(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１２に記載の塩基配列からなる、ＨＨＶ７のＵ９５プロモーター活性を有する核酸。
【請求項２】
請求項１に記載のＨＨＶ７のＵ９５プロモーター活性を有する核酸を含む、核酸構築物。
【請求項３】
前記核酸構築物は前記ＨＨＶ７のＵ９５プロモーター活性を有する核酸とは異なる由来の外来遺伝子をコードする配列を含み、該外来遺伝子をコードする配列は該ＨＨＶ７のＵ９５プロモーター活性を有する核酸の配列に対して作動可能に連結される、請求項２に記載の核酸構築物。
【請求項４】
前記外来遺伝子は、ＲＮＡｉ分子、薬剤、欠損される劣性遺伝子、選択マーカーをコードする、請求項３に記載の核酸構築物。
【請求項５】
前記選択マーカーは、前記核酸構築物が導入される宿主の培地での選択を可能にする、請求項４に記載の核酸構築物。
【請求項６】
前記選択マーカーは、前記核酸構築物が導入される宿主での視覚での選択を可能にする、請求項４に記載の核酸構築物。
【請求項７】
前記選択マーカーは、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ｈｐｒｔ）、または緑色蛍光プロテイン（ＧＦＰ）、青色蛍光プロテイン（ＣＦＰ）、黄色蛍光プロテイン（ＹＦＰ）および赤色蛍光プロテイン（ｄｓＲｅｄ）からなる群より選択される蛍光マーカーを含む、請求項４に記載の核酸構築物。
【請求項８】
前記選択マーカーは、前記核酸構築物が導入される宿主に対して毒性を示さない、請求項４に記載の核酸構築物。
【請求項９】
前記欠損される劣性遺伝子は、ＡＤＡ遺伝子、ＰＮＰ遺伝子、γｃ鎖遺伝子、ＴＡＰ遺伝子、ＭＨＣ  ＩＩ遺伝子、Ｘ連鎖ＷＡＳＰ、ＣＤ４０リガンド、ＰＩ３Ｋ遺伝子、ＤＮＡヘリカーゼからなる群より選択される、請求項４に記載の核酸構築物。
【請求項１０】
前記薬剤は、サイトカイン、ケモカイン、増殖因子、タンパク質ホルモンおよびペプチドホルモンからなる群より選択される、請求項４に記載の核酸構築物。
【請求項１１】
前記Ｕ９５プロモーター活性を有する核酸は、前記外来遺伝子の血球系細胞での特異的発現を誘導する、請求項３に記載の核酸構築物。
【請求項１２】
前記Ｕ９５プロモーター活性を有する核酸は、前記外来遺伝子のＴリンパ球での特異的発現を誘導する、請求項１１に記載の核酸構築物。
【請求項１３】
請求項２に記載の核酸構築物を含む発現ベクター。
【請求項１４】
請求項２に記載の核酸構築物を含む、細胞。
【請求項１５】
前記細胞は、前記Ｕ９５プロモーター活性を有する核酸とは異種である、請求項１４に記載の細胞。
【請求項１６】
請求項２に記載の核酸構築物を含む、組織。
【請求項１７】
請求項２に記載の核酸構築物を含む、臓器。
【請求項１８】
請求項２に記載の核酸構築物を含む、生物。
【請求項１９】
請求項１に記載のＵ９５プロモーター活性を有する核酸、および抗原をコードする配列を含む核酸を含む、薬学的組成物。
【請求項２０】
ＤＮＡワクチンである、請求項１９に記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
リンパ球特異的な処置が所望される疾患、障害または状態を処置するための薬学的組成物であって、請求項１に記載のＵ９５プロモーター活性を有する核酸および該処置のための核酸を含む、薬学的組成物。
【請求項２２】
前記処置のための核酸は、サイトカインをコードする核酸配列、ケモカインをコードする核酸配列、増殖因子をコードする核酸配列、タンパク質ホルモンをコードする核酸配列、ペプチドホルモンをコードする核酸配列、リボザイムおよびＲＮＡｉからなる群より選択される配列を含む核酸である、請求項１９に記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
リンパ球特異的にタンパク質を発現させる方法であって、
Ａ）請求項１に記載のＵ９５プロモーター活性を有する核酸に該タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた核酸構築物を作製する工程；
Ｂ）該核酸構築物を、該Ｕ９５プロモーター活性を有する核酸が該タンパク質をコードする核酸配列の発現を誘導させる条件下に配置する工程、
を包含する、方法。
【請求項２４】
リンパ球特異的にタンパク質を発現させるキットであって、
Ａ）請求項１に記載のＵ９５プロモーター活性を有する核酸に該タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた核酸構築物；
Ｂ）該核酸構築物を、該Ｕ９５プロモーター活性を有する核酸が該タンパク質をコードする核酸配列の発現を誘導させる条件下に配置する手段、
を包含する、キット。
【請求項２５】
リンパ球特異的にタンパク質を発現させるキットであって、
Ａ）請求項１に記載のＵ９５プロモーター活性を有する核酸；および
Ｂ）該Ｕ９５プロモーター活性を有する核酸に該タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた核酸構築物を作製するための手段；
を包含する、キット。
【請求項２６】
リンパ球特異的にタンパク質を発現させることを必要とする疾患、障害または状態を処置または予防するためのキットであって、
Ａ）請求項１に記載のＵ９５プロモーター活性を有する核酸に該タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた核酸構築物；
Ｂ）該核酸構築物を、該Ｕ９５プロモーター活性を有する核酸が該タンパク質をコードする核酸配列の発現を誘導させる条件下に配置する手段、
を包含する、キット。
【請求項２７】
リンパ球特異的にタンパク質を発現させることを必要とする疾患、障害または状態を処置または予防するためのキットであって、
Ａ）請求項１に記載のＵ９５プロモーター活性を有する核酸；および
Ｂ）該Ｕ９５プロモーター活性を有する核酸に該タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた核酸構築物を作製するための手段；
を包含する、キット。
【請求項２８】
タンパク質を生産する方法であって、
Ａ）請求項１に記載のＵ９５プロモーター活性を有する核酸に該タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた核酸構築物を作製する工程；
Ｂ）該核酸構築物を、該Ｕ９５プロモーター活性を有する核酸が該タンパク質をコードする核酸配列の発現を誘導させる条件下に配置する工程、
を包含する、方法。
【請求項２９】
タンパク質を生産するためのキットであって、
Ａ）請求項１に記載のＵ９５プロモーター活性を有する核酸に該タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた核酸構築物；
Ｂ）該核酸構築物を、該Ｕ９５プロモーター活性を有する核酸が該タンパク質をコードする核酸配列の発現を誘導させる条件下に配置する手段、
を包含する、キット。
【請求項３０】
タンパク質を生産するためのキットであって、
Ａ）請求項１に記載のＵ９５プロモーター活性を有する核酸；および
Ｂ）該Ｕ９５プロモーター活性を有する核酸に該タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた核酸構築物を作製するための手段；
を包含する、キット。
【請求項３１】
請求項１に記載のＵ９５プロモーター活性を有する核酸の、リンパ球特異的な処置が所望される疾患、障害または状態を処置するための薬学的組成物の製造における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リンパ球系・血球系細胞へ遺伝子導入するためのプロモーターおよびその利
用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
リンパ球細胞を標的とする種々の疾患、例えば、白血病、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩ
Ｖ）感染の治療のために、リンパ球細胞に対して遺伝子治療を行うための技術の確立が望
まれているが、いまだ、リンパ球細胞に所望の遺伝子を導入するためのプロモーターとし
て十分なものは開発されていない。
【０００３】
ヘルペスウイルス（ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ；ＨＨＶ）とは、ヘルペスウイルス科に属
するウイルスの総称である。ヒトヘルペスウイルス６  あるいは７（ＨＨＶ−６あるいは
ＨＨＶ−７）は、いずれもヘルペスウイルス科βヘルペスウイルス亜科に属する２本鎖Ｄ
ＮＡ  ウイルスであり、突発性発疹（Ｅｘａｎｔｈｏｍ  ｓｕｂｉｔｕｍ）の原因ウイル
スである。（非特許文献１および非特許文献２）  ＨＨＶ−６にはＨＨＶ−６ＡおよびＨ
ＨＶ−６Ｂの２つの株が存在する。乳児期に罹患することが多く、突然の高熱と解熱前後
の発疹を特徴とするウイルス感染症で、予後は一般に良好である。ＨＨＶ−７  はＨＨＶ
−６  よりも遅れて感染する傾向がある（非特許文献３）ため、ＨＨＶ−７による突発性
発疹は臨床的には二度目の突発性発疹として経験されることが多い。ＨＨＶ−６、ＨＨＶ
−７  の血清疫学調査からは、２〜３歳頃までにほとんどの小児が抗体陽性となることが
判明しており、不顕性感染は２０〜４０％と報告されている。
【０００４】
ＨＨＶ−７は、１９９０  年にＦｒｅｎｋｅｌらが健常人末梢血のＣＤ４＋Ｔ  リンパ
球を培養しているときに細胞変性効果が起こって新たに見いだされたヘルペスウイルスで
ある（非特許文献４）。ヒト末梢血単核球から分離されたウイルスであり、ＨＨＶ−６、
ＨＨＶ−７はともにＣＤ４＋Ｔリンパ球向性ウイルスである。ＨＨＶ−７が感染する際の
細胞側レセプターはＣＤ４であり、ヒトＴリンパ球においてのみ増殖可能である。ゆえに
ヒトＴリンパ球の遺伝子改変に使用し得るウイルスである。
【０００５】
ＨＨＶ−７のゲノムは、二本鎖ＤＮＡであって、約１４５ｋｂｐからなる。全塩基配列
は、Ｎｉｃｈｏｌａｓらによって決定されており、ゲノム上には少なくとも１０１の遺伝
子が存在することが知られている（非特許文献５）。
【０００６】
しかし、これらのＨＨＶについては、そのプロモーター活性について詳細な解析がされ
ていない。しかも、ウイルスがリンパ球指向性なのは、細胞側のレセプターとの相互作用
、およびヒトＴリンパ球においてのみ増殖可能であるという生活環に起因していた。
【０００７】
また、これらウイルス、特にＨＨＶ−７ウイルスは、健常人に害を及ぼさないとされて
いるとはいえ、ウイルス自体を使用すると、変異などによって有害化するおそれもあるこ
とから、その特性を利用し安全性を増した発現系の開発が望ましいことはいうまでもない
。また、ワクチンとして用いる場合、その継代培養とともに、遺伝子型が変化することは
、品質管理および品質保証の点から、好ましくない。そのため、ワクチンとして組換えウ
イルスを使用する場合は、単一の組換え遺伝子型由来のウイルスを安定的に供給する必要
がある。そのため、単一の遺伝子型を有するシステムを作製する方法の開発が望まれてい
る。
【０００８】
さらに、Ｔリンパ球細胞株ＳｕｐＴ１細胞におけるＨＩＶ感染とＴリンパ球向性ヒトヘ
ルペスウイルス（ＨＨＶ−６Ａ（Ｕ１１０２株）、ＨＨＶ−７（ＭＲＫ、ＭＳＯ株））と
の相互関係について検討されている。ＣＤ４が細胞側のレセプターであるＨＨＶ−７株は
、ＳｕｐＴ１細胞では良好な増殖を示すものの、ＳｕｐＴ１／ＨＩＶ細胞には感染を成立
できなかった。これに対して、ＨＨＶ−６Ａ  株は、ＨＩＶ持続感染ＳｕｐＴ１（Ｓｕｐ
−Ｔ１／ＨＩＶ）細胞に感染し明瞭なＣＰＥを認めている（非特許文献６）。
【０００９】
理想的なＨＩＶワクチンは、全ての型のＨＩＶに対して完全かつ長期の保護を示すこと
である。しかし、従来の不活化ＨＩＶワクチンの利点および欠点のいくつかは以下のとお
りである。リコンビナントワクチンの製造方法は常法を駆使するが、免疫原性を維持する
ことが困難なため（低免疫原性のため）、高い抗原負荷、アジュバントと頻回接種が要求
される。そして、その安全性が最大の関心事である。また、ネーティブまたはリコンビナ
ントのサブユニットのどちらかを含むサブユニットワクチンは安全であるかもしれないが
、サブユニットの選択および免疫原性が低いことから制限を受ける。このようなＨＩＶワ
クチンなどの免疫担当細胞の処置に使用可能なワクチンを開発することができる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｙａｍａｎｉｓｈｉ  Ｋら “Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  ６  ａｓ  ａ  ｃａｓｕａｌ  ａｇｅｎｔ  ｆｏｒ  ｅｘａｎｔｈｅｍ  ｓｕｂｉｔｕｍ．”Ｌａｎｃｅｔ  １９８８；ｉ：１０６５〜１０６７頁
【非特許文献２】Ｔａnａｋａ  Ｋら  “ Ｈｕｍａｎ  ｈｅｒｕｐｅｓｖｉｒｕｓ  ７：Ａｎｏｔｈｅｒ  ｃａｓｕａｌ  ａｇｅｎｔ  ｆｏｒ    ｒｏｓｅｏｌａ（ｅｘａｎｔｈｅｍ  ｓｕｂｉｔｕｍ）”Ｊ  ｐｅｄｉａｔｒ．１９９４；１２５：１〜５頁
【非特許文献３】Ｔｎａｎａｋａ−Ｔａｙａ  Ｋら“Ｓｅｒｏｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ−６  ａｎｄ  −７  ｉｎ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ａｇｅｓ  ａｎｄ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｏｓｅ  ｔｗｏ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ｉｎ  ｔｈｒｏａｔ  ｓｗａｂｓ  ｂｙ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ”  Ｊｏｕｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ.  １９９６；４８：８８〜９４頁
【非特許文献４】Ｆｒａｎｋｅｌ  Ｎら、“Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ＣＤ４＋Ｔ  ｃｅｌｌｓ．”ＰｒｏＮＡＳ  ＵＳＡ  ８７：７４９−７５２，ＰｒｏＮＡＳ  ＵＳＡ  ８７：７４９−７５２，１９９０
【非特許文献５】Ｊｏｈｎ  Ｎ.ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｓｅｐ．１９９６，５９７５〜５９８９頁
【非特許文献６】山田雅夫らＨＩＶ持続感染Ｓｕｐ−Ｔ１細胞へのＨＨＶ−６および−７重複感染の試み、演題番号１２２、第７回日本エイズ学会総会演題抄録集、１９９３年、東京
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、リンパ球などの免疫担当細胞・血球系細胞において、選択的に、強力に発現
を誘導するプロモーターを提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記課題は、本発明において、ＨＨＶ６のＭＩＥプロモーター、ＨＨＶ７ＭＩＥプロモ
ーターおよびＨＨＶ７Ｕ９５プロモーターが、予想外に、Ｔリンパ球などの免疫担当細胞
・血球系細胞において特異的な発現を誘導することを見出したことによって解決された。
【００１３】
新テクノロジーとして着目されているＤＮＡワクチン開発においては、強力な発現プロ
モーターが必要不可欠である。現在までの事例では、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭ
Ｖ）の前初期（ＩＥ）プロモーターがＤＮＡワクチンに汎用されている。その根拠は、Ｈ
ＣＭＶＩＥプロモーターが一般的に種々の細胞において強い活性を示すと考えられている
ことによる。しかし、リンパ球系細胞での発現効率が低いことや、メチル化による不活化
等の現象が見られることも他方では報告されている。また、ＨＨＶ  ＩＥプロモーターの
ＤＮＡワクチンヘの利用については、種々の制約が実現性を抑制している問題点もある。
【００１４】
ＨＣＭＶは、感染可能な細胞が非常に限られており、繊維芽細胞や血管内被細胞等に感
染することが知られている。一方、ＨＨＶ−６は、ヒトの乳幼児期に感染して、突発性発
疹を引き起こすことが明らかとなっており、ヒトのリンパ球系細胞、特にＴ細胞で良く増
殖する事が知られている。本発明者らは本発明において、ＨＣＭＶと同じヒトヘルペスウ
イルス属βウイルス亜科に属するＨＨＶ−６の主要前初期遺伝子（ＭＩＥ）のプロモータ
ーが強い活性を示すことを明らかにした。本発明者らは、このＭＩＥ遺伝子プロモーター
のＤＮＡワクチンにも利用可能なことを明らかにした。ＨＨＶ−７もまた、ＣＤ４＋Ｔリ
ンパ球向性ウイルスであり、そのプロモーターを利用して例えば、ＤＮＡワクチンを開発
すれば、ＣＤ４＋Ｔリンパ球に関する疾患の予防または治療に応用可能である。本発明者
らは、ＨＨＶ７ＭＩＥプロモーターおよびＨＨＶ７Ｕ９５プロモーターの有用性を本発明
において明らかにし、従って、ＤＮＡワクチンにも利用可能なことを明らかにした。
【００１５】
従って、本発明は、以下を提供する。
【００１６】
（１）  ＨＨＶ６ＢのＭＩＥプロモーター。
【００１７】
（２）  上記プロモーターは、配列番号１に示す配列のうち、少なくとも８の連続する
ヌクレオチド配列を含む、項目１に記載のプロモーター。
【００１８】
（３）  上記プロモーターは、配列番号１に示す配列のうち、少なくともＲ３領域また
はその機能的改変体を含む、項目１に記載のプロモーター。
【００１９】
（４）  上記プロモーターは、配列番号１に示す配列のうち、転写開始点より少なくと
も−５７４〜−４２７（配列番号１３）の配列を含む、項目１に記載のプロモーター。
【００２０】
（５）  上記プロモーターは、配列番号１に示す配列のうち、転写開始点より少なくと
も−１０５１〜−４２７（配列番号１４）の配列を含む、項目１に記載のプロモーター。
【００２１】
（６）  上記プロモーターは、ＮＦ−κＢおよびＡＰ−１のモチーフを含む、項目１に
記載のプロモーター。
【００２２】
（７）  上記プロモーターは、配列番号１に示す配列を含む、項目１に記載のプロモー
ター。
【００２３】
（８）  上記プロモーターは、
（ａ）配列番号１に記載の塩基配列もしくはそれに対応する塩基配列またはそのフラグメ
ント配列を有するポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号１に記載の塩基配列もしくはそれに対応する塩基配列の対立遺伝子変異体
またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド；
（ｃ）（ａ）〜（ｂ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハ
イブリダイズし、かつ、生物学的活性を有するポリヌクレオチド；または
（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同
一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリヌク
レオチド、
を含む、
項目１に記載のプロモーター。
【００２４】
（９）少なくとも１０の連続するヌクレオチド長を有する、項目１に記載のプロモータ
ー。
【００２５】
（１０）  上記生物学的活性は、プロモーター活性である、項目８に記載のプロモータ
ー。
【００２６】
（１１）  項目１に記載のプロモーターを含む、核酸構築物。
【００２７】
（１２）  上記プロモーターとは異なる由来の外来遺伝子をコードする配列を、上記プ
ロモーターの配列に対して作動可能に連結されて、含む、項目１１に記載の核酸構築物。
【００２８】
（１３）  上記外来遺伝子は、ＲＮＡｉ分子、薬剤、欠損される劣性遺伝子、選択マー
カーをコードする、項目１２に記載の核酸構築物。
【００２９】
（１４）上記選択マーカーは、上記核酸構築物が導入される宿主の培地での選択を可能
にする、項目１３に記載の核酸構築物。
【００３０】
（１５）上記選択マーカーは、上記核酸構築物が導入される宿主での視覚での選択を可
能にする、項目１３に記載の核酸構築物。
【００３１】
（１６）上記選択マーカーは、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラ
ーゼ（ｈｐｒｔ）、または緑色蛍光プロテイン（ＧＦＰ）、青色蛍光プロテイン（ＣＦＰ
）、黄色蛍光プロテイン（ＹＦＰ）および赤色蛍光プロテイン（ｄｓＲｅｄ）からなる群
より選択される蛍光マーカーを含む、項目１３に記載の核酸構築物。
【００３２】
（１７）上記選択マーカーは、上記核酸構築物が導入される宿主に対して実質的に毒性
を示さない、項目１３に記載の核酸構築物。
【００３３】
（１８）上記欠損される劣性遺伝子は、ＡＤＡ遺伝子、ＰＮＰ遺伝子、γｃ鎖遺伝子、
ＴＡＰ遺伝子、ＭＨＣ  ＩＩ遺伝子、Ｘ連鎖ＷＡＳＰ、ＣＤ４０リガンド、ＰＩ３Ｋ類似
遺伝子およびＤＮＡヘリカーゼからなる群より選択される、項目１３に記載の核酸構築物
。
【００３４】
（１９）上記薬剤は、サイトカイン、ケモカイン、増殖因子、タンパク質ホルモン、ペ
プチドホルモン（インターフェロン［ＩＦＮ］−α，ＩＦＮ−γ，インターロイキン［Ｉ
Ｌ］−２，ＩＬ−１２，顆粒球コロニー刺激因子［Ｇ−ＣＳＦ］，顆粒球マクロファージ
コロニー刺激因子［ＧＭ−ＣＳＦ］）からなる群より選択される、項目１３に記載の核酸
構築物。
【００３５】
（２０）  上記プロモーターは、上記外来遺伝子の血球系細胞、特にＴリンパ球での特
異的発現を誘導する、項目１２に記載の核酸構築物。
【００３６】
（２１）  項目１１に記載の核酸構築物を含む発現ベクター。
【００３７】
（２２）項目１１に記載の核酸構築物を含む、細胞。
【００３８】
（２３）上記細胞は、上記プロモーター配列とは異種である、項目２２に記載の細胞。
【００３９】
（２４）項目１１に記載の核酸構築物を含む、組織。
【００４０】
（２５）項目１１に記載の核酸構築物を含む、臓器。
【００４１】
（２６）項目１１に記載の核酸構築物を含む、生物。
【００４２】
（２７）項目１に記載のプロモーターおよび抗原をコードする配列を含む、薬学的組成
物。
【００４３】
（２８）ＤＮＡワクチンである、項目２７に記載の薬学的組成物。
【００４４】
（２９）リンパ球特異的な処置が所望される疾患、障害または状態を処置するための薬
学的組成物であって、項目１に記載のプロモーターおよび上記処置のための核酸配列を含
む、薬学的組成物。
【００４５】
（３０）上記処置のための核酸配列はサイトカインをコードする核酸配列、ケモカイン
をコードする核酸配列、増殖因子をコードする核酸配列、タンパク質ホルモンをコードす
る核酸配列、ペプチドホルモンをコードする核酸配列、リボザイム、ＲＮＡｉ（ＨＩＶ−
１  ｇｐ４１：  ＡＡＴＡＡＧＡＣＡＧＧＧＣＴＴＧＧＡＡＡＧＡＣＡＣＴＴＴＣＣＡＡ
ＧＣＣＣＴＧＴＣＴＴＡＴＴＴＴＴ（配列番号３３）／ＨＩＶ−１  ｔａｔ：  ＡＡＧＣ
ＡＴＣＣＡＧＧＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＡＣＡＡＧＧＣＴＧＡＣＴＴＣＣＴＧＧＡＴＧＣＴ
ＴＴＴＴ（配列番号３４）／ＨＴＬＶ−１  ｔａｘ：  ＧＡＡＣＡＴＴＧＧＴＧＡＧＧＡ
ＡＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＣＡＣＣＡＡＴＧＴＴＣＴＴＴＴＴ（配列番号３５））
を含む、項目２９に記載の薬学的組成物。
【００４６】
（３１）リンパ球特異的にタンパク質を発現させる方法であって、
Ａ）項目１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に
連結させた核酸構築物を作製する工程；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する工程、
を包含する、方法。
【００４７】
（３２）リンパ球特異的にタンパク質を発現させるキットであって、
Ａ）項目１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に
連結させた核酸構築物；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する手段、
を包含する、キット。
【００４８】
（３３）リンパ球特異的にタンパク質を発現させるキットであって、
Ａ）項目１に記載のプロモーター；および
Ｂ）上記プロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた
核酸構築物を作製するための手段；
を包含する、キット。
【００４９】
（３４）リンパ球特異的にタンパク質を発現させることを必要とする疾患、障害または
状態を処置または予防するための方法であって、
Ａ）項目１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に
連結させた核酸構築物を作製する工程；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する工程、
を包含する、方法。
【００５０】
（３５）リンパ球特異的にタンパク質を発現させることを必要とする疾患、障害または
状態を処置または予防するためのキットであって、
Ａ）項目１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に
連結させた核酸構築物；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する手段、
を包含する、キット。
【００５１】
（３６）リンパ球特異的にタンパク質を発現させることを必要とする疾患、障害または
状態を処置または予防するためのキットであって、
Ａ）項目１に記載のプロモーター；および
Ｂ）上記プロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた
核酸構築物を作製するための手段；
を包含する、キット。
【００５２】
（３７）  タンパク質を生産する方法であって、
Ａ）項目１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に
連結させた核酸構築物を作製する工程；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する工程、
を包含する、方法。
【００５３】
（３８）  タンパク質を生産するためのキットであって、
Ａ）項目１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に
連結させた核酸構築物；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する手段、
を包含する、キット。
【００５４】
（３９）  タンパク質を生産するためのキットであって、
Ａ）項目１に記載のプロモーター；および
Ｂ）上記プロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた
核酸構築物を作製するための手段；
を包含する、キット。
【００５５】
（４０）  項目１に記載のプロモーターの、リンパ球特異的な処置が所望される疾患、
障害または状態を処置するための薬学的組成物の製造における使用。
【００５６】
（４１）  ＨＨＶ７のＭＩＥプロモーター。
【００５７】
（４２）  上記プロモーターは、配列番号２に示す配列のうち、少なくとも８の連続す
るヌクレオチド配列を含む、項目４１に記載のプロモーター。
【００５８】
（４３）  上記プロモーターは、配列番号２に示す配列のうち、少なくともＲ２領域ま
たはその機能的改変体を含む、項目４１に記載のプロモーター。
【００５９】
（４４）  上記プロモーターは、配列番号２に示す配列のうち、少なくとも＋２２〜−
２３３の配列を含む、項目４１に記載のプロモーター。
【００６０】
（４５）  上記プロモーターは、配列番号２に示す配列のうち、少なくとも＋２２〜−
３８８の配列を含む、項目４１に記載のプロモーター。
【００６１】
（４６）  上記プロモーターは、Ｒ２領域に存在するＮＦ−κＢ結合モチーフを含む、
項目４１に記載のプロモーター。
【００６２】
（４７）  上記プロモーターは、配列番号１５に示す配列を含む、項目４１に記載のプ
ロモーター。
【００６３】
（４８）  上記プロモーターは、
（ａ）配列番号２に記載の塩基配列もしくはそれに対応する塩基配列またはそのフラグメ
ント配列を有するポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号２に記載の塩基配列もしくはそれに対応する塩基配列の対立遺伝子変異体
またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド；
（ｃ）（ａ）〜（ｂ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハ
イブリダイズし、かつ、生物学的活性を有するポリヌクレオチド；または
（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同
一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリヌク
レオチド、
を含む、
項目４１に記載のプロモーター。
【００６４】
（４９）少なくとも１０の連続するヌクレオチド長を有する、項目４１に記載のプロモ
ーター。
【００６５】
（５０）  上記生物学的活性は、プロモーター活性である、項目４８に記載のプロモー
ター。
【００６６】
（５１）  項目４１に記載のプロモーターを含む、核酸構築物。
【００６７】
（５２）  上記プロモーターとは異なる由来の外来遺伝子をコードする配列を、上記プ
ロモーターの配列に対して作動可能に連結されて、含む、項目５１に記載の核酸構築物。
【００６８】
（５３）  上記外来遺伝子は、ＲＮＡｉ分子、薬剤、欠損される劣性遺伝子、選択マー
カーをコードする、項目５２に記載の核酸構築物。
【００６９】
（５４）上記選択マーカーは、上記核酸構築物が導入される宿主の培地での選択を可能
にする、項目５３に記載の核酸構築物。
【００７０】
（５５）上記選択マーカーは、上記核酸構築物が導入される宿主での視覚での選択を可
能にする、項目５３に記載の核酸構築物。
【００７１】
（５６）上記選択マーカーは、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラ
ーゼ（ｈｐｒｔ）、または緑色蛍光プロテイン（ＧＦＰ）、青色蛍光プロテイン（ＣＦＰ
）、黄色蛍光プロテイン（ＹＦＰ）および赤色蛍光プロテイン（ｄｓＲｅｄ）からなる群
より選択される蛍光マーカーを含む、項目５３に記載の核酸構築物。
【００７２】
（５７）上記選択マーカーは、上記核酸構築物が導入される宿主に対して実質的に毒性
を示さない、項目５３に記載の核酸構築物。
【００７３】
（５８）上記欠損される劣性遺伝子は、ＡＤＡ遺伝子、ＰＮＰ遺伝子、γｃ鎖遺伝子、
ＴＡＰ遺伝子、ＭＨＣ  ＩＩ遺伝子、Ｘ連鎖ＷＡＳＰ、ＣＤ４０リガンド、ＰＩ３Ｋ類似
遺伝子、ＤＮＡヘリカーゼからなる群より選択される、項目５３に記載の核酸構築物。
【００７４】
（５９）上記薬剤は、サイトカイン、ケモカイン、増殖因子、タンパク質ホルモン、ペ
プチドホルモン（ＩＦＮ−α，ＩＦＮ−γ，ＩＬ−２，ＩＬ−１２，Ｇ−ＣＳＦ，ＧＭ−
ＣＳＦ）からなる群より選択される、項目５３に記載の核酸構築物。
【００７５】
（６０）  上記プロモーターは、上記外来遺伝子の血球系細胞、特にＴリンパ球での特
異的発現を誘導する、項目５２に記載の核酸構築物。
【００７６】
（６１）  項目５１に記載の核酸構築物を含む発現ベクター。
【００７７】
（６２）項目５１に記載の核酸構築物を含む、細胞。
【００７８】
（６３）上記細胞は、上記プロモーター配列とは異種である、項目６２に記載の細胞。
【００７９】
（６４）項目５１に記載の核酸構築物を含む、組織。
【００８０】
（６５）項目５１に記載の核酸構築物を含む、臓器。
【００８１】
（６６）項目５１に記載の核酸構築物を含む、生物。
【００８２】
（６７）項目４１に記載のプロモーターおよび抗原をコードする配列を含む、薬学的組
成物。
【００８３】
（６８）ＤＮＡワクチンである、項目６７に記載の薬学的組成物。
【００８４】
（６９）リンパ球特異的な処置が所望される疾患、障害または状態を処置するための薬
学的組成物であって、項目４１に記載のプロモーターおよび上記処置のための核酸配列を
含む、薬学的組成物。
【００８５】
（７０）上記処置のための核酸配列は、サイトカインをコードする核酸配列、ケモカイ
ンをコードする核酸配列、増殖因子をコードする核酸配列、タンパク質ホルモンをコード
する核酸配列、ペプチドホルモンをコードする核酸配列、リボザイム、ＲＮＡｉ（ＨＩＶ
−１  ｇｐ４１：  ＡＡＴＡＡＧＡＣＡＧＧＧＣＴＴＧＧＡＡＡＧＡＣＡＣＴＴＴＣＣＡ
ＡＧＣＣＣＴＧＴＣＴＴＡＴＴＴＴＴ（配列番号３３）／ＨＩＶ−１  ｔａｔ：  ＡＡＧ
ＣＡＴＣＣＡＧＧＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＡＣＡＡＧＧＣＴＧＡＣＴＴＣＣＴＧＧＡＴＧＣ
ＴＴＴＴＴ  （配列番号３４）／ＨＴＬＶ−１  ｔａｘ：  ＧＡＡＣＡＴＴＧＧＴＧＡＧ
ＧＡＡＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＣＡＣＣＡＡＴＧＴＴＣＴＴＴＴＴ（配列番号３５
））を含む、項目６９に記載の薬学的組成物。
【００８６】
（７１）リンパ球特異的にタンパク質を発現させる方法であって、
Ａ）項目４１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能
に連結させた核酸構築物を作製する工程；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する工程、
を包含する、方法。
【００８７】
（７２）リンパ球特異的にタンパク質を発現させるキットであって、
Ａ）項目４１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能
に連結させた核酸構築物；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する手段、
を包含する、キット。
【００８８】
（７３）リンパ球特異的にタンパク質を発現させるキットであって、
Ａ）項目４１に記載のプロモーター；および
Ｂ）上記プロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた
核酸構築物を作製するための手段；
を包含する、キット。
【００８９】
（７４）リンパ球特異的にタンパク質を発現させることを必要とする疾患、障害または
状態を処置または予防するための方法であって、
Ａ）項目４１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能
に連結させた核酸構築物を作製する工程；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する工程、
を包含する、方法。
【００９０】
（７５）リンパ球特異的にタンパク質を発現させることを必要とする疾患、障害または
状態を処置または予防するためのキットであって、
Ａ）項目４１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能
に連結させた核酸構築物；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する手段、
を包含する、キット。
【００９１】
（７６）リンパ球特異的にタンパク質を発現させることを必要とする疾患、障害または
状態を処置または予防するためのキットであって、
Ａ）項目４１に記載のプロモーター；および
Ｂ）上記プロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた
核酸構築物を作製するための手段；
を包含する、キット。
【００９２】
（７７）  タンパク質を生産する方法であって、
Ａ）項目４１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能
に連結させた核酸構築物を作製する工程；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する工程、
を包含する、方法。
【００９３】
（７８）  タンパク質を生産するためのキットであって、
Ａ）項目４１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能
に連結させた核酸構築物；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する手段、
を包含する、キット。
【００９４】
（７９）  タンパク質を生産するためのキットであって、
Ａ）項目４１に記載のプロモーター；および
Ｂ）上記プロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた
核酸構築物を作製するための手段；
を包含する、キット。
【００９５】
（８０）  項目４１に記載のプロモーターの、リンパ球特異的な処置が所望される疾患
、障害または状態を処置するための薬学的組成物の製造における使用。
【００９６】
（８１）  ＨＨＶ７のＵ９５プロモーター。
【００９７】
（８２）  上記プロモーターは、配列番号１２に示す配列のうち、少なくとも８の連続
するヌクレオチド配列を含む、項目８１に記載のプロモーター。
【００９８】
（８３）  上記プロモーターは、配列番号１２に示す配列のうち、少なくともＲ２領域
またはその機能的改変体を含む、項目８１に記載のプロモーター。
【００９９】
（８４）  上記プロモーターは、配列番号１２に示す配列のうち、少なくとも＋１６〜
−３０４の配列を含む、項目８１に記載のプロモーター。
【０１００】
（８５）  上記プロモーターは、配列番号１２に示す配列のうち、少なくとも＋１６〜
−３７９の配列を含む、項目８１に記載のプロモーター。
【０１０１】
（８６）  上記プロモーターは、Ｒ２領域に存在するＮＦ−κＢ結合モチーフを含む、
項目８１に記載のプロモーター。
【０１０２】
（８７）  上記プロモーターは、配列番号１６に示す配列を含む、項目８１に記載のプ
ロモーター。
【０１０３】
（８８）  上記プロモーターは、
（ａ）配列番号１２に記載の塩基配列もしくはそれに対応する塩基配列またはそのフラグ
メント配列を有するポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号１２に記載の塩基配列もしくはそれに対応する塩基配列の対立遺伝子変異
体またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド；
（ｃ）（ａ）〜（ｂ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハ
イブリダイズし、かつ、生物学的活性を有するポリヌクレオチド；または
（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同
一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリヌク
レオチド、
を含む、
項目８１に記載のプロモーター。
【０１０４】
（８９）少なくとも１０の連続するヌクレオチド長を有する、項目８１に記載のプロモ
ーター。
【０１０５】
（９０）  上記生物学的活性は、プロモーター活性である、項目８８に記載のプロモー
ター。
【０１０６】
（９１）  項目８１に記載のプロモーターを含む、核酸構築物。
【０１０７】
（９２）  上記プロモーターとは異なる由来の外来遺伝子をコードする配列を、上記プ
ロモーターの配列に対して作動可能に連結されて、含む、項目９１に記載の核酸構築物。
【０１０８】
（９３）  上記外来遺伝子は、ＲＮＡｉ分子、薬剤、欠損される劣性遺伝子、選択マー
カーをコードする、項目９２に記載の核酸構築物。
【０１０９】
（９４）上記選択マーカーは、上記核酸構築物が導入される宿主の培地での選択を可能
にする、項目９３に記載の核酸構築物。
【０１１０】
（９５）上記選択マーカーは、上記核酸構築物が導入される宿主での視覚での選択を可
能にする、項目９３に記載の核酸構築物。
【０１１１】
（９６）上記選択マーカーは、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラ
ーゼ（ｈｐｒｔ）、または緑色蛍光プロテイン（ＧＦＰ）、青色蛍光プロテイン（ＣＦＰ
）、黄色蛍光プロテイン（ＹＦＰ）および赤色蛍光プロテイン（ｄｓＲｅｄ）からなる群
より選択される蛍光マーカーを含む、項目９３に記載の核酸構築物。
【０１１２】
（９７）上記選択マーカーは、上記核酸構築物が導入される宿主に対して実質的に毒性
を示さない、項目９３に記載の核酸構築物。
【０１１３】
（９８）上記欠損される劣性遺伝子は、ＡＤＡ遺伝子、ＰＮＰ遺伝子、γｃ鎖遺伝子、
ＴＡＰ遺伝子、ＭＨＣ  ＩＩ遺伝子、Ｘ連鎖ＷＡＳＰ、ＣＤ４０リガンド、ＰＩ３Ｋ類似
遺伝子、ＤＮＡヘリカーゼからなる群より選択される、項目９３に記載の核酸構築物。
【０１１４】
（９９）上記薬剤は、サイトカイン、ケモカイン、増殖因子、タンパク質ホルモン、ペ
プチドホルモン（ＩＦＮ−α，ＩＦＮ−γ，ＩＬ−２，ＩＬ−１２，Ｇ−ＣＳＦ，ＧＭ−
ＣＳＦ）からなる群より選択される、項目９３に記載の核酸構築物。
【０１１５】
（１００）  上記プロモーターは、上記外来遺伝子の血球系細胞、特にＴリンパ球での
特異的発現を誘導する、項目９２に記載の核酸構築物。
【０１１６】
（１０１）  項目９１に記載の核酸構築物を含む発現ベクター。
【０１１７】
（１０２）項目９１に記載の核酸構築物を含む、細胞。
【０１１８】
（１０３）上記細胞は、上記プロモーター配列とは異種である、項目１０２に記載の細
胞。
【０１１９】
（１０４）項目９１に記載の核酸構築物を含む、組織。
【０１２０】
（１０５）項目９１に記載の核酸構築物を含む、臓器。
【０１２１】
（１０６）項目９１に記載の核酸構築物を含む、生物。
【０１２２】
（１０７）項目８１に記載のプロモーターおよび抗原をコードする配列を含む、薬学的
組成物。
【０１２３】
（１０８）ＤＮＡワクチンである、項目１０７に記載の薬学的組成物。
【０１２４】
（１０９）リンパ球特異的な処置が所望される疾患、障害または状態を処置するための
薬学的組成物であって、項目８１に記載のプロモーターおよび上記処置のための核酸配列
を含む、薬学的組成物。
【０１２５】
（１１０）上記処置のための核酸配列は、サイトカインをコードする核酸配列、ケモカ
インをコードする核酸配列、増殖因子をコードする核酸配列、タンパク質ホルモンをコー
ドする核酸配列、ペプチドホルモンをコードする核酸配列、リボザイム、ＲＮＡｉ（ＨＩ
Ｖ−１  ｇｐ４１：  ＡＡＴＡＡＧＡＣＡＧＧＧＣＴＴＧＧＡＡＡＧＡＣＡＣＴＴＴＣＣ
ＡＡＧＣＣＣＴＧＴＣＴＴＡＴＴＴＴＴ（配列番号３３）／ＨＩＶ−１  ｔａｔ：  ＡＡ
ＧＣＡＴＣＣＡＧＧＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＡＣＡＡＧＧＣＴＧＡＣＴＴＣＣＴＧＧＡＴＧ
ＣＴＴＴＴＴ  （配列番号３４）／ＨＴＬＶ−１  ｔａｘ：  ＧＡＡＣＡＴＴＧＧＴＧＡ
ＧＧＡＡＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＣＡＣＣＡＡＴＧＴＴＣＴＴＴＴＴ（配列番号３
５））を含む、項目１０９に記載の薬学的組成物。
【０１２６】
（１１１）リンパ球特異的にタンパク質を発現させる方法であって、
Ａ）項目８１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能
に連結させた核酸構築物を作製する工程；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する工程、
を包含する、方法。
【０１２７】
（１１２）リンパ球特異的にタンパク質を発現させるキットであって、
Ａ）項目８１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能
に連結させた核酸構築物；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する手段、
を包含する、キット。
【０１２８】
（１１３）リンパ球特異的にタンパク質を発現させるキットであって、
Ａ）項目８１に記載のプロモーター；および
Ｂ）上記プロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた
核酸構築物を作製するための手段；
を包含する、キット。
【０１２９】
（１１４）リンパ球特異的にタンパク質を発現させることを必要とする疾患、障害また
は状態を処置または予防するための方法であって、
Ａ）項目８１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能
に連結させた核酸構築物を作製する工程；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する工程、
を包含する、方法。
【０１３０】
（１１５）リンパ球特異的にタンパク質を発現させることを必要とする疾患、障害また
は状態を処置または予防するためのキットであって、
Ａ）項目８１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能
に連結させた核酸構築物；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する手段、
を包含する、キット。
【０１３１】
（１１６）リンパ球特異的にタンパク質を発現させることを必要とする疾患、障害また
は状態を処置または予防するためのキットであって、
Ａ）項目８１に記載のプロモーター；および
Ｂ）上記プロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた
核酸構築物を作製するための手段；
を包含する、キット。
【０１３２】
（１１７）  タンパク質を生産する方法であって、
Ａ）項目８１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能
に連結させた核酸構築物を作製する工程；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する工程、
を包含する、方法。
【０１３３】
（１１８）  タンパク質を生産するためのキットであって、
Ａ）項目８１に記載のプロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能
に連結させた核酸構築物；
Ｂ）上記核酸構築物を、上記プロモーターが上記タンパク質をコードする核酸配列の発
現を誘導させる条件下に配置する手段、
を包含する、キット。
【０１３４】
（１１９）  タンパク質を生産するためのキットであって、
Ａ）項目８１に記載のプロモーター；および
Ｂ）上記プロモーターに上記タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた
核酸構築物を作製するための手段；
を包含する、キット。
【０１３５】
（１２０）  項目８１に記載のプロモーターの、リンパ球特異的な処置が所望される疾
患、障害または状態を処置するための薬学的組成物の製造における使用。
【０１３６】
以下に、本発明の好ましい実施形態を示すが、当業者は本発明の説明および当該分野に
おける周知慣用技術からその実施形態などを適宜実施することができ、本発明が奏する作
用および効果を容易に理解することが認識されるべきである。
【発明の効果】
【０１３７】
本発明によって、Ｔリンパ球などの免疫担当細胞においてタンパク質の発現を選択的に
誘導するプロモーターが提供された。本発明のプロモーターを利用して、先天性免疫不全
症候群などの免疫疾患を効果的に予防または治療するための方法および医薬が提供された
。本発明はまた、効率よく遺伝子治療を行うための技術を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０１３８】
【図１】図１は、接着細胞でのプロモーター活性の比較したものを示す。横軸には、種々のプロモーターを並列させ、１つのプロモーターについてＶｅｒｏ細胞、ＨＥＬ細胞、Ｌ９２９細胞、２９３細胞、Ｕ３７３細胞でのプロモーター活性をＬｏｇ（ＲＬＵ）／β−ｇａｌで対数表示したものを示す。
【図２】図１は、リンパ球系細胞でのプロモーター活性の比較したものを示す。横軸には、種々のプロモーターを並列させ、１つのプロモーターについてＴＨＰ−１細胞、ＳｕｐＴ１細胞、Ｕ９３７細胞でのプロモーター活性をＬｏｇ（ＲＬＵ）／β−ｇａｌで対数表示したものを示す。
【図３】図３は、ＴＰＡで細胞を刺激した場合のＨＨV−６ＭＩＥ領域のプロモーター活性を示す（Ｖｅｒｏ細胞）。横軸には、種々のプロモーターを並列させ、１つのプロモーターについてＴＰＡの有無でのプロモーター活性をＬｏｇ（ＲＬＵ）／β−ｇａｌで対数表示したものを示す。
【図４】図４は、ＴＰＡで細胞を刺激した場合のＨＨV−６ＭＩＥ領域のプロモーター活性を示す（Ｌ９２９細胞）。横軸には、種々のプロモーターを並列させ、１つのプロモーターについてＴＰＡの有無でのプロモーター活性をＬｏｇ（ＲＬＵ）／β−ｇａｌで対数表示したものを示す。
【図５】図５は、ＨＨＶ６Ｂのプロモーター領域の種々の欠失改変体の模式図を示す。上には、プロモーター領域を示し、そのプロモーター領域中の種々のモチーフを示す。
【図６】図６は、プロモーター活性の測定系の模式図を示す。
【図７】図７は、ＨＨＶ６Ｂのプロモーター領域の種々の欠失改変体の模式図とともにプロモーター活性（相対ルシフェラーゼ活性）を示す。
【図８】図８は、ＨＨＶ７のプロモーター領域に関する前初期（ＩＥ）遺伝子およびプロモーターの領域の模式図を示す。左欄は、上から順に７ＭＩＥプロモーター（−４９３）、７ＭＩＥプロモーター（−３８８）、７ＭＩＥプロモーター（−２３３）を示し、右欄は、上から７Ｕ９５プロモーター（−４８４）、７Ｕ９５プロモーター（−３７９）、７Ｕ９５プロモーター（−３０４）を示す。
【図９】図９は、ＨＨＶ７のＩＥプロモーターのリンパ球系細胞株における活性を示す。左上は、Ｊｕｒｋａｔ細胞、右上はＭｏｌｔ−３細胞、左下はＳｕｐＴ１細胞、右下はＳＡＳ−４１３細胞を示す。各グラフ中は、各々左からＣＭＶＰ、６ＭＩＥＰ、６Ｕ９５Ｐ、７ＭＩＥ（−４９３）、７Ｕ９５Ｐ（−４８４）を示す。
【図１０】図１０は、プロモーター活性に対するＲ２欠失の効果を示す。左上は、Ｊｕｒｋａｔ細胞、右上はＭｏｌｔ−３細胞、左下はＳｕｐＴ１細胞、右下はＳＡＳ−４１３細胞を示す。各グラフ中は、各々上から、７ＭＩＥプロモーター（−４９３）、７ＭＩＥプロモーター（−３８８）、７ＭＩＥプロモーター（−２３３）、７Ｕ９５プロモーター（−４８４）、７Ｕ９５プロモーター（−３７９）、７Ｕ９５プロモーター（−３０４）を示す。
【図１１】図１１は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）におけるプロモーター活性を示す。左上、右上および下の順に、系統１、系統２および系統３を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１３９】
以下に本発明の好ましい形態を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、
特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、
単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など、他の言語にお
ける対応する冠詞、形容詞など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むこ
とが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない
限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したが
って、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用
語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
【０１４０】
（定義）
以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙する。
【０１４１】
本明細書において使用される「ＨＨＶ」とは、ヒトヘルペスウイルス（ｈｕｍａｎ  ｈ
ｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ）をいい、そのタイプによって、１型、２型、３型、４型、５型、
６型、７型、８型などが存在する。
【０１４２】
本明細書において使用される場合、用語「ヘルペスウイルス」とは、ＨＨＶ−６Ａ、Ｈ
ＨＶ−６Ｂ、およびＨＨＶ−７の全てを包含し、かつ、特に言及されない限り、これらウ
イルスの野生型、組換え型のいずれをも含む。また、本明細書において使用される場合、
用語「ＨＨＶ−６（ヒトヘルペスウイルス６）」は、ＨＨＶ−６ＡおよびＨＨＶ−６Ｂを
包含し、かつ、特に言及されない限り、これらウイルスの野生型、組換え型のいずれをも
含む。ＨＨＶ６は、サイトメガロウイルスＨＨＶ−５と同じくβ亜科に属し、ＨＨＶ−６
Ｂは突発性発疹の原因ウイルスであり、日本ではほぼ全員が２歳までに感染するといわれ
ている。本明細書において使用される場合、用語「ＨＨＶ−７（ヒトヘルペスウイルス７
）」は、この型のヘルペスウイルスに属する任意のヘルペスウイルスを言う。ＨＨＶ７も
突発性発疹の病原体とされているが、ＨＨＶ６−Ｂに比べると、頻度は少なく、感染する
年齢もより高い。ＨＨＶ−６と同じくβ亜科に属し、ＣＤ４＋Ｔ細胞に感染、ジベルばら
色粃糠疹の発症に関連するともいわれており、日本人では２歳までにほぼ全員が感染する
といわれている。
【０１４３】
本明細書においてヘルペスウイルスの「野生株」とは、人工的な改変を受けていない、
天然より単離されたヘルペスウイルス株をいう。野生株の例としては、ＪＩ株が挙げられ
るが、これに限定されない。
【０１４４】
本明細書においてＨＨＶ−６Ａの「野生株」とは、人工的な改変を受けていない、天然
より単離されたＨＨＶ−６Ａ株をいう。野生株の例としては、Ｕ１１０２株が挙げられる
が、これに限定されない。
【０１４５】
本明細書において「変異株」とは、野生株であるウイルス株に、変異誘発、多数回の継
代培養などによって変異誘発をしたヘルペスウイルス株をいう。ヘルペスウイルス株に変
異誘発する場合、この変異誘発は、ランダムな変異導入であっても、部位特異的変異導入
であってもよい。
【０１４６】
本明細書においてＨＨＶ−６Ｂの「野生株」とは、人工的な改変を受けていない、天然
より単離されたヘルペスウイルス株をいう。ＨＨＶ−６Ｂ野生株の例としては、ＨＳＴ株
が挙げられるが、これに限定されない。
【０１４７】
本明細書において使用される用語「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチ
ド」および「ペプチド」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ
酸のポリマーをいう。
【０１４８】
本明細書において使用される用語「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」およ
び「核酸」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのヌクレオチドのポリ
マーをいう。他にそうではないと示されなければ、特定の核酸配列はまた、明示的に示さ
れた配列と同様に、その保存的に改変された改変体（例えば、縮重コドン置換体）および
相補配列を包含することが企図される。具体的には、縮重コドン置換体は、１またはそれ
以上の選択された（または、すべての）コドンの３番目の位置が混合塩基および／または
デオキシイノシン残基で置換された配列を作成することにより達成され得る（Ｂａｔｚｅ
ｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋ
ａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８（１９８５）；Ｒｏｓｓｏ
ｌｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８（１９９４））。
【０１４９】
本明細書において「遺伝子」とは、遺伝形質を規定する因子をいう。通常染色体上に一
定の順序に配列している。タンパク質の一次構造を規定する遺伝子を構造遺伝子といい、
その発現を左右する領域を調節エレメントという。本明細書では、「遺伝子」は、「ポリ
ヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」ならびに／あるいは「タンパク
質」「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」をさすことがある。本明
細書において遺伝子の「オープンリーディングフレーム」または「ＯＲＦ」とは、遺伝子
の塩基配列を３塩基ずつに区切った時の３通りの枠組の１つであって、開始コドンを有し
、そして途中に終止コドンが出現せずある程度の長さを持ち、実際にタンパク質をコード
する可能性のある読み枠をいう。ヘルペスウイルスゲノムは、その全塩基配列が決定され
ており、少なくとも１０１個の遺伝子が同定されており、その遺伝子の各々がオープンリ
ーディングフレーム（ＯＲＦ）を有することが公知である。
【０１５０】
本明細書において「ＲＮＡｉ」とは、ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅの略称で、二
本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡともいう）のようなＲＮＡｉを引き起こす因子を細胞に導入する
ことにより、相同なｍＲＮＡが特異的に分解され、遺伝子産物の合成が抑制される現象お
よびそれに用いられる技術をいう。本明細書においてＲＮＡｉはまた、場合によっては、
ＲＮＡｉを引き起こす因子と同義に用いられ得る。
【０１５１】
本明細書において「ＲＮＡｉを引き起こす因子」とは、ＲＮＡｉを引き起こすことがで
きるような任意の因子をいう。本明細書において「遺伝子」に対して「ＲＮＡｉを引き起
こす因子」とは、その遺伝子に関するＲＮＡｉを引き起こし、ＲＮＡｉがもたらす効果（
例えば、その遺伝子の発現抑制など）が達成されることをいう。そのようなＲＮＡｉを引
き起こす因子としては、例えば、標的遺伝子の核酸配列の一部に対して少なくとも約７０
％の相同性を有する配列またはストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列を含
む、少なくとも１０ヌクレオチド長の二本鎖部分を含むＲＮＡまたはその改変体が挙げら
れるがそれに限定されない。ここで、この因子は、好ましくは、３’突出末端を含み、よ
り好ましくは、３’突出末端は、２ヌクレオチド長以上のＤＮＡ（例えば、２〜４ヌクレ
オチド長のＤＮＡであり得る。
【０１５２】
理論に束縛されないが、ＲＮＡｉが働く機構として考えられるものの一つとして、ｄｓ
ＲＮＡのようなＲＮＡｉを引き起こす分子が細胞に導入されると、比較的長い（例えば、
４０塩基対以上）ＲＮＡの場合、ヘリカーゼドメインを持つダイサー（Ｄｉｃｅｒ）と呼
ばれるＲＮａｓｅＩＩＩ様のヌクレアーゼがＡＴＰ存在下で、その分子を３’末端から約
２０塩基対ずつ切り出し、短鎖ｄｓＲＮＡ（ｓｉＲＮＡとも呼ばれる）を生じる。本明細
書において「ｓｉＲＮＡ」とは、ｓｈｏｒｔ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡの略称で
あり、人工的に化学合成されるかまたは生化学的に合成されたものか、あるいは生物体内
で合成されたものか、あるいは約４０塩基以上の二本鎖ＲＮＡが体内で分解されてできた
１０塩基対以上の短鎖二本鎖ＲＮＡをいい、通常、５’−リン酸、３’−ＯＨの構造を有
しており、３’末端は約２塩基突出している。このｓｉＲＮＡに特異的なタンパク質が結
合して、ＲＩＳＣ（ＲＮＡ−ｉｎｄｕｃｅｄ−ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ−ｃｏｍｐｌｅｘ）が
形成される。この複合体は、ｓｉＲＮＡと同じ配列を有するｍＲＮＡを認識して結合し、
ＲＮａｓｅＩＩＩ様の酵素活性によってｓｉＲＮＡの中央部でｍＲＮＡを切断する。ｓｉ
ＲＮＡの配列と標的として切断するｍＲＮＡの配列の関係については、１００％一致する
ことが好ましい。しかし、ｓｉＲＮＡの中央から外れた位置についての塩基の変異につい
ては、完全にＲＮＡｉによる切断活性がなくなるのではなく、部分的な活性が残存する。
他方、ｓｉＲＮＡの中央部の塩基の変異は影響が大きく、ＲＮＡｉによるｍＲＮＡの切断
活性が極度に低下する。このような性質を利用して、変異をもつｍＲＮＡについては、そ
の変異を中央に配したｓｉＲＮＡを合成し、細胞内に導入することで特異的に変異を含む
ｍＲＮＡだけを分解することができる。従って、本発明では、ｓｉＲＮＡそのものをＲＮ
Ａｉを引き起こす因子として用いることができるし、ｓｉＲＮＡを生成するような因子（
例えば、代表的に約４０塩基以上のｄｓＲＮＡ）をそのような因子として用いることがで
きる。
【０１５３】
また、理論に束縛されることを希望しないが、ｓｉＲＮＡは、上記経路とは別に、ｓｉ
ＲＮＡのアンチセンス鎖がｍＲＮＡに結合してＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲ
Ｐ）のプライマーとして作用し、ｄｓＲＮＡが合成され、このｄｓＲＮＡが再びダイサー
の基質となり、新たなｓｉＲＮＡを生じて作用を増幅することも企図される。従って、本
発明では、ｓｉＲＮＡ自体およびｓｉＲＮＡが生じるような因子もまた、有用である。実
際に、昆虫などでは、例えば３５分子のｄｓＲＮＡ分子が、１，０００コピー以上ある細
胞内のｍＲＮＡをほぼ完全に分解することから、ｓｉＲＮＡ自体およびｓｉＲＮＡが生じ
るような因子が有用であることが理解される。
【０１５４】
本発明においてｓｉＲＮＡと呼ばれる、約２０塩基前後（例えば、代表的には約２１〜
２３塩基長）またはそれ未満の長さの二本鎖ＲＮＡを用いることができる。このようなｓ
ｉＲＮＡは、細胞に発現させることにより遺伝子発現を抑制し、そのｓｉＲＮＡの標的と
なる病原遺伝子の発現を抑えることから、疾患の治療、予防、予後などに使用することが
できる。
【０１５５】
本発明において用いられるｓｉＲＮＡは、ＲＮＡｉを引き起こすことができる限り、ど
のような形態を採っていてもよい。
【０１５６】
別の実施形態において、本発明のＲＮＡｉを引き起こす因子は、３’末端に突出部を有
する短いヘアピン構造（ｓｈＲＮＡ；ｓｈｏｒｔ  ｈａｉｒｐｉｎ  ＲＮＡ）であり得る
。本明細書において「ｓｈＲＮＡ」とは、一本鎖ＲＮＡで部分的に回文状の塩基配列を含
むことにより、分子内で二本鎖構造をとり、ヘアピンのような構造となる約２０塩基対以
上の分子をいう。そのようなｓｈＲＮＡは、人工的に化学合成される。あるいは、そのよ
うなｓｈＲＮＡは、センス鎖およびアンチセンス鎖のＤＮＡ配列を逆向きに連結したヘア
ピン構造のＤＮＡをＴ７  ＲＮＡポリメラーゼによりインビトロでＲＮＡを合成すること
によって生成することができる。理論に束縛されることは希望しないが、そのようなｓｈ
ＲＮＡは、細胞内に導入された後、細胞内で約２０塩基（代表的には例えば、２１塩基、
２２塩基、２３塩基）の長さに分解され、ｓｉＲＮＡと同様にＲＮＡｉを引き起こし、本
発明の処置効果があることが理解されるべきである。このような効果は、昆虫、植物、動
物（哺乳動物を含む）など広汎な生物において発揮されることが理解されるべきである。
このように、ｓｈＲＮＡは、ｓｉＲＮＡと同様にＲＮＡｉを引き起こすことから、本発明
の有効成分として用いることができる。ｓｈＲＮＡはまた、好ましくは、３’突出末端を
有し得る。二本鎖部分の長さは特に限定されないが、好ましくは約１０ヌクレオチド長以
上、より好ましくは約２０ヌクレオチド長以上であり得る。ここで、３’突出末端は、好
ましくはＤＮＡであり得、より好ましくは少なくとも２ヌクレオチド長以上のＤＮＡであ
り得、さらに好ましくは２〜４ヌクレオチド長のＤＮＡであり得る。
【０１５７】
本発明において用いられるＲＮＡｉを引き起こす因子は、人工的に合成した（例えば、
化学的または生化学的）ものでも、天然に存在するものでも用いることができ、この両者
の間で本発明の効果に本質的な違いは生じない。化学的に合成したものでは、液体クロマ
トグラフィーなどにより精製をすることが好ましい。
【０１５８】
本発明において用いられるＲＮＡｉを引き起こす因子は、インビトロで合成することも
できる。この合成系において、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼおよびＴ７プロモーターを用い
て、鋳型ＤＮＡからアンチセンスおよびセンスのＲＮＡを合成する。これらをインビトロ
でアニーリングした後、細胞に導入すると、上述のような機構を通じてＲＮＡｉが引き起
こされ、本発明の効果が達成される。ここでは、例えば、リン酸カルシウム法でそのよう
なＲＮＡを細胞内に導入することができる。
【０１５９】
本発明のＲＮＡｉを引き起こす因子としてはまた、ｍＲＮＡとハイブリダイズし得る一
本鎖、あるいはそれらのすべての類似の核酸アナログのような因子も挙げられる。そのよ
うな因子もまた、本発明の処置方法および組成物において有用である。
【０１６０】
本明細書において「対応する」アミノ酸および核酸とは、それぞれあるポリペプチドお
よび核酸分子において、比較の基準となるポリペプチドおよび核酸分子における所定のア
ミノ酸および核酸と同様の作用を有するか、または有することが予測されるアミノ酸およ
び核酸をいい、例えば、ユビキチンにおいては、リジンとの連結を担う配列（例えば、Ｃ
末端のグリシン）と同様の位置に存在し触媒活性に同様の寄与をするアミノ酸およびそれ
をコードする核酸をいう。例えば、核酸配列であれば、その核酸配列またはそれがコード
する特定の部分と同様の機能を発揮する部分であり得る。
【０１６１】
本明細書において「対応する」遺伝子（例えば、ポリペプチド、核酸分子など）とは、
ある種において、比較の基準となる種における所定の遺伝子と同様の作用を有するか、ま
たは有することが予測される遺伝子をいい、そのような作用を有する遺伝子が複数存在す
る場合、進化学的に同じ起源を有するものをいう。従って、ある遺伝子の対応する遺伝子
は、その遺伝子のオルソログであり得る。したがって、ヘルペスウイルス６Ｂ型の配列、
癌抗原などの遺伝子に対応する遺伝子は、他の生物（ヘルペスウイルス７型など）におい
ても見出すことができる。そのような対応する遺伝子は、当該分野において周知の技術を
用いて同定することができる。したがって、例えば、ある動物における対応する遺伝子は
、対応する遺伝子の基準となる遺伝子（例えば、ヘルペスウイルス−６ＡのＭＩＥプロモ
ーター配列）の配列をクエリ配列として用いてその動物（例えばヘルペスウイルス６Ｂ）
の配列データベースを検索することによって、またはウェットの実験でライブラリーをス
クリーニングすることによって見出すことができる。
【０１６２】
本明細書において「単離された」物質（例えば、核酸またはタンパク質などのような生
物学的因子）とは、その物質が天然に存在する環境（例えば、生物体の細胞内）の他の物
質（好ましくは、生物学的因子）（例えば、核酸である場合、核酸以外の因子および目的
とする核酸以外の核酸配列を含む核酸；タンパク質である場合、タンパク質以外の因子お
よび目的とするタンパク質以外のアミノ酸配列を含むタンパク質など）から実質的に分離
または精製されたものをいう。「単離された」核酸およびタンパク質には、標準的な精製
方法によって精製された核酸およびタンパク質が含まれる。したがって、単離された核酸
およびタンパク質は、化学的に合成した核酸およびタンパク質を包含する。
【０１６３】
本明細書において「精製された」物質（例えば、核酸またはタンパク質などのような生
物学的因子）とは、その物質に天然に随伴する因子の少なくとも一部が除去されたものを
いう。したがって、通常、精製された物質におけるその物質の純度は、その物質が通常存
在する状態よりも高い（すなわち濃縮されている）。
【０１６４】
本明細書において「精製された」および「単離された」とは、好ましくは少なくとも７
５重量％、より好ましくは少なくとも８５重量％、よりさらに好ましくは少なくとも９５
重量％、そして最も好ましくは少なくとも９８重量％の、同型の物質が存在することを意
味する。
【０１６５】
本明細書において遺伝子の「相同性」とは、２以上の遺伝子配列の、互いに対する同一
性の程度をいう。従って、ある２つの遺伝子の相同性が高いほど、それらの配列の同一性
または類似性は高い。２種類の遺伝子が相同性を有するか否かは、配列の直接の比較、ま
たは核酸の場合ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーション法によって調べら
れ得る。２つの遺伝子配列を直接比較する場合、その遺伝子配列間でＤＮＡ配列が、代表
的には少なくとも５０％同一である場合、好ましくは少なくとも７０％同一である場合、
より好ましくは少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９
％同一である場合、それらの遺伝子は相同性を有する。
【０１６６】
本明細書において「ストリンジェントなハイブリダイズ条件」とは、当該分野で慣用さ
れる周知の条件をいう。本発明のポリヌクレオチド中から選択されたポリヌクレオチドを
プローブとして、コロニー・ハイブリダイゼーション法、プラーク・ハイブリダイゼーシ
ョン法あるいはサザンブロットハイブリダイゼーション法等を用いることにより、そのよ
うなポリヌクレオチドを得ることができる。具体的には、ストリンジェントな条件でハイ
ブリダイズするポリヌクレオチドは、コロニーあるいはプラーク由来のＤＮＡを固定化し
たフィルターを用いて、０．７〜１．０ＭのＮａＣｌ存在下、６５℃でハイブリダイゼー
ションを行った後、０．１〜２倍濃度のＳＳＣ（ｓａｌｉｎｅ−ｓｏｄｉｕｍ  ｃｉｔｒ
ａｔｅ）溶液（１倍濃度のＳＳＣ溶液の組成は、１５０ｍＭ  塩化ナトリウム、１５ｍＭ
クエン酸ナトリウムである）を用い、６５℃条件下でフィルターを洗浄することにより同
定できるポリヌクレオチドを意味する。ハイブリダイゼーションは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２ｎｄ  ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １−３８、ＤＮＡ  Ｃｌｏｎ
ｉｎｇ  １：Ｃｏｒｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａ
ｃｈ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓ
ｓ（１９９５）等の実験書に記載されている方法に準じて行うことができる。ここで、ス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列からは、好ましくは、Ａ配列のみまた
はＴ配列のみを含む配列が除外される。「ハイブリダイズ可能なポリヌクレオチド」とは
、上記ハイブリダイズ条件下で別のポリヌクレオチドにハイブリダイズすることができる
ポリヌクレオチドをいう。ハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドとして具体的には、本
発明で具体的に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするＤＮＡの塩基配
列と少なくとも６０％以上の相同性を有するポリヌクレオチド、好ましくは８０％以上の
相同性を有するポリヌクレオチド、さらに好ましくは９５％以上の相同性を有するポリヌ
クレオチドを挙げることができる。
【０１６７】
本明細書では塩基配列の同一性の比較および相同性の算出は、配列分析用ツールである
ＢＬＡＳＴを用いてデフォルトパラメータを用いて算出される。同一性の検索は例えば、
ＮＣＢＩのＢＬＡＳＴ  ２．２．９  （２００４．５．１２  発行）を用いて行うことが
できる。本明細書における同一性の値は通常は上記ＢＬＡＳＴを用い、デフォルトの条件
でアラインした際の値をいう。ただし、パラメーターの変更により、より高い値が出る場
合は、最も高い値を同一性の値とする。複数の領域で同一性が評価される場合はそのうち
の最も高い値を同一性の値とする。
【０１６８】
本明細書において、「検索」とは、電子的にまたは生物学的あるいは他の方法により、
ある核酸塩基配列を利用して、特定の機能および／または性質を有する他の核酸塩基配列
を見出すことをいう。電子的な検索としては、ＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａ
ｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０））、ＦＡＳＴＡ（Ｐ
ｅａｒｓｏｎ  ＆  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ  
８５：２４４４−２４４８（１９８８））、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ法（
Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５−１９
７（１９８１））、およびＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ法（Ｎｅｅｄｌｅ
ｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３（１９７
０））などが挙げられるがそれらに限定されない。生物学的な検索としては、ストリンジ
ェントハイブリダイゼーション、ゲノムＤＮＡをナイロンメンブレン等に貼り付けたマク
ロアレイまたはガラス板に貼り付けたマイクロアレイ（マイクロアレイアッセイ）、ＰＣ
Ｒおよび  ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションなどが挙げられるがそれらに限定され
ない。本明細書において、本発明において使用されるプロモーターとしては、このような
電子的検索、生物学的検索によって同定された対応する配列も含まれるべきであることが
意図される。
【０１６９】
本明細書において遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなどの「発現」とは、その
遺伝子などがインビボで一定の作用を受けて、別の形態になることをいう。好ましくは、
遺伝子、ポリヌクレオチドなどが、転写および翻訳されて、ポリペプチドの形態になるこ
とをいうが、転写されてｍＲＮＡが作製されることもまた発現の一態様であり得る。より
好ましくは、そのようなポリペプチドの形態は、翻訳後プロセシングを受けたものであり
得る。
【０１７０】
アミノ酸は、その一般に公知の３文字記号か、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される１文
字記号のいずれかにより、本明細書中で言及され得る。ヌクレオチドも同様に、一般に受
け入れられた１文字コードにより言及され得る。
【０１７１】
その文字コードは以下のとおりである。
アミノ酸
３文字記号  １文字記号  意味
Ａｌａ      Ａ          アラニン
Ｃｙｓ      Ｃ          システイン
Ａｓｐ      Ｄ          アスパラギン酸
Ｇｌｕ      Ｅ          グルタミン酸
Ｐｈｅ      Ｆ          フェニルアラニン
Ｇｌｙ      Ｇ          グリシン
Ｈｉｓ      Ｈ          ヒスチジン
Ｉｌｅ      Ｉ          イソロイシン
Ｌｙｓ      Ｋ          リジン
Ｌｅｕ      Ｌ          ロイシン
Ｍｅｔ      Ｍ          メチオニン
Ａｓｎ      Ｎ          アスパラギン
Ｐｒｏ      Ｐ          プロリン
Ｇｌｎ      Ｑ          グルタミン
Ａｒｇ      Ｒ          アルギニン
Ｓｅｒ      Ｓ          セリン
Ｔｈｒ      Ｔ          トレオニン
Ｖａｌ      Ｖ          バリン
Ｔｒｐ      Ｗ          トリプトファン
Ｔｙｒ      Ｙ          チロシン
Ａｓｘ                  アスパラギンまたはアスパラギン酸
Ｇｌｘ                  グルタミンまたはグルタミン酸
Ｘａａ                  不明または他のアミノ酸。
【０１７２】
塩基
記号  意味  
ａ    アデニン
ｇ    グアニン
ｃ    シトシン
ｔ    チミン
ｕ    ウラシル
ｒ    グアニンまたはアデニンプリン
ｙ    チミン／ウラシルまたはシトシンピリミジン
ｍ    アデニンまたはシトシンアミノ基
ｋ    グアニンまたはチミン／ウラシルケト基
ｓ    グアニンまたはシトシン
ｗ    アデニンまたはチミン／ウラシル
ｂ    グアニンまたはシトシンまたはチミン／ウラシル
ｄ    アデニンまたはグアニンまたはチミン／ウラシル
ｈ    アデニンまたはシトシンまたはチミン／ウラシル
ｖ    アデニンまたはグアニンまたはシトシン
ｎ    アデニンまたはグアニンまたはシトシンまたはチミン／ウラシル、不明、または他
の塩基。
【０１７３】
本明細書において、「フラグメント」とは、全長のポリペプチドまたはポリヌクレオチ
ド（長さがｎ）に対して、１〜ｎ−１までの配列長を有するポリペプチドまたはポリヌク
レオチドをいう。フラグメントの長さは、その目的に応じて、適宜変更することができ、
例えば、その長さの下限としては、ポリペプチドの場合、３、４、５、６、７、８、９、
１０、１５，２０、２５、３０、４０、５０およびそれ以上のアミノ酸が挙げられ、ここ
で具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、１１など）もまた、下限として
適切であり得る。また、ポリヌクレオチドの場合、５、６、７、８、９、１０、１５，２
０、２５、３０、４０、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、６００
、６００、７００、８００、９００、１０００およびそれ以上のヌクレオチドが挙げられ
、ここで具体的に列挙していない整数で表される長さ（例えば、１１など）もまた、下限
として適切であり得る。
【０１７４】
本発明において使用されるポリペプチドは、天然型のポリペプチドと実質的に同一の作
用を有する限り、アミノ酸配列中の１以上（例えば、１または数個）のアミノ酸が置換、
付加および／または欠失していてもよく、糖鎖が置換、付加および／または欠失していて
もよい。
【０１７５】
あるアミノ酸を、同様の疎水性指数を有する他のアミノ酸により置換して、そして依然
として同様の生物学的機能を有するタンパク質（例えば、酵素活性において等価なタンパ
ク質）を生じさせ得ることが当該分野で周知である。このようなアミノ酸置換において、
疎水性指数が±２以内であることが好ましく、±１以内であることがより好ましく、およ
び±０．５以内であることがさらにより好ましい。疎水性に基づくこのようなアミノ酸の
置換は効率的であることが当該分野において理解される。親水性指標もまた、改変体作製
において考慮される。米国特許第４、５５４、１０１号に記載されるように、以下の親水
性指数がアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．
０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０
．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオ
ニン（−０．４）；プロリン（−０．５±１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−
０．５）；システイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロ
イシン（−１．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラ
ニン（−２．５）；およびトリプトファン（−３．４）。アミノ酸が同様の親水性指数を
有しかつ依然として生物学的等価体を与え得る別のものに置換され得ることが理解される
。このようなアミノ酸置換において、親水性指数が±２以内であることが好ましく、±１
以内であることがより好ましく、および±０．５以内であることがさらにより好ましい。
【０１７６】
本発明において、「保存的置換」とは、アミノ酸置換において、元のアミノ酸と置換さ
れるアミノ酸との親水性指数または／および疎水性指数が上記のように類似している置換
をいう。保存的置換の例は、当業者に周知であり、例えば、次の各グループ内での置換：
アルギニンおよびリジン；グルタミン酸およびアスパラギン酸；セリンおよびスレオニン
；グルタミンおよびアスパラギン；ならびにバリン、ロイシン、およびイソロイシン、な
どが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１７７】
本明細書において、「改変体」とは、もとのポリペプチドまたはポリヌクレオチドなど
の物質に対して、一部が変更されているものをいう。そのような改変体としては、置換改
変体、付加改変体、欠失改変体、短縮（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）改変体、対立遺伝子変異体
などが挙げられる。対立遺伝子（ａｌｌｅｌｅ）とは、同一遺伝子座に属し、互いに区別
される遺伝的改変体のことをいう。従って、「対立遺伝子変異体」とは、ある遺伝子に対
して、対立遺伝子の関係にある改変体をいう。「種相同体またはホモログ（ｈｏｍｏｌｏ
ｇ）」とは、ある種の中で、ある遺伝子とアミノ酸レベルまたはヌクレオチドレベルで、
相同性（好ましくは、６０％以上の相同性、より好ましくは、８０％以上、８５％以上、
９０％以上、９５％以上の相同性）を有するものをいう。そのような種相同体を取得する
方法は、本明細書の記載から明らかである。「オルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）」とは、
オルソロガス遺伝子（ｏｒｔｈｏｌｏｇｏｕｓ  ｇｅｎｅ）ともいい、二つの遺伝子があ
る共通祖先からの種分化に由来する遺伝子をいう。例えば、多重遺伝子構造をもつヘモグ
ロビン遺伝子ファミリーを例にとると、ヒトとマウスのαヘモグロビン遺伝子はオルソロ
グであるが，ヒトのαヘモグロビン遺伝子とβヘモグロビン遺伝子はパラログ（遺伝子重
複で生じた遺伝子）である。オルソログは、分子系統樹の推定に有用であることから、本
発明のオルソログもまた、本発明において有用であり得る。
【０１７８】
本明細書において「機能的改変体」とは、基準となる配列が担う生物学的活性（特に、
プロモーター活性）を保持する改変体をいう。
【０１７９】
本明細書において「保存的（に改変された）改変体」は、アミノ酸配列および核酸配列
の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に改変された改変体とは、同一の
または本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸をいい、核酸がアミノ酸配列をコー
ドしない場合には、本質的に同一な配列をいう。遺伝コードの縮重のため、多数の機能的
に同一な核酸が任意の所定のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、
ＧＣＧ、およびＧＣＵはすべて、アミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニン
がコドンにより特定される全ての位置で、そのコドンは、コードされたポリペプチドを変
更することなく、記載された対応するコドンの任意のものに変更され得る。このような核
酸の変動は、保存的に改変された変異の１つの種である「サイレント改変（変異）」であ
る。核酸においては、保存的置換は、例えば、プロモーター活性を測定しながら確認する
ことができる。
【０１８０】
本明細書中において、機能的に等価なポリペプチドをコードする遺伝子を作製するため
に、アミノ酸の置換のほかに、アミノ酸の付加、欠失、または修飾もまた行うことができ
る。アミノ酸の置換とは、もとのペプチドを１つ以上、例えば、１〜１０個、好ましくは
１〜５個、より好ましくは１〜３個のアミノ酸で置換することをいう。アミノ酸の付加と
は、もとのペプチド鎖に１つ以上、例えば、１〜１０個、好ましくは１〜５個、より好ま
しくは１〜３個のアミノ酸を付加することをいう。アミノ酸の欠失とは、もとのペプチド
から１つ以上、例えば、１〜１０個、好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜３個のア
ミノ酸を欠失させることをいう。アミノ酸修飾は、アミド化、カルボキシル化、硫酸化、
ハロゲン化、アルキル化、グリコシル化、リン酸化、水酸化、アシル化（例えば、アセチ
ル化）などを含むが、これらに限定されない。置換、または付加されるアミノ酸は、天然
のアミノ酸であってもよく、非天然のアミノ酸、またはアミノ酸アナログでもよい。天然
のアミノ酸が好ましい。
【０１８１】
本明細書において発現されるべきポリペプチドの核酸形態は、そのポリペプチドのタン
パク質形態を発現し得る核酸分子をいう。この核酸分子は、発現されるポリペプチドが天
然型のポリペプチドと実質的に同一の活性を有する限り、上述のようにその核酸の配列の
一部が欠失または他の塩基により置換されていてもよく、あるいは他の核酸配列が一部挿
入されていてもよい。あるいは、５’末端および／または３’末端に他の核酸が結合して
いてもよい。また、ポリペプチドをコードする遺伝子をストリンジェントな条件下でハイ
ブリダイズし、そのポリペプチドと実質的に同一の機能を有するポリペプチドをコードす
る核酸分子でもよい。このような遺伝子は、当該分野において公知であり、本発明におい
て利用することができる。
【０１８２】
このような核酸は、周知のＰＣＲ法により得ることができ、化学的に合成することもで
きる。これらの方法に、例えば、部位特異的変異誘発法、ハイブリダイゼーション法など
を組み合わせてもよい。
【０１８３】
本明細書において、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの「置換、付加または欠失」
とは、もとのポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対して、それぞれアミノ酸もしくは
その代替物、またはヌクレオチドもしくはその代替物が、置き換わること、付け加わるこ
とまたは取り除かれることをいう。このような置換、付加または欠失の技術は、当該分野
において周知であり、そのような技術の例としては、部位特異的変異誘発技術などが挙げ
られる。置換、付加または欠失は、１つ以上であれば任意の数でよく、そのような数は、
その置換、付加または欠失を有する改変体において目的とする機能が保持される限り、多
くすることができる。例えば、そのような数は、１または数個であり得、そして好ましく
は、全体の長さの２０％以内、１０％以内、または１００個以下、５０個以下、２５個以
下などであり得る。
【０１８４】
（プロモーター）
本明細書において「プロモーター」（またはプロモーター配列）とは、遺伝子の転写の
開始部位を決定し、またその頻度を直接的に調節するＤＮＡ上の領域をいい、通常ＲＮＡ
ポリメラーゼが結合して転写を始める塩基配列である。したがって、本明細書においてあ
る遺伝子のプロモーターの働きを有する部分を「プロモーター部分」という。プロモータ
ーの領域は、ＤＮＡ解析用ソフトウエアを用いてゲノム塩基配列中のタンパク質コード領
域を予測すれば、プロモーター領域を推定することができる。推定プロモーター領域は、
構造遺伝子ごとに変動するが、通常構造遺伝子の上流にあるが、これらに限定されず、構
造遺伝子の下流にもあり得る。
【０１８５】
本明細書において、「ＭＩＥプロモーター」とは、主要前初期プロモーター（ｍａｊｏ
ｒ  ｉｍｍｅｄｉａｔｅ  ｅａｒｌｙ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ）のプロモーターのことをいい
、ウイルス感染後，宿主由来またはビリオン由来の転写因子によって直ちに転写される遺
伝子のプロモーターをいう。ＭＩＥ遺伝子は、シクロヘキシミド（ＣＨＸ）処理感染細胞
から抽出したＲＮＡを用いたＲＴ−ＰＣＲによって同定することができる。
【０１８６】
本明細書において「Ｕ９５プロモーター」とは、前初期遺伝子Ｕ９５のプロモーターを
いう。このＵ９５もまた、前初期遺伝子であるので、ウイルス感染後，宿主由来またはビ
リオン由来の転写因子によって直ちに転写される。
【０１８７】
本発明において、プロモーターの同定方法は、以下の通りである。すなわち、構造遺伝
子の周辺の配列をいくつかスクリーニングし（例えば、実施例に記載されるような発現カ
セットを用いる）、遺伝子発現促進活性を持つ配列をマッピングする。これによって、有
意な促進活性を有する配列を同定することができる。通常は、上流に配置されていること
がおおいが、それに限定されない。
【０１８８】
本明細書において「ＨＨＶ６ＢのＭＩＥプロモーター」は、配列番号１におけるプロモ
ーター活性を有する任意の配列をいう。好ましくは、配列番号１における転写開始点より
−８１４位〜０位を有する。そのような配列は、配列番号１またはそれに対応する配列な
どが挙げられるがそれらに限定されない。ＨＨＶ６Ｂ遺伝子の発現制御には、転写開始点
から上流−５７４〜−４２７の領域、好ましくは−１０５１〜−４２７の領域があること
が好ましく、その塩基配列としては、配列番号１５、１６に示される配列などが挙げられ
る。その中でも、ＮＦ−κＢおよびＡＰ−１のモチーフ（転写開始点を起点とすれば−６
０３〜−５９４がＮＦ−κＢモチーフ配列であり、−４８８〜−４７８、および−２４９
〜−２３９がＡＰ−１のモチーフ配列である）がモチーフとなることが、塩基配列置換の
実験から明らかになった。従って、好ましくは、本発明のＨＨＶ６ＢのＭＩＥプロモータ
ーは、（ａ）配列番号１に記載の塩基配列もしくはそれに対応する塩基配列またはそのフ
ラグメント配列を有するポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号１に記載の塩基配列もしくは
それに対応する塩基配列の対立遺伝子変異体またはそのフラグメントである、ポリヌクレ
オチド；（ｃ）（ａ）〜（ｂ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条
件下でハイブリダイズし、かつ、生物学的活性を有するポリヌクレオチド；または（ｄ）
（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が
少なくとも７０％である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリヌクレオチ
ド、を含む。
【０１８９】
本明細書において「ＨＨＶ７のＭＩＥプロモーター」とは、配列番号２におけるプロモ
ーター活性を有する任意の配列をいう。好ましくは、配列番号２における−４９３位〜＋
２２位を有する。そのような配列は、配列番号２またはそれに対応する配列などが挙げら
れるがそれらに限定されない。ＨＨＶ７遺伝子の発現制御には、転写開始点から上流−３
８８の領域、好ましくは−４９３の領域があることが好ましく、その塩基配列としては、
配列番号２に示される配列などが挙げられる。その中でも、ＮＦ−κＢのモチーフ（転写
開始点を起点とすれば−４６４〜−４５５、および−３５９〜−３５０がＮＦ−κＢモチ
ーフ配列である）がモチーフとなることが、塩基配列置換の実験から明らかになった。従
って、好ましくは、本発明のＨＨＶ７のＭＩＥプロモーターは、（ａ）配列番号２に記載
の塩基配列もしくはそれに対応する塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌ
クレオチド；（ｂ）配列番号２に記載の塩基配列もしくはそれに対応する塩基配列の対立
遺伝子変異体またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド；（ｃ）（ａ）〜（ｂ）
のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ
、生物学的活性を有するポリヌクレオチド；または（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つ
のポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配
列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリヌクレオチド、を含む。
【０１９０】
本明細書において「ＨＨＶ７のＵ９５プロモーター」とは、配列番号１２におけるプロ
モーター活性を有する任意の配列をいう。好ましくは、配列番号１２における−４８４位
〜＋１６位を有する。そのような配列は、配列番号２またはそれに対応する配列などが挙
げられるがそれらに限定されない。ＨＨＶ７遺伝子の発現制御には、転写開始点から上流
−３７９の領域、好ましくは−４８４の領域があることが好ましく、その塩基配列として
は、配列番号２に示される配列などが挙げられる。その中でも、ＮＦ−κＢのモチーフ（
転写開始点を起点とすれば−４７８〜−４６９、および−３７３〜−３６４がＮＦ−κＢ
モチーフ配列である）がモチーフとなることが、塩基配列置換の実験から明らかになった
。従って、好ましくは、本発明のＨＨＶ７のＵ９５プロモーターは、（ａ）配列番号１２
に記載の塩基配列もしくはそれに対応する塩基配列またはそのフラグメント配列を有する
ポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号１２に記載の塩基配列もしくはそれに対応する塩基配
列の対立遺伝子変異体またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド；（ｃ）（ａ）
〜（ｂ）のいずれか１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズ
し、かつ、生物学的活性を有するポリヌクレオチド；または（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいず
れか１つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％であ
る塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリヌクレオチド、を含む。
【０１９１】
本明細書において、本発明のプロモーターの発現が「構成的」（constructive）である
とは、生物のすべての組織において、その生物の発生のいずれの段階にあってもほぼ一定
の量で発現される性質をいう。具体的には、本明細書の実施例と同様の条件でノーザンブ
ロット分析したとき、例えば、任意の時点で（例えば、２点以上（例えば、５日目および
１５日目））の同一または対応する部位のいずれにおいても、ほぼ同程度の発現量がみら
れるとき、本発明の定義上、発現が構成的であるという。構成的プロモーターは、通常の
生育環境にある生物の恒常性維持に役割を果たしていると考えられる。これらの性質は、
生物の任意の部分からＲＮＡを抽出してノーザンブロット分析で発現量を分析することま
たは発現されたタンパク質をウェスタンブロットにより定量することにより決定すること
ができる。
【０１９２】
本明細書において「エンハンサー」は、目的遺伝子の発現効率を高めるために用いられ
得る。動物細胞において使用する場合、エンハンサーとしては、ＳＶ４０プロモーター内
の上流側の配列を含むエンハンサー領域が好ましい。エンハンサーは複数個用いられ得る
が１個用いられてもよいし、用いなくともよい。プロモーター中のプロモーター活性を強
める領域もまたエンハンサーと呼ばれることがある。
【０１９３】
本明細書において使用する場合、「作動可能に連結された（る）」(operative linked)
とは、所望の配列の発現（作動）がある転写翻訳調節配列（例えば、プロモーター、エン
ハンサーなど）または翻訳調節配列の制御下に配置されることをいう。プロモーターが遺
伝子に作動可能に連結されるためには、通常、その遺伝子のすぐ上流にプロモーターが配
置されるが、必ずしも隣接して配置される必要はない。
【０１９４】
（核酸構築物）
本明細書において、「核酸構築物」または「遺伝子カセット」とは、交換可能に用いら
れ、遺伝子をコードする核酸分子（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）と、これに必要に応じて作
動可能に（すなわち、その核酸の発現を制御し得るように）連結された制御配列（例えば
、プロモーター）とを含む核酸配列、ならびに、必要に応じて制御配列（例えば、プロモ
ーター）と、これに作動可能に（すなわち、インフレームに）連結された異種遺伝子とを
含む核酸分子をいう。このカセットまたは構築物は、必要に応じて他の調節エレメントと
組み合わせて使用することもまた、本発明の範囲に含まれる。好ましい発現カセットは、
特定の制限酵素で切断され、容易に回収され得る遺伝子カセットまたは核酸構築物である
。
【０１９５】
本明細書において遺伝子について言及する場合、「ベクター」とは、目的のポリヌクレ
オチド配列を目的の細胞へと移入させることができるものをいう。そのようなベクターと
しては、原核生物細胞、酵母、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、動物個体および植物個体
等の宿主細胞において自律複製が可能であるか、または染色体中への組込みが可能で、本
発明のポリヌクレオチドの転写に適した位置にプロモーターを含有しているものが例示さ
れる。本明細書では、例えば、ＢＡＣベクターを用いることができる。ＢＡＣベクターと
は、大腸菌のＦプラスミドをもとにして作製されたプラスミドで、約３００ｋｂ以上の巨
大なサイズのＤＮＡ断片をも大腸菌などの細菌内で安定に保持し増殖させることが可能な
ベクターである。ＢＡＣベクターは、少なくともＢＡＣベクターの複製に必須の領域を含
む。その複製に必須の領域としては、例えば、Ｆプラスミドの複製開始点であるｏｒｉＳ
またはその改変体が挙げられる。
【０１９６】
本明細書において使用する場合、「選択マーカー」とは、核酸構築物、ベクターを含む
宿主細胞を選択する指標として機能する遺伝子をいう。選択マーカーとしては、蛍光マー
カー、発光マーカー、および薬剤選択マーカーが挙げられるが、これらに限定されない。
「蛍光マーカー」としては、緑色蛍光プロテイン（ＧＦＰ）、青色蛍光プロテイン（ＣＦ
Ｐ）、黄色蛍光プロテイン（ＹＦＰ）および赤色蛍光プロテイン（ｄｓＲｅｄ）のような
蛍光タンパク質をコードする遺伝子が挙げられるが、これらに限定されない。「発光マー
カー」としては、ルシフェラーゼのような発光タンパク質をコードする遺伝子が挙げられ
るが、これらに限定されない。「薬剤選択マーカー」としてはヒポキサンチングアニンホ
スホリボシルトランスフェラーゼ（ｈｐｒｔ）、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子、グルタミ
ンシンセターゼ遺伝子、アスパラギン酸トランスアミナーゼ、メタロチオネイン（ＭＴ）
、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）、AMPデアミナーゼ（ＡＭＰＤ１，２）、キサンチ
ン−グアニン−ホスホリボシルトランスフェラーゼ、ＵＭＰシンターゼ、Ｐ−グリコプロ
テイン、アスパラギンシンテターゼ、およびオルニチンデカルボキシラーゼ。これら薬剤
選択マーカーと使用される薬剤との組み合わせは、例えば、以下のとおりである：ジヒド
ロ葉酸還元酵素遺伝子（ＤＨＦＲ）とメソトレキセート（ＭＴＸ）との組み合わせ、グル
タミンシンセターゼ（ＧＳ）遺伝子とメチオニンスルホキシミン（Ｍｓｘ）との組み合わ
せ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）遺伝子とＮ−ホスホンアセチル−Ｌ−
アスパラギン酸（Ｎ−ｐｈｏｓｐｈｏｎａｃｅｔｙｌ−Ｌ−ａｓｐａｒｔａｔｅ）（ＰＡ
ＬＡ）との組み合わせ、ＭＴ遺伝子とカドミウム（Ｃｄ２＋）との組み合わせ、アデノシ
ンデアミナーゼ（ＡＤＡ）遺伝子とアデノシン、アラノシン、２’−デオキシコホルマイ
シンとの組み合わせ、AMPデアミナーゼ（ＡＭＰＤ１，２）遺伝子とアデニン、アザセリ
ン、コホルマイシンとの組み合わせ、キサンチン−グアニン−ホスホリボシルトランスフ
ェラーゼ遺伝子と、マイコフェノール酸との組み合わせ、ＵＭＰシンターゼ遺伝子と６−
アザウリジン、ピラゾフラン（ｐｙｒａｚｏｆｕｒａｎ）との組み合わせ、Ｐ−グリコプ
ロテイン（Ｐ−ｇｐ，ＭＤＲ）遺伝子と多剤薬剤との組み合わせ、アスパラギンシンテタ
ーゼ（ＡＳ）遺伝子とβ−アスパルチルヒドロキサム酸またはアルビジイン（ａｌｂｉｚ
ｚｉｉｎ）との組み合わせ、オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）遺伝子とα−ジフ
ルオロメチル−オルニチン（ＤＦＭＯ）などのタンパク質をコードする遺伝子が挙げられ
るが、これらに限定されない。
【０１９７】
本明細書において使用する場合、「発現ベクター」は、構造遺伝子およびその発現を調
節するプロモーターに加えて種々の調節エレメントが宿主の細胞中で作動し得る状態で連
結されている核酸配列をいう。調節エレメントは、好ましくは、ターミネーター、薬剤耐
性遺伝子（例えば、カナマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子など）のよう
な選択マーカーおよび、エンハンサーを含み得る。生物（例えば、動物）の発現ベクター
のタイプおよび使用される調節エレメントの種類が、宿主細胞に応じて変わり得ることは
、当業者に周知の事項である。
【０１９８】
本明細書において使用する場合、「組換えベクター」とは、目的のポリヌクレオチド配
列を目的の細胞へと移入させることができるベクターをいう。そのようなベクターとして
は、原核細胞、酵母、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、動物個体および植物個体等の宿主
細胞において自律複製が可能、または染色体中への組込みが可能で、本発明のポリヌクレ
オチドの転写に適した位置にプロモーターを含有しているものが例示される。
【０１９９】
本明細書において「ターミネーター」は、遺伝子のタンパク質をコードする領域の下流
に位置し、ＤＮＡがｍＲＮＡに転写される際の転写の終結、ポリＡ配列の付加に関与する
配列である。ターミネーターは、ｍＲＮＡの安定性に関与して遺伝子の発現量に影響を及
ぼすことが知られている。ターミネーターとしては、ＡＡＴＡＡＡを含む配列などが挙げ
られるが、これに限定されない。
【０２００】
本明細書において「外来遺伝子」とは、ある生物において、その生物には天然には存在
しない遺伝子をいう。そのような外来遺伝子は、その生物に天然に存在する遺伝子を改変
したものであってもよく、天然において他の生物に存在する遺伝子（例えば、ＡＤＡ遺伝
子）であってもよく、人工的に合成した遺伝子であってもよく、それらの複合体（例えば
、融合体）であってもよい。そのような外来遺伝子を含む生物は、天然では発現しない遺
伝子産物を発現し得る。例えば、欠損される劣性遺伝子（例えば、ＡＤＡ遺伝子、ＰＮＰ
遺伝子、γｃ鎖遺伝子、ＴＡＰ遺伝子、ＭＨＣ  ＩＩ遺伝子、Ｘ連鎖ＷＡＳＰ、ＣＤ４０
リガンド、ＰＩ３Ｋ類似遺伝子、ＤＮＡヘリカーゼ）を外来遺伝子として使用することが
できる。
【０２０１】
本発明においては、外来遺伝子はサイトカインであっても良い。本明細書において使用
される「サイトカイン」は、当該分野において用いられる最も広義の意味と同様に定義さ
れ、細胞から産生され同じまたは異なる細胞に作用する生理活性物質をいう。サイトカイ
ンは、一般にタンパク質またはポリペプチドであり、免疫応答の制御作用、内分泌系の調
節、神経系の調節、抗腫瘍作用、抗ウイルス作用、細胞増殖の調節作用、細胞分化の調節
作用などを有する。本明細書では、サイトカインはタンパク質形態または核酸形態あるい
は他の形態であり得るが、実際に作用する時点においては、サイトカインは通常はタンパ
ク質形態を意味する。本明細書において用いられる「増殖因子」とは、細胞の増殖を促進
または制御する物質をいう。増殖因子は、成長因子または発育因子ともいわれる。増殖因
子は、細胞培養または組織培養において、培地に添加されて血清高分子物質の作用を代替
し得る。多くの増殖因子は、細胞の増殖以外に、分化状態の制御因子としても機能するこ
とが判明している。サイトカインには、代表的には、インターロイキン類、ケモカイン類
、コロニー刺激因子のような造血因子、腫瘍壊死因子、インターフェロン類が含まれる。
増殖因子としては、代表的には、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧ
Ｆ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、肝実質細胞増殖因子（ＨＧＦ）、血管内皮増殖因
子（ＶＥＧＦ）のような増殖活性を有するものが挙げられる。
【０２０２】
本発明において、発現されるべき外来遺伝子は、上述の天然型の外来遺伝子と相同性の
あるものが使用され得る。そのような相同性を有する外来遺伝子としては、例えば、Ｂｌ
ａｓｔのデフォルトパラメータを用いて比較した場合に、比較対照の外来遺伝子に対して
、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％
、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％
の同一性または類似性を有する核酸配列を含む核酸分子または少なくとも約３０％、約３
５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７
５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％の同一性または類似性を有す
るアミノ酸配列を有するポリペプチド分子が挙げられるがそれらに限定されない。
【０２０３】
本明細書において遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなど遺伝子産物の「発現」
とは、その遺伝子などがインビボで一定の作用を受けて、別の形態になることをいう。好
ましくは、遺伝子、ポリヌクレオチドなどが、転写および翻訳されて、ポリペプチドの形
態になることをいうが、転写されてｍＲＮＡが作製されることもまた発現の一形態であり
得る。より好ましくは、そのようなポリペプチドの形態は、翻訳後プロセシングを受けた
ものであり得る。
【０２０４】
従って、本明細書において遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなどの「発現」の
「減少」とは、本発明の因子を作用させたときに、作用させないときよりも、発現の量が
有意に減少することをいう。好ましくは、発現の減少は、ポリペプチドの発現量の減少を
含む。本明細書において遺伝子、ポリヌクレオチド、ポリペプチドなどの「発現」の「増
加」とは、本発明の因子を作用させたときに、作用させないときよりも、発現の量が有意
に増加することをいう。好ましくは、発現の増加は、ポリペプチドの発現量の増加を含む
。本明細書において遺伝子の「発現」の「誘導」とは、ある細胞にある因子を作用させて
その遺伝子の発現量を増加させることをいう。したがって、発現の誘導は、まったくその
遺伝子の発現が見られなかった場合にその遺伝子が発現するようにすること、およびすで
にその遺伝子の発現が見られていた場合にその遺伝子の発現が増大することを包含する。
【０２０５】
本明細書において、遺伝子が「特異的に発現する」とは、その遺伝子が、植物の特定の
部位または時期において他の部位または時期とは異なる（好ましくは高い）レベルで発現
されることをいう。特異的に発現するとは、ある部位（特異的部位）にのみ発現してもよ
く、それ以外の部位においても発現していてもよい。好ましくは特異的に発現するとは、
ある部位においてのみ発現することをいう。
【０２０６】
本明細書において使用される場合、組換えベクターの導入方法としては、ＤＮＡを導入
する方法であればいずれも用いることができ、例えば、塩化カルシウム法、エレクトロポ
レーション法［Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１９４，１８２（１９９０）］、リ
ポフェクション法、スフェロプラスト法［Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，８４，１９２９（１９７８）］、酢酸リチウム法［Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１５
３，１６３（１９８３）］、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７５，１
９２９（１９７８）記載の方法などが例示される。
【０２０７】
本明細書において使用されるゲノムまたは遺伝子座などを除去する方法において用いら
れる、Ｃｒｅ酵素の一過的発現、染色体上でのＤＮＡマッピングなどは、細胞工学別冊実
験プロトコールシリーズ「ＦＩＳＨ実験プロトコール  ヒト・ゲノム解析から染色体・遺
伝子診断まで」松原謙一、吉川  寛  監修  秀潤社（東京）などに記載されるように、当
該分野において周知である。
【０２０８】
本明細書において遺伝子発現（たとえば、ｍＲＮＡ発現、ポリペプチド発現）の「検出
」または「定量」は、例えば、ｍＲＮＡの測定および免疫学的測定方法を含む適切な方法
を用いて達成され得る。分子生物学的測定方法としては、例えば、ノーザンブロット法、
ドットブロット法またはＰＣＲ法などが例示される。免疫学的測定方法としては、例えば
、方法としては、マイクロタイタープレートを用いるＥＬＩＳＡ法、ＲＩＡ法、蛍光抗体
法、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法などが例示される。また、定量方法としては
、ＥＬＩＳＡ法またはＲＩＡ法などが例示される。アレイ（例えば、ＤＮＡアレイ、プロ
テインアレイ）を用いた遺伝子解析方法によっても行われ得る。ＤＮＡアレイについては
、（秀潤社編、細胞工学別冊「ＤＮＡマイクロアレイと最新ＰＣＲ法」）に広く概説され
ている。プロテインアレイについては、Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．２００２  Ｄｅｃ；３２  
Ｓｕｐｐｌ：５２６−３２に詳述されている。遺伝子発現の分析法としては、上述に加え
て、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＡＣＥ法、ＳＳＣＰ法、免疫沈降法、ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄシステ
ム、インビトロ翻訳などが挙げられるがそれらに限定されない。そのようなさらなる分析
方法は、例えば、ゲノム解析実験法・中村祐輔ラボ・マニュアル、編集・中村祐輔  羊土
社（２００２）などに記載されており、本明細書においてそれらの記載はすべて参考とし
て援用される。
【０２０９】
本明細書において「発現量」とは、目的の細胞などにおいて、ポリペプチドまたはｍＲ
ＮＡが発現される量をいう。そのような発現量としては、本発明の抗体を用いてＥＬＩＳ
Ａ法、ＲＩＡ法、蛍光抗体法、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法などの免疫学的測
定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明ポリペプチドのタンパク質レベル
での発現量、またはノーザンブロット法、ドットブロット法、ＰＣＲ法などの分子生物学
的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明のポリペプチドのｍＲＮＡレ
ベルでの発現量が挙げられる。「発現量の変化」とは、上記免疫学的測定方法または分子
生物学的測定方法を含む任意の適切な方法により評価される本発明のポリペプチドのタン
パク質レベルまたはｍＲＮＡレベルでの発現量が増加あるいは減少することを意味する。
【０２１０】
本発明において使用する場合、用語「形質転換」、「形質導入」および「トランスフェ
クション」は、特に言及しない限り互換可能に使用され、宿主細胞への核酸の導入を意味
する。形質転換方法としては、宿主細胞にＤＮＡを導入する方法であればいずれも用いる
ことができ、例えば、エレクトロポレーション法、パーティクルガン（遺伝子銃）を用い
る方法、リン酸カルシウム法などの種々の周知の技術が挙げられる。
【０２１１】
「形質転換体」とは、形質転換によって作製された細胞などの生命体の全部または一部
をいう。形質転換体としては、原核細胞、酵母、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞等が例示
される。形質転換体は、その対象に依存して、形質転換細胞、形質転換組織、形質転換宿
主などともいわれ、本明細書においてそれらの形態をすべて包含するが、特定の文脈にお
いて特定の形態を指し得る。
【０２１２】
原核細胞としては、エシェリヒア属、セラチア属、バチルス属、ブレビバクテリウム属
、コリネバクテリウム属、ミクロバクテリウム属、シュードモナス属等に属する原核細胞
、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＸＬ１−Ｂｌｕｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ  ｃｏｌｉ  ＸＬ２−Ｂｌｕｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＤＨ１、Ｅｓ
ｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＭＣ１０００、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｋ
Ｙ３２７６、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｗ１４８５、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ  ＪＭ１０９、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＨＢ１０１、Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｎｏ．４９、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｗ３１１０
、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＮＹ４９、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  
ＢＬ２１（ＤＥ３）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓ
Ｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＨＭＳ１７４（ＤＥ３）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ  ｃｏｌｉ  ＨＭＳ１７４（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｆｉｃａｒｉ
ａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｆｏｎｔｉｃｏｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅ
ｎｓ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ
、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ  ａｍｍｍｏｎｉａｇｅｎｅｓ、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｍｍａｒｉｏｐ
ｈｉｌｕｍ  ＡＴＣＣ１４０６８、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓａｃｃｈａｒｏｌ
ｙｔｉｃｕｍＡＴＣＣ１４０６６、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃ
ｕｍ  ＡＴＣＣ１３０３２、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  
ＡＴＣＣ１４０６７、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＡＴＣ
Ｃ１３８６９、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｅｔｏａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｍ  
ＡＴＣＣ１３８７０、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｍｍｏｎｉａｐｈｉｌｕｍ  Ａ
ＴＣＣ１５３５４、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．Ｄ−０１１０などが例示される。
【０２１３】
動物細胞としては、臍帯血単核球、末梢血単核球、およびＳｕｐ-Ｔ１細胞などを挙げ
ることができる。
【０２１４】
本明細書において「動物」は、当該分野において最も広義で用いられ、脊椎動物および
無脊椎動物を含む。動物としては、哺乳綱、鳥綱、爬虫綱、両生綱、魚綱、昆虫綱、蠕虫
綱などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０２１５】
本明細書において、生物の「組織」とは、細胞の集団であって、その集団において一定
の同様の作用を有するものをいう。従って、組織は、臓器（器官）の一部であり得る。臓
器（器官）内では、同じ働きを有する細胞を有することが多いが、微妙に異なる働きを有
するものが混在することもあることから、本明細書において組織は、一定の特性を共有す
る限り、種々の細胞を混在して有していてもよい。
【０２１６】
本明細書において、「器官（臓器）」とは、１つ独立した形態をもち、１種以上の組織
が組み合わさって特定の機能を営む構造体を形成したものをいう。動物では、胃、肝臓、
腸、膵臓、肺、気管、鼻、心臓、動脈、静脈、リンパ節（リンパ管系）、胸腺、卵巣、眼
、耳、舌、皮膚等が挙げられるがそれらに限定されない。
【０２１７】
本明細書において、「トランスジェニック」とは、特定の遺伝子をある生物に組み込む
ことまたはそのような遺伝子が組み込まれた生物（例えば、植物または動物（マウスなど
）を含む）をいう。トランスジェニック生物のうち、ある遺伝子が欠失または抑制されて
いるものをノックアウト生物という。
【０２１８】
本発明の生物が、動物の場合、トランスジェニック生物は、マイクロインジェクション
法（微量注入法）、ウィルスベクター法、ＥＳ細胞法（胚性幹細胞法）、精子ベクター法
、染色体断片を導入する方法（トランスゾミック法）、エピゾーム法などを利用したトラ
ンスジェニック動物の作製技術を使用して作製することができる。そのようなトランスジ
ェニック動物の作成技術は当該分野において周知である。
【０２１９】
本明細書において使用される場合、「スクリーニング」とは、目的とするある特定の性
質をもつ物質、あるいは宿主細胞またはウイルスなどを、特定の操作および／または評価
方法で多数の候補から選抜することをいう。本発明では、所望の活性を有するスクリーニ
ングによって得られたウイルスもまた、本発明の範囲内に包含されることが理解される。
【０２２０】
本明細書において「チップ」または「マイクロチップ」は、互換可能に用いられ、多様
の機能をもち、システムの一部となる超小型集積回路をいう。チップとしては、例えば、
ＤＮＡチップ、プロテインチップ、細胞チップなどが挙げられるがそれらに限定されない
。
【０２２１】
本発明のヘルペスウイルスのプロモーターは、リンパ系または血液系の疾患、免疫系疾
患、感染症の処置、予防、および／または治療のための薬学的組成物の成分としても使用
することが可能である。
【０２２２】
本明細書において薬剤の「有効量」とは、その薬剤が目的とする薬効を発揮することが
できる量をいう。本明細書において、そのような有効量のうち、最小の濃度を最小有効量
ということがある。そのような最小有効量は、当該分野において周知であり、通常、薬剤
の最小有効量は当業者によって決定されているか、または当業者は適宜決定することがで
きる。そのような有効量の決定には、実際の投与のほか、動物モデルなどを用いることも
可能である。本発明はまた、このような有効量を決定する際に有用である。
【０２２３】
本明細書において「薬学的に受容可能なキャリア」は、医薬または動物薬のような農薬
を製造するときに使用される物質であり、有効成分に有害な影響を与えないものをいう。
そのような薬学的に受容可能なキャリアとしては、例えば、以下が挙げられるがそれらに
限定されない：抗酸化剤、保存剤、着色料、風味料、および希釈剤、乳化剤、懸濁化剤、
溶媒、フィラー、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、賦形剤および／または農学的もしくは
薬学的アジュバント。
【０２２４】
本発明の処置方法において使用される薬剤の種類および量は、本発明の方法によって得
られた情報（例えば、疾患に関する情報）を元に、使用目的、対象疾患（種類、重篤度な
ど）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、投与される被験体の部位の形態または種類など
を考慮して、当業者が容易に決定することができる。本発明のモニタリング方法を被験体
（または患者）に対して施す頻度もまた、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患
者の年齢、体重、性別、既往歴、および治療経過などを考慮して、当業者が容易に決定す
ることができる。疾患状態をモニタリングする頻度としては、例えば、毎日−数ヶ月に１
回（例えば、１週間に１回−１ヶ月に１回）のモニタリングが挙げられる。１週間−１ヶ
月に１回のモニタリングを、経過を見ながら施すことが好ましい。
【０２２５】
本明細書において「指示書」は、本発明の治療方法などを医師、患者など投与を行う人
に対して記載したものである。この指示書は、本発明の医薬などを例えば、放射線治療直
後または直前（例えば、２４時間以内など）に投与することを指示する文言が記載されて
いる。この指示書は、本発明が実施される国の監督官庁（例えば、日本であれば厚生労働
省、米国であれば食品医薬品局（ＦＤＡ）など）が規定した様式に従って作成され、その
監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、いわゆる添付文書（ｐａｃｋａ
ｇｅ  ｉｎｓｅｒｔ）であり、通常は紙媒体で提供されるが、それに限定されず、例えば
、電子媒体（例えば、インターネットで提供されるホームページ、電子メール）のような
形態でも提供され得る。
【０２２６】
必要に応じて、本発明の治療では、２種類以上の薬剤が使用され得る。２種類以上の薬
剤を使用する場合、類似の性質または由来の物質を使用してもよく、異なる性質または由
来の薬剤を使用してもよい。このような２種類以上の薬剤を投与する方法のための疾患レ
ベルに関する情報も、本発明の方法によって入手することができる。
【０２２７】
本発明で使用される培養方法は、例えば、動物培養細胞マニュアル、瀬野ら編著、共立
出版、１９９３年などに記載され支持されており、本明細書においてこのすべての記載を
援用する。
【０２２８】
（ポリペプチドの製造方法）
本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡを組み込んだ組換え体ベクターを保有する微
生物、動物細胞などに由来する形質転換体を、通常の培養方法に従って培養し、本発明の
ポリペプチドを生成蓄積させ、本発明の培養物より本発明のポリペプチドを採取すること
により、本発明のポリペプチドを製造することができる。
【０２２９】
本発明の形質転換体を培地に培養する方法は、宿主の培養に用いられる通常の方法に従
って行うことができる。大腸菌等の原核生物あるいは酵母等の真核生物を宿主として得ら
れた形質転換体を培養する培地としては、本発明の生物が資化し得る炭素源、窒素源、無
機塩類等を含有し、形質転換体の培養を効率的に行える培地であれば天然培地、合成培地
のいずれを用いてもよい。
【０２３０】
炭素源としては、それぞれの微生物が資化し得るものであればよく、グルコース、フラ
クトース、スクロース、これらを含有する糖蜜、デンプンあるいはデンプン加水分解物等
の炭水化物、酢酸、プロピオン酸等の有機酸、エタノール、プロパノール等のアルコール
類を用いることができる。
【０２３１】
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウ
ム、リン酸アンモニウム等の各種無機酸または有機酸のアンモニウム塩、その他含窒素物
質、ならびに、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンスチープリカー、カゼイン加水
分解物、大豆粕および大豆粕加水分解物、各種発酵菌体およびその消化物等を用いること
ができる。
【０２３２】
無機塩としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫
酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウム
等を用いることができる。培養は、振盪培養または深部通気攪拌培養等の好気的条件下で
行う。
【０２３３】
培養温度は１５〜４０℃がよく、培養時間は、通常５時間〜７日間である。培養中ｐＨ
は、３．０〜９．０に保持する。ｐＨの調整は、無機あるいは有機の酸、アルカリ溶液、
尿素、炭酸カルシウム、アンモニア等を用いて行う。また培養中必要に応じて、アンピシ
リンまたはテトラサイクリン等の抗生物質を培地に添加してもよい。
【０２３４】
プロモーターとして誘導性のプロモーターを用いた発現ベクターで形質転換した微生物
を培養するときには、必要に応じてインデューサーを培地に添加してもよい。例えば、ｌ
ａｃプロモーターを用いた発現ベクターで形質転換した微生物を培養するときにはイソプ
ロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド等を、ｔｒｐプロモーターを用いた発現ベクタ
ーで形質転換した微生物を培養するときにはインドールアクリル酸等を培地に添加しても
よい。遺伝子を導入した植物の細胞または器官は、ジャーファーメンターを用いて大量培
養することができる。培養する培地としては、一般に使用されているムラシゲ・アンド・
スクーグ（ＭＳ）培地、ホワイト（Ｗｈｉｔｅ）培地、またはこれら培地にオーキシン、
サイトカイニン等、植物ホルモンを添加した培地等を用いることができる。
【０２３５】
例えば、動物細胞を用いる場合、本発明の細胞を培養する培地は、一般に使用されてい
るＲＰＭＩ１６４０培地［Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  
Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，１９９，５１９（１９６７）］、Ｅａｇｌｅ
のＭＥＭ培地［Ｓｃｉｅｎｃｅ，１２２，５０１（１９５２）］、ＤＭＥＭ培地［Ｖｉｒ
ｏｌｏｇｙ，８，３９６（１９５９）］、１９９培地［Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  
ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，
７３，１（１９５０）］またはこれら培地にウシ胎児血清等を添加した培地等が用いられ
る。
【０２３６】
培養は、通常ｐＨ６〜８、２５〜４０℃、５％ＣＯ２存在下等の条件下で１〜７日間行
う。また培養中必要に応じて、カナマイシン、ペニシリン、ストレプトマイシン等の抗生
物質を培地に添加してもよい。本発明のポリペプチドをコードする核酸配列で形質転換さ
れた形質転換体の培養物から、本発明のポリペプチドを単離または精製するためには、当
該分野で周知慣用の通常の酵素の単離または精製法を用いることができる。例えば、本発
明のポリペプチドが本発明のポリペプチド製造用形質転換体の細胞外に本発明のポリペプ
チドが分泌される場合には、その培養物を遠心分離等の手法により処理し、可溶性画分を
取得する。その可溶性画分から、溶媒抽出法、硫安等による塩析法脱塩法、有機溶媒によ
る沈澱法、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ＤＩＡＩＯＮ  Ｈ
ＰＡ−７５（三菱化学）等樹脂を用いた陰イオン交換クロマトグラフィー法、Ｓ−Ｓｅｐ
ｈａｒｏｓｅ  ＦＦ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）等の樹脂を用いた陽イオン交換クロマトグラ
フィー法、ブチルセファロース、フェニルセファロース等の樹脂を用いた疎水性クロマト
グラフィー法、分子篩を用いたゲルろ過法、アフィニティークロマトグラフィー法、クロ
マトフォーカシング法、等電点電気泳動等の電気泳動法等の手法を用い、精製標品を得る
ことができる。
本発明のポリペプチドが本発明のポリペプチド製造用形質転換体の細胞内に溶解状態で蓄
積する場合には、培養物を遠心分離することにより、培養物中の細胞を集め、その細胞を
洗浄した後に、超音波破砕機、フレンチプレス、マントンガウリンホモジナイザー、ダイ
ノミル等により細胞を破砕し、無細胞抽出液を得る。その無細胞抽出液を遠心分離するこ
とにより得られた上清から、溶媒抽出法、硫安等による塩析法脱塩法、有機溶媒による沈
澱法、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ＤＩＡＩＯＮ  ＨＰＡ
−７５（三菱化学）等樹脂を用いた陰イオン交換クロマトグラフィー法、Ｓ−Ｓｅｐｈａ
ｒｏｓｅ  ＦＦ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）等の樹脂を用いた陽イオン交換クロマトグラフィ
ー法、ブチルセファロース、フェニルセファロース等の樹脂を用いた疎水性クロマトグラ
フィー法、分子篩を用いたゲルろ過法、アフィニティークロマトグラフィー法、クロマト
フォーカシング法、等電点電気泳動等の電気泳動法等の手法を用いることによって、精製
標品を得ることができる。
【０２３７】
また、本発明のポリペプチドが細胞内に不溶体を形成して発現した場合は、同様に細胞
を回収後破砕し、遠心分離を行うことにより得られた沈澱画分より、通常の方法により本
発明のポリペプチドを回収後、そのポリペプチドの不溶体をポリペプチド変性剤で可溶化
する。この可溶化液を、ポリペプチド変性剤を含まないあるいはポリペプチド変性剤の濃
度がポリペプチドが変性しない程度に希薄な溶液に希釈、あるいは透析し、本発明のポリ
ペプチドを正常な立体構造に構成させた後、上記と同様の単離精製法により精製標品を得
ることができる。
【０２３８】
また、通常のタンパク質の精製方法［Ｊ．Ｅｖａｎ．Ｓａｄｌｅｒら：Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，８３，４５８］に準じて精製できる。また、本発明のポ
リペプチドを他のタンパク質との融合タンパク質として生産し、融合したタンパク質に親
和性をもつ物質を用いたアフィニティークロマトグラフィーを利用して精製することもで
きる［山川彰夫，実験医学（Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ），１３，４
６９−４７４（１９９５）］。例えば、Ｌｏｗｅらの方法［Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８６，８２２７−８２３１（１９８９）、ＧｅｎｅｓＤｅｖｅｌ
ｏｐ．，４，１２８８（１９９０）］に記載の方法に準じて、本発明のポリペプチドをプ
ロテインＡとの融合タンパク質として生産し、イムノグロブリンＧを用いるアフィニティ
ークロマトグラフィーにより精製することができる。
【０２３９】
また、本発明のポリペプチドをＦＬＡＧペプチドとの融合タンパク質として生産し、抗
ＦＬＡＧ抗体を用いるアフィニティークロマトグラフィーにより精製することができる［
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８６，８２２７（１９８９）、Ｇｅ
ｎｅｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐ．，４，１２８８（１９９０）］。
【０２４０】
さらに、本発明のポリペプチド自身に対する抗体を用いたアフィニティークロマトグラ
フィーで精製することもできる。本発明のポリペプチドは、公知の方法［Ｊ．Ｂｉｏｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ  ＮＭＲ，６，１２９−１３４、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，１１６２−１
１６４、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１０，１６６−１６８（１９９１）］に準じて、ｉｎ
ｖｉｔｒｏ転写・翻訳系を用いてを生産することができる。
【０２４１】
上記で取得されたポリペプチドのアミノ酸情報を基に、Ｆｍｏｃ法（フルオレニルメチ
ルオキシカルボニル法）、ｔＢｏｃ法（ｔ−ブチルオキシカルボニル法）等の化学合成法
によっても本発明のポリペプチドを製造することができる。また、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃ
ｈｅｍＴｅｃｈ、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏ
ｔｅｃｈ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ、Ｓｙｎｔｈ
ｅｃｅｌｌ−Ｖｅｇａ、ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ、島津製作所等のペプチド合成機を利用し
化学合成することもできる。
【０２４２】
精製した本発明のポリペプチドの構造解析は、タンパク質化学で通常用いられる方法、
例えば遺伝子クローニングのためのタンパク質構造解析（平野久著、東京化学同人発行、
１９９３年）に記載の方法により実施可能である。
【０２４３】
（変異型ポリペプチドの作製方法）
本発明ポリペプチドのアミノ酸の欠失、置換もしくは付加は、出願前周知技術である部
位特異的変異誘発法により実施することができる。かかる１もしくは数個のアミノ酸が欠
失、置換もしくは付加は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒ
ｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏ
ｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １〜３
８，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７−１９９７）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃ
ｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１０，６４８７（１９８２）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，７９，６４０９（１９８２）、Ｇｅｎｅ，３４，３１５（１９８
５）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１３，４４３１（１９８５）、
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８２，４８８（１９８５）、Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８１，５６６２（１９８４）、Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ，２２４，１４３１（１９８４）、ＰＣＴ  ＷＯ８５／００８１７（１９８５）、Ｎａ
ｔｕｒｅ，３１６，６０１（１９８５）等に記載の方法に準じて調製することができる。
【０２４４】
（遺伝子治療）
特定の実施形態において、抗体またはその機能的誘導体をコードする配列を含む核酸は
、本発明のポリペプチドの異常な発現および／または活性に関連した疾患または障害を処
置、阻害または予防するために、遺伝子治療の目的で投与される。遺伝子治療とは、発現
されたか、または発現可能な核酸の、被験体への投与により行われる治療をいう。本発明
のこの実施形態において、核酸は、それらのコードされたタンパク質を産生し、そのタン
パク質は治療効果を媒介する。
【０２４５】
当該分野で利用可能な遺伝子治療のための任意の方法が、本発明に従って使用され得る
。例示的な方法は、以下のとおりである。
【０２４６】
遺伝子治療の方法の一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら，Ｃｌｉｎｉｃａ
ｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  １２：４８８−５０５（１９９３）；ＷｕおよびＷｕ，Ｂｉｏｔ
ｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５（１９９１）；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．
Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６（１９９３）；Ｍｕｌｌｉ
ｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２（１９９３）；ならびにＭｏｒｇａｎ
およびＡｎｄｅｒｓｏｎ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１
９９３）；Ｍａｙ，ＴＩＢＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２１５（１９９３）を参照の
こと。遺伝子治療において使用される一般的に公知の組換えＤＮＡ技術は、Ａｕｓｕｂｅ
ｌら（編），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏ
ｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；およびＫｒｉｅｇ
ｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載さ
れる。
【０２４７】
（治療活性または予防活性の証明）
本発明の化合物または薬学的組成物は、好ましくは、ヒトでの使用の前にインビトロで
、そして次いでインビボで、所望の治療活性または予防活性について試験される。例えば
、化合物または薬学的組成物の、治療有用性または予防有用性を証明するためのインビト
ロアッセイとしては、細胞株または患者組織サンプルに対する化合物の効果が挙げられる
。細胞株および／または組織サンプルに対する化合物または組成物の効果は、当業者に公
知である技術（細胞溶解アッセイが挙げられるがこれらに限定されない）を利用して決定
され得る。本発明に従って、特定の化合物の投与が示されるか否かを決定するために用い
られ得るインビトロアッセイとしては、インビトロ細胞培養アッセイが挙げられ、このア
ッセイでは、患者組織サンプルが培養物において増殖し、そして化合物に曝されるか、そ
うでなければ化合物が投与され、そして、組織サンプルに対するそのような化合物の効果
が観察される。
【０２４８】
（治療／予防のための投与および組成物）
本発明は、被験体への有効量の本発明のプロモーターを含む成分または薬学的組成物の
投与による処置、阻害および予防の方法を提供する。好ましい局面において、プロモータ
ーを含む成分は実質的に精製されたものであり得る（例えば、その効果を制限するかまた
は望ましくない副作用を生じる物質が実質的に存在しない状態が挙げられる）。被験体は
好ましくは、ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどの動物が挙げられるがそれら
に限定されない動物であり、そして好ましくは哺乳動物であり、そして最も好ましくはヒ
トである。
【０２４９】
本発明の核酸分子またはポリペプチドが医薬として使用される場合、そのような組成物
は、薬学的に受容可能なキャリアなどをさらに含み得る。本発明の医薬に含まれる薬学的
に受容可能なキャリアとしては、当該分野において公知の任意の物質が挙げられる。
【０２５０】
そのような適切な処方材料または薬学的に受容可能なキャリアとしては、抗酸化剤、保
存剤、着色料、風味料、および希釈剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、フィラー、増量剤、緩
衝剤、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤および／または薬学的アジュバント挙げられるがそ
れらに限定されない。代表的には、本発明の医薬は、単離された多能性幹細胞、またはそ
の改変体もしくは誘導体を、１つ以上の生理的に受容可能なキャリア、賦形剤または希釈
剤とともに含む組成物の形態で投与される。例えば、適切なビヒクルは、注射用水、生理
的溶液、または人工脳脊髄液であり得、これらには、非経口送達のための組成物に一般的
な他の物質を補充することが可能である。
【０２５１】
本明細書で使用される受容可能なキャリア、賦形剤または安定化剤は、レシピエントに
対して非毒性であり、そして好ましくは、使用される投薬量および濃度において不活性で
あり、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、または他の有機酸；アスコルビン酸、α−トコフ
ェロール；低分子量ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまた
は免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例
えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；モノサッカリ
ド、ジサッカリドおよび他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンを
含む）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたは
ソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；ならびに／あるいは非イオン
性表面活性化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ、プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）またはポリエ
チレングリコール（ＰＥＧ））などが挙げられるがそれらに限定されない。
【０２５２】
例示の適切なキャリアとしては、中性緩衝化生理食塩水、または血清アルブミンと混合
された生理食塩水が挙げられる。好ましくは、その生成物は、適切な賦形剤（例えば、ス
クロース）を用いて凍結乾燥剤として処方される。他の標準的なキャリア、希釈剤および
賦形剤は所望に応じて含まれ得る。他の例示的な組成物は、ｐＨ７．０−８．５のＴｒｉ
ｓ緩衝剤またはｐＨ４．０−５．５の酢酸緩衝剤を含み、これらは、さらに、ソルビトー
ルまたはその適切な代替物を含み得る。
【０２５３】
本発明の医薬は、経口的または非経口的に投与され得る。あるいは、本発明の医薬は、
静脈内または皮下で投与され得る。全身投与されるとき、本発明において使用される医薬
は、発熱物質を含まない、薬学的に受容可能な水溶液の形態であり得る。そのような薬学
的に受容可能な組成物の調製は、ｐＨ、等張性、安定性などを考慮することにより、当業
者は、容易に行うことができる。本明細書において、投与方法は、経口投与、非経口投与
（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、粘膜投与、直腸内投与、膣内
投与、患部への局所投与、皮膚投与など）であり得る。そのような投与のための処方物は
、任意の製剤形態で提供され得る。そのような製剤形態としては、例えば、液剤、注射剤
、徐放剤が挙げられる。
【０２５４】
本発明の医薬は、必要に応じて生理学的に受容可能なキャリア、賦型剤または安定化剤
（日本薬局方第１４版、その追補またはその最新版、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒ
ｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎ
ｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０などを
参照）と、所望の程度の純度を有する糖鎖組成物とを混合することによって、凍結乾燥さ
れたケーキまたは水溶液の形態で調製され保存され得る。
【０２５５】
本発明の処置方法において使用される糖鎖組成物の量は、使用目的、対象疾患（種類、
重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して
、当業者が容易に決定することができる。本発明の処置方法を被験体（または患者）に対
して施す頻度もまた、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性
別、既往歴、および治療経過などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。頻
度としては、例えば、毎日〜数ヶ月に１回（例えば、１週間に１回〜１ヶ月に１回）の投
与が挙げられる。１週間〜１ヶ月に１回の投与を、経過を見ながら施すことが好ましい。
【０２５６】
（免疫治療）
本明細書において「ワクチン」とは、身体中に投与されて、活性な免疫を生成する、通
常感染性因子または感染因子のある部分またはそのような因子または部分を生成すること
ができる因子（例えば、遺伝子配列など）を含む組成物（例えば、懸濁液または溶液）を
いう。ワクチンを構成する抗原性部分は、微生物（例えば、ウイルスまたは細菌など）ま
たは微生物から精製された天然の産生物、合成生成物または遺伝子操作したタンパク質、
ペプチド、多糖または同様な産生物、あるいはそのようなタンパク質をコードする核酸配
列を含む核酸分子であり得る。ワクチンは、中和抗体を生起することによって、その効果
を発現する。
【０２５７】
本明細書において「遺伝子ワクチン」とは、ワクチンのうち、投与される被験体におい
て発現され、その発現物がワクチンの作用を有するような因子（代表的には、核酸分子）
を含む組成物（例えば、懸濁液または溶液など）をいう。代表的な遺伝子ワクチンは、抗
原性を有する遺伝子産物をコードする核酸配列を含む核酸分子（例えば、ベクター、プラ
スミド、Ｎａｋｅｄ  ＤＮＡなど）であり得る。
【０２５８】
本明細書においてワクチンの免疫学的な効果は、当該分野において公知の任意の方法を
用いて確認することができる。そのような方法としては、例えば、ＣＴＬ前駆細胞頻度分
析、ＥＬＩＳＰＯＴ法、テトラマー法、リアルタイムＰＣＲ法などが挙げられるがそれら
に限定されない。例示的な説明として、ＣＴＬ前駆細胞頻度分析では、末梢血リンパ球ま
たは抗原ペプチドおよびＩＬ−２存在下で培養したリンパ球を限界希釈し、ＩＬ−２とフ
ィーダー細胞との共存下で培養し、増殖したウェルをワクチンまたはその候補で刺激し、
ＩＦＮ−γ産生の有無をＥＬＩＳＡなどで測定する。ここで陽性ウェルをポアソン分析に
従ってＣＴＬ前駆細胞の頻度を算出し、ワクチンの効力を評価することができる。ここで
、陽性の細胞数が抗原特異的ＣＴＬ数であり、その数が多いほどワクチンとして効力が高
いといえる。
【０２５９】
本発明は、癌ワクチンとしても使用され得る。そのような場合、癌抗原を外来遺伝子と
して組み込むことができる。
【０２６０】
本明細書において「癌抗原」とは、正常細胞が癌化するに伴って新たに発現するように
なる抗原分子をいう。そのような癌抗原としては、例えば、以下のようなものが挙げられ
るがそれらに限定されない：
（１）癌ウイルス由来抗原（例えば、アデノウイルス、ポリオーマウイルス、SV40など
のDNA型腫瘍ウイルスに由来するＴ抗原など）。ヒト、マウスのRNA型腫瘍ウイルスでは、
ウイルスのエンベロープタンパク質が細胞表面に発現される；
（２）癌特異移植抗原（ｔｕｍｏｒ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉ
ｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎ，ＴＳＴＡ）；この抗原は、同系の癌細胞に対して特異的免疫応答
が成立する結果、その癌細胞が拒絶される場合、その標的抗原となるものが該当する。遺
伝子変異により、癌細胞内に変異タンパク質が作られると、他の細胞内正常タンパク質と
同様に、ペプチド断片として細胞内で、主要組織適合抗原遺伝子複合体（ＭＨＣ）の分子
と会合し癌細胞表面に発現されるようになる。；
（３）癌関連抗原（ｔｕｍｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ，ＴＡＡ）。
癌細胞に必ずしも特異的でないが，癌化に伴って特徴的な発現を示す抗原。例えば、肝癌
におけるα−フェトプロテイン、腸癌などにおける胎児性癌抗原（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂ
ｒｙｏｎｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ，ＣＥＡ）などが該当する。これらは、元来は正常の胎児
だけに存在するタンパク質であり、成人の組織には認められない。しかし、これらのタン
パク質は、癌化に伴って再発現を示すので癌胎児抗原（ｏｎｃｏｆｅｔａｌ  ａｎｔｉｇ
ｅｎ）と呼ばれる。
【０２６１】
本明細書において使用される場合、癌抗原としては、どのような形態のものであっても
用いることができるが、特に、癌関連抗原と呼ばれる形態のものが好ましく用いられる。
ＭＨＣとの会合によって、癌細胞の表面に発現されるようになるからである。
【０２６２】
本明細書において「アジュバント」とは、投与された免疫原と混合するとき、免疫応答
を増加するか、あるいはそうでなければ変更する物質である。アジュバントは、例えば、
鉱物、細菌、植物、合成または宿主の産生物に場合に応じて分類される。
【０２６３】
本明細書において「病原体」とは、宿主に対して疾患または障害を発生し得る生物また
は因子をいう。
【０２６４】
本明細書において「予防」（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓまたはｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）と
は、ある疾患または障害について、そのような状態が引き起こされる前に、そのような状
態が起こらないように処置することをいう。
【０２６５】
本明細書において「治療」とは、ある疾患または障害について、そのような状態になっ
た場合に、そのような疾患または障害の悪化を防止、好ましくは、現状維持、より好まし
くは、軽減、さらに好ましくは消長させることをいう。
【０２６６】
このような治療活性または予防活性は、本発明のワクチンについて判定されるとき、好
ましくは、ヒトでの使用の前にインビトロで、そして次いでインビボで試験される。例え
ば、本発明の遺伝子ワクチンの、治療有用性または予防有用性を証明するためのインビト
ロアッセイとしては、細胞株または患者組織試料に対するワクチンの特異的結合の効果が
挙げられる。そのような試験は、当業者に公知である技術（例えば、ＥＬＩＳＡなどの免
疫学的アッセイ）を利用して決定され得る。インビボ試験としては、例えば、中和抗体を
惹起する能力があるかどうかを試験する方法が挙げられるがそれらに限定されない。
【０２６７】
本明細書において「被験体」とは、本発明の処置が適用される生物をいい、「患者」と
もいわれる。患者または被験体は好ましくは、ヒトであり得る。
【０２６８】
本発明は、被験体への有効量の本発明の遺伝子ワクチンの投与による処置、阻害および
予防の方法を提供する。好ましい局面において、本発明の遺伝子ワクチンは実質的に精製
されたものであり得る（例えば、その効果を制限するかまたは望ましくない副作用を生じ
る物質が実質的に存在しない状態が挙げられる）。
【０２６９】
本明細書中、「投与する」とは、本発明のワクチンなどまたはそれを含む医薬組成物を
、単独で、または他の治療剤と組み合わせて処置が意図される宿主に与えることを意味す
る。組み合わせは、例えば、混合物として同時に、別々であるが同時にもしくは並行して
；または逐次的にかのいずれかで投与され得る。これは、組み合わされた薬剤が、治療混
合物としてともに投与される提示を含み、そして組み合わせた薬剤が、別々であるが同時
に（例えば、同じ個体へ別々の粘膜を通じての場合）投与される手順もまた含む。「組み
合わせ」投与は、第１に与えられ、続いて第２に与えられる化合物または薬剤のうちの１
つを別々に投与することをさらに含む。
【０２７０】
本発明におけるワクチンの投与は、どのような手法を用いて行ってもよいが、好ましく
は、針無し注射を用いることが有利である。患者に過度の負担を与えることなく投与を行
えるからである。
【０２７１】
ここで本発明における針無注射器とは、注射針を用いずに、ガス圧または弾性部材の弾
力によりピストンを移動させて薬液を皮膚に噴射し、薬剤成分を皮下、より好ましくは皮
下の細胞内に投与する医療機器を意味する。
【０２７２】
具体的には例えば、シマジェットＴＭ  （島津製作所製）、メディ・ジェクター  ビジ
ョン（Ｍｅｄｉ−Ｊｅｃｔｏｒ  Ｖｉｓｉｏｎ）ＴＭ  （Ｅｌｉｔｅｍｅｄｉｃａｌ社製
）、ペンジェット（ＰｅｎＪｅｔ）ＴＭ  （ＰｅｎＪｅｔ社製）などが市販されている。
なお遺伝子銃（パーティクルガン）とは、ＤＮＡを被覆した金やタングステン等の高密度
粒子をヘリウム等のガス圧を利用して加速し、ｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝子導入が可能な医療／
実験機器である。遺伝子銃の利点は、少量のＤＮＡでも効率良く細胞導入できることと、
異なる操作者でも安定した結果が得られることである。
【０２７３】
具体的には、例えば米国Ｂｉｏ−Ｒａｄ社製のＨｅｌｉｏｓ  Ｇｅｎｅ  Ｇｕｎなどが
市販されており、利用することができる。
【０２７４】
本明細書において「指示書」は、本発明の医薬などを投与する方法または診断する方法
などを医師、患者など投与を行う人、診断する人（患者本人であり得る）に対して記載し
たものである。この指示書は、本発明の診断薬、予防薬、医薬などを投与する手順を指示
する文言が記載されている。この指示書は、本発明が実施される国の監督官庁（例えば、
日本であれば厚生労働省、米国であれば食品医薬品局（ＦＤＡ）など）が規定した様式に
従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、いわゆる
添付文書（ｐａｃｋａｇｅ  ｉｎｓｅｒｔ）であり、通常は紙媒体で提供されるが、それ
に限定されず、例えば、瓶に貼り付けられたフィルム、電子媒体（例えば、インターネッ
トで提供されるホームページ（ウェブサイト）、電子メール）のような形態でも提供され
得る。
【０２７５】
本発明の方法による予防処置の終了の判断は、市販のアッセイもしくは機器使用によっ
て惹起される抗体を確認することによって行うことができる。
【０２７６】
本発明はまた、本発明の医薬を含む容器を備える薬学的パッケージまたはキットを提供
する。医薬品または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関が定めた形
式の通知が、このような容器に任意に付属し得、この通知は、ヒトへの投与に対する製造
、使用または販売に関する政府機関による承認を表す。
【０２７７】
（本明細書において用いられる一般的技術）
本明細書において使用される技術は、そうではないと具体的に指示しない限り、当該分
野の技術範囲内にある、糖鎖科学、マイクロフルイディクス、微細加工、有機化学、生化
学、遺伝子工学、分子生物学、微生物学、遺伝学および関連する分野における周知慣用技
術を使用する。そのような技術は、例えば、以下に列挙した文献および本明細書において
他の場所おいて引用した文献においても十分に説明されている。
【０２７８】
微細加工については、例えば、Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｓ．Ａ．（１９９６）．Ｔｈｅ  Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉ
ｃ  Ｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ；Ｚａ
ｕｔ，Ｐ．Ｖ．（１９９６）．Ｍｉｃｒｏｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  Ｆａｂｒｉｃａｔｉｏ
ｎ：ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｓｅｍｉｃｏｎｄｕｃｔｏｒ  Ｐｒｏ
ｃｅｓｓｉｎｇ，Ｓｅｍｉｃｏｎｄｕｃｔｏｒ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ；Ｍａｄｏｕ，Ｍ．Ｊ
．（１９９７）．Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ
，ＣＲＣ１  ５  Ｐｒｅｓｓ；Ｒａｉ−Ｃｈｏｕｄｈｕｒｙ，Ｐ．（１９９７）．Ｈａｎ
ｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｌｉｔｈｏｇｒａｐｈｙ，Ｍｉｃｒｏｍａｃｈｉｎｉｎｇ
，＆  Ｍｉｃｒｏｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ：Ｍｉｃｒｏｌｉｔｈｏｇｒａｐｈｙなどに記
載されており、これらは本明細書において関連する部分が参考として援用される。
【０２７９】
本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法、糖鎖
科学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、Ｍａｎｉａ
ｔｉｓ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（１９８９）．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒおよびその
３ｒｄ  Ｅｄ．（２００１）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．  ｅｄｓ，Ｃｕ
ｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈ
ｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．，ＮＹ，１０１５８（２０００）；Ｉｎｎｉｓ
，Ｍ．Ａ．（１９９０）．ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｉｎｎ
ｉｓ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）．ＰＣＲ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｓｎｉｎｓｋｙ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）．ＰＣＲ  Ａ
ｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎ
ｏｍｉｃｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（１９８５）．Ｏｌｉ
ｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏ
ａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（１９９０）．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅ
ｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ
Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｆ．（１９９１）．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃ  ，ＩＲＬ
Ｐｒｅｓｓ；Ａｄａｍｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）．Ｔｈｅ  Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，Ｃｈａｐｍａｎ  ＆  Ｈａ
ｌｌ；Ｓｈａｂａｒｏｖａ，Ｚ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）．Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇ
ａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ
；Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ，Ｇ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ
ｓ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒ
ｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．（１９９６）．Ｂｉｏｃｏｎｊｕ
ｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｍｅｔｈｏｄ  ｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２３０、２４２、２４７、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１
９９４；別冊実験医学「遺伝子導入＆発現解析実験法」羊土社、１９９７などに記載され
ており、これらは本明細書において関連する部分（全部であり得る）が参考として援用さ
れる。
【０２８０】
（好ましい実施形態の説明）
以下に好ましい実施形態の説明を記載するが、この実施形態は本発明の例示であり、本
発明の範囲はそのような好ましい実施形態に限定されないことが理解されるべきである。
当業者はまた、以下のような好ましい実施例を参考にして、本発明の範囲内にある改変、
変更などを容易に行うことができることが理解されるべきである。
【０２８１】
１つの局面において、本発明は、ＨＨＶ６（ＨＨＶ６ＡおよびＨＨＶ６Ｂを含み、特に
、ＨＨＶ６Ｂ）、ＨＨＶ７のＭＩＥプロモーターおよび／またはＨＨＶ７のＵ９５プロモ
ーターを提供する。特に、このＨＨＶ６ＢのＭＩＥプロモーター、ＨＨＶ７のＭＩＥプロ
モーターおよびＨＨＶ７のＵ９５プロモーターは、予想外に、ＨＣＭＶのＩＥプロモータ
ーよりも、リンパ球への選択性が高まっていたことが見出された。特に、付着性細胞（２
９３細胞、Ｖｅｒｏ細胞など）では、ＨＣＭＶのＩＥプロモーターの１００分の１程度の
活性しかＭＩＥプロモーターは示さなかったのに対して、ＳｕｐＴ１、Ｕ９３７などのリ
ンパ球系細胞では、数倍高い発現効率が得られた。このような選択性、特異性の高さは、
ＤＮＡワクチン、遺伝子治療として特にリンパ球をターゲットとした医薬の開発に応用で
きることを明らかにした。また、インビボにおける発現系では、メチレースの作用によっ
てＣＭＶプロモーターなどの強力な活性を持つものでも活性が減弱されることから、血球
系・リンパ球系細胞でのインビボでの発現量の確保のために、本発明のプロモーターを用
いることができることが理解される。遺伝病、がんの遺伝子治療などにおいて、レトロウ
イルスベクターが一般的に使用されているが、プロモーターとしてのＬＴＲの活性はあま
り強くないことから、発現させようとする遺伝子の上流に本発明のプロモーターを導入す
ることによって、血球系細胞において強い発現を得ることができる。白血病などの血液細
胞の疾患をターゲットにした遺伝子治療において本発明は有用である。さらに、遺伝子発
現をノックアウトする方法としてＲＮＡｉを用いて、ヘアピン型ＲＮＡ発現ベクターのプ
ロモーターとして本発明のプロモーターを用いることによって、血球系の発現抑制効果を
より効率よいものにすることができる。生体の末梢血よりマクロファージまたは樹状細胞
などをフローサイトメトリーによって分離精製し、これらの細胞に本発明のプロモーター
制御下で癌特異的抗原および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）遺伝子などを発現させるように構築
したプラスミドをトランスフェクトし、がん抗原の発現を確認した後に元の生体に戻すこ
とによって、クラスＩ−ＨＬＡを介した癌抗原特異的ＣＴＬを効率的に活性化させて癌の
遺伝子治療を実現することができる。
【０２８２】
１つの実施形態において、本発明のプロモーターは、配列番号１に示す配列のうち、少
なくとも８の連続するヌクレオチド配列を含む。好ましくは、本発明のプロモーターは、
配列番号１に示す配列のうち、少なくともＲ３領域またはその機能的改変体を含む。さら
に好ましくは、本発明のプロモーターは、配列番号１に示す配列のうち、転写開始点を起
点として少なくとも−５７４〜−４２７の配列、さらにより好ましくは、転写開始点を起
点として少なくとも−１０５１〜−４２７の配列を含む。これらの領域にエンハンサー活
性がある領域があると予測されるからである。
【０２８３】
１つの実施形態において、本発明のプロモーターは、ＮＦ−κＢおよびＡＰ−１のモチ
ーフを含む。
【０２８４】
好ましい実施形態では、本発明のプロモーターは、配列番号１に示す配列を含み、より
好ましくは、配列番号１に示す配列から実質的に構成される。
【０２８５】
１つの実施形態では、本発明のプロモーターは、（ａ）配列番号１に記載の塩基配列も
しくはそれに対応する塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号１に記載の塩基配列もしくはそれに対応する塩基配列の対立遺伝子変異体
またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド；（ｃ）（ａ）〜（ｂ）のいずれか１
つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ、生物学的活
性を有するポリヌクレオチド；または（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリヌクレ
オチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、
かつ、生物学的活性を有するポリヌクレオチド、を含む。ここで、この生物学的活性は、
プロモーター活性および／またはエンハンサー活性であり得るがそれに限定されない。プ
ロモーター活性およびエンハンサー活性は、当該分野において周知の技法を用いて測定す
ることができ、そのような技法は、本明細書においても記載されており、実施例において
例示されている。
【０２８６】
１つの好ましい実施形態において、本発明のプロモーターは、上記（ａ）〜（ｄ）にお
いて置換、付加または欠失を含んでいてもよい。このような置換、付加および欠失の数は
、限定され得、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下
、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ま
しい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好
ましくは、ＨＨＶ６ＢのＭＩＥプロモーターと類似するかまたは実質的に同一の活性を有
する）限り、多い数であってもよい。
【０２８７】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリヌクレオチドま
たはその相補配列に対する同一性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少な
くとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ま
しくは少なくとも約９９％であり得る。
【０２８８】
好ましい実施形態において、本発明の核酸分子は、少なくとも８の連続するヌクレオチ
ドであり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド
長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌク
レオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり
得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌク
レオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１
、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．
３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、プロモー
ター）として使用することができる限り、その上限の長さは、制限されない。ストリンジ
ェンシーは、高くても、中程度であっても、低くてもよく、程度は、当業者が適宜状況に
応じて決定することができる。
【０２８９】
別の実施形態において、本発明のプロモーターは、配列番号２に示す配列のうち、少な
くとも８の連続するヌクレオチド配列を含む。好ましくは、本発明のプロモーターは、配
列番号２に示す配列のうち、少なくともＲ２領域またはその機能的改変体を含む。さらに
好ましくは、本発明のプロモーターは、配列番号２に示す配列のうち、転写開始点を起点
として少なくとも−３８８〜＋２２の配列、さらにより好ましくは、転写開始点を起点と
して少なくとも−４９３〜＋２２の配列を含む。これらの領域にエンハンサー活性がある
領域があると予測されるからである。
【０２９０】
１つの実施形態において、本発明のプロモーターは、ＮＦ−κＢ（配列番号２における
−４６４〜−４５５、および−３５９〜−３５０の配列領域。）のモチーフを含む。
【０２９１】
好ましい実施形態では、本発明のプロモーターは、配列番号２に示す配列を含み、より
好ましくは、配列番号２に示す配列から実質的に構成される。
【０２９２】
１つの実施形態では、本発明のプロモーターは、（ａ）配列番号２に記載の塩基配列も
しくはそれに対応する塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号２に記載の塩基配列もしくはそれに対応する塩基配列の対立遺伝子変異体
またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド；（ｃ）（ａ）〜（ｂ）のいずれか１
つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ、生物学的活
性を有するポリヌクレオチド；または（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリヌクレ
オチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からなり、
かつ、生物学的活性を有するポリヌクレオチド、を含む。ここで、この生物学的活性は、
プロモーター活性および／またはエンハンサー活性であり得るがそれに限定されない。プ
ロモーター活性およびエンハンサー活性は、当該分野において周知の技法を用いて測定す
ることができ、そのような技法は、本明細書においても記載されており、実施例において
例示されている。
【０２９３】
１つの好ましい実施形態において、本発明のプロモーターは、上記（ａ）〜（ｄ）にお
いて置換、付加または欠失を含んでいてもよい。このような置換、付加および欠失の数は
、限定され得、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下
、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ま
しい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好
ましくは、ＨＨＶ７のＭＩＥプロモーターと類似するかまたは実質的に同一の活性を有す
る）限り、多い数であってもよい。
【０２９４】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリヌクレオチドま
たはその相補配列に対する同一性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少な
くとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ま
しくは少なくとも約９９％であり得る。
【０２９５】
好ましい実施形態において、本発明の核酸分子は、少なくとも８の連続するヌクレオチ
ドであり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド
長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌク
レオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり
得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌク
レオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１
、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．
３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、プロモー
ター）として使用することができる限り、その上限の長さは、制限されない。ストリンジ
ェンシーは、高くても、中程度であっても、低くてもよく、程度は、当業者が適宜状況に
応じて決定することができる。
【０２９６】
別の実施形態において、本発明のプロモーターは、配列番号１２に示す配列のうち、少
なくとも８の連続するヌクレオチド配列を含む。好ましくは、本発明のプロモーターは、
配列番号１２に示す配列のうち、少なくともＲ２領域またはその機能的改変体を含む。さ
らに好ましくは、本発明のプロモーターは、配列番号１２に示す配列のうち、転写開始点
を起点として少なくとも−３７９〜＋１６の配列、さらにより好ましくは、転写開始点を
起点として少なくとも−４８４〜＋１６の配列を含む。これらの領域にエンハンサー活性
がある領域があると予測されるからである。
【０２９７】
１つの実施形態において、本発明のプロモーターは、ＮＦ−κＢ（配列番号１２におけ
る−４７８〜−４６９、および−３７３〜−３６４の配列領域。）のモチーフを含む。
【０２９８】
好ましい実施形態では、本発明のプロモーターは、配列番号１２に示す配列を含み、よ
り好ましくは、配列番号１２に示す配列から実質的に構成される。
【０２９９】
１つの実施形態では、本発明のプロモーターは、（ａ）配列番号１２に記載の塩基配列
もしくはそれに対応する塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド
；（ｂ）配列番号１２に記載の塩基配列もしくはそれに対応する塩基配列の対立遺伝子変
異体またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド；（ｃ）（ａ）〜（ｂ）のいずれ
か１つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ、生物学
的活性を有するポリヌクレオチド；または（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれか１つのポリヌ
クレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも７０％である塩基配列からな
り、かつ、生物学的活性を有するポリヌクレオチド、を含む。ここで、この生物学的活性
は、プロモーター活性および／またはエンハンサー活性であり得るがそれに限定されない
。プロモーター活性およびエンハンサー活性は、当該分野において周知の技法を用いて測
定することができ、そのような技法は、本明細書においても記載されており、実施例にお
いて例示されている。
【０３００】
１つの好ましい実施形態において、本発明のプロモーターは、上記（ａ）〜（ｄ）にお
いて置換、付加または欠失を含んでいてもよい。このような置換、付加および欠失の数は
、限定され得、例えば、５０以下、４０以下、３０以下、２０以下、１５以下、１０以下
、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下であることが好ま
しい。より少ない数の置換、付加および欠失が好ましいが、生物学的活性を保持する（好
ましくは、ＨＨＶ７のU95プロモーターと類似するかまたは実質的に同一の活性を有する
）限り、多い数であってもよい。
【０３０１】
好ましい実施形態において、上記（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリヌクレオチドま
たはその相補配列に対する同一性は、少なくとも約８０％であり得、より好ましくは少な
くとも約９０％であり得、さらに好ましくは少なくとも約９８％であり得、もっとも好ま
しくは少なくとも約９９％であり得る。
【０３０２】
好ましい実施形態において、本発明の核酸分子は、少なくとも８の連続するヌクレオチ
ドであり得る。本発明の核酸分子は、本発明の使用目的によってその適切なヌクレオチド
長が変動し得る。より好ましくは、本発明の核酸分子は、少なくとも１０の連続するヌク
レオチド長であり得、さらに好ましくは少なくとも１５の連続するヌクレオチド長であり
得、なお好ましくは少なくとも２０の連続するヌクレオチド長であり得る。これらのヌク
レオチド長の下限は、具体的に挙げた数字のほかに、それらの間の数（例えば、９、１１
、１２、１３、１４、１６など）あるいは、それ以上の数（例えば、２１、２２、．．．
３０、など）であってもよい。本発明の核酸分子は、目的とする用途（例えば、プロモー
ター）として使用することができる限り、その上限の長さは、制限されない。ストリンジ
ェンシーは、高くても、中程度であっても、低くてもよく、程度は、当業者が適宜状況に
応じて決定することができる。
【０３０３】
別の局面において、本発明は、本発明のプロモーター（ＨＨＶ−６のＭＩＥプロモータ
ー、ＨＨＶ−７のＭＩＥプロモーター、ＨＨＶ−７のＵ９５プロモーターなど）を含む核
酸構築物を提供する。ここで、このような核酸構築物は、リンパ球特異的な発現を誘導さ
せる性質を有しており、その有用性は高く、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）のＩ
Ｅプロモーターに比べて予想外に高い選択性を示す。
【０３０４】
従って、１つの実施形態において、本発明の核酸構築物は、本発明のプロモーターとは
異なる由来の外来遺伝子をコードする配列を、本発明のプロモーターの配列に対して作動
可能に連結されて、含む。
【０３０５】
このような外来遺伝子としては、例えば、ＲＮＡｉ分子、薬剤、欠損される劣性遺伝子
、選択マーカーをコードするものが挙げられるがそれらに限定されない。
【０３０６】
好ましくは、本発明において使用される選択マーカーは、本発明の核酸構築物が導入さ
れる宿主の培地での選択を可能にするものが好ましく、例えば、この選択マーカーは、前
記核酸構築物が導入される宿主での視覚での選択を可能にするものであってもよく、例示
的には、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ｈｐｒｔ）、また
は緑色蛍光プロテイン（ＧＦＰ）、青色蛍光プロテイン（ＣＦＰ）、黄色蛍光プロテイン
（ＹＦＰ）および赤色蛍光プロテイン（ｄｓＲｅｄ）などを挙げることができる。
【０３０７】
本発明の核酸構築物において含まれる選択マーカーは、好ましくは、本発明の核酸構築
物が導入される宿主に対して実質的に毒性を示さないものであることが有利である。治療
、予防目的で本発明を用いる場合、有害作用は皆無であることが好ましいからである。
【０３０８】
本発明の核酸構築物において含まれるものとしては、例えば、欠損される劣性遺伝子が
ある。ここで欠損される劣性遺伝子とは、欠損されると疾患状態を呈示する任意の劣性遺
伝子をいい、例えば、ＡＤＡ遺伝子（重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）に関連する）、Ｐ
ＮＰ遺伝子（重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）に関連する）、γｃ鎖遺伝子（重症複合免
疫不全症（ＳＣＩＤ）に関連する）、ＴＡＰ遺伝子（ＭＨＣ  Ｉ欠損症に関連する）、Ｍ
ＨＣ  ＩＩ遺伝子（ＭＨＣ  ＩＩ欠損症に関連する）、Ｘ連鎖ＷＡＳＰ（Ｗｉｓｋｏｔｔ
−Ａｌｄｒｉｃｈ症候群に関連する）、ＣＤ４０リガンド（Ｘ連鎖性高ＩｇＭ症候群に関
連する）、ＰＩ３Ｋ類似遺伝子（毛細血管拡張性失調症に関連する）、ＤＮＡヘリカーゼ
（Ｂｌｏｏｍ’ｓ症候群が関連する）などを挙げることができる。
【０３０９】
好ましい実施形態では、本発明の核酸構築物において含まれる薬剤は、サイトカイン、
ケモカイン、増殖因子、タンパク質ホルモン、ペプチドホルモン（ＩＦＮ−α，ＩＦＮ−
γ，ＩＬ−２，ＩＬ−１２，Ｇ−ＣＳＦ，ＧＭ−ＣＳＦ）等のタンパク質性の薬剤であり
得る。
【０３１０】
１つの実施形態では、本発明の核酸構築物では、本発明のプロモーターは、外来遺伝子
の血球系細胞、特にＴリンパ球での特異的発現を誘導するために用いられる。
【０３１１】
他の局面において、本発明は、本発明の核酸構築物を含む発現ベクターを提供する。こ
のような発現ベクターには、本発明の核酸構築物に存在していないかもしれない、発現に
必須のエレメント、例えば、ターミネーター、エンハンサー配列などをいずれも作動可能
に連結された状態で含み、宿主での発現を可能にする。
【０３１２】
別の好ましい実施形態では、選択マーカーは、不死化遺伝子（例えば、ｂｃｌ−２）で
あり得る。あるいは、選択マーカーは、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラー
ゼ（ＨＰＲＴ）、毒性産物をコードする遺伝子、自殺基質と組合せて条件により活性な毒
性遺伝子産物（例えば、アシクロビル（ａｃｙｃｌｏｖｉｒ）と組合せた単純ヘルペスウ
イルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ−ＴＫ））であり得る。
【０３１３】
別の局面において、本発明は、本発明の核酸構築物を含む、細胞を提供する。このよう
な細胞は、リンパ球である場合、外来遺伝子にコードされたタンパク質の発現が亢進され
ている。
【０３１４】
好ましくは、本発明の細胞は、本発明のプロモーター配列とは異種の細胞であることが
有利である。異種であってもプロモーター活性を有することは驚くべき効果のひとつとい
ってもよい。本発明の核酸分子を細胞に導入する方法は、当該分野において周知であり、
本明細書において上記節において詳述されている。あるいは、そのような細胞は、細胞を
含むサンプル中において、その核酸分子を含む細胞をスクリーニングすることによって、
同定することができる。本発明の核酸分子を含む細胞は、好ましくは、未分化状態であり
得る。本発明の核酸分子が発現している細胞は、通常未分化状態である。したがって、そ
のような核酸分子が制御可能に発現されるように導入された細胞は、その未分化状態を制
御することができる。あるいは、そのような細胞を用いて、本発明の核酸分子を大量に生
産することができる。そのような生産方法は、当該分野において周知であり、本明細書に
おいて記載された文献に記載されている。
【０３１５】
別の局面において、本発明は、本発明の核酸構築物を含む、組織を提供する。そのよう
な核酸配列は、制御配列に作動可能に連結されることが好ましい。そのような組織は、動
物組織であってもよく、他の生物（例えば、植物）の組織であってもよい。あるいは、そ
のような組織を用いて、本発明の核酸分子を大量に生産することができる。そのような生
産方法は、当該分野において周知であり、本明細書において記載された文献に記載されて
いる。
【０３１６】
他の局面において、本発明は、本発明の核酸構築物を含む、臓器を提供する。そのよう
な核酸配列は、制御配列に作動可能に連結されることが好ましい。そのような臓器または
器官は、動物臓器または器官であってもよく、他の生物（例えば、植物）の臓器または器
官であってもよい。あるいは、そのような臓器または器官を用いて、本発明の核酸分子を
大量に生産することができる。そのような生産方法は、当該分野において周知であり、本
明細書において記載された文献に記載されている。
【０３１７】
なお他の局面において、本発明は、本発明の核酸構築物を含む、生物を提供する。その
ような生物は、動物であってもよく、他の生物（例えば、植物）であってもよい。あるい
は、そのような生物を用いて、本発明の核酸分子を大量に生産することができる。そのよ
うな生産方法は、当該分野において周知であり、本明細書において記載された文献に記載
されている。
【０３１８】
別の局面において、本発明は、本発明のプロモーターおよび抗原をコードする配列を含
む、薬学的組成物を提供する。ここで、抗原としては、宿主に免疫反応を惹起することが
所望される任意のタンパク質を使用することができる。そのような抗原としては、例えば
、がん抗原などを挙げることができるがそれらに限定されない。従って、本発明の薬学的
組成物は、好ましくはＤＮＡワクチンであり得る。
【０３１９】
他の局面において、本発明は、リンパ球特異的な処置が所望される疾患、障害または状
態を処置するための薬学的組成物であって、本発明のプロモーターおよび該処置のための
核酸配列を含む、薬学的組成物を提供する。ここで、この薬学的組成物のターゲットとし
ては、リンパ球特異的な処置が所望される任意の疾患、障害、状態などが適切であり、例
えば、先天性免疫不全症候群を例示することができる。先天性免疫不全症候群としては、
例えば、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ＭＨＣ  Ｉ欠損症、ＭＨＣ  ＩＩ欠損症、Ｗ
ｉｓｋｏｔｔ−Ａｌｄｒｉｃｈ症候群、Ｘ連鎖性高ＩｇＭ症候群、毛細血管拡張性失調症
、Ｂｌｏｏｍ’ｓ症候群などを挙げることができるがそれらに限定されない。理論に束縛
されないが、先天性免疫不全症候群は、何らかの劣性遺伝子の欠損によっておこる（ここ
では、欠損される劣性遺伝子ともいう）。患者から採取した骨髄細胞にこの欠損遺伝子を
導入して再び患者に戻してやる体細胞遺伝子治療（ｓｏｍａｔｉｃ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒ
ａｐｙ）を実施することが可能である。この際、本発明のＨＨＶ６Ｂ  ＭＩＥプロモータ
ーを利用して、Ｔ細胞、マクロファージなどに分化した細胞での遺伝子発現効率の上昇が
見込める。このような遺伝子構築物の導入は、例えば、レトロウイルスなどによって行う
ことができる。
【０３２０】
好ましい実施形態では、本発明において使用されるべき処置のための核酸配列は、サイ
トカインをコードする核酸配列、ケモカインをコードする核酸配列、増殖因子をコードす
る核酸配列、タンパク質ホルモンをコードする核酸配列、ペプチドホルモンをコードする
核酸配列、リボザイム、ＲＮＡｉ（ＨＩＶ−１  ｇｐ４１：  ＡＡＴＡＡＧＡＣＡＧＧＧ
ＣＴＴＧＧＡＡＡＧＡＣＡＣＴＴＴＣＣＡＡＧＣＣＣＴＧＴＣＴＴＡＴＴＴＴＴ（配列番
号３３）／ＨＩＶ−１  ｔａｔ：  ＡＡＧＣＡＴＣＣＡＧＧＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＡＣＡ
ＡＧＧＣＴＧＡＣＴＴＣＣＴＧＧＡＴＧＣＴＴＴＴＴ（配列番号３４）／ＨＴＬＶ−１  
ｔａｘ：  ＧＡＡＣＡＴＴＧＧＴＧＡＧＧＡＡＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＣＡＣＣＡ
ＡＴＧＴＴＣＴＴＴＴＴ（配列番号３５））を含む。
【０３２１】
別の局面において、本発明は、リンパ球特異的にタンパク質を発現させる方法であって
、Ａ）本発明のプロモーターに該タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させ
た核酸構築物を作製する工程；Ｂ）該核酸構築物を、該プロモーターが該タンパク質をコ
ードする核酸配列の発現を誘導させる条件下に配置する工程、を包含する。
【０３２２】
本発明はまた、リンパ球特異的にタンパク質を発現させるキットであって、Ａ）本発明
のプロモーターに該タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた核酸構築物
；Ｂ）該核酸構築物を、該プロモーターが該タンパク質をコードする核酸配列の発現を誘
導させる条件下に配置する手段、を包含する、キットを提供する。
【０３２３】
本発明はさらに、リンパ球特異的にタンパク質を発現させるキットであって、Ａ）本発
明のプロモーター；およびＢ）該プロモーターに該タンパク質をコードする核酸配列を作
動可能に連結させた核酸構築物を作製するための手段；を包含する、キットを提供する。
【０３２４】
別の局面において、本発明は、リンパ球特異的にタンパク質を発現させることを必要と
する疾患、障害または状態を処置または予防するための方法であって、Ａ）本発明のプロ
モーターに該タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた核酸構築物を作製
する工程；Ｂ）該核酸構築物を、該プロモーターが該タンパク質をコードする核酸配列の
発現を誘導させる条件下に配置する工程、を包含する、方法を提供する。
【０３２５】
本発明はまた、リンパ球特異的にタンパク質を発現させることを必要とする疾患、障害
または状態を処置または予防するためのキットであって、Ａ）本発明のプロモーターに該
タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた核酸構築物；Ｂ）該核酸構築物
を、該プロモーターが該タンパク質をコードする核酸配列の発現を誘導させる条件下に配
置する手段、を包含する、キットを提供する。
【０３２６】
本発明はさらに、リンパ球特異的にタンパク質を発現させることを必要とする疾患、障
害または状態を処置または予防するためのキットであって、Ａ）本発明のプロモーター；
およびＢ）該プロモーターに該タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた
核酸構築物を作製するための手段；を包含する、キットを提供する。
【０３２７】
別の局面において、本発明は、タンパク質を生産する方法であって、Ａ）本発明のプロ
モーターに該タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた核酸構築物を作製
する工程；Ｂ）該核酸構築物を、該プロモーターが該タンパク質をコードする核酸配列の
発現を誘導させる条件下に配置する工程、を包含する、方法を提供する。
【０３２８】
本発明はまた、タンパク質を生産するためのキットであって、Ａ）本発明のプロモータ
ーに該タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結させた核酸構築物；
Ｂ）該核酸構築物を、該プロモーターが該タンパク質をコードする核酸配列の発現を誘
導させる条件下に配置する手段、を包含する、キットを提供する。
【０３２９】
本発明はさらに、タンパク質を生産するためのキットであって、Ａ）本発明のプロモー
ター；およびＢ）該プロモーターに該タンパク質をコードする核酸配列を作動可能に連結
させた核酸構築物を作製するための手段；を包含する、キットを提供する。
【０３３０】
別の局面において、本発明は、本発明のプロモーターの、リンパ球特異的な処置が所望
される疾患、障害または状態を処置するための薬学的組成物の製造における使用を提供す
る。
【０３３１】
本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体
が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。
【０３３２】
以上、本発明を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に
、実施例に基づいて本発明を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的
のみに提供され、本発明を限定する目的で提供したのではない。従って、本発明の範囲は
、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、特許請求の範囲に
よってのみ限定される。
【実施例】
【０３３３】
以下の実施例で用いた動物の取り扱いは、大阪大学において規定される基準を遵守した
。
【０３３４】
（実施例１：ＨＨＶ６Ｂプロモーターの探索とＤＮＡワクチンの開発）
ＨＨＶ−６の前初期タンパク質（ｉｍｍｅｄｉａｔｅ  ｅａｒｌｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ）
のプロモーター（大きさの異なる９Ｕ、２０Ｕ、ＭＩＥ、Ｕ９５、ＭＩＥ／３Ｋ、Ｕ９５
／３Ｋ）について、その活性をサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターと比較した
。方法は、ｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃ  Ｖｅｃｔｏｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）のルシブェラーゼ遺
伝子の上流に各プロモーター領域を挿入し、各種の細胞にトランスフェクションしてルシ
フェラーゼ活性を指標に活性を比較した。以下に材料および方法の詳細を記載する。
【０３３５】
（材料および方法）
（概略）
ＨＨＶ−６ＢのＭＩＥ遺伝子のプロモーター領域（約１．２Ｋｂｐ）をクローニングし
、さらにその下流に日本脳炎ウイルス北京−１株の外皮糖タンパク遺伝子ｃＤＮＡを連結
したプラスミドｐ９ｕ／ＪＥＶｅｎｖ）を構築した。緑色蛍光タンパク質発現プラスミド
ｐＥＧＦＰ−Ｎ１は市販のものを使用した（Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手可能）。
【０３３６】
ｐｃＤＮＡ３．１Ｚｅｏ＋ベクターのＨＣＭＶ−ＩＥプロモーター下流にＪＥＶｅｎｖ
を連結したプラスミド（ｐｃＤＮＡ３．１／ＪＥＶｅｎｖ）を対照に構築した。緑色蛍光
タンパク質発現プラスミドｐＥＧＦＰ−Ｎ１は市販のもの（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ
ｓから入手可能）を使用した。また、ルシフェラーゼ発現プラスミドは既に構築したもの
を用いた（ｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃ；Ｐｒｏｍｅｇａから入手可能）。
【０３３７】
これらプラスミドを２９３細胞（ヒト腎臓由来）、Ｖｅｒｏ細胞（サル腎臓由来）、Ｓ
ｕｐＴ１細胞（ヒトＴリンパ球由来）、Ｕ９３７細胞（ヒト単球由来）等（これらの細胞
は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）、理化学研究所の細胞バンク
、遺伝子バンクなどから入手可能。）にリポフェクション法で導入した。細胞内での外皮
糖タンパクの発現は、抗ＪＥＶポリクローナル抗体を用いた間接蛍光抗体法、細胞抽出液
のウエスタンブロット法で検討した。
【０３３８】
ＨＨＶ−６ＭＩＥプロモータ領域をルシフェラーゼベクターｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃ（プ
ロメガ）のホタルルシフェラーゼ遺伝子上流に挿入したプラスミドｐ９ｕを基にし、ＭＩ
Ｅプロモーター領域の上流からＭｕｎｇ  Ｂｅａｎ  Ｅｘｏｎｕｃｌｅａｓｅで塩基を削
ることによって短縮ミュータントを作製した。
【０３３９】
これらの短縮ミュータントとトランスフェクション効率補正用のウミシイタケルシフェ
ラーゼ発現プラスミド（ｐｈＲＬ−ＳＶ４０）をＶｅｒｏ細胞に、リポフェクション法で
トランスフェクションした。トランスフェクションから２４時間後に細胞を回収し、細胞
溶解液を加えた。次いでこのライセート中の、ホタルルシフェラーゼおよびウミシイタケ
ルシフェラーゼの発光量を測定した。なお、トランスフェクションの効率を補正するため
に、ホタルルシフェラーゼによる発光量をウミシイタケルシフェラーゼによる発光量で除
した。
【０３４０】
１）細胞
プロモーター活性測定には、以下の８種類の細胞株を用いた。
【０３４１】
（１）Ｖｅｒｏ細胞（サル腎臓由来）
（２）ＨＥＬ細胞（ヒト胎児繊維芽細胞）
（３）Ｌ９２９細胞（マウス繊維芽細胞由来）
（４）２９３細胞（ヒト腎臓由来）
（５）Ｕ３７３細胞（ヒトグリオーマ由来）
（６）ＴＨＰ−１細胞（ヒト単球由来）
（７）ＳｕｐＴｌ細胞（ヒトＴ細胞由来）
（８）Ｕ９３７細胞（ヒト単球由来）
（これらの細胞は、それぞれアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から
入手可能である。）。
【０３４２】
２）プロモーター活性測定用プラスミド
プロモーター活性の測定には、ホタル・ルシフェラーゼ遺伝子を持つｐＧＬ３−Ｂａｓ
ｉｃ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いた。このプラスミドは、真核細胞のプロモーター配列とエ
ンハンサー配列を持たないため、種々の塩基配列をルシフェラーゼ遺伝子の上流に挿入し
、発現したルシフェラーゼ量を測定することにより挿入配列のプロモーター活性を測定す
ることができる。
【０３４３】
３）ｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃに組み込んだプロモーター配列
測定には、以下に示すように、ＨＨＶ−６ＭＩＥプロモーター領域、ＨＨＶ−６の前初
期遺伝子であるＵ９５遺伝子のプロモーター領域および市販の発現ベクターに使用されて
いるＨＣＭＶ  ＭＩＥプロモーター領域を用いた。
【０３４４】
ＨＨＶ−６のプロモーター領域はＰＣＲで増幅したものをｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃに挿入
した。
【０３４５】
（１）２０ｕ［ＨＨＶ−６ＭＩＥプロモーター領域（１３９３８１←１４０６２４：１
２４３ｂｐ）を挿入したもの］（配列番号５）
（２）９ｕ［ＨＨＶ−６ＭＩＥプロモーター領域（１３９３８１←１４０４２７：１０
４６ｂｐ）を挿入したもの］（配列番号６）
（３）ＭＩＥ［ＨＨＶ−６ＭＩＥプロモーター領域（１３９４５７←１４０２１１：７
５４ｂｐ）を挿入したもの］（配列番号７）
（４）Ｕ９５［ＨＨＶ−６Ｕ９５遺伝子のプロモーター領域（１４１８２３→１４２５
７８：７５６ｂｐ）を挿入したもの］（配列番号８）
（５）ＣＭＶ［市販の発現ベクター（ｐｃＤＮＡ３．１）から切り出したＨＣＭＶ  Ｍ
ＩＥプロモーターを挿入したもの：７５０ｂｐ］（配列番号９）
（６）ＭＩＥ／３Ｋ［ＨＨＶ−６ＭＩＥプロモーター領域（１３９４４３←１４２５７
８：３１３６ｂｐ）を挿入したもの］（配列番号１０）
（７）Ｕ９５／３Ｋ［ＨＨＶ−６ＭＩＥプロモーター領域（１３９４４３→１４２５７
８：３１３６ｂｐ）（を挿入したもの］（配列番号１１）  なおコントロールとして塩基
配列を挿入していないインタクトのｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃを用いた。
【０３４６】
さらに、種々の欠失改変体を作製した。これらの模式図は、図５に示す。改変体として
は、図５に示されるように、以下の物を調製した。
【０３４７】
（１）９ｕ：            −１０５１〜＋１（配列番号５）
（２）９ｕ−ｄ２−７：  −８１４〜＋１（配列番号１７）
（３）９ｕ−ｄ１−４：  −５７４〜＋１（配列番号１８）
（４）９ｕ−ｄ１−５：  −４２７〜＋１（配列番号１９）
（５）９ｕ−ｄ１−７：  −３５０〜＋１（配列番号２０）
（６）９ｕ−ｄ３−７：  −２７６〜＋１（配列番号２１）
（７）９ｕ−ｄ５：  −２４０〜＋１（配列番号２２）
（８）９ｕ−ｄ６：  −２１２〜＋１（配列番号２３）
（９）９ｕ−ｄ７：  −１１６〜＋１（配列番号２４）
（１０）９ｕ−ｄ８：  −７７〜＋１（配列番号２５）。
【０３４８】
４）細胞へのプラスミドのトランスフェクション
トランスフェクションは、ＳｕｐｅｒＦｅｃｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いたリポフェクシ
ョン法により行なった。
【０３４９】
トランスフェクション効率の補正のために、β−ガラクトシダーゼの発現プラスミド（
ｐＣＨ１１０、Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を同時に細胞に導入し、β−ガラクトシダーゼ活性
を測定した。ｐＣＨ１１０は、ＳＶ４０初期プロモーターの制御下に、β−ガラクトシダ
ーゼを発現する。
【０３５０】
ｐＧＬ３ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ  ８μｌとｐＣＨ１１０  ０．２μｌを混合し、Ｓｕｐｅ
ｒｆｅｃｔ試薬８μｌを加えてトランスフェクションを行なった。
【０３５１】
５）ルシフェラーゼ活性の測定
ルシフェラーゼ活性の測定には、Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（
Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いた。
【０３５２】
ｐＧＬ３ｃｏｎｓｔｒｕｃｔおよびｐＣＨ１１０をｃｏ−ｔｒａｎｓｆｅｃｔし４８時
間後に細胞を回収した。ＰＢＳで２回洗浄した後、細胞溶解液１５０μｌに溶解した。細
胞溶解液の上清２０μｌにルシフェラーゼ基質液１００μｌを添加し、３０秒後にルミノ
メー夕ーで発光量を測定した。
【０３５３】
６）β−ガラクトシダーゼ活性の測定
β−ガラクトシダーゼ活性の測定は、β−ｇａｌ  ｒｅｐｏｒｔｅｒ  ｓｙｓｔｅｍ（
Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を使用した。ルシフェラーゼ活性測定と同様に調製した細胞溶解液の
上清２０μｌに発光基質液１００μｌを添加し、１時間後にルミノメーターで発光量を測
定した。
【０３５４】
７）ＴＰＡで細胞を活性化した条件下でのプロモーター活性の測定
Ｖｅｒｏ細胞とＬ９２９細胞にプラスミドをトランスフェクションし、２４時間後にＴ
ＰＡ（２５ｎｇ／ｍｌ）存在下または非存在下で、さらに２４時間培養した。その後に細
胞を回収して、ルシフェラーゼおよびβ−ガラクトシダーゼの活性を測定した。
【０３５５】
（結果）
１）ＨＨＶ−６ＭＩＥ領域のプロモーター活性
ＨＨＶ−６ＭＩＥ領域のプロモーター活性およびＨＣＭＶＭＩＥプロモーター活性は上
皮様の接着細胞とリンパ球系細胞で異なった挙動を示した。
【０３５６】
（１）接着細胞でのプロモーター活性の比較（図１）
ＨＨＶ−６ＭＩＥ領域のプロモーター配列は、接着細胞において、ＨＣＭＶと比べると
弱いが、ある程度のプロモーター活性を示した。ＨＨＶ−６の前初期遺伝子であるＵ９５
のプロモーターには、あまり活性が認められなかった。一方、ＨＣＭＶ、ＭＩＥプロモー
ターは、接着細胞においてはＨＨＶ−６ＭＩＥプロモーターの約１０倍から５０倍の活性
を示した。特にＨＣＭＶ増殖許容細胞である、ＨＥＬ細胞およびＵ３７３細胞では強い活
性を示した。
【０３５７】
ＨＨＶ−６ＭＩＥ領域のプロモーター活性は、プロモーター領域の長さが、０．７ｋｂ
から１．２ｋｂまではほぼ同じ活性を示したが、３ｋｂの配列では活性の減少が認められ
た。
【０３５８】
（２）リンパ球系細胞でのプロモーター活性の比較（図２）
ＨＨＶ−６の増殖許容細胞であるリンパ球系細胞では、ＨＨＶ−６ＭＩＥ領域はＨＣＭ
Ｖの約１０倍のプロモーター活性を示した。特に、単球のマクロファージ系の細胞株であ
るＴＨＰ−１およびＵ９３７で強い活性を示した。ＨＣＭＶ  ＭＩＥプロモーターはリン
パ球系細胞では、あまり強い活性を示さなかった。
【０３５９】
ＨＨＶ−６ＭＩＥ領域のプロモーター活性は、プロモーター領域が０．７ｋｂから１．
２ｋｂと長くなるに従って活性が増強したが、３ｋｂの長さではプロモーター活性が低下
した。
【０３６０】
２）ＴＰＡで細胞を刺激した場合のＨＨＶ−６ＭＩＥ領域のプロモーター活性（図３〜
４）
Ｖｅｒｏ細胞を１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール１３−アセテート（ＴＰＡ）刺
激して、ＨＨＶ−６ＭＩＥプロモーター活性を測定したところ、すべてのプロモーター活
性は．上昇し、ＨＣＭＶＭＩＥプロモーターとほぼ同程度の活性を示した（図３）。
【０３６１】
しかし、Ｌ９２９細胞では、ＴＰＡ刺激による細胞活性化でのプロモーター活性の上昇
は、見られなかった（図４）。これは、細胞種によるＴＰＡの反応性が異なる事によると
考えられた。
【０３６２】
Ｖｅｒｏ細胞では、ＴＰＡにより、種々の転写活性化因子が、多量に誘導されることに
よりＨＨＶ−６ＭＩＥプロモーター活性が上昇したと考えられた。則ち、ＨＨＶ−６ＭＩ
Ｅプロモーターの最大活性は、ＨＣＭＶ  ＭＩＥプロモーターとほぼ同程度であると思わ
れる。従って、本発明のプロモーターの特異性、選択性が実証された。
【０３６３】
このように、本発明において、Ｖｅｒｏ細胞、ＨＥＬ細胞、Ｌ９２９細胞、２９３細胞
、Ｕ３７３細胞の付着性の細胞では、ＣＭＶプロモーターの方がＨＨＶ−６のプロモータ
ーより１０倍以上強い活性を示した（図１）。しかし、ＴＨＰ−１細胞、ＳｕｐＴ１細胞
、Ｕ９３７細胞のヒト由来リンパ球系の細胞では数倍ＨＨＶ−６プロモーターの方が活性
が強く、しかも短いものの方が強い傾向が認められた（図２）。
【０３６４】
ＨＨＶ−６の有望なプロモーターが確認でき、これらの結果からこのプロモーターは、
ＤＮＡワクチン（ムンプス（Ｍｕｍｐｓ）ワクチン）に応用することができ、非常に有望
であることが理解される。
【０３６５】
ＨＣＭＶのＩＥプロモーターをコントロールにして、本発明者らのクローニングしたＨ
ＨＶ−６ＢのＭＩＥプロモーターの活性をルシフェラーゼ発現系で比較検討した。その結
果、２９３細胞、Ｖｅｒｏ細胞など付着性の細胞では、ＨＨＶ−６ＭＩＥプロモーターは
ＨＣＭＨＥプロモーターの１／１０程度の活性しか示さなかった。しかし、ＳｕｐＴＩや
Ｕ９３７等のリンパ系細胞においては数倍高い発現効率が得られた。そこで、このプロモ
ーター下流にＪＥＶｃＤＮＡを連結したｐ９ｕ／ＪＥＶｅｎｖによるＪＥＶの外皮糖タン
パクの発現を検索したところ、トランスフェクション４８時間後の付着性細胞、浮遊リン
パ系細胞の何れにおいてもＪＥＶタンパクの発現が検知されなかった。
【０３６６】
他方、ＨＣＭＶのＩＥプロモーターを用いたｐＣＤＮＡ３．１／ＪＥＶｅｎｖではＪＥ
Ｖタンパク質の発現が確認された。
【０３６７】
また、陽性対照としたＪＥＶ感染Ｖｅｒｏ細胞では、外皮糖タンパクが容易に検出され
た。原因解明のため、ＧＦＰタンパク発現プラスミドを用いてトランスフェクション効率
の確認を行った。その結果、ＳｕｐＴ１細胞での導入効率は０．１％以下と低い値であっ
たが、付着性の２９３細胞とＶｅｒｏ細胞ではそれぞれ４５％、２０％と高い導入効率で
あった。クローニングされたＨＨＶ−６ＭＩＥプロモーターが、リンパ系細胞でＨＣＭＶ
ＭＩＥプロモーターの数倍の発現活性を示した。しかし、発現遺伝子をＪＥＶの外皮糖
蛋白遺伝子に変換するとその活性が検出されなかった。
【０３６８】
クローニングされたＨＨＶ−６ＭＩＥプロモーターがリンパ系細胞でＨＣＭＶ−ＩＥプ
ロモーターの数倍の発現活性を示したことは興味深い。しかし、発現遺伝子をレポーター
遺伝子からＪＥＶの外皮糖タンパク遺伝子に変換したときに、その活性が検出されなかっ
た点は不可解な結果であった。そこで、発現ＪＥＶタンパク質がフィードバックして、逆
にプロモーター活性が抑制されたのか、発現抗原がこれらの細胞では不安定なのか、原因
の解明に努めた。
【０３６９】
本実施例をまとめると以下のようになる。
【０３７０】
１）ＨＨＶ−６ＭＩＥプロモーターは、リンパ球系細胞、特に、単球／マクロファージ
系細胞でＨＣＭＶ  ＭＩＥプロモーターの１０倍程度の活性を示した。
【０３７１】
２）上皮系の接着細胞では、ＨＨＶ−６ＭＩＥプロモーター活性は、ＨＣＭＶ  ＭＩＥ
プロモーター活性の約１／１０であった。
【０３７２】
３）ＨＨＶ−６ＭＩＥプロモーターは、種々の転写活性化因子が、多量に誘導された条
件下においては、ＨＣＭＶ、ＭＩＥプロモーターと同程度の活性を示すことが示唆された
。
【０３７３】
以上のように、本実施例では、レポータープラスミドとして、ＨＨＶ−６Ｂの主要前初
期（ＭＩＥ）遺伝子の上流約１２ｋｂｐ（６ＭＩＥＰ）とＵ９５遺伝子の上流約７００ｂ
ｐ（６Ｕ９５Ｐを、ｐＧＬ３Ｂａｓｉｃベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）のルシフェラーゼ遺
伝子上流に挿入したものを用いた。従来のプロモーターと比較して、これらのＩＥプロモ
ーターのＤＮＡワクチンヘの利用の可能性を検討するために、ヒトサイトメガロウイルス
（ＨＣＭＶ）のＩＥエンハンサープロモーター（ＣＭＶＰ）との活性の比較を、血球系細
胞を用いて行った。本実施例では、ヒトヘルペスウイルス６Ｂ（ＨＨＶ−６Ｂ）がコード
する前初期（ＩＥ）プロモーターは血球系細胞において非常に高い活性を持つことを実証
した。
【０３７４】
４）さらに、図７に示すように、各々のフラグメントでの活性を調べたところ、少なく
とも開始点から上流の−５７４〜−４２７、特に−１０５１〜−４２７が強力なプロモー
ター活性に好ましいエンハンサー活性があることが明らかになった。−４２７〜＋１の部
位はプロモーター活性に必要であるが、特異性を担保するためには、このエンハンサー活
性が必要であるようである。上記エンハンサー活性をになう部分には、ＮＦ−κＢおよび
ＡＰ−１のモチーフがあることが明らかになった。従って、これらのモチーフを有するこ
とが、リンパ球での特異性を強めるのに役割を果たしているようである。
【０３７５】
（実施例２：ＨＨＶ−７のＭＩＥおよびＵ９５プロモーター）
次に、ＨＨＶ−７のプロモーターに関する実験を行った。
【０３７６】
ＨＨＶ−７の２種類の前初期プロモーター（７ＭＩＥＰ、７Ｕ９５Ｐ）の活性を、サイ
トメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターとＨＨＶ−６のＩＥプロモーター（９Ｕ、Ｕ９
５）の活性と比較した。比較の方法はｐＧＬ３  Ｂａｓｉｃベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）
のルシフェラーゼ遺伝子の上流にＩＥプロモーター領域を挿入し、各種の細胞にトランス
フェクションしてルシフェラーゼ活性を測定することによって行った。また各プロモータ
ー上流に存在するＲ２領域の影響を検討するために、各々欠失変異体を作製し、プロモー
ター活性を測定した。
【０３７７】
（概要）
レポータープラスミドとして、ＨＨＶ−７のＭＩＥとｕ９５遺伝子のそれぞれの上流約
５００ｂｐ（７ＭＩＥＰと７Ｕ９５Ｐ）を、ｐＧＬ３Ｂａｓｉｃベクター（Ｐｒｏｍｅｇ
ａ）のルシフェラーゼ遺伝子上流に挿入したものを用いた。
【０３７８】
T細胞株であるJurkat、Molt-3、SupT-1と骨髄系細胞株であるSAS-413にリポフェクショ
ン法によって、また末梢血単核球(PBMC)にエレクトロポレーション法によって、レポータ
ープラスミドを導入し、ルシフェラーゼの活性を測定した。その結果、HCMVMIEプロモー
ターとの比較では、T細胞株では概ねHHV-7MIEプロモーターとHHV-7 U95プロモーターの
方が数倍高い活性を示したが、SAS-413細胞ではHCMVMIEプロモーター活性の方が10倍以上
高かった。3ロットのPBMCに導入した実験では、HHV-7MIEプロモーターおよびHHV-7 U95
プロモーターの方が活性が低かった。HHV-6のIEプロモーター(9UおよびU95)との比較では
、いずれの細胞種においてもHHV-7の両プロモーターの方が活性が低かった。またHHV-7MI
EプロモーターおよびHHV-7U95プロモーターのそれぞれの欠失変異体を用いた実験によっ
て、細胞種によって程度の差はあるもののR2領域が両プロモーターに対して主要なエンハ
ンサー活性を担っていることも明らかとなった。本実施例では、ヒトヘルペスウイルス７
(HHV-7)がコードする前初期(IE)プロモーターは血球系細胞において非常に高い活性を持
つことを実証した。
【０３７９】
以下に材料および方法の詳細を記載する。
【０３８０】
（材料および方法）
１）細胞
プロモーター活性測定には、以下の５種類の細胞を用いた。
【０３８１】
（１）  Ｊｕｒｋａｔ細胞（ヒトＴ細胞由来）
（２）  Ｍｏｌｔ−３細胞（ヒトＴ細胞由来）
（３）  ＳｕｐＴ１細胞（ヒトＴ細胞由来）
（４）  ＳＡＳ−４１３細胞（ヒト骨髄細胞由来）
（５）  末梢血単核球（ＰＢＭＣ）
２）  プロモーター活性測定用プラスミド
プロモーター活性の測定には、ホタルルシフェラーゼ遺伝子を持つｐＧＬ３  Ｂａｓｉ
ｃ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いた。
【０３８２】
３）  ｐＧＬ３  Ｂａｓｉｃに挿入したプロモーター配列
ＨＨＶ−７  ＭＩＥ遺伝子プロモーター領域（７ＭＩＥＰ）およびＨＨＶ−７  Ｕ９５
遺伝子プロモーター領域（７Ｕ９５Ｐ）の各々約５００ｂｐをＰＣＲによって増幅し、各
々について欠失変異体を作製した。これらの模式図は図８に示す。
【０３８３】
（１）  ７ＭＩＥＰ（−４９３）［ＨＨＶ−７  ＭＩＥ遺伝子の転写開始点より上流４
９３ｂｐから下流２２ｂｐまでを挿入したもの］（配列番号２６）
（２）  ７ＭＩＥＰ（−３８８）［ＨＨＶ−７  ＭＩＥ遺伝子の転写開始点より上流３
８８ｂｐから下流２２ｂｐまでを挿入したもの］（配列番号２７）
（３）  ７ＭＩＥＰ（−２３３）［ＨＨＶ−７  ＭＩＥ遺伝子の転写開始点より上流２
３３ｂｐから下流２２ｂｐまでを挿入したもの］（配列番号２８）
（４）  ７Ｕ９５Ｐ（−４８４）［ＨＨＶ−７  Ｕ９５遺伝子の転写開始点より上流４
８４ｂｐから下流１６ｂｐまでを挿入したもの］（配列番号２９）
（５）  ７Ｕ９５Ｐ（−３７９）［ＨＨＶ−７  Ｕ９５遺伝子の転写開始点より上流３
７９ｂｐから下流１６ｂｐまでを挿入したもの］（配列番号３０）
（６）  ７Ｕ９５Ｐ（−３０４）［ＨＨＶ−７  Ｕ９５遺伝子の転写開始点より上流３
０４ｂｐから下流１６ｂｐまでを挿入したもの］（配列番号３１）
なおコントロールとしてプロモーター配列を挿入していないｐＧＬ３  Ｂａｓｉｃを用
いた。
【０３８４】
４）  細胞へのプラスミドのトランスフェクション
トランスフェクションは、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｍｏｌｔ−３細胞、ＳｕｐＴ１細胞、お
よびＳＡＳ−４１３細胞に対してはＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｉｎｖｉｔ
ｒｏｇｅｎ）を用いたリポフェクション法により行い、ＰＢＭＣに対してはＮｕｃｌｅｏ
ｆｅｃｔｏｒ（ａｍａｘａ）を用いたエレクトロポレーション法により行った。
【０３８５】
トランスフェクション効率の補正のために、ウミシイタケルシフェラーゼの発現プラス
ミド（ｐＲＬ−ＴＫ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を同時に細胞に導入し、ウミシイタケルシフェラ
ーゼ活性を測定した。ｐＲＬ−ＴＫは単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ（ＴＫ）
プロモーターの制御下に、ウミシイタケルシフェラーゼを発現する。
【０３８６】
１．２μｇのｐＧＬ３レポーターと５０ｎｇのｐＲＬ−ＴＫを混合し、２μｌのＬｉｐ
ｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００を加えてトランスフェクションを行った。
【０３８７】
５）  ルシフェラーゼ活性の測定
ルシフェラーゼ活性の測定には、Ｄｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ
Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いた。
【０３８８】
トランスフェクション後１６時間後に細胞を回収し、細胞溶解液１００μｌに溶解した
。細胞溶解液の上清５μｌにホタルルシフェラーゼ基質液２５μｌを添加し、直後にルミ
ノメーターで発光量を測定した。次に、測定後のサンプルにウミシイタケルシフェラーゼ
基質液２５μｌを添加し、直後にルミノメーターで発光量を測定した。
【０３８９】
（結果）
１）ＨＨＶ−７  ＭＩＥプロモーター領域の活性
４種類の細胞株を用いた実験の結果、ＣＭＶプロモーターの活性と比較した場合、７Ｍ
ＩＥＰ（−４９３）は、Ｍｏｌｔ−３細胞およびＳｕｐＴ１細胞では約６〜７倍高く、Ｊ
ｕｒｋａｔ細胞では同等、ＳＡＳ−４１３細胞では約１／１１の活性であった。またＨＨ
Ｖ−６のＩＥプロモーター（９Ｕ、Ｕ９５）と比較した場合、いずれの細胞種においても
７ＭＩＥＰ（−４９３）の方が活性が低かった。（図９）
【０３９０】
３ロットのＰＢＭＣを用いた実験の結果、７ＭＩＥＰ（−４９３）の活性はＣＭＶプロ
モーターおよび９Ｕと同等か、やや低く、またＨＨＶ−６  Ｕ９５と同等か、やや高い活
性を示した。（図１０）
【０３９１】
２）ＨＨＶ−７  Ｕ９５プロモーター領域の活性
４種類の細胞株を用いた実験の結果、ＣＭＶプロモーターの活性と比較した場合、７Ｕ
９５Ｐ（−４８４）は、Ｊｕｒｋａｔ細胞で２．５倍、Ｍｏｌｔ−３細胞で４倍、Ｓｕｐ
Ｔ１細胞で２０倍高い活性を示したが、ＳＡＳ−４１３細胞では約１／８の活性であった
。またＨＨＶ−６のＩＥプロモーターと比較した場合、ＳｕｐＴ１細胞ではＵ９５よりも
若干高い活性を示したものの、９Ｕの活性の約１／２に留まり、またそれ以外の細胞でも
７Ｕ９５Ｐ（−４８４）の方が活性が低かった。（図９）
【０３９２】
３ロットのＰＢＭＣを用いた実験では、７Ｕ９５Ｐ（−４８４）は他のプロモーターの
約１／２〜１／４の活性に留まった。（図１０）
【０３９３】
３）Ｒ２領域のプロモーター活性への影響
７ＭＩＥＰおよび７Ｕ９５Ｐの各欠失変異体を４種類の細胞株に導入して実験を行った
結果、Ｒ２の欠失によってプロモーター活性が低下するかどうかは、細胞株に依存するこ
とが明らかとなった。具体的には、７ＭＩＥＰはＪｕｒｋａｔ細胞ではＲ２欠失による影
響を示さなかったが、それ以外の細胞株では活性が約１／５〜１／２まで減少した。また
７Ｕ９５ＰはＳＡＳ−４１３細胞ではＲ２欠失による影響を示さなかったが、それ以外の
細胞株では活性が約１／７〜１／２まで減少した。（図１１）
【０３９４】
（総括）
本実験例をまとめると以下のようになる。
【０３９５】
１）  ７ＭＩＥＰ（−４９３）、７Ｕ９５Ｐ（−４８４）ともに、Ｔ細胞株においては
概ねＣＭＶプロモーターよりも強い活性を示したが、骨髄系細胞株であるＳＡＳ−４１３
細胞では逆に活性が低かった。ＰＢＭＣでは、７ＭＩＥＰ（−４９３）はＣＭＶプロモー
ターとほぼ同等の活性を示し、７Ｕ９５Ｐ（−４８４）はＣＭＶプロモーターより活性が
低かった。
【０３９６】
２）  ＨＨＶ−６のＩＥプロモーターとの比較では、いずれの細胞種においても概ねＨ
ＨＶ−６の２種類のＩＥプロモーター（９Ｕ、Ｕ９５）の方が、７ＭＩＥＰ（−４９３）
および７Ｕ９５Ｐ（−４８４）よりも高い活性を示した。
【０３９７】
３）  Ｒ２領域は、多くの細胞で７ＭＩＥＰと７Ｕ９５Ｐに対して、エンハンサーとし
て機能していることが明らかとなった。Ｒ２領域に結合する転写因子は未同定であるが、
ＨＨＶ−６のＲ３領域がＮＦ−κＢを結合してＵ９５プロモーターのエンハンサーとして
機能していることを考慮すると、Ｒ２領域内に繰り返し存在するＮＦ−κＢ結合モチーフ
がＲ２領域のエンハンサー活性を担っている可能性が高い。（図８）
【０３９８】
（実施例３：特異的欠失システムの構築）
血球系細胞における遺伝子発現のノックアウトをＩＥプロモーターおよびＲＮＡｉ法を
使用して実施する。ＩＥプロモーターは血球系細胞で発現量が非常に多いため、解析に有
利である。
【０３９９】
１）細胞の調製（マクロファージの場合）
健常人末梢血を採取し、Ｆｉｃｏｌｌ・Ｈｙｐａｑｕｅを使用した密度勾配によりＰＢ
ＭＣを分離精製する。ＡＩＭ  Ｖ  ｓｅｒｕｍ  ｍｅｄｉｕｍ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ）に１００Ｕ／ｍｌのＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を加えて上記
ＰＢＭＣを培養する。培地は、３日ごとに交換し、培養６または７日後のマクロファージ
を実験に使用する。
【０４００】
２）ｓｉＲＮＡ発現レトロウイルスベクターの作製
・ヘアピン型ＲＮＡを発現させるために「センス鎖標的配列」、「ループ配列」、「アン
チセンス鎖標的配列」および「ターミネーター配列」を含む合成オリゴＤＮＡを作製する
。このようなセンス鎖標的配列、ループ配列、アンチセンス標的配列、ターミネーター配
列は、当該分野において周知の技術を用いて実現することができる。当業者は、実際に使
用する場合は、その状況に応じて適切な配列を採用することができることが理解され得る
。
【０４０１】
ＩＥ配列下流に上記オリゴＤＮＡを繋ぎ、レトロウイルスの複製に必要なｇａｇ、ｐｏ
ｌおよびｅｎｖを欠失させ、ＮｅｏＲ遺伝子を含んだプラスミドベクターに制限酵素配列
等を利用して上記ＤＮＡを組み込む。作製したプラスミドベクター１０μｌを１００μｌ
のコンピテントセルに加え形質転換し、ＬＢＡｍｐプレートにまき３７℃で１６時間培養
する。形質転換により得られたコロニーをＬＢＡｍｐ液体培地で３７℃で１６時間培養し
、培養液より常法にてプラスミドを抽出精製する。
【０４０２】
ｇａｇ、ｐｏ１およびｅｎｖを発現しているレトロウイルスパッケージング細胞を直径
１０ｃｍのシャーレに播き、トランスフェクション試薬を開いて、１０μｇの上記プラス
ミドをトランスフェクションする。２４〜４８時間後、細胞をＧ４１８含有培地（５００
μｇ／ｍｌ）に段階希釈後、継代する。
【０４０３】
３〜４日ごとにＧ４１８培地を交換し約２週間培養する。コロニーを回収し、６ウエル
プレートにコンフルエントに生育したところで、（Ｇ４１８を含まない培地に交換し、２
４時間後、上清を回収する。また、細胞はストックする。
【０４０４】
上清中に含まれるレトロウイルスベクターを段階希釈し、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞に感染さ
せ、生育したコロニーをカウントすることにより、感染価を算出する。
【０４０５】
３）レトロウイルスベクターを用いた遺伝子導入実験
１）で調製したマクロファージ等血球系細胞にレトロウイルスベクターを感染させる。
洗浄後ただちに、０．５〜２．５×１０４細胞／ｃｍ２となるようにプレートに播く。感
染後２４時間でＧ４１８含有培地と交換し、３〜４日ごとに培地を交換する。約２週間後
、遺伝子導入細胞を得る。この細胞を使用し、目的ノックアウト遺伝子の発現量を確認す
る。
【０４０６】
これらの実験を行うことによって、遺伝子導入後、実際に本発明のプロモーターでのリ
ンパ球特異的外来遺伝子発現がノックアウトされることが確認される。
【０４０７】
（実施例４：特異的発現）
実施例３におけるＲＮＡｉに代えて発現が所望される遺伝子（例えば、ＴＧＦβなどの
サイトカイン）をコードする核酸分子を導入する。
【０４０８】
その結果、実施例３と同様の実験を行うことによって、遺伝子導入後、実際に本発明の
プロモーターがリンパ球特異的外来遺伝子発現を誘導することが確認される。
【０４０９】
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は
、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明
細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に
記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきである
ことが理解される。
【産業上の利用可能性】
【０４１０】
本発明によって、Ｔリンパ球などの免疫担当細胞においてタンパク質の発現を選択的に
誘導するプロモーターが提供された。本発明のプロモーターは、先天性免疫不全症候群な
どの免疫疾患を効果的に予防または治療するための方法および医薬において有用である。
本発明はまた、効率よく遺伝子治療を行うための技術においても有用である。
【配列表フリーテキスト】
【０４１１】
（配列表の説明）
配列番号１は、ＨＨＶ６ＢのＭＩＥプロモーター配列である。
配列番号２は、ＨＨＶ７のＭＩＥプロモーター配列である。
配列番号３は、ＨＨＶ６ＡのＭＩＥプロモーター配列である。
配列番号４は、ＨＨＶ６ＢのＲ３領域配列である。
配列番号５は、実施例１で使用された２０ｕの配列である。
配列番号６は、実施例１で使用された９ｕの配列である。
配列番号７は、実施例１で使用されたＭＩＥの配列である。
配列番号８は、実施例１で使用されたＵ９５の配列である。
配列番号９は、実施例１で使用されたＣＭＶの配列である。
配列番号１０は、実施例１で使用されたＭＩＥ／３Ｋ領域の配列である。
配列番号１１は、実施例１で使用されたＵ９５／３Ｋ領域の配列である。
配列番号１２は、ＨＨＶ７のＵ９５プロモーター配列である。
配列番号１３は、ＨＨＶ−６ＢのＭＩＥの、転写開始点より−５７４〜−４２７の配列
である。
配列番号１４は、ＨＨＶ−６ＢのＭＩＥの、転写開始点より−１０５１〜−４２７の配
列である。
配列番号１５は、ＨＨＶ−７のＭＩＥの、転写開始点より＋２２〜−４９３の配列であ
る。
配列番号１６は、ＨＨＶ−７のＵ９５の、転写開始点より＋１６〜−４８４の配列であ
る。
配列番号１７は、実施例１で使用された９ｕ−ｄ２−７の配列である。
配列番号１８は、実施例１で使用された９ｕ−ｄ１−４の配列である。
配列番号１９は、実施例１で使用された９ｕ−ｄ１−５の配列である。
配列番号２０は、実施例１で使用された９ｕ−ｄ１−７の配列である。
配列番号２１は、実施例１で使用された９ｕ−ｄ３−７の配列である。
配列番号２２は、実施例１で使用された９ｕ−ｄ５の配列である。
配列番号２３は、実施例１で使用された９ｕ−ｄ６の配列である。
配列番号２４は、実施例１で使用された９ｕ−ｄ７の配列である。
配列番号２５は、実施例１で使用された９ｕ−ｄ８の配列である。
配列番号２６は、実施例２で使用された７ＭＩＥＰ（−４９３）の配列である。
配列番号２７は、実施例２で使用された７ＭＩＥＰ（−３８８）の配列である。
配列番号２８は、実施例２で使用された７ＭＩＥＰ（−２３３）の配列である。
配列番号２９は、実施例２で使用された７Ｕ９５Ｐ（−４８４）の配列である。
配列番号３０は、実施例２で使用された７Ｕ９５Ｐ（−３７９）配列である。
配列番号３１は、実施例２で使用された７Ｕ９５Ｐ（−３０４）の配列である。
配列番号３２は、実施例２で使用されたｐＧＬ３  Ｂａｓｉｃの配列である。
配列番号３３は、ＨＩＶ−１  ｇｐ４１のＲＮＡｉの例である。
配列番号３４は、ＨＩＶ−１  ｔａｔのＲＮＡｉの例である。
配列番号３５は、ＨＴＬＶ−１  ｔａｘのＲＮＡｉの例である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【配列表】
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