(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣｕＫα線を使用して測定したとき、１０．１度２θ（±０．２度２θ）においてピークを含むＸ線粉末回折パターンを有する、結晶形態の下記の式（１）の化合物の結晶性ナトリウム塩。
【化１】
0005520301.tif 000014
【請求項２】
前記Ｘ線粉末回折パターンが、ＣｕＫα線を使用して測定したとき、５．４、８．７、１３．０および１８．２度２θ（±０．２度２θ）においてピークをさらに含む、請求項１に記載の結晶性ナトリウム塩。
【請求項３】
前記Ｘ線粉末回折パターンが、ＣｕＫα線を使用して測定したとき、５．４、６．５、８．７、１０．１、１１．９、１３．０、１８．２、２０．２および２４．７度２θ（±０．２度２θ）においてピークを含む、請求項１に記載の結晶性ナトリウム塩。
【請求項４】
図３に示されているものと実質的に同じである、ＣｕＫα線を使用して作成したＸ線粉末回折パターンを有する、請求項１に記載の結晶性ナトリウム塩。
【請求項５】
前記化合物の少なくとも５０％が、請求項１、２、３または４に記載のナトリウム塩化合物の形態で存在する、下記の式（１）の化合物を含む組成物。
【化２】
0005520301.tif 000015
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、下記の２００８年９月１６日に出願された米国特許仮出願第６１／０９７，２９１号、および２００９年３月９日に出願された同第６１／１５０，８２６号の利益を主張する。
本発明は、本明細書に記載されているような化合物（１）の新規な結晶形態および化合物（１）のナトリウム塩、それを調製する方法、その医薬組成物、およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
下記の化合物（１）
【化１】
0005520301.tif 000002
は、ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼの選択的および強力な阻害剤として公知である。化合物（１）は、米国特許第６，３２３，１８０号および同第７，５１４，５５７号および同第７，５８５，８４５号に開示されているＨＣＶ阻害剤の非環状ペプチドシリーズの範囲内に入る。化合物（１）は、米国特許第７，５８５，８４５号において化合物＃１０５５として、および米国特許第７，５１４，５５７号において化合物＃１００８として特に開示されている。化合物（１）は、参照により本明細書に組み込まれている上記の文献に見出される一般手順によって調製することができる。
【０００３】
化合物（１）はまた、上記の構造と等しいその化学構造の下記の代替表示によって知られていることがあり、
【化２】
0005520301.tif 000003
式中、Ｂは、
【化３】
0005520301.tif 000004
であり、
Ｌ0は、ＭｅＯ−であり、Ｌ1は、Ｂｒであり、Ｒ2は、
【化４】
0005520301.tif 000005
である。
【０００４】
上記の文献に記載されている一般手順によって合成されるとき、化合物（１）は、完全な医薬品処理のために一般により適していない形態であるアモルファス固体として調製される。したがって、医薬品の厳格な必要条件および基準に合致する製剤を可能にするような結晶形態の化合物（１）を生成することが求められている。さらに、化合物（１）が生成される方法は、大規模な生成を受け入れられるものである必要がある。さらに、生成物は、濾過されやすく、容易に乾燥する形態であることが望ましい。最後に、生成物は、専用の保存状態を必要とせずに長期間安定であることが経済的に望ましい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
化合物（１）は、結晶形態で、またそのナトリウム塩の形態で、さらに好ましくは結晶性ナトリウム塩形態で調製することができることを、本発明者らは驚いたことに予想外に今や初めて見出した。したがって、本発明は、本明細書の一実施形態においてタイプＡと称する新規な結晶多形である結晶形態の化合物（１）、およびまた化合物（１）の新規な結晶性ナトリウム塩の形態を提供する。これらの新規な結晶形態は、非晶形の使用に付いて回る医薬品処理の困難を克服し、ナトリウム塩形態は特に、下記で詳細を記載するようにそれを医薬製剤処理において特に有利なものとする他の特性を有する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一実施形態において、本発明は、結晶形態の化合物（１）を対象とする。より特定の実施形態において、本発明者らは、以下「タイプＡ」と称する化合物（１）の新規な結晶多形を発見した。
タイプＡは、ＣｕＫα線を使用して測定すると、度２θ（±０．２度２θ）で表して、４．８、６．８、９．６、１３．６、１７．３、１９．８および２４．５において特徴的なピークを有する特徴的なＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【０００７】
別の実施形態は、化合物（１）のナトリウム塩を対象とし、このナトリウム塩は結晶形態で調製することができる。化合物（１）の結晶性ナトリウム塩は、ＣｕＫα線を使用して測定すると、度２θ（±０．２度２θ）で表して、５．４、６．５、８．７、１０．１、１１．９、１３．０、１８．２、２０．２および２４．７において特徴的なピークを有する特徴的なＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
また別の実施形態は、化合物（１）のタイプＡもしくはナトリウム塩、またはその混合物、および少なくとも１種の薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物を対象とする。
また別の実施形態は、哺乳動物に、治療有効量の化合物（１）のタイプＡもしくはナトリウム塩、またはその混合物を投与することを含む、前記哺乳動物においてＨＣＶ感染を治療する方法を対象とする。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】タイプＡについての特徴的なＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンである。
【図２】タイプＡの結晶についてのＤＳＣ熱曲線である（ＤＳＣは毎分１０℃の加熱速度にて圧着カップ（crimped cup）中で行われる）。
【図３】化合物（１）の結晶性ナトリウム塩についての特徴的なＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンである。
【図４】化合物（１）の結晶性ナトリウム塩の結晶についてのＤＳＣ熱曲線である（ＤＳＣは毎分１０℃の加熱速度にて開放したカップ中で行われる）。
【図５】化合物（１）のタイプＡの結晶形態（下部）、プロピレングリコール中でスラリー化した後の化合物（１）のタイプＡの結晶形態（中央）、およびエタノール中でスラリー化した後の化合物（１）のタイプＡの結晶形態（上部）のＸＲＰＤパターンを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
定義
本明細書において特に定義されていない用語には、開示および文脈に照らして当業者が与えるであろう意味を与えるべきである。しかし、本出願を通して使用されているように、それとは別に明記しない限り、下記の用語は示した意味を有する。
「タイプＡ」という用語は、ＣｕＫα線を使用して測定したとき、９．６度２θ（±０．２度２θ）において少なくとも特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターンを有する化合物（１）の結晶多形を意味する。この特徴的なピークは、タイプＡを化合物（１）の他の結晶形態と区別すると考えられる。
「約」という用語は、所与の値または範囲の５％以内、さらに好ましくは１％以内を意味する。例えば、「約３．７％」とは、３．５〜３．９％、好ましくは３．６６〜３．７４％を意味する。「約」という用語が値の範囲（例えば、「約Ｘ％からＹ％」）と関連しているとき、「約」という用語は、記載された範囲のより低い（Ｘ）値およびより高い（Ｙ）値の両方を修飾することを意図する。例えば、「約２０％から４０％」は、「約２０％から約４０％」と等しい。
物質に関して「薬学的に許容される」という用語は本明細書において使用する場合、過度の毒性、刺激作用、アレルギー反応などがなく、正しい医学的判断の範囲内でヒトおよび下等動物の組織と接触させて使用するのに適し、合理的な便益／リスク比と釣り合い、かつ物質が医薬組成物中で使用されるとき使用目的のために有効な物質を意味する。
【００１０】
患者における病態の治療に関して「治療する」という用語には、
（ｉ）患者において病態を阻害または寛解させ、例えば、その発症を抑止または遅延させ、あるいは
（ｉｉ）患者において病態を緩和し、すなわち、病態の後退または治癒をもたらすことが含まれる。ＨＣＶの場合、治療には、患者においてＨＣＶウイルス量のレベルを低下させることが含まれる。
【００１１】
結晶化合物（１）
化合物（１）は、本明細書において「タイプＡ」と称される結晶多形形態として単離した。一般に、タイプＡは、度２θ（±０．２度２θ）で表して、４．８、６．８、９．６、１３．６、１７．３、１９．８および２４．５においてピークを有する特徴的なＸ線粉末回折（「ＸＲＰＤ」）パターンを示す。
【００１２】
タイプＡのＸＲＰＤパターンを図１に示す。図１におけるＸＲＰＤパターンについての特徴的なピーク位置および相対強度を、下記の表１に示す。
表１
0005520301.tif 000006
図２は、タイプＡの結晶についての示差走査熱量測定（ＤＳＣ）熱曲線を示す（ＤＳＣは毎分１０℃の加熱速度にて圧着カップ中で行う）。
一般の一実施形態において、本発明は、結晶形態の化合物（１）を対象とする。
別のより特定の実施形態は、少なくとも下記の特徴（ＣｕＫα線を使用して測定したとき、９．６度２θ（±０．２度２θ）においてピークを含むＸ線粉末回折パターン）を有する化合物（１）の結晶多形を対象とする。
別の実施形態は、ＣｕＫα線を使用して測定したとき、９．６度２θ（±０．２度２θ）において上記のようにピークを含み、１９．８度２θ（±０．２度２θ）においてピークをさらに含むＸＲＰＤパターンを有する、化合物（１）の結晶多形を対象とする。
【００１３】
別の実施形態は、ＣｕＫα線を使用して測定したとき、９．６度２θ（±０．２度２θ）において上記のようにピークを含み、４．８および１９．８度２θ（±０．２度２θ）においてピークをさらに含むＸＲＰＤパターンを有する、化合物（１）の結晶多形を対象とする。
【００１４】
別の実施形態は、ＣｕＫα線を使用して測定したとき、９．６度２θ（±０．２度２θ）において上記のようにピークを含み、４．８、６．８、１３．６、１７．３、１９．８および２４．５度２θ（±０．２度２θ）においてピークをさらに含むＸＲＰＤパターンを有する、化合物（１）の結晶多形を対象とする。
【００１５】
別の実施形態は、図１において示すものと実質的に同じＸＲＰＤパターンを示す化合物（１）の結晶多形を対象とする。
別の実施形態は、９．６度２θ（±０．２度２θ）において上記のようにピークを含むＸＲＰＤパターンを有し、かつまた圧着カップ中毎分１０℃の加熱速度で図２において示すものと実質的に同じＤＳＣ熱曲線を示す、化合物（１）の結晶多形を対象とする。
別の実施形態は、化合物（１）の分量を対象とし、上記のＸＲＰＤによって定義した実施形態のいずれかによって特性決定すると、前記物質の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７５％、さらに好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％は、結晶形態、例えばタイプＡの結晶多形の形態で存在する。化合物（１）の分量中のこのような量のタイプＡの存在は典型的には、化合物のＸＲＰＤ分析を使用して測定可能である。
さらなる実施形態は、化合物（１）と薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物を対象とし、上記のＸＲＰＤによって定義した実施形態のいずれかによって特性決定すると、組成物中の化合物（１）の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７５％、さらに好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％は、結晶形態、例えば、タイプＡの結晶多形の形態で存在する。
【００１６】
本発明は、タイプＡを生じさせる条件下で溶媒中溶液から化合物（１）を結晶化させることを含む、タイプＡを調製する方法を提供する。タイプＡが形成される正確な条件は経験的に決定することができ、実際に適切であることが見出された方法を示すことのみが可能である。
化合物（１）のタイプＡは、下記のステップを含む方法（この方法もまた本発明の実施形態である）によって調製し得ることが見出された。
（ｉ）混合物を約６５〜７５℃の温度に加熱することによって、化合物（１）を、水を共溶媒として含有してもよい脂肪族アルコール溶媒に溶解し、溶液を得るステップ、
（ｉｉ）水をステップ（ｉ）において得た溶液に加え、その間に溶液を約７０〜７５℃の温度に維持し、スラリーを得るステップ、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）において得たスラリーを冷却し、固体材料を得るステップ、
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の固体材料を集め、前記材料を約６５〜８０℃の温度で乾燥させ、化合物（１）のタイプＡを得るステップ。
【００１７】
この方法において用い得る脂肪族アルコールには、例えば、エタノール（例えば、変性、２００プルーフまたは１００％純粋）、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、イソ−ブチルアルコールおよびイソ−ペンチルアルコール、好ましくはエタノールが含まれる。このように得られたタイプＡの結晶は、当技術分野において公知の任意の従来の方法によって回収し得る。
最終ステップ（ｉｖ）において、ステップ（ｉｉｉ）においてこのように得られた固体は、従来の収集および高温乾燥技術、例えば、濾過および真空オーブンを使用して、集め、高温で乾燥し得る。
【００１８】
好ましい一実施形態において、アモルファス化合物（１）が完全に溶解するまで、撹拌し、混合物を約７２〜７４℃の温度に加熱することによって、化合物（１）を、約１０％ｖ／ｖまでの水を共溶媒として含有する脂肪族アルコール溶媒（例えば、エタノール）に溶解する。水および約１０％ｖ／ｖまでの脂肪族アルコール（例えば、エタノール）を含有する別の水添加溶液を調製し、この水添加溶液を、化合物（１）の溶液に時間をかけて概ね直線的に加え、その間混合物を約７２〜７４℃の温度で維持する。化合物（１）のタイプＡは、水溶液の添加の間に結晶化し始める。このように得られた結晶スラリーを冷却し、撹拌し、次いで結晶を濾過し、洗浄し、約６５〜７５℃の温度で従来の技術を使用して乾燥させる。
【００１９】
工程ステップは当然ながら、方法の円滑化のためによく理解されるように、従来のかき混ぜ技術、例えば、撹拌、および他の従来の技術によって円滑化し得る。
化合物（１）のナトリウム塩
式（１）の化合物のナトリウム塩は、それは安定な結晶形態として調製することができるという事実によって、医薬品処理に特に適していることが見出された。一般に、化合物（１）の結晶性ナトリウム塩は、度２θ（±０．２度２θ）で表して、５．４、６．５、８．７、１０．１、１１．９、１３．０、１８．２、２０．２、および２４．７において特徴的なピークを有する特徴的なＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【００２０】
化合物（１）の結晶性ナトリウム塩のＸＲＰＤパターンを図３に示す。図３におけるＸＲＰＤパターンについての特徴的なピーク位置および相対強度を、下記の表２に示す。
表２
0005520301.tif 000007
図４は、化合物（１）の結晶性ナトリウム塩結晶についての示差走査熱量測定（ＤＳＣ）熱曲線を示す（ＤＳＣは毎分１０℃の加熱速度にて開放したカップ中で行われる）。
【００２１】
ナトリウム塩形態は、医薬製剤処理においてそれを特に有利なものとする独特の特性を有することが予想外に見出された。特に、ナトリウム塩形態は、脂質をベースとする薬物送達システム（ＬＢＤＤＳ）において製剤するのにそれを特に適したものとする特定の特性を有する。
第一に、ナトリウム塩形態は、ＬＢＤＤＳ製剤のために通常使用される添加剤（例えば、プロピレングリコールおよびエタノールを含めて）中で非常に改善された溶解性を有することが予想外に見出された。下記の表は、特定の添加剤中の化合物（１）のタイプＡ形態と比較して、化合物（１）のナトリウム塩形態の非常に改善された溶解性を示すデータを提供する。
【００２２】
様々な添加剤中の化合物（１）のタイプＡに対する化合物（１）のＮａ塩の溶解性比較
0005520301.tif 000008
プロピレングリコールおよびエタノール中のナトリウム塩形態の非常に改善された溶解性によって、この形態は、これらの通常の添加剤の１つまたは複数を用いたＬＢＤＤＳ製剤の開発に特に適しているものとなる。
第２に、ナトリウム塩は、タイプＡ形態と比較して、プロピレングリコールおよびエタノール中でより高い形態安定性を予想外に示す。特に、化合物（１）のタイプＡ形態は、エタノールまたはプロピレングリコール中でスラリー化したときに、そのＸＲＰＤパターンの変化によって示されているように明らかな形態変化を示す。図５は、結晶形態の変化を明らかに示す、タイプＡの結晶形態（下部−Ｌｏｔ  Ａ０３）、プロピレングリコール中でスラリー化した後（中央−プロピレングリコール固体）、およびエタノール中でスラリー化した後のタイプＡ形態（上部−ＥｔＯＨ固体）のＸＲＰＤパターンを示す。対照的に、化合物（１）の結晶性ナトリウム塩形態をプロピレングリコールまたはエタノール中でスラリー化したときに、残った固相についてＸＲＰＤパターンの変化は観察されない。これによってこれらの添加剤中のナトリウム塩形態の改善された安定性が示され、これによってまたナトリウム塩形態は、これらの通常の添加剤の１つまたは複数を用いたＬＢＤＤＳ製剤の開発に特に適したものとなる。これらの結果を生じさせるために使用される方法を、特性決定方法の項において下記に記載する。
【００２３】
化合物、特に化合物（１）の遊離形態と異なる塩形態との間の、溶解性および物理的安定性の傾向におけるこのような差異を予想することは、このような形態が首尾よく調製された後でさえ一般に可能ではないため、結晶性ナトリウム塩で得られた上記の結果は予想外である。
【００２４】
一般の一実施形態において、本発明は、化合物（１）のナトリウム塩を対象とする。
より特定の実施形態において、化合物（１）のナトリウム塩は、結晶形態である。
よりさらに特定の実施形態において、本発明は、少なくとも下記の特徴（ＣｕＫα線を使用して測定したとき、１０．１度２θ（±０．２度２θ）においてピークを含むＸ線粉末回折パターン）を有する、化合物（１）の結晶性ナトリウム塩を対象とする。
【００２５】
別の実施形態は、ＣｕＫα線を使用して測定したとき、１０．１度２θ（±０．２度２θ）において上記のようにピークを含み、１３．０および１８．２度２θ（±０．２度２θ）においてピークをさらに含むＸＲＰＤパターンを有する、化合物（１）の結晶性ナトリウム塩を対象とする。
別の実施形態は、ＣｕＫα線を使用して測定したとき、１０．１度２θ（±０．２度２θ）において上記のようにピークを含み、５．４、８．７、１３．０および１８．２度２θ（±０．２度２θ）においてピークをさらに含むＸＲＰＤパターンを有する、化合物（１）の結晶性ナトリウム塩を対象とする。
別の実施形態は、ＣｕＫα線を使用して測定したとき、１０．１度２θ（±０．２度２θ）において上記のようにピークを含み、５．４、６．５、８．７、１１．９、１３．０、１８．２、２０．２および２４．７度２θ（±０．２度２θ）においてピークをさらに含むＸＲＰＤパターンを有する、化合物（１）の結晶性ナトリウム塩を対象とする。
【００２６】
別の実施形態は、図３において示すものと実質的に同じであるＸＲＰＤパターンを示す、化合物（１）の結晶性ナトリウム塩を対象とする。
別の実施形態は、１０．１度２θ（±０．２度２θ）において上記のように特徴的なピークを有するＸＲＰＤパターンを有し、かつまた開放したカップ中毎分１０℃の加熱速度で図４において示すものと実質的に同じＤＳＣ熱曲線を示す、化合物（１）の結晶性ナトリウム塩を対象とする。
別の実施形態は、化合物（１）の分量を対象とし、上記のＸＲＰＤによって定義した実施形態のいずれかによって特性決定し得るように、前記物質の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７５％、さらに好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％は、化合物（１）の結晶性ナトリウム塩の形態で存在する。化合物（１）の分量中のこのような量の化合物（１）の結晶性ナトリウム塩の存在は典型的には、化合物のＸＲＰＤ分析を使用して測定可能である。
さらなる実施形態は、化合物（１）のナトリウム塩と薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物を対象とする。より特定の実施形態において、組成物中の化合物（１）のナトリウム塩の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７５％、さらに好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％は、上記のＸＲＰＤによって定義した実施形態のいずれかによって特性決定し得るように、結晶形態、例えば、化合物（１）の結晶性ナトリウム塩の形態で存在する。
【００２７】
本発明は、結晶性ナトリウム塩を生じさせる条件下で溶媒中溶液から化合物（１）を結晶化させることを含む、化合物（１）の結晶性ナトリウム塩を調整する方法を提供する。結晶性ナトリウム塩が形成される正確な条件は、経験的に決定することができ、実際に適切であることが見出された方法を示すことのみが可能である。
【００２８】
化合物（１）の結晶性ナトリウム塩は、下記のステップを含む方法（この方法もまた本発明の実施形態である）によって調製し得ることが見出された。
（ｉ）混合物をスラリーとして加熱することによって、または完全な溶液を得ることによって、化合物（１）を、水を共溶媒として含有してもよいケトンまたはアセテート溶媒に溶解するステップ、
（ｉｉ）水をステップ（ｉ）において得た溶液に加え、その間に溶液を約５０〜７０℃の温度に維持し、溶液またはスラリーを得るステップ、
（ｉｉｉ）化合物（１）の結晶性ナトリウム塩による種晶添加のステップ、
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）において得たスラリーを冷却し、固体材料を得るステップ、
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の固体材料を集め、前記材料を約４５〜７５℃の温度で乾燥させ、化合物（１）の結晶性ナトリウム塩を得るステップ。
【００２９】
化合物（１）の結晶性ナトリウム塩を調製するためのさらなる代替方法は、下記の例の項に見出すことができ、それらの各々はさらなる本発明の実施形態である。
医薬組成物および方法
タイプＡおよびナトリウム塩形態を含めた化合物（１）の上記の形態は、ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼに対する化合物（１）の示された阻害活性を考慮すると、抗ＨＣＶ剤として有用である。したがって、これらの形態は、哺乳動物においてＨＣＶ感染の治療に有用であり、患者においてＨＣＶ感染を治療し、または１種もしくは複数のその症状を軽減するための医薬組成物の調製のために使用することができる。さらに、化合物（１）のナトリウム塩形態は、ヒト臨床試験においてＨＣＶ感染患者の治療において有効性を示してきた。特定の患者についての適当な投与量および投与計画は、当技術分野において公知の方法によって、および米国特許第６，３２３，１８０Ｂ１号および同第７，５８５，８４５号における開示を参照することによって決定することができる。一般に、哺乳動物におけるＨＣＶ感染の治療のための治療有効量を投与する。一実施形態において、単回用量または多回用量で成人のヒト毎に１日当たり約５０ｍｇ〜１０００ｍｇ、さらに好ましくは約１２０ｍｇ〜約４８０ｍｇを投与する。
【００３０】
任意の特定の患者についての特定の最適な投与量および治療計画は当然ながら、年齢、体重、身体全体の健康状態、性別、食事、投与時間、排せつ率、薬物の組合せ、感染の重症度および経過、感染に対する患者の傾向および治療を行う医師の判断を含めた種々の要因によって決まる。一般に、有害または悪い副作用をもたらすことなしに抗ウイルス的に有効な結果が一般に得られる濃度レベルで化合物を投与することが最も望ましい。
選択された投与量レベルの化合物（１）のこれらの結晶形態またはそのナトリウム塩は典型的には、患者に医薬組成物によって投与される。例えば、本発明において用い得る様々なタイプの組成物については米国特許第６，３２３，１８０号および同第７，５８５，８４５号における記載を参照されたい。医薬組成物は、経口的、非経口的に、または埋込レザバーによって投与し得る。非経口という用語には、本明細書において使用する場合、皮下、皮内、静脈内、筋内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下腔内、および病巣内の注射または注入技術が含まれる。経口投与または注射による投与が好ましい。
本発明の医薬組成物は、任意の従来の無毒性で薬学的に許容される担体、賦形剤、アジュバント、添加剤またはビヒクルを含有し得る。場合によっては、製剤のｐＨは、薬学的に許容される酸、塩基または緩衝液で調節し、製剤された化合物またはその送達形態の安定性を増強し得る。
医薬組成物は、無菌の注射可能な調製品の形態で、例えば、無菌の注射可能な水性または油性懸濁剤としてでよい。この懸濁剤は、適切な分散化剤または湿潤剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０など）および懸濁化剤を使用して、当技術分野で公知の技術によって製剤し得る。
【００３１】
医薬組成物はまた、化合物（１）のタイプＡもしくはナトリウム塩、またはその混合物と、少なくとも１種の薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む経口医薬組成物の形態のことがある。経口医薬組成物は、これらに限定されないが、錠剤、液体入りカプセル剤を含めたカプセル剤（例えば、硬質または軟質ゼラチンカプセル剤）、および水性懸濁剤および溶液剤を含めて、任意の経口的に許容される剤形で経口的に投与し得る。経口使用のための錠剤の場合、通常使用される担体には、ラクトースおよびトウモロコシデンプンが含まれる。滑沢剤（ステアリン酸マグネシウムなど）をまた典型的には加える。カプセル剤形態での経口投与のために、有用な賦形剤には、ラクトースおよび乾燥トウモロコシデンプンが含まれる。使用することができる軟質ゼラチンカプセル剤の例には、欧州特許第６４９６５１Ｂ１号および米国特許５，９８５，３２１号に開示されているものが含まれる。水性懸濁剤が経口的に投与されるとき、活性成分を、乳化剤および懸濁化剤と合わせる。必要に応じて、特定の甘味剤および／または香味剤および／または着色剤を加えてもよい。
【００３２】
上記の製剤および組成物のための他の適切なビヒクルまたは担体は、標準的な医薬品テキスト、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、第１９版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎ．、１９９５に見出すことができる。
【００３３】
確かに、結晶性ナトリウム塩が液体ビヒクル中で製剤されるとき（例えば、経口投与のための溶液剤もしくは懸濁剤として、または注射によって、例えば、液体入りカプセル剤中を含めて）、ナトリウム塩は、その結晶性を喪失する。それにもかかわらず、最終的な液体をベースとする医薬組成物は、化合物（１）の新規なナトリウム塩を含有し、したがって本発明に包含される別個の実施形態と考えられる。安定な結晶形態のナトリウム塩を調製する方法を発見することのみによって、本発明者らは、ナトリウム塩形態を使用した効率的な医薬品処理および医薬製剤の製造を可能にした。したがって、この発見により可能になったナトリウム塩形態を含有する最終的な医薬製剤は、本発明の別の態様および実施形態と考えられる。
【００３４】
特性決定方法
１．Ｘ線粉末回折
Ｘ線粉末回折分析は、ＣｕＫα線を使用した、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ、Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩから入手可能なＢｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｘ線粉末回折計モデルＤ８Ｄｉｓｃｏｖｅｒで行った。機器は、長い高精度焦点Ｘ線管を備えている。管のパワー（tube power）は、４０ｋＶおよび４０ｍＡに設定した。機器は、０．６ｍｍの出口スリット、０．４°ソーラースリット、ＬｉＦ平板結晶回折ビームモノクロメータおよびＮａＩシンチレーション検出器を使用してＧｏｂｅｌ  Ｍｉｒｒｏｒによって平行ビームモードで操作した。検出器スキャンは、１°２θの管の角度を使用して操作した。ステップスキャンは、２〜４０°２θ、ステップ毎に０．０５°、ステップ毎に４秒で操作した。石英の参照標準を使用して、機器の整合性を点検した。ゼロバックグラウンド石英ホルダーをファイリングすることによって、試料を分析のために調製した。
【００３５】
２．ＤＳＣ分析
ＤＳＣ分析は、ＴＡ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＤＳＣ  Ｑ１０００で行った。示差走査熱量測定曲線は、窒素流下で圧着カップ中摂氏１０度に加熱したタイプの試料で得た。
【００３６】
３．溶解性および形態変化研究
タイプＡまたはナトリウム塩形態としての化合物（１）の溶解性を、様々な非水性溶媒中で調査した。溶液は、Ｔｅｆｌｏｎで裏打ちしたキャップを有するねじ蓋アンバーバイアル中で過剰な化合物（１）を０．２５ｍｌ〜１．０ｍｌの添加剤に加えることによって調製した。試料は室温で４日まで回転させた。試料採取は、遠心分離し（エッペンドルフモデル５４１５Ｃテーブルトップ遠心機で１４，０００ｒｐｍ）、０．４５μｍのＰＶＤＦフィルターを通して濾過することによって行った。溶解性を決定するために、濾液をＨＰＬＣ分析にかけた。ＨＰＬＣ分析は、勾配または定組成条件を使用してＡｇｉｌｅｎｔ１１００で行った。両方の方法は、アセトニトリル／水（各々、０．１％トリフルオロ酢酸（Ｔｒｉｆｌｏｕｒｏａｃｅｔｉｃ  Ａｃｉｄ）を有する）およびＡＣＥ  Ｃ−１８固定相を使用し、カラム加熱を４０〜４５℃に維持した。検出の波長は２２０ｎｍまたは２６４ｎｍに設定した。湿った固体を集め、ＸＲＰＤによって形態変化（安定性）について分析した。
形態変化研究についてのＸＲＰＤ分析は、ＣｕＫα線を使用して、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ、Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩから入手可能なＢｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｘ線粉末回折計モデルＤ８ＤｉｓｃｏｖｅｒまたはＤ８Ａｄｖａｎｃｅで行った。管のパワーは、４０ｋＶおよび４０ｍＡまたは４０ｋＶおよび３０ｍＡに設定した。機器（複数可）は、０．６ｍｍの出口スリット、０．４°ソーラースリットおよびＬｉＦ平板結晶回折ビームモノクロメータを使用して、または１ｍｍの発散スリット、０．１２ｍｍのソーラースリットを使用して、Ｇｏｂｅｌ  Ｍｉｒｒｏｒによって平行ビームモードで操作した。Ｄ８  Ａｄｖａｎｃｅを伴うＢｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏ配置（１ｍｍの発散スリット、０．１２ｍｍのソーラースリット）をまた、いくつかの分析のために使用した。各配置／機器は、ＮａＩシンチレーション検出器を用いた。検出器スキャンは、１°２θの管の角度を使用して操作した。ステップスキャンは、２〜３５°２θまたは４０°２θ、ステップ毎に０．０５°、ステップ毎に０．６秒または４秒で操作した。石英の参照標準を使用して、機器の整合性を点検した。ゼロバックグラウンド石英ホルダーまたはＮｉめっきホルダーをファイリングすることによって、試料を分析のために調製した。
【００３７】
本発明をより十分に理解するために、下記の例を記載する。これらの例は、本発明の実施形態を例示するためであり、本発明の範囲を決して限定するものと解釈されない。下記の例において使用される反応剤は、本明細書に記載されているように得ることができ、または本明細書に記載されていない場合、それ自体が市販であるか、もしくは当技術分野において公知の方法によって市販の材料から調製し得る。例えば特定の出発物質は、国際出願第ＷＯ００／０９５４３号、同第ＷＯ００／０９５５８号、同第ＷＯ００／５９９２９号、米国特許第６，３２３，１８０号、同第６，６０８，０２７号および同第７，５１４，５５７号および同第７，５８５，８４５号に記載されている方法によって得ることができる。
【００３８】
他に特定しない限り、溶媒、温度、圧力、および他の反応条件は、当業者は直ちに選択し得る。典型的には、反応の進行は、必要に応じて高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によってモニターしてもよく、中間体および生成物は、シリカゲル上のクロマトグラフィーによって、および／または再結晶によって精製してもよい。
【実施例】
【００３９】
例１−キノリン出発物質である化合物１１の調製
【化５】
0005520301.tif 000009
【００４０】
ステップ１
アミド１のジアニオン（１．００ｇのアミド１から上記のように全く同一に調製）を−７８℃に冷却し、次いで２．１９ｍＬのペルフルオロオクチルブロミド（８．４６ｍｍｏｌ、１．７５当量）をシリンジによって５分に亘り滴下で添加した。次いで、暗色の反応混合物を−１０℃のバス中に入れた。２時間後、１０ｍＬのＨＣｌ（１Ｎ）を注意深く加え、混合物をＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、溶媒を真空中で除去した。次いで、残渣を４：１のヘキサン：ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲル上でクロマトグラフィーにかけ、１．１３ｇのブロモアミド５（８１％）を無色の油として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.12 (br s, 1H), 8.04 (dd, J = 1.3, 8.4 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 6.63 (dd, J = 1.3, 8.3 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 1.33 (s, 9H).  13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 176.57 (s), 155.74 (s), 136.98 (s), 128.34 (d), 113.63 (d), 106.86 (d), 103.07 (s), 56.26 (q), 40.20 (s), 27.45 (q).
【００４１】
ステップ２
０．２５ｇのブロモアミド５（０．８７ｍｍｏｌ、１当量）、２．０ｍＬの濃ＨＣｌ（２４ｍｍｏｌ、２８当量）、および１．０ｍＬのジグリムを、１００℃で２４時間加熱した。次いで、混合物を冷却し、濾過した（生成物）。Ｈ2Ｏを使用して濾液を真空中で蒸発させ、全ての溶媒を共沸的に除去した。残渣をＥｔＯＡｃで粉砕し、さらなる生成物の沈殿がもたらされ、それをまた濾過した。合わせた固体を乾燥させ、０．１６ｇ（７７％）のブロモアニリン６・ＨＣｌを薄茶色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.09 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.47 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.84 (br s, 2H), 3.77 (s, 3H).
【００４２】
ステップ３
ブロモアニシジン・ＨＣｌ（５．７３ｇ、２４．０ｍｍｏｌ）、三塩化アルミニウム（３．５２ｇ）およびクロロベンゼン（１５．０ｍＬ）を、オーブンで乾燥させた１００ｍＬの三つ口フラスコ中に室温で充填する（温度は３０℃に上昇する）。次いで、このように得られた混合物を１０分間撹拌し、次いで０〜５℃に冷却し、続いてアセトニトリル（１．８９ｍＬ、３６．０ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、続いてＢＣｌ3（２．８２ｇ）を加え、気体（または液体）として反応混合物中に移し、温度を５℃未満に保つ。次いで、このように得られた混合物を室温で２０分間撹拌し、次いで８５〜１００℃に１６時間加熱する。ＨＰＬＣは反応が完了したことを示す（２２０ｎｍでＳＭ＜０．５％）。混合物を５０℃に冷却する。次いでトルエン（１５ｍＬ）を加え、続いてＩＰＡ（１１．１ｍＬ）をゆっくりと加え、次いで水（３２ｍＬ）を５０℃でゆっくりと加えた。このように得られた混合物をこの温度でさらに２時間撹拌し、次いで３ｇのセライトを加え、撹拌した混合物を室温に冷却した。濾過し、次いで有機画分を水（１×１５ｍＬ）、５％ＮａＨＣＯ3（２×１５ｍＬ）、水（１×１５ｍＬ）で洗浄し、次いで減圧下で濃縮し、３．９２〜４．４ｇの所望の生成物を６８〜７２％単離収率で得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.72 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.1 (br s, 2H), 6.28 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 2.55 (s, 3H).
【００４３】
ステップ４
塩化オキサリル（８．１５ｍＬ）をＴＨＦ（３００ｍＬ）およびＤＭＦ（３００μＬ）に溶解したチアゾール酸８（２０．１８ｇ）の冷たい混合物（１０±５℃）に約５分の期間に亘り滴下で添加し、内部温度を１０±５℃に維持する。反応混合物は、黄色で均質となる。冷却槽を除去し、混合物を約３０分の期間に亘り周囲温度に到達させる。ガス発生が観察される。混合物を周囲温度で３０分間から１時間撹拌する。アニリン７（１９．８ｇ）、ＤＭＡＰ（１４０ｍｇ）およびＴＨＦ（３５ｍＬ）の溶液を、１０±５℃で加えた。Ｅｔ3Ｎ（１３．２ｍＬ）を、１０±５℃で１０分の期間に亘り少しずつ加えた。氷バスを除去し、混合物を６５±２℃に加熱し、一晩（１８時間）撹拌した。混合物を周囲温度に到達させ、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、水（１５０ｍＬ）で洗浄した。ＮａＨＣＯ3（５％、２２５ｍＬ）を有機部分に加え、混合物を周囲温度で３０分間撹拌した。有機部分を概ね４０℃にて減圧下で濃縮した。ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）をこのように得られた材料に加え、残留した水を除去し、混合物を減圧下で概ね４０℃にて濃縮した（水を共沸させた）。ＥｔＯＡｃ（９４ｍＬ）を加え、このように得られたスラリーを２〜６時間撹拌し、濾過した。固体をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）、続いてヘプタン（３０ｍＬ）で洗浄し、１時間空気乾燥させ、所望の生成物を７０％収率で得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ:  1.32 (d, 6H, J = 7.8 Hz), 2.58 (s, 3H), 2.65-2.72 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 6.83 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.70 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.86 (s, 1H), 8.98 (bs, 1H), 10.13 (bs, 1H).
【００４４】
ステップ５
２Ｌのフラスコ中に、カリウムｔ−ブトキシド（１１２ｇ）を入れた。乾燥ＤＭＥを室温で加えた（発熱：温度は３５℃に上昇した）。生成した溶液を約８０℃に加熱し、温度を８０〜８５℃に維持するように、アミド（８８ｇ）を１０分割でゆっくりと加えた。完了すると、反応混合物を８５℃で２時間撹拌した。反応の間に固体が沈殿した。ＨＰＬＣ分析は、反応がこの時点で完了したことを示した（変換：１００％）。反応混合物を室温に、次いで冷浴で１０℃に冷却した。２ＮのＨＣｌ水溶液（約５００ｍｌ）を、温度を２５℃未満に保つためにゆっくりと加え、反応混合物をクエンチした。ｐＨを４〜５に調節した。約１００ｍｌの水を加え（注：濾過を促進するために、水の量は調節する必要があり得る）、このように得られた懸濁液を室温で５〜１０時間撹拌した。生成物を濾過によって単離し、ＴＨＦで洗浄し、真空下で乾燥させた。収量：８１ｇ、９６％収率。
1H-NMR (400 M Hz, DMSO-d6): 1.14 (6H, d, J = 6.8 Hz, i-Pr), 2.48 (1H, 七重線, J = 6.8 Hz, i-Pr), 3.99 (3H, s, MeO), 6.75 (1H, s, H-3), 7.24 (1H, d, J= 8.5 Hz, H-6), 8.10 (1H, d, J = 8.5 Hz, H5), 8.22 (1H, s, H-5'), 9.87 (1H, s, OH), 12.40 (1H, s, アミド NH).
【００４５】
ステップ６
１００ｍｌのフラスコ中に、出発物質キノロン（４．２２ｇ）およびジオキサン（４０ｍｌ）を入れた。ＰＯＣｌ3（４．６ｇ）を加え、混合物を７５℃に加熱した。２時間後、ＨＰＬＣは反応が完了したことを示した（９９．７％の変換）。反応混合物を室温に冷却し、次いで１００ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ3溶液および２０ｍｌのＥｔＯＡｃに注いだ。このように得られた懸濁液を３時間撹拌した。生成物を濾過によって単離し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、真空下で乾燥させた。収量：４．０ｇ、９０．９％。
1H-NMR (400 M Hz, CDCl3): 1.14 (6H, d, J = 6.8 Hz, i-Pr), 2.76 (1H, 七重線, J = 6.8 Hz, i-Pr), 4.05 (3H, s, MeO), 7.68 (1H, d, J= 8.5 Hz, H-6), 8.07 (1H, s, H-3), 8.13 (1H, s, H-5'), 8.20 (1H, d, J = 8.5 Hz, H5), 12.30 (1H, s, アミド NH).
【００４６】
例２−ジペプチド酸化合物１３（出発物質）の調製
【化６】
0005520301.tif 000010
【００４７】
熱電対、窒素注入口、および磁気撹拌棒を有する２５０ｍＬの三つ口フラスコを、Ｎ−シクロペンチルオキシ（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｌｙｏｘｙ）カルボニル−ｔｅｒｔ−Ｌ−ロイシン（２０．０ｇ、８２．２ｍｍｏｌ、１．０当量）、１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（１２．７３ｇ、９０．４２ｍｍｏｌ、１．１当量）、および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１７．３３ｇ、９０．４２ｍｍｏｌ、１．１当量）で充填した。フラスコを窒素でパージし、撹拌を始めた。無水ＤＭＦ（６２ｍＬ）をフラスコに加え、混合物を２０分間室温（約２４℃）で撹拌した。反応物は穏やかな発熱性であり、内部温度は２９℃に上昇した。固体ｔｒａｎｓ−４−ヒドロキシプロリンメチルエステルＨＣｌ（１４．９３ｇ、８２．２ｍｍｏｌ、１．０当量）を、反応物に一度に加えた。シリンジを使用して、ジイソプロピルエチルアミン（１４．３６ｍＬ、８２．２ｍｍｏｌ、１．０当量）を、反応物に２５分に亘り滴下で添加した。内部温度は、２９℃から３４．５℃に上昇した。反応物を１．７５時間撹拌し、１２が形成された。次いで、反応物を０．１ＭのＨＣｌ（１００ｍＬ）でクエンチし、内部温度は３４℃に上昇した。反応物を７５ｍＬの酢酸エチルで３度抽出し、有機層を合わせた。有機層を７５ｍＬのＨ2Ｏ、および２×７５ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ3で洗浄した。有機層（約２３５ｍＬ）を、機械式撹拌機、短経路蒸留ヘッド、内部および外部熱電対を取り付けた５００ｍＬのフラスコに移し、ハウスバキューム（ｈｏｕｓｅ  ｖａｃｕｕｍ）（約１１０ｍｍＨｇ）下、３５℃未満の内部温度、４０℃の油バス温度で最小の撹拌可能な容量に蒸留した。次いで、この粗混合物１２に、テトラヒドロフラン（１５０ｍＬ）を加え、それを最小の撹拌可能な容量に蒸留した。テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）をフラスコに加え、それを再び最小の撹拌可能な容量に蒸留した。蒸留ヘッドを添加漏斗と交換した。テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）およびメタノール（５０ｍＬ）をフラスコに加え、溶液を約１５分撹拌した。３．２ＭのＬｉＯＨの溶液（７７ｍＬ、２４６．６ｍｍｏｌ、３当量）を添加漏斗に充填し、４５分に亘り加えた。温度は２２℃から２９℃に上昇し、反応混合物は僅かに濁った。混合物を冷水バス中で冷却し、次いで反応物を４ＭのＨＣｌ（５８〜６５ｍＬ）をゆっくりと（４５分）加えることによってクエンチし、ｐＨを３．５に調節し、温度を２７℃へと僅かに増加させた。フラスコに蒸留ヘッドを取り付け、メタノールおよびテトラヒドロフラン（ｔｅｒｔａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ）を減圧にて４０℃のバス温度、３０℃未満の内部温度で蒸留によって除去した。混合物を１５０ｍＬのＭＴＢＥで２度抽出した。ＭＴＢＥ溶液を減圧（３５０ｍｍＨｇ）にて最小の撹拌可能な容量に濃縮した。５０ｍＬのＭＴＢＥを加え、それを蒸留によって除去した（３５℃未満の内部温度）。反応物は透明な粘稠液体であり、２０ｍＬのＭＴＢＥを加え、混合物を５０℃に加熱した。溶液は透明であり、油バスをオフにし、溶液を室温（約２４℃）に１．５時間に亘り冷却した。次いで、生成したスラリーに、６０ｍＬのＭＴＢＥを加え、２時間撹拌し、次いでスラリーを濾過し、約２０ｍＬのＭＴＢＥを使用して混合物を移した。次いで、固体を真空下で３５℃にて恒量１６．４ｇ（５２％）に乾燥させ、１／３ＭＴＢＥ溶媒和物化合物１３を無色の固体として得た。ｍ．ｐ．１１７〜１２４℃；αD＝−５８．６（ｃ２．１７、ＭｅＯＨ）；1H NMR (400 MHz, DMSO, 報告されている主要な回転異性体) δ: 6.76 (d, J= 9.3 Hz, 1H), 5.15 (s, 1H), 4.92 (m, 1H), 4.31 (br s, 1H), 4.26 (t, J= 8.3 Hz, 1H), 4.19 (d, J= 9.3 Hz, 1H), 3.63 (m, 2H), 3.06 (s, 1H, (MTBE)), 2.08 (m, 1H), 1.87-1.48 (m, 9H), 1.09 (s, 3H, (MTBE)), 0.92 (s, 9H).
【００４８】
例３−トリペプチド酸化合物１６（出発物質）の調製
【化７】
0005520301.tif 000011
２５ｍｌのフラスコ中で、１４を３ｍｌのＤＭＦに溶解した。ＨＯＢｔ（１４９ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（２１１ｍｇ、１，１ｍｍｏｌ）、１３（２９０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）およびｉ−Ｐｒ2ＮＥｔ（１２９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を、所与の順序で室温にて加えた。このように得られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を１５ｍｌのＮａＨＣＯ3水溶液に注ぎ、酢酸エチル（２０ｍｌ）で抽出した。有機層をＨＣｌ（０．５Ｎ、２×１０ｍｌ）および飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（１０ｍｌ）で洗浄した。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去した後、１５を白色の固体として得た。０．４６ｇ（９５％収率）。1H-NMR (400 M Hz, CDCl3): 0.96 (s, 9H), 1.35 (1H, dd, J = 3.0, 4.5 Hz), 1.45-1.90 (m, 9H), 1.77 (1H, dd, J = 3.0, 4.0 Hz), 2.00-2.09 (1H, m), 2.45-2.52 (1H, m), 3.02 (1H, br), 3.50 (1H, dd, J = 11.0, 3.0 Hz), 3.58 (3H, s), 3.99 (1H, d, J = 11.0 Hz), 4.18 (1H, d, J = 9.0 Hz), 4.43 (1H, br),  Hz), 4.63 (1H, t, J = 8.0 Hz), 4.93-5.00 (1H, m), 5.04 (1H, dd, J = 10.5, 2.0 Hz), 5.20 (1H, d, J = 18.0 Hz), 5.20-5.25 (1H, m), 5.65-5.77 (1H, ddd, J = 18.0, 10.5, 2.0 Hz), 7.78 (1H, br) ppm.
【００４９】
３２０ｍｇのエステル１５（０．６６７ｍｍｏｌ、１当量）を、周囲温度でＮ2下にて６．７ｍＬのＴＨＦおよび３．４ｍＬのＭｅＯＨに溶解した。次いで、この溶液に、３．３４ｍＬのＬｉＯＨ（５．３４ｍｍｏｌ、８当量）（１．６Ｍ）を５分に亘り滴下で添加した。１．５時間後、溶媒を真空中で除去し、残渣を１５ｍＬのＥｔＯＡｃおよび１０ｍＬの飽和ＮａＣｌで希釈し、次いでｐＨ３．４５に達成するまで１ＮのＨＣｌを加えた。相を分離し、水相を１５ｍＬのＥｔＯＡｃで再抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ層をＨ2Ｏ（１×５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、溶媒を真空中で除去し、油を得た。油をＭＴＢＥ（１×１５ｍＬ）と共に共沸させ、残渣を高真空下にて乾燥させ、３２０ｍｇの１６（１００％）を無色の泡として得た。Ｃ23Ｈ35Ｎ3Ｏ7についての正確な質量：計算値４６５．２５；実測値（ＥＳ−）：４６４．２９；1H NMR (400 MHz, DMSO, 報告されている主要な回転異性体) δ: 12.40 (br s, 1H), 8.49 (s, 1H), 6.77 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.71 (m, 1H), 5.22-4.85 (m, 4H), 4.36-4.10 (m, 3H), 3.80-3.21 (m, 4H), 2.00-1.42 (m, 11H), 0.92 (s, 9H).
【００５０】
例４−アモルファス化合物（１）へのジペプチドＳNＡｒアプローチ
【化８】
0005520301.tif 000012
【００５１】
ＳNＡｒプロトコル１：１００ｍＬの三つ口丸底フラスコを１．９３ｇの１３（５．００ｍｍｏｌ、１当量）で充填し、次いで排気し／Ａｒで満たし（３×）、次いで１７．０ｍＬのＤＭＳＯをシリンジによって加え、透明で無色の溶液を得た。フラスコを再び排気し／Ａｒで満たし（３×）、次いで２．５３ｇのｔ−ＢｕＯＫ（２２．５ｍｍｏｌ、４．５当量）を未希釈で一度に加えた。最高３１．５℃への発熱が観察された。フラスコを排気し／Ａｒで満たし（３×）、次いでハウスバキューム（ｈｏｕｓｅ  ｖａｃｕｕｍ）（約６０ｍｍ）下で１時間撹拌し、いくらかの泡立ち（−ｔ−ＢｕＯＨ）が観察された。真空をＡｒと交換し、次いで２．２０ｇの１１（５．００ｍｍｏｌ、１当量）を未希釈で一度に加えた。２８．６℃への発熱が観察された。フラスコを排気し／Ａｒで満たし（３×）、次いで光から保護し周囲温度でハウスバキューム（ｈｏｕｓｅ  ｖａｃｕｕｍ）下で撹拌した。６．５時間後、真空をＡｒと交換し、ＨＰＬＣのために試料を取り出し、それは＜２％の未反応の１１を示した。次いで、フラスコを冷水バス中１８℃まで冷却し、１．７２ｍＬの氷ＨＯＡｃ（３０ｍｍｏｌ、６当量）を次いでシリンジによって約１０分に亘り加えた。２０．５℃への発熱が観察された。混合物を１０分間撹拌し、次いで十分に撹拌した３０ｍＬのＨ2Ｏ溶液（約０．００１ＭのＨＣｌ）（ｐＨ３．５）を含有した第２のフラスコに１５分に亘り１８℃にて滴下で添加し、沈殿物が直ちに形成され、２１．０℃に発熱した。２．０ｍＬのＤＭＳＯを使用して、水性混合物中に残渣を洗浄し、それに続いて５．０ｍＬのＨＣｌ（約０．００１Ｍ）で洗浄した。このように得られた懸濁液を１５分間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃ：ＭＴＢＥの１：１混合物（３０ｍＬ）を加え、混合物を１５分間激しくかき混ぜた。かき混ぜを停止し、相が分離した。急速な相分離および明らかな二相の形成（ラグ層なし）が見出された。次いで、下部水相を１：１のＥｔＯＡｃ：ＭＴＢＥ（３０ｍＬ）（同じ急速な分離）で再抽出し、有機抽出物を合わせ、保存した。水相を廃棄物として廃棄した。
【００５２】
次いで、有機溶液をＨ2Ｏ（３×３０ｍＬ）で洗浄し、再び全ての抽出によって相の急速な分離（ラグ層なし）がもたらされ、次いでＥｔＯＡｃを最小の撹拌可能な容量に蒸留した。次いで、残渣を３０ｍＬのＴＨＦ（２×）と共に共沸させ、再び最小の撹拌可能な容量に蒸留した。粗製物１８の生成したスラリーは、ペプチドカップリングにおいて直ちに使用した。Ｃ34Ｈ42ＢｒＮ5Ｏ8Ｓについての正確な質量：計算値７５９．１９；実測値（ＭＳ−）：７５７．９２。
【００５３】
ＳNＡｒプロトコル２：１．００ｇの１３（２．５９ｍｍｏｌ、１当量）および１．３５ｇの１１（２．５９ｍｍｏｌ、１当量）を、乾燥フラスコに充填した。次いで、フラスコを排気し／Ａｒで満たし（３×）、次いで１０ｍＬの乾燥ＤＭＳＯをシリンジによって加えた。フラスコを再び排気し／Ａｒで満たし（３×）、次いで冷水バスで１９℃に冷却した。次いで、この混合物に、ＫＤＭＯ／ヘプタンの２Ｍ溶液（５．７１ｍＬ、１１．７ｍｍｏｌ、４．５当量）を３０分に亘り滴下で添加した。６時間後、ＨＰＬＣは、反応が完了したことを示した。反応物を０．８９ｍＬのＨＯＡｃ（６当量）でクエンチし、２５ｍＬの撹拌したＨ2Ｏにゆっくりと加え、沈殿物が形成した。次いで、混合物をＩＰＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出した。合わせたＩＰＡｃ相をＨ2Ｏ（１×２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、溶媒を真空中で除去し、固体を得て、それをＭｅＣＮ（１×２５ｍＬ）と共に共沸させ、次いでヘプタンで希釈し、スラリーを得た。スラリーを濾過し、乾燥させ、１．８０ｇの１８（９１％）を得た。
【００５４】
ペプチドカップリングプロトコル１：ＳNＡｒプロトコル１からの粗製物１８のＴＨＦスラリー（５．００ｍｍｏｌ、１当量とする）に、Ａｒ下にて周囲温度で光から保護したフラスコ中で、１．７２ｇの１４（５．５ｍｍｏｌ、１．１当量）および２５ｍＬのＴＨＦを加えた。次いで、溶液をＡｒ下で５℃に冷却し、次いで０．９５８ｍＬのＤＩＥＡ（５．５０ｍｍｏｌ、１．１当量）をシリンジによって５分に亘り滴下で添加した。ＤＩＥＡ添加が完了した５分後、０．８５ｇのＨＯＢＴ水和物（６．００ｍｍｏｌ、１．２当量）、および１．０５ｇのＥＤＣ（５．５０ｍｍｏｌ、１．１当量）を、次いで未希釈で一度に加えた。次いで、フラスコを冷バスから取り除き、生成した混合物を次いで周囲温度でＡｒ下にて４時間撹拌した。試料をＨＰＬＣのために取り出したが、それは残った＜２％の未反応１８を示した。混合物を５℃に冷却し、次いで４０ｍＬのＨＣｌ（０．１Ｎ）を添加漏斗によって５分に亘り滴下で添加し、続いて４０ｍＬのＥｔＯＡｃを加えた。混合物を１５分間十分にかき混ぜ、次いでかき混ぜを停止し、相を分離した。次いで、下部水相を４０ｍＬのＥｔＯＡｃで再抽出し、有機相を合わせ、保存した。水相は廃棄物として廃棄した。次いで、有機溶液をＨ2Ｏ（１×４０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ3（２×４０ｍＬ）、再びＨ2Ｏ（１×４０ｍＬ）で洗浄し、次いで最小の撹拌可能な容量に蒸留した。次いで、残渣をＭＴＢＥ（２×４０ｍＬ）と共に共沸させ、最小の撹拌可能な容量に再び蒸留した。残渣を高真空下にて乾燥させ、４．７０ｇの粗製物１９をオレンジ色の固体として得た（ＨＰＬＣ純度７８．３％）。次いで、この材料を２：１のＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出するシリカゲル上でクロマトグラフィーにかけ、３．０１ｇ（２ステップに亘り６８％）の純粋な１９を黄色の粉末として得た。Ｃ41Ｈ51ＢｒＮ6Ｏ9Ｓについての正確な質量：計算値８８２．２６、ＭＳ＋：８８３．３０。1H NMR (400 MHz, DMSO, 報告されている主要な回転異性体) δ: 12.32 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.14 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.33 (d, J= 9.4 Hz, 1H), 6.97 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 5.65 (m, 1H), 5.40 (s, 1H), 5.20 (dd, J= 1.5, 17 Hz, 1H), 5.06 (dd, J= 1.6, 10.2 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 4.46 (m, 1H), 4.37 (d, J= 9 Hz, 1H), 4.08 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.90 (m, 1H), 3.56 (s, 3H), 2.81 (m, 1H), 2.51 (m, 1H), 2.25 (m, 1H), 2.07 (m, 1H), 1.70-1.32 (m, 7H), 1.30 (m, 3H), 1.15 (d, J= 8.1 Hz, 6H), 0.95 (s, 9H).
【００５５】
ペプチドカップリングプロトコル２：機械式撹拌機、添加漏斗、および熱電対を取り付けた５Ｌの四つ口ＲＢＦを、６９．５７ｇの１４（２２２ｍｍｏｌ、１．３当量）で充填し、次いで排気し／Ａｒで満たした（３×）。次いで、これに、１８のＴＨＦ溶液（２００ｍＬ）（１２９．８５ｇ、１７１ｍｍｏｌ、１当量を含有）を加え、次いで５２３ｍＬのＴＨＦを充填し、最終ＴＨＦ容量を１Ｌとした。次いで、混合物をＡｒ下で４．０℃に冷却した。次いで、３８．６７ｍＬのＤＩＥＡ（２２２ｍｍｏｌ、１．３当量）を添加漏斗によって１０分に亘り滴下で添加し、内部温度は２．４℃に下がった。混合物を５分間熟成させ、次いで２９．９８ｇのＨＯＢＴ・Ｈ2Ｏ（２２２ｍｍｏｌ、１．３当量）を加え、続いて４２．５７ｇのＥＤＣ（２２２ｍｍｏｌ、１．３当量）を加えた。内部温度はその時３．６℃であった。次いで、バスを取り除いた。内部温度は９０分に亘り２０．５℃に上昇した。ＥＤＣ添加が完了した４時間後、ＨＰＬＣは反応が完了したことを示した。混合物を４．０℃に冷却し、次いで７５０ｍＬのＨＣｌ（０．１Ｎ）を３０分に亘り添加漏斗によって加え、９．５℃に発熱した。次いで、この混合物に、２５０ｍＬの飽和ＮａＣｌ、続いて１ＬのＩＰＡｃを加えた。５分間激しく撹拌した後、混合物を分液漏斗に加え、相を分離した。次いで、下部水相を５００ｍＬのＩＰＡｃで再抽出し、ＩＰＡｃ相を合わせた。次いで、これらをＨ2Ｏ（１×１Ｌ）、飽和ＮａＨＣＯ3（１×１Ｌ）、次いでＨ2Ｏ（１×１Ｌ）で連続的に洗浄した。次いで、混合物を１２時間機械撹拌し、キノロン７が沈殿した。次いで、混合物を中程度のガラス漏斗を通して濾過し、最小の撹拌可能な容量が達成されるまで濾液を蒸留した。次いで、残渣をＭＴＢＥ（２×４００ｍＬ）と共に共沸させ、最小の撹拌可能な容量に再び蒸留した。残渣を高真空下にて乾燥させ、１２８ｇの１９を黄色の固体として得た（８９％のＨＰＬＣ純度）。
【００５６】
１４０ｍｇの１９（０．１５８ｍｍｏｌ、１当量）を、周囲温度でＮ2下、１．６ｍＬのＴＨＦおよび０．８０ｍＬのＭｅＯＨに溶解した。次いで、この溶液に、０．７９ｍＬのＬｉＯＨ（１．２７ｍｍｏｌ、８当量）（１．６Ｍ）を５分に亘り滴下で添加した。１．５時間後、有機溶媒を真空中で除去し、残渣を１０ｍＬのＥｔＯＡｃおよび１０ｍＬの飽和ＮａＣｌで希釈した。次いで、１ＮのＨＣｌでｐＨを５．７５に調節した。混合物を１時間激しくかき混ぜ、次いで相を分離した。水相を１０ｍＬのＥｔＯＡｃで再抽出した。次いで、合わせたＥｔＯＡｃ相をＨ2Ｏ（２×２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、溶媒を真空中で除去し、１２５ｍｇの化合物（１）（９１％）をアモルファスの黄色い粉末として得た。
【００５７】
例５−アモルファス化合物（１）へのトリペプチドＳNＡｒアプローチ
【化９】
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２３３ｍｇのトリペプチド酸１６（０．５０ｍｍｏｌ）をフラスコに充填し、次いでフラスコを排気し／Ａｒで満たした（３×）。次いで、１．７ｍＬのＤＭＳＯを加え、混合物を排気し／Ａｒで満たした（３×）。次いで、混合物を冷水バス中で冷却し、次いで３１７ｍｇのｔ−ＢｕＯＫ（２．８２ｍｍｏｌ、５．６３当量）を加えた。フラスコを再び排気し／Ａｒで満たし（３×）、次いで６０ｍｍ真空下で１時間撹拌した。次いで、２２０ｍｇのキノリン１１（０．５０ｍｍｏｌ、１当量）を加え、フラスコを排気し／Ａｒで満たし（３×）、次いで６０ｍｍ真空下で暗中周囲温度にて３時間撹拌した。次いで、０．３０ｍＬのＨＯＡｃを加え、次いでこのように得られた溶液を２５ｍＬのＨＣｌ（０．００１Ｍ）に加え、沈殿物が形成された。スラリーを濾過し、固体を２５ｍＬのＨ2Ｏで洗浄した。固体をＮ2下で２時間乾燥させ、次いでＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲル上でクロマトグラフィーにかけ、２２６ｍｇ（５２％）の化合物（１）をアモルファスの黄色の固体として得た。
【００５８】
アモルファス化合物（１）を調製するためのさらなる方法は、参照により本明細書に組み込まれている米国特許６，３２３，１８０号、同第７，５１４，５５７号および同第７，５８５，８４５号に見出すことができる。
【００５９】
例６−化合物（１）のタイプＡの調製
アモルファス化合物（１）（バッチ７、１３．８０ｇ）を、１０００ｍｌの三つ口フラスコに加えた。無水エタノール（２４８．９ｇ）を、フラスコに加えた。撹拌している間、フラスコの内容物を摂氏６０度／時間で摂氏約７４度に加熱した（固体は摂氏７４度で溶解しない）。次いで、水（２５７．４ｇ）を、このように得られたスラリーに４時間に亘り直線的に加え、その間撹拌し、温度を摂氏７４度に維持した。水の添加が完了した後、温度を周囲温度へと摂氏８度／時間で直線的に低下させ、次いで周囲温度で６時間維持し、その間撹拌した。このように得られた固体を濾過によって集め、１／１（ｗ／ｗ）のＥｔＯＨ／水（５０ｍｌ）で洗浄した。湿った固体は、Ｎ2をケークによって吸引することによって漏斗上で３０分間乾燥させた（この試料のＸＲＰＤ分析は、パターンがＥｔＯＨ溶媒和物と同様であることを示す）。次いで、固体を摂氏６５〜７０度にて真空（ＨｇでＰ＝２５）および窒素流下で１．５時間乾燥させた。このように得られた固体（１２．６ｇ、９５．５％補正収率）を、ＸＲＰＤによってタイプＡ化合物（１）であると確認した。
【００６０】
化合物（１）のタイプＡの独特のＸＲＰＤパターンおよびＤＳＣ曲線を、図１および２に示す。
【００６１】
例７−化合物（１）のナトリウム塩の調製−方法１
アモルファスの化合物（１）のナトリウム塩（２．１ｇ）および８．９０ｇのアセトンをバイアルに加え、周囲温度で３時間撹拌した。スラリーは濾過した母液であり、このように得られた固体を２０分間窒素流下で２０分間乾燥させた。１．５１ｇの化合物（１）の結晶性ナトリウム塩を固体として集めた。
【００６２】
例８−化合物（１）のナトリウム塩の調製−方法２
１５．６ｇの化合物（１）のタイプＡ、１７５ｍＬのアセトンおよび３．６ｍＬの水を２５０ｍｌの反応器に加え、摂氏５３度に加熱し、固体を溶解した。９００ｕｌのＮａＯＨ（１０．０Ｎ）を反応器に加え、溶液をタイプＡで種晶添加した。種晶添加した溶液を摂氏５３度で１０分間撹拌した。第２の９００ｕｌ部分のＮａＯＨ（１０．０Ｎ）を加え、系を摂氏５３度で３０分間撹拌し、その間にスラリーが発生した。スラリーを、１時間当たり摂氏１５度の冷却速度で摂氏１９度に冷却し、摂氏１９度で一晩保持した。最終的なこのように得られたスラリーを濾過し、湿った固体を１５ｍＬのアセトンで洗浄した。固体を摂氏５２度で真空下にて１時間窒素流で乾燥させ、次いで固体を実験室の空気に１時間曝した。１２．１ｇの化合物（１）の結晶性ナトリウム塩固体を集めた。
【００６３】
例９−化合物（１）のナトリウム塩の調製−方法３
２５．４Ｋｇのアモルファス化合物（１）、２２８ＬのＴＨＦおよび１１．１Ｋｇの１０重量％ＮａＯＨ（水溶液）を、反応器に加えた。成分を摂氏２５度で混合し、全ての固体を溶解した。このように得られた溶液を濾過し、反応器およびフィルターを２３ＬのＴＨＦで洗浄した。１８０Ｌの溶媒は、摂氏６５度で常圧蒸留を使用して除去した。１９５ＬのＭＩＢＫを加え、１６６Ｌの溶媒は、摂氏約４４度で減圧蒸留によって除去した。１６１ＬのＭＩＢＫおよび０．４１Ｋｇの水を反応器に戻し、内容物を摂氏７０度に加熱した。２５５ｇの化合物（１）のナトリウム塩の種晶を摂氏７０度で加え、１．４２Ｌの水を１．５時間に亘り加えた。水を添加した後、スラリーを摂氏７０度で４５分間保持し、次いで摂氏４５度に１時間に亘り冷却した。このように得られたスラリーを濾過し、約０．８重量％の水を含有する６４ＬのＭＩＢＫで洗浄した。湿ったケークを摂氏５５度で乾燥させ、約２５Ｋｇの化合物（１）の結晶性ナトリウム塩を得た。
【００６４】
例１０−化合物（１）のナトリウム塩の調製−方法４
２．００ｇのアモルファス化合物（１）、９．９６ｇのＴＨＦおよび０．１１ｇの水を反応器に加え、周囲温度で撹拌し、固体を溶解した。エタノール中の２１重量％のＮａＯＥｔ（０．８２０ｍｌ）を滴下で添加し、その間溶液を撹拌し、溶液Ａを得た。１５．９ｇのｎ−ＢｕＡｃおよび１６０ｕｌの水を第２の反応器に加え、摂氏６５度に加熱した（溶液Ｂ）。２．５６ｇの溶液Ａを溶液Ｂに摂氏６５度で加え、このように得られた混合物を、４０ｍｇの化合物（１）のナトリウム塩の種晶で種晶添加した。種晶添加した混合物を摂氏６５度で４５分間熟成させた。４つの別々の間隔で２．５６ｇの溶液Ｂを溶液Ａに加え、４５分間熟成させた。最後の添加および熟成後に、スラリーを１時間に亘り摂氏５０度に冷却し、濾過した。湿ったケークを、０．５重量％の水を含有する６ｍＬのｎ−ＢｕＡｃで洗浄した。最終的な固体を、窒素パージを使用して摂氏５０度にて真空下で乾燥させた。化合物（１）の結晶性ナトリウム塩固体を集めた。
【００６５】
例１１−化合物（１）のナトリウム塩の調製−方法５
室温でナトリウムエトキシドのエタノール（２１重量％；３０６ｍｌ）溶液を、化合物（１）（７４５ｇ）のＴＨＦ（２０００ｍｌ）および水（７６．５ｍｌ）溶液に加え、その間撹拌した。３０分間撹拌した後、混合物を濾過し、フィルターをＴＨＦ（８５ｍｌ）で洗浄した。このように得られた溶液を６５℃に温め、濾過した酢酸ブチル（６６４０ｍｌ、６５℃に事前に温めてもよい）で３０分以内に処理した。種結晶（０．５０ｇ）を加え、混合物を６５℃で２時間撹拌し、その間約３０分後に結晶化が開始した。懸濁液を１時間以内に５０℃に冷却し、この温度でさらに１時間撹拌した。表題化合物を濾過によって単離し、濾過した酢酸ブチル（７６５ｍｌ、５０℃に事前に温めてもよい）で洗浄し、６５℃で約１６時間乾燥させ、化合物（１）の結晶性ナトリウム塩（約７２５ｇ）を得た。
【００６６】
化合物（１）の結晶性ナトリウム塩の独特のＸＲＰＤパターンおよびＤＳＣ曲線を図３および４に示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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