(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で示される化合物の塩
【化８】
0005536869.tif 000011
［式中、
Ｒは、メチル、フェニル、４−ヒドロキシ−フェニル、又は４−メトキシフェニルであり、
Ｚは、プロパン酸、又は２，４−ジクロロフェニル酢酸である］、
又はその互変異性体の２つの光学エナンチオマーを優先晶出によって分割するための方法であって、
以下の工程：
ａ）式（Ｉ）で示される化合物の塩
【化９】
0005536869.tif 000012
［式中、
Ｒは、メチル、フェニル、４−ヒドロキシ−フェニル、又は４−メトキシフェニルであり、
Ｚは、プロパン酸、又は２，４−ジクロロフェニル酢酸である］のラセミ混合物を、有機溶媒に溶解する工程と、
ｂ）この溶液に、式（Ｉ）で示される化合物の塩の単一エナンチオマーを接種する工程と、
ｃ）得られた結晶化エナンチオマーを単離する工程と、を含み、
該方法は、エタノール、イソプロパノール、メタノール及びそれらの混合物からなる群から選択される溶媒中で実施される、方法。
【請求項２】
Ｒが、メチル又は４−ヒドロキシフェニルである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
Ｒが、メチルである、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
Ｚが、プロパン酸である、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
−２０〜９０℃の間の温度で実施される、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
ａ）エタノール中の２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４−ジメチルアミノ−６−メチル−１，３，５−トリアジン（「Ａ１」）プロピオン酸塩ラセミ混合物の懸濁液を、清澄な溶液が得られるまで４０〜５０℃で加熱し、
ｂ）その溶液を冷まして、２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４-−ジメチルアミノ−６-−メチル−１，３，５−トリアジンプロピオン酸塩の単一エナンチオマーを接種し、
ｃ）５〜１０℃の間の温度で、結晶化した２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４−ジメチルアミノ−６−メチル−１，３，５−トリアジンプロピオン酸塩を単離する、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
以下の工程：
ｄ）工程ｃ）の後、工程ａ）と同じラセミ混合物を、工程ｃ）の後に回収された溶液に加える工程と、
ｅ）場合により、次いで、得られた溶液に、他方のエナンチオマーを接種する工程と、
ｆ）結晶化した他方を単離する工程と、をさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
工程ｄ）、ｅ）及びｆ）は、ラセミ混合物の第１及び第２エナンチオマーを連続的に分離するために繰り返される、請求項７記載の方法。
【請求項９】
０〜５０℃の間の温度で実施される、請求項５記載の方法。
【請求項１０】
２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４-−ジメチルアミノ−６-−メチル−１，３，５−トリアジンプロピオン酸塩の単一エナンチオマーが、Ｒ−エナンチオマーである、請求項６記載の方法。
【請求項１１】
工程ｄ）で加えられるラセミ混合物の重量による量が、単離された結晶の重量による量に等しい、請求項７記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
３，６−ジヒドロ−１，３，５−トリアジン誘導体は、インスリン抵抗性症候群に関連する病態の処置において薬理学的特性を示す。幾つかの特許文献が、３，６−ジヒドロ−１，３，５−トリアジン誘導体の調製を記載している。例えば、米国特許第３，２８７，３６６号には、以下の構造を有するジヒドロ−トリアジンの合成が記載されている。
【化１】
0005536869.tif 000002
【０００２】
その合成は、昇温で酸の存在下における、一置換ビスグアニジンとアルデヒド又はケトンとの反応を伴う。
【０００３】
日本特許第４８０６４０８８号は、以下の構造を有するジヒドロ−トリアジンの合成を記載している。
【化２】
0005536869.tif 000003
【０００４】
類似する合成も、酸性条件下での加熱を伴う。
【０００５】
日本特許第５４０１４９８６号は、以下の構造を有するジヒドロ−トリアジンの合成を記載している。
【化３】
0005536869.tif 000004
【０００６】
同様に、この方法は、酸性条件下での加熱を必要とする。
【０００７】
特許出願ＷＯ  ０１／５５１２２号は、以下の構造で示されるジヒドロ−トリアジンの合成を記載している。
【化４】
0005536869.tif 000005
【０００８】
その合成は、昇温で酸の存在下における、一置換ビスグアニジンと、アセタール、ヘミアセタール、ケタール、ヘミケタール、アルデヒド又はケトンとの反応に向けられている。
【０００９】
国際公開公報第０４／０８９９１７号は、キラル分割剤を使用することによってジヒドロ−１，３，５トリアジンのエナンチオマー混合物を分離するための方法を開示している（ジアステレオマー分割）。この方法は、７０％のｅｅ（エナンチオマー過剰率）（エナンチオマー純度８５％）を示す生成物を生み出す。
【００１０】
国際公開公報第９５／０８５２２号、又は米国特許第６，０２２，４０９号は、優先晶出法（preferential crystallization）による光学エナンチオマー分割の方法を開示している。
【００１１】
G. Coquerelは、論文「Preferential Crystallization」をTop Curr Chem (2007) 269: 1-51; (c) Springer-Verlag Berlin Heidelberg 2007; published online: 4 November 2006に公開した。
【００１２】
この論文は主として、固態でのキラル識別、すなわちコングロメレート（conglomerates）の状態、それらの検出方法、及び、結晶格子におけるキラル認識から検索されうる様々な利点に焦点を当てている。
【００１３】
優先晶出法は、安定なコングロメレートとして結晶化するラセミ混合物に適用できる。統計は、ほぼ５％のラセミ混合物が安定なコングロメレートを形成することを示している。この方法の利点は、以下のとおりである：
−母液を再利用することができることによる理論上の定量的収率；
−（大抵の場合高価である）分割剤が必要ない。
コングロメレートは、対称鏡像異性体過剰率（enantiomeric excesses）を示す鏡像結晶化相の混合物である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、式（Ｉ）のジヒドロ−１，３，５トリアジンの２つの光学エナンチオマーの分割のための新規の方法を見つけるという目的を有する。これは、エネルギーを節約し、発生する廃棄物の量を減らし、そして方法の安全性を改善するものであった。
【００１５】
予想外にも、式（Ｉ）で示される化合物が、安定なコングロメレート塩を形成することができ、そしてこれら塩の光学エナンチオマーが、優先晶出法によって分割されることができるということが見出された。この方法の利点は、
−母液を再利用することができることによる理論上の定量的収率、
−大抵の場合高価であるキラル分割剤が必要ないこと、である。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、式（Ｉ）で示される化合物の塩、もしくはこの塩の溶媒和物
【化５】
0005536869.tif 000006
［式中、
Ｒは、メチル、フェニル、４−ヒドロキシ−フェニル又は４−メトキシフェニルであり、
Ｚは、塩酸、臭化水素酸、硝酸、酢酸、プロパン酸、２，４−ジクロロフェニル酢酸、３，４−ジクロロフェニル酢酸、バルビツール酸、クロロ酢酸、アジピン酸、グリコール酸、コハク酸、又は（±）ジ−Ｏ，Ｏ’−ｐ−トリル酒石酸である］、
又はその互変異性体の２つの光学エナンチオマーを優先晶出によって分割するための方法に関する。
【００１７】
式（Ｉ）はまた、前記化合物の互変異性型を包含する。例えば、Ｒがメチルである式（Ｉ）で示される化合物の互変異性型は、以下：
【化６】
0005536869.tif 000007
を含む。
【００１８】
式（Ｉ）で示される化合物の塩は、Ｚ：式（Ｉ）で示される化合物が異なる比率で形成されうる。例えば、前記塩は、モノ−、ジ−、又はトリ−塩、すなわち１個の式（Ｉ）で示される分子につき、それぞれ１、２、又は３個のＺ分子でありうる。別の例としては、１個のＺ分子につき１、２、又は３個の式（Ｉ）で示される分子を有する塩である。
【００１９】
好ましくは、エナンチオマーの分離は、
ａ）式（Ｉ）で示される化合物の塩のラセミ混合物
【化７】
0005536869.tif 000008
［式中、
Ｒは、メチル、フェニル、４−ヒドロキシ−フェニル又は４−メトキシフェニルであり、
Ｚは、塩酸、臭化水素酸、硝酸、酢酸、プロパン酸、２，４−ジクロロフェニル酢酸、３，４−ジクロロフェニル酢酸、バルビツール酸、クロロ酢酸、アジピン酸、グリコール酸、コハク酸、又は（±）ジ−Ｏ，Ｏ’−ｐ−トリル酒石酸である］を有機溶媒に溶解し、
ｂ）この溶液に、式（Ｉ）で示される化合物の塩の単一エナンチオマーを接種し、
ｃ）得られた結晶化エナンチオマーを単離する、方法に向けられる。
【００２０】
工程（ａ）において使用されるラセミ混合物は、コングロメレートとして結晶化するラセミ混合物である。
【００２１】
２つの光学エナンチオマーの分割のための好ましい方法は、Ｒがメチル又は４−ヒドロキシフェニルであり；最も好ましくはＲがメチルである、式（Ｉ）で示される化合物に対応するものである。好ましくは、Ｚは、塩酸、プロパン酸、アジピン酸、クロロ酢酸、グリコール酸、臭化水素酸、又はコハク酸である。好ましくは、Ｚは、プロピオン酸とも呼ばれる、プロパン酸である。
【００２２】
好ましくは、前記方法は、トルエン、アセトン、エタノール、イソプロパノール、メタノール、水、又はこれら溶媒の混合物中で実施される。
【００２３】
好ましくは、前記方法は、エタノール、イソプロパノール、メタノール、及びそれらの混合物からなる群から選択される有機溶媒中で実施される。最も好ましくは、エタノールが、有機溶媒として使用される。特定の実施態様にしたがい、前記方法は、共溶媒、特にメタノールを用いて行われる。
【００２４】
温度及び動的スケジュールを含む、前記方法の物理的条件は、選択される塩及び溶媒に応じて当業者によって容易に決定される。
【００２５】
好ましくは、前記方法は、−２０〜９０℃の間、最も好ましくは０〜６５℃の間、非常に好ましくは０〜５０℃の間の温度で実施される。
【００２６】
非常に好ましい方法は、
ａ）エタノール中の２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４−ジメチルアミノ−６−メチル−１，３，５−トリアジン（「Ａ１」）プロピオン酸塩ラセミ混合物の懸濁液を、清澄な溶液が得られるまで４０〜５０℃で加熱し、
ｂ）その溶液を冷まして、２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４−ジメチルアミノ−６−メチル−１，３，５−トリアジンプロピオン酸塩の単一エナンチオマー（より詳細にＲ−エナンチオマー）を接種し、
ｃ）５〜１０℃の間の温度で、結晶化した２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４−ジメチルアミノ−６−メチル−１，３，５−トリアジンプロピオン酸塩（より詳細にはＲ−エナンチオマー）を単離する、ものである。
【００２７】
本発明にしたがう方法は、好ましくは繰り返し行われる。より具体的には、工程ｃ）の後、工程ａ）と同じラセミ混合物を、母液（結晶を収集した―工程ｃ）の後に回収された溶液）に加え、好ましくは加えられるラセミ混合物の重量による量は、収集された（もしくは単離された）結晶の重量による量と等しい。その結果として、前記母液は、過剰量の他方の（すなわち反対の）エナンチオマーを示す。特定の実施態様にしたがい、次に、得られた溶液に、他方のエナンチオマーを接種する。その後、他方の結晶化エナンチオマーを単離することができる。次に、作業（もしくは工程）のサイクルは、ラセミ混合物の第１及び第２エナンチオマーを連続的に分離するために、適宜に（１、２、３、４、５回又はそれ以上）繰り返すことができる。
【００２８】
特定の実施態様にしたがい、本方法は、工程ａ、ｂ、及びｃの後、以下の工程：
ｄ）工程ａ）と同じラセミ混合物（又はそれ以降、前の工程ｄ）と同じラセミ混合物）を、工程ｃ）の後に回収された溶液（又はそれ以降、前の工程ｆ）の回収された溶液）に加え、好ましくは加えられるラセミ混合物の重量による量は、先に単離された結晶の重量による量に等しく、
ｅ）場合により、次いで、得られた溶液に、他方のエナンチオマーを接種し、
ｆ）結晶した他方を単離する、を含む。
有利に、工程ｄ）、ｅ）、及びｆ）を、ラセミ混合物の第１及び第２エナンチオマーを連続的に分離するために繰り返す。
【００２９】
コングロメレートは、Ｘ線分析を使用することによって特徴付けることができ、鏡像体過剰率（ｅｅ：the enantiomeric excess）は、ＨＰＬＣによって測定することができる。コングロメレートをいったん確認したら、ラセミ酸塩を合成して、優先晶出の方法を実施する。単離された純粋なエナンチオマーを次に、（必要ならば）適切な塩の形態に変化させる。
【００３０】
一対のエナンチオマーは、主要な３つの様式で結晶化することができる：
・コングロメレート；
・ラセミ混合物；物質が、２つのエナンチオマーが単位格子中に規則正しい１：１の比で存在する、単一結晶相を形成する；
・完全固溶体；２つのエナンチオマーが、結晶格子中に不規則な様式で共存する。
【００３１】
コングロメレートは、エナンチオマー的に純粋な結晶（部分的な固溶体の欠如が推測される）の機械的混合物である。任意の純粋なエナンチオマーの空間群は、キラルである。それらは、同じＸＲＰＤ（Ｘ線粉末回折）パターンを示す。統計は、５〜１０％のエナンチオマー対がコングロメレートとして結晶化することを示している。
【００３２】
この場合、純粋なエナンチオマーは、結晶化によってラセミ混合物から容易に単離することができる。エナンチオマーを加熱することができない（変質の問題）場合、別の成分（好ましくは溶媒）の添加によって過剰なエナンチオマーを分離することができる。
【００３３】
優先晶出法は、ラセミ混合物のエナンチオマー対がコングロメレートとして結晶化するので、本発明のラセミ混合物に対して行うことができる。
【００３４】
本発明の選択された塩のラセミ混合物は、コングロメレートとして結晶化する。当業者であれば、本発明の選択された塩を生成する古典的手順が分かるであろう。
【００３５】
優先晶出法は、国際公開公報第９５／０８５２２号に開示されているが、より具体的には、結晶化が始まる毎に、過剰なエナンチオマー及び飽和溶液（接種後に得られる）を含有する２相領域で開始すること、及び、（所与の溶媒、濃度及び塩を含む物理化学パラメータに基づいて、当業者によって容易に定義されうる）動的スケジュールにしたがい冷却することを含む。冷却することによってエナンチオマーが結晶し、このようにして単離することができる。（有利に微細な粒度の）ラセミ混合物を好ましくは、結晶を収集した後に得られた母液に加え、次に母液を有利に加熱し、より具体的には、過剰のエナンチオマーが溶液と平衡にある固態でのみ存在するような、溶液の均質化の温度よりも低い温度に加熱する。さらに冷却すること、そして好ましくは他方のエナンチオマーを接種することにより、他方のエナンチオマーを生成し、次に繰り返して行うこともできる作業のサイクルを完了する。
【００３６】
それゆえに優先晶出法は、エナンチオマーの分離のための魅力的な方法である。開始状態は、１つの光学異性体で濃縮されたエナンチオマーの混合物から構成されている。ＡＳ３ＰＣ（自動接種化多温プログラム化優先晶出法（autoseeded polythermic programmed preferential crystallization））が適用される場合、過剰のエナンチオマーの一部は、出発点において（すなわち最高温度で）固体である。対照的に、Ｓ３ＰＣ方法、（接種化多温プログラム化優先晶出法）については、最初の富化は、完全に溶解している（開始状態は、均質溶液である）。次に、（最初の過剰量のものと同じキラリティーの）少量の純粋なエナンチオマーを加えてその系に接種する。過飽和を作り出し、冷却勾配の適用によって（動的スケジュールにしたがい）増大させた。最初の過剰のエナンチオマーの結晶化は、立体選択的二次核生成及び結晶成長による。この方法を正確に最適化した場合、反対のエナンチオマーの発芽は、当該方法の終了（濾過）前に起こらない。最大量の異性体が結晶した（母液が、結晶しているエナンチオマーの準安定溶解度近くの点に達した）とき、迅速な濾過を行う。理想的には、純粋な光学異性体、及び反対のエナンチオマーで富化されている液体が、得られる。次に、濾過により回収したものとして、等しい質量のラセミ混合物を、母液に加え、そして、温度を固体の完全溶解まで上昇させる。冷却すると同時に、過飽和溶液は、第２のエナンチオマーによって接種されて、この第２エナンチオマーの優先晶出を導く。続く工程は、これらの交互の優先晶出（Ｒ、Ｓ、Ｒ、Ｓ、Ｒ、Ｓ、Ｒ、Ｓ…又はその逆）を繰り返すことを含む。
【００３７】
本発明の他の態様及び利点は、例示的であり限定的でないと考えられるべき以下の実施例により例示される。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】単一エナンチオマーのＸＲＰＤ分析（上方のスペクトル）と比較した２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４−ジメチルアミノ−６−メチル−１，３，５−トリアジンプロピオン酸塩コングロメレートのＸＲＰＤ分析（下方のスペクトル）である。
【図２】単一エナンチオマーのＸＲＰＤ分析（上方のスペクトル）と比較した２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４−ジメチルアミノ−６−メチル−１，３，５−トリアジン塩酸塩コングロメレートのＸＲＰＤ分析（下方のスペクトル）である。
【図３】単一エナンチオマーのＸＲＰＤ分析（上方のスペクトル）と比較した２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４−ジメチルアミノ−６−メチル−１，３，５−トリアジン  ２，４ジクロロフェニル酢酸塩（メタノール溶媒和物）コングロメレートのＸＲＰＤ分析（下方のスペクトル）である。
【図４】単一エナンチオマーのＸＲＰＤ分析（上方のスペクトル）と比較した２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４−ジメチルアミノ−６−メチル−１，３，５−トリアジン（±）ジ−Ｏ，Ｏ’−ｐ−トリル酒石酸塩コングロメレートのＸＲＰＤ分析（下方のスペクトル）である。
【００３９】
塩がコングロメレートとして結晶することを証明するために、幾つかの実験を実施した。
【００４０】
コングロメレートが存在していることを確実に証明するために、エナンチオマー及びラセミ混合物の双方を、同じプロトコールを使用して結晶化させる。次に、双方の固体をＸＲＰＤによって分析する。パターンが一致した場合、塩はコングロメレートとして結晶化している。
【００４１】
実施例：
Ｉ．  ６つのコングロメレート塩の特徴付け実験の一般手順
本手順は、潜在的な関心対象の本発明の特定のコングロメレートをふるい分け（screen）するために用いた。
【００４２】
手順：６２．９％ｅｅの２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４−ジメチルアミノ−６−メチル−１，３，５−トリアジンの開始用基礎溶液を、エナンチオマー塩酸塩の混合物から調製した。濃度は、外部標準を使用するＨＰＬＣによって測定した。酸（１：１塩について３．２２mmol、２：１塩について１．６１mmol）を、Ｒａｄｌｅｙｓ並発反応回転式ワークステーション管に入れた。ＥｔＯＨ／ｉ−ＰｒＯＨ（６ml）を加えて、その酸を撹拌した。適切な量の基礎溶液（６２．９％ｅｅ、３．２２mmol）を加えて、得られた混合物を１５分間撹拌した。管を排気して全ての溶媒を除去した。次に、塩を、還流温度で溶解するのに必要とされる最少量の溶媒（以下に示すとおりのエタノール又はＩＰＡ）に溶解した。溶媒を、８０℃で完全に溶解するまで、０．２５mlずつ加えた。これらを２１℃で一晩放冷した。次にこれを、各酸について、２倍（２×）及び３倍（３×）溶媒量を用いて繰り返した。反応を、濾過後（洗浄せず）、液及び結晶についてＨＰＬＣにより分析した。塩 ３．２２mmolを溶解するために必要な溶媒量の決定後、さらに２回の実験を、１．５倍及び２／３倍の溶媒量を使用して、各塩に対して行った。この場合の結晶は乾式圧縮し、そしてこれもまた洗浄し乾燥させた。
【００４３】
６２．９％ｅｅの開始用基礎液を用いた実験の結果：
略記：        洗浄前液：（ａ）
乾式圧縮した結晶：（ｂ）
液＋洗浄液：（ｃ）
洗浄した結晶：（ｄ）
【００４４】
【表１】
0005536869.tif 000009
【００４５】
このような実験条件の下で、この表は、２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４−ジメチルアミノ−６−メチル−１，３，５−トリアジン、プロピオン酸塩が、優先晶出によって分割される最適塩に対応するということを示している。
【００４６】
II．  「Ａ１」ＨＣｌ塩のエントレインメント（Entrainment）
ＨＣｌ塩ラセミ体の飽和溶液を、ＥｔＯＨ（３５０ml）中の塩 ５０ｇを加熱しながら還流することによって調製した。清澄な溶液が形成された。これを４０℃に放冷した。混合物に、ＨＣｌ塩ラセミ体のスラリーを接種した。
【００４７】
結晶化が観察された。これを一晩平衡化するにまかせた。混合物を、（４０℃に予熱した）反応容器内へ濾過した。これを完全な溶解を確実にするために６０℃に加熱し、４０℃に冷却し、サンプル採取してＨＰＬＣによって濃度を測定した。次にこれを１℃／５分の単位で１３℃に冷却した。１３℃で、少量の結晶化が観察された。種晶サンプルも加え、これを一晩平衡化するにまかせた。１３℃で濃度測定のためにサンプルを取り除いた。
【００４８】
混合物を６０℃に加熱し、ＥｔＯＨに全ての固体を溶解した。次にこれを４０℃に冷却し、この温度で３０分間維持した。９４．５％ｅｅの（Ｒ）−塩酸塩（２５ml中４．８ｇ）の新たに超音波処理したスラリーを加え、反応温度を５分毎に１℃低下させた。混合物を１０分毎にサンプル採取して、結晶の光学純度を測定した。結果を以下に記述した。
４０℃での飽和溶液の濃度＝９２．２ｇ／Ｌ
１３℃での濃度＝６９．７４ｇ／Ｌ
【００４９】
【表２】
0005536869.tif 000010
【００５０】
この表は、結晶の収集を、５分毎に１℃の温度低下に対して最良の分割を与えるために、２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４−ジメチルアミノ−６−メチル−１，３，５−トリアジン（「Ａ１」）．ＨＣｌのラセミ混合物について３０分以内に行うべきであること示している。
【００５１】
III．  「Ａ１」プロピオン酸塩からのエナンチオマー分離
エタノール ６００ｇ中の２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４−ジメチルアミノ−６−メチル−１，３，５−トリアジン（「Ａ１」）プロピオン酸塩 ２００ｇのラセミ混合物の懸濁液を、清澄な溶液が得られるまで（４５℃）加熱した。次にこの溶液を冷却して、２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４−ジメチルアミノ−６−メチル−１，３，５−トリアジンプロピオン酸塩の単一エナンチオマー（Ｒ−エナンチオマー）を接種し、接種した異性体のみが、結晶化を開始した。最終温度（７℃）に達した後、結晶を単離し（４０ｇ；７６〜８０％ｅｅのＲ−エナンチオマー）、そして母液を回収した。結晶化の成長は、その液のオンライン偏光分析法を介して観察することができる。この方法を適用することによって、結晶の単離のための（エナンチオマー純度及び収率に関する）最適点を見つけることが可能である。次のサイクルのために、２−アミノ−３，６−ジヒドロ−４−ジメチルアミノ−６−メチル−１，３，５−トリアジンプロピオン酸塩ラセミ体 ４０ｇを、第１サイクルの母液に加えて、その懸濁液を、最初の濃度を有する清澄な溶液を得るために加熱した。この溶液を（今ではＳ−エナンチオマーで富化されている）を冷まして、Ｓ−エナンチオマーの結晶を接種した。結晶を、最終温度で再度単離して（４０ｇ；７６〜８０％ｅｅのＳ−エナンチオマー）、母液を回収した（今ではＲ−エナンチオマーで富化されている）。このサイクルは、エナンチオマー過剰率も収率も大幅に減少をすることなく、数回繰り返すことができる。
【００５２】
エナンチオマー過剰率の測定のためのＨＰＬＣ−方法：
ＨＰＬＣ−システム：Merck Hitachi LaChrom
固定相：Chirobiotic（商標） T2
移動相：０．１ｗ／ｗ％トリフルオロ酢酸アンモニウムを含むメタノール
流速：１ml／分
カラム温度：２５℃
注入量：５０μl
圧力：５０〜２００バール
２４０nmでのＵＶ検出
【図１】
0005536869.tif 000013
【図２】
0005536869.tif 000014
【図３】
0005536869.tif 000015
【図４】
0005536869.tif 000016