ酸が置換、付加または欠如している自然発生のＣＬドメインであってもよい。所望の生物活性は、自然発生の配列と比較して、天然の生物活性であっても、増強された生物活性であっても、低減された生物活性であってもよい。ＣＬドメインは、Ｃ末端のリジンを含んでいてもいなくてもよい。
【００９２】
「保存的置換」または「保存的アミノ酸置換」とは、タンパク質またはペプチドにおける１個以上のアミノ酸残基の置換であって、それぞれの特定の置換前のアミノ酸残基について、そのような特定のアミノ酸残基がそのような特定の置換アミノ酸によって置換される場合にタンパク質またはペプチドのコンファメーション（ｃｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎ）も機能も変化させる可能性がないことが知られている特定の置換アミノ酸による置換を意味する。そのような保存的置換は、典型的には、１つのアミノ酸を、電荷および／またはサイズにおいてその最初のアミノ酸に類似している別のアミノ酸で置換することを含み、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、またはロイシン（Ｌ）のいずれかを互いに置換すること、アスパラギン酸（Ｄ）をグルタミン酸（Ｅ）と置換すること（逆の場合も同じ）；グルタミン（Ｑ）をアスパラギン（Ｎ）と置換すること（逆の場合も同じ）；およびセリン（Ｓ）をトレオニン（Ｔ）と置換すること（逆の場合も同じ）が含まれる。他の置換は、特定の配列または構造的環境において保存的であることが、当該技術分野において周知である。例えば、グリシン（Ｇ）およびアラニン（Ａ）は、しばしば、互いに置換されて保存的置換をもたらし得、アラニンおよびバリン（Ｖ）も同様である。比較的疎水性であるメチオニン（Ｍ）は、しばしば、ロイシンまたはイソロイシン、ときにバリンと保存的に置き換わるか、またはそれらによって保存的に置換される。リジン（Ｋ）およびアルギニン（Ｒ）は、しばしば、アミノ酸残基の重要な特徴がその電荷であり、これらの２つの塩基性アミノ酸残基の異なるｐＫが重要ではないと予想される位置において、交換可能である。そのような置換の影響は、ＡＭ１２０、ＰＡＭ‐２００、およびＰＡＭ‐２５０などの置換スコア行列を用いて算出することができる。他のそのような保存的置換、例えば、同様の疎水的特性を有する領域全体（例えば、膜貫通領域）の置換がよく知られている。
【００９３】
免疫グロブリンの軽鎖上のＣＲドメインは、同義的に「ＣＬ」、「軽鎖ＣＲドメイン」、「ＣＬ領域」または「ＣＬドメイン」と称される。免疫グロブリンの重鎖上の定常領域（例えば、ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３ドメイン）は、同義的に「ＣＨ」、「重鎖定常領域」、「ＣＨ」領域または「ＣＨドメイン」と称される。免疫グロブリン軽鎖上の可変領域は、同義的に、「ＶＬ」、「軽鎖可変領域」、「ＶＬ領域」または「ＶＬドメイン」と称される。免疫グロブリン重鎖上の可変領域は、同義的に、「ＶＨ」、「重鎖可変領域」、「ＶＨ領域」または「ＶＨドメイン」と称される。
【００９４】
「ドメイン」は、例えば、β‐プリーツシートおよび／または鎖内のジスルフィド結合によって安定化され得るペプチドループ（例えば、１〜４個のペプチドループ）を含み得る、重鎖または軽鎖ポリペプチドの領域、例えば、独立してフォールディングしている、球状領域または非球状領域（例えば、リンカードメイン）を指す。免疫グロブリン重鎖および軽鎖の定常およびＶＲは、典型的には、ドメインに折り畳まれる。具体的には、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４、ＣＬ、ＶＨおよびＶＬドメインのそれぞれが、ループ構造を典型的に形成する。
【００９５】
「ＥＣ５０」、あるいは「ＥＣ５０」は、結合アッセイまたはシグナル伝達経路などの特定の系へのタンパク質の最大作用の５０％を与える、分子（例えば、ＰＢＡ）の濃度を指す。
【００９６】
「ＥｒｂＢ３」および「ＨＥＲ３」は、米国特許第５，４８０，９６８号に記載されるＥｒｂＢ３タンパク質を指す。ヒトＥｒｂＢ３タンパク質配列は、米国特許第５，４８０，９６８号の図４および配列番号４に示されており、最初の１９個のアミノ酸は成熟タンパク質から切断されるリーダー配列と一致している。ＥｒｂＢ３は受容体であるＥｒｂＢファミリーのメンバーであり、その他のメンバーとしては、ＥｒｂＢ１（ＥＧＦＲ）、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２／Ｎｅｕ）およびＥｒｂＢ４が挙げられる。ＥｒｂＢ３それ自体はチロシンキナーゼ活性が欠如しいるが、ＥｒｂＢ３の、受容体型チロシンキナーゼである別のＥｒｂＢファミリー受容体（例えば、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２およびＥｒｂＢ４）との二量体化後にそれ自身がリン酸化される。ＥｒｂＢファミリーに対するリガンドとしては、ヘレグリン（ＨＲＧ）、ベータセルリン（ＢＴＣ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ヘパリン結合上皮増殖因子（ＨＢ−ＥＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦ‐α）、アンフィレグリン（ＡＲ）、エピゲン（epigen）（ＥＰＧ）およびエピレグリン（ＥＰＲ）が挙げられる。ヒトＥｒｂＢ３のアミノ酸配列はＧｅｎｅＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１９７３．２（受容体チロシン−プロテインキナーゼｅｒｂＢ−３アイソフォーム１前駆物質）に提供されており、ＧｅｎｅＩＤ：２０６５を割り当てられている。
【００９７】
「ＥＵ」は、重鎖ＣＲにおけるアミノ酸の位置（例えば、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸位置）が、本明細書において、ＥＵインデックス番号付システムに従って番号付けされていることを示している（Kabat  et  al.、“Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest”,  U.S.  Dept.  Health  and  Human  Services,  5th  edition,  1991参照）。
【００９８】
「Ｆａｂ」は、２つの鎖：ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインを含む第一の鎖、ならびにＶＬドメインおよびＣＬドメインを含む第二の鎖、を含む、抗体の抗原結合部分を指す。Ｆａｂは、典型的には、パパインで処理され、ヒンジ領域の部分を含む抗体のＮ末端断片として記述されるが、本明細書においては、重鎖がヒンジの部分を含んでいない結合ドメインを指す際にも使用される。
【００９９】
「Ｆｃ領域」は、パパイン切断部位（すなわち、重鎖ＣＲの最初の残基を１１４番目としたときのＩｇＧの２１６番目の残基）のすぐ上流のヒンジ領域から始まり、抗体のＣ末端で終わる、一本の免疫グロブリン重鎖の部分を指す。従って、完全なＦｃ領域は少なくともヒンジ、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含む。二量体化した２つのＦｃ領域は「Ｆｃ」または「Ｆｃ二量体」と称される。Ｆｃ領域は、所望の生物学的特性を有する限りは、自然発生のＦｃ領域であっても、１つ以上のアミノ酸が置換、付加または欠如している自然発生のＦｃ領域であってもよい。所望の生物活性は、自然発生の配列と比較して、天然の生物活性であっても、増強された生物活性であっても、低減された生物活性であってもよい。
【０１００】
「フレームワーク領域」または「ＦＲ」または「ＦＲ領域」には、ＶＲの一部分であるがＣＤＲの一部分ではないアミノ酸残基が含まれる（例えば、ＣＤＲのＫａｂａｔ定義を使用）。従って、ＶＲフレームワークは約１００〜１２０のアミノ酸長であるが、ＣＤＲの外側のアミノ酸のみを含む。重鎖ＶＲおよびKabat  et  al.,  1991（同節）により定義されるＣＤＲの具体例として、フレームワーク領域１はアミノ酸１〜３０を含むＶＲのドメインに対応し；フレームワーク領域２はアミノ酸３６〜４９を含むＶＲのドメインに対応し；フレームワーク領域３はアミノ酸６６〜９４を含むＶＲのドメインに対応し、フレームワーク領域４はアミノ酸１０３〜ＶＲの終端を含むＶＲのドメインに対応する。軽鎖のフレームワーク領域も同様に、軽鎖ＶＲ  ＣＤＲのそれぞれによって分離されている。同様に、Chothia  et  al.またはMcCallum  et  al.によるＣＤＲの定義を用いると、フレームワーク領域の境界は、上記と同様に、各々のＣＤＲ終端によって分離されている。好ましい実施形態では、ＣＤＲはＫａｂａｔ．により定義される。
【０１０１】
「完全長抗体」は、１つ以上の重鎖および１つ以上の軽鎖を含む抗体である。各重鎖は重鎖ＶＲ（本明細書ではＶＨと省略）および重鎖ＣＲで構成される。重鎖ＣＲは、３つのドメイン、ＣＨｌ、ＣＨ２、およびＣＨ３、ならびに所望により４つ目のドメイン、ＣＨ４で構成される。各軽鎖は軽鎖ＶＲ（本明細書ではＶＬと省略）および軽鎖ＣＲで構成される。軽鎖ＣＲは１つのドメイン、ＣＬで構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存された領域と共に散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性領域にさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、典型的には３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成され、それらはアミノ末端からカルボキシ末端に向けて、以下の順番で並んでいる：ＦＲｌ、ＣＤＲｌ、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４。免疫グロブリンタンパク質は、クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）または、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡｌおよびＩｇＡ２）またはサブクラスのいずれかの型であり得る。
【０１０２】
「Ｇｌｙ−Ｓｅｒリンカー」または「Ｇｌｙ−Ｓｅｒペプチド」は、グリシンおよびセリン残基から成るペプチドを指す。例となるＧｌｙ−Ｓｅｒペプチドは、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（配列番号３９５）を含み、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上である。ある実施形態では、ｎは１〜５の数であり、ｎは６〜１０の数であり、ｎは１１〜１５の数であり、ｎは１６〜２０の数であり、ｎは２１〜２５の数であり、あるいはｎは２６〜３０の数である。
【０１０３】
「重鎖免疫グロブリンＣＲ」または「ＨＣ  Ｉｇ  ＣＲ」は、ＣＨ１ドメインおよびＦｃ領域を含み得、そのＦｃ領域はヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインおよび／またはＣＨ４ドメインを含み得る。軽鎖免疫グロブリンＣＲはＣＬドメインを含み得る。
【０１０４】
「ヒンジ」または「ヒンジ領域」または「ヒンジドメイン」は、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインの間に位置する、重鎖の自由度が高い部分を指す。ヒンジは、およそ２５のアミノ酸長であり、「上部ヒンジ」、「中央ヒンジ」、および「下部ヒンジ」に分けられる。ヒンジは、所望の生物学的特性を有する限りは、自然発生のヒンジであっても、１つ以上のアミノ酸が置換、付加または欠如している自然発生のヒンジであってもよい。所望の生物活性は、自然発生の配列と比較して、天然の生物活性であっても、増強された生物活性であっても、低減された生物活性であってもよい。
【０１０５】
「ＩＣ５０」、または「ＩＣ５０」は、最大活性（例えば、刺激に対する応答または恒常的活性）の５０％の阻害率を供する分子（例えば、ＰＢＡ）の濃度、すなわち、最大活性とベースラインの中間のレベルまで活性を低減する濃度を指す。ＩＣ５０値は、例えばＣｈｅｎｇ‐Ｐｒｕｓｏｆｆ式を用いて、絶対阻害定数（Ｋｉ）に変換され得る。抗体または本明細書で提供される二重特異的結合タンパク質などの結合剤により阻害される系においては、ＩＣ５０はＥＣ５０と区別不能である場合がある。
【０１０６】
「ＩＧＦ‐１Ｒ」または「ＩＧＦ１Ｒ」は、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ‐１、以前はソマトメジンＣとして知られていた）に対する受容体である。ＩＧＦ‐１Ｒはまた、インスリン様増殖因子２（ＩＧＦ−２）にも結合し、それによって活性化される。ＩＧＦ１−Ｒは受容体型チロシンキナーゼであり、ＩＧＦ‐１またはＩＧＦ−２による活性化後に自己リン酸化される。ヒトＩＧＦ‐１Ｒ前駆物質のアミノ酸配列は、ＧｅｎｅＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００８６６に提供されており、ＧｅｎｅＩＤ：３４８０を割り当てられている。
【０１０７】
「ＩｇＧ−（ｓｃＦｖ）２」は、それぞれＩｇＧ重鎖およびＩｇＧ軽鎖で構成される２つのＮ末端Ｆａｂ結合部位を有するＩｇＧから成る四価のＰＢＡを表し、各重鎖のＣ末端は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインで構成される結合部位を有するｓｃＦｖに連結している。免疫グロブリンＣＲがＩｇＧ１のそれである場合、ＰＢＡは「ＩｇＧ１−（ｓｃＦｖ）２」と称される。例となるＩｇＧ１−（ｓｃＦｖ）２ＰＢＡは、その４つの結合部位が２つの本質的に同一の抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位および２つの本質的に同一の抗ＥｒｂＢ３結合部位を含むものである。以下の、発明を実施するための形態の小見出し「ＩｇＧ１ＣＲを含む例となるＩＧＦ‐１Ｒ＋ＥｒｂＢ３  ＰＢＡ」（図５ＡおよびＢも参照）下に記載される３８種の四価のＰＢＡはそれぞれ、２つの連結した本質的に同一のサブユニットを含み、各サブユニットは互いにジスルフィド結合した重鎖および軽鎖を含み、例えば、Ｍ７−Ｇ１−Ｍ７８（配列番号２８４および配列番号２６２）、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（配列番号２２６および配列番号２０４）、およびＰ４−Ｇ１−Ｃ８（配列番号２２２および配列番号２０４）は、そのようなＩｇＧ１−（ｓｃＦｖ）２タンパク質の例となる実施形態である。免疫グロブリンＣＲがＩｇＧ２のそれである場合、そのタンパク質は「ＩｇＧ２−（ｓｃＦｖ）２」と称される。例となる「ＩｇＧ２−（ｓｃＦｖ）２タンパク質は、ＥＬＩ-７である。免疫グロブリンＣＲがＩｇＧ１に部分的に由来し、ＩｇＧの別のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ２）に部分的に由来する場合、そのタンパク質は、例えば、「ＩｇＧ１／２−（ｓｃＦｖ）２」と称される。
【０１０８】
「免疫グロブリンＣＲ」または「Ｉｇ  ＣＲ」は、免疫グロブリン（すなわち、抗体）の、その可変領域の外側の一部を指す。ある実施形態では、免疫グロブリンＣＲは、「重鎖の免疫グロブリンＣＲ」および「軽鎖の免疫グロブリンＣＲ」を含む。
【０１０９】
結合タンパク質による生物活性の「阻害」は、結合タンパク質によって仲介される、生物活性における、再現性よく検出可能なあらゆる減少を指す。一部の実施形態では、阻害は、結合タンパク質非存在下で決定される生物活性と比較して、生物活性における統計的に有意な減少、例えば、生物活性における約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％の減少を与える。
【０１１０】
ポリヌクレオチド、ポリペプチドまたはタンパク質に関して、「単離された」は、そのポリヌクレオチド、ポリペプチドまたはタンパク質が、自然では、それ、またはその類似体と共に生じるポリヌクレオチド、ポリペプチド、タンパク質または他の高分子から隔てられることを指す。「単離された」という用語は、特定の純度を要求することを意図していないが、典型的にタンパク質は、少なくとも約７５％純粋、より好ましくは少なくとも約８０％純粋、より好ましくは少なくとも約８５％純粋、より好ましくは少なくとも約９０％純粋、さらにより好ましくは少なくとも約９５％純粋、最も好ましくは少なくとも約９９％純粋である。
【０１１１】
免疫グロブリンのアミノ酸配列位置の設計に関連して用いられる「Ｋａｂａｔ」は、軽鎖ＣＲ（例えば、ＣＬドメイン）におけるアミノ酸の位置が、Ｋａｂａｔインデックス付番方式（Kabat  et  al.,  1991.,  op.  cit.参照）に従って番号付けされていることを表す。
【０１１２】
「〜に連結した」は、本文中では、アミノ酸またはヌクレオチドの、直接的または間接的な連結または結合を指す。「間接的な連結」は、例えば、１つ以上のアミノ酸またはヌクレオチドを含むリンカーまたはドメインを介した連結を指す。２つのポリペプチド断片に関して、「直接的な連結」または「直接的に連結した」は、その２つのポリペプチド断片の間に共有結合が存在すること、例えば、その２つのポリペプチド断片が介在配列無しに隣接して連結していることを指す。
【０１１３】
「リンカー」は、２つのドメインまたは領域を連結する、１つ以上のアミノ酸を指す。リンカーは、自由度が高いことで、そのリンカーによって連結しているドメインが適切な三次元構造を形成することを可能にし、それによりそれらが必要とされる生物活性を有することを可能にし得る。ｓｃＦｖのＶＨとＶＬを連結しているリンカーは「ｓｃＦｖリンカー」と称される。ＶＨドメインのＮ末端またはＣＨ３ドメインのＣ末端を、第二のＶＨドメイン（例えば、ｓｃＦｖのＶＨドメイン）に連結しているリンカーは、「連結リンカー」と称される。
【０１１４】
「モジュール」は、結合部位（例えば、ｓｃＦｖドメインまたはＦａｂドメイン）およびＩｇ定常領域などの、構造的および／または機能的に固有の、ＰＢＡの部分を指す。本明細書で提供されるモジュールは、他のモジュールとの多数の組み合わせで再配列して（それらをコードする配列を、核酸の組換え、または新しいポリヌクレオチドの完全なもしくは部分的な新規合成のいずれかにより組換えることによって）、種々様々なＰＢＡ（例えば、本明細書に記載のもの）を生成することが可能である。例えば、「ＳＦ」モジュールとは、結合部位「ＳＦ」（すなわち、ＳＦ  ＶＨおよびＳＦ  ＶＬドメインの少なくともＣＤＲを含む）を指す。「Ｃ８」モジュールとは結合部位「Ｃ８」を指す。
【０１１５】
「ＰＢＡ」は、少なくとも２つの異なる結合部分またはドメインおよび、従って、少なくとも２つの異なる結合部位（例えば、２つの異なる抗体結合部位）を含み、その複数の結合部位のうちの一つまたは複数が、例えばペプチド結合を介して、互いに共有結合している、人工のハイブリッドタンパク質である、多価二重特異性抗体を指す。本明細書に記載の好ましいＰＢＡは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＰＢＡであり、これは、ＩＧＦ‐１Ｒタンパク質（例えば、ヒトＩＧＦ‐１Ｒタンパク質）に特異的に結合している１つ以上の第一結合部位、およびＥｒｂＢ３タンパク質（例えば、ヒトＥｒｂＢ３タンパク質）に特異的に結合している１つ以上の第二結合部位を含む、多価二重特異性抗体である。抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＰＢＡは、分子中の抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位および抗ＥｒｂＢ３結合部位の相対配向に関係なく、そのように命名されるが、ＰＢＡの名称がスラッシュ（／）で隔てられた２つの抗原を含む場合、スラッシュの左側の抗原は、スラッシュの右側の抗原に対するアミノ末端である。ＰＢＡは、二価の結合タンパク質、三価の結合タンパク質、四価の結合タンパク質、または４より多くの結合部位を有する結合タンパク質であり得る。例となるＰＢＡは、四価の二重特異性抗体、すなわち、４つの結合部位を有するが、２種の異なる抗原またはエピトープにのみ結合する抗体である。例となる二重特異性抗体は、四価の「抗ＩＧＦ‐１Ｒ／抗ＥｒｂＢ３」ＰＢＡおよび「抗ＥｒｂＢ３／抗ＩＧＦ‐１Ｒ」ＰＢＡである。典型的には、四価ＰＢＡのＮ末端結合部位はＦａｂであり、Ｃ末端結合部位はｓｃＦｖである。
【０１１６】
「同一パーセント」または「同一％」は、２つ以上の核酸またはポリペプチド配列または部分配列が、その２つの配列が最大一致するよう整列され比較された場合に、同一である（１００％同一）こと、または同一であるヌクレオチドもしくはアミノ酸残基を特定の割合で有すること、を指す。最大一致するよう整列させるため、比較している配列の一方に、ギャップを挿入してもよい。次に、対応する位置にあるアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較され、数量化される。第一の配列のある位置が、第二の配列の対応する位置と同一の残基によって占められている場合、その配列はその位置において同一である。２つの配列間の同一パーセントは、それらの配列に共有される同一である位置の数の関数である（例えば、％同一性＝同一である位置の数／位置の総数（例えば、重複している位置）×１００）。ある実施形態では、２つの配列は同じ長さである。ある配列が、もう一方の配列と、測定％同一（measured  %  identical）であるという決定は、数理アルゴリズムを用いて決定することが可能である。そのような２つの配列の比較に利用される数理アルゴリズムの非限定例は、ＧＣＧ配列アライメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。ＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合（例えば、アミノ酸配列比較のために）、ＰＡＭ１２０重量残基表（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ）、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナルティを用いることができる。配列解析のためのさらなるアルゴリズムは、当該技術分野において周知であり、多くがオンライン上で利用可能である。
【０１１７】
参照部分の「部分」または「断片」（例えば、ドメインの）とは、参照部分のサイズの少なくとも、または多くても、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％である、参照部分全体の別個の部分（例えば、ドメイン、例えば、自然発生のドメイン）を指す。
【０１１８】
「ｓｃＦｖリンカー」は、ｓｃＦｖのＶＬとＶＨドメインの間に挿入された、ペプチドまたはポリペプチドドメインを指す。ｓｃＦｖリンカーは、好ましくは、抗原結合コンフォメーションにおけるＶＬおよびＶＨドメインの配向を可能にする。一実施形態では、ｓｃＦｖリンカーは、グリシンおよびセリンを含むのみのペプチドまたはポリペプチドリンカー（「Ｇｌｙ−Ｓｅｒリンカー」）を含むか、またはそれらから成る。ある実施形態では、ｓｃＦｖリンカーはジスルフィド結合を含む。
【０１１９】
「ｓｃＦｖタンパク質」は、１つの軽鎖可変領域（ＶＬ）、および１つの重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、各可変領域が同じまたは異なる抗体に由来する、単一のポリペプチドから成る結合タンパク質を指す。ｓｃＦｖタンパク質は、典型的には、ＶＨドメインとＶＬドメインの間に挿入されたｓｃＦｖリンカーを含む。ＳｃＦｖタンパク質は当該技術分野において周知であり、例えば、米国特許第５，８９２，０１９号に記載されている。
【０１２０】
２つ以上のポリペプチド配列との関連で、「類似性」または「類似性パーセント」は、２つ以上の配列または部分配列が、最大一致するよう比較および整列された場合に、同一であるかまたは保存的置換されているアミノ酸残基を特定の割合で有することを指す。一例として、第一のアミノ酸配列が、第二のアミノ酸配列に対して、少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、またはさらには９５％同一であるか、または保存的に置換されている場合に、第一の配列中に含まれる数と等しい数のアミノ酸と比較された場合に、または当該技術分野において周知のコンピュータによる類似性プログラムによって整列されたポリペプチドのアライメントと比較した場合に、第一のアミノ酸配列は第二のアミノ酸配列と類似していると見なすことができる。これらの用語は、２つ以上のポリヌクレオチド配列にも適用可能である。
【０１２１】
結合部位のその標的エピトープへの結合、または結合部位の組み合わせのそれらの標的エピトープへの結合に関する、「特異的結合」、「特異的に結合する」（“specifically  binds”および“binds  specifically”）、「選択的結合」、および「選択的に結合する」（“selectively  binds”および“binds  selectively”）とは、その結合部位が、その標的エピトープに対して、免疫特異的な結合を示すことを指す。エピトープに特異的に結合する結合部位は、標的エピトープに対して検出可能な親和性を示し、いかなる無関係のエピトープにも検出可能な親和性を示さず、好ましくは、いかなる無関係なエピトープにも、標的エピトープに対する親和性と等しい、それより大きい、またはそれよりも２桁内に低い親和性を示さないという点で、通常、他のエピトープとの交差反応性を示さない。「検出可能な」または好ましい結合には、１０−８、１０−９Ｍ、１０−１０、１０−１１、１０−１２Ｍ、１０−１３Ｍ、またはさらに低いＫｄ値の解離定数（Ｋｄ）での結合が含まれる。Ｋｄ（解離定数）のより低い値は、より高い結合親和性を示すことに注意されたい。従って、Ｋｄ１０−７はＫｄ１０−８よりも高いＫｄ値であるが、Ｋｄ１０−８よりも低い結合親和性を示す。約１０−７Ｍ、および低くても約１０−８  Ｍの値を有する解離定数は、抗体医薬に適切な解離定数の上限である。結合親和性は、ある範囲の解離定数により、例えば、１０−６〜１０−１２Ｍ、１０−７〜１０−１２Ｍ、１０−８〜１０−１２Ｍ以下（すなわち、より低い値の解離定数）により示され得る。ナノモル（１０−９Ｍ）からピコモル（１０−１２Ｍ）の範囲にある、またはそれより小さい解離定数は、典型的には、抗体医薬に最も有用である。適切な解離定数は、５０ｎＭもしくはそれより小さいＫｄ（すなわち、５０ｎＭまたはそれより高い結合親和性−例えば、４５ｎＭのＫｄ）、または４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎｍ、１００ｐＭ、１０ｐＭもしくは１ｐＭ、またはそれより小さいＫｄである。特異的な、または選択的な結合は、そのような結合を決定するための当該技術分野において承認されているいかなる手法に従っても（例えば、スキャチャード解析および／または競合的結合アッセイに従って）、決定することができる。
【０１２２】
多価二重特異性抗体
本明細書は多価二重特異性抗体（「ＰＢＡ」）を提供するが、それらは単離されたモノクローナル抗体であり得る。例となるＰＢＡは少なくとも１つの抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位と少なくとも１つの抗ＥｒｂＢ３結合部位、または少なくとも２つの抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位と少なくとも２つの抗ＥｒｂＢ３結合部位を含む。好ましい実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位はヒトＩＧＦ‐１Ｒに特異的に結合し、そして、抗ＥｒｂＢ３結合部位はヒトＥｒｂＢ３に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、ＰＢＡ互いに結合して単一のタンパク質を形成する２本の重‐軽鎖対を含み、それぞれの重‐軽鎖対は抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位と抗ＥｒＢ３結合部位を含む。ある特定の実施形態では、第１の重‐軽鎖対の抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位と抗ＥｒｂＢ３結合部位は、別の重‐軽鎖対の免疫グロブリンＣＲと（例えば、ジスルフィド結合により）結合して例えば、単一のＩｇＧ様タンパク質を形成する免疫グロブリンＣＲを介して連結されている。本明細書に記載される好ましいＰＢＡは、腫瘍細胞増殖を阻害する能力、ならびにその単離された抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部分かその単離された抗ＥｒｂＢ３結合部分のどちらかと同等またはそれ以上に強力に腫瘍成長を低減または安定化させる能力、ならびにある特定の実施形態では腫瘍侵襲および腫瘍転移のどちらか、または両方を阻害する能力などの有利な特性を有する。本明細書に記載される例となるＰＢＡは、ＩＧＦ‐１Ｒ、ＥｒｂＢ３およびＡＫＴのリン酸化などのＩＧＦ‐１Ｒ介在性シグナル伝達およびＥｒｂＢ３介在性シグナル伝達のどちらか、または両方をその単離された抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部分かその単離された抗ＥｒｂＢ３結合部分のどちらかと同等またはそれ以上に強力に阻害することができる。例となるＰＢＡは（ｉ）腫瘍細胞の増殖を、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％もしくはそれ以上阻害する、または（ｉｉ）ＩＧＦ‐１Ｒ、ＥｒｂＢ３もしくはＡｋｔのリン酸化を、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％もしくはそれ以上、例えば、その単離された抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部分かその単離された抗ＥｒｂＢ３結合部分のどちらかと同様の程度まで、もしくはそれ以上に強力に阻害する、または（ｉ）と（ｉｉ）の両方である。例となるＰＢＡは（ｉｉｉ）安定である、例えば、４℃、室温もしくは３７℃で１日、２日、３日、４日、５日もしくはそれ以上の後に溶液中で少なくとも８０％が単量体である、または（ｉｖ）少なくとも５０℃、５５℃、６０℃、６５℃もしくはそれ以上の（例えば、ＤＳＦによって決定されるような）Ｔｍを有する、または（ｉｉｉ）と（ｉｖ）の両方である。本明細書に記載されるＰＢＡは、例えば、癌を有する対象を標的とするために使用され得る。
【０１２３】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの免疫グロブリンＣＲはＩｇＧ重鎖のＣＲを含むことができ、それはＦｃ領域を含むことができる。免疫グロブリンの定常ドメインは重‐軽鎖対として存在することができ、その重鎖Ｆｃ領域は、別のそのような重‐軽鎖対のＣＨ３ドメインと（例えば、ジスルフィド結合により）結合するＣＨ３ドメインを含むことができる。免疫グロブリンＣＲ部分はまたＣＨ２ドメイン、ヒンジ部および／またはＣＨ１ドメインを含み得る。本明細書にさらに記載されるように、ＰＢＡのＣＨ１ドメイン、ヒンジ部、ＣＨ２ドメイン、もしくはＣＨ３ドメインのそれぞれは天然（または野生型）のドメインであり得、またはそれは、特定のドメインが、ＣＨ３関連活性およびＣＬ関連活性のどちらか、または両方など、その所望の生物活性を保持することを条件として、１つ以上のアミノ酸置換（例えば、保存的置換）、付加または欠失によって天然のドメインとは異なり得る。ＣＨ１ドメイン、ヒンジ部、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインは、存在する場合は、それらが天然で生じるＮ末端からＣ末端への順序で、すなわち、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ部、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインの順序であることが好ましい。これらのドメインは直接的または間接的に互いに連結または結合し得る。間接的結合は、１つ以上のアミノ酸からなるリンカーを介する結合である。１つの実施形態では、各ＣＨドメインその隣接するドメインに直接的に結合する。したがって、１つの実施形態では、ＣＨ１ドメインはそのＣ末端でヒンジドメインのＮ末端に結合し、ヒンジドメインはそのＣ末端でＣＨ２ドメインのＮ末端に結合し、ＣＨ２ドメインはそのＣ末端でＣＨ３ドメインのＮ末端に結合する。
【０１２４】
ある特定のＰＢＡは少なくとも２つの抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位と少なくとも２つの抗ＥｒｂＢ３結合部位を含み、それらの各々はそれぞれＩＧＦ‐１ＲまたはＥｒｂＢ３に特異的に結合する。それらの結合部位は、各結合部位がそのそれぞれの標的に特異的に結合することを条件として、任意の種類の免疫グロブリン由来または模倣結合部位であり得る。例えば、結合部位はＦａｂドメイン、ｓｃＦｖ、または単一ドメイン抗体の断片であり得る。ＰＢＡの抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位と抗ＥｒｂＢ３結合部位は同じ種類の結合部位でも異なる種類の結合部位でもよい。例えば、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位はＦａｂであってよく、そして、抗ＥｒｂＢ３結合部位はｓｃＦｖであってよい。あるいは、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位はｓｃＦｖであってよく、そして、抗ＥｒｂＢ３結合部位はＦａｂであってよい。別の実施形態では、１つの抗ＥｒｂＢ３結合部位はＦａｂであり、そして、別の抗ＥｒｂＢ３結合部位はｓｃＦｖであり、別の実施形態では、１つの抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位はＦａｂであり、そして、別の抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位はｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、第１および第２のＦａｂはそれぞれ免疫グロブリンＣＲドメインのＮ末端およびＣ末端に結合する。いくつかの実施形態では、第１および第２のｓｃＦｖはそれぞれ免疫グロブリンＣＲドメインのＮ末端およびＣ末端に結合する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＦａｂドメインは（例えば、ＦａｂとＣＲの自然の配置で）免疫グロブリンＣＲドメインのＮ末端に結合し、そして、少なくとも１つのｓｃＦｖは免疫グロブリンＣＲドメインのＣ末端に結合する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのｓｃＦｖは免疫グロブリンＣＲドメインのＮ末端に結合し、そして、少なくとも１つのＦａｂは免疫グロブリンＣＲドメインのＣ末端に結合する。ＦａｂおよびｓｃＦｖと抗ＩＧＦ‐１Ｒおよび抗ＥｒｂＢ３二重特異性抗体の例となる配置は表４の配置である。
【０１２５】
【表４】
0005588086.tif 000005
【０１２６】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの免疫グロブリンＣＲは第１の重鎖可変（ＶＨ）ドメインに結合するＣＨ１ドメインを含む。例えば、そのＣＨ１ドメインはＮ末端で第１ＶＨドメインのＣ末端に結合し得る。
【０１２７】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡの免疫グロブリンＣＲは第２ＶＨドメインに結合するＣＨ３ドメインを含む。ＩｇＧの第１結合部位および第２結合部位に基づく（例えば、ＩｇＧのＣＲの少なくとも一部およびＩｇＧの少なくとも一部に由来する、または含む）、本明細書において提供されるＰＢＡについて言及するとき、「第１」結合部位は、免疫グロブリンＣＲ部分に対してＮ末端に位置する結合部位を指し、一方、「第２」結合部位は、免疫グロブリンＣＲ部分に対してＣ末端に位置する結合部位を指す。例えば、ＣＨ３ドメインはそのＣ末端で第２ＶＨドメインのＮ末端に結合し得る。そのＣＨ３ドメインはそのＣ末端でリンカーのＮ末端に結合してよく、そのリンカーはそのＣ末端で第２ＶＨドメインのＮ末端に結合する。そのようなリンカーは、そのタンパク質が適切な三次元構造を得て生物活性を有するようになることができるように免疫グロブリンの定常領域と第２ＶＨドメインの間に柔軟性をもたらすのに有用であり得る。
【０１２８】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、抗体に通常見られるような（すなわち、２つのＦａｂを含む）抗原結合部位である２つの結合部位を含む。そのようなＰＢＡはたいてい２本の軽鎖を含み、各軽鎖は２本の重鎖のそれぞれのＶＨドメインと（例えば、ジスルフィド結合により）結合して２つの結合部位を形成する軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。そのＶＬドメインは軽鎖（ＣＬ）定常ドメインし、軽鎖Ｆａｂ領域を形成することができる。例えば、ＶＬドメインはそのＣ末端でＣＬドメインのＮ末端に結合し得る。第１および第２結合部位がＦａｂである実施形態では、ＰＢＡは第１および第２軽鎖と呼称される２つの異なる軽鎖を有し、第１および第２軽鎖はそれぞれ第１および第２ＶＬドメインを含み、任意で、それぞれ第１および第２のＣＬドメインを含んでもよく、そして、それぞれ第１および第２ＶＨドメインと結合（例えば、二量体化）し、任意で第１および第２のＣＨ１ドメインと結合する。
【０１２９】
ＰＢＡが１つ以上のｓｃＦｖを含む実施形態では、各ｓｃＦｖのＶＨドメインはｓｃＦｖリンカーに結合し、それはＶＬドメインに結合し、そしてＶＨドメインとＶＬドメインは互いに結合して抗原結合部位を形成する。１つの実施形態では、ＶＨドメインはそのＣ末端でｓｃＦｖリンカーのＮ末端に結合し、それはそのＣ末端でＶＬドメインのＮ末端に結合する。１つのｓｃＦｖが免疫グロブリンＣＲのＮ末端に結合し、そして、１つのｓｃＦｖがそのＣ末端に結合する実施形態では、その免疫グロブリンＣＲのＮ末端は第１ＶＨドメインに結合し、それは第１のｓｃＦｖリンカーに結合し、それは第１ＶＬドメインに結合し、そして第１ＶＨドメインと第１ＶＬドメインは第１結合部位を形成する。前記免疫グロブリンＣＲのＣ末端は第２ＶＨドメインに結合し、それは第２のｓｃＦｖリンカーに結合し、それは第２ＶＬドメインに結合し、そして第２ＶＨドメインと第２ＶＬドメインは第２結合部位を形成し、２つのそのような免疫グロブリンＣＲは（例えば、少なくとも１つの結合、例えば、ジスルフィド結合またはファンデアワールス結合により）二量体化するか、それとも結合して単一の四価タンパク質を形成する。
【０１３０】
好ましい実施形態では、免疫グロブリンＣＲはヒト免疫グロブリンＣＲであり、すなわち、それはヒト免疫グロブリンレパートリーから得られるアミノ酸配列から基本的になる。免疫グロブリンＣＲは任意の免疫グロブリンアイソタイプ、クラスまたはサブクラスのＣＲであり得る。１つの実施形態では、免疫グロブリンＣＲはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のＣＲのようなＩｇＧのＣＲである。ある特定の実施形態では、そのＣＲは少なくとも２つの異なるクラスまたはサブクラスまたはタイプの免疫グロブリンから構成されるハイブリッドである。例えば、免疫グロブリンＣＲはＩｇＧ１由来の１つのドメインとＩｇＧ４由来の１つ以上の他のドメインを有し得る。本明細書にさらに記載されるように、ある特定の実施形態では、免疫グロブリンＣＲ内のドメイン（例えば、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ部、ＣＨ２ドメインまたはＣＨ３ドメイン）は普通１つのアイソタイプの免疫グロブリンに由来し得るが、例えば別のタイプまたはクラスの免疫グロブリンＣＲの特質を変異型免疫グロブリンＣＲに与えるために１つ以上のアミノ酸変異（例えば、置換、付加または欠失）を有し得る。
【０１３１】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡはＩｇＧ−（ｓｃＦｖ）２構造を有する。そのようなタンパク質は２つの第１結合部位を有するＩｇＧ抗体を含み、第２結合部位を有するｓｃＦｖがそのＩｇＧ抗体に、例えば、そのＩｇＧタンパク質の２つのＣ末端のそれぞれに結合する。例となるＩｇＧ−（ｓｃＦｖ）２は、ＩｇＧがＩｇＧ１であるＩｇＧ１−（ｓｃＦｖ）２である。
【０１３２】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡはｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖにより表される構造を有する重鎖を含み、そのＰＢＡは（ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ）２構造を有し得る。そのＦｃはヒンジ部、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含むＦｃ領域であり得る。ある特定の実施形態では、そのようなタンパク質はＣＨ１またはＣＬドメインを含まない。
【０１３３】
１つの実施形態では、ＰＢＡはＩｇＧ様分子を形成する２つの同じ重‐軽鎖対を含み、各対は抗ＩＧＦ‐１Ｒ  Ｆａｂである１つの結合部分と抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖである別の結合部分を含み、そして、その２つの結合部分は免疫グロブリンＣＲを介して連結され、その免疫グロブリンＣＲはＮ末端からＣ末端へヒンジドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインの順序でそれらを含む。そのｓｃＦｖはリンカーを介してそのＣＨ３ドメインに結合し得る。例となる実施形態では、ＰＢＡは二量体を形成する２つの同じ重鎖、および各軽鎖が重鎖と結合する２つの同一の軽鎖を含み、そして各重鎖はそのＣ末端でＣＨ１ドメインのＮ末端に結合する第１ＶＨドメインを含み、そのＣＨ１ドメインはそのＣ末端でヒンジドメインのＮ末端に結合し、そのヒンジドメインはそのＣ末端でＣＨ２ドメインのＮ末端に結合し、そのＣＨ２ドメインはそのＣ末端でＣＨ３ドメインのＮ末端に結合し、そのＣＨ３ドメインはそのＣ末端でリンカーのＮ末端に結合し、そのリンカーはそのＣ末端で第２ＶＨドメインのＮ末端に結合し、その第２ＶＨドメインはそのＣ末端でｓｃＦｖリンカーのＮ末端に結合し、そのｓｃＦｖリンカーはそのＣ末端で第２ＶＬドメインのＮ末端に結合し、その第２ＶＬドメインは第２ＶＨドメインと結合して第２結合部位を形成し、および、各軽鎖はそのＣ末端でＣＬドメインのＮ末端に結合する第１ＶＬドメインを含み、その第１ＶＨドメインと第１ＶＬドメインは第１結合部位を形成する。１つの実施形態では、第１結合部位は抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位であり、第２結合部位は抗ＥｒｂＢ３結合部位である。別の実施形態では、第１結合部位は抗ＥｒｂＢ３結合部位であり、第２結合部位は抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位である。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、配列番号３０４のコンセンサス配列からなるＶＨＣＤＲ３、ならびに任意で、それぞれ配列番号３０２および３０３のコンセンサス配列からなるＶＨＣＤＲ１および／またはＶＨＣＤＲ２を含むＩＧＦ‐１Ｒ結合部位を含む（図１を参照のこと）。ある特定の実施形態では、配列番号３０４の最後の（Ｃ末端）Ｘアミノ酸はＩではない。ＰＢＡはまた配列番号３０７または３０８のコンセンサス配列からなるＶＬＣＤＲ３、ならびに任意で、それぞれ配列番号３０５および３０６の配列からなるＶＬＣＤＲ１およびＶＬＣＤＲ２のどちらか、または両方を含む抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位を含み得る（図２を参照のこと）。ある特定の実施形態では、ＰＢＡはそれぞれ配列番号３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、および３０７（または３０８）のコンセンサス配列からなるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含む抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位を含む。
【０１３５】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡは配列番号３１１のコンセンサス配列からなるＶＨＣＤＲ３、ならびに任意で、それぞれ配列番号３０９および３１０の配列からなるＶＨＣＤＲ１および／またはＶＨＣＤＲ２を含む抗ＥｒｂＢ３結合部位を含む（図３を参照のこと）。ＰＢＡはまた配列番号３１４または３１５のコンセンサス配列からなるＶＬＣＤＲ３、ならびに任意で、それぞれ配列番号３１２および３１３の配列からなるＶＬＣＤＲ１および／またはＶＬＣＤＲ２を含む抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位を含む（図４を参照のこと）。ある特定の実施形態では、ＰＢＡはそれぞれ配列番号３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、および３１４（または３１５）の配列からなるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含む抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位を含む。
【０１３６】
配列番号３０２〜３１５の配列は以下に示される。
抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＣＤＲ：
ＶＨＣＤＲ１コンセンサス配列：ＧＦＸ１ＦＳＸ２ＹＰＭＨ（配列番号３０２）
ＶＨＣＤＲ２コンセンサス配列：ＩＳＸ１Ｘ２ＧＧＡＴＸ３ＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３０３）
ＶＨＣＤＲ３コンセンサス配列：ＤＦＹＸ１Ｘ２ＬＴＧＮＡＦＤＸ３（配列番号３０４）
ＶＬＣＤＲ１配列：            ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号３０５）
ＶＬＣＤＲ２コンセンサス配列：ＡＸ１ＳＴＸ２ＱＳ（配列番号３０６）
ＶＬＣＤＲ３コンセンサス配列：ＱＱＹＸ１Ｘ２Ｘ３ＰＬＴ（配列番号３０７）およびＱＱＹＷＸ１Ｘ２ＰＬＴ（配列番号３０８）
抗ＥｒｂＢ３  ＣＤＲ：
ＶＨＣＤＲ１配列：            ＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨ（配列番号３０９）
ＶＨＣＤＲ２コンセンサス配列：ＩＳＷＸ１ＳＧＳＸ２ＧＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３１０）
ＶＨＣＤＲ３コンセンサス配列：ＤＬＧＸ１Ｘ２ＱＷＸ３Ｘ４ＧＦＤＹ（配列番号３１１）
ＶＬＣＤＲ１配列：            ＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳ（配列番号３１２）
ＶＬＣＤＲ２配列：            ＧＫＮＮＲＰＳ（配列番号３１３）
ＶＬＣＤＲ３コンセンサス配列：Ｘ１ＳＲＤＸ２Ｘ３ＧＸ４Ｘ５ＷＶ（配列番号３１４）およびＸ１ＳＲＤＸ２ＰＧＸ３Ｘ４ＷＶ（配列番号３１５）
【０１３７】
数字の前のアミノ酸「Ｘ」はそれぞれ不定のアミノ酸であり、図１、２、３または４中の対応する位置に局在するあらゆるアミノ酸などの任意のアミノ酸を独立して表す。配列番号３０２のＸ１〜Ｘ２、配列番号３０３のＸ１〜Ｘ２および配列番号３０４のＸ１〜Ｘ３に対する例となるアミノ酸は図１のアミノ酸配列中の対応する位置に示される。配列番号３０６のＸ１〜Ｘ２、配列番号３０７のＸ１〜Ｘ３および配列番号３０８のＸ１〜Ｘ２に対する例となるアミノ酸は図２のアミノ酸配列中の対応する位置に示される。配列番号３１０のＸ１〜Ｘ２および配列番号３１１のＸ１〜Ｘ４に対する例となるアミノ酸は図３のアミノ酸配列中の対応する位置に示される。配列番号３１４のＸ１〜Ｘ５または配列番号３１５のＸ１〜Ｘ４に対する例となるアミノ酸は図４のアミノ酸配列中の対応する位置に示される。
【０１３８】
例となるＰＢＡは、それぞれ配列番号３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、および３０７（または３０８）の配列からなるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含む抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位、ならびに、それぞれ配列番号３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、および３１４（または３１５）の配列からなるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含む抗ＥｒｂＢ３結合部位を含む。
【０１３９】
例となるＰＢＡは、図１〜４に示されるＶＲのうちの１つ以上に由来する１つ以上のＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位は図１のＶＨドメインのうちの１つの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、および／または図２のＶＬドメインのうちの１つの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含む。例えば、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部分は配列番号１１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３、ならびに／または配列番号３５のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３（１６ＦのＣＤＲ）を含み得る。ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部分は、（ｉ）その結合部分は１６Ｆの結合部分ではない、または（ｉｉ）その抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合単位のＣＤＲのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つが１６Ｆの抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合単位中に存在しない、または（ｉｉｉ）その抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合単位のＶＨドメインもしくはＶＬドメインがそれぞれ１６Ｆ中の対応するＶＨドメインもしくはＶＬドメインと同一ではないことを条件として（すなわち、その場合）、図１および２のＣＤＲの組合せを含む。
【０１４０】
例となるＰＢＡは、図１中の配列の、例えば、配列番号８、９、１０および１１のうちの１つのＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメインを包含する抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合単位を含む（これらのＣＤＲの位置は図１中に示される）。ＰＢＡは、配列番号３２、３３、３４および３５のうちの１つのＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合単位を含むこともできる（これらのＣＤＲの位置は図２に示される）。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、配列番号８、９、１０および１１のうちの１つのＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号３２、３３、３４および３５のうちの１つのＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合単位を含む。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合ドメインは、配列番号８のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号３２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合ドメインは、配列番号９のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号３３のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合ドメインは、配列番号１０のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号３４のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合ドメインは、配列番号１１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号３５のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合ドメインは、配列番号８のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号３３のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合ドメインは、配列番号１０のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号３２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。
【０１４１】
ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合部位は図３のＶＨドメインのうちの１つの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲ、および／または図４のＶＬドメインのうちの１つの１つ、２つ、もしくは３つのＣＤＲを含む。例えば、抗ＥｒｂＢ３結合部分は配列番号１４３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３、ならびに／または配列番号１７５のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３（１６ＦのＣＤＲ）を含み得る。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合部分は、（ｉ）その結合部分は１６Ｆの結合部分ではない、または（ｉｉ）その抗ＥｒｂＢ３結合単位のＣＤＲのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは６つが１６Ｆの抗ＥｒｂＢ３結合単位中に存在しない、または（ｉｉｉ）その抗ＥｒｂＢ３結合単位のＶＨドメインもしくはＶＬドメインがそれぞれ１６Ｆ中の対応するＶＨドメインもしくはＶＬドメインと同一ではないことを条件として（すなわち、その場合）、図１および２のＣＤＲの組合せを含む。
【０１４２】
例となるＰＢＡは、図３中の配列の、例えば、配列番号１３４〜１４３のうちの１つのＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメインを包含する抗ＥｒｂＢ３結合単位を含む（これらのＣＤＲの位置は図３に示される）。ＰＢＡは、配列番号１６６〜１７５のうちの１つのＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する抗ＥｒｂＢ３結合単位を含むこともできる（これらのＣＤＲの位置は図４に示される）。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、配列番号１３４〜１４３のうちの１つのＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号１６６〜１７５のうちの１つのＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する抗ＥｒｂＢ３結合単位を含む。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１３４のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号１６６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１３５のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号１６７のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１３６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号１６８のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１３７のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号１６９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１３８のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号１７０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１３９のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号１７１のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１４０のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号１７２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１４１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号１７３のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１４２のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号１７４のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１４３のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号１７５のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１３６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号１６９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。
【０１４３】
結合部位は、結合部位がそれらの標的になお特異的に結合することができることを条件として、１つ、２つ、または３つのアミノ酸が変更されている、例えば、置換、付加または欠失されている図１〜４のＶＲの１つ以上のＣＤＲを含むこともできる。
【０１４４】
ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位は、次のコンセンサス配列を含むＶＨドメインを包含する：ＥＶＱＬＬＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＸ１ＦＳＸ２ＹＰＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＸ３ＳＩＳＸ４Ｘ５ＧＧＡＴＸ６ＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＸ７ＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＦＹＸ８Ｘ９ＬＴＧＮＡＦＤＸ１０ＷＧＱＧＴＸ１１ＶＴＶＳＳ（配列番号１；ＣＤＲに下線が引かれている）。
このコンセンサス配列は、２４種の高親和性抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位のＶＨ配列を配列比較ることにより得た。その配列比較は図１に示されている。
【０１４５】
ある特定の実施形態では、配列番号１のアミノ酸Ｘ１〜Ｘ１１のそれぞれは任意のアミノ酸を独立して表す。他の実施形態では、配列番号１のアミノ酸Ｘ１〜Ｘ１１のそれぞれは、図１中の配列のいずれかのそれらの位置に示される任意のアミノ酸を独立して表す。１つのそのような実施形態では、Ｘ１はＴ、Ｘ２はＶ、Ｘ３はＳ、Ｘ４はＳ、Ｘ５はＳ、Ｘ６はＲ、Ｘ７はＡ、Ｘ８はＤ、Ｘ９はＩ、Ｘ１０はＩ、およびＸ１１はＴである（ＳＦ重鎖１６Ｆ；配列番号１１）。例となるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨ配列は配列番号８〜３１として示される。
【０１４６】
ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位のＶＨドメインは、その配列が、例えば、少なくとも１つのアミノ酸でそれと異なることによりＳＦ重鎖１６Ｆの配列ではないことを条件として（すなわち、その場合）、配列番号１のコンセンサス配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位のＶＨドメインは、Ｘ１がＴではなく、Ｘ２がＶではなく、Ｘ６がＲではなく、Ｘ８がＤではなく、または、Ｘ１０がＩではないことを条件として（すなわち、その場合）、配列番号１のコンセンサス配列を含む。例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨ配列は配列番号８〜１０および１２〜３１として示される。
【０１４７】
ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位は、次のコンセンサス配列を含むＶＬドメインを包含する：
ＤＩＱＸ１ＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＸ２ＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＸ３ＳＴＸ４ＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＸ５ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＸ６Ｘ７ＴＹＹＣＱＱＹＸ８Ｘ９Ｘ１０ＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２；ＣＤＲに下線が引かれている）。
【０１４８】
このコンセンサス配列は、約１００種の高親和性抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位のＶＬ配列を配列比較することにより得た。その配列比較は図２に示されている。
【０１４９】
ある特定の実施形態では、配列番号２のアミノ酸Ｘ１〜Ｘ１０のそれぞれは任意のアミノ酸を独立して表す。他の実施形態では、配列番号２のアミノ酸Ｘ１〜Ｘ１０のそれぞれは、図２中の配列のいずれかのそれらの位置に示される任意のアミノ酸を独立して表す。１つのそのような実施形態では、Ｘ１はＭ、Ｘ２はＴ、Ｘ３はＡ、Ｘ４はＬ、Ｘ５はＤ、Ｘ６はＦ、Ｘ７はＡ、Ｘ８はＦ、Ｘ９はＴ、およびＸ１０はＦである（ＳＦκ軽鎖１６Ｆ；配列番号３５）。例となるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬ配列は配列番号３２〜１３３として示される。
【０１５０】
ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位のＶＬドメインは、その配列が、例えば、少なくとも１つのアミノ酸でそれと異なることによりＳＦ軽鎖１６Ｆの配列ではないことを条件として（すなわち、その場合）、配列番号２のコンセンサス配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位のＶＬドメインは、Ｘ２がＴではなく、Ｘ６がＦではなく、またはＸ８がＦではないことを条件として（すなわち、その場合）、配列番号２のコンセンサス配列を含む。Ｘ２がＴではなく、Ｘ６がＦではなく、および／またはＸ８がＦではないとき、次のコンセンサス配列のようにＸ２はＬであり得、Ｘ６はＦであり得、および／またはＸ８はＦであり得る：
ＤＩＱＸ１ＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＸ２ＳＴＸ３ＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＸ４ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＳＸ５ＴＹＹＣＱＱＹＷＸ６Ｘ７ＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３；ＣＤＲに下線が引かれている）。
【０１５１】
ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位のＶＬドメインは配列番号３のコンセンサス配列を含み、配列番号３のアミノ酸Ｘ１〜Ｘ７のそれぞれは任意のアミノ酸を独立して表す。他の実施形態では、配列番号３のアミノ酸Ｘ１〜Ｘ７のそれぞれは、図２中の配列のいずれかのそれらの位置に示される任意のアミノ酸を独立して表す。例となるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬ配列は配列番号３２〜３４および３６〜１３３として示される。
【０１５２】
ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合部位は、次のコンセンサス配列を含むＶＨドメインを包含する：
Ｘ１ＶＱＬＶＸ２ＳＧＧＧＬＶＱＰＧＸ３ＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＸ４ＧＩＳＷＸ５ＳＧＳＸ６ＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＸ７ＥＤＴＡＸ８ＹＹＣＡＲＤＬＧＸ９Ｘ１０ＱＷＸ１１Ｘ１２ＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４；ＣＤＲに下線が引かれている）。
【０１５３】
このコンセンサス配列は、３２種の高親和性抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位のＶＨ配列を配列比較することにより得た。その配列比較は図３に示されている。
【０１５４】
ある特定の実施形態では、配列番号４のアミノ酸Ｘ１〜Ｘ１２のそれぞれは任意のアミノ酸を独立して表す。他の実施形態では、配列番号４のアミノ酸Ｘ１〜Ｘ１２のそれぞれは、図３中の配列のいずれかのそれらの位置に示される任意のアミノ酸を独立して表す。１つのそのような実施形態では、Ｘ１はＱ、Ｘ２はＱ、Ｘ３はＧ、Ｘ４はＡ、Ｘ５はＮ、Ｘ６はＩ、Ｘ７はＰ、Ｘ８はＶ、Ｘ９はＹ、Ｘ１０はＮ、Ｘ１１はＶ、およびＸ１２はＥである（Ｃ８重鎖１６Ｆ；配列番号１４３）。例となるＥｒｂＢ３  ＶＨ配列は配列番号１３４〜１６５として示される。
【０１５５】
ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合部位のＶＨドメインは、配列が、例えば、少なくとも１つのアミノ酸において異なることによりＣ８重鎖１６Ｆの配列ではないことを条件として（すなわち、その場合）、配列番号４のコンセンサス配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合部位のＶＨドメインは、アミノ酸Ｘ７がＰではなく、またはＸ８はＶではないことを条件として（すなわち、その場合）、配列番号４のコンセンサス配列を含む。Ｘ７がＰではなく、および／またはＸ８がＶではないとき、次のコンセンサス配列のようにＸ７はＡであり得、および／またはＸ８はＬであり得る：
Ｘ１ＶＱＬＶＸ２ＳＧＧＧＬＶＱＰＧＸ３ＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＸ４ＧＩＳＷＸ５ＳＧＳＸ６ＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＤＬＧＸ７Ｘ８ＱＷＸ９Ｘ１０ＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５；ＣＤＲに下線が引かれている）。
【０１５６】
ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合部位のＶＨドメインは配列番号５のコンセンサス配列を含み、配列番号５のアミノ酸Ｘ１〜Ｘ１０のそれぞれは任意のアミノ酸を独立して表す。他の実施形態では、配列番号５のアミノ酸Ｘ１〜Ｘ１０のそれぞれは、図３中の配列のいずれかのそれらの位置に示される任意のアミノ酸を独立して表す。例となるＥｒｂＢ３  ＶＨ配列は配列番号１３４〜１４２および１４４〜１６５として示される。
【０１５７】
ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合部位は、次のコンセンサス配列を含むＶＬドメインを包含する：
ＳＸ１ＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＸ２ＳＧＮＸ３ＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＸ４ＳＲＤＸ５Ｘ６ＧＸ７Ｘ８ＷＶＦＧＧＧＴＫＶＴＶＸ９Ｇ（配列番号６；ＣＤＲに下線が引かれている）。
【０１５８】
このコンセンサス配列は、３５種の高親和性抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位のＶＬ配列を配列比較することにより得た。その配列比較は図４に示されている。
【０１５９】
ある特定の実施形態では、配列番号６のアミノ酸Ｘ１〜Ｘ９のそれぞれは任意のアミノ酸を独立して表す。他の実施形態では、配列番号６のアミノ酸Ｘ１〜Ｘ１０のそれぞれは、図４中の配列のいずれかのそれらの位置に示される任意のアミノ酸を独立して表す。１つの実施形態では、Ｘ１はＹ、Ｘ２はＴ、Ｘ３はＳ、Ｘ４はＮ、Ｘ５はＳ、Ｘ６はＳ、Ｘ７はＮ、Ｘ８はＨ、およびＸ９はＬである（Ｃ８λ軽鎖１６Ｆ；配列番号１７５）。例となるＥｒｂＢ３  ＶＬ配列は配列番号１６６〜２００として示される。
【０１６０】
ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合部位のＶＬドメインは、その配列が、例えば、少なくとも１つのアミノ酸でそれと異なることによりＣ８λ軽鎖１６Ｆの配列ではないことを条件として（すなわち、その場合）、配列番号６のコンセンサス配列を含む。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合部位のＶＬドメインは、Ｘ６がＳではないことを条件として（すなわち、その場合）、配列番号６のコンセンサス配列を含む。Ｘ６がＳではないとき、次のコンセンサス配列のようにＸ６はＰであり得る：
ＳＸ１ＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＸ２ＳＧＮＸ３ＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＸ４ＳＲＤＸ５ＰＧＸ６Ｘ７ＷＶＦＧＧＧＴＫＶＴＶＸ８Ｇ（配列番号７；ＣＤＲに下線が引かれている）。
【０１６１】
ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合部位のＶＬドメインは配列番号７のコンセンサス配列を含み、配列番号７のアミノ酸Ｘ１〜Ｘ８のそれぞれは任意のアミノ酸を独立して表す。他の実施形態では、配列番号７のアミノ酸Ｘ１〜Ｘ８のそれぞれは、図４中の配列のいずれかのそれらの位置に示される任意のアミノ酸を独立して表す。例となるＥｒｂＢ３  ＶＬ配列は配列番号１６６〜１７４および１７６〜２００として示される。
【０１６２】
例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインにはＭ５７  ＶＨドメイン（配列番号８）、Ｍ７８  ＶＨドメイン（配列番号９）、Ｐ４  ＶＨドメイン（配列番号１０）およびＳＦ  ＶＨドメイン（配列番号１１）が挙げられる。例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインにはＭ５７  ＶＬドメイン（配列番号３２）、Ｍ７８  ＶＬドメイン（配列番号３３）、Ｐ４  ＶＬドメイン（配列番号３４）およびＳＦ  ＶＬドメイン（配列番号３５）が挙げられる。
【０１６３】
例となる抗ＥｒｂＢ３  ＶＨドメインにはＢ６０  ＶＨドメイン（配列番号１３４）、Ｂ７２  ＶＨドメイン（配列番号１３５）、Ｍ２７  ＶＨドメイン（配列番号１３６）、Ｍ７  ＶＨドメイン（配列番号１３７）、Ｐ１  ＶＨドメイン（配列番号１３８）、Ｍ２７  ＶＨドメイン（配列番号１３９）、Ｂ６９  ＶＨドメイン（配列番号１４０）、Ｐ６  ＶＨドメイン（配列番号１４１）、Ｍ１．３  ＶＨドメイン（配列番号１４２）、およびＣ８  ＶＨドメイン（配列番号１４３）が挙げられる。例となる抗ＥｒｂＢ３  ＶＬドメインにはＢ６０  ＶＬドメイン（配列番号１６６）、Ｂ７２  ＶＬドメイン（配列番号１６７）、Ｍ２７  ＶＬドメイン（配列番号１６８）、Ｍ７  ＶＬドメイン（配列番号１６９）、Ｐ１  ＶＬドメイン（配列番号１７０）、Ｍ２７  ＶＬドメイン（配列番号１７１）、Ｂ６９  ＶＬドメイン（配列番号１７２）、Ｐ６ＶＨドメイン（配列番号１７３）、Ｍ１．３  ＶＬドメイン（配列番号１７４）、およびＣ８  ＶＬドメイン（配列番号１７５）が挙げられる。
【０１６４】
結合部位は、同じモジュール名（例えば、「Ｍ５７」、「Ｍ７８」および「Ｐ４」）を有するＶＨドメインおよびＶＬドメイン、すなわち、元々単離されたその結合部位の抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含むことができ、または、それらはうまく組み合わされ得る。例えば、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部分は、（ｉ）モジュールＭ５７のＶＨドメイン（配列番号８）およびモジュールＭ５７のＶＬドメイン（配列番号３２）、モジュールＭ７８のＶＨドメイン（配列番号９）およびモジュールＭ７８のＶＬドメイン（配列番号３３）、（ｉｉｉ）モジュールＰ４のＶＨドメイン（配列番号１０）およびモジュールＰ４のＶＬドメイン（配列番号３４）、または（ｉｖ）モジュールＳＦのＶＨドメイン（配列番号１１）およびモジュールＳＦのＶＬドメイン（配列番号３５）を含み得る。抗ＥｒｂＢ３結合部分は、（ｉ）モジュールＢ６０のＶＨドメイン（配列番号１３４）およびモジュールＢ６０のＶＬドメイン（配列番号１６６）、（ｉｉ）モジュールＢ７２のＶＨドメイン（配列番号１３５）およびモジュールＢ７２のＶＬドメイン（配列番号１６７）、（ｉｉｉ）モジュールＭ２７のＶＨドメイン（配列番号１３６）およびモジュールＭ２７のＶＬドメイン（配列番号１６８）、（ｉｖ）モジュールＭ７のＶＨドメイン（配列番号１３７）およびモジュールＭ７のＶＬドメイン（配列番号１６９）、（ｖ）モジュールＰ１のＶＨドメイン（配列番号１３８）およびモジュールＰ１のＶＬドメイン（配列番号１７０）、（ｖｉ）モジュールＭ２７のＶＨドメイン（配列番号１３９）およびモジュールＭ２７のＶＬドメイン（配列番号１７１）、（ｖｉｉ）モジュールＢ６９のＶＨドメイン（配列番号１４０）およびモジュールＢ６９のＶＬドメイン（配列番号１７２）、（ｖｉｉｉ）モジュールＰ６のＶＨドメイン（配列番号１４１）およびモジュールＰ６のＶＬドメイン（配列番号１７３）、（ｉｘ）モジュールＭ１．３のＶＨドメイン（配列番号１４２）およびモジュールＭ１．３のＶＬドメイン（配列番号１７４）、ならびに（ｘ）モジュールＣ８のＶＨドメイン（配列番号１４３）およびモジュールＣ８のＶＬドメイン（配列番号１７５）を含み得る。
【０１６５】
ＰＢＡの結合部分はうまく組み合わされたＶＨドメインおよびＶＬドメインを含むこともできる。すなわち、結合部分は１つのモジュール由来のＶＨドメインおよび別のモジュール由来のＶＬドメインを含み得る。例えば、ＩＧＦ‐１Ｒ結合部分は、モジュールＭ５７のＶＨドメイン（配列番号８）およびモジュールＭ７８のＶＬドメイン（配列番号３３）、またはモジュールＰ４のＶＨドメイン（配列番号１０）およびモジュールＭ５７のＶＬドメイン（配列番号３２）を含み得る。抗ＥｒｂＢ３結合部分はモジュールＭ２７のＶＨドメイン（配列番号１３６）およびモジュールＭ７のＶＬドメイン（配列番号１６９；例えば、実施例７を参照のこと）を含み得る。高親和性でもって標的に結合する混合鎖結合部分が好ましい。
【０１６６】
ＰＢＡは、そのＰＢＡがＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３に特異的に結合することを条件として、本明細書に記載されるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨ（配列番号１）、ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬ（配列番号２）、ＥｒｂＢ３  ＶＨ（配列番号４）およびＥｒｂＢ３  ＶＬ（配列番号６）のコンセンサス配列のうちの２つ以上に含まれるアミノ酸配列を含むこともできる。例えば、ＰＢＡは、
−  配列番号１を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインおよび配列番号２を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメイン、
−  配列番号１を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインおよび配列番号４を含むＥｒｂＢ３  ＶＨドメイン、
−  配列番号１を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインおよび配列番号６を含むＥｒｂＢ３  ＶＬドメイン、
−  配列番号１を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメイン、配列番号２を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメイン、および配列番号４を含むＥｒｂＢ３  ＶＨドメイン、
−  配列番号１を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメイン、配列番号２を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメイン、および配列番号６を含むＥｒｂＢ３  ＶＬドメイン、
−  配列番号１を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメイン、配列番号２を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメイン、配列番号４を含むＥｒｂＢ３  ＶＨドメイン、および配列番号６を含むＥｒｂＢ３  ＶＬドメイン、
−  配列番号２を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインおよび配列番号４を含むＥｒｂＢ３  ＶＨドメイン、
−  配列番号２を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインおよび配列番号６を含むＥｒｂＢ３  ＶＬドメイン、
−  配列番号２を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメイン、配列番号４を含むＥｒｂＢ３  ＶＨドメイン、および配列番号６を含むＥｒｂＢ３  ＶＬドメイン、または
−  配列番号４を含むＥｒｂＢ３  ＶＨドメインおよび配列番号６を含むＥｒｂＢ３  ＶＬドメイン、
のうちのいずれかを含むことができ、その中で、そのＰＢＡがＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３に特異的に結合することを条件として、不定のアミノ酸は独立して任意のアミノ酸であり、または、不定のアミノ酸は独立して、図１〜４のこれらのコンセンサス配列のそれぞれについて対応する位置に示されるアミノ酸のうちのいずれかである。
【０１６７】
ＰＢＡは、そのＰＢＡがＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３に特異的に結合することを条件として、そのＰＢＡが１６Ｆではないことを条件として（すなわち、その場合）、本明細書に記載されるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨ（配列番号１）、ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬ（配列番号２）、ＥｒｂＢ３  ＶＨ（配列番号４）およびＥｒｂＢ３  ＶＬ（配列番号６）のコンセンサス配列のうちの２つ以上に含まれるアミノ酸配列を含むこともできる。例えば、ＰＢＡは、それらがＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３に特異的に結合することを条件として、本明細書に記載されるＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨ（配列番号１）、ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬ（配列番号３）、ＥｒｂＢ３  ＶＨ（配列番号５）およびＥｒｂＢ３  ＶＬ（配列番号７）のコンセンサス配列のうちの２つ以上に含まれるアミノ酸配列を含むことができる。例えば、ＰＢＡは、
−  配列番号１を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインおよび配列番号３を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメイン、
−  配列番号１を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインおよび配列番号５を含むＥｒｂＢ３  ＶＨドメイン、
−  配列番号１を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメインおよび配列番号７を含むＥｒｂＢ３  ＶＬドメイン、
−  配列番号１を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメイン、配列番号３を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメイン、および配列番号５を含むＥｒｂＢ３  ＶＨドメイン、
−  配列番号１を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメイン、配列番号３を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメイン、および配列番号７を含むＥｒｂＢ３  ＶＬドメイン、
−  配列番号１を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメイン、配列番号３を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメイン、配列番号５を含むＥｒｂＢ３  ＶＨドメイン、および配列番号７を含むＥｒｂＢ３  ＶＬドメイン、
−  配列番号３を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインおよび配列番号５を含むＥｒｂＢ３  ＶＨドメイン、
−  配列番号３を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメインおよび配列番号７を含むＥｒｂＢ３  ＶＬドメイン、
−  配列番号３を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメイン、配列番号５を含むＥｒｂＢ３  ＶＨドメイン、および配列番号７を含むＥｒｂＢ３  ＶＬドメイン、または
−  配列番号５を含むＥｒｂＢ３  ＶＨドメインおよび配列番号７を含むＥｒｂＢ３  ＶＬドメイン
を含むことができ、その中で、そのＰＢＡがＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３に特異的に結合することを条件として、不定のアミノ酸は独立して任意のアミノ酸であり、または、不定のアミノ酸は独立して、図１〜４のこれらのコンセンサス配列のそれぞれについて対応する位置に示されるアミノ酸のうちのいずれかである。
【０１６８】
例となるＰＢＡは、図１中のアミノ酸配列、例えば、配列番号８、９、１０および１１のうちの１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメインを包含する抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合単位を含む。ＰＢＡは、図２中のアミノ酸配列、例えば、配列番号３２、３３、３４および３５のうちの１つのアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合単位を含むこともできる。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、配列番号８、９、１０および１１のうちの１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、ならびに配列番号３２、３３、３４および３５のうちの１つのアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合単位を含む。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。
【０１６９】
例となるＰＢＡは、配列番号１３４〜１４３のうちの１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメインを包含する抗ＥｒｂＢ３結合単位を含む。ＰＢＡは、配列番号１６６〜１７５のうちの１つのアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する抗ＥｒｂＢ３結合単位を含むこともできる。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、配列番号１３４〜１４３のうちの１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および配列番号１６６〜１７５のうちの１つのアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する抗ＥｒｂＢ３結合単位を含む。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号１６７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合ドメインは、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。
【０１７０】
例となる実施形態では、ＰＢＡは、ＩｇＧ１のＣＨ１ドメイン、ヒンジ部、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む、それらから基本的になる、またはそれらからなる免疫グロブリンＣＲ（「ＩｇＧ１  ＣＲ」と呼称される）を含む重鎖を包含する。例となるＰＢＡは、ＩｇＧ１  ＣＲと次のアミノ酸配列：配列番号１のコンセンサス配列を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメイン、配列番号２のコンセンサス配列を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメイン、配列番号４のコンセンサス配列を含むＥｒｂＢ３  ＶＨドメイン、および配列番号６のコンセンサス配列を含むＥｒｂＢ３  ＶＬドメインのうちの１つ以上を含み、ならびに図５Ａ、５Ｂ、７Ａおよび７Ｂの重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を含むＰＢＡを含む。
【０１７１】
他の例となるＰＢＡは、ＩｇＧ１  ＣＲと次のアミノ酸配列：配列番号１のコンセンサス配列を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨドメイン、配列番号３のコンセンサス配列を含むＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬドメイン、配列番号５のコンセンサス配列を含むＥｒｂＢ３  ＶＨドメイン、および配列番号７のコンセンサス配列を含むＥｒｂＢ３  ＶＬドメインのうちの１つ以上を含む重鎖を包含し、ならびに図５Ａおよび５Ｂの重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含むが、１６の重鎖および軽鎖を除くＰＢＡを含む。
【０１７２】
元々リシンまたはアルギニンで終わるカルボキシ末端を含むＰＢＡはカルボキシペプチダーゼによってそれらのカルボキシ末端のアミノ酸を切り取られることがある。これを避けるために、そのようなカルボキシ末端に１つ以上のアミノ酸を付加することが有益であり得る。例えば、タンパク質が元々「ＶＥＩＫ」をそのカルボキシ末端に有するとき、そのリシンの除去を防ぐため、１個、２個、３個、４個、５個、またはそれ以上のアミノ酸をカルボキシ末端に付加することができる。ある特定の実施形態では、これらの付加アミノ酸はＣＬドメインに由来し得る。したがって、例えば、ＰＢＡが「ＶＥＩＫ」で終わる抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＬ配列中に終わる場合、「ＲＴ」というアミノ酸をカルボキシ末端に付加することができる（例えば、Ｐ１‐Ｇ１‐Ｐ４；配列番号２６８を参照のこと）。
【０１７３】
抗ＩＧＦ‐１Ｒ／ＥｒｂＢ３  ＰＢＡは、重鎖融合体（ハイブリッド）：ＳＦ‐Ｇ１‐Ｃ８（すなわち、１６Ｆ；配列番号２１０）、ＳＦ‐Ｇ１‐Ｐ１（配列番号２１２）、ＳＦ‐Ｇ１‐Ｍ１．３（配列番号２１４）、ＳＦ‐Ｇ１‐Ｍ２７（配列番号２１６）、ＳＦ‐Ｇ１‐Ｐ６（配列番号２１８）、ＳＦ‐Ｇ１‐Ｂ６９（配列番号２２０）、Ｐ４‐Ｇ１‐Ｃ８（配列番号２２２）、Ｐ４‐Ｇ１‐Ｐ１（配列番号２２４）、Ｐ４‐Ｇ１‐Ｍ１．３（配列番号２２６）、Ｐ４‐Ｇ１‐Ｍ２７（配列番号２２８）、Ｐ４‐Ｇ１‐Ｐ６（配列番号２３０）、Ｐ４‐Ｇ１‐Ｂ６９（配列番号２３２）、Ｍ７８‐Ｇ１‐Ｃ８（配列番号２３４）、Ｍ７８‐Ｇ１‐Ｐ１（配列番号２３６）、Ｍ７８‐Ｇ１‐Ｍ１．３（配列番号２３８）、Ｍ７８‐Ｇ１‐Ｍ２７（配列番号２４０）、Ｍ７８‐Ｇ１‐Ｐ６（配列番号２４２）、Ｍ７８‐Ｇ１‐Ｂ６９（配列番号２４４）、Ｍ５７‐Ｇ１‐Ｃ８（配列番号２４６）、Ｍ５７‐Ｇ１‐Ｐ１（配列番号２４８）、Ｍ５７‐Ｇ１‐Ｍ１．３（配列番号２５０）、Ｍ５７‐Ｇ１‐Ｍ２７（配列番号２５２）、Ｍ５７‐Ｇ１‐Ｐ６（配列番号２５４）、およびＭ５７‐Ｇ１‐Ｂ６９（配列番号２５６）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を包含することができる。抗ＩＧＦ‐１Ｒ／ＥｒｂＢ３  ＰＢＡは、κ軽鎖：ＳＦ（配列番号２０２）、Ｐ４（配列番号２０４）、Ｍ７８（配列番号２０６）、およびＭ５７（配列番号２０８）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を包含することができる。
【０１７４】
抗ＥｒｂＢ３／ＩＧＦ‐１Ｒ  ＰＢＡは、重鎖融合体（ハイブリッド）：Ｐ１‐Ｇ１‐Ｐ４（配列番号２６８）、Ｐ１‐Ｇ１‐Ｍ５７（配列番号２７０）、Ｐ１‐Ｇ１‐Ｍ７８（配列番号２７２）、Ｍ２７‐Ｇ１‐Ｐ４（配列番号２７４）、Ｍ２７‐Ｇ１‐Ｍ５７（配列番号２７６）、Ｍ２７‐Ｇ１‐Ｍ７８（配列番号２７８）、Ｍ７‐Ｇ１‐Ｐ４（配列番号２８０）、Ｍ７‐Ｇ１‐Ｍ５７（（配列番号２８２）、Ｍ７‐Ｇ１‐Ｍ７８（配列番号２８４）、Ｂ７２‐Ｇ１‐Ｐ４（配列番号２８６）、Ｂ７２‐Ｇ１‐Ｍ５７（配列番号２８８）、Ｂ７２‐Ｇ１‐Ｍ７８（配列番号２９０）、Ｂ６０‐Ｇ１‐Ｐ４（配列番号２９２）、Ｂ６０‐Ｇ１‐Ｍ５７（配列番号２９４）、Ｂ６０‐Ｇ１‐Ｍ７８（配列番号２９６）、Ｂ６０‐Ｇ２‐Ｍ７８（配列番号３５５）、およびＭ７‐Ｇ２‐Ｍ７８（配列番号３５７）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を包含することができる。抗ＥｒｂＢ３／ＩＧＦ‐１Ｒ  ＰＢＡは、λ軽鎖：Ｐ１（配列番号２５８）、Ｍ２７（配列番号２６０）、Ｍ７（配列番号２６２）、Ｂ７２（配列番号２６４）、およびＢ６０（配列番号２６６）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を包含することができる。
【０１７５】
重鎖は、その重鎖のＶＨドメインと同じモジュールのＶＬドメインを含む軽鎖と対合し得る。しかしながら、重鎖と軽鎖はまた、その結合部位がそれらの標的への高親和性結合を保持することを条件として、うまく組み合わされ得る。
【０１７６】
例となるＩｇＧ１  ＣＲを含むＩＧＦ‐１Ｒ＋ＥｒｂＢ３  ＰＢＡ
ここで３８種の例となるＩｇＧ１  ＣＲを含むＩＧＦ‐１Ｒ＋ＥｒｂＢ３  ＰＢＡの名称が以下の表５に示される。名称のそれぞれの後に（括弧内、この順序で）重鎖の配列番号と軽鎖の配列番号が続く。これらのＩｇＧ様ＰＢＡは２つの基本的に同じ重鎖および２つの基本的に同じ軽鎖を含む。
【０１７７】
【表５】
0005588086.tif 000006
0005588086.tif 000007
0005588086.tif 000008
【０１７８】
例となる実施形態では、ＰＢＡは２つの同一の重鎖および２つの同一の軽鎖を含み、その重鎖のそれぞれの配列は配列番号２１０または３００を含み、それから基本的になり、またはそれからなり、そして、その軽鎖ドメインのそれぞれの配列は配列番号２０２または２９８を含む、それから基本的になる、またはそれからなる。ＰＢＡは、そのＰＢＡが本明細書にさらに記載されるような所望の生物学的特性を有することを条件として、それぞれ配列番号２０２もしくは２９８または配列番号２１０もしくは３００とちょうど、または多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、５０、１００、２００、または３００アミノ酸が異なるアミノ酸配列を含む重鎖および／または軽鎖を含むこともできる。１つの実施形態では、ＰＢＡは、ＣＨ３ドメインの末端にリシン（Ｋ）を付加して、すなわち、配列…ＳＬＳＬＳＰＧＫＧＧＧＧＳ…（配列番号３０１）を作製して、配列番号２１０または３００と異なるアミノ酸配列を含む。ＰＢＡは、ＣＨ３ドメイン内に次のアミノ酸置換：Ｓ２３９Ｄ、Ｎ２９７Ｑ、Ｓ２９８Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｔ２９９Ｃ、Ｔ２９９Ｋ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８Ｌ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ３４３Ｋ（ＥＵ番号付；図７Ａを参照のこと）のうちの１つ以上を含むことで配列番号２１０または３００と異なるアミノ酸配列を含むこともできる。
【０１７９】
ＰＢＡは２つの同一の重鎖および２つの同一の軽鎖を含むこともでき、その重鎖のそれぞれの配列およびその軽鎖のそれぞれの配列は図５Ａまたは５Ｂの配列（すなわち、配列番号２０２〜２９６から選択されるあらゆる偶数の配列番号の配列）を含む、それから基本的になる、またはそれからなる。ＰＢＡは、そのＰＢＡが本明細書にさらに記載されるような所望の生物学的特性を有することを条件として、図５Ａまたは５Ｂの配列とちょうど、または多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、５０、１００、２００、または３００アミノ酸異なるアミノ酸配列を含む重鎖および／または軽鎖を含むこともできる。アミノ酸の違いはアミノ酸欠失、付加または置換（例えば、保存的置換）であり得る。例えば、ＰＢＡは、ＣＨ３ドメインの末端にリシンを付加することで（または欠失することで）、および／またはＣＨ３ドメイン内の次のアミノ酸置換：Ｓ２３９Ｄ、Ｎ２９７Ｑ、Ｓ２９８Ａ、Ｔ２９９Ａ、Ｔ２９９Ｃ、Ｔ２９９Ｋ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ｅ３５６Ｄ、Ｍ３５８Ｌ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ３４３Ｋ（図７Ａを参照のこと）のうちの１つ以上を含むことで図５Ａまたは５Ｂのアミノ酸配列と異なるアミノ酸配列を含み得る。１つ以上のアミノ酸の違いが２つのＶＨドメインの片方もしくは両方または２つのＶＬドメインの片方もしくは両方に、例えば、１つ以上のＣＤＲまたは１つ以上のフレームワーク領域（ＦＲ）に存在してよい。１つ以上のアミノ酸の違いが免疫グロブリンＣＲのドメインの１つ以上に、例えば、ＣＨ１ドメイン、ＣＬドメイン、ヒンジ部、ＣＨ２ドメインおよび／またはＣＨ３ドメインに存在してもよい。例えば、免疫グロブリンの１つ以上の特性を変更するために免疫グロブリンＣＲに対してなされ得る特定のアミノ酸の変更は本明細書にさらに記載される。アミノ酸の変更は、ＣＨ３ドメインのＣ末端をｓｃＦｖのＮ末端に連結するリンカー、および／またはｓｃＦｖのＶＨドメインのＣ末端をｓｃＦｖのＶＬドメインのＮ末端に連結するｓｃＦｖリンカーに存在してもよい。連結リンカーおよびｓｃＦｖリンカーに対してなされ得る例となる修飾は本明細書にさらに記載される。
【０１８０】
次のＰＢＡを使用することができる：
−  配列番号２１０もしくは３００を有する重鎖ドメインおよび／または配列番号２０２もしくは２９８（１６Ｆの配列番号）を有する軽鎖ドメインのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖および／または軽鎖を含むＰＢＡであって、所望の生物学的特性を有するＰＢＡ；
−  それぞれが配列番号２１０または３００からなる２つの重鎖ドメイン、および、それぞれが配列番号２０２または２９８からなる２つの軽鎖ドメインを含むＰＢＡの生物学的同等物または生物学的等価物であるＰＢＡ；
−  １つ以上のドメイン、例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＣＤＲドメイン、ＦＲドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＬドメイン、ヒンジ部、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、リンカー、ｓｃＦｖ  ＶＨドメイン、ｓｃＦｖリンカー、およびｓｃＦｖ  ＶＬドメインを含むＰＢＡであって、配列番号２０２、２１０、２９８または３００の中の対応するドメインのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含むＰＢＡ；
−  図５Ａもしくは５Ｂの重鎖ドメインおよび／または図５Ａもしくは５Ｂの軽鎖ドメインに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖ドメインおよび／または軽鎖ドメインを含むＰＢＡであって、所望の生物学的特性を有するＰＢＡ；
−  それぞれが図５Ａまたは５Ｂのアミノ酸配列を含む２つの重鎖ドメイン、および、それぞれが図５Ａまたは５Ｂのアミノ酸配列を含む２つの軽鎖ドメインからなるＰＢＡの生物学的同等物または生物学的等価物であるＰＢＡ；
−  １つ以上のドメイン、例えば、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＣＤＲドメイン、ＦＲドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＬドメイン、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、リンカードメイン、ｓｃＦｖ  ＶＨドメイン、ｓｃＦｖリンカードメイン、およびｓｃＦｖ  ＶＬドメインを含むＰＢＡであって、図５Ａまたは５Ｂのアミノ酸配列のいずれか１つの中の対応するドメインのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含むＰＢＡ。
【０１８１】
ＰＢＡが本明細書において示されるアミノ酸配列（例えば、図５または６のアミノ酸）と異なるアミノ酸配列を含む、ある特定の実施形態では、そのＰＢＡは１６Ｆではない（すなわち、配列番号２１０からなる２本の重鎖および配列番号２０２からなる２本の軽鎖を含まない）。
【０１８２】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、互いに結合する２本の重‐軽鎖対を含み、各重‐軽鎖対は抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位および抗ＥｒｂＢ３結合部位を含み、その重‐軽鎖対は互いに異なる。その重‐軽鎖対は１つ以上のアミノ酸（例えば、ちょうど、または多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０、または最大で１００アミノ酸）が異なってもよい。例えば、第１の重‐軽鎖対は重鎖ＣＲを含むことができ、第２の重‐軽鎖対は第２の重鎖ＣＲを含むことができ、その第１および第２の重鎖ＣＲはそれらの互いの結合に好都合なアミノ酸の違い（例えば、「ノブ・アンド・ホール」）を有する。
【０１８３】
ある特定の実施形態では、多価タンパク質は、４つより多い結合部位を含む。例えば、６価結合タンパク質はＩｇＧ‐（ｓｃＦｖ）２を含み得る、すなわち、タンパク質がＩｇＧの一部である２つの結合部位を含み、１つのｓｃＦｖがＩｇＧのＣＨ３ドメインのそれぞれのＣ末端に結合し、そして、例えば、リンカーを介してそのＩｇＧタンパク質のＮ末端かそのｓｃＦｖのそれぞれのＣ末端のどちらかに結合した別のＦａｂまたはｓｃＦｖをさらに含む。８価結合タンパク質は６価結合タンパク質と同じ構造を含むことができ、２つの追加の結合部位をさらに含む。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、本明細書にさらに記載されるもののような、当技術分野において公知の結合タンパク質または抗体に由来する１つの結合部位を含み得る。例えば、ＰＢＡは、ＣＰ‐７５１，８７１、ＩＭＣ‐Ａ１２、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  Ａｂ＃Ａ、ＢＩＩＢ‐Ｇ１１、およびＣ０６からなる群より選択される抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体に由来する１つ以上のＣＤＲを含むことができる。それらの重鎖および軽鎖アミノ酸配列は図３７に示される。例えば、ＰＢＡに使用される抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位は配列番号３２１〜３３５のいずれか１つのＶＨＣＤＲ３および／またはＶＬＣＤＲ３ドメイン、ならびに任意で、ＶＨＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２および／またはＶＬＣＤＲ２を含むことができる。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、その結合部位が標的（抗原）に特異的に結合することを条件として、配列番号３２１〜３３５のうちの１つの対応する部分と１つ、２つ、または３つのアミノ酸付加、欠失または置換により異なるアミノ酸配列を含む１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含む抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、配列番号３２１〜３３５のうちの１つの対応するＣＤＲに対して少なくとも７０％、８０％、９０％または９５％同一である、または類似しているアミノ酸配列を含む１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含む抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、配列番号３２１〜３３５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨ鎖および／またはＶＬ鎖を含む。他の実施形態では、ＰＢＡは、その結合部位が標的に特異的に結合することを条件として、配列番号３２１〜３３５のいずれか１つと多くとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５もしくは３０アミノ酸の欠失、付加もしくは置換において異なるアミノ酸配列、または配列番号３２１〜３３５の配列に対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ鎖および／またはＶＬ鎖を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、結合部位配列番号３２１〜３３５のうちの１つのアミノ酸配列を含む軽鎖および／もしくは重鎖を含む結合部位を包含し、または、結合部位がその標的に特異的に結合し続けることを条件として、それと多くとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００アミノ酸の欠失、付加もしくは置換において異なる、または配列番号３２１〜３３５の配列に対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％同一である軽鎖および／もしくは重鎖を含む結合部位を包含する。例えば、ＰＢＡは、ＣＰ‐７５１，８７１、ＩＭＣ‐Ａ１２、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  Ａｂ＃Ａ、ＢＩＩＢ‐Ｇ１１およびＣ０６からなる抗体群から選択される抗体の（ｉ）ＶＨドメインおよびＶＬドメイン、（ｉｉ）重鎖および軽鎖、または（ｉｉｉ）ＶＨ鎖とＶＬ鎖を含むｓｃＦｖを包含し得る。そのようなＰＢＡは本明細書に記載される抗ＥｒｂＢ３結合部位を含み得る。
【０１８５】
ＰＢＡは、抗ＥｒｂＢ３抗体、例えば、抗ＥｒｂＢ３  Ａｂ＃Ａ、Ｈ３（米国特許第７，３３２，５８０号）、ＭＭ  Ａｂ＃３、ＭＭ  Ａｂ＃１４、ＭＭ  Ａｂ＃１７またはＭＭ  Ａｂ＃１９に由来する１つ以上のＣＤＲを含み得る。それらの重鎖および軽鎖アミノ酸配列は図３８に示されている。例えば、ＰＢＡ中に使用される抗ＥｒｂＢ３結合部位は配列番号３３６〜３５３のいずれか１つのＶＨＣＤＲ３および／またはＶＬＣＤＲ３ドメイン、ならびに任意で、ＶＨＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２および／またはＶＬＣＤＲ２を含むことができる。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、その結合部位が標的に特異的に結合することを条件として、配列番号３３６〜３５３のうちの１つの対応する部分と１つ、２つ、または３つのアミノ酸付加、欠失または置換により異なるアミノ酸配列を含む１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含む抗ＥｒｂＢ３結合部位を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、配列番号３３６〜３５３のうちの１つの対応するＣＤＲに対して少なくとも７０％、８０％、９０％または９５％同一である、または類似しているアミノ酸配列を含む１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含む抗ＥｒｂＢ３結合部位を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは配列番号３３６〜３５３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨ鎖および／またはＶＬ鎖を含む。他の実施形態では、ＰＢＡは、その結合部位がその標的に特異的に結合し続けることを条件として、配列番号３３６〜３５３のいずれか１つと多くとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５もしくは３０アミノ酸の欠失、付加もしくは置換において異なるアミノ酸配列、または配列番号３３６〜３５３の配列に対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ鎖および／またはＶＬ鎖を含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、結合部位配列番号３３６〜３５３のうちの１つのアミノ酸配列を含む軽鎖および／もしくは重鎖を含む結合部位を包含し、または、結合部位が標的に特異的に結合することを条件として、それと多くとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００アミノ酸の欠失、付加もしくは置換において異なる、または配列番号３３６〜３５３の配列に対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％同一である軽鎖および／もしくは重鎖を含む結合部位を包含する。例えば、ＰＢＡは、抗ＥｒｂＢ３  Ａｂ＃Ａ、Ｈ３（米国特許第７，３３２，５８５号）、ＭＭ  Ａｂ＃３、ＭＭ  Ａｂ＃１４、ＭＭ  Ａｂ＃１７およびＭＭ  Ａｂ＃１９からなる抗体群から選択される抗体の（ｉ）ＶＨドメインおよびＶＬドメイン、（ｉｉ）重鎖および軽鎖、または（ｉｉｉ）ＶＨ鎖とＶＬ鎖を含むｓｃＦｖを包含し得る。使用することができるさらに他の抗ＥｒｂＢ３結合部位（またはＣＤＲ、Ｖドメインまたは鎖などのその部分）は、どちらも例えば米国特許出願公開第２００４０１９７３３２号に記載され、ハイブリドーマ細胞株ＤＳＭ  ＡＣＣ２５２７またはＤＳＭ  ＡＣＣ２５１７（ＤＳＭＺに寄託）により産生される抗ＥｒｂＢ３抗体１Ｂ４Ｃ３（カタログ番号ｓｃ‐２３８６５、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）および２Ｄ１Ｄ１２（Ｕ３  Ｐｈａｒｍａ  ＡＧ）、米国特許第７，８４６，４４０号中で記載されるものであるＡＶ‐２０３（国際公開第２０１１／１３６９１１号中の配列番号１９０（重鎖）および配列番号２０６（軽鎖）、Ａｖｅｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）または８Ｂ８（ＡＴＣＣ（登録商標）ハイブリドーマ＃ＨＢ‐１２０７０（商標）により産生され、国際公開第１９９７／０３５８８５号に記載される）、モノクローナル抗体Ｍａｂ２０５．１０．２（米国特許出願公開第２０１１０１７１２２２号中の配列番号８（重鎖）および配列番号１０（軽鎖）、Ｒｏｃｈｅ  Ｇｌｙｃａｒｔ）、米国特許出願公開第２０１００３１０５５７号に記載されるマウス抗ＥｒｂＢ３抗体（Ｔｒｅｌｌｉｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）または二重特異性抗ＥｒｂＢ３／抗ＥＧＦＲ抗体（例えば、配列番号１４（重鎖）および配列番号１３（軽鎖）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）に由来するものである。そのようなＰＢＡは本明細書に記載される抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位を含み得る。
【０１８６】
ＰＢＡは本明細書において提供される結合部分と同じヒトＩＧＦ‐１ＲまたはヒトＥｒｂＢ３上のエピトープに結合する結合部位を含むこともできる。例えば、それは図５Ａおよび５Ｂの配列のような配列を有する結合部分と競合し得る。本明細書に包含される結合部分は抗原への結合について本明細書に記載される結合部分と競合することもできる。例えば、それは図５Ａおよび５Ｂの配列のような配列を有する結合部分と競合し得る。標的抗原またはエピトープへの結合について本明細書に記載される結合部分と競合する結合部分を含む結合タンパク質は、本明細書に記載される結合部分の前または後にＥＬＩＳＡに添加されると、本明細書に記載される結合部分と置換することができる結合部分であり得る。
【０１８７】
ある特定の実施形態では、本明細書において提供されるＰＢＡは国際出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５２７１２号に記載されるＰＢＡを含まず、他の実施形態では、本明細書において提供されるＰＢＡは国際出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５２７１２号に記載されるＰＢＡの可変ドメインを含まない。
【０１８８】
例となる免疫グロブリンＣＲ
ある特定の実施形態では、ＰＢＡは２本の重鎖を含み、それぞれが免疫グロブリンＣＲを含む。多価結合ドメインは２本の軽鎖を含むこともでき、各軽鎖がＣＬドメインを含む。免疫グロブリンＣＲはヒトＩｇ、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４、または１つより多くのアイソタイプの免疫グロブリンに由来し得る。例えば、１つのドメインがＩｇＧ１由来であってよく、他のドメインが他のＩｇＧアイソタイプ由来であってよい。ある特定の実施形態では、１つのドメインの一部が１つのＩｇＧアイソタイプに由来し、その他のドメインが別のＩｇＧアイソタイプに由来する。
【０１８９】
ＣＨ１ドメイン、ヒンジ部、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインおよびＣＨ４ドメインのうちの１つ以上を含み得る重鎖免疫グロブリンＣＲは、特定のＩｇＧアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１の天然型もしくは野生型定常ドメインの重鎖免疫グロブリンＣＲ、または本明細書において示されるアミノ酸配列のうちの１つのＣＲに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含み得る、またはそれからなり得る。ＣＬドメインは、天然型もしくは野生型のκ軽鎖もしくはλ軽鎖、または本明細書において示されるアミノ酸配列のうちの１つのＣＬドメインに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、またはそれからなることもできる。
【０１９０】
ＣＨ１ドメイン、ヒンジ部、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインおよびＣＨ４ドメインのうちの１つ以上を含み得る重鎖免疫グロブリンＣＲは、特定のＩｇＧアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１の天然型もしくは野生型定常ドメインの同じ重鎖免疫グロブリンＣＲと比較して、または本明細書において、例えば、図５〜７において示される重鎖免疫グロブリンＣＲと比較して、ちょうど、または多くとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１〜１５個、１６〜２０個、２１〜２５個、２６〜３０個、３１〜３５個、３６〜４０個、４１〜４５個、４６〜５０個、５０〜１００個、またはそれ以上のアミノ酸置換、付加および／または欠失を含み得る。ＣＬドメインは、天然型もしくは野生型のκ軽鎖もしくはλ軽鎖のＣＬドメイン、または本明細書において示されるＣＬドメインと比較して、ちょうど、または多くとも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１〜１５個、１６〜２０個、２１〜２５個、２６〜３０個、３１〜３５個、３６〜４０個、４１〜４５個、４６〜５０個、５０〜１００個、またはそれ以上のアミノ酸置換、付加および／または欠失を含み得る。
【０１９１】
ＣＲの各ドメイン、すなわち、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ部、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインおよびＣＬドメインは、特定のＩｇＧアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１の天然型もしくは野生型定常ドメイン、または本明細書において示される定常ドメインと比較して、１つ以上の（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、またはそれ以上）のアミノ酸置換、付加および／または欠失を含み得る。ＣＲの各ドメイン、すなわち、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ部、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインおよびＣＬドメインは、特定のＩｇＧアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１の天然型もしくは野生型定常ドメイン内の同じドメイン、または本明細書において示されるドメインに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含み得る。
【０１９２】
アミノ酸置換、付加または欠失は互いに対して少なくとも１アミノ酸またはそれ以上の位置、例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０アミノ酸、またはそれ以上の位置の間隔で位置し得る。ある特定の実施形態では、操作されたアミノ酸は互いに少なくとも５、１０、１５、２０、もしくは２５アミノ酸、またはそれ以上の位置の間隔をあけて位置する。
【０１９３】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、本明細書において示されるアミノ酸配列を含むＣＲ、例えば、Ｆｃ領域またはそのドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、本明細書において示されるアミノ酸配列であって、１個以上のアミノ酸が欠失、付加もしくは置換されているアミノ酸配列、または本明細書において示される配列に対して少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含むＣＲ、例えば、Ｆｃ領域またはそのドメインを含む。例えば、配列番号３００または図５および６の他の任意のアミノ酸配列のＣＨ３ドメイン中のアミノ酸３５６および３５８が、野生型ＩｇＧ１  ＣＨ３配列を反映するために、例えば、Ｅ３５６ＤおよびＭ３５８Ｌに置換され得る。任意のハプロタイプを表す任意の定常ドメイン異型体も本明細書に包含される。
【０１９４】
定常ドメインに対するある特定のアミノ酸の変更の効果は、本明細書にさらに記載されるように、または当技術分野において公知のとおりに決定することができる。
【０１９５】
抗体のエフェクター機能を変えるためのアミノ酸残基の置換は当技術分野において公知である（米国特許第５，６４８，２６０号および同第５，６２４，８２１号）。抗体のＦｃ部分はいくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）ならびに抗体および抗原抗体複合体の半減期／排除速度を仲介する。いくつかの場合では、これらのエフェクター機能は治療用抗体にとって望ましいが、他の場合では、治療目標に応じて、不必要であるか、有害であることさえあり得る。ある特定のヒトＩｇＧアイソタイプ、特にＩｇＧ１およびＩｇＧ３はＦｃγＲおよび補体Ｃ１ｑを介してそれぞれＡＤＣＣおよびＣＤＣを仲介する。新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は抗体の循環半減期を決定する重要な要素である。さらに別の実施形態では、抗体のエフェクター機能が変わるように、少なくとも１つのアミノ酸残基が抗体のＣＲ、例えば、抗体のＦｃ領域内で置換される。免疫グロブリンの２つの同じ重鎖の二量体化にはＣＨ３ドメインの二量体が介在し、ヒンジ部領域内でのジスルフィド結合がそれを安定化する。
【０１９６】
１つの実施形態では、ＰＢＡは次の特質：ヒトにおいて賦活化性ＦｃγＲＩ受容体、ＦｃγＲＩＩａ／ｃ受容体、ＦｃγＲＩＩＩａ受容体および阻害性ＦｃγＲＩＩｂ受容体との相互作用により決定される抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および抗体依存性細胞性食作用（ＡＤＣＰ）、補体系の構成要素への抗体の結合により引き起こされる補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、ならびに能動的再利用を介して新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）によって仲介される長い半減期のうちの１つ以上、好ましくは全てを保持する。これらの機能の全てが調製されて抗癌治療の効果性を最適化することができ、そして、好ましくはこれらの機能の全てがＰＢＡに保持される。
【０１９７】
上で示したもののような、定常ドメインの天然の生物学的活性を低下または上昇させるために、ある特定のアミノ酸修飾を免疫グロブリンＣＲに対して行うことができる。したがって、ある特定の実施形態では、免疫グロブリンの定常領域はＦｃの「１５オングストローム接触ゾーン」内にあるアミノ酸位置でのアミノ酸置換、欠失または付加を含む。１５オングストロームゾーンは全長野生型Ｆｃ部分のＥＵ位置２４３〜２６１、２７５〜２８０、２８２〜２９３、３０２〜３１９、３３６〜３４８、３６７、３６９、３７２〜３８９、３９１、３９３、４０８、および４２４〜４４０に位置する残基を含む。
【０１９８】
ある特定の実施形態では、結合タンパク質（例えば、ＰＢＡ、抗ＩｇＧ‐１Ｒ結合部位および抗ＥｒｂＢ３結合部位）は、Ｆｃドメイン内にそのドメインの１つ以上の抗原依存性エフェクター機能、例えば、そのドメインを含むタンパク質の循環半減期を変えるアミノ酸変化（例えば、アミノ酸置換、付加または欠失）を含む。例となる抗体は、そのようなアミノ酸変化を持たない抗体と比較すると、増加または低減したＦｃＲｎへの結合を示し、したがって、それぞれ上昇または低下した血清中の半減期を有する。ＦｃＲｎへの向上した親和性を有するＦｃ異型体を含む抗体は、より長い血清半減期を有することが予想され、一方、低下したＦｃＲｎ結合親和性を有するＦｃ異型体を含む抗体はより短い半減期を有することが予想される。１つの実施形態では、変化したＦｃＲｎ結合を有する結合タンパク質は、Ｆｃドメインの「ＦｃＲｎ結合ループ」内に１つ以上のアミノ酸変化を有する少なくとも１つのＦｃドメインを含む。ＦｃＲｎ結合ループは野生型全長Ｆｃのアミノ酸残基２８０〜２９９（ＥＵ）から構成される。他の実施形態では、変化したＦｃＲｎ結合親和性を有する結合タンパク質は、１５Å  ＦｃＲｎ「接触ゾーン」内に１つ以上のアミノ酸置換を有する少なくとも１つのＦｃドメインを含む。１５Å  ＦｃＲｎ「接触ゾーン」という用語は野生型全長Ｆｃドメインの次の位置：２４３〜２６１、２７５〜２８０、２８２〜２９３、３０２〜３１９、３３６〜３４８、３６７、３６９、３７２〜３８９、３９１、３９３、４０８、４２４、４２５〜４４０（ＥＵ）にある残基を含む。ある特定の実施形態では、変化したＦｃＲｎ結合親和性を有する結合タンパク質は、次のＥＵ位置のうちのいずれか１つに対応するアミノ酸位置に１つ以上のアミノ酸変化を有する少なくとも１つのＦｃドメイン（例えば、１つ、または２つのＦｃ部分）を含む：２５６、２７７〜２８１、２８３〜２８８、３０３〜３０９、３１３、３３８、３４２、３７６、３８１、３８４、３８５、３８７、４３４（例えば、Ｎ４３４ＡまたはＮ４３４Ｋ）、および４３８。ＦｃＲｎ結合活性を変化させる例となるアミノ酸変化は国際ＰＣＴ公開番号第０５／０４７３２７号に開示される。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、特定のＡＤＣＣまたは補体活性化において例えば、野生型Ｆｃ領域と比較してそのポリペプチドの抗原依存的エフェクター機能を変えるアミノ酸変化を含むＦｃ異型体を含む。例となる実施形態では、前記抗体はＦｃγ受容体（例えば、ＣＤ１６）への変化した結合を示す。そのような抗体は、野生型ポリペプチドと比較すると、増加または低減したＦｃγＲへの結合のどちらかを示し、したがって、それぞれ増強または低下したエフェクター機能を仲介する。ＦｃγＲへの上昇した親和性を有するＦｃ異型体はエフェクター機能を増強させることが予想され、そして、そのようなタンパク質は標的分子の破壊が望まれる動物の治療方法、例えば、腫瘍の治療に有用な適用を有し得る。対照的に、低下したＦｃγＲ結合親和性を有するＦｃ異型体はエフェクター機能を低下することが予想される。１つの実施形態では、結合タンパク質は、オプソニン作用、食作用、補体依存性細胞傷害、抗原依存的細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、またはエフェクター細胞調節からなる群より選択される少なくとも１つの、野生型Ｆｃ領域を含む結合タンパク質と比較して変化した抗原依存的エフェクター機能を含む。
【０２００】
１つの実施形態では、結合タンパク質は賦活化性ＦｃγＲ（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩＩａ）への変化した結合を示す。別の実施形態では、結合タンパク質は阻害性ＦｃγＲ（例えば、ＦｃγＲＩＩｂ）への変化した結合親和性を示す。他の実施形態では、上昇したＦｃγＲ結合親和性（例えば、上昇したＦｃγＲＩＩＩａ結合親和性）を有する結合タンパク質は、次の位置のうちの１つ以上に対応するアミノ酸位置にアミノ酸変化を有する少なくとも１つのＦｃドメインを含む：２３９、２６８、２９８、３３２、３３４、および３７８（ＥＵ）。ある特定の実施形態では、低下したＦｃγＲ結合親和性（例えば、低下したＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、またはＦｃγＲＩＩＩａ結合親和性）を有する結合タンパク質は次の位置のうちの１つ以上に対応するアミノ酸位置にアミノ酸変化を有する少なくとも１つのＦｃドメインを含む：２３４、２３６、２３９、２４１、２５１、２５２、２６１、２６５、２６８、２９３、２９４、２９６、２９８、２９９、３０１、３２６、３２８、３３２、３３４、３３８、３７６、３７８、および４３５（ＥＵ）。
【０２０１】
ある特定の実施形態では、上昇した補体結合親和性（例えば、上昇したＣ１ｑ結合親和性）を有する結合タンパク質は次の位置のうちの１つ以上に対応するアミノ酸位置にアミノ酸変化を有するＦｃドメインを含む：２５１、３３４、３７８、および４３５（ＥＵ）。ある特定の実施形態では、低下した補体結合親和性（例えば、低下したＣ１ｑ結合親和性）を有する結合タンパク質は次の位置のうちの１つ以上に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を有するＦｃドメインを含む：２３９、２９４、２９６、３０１、３２８、３３３、および３７６（ＥＵ）。ＦｃγＲまたは補体結合活性を変える例となるアミノ酸変化は国際ＰＣＴ公開番号第０５／０６３８１５号に開示される。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は次の特定のＦｃ領域置換のうちの１つ以上を含み得る：Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｅ、Ｍ２５２Ｔ、Ｈ２６８Ｄ、Ｈ２６８Ｅ、Ｉ３３２Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｎ４３４Ａ、およびＮ４３４Ｋ（ＥＵ）。
【０２０２】
結合タンパク質は結合タンパク質のグリコシル化を変えるアミノ酸置換を含むこともできる。例えば、結合タンパク質の免疫グロブリンＣＲはグリコシル化（例えば、Ｎ‐結合グリコシル化またはＯ‐結合グリコシル化）の低減をもたらす変異を有するＦｃドメインを含み得、または野生型Ｆｃドメインの変化した糖型（例えば、低フコースグリカンまたは無フコースグリカン）を含み得る。「改変糖型」はＦｃ領域に共有結合している炭水化物組成物であって、親Ｆｃ領域のものと化学的に異なる前記炭水化物組成物を指す。改変糖型はエフェクター機能の増強または低下を含むが、これらに限定されない様々な目的に有用であり得る。改変糖型は当技術分野において公知の様々な方法によって形成され得る（米国特許第６，６０２，６８４号、米国特許出願公開第２０１０‐０２５５０１３号、米国特許出願公開第２００３０００３０９７号、国際公開第００／６１７３９Ａ１号、国際公開第０１／２９２４６Ａ１号、国際公開第０２／３１１４０Ａ１号、国際公開第０２／３０９５４Ａ１号）、（Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（商標）テクノロジー（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．、プリンストン、ニュージャージー州）、およびＧｌｙｃｏＭＡｂ（商標）グリコシル化工学技術（Ｇｌｙｃａｒｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＡＧ、チューリッヒ、スイス））。これらの技術の多くはフコシル化オリゴ糖のレベルの制御および／またはＦｃ領域に共有結合するオリゴ糖の二等分割に基づく、例えば、遺伝子操作されていてもいなくても様々な生物または細胞株（例えば、Ｌｅｃ‐１３ＣＨＯ細胞またはラットハイブリドーマＹＢ２／０細胞）でＦｃポリペプチドを発現することによる、グリコシル化経路に関与する酵素（例えば、ＦＵＴ８［１，６‐フコシルトランスエラーゼ］および／または（３１‐４‐Ｎ‐アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ［ＧｎＴＩＩＩ］）を調節することによる、または、Ｆｃポリペプチドが発現された後に炭水化物を修飾することによる。
【０２０３】
例となる実施形態では、アミノ酸変化、例えば、アミノ酸置換によって、Ｆｃ領域は、通常アミノ酸位置２９７（ＥＵ）に見出されるＮ結合グリカンのグリコシル化を低減することになる。そのＦｃ領域はアミノ酸位置２９７（ＥＵ）に低フコースグリカンまたは無フコースグリカンを含むこともできる。ある特定の実施形態では、その結合タンパク質はグリコシル化モチーフ、例えば、ＮＸＴまたはＮＸＳというアミノ酸配列を含有するＮ結合グリコシル化モチーフの近傍またはその内側にアミノ酸置換を有する。特定の実施形態では、結合タンパク質はＦｃ（ＥＵ）の２９７または２９９に対応するアミノ酸位置にアミノ酸置換を含む。グリコシル化を低下または変化する例となるアミノ酸置換は国際ＰＣＴ公開番号第０５／０１８５７２号および米国特許出願公開第２００７０１１１２８１号に開示される。
【０２０４】
他の実施形態では、結合タンパク質は、溶媒に露出される表面に局在する１つ以上の改変システイン残基またはその類似体を有する少なくとも１つのＦｃドメインを含む。その改変システイン残基またはその類似体はその結合タンパク質の所望の生物活性に干渉しないことが好ましい。例えば、その変化がＦｃのＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、またはＦｃγＲＩＩＩ）または補体タンパク質（例えば、Ｃ１ｑ）に結合する能力、または免疫エフェクター機能（例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣＣ））を引き起こす能力に干渉しないことが望ましい場合がある。ある特定の実施形態では、前記抗体は、２つ目のシステイン残基とのジスルフィド結合が実質的に無い少なくとも１つの改変遊離システイン残基またはその類似体を含むＦｃドメインを含む。前記抗体はＣＨ３ドメイン内の次の位置：３４９〜３７１、３９０、３９２、３９４〜４２３、４４１〜４４６、および４４６ｂ（ＥＵ）のうちの１つ以上に改変システイン残基またはその類似体を有するＦｃドメインを含み得る。前記抗体は次の位置：３５０、３５５、３５９、３６０、３６１、３８９、４１３、４１５、４１８、４２２、４４１、４４３、およびＥＵ位置４４６ｂのうちのいずれか１つに改変システイン残基またはその類似体を有するＦｃ異型体を含み得る。
【０２０５】
所望のエフェクター機能は、特定の免疫グロブリンクラスもしくはサブクラスに由来するＦｃを選択することにより、または特定の免疫グロブリンのクラスもしくはサブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２などに由来する特定の領域を組み合わせることにより得ることもできる。例えば、（それぞれＩｇＧのＦｃγＲおよびＣ１ｑへの結合を介する）ＡＤＣＣおよびＣＤＣはヒンジ部およびＣＨ２ドメインに位置する残基により仲介されるので、ならびにＩｇＧ４は基本的にエフェクター機能が無いので、無エフェクターＦｃは、ＩｇＧ４のヒンジ部およびＣＨ２ドメインとＩｇＧ１のＣＨ３ドメインを組み合わせることによって構築することができる。ＩｇＧ４ヒンジ部を含むタンパク質でのＦａｂアーム交換はヒンジ部でのＳ２２８Ｐという置換によって低下し得る。
【０２０６】
免疫グロブリンＣＲはまた、当技術分野において「ノブ‐イントゥー‐ホール」と称され、そして、例えば、米国特許第７，１８３，０７６号に記載される改変を、例えば、ＣＨ３ドメイン内に行うことによって修飾され得る。この戦略では、２本の重鎖のＦｃ部分は改変されて一方に突出性の「ノブ」と他方に相補性の「ホール」をもたらし、それによって、それらは重鎖の結合に有利に働く。
【０２０７】
例となるリンカー
リンカーは、２つのドメインまたは領域を一つに連結するために、例えば、可変ドメインを定常ドメインに、可変ドメインを可変ドメインに、そして、定常ドメインを定常ドメインに連結するために使用され得る。ｓｃＦｖのＶＨドメインをｓｃＦｖのＶＬドメインに連結するリンカーは「ｓｃＦｖリンカー」と称される。ｓｃＦｖを定常ドメイン、例えば、ＣＨ３ドメインに連結するリンカーは「連結リンカー」と称される。
【０２０８】
リンカーは、連結されるドメインまたは領域の適切な折り畳みを可能にするのに十分な長さであることが好ましい。例えば、リンカーは１〜１０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０または少なくとも９０〜１００アミノ酸長であり得る。
【０２０９】
ある特定の実施形態では、リンカーは生物学的に不活性であり、例えば、生物学的応答、例えば、免疫応答を誘導することがほとんどできない。
【０２１０】
ポリペプチドリンカーはＧｌｙ‐Ｓｅｒリンカーを含む、またはＧｌｙ‐Ｓｅｒリンカーからなることができる。「Ｇｌｙ‐Ｓｅｒリンカー」は、グリシン残基およびセリン残基からなるペプチドを指す。例となるＧｌｙ‐Ｓｅｒリンカーは、ｎが正の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０）である、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（配列番号３９５）という式を有するアミノ酸配列を含む。例えば、ある特定の実施形態では、連結リンカーは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号３９６）もしくは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号３９７）もしくは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）５（配列番号３９８）を含む、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖリンカー（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３もしくは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号３９７）もしくは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）５（配列番号３９８）を含む、またはそれからなる。（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ配列に加えて、リンカーは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ配列に対してＮ末端またはＣ末端に位置する１つ以上の追加的アミノ酸を含むこともできる。例えば、ｓｃＦｖリンカーは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（配列番号３９９）配列に対してＮ末端に位置する３個のアミノ酸、例えば、ＡＳＴを含み得る（例えば、図７の１６Ｆの、および配列番号３００としての重鎖配列中のものを参照のこと）。その配列では、ｓｃＦｖリンカーはＡＳＴ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３というアミノ酸配列（配列番号４００）からなる。
【０２１１】
ＰＢＡの例となる生物学的特性
ある特定の実施形態では、ＰＢＡは腫瘍細胞の増殖をインビトロで阻害する。実施例３（Ｃ）ならびに図１６および１７に示されるように、抗ＥｒｂＢ３／抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ２（ｓｃｆｖ）２  ＰＢＡは、２Ｄ培養されている２つの異なる腫瘍細胞株の増殖を阻害し、一方、どちらかの結合部位のみではそれらの増殖は顕著に阻害されなかった。したがって、ある特定の実施形態では、ＰＢＡはそれらの結合部位のうちのどちらかのみよりも（例えば、６日培養物、例えば、実施例３（Ｃ）に記載される培養物について阻害パーセントにより測定されるように）強力に腫瘍細胞増殖をインビトロで阻害する。増殖はＰＢＡにより、そのＰＢＡが無いときの細胞の増殖と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０＆、８０％、９０％またはそれ以上阻害され得る。
【０２１２】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡは腫瘍細胞増殖をインビボで阻害する。実施例３（Ｄ）および図１８Ａ〜２０Ｂに示されるように、抗ＥｒｂＢ３／抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ２（ｓｃｆｖ）２  ＰＢＡは癌のマウスモデルにおいて２つの異なる腫瘍細胞株の増殖を個々の結合部位によるものと比較してより高度に阻害した。したがって、ある特定の実施形態では、ＰＢＡはそれらの結合部位のうちのどちらかのみよりも（例えば、実験の最後での腫瘍サイズを例えば、実施例３（Ｄ）に記載される腫瘍サイズと比較することにより測定されるように）強力に腫瘍細胞増殖をインビボで阻害する。腫瘍成長はＰＢＡにより、そのＰＢＡが無いときの腫瘍成長と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上阻害され得る。
【０２１３】
「結合部位のうちのどちらかのみと比較される」は、その結合部位がＰＢＡ中の結合部位のうちのＶＲと同じＶＲを含み、そして、例えば、抗体、例えば、ＩｇＧ１抗体の形態（例えば、実施例に示されるように）をとるとき、そのＰＢＡの結合部位のうちの一方または他方との比較を指す。
【０２１４】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡはＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３のどちらか、または両方を介在するシグナル伝達を阻害する。実施例３（Ｂ）、４および５（Ｃ）に示されるように、様々なＰＢＡがＩＧＦ‐１Ｒ、ＥｒｂＢ３およびＡＫＴのリン酸化の阻害により判断されるように、ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３を介したシグナル伝達を阻害した。前記実施例は、ＰＢＡは先行技術の抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体（抗ＩＧＦ‐１Ｒ  Ａｂ＃Ａ−ＨＣについて配列番号３２７およびＬＣについて配列番号３２８）または抗ＥｒｂＢ３抗体（抗ＥｒｂＢ３  Ａｂ＃Ａ−ＨＣについて配列番号３３６およびＬＣについて配列番号３３７）またはそれらの組合せと比較して同様またはより高い程度または範囲にまでシグナル伝達を阻害することができることを示す。ある特定の実施形態では、ｐＩＧＦ‐１Ｒ、ｐＥｒｂＢ３およびｐＡＫＴのうちのいずれか１つ、または２つの組合せ、または３つのレベルのパーセント減少は抗ＩＧＦ‐１Ｒ  Ａｂ＃Ａまたは抗ＥｒｂＢ３  Ａｂ＃Ａまたはそれらの組合せのパーセント減少に等しい（例えば、１％、５％、もしくは１０％以内）、それより（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％もしくは５０％）大きい、またはそれより（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％）小さい。いくつかの実施形態では、実施例に記載されるような、実験の最後でのリン酸化の阻害（例えば、阻害％）は先行技術の抗ＩＧＦ‐１Ｒまたは抗ＥｒｂＢ３抗体またはそれらの組合せでの阻害に等しい、またはそれよりも高い、またはそれよりも低い。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、ＰＢＡが無いときのリン酸化と比較してＩＧＦ‐１Ｒ、ＥｒｂＢ３および／またはＡＫＴのリン酸化を、例えば、実施例に記載されるような、例えば、実験の最後で比較されると、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、またはそれ以上阻害する。好ましいＰＢＡは、例えば、ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３のリン酸化の阻害によって測定すると、ＩＧＦ‐１Ｒおよび／またはＥｒｂＢ３シグナル伝達をほぼ完全に、例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９．５％阻害する。
【０２１５】
（ａ）ＥｒｂＢ３のリガンド介在性リン酸化、および（ｂ）ＩＧＦ‐１またはＩＧＦ‐２介在性のＩＧＦ‐１Ｒのリン酸化の阻害はそれぞれ、ＰＢＡが（ａ）ＥｒｂＢファミリーリガンド（例えば、ヘレグリン）により誘導されるＥｒｂＢ３、（ｂ）ＩＧＦ‐１Ｒリガンド（すなわち、ＩＧＦ‐１またはＩＧＦ‐２）により誘導されるＩＧＦ‐１Ｒ、または（ｃ）ＩＧＦ‐１ＲリガンドもしくはＥｒｂＢ３リガンドにより誘導されるＡＫＴのリン酸化のレベルを、そのＰＢＡと接触していない対照細胞でのリン酸化とそれぞれ比較して再現的に低下させる能力によって示され得る。ＥｒｂＢ３および／もしくはＩＧＦ‐１Ｒを発現する細胞は天然の細胞もしくは細胞株の細胞であり得、またはＥｒｂＢ３および／もしくはＩＧＦ‐１Ｒをコードする核酸を宿主細胞に導入することにより組換え技術で作製され得る。１つの実施形態では、ＰＢＡは、例えば、下の実施例に記載されるようなウエスタンブロッティングとそれに続く抗リン酸化チロシン抗体を用いる調査によって決定されるように、ＥｒｂＢ３のＥｒｂＢファミリーリガンド介在性リン酸化を少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％、またはそれ以上阻害する。別の実施形態では、そのＰＢＡは、例えば、下の実施例に記載されるようなウエスタンブロッティングとそれに続く抗リン酸化チロシン抗体を用いる調査によって決定されるように、ＩＧＦ‐１ＲのＩＧＦ‐１‐またはＩＧＦ‐２介在性リン酸化を少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％、またはそれ以上を阻害する。
【０２１６】
ＰＢＡは細胞、例えば、癌細胞において、ヘレグリン誘導性ｐＡＫＴシグナル伝達を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％を抑制し得る。ＰＢＡは細胞、例えば、癌細胞において、ＩＧＦ‐１誘導性ｐＡＫＴシグナル伝達を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％抑制し得る。ＰＢＡは細胞、例えば、癌細胞においてインスリン誘導性ｐＡＫＴシグナル伝達を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％抑制し得る。ＰＢＡは細胞、例えば、癌細胞においてＩＧＦ‐２誘導性ｐＡＫＴシグナル伝達を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％％、９７％、９８％、９９％または１００％を抑制し得る。ｐＡＫＴシグナル伝達の阻害は本明細書、例えば、実施例にさらに記載されるように決定され得る。
【０２１７】
ＰＢＡはＩＧＦ‐１Ｒのリガンド誘導性リン酸化を少なくとも７０％または８０％、ＥｒｂＢ３のリガンド誘導性リン酸化を少なくとも７０％または８０％、および任意でＡＫＴのリガンド誘導性リン酸化を少なくとも３０％または４０％阻害し得る。ＰＢＡはＩＧＦ‐１Ｒのリガンド誘導性リン酸化を少なくとも８５％、ＥｒｂＢ３のリガンド誘導性リン酸化を少なくとも８５％および任意でＡＫＴのリガンド誘導性リン酸化を少なくとも７５％阻害することもできる。ある特定の実施形態では、ＰＢＡはＩＧＦ‐１Ｒのリガンド誘導性リン酸化を少なくとも５０％、およびＥｒｂＢ３のリガンド誘導性リン酸化を少なくとも９０％、および任意でＡＫＴのリガンド誘導性リン酸化を少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％阻害する。
【０２１８】
ＰＢＡは、ＩＧＦ‐１Ｒ、ＥｒｂＢ３およびＡＫＴのうちの１つ以上のリン酸化の阻害についてのＥＣ５０（すなわち、最大阻害の５０％が得られるＰＢＡの濃度）によっても定義され得る。そのＥＣ５０は本明細書にさらに記載されるように決定され得る。例えば、本明細書に開示されるＰＢＡは１０−９Ｍ、１０−１０Ｍまたはそれ以下のＥＣ５０でＩＧＦ‐１Ｒのリン酸化を阻害し得る。それらは１０−９Ｍ、１０−１０Ｍまたはそれ以下のＥＣ５０でＥｒｂＢ３のリン酸化を阻害し得る。それらは１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍまたはそれ以下のＥＣ５０でＡＫＴのリン酸化を阻害し得る。本明細書に開示されるいくつかのＰＢＡは１０−９Ｍ、１０−１０Ｍまたはそれ以下のＥＣ５０でＩＧＦ‐１Ｒのリン酸化を少なくとも８０％または８５％阻害し、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍまたはそれ以下のＥＣ５０でＥｒｂＢ３のリン酸化を少なくとも８０％または８５％阻害し、および任意で１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍまたはそれ以下のＥＣ５０でＡＫＴのリン酸化を少なくとも５５％または６５％または７５％阻害する。いくつか事例では、ＩＧＦ‐１Ｒのリン酸化およびＥｒｂＢ３のリン酸化のどちらか、または両方の基本的に完全な阻止が本明細書において開示されるＰＢＡを用いて得られる。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、本明細書において提供されるＰＢＡは、その標的（すなわち、そのＰＢＡが結合する抗原）の一方または両方を発現する細胞に、例えば、そのＰＢＡの標的抗原の片方または両方を発現するそのような細胞を用いるフローサイトメトリーによってそれぞれが測定される、約０．０２ｎＭ以下から約１０ｎＭまでのＥＣ５０、または約１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、もしくは１０−１２Ｍ、もしくはそれ以下のＫｄで結合する。他の実施形態では、本明細書において提供されるＰＢＡは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ装置を使用する表面プラズモン共鳴により測定されるような、約１０−６Ｍ、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、または１０−１２Ｍ、またはそれ以下のＫｄでその標的（例えば、ヒトＩＧＦ‐１ＲおよびヒトＥｒｂＢ３のどちらか、または両方）に結合する。例えば、本明細書において提供される抗ＥｒｂＢ３／抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ２（ｓｃｆｖ）２  ＰＢＡはそれぞれ２．５ｎＭおよび２．１ｎＭのＫｄでＡＤＲｒ細胞およびＭＣＦ７細胞に結合することが示された（実施例３Ａを参照のこと）。実施例５（Ａ）は、他のいくつかのＰＢＡが約２〜５ｎＭのＥＣ５０でＢｘＰＣ‐３細胞に結合することを示す。実施例５（Ｂ）は、いくつかのＰＢＡが約０．２〜０．４ｎＭのＥＣ５０でＥｒｂＢ３に結合することを示す。他のＰＢＡは０．０２ｎＭ（例えば、Ｐ４‐Ｇ１‐Ｐ６）から約１ｎＭまで、または約２ｎＭまでの範囲のＥＣ５０でＢｘＰＣ‐３細胞に結合する。
【０２２０】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡは５０ｎＭ以下の解離定数（Ｋｄ）（すなわち、５０ｎＭのＫｄによって示される結合親和性と少なくとも同じくらい高い結合親和性）（例えば、４０ｎＭまたは３０ｎＭまたは２０ｎＭまたは１０ｎＭまたは１ｎＭ、または１００ｐＭまたは１０ｐＭまたは１ｐＭまたはそれ以下のＫｄ）で抗原（例えば、ＥｒｂＢ３またはＩＧＦ‐１Ｒのどちらか）に結合する。特定の実施形態では、ＰＢＡは８ｎＭまたはそれより良いＫｄ（例えば、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭ、１０ｐＭまたは１ｐＭまたは０．１ｐＭまたはそれ以下）で抗原（ＥｒｂＢ３またはＩＧＦ‐１Ｒのどちらか）に結合する。他の実施形態では、結合タンパク質、結合部分または結合部位は約１０−７Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）、例えば、約１０−８Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、１０−１１Ｍ未満または１０−１２Ｍ未満またはそれよりずっと低い解離定数で抗原（例えば、ＥｒｂＢ３またはＩＧＦ‐１Ｒ）に結合し、そして、非特異的抗原（例えば、ＫＬＨ、ＢＳＡ、またはカゼイン）へのその結合親和性よりも少なくとも一桁高い親和性（すなわち、少なくとも１０倍低いＫｄ値）で抗原に結合する。
【０２２１】
ＰＢＡはリガンドのＩＧＦ‐１Ｒおよび／またはＥｒｂＢ３への結合を阻害し得る。例えば、ＰＢＡはリガンドのＩＧＦ‐１Ｒおよび／またはＥｒｂＢ３への結合を、例えば、細胞上またはインビトロで測定すると、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％阻害し得る。ある特定のＰＢＡはリガンドのＩＧＦ‐１Ｒおよび／またはＥｒｂＢ３への結合のレベルを、そのリガンドがそのＰＢＡの前または後に添加されると、抑制する。
【０２２２】
ある特定の実施形態では、０．３、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５ｍｇ／ｍｌまたはそれ以上（またはこれらの数値のうちのいずれか２つの間の濃度範囲）の濃度でＰＢＡを含む溶液は、例えば、例えば下記のような安定性試験の後のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により決定すると、ＰＢＡの７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％よりも多くを非凝集形態（この背景では単量体と呼ぶ）で含む。単量体のパーセンテージは次の安定性試験のうちの１つの後の溶液で決定され得る：（ａ）４℃で１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、または６日間、または１週間、２週間、３週間またはそれ以上のインキュベーション、（ｂ）室温で１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、または６日間、または１週間、２週間、３週間またはそれ以上のインキュベーション、（ｃ）３７℃で１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、または６日間、または１週間、２週間、３週間またはそれ以上のインキュベーション、（ｄ）１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクルまたは５サイクルの凍結融解、および（ｅ）室温で、例えば、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間またはそれ以上の撹拌、例えば、オービタルシェーカー上での穏やかな撹拌。
【０２２３】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡは血清中３７℃でのインキュベーションの１、２、３、４または５日後に第０日のその安定性と比較して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の安定性を示し、その場合、タンパク質の安定性は、例えば、インキュベーション後にその標的抗原のうちの１つ以上に結合するその能力を測定することにより、例えば、ＥＬＩＳＡ（例えば、実施例７を参照のこと）により決定されるように、決定される。
【０２２４】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、例えば、実施例に記載されるような、少なくとも５０℃、５５℃、６０℃、６１℃、６２℃、６３℃、６４℃、６５℃、６６℃、６７℃、６８℃、６９℃または７０℃の走査型示差蛍光分析（ＤＳＦ）によって決定される融点（Ｔｍ）を有する。
【０２２５】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、リガンドが高濃度または低濃度で存在するとき、ＩＧＦ‐１Ｒおよび／またはＥｒｂＢ３を介したシグナル伝達を効果的に阻害する。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは基礎シグナル伝達を抑制する、例えば、リガンド誘導が無いときに細胞に存在するｐＡＫＴのレベルを抑制する。ＰＢＡはＩＧＦ‐１Ｒおよび／またはＥｒｂＢ３、例えば、細胞表面上のリン酸化および／または非リン酸化受容体をそのＰＢＡに曝露されなかった細胞と比較して、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上下方制御することができる。ＰＢＡは細胞中のインスリンシグナル伝達をそのＰＢＡに曝露されなかった細胞と比較して、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上阻害することもできる。
【０２２６】
ＰＢＡはマウスまたはヒトの血清中で少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、または１０日の安定性を有することができる。ＰＢＡは、マウスあたり５または２５ｍｇ／ｋｇの用量で注入すると、カニクイザルにおいて少なくとも１０時間、２０時間、３０時間、４０時間、４５時間、５０時間、６０時間、７０時間、８０時間、９０時間、１００時間、１１０時間、１１５時間またはそれ以上の半減期を有することができる。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは、マウスまたはカニクイザルである生物において、同じ生物の同じエピトープに結合する、抗原結合特異性の方向がｆａｂの特異性とｓｃｆｖの特異性の間で逆転している別の多価二重特異性抗体の半減期よりも統計学的に有意に長い半減期、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、１００％（すなわち、２倍）、１５０％または２００％長い半減期を有する。
【０２２７】
ある特定の実施形態では、ＰＢＡは例えば、そのＰＢＡが結合するのと同じＩＧＦ‐１Ｒ上のエピトープに結合する単一特異性抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体と比較して約５０％、２倍、３倍、４倍、５倍、またはそれ以上、ｍＴＯＲのタンパク質レベルもしくはリン酸化ｍＴＯＲのレベルを抑制する、またはｍＴＯＲ活性化を低下させる、もしくは阻害する（すなわち、ｐｍＴＯＲのレベルを低下させる）。
【０２２８】
ＰＢＡは本明細書において示される特徴のうちの２つ以上の組合せを有し得る。例えば、ＰＢＡはＩＧＦ‐１Ｒのリガンド誘導性リン酸化を少なくとも８０％阻害することができ、ＥｒｂＢ３のリガンド誘導性リン酸化を少なくとも８０％阻害することができ、そしてまた、次の特徴のうちの１つ以上を示す：（ｉ）ＤＳＦによって決定されるような少なくとも６０℃または６５℃のＴｍ、（ｉｉ）１０ｍｇ／ｍＬの濃度でＰＢＳ中に室温で５日の後に少なくとも８０％、９０％または９５％が単量体であること、および（ｉｉｉ）血清中に３７℃で５日のインキュベーションの後に少なくとも７０％、８０％または９０％の安定性を有すること。ある特定の実施形態では、ＰＢＡは少なくとも６０℃のＴｍと少なくとも９０％の血清安定性を有する。他の実施形態では、ＰＢＡは、例えば、どちらかの結合単位のみ、または両方と類似の程度まで、またはより効果的もしくは強力に（ｉ）腫瘍細胞の増殖を、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％もしくはそれ以上阻害する、（ｉｉ）ＩＧＦ‐１Ｒおよび／もしくはＥｒｂＢ３が介在するシグナル伝達を、例えば、少なくとも７０％、８０％、９０％もしくはそれ以上阻害する、（ｉｉｉ）安定であり、例えば、４℃、室温もしくは３７℃で１日、２日、３日、４日、５日もしくはそれ以上の後に溶液中で少なくとも８０％が単量体であり、および／または（ｉｖ）ＤＳＦによって決定されるような、少なくとも５０℃、５５℃、６０℃、６５℃、もしくはそれ以上のＴｍを有する。
【０２２９】
標準的検定法を、抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＰＢＡの生物活性および特徴の決定に用いることができる。次の試験の例となる検定法は本明細書の実施例において提供される：（ａ）結合部位のその標的に対する結合親和性またはＫｄを決定するための検定法、（ｂ）結合タンパク質の細胞に結合する能力を決定するための検定法、（ｃ）ＩＧＦ‐１Ｒ、ＥｒｂＢ３またはＡＫＴのリン酸化の阻害を測定することによる、結合タンパク質のシグナル伝達を阻害する能力を決定するためのエッセー、（ｄ）ＰＢＡの細胞増殖をインビトロで阻害する能力を決定するための検定法、（ｅ）ＰＢＡのインビボでの腫瘍細胞への影響を決定するための検定法、および（ｆ）ＰＢＡの安定性を決定する検定法。
【０２３０】
一価および二価単一特異性抗体
本明細書は、（１）抗体の重鎖をコードする少なくとも１つの核酸分子、および重鎖をコードするその分子と同じもしくは異なっていてよい、抗体の軽鎖をコードする少なくとも１つの核酸分子の共発現によって作製され得る二価ＩｇＧ抗体、または（２）ｓｃＦｖをコードする少なくとも１つの核酸分子の発現によって作製され得る一価単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体、のどちらかであって、市販の発現システムおよび当技術分野において周知の他のものを含む、本明細書に記載されるような適切な発現システムにおいてそれぞれ発現される、一価および二価単一特異性抗体をさらに提供する。これらの抗体はモノクローナル抗体であり得る。
【０２３１】
抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体
本明細書はヒトＩＧＦ‐１Ｒに特異的に結合する抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ＩＧＦ‐１Ｒ結合タンパク質は互いに結合して結合部分、例えば、抗体、またはその抗原結合ドメインを形成する重鎖および軽鎖を含む。本明細書において提供される説明は抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体に当てはまるが、ＰＢＡに含まれる抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部分にも当てはまる。逆に、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部分の説明は抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体またはその抗原結合部位に当てはまる。
【０２３２】
ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合タンパク質は、配列番号３０２のコンセンサス配列に包含されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３０３のコンセンサス配列に包含されるＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３０４のコンセンサス配列に包含されるＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号３０５のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３０６のコンセンサス配列に包含されるＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３０７（または３０８）のコンセンサス配列に包含されるＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる群より選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含む。例えば、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合タンパク質図１のアミノ酸配列のうちの１つ、例えば、配列番号８〜３１のうちのいずれか１つの中のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに図２のアミノ酸配列のうちの１つ、例えば、配列番号３２〜１３３のうちの１つの中のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる群より選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含み得る。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合タンパク質は、配列番号１１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列またはＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列ならびに配列番号３５のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（１６ＦのＣＤＲ）からなる群より選択される１つ、２つ、または３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含むＶＨドメインを包含する。ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合タンパク質は、図１中の配列、例えば、配列番号８〜１０および１２〜３１の配列のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに図２中の配列、例えば、配列番号３２〜３４および３６〜１３３のうちの配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる群より選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含むＶＨドメインを包含する。
【０２３３】
ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合タンパク質は、配列番号１のコンセンサス配列によって包含されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび／または配列番号２のコンセンサス配列によって包含されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。例となるＶＨアミノ酸配列は図１、例えば、配列番号８〜３１の配列である。例となるＶＬアミノ酸配列は図２、例えば、配列番号３２〜１３３の配列である。１つの実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合タンパク質は配列番号１１を含むＶＨアミノ酸配列および／または配列番号３５を含むＶＬアミノ酸配列（１６Ｆの可変ドメイン）を含む。
【０２３４】
ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合タンパク質は、配列番号１のコンセンサス配列によって包含されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび／または配列番号３のコンセンサス配列によって包含されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。例となるＶＨアミノ酸配列は配列番号８〜１０および１２〜３１として示される配列である。例となるＶＬアミノ酸配列は配列番号３２〜３４および３６〜１３３として示される配列である。
【０２３５】
本明細書はまた、ＶＨドメインが、図１のＶＨアミノ酸配列、例えば、配列番号８〜３１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含み、および／またはＶＬドメインが図２のＶＬアミノ酸配列、例えば、配列番号３２〜１３３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＩＧＦ‐１Ｒに特異的に結合する抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体を提供する。ある特定の実施形態では、配列番号１１のＶＨ配列および／または配列番号３５のＶＬ配列が除外される。
【０２３６】
本明細書はまた、ＶＨドメインが図１のアミノ酸配列、例えば、配列番号８〜３１と１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１〜５個、６〜１０個、１１〜１５個、１６〜２０個、２１〜２５個、２６〜３０個、３１〜３５個、３６〜４０個、４１〜４５個、４６〜５０個または５０〜１００個のアミノ酸置換、付加または欠失において異なるアミノ酸配列を含み、そして、ＶＬドメインが図２のアミノ酸配列、例えば、配列番号３２〜１３３と１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１〜５個、６〜１０個、１１〜１５個、１６〜２０個、２１〜２５個、２６〜３０個、３１〜３５個、３６〜４０個、４１〜４５個、４６〜５０個または５０〜１００個のアミノ酸アミノ酸置換、付加または欠失において異なるアミノ酸配列を含む、ＩＧＦ‐１Ｒに特異的に結合する抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体を提供する。ある特定の実施形態では、配列番号１１のＶＨ配列および／または配列番号３５のＶＬ配列が除外される。
【０２３７】
抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体は抗体の構造、例えば、全長抗体、またはその抗原結合断片を有し得る。例えば、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端までＶＨドメイン、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ部、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、および任意でＣＨ４ドメインの順序でそれらを含む重鎖ならびにＮ末端からＣ末端までＶＬドメインおよびＣＬドメインの順序でそれらを含む軽鎖を包含し得る。定常ドメインは好ましくはヒトの定常ドメインであり、そして、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそれらの組合せに由来し得る。定常ドメインは天然配列、または、１つ以上のアミノ酸置換、付加もしくは欠失がその天然配列に対して行われている変異配列であり得る。
【０２３８】
抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合タンパク質は、ＳＦ重鎖（配列番号３５８）、Ｐ４重鎖（配列番号３５９）、Ｍ７８重鎖（配列番号３６０）およびＭ５７重鎖（配列番号３６１）（図６Ａ）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を包含することができる。抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合タンパク質は、ＳＦκ軽鎖（配列番号２０２）、Ｐ４κ軽鎖（配列番号２０４）、Ｍ７８κ軽鎖（配列番号２０６）およびＭ５７κ軽鎖（配列番号２０８）（図５Ａ）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を包含することもできる。抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合タンパク質は、ＳＦ重鎖（配列番号３５８）、Ｐ４重鎖（配列番号３５９）、Ｍ７８重鎖（配列番号３６０）およびＭ５７重鎖（配列番号３６１）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびにＳＦκ軽鎖（配列番号２０２）、Ｐ４κ軽鎖（配列番号２０４）、Ｍ７８κ軽鎖（配列番号２０６）およびＭ５７κ軽鎖（配列番号２０８）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を包含することができる。特別な実施形態では、ＩＧＦ‐１Ｒ抗体は同じ名称を持つアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖、例えば、ＳＦ重鎖およびＳＦ軽鎖、Ｐ４重鎖およびＰ４軽鎖、Ｍ７８重鎖およびＭ７８軽鎖、ならびにＭ５７重鎖およびＭ５７軽鎖を含む。しかしながら、重鎖および軽鎖をうまく組み合わせてもよい。例えば、Ｍ５７重鎖をＭ７軽鎖と対合させることができ、そして、Ｐ４重鎖をＭ５７軽鎖と対合させることができる。
【０２３９】
特に、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ抗体ＳＦ（重鎖；配列番号３５８、κ軽鎖；配列番号２０２）、Ｐ４（重鎖；配列番号３５９、κ軽鎖；配列番号２０４）、Ｍ７８（重鎖；配列番号３６０、κ軽鎖；配列番号２０６）およびＭ５７（重鎖；配列番号３６１、κ軽鎖；配列番号２０８）が提供され、それら全てがＩｇＧ１アイソタイプの抗体である。
【０２４０】
ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合タンパク質は、配列番号３５８、３５９、３６０および３６１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖ならびに／または配列番号２０２、２０４、２０６および２０８のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を包含する。
【０２４１】
他の実施形態では、ＩＧＦ‐１Ｒ結合タンパク質は、配列番号３５８、３５９、３６０および３６１のアミノ酸配列と１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、もしくは１〜５個、６〜１０個、１１〜１５個、１６〜２０個、２１〜２５個、２６〜３０個、３１〜３５個、３６〜４０個、４１〜４５個、４６〜５０個もしくは５０〜１００個のアミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含む重鎖ならびに／または配列番号２０２、２０４、２０６および２０８からなる群より選択されるアミノ酸配列と１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、もしくは１〜５個、６〜１０個、１１〜１５個、１６〜２０個、２１〜２５個、２６〜３０個、３１〜３５個、３６〜４０個、４１〜４５個、４６〜５０個もしくは５０〜１００個のアミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含む軽鎖を包含する。
【０２４２】
抗ＥｒｂＢ３抗体の生物学的活性および特性は、検定法、例えばＰＢＡについて本明細書に記載される検定法によって決定され得る。抗ＥｒｂＢ３タンパク質はＥｒｂＢ３のリン酸化、腫瘍細胞の増殖および／または腫瘍成長の阻害をインビボでリガンド介在的に阻害することができる。
【０２４３】
抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部分は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖの形態または結合部位の他の形態であり得る１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の他の結合部位を含み得る、またはそれらに結合し得る。例えば、抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合タンパク質は抗ＥｒｂＢ３結合部位、例えば、抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖを含み得る。
【０２４４】
抗ＥｒｂＢ３抗体
本明細書はまた、ヒトＥｒｂＢ３に特異的に結合する抗ＥｒｂＢ３抗体を提供する。ある特定の実施形態では、ＥｒｂＢ３結合タンパク質は、互いに結合し、結合タンパク質、例えば、抗体、またはその抗原結合ドメインを形成する重鎖および軽鎖を含む。下で提供される説明は抗ＥｒｂＢ３抗体に当てはまるが、ＰＢＡに含まれる抗ＥｒｂＢ３結合部位にも当てはまる。逆に、抗ＥｒｂＢ３結合部位の説明は抗ＥｒｂＢ３抗体またはその抗原結合部位に当てはまる。
【０２４５】
ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合タンパク質は、配列番号３０９のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３１０のコンセンサス配列に包含されるＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３１１のコンセンサス配列に包含されるＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号３１２の配列であるＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３１３の配列であるＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３１４（または３１５）のコンセンサス配列に包含されるＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる群より選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含む。例えば、抗ＥｒｂＢ３結合タンパク質は、図３中の配列、例えば、配列番号１３４〜１６５のうちのいずれか１つの中の配列のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに図４中の配列、例えば、配列番号１６６〜２００の中の配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる群より選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含み得る。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合タンパク質は、配列番号１４３のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列またはＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列ならびに配列番号１７５のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（１６ＦのＣＤＲ）からなる群より選択される１つ、２つ、または３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含むＶＨドメインを包含する。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合タンパク質は、図３、例えば、配列番号１３４〜１４２および１４４〜１６５のうちのいずれか１つのＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列またはＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ならびに図４、例えば、配列番号１６６〜１７４および１７６〜２００のうちのいずれか１つの配列であるＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる群より選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含むＶＨドメインを包含する。
【０２４６】
ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合タンパク質は、配列番号４のコンセンサス配列に包含されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび／または配列番号６のコンセンサス配列に包含されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。例となるＶＨアミノ酸配列は図３、例えば、配列番号１３４〜１６５の配列である。例となるＶＬアミノ酸配列は表４、例えば、配列番号１６６〜２００の配列である。１つの実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合タンパク質は、配列番号１４３を含むＶＨアミノ酸配列および／または配列番号１７５を含むＶＬアミノ酸配列（１６Ｆの可変ドメイン）を含む。
【０２４７】
ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合タンパク質は、配列番号５のコンセンサス配列に包含されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび／または配列番号７のコンセンサス配列に包含されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含する。例となるＶＨアミノ酸配列は配列番号１３４〜１４２および１４５〜１６５として示される配列である。例となるＶＬアミノ酸配列は配列番号１６６〜１７４および１７６〜２００として示される配列である。
【０２４８】
本明細書はまた、ＶＨドメインが図３、例えば、配列番号１３４〜１６５のＶＨアミノ酸配列のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、および／またはＶＬドメインが図４、例えば、配列番号１６６〜２００のＶＬアミノ酸配列のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＥｒｂＢ３に特異的に結合する抗ＥｒｂＢ３抗体を提供する。ある特定の実施形態では、配列番号１４３のＶＨ配列および／または配列番号１７５のＶＬ配列が除外される。
【０２４９】
本明細書はまた、ＶＨドメインが図３、例えば、配列番号１３４〜１６５のアミノ酸配列と１〜５個、６〜１０個、１１〜１５個、１６〜２０個、２１〜２５個、２６〜３０個、３１〜３５個、３６〜４０個、４１〜４５個、４６〜５０個または５０〜１００個までのうちの１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、またはそれ未満のアミノ酸置換、付加または欠失において異なるアミノ酸配列を含み、そして、ＶＬドメインが図４、例えば、配列番号１６６〜２００のアミノ酸配列と１〜５個、６〜１０個、１１〜１５個、１６〜２０個、２１〜２５個、２６〜３０個、３１〜３５個、３６〜４０個、４１〜４５個、４６〜５０個または５０〜１００個までのうちの１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、またはそれ未満のアミノ酸置換、付加または欠失において異なるアミノ酸配列を含む、ＥｒｂＢ３に特異的に結合する抗ＥｒｂＢ３抗体を提供する。ある特定の実施形態では、配列番号１４３のＶＨ配列および／または配列番号１７５のＶＬ配列が除外される。
【０２５０】
抗ＥｒｂＢ３抗体は抗体の構造、例えば、ホロ抗体（全長抗体）またはその抗原結合断片を有し得る。例えば、抗ＥｒｂＢ３結合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端までＶＨドメイン、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ部、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、および任意でＣＨ４ドメインの順序でそれらを含む重鎖ならびにＮ末端からＣ末端までＶＬドメインおよびＣＬドメインの順序でそれらを含む軽鎖を包含し得る。定常ドメインは好ましくはヒトの定常ドメインであり、そして、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそれらの組合せに由来し得る。定常ドメインは天然配列、または、１つ以上のアミノ酸置換、付加もしくは欠失がその天然配列に対して行われている変異配列であり得る。
【０２５１】
抗ＥｒｂＢ３結合タンパク質は、Ｐ１重鎖（配列番号３６２）、Ｍ２７重鎖（配列番号３６３）、Ｍ７重鎖（配列番号３６４）Ｂ７２重鎖（配列番号３６５）およびＢ６０（配列番号３６６）（図５Ｂ）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を包含することができる。抗ＥｒｂＢ３結合タンパク質は、Ｐ１λ軽鎖（配列番号２５８）、Ｍ２７λ軽鎖（配列番号２６０）、Ｍ７λ軽鎖（配列番号２６２）、Ｂ７２λ軽鎖（配列番号２６４）およびＢ６０λ軽鎖（配列番号２６６）（図５Ｂ）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を包含することもできる。抗ＥｒｂＢ３結合タンパク質は、Ｐ１重鎖（配列番号３６２）、Ｍ２７重鎖（配列番号３６３）、Ｍ７重鎖（配列番号３６４）Ｂ７２重鎖（配列番号３６５）およびＢ６０（配列番号３６６）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、ならびにＰ１λ軽鎖（配列番号２５８）、Ｍ２７λ軽鎖（配列番号２６０）、Ｍ７λ軽鎖（配列番号２６２）、Ｂ７２λ軽鎖（配列番号２６４）およびＢ６０λ軽鎖（配列番号２６６）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を包含することができる。特別な実施形態では、ＩＧＦ‐１Ｒ抗体は同じ名称を持つアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖、例えば、Ｐ１重鎖およびＰ１軽鎖、Ｍ２７重鎖およびＭ２７軽鎖、Ｍ７重鎖およびＭ７軽鎖、Ｂ７２重鎖およびＢ７２軽鎖、およびＢ６０重鎖およびＢ６０軽鎖を含む。しかしながら、重鎖および軽鎖をうまく組み合わせてもよい。例えば、Ｍ５７重鎖をＭ７軽鎖と対合させることができ、そして、Ｐ４重鎖をＭ５７軽鎖と対合させることができる。
【０２５２】
また、抗ＥｒｂＢ３抗体Ｐ１（重鎖；配列番号３６２、λ軽鎖；配列番号２５８）、Ｍ２７（重鎖；配列番号３６３、λ軽鎖；配列番号２６０）、Ｍ７（重鎖；配列番号３６４、λ軽鎖；配列番号２６２）、Ｂ７２（重鎖；配列番号３６５、λ軽鎖；配列番号２６４）、およびＢ６０（重鎖；配列番号３６６、λ軽鎖；配列番号２６６）が提供され、それら全てがＩｇＧ１アイソタイプの抗体である。
【０２５３】
ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３結合タンパク質は、配列番号３６２、３６３、３６４、３６５および３６６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖ならびに／または配列番号２５８、２６０、２６２、２６４および２６６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を包含する。
【０２５４】
他の実施形態では、ＥｒｂＢ３結合タンパク質は、配列番号３６２、３６３、３６４、３６５および３６６のアミノ酸配列と１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、もしくは１〜５個、６〜１０個、１１〜１５個、１６〜２０個、２１〜２５個、２６〜３０個、３１〜３５個、３６〜４０個、４１〜４５個、４６〜５０個もしくは５０〜１００個のアミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含む重鎖ならびに／または配列番号２５８、２６０、２６２、２６４および２６６からなる群より選択されるアミノ酸配列と１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、もしくは１〜５個、６〜１０個、１１〜１５個、１６〜２０個、２１〜２５個、２６〜３０個、３１〜３５個、３６〜４０個、４１〜４５個、４６〜５０または５０〜１００アミノ酸置換、付加もしくは欠失において異なるアミノ酸配列を含む軽鎖を包含する。
【０２５５】
抗ＥｒｂＢ３抗体の生物学的活性および特性は、検定法、例えばＰＢＡについて本明細書に記載される検定法によって決定され得る。抗ＥｒｂＢ３タンパク質はＥｒｂＢ３のリン酸化、腫瘍細胞の増殖および／または腫瘍成長の阻害をインビボでリガンド介在的に阻害することができる。
【０２５６】
抗ＥｒｂＢ３結合部分は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖの形態または結合部位の他の形態であり得る１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の他の結合部位を含み得る、またはそれらに結合し得る。例えば、抗ＥｒｂＢ３結合タンパク質は抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位、例えば、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖを含み得る。
【０２５７】
ｓｃＦｖ抗体
ｓｃＦｖ、例えば、単離されたモノクローナルｓｃＦｖもまた提供される。例となるｓｃＦｖは抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖおよび抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖである。例となるｓｃＦｖは、ｓｃＦｖリンカーによって一つに結合されるＶＨドメインおよびＶＬドメインを含むポリペプチドである。ｓｃＦｖのＶＨ鎖およびＶＬ鎖はＶＨ鎖とＶＬ鎖の間に挿入されるｓｃＦｖリンカーによって一つに結合される。ｓｃＦｖリンカーは、１０〜３０個のアミノ酸、例えば１５〜２０個のアミノ酸からなる連続アミノ酸配列から構成され得る。例となるｓｃＦｖリンカーは、Ｇｌｙ‐Ｓｅｒリンカー（配列番号３９９）であり、ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（配列番号４０１）であり得る。好ましいｓｃＦｖリンカーは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号３９６）または（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号３９７）を含む。他の好ましいｓｃＦｖリンカーは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号３９６）または（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号３９７）に加えて１〜５個のアミノ酸、例えば、ＡＳＴを含み、そして、次のアミノ酸配列：ＡＳＴ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号４００）またはＡＳＴ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号４０２）を含み得る。
【０２５８】
抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖ抗体は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む３つのＶＨＣＤＲからなるセットを含むＶＨドメイン、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む３つのＶＬＣＤＲからなるセットを含むＶＬドメインを包含することができ、前記ＣＤＲはそれぞれ配列番号３０２、３０３または３０４、３０５、３０６または３０７（もしくは３０８）のアミノ酸配列を含み、そして、各ＣＤＲはアミノ末端およびカルボキシ末端をさらに含み、各ＣＤＲセットのＣＤＲは可変ドメイン中でアミノ末端からカルボキシ末端までＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の線形順序で配置され、そして、配列番号３０２、３０４、３０５、３０６、３０７（または３０８）中のＸアミノ酸は不定のアミノ酸を表し、それは（ＶＨについて）図１中および（ＶＬについて）図２中の対応する位置に局在する任意のアミノ酸であり得る。抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖは、図１中のＶＨアミノ酸配列からなる群、例えば、配列番号８〜３１からなる群のうちのアミノ酸配列から構成されるＶＨドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３、ならびに／または図２中のＶＬアミノ酸配列からなる群、例えば、配列番号３２〜１３３からなる群のうちのアミノ酸配列から構成されるＶＬドメインのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み得る。ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖは１６Ｆの６つのＣＤＲ全てを含むことはなく、または１６ＦのＶＨドメインと１６ＦのＶＬドメインの両方か一方を含まない。例えば、ｓｃＦｖは、１６Ｆ中のものと少なくとも１つのアミノ酸において異なるＶＨアミノ酸配列およびＶＬアミノ酸配列を含む。
【０２５９】
抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖ抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび／または配列番号２（もしくは３）に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含することができ、配列番号１、２および３中のＸアミノ酸は、（ＶＨドメインについて）図１中および（ＶＬドメインについて）図２中の対応する位置にある任意のアミノ酸であり得る不定のアミノ酸である。抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖ抗体は、図１のアミノ酸配列、例えば、配列番号８〜３１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび／または図２のアミノ酸配列、例えば、配列番号３２〜１３３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含することができる。
【０２６０】
例となる抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖは、配列番号８、９、１０および１１からなるＶＨアミノ酸配列から構成される群より選択されるアミノ酸配列のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列（これらのＣＤＲの位置は図１中に示される）からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含する。抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖは、配列番号３２、３３、３４および３５からなるＶＬアミノ酸配列から構成される群より選択されるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（これらのＣＤＲの位置は図２に示される）からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメインを包含することもできる。ある特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖは、配列番号８、９、１０および１１からなるＶＨアミノ酸配列から構成される群より選択されるアミノ酸配列のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含し、ならびに配列番号３２、３３、３４および３５からなるＶＬアミノ酸配列から構成される群より選択されるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖは、配列番号８のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメイン、ならびに配列番号３２からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（Ｍ５７モジュール）を包含する。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖは、配列番号９のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメイン、ならびに配列番号３３からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（モジュールＭ７８）を包含する。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖは、配列番号１０のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメイン、ならびに配列番号３４からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（モジュールＰ４）を包含する。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖは、配列番号８のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメイン、ならびに配列番号３３からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２ア���ノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（モジュールＭ５７／Ｍ７８）を包含する。特定の実施形態では、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖは、配列番号１０のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメイン、ならびに配列番号３２からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（モジュールＰ４／Ｍ５７）を包含する。
【０２６１】
抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖ抗体は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含む３つのＶＨＣＤＲからなるセットを含むＶＨドメイン、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含む３つのＶＬＣＤＲからなるセットを含むＶＬドメインを包含することができ、前記ＣＤＲはそれぞれ配列番号３０９、３１０または３１１、３１２、３１３または３１４（もしくは３１５）のアミノ酸配列を含み、そして、各ＣＤＲはアミノ末端およびカルボキシ末端をさらに含み、各ＣＤＲセットのＣＤＲは可変ドメイン中でアミノ末端からカルボキシ末端までＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の線形順序で配置され、そして、３０９、３１０または３１１、３１２、３１３または３１４（または３１５）中のＸアミノ酸は不定のアミノ酸を表し、それは（ＶＨについて）図１中および（ＶＬについて）図２中の対応する位置に局在する任意のアミノ酸であり得る。抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは、図３中のＶＨアミノ酸配列からなる群、例えば、配列番号１３４〜１６５からなる群のうちのアミノ酸配列から構成されるＶＨドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３、ならびに／または図４中のＶＬアミノ酸配列からなる群、例えば、配列番号１６６〜２００からなる群のうちのアミノ酸配列から構成されるＶＬドメインのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含み得る。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは１６Ｆの６つのＣＤＲ全てを含むことはなく、または１６ＦのＶＨドメインと１６ＦのＶＬドメインの両方か一方を含まない。例えば、ｓｃＦｖは、１６Ｆ中のものと少なくとも１つのアミノ酸において異なるＶＨアミノ酸配列およびＶＬアミノ酸配列を含む。
【０２６２】
抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖ抗体は、配列番号４（もしくは５）のアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび／または配列番号６（もしくは７）に示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含することができ、配列番号４、５、６および７中のＸアミノ酸は、（ＶＨドメインについて）図３中および（ＶＬドメインについて）図４中の対応する位置にある任意のアミノ酸であり得る不定のアミノ酸である。抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖ抗体は、図３のアミノ酸配列、例えば、配列番号１３４〜１６５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび／または図４のアミノ酸配列、例えば、配列番号１６６〜２００からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを包含することができる。
【０２６３】
例となる抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは、配列番号１３４〜１４３からなるＶＨアミノ酸配列から構成される群より選択されるアミノ酸配列のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列（これらのＣＤＲの位置は図３に示される）からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含する。抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは、配列番号１６６〜１７５からなるＶＬアミノ酸配列から構成される群より選択されるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列（これらのＣＤＲの位置は図４に示される）からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメインを包含することもできる。ある特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは、配列番号１３４〜１４３からなるＶＨアミノ酸配列から構成される群より選択されるアミノ酸配列のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含し、ならびに配列番号１６６〜１７５からなるＶＬアミノ酸配列から構成される群より選択されるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメインを包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは、配列番号１３４のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメイン、ならびに配列番号１６６からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（モジュールＢ６０）を包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは、配列番号１３５のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメイン、ならびに配列番号１６７からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（Ｂ７２）を包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは、配列番号１３６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメイン、ならびに配列番号１６８からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（モジュールＭ２７）を包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは、配列番号１３７のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメインならびに配列番号１６９からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列から���る、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（Ｍ７モジュール）を包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは、配列番号１３８のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメイン、ならびに配列番号１７０からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（Ｐ１モジュール）を包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは、配列番号１３９のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメイン、ならびに配列番号１７１からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（Ｍ２７モジュール）を包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは、配列番号１４０のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメイン、ならびに配列番号１７２からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（Ｂ６９モジュール）を包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは、配列番号１４１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメイン、ならびに配列番号１７３からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（Ｐ６モジュール）を包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは、配列番号１４２のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメイン、ならびに配列番号１７４からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（Ｍ１．３モジュール）を包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは、配列番号１４３のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメイン、ならびに配列番号１７５からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（Ｃ８モジュール）を包含する。特定の実施形態では、抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖは、配列番号１３６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＨＣＤＲ３��ミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＨドメインを包含するＶＨドメイン、ならびに配列番号１６９からなるアミノ酸配列のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列およびＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列からなる、または少なくともそれらを含むＶＬドメイン（Ｍ２７／Ｍ７モジュール）を包含する。
【０２６４】
例となるｓｃＦｖは抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖ抗体Ｐ４（配列番号３６７）、Ｍ５７（配列番号３６８）、Ｍ７８、（配列番号３６９）、およびＭ７６（配列番号３８２）、ならびに抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖ抗体Ｃ８（配列番号３７０）、Ｐ１（配列番号３７１）、Ｍ１．３（配列番号３７２）、Ｍ２７（配列番号３７３）、Ｐ６（配列番号３７４）、Ｂ６９（配列番号３７５）およびＰ６Ｌ（配列番号３８３）である。
【０２６５】
ｓｃＦｖは、それらの結合特性を保持しつつ、それぞれ本明細書において示されるＣＤＲ、可変ドメイン、または全長ｓｃＦｖと１つ以上のアミノ酸付加、欠失または置換において異なるＣＤＲ、可変ドメインまたはそれらの全長アミノ酸を含むこともできる。例えば、それぞれ、ＣＤＲは本明細書において提供されるＣＤＲ配列と１個または２個のアミノ酸において異なる場合があり、可変ドメインは本明細書において提供される可変ドメイン配列と１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個のアミノ酸において異なる場合があり、そして、ｓｃＦｖは本明細書において提供されるｓｃＦｖと１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、２０個、３０個、４０個または５０個のアミノ酸において異なる場合がある。ｓｃＦｖは、本明細書において提供されるＣＤＲ、可変ドメインまたは全長ｓｃＦｖ配列の配列に対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一であるＣＤＲ、可変ドメインまたはその全長アミノ酸配列を含むこともできる。１つの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３６７、３６８、３６９、３７０、３７２、３７３、３７４および３７５からなるｓｃＦｖ配列から構成される群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０２６６】
ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖはＶＬドメインのアミノ末端またはカルボキシ末端に１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個のアミノ酸を含む。例えば、目的のｓｃＦｖのカルボキシ末端がカルボキシペプチダーゼなどの酵素によって切り取られ得るアミノ酸（例えば、リシンまたはアルギニン）である場合、そのアミノ酸が切り取られることを防ぐために１つ以上のアミノ酸を付加してよい。例えば、ＣＬドメインの「ＲＴ」というアミノ酸は、例えば、配列番号３６７〜３６９に示されるような抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖ中の「ＶＥＩＫ」というカルボキシ末端に付加され得る。
【０２６７】
核酸、発現ベクターおよび宿主細胞
本明細書は、本明細書に記載されるポリペプチドをコードする核酸、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡを提供する。本明細書において提供される例となるヌクレオチド配列は図１〜７のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、例えば、別表のヌクレオチド配列、またはそれらの部分、例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのドメインをコードする部分である。本明細書において示されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、例えば、本明細書において示されるヌクレオチド配列に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一であるヌクレオチド配列もまた包含される。そのようなヌクレオチド配列は本明細書において示されるタンパク質をコードすることができ、または、図１〜７のいずれか１つのうちのアミノ酸配列のような、本明細書において示されるタンパク質もしくはその部分（例えば、ドメイン）に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％同一である、もしくは類似しているタンパク質をコードすることができる。
【０２６８】
リーダー配列を有する１６Ｆの重鎖をコードするヌクレオチド配列（アミノ酸配列は配列番号３００）は配列番号２９９として示される。リーダー配列を有する１６Ｆの軽鎖をコードするヌクレオチド配列（アミノ酸配列は配列番号２９８）は配列番号２９７として示される。
【０２６９】
ある特定の実施形態では、核酸は、リーダー配列（またはシグナルペプチド）を含む抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする。例となるリーダー配列は１６Ｆについて図７に示されている配列である。したがって、本明細書は、図７に示されるもののようなリーダー配列に結合している抗体、例えば、図５および６に示される抗体、およびそのような抗体をコードする核酸も提供する。
【０２７０】
ある特定の実施形態では、核酸は、タンパク質の産生ために細胞内でヌクレオチド配列の発現を増強または促進するための配列に結合している。そのような核酸は、ベクター、例えば、発現ベクター内に含まれ得る。膜貫通タンパク質であるタンパク質の発現のために、シグナル配列、例えば、図７Ａのうちの１つを含むことも好ましいが、そのシグナル配列は成熟型タンパク質を形成するためにしばしば欠失される。
【０２７１】
本明細書はまた、本明細書において提供される核酸またはベクターを含む細胞、例えば、宿主細胞も包含する。
【０２７２】
本明細書に記載される抗体は組換え方法によって作製され得る。組換え生産の方法は当技術分野の段階で広く知られており、原核細胞および真核細胞でのタンパク質発現とその後の抗体の単離と通常薬学的に許容可能な純度にまでの精製を含む。宿主細胞での抗体の発現のため、それぞれのポリペプチド、例えば、軽鎖および重鎖をコードする核酸が標準的な方法により発現ベクターに挿入される。発現は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞、ＳＰ２／０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、酵母、または大腸菌細胞のような適切な原核宿主細胞または真核宿主細胞で行われ、そして、結合タンパク質がその細胞（上清または溶解後の細胞）から回収される。抗体の組換え生産のための一般的な方法は当技術分野において周知である。
【０２７３】
抗体は、例えば、プロテインＡセファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、または親和性クロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製法によって培地から適切に分離され得る。抗体をコードするＤＮＡおよびＲＮＡは従来の手法を用いて容易に単離され、配列分析される。ハイブリドーマ細胞はそのようなＤＮＡおよびＲＮＡの供給源として機能し得る。一度単離されると、ＤＮＡは発現ベクターに挿入され、次にそれが、本来は免疫グロブリンタンパク質を産生しないＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、または骨髄腫細胞などの宿主細胞に形質移入され、その宿主細胞内で組換え抗体の合成を得ることができる。
【０２７４】
抗体のアミノ酸配列異型体（例えば、変異体）はその抗体ＤＮＡに適切なヌクレオチドの変更を導入することにより、またはヌクレオチド合成により調製され得る。
【０２７５】
「宿主細胞」は、改変されて本明細書に記載される抗体を生成することができる、あらゆる種類の細胞系を指す。１つの実施形態では、ＨＥＫ２９３細胞およびＣＨＯ細胞が宿主細胞として使用され、別の実施形態では、ＣＨＯ細胞またはＮＳＯ細胞が使用される。
【０２７６】
原核生物に適切な制御配列は、例えば、プロモーター、任意でオペレーター配列、およびリボソーム結合部位を含む。真核細胞はプロモーター、エンハンサーおよびポリアデニル化シグナルを利用することが知られている。
【０２７７】
核酸が別の核酸配列と機能的な関係で配置されているとき、その核酸は「機能するように結合」している。例えば、先行配列または分泌リーダーのＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に関与する先行タンパク質として発現する場合、そのポリペプチドのＤＮＡに機能するように結合している。プロモーターまたはエンハンサーは、それがコード配列の転写に影響する場合、そのコード配列に機能するように結合している。または、リボソーム結合部位は、それが翻訳を促進するように位置している場合、コード配列に機能するように結合している。一般に、「機能するように結合している」は、結合しているＤＮＡ配列が連続的であり、そして、分泌リーダーの場合では、連続的であり、且つ、読み枠にあっていることを指す。しかしながら、エンハンサーは連続している必要は無い。結合は都合の良い制限部位でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを従来の実践に従って使用する。
【０２７８】
抗体の精製は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド形成、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、および当技術分野において周知の他の技法を含む標準的な技法により細胞の構成要素または他の汚染混入物質、例えば、他の細胞性核酸またはタンパク質を排除するために実行され得る。微生物タンパク質を用いる親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテインＡまたはプロテインＧ親和性クロマトグラフィー）、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、陽イオン交換（カルボキシメチル樹脂）、陰イオン交換（アミノエチル樹脂）および混合モード交換）、（例えば、β‐メルカプトエタノールおよび他のＳＨリガンドを用いる）イオウ親和性吸着クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィーまたは（例えば、フェニル‐セファロース、アザ‐アレノフィリック樹脂、またはｍ‐アミノフェニルボロン酸を用いる）芳香族吸着クロマトグラフィー、（例えば、Ｎｉ（ＩＩ）親和性材料およびＣｕ（ＩＩ）親和性材料を用いる）金属キレート親和性クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、および電気泳動法（ゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動など）のような様々な方法が十分に確立されており、タンパク質精製のために広く用いられている。
【０２７９】
本明細書において提供される抗体の使用方法
本明細書は、本明細書に記載される抗体、例えば、抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３ＰＢＡ、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体および抗ＥｒｂＢ３抗体の治療用途のための使用方法を提供する。本明細書において開示される抗体は、様々な癌を含む、ＥｒｂＢ３および／またはＩＧＦ‐１Ｒ依存性シグナル伝達に関連する疾患または障害の治療のために使用され得る。
【０２８０】
１つの実施形態では、ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３を発現する腫瘍細胞の増殖を阻害するための方法であって、腫瘍細胞の増殖が阻害され、遅らされ、もしくは停止されるように、または腫瘍細胞が死ぬように、腫瘍細胞を抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３二重特異性（任意で多価）抗体と接触させることを含む方法が提供される。
【０２８１】
本明細書は、ＥｒｂＢ３および／またはＩＧＦ‐１Ｒ依存性シグナル伝達に関連する疾患または障害を治療するための方法であって、その疾患または障害を治療するために有効な量の本明細書において開示される抗体を患者に投与することによる方法を提供する。適切な疾患または障害には、例えば、乳癌および以下に示される癌を含むが、これらに限定されない様々な癌が含まれる。１つの実施形態では、癌のような増殖性疾患を有する対象を治療するための方法は、抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３二重特異性抗体のような１つ以上の本明細書に記載される抗体の治療上有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む。
【０２８２】
患者においてＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３を発現する腫瘍を治療するための方法（または、例えば、そのための医薬における二重特異性抗体）であって、（例えば、腫瘍成長を遅らせる、もしくは停止させるのに有効な、または腫瘍を縮小させるのに有効な、または腫瘍浸潤もしくは腫瘍転移を遅らせる、もしくは停止させるのに有効な）有効量の本明細書に記載される抗体を投与することを含む方法も提供される。次の癌の腫瘍を含む、ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３を発現するどのような腫瘍も治療され得る：肺癌、肉腫、大腸癌、膵臓癌、前立腺癌、腎細胞癌、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、黒色腫および乳癌。そのような腫瘍の特定の例には、非小細胞肺癌、ユーイング肉腫、タモキシフェン耐性エストロゲン受容体陽性乳癌、トラスツズマブ耐性またはラパチニブ耐性ＨＥＲ２陽性転移性乳癌、ゲフィチニブ耐性またはエルロチニブ耐性肺癌、セツキシマブ耐性またはパニツムマブ耐性大腸癌、セツキシマブ耐性頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、およびエルロチニブ耐性膵臓癌が挙げられる。
【０２８３】
本明細書において開示される１つ以上抗体を含むキットも提供される。キットは、そのキットの内容物の用途を示すラベルを含むことができ、ＥｒｂＢ３および／またはＩＧＦ‐１Ｒ依存性シグナル伝達に関連する疾患または障害の治療、例えば、腫瘍の治療におけるそのキットの取扱説明書を含んでもよい。ラベルという用語には、そのキットに、もしくはそのキットと提供されるか、それともそのキットに付属するあらゆる文書、販売資料または記録資料が含まれる。
【０２８４】
本明細書において提供される腫瘍の治療方法は前記抗体と組み合わせて第２の抗癌剤を投与することをさらに含むことができる。したがって、第２の抗癌剤、典型的には生物剤と併せて、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体または賦形剤と共に本明細書において開示される抗体を含む、新規の医薬組成物が企図されている。
【０２８５】
医薬組成物
別の態様では、患者における腫瘍の治療のための組成物、例えば、医薬組成物、ならびに、患者において腫瘍を治療するためにそれぞれのそのような組成物を使用する方法が提供される。本明細書において提供される組成物は、薬学的に許容可能な担体と共に製剤される、本明細書において開示される抗体のうちの１つ以上を含有する。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容可能な担体」には、生理的に適合するありとあらゆる溶媒、分散媒体、被覆、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、などが含まれる。好ましくは、担体は（例えば、注射または点滴による）静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、非経口投与、脊髄投与または表皮性投与に適切である。投与経路に応じて、抗体は、タンパク質を不活化することができる酸の作用または他の自然条件からそれを保護する材料で被覆されてよい。
【０２８６】
医薬組成物は単独で、または併用療法で、すなわち、他の薬剤と組み合わせて投与され得る。例えば、併用療法は本開示の抗体と抗癌剤のような少なくとも１つの追加の治療薬を含み得る。医薬組成物は放射線治療および／または外科手術などの別の抗癌治療法と併せて投与されることもできる。
【０２８７】
本開示の組成物は当技術分野において公知の様々な方法によって投与され得る。当業者が認識するように、投与経路および／または投与モードは所望の結果に応じて左右される。
【０２８８】
本明細書において提供される組成物をある特定の投与経路によって投与するためには、抗体の不活化を防ぐ材料でその抗体を被覆すること、またはその材料とその抗体を共投与することが必要または望ましい場合がある。例えば、抗体は適切な担体、例えば、リポソーム中で、または希釈剤中で患者に投与され得る。薬学的に許容可能な希釈剤には生理食塩水および水性緩衝溶液が含まれる。リポソームには水中油中水型ＣＧＦ乳剤ならびに従来のリポソームが含まれる。
【０２８９】
薬学的に許容可能な担体には、無菌で注射可能な溶液または分散液を即席で調製するための無菌で水性の溶液または分散液および無菌の粉体が含まれる。医薬活性物質のためにそのような媒体および薬品を使用することは当技術分野において公知である。どのような賦形剤、希釈剤または薬品も、その活性化合物と不適合である場合を除いて、本明細書において提供される医薬組成物中でのその使用が企図されている。補充的な活性化合物（例えば、さらなる抗癌剤）もその組成物に組み込むことができる。
【０２９０】
治療用組成物は通常、製造条件下および貯蔵条件下で無菌状態であり、安定でなくてはならない。その組成物は溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高薬品濃度に適切な他の規則構造として製剤され得る。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物を含有する溶剤または分散媒体であり得る。生理食塩水溶液およびブドウ糖水溶液およびグリセロール水溶液は液体担体として、特に注射可能溶液の液体担体として用いられ得る。前記組成物は、所望により、少量の湿潤剤または溶解度増強剤、安定化剤、保存剤、またはｐＨ緩衝剤を含有することもできる。多くの場合で、前記組成物中に等張剤、例えば、塩化ナトリウム、糖、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなどのポリアルコールを含むことが有益である。注射可能組成物の吸収の長期化は、吸収を遅らせる薬品、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンをその組成物中に含むことによってもたらされ得る。
【実施例】
【０２９１】
以下の実施例は、本開示の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【０２９２】
材料と方法
特に明記しない限り、実施例全体に渡って以下の材料および方法を使用する。通常、本開示の技術の実施には、特に明記しない限り、化学、分子生物学、組換えＤＮＡ技術、免疫学（特に、例えば、抗体技術）、薬理学、調剤学、およびポリペプチド調製における標準的な技術の従来技術が使用される。
【０２９３】
リガンド
これらの実施例および図中で使用される場合、「ＨＲＧ」は、ヘレグリン１β１（ＨＲＧ１‐Ｂ、ＨＲＧ‐β１、ニューレグリン１、ＮＲＧ１、ニューレグリン１β１、ＮＲＧ１‐ｂ１、またはＨＲＧ  ＥＣＤと称されることもある）として知られるヘレグリンのアイソフォームを指す（例えば、Ｒ＆Ｄシステム社、３７７−ＨＢ−０５０／ＣＦ）。これらの実施例および図中で使用される場合、ＩＧＦ‐１は、インスリン様増殖因子１を指す（例えば、Ｒ＆Ｄシステム社、２９１−ＧＩ−０５０／ＣＦ）。
【０２９４】
細胞株
下記の実験に使用するためのヒト細胞株は全て、表示の通り、米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ、バージニア州マナッサス）または米国国立癌研究所（ＮＣＩ）（例えば、Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（ＤＣＴＤ））から入手することができる。
・ＭＣＦ７−ＡＴＣＣ（登録商標）カタログ番号ＨＴＢ−２２（商標）
・ＡＤＲｒ−ＮＣＩ（名称変更  ＮＣＩ／ＡＤＲ−ＲＥＳ）
・ＢｘＰＣ‐３−ＡＴＣＣ（登録商標）カタログ番号ＣＲＬ−１６８７（商標）
・ＤＵ１４５−ＡＴＣＣ（登録商標）カタログ番号ＨＴＢ−８１（商標）
・Ｃａｋｉ‐１−ＡＴＣＣ（登録商標）カタログ番号ＨＴＢ−４６（商標）
・ＳＫ−ＥＳ−１−ＡＴＣＣ（登録商標）カタログ番号ＨＴＢ−８６（商標）
【０２９５】
マウス  抗ヒト−ＩＧＦ‐１Ｒモノクローナル抗体ｍＡｂ３９１（ＩｇＧ１、Ｒ＆Ｄシステム社  ＭＡＢ３９１）を抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ抗体対照として使用する。
【０２９６】
実施例１：複数のシグナル経路を標的とする抗体治療薬の合理的設計
ＥｒｂＢ受容体が特定の種類の癌においての高発現していることから、ＥｒｂＢ経路は癌研究において長く注目されてきた。ＨＥＲ２／ＥｒｂＢ２はいくつかの乳癌において増幅される遺伝子であり、ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ１は結腸癌およびＮＳＣＬＣにおいて高発現される。ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ１経路およびＨＥＲ２／ＥｒｂＢ２経路の２つのメンバーに対して、承認されたモノクローナル抗体薬剤（例えば、セツキシマブおよびトラスツズマブ）および小分子チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、エルロチニブ、ラパチニブ）が存在する。これらの治療薬は、細胞外刺激が下流の細胞内シグナル伝達ネットワークを活性化する能力を混乱させる。しかし、ＥｒｂＢシグナル伝達ネットワークがかなり複雑であること（図９Ａ）を考えると、最適な治療方針が何であるかを決定することは困難である。ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ１およびＨＥＲ２／ＥｒｂＢ２（リガンド結合活性を欠く）に加えて、ＥｒｂＢ経路−ＥｒｂＢ３（キナーゼ・デッド型）およびＥｒｂＢ４の２つの他のメンバーが存在する。４つの受容体は全て、リガンド活性化後に、様々な程度に互いに二量体化し、細胞内シグナル伝達に必要とされる重要なステップに寄与し得る。二量体化後、これらの受容体は内部移行し、二量体の型、およびＰＩ３Ｋ経路などの下流シグナル経路の活性化状態に応じた速度でリサイクルされ得る。
【０２９７】
ＥｒｂＢネットワークの複雑さは、主要要素の存在量および活性化状態を測定する能力と結びつけると、コンピュータモデリングに適している。コンピュータモデリングを用いることで、受容体輸送の二量体化依存性、フィードバックループを通じてのシグナル増幅の制御、およびシグナル伝播のリガンド依存性などの、いくつかの生物学的現象を上手く説明することができる。例えば、ＥｒｂＢ経路を阻害するための最適戦略を決定するため、ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ１またはＥｒｂＢ３ヘテロ二量体をそれぞれ選択的に活性化するリガンドであるベータセルリンおよびヘレグリンに応答するＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路の活性化を説明するネットワークモデルを設計した。その機序モデルは、リガンド結合；受容体二量体化；受容体輸送およびシグナル伝播からなるプロセスを、質量作用速度論により定義される一連の反応と共に説明した。信頼できる予測をたてるため、機序モデルは、主要な動的事象、特に、ＥｒｂＢ受容体およびＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路の活性化を捕捉する時間および用量依存的な実験を用いて、最初に慣らす必要がある。もっとも大きな影響を有するネットワーク成分を感度分析により特定した。その感度分析では、ネットワークの各成分がわずかに攪乱され、下流で生じる結果（downstream  output）への相対的な貢献度が評価される（図９Ｂ）。
【０２９８】
これらの方法を用いて、ＥｒｂＢネットワークのコンピュータモデルを作成し、これにより、キナーゼ・デッド型ＥｒｂＢ３が、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路の最も強力な活性化因子であることが特定された。実際、その低い発現レベルにもかかわらず、ヘレグリンまたはベータセルリンのいずれかの存在下で、ＥｒｂＢ３は前記モデルにおけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路の活性化に対し最も強力な寄与を与えた。特に、このコンピュータによる観察結果は、比較的低レベルのＥｒｂＢ３および１０倍高いレベルのＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ１またはＨＥＲ２／ＥｒｂＢ２を発現する細胞株にさえ当てはまった。
【０２９９】
最適な標的を特定することに加え、機序モデリングは、最適な治療的設計特性を決定するのにも使用することができる。キナーゼ・デッド型ＥｒｂＢ３を標的にする場合、治療用モノクローナル抗体の最適化シミュレーションにより、リガンド誘導性ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ３二量体化の阻止に特に重点を置いて、ＥｒｂＢ３への結合、ヘレグリン結合の阻止、および二量体化の阻止などのいくつかの設計特性が調査された。ある範囲の解離速度定数内での阻害剤のシミュレーションを通じて、ＡＫＴリン酸化の最大阻害を達成するために必要な親和性を決定するのに、シミュレーションを用いた。このシミュレーションから、１ナノモル親和性が最大阻害剤作用強度に十分であることが予測され、より高い親和性を有する阻害剤は限定的な向上しか示さなかった（図９Ｃおよび図９Ｄ）。
【０３００】
生物系と相互作用する二重特異性薬剤のさらなる複雑性のため、エンジニアリング活動を導く機序モデリングを利用するさらに大きな機会が生じる。全ての二重特異性タンパク質はそれらの標的と、各標的に対する親和性、結合活性が増強された架橋能（avidity-enhanced  crosslinking  ability）、および各標的の相対的存在量に依存した様式で結合する。強力な阻害用に最適化された二重特異性抗体の設計には、もし存在するならば、競合するリガンドと二量体化パートナーの親和性、ならびに共通の下流シグナル伝達カスケード、およびその後の細胞成長および生存機構を活性化することにおける各標的の相対的強弱度についての知識も必要となる。望ましい見かけのＫｄは、複数回の親和性および結合活性の改善を通じて達成することができ、シミュレーションモデルにより、最も適した分子構成および能率化された最適化経路に向けたエンジニアリング活動を導くことができる。シミュレーションを用いて、標的親和性、結合活性および目標の発現レベルの置換（permutation）のための、二重特異性タンパク質概念の性能を、調査することができる。
【０３０１】
各標的に向けられる１個の結合部分を有する、２種類の細胞表面増殖因子受容体（ＩＧＦ‐１Ｒ、ＥＲＢＢ３）を阻害するよう設計された二重特異性抗体
全ての二重特異性タンパク質は、各標的に対する親和性、結合活性が増強された架橋能、および各標的の相対的存在量に依存した様式で、それらの標的と結合する。生物系と相互作用する二重特異性薬剤のさらなる複雑性のため、エンジニアリング活動を導く機序モデリングを利用するさらに大きな機会が生じる。強力な阻害用に最適化された二重特異性抗体の設計には、もし存在するならば、競合するリガンドと二量体化パートナーの親和性、ならびに共通の下流シグナル伝達カスケード、およびその後の細胞成長および生存機構を活性化することにおける各標的の相対的強弱度についての知識も必要となる。望ましい見かけのＫｄは、複数回の親和性および結合活性の改善を通じて達成することができ、シミュレーションモデルにより、最も適した分子構成および合理化された最適化経路に向けたエンジニアリング活動を導くことができる。シミュレーションを用いて、標的親和性、結合活性および目標の発現レベルの置換（permutation）のための、二重特異性タンパク質概念の性能を、調査することができる。
【０３０２】
この系において、各標的に対する１個の結合部分を有する、２種類の細胞表面増殖因子受容体（ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３）を阻害するよう設計された二重特異性抗体の用量反応的な挙動をシミュレートすることによって、ＥｒｂＢ３がより高発現される場合にＩＧＦ‐１Ｒがより強力に阻害され、ＥｒｂＢ３がほとんど発現されていない場合にＩＧＦ‐１Ｒがそれほど強力に阻害されないことが明らかにされる（図１０Ａ）。従って、二重特異性抗体のＩＧＦ‐１Ｒを阻害する能力は、その活性が高い結合に依存している。この現象は、標的の相対発現およびその標的に対する二重特異性抗体の相対親和性の両方に特有であり、二重特異性抗体はＩＧＦ‐１Ｒよりも高い親和性でＥｒｂＢ３に結合することがシミュレートされているため、ＥｒｂＢ３の阻害はＩＧＦ‐１Ｒの発現にそれほど影響を受けない（図１０Ｂ）。二重特異性阻害剤について、両経路に共通する下流の細胞内読み出し（readout）であるＡＫＴに対するシミュレートされた影響に示されるように、この受容体レベル依存的な挙動は、全体的な有効性を著しく限定する可能性がある。ＥｒｂＢ３が低発現である場合に、ＩＧＦ‐１Ｒが十分に阻害されないことから、ｐＡＫＴの不十分な阻害が予測される（図１０Ｃ）。このモデル系のシミュレーションによって、各標的に対する二重特異性阻害剤の性能が、両標的の相対発現に高度に依存的であり得ることが明らかにされ、これは、治療薬設計に有用であり得る情報である。
【０３０３】
二重特異性抗体の作用強度に対する受容体レベル依存性の影響は、各標的の発現レベルが臨床的に意義のある範囲に渡って変動する多くの仮定の癌細胞のシミュレーションを通じて、広範に調査することができ、各標的および下流の読み出し（readout）のＩＣ５０が算出され、反応曲面上にプロットされる。ＩＣ５０反応曲面の形状は、根底にある経路相互作用に依存する。ＥｒｂＢ３は、下流シグナル伝達の強力な活性化因子であり、二重特異性阻害剤が最も効果的であろう領域を明確にする。各標的に対し１個の結合部分を有する二重特異性抗体のシミュレーションは、下流標的の最も強力な阻害は、標的が等しく発現している領域に集中していることを明らかにしている。実際、一方の標的がたった５倍だけ過剰発現している場合、ＩＣ５０値は１００倍に増加し、作用強度がかなり減少し得る。
【０３０４】
腫瘍細胞株または臨床試料における実際の目標レベルのＩＣ５０反応曲面上へのマッピングを使用して、最も強力な阻害の領域が関連する患者集団と重なるかどうかを明らかにすることにより、治療改善の試みを導くことができる。予測された最適な作用強度の領域を変化させて、異なるまたは広範な患者集団を治療するための戦略は、最初に、シミュレーションを通じて調査され得る。ＩｇＧ様二重特異性抗体は各標的に対する２つの結合部分を有し、それ故、交差標的結合活性（cross-target  avidity）に加えて、同一標的結合活性（same-target  avidity）を示し、各標的に対する有効な結合親和性を向上させている。二価の二重特異性タンパク質に等しい一価の結合親和性を有するＩｇＧ様二重特異性抗体のシミュレーションは、この型が、性能について交差標的結合活性にあまり依存しないことを示している。最適な作用強度の領域は一価の二重特異性抗体よりも広い。従って、広範な患者集団を治療することが目的である場合、モデル予測はＩｇＧ様二重特異性抗体設計を使用するべきであろう。
【０３０５】
最適な作用強度の領域を改善する際の、抗体機能の親和性成熟の利点は、シミュレーションと通して試験することもできる。最適でない四価二重特異性抗体により受容体空間全体に渡る下流標的阻害を刺激することによって、特にＩＧＦ‐１Ｒがより高発現している場合の、阻害が乏しい領域が特定される。解離速度を低下させることで二重特異性抗体のＩＧＦ‐１Ｒに対する一価結合親和性を１０倍に増加させることにより、親和性成熟が達成するであろう向上が予測される。下流標的は、ＩＧＦ‐１Ｒがより高発現されている場合およびＥｒｂＢ３がより高発現されている場合の両方で、有意により強力に阻害され、このことは、１つの標的に向けた親和性成熟が、交差標的結合活性を通して、第二の標的に対する作用強度を増強していることを示している。
【０３０６】
これらの考察を、設計基準を確認する、増殖因子誘導性シグナル伝達の強力な阻害および異種移植モデルにおける腫瘍阻止を示した、概念を実証するためのＩｇＧ様二重特異性治療用タンパク質の最適化活動（optimization  campaign）のための判断基準とした。このタンパク質は、ＩＧＦ‐１Ｒを標的とするＩｇＧ抗体フレームワークおよびＥｒｂＢ３を標的とする２つのＣ末端融合ｓｃＦｖモジュールを含むが、十分な固有の安定性を有さない不安定化したｓｃＦｖモジュールを含むために、下流の発達（downstream  development）には適していなかった。この現象は十分に理解されており、安定性のためのｓｃＦｖモジュールの設計は、リンカーの最適化、ジスルフィド設計、標的変異、共変動解析、安定なフレームワーク上のループ移植、構造誘導設計（structure-guided  design）、集中設計（focused  design）およびファージディスプレイを含む、種々の技術を用いて記述されている。
【０３０７】
単一の活動（campaign）内のｓｃＦｖモジュール親和性および安定性の最適化を組み合わせるため、構造誘導設計、酵母表面ディスプレイおよびマイクロスケール生物物理学的性質決定の組み合わせを使用した。安定性を増強する変異が導入された構造誘導ｓｃＦｖ変異体を設計し、潜在的なＣＭＣ傾向を与えるモチーフを変異させ、異型フレームワークアミノ酸を除去または置換し、ＣＤＲの多様性が低い部分に変異を導入した。酵母細胞は真核生物の翻訳後修飾およびポリペプチド輸送機構を有するため、熱安定性および可溶性分泌効率を予測することが報告された細胞表面発現レベルをモニターした。さらに、熱暴露「ｃｏｏｋ−ａｎｄ−ｂｉｎｄ」プロトコルを開発した。この実験では、不安定なｓｃＦｖモジュールがアンフォールディングし、一方、安定な高親和性タンパク質は、抗原への結合を保持するために、富化される（図１１Ａ）。個々のクローンを単離した後、酵母表面に融合したｓｃＦｖを暴露し、フローサイトメトリーにより測定された残留親和性に基づいてクローンを選択した（図１１Ｂ）。酵母表面上でＫｄにおいて１０倍超の向上を示した熱安定性のｓｃＦｖモジュールを、可溶性タンパク質として生成し、抗原結合の向上、阻害増殖因子シグナル伝達の阻害、および許容できる安定性を示すものを選択した。これらの最適化されたｓｃＦｖモジュールを、ＩＧＦ−Ｒ１抗体のＣ末端に融合した。得られたＩｇＧ様タンパク質を、一過性発現系で発現し、プロテインＡクロマトグラフィーを用いて精製し、生物物理学的アッセイ、生化学的アッセイ、および細胞情報伝達アッセイを用いてプロファイリングした。多くの有用な生物物理学的技術の中で、示差走査型蛍光および熱不活性化アッセイは、１〜５マイクログラムスケールで、最も情報価値があることが分かった。示差走査型蛍光プロファイリングおよび熱不活性化アッセイで構成されるマイクロスケールのトリアージ（triage）により、血清中安定性および凝集安定性が向上した二重特異性抗体の選択が可能となる。示差走査型蛍光プロファイリングおよび熱不活性化アッセイにより、最も低い安定性のタンパク質ドメインのアンフォールディングの速度および凝集の速度についての補完的な情報が得られる。これらのデータによって、ＩｇＧ様二重特異性抗体の血清中安定性および凝集安定性が定性的に予測される（図１２）。確実で高感度のマイクロスケールアッセイを有することの重要性は、１つの設計活動（design  campaign）内で多数の多様な候補を調べるための能力を直接生み出すため、どれほど強調してもし過ぎることはない。設計されたＩｇＧ様二重特異性タンパク質の作用強度および安定性の向上を、通常スケールのアッセイ：両方の標的を発現するＢｘＰＣ‐３細胞への結合（図１３）を用いて確認した。これは、多機能タンパク質のモジュールの平行集中設計（parallel  focused  engineering）、続くハイスループット生成および特徴付けを特色とするアプローチが、通常、１つの治療的設計サイクルとの関連で、標的化二重特異性抗体様タンパク質の作用強度および製造性の向上に、適応可能であることを示している。
【０３０８】
実施例２：ＩｇＧ四価二重特異性タンパク質の調製、発現および精製
実施例３に記載される実験で使用するための、３種の抗ＥｒｂＢ３−抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ２四価二重特異性タンパク質（「ＥＬＩ-７」、「ＩＬＥ‐１０」および「ＩＬＥ‐１２」）および他の対照タンパク質を、基本的には以下の通りに調整した。ＥＬＩ-７、ＩＬＥ‐１０およびＩＬＥ‐１２は、構造ＩｇＧ２（ｓｃＦｖ）２を有する。
【０３０９】
ＥＬＩ-７は、抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ２抗体を含む抗ＥｒｂＢ３／抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ２四価二重特異性タンパク質であり、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ｓｃＦｖが、ＩｇＧ２タンパク質の重鎖のＣ末端のそれぞれに連結している。
【０３１０】
ＩＬＥ‐１０およびＩＬＥ‐１２は、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ２抗体を含む抗ＩＧＦ‐１Ｒ／抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ２四価二重特異性タンパク質であり、抗ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖが、ＩｇＧ２タンパク質の重鎖のＣ末端のそれぞれに連結している。
【０３１１】
ＥＬＩ-７、ＩＬＥ‐１０およびＩＬＥ‐１２の構造および関連性を表６に記載する。簡潔に述べると、それらは全て、同一の抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＶＨ配列（「モジュール５−７」）を含んでいる。ＩＬＥ‐１０およびＩＬＥ‐１２は、ＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖの配列においてのみ異なる。ＩＬＥ‐１０およびＥＬＩ-７は、同一の抗ＩＧＦ‐１Ｒおよび抗ＥｒｂＢ３  ＶＨ配列を含んでおり、ＩＬＥ‐１０がＩＧＦ‐１Ｒ  ＦａｂおよびＥｒｂＢ３  ｓｃＦｖを有し（「ＩＬＥ」）、ＥＬＩ-７が逆の立体配置を有する（「ＥＬＩ」）ことにおいて異なる。対照抗体は単一特異性であり、それぞれ、二重特異性抗体に存在する結合部位と類似した結合部位を含む。
【０３１２】
【表６】
0005588086.tif 000009
0005588086.tif 000010
【０３１３】
ＥＬＩ-７、ＩＬＥ‐１０およびＩＬＥ‐１２を含む、本明細書の実施例２〜３の開示の多くは、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５２７１２号に見出される。
【０３１４】
各タンパク質の軽鎖および重鎖のアミノ酸配列は以下の通りである：
ＥＬＩ-７の重鎖：配列番号３１６。
ＥＬＩ-７の軽鎖：配列番号３１７。
ＩＬＥ‐１０の重鎖：配列番号３１８。
ＩＬＥ‐１２の重鎖：配列番号３１９。
ＩＬＥ‐１０およびＩＬ−１２の軽鎖：配列番号３２０。
【０３１５】
これらのタンパク質（「融合タンパク質」と称される）をコードする核酸を、標準的な組換えＤＮＡ技術を用いて、単一タンパク質として発現プラスミドにクローニングする。使用する発現ベクターはｐＭＰ１０Ｋ（ＳＥＬＥＸＩＳ）である。発現プラスミドを線形化し、ＱＩＡｑｕｉｃｋ（登録商標）精製キット（キアゲン社（ＱＩＡＧＥＮ））を用いて精製し、リポフェクタミン（商標）ＬＴＸ（インビトロジェン社）を用いてＣＨＯ細胞に同時形質移入する。形質移入細胞を、１０％ＦＢＳ含有Ｆ１２Ｈａｍｓ培地を用いて、選択圧無しで２日間、その後選択圧有りで４日間、回復させる。４日後、それらを、選択圧有りのグルタミン含有無血清培地（ハイクロン社（Hyclone））に交換する。１週間後、細胞を発現について調べ、所望の体積までスケールアップする。３つのクロマトグラフィーステップ、すなわちプロテインＡ親和性、陽イオン交換および陰イオン交換の組み合わせを用いて、全てのタンパク質を精製する。それぞれ、製造業者の取扱説明書に従って実行する。プロテインＡ親和性ステップを使用して、回収した細胞培養液（ＨＣＣＦ）から、選択的および効率的に融合タンパク質を精製する。これは、高収量且つハイスループットな１回のステップで、生成不純物の９５％超を除去する。このステップ後の融合タンパク質に望ましい分子形態の割合は、６０〜９８％の範囲であった。ＧＥ社製ＭＡＢＳＥＬＥＣＴを、プロテインＡ親和性樹脂として使用する。アガロースをベースとした樹脂である、ＧＥ社製ＳＰＦＦ（ｓｕｌｐｈｏｐｒｏｐｙｌ  ｆａｓｔ  ｆｌｏｗ）を、第二クロマトグラフィーステップにおける陽イオン交換樹脂として使用する。このステップ後の融合タンパク質に望ましい分子形態の割合は、９０〜９９％の範囲であった。アガロースをベースとする陰イオン交換樹脂であるＧＥ社製ＱＳＦＦ（Ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ−ａｍｉｎｅ  ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ｆａｓｔ  ｆｌｏｗ）を、第三および最終クロマトグラフィーステップで使用する。精製した物質を濃縮し、ＰＢＳに透析した。このステップ後の融合タンパク質の最終収量は、２０ｍｇ〜１００ｍｇ／Ｌの範囲であった。
【０３１６】
実施例３：抗ＥｒｂＢ３＋抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ四価二重特異性タンパク質の結合活性および生物活性
本実施例は、抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ四価二重特異性タンパク質（ＥＬＩ-７）が、ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３に高親和性で結合し（２つの類似のタンパク質、ＩＬＥ‐１０およびＩＬＥ‐１２についても示される）、１）ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３受容体からのシグナル伝達、２）ＡＫＴリン酸化、ならびに３）腫瘍細胞増殖を、インビトロおよびインビボで強力に阻害することを示す。基本的には以下の通りの結果が得られた。
【０３１７】
Ａ）ＥＬＩ-７、ＩＬＥ‐１０およびＩＬＥ‐１２の、ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３への結合
１×１０５個のＭＣＦ７細胞または１×１０５個のＡＤＲｒ細胞を、２μＭ、続いて１２点の連続３倍希釈の、ＥＬＩ-７、ＩＬＥ‐１０およびＩＬＥ‐１２、２種の抗ＥｒＢ３抗体および１種の抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体のそれぞれと共に、室温で２時間インキュベートした。次に、ヤギ抗ＨＳＡ−Ａｌｅｘａ６４７結合抗体を検出抗体として用いて、細胞を氷上で４０分間インキュベートする。ＭＣＦ７細胞およびＡＤＲｒ細胞に対する抗体の細胞結合解離定数（結合親和性の測定値）をＦＡＣＳで評価し、見かけの解離定数を各タンパク質について決定する。以下の結果が得られた（図１４Ａおよび１４Ｂも参照）：
【０３１８】
【表７】
0005588086.tif 000011
【０３１９】
結果は、ＩｇＧ−二重特異性抗体（すなわちＥＬＩ-７、ＩＬＥ‐１０、ＩＬＥ‐１２）が両方の細胞型に結合し、いくつかの場合では低い濃度でより強く結合したことを示しており、このことは、活性が高い結合および各受容体に結合する能力を示している。ＩｇＧ−二重特異性抗体は、当量のモノクローナル抗体成分と同様のＫｄを有していた。
【０３２０】
Ｂ）ＥＬＩ-７およびＩＬＥ‐７によるＩＧＦ‐１Ｒ、ＥｒｂＢ３およびＡｋｔのシグナル阻害
ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３に拮抗し、下流成分であるＩＧＦ‐１Ｒ、ＥｒｂＢ３およびＡｋｔの活性化（リン酸化）のリン酸化を阻害するＥＬＩ-７およびＩＬＥ‐７の能力を調べた。３．５〜１０４個のＢｘＰＣ‐３細胞を、０．３μＭ、続いて９点の３倍ずつの連続希釈の抗体と一緒に１時間プレインキュベートし、１０データ点の曲線を作成する。細胞を、８０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ‐１、および２０ｎｇ／ｍｌのヘレグリンで、１５分間処理する。ＩＧＦ‐１Ｒのリン酸化によるリン酸化ＩＧＦ‐１Ｒ（ｐＩＧＦ‐１Ｒ）の生成を、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄシステム社；カタログ番号ＤＹＣ１７７０）で測定し、ｐＩＧＦ‐１Ｒ形成を阻害する薬剤の能力を評価する。ＥｒｂＢ３のリン酸化をＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄシステム社；カタログ番号ＤＹＣ１７６９）で測定して、ｐＥｒｂＢ３形成を阻害する薬剤の能力を評価する。ＡＫＴのリン酸化を、以下の抗体、すなわち抗ＡＫＴ、クローンＳＫＢ１（ミリポア社、カタログ番号０５−５９１）；ビオチン化抗リン酸化ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３特異的；セルシグナリングテクノロジー社（Cell  Signaling  Technology）カタログ番号５１０２）を用いるＥＬＩＳＡで測定する。ＩＬＥ‐７は、ＥＬＩ-７と同じ結合部位を有する三価のタンパク質であり、ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５２７１２に記載されている。図１５Ａ〜図１５Ｃは、ＩＬＥ‐７およびＥＬＩ-７に関する上記と基本的に同様に得られた結果を示している。得られた結果は下表にも要約される。
【０３２１】
【表８】
0005588086.tif 000012
【０３２２】
結果は、ＥＬＩ-７が、ＩＧＦ‐１およびＨＲＧでの同時刺激を用いたときでさえ、ＥｒｂＢ３、ＩＧＦ‐１ＲおよびＡｋｔのリン酸化を阻害することを示している。
【０３２３】
Ｃ）二次元培養におけるＥＬＩ-７による細胞増殖阻害
細胞内ＡＴＰの存在量（相対発光量（ＲＬＵ）として表示）を測定する、発光に基づくアッセイであるＣＴＧアッセイ（プロメガ社；カタログ番号ＰＲ−Ｇ７５７２）を用いて、腫瘍細胞増殖に対するＥＬＩ-７の効果をインビトロで試験する。５００細胞／ウェルのＤＵ１４５細胞を、８０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ‐１および２０ｎｇ／ｍｌのＨＲＧを含有し、２μＭから開始して３倍ずつ希釈した阻害剤を含有する培地中で６日間インキュベートする。対照は、増殖因子も抗体も無しでインキュベートされたＤＵ１４５細胞から成る。
【０３２４】
基本的には上記の通りにして得られた結果は、ＥＬＩ-７はＤＵ１４５細胞の増殖を阻害するが（Ｋｉ＝１２ｎＭ、図１６参照）、一方でＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３のいずれかの阻害剤も細胞成長に対し効果をもたないことを示している。
【０３２５】
同様の実験を別の細胞株に対して行った。２０００個／ウェルのＢｘＰＣ‐３細胞を、１μＭから開始した３倍希釈の阻害剤を含有する培地中で６日間インキュベートする。対照は、ヒト骨髄腫血漿由来のＩｇＧ２κ（シグマアルドリッチ社カタログ番号Ｉ５４０５）から成る。
【０３２６】
基本的には上記の通りにして得られた結果は、ＥＬＩ-７がＢｘＰＣ‐３増殖を４６阻害率したことを示している（ｐ＜０．００１、スチューデントｔ検定）（図１７）。
【０３２７】
Ｄ）癌のヒト異種移植片マウスモデルにおける二重特異性タンパク質による腫瘍成長阻害
本実施例は、２つの異なるモデルで、癌のマウスモデルにおいてＥＬＩ-７が腫瘍増殖を阻害することを示す。
【０３２８】
最初に、マウスにおける各二重特異性タンパク質の薬物動態特性を算出した。６００μｇのＥＬＩ-７または５００μｇの各ＨＡＳ連結三価対照タンパク質（ＩＬＥ‐３、ＩＬＥ‐７、およびＩＬＥ‐９；ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５２７１２に記載）を、尾静脈を介して各マウス（阻害剤および時点当たり４匹のマウス）に注射した。その後、血液を種々の時点で採取した（マウスをまず安楽死させ、その後血液を心穿刺により採取した）。ＥＬＩ-７について、時点は、０．５、４、２４、７２、１２０、１６８および２４０時間である。三価対照タンパク質について、時点は、０．５、４、８、２４、２８、７２、および１２０時間である。ＥＬＩ-７について、抗ヒトＩｇＧ  ＥＬＩＳＡキット（ベチル・ラボラトリーズ社（Bethyl  labs）カタログ番号Ｅ８０−１０４）を製造業者の取扱説明書に従って用いて、血液濃度を測定する。三価タンパク質について、特異的に結合しているＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３を検出するＥＬＩＳＡキットを用いて血液中濃度を測定する。プレートをＨｉｓ標識ヒトＩＧＦ‐１Ｒでコートし、三価タンパク質またはＥＬＩ-７と共にインキュベートし、次にヒトＥｒｂＢ３−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄシステム社）および抗Ｆｃ−ＨＲＰ検出試薬で検出する。一区画モデルを用いて、各タンパク質の薬物動態特性（半減期および最高血中濃度（Ｃｍａｘ））を算出する。以下の結果が得られた。
【０３２９】
【表９】
0005588086.tif 000013
【０３３０】
薬物特異的な半減期のシミュレーションにより、以下の用量が等しい暴露量（またはＩＬＥ‐７の場合は５０％相当の暴露量）をもたらすであろうという予測が導かれる。
【０３３１】
【表１０】
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【０３３２】
次に、マウスモデルにおけるヒト膵癌異種移植片の腫瘍増殖に対するＥＬＩ-７の効果を、５×１０６個のＢｘＰＣ‐３細胞（ＰＢＳおよび増殖因子減少マトリゲル；ＢＤバイオサイエンス社カタログ番号３５４２３０の１：１混合物中に再懸濁）を、各マウスの側腹部の皮下腔に注射することにより評価した。腫瘍を７〜１０日間（腫瘍がおよそ１００〜２００ｍｍ３の体積に達するまで）発達させ、その後、各マウスの腫瘍サイズを測定した（π／６×長さ×幅２、ここで幅は最小の測定値）。次に、マウスをサイズ一致させた後、無作為に処置群に割り当てた。次に、ＥＬＩ-７、三価対照タンパク質（ＩＬＥ‐７）、抗ＥｒｂＢ３抗体、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体またはＰＢＳ対照を、試験完了まで３日毎に注射した。
【０３３３】
結果（図１８および１９）は、ＥＬＩ-７が、ＰＢＳ対照と比較して、ＢｘＰＣ‐３腫瘍の異種移植片腫瘍増殖を有意に阻害したことを示している。最終腫瘍体積は、ＰＢＳ対照と比較して、ＥＬＩ-７処置腫瘍において７７％小さかった（スチューデントｔ検定でｐ値を決定）。０日目は投与初日を指す。
【０３３４】
マウスモデルにおけるヒト前立腺癌異種移植片の腫瘍増殖に対するＥＬＩ-７の効果を、５×１０６個のＤＵ１４５細胞（ＰＢＳおよび増殖因子減少マトリゲル；ＢＤバイオサイエンス社カタログ番号３５４２３０の１：１混合物中に再懸濁）を、各マウスの側腹部の皮下腔に注射することにより評価した。腫瘍を７〜１０日間（それぞれがおよそ１００〜２００ｍｍ３の体積に達するまで）発達させ、その後、各マウスの腫瘍サイズを測定した（π／６×長さ×幅２、ここで幅は最小の測定値）。次に、マウスの腫瘍サイズを一致させた後、無作為に処置群に割り当てた。次に、ＥＬＩ-７、三価対照タンパク質（ＩＬＥ‐７）、抗ＥｒｂＢ３抗体、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体またはＰＢＳ対照を、試験完了まで３日毎に注射した。
【０３３５】
結果（図２０Ａおよび２０Ｂ）は、ＥＬＩ-７はＤＵ１４５細胞の異種移植片腫瘍増殖を有意に阻害したが、一方、対照の抗ＩＧＦ‐１Ｒおよび抗ＥｒｂＢ３抗体は阻害しなかったことを示している。最終腫瘍体積は、ＰＢＳ対照と比較して、ＥＬＩ-７処置腫瘍において５０％小さかった（スチューデントｔ検定でｐ値を決定）。０日目は投与初日を指す。
【０３３６】
Ｅ）  ＥＬＩ-７は、広範囲のＥｒｂＢ３およびＩＧＦ‐１Ｒ受容体レベルに渡ってシグナル伝達を阻害する。
ＥＬＩ-７が広範囲のＥｒｂＢ３およびＩＧＦ‐１Ｒ受容体レベルに渡って下流シグナル伝達を阻害し得るかどうかを決定するために、以下の実験を行った。
【０３３７】
ｐＬＫＯ．１  ＰＵＲＯベクター（シグマ社）を用いて、ＢｘＰＣ‐３細胞におけるＩＧＦ‐１ＲまたはＥｒｂＢ３のｓｈＲＮＡを介したノックダウンにより、ＢｘＰＣ‐３細胞の受容体レベルを変化させる。ｓｈＲＮＡ配列はＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５２７１２に提供されている。次に、ＥｒｂＢ３およびＩＧＦ‐１Ｒのレベルを定量的ＦＡＣＳにより測定し、次に平均受容体レベルを得られた分布から算出する（相対発現レベルについては表１１を参照）。ＥＬＩ-７の作用強度を決定するために、細胞を血清飢餓状態にし、３７℃で１時間、ＥＬＩ-７で前処理し、続いて２０ｎｇ／ｍｌのＨＲＧ＋８０ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１で１５分間刺激する。シグナル阻害を、ｐＡＫＴについてのＥＬＩＳＡにより評価する。
【０３３８】
結果は、ＥＬＩ-７が、改変された受容体レベルを有するＢｘＰＣ‐３細胞株の全体に渡って、それらのＩＣ５０値および重複した信頼区間（表１１参照）で示されるように、同様の作用強度を示したことを示しており、このことは、ＥＬＩ-７がある範囲の受容体プロファイル（receptor  profile）に対して広範な活性を有することを示している（図２１）。
【０３３９】
【表１１】
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【０３４０】
実施例４：ＥＬＩ-７と比較して増強された活性を有する抗ＩＧＦ‐１Ｒ／抗ＥｒｂＢ３四価二重特異性タンパク質（１６Ｆ）の生物活性
実施例２および３に記載される概念実証のためのタンパク質（ＥＬＩ-７）を、実施例１に記載されるように、さらに改善して、その、ＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３に対する結合親和性、生物活性、安定性および溶解性を増加させた。以下の変化を起こした：（ｉ）配向をＩｇＧ成分としての抗ＥｒｂＢ３からＩｇＧ成分としての抗ＩＧＦ‐１Ｒに転換；（ｉｉ）異なるエピトープに結合する抗ＥｒｂＢ３結合部分を使用；（ｉｉｉ）そのＣＤＲ３  ＶＨ領域を親和性成熟；（ｉｖ）抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧ成分を変異させて安定化（安定化変異）、および（ｖ）その骨格をＩｇＧ２からＩｇＧ１に交換。得られたタンパク質が、図７のアミノ酸配列を有する１６Ｆである。
【０３４１】
ＩＧＦ‐１Ｒリン酸化の阻害の関数としての、ＥＬＩ-７のそれと比較した場合の、１６Ｆの抗ＩＧＦ‐１Ｒ作用強度における増加を、実施例３に記載されたように、測定する。基本的に上記のように得られた結果（図２２）は、再設計したタンパク質が、ＩＧＦ‐１Ｒシグナル伝達の有意により強力な阻害剤であることを示している。
【０３４２】
ＥｒｂＢ３を介した、およびＡＫＴリン酸化の阻害を介したシグナル伝達の阻害の作用強度を、１６Ｆ、ＥＬＩ-７、ならびに抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）および抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）の組み合わせについての、実施例３の記載と基本的に同様に測定する。これらの測定は、ＨＲＧおよびＩＧＦ１の存在下、ＢｘＰＣ‐３細胞において行う。基本的に上記のように得られた結果（表１２）は、１６Ｆが、ＥＬＩ-７と比較して、シグナル伝達を阻害することにおいて増強された効能を有し、その効能が、臨床用阻害剤である抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａの組み合わせのそれに匹敵することを示している。
【０３４３】
【表１２】
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【０３４４】
実施例１の記載と同様に、再改変した二重特異性抗体（すなわち１６Ｆ）が、ＥＬＩ-７よりも、熱に対して、および血清中でより安定であることも示された。さらに、１６Ｆはより凝集しにくい。（ｉ）１６Ｆは４℃のＰＢＳ中１９ｍｇ／ｍｌで安定であり、３３日間で約２％のみが凝集し；（ｉｉ）３回の凍結融解サイクル後の単量体の割合において有意な変化が観察されず；（ｉｉｉ）４℃で１日間振盪した後の単量体の割合において有意な変化が観察されず；そして、（ｉｖ）３７℃で６日間インキュベートした後の単量体の割合において有意な変化が観察されなかった。
【０３４５】
下記の追加の比較実験から得られた結果は、１６Ｆが、シグナル伝達阻害において、市販の抗ＩＧＦ‐１Ｒおよび抗ＥｒｂＢ３の組み合わせと少なくとも同程度に効果的であることも示している。
【０３４６】
第一の一連の実験で、リン酸化ＩＧＦ‐１Ｒ、ＥｒｂＢ３またはＡＫＴ阻害における１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）の有効性を、２種の異なる細胞株（ＢｘＰＣ‐３およびＤＵ１４５）において、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ（シクスツムマブ；配列番号３２４＋配列番号３２５）、抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａのそれに対して比較した。
【０３４７】
ＢｘＰＣ‐３およびＤＵ１４５細胞を、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシンおよびＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で維持する。シグナル伝達実験のために、３．５×１０４個の細胞を、９６ウェル組織培養プレート中の完全培地に播種する。次の日、完全培地を無血清培地に置き換え、細胞を３７℃で一晩インキュベートする。細胞を表示される用量の抗体で１時間前処理し、次に、１００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ‐１（カルバイオケム社）および３０ｎｇ／ｍｌのＨＲＧ（Ｒ＆Ｄシステム社）で１５分間刺激した。細胞をＰＢＳで洗浄し、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を添加したＭＰｅｒ緩衝液中で溶解した。
【０３４８】
リン酸化ＩＧＦ‐１Ｒ（ｐＩＧＦ‐１Ｒ）およびリン酸化ＥｒｂＢ３（ｐＥｒｂＢ３）についてのＥＬＩＳＡを、製造業者（Ｒ＆Ｄシステム社）のプロトコルに従って行った。リン酸化ＡＫＴ（ｐＡＫＴ）についてのＥＬＩＳＡを、以下の試薬を用いて行った：抗ＡＫＴ捕捉抗体（ミリポア社）、抗ｐＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）検出抗体（セルシグナリング社）、およびストレプトアビジン−ＨＲＰ（Ｒ＆Ｄシステム社）。ＳＵＰＥＲＳＩＧＮＡＬ  ＥＬＩＳＡ  ＰＩＣＯ化学発光基質（ピアス社）を添加し、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎ（登録商標）プレートリーダーでプレートを読んだ。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５ソフトウェアを用いて、発光値をプロットしＩＣ５０値を算出した。
【０３４９】
基本的に上記のように得られた、図２３（ＢｘＰＣ‐３細胞）および図２４（ＤＵ１４５細胞）および表１３に示される結果は、１６Ｆが、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ｂおよび抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａの組み合わせよりも、ｐＥｒｂＢ３およびｐＡＫＴを介する二重経路シグナル伝達の驚くほどにより強力な阻害を示すことを示している。
【０３５０】
【表１３】
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0005588086.tif 000019
【０３５１】
第二の一連の実験で、リン酸化ＩＧＦ‐１Ｒ、ＥｒｂＢ３またはＡＫＴ阻害における１６Ｆ（ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８）の有効性を、ＢｘＰＣ‐３細胞において、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体  抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ、抗ＥｒＢ３抗体  抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ、または後者の２種の抗体の組み合わせのそれと比較した。
【０３５２】
基本的に上記のように得られた、図２４および表１４に示される結果は、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａおよび抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａの組み合わせによる結果よりも、驚くほどにより強力な、１６ＦによるｐＥｒｂＢ３およびｐＩＧＦ‐１Ｒを介した二重経路シグナル伝達の阻害を示している。
【０３５３】
【表１４】
0005588086.tif 000020
【０３５４】
実施例５：ＳＦモジュールと比較した場合の、追加の抗ＩＧＦ‐１Ｒ／抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ四価二重特異性抗体の結合活性および生物活性
追加の抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧ四価二重特異性抗体を構築した。これらの各ＰＢＡは、基本的には図８に示される通りに３つのモジュールを組み合わせることにより構築した。各ＰＢＡは重鎖融合ポリペプチド対（それぞれ少なくとも３つの各モジュールの一部分を含む）を含み、重鎖対の各構成要素はその他の構成要素に結合しており、さらに各構成要素は軽鎖対の一つに結合している。各ＰＢＡに構築される３つのモジュールは：
１．  両方の（本質的に同一の）軽鎖および両重鎖のＮ末端を含むＮ末端（アミノ末端）Ｆａｂ可変領域モジュール；
２．  ｓｃＦｖモジュール；ならびに
３．  Ｎ末端Ｆａｂ可変領域モジュールとｓｃＦｖモジュールの間に挿入されるＨＣ  ＩｇＧ  ＣＲモジュール
【０３５５】
融合ポリペプチドである重鎖は、Ｎ末端Ｆａｂモジュールの重鎖部分、ＩｇＧ  ＣＲモジュールおよびＣ末端ｓｃＦｖモジュールを含む。
【０３５６】
新規の抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３抗体は、異なる配向で配置されるモジュールとして構築される、表１５に記載の抗ＩＧＦ‐１Ｒおよび抗ＥｒｂＢ３部分の組み合わせから作製した。表１５および１６のそれぞれについて、構築された各ＰＢＡは、Ｎ末端からＣ末端（アミノからカルボキシ）への順番で、左のカラムに命名されているＩｇＧ１  ＣＲ（Ｇ１）を有する各Ｆａｂモジュールおよび同じ表の右のカラムに命名されているいずれか１つのｓｃＦｖモジュールを有する各Ｆａｂモジュールの組み合わせをそれぞれ含む、本質的に同一の重鎖ポリペプチドの対を含む、融合タンパク質を含む。これらの追加のＰＢＡの重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、図５Ａ（抗ＩＧＦ‐１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３）および図５Ｂ（抗ＥｒｂＢ３および抗ＩＧＦ‐１Ｒ）に記載される。
【０３５７】
【表１５】
0005588086.tif 000021
【０３５８】
【表１６】
0005588086.tif 000022
【０３５９】
本実施例は、Ｎ末端「ＳＦ」モジュールを含む抗体が、ＢｘＰＣ‐３細胞と結合すること、ＥｒｂＢ３と結合すること、ＩＧＦ‐１Ｒ、ＥｒｂＢ３およびＡＫＴリン酸化を阻害すること、そして安定であることを示す。その他のタンパク質を用いて得られた結果は、実施例６に記載される。
【０３６０】
Ａ）ＢｘＰＣ−３細胞への結合のデータ
ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７、ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３およびＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（１６Ｆ）のＢｘＰＣ‐３への結合を、基本的に以下の通りに測定した。
【０３６１】
ＢｘＰＣ‐３細胞を、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシンおよびＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で維持する。培地を除去し、ＢｘＰＣ‐３細胞をＰＢＳで洗浄した。細胞がプレートから剥離するまでトリプシンを添加し、その後培地＋１０％血清で中和する。細胞を遠心沈殿し、ＦＡＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ＋２％血清＋０．１％アジ化物）中に再懸濁する。上下にピペッティングすることにより凝集物を単一細胞に崩し、それらの細胞をセルストレーナーに通す。細胞を遠心沈殿し、２×１０６細胞／ｍｌの濃度でＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁する。９６ウェル円錐底プレート中で、５０μｌの細胞懸濁液を各ウェルに分注し、１０５細胞／ウェルを得る。
【０３６２】
抗体をＦＡＣＳ緩衝液中で１μＭに希釈し、１０回の３倍希釈を行い、最後のウェルはＦＡＣＳ緩衝液のみ（一次抗体無し）で構成させる。最も高い最終抗体濃度が最初のウェルで５００ｎＭとなるように、５０μｌの抗体を５０μｌの細胞に添加する。細胞および抗体を、穏やかに撹拌しながら室温で２時間インキュベートする。プレートを１，５００ＲＰＭで５分間遠心し、上清を除去する。ペレットをＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄する。最後の洗浄の後、ＦＡＣＳ緩衝液を除去し、ＦＡＣＳ緩衝液（１：１００）中の５０μｌのａｎｔ−Ｆｃ−ＤｙＬｉｇｈｔ６４９二次抗体（アブカム社）を添加する。細胞を低温室の暗所で穏やかに撹拌しながら１時間インキュベートし、再度３回洗浄し、１００μｌの固定緩衝液（１％パラホルムアルデヒド、２％ＦＢＳ含有ＰＢＳ）中に再懸濁する。試料を９６ウェルＵ底ＦＡＣＳプレート（ベクトン・ディッキンソン社）に移し、使用するまで４℃暗所で保持する。試料はＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ベクトン・ディッキンソン社）を用いて読み取り、蛍光強度中央値（ＭＦＩ）はＦｌｏｗＪｏを用いて決定した。分析は、ｌｏｇ（作動薬）ｖｓ．反応（３パラメータ）非線形回帰曲線適合を用いてＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭで行った。
【０３６３】
結果（図２５）および表１７は、これらの二重特異性抗体がＢｘＰＣ‐３細胞に対して強い結合を示すことを示している。
【０３６４】
【表１７】
0005588086.tif 000023
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【０３６５】
Ｂ）  ＥｒｂＢ３結合データ
ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７、ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３およびＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（１６Ｆ）の組換えＥｒｂＢ３への結合を、基本的に以下の通りに測定した。
【０３６６】
９６ウェルＲＥＡＣＴＩ−ＢＩＮＤプレート（ピアス社）を５０μｌのＥｒｂＢ３−Ｈｉｓ（Ｃ末端ヘキサ−ヒスチジン標識を有するＥｒｂＢ３−ＰＢＳ中２μｇ／ｍｌ）（配列番号４０３として開示された「ヘキサ−ヒスチジン」）でコートし、４℃で一晩インキュベートする。次の日、プレートをＰＢＳ＋０．０５％ツイーン２０（ＰＢＳ−Ｔ）で洗浄し、１００μｌのタンパク質フリーブロッキング緩衝液（ピアス社）を用いて室温で１時間ブロッキングする。プレートをＰＢＳ−Ｔで洗浄し、５０μｌの各二重特異性抗体を２連で添加する。濃度は５００ｎＭ（ＰＢＳ−Ｔ中）から開始し、さらに１０点の２倍連続希釈液および１点のブランク（ＰＢＳ−Ｔのみ）を含む。プレートを室温で２時間インキュベートし、次にＰＢＳ−Ｔで洗浄する。ＰＢＳ−Ｔ中１：４０，０００の５０μｌの抗Ｆｃ−ＨＲＰ（ジャクソンラボラトリー社（Jackson  Labs））を添加し、プレートを室温暗所で１時間インキュベートする。プレートを再度ＰＢＳ−Ｔで洗浄し、１００μｌのＴＭＢ基質（サーモサイエンティフィック社、ＴＭＢおよび過酸化物の１：１混合溶液）を添加する。プレートを青色に変色するまで室温で５〜１５分間インキュベートし、１００μｌの停止液（セルシグナリングテクノロジー社）で反応を止める。吸光度はパーキンエルマー社製Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー上、４５０ｎｍで測定し、結合曲線はｌｏｇ（作動薬）ｖｓ．反応（３パラメータ）非線形回帰曲線適合を用いてＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭで作成した。
【０３６７】
結果（図２６および表１８）は、二重特異性抗体が組換えＥｒｂＢ３タンパク質に対し強い結合を示すことを示している。
【０３６８】
【表１８】
0005588086.tif 000025
【０３６９】
Ｃ）  シグナル伝達の阻害
ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７、ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３およびＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（１６Ｆ）によるシグナル伝達の阻害を、基本的に以下の通りに測定した。
【０３７０】
ＢｘＰＣ‐３細胞を、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシンおよびＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で維持する。３．５×１０４個の細胞を、９６ウェル組織培養プレート中の完全培地に播種する。次の日、完全培地を無血清培地と取り換え、細胞を３７℃で一晩インキュベートする。細胞を表示用量の薬剤で１時間前処理し、次に、１００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１（カルバイオケム社）および３０ｎｇ／ｍｌのＨＲＧ（Ｒ＆Ｄシステム社）で１５分間刺激する。細胞をＰＢＳで洗浄し、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を添加したＭＰｅｒ緩衝液（「Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ」ピアス・サーモサイエンティフィック社（Pierce  Thermo  Scientific））中で溶解する。
【０３７１】
リン酸化ＩＧＦ１Ｒ（ｐＩＧＦ１Ｒ）  リン酸化ＥｒｂＢ３（ｐＥｒｂＢ３）およびリン酸化ＡＫＴ（ｐＡＫＴ）についてのＥＬＩＳＡを、上記実施例４に記載の通りに行う。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５ソフトウェアを用いて、相対発光強度（ＲＬＵ）をプロットし、ＩＣ５０値を算出した。
【０３７２】
結果（図２７および表１９）は、二重特異性タンパク質が二重経路シグナル伝達を強力に阻害することを示している。
【０３７３】
【表１９】
0005588086.tif 000026
0005588086.tif 000027
【０３７４】
Ｄ）  二重特異性タンパク質の安定性
種々の安定性試験を行った。それらにより、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ１、ＳＦ−Ｇ１−Ｐ６、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ２７、ＳＦ−Ｇ１−Ｂ６９、ＳＦ−Ｇ１−Ｍ１．３が血清中で安定であり、熱的に安定であり、低ｐＨで安定であることが示される。
【０３７５】
血清中安定性を決定するため、タンパク質を、２．５μＭの最終濃度のマウス血清（シグマ社）中で、３７℃で０時間または７２時間インキュベートする。次に、上記の比色ＥＬＩＳＡ結合アッセイを用いて試料をアッセイし、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍで結合曲線を作成する。吸光度値を各曲線の屈曲点で０時間に対して正規化して、３７℃の血清中で７２時間後に保持される結合率を決定する。
【０３７６】
基本的に上記のように得られた結果（図２８）は、試験された各ＰＢＡが、少なくとも７０％の、７２時間後の（正規化された）血清中安定性を有することを示している。あるＰＢＡは約１００％の安定性を有する。
【０３７７】
熱安定性を決定するため、各ＰＢＡのＥＣ９０値を、上記のＥＬＩＳＡ結合実験で作成された結合曲線を用いて算出した。各ＰＢＡを、ＰＢＳ中でそのＥＣ９０値の５倍値に調製し、５０μｌ／ウェルでＰＣＲプレート（バイオラド社）に移す。プレートを遠心沈殿し、ＩＣＹＣＬＥＲ  ＩＱ勾配ＰＣＲ装置（バイオラド社）に設置し、抗体を４７℃から７２℃に１時間かけて加熱する。また、各抗体の一定量を２５℃および３７℃で１時間保持する。次にプレートを２，０００ＲＰＭで５分間遠心沈殿し、上清をＰＢＳ−Ｔ中で５倍に希釈してそれらのＥＣ９０濃度にする。次に試料を、上記の比色ＥＬＩＳＡ結合アッセイを用いてアッセイし、吸光度を２５℃に対して正規化する。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いて結合曲線を作成し、Ｔ５０値を決定した。
【０３７８】
基本的に上記のように得られた結果（表２０）は、Ｔ５０値が４６．７℃〜６２．６℃で変化することを示している。
【０３７９】
【表２０】
0005588086.tif 000028
【０３８０】
ＰＢＡがアンフォールディングを起こす温度を示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦ）で決定した。ＩＱ５リアルタイム検出系（バイオラド社）においてＤＳＦアッセイを行う。１５μＭの二重特異性抗体、１×Ｓｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅ（インビトロジェンライフテクノロジーズ社）、および１×ＰＢＳの２０μｌ溶液を、９６ウェルプレートのウェルに添加した。プレートを１℃／分の加熱速度で２０℃から９０℃に加熱した。データを解析のためにＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍに移した。
【０３８１】
基本的に上記のように得られた結果（表２１）は、前記タンパク質が異なる温度でアンフォールディングすることを示している。
【０３８２】
【表２１】
0005588086.tif 000029
【０３８３】
ｐＨ３での安定性を決定するため、ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８原液を０．１Ｍ酢酸（ｐＨ３．０）中に希釈し、１時間インキュベートする。次にその溶液を１Ｍのトリス塩基で中和し、ＰＢＳに対して透析し、濃縮する。プロテインＡ精製の直後に中和されたＳＦ−Ｇ１−Ｃ８の試料に対するＳＥＣ（分子ふるいクロマトグラフィー）および比色ＥＬＩＳＡによって、透析液を試験する。Ａｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズＨＰＬＣ系を用いてＳＥＣを行う。５０μｇのＳＦ−Ｇ１−Ｃ８をＴＳＫ  Ｓｕｐｅｒ  ＳＷ３０００ゲルカラム（東ソーバイオサイエンス社、Ｐ／Ｎ１８６７５）上に注入する。ＰＢＳを、０．３５ｍｌ／分の流速で、泳動緩衝液および平衡緩衝液として使用する。ＥＬＩＳＡを上記の通りに行い、プレートは組換えＩＧＦ１Ｒ−ＨｉｓまたはＥｒｂＢ３−Ｈｉｓでコートする。
【０３８４】
基本的に上記のように得られた結果は、ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８が安定であり、１時間の低ｐＨインキュベーション（ｐＨ３）後にＩＧＦ１ＲおよびＥｒｂＢ３−Ｈｉｓへの結合が実質的に影響されていないことを示している。
【０３８５】
４℃での延長された時間におけるＳＦ−Ｇ１−Ｃ８の安定性を決定するために、ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８（１９ｍｇ／ｍｌ）を４℃で１、６または３３日間ＰＢＳ中でインキュベートし、ＳＥＣにかけた。単量体の割合（％）を上記の通りのＳＥＣにより決定した。結果は、ＳＦ−Ｇ１−Ｃ８が４℃での３３日間後に９８％の安定性を示すことを示している。
【０３８６】
実施例６：追加の抗ＩＧＦ‐１Ｒ／ＥｒｂＢ３および抗ＥｒｂＢ３／ＩＧＦ‐１Ｒ  ＰＢＡの特徴付け
【０３８７】
Ａ）  ＢｘＰＣ‐３細胞への結合
ＰＢＡのＢｘＰＣ‐３細胞への結合を以下の通りに決定する。ＢｘＰＣ‐３細胞を、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシンおよびＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で維持する。培地を除去し、ＢｘＰＣ‐３細胞をＰＢＳで洗浄する。細胞がプレートから剥離するまでトリプシンを添加し、その後、培地＋１０％血清で中和する。細胞を遠心沈殿し、ＦＡＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ＋２％血清＋０．１％アジド）中に再懸濁する。上下にピペッティングすることにより凝集物を単一細胞に崩し、それらの細胞をセルストレーナーに通す。細胞を遠心沈殿し、１×１０６細胞／ｍｌの密度でＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁する。９６ウェル円錐底プレート中で、５０μｌの細胞懸濁液を各ウェルに分注し、５×１０４細胞／ウェルを得る。
【０３８８】
ＰＢＡをＦＡＣＳ緩衝液中で２μＭに希釈し、１０回の３倍希釈を行い、最後のウェルはＦＡＣＳ緩衝液のみ（一次抗体無し）で構成させる。最も高い最終抗体濃度が最初のウェルで１μＭとなるように、５０μｌの連続希釈抗体を５０μｌの細胞に添加する。細胞および抗体を、穏やかに撹拌しながら室温で２時間インキュベートする。プレートを１，５００ＲＰＭで５分間遠心し、上清を除去する。ペレットをＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄する。最後の洗浄の後、ＦＡＣＳ緩衝液を除去し、５０μｌの抗Ｆｃ−ＤｙＬｉｇｈｔ６４９二次抗体（アブカム社）をＦＡＣＳ緩衝液中１：１００で添加する。細胞を低温室の暗所で穏やかに撹拌しながら１時間インキュベートし、再度３回洗浄し、１００μｌの固定緩衝液（１％パラホルムアルデヒド、２％ＦＢＳ含有ＰＢＳ）中に再懸濁する。試料を９６ウェルＵ底ＦＡＣＳプレート（ベクトン・ディッキンソン社）に移し、使用するまで４℃暗所で保持する。試料はＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ベクトン・ディッキンソン社）を用いて読み取り、蛍光強度中央値（ＭＦＩ）はＦｌｏｗＪｏを用いて決定した。ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭでＥＣ５０値を決定するのにＯｎｅ  Ｓｉｔｅ‐Ｔｏｔａｌ  Ｂｉｎｄｉｎｇを使用した。
【０３８９】
基本的に上記のように得られた、図２９（Ａ〜Ｃ）および下記の表２２に示される結果は、ＰＢＡがＢｘＰＣ‐３細胞に対して強い結合を示すことを示している。図２９（Ｄ）および下記の表２２は、Ｏｎｅ  Ｓｉｔｅ−Ｔｏｔａｌ  Ｂｉｎｄｉｎｇ曲線適合を用いて解析された結合データを示している。
【０３９０】
【表２２】
0005588086.tif 000030
0005588086.tif 000031
0005588086.tif 000032
【０３９１】
Ｂ）  細胞情報伝達の阻害
ＰＢＡによる細胞情報伝達の阻害を、基本的に以下の通りに決定する。ＢｘＰＣ‐３細胞を、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシンおよびＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で維持する。３．５×１０４個の細胞を９６ウェル組織培養プレート中の完全培地に播種する。次の日、完全培地を無血清培地と取り換え、細胞を３７℃で一晩インキュベートする。細胞を表示用量の薬剤で１時間前処理し、次に１００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１（カルバイオケム社）および３０ｎｇ／ｍｌのＨＲＧ（Ｒ＆Ｄシステム社）で１５分間刺激する。細胞をＰＢＳで洗浄し、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を添加したＭＰｅｒ緩衝液中で溶解する。
【０３９２】
リン酸化ＩＧＦ１Ｒ（ｐＩＧＦ１Ｒ）  リン酸化ＥｒｂＢ３（ｐＥｒｂＢ３）およびリン酸化ＡＫＴ（ｐＡＫＴ）についてのＥＬＩＳＡを、上記実施例４に記載の通りに行う。
【０３９３】
上記のＩＬＥ‐１０（１４Ｆまたは１４ｆ））およびＥＬＩ-７（５Ｆまたは５ｆ）を参照タンパク質として使用する。
【０３９４】
基本的に上記のように得られた、図３０（ｐＩＧＦ‐１Ｒ）、図３１（ｐＥｒｂＢ３）および図３２（ｐＡＫＴ）、および下記の表２３に示される結果は、ＰＢＡが二重経路シグナル伝達の強力な阻害を示すことを示している。
【０３９５】
【表２３】
0005588086.tif 000033
0005588086.tif 000034
0005588086.tif 000035
【０３９６】
別の一連の実験で、ＰＢＡによるリガンド誘導性シグナル伝達の阻害レベルを、先行技術である抗ＩＧＦ‐１Ｒ（抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ−ＨＣについては配列番号３３６およびＬＣについては配列番号３３７）および先行技術である抗ＥｒｂＢ３（抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ−ＨＣについては配列番号３２７およびＬＣについては配列番号３２８）抗体を用いて得られたそれと比較した。実験は基本的に本実施例のすぐ上に記載された通りに行った。
【０３９７】
結果（図３３、３４および３５ならびに表２４）は、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａおよび抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａの組み合わせと比較して、ＰＢＡが驚くほど高いレベルの、二重経路シグナル伝達の阻害を示すことを示している。
【０３９８】
【表２４】
0005588086.tif 000036
【０３９９】
Ｃ）  二重特異性タンパク質の安定性
種々の安定性試験を基本的に上記実施例５Ｄに記載の通りに行った。それらの結果は、試験されたＰＢＡが血清中で安定であり、熱的に安定であったことを示している。
【０４００】
血清中安定性の結果（図３６）は、これらのＰＢＡが血清中安定性においていくらかの差異を示すことを示している。最も低い安定性は約６５％であり、最も高い安定性は約１００％であった。約１（またはそれ以上）の数字を有するものは、約１００％の安定性を有すると見なされる。
【０４０１】
融解温度の結果を表２５に記載する。結果は、これらのＰＢＡが種々の温度でアンフォールディングを起こすことを示している。
【０４０２】
【表２５】
0005588086.tif 000037
【０４０３】
ＳＥＣ安定性の結果を表２６に示す。結果は、これらのＰＢＡが大部分は単量体であることを示している。
【０４０４】
【表２６】
0005588086.tif 000038
【０４０５】
実施例８：追加の高親和性抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合ドメインおよび抗ＥｒｂＢ３結合ドメインの特定
多くのより高親和性である抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合ドメインおよび抗ＥｒｂＢ３結合ドメインを、ファージスクリーニングにより単離した。これらのタンパク質の重鎖および軽鎖の配列を、図１〜４の１６Ｆ配列の下に記載する。抗ＩＧＦ‐１Ｒ結合部位の配列は「５−７」から開始され、抗ＥｒｂＢ３結合部位の配列は「Ｅ３Ｂ」から開始される。
【０４０６】
実施例９：抗ＥＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡによる、二重ＩＧＦ１およびＨＲＧ誘導性シグナル伝達の強力な阻害
本実施例は、抗ＥＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＰＢＡが、ＤＵ１４５細胞およびＢｘＰＣ‐３細胞における、二重ＩＧＦ１およびＨＲＧ誘導性シグナル伝達の強力な阻害剤であることを示す。
【０４０７】
結果は基本的に以下の通りにして得た。３５，０００個のＢｘＰＣ‐３細胞を、３７℃で一晩、１０％血清中に播種する。次の日、細胞を、０．５％血清を含有する培地中で飢餓状態にし、３７℃で一晩インキュベートする。細胞を表示濃度の抗体で１時間前処理し、次に、３０ｎｇ／ｍｌのＨＲＧ１ｂ１−ＥＣＤ＋１００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１で１５分間刺激した。本実施例、および実施例１０〜１３および２１では、対照抗ＩＧＦ１Ｒおよび抗ＥｒｂＢ３モノクローナル抗体は、それぞれ、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａおよび抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａである。細胞をＭ−Ｐｅｒ緩衝液（＋プロテアーゼ／ホスファターゼ阻害剤）中で溶解し、ｐＡＫＴについてのＥＬＩＳＡにかける。ｐＡＫＴ  ＥＬＩＳＡアッセイについて、プレートを抗ＡＫＴ（ミリポア社）でコートし、ＰＢＳ＋２％ＢＳＡでブロッキングし、ライセートおよび標準物質と共にインキュベートし、ビオチン化抗ｐＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）およびストレプトアビジン−ＨＲＰを用いて検出する。ＥＬＩＳＡピコ化学発光基質を添加し、パーキンエルマー社製Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーでプレートを読み取る。ＩＣ５０の曲線および算出値は全て、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍで作成する。
【０４０８】
リン酸化ＡＫＴ（ｐＡＫＴ）を測定することにより決定された結果（図３９）は、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８およびＳＦ−Ｇ１−Ｃ８が、ＤＵ１４５細胞およびＢｘＰＣ‐３細胞の両方において、ＩＧＦ‐１およびＨＲＧにより誘導されるシグナル伝達を強力に阻害することを示している。
【０４０９】
実施例１０：抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡの作用強度は、広範な受容体プロファイルに渡って保持される。
本実施例は、抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＰＢＡが、種々のレベルのＩＧＦ１ＲまたはＥｒｂＢ３を有する細胞における、二重ＩＧＦ１およびＨＲＧ誘導性シグナル伝達の強力阻害剤であることを示す。
【０４１０】
結果は基本的に以下の通りにして得られた。ＢｘＰＣ‐３細胞を、対照ヘアピンを発現するレンチウイルス、またはＩＧＦ１ＲもしくはＥｒｂＢ３（シグマ社）に特異的な、これらのタンパク質の発現を約５０％減少させるｓｈＲＮＡに感染させる。ＦＡＣＳおよびウエスタンブロット解析によりノックダウンを確認する。細胞を播種し、実施例９に記載される通りに処理する。ｐＡＫＴのレベルを、実施例９に記載される通りに決定する。
【０４１１】
リン酸化ＡＫＴ（ｐＡＫＴ）を測定することにより決定された結果（図４０および表２７）は、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８およびＳＦ−Ｇ１−Ｃ８が、高レベルまたは低レベル（５０％減少したレベル）のＩＧＦ１ＲまたはＥｒｂＢ３を有するＢｘＰＣ‐３細胞におけるＩＧＦ‐１およびＨＲＧにより誘導されるシグナル伝達を強力に阻害することを示している。
【０４１２】
【表２７】
0005588086.tif 000039
0005588086.tif 000040
【０４１３】
実施例１１：抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＰＢＡは、低用量または高用量のＩＧＦ１またはＨＲＧにより誘導されるシグナル伝達の強力な阻害剤である。
本実施例は、抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＰＢＡが、高濃度または低濃度のリガンド（ＩＧＦ１またはＨＲＧ）に応答しての二重ＩＧＦ１およびＨＲＧ誘導性シグナル伝達の強力な阻害剤であることを示す。
【０４１４】
結果は、基本的に次のようにして得られた。３５，０００個のＢｘＰＣ‐３細胞を、３７℃で一晩、１０％血清中に播種する。次の日、細胞を、０．５％血清を含有する培地中で飢餓状態にし、３７℃で一晩インキュベートする。細胞を、表示濃度のＰＢＡで１時間前処理し、次に低濃度（４０ｎｇ／ｍｌ）もしくは高濃度（４００ｎｇ／ｍｌ）ＩＧＦ１、または低濃度（２０ｎｇ／ｍｌ）もしくは高濃度（２００ｎｇ／ｍｌ）ＨＲＧ１ｂ１−ＥＣＤで１５分間刺激する。ｐＥｒｂＢ３、ｐＩＧＦ１Ｒ、およびｔＩＧＦ１ＲについてのＥＬＩＳＡは、商業的供給源（Ｒ＆Ｄシステム社）から入手されるものである。ｐＡＫＴ  ＥＬＩＳＡアッセイについて、プレートを抗ＡＫＴ（ミリポア社）でコートし、ＰＢＳ＋２％ＢＳＡでブロッキングし、ライセートまたは標準物質と共にインキュベートし、ビオチン化抗ｐＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）およびストレプトアビジン−ＨＲＰを用いて検出する。ＥＬＩＳＡピコ化学発光基質を添加し、パーキンエルマー社製Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーでプレートを読み取る。ＩＣ５０の曲線および算出値は全て、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍで作成する。
【０４１５】
ｐＡＫＴ（ｐＡＫＴ）、ｐＩＧＦ‐１ＲおよびｐＥｒｂＢ３のレベルを測定することにより決定された結果（図４１、４２および表２８）は、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８およびＳＦ−Ｇ１−Ｃ８が、ＢｘＰＣ‐３細胞における高レベルまたは低レベルのＩＧＦ‐１およびＨＲＧにより誘導されるシグナル伝達を強力に阻害することを示している。
【０４１６】
【表２８】
0005588086.tif 000041
【０４１７】
実施例１２：抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＰＢＡは基底シグナル伝達を抑制する。
本実施例は、抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＰＢＡがシグナル伝達の基底レベルを阻害することを示す。
【０４１８】
結果は基本的に以下の通りにして得た。３５，０００個のＢｘＰＣ‐３細胞を、３７℃で一晩、１０％血清に播種する。次の日、細胞を、０．５％血清を含有する培地中で飢餓状態にし、３７℃で一晩インキュベートする。細胞を、表示濃度の抗体の存在下、しかしリガンド刺激の非存在下で、１５分間または２４時間前処理する。細胞をＭ−Ｐｅｒ緩衝液（＋プロテアーゼ／ホスファターゼ阻害剤）中で溶解し、実施例９に記載される通りのｐＡＫＴについてのＥＬＩＳＡにかける。
【０４１９】
結果（図４３）は、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、およびＰ４−Ｇ１−Ｃ８が、基底レベルのｐＡＫＴを抑制することを示している。
【０４２０】
実施例１３：抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＰＢＡはＩＧＦ１Ｒを強力に下方制御する。
本実施例は、抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＰＢＡがＩＧＦ１Ｒを下方制御することを示す。
【０４２１】
結果は、基本的に次のようにして得られた。３５，０００個のＢｘＰＣ‐３細胞を、３７℃で一晩、１０％血清中に播種する。次の日、細胞を、０．５％血清を含有する培地中で飢餓状態にし、３７℃で一晩インキュベートする。次に、細胞を、０．５％血清および表示濃度の抗体（高用量の５Ｅ−０７Ｍから開始し、３倍ずつ連続希釈）を含有する培地中で２４時間インキュベートする。細胞を溶解し、Ｒ＆Ｄシステム社から得られる市販キットを用いるＥＬＩＳＡにより、総ＩＧＦ１Ｒを測定する。下方制御率（％）を、以下の式を用いて、Ｐｒｉｓｍから算出する：１００＊（（当てはめた最大値（fit.max）−観察された最小値（min.observed））／（当てはめた最大値−刺激無し）。
【０４２２】
結果（図４４および表２９）は、ＰＢＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、およびＰ４−Ｇ１−Ｃ８が、Ａ５４９細胞およびＢｘＰＣ‐３細胞におけるＩＧＦ１Ｒのレベルを減少させることを示している。
【０４２３】
【表２９】
0005588086.tif 000042
0005588086.tif 000043
【０４２４】
実施例１４：抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡは、両方のＩＧＦ１およびＩＧＦ２仲介性シグナル伝達を阻害する。
本実施例は、抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡが、ＩＧＦ１およびＩＧＦ２により誘導されるシグナル伝達を阻害することを示す。
【０４２５】
結果は、基本的に次のようにして得られた。５００，０００個／ウェルのＤＵ１４５細胞およびＭｉａ  ＰａＣａ−２細胞を、１０％血清中で一晩、１２ウェルプレートに播種する。２日目に、細胞を一晩血清飢餓状態にする。３日目に、抗体（２５０ｎＭのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３またはＰ４−Ｇ１−Ｃ８）のプレインキュベーション１時間行い、増殖因子（１００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１またはＩＧＦ２）を溶解前に１５分間添加する。全ての細胞をＰＢＳで洗浄し、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を添加した１００μｌのＭＰｅｒ緩衝液中で溶解する。試料を４〜１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル上で泳動するに先立ち、ｂ−メルカプトエタノール（ｂ−ＭＥ）を含有するローディングバッファーを添加し、ライセートを９５℃で５分間煮沸する。ゲルを１５０ボルト（定電圧）でおよそ９０分間泳動し、ｉＢｌｏｔ（インビトロジェン社）転写系の８分間転写プログラムを用いてニトロセルロース膜に転写する。膜を、Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｉｃｏｒバイオサイエンス社（Licor  Biosciences））中で、室温で１時間ブロッキングし、その後、５％ＢＳＡ含有ＴＢＳ−Ｔ中の一次抗体と共に４℃で一晩インキュベートする。使用した抗体はｐＡｋｔ、ｐＩＧＦ１Ｒ、βアクチン（全てセルシグナリングテクノロジーズ社から入手）である。βアクチンは１：５，０００で、リン酸化Ａｋｔは１：２，０００で、他は全て１：１，０００で使用した。次の日、膜を３回×５分間、それぞれＴＢＳ−Ｔで間洗浄し、次に、５％スキムミルク（milk）含有ＴＢＳ−Ｔ中１：１５，０００の抗ウサギＩｇＧ−ＤｙＬｉｇｈｔ８００（セルシグナリング社）と共に、室温で１時間インキュベートする。次に、膜を３回×５分間、それぞれＴＢＳ−Ｔで間洗浄し、Ｌｉｃｏｒ  Ｏｄｙｓｓｅｙシステム（Ｌｉｃｏｒバイオサイエンス社）を用いてスキャンする。積分強度を算出し、βアクチンレベルに対して正規化する。
【０４２６】
結果（図４５）は、ＢＰＡのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３およびＰ４−Ｇ１−Ｃ８が、ＩＧＦ１またはＩＧＦ２により誘導されるＡＫＴリン酸化を阻害することを示している。
【０４２７】
実施例１５：抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡはインスリンのシグナル伝達を部分的に阻害する。
本実施例は、抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡが、ＤＵ１４５細胞におけるインスリンのシグナル伝達を部分的に阻害することを示す。
【０４２８】
結果は、基本的に次のようにして得られた。５００，０００／ウェルのＤＵ１４５細胞を、１０％血清中で一晩、１２ウェルプレートに播種する。２日目に、細胞を一晩血清飢餓状態にする。３日目に、抗体（５００ｎＭのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３）のプレインキュベーションを１時間行い、溶解に先立ち増殖因子（１００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１または５μｇ／ｍｌのインスリン）を１５分間添加する。ライセートおよびウエスタンブロットを、実施例１４に記載される通りに調製する。
【０４２９】
ｐＡＫＴレベルにより測定された結果（図４６）は、ＢＰＡのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３が、インスリンにより誘導されるシグナル伝達を部分的に阻害することを示している。
【０４３０】
実施例１６：抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡは、ＥｒｂＢ３およびＩＧＦ１Ｒの全受容体レベルを下方制御する。
本実施例は、抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡが、ＩＧＦ１およびＨＲＧにより誘導されるかまたは誘導されない、細胞におけるＥｒｂＢ３およびＩＧＦ１Ｒレベルを下方制御することを示す。
【０４３１】
結果は、基本的に次のようにして得られた。５００，０００個／ウェルのＢｘＰＣ‐３細胞を、１０％血清中で一晩、１２ウェルプレートに播種する。２日目に、細胞を一晩血清飢餓状態にする。３日目に、抗体（２５０ｎＭのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８またはＰ４−Ｇ１−Ｃ８）のプレインキュベーションを６時間行う。また、試料の半分には、溶解に先立って、増殖因子（１００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１および３０ｎｇ／ｍｌのＨＲＧ）を１５分間添加する。ライセートおよびウエスタンブロットは実施例１４に記載される通りに調製する。また、ＩＧＦ１Ｒ、ＥｒｂＢ３およびｐＥｒｂＢ３はセルシグナリングテクノロジーズ社から入手される。
【０４３２】
結果（図４７）は、ＥｒｂＢ３およびＩＧＦ１Ｒの総レベル（リン酸化型および非リン酸化型）が、ＢＰＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８およびＰ４−Ｇ１−Ｃ８により減少されることを示している。
【０４３３】
実施例１７：抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡはヒト、マウスおよびサル血清中で安定性を示す。
本実施例は、抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡがヒト、マウスおよびサル血清中で安定であることを示す。
【０４３４】
結果は、基本的に次のようにして得られた。ＰＢＡを、２．５μＭの最終濃度のプールヒト血清（イノベーティブリサーチ社（Innovative  Research））、マウス血清（シグマ社）またはカニクイザル血清（イノベーティブリサーチ社）中で、３７℃で０日間または５日間インキュベートする。次に比色ＥＬＩＳＡ結合アッセイを用いて、試料をアッセイする。９６ウェルＲｅａｃｔｉ−ｂｉｎｄプレート（ピアス社、Ｆｉｓｈｅｒカタログ番号ＰＩ−１５０４１）を、抗体のｓｃＦｖ（ＰＢＳ中２μｇ／ｍｌのＥｒｂＢ３−ＨｉｓまたはＩＧＦ１Ｒ−Ｈｉｓ（Ｒ＆Ｄシステム社、それぞれのカタログ番号は３４８−ＲＢおよび３０５−ＧＲ））に対応するタンパク質５０μｌでコートし、４℃で一晩インキュベートする。次の日、プレートをＰＢＳ＋０．０５％ツイーン２０（ＰＢＳ−Ｔ）で洗浄し、１００μｌのタンパク質フリーブロッキング緩衝液（ピアス社）を用いて室温で１時間ブロッキングする。プレートをＰＢＳ−Ｔで洗浄し、５０μｌの各ＢＰＡを２連で添加する。濃度はＰＢＳ−Ｔ中５００ｎＭ（血清中の２．５μＭ二重特異性抗体の１：５希釈）から開始し、さらに１０点の二倍連続希釈液（ＰＢＳ−Ｔ＋２０％血清中）および１点のブランク（ＰＢＳ−Ｔ＋血清のみ）を含む。プレートを室温で２時間インキュベートし、その後ＰＢＳ−Ｔで洗浄する。５０μｌの抗Ｆｃ−ＨＲＰ（ジャクソンラボ社）をＰＢＳ−Ｔ中１：４０，０００で添加し、プレートを室温暗所で１時間インキュベートする。プレートを再度ＰＢＳ−Ｔで洗浄し、１００μｌのＴＭＢ基質（サーモサイエンティフィック社、ＴＭＢおよび過酸化物の１：１混合溶液）を添加する。プレートを、青色に発色するまで室温で５〜１５分間インキュベートし、反応を１００μｌの停止液（セルシグナリングテクノロジー社）で停止させる。吸光度をパーキンエルマー社製Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーの４５０ｎｍで読み取り、結合曲線をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いて作成する。
【０４３５】
結果（図４８）は、ＢＰＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、およびＰ４−Ｇ１−Ｃ８が、マウスおよびカニクイザル血清中で少なくとも５日間安定であること、ならびに、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３が、ヒト血清中で少なくとも６日間安定であることを示している。
【０４３６】
実施例１８：抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡは、ヒト、マウス、ラットおよびサルのＩＧＦ１ＲおよびＥｒｂＢ３と交差反応性を示す。
【０４３７】
本実施例は、抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡが、ヒト、マウス、ラットおよびサルのＩＧＦ１ＲおよびＥｒｂＢ３と交差反応性であることを示す。
【０４３８】
結果は、基本的に次のようにして得られた。９６ウェルＲｅａｃｔｉ−ｂｉｎｄ（登録商標）プレート（ピアス社、Ｆｉｓｈｅｒカタログ番号ＰＩ−１５０４１）を、ＰＢＳ中に２μｇ／ｍｌの種特異的ＥｒｂＢ３−ＨｉｓまたはＩＧＦ‐１Ｒ−Ｈｉｓ（Ｒ＆Ｄシステム社、それぞれのカタログ番号は３４８−ＲＢおよび３０５−ＧＲ））５０μｌでコートし、４℃で一晩インキュベートする。次の日、プレートをＰＢＳ＋０．０５％ツイーン２０（ＰＢＳ−Ｔ）で洗浄し、１００μｌのタンパク質フリーブロッキング緩衝液（ピアス社）を用いて室温で１時間ブロッキングする。プレートをＰＢＳ−Ｔで洗浄し、５０μｌの各ＰＢＡを２連で添加する。濃度は５００ｎＭ（ＰＢＳ−Ｔ中）から開始し、さらに１０点の二倍連続希釈液および１点のブランク（ＰＢＳ−Ｔのみ）を含む。プレートを室温で２時間インキュベートし、その後ＰＢＳ−Ｔで洗浄する。５０μｌの抗Ｆｃ−ＨＲＰ（ジャクソンラボ社）をＰＢＳ−Ｔ中１：４０，０００で添加し、プレートを室温暗所で１時間インキュベートする。プレートを再度ＰＢＳ−Ｔで洗浄し、１００μｌのＴＭＢ基質（サーモサイエンティフィック社、ＴＭＢおよび過酸化物の１：１混合溶液）を添加する。プレートを、青色に発色するまで室温で５〜１５分間インキュベートし、反応を１００μｌの停止液（セルシグナリングテクノロジー社）で停止させる。吸光度をパーキンエルマー社製Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーの４５０ｎｍで読み取り、結合曲線をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いて作成する。
【０４３９】
結果（図４９）は、ＢＰＡのＰ４−Ｇ１−Ｃ８、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３およびＭ７−Ｇ１−Ｍ７８が、ヒト、マウス、ラットおよびサルのＩＧＦ１ＲおよびＥｒｂＢ３と効率的に結合することを示している。
【０４４０】
実施例１９：抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡは、ＩＧＦ１およびＩＧＦ２のそれらの受容体ＩＧＦ１Ｒへの結合を阻止する。
本実施例は、抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡが、ＩＧＦ１およびＩＧＦ２の両方のＩＧＦ１Ｒへの結合を阻止することを示す。
【０４４１】
結果は、基本的に次のようにして得られた。ＥＬＩＳＡプレートをＩＧＦ１Ｒ−Ｈｉｓでコートし、実施例１８に記載される通りにブロッキングする。ブロッキングステップの後、プレートを洗浄し、ＩＧＦ１（１００ｎｇ／ｍｌ）またはＩＧＦ２（１００ｎｇ／ｍｌ）（ＥＭＤケミカルズ社（EMD  Chemicals））と共に、室温で１時間インキュベートする。プレートをＰＢＳ−Ｔで洗浄し、１００μｌの各Ａｂを２連で添加する。濃度は５００ｎＭ（ＰＢＳ−Ｔ中）から開始し、さらに１０点の二倍連続希釈液および１点のブランク（ＰＢＳ−Ｔのみ）を含む。プレートを室温で２時間インキュベートし、その後ＰＢＳ−Ｔで洗浄する。５０μｌのウサギ抗ヒトＩＧＦ１（サーモサイエンティフィック社）またはウサギ抗ヒトＩＧＦ２（アブカム社）を、ＰＢＳ−Ｔ中１：１，０００で、室温で１時間添加する。プレートを再度洗浄し、ＰＢＳ−Ｔ中１：１，０００の抗ウサギＨＲＰ（セルシグナリング社）中で、室温で１時間インキュベートする。上記の通りにプレートを発色させ、読み取り、解析する。
【０４４２】
結果（図５０）は、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３が、ＩＧＦ１およびＩＧＦ２の両方のＩＧＦ１Ｒへの結合を阻害したことを示している。
【０４４３】
実施例２０：抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡは、マウスにおいては用量依存的且つ異なる半減期を示し、カニクイザルにおいては長い半減期を示す。
本実施例は、マウスおよびカニクイザルにおける抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＢＰＡの薬物動態特性を提供する。
【０４４４】
結果は、基本的に次のようにして得られた。投与および試料の採取：マウスに、１００μｇ／マウスまたは５００μｇ／マウスのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３またはＭ７−Ｇ１−Ｍ７８を静脈内瞬時投与し、０．２５、１、４、８、２４、４８、７２、９６および１６８時間目に採血する。４匹のマウスを時点毎に採血する。カニクイザル（ＷＩＬリサーチラボラトリーズ社）の静脈内注入を、Ｐ４−Ｃ８およびＰ４−Ｍ１．３を用いて行う。各群の２匹のサルに、５ｍｇ／ｋｇまたは２５ｍｇ／ｋｇで投与し、０．０８、１、４、８、２４、４８、７２、９６および１６８時間目に採血する。ＥＬＩＳＡ結合アッセイおよびモデル化分析：Ｒｅａｃｔｉ−ｂｉｎｄ（登録商標）９６ウェルプレート（ピアス社、Ｆｉｓｈｅｒカタログ番号ＰＩ−１５０４１）を、ＰＢＳ中２μｇ／ｍｌの５０μｌのＩＧＦ１Ｒ（タグ無し）でコートし、４℃で一晩インキュベートする。プレートをＰＢＳ−０．０５％ツイーン２０（ＰＢＳ−Ｔ）で洗浄し、１００μｌのピアス社製タンパク質フリーブロッキング緩衝液を用いて室温で１時間ブロッキングする。プレートを再度ＰＢＳ−Ｔで洗浄する。１００μｌの試料および標準物質をプレートに添加し、室温で２時間インキュベートする。検量線のため、抗体をＰＢＳ−Ｔ中で１２μｇ／ｍｌに希釈し、次にさらに１０回の３倍連続希釈を行い、最後のウェルはブランクとする。血清試料をＰＢＳ−Ｔ中で１：５０に希釈し、さらに１０回の３倍連続希釈を行い、最後のウェルはブランクとする。プレートをＰＢＳ−Ｔで洗浄し、ＰＢＳ−Ｔ中に１μｇ／ｍｌのＥｒｂＢ３−Ｈｉｓの１００μｌを、室温で１時間添加する。プレートを洗浄し、１００μｌの抗Ｈｉｓ−ＨＲＰ（アブカム社）をＰＢＳ−Ｔ中１：１０，０００で添加し、室温で１時間インキュベート（被覆）する。プレートを再度ＰＢＳ−Ｔで洗浄し、１００μｌのＴＭＢ基質（サーモサイエンティフィック社、ＴＭＢおよび過酸化物の１：１混合溶液）を添加する。プレートを、青色に発色するまで室温で５〜１５分間インキュベートし、反応を１００μｌの停止液（セルシグナリングテクノロジー社）で停止させる。吸光度をパーキンエルマー社製Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーの４５０ｎｍで読み取り、データ解析を、標準プロトコルに従いＭＡＴＬＡＢ（Ｍａｔｈｗｏｒｋｓ−ｗｗｗ．ｍａｔｈｗｏｒｋｓ．ｃｏｍ）およびＷｉｎＮｏｎＬｉｎ（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ−ｗｗｗ．ｐｈａｒｓｉｇｈｔ．ｃｏｍ）を用いて行う。
【０４４５】
マウスにおける結果（表３０）は、ＢＰＡのＭ７−Ｇ１−Ｍ７８およびＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３が、マウスに投与されたＢＰＡおよびＢＰＡの濃度に応じて、平均して３．３３から４１．９０時間にわたる、マウスにおける半減期を有することを示している。カニクイザルにおける結果（表３１）は、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８およびＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３の半減期が、５ｍｇ／ｋｇについてはそれぞれ５１時間および６１時間であること、ならびに、２５ｍｇ／ｋｇのＰＢＡについてはそれぞれ１１５時間および７８時間であることを示している。従って、抗ＩＧＦ１Ｒ−抗ＥｒｂＢ３の配向を有するＰＢＡ（すなわち、抗ＩＧＦ１Ｒ部分が完全長抗体であり、抗ＥｒｂＢ３部分が２つのｓｃＦｖで構成される）は、反対の高次構造を有するＰＢＡ（すなわち、抗ＥｒｂＢ３が完全長抗体であり、抗ＩＧＦ１Ｒ部分が２つのｓｃＦｖで構成される）よりも、より安定である。
【０４４６】
【表３０】
0005588086.tif 000044
【０４４７】
【表３１】
0005588086.tif 000045
【０４４８】
実施例２１：Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３は、リガンド誘導性受容体活性化およびＡｋｔ／ｍＴＯＲ／ＥＲＫシグナル伝達の経時的なインビトロ阻害を示す。
本実施例は、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３が、ＢｘＰＣ‐３培養細胞におけるＩＧＦ‐１ＲおよびＥｒｂＢ３、ならびに下流タンパク質であるＡｋｔ、Ｅｒｋ、ｍＴＯＲおよびＳ６のリガンド誘導性リン酸化を、経時的に阻害することを示す。
【０４４９】
方法
ＢｘＰＣ‐３細胞を、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシンおよびＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で維持する。３．５×１０４個の細胞を９６ウェル組織培養プレート中の完全培地に播種する。次の日、完全培地を無血清培地と取り換え、細胞を３７℃で一晩インキュベートする。細胞を、１μＭのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３で１時間前処理するか、または阻害剤を含まない無血清培地中で維持し、その後、全細胞を、１００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１（カルバイオケム社）および７０ｎｇ／ｍｌのＨＲＧ（Ｒ＆Ｄシステム社）で５、１５、３０、６０または１２０分間刺激する。細胞をＰＢＳで洗浄し、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を添加したＭＰｅｒ緩衝液中で溶解する。
【０４５０】
リン酸化ＩＧＦ１Ｒ（ｐＩＧＦ１Ｒ）  リン酸化ＥｒｂＢ３（ｐＥｒｂＢ３）およびリン酸化ＡＫＴ（ｐＡＫＴ）についてのＥＬＩＳＡを、上記実施例４に記載される通りに行う。リン酸化ＥＲＫ（ｐＥＲＫ、セルシグナリングテクノロジー社カタログ番号７２４６）、リン酸化Ｓ６（ｐＳ６、Ｒ＆Ｄシステム社カタログ番号ＤＹＣ３９１８）およびリン酸化ｍＴＯＲ（ｐｍＴＯＲ、Ｒ＆Ｄシステム社カタログ番号ＤＹＣ１６６５）についてのＥＬＩＳＡを、製造業者の取扱説明書に従って行う。得られた各リン酸化タンパク質の濃度を、ＢＣＡ法を用いて決定した総タンパク質レベルに対して正規化する。
【０４５１】
結果（図５１）は、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３が、ＩＧＦ‐１およびＨＲＧ存在下で、リン酸化ＩＧＦ‐１Ｒ（５１Ａ）、リン酸化ＥｒｂＢ３（５１Ｂ）、リン酸化Ａｋｔ（５１Ｃ）、リン酸化ＥＲＫ（ｐ４４／ｐ４２；５１Ｄ）、リン酸化ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８、５１Ｅ）、およびリン酸化Ｓ６（Ｓｅｒ２３５／２３６；５１Ｆ）のリガンド誘導性生成を有意に阻止できることを示している。
【０４５２】
実施例２２：抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＰＢＡは、ＩＧＦ１Ｒ−インスリン受容体ヘテロ二量体に仲介されるシグナル伝達を遮断する。
本実施例は、抗ＩＧＦ１Ｒ＋抗ＥｒｂＢ３  ＰＢＡによるインスリンおよびＩＧＦ２シグナル伝達の阻害が、ＩＧＦ１Ｒ−インスリン受容体ヘテロ二量体に仲介されることを示す。
【０４５３】
結果は、基本的に次のようにして得られた。５００，０００個／ウェルのＢｘＰＣ‐３細胞およびＡ６７３細胞を、１０％血清中で一晩、１２ウェルプレートに播種する。２日目に、細胞を一晩血清飢餓状態にする。３日目に、抗体（５００ｎＭのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３）のプレインキュベーションを１時間行い、溶解に先立ち、増殖因子（１００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ１、ＩＧＦ２または５μｇ／ｍｌのインスリン）を１５分間添加する。
【０４５４】
結果（図５２）は、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３が、高レベルのインスリン受容体（ＩＲ）を発現するＡ６７３細胞におけるＩＧＦ２およびインスリンのシグナル伝達を有意に遮断できることを示している。このレベルの阻害は、低レベルのＩＲを発現するＢｘＰＣ‐３細胞では見られなかった。
【０４５５】
実施例２３：ＰＢＡのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３は、抗ＩＧＦ‐１Ｒモノクローナル抗体と比較して、ｍＴＯＲ活性化およびｍＴＯＲタンパク質レベルの優れた低減を示す。
本実施例は、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３が、研究終了時のＢｘＰＣ‐３腫瘍において、抗ＩＧＦ‐１Ｒモノクローナル抗体と比較して、ｍＴＯＲ活性化の優れた制御を示すことを示す。
【０４５６】
ＢｘＰＣ‐３異種移植片試験から得られた腫瘍のプロファイリングを、基本的に以下の通りに行った。ヒト腫瘍細胞株異種移植片を有するマウスを作製し、種々の処置を、基本的に上記の実施例３Ｄに記載の通りに施した。５つの研究終了時腫瘍を、ＰＢＳ対照群、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（５００μｇ／マウスｑ３ｄ）の最高用量群、および抗ＩＧＦ１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）（３６８μｇ／マウスｑ３ｄ）の最高用量群から採取し、基本的に以下の通りに調製した。ライセートを、ＴＥＲ１緩衝液（インビトロジェン社）中での組織の粉砕および溶解により作製する。総タンパク質をＢＣＡ法で定量し、当量の総タンパク質を４〜１２％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルで泳動する。標準方法を用いてゲルをニトロセルロースに転写する。ウエスタンブロッティングを、抗ｍＴＯＲ一次抗体および抗リン酸化ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８）一次抗体（全てセルシグナリングテクノロジー社から入手）を用いて行う。使用される二次抗体は、抗ウサギＩｇＧ−ＤｙｅＬｉｇｈｔ８００（セルシグナリングテクノロジー社）である。Ｌｉ−Ｃｏｒ  Ｏｄｙｓｓｅｙシステムを用いてブロットを発色させる。標的のバンドの強度をその関連βアクチン対照のバンドの強度で除算することにより、βアクチンに対する正規化を行う。
【０４５７】
結果（図５３ＡおよびＢおよび表３２）は、ｍＴＯＲおよびリン酸化ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８）のレベルが、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａで処置されたマウスと比較して、ＰＢＡのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３で処置されたマウスから得られた腫瘍において有意により低いことを示している。
【０４５８】
【表３２】
0005588086.tif 000046
【０４５９】
実施例２４：Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３は、Ｃａｋｉ‐１およびＢｘＰＣ‐３異種移植モデルにおいて、受容体を下方制御し、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達を阻害する。
本実施例は、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３が、研究終了時腫瘍におけるＣａｋｉ‐１ヒト腎明細胞癌およびＢｘＰＣ‐３ヒト膵臓腺癌の異種移植モデルにおいて、受容体を下方制御し、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達を阻害することを示す。
【０４６０】
Ｃａｋｉ‐１異種移植片試験から得た腫瘍のプロファイリングを、基本的に以下の通りに行った。ヒト腫瘍細胞株異種移植片を有するマウスを作製し、種々の処置を、基本的に上記の実施例３Ｄに記載の通りに施した。Ｃａｋｉ‐１異種移植片試験のため、各々５匹のマウスを含む３つの群を確立した。これらは、対照、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３（６００μｇ）、および抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（２９１μｇ  用量１、３２０μｇ  用量２）を含んだ。抗体を、３日間の間隔をおいて２回腹腔内（ＩＰ）投与した。エベロリムスを毎日（ｐｄ）、経口（ＰＯ）投与した。腫瘍を、２回目の抗体投与の２４時間後に採取した。
【０４６１】
ＢｘＰＣ‐３異種移植片試験から得た腫瘍のプロファイリングを、基本的に実施例２３に記載の通りに行った。
【０４６２】
腫瘍を最初に秤量し、ＣｒｙｏＰｒｅｐ組織微粉砕機（モデルＣＰ−０２、コバリス社（Covaris））で微粉砕した。プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含有するＴｉｓｓｕｅ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ  １（ＴＥＲ１、ライフテクノロジーズ社（商標））を、１００ｍｇの組織あたり１ｍｌのＴＥＲ１の割合で腫瘍に加えた。製造業者のプロトコルに従って、試料を氷上で３０分間インキュベートして組織を溶解し、ＱＩＡｓｈｒｅｄｄｅｒ（商標）カラム（キアゲン社）に通した。製造業者のプロトコルに従ってＢＣＡアッセイ（ピアス社）を行い、タンパク質濃度を決定した。
【０４６３】
試料をウエスタンブロットで分析した。β‐メルカプトエタノール（β‐ＭＥ）を含有するローディングバッファーを加え、ライセートを９５℃で５分間煮沸した。およそ４０μｇのタンパク質および２種類のラダー（インビトロジェン社）を、１８ウェルゲル（バイオラド社）の各ウェル上で流した。ゲルを１５０ボルト（定電圧）でおよそ９０分間泳動し、ｉＢｌｏｔ（登録商標）（インビトロジェン社）転写系の８分間転写プログラムを用いてニトロセルロース膜に移した。膜を、Ｏｄｙｓｓｅｙ（登録商標）Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｉｃｏｒ（登録商標）バイオサイエンス社）中で、室温で１時間ブロッキングし、その後、５％ＢＳＡ含有ＴＢＳ−Ｔ中の一次抗体と共に４℃で一晩インキュベートした。抗体は全て、セルシグナリング社から購入し、推奨の希釈で使用した。次の日、膜を３回×５分間、それぞれＴＢＳ−Ｔで間洗浄し、次に、５％スキムミルク（ｍｉｌｋ）含有ＴＢＳ−Ｔ中１：１０，０００〜１５，０００の抗ウサギＩｇＧ−ＤｙＬｉｇｈｔｔ（登録商標）８００（セルシグナリング社）または抗ウサギＩＲＤｙｅ（登録商標）８００（Ｌｉｃｏｒ（登録商標）バイオサイエンス社）と共に、室温で１時間インキュベートした。次に、膜を３回×５分間、それぞれＴＢＳ−Ｔで間洗浄し、Ｌｉｃｏｒ（登録商標）Ｏｄｙｓｓｅｙ（登録商標）システム（Ｌｉｃｏｒ（登録商標）バイオサイエンス社）を用いてスキャンした。Ｉｍａｇｅ  Ｓｔｕｄｉｏ  ２．０を用いてバンド強度を定量化し、βアクチンレベルに対して正規化した。Ｃａｋｉ‐１異種移植片において、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ、またはエベロリムスで処理されたものに対して、対照腫瘍を比較した。
【０４６４】
Ｃａｋｉ‐１プロファイリング試験の結果（図５４Ａ〜Ｆ）は、ＩＧＦ‐１Ｒ、インスリン受容体、ＥｒｂＢ３、ＥＧＦＲ、ｐＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３またはＴｈｒ３０８）、ｐＦｏｘ０１（Ｔｈｒ２４）／Ｆｏｘ０３ａ（Ｔｈｒ３２）およびリン酸化ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８またはＳｅｒ２４８１）のレベルが、全て対照マウスにおけるレベルと同様であるか、または抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ＋抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａの組み合わせもしくはｍＴＯＲ阻害剤エベロリムスで処置されたマウスと比較して、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３で処置されたマウスから得た腫瘍においてより低いことを示している。
【０４６５】
ＢｘＰＣ‐３プロファイリング試験の結果（図５５Ａ〜Ｃ）は、ＩＧＦ‐１Ｒ、ＥｒｂＢ３、ｐＥＧＦＲ、ｐｍＴＯＲ（Ｓ２４４８）、およびｐＳ６（Ｓ２３５／２３６）が、すべて、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃ＡまたはＰＢＳ単独で処置されたマウスと比較して、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３で処置されたマウスから得た腫瘍においてより低いことを示している。
【０４６６】
実施例２５：Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３はＩＧＦ‐１およびＩＧＦ−２の、受容体への結合を阻止する。
本実施例は、ＥＬＩＳＡアッセイにより、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３が、ＩＧＦ‐１およびＩＧＦ−２の、ＩＧＦ‐１Ｒへの結合を効果的に阻止することを示す。
【０４６７】
９６ウェルＲｅａｃｔｉ−ｂｉｎｄ（登録商標）プレート（ピアス社）を、５０μｌのＩＧＦ‐１Ｒ−Ｈｉｓ（Ｒ＆Ｄシステム社カタログ番号３０５−ＧＲ；ＰＢＳ中２μｇ／ｍｌ）でコートし、４℃で一晩インキュベートした。次の日、プレートをＰＢＳ＋０．０５％ツイーン２０（ＰＢＳ−Ｔ）で洗浄し、１００μｌのタンパク質フリーブロッキング緩衝液（ピアス社）で、室温で１時間ブロッキングした。プレートをＰＢＳ−Ｔで洗浄し、１００μｌのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３を２連で添加した。抗体濃度は５００ｎＭ（ＰＢＳ−Ｔ中）から開始し、さらに１０点の２倍連続希釈液および１点のブランク（ＰＢＳ‐Ｔのみ）を含んだ。プレートを室温で２時間インキュベートし、次にＰＢＳ−Ｔで洗浄した。１００μｌのＩＧＦ‐１またはＩＧＦ−２（ＥＭＤケミカルズ社）を１００ｎｇ／ｍｌで添加し、室温で１時間インキュベートした。洗浄後、１００μｌのウサギ抗ＩＧＦ‐１またはウサギ抗ＩＧＦ−２（両方ともアブカム社、５μｇ／ｍｌ）をプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。次に、プレートを洗浄し、１００μｌの抗ウサギＨＲＰ（セルシグナリング社）と共に室温で１時間インキュベートし、再度洗浄し、１００μｌのＴＭＢ基質（セルシグナリング社）を添加した。青色に発色するまでプレートを室温で５〜１５分間インキュベートし、反応を１００μｌの停止液（セルシグナリングテクノロジー社）で停止させた。吸光度をパーキンエルマー社製Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーの４５０ｎｍで読み取り、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）を用いて結合曲線を作成した。
【０４６８】
ＥＬＩＳＡアッセイの結果（図５６）は、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３が、ＩＧＦ‐１およびＩＧＦ−２両方のＩＧＦ‐１Ｒへの結合を、用量依存的に阻止することを示している。
【０４６９】
実施例２６：ＤＵ１４５、ＢｘＰＣ‐３、ＳＫ−ＥＳ−１、およびＣａｋｉ‐１腫瘍異種移植モデルにおいてのＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３およびＰ４−Ｇ１−Ｃ８
下記の試験Ａ〜Ｄそれぞれのため、細胞をＰＢＳ：増殖因子低減化マトリゲル（登録商標）で１：１に再懸濁し、Ｎｕ／Ｎｕマウスに皮下注射した。腫瘍を８日間発達させた。抗体を、表示用量／マウスで３日毎に（ｑ３ｄ）腹腔内注射した。腫瘍の長さおよび幅をノギスにより手動で週２回測定し、以下の式を用いて腫瘍体積を算出した：π／６（Ｌ×Ｗ２）。試験の各群には１０匹の動物が含まれた。
【０４７０】
Ａ．  Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８およびＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３は、インビボにおいてＤＵ１４５前立腺癌細胞の腫瘍増殖を抑制する。
このＤＵ１４５異種移植片試験のため、８×１０６個のＤＵ１４５細胞を調製し、上記の通りに使用した。
結果（図５７Ａ）は、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８およびＰ４−Ｇ１−Ｍ．３の両方が、インビボにおいて、前立腺癌細胞の増殖を抑制することを示している。
【０４７１】
Ｂ．  Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８およびＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３は、インビボにおいて、ＢｘＰＣ‐３膵癌細胞の腫瘍増殖を、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧよりも良好に抑制する。
本研究のため、５×１０６個のＢｘＰＣ‐３細胞を調製し、上記に記載の通りに使用した。
結果（図５７Ｂ）は、Ｐ４−Ｇ１−Ｃ８およびＰ４−Ｇ１−Ｍ１．３がインビボにおいてＢｘＰＣ‐３膵癌細胞の腫瘍増殖を抑制すること、およびその両方が腫瘍細胞成長阻害において抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａより優れていることを示している。
【０４７２】
Ｃ．  Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３は、インビボにおいてＳＫ−ＥＳ−１ユーイング肉腫癌細胞の腫瘍増殖を抑制する。
この異種移植片試験のため、１０×１０６個のＳＫ−ＥＳ−１細胞を調製し、上記に記載の通りに使用した。
結果（図５７Ｃ）は、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３が腫瘍細胞成長を用量依存的に抑制することを示している。
【０４７３】
Ｄ．  Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３は、インビボにおいてＣａｋｉ‐１腎細胞癌の癌細胞の腫瘍増殖を抑制し、抗ＩＧＦ‐１Ｒ  ＩｇＧおよび抗ＥｒｂＢ３  ＩｇＧの組み合わせと比較してすぐれた抑制能を示す。
本試験のため、８×１０６個のＣａｋｉ‐１細胞を調製し、上記に記載の通りに使用した。結果（図５７Ｄ）は、Ｐ４−Ｇ１−Ｍ１．３が、腫瘍細胞成長を用量依存的に抑制し、抗ＩＧＦ‐１Ｒ抗体＃Ａ（ガニツマブ；配列番号３２７＋配列番号３２８）および抗ＥｒｂＢ３抗体＃Ａ（配列番号３３６＋配列番号３３７）抗体の組み合わせよりも、これらの抗体が同などの暴露量でまたは等モル投与で与えられる場合であっても、腫瘍細胞成長の阻害においてより効果的であることを示している。
【０４７４】
実施例２７：マウスにおけるＰＤ／効能試験を設計するためのＰＫデータのコンピュータ分析
本実施例は、Ｍ１．３−Ｇ１−Ｐ４の薬物動態（ＰＫ）パラメータを推定するための、数理モデリングの実験データへの当てはめに使用される計算方法を説明する。
【０４７５】
数理モデリングのＰＫデータへの当てはめ
Ｍ１．３−Ｇ１−Ｐ４のＰＫパラメータを、静脈内（ＩＶ）ボラース標的介在性薬物動態（ＴＭＤＤ）モデルの実行により推測した。ＩＶ  ＴＭＤＤは、以下の一組の四次連微分方程式として構成される、２−コンパートメントＰＫモデルである：
【０４７６】
【数１】
0005588086.tif 000047
【０４７７】
【数２】
0005588086.tif 000048
【０４７８】
【数３】
0005588086.tif 000049
【０４７９】
【数４】
0005588086.tif 000050
【０４８０】
式１Ａ〜１Ｄにおいて、ＤｃおよびＤｐは中央区画および末梢区画における薬剤の濃度であり、ＶｃおよびＶｐは中央区画および末梢区画の体積であり、一方、ＲおよびＤ：Ｒは、中央区画における遊離型標的受容体および薬物受容体複合体の濃度を示す。さらに、Ｃｌｄ、Ｃｌ、ｋｉｎ、ｋｏｕｔ、ｋｏｎ、ｋｏｆｆおよびｋｅｌはそれぞれ、区画間輸送、中央区画からの薬物クリアランス、受容体合成、受容体分解、薬物受容体対合、薬物受容体解離、および中央区画からの薬物受容体クリアランスの速度定数を表す。ＩＶ  ＴＭＤＤモデルは、標的受容体への薬物結合および中央区画における薬物クリアランスの動的プロセス、ならびに目的の薬物が中央区画（血液）に直接注射される場合の中央区画から末梢区画への薬物クリアランスのプロセスを説明する。ＴＭＤＤモデルの、マウス血液から得られた実験データへの当てはめによって、Ｍ１．３−Ｇ１−Ｐ４のＰＫ特性を推定することができる。
【０４８１】
図５８は、ＴＭＤＤモデルの、実験データへの当てはめを示している（実線は静脈内投与された５００μｇ／マウス用量の当てはめであり、二重線は静脈内投与された１００μｇ／マウス用量の当てはめである）。Ｍ１．３−Ｇ１−Ｐ４のＰＫパラメータを下記の表２４に列挙する。
【０４８２】
【表３３】
0005588086.tif 000051
【０４８３】
等価物
当業者であれば、通例の実験法だけを使用して、本明細書に記載の特定の実施形態の等価物を多く認識し、または確認および実施することができるだろう。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲により包含されることが意図されている。従属クレームで開示された実施形態のあらゆる組み合わせが、本開示の範囲内であることが企図される。
【０４８４】
参照による組込み
本明細書に参照されている、ありとあらゆる米国および外国特許および係属特許出願および公報の開示は、その全体が参照によって本明細書に明確に組み込まれる。
【図１Ａ】
0005588086.tif 000052
【図１Ｂ】
0005588086.tif 000053
【図２Ａ】
0005588086.tif 000054
【図２Ｂ】
0005588086.tif 000055
【図２Ｃ】
0005588086.tif 000056
【図２Ｄ】
0005588086.tif 000057
【図２Ｅ】
0005588086.tif 000058
【図３Ａ】
0005588086.tif 000059
【図３Ｂ】
0005588086.tif 000060
【図４Ａ】
0005588086.tif 000061
【図４Ｂ】
0005588086.tif 000062
【図５Ａ−１】
0005588086.tif 000063
【図５Ａ−２】
0005588086.tif 000064
【図５Ａ−３】
0005588086.tif 000065
【図５Ａ−４】
0005588086.tif 000066
【図５Ａ−５】
0005588086.tif 000067
【図５Ａ−６】
0005588086.tif 000068
【図５Ａ−７】
0005588086.tif 000069
【図５Ａ−８】
0005588086.tif 000070
【図５Ａ−９】
0005588086.tif 000071
【図５Ａ−１０】
0005588086.tif 000072
【図５Ｂ−１】
0005588086.tif 000073
【図５Ｂ−２】
0005588086.tif 000074
【図５Ｂ−３】
0005588086.tif 000075
【図５Ｂ−４】
0005588086.tif 000076
【図５Ｂ−５】
0005588086.tif 000077
【図５Ｂ−６】
0005588086.tif 000078
【図５Ｂ−７】
0005588086.tif 000079
【図５Ｂ−８】
0005588086.tif 000080
【図６Ａ】
0005588086.tif 000081
【図６Ｂ−１】
0005588086.tif 000082
【図６Ｂ−２】
0005588086.tif 000083
【図６Ｃ】
0005588086.tif 000084
【図６Ｄ−１】
0005588086.tif 000085
【図６Ｄ−２】
0005588086.tif 000086
【図７Ａ】
0005588086.tif 000087
【図７Ｂ】
0005588086.tif 000088
【図８】
0005588086.tif 000089
【図９Ａ】
0005588086.tif 000090
【図９Ｂ】
0005588086.tif 000091
【図９Ｃ】
0005588086.tif 000092
【図９Ｄ】
0005588086.tif 000093
【図１０Ａ】
0005588086.tif 000094
【図１０Ｂ】
0005588086.tif 000095
【図１０Ｃ】
0005588086.tif 000096
【図１１Ａ】
0005588086.tif 000097
【図１１Ｂ】
0005588086.tif 000098
【図１２Ａ】
0005588086.tif 000099
【図１２Ｂ】
0005588086.tif 000100
【図１３】
0005588086.tif 000101
【図１４Ａ】
0005588086.tif 000102
【図１４Ｂ】
0005588086.tif 000103
【図１５】
0005588086.tif 000104
【図１６】
0005588086.tif 000105
【図１７】
0005588086.tif 000106
【図１８】
0005588086.tif 000107
【図１９】
0005588086.tif 000108
【図２０Ａ】
0005588086.tif 000109
【図２０Ｂ】
0005588086.tif 000110
【図２１】
0005588086.tif 000111
【図２２】
0005588086.tif 000112
【図２３Ａ】
0005588086.tif 000113
【図２３Ｂ】
0005588086.tif 000114
【図２３Ｃ】
0005588086.tif 000115
【図２３Ｄ】
0005588086.tif 000116
【図２３Ｅ】
0005588086.tif 000117
【図２３Ｆ】
0005588086.tif 000118
【図２４Ａ】
0005588086.tif 000119
【図２４Ｂ】
0005588086.tif 000120
【図２４Ｃ】
0005588086.tif 000121
【図２４Ｄ】
0005588086.tif 000122
【図２４Ｅ】
0005588086.tif 000123
【図２４Ｆ】
0005588086.tif 000124
【図２５】
0005588086.tif 000125
【図２６】
0005588086.tif 000126
【図２７Ａ】
0005588086.tif 000127
【図２７Ｂ】
0005588086.tif 000128
【図２７Ｃ】
0005588086.tif 000129
【図２８】
0005588086.tif 000130
【図２９Ａ】
0005588086.tif 000131
【図２９Ｂ】
0005588086.tif 000132
【図２９Ｃ】
0005588086.tif 000133
【図２９Ｄ】
0005588086.tif 000134
【図３０Ａ】
0005588086.tif 000135
【図３０Ｂ】
0005588086.tif 000136
【図３０Ｃ】
0005588086.tif 000137
【図３０Ｄ】
0005588086.tif 000138
【図３０Ｅ】
0005588086.tif 000139
【図３０Ｆ】
0005588086.tif 000140
【図３０Ｇ】
0005588086.tif 000141
【図３０Ｈ】
0005588086.tif 000142
【図３０Ｉ】
0005588086.tif 000143
【図３１Ａ】
0005588086.tif 000144
【図３１Ｂ】
0005588086.tif 000145
【図３１Ｃ】
0005588086.tif 000146
【図３１Ｄ】
0005588086.tif 000147
【図３１Ｅ】
0005588086.tif 000148
【図３１Ｆ】
0005588086.tif 000149
【図３１Ｇ】
0005588086.tif 000150
【図３１Ｈ】
0005588086.tif 000151
【図３１Ｉ】
0005588086.tif 000152
【図３１Ｊ】
0005588086.tif 000153
【図３１Ｋ】
0005588086.tif 000154
【図３２Ａ】
0005588086.tif 000155
【図３２Ｂ】
0005588086.tif 000156
【図３２Ｃ】
0005588086.tif 000157
【図３２Ｄ】
0005588086.tif 000158
【図３２Ｅ】
0005588086.tif 000159
【図３２Ｆ】
0005588086.tif 000160
【図３２Ｇ】
0005588086.tif 000161
【図３２Ｈ】
0005588086.tif 000162
【図３２Ｉ】
0005588086.tif 000163
【図３３Ａ】
0005588086.tif 000164
【図３３Ｂ】
0005588086.tif 000165
【図３３Ｃ】
0005588086.tif 000166
【図３３Ｄ】
0005588086.tif 000167
【図３４Ａ】
0005588086.tif 000168
【図３４Ｂ】
0005588086.tif 000169
【図３４Ｃ】
0005588086.tif 000170
【図３４Ｄ】
0005588086.tif 000171
【図３５Ａ】
0005588086.tif 000172
【図３５Ｂ】
0005588086.tif 000173
【図３５Ｃ】
0005588086.tif 000174
【図３５Ｄ】
0005588086.tif 000175
【図３６Ａ】
0005588086.tif 000176
【図３６Ｂ】
0005588086.tif 000177
【図３７Ａ】
0005588086.tif 000178
【図３７Ｂ】
0005588086.tif 000179
【図３７Ｃ】
0005588086.tif 000180
【図３８Ａ】
0005588086.tif 000181
【図３８Ｂ】
0005588086.tif 000182
【図３８Ｃ】
0005588086.tif 000183
【図３８Ｄ】
0005588086.tif 000184
【図３９Ａ】
0005588086.tif 000185
【図３９Ｂ】
0005588086.tif 000186
【図３９Ｃ】
0005588086.tif 000187
【図３９Ｄ】
0005588086.tif 000188
【図４０Ａ】
0005588086.tif 000189
【図４０Ｂ】
0005588086.tif 000190
【図４０Ｃ】
0005588086.tif 000191
【図４０Ｄ】
0005588086.tif 000192
【図４０Ｅ】
0005588086.tif 000193
【図４０Ｆ】
0005588086.tif 000194
【図４１Ａ】
0005588086.tif 000195
【図４１Ｂ】
0005588086.tif 000196
【図４１Ｃ】
0005588086.tif 000197
【図４１Ｄ】
0005588086.tif 000198
【図４２Ａ】
0005588086.tif 000199
【図４２Ｂ】
0005588086.tif 000200
【図４２Ｃ】
0005588086.tif 000201
【図４２Ｄ】
0005588086.tif 000202
【図４３Ａ】
0005588086.tif 000203
【図４３Ｂ】
0005588086.tif 000204
【図４３Ｃ】
0005588086.tif 000205
【図４３Ｄ】
0005588086.tif 000206
【図４４Ａ】
0005588086.tif 000207
【図４４Ｂ】
0005588086.tif 000208
【図４５】
0005588086.tif 000209
【図４６】
0005588086.tif 000210
【図４７】
0005588086.tif 000211
【図４８Ａ】
0005588086.tif 000212
【図４８Ｂ】
0005588086.tif 000213
【図４８Ｃ】
0005588086.tif 000214
【図４８Ｄ】
0005588086.tif 000215
【図４８Ｅ】
0005588086.tif 000216
【図４８Ｆ】
0005588086.tif 000217
【図４８Ｇ】
0005588086.tif 000218
【図４８Ｈ】
0005588086.tif 000219
【図４９Ａ】
0005588086.tif 000220
【図４９Ｂ】
0005588086.tif 000221
【図４９Ｃ】
0005588086.tif 000222
【図４９Ｄ】
0005588086.tif 000223
【図４９Ｅ】
0005588086.tif 000224
【図４９Ｆ】
0005588086.tif 000225
【図５０Ａ】
0005588086.tif 000226
【図５０Ｂ】
0005588086.tif 000227
【図５１Ａ】
0005588086.tif 000228
【図５１Ｂ】
0005588086.tif 000229
【図５１Ｃ】
0005588086.tif 000230
【図５１Ｄ】
0005588086.tif 000231
【図５１Ｅ】
0005588086.tif 000232
【図５１Ｆ】
0005588086.tif 000233
【図５２】
0005588086.tif 000234
【図５３Ａ】
0005588086.tif 000235
【図５３Ｂ】
0005588086.tif 000236
【図５４Ａ】
0005588086.tif 000237
【図５４Ｂ】
0005588086.tif 000238
【図５４Ｃ】
0005588086.tif 000239
【図５４Ｄ】
0005588086.tif 000240
【図５４Ｅ】
0005588086.tif 000241
【図５４Ｆ】
0005588086.tif 000242
【図５４Ｇ】
0005588086.tif 000243
【図５４Ｈ】
0005588086.tif 000244
【図５４Ｉ】
0005588086.tif 000245
【図５４Ｊ】
0005588086.tif 000246
【図５４Ｋ】
0005588086.tif 000247
【図５５Ａ】
0005588086.tif 000248
【図５５Ｂ】
0005588086.tif 000249
【図５５Ｃ】
0005588086.tif 000250
【図５５Ｄ】
0005588086.tif 000251
【図５５Ｅ】
0005588086.tif 000252
【図５６Ａ】
0005588086.tif 000253
【図５６Ｂ】
0005588086.tif 000254
【図５７Ａ】
0005588086.tif 000255
【図５７Ｂ】
0005588086.tif 000256
【図５７Ｃ】
0005588086.tif 000257
【図５７Ｄ】
0005588086.tif 000258
【図５８】
0005588086.tif 000259
【配列表】
0005588086000001.app