(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
安定した注射可能な水中油型ドセタキセルナノエマルション組成物であって、２００ｎｍ未満の液滴サイズ及びｐＨ４．０〜５．５を有し、過敏症反応及び体液貯留がなく、ドセタキセルと、唯一の油成分として合成トリグリセリド油と、乳化剤としてＰＥＧ鎖が２０００〜５０００の分子量を有するＮ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン及び精製天然ホスファチドのみと、グリセロールと、注射用蒸留水とを含み、更に溶媒又は共溶媒を含まないことを特徴とする組成物。
【請求項２】
Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンが、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
安定した注射可能な水中油型ドセタキセルナノエマルション組成物を形成する非経口投与用凍結乾燥組成物であって、再構成時に２００ｎｍ未満の液滴サイズ及びｐＨ４．０〜５．５を有し、過敏症反応及び体液貯留がなく、ドセタキセルと、唯一の油成分として合成トリグリセリド油と、乳化剤としてＰＥＧ鎖が２０００〜５０００の分子量を有するＮ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン及び精製天然ホスファチドのみと、グリセロールと、凍害防止剤とを含み、更に溶媒又は共溶媒を含まないことを特徴とする凍結乾燥組成物。
【請求項４】
Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンが、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ドセタキセルが、前記組成物の０．０５〜２．０％ｗ／ｖである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記合成トリグリセリド油が、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸及びこれらの混合物から選択される脂肪酸を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記合成トリグリセリド油の脂肪酸組成が、カプリル酸を８５〜１００質量％有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記合成トリグリセリド油が、トリカプリリン又はトリオレイン、及び／又はカプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸又はこれらの混合物の混合トリグリセリドである、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
前記精製天然ホスファチドが、精製卵レシチン、精製大豆レシチン及びこれらの混合物から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
合成トリグリセリド油対ドセタキセル質量比が、１：１〜１００：１である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
合成トリグリセリド油対Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン質量比が、１：１〜１００：１である、請求項２に記載の組成物。
【請求項１２】
合成トリグリセリド油対精製天然ホスファチド質量比が、４：１〜４０：１である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
グリセロール含有量が、前記組成物の０．５〜３％ｗ／ｖである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
請求項１に記載のドセタキセルナノエマルション組成物を調製するための方法であって、以下の工程、
（ｉ）音波処理又は加熱によりドセタキセルを合成トリグリセリド油に溶解させることによって油相を形成する透明な溶液を得る工程、
（ｉｉ）グリセロールを注射用蒸留水に可溶化させて水相を形成する工程、
（ｉｉｉ）Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを工程ｉの前記油相若しくは工程ｉｉの前記水相に又は一部を工程ｉの前記水相、一部を工程ｉｉの前記油相に分散させる工程、
（ｉｖ）精製天然ホスファチドを工程ｉｉで調製した前記水相に分散させる工程、
（ｖ）攪拌しながら前記油相を前記水相に添加して粗エマルションを得る工程、
（ｖｉ）前記粗エマルションを均質化して平均小球サイズ２００ｎｍ未満を得る工程、
（ｖｉｉ）得られたエマルションのｐＨを工程ｖ又は工程ｖｉで４．０〜５．５に調節する工程、
（ｖｉｉｉ）工程ｖｉｉの最後に得られるナノエマルションを０．２μｍフィルタで無菌的に濾過し、窒素下でバイアルに充填する工程、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１５】
前記工程（ｖｉ）における平均小球サイズが１００ｎｍ未満である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
凍害防止剤がショ糖、トレハロース、マンニトール、乳糖又はこれらの混合物から選択される、請求項３又は４に記載の凍結乾燥組成物。
【請求項１７】
凍害防止剤が最高２０質量％の量のショ糖である、請求項３又は４に記載の凍結乾燥組成物。
【請求項１８】
請求項３に記載の凍結乾燥組成物を調製するための方法であって、以下の工程、
（ｉ）音波処理又は加熱によりドセタキセルを合成トリグリセリド油に溶解させることによって油相を形成する透明な溶液を得る工程、
（ｉｉ）グリセロール及び凍害防止剤を注射用蒸留水に可溶化させて水相を形成する工程、
（ｉｉｉ）Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを工程ｉの前記油相若しくは工程ｉｉの前記水相に又は一部を工程ｉの前記水相、一部を工程ｉｉの前記油相に分散させる工程、
（ｉｖ）精製天然ホスファチドを工程ｉｉで調製した前記水相に分散させる工程、
（ｖ）攪拌しながら前記油相を前記水相に添加して粗エマルションを得る工程、
（ｖｉ）前記粗エマルションを均質化して平均小球サイズ２００ｎｍ未満を得る工程、
（ｖｉｉ）得られたエマルションのｐＨを工程ｖ又は工程ｖｉで４．０〜５．５に調節する工程、
（ｖｉｉｉ）工程ｖｉｉの最後に得られるナノエマルションを０．２μｍフィルタで無菌的に濾過し、バイアルに充填し、凍結乾燥する工程、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１９】
前記工程（ｖｉ）における平均小球サイズが１００ｎｍ未満である、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ドセタキセル(docetaxel)を含有する水中油型ナノエマルションに関する。
本発明は特は、非経口投与用のドセタキセルを含有する安定した水中油型ナノエマルションに関する。
【背景技術】
【０００２】
ドセタキセルは、注射用濃縮液の形態で商標名「タキソテール（Taxotere）」として市販され、また乳癌、非小細胞肺癌及び前立腺癌の治療に使用される。タキソテールは、溶解剤としてのポリソルベート８０中に処方される。タキソテール注射剤は、注入前に２段階の希釈を必要とする２つの容器に分かれた製剤から構成される。第１の工程において、希釈バイアルの中身（注射用蒸留水中の１３％エタノール）で希釈し、第２の工程において、非経口投与のためにブドウ糖注射液又は通常の生理食塩水等の希釈液で更に希釈する。
【０００３】
ポリソルベート８０は重度の過敏症反応及び体液貯留(fluid retention)を引き起こすため、患者は前投薬を必要とする。従って、市販の製剤には取り扱い及び副作用に関して大きな限界がある。
【０００４】
更に、ポリソルベート８０をＰＶＣ製の送達装置で使用することはできない。極めて毒性が高いジエチルヘキシルフタレートを浸出させる傾向があるからである。
【０００５】
注射前に２種類の溶液を混合するこれらの難点を回避するために、以下の発明が報告されている。
【０００６】
ＵＳ５４７８８６０明細書には、油と、疎水性化合物と、ポリエチレングリコール結合脂質との混合物を含む安定したマイクロエマルション組成物が記載されており、この混合物は、極性脂質の単層に取り囲まれている。一実施形態において、この混合物は更にリン脂質を含む。好ましい実施形態において、疎水性化合物は治療薬である。
【０００７】
上記特許の一実施例において、タキソール（パクリタキセル）エマルションの調製が記載されている。この方法において、タキソールはまずトウモロコシ油に添加され、そこにＭｅＰＥＧＳ．２０００−ＤＳＰＥとＥＰＣとのクロロホルム混合液を添加し、次にクロロホルムを除去して脂質の薄膜を得る。この膜をＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）で水和し、次に直径７０ｎｍの卵ホスファチジルコリンリン脂質供与ベシクルを添加する。この混合物をマイクロエマルション形成装置（ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒ）に通してマイクロエマルションを得る。これはこの方法が、リポソーム形成を経ることを意味する。
【０００８】
ＵＳ２００６／００６７９５２Ａ１明細書には、タキソイド薬、特にはパクリタキセル、ドセタキセルの注射可能な水中油型エマルションが記載されており、このエマルションはリン脂質及び植物油を含み、投与前に水溶液で希釈しなくてはならない。
【０００９】
ドセタキセルエマルションの典型的な製造方法は、ドセタキセル（０．０５％）、低油(low oil)（３．１％）（大豆油、加えてＭＣＴ油）、卵レシチン（３．１％）及び十分な量のエタノールを混合して透明な溶液を生成することを含む。この溶液を、残留エタノールが２．０質量％未満になるまで真空下で乾燥させる。水相は、グリセリン（１．７５）及びグリシン（０．５）を水中に溶解させることによって調製される。次に、この水相を高せん断ミキサによる攪拌下で油相に添加して粗エマルションを得る。ｐＨを約４〜４．５に調節し、エマルションをマイクロフルイダイザ（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）に通し、得られたエマルションを０．２μ無菌フィルタで濾過する。
【００１０】
本発明者は、ＵＳ２００６／００６７９５２Ａ１明細書に記載のエマルション組成物が、ドセタキセル以外のパクリタキセルに関することを発見した。パクリタキセル及びドセタキセルは、異なるｐＨで安定性を有する。すなわち、パクリタキセルは７前後のｐＨでより安定するが、ドセタキセルは４．５前後のｐＨで安定する。植物油を含有するエマルションは、酸性ｐＨでの安定性が極めて悪い。このようなエマルションでは、遊離脂肪酸の生成と油の小球の凝集が報告されている。このため、ドセタキセルの安定性又はそのエマルションの安定性に悪影響を与えることなくパクリタキセル用の組成をドセタキセルに当てはめることはできない。
【００１１】
更に、ＵＳ２００６／００６７９５２Ａ１明細書には、最高０．５ｍｇ／ｍＬの薬物を含有する安定した組成物が記載されている。しかしながら、より高い薬物含有量を得るためには、油の含有量を１０％ｗ／ｖより高くしなくてはならないが、この文献自体において結論づけられているように、「・・・・形成されたエマルションは安全な非経口薬物送達ビヒクルとしてもはや許容範囲外にある」。このため、ＵＳ２００６／００６７９５２Ａ１の組成物は、必要とされる薬物含有量が０．５ｍｇ／ｍＬより多いと商業的に実現不可能となる。
【００１２】
ＷＯ２００８／０４２８４１Ａ２パンフレットには、ドセタキセル含有共溶媒（エタノール、プロピレングリコール等）、リン脂質及びペグ化リン脂質を含む、水溶液で希釈すると腫瘍状態を治療するための非経口投与に適切なものになる予備濃縮組成物が記載されている。この予備濃縮物は非水溶液であり、希釈するとエマルションを形成する。しかしながら、大用量で使用すると、エタノール等の溶媒の毒性により有害となる可能性がある。
【００１３】
ＷＯ２００８／０４２８４１Ａ２の組成物は、大用量で投与した場合に有害となる共溶媒を含有する。
【００１４】
本発明の主な目的は、過敏症反応及び体液貯留を回避でき、またそれによって前投薬を回避できるドセタキセル製剤を製造することである。
【００１５】
本発明の別の目的は、製剤におけるエタノール等の共溶媒の使用を回避することによって、共溶媒によって引き起こされる有害作用を排除することである。
【００１６】
本発明の更に別の目的は、組成物１ｍｌあたりのドセタキセル含有レベルがより高い、安定したドセタキセル製剤を製造することである。
【００１７】
本発明の更に別の目的は、より高いドセタキセル血漿濃度が得られる、安定したドセタキセル製剤を製造することである。
【００１８】
本発明の更に別の目的は、より高い安定性及び長い貯蔵寿命を有するドセタキセル製剤を得ることである。
【発明の概要】
【００１９】
従って、本発明は、２００ｎｍ未満の液滴サイズ及びｐＨ４．０〜５．５を有し、過敏症反応及び体液貯留がなく、ドセタキセルと、唯一の油成分として合成トリグリセリド油と、乳化剤としてＰＥＧ鎖が２０００〜５０００の分子量を有するＮ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ  ＰＥＧ）及び精製天然ホスファチドのみと、グリセロールと、注射用蒸留水とを含み、更に溶媒又は共溶媒を含まない、安定した注射可能な水中油型ドセタキセルナノエマルション組成物を提供する。
【００２０】
これらのドセタキセルナノエマルション組成物を調製するための方法は、以下の工程
（ｉ）音波処理又は加熱によりドセタキセルを合成トリグリセリド油に溶解させることによって油相を形成する透明な溶液を得て、
（ｉｉ）グリセロールを注射用蒸留水に可溶化させて水相を形成し、
（ｉｉｉ）Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを工程ｉの油相若しくは工程ｉｉの水相に又は一部を工程ｉの水相、一部を工程ｉｉの油相に分散させ、
（ｉｖ）精製天然ホスファチドを工程ｉｉで調製した水相に分散させ、
（ｖ）攪拌しながら油相を水相に添加して粗エマルションを得て、
（ｖｉ）この粗エマルションを均質化して平均小球サイズ２００ｎｍ未満、好ましくは１００ｎｍ未満を得て、
（ｖｉｉ）得られたエマルションのｐＨを工程ｖ又は工程ｖｉで４．０〜５．５に調節し、
（ｖｉｉｉ）工程ｖｉｉの最後に得られるナノエマルションを０．２μフィルタで無菌的に濾過し、窒素下でバイアルに充填する
を含む。
【００２１】
本発明の別の実施形態において、安定した注射可能な水中油型ドセタキセルナノエマルション組成物を形成する非経口投与用凍結乾燥組成物が提供され、この組成物は、再構成時に２００ｎｍ未満の液滴サイズ及びｐＨ４．０〜５．５を有し、過敏症反応及び体液貯留がなく、ドセタキセルと、唯一の油成分として合成トリグリセリド油と、乳化剤としてＰＥＧ鎖が２０００〜５０００の分子量を有するＮ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン及び精製天然ホスファチドのみと、グリセロールと、凍害防止剤とを含み、更に溶媒又は共溶媒を含まない。
【００２２】
これらの凍結乾燥ドセタキセルナノエマルション組成物を調製するための方法は、以下の工程
（ｉ）音波処理又は加熱によりドセタキセルを合成トリグリセリド油に溶解させることによって油相を形成する透明な溶液を得て、
（ｉｉ）グリセロール及び凍害防止剤を注射用蒸留水に可溶化させて水相を形成し、
（ｉｉｉ）Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを工程ｉの油相若しくは工程ｉｉの水相に又は一部を工程ｉの水相、一部を工程ｉｉの油相に分散させ、
（ｉｖ）精製天然ホスファチドを工程ｉｉで調製した水相に分散させ、
（ｖ）攪拌しながら油相を水相に添加して粗エマルションを得て、
（ｖｉ）この粗エマルションを均質化して平均小球サイズ２００ｎｍ未満、好ましくは１００ｎｍ未満を得て、
（ｖｉｉ）得られたエマルションのｐＨを工程ｖ又は工程ｖｉで４．０〜５．５に調節し、
（ｖｉｉｉ）工程ｖｉｉの最後に得られるナノエマルションを０．２μフィルタで無菌的に濾過し、バイアルに充填し、凍結乾燥する
を含む。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
ナノエマルション
国際純正・応用化学連合（ＩＵＰＡＣ）によるエマルションの定義は、「エマルションにおいて、液滴及び／又は液晶は液体中で分散している」である。「分散する（ｄｉｓｐｅｒｓｅｄ）」という言葉を非平衡であり且つマイクロエマルション及びミセル系に適用可能な用語「可溶化される（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｄ）」の反対であると解釈した場合、マイクロエマルションはこの定義から明らかに外れる。従って、マイクロエマルションとナノエマルションとの間には根本的な違いがある。マイクロエマルションは平衡系であり（すなわち、熱力学的に安定である）、ナノエマルションは非平衡系であり、構成成分の相に自然に分離する傾向がある。しかしながら、界面活性剤及びその他の賦形剤の添加によって安定する。
【００２４】
本発明において、ナノエマルションは、液滴サイズが小さい（ナノメートル範囲。例えば２０〜２００ｎｍ）エマルション（非平衡系）である。
【００２５】
ナノエマルションを、熱力学的に安定であり且つ「自己乳化系」と称されることが多い古典的な「マイクロエマルション」と混同してはならない。マイクロエマルションは、表面張力がゼロ近くにまで低下した場合に形成され、これは特定の界面活性剤、吸着層と界面活性剤、共界面活性剤との組み合わせ又は特定のパッキングによってのみ達成される。これらのマイクロエマルションは極めて低い粘度を示し、また基本的に油（及び薬物）が可溶化された膨潤ミセルを含む。マイクロエマルション系は透明（光学的に等方）であるが、希釈すると従来のエマルション系を形成可能である。
【００２６】
本発明のナノエマルション組成物
本発明は、２つの形態：（ｉ）液体（ナノエマルション）及び（ｉｉ）固体の凍結乾燥粉末（再構成時にナノエマルションとなる）としてのナノエマルションについて説明する。
【００２７】
ドセタキセル
実施例で使用のドセタキセルは概して三水和物であり、ナノエマルションにおけるドセタキセルの濃度は液体組成物における無水基準で０．０５〜２．０％ｗ／ｖであり、好ましくは、濃度は組成物において０．１〜２．０％ｗ／ｖである。
【００２８】
合成トリグリセリド油
広範囲にわたる実験後、発明者は、通常の注射用油を使用したドセタキセルのナノエマルションの貯蔵寿命が良好ではないことを発見した。ＭＣＴ油と植物油との混合物で形成したナノエマルションの貯蔵寿命は満足のいくものではない。理論によって拘束するものではないが、発明者は、エステル交換及び脂肪分解反応が起きて植物油を含有しているナノエマルションの安定性がゆっくりと劣化すると考えている。発明者は驚くべきことに、合成トリグリセリドを使用するとこのような劣化が起こらないことを発見した。
【００２９】
中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ油）は、グリセリドの天然源又は部分的に若しくは完全に合成の材料を使用して合成される。ＭＣＴは、通常約８〜約１２炭素長の遊離脂肪酸から形成される。代表的なものは、ＭＩＧＬＹＯＬ  ８１２、ＣＲＯＤＡＭＯＬ  ＧＴＣＣ−ＰＮ、ＮＥＯＢＥＥ  Ｍ−５油として市販されている。
【００３０】
本発明のナノエマルション組成物で使用される合成トリグリセリド油は、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸及びこれらの混合物から選択される脂肪酸を有し、好ましくはカプリル酸が５０〜１００質量％であり、より好ましくはカプリル酸が８５〜１００質量％である。
【００３１】
本発明で使用される合成トリグリセリド油は、中鎖トリグリセリド、トリカプリリン、トリオレイン及びこれらの混合物から選択される。
【００３２】
ホスファチド
ホスファチドは、ナノエマルションのための乳化剤、また安定剤として使用される。使用されるホスファチドは、精製された天然リン脂質である。リン脂質は、２つの脂肪酸と１つのホスフェートイオンとのグリセロールのトリエステルである。精製天然ホスファチドは、精製卵レシチン、精製大豆レシチン及びこれらの混合物から選択される。
【００３３】
グリセロール
グリセロールは、安定したナノエマルションの調製に有用である。
【００３４】
ＤＳＰＥ  ＰＥＧ（ペグ化ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン）
この物質は化学的にはＮ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンとして知られている。この物質は、本発明のナノエマルション中で乳化剤及び安定剤のような役割を果たす。
【００３５】
本発明のためのリン脂質−ＰＥＧ複合体は、２０００〜５０００の範囲の分子量のＰＥＧ鎖を有するＰＥＧ−ホスファチジルエタノールアミンＤＳＰＥ−ＰＥＧである。ＤＳＰＥ  ＰＥＧ−２０００が好ましい。
【００３６】
エマルションの形成中、このＤＳＰＥ  ＰＥＧを水相若しくは油相に又は一部を水相、一部を油相に添加する。
【００３７】
賦形剤
本発明の組成物は任意で薬学的に許容可能な添加剤、例えば酸性化剤、アルカリ化剤、緩衝剤、安定剤、浸透圧調節剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ  ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）及びその他の生体適合性材料を含有し得る。このような添加剤は一般にエマルションの水相中に存在し、エマルションの安定化に役立つ。
【００３８】
酸性化剤の例は、塩酸、クエン酸、酢酸等であるが、これらの酸に限定はされない。
【００３９】
アルカリ化剤(alkaliner)の例には、水酸化ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が含まれる。
【００４０】
凍害防止剤材料（ショ糖、トレハロース、乳糖、マンニトール等）を使用して、凍結乾燥時にナノエマルションの性質を保護する。凍結乾燥物を再構成すると、凍結乾燥前と同様の規格を有するナノエマルションが再度得られる。
【００４１】
その他の生体適合性材料には、限定するものではないがアルブミン、ソルビトール、グリシン、デキストラン等が含まれる。
【００４２】
ナノエマルション組成物において、合成トリグリセリド油対ドセタキセル質量比は１：１〜１００：１であり、好ましくは１０：１〜５０：１である。
【００４３】
ナノエマルション組成物において、合成トリグリセリド油対Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン質量比は１：１〜１００：１、好ましくは５：１〜２０：１である。
【００４４】
ナノエマルション組成物において、合成トリグリセリド油対精製天然ホスファチド質量比は４：１〜４０：１、好ましくは７：１〜２０：１である。
【００４５】
ナノエマルション組成物において、グリセロール含有量は組成物の０．５〜３％ｗ／ｖである。
【００４６】
凍結乾燥ナノエマルション組成物
凍結乾燥ナノエマルション組成物において、凍結乾燥前、ドセタキセルは０．０５〜２．０％ｗ／ｖであり、好ましくは凍結乾燥前の濃度は０．１〜２．０％ｗ／ｖである。
【００４７】
凍結乾燥ナノエマルション組成物において、脂肪酸（カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリル酸、ミリスチン酸、オレイン酸、これらの混合物）、好ましくはカプリル酸を有する合成トリグリセリド油は５０〜１００質量％であり、より好ましくはカプリル酸は８５〜１００質量％である。
【００４８】
凍結乾燥ナノエマルション組成物において、合成トリグリセリド油は、中鎖トリグリセリド、トリカプリリン、トリオレイン及びこれらの混合物から選択される。
【００４９】
凍結乾燥ナノエマルション組成物において、精製天然ホスファチドは、精製卵レシチン、精製大豆レシチン及びこれらの混合物から選択される。
【００５０】
凍結乾燥ナノエマルション組成物において、合成トリグリセリド油対ドセタキセル質量比は１：１〜１００：１、好ましくは１０：１〜５０：１である。
【００５１】
凍結乾燥ナノエマルション組成物において、合成トリグリセリド油対Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン質量比は１：１〜１００：１、好ましくは５：１〜２０：１である。
【００５２】
凍結乾燥ナノエマルション組成物において、合成トリグリセリド油対精製天然ホスファチド質量比は４：１〜４０：１、好ましくは７：１〜２０：１である。
【００５３】
凍結乾燥ナノエマルション組成物において、グリセロール含有量は０．５〜３質量％である。
【００５４】
凍結乾燥ナノエマルション組成物において、ショ糖含有量は最高２０質量％である。
【実施例】
【００５５】
ここで本発明を実施例の助けを借りて説明する。
【００５６】
実施例は説明のためのものに過ぎず、本発明の範囲を限定しない。
【００５７】
実施例１〜２０及び実施例２８全てについての製剤を表１に示す。
【００５８】
調製した実施例１〜１４及び実施例２８のナノエマルションの試料の観察結果を表２に示す。
【００５９】
安定性についての結果を表３に示す。
【００６０】
実施例１〜２０及び実施例２８の製剤に続いて、毒性及びその他の生物学的研究の実施例を実施例２１〜２６と番号づけした。実施例２７は貯蔵寿命のデータを示す。
【００６１】
これらの実施例で使用の材料は注射グレード／医薬品グレードであり、また現地で調達された。
・ドセタキセル三水和物（Ｄｒ．Ｒｅｄｄｙ´ｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ製）
・無水ドセタキセル（Ｄａｂｕｒ  Ｐｈａｒｍａ  Ｌｔｄ．製）
・エタノール（Ｈａｙｍａｎ製）
・ＭＣＴ油、大豆油、ＤＳＰＥ  ＰＥＧ−２０００ナトリウム、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、卵レシチン、オレイン酸ナトリウム（Ｌｉｐｏｉｄ製）
・トリカプリリン、トリオレイン、ショ糖、トレハロース（Ｓｉｇｍａ製）
・グリセロール（Ｑｕａｌｉｇｅｎ製）
・グリシン（Ｍｅｒｃｋ製）
【００６２】
実施例において記載される際は常に、比較用試料としてＳａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ製のタキソテールを使用する。
【００６３】
使用機器
・水浴、Ｕｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘ  ＩＫＡ攪拌装置、超音波処理装置（ｂａｔｈ  ｓｏｎｉｃａｔｏｒ）、Ｎｉｒｏ  Ｓｏａｖｉホモジナイザ
【００６４】
実施例１
【表１】
0005635504.tif 000002
【００６５】
実施例１の製剤組成は表１にも示されている。
【００６６】
【表２】
0005635504.tif 000003
【００６７】
実施例１の上記ドセタキセルナノエマルション組成物は以下のようにして調製された。
【００６８】
油相の調製
１．ドセタキセル三水和物（２１４ｍｇ）をＭＣＴ油（１０ｇ）に添加した。
２．上記の混合物を１０分間にわたって超音波処理し、また７０℃にまで加熱すると透明で油性の無色の液体が得られた。
【００６９】
水相の調製
３．グリセロール（４．５ｇ）を注射用蒸留水（十分量〜２００ｍｌ）と室温（２０℃±５℃）で混合した。
４．ＤＳＰＥ  ＰＥＧ−２０００（１ｇ）を工程３で得られた上記の溶液中で可溶化させた。
５．次に、卵レシチン（２．４ｇ）を工程４で得られた水溶液中に分散させた。
【００７０】
粗エマルションの調製
６．油相を水相に高速攪拌下（Ｕｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘ  ＩＫＡ攪拌装置）で移して粗エマルションを得る。
【００７１】
均質化によるナノエマルションの調製
７．得られた粗エマルションを直ちに高圧ホモジナイザに通し、１２００ｂａｒで５分間にわたって均質化することによって８０〜１２０ｎｍの小球サイズ分布を得た。得られた平均小球サイズは９９ｎｍであった。
８．上記のエマルションのｐＨを、希塩酸の添加によって４．８８に調節した。
９．次に、エマルションを０．２μフィルタで濾過し、バイアルに充填し、窒素パージ下で密封した。
【００７２】
組成物のｐＨ及び粒径分布をプロセス中に監視した。観察結果を表２に示す。粒径は、Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｏｕｎｔｅｒ  Ｎ４を使用して光子相関分光法で監視された。
【００７３】
形成されたナノエマルションの安定性を、異なる温度で保管することによって検査した。結果を表３に示す。
【００７４】
実施例２：比較例
製剤組成を表１に示し、観察結果及び安定性についての結果を表２、表３にそれぞれ示す。
【００７５】
組成及びプロセスは実施例１と同じである。ただし実施例２においてＤＳＰＥ  ＰＥＧ−２０００は使用せず、均質化はより高い圧力（１５００ｂａｒ）で２０分間にわたって行われた。
【００７６】
組成物中にペグ化リン脂質が不在だと、エマルションの均質化時間を延長することによって平均粒径を１４０ｎｍ未満にまで下げるのは不可能であることが観察された。
【００７７】
更に、ペグ化リン脂質の不在下では、ナノエマルションが不安定であることが観察される。実施例２のナノエマルションの試料は、２４時間後に薬物の沈殿を示す。一方、実施例１のペグ化リン脂質を入れて調製したエマルション生成物は、調査した全保管条件において沈殿を示さない。
【００７８】
毒性及びその他の生物学的研究の実施例を、２０個の製剤実施例に続いて番号づけした。これらは実施例２１〜２６と番号づけされる。
【００７９】
実施例のドセタキセルナノエマルションの試料を、スイスアルビノマウス及びウィスターラットを使用して、毒性、血漿濃度に関する薬物動態試験について検査した。比較のために、タキソテールを使用した。同様にして、実施例１、２の試料の試験管内血漿研究も行われた。
【００８０】
実施例２１：実施例１の組成物の急性毒性研究
（Ａ）マウスにおける単回投与急性毒性
動物：マウス
種：スイスアルビノ
１群あたりの動物数：１０
用量：１５０ｍｇ／ｋｇ
【表３】
0005635504.tif 000004
【００８１】
（Ｂ）ラットにおける単回投与急性毒性
【表４】
0005635504.tif 000005
【００８２】
実施例２２：実施例１の組成物についての毒性研究
動物：マウス
種：スイスアルビノ
用量：１０、２２、３３、５０ｍｇ／ｋｇ
投与スケジュール：４日ごとに３回（０、４、８日）
【表５】
0005635504.tif 000006
【００８３】
実施例２３：ラットにおける比較単回投与薬物動態
実施例１の組成物を使用し、タキソテールを比較例として使用する。
動物：ラット
種：ウィスター
用量：１０ｍｇ／ｋｇ
【表６】
0005635504.tif 000007
【００８４】
時間（時間、Ｘ軸）に対して血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ、Ｙ軸）をプロットして得たグラフから、実施例１の組成物の場合のＣmax及びＡＵＣが、比較用生成物タキソテールで得られるものより高いことが判明した。
【００８５】
実施例２４：実施例１、２の生成物についての試験管内血漿研究
手順
１．０．２ｍｌのドセタキセルエマルションをエッペンドルフチューブ内で０．９ｍｌのヒト血漿と混合する。
２．混合物の粒径を分析する。
３．混合した試料を３７℃で２４時間にわたってインキュベートする。
４．インキュベートした試料の粒径を分析する。
【表７】
0005635504.tif 000008
【００８６】
ペグ化リン脂質を使用して調製したナノエマルションは血漿中で安定である。一方、ペグ化リン脂質なしで調製したエマルションは物理的に安定でない。
【００８７】
実施例３
プロセス及び原料の量は実施例１で採用のものと同じである。ただし無水ドセタキセルをドセタキセル三水和物の代わりに使用した。
【００８８】
製剤組成を表１に示し、観察結果及び安定性についての結果を表２、表３にそれぞれ示す。
【００８９】
結論
この実施例から、無水ドセタキセルのエマルションがドセタキセル三水和物と同様の安定性プロファイルを示すことがわかる。
【００９０】
実施例４：植物油とＭＣＴ油との混合物を使用して調製したナノエマルション（この実施例は本発明のものではない）
製剤組成を表１に示す。
【００９１】
手順
実施例１と同じであり、適切な原料及びその質量は処方通りである。
【００９２】
観察結果及び安定性についての結果を表２、表３にそれぞれ示す。エマルションは２４時間試験において安定であったものの、より長い期間にわたる保管時の物理的安定性は満足がいくものではないと判明した。すなわち、油層の分離が観察された。遊離脂肪酸含有量も３ヶ月にわたる２５℃での保管時に著しく上昇し、生成物からは、おそらくは大豆油と水分との低ｐＨでの接触により悪臭がした。
【００９３】
実施例５：ＵＳ２００６／００６７９５２Ａ１の組成及び方法に従って調製（比較例）
製剤組成を表１に示す。
【００９４】
観察結果及び安定性についての結果を表２、表３にそれぞれ示す。
【００９５】
２４時間後に薬物の沈殿が観察され、安定したエマルションは形成されない。これはおそらく組成がエタノール、大豆油であり、ＤＳＰＥ  ＰＥＧ−２０００を含有していないからである。
【００９６】
実施例６：この実施例においては、卵レシチンの代わりにＤＰＰＣを界面活性剤として使用して製剤を調製
製剤組成を表１に示す。
【００９７】
手順
実施例１と同じであり、適切な原料及びその質量は処方通りである。
【００９８】
卵レシチンの代わりに、ＤＰＰＣを水相に分散させた。
【００９９】
観察結果及び安定性についての結果を表２、表３にそれぞれ示す。
【０１００】
実施例７：７％のＭＣＴ油を使用してこの製剤を調製した。
製剤組成を表１に示す。
【０１０１】
手順
実施例１と同じであり、適切な原料及びその質量は処方通りである。
【０１０２】
観察結果及び安定性についての結果を表２、表３にそれぞれ示す。
【０１０３】
実施例８：１０％のＭＣＴ油を使用してこの製剤を調製した。
製剤組成を表１に示す。
【０１０４】
手順
実施例１と同じであり、適切な原料及びその質量は処方通りである。
【０１０５】
観察結果及び安定性についての結果を表２、表３にそれぞれ示す。
【０１０６】
実施例９、１０：これらの製剤は、ＤＳＰＥ  ＰＥＧ−２０００の濃度が異なること以外は同様である。
実施例９、１０についての薬物動態研究の詳細を実施例２５で述べる。実施例９、１０についての抗腫瘍効力研究の詳細を実施例２６で述べる。
【０１０７】
製剤組成を表１に示す。
【０１０８】
実施例９、１０の手順
実施例１と同じであり、適切な原料及びその質量は処方通りである。
【０１０９】
観察結果を表２に示す。
【０１１０】
実施例９、１０の生成物の安定性は良好であると判明した。両者は類似していることから、実施例１０の生成物を、実施例２７に記載されるような貯蔵寿命試験に供した。貯蔵寿命試験の結果は表４、５に示され、これらの結果は満足のいくものであると判明した。
【０１１１】
実施例２５：実施例９、１０の組成物についての薬物動態研究
血漿試料をＨＰＬＣ法で分析した。ＨＰＬＣ法の詳細を以下に示す。
カラム：Ｃ−１８（１００ｘ４．６ｍｍｘ３μ）
カラム温度：６０℃
流量：１ｍＬ／分
移動相：メタノール：ＴＨＦ：水：水酸化アンモニウム（６０：２．５：３７．５：０．１）。ｐＨを蟻酸で６．０に調節
波長：２３０λ
動物：ラット
種：ウィスター
用量：１０ｍｇ／ｋｇ
【表８】
0005635504.tif 000009
【０１１２】
上記のデータは、ドセタキセルの血漿濃度が、慣用のドセタキセル製剤（すなわちタキソテール）より約８倍高いことを示す。
【０１１３】
実施例２６：実施例１０の生成物の試料の抗腫瘍効力
抗腫瘍効力を、ＭＸ−１腫瘍誘導ＳＣＩＤマウスにおいて評価した。薬物を８．５ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇで３回、４日間隔（ｑ４ｄ）で注射した。
【表９】
0005635504.tif 000010
#-未処置群
##-未処置ビヒクル対照（ドセタキセルなし）群
@-ｑ４ｄ（４日間ごと）ｘ３回に３分割された用量での静脈内投与による全用量
【０１１４】
上記のデータは、本発明の製剤の抗腫瘍効力を決定的に示す。
【０１１５】
実施例１１：オレイン酸ナトリウムを使用して調製した製剤
製剤組成を表１に示す。オレイン酸ナトリウムを水相に取り入れる。
【０１１６】
手順
実施例１と同じであり、適切な原料及びその質量は処方通りである。
【０１１７】
観察結果及び安定性についての結果を表２、表３にそれぞれ示す。
【０１１８】
実施例２７：貯蔵寿命研究
組成物実施例１０の生成物を安定性について研究した。安定性についての結果を表４、表５に示す。表４のデータは、組成物が調査した６ヶ月間にわたって２〜８℃で安定であることを示す。
【表１０】
0005635504.tif 000011
ＷＯＬ−白色不透明な液体
【表１１】
0005635504.tif 000012
ＷＯＬ−白色不透明な液体
【０１１９】
実施例１２〜１４、２８：ＭＣＴ油、トリカプリリン、トリオレインを使用して調製した異なる組成の合成トリグリセリド油から形成したナノエマルション
【表１２】
0005635504.tif 000013
【０１２０】
製剤を表１に示す。
【０１２１】
手順
実施例１と同じであり、適切な原料及びその質量は処方通りである。
【０１２２】
観察結果及び安定性についての結果を表２、表３にそれぞれ示す。これらの実施例は、より高いドセタキセルレベルの安定したナノエマルションの調製を示す。
【０１２３】
実施例１５〜２０は、ナノエマルションが凍結乾燥させられ、またナノエマルションに再構成可能である本発明の第２の実施形態を説明するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。
【０１２４】
実施例１５〜２０：凍結乾燥製剤
手順については本文中で説明したが、基本的に実施例１と同じであり、適切な原料及びその質量は処方通りである。ただし、ショ糖、トレハロース等の凍害防止剤を水相に添加する。ｐＨの調節後、生成物を０．２μ無菌フィルタで濾過し、各バイアルに５ｍＬ充填した。全てのバイアルを、以下の条件で凍結乾燥させた。
凍結温度：−４５℃で２４０分
１次乾燥温度：５℃
１次乾燥時間：５２〜６０時間
１次乾燥真空：１００ｍＴｏｒｒ
２次乾燥温度：２５℃
２次乾燥時間：１２時間
２次乾燥真空：５０ｍＴｏｒｒ
【０１２５】
全ての凍結乾燥ケークを５ｍｌの注射用蒸留水で再構成した。ただし実施例１９の凍結乾燥ケークは１５ｍｌの注射用蒸留水で再構成された。２〜８℃で保管された凍結乾燥生成物を再構成したナノエマルションの検査による観察結果及び貯蔵寿命研究結果を表６、表７にそれぞれ示す。安定性は満足がいくものであると判明した。
【表１３】
0005635504.tif 000014
【表１４】
0005635504.tif 000015
【表１５】
0005635504.tif 000016
【０１２６】
本発明の利点
１．本発明の組成物はエタノール及び界面活性剤ポリソルベート８０を含有していない。このため、本発明の組成物には、これらの成分の過敏症反応及び体液貯留特性がない。
２．調製方法において、エタノール、クロロホルム等の溶媒、共溶媒を使用しない。
３．現在市販の製剤で起こる過敏症反応を克服するための前投薬を必要としない。
４．より高いＣmax及びＡＵＣは、同等用量でのより高い効力につながる可能性がある。或いは、同等の治療効力をより低い用量で得られることから、薬物の毒性作用が軽減される可能性がある。
５．この方法では、ＥＰＲ（ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ）効果をもたらす安定したナノエマルションが得られる。
６．本発明のナノエマルションは、より長期間にわたって安定であり且つ商業的に実現可能である。
７．本発明のナノエマルションは、より高いドセタキセル強度及びより高い血漿濃度を有する。
【０１２７】
【表１６】
0005635504.tif 000017
* 本発明以外
【表１７】
0005635504.tif 000018
【０１２８】
【表１８】
0005635504.tif 000019
【表１９】
0005635504.tif 000020
表２続き
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【０１２９】
【表２０】
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