(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
低重量平均分子量（Ｍｗ）を具えるヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）を具えるヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）から形成されるヒアルロン酸混合物を含み、そのうち、該低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）の重量平均分子量（Ｍｗ）が１００万ダルトン（Ｄａ）であり、該高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）の重量平均分子量（Ｍｗ）が２００万ダルトン（Ｄａ）であり、且つ低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）の混合比率が２０：８０であることを特徴とする炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療及び予防に使用するための医薬組成物。
【請求項２】
前記ヒアルロン酸混合物の濃度が０．５ミリグラム／ミリリットル〜５０ミリグラム／ミリリットルであることを特徴とする請求項１に記載の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療及び予防に使用するための医薬組成物。
【請求項３】
前記ヒアルロン酸混合物の濃度が０．５ミリグラム／ミリリットル〜５ミリグラム／ミリリットルであることを特徴とする請求項１に記載の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療及び予防に使用するための医薬組成物。
【請求項４】
前記ヒアルロン酸混合物が適切な賦形剤を組み合わせ、口服錠剤に調剤することを特徴とする請求項１に記載の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療及び予防に使用するための医薬組成物。
【請求項５】
前記ヒアルロン酸混合物は、適切な賦形剤を組み合わせ、肛門栓剤（直腸栓剤）又は灌流剤に調剤することを特徴とする請求項１に記載の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療及び予防に使用するための医薬組成物。
【請求項６】
ステロイド、免疫制御剤又は抗発炎薬品を更に併用することを特徴とする請求項５に記載の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療及び予防に使用するための医薬組成物。
【請求項７】
前記ヒアルロン酸混合物は、潰瘍性結腸炎、急性腸炎、慢性腸炎、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）又はクローン病を治療及び予防する薬品を製造する用途とすることを特徴とする請求項１に記載の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療及び予防に使用するための医薬組成物。
【請求項８】
胃腸の傷口の癒合の薬品を製造する用途とすることを特徴とする請求項１に記載の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療及び予防に使用するための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ，ＩＢＤ）治療及び予防に使用する医薬組成物に関し、特に、２種類の異なる重量平均分子量（Ｍｗ）を有し、異なる流体変化を有するヒアルロン酸を利用し混合してなり、得られるヒアルロン酸混合物は、好適な粘着力、隔絶力、組織構造機能及び治療効果時間を備え、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎、クローン病（ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）を含む）に対する治療及び予防に用い、治療即の効性及び緩効性を兼ね備える作用を達成する。
【背景技術】
【０００２】
ヒアルロナン（ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ）は、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、その薬理が受け入れることができる塩（ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ）を概括し、「ＨＡ」として略称され、以下、統一してリアルロン酸として記載し、グリコサミノグリカン（ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ）であり、交替するＮ‐アセチル‐Ｄ‐グルコサミン（Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ）及びＤ−グルクロン酸基（ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｍｏｉｅｔｙ）を含む。
0005636225.tif 000002
ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ）の分子式
【０００３】
通常、そのナトリウム塩形態で存在するヒアルロン酸巨大分子は、既知となり５０年を超える化合物である。先ず、「Ｍｅｙｅｒ  ａｎｄ  ｅｔａｌ［Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１０７，６２９（１９３４年）］」が記載するヒアルロン酸は、本質上、交替するβ１−３グルクロン酸及びβ１−４グリコサミン部分を含む高粘度グルコサンであり、その重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０，０００ダルトン（Ｄａｌｔｏｎ．Ｄａ）及び数百万ダルトン（Ｄａ）の間に介在する。
【０００４】
ヒアルロン酸は、哺乳類動物体の結合組織中に存在するが、そのうち、皮膚、眼のガラス状体、関節液帯及び軟骨組織は、比較的高い含量のヒアルロン酸を含む。
【０００５】
ヒアルロン酸水溶液は、粘着弾性流体であり、細胞及びコラーゲン繊維空間の中に充填され、且つ某表皮組織上に被覆する。動物体において、その主要な機能は、細胞を保護し、潤滑することであり、細胞のこの粘着弾性基質上の移動を調節し、コラーゲン網状構造を安定させ、それが機械的破壊を受けることを回避するよう保護する。ヒアルロン酸は、天然性潤滑及び吸震性高分子であるので、腱、腱鞘及び粘膜表面において、潤滑剤とすることができる。また、ヒアルロン酸は、組織流体力学、運動及び細胞の増殖を補助し（Ｄｅｌｐｅｃｈ，Ｂ．，Ｇｉｒａｒｄ，Ｎ．，  Ｂｅｒｔｒａｎｄ，Ｐ．，Ｃｏｕｒｅｌ，Ｍ．−Ｎ．，Ｃｈａｕｚｙ，Ｃ．，Ｄｅｌｐｅｃｈ，Ａ．，１９９７年．Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ：ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．２４２，４１−４８，Ｒｏｏｎｅｙ，Ｐ．，Ｋｕｍａｒ，Ｓ．，Ｐｏｎｔｉｎｇ，Ｊ．，Ｗａｎｇ，Ｍ．，１９９５．Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ｉｎ  ｔｕｍｏｕｒ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ６０，６３２−３６，Ｅｎｔｗｉｓｔｌｅ  Ｊ，Ｈａｌｌ  ＣＬ，Ｔｕｒｌｅｙ  ＥＡ．Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ  ｏｆ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ１９９６年；６１：５６９−７７参照）、細胞表面の受容体相互作用に参加し、特に、受容体−ＣＤ４４を含む。ＣＤ４４の発現上昇は、既に広く受け入れられ、リンパ球細胞活性化の標記となっており（Ｔｅｄｅｒ  Ｐ，Ｖａｎｄｉｖｉｅｒ  ＲＷ，Ｊｉａｎｇ  Ｄ，Ｌｉａｎｇ  Ｊ，Ｃｏｈｎ  Ｌ，Ｐｕｒｅ  Ｅ，Ｈｅｎｓｏｎ  ＰＭ，ＮｏｂｌｅＰＷ．Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｕｎｇ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  ＣＤ４４．Ｓｃｉｅｎｃｅ２００２年；２９６：１５５−１５８，Ｓｈｅｅｈａｎ  ＫＭ，ＤｅＬｏｔｔＬＢ，ＤａｙＳＭ，ＤｅＨｅｅｒ  ＤＨ，Ｈｙａｌｇａｎ  ｈａｓａ  ｄｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ．Ｊ  Ｏｒｔｈｏｐ  Ｒｅｓ２００３年；２１：７４４−５１参照）。
【０００６】
ヒアルロン酸は、細胞外基質の組織及び修正により、空間を創造及び補充する能力を有し、軟性組織の充填に広く用いられ、年齢と関連する皮膚老化及び光による皮膚老化を制御することができ、且つ顔部脂肪の代謝障害を矯正することに用いることができ、傷跡又はケロイド増加の発生を防止する。
【０００７】
また、ヒアルロン酸は、眼科手術補助剤又は関節炎症患者に膝頭及び関節の活動的痛みを減少させることに用いることができる。
【０００８】
近年よりヒアルロン酸は、そのナトリウム塩形態により臨床治療に応用され、主要な範囲は、眼科、皮膚科、外科、動脈治療及び化粧品である。ヒアルロン酸及びアルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン（例えば、マグネシウム）、アルミイオン、アンモニアイオン及びアンモニアイオンの置換を経て形成される塩類は、薬物の吸収を促進するキャリアを補充することができる（ベルギー特許第９０４，５４７号参照）。ヒアルロン酸の重金属塩類中、銀塩は、殺菌剤として用いられる。金塩は、慢性関節リウマチの治療に用いることができる（WIPO特許ＷＯ８７/０５５１７参照）。
【０００９】
特に、肢潰瘍、床擦れ等に対し治療作用を有する脱プトロンヒアルロン酸及び周期表第４族金属イオンの複合体（錯合物）、例えば、ヒアルロン酸亜鉛及びコバルト塩は、ポルトガル特許出願第２０３，３７２号中に論述され、外界使用により既にその治療効果が実証されている。
【００１０】
カナダＢｉｏｎｉｃｈｅ会社モラレス等の米国特許第５，８８８，９８６号は、効率的濃度のヒアルロン酸を使用し、膀胱炎を治療する方法及び関連構造を開示しており、そのうち、ヒアルロン酸が有する重量平均分子量（Ｍｗ）は２０万ダルトン（Ｄａ）より多い。例において、特定の重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸のみを使用し、例えば、重量平均分子量（Ｍｗ）６５０キロダルトン（ｋＤａ）又は１，９００キロダルトン（ｋＤａ）のヒアルロン酸を採用し、膀胱炎を治療しているが、単一剤量のヒアルロン酸は、治療の即効性及び持久性を兼ね備えることができない。
【００１１】
カナダのピーター・レイラ・ロバート・ジョンの米国専利出願第２００５/００８００３７（Ａ１）は、ヒアルロン酸を用いて急性及び過度の捻挫及び応変を治療することを開示しており、そのうち、ヒアルロン酸の重量平均分子量（Ｍｗ）は、９０万ダルトン（Ｄａ）〜１２０万ダルトン（Ｄａ）に介在し、同様に単一剤量のヒアルロン酸は、治療の即効性及び持久性を兼ね備えることができない。
【００１２】
２００８年４月８日、日本Ｓｅｉｋａｇａｋｕ  Ｋｏｇｙｏ株式会社が提示する米国特許第７，３５４，９１０号-発明名称「炎症性腸疾患の治療薬剤」（Ａｇｅｎｔ  ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｉｎｇ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅｓ）は、重量平均分子量（Ｍｗ）の６００キロダルトン（ｋＤａ）〜１，２００キロダルトン（ｋＤａ）のヒアルロン酸又はその塩が炎症性腸疾患を治療できることを開示している。そのうち、重量平均分子量（Ｍｗ）が６０〜１２０万ダルトン（Ｄａ）のヒアルロン酸又はその塩を用い、迅速に蔓延し、炎症性腸疾患を治療する特長を有するが、体内に植入後、分解速度が速く（Ｔｈｏｒｎ−ｔｏｎ  ＭＨ，Ｊｏｈｎｓ  ＤＢ，  Ｃａｍｐｅａｕ  ＪＤ，Ｈｏｅｈｌｅｒ  Ｆ，  ｄｉＺｅｒｅｇａ  ＧＳ．Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  １９９８年；１３：１４８０−８５．参照）、十分な時間の治療効果を保持することができず、臨床において、患者に対する使用は、不便である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
発明者は、上記の問題及び欠陥に鑑みて、関連資料を収集し、多方面の評価及び考慮を経て、業界に従事する長年の研究開発経験を利用し、絶え間ない試作及び修正を経て、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）利用及び予防に使用するヒアルロン酸の混合物を設計する。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明の目的は、２種類の異なる重量平均分子量（Ｍｗ）の薬理許可塩形式のヒアルロン酸の生物活性を利用し、消化性潰瘍を治療することにある。 低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（略称ＬＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（略称ＨＭＷＨＡ）は、それぞれ異なる分解率を有し、そのうち、重量平均分子量（Ｍｗ）が５０万〜１５０万ダルトン（Ｄａ）である低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）とし、重量平均分子量（Ｍｗ）が１５０万〜５００万ダルトン（Ｄａ）である高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）であり、低重量辺貴分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）を具える混合物を達成し、低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）の迅速な被覆性を利用し、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性結腸炎、急性腸炎、慢性腸炎、クローン病、過敏性腸症候群又は胃腸の傷口の癒合）を治療する利点を有し、高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）が具える持久的分解が長時間の薬効を保持でき、治療の即効性及び緩効性の作用を達成する。
【００１５】
本発明が使用する高重量平均分子量（Ｍｗ）ヒアルロン酸は、好適には、１５０万〜３５０万ダルトン（Ｄａ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）であり、最も好適には、２００万ダルトン（Ｄａ）の高重量平均分子量（Ｍｗ）ヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）である。本発明が使用する低重量平均分子量（Ｍｗ）ヒアルロン酸は、好適には、５０万〜１５０万ダルトン（Ｄａ）のヒアルロン（ＬＭＷＨＡ）であり、最も好適には、１００万ダルトン（Ｄａ）の低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）である。
【００１６】
本発明のもう１つの目的は、該低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）のヒアルロン酸混合物は、ステロイド、免疫制御剤又は抗発炎薬品を併用し、治療効果を増加することができるようにすることである。
【００１７】
本発明のもう１つの目的は、低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）のヒアルロン酸混合物を主成分とし、一般の製薬プロセスにより製作され、適当な賦形剤を組み合わせ口服錠剤（例えば、腸溶錠）、肛門栓剤（直腸栓剤）又は灌流液（直腸又は結腸灌流液）とすることができる。前記薬品製剤は、一般の製剤技術を使用し完成することができる。
【００１８】
本発明のもう１つの目的は、該低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）のヒアルロン酸混合物又はその薬理が受け入れ可能な塩の濃度は、０．５ミリグラム/ミリリットル〜５０ミリグラム/ミリリットルであり、好適には、０．５ミリグラム/ミリリットル〜５ミリグラム/ミリリットルであり、但し、液剤形式濃度は、０．０５〜０．５％（重量／体積）であることである。
【００１９】
本発明の治療又は予防製薬の口服用量は、好適には、毎回１０〜１，０００ミリグラムであり、より好適には、１０〜５００ミリグラムである。
【発明の効果】
【００２０】
本発明は、２種類の異なる重量平均分子量（Ｍｗ）の藥理許可塩形式のヒアルロン酸から組成されるヒアルロン酸混合物を提供し、低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）の透明質（ＨＭＷＨＡ）がそれぞれ異なる分解率を有し、低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）の迅速に蔓延可能な利点及び高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）が具える持久的分解の長時間の薬効の保持により、治療の即効性及び緩効性を兼ね備える作用を達成する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】治療組ラットの結腸道臨床病変及び対照組の臨床病変の平均値を比較した相對回復比率程度（％）
【発明を実施するための形態】
【００２２】
上記発明の目的を達成する為、本発明が採用する技術手段及びその効果について、本発明の好適実施例を挙げ、そのステップ及び機能を詳細に説明する。
【００２３】
本発明の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）治療及び予防に使用するヒルアロン酸混合物は、低重量平均分子量（Ｍｗ）を有するヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）を有するヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）の２種類から形成されるヒアルロン酸が混合してなり、該高重量平均分子量及び低重量平均分子量のヒアルロン酸は、線状（ｌｉｎｅａｒ ＨＡ）、交鎖状（ｃｒｏｓｓ ｌｉｎｋｅｄ ＨＡ）の少なくとも１つ又はその組み合わせを形成することができ、且つ該低重量平均分子量（Ｍｗ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）の２種類から形成されるヒアルロン酸を有し、異なる重量平均分子量（Ｍｗ）を利用し、異なる流体変化、組織構造及び隔絶機能、及び溶液中の分解性を有し、得られるヒアルロン酸混合物は、好適な粘着力、隔絶力、組織構造機能、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性結腸炎、急性腸炎、慢性腸炎、過敏性腸症候群、クローン病又は胃腸の傷口の癒合）に対する治療及び予防を備え、治療の即効性及び持久的薬効時間を兼ね備える。
【００２４】
また、重量平均分子量（Ｍｗ）が１５０万ダルトン（Ｄａ）より低いものが低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）であり、好適には、低重量平均分子量（Ｍｗ）の範囲は、５０万〜１５０万ダルトン（Ｄａ）である。また、重量平均分子量（Ｍｗ）が１５０万ダルトン（Ｄａ）であるものが、高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）であり，高重量平均分子量（Ｍｗ）範囲は、１５０万〜５００万ダルトン（Ｄａ）であることができ、低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸及び高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸の混合物を利用し、低重量平均分子量（Ｍｗ）を具えるヒアルロン酸が迅速に蔓延し、炎症性腸疾患の利点を治療することができ、同時に高重量平均分子量（Ｍｗ）を具えるヒアルロン酸を介して持久的分解性を有することができ、長時間の薬効を保持することができ、治療の即効性及び緩効性の作用を兼ね備える。
【００２５】
本発明が使用する高重量平均分子量（Ｍｗ）ヒアルロン酸は、好適には、１５０万〜３５０万ダルトン（Ｄａ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）であり、最も好適には、２００万ダルトン（Ｄａ）の高重量平均分子量（Ｍｗ）ヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）である。本発明が使用する低重量平均分子量（Ｍｗ）ヒアルロン酸は、好適には、５０万〜１５０万ダルトン（Ｄａ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）であり、最も好適には、１００万ダルトン（Ｄａ）の低重量平均分子量（Ｍｗ）ヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）である。
【００２６】
本発明の好適実施例は、該低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）の混合比率が１：１であることができるが、実際の病状に応じ、２０：８０〜８０：２０の範囲内で低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）又はその塩型式の混合比率を調整することができる。比較的高い比率の低重量平均分子量（Ｍｗ）ヒアルロン酸を具えるヒアルロン酸混合物は、意に応じて治療時間の即効性を偏重し、比較的高い高重量平均分子量（Ｍｗ）ヒアルロン酸を具えるヒアルロン酸混合物，意に応じて分解性持久効果を偏重することを達成する。
【００２７】
本発明の他の好適実施例は、該低重量平均分子量（Ｍｗ）を具えるヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）を具えるヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）のヒアルロン酸混合物は、ステロイド、免疫制御剤又は抗発炎薬品を併用し、治療を増加することができる。
【００２８】
本発明の他の好適実施例は、低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）のヒアルロン酸混合物を主成分とし、一般の製薬プロセスで製作され、適切な賦形剤を組み合わせ口服錠剤（例えば、腸溶錠）、肛門栓剤（直腸栓剤）又は灌流液（直腸又は結腸灌流液）とすることができる。この賦形剤は、これに限定するものではないが、ゼラチン（ｇｅｌａｔｉｎ）、コラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）、コンドロインチン（ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ）、カルボポール（ｃａｒｂｏｐｏｌ）、寒天（Ａｇａｒ）、繊維素グリコール酸（ＣＭＣ）、燐酸緩衝食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ＰＢＳ）を含む。
【００２９】
本発明の薬の供給経路が口服［例えば、口服腸溶錠（ｅｎｔｅｒｉｃ  ｃｏａｔｉｎｇ  ｔａｂｌｅｔ）］による時、腸溶錠を介し胃の中で比較的強酸により溶解及び消化されず、腸の部位が徐々に溶解し、上記ヒアルロン酸混合物を放出し、発炎した結腸（例えば、およそ上昇（結腸）及び横結腸の位置）に保護膜を形成し、発炎部位の癒合の加速を達成し、治療の緩効性の作用を兼ね備える。
【００３０】
本発明の薬の供給経路が肛門栓剤（ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｙ）による時、肛門栓を経由して上記ヒアルロン酸混合物を塞入し、上記ヒアルロン酸混合物が直腸位置で溶解した後、その他の結腸位置（例えば、およそ下降結腸位置）に拡散し、発炎した結腸に保護膜を形成し、発炎部位の癒合の加速を達成し、治療の緩効性の作用を兼ね備える。
【００３１】
本発明の薬の供給経路が灌流液［例えば、結腸灌流液（ｅｎｅｍａ）］による時、上記ヒアルロン酸混合物を主成分とし、適切な賦形剤を組み合わせ、この賦形剤は、これに限るものではないが、ゼラチン（ｇｅｌａｔｉｎ）、コラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）、コンドロイチン（ｃｈｏｎｄｒｏｉｔｉｎ）、カルボポール（ｃａｒｂｏｐｏｌ）、寒天（Ａｇａｒ）、繊維素グリコール酸（ＣＭＣ）、燐酸緩衝食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ＰＢＳ）のうちの１つを含むか、又は上記の相互の結合が形成する組合物であるか、澱粉を含む懸濁液であり、直接又は補助軟性管を介して、上記ヒアルロン酸混合物の組合液を結腸位置に灌入し、その他の結腸位置（例えば、およそ下降結腸位置）に拡散し、発炎した結腸に保護膜を形成し、発炎部の癒合を加速し、治療の緩効性の作用を兼ね備える。
【００３２】
上記該低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）のヒアルロン酸混合物又はその薬理が受け入れ可能な塩の好適な濃度は、０．５ミリグラム/ミリリットルミリリットル〜５ミリグラム/ミリリットルであり、液剤形式では、好適には０．０５〜０．５％（重量/体積）であり、その薬理は、受け入れ可能な濃度が０．５ミリグラム/ミリリットル〜５０ミリグラム/ミリリットルであり、好適な濃度は、０．５ミリグラム/ミリリットル〜５ミリグラム／ミリリットルである。液剤形式では０．０５〜５％（重量/体積）であり、液剤形式では、好適には、０．０５〜０．５％（重量／体積）である。また、口服時（例えば、調配した腸溶錠）、本発明の治療又は予防薬剤の用量は、好適には、毎回、１０〜５００ミリグラムであり、薬学許可塩形式のヒアルロン酸は、例えば、ヒアルロン酸ナトリウム及びヒアルロン酸亜鉛等である。
【００３３】
また、本発明の低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）のヒアルロン酸混合物は、ステロイド、免疫制御剤又は抗発炎薬品を併用し、治療効果を増加することができる。
【００３４】
本発明ヒアルロン酸混合物の効果を照明する。この動物実験は、台湾動物科学研究所に委託して行なう動物実験であり、その実験報告結果は、以下の通りである。
【００３５】
効果実施例１：
１−１：概要
本試験は、発炎性腸炎動物モードを利用し、サンプルＩＢＤ９８の動物体での効果を評価し、予防組ラットは、先ず肛門を経てＩＢＤ９８を投与した後、トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）を投与し腸炎病変を誘発し、その後、連続３日肛門を経由してサンプルＩＢＤ９８を与え、対照組は、ＴＮＢＳを投与し、腸炎病変を誘発するだけであり、３日観察し、全てのラットにＴＮＢＳを投与した後、第４日目の犧牲により臨床病変を検視し、薬を与える前と犠牲時の血液を採集し、発炎指標を検測する。結果は、予防組及び対照組の結腸発炎範囲平均値がそれぞれ３．９ｃｍ及び４．３ｃｍであり、両者間に顕著な差異を有していない。予防組及び対照組のラットの薬を与える前と犠牲時のＴＮＦ−α（Ｔｕｍｏｒ  ＮｅｃｒｏｓｉｓＦａｃｔｏｒ−ａｌｆａ）及びＩＬ−１β（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１β）濃度は、何れも顕著な差異を有し、ラットは、確実に発炎が発生する現象を誘発される。犠牲時のＴＮＦ−α濃度は、予防組ラットが対照組ラットより明らかに低く、顕著な差異を有するが、ＩＬ−１β濃度は、顕著な差異を有していない。本試験は、このモードが動物の腸炎の病変を誘発することができ、臨床病変は、明らかな差異がないことを確認するので、ＩＢＤ９８サンプルの投与の回復状況によりサンプル効果を評価することができる。実験結果は、ＴＮＦ−αは、予防組及び対照組の間に顕著な差異を有し、このように、サンプルＩＢＤ９８のＩＢＤの予防に対して発炎反応を低減する効果を確実に有することを推論することができる。
【００３６】
１−２：試験工程
Ａ．試験目的：
ＴＮＢＳを利用し、ラットの発炎性腸炎を誘発し、ＩＢＤ９８がラットの発炎性腸炎を治療又は予防するか、発炎を低減する効果を有するか否かを評価する。
【００３７】
Ｂ．試験物質：
ＩＢＤ９８は、禾伸堂生技股▲ふん▼有限公司により提供される。このＩＢＤ９８は、高重量平均分子量及び低重量平均分子量を有するヒアルロン酸を含み、そのうち、ヒアルロン酸の高重量平均分子量が２００万ダルトンであり、ヒアルロン酸の低重量平均分子量が１００万ダルトンであり、その混合比率は、１：１であり、ＰＢＳ溶液に０．５％濃度まで分解する。
【００３８】
Ｃ．試験方法：
１．実験動物：
３０頭の８週齢のＳＰＦレベルのスプラーグドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）雄性ラットを選出し、２組に分け、毎組１５頭ラットとし、２頭ごとに一籠で台湾動物科技研究所齧歯類動物室において飼育する。
【００３９】
２．動物試験：
予防組のラットは、試験前、先ず２４時間以上禁食し、試験第１日目、ラットを麻酔した後、肛門を経由し１ミリリットルのＩＢＤ−９８を投与し、１時間後、更に、肛門から１ミリリットルのＴＮＢＳ（５０ｍｇ／ｍＬ）を投与し、第２日目〜第４日目は、毎日、肛門から１ミリリットルのＩＢＤ９８を投与し、第５日目、全てのラットを犠牲にし、直腸部位を取り、臨床病変を観察する。
【００４０】
対照組のラットは、試験前、先ず２４時間以上禁食し、試験第１日目、ラットを麻酔した後、肛門を経由し１ミリリットルのＴＮＢＳ（５０ｍｇ／ｍＬ）を投与し、第２日目〜第４日目は、毎日、肛門から１ミリリットルのＰＢＳを投与し、第５日目に全てのラットを犠牲にし、直腸部位を取り、臨床病変を観察する。
【００４１】
３．発炎指標の検測：
予防組及び対照組のラットは、第１日目の試験前に尾の静脈から採血し、第５日目に犧牲時の心臓から採血し、離心後に血清を収集し、それぞれ酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）により血清中のＴＮＦ−α及びＩＬ−１βの変化を検測する。
【００４２】
１−３：試験データ
表１．予防組及び対照組のラットの結直腸臨床病変
0005636225.tif 000003
【００４３】
表２．予防組及び腸炎誘発組（対照組）の薬投与前（Ｄ１）及び薬投与４日後（Ｄ５）
0005636225.tif 000004
＊＊：予防組ラットＤ５及びＤ１の血清中のＴＮＦ−αの濃度は、極めて顕著な差異（Ｐ＜０．０１）を有し、腸炎誘発組も同じ（Ｐ＜０．０１）である。
＊：予防組ラットＤ５及びＤ１の血清中のＩＬ−１βの濃度は、顕著な差異（Ｐ＜０．０５）を有し、腸炎誘発組も同じ（Ｐ＜０．０５）である。
＃：予防組及び対照組Ｄ５のＴＮＦ−αの濃度は、顕著な差異（Ｐ＜０．０５）を有する。
【００４４】
１−４：試験結果
今回、３０頭のラットに試験を行い、予防組と対照組の２組に分け、毎組１５頭のラットとし、試験前、ラットを２４時間以上禁食させ、薬を投与前に浣腸剤で排便させ、第１日目（Ｄ１）、対照組１ｍＬのＴＮＢＳを投与し、その後、連続3日（Ｄ２−Ｄ４）ＰＢＳを投与する。予防組は、第１日目（Ｄ１）に先ず１ｍＬのＴＮＢＳを投与後１時間で１ｍＬのＩＢＤ９８を投与し、その後、連続3日（Ｄ２−Ｄ４）、ＩＢＤ９８を投与する。２組は、第２日目Ｄ５まで行い、ラットを犧牲にし、腸道病変及び発炎範囲を解剖検視する。試験途中で死亡したラットは、計算に入れず、試験終了時、予防組は、１３頭、対照組は、１２頭のラットが分析可能であった。予防組及び対照組の発炎範囲の平均値は、それぞれ３．９センチメートル及び４．３センチメートルであるが、明らかな差異を有していない（表１参照）。
【００４５】
発炎指標のＴＮＦ−α平均濃度（ｐｇ／ｍＬ）は、試験前（Ｄ１）及び犧牲時（Ｄ５）において、予防組は、２１．３から７５９．３に上昇し、対照組は、１２．３から１３４９．６に上昇し、２組のＴＮＦ−α平均濃度の上昇状況は、何れも顕著な差異（Ｐ＜０．０１）を有する。ＩＬ−１β平均濃度（ｐｇ／ｍＬ）は、試験前（Ｄ１）及び犧牲時（Ｄ５）において、予防組が３．３から２７５．８に上昇し、対照組が１４．１から４６９．４に上昇し、２組のＩＬ−１β平均濃度の上昇状況も顕著な差異（Ｐ＜０．０５）を有する。ＴＮＢＳ誘発の下、本試験のラットは、確実に発炎反応が出現することが示される。２組を連続処理し３日後（Ｄ５）の発炎指標を比較し、ＴＮＦ−α平均濃度は、予防組が７５９．３であり、対照組が１３４９．６であり、２組の間に顕著な差異（Ｐ＜０．０５）を有し、即ち、予防組のラットの血清中のＴＮＦ−α平均濃度は、対照組より明らかに低く、ＩＢＤ９８の処理後のラットは、発炎状況が未処理のものと比べて低くなっている（表２参照）。
【００４６】
１−５．結論
対照組が腸道発炎を誘発後、薬物治療を使用せず、予防組は、ＴＮＢＳを使用する前に先ず、ＩＢＤ９８により処理し、その後、連続3日治療し、対照組及び予防組の発炎指標ＴＮＦ−α及びＩＬ−１β濃度は、何れも明らかに上昇し、ラットが炎症反応を誘発されていることを確認している。予防組のＴＮＦ−α濃度は、対照組より明らかに低く、ＩＢＤ９８処理を使用したラットの発炎性腸炎は、確かに発炎反応を低減する效果を有することが示される。
【００４７】
効果実施例２：
２−１：概要
本試験は、発炎性腸炎動物モードを利用し、サンプルＩＢＤ９８の動物体での効果を評価し、実験用ラットは、先ず、トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）を肛門から投与し、腸炎病変を誘発し、３日後に肛門からそれぞれサンプルＩＢＤ９８（治療組）及び燐酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（対照組）を投与し、連続７日処理し、ラットを犠牲にし、臨床病変を検視し、結果は、治療組のサンプルＩＢＤ９８を投与したラットの結腸発炎範囲が平均約１．２５センチメートルであり、対照組の燐酸緩衝生理食塩水を投与したラットの結腸発炎範囲が平均約１．８７５センチメートルであり、治療組及び対照組を比較した相對回復程度が３３％であり、ＩＢＤ９８を使用し処理したラットの発炎性腸炎（ＩＢＤ）が腸道組織回復を促進する趨勢を有することが示される。
【００４８】
２−２：試験プログラム
Ａ．試験目的：
ＴＮＢＳを利用し、ラットの発炎性腸炎を誘発し、ＩＢＤ９８がラット発炎性腸炎の治療又は予防又は発炎を低下する效果を有するか否かを確認する。
【００４９】
Ｂ．試験物質：
ＩＢＤ９８は、禾伸堂生技股▲ふん▼有限公司により提供される。高平均重量分子量及び低平均重量分子量のヒアルロン酸は、そのうち、ヒアルロン酸の高重量平均分子量が２００万ダルトンであり、ヒアルロン酸の低重量平均分子量が１００万ダルトンであり、その混合比率が７：３であり、燐酸緩衝生理食塩水に０．５％の濃度まで溶解する。
【００５０】
Ｃ．試験方法
１．実験動物：
３６頭の８週齢のＳＰＦレベルのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ雄性ラットを選出し、2組に分け、毎組１８頭ラットとし、２頭ごとに一籠で台湾動物科技研究所齧歯類動物室において飼育する。
【００５１】
２．動物試験：
ラットは、動物試験前に先ず、２４時間以上禁食させ、動物試験第１日目、ラットを麻酔した後、肛門から１ミリリットルのトリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ，５０ｍｇ／ｍＬ）を投与し、３日間観察し、第３日目に依然として軟便及び水樣便であるラットを選出し、後続試験を進行する。
【００５２】
治療組の動物試験は、第４日目〜第１０日目、麻酔後に１ミリリットルのＩＢＤ９８（５ｍｇ／ｍＬ）を投与する。対照組の動物試験は、第４日目〜第１０日目、麻酔後に１ミリリットルＰＢＳを投与し、全てのラットを動物試験の第１１日目に犧牲にし、直腸部位を取り、臨床病変を観察する。
【００５３】
２−３：試験データ
表３．対照組ラットの腸道臨床病変
0005636225.tif 000005
【００５４】
表４．治療組ラットの腸道臨床病変及び相對回復比率
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＊ 相對回復比率（％）＝（治療組ラットの腸道発炎範囲−対照組ラットの発炎範囲の平均値）／対照組ラットの発炎範囲の平均値
【００５５】
２−４：試験結果
今回は、３６頭のラットに試験を行い、治療組及び対照組の２組に分け、毎組１８頭ラットとし、試験前、ラットは、２４時間以上禁食させ、薬を投与する前、先ず浣腸剤で排便させ、ＴＮＢＳを投与し、その後、３日間観察し、観察期間に２頭のラットが志望し、５頭のラットに腸道病変を確認し、排便が正常なラットを排除し、第４日目に依然として軟便及び水様便が出現したラットを選択し、治療組（１０頭ラット）は、連続７日（第４日−第１０日）肛門からＩＢＤ９８を投与する。対照組（７頭ラット）は、連続７日ＰＢＳを投与し、試験期間に治療組及び対照組は、それぞれ１頭が死亡し、試験第１１日目に全てのラットを犠牲にし、腸道病変及び発炎範囲を解剖検視する。
【００５６】
対照組は、１頭のラットが病変無しであり、３頭のラットに約０．３−１センチメートルの局部発炎及び１級病変が出現し、２頭のラットに２−２．５センチメートルの局部発炎及び２級病変が出現した（表３参照）。治療組のラットは、７頭に約０．３−１．５センチメートルの局部発炎及び１級病変が出現し、２頭のラットに約２センチメートルの発炎及び２級病変が出現した（表４参照）。統計後に、対照組のラットの腸道発炎範囲の平均が約１．８７５センチメートルであり、治療組の腸道発炎範囲の平均が１．２５センチメートルであり、治療組のラット及び対照組のラットの相對癒合程度が３３％であることが分かる（表４、図１参照）。
【００５７】
上記のように、本発明は、２種類の異なる重量平均分子量（Ｍｗ）の藥理許可塩形式のヒアルロン酸から組成されるヒアルロン酸混合物を提供し、低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）及び高重量平均分子量（Ｍｗ）の透明質（ＨＭＷＨＡ）がそれぞれ異なる分解率を有し、低重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＬＭＷＨＡ）の迅速に蔓延可能な利点及び高重量平均分子量（Ｍｗ）のヒアルロン酸（ＨＭＷＨＡ）が具える持久的分解の長時間の薬効の保持により、治療の即効性及び緩効性を兼ね備える作用を達成するが、上記は、本発明の好適実施例を開示するだけであり、これらは決して本発明に限定するものではなく、当該技術を熟知する者なら誰でも、本発明の精神と領域を脱しない均等の範囲内で各種の変動や潤色を加えることができることは勿論である。
【００５８】
本発明の上記の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療及び予防に使用するためのヒアルロン酸混合物は、その効果及び目的を確実に達成することができ、よって、本発明は、実用性に優れた発明である。
【図１】
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