(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物またはその塩。
【化１】
0005387567.tif 000021
【請求項２】
請求項１に記載の化合物の塩がアルミニウムまたは鉄との塩である、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物の塩がアルミニウムとの塩である、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項４】
受託番号がFERM BP-10916のアクレモニウム・ペルシシヌムMF-347833株（Acremonium persicinum MF-347833株）に記載の菌株を培養し、その培養ブロスを抽出・精製することにより得られる、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項５】
真菌アクレモニウム属に属する菌株を培養し、その培養ブロスから式（Ｉ）の化合物を単離することを含む、請求項１に記載の化合物またはその塩の製造方法。
【請求項６】
真菌アクレモニウム属に属する菌株が受託番号がFERM BP-10916のアクレモニウム・ペルシシヌムMF-347833株（Acremonium persicinum MF-347833株）である、請求項５に記載の製造方法。
【請求項７】
請求項１に記載の化合物の塩がガリウムとの塩である、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項８】
請求項１に記載の化合物またはその塩、および製薬学的に許容される賦形剤を含有する医薬組成物。
【請求項９】
請求項１に記載の化合物またはその塩を含有する真菌症の予防用若しくは治療用医薬組成物。
【請求項１０】
真菌症の予防若しくは治療用医薬組成物の製造のための請求項１に記載の化合物またはその塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬組成物、真菌症、殊に深在性真菌症の治療用医薬組成物の有効成分として有用な環状化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
深在性真菌症は、抗生物質を患者に長期間投与した場合に、標的としている病原菌は除かれるが、抗生物質の効かない真菌が増加することにより発症する（ここで、生き残った真菌が異常に増殖する現象は、いわゆる菌交代現象と呼ばれる）、あるいは、高齢患者、手術後の患者、または抗がん剤や免疫抑制剤を投与された患者は、生体防御機能が抑制されている為に真菌に感染し易くなり、その真菌が増殖して発症すると考えられている。【０００３】
深在性真菌症の治療薬としては、１）真菌のＤＮＡ合成阻害作用をメカニズムとする核酸塩基系薬剤であるフルシトシンや、２）真菌の細胞膜の合成阻害作用をメカニズムとするポリエンマクロライド系薬剤であるアンホテリシンＢ、イミダゾール系薬剤であるミコナゾール、そしてトリアゾール系薬剤であるフルコナゾール等の抗真菌剤がある。【０００４】
ところで、以下に示す、３個のオルニチンにより構成されている環状ヘキサペプチドであるフェリクローム（Ferrichrome）が知られている（非特許文献１）が、当該文献にはフェリクロームが抗真菌活性を有するという記載はない。【０００５】
【化１】
0005387567.tif 000002
【０００６】
【非特許文献１】Journal ofAmerican Chemical Society, 102巻, pp.4224-4231, 1980年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
医薬組成物、真菌症、特に深在性真菌症治療用医薬組成物の有効成分として有用な化合物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、天然に存在する微生物が生産する抗真菌作用を有する化合物について鋭意検討した結果、真菌アクレモニウム・ペルシシヌムMF-347833株と称する菌株が、優れた抗真菌作用を有する化合物を生産することを見出した。さらに、当該菌株の培養液を詳細に検討し、本菌株の培養液より優れた抗真菌作用を有する環状化合物を単離することに成功し、本発明を完成させた。【０００９】
即ち、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその塩、並びに、式（Ｉ）の化合物またはその塩、および賦形剤を含有する医薬組成物に関する。【００１０】
【化２】
0005387567.tif 000003
【００１１】
また、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその塩を含有する真菌症治療用医薬組成物、即ち、式（Ｉ）の化合物またはその塩を含有する真菌症治療剤に関する。
また、本発明は、真菌症治療用医薬組成物の製造のための式（Ｉ）の化合物またはその塩の使用、並びに、式（Ｉ）の化合物またはその塩の有効量を患者に投与することを含む真菌症治療方法に関する。
【発明の効果】
【００１２】
式（Ｉ）の化合物またはその塩は、真菌症、特に、深在性真菌症等の予防および／または治療剤として使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、化合物Ａの1H-NMRスペクトルのチャートである。（測定溶媒はd6-DMSO）
【図２】図２は、化合物Ａの13C-NMRスペクトルのチャートである。（測定溶媒はd6-DMSO）
【図３】図３は、化合物Ｂの1H-NMRスペクトルのチャートである。（測定溶媒はd6-DMSO）
【図４】図４は、化合物Ｂの13C-NMRスペクトルのチャートである。（測定溶媒はd6-DMSO）
【図５】図５は、化合物Ｄの1H-NMRスペクトルのチャートである。（測定溶媒はd6-DMSO）
【図６】図６は、化合物Ｄの13C-NMRスペクトルのチャートである。（測定溶媒はd6-DMSO）
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明化合物は、塩基との塩を形成する場合もある。かかる塩としては、具体的には、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等の無機塩基、メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン、リジン、オルニチン等の有機塩基との塩等が挙げられる。また、塩は、いわゆる錯塩やキレート化合物も包含する。かかる塩を形成する金属としては２価または３価の金属が挙げられ、例えば、鉄、アルミニウム、ガリウム等が挙げられる。
以下、本明細書において、
式（Ｉ）の化合物のFree体を化合物Ａ、
式（Ｉ）の化合物のアルミニウム塩を化合物Ｂ、
式（Ｉ）の化合物の鉄塩を化合物Ｃ、
式（Ｉ）の化合物のガリウム塩を化合物Ｄ、
と記載することがある。【００１５】
式（Ｉ）の化合物には幾何異性体が存在しうる。本明細書中、式（Ｉ）の化合物が異性体の一形態のみで記載されることがあるが、本発明はそれ以外の異性体も包含し、異性体の分離されたもの、あるいはそれらの混合物も包含する。
また、式（Ｉ）の化合物には、不斉炭素原子を有する場合があり、これに基づく光学異性体が存在しうる。本発明は、式（Ｉ）の化合物の光学異性体の分離されたもの、あるいはそれらの混合物も包含する。【００１６】
さらに、本発明は、式（Ｉ）で示される化合物の製薬学的に許容されるプロドラッグも包含する。製薬学的に許容されるプロドラッグとは、加溶媒分解によりまたは生理学的条件下で、オキシム基等に変換されうる基を有する化合物である。【００１７】
さらに、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその塩の各種の水和物や溶媒和物、および結晶多形の物質も包含する。また、本発明は、種々の放射性または非放射性同位体でラベルされた化合物も包含する。【００１８】
式（Ｉ）の化合物またはその塩を産生する微生物の菌学的性質を以下に示す。
（１）生産菌の由来
真菌アクレモニウム属MF-347833株はマレーシアのジョホール州、Endau Rompin国立公園内で採集された落葉腐植物から分離された。本菌株は独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（あて名：〒305-8566  日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１  中央第６）に受託番号FERM
BP-10916（受託日2007年10月10日）として寄託されている。【００１９】
（２）生産菌の形態学的性質
形態的特徴はポテトデキストロース寒天培地上での形態を観察して判定した。ポテトデキストロース寒天培地（Difco社製2010）上での生育は旺盛で、25℃で2週間後に直径39-41mmにまで拡がり、分生子の形成も見られた。集落表面は羊毛状（floccose）であり、集落周縁は波状（undulate）であった。中央部から周縁部に数本の放射状の溝を生じたが、表面から溝は確認し難かった。集落の色は白色（white, 1A1）だが中央部はやや薄い白黄色（yellowish white,
4A2）であった。集落裏面では中央部から周縁部に放射状に生じた溝を確認できた。色は全体的に薄ベージュ色（Ivory,
4A3）だが、集落中央部の色は薄茶色（mustard brown, 5E6）であった。30℃での2週間後の集落の直径は約24mmであり、5℃と37℃では生育は認められなかった。【００２０】
なお、コーンミール寒天培地（Difco社製0386）上での生育も旺盛で、25℃で2週間後の直径は39-40mmまで拡がった。集落表面はフェルト状（felty）であった。集落周縁は波状（undulate）で集落に溝は生じなかった。集落の色は白色（white, 1A1）であった。集落裏面の色も白色（white, 1A1）であった。30℃で2週間培養した後の集落の直径は14mmであった。集落表面に溝は生じなかった。5℃と37℃において生育は認められなかった。【００２１】
栄養菌糸の太さは1.8-2.7μmであり、厚膜胞子は観察されなかった。分生子柄は分枝せず、無色で1本の栄養菌糸、あるいは結束の緩い分生子束から生じた。分生子柄の表面には小さなイボ状の突起が多数存在し、分生子柄の根元には隔壁を生じた。分生子形成様式はフィアロ型で分生子柄の根元からフィアライドの先端までの長さは33-40μmであった。分生子は無色で楕円形であった。大きさは3.7-4.5×2.8-3.2μm（平均4×3μm）であった。やや粘性をもち、フィアライドの先端で分生子塊となった。分生子の表面は光学顕微鏡（400倍）では滑面に見えたが、電子顕微鏡（9000倍）で観察すると荒い凹凸模様が確認できた。【００２２】
これらの形態的特徴は、本菌がアクレモニウム属に属する可能性を示唆するものである。このため、Cephalosporium-artige Schimmelpilze (Hyphomycetes)/Walter Gams
(1971)で比較検討した結果、Gliomastix節のアクレモニウム・ペルシシヌムの形態的特徴とよく一致した。また、本菌の28SrDNAと18SrDNAを相同性検索した結果、Gliomastix節のアクレモニウム・ペルシシヌムのクレードに含まれることから、形態的にも遺伝子的にも矛盾が無かった。従って、本菌をアクレモニウム・ペルシシヌムと同定し、アクレモニウム・ペルシシヌムMF-347833株と称した。【００２３】
（３）培養特性
培養特性は、市販の培地、および文献に記載の組成で調製した培地で判定した。ポテトデキストロース寒天培地はDifco社2010、サブローデキストロース寒天培地はDifco社0109、Emerson
YpSs寒天培地はDifco社0739、コーンミール寒天培地はDifco社0386、オートミール寒天培地はDifco社0552をそれぞれ購入した。麦芽抽出寒天培地、ツァペック氏液寒天培地、MY20寒天培地の組成は、JCMカタログ（Nakase,T. 6th ed., pp.617, Japan Collection of Microorganisms, the Institute of Physical and Chemical Research, Saitama, 1995）に従った。【００２４】
真菌MF-347833株は、各寒天培地に接種してから、25℃で14日間培養した後に観察した。色調の記載はMethuen Handbook of
Colour（Kornerup, A. and J.H.Wanscher, 3rd ed., pp.252, Methuen, London, 1987）を参照した。生育温度に関してはポテトデキストロース寒天培地（Difco社製2010）上で判定した。【００２５】
【表１】
0005387567.tif 000004
【００２６】
なお、本菌株は人工的にまたは自然に変異を起こすこともあり、本発明において用いられる真菌アクレモニウム・ペルシシヌムMF-347833株は、天然から分離された微生物の他に、これに紫外線、放射線、化学薬剤などで人工的に変異させたものおよびそれらの天然変異株についても包含する。【００２７】
（生産方法）
本発明化合物は、本発明化合物の生産能を有するアクレモニウム属の微生物を培養して得られる。培養は、一般微生物の培養方法に準じて行われる。
培地としては、真菌アクレモニウム・ペルシシヌムMF-347833株が利用する栄養源を含有する培地であればよく、合成培地、半合成培地または天然培地が用いられる。培地の組成は、例えば炭素源としては、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、シュークロース、イノシトール、Ｌ−ラムノース、ラフィノース、Ｄ−マンニトール、マンノース、メリビオース、ラクトース、Ｄ−ガラクトース、マルトース、トレハロース、サリシン、キサンチン、キチン、デンプン、ブドウ糖、デキストリン、グリセリン、植物油等が、窒素源としては肉エキス、ペプトン、グルテンミール、綿実粕、大豆粉、落花生粉、魚粉、コーンスチーブリカー、乾燥酵母、酵母エキス、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿酸その他の有機、無機の窒素源が用いられる。また、金属塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、亜鉛、コバルトなどの硫酸塩、硝酸塩、炭酸塩、リン酸塩などが必要に応じて添加される。さらに、必要に応じてメチオニン、システイン、シスチン、チオ硫酸塩、オレイン酸メチル、ラード油、シリコーン油、界面活性剤などの生成促進物質または消泡剤を添加することもできる。
培養条件としては、好気的条件下で培養するのが一般的に有利で、培養温度は8.9〜31.2℃の範囲、好ましくは26.0〜27.6℃付近で行われる。培養期間は培地の組成、温度条件に応じて適宜設定されるが、通常1〜30日程度、好ましくは2〜7日程度である。【００２８】
培養物から本発明化合物を精製して単離するには、通常の微生物の培養物から生理活性物質を精製して単離する方法が適用される。即ち、培養物から適当な有機溶媒で抽出し、その抽出物から、精製して有効物質を単離する。すなわち、抗真菌活性を指標として、適当な溶剤に対する溶解性および溶解度の差等を利用する一般の生理活性物質の製造に用いられる手段によって、分離、精製される。これらの方法は必要に応じて単独に用いられ、または任意の順序に組合せ、反復して適用できる。その他に精製法としては、培養物をそのまま、あるいは遠心分離またはろ過して菌体を除去した後、適当な溶剤に対する溶解性および溶解度の差、溶液からの析出速度の差、種々の吸着剤に対する吸着親和性の差、２種の液相間における分配の差等を利用する方法を適用することができる。具体的には例えば、培養液を適宜の担体に接触させて該化合物を吸着させ、ついで適当な溶媒で溶出することにより該化合物を精製する方法を挙げることができる。これらの方法は必要に応じて単独に用いられ、または任意の順序に組合せ、反復して適用できる。【００２９】
本発明化合物である、式（Ｉ）の化合物の塩は、式（Ｉ）の化合物に、無機塩（例えば、AlK(SO4)2・12H2O、FeCl3・6H2O、Ga2(SO4)3・nH2O等）を、反応に影響を及ぼさない溶媒中で、室温から加温条件下に反応させることにより製造することもできる。溶媒の例としては、特に限定はされないが、メタノール等のアルコール類を含有する水溶液が挙げられる。反応温度としては、10℃〜50℃が好ましい。【００３０】
本発明の環状化合物（Ｉ）またはその塩は、該物質生産菌を栄養培地にて培養し、該化合物を蓄積させた培養物から常法によって得られる。該化合物の製造方法において使用する微生物は、アクレモニウム属に属し、該化合物の生産能を有する微生物であればいずれも用いることができる。【００３１】
式（Ｉ）の化合物またはその塩の１種または２種以上を有効成分として含有する医薬組成物は、当分野において通常用いられている賦形剤、即ち、薬剤用賦形剤や薬剤用担体等を用いて、通常使用されている方法によって調製することができる。
投与は錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等による経口投与、または、関節内、静脈内、筋肉内等の注射剤、坐剤、点眼剤、眼軟膏、経皮用液剤、軟膏剤、経皮用貼付剤、経粘膜液剤、経粘膜貼付剤、吸入剤等による非経口投与のいずれの形態であってもよい。【００３２】
経口投与のための固体組成物としては、錠剤、散剤、顆粒剤等が用いられる。このような固体組成物においては、１種または２種以上の有効成分を、少なくとも１種の不活性な賦形剤、例えば乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、および／またはメタケイ酸アルミン酸マグネシウム等と混合される。組成物は、常法に従って、不活性な添加剤、例えばステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤やカルボキシメチルスターチナトリウム等のような崩壊剤、安定化剤、溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤または丸剤は必要により糖衣または胃溶性若しくは腸溶性物質のフィルムで被膜してもよい。
経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤またはエリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水またはエタノールを含む。当該液体組成物は不活性な希釈剤以外に可溶化剤、湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。【００３３】
非経口投与のための注射剤は、無菌の水性または非水性の溶液剤、懸濁剤または乳濁剤を含有する。水性の溶剤としては、例えば注射用蒸留水または生理食塩液が含まれる。非水性の溶剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコールまたはオリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、またはポリソルベート80（局方名）等がある。このような組成物は、さらに等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、または溶解補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合または照射によって無菌化される。また、これらは無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水または無菌の注射用溶媒に溶解または懸濁して使用することもできる。【００３４】
外用剤としては、軟膏剤、硬膏剤、クリーム剤、ゼリー剤、パップ剤、噴霧剤、ローション剤、点眼剤、眼軟膏等を包含する。一般に用いられる軟膏基剤、ローション基剤、水性または非水性の液剤、懸濁剤、乳剤等を含有する。例えば、軟膏またはローション基剤としては、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、白色ワセリン、サラシミツロウ、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、モノステアリン酸グリセリン、ステアリルアルコール、セチルアルコール、ラウロマクロゴール、セスキオレイン酸ソルビタン等が挙げられる。【００３５】
吸入剤や経鼻剤等の経粘膜剤は固体、液体または半固体状のものが用いられ、従来公知の方法に従って製造することができる。例えば公知の賦形剤や、更に、pH調製剤、防腐剤、界面活性剤、滑沢剤、安定剤や増粘剤等が適宜添加されていてもよい。投与は、適当な吸入または吹送のためのデバイスを使用することができる。例えば、計量投与吸入デバイス等の公知のデバイスや噴霧器を使用して、化合物を単独でまたは処方された混合物の粉末として、もしくは医薬的に許容し得る担体と組み合わせて溶液または懸濁液として投与することができる。乾燥粉末吸入器等は、単回または多数回の投与用のものであってもよく、乾燥粉末または粉末含有カプセルを利用することができる。あるいは、適当な駆出剤、例えば、クロロフルオロアルカン、ヒドロフルオロアルカンまたは二酸化炭素等の好適な気体を使用した加圧エアゾールスプレー等の形態であってもよい。【００３６】
通常経口投与の場合、１日の投与量は、体重当たり約0.01〜100mg/kg、好ましくは0.1〜10mg/kgが適当であり、これを１回であるいは２回〜４回に分けて投与する。静脈内投与される場合は、１日の投与量は、体重当たり約0.01〜100mg/kgが適当で、１日１回〜複数回に分けて投与する。投与量は症状、年令、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定される。【００３７】
式（Ｉ）の化合物またはその塩は、前述の式（Ｉ）の化合物またはその塩が有効性を示すと考えられる疾患の種々の治療剤または予防剤と併用することができる。当該併用は、同時投与、或いは別個に連続して、若しくは所望の時間間隔をおいて投与してもよい。同時投与製剤は、配合剤であっても別個に製剤化されていてもよい。
【実施例】
【００３８】
以下、実施例に基づき、式（Ｉ）の化合物またはその塩の製造法をさらに詳細に説明する。なお、本発明は、下記実施例に記載の化合物に限定されるものではない。また、式（Ｉ）の化合物またはその塩の製造法は、以下に示される具体的実施例の製造法のみに限定されるものではなく、式（Ｉ）の化合物またはその塩はこれらの製造法の組み合わせ、あるいは当業者に自明である方法によっても製造されうる。【００３９】
また、実施例、製造例、および後記表中において、以下の略号を用いることがある。【００４０】
【表２】
0005387567.tif 000005
【００４１】
実施例１
（化合物Ａの培養生産）【００４２】
種培地１（表３を参照、30mL）を三角フラスコ（サイズ：100mL）に分注し、オートクレーブで滅菌した（121℃、30分）。この種培地1に真菌MF-347833株の斜面培養物（スラント培養物）を一白金耳分、無菌的に植菌し、25℃で4日間、ロータリーシェーカーで振盪培養した（220rpm）。次に、生産培地１（表４を参照、100mL）を三角フラスコ（サイズ：500mL）に分注し、オートクレーブで滅菌した（121℃、30分）。このフラスコに種培養物（2mL）を無菌的に植菌し、25℃で7日間、ロータリーシェーカーで振盪培養（220rpm）した。培養はHPLCで分析しながら行った（分析HPLC1、条件は表５を参照）。【００４３】
【表３】
0005387567.tif 000006
【００４４】
【表４】
0005387567.tif 000007
【００４５】
【表５】
0005387567.tif 000008
【００４６】
（化合物Ａの単離精製）
上記の培養方法で得られた培養物（2.6L）に等量のアセトンを添加し、１時間撹拌後、ろ過して培養抽出物を得た。その培養抽出液に２倍量の水を加え、Diaion SP 850カラム（サイズ：400mL、三菱ケミカル社製）に通液し、混合溶媒｛アセトン：水=30：70（v/v）、1.9L｝で溶出した。
この溶出液に水（2.1L）を加え、Daisogel SP-120-ODS-Bカラム（サイズ：350mL、15/30μm、DAISO社製）に通液し、混合溶媒｛MeCN：水=25：75（v/v）、340mL｝で溶出した。
この溶出液に水（350mL）を加え、OASIS HLBカートリッジ（サイズ：6g、Waters社製）に通液し、MeOH（150mL）で溶出した。この溶出液を減圧濃縮し、アセトンを添加し沈殿物を得た。この沈殿物を乾燥して黄色粉末（100mg）を得た。【００４７】
この黄色粉末（15mg）を少量のMeOHに溶解し、分取HPLC1で精製した（条件は表６を参照）。溶出時間が約22分のピークを分取した。このフラクションに等量の水を加え、OASIS HLBカートリッジ（サイズ：500mg）に通液し、水（50mL）を通液した後、MeOH（50mL）で溶出した。この溶出液を減圧濃縮し、アセトンを添加して沈殿物を得た。この沈殿物を乾燥し、化合物Ａ（13mg）を白色粉末として得た。【００４８】
【表６】
0005387567.tif 000009
【００４９】
（化合物Ａの物理化学的性質）
上記の手法で精製単離した化合物Ａは、以下の物理化学的性質を示した。【００５０】
【表７】
0005387567.tif 000010
【００５１】
物理化学的性質から化合物Ａの化学構造は、以下の式（II）のように決定した。構成アミノ酸の立体配置については、改良マーフィー法を適用し、D-Phe,
L-Leu, L-Asnであると決定した。オルニチン部分に関しては、類似天然物のフェリクローム（非特許文献１）と比較し、アミノ酸分析から３つのアミノ酸が同一であることから、Ｌ−オルニチンであると推定した。【００５２】
【化３】
0005387567.tif 000011
【００５３】
実施例２
（化合物ＢおよびＣの培養生産）【００５４】
種培地２（表８を参照）を三角フラスコ（サイズ：100mL）に分注（30mL）し、オートクレーブで滅菌した（121℃、30分）。この培地に真菌MF-347833株の斜面培養物（スラント培養物）を一白金耳分、無菌的に植菌し、25℃で4日間、ロータリーシェーカー（220rpm）で振盪培養した。
次に、同じ組成の種培地（160mL）を三角フラスコ（サイズ：500mL）に分注し、オートクレーブで滅菌した（121℃、30分）。この種培地に種培養物（3.2mL）を無菌的に植菌し、25℃で3日間、ロータリーシェーカーで振盪培養（220rpm）した。
次に、生産培地２（表９を参照）を調製しておき、この生産培地２（20L）をジャーファーメンター（サイズ：30L）に注入し、滅菌（121℃、30分）後に種培養物（480mL）を無菌的に植菌した。培養条件は、通気量を20L/分、撹拌速度を200rpmとして、25℃で7日間培養した。培養はHPLCで分析しながら行った（分析HPLC2、条件は表１１を参照）。
なお、生産培地２の代わりに生産培地３を用いても同様の培養条件で生産できた。【００５５】
【表８】
0005387567.tif 000012
【００５６】
【表９】
0005387567.tif 000013
【００５７】
【表１０】
0005387567.tif 000014
【００５８】
【表１１】
0005387567.tif 000015
【００５９】
（化合物Ｂおよび化合物Ｃの単離精製）
上記の培養方法で得られた培養物（生産培地２：90L）に等量のアセトンを添加し、１時間撹拌後、ろ過して培養抽出物を得た。その抽出液に等量の水を加え、Diaion SP 850カラム（10L、三菱ケミカル社）に通液し、混合溶媒｛アセトン：水=40：60（v/v）、40L｝で溶出した。
この溶出液に等量の水を加え、Daisogel SP-120-ODS-Bカラム（15/30μm、サイズ：2L、DAISO社製）に通液し、混合溶媒｛MeCN：水=25：75（v/v）、7L｝で溶出した。
この溶出液に等量の水を加え、再度Daisogel SP-120-ODS-Bカラム（サイズ：2L）に通液し、混合溶媒｛MeCN：水=27.5：72.5（0.05 %TFAを含有）（v/v）｝で溶出した。
この溶出液に等量の水を加え、再度Daisogel SP-120-ODS-Bカラム（サイズ：180mL）に通液し、MeOHで溶出し、溶出液を減圧濃縮した。【００６０】
残渣を少量のMeOHに溶解し、分取HPLC2で精製した（条件は表１２を参照）。
溶出時間が約24〜25分のフラクションに等量の水を加え、OASIS HLBカートリッジ（サイズ：6g、Waters社製）に通液し、水（100mL）を通液した後、MeOH（100mL）で溶出した。この溶出液を減圧濃縮し、水に置換後、凍結乾燥することで、化合物Ｃ（130mg）を粉末として得た。この粉末を溶媒（MeOH、酢酸エチル、ｎ−ヘキサン）で結晶化し、化合物Ｃを橙色結晶として得た。
溶出時間が約19〜21分のフラクションも同様の操作で粉末とし、CHCl3に溶解後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（球状60N、中性、40-100μm、関東化学株式会社製；CHCl3：MeOH=10：1）で精製した。この溶出液を減圧濃縮し、水に置換後、凍結乾燥することにより、化合物Ｂ（150mg）を白色粉末として得た。この白色粉末（109mg）を溶媒（MeOH、酢酸エチル、ｎ−ヘキサン）で結晶化し、化合物Ｂ（90.1mg）を無色結晶として得た。【００６１】
【表１２】
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【００６２】
（化合物Ｂの物理化学的性質）
上記の手法で精製単離した化合物Ｂは、以下の物理化学的性質を示したことから、化合物Ａとアルミニウムが１：１の比率である化合物と推定した。【００６３】
【表１３】
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【００６４】
（化合物Ｃの物理化学的性質）
上記の手法で精製して単離した化合物Ｃは、以下の物理化学的性質を示したこと、および単結晶Ｘ線構造解析から、化合物Ａと鉄が１：１の比率である化合物と決定した。【００６５】
【表１４】
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【００６６】
実施例３
（化合物Ｄの製造）
化合物Ａ（4mg)を、MeOH（0.4mL）と水（0.4mL）の混合溶媒に溶解し、Ga2(SO4)3・nH2O（10mg）の水溶液（1.2mL）を加え、25℃で18時間攪拌した。反応液に水を（18mL）加え、OASIS HLBカートリッジ（Warters社製）に通液し、水（6mL）を通液した後、MeOH（4mL）で溶出した。この溶出液を減圧濃縮し、化合物Ｄ（4mg）を白色粉末として得た。【００６７】
（化合物Ｄの物理化学的性質）
上記の手法で製造した化合物Ｄは、以下の物理化学的性質を示したことから、化合物Ａとガリウムが１：１の比率である化合物と推定した。【００６８】
【表１５】
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【００６９】
実施例４
（抗真菌活性測定法）
以下の表に示した検定菌に対する抗真菌活性は、微量液体希釈法（久米光、山崎敏和著、臨床と微生物、21巻5号、573-580頁、1994年）を用いて測定した。その結果、化合物Ｂの各種検定菌に対する抗菌活性試験の結果を以下の表に記載した。【００７０】
【表１６】
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【００７１】
以上の試験の結果、式（Ｉ）の化合物またはその塩は抗真菌作用を有することが確認された。従って、式（Ｉ）の化合物またはその塩は、真菌症、特に深在性真菌症等、例えば副鼻腔炎真菌症の治療等に使用できる。
なお、例えば、フェリクローム（Sigmaより購入）は、アスペルギウス フミガーツスFP1305に対するMECが50μg/mL以上であった。【００７２】
実施例５
（細胞傷害性測定法）
細胞障害性は、マウスTリンパ腫細胞株であるEL-4細胞に試験薬剤を各種濃度で添加し、CO2インキュベーターにて37℃、72時間培養した後、セルカウンティングキット（和光純薬工業株式会社製）を用いて細胞数を測定し、IC50値を算出することで判定した。
その結果、例えば、化合物Ｂは、EL-4細胞に対して50μg/mLの濃度において細胞障害性を示さなかった。
【産業上の利用可能性】
【００７３】
式（Ｉ）の化合物またはその塩は、真菌症、特に、深在性真菌症等の予防および／または治療剤として使用できる。
以上、本発明を特定の態様に沿って説明したが、当業者に自明の変形や改良は本発明の範囲に含まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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