(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
蛋白質分解酵素を用いて、黒ゴマの脱脂粕を加水分解して得られる分解物からなるものであって、
前記分解物は、ｐＨ９のアンモニア水溶液に不溶であること
を特徴とする薬効性を有する抗酸化剤。
【請求項２】
請求項１に記載の薬効性を有する抗酸化剤の、医薬又は健康食品の製造のための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、黒ゴマの脱脂粕に蛋白質分解酵素（プロテアーゼ）を作用させて得られる薬効性を有する抗酸化剤に関するものである。
この抗酸化剤は、優れた抗酸化活性により、抗酸化剤としての利用はもとより、健康食品の原料ないし添加剤として、さらには各種疾病の予防又は治療用の医薬ないしその添加剤として使用される可能性の高いもので、それら健康食品調製技術、医薬調製技術に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ゴマは、その種子が食用油の原料として非常に多く使用されている。
また、その風味を愛しんで、食品製造業、レストランなどに限らず一般家庭においても、幅広く使用されているものである。
さらに、ゴマには薬理的効果も伝承されているもので、しかも人体に対して安全な材料であるため、その成分について、これまでも、種々検討されてきている。
【０００３】
例えば、特開平０８−２３１９５３号公報（特許文献１）には、ゴマ種子には特徴的な化合物としてリグナン類が含まれ、その抗酸化活性をはじめ、種々の生理活性機能に関する研究がなされていること、ゴマ種子又はその脱脂粕中には、フェノール性リグナン類が糖化合物（リグナン配糖体）として存在することが示されている。
また、ゴマ種子の粉砕物からは、脂質の酸化に対する抗酸化効果を有するピノレジノール配糖体が得られることなどを例示した上で、ゴマ種子の加湿物もしくは発芽物の粉砕物又はその脱脂粕を含水低級アルコールで抽出し、この抽出物から脂溶性物質および水溶性物質を除去することにより得られる新規なリグナン配糖体が、ヒドロキシラジカル消去剤として有効であることを開示している。
【０００４】
一方、本願の出願人は、先に、特許第３１０８０５９号公報（特許文献２）において、植物を原料とする生理活性ペプチド含有物の製造法として、酢酸水溶液によるインキュベート処理と、この酢酸処理物をプロテアーゼ処理し、蛋白質を低分子化してペプチド含有物を得る方法を提案している。
【０００５】
この特許文献２においては、生理活性ペプチド含有物の製造方法によって、精白ハトムギ粉末から生理活性ペプチド含有物が得られること、得られた組成物は、アンジオテンシンＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α産生調節作用、活性酸素産生抑制作用、抗腫瘍作用等優れた生理作用を有する上に、天然物由来の組成物で、非常に安全性の高いものであることを開示した。
【０００６】
さらに、本願の出願人は、蛋白質を低分子化してペプチド含有物を得る方法は、各種の植物への適用が可能で、適用されるものに関して、以下のように開示した。
【０００７】
すなわち、植物種子、樹皮、実部、茎部、根部、葉部等植物全般、その各部又はその１部、もしくはこれらの処理物、これらから得られた食品又はその処理物に適用される。
植物種子としては、ハトムギ、米、大麦、小麦、カラス麦、裸麦、そば、大豆、エンドウ、ソラ豆、落花生、インゲン、トウモロコシ、コウリャン、ゴマ、アワ、ヒエ、ヒマワリ、麻の実、野菜の種子その他が挙げられる。
その処理物としては、植物種子を脱穀したもの、それを粉砕したもの、糠類、ヨクイニン、そのヘキサン等による脱脂物、その水抽出残渣、そのアルコール等有機溶媒抽出物、その他植物種子の各種処理物が挙げられる。
また、その処理物には、酒粕、オカラ、焼酎粕、醤油製造粕、澱粉製造粕、その他植物種子又はその処理物を加工、処理して飲食品を製造する際に副生するものも包含される。
【特許文献１】特開平０８−２３１９５３号公報（特許請求の範囲、段落番号０００    ７〜０００９）
【特許文献２】特許第３１０８０５９号公報（特許請求の範囲、段落番号０００１、    ０００６）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
発明者は、先の提案の蛋白質を低分子化してペプチド含有物を得る方法により、各種植物材料の中から、含有する蛋白質を低分子化して、生体に対する優れた機能を有するペプチド含有物を見つけ出すために、幅広く検討を行い、健康食品や医薬の原料として有効に用いられる薬効性を有する組成物を求めることを課題として検討を行なった。
【０００９】
その結果、発明者等は、植物材料として黒ゴマ種子から油を抽出した後の粕、すなわち、黒ゴマの脱脂粕を、蛋白質分解酵素を用いて加水分解することによって、ポリペプチド、ペプチドなどの低分子化した蛋白質、さらには生理活性ペプチド含有物などが調製されること、特に、黒色ポリフェノール重合体が含まれているものが得られること、さらに、先の方法における酢酸溶液中でのインキュベート処理が、黒ゴマの脱脂粕の場合では不要であることを見出し、この発明を完成したのである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
すなわち、この発明の請求項１に記載の発明は、
蛋白質分解酵素を用いて、黒ゴマの脱脂粕を加水分解して得られる分解物からなるものであって、
前記分解物は、ｐＨ９のアンモニア水溶液に不溶であること
を特徴とする薬効性を有する抗酸化剤である。
【００１１】
この発明の請求項２に記載の発明は、
請求項１に記載の薬効性を有する抗酸化剤の、医薬又は健康食品の製造のための使用方法である。
【発明の効果】
【００１２】
この発明の薬効性を有する抗酸化剤は、抗酸化機能に加えて、以下のような生体に対する優れた機能を奏するもので、健康食品の素材として、また医薬の原料として、有効に利用されるものである。
１．コレステロール低下機能
２．脂肪肝の予防と治癒機能
３．赤血球変形能の改善機能（いわゆる血液さらさら状態への改善）
【００１３】
この発明の抗酸化剤は、粉末状態でも、水溶液、弱酸又は弱アルカリの水溶液としても使用することができるため、抗酸化剤として、また、上記のような機能を発現させるために、健康食品や医薬の素材として利用され、その際に、効率的に、また効果的に活用することを可能とするものである。
【００１４】
このような効果は、抗酸化剤中に存在することが確実な、ゴマに存在するリグナン配糖体と、分解により調製された低分子化された蛋白質、すなわちオリゴペプチドやペプチド、特に生理活性ペプチド、さらにはポリフェノールの存在により奏されると推定されるもので、この発明の抗酸化剤の有する大きなかつ優れた特長である。
【００１５】
さらに、この発明は、黒ゴマの脱脂粕という利用価値の著しく低下したものを、健康食品や医薬の抗酸化剤として、さらに機能改善素材として有効に利用できるという、黒ゴマの脱脂粕を有効利用できるものにするという優れた効果を奏するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
この発明の薬効性を有する抗酸化剤は、黒ゴマから油、いわゆる食用として広く用いられているゴマ油を抽出した後の粕、すなわち、黒ゴマの脱脂粕を原料として得られるものである。
黒ゴマの脱脂粕は、後述するように、生理機能に優れている黒色ポリフェノール重合体を含有するもので、この発明にとり原料として必須のものである。
【００１７】
この発明において、抗酸化剤は、黒ゴマの脱脂粕を必要に応じて乾燥し、あるいは微細粉化した後、水や熱水等にそれらを添加し、攪拌などにより均一に分散化（ホモゲナイズ）し、それらに蛋白質分解酵素を加え、脱脂粕中に存在する蛋白質を加水分解することにより、低分子量の蛋白質を含んだ薬効性を有する抗酸化剤として利用されるのである。
【００１８】
使用される蛋白質分解酵素としては、ペプシン、パパイン、ビオプラーゼ、プロメライン、サーモライシン等、動植物や微生物起源のプロテアーゼが市販品を含め各種使用可能である。
それらは単独であるいは複数を組合せて用いることができ、組合せて用いる場合には、同時に併用しても、順次に使用してもよい。
この発明にとり、好ましいものは、ビオプラーゼ（商標；ナガセケムテックス株式会社製）である。
【００１９】
蛋白質の分解の際における、分解温度は、用いられる蛋白質分解酵素の活性化温度により定められる。
例えば、プロテアーゼであれば温度４５〜６０℃程度で、分解時間としては、用いられる蛋白質分解酵素の蛋白質分解能力、分解温度に応じて決められるが、通常１５〜３０時間程度である。
【００２０】
このようにして得られた抗酸化剤は、リグナン配糖体、ペプチドなどの蛋白質の低分子化物、ポリフェノール重合体を含有する組成物と推定され、後述する種々の生理機能を有するものであって、健康食品の素材として、また、医薬の原料として、有効に利用することができるものである。
【００２１】
この発明の抗酸化剤は、前記した抗酸化機能に加えて、コレステロール低下機能、脂肪肝の予防と治癒機能、さらには、赤血球変形能の改善機能（いわゆる血液サラサラ状態への改善）等の生理作用を有し、しかも天然の食品関連植物由来であって、安全性にも問題がない。
したがって、通常の飲食品はもとより、特定保健用飲食品、健康食品、健康飲料、栄養食品などの飲食品に薬効性を有する抗酸化剤として用いることができ、また、各種の医薬品への利用も可能なものである。
【００２２】
なお、この際、この抗酸化剤は、固体状（粉末、顆粒状その他）、濃縮物、ペースト状、液状ないし懸濁状のいずれでも使用可能である。
さらに、健康食品や医薬の製剤において用いられている賦形剤、結合剤などを利用することにより、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤などとして用いることができる。
【００２３】
この抗酸化剤は天然起源で、しかも、永年に亘って漢方薬や食品として使用されていたものを起源とするため、毒性は全くないか又はきわめて低く、卓越した安全性を示すもので、その使用に格別の限定はなく、たとえ高齢者、乳児、病弱者であっても長期間摂取することができる。
【実施例】
【００２４】
１）抗酸化剤の調製
黒ゴマ油粕１ｋｇに脱イオン水を加えて約８リットルとし、５％アンモニア溶液でｐＨ９に調節した後、ビオブラーゼ１０ｇを加え、攪拌しながら温度５５℃の恒温槽中で、５％アンモニア溶液でｐＨ９に調節しながら、２０時間、ビオブラーゼ（商標：ナガセケムテックス株式会社製）を用いて蛋白質を加水分解（インキュベート）させた。
得られた反応液について、８０メッシュのナイロン濾布を用い、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心濾過して濾液を分離した。
また、残渣に約４リットルの脱イオン水を加えて攪拌し、前記と同様に遠心濾過して濾液を分離した。
これらの濾液を併せたものを、温度６０℃の恒温槽中ロータリーエバポレーターを用いて減圧濃縮し、さらに凍結乾燥して、低分子量の蛋白質を含有する抗酸化剤（以下、「ブラックＰ」という。）を５２５ｇ（収量：５２．５％）得た。
また、上記手順に準じて、比較のために、白ゴマ油粕を用いて、収量４４．５％で薬効性組成物（以下、「ホワイトＰ」という。）を得た。
得られたブラックＰの、成分の分析結果は、表１に示すとおりであった。
【００２５】
【表１】
0005635222.tif 000002
【００２６】
２）ゲル濾過による分析及び分取
ブラックＰを０．１％アンモニア水溶液に溶解し、遠心分離して得られた上清液を、予め０．１％アンモニア水溶液で洗浄したＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−１０（４×４５ｃｍ）カラムに供し、０．１％アンモニア水溶液で展開した。
溶出液は、ドロップカウンターを用いて一定量ずつ分取した。
成分の検出は２８０ｎｍにおける吸光度を測定して行ない、その結果をゲル濾過法における溶出パターンとして、図１（ブラックＰ）、図３（ホワイトＰ）に示す。
【００２７】
３）抗酸化活性の測定
８区分に分取した各試料液０．１ｍｌを分注した分光光度計用試験管セルに、リノ−ル酸−β−カロチン溶液４．９ｍｌを加えて攪拌し、温度５０℃の恒温槽で一定時間インキュベートした場合のβ−カロチンの退色度を４７０ｎｍの吸光度によって求め、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）濃度に換算した酸化度を求めた。
その結果を、図２（ブラックＰ）、図４（ホワイトＰ）に示す。
【００２８】
４）ブラックＰの再分画
ブラックＰ１０ｇに、アンモニアでｐＨ９に調整された脱イオン水２００ｍｌを加え、攪拌して、溶解物と不溶解物に分離した。
不溶解物（以下、ｐＨ９−Ｐ）は、濾過し、凍結乾燥したところ１．８８ｇ得られた。
溶解物は、さらに酢酸でその溶液のｐＨを５とし、溶解物と不溶解物に分離した。
不溶解物（以下、ｐＨ５−Ｐ）は濾過し、凍結乾燥したところ２．３２ｇ得られた。
また、溶解物（以下、ｐＨ５−Ｓ）は、溶液を減圧濃縮し、凍結乾燥することにより５．８０ｇ得られた。
それらの抗酸化活性の測定結果を、図５に示す。
また、ゲル濾過による溶出パターンを、図６（ｐＨ５−Ｓ）および図７（ｐＨ９−Ｐ）に示す。
【００２９】
５）生体機能試験
年齢２０歳以上６５歳未満の成人１３人に、ブラックＰを７５ｍｇ含有する錠剤とし、一日１２錠（ブラックＰ９００ｍｇ）を二回に分け、４週間摂取させたのち、摂取前及び摂取後の赤血球変形能及び血液生化学的検査、並びに、試験担当医師の診察、理学的検査及び臨床検査による安全性評価を行なった。
赤血球変形能及び血液生化学的検査（空腹時血糖、グリコアルブミン、総コレステロール，ＬＤＬコレステロール，ＨＤＬコレステロールなど）の結果を、表２に示す。
なお、表２の各欄における数値は、上段が摂取前、下段が摂取後の値である。
【００３０】
前記赤血球変形能は、従来の定量性と再現性に難点のある微細孔（ｎｕｃｌｅｉｐｏｒｅ）フィルターを用いた方法に代わるものとして、発明者が開発したニッケルメッシュ（ｎｉｃｋｅｌｍｅｓｈ）フィルターを用いる、フィルター特性が顕著に改善された、以下の方法で測定した。
【００３１】
ニッケルメッシュは、フォトレジスト法と特殊メッキ法を組み合せて作成されたニッケル薄膜フィルターで、微小孔の数、形状、分布が正確に一定であるばかりでなく、数秒間の超音波洗浄によって１００回以上の再使用が可能である。
加えて、ニッケルメッシュの微小孔の辺縁は滑らかでテーパを持ち、これにより混入白血球が機械的影響を受けることはなく、微小孔には融合や分枝がまったくない。
これらの特徴により、以下の方法は、高い定量性と再現性を保持するものである。
【００３２】
赤血球変形能測定法（Ｎｉｃｋｅｌ ｍｅｓｈ ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ法）
試験は、垂直に立てたガラス管（ｖｅｒｔｉｃａｌ ｔｕｂｅ）に、タイゴンチューブを介してニッケルメッシュホルダーを接続し、通常１５ｃｍの高さ（ｈｅｉｇｈｔ：ｈ）より、ＨＥＰＥＳバッファーで調整した生理食塩水で作成した赤血球浮遊液を濾過させて行なう。
ガラス管の周囲は恒温水を還流させて、試料を定温に保っている。
ガラス管のゼロレベルに設置した圧力（ｐｒｅｓｓｕｒｅ：Ｐ）トランスデューサーで試料を濾過中の圧力降下を連続的に検出し、これを増幅器とＡＤ変換器を介してパソコンに取り込み、流量（ｆｌｏｗｒａｔｅ：Ｑ）を計算する。
流量は、圧力を高さに変換し（Ｐ＝ρｇｈ）、高さ−時間（ｈ−ｔ）曲線の微分値（ｄｈ／ｄｔ）を取って、これにガラス管の断面積（ａ）を乗じて得られる（Ｑ＝ｄｈ／ｄｔ・ａ）。
血球を含まないコントロール溶液（ＨＥＰＥＳバッファー調整生食水：ニュートン流体）の圧−流量曲線を対照として赤血球浮遊液の圧−流量曲線を検討し、ある一定圧（通常１００ｍｍ・Ｈ２  Ｏ）での対照液の流量に対する赤血球浮遊液の流量（％）をもって、赤血球変形能を評価する。
【００３３】
【表２】
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【００３４】
表２に示されるデータの内、特異性ないし有意性を有するものについて図示すれば、図８〜図１２に示す通りである。
図８は、総コレステロールの摂取前〜摂取後の変化、同様に図９はＡＳＴの変化、図１０はＡＬＴの変化、図１１はγ−ＧＴＰの変化、図１２は赤血球変形能の変化をそれぞれ示している。
【００３５】
これらの図から、ブラックＰを摂取することにより、総コレステロール、ＡＳＴ、ＡＬＴおよびγ−ＧＴＰの値は、高値の人は低下し正常化すること、および正常の人は変化しないことが認められた。
赤血球変形能に関しては、低値の人は上昇し常化すること、および正常の人は変化しないことが認められる。
【００３６】
これらの結果から明らかなように、この発明の抗酸化剤は、高い抗酸化活性を有するとともに、コレステロールの低下機能、脂肪肝の予防と治癒機能、赤血球変形改善機能、いわゆる血液サラサラにする機能などの薬効性を有するものである。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
この発明の薬効性を有する抗酸化剤は、上記のような優れた特性を有し、かつ粉末ないし水溶液としても供給可能なため、健康食品産業や医薬業界で広く利用される可能性の高いものである。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】この発明の黒ゴマの脱脂粕を原料とした抗酸化剤のゲル濾過法における溶出パターン図である。
【図２】図１の溶出パターン図に示されたこの発明の抗酸化剤を分画して得た各画分の抗酸化活性を示す図である。
【図３】白ゴマの脱脂粕を原料とした抗酸化剤のゲル濾過法における溶出パターン図である。
【図４】図３の溶出パターン図に示されたこの発明の抗酸化剤を分画して得た各画分の抗酸化活性を示す図である。
【図５】図１の溶出パターン図に示されたこの発明の抗酸化剤を酸アルカリで分画して得た各画分の抗酸化活性を示す図である。
【図６】画分ｐＨ５−Ｓのゲル濾過法における溶出パターン図である。
【図７】画分ｐＨ９−Ｐのゲル濾過法における溶出パターン図である。
【図８】表２における総コレステロールの摂取前〜摂取後の変化を示す図である。
【図９】表２におけるＡＳＴの変化を示す図である。
【図１０】表２におけるＡＬＴの変化を示す図である。
【図１１】表２におけるγ−ＧＴＰの変化を示す図である。
【図１２】表２における赤血球変形能の変化を示す図である。
【符号の説明】
【００３９】
なし
【図８】
0005635222.tif 000004
【図９】
0005635222.tif 000005
【図１０】
0005635222.tif 000006
【図１１】
0005635222.tif 000007
【図１２】
0005635222.tif 000008
【図１】
0005635222.tif 000009
【図２】
0005635222.tif 000010
【図３】
0005635222.tif 000011
【図４】
0005635222.tif 000012
【図５】
0005635222.tif 000013
【図６】
0005635222.tif 000014
【図７】
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