(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式の化合物：
【化１】
0005634596.tif 000014
またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
２−｛５−クロロ−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロペンチルアミノ］ピリミジン−４−イル｝−Ｎ−シクロプロピル−１Ｈ−インドール−４−カルボキサミドである、請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
２−｛５−クロロ−２−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−ヒドロキシシクロペンチルアミノ］ピリミジン−４−イル｝−Ｎ−シクロプロピル−１Ｈ−インドール−４−カルボキサミドである、請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４】
１つ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と組み合わせて、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む医薬組成物。
【請求項５】
１つ以上の他の治療剤をさらに含む、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記治療剤がＴＮＦαおよびビンクリスチンからなる群から選択される、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
哺乳動物において、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患、喘息、多発性硬化症、および炎症性腸疾患からなる群から選択される炎症性疾患を治療するための医薬組成物であって、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む、医薬組成物。
【請求項８】
哺乳動物において、多発性骨髄腫、結腸がん、大細胞肺がん、膠芽腫、膵がん、および卵巣がんからなる群から選択されるがんを治療するための医薬組成物であって、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を含む、医薬組成物。
【請求項９】
炎症性疾患またはがんを治療するための医薬の製造における請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容可能な塩の使用。
【請求項１０】
前記炎症性疾患が、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患、喘息、多発性硬化症および炎症性腸疾患からなる群から選択される、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
前記がんが、多発性骨髄腫、結腸がん、大細胞肺がん、膠芽腫、膵がんおよび卵巣がんからなる群から選択される、請求項９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピリミジニルインドール化合物、製剤、ならびに特にがんおよび炎症性疾患の治療におけるその治療的使用を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
ＩＫＫβは、炎症およびストレス関連経路を調節する重要なキナーゼであり、したがってがんから炎症性疾患まで種々のヒト疾患の発症に関連付けられている。
【０００３】
キナーゼ阻害剤として有用なピリミジニルインドール化合物は、当技術分野においてすでに知られている。国際公開第04089913号（ＩＫＫβ阻害剤）、国際公開第06038001号、および国際公開第06075152号を参照されたい。さらに、ＩＫＫβの阻害剤として有用なピリミジニルベンゾチオフェン化合物も、当技術分野において知られている。国際公開第07092095号を参照されたい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
がんまたは炎症性疾患の治療にとって有用である強力なＩＫＫβ阻害剤が必要とされている。ＴＮＦαまたはビンクリスチン（ＶＣＲ）と併用すると相乗情動（synergistic affect）を有するこのような化合物も必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、ＩＫＫβを阻害することによりがんおよび炎症性疾患を治療するために臨床的に使用される新規ピリミジニルインドール化合物を提供する。さらに詳細には、本発明は、次式の新規ピリミジニルインドール化合物：
【化２】
0005634596.tif 000002
またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【０００６】
本発明は、哺乳動物において多発性骨髄腫、結腸がん（colon cancer）、大細胞肺がん、膠芽腫、膵がん、および卵巣がんからなる群から選択されるがんを治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、有効量の本発明の化合物または塩を投与する工程を含む方法も提供する。
【０００７】
本発明は、哺乳動物において、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患、喘息、多発性硬化症、および炎症性腸疾患からなる群から選択される炎症性疾患を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、有効量の本発明の化合物または塩を投与する工程を含む方法も提供する。
【０００８】
本発明は、１つ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて、本発明の化合物または塩を含む医薬組成物も提供する。特定の一実施形態において、組成物は、１つ以上の他の治療剤をさらに含む。さらなる実施形態において、他の治療剤はＴＮＦαである。さらなる実施形態において、他の治療剤はビンクリスチンである。
【０００９】
本発明は、療法（therapy）で使用するための本発明の化合物または塩も提供する。本発明は、がんの治療で使用するための本発明の化合物または塩も提供する。さらに、本発明は、がんを治療するための医薬（medicament）の製造における本発明の化合物または塩の使用を提供する。特に、これらのがんは、多発性骨髄腫、結腸がん、大細胞肺がん、膠芽腫、膵がん、および卵巣がんからなる群から選択される。一実施形態は多発性骨髄腫である。別の実施形態は結腸がんである。別の実施形態は大細胞肺がんである。別の実施形態は膠芽腫である。別の実施形態は膵がんである。別の実施形態は卵巣がんである。本発明は、炎症性疾患の治療で使用するための本発明の化合物または塩も提供する。さらに、本発明は、炎症性疾患を治療するための医薬の製造における本発明の化合物または塩の使用を提供する。特に、炎症性疾患は、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患、喘息、多発性硬化症、および炎症性腸疾患からなる群から選択される。一実施形態は関節リウマチである。別の実施形態は慢性閉塞性肺疾患である。別の実施形態は喘息である。別の実施形態は多発性硬化症である。別の実施形態は炎症性腸疾患である。さらに、本発明は、多発性骨髄腫、結腸がん、大細胞肺がん、膠芽腫、膵がん、および卵巣がんからなる群から選択されるがんを治療するための医薬組成物であって、本発明の化合物または塩を活性成分として含む医薬組成物を提供する。さらに、本発明は、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患、喘息、多発性硬化症、および炎症性腸疾患からなる群から選択される炎症性疾患を治療するための医薬組成物であって、本発明の化合物または塩を活性成分として含む医薬組成物を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の化合物および塩を、本質的にはスキームと実施例とで例示するように調製する。さらに、本発明の化合物および塩はすべて、シクロペンチル環置換のためジアステレオマーまたは鏡像異性体として存在する。したがって、特定のジアステレオマーを反応物質として使用することによって光学純度が導入される。光学純度は、本発明の化合物または塩に対応するジアステレオマーまたはラセミ体の混合物についてクロマトグラフィー／キラルクロマトグラフィーを使用することによっても導入することもできる。
【００１１】
【化３】
0005634596.tif 000003
【００１２】
本発明の化合物は、その保護前駆体（Ａ）をメタノールまたはエタノール中、ＨＣｌ、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）またはｐ−トルエンスルホン酸（ＴｓＯＨ）で処理して、脱保護することにより調製される。
【００１３】
【化４】
0005634596.tif 000004
【００１４】
前駆体Ａは、以上に示す２通りの方式で調製する。上側の反応においては、インドール−４−カルボン酸（Ｂ）とシクロプロピルアミンを、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ）またはジシクロヘキシルカルボジイミドなどの脱水剤の存在下にカップリングする。有機合成の当業者は、これらのアミドカップリング反応を、式（Ｉ）の化合物に導く一連の合成において好都合な任意の時点で行ってもよいことを認識するであろう。
【００１５】
下側の反応においては、２−アミノシクロペンタノール（Ｄ）が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（dimethyformamide）（ＤＭＦ）などの溶媒中、水素化ナトリウム、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）または炭酸カリウムなどの塩基の存在下に高温（７０〜１３０℃）で、クロロピリミジン中間体（Ｃ）中のクロロ基に置換する。有機合成の当業者は、これらのクロロ置換反応を、本発明の化合物に導く一連の合成において好都合な任意の時点で行ってもよいことを認識するであろう。
【００１６】
【化５】
0005634596.tif 000005
【００１７】
インドール−４−カルボン酸（Ｂ）は、ピリミジニルエステル（Ｅ）のクロロ基をスキームＩＩの下側の反応と同様に２−アミノシクロペンタノール（Ｄ）で置換し、続いて中間体のカルボン酸エステル基のけん化を行うことによって調製される。
【００１８】
【化６】
0005634596.tif 000006
【００１９】
ピリミジニルクロリド（Ｃ）および（Ｅ）は、インドール−２−ボロン酸（ＦまたはそのＣ1〜Ｃ3アルキルボロン酸エステル）と市販のトリクロロピリミジン（Ｇ）とのパラジウム触媒カップリング反応により調製される。触媒はＰｄ（ＯＡｃ）2、Ｐｄ（ＰＰｈ3）4、またはＰｄＣｌ2（ｄｐｐｆ）であり、カップリング反応は、極性非プロトン性溶媒、例えばテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中、高温（５０〜１１０℃）で行われる。
【００２０】
市販または文献の方法で調製されるインドール前駆体（Ｈ）を、まずクロロメチルエチルエーテル、Ｃ1〜Ｃ3トリアルキルシリルクロリド、またはジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートを用いて、塩基の存在下にＮ１−保護を行い、続いてインドールの２位をリチオ化し、Ｃ1〜Ｃ3トリアルキルボロン酸エステルで処理すると、ボロン酸またはボロン酸エステル（boronate）（Ｆ）が生成する。
【００２１】
本発明は、様々な立体異性体およびその混合物を含む。立体異性体としては、鏡像異性体およびジアステレオマー、ならびに鏡像異性体またはジアステレオマーの混合物が挙げられる。本発明の化合物の個々の立体異性体は、不斉またはキラル中心を含む市販の出発材料から合成により調製することができ、あるいはラセミ混合物の調製と、その後に続く当業者によく知られている方法による分割により調製することができる。これらの分割方法の例としては、（１）Furniss, Hannaford, Smith, and Tatchell, ”Vogel’s Textbook of Practical Organic Chemistry”, 第5版(1989), Longman Scientific & Technical, Essex CM20 2JE, Englandに記載されているように、鏡像異性体の混合物のキラル補助基への連結、得られたジアステレオマーの混合物の再結晶もしくはクロマトグラフィーによる分離、および場合によっては、光学的に純粋な生成物の補助基からの遊離、または（２）光学鏡像異性体の混合物のキラルクロマトグラフ用カラムによる直接分離、または（３）分別再結晶法が挙げられる。
【００２２】
ＣｈｅｍＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ  １０．０を使用して、以下の化合物を命名する。
【００２３】
調製１
Ｎ−シクロプロピル−２−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イル）−１−（エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−４−カルボキサミド
（Ａ）１−（エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸メチルの調製。
窒素下、１Ｈ−インドール−４−カルボン酸メチル（８０ｇ、０．４６ｍｏｌ）のＴＨＦ（７００ｍＬ）溶液に、０℃でカリウムヘキサメチルジシラジド（ＴＨＦ中１Ｍ、５５０ｍＬ、０．５５ｍｏｌ）を滴下する。混合物を０℃で３０分間（ｍｉｎ）撹拌し、次いでクロロメチルエチルエーテル（５１ｍＬ、０．５５ｍｏｌ）を０〜５℃で添加する。添加した後、反応混合物を周囲温度でさらに３時間（ｈ）撹拌し、水３００ｍＬで慎重にクエンチし、酢酸エチル（ＥＡ、３×３００ｍＬ）で抽出する。抽出液を合わせて、飽和塩化ナトリウム水溶液（２×４００ｍＬ）で洗浄し、次いでＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製すると、表題化合物（８０ｇ、７５％）が得られる。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２３４（Ｍ＋Ｈ）+。
【００２４】
（Ｂ）１−（エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸の調製。
１−（エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸メチル（１３５ｇ、０．５８ｍｏｌ）のメタノール（２Ｌ）溶液に、水酸化ナトリウム水溶液（Ｈ2Ｏ（３４０ｍＬ）中６８ｇ、１．７４ｍｏｌ）を添加する。反応混合物を５０℃で３時間撹拌する。揮発性物質を真空除去する。残渣を、ＨＣｌ（２Ｍ）でｐＨ＝３〜４になるまで酸性化し、次いでＥＡ（２×７００ｍＬ）で抽出する。抽出液を合わせて、飽和塩化ナトリウム水溶液（２×２５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮すると、表題化合物（１２３ｇ、９６％）が得られる。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２２０（Ｍ＋Ｈ）+。
【００２５】
（Ｃ）Ｎ−シクロプロピル−１−（エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−４−カルボキサミドの調製。
１−（エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（１２３ｇ、０．５６ｍｏｌ）のＴＨＦ（１．５Ｌ）溶液に、シクロプロピルアミン（５８ｍＬ、０．８４ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ、１６７ｍＬ、１．１２ｍｏｌ）と、続いてＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（２４０ｇ、０．６２ｍｏｌ）を０℃で添加する。反応混合物を周囲温度で終夜撹拌する。揮発性物質を真空除去する。残渣をＥＡ（１．５Ｌ）およびＨＣｌ（０．５％、１Ｌ）中で１０分間撹拌する。有機層を分別し、飽和塩化ナトリウム水溶液（３×１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製すると、表題化合物（１１０ｇ、７７％）が得られる。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５９（Ｍ＋Ｈ）+。
【００２６】
（Ｄ）Ｎ−シクロプロピル−２−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イル）−１−（エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−４−カルボキサミドの調製。
ジイソプロピルアミン（ＤＩＰＡ、１４７ｍＬ、１．０４ｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（６００ｍＬ）溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ、４２０ｍＬ、１．０４ｍｏｌ）を−５０℃で添加する。添加した後、混合物を−２０℃で３０分間撹拌し、次いで−７０℃に冷却する。Ｎ−シクロプロピル−１−（エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−４−カルボキサミド（６０ｇ、０．２３ｍｏｌ）とホウ酸トリ（イソプロピル）（５６．４ｍＬ、０．２５ｍｏｌ）との無水ＴＨＦ（３００ｍＬ）溶液を添加する。反応混合物を−７０℃で３０分間撹拌する。反応物を周囲温度までゆっくり温め、１時間撹拌し、次いでＫ3ＰＯ4・３Ｈ2Ｏ水溶液（水７００ｍＬ中１９５ｇ、０．７４ｍｏｌ）でクエンチする。粗反応混合物を脱気し、Ｎ2で３回パージする。２，４，５−トリクロロピリミジン（５１ｇ、０．２７ｍｏｌ）および二塩化パラジウムジフェニルホスフィノフェロセン（ＰｄＣｌ2（ｄｐｐｆ）・ＣＨ2Ｃｌ2、１９．２ｇ、０．０２３ｍｏｌ）を添加し、窒素下、環流温度で１．５時間撹拌する。揮発性物質を真空除去する。残渣をジクロロメタン（ＤＣＭ、３×５００ｍＬ）で抽出する。抽出液を合わせて、飽和塩化ナトリウム水溶液（３×１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製すると、表題化合物（３０ｇ、３２％）が得られる。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０５［（Ｍ＋１）+，35Ｃｌ，35Ｃｌ］，４０７［（Ｍ＋１）+，35Ｃｌ，37Ｃｌ］および４０９［（Ｍ＋１）+，37Ｃｌ，37Ｃｌ］。
【実施例１】
【００２７】
【化７】
0005634596.tif 000007
【００２８】
上記の生成物（７ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）と塩化水素（メタノール中６Ｍ、２１０ｍＬ、１．２６ｍｏｌ）を４５℃で１２時間撹拌する。沈殿物を濾過で回収し、メタノールで洗浄し、真空乾燥すると、表題化合物（４．７ｇ、７０％）が得られる。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１２（35Ｃｌ）および４１４（37Ｃｌ）（Ｍ＋Ｈ）+。
【実施例２】
【００２９】
【化８】
0005634596.tif 000008
ＤＭＳＯ（１５０ｍＬ）中で、Ｎ−シクロプロピル−２−（２，５−ジクロロピリミジン−４−イル）−１−（エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−４−カルボキサミド（３０ｇ、７５ｍｍｏｌ）、（１Ｒ，２Ｒ）−２−アミノシクロペンタノール塩酸塩（１２．３ｇ、９０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３７．５ｍＬ、２２５ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃で１６時間撹拌し、次いで水（１Ｌ）に注ぎ込み、ＥＡ（２×５００ｍＬ）で抽出する。抽出液を合わせて、飽和塩化ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、真空濃縮する。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製すると、２−｛５−クロロ−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロペンチルアミノ］ピリミジン−４−イル｝−Ｎ−シクロプロピル−１−（エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−４−カルボキサミド（３３ｇ、９３％）が得られる。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４７０（35Ｃｌ）および４７２（37Ｃｌ）（Ｍ＋Ｈ）+。
【００３０】
上記の生成物（３３ｇ、７０ｍｍｏｌ）と塩化水素（メタノール中６Ｍ、１Ｌ、６ｍｏｌ）を４５℃で１６時間撹拌する。沈殿物を濾過で回収し、メタノール（２×３００ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥すると、表題化合物（２６．８ｇ、８５％）が得られる。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１２（35Ｃｌ）および４１４（37Ｃｌ）（Ｍ＋Ｈ）+。
【００３１】
ラットにおいて、アジュバント誘発性関節炎の重症度が、ドミナントネガティブ型ＩＫＫβの関節内投与によって有意に低減された（Tak PPら、Arthritis Rheum.(2001)44(8)1897-1907）。ＩＫＫβノックアウト細胞は、ＴＮＦα誘発性サイトカイン、ケモカイン、または接着分子を発現する際に著しい欠点を有する。ＩＫＫβのコンディショナルまたは組織特異的ノックアウトにより、このキナーゼは、ＴＮＦαによって媒介される末梢Ｂ細胞の生存および増殖ならびにアポトーシスの予防に必要とされることが判明している（Li Z-W, Omori AS, Labuda T, Karin M, Rickert RC, “IKKβ is required for peripheral B cell survival and proliferation” The J. Immunol.,(2003), 170:4630-4637;Maeda S, Chang L,ら “IKKβ is required for prevention of apoptosis mediated by cell-bound but not by circulating TNFa” Immunity,(2003), 19:725-737）。さらに、骨髄性細胞におけるＩＫＫβの欠失によっても、大腸炎関連がんの増殖が低減した（Greten FRら, Cell,(2004), 118:285-296）。さらに、いくつかのグループは、ＩＫＫβキナーゼ阻害剤が、異なるがん細胞系において細胞増殖阻害を誘発し、かつ／あるいはＴＮＦα−またはＴＲＡＩＬ−誘発性の細胞死を増加させ得ることを実証した（Takaomiら Clinical Cancer Res.,(2005), Vol 11:1974-82;Hideshimaら, JBC,(2002)277:16639-47;Lamら Clinical Cancer Res.,(2005)Vol 11:28-40）。
【００３２】
さらに、国際公開第07092095号には、多発性骨髄腫、結腸がん、大細胞肺がん、膠芽腫、および卵巣がんを治療するのに有用であるＩＫＫβの阻害剤が開示されている。
【００３３】
生物学的特性の評価
本発明の化合物の生物学的特性は、以下のアッセイによって決定することができる。本発明の化合物によるＩＫＫβの阻害活性については、それぞれのキナーゼによるＩκＢα基質のリン酸化を測定するＩＫＫβ−キナーゼ酵素アッセイ、ならびにＢｘＰＣ−３およびＳｋｏｖ３−ｌｕｃを含めて種々の腫瘍細胞系において細胞増殖を阻害する化合物の能力を測定する細胞生存率アッセイにより評価する。本発明の化合物の抗腫瘍効果は、Ｕ８７ＭＧ異種移植片におけるＴＮＦα遺伝子発現の阻害に対する化合物の効果を測定するＩＶＴＩ（インビボ標的阻害）Ｕ８７ＭＧモデルと、ヌードマウスにおけるヒト卵巣がんＳＫＯＶ−３ｘ−ＦＦ−ｌｕｃｉ腫瘍増殖に及ぼす化合物単独の効果、およびヒト卵巣がんＳＫＯＶ−３ｘ−ＦＦ−ｌｕｃｉ異種移植片においてはビンクリスチン（ＶＣＲ）、またはヒト結腸がんＨＴ−２９異種移植片においてはＣＰＴ−１１のいずれかとともに化合物を用いて試験する併用研究を含む、複数の異種移植片有効性モデルとの両方によって決定される。本発明の化合物の抗炎症活性は、化合物のマウスにおけるＬＰＳ誘発性血漿サイトカイン産生を阻害する能力を評価するリポ多糖（ＬＰＳ）ＩＶＴＩ（インビボ標的阻害）モデルによって決定される。
【００３４】
本発明の化合物の抗炎症活性を、ＩＶＴＩ（インビボ標的阻害）モデルとＩＶＥＦ（インビボ有効性）モデルの両方で調査する。マウスとラットの両方におけるリポ多糖（ＬＰＳ）ＩＶＴＩモデルを使用して、化合物のＬＰＳ誘発性血漿サイトカイン産生を阻害する能力を評価する。マウスおよびラットにおけるコラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）モデルを使用して、抗炎症効果および抗サイトカイン効果を評価する。マウスおよびラットにおけるオバルブミン（ＯＶＡ）誘発性肺炎症モデルを使用して、化合物のＯＶＡ誘発性気道炎症に及ぼす効果を評価する。マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデル、多発性硬化症の動物モデル、およびラットにおけるジニトロベンゼンスルホン酸（ＤＮＢＳ）誘発性大腸炎モデルも、抗炎症効果および抗サイトカイン効果の評価に使用される。
【００３５】
これらのアッセイから、実施例１および２は、強力なＩＫＫβ阻害剤であり、これらの化合物の少なくとも一方は、抗炎症活性または抗がん活性を有することが実証される。
【００３６】
ＩＫＫβキナーゼアッセイ
ＩＫＫβキナーゼアッセイを利用して、本発明の化合物のＩＫＫβキナーゼの酵素活性に及ぼす効果を評価する。ＩＫＫβキナーゼアッセイは、ＩＫＫβ阻害剤スクリーニングキット（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ．、カタログ番号ＣＢＡ０４４）を使用して、インビトロで行う。すべての反応（５０μＬ）は、１０μＬのキナーゼバッファー（キット構成要素、番号ＪＡ９１３０）、１０μＬのＧＳＴ−ＩＫＢａ基質（ＩＫＫｂ基質、キット構成要素、番号ＪＡ９１２７）、１０μＬのＩＫＫβ（２．５ｎｇ／ウェル、キット構成要素、番号４８１４０４）、１０μＬの試験化合物（ＤＭＳＯ溶液）またはＨ2Ｏ、および１０μＬのＡＴＰ／ＭｇＣｌ2（キット構成要素、番号ＪＡ７９１４）を添加し、次いで３０℃で３０分間インキュベートすることによって開始する。次いで、ウェルの内容物を廃棄する。各ウェルを２００μＬの１×洗浄バッファー（キット構成要素、番号ＪＡ１６１７、１：２０希釈）で３回洗浄する。１００μＬの抗ホスホＩκＢα（Ｓｅｒ32／Ｓｅｒ36）抗体複合体（conjugate）（キット構成要素、番号ＪＡ９１２６）を各ウェルに添加し、室温で１時間インキュベートする。次いで、１×洗浄バッファー（キット構成要素、番号ＪＡ１６１７、１：２０希釈）を２００ｍＬ／ウェルで用いて、ウェルを３回洗浄し、１００μＬのＨＲＰ複合体（キット構成要素、番号ＪＡ７６４３）を各ウェルに添加し、室温で１時間インキュベートする。次いで、ウェルを２００μＬの１×洗浄バッファー（キット構成要素、番号ＪＡ１６１７、１：２０希釈）で３回洗浄し、１００μＬのＴＭＢ基質複合体（キット構成要素、番号ＪＡ１６０８）を各ウェルに添加する。プレートを、変色するまで室温でインキュベートする。次いで、１００μＬのＥＬＩＳＡ停止液（キット構成要素、番号ＪＡ１６１６）を各ウェルに添加する。ＭｕｌｔｉＳｃａｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）で、参照波長を５７０ｎｍとして、データを４５０ｎｍで収集する。１：３段階希釈スキームを利用して、すべての化合物を８つの濃度で試験する（１０μＭ〜０．００３μＭ）。本発明において例証される化合物はすべて、ＩＣ50＜０．１μＭを示す。例えば、実施例１はＩＣ50が０．０１５μＭであり、化合物が強力なＩＫＫβ阻害剤であることが示唆される。
【００３７】
あるいは、Ｚ’−ＬＹＴＥTMアッセイキット−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ５ペプチド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号ＰＶ３１７８）を使用して、ＩＫＫβキナーゼアッセイをインビトロで行う。すべての反応（２０μＬ）は、０．８μＬの試験化合物のＤＭＳＯ溶液、１０μＬのキナーゼ／ペプチド混合物またはホスホ−ペプチド溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号ＰＶ３２１９、１．３３×キナーゼバッファーで希釈）、５μＬの１．３３×キナーゼバッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号ＰＶ３１８９、蒸留水で５倍希釈）またはＡＴＰ溶液（５μＭ）、および４．２μＬの蒸留水を添加することによって開始する。３８４ウェルアッセイプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号３５７５）を混合し、室温で１時間インキュベートする。次いで、１０μＬの展開液［展開試薬Ｂ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号ＰＶ３２９６）／展開バッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号ＰＶ３１２７）＝１：１２８］を各ウェルに添加し、混合し、室温でもう１時間インキュベートする。次いで、１０μＬの停止試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号ＰＶ３０９４）を添加することによって、キナーゼ反応を停止し、Ｗａｌｌａｃ  １４２０  ＶＩＣＴＯＲ3  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（ＰＥＲＫＩＮ  ＥＬＭＥＲTM）を用いて、プレートを４４５ｎｍおよび５２０ｎｍの蛍光で読み取る。アッセイは、ＭＳＲが２．１４である。１：３段階希釈スキームを利用して、化合物を最初に８つの濃度（１０μＭ〜０．００３μＭ）で試験する。実施例２はＩＣ５０が０．０５８μＭである。この結果から、実施例２も強力なＩＫＫβ阻害剤であることが明らかである。
【００３８】
細胞生存率試験
化合物の生物活性をインビトロで評価するために、ＩＫＫβ受容体が細胞生存および増殖において重要な役割を果たす細胞生存率試験を適用する。一旦ＩＫＫβ経路が阻害剤でブロックされると、細胞はアポトーシスまたは死に至る可能性がある。細胞生存率試験は、ＩＫＫ阻害剤で処理した後の細胞生存に関する情報をもたらす。
【００３９】
ＢｘＰＣ−３細胞（ＡＴＣＣ  ＃ＣＲＬ−１６８７；ヒト膵がん細胞系）を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ  ＃１００９９−１４１）を補充したRoswell Park Memorial Institute（ＲＰＭＩ）１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ  ＃Ａ１０４９１−０１）中で増殖させる。Ｓｋｏｖ３−ｌｕｃ細胞（ＡＴＣＣ、ヒト卵巣癌細胞系）を、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ＃１００９９−１４１）を補充したＭｃＣｏｙ’ｓ  ５ａ培地（Ｇｉｂｃｏ＃１６６００）中で増殖させる。化合物試験では、ＢｘＰｃ−３細胞およびＳｋｏｖ３−Ｌｕｃ細胞を、処理より２０時間前に、９６ウェルプレート中、各細胞系について先に指定された対応する培地１００μＬにそれぞれ２０００細胞／ウェルおよび５０００細胞／ウェルで播種する。細胞を、０．５％ＤＭＳＯの存在下に異なる８つの濃度の試験化合物で７２時間処理する。各ウェル中の細胞死は、２０μＬのOne Solution Reagent（ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ  ９６（登録商標）AQueous One Solution Cell Proliferation Assay、Ｐｒｏｍｅｇａ  ＃Ｇ３５８０）の添加によって決定される。３７℃で２〜４時間インキュベートした後、４９２ｎｍにおける光学密度をマイクロプレートリーダーで測定する。細胞生存率の阻害は、試験化合物の非存在下に処理された対照細胞との比較によって決定される。
【００４０】
化合物と他の抗腫瘍剤との併用研究では、ＢｘＰｃ−３細胞およびＳｋｏｖ３−Ｌｕｃ細胞を、処理より２０時間前に、９６ウェルプレート中、各細胞系について先に指定された対応する培地１００μＬにそれぞれ２０００細胞／ウェルおよび５０００細胞／ウェルで播種する。細胞をいくつかの濃度の試験化合物で３０分間処理し、次いで５ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαまたは０．１５〜０．６ｕＭのＶＣＲ（ビンクリスチン硫酸塩）にさらに７２時間曝露する。各ウェル中の細胞死は、２０μＬのOne Solution Reagent（ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ  ９６（登録商標）AQueous One Solution Cell Proliferation Assay、Ｐｒｏｍｅｇａ  ＃Ｇ３５８０）の添加によって決定される。３７℃で２〜４時間インキュベートした後、４９２ｎｍにおける光学密度をマイクロプレートリーダーで測定する。細胞生存率の阻害は、試験化合物の非存在下に処理された対照細胞との比較によって決定される。例えば、実施例１との併用研究の結果を、表２に特別に詳述する。実施例１は、Ｂｘｐｃ−３およびＳｋｏｖ３腫瘍細胞増殖を阻害する際にＴＮＦαまたはＶＣＲと併用すると相乗効果を示す（実施例１の効果は、増強または拡大される。表２を参照されたい。Ｂｘｐｃ−３細胞系において：実施例１（２．５ｕＭ）単独、−１６．４８％阻害；ＴＮＦａ（５ｎｇ／ｍＬ）単独、５．７３％阻害；ＴＮＦα（５ｎｇ／ｍＬ）＋実施例１（２．５μＭ）、８７．７５％阻害、またＢｘｐｃ−３細胞系において、実施例１（２５μＭ）単独、１１．５％阻害；ビンクリスチン（０．１５μＭ）単独、９．４８％阻害；ビンクリスチン（０．１５μＭ）＋実施例１（２５μＭ）、８０．２５％阻害）。このデータから、卵巣がんまたは膵がんの治療において実施例１はＴＮＦαまたはＶＣＲと併用すると治療上有用であることが実証される。
【００４１】
【表１】
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【００４２】
Ｕ８７ＭＧ異種移植片におけるＴＮＦα遺伝子発現の阻害
ＴＮＦαはＩＫＫβシグナル伝達を刺激し、ＴＮＦα遺伝子発現の引き金となる。化合物がインビボでＩＫＫβを標的にしていることを確認するために、化合物を、Ｕ８７ＭＧ（ヒト膠芽腫細胞系）異種移植片においてＴＮＦα誘発性ＴＮＦα遺伝子発現を阻害する能力についてスクリーニングする。３×１０6のＵ８７ＭＧ腫瘍細胞を、雌性Ｂａｌｂ／ｃ胸腺欠損ヌードマウス（６〜８週齢）の右側腹部皮下に移植する。１０〜１２日後、腫瘍容積が２００〜３００ｍｍ3に達したときに、動物を以下の群にランダム化する：対照群（非ＴＮＦα刺激）、モデル群（ＴＮＦα刺激）、および試験化合物処置群：１０、３０、６０および１００ｍｇ／ｋｇ（ＴＮＦα刺激あり）。腫瘍採取より２時間前に、ヌードマウスに試験化合物を経口投与する。腫瘍採取より１時間前に、ＴＮＦα（Ｒ＆Ｄ、Ｃａｔ：２１０−ＴＡ）を８μｇ／ｋｇで静脈内注射する。
【００４３】
ＲＮＥＡＳＹ（登録商標）ミニキット（ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）、Ｃａｔ：７４１２６）を使用して、全ＲＮＡを抽出する。Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ逆転写キット（ＡＢＩ、Ｃａｔ：４３６８８１３）を使用して、ｃＤＮＡを合成する。７５００リアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で、ヒトＧＡＰＤＨ遺伝子（ＡＢＩ  Ｈｓ９９９９９９０５＿ｍ１）およびヒトＴＮＦα遺伝子（ＡＢＩ  Ｈｓ００１７４１２８＿ｍ１）の対応するプライマー／プローブ、ならびにＡＢｇｅｎｅ  Ａｂｓｏｌｕｔｅ  ＱＰＣＲ  ＲＯＸ  ２Ｘマスターミックス（ＡＢ−１１３９／Ｂ）を使用して、リアルタイム定量ＰＣＲを実施する。
【００４４】
ＴＮＦα遺伝子発現をβ−アクチン遺伝子発現に対して正規化する。遺伝子カウント数をＰＣＲ機から読み取る。阻害（％）＝（モデル群のカウント数−処置群のカウント数）／（モデル群のカウント数−対照群のカウント数）×１００％。実施例１を表３に特に詳述する。実施例１は、Ｕ８７ＭＧ異種移植片においてＴＮＦα誘発性ＴＮＦα遺伝子発現を用量依存的に阻害する。
【００４５】
【表２】
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【００４６】
実施例２を表４に特に詳述する。実施例２は、Ｕ８７ＭＧ異種移植片においてＴＮＦα誘発性ＴＮＦα遺伝子発現を用量依存的に阻害する。
【００４７】
【表３】
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【００４８】
実施例１および２は、Ｕ８７ＭＧ異種移植片におけるＴＮＦα誘発性ＴＮＦα遺伝子発現の阻害が用量依存的であることを示す。
【００４９】
ヒト卵巣がんＳＫＯＶ−３ｘ−ＦＦ−ｌｕｃｉ異種移植片における抗腫瘍効果
ＳＫＯＶ−３ｘ−ＦＦ−ｌｕｃｉヒト卵巣がん系細胞系（ＡＴＣＣ）を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を含有するＭｃＣｏｙ’ｓ  ５ａ培地で培養する。雌性Ｂａｌｂ／ｃ  ｎｕ／ｎｕマウス（６〜８週齢）に、２×１０6細胞を含む細胞懸濁液０．２ｍＬを腹腔注射する。細胞移植して６日後、マウスを５群に分ける。試験化合物を６０、９０および１５０ｍｇ／ｋｇの用量で、１日２回（ｂｉｄ）または１日３回（ｔｉｄ）のレジメンで、続けて２１日間、動物に経口投与する。対照群のマウスには、ビヒクルを投与する（１０％アカシア、ｐＨ２．１、bid）。処置の終わりに、すべてのマウスをＣＯ2で安楽死させ、腹膜腔、横隔膜筋、腸間膜、肝臓、脾臓、および卵巣における腫瘍を切り離し、採取し、まとめて、それらの合わせた重量を測定する。腫瘍重量および阻害率（ＩＲ）の結果を評価する。次式を用いて、阻害率を算出する：ＩＲ（％）＝（対照群の腫瘍重量−薬物処置群の腫瘍重量）／対照群の腫瘍重量×１００％。実施例１の結果を、表５に特別に詳述する。実施例１は、ヌードマウスにおいて６０ｍｇ／ｋｇ（t.i.d.）の経口用量で、ＩＲ７６．３１％でヒト卵巣腫瘍の増殖を有意に阻害する（Ｐ＜０．０１、スチューデントのＴ検定）。このデータから、卵巣がんの治療において実施例１は治療上有用であることが実証される。
【００５０】
【表４】
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【００５１】
あるいは、試験化合物を、ヌードマウスにおけるヒト卵巣がんＳＫＯＶ−３ｘ−ＦＦ−ｌｕｃｉの腫瘍増殖に及ぼすその抗腫瘍効果について評価する。ＳＫＯＶ−３ｘ−ＦＦ−ｌｕｃｉ細胞系（ＡＴＣＣ）を、１０％ウシ胎仔血清を含有するＭｃＣｏｙ’ｓ  ５ａ培地で培養する。雌性Ｂａｌｂ／ｃ  ｎｕ／ｎｕマウス（６〜７週齢）に、２×１０6細胞を含む細胞懸濁液０．２ｍＬを腹腔注射する。細胞移植して６日後、マウスをランダム化し、４群に分ける。試験化合物を３０および１００ｍｇ／ｋｇの用量で、１日２回、続けて２３日、動物に経口投与する。対照群のマウスには、ビヒクル（１０％アカシア）を１日２回投与する。陽性対照群のマウスには、シスプラチン（４ｍｇ／ｋｇ）を週１回経尾静脈注射する。処置の終わりに、すべてのマウスをＣＯ2で安楽死させ、腹膜腔、横隔膜筋、腸間膜、肝臓、脾臓、および卵巣における腫瘍小結節を切り離し、採取し、合わせて、重量を測定する。阻害率：ＩＲ（％）＝（対照群の腫瘍重量−薬物処置群の腫瘍重量）／対照群の腫瘍重量×１００％）。実施例２は、用量３０および１００ｍｇ／ｋｇで、それぞれ５９．３％および９３．９％の腫瘍阻害率（ＩＲ）を示す。単剤療法によっても、実施例２は、ＳＫＯＶ−３ｘ−ＦＦ−ｌｕｃｉ腫瘍増殖を阻害する。このデータから、卵巣がんの治療において実施例２は治療上有用であることが実証される。
【００５２】
ヒト結腸がんＨＴ−２９異種移植片における抗腫瘍効果
ＩＫＫβ阻害剤は、ＣＰＴ−１１と併用するとＨＴ−２９腫瘍増殖を抑制することが報告されている（Lagadec P, Griessinger E, Nawrot MP,ら Br. J. Cancer(2008)98, 335−344）。次いで、ＣＰＴ−１１と併用して、ヒト結腸がんＨＴ−２９異種移植片において化合物の抗腫瘍効果を調査する。文献に報告されている方法に本質的に記載されているように、ＣＰＴ−１１を同時投与して／同時投与せず、化合物のヒト結腸がんＨＴ−２９異種移植片におけるその抗腫瘍効果を試験する（Lagadec P, Griessinger E, Nawrot MP,ら Br. J. Cancer(2008)98, 335−344）。
【００５３】
ＨＴ−２９ヒト結腸直腸腺癌細胞系はＡＴＣＣから入手し、１０％ウシ胎仔血清を含有するＭｃＣｏｙ’ｓ  ５ａ培地で培養する。雄性Ｂａｌｂ／ｃ  ｎｕ／ｎｕマウス（６〜７週齢）に、３．０×１０6細胞を含む細胞懸濁液０．１ｍＬを右側腹部皮下に注射する。細胞移植して７日後、マウスを６群に分ける。試験化合物を６０および２０ｍｇ／ｋｇで、１日２回経口投与する。ＣＰＴ−１１を２０ｍｇ／ｋｇで、週２回腹腔投与する。併用処置では、試験化合物を投与して１時間後に、ＣＰＴ−１１を投与する。対照群のマウスには、ビヒクル（１０％アカシア、ｐＨ２．１）を１日２回経口投与し、生理食塩水を週２回腹腔投与する。腫瘍の直交する２つの直径を、デジタルノギスで週３回測定する。処置期間中、腫瘍容積（ＴＶ）を測定し、式：ＴＶ＝長さ×幅2／２により記録する。絶対腫瘍容積についての腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を次式により算出する。式中、Ｖ0は０日目の腫瘍容積であり（群分けの日）、Ｖtは測定日ｔの腫瘍容積である：ＴＧＩ＝［１−（Ｖt−Ｖ0）薬物処置群／（Ｖt−Ｖ0）ヒ゛ヒクル対照群］×１００％。マウスを以下の条件で安楽死させる：１）研究の終わり（６６日目）；２）ＴＶ＞４０００ｍｍ3の個体；３）腫瘍が潰瘍化した個体。実施例１は単剤として、６０または２０ｍｇ／ｋｇで経口投与する（p.o.）と、ＨＴ−２９腫瘍増殖を阻害しないが、ＣＰＴ−１１（２０ｍｇ／ｋｇ、i.p.）と併用すると、これらの投薬量でＣＰＴ−１１の抗腫瘍効果を高める（Ｐ＜０．０５、スチューデントのｔ検定）。
【００５４】
ＣＰＴ−１１と併用すると、実施例１は、ヒト結腸がんＨＴ−２９異種移植片モデルにおいて抗腫瘍効果を示し、実施例１が腫瘍抑制において役割を果たすことが示唆される。このデータから、結腸がんの治療において実施例１はＣＰＴ−１１と併用すると治療上有用であることが実証される。
【００５５】
ビンクリスチン（ＶＣＲ）によるＳＫＯＶ−３ｘ−ＦＦ−ｌｕｃｉ異種移植片における抗腫瘍効果
抗腫瘍スペクトルを拡大するために、さらなる併用試験を探索する。実施例１とＶＣＲのインビトロ相乗効果に基づいて、化合物を、ＶＣＲの存在／非存在下でＳＫＯＶ−３ｘ−ＦＦ−ｌｕｃｉ異種移植片におけるその抗腫瘍効果について試験する。ＳＫＯＶ−３ｘ−ＦＦ−ｌｕｃｉヒト卵巣がん系（ＡＴＣＣ）を、１０％ＦＣＳを含有するＭｃＣｏｙ’ｓ  ５ａ培地で培養する。雌性Ｂａｌｂ／ｃ  ｎｕ／ｎｕマウス（６〜７週齢）に、２×１０6細胞を含む細胞懸濁液０．２ｍＬを腹腔注射する。細胞移植して６日後、マウスを９群に分ける。試験化合物を、６０ｍｇ／ｋｇで１日２回、続けて２０日間、または９０ｍｇ／ｋｇで２日間投与５日間休薬の投与計画で経口投与する。ＶＣＲを１または０．３ｍｇ／ｋｇで、週１回経尾静脈注射によって投与する。併用群では、試験化合物を投与して１時間後に、ＶＣＲを投与する。対照群のマウスには、経口用ビヒクル（１０％アカシア、ｐＨ２．１）を投与し、生理食塩水を腹腔内注射する。処置の終わりに、すべてのマウスをＣＯ2で安楽死させ、腹膜腔、横隔膜筋、腸間膜、肝臓、脾臓、および卵巣における腫瘍を手術用はさみで採取し、計量する。最適以下の用量で、ＶＣＲは腫瘍増殖を３８％阻害し；実施例１は６０ｍｇ／ｋｇおよび９０ｍｇ／ｋｇで、腫瘍増殖をそれぞれ４２％および３６％阻害する。併用群では、腫瘍増殖が７６％および７４％阻害される。単剤療法と比べて、併用と単剤療法との間に統計的有意性が認められる。したがって、実施例１は、ＶＣＲと併用すると相乗効果を示し、実施例１が異なる化学療法剤と併用すると比較的広い抗腫瘍スペクトルを有することが示唆される。このデータから、卵巣がんの治療において実施例１はＶＣＲと併用すると治療上有用であることも特に実証される。
【００５６】
リポ多糖（ＬＰＳ）誘発性マウス血漿サイトカイン産生モデル
インビボで化合物の炎症に及ぼす阻害効果を評価するために、化合物を、ＬＰＳ誘発性血漿サイトカイン産生を阻害する能力についてスクリーニングする。
【００５７】
Ｂａｌｂ／ｃマウス（雌性、体重１８〜２０ｇ）をこれらの実験で用いる。ＬＰＳ（０．４ｍｇ／ｋｇ）で処置されたマウスにおいて、試験化合物の用量依存性、経時的研究および薬物動態学／薬力学的関係を実施する。ＬＰＳを０．４ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射するより１時間前に、マウス８匹／群に試験化合物（１０％アカシア中懸濁液）またはビヒクルを１〜１００ｍｇ／ｋｇで強制経口投与する。ＬＰＳを投与して９０分後、血液試料を、抗凝固用にヘパリンを入れたチューブに回収する。血漿試料を希釈バッファー（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号Ｐａｒｔ  ８９５２０６、キャリブレータ希釈液ＲＤ５Ｚ）で３倍に希釈する。ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号ＭＴＡ００）を使用して、製造業者のプロトコルに基づいてＴＮＦαレベルを測定する。ＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）Ｍ２ｅ  Ｐｌｕｓプレートリーダーを使用して、データを取得し、標準曲線適合により分析する。１０ｍｇ／ｋｇの実施例１は、ＴＮＦαの産生をベースラインの２３４６．２ｐｇ／ｍＬから１４７４．９ｐｇ／ｍＬに至るまで有意に抑制し（ｐ＜０．０１）、阻害は３７．１％である。
【００５８】
あるいは、文献に報告されている方法に従って、化合物を、ラット血漿中におけるＬＰＳ誘発性サイトカイン産生を阻害する能力についてスクリーニングする（Ziegelbauer K, Gantner F, Lukacs NW,ら Br J. Pharmacol. 2005,145(2):178-92）。簡潔に言えば、Ｌｅｗｉｓラット（雄性、体重１４０ｇ〜１８０ｇ）を実験で用いる。ＬＰＳを０．４ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与するより１時間前に、動物（８匹／群）に試験化合物（testing compound）（ソルトール３５％＆ＰＥＧ４００  ６０％＆ＰＧ５％中懸濁液）またはビヒクルを１〜１００ｍｇ／ｋｇで強制経口投与する。ＬＰＳを腹腔内投与して９０分後、ヘパリンで抗凝固処理されたチューブに血液を回収して、Ｒ＆ＤシステムＥＬＩＳＡキットで一般キットプロトコルに基づいてＴＮＦαを測定する。血漿試料を希釈バッファーで１００倍に希釈し、希釈した試料５０μＬを各測定で使用する。プレートをＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）Ｍ２ｅ  Ｐｌｕｓプレートリーダーで読み取り、ＴＮＦαレベルを検量線に基づいて分析する。血漿中薬物レベルをＬＣ−ＭＳ−ＭＳで測定する。実施例２は、血漿中ＴＮＦα産生を用量依存的に阻害し、ＥＤ50値は１９．８±１０．９ｍｇ／ｋｇであり、ＥＣ50値は、４．０４２±１．２８μｇ／ｍＬである。
【００５９】
あるいは、化合物を、マウス血漿中におけるＬＰＳ誘発性サイトカイン産生を阻害する能力についてスクリーニングする。Ｂａｌｂ／ｃマウス（雌性、体重１８〜２０ｇ）を実験で用いる。ＬＰＳ（０．４ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内（i.p.）投与より１時間前に、マウス（８匹／群）に試験化合物（１０％アカシア中懸濁液）またはビヒクルを１〜１００ｍｇ／ｋｇで強制経口投与する。ＬＰＳを投与して９０分後、ヘパリンで抗凝固処理されたチューブを用いて、血液を回収して、一般キットプロトコルに基づいてＴＮＦαレベル（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号ＭＴＡ００）、ＩＬ−６（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号Ｍ６０００Ｂ）およびＩＬ−１β（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号ＭＬＢ００Ｂ）を測定する。希釈したまたは希釈していない血漿試料５０μＬを各測定に使用する。ＴＮＦαの測定には、血漿試料を希釈バッファー（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号Ｐａｒｔ  ８９５２０６、キャリブレータ希釈液ＲＤ５Ｚ）で３倍に希釈する。ＩＬ−６の測定には、血漿試料を希釈バッファー（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号Ｐａｒｔ  ８９５１７５、キャリブレータ希釈液ＲＤ５Ｔ）で２５倍に希釈する。希釈していない血漿試料はＩＬ−１βの測定に使用する。プレートをＳＰＥＣＴＲＭＡＸ（登録商標）Ｍ２ｅ  Ｐｌｕｓプレートリーダーで読み取り、検量線を使用して、データを分析する。実施例２は、血漿中におけるＴＮＦαおよびＩＬ−６産生を用量依存的に阻害し、ＥＤ50は、それぞれ４．８４ｍｇ／ｋｇ（ＥＣ50は２４２０ｎｇ／ｍＬの範囲）および１５．１ｍｇ／ｋｇであるが、ＩＬ−１β産生に及ぼす効果は、１００ｍｇ／ｋｇの用量であっても認められなかった。
【００６０】
実施例１および２はともに、強力なＩＫＫβ阻害剤であることがインビトロで確認され、マウスモデルにおいて、有意なＬＰＳ誘発性サイトカイン放出活性をインビボで示す。
【００６１】
ラットにおけるＬＰＳ誘発性急性関節炎症
ラットにおいて、アジュバント誘発性関節炎の重症度が、ドミナントネガティブ型ＩＫＫβの関節内投与によって有意に低減された（Tak PPら、Arthritis Rheum.(2001)44(8)1897-1907）。ＩＫＫβ阻害剤の機序に関連する関節炎症に及ぼす効果をさらに調査するために、化合物を、文献に報告されている方法によって本質的に記載されているように、ラットにおけるＬＰＳ誘発性関節急性炎症を阻害する能力についてスクリーニングする（Matsukawa A, Yoshimura T, Miyamoto K, Ohkawara S, Yoshinaga M. Lab Invest. 1997, 76(5):629-38）。簡潔に言えば、Ｗｉｓｔａｒラット（雌性、体重１５０ｇ〜１７０ｇ）を実験で用いる。２６ゲージ針を使用して、生理食塩水１０μＬ中ＬＰＳ１０μｇを各ラットの左後膝に関節内（ｉ．ａ．）投与するより１時間前に、動物（８匹／群）に試験化合物［ソルトール３５％（マクロゴール１５ヒドロキシステアレート）＆ＰＥＧ４００  ６０％＆ＰＧ（プロピレングリコール）５％中懸濁液］またはビヒクルを１〜１００ｍｇ／ｋｇで強制経口投与する。対照として、各ラットの右後膝に生理食塩水１０μＬを注射する。ＬＰＳを注射して２時間後、ラットの各足首を生理食塩水１００μＬで洗浄する。滑液を回収し、−８０℃で貯蔵する。血漿を希釈バッファーで２倍に希釈し、希釈した試料５０μＬを使用して、Ｒ＆ＤシステムＥＬＩＳＡキットで一般キットプロトコルに基づいてＴＮＦαレベルを測定する。プレートをＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）Ｍ２ｅ  Ｐｌｕｓプレートリーダーで読み取り、検量線を使用して、ＴＮＦαレベルを分析する。液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ−ＭＳ）で、薬物レベルも測定する。実施例２は、関節ＴＮＦα産生を用量依存的に阻害し、ＥＤ50は２３．４ｍｇ／ｋｇである。データは、ＴＮＦα産生の阻害は、薬物血漿中濃度および関節濃度と相関することも示している。まとめると、これらのデータは、実施例２の化合物が関節炎症を阻害することを示唆する。
【００６２】
マウスにおけるコラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）モデルのプロトコル
以前の研究によって、ＩＫＫβの低分子阻害剤は、マウスＣＩＡモデルにおいて有効であることが示されている（Podolin, PLら, J. Pharm. Exp. Ther., 2005, 312:373-381）。さらに、ドミナントネガティブ型のＩｋＢａを発現するＴ細胞を有するマウスは、ＣＩＡを発症することから保護される（Seetharaman R.ら J. Immunol. 1999:163, 1577-1583）。これらの観察から、ＩＫＫβ阻害剤は関節リウマチを治療する際に有効である可能性が高いということが示唆される。したがって、本発明の化合物は、文献に報告されている方法に本質的に記載されているように、マウスにおけるコラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）モデルで試験される（Rosloniec EF, Cremer M, Kang A, Myers LK. Current Protocols in Immunology. 1996, 15.5.1-15.5.24）。
【００６３】
簡潔に言えば、０日目および２１日目に、ＤＢＡ／１マウスを、完全フロインドアジュバント（ＣＦＡ，Ｓｉｇｍａ，ＵＳ）で乳化された鶏コラーゲンＩＩ（２００μｇ／マウス）で皮内免役して、関節炎を誘発する。関節炎の重症度は、視覚的スコア化システム（visual scoring system）を使用して評価する。そのシステムでは、足をそれぞれ、０から４まで等級付けする（０＝正常、４＝足全体の重度腫脹）。後関節の厚さをマイクロメートルで測定する。試験化合物を予防または治療目的で経口投与する。予防目的の試験では、試験化合物を１日２回、１日目から４２日目まで経口投与する。治療目的の試験では、関節炎の発症後に薬物処置を開始する。関節炎は、通常２回目の免疫化の１週間以内に発症する。マウスを薬物で２１日間処置する。
【００６４】
免疫抑制剤であるレフノミド（Lefunomide）（ＬＥＦ）を、陽性対照として１０ｍｇ／ｋｇ／日、１日１回（ｑ．ｄ．）使用する。いずれの処置も受けていない正常な動物を、陰性対照として用いる。薬物を３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇで、１日２回（bid）、４２日間経口投与する。実施例２では、１０および３０ｍｇ／ｋｇ、１日２回（２０および６０ｍｇ／ｋｇ／日）で、統計的に有意な関節腫脹の阻害および関節炎のスコア低下が認められ、ＥＤ50は４．３ｍｇ／ｋｇである。
【００６５】
このデータから、関節リウマチの治療において実施例２は治療上有用であることが実証される。
【００６６】
ラットコラーゲンＩＩ誘発性関節炎（ＣＩＡ）モデル
マウスＣＩＡモデルで得られた結果を確認するために、文献に報告されている方法に本質的に記載されているように、化合物をラットのＣＩＡモデルでも試験する（Rosloniec EF, Cremer M, Kang A, Myers LK. Current Protocols in Immunology. 1996, 15.5.1-15.5.24）。簡潔に言えば、Ｗｉｓｔａｒラットを、０日目に、不完全フロインドアジュバント（ＩＦＡ，Ｓｉｇｍａ，ＵＳ）中で乳化されたウシコラーゲンＩＩ  ２００μｇで経皮免役し、７日目に、ＩＦＡ（不完全フロインドアジュバント）中で乳化されたコラーゲンＩＩ  １００μｇで経皮免役する。後足の容積を免疫化の前後に測定する。４本の足の疾患発症を関節炎スコアで数量化する。正常群およびモデル群のラットを、ビヒクルまたは薬物（処置群）で処置する。１回目の免疫化の後、処置群のラットに、試験化合物を３、１０、３０ｍｇ／ｋｇ（１日２回（bid））の用量で、１日目から２１日目まで経口投与する。陽性対照としてＬＥＦ群では、ラットにＬＥＦを１０ｍｇ／ｋｇの用量で、１日１回（q.d.）経口投与する。３０ｍｇ／ｋｇの実施例２により、関節炎スコアおよび後足の容積の低下によって示されるように、コラーゲン誘発性関節炎が有意に弱まる。このデータから、関節リウマチの治療において実施例２は治療上有用であることが実証される。
【００６７】
マウスにおけるオバルブミン（ＯＶＡ）誘発性肺炎症
以前の研究によって、ＩＫＫβの低分子阻害剤は、マウスにおいてアレルゲン誘発性気道炎症および反応亢進（hyper-reactivity）を抑制できることが示されている（Birrell MAら, Am J Respir Crit Care Med, 2005, 172:962-971）。この研究の目的は、抗原によって引き起こされる気道炎症のインビボモデルに及ぼすＩＫＫβ阻害剤の効果を調査することである。
【００６８】
本発明の化合物を、文献に報告されている方法に本質的に記載されているように、マウスにおいてＯＶＡ誘発性肺炎症モデルで試験する（Muriel Pichavant, Sho Goya, Eckard Hamelmann, Erwin W. Gelfand, and Dale T. Umetsu. Animal Models of Airway Sensitization. Current Protocols in Immunology.(1999)15.18.1-15.18.13）。簡潔に言えば、１日目および１４日目に、２０μｇのＯＶＡおよび２ｍｇの水酸化アルミニウムを含有する生理食塩水１００μＬを腹腔内注射することによって、体重１８〜２０ｇの雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスを感作させる。２８日目、２９日目および３０日目に、Ｂｕｘｃｏ  Ｍａｓｓ  Ｄｏｓｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍで、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中１％オバルブミン（ＯＶＡ）を２０分間エアロゾル化することによって、マウスに一度にそれぞれチャレンジする。陽性対照として機能する１ｍｇ／ｋｇ（１日１回（qd））の用量のデキサメタゾン、および１、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ（１日１回（qd））の用量の試験化合物を、マウスに１日目から３１日目まで経口投与する。３２日目に、各群の動物に１％ペントバルビタールナトリウムで麻酔をかける。胸腔および腹腔を開いて、血漿を、遠心分離した検体から回収する。次いで、気管を切り離し、横切開する。１８ゲージのカテーテルを気管に挿入することにより、肺を合計１．５ｍＬの無菌ＰＢＳで洗浄し、次いで検体容器に入れる。ＢＡＬ液を遠心することによって、無細胞のＢＡＬ上澄液が得られる。血清およびＢＡＬ上澄液はすべて、使用時まで−８０℃で貯蔵する。ＢＡＬ細胞のサイトスピン調製物について細胞分画（differential cell count）を行って、細胞計数およびサイトカイン決定を行う。ＢＡＬ上澄液を回収した後、レシピエントマウスの肺をひとまとめにして取り出し、（ＰＢＳ中）１０％緩衝ホルマリンの気管内注入により固定する。病理学的研究のため、レシピエントの肺の門周囲部（perihilar region）から、３〜６枚のパラフィン切片を作製し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色し、光学顕微鏡下で検査する。
【００６９】
正常対照と比べて、ＯＶＡは、ＢＡＬＦ中の好酸球（ｐ＜０．０１）およびＩＬ−１３（ｐ＜０．０５）レベルを有意に増加する。陽性対照として機能する、１ｍｇ／ｋｇ（１日１回）の用量のデキサメタゾンにより、好酸球細胞数の増加が完全に阻害され、ＩＬ−１３が７７％低下する。１、３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇ（１日２回）の用量の実施例２により、好酸球細胞数がそれぞれ５８．６％、４９．３％、９４．１％（ｐ＜０．０５）および９０．２％（ｐ＜０．０５）低下する。１０および３０ｍｇ／ｋｇの用量の実施例２により、ＩＬ−１３産生も７３．０％（ｐ＜０．０５）および８５．１％（ｐ＜０．０１）有意に低下する。さらに、ヘマトキシリンおよびエオシンの染色は、１〜３０ｍｇ／ｋｇ群の用量の実施例２および１ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾンで処置したマウスにおける肺炎症の改善を示すものである。
【００７０】
この研究から、喘息の治療において実施例２は治療上有用であることがさらに実証される。
【００７１】
Ｂｒｏｗｎ−Ｎｏｒｗａｙ（ＢＮ）ラットにおけるＯＶＡ誘発性肺炎症
インビボで抗原によって引き起こされる気道炎症に及ぼすＩＫＫβ阻害剤の効果を評価するために、化合物はまた、文献に報告されている方法に本質的に記載されているように、ラットにおけるＯＶＡ誘発性肺炎症モデルで試験する（Yamamoto N, Takeshita K, Shichijo M, Kokubo T, Sato M, Nakashima K, Ishimori M, Nagai H, Li YF, Yura T, Bacon KB. J Pharm. Exp Ther. 2003;306(3):1174-81）。簡潔に言えば、１日目、２日目および３日目に、１ｍｇのＯＶＡおよび１３ｍｇの水酸化アルミニウムを含有する生理食塩水１ｍＬを腹腔内注射することによって、体重２４０〜２６０ｇの雄性ＢＮラットに感作させる。正常対照として機能するラットに、ＯＶＡの代わりに１ｍＬの生理食塩水を投与する。２０日目および２１日目に、試験化合物を０．３、１、３および３０ｍｇ／ｋｇ（１日２回）の用量でラットに経口投与する。２１日目に、Ｂｕｘｃｏ  Ｍａｓｓ  Ｄｏｓｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍで、ラットに１％ＯＶＡを１５分間チャレンジする。２２日目に、ラットに１％ペントバルビタールナトリウムで麻酔をかける。胸腔および腹腔を開く。血漿を、遠心分離した検体から回収する。気管を切り離し、横切開する。１８ゲージのカテーテルを気管に挿入することにより、肺を合計１５ｍＬの無菌ＰＢＳで洗浄し、次いで検体容器に入れる。ＢＡＬ液を遠心することによって、無細胞のＢＡＬ上澄液が得られる。血清およびＢＡＬ上澄液はすべて、使用時まで−８０℃で貯蔵する。ＢＡＬ細胞のサイトスピン調製物について細胞分画を行って、細胞計数およびサイトカイン決定を行う。正常対照と比べて、ＯＶＡは、ＢＡＬ液中の総細胞数および好酸球数を有意に増加する（ｐ＜０．０１）。０．３〜３０ｍｇ／ｋｇの実施例２は、総細胞および好酸球の増加を有意に用量依存的に阻害し（ｐ＜０．０５）、ＥＤ50は０．４９ｍｇ／ｋｇである。この研究から、喘息の治療において実施例２は治療上有用であることがさらに実証される。
【００７２】
マウス実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデル
ＩＫＫ１ではなくＮＥＭＯまたはＩＫＫ２（ＩＫＫβ）のＣＮＳ制限アブレーションによって、多発性硬化症のマウスモデルにおいて疾患の病状が改善した(Nature Immunology, 2006;7(9), 954-61)。これらの研究は、ＩＫＫβ阻害剤がマウスＥＡＥモデルにおいて有効なはずであるということを示唆する。
【００７３】
本発明の化合物を、文献に報告されている方法に本質的に記載されているように、マウスにおけるＰＬＰ−１３９−１５１誘発性ＥＡＥモデルで試験する（Miller SD, Karpus WJ. Experimental autoimmune encephalomyelitis in the mouse. Current Protocols in Immunology. 1996, 15.1.1-15.1.13）。簡潔に言えば、雌性ＳＪＬ／Ｊマウスを、ＣＦＡ（完全フロインドアジュバント）中Ｈ３７Ｒａ（ヒト結核菌株）（３００μｇ  Ｈ３７Ｒａ）で乳化されたＰＬＰ  １３９−１５１（２００μｇ／マウス）で経皮免役する。３、１０、３０ｍｇ／ｋｇの用量の試験化合物、またはビヒクルで１日２回、予防目的の試験の免疫化を行った後１日目から経口投与し、あるいはＥＡＥ再発の日から投与し、治療目的の試験の疾患中継続する。デキサメタゾン（１ｍｇ／ｋｇ、経口投与、１日１回）を陽性対照として使用する。体重およびＥＡＥの臨床的評価を毎日行う。疾患のスコア化は次の基準に従う：０、疾患の明白な徴候なし；１、尻尾挙上不全（limp tail）または両後肢ではなく片後肢衰弱；２、尻尾挙上不全および片後肢衰弱；３、片後肢部分麻痺；４、片後肢完全麻痺；５、瀕死状態または死。ＰＬＰ  １３９−１５１で免疫されたマウスは、ＥＡＥ関連臨床症状を発症し、体重の減少が１１日目から始まる。ＥＡＥスコアは、急速に上昇し、１５日目には最大レベルに達した。ＥＡＥスコアの低下は、約２０日目に起こる。次いで、自然再発がその後に起こる（モデル群）。実施例２を用いた薬物群では、高いＥＡＥ関連臨床スコアが用量依存的に低下する。１０および３０ｍｇ／ｋｇの用量の実施例２により、体重減少が改善する。３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇの用量の実施例２により、ＥＡＥ臨床スコアが低下し、ＥＤ50は３．７ｍｇ／ｋｇである。この研究から、多発性硬化症の治療において実施例２は治療上有用であることが実証される。
【００７４】
ラットにおけるジニトロベンゼンスルホン酸（ＤＮＢＳ）誘発性大腸炎
ＩＫＫβキナーゼは、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の病因にとって重大な意味をもつ様々な炎症促進性タンパク質（pro-inflammatory protein）の発現の調節に関与する。したがって、ＩＫＫβキナーゼは、ＩＢＤを治療するための新規薬剤の開発の有望な標的を表すものである。
【００７５】
化合物を、文献に報告されている方法に本質的に記載されているように、ラットにおけるＤＮＢＳ誘発性大腸炎モデルで試験する（Gut. 2002;50(3):440-1）。簡潔に言えば、Ｗｉｓｔａｒラットを実験で用いる。ＤＮＢＳの結腸内注入による遠位大腸炎の誘発に続いて、試験化合物を３、１０、３０、６０ｍｇ／ｋｇ（１日２回）の用量で、ラットに６日間経口投与する。陰性対照群は、ＤＮＢＳ注入を行わず、ビヒクル単独で処置する。ビヒクル対照群のラットは、ＤＮＢＳによって誘発され、ビヒクルで処置される。陽性対照群では、スルファサラジンを１日３００ｍｇ／ｋｇ、続けて６日間、ラットに経口投与する。最後の処置をしてから２４時間後に、動物を安楽死させる。結腸と体重の比および結腸損傷スコアを各動物について算出する。ラットのビヒクル処置は、臨床症状が漸進的な悪化をもたらし、注入してから７日目に最大の結腸損傷スコア６．１±０．６、および結腸と体重の比−結腸長さ（colon-to-body weight ratio-colon length）が０．９６±０．１０を達成する。このＤＮＢＳ誘発性炎症性腸疾患モデルでは、３、１０、３０および６０ｍｇ／ｋｇの用量の実施例２で処置したラットは、結腸損傷スコアの顕著な低下を示し、結腸と体重と結腸長さの比が３０％を超える低下を示す。３〜６０ｍｇ／ｋｇ／日の実施例２の効果は、３００ｍｇ／ｋｇ／日のスルファサラジンの効果と同様である。
【００７６】
この研究から、炎症性腸疾患の治療において実施例２は治療上有用であることが実証される。
【００７７】
本発明の化合物は、好ましくは種々の経路で投与される医薬組成物として製剤化される。最も好ましくは、このような組成物は、経口投与または静脈内投与向けのものである。このような医薬組成物およびそれを調製するプロセスは、当技術分野においてよく知られている。例えば、REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY（D. Troy,ら編, 第21版, Lippincott Williams & Wilkins, 2005）を参照されたい。
【００７８】
本発明の化合物は、一般に広範な投薬量範囲にわたって有効である。例えば、１日あたりの投薬量は、通常、約０．０５〜約５００ｍｇ／体重１ｋｇの範囲内に入る。場合によっては、上記の範囲の下限を下回る投薬量レベルは、十分なレベルを超える可能性があるが、他の場合に、有害な副作用を全く引き起こすことなく、さらに多い用量を用いることができ、したがって上記の投薬量範囲は、決して本発明の範囲を限定するものではない。実際に投与される化合物の量は、治療されるべき状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物（１つまたは複数）、個々の患者の年齢、体重および応答性、ならびに患者の症状の重症度を含めて、関連する状況を考慮に入れて、医師によって決定されることになることが理解されよう。
本発明は、以下の態様を包含する。
［１］
次式の化合物：
【化９】
0005634596.tif 000013
またはその医薬的に許容される塩。
［２］
２−｛５−クロロ−２−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロペンチルアミノ］ピリミジン−４−イル｝−Ｎ−シクロプロピル−１Ｈ−インドール−４−カルボキサミドである、上記［１］に記載の化合物または塩。
［３］
２−｛５−クロロ−２−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−ヒドロキシシクロペンチルアミノ］ピリミジン−４−イル｝−Ｎ−シクロプロピル−１Ｈ−インドール−４−カルボキサミドである、上記［１］に記載の化合物または塩。
［４］
１つ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と組み合わせて、上記［１］〜［３］のいずれか一項に記載の化合物または塩を含む医薬組成物。
［５］
１つ以上の他の治療剤をさらに含む、上記［４］に記載の医薬組成物。
［６］
前記治療剤がＴＮＦαである、上記［５］に記載の医薬組成物。
［７］
前記治療剤がビンクリスチンである、上記［５］に記載の医薬組成物。
［８］
哺乳動物において、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患、喘息、多発性硬化症、および炎症性腸疾患からなる群から選択される炎症性疾患を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、有効量の上記［１］〜［３］のいずれか一項に記載の化合物または塩を投与する工程を含む、方法。
［９］
前記炎症性疾患が関節リウマチである、上記［８］に記載の方法。
［１０］
前記炎症性疾患が慢性閉塞性肺疾患である、上記［８］に記載の方法。
［１１］
前記炎症性疾患が喘息である、上記［８］に記載の方法。
［１２］
前記炎症性疾患が多発性硬化症である、上記［８］に記載の方法。
［１３］
前記炎症性疾患が炎症性腸疾患である、上記［８］に記載の方法。
［１４］
哺乳動物において、多発性骨髄腫、結腸がん、大細胞肺がん、膠芽腫、膵がん、および卵巣がんからなる群から選択されるがんを治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、有効量の上記［１］〜［３］のいずれか一項に記載の化合物または塩を投与する工程を含む、方法。
［１５］
前記がんが多発性骨髄腫である、上記［１４］に記載の方法。
［１６］
前記がんが結腸がんである、上記［１４］に記載の方法。
［１７］
前記がんが大細胞肺がんである、上記［１４］に記載の方法。
［１８］
前記がんが膠芽腫である、上記［１４］に記載の方法。
［１９］
前記がんが膵がんである、上記［１４］に記載の方法。
［２０］
前記がんが卵巣がんである、上記［１４］に記載の方法。
［２１］
療法で使用するための上記［１］〜［３］のいずれか一項に記載の化合物または塩。
［２２］
炎症性疾患の治療で使用するための上記［１］〜［３］のいずれか一項に記載の化合物または塩。
［２３］
前記炎症性疾患が関節リウマチである、上記［２２］に記載の使用のための化合物または塩。
［２４］
前記炎症性疾患が慢性閉塞性肺疾患である、上記［２２］に記載の使用のための化合物または塩。
［２５］
前記炎症性疾患が喘息である、上記［２２］に記載の使用のための化合物または塩。
［２６］
前記炎症性疾患が多発性硬化症である、上記［２２］に記載の使用のための化合物または塩。
［２７］
前記炎症性疾患が炎症性腸疾患である、上記［２２］に記載の使用のための化合物または塩。
［２８］
がんの治療のための上記［１］〜［３］のいずれか一項に記載の化合物または塩。
［２９］
前記がんが多発性骨髄腫である、上記［２８］に記載の使用のための化合物または塩。
［３０］
前記がんが結腸がんである、上記［２８］に記載の使用のための化合物または塩。
［３１］
前記がんが大細胞肺がんである、上記［２８］に記載の使用のための化合物または塩。
［３２］
前記がんが膠芽腫である、上記［２８］に記載の使用のための化合物または塩。
［３３］
前記がんが膵がんである、上記［２８］に記載の使用のための化合物または塩。
［３４］
前記がんが卵巣がんである、上記［２８］に記載の使用のための化合物または塩。