(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
セイヨウクロタネソウ種子からチモキノンリッチ画分（ＴＱＲＦ）を抽出するための超臨界流体抽出法であって、
（ａ）３００バール〜６００バールの間の圧力にて３１℃〜８０℃の間の温度でセイヨウクロタネソウ種子粗油を抽出するステップと
（ｂ）ステップ（ａ）で得たセイヨウクロタネソウ種子粗油を１００〜３００バールの圧力にて３１〜８０℃の温度で分画し、ＴＱＲＦを得るステップと
を含み、超臨界流体が超臨界二酸化炭素であり、二酸化炭素供給量が２５ｇ／分〜３０ｇ／分の間である、超臨界流体抽出法。
【請求項２】
２時間〜３時間の間の期間実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
汚れを除き、乾燥させ、粉砕したセイヨウクロタネソウ種子１００ｇのサンプルサイズで実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記抽出ステップが、温度８０℃及び圧力６００バールで実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記抽出ステップが、温度４０℃及び圧力６００バールで実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法によってセイヨウクロタネソウ種子から得られた、チモキノンリッチ画分（ＴＱＲＦ）。
【請求項７】
チモキノン（ＴＱ）含量が、ＴＱＲＦ１グラムあたりＴＱ５．７〜６４．５ｍｇの範囲である、請求項６に記載のＴＱＲＦ。
【請求項８】
ＴＱＲＦが抗酸化活性を示す、請求項６又は７に記載のＴＱＲＦ。
【請求項９】
セイヨウクロタネソウ種子から固定油及びチモキノンリッチ画分（ＴＱＲＦ）を同時に抽出するための、超臨界流体抽出法であって、
（ａ）３００バール〜６００バールの間の圧力にて３１℃〜８０℃の間の温度でセイヨウクロタネソウ種子粗油を抽出するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で得たセイヨウクロタネソウ種子粗油を１００〜３００バールの圧力にて３１〜８０℃の温度で分画し、ＴＱＲＦ及び固定油を得るステップと
を含み、超臨界流体が超臨界二酸化炭素であり、二酸化炭素供給量が２５ｇ／分〜３０ｇ／分の間である、超臨界流体抽出法。
【請求項１０】
２時間〜３時間の間の期間実施される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
汚れを除き、乾燥させ、粉砕したセイヨウクロタネソウ種子１００ｇのサンプルサイズで実施される、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
分画温度４０〜８０℃及び分画圧力１００〜３００バールでのＴＱ含量が、ＴＱＲＦ中では固定油中の２〜６５倍の範囲になる、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
それぞれ１グラムの固定油又はＴＱＲＦが、１２〜７５ｍｇのα−トコフェロールと同等の抗酸化活性を示す、請求項９〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ＴＱＲＦの抗酸化活性が固定油の７倍である、請求項９〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に、固定油及びチモキノンリッチ画分（ＴＱＲＦ）の抽出に関する。
【背景技術】
【０００２】
セイヨウクロタネソウ（Ｎｉｇｅｌｌａ  ｓａｔｉｖａ  Ｌ．）は、キンポウゲ科に属し、数千年前から、食品着香料、食品保存料、並びに健康増進成分として知られている。一般に、セイヨウクロタネソウ種子は、３０％を超える固定油、及び０．４０％〜０．４５％の揮発性油を含有する。セイヨウクロタネソウ油は、ヒトの栄養並びに疾患の予防及び治療において有利な役割を担うので、優れた機能性食用油の一つであるとみなされる。
【０００３】
チモキノン（ＴＱ）は、セイヨウクロタネソウ揮発性油中の主要な生理活性成分（１８．４％〜２４％）である。多くの薬理学的調査で、セイヨウクロタネソウ油及びその生理活性化合物であるＴＱは、抗腫瘍、抗炎症、抗菌、抗糖尿病、抗高血圧、高血糖、抗酸化、及び免疫修飾の活性を含む、健康に有益な複合的活性を有することが報告された。
【０００４】
健康への複合的な利益をもたらすので、セイヨウクロタネソウ種子からのＴＱの抽出は、重要度が高く、したがって、近年世界的に研究者及び栄養補助食品業界から絶えず注目を浴びるようになった。しかし、セイヨウクロタネソウ種子油抽出に使用される現在の方法（溶媒抽出及び水蒸気蒸留（ｈｙｄｒｏ  ｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ））は、時間がかかり、コスト高であり、環境に有害であるばかりでなく、エキスから有機溶媒が完全に除去されなければ、消費者の健康をも脅かす。この筋書きでは、超臨界二酸化炭素流体抽出（ＳＦＥ）が、セイヨウクロタネソウ種子抽出のためのより好適な代替手段になると思われる。好都合なことに、ＳＦＥは、毒性、爆発性がなく、環境にやさしく、費用効果が高く、時間の節約となり、選択性が調節可能な溶媒（超臨界二酸化炭素流体）を抽出過程で使用するものである。さらに、ＳＦＥでは、低温及び酸素なしの条件下で油抽出を実施することも可能になる。この特徴は、酸化分解を非常に受けやすい生理活性化合物、たとえばＴＱの抽出において極めて重要である。一方、ＳＦＥを使用する同時分画によって、ＴＱなどのターゲットとなる生理活性化合物の濃縮を、溶媒なしというだけでなく、時間及び費用の節約になる方法で行うことが可能になる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、ＳＦＥ抽出及び分画によって、（ＴＱなどの）生理活性化合物が多く、抗酸化活性が高いセイヨウクロタネソウ種子油及び画分を得る抽出手順を開発することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
したがって、セイヨウクロタネソウ種子から固定油を抽出するための超臨界流体抽出法が提供され、この方法は、３００バール〜６００バールの間の圧力にて３１℃〜８０℃の間の温度でセイヨウクロタネソウ種子粗油を抽出するステップを含む。
【０００７】
セイヨウクロタネソウ種子からチモキノンリッチ画分（ＴＱＲＦ）を抽出するための、二酸化炭素供給量が２５ｇ／分〜３０ｇ／分の間である超臨界流体抽出法も提供されるが、この方法は、（ａ）３００バール〜６００バールの間の圧力にて３１℃〜８０℃の間の温度でセイヨウクロタネソウ種子粗油を抽出するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）で得たセイヨウクロタネソウ種子粗油を１００〜３００バールの圧力にて３１〜８０℃の温度で分画するステップとを含む。
【０００８】
さらに、セイヨウクロタネソウ種子から固定油とチモキノンリッチ画分（ＴＱＲＦ）を同時に抽出するための、二酸化炭素供給量が２５ｇ／分〜３０ｇ／分の間である超臨界流体抽出法も提供されるが、この方法は、（ａ）セイヨウクロタネソウ種子粗油を３００バール〜６００バールの圧力にて３１℃〜８０℃の温度で抽出するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）で得たセイヨウクロタネソウ種子粗油を１００〜３００バールの圧力にて３１〜８０℃の温度で分画するステップとを含む。
【０００９】
本発明は、いくつかの新規な特徴と、付随する記述及び図面において以下で十分に説明及び例示する各部分の組合せとからなるが、本発明の範囲から逸脱することも本発明の利点のいずれかを犠牲にすることもなく、細目を様々に変更してもよいことは理解される。
【００１０】
図面は、本明細書の一部を構成しており、様々な形で具体化することのできる本発明の例示的又は好ましい実施形態を含む。しかし、開示される好ましい実施形態は、単に本発明を例示するものにすぎないことを理解されたい。したがって、本明細書に添付する図面は、限定するものとは解釈されず、単に特許請求の範囲の基盤として、また本発明の分野の技術者に教示するためにあると解釈される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】異なるセイヨウクロタネソウ種子油画分（ｎ＝２）の収率を示すグラフである。
【図２】異なるセイヨウクロタネソウ種子油画分（ｎ＝２）のＴＱ濃度を示すグラフである。
【図３】異なるセイヨウクロタネソウ種子油画分（ｎ＝２）のＤＰＰＨラジカル捕捉活性を示すグラフである。
【図４】異なるセイヨウクロタネソウ種子油画分（ｎ＝２）のガルボノキシル（ｇａｌｖｏｎｏｘｙｌ）捕捉活性を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は一般に、固定油及びチモキノンリッチ画分（ＴＱＲＦ）の抽出に関する。以下、本明細書では、本発明を本発明の好ましい実施形態に従って記述する。しかし、その記述を本発明の好ましい実施形態に限定するのは、単に本発明の論述を容易にするためにすぎないと理解されたく、また当業者が、付属の特許請求の範囲から逸脱することなく、様々な変更形態及び等価形態を考案してもよいと考える。
【００１３】
本発明は、セイヨウクロタネソウ種子の全油抽出とセイヨウクロタネソウ油画分のＴＱ濃縮の同時の実施を可能にするＳＦＥ抽出手順を提供する。本発明によって、有害な有機溶媒の使用を伴う任意のさらなる精製過程、並びに高価な設備を使用することなく、より短時間且つより低コストの方法で、セイヨウクロタネソウ種子の高度抗酸化ＴＱＲＦを得ることができるはずである。本発明は、ＴＱＲＦを生成するほかに、他の経済的価値を有すると思われる多量のセイヨウクロタネソウ種子固定油（ＮＳＯ）も同時に生成する。ＮＳＯは、機能性料理用油、顔用クリームなどの、品揃えの少ないセイヨウクロタネソウ栄養補助食品及び薬用化粧品の主成分にすることができるはずである。すなわち、本発明は、セイヨウクロタネソウ種子油の廃棄量の削減及び機能性の多角化にも寄与する。
【００１４】
一般に、本発明は、セイヨウクロタネソウ種子粗油を３００バール〜６００バールの間の圧力にて３１℃〜８０℃の間の温度で抽出するステップと、ステップ（ａ）で得たセイヨウクロタネソウ種子粗油を１００〜３００バールの圧力にて３１〜８０℃の温度で分画するステップとを含む、セイヨウクロタネソウ種子からの固定油及びＴＱＲＦの抽出を提供する。
【００１５】
各抽出は独立したものでもよく、すなわち、固定油とＴＱＲＦは、別々に抽出しても、同時に抽出してもよい。
【００１６】
本発明の好ましい実施形態では、超臨界流体は超臨界二酸化炭素であり、抽出は、汚れを除き、乾燥させ、粉砕したセイヨウクロタネソウ種子１００ｇのサンプルサイズに準拠したものである。
【００１７】
以下の実施例を参考事項として挙げるが、そうした実施例は、例示的なものであり、限定するものではない。
【実施例】
【００１８】
分画のためのＳＦＥパラメーターの選択
ａ．  サンプル調製
セイヨウクロタネソウ種子の汚れを除き、恒量になるまで４０℃のオーブンで乾燥させた。次いで、１００ｇの種子を、電気粉砕機（Ｗａｒｉｎｇ  Ｂｌｅｎｄｅｒ）を１分間使用することにより粉砕して粉末にした。この手順は、ＳＦＥ抽出を開始する直前に実施すべきである。
【００１９】
ｂ．  ＳＦＥ抽出
超臨界二酸化炭素抽出装置（Ｔｈａｒ  １０００Ｆ）を４通りの異なる抽出パラメーター（４００バール／４０、６００／４０、６００／６０、６００／８０の圧力（バール）／温度（℃））で使用することにより、セイヨウクロタネソウ種子を抽出にかけた。簡潔に述べると、１００グラムの粉砕したセイヨウクロタネソウ種子を１リットル容抽出容器に入れた。抽出容器をしっかりと密閉した後、所望の抽出温度を設定した。抽出容器内の圧力を、一定の二酸化炭素流量（３０ｇ／分）を用いて強め、自動式背圧調節装置によって調節した。望ましい温度及び圧力が得られた後、ＳＦＥ抽出を開始した。抽出過程は全体で３時間続き、１時間刻みで収集容器から油サンプルを集めた。この抽出の合計収油率を、区間収率を合計して算出した。
【００２０】
ｃ．  セイヨウクロタネソウＳＦＥ油中のＴＱ含量の測定
セイヨウクロタネソウ油中のＴＱ含量を、Ｃ１８逆相カラム（Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８）を完備した分析用ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００）を使用して測定した。移動相は、それぞれ５０：４５：５（ｖ／ｖ）の比の水、メタノール（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、及びイソプロパノール（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）からなるものであった。移動相の流量は、１．５ｍｌ／分に設定した。セイヨウクロタネソウ油を最初にイソプロパノールに溶解させ、０．４５μｍのＭｉｌｌｉｐｏｒｅフィルターで濾過してからＨＰＬＣシステムに注入（２０μｌ）した。セイヨウクロタネソウＳＦＥ油のチモキノン含量を、チモキノン標準物質（Ｓｉｇｍａ）曲線から決定し、ｍｇ  ＴＱ／ｇ油で示した。
【００２１】
ｄ．  結果
【表１】
0005641521.tif 000002
【００２２】
【表２】
0005641521.tif 000003
【００２３】
表１及び２は、それぞれ、ＳＦＥによって抽出したセイヨウクロタネソウ種子油の収率及びＴＱ含量を示す。結果は、等温条件下（４０℃）で抽出圧が４００バールから６００バールに上昇すると、セイヨウクロタネソウ油の収率が有意に増加することを示している（Ｐ＜０．０５）。その上、結果は、６００バールの一定圧力でＳＦＥ抽出温度が上昇すると、得られる収率は有意に増加するが、油中のＴＱ含量は減少することも示している（Ｐ＜０．０５）。４０〜８０℃の範囲の温度と組み合わせた６００バールでのＳＦＥ抽出では、抽出の最初の１時間でセイヨウクロタネソウ種子から油及びＴＱの大部分（総抽出可能物質の＞５０％）が効率よく抽出された。しかし、その後の２時間の抽出では収油率及びＴＱ含量の下降性の減少が認められた。この実験では終始、ＴＱ含量が多く、エネルギー（熱）要件が低いので、６００バール／４０℃をさらなる分画のＳＦＥパラメーターとして選択した。
【００２４】
ＳＦＥ分画によるセイヨウクロタネソウ種子からの高度抗酸化ＴＱＲＦの生成
ａ．  サンプル調製
セイヨウクロタネソウ種子の汚れを除き、恒量になるまで４０℃のオーブンで乾燥させた。次いで、１００ｇの種子を、電気粉砕機（Ｗａｒｉｎｇ  Ｂｌｅｎｄｅｒ）を１分間使用することにより粉砕して粉末にした。この手順は、ＳＦＥ抽出を開始する直前に実施すべきである。
【００２５】
ｂ．  ＳＦ抽出及び分画
セイヨウクロタネソウ種子を抽出にかけ（６００バール／４０℃）、超臨界二酸化炭素抽出装置（Ｔｈａｒ  １０００Ｆ）を９通りの異なる分画パラメーター（３００バール／４０℃、３００バール／６０℃、２００バール／４０℃、２００バール／６０℃、１００バール／４０℃、１００バール／６０℃の圧力（バール）／温度（℃））で使用することにより分画した。簡潔に述べると、１００グラムの粉砕したセイヨウクロタネソウ種子を１リットル容抽出容器に入れた。抽出容器をしっかりと密閉した後、抽出温度を４０℃に設定した。抽出容器内の圧力を、一定の二酸化炭素流量（２５ｇ／分）を用いて強め、自動式背圧調節装置によって調節した。抽出容器が６００バール及び４０℃に達した後、ＳＦＥ分画を開始した。セイヨウクロタネソウ油の分画は、容器内部の圧力及び温度を６通りの異なる計画分画パラメーター：（圧力（バール）／温度（℃）：３００バール／４０℃、３００バール／６０℃、２００バール／４０℃、２００バール／６０℃、１００バール／４０℃、１００バール／６０℃）に従って調節することにより、第１の収集容器１で実施した。同時に、第１の容器での分画からのすべての抽出可能物質を集めるために、第２の収集容器の条件を大気圧（１バール）及び室温（２５℃）に設定した。抽出及び分画の過程は全体で２．５時間続いた。抽出が完了した後、抽出容器及び第１の収集容器を減圧し、それぞれ第１の収集容器及び第２の収集容器から画分を集めた。第１の収集容器及び第２の収集容器中のセイヨウクロタネソウ画分の収率を最後に算出した。ＳＦＥ未分画及び石油エーテル抽出（ソックスレー、ＡＯＡＣ法）セイヨウクロタネソウ油を、この実施例の比較対象として使用した。
【００２６】
ｃ．  ソックスレー法の使用による溶媒抽出
ソックスレー法（ＡＯＡＣ法）の使用による溶媒抽出を実施したが、使用した溶媒は石油エーテルである。まず、１０グラムの粉砕したセイヨウクロタネソウ種子を秤量し、抽出シンブルに移した。次いで、シンブルをソックスレー抽出器（Ｗｉｔｅｇ、ドイツ）に移し、秤量したフラスコを取り付けた。２００ｍｌの石油エーテルをフラスコに加えた。この装置を冷却器に接続し、水道の蛇口をひねった。抽出は、電熱抽出ユニット上で８時間行った。８時間後、石油エーテルを含んでいるフラスコを取り外した。石油エーテルを減圧下で蒸発させた。次いで、フラスコを１時間真空オーブンに移して、抽出物を乾燥させた。最後に、フラスコをデシケーター中で冷却し、画分の収率を算出した。
【００２７】
ｄ．  セイヨウクロタネソウＳＦＥ画分中のＴＱ含量の測定
セイヨウクロタネソウ画分中のＴＱ含量を、Ｃ１８逆相カラム（Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８）を完備した分析用ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００）を使用して測定した。移動相は、それぞれ５０：４５：５（ｖ／ｖ）の比の水、メタノール（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、及びイソプロパノール（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）からなるものであった。移動相の流量は、１．５ｍｌ／分に設定した。セイヨウクロタネソウ画分を最初にイソプロパノールに溶解させ、０．４５μｍのＭｉｌｌｉｐｏｒｅフィルターで濾過してからＨＰＬＣシステムに注入（２０μｌ）した。セイヨウクロタネソウＳＦＥ画分のチモキノン含量を、チモキノン標準物質（Ｓｉｇｍａ）曲線から決定し、ｍｇ  ＴＱ／ｇ画分で示した。
【００２８】
ｅ．  セイヨウクロタネソウＳＦＥ画分のＤＰＰＨラジカル捕捉活性
セイヨウクロタネソウＳＦＥ画分のＤＰＰＨラジカル捕捉活性を測定した。α−トコフェロールをこの試験の標準親油性抗酸化物質として使用した。簡潔に述べると、異なる濃度のサンプルトルエン溶液０．１ｍｌに、０．３９ｍｌの新鮮なＤＰＰＨトルエン溶液（０．１ｍＭ）を加えた。次いで、混合物を激しく振盪し、６０分間暗所に放置した。最後に、混合物の吸光度を、紫外可視分光光度計（Ｐｈａｒｍａｓｐｅｃ  ｕｖ−１７００、島津製作所）を使用して、５１５ｎｍで純粋トルエン（ブランク）に対して測定した。セイヨウクロタネソウＳＦＥ画分のＤＰＰＨ捕捉活性を、α−トコフェロール標準曲線から決定し、ｍｇ  α−トコフェロール当量（Ｔｅｑ）／ｇサンプルで示した。
【００２９】
ｆ．  セイヨウクロタネソウＳＦＥ画分のガルビノキシルラジカル捕捉活性
セイヨウクロタネソウＳＦＥ画分のガルビノキシルラジカル捕捉活性を測定した。α−トコフェロールをこの試験の標準親油性抗酸化物質として使用した。簡潔に述べると、２０ｍｇの油サンプル（２００μｌのトルエン中）を、２００μｌのガルビノキシルトルエン溶液（０．１２５ｍＭ）と６０分間反応させた。引き続いて、ＥＳＲ（日本電子株式会社）を以下の条件、すなわち中心磁場＝３３６．３７４±５ｍＴ、掃引時間＝１分、マイクロ波電力＝４ｍＷ、変調周波数＝１００ｋＨｚ、変調幅＝０．０８ｍＴ、振幅＝６０、及び時定数＝０．１秒で使用することにより、サンプルの抗ラジカル活性を室温で測定した。セイヨウクロタネソウＳＦＥ画分のガルビノキシルラジカル捕捉活性を、α−トコフェロール標準曲線から決定し、ｍｇ  α−トコフェロール当量（Ｔｅｑ）／ｇサンプルで示した。
【００３０】
ｇ．  結果
この試験の結果は、添付の図面に示す。図１は、種々のセイヨウクロタネソウ種子油画分の収率を示す。結果は、ソックスレー抽出では、すべてのＳＦＥ抽出より高いパーセンテージの油がセイヨウクロタネソウ種子から得られたことを示している（Ｐ＜０．０５）。その上、結果は、分画圧力が低下すれば、第２の収集容器中に得られる画分収率が減少することになった（Ｐ＜０．０５）が、分画温度が変化しても、ほとんどの場合その画分の収率が変化しなかった（Ｐ＞０．０５）ことも示している。
【００３１】
図２は、種々のセイヨウクロタネソウ種子油画分のＴＱ濃度を示す。結果は、１００バール／４０℃での分画によって、セイヨウクロタネソウ油中のＴＱ含量が、未分画サンプル及びソックスレーサンプルの約１０倍に効率よく増加したことを示している（Ｐ＜０．０５）。一方、１００バール／４０℃画分中のＴＱ含量（油の約６．５％ｗ／ｗ）は、従来技術で報告されているセイヨウクロタネソウ油中ＴＱ含量（油の０．０５％ｗ／ｗ）の約１００倍であった。
【００３２】
図３及び４は、種々のセイヨウクロタネソウ種子油画分のＤＰＰＨラジカル及びガルビノキシルラジカル捕捉活性を示す。結果は、１００バール／４０℃及び１００バール／６０℃での分画によって、ＤＰＰＨラジカル及びガルビノキシルラジカルに対するセイヨウクロタネソウ油の抗ラジカル活性が、未分画サンプル及びソックスレーサンプルと比べて大幅に向上することを示している（Ｐ＜０．０５）。結論として、１００バール／４０℃での分画は、ＴＱの含有量が多く、抗酸化活性が大幅に向上するので、高度抗酸化ＴＱＲＦ生成において最良のＳＦＥ分画パラメーターであることが判明した。
【００３３】
各図からわかるように、圧力や温度などの様々なパラメーターを操作することで、収率の最適化が可能になる。一例では、等温条件下（４０℃）で抽出圧が４００バールから６００バールに上昇すると、収油率が１９．３２％から２７．９１９％に増加する。一方、等圧条件下（６００バール）で抽出温度が４０℃から８０℃に上昇すると、収油率が２７．９１９％から３６．８７％に増加する。等圧条件下（６００バール）で抽出温度が８０℃から４０℃に低下すると、油中のＴＱ含量は０．０８％から０．２％（ｗ／ｗ）に増加する。セイヨウクロタネソウ種子から油とＴＱＲＦを同時に生産するには、６００バールの抽出圧を４０℃の抽出温度と組み合わせたものが、さらなる分画を考えて選択される最適なＳＦＥパラメーターである。
【００３４】
二酸化炭素供給量は２５ｇ／分〜３０ｇ／分の間であり、抽出時間は、抽出容器が４００〜６００バールの抽出圧及び４０〜８０℃の抽出温度に達した後２．５時間〜３時間の間である。
【００３５】
４００〜６００バールの範囲の抽出圧を４０〜８０℃の範囲の抽出温度と組み合わせると、１９．３２％〜３６．８７％（ｗ／ｗ）の範囲の収油率をもたらすＳＦＥが、セイヨウクロタネソウ種子油抽出に適することがわかる。
【００３６】
６００バールの抽出圧を８０℃の抽出温度と組み合わせると、収油率が最高になる（３６．８７％）。同時に、６００バールの抽出圧を４０℃の抽出温度と組み合わせると、油中のＴＱ含量が最高になる（０．２％）。
【００３７】
４０〜８０℃の範囲の抽出温度での等圧（６００バール）ＳＦＥ抽出では、抽出の最初の１時間でセイヨウクロタネソウ種子から油及びＴＱの大部分（総抽出可能物質の＞５０％）が効率よく抽出された。
【００３８】
この方法では、３．８４〜３６．０１％の範囲の収油率及びＴＱが５．７〜６４．５ｍｇ／ｇ油の範囲のＴＱ含量が提供される。抽出の２時間目及び３時間目に収油率及びＴＱ含量の下降性の低下が認められたことがわかる。
【００３９】
図１〜４に示したソックスレーセイヨウクロタネソウ種子油は、ＡＯＡＣ標準法に従う石油エーテルの使用によるソックスレー抽出から得る。ソックスレー抽出が、すべてのＳＦＥ抽出及び分画より収率が高いことがわかる。ソックスレー抽出では、ＴＱ含量は、すべてのＳＦＥ抽出及び分画より少なくなる。セイヨウクロタネソウ種子油の分画によって、ＴＱ含量は、ソックスレーセイヨウクロタネソウ種子油（４．３〜５８．８ｍｇ  ＴＱ／ｇ油多い）及び未分画セイヨウクロタネソウ種子油（２．４〜５６．９ｍｇ  ＴＱ／ｇ油多い）より多くなる。
【００４０】
未分画及びソックスレーのセイヨウクロタネソウ種子油は、比較目的で生成している。セイヨウクロタネソウ種子油を、超臨界流体抽出を使用して、１００〜３００バールの圧力にて４０〜６０℃の温度で分画すると、得られる総収油率は未分画油と比べて３．８％〜６．１％の範囲で減少する。
【００４１】
等圧条件下（それぞれ１００、２００、及び３００バール）で分画温度が４０℃から６０℃に上昇すると、それに対応して、第１の収集容器では収油率が増加するが、第２の収集容器では収油率が減少する。一方、等温条件下（それぞれ４０℃及び６０℃）で分画温度が１００バールから３００バールに上昇すると、それに対応して、第１の収集容器では収油率が減少するが、第２の収集容器では収油率が増加する。
【００４２】
各グラム数のセイヨウクロタネソウ種子油又は画分が、ＤＰＰＨラジカル捕捉活性試験によって、４０．９６〜７３．６８ｍｇのα−トコフェロールと同様の抗酸化活性をもたらすことがわかる。同様に、各グラム数のセイヨウクロタネソウ油又は画分が、ガルビノキシルラジカル捕捉活性試験によって、１２．２６〜７３．４４ｍｇのα−トコフェロールと同様の抗酸化活性ももたらす。
【００４３】
６００バールの抽出圧及び４０℃の抽出温度の後、１００〜２００バールの分画圧力及び４０〜６０℃の分画温度で生成したセイヨウクロタネソウ種子画分は、ＤＰＰＨ及びガルビノキシルラジカル捕捉活性試験によって、ソックスレー油及び未分画油より良好な抗酸化活性を示す（２．４〜５６．９ｍｇ  ＴＱ／ｇ油高い）。
【００４４】
セイヨウクロタネソウ種子油の抽出から得られたＴＱＲＦが、ＳＦＥ−未分画セイヨウクロタネソウ種子油及び従来の溶媒（石油エーテル）で抽出した油より高いＴＱ含量及び抗酸化活性を有することがわかる。これは、α−トコフェロール、トコトリエノール、植物ステロールなどの他の抗酸化化合物が、ＴＱＲＦの抗酸化活性にも寄与し得るからである。
【００４５】
上述のような方法が、他の揮発性生理活性化合物の濃縮に使用できることも評価されるに相違ない。
【図１】
0005641521.tif 000004
【図２】
0005641521.tif 000005
【図３】
0005641521.tif 000006
【図４】
0005641521.tif 000007