(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
キャリアと、前記キャリアと連結しそして白血球レセプタと相互作用させるのに好適なリガンドであるＦａｓＬ蛋白質と、を含み、チューブ結合部を有する人工心肺の循環系に導入され、白血球の活性を減少させるモジュールであって、
ハウジングと、
前記人工心肺のチューブ結合部と結合する血液導入ノズルおよび血液排出ノズルと、
前記キャリアであって、活性化白血球を接着し、レセプタ誘導信号を介してそれらを不活性化又は殺傷するために前記リガンドと結合することによって変性した表面を有するポリエステル膜、または、前記リガンドを結合するのに好適な材料と、
を備えることを特徴とするモジュール。
【請求項２】
前記リガンドが前記キャリアと連結する結合媒体と連結されている請求項１に記載のモジュール。
【請求項３】
前記結合媒体が細胞である請求項２に記載のモジュール。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、白血球不活性化モジュール（ＬＩＭ）及び白血球の活性を減少させる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
急激に増加した病理学的細胞免疫応答は、しばしば種々の臨床的状況において惹起する。その例として
−心臓手術の際の人工心肺の動脈又は静脈ライン；
−  多重損傷又は肺結病（肺結病ショック）後の全身性炎症反応症候群（SIRS）；
−  過剰免疫活性による多臓器機能障害（MODS）
が挙げられる。
【０００３】
上記手術又は臨床学的合併症の際に、望ましくない白血病の活性化が生じ、その結果患者に過酷な病理学的合併症が生じてしまう。これを回避するために、活性化した白血球（特に好中球）を血流から除去し、そして直ちに不活性化すべきである。現在有効な白血球フィルタにおいて、数が増加した活性化白血球を血液から除去している。しかしながら、なおも生存する細胞は、実際の病原の原因である病理学的物質（サイトカイン、酵素、酸素ラジカル種等）を産生しそして分泌してしまう。フィルタネット中の白血球が恐らく機械的ストレス及び細胞と異質表面との接触により活性化してしまうという兆候がある。一例として、活性化好中球により産生された酵素エラスターゼが多量に分泌される。エラスターゼは、特に血管壁の細胞外マトリックスに作用し、そして内皮（interendothedial）細胞細胞接触を分割し、その結果血管壁の透過性を増加させ、浮腫を起こし、炎症を強めたりする。
【０００４】
アポトーシスは、免疫系の最も重要な制御調整要素の一つである。免疫関連細胞のアポトーシスの結果、免疫応答後、例えば微生物病原体に対する免疫応答後、免疫系の活性が通常化される。また、個体の発達の際に、免疫系は、内因性の構造又は環境からの天然抗原に対して作用する免疫細胞を殺傷しなければならない（例えば、自動免疫疾患又はアレルギー）。いわゆる抗原提示細胞(apc)を介して活性化されるＴ細胞は、通常所定量の情報を受ける。ａｐｃにより加工された抗原は、ＭＨＣ−Ｉ又はＭＨＣ−ＩＩ分子の群に存在する。抗原に対するＴ細胞レセプタの親和性が弱すぎる場合あるいは共刺激信号（例えば、接着分子を介する共刺激信号）が不存在の場合、細胞は、アポトーシス化する。アポトーシスの結果生じる別のメカニズムは、Ｆａｓ／ＦａｓＬ経路を介してスタートする。このメカニズムは、例えば血管壁の内皮細胞又は他の内皮細胞は、ＦａｓＬを発現することができ、従って細胞を活性化した免疫細胞となるのを保護する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
白血球の活性化を減少するのに好適な装置を提供することによって白血球による病理的物質の分泌を減少することである。さらに、本発明は、かかる装置を用いて白血球の活性を減少させる方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者等は、ヒトの目からのサイトメガロウイルス感染網膜色素内皮細胞を用いて鋭意検討を行い、そして内皮細胞上でのＦａｓＬとの接触のため、活性化好中球が前記内皮細胞への接着性を保持又は増加するための能力を失ったことを見出した。この驚くべき結果は、エンドセリン及び炎症に対する対応する組織の保護メカニズムであると考えられる。好中球−エフェクタメカニズムの機能的損失は、細胞間接触後数分内で観察でき、そして好中球におけるアポトーシスの信号経路とほぼ依存していないようだ。これらの驚くべき知見に基づいて,例えば、Ｆａｓ／ＦａｓＬ経路又は白血球―エフェクタ機能の早期抑制メカニズムを、急性過剰免疫反応に対する実験的及び臨床的用途に使用することができる。
【０００７】
本発明は、キャリアと前記キャリアと連結しそして白血球レセプタと相互作用させるのに好適なリガンドを含む白血球の活性を減少させるモジュールを提供する。更に、本発明は、前記モジュールを使用して白血球の活性を減少する方法を提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の利点は、白血球不活性化モジュール（ＬＩＭ）内で活性化された白血球を結合した後、細胞の損傷活性が数分で抑制されることである。このことは、白血球の細胞膜上の特定のレセプタの前記ＬＩＭにおける対応するリガンドとの接触によるものである。前記リガンドは、細胞膜上のレセプタとの接触後、白血球を刺激して分泌発生及び免疫性を減少させる信号を誘発する蛋白質であることができる。これは、関連するレセプタ−リガンド相互作用、例えばＦａｓ／ＦａｓＬを介するアポトーシスの誘導によって実現される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明のモジュールは、シャルドン（Ｓｈａｌｄｏｎ）カテーテルを使用して患者の血流に又は人工心肺の循環系に導入するのに好適である。
モジュールは、例えば直径１０ｃｍの白金製のハウジングからなることが好ましい。人工心肺のチューブ結合部には、血液導入ノズルと血液排出ノズルが設けられている。モジュール中にはキャリア、例えば活性化白血球の接着のため及びレセプタ誘導信号を介してこれらを不活性化又は殺傷する（例えばアポトーシスを誘導する）ための変性された表面を有する三次元的に折り畳んだポリエステル膜がある。キャリア材として、リガンドを結合するのに好適ないずれの材料も使用できる。本明細書で使用する用語「結合」は、リガンドとキャリアとの共有結合及び非共有結合、例えば塩結合、疎水性相互作用及び親和結合を含むものである。更に、リガンドは、キャリアと直接又は間接的に結合されてもよい。間接的結合は、リガンドのよりよい発現のための結合媒体、例えば長鎖分子を介する結合又はリガンドを含みそして他の結合相互作用を介してキャリアと結合される細胞を介する結合を含む。
【００１０】
本発明のＬＩＭは、いずれかの白血球、すなわち、Ｂ−リンパ球、Ｔ−リンパ球、顆粒球、好中球に好適である。
【００１１】
血流、血圧又は流体力学を決定するその他のパラメータは、既に臨床学的に使用されている従来の白血球フィルタと同様である。
【実施例】
【００１２】
実施例１
１２ウェル培養プレートのウェルをポリエステル膜（孔径４０μｍ）で裏打ちし、そして一晩種々の濃度のＦａｓ（ＣＤ９５）に対する機能的活性化ＩｇＭ抗体を用いて温置した。以下の対照を用いた。
膜を有さないウェル
膜を有するウェル、予備温置を行わず。
膜を有するウェル、関連のないＩｇＭを用いた予備温置を実施。
試験細胞としてＦａｓ発現（Ｆａｓ＋）及びＦａｓ−欠落（Ｆａｓ−：表面上にＦａｓを発現せず）ジャーカット細胞を１×１０6／ｍｌの濃度で２４時間添加した。
アポトーシス速度及びネクローシス速度をアネキシン結合検定を用いてフローサイトメトリーにより定量測定した。
【００１３】
結果：  Ｆａｓジャーカット細胞は、予備処理したウェル中で培養後にアネキシンＶ結合性の著しい増加を示した。これに対して、アポトーシスの著しい誘導がＩｇＭ抗体の濃度に依存して見られた。
【００１４】
【表１】
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【００１５】
上記対照において、アポトーシスの誘導は見出されなかった。同様の結果は、新たに単離した好中球を用いて得られた。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本発明の実施例の結果を示す。
【図１】
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