(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）Ｃ１〜Ｃ３アルコールまたはその混合物もしくは含水量が９０％（ｖ／ｖ）以下のその水溶液を用いてブドウ種子を抽出して抽出物を形成するステップと、
ｂ）ステップａ）からの抽出物を冷却し、不溶性物質を濾過および遠心分離除去して、不水溶性タンニンを除去するステップと、
ｃ）ポリビニルポリピロリドン（ＰＶＰＰ）をステップｂ）からの抽出物に加えることによって、水溶性タンニンを除去するステップと、
ｄ）溶媒による脱着を繰り返すカラムでのクロマトグラフィー精製によって、ステップｃ）からの抽出物中の異なる分子量の生成物を分離して、エピカテキンおよびカテキンのモノマーをそれぞれ異なる含量で有する複数の生成物を得るステップと
を含み、
前記クロマトグラフィー精製を、スチレン−ジビニルベンゼンで実施する、
ビティスビニフェラ（Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ）種子の抽出方法。
【請求項２】
抽出溶媒が、４０％ｖ／ｖの水−エタノール溶液である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抽出を、７０℃で実施する、請求項１または２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、樹脂で分画することによって得られるブドウ種子の抽出物およびその調製方法に関する。
【０００２】
本発明の方法は、カテキンおよびエピカテキン（モノマー）の含量が可変の、ブドウ種子から出発する抽出物を提供する。本発明に従って得られる生成物は、抗酸化作用を有し、化粧品、補助食品（特に心臓保護用補助食品）および栄養補給食品として主に使用される。
【背景技術】
【０００３】
技術的背景
ブドウ種子の処理（ｗｏｒｋｕｐ）によって得られた完全抽出物（ｔｏｔａｌ  ｅｘｔｒａｃｔ）は、幾つかの代謝物（ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ）、特にカテキンおよびエピカテキンモノマー、関係するプロアントシアニドールオリゴマーおよびポリマー（プロシアニジン）、ならびにポリマーおよび高分子量のタンニンを含有する。
【０００４】
欧州特許第２７５２２４号公報には、ビティスビニフェラ（Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ）フラボノイドのリン脂質複合体の調製方法が開示されている。
【０００５】
国際公開第２００５／３６９８８号公報には、抽出物の処理直後に種子から皮を分離する、ビティスビニフェラ種子の抽出方法が開示されている。得られた抽出物は、単量体ポリフェノール類含量が少ないことを特徴としている。
【０００６】
欧州特許第３４８７８１号公報には、ビティスビニフェラ種子を、エーテル、または芳香族炭化水素とのエステルもしくはエステルの混合物を用いて、かつ／または濾過によって抽出して得られた、プロシアニドールオリゴマーに富んだ画分が開示されている。
【０００７】
欧州特許第１０３５８５９号には、ビティスビニフェラの抽出物のリン脂質複合体を、アテローム性動脈硬化症の治療および予防に使用することが開示されている。
【０００８】
公知の方法は、有害な溶媒を使用し、あるいは特定植物または複雑な手順を必要とするなどの幾つかの欠点を有する。
【０００９】
したがって、容易なやり方で工業的に実施され、有効成分の含量が任意に調節され得る抽出物を提供する便利な方法が必要とされている。
【発明の開示】
【００１０】
発明の開示
本発明の方法は、含有されているカテキンおよびエピカテキン誘導体の分子量（ＭＷ）が異なる幾つもの画分を分離できることから柔軟性がある。したがってこの方法は、プロアントシアニドールオリゴマーおよびポリマー（プロシアニジン）の含量が少ないカテキンおよびエピカテキンに富んだ抽出物と、それと正反対の特徴を有する、すなわちオリゴマーおよびプロシアニジン含量が多くモノマー（カテキンおよびエピカテキン）の含量が少ない抽出物の両方、ならびにモノマーおよびプロシアニジンの所望の任意含量を有する抽出物の調製を可能にする。
【００１１】
このような柔軟性は、これらの異なる画分を混合して所定のモノマー含量の最終生成物（ｆｉｎａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ）を得る可能性にも係わる。
【００１２】
完全抽出物に含有されている高分子量ポリマーおよびタンニンを、最初の処理ステップで、水での部分精製によって所望の画分から除去し、任意選択で、ポリビニルポリピロリドン（ＰＶＰＰ）を用いた後処理によって最適化することができる。
【００１３】
水での部分精製によって、タンニンの一部（５０％ｗ／ｗ超）のみが除去されるが、ＰＶＰＰ精製だけが、最終抽出物の重量の５％未満までタンニン含量を低減させる。
【００１４】
本発明は、以下の基本的な特性において、ブドウ種子に由来する生成物（ｐｒｏｄｕｃｔｓ）の従来の調製方法とは異なっている。
ｉ．ブドウ種子の抽出を、ｐＨ調節を必要とせず、塩基性化学物質も酸性化学物質も使用せずに実施すること。
ｉｉ．抽出および製造方法全体を、水およびエタノールだけを溶媒として使用して実施できること。
ｉｉｉ．該方法は、モノマーおよびオリゴマーの最終抽出物含量を任意に調節可能であることから柔軟性があること。
ｉｖ．高分子量ポリマーおよびタンニンが除去されること。
【００１５】
概して、本発明の方法は、以下の
ａ）溶媒を用いてブドウ種子を抽出するステップ（完全抽出物）と、
ｂ）不水溶性タンニンを除去するステップと、
ｃ）任意選択で水溶性タンニンを除去するステップと、
ｄ）異なるＭＷの生成物を、カラムでのクロマトグラフィー精製によって分離するステップ（このステップは、ステップｃを実施する必要もなく、ステップｂから得られた任意の溶液で直接実施することもできる）
の４つの主なステップを含む。
【００１６】
ステップ（ａ）は、溶媒としてのアセトンもしくはＣ1〜Ｃ3アルコール、またはその混合物もしくは含水量が９０％（ｖ／ｖ）を超えない限りその水溶液を用いて、ブドウ種子を抽出することによって実施される。４０％ｖ／ｖの水−エタノール溶液が好ましい。
【００１７】
抽出温度は、０℃から溶媒の沸点までの範囲にわたることができ、好ましくは７０℃である。
【００１８】
該抽出物から不水溶性物質、特に高分子量タンニンを除去することができるステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）からの抽出物を冷却し、不溶性物質を濾過または遠心分離除去して実施される。
【００１９】
ステップ（ｃ）は、任意選択のステップであり、ステップ（ｂ）からの抽出物に依然として存在する任意のタンニンを除去するために実施することができる。これらの代謝物は、ポリビニルポリピロリドン（ＰＶＰＰ）を使用して除去することができる。
【００２０】
好ましくは、本発明の方法は、ステップ（ｃ）も含む。
【００２１】
ステップ（ｄ）によって、ほとんどの無用な第２代謝物（糖類等）を除去すると同時に、プロシアニジンを保持して、抽出物を分画することができる。このステップは、ポリマー樹脂への吸着によるクロマトグラフィー分離である。この目的に適した樹脂の例には、ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＨＰ２０（登録商標）もしくはロームアンドハース製ＸＡＤ１１８０（登録商標）などのスチレン−ＤＶＢ樹脂、またはロームアンドハース製ＸＡＤ７ＨＰ（登録商標）などのアクリル樹脂がある。
【００２２】
ブドウ種子から得られた完全抽出物を濃縮して、５％〜５０％ｗ／ｗの範囲、好ましくは１０％ｗ／ｗの乾燥残渣（ｄｒｙ  ｒｅｓｉｄｕｅ）とし、１℃〜２５℃の範囲の温度、好ましくは４℃で、撹拌なしに１時間〜２４時間の範囲で、好ましくは１６時間静置する。
【００２３】
得られた懸濁液を、水溶液から残りの沈殿物が除去されるまで、４℃で遠心分離にかける。透明水溶液を、ロータリーエバポレーター中で濃縮し、水を添加して、５％〜５０％ｗ／ｗの範囲、好ましくは１０％ｗ／ｗの乾燥残渣とする。場合によっては、該溶液は、水溶液だけでなく、水−アルコールまたは水−アセトン溶液のいずれかであってよい。これは、所望の最終生成物によって決まり、例えば、カテキンモノマーおよびオリゴマー含量が多い生成物が所望される場合、好ましくは水溶液が使用され、そうでなければ水−アルコールまたは水−アセトン溶液のいずれかが使用される。
【００２４】
したがって、低分子量の画分が最終生成物から除去されるべき場合には、カラムに入れる該溶液は、５％〜５０％ｗ／ｗの範囲の乾燥残渣、ならびに５％〜３０％ｖ／ｖの範囲、好ましくは１０％ｖ／ｖのアルコール（Ｃ１〜Ｃ３アルコール）またはアセトン含量を有するべきである。こうして調製された溶液は樹脂に吸着するが、保持されなかった溶液は除去される。
【００２５】
その後、水−アルコール（Ｃ1〜Ｃ3アルコール、好ましくはエタノール）または水−アセトン溶液で樹脂を洗浄して、望ましくない第２の代謝物を除去する。溶媒は、１００％〜７０％ｖ／ｖの範囲、好ましくは９０％ｖ／ｖの含水量を有するべきである。カラムから出る洗浄液は処分される。
【００２６】
生成物を、含水量が５０％〜５％ｖ／ｖの範囲、好ましくは３０％ｖ／ｖの水−アルコール溶液（Ｃ１〜Ｃ３アルコール）、好ましくはエタノール、で溶出する。アルコール溶液は、任意選択で、含水量が５０％〜０％ｖ／ｖの範囲、好ましくは３０％ｖ／ｖの水−アセトン溶液で置き換えることができる。
【００２７】
本発明を、以下の例でさらに詳細に説明する。
【００２８】
例１
水−アルコール溶液を用いたブドウ種子の抽出（ステップａ）
このステップでは、後のカラムクロマトグラフィー分離のための出発材料として使用する完全抽出物を調製する。
【００２９】
ブドウ種子１０００ｇを、ジャケット付き静的パーコレーター（ｓｔａｔｉｃ  ｐｅｒｃｏｌａｔｏｒ）中、７０℃で４時間、エタノール（４０％ｖ／ｖ）１．５リットルで覆う。４時間後に濾過液を回収し、各抽出につき溶媒１リットルを使用する以外は同じ条件下で７回再抽出して、全濾過液約８リットルを得る。その混合濾過液を、吸引しながら熱濾過し、減圧下６０℃でロータリーエバポレーターによって濃縮する。この抽出物は、全乾燥残渣を２２８ｇ有し、出発材料に対する収率は２２．８％ｗ／ｗである。該濾過液を濃縮して、乾燥残渣１０％ｗ／ｗの、完全に水性の懸濁液２．２８ｋｇを得る。
【００３０】
例２
水−アセトン溶液を用いたブドウ種子の抽出（ステップａ）
このステップでは、後のカラムクロマトグラフィー分離のための出発材料として使用することができる完全抽出物を調製する。
【００３１】
ブドウ種子１０００ｇを、ジャケット付き静的パーコレーター中または撹拌機を備えたジャケット付き反応器中、７０℃で４時間、４０％ｖ／ｖのアセトン１．５リットルで覆う。４時間後に濾過液を回収し、各抽出につき溶媒１リットルを使用する以外は同じ条件下で７回再抽出して、全濾過液約８リットルを得る。その混合濾過液を、吸引しながら熱濾過し、減圧下６０℃でロータリーエバポレーターによって濃縮する。この抽出物は、全乾燥残渣を２３５．６ｇ有し、出発材料に対する収率は２３．５６％ｗ／ｗである。
【００３２】
該濾過液を濃縮して、乾燥残渣１０％ｗ／ｗの、完全に水性の懸濁液２．３５ｋｇを得る。
【００３３】
例３
ブドウ種子から得られた抽出物の精製（ステップｂ）：不水溶性物質の除去
ステップ（ａ）（例１）の水−アルコール抽出物から得た水性懸濁液を、４℃に冷却し、１６時間静置し、次いで依然冷却されたままの水性懸濁液を、３０００ｇで２０分間遠心分離にかけて、透明水溶液から沈殿残渣を分離する。高分子生成物に富んだ残渣を処分する。
【００３４】
得られた透明溶液は、カテキンＨＰＬＣ含量３．７５％、エピカテキンＨＰＬＣ含量２．８７％およびモノマー全含量（カテキン＋エピカテキン）６．６２％ｗ／ｗを有する部分的に精製された抽出物の１６８ｇに等しい乾燥残渣を有する。出発材料に対する重量収率は１６．８％ｗ／ｗである。
【００３５】
以下に記載するクロマトグラフィーカラム精製手順（４つの異なる手順）は全て、この溶液に適用することができる。簡略化のために、例５のみ（手順１を利用）を、この溶液の直接精製の例を用いて報告することにする。後に記載の他の方法は全て、ＰＶＰＰ処理溶液に適用する。
【００３６】
例４
ブドウ種子から得られた抽出物の精製（ステップｂ）：不水溶性物質の除去
ステップ（ａ）（例２）の水−アセトン抽出から得た水性懸濁液を、４℃に冷却し、１６時間静置し、次いで依然冷たい水性懸濁液を、３０００ｇで２０分間遠心分離にかけて、透明水溶液から沈殿残渣を分離する。高分子生成物に富んだ残渣を処分する。
【００３７】
得られた透明溶液は、カテキンＨＰＬＣ含量４．２１％、エピカテキンＨＰＬＣ含量２．７０％およびＨＰＬＣモノマー全含量（カテキン＋エピカテキン）６．９１％ｗ／ｗを有する部分的に精製された抽出物の乾燥残渣を１７３ｇ有する。出発材料に対する重量収率は１７．３％ｗ／ｗである。
【００３８】
以下に記載するクロマトグラフィー精製手順（４つの異なる手順）は全て、この溶液に適用することができる。簡略化のために、例６のみ（手順３を利用）を、この溶液の直接精製の例を用いて報告することにする。後に記載の他の方法は全て、ＰＶＰＰ処理溶液に適用する。
【００３９】
例５
ブドウ種子から得られた抽出物の精製：手順１（ステップｄ）
ステップ（ｂ）（例３）に記載の部分精製プロセスの最後に得られた、乾燥残渣を１６８ｇ有する透明水溶液を濃縮して、乾燥残渣１０％ｗ／ｗにする。部分的に精製された抽出物のこの透明溶液は、カテキンＨＰＬＣ含量３．７５％、エピカテキンＨＰＬＣ含量２．８７％およびＨＰＬＣモノマー全含量（カテキン＋エピカテキン）は６．６２％ｗ／ｗを有する乾燥残渣を有する。
【００４０】
この水溶液を室温に温め、次いで水で調整したロームアンドハース製ＸＡＤ７ＨＰ（登録商標）樹脂３３００ｍｌを含むクロマトグラフィーカラムに入れる。該水溶液は樹脂に吸着するが、カラムから出る保持されなかった溶液は処分される。次いで、樹脂を水６．６リットルで洗浄し、モノマー含量がごくわずかであり、プロシアニジン含量が少ないために、この溶液も除去する。処分したこれらの水溶液（生成物１）は、全乾燥残渣６９ｇ（出発材料に対する重量収率：６．９％ｗ／ｗ）、カテキンＨＰＬＣ含量０．０９％、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．１０％、全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）０．１９％ｗ／ｗを有する。
【００４１】
カラムを、９０％ｖ／ｖの水性エタノール９リットルで溶出する。得られた溶出液を回収し、減圧下６０℃で乾燥して、出発材料に対する収率が９．８０％ｗ／ｗに相当する乾燥生成物（生成物２）９８グラムを得る。この生成物は、カテキンＨＰＬＣ含量６．２５％、エピカテキンＨＰＬＣ含量４．７７％およびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）１１．０２％ｗ／ｗを有する。
【００４２】
例６
ブドウ種子から得られた抽出物の精製：手順２（ステップｄ）
水−アセトン抽出（ステップａ；例２）後、ステップ（ｂ）（例４）に記載の部分精製によって得られた、乾燥残渣を１７３ｇ有する透明水溶液を濃縮して、乾燥残渣１０％ｗ／ｗにする。
【００４３】
その後、この水溶液を室温に戻し、次いでロームアンドハース製ＸＡＤ１１８０（登録商標）樹脂３３００ｍｌを含むクロマトグラフィーカラムに挿入し、保持されなかった溶液を除去する。樹脂を水６リットルで洗浄し、洗浄液を、保持されなかった溶液と混合する。得られた水溶液を乾燥して、乾燥残渣９９．４ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量１．２９％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．４６％ｗ／ｗを有する生成物３を得る。
【００４４】
次いで、樹脂を１０％ｖ／ｖのアセトン６リットルで洗浄し、得られた溶液を収集し乾燥する（生成物４）。前記生成物は、乾燥残渣２３．９ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量１３．５％ｗ／ｗ、ＨＰＬＣエピカテキン含量８．４１％ｗ／ｗを有する。
【００４５】
次いで、樹脂を２０％ｖ／ｖのアセトン６リットルで洗浄し、得られた溶液を収集し乾燥する（生成物５）。前記生成物は、乾燥残渣１５．３ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量１４．３％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量１０．９％ｗ／ｗを有する。
【００４６】
次いで、樹脂を３０％ｖ／ｖのアセトン６リットルで洗浄し、得られた溶液を収集し乾燥する（生成物６）。前記生成物は、乾燥残渣１４．９５ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量２．２１％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量２．０４％ｗ／ｗを有する。
【００４７】
次いで、樹脂を４０％ｖ／ｖのアセトン６リットルで洗浄し、得られた溶液を収集し乾燥する（生成物７）。前記生成物は、乾燥残渣１４．２ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量１．０６％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．６６％ｗ／ｗを有する。
【００４８】
次いで、樹脂を５０％ｖ／ｖのアセトン６リットルで洗浄し、得られた溶液を収集し乾燥する（生成物８）。前記生成物は、乾燥残渣３．５１ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量０．６７％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．４６％ｗ／ｗを有する。
【００４９】
得られた各生成物を、任意で混合して、所望のモノマー含量の生成物を得ることができる。例えば、モノマー含量が少ない生成物は、３．５１ｇの生成物８を１４．２ｇの生成物７と混合して、カテキンＨＰＬＣ含量０．９８％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．６２％ｗ／ｗ、ＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）１．６０％ｗ／ｗを有する生成物を１７．７１ｇ得ることによって得られる。あるいは、３．５１ｇの生成物８を、１４．２ｇの生成物７および１５．０ｇの生成物３と混合して、カテキンＨＰＬＣ含量１．１２％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．５５％ｗ／ｗおよびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）１．６７％ｗ／ｗを有する生成物を３２．７１ｇ得ることもできる。
【００５０】
一方、モノマー含量の多い生成物は、２３．９ｇの生成物４を１５．３ｇの生成物５と混合して、カテキンＨＰＬＣ含量１３．８１％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量９．３８％ｗ／ｗおよびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）２３．１９％ｗ／ｗを有する生成物を３９．２ｇ得ることによって得られる。
【００５１】
例７
ブドウ種子から得られた抽出物からの水溶性タンニンの除去（ステップｃ）
乾燥残渣を１６８ｇ有するステップｂ（例３）の部分精製から得られた透明水溶液を処理して、水溶性タンニンを除去する。該溶液に、処理される抽出物の乾燥残渣の重量に対して約２０％ｗ／ｗに相当する３４ｇのＰＶＰＰを添加する。
【００５２】
室温で１時間撹拌した後、ＰＶＰＰを、ひだ付きフィルターで濾別する。得られた溶液は、２．７％ｗ／ｗのタンニン含量を有する部分的に精製された抽出物の乾燥残渣を１６０ｇ有する。
【００５３】
出発材料に対する重量収率は、１６．０％ｗ／ｗである。
【００５４】
例８
ブドウ種子から得られた抽出物からの水溶性タンニンの除去（ステップｃ）
ステップｂ（例４）の部分精製から得られ、乾燥残渣を１６８ｇ有する透明水溶液を処理して、水溶性タンニンを除去する。該溶液に、処理される抽出物の乾燥残渣の重量に対して約３０％ｗ／ｗに相当する５２ｇのＰＶＰＰを添加する。
【００５５】
室温で１時間撹拌した後、ＰＶＰＰを、ひだ付きフィルターで濾別する。
【００５６】
得られた溶液は、１．５％ｗ／ｗのタンニン含量を有する部分的に精製された抽出物の乾燥残渣を１６３ｇ有する。
【００５７】
出発材料に対する重量収率は、１６．３％ｗ／ｗである。
【００５８】
例９
ブドウ種子から得られた抽出物の精製：手順１（ステップｄ）
ステップ（ｃ）（例７）の部分精製から得られた、乾燥残渣を１６０ｇ有する透明水溶液を濃縮して、１０％ｗ／ｗの乾燥残渣にする。部分的に精製された抽出物のこの透明溶液は、カテキンＨＰＬＣ含量３．８７％、エピカテキンＨＰＬＣ含量２．９６％およびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）６．８３％ｗ／ｗの乾燥残渣を有する。
【００５９】
この水溶液を室温に戻し、次いで水で調整したロームアンドハース製ＸＡＤ７ＨＰ（登録商標）樹脂３２００ｍｌを含むクロマトグラフィーカラムに入れる。該水溶液は樹脂に吸着するが、カラムから出る保持されなかった溶液は処分される。次いで、樹脂を水６．４リットルで洗浄し、モノマー含量がごくわずかであり、プロシアニジン含量が少ないために、この溶液も除去する。処分したこれらの水溶液（生成物９）は、全乾燥残渣６５ｇ（出発材料に対する重量収率：６．５％ｗ／ｗ）、カテキンＨＰＬＣ含量０．０９％、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．１０％を有し、モノマー全含量（カテキン＋エピカテキン）は０．１９％ｗ／ｗとなる。
【００６０】
カラムを、９０％ｖ／ｖの水性エタノール９リットルで溶出する。得られた溶出液を回収し、減圧下６０℃で乾燥させて、出発材料に対して９．５０％ｗ／ｗの収率に相当する乾燥生成物（生成物１０）９５グラムを得る。この生成物は、カテキンＨＰＬＣ含量６．３４％、エピカテキンＨＰＬＣ含量４．８５％およびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）１１．１９％ｗ／ｗを有する。
【００６１】
例１０
ブドウ種子から得られた抽出物の精製：手順３（ステップｄ）
ステップ（ｃ）（例７）の部分精製から得られた、乾燥残渣を１６０ｇ有する透明水溶液を濃縮して、１０％ｗ／ｗの乾燥残渣にする。
【００６２】
この透明水溶液を室温に戻し、次いでロームアンドハース製ＸＡＤ１１８０（登録商標）樹脂１６００ｍｌを含むクロマトグラフィーカラムに入れる。該水溶液は樹脂に吸着するが、カラムから出る保持されなかった溶液は除去される。次いで、樹脂を水３リットルで洗浄し、洗浄液を収集し、それを保持されなかった溶液と混合する。得られた水溶液を乾燥させて（生成物１１）を得る。前記生成物は、乾燥残渣１０６．２ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量１．３９％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．９５％ｗ／ｗを有する。
【００６３】
次いで、樹脂をエタノール（１０％ｖ／ｖ）３リットルで洗浄し、次いで、得られた溶液を収集し乾燥する（生成物１２）。前記生成物は、乾燥残渣１２．０ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量１２．０％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量７．８０％ｗ／ｗを有する。
【００６４】
次いで、樹脂をエタノール（２０％ｖ／ｖ）３リットルで洗浄し、得られた溶液を収集し乾燥する（生成物１３）。前記生成物は、乾燥残渣１４．７ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量１１．５％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量９．２３％ｗ／ｗを有する。
【００６５】
次いで、樹脂をエタノール（３０％ｖ／ｖ）３リットルで洗浄し、得られた溶液を収集し乾燥する（生成物１４）。前記生成物は、乾燥残渣２０．０ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量６．４９％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量５．７６％ｗ／ｗを有する。
【００６６】
次いで、樹脂をエタノール（４０％ｖ／ｖ）３リットルで洗浄し、得られた溶液を収集し乾燥する（生成物１５）。前記生成物は、乾燥残渣５．０８ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量２．８４％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量２．５９％ｗ／ｗを有する。
【００６７】
次いで、樹脂をエタノール（５０％ｖ／ｖ）３リットルで洗浄し、得られた溶液を収集し乾燥する（生成物１６）。前記生成物は、乾燥残渣１．５５ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量０．５１％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．３５％ｗ／ｗを有する。
【００６８】
得られた各生成物を、任意で混合して、所望のモノマー含量の生成物を得ることができる。例えば、モノマー含量が少ない生成物は、１．５５ｇの生成物１６を５．０８ｇの生成物１５と混合して、カテキンＨＰＬＣ含量２．２６％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量２．１１％ｗ／ｗおよびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）４．３７％ｗ／ｗを有する生成物を６．６３ｇ得ることによって得られ、あるいは１．５５ｇの生成物１６を７．００ｇの生成物１１と混合して、カテキンＨＰＬＣ含量１．１９％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．８９％ｗ／ｗおよびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）２．０８％ｗ／ｗを有する生成物を８．５５ｇ得ることができる。
【００６９】
一方、モノマー含量の多い生成物は、１２．０ｇの生成物１２を、１２．０ｇの生成物１３および１５．０ｇの生成物１４と混合して、カテキンＨＰＬＣ含量９．７３％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量７．４６％ｗ／ｗおよびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）１７．１９％ｗ／ｗを有する生成物を３９．０ｇ得ることによって得られ、あるいは１２．０ｇの生成物１２を１２．０ｇの生成物１３と混合して、カテキンＨＰＬＣ含量１１．７５％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量８．５２％ｗ／ｗおよびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）２０．２７％ｗ／ｗを有する生成物を２４．０ｇ得ることができる。
【００７０】
例１１
ブドウ種子から得られた抽出物の精製：手順４（ステップｄ）
ステップ（ｃ）（例７）の部分精製から得られた、乾燥残渣を１６０ｇ有する透明水溶液を濃縮して、１０％ｗ／ｗの乾燥残渣にする。
【００７１】
この透明水溶液を濃縮して、乾燥残渣（１２％ｗ／ｗ）にし、次いでエタノール（９５％ｖ／ｖ）３２０ｍｌを添加して、約１０％ｗ／ｗの乾燥残渣および約（２０％ｖ／ｖ）のエタノール含量を得る。この水−アルコール溶液を室温に戻し、次いでロームアンドハース製ＸＡＤ１１８０（登録商標）樹脂１６００ｍを含むクロマトグラフィーカラムに入れる。カラムから出る保持されなかった溶液を除去する。次いで、樹脂を２０％ｖ／ｖのエタノール９．６０リットルで洗浄し、カテキンＨＰＬＣ含量４．３７％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量３．３５％ｗ／ｗおよびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）７．７２％ｗ／ｗの乾燥残渣を１３５．６ｇ有する洗浄液を、やはり除去する。
【００７２】
カラムを７０％ｖ／ｖの水性エタノール６．６０リットルで溶出し、カラムから出る溶出液を収集し、減圧下６０℃で乾燥させて、乾燥残渣２４．３ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量０．７９％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．６２％ｗ／ｗおよびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）１．４１％ｗ／ｗを有する生成物（生成物１７）を得る。
【００７３】
例１２
ブドウ種子から得られた抽出物の精製：手順２（ステップｄ）
ステップ（ａ）（例２）の水−アセトン抽出の後、ステップ（ｂ）（例４）の部分精製およびステップ（ｃ）（例８）のタンニン除去から得られた、乾燥残渣を１６３ｇ有する透明水溶液を濃縮して、１０％ｗ／ｗの乾燥残渣にする。
【００７４】
この透明水溶液を室温に戻し、次いで水で調整したロームアンドハース製ＸＡＤ７ＨＰ（登録商標）樹脂３２００ｍｌを含むクロマトグラフィーカラムに入れる。水−アルコール溶液は樹脂に吸着するが、カラムから出る保持されなかった溶液は除去される。次いで、樹脂を水６．４リットルで洗浄し、モノマー含量がごくわずかであり、プロシアニジン含量が少ないために、この溶液も除去する。処分したこれらの水溶液（生成物１８）は、全乾燥残渣６２．５ｇ（出発材料に対する重量収率：６．３％ｗ／ｗ）、カテキンＨＰＬＣ含量０．１１％、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．１４％およびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）０．２５％ｗ／ｗを有する。
【００７５】
カラムを９０％ｖ／ｖの含水アセトン９リットルで溶出し、カラムから出る溶出液を収集し、減圧下６０℃で乾燥させて、乾燥生成物（生成物１９）９９．８ｇを得る（出発材料に対する収率：１０％ｗ／ｗ）。この生成物は、カテキンＨＰＬＣ含量７．１１％、エピカテキンＨＰＬＣ含量４．５２％およびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）１１．６３％ｗ／ｗを有する。
【００７６】
例１３
ブドウ種子から得られた抽出物の精製：手順３（ステップｄ）
ステップａ（例２）の水−アセトン抽出の後、ステップ（ｂ）（例４）の部分精製およびステップｃ（例８）のタンニン除去によって得られた、乾燥残渣を１６３ｇ有する透明水溶液を濃縮して、１０％ｗ／ｗの乾燥残渣にする。
【００７７】
この水溶液を室温に戻し、次いで水で調整したロームアンドハース製ＸＡＤ１１８０（登録商標）樹脂３２００ｍｌを含むクロマトグラフィーカラムに入れる。
【００７８】
該水溶液は樹脂に吸着するが、カラムから出る保持されなかった溶液は除去される。次いで、樹脂を水６リットルで洗浄し、この溶液も除去し、それを保持されなかった溶液と混合する。得られた水溶液を乾燥して、生成物（生成物２０）を得る。前記生成物は、乾燥残渣１０６．４ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量１．５８％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．４７％ｗ／ｗを有する。
【００７９】
次いで、樹脂を２０％ｖ／ｖのアセトン６リットルで洗浄し、得られた溶液を収集し乾燥する（生成物２２）。前記生成物は、乾燥残渣１１．７ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量１６．８％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量１５．２％ｗ／ｗを有する。
【００８０】
次いで、樹脂を３０％ｖ／ｖのアセトン６リットルで洗浄し、得られた溶液を収集し乾燥する（生成物２３）。前記生成物は、乾燥残渣１１．８ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量２．２０％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量２．２０％ｗ／ｗを有する。
【００８１】
次いで、樹脂を４０％ｖ／ｖのアセトン６リットルで洗浄し、得られた溶液を収集し乾燥する（生成物２４）。前記生成物は、乾燥残渣１０．２ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量１．１５％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．７５％ｗ／ｗを有する。
【００８２】
次いで、樹脂を５０％ｖ／ｖのアセトン６リットルで洗浄し、得られた溶液を収集し乾燥する（生成物２５）。前記生成物は、乾燥残渣３．０４ｇ、カテキンＨＰＬＣ含量０．７１％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．４３％ｗ／ｗを有する。
【００８３】
得られた各生成物を、任意で混合して、所望のモノマー含量の生成物を得ることができる。例えば、モノマー含量が少ない生成物は、３．０４ｇの生成物２５を１０．２ｇの生成物２４と混合して、カテキンＨＰＬＣ含量１．０５％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．６８％ｗ／ｗおよびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）１．７３％ｗ／ｗを有する生成物を１３．２４ｇ得ることによって得られ、あるいは３．０４ｇの生成物２５を、１０．２ｇの生成物２４および１５．０ｇの生成物２０と混合して、ＨＰＬＣモノマー含量ｘ１．３３％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量０．５７％ｗ／ｗおよびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）１．９０％ｗ／ｗを有する生成物を２８．２４ｇ得ることができる。
【００８４】
一方、モノマー含量の多い生成物は、１９．６ｇの生成物２１を１１．７ｇの生成物２２と混合して、カテキンＨＰＬＣ含量１５．８０％ｗ／ｗ、エピカテキンＨＰＬＣ含量１１．８８％ｗ／ｗ、およびＨＰＬＣ全モノマー含量（カテキン＋エピカテキン）２７．７６％ｗ／ｗを有する生成物を３１．３ｇ得ることによって得られる。