(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
自毛植毛の際に、移植用の毛髪の浸漬処理に用いるための、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドを有効成分として含有する、移植毛の頭皮への着生率向上剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な毛乳頭細胞増殖促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
高齢化社会、ストレス社会といわれる現代社会では、毛髪が様々な原因により、脱毛の危機にさらされる機会が増加しており、これに対応して様々な「育毛剤」が提案されている。しかしながら、従来の育毛剤では、その脱毛防止、発毛効果などの育毛作用は、必ずしも充分なものではなかった。その原因の一つとして、育毛剤は、非常に複雑な発毛機構の特定部位に作用するにも関わらず、その点をあまり考慮することなく使用されるため、使用した育毛剤が、使用者の脱毛原因の解決に適していない場合があったためと考えられる。その点、作用点が明らかな育毛剤が開発されれば、脱毛の原因や症状などに応じて育毛剤を選択又は組み合わせて、脱毛などを防止することが可能となり、より効果的なヘアケアを行うことが可能になる。なお、本発明でいう育毛とは、毛髪の形成促進、発毛促進、養毛、薄毛改善、ふけの発生抑制、かゆみの抑制及び脱毛の抑制を含む。【０００３】
近年、発毛の機構の研究が進み、ヒトの毛髪毛包を構成する毛包角化細胞の増殖／分化やアポトーシスを調整し、毛髪の成長サイクル（以下、「毛周期」という。）の調節の中心的な役割を毛乳頭細胞が担っていることが明らかになり、育毛のための毛乳頭細胞増殖促進剤が提案されるようになっている（例えば、特開平９−２０８４３１号公報及び特開２００５−４１８７１号公報参照）。また、植毛技術の進歩により、自身の脱毛の起きていない部位の毛髪を外科的に採取して、脱毛部位に移植する試みも行われている。しかしながら、依然として、毛周期を完全にコントロールできる発毛剤や育毛剤は開発されていない。また、移植した毛髪（以下、「移植毛」と略記する場合がある。）も、必ずしも効率よく脱毛部位の頭皮に着生するわけではなく、着生率を向上するためには、移植毛の毛包部に存在する毛母の細胞などの増殖をコントロールする毛乳頭細胞を効率よく増殖させることが重要と考えられている。したがって、毛周期を、簡便かつ効果的にコントロールしたり、植毛時の移植毛の着生率を向上させるために有効な新規な毛乳頭細胞増殖促進剤の開発が望まれている。【０００４】
一方、脂質の分解抑制作用を有するＬ−アスコルビン酸２−グルコシド（以下、「ＡＡ−２Ｇ」と略記する場合がある。）、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン及び感光素３０１号（６−［２−［（５−ブロモ−２−ピリジル）アミノ］ビニル］−１−エチル−２−ピコリニウムヨーダイド、以下、「感光素３０１号」と略記する。）、α，α−トレハロースなどの非還元性糖類などは、何れも皮膚外用剤の配合成分として使用されている物質であり、毛髪化粧品の有効成分としても提案されている（例えば、特開平４−１８２４１４号公報及び特開平４−４６１１２号公報参照）。しかしながら、これらの特許文献には、毛乳頭細胞の増殖促進に関する記載や、これらの物質に、毛乳頭細胞の増殖を促進する作用や、移植毛の頭皮への着生率を向上する作用があることについての記載や示唆は何もされていない。
【発明の開示】
【０００５】
本発明は、毛乳頭細胞増殖促進剤を提供することを課題とする。
【０００６】
本発明者は、上記課題を解決するために、鋭意研究、検討を重ねた結果、Ｌ−アスコルビン酸類、フラボノイド類（ヘスペリジン類、ルチン類、ナリンジン類などを含む）、リボフラビン類、感光素３０１号、及び、α，α−トレハロースなどの非還元性糖類から選ばれる、何れか１種又は２種以上の物質が、毛乳頭細胞の増殖を極めて効果的に促進し、これらの物質は何れも脂質からのラジカルの発生やアルデヒドの生成を抑制し脂質の分解を抑制する作用を有することを見出し、これら物質を有効成分とする毛乳頭細胞増殖促進剤を確立した。また、Ｌ−アスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類及び／又は非還元性糖類の持つ毛乳頭細胞の増殖促進効果は、これらの物質を皮膚外用剤として直接頭皮に使用した場合だけでなく、経口摂取や、注射などによる非経口的な投与方法であっても発揮されることを見出した。さらに、アスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素３０１号、及び／又は非還元性糖類を含有する水系媒体の処理液に浸漬した毛髪は、毛乳頭細胞の増殖が促進されて、頭皮に移植した際の頭皮への着生率が向上するだけでなく、これらの物質を、毛髪を移植後に、皮膚外用剤として直接頭皮に使用した場合や経口摂取、さらには、注射などの方法で非経口的に投与した場合にも、移植毛の頭皮への着生率が向上することを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、毛乳頭細胞の増殖を極めて効果的に促進するという優れた効果を有しているので、この毛乳頭細胞増殖促進剤は、毛周期の調節能に優れ、毛周期の回転を促進することから、休止期にある毛根の割合を低減し、毛髪の形成を促進すると共に、毛根を強化して脱毛も抑制するなどの優れた育毛効果を発揮することができる。また、移植用の毛髪の毛根部位を当該毛乳頭細胞増殖促進剤で処理することにより、その毛乳頭細胞の増殖を促進し、頭皮に移植した毛髪の着生率を向上させると共に、着生後の移植毛からの毛髪の形成を促進することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤に使用する、Ｌ−アスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素３０１号、非還元性糖類は、何れも脂質の分解抑制作用を有する物質で、本発明の所期の効果を有するものであれば、その由来や起源は問わず、抽出法、発酵法、酵素法、合成法など、それぞれの物質の製造に適した公知の方法で調製することができる。【０００９】
本発明でいうＬ−アスコルビン酸類とは、Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸の誘導体、これらのアルカリ金属或いはアルカリ土類金属塩などであって、脂質の分解抑制作用を有するものをいう。Ｌ−アスコルビン酸誘導体としては、例えば、Ｌ−アスコルビン酸グリコシド、Ｌ−アスコルビン酸グリコシドのアシル化誘導体、テトラヘキシルデカン酸アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸とトコフェロールがリン酸基を介して結合したアスコルビン酸−トコフェロールリン酸ジエステル、Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステル、ジパルミチン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビル、Ｌ−アスコルビン酸ステアリル、リン酸Ｌ−アスコルビル、Ｌ−アスコルビン酸エチルやそれらのアシル化誘導体などを挙げることができ、なかでも、毛乳頭細胞増殖促進活性の強さ及び安全性の点では、糖転移Ｌ−アスコルビン酸が望ましく、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドが特に望ましい。なお、本発明でいう脂質の分解抑制作用を有するとは、その物質自体が脂質の分解抑制作用を有する場合だけではなく、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドなどのように、生体に存在する酵素などにより分解されて、脂質の分解抑制作用を発揮する場合を含む。【００１０】
本発明でいうフラボノイド類とは、二つのフェニル基がピラン環或いはそれに近い構造の３個の炭素原子をはさんで結合している、いわゆるＣ６−Ｃ３−Ｃ６の炭素骨格からなる化合物群であって、脂質の分解抑制作用を有するものをいう。具体的には、フラボン類、イソフラボン類、フラボノール類、フラバノン類、フラバノノール類、フラバン−３，４−ジオール類、フラバン−３−オール類、アントシアニジン類、オーロン類、カルコン類、ジヒドロカルコン類などやこれらの誘導体をいう。なかでも、毛乳頭細胞増殖促進活性の強さの点では、フラボノール類やフラバン３−オール類が望ましい。これらの中でも、ヘスペリジン類、ルチン類、ナリンジン類が特に望ましく、具体的には、ルチン、ヘスペリジン、ナリンジン、これらの糖転移物、アグリコンやアグリコン配糖体などを挙げることができる。【００１１】
本発明でいうリボフラビン類とは、リボフラビン及びその誘導体であって脂質の分解抑制作用を有するものをいい、具体的には、リボフラビン酪酸エステル、リボフラビンリン酸エステル、ロイコフラビン、モノハイドロフラビン、ロイコフラビンリン酸エステル、糖転移リボフラビン、フラビンモノヌクレオチド、フラビンジヌクレオチドなどを挙げることができる。毛乳頭細胞増殖促進活性の強さの点では、リボフラビン及び糖転移リボフラビンが望ましい。【００１２】
本発明でいう感光素３０１号とは、厚生省が昭和５７年１２月２７日付けて公示した、化粧品原料基準第二版に収載されたアミノビニール系の化合物で、化学名が６−［２−［（５−ブロモ−２−ピリジル）アミノ］ビニル］−１−エチル−２−ピコリニウムヨーダイドのものをいう。【００１３】
本発明でいう非還元性糖類とは、α，α−トレハロース、α−マルトシルマルトースなどのα，α−トレハロースの糖質誘導体、マルチトール、マルトトリイトールなどの糖アルコール、同じ出願人による国際公開ＷＯ  ０２／１０３６１号明細書などに記載のサイクロ｛→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→｝の構造を有する環状四糖（以下、「環状ニゲロシルニゲロース」という。）、或いは、特開平２００５−９５１４８号公報などに記載のサイクロ｛→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→｝の構造を有する環状四糖（以下、「環状マルトシルマルトース」という。）やサイクロデキストリンなどの環状糖質などのような、脂質の分解抑制作用を有するものを挙げることができる。毛乳頭細胞増殖促進活性の強さの点では、α，α−トレハロース、α，α−トレハロースの糖質誘導体、マルチトール及び環状四糖が望ましい。【００１４】
本発明で使用するこれらの物質は、必ずしも高度に精製されておらずともよく、原料物質や調製の過程で共存するその他の成分との未分離組成物としての形態、それらを部分精製、或いは、高度に精製したものであってもよいし、市販品を使用することも随意である。なお、注射などの方法で直接体内に投与する場合には、高度に精製したものを使用することが望ましく、発熱物質や微生物が除去されたものが特に望ましい。また、Ｌ−アスコルビン酸、ヘスペリジン、ルチン、ナリンジン及びリボフラビンなどの糖転移物（以下、これらの物質を総称して「ビタミン配糖体」という場合がある。）は、１分子当たり１分子乃至１０分子程度のグルコースが結合したものを含んでいてもよく、これらの配糖体の調製の過程で共存する配糖化されていない原料物質を含んでいてもよいが、注射剤や皮膚外用剤の形態で使用する場合には、１分子のグルコースが結合したモノグルコシル配糖体の純度を高めたものを使用するのが特に望ましい。ちなみに、これらのビタミン配糖体の市販品としては、例えば、食品級のＬ−アスコルビン酸２−グルコシド（株式会社林原商事販売、商品名「アスコフレッシュ」）、皮膚外用剤用のＬ−アスコルビン酸２−グルコシド（株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「ＡＡ２Ｇ」）、グルコシルヘスペリジン（株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「林原グルコシルヘスペリジンＳ」）、グルコシルルチン（株式会社林原商事販売、商品名「αＧルチン」）がある。また、感光素３０１号は株式会社林原生物化学研究所から「タカナール」の商品名で販売されている。【００１５】
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、有効成分として、脂質の分解抑制作用を有するＬ−アスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素３０１号及び非還元性糖類から選ばれる何れか１種又は２種以上を含むものであればよく、毛乳頭細胞増殖促進効果の強さの点からは、有効成分が１種の場合には、Ｌ−アスコルビン酸類が望ましいが、２種以上を組み合わせて用いることが特に望ましい。とりわけ、Ｌ−アスコルビン酸類とフラボノイド類、リボフラビン類、感光素３０１号及び非還元性糖類から選ばれる何れか１種又は２種以上とを併用することにより、その相乗作用により、強い毛乳頭細胞増殖促進効果を得ることができる。【００１６】
また、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、必須成分であるＬ−アスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素３０１号及び／又は非還元性糖類に加えて、必要に応じて、かつ本発明の所期の効果を損なわない限り、育毛作用が認められている、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤の有効成分以外の５αレダクターゼ阻害剤、血行促進剤、毛包賦活剤などのような既知の成分の１種又は２種以上を併用することにより、Ｌ−アスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素３０１号及び／又は還元性糖類による毛乳頭細胞の増殖促進作用を、さらに効果的に増強することができる。具体的には、５αレダクターゼ阻害剤としては、アセンヤク、アチコリア、イエルバルイサ、イチイ、インチン、ウォロ、ウイキョウ、ウスベニアオイ、エイジツ、オルティガニグラ、オンジ、カゴソウ、カコチャ、カシュウ、カッコウアザミ、カノコソウ、ガラナ、カルドサント、カンゾウ、キササゲ、キンセンカ、キンモクセイ、ケイガイ、ケンゴシ、ゲンノショウコ、クアチャララーテ、クサノオウ、クマセバ、ゴバイシ、ゴボウシ、コリアンダー、サイカチ、サイコ、サンシシ、サンショウ、シャクヤク、シャゼンシ、ジャンカン、ジョウザン、セドロン、センソ、ソクハクヨウ、ソヨウ、ダイオウ、ダウントラワス、チャンカピエドラ、チョウジ、ニガキ、ビンロウジ、マチコ、モッカ、ヤクモソウ、ヤマハギ、ヨクイニン、レグロ、ロジン、ワタからなる群から選ばれた１種又は２種以上の植物の溶媒抽出エキス、オキセンドロン、または、フィナステリドなどを挙げることができる。血行促進剤としては、アセチルコリン、センブリエキス、ヨウ化ニンニクエキス、イチョウエキス、塩化カルプロニウム、スピロノラクトン、ビタミンＢ６塩酸塩、γ−オリザノール、サークレチン、クロマカリム、セファランチン、ニコランジル、ＤＬ−α−トコフェロール、Ｄ−α−トコフェロール、酢酸ＤＬ−α−トコフェロール、酢酸Ｄ−α−トコフェロールなどのビタミンＥ類、ニコチン酸、ニコチン酸メチル、ＤＬ−α−トコフェロールニコチン酸エステル、ニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジルなどのニコチン酸類、ピナシジル、ミノキシジル、フタリド類、キナエキス、ショウブ根エキス、ソフォラ抽出液、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、トウヒエキス、トウガラシチンキ、ユズ抽出液、カンタリスチンキ、ショウキョウチンキなどが挙げられる。などを挙げることができる。また、毛包賦活剤としては、パントテン酸、パントテン酸エステル、パンテノール、パントテニルエチルエーテルなどのパントテン酸類、Ｎ−アシルアミノ酸、ペンタデカン、ペンタデカン酸、ペンタデカン酸グリセリド、６−ベンジルアミノプリン、アデノシン、アデノシン５´−リン酸、アデノシン５´−リン酸の塩などのアデノシン類、アスパラギン酸カリウム、ビオチン、タマサキツヅラフジエキス、チクセツニンジンエキス、オタネニンジンエキスなどのニンジンエキス、ブドウエキス、リンゴエキス、モノニトログアヤコールナトリウム、酵母エキス、ニンニクエキス、真珠蛋白抽出液、プラセンタエキス、ローヤルゼリー、カテコール、レゾルシノール、ヒドロキノン、クロロゲルシノール、カテキン、タンニンなど���ポリフェノール類、ミノキシジル酸などが挙げられる。Ｌ−アスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素３０１号及び／又は非還元性糖類による毛乳頭細胞増殖促進作用をさらに増強する作用の強さの点からは、カテキンやタンニンをはじめとするポリフェノール類が望ましい。また、これらの５αレダクターゼ阻害剤、血行促進剤及び／又は毛包賦活剤の含有量は、本発明の所期の効果を妨げない量であれば特に制限はないが、十分な育毛効果と、使用時の皮膚や口腔に対する刺激抑制の観点から、通常、毛乳頭細胞増殖促進剤の全組成中の０．０００１質量％乃至１０質量％（以下、本明細書では特にことわらない限り質量％を「％」と表記する。）、特に０．００１％乃至５％が好ましい。【００１７】
さらに、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、必要に応じて、かつ本発明の所期の効果を損なわない限り、化粧品、医薬部外品、医薬品、飲食品などにおいて一般的に用いられる、上記以外の各種の油性又は水性成分、保湿剤、増粘剤、防腐剤、酸化防止剤、皮膚溶解剤、角質溶解剤、粉体、乳化剤、ｐＨ調節剤、香料、色剤、各種の薬剤、水を含む溶媒などを配合することができる。【００１８】
その具体例を挙げると、例えば、高級脂肪酸、固形パラフィン、流動パラフィン、シリコーン油、スクワラン、モノオレイン酸グリセリル、オリーブ油、イソプロピルミリステート、高級アルコールなどの油分、グリセリン、ヒアルロン酸、プロピレングリコール、アテロコラーゲン、乳酸ナトリウムなどの保湿剤、マルメロ粘質物、カルボキシビニルポリマー、キサンタンガム、プルラン、ヒアルロン酸やコンドロイチン硫酸をはじめとするムコ多糖類などの増粘剤、セリン、メチオニン、アルギニン、カルニチンなどのアミノ酸類、ビタミンＢ６、ビオチン、パントテン酸類などのビタミン類、セファランチンなどの皮膚機能亢進剤、エストラジオールなどの女性ホルモン剤、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、アズレン、カンゾウ抽出物、藍抽出液などの消炎剤、ヒノキチオールなどの抗菌剤、メントールなどの清涼剤、サリチル酸、亜鉛類、α−リポ酸、生理活性物質、乳酸、クエン酸などの有機酸類、ミネラル類、甘味料、高甘味度甘味料、コエンザイムＱ１０、上記以外のビタミン類、ハーブエキス類、生薬エキス類などを配合することができる。また、本発明で使用するビタミン配糖体は、何れも生体内で酵素分解を受けて徐々にビタミンとなるので、本来徐放性を有しているものの、この機能をさらに強化するためにリポソームのようなドラッグデリバリーシステム用の担体と共に使用することも随意である。【００１９】
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、その各成分を、原料の段階から製品の段階に至るまでの適宜の工程で、或いは、既存の製品に対して、例えば、希釈、濃縮、乾燥、濾過、遠心分離、混和、混捏、溶解、融解、分散、懸濁、乳化、浸漬、浸透、散布、塗布、被覆、噴霧、注入、晶出、固化、逆ミセル化などの方法の１種又は２種以上を適宜組み合わせて製造することができる。【００２０】
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、その全量に対して、有効成分であるＬ−アスコルビン酸類、フラボノイド類或いはリボフラビン類が、何れも０．０００１％乃至１０％となるように含有せしめればよく、好ましくは、何れも０．００１％乃至１％となるように含有せしめればよい。感光素３０１号は、全量に対して、０．００００１％乃至１％となるように含有せしめればよく、好ましくは０．０００１％乃至０．５％となるように含有せしめればよい。また、非還元性糖類は、全量に対して、０．０５％乃至１０％となるように含有せしめればよく、好ましくは０．５％乃至５％となるように含有せしめればよい。これらの物質の配合量が毛乳頭細胞増殖促進剤の全量に対して上記配合量の下限よりも少ない場合には、所望する毛乳頭細胞の増殖促進作用が充分に発揮されず好ましくない。また、上記配合量の上限を超えて配合しても、その効果が増強されることが無いだけでなく、ヘスペリジン、ルチン、ナリンジンをはじめとするフラボノイド類、リボフラビン類或いは感光素３０１号にあっては、毛乳頭細胞の増殖が阻害される場合がある。また、上記配合量の上限を超えると各々の物質特有の不快臭や不快味を伴うようになったり、使用感が悪くなったりする場合がある点でも好ましくない。なお、Ｌ−アスコルビン酸類と、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素３０１号及び非還元性糖類の何れか１種又は２種以上とを併用する場合、Ｌ−アスコルビン酸類の配合量の下限については、相乗効果により、単剤で使用する場合よりも低濃度でも毛乳頭細胞増殖促進作用が発揮される場合があるので、本発明の所望する作用が発揮される範囲で、適宜上記配合量をさらに減ずることができる。【００２１】
本発明の毛乳頭増殖促進剤の剤型は、皮膚外用の化粧品、医薬部外品、医薬品などとして、頭部外皮に適用可能な剤型であれば特に限定されず、例えば、液状、乳液状、クリーム状、エアゾール状、ジェル状などの剤型を選択することができ、例えば、トニック、ヘアークリーム、ムース、シャンプー、リンス、乳液、化粧水、パック、エアゾール剤などの形態で使用することができる。【００２２】
本発明の毛乳頭増殖促進剤のうち、感光素３０１号のように経口摂取が認められていない成分を配合したもの以外は、経口摂取はもとより、カテーテルなどを使用して胃や腸内に直接投与してもよく、注射などにより直接体内に投与することもできる。その経口摂取用の組成物としては、経口的に摂取可能な形態であれば特に制限はなく、例えば、固状、錠剤、粉末、液状、ペースト状などの形態を選択することができるし、一般の飲食品の形態であってもよい。この毛乳頭細胞増殖促進剤は、経口的に摂取した場合や、注射投与などにより直接体内に投与した場合においても、毛乳頭細胞の増殖促進作用を示す。また、本発明の毛乳頭剤増殖促進剤は、何れの投与経路の場合にも、頭皮を含む皮膚の血行を改善し、シワやクスミを改善することもできるので、皮膚に潤いや艶を与え、シワやコジワを改善する美肌効果にも優れている。したがって、これらの毛乳頭細胞増殖促進剤は、毛乳頭細胞増殖促進効果と美肌効果のいずれかを標榜することも、その両方を標榜して販売することも可能である。【００２３】
また、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤を、例えば、自毛を、頭皮の脱毛部位に移植する植毛手術の際に、後頭部や側頭部の健康な毛髪の部位を外科的に採取した頭皮から、毛髪（毛根部位）を移植用に、１本乃至数本に分離する時に使用する洗浄液や、毛髪の処理液乃至保存液、又は乾燥防止液などの水系媒体として使用し、毛根の部位を一定時間、当該毛乳頭細胞増殖促進剤と接触せしめることにより、植毛後の毛根の毛乳頭細胞や毛包上皮幹細胞の増殖を促進し、移植した毛髪の着生率の向上及び毛髪形成の促進をはかることができる。また、植毛時に休止期にある移植毛の毛根にあっても、その毛周期を回転させて、発毛期に移行させることできるので、より効果的に毛髪の形成を促進させることができる。さらに、これらの物質は、毛包上皮幹細胞に対する細胞増殖促進効果も有することから、健康な毛髪から採取した毛乳頭細胞や毛包上皮幹細胞を、試験管内で培養増殖させ、そのまま或いは凍結保存後に、再度、頭皮に移植して毛髪を再生する場合にも、試験管内でのこれらの細胞の増殖促進、及び、移植部位でのこれらの細胞の着生率向上や毛髪形成の促進にも有利に利用することができる。しかも、これらの物質のもつ移植毛の着生率の向上作用及び毛髪形成の促進作用は、当該毛乳頭細胞増殖促進剤を、移植後の頭皮に皮膚外用剤として使用した場合や、経口摂取、注射投与などにより直接体内に投与した場合においても発揮される。【００２４】
以下、実験に基づいて、より詳細に本発明を説明する。【００２５】
＜実験１：正常ヒト頭髪毛乳頭細胞の増殖に及ぼすＬ−アスコルビン酸類、ヘスペリジン、ルチン、リボフラビン又は感光素３０１号の影響＞
正常ヒト頭髪毛乳頭細胞の増殖に及ぼすＬ−アスコルビン酸類、ヘスペリジン、ルチン、リボフラビン又は感光素３０１号の影響を調べる実験を、ヒト毛乳頭細胞を使用して、以下のようにしておこなった。【００２６】
＜正常ヒト頭髪毛乳頭細胞の調製＞
正常ヒト頭髪毛乳頭細胞（東洋紡績株式会社販売、商品名「正常ヒト頭髪毛乳頭細胞」）（以下、「ヒト毛乳頭細胞」と略記する場合がある。）を、１容積％ウシ胎児血清（以下、「ＦＣＳ」と略記する。）を含むヒト毛乳頭細胞培養培地（東洋紡績株式会社販売、商品名「毛乳頭細胞増殖培地」、「正常ヒト頭髪毛乳頭細胞」に同梱）を用いて、３７℃、５容積％ＣＯ２の条件で、７５ｃｍ２のカルチャーフラスコ（コーニング社販売、商品名「７５ｃｍ２カルチャーフラスコ」）で培養した。この細胞（継代数４）を、０．０５％トリプシン含有リン酸緩衝生理食塩水を用いて回収し、１容積％ＦＣＳを添加したダルベッコウのＭＥＭ培地（ギブコ社販売、以下、「ＤＭＥＭ」と略記する。）に再懸濁し、９６ウエルのマイクロプレート（岩城硝子株式会社販売、商品名「コラーゲンタイプＩコート９６ウエルプレート」）に、１．５×１０３細胞／５０μｌ／ウエルで播種し、以下の試験に使用した。【００２７】
＜ヒト毛乳頭細胞の増殖効果の判定＞
Ｌ−アスコルビン酸（以下、「ＡｓＡ」と略記する場合がある。）、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド（株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「ＡＡ２Ｇ」、純度９８％以上）（以下、「ＡＡ−２Ｇ」と略記する場合がある。）、ヘスペリジン（シグマ社販売、商品名「ヘスペリジン」）、ルチン（シグマ社販売、商品名「ルチン」）、リボフラビン（シグマ社販売、商品名「リボフラビン」）及び感光素３０１号（株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「タカナール」、純度９９％以上）を試験試薬として使用し、その何れか１種を、最終濃度が、表１又は表２に記載の濃度となるように、１容積％のＦＣＳ添加ＤＭＥＭ培地に添加し試験液を調製した。これら何れかの試験液を、先に調製したヒト毛乳頭細胞培養９６ウエルプレートに５０μｌ／ウエルで添加し、５容積％ＣＯ２、３７℃の条件で、4日間培養後、ＭＴＴ法を用いてヒト毛乳頭細胞の増殖率を求め、その結果を表１又は表２に示す。なお、ヒト毛乳頭細胞の増殖率（％）は、１容積％ＦＣＳ添加ＤＭＥＭに、塩基性線維芽細胞増殖因子（以下、「ｂＦＧＦ」と略記する場合がある。）を最終濃度10ｎｇ／ｍｌになるように加えて培養したヒト毛乳頭細胞を陽性対照とし、１容積％ＦＣＳ添加ＤＭＥＭのみで培養したヒト毛乳頭細胞を陰性対照として用い、４５０ｎｍの吸光度を測定して、次式により求めた。増殖率（％）＝｛（試料の吸光度−陰性対照の吸光度）÷（陽性対照の吸光度−陰性対照の吸光度）｝×１００【００２８】
【表１】
0005635226.tif 000002
【００２９】
【表２】
0005635226.tif 000003
【００３０】
表１から明らかなように、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドは１０μＭ乃至１０ｍＭの濃度で、濃度依存的にヒト毛乳頭細胞の増殖促進作用を示した。一方、Ｌ−アスコルビン酸を単回添加した場合、１００μＭ以下ではヒト毛乳頭細胞の増殖促進作用は認められず、１ｍＭ以上添加した場合には細胞毒性が認められた。また、Ｌ−アスコルビン酸を、投与開始日から１日１回、３日間添加した場合、１０μＭ乃至１００μＭでヒト毛乳頭細胞増殖促進作用が認められたことから、１）ヒト毛乳頭細胞の増殖促進作用は、Ｌ−アスコルビン酸の作用によるものであり、２）Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドは、Ｌ−アスコルビン酸に比して、細胞毒性が低く、且つ、培地中でも安定で、毛乳頭細胞に存在するα−グルコシダーゼの作用により、徐々に分解されてＬ−アスコルビン酸になることから、より強い細胞増殖作用が得られると推測された。また、表２から明らかなように、感光素３０１号、ヘスペリジン、ルチン或いはリボフラビンを添加した場合には、各々０．０１ｎＭ乃至１μＭの濃度でヒト毛乳頭細胞の増殖促進作用が認められた。また、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドが濃度依存的なヒト毛乳頭細胞の増殖促進作用を示したのに対して、感光素３０１号、ヘスペリジン、ルチン或いはリボフラビンは、特定の濃度範囲でのヒト毛乳頭細胞の増殖促進作用を示し、それを越えた濃度では逆に細胞の増殖が抑制されたことから、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドと、感光素３０１号、ヘスペリジン、ルチン或いはリボフラビンとは、毛乳頭細胞増殖促進の作用機作が異なっているものと推測された。【００３１】
＜実験２：ヒト毛乳頭細胞の増殖に及ぼすグルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルナリンジン、マルトース、α，α−トレハロース、マルチトール、α−マルトシルα，α−トレハロース、環状ニゲロシルニゲロース或いは環状マルトシルマルトースの影響＞
ヒト毛乳頭細胞の増殖に及ぼすグルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルナリンジン、マルトース、α，α−トレハロース、マルチトール、α−マルトシルα，α−トレハロース、環状ニゲロシルニゲロース或いは環状マルトシルマルトースの影響を調べる実験を、以下のようにしておこなった。すなわち、グルコシルヘスペリジン（株式会社林原生物化学研究所販売、試薬級、純度９８％以上）、グルコシルルチン（株式会社林原生物化学研究所製造、純度９８％以上）、グルコシルナリンジン（株式会社林原生物化学研究所製造、純度９８％以上）、マルトース（株式会社林原生物化学研究所販売、試薬級、純度９９％以上）、α，α−トレハロース（株式会社林原生物化学研究所販売、化粧品用、純度９９％以上）、マルチトール（株式会社林原生物化学研究所販売、試薬級、純度９９％以上）α−マルトシルα，α−トレハロース（株式会社林原生物化学研究所製造、純度９８％以上）、環状ニゲロシルニゲロース（株式会社林原生物化学研究所製造、純度９８％以上）、環状マルトシルマルトース（株式会社林原生物化学研究所製造、純度９８％以上）を試験試薬として使用し、その何れか１種を、最終濃度が、表３或いは表４に記載の濃度となるように、１容積％のＦＣＳ添加ＤＭＥＭ培地に添加し試験液を調製した。これら何れかの試験液を、実験１と同様に調製したヒト毛乳頭細胞培養９６ウエルプレートに５０μｌ／ウエルで添加し、５容積％ＣＯ２、３７℃の条件で、4日間培養後、実験１と同じ方法で、ＭＴＴ法を用いてヒト毛乳頭細胞の増殖率（％）を求め、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン或いはグルコシルナリンジンを添加した場合の結果を表３に、マルトース、α，α−トレハロース、マルチトール、α−マルトシルα，α−トレハロース、環状ニゲロシルニゲロース、或いは、環状マルトシルマルトースを添加した場合の結果を表４に示す。【００３２】
【表３】
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【００３３】
【表４】
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【００３４】
表３から明らかなように、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン或いはグルコシルナリンジンを添加した場合には、各々０．０１ｎＭ乃至１μＭの濃度でヒト毛乳頭細胞の増殖促進作用が認められた。この結果は、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン或いはグルコシルナリンジンは、特定の濃度範囲で、毛乳頭細胞の増殖促進作用を有することを物語っている。なお、表２と表３を対比すると、同濃度のルチンとグルコシルルチンが同程度の増殖促進作用を示したのに対して、同濃度のグルコシルヘスペリジンとヘスペリジンとでは、グルコシルヘスペリジンの方が、何れの濃度においても低い増殖促進効果しか示さなかったのは、この実験系では、グルコシルルチンとグルコシルヘスペリジンとで、ヒト毛乳頭細胞に由来するα−グルコシダーゼによる分解の速度に差があるためと推測された。また、表４から明らかなように還元糖のマルトースを添加した場合には、毛乳頭細胞に増殖は認められなかった。これに対して、非還元糖のα，α−トレハロース、マルチトール、α−マルトシルα，α−トレハロース、環状ニゲロシルニゲロース、或いは、環状マルトシルマルトースを添加した場合には、何れの非還元性糖類を添加した場合においても、濃度に依存した毛乳頭細胞の増殖が認められた。α，α−トレハロース及びマルチトールを添加した場合には、１．５ｍＭ以上の添加で、毛乳頭細胞増殖促進効果が認められ、１５ｍＭ以上の添加で、その効果は顕著となった。また、α−マルトシルα，α−トレハロース、環状ニゲロシルニゲロース、或いは、環状マルトシルマルトースを添加した場合には、０．７５ｍＭ以上の添加で毛乳頭細胞増殖促進効果が認められ、７．５ｍＭ以上の添加で、その効果は顕著となった。これら非還元性糖類による毛乳頭細胞増殖促進効果は、添加量を増やしても細胞増殖は抑制されないことから、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン或いはグルコシルナリンジンによる毛乳頭細胞増殖促進のメカニズムとは異り、アスコルビン酸類を添加した場合と類似していることを物語っている。【００３５】
＜実験３：Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドのヒト毛乳頭細胞増殖促進作用に及ぼす感光素３０１号、ヘスペリジン、グルコシルルチン、リボフラビン、α，α−トレハロース或いは環状ニゲロシルニゲロースの影響＞
実験１及び実験２から、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドや非還元性糖類と、感光素３０１号、ヘスペリジン、グルコシルルチン或いはリボフラビンとは、ヒト毛乳頭増殖の作用機作が異なることが判明したので、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドの毛乳頭細胞増殖促進作用に及ぼす感光素３０１号、ヘスペリジン、グルコシルルチン、リボフラビン、α，α−トレハロース或いは環状ニゲロシルニゲロースの影響を調べる実験を、以下のようにしておこなった。すなわち、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド（株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「ＡＡ２Ｇ」、純度９８％以上）、感光素３０１号（株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「タカナール」）、ヘスペリジン（シグマ社販売、商品名「ヘスペリジン」）、リボフラビン（シグマ社販売、商品名「リボフラビン」）、グルコシルルチン（株式会社林原生物化学研究所製造、純度９８％以上）、α，α−トレハロース（林原生物化学研究所販売、試薬級、純度９９％以上）及び環状ニゲロシルニゲロース（株式会社林原生物化学研究所製造、純度９８％以上）を試験薬剤として使用し、最終濃度が、表５に記載の濃度となるように、１容積％のＦＣＳを含むＤＭＥＭ培地に添加し試験液を調製した。これら何れかの試験液を、実験１と同じ方法で調製したヒト毛乳頭細胞培養９６ウエルプレートに５０μｌ／ウエルで添加し、５容積％ＣＯ２、３７℃の条件で、４日間培養後、ＭＴＴ法を用いて実験１と同じ方法で、各試験液で培養したヒト毛乳頭細胞の増殖率を求めた。この増殖率を使用して、Ｃｈｏｕ  Ｊ．  Ｈ．（「Ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ  ａｎｄ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｉｎ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」，２２３−２４１，１９９１参照）の理論に基づき、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドと他の試験試薬の二剤を併用した時のＬ−アスコルビン酸２−グルコシドの投与量の併用効果指数（Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｅｘ、以下「ＣＩ」と略記する。）を、ＣＩ計算用ソフト（カルックシン（ＣａｌｃｕＳｙｎ）、バイオソフト（ＢＩＯＳＯＦＴ）社(英国)販売）で計算し、その結果を表５に示す。また、ＣＩに基づく、二剤併用時の相乗効果の程度は、表６に示す当該計算ソフトに添付されたマニュアルに記載の判定基準に基づき判定し、併せて、表５に示す。【００３６】
【表５】
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【００３７】
【表６】
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【００３８】
表５及び表６から明らかなように、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド（ＡＡ−２Ｇ）と感光素３０１号とを併用した場合には、ＣＩが０．４０となり、ヒト毛乳頭細胞の増殖促進に対して、相乗効果があることが確認された。また、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドと、ヘスペリジン、グルコシルルチン或いはリボフラビンの何れかとを併用した場合には、ＣＩが０．１−０．３の範囲内となり、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドと、ヘスペリジン、グルコシルルチン或いはリボフラビンとの併用により、ヒト毛乳頭細胞の増殖促進に対して、強い相乗効果があることが確認された。また、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド（ＡＡ−２Ｇ）と、α，α−トレハロース或いは環状ニゲロシルニゲロースとを併用した場合にも、ＣＩが、各々０．３９、０．３６となって、ヒト毛乳頭細胞の増殖促進に対して、相乗効果があることが確認された。これらの試験結果は、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドと感光素３０１号、ヘスペリジン、グルコシルルチン、リボフラビン、或いは、α，α−トレハロースや環状ニゲロシルニゲロースなどの非還元性糖類とを併用することにより、優れた毛乳頭細胞増殖促進剤が調製できることを物語っている。【００３９】
＜実験４：毛周期に及ぼすＬ−アスコルビン酸２−グルコシド、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、グルコシルナリンジン、感光素３０１号或いはα，α−トレハロースの糖質誘導体の影響＞
毛周期に及ぼすＬ−アスコルビン酸２−グルコシド、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、グルコシルナリンジン、感光素３０１号、或いはα，α−トレハロースの糖質誘導体の影響を調べる試験を以下のように行った。すなわち、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド（株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「ＡＡ２Ｇ」、純度９８％以上）、グルコシルヘスペリジン（株式会社林原生物化学研究所販売、試薬級、純度９８％以上）、グルコシルルチン（株式会社林原生物化学研究所製造、純度９８％以上）、グルコシルリボフラビン（株式会社林原生物化学研究所製造、純度９８％以上）、グルコシルナリンジン（株式会社林原生物化学研究所製造、純度９８％以上）及び感光素３０１号（株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「タカナール」、純度９８％以上）、α，α−トレハロースの糖質誘導体含有糖質（株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「トルナーレ」、α−マルトシルα，α−トレハロースを無水物換算で約５３％含有）を試験試薬として使用した。Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド１％、クエン酸１％、クエン酸ナトリウム１％、７０％エタノール９０％、硬化ヒマシ油エチレンオキシド（４０モル付加物）１％からなる基本処方に、表７に示す前記試験試薬の何れか１種を、表７に示す量添加し、適量のイオン交換水を加えて全量を１００％として、常法により試験用の育毛料Ｎｏ１乃至育毛料Ｎｏ６を調製した。また、基本処方に適量のイオン交換水を加えて全量を１００％とした育毛料Ｎｏ７及び、陰性対照として、基本処方からＬ−アスコルビン酸２−グルコシドを除いた処方に適量のイオン交換水を加えて、全量を１００％として育毛料Ｎｏ８を調製した。なお、α，α−トレハロースの糖質誘導体含有糖質は、α−マルトシルα，α−トレハロースの配合割合が０．５％となるように添加した。【００４０】
＜毛周期に及ぼす影響の確認試験＞
試験用の育毛料Ｎｏ１乃至育毛料Ｎｏ７及び陰性対照（育毛料Ｎｏ８）の育毛料を用いてこれらの育毛料の毛周期に及ぼす影響を調べるために、ヒトに対して、以下の方法で試験を実施した。すなわち、育毛料Ｎｏ１乃至育毛料Ｎｏ７或いは陰性対照（育毛料Ｎｏ８）の何れか１種を、男性型脱毛に悩む男性１０名（合計８０名）を被験者として、１日に朝晩２回、６ヶ月間使用を続けてもらった。育毛料の有効性評価は、塗布直前及び塗布終了直後に、被験者１名につき脱毛部位に残存している毛髪を、無作為に３０本抜毛し、毛根を顕微鏡で観察した。毛根の形態により、休止期毛根数を計数し、休止期毛根の割合を求め、休止期毛根の割合が、試験育毛料塗布前に比して２０％以上減少、２０％未満減少乃至２０％未満増加、２０％以上増加の３群に分けて、その人数を表７に示す。また、各試験育毛料を塗布した被験者に占める、休止期毛根の割合が、塗布前に比して２０％以上減少した被験者の割合（％）を求め、下記の判定基準に基づき、毛周期の回転に及ぼす効果を評価して、結果を表７に示す。なお、試験を通じて、安全性に関する問題は見られなかった。【００４１】
休止期毛根の割合の増減により、育毛料Ｎｏ１乃至育毛料Ｎｏ７及び陰性対照の育毛作用を比較した。休止期毛根とは成長の止まった毛の毛根であり、脱毛を訴えるヒトは、正常なヒトよりもこの休止期毛根の割合が多いことが認められているので育毛作用の効果は、下記の判定基準で評価した。【００４２】
＜判定基準＞
休止期毛根の割合が育毛料使用前に比して２０％以上減少した被験者が、４０％以上である場合を「有効」、２０％以上４０％未満である場合を「やや有効」、２０％未満である２合を「無効」とした。【００４３】
【表７】
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【００４４】
表７から明らかなように、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドと、グルコシルヘスペリジン（育毛料Ｎｏ１）、グルコシルルチン（育毛料Ｎｏ２）、グルコシルリボフラビン（育毛料Ｎｏ３）、グルコシルナリンジン（育毛料Ｎｏ４）、感光素３０１号（育毛料Ｎｏ５）或いはα，α−トレハロースの糖質誘導体含有糖質（育毛料Ｎｏ６）の何れか１種とを併用した育毛料を使用した場合には、休止期毛根の割合が、使用前に比して減少することが明らかとなった。その効果は、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドとグルコシルヘスペリジン或いはグルコシルルチンとを併用した場合に最も高くなった。また、試験試薬としてＬ−アスコルビン酸２−グルコシドのみを含む基本処方の育毛剤（育毛料Ｎｏ７）を使用した場合にも、試験試薬２剤を併用した場合（育毛料Ｎｏ１乃至育毛料Ｎｏ６）よりは弱いながら、使用前に比して休止期毛根の割合の減少が認められた。これらに対して、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、グルコシルナリンジン及び感光素３０１号の何れも含まない陰性対照（育毛料Ｎｏ８）を使用した場合には、使用前に比して休止期毛根の割合の減少は殆ど認められなかった。【００４５】
＜実験５：自毛植毛した際の毛乳頭細胞の増殖に及ぼすＬ−アスコルビン酸２−グルコシド、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、感光素３０１号、α，α−トレハロース或いはα−マルトシルα，α−トレハロースの影響＞
自毛植毛した際の毛乳頭細胞の増殖に及ぼすＬ−アスコルビン酸２−グルコシド、糖転移ヘスペリジン、糖転移ルチン、糖転移リボフラビン、感光素３０１号、α，α−トレハロース或いはα−マルトシルα，α−トレハロースの影響を調べる実験を自毛移植の際の移植毛を使用して、以下のようにしておこなった。【００４６】
＜自毛移植用の移植毛の調製＞
自毛植毛を希望する脱毛症の男性８０名を、無作為に１０名ずつ８つのグループに分けた。各自の後頭部の健康毛の部位から、常法により、毛髪のはえた頭皮を、外科的に採取した。採取した頭皮を、抗菌剤を含む生理食塩水で洗浄後、試験試薬として、実験１で使用したものと同じＬ−アスコルビン酸２−グルコシド、及び、実験２で使用したものと同じグルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、感光素３０１号、α，α−トレハロース或いはα−マルトシルα，α−トレハロースの何れかを、生理食塩水に添加して、表８に示す濃度となるように調製した処理液に２時間浸漬し、その浸漬期間中に、処理液中で、個々の毛髪乃至休止期の移植毛を、移植用に切り分けた。対照として生理食塩水のみを使用した処理液で、移植用の毛髪乃至休止期の移植毛を調製した。【００４７】
＜移植した毛髪乃至休止期の毛髪の着生の有無の判定＞
処理液に２時間浸漬した移植毛を、生理食塩水に移し、常法により、脱毛部位の頭皮に移植した。移植終了後、移植部位をデジタルカメラで撮影し、約１００本の毛髪を移植した部位を特定して、その範囲に移植した移植毛の本数を正確にカウントした。移植６０日後に、前に撮影したデジタルカメラの映像を基に、移植時にその移植毛の本数をカウントした部位について、移植毛の数をカウントし、移植時の本数で除し、１００倍して、移植毛の着生率（％）を求め、その結果を表８に示す。【００４８】
【表８】
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【００４９】
表８から明らかなように、対照として使用した生理食塩水中で処理した移植毛を移植した場合の着生率は、３４．７％だったのに対して、アスコルビン酸２−グルコシド、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、感光素３０１号、α，α−トレハロース或いはα−マルトシルα，α−トレハロースを添加した生理食塩水中で処理した移植毛の着生率は、各４４．１％、４７．６％、４５．２％、５０．８％、５６．９％、４４．５％、４６．６％となって、何れの場合も、対照よりも高い着生率を示した。この試験結果は、移植毛を頭皮に移植する前に、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド、感光素３０１号、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、α，α−トレハロース或いはα−マルトシルα，α−トレハロースを含有する溶液で処理することにより、移植毛の頭皮への着生率を向上できることを物語っている。【００５０】
＜実験６：Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドのヒト毛髪の自毛移植の着生に及ぼす感光素３０１号、グルコシルヘスペリジン、グルコシルグルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、α，α−トレハロース、或いは、α−マルトシルα，α−トレハロースの影響＞
実験５から、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド、感光素３０１号、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、α，α−トレハロース、或いは、α−マルトシルα，α−トレハロースは、自毛移植時の移植毛の着生率を向上させる作用があることが判明したので、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドの移植毛の着生に及ぼす感光素３０１号、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、α，α−トレハロース、或いは、α−マルトシルα，α−トレハロースの影響を調べる実験を、以下のようにしておこなった。すなわち、実験５で使用したものと同じ試験薬剤を使用し、最終濃度が、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドは、実験５の１０分の１の１ｍＭとし、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド以外は、実験５と同じ濃度として、表９に示す濃度となるように、処理液を調製した。これらの処理液を使用して、実験５と同一の方法、条件で、各処理液につき１０名の脱毛症の男性に自毛植毛を実施した。植毛後６０日目に、実験５と同じ方法で移植毛の本数をカウントして、着生率を求めて、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドと感光素３０１号、グルコシルヘスペリジン、グルコシルグルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、α，α−トレハロース、或いは、α−マルトシルα，α−トレハロースとの併用の効果を調べて、その結果を表９に示した。【００５１】
【表９】
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【００５２】
表９から明らかなように、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド（ＡＡ−２Ｇ）と、感光素３０１号、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、α，α−トレハロース或いはα−マルトシルα，α−トレハロースの何れかとを併用した場合には、移植毛の着生率が、各々６６．３％、６８．５％、７３．１％、７４．２％、５９．３％、６１．２％となって、何れの場合も、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド単独の場合の着生率（４３．４％）よりも高い値を示した。また、表９と表８との比較から明らかなように、感光素３０１号、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、α，α−トレハロース或いはα−マルトシルα，α−トレハロースの何れかを単独で使用した場合よりも、その着生率が向上していることから、感光素３０１号、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、α，α−トレハロース或いはα−マルトシルα，α−トレハロースには、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドによる移植毛の着生率増強効果をさらに増強する作用があることが確認された。この実験結果は、自毛移植の際に、移植毛を頭皮に移植する前に、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドと感光素３０１号、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、α，α−トレハロース或いはα−マルトシルα，α−トレハロースとを併用して処理することにより、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドを単独で使用するよりも、移植毛の頭皮への着生率を向上できることを物語っている。【００５３】
これらの実験結果は、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、グルコシルナリンジン、感光素３０１号或いはα，α−トレハロースをはじめとする非還元性糖類は、毛乳頭細胞の増殖を促進し、毛周期における休止期の毛根の割合を低減すると共に、毛根を活性化することができるので、これらの物質の１種又は２種以上を用いることによって、優れた育毛効果（発毛効果、脱毛抑制効果を含む）や自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上効果を得ることができることを物語っている。また、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドと、グルコシルヘスペリジン、グルコシルルチン、グルコシルリボフラビン、グルコシルナリンジン、感光素３０１号或いはα，α−トレハロースをはじめとする非還元性糖類から選ばれる１種又は２種とを併用することにより、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドのもつ毛乳頭細胞の増殖を促進し、毛周期における休止期の毛根の割合を低減すると共に、毛根を活性化する作用を、さらに増強できることを物語っている。【００５４】
以下、実施例により、本発明をさらに具体的に説明するが、この実施例により、本発明の技術的範囲が限定的に解釈されるべきものではない。なお、以下の実施例の各成分の配合量は、特に断わらない限り、配合される対象物全体に対する割合（％）で示す。
【実施例１】
【００５５】
＜毛乳頭細胞増殖促進剤＞
以下の成分を以下の配合で均一に混合して、毛乳頭細胞増殖促進剤を調製した。【００５６】
含水結晶α，α−トレハロース（株式会社林原商事
販売、商品名「トレハ」）                                  ６９
Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド（株式会社林原
生物化学研究所販売、商品名「ＡＡ２Ｇ」）                  ２８
グルコシルヘスペリジン（株式会社林原生物化学研
究所販売、商品名「林原ヘスペリジンＳ」）                    １
グルコシルルチン（株式会社林原商事販売、商品名
「αＧルチン」）                                            １
グルコシルリボフラビン（株式会社林原生物化学研
究所製造）                                                  １【００５７】
本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用や自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を示し、皮膚に潤いを与え、皮膚の老化防止に奏効する、簡便に利用できかつ著効を示す毛乳頭細胞増殖促進剤である。また、本品は、適度な酸味により良好な呈味を示すので、毛乳頭細胞増殖促進のために用いられる旨の表示を付して、毛乳頭細胞増殖促進のための健康補助食品として、このまま経口的に摂取することも、又、水やその他の飲料などに溶解して摂取することも随意である。さらには、特別用途食品、保健機能食品、化粧品、医薬部外品、医薬品、飼料、ペットフード、雑貨などに配合して、これらに毛乳頭細胞増殖促進作用を付与することも随意である。また、本品を、注射剤の製造原料として使用することも随意である。【００５８】
本品を、１容積％ＦＣＳ添加ＤＭＥＭで、グルコシルヘスペリジンの濃度が０．５μＭとなるように希釈して、実験１に記載の方法により測定したところ、明確な毛乳頭細胞増殖促進作用が確認された。
【実施例２】
【００５９】
＜毛乳頭細胞増殖促進剤＞
以下の成分を以下の配合で均一に混合して、毛乳頭細胞増殖促進剤を調製した。【００６０】
α，α−トレハロースの糖質誘導体含有シラップ（
株式会社林原生物化学研究所販売、商品名「トルナ
ーレ」）                                                ７５
Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド（株式会社林原
生物化学研究所販売、商品名「ＡＡ２Ｇ」）                ２４
グルコシルヘスペリジン（株式会社林原生物化学研
究所販売、商品名「林原ヘスペリジンＳ」）                  ０．５
グルコシルリボフラビン（株式会社林原生物化学研
究所製造）                                                ０．３
感光素３０１号（株式会社林原生物化学研究所販売、
商品名「タカナール」）                                    ０．２【００６１】
本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用や自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を示し、皮膚に潤いを与え、皮膚の老化防止に奏効する、簡便に利用できかつ著効を示す毛乳頭細胞増殖促進剤である。また、本品を、化粧品、医薬部外品、医薬品などの皮膚外用剤に配合して、これらに毛乳頭細胞増殖促進作用を付与することも随意である。【００６２】
本品を、１容積％ＦＣＳ添加ＤＭＥＭで、グルコシルヘスペリジンの濃度が２００ｎＭとなるように希釈して、実験１に記載の方法により測定したところ、明確な毛乳頭細胞増殖促進作用が確認された。
【実施例３】
【００６３】
＜毛乳頭細胞増殖促進用剤＞
以下の成分を以下の配合で均一に混合して、液状の毛乳頭細胞増殖促進剤を調製した。
Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド                              ２
クエン酸                                                      ０．０１
クエン酸ナトリウム                                            ０．１
グルコシルヘスペリジン                                        ０．５
ステアリルジメチルアミンオキシド                              ０．５
硬化ヒマシ油エチレンオキシド（４０モル）付加物                １
α，α−トレハロースの糖質誘導体含有糖質（株式会
社林原生物化学研究所販売、商品名「トルナーレ）              １
９５％エタノール                                            ５４
イオン交換水                                                残量【００６４】
本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用や自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を有し、かつ、育毛効果及び脱毛抑制作用を有する毛乳頭細胞増殖促進剤である。【００６５】
本品を、１容積％ＦＣＳ添加ＤＭＥＭで、グルコシルヘスペリジンの濃度が２００ｎＭとなるように希釈して、実験１に記載の方法により測定したところ、明確な毛乳頭細胞増殖促進作用が確認された。
【実施例４】
【００６６】
＜毛乳頭細胞増殖促進剤＞
以下の成分を以下の配合で均一に混合して、液状の毛乳頭細胞増殖促進剤を調製した。
Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド                              ２
クエン酸                                                      ０．０１
クエン酸ナトリウム                                            ０．１
グルコシルヘスペリジン                                        ０．５
Ｎ−ヤシラウリル−β−アミノプロピオン酸ソーダ                ０.２
ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム                          ０.５
硬化ヒマシ油エチレンオキシド（４０モル）付加物                １
藍エキス（株式会社林原生物化学研究所販売、商品名
「藍ルーロス」）                                            １
９５％エタノール                                            ５４
イオン交換水                                                  残量【００６７】
本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用や自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を有し、かつ、育毛作用及び脱毛抑制作用を示す、優れた毛乳頭細胞増殖促進剤である。【００６８】
本品を、１容積％ＦＣＳ添加ＤＭＥＭで、グルコシルヘスペリジンの濃度が２００ｎＭとなるように希釈して、実験１に記載の方法により測定したところ、明確な毛乳頭細胞増殖促進作用が確認された。
【実施例５】
【００６９】
＜毛乳頭細胞増殖促進剤＞
下記配合に基づき、Ａ相を６０℃で加熱溶解し、これに溶解したＢ相を加え、次にＣ相を添加し混合した。これにＤ相を徐々に添加し分散させ、ジェル状の毛乳頭細胞増殖促進剤を調製した。
（Ａ相）
硬化ヒマシ油エチレンオキシド（６０モル）付加物                ２
グリセリン                                                  １０
ジプロピレングリコール                                      １０
１,３−ブチレングリコール                                    ５
ポリエチレングリコール１５００                                ５
ペンチレングリコール                                          ３．５
（Ｂ相）
カルボキシビニルポリマー１％水溶液                          ３０
ヘキサメタリン酸ソーダ                                        ０.０３ 
イオン交換水                                                  ８.３５
（Ｃ相）
水酸化カリウム                                                ０.１２
イオン交換水                                                  ５
（Ｄ相）
Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド                              ２
水酸化カリウム                                                ３
グルコシルリボフラビン                                        ０．０５
イオン交換水                                                １５．９５【００７０】
本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用や自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を有し、かつ、育毛作用及び脱毛抑制作用を示す、優れた毛乳頭細胞増殖促進剤である。
【実施例６】
【００７１】
＜毛乳頭細胞増殖促進剤＞
下記配合に基づき、Ａ相、Ｂ相をそれぞれ加熱溶解して混合し、ホモミキサーで乳化してクリーム状の毛乳頭細胞増殖促進剤を調製した。
（Ａ相）
流動パラフィン                                                ５
セトステアリルアルコール                                      ５.５
グリセリルモノステアレート                                    ３
ＥＯ（２０モル）−２−オクチルドデシルエーテル                ３
プロピルパラベン                                              ０.３
香料                                                          ０.１
（Ｂ相）
Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド                              ２
クエン酸                                                      ０．０１
クエン酸ナトリウム                                            ０．１
感光素３０１号                                                ０．００５
グリセリン                                                    ７
サイクリックマルトシルマルトース（株式会社林原生
物化学研究所製造）                                          １
ジプロピレングリコール                                      ２０
ポリエチレングリコール４０００                                ５
ドデシル硫酸ナトリウム                                        ０.１
ヘキサメタリン酸ソーダ                                        ０.００５
イオン交換水                                                  残量【００７２】
本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用や自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を有し、かつ、育毛作用及び脱毛抑制作用を示す、優れた毛乳頭細胞増殖促進剤である。【００７３】
男性型脱毛に悩む男性１０名に対して、本品を１日に朝晩２回、１回０．５ｇを、４ヶ月間脱毛部に使用してもらい、実験４と同じ方法で、休止期の毛根の割合を測定したところ、試験開始前に比べて、１０名中７名で、休止期の毛根の割合が、使用前に比して２０％以上減少した。
【実施例７】
【００７４】
＜毛乳頭細胞増殖促進剤＞
下記配合処方に基づき、９５％エタノールに適量のイオン交換水を加え、これに、実施例２の方法で調製した毛乳頭細胞増殖促進剤、硬化ヒマシ油エチレンオキシド（４０モル）付加物及びポリオキシエチレンラウリルアミンオキシド、ジメチルラウリルアミンオキシドを加えた後、攪拌して、液状の毛乳頭細胞増殖促進剤を得た。
実施例２の方法で調製した毛乳頭細胞増殖促進剤                  １
ポリオキシエチレンラウリルアミンオキシド                      ０．１
ジメチルラウリルアミンオキシド                                １
硬化ヒマシ油エチレンオキシド（４０モル）付加物                １
マルチトール                                                  ０．５
９５％エタノール                                            ５４
香料                                                          適量
イオン交換水                                                  残量【００７５】
本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用や自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を有し、かつ、育毛作用及び脱毛抑制作用を示す、優れた毛乳頭細胞増殖促進剤である。【００７６】
本品を、１容積％ＦＣＳ添加ＤＭＥＭで、グルコシルヘスペリジンの濃度が２００ｎＭとなるように希釈して、実験１に記載の方法により測定したところ、明確な毛乳頭細胞増殖促進作用が確認された。
【実施例８】
【００７７】
＜毛乳頭細胞増殖促進剤＞
下記配合処方に基づき、液状の毛乳頭細胞増殖促進剤を調製した。
Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド                              ２
クエン酸                                                      ０．０１
クエン酸ナトリウム                                            ０．１
グルコシルルチン                                              ０．５
グルコシルナリンジン（株式会社林原生物化学研究所製造）        ０．２
感光素３０１号                                                ０．００１
Ｎ−ヤシラウリル−β−アミノプロピオン酸ソーダ                ０.２
ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム                          ０.５
硬化ヒマシ油エチレンオキシド（４０モル）付加物                １
サイクリックニゲロシルニゲロース                              ０．１
９５％エタノール                                            ５４
イオン交換水                                                  残量【００７８】
本品は、毛乳頭細胞増殖促進作用や自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上作用を有し、かつ、育毛作用及び脱毛抑制作用を示す、優れた毛乳頭細胞増殖促進剤である。【００７９】
本品を、１容積％ＦＣＳ添加ＤＭＥＭで、グルコシルヘスペリジンの濃度が２００ｎＭとなるように希釈して、実験１に記載の方法により測定したところ、明確な毛乳頭細胞増殖促進作用が確認された。
【実施例９】
【００８０】
＜毛乳頭細胞増殖促進剤＞
以下の成分を以下の配合で均一に混合して、粉末状の毛乳頭細胞増殖促進剤を調製した。【００８１】
含水結晶α，α−トレハロース（株式会社林原商事
販売、商品名「トレハ」）                                ６５．５
Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド（株式会社林原
商事販売、商品名「アスコフレッシュ」）                  １５
キトサン                                                  １５
糖転移ヘスペリジン（株式会社林原商事販売、商品
名「林原グルコシルヘスペリジンＳ」）                      ２
グルコシルリボフラビン                                      １
アデノシンモノフォスフェイト                                １
コエンザイムＱ１０                                          ０．５【００８２】
本品は、毛乳頭細胞増殖促進や自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上のために用いられる旨の表示を付して使用することのできる毛乳頭細胞増殖促進剤である。【００８３】
本品は、皮膚組織の血行を促進し、皮膚に潤いを与え、皮膚の張りや艶をよくし、シワやコジワの改善にも優れた効果を有している。男性型脱毛に悩む男性１０名に対して、本品を１日に朝晩２回、１回１ｇを、６ヶ月間食べ続けてもらい、実験４と同じ方法で、休止期の毛根の割合を測定したところ、試験開始前に比べて、１０名中６名で、休止期の毛根の割合が、使用前に比して２０％以上減少した。
【実施例１０】
【００８４】
＜毛乳頭細胞増殖促進剤＞
粉末マルチトール                                          ３５
実施例１の方法で調製した毛乳頭細胞増殖促進剤              １５
粉末卵黄                                                  １９
脱脂粉乳                                                  ２０
塩化ナトリウム                                              ４．５
塩化カリウム                                                １．８５
硫酸マグネシウム                                            ４
チアミン                                                    ０．０１
ビタミンＥアセテート                                        ０．６
ニコチン酸アミド                                            ０．０４
上記配合組成からなる配合物を調製した。この配合物２５質量部を精製水１５０質量部に均一に分散・溶解させ、２００ｇずつ褐色ガラス瓶に封入した。【００８５】
本品を、１容積％ＦＣＳ添加ＤＭＥＭで、グルコシルヘスペリジンの濃度が２００ｎＭとなるように希釈して、実験１に記載の方法により測定したところ、明確な毛乳頭細胞増殖促進作用が確認された。【００８６】
本品は、毛乳頭細胞増殖促進や自毛植毛時の移植毛の頭皮への着生率向上のために用いられる旨の表示を付して使用することのできる毛乳頭細胞増殖促進剤である。また、本品は、皮膚組織の血行を促進し、皮膚に潤いを与え、皮膚の張りや艶をよくし、シワやコジワの改善にも優れた効果を示す。
【産業上の利用可能性】
【００８７】
以上説明したように、本発明のＬ−アスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類、感光素３０１号及びα，α−トレハロースをはじめとする非還元性糖類などの脂質の分解抑制作用を有する物質から選ばれる何れか１種又は２種以上を有効成分とする毛乳頭細胞増殖促進剤は、毛乳頭細胞の増殖を効果的に促進することができる。また、Ｌ−アスコルビン酸類、フラボノイド類、リボフラビン類感光素３０１号、及び、非還元性糖類は何れも、飲食品或いは皮膚外用剤に長期間使用されている安全性の極めて高い物質であり、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤の有効成分として、副作用を懸念すること無く使用することができる。本発明は、斯くも顕著な作用効果を奏する発明であり、斯界に多大の貢献をする、誠に意義のある発明である。