(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
真皮組織の破壊又は線維芽細胞の機能低下に起因する皮膚のしわ、たるみ、菲薄化、皮膚粘弾力性の低下から選択される１種又は２種以上の皮膚の老化を治療するための皮膚老化治療剤であって、皮内又は皮下投与することを特徴とする、ｂＦＧＦを単独の有効成分として含有する皮膚老化治療剤。
【請求項２】
皮膚の老化が皮膚の光老化であることを特徴とする請求項１に記載の皮膚老化治療剤。
【請求項３】
ｂＦＧＦの投与量が、治療の対象となる皮膚１ｃｍ２当たり０．１μｇ〜１ｍｇの量であることを特徴とする請求項１又は２に記載の皮膚老化治療剤。
【請求項４】
ｂＦＧＦを単独の有効成分として含有する皮膚瘢痕治療剤であって、治療の対象となる瘢痕の部分やその周辺部分に、皮内又は皮下投与することを特徴とする、皮膚瘢痕治療剤。
【請求項５】
瘢痕が、ケロイド、肥厚性瘢痕、瘢痕拘縮から選択される１種又は２種以上であることを特徴とする請求項４に記載の皮膚瘢痕治療剤。
【請求項６】
ｂＦＧＦの投与量が、治療の対象となる皮膚１ｃｍ２当たり０．１μｇ〜１ｍｇの量であることを特徴とする請求項４又は５に記載の皮膚瘢痕治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚の老化の予防・治療剤や、皮膚の瘢痕の治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚のしわ、たるみ・ゆるみ、色素沈着、色素脱失、菲薄化、皮膚粘弾力性の低下などの皮膚の老化は、とりわけ女性のＱＯＬ（Quality of life：生活の質）にとって大きな影響を与え、程度が著しい場合は、社会生活の障害となる場合もある。従来、皮膚の老化は、その多くが加齢によって進行するいわゆる生理的老化であると考えられていたが、近年、皮膚の老化のほとんどの部分は、紫外線への暴露による老化（いわゆる光老化）によるものであるとされている。皮膚を紫外線に暴露すると、炎症やそれに引き続く真皮組織の破壊、線維芽細胞の機能低下などの機転が働き、前述のような皮膚の老化が進行する。【０００３】
一方、皮膚の老化と同様に、ケロイド等の皮膚の瘢痕も、患者のＱＯＬに大きな影響を与え、程度や部位（顔面等）によっては、社会生活の障害となる場合がある。瘢痕は、外傷等の以下のような治癒過程で生成する。すなわち、外科手術等により生じた外傷によって皮膚が損傷すると、出血・凝固期、炎症期、増殖期などの創傷治癒機転が働き、一定期間の経過後に表皮化が終了し、その後は瘢痕が成熟する成熟期を経て瘢痕を残して治癒する。この際、治癒の遅れ、患者の年齢、身体の部位等の条件によっては、肥厚性瘢痕、擁痕拘縮、ケロイド、萎縮瘢痕皮膚などの瘢痕になることもある。多くの場合、肥厚性の変化は時間の経過とともに沈静化していくが、症例によっては発赤、掻痒、疼痛などの症状が強く、長期間、患者のＱＯＬを著しく低下させる場合がある。また、沈静化しても幅の広い瘢痕や萎縮瘢痕皮膚を残すことが多く、いずれの場合にも患者のＱＯＬを長期間低下させる場合が多かった。【０００４】
以上のように、皮膚の老化や皮膚の瘢痕は、単に、患者の整容的、機能的問題であることに止まらず、患者のＱＯＬ等の社会的な問題といえる。そこで、皮膚の老化や皮膚の瘢痕を予防・治療する試みは多くなされてきた。皮膚の老化の予防・治療に関していえば、例えば特許文献１には、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）を有効成分とすることを特徴とする皮膚化粧料を皮膚に外用することによって、しわや皮膚のたるみを治療することが開示されている。ｂＦＧＦは、Grotendorstらによって発見・同定された増殖因子の一種であり、分子量およそ１７Ｋダルトンの糖類を持たない一本鎖のポリペプチドでリン脂質親和性を有している。また、特許文献２には、繊維芽細胞成長因子と表皮成長因子とを含有する皮膚外用剤が、しわ、しみ、脱毛等を改善する効果を有していることが記載されている。しかし、前述の皮膚化粧料や皮膚外用剤のいずれも、皮膚の老化を十分に予防・治療し得るものではなかった。【０００５】
一方、皮膚の瘢痕の治療に関していえば、従来は外科的治療が基本であり、症例によっては副腎皮質ホルモン剤の外用・局所投与・含有テープの貼布、抗アレルギー剤の内服、放射線治療などの治療法が行われてきた。しかし、それらの治療法にはかなりの期間を要し、さらに全ての治療法を駆使しても、瘢痕を十分に治療することは困難であった。他方、皮膚の瘢痕の予防に関していえば、例えば特許文献３には、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）に加えてさらに塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）を創傷形成直後の皮膚に皮下投与すると、創傷部分の組織再生が促進されたり、創傷治癒後の瘢痕の形成が抑制されることが開示されている。この特許文献３には、この作用の機序として、まず、受傷の初期においてｂＦＧＦの創傷治癒作用が働き、続いて瘢痕成熟期にＨＧＦが肉芽組織の過剰な増殖および線維化の抑制に作用することが推定される旨が記載されている。しかし、瘢痕が既に形成されてしまった場合のＨＧＦの併用を伴わないｂＦＧＦの効果については未だ報告はなされていない。【０００６】
また、特許文献４には、ジンセノサイド類もしくはその代謝産物又はそれらの塩を含有してなる生体組織の病理組織学的変化をきたす器質的疾患の予防・処置又は治療用の医薬組成物又は獣医薬組成物が開示されている。この特許文献４の従来技術の部分には、「これまで塩基性線維芽細胞成長因子（basic fibroblast growth factor；ｂＦＧＦ）や血小板由来増殖因子（platelet derived growth factor；ＰＤＧＦ）などの局所塗布や局所噴霧が部分的に皮膚組織の再生・再構築を促進し、皮膚潰瘍や褥創に効果・効能を示すことが知られているが、必ずしもその効果は臨床的見地からも満足すべきものであるとは言えない（Singer, A. J. and Clark, R. A. F. New Eng. J. Med., 341, 738-746, 1999）。また前述のペプチド性因子（ｂＦＧＦ，ＰＤＧＦ）は局所塗布や局所噴霧のみ可能な医薬組成物であり、静脈内投与等の全身投与ではほとんど効果・効能を期待できない。」と記載されている。【０００７】
以上のような状況下において、十分な効果を発揮し得る皮膚老化の予防・治療剤や、皮膚瘢痕の治療剤の開発が待望されていた。【０００８】
【特許文献１】特開平５−４３４４２号公報
【特許文献２】特開２００４−０４３３１３号公報
【特許文献３】特開２００３−３４２１９４号公報
【特許文献４】特開２００２−２４９４９８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の課題は、十分な効果を発揮し得る皮膚老化の予防・治療剤や、皮膚瘢痕の治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
背景技術において前述したように、ｂＦＧＦは、局所塗布や局所噴霧のみ可能な医薬組成物であり、静脈内投与等の全身投与ではほとんど効果・効能を期待できないとされていた。すなわち、ｂＦＧＦ自体を皮内又は皮下投与しても、何らかの疾患や症状を顕著に予防したり治療し得るとは考えられていなかった。本発明者らは、このような当業者の共通認識のもとで、ｂＦＧＦを皮膚表面に外用するのではなく、敢えて皮内又は皮下投与することによって、皮膚老化に対する顕著な予防・治療効果や、皮膚瘢痕に対する顕著な治療効果を奏することを偶然見い出し、この知見に基づいて本発明を完成した。本発明における皮内投与とは、皮膚の真皮組織内に薬剤を投与（好ましくは注射投与）することを意味し、本発明における皮下投与とは、皮膚の下の脂肪組織に薬剤を投与（好ましくは注射投与）することを意味する。【００１１】
すなわち本発明は、（１）真皮組織の破壊又は線維芽細胞の機能低下に起因する皮膚のしわ、たるみ、菲薄化、皮膚粘弾力性の低下から選択される１種又は２種以上の皮膚の老化を治療するための皮膚老化治療剤であって、皮内又は皮下投与することを特徴とする、ｂＦＧＦを単独の有効成分として含有する皮膚老化治療剤や、（２）皮膚の老化が皮膚の光老化であることを特徴とする上記（１）に記載の皮膚老化治療剤や、（３）ｂＦＧＦの投与量が、治療の対象となる皮膚１ｃｍ２当たり０．１μｇ〜１ｍｇの量であることを特徴とする上記（１）又は（２）に記載の皮膚老化治療剤に関する。
【００１２】
また本発明は、（４）ｂＦＧＦを単独の有効成分として含有する皮膚瘢痕治療剤であって、治療の対象となる瘢痕の部分やその周辺部分に、皮内又は皮下投与することを特徴とする、皮膚瘢痕治療剤や、（５）瘢痕が、ケロイド、肥厚性瘢痕、瘢痕拘縮から選択される１種又は２種以上であることを特徴とする上記（４）に記載の皮膚瘢痕治療剤や、（６）ｂＦＧＦの投与量が、治療の対象となる皮膚１ｃｍ２当たり０．１μｇ〜１ｍｇの量であることを特徴とする上記（４）又は（５）に記載の皮膚瘢痕治療剤に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明の製剤の真皮内への注入の様子を、症例１の右外眼角部への注入を例に示す図である。
【図２】本発明の製剤の注入前後（治療前後）における、症例１の治療対象部位（右外眼角部）の状態を示す図である。図２左上は治療前の状態を、図２右上は治療から１か月経過後の状態を、図２左下は治療から２か月経過後の状態を、図２右下は治療から３か月経過後の状態を示す。
【図３】本発明の製剤の注入前後（治療前後）における、症例２の治療対象部位（右外眼角部と下眼瞼）の状態を示す図である。図３左上は治療前の状態を、図３右下は治療から２か月経過後の状態を示す。
【図４】本発明の製剤の注入前後（治療前後）における、症例３の治療対象部位（上口唇縁）の状態を示す図である。図４左は治療前の状態を、図４右は治療から２か月経過後の状態を示す。
【図５】本発明の製剤の注入前後（治療前後）における、症例４の治療対象部位（眉間）の状態を示す図である。図５左は治療前の状態を、図５右は治療から３か月経過後の状態を示す。
【図６】本発明の製剤の注入前後（治療前後）における、症例５の治療対象部位（右手背）の状態を示す図である。図６左は治療前の状態を、図６右は治療から３か月経過後の状態を示す。
【図７】本発明の製剤の注入前後（治療前後）における、症例６の治療対象部位（左肩部の瘢痕）の状態を示す図である。図７左は治療前の状態を、図７右は治療から３か月経過後の状態を示す。
【図８】本発明の製剤の注入前後（治療前後）における、症例７の治療対象部位（腹部の瘢痕）の状態を示す図である。図８左は治療前の状態を、図８右は治療から３か月経過後の状態を示す。
【図９】各年齢層の正常人の手背のそれぞれのＲ２平均値を示す図である。
【図１０】症例の非治療部の手背のＲ２平均値、及び、治療部の手背のＲ２平均値を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明の皮膚老化予防・治療剤としては、皮内又は皮下投与することを特徴とする、皮膚の老化を治療するための、ｂＦＧＦを含有している限り特に制限されず、また、本発明の皮膚瘢痕治療剤としては、皮内又は皮下投与することを特徴とする、皮膚の老化を治療するための、ｂＦＧＦを含有している限り特に制限されない。【００１６】
本発明において使用されるｂＦＧＦは、広く一般に知られた物質であり、市販品としても入手可能（例えば、ｂＦＧＦ市販品「トラフェルミン（遺伝子組換え）：科研製薬株式会社製」など）である。ｂＦＧＦの態様は、本発明における皮膚老化予防・治療効果や皮膚瘢痕治療効果を有している限り、天然型又は遺伝子組換え型ｂＦＧＦ、あるいはそれらの前駆体蛋白質、天然型又は遺伝子組換え型ｂＦＧＦの構成アミノ酸の１又は２以上が置換・欠失・挿入された蛋白質、天然型ヒトｂＦＧＦのｃＤＮＡに対してストリンジェントな条件下（６５℃、１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、又は０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ）でハイブリダイズし得るｃＤＮＡにコードされる蛋白質、天然型ヒトｂＦＧＦのｃＤＮＡに対して７５％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは８５％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらにより好ましくは９５％以上の相同性を有する蛋白質、のいずれでもよく、また、それぞれの蛋白質の遺伝子をコードする核酸（ｃＤＮＡまたはｃＤＮＡプラスミド；本発明においては、以下、これらを総称して「遺伝子」という。）であってもよい。遺伝子は、プラスミド単独として、又は発現ベクターとしてリポソームなどと組み合わせた複合プラスミドの形態として投与することができる。本発明において遺伝子の導入効率を高めるために使用される発現ベクターとしては、ウィルスベクターなどの任意の発現ベクターが挙げられるが、好ましくは、哺乳動物細胞用の発現ベクターである。また、本発明で使用される発現ベクターに含まれるプロモーターは、ｂＦＧＦ遺伝子に作動可能に連結しており、哺乳動物（好ましくは、ヒト）細胞において機能的なプロモーターである。このプロモーターは誘導性又は構成的であり、そして必要に応じて組織特異的であってもよい。また、プロモーターは、その種類によって遺伝子を発現する早さが異なることが知られていて、例えば、初期即時型（early immidiate）プロモーター、初期プロモーター及び後期プロモーターではその制御下にある遺伝子の発現の早さが異なる。したがって、ｂＦＧＦを遺伝子として哺乳動物に投与する場合には、適宜これらプロモーターの種類を選択することによって、そのｂＦＧＦ蛋白質の発現の早さ及び持続性をも調節することができる。【００１７】
本発明において使用されるｂＦＧＦは、常法によって適宜の製剤とすることができる。製剤としては散剤、顆粒剤などの固形製剤であってもよいが、より優れた皮膚老化への予防・治療効果や皮膚瘢痕への治療効果を得る観点からは、溶液剤、乳剤、懸濁剤などの注射用の液剤や、注射用のゲル剤とすることが好ましい。前述の液剤の製造方法としては、例えばｂＦＧＦを溶剤と混合する方法や、さらに懸濁化剤や乳化剤を混合する方法を好適に例示することができ、前述のゲル剤の製造方法としては、例えばｂＦＧＦをゼラチンと混和する方法を好適に例示することができる。以上のように、本発明におけるｂＦＧＦを製剤とする場合には、製剤上の必要に応じて、適宜の薬学的に許容される担体、例えば、賦形剤、結合剤、溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、等張化剤、緩衝剤、安定化剤、無痛化剤、防腐剤、抗酸化剤、着色剤などの任意成分を配合することができる。【００１８】
前述の溶剤としては、精製水、生理的食塩水、リンゲル液、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン、ポリエチレングリコール、マクロゴールなどの親水性溶剤や、オリーブ油、ラッカセイ油、ゴマ油、ツバキ油、ナタネ油、脂肪酸モノグリセリド、脂肪酸ジグリセリド、高級脂肪酸エステル、流動パラフィンなどの油性溶剤を例示することができ、また、前述の懸濁化剤としては、ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリソルベート類、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、アラビアゴム、ベントナイトなどを例示することができ、さらに、前述の乳化剤としては、アラビアゴム、ゼラチン、レシチン、コレステロール、卵黄、ベントナイト、ビーガム、セタノール、モノステアリン酸グリセリン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ステアリン酸などを例示することができる。【００１９】
前述の溶解補助剤としては、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ−マンニトール、トレハロース、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなどを例示することができ、また、前述の賦形剤としては、乳糖、白糖、Ｄ−ソルビトール、デンプン、α化デンプン、コーンスターチ、Ｄ−マンニトール、デキストリン、結晶セルロース、アラビアゴム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、血清アルブミンなどを例示することができ、さらに、前述の結合剤としては、α化デンプン、ショ糖、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、白糖、Ｄ−マンニトール、トレハロース、デキストリン、プルラン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコールなどを例示することができる。【００２０】
前述の等張化剤としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グルコース、フルクトース、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、サッカロース、グリセリン、尿素などを例示することができ、また、前述の緩衝剤としては、クエン酸ナトリウム、グリセリンなどを例示することができ、さらに、前述の防腐剤としては、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸などを例示することができる。前述の安定化剤としては、ポリエチレングリコール、デキストラン硫酸ナトリウム、アミノ酸、ヒト血清アルブミンなどを例示することができ、また、前述の無痛化剤としては、ブドウ糖、グルコン酸カルシウム、塩酸プロカインなどを例示することができ、さらに、前述の抗酸化剤としては、亜硫酸塩、アスコルビン酸などを例示することができる。また、前述の着色剤としては、タール系色素、カラメル、ベンガラ、二酸化チタン、エリス・アンド・エベラールド社のＦＤ＆Ｃブルー２号ならびにＦＤ＆Ｃレッド４０号などのＦＤ＆Ｃ染料などを例示することができる。【００２１】
また、本発明において使用されるｂＦＧＦは、さらに、アルギン酸、ヒアルロン酸、キチン、カルボキシメチル澱粉、カルボキシメチルセルロースなどの多糖類、ゼラチン、コラーゲン、アルブミン、フィブリンなどのタンパク質類、ポリアラニン、ポリグリコール酸、ポリプロピレンカーボネートなどの合成高分子類、リン酸三カルシウム、ハイドロキシアパタイトなどの担体を適宜に使用することによって、組織増量剤、または徐放性製剤とすることもできる。【００２２】
また、本発明の皮膚老化予防・治療剤や皮膚瘢痕治療剤には、皮膚老化予防・治療効果や皮膚瘢痕治療効果を有する又は期待されるものを、ｂＦＧＦ以外にさらに含有していてもよい。前述の効果を有する又は期待されるものとしては、ＤＰＰ（decapentaplegic）、トランスフォーミング成長因子ベータ、Ｈｈ（Hedgehog）、ｓｈｈ（ソニックHedgehog）、Ｗｎｔ（Wingless int）、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、Epidermal成長因子及びインスリン様増殖因子（ＩＬＧＦ）等のmorphogen（形原）や、血小板由来細胞増殖因子（ＰＤＧＦ；platelet derived Growth Factor）、血管内皮増殖因子（ＶＧＥＦ；Vascular Endothelial Growth Factor）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ；Hepatocyte Growth Factor）などからなる群から選択される１種類又は２種類以上のものを好適に例示することができる。また、これらのものを、本発明の皮膚老化予防・治療剤や皮膚瘢痕治療剤とは別に皮内又は皮下投与することによって、本発明の皮膚老化予防・治療剤や皮膚瘢痕治療剤と併用することもできる。【００２３】
本発明の皮膚老化予防・治療剤や本発明の皮膚瘢痕治療剤を皮内又は皮下投与する方法としては、予防や治療の対象となる老化皮膚や瘢痕の部分やその周辺部分に皮内又は皮下投与する方法である限り特に制限されない。投与量としては、特に制限されないが、予防や治療の対象となる皮膚１ｃｍ２当たり、ｂＦＧＦ（凍結乾燥）換算で通常０．１μｇ〜１ｍｇ、好ましくは１μｇ〜１００μｇ、より好ましくは１μｇ〜１０μｇとすることができる。また、投与回数としては特に制限されず、１回でも十分な効果を発揮するが、より優れた効果を持続させる観点からは、例えば１ヶ月毎等の一定期間毎に、継続的に投与することが好ましい。なお、本発明の皮膚老化予防・治療剤や本発明の皮膚瘢痕治療剤中のｂＦＧＦの濃度としては特に制限されないが、皮内又は皮下投与する剤の容量が皮膚１ｃｍ２当たり０．１〜０．３ｍｌ、好ましくは０．１５〜０．２５ｍｌとなるように適宜調節することが好ましい。また、本発明の皮膚老化予防・治療剤や本発明の皮膚瘢痕治療剤を皮内又は皮下投与する際には、より簡便かつ正確に注入する観点から、加圧注入器を用いることが好ましい。【００２４】
本発明の皮膚老化予防・治療剤の対象となる皮膚の老化としては、皮膚の老化である限り特に制限されず、加齢による生理的老化であっても、紫外線の照射を受けることによる光老化であってもよく、具体的には、皮膚のしわ、しみ、たるみ、荒れ、菲薄化、皮膚粘弾力性の低下から選択される１種又は２種以上を好適に例示することができる。また、本発明の皮膚瘢痕治療剤の対象となる皮膚の瘢痕としては、皮膚の瘢痕である限り特に制限されず、具体的には、ケロイド、肥厚性瘢痕、瘢痕拘縮から選択される１種又は２種以上を好適に例示することができる。なお、本発明における皮膚老化に対する予防効果（皮膚老化予防効果）を有するものとは、いずれかの皮膚の老化をあらかじめ低減する効果を有するものをいい、本発明における皮膚老化に対する治療効果（皮膚老化治療効果）とは、いずれかの皮膚の老化を改善する効果を有するものをいい、本発明における皮膚瘢痕に対する治療効果（皮膚瘢痕治療効果）とは、いずれかの皮膚の瘢痕を改善する効果を有するものをいう。【００２５】
また、本発明には、皮膚の老化の予防・治療剤の製造におけるｂＦＧＦの使用や、皮膚の瘢痕の治療剤の製造におけるｂＦＧＦの使用や、ｂＦＧＦを皮膚の老化の予防・治療剤に使用する方法や、ｂＦＧＦを皮膚の瘢痕の治療剤に使用する方法や、皮膚の老化の予防・治療におけるｂＦＧＦの使用や、皮膚の瘢痕の治療におけるｂＦＧＦの使用や、ｂＦＧＦを哺乳動物（特にヒト）に皮内又は皮下投与することを特徴とする皮膚老化の予防・治療方法や、ｂＦＧＦを哺乳動物（特にヒト）に皮内又は皮下投与することを特徴とする皮膚瘢痕の治療方法も含まれる。これらの使用や方法における文言の内容やその好ましい態様は、前述したとおりである。
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２６】
［本発明の製剤の製造］
注射用蒸留水５０ｍｌに、市販のｂＦＧＦの凍結乾燥品（トラフェルミン：科研製薬株式会社製）５００μｇを溶解して、１０μｇ／ｍｌのｂＦＧＦ溶液を作製した。そのｂＦＧＦ溶液を１ｍｌ毎に、滅菌されたポリプロピレン性容器に分注した後、直ちに−７０℃のフリーザーに入れて凍結保存した。後述の試験では、この凍結保存品を室温で自然融解したｂＦＧＦ溶液を、本発明の製剤（皮膚老化予防・治療剤又は皮膚瘢痕治療剤）として用いた。
【実施例２】
【００２７】
［皮膚の老化の予防・治療効果の確認試験］
１．症例１
６１歳の女性（症例１）の治療対象部位（右外眼角部）の真皮内に、本発明の製剤０．８ｍｌ（治療部位の皮膚１ｃｍ２あたり０．２ｍｌ）を注入した（図１）。この治療から１か月経過後に治療部位を観察したところ、治療前に認められた右外眼角部の数本の長めのしわや目じりの複数の細かいしわ（図２左上）が消失し、皮膚の質感も明らかに改善された（図２右上）。また、治療から２か月経過した後でもその状態が維持されているだけでなく、さらに皮膚に張りが出て目元がふっくらし、外眼角部が挙上されるなどの改善が認められ（図２左下）、治療から３ヶ月経過後にはその改善傾向のさらなる進行が認められた（図２右下）。【００２８】
２．症例２
６６歳の女性（症例２）の２か所の治療対象部位（右外眼角部と下眼瞼）の真皮内に、本発明の製剤を合計で１．６ｍｌ（治療部位の皮膚１ｃｍ２あたり０．２ｍｌ）注入した。この治療から２か月経過後に治療部位を観察したところ、治療前に認められた右外眼角部の複数の細かいしわ（図３左上）が、皮膚のはりが改善することによって軽減した（図３右下）。さらに、治療２か月経過後においては、目元がふっくらするとともに、治療前に比較して下眼瞼部の膨隆が軽微となり若返りの効果が認められた（図３右下）。【００２９】
３．症例３
５６歳の女性（症例３）の治療対象部位（上口唇縁）、より具体的には上口唇縁から下口唇と反対方向に１ｃｍ離れ、かつ、上口唇の幅全体の部分の真皮内に、本発明の製剤を合計で１．６ｍｌ（治療部位の皮膚１ｃｍ２あたり０．２ｍｌ）注入した。この治療から２か月経過後に治療部位を観察したところ、治療前に認められた上口唇における縦方向の細かい複数のしわ（図４左）が、上口唇にハリがでてふっくらすることによって軽減した（図４右）。さらに、治療２か月経過後においては、上口唇がふっくらして立体的になることで、上口唇の縦の長さが短くなっている（図４右）。【００３０】
４．症例４
６８歳の女性（症例４）の治療対象部位（眉間）の真皮内に、本発明の製剤を１．０ｍｌ（治療部位の皮膚１ｃｍ２あたり０．２ｍｌ）注入した。この治療から３か月経過後に治療部位を観察したところ、治療前に認められた眉間にある数本の深いしわ（図５左）が、治療前に比べて薄く短くなっていた（図５右）。さらに、治療前には固かった皮膚が、治療から３か月経過時には柔らかくなっており、複数の小さなしわも少なくなるとともに皮膚の質感も明らかに改善された（図５右）。【００３１】
５．症例５
３５歳の女性（症例５）の治療対象部位（右手背）の真皮内に、本発明の製剤を３．０ｍｌ（治療部位の皮膚１ｃｍ２あたり０．２ｍｌ）注入した。この治療から３か月経過後に治療部位を観察したところ、治療前には皮膚が菲薄化して血管がはっきり見えていた状態（図６左）であったが、治療後３ヶ月目には皮膚に張りが出て血管の膨隆が目立たなくなるとともに皮膚の質感も明らかに改善されていた（図６右）。
以上のように、本発明の製剤は、皮膚の老化に対して顕著な予防・治療効果を有していることが示された。
【実施例３】
【００３２】
［皮膚の瘢痕の予防・治療効果の確認試験］
６．症例６
左肩部に瘢痕（ケロイド）を有する５７歳の女性（症例６）は、今まで２０年近く、瘢痕について種々の治療を受けてきたが改善が認められていなかった。この症例６の左肩上方のケロイド部（マーキング部）（図７左）の真皮内に、本発明の製剤を１．０ｍｌ（治療部位の皮膚１ｃｍ２あたり０．２ｍｌ）注入した。この治療から３か月経過後に治療部位を観察したところ、治療前の状態（図７左）に比べて、ケロイドの平坦化が認められるとともに、赤みが薄くなっていた（図７右）。このように、本発明の製剤は、難治性の瘢痕（ケロイド）に対して、１度の施術で顕著な治療効果が認められた。【００３３】
７．症例７
腹部に３か所（上部、中央部、右下部）の瘢痕（ケロイド）を有する６６歳の女性（症例７）の治療対象部位（腹部の３か所のケロイド部）の真皮内に、本発明の製剤をそれぞれ１．０ｍｌ（治療部位の皮膚１ｃｍ２あたり０．２ｍｌ）ずつ注入した。この治療から３か月経過後に治療部位を観察したところ、治療前の状態（図８左）に比べて、上部のケロイドは平坦化し、中央部のケロイドは赤みの範囲が狭くなっている（図８右）。また右下部のケロイドでは治療前に認められた皮下の硬結と赤み（図８左）が、治療から３か月経過後には消失し、直情の皮膚が牽引されるために生じていた皮膚の陥凹も殆どなくなっている（図８右）。
以上のように、本発明の製剤は、皮膚の瘢痕に対して顕著な治療効果を有していることが示された。
【実施例４】
【００３４】
［皮膚粘弾力性の改善効果の確認試験］
本発明の製剤が皮膚粘弾力性の改善効果を有しているかどうかを確認するために、皮膚粘弾力測定装置Cutometer MPA580 (Courage + Khazaka, Germany)を用いて、症例の手背の皮膚粘弾力性の測定を行なった。具体的には以下の方法で行なった。【００３５】
症例の手背の皮膚粘弾力性の測定に先立って、皮膚に疾患の無い正常人の手背の皮膚粘弾力性と、その正常人の年齢との相関式の算出を試みた。まず、６つの年齢層（２０歳代、３０歳代、４０歳代、５０歳代、６０歳代、７０〜９０歳）についてそれぞれ１０人ずつ、合計６０人の正常人を集め、その手背（各年齢層につき２０手ずつ；合計１２０手）の皮膚粘弾力性を測定した。１手の手背につき、２回測定し、最大変位値に対する２秒後の復元値の比率（Ｒ２＝Ｕａ／Ｕｆ）を算出した。各年齢層におけるＲ２の平均値を図９に示す。図９から分かるように、正常人の手背のＲ２平均値は、２０歳代（２０〜２９）で９６．７％、３０歳台で９３．１％、４０歳台で８６．８％、５０歳台で７６．２％、６０歳台で６９．５％、７０〜９０歳で６４．３％であった。この結果に基づいて、正常人の手背のＲ２値と年齢との相関式を求めたところ、「年齢」＝１４３．５５２−「Ｒ２値」×１１５．３４７、との相関式が算出された。【００３６】
次に、症例として１９人（平均年齢５６．２歳）を集め、それぞれの一方の手背の真皮内に、本発明の製剤を１日につき５．０ｍｌ（治療部位の皮膚１ｃｍ２あたり０．２ｍｌ）注入して治療を開始した。また、各症例の他方の手背の真皮には、対照として治療を行なわずに経過を観察した。治療の開始から６ヶ月経過後に、すべての症例について、本発明の製剤を注入した側の手背（治療部）と、対照として治療を行わなかった側の手背（非治療部）の皮膚粘弾力性（Ｒ２値）の測定を行なった。治療部の手背のＲ２平均値と、非治療部の手背のＲ２平均値を図１０に示す。図１０から分かるように、非治療部（非治療）の手背のＲ２平均値は７１．６％（６１．０歳相当）であったのに対し、治療部（治療後）の手背のＲ２平均値は９０．８％（３８．８歳相当）であった。すなわち、本発明の製剤により、手背の皮膚粘弾力性が２２．２歳相当も改善されるという、極めて顕著な効果が得られた。このように、本発明の製剤によると、皮膚の若返り効果という、生理的に望ましい治療効果が得られることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明の皮膚老化予防・治療剤は、皮内又は皮下投与することにより、皮膚のしわ、しみ、たるみ、荒れ、菲薄化、皮膚粘弾力性の低下等の皮膚の老化に対し、顕著な予防・治療効果を奏する。また、本発明の皮膚瘢痕治療剤は、皮内又は皮下投与することにより、既に形成された皮膚瘢痕に対し、顕著な治療効果を奏する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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