(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式(I)の化合物、または薬学的に許容されるその塩:
0005448299.tif 000129
式中、
R1はアルキル;アルケニル;アルキニル;アリール;ヘテロシクリル; CN;C(O)NR5R6;C(O)NHR5;C(O)NH2;CO2R5;SR5;SSR5;SH;NH2;NHR5;NR5R6;またはCH2OHであり; 
R2はアルキルまたはCH(O)であり;
R3は水素、アルキル、またはC(O)R5であり;
R4は水素またはC(O)R5であり;
R5、R6およびR7はそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロシクリルであり;
R8は水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロシクリル、またはアシルであり;
R9はOHおよびR10はHであり、またはR9およびR10は一緒になり架橋二重結合を形成し;
R5およびR6は環を形成することができ、またはR6およびR7は環を形成することができ;
XはOR5、NR5R6、NHNH2、NHNHC(O)R5、OH; NHR5; NH2; またはNHNHC(O)Hであり;
R4およびXは、任意に、介在する原子と共に結合し環を形成してもよく;
R1およびR8は、任意に、共に結合されてもよく;
ここで、
アルキルおよびアルケニル基は分枝、直鎖、非置換であり、および/または置換され、および
ここで、
アリール、アルキニルおよびヘテロシクリル基は置換され、または非置換であり、
ただし、R1が非置換アリールである場合、R2がCH3ではないことを条件とする。
【請求項２】
R3がアセチルである、請求項1記載の化合物。
【請求項３】
R4が水素である、請求項1記載の化合物。
【請求項４】
XがOMeである、請求項1記載の化合物。
【請求項５】
R3がアセチル、R4が水素およびXがOMeである、請求項1記載の化合物。
【請求項６】
R2がCH(O)である、請求項1記載の化合物。
【請求項７】
R2がアルキルである、請求項1記載の化合物。
【請求項８】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000130
0005448299.tif 000131
0005448299.tif 000132
0005448299.tif 000133
【請求項９】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000134
0005448299.tif 000135
0005448299.tif 000136
0005448299.tif 000137
【請求項１０】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000138
【請求項１１】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000139
0005448299.tif 000140
0005448299.tif 000141
【請求項１２】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000142
0005448299.tif 000143
【請求項１３】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000144
【請求項１４】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000145
【請求項１５】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000146
【請求項１６】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000147
【請求項１７】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000148
【請求項１８】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000149
【請求項１９】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000150
0005448299.tif 000151
【請求項２０】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000152
0005448299.tif 000153
【請求項２１】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000154
【請求項２２】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000155
【請求項２３】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000156
0005448299.tif 000157
【請求項２４】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000158
【請求項２５】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000159
【請求項２６】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000160
【請求項２７】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000161
【請求項２８】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000162
【請求項２９】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000163
【請求項３０】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000164
【請求項３１】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000165
【請求項３２】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000166
【請求項３３】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000167
【請求項３４】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000168
【請求項３５】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000169
【請求項３６】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000170
【請求項３７】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000171
【請求項３８】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000172
0005448299.tif 000173
【請求項３９】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000174
0005448299.tif 000175
0005448299.tif 000176
【請求項４０】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000177
【請求項４１】
下記化学式を有する、請求項1記載の化合物。
0005448299.tif 000178
0005448299.tif 000179
0005448299.tif 000180
【請求項４２】
下記化学式：
0005448299.tif 000181
を有する、請求項1記載の式Ｉの2構造を含む化合物。
【請求項４３】
下記式(I)：
0005448299.tif 000182
［式中、
R1はアルキル;アルケニル;アルキニル;アリール;ヘテロシクリル;CN;C(O)NR5R6;C(O)NHR5;C(O)NH2;CO2R5;SR5;SSR5;SH;NH2;NHR5;NR5R6;NR5SO2R6;またはCH2OHであり;
R2はアルキルまたはCH(O)であり;
R3は水素、アルキル、またはC(O)R5であり;
R4は水素またはC(O)R5であり;
R5、R6およびR7はそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロシクリルであり;
R8は水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロシクリル、またはアシルであり;
R9はOHおよびR10はHであり、またはR9およびR10は一緒になり架橋二重結合を形成し;
R5およびR6は環を形成することができ、またはR6およびR7は環を形成することができ;
XはOR5、NR5R6、NHNH2、NHNHC(O)R5、OH; NHR5; NH2; またはNHNHC(O)Hであり;
R4およびXは、任意に、介在する原子と共に結合し環を形成してもよく;
R1およびR8は、任意に、共に結合されてもよく;
ここで、
アルキルおよびアルケニル基は分枝、直鎖、非置換であり、および/または置換され、および
ここで、
アリール、アルキニルおよびヘテロシクリル基は置換され、または非置換であり、
ただし、R1が非置換アリールである場合、R2がCH3ではないことを条件とする］
の誘導体生成化合物、または薬学的に許容されるその塩を調製するための方法であって、
下記式：
0005448299.tif 000183
(式中、Y1はハロゲンであり、Y2はハロゲンまたは水素である) の中間化合物をパラジウム触媒の存在下で変換して、式(I)の生成化合物を生成する段階を含む、方法。
【請求項４４】
下記式の開始材料化合物をハロゲン化剤と反応させて中間化合物を形成する段階をさらに含む、請求項４３記載の方法。
0005448299.tif 000184
【請求項４５】
ハロゲン化剤が、N-ブロモスクシンイミド、N-ヨード-スクシンイミド、および一塩化ヨウ素からなる群より選択される、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
パラジウム触媒試薬が、酢酸パラジウム、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム、およびビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)ジクロリドからなる群より選択される、請求項４４記載の方法。
【請求項４７】
請求項1記載の化合物および1または複数の薬学的賦形剤を含む、物質の薬学的組成物。
【請求項４８】
R3がアセチルである、請求項４７記載の薬学的組成物。
【請求項４９】
R4が水素である、請求項４７記載の薬学的組成物。
【請求項５０】
XがOMeである、請求項４７記載の薬学的組成物。
【請求項５１】
R3がアセチル、R4が水素およびXがOMeである、請求項４７記載の薬学的組成物。
【請求項５２】
R2がCH(O)である、請求項４７記載の薬学的組成物。
【請求項５３】
R2がアルキルである、請求項４７記載の薬学的組成物。
【請求項５４】
哺乳動物において細胞増殖を阻害するための組成物であって、治療的有効量の請求項1記載の化合物を含む組成物。
【請求項５５】
R3がアセチルである、請求項５４記載の組成物。
【請求項５６】
R4が水素である、請求項５４記載の組成物。
【請求項５７】
XがOMeである、請求項５４記載の組成物。
【請求項５８】
R3がアセチル、R4が水素およびXがOMeである、請求項５４記載の組成物。
【請求項５９】
R2がCH(O)である、請求項５４記載の組成物。
【請求項６０】
R2がアルキルである、請求項５４記載の組成物。
【請求項６１】
前記組成物が、癌を患っている哺乳動物において細胞増殖を阻害するために用いられる、請求項５４記載の組成物。
【請求項６２】
癌が、固形腫瘍、癌腫、リンパ腫、癌疾患、ホジキン病、および腫瘍性疾患からなる群より選択される、請求項６１記載の組成物。
【請求項６３】
哺乳動物がヒトである、請求項５４記載の組成物。
【請求項６４】
次の化学式：
0005448299.tif 000185
（式中、
R1はアルキル;アルケニル;アルキニル;CN;SR5;またはCF3であり;
R2はアルキルまたはCH(O)であり;
R5は水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロシクリルであり;
ここで、アルキルおよびアルケニル基は分枝鎖または直鎖である）
を有する請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６５】
次の化学式：
0005448299.tif 000186
（式中、
R1はアルキルまたはSR5であり;
R5は水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロシクリルであり;
ここで、アルキルおよびアルケニル基は分枝鎖または直鎖である）
を有する請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６６】
次の化学式：
0005448299.tif 000187
（式中、
R1はアルキルであり;
ここで、アルキル基は分枝鎖または直鎖である）
を有する請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６７】
次の化学式：
0005448299.tif 000188
（式中、
R1はアルキルであり;
ここで、アルキル基は分枝鎖または直鎖である）
を有する請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、細胞有糸分裂および増殖の強力な阻害剤であるビンカアルカロイドの誘導体、ならびに薬学的組成物、調製方法、および様々な状態の治療のための使用方法に関する。なお、本発明は2003年12月4日に出願された米国特許仮出願第60/526,912号の恩典を主張する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
細胞増殖および癌
細胞増殖の外部または内部調節の崩壊により、制御されていない細胞増殖および癌では、腫瘍形成に至ることがある。この細胞増殖制御の喪失は、多くのレベルで起きることがあり、実際、ほとんどの腫瘍において複数のレベルで起きている。これらの状況下では、腫瘍細胞はもはや自身の増殖を制御することができないが、そのような細胞は、依然として、その増殖および複製を誘導するために、正常の細胞が使用するのと同じ基本的な細胞機構を使用しなければならない。
【０００３】
有糸分裂および紡錘体形成
有糸分裂として公知の過程では、癌細胞は、全ての哺乳動物細胞のように、オリジナルの染色体の複製および分離を介して増殖する。S相でのDNAの複製後、細胞はG2相に進む。G2相中、細胞は量的に増加し続け、細胞分裂の準備をする。G2相で染色体損傷が存在すると、影響を受けた細胞が、G2相チェックポイントを活性化することにより応答し、これにより有糸分裂への進行が阻止される。DNAの損傷がない場合、または損傷の修復後、次にG2相細胞は、M相に入る。この相では、同一の染色体対が分離し、細胞の反対側に輸送される。その後、細胞は分裂し、2つの同一の娘細胞となる。
【０００４】
紡錘体形成として公知の過程では、細胞は有糸分裂紡錘体装置を利用して、染色体を分離し、引き離す。この装置は、部分的には、細胞分裂の第1段階中に形成する微小管のネットワークからなる。微小管はα-およびβ-チューブリン由来のチューブリンヘテロ二量体の構築により形成される中空管である。チューブリンを微小管にする構築は、動的過程であり、チューブリン分子が一定に付加され、各端から解離される。
【０００５】
有糸分裂および細胞増殖の阻害剤としてのビンカ化合物
一般に、ビンカ化合物は、有糸分裂および細胞増殖の阻害剤であることが知られている。特に、ビンカアルカロイドクラスの薬剤の抗増殖活性は、チューブリンに結合することができる能力によるものであることが示されている。チューブリンの微小管への構築は有糸分裂のために必須であり、ビンカのチューブリンへの結合は、細胞サイクルをM相で停止させ、その後アポトーシスに導く。例えば、低濃度では、これらの化合物は微小管形成の動力学を妨げる。より高い濃度では、これらの化合物は微小管分解を引き起こし、より高い濃度ではチューブリン準結晶の形成を引き起こす。
【０００６】
さらに、ビンカアルカロイドの抗癌活性は一般に、核分裂停止によって生じる微小管の破壊に起因すると考えられる。しかしながら、ビンカアルカロイドの細胞毒性もまた、非有糸分裂細胞において証明されている。多くの細胞過程における微小管の役割を考慮すると、ビンカアルカロイドの細胞毒性作用には、非有糸分裂微小管依存性過程の阻害からの寄与が関係することがある。
【０００７】
細胞毒性はまた、ビンカアルカロイドが脂質二重層に分配されることに起因する膜構造の変化の結果である場合がある。別のチューブリン結合化合物、タキソールを用いた研究では、細胞周期停止は、この型の薬剤によるアポトーシスへの前提条件ではないことが示されている。そのため、ビンカアルカロイドの抗癌活性は、多くの別個の微小管依存性過程およびおそらく、微小管非依存性過程の崩壊の結果である可能性がある。
【０００８】
チューブリンの微小管への構築は、動的不安定性(すなわち、微小管の両端での遅い成長と迅速な短縮の期間の切り換え)、およびトレッドミリング(すなわち、微小管の一端へのチューブリンの付加が、他端からのチューブリンの喪失と同じ速度で起きる)が関係する複雑な過程である。低濃度のビンカアルカロイドは、微小管の末端に結合し、有糸分裂の中期中、微小管の不安定性およびトレッドミリングの両方を抑制することが示されている。例えば、ビンカアルカロイドは、微小管プラス端を安定化し、微小管マイナス端を不安定化することが示されている。紡錘体はこれらの条件下で保持されるが、凝縮した染色体の異常な配列がしばしば存在する。より高濃度のビンカアルカロイドでは、紡錘体は存在せず、染色体分布は前中期細胞の染色体分布に類似する。低濃度および高濃度の両方のビンカで、分裂停止は、中期-後期チェックポイントの活性化に起因する。このチェックポイントの分子基盤は、微小管に結合していない染色体の動原体から伝達される負のシグナルである。このシグナルは後期事象の開始を生じる経路の活性化を阻止する。
【０００９】
チューブリン上にはビンカアルカロイドに対する共通の結合部位が存在するが、このクラスのメンバーは異なった挙動をする。β-チューブリン結合に対する相対的な全体親和性はビンクリスチン>ビンブラスチン>ビノレルビン>ビンフルニンであるが、チューブリンヘテロ二量体に対しては4つの全ての薬剤の親和性に有意の差はない。矛盾は、らせんポリマーに対するビンカ結合ヘテロ二量体の親和性、および薬物のリガンド非結合ポリマーへの結合の差により主に説明される。例えば、ビンフルニンにより誘導されるチューブリンスパイラルは、ビノレルビンにより誘導されるものよりも著しく小さい。
【００１０】
さらに、ビンカアルカロイドはまた、微小管動力学への効果において違いがある。ビンフルニンおよびビノレルビンは、微小管成長速度を遅くし、成長事象の平均持続期間を増大させ、短縮持続期間を減少させることにより動的不安定性を抑制する。対照的に、ビンブラスチンは短縮速度を減少させ、微小管が減衰状態で費やす時間の割合を増加させる。ビンブラスチン、ビノレルビン、およびビンフルニンは全て、トレッドミリングを抑制し、ビンブラスチンが最も大きな効力を示す。
【００１１】
インビボ特性
ビンカ誘導体は細胞毒性抗癌剤の一般クラスに入り、そのようなものとして、全ての細胞毒と同じ問題-すなわち、毒性を有する。ビンクリスチンおよびビンブラスチンは神経毒である。ビノレルビンは、構造的にはビンブラスチンおよびビンクリスチンと非常に類似し、効力がわずかに劣るだけであるが、神経毒性が低い。この毒性の変化は、これらの化合物のチューブリンに対する結合親和性の試験だけでは説明できない。腫瘍細胞における微小管動力学の変化に対する感度の増加から生じると仮定されているが、上記のように、これらの化合物は微妙に異なる効果を有することが示されている。それはまた、薬物の細胞取り込みの変化に起因するであろう。ビンフルニンはインビトロではそれほど強力ではないが、インビボでは活性であり、これはその優れた細胞取り込みに起因する。ビンカアルカロイドの効能特性にもかなり著しい違いが存在する。ビンクリスチンは、白血病およびリンパ腫を含む血液悪性腫瘍の治療において広く用いられている。小児固形腫瘍、および過去には小細胞肺ガンにおいても広く使用されている。ビンブラスチンは、睾丸癌に治癒をもたらす併用療法の重要な成分である。ビノレルビンはかなり異なり、乳癌および非小細胞肺ガンにおいて主に使用されている。
【００１２】
薬理学的特性および治療特性が改善された新規ビンカ誘導体、そのようなビンカ誘導体化合物を調製するための改良法、対応する薬学的組成物、ならびに使用法が必要である。
【００１３】
本発明はこれらの目的を達成することを対象とする。
【発明の開示】
【００１４】
発明の概要
本発明は下記式(I)の化合物、または薬学的に許容されるその塩に関し:
0005448299.tif 000002
式中、
R1はアルキル;アルケニル;アルキニル;アリール;ヘテロシクリル;ハロゲン;CN;CH(O);COR5;C(O)NHR5;C(O)NR5R6;C(S)NH2;C(O)NHNH2;C(O)NR5NH2;C(O)NR5NHR6;C(O)NR5NR6R7;C(O)NHNHR5;C(O)NHNR5R6;C(O)NHOH;SO2NHNH2;SO2NR5NH2;SO2NR5NHR6;SO2NR5NR6R7;SO2NHNHR5;SO2NHNR5R6;CO2R5;SR5;SSR5;SO2NHR5;SO2NR5R6;B(OR5)2;CF3;SH;SO2NH2;NH2;NHR5;NHSO2R5;NR5R6;NHCOR5;NR5COR6;NR5SO2R6であり;または、
R2はアルキルまたはCH(O)であり;
R3は水素、アルキル、またはC(O)R5であり;
R4は水素またはC(O)R5であり;
R5、R6およびR7はそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロシクリルであり;
R8は水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロシクリル、アシル、またはチオアルキルであり;
R9はOHおよびR10はHであり、またはR9およびR10は一緒になり架橋二重結合を形成し、
R5およびR6は、R6およびR7のように環を形成することができ、
XはOR5、NR5R6、NHNH2、NHNHC(O)R5、OH; NHR5; NH2; またはNHNHC(O)Hであり;
R4およびXは介在する原子と共に結合し環を形成してもよく;
R1およびR8は共に結合されてもよく;
ここで、
アルキルおよびアルケニル基は分枝、直鎖、非置換であってもよく、および/または置換されてもよく、および
ここで、
アリール、アルキニルおよびヘテロシクリル基は置換され、または非置換であり、
ただし、R8がH、R9がOH、およびR10がHである場合、R1はBr、I、OHまたはOMeではないことを条件とする。
より好ましくは、
ビンクリスチンおよびビンブラスチンのように、R9はOH、R10はHであり、
ビンクリスチンおよびビンブラスチンのように、R3はAcであり、
ビンクリスチンおよびビンブラスチンのように、R4はHであり、
ビンクリスチンおよびビンブラスチンのように、XはMeであり、
R1はアルキル;アルケニル;アルキニル;アリール;ヘテロシクリル;ハロゲン;CN;CH(O);COR5;C(O)NHR5;CO2R5;SR5;SSR5;SH;NH2;NHR5;NR5R6である。
最も好ましくは、
R1はアルキル;アルケニル;アルキニル;ハロゲン;CN;SR5;SSR5;SH;NH2;NHR5;NR5R6であり、ここで、R5およびR6は環を形成する。
【００１５】
本発明の別の局面は、下記式(I)の誘導体生成化合物、または薬学的に許容されるその塩を調製するための方法に関し:
0005448299.tif 000003
式中、
R1はアルキル;アルケニル;アルキニル;アリール;ヘテロシクリル;CN;CH(O);COR5;C(O)NR5R6;C(O)NHR5;C(O)NH2;C(O)NHNH2;C(O)NR5NH2;C(O)NR5NHR6;C(O)NR5NR6R7;C(O)NHNHR5;C(O)NHNR5R6;C(O)NHOH;SO2NHNH2;SO2NR5NH2;SO2NR5NHR6;SO2NR5NR6R7;SO2NHNHR5;SO2NHNR5R6;CO2R5;SR5;SSR5;SO2NHR5;SO2NR5R6;B(OR5)2;CF3;SH;SO2NH2;NH2;NHR5;NHCOR5;NHSO2R5;NR5R6;NHCOR5;NR5COR6;またはNR5SO2R6であり;
R2はアルキルまたはCH(O)であり;
R3は水素、アルキル、またはC(O)R5であり;
R4は水素またはC(O)R5であり;
R5、R6およびR7はそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロシクリルであり;
R8は水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロシクリル、アシル、またはチオアルキルであり;
R9はOHおよびR10はHであり、またはR9およびR10は一緒になり架橋二重結合を形成し、
R5およびR6は環を形成することができ、またはR6およびR7は環を形成することができ;
XはOR5、NR5R6、NHNH2、NHNHC(O)R5、OH; NHR5; NH2; またはNHNHC(O)Hであり;
R4およびXは介在する原子と共に結合し環を形成してもよく;
R1およびR8は共に結合されてもよく;
ここで、
アルキルおよびアルケニル基は分枝、直鎖、非置換であってもよく、および/または置換されてもよく、および
ここで、
アリール、アルキニルおよびヘテロシクリル基は置換され、または非置換であり、
ただし、R8がH、R9がOH、およびR10がHである場合、R1はBr、I、OHまたはOMeではないことを条件とする。この方法はまた、式(I)の生成化合物を生成するのに有効な条件下、下記式の中間化合物を変換する段階を含み:
0005448299.tif 000004
式中、Y1はハロゲンであり、Y2はハロゲンまたは水素である。
【００１６】
本発明の別の局面は、下記式(I)の誘導体生成化合物、または薬学的に許容されるその塩を調製するための方法に関し:
0005448299.tif 000005
式中、
R1はハロゲンであり;
R2はアルキルまたはCH(O)であり;
R3は水素、アルキル、またはC(O)R5であり;
R4は水素またはC(O)R5であり;
R5、R6およびR7はそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロシクリルであり;
R8は水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロシクリル、アシル、またはチオアルキルであり;
R9はOHおよびR10はHであり、またはR9およびR10は一緒になり架橋二重結合を形成し;
R5およびR6は環を形成することができ、またはR6およびR7は環を形成することができ;
XはOR5、NR5R6、NHNH2、NHNHC(O)R5、OH; NHR5; NH2; またはNHNHC(O)Hであり;
R4およびXは介在する原子と共に結合し環を形成してもよく;
R1およびR8は共に結合されてもよく;
ここで、
アルキルおよびアルケニル基は分枝、直鎖、非置換であってもよく、および/または置換されてもよく、および
ここで、
アリール、アルキニルおよびヘテロシクリル基は置換され、または非置換であり、
ただし、R8がH、R9がOH、およびR10がHである場合、R1はBr、I、OHまたはOMeではないことを条件とする。この方法はまた、誘導体生成化合物を形成するのに有効な条件下で、下記式の開始材料をハロゲン化する段階を含む。
0005448299.tif 000006
【００１７】
本発明はまた、治療的有効量の式(I)の化合物を哺乳動物に投与する段階を含む、哺乳動物において細胞増殖を阻害するための方法に関する。
【００１８】
本発明はまた、治療的有効量の式(I)の化合物を哺乳動物に投与する段階を含む、哺乳動物において状態を治療するための方法に関する。状態は、細菌感染、アレルギー、心疾患、AIDS、ヒトTリンパ球指向性ウイルスI感染、ヒトヘルペスウイルス3、ヒトヘルペスウイルス4、ヒトパピローマウイルス、糖尿病、関節リウマチ、アルツハイマー病、炎症、関節炎、喘息、マラリア、自己免疫疾患、湿疹、紅斑性狼瘡、乾癬、リウマチ性疾患、シェーグレン症候群、およびウイルス感染とすることができる。
【００１９】
本発明はまた、式(I)の化合物および1または複数の薬学的賦形剤を含む、物質の薬学的組成物に関する。
【００２０】
発明の詳細な説明
本発明は、ビンカアルカロイドの新規誘導体、対応する薬物組成物、調製方法、および様々な疾患の治療のための使用方法に関する。
【００２１】
一般に、本発明の化合物のビンカファミリーの新規化合物は、ビンクリスチン、ビンブラスチン、アンヒドロビンブラスチン、およびアンヒドロビンクリスチンなどの誘導体を含む。本発明によれば、そのような誘導体化合物は、本明細書で示されるように式(I)の化学構造により表される。
【００２２】
特に、本発明は、下記式(I)の化合物、または薬学的に許容されるその塩に関し:
0005448299.tif 000007
式中、
R1はアルキル;アルケニル;アルキニル;アリール;ヘテロシクリル;ハロゲン;CN;CH(O);COR5;C(O)NR5R6;C(O)NHR5;C(O)NH2;C(O)NHNH2;C(O)NR5NH2;C(O)NR5NHR6;C(O)NR5NR6R7;C(O)NHNHR5;C(O)NHNR5R6;C(O)NHOH;SO2NHNH2;SO2NR5NH2;SO2NR5NHR6;SO2NR5NR6R7;SO2NHNHR5;SO2NHNR5R6;CO2R5;SR5;SSR5;SO2NHR5;SO2NR5R6;B(OR5)2;CF3;SH;SO2NH2;NH2;NHR5;NHSO2R5;NR5R6;NHCOR5;NR5COR6;またはNR5SO2R6であり;
R2はアルキルまたはCH(O)であり;
R3は水素、アルキル、またはC(O)R5であり;
R4は水素またはC(O)R5であり;
R5、R6およびR7はそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロシクリルであり;
R8は水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロシクリル、アシル、またはチオアルキルであり;
R9はOHおよびR10はHであり、またはR9およびR10は一緒になり架橋二重結合を形成し、
R5およびR6は環を形成することができ、またはR6およびR7は環を形成することができ;
XはOR5、NR5R6、NHNH2、NHNHC(O)R5、OH; NHR5; NH2; またはNHNHC(O)Hであり;
R4およびXは介在する原子と共に結合し環を形成してもよく;
ここで、
アルキルおよびアルケニル基は分枝、直鎖、非置換であってもよく、および/または置換されてもよく、および
ここで、
アリール、アルキニルおよびヘテロシクリル基は置換され、または非置換であり、
ただし、R8がH、R9がOH、およびR10がHである場合、R1はBr、I、OHまたはOMeではないことを条件とする。
【００２３】
1つの態様では、本発明はR3がアセチルである化合物に関する。
【００２４】
別の態様では、本発明はR4が水素である化合物に関する。
【００２５】
別の態様では、本発明はXがOMeである化合物に関する。
【００２６】
別の態様では、本発明はR3がアセチル、R4が水素、およびXがOMeである化合物に関する。
【００２７】
別の態様では、本発明はR2がCH(O)である化合物に関する。
【００２８】
別の態様では、本発明はR2がアルキルである化合物に関する。
【００２９】
式(I)の化合物の代表的な例を下記表1で説明する。
【００３０】
（表1）式(I)の化合物
0005448299.tif 000008
0005448299.tif 000009
0005448299.tif 000010
0005448299.tif 000011
0005448299.tif 000012
0005448299.tif 000013
0005448299.tif 000014
0005448299.tif 000015
0005448299.tif 000016
0005448299.tif 000017
0005448299.tif 000018
0005448299.tif 000019
0005448299.tif 000020
0005448299.tif 000021
0005448299.tif 000022
0005448299.tif 000023
【００３１】
本発明のさらに別の態様では、R1基で共に連結された式(I)の2構造を含む複合体が形成される。この場合、各R1は-S-である。
【００３２】
式(I)の化合物を調製するための合成反応スキームを下記で記述する。
【００３３】
式(I)の化合物を調製するための合成スキームを下記スキーム1に示す。ビンカアルカロイドをN-ブロモスクシンイミドまたはN-ヨードスクシンイミドのいずれかで処理し、12'位および13'位にハロゲンを導入する。その後、Pd媒介カップリングを使用し、これらの位置に他の官能基を導入する。この方法を使用して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロシクリル、アシル、シアノ、アミノ、およびホルミル基を導入し、およびスルフィドを形成させることができる。これらの官能基の各々はその後、有機合成の標準法に従い、さらに誘導体化させることができる。
0005448299.tif 000024
【００３４】
上記方法を実施する際には、様々な触媒を利用してもよく、例えば、塩化パラジウム、酢酸パラジウム、トリス(ジベンジリデンアセトン)パラジウム(0)、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)、ジクロロビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)、ベンジルクロロビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)、または[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)などである。
【００３５】
下記で説明する標準薬理学試験手順で得られる結果に基づき、本発明の化合物は、哺乳動物に有効量の本発明の化合物を投与することにより哺乳動物における細胞増殖を阻害するのに有益である。
【００３６】
特に、そのようなビンカ化合物誘導体は、抗腫瘍薬として有益である。より具体的には、本発明の化合物は、腫瘍細胞の増殖を阻害し、腫瘍細胞の細胞死を引き起こし、腫瘍細胞を根絶するのに有益である。本発明の化合物はそのため、固形腫瘍(例えば、肉腫)、癌腫(例えば、星状細胞腫)、リンパ腫(例えば、成人T細胞リンパ腫)、異なる癌疾患型(例えば、前立腺癌、乳癌、小細胞肺ガン、卵巣癌)、ホジキン病、および他の腫瘍性疾患状態(例えば、白血病、特に成人T細胞白血病)を治療するのに有益である。
【００３７】
ビンカ化合物はチューブリン阻害剤であることが知られているので、本発明の化合物はまた、下記状態の治療に有益であると予測される:細菌感染;アレルギー;心疾患;AIDS;ヒトTリンパ球指向性ウイルス1感染;ヒトヘルペスウイルス3;ヒトヘルペスウイルス4;ヒトパピローマウイルス;糖尿病;関節リウマチ;アルツハイマー病;炎症;関節炎;喘息;マラリア;自己免疫疾患;湿疹;紅斑性狼瘡;乾癬;リウマチ性疾患;シェーグレン症候群;およびウイルス感染。
【００３８】
本発明のビンカ誘導体化合物は、上記で示されるように単独で投与することができ、または適した、薬学的に許容される担体、アジュバントおよび/または賦形剤と共に薬学的組成物中で生物学的に活性な成分として利用することができる。
【００３９】
本発明によれば、化合物および/または対応する組成物は、異なる投与経路を介して導入することができ、経口、非経口、静脈内、腹腔内、鼻内注入、または、鼻、喉および気管支などの粘膜への塗布が挙げられる。
【００４０】
本発明の活性化合物は、例えば、不活性希釈剤と、または吸収可能な食用担体と共に経口投与してもよく、または本発明の活性化合物は、ハードもしくはソフトシェルカプセル中に封入してもよく、または圧縮して錠剤としてもよい。
【００４１】
投与される化合物の量は、患者および投与方法によって変動し、任意の有効な量とすることができる。投与される化合物の量は、広範囲にわたり変動する可能性があり、単位用量において、一日あたり約0.01mg/kg〜20mg/kgの患者の体重の有効量が提供され、所望の効果が達成される。そのような治療上有益な組成物中の活性化合物の量は、適した用量が得られるようなものである。本発明による好ましい組成物は、経口用量単位が約1mg〜250mgの間の活性化合物を含むように調製される。
【００４２】
例えば、治療のための経口投与では、これらの活性化合物を賦形剤と共に組み入れ、錠剤、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、などの形態で使用してもよい。そのような組成物および調製物は、少なくとも0.1%の活性化合物を含むべきである。これらの組成物中の化合物の割合は、当然、変動させてもよく、単位重量の約2%〜約60%の間であると好都合である。
【００４３】
錠剤、カプセル、などはまた、トラガカントゴム、アラビアゴム、トウモロコシデンプン、またはゼラチンなどの結合剤;リン酸二カルシウムなどの賦形剤;トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギニン酸などの崩壊剤;ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤;およびショ糖、乳糖、またはサッカリンなどの甘味剤を含んでもよい。用量単位形態がカプセルである場合、上記型の材料の他に、液体担体、例えば脂肪油を含んでもよい。
【００４４】
様々な他の材料がコーティングとして、または用量単位の物理的形態を修飾するために存在してもよい。例えば、錠剤はシェラック、糖、または両方でコートされてもよい。
【００４５】
これらの活性化合物および/または薬学的組成物はまた非経口投与されてもよい。これらの活性化合物および/または組成物の溶液は水中で調製することができる。分散液はまた、油中のグリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物中で調製することができる。
【００４６】
例示的な油は、動物、植物、または合成起源の油、例えば、ピーナツ油、大豆油、または鉱物油である。一般的に、水、生理食塩水、水溶性デキストロースおよび関連糖の溶液、ならびにグリコール、例えばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールが、特に注射溶液に対しては好ましい液体担体である。普通の貯蔵および使用条件下では、これらの調製物は保存薬を含み、微生物の増殖が阻止される。
【００４７】
注射用に適した薬学的形態としては、滅菌水溶液または分散液、および滅菌注射溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が挙げられる。全ての場合において、本発明の薬学的形態は滅菌されてなければならず、容易に注入できる程度まで流動性がなければならない。製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、微生物、例えば細菌および真菌の汚染作用に抵抗するように保存されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール)、適したそれらの混合物、および植物油を含む溶媒または分散媒質とすることができる。
【００４８】
本発明の化合物および/または薬学的組成物はまた、エアロゾルの形態で気道に直接投与してもよい。エアロゾルとして使用するために、溶液または懸濁液形態の本発明の化合物を加圧エアロゾル容器内に、適した噴射剤、例えば、プロパン、ブタン、またはイソブタンのような炭化水素噴射剤と共に、従来のアジュバントと共にパッケージしてもよい。本発明の材料はまた、噴霧器またはアトマイザなどで、非加圧形態で投与してもよい。
【００４９】
本発明の化合物のいくつかは薬学的に許容される酸付加塩および/または塩基塩の形態とすることができる。これらの形態の塩はすべて、本発明の範囲内にある。
【００５０】
本発明の化合物の薬学的に許容される酸付加塩としては、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、フッ化水素酸、亜リン酸のような非毒性無機酸に由来する塩、ならびに、脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル-置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、アルカン二酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などの非毒性有機酸に由来する塩が挙げられる。このような塩は、従って、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、プロピオン酸塩、カプロン酸塩、イソ酪酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、フタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、などを含む。アミノ酸の塩、例えばアルギニン酸塩、グルコン酸塩、およびガラクツロン酸塩もまた企図される(例えば、Berge S.M. et al., 「Pharmaceutical Salts」, Journal of Pharmaceutical Science, 66:1-19(1997)を参照のこと、参照により全体が本明細書に組み入れられる)。
【００５１】
塩基性化合物の酸付加塩は、遊離塩基形態を十分な量の所望の酸と接触させ、従来の様式で塩を生成させることにより調製する。
【００５２】
薬学的に許容される塩基付加塩は、金属またはアミン、例えばアルカリ土類金属または有機アミンと共に形成される。カチオンとして使用される金属の例はナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどである。適したアミンの例は、N,N-ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、エチレンジアニリン、N-メチルグルカミン、およびプロカインである(例えば、Berge S.M. et al.,「Pharmaceutical Salts」, Journal of Pharmaceutical Science, 66:1-19(1997)を参照のこと、参照により全体が本明細書に組み入れられる)。
【００５３】
酸性化合物の塩基付加塩は、遊離酸形態を十分な量の所望の塩基と接触させ、従来の様式で塩を生成させることにより調製する。
【００５４】
本発明の一定の化合物は、非溶媒和形態ならびに水和形態を含む溶媒和形態で存在することができる。一般に、水和形態を含む溶媒和形態は、非溶媒和形態と同等であり、本発明の範囲内に含まれるものとする。
【００５５】
本発明は、他の化学療法薬および放射線療法を含む他の公知の癌治療と組み合わせて使用することができる。
【００５６】
実施例
下記実施例は、本発明の態様を説明するために提供したものであり、その範囲を限定するものではない。
【００５７】
下記実験手順で記述した生成物の分光分析は、当技術分野で公知の従来の、または標準の科学的器具類を用いて実施した。プロトンNMRスペクトルは、Bruker AC 300分光計により300MHzで、またはBruker 500MHz分光計により500MHzで取得し、内標準としてのテトラメチルシランを参照した。質量スペクトルは、Shimadzu QP-5000またはPE Sciex API 150質量分析計により取得した。
【００５８】
実施例1- 12'-ブロモビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
窒素下の、トリフルオロ酢酸(50mL)に溶解した硫酸ビンブラスチン(0.5g、0.55mmol)の溶液を室温で20分間撹拌した。フラスコを箔で包み、反応混合物を暗中で保持し、トリフルオロ酢酸(25mL)に溶解したN-ブロモスクシンイミド(103mg、0.58mmol)の溶液を滴下した。18時間撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮し、ジクロロメタンで希釈し、氷水に注ぎ入れた。水層を3度ジクロロメタンで洗浄した。混合物のpHを3% NH3(aq)で11〜12に調整した。有機層を分離し、水層をジクロロメタン(3×)で抽出し、混合した有機層を水で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー(シリカ(ヘキサン中の10%トリエチルアミンで溶離することにより非活性化)、EtOAc)により精製すると、一臭化物および二臭化物の混合物が得られた(0.33g、65%)。逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると12'-ブロモビンブラスチンがトリフルオロアセテートとして得られた(0.42g、69%)。
0005448299.tif 000025
【００５９】
実施例2- 12'-ヨードビンブラスチンの調製
トリフルオロ酢酸/塩化メチレン(1:1、16mL)に溶解したN-ヨードスクシンイミド(254mg、1.13mmol)の溶液を、氷水ジャケット付き滴下漏斗(addition funnel)中で約0℃まで冷却し、その後、-15℃の、硫酸水素ビンブラスチン(1.08g、1.19mmol)を含むトリフルオロ酢酸/塩化メチレン(1:1、32mL)に滴下した。温度を内部温度計でモニタし、添加過程中(45分)、-15±3℃に維持した。添加が完了した後、反応混合物を10分間撹拌し、その後、注意深く、10%亜硫酸ナトリウム/飽和炭酸水素ナトリウム/クロロホルム(1:2:2、200mL)の急速撹拌混合物に注ぎ入れた。その後、固体炭酸水素ナトリウムを少量ずつ、気体の発生が止まるまで添加した。その後、溶液をクロロホルム(3×50mL)で抽出し、混合した有機抽出物を10%の亜硫酸ナトリウム(50mL)および塩性溶液(50mL)で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。溶媒を真空除去すると、12'-ヨードビンブラスチン(1.19g、定量的)が黄褐色泡沫として得られ、これをさらに精製せずに次に進めた。
0005448299.tif 000026
【００６０】
実施例3- 12'-ブロモビンクリスチンの調製
実施例1で記述した手順に従い、ビンクリスチンから12'-ブロモビンクリスチンを調製した。収率(1.41g、72%)。
0005448299.tif 000027
【００６１】
実施例4- 12'-ヨードビンクリスチンの調製
トリフルオロ酢酸/塩化メチレン(1:1、20mL)に溶解したN-ヨードスクシンイミド(160mg、0.711mmol)の溶液を、氷水ジャケット付き滴下漏斗中で約0℃まで冷却し、その後、-15℃の、硫酸水素ビンブラスチン(725mg、0.785mmol)を含むトリフルオロ酢酸/塩化メチレン(1:1、30mL)に滴下した。温度を内部温度計でモニタし、添加過程中(30分)、-15±3℃に維持した。反応は、HPLC(C18、アセトニトリル、H2O、0.5%トリフルオロ酢酸)により判定すると、>97%完了した。追加のN-ヨードスクシンイミド(8.0mg、0.036mmol)を添加し、10分間撹拌した。HPLCにより、開始材料が残っていないことが示された。反応混合物を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で処理し、さらに、NaOH(3N)を用いてpH=8となるまで中和させた。溶液を塩化メチレン(150mL)で希釈した。有機層を水および塩性溶液で洗浄し、その後、Na2SO4上で乾燥させた。溶媒を真空除去すると、12'-ヨードビンクリスチン(0.68g、91%)が黄褐色粉末として得られ、これをさらに精製せずに次に進めた。
0005448299.tif 000028
【００６２】
実施例5- 12'-フェニルビンクリスチンの調製
1,4-ジオキサン(10mL)に溶解した12'-ブロモビンクリスチン(231mg、0.256mmol)、炭酸セシウム(0.5g、1.5mmol)およびフェニルボロン酸(62.5mg、0.51mmol)の混合物をアルゴンで脱酸素化した。[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(21mg、0.026mmol)を添加し、混合物を再び、アルゴンパージにより脱酸素化し、その後、60℃で24時間加熱した。冷却後、反応混合物をショートシリカカラムを通して濾過し、ジクロロメタン、その後EtOAcで洗浄し、濾液を減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー(シリカ、EtOAc、その後、99:1 EtOAc/EtOH)により残渣を精製すると、12'-フェニルビンクリスチンが得られた(185mg、80%)。
0005448299.tif 000029
【００６３】
実施例6- 12'-フェニルビンブラスチンの調製
実施例5で記述した手順に従い、12'-ブロモビンブラスチンおよびフェニルボロン酸から12'-フェニルビンブラスチンを調製した。収率(45mg、19%)。
0005448299.tif 000030
【００６４】
実施例7- 12'-(4-メトキシフェニル)ビンクリスチントリフルオロアセテートの調製
実施例5で記述した手順に従い、12'-ブロモビンクリスチンおよび4-メトキシフェニルボロン酸から、12'-(4-メトキシフェニル)ビンクリスチンのトリフルオロアセテートを調製した。逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(4-メトキシフェニル)ビンクリスチントリフルオロアセテートが得られた(135mg、87%)。
0005448299.tif 000031
【００６５】
実施例8- 12'-(4-メトキシフェニル)ビンブラスチンの調製
実施例5で記述した手順に従い、12'-ブロモビンブラスチンおよび4-メトキシフェニルボロン酸から、12'-(4-メトキシフェニル)ビンブラスチンを調製した(39mg、26%)。
0005448299.tif 000032
【００６６】
実施例9- 12'-(3-メトキシフェニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
ジオキサン(1mL)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(45mg、0.05mmol)の溶液に、3-メトキシフェニルボロン酸(15mg、0.1mmol)およびCs2CO3(78mg、0.24mmol)を添加した。混合物をアルゴンパージで脱酸素化し、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(5mg、0.006mmol)を添加した。得られた混合物を再び脱酸素化し、その後、60℃まで4時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、CH2Cl2で希釈し、珪藻土を通して濾過した。濾液を水および塩性溶液で洗浄し、その後乾燥させた(MgSO4)。カラムクロマトグラフィー(シリカ、9:1 CH2Cl2/MeOH)、その後分取TLC(シリカ、7:3 EtOAc/MeOH)により精製すると、12'-(3-メトキシフェニル)ビンブラスチンが得られた(18.4mg、41%)。この材料をCH2Cl2(1mL)に溶解し、一滴のトリフルオロ酢酸で処理した。この溶液を蒸発させると、12'-(3-メトキシフェニル)ビンブラスチントリフルオロアセテート(22mg、定量的)が得られた。
0005448299.tif 000033
【００６７】
実施例10- 12'-(4-フルオロフェニル)ビンブラスチンの調製
実施例5で記述した手順に従い、12'-ブロモビンブラスチンおよび4-フルオロフェニルボロン酸から、12'-(4-フルオロフェニル)ビンブラスチンを調製した(63mg、43%)。
0005448299.tif 000034
【００６８】
実施例11- 12'-(3-フルオロフェニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
ジオキサン(1mL)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(45mg、0.05mmol)の溶液に、3-フルオロフェニルボロン酸(14mg、0.1mmol)およびCs2CO3(80mg、0.25mmol)を添加した。混合物をアルゴンパージで脱酸素化し、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(5mg、0.006mmol)を添加した。得られた混合物を再び脱酸素化し、その後、60℃まで4時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、CH2Cl2で希釈し、珪藻土を通して濾過した。濾液を水および塩性溶液で洗浄し、その後乾燥させた(MgSO4)。カラムクロマトグラフィー(シリカ、9:1 CH2Cl2/MeOH)に続いて、分取TLC(シリカゲル、7:3 EtOAc/MeOH)により精製すると、12'-(3-フルオロフェニル)ビンブラスチンが得られた(9.1mg、20%)。この材料をCH2Cl2(1mL)に溶解し、一滴のトリフルオロ酢酸で処理した。この溶液を蒸発させると、12'-(3-フルオロフェニル)ビンブラスチントリフルオロアセテート(11mg、80%)が得られた。
0005448299.tif 000035
【００６９】
実施例12- 12'-(3-ヒドロキシフェニル)ビンブラスチンの調製
ジオキサン(1mL)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(39mg、0.040mmol)の溶液に、3-ヒドロキシフェニルボロン酸(12mg、0.080mmol)およびCs2CO3(68mg、0.21mmol)を添加した。混合物をアルゴンで脱酸素化し、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(4mg、0.0040mmol)を添加した。得られた混合物を再びアルゴンで脱酸素化し、その後、70℃で6時間および80℃で一晩中加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、CH2Cl2で希釈し、珪藻土を通して濾過した。濾液を水および塩性溶液で洗浄し、その後乾燥させた。溶媒を除去した後、残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカ、9:1 CH2Cl2/MeOH)に続いて、分取TLC(シリカ、7:3 EtOAc/MeOH)により精製すると、12-(3-ヒドロキシフェニル)ビンブラスチンが得られた(4.2mg、12%)。
0005448299.tif 000036
【００７０】
実施例13- 12'-(3-ピリジル)ビンブラスチンの調製
実施例5で記述した手順に従い、12'-ブロモビンブラスチンおよび3-ピリジルボロン酸から、12'-(3-ピリジル)ビンブラスチンを調製した(26mg、16%)。
0005448299.tif 000037
【００７１】
実施例14- 12'-(3-チエニル)ビンブラスチンの調製
実施例5で記述した手順に従い、12'-ブロモビンブラスチンおよび3-チエニルボロン酸から、12'-(3-チエニル)ビンブラスチンを調製し、水酸化アンモニウムを用いる処理により遊離塩基に変換させた(45mg、23%)。
0005448299.tif 000038
【００７２】
実施例15- 12'-(2-チアゾリル)ビンブラスチンの調製
THF(3mL)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(298mg、0.26mmol)の溶液をアルゴンパージで脱酸素化した。テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(24mg、0.026mmol)および臭化2-チアゾリル亜鉛(1.68mL、1.06mmol)を添加し、混合物を一晩中60℃で加熱した。反応混合物を塩性溶液で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を混合し、減圧下で濃縮した。逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%濃縮水酸化アンモニウム)により精製すると12'-(2-チアゾリル)ビンブラスチンが得られた(32.8mg、14%)。
0005448299.tif 000039
【００７３】
実施例16-12'-(トリメチルシリルエチニル)ビンブラスチンの調製
トルエン(5mL)およびトリエチルアミン(3mL)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(310mg、0.33mmol)の溶液をアルゴンパージで脱酸素化し、ヨウ化銅(I)(2.5mg、0.013mmol)およびジクロロビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)(10mg)を添加し、混合物を再び脱酸素化した。トリメチルアセチレン(0.06mL、0.42mmol)を添加し、混合物を24時間55℃で撹拌した。冷却後、反応混合物をメタノールで希釈し、珪藻土を通して濾過し、約30mLまで濃縮し、再び濾過し、その後濃縮乾固した。混合物を1N HClで希釈し、クロロホルムで抽出した。有機溶液を分離し、減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー(シリカ、97:3 CHCl3/MeOH)により精製すると、12'-(トリメチルシリルエチニル)ビンブラスチンが得られた(28mg、定量的)。
0005448299.tif 000040
【００７４】
実施例17- 12'-エチニルビンブラスチンの調製
メタノール(1.8mL)に溶解した12'-(トリメチルシリルエチニル)ビンブラスチン(0.088g、0.097mol)の溶液に、炭酸カリウム(1.3mg、0.01mmol)を添加し、混合物を室温で4時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、ジクロロメタンで希釈し、水および飽和重炭酸ナトリウムで洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、減圧下で濃縮した。逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%濃水酸化アンモニウム)により精製すると、12'-(エチニル)ビンブラスチンが得られた(24.4mg、30%)。
0005448299.tif 000041
【００７５】
実施例18- 12'-プロピニルビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
臭化プロピニルマグネシウム(0.5MのTHF溶液、0.30mL、0.15mmol)を臭化亜鉛(0.5MのTHF溶液、0.30mL、0.15mmol)を含む無水1,4-ジオキサン(2mL)に窒素下で添加した。10分後、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(6.1mg、0.008mmol)を、その後、12'-ヨードビンブラスチン(71mg、0.076mmol)を含む無水1,4-ジオキサン(1mL)を添加した。反応混合物を45℃で45分加熱し、飽和NaHCO3(5mL)を添加することによりクエンチした。クロロホルムで抽出した後(3×8mL)、混合した有機抽出物を塩性溶液(5mL)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-プロピニルビンブラスチントリフルオロアセテートが、凍結乾燥後白色粉末として得られた(38.6mg、47%)。
0005448299.tif 000042
【００７６】
実施例19- 12'-(2-フェニルエチニル)ビンブラスチンの調製
反応を室温で実施したことを除き、実施例16で記述した手順に従い、12'-ヨードビンブラスチンおよびフェニルアセチレンから12'-(2-フェニルエチニル)ビンブラスチンを調製した(23mg、17%)。
0005448299.tif 000043
【００７７】
実施例20- 12'-(3-メチルブチニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
12'-ヨードビンブラスチン(52.7mg、0.0566mmol)、ヨウ化銅(I)(1.6mg、0.0084mmol)、ジクロロビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)(3.9mg、0.0056mmol)、トルエン(1.2mL)、およびトリエチルアミン(0.8mL)を、再シール可能なガラス試験管中で混合し、アルゴンを、溶液を通して10分間バブリングさせた。3-メチルブト-1-イン(22.9mg、0.33mmol)を添加し、試験管を密封し、混合物を55℃で1.5時間加熱した。飽和NaHCO3水溶液(5mL)を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した(3×5mL)。混合した有機抽出物を塩性溶液(5mL)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(3-メチルブト-1-イン)ビンブラスチントリフルオロアセテートが、凍結乾燥後白色粉末として得られた(24.0mg、40%)。
0005448299.tif 000044
【００７８】
実施例21- 12'-(3-メチルブチニル)ビンクリスチンの調製
THF(3mL)に溶解した12'-ヨードビンクリスチン(210mg、0.22mmol)およびトリエチルアミン(3mL)の溶液をアルゴンで20分間脱酸素化した。ジクロロビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)(9mg、0.01mmol)およびヨウ化銅(I)を添加し、反応混合物をアルゴンで10分間再び脱ガスし、3-メチル-1-ブチン(0.05mL)を添加した。反応混合物を60℃で一晩中加熱し、室温まで冷却し、1N HClを添加することによりクエンチした。反応混合物を塩化メチレンで抽出し、有機層を乾燥させ(硫酸ナトリウム)、濾過し、減圧下で濃縮すると、淡橙色固体が得られた。フラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカ、97:3〜95:%のCH2Cl2/MeOH)により精製すると、12'-(3-メチル-ブチニル)ビンクリスチンが橙色固体として得られた(22mg、11%)。
0005448299.tif 000045
【００７９】
実施例22- 12'-(ヘキシニル)ビンクリスチンの調製
実施例16で記述した手順に従い、12'-ヨードビンブラスチンから12'-(ヘキシニル)ビンクリスチンを調製した(12mg、44%)。
0005448299.tif 000046
【００８０】
実施例23- 12'-(ヘキシニル)ビンブラスチンの調製
実施例16で記述した手順に従い、12'-ヨードビンブラスチンから12'-(ヘキシニル)ビンブラスチンを調製した(19mg、14%)。
0005448299.tif 000047
【００８１】
実施例24- 12'-(N,N-ジメチルアミノプロピニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
12'-ヨードビンブラスチン(52.8mg、0.057mmol)、ヨウ化銅(I)(1.6mg、0.0086mmol)、ジクロロビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)(4.0mg、0.0057mmol)、トルエン(1.2mL)、およびトリエチルアミン(0.8mL)を、再シール可能なガラス試験管中で混合し、アルゴンを、溶液を通して10分間バブリングさせた。1-ジメチルアミノ-2-プロピン(36.7μL、0.33mmol)を添加し、試験管を密封し、混合物を55℃で1.5時間加熱した。飽和NaHCO3水溶液(5mL)を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した(3×5mL)。混合した有機抽出物を塩性溶液(5mL)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(N,N-ジメチルアミノプロピニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートが、凍結乾燥後白色固体として得られた(22.4mg、33%)。
0005448299.tif 000048
【００８２】
実施例25- 12'-ビニルビンブラスチンの調製
DME(0.5mL)および水(0.2mL)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(39mg、0.042mmol)の溶液をアルゴンで3分間脱酸素化した。反応容器に、2,4,6-トリビニルシクロトリボロキサンピリジン錯体(11mg、0.46mmol)、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(6.3mg、0.050mmol)、K2CO3(6.4mg、0.046mmol)を入れ、混合物を80℃〜90℃まで加熱した。2時間後、ESI質量スペクトル分析により、反応が完了したことが示された。反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(8mL)で希釈し、EtOAc(2×2mL)で抽出した。混合した抽出物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮すると褐色固体が得られ、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカ、[CHCl3/MeOH/NH4OH(40:18:2)]/CH2Cl2、1:99〜10:90)により精製すると、12'-ビニルビンブラスチンが白色固体として得られた(14mg、31%)。
0005448299.tif 000049
【００８３】
実施例26- 12'-(2-エトキシカルボニルビニル)ビンブラスチンの調製
トルエン(2mL)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(0.248g、0.26mmol)の溶液をアルゴンで脱酸素化した。酢酸パラジウム(3mg、0.013mmol)、トリフェニルホスフィン(32mg、0.12mmol)、およびトリエチルアミン(0.05mL、0.36mmol)を添加し、混合物を再び脱酸素化した。70℃まで加熱した後、アクリル酸エチル(0.058mL、0.53mmol)を添加し、混合物を一晩中撹拌した。その後、混合物を室温まで冷却し、ジクロロメタンで希釈し、珪藻土を通して濾過し、減圧下で濃縮した。酢酸エチルを添加し、混合物を、珪藻土を通して濾過し、減圧下で濃縮した。逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%濃水酸化アンモニウム)により精製すると、12'-(2-エトキシカルボニルビニル)ビンブラスチンが得られた(24.3mg、定量的)。
0005448299.tif 000050
【００８４】
実施例27- 12'-(2-tert-ブトキシカルボニルビニル)ビンブラスチンの調製
トルエン(2mL)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(114mg、0.122mmol)の溶液に、酢酸パラジウム(2mg、0.009mmol)、トリフェニルホスフィン(3.1mg、0.005mmol)、トリエチルアミン(24μL、0.172mmol)を添加し、反応混合物をアルゴンパージで脱酸素化した。tert-ブチルアクリレート(36μL、0.246mmol)を添加し、反応混合物を70℃まで加熱した。1時間後、HPLC分析により、12'-ヨードビンブラスチンが存在していることが示され、そのため、12'-ヨードビンブラスチン以外の全ての試薬をさらに1当量添加し、反応混合物を70℃までさらに17時間加熱した。反応物を室温まで冷却し、混合物をCH2Cl2(15mL)で希釈し、その後、珪藻土を通して濾過した。濾液を濃縮乾燥し、得られた残渣を9:1の酢酸エチル/メタノールで倍散し、固体を濾過により除去した。濾液を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカ、9:1のEtOAc/MeOH)により精製すると橙色固体が得られ、これをさらに逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%濃水酸化アンモニウム)により精製すると、12'-(2-tert-ブトキシカルボニルビニル)ビンブラスチンが黄褐色固体として得られた(13mg、11%)。
0005448299.tif 000051
【００８５】
実施例28- 12'-(2-カルボキシビニル)ビンブラスチンの調製
CH2Cl2(1mL)に溶解した12'-(2-tert-ブトキシカルボニルビニル)ビンブラスチン(17mg、0.018mmol)の混合物を室温でトリフルオロ酢酸(45μL、0.069mmol)により処理した。3.5時間後、HPLCにより反応が完了したことが示された。反応を飽和重炭酸ナトリウム水溶液でクエンチし、CH2Cl2で希釈し、層を分離した。水相をCH2Cl2で抽出した(2×10mL)。混合した有機物をMgSO4上で乾燥させ、濾過し濃縮すると、12'-(2-カルボキシビニル)ビンブラスチンが褐色固体として得られた(9.4mg、59%)。
0005448299.tif 000052
【００８６】
実施例29- 12'-(3-オキソへクス-1-エニル)ビンブラスチンの調製
実施例26で記述した手順に従い12'-ヨードビンブラスチンおよびヘキセン-3-オンから12'-(3-オキソへクス-1-エニル)ビンブラスチンを調製した。収率(90mg、42%)。
0005448299.tif 000053
【００８７】
実施例30- 12'-(2-シアノビニル)ビンブラスチンの調製
実施例26で記述した手順に従い12'-ヨードビンブラスチンおよびアクリロニトリルから12'-(2-シアノビニル)ビンブラスチンを調製した。収率(10mg、4%)。
0005448299.tif 000054
【００８８】
実施例31- 12'-(3-tert-ブトキシカルボニルアミノプロペニル)ビンブラスチンの調製
実施例26で記述した手順に従い12'-ヨードビンブラスチンおよびtert-ブチル-N-アリルカーボネートから12'-(3-tert-ブトキシカルボニルアミノプロペニル)ビンブラスチンを調製した。収率(24mg、9%)。
0005448299.tif 000055
【００８９】
実施例32-12'-(4-ヒドロキシブチルスルファニル)ビンブラスチンの調製
化合物12'-ヨードビンブラスチン(200mg、0.214mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(19.6mg、0.0214mmol)および1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(47.5mg、0.0856mmol)を含むフラスコをアルゴンでフラッシングした。トリエチルアミン(47μL、0.428mmol)、N-メチルピロリジン(4mL)および4-メルカプトブタン-1-オール(44μL、0.428mmol)をシリンジにより添加し、混合物を60℃で2日間加熱した。冷却後、混合物をジクロロメタンで希釈し、塩性溶液で洗浄した。水相をジクロロメタンで抽出し、混合した有機層を減圧下で濃縮し、高真空下で乾燥させた。逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%濃水酸化アンモニウム)により精製すると、12'-(4-ヒドロキシブチルスルファニル)ビンブラスチンが得られた(0.030g、15%)。
0005448299.tif 000056
【００９０】
実施例33-12'-(4-ヒドロキシプロピルスルファニル)ビンブラスチンの調製
実施例33で記述した手順に従い12'-ヨードビンブラスチンおよび3-メルカプトプロパン-1-オールから12'-(4-ヒドロキシプロピルスルファニル)ビンブラスチンを調製した。収率(16mg、8%)。
0005448299.tif 000057
【００９１】
実施例34- 12'-(3-メタンスルホニルオキシプロピルスルファニル)ビンブラスチンの調製
ジクロロメタン(2.0mL)に溶解した12'-(3-ヒドロキシプロピルチオ)ビンブラスチン(77mg、0.085mmol)およびトリエチルアミン(24μL、0.17mmol)の混合物を0℃の塩化メタンスルホニル(7.6μL、0.097mmol)で処理し、反応物を室温で4時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、混合物を飽和NaHCO3および塩性溶液で洗浄した。有機層をMgSO4上で乾燥させ、濃縮すると橙色固体が得られた。カラムクロマトグラフィー(シリカゲル、CH2Cl2/CH3OH、39:1)により精製すると、12'-(3-メタンスルホニルオキシプロピルスルファニル)ビンブラスチンがオフホワイトの固体として得られた(40mg、48%)。
0005448299.tif 000058
【００９２】
実施例35- 12'-(2-ヒドロキシエチルスルファニル)ビンブラスチンの調製
実施例33で記述した手順に従い12'-ヨードビンブラスチンおよび2-メルカプトエタノールから12'-(2-ヒドロキシエチルスルファニル)ビンブラスチンをオフホワイトの粉末として調製した。収率(33mg、17%)。
0005448299.tif 000059
【００９３】
実施例36- 12'-(4-メトキシベンジルスルファニル)ビンブラスチンの調製
NMP(4mL)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(200mg、0.214mmol)、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(48mg、0.09mmol)、およびトリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(20mg、0.02mmol)の混合物をアルゴンで10分間脱酸素化した。トリエチルアミン(47μL)およびチオール(66mg、0.428mmol)を添加し、反応混合物を60℃まで72時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、塩性溶液と塩化メチレンとの間で分配させた。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。得られた残渣をクロマトグラフィー(シリカ、9:1 CH2Cl2/MeOH)により精製し、その後さらに逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%濃水酸化アンモニウム)により精製すると、12'-(4-メトキシベンジルスルファニル)ビンブラスチンが白色固体として得られた(3mg、1%)。
0005448299.tif 000060
【００９４】
実施例37- 12'-(2-クロロベンジルスルファニル)ビンクリスチンの調製
NMP(3mL)に溶解した11'-ヨードビンクリスチン(60mg、0.063mmol)の溶液をアルゴンで10分間脱酸素化した。反応容器に、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(20mg、0.035mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(9mg、0.009mmol)およびEt3N(13mg、0.13mmol)の混合物を入れた。混合物を10分間室温で撹拌し;2-クロロベンゼンメタン-チオール(20mg、0.126mmol)を添加し、その後、混合物を60℃で一晩中撹拌した。混合物を室温まで冷却し、塩化メチレン(100mL)で希釈し、飽和NH4Cl水溶液(3×10mL)および塩性溶液(3×10mL)で洗浄した。有機層を乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカル、10:1 CH2Cl2/MeOH)、その後逆相クロマトグラフィー(C-18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12mgの白色固体が得られた。この固体をEtOAc 10mLに溶解し、固体NaHCO3 50mgと共に1時間撹拌した。混合物を濾過し、濃縮すると、12'-(2-クロロベンジルスルファニル)ビンクリスチンがオフホワイトの固体として得られた(9.7mg、15%):mp 168℃-170℃。
0005448299.tif 000061
【００９５】
実施例38- 12'-(2-フルオロベンジルスルファニル)ビンクリスチントリフルオロアセテートの調製
NMP(1.5mL)に溶解した12'-ヨードビンクリスチン(50mg、0.053mmol)の溶液をアルゴンで10分間脱酸素化した。反応容器に、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(20mg、0.035mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(10mg、0.011mmol)およびEt3N(13mg、0.13mmol)の混合物を入れた。混合物を20分間室温で撹拌し、2-フルオロフェニルメタン-チオール(20mg、0.14mmol)を添加し、その後、混合物を60℃で一晩中撹拌した。混合物を室温まで冷却し、EtOAc(100mL)で希釈し、飽和NH4Cl水溶液(3×10mL)および塩性溶液(3×10mL)で洗浄した。有機層を乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー(シリカ、4:1 CH2Cl2/MeOH)、その後逆相クロマトグラフィー(C-18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(2-フルオロベンジルスルファニル)ビンクリスチンが淡褐色固体として得られた(8mg、15%)。
0005448299.tif 000062
【００９６】
実施例39- 12'-(プロピルスルファニル)ビンブラスチンの調製
NMP(2mL)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(200mg、0.214mmol)、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(48mg、0.09mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(20mg、0.02mmol)の撹拌溶液をアルゴンで10分間脱酸素化し、続いて、トリエチルアミン(47μL、0.428mmol)および1-プロパンチオール(39μL、0.428mmol)を添加した。反応混合物を60℃まで5時間加熱し、室温まで冷却し、その後、塩化メチレンと塩性溶液との間で分配した。有機層を減圧下で濃縮し、残渣をクロマトグラフィー(シリカ、85:15 MeOH/CH2Cl2)、その後、さらに逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%濃水酸化アンモニウム)により精製すると、12'-(プロピルスルファニル)ビンブラスチンが黄褐色固体として得られた(36mg、19%)。
0005448299.tif 000063
【００９７】
実施例40- 12'-(エチルスルファニル)ビンクリスチンL-タートレートの調製
12'-ヨードビンクリスチン(650mg、0.684mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(94mg、0.10mmol)、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(227mg、0.410mmol)、1-メチル-2-ピロリジノン(6mL)、およびトリエチルアミン(0.23mL)を、再シール可能なガラス試験管中で混合した。アルゴンを、溶液を通して10分間バブリングさせ、その後、エタンチオール(0.25mL、3.4mmol)を添加し、試験管を密封し、混合物を60℃まで加熱した。4時間後、さらにエタンチオール(0.25mL、3.4mmol)を添加し、混合物を60℃まで一晩中加熱した。冷却後、混合物を酢酸エチル(250mL)で希釈し、飽和NaH4Cl水溶液(3×20mL)、水、塩性溶液で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(エチルスルファニル)ビンクリスチントリフルオロアセテートが、凍結乾燥後白色粉末として得られた(130mg、17%)。遊離塩基に変換した後、2当量のL-酒石酸で処理すると、12'-(エチルスルファニル)ビンクリスチンがL-タートレートとして得られた。
0005448299.tif 000064
【００９８】
実施例41- 12'-(エチルスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
12'-ヨードビンブラスチン(100mg、0.10mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(14mg、0.015mmol)、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(33mg、0.060mmol)、1-メチル-2-ピロリジノン(1mL)、およびトリエチルアミン(34μL)を、再シール可能なガラス試験管中で混合した。アルゴンを、溶液を通して10分間バブリングさせ、その後、エタンチオール(37μL、0.50mmol)を添加し、試験管を密封し、混合物を60℃まで加熱した。4時間後、さらにエタンチオール(75μL、1.0mmol)を添加し、混合物を60℃まで一晩中加熱した。冷却後、混合物を酢酸エチル(100mL)で希釈し、飽和NaH4Cl水溶液(3×15mL)、水、塩性溶液で洗浄し、その後乾燥させ(Na2SO4)、真空下で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(エチルスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートが、凍結乾燥後白色粉末として得られた(10mg、11%)。
0005448299.tif 000065
【００９９】
実施例42- 12'-(メチルスルファニル)ビンクリスチントリフルオロアセテートの調製
12'-ヨードビンクリスチン(85mg、0.089mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(12mg、0.013mmol)、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(30mg、0.053mmol)、1-メチル-2-ピロリジノン(1mL)、およびトリエチルアミン(31μL)を、再シール可能なガラス試験管中で混合した。アルゴンを、溶液を通して10分間バブリングさせ、メタンチオール(4NのNMP溶液0.22mL、0.89mmol)を添加し、試験管を密封し、混合物を65℃まで加熱した。3時間後、さらにメタンチオール(4NのNMP溶液0.22mL、0.89mmol)を添加し、混合物を65℃まで一晩中加熱した。冷却後、混合物を酢酸エチル(100mL)で希釈し、飽和NaH4Cl水溶液(3×15mL)、水、塩性溶液で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、真空下で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(メチルスルファニル)ビンクリスチントリフルオロアセテートが、凍結乾燥後白色粉末として得られた(9mg、9%)。
0005448299.tif 000066
【０１００】
実施例43- 12'-(メチルスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
12'-ヨードビンブラスチン(45mg、0.048mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(9.0mg、0.0096mmol)、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(21mg、0.038mmol)、1-メチル-2-ピロリジノン(0.5mL)、およびトリエチルアミン(17μL)を、再シール可能なガラス試験管中で混合した。アルゴンを、溶液を通して10分間バブリングさせ、その後、メタンチオールを10秒間バブリングさせ、試験管を密封し、混合物を60℃まで5時間加熱した。冷却後、混合物を酢酸エチル(75mL)で希釈し、飽和NaH4Cl水溶液(3×15mL)、水、塩性溶液で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、真空下で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(メチルスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートが、凍結乾燥後白色粉末として得られた(3.5mg、7%)。
0005448299.tif 000067
【０１０１】
実施例44- 12'-(tert-ブトキシカルボニルメチルスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
tert-ブチルチオグリコレート(160mg、1.08mmol)、12'-ヨードビンブラスチン(101mg、0.108mmol)、トリエチルアミン(218mg、2.15mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(9.8mg、0.011mmol)および1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(24mg、0.043mmol)を、N-メチル-2-ピロリジノン(2.5mL)中で混合し、溶液を通して30分間アルゴンをバブリングすることにより、反応混合物を脱酸素化した。混合物を60℃で2時間加熱し、その後、酢酸エチル(20mL)で希釈した。有機溶液を水(5mL)、飽和NaHCO3(5mL)および塩性溶液(5mL)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、真空下で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(tert-ブトキシカルボニルメチルスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートが、凍結乾燥後白色粉末として得られた(55mg、43%)。
0005448299.tif 000068
【０１０２】
実施例45- 12'-(カルボキシメチルスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
12'-tert-ブトキシカルボニルメチルスルファニルビンブラスチン(26mg、0.022mmol)を塩化メチレン(1mL)に入れ、0℃まで冷却した。トリフルオロ酢酸(2mL)を滴下し、反応混合物を0℃で20分間、その後室温で30分間撹拌した。反応混合物を真空で蒸発乾固させ、残渣を脱イオン水(1mL)中に入れ、凍結乾燥させると12'-(カルボキシメチルスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートが白色粉末として得られた(25mg、定量的収率)。
0005448299.tif 000069
【０１０３】
実施例46- 12'-(メチルアミノカルボニルメチルスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
12'-tert-ブトキシカルボニルメチルスルファニルビンブラスチン(19mg、0.016mmol)を塩化メチレン(1mL)に入れ、0℃まで冷却した。トリフルオロ酢酸(2mL)を滴下し、反応混合物を0℃で20分間、その後室温で30分間撹拌した。反応混合物を真空で蒸発乾固させ、DMF(1mL)に入れ、その後HATU(9mg、0.024mmol)、メチルアミン(40%水溶液、14μL、0.16mmol)、およびトリエチルアミン(22mL、0.16mmol)を添加した。反応混合物を窒素下24時間撹拌し、その後、溶媒を真空除去した。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(メチルアミノカルボニルメチルスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートが、凍結乾燥後白色粉末として得られた(1.6mg、9%)。
0005448299.tif 000070
【０１０４】
実施例47- 12'-(メトキシカルボニルエチルスルファニル)ビンクリスチン
12'-ヨードビンクリスチン(200mg、0.210mmol)、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(47mg、0.085mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(21mg、0.023mmol)、トリエチルアミン(0.050mL、0.36mmol)、および3-メルカプトプロピオン酸メチル(0.050mL、0.45mmol)を、N-メチルピロリジノン(4mL)中で混合し、アルゴン下16時間、60℃で加熱した。冷却後、混合物を塩化メチレン(10mL)で希釈し、塩性溶液(10mL)で洗浄した。水層を塩化メチレンで抽出し(2×10mL)、混合した有機層を乾燥させ(Na2SO4)、真空下で蒸発乾固させた。残渣を酢酸エチル(50mL)に溶解し、水(3×20mL)および塩性溶液(20mL)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。逆相クロマトグラフィー(C18、メタノール/水)により精製すると、12'-(メトキシカルボニルエチルスルファニル)ビンクリスチンが、オフホワイト粉末として得られた(29.7mg、15%)。
0005448299.tif 000071
【０１０５】
実施例48- 12'-(2-(N,N-ジメチルアミノ)エチルスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテート
12'-ヨードビンブラスチン(47mg、0.05mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(4.6mg、0.005mmol)、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(11mg、0.02mmol)、トリエチルアミン(28μL、0.2mmol)および1-メチル-2-ピロリジノン(2mL)の混合物に、2-(ジメチルアミノ)エタンチオール塩酸塩(14.2mg、0.1mmol)を添加した。添加が完了した後、反応混合物をアルゴンパージで脱酸素化し、その後6時間70℃まで加熱した。12'-ヨードビンブラスチンを除く、さらに0.5当量の全ての試薬を室温で反応混合物に添加した。得られた混合物を再び脱酸素化し、その後、さらに20時間70℃まで加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、水で希釈し、CH2Cl2(2×20mL)で抽出した。混合した有機物を水および塩性溶液で洗浄し、その後、乾燥させた(MgSO4)。フラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカ、97:2:1 CH2Cl2/CH3OH/Et3N)、その後分取TLC(シリカ、2:3 CH2Cl2/CH3OH)により精製すると、12'-(2-ジメチルアミノエチルスルファニル)ビンブラスチンが黄褐色固体として得られた(15mg、33%)。固体をCH2Cl2(1mL)に溶解し、一滴のトリフルオロ酢酸で処理した。溶液を蒸発させると、12'-(2-(N,N-ジメチルアミノ)エチルスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(15mg、73%)。
0005448299.tif 000072
【０１０６】
実施例49- 12'-[3-(モルホリン-4-イル)プロピルスルファニル]ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
THF(2mL)に溶解した12'-(3-メシルオキシプロピルスルファニル)ビンブラスチン(75mg、0.077mmol)およびモルホリン(33.4μL、0.38mmol)の混合物を加熱して、24時間還流させ、その後、室温まで冷却した。反応混合物を水で希釈し、CH2Cl2(2×20mL)で抽出した。混合した有機物を水および塩性溶液で洗浄し、その後、乾燥させた(MgSO4)。カラムクロマトグラフィー(シリカ、9:1 CH2Cl2/CH3OH)、その後分取TLC(シリカ、4:1 CH2Cl2/CH3OH)により精製すると、12'-[3-(モルホリン-4-イルプロピルスルファニル]ビンブラスチンが固体として得られた(29mg、39%)。固体をCH2Cl2(1mL)に溶解し、一滴のトリフルオロ酢酸で処理した。溶液を蒸発させると、12'-[3-(モルホリン-4-イル)プロピルスルファニル]ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(33.4mg、87%)。
0005448299.tif 000073
【０１０７】
実施例50- 12'-[3-(ピペリジン-1-イル)プロピルスルファニル]ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
THF(3mL)に溶解した12'-(3-メシルオキシプロピルスルファニル)ビンブラスチン(100mg、0.102mmol)およびピペリジン(51μL、0.51mmol)の混合物を加熱して、72時間還流させ、その後、室温まで冷却した。反応混合物を水で希釈し、CH2Cl2(2×20mL)で抽出した。混合した有機物を水および塩性溶液で洗浄し、その後、乾燥させた(MgSO4)。分取TLC(シリカ、4:1 アセトン/CH3OH)、その後イオン交換クロマトグラフィー(Isolute SCX-2カラム、3:1 MeOH/NH4OH)により精製すると、12'-[3-(ピペリジン-1-イル)プロピルスルファニル]ビンブラスチンが固体として得られた(37mg、37%)。固体をCH2Cl2(1mL)に溶解し、一滴のトリフルオロ酢酸で処理した。溶液を蒸発させると、12'-[3-(ピペリジン-1-イル)プロピルスルファニル]ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(45mg、90%)。
0005448299.tif 000074
【０１０８】
実施例51- 12'-[2-ピロリジン-1-イル-エチルスルファニル]ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
12'-ヨードビンブラスチン(176mg、0.17mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(15mg、0.016mmol)、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(18mg、0.030mmol)、トリエチルアミン(81μL、0.59mmol)および1-メチル-2-ピロリジノン(2mL)の混合物に、2-ピロリジン-1-イル-エタンチオール(28mg、0.50mmol)を添加した。添加が完了した後、反応混合物をアルゴンパージで脱酸素化し、その後16時間70℃まで加熱した。室温まで冷却した後、反応混合物を水で希釈し、EtOAcで抽出した(2×20mL)。混合した有機物をH2Oおよび塩性溶液で洗浄し、その後、乾燥し(Na2SO4)、濃縮させた。逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(2-ピロリジン-1-イル-エチルスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(33mg、21%)。
0005448299.tif 000075
【０１０９】
実施例52- 12'-[2-(アセチルアミノ)エチルスルファニル]ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
12'-ヨードビンブラスチン(39mg、0.04mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(3.6mg、0.004mmol)、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(9.1mg、0.016mmol)、トリエチルアミン(12μL、0.08mmol)および1-メチル-2-ピロリジノン(1mL)の混合物に、N-(2-メルカプトエチル)アセトアミド(9μL、0.08mmol)を添加した。添加が完了した後、反応混合物をアルゴンパージで脱酸素化し、その後2時間70℃まで加熱し、その後、室温まで冷却した。反応混合物を水で希釈し、CH2Cl2(2×20mL)で抽出した。混合した有機物をH2Oおよび塩性溶液で洗浄し、その後、乾燥させた(MgSO4)。分取TLC(シリカ、92.5:7.5 CH2Cl2/CH3OH)で精製すると、橙色固体が得られた。固体をさらに、分取TLC(シリカゲル、CH3OH/アセトン、4:1)で精製すると、12'-[2-(アセチルアミノ)エチルスルファニル]ビンブラスチンがオフホワイト固体として得られた(19mg、50%)。固体をCH2Cl2(1mL)に溶解し、一滴のトリフルオロ酢酸で処理した。溶液を蒸発させると、12'-[2-アセチルアミノエチルスルファニル]ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(19mg、80%)。
0005448299.tif 000076
【０１１０】
実施例53- 12'-チオビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
12'-ヨードビンブラスチン(60mg、0.064mmol)、チオトリイソプロピルシリルカリウム塩(44mg、0.192mmol)、およびテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(15mg、0.012mmol)をベンゼン/テトラヒドロフラン(4mL、3:1)中で混合し、30分間、溶液を通してアルゴンをバブリングすることにより反応混合物を脱酸素化した。混合物を65℃で1.5時間加熱し、その後、酢酸エチル(15mL)で希釈した。有機溶液を水(5mL)、飽和NaHCO3水溶液(5mL)および塩性溶液(5mL)で洗浄し、MgSO4上で乾燥し、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-チオビンブラスチントリフルオロアセテートが、凍結乾燥後白色粉末として得られた(18.9mg、28%)。
0005448299.tif 000077
【０１１１】
実施例54- 12'-(3-ヒドロキシフェニルスルファニル)ビンクリスチン
N-メチルピロリジン(4mL)に溶解した12'-ヨードビンクリスチン(158mg、0.17mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(18mg、0.02mmol)、トリエチルアミン(0.05mL)の溶液を、アルゴンで10分間脱酸素化し、その後、3-ヒドロキシチオフェノール(0.05mL)を添加し、反応混合物を60℃まで一晩中加熱した。この時間後、さらに、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(15mg)を添加し、さらに24時間加熱し続けた。反応混合物を室温まで冷却し、CH2Cl2で希釈した。有機層を塩性溶液で洗浄し、乾燥し(硫酸ナトリウム)、濾過し、減圧下で濃縮すると、暗褐色固体が得られた。フラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカ、94.5:5:0.5 CH2Cl2/MeOH/NH4OH)、その後、逆相クロマトグラフィー(C18、MeOH/水)により精製すると、12'-(3-ヒドロキシフェニルスルフィド)ビンクリスチンがオフホワイト固体として得られた(2.8mg、2%)。
0005448299.tif 000078
【０１１２】
実施例55- 12'-(2-ヒドロキシフェニルスルファニル)ビンブラスチンの調製
NMP(3.2mL)に溶解したヨードビンブラスチン(200mg、0.214mmol)、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(48mg、0.09mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(20mg、0.02mmol)、およびトリエチルアミン(47μL、0.43mmol)の溶液をアルゴンで10分間脱酸素化し、その後、2-ヒドロキシチオフェノール(44.3μL、0.428mmol)を添加し、反応混合物を60℃まで22時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、その後、塩化メチレンと塩性溶液との間で分配させた。有機層を減圧下で濃縮し、得られた残渣をクロマトグラフィー(シリカ、85:15 CH2Cl2/MeOH)により精製した。逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%濃水酸化アンモニウム)によりさらに精製すると、12'-(2-ヒドロキシフェニルスルファニル)ビンブラスチンが白色固体として得られた(28mg、8%)。
0005448299.tif 000079
【０１１３】
実施例56- 12'-(2-クロロフェニルスルファニル)ビンクリスチントリフルオロアセテートの調製
NMP(1.5mL)に溶解した12'-ヨードビンクリスチン(60mg、0.05mmol)の溶液をアルゴンで10分間脱酸素化した。反応容器に、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(20mg、0.035mmol)、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(9mg、0.009mmol)およびEt3N(13mg、0.13mmol)を入れた。混合物を20分間室温で撹拌し、2-クロロベンゼン-チオール(15mg、0.105mmol)を添加し、その後、60℃で一晩中撹拌した。混合物を室温まで冷却し、酢酸エチル(100mL)で希釈し、飽和NH4Cl水溶液(3×10mL)および塩性溶液(3×10mL)で洗浄した。有機層を乾燥させ(Na2SO4)、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、10:1 CH2Cl2/MeOH)、その後逆相クロマトグラフィー(C-18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、11'-(2-クロロフェニルスルファニル)ビンクリスチントリフルオロアセテートが得られた(18mg、35%)。
0005448299.tif 000080
【０１１４】
実施例57- 12'-(メチルジスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
12'-スルファニルビンブラスチン(26mg、0.031mmol)およびN-(メチルチオ)フタルイミド(12mg、0.062mmol)を、窒素下、室温で、ベンゼン(1ml)中で混合した。45分間撹拌した後、溶媒を真空除去し、残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(メチルジスルファニル)ビンブラスチンがトリフルオロ酢酸塩として得られた(11.9mg、35%)。凍結乾燥すると白色粉末となった。
0005448299.tif 000081
【０１１５】
実施例58- 12'-(イソプロピルジスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
12'-スルファニルビンブラスチン(17mg、0.020mmol)およびN-イソプロピルスルフェニルヒドラゾジカルボン酸ジエチル(15mg、0.060mmol)を、窒素下、ベンゼン(1ml)中で混合し、室温で5時間、その後50℃で一晩中撹拌した。溶媒を真空除去し、Absolute SCX-2カラムを通して、最初にメタノール、その後10%水性水酸化アンモニウム/メタノールを用いて残渣をフラッシングすることにより、非塩基性不純物を除去した。塩基性メタノール画分を真空で蒸発させ、残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、ジ(12'-ビンブラスチン)ジスルフィドトリフルオロアセテート(11.5mg、51%)および12'-(イソプロピルジスルファニル)ビンブラスチン(3.0mg、13%)が凍結乾燥後白色粉末として得られた。12'-イソプロピルジスルファニルビンブラスチンのトリフルオロアセテートに対するデータは下記の通りである。
0005448299.tif 000082
【０１１６】
実施例59-12'-(tert-ブチルジスルファニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
12'-スルファニルビンブラスチン(19mg、0.023mmol)およびN-tert-ブチルスルフェニルヒドラゾジカルボン酸ジエチル(12mg、0.045mmol)を、窒素下、ベンゼン(1ml)中で混合し、50℃で一晩中撹拌した。追加のN-tert-ブチルスルフェニルヒドラゾジカルボン酸ジエチル(30mg、0.113mmol)を添加し、反応混合物を50℃で4日間維持した。溶媒を真空除去し、Absolute SCX-2カラムを通して、最初にメタノール、その後10%水性水酸化アンモニウム/メタノールを用いて残渣をフラッシングすることにより、非塩基性不純物を除去した。塩基性メタノール画分を真空で蒸発させ、残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、ジ(12'-ビンブラスチン)ジスルフィドが三酢酸塩(6.2mg、33%)として、12'-(tert-ブチルジスルファニル)ビンブラスチンがトリフルオロ酢酸塩(1.9mg、7.3%)として得られた。12'-(tert-ブチルジスルファニル)ビンブラスチンのトリフルオロアセテートに対するデータは下記の通りである。
0005448299.tif 000083
【０１１７】
実施例60- ジ-(12'-ビンブラスチン)ジスルフィドトリフルオロアセテートの調製
12'-スルファニルビンブラスチン(17mg、0.020mmol)およびN-イソプロピルスルフェニルヒドラゾジカルボン酸ジエチル(15mg、0.060mmol)を、窒素下、ベンゼン(1ml)中で混合し、室温で5時間、その後50℃で一晩中撹拌した。溶媒を真空除去し、Absolute SCX-2カラムを通して、最初にメタノール、その後10%水性水酸化アンモニウム/メタノールを用いて残渣をフラッシングすることにより、非塩基性不純物を除去した。塩基性メタノール画分を真空で蒸発させ、残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、ジ(12'-ビンブラスチン)ジスルフィドトリフルオロアセテート(11.5mg、51%)および12'-イソプロピルジスルファニルビンブラスチンがトリフルオロ酢酸塩(3.0mg、13%収率)として得られた。ジ-(12'-ビンブラスチン)ジスルフィドのトリフルオロアセテートに対するデータは下記の通りである。
0005448299.tif 000084
【０１１８】
実施例61- 12'-ホルミルビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
ビンブラスチン(55mg、0.068mmole)を含むトリフルオロ酢酸(12mL)をピペットにより、固体ヘキサメチレンテトラアミン(114mg、0.814mmol)に添加し、その後加熱し20分間還流させた。室温まで冷却した後、反応混合物を注意深く、磁気的に撹拌した飽和NaHCO3:水(1:1、100mL)水溶液に添加した。その後、固体NaHCO3を注意深く、少量ずつ、ガスの発生が見られなくなるまで添加した。混合物をクロロホルム(3×25mL)で抽出し、混合した有機抽出物を塩性溶液(25mL)で洗浄し、MgSO4上で乾燥し、その後、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-ホルミルビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(28mg、40%)。
0005448299.tif 000085
【０１１９】
実施例62- 12'-ホルミルビンクリスチントリフルオロアセテートの調製
THF(1mL)に溶解した12'-ヨードビンクリスチン(58mg、0.062mmol)の溶液をアルゴンで3分間脱酸素化した。反応容器に、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(1mg、0.011mmol)を入れ、フラスコをセプタムで密閉した。COガス(1atm、バルーン)を溶液中へ1分間バブリングさせ、飽和溶液を生成させ、フラスコ内でCO雰囲気を確立した。反応混合物を50℃まで加熱し、脱酸素THF(0.5mL)に溶解した水素化トリ-n-ブチルスズ(18μl、0.068mmol)の溶液を徐々に30分にわたり添加しながら(シリンジポンプ)撹拌した。添加が完了した後、混合物をさらに15分間50℃で撹拌し、その後、反応の進行をESI質量スペクトル解析によりチェックした。開始材料がESI MSにより観察され、そのため、さらに脱酸素THF(0.5mL)に溶解した水素化トリ-n-ブチルスズ8μlを15分にわたり添加した。30分後、ESI質量分析では開始材料は残っていなかった。反応混合物を室温まで冷却し、ジエチルエーテル(75mL)で希釈し、1N HCl(3×25mL)で洗浄した。混合した水性洗浄液をジエチルエーテル(25mL)で逆抽出した。酸性水層を飽和NaHCO3水溶液(10mL)で部分的に中和させ、得られた混濁混合物をEtOAc(3×25mL)で抽出した。混合した有機抽出物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮した。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-ホルミルビンクリスチントリフルオロアセテートが得られた(16mg、30%)。
0005448299.tif 000086
【０１２０】
実施例63- 12'-(ヒドロキシメチル)ビンブラスチンの調製
THF(1mL)に溶解した12'-ホルミルビンブラスチン(25mg、0.030mmol)の氷冷溶液を水素化トリ-tert-ブトキシアルミニウムリチウム(11mg、0.045mmol)で処理した。得られた混合物を室温まで温め、2時間撹拌した後、反応をESI質量スペクトル解析によりチェックした。反応物を再び水素化トリ-tert-ブトキシアルミニウムリチウム(2×15mg)で20時間にわたり処理した。その後、反応を飽和塩化アンモニウム水溶液(5mL)でクエンチし、水(7mL)で希釈し、塩化メチレン(3×10mL)で抽出した。混合した抽出物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮し白色固体とした。分取TLC(シリカ、7:3 EtOAc/ヘキサン)により精製し、その後、アセトニトリルおよび水から凍結乾燥させると、12'-(ヒドロキシメチル)ビンブラスチンが白色固体として得られた(15mg、60%)。
0005448299.tif 000087
【０１２１】
実施例64- 12'-(N-イソプロピルアミノメチル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
1,2-ジクロロエタン(1mL)に溶解した12'-ホルミルビンブラスチン(30mg、0.036mmol)の溶液をイソプロピルアミン(4.2mg、0.072mmol)およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(15mg、0.072mmol)で処理した。得られた混合物を、EIS質量スペクトル解析により開始材料が残っていないことが示されるまで、室温で撹拌した。反応を飽和重炭酸ナトリウム水溶液(5mL)でクエンチし、得られた混合物を塩化メチレンで抽出した(2×10mL)。混合した有機物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮し黄褐色固体とした。逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(N-イソプロピルアミノメチル)ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(26.3mg、59%)。
0005448299.tif 000088
【０１２２】
実施例65- 12'-シアノビンブラスチンの調製
DMF(15mL)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(496mg、0.53mmol)の溶液をアルゴンで10分間パージした。シアン化亜鉛(137mg、1.17mmol)、1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(49mg、0.05mmol)およびトリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(59mg、0.11mmol)を添加した。反応混合物をアルゴンで再びパージし、65℃まで5時間加熱した。反応混合物を0℃まで冷却し、EtOAcで希釈し、5% LiCl、塩性溶液で洗浄し、乾燥させ(硫酸ナトリウム)、濾過し、減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカ、96:4〜94:6 CH2Cl2/MeOH)により精製すると、12'-シアノビンブラスチンが淡黄色固体として得られた(167mg、38%)。
0005448299.tif 000089
【０１２３】
実施例66- 12'-シアノビンクリスチンの調製
アルゴンでパージした、DMF(4mL)に溶解したヨードビンクリスチン(81.5mg、0.086mmol)の溶液に、シアン化亜鉛(22mg、0.19mmol)、続いて1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(10.5mg、0.019mmol)およびトリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(8.5mg、0.009mmol)を添加した。反応混合物を65℃で4.5時間加熱し、室温まで冷却し、その後、塩化メチレンと飽和重炭酸ナトリウム水溶液との間で分配させた。有機層を乾燥させ(硫酸ナトリウム)、濾過し、減圧下で濃縮すると、褐色残渣が得られた。フラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカ、97:3 CH2Cl2/MeOH)、その後逆相クロマトグラフィー(C18、水/MeOH)により精製すると、12'-シアノビンクリスチンが白色固体として得られた(2.8mg、4%)。
0005448299.tif 000090
【０１２４】
実施例67- 12'-(メチルカルボニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
DMF/メタノールの混合物(3mL、1:1)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(81mg、0.086mmol)、トリエチルアミン(87mg、0.86mmol)およびビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)ジクロリド(12mg、0.017mmol)の溶液を通して、一酸化炭素を5分間バブリングさせた。反応混合物を50℃で14時間、1気圧の一酸化炭素下(バルーン)で加熱した。その後、溶液を酢酸エチル(20mL)で希釈し、その後、飽和NaHCO3水溶液(2×5mL)および塩性溶液(5mL)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(メチルカルボニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートが、凍結乾燥後白色粉末として得られた(53mg、56%)。
0005448299.tif 000091
【０１２５】
実施例68- 12'-(2,2,2-トリクロロエチルカルボニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
DMF/2,2,2-トリクロロエタノールの混合物(2mL、1:1)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(53mg、0.057mmol)、トリエチルアミン(57mg、0.565mmol)およびビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)ジクロリド(8mg、0.011mmol)の溶液を通して、一酸化炭素を5分間バブリングさせ、その後、反応混合物を50℃で9時間、1気圧の一酸化炭素下(バルーン)で加熱した。溶液を酢酸エチル(15mL)で希釈し、その後、飽和NaHCO3水溶液(2×5mL)および塩性溶液(5mL)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(2,2,2-トリクロロエチルカルボニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートが、凍結乾燥後白色粉末として得られた(33mg、48%)。
0005448299.tif 000092
【０１２６】
実施例69- 12'-(N-メチルアミノカルボニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
DMF(0.6mL)に溶解した12'-(カルボキシ)ビンブラスチン(15mg、0.014mmol)、HATU(10mg、0.028mmol)およびN-メチルアミン(2.0MのTHF溶液、35μL、0.069mmol)に、ジイソプロピルエチルアミン(36mg、0.276mmol)を添加した。一晩中撹拌した後、1-ヒドロキシ-7-アザベンズトリアゾールエステルのみがESI MSにより検出された。N-メチルアミン(40%水溶液、0.5mL)を反応混合物に添加し、溶媒を真空除去した。この手順を繰り返し、その後、残渣を酢酸エチル(15mL)で希釈し、飽和NaHCO3水溶液(2×5mL)および塩性溶液(5mL)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(N-メチルアミノ)ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(3.4mg、22%)。
0005448299.tif 000093
【０１２７】
実施例70- 12'-アセチルビンブラスチンの調製
ギ酸(5mL)に溶解した12'-(トリメチルシリルエチニル)ビンブラスチン(130mg、0.143mmol)の溶液を80℃で2時間加熱した。冷却後、混合物をジクロロメタン(25mL)で希釈し、徐々に飽和NaHCO3水溶液に注ぎ入れた。有機層を塩性溶液で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー(シリカ、98:2:0.5〜96:4:05 CHCl3/MeOH/トリエチルアミン)により精製すると、12'-アセチルビンブラスチンが得られた(88mg、84%)。
0005448299.tif 000094
【０１２８】
実施例71- 12'-(3-メチルブタノイル)ビンクリスチンの調製
ギ酸(2mL)に溶解した12'-(3-メチルブチニル)ビンクリスチン(75mg、0.08mmol)の溶液を80℃で4時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、固体重炭酸ナトリウムを添加することにより中和した。水を添加し、混合物を塩化メチレンで抽出した。有機層を乾燥させ(硫酸ナトリウム)、濾過し、減圧下で濃縮すると褐色残渣が得られた。フラッシュクロマトグラフィー(シリカ、97:3〜95:5 CH2Cl2/MeOH)により精製すると、12'-(3-メチルブタノイル)ビンクリスチンが黄褐色固体として得られた(27mg、35%)。
0005448299.tif 000095
【０１２９】
実施例72- 12'-(ヘキサノイル)ビンクリスチンの調製
12'-(ヘキシニル)ビンブラスチンから12'-(ヘキサノイル)ビンブラスチンの調製を、実施例71で記述した手順に従い実施した(29mg、40%)。
0005448299.tif 000096
【０１３０】
実施例73- 12'-(3-メチルブチル)ビンクリスチンの調製
トリフルオロ酢酸(1mL)に溶解した12'-(3-メチルブチニル)ビンクリスチン(15mg、0.02mmol)の溶液に、Et3SiH(0.05mg、0.31mmol)を添加し、反応混合物を一晩中撹拌した。飽和重炭酸ナトリウム水溶液を添加し、反応をクエンチし、混合物を塩化メチレンで抽出した。有機層を乾燥させ(硫酸ナトリウム)、濾過し、減圧下で濃縮すると黄褐色固体が得られた。フラッシュカラムクロマトグラフィー(シリカ、95:5〜90:10 CH2Cl2/MeOH)により精製すると、12'-(3-メチルブチル)ビンクリスチンがオフホワイト固体として得られた(9mg、50%)。
0005448299.tif 000097
【０１３１】
実施例74- 12'-ヘキシルビンクリスチンの調製
12'-(ヘキサノイル)ビンクリスチンから、実施例73で記述した手順に従い12'-ヘキシルビンクリスチンを調製した(87mg、44%)。
0005448299.tif 000098
【０１３２】
実施例75- 12'-メチルビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
ジメチル亜鉛(2.0Mのトルエン溶液、0.054mL、0.109mmol)を、窒素下、無水1,4-ジオキサン(2mL)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(51mg、0.054mmol)および[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(4.4mg、0.005mmol)に添加した。反応混合物を45℃で45分間加熱し、その後、飽和NaHCO3水溶液(3mL)を添加することによりクエンチした。クロロホルムで抽出した後(3×5mL)、混合した有機抽出物を塩性溶液(5mL)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-メチルビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(9.4mg、16%)。
0005448299.tif 000099
【０１３３】
実施例76- 12'-メチルビンクリスチントリフルオロアセテートの調製
ジメチル亜鉛(2.0Mのトルエン溶液0.080mL、0.160mmol)を、窒素下、無水1,4-ジオキサン(1mL)に溶解した12'-ヨードビンクリスチン(61mg、0.064mmol)および[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]-ジクロロパラジウム(II)(9.4mg、0.012mmol)に添加した。反応混合物を80℃で2時間加熱し、その後、飽和NaHCO3水溶液(3mL)を添加することによりクエンチした。EtOAc(2×5mL)で抽出した後、混合した有機抽出物を乾燥させ(Na2SO4)、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-メチルビンクリスチントリフルオロアセテートが得られた(16mg、30%)。
0005448299.tif 000100
【０１３４】
実施例77- 12'-エチルビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
ジエチル亜鉛(1.1Mのトルエン溶液、0.103mL、0.113mmol)を、窒素下、無水1,4-ジオキサン(2mL)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(53mg、0.057mmol)および[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(4.6mg、0.006mmol)に添加した。反応混合物を45℃で45分間加熱し、その後、飽和NaHCO3水溶液(3mL)を添加することによりクエンチした。クロロホルムで抽出した後(3×4mL)、混合した有機抽出物を塩性溶液(5mL)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-エチルビンブラスチンがトリフルオロ酢酸塩として得られた(33.2mg、55%)。
0005448299.tif 000101
【０１３５】
実施例78- 12'-エチルビンクリスチントリフルオロアセテートの調製
ジエチル亜鉛(1.0Mのトルエン溶液0.174mL、0.174mmol)を、窒素下、無水1,4-ジオキサン(1mL)に溶解した12'-ヨードビンクリスチン(66mg、0.069mmol)および[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(10.2mg、0.014mmol)に添加した。反応混合物を80℃まで2時間加熱し、その後、飽和NaHCO3水溶液(3mL)を添加することによりクエンチした。EtOAcで抽出した後(2×5mL)、混合した有機抽出物を乾燥させ(Na2SO4)、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-エチルビンクリスチントリフルオロアセテートが得られた(28mg、46%)。
0005448299.tif 000102
【０１３６】
実施例79- 12'-(N-メチル-N-フェニルアミノ)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
12'-(N-メチル-N-フェニルアミノ)ビンブラスチンを下記スキームに従い調製した。
0005448299.tif 000103
【０１３７】
段階1
CH2Cl2(3mL)に溶解した12'-ヨードビンブラスチン(308mg、0.328mmol)の溶液に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(575μL、3.28mmol)およびtert-ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート(128μL、0.558mmol)を添加した。2時間後、反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(8mL)で希釈し、CH2Cl2(2×10mL)で抽出した。混合した抽出物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮すると、褐色固体が得られた。これを、フラッシュクロマトグラフィー(シリカ、[CHCl3/MeOH/NH4OH(40:18:2)/CH2Cl2、1:99〜10:90)により精製すると、12'-ヨード-3,4'-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(88mg、25%)が白色固体として、12'-ヨード-3-(tert-ブチル-ジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(80mg、23%)が白色固体として得られた。12'-ヨード-3,4'-(tert-ブチル-ジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチンに対するデータは下記の通りである:ESI MS m/z 1165[C58H85IN4O9Si2+H]+。12'-ヨード-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン:ESI MS m/z 1051[M+H]+。
【０１３８】
段階2
12'-ヨード-3,4'-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(32mg、0.030mmol)、N-メチルアニリン(7.4mg、0.070mmol)、およびNaOt-Bu(9.2mg、0.10mmol)を、封管中、アルゴン雰囲気下撹拌しながら、無水トルエン(1.0mL)に溶解した。反応混合物をアルゴンにより、室温で3分間脱酸素化し、その後、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(2.5mg、2.7μmol)および2-(ジシクロヘキシル-ホスフィノ)-2',4',6'-トリ-i-プロピル-1,1'-ビフェニル(2.6mg、10μmol)を添加した。反応混合物を密閉し、80℃まで4時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、EtOAcで希釈し、珪藻土を通して濾過し、その後濃縮すると、粗12'-(N-メチル-N-フェニルアミノ)-3,4'-(tert-ブチル-ジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチンが得られた: ESI MS m/z 1144[M+H]+。
【０１３９】
段階3
THF(1.5mL)に溶解した粗12'-(N-メチルフェニルアミノ)-3,4'-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(32mg、0.030mmol)の溶液を、フッ化テトラブチルアンモニウム(1NのTHF溶液400μL、0.40mmol)で処理した。16時間後、反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(10mL)で希釈し、その後、CH2Cl2(2×10mL)で抽出した。混合した有機物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、[CHCl3/MeOH/NH4OH(40:18:2)/CH2Cl2、1:99〜10:90)により精製すると、12'-(N-メチル-N-フェニルアミノ)-4'-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチンが得られた: ESI MS m/z 1030[M+H]+。
【０１４０】
段階4
12'-(N-メチル-N-フェニルアミノ)-4'-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(32mg、0.030mmol)の溶液を、フラスコ中、純粋溶液として、HF・ピリジン(100μL)中で撹拌した。16時間後、反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(10mL)で希釈し、その後、CH2Cl2(2×10mL)で抽出した。混合した有機物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮し、逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(N-メチル-N-フェニルアミノ)ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(6mg、24%)。
0005448299.tif 000104
【０１４１】
実施例80-12'-アミノビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
段階1
12'-ヨード-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)-ビンブラスチン(100mg、0.0951mmol)、ベンゾフェノンイミン(39μL、0.23mmol)、およびNaOt-Bu(32mg、0.33mmol)を、封管中、アルゴン雰囲気下撹拌しながら、無水トルエン(3mL)に溶解した。混合物をアルゴンにより、室温で3分間脱酸素化し、その後、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(8.7mg、9.5μmol)および2-(ジシクロヘキシルホスフィノ)-2',4',6'-トリ-i-プロピル-1,1'-ビフェニル(9.0mg、19μmol)を添加した。反応容器を密閉し、混合物を80℃まで3時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、EtOAcで希釈し、珪藻土を通して濾過し、その後濃縮すると、粗12'-ベンズヒドリリデンアミノ-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチンが得られた。
【０１４２】
段階2
メタノール(1.5mL)に溶解した粗12'-ベンズヒドリリデンアミノ-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(105mg、0.0952mmol)の溶液をNaOAc(54mg、0.66mmol)およびヒドロキシアミン塩酸塩(33mg、0.47mmol)で処理した。4時間後、ESI質量スペクトル解析により示されるように、反応が完了したと思われ、反応混合物を濃縮乾燥させた。残渣を飽和NaHCO3水溶液(10mL)で希釈し、CH2Cl2(2×10mL)で抽出した。混合した抽出物を乾燥させ(Na2SO4)、その後濃縮すると、粗12'-アミノ-3-(tert-ブチル-ジメチルシラニルオキシ)-ビンブラスチンが褐色油として得られた。THF(1.5mL)に溶解した粗12'-アミノ-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(89mg、0.094mmol)の溶液を、フッ化テトラブチルアンモニウム(1NのTHF溶液450μL、0.450mmol)で処理した。3時間後、ESI質量スペクトル解析により示されるように、反応が完了したと思われた。反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(10mL)で希釈し、EtOAc(2×10mL)で抽出した。混合した抽出物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮した。残渣を、逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-アミノビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(32mg、3段階にわたり収率32%)。
0005448299.tif 000105
【０１４３】
実施例81- 12'-(N,N-ジメチルアミノ)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
段階1
12'-ヨード-3-(tert-ブチル-ジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(31mg、0.030mmol)、ジメチルアミン塩酸塩(6.0mg、0.070mmol)、およびNaOt-Bu(17mg、0.18mmol)を、封管中、アルゴン雰囲気下撹拌しながら、無水トルエン(1.0mL)に溶解した。混合物をアルゴンにより、室温で3分間脱酸素化し、その後、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(2.7mg、2.9μmol)および2-(ジシクロヘキシルホスフィノ)-2',4',6'-トリ-i-プロピル-1,1'-ビフェニル(2.8mg、6.0μmol)を添加した。反応容器を密閉し、混合物を80℃まで3.5時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、EtOAcで希釈し、珪藻土を通して濾過し、その後濃縮すると、粗12'-(N,N-ジメチルアミノ)-3-(tert-ブチルジメチル-シラニルオキシ)ビンブラスチンが得られた。
【０１４４】
段階2
THF(1.0mL)に溶解した12'-(N,N-ジメチルアミノ)-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(28.7mg、0.030mmol)の溶液を、フッ化テトラブチルアンモニウム(1NのTHF溶液400μL、0.42mmol)で処理した。3.5時間後、反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(10mL)で希釈し、その後CH2Cl2(2×10mL)で抽出した。混合した抽出物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮し、逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(N,N-ジメチルアミノ)ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(8.8mg、25%)。
0005448299.tif 000106
【０１４５】
実施例82- 12'-(4-メトキシフェニルアミノ)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
段階1
12'-ヨード-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(33mg、0.030mmol)、アニリン(7.3mg、0.080mmol)、およびNaOt-Bu(10mg、0.11mmol)を、封管中、アルゴン雰囲気下で撹拌しながら、無水トルエン(1.0mL)に溶解した。混合物をアルゴンにより、室温で3分間脱酸素化し、その後、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(2.9mg、3.2μmol)および2-(ジシクロヘキシルホスフィノ)-2',4',6'-トリ-i-プロピル-1,1'-ビフェニル(3.0mg、6.4μmol)を添加した。反応物を密閉し、80℃まで3.5時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、EtOAcで希釈し、珪藻土を通して濾過し、その後濃縮すると、粗12'-(フェニルアミノ)-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチンが得られた。
【０１４６】
THF(1.0mL)に溶解した粗12'-(フェニルアミノ)-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(32.7mg、0.030mmol)の溶液を、フッ化テトラブチルアンモニウム(1NのTHF溶液400μL、0.42mmol)で処理した。3.5時間後、反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(10mL)で希釈し、その後CH2Cl2(2×10mL)で抽出した。混合した有機物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮し、逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(フェニルアミノ)ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(6mg、20%)。
0005448299.tif 000107
【０１４７】
実施例83- 12'-(4-メトキシフェニルアミノ)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
段階1
12'-ヨード-3-(tert-ブチル-ジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(54.4mg、0.0501mmol)、p-アニシジン(14mg、0.13mmol)、およびNaOt-Bu(17mg、0.18mmol)を、封管中、アルゴン雰囲気下で撹拌しながら、無水トルエン(1.0mL)に溶解した。反応混合物をアルゴンにより、室温で3分間脱酸素化し、その後、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(4.7mg、5.2μmol)および2-(ジシクロヘキシルホスフィノ)-2',4',6'-トリ-i-プロピル-1,1'-ビフェニル(4.9mg、10μmol)を添加した。反応容器を密閉し、80℃まで4時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、EtOAcで希釈し、珪藻土を通して濾過し、その後濃縮すると、粗12'-(4-メトキシフェニルアミノ)-3-(tert-ブチル-ジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチンが得られた:ESI MS m/z 1046[M+H]+。
【０１４８】
段階2
THF(1.0mL)に溶解した12'-(4-メトキシフェニルアミノ)-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(54mg、0.051mmol)の溶液を、フッ化テトラブチルアンモニウム(1NのTHF溶液154μL、0.154mmol)で処理した。4時間後、ESI質量スペクトル解析により示されるように、反応が完了したと思われた。反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(10mL)で希釈し、CH2Cl2(2×10mL)で抽出した。混合した抽出物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮し、逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(4-メトキシフェニルアミノ)ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(23mg、48%)。
0005448299.tif 000108
【０１４９】
実施例84- 12'-(4-トリフルオロメチルフェニルアミノ)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
段階1
12'-ヨード-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(31mg、0.030mmol)、4-トリフルオロメチルアニリン(11mg、0.070mmol)、およびNaOt-Bu(9.0mg、0.090mmol)を、封管中、アルゴン雰囲気下で撹拌しながら、無水トルエン(1.0mL)に溶解した。混合物をアルゴンにより、室温で3分間脱酸素化し、その後、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(2.4mg、2.6μmol)および2-(ジシクロヘキシルホスフィノ)-2',4',6'-トリ-i-プロピル-1,1'-ビフェニル(2.5mg、5.3μmol)を添加した。反応物を密閉し、80℃まで3時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、EtOAcで希釈し、珪藻土を通して濾過し、その後濃縮すると、粗12'-(4-トリフルオロメチルフェニルアミノ)-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチンが得られた。
【０１５０】
段階2
THF(1.0mL)に溶解した粗12'-(4-トリフルオロメチルフェニルアミノ)-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(29mg、0.030mmol)の溶液を、フッ化テトラブチルアンモニウム(1NのTHF溶液700μL、0.70mmol)で処理した。16時間後、反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(10mL)で希釈し、その後CH2Cl2(2×10mL)で抽出した。混合した有機物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮し、逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(4-トリフルオロメチルフェニルアミノ)ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(5mg、19%)。
0005448299.tif 000109
【０１５１】
実施例85- 12'-(4-ピペリジニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
段階1
12'-ヨード-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(23mg、0.022mmol)、ピペリジン(5.4mg、0.055mmol)、およびNaOt-Bu(7.4mg、0.077mmol)を、封管中、アルゴン雰囲気下で撹拌しながら、無水トルエン(1.0mL)に溶解した。混合物をアルゴンにより、室温で3分間脱酸素化し、その後、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(2.0mg、2.2μmol)および2-(ジシクロヘキシルホスフィノ)-2',4',6'-トリ-i-プロピル-1,1'-ビフェニル(2.1mg、4.4μmol)を添加した。反応容器を密閉し、80℃まで4時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、EtOAcで希釈し、珪藻土を通して濾過し、その後濃縮すると、粗12'-(1-ピペリジニル)-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチンが得られた:ESI MS m/z 1008[M+H]+。
【０１５２】
段階2
THF(1.0mL)に溶解した12'-(1-ピペリジニル)-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(24mg、0.023mmol)の溶液を、フッ化テトラブチルアンモニウム(1NのTHF溶液95μL、0.095mmol)で処理した。3時間後、ESI質量スペクトル解析により示されるように、反応が完了したと思われた。反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(10mL)で希釈し、CH2Cl2(2×10mL)で抽出した。混合した抽出物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮し、逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(1-ピペリジニル)ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(6.1mg、25%)。
0005448299.tif 000110
【０１５３】
実施例86- 12'-(4-モルホリノ)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
段階1
12'-ヨード-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(23.3mg、0.022mmol)、ピペリジン(6.8mg、0.055mmol)、およびNaOt-Bu(7.4mg、0.077mmol)を、封管中、アルゴン雰囲気下で撹拌しながら、無水トルエン(1.0mL)に溶解した。反応混合物をアルゴンにより、室温で3分間脱酸素化し、その後、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(2.0mg、2.2μmol)および2-(ジシクロヘキシルホスフィノ)-2',4',6'-トリ-i-プロピル-1,1'-ビフェニル(2.1mg、4.4μmol)を添加した。反応混合物を密閉し、80℃まで4時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、EtOAcで希釈し、珪藻土を通して濾過し、その後濃縮すると、粗12'-(4-モルホリノ)-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチンが得られた:ESI MS m/z 1010[M+H]+。
【０１５４】
段階2
THF(1.0mL)に溶解した12'-(4-モルホリノ)-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(24mg、0.023mmol)の溶液を、フッ化テトラブチルアンモニウム(1NのTHF溶液95μL、0.095mmol)で処理した。3時間後、ESI質量スペクトル解析により示されるように、反応が完了したと思われた。反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(10mL)で希釈し、CH2Cl2(2×10mL)で抽出した。混合した抽出物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮し、逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(4-モルホリノ)ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(5.1mg、20)。
0005448299.tif 000111
【０１５５】
実施例87- 12'-(ピロリジン-1-イル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
段階1
12'-ヨード-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(100mg、0.10mmol)、ピロリジン(19μL、0.24mmol)、およびNaOt-Bu(32mg、0.33mmol)を、封管中、アルゴン雰囲気下で撹拌しながら、無水トルエン(2.0mL)に溶解した。反応混合物をアルゴンにより、室温で3分間脱酸素化し、その後、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(8.7mg、9.5μmol)および2-(ジシクロヘキシルホスフィノ)-2',4',6'-トリ-i-プロピル-1,1'-ビフェニル(9.1mg、20μmol)を添加した。反応混合物を密閉し、80℃まで2時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、EtOAcで希釈し、珪藻土を通して濾過し、その後濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー(シリカ、8:1〜1:1 EtOAc/ヘキサン)により精製すると、12'-(ピロリジン-1-イル)-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチンが得られた:ESI MS m/z 994[M+H]+。
【０１５６】
段階2
THF(2.0mL)に溶解した12'-(ピロリジン-1-イル)-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(12mg、0.012mmol)の溶液を、フッ化テトラブチルアンモニウム(1NのTHF溶液1mL)で処理した。3時間後、ESI質量スペクトル解析により示されるように、反応が完了したと思われた。反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(10mL)で希釈し、その後EtOAc(2×10mL)で抽出した。混合した抽出物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮した。逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(ピロリジン-1-イル)ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(2mg、2%):ESI MS m/z 880[M+H]+。
0005448299.tif 000112
【０１５７】
実施例88- 12'-(アゼチジン-1-イル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
段階1
12'-ヨード-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(716mg、0.68mmol)、アゼチジン(160μL、2.3mmol)、およびNaOt-Bu(229mg、2.38mmol)を、封管中、アルゴン雰囲気下で撹拌しながら、無水トルエン(5.0mL)に溶解した。反応混合物をアルゴンにより、室温で3分間脱酸素化し、その後、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)(62mg、68μmol)および2-(ジシクロヘキシルホスフィノ)-2',4',6'-トリ-i-プロピル-1,1'-ビフェニル(64mg、140μmol)を添加した。反応混合物を密閉し、60℃まで3時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、EtOAcで希釈し、珪藻土を通して濾過し、その後濃縮した:ESI MS m/z 980[M+H]+。
【０１５８】
段階2
THF(2.0mL)に溶解した粗12'-(アゼチジン-1-イル)-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチンの溶液を、フッ化テトラブチルアンモニウム(1NのTHF溶液1mL)で処理した。3時間後、ESI質量スペクトル解析により示されるように、反応が完了したと思われた。反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(10mL)で希釈し、EtOAc(2×10mL)で抽出した。混合した抽出物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮し、逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(アゼチジン-1-イル)ビンブラスチンがトリフルオロ酢酸塩として得られた(230mg、39%)。これをL-酒石酸塩に変換させた(200mg、収率64%)。12'-(アゼチジン-1-イル)ビンブラスチンL-酒石酸を白色粉末として単離した。
0005448299.tif 000113
【０１５９】
実施例89- 12'-(3-メチルピラゾール-1-イル)ビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
段階1
12'-ヨード-3-(tert-ブチル-ジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(34mg、0.030mmol)、3-メチル-1H-ピラゾール(5.9μL、0.070mmol)、およびK2CO3(14mg、0.10mmol)を、封管中、アルゴン雰囲気下で撹拌しながら、無水トルエン(1.0mL)に溶解した。混合物をアルゴンにより、室温で3分間脱酸素化し、その後、ヨウ化銅(I)(2.7mg、2.9μmol)およびN,N-ジメチルエチレンジアミン(5.6μL、10μmol)を添加した。反応容器を密閉し、混合物を80℃まで2日間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、EtOAcで希釈し、珪藻土を通して濾過し、その後濃縮すると、粗12'-(3-メチルピラゾール-1-イル)-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチンが得られた:ESI MS m/z 1005[M+H]+。
【０１６０】
段階2
THF(1.0mL)に溶解した粗12'-(3-メチルピラゾール-1-イル)-3-(tert-ブチルジメチルシラニルオキシ)ビンブラスチン(30mg、0.030mmol)の溶液を、フッ化テトラブチルアンモニウム(1NのTHF溶液1.2mL、1.2mmol)で処理した。5時間後、反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(10mL)で希釈し、その後CH2Cl2(2×10mL)で抽出した。混合した有機物を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮し、逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12'-(3-メチルピラゾール-1-イル)ビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(5.0mg、19%)。
0005448299.tif 000114
【０１６１】
実施例90- 12',13'-ジヨードビンクリスチントリフルオロアセテートの調製
1:1トリフルオロ酢酸/CH2Cl2(5.0mL)に溶解したN-ヨードスクシンイミド(65mg、0.288mmol)の氷冷溶液を、0℃の1:1トリフルオロ酢酸/CH2Cl2(5.0mL)に溶解した硫酸ビンクリスチン(188mg、0.190mmol)の溶液に、30分にわたり滴下した。HPLCにより示されるように反応が完了すると、反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(50mL)および10% NaHSO3水溶液(30mL)の溶液に注ぎ入れ、その後、EtOAcで抽出した(2×30mL)。混合した有機物を塩性溶液(30mL)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12',13'-ジヨードビンクリスチントリフルオロアセテートが得られた(44mg、18%)。
0005448299.tif 000115
【０１６２】
実施例91- 12',13'-ジヨードビンブラスチントリフルオロアセテートの調製
1:1トリフルオロ酢酸/CH2Cl2(10mL)に溶解したN-ヨードスクシンイミド(112mg、0.498mmol)の氷冷溶液を、0℃の1:1トリフルオロ酢酸/CH2Cl2(10mL)に溶解した硫酸ビンブラスチン(261mg、0.249mmol)の溶液に、40分にわたり滴下した。HPLCにより示されるように反応が完了すると、反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(50mL)および10% NaHPO3水溶液(30mL)の溶液に注ぎ入れ、その後、EtOAcで抽出した(2×30mL)。混合した有機物を塩性溶液(30mL)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12',13'-ジヨードビンブラスチントリフルオロアセテートが得られた(79.5mg、25%)。
0005448299.tif 000116
【０１６３】
実施例92- 13'-ヨード-12'-メチルビンクリスチントリフルオロアセテートの調製
1:1トリフルオロ酢酸/CH2Cl2(4.0mL)に溶解したN-ヨードスクシンイミド(8.2mg、0.037mmol)の氷冷溶液を、0℃の1:1トリフルオロ酢酸/CH2Cl2(4.0mL)に溶解した12'-メチルビンクリスチン(31mg、0.37mmol)の溶液に、30分にわたり滴下した。HPLCにより示されるように反応が完了すると、反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(50mL)および10% NaHSO3水溶液(30mL)の溶液に注ぎ入れ、得られた混合物をEtOAcで抽出した(2×30mL)。混合した有機物を塩性溶液(30mL)で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、13'-ヨード-12'-メチルビンクリスチントリフルオロアセテートが得られた(6mg、17%)。
0005448299.tif 000117
【０１６４】
実施例93- 12',13'-ジメチルビンクリスチントリフルオロアセテートの調製
ジメチル亜鉛(2.0Mのトルエン溶液0.162mL、0.324mmol)を、窒素下、無水1,4-ジオキサンに溶解した12',13'-ジヨードビンクリスチン(70mg、0.064mmol)および[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(9.4mg、0.013mmol)に添加した。反応混合物を80℃まで3時間加熱し、その後、飽和NaHCO3水溶液(10mL)を添加することによりクエンチした。CH2Cl2で抽出した後(2×10mL)、混合した有機物を塩性溶液(5mL)で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12',13'-ジメチルビンクリスチントリフルオロアセテートが得られた(12mg、21%)。
0005448299.tif 000118
【０１６５】
実施例94- 13'-エチル-12'-メチルビンクリスチントリフルオロアセテートの調製
ジエチル亜鉛(1.0Mのトルエン溶液0.074mL、0.074mmol)を、窒素下、無水1,4-ジオキサン(1mL)に溶解した13'-ヨード-12'-メチルビンクリスチン(28mg、0.029mmol)および[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(21mg、0.029mmol)に添加した。反応混合物を80℃まで2時間加熱し、その後、飽和NaHCO3水溶液(3mL)を添加することによりクエンチした。EtOAcで抽出した後(2×5mL)、混合した有機物を乾燥させ(Na2SO4)、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、13'-エチル-12'-メチルビンクリスチントリフルオロアセテートが得られた(5.0mg、19%)。
0005448299.tif 000119
【０１６６】
実施例95- 12',13'-ジエチルビンクリスチントリフルオロアセテートの調製
ジエチル亜鉛(1.0Mのトルエン溶液0.308mL、0.308mmol)を、窒素下、無水1,4-ジオキサンに溶解した12',13'-ジヨードビンクリスチン(66mg、0.061mmol)および[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(13.5mg、0.018mmol)に添加した。反応混合物を80℃まで30分間加熱し、その後、飽和NaHCO3水溶液(10mL)を添加することによりクエンチした。CH2Cl2で抽出した後(2×10mL)、混合した有機物を塩性溶液(5mL)で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、12',13'-ジエチルビンクリスチントリフルオロアセテートが得られた(25mg、36%)。
0005448299.tif 000120
【０１６７】
実施例96- 13'-アセチル-12'-ジエチルビンクリスチントリフルオロアセテートの調製
段階1
13'-ヨード-12'-メチルビンクリスチン(28mg、0.030mmol)、ヨウ化銅(I)(0.83mg、0.0044mmol)、ジクロロビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)(2.0mg、0.0029mmol)、トルエン(2mL)、およびトリエチルアミン(1mL)を、再シール可能なガラス試験管中で混合した。アルゴンを、溶液を通して3分間バブリングさせ、その後、(トリメチルシリル)アセチレン(24μL、0.17mmol)を添加し、混合物を55℃で1時間加熱した。飽和NaHCO3水溶液(5mL)を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した(3×5mL)。混合した有機物を塩性溶液(5mL)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、真空で蒸発乾固させると、粗12'-メチル-13'-トリメチルシラニルエチニルビンクリスチンが得られた:ESI MS m/z 935[M+H]+。
【０１６８】
段階2
粗12'-メチル-13'-トリメチルシラニルエチニルビンクリスチン(27mg、0.028mmol)を、CH2Cl2(1mL)およびトリフルオロ酢酸(1mL)の溶液に添加した。反応をESI MSによりモニタした。30分後、反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(50mL)に注ぎ入れ、得られた混合物をEtOAcで抽出した(2×30mL)。混合した有機物を塩性溶液(30mL)で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、真空で蒸発乾固させた。残渣を逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%トリフルオロ酢酸)により精製すると、13'-アセチル-12'-メチルビンクリスチントリフルオロアセテートが得られた(6mg、17%)。
0005448299.tif 000121
【０１６９】
実施例97- 12'-ブロモアンヒドロビンブラスチンの調製
DMF(1mL)に溶解した12'-ブロモビンブラスチン(0.1g、0.09mmol)の氷冷溶液に塩化チオニル(0.04mL、0.45mmol)を添加し、混合物を2時間撹拌した。反応混合物を5% LiCl(aq)で希釈し、ジクロロメタン(3×)で抽出した。有機層を減圧下で濃縮し、残渣を高真空下で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー(シリカ、94:4 CHCl3/MeOH)後、逆相クロマトグラフィー(C18、アセトニトリル/水、0.05%濃水酸化アンモニウム)により精製すると、12'-ブロモアンヒドロビンブラスチンが得られた(26mg、26%)。
0005448299.tif 000122
【０１７０】
実施例98- 12'-ヨードアンヒドロビンブラスチンの調製
12'-ヨードアンヒドロビンブラスチンを12'-ヨードビンブラスチンから、実施例98で説明した手順に従い調製し、さらに精製せずに使用した。収率(0.25g、定量的)。
0005448299.tif 000123
【０１７１】
実施例99- 12'-ブロモアンヒドロビンクリスチンの調製
12'-ブロモアンヒドロビンクリスチンを12'-ブロモビンクリスチンから、実施例98で説明した手順に従い調製し、精製した。収率(32mg、23%)。
0005448299.tif 000124
【０１７２】
実施例100- 生物学的アッセイ法の説明
A. HeLa GI50決定
増殖阻害(GI50)値を、プラスチック上での増殖のために選択した、ヒト子宮頸癌細胞系、HeLa-3について測定した。HeLa細胞アッセイ法は、参照により全体が本明細書に組み入れられる、Skehan et al., J. Natl. Cancer Inst., 82:1107-12(1990)の記述に基づくものとした。HeLa細胞を96ウエルプレートに2×104細胞/ウエルで播種した。1日後、TCAを5%まで添加することにより対照プレートを固定した。5回水道水ですすいだ後、プレートを空気乾燥させ、4℃で保存した。試験化合物を残りのプレートに10倍希釈で添加した。2日後、全てのプレートを上記のように固定した。その後、細胞を100μL/ウエルの0.4% スルホローダミンB(SRB)を含む1%酢酸を30分間、4℃で添加することにより染色した。その後、ウエルを直ちに1%酢酸で5回すすぎ、空気乾燥させた。その後、100μL/ウエルの非緩衝10mMトリス塩基を添加することにより、SRBを可溶化した。Molecular Devicesマイクロプレートリーダー上で490nmの吸光度を測定することにより色素を定量した。増殖阻害を、下記式に従い計算した:GI=100×(T-T0)/(C-T0)。ここで、処理2日後の試験ウエルの光学密度(OD)がT、0日の対照プレートのウエルのODがT0、およびCが未処理ウエルのODであった。阻害剤濃度に対する%増殖阻害のプロットを使用して、GI50を決定した。
【０１７３】
B. MCF-7 GI50決定
増殖阻害(GI50)値を、ヒト乳癌系、MCF-7について測定した。MCF-7細胞を96ウエルプレートに2×104細胞/ウエルで播種し、薬物を含まない培地で24時間増殖させた。2日目に、試験化合物をプレートに10倍希釈で添加した。4日後、細胞を、グルタルアルデヒドを0.75%まで添加することにより固定した。30分後、固定した細胞を蒸留水で完全にすすぎ、室温で1時間乾燥させた。その後、細胞を、0.2%クリスタルバイオレット溶液で1時間、室温で染色した。非結合染色液を、水道水で10回すすぐことにより除去し、プレートを30分間空気乾燥させた。その後10%酢酸を15分間添加することにより、クリスタルバイオレットを可溶化させ、Molecular Devicesマイクロプレートリーダー上で570nmの吸光度を測定することにより定量した。増殖阻害を、下記式に従い計算した:GI=100×(T/T0)。ここで、4日の処理後の試験ウエルの光学密度(OD)がT、0日目の対照プレートのウエルのODがT0であった。阻害剤濃度に対する%増殖阻害のプロットを使用して、GI50を決定した。
【０１７４】
（表3）本発明の化合物に対するHeLa細胞の増殖阻害(GI50)
0005448299.tif 000125
0005448299.tif 000126
【０１７５】
D. NCI60細胞系データ
表4の下記データは、本発明のいくつかの化合物の60個のヒト形質転換細胞系に対する増殖阻害特性を要約したものである。これらのデータは、公表された手順に従い、60細胞系増殖阻害アッセイ法において国立癌研究所(Natinal Cancer Institute)の協力で得られたものである(Boyd, M.R., 「Anticancer Drug Development Guide」, Preclinical Screening, Clinical Trials, and Approval; Teicher, B. Ed.; Humana Press; Totowa, NJ, 23-42(1997)、参照により本明細書に組み入れられる)。
【０１７６】
（表4）本発明のいくつかの化合物のNCIヒト形質転換細胞系のインビトロ増殖阻害(GI50)
0005448299.tif 000127
0005448299.tif 000128
【０１７７】
本発明について例示目的で詳細に記述してきたが、そのような詳細はそのような目的のために限られ、当業者によって、添付の請求の範囲により規定される本発明の精神および範囲から逸脱せずに、様々な変更が可能であることは理解されるであろう。