(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
キラル第一級アミン又はキラルスルフィンアミドを分割剤として使用することによって分割を実施することを含む、ピノセンブリンラセミ体を分割する方法であって、
前記キラル第一級アミン及び前記キラルスルフィンアミドがそれぞれ下記一般式により表され：
【化１】
0005436438.tif 000005
（式中、
Ｒ1は、−Ｈ、−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3、−ＣＨ（ＣＨ3）2又は−ＣＨ2ＯＨから選択され、
Ｒ2は、フェニル、ベンジル、又は芳香環上に置換基を有するフェニル若しくはベンジル、−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3、−ＣＨ（ＯＨ）Ｃ2Ｈ5、ｐｈＣＨ（ＯＨ）−から選択され、ここで該置換基は、−ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ3、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3、−（ＣＨ2）3ＣＨ3、−ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＮＯ2、−ＣＦ3、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＯＣＨ3、−ＯＣ2Ｈ5、−ＣＯＯＣＨ3、−ＣＯＯＣ2Ｈ5、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨＣＨ3、−ＣＯＮＨＣ2Ｈ5、−ＣＯＮ（ＣＨ3）2又は−ＣＯＮＨＣＨ（ＣＨ3）2から選択され、
Ｒ3は、Ｒ1及びＲ2のものと同様に定義されるが、但し、Ｒ3は、Ｒ1又はＲ2が有するのと同様の構造を同時には有しないものとし、
Ｒ4は、１個〜６個の炭素原子を有するアルキル、６個〜９個の炭素原子を有するアリール又はアラルキル、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキル、６個〜９個の炭素原子を有する置換アリール又はアラルキルから選択され、ここで該置換基は、−ＮＯ2、−ＣＦ3、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＯＣＨ3、−ＯＣ2Ｈ5、−ＣＯＯＣＨ3、−ＣＯＯＣ2Ｈ5、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨＣＨ3、−ＣＯＮＨＣ2Ｈ5、−ＣＯＮ（ＣＨ3）2、−ＣＯＮＨＣＨ（ＣＨ3）2から選択される）、
（１）ジアステレオ異性体の混合物をもたらすようにキラル第一級アミン又はキラルスルフィンアミドを用いて、必要に応じてベンジル、メチル、アセチル又はメトキシメチルを使用することによってフェノール性ヒドロキシル基保護が施されるピノセンブリン光学異性体の混合物の誘導体化反応を実施し、ジアステレオ異性体の該混合物の分離を実施し、且つ必要に応じて精製を実施する工程と、
（２）前記分離されたジアステレオ異性体を脱誘導体化し、ピノセンブリン光学異性体の前記混合物に前記フェノール性ヒドロキシル基保護が施されている場合には脱保護を実施し、且つ必要に応じて精製を実施して、（Ｒ）−（＋）−ピノセンブリン及び／又は（Ｓ）−（−）−ピノセンブリンを得る工程と、
を含む、方法。
【請求項２】
前記工程（１）における誘導体化反応前に保護基を使用することによって前記フェノール性ヒドロキシル基保護を実施し、該保護基を該誘導体化反応後に除去する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記保護基が、塩化ベンジル又は臭化ベンジルを使用することによって前記フェノール性ヒドロキシル基保護を実施する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ルイス酸の触媒下で前記誘導体化反応を実施する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記キラル第一級アミン又はキラルスルフィンアミドと、ピノセンブリン光学異性体の前記混合物とのモル比が、１０：１〜１：１の範囲内である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記キラル第一級アミンがＤ−又はＬ−α−フェネチルアミンであり、前記キラルスルホンアミドが、Ｒ体又はＳ体のフェニルスルフィンアミド、ｐ−トリルスルフィンアミド又はｔｅｒｔ−ブチルスルフィンアミドから選択されるスルホンアミドである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記工程（１）の分離又は精製が、結晶化、抽出又はクロマトグラフィである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
酸の存在下における前記ジアステレオ異性体の加水分解により前記工程（２）を実施し、該酸が、ＨＣｌ、ＨＮＯ3、Ｈ2ＳＯ4、Ｈ3ＰＯ4等の無機酸、ＨＯＡｃ又はそれらの組合せである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記酸が、前記加水分解系において１０％の濃度を有するＨＣｌ水溶液である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
Ｐｄ／Ｃを触媒として使用する水素化反応により、前記脱誘導体化されたジアステレオ異性体の脱保護を実施する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ルイス酸が、ＴｉＣｌ4若しくはＴｉ（ＯＥｔ）4又はそれらの混合物から選択され、該ルイス酸とピノセンブリン光学異性体の前記混合物とのモル比が、５：１〜０．１：１の範囲内である、請求項４に記載の方法。
【請求項１２】
ルイス酸とピノセンブリン光学異性体の混合物とのモル比が、０．５：１である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記Ｐｄ／Ｃと、ピノセンブリンジアステレオ異性体の前記混合物とのモル比が、０．１：１〜５：１の範囲内である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記Ｐｄ／Ｃと、ピノセンブリンジアステレオ異性体の前記混合物とのモル比が、０．８：１である、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は薬学分野に関する。本発明は、詳細には、ピノセンブリン光学異性体の混合物、とりわけピノセンブリンラセミ体を、単一配置を有するエナンチオマーに分割する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ピノセンブリンは、２，３−ジヒドロ−５，７−ジヒドロキシ−２−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オンという化学名を有する。ピノセンブリンは、その化学構造中に１つのキラル中心を有するフラバノン化合物である。天然のピノセンブリンは、Ｓ配置の立体構造及び−４５．３の比旋光度［α］Ｄ１５（ｃ、０．９、溶媒としてアセトン）を有する。ピノセンブリンは、比較的少量のプロポリス、及びヨーロッパハイマツ（Pinus cembra）、ユーカリプタス・シエベリ（Eucalyptus sieberi）、オオバヤシャブシ（Alnus sieboldiana）等の植物から分離することができる。したがって、それらの完全合成が当該技術分野において研究されており、ラセミ体形態のピノセンブリンは大量に調製され得る（非特許文献１）。
【０００３】
ピノセンブリンは、その分子中に１つのキラル炭素を有するため、一対のエナンチオマー、すなわち（Ｒ）−ピノセンブリン及び（Ｓ）−ピノセンブリンを有する。天然のピノセンブリンは（Ｓ）−ピノセンブリンであるが、植物中におけるその含有量が極めて低いため、大量に得ることができず、（Ｒ）−ピノセンブリンの生物活性に関する研究は未だに明らかになっていない。加えて、ピノセンブリンは、その構造中に塩形成酸性基又は塩形成塩基性基を有しないため、ジアステレオマー塩を形成する従来方法によっては、ピノセンブリンの光学分割を実施することができない。現在のところ、結晶化、機械的方法又は選択吸着等の他の方法のいずれも分割に好適であるとは分かっていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】DUAN Yabo, et al., Chinese Journal of Medicinal Chemistry,16(6): 342-346, 2006
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
それゆえ、依然として単一配置を有するピノセンブリンエナンチオマーを得るように、ラセミ体のピノセンブリンを分割する方法についての必要性がある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
キラル第一級アミン又はキラルスルフィンアミドを分割剤として使用することによって、ピノセンブリン光学異性体の混合物、特にピノセンブリンラセミ体が効果的に分割され得ることが、驚くべきことに本発明者等により見出された。
【０００７】
それゆえ一態様において、本発明は、キラル第一級アミン又はキラルスルフィンアミドを分割剤として使用することによって分割を実施することを含む、ピノセンブリン光学異性体の混合物、特にピノセンブリンラセミ体を分割する方法を提供する。一実施の形態において、該方法は、（１）キラル第一級アミン又はキラルスルフィンアミドを使用することによって、ピノセンブリン光学異性体の混合物、特にピノセンブリンラセミ体を、ジアステレオ異性体誘導体の混合物に変換する工程と、（２）それらの種々の物理特性を利用することによって一対のジアステレオ異性体を分離すると共に脱誘導体化（dederivatizing）して、光学活性を有する（Ｒ）−（＋）−ピノセンブリン及び（Ｓ）−（−）−ピノセンブリンを得る工程とを含む。必要に応じて、分離及び精製されたジアステレオ異性体を脱誘導体化することは、それらを加水分解、還元及び必要に応じて精製して、ピノセンブリンの単一エナンチオマーを得ることを含む。
【０００８】
さらなる態様において、本発明は、本発明による分割方法によってラセミ体のピノセンブリンから得ることができる（Ｒ）−ピノセンブリンを提供する。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
一実施形態において、本発明は、（１）分離すべきピノセンブリン光学異性体の混合物を誘導体化して、有機溶媒中でキラル第一級アミン又はキラルスルフィンアミドを使用することによってジアステレオ異性体誘導体の混合物を形成する工程と、（２）ジアステレオ異性体誘導体を分離すると共に、分離された異性体を脱誘導体化して、光学活性を有する（Ｒ）−（＋）−ピノセンブリン及び（Ｓ）−（−）−ピノセンブリンを得る工程とを含む、ピノセンブリン光学異性体の混合物、特にピノセンブリンラセミ体を分割する方法を提供する。
【００１０】
本発明は、（Ｒ）−ピノセンブリン及び（Ｓ）−ピノセンブリンに分割することを必要とするピノセンブリン光学異性体の様々な混合物に好適であり、これらの混合物中で、（Ｒ）−ピノセンブリン及び（Ｓ）−ピノセンブリンはあらゆる比率で存在するものとする。一実施形態において、ピノセンブリン光学異性体の混合物はラセミ体のピノセンブリンである。
【００１１】
本発明において、ピノセンブリンは、キラル第一級アミン又はキラルスルフィンアミドを使用することによって直接誘導体化され、如何なる前処理も必要とすることなく分割を達成し得る。代替的に、キラル第一級アミン又はキラルスルホンアミド（sulfonamide）を用いた誘導体化（derivation）の前に、ピノセンブリンのフェノール性ヒドロキシル基を保護基で必要に応じて保護してもよく、また該保護基は、Ｒ体及びＳ体の異性体の誘導体化反応又は分割後に除去することができる。
【００１２】
それゆえ一実施形態において、分割すべきピノセンブリンのフェノール性ヒドロキシル基が保護される。保護基は、ベンジル、メチル、アセチル、メトキシメチル等、及び当業者に既知のフェノール性ヒドロキシル基を保護するのに好適な他の基であり得る。これらの保護基並びに保護及び脱保護の方法に関しては、例えば、Greene Woods, Protective Groups in Organic Synthesis, Publishing House of East China University of Science and Technology, Shanghai, 2004を参照することができる。この態様の一実施形態では、保護基がベンジル化剤である。好ましくは、ベンジル化剤は塩化ベンジル又は臭化ベンジルである。より好ましくは、ベンジル化剤は塩化ベンジルである。ピノセンブリンのフェノール性ヒドロキシル基を保護する反応は、任意の好適な温度で実施され得る。好ましくは、反応温度は、０℃〜１５０℃であり、より好ましくは６０℃〜８０℃である。場合によっては、保護反応は塩基の存在下で実施される。塩基は、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、ヨウ化カリウム（実施例１におけるフェノール性ヒドロキシル基の保護も参照）、炭酸アンモニウム等から選択され得る。塩基の量は、従来の技術的手段によって当業者により容易に決定することができる。
【００１３】
本発明で使用される「キラル第一級アミン」という用語は、その分子中の１つ又は複数のキラル中心を特徴とする、光学活性を有する第一級レボアミン又は第一級デキストロアミンを指す。それらの代表的な構造式は以下の通りである：
【００１４】
【化１】
0005436438.tif 000002
【００１５】
（式中、
Ｒ１は、−Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２及び−ＣＨ２ＯＨから選択することができ、
Ｒ２は、フェニル、ベンジル、並びに芳香環上に他の置換基を有するフェニル及びベンジル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ（ＯＨ）Ｃ２Ｈ５、並びにｐｈＣＨ（ＯＨ）−から選択することができ、ここで該置換基は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＯ２、−ＣＦ３、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＯＣＨ３、−ＣＯＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＣＨ３、−ＣＯＮＨＣ２Ｈ５、−ＣＯＮ（ＣＨ３）２及び−ＣＯＮＨＣＨ（ＣＨ３）２から選択することができ、
Ｒ３は、Ｒ１及びＲ２のものと同様に定義されるが、但し、Ｒ３は、Ｒ１又はＲ２が有するのと同様の構造を同時には有しないものとする）。
【００１６】
好ましいキラル第一級アミンは、１−（フェニル）エチルアミン、１−（フェニル）プロピルアミン、２−（フェニル）プロピルアミン、２−アミノ−１−（フェニル）−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−１−（４−クロロフェニル）−１，３−プロパンジオール及び２−アミノ−１−（４−ニトロフェニル）−１，３−プロパンジオールから成る群から選択される。
【００１７】
上記キラル第一級アミンのうち、Ｄ−α−フェニルエチルアミン又はＬ−α−フェニルエチルアミンが好ましい。
【００１８】
ピノセンブリンのカルボニル基は上記キラル第一級アミンを用いて誘導体化され、少なくとも２つのキラル中心を有するピノセンブリンの光学異性体誘導体を形成し得る。キラル第一級アミンは市販されているか、又は当該技術分野において既知の様々な方法を用いた合成によって得ることができる。
【００１９】
本発明で使用される「キラルスルフィンアミド」は、その分子中の１つ又は複数のキラル中心を特徴とする任意のキラル体を有し得る。その構造は以下の通りである：
【００２０】
【化２】
0005436438.tif 000003
【００２１】
（式中、Ｒ４は、１個〜６個の炭素原子を有するアルキル、６個〜９個の炭素原子を有するアリール又はアラルキル、１個〜６個の炭素原子を有する置換アルキル、６個〜９個の炭素原子を有する置換アリール又はアラルキルであり得るが、ここで該置換基は、−ＮＯ２、−ＣＦ３、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＯＣＨ３、−ＣＯＯＣ２Ｈ５、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＣＨ３、−ＣＯＮＨＣ２Ｈ５、−ＣＯＮ（ＣＨ３）２又は−ＣＯＮＨＣＨ（ＣＨ３）２から選択され得る）。
【００２２】
好ましいキラルスルホンアミドは、下記スルフィンアミド：Ｒ体又はＳ体のフェニルスルフィンアミド、ｐ−トリルスルフィンアミド又はｔｅｒｔ−ブチルスルフィンアミドから選択される。
【００２３】
ピノセンブリンのカルボニル基は上記キラルスルホンアミドを用いて誘導体化され、少なくとも２つのキラル中心を含むピノセンブリンの光学異性体誘導体を形成し得る。
【００２４】
本発明で使用されるキラル第一級アミン又はキラルスルホンアミドは好ましくは光学的に純粋である。
【００２５】
本発明の分割方法において、キラル第一級アミン又はキラルスルホンアミドは、分割すべきピノセンブリン混合物、とりわけピノセンブリンラセミ体に対して任意の好適な比率で使用することができる。好ましくは、キラル第一級アミン又はキラルスルホンアミドと、分離すべきピノセンブリン混合物とのモル比は、１０：１〜１：１、より好ましくは１：１である。
【００２６】
本発明によるキラル第一級アミン又はキラルスルホンアミドによるピノセンブリン光学異性体の混合物の誘導体化反応は、任意の好適な有機溶媒中で実施することができる。有機溶媒は、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、酢酸エチル、アセトン、ジクロロメタン、クロロホルム、石油エーテル、エチルエーテル、ベンゼン、トルエン、ＤＭＦ、ＴＨＦ及びそれらの任意の組合せから成る群から選択され得るが、これらに限定されない。
【００２７】
本発明において、キラル第一級アミン又はキラルスルホンアミドによるピノセンブリン光学異性体の混合物の誘導体化反応はその他、酸、好ましくはルイス酸の触媒下で実施することができる。好ましいルイス酸は、ＴｉＣｌ４若しくはＴｉ（ＯＥｔ）４又はそれらの組合せである。誘導体化反応において、ルイス酸は、ピノセンブリン光学異性体の混合物に対して任意の好適な比率で使用することができる。好ましくは、それらのモル比は、５：１〜０．１：１、好ましくは０．５：１である。当業者は、誘導体化反応において使用することができる溶媒のタイプを熟知している。
【００２８】
本発明の好ましい一実施形態において、工程（１）の反応を実施する場合には、ベンジル基で保護されたラセミ体のピノセンブリン、キラル第一級アミン又はキラルスルホンアミド、及びトリエチルアミン、並びにＴｉＣｌ４を順番に添加する。反応は０℃の後、室温で攪拌しながら実施され得る。
【００２９】
誘導体化反応の終了後、反応物をセライトで必要に応じて濾過し、濾過ケーキを十分に洗浄する。
【００３０】
誘導体化反応が終わったら、誘導体化反応の生成物を、様々な好適な方法により分離及び精製することができる。上記方法は、クロマトグラフィ、結晶化又は抽出等であり得る。好ましい一実施形態において、誘導体化反応の生成物は、クロマトグラフィ、とりわけカラムクロマトグラフィにより分離される。クロマトグラフィによって、異なる極性を利用することによりピノセンブリンのジアステレオマー誘導体を分離して、極性のより低い単一の異性体と、極性のより高い単一の異性体とを得ることができる。
【００３１】
さらに、好適な方法を用いることによって、工程（２）で得られるピノセンブリン光学異性体誘導体を脱誘導体化する。
【００３２】
一実施形態では、加水分解反応によって脱誘導体化を達成することができる。加水分解反応は有機溶媒中で実施することができる。有機溶媒は、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、酢酸エチル、アセトン、ジクロロメタン、クロロホルム、石油エーテル、エチルエーテル、ベンゼン、トルエン、ＤＭＦ、ＴＨＦ及びそれらの任意の組合せから成る群から選択され得るが、これらに限定されない。加水分解反応は酸の存在下で実施することもできる。酸は、ＨＣｌ、ＨＮＯ３、Ｈ２ＳＯ４、Ｈ３ＰＯ４等の無機酸、ＨＯＡｃ若しくはそれらの任意の組合せ又はギ酸、酢酸、プロパン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、シュウ酸、クロロ酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸（trifluroacetic acid）若しくはそれらの任意の組合せ等の有機酸から選択され得る。これらの酸は、任意の好適な濃度、例えば、１％〜２０％、５％〜１５％又は７％〜１３％の濃度を有し得る。酸は、加水分解系において１０％の濃度のＨＣｌ水溶液であることが好ましい。
【００３３】
分割すべきピノセンブリン光学異性体の混合物を分割前に保護する場合には、脱誘導体化を終えた後に、上記保護されたピノセンブリン光学異性体を必要に応じて脱保護することができる。上記の通り、当業者は、保護されたフェノール性ヒドロキシル基の保護方法をよく知っており、例えば、還元反応を含めて実施してもよい。一実施形態では、水素化反応により還元反応を実施することによって、フェノール性ヒドロキシル基の脱保護が達成される。水素化反応は、触媒としてＰｄ／Ｃを用いて実施することができる。好ましくは、Ｐｄ／Ｃと保護されたピノセンブリンとのモル比は、０．１：１〜５：１の範囲内、より好ましくは０．８：１である。
【００３４】
ピノセンブリン光学異性体の混合物を、分割、上記脱誘導体化及び任意で脱保護に付した後、必要に応じて生成物を必要に応じて精製してもよい。精製方法は、例えば、カラムクロマトグラフィ又は再結晶化等を含む、工程（１）の誘導体化反応生成物を分離及び精製する方法と同様である。
【００３５】
本発明の好ましい一実施形態によれば、その反応スキームは以下のように明示される。
【００３６】
【化３】
0005436438.tif 000004
【００３７】
本発明で使用される反応のための溶媒、カラムクロマトグラフィのための溶離液、並びに凝固及び再結晶化のための溶媒は、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、酢酸エチル、アセトン、ジクロロメタン、クロロホルム、石油エーテル、エチルエーテル、ベンゼン、トルエン、ＤＭＦ、ＴＨＦ、様々な濃度を有するそれらの水溶液、及びそれらの任意の組合せから成る群から選択され得るが、これらに限定されない。このうち、フェノール性ヒドロキシル基の保護反応のための溶媒は好ましくはアセトンであり、再結晶化のための溶媒は好ましくは石油エーテル、酢酸エチル又はそれらの組合せであり、工程（１）の誘導体化反応のための溶媒は好ましくはトルエンであり、工程（１）の誘導体化反応の生成物を分離するための溶離液は好ましくは石油エーテル、酢酸エチル又はそれらの組合せであり、工程（２）の加水分解反応のための溶媒は好ましくはエタノール、酢酸エチル及びそれらの組合せであり、再結晶化反応のための溶媒は好ましくは酢酸エチル、エタノール又はそれらの組合せであり、工程（２）の還元反応のための溶媒は好ましくはＤＭＦであり、工程（２）の還元生成物の再結晶化のための溶媒は好ましくはエタノール又はその水溶液である。
【００３８】
ピノセンブリン光学異性体の混合物、特にピノセンブリンラセミ体を分割するために本発明によって提供される方法は、経済的且つ簡潔であり、その生成物は高い純度及びより良い収率を有するため、該方法は、単一配置を有するピノセンブリンエナンチオマーを大量に得るために使用することができ、またピノセンブリン光学異性体のさらなる研究及び開発を促進させ得る。
【００３９】
さらに、本発明はまた、本発明による分割方法によって得られる（Ｒ）−（＋）−ピノセンブリンに関する。
【００４０】
以下の実施例は本発明の理解に役立つが、本発明の範囲を限定するように意図されるものではない。本明細書を通じて、公的に利用可能な引用文献のいずれか及び全ては、参照により本特許出願中に援用される。当業者は、本発明の精神及び範囲を逸脱するものでない本発明の技術的な解決策のいずれの変形形態、変更形態及び等価な代替形態も本発明の範囲内にあることを十分に理解している。
【００４１】
実施例において高速液体クロマトグラフィにより単一配置のピノセンブリンのｅ．ｅ．値（エナンチオマー過剰率）を測定する。この際、具体的なパラメータは以下の通りである。
【００４２】
株式会社島津製作所のＬＣ−１０Ａｖｐタイプの高速液体クロマトグラフィ；ＣＬＡＳＳ−ＶＰクロマトグラフィデータシステム；Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＡＤ−ＲＨカラム、５μｍ、１５０ｍｍ×４．６ｍｍ（内径）；移動相：メタノール；流速：０．５ｍＬ／分；カラム温度：２０℃；検出波長：２９０ｎｍ。
【実施例】
【００４３】
実施例１：ピノセンブリンのフェノール性ヒドロキシル基の保護
１００ｍｌのアセトンに、８．５３ｇ（３３ｍｍｏｌ）のラセミ体のピノセンブリン粉末（非特許文献１の方法に従って入手）を添加し、攪拌して溶解した後、５ｇ（３６ｍｍｏｌ）のＫ２ＣＯ３粉末及び０．３１ｇ（１．８８ｍｍｏｌ）のＫＩをこれに添加し、５分間攪拌した。５ｍｌ（４３ｍｍｏｌ）の塩化ベンジルを添加し、油浴で加熱して還流させ、反応が完了するまで（約４時間）ＴＬＣによりモニタリングした。次に、加熱を止め、室温まで冷却し、減圧濾過により無機塩を除去し、濾過ケーキをアセトンで完全に洗浄した後、濾液を回収し、濃縮し、一般的なシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して、淡黄色油生成物を得た。これを軽質油で凝固させると、ベンジルで保護されたラセミ体のピノセンブリンの固体が得られた（１０．２６ｇ、収率８９．０％）。
実施例２：誘導体化反応及び分割
１００ｍｌのトルエンに、１９．７ｇ（５７ｍｍｏｌ）のベンジルで保護されたラセミ体のピノセンブリンを添加し、攪拌した後、氷浴で０℃まで冷却した。１５ｍｌ（１０９ｍｍｏｌ）のトリエチルアミン及び７．３ｍｌ（５７ｍｍｏｌ）のＬ−α−メチルベンジルアミンを２０ｍｌのトルエンに溶解し、得られた混合物溶液を上記反応液に添加し、５分間攪拌した。３．２５ｍｌ（２９ｍｍｏｌ）のＴｉＣｌ４を１０ｍｌのトルエンに溶解し、得られた混合物溶液を反応液に滴下した。１０分間混ぜ合わせた後、氷浴を取り出し、室温で混ぜ合わせ続けた。この反応を脱水（desiccation）処理に付した。すなわち、全ての器具及び試薬を乾燥させ、反応の間Ｎ２保護を用いた。完了するまで（約４８時間）反応をＴＬＣによりモニタリングした。混ぜ合わすのを止め、反応混合物を十分なセライトを充填させた漏斗に通して濾過し、濾過ケーキを酢酸エチルで十分に洗浄し、濾液を回収し、濃縮し、一般的なシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製すると、６．７ｇの極性のより低い黄色油生成物と、７．５ｇの極性のより高い黄色油生成物とが得られた（総収率は約５５．５％であった）。
実施例３：分割生成物の脱誘導体化
実施例２で得られた７．５ｇの極性のより高い黄色油生成物を、５：２（Ｖ：Ｖ）の比率の酢酸エチルとエタノールとの混合物溶媒７０ｍｌに溶解し、攪拌し、油浴で加熱して還流させ、２０ｍｌの１０％水性ＨＣｌを４回に分けて（各５ｍｌ）１回毎に０．５時間の時間間隔で添加した。完了するまで（約２．５時間）反応をＴＬＣによりモニタリングした。次に、加熱を止め、室温まで冷却し、反応混合物を酢酸エチル及び水で抽出した。有機相を回収し、濃縮して、９５％エタノールを用いて再結晶化させると、比旋光度［α］Ｄ２０＝−３０．７８°（ｃ＝０．５１０、アセトン）を有するＳ配置のベンジルで保護されたピノセンブリンの白色固体（４．４ｇ）が得られた。
実施例４：分割生成物の脱誘導体化
実施例２で得られた６．７ｇの極性のより低い黄色油生成物を、５：２（Ｖ：Ｖ）の比率の酢酸エチルとエタノールとの混合物溶液７０ｍｌに溶解し、攪拌し、油浴で加熱して還流させ、２０ｍｌの１０％水性ＨＣｌを４回に分けて（各５ｍｌ）１回毎に０．５時間の時間間隔で添加した。完了するまで（約２．５時間）反応をＴＬＣによりモニタリングした。次に、加熱を止め、反応混合物を室温まで冷却し、酢酸エチル及び水で抽出した。有機相を回収し、濃縮して、９５％エタノールを用いて再結晶化させると、比旋光度［α］Ｄ２０＝＋３０．８８°（ｃ＝０．５１０、アセトン）を有するＲ配置のベンジルで保護されたピノセンブリンの白色固体（４．８ｇ）が得られた。
実施例５：脱誘導体化生成物の脱保護
実施例３で得られたＲ配置のベンジルで保護されたピノセンブリン４．４ｇを、１００ｍｌのＤＭＦに溶解し、６２．９％の含水量を有する２０ｍｌの１０％水性ＨＣｌ及び３．５ｇの１０％Ｐｄ−Ｃを添加した後、常圧で水素化を実施した。完了するまで（約５時間）反応をＴＬＣによりモニタリングした。次に、攪拌を止め、反応混合物を濾過し、酢酸エチル及び水で抽出した。有機相を回収し、蒸発させて溶媒を除去し、９５％エタノールを用いて再結晶化させると、比旋光度［α］Ｄ２０＝−４５．６３°（ｃ＝０．５１５、メタノール）及びｅ．ｅ％＞９９．３％を有する（Ｓ）−ピノセンブリンの白色固体（３．０ｇ、収率９２％）が得られた。
実施例６：脱誘導体化生成物の脱保護
実施例４で得られたＲ配置のベンジルで保護されたピノセンブリン４．８ｇを、１００ｍｌのＤＭＦに溶解し、６２．９％の含水量を有する２０ｍｌの１０％水性ＨＣｌ及び３．５ｇの１０％Ｐｄ−Ｃを添加した後、常圧で水素化を実施した。完了するまで（約５時間）反応をＴＬＣによりモニタリングした。次に、攪拌を止め、反応混合物を濾過し、酢酸エチル及び水で抽出した。有機相を回収し、蒸発させて溶媒を除去し、９５％エタノールを用いて再結晶化させると、比旋光度［α］Ｄ２０＝＋４５．８３°（ｃ＝０．５１５、メタノール）及びｅ．ｅ％＞９９．３％を有する（Ｒ）−ピノセンブリンの白色固体（３．１ｇ、収率９０％）が得られた。
【００４４】
本発明の方法を通じて、比旋光度［α］Ｄ２０≦−４５．６３°（ｃ＝０．５１５、メタノール）を有する（Ｓ）−（−）−ピノセンブリン、及び比旋光度［α］Ｄ２０≧＋４５．８３°（ｃ＝０．５１５、メタノール）を有する（Ｒ）−（＋）−ピノセンブリンが得られた。キラルＨＰＬＣによる測定によって、２つの光学異性体は両方とも９９．３％以上の光学純度を有することが示された。