(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式（Ｉ）：
【化１】
0005509099.tif 000011
（式中のＡは−Ｘ１−または−Ｘ１−ＯＣ（Ｒ９）（Ｒ10）−であり、
Ｘ１は炭素原子１〜５を有するアルキル基で、炭素原子１〜５を有する１つ以上のアルキル基、または炭素原子１〜３を有する１つ以上のアルコキシ基で任意に置換され、
Ｒ９およびＲ１０は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、または炭素原子１〜３を有するアルコキシ基であり、
ＹはＯＨであり、
Ｒ１およびＲ２は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、または炭素原子１〜３を有するアルコキシ基であり、
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ８は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、炭素原子１〜３を有するアルコキシ基、ハロゲン原子、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ’）（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯＲ”、−ＣＮ、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２Ｒ’、ニトロ基、およびトリフルオロメチルであり、Ｒ’およびＲ”は互いに同一または異なり、水素および炭素原子１〜５を有するアルキル基で示され、
Ｒ５は水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、炭素原子１〜３を有するアルコキシ基、ハロゲン原子、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ’）（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯＲ”、ニトロ基およびトリフルオロメチル、またはＲ５がＲ６およびＲ７の一つと共に炭素原子５または６を有する環を形成し、Ｒ’およびＲ”は互いに同一または異なり、水素および炭素原子１から５を有するアルキル基を示し、
Ｒ６およびＲ７は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、またはＣ＝Ｏ基を共に形成する、またはＲ６およびＲ７の一つがＲ５と共に炭素原子５または６を有する環を形成し、
Ａが炭素原子１のアルキル基の場合には、炭素原子１〜５を有する一つ以上のアルキル基で任意に置換され、少なくともＲ１〜Ｒ８のいずれかの群の一つは水素と異なるものである）化合物。
【請求項２】
Ｘ１は炭素原子１〜３を有するアルキル基で、任意に炭素原子１〜３を有する一つ以上のアルキル基、または炭素原子１または２を有する一つ以上のアルコキシ基であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘ１はＣＨ２基、ＣＨ２ＣＨ２基またはＣ（ＣＨ３）２基で、そしてＲ９とＲ１０は互いに同一または異なり、水素またはＣＨ３基であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ａ残基はＣＨ２基、ＣＨ２ＣＨ２基、Ｃ（ＣＨ３）２基、ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２基、ＣＨ２ＣＨ２ＯＣ（ＣＨ3）２基、およびＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣ（ＣＨ3）２基からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３，Ｒ４およびＲ８は互いに同一または異なり、水素原子、炭素原子１〜３を有するアルキル基、炭素原子１または２を有するアルコキシル基、Ｂｒ、Ｃｌ、またはＦ原子、ＯＨ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、またはＮ（Ｒ’）（Ｒ”）基、または−Ｎ（Ｒ’）ＣＯＲ”基、−ＣＮ基、−ＣＯＮＲ’Ｒ”基、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”基、−ＳＯ２Ｒ’ からなる群から選択され、Ｒ’およびＲ”は互いに同一または異なり、水素原子、炭素原子１から３を有するアルキル基で示すことを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ５は水素原子、炭素原子１から３を有するアルキル基、炭素原子１または２を有するアルコキシル基、ハロゲン原子、ＯＨ基からなる群から選択されるか、またはＲ５がＲ６およびＲ７の一つと共に炭素原子５または６を有する環を形成することを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ６およびＲ７は互いに同一または異なり、水素原子、炭素原子１〜３を有するアルキル基である群から選択されるか、または一緒にＣ＝Ｏ基を共に形成するか、またはＲ６およびＲ７の一つがＲ５と共に炭素原子５または６の環を形成することを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物、または薬学的に受け入れられるそれらの塩と、少なくとも一種の薬学的に受け入れられる媒介物とを含む医薬品組成物。
【請求項９】
前記薬学的に受け入れられる塩は付加塩と生理的に受け入れられる有機または無機酸類または塩基類であることを特徴とする、請求項８に記載の医薬品組成物。
【請求項１０】
前記生理的に受け入れられる酸類は塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、酢酸、アスコルビン酸、安息香酸、クエン酸、フマル酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、コハク酸、タンニン酸、および酒石酸からなる群から選択されることを特徴とする、請求項９に記載の医薬品組成物。
【請求項１１】
前記生理的に受け入れられる塩基類は水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、炭酸マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、Ｎ−メチルグルカミン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペリジン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピロリジン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、およびトロメタミンからなる群から選択されることを特徴とする、請求項９に記載の医薬品組成物。
【請求項１２】
前記組成物は式（Ｉ）の化合物、またはそれらの薬学的に受け入れられる塩、または混合物の立体異性体またはエナンチオマーを含むことを特徴とする、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の医薬品組成物。
【請求項１３】
前記薬学的に受け入れられる媒介物は流動促進剤、結合剤、崩壊剤、充填剤、希釈剤、香味剤、着色剤、流動化剤、滑剤、保存剤、保湿剤、吸収剤、および甘味料を含む群から選択されることを特徴とする、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の医薬品組成物。
【請求項１４】
次式（Ｉ）：
【化２】
0005509099.tif 000012
（式中のＡは−Ｘ１−または−Ｘ１−ＯＣ（Ｒ９）（Ｒ10）−であり、
Ｘ１は炭素原子１〜５を有するアルキル基で、炭素原子１〜５を有する一以上のアルキル基または炭素原子１〜３を有する一以上のアルコキシ基で任意に置換され、そして
Ｒ９およびＲ１０は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、または炭素原子１〜３を有するアルコキシ基であり、
ＹはＯＨであり、
Ｒ１およびＲ２は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、または炭素原子１〜３を有するアルコキシ基であり、
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ８は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、炭素原子１〜３を有するアルコキシ基、ハロゲン原子、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ’）（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯＲ”、−ＣＮ、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２Ｒ’、ニトロ基、およびトリフルオロメチルで、Ｒ’およびＲ”は互いに同一または異なり、水素および炭素原子１〜５を有するアルキル基で示し、
Ｒ５は水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、炭素原子１〜３を有するアルコキシ基、ハロゲン原子、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ’）（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯＲ”、ニトロ基およびトリフルオロメチル、またはＲ５がＲ６およびＲ７の一つと共に、炭素原子５または６を有する環を形成し、Ｒ’およびＲ”は互いに同一または異なり、水素および炭素原子１〜５を有するアルキル基を示し、
Ｒ６およびＲ７は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、またはＣ＝Ｏ基を共に形成するか、またはＲ６とＲ７の一方がＲ５と共に炭素原子５または６を有する環を形成する）化合物の、ＣＸ３ＣＲ１およびｐ４０の発現に基づく疾患で、ループス腎炎類、糖尿病性ネフロパシー、クローン病、潰瘍性大腸炎類、冠動脈疾患類、再狭窄、心筋梗塞、咽喉痛、慢性退行性炎症性疾患類、乾癬、ＩＩ型糖尿病、腫瘍類、癌医薬組成物を含む群から選択される疾患を治療用の医薬品組成物の製造への使用。
【請求項１５】
次式（Ｉ）：
【化３】
0005509099.tif 000013
（式中のＡは−Ｘ１−または−Ｘ１−ＯＣ（Ｒ９）（Ｒ１０）−であり、
Ｘ１は炭素原子１〜５を有するアルキル基で、炭素原子１〜５を有するアルキル基、または炭素原子１〜３を有する一つ以上のアルコキシ基で任意に置換され、
Ｒ９およびＲ１０は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、または炭素原子１〜３を有するアルコキシ基であり、
ＹはＯＨであり、
Ｒ１およびＲ２は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、または炭素原子１〜３を有するアルコキシ基であり、
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ８は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、炭素原子１〜３を有するアルコキシ基、ハロゲン原子、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ’）（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯＲ”、−ＣＮ、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２Ｒ’、ニトロ基、およびトリフルオロメチルであり、Ｒ’およびＲ”は互いに同一または異なり、水素および炭素原子１〜５を有するアルキル基で示され、
Ｒ５は水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、炭素原子１〜３を有するアルコキシ基、ハロゲン原子、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ’）（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯＲ”、ニトロ基およびトリフルオロメチル、またはＲ５がＲ６およびＲ７の一方と結合し、炭素原子５または６を有する環を形成し、Ｒ’およびＲ”は互いに同一または異なり、水素および炭素原子１〜５を有するアルキル基を示し、
Ｒ６およびＲ７は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、またはＣ＝Ｏ基を共に形成するか、またはＲ６およびＲ７の一方がＲ5と共に結合し、炭素原子５または６を有する環を形成し、
Ａが炭素原子１のアルキル基の場合には、炭素原子１〜５を有する一つ以上のアルキル基で任意に置換され、少なくともＲ１〜Ｒ８のいずれかの群の一つは水素と異なるものである）化合物の、
ＭＣＰ−１、ＣＸ３ＣＲ１およびｐ４０の発現に基づいた疾患の治療用の医薬品組成物の製造への使用。
【請求項１６】
前記ＭＣＰ−１およびＣＸ３ＣＲ１の発現に基づく疾患は、関節疾患、腎疾患、循環器疾患、メタボリック症候群、肥満、糖尿病、インスリン耐性および癌を含む群から選択されることを特徴とする、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記ＭＣＰ−１の発現に基づく疾患はリウマチ性関節炎、ウイルス感染によって引き起こされる関節炎、乾癬性関節炎、関節症、ループス腎炎、糖尿病性ネフロパシー、糸球体腎炎、多発性嚢胞腎、間質性肺炎、線維症、多発性硬化症、アルツハイマー病、ＨＩＶに付随する痴呆、アトピー性皮膚炎、乾癬、血管炎、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、篇桃炎、急性冠状動脈症候群、腺腫類、癌腫および転移、代謝疾患および外科的処置後の合併症を含む群から選択されることを特徴とする、請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
前記ＣＸ３ＣＲ１の発現に基づく疾患は、リウマチ性関節炎、ループス腎炎、糖尿病性ネフロパシー、クローン病、潰瘍性大腸炎、冠動脈疾患、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、扁桃炎および外科的処置後の合併症を含む群から選択されることを特徴とする、請求項１５に記載の使用。
【請求項１９】
前記ｐ４０の発現に基づく疾患は、自己免疫疾患、慢性退行性炎症性疾患、癌を含む群から選択されることを特徴とする、請求項１５に記載の使用。
【請求項２０】
前記ｐ４０の発現に基づく疾患は、リウマチ性関節炎、乾癬、糸球体腎炎、糖尿病、エリテマトーデス、糖尿病、クローン病、および腫瘍を含む群から選択されることを特徴とする、請求項１５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１−ベンジル−３−ヒドロキシメチルインダゾール誘導体、それを含む医薬品組成物、並びにそのＭＣＰ−１、ＣＸ３ＣＲ１およびｐ４０の発現に基づく疾患の治療への使用に関するものである。
【０００２】
特に、本発明は下記式（Ｉ）に係る新規な１−ベンジル−３−ヒドロキシメチルインダゾール誘導体、およびこれを薬学的に許容可能な賦形剤と共に含む医薬品組成物に関する。さらに、本発明はＭＣＰ−１、ＣＸ３ＣＲ１およびｐ４０の発現に基づく疾患の治療に活性である医薬品組成物を製造するための１−ベンジル−３−ヒドロキシメチルインダゾール誘導体の使用、ならびにＭＣＰ−１、ＣＸ３ＣＲ１およびｐ４０の発現に基づく疾患を治療または予防する方法の使用に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
既に知られているように、ＭＣＰ−１（単球走化性タンパク質−１）はケモカインのβサブファミリーに属するタンパク質である。ＭＣＰ−１は単球に対する強力な走化作用を有し、またＴリンパ球、肥満細胞および好塩基球に対してその活性を及ぼす（Ｒｏｌｌｉｎｓ  ＢＪ．，Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ，Ｂｌｏｏｄ１９９７；９０：９０９−９２８；Ｍ．Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ，Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｔｒａｆｆｉｃ，Ｎａｔｕｒｅ１９９８；３９２：５６５−５６８）。
【０００４】
βサブファミリーに属する他のケモカインは、例えば、ＭＣＰ−２（単球走化性タンパク質−２）、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４、ＭＩＰ−１α、およびＭＩＰ−１β、ＲＡＮＴＥＳがある。
【０００５】
βサブファミリーはαサブファミリーと構造が異なり、最初の２つのシステインがβサブファミリーでは隣接する一方、αサブファミリーでは介在するアミノ酸によって分離される。
【０００６】
ＭＣＰ−１は様々な細胞種（白血球、血小板、線維芽細胞、血管内皮細胞および平滑筋細胞）によって産出される。
【０００７】
全ての既知のケモカインの中で、ＭＣＰ−１は単核細胞およびマクロファージに対して最も大きな特異性を示し、このため化学走化性因子だけでなく活性化刺激までも構成し、その結果多数の炎症性要因（スーパーオキサイド、アラキドン酸および誘導体、サイトカイン／ケモカイン）を産出し、食細胞活性を増幅するためのプロセスを誘導する。
【０００８】
一般的にケモカイン、特にＭＣＰ−１の分泌は、通常様々な炎症誘導性因子、例えばインターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、ＴＮＦα（腫瘍壊死因子α）、インターフェロン−γおよび細菌性リポ多糖（ＬＰＳ）によって誘導される。
【０００９】
ケモカイン／ケモカイン受容体系をブロックすることによる炎症反応の予防は、薬理学的関与の主な標的の一つを示す（Ｇｅｒａｒｄ  Ｃ．  ａｎｄ  Ｒｏｌｌｉｎｓ  Ｂ．  Ｊ．，Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１；２：１０８−１１５）。
【００１０】
ＭＣＰ−１は炎症処理中に重要な役割を果たし、様々な病理における新しく確証された標的として示されることを示唆する多くの証拠がある。
【００１１】
ＭＣＰ−１の顕著な物理病理学的貢献の証拠は、関節および腎臓炎症性の疾患（慢性関節リウマチ、ループス腎炎、糖尿病性腎臓障害および移植後の拒絶）を伴う患者のケースから得られた。
【００１２】
しかしながら、より最近、ＭＣＰ−１は、ＣＮＳ（多発性硬化症、アルツハイマー病、ＨＩＶに関連した認知症）および他の病理および症状に関与した要因のうち明らかな炎症性の構成要素の有無で、過敏性皮膚炎、大腸炎、介在性の肺病理、再狭窄、アテローム性動脈硬化、外科的関与（例えば血管形成術、動脈切除、移植、器官および／または組織置換、プロテーゼのインプラント）後の合併症、癌（アデノーマ、癌腫および転移）およびインスリン耐性および肥満のような代謝病さえ含むことが判明した。
【００１３】
さらにケモカイン系がウイルス感染の制御および克服に関与する事実にも関わらず、最近の研究は、あるケモカイン、特に、ケモカインのＭＣＰ−１の反応が宿主病原体相互作用の場合に有害な役割を有する場合があることを証明した。特にＭＣＰ−１は、関節および筋肉における単核細胞／マクロファージ浸潤によって特徴付けられたαウイルスが媒介となる病理の器官および組織損害に対して寄与することを示した（Ｍａｈａｌｉｎｇａｍ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｖｉｒｕｓｅｓ：ｆｒｉｅｎｄ  ｏｒ  ｆｏｅｓ？  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ２００３；１１：３８３−３９１；Ｒｕｌｌｉ  Ｎ．  ｅｔ  ａｌ．Ｒｏｓｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｖｉｒｕｓ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．２００５；１０７：３２９−３４２）。
【００１４】
単核細胞はマクロファージおよび樹状細胞の主な前躯体であって、炎症プロセスの媒介物として重要な役割を果たす。ＣＸ３ＣＲ１とそのリガンドＣＸ３ＣＬ１（フラクタルカイン）と共に、単核細胞の移行性および細胞間接着性を調整する際の重要な因子である。ＣＸ３ＣＲ１は単核球で発現する一方、ＣＸ３ＣＬ１は血管内皮細胞の膜内外ケモカインである。ヒトおよび動物モデルの遺伝子の研究は、炎症性疾患の生理病理学においてＣＸ３ＣＲ１およびＣＸ３ＣＬ１の重要な役割を立証する。実際、関節、腎臓、胃腸および脈管炎症性の疾患（例えば慢性関節リウマチ、ループス腎炎、糖尿病性腎障害、クローン病、潰瘍性大腸炎、再狭窄およびアテローム性動脈硬化）の発病および進行において、ＣＸ３ＣＲ１およびそのリガンドの重要な貢献を示唆する多くの証拠がある。
【００１５】
ＣＸ３ＣＲ１の発現は、Ｔ細胞で過度に制御されて、慢性関節リウマチを患う患者において、関節滑膜に蓄積すると考えられる。さらに、ＣＸ３ＣＬ１の発現は、これら患者の滑膜内に存在する血管内皮細胞および線維芽細胞において過度に規制される。その結果、ＣＸ３ＣＲ１／ＣＸ３ＣＬ１系は細胞の種類および滑膜での浸潤方法を制御する際に重要な役割を果たし、慢性関節リウマチの発病に関与する（Ｎａｎｋｉ  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＸ３ＣＲ１−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｔｙｐｅ  １  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ｓｙｎｏｖｉｕｍ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ”，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（２００２），ｖｏｌ．４６，Ｎｏ．１１，ｐｐ．２８７８−２８８３）。
【００１６】
腎障害を患う患者において、腎臓を浸潤する大部分の炎症性白血球はＣＸ３ＣＲ１を発現し、特に最も共通の炎症性腎臓病理ならびに腎臓移植拒絶反応に関与した主な細胞型の２つ、すなわちＴ細胞および単核細胞で発現する（Ｓｅｇｅｒｅｒ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆｒａｃｔａｌｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  （ＣＸ３ＣＲ１）  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｋｉｄｎｅｙ  ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（２００２）６２，ｐｐ．４８８−４９５）。
【００１７】
ＣＸ３ＣＲ１／ＣＸ３ＣＬ１系の関与はまた炎症性腸疾患（ＩＢＤ）で示唆された。実際、ＩＢＤを患う患者（例えばクローン病、潰瘍性大腸炎）の場合、腸の毛管系によるＣＸ３ＣＬ１の生産の顕著な増加およびＣＸ３ＣＲ１陽性細胞の顕著な増加が、循環レベルで、また粘膜内の両方で立証された（Ｓａｎｓ  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ＣＸ３ＣＲ１＋Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｍｕｃｏｓａｌ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒａｃｔａｌｋｉｎｅ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅｓ”，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ２００７，ｖｏｌ．１３２，Ｎｏ．１，ｐｐ．１３９−１５３）。
【００１８】
さらに関心深いことは、血管障害、特に病的状態、例えばアテローム性動脈硬化および再狭窄下でＣＸ３ＣＲ１／ＣＸ３ＣＬ１系により果たされる重要な役割の立証である。ＣＸ３ＣＲ１は、血管壁における単核球の浸潤および蓄積のプロセスに重要な因子として示され、ヒトでのＣＸ３ＣＲ１多形成はアテローム性動脈硬化、冠状動脈障害および再狭窄の軽減した罹患率と関係している（Ｌｉｕ  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｒｏｓｓ−ｔａｌｋ  ａｍｏｎｇ  Ｓｍａｄ，  ＭＡＰＫ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ａｄｖｅｎｔｉｔｉａｌ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｂｙ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−１  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｇａｘ”Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｅ．Ｂｉｏｌ．２００８；ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ  Ｄ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｕｔａｎｔ  ＣＸ３ＣＲ１  −  Ｍ２８０  ｈａｓ  ｉｍｐａｉｒｅｄ  ａｄｈｅｓｉｖｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ”，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２００３；Ｎｉｅｓｓｎｅｒ  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ２００５）。
【００１９】
ＩＬ−１２およびＩＬ−２３は炎症誘発性のヘテロ二量体のサイトカインの小ファミリーのメンバーである。双方のサイトカインは、共通のサブユニットｐ４０を共有するとともに、ｐ３５サブユニットと共有結合し、ＩＬ−１２成熟形態を生成、またはｐ１９サブユニットと共有結合し、ＩＬ−２３成熟形態を生成する。ＩＬ−１２のレセプターはサブユニットＩＬ−１２Ｒβ１とＩＬ−１２Ｒβ２から構成される一方、ＩＬ−２３のレセプターはサブユニットＩＬ−１２Ｒβ１とＩＬ−２３Ｒから構成される。
【００２０】
ＩＬ−１２およびＩＬ−２３は活性化した樹枝細胞および食細胞で主に発現している。２つのサイトカインの受容体はＴおよびＮＫ細胞、ならびにＮＫ  Ｔ細胞で発現しているが、ＩＬ−２３のレセプター複合体の低レベルはさらに単核球、大食細胞、および樹枝細胞で存在する。
【００２１】
これらの類似点にも関わらず、ＩＬ−１２およびＩＬ−２３が異なった免疫学的回路を制御することを示唆する多くの証拠を立証した。実際は、ＩＬ−１２は、γ−インターフェロン（ＩＦＮ−γ）を産出できるＴｈ１細胞の分化を制御するとともに、細胞毒性、抗菌および抗腫瘍性反応を増加させるのに対して、ＩＬ−２３は、ＩＬ−１７を産出することができるＣＤ４＋細胞の産出を指示する回路を制御する。ＩＬ−２３依存性過程の誘導は、様々な種類の炎症細胞、例えばＴＨ−１７の流動化を指示し、それは免疫学的な反応で介在される数々の炎症症状の原因に重要なことを明らかにした。
【００２２】
ｐ４０の発現と関連のある症状の典型的な例は関節組織の慢性炎症疾患（例えば慢性関節リウマチ）、皮膚病組織の慢性炎症疾患（例えば乾癬）および胃腸組織の慢性炎症疾患（例えばクローン病）である。しかしながら、ＩＬ−２３はさらに腫瘍発生および成長を誘導する役割を及ぼす。実際は、ＩＬ−２３は連続した回路を腫瘍状況で調整して、血管形成および炎症性媒介の産出を刺激する。
【００２３】
乾癬とは世界の人口の３％に影響を及ぼす慢性炎症性の皮膚疾患である（Ｋｏｏ  Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｃｌｉｎ．１９９６；１４：４８５−９６；Ｓｃｈｏｎ  Ｍ．Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２００５；３５２：１８９９−９１２）。タイプ−１の異常な免疫反応は乾癬の病因と相互に関連があり、例えばＩＬ−１２およびＩＬ−２３といった、この反応を誘導するサイトカインが適切な治療目的を示すことができる。サブユニットｐ４０を共用するＩＬ−１２およびＩＬ−２３の発現が乾癬斑で著しく増加していて、そして前臨床の研究は乾癬の病因にこれらのサイトカインが役割を立証した。より最近、乾癬を患っている患者における抗ＩＬ−１２およびＩＬ−２３モノクローナル抗体治療が進行の兆候および重症な疾患の改善に効果的であり、その後、生理病理学的に乾癬のＩＬ−１２およびＩＬ−２３の役割を補強した。
【００２４】
クローン病は消化器の慢性炎症性病状で、それのいかなる部位（口から肛門）に影響がある。それは一般的に回腸の管の末端および大腸の特定な領域を悪化させる。それはしばしば、例えば口腔内潰瘍およびリウマチ性関節炎といった全身の自己免疫疾患と関連がある。クローン病はヨーロッパで５００，０００人以上そしてアメリカでは６００，０００人以上に影響を及ぼす。
【００２５】
クローン病はＴｈ１細胞媒介によるサイトカインの過度な活性と関連のある病状である。ＩＬ−１２はＴｈ１細胞媒介の炎症反応の開始に重要なサイトカインである。クローン病は、腸組織における抗原を示す細胞ではＩＬ−１２、そしてリンパ球および腸マクロファージではγ−インターフェロン（ＩＦＮ−γ）およびＴＮＦαの産出の増加と特徴づけられる。これらのサイトカインは、腸壁の炎症プロセスおよび肥大を誘導や支持するという病状兆候を特徴とする。臨床前および臨床の証拠は、ＩＬ−１２の阻害が腸炎症および／またはクローン病を患っている患者のモデルにおいて炎症反応の抑制を制御するのに効果的である事を立証した。
【００２６】
癌と炎症の関係は今では既成の事実である。腫瘍の多くの形状は炎症部位から由来し、そして炎症媒介はしばしば腫瘍で産出される。
【００２７】
ＩＬ−２３は癌と関連のあるサイトカインと識別され、特にＩＬ−２３の発現はヒト癌腫のサンプルにおいて正常な隣接した組織と比較して著しく高い。さらに正常な隣接した組織で、著しいＩＬ−２３発現の欠乏は腫瘍におけるＩＬ−２３の過剰な制御を示唆し、腫瘍発生でその役割を強化している。
【００２８】
欧州特許第３８２２７６号明細書（特許文献１）は、多くの１−ベンジル−３−ヒドロキシメチルインダゾール誘導体が、鎮痛剤活性に寄与していることを記載する。次に、欧州特許第５１０７４８号明細書（特許文献２）では、一方、これらの誘導体の自己免疫の治療で活性化している医薬品組成物の調製の使用を記載する。最後に、欧州特許第００５３３２号明細書（特許文献３）は、ＭＣＰ−１の産出を由来とする疾患の治療において活性のある医薬品組成物の調製で、この誘導体の使用を記載する。２−メチル−２−｛［１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］メトキシ｝プロパン酸は用量依存的にＭＣＰ−１の産出、そしてＴＮＦ−αは生体外の単球からＬＰＳおよびカンジダ・アルビカンスにおいて阻害すると考えられているのに対して、同じ化合物はサイトカインＩＬ−１およびＩＬ−６、そしてケモカインＩＬ−８、ＭＩＰ−１α、およびＲＡＮＴＥＳの産出には効果がなかったことを示した（Ｓｉｒｏｎｉ  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，“Ａ  ｓｍａｌｌ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｃａｐａｂｌｅ  ｏｆ  ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＣ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ−  １”，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗｏｒｋ．Ｖｏｌ．１０，Ｎｏ．３，４３７−４１，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ１９９９）。
【００２９】
欧州特許出願公開第１８５５２８号明細書（特許文献４）は多数のトリアジン誘導体を使用したＩＬ−１２の生産阻害に関する。欧州特許出願公開第１８８４３８号明細書（特許文献５）および欧州特許出願公開第１９９０７４号明細書（特許文献６）は、例えばロリプラム、アリフロ、およびジアゼビン−インドール誘導体といった酵素ＰＤＥ４の阻害剤を過度なＩＬ−１２産出と関連した疾患の治療および予防への使用に関する。欧州特許出願公開第３６９１１９号明細書（特許文献７）は分子量６００，０００から３，０００，０００ダルトンの間のヒアルロン酸をＩＬ−１２発現の制御および阻害に使用することに関する。欧州特許出願公開第４５８６８７号明細書（特許文献８）は、ＩＬ−１２の過度な産出に関する疾患の治療で、ピリミジン誘導体の使用に関する。欧州特許出願公開第８１９３４１号明細書（特許文献９）は、例えばピリジン、ピリミジン、トリアジン誘導体といったナイトラジェナスヘテロ環化合物をＩＬ−１２（または他のサイトカイン、例えばＩＬ−１２の産出を刺激するＩＬ−２３およびＩＬ−２７）の産出の阻害に使用することに関する。欧州特許出願公開第８２７４４７号明細書（特許文献１０）は、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、およびＩＬ−２７を過度に産出する疾患の治療に関してで、ピリミジン誘導体を使用することに関する。
【００３０】
欧州特許出願公開第８６９０５５号明細書（特許文献１１）、欧州特許出願公開第８６９０５６号明細書（特許文献１２）、および欧州特許出願公開第６７５８６２号明細書（特許文献１３）は、ＣＸ３ＣＲ１受容体の拮抗として働く、１，３−チアゾロ−４，５−ピリミジン誘導体を記載する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００３１】
【特許文献１】欧州特許第３８２２７６号明細書
【特許文献２】欧州特許第５１０７４８号明細書
【特許文献３】欧州特許第００５３３２号明細書
【特許文献４】欧州特許出願公開第１８５５２８号明細書
【特許文献５】欧州特許出願公開第１８８４３８号明細書
【特許文献６】欧州特許出願公開第１９９０７４号明細書
【特許文献７】欧州特許出願公開第３６９１１９号明細書
【特許文献８】欧州特許出願公開第４５８６８７号明細書
【特許文献９】欧州特許出願公開第８１９３４１号明細書
【特許文献１０】欧州特許出願公開第８２７４４７号明細書
【特許文献１１】欧州特許出願公開第８６９０５５号明細書
【特許文献１２】欧州特許出願公開第８６９０５６号明細書
【特許文献１３】欧州特許出願公開第６７５８６２号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３２】
これまでに開発された活性にも関わらず、ＭＣＰ−１、ＣＸ３ＣＲ１、およびｐ４０の発現に基づく疾患の治療における新規医薬品組成物および化合物がいまだに必要だと考えられる。
【００３３】
出願人は、驚くべきことに、薬理活性を有する新規１−ベンジル−３−ヒドロキシメチルインダゾール誘導体を見出した。
【００３４】
出願人は、驚くべきことに、本発明の下記式（Ｉ）に係る新規１−ベンジル−３−ヒドロキシメチルインダゾール誘導体がＭＣＰ−１ケモカイン産出を減少させることができることを見出した。
【００３５】
さらに驚くべきことに、出願人は本発明の下記式（Ｉ）に係る新規１−ベンジル−３−ヒドロキシメチルインダゾール誘導体がケモカインＭＣＰ−１の発現量を減少することができることを見出した。
【００３６】
さらに驚くべきことに、出願人は本発明の下記式（Ｉ）に係る新規１−ベンジル−３−ヒドロキシメチルインダゾール誘導体が、サイトカインＩＬ−１２およびＩＬ−２３の産出および受容体ＣＸ３ＣＲ１発現に関わる、サブユニットｐ４０の発現を減少できることを見出した。
【課題を解決するための手段】
【００３７】
したがって、第一の態様において、本発明は、
【化１】
0005509099.tif 000002
Ａは−Ｘ１−または−Ｘ１−ＯＣ（Ｒ９）（Ｒ10）−であり、
Ｘ１は炭素原子１〜５を有するアルキル基で、炭素原子１〜５を有する１つ以上のアルキル基、または炭素原子１〜３を有する１つ以上のアルコキシ基で任意に置換され、
Ｒ９およびＲ１０は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、または炭素原子１〜３を有するアルコキシ基であり、
ＹはＯＨであり、
Ｒ１およびＲ２は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、または炭素原子１〜３を有するアルコキシ基であり、
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ８は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、炭素原子１〜３を有するアルコキシ基、ハロゲン原子、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ’）（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯＲ”、−ＣＮ、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２Ｒ’、ニトロ基、およびトリフルオロメチルであり、Ｒ’およびＲ”は互いに同一または異なり、水素および炭素原子１〜５を有するアルキル基で示され、
Ｒ５は水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、炭素原子１〜３を有するアルコキシ基、ハロゲン原子、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ’）（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯＲ”、ニトロ基およびトリフルオロメチル、またはＲ５がＲ６およびＲ７の一つと共に炭素原子５または６を有する環を形成し、Ｒ’およびＲ”は互いに同一または異なり、水素および炭素原子１から５を有するアルキル基を示し、
Ｒ６およびＲ７は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、またはＣ＝Ｏ基を共に形成する、またはＲ６およびＲ７の一つがＲ５と共に炭素原子５または６を有する環を形成し、
Ａが炭素原子１のアルキル基の場合には、炭素原子１〜５を有する一つ以上のアルキル基で任意に置換され、または少なくともＲ１〜Ｒ８のいずれかの群の一つは水素と異なるものである）化合物。
【００３８】
第二の態様で、本発明は下記式（Ｉ）に係る１−ベンジル−３−ヒドロキシメチルインダゾール誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を、少なくとも１種の薬学的に許容可能な媒体と共に含む医薬品組成物に関する。
【００３９】
上記記載のＭＣＰ−１、ＣＸ３ＣＲ１、およびｐ４０の発現の過度な制御および／または増加は、最新の結果でＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３の発現／産出に至り、病状および／または疾患の発症を生じることになり、しばしば“過剰発現”という用語として参照される。本発明の目的として、発現の用語は当業界で既知のように、過剰発現を含む用語を意図する。
【００４０】
驚くべきことに、出願人は新規１−ベンジル−３−ヒドロキシメチルインダゾール誘導体を、ケモカインＭＣＰ−１、サブユニットｐ４０、その結果としてのサイトカインＩＬ−１２およびＩＬ−２３、ならびにその受容体ＣＸ３ＣＲ１に基づく疾患の場合に活性化する医薬品組成物の調製に使用することを見出した。
【００４１】
さらに驚くべきことに、出願人は多数の既知の１−ベンジル−３−ヒドロキシメチルインダゾール誘導体がサブユニットｐ４０、その結果としてのサイトカインＩＬ−１２およびＩＬ−２３、ならびにその受容体ＣＸ３ＣＲ１の発現に基づく疾患の治療で、活性がある医薬品組成物の調製に使用することができることを見出した。
【００４２】
したがって、さらなる態様において、本発明は、
【化２】
0005509099.tif 000003
（式中のＡは−Ｘ１−または−Ｘ１−ＯＣ（Ｒ９）（Ｒ10）−であり、
Ｘ１は炭素原子１〜５を有するアルキル基で、炭素原子１〜５を有する一以上のアルキル基または炭素原子１〜３を有する一以上のアルコキシ基で任意に置換され、そして
Ｒ９およびＲ１０は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、または炭素原子１〜３を有するアルコキシ基であり、
ＹはＯＨであり、
Ｒ１およびＲ２は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、または炭素原子１〜３を有するアルコキシ基であり、
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ８は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、炭素原子１〜３を有するアルコキシ基、ハロゲン原子、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ’）（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯＲ”、−ＣＮ、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２Ｒ’、ニトロ基、およびトリフルオロメチルで、Ｒ’およびＲ”は互いに同一または異なり、水素および炭素原子１〜５を有するアルキル基で示し、
Ｒ５は水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、炭素原子１〜３を有するアルコキシ基、ハロゲン原子、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ’）（Ｒ”）、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯＲ”、ニトロ基およびトリフルオロメチル、またはＲ５がＲ６およびＲ７の一つと共に、炭素原子５または６を有する環を形成し、Ｒ’およびＲ”は互いに同一または異なり、水素および炭素原子１〜５を有するアルキル基を示し、
Ｒ６およびＲ７は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜５を有するアルキル基、またはＣ＝Ｏ基を共に形成する、またはＲ６とＲ７の一方がＲ５と共に炭素原子５または６を有する環を形成する）の化合物の、
ＣＸ３ＣＲ１およびｐ４０の発現に基づいた疾患の治療用の医薬品組成物の製造への使用または、
Ａが炭素原子１のアルキル基の場合には、炭素原子１〜５を有する一つ以上のアルキル基で任意に置換され、または少なくともＲ１〜Ｒ８のいずれかの群の一つは水素と異なるものである、
ＭＣＰ−１の発現に基づいた疾患の治療用の医薬品組成物の製造への使用に関する。
【００４３】
さらに、さらなる態様において、本発明はＭＣＰ−１、ＣＸ３ＣＲ１およびｐ４０の発現に基づいた疾患の治療または予防する方法であって、それを必要とする者に前述の一般式（Ｉ）の有効量を投与することを特徴とする方法に関する。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
前述の式（Ｉ）において、残基Ａは−Ｘ１−または−Ｘ１−ＯＣ（Ｒ９）（Ｒ10）−の基であり、Ｘ１は炭素原子１〜３を有するアルキル基で、炭素原子１〜３を有する１つ以上のアルキル基、または炭素原子１または２を有する１つ以上のアルコキシ基で任意に置換され、Ｒ９およびＲ１０は互いに同一または異なり、水素、炭素原子１〜３を有するアルキル基、または炭素原子１または２を有するアルコキシ基であることが好ましい。
【００４５】
残基Ａは−Ｘ１−または−Ｘ１−ＯＣ（Ｒ９）（Ｒ１０）−の基で示され、Ｘ１はＣＨ２基、ＣＨ２ＣＨ２基、またはＣ（ＣＨ３）２基であり、Ｒ９およびＲ１０は互いに同一または異なり、水素またはＣＨ３基がより好ましい。
【００４６】
残基ＡはＣＨ２基、ＣＨ２ＣＨ２基、Ｃ（ＣＨ３）２基、ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２基、ＣＨ２ＣＨ２ＯＣ（ＣＨ３）２基、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣ（ＣＨ３）２基を含む群から選択されることが有利である。
【００４７】
Ｒ１およびＲ２は互いに同一または異なり、水素原子、炭素原子１〜３を有するアルキル基または炭素原子１または２を有するアルコキシ基を示すことが好ましい。
【００４８】
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ８は互いに同一または異なり、水素原子、炭素原子１〜３を有するアルキル基、炭素原子１または２を有するアルコキシ基、Ｂｒ，ＣｌまたはＦ原子、ＯＨ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、またはＮ（Ｒ’）（Ｒ”）、またはＮ（Ｒ’）ＣＯＲ”；−ＣＮ、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２Ｒ’で、ここでＲ’およびＲ”が互いに同一または異なり、水素原子および炭素原子１〜３を有するアルキル基が好ましい。
【００４９】
Ｒ５は水素原子、炭素原子１〜３を有するアルキル基、炭素原子１または２を有するアルコキシ基、ハロゲン原子、ＯＨ基であるか、またはＲ５がＲ６およびＲ７の一つと共に炭素原子５または６を有する環を形成するのが有利である。
【００５０】
Ｒ６およびＲ７は、互いに同一または異なり、水素原子、炭素原子１〜３を有するアルキル基であるか、若しくはＣ＝Ｏ基を共に形成するか、またはＲ５がＲ６およびＲ７の一つと共に炭素原子５または６を有する環を形成するのが好ましい。
【００５１】
特定の置換基の場合、本発明に係る一般式（Ｉ）の化合物は不斉炭素原子とすることができ、そして立体異性体およびエナンチオマーの形態とすることができる。
【００５２】
置換基の性質に応じて、一般式（Ｉ）の化合物が生理的に許容可能な有機または無機の酸もしくは塩基との付加塩を形成することができる。
【００５３】
適切な生理的に許容可能な無機酸の代表例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸である。
【００５４】
適切な生理的に許容可能な有機酸の代表例は、酢酸、アスコルビン酸、安息香酸、クエン酸、フマル酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、コハク酸、タンニン酸、および酒石酸である。
【００５５】
適切な生理的に許容可能な無機塩基の代表例は、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、ナトリウム、カリウムの水酸化物、炭酸塩、および炭酸水素塩であり、例えば水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、炭酸マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、および炭酸水素カリウムである。
【００５６】
適切な生理的に許容可能な有機塩基の代表例は、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２‐ジエチルアミノエタノール、２‐ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、Ｎ−メチルグルカミン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペリジン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピロリジン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミンおよびトロメタミンである。
【００５７】
置換基の性質に応じて、一般式（Ｉ）の化合物が生理的に許容可能な有機の酸または塩基とエステルを形成することができる。
【００５８】
本発明の化合物はまた、請求項に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物のプロドラック、立体異性体、エナンチオマーおよび薬学的に許容可能な塩類またはエステルを含む。一般式（Ｉ）の化合物のプロドラックは、実質的に不活性形態の物質であり、これを生物に投与した際に一般式（Ｉ）の化合物に代謝される。
【００５９】
「薬学的に許容可能」および「生理的に許容可能」の用語は、いずれかの特定の制限をすることなく、生物に投与すべき医薬品組成物を調製するのに適したあらゆる材料と定義することを意図する。
【００６０】
本発明の一般式（Ｉ）に係る化合物は、ケモカインＭＣＰ−１、サイトカインｐ４０、サブユニットｐ４０（サイトカインＩＬ−１２およびＩＬ−２３の産出に関与）、受容体ＣＸ３ＣＲ１の発現に基づく疾患（または病理）の治療で活性がある医薬品組成物の製造のために使用することができる。
【００６１】
ＭＣＰ−１およびＣＸ３ＣＲ１の発現と関連する病理は、関節疾患、腎臓病、心臓血管疾患、代謝性症候群、肥満、糖尿病、インスリン耐性および癌が好ましい。
【００６２】
特に、ＭＣＰ−１の発現と関連のある病理は、慢性関節リウマチ、ウイルス感染によって誘発される関節炎、乾癬性関節炎、関節症、ループス腎炎、糖尿病性腎障害、糸球体腎炎、多発性嚢胞腎、間質性肺疾患、繊維症、多発性硬化症、アルツハイマー病、ＨＩＶ関連の認知症、過敏性皮膚炎、乾癬、脈管炎、再狭窄、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、狭心症、急性の冠状動脈疾患、アデノーマ、癌腫および転移、代謝病ならびに、例えば血管形成術、動脈切除、循環回復法、移植、臓器移植、組織移植および人工器官の埋め込みのような外科的関与後の合併症である。
【００６３】
特に、ＣＸ３ＣＲ１の発現に伴う病理は、慢性関節リウマチ、ループス腎炎、糖尿病性腎障害、クローン病、潰瘍性大腸炎、冠状動脈障害、再狭窄、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、狭心症ならびに、例えば血管形成術、動脈切除および循環回復技術のような外科的関与後の合併症である。
【００６４】
ｐ４０、ひいてはＩＬ−１２およびＩＬ−２３の発現と関連する病理は、自己免疫疾患、例えば慢性変性炎症疾患および癌が好ましい。
【００６５】
特に、ｐ４０の発現に関連する病理は、慢性関節リウマチ、乾癬、糸系体腎炎、糖尿病性腎障害、ループス腎炎、糖尿病性腎障害、クローン病、および腫瘍ならびに、例えば結腸腺癌、乳癌、肺癌および前立腺癌、および皮膚とＣＮＳ新生組織形成である。
【００６６】
本発明の医薬品組成物は、一般式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、エステルもしくはプロドラックの有効量と、少なくとも一つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む適切な投薬形態で調製するのが好ましい。
【００６７】
従来技術で既知の薬学的に許容可能な賦形剤の例は、例えば、流動促進剤、結合剤、崩壊剤、充填剤、希釈液、調味料、着色剤、流動化剤、潤滑剤、保存剤、湿潤剤、吸収剤および甘味料である。
【００６８】
薬学的に許容可能な賦形剤の有用な例は、ラクトース、グルコースまたはスクロースのような糖類、トウモロコシ澱粉およびジャガイモ澱粉のような澱粉、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロースおよび酢酸セルロースのようなセルロールおよびそれの誘導体、トラガカント、麦芽、ゼラチン、タルク、カカオ脂、ワックス、落花生油、綿実油、紅花油、胡麻油、オリーブ油、とうもろこし油およびダイズ油のような油、プロピレングリコールのようなグリコール、グリセリンのようなポリオール、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルのようなエステル、天草等である。
【００６９】
適切な投薬形態の例は、経口投与用の錠剤、カプセル、コーティング錠、顆粒、溶液およびシロップ；経皮投与用の医薬用絆創膏、溶液、ペースト、クリームおよび軟膏；直腸投与用の座薬および注射またはエアゾール投与用の滅菌溶液である。
【００７０】
他の適切な投薬形態は、経口または注射経路のいずれかのための持続性形態およびリポソームに基づく形態である。
【００７１】
かかる投薬形態はまた、保存剤、安定剤、界面活性剤、緩衝剤、浸透圧調節剤機、乳化剤、甘味料、着色剤、調味料等のような他の従来の成分を含むことができる。
【００７２】
特定の治療法で必要なとき、本発明の医薬品組成物は同時投与が有用である他の薬理学的に活性化した成分を含むことができる。
【００７３】
本発明の医薬品組成物における一般式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩、エステルまたはプロドラックの量は、既知の因子、例えば治療すべき病理の種類、疾患の重篤性、患者の体重、投薬形態、投与の選択される経路、１日の投与回数および一般式（Ｉ）の選択化合物の有効性の関数として広範囲で変えることができる。しかしながら、最適量は、当業者によって簡単かつ日常的に決定することができる。
【００７４】
一般的に、一般式（Ｉ）の化合物または薬学的に受容可能な塩、エステルまたはプロドラックの量における本発明の医薬品組成物は、０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の間の投与レベルを確保するようなものである。投与レベルは、０．０５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日が好ましく、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日がより好ましい。
【００７５】
本発明の医薬品組成物の投薬形態は、混合、造粒、打錠、溶解、滅菌などを含む薬剤師に既知の技術に従って調製することができる。
【００７６】
ＭＣＰ−１およびＣＸ３ＣＲ１に対する本発明の化合物の活性を、「リアルタイム」ＲＴ−ＰＣＲによる遺伝子発現分析の技術によってヒト単核細胞おいて生体外で、また免疫酵素試験によるタンパク質産出分析によって立証した。当業者に既知なように、上述した実験モデルは、ＭＣＰ−１の発現および産出ならびにＣＸ３ＣＲ１の発現に対して化合物の活性を検査するのに有用であると考慮される。その結果、上述したモデルは、ＭＣＰ−１の発現および産出、ＣＸ３ＣＲ１の発現ならびに単核細胞およびマクロファージに豊富な浸潤物の存在による炎症性疾患によって特徴づけられる病理の治療のためヒトにおける活性の予測として考慮することができる。
【００７７】
ｐ４０に対する本発明の化合物の活性を、「リアルタイム」ＲＴ−ＰＣＲによる遺伝子発現分析技術によってヒト単核細胞おいて生体外で立証した。当業者に既知のように、上述した実験的なモデルは、ｐ４０の発現に関して化合物の活性を検査するのに有用であり、ヒトにおけるｐ４０の発現を特徴とする病状の治療において活性の予測として考慮することができる。
【００７８】
一般式（Ｉ）の化合物の調製は、以下の手順のいずれか１つに従って実施することができる。
【化３】
0005509099.tif 000004
【００７９】
方法Ａにおいて、一般式（ＩＩＩ）の化合物を一般式（ＩＶ）の化合物と反応させた。置換基Ｒ１〜Ｒ８、ＡおよびＹは一般式（Ｉ）の化合物に前述の意味であり、そしてＱはハロゲン、ＣＨ３ＳＯ３−およびｐ−ＣＨ３ＰｈＳＯ３−を含む群から選択される脱離基である。
【００８０】
方法Ａを従来技術に従って実施した。例えば、一般式（ＩＩＩ）のアルコールは、それぞれ一般式（ＩＶ）の誘導体と反応し、Ｑは好ましくは塩素原子、臭素原子およびメタンスルホニル基を含む群から選択される脱離基である。反応を適切な塩基の存在下で適切な溶媒内で実施する。使用される塩基はＮａＨ、ブチルリチウムおよびリチウムジイソプロピルアミドを使用することができることが好ましく、この種類の反応に適切な溶媒は極性非プロトン性溶媒が好ましくは、例えばテトラヒドロフラン、ジエチルエーテルまたは１，４−ジオキサンである。反応温度は好ましくは室温と使用した溶媒の還流温度との間である。この種類の反応は、数時間から数日まで続けることができる。
【００８１】
【化４】
0005509099.tif 000005
【００８２】
方法Ｂで、一般式（Ｖ）の化合物は一般式（ＶＩ）の化合物と反応させる。置換基Ｒ１〜Ｒ８、ＡおよびＹは上述された一般式（Ｉ）の化合物の意味を有し、Ｑはハロゲン、ＣＨ３ＳＯ３−およびｐ−ＣＨ３ＰｈＳＯ３−を含む群から選択した脱離基である。
【００８３】
方法Ｂは従来技術に従って実施する。例えば、一般式（ＶＩ）のアルコールを、それぞれ一般式（Ｖ）の誘導体と反応させ、Ｑは好ましくは塩素原子、臭素原子およびメタンスルホニル基を含む群から選択した脱離基である。反応は適切な塩基の存在下で、適切な溶媒内で実施する。好ましく使用される塩基はＮａＨ、ブチルリチウムおよびリチウムジイソプロピルアミドで、この種類の反応に適切な溶媒は好ましくは極性非プロトン性溶媒で、例えばテトラヒドロフラン、ジエチルエーテルまたは１，４−ジオキサンである。反応温度は、好ましくは室温と使用する溶媒の還流温度との間である。この種類の反応は、数時間から数日まで続くことができる。
【００８４】
以下に、実施例を挙げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明は下記の実施例に何ら限定されるものではない。
【実施例】
【００８５】
調製例
下記表Ａに示した一般式（Ｉ）の化合物を前述に記載の調製方法を用いて調製した。
【００８６】
【表Ａ】
0005509099.tif 000006
【００８７】
表Ａの大部分の化合物の調製の詳細は後述の通りである。残りの化合物は適切な出発原料および試薬を使用して、同様な技術で調製した。
【００８８】
化合物１の調製
２−｛［１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］メトキシ｝−２−メチルプロピオン酸
１ａ）［１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］メタノール
６０％ＮａＨ（2.7 g; 0.07 mol）のトルエン（２００ｍＬ）の懸濁液に、１−ベンジル−３−ヒドロキシメチルインダゾール（１０ｇ；０．０７ｍｏｌ）を加えた。混合物を沸点まで上昇させ、そして還流で１時間撹拌した。その後４−メトキシベンジル塩化物（１４ｇ；０．０９ｍｏｌ）を加えた。その後混合物を、還流で４時間撹拌した。反応は混合物を室温まで冷却して、水（５０ｍＬ）を添加して終了した。有機相を分離し、２Ｎ  ＨＣｌ（５０ｍＬ）および水（５×５０ｍＬ）で洗浄した。溶媒を減圧下で蒸発させた。このようにして得た粗残留物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで、３／２ヘキサン／酢酸エチルを溶離剤として使用して精製した。得られた生成物を５／１ヘキサン／酢酸エチルの混合物で結晶化し、[１−(４−メトキシベンジル)−１Ｈ−インダゾール−３−イル]メタノール５．１ｇを、融点９５〜９７℃で得た。
【００８９】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：３．４３（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），４．９８（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），５．３６（ｓ，２Ｈ），６．５−６．８（ｍ，２Ｈ），６．９−７．４（ｍ，７Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝７．８６Ｈｚ，１Ｈ）
【００９０】
１ｂ）２−｛［１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル］メトキシ｝−２−メチルプロピオン酸
ＮａＯＨ（１５．６ｇ；０．３９ｍｏｌ)の酢酸塩(５０ｍＬ）懸濁液に[１−(４−メトキシベンジル)−１Ｈ−インダゾール−３−イル]メタノール（８．７ｇ；  ０．０３ｍｏｌ）を加えた。混合物にゆっくりとクロロホルム（７．２ｍＬ；０．０９ｍｏｌ）とアセトン（７．２ｍＬ；０．１ｍｏｌ）の溶液を加えた。この添加は溶媒の混合物の還流を引き起こした。添加が終了した時点で、混合物を１時間還流した。反応は混合物を室温まで下げ、そして減圧下で溶媒を蒸発することによって完了した。生じた粗残留物をトルエン（１００ｍＬ）および水（５０ｍＬ）に溶解した。水相を有機層から分離し、その後トルエン（２×５０ｍＬ）で洗浄した。混合した有機相を水（３×５０ｍＬ）で抽出した。混合した水相をヘキサン（２×３０ｍＬ）で洗浄し、その後２Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、そして室温で撹拌した。このようにして得た固体を濾過し、最初に５／１の水／酢酸の混合物で、その後トルエンで結晶化して、２−{[１−(４−メトキシベンジル)−１Ｈ−インダゾール−３−イル]メトキシ}−２−メチルプロパン酸４．８ｇを、融点１６９〜１７１℃で得た。
【００９１】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ  ｐｐｍ）：１．４４（ｓ，６Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），４．７４（ｓ，２Ｈ），５．５２（ｓ，２Ｈ），６．８２−６．９０（ｍ，２Ｈ），７．１３（ｔ，Ｊ＝７．５０Ｈｚ，１Ｈ），７．１８−７．２６（ｍ，２Ｈ），７．３６（ｔ，Ｊ＝７．２３Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｄｄ，Ｊ＝８．１４；１．０１Ｈｚ，１Ｈ），１２．７６（ｓ，１Ｈ）
【００９２】
化合物２の調製
２−[(１−ベンジル−５−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−３−イル)メトキシ]−２−メチルプロパン酸
２ａ）１−ベンジル−５−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸ベンジル
５−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸（２１．５ｇ；０．１１ｍｏｌ）および６０％ＮａＨ（１０．５ｇ；０．４４ｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の懸濁液を７０℃で１時間撹拌した。その後ベンジルクロリド（３２．９ｇ；０．２６ｍｏｌ）をゆっくり懸濁液に加え、そして混合物を７０℃で４時間撹拌した。反応を、混合物を室温まで冷却し、そして混合物を水および氷内に注入することによって完了した。生成物を酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を減圧下で濃縮した。このようにして得た粗残留物を連続した結晶化によって精製し、１８ｇの１−ベンジル−５−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸ベンジルを、融点１０７〜１０９℃で得た。
【００９３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：３．７８（ｓ，３Ｈ），５．５１（ｓ，２Ｈ），６．９−７．６（ｍ，１３Ｈ）
【００９４】
２ｂ）（１−ベンジル−５−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メタノール
室温で撹拌した１−ベンジル−５−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸ベンジル（１７．７ｇ；０．０５ｍｏｌ）、ジエチルエーテル(１００ｍＬ)とテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１７０ｍｌ）の溶液にＬｉＡｌＨ４（３．８ｇ；０．１ｍｏｌ）をゆっくり加えた。添加が終了した時点で、懸濁液を還流で２４時間撹拌した。反応を水（４０ｍＬ）および５Ｎ  ＮａＯＨ（１０ｍＬ）を加えて余分なＬｉＡｌＨ４を消失させることによって完了した。有機層を分離して、溶媒を減圧下で乾燥させた。得られた粗残留物を９５°のエタノールによる結晶化によって精製し、１４ｇの（１−ベンジル−５−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メタノールを、融点９７〜９８℃で得た。
【００９５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：３．３（ｂｓ，１Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），４．９２（ｓ，２Ｈ），５．４７（ｓ，２Ｈ），６．９−７．５（ｍ，８Ｈ）
【００９６】
２ｃ）（１−ベンジル−３−（クロロメチル）−５−メトキシ−１Ｈ−インダゾール
室温で撹拌した１−ベンジル−５−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メタノール（１８ｇ；０．０７ｍｏｌ）のクロロホルム（２００ｍＬ）溶液に、塩化チオニル（１５．８ｇ；０．１３ｍｏｌ）をゆっくり加えた。添加が終了した時点で、溶液を２４時間還流した。その後反応を、混合物を室温まで冷却し、溶媒を減圧下で蒸発させて完了した。その後残留物を数回トルエンで溶解し、減圧下で濃縮した。得られた粗残留物をヘキサンでの結晶化によって精製し、９．５ｇの１−ベンジル−３−（クロロメチル）−５−メトキシ−１Ｈ−インダゾールを、融点７８〜８０℃で得た。
【００９７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：３．８５（ｓ，３Ｈ），４．９７（ｓ，２Ｈ），５．５１（ｓ，２Ｈ），６．９−７．４（ｍ，８Ｈ）
【００９８】
２ｄ）２−［（１−ベンジル−５−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ］−２−メチルプロパン酸
室温で撹拌した１−ベンジル−３−（クロロメチル）−５−メトキシ−１Ｈ−インダゾール（２．９５ｇ；０．０１ｍｏｌ）およびエチル３−ヒドロキシ−３−酪酸メチル（１．９８ｇ；０．０１５ｍｏｌ）を含有するＤＭＦ（３０ｍｌ）溶液に、６０％ＮａＨ（０．３６ｇ；０．０１５ｍｏｌ）をゆっくり加えた。その後混合物を、４０℃で２４時間加熱した。反応を、懸濁液を室温まで冷却し、水（２００ｍＬ）を加えて完了した。溶媒を減圧下で濃縮し、残留物をＮａＯＨ（０．８４ｇ；０．０２１ｍｏｌ）の水（６ｍＬ）および９５°エタノール（６ｍＬ）で、６時間還流で処理した。アルカリ性層をジエチルエーテル(２×２０ｍＬ)で洗浄し、その後濃縮したＨＣｌで酸性にし、そしてジエチルエーテル（３×３０ｍＬ）で抽出した。
【００９９】
混合した有機相を減圧下で濃縮し、得られた粗残留物を１０／１のヘキサン／酢酸エチル混合物での結晶化によって精製し、０．８ｇの２−［（１−ベンジル−５−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ］−２−メチルプロパン酸を、融点１２８〜１３０℃で得た。
【０１００】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ  ｐｐｍ）：１．４４（ｓ，６Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），４．６９（ｓ，２Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．０２（ｄｄ，Ｊ＝９．１５；２．３８Ｈｚ，１Ｈ），７．１７−７．３３（ｍ，５Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝２．３８Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝９．１５Ｈｚ，１Ｈ），１２．７９（ｓ，１Ｈ）
【０１０１】
化合物３の調製
２−［（１−ベンゾイル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ］−２−メチルプロパン酸
３ａ）（１−トリチルインダゾール−３−イル）メタノール
室温で撹拌した１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸イソブチル（２８０ｇ；１．２８ｍｏｌ）のクロロホルム（２Ｌ）を含有する溶液に、トリエチルアミン（３００ｍＬ；２．１６ｍｏｌ）およびトリフェニルクロロメタン（４００ｇ；１．４ｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で４日間撹拌し、その後水（５００ｍＬ）を加えた。有機層を分離し、減圧下で濃縮した。得られた粗残留物をさらなる精製することなく次の工程で使用した。
【０１０２】
室温で撹拌した粗イソブチル−１−トリチルインダゾール−３−カルボン酸（１８０ｇ；０．３９）のＴＨＦ（１Ｌ）の溶液に、ＬｉＡｌＨ４（１８ｇ；０．４８ｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）の懸濁液をゆっくり加えた。添加が終了した時点で、混合物を室温で３０分間撹拌し、その後反応を、混合物を０℃まで冷却し、水（４０ｍＬ）、２Ｎ  ＮａＯＨ（４０ｍＬ）および水（６０ｍＬ）を連続して加えることによって完了した。このようにして形成した固体を濾過し、そして溶液を減圧下で濃縮した。得られた粗残留物を１／１のヘキサン／酢酸エチル混合物による結晶化によって精製した。１２０ｇの（１−トリチルインダゾール−３−イル）メタノールを得た。
融点＝１９２〜１９３℃
【０１０３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３；δ  ｐｐｍ）：２．５１（ｔ，Ｊ＝６．９８Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｄ，Ｊ＝６．９８Ｈｚ，２Ｈ），６．２−６．５（ｍ，１Ｈ），６．９−７．４（ｍ，１７Ｈ），７．６−７．８（ｍ，１Ｈ）
【０１０４】
３ｂ）２−（１−トリチルインダゾール−３−イルメトキシ）−２−メチルプロパン酸
室温で撹拌した（１−トリチルインダゾール−３−イル）メタノール（７８ｇ；０．２０ｍｏｌ）の、アセトン（２６０ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）の懸濁液に、ＮａＯＨ（７６ｇ；１．９ｍｏｌ）およびゆっくり１／１のクロロホルム／アセトン混合物（１００ｍＬ）を加えた。反応は発熱性であり、添加速度を、反応温度を沸点付近に保つように調節した。添加してから３０分後、反応を、混合物を室温で冷却し、そして溶媒を減圧下で蒸発することによって完了した。残留物を水（５００ｍＬ）に溶解し、ジエチルエーテル（３×１００ｍＬ）で洗浄した。水層をその後、高濃度なＨＣｌで酸性化し、生成物をトルエン（３×２５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を減圧下で濃縮し、得た粗残留物を３／７のヘキサン／酢酸エチル混合物での結晶化によって２２ｇの２−（１−トリチルインダゾール−３−イルメトキシ）−２−メチルプロパン酸を融点＝１７９〜１８０℃で得た。
【０１０５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：１．５３（ｓ，６Ｈ），４．８８（ｓ，２Ｈ），６．３−６．５（ｍ，１Ｈ），６．９−７．５（ｍ，１７Ｈ），７．８−８．０（ｍ，１Ｈ），９．３（ｂｓ，１Ｈ）
【０１０６】
３ｃ）２−（１Ｈ−インダゾール−３−イルメトキシ）−２−メチルプロパン酸
室温で撹拌した２−（１−トリチルインダゾール−３−イルメトキシ）−２−メチルプロパン酸（８３ｇ；０．１７４ｍｏｌ）のジクロロメタン（ＤＣＭ）（９００ｍＬ）にパラ−トルエンスルホン酸（ＰＴＳＡ）（５０ｇ；０．２９ｍｏｌ）を加えた。混合物を３０分間室温で撹拌し、その後５Ｎ  ＮａＯＨ（４００ｍＬ）に注いだ。有機層を分離し、水（３００ｍＬ）で洗浄した。混合した有機層を高濃度のＨＣｌで酸性化し、その後酢酸エチル（５×３００ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を減圧下で濃縮し、結果として生じた粗残留物を１／１のヘキサン／酢酸エチルでの結晶化によって精製した。
【０１０７】
４２ｇの２−（１Ｈ−インダゾール−３−イルメトキシ）−２−メチルプロパン酸を、融点＝１３５〜１３７℃で得た。
【０１０８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ  ｐｐｍ）：１．４６（ｓ，６Ｈ），４．７７（ｓ，２Ｈ），７．０−７．６（ｍ，３Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝７．８８Ｈｚ，１Ｈ）
【０１０９】
３ｄ）２−〔（１−ベンゾイル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロパン酸
室温で撹拌した２−（１Ｈ−インダゾール−３−イルメトキシ）−２−メチルプロパン酸(６ｇ；０．０２６ｍｏｌ)のアセトン（５０ｍＬ）の溶液にＫ２ＣＯ３（６．８ｇ；０．０４９ｍｏｌ）を加え、その後ゆっくりベンゾイルクロリド（５ｍＬ；０．０４３ｍｏｌ）のアセトン（３０ｍＬ）を加えた。混合物を室温で２４時間撹拌し、その後水(１Ｌ）の中に注いだ。その後溶液を５Ｎ  ＮａＯＨで塩基性のｐＨにし、ジエチルエーテル（３×150ｍｌ）で洗浄した。その後アルカリ層を、濃ＨＣｌで酸性化し、ジエチルエーテル（３×３００ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を減圧下で濃縮し、得られた粗残留物を１／１のヘキサン／酢酸エチル混合物での結晶化によって精製した。２ｇの２−〔（１−ベンゾイル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロパン酸を、融点＝１３２〜１３５℃で得た。
【０１１０】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：１．６１（ｓ，６Ｈ），４．９３（ｓ，２Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝７．６０Ｈｚ，１Ｈ），７．４６−７．６６（ｍ，４Ｈ），８．０２−８．０９（ｍ，３Ｈ），８．６８（ｂｓ，１Ｈ），８．５３（ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ，１Ｈ）
【０１１１】
化合物４の調製
２−｛〔１−（４−クロロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕｝−２−メチルプロパン酸
４ａ）〔１−（４−クロロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メタノール
生成物を、試薬として４−クロロベンジルクロリドの試薬を使用して、実施例１ａ）に記載の方法を用いて得た。
【０１１２】
得られた生成物を５／１のヘキサン／酢酸エチル混合物による結晶化によって精製した。
融点＝１０２〜１０４℃
【０１１３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：３．５（ｂｓ，１Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ），５．３７（ｓ，２Ｈ），６．８−７．５（ｍ，７Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ）
【０１１４】
４ｂ）２−｛〔１−（４−クロロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メトキシ｝−２−メチルプロパン酸
生成物を、試薬として〔１−（４−クロロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メタノールを使用して、実施例１ｂに記載の方法を用いて得た。
【０１１５】
得られた生成物をトルエンによる結晶化によって精製した。
融点＝１８６〜１８８℃
【０１１６】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：１．６１（ｓ，６Ｈ），４．９１（ｓ，２Ｈ），５．５４（ｓ，２Ｈ），７．０−７．５（ｍ，７Ｈ），８．０７（ｓ，１Ｈ），１０．３（ｂｓ，１Ｈ）
【０１１７】
化合物５の調製
２−〔（１−ベンジル−５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロパン酸
欧州特許第３８２２７６号明細書（特許文献１）号明細書に記載されたように調製した２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチル−プロパン酸（２０ｇ；０．０６２ｍｏｌ）の氷酢酸（２５０ｍＬ）の、約２０℃の温度で熱浴で撹拌した懸濁液に、出発原料をＴＬＣで確認して使い切るまで送り込む（bubbling）ことによって、Ｃｌ２を加えた。その後溶液を、水および氷（１Ｌ）内に注ぎ、室温で終夜放置した。このようにして形成した固体を濾過し、その後一度９５°エタノールで結晶化し、二度目に１／１のヘキサン／酢酸エチル混合物で結晶化した。
【０１１８】
５．５ｇの２−〔（１−ベンジル−５−クロロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロパン酸を得た。
融点＝１４５〜１４７℃
【０１１９】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：１．６１（ｓ，６Ｈ），４．９１（ｓ，２Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．１３−７．３４（ｍ，７Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝１．８３Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｂｓ，１Ｈ）
【０１２０】
化合物６の調製
２−〔（１−ベンジル−５−ニトロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メトキシ〕−２−メチルプロパン酸
６ａ）２−メチル−２−〔（５−ニトロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕プロパン酸
約１０〜２０℃で撹拌した６５％ＨＮＯ３（１００ｍＬ）と濃Ｈ２ＳＯ４（１００ｍＬ）の混合物に、２−（１Ｈ−インダゾール−３−イルメトキシ）−２−メチルプロパン酸（２５ｇ；０．１０７ｍｏｌ）を加えた。混合物を、２０℃以下の制御された温度で、出発原料が完全に溶解するまで撹拌した。その後溶液を水および氷（約１Ｌ）内に注ぎ、その結果形成した固体を濾過し、最初は水で、その後メタノールで洗浄した。
【０１２１】
２６ｇの２−メチル−２−〔（５−ニトロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕プロパン酸を得て、更なる精製をせずに以下の反応で使用した。
融点＝分解を伴った２１０℃
【０１２２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＤＭＳＯ−ｄ６，δ  ｐｐｍ）：１．５８（ｓ，６Ｈ），４．９１（ｓ，２Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝９．１８Ｈｚ，１Ｈ），８．１９（ｄｄ，Ｊ１，Ｊ２＝９．１８；２．１５Ｈｚ，１Ｈ），９．１３（ｄ，Ｊ＝２．１５Ｈｚ，１Ｈ），１２．５（ｂｓ，１Ｈ）
【０１２３】
６ｂ）２−〔（５−ニトロ−１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロパン酸
２−メチル−２−〔（５−ニトロ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕プロパン酸（２６ｇ；０．０９３ｍｏｌ）のＤＭＦ（２００ｍＬ）の溶液に、６０％ＮａＨ（１０ｇ；０．２５ｍｏｌ）を加え、混合物を６０℃で１０分間撹拌した。その後ベンジルクロリド（２５ｍＬ；０．２１７ｍｏｌ）を混合物に加え、全部を６０℃で１８時間撹拌した。反応を、混合物を水（１Ｌ）内に注ぎ、その後５Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、そして生成物をジエチルエーテル（３×２５０ｍＬ）で抽出することによって完了した。得られた残留物を９５°エタノール（１００ｍＬ）に溶解し、１Ｎ  ＮａＯＨ（２００ｍＬ）の還流で２時間処理した。その後液体を室温で冷却し、ジエチルエーテル（３×２００ｍＬ）で洗浄した。その後アルカリ層を、濃ＨＣｌで酸性化し、酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を減圧下で濃縮し、得られた粗残留物を酢酸エチルによる結晶化によって精製した。
【０１２４】
１６ｇの２−〔（５−ニトロ−１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロパン酸をこのようにして得た。
融点＝１２９〜１３１℃
【０１２５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：１．６４（ｓ，６Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），５．５９（ｓ，２Ｈ），７．８０（ｂｓ，１Ｈ），７．１５−７．３９（ｍ，６Ｈ），８．２０（ｄｄ，Ｊ＝９．２４；２．１０Ｈｚ，１Ｈ），９．００（ｄ，Ｊ＝２．２０Ｈｚ，１Ｈ）
【０１２６】
化合物７の調製
２−｛〔１−（３，４−ジクロロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メトキシ｝−２−メチルプロパン酸
７ａ）〔１−（３，４−ジクロロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メタノール
得られた生成物を、試薬として３，４−クロロベンジルクロリドを使用して、実施例１ａ）に記載の方法により得た。
【０１２７】
得られた生成物を１／１のヘキサン／酢酸エチル混合物による結晶化によって精製した。
融点＝１１８〜１２０℃
【０１２８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：３．１−３．３（ｍ，１Ｈ），４．９−５．２（ｍ，２Ｈ），５．３８（ｓ，２Ｈ），６．８９（ｄｄ，Ｊ１，Ｊ２＝８．２７；２．０５Ｈｚ，１Ｈ），７．１−７．５（ｍ，５Ｈ），７．８２（ｄｔ，Ｊ１，Ｊ２＝８．０１；０．９３，１Ｈ）
【０１２９】
７ｂ）２−｛〔１−（３，４−ジクロロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メトキシ｝−２−メチルプロパン酸
生成物を、出発原料として〔１−（３，４−ジクロロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メタノールを使用して、実施例１ｂ）に記載の方法により得た。
【０１３０】
得られた生成物を、トルエンによる結晶化によって精製した。
融点＝１７４〜１７６℃
【０１３１】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ  ｐｐｍ）：１．４４（ｓ，６Ｈ），４．７６（ｓ，２Ｈ），５．６４（ｓ，２Ｈ），７．１２−７．２２（ｍ，２Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝７．６８Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝２．０１Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝８．０５Ｈｚ，１Ｈ），１２．８１（ｂｓ，１Ｈ）
【０１３２】
化合物８の調製
２−メチル−２−｛〔１−（１，２，３，４−テトラヒドロナフス−１−イル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メトキシ｝−プロパン酸
生成物を、出発原料として２−メチル−２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕プロパン酸、および試薬として１−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロナフサレンを使用して、実施例６ｂ）に記載の方法によって調製した。
【０１３３】
生成物を１／１のヘキサン／酢酸エチル混合物による結晶化によって精製した。
沸点＝１３２〜１３４℃
【０１３４】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：１．６０（ｄ，Ｊ＝２．１５Ｈｚ，６Ｈ），１．８４−２．０２（ｍ，１Ｈ），２．０３−２．１８（ｍ，１Ｈ），２．２３−２．４６（ｍ，２Ｈ），２．９０（ｄｔ，Ｊ＝１６．５０；４．８５Ｈｚ，１Ｈ），２．９８−３．１２（ｍ，１Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ），５．９２（ｄｄ，Ｊ＝８．８３；６．５２Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝７．７６Ｈｚ，１Ｈ），６．９３−７．０５（ｍ，２Ｈ），７．０８−７．３２（ｍ，４Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝８．０９Ｈｚ，１Ｈ）
【０１３５】
化合物１７の精製
｛〔１−（４−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メトキシ｝酢酸
１７ａ）〔１−（４−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メタノール
生成物を試薬として４−フルオロベンジルクロリドを使用して、実施例１ａ）に記載の方法で調製した。
【０１３６】
生成物をヘキサンによる結晶化によって精製した。
融点＝８０〜８１℃
【０１３７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：３．４（ｂｓ，１Ｈ），５．０２（ｓ，２Ｈ），５．３８（ｓ，２Ｈ），６．７−７．５（ｍ，７Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．０１Ｈｚ，１Ｈ）
【０１３８】
１７ｂ）｛〔１−（４−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メトキシ｝酢酸
〔１−（４−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メタノール（６ｇ；０．０２２ｍｏｌ）、ブロモ酢酸（４ｇ；０．０３ｍｏｌ）および５０％ＮａＨ（３ｇ；０．０６６ｍｏｌ）のＴＨＦ（１７０ｍＬ）の懸濁液を、還流で７２時間撹拌した。その後反応を、懸濁液と水および氷（３００ｍＬ）とで希釈し、水層をジエチルエーテル（３×１５０ｍＬ）で洗浄した。水層を濃ＨＣｌで酸性にした。このようにして形成した固体を濾過して、イソプロパノールによるの結晶化によって精製した。４ｇの｛〔１−（４−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メトキシ｝酢酸をこのようにして得た。
融点＝１３５〜１３６℃
【０１３９】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ  ｐｐｍ）：４．１０（ｓ，２Ｈ），４．８７（ｓ，２Ｈ），５．６３（ｓ，２Ｈ），７．０８−７．２１（ｍ，３Ｈ），７．２４−７．３３（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｔ，Ｊ＝７．６８Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．０５Ｈｚ，１Ｈ），１２．６８（ｂｓ，１Ｈ）．
【０１４０】
化合物１８の調製
｛〔１−（２，４−ジクロロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メトキシ｝酢酸
１８ａ）〔１−（２，４−ジクロロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メタノール
生成物を、試薬として２，４−ジクロロベンジルクロリドを使用して、実施例１ａ）に記載の方法で調製した。
【０１４１】
生成物を７／３のエタノール／水の混合物により結晶化によって精製した。
融点＝１０５〜１０６℃
【０１４２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：３．０（ｂｓ，１Ｈ），５．０４（ｓ，２Ｈ），５．５２（ｓ，２Ｈ），６．５８（ｄ，Ｊ＝８．３６Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｄｄ，Ｊ＝８．３４；２．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．１−７．５（ｍ，４  Ｈ），７．８４（ｄｔ，Ｊ＝９．７９；１．１２Ｈｚ，１Ｈ）
【０１４３】
１８ｂ）｛〔１−(２，４−ジクロロベンジル)−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メトキシ｝酢酸
生成物を、出発原料として〔１−（２，４−ジクロロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メタノールを使用して、実施例１７ｂに記載の方法で得た。
【０１４４】
生成物をイソプロパノールによる結晶化によって精製した。
融点＝１４４〜１４５℃
【０１４５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ  ｐｐｍ）：４．１０（ｓ，２Ｈ），４．８６（ｓ，２Ｈ），５．７０（ｓ，２Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｄｄｄ，Ｊ＝８．０５；７．０４；０．８２Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄｄ，Ｊ＝８．４２；２．２０Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄｄｄ，Ｊ＝８．３２；７．０４；１．１０Ｈｚ，１Ｈ），７．６３−７．６９（ｍ，２Ｈ），７．９１（ｄｔ，Ｊ＝８．０５；０．９１Ｈｚ，１Ｈ），１２．６８（ｂｓ，１Ｈ）
【０１４６】
組成物１９の調製
｛２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕エトキシ｝酢酸
１９ａ）２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕エタノール
室温で撹拌したＮａＯＨ（２．８ｇ；０．０７）のエチレングリコール（１５０ｍＬ）の溶液に、欧州特許第３８２２７６号明細書（特許文献１）号明細書に記載されたように調製した１−ベンジル−３−クロロメチルインダゾール（１７．６ｇ；０．０７ｍｏｌ、）を加えた。溶液を１３０℃で４時間加熱し、その後室温で冷却し、減圧下で溶媒を蒸発した。残留物を水（１００ｍＬ）に溶解し、生成物を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を減圧下で濃縮し、得られた粗残留物を約１／１のヘキサン／酢酸エチル混合物による結晶化によって精製した。
【０１４７】
１３．８ｇの２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕エタノールをこのようにして得た。
融点＝６７〜６９℃
【０１４８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：２．１５（ｂｓ，１Ｈ），３．６１−３．８２（ｍ，４Ｈ），４．９７（ｓ，２Ｈ），５．５７（ｓ，２Ｈ），７．１１−７．３８（ｍ，８Ｈ），７．８１（ｄｔ，Ｊ＝８．１５；０．９７Ｈｚ，１Ｈ）
【０１４９】
１９ｂ）｛２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕エトキシ｝酢酸
室温で撹拌した２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕エタノール（１１．２８ｇ、０．０４ｍｏｌ）の乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１００ｍＬ）の溶液に、６０％の水素化ナトリウム（１．６ｇ；０．０４ｍｏｌ）を加えた。混合物を沸点で２時間加熱し、その後室温で冷却し、そしてブロモ酢酸エチル（７．４ｇ，０．０４４ｍｏｌ）のＴＨＦ（７ｍＬ）をそれにゆっくり加えた。添加が終了した時点で、混合物をさらに２時間還流した。室温で冷却し、溶媒を減圧で蒸発させることによって、反応を完了した。残留物を２Ｎ  ＮａＯＨ（１００ｍＬ）に溶解し、生成物をジエチルエーテル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を減圧下で濃縮した。
【０１５０】
粗残留物を、ＮａＯＨ（１．９ｇ，０．０４５ｍｏｌ）の１／１の水／エタノールの溶液（１６０ｍＬ）に溶解した。その後混合物を、還流で２時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮し、残留物を水（１００ｍＬ）に溶解し、ジエチルエーテル（３×１５０ｍＬ）で洗浄することで、反応を完了させた。その後アルカリ層を、濃ＨＣｌで酸性にし、形成した固体を濾過した。生成物を１／３のヘキサン／酢酸エチル混合物により二回重結晶化によって精製した。
【０１５１】
５．８ｇの｛２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕エトキシ｝酢酸を得た。
融点＝１０１〜１０３℃
【０１５２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：３．６６−３．７９（ｍ，４Ｈ），４．１３（ｓ，２Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ），５．５８（ｓ，２Ｈ），７．６６（ｂｓ，１Ｈ），７．１４−７．４０（ｍ，８Ｈ），７．８４（ｄｔ，Ｊ＝８．１１；０．９９Ｈｚ，１Ｈ）
【０１５３】
化合物２０の調製
２−｛２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕エトキシ｝−２−メチルプロパン酸
室温で撹拌した２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕エタノール（３５ｇ、０．１２４ｍｏｌ）およびＮａＯＨ（６３ｇ、１．５７ｍｏｌ）の、アセトン（１８０ｍＬ）および水（１ｍＬ）の混合物に、１／１のクロロホルム／アセトン混合物（８０ｍＬ）をゆっくり加えた。添加中に、温度を還流点まで上昇させた。添加が終了した時点で、溶媒を減圧下で蒸発させ、残留物を水（１０ｍＬ）に溶解させ、ジエチルエーテル（３×５０ｍＬ）で洗浄した。水層を氷酢酸で酸性にし、その後ジエチルエーテル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗残留物を、１／１のヘキサン／酢酸エチルの混合物による結晶化によって精製した。
【０１５４】
１２．４ｇの２−｛２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕エトキシ｝−２−メチル−プロパン酸を得た。
融点＝９４〜９５℃
【０１５５】
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：１．４３（ｓ，６Ｈ），３．５６−３．６３（ｍ，２Ｈ），３．６５−３．７１（ｍ，２Ｈ），５．０３（ｓ，２Ｈ），５．５８（ｓ，２Ｈ），７．１３−７．３９（ｍ，８Ｈ），７．８３（ｄｔ，Ｊ＝８．０５；０．８２Ｈｚ，１Ｈ），９．６０（ｂｓ，１Ｈ）
【０１５６】
化合物２１の調製
２−｛３−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕プロポキシ｝−２−メチルプロパン酸
２１ａ）３−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕プロパン−１−オル
室温で撹拌したＮａＯＨ（２．８ｇ；０．０７ｍｏｌ）の１，３−プロパンジオール（１５０ｍＬ）の溶液に、欧州特許第３８２２７６号明細書（特許文献１）号明細書に記載されたように調製した１−ベンジル−３−クロロメチルインダゾール（１７．６ｇ；０．０７ｍｏｌ）を加えた。溶液を１３０℃で４時間加熱し、その後室温に冷却し、そして溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物を水（１００ｍＬ）に溶解させ、生成物を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を減圧下で濃縮し、得られた粗残留物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで、約１／１のヘキサン／酢酸エチル混合物を溶離剤として使用して、精製した。
【０１５７】
１０．５ｇの３−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕プロパン−１−オルをこのようにして得た。
【０１５８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：１．８５（ｑ，Ｊ＝５．８３Ｈｚ，２Ｈ），２．７５（ｂｓ，１Ｈ），３．７１（ｔ，Ｊ＝７．７４Ｈｚ，４Ｈ），４．９１（ｓ，２Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．０−７．４（ｍ，８Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝７．７７Ｈｚ，１Ｈ）
【０１５９】
２１ｂ）２−｛３−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕プロポキシ｝−２−メチルプロパン酸
生成物を、出発原料として３−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕プロパン−１−オルを使用して、実施例２０に記載の方法で得た。生成物を７／３のヘキサン／酢酸エチル混合物により結晶化によって精製した。
融点＝５７〜５９℃
【０１６０】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ  ｐｐｍ）：１．２５（ｓ，６Ｈ），１．７２（ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝６．４０Ｈｚ，２Ｈ），３．３７（ｔ，Ｊ＝６．４０Ｈｚ，２Ｈ），３．５３（ｔ，Ｊ＝６．４０Ｈｚ，２Ｈ），４．７７（ｓ，２Ｈ），５．６２（ｓ，２Ｈ），７．１４（ｄｄｄ，Ｊ＝８．００；７．００；０．７３Ｈｚ，１Ｈ），７．１９−７．３３（ｍ，５Ｈ），７．３８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．３７；７．００；０．９１Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄｔ，Ｊ＝８．０５；０．９１Ｈｚ，１Ｈ），１２．４６（ｓ，１Ｈ）
【０１６１】
化合物２２の調製
２−｛〔１−（４−メチルベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メトキシ｝−２−メチルプロパン酸
２２ａ）〔１−（４−メチルベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メタノール
生成物を、試薬として４−メチルベンジルクロリドを使用して実施例１ａに記載の方法で得た。
【０１６２】
得られた生成物を、５／１のヘキサン／酢酸エチル混合物による結晶化によって精製した。
融点＝９０〜９２℃
【０１６３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：２．２４（ｓ，３Ｈ），３．４（ｂｓ，１Ｈ），５．０（ｓ，２Ｈ），５．３６（ｓ，２Ｈ），６．９−７．４（ｍ，７Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝７．８４Ｈｚ，１Ｈ）
【０１６４】
２２ｂ）２−｛〔１−（４−メチルベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メトキシ｝−２−メチルプロパン酸
生成物を、試薬として〔１−（４−メチルベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メタノールを使用して、実施例１ｂ）に記載の方法で得た。
得られた生成物をトルエンによる結晶化によって精製した。
融点＝１６０〜１６２℃
【０１６５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ  ｐｐｍ）：１．４５（ｓ，６Ｈ），２．２３（ｓ，３Ｈ），４．７５（ｓ，２Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），６．９−７．２（ｍ，５Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝６．９８Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．３２Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．３２Ｈｚ，１Ｈ）
【０１６６】
化合物２３の調製
２−〔（１−ベンジル−５−ブロモ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロパン酸
約１０℃の熱浴で撹拌した２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロパン酸（１７．５ｇ；０．０５４ｍｏｌ）の氷酢酸（７５ｍＬ）の懸濁液に、Ｂｒ２（１０ｍＬ；０．１９５ｍｏｌ）の氷酢酸（７５ｍＬ）の溶液を滴加した。添加が終了した時点で、溶液を室温で３０分間撹拌し、その後水（３００ｍＬ）内に注いだ。その後飽和Ｎａ２ＳＯ３溶液（１００ｍＬ）を混合物に加え、そして生成物を酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を減圧下で濃縮し、得られた粗残留物を、１／１のヘキサン／酢酸エチル混合物による結晶化によって精製した。
【０１６７】
８ｇの２−〔（１−ベンジル−５−ブロモ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロパン酸を得た。
融点＝１６８〜１７０℃
【０１６８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：１．６１（ｓ，６Ｈ），４．９１（ｓ，２Ｈ），５．５４（ｓ，２Ｈ），８．１１（ｂｓ，１Ｈ），７．１１−７．３３（ｍ，６Ｈ），７．４０（ｄｄ，Ｊ＝８．８７；１．７４Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝１．８３Ｈｚ，１Ｈ）
【０１６９】
化合物２４の調製
２−〔（５−アミノ−１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロパン酸
室温で撹拌した２−メチル−２−〔（５−ニトロ−１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕プロパン酸（化合物６）（５．６ｇ；０．０１５ｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）の懸濁液に、ギ酸アンモニウム（５．５ｇ；０．０８７ｍｏｌ）を加え、その後１０％のパラジウム−オン−炭素（１ｇ；０．９ｍｍｏｌ）をとてもゆっくり加えた。添加が終了した時点で、混合物を室温で３０分間撹拌し、その後濾過し、そして溶液を減圧下で濃縮した。残留物を水（１００ｍＬ）に溶解させ、混合物を氷酢酸で中和した。この様にして形成した固体を濾過し、１／１の酢酸エチル／エタノール混合物による結晶化によって精製した。
【０１７０】
３ｇの２−メチル−２−〔（５−アミノ−１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール酢酸−３−イル）メトキシ〕プロパン酸をこのようにして得た。
融点＝１７２〜１７３℃
【０１７１】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６＋Ｄ２Ｏ，δｐｐｍ）：１．４３（ｓ，６Ｈ），４．６４（ｓ，２Ｈ），５．４７（ｓ，２Ｈ），６．０−８．０（ｂｍ，１１Ｈ）
【０１７２】
化合物２５の調製
｛〔１−（４−クロロ−２−メチルベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メトキシ｝酢酸
生成物を、出発原料として〔１−（４−クロロ−２−メチルベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル〕メタノールを使用して、実施例１７ｂに記載の方法で得た。
【０１７３】
生成物をイソプロパノールによる結晶化によって精製した。
融点＝１４４〜１４６℃
【０１７４】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，δ  ｐｐｍ）：２．３４（ｓ，３Ｈ），４．１２（ｓ，２Ｈ），４．８８（ｓ，２Ｈ），５．６３（ｓ，２Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝８．１９Ｈｚ，１Ｈ），７．０−７．５（ｍ，４Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝８．１９Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝７．６９Ｈｚ，１Ｈ）
【０１７５】
化合物２９の調製
２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロパン酸
生成物２９の調製を欧州特許出願公開第３８２２７６号明細書に記載されたように実施した。
【０１７６】
化合物３３の調製
｛３−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕プロポキシ｝酢酸
３３ａ）３−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕プロパン−１−オル
室温で撹拌したＮａＯＨ（２．８ｇ；０．０７ｍｏｌ）の１，３−プロパンジオール（１５０ｍＬ）の溶液に、欧州特許第３８２２７６号明細書の実施例２ａ（１７．６ｇ；０．０７ｍｏｌ）に記載されたように調製した１−ベンジル−３−クロロメチルインダゾールを加えた。溶液を１３０℃で４時間加熱し、その後室温で冷却し、溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物を水（１００ｍＬ）に溶解させ、生成物を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を減圧下で濃縮し、得られた粗残留物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで、１／１のヘキサン／酢酸エチルの混合物を溶離剤として使用して抽出した。生成物を約１／１のヘキサン／酢酸エチル混合物による結晶化によって精製した。
【０１７７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：１．８５（ｑ，Ｊ＝５．８３Ｈｚ，２Ｈ），２．７５（ｂｓ，１Ｈ），３．７１（ｔ，Ｊ＝７．７４Ｈｚ，４Ｈ），４．９１（ｓ，２Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．０−７．４（ｍ，８Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝７．７７Ｈｚ，１Ｈ）
【０１７８】
３３ｂ）｛３−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕プロポキシ｝酢酸
室温で撹拌した３−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕プロパン−１−オル（１１．５ｇ、０．０４ｍｏｌ）の乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１００ｍＬ）の溶液に、６０％の水素化ナトリウム（１．６ｇ、０．０４ｍｏｌ）を加えた。混合物を沸騰で２時間加熱し、その後室温で冷却し、そしてブロモ酢酸エチル（７．４ｇ，０．０４４ｍｏｌ）のＴＨＦ（７ｍＬ）溶液をそれにゆっくり加えた。添加が終了した時点で、混合物をさらに２時間還流した。室温で冷却し、溶媒を減圧下で蒸発させることによって、反応を終了した。残留物を２Ｎ  ＮａＯＨ（１００ｍＬ）に溶解させ、生成物をジエチルエーテル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を減圧下で濃縮した。
【０１７９】
粗残留物を、ＮａＯＨ（１．９ｇ、０．０４５ｍｏｌ）の１／１の水／エタノール混合物（１６０ｍＬ）の溶液に溶解した。その後混合物を還流で２時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮することによって、反応を完了し、残留物を水（１００ｍＬ）に溶解させ、ジエチルエーテル（３×５０ｍＬ）で洗浄した。その後アルカリ層を、濃ＨＣｌで酸性にし、形成した固形物を濾過した。生成物を、１／３のヘキサン／酢酸エチル混合物により二回の結晶化によって精製した。５．５ｇの｛３−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕プロポキシ｝酢酸をこのようにして得た。
【０１８０】
化合物３４の調製
｛２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロポキシ｝酢酸
３４ａ）２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロパン−１−オル
室温で撹拌したＬｉＡｌＨ４（４．４８ｇ；０．１１８ｍｏｌ）のジエチルエーテル（１００ｍＬ）の懸濁液に、欧州特許第３８２２７６号明細書（特許文献１）号明細書に記載された方法に従って調製したメチル２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロパノアート（２０ｇ；０．０６ｍｏｌ）の、ジエチルエーテル（２００ｍＬ）およびＴＨＦ（５０ｍＬ）の溶液をゆっくり加えた。添加が終了した時点で、混合物を３０分間室温で撹拌し、その後反応を１０Ｎ  ＮａＯＨ（２０ｍＬ）および水（４０ｍＬ）を加えることによって完了した。溶媒を減圧下で蒸発させ、油質残留物を0.01mmHg190℃で蒸留させることで精製した。このようにして得た固形生成物をイソプロパノールで結晶化した。
【０１８１】
１１ｇの２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロパン−１−オルをこのようにして得た。
融点＝５２〜５３℃
【０１８２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ  ｐｐｍ）：１．３４（ｓ，６Ｈ），２．５０（ｂｓ，１Ｈ），  ３．５１（ｓ，２Ｈ），４．８７（ｓ，２Ｈ），５．５５（ｓ，２Ｈ），７．１４（ｄｄｄ，Ｊ＝８．０４；６．２１；１．６８Ｈｚ，１Ｈ），７．１７−７．３８（ｍ，７Ｈ），７．７８（ｄｔ，Ｊ＝８．０８；１．００Ｈｚ，１Ｈ）
【０１８３】
３４ｂ）｛２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロポキシ｝酢酸
室温で撹拌した２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロポキシ−１−オル（１１．０ｇ、０．０４ｍｏｌ）の乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１００ｍＬ）溶液に、６０％の水素化ナトリウム（１．６ｇ，０．０４ｍｏｌ）を加えた。混合物を沸点で２時間加熱し、その後室温に冷却し、そしてブロモ酢酸エチル（７．４ｇ，０．０４４ｍｏｌ）のＴＨＦ（７ｍＬ）溶液をそれにゆっくり加えた。添加が終了した時点で、混合物をさらに２時間還流した。室温で冷却し、溶媒を減圧下で蒸発させることによって反応を完了した。残留物を２Ｎ  ＮａＯＨ（１００ｍＬ）に溶解させ、生成物をジエチルエーテル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を減圧下で濃縮した。
【０１８４】
粗残留物を、ＮａＯＨ（１．９ｇ，０．４５ｍｏｌ）の１／１の水／エタノール混合物（１６０ｍＬ）に溶解した。その後混合物を還流で２時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮することによって反応を完了し、残留物を水（１００ｍＬ）に溶解させ、そしてジエチルエーテル（３×１５０ｍＬ）で洗浄した。その後アルカリ層を、濃ＨＣｌで酸性にし、固体を濾過した。生成物を、１／２のヘキサン／酢酸エチルの混合物により二回の結晶化によって精製した。４．６ｇの｛２−〔（１−ベンジル−１Ｈ−インダゾール−３−イル）メトキシ〕−２−メチルプロポキシ｝酢酸をこのようにして得た。
【０１８５】
実施例１
ヒト単球株におけるＭＣＰ−１の遺伝子発現の分析
リポ多糖類（ＬＰＳ）を活性化したＭｏｎｏＭａｃ６細胞によるＭＣＰ−１発現の阻害する化合物の能力を評価した。細胞を９６穴プレートに５００００細胞／穴の濃度で播種した。化合物を、表１（３０〜３００μＭの範囲）に示した最大可溶な濃度で試験し、１時間培養した。その後細胞をＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）で４時間活性化した。
【０１８６】
総ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙミニキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて細胞のペレットから抽出し、ＴａｑＭａｎ  Ｒｅｖｅｒｓｅ転写試薬合成キット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ）で逆転写して、得られたｃＤＮＡをリアルタイムＰＣＲ反応に使用した。増幅を、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７０００配列検出系（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、以下の温度プロファイル：５０℃で２分、９５℃で１０分、そして９５℃で１５秒と６０℃で１分の４５サイクルを適用することによって、９６穴プレートで得た。増幅のために、ヒトＭＣＰ−１に特異的なプライマーおよびプローブの一式を使用した（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  ＲｅｆＳｅｑ  ＮＭ＿００２９８２．３）。β−アクチンに対するプライマーとプローブの一式を異なった穴に、サンプルの内部統制として、正常化の目的で使用した。反応が起きた時点で、蛍光データを、閾値サイクル（Ｃｔ）をそれぞれのサンプルで算出し、その後ΔΔＣｔ方法での相対的定量化を行うことによりＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ７０００ＳＤＳソフトウェアを用いて分析した。
【０１８７】
得られた結果を、パーセント阻害率で表示し、以下の表１に照合する。
【表１】
0005509099.tif 000007
【０１８８】
得られた結果を表１に加えて示すように、化合物はヒト単球株でＭＣＰ−１のＬＰＳ誘導による発現を著しく阻害することができ、２６％〜９５％の間の特異的なｍＲＮＡのレベルで減少したことを示す。
【０１８９】
実施例２
ヒト単球株でのＭＣＰ−１産出の測定
リポ多糖類（ＬＰＳ）で活性化したＭｏｎｏＭａｃ６細胞で、ＭＣＰ−１タンパク質の発現を阻害する化合物の能力を評価した。細胞を９６穴プレートに５００００細胞／穴の濃度で播種した。化合物を、表２（３０〜３００μＭの範囲）に示した最大可溶な濃度で試験し、１時間培養した。その後細胞をＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）で２０時間活性化した。
【０１９０】
産出されたＭＣＰ−１の量を、バッファーで適度に希釈した上清で、商業用キット（ＥＬＩＳＡ  ＭＣＰ−１／ＪＥ，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、免疫酵素試験（ＥＬＩＳＡ）によって測定した。
【０１９１】
得られた結果を、パーセント阻害率で表現し、以下の表２に照合する。
【表２】
0005509099.tif 000008
【０１９２】
得られた結果を表２に加えて示すように、化合物はヒト単球株においてＭＣＰ−１のＬＰＳ誘導による発現を著しく阻害することができ、産出したタンパク質の２９％〜１００％の間のレベルで減少したことを示す。
【０１９３】
実施例３
ヒト単球株でのＣＸ３ＣＲ１の遺伝子発現の分析
リポ多糖類（ＬＰＳ）を活性化したＭｏｎｏＭａｃ６細胞によるＣＸ３ＣＲ１の発現を阻害する化合物の能力を評価した。細胞を９６穴プレートに５００００細胞／穴の濃度で播種した。化合物を、表３（３０〜３００μＭの範囲）に示した最濃度で試験し、１時間培養した。その後細胞をＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）で２０時間活性化した。
【０１９４】
総ＲＮＡを、ＮＡｅａｓｙミニキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して細胞のペレットから抽出し、ＴａｑＭａｎ  Ｒｅｖｅｒｓｅ転写試薬合成キット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で逆転写して、得られたｃＤＮＡをリアルタイムＰＣＲ反応に使用した。増幅を、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７０００配列検出系（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、以下の温度プロファイル：５０℃で２分、９５℃で１０分、そして９５℃で１５秒と６０℃で１分の４５サイクルを適用することによって、９６穴プレートで得た。増幅のために、ヒトＣＸ３ＣＲ１に特異的なプライマーおよびプローブの一式を使用した（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  ＲｅｆＳｅｑ  ＮＭ＿００１３３７．３）。β−アクチンに対するプライマーとプローブの一式を、標準化のためにサンプルの内部対照として、異なった穴に使用した。蛍光データを、反応が起こった時点で、閾値サイクル（Ｃｔ）をそれぞれのサンプルで算出し、その後ΔΔＣｔ方法での相対的定量化を行って、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ７０００ＳＤＳソフトウェアを用いて分析した。
【０１９５】
得られた結果を、パーセント阻害率で示し、以下の表３に照合する。
【表３】
0005509099.tif 000009
【０１９６】
得られた結果を表３に加えて示すように、化合物はヒト単球株においてＣＸ３ＣＲ１のＬＰＳ誘導による発現を著しく阻害し、特異的なｍＲＮＡを７５％〜９９％の間のレベルで減少したことを示す。
【０１９７】
実施例４
ヒト単球株におけるｐ４０の遺伝子発現の分析
リポ多糖類（ＬＰＳ）で活性化したＭｏｎｏＭａｃ６細胞で、ｐ４０発現を阻害する化合物の能力を評価した。細胞を９６穴プレートに５００００細胞／穴の濃度で播種した。化合物を、表４（３０〜３００μＭの範囲）に示した最大可溶な濃度で試験し、１時間培養した。その後細胞をＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）で４時間活性化した。
【０１９８】
総ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙミニキット（Ｑｉａｇｅｎ），ＴａｑＭａｎ  Ｒｅｖｅｒｓｅ転写試薬合成キット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ）で、以下の温度プロファイル：５０℃で２分、９５℃で１０分、そして９５℃で１５秒と６０℃で１分の４５サイクルを用いて、細胞のペレットから抽出した。増幅のために、ヒトｐ４０に特異的なプライマーとプローブの一式を使用した（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＲｅｆＳｅｑ  ＮＭ＿００２１８７．２）。β−アクチンに対するプライマーとプローブの一式を、標準化のためにサンプルの内部対照として、異なった穴に使用した。反応が起こった時点で、蛍光データを、閾値サイクル（Ｃｔ）をそれぞれのサンプルで算出し、その後ΔΔＣｔ方法での相対的定量化を行って、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ７０００ＳＤＳソフトウェアを用いて分析した。
【０１９９】
得られた結果は、パーセント阻害率で示し、以下の表４に照合する。
【表４】
0005509099.tif 000010
【０２００】
得られた結果を表４に加えて示すように、化合物はヒト単球株においてｐ４０のＬＰＳ誘導による発現を著しく阻害することができ、特異的なｍＲＮＡを４７％〜６４％の間のレベルで減少したことを示す。