(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘプタ−ヘテロアリール誘導体であって、下記構造：
−  （Ｒ１により置換されたＨｅｔ−３）−（Ｈｅｔ−２）−（Ｈｅｔ−１）−（Ｈｅｔ−２）−（Ｒ１により置換されたＨｅｔ−３）又は
−  （Ｒ１により置換されたＨｅｔ−３）−（Ｈｅｔ−２）−１，３−フェニレン−ジイル−（Ｈｅｔ−２）−（Ｒ１により置換されたＨｅｔ−３）
［構造中、複素環１（Ｈｅｔ−１）、複素環２（Ｈｅｔ−２）、複素環３（Ｈｅｔ−３）は、それぞれ式（Ｉ）、（II）、及び（III）：
【化１】
0005636369.tif 000025
であり、ここで、
−  Ｙは、Ｏ又はＳであり；
−  Ｈｅｔ−１は、２，６−ピリジン−ジイル又は２，４−ピリミジン−ジイル又は３，５−ピラジン−ジイル又は２，４−（１，３，５−トリアジン）ジイル又は３，５−（１，２，４−トリアジン）ジイル又は２，４−オキサゾリン−ジイル又は２，４−チアゾリン−ジイルを含む群において選択される窒素複素環−ジイル環のクラスであり；
−  Ｈｅｔ−２は、２，５−オキサゾール−ジイル又は２，５−チアゾリン−ジイル又は２，５−チオフェン−ジイル又は２，５−フラン−ジイルを含む群において選択される５員複素環−ジイル環のクラスであり；
−  Ｈｅｔ−３は、２−ピリジル又は２−ピリミジル又は４−ピリミジル又は２−ピラジル又は２−（１，３，５）トリアジル又は３−（１，２，４）トリアジル又は５−（１，２，４）トリアジル又は４−オキサゾリル又は４−チアゾリルから選択される窒素複素環−イル環のクラスであり；
−  Ｒ１は、フェニル、ベンジル、ナフチル、オキサゾリル、及ピリジニルから選択される単環又は二環から選択される］で表される誘導体、そのＮ−オキシド、その薬学的に許容しうる付加塩。
【請求項２】
・  Ｒ１が、オキサゾリル−若しくはピリジニル基であるか、かつ／又は
・  Ｈｅｔ−２が、オキサゾール−ジイル基であるか、かつ／又は
・  Ｈｅｔ−１が、２，６−ピリジン−ジイル、２，６−ピリミジン−ジイル、若しくは２，６−ピラジン−ジイル基である、請求項１に記載の誘導体。
【請求項３】
−２，６−ビス｛２−［６−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−イル］オキサゾール−５−イル｝ピリジン；
−１，３−ビス（２−（６−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−イル）オキサゾール−５−イル）ベンゼン；
−２，６−ビス（２−（２，２’−ビピリジン−６−イル）オキサゾール−５−イル）ピリジン；
−２，６−ビス（２−（６−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−イル）オキサゾール−５−イル）ピラジン；
から選択される、請求項１〜２のいずれか１項に記載の誘導体。
【請求項４】
１個以上の原子が、同一の原子番号を有するが、自然界で通常見られる原子質量又は質量数とは異なる原子質量又は質量数を有する原子により置換されている、請求項１〜３のいずれか１項に記載の誘導体。
【請求項５】
有効量の請求項１〜４のいずれか１項に記載の少なくとも１つの誘導体を薬学的に許容しうる担体と組合せて含む医薬組成物。
【請求項６】
経口又は非経口経路による投与に適切な剤形下の、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
癌又は感染症の処置用薬物を製造するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の誘導体の使用。
【請求項８】
感染症がマラリアである、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のヘプタ−ヘテロアリール誘導体の製造方法であって、
・  Ｘ１−Ａ−Ｘ２を
・  Ｂ−Ｘ３と、又はＸ４−Ｂ−Ｘ３と、
所望のポリヘテロアリール誘導体を与える条件下で反応させること［ここで、
−  Ａは、ジ−又はトリ−又はテトラ−ヘテロアリール−１，４鎖であり、そしてＢは、モノ−又はジ−又はトリ−又はテトラ−ヘテロアリール−１，４−であり（ここで、ヘテロアリール部分は、場合により１個のフェニレン末端部分を含み、
−  ヘテロアリール−１，４は、上記と同義のＨｅｔ−１及び／又はＨｅｔ−２及び／又はＨｅｔ−３の組合せである）、
−  Ｘ１及びＸ２は、同一であるか又は異なって、水素又はハロゲン又はトリフラート基を表し、
−  Ｘ３は、ハロゲン又はハロゲン化亜鉛又はトリアルキルスズ又はボロン酸基を表し、
−  Ｘ４は、カルボキサルデヒド基を表す］を含む方法。
【請求項１０】
ＤＮＡ四重鎖特異的プローブとしての、請求項１〜４のいずれか１項に記載の誘導体の使用。
【請求項１１】
四重鎖ＤＮＡ又は関連核酸構造を検出及び／又は精製するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の誘導体の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、四重鎖ＤＮＡに特異的に結合してこれを安定化する、ポリ−ヘテロアリール誘導体に関する。本発明はまた、このような化合物の薬学的に許容しうる塩、これらを含有する医薬組成物の製造方法、並びに癌及び感染症の処置におけるこのような化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
「ポリヘテロアリール」は、本明細書及び請求の範囲において使用されるとき、場合によりフェニレン部分を包含するか、かつ／又は末端フェニル基を有する、芳香族複素環部分よりなる配列／鎖を意味する。
【０００３】
Ｇ−四重鎖ＤＮＡは、現在のところ高Ｇ含量配列の機能を調節できる構造要素と考えられている。詳細には、多くの証拠から、テロメアにおける、又はｃ−Ｍｙｃ、Ｂｃｌ−２、ＶＥＧＦ、Ｈｉｆ−１ａ、Ｒｅｔ、ｃ−Ｋｉｔ、ＰＤＧＦ−Ａ、ＫＲＡＳ及びｃ−Ｍｙｂ（１）を包含する種々のヒト腫瘍遺伝子中の特異的遺伝子プロモーターにおける、この特有のＤＮＡ構造の形成が、癌細胞増殖を阻害することが示唆されている。
【０００４】
ヒト細胞のテロメアＤＮＡは、配列：5'-TTAGGG-3'の縦列反復を含むが、これはその３’側で、インビトロでＧ−四重鎖中に折り畳まれることが証明されている、一本鎖オーバーハングで終わる。インビボでのこのような四重鎖構造の形成は、テロメアと通常結合した保護タンパク質（シェルタリン（shelterin）複合体）の変位をもたらし、このためテロメア構造が崩壊してゲノムが不安定になると仮定されている。
【０００５】
腫瘍遺伝子プロモーターでは、四重鎖の安定化は、遺伝子発現を調節するタンパク質因子の局所環境を崩壊させることが予想されるが、これはｃ−ｍｙｃに関しては充分な証拠がある（１）。よって四重鎖ＤＮＡ形成を誘導又は安定化することができる化学的介入は、低分子四重鎖結合剤を介して、特に癌細胞においてＤＮＡ関連機能（テロメア伸長、腫瘍遺伝子転写）を制御することを目的として、徹底調査されている。
【０００６】
Ｇ−四重鎖ＤＮＡと相互作用する化合物は、現在これらに傾けられた最近の総説（２〜９）の数に例証されるとおり、文献上非常に多い。しかし、二重鎖ＤＮＡよりも四重鎖ＤＮＡに対して高度の選択性を示す化合物は少なく；更には、これらの化合物の少数のものだけが、抗癌剤として徹底調査されている。このファミリーのリード化合物は、５個のオキサゾール環、２個のメチルオキサゾール環及び１個のチアゾリン環からなる、天然の大環状物質（Streptomyces anulatus 3533-SV4から単離）である、テロメスタチン（telomestatin）である。テロメスタチンは、四重鎖選択的相互作用に関して１つのパラダイムを表し、そしてインビトロで並外れたテロメラーゼ阻害特性を示す（TRAP又は直接アッセイのいずれかにより評価、ＩＣ５０−TRAP＝０．６nM及びＩＣ５０−直接アッセイ＝５８nM）（１０）。更に、テロメスタチンはまた、その細胞効果についても深く調査され、そして種々の腫瘍細胞株において抗増殖及びアポトーシス特性を呈した（１１及び１２）。テロメスタチンは、テロメアの完全性を変え（１３）、テロメアでのＤＮＡ損傷応答を引き起こす（１４）。テロメスタチンは、インビトロでＰＯＴ１脱キャップ形成（uncapping）を誘導し（ＩＣ５０−ＰＯＴ１＝５００nM）、そして腫瘍細胞でテロメアからＧＦＰ−ＰＯＴ１を除去する（１５）。テロメスタチンの厳しい合成経路を考慮して（１６）、興味深い四重鎖相互作用特性を呈する類似体が報告されている（１７、１８及び１９）。
【０００７】
しかし、これらの化合物のどれもが、テロメスタチンの並外れた特性を示していない。更に、テロメスタチン自体を包含するこれらの化合物のどれもが、その蛍光特性について調査されていない。テロメスタチンの化学的不安定性、難水溶性及び特に困難な合成を前提とすると、それの大規模な治療的使用には問題が多い。
【０００８】
このような状況において、本発明者らは、新しい非大環状ポリヘテロアリール誘導体が、二重鎖ＤＮＡよりも四重鎖ＤＮＡに対して優れた選択性を示すこと、そしてこれらの誘導体のそのＤＮＡ標的との結合が、ｉ）その分光学的特性の大きな変化をもたらし、ii）テロメアＧ−オーバーハングからのヒトＰＯＴ１（テロメアの保護１）タンパク質を脱キャップし、iii）ヒト腫瘍細胞株の細胞増殖を阻害することを見い出した。この新しいファミリーの化合物の生理学的液体中での安定性及び可溶性は、治療処置におけるその使用に適合する。更には、本発明者らは、これらの化合物を入手するための効率的かつ独創的な製造法を見い出した。
【０００９】
次に本発明の１つの目的は、新しい製品としてこのような非大環状ポリヘテロアリール誘導体を提供することである。
【００１０】
また、これらの合成方法にも関する。
【００１１】
別の目的により、本発明は、該化合物の四重鎖相互作用特性を利用して、更に四重鎖特異的プローブとしての該誘導体の使用に関する。詳細には、開示化合物の高蛍光量子収率量子を考慮して、このような化合物は、四重鎖ＤＮＡ又は関連核酸構造（特に限定されないが四重鎖ＲＮＡを包含する）の検出及び／又は精製用の蛍光プローブとして使用することができよう。
【００１２】
更に別の目的では、本発明は、活性成分として該誘導体を含有する医薬組成物を提供し、また広範な疾患用の薬物、特に例えば、癌又はマラリアのような感染症に罹患している患者の処置用の薬物の製造における該誘導体の使用に関する。
【００１３】
本発明はまた、癌及び感染症の処置方法であって、有効量の該誘導体をこれを必要とする患者に投与することを含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、種々の条件での本発明の誘導体の吸収スペクトルを表す。
【図２】図２は、種々の滴定の要約を表す。
【図３】図３は、ヒト又はマラリア原虫テロメア配列を模倣するオリゴヌクレオチド及びＦＲＥＴパートナーによるＦＲＥＴ融解試験法の結果を表す。
【図４】図４は、本発明の誘導体を伴うか又は伴わないＧ−四重鎖の蛍光融解の結果を表す。
【図５】図５は、Ｇ−四重鎖単独又は本発明の誘導体の存在下での蛍光融解の結果を表す。
【図６】図６は、種々のＦＲＥＴ融解実験の要約を表す。
【図７】図７は、本発明の誘導体を加えた四重鎖ＤＮＡでの蛍光融解の結果を表す。
【図８】図８は、本発明の誘導体を加えた四重鎖又は短い二重鎖ＤＮＡを用いた蛍光滴定の結果を表す。
【図９】図９は、本発明の誘導体を加えた種々の四重鎖ＤＮＡ構造を用いた蛍光滴定の結果を表す。
【図１０】図１０は、種々の蛍光滴定の要約のグラフ表示である。
【図１１】図１１は、本発明の誘導体を加えた四重鎖ＤＮＡの円偏光二色性の結果を表す。
【図１２】図１２は、本発明の誘導体を加えた四重鎖ＤＮＡの円偏光二色性の結果を表す。
【図１３】図１３は、四重鎖構造の誘導に関する結果を表す。
【図１４】図１４は、本発明の誘導体によるインビトロでのテロメア配列へのＰＯＴ１結合の阻害に関する結果を表す。
【図１５】図１５は、本発明の誘導体による細胞増殖の阻害に関する結果を表す。
【図１６】図１６は、四重鎖ＤＮＡの安定化、及び本発明の誘導体の二重鎖に対する四重鎖ＤＮＡの選択性に関する結果を表す。
【００１５】
本発明のポリヘテロアリール誘導体は、ペンタ−、ヘキサ−、ヘプタ−、オクタ−、ノナ−及びデカ−ヘテロアリール誘導体（以降ペンタ−〜デカ−ヘテロアリールと略す）であって、それぞれ式（Ｉ）、（II）、（III）及び（IV）の複素環１（Ｈｅｔ−１）ａ及び／又は複素環２（Ｈｅｔ−２）ｂ及び／又は複素環３（Ｈｅｔ−３）ｃ及び／又は複素環４（Ｈｅｔ−４）ｄ：
【００１６】
【化１】
0005636369.tif 000002
の組合せ、Ｎ−オキシド、薬学的に許容しうる付加塩［ここで、
−  該組合せは、少なくとも２種の異なる複素環部分を含み、そして場合により式（Ｖ）の（Ａｒｙｌ−５）ｅ部分を含み、
−  ａ、ｂ及びｅは、０〜６の整数であり、ｃ及びｄは、０〜２の整数であり、ａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ＋ｅの合計は、≦１０であり、
−  Ｙは、Ｏ又はＳであり；
−  Ｈｅｔ−１は、２，６−ピリジン−ジイル又は２，４−ピリミジン−ジイル又は３，５−ピラジン−ジイル又は２，４−（１，３，５−トリアジン）ジイル又は３，５−（１，２，４−トリアジン）ジイル又は２，４−オキサゾリン−ジイル又は２，４−チアゾリン−ジイルを含む群において選択される窒素複素環−ジイル環のクラスであり；
−  Ｈｅｔ−２は、２，５−オキサゾリン−ジイル又は２，５−チアゾリン−ジイル又は２，５−チオフェン−ジイル又は２，５−フラン−ジイルを含む群において選択される５員複素環−ジイル環のクラスであり；
−  Ｈｅｔ−３及び／又はＨｅｔ−４は、該ペンタ−、ヘキサ−、ヘプタ−、オクタ−、ノナ−及びデカ−ヘテロアリール誘導体の終点を構成するが、ここで、
−  Ｈｅｔ−３は、２−ピリジル又は２−ピリミジル又は４−ピリミジル又は２−ピラジル又は２−（１，３，５）トリアジル又は３−（１，２，４）トリアジル又は５−（１，２，４）トリアジル又は４−オキサゾリル又は４−チアゾリルから選択される窒素複素環−イル環のクラスであり；
−  Ｈｅｔ−４は、２−オキサゾリル又は５−オキサゾリル又は２−チアゾリル又は５−チアゾリル又は２−チエニル又は２−フラニルから選択される５員複素環−イルのクラスであり；
−  Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、水素；Ｃ１−６アルキル；Ｃ１−４アルキルオキシ；ハロ；ヒドロキシ；ヒドロキシメチル；ニトロ；アミノ；モノ−又はジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ；Ｃ１−４アルキルメチルアミノ；モノ−又はジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ（Ｃ２−４アルキル）アミノメチル；モルホリン−４−イルＣ２−４アルキルオキシ；ピペラジン−１−イルＣ２−４アルキルオキシ；４−Ｃ１−４アルキルピペラジン−１−イル；フェニル、ベンジル、ナフチルから選択される単環又は二環から選択される］を含む誘導体である。
【００１７】
本発明のある実施態様では、ａ、ｂ、ｃ及びｄは、０〜３の整数であり、ｅ＝０であり、そしてａ＋ｂ＋ｃ＋ｄの合計は、≦１０である。
【００１８】
本発明のある実施態様では、１個又は数個の上記部分は、それぞれ独立にＣ１−６アルキル；Ｃ１−４アルキルオキシ；ハロ；ヒドロキシ；ニトロ；アミノ；モノ−又はジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ；Ｃ１−４アルキルメチルアミノ；モルホリン−４−イルＣ２−４アルキルオキシ；ピペラジン−１−イルＣ２−４アルキルオキシ；４−Ｃ１−４アルキルピペラジン−１−イルＣ２−４アルキルオキシ；フェニル、ベンジル、ナフチルから選択される単環式又は二環式環から選択される、１、２又は３個の置換基で置換されている。
【００１９】
本発明は、詳細には少なくとも５個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個又は１０個の複素環部分を含む、上記と同義の誘導体に関する。
【００２０】
別の態様では、本発明はまた、詳細には１個又は２、３若しくは４個のような数個の１，３−フェニレン−ジイル部分を更に含む、上記と同義の誘導体に関する。
【００２１】
本発明の特に好ましい誘導体は、下記構造の１つを有する：
−（Ｒ２により置換されたＨｅｔ−４）−（Ｈｅｔ−１）−（Ｒ２により置換されたＨｅｔ−４）
−（Ｒ１により置換されたＨｅｔ−３）−（Ｈｅｔ−２）−（Ｒ１により置換されたＨｅｔ−３）
−（Ｒ１により置換されたＨｅｔ−３）−（Ｈｅｔ−２）−（Ｈｅｔ−１）−（Ｈｅｔ−２）−（Ｒ１により置換されたＨｅｔ−３）
−（Ｒ１により置換されたＨｅｔ−３）−（Ｈｅｔ−２）−１，３−フェニレン−ジイル−（Ｈｅｔ−２）−（Ｒ１により置換されたＨｅｔ−３）
−（Ｒ１又はＲ２により置換された１，３−フェニレン−ジイル）−（Ｈｅｔ−２）−（Ｈｅｔ−１）−（Ｈｅｔ−２）−（Ｒ１又はＲ２により置換された１，３−フェニレン−ジイル）
−（Ｒ１により置換されたＨｅｔ−３）−（Ｈｅｔ−２）−（Ｈｅｔ−１）−（Ｈｅｔ−２）−（Ｒ１により置換されたＨｅｔ−３）
−（Ｒ１により置換されたＨｅｔ−３）−（Ｈｅｔ−２）−（Ｈｅｔ−１）−（Ｈｅｔ−１）−（Ｈｅｔ−２）−（Ｒ１により置換されたＨｅｔ−３）。
【００２２】
好ましい誘導体において、
・  Ｒ１及びＲ２は、オキサゾリン−若しくはピリジン−ジイル基であるか、かつ／又は
・  Ｈｅｔ−２は、オキサゾリン−ジイル基であるか、かつ／又は
・  Ｈｅｔ−１は、２，６−ピリジン−ジイル、２，６−ピリミジン−ジイル、２，６−ピラジン−ジイル、若しくは１，３−フェニレン−ジイル基である。
【００２３】
有利な群では、誘導体のＧ−四重鎖相互作用特性を考慮して、Ｈｅｔ−１は、２個のＨｅｔ−２に結合している。
【００２４】
該群の好ましい誘導体において、Ｈｅｔ−１は、ピリジン−ジイルであり、そしてＨｅｔ−４は、ピリジル又はピリジル−オキサゾリルにより置換されている、オキサゾリルである。
【００２５】
第２の有利な群では、Ｈｅｔ−２は、２個のＨｅｔ−１に結合している。
【００２６】
好ましい誘導体において、Ｈｅｔ−２は、オキサゾリルであり、そしてＨｅｔ−１は、ピリジル−オキサゾリルである。
【００２７】
本発明の特定の好ましい化合物は、後述の実施例の項にリストされているもの、特に化合物（３）及び（４）である。
【００２８】
上で定義された誘導体の薬学的に許容しうる付加塩は、その酸付加塩及び塩基塩（二塩を包含する）を包含する。
【００２９】
適切な酸付加塩は、非毒性塩を形成する酸から形成される。例は、酢酸、アスパラギン酸、安息香酸、ベシル酸、重炭酸／炭酸、重硫酸／硫酸、ホウ酸、カンシル酸、クエン酸、エジシル酸、エシル酸、ギ酸、フマル酸、グルセプト酸、グルコン酸、グルクロン酸、ヘキサフルオロリン酸、ヒベンズ酸、塩酸／塩化物、臭化水素酸／臭化物、ヨウ化水素酸／ヨウ化物、イセチオン酸、乳酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、メシル酸、メチル硫酸、ナフチル酸、２−ナプシル酸、ニコチン酸、硝酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸／リン酸水素／リン酸二水素、サッカラート、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、トシル酸及びトリフルオロ酢酸塩を包含する。
【００３０】
適切な塩基塩は、非毒性塩を形成する塩基から形成される。例は、アルミニウム、アルギニン、ベンザチン、カルシウム、コリン、ジエチルアミン、ジオラミン、グリシン、リシン、マグネシウム、メグルミン、オラミン、カリウム、ナトリウム、トロメタミン及び亜鉛塩を包含する。
【００３１】
上で定義された誘導体のこのような薬学的に許容しうる塩は、該誘導体及び所望の酸又は塩基の溶液を必要に応じて一緒に混合することにより、容易に調製できる。塩は、溶液から沈殿するため、これを濾過により収集するか、又は溶媒の留去により回収することができる。塩におけるイオン化の程度は、完全にイオン化からほぼイオン化がない状態まで変化しうる。
【００３２】
本発明はまた、上記と同義の同位体標識誘導体、好ましくは薬学的に許容しうる同位体標識誘導体を包含するが、この誘導体では１個以上の原子が、同一の原子番号を有するが、自然界で通常見られる原子質量又は質量数とは異なる原子質量又は質量数を有する原子により置換されている。
【００３３】
本発明の化合物に含めるのに適切な同位体の例は、２Ｈ及び３Ｈのような水素、１１Ｃ、１３Ｃ及び１４Ｃのような炭素、３６Ｃｌのような塩素、１８Ｆのようなフッ素、１２３Ｉ及び１２５Ｉのようなヨウ素、１３Ｎ及び１５Ｎのような窒素、１５Ｏ、１７Ｏ及び１８Ｏのような酸素、３２Ｐのようなリン、並びに３５Ｓのような硫黄の同位体を包含する。
【００３４】
本発明のある種の同位体標識誘導体、例えば、放射性同位体を取り込んだ誘導体は、薬物及び／又は基質の組織分布研究において有用である。放射性同位体のトリチウム、即ち、３Ｈ、及び炭素１４、即ち、１４Ｃは、その取り込みの容易さ及び即時の検出手段を考慮して、この目的に特に有用である。
【００３５】
ジュウテリウム、即ち、２Ｈのような重い同位体での置換では、代謝安定性の高さに起因するある種の治療上の利点、例えば、インビボ半減期の延長又は必要用量の減少が得られ、このため幾つかの状況では好ましい。
【００３６】
１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏ及び１３Ｎのような陽電子放出同位体での置換では、基質の受容体占有率を検査するための陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）研究において有用でありうる。
【００３７】
後述の実施例に示されるように、本発明の誘導体は、四重鎖ＤＮＡに特異的に結合して安定化するが、このため四重鎖特異的プローブとして大いに興味深い。四重鎖ＤＮＡに結合する該誘導体の能力、更にはその選択性は、後述の実施例の項に記述される試験法を包含する、当業者には既知の試験法を用いて測定することができる。
【００３８】
これらはまた、種々の疾患の処置のために大いに価値がある。
【００３９】
よって本発明は、上記誘導体の薬物としての使用に関する。
【００４０】
本発明はまた、有効量の少なくとも１つの上記のような誘導体を薬学的に許容しうる担体と組合せて含む医薬組成物に関する。
【００４１】
本明細書において使用されるとき、「治療有効量」又は「有効量」は、疾患の処置を構成するのに充分な、患者に投与される上記誘導体のような治療剤の量を意味する。
【００４２】
本明細書において使用されるとき、疾患の「処置」という用語は、（１）このような用語が適用される病態又は病状の症状の進行、増悪、再発、播種又は悪化を遅延又は停止させること；（２）このような用語が適用される病態又は病状の症状を軽減させるか又は改善をもたらすこと；及び／あるいは（３）このような用語が適用される病態又は病状を回復させるか又は治癒することを目指した任意の活動のことをいう。
【００４３】
医薬用途の本発明の誘導体は、実際に単独で、又は１種以上の他の本発明の誘導体と組合せて、又は１種以上の他の薬物、特に抗癌薬若しくは抗感染症薬と組合せて（又はその任意の組合せとして）投与することができる。一般に、これらは１種以上の薬学的に許容しうる担体と結び付けた製剤として投与されよう。「担体」という用語は、本明細書において本発明の誘導体以外の任意の成分を記述するために使用される。担体の選択は、大体において、特定の投与様式、溶解度及び安定性に及ぼす担体の効果、並びに投与剤形の性質のような要因に依存する。
【００４４】
上記の誘導体の送達に適切な医薬組成物及びその製造方法は、当業者には容易に明らかとなるだろう。このような組成物及びその製造方法は、例えば、'Remington’s Pharmaceutical Sciences', 19th Edition (Mack Publishing Company, 1995)に見い出すことができる。
【００４５】
本医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル剤、丸剤、粉剤、徐放製剤、液剤、懸濁剤として経口投与に；液剤、懸濁剤又は乳剤として非経口投与に；軟膏剤又はクリーム剤として局所投与に；あるいは坐剤として直腸内投与に適切な剤形にしてもよい。本医薬組成物は、正確な用量の単回投与用に適切な単位投与剤形にしてもよい。
【００４６】
適切な製剤担体は、不活性希釈剤又は増量剤、水及び種々の有機溶媒を包含する。本医薬組成物は、必要に応じて、香味料、結合剤、賦形剤などのような追加の成分を含有してもよい。よって経口投与には、クエン酸のような種々の賦形剤を含有する錠剤を、デンプン、アルギン酸及びある種のケイ酸複合体のような種々の崩壊剤と、並びにショ糖、ゼラチン及びアカシアゴムのような結合剤と一緒にして利用してもよい。更には、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム及びタルクのような滑沢剤は、錠剤化目的にしばしば有用である。同様のタイプの固体組成物はまた、軟及び硬充填ゼラチンカプセル剤にして利用することができる。このために好ましい材料は、ラクトース、即ち乳糖及び高分子量ポリエチレングリコール類を包含する。経口投与に水性懸濁剤又はエリキシル剤が必要であれば、上記誘導体は、種々の甘味剤又は着香剤、着色料又は色素、及び必要に応じて乳化剤又は懸濁剤と、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン、又はこれらの組合せと一緒にして合せることができる。
【００４７】
本明細書において使用されるとき、医薬組成物の「非経口投与」は、対象の組織の物理的突破を特徴とする投与の任意の経路、及び組織での突破による医薬組成物の投与を包含する。よって非経口投与は、特に限定されないが、組成物の注射による、外科的切開を介した組成物の適用による、組織浸透性の非外科的創傷を介した組成物の適用によるなどの医薬組成物の投与を包含する。特に、非経口投与は、特に限定されないが、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、筋肉内、胸骨内注射、及び腎臓透析点滴法を包含するものである。
【００４８】
非経口投与に適切な医薬組成物の製剤は、活性成分を無菌水又は無菌等張性食塩水のような薬学的に許容しうる担体と合わせて含む。このような製剤は、ボーラス投与又は連続投与に適した剤形で調製、包装、又は販売することができる。非経口投与用の製剤は、特に限定されないが、後述のような懸濁剤、液剤、油性又は水性ビヒクル中の乳剤、ペースト、及び埋め込み型徐放性又は生分解性製剤を包含する。このような製剤は更に、特に限定されないが、懸濁剤、安定化剤、又は分散剤を包含する１種以上の追加の成分を含んでいてもよい。非経口投与用製剤の１つの実施態様において、活性成分は、復元組成物の非経口投与に先立って適切なビヒクル（例えば、無菌の発熱性物質除去水）で復元するための、乾燥（即ち、粉末又は顆粒）製剤として提供される。
【００４９】
本発明の医薬組成物は、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化送達系を包含する放出制御製剤のように、本化合物を急速放出に対して保護する担体と共に調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル類、及びポリ乳酸のような、生分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。
【００５０】
治療用途には、組成物中の活性成分の有効な１日量は、一般に、０．０１mg/kg〜５０mg/kg体重、更に好ましくは０．１mg/kg〜１０mg/kg体重であろう。当然ながら、これは使用する誘導体、投与様式、必要な処置、適応疾患、更には患者の生理学的データ（例えば、年齢、サイズ、及び体重）により変化する。この１日総用量は、単回又は分割用量として投与することができる。治療剤の投与に適切な用量及び用法の決定は、当該分野において周知であり、当業者であれば含まれることを理解するであろう。
【００５１】
上記の誘導体及びその医薬組成物は、癌及びマラリアのような感染症を処置するのに特に有用である。
【００５２】
「癌」という用語は、本明細書において使用されるとき、無制限増殖、不死性、転移能、及びある種の特徴的な形態学的状態のような、発癌性細胞に典型的な特徴を持つ細胞の存在のことをいう。この用語は、任意のタイプの悪性腫瘍（原発性又は転移性）のことをいう。
【００５３】
「感染症」という用語は、本明細書において使用されるとき、細菌、寄生虫、酵母、真菌のような微生物による哺乳動物（ヒト又は動物）の感染に起因する疾患のことをいう。ウイルスによる感染もまた包含される。
【００５４】
癌又はマラリアのような感染症の処置用薬物を製造するための上記誘導体及びその医薬組成物の使用は、本発明の範囲の一部になる。
【００５５】
本発明はまた、癌又は感染症の処置方法であって、有効量の上記の誘導体又はその医薬組成物をこれを必要とする患者に投与することを含む方法を包含する。
【００５６】
本発明はまた、上記の誘導体の製造方法を含める。
【００５７】
該方法は、
・  Ｘ１−Ａ−Ｘ２を
・  Ｂ−Ｘ３と、又はＸ４−Ｂ−Ｘ３と、
所望のポリヘテロアリール誘導体を与える条件下で反応させること［ここで、
−  Ａは、ジ−又はトリ−又はテトラ−ヘテロアリール−１，４鎖であり、そしてＢは、（モノ−又はジ−又はトリ−又はテトラ−ヘテロアリール−１，４）−であり（ここで、ヘテロアリール部分は、場合により１個、２個、３個又は４個のＡｒｙｌ−５部分又はＡｒｙｌ−５末端部分を含み、ヘテロアリール−１，４は、上記と同義のＨｅｔ−１及び／又はＨｅｔ−２及び／又はＨｅｔ−３及び／又はＨｅｔ−４の組合せである）、
−  Ｘ１及びＸ２は、同一であるか又は異なって、水素又はハロゲン又はトリフラート基を表し、
−  Ｘ３は、ハロゲン又はハロゲン化亜鉛又はトリアルキルスズ又はボロン酸基を表し、
−  Ｘ４は、カルボキサルデヒド基を表す］を含む。
【００５８】
本発明の他の特徴及び利点は、図１〜図１６を参照する以下の実施例に与えられるが、ここで、
−  図１Ａ〜図１Ｄは、種々の条件での本発明の誘導体の吸収スペクトルを表し；
−  図２、種々の滴定の要約；
−  図３Ａ〜図３Ｃ、ヒト又はマラリア原虫テロメア配列を模倣するオリゴヌクレオチド及びＦＲＥＴパートナーによるＦＲＥＴ融解試験法の結果；
−  図４Ａ〜図４ｂ及び図５、本発明の誘導体を伴うか又は伴わないＧ−四重鎖の蛍光融解の結果；
−  図５、Ｇ−四重鎖単独又は本発明の誘導体の存在下での蛍光融解の結果（過剰の四重鎖ＤＮＡ競合物質を伴うか又は伴わない）；
−  図６、種々のＦＲＥＴ融解実験の要約；
−  図７Ａ及び図７Ｂ、本発明の誘導体を加えた四重鎖ＤＮＡでの蛍光融解の結果；
−  図８、本発明の誘導体を加えた四重鎖又は短い二重鎖ＤＮＡを用いた蛍光滴定の結果；
−  図９、本発明の誘導体を加えた種々の四重鎖ＤＮＡ構造を用いた蛍光滴定の結果；
−  図１０、種々の蛍光滴定の要約のグラフ表示；
−  図１１Ａ及び図１１ｂ及び図１２、本発明の誘導体を加えた四重鎖ＤＮＡの円偏光二色性の結果；
−  図１３、四重鎖構造の誘導に関する結果；
−  図１４、本発明の誘導体によるインビトロでのテロメア配列へのＰＯＴ１結合の阻害に関する結果；
−  図１５、本発明の誘導体による細胞増殖の阻害に関する結果；並びに
−  図１６、四重鎖ＤＮＡの安定化、及び本発明の誘導体の二重鎖に対する四重鎖ＤＮＡの選択性に関する結果。
【００５９】
Ｉ  −  ポリ−ヘテロアリール誘導体の合成
以下の実施例は、本発明を説明するものである。本化合物はまた、当業者が既知の他の製造法によっても得られる。出発物質として使用される、２，６−ピリジンジカルボキサルデヒド、６−ブロモピリジン−２−カルバルデヒド、イソシアン化ｐ−トルエンスルホニルメチル（ＴｏｓＭＩＣ）、２−ピリジル亜鉛ブロミド、１，３−ベンゼンジカルボキサルデヒド、６−ブロモピリジン−２−カルボキサルデヒド、３−ブロモベンズアルデヒド及び５−ブロモ−２−フルアルデヒドは、市販の製品である。
【００６０】
１．：実施例１：  ２，６−ビス［２−（ピリジン−２−イル）オキサゾール−５−イル］ピリジン（化合物（１））
【００６１】
【化２】
0005636369.tif 000003
【００６２】
１．１．：  ２，６−ビス（オキサゾール−５−イル）ピリジン（中間体（１））
【００６３】
【化３】
0005636369.tif 000004
メタノール１００mL中の２，６−ピリジンジカルボキサルデヒド（４．０ｇ；２９．２mmol）、ＴｏｓＭＩＣ（１１．４ｇ；５８．３mmol）及び炭酸カリウム（１６．３ｇ；１１７．８mmol）を３時間加熱還流した。真空で溶媒を留去して、残渣を食塩水中に注ぎ入れ、ジクロロメタン（４×１５０mL）で抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥して、真空で濃縮した。残渣は、ジクロロメタン：エタノール（９５：５）を溶離液とするシリカゲルカラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を黄色の固体として得た（５．６ｇ、９０％）、融点＝１９０〜１９１℃；1H NMR (300 MHz, CDCl3) 7.56 (d ; 2H ; J= 8.0) ; 7.74 (s ; 2H ) ; 7.80 (t ; 1H ; J= 8.0 Hz) ; 7.96 (s ; 2H) ; 13C NMR (75 MHz, CDCl3) 118.7, 125.7, 138.0, 147.4, 150.8, 151.0; SM m/z 214.1 (M+1) ; 元素分析、C11H7N3O2の理論値: C, 91.97 ; H, 3.31 ; N, 19.71. 実測値: C, 61.51, H, 3.43, 19.48.
【００６４】
１．２．：  ２，６−ビス−（２−ヨードオキサゾール−５−イル）ピリジン（中間体（２））
【００６５】
【化４】
0005636369.tif 000005
アルゴン雰囲気下、中間体（１）（０．１ｇ；０．５mmol）及びＴＭＥＤＡ（０．２mL；１．０mmol）を無水ＴＨＦ  ５mLに溶解して、−７８℃で冷却した。ＴＨＦ中のＬｉＨＭＤＳ  １Ｍの溶液（０．５mL；０．５mmol）を滴下により加え、−７８℃で３０分間及び−４０℃で１時間撹拌した。この混合物を再度−７８℃で冷却して、１，２−ジヨードエタン（０．５ｇ；１．９mmol）を加えた。室温で一晩撹拌後、この混合物をチオ硫酸ナトリウム溶液中に注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した（３×１０mL）。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥して、真空で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ジクロロメタン：エタノール、９５：５）により精製して、中間体（２）をベージュ色の固体として得た（１１７mg、５０％）、1H NMR (300 MHz, CDCl3) 7.58 (d ; 2H ; J= 8 Hz) ; 7.69 (s ; 2H) ; 7.85 (t ; 1H ; J= 8 Hz ) ; 13C NMR (75 MHz, CDCl3) 119.5, 129.7, 138.7, 147.0, 157.2, 151.5; SM m/z 465.8 (M+1), 487.8 (M+23).
【００６６】
１．３．：  ２，６−ビス［２−（ピリジン−２−イル）オキサゾール−５−イル］ピリジン（化合物（１））
方法１：  中間体（２）（６５mg；０．１４mmol）、２−ピリジル亜鉛ブロミド（１．２mL；０．６０mmol）及びＰｄ（ＰＰｈ３）４（１２mg；０．０１mmol）の混合物を無水ＴＨＦ  ２mL中で４時間加熱還流した。水を加えて、この混合物を酢酸エチルで抽出した（３×１０mL）。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過して真空で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ジクロロメタン：エタノール、９５：５）により精製して、目的化合物（１）をベージュ色の固体として得た（１３mg、２５％）、融点＝２４２〜２４５℃；1H NMR (300 MHz, CDCl3) 7.40 (m ; 2H) ; 7.83-7.88 (m ; 5H) ; 7.97 (s ; 2H) ; 8.23 (d ; 2H ; J= 7.9 Hz) ; 8.77 (d ; 2H ; J= 4.5 Hz) ; 13C NMR (75 MHz, CDCl3) 119.7, 123.3, 125.6, 128.6, 137.8, 138.5, 146.6, 147.9, 150.9,152.3, 161.5; SM m/z 368.0 (M+1), 390.0 (M+23).
【００６７】
方法２：  中間体（１）（０．１ｇ；０．５mmol）、２−ブロモピリジン（９１μL；０．９mmol）、二酢酸パラジウム（１１mg；０．０５mmol；１０mol%）、ＰＣｙ３．ＨＢＦ４（３５mg；０．１mmol；２０mol%）、ヨウ化銅（Ｉ）（０．１８ｇ；０．９mmol）、炭酸セシウム（０．６１mg；１．８８mmol）及び無水トルエン１．３mLの混合物をマイクロ波照射条件（１３０℃、１５０Ｗ）下に４時間置いた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ジクロロメタン：エタノール、９５：５）により精製して、化合物（１）（８mg、３３％）を得たが、これは上の方法１に記述されたものと同一である。
【００６８】
２．実施例２：  ２，５−ビス−［６−（オキサゾール−５−イル）］ピリジン−２−イルオキサゾール（化合物（２））
【００６９】
【化５】
0005636369.tif 000006
【００７０】
２．１：  ５−（２−ブロモピリジン−２−イル）オキサゾール（中間体（３））
【００７１】
【化６】
0005636369.tif 000007
６−ブロモピリジン−２−カルバルデヒド（４．０ｇ；２１．５mmol）、ＴｏｓＭＩＣ（４．２ｇ；２１．５mmol）及び炭酸カリウム（６．０ｇ；４３．４mmol）をメタノール７５mL中で３時間加熱還流した。真空で溶媒を留去して、残渣を食塩水中に注ぎ入れ、ジクロロメタンで抽出した（４×１００mL）。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥して真空で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ジクロロメタン：エタノール、９５：５）により精製して、中間体（３）を黄色の固体として得た（２．９ｇ、６０％）；融点＝９０〜９１℃；1H NMR (300 MHz, CDCl3) 7.38 (dd ; 1H ; J= 3.5 & 5.3 Hz) ; 7.57 (m ; 2H ) ; 7.73 (s ; 1H) ; 7.97 (s ; 1H) ; 13C NMR (75 MHz, CDCl3) 118.1, 126.4, 127.6, 139.3, 142.4, 148.0, 151.6 ; SM m/z 225.0 and 227.1 (M+1).
【００７２】
２．２：  ２，５−ビス−［６−（オキサゾール−５−イル）］ピリジン−２−イルオキサゾール（化合物（２））
中間体（１）（０．１０ｇ；０．５mmol）、中間体（３）（０．１０ｇ；０．５mmol）、二酢酸パラジウム（１１mg；０．０５mmol；１０mol%）、ＰＣｙ３．ＨＢＦ４（３５mg；０．０９mmol；２０mol%）、ヨウ化銅（Ｉ）（０．１ｇ；０．５mmol）、炭酸セシウム（０．３mg；０．９mmol）及び無水トルエン１．３mLの混合物をマイクロ波照射条件（１３０℃、１５０Ｗ）下に６時間置いた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ジクロロメタン：エタノール、９５：５）により精製して、目的化合物（２）をベージュ色の固体として得た（６０mg、３６％）；1H NMR (300 MHz, CDCl3) 7.70 (d ; 2H ; J= 7.5 Hz) ; 7.80 (d ; 1H; J= 7.5Hz) ; 7.85 (d ; 2H ; J= 7.5 Hz ) ; 7.90 (s ; 1H) ; 7.93 (d; 2H ; J= 5 Hz) ; 8.00 (s ; 1H) ; 8.04 (d ; 1H ; J= 5 Hz) ; 8.20 (d ; 1H ; J= 7.5 Hz); SM m/z358.1 (M+1).
【００７３】
３．実施例３：  ２，６−ビス｛２−［６−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−イル］オキサゾール−５−イル｝ピリジン（化合物（３））
【００７４】
【化７】
0005636369.tif 000008
中間体（１）（０．１０ｇ；０．５mmol）、中間体（３）（０．２１ｇ；０．９mmol）、二酢酸パラジウム（１１mg；０．０５mmol；１０mol%）、ＰＣｙ３．ＨＢＦ４（３５mg；０．０９mmol；２０mol%）、ヨウ化銅（Ｉ）（０．１８ｇ；０．９mmol）、炭酸セシウム（０．６１mg；１．９mmol）及び無水トルエン１．３mLの混合物をマイクロ波照射条件（１３０℃、１５０Ｗ）下に６時間置いた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ジクロロメタン：エタノール、９５：５）により精製して、目的化合物（３）をベージュ色の固体として得た（５２mg、２２％）；融点＞２５０℃；1H NMR (300 MHz, CDCl3) 7.65 (m; 1H) ; 7.75 (m; 2H);  7.90-8.05 (m; 9H); 8.10 (s; 1H); 8.20 (m; 2H); SM m/z 524.2 (M+23).
【００７５】
４．実施例４：  １，３−ビス（２−（６−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−イル）オキサゾール−５−イル）ベンゼン（化合物（４））
【００７６】
【化８】
0005636369.tif 000009
【００７７】
４．１：  ６，６’−（５，５’−（１，３−フェニレン）ビス（オキサゾール−５，２−ジイル））ジピリジン−２−カルバルデヒド（中間体（４））
【００７８】
【化９】
0005636369.tif 000010
Sambavisarao及びVrajesh（Synthesis, 2007, 3653）に報告されたように得られた１，３−ジ（オキサゾール−５−イル）ベンゼン（０．２１ｇ；１mmol）、６−ブロモピリジン−２−カルボキサルデヒド（０．２４ｇ；１．３mmol）、二酢酸パラジウム（６４mg；０．２８mmol、２８mol%）、ＰＣｙ３．ＨＢＦ４（６２mg；０．１７mmol；１７mol%）、ヨウ化銅（Ｉ）（０．４３ｇ；２．３mmol）、炭酸セシウム（１．４ｇ；４．３mmol）及び無水ジオキサン４mLの混合物を封管中で１３０℃で２時間加熱した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ジクロロメタン：エタノール、９５：５）により精製して、中間体（４）をベージュ色の固体として得た（８３mg、３０％）；1H NMR (300 MHz, CDCl3) 10.27 (s ; 1H); 8.45-8.40 (m ; 1H) ; 8.20 (s ; 0.5H) ; 8.10-8.05 (m ; 2H) ; 7.83 (dd ; 1H; J= 7.8 & 1.6 Hz) ; 7.71 (s; 1H) ; 7.61 (t ; 0.5H; J= 7.93 Hz); SM m/z 423.1 (M+1).
【００７９】
４．２：  １，３−ビス（２−（６−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−イル）オキサゾール−５−イル）ベンゼン（化合物（４））
無水エタノール８mL中のジカルボキサルデヒド中間体（４）（７５mg；０．１８mmol）、ＴｏｓＭＩＣ（８６mg；０．４４mmol）及び炭酸カリウム（１２６mg；０．９mmol）の混合物を２時間加熱還流した。真空で溶媒を留去して、残渣を食塩水中に注ぎ入れ、ジクロロメタンで抽出した（３×５０mL）。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥して真空で濃縮した。残渣は、ジクロロメタン：エタノール（９５：５）を溶離液とするシリカゲルカラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物をオフホワイト色の固体として得た（５５mg、６２％）、融点＞２５０℃；1H NMR (300 MHz, CDCl3) 8.22 (br s ; 0.5H) ; 8.17 (d ; 1H; J= 7.8 Hz) ; 8.03 (s; 1H) ; 7.99 (t ; 1H, J= 7.8 Hz), 7.93 (s; 1H) ; 7.85-7.76 (m; 2H); 7.68 (s; 1H); 7.64-7.57 (m; 0.5H); SM m/z 501.1 (M+1) ; 元素分析、C28H16N6O4. 0.75 H2Oの理論値: C, 65.43 ; H, 3.40 ; N, 16.36, 実測値: C, 65.92, H, 3.37, 15.92.
【００８０】
５．実施例５：  ２，６−ビス（２−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）オキサゾール−５−イル）ピリジン（化合物（５））
【００８１】
【化１０】
0005636369.tif 000011
【００８２】
５．１：  ３，３’−（５，５’−（ピリジン−２，６−ジイル）ビス（オキサゾール−５，２−ジイル））ジベンズアルデヒド（中間体（５））
【００８３】
【化１１】
0005636369.tif 000012
中間体（１）（０．１８ｇ；０．８４mmol）、３−ブロモベンズアルデヒド（０．５０ｇ；２．７mmol）、二酢酸パラジウム（８０mg；０．３６mmol；４３mol%）、ＰＣｙ３．ＨＢＦ４（６８mg；０．１８mmol；２０mol%）、ヨウ化銅（Ｉ）（０．３７ｇ；１．９mmol）、炭酸セシウム（１．２ｇ；３．７mmol）及び無水ジオキサン３．５mLの混合物を封管中で１３０℃で１８時間加熱した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ジクロロメタン：エタノール、９８：２）により精製して、中間体（５）を黄色の固体として得た（５０mg、１４％）；1H NMR (300 MHz, CDCl3) 10.15 (s ; 1H); 8.66 (s ; 1H) ; 8.45 (d ; 1H; J= 7.7 Hz) ; 8.04 (d; 1H; J= 7.6 Hz) ; 7.98-7.92 (m ; 1.5H) ; 7.76 (d ; 1H; J= 7.9 Hz) ; 7.72 (t ; 1H; J= 7.7 Hz); SM m/z 444.0 (M+Na); 元素分析、C25H15N3O4. 0.25 H2Oの理論値: C, 70.50 ; H, 3.64 ; N, 9.87, 実測値: C, 70.11, H, 3.51, 9.75.
【００８４】
５．２：  ２，６−ビス（２−（３−（オキサゾール−５−イル）フェニル）オキサゾール−５−イル）ピリジン（化合物（５））
無水エタノール６mL中のジカルボキサルデヒド中間体（５）（５０mg；０．１２mmol）、ＴｏｓＭＩＣ（５０mg；０．２５mmol）及び炭酸カリウム（７０mg；０．５mmol）の混合物を２時間加熱還流した。真空で溶媒を留去して、残渣を食塩水中に注ぎ入れ、ジクロロメタンで抽出した（３×５０mL）。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥して、真空で濃縮した。残渣は、ジクロロメタン：エタノール（９４：６）を溶離液とするシリカゲルカラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を淡黄色の固体として得た（４０mg；６７％）、融点２５４〜２５６℃；1H NMR (300 MHz, CDCl3) 8.45 (s ; 1H) ; 8.14 (d ; 1H; J= 7.9 Hz) ; 7.99 (s; 1H) ; 7.96-7.88 (m ; 1.5H), 7.79 (d ; 1H; J= 7.9 Hz); 7.74 (d ; 1H; J= 7.9 Hz); 7.60 (t ; 1H; J= 7.9 Hz); 7.51 (s; 1H); SM m/z 500.2 (M+1) ; 元素分析、C29H17N5O4. H2Oの理論値: C, 67.31 ; H, 3.67 ; N, 13.53, 実測値: C, 67.53, H, 3.82, 13.29.
【００８５】
６．実施例６：  ２，６−ビス（２−（５−（オキサゾール−５−イル）フラン−２−イル）オキサゾール−５−イル）ピリジン（化合物（６））
【００８６】
【化１２】
0005636369.tif 000013
【００８７】
６．１：  ５，５’−（５，５’−（ピリジン−２，６−ジイル）ビス（オキサゾール−５，２−ジイル））ジフラン−２−カルバルデヒド（中間体（６））
【００８８】
【化１３】
0005636369.tif 000014
中間体（１）（０．２１ｇ；１mmol）、５−ブロモ−２−フルアルデヒド（０．２１ｇ；１．２mmol）、二酢酸パラジウム（８３mg；０．３７mmol；３７mol%）、ＰＣｙ３．ＨＢＦ４（７２mg；０．２mmol；２０mol%）、ヨウ化銅（Ｉ）（０．４６ｇ；２．４mmol）、炭酸セシウム（１．４ｇ；４．３mmol）及び無水ジオキサン４mLの混合物を封管中で１３０℃で２時間加熱した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ジクロロメタン：エタノール、９８：２）により精製して、中間体（６）を黄色の固体として得た（６２mg、２６％）；1H NMR (300 MHz, CDCl3) 9.83 (s ; 1H); 7.97 (s ; 1H) ; 7.95-7.90 (m ; 0.5H) ; 7.79 (d; 1H; J= 8.2 Hz) ; 7.39 (d; 1H; J= 3.8 Hz) ; 7.31 (d ; 1H; J= 3.8 Hz); SM m/z 402.1 (M+1);元素分析、C21H11N3O6. 1.5 H2Oの理論値: C, 58.87 ; H, 3.27 ; N, 9.81, 実測値: C, 58.77, H, 2.85, 9.83.
【００８９】
６．２：  ２，６−ビス（２−（５−（オキサゾール−５−イル）フラン−２−イル）オキサゾール−５−イル）ピリジン（化合物（６））
無水エタノール３mL中のジカルボキサルデヒド中間体（６）（３０mg；０．０７mmol）、ＴｏｓＭＩＣ（４３mg；０．２２mmol）及び炭酸カリウム（６３mg；０．４５mmol）の混合物を２時間加熱還流した。真空で溶媒を留去して、残渣を食塩水中に注ぎ入れ、ジクロロメタンで抽出した（３×５０mL）。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥して、真空で濃縮した。残渣は、ジクロロメタン：エタノール（９６：４）を溶離液とするシリカゲルカラムのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を淡黄色の固体として得た（１３mg；３６％）、融点＞２５０℃；1H NMR (300 MHz, CDCl3) 7.95-7.91 (m ; 2.5H) ; 7.71 (d ; 1H; J= 8.1 Hz) ; 7.53 (s; 1H) ; 7.34-7.29 (m ; 2H); SM m/z 480.1 (M+1).
【００９０】
７．：  ２，６−ビス（２−（２，２’−ビピリジン−６−イル）オキサゾール−５−イル）ピリジン（化合物（７））
【００９１】
【化１４】
0005636369.tif 000015
中間体（１）から出発し、そして中間体（３）の代わりに６−ブロモ−２，２’−ビピリジン（U. Lehmann and A.D. Schluter, Eur. J. Org. Chem. 2000, 3483-3487）を用いて、化合物（３）の合成に関して上記されたプロトコールを適用することにより、標題化合物（７）を得た。
【００９２】
８．：  ２，６−ビス（２−（６−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−イル）オキサゾール−５−イル）ピラジン（化合物（８））
【００９３】
【化１５】
0005636369.tif 000016
【００９４】
８．１：  ２，６−ジ（オキサゾール−５−イル）ピラジン（中間体（７））
【００９５】
【化１６】
0005636369.tif 000017
２，６−ピリジンジカルボキサルデヒドの代わりにピラジン−２，６−ジカルバルデヒド（H. Schumann and H.-K. Luo,  Zeitschrift fuer Naturforschung, B : Chemical Sciences, 2005, 60(1), 22-24）から出発して、中間体（１）の合成に関して上記されたプロトコールを適用することにより、標題中間体（７）を得た。
【００９６】
８．２：  ６，６’−（５，５’−（ピラジン−２，６−ジイル）ビス（オキサゾール−５，２−ジイル））ジピリジン−２−カルバルデヒド（中間体（８））
【００９７】
【化１７】
0005636369.tif 000018
中間体（１）及び３−ブロモベンズアルデヒドの代わりに中間体（７）及び６−ブロモピリジン−２−カルバルデヒドから出発して、中間体（５）の合成に関して上記されたプロトコールを適用することにより、標題中間体（８）を得た。
【００９８】
８．３：  ２，６−ビス（２−（６−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−イル）オキサゾール−５−イル）ピラジン（化合物（８））
中間体（５）の代わりに中間体（８）から出発して、化合物（５）の合成に関して上記されたプロトコールを適用することにより、標題化合物（８）を得た。
【００９９】
９．：  ６，６’−ビス（２−（６−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−イル）オキサゾール−５−イル）−２，２’−ビピリジン（化合物（９））
【０１００】
【化１８】
0005636369.tif 000019
【０１０１】
９．１：  ６，６’−ジ（オキサゾール−５−イル）−２，２’−ビピリジン（中間体（１０））
【０１０２】
【化１９】
0005636369.tif 000020
２，６−ピリジンジカルボキサルデヒドの代わりに２，２’−ビピリジン−６，６’−ジカルバルデヒド（G. R. Newkome and H.-W. Lee; J. Am. Chem. Soc. 1983, 105(18), 5956-5957）から出発して、中間体（１）の合成に関して上記されたプロトコールを適用することにより、標題中間体（１０）を得た。
【０１０３】
９．２：  ６，６’−（５，５’−（２，２’−ビピリジン−６，６’−ジイル）ビス（オキサゾール−５，２−ジイル））ジピリジン−２−カルバルデヒド（中間体（１１））
【０１０４】
【化２０】
0005636369.tif 000021
中間体（１）及び３−ブロモベンズアルデヒドの代わりに中間体（１０）及び６−ブロモピリジン−２−カルバルデヒドから出発して、中間体（５）の合成に関して上記されたプロトコールを適用することにより、標題中間体（１１）を得た。
【０１０５】
９．３：  ６，６’−ビス（２−（６−（オキサゾール−５−イル）ピリジン−２−イル）オキサゾール−５−イル）−２，２’−ビピリジン（化合物（９））
中間体（５）の代わりに中間体（１１）から出発して、化合物（５）の合成に関して上記されたプロトコールを適用することにより、標題化合物（９）を得た。
【０１０６】
II  −  生物物理学的方法及びデータ：
試験II−１：  可溶性を調査するための紫外可視分光光度法
ａ）  紫外可視滴定：
本試験において詳述されるピリジン系ポリ芳香族複素環化合物の紫外可視特性の試験によって、種々の条件でその可溶性の測定が可能になる（ＤＭＳＯ、Ｈ２Ｏ及びカコジル酸緩衝液（１０mMカコジル酸ナトリウム＋１００mM  ＮａＣｌ（Ｃａｃｏ．Ｎａ用）又はＫＣｌ（Ｃａｃｏ．Ｋ用））：このための最も簡便な方法は、種々の濃度（０〜３２μM）で化合物（３）の吸収スペクトルを測定することである；こうして化合物（３）の可溶性は、化合物（３）の濃度の関数としての所定の波長（ここでは３３８nm（Ａ３３８））でのその吸光度の報告とBeer-Lambertの法則の適用とによって評価する。結果は、図１に与えられる。
【０１０７】
ｂ）  要約
種々の滴定は、図２に要約する。
これらのデータは、化合物（３）が、
−  ここで使用した全ての溶媒系に可溶性であること（ＤＭＳＯ、Ｈ２Ｏ及びカコジル酸水性緩衝液（高Ｎａ＋又は高Ｋ＋の両方）；
−  ここで使用した全ての溶媒中で、０〜３２μM濃度範囲内で自己凝集しないこと；
を示した。
【０１０８】
試験II−２：  四重鎖ＤＮＡの安定化及び二重鎖に対する四重鎖ＤＮＡの選択性
四重鎖構造を持つ化合物の安定化、ひいては相互作用は、二重鎖に対する四重鎖ＤＮＡ選択性、更には四重鎖内選択性の測定をも可能にするバージョンで、ＦＲＥＴ融解試験法によりモニターする（１７）。
【０１０９】
ＦＲＥＴ試験法は、ヒト又はマラリア原虫テロメア配列を模倣するオリゴヌクレオチドで実施し、そしてそれぞれの先端にＦＲＥＴパートナーを取り付ける：Ｆ２１Ｔ（FAM-G3[T2AG3]3-Tamra）、ＦＰｆ１Ｔ（FAM-G3[T3AG3]3-Tamra）及びＦＰｆ８Ｔ（FAM-G3[T2CAG3]3-Tamra）（ここで、FAM：６−カルボキシフルオレセインであり、そしてTamra：６−カルボキシ−テトラメチルローダミンである）。測定は４９２nm励起及び５１６nm検出で行った。
【０１１０】
ａ）  四重鎖安定化：
蛍光融解を実施した。結果は、図３Ａ〜図３Ｃに与えられる。本実験は、１０mMカコジル酸リチウム（ｐＨ７．２）及び１００mM  ＮａＣｌ又はＫＣｌを含有する緩衝液中の０．２μMのＦ２１Ｔ、ＦＰｆ１Ｔ又はＦＰｆ８Ｔで実施した（後述のＦ２１Ｔの例を参照のこと、ＮａＣｌ（左）及びＫＣｌ（右））；四重鎖ＤＮＡの融解は、単独及び１μM（５当量）の化合物（３）の存在下でモニターした。
【０１１１】
３種のオリゴヌクレオチドでの化合物（３）により誘導される安定化効果は、融解温度（ΔＴ１／２）の上昇により定量する。値は以下の表に示す。
【０１１２】
【表１】
0005636369.tif 000022
【０１１３】
ｂ）  二重鎖に対する四重鎖ＤＮＡの選択性：
蛍光融解は、１０mMカコジル酸リチウム（ｐＨ７．２）及び１００mM  ＮａＣｌを含有する緩衝液中の０．２μMのＦ２１Ｔで実施した；Ｇ−四重鎖の融解は、単独及び１μMの化合物（３）（過剰（１、３及び１０μM）の二重鎖ＤＮＡ競合物質ｄｓ２６（自己相補的配列[5’-CAATCGGATCGAATTCGATCCGATTG-3’]よりなる２６塩基対の二重鎖ＤＮＡ）を含むか又は含まない）の存在下でモニターした。結果は図４に与えられる。
【０１１４】
ｃ）  四重鎖内選択性：
蛍光融解実験は、１０mMカコジル酸リチウム（ｐＨ７．２）及び１００mM  ＮａＣｌを含有する緩衝液中の０．２μMのＦ２１Ｔで実施した；Ｇ−四重鎖の融解は、単独及び１μMの化合物（３）（過剰（１、３及び１０μM）の四重鎖ＤＮＡ競合物質（両方とも分子内の四重鎖構造中に折り畳まれることが強く疑われる、ＴＧ５Ｔ（[(5’-TG5T-3’)4]、以前の研究（２１）において使用した４分子四重鎖ＤＮＡ）又はｃ−ｍｙｃ（[5'-GAGGGTGGGGAGGGTGGGGAAG-3']、腫瘍遺伝子ｃ−ｍｙｃのプロモーター領域に存在する配列））を含むか又は含まない）の存在下でモニターした（２２〜２５）。結果は図５Ａ〜図５Ｂに与えられる。
【０１１５】
ｄ）  要約
種々のＦＲＥＴ融解実験は、図６の棒グラフ表示に要約する。
これらのデータは、化合物（３）が、
−  ナトリウム緩衝液中でテロメア四重鎖Ｆ２１Ｔ（ヒト）、ＦＰｆ１Ｔ及びＦＰｆ８Ｔ（Plasmodium falciparum）と効率的に相互作用するが、一方カリウム条件ではこれらのオリゴヌクレオチドを安定化しないこと（表を参照のこと）（試験した３つのケースでは、化合物（３）が、カチオンに基づく四重鎖内選択性を提示することを意味する）；
−  二重鎖ＤＮＡから四重鎖ＤＮＡを非常に効率的に識別すること（Ｆ２１Ｔ安定化（ナトリウム緩衝液中）が、１、３又は１０μMのｄｓ２６の存在により限定的に影響を受けるに過ぎないため（安定化は、全てのケースで＞９１％維持される））；
−  ほぼ確実にスタッキング相互作用を介して四重鎖構造の外部Ｇ−カルテットと相互作用すること（Ｆ２１Ｔ安定化が、非ループ４分子四重鎖ＤＮＡ（ＴＧ５Ｔ、Ｆ２１Ｔ安定化は、１、３及び１０μMのＴＧ５Ｔの存在下でそれぞれ６１、３７及び１７％維持されている）又は二本鎖のみ反転ループ四重鎖ＤＮＡ（ｃ−ｍｙｃ、Ｆ２１Ｔ安定化は、１、３及び１０μMのｃ−ｍｙｃの存在下でそれぞれ４２、１５及び１％維持されている）の競合に対して高感受性であるため）
を示す。
Ｎａ＋及びＫ＋条件の間で観測される劇的な違いを考えると、４分子及びループ両方との本化合物の相互作用もまた仮定することができる。
【０１１６】
試験II−２の２：  図１６に、ａ）及びｂ）に上記されたのと同じナトリウム条件を用いた、化合物（３）及び（４）でのＦＲＥＴ融解で得られた結果を与える。蛍光標識四重鎖Ｆ２１Ｔの融解は、単独及び１μMの化合物（３）又は化合物（４）（過剰（１、３及び１０μM）の二重鎖ＤＮＡ競合物質ｄｓ２６（上記の自己相補的配列[5’-CAATCGGATCGAATTCGATCCGATTG-3’]よりなる２６塩基対の二重鎖ＤＮＡ）を含むか又は含まない）の存在下でモニターした。
【０１１７】
ｄｓ２６の存在によりほとんど影響されない融解温度の上昇が、両方の化合物について得られる。
【０１１８】
試験II−３：  蛍光試験によりモニターされるＤＮＡとの相互作用
本試験に詳述されるピリジン系ポリ芳香族複素環化合物は、強い蛍光を特徴とする。注目すべきは、量子収率が、純粋な有機（例えば、ＤＭＳＯ）から生理学的条件（例えば、緩衝液：１０mMカコジル酸ナトリウム＋１００mM  ＫＣｌ（ｐＨ７．２）、表を参照のこと）までの使用される溶媒の性質に影響されないことである。ＤＮＡとの相互作用に及ぼす試験化合物の蛍光特性の変化により、生物学的に関連する幾つかの四重鎖に対する、これらの見かけの結合親和性を比較することができる（２７）。
【０１１９】
【表２】
0005636369.tif 000023
注意：化合物（３）の量子収率（及び標準偏差（s.d.））は、エタノール中のアントラセンを参照として、ＣＨ２Ｃｌ２（ＤＣＭ）及び水中で測定した。
【０１２０】
ａ）  四重鎖相互作用：
ここで使用した四重鎖ＤＮＡは２２ＡＧである：これは、ヒトテロメア配列を模倣する２２ｎｔオリゴヌクレオチドの折り畳みに由来する：２２ＡＧは[5’-AG3(T2AG3)3-3’]である。２２ＡＧからの四重鎖構造は、対応するオリゴヌクレオチドを９０℃で５分間、１０mMカコジル酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）、１００mM  ＮａＣｌ（２２ＡＧ  Ｎａ用）又はＫＣｌ（２２ＡＧ  Ｋ用）中で加熱し、そして氷中で冷却して速度論的トラップにより分子内折り畳みを助けることによって調製する。濃度は、使用前に紫外可視測定（８５℃で５分の熱変性後）により２６０nmで測定する（図７Ａ及び図７Ｂを参照のこと）。
【０１２１】
増加量の２２ＡＧ  Ｎａ（左）又は２２ＡＧ  Ｋ（右）をカコジル酸緩衝液（１０mMカコジル酸ナトリウム＋１００mM  ＮａＣｌ（右）又はＫＣｌ（左））中の化合物（３）の０．２５μM溶液に加えると、化合物（３）の蛍光の漸進的消光が起こる（λｅｘ＝３４０nm）。
【０１２２】
ｂ）  二重鎖に対する四重鎖ＤＮＡの選択性：
二重鎖に対する四重鎖選択性は、２２ＡＧ（上記参照）及び短い二重鎖ＤＮＡ：ｄｓ１７（以前の研究に使用した生物学的配列を表す１７塩基対の二重鎖ＤＮＡであり（２８）；２本の相補鎖の配列は、以下のとおりである：[5’-CCAGTTCGTAGTAACCC-3’]/[5’-GGGTTACTACGAACTGG-3’]）で実施した実験の比較による蛍光滴定によって評価する。二重鎖構造は、２本の対応する相補鎖を９０℃で５分間、１０mMカコジル酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．３）、１００mM  ＫＣｌ中で加熱し、次に６時間ゆっくり冷却することによって調製する。濃度は、使用前に紫外可視測定（８５℃で５分の熱変性後）により２６０nmで測定する。結果は図８に与えられる。
【０１２３】
増加量のｄｓ１７をカコジル酸緩衝液（１０mMカコジル酸ナトリウム＋１００mM  ＫＣｌ）中の化合物（３）の０．２５μM溶液に加えても、化合物（３）の蛍光の漸進的消光は起こらない（λｅｘ＝３４０nm）。
【０１２４】
ｃ）  四重鎖内選択性：
四重鎖内選択性は、２２ＡＧ（上記参照）及び２種の他の四重鎖構造：ｃ−ｍｙｃ及びｃ−ｋｉｔ２で実施した実験の比較による蛍光滴定によって評価する。これら２種の四重鎖ＤＮＡの形成は、目下ｃ−ｍｙｃ（上記参照）及びｃ−ｋｉｔ（２２；２９及び３０）腫瘍遺伝子のプロモーター領域で起こることが強く疑われる。この配列は以下のとおりである：ｃ−ｍｙｃ：[5’-TGAGGGTGGGTAGGGTGGGTAA-3’]及びｃ−ｋｉｔ２：[(5’-CGGGCGGGCGCGAGGGAGGGG-3’]。四重鎖構造は、対応するオリゴヌクレオチドを９０℃で５分間、１０mMカコジル酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）、１００mM  ＫＣｌ中で加熱し、そして氷中で冷却して速度論的トラップにより分子内折り畳みを助けることによって調製する。濃度は、使用前に紫外可視測定（８５℃で５分の熱変性後）により２６０nmで測定する。
結果は、図９Ａ及び図９Ｂに与えられる。
【０１２５】
増加量のｃ−ｍｙｃ（左）又はｃ−ｋｉｔ２（右）をカコジル酸緩衝液（１０mMカコジル酸ナトリウム＋１００mM  ＫＣｌ）中の化合物（３）の０．２５μM溶液に加えると、化合物（３）の蛍光の漸進的消光が起こる（λｅｘ＝３４０nm）。
【０１２６】
ｄ）  要約：
種々の蛍光滴定（λｅｘ＝３４０nm）は、グラフ表示を与える図１０に要約する：
これらのデータは、化合物（３）が、
−  二重鎖ＤＮＡマトリックス（ｄｓ１７）から四重鎖ＤＮＡ（２２ＡＧ  Ｋ、２２ＡＧ  Ｎａ、ｃ−ｋｉｔ２及びｃ−ｍｙｃ）を非常に効率的に識別し、よってＦＲＥＴ融解の結果を裏付けること；
−  更に効率的かつ迅速に２２ＡＧ  Ｎａ、ｃ−ｋｉｔ２及びｃ−ｍｙｃと相互作用するが、一方２２ＡＧ  Ｋとのその相互作用は弱いこと；この結果は、ＦＲＥＴ融解実験を介して観測される結果に一致し、そして四重鎖内選択性において有望な候補であること
を示した。
【０１２７】
試験II−４：  円偏光二色性試験
円偏光二色性（ＣＤ）により、リガンドの結合時のＤＮＡ構造の修飾の深い研究が可能である；よってこれは、リガンドのその標的に対する親和性を反映し、またその結合様式への洞察をも提供しうる（Paramasivan et al, Methods, 2007, 43, 324）。
【０１２８】
ａ）  四重鎖相互作用：
ここで使用した四重鎖ＤＮＡは、２２ＡＧ（上記参照）であり、両方とも１０mMカコジル酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）、１００mM  ＮａＣｌ（２２ＡＧ  Ｎａ用）又はＫＣｌ（２２ＡＧ  Ｋ用）中でアニーリングされている。両方の緩衝液中の２２ＡＧの３μM溶液に、過剰の化合物（３）（３０μM、１０当量）を加える。結果は図１１に与えられる。四重鎖との化合物（３）の相互作用は、時間の関数としてモニターする：これにより２２ＡＧ  ＮａのＣＤシグナルは大きさが変化する（左、特に２６３nmで）が、一方２２ＡＧ  Ｋの構造は完全に再編成する（右、特に２６３nmで）。
【０１２９】
ｂ）  四重鎖内選択性：
四重鎖内選択性は、２２ＡＧ（上記参照）及び２種の他の四重鎖構造：ｃ−ｍｙｃ及びｃ−ｋｉｔ２（上記参照）で実施した実験の比較によるＣＤによって評価する。結果は図１１Ａ及び図１１Ｂに与えられる。カコジル酸緩衝液（１０mMカコジル酸ナトリウム＋１００mM  ＫＣｌ）中のｃ−ｋｉｔ２（左）及びｃ−ｍｙｃ（右）両方の３μM溶液に、過剰の化合物（３）（３０μM、１０当量）を加える。四重鎖との化合物（３）の相互作用は、時間の関数としてモニターする：これによりｃ−ｋｉｔ２のＣＤシグナルの大きさが変化し（特に２８５nmで）、これより少ないがｃ−ｍｙｃでも変化する（２８５nm）。
【０１３０】
ｃ）  四重鎖構造の誘導：
２２ＡＧオリゴヌクレオチドの折り畳まれた形と折り畳まれていない形の間の平衡は、入れられる緩衝液の存在及び性質に高感受性である。対応する結果は図１２Ａ及び図１２Ｂに与えられる。１０mMトリスＨＣｌ（ｐＨ７．２）のような低カチオン性緩衝液では、２２ＡＧは大部分折り畳まれていない（ランダムコイル状）；よって化合物（３）を加えることにより折り畳まれた形＜−＞折り畳まれていない形の平衡に影響を及ぼすことができる。即ち、トリスＨＣｌ緩衝液中のランダムコイル状２２ＡＧの３μM溶液に、増加量の化合物（３）（０〜７．５当量）を加える；これにより２２ＡＧのＣＤシグナルは大きく変化し、ランダムコイルに典型的な２５７nmシグナルの消失と、２つの新規な極大［一方は正（２９０nm付近）であり他方は負（２６５nm付近）であり、両方とも「逆平行」四重鎖ＤＮＡ構造（２２ＡＧ  Ｎａとして、上記参照）のＣＤシグナルに典型的である］の獲得に至る。
【０１３１】
ｄ）  要約：
これらのデータは、化合物（３）が、
−  効率的にかつほぼ自発的に２２ＡＧ  Ｎａと相互作用するが、２２ＡＧ  Ｋとは効率的ではあるがゆっくりと反応すること（これは蛍光滴定及びＦＲＥＴ融解実験結果と一致する）；
−  ｃ−ｍｙｃ及びｃ−ｋｉｔ２と相互作用するが、その相互作用は、これら２つの四重鎖の構造を修飾しないこと；
−  ２２ＡＧの折り畳まれていない形と折り畳まれた形の間の平衡を折り畳まれた形へとシフトさせることができること
を示した。
【０１３２】
III  −  生物学的方法及びデータ：
試験III−１：  化合物（３）によるインビトロでのテロメア配列へのＰＯＴ１結合の阻害
ｈＰＯＴ１を用いる電気泳動移動度シフトアッセイをテロメア２２ＡＧオリゴヌクレオチド（上記参照）に実行した。２２ＡＧは、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて５’末端を［γ−３２Ｐ］−ＡＴＰで標識した。精製組換えｈＰＯＴ１は、バキュロウイルス発現系で産生させた。ＰＯＴ１／２２ＡＧ結合アッセイは、５０mMヘペス（ｐＨ７．９）、１００mM  ＮａＣｌ、０．１mM  ＥＤＴＡ、４％w/vショ糖、２％v/vグリセロール、０．１mg/ml  ＢＳＡ、０．０２％w/vブロモフェノールブルー、３０nM  ｈＰＯＴ１、２０nM［α−３２Ｐ］−２２ＡＧを含有する総容量１０μl中で実行した。様々な濃度の化合物（３）（１０、１、０．１及び０．０１μM）をｈＰＯＴ１と共にこの溶液に加え、この混合物を室温で３０分間インキュベートした。それぞれ個々の試料は、０．５×トリス−ホウ酸−ＥＤＴＡ緩衝液中で１％アガロースゲル上で電気泳動により分離した。ゲルは８０Ｖで３５分間流して、ワットマンＤＥ８１紙上で乾燥して、放射活性はホスファイメージャー（phosphorimager）（Typhoon 9210, Amersham）により可視化した。データの解析は、ImageQuantソフトウェア（Amersham）により実施して、結果は未処理対照（１００％と定義）で得られるＰＯＴ１−２２ＡＧ複合体の百分率として表した（図１４を参照のこと）。
【０１３３】
これらのデータは、化合物（３）が、テロメア２２ＡＧ配列へのｈＰＯＴ１の結合を用量依存的に阻害することを示した。後述の実験において、化合物（３）のＩＣ５０−ＰＯＴ１は３００nMに等しい。
【０１３４】
試験III−２：  化合物（３）による細胞増殖の阻害
ｐＥＧＦＰ−ＰＯＴ１ベクターで安定にトランスフェクトしたＨＴ１０８０ヒト線維肉腫細胞株（ＨＴ１０８０ＧＦＰ−ＰＯＴ１）は以前に報告されており（３２）、Ｕ２０Ｓヒト骨肉腫はAmerican Type Culture Collection（Rockville, 米国）から得た。細胞は、ＨＴ１０８０ＧＦＰ−ＰＯＴ１用に１０％v/vウシ胎仔血清及び４００μg/mlジェネティシンを補足したダルベッコー修飾イーグル培地（Invitrogen）で増殖させた。細胞は、様々な濃度の化合物（３）（１０、３、１、０．３及び０．１μM）の存在下で各濃度二重反復で、０日目に４．５×１０４細胞／ウェルで６ウェル培養プレートに蒔き、更に７２時間培養した。３日目に、細胞を１×ＰＢＳで洗浄してトリプシン処理した。各処理細胞試料について、生存細胞の数をトリパンブルーの存在下で測定した。結果は図１５Ａ及び図１５Ｂに与えられる。これらは、１００％と定義した未処理対照細胞に比較した相対細胞数（パーセント）に相当する。
【０１３５】
これらのデータは、化合物（３）が、癌細胞の増殖を０．１〜１μMの間であるＩＣ５０で妨害することを示す。
【０１３６】
特に限定されないが、特許公報、特許出願、本及び学術論文を包含する、本出願に引用される全ての刊行物は、それぞれ引用例としてその全体が本明細書に取り込まれる。本発明は開示された実施態様を参照して上述されているが、当業者には、詳述された特定の実験は、単に本発明の例証であることが容易に理解されよう。当然のことながら、本発明の本質を逸することなく、ここに種々の変更を加えることができる。したがって、本発明は以下の請求の範囲によってのみ限定される。
【０１３７】
【表３】
0005636369.tif 000024
【図１】
0005636369.tif 000026
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
0005636369.tif 000030
【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【配列表】
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