(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
オリゴメリックプロアントシアニジンを含有する松樹皮抽出物成分の吸収促進用の吸収促進剤であって、
スフィンゴ脂質を有効成分として含有してなり、
前記オリゴメリックプロアントシアニジンが、前記松樹皮抽出物中の固形分に対して２５質量％以上であり、かつ、前記松樹皮抽出物成分が、９０％以上の溶解率であることを特徴とする吸収促進剤。
【請求項２】
前記スフィンゴ脂質がスフィンゴ糖脂質である、請求項１に記載の吸収促進剤。
【請求項３】
前記松樹皮抽出物成分は、オリゴメリックプロアントシアニジンおよび高分子プロアントシアニジンを含有するものであり、
前記高分子プロアントシアニジン１質量部に対して、前記オリゴメリックプロアントシアニジンが０．９質量部以上の割合で含まれる、請求項１または２に記載の吸収促進剤。
【請求項４】
前記オリゴメリックプロアントシアニジンが、前記松樹皮抽出物中の固形分に対して３５質量％以上であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の吸収促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スフィンゴ脂質を有効成分とするプロアントシアニジンを含有する木本植物の樹皮抽出物成分の吸収促進剤に関する。詳細には、水に対して優れた溶解性を有するプロアントシアニジンを含有する木本植物の樹皮抽出物の吸収促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリフェノール、特にプロアントシアニジンは、活性酸素を除去する強い抗酸化作用を有する。プロアントシアニジンは、化学処理（例えば酸処理）をすればアントシアニジンを生じる化合物であり、フラバン−３−オール誘導体を構成単位とする縮重合体からなる化合物群である。近年、このようなプロアントシアニジンを多く含有する樹皮抽出物が注目されている。
【０００３】
しかし、この樹皮抽出物は、水に対して溶解性が低く、そのため、例えば、樹皮抽出物を液状の化粧品または飲料の材料として利用する場合、沈殿または白濁を生じるといった問題が生じる。このような問題は、製品の外観上好ましくなく、あるいは沈殿または白濁の原因であるプロアントシアニジンなどの成分の体内への吸収を阻害する。また、プロアントシアニジンは、例えば、非特許文献１に記載されているように、生体への吸収効率が悪いともいわれている。
【０００４】
そこで、樹皮抽出物の溶解性を高めるために種々の方法が検討されている。例えば、特許文献１には、ポリフェノール含量が高い樹皮抽出物と、所定量の糖質とを水溶液中に含有させることによって、ポリフェノールの水に対する溶解性を向上させ、結果として、樹皮抽出物の水に対する溶解性を高める方法が記載されている。しかし、上記方法は、糖質を添加することが必須であるため、事前に糖質を水に溶解させる工程が必要となる。この工程の追加により、製造工程が複雑となり、さらに糖質の追加は、特に食品（飲料）に用いる場合に摂取カロリーの増加につながるため、好ましくない。
【非特許文献１】“ポリフェノールの吸収代謝”、ＦＯＯＤ  Ｓｔｙｌｅ  ２１、２００３年３月、ｐ．３７
【特許文献１】特開２００３−２８４５２５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、プロアントシアニジンを含有する本木植物の樹皮抽出物成分の吸収促進剤を提供し、より詳細には、かつ水に対する溶解性が高められたプロアントシアニジン含有樹皮抽出物成分の吸収促進剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、プロアントシアニジンを含有する木本植物の樹皮抽出物成分の吸収を促進しえる成分について鋭意検討を行った。その結果、スフィンゴ脂質が優れた樹皮抽出物成分の吸収を促進し得ることを見出し、本発明に至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、プロアントシアニジンを含有する木本植物の樹皮抽出物成分の吸収促進剤であって、スフィンゴ脂質を有効成分とする吸収促進剤に関する。
【０００８】
好ましい実施様態においては、前記スフィンゴ脂質がスフィンゴ糖脂質である吸収促進剤に関する。
【０００９】
また、好ましい実施態様においては、上記樹皮抽出物の溶解率が９０％以上である。
【００１０】
さらに好ましい実施様態においては、オリゴメリックプロアントシアニジンおよび高分子プロアントシアニジンを含有する樹皮抽出物成分の吸収促進剤であって、該オリゴメリックプロアントシアニジンが、フラバン−３−オール誘導体の２量体から４量体の化合物であり、該高分子プロアントシアニジンが、フラバン−３−オール誘導体の５量体以上の化合物であり、該オリゴメリックプロアントシアニジンが、樹皮抽出物中の固形分に対して２５質量％以上含有されている樹皮抽出物である、吸収促進剤に関する。
【００１１】
好ましい実施態様においては、前記高分子プロアントシアニジン１質量部に対して、前記オリゴメリックプロアントシアニジンが０．９質量部以上の割合で含まれる、吸収促進剤に関する。
【００１２】
好ましい実施態様においては、さらに、カテキン類を、樹皮抽出物中の固形分に対して５質量％以上含有する、吸収促進剤に関する。
【００１３】
また、本発明の樹皮抽出物成分の吸収促進方法は、プロアントシアニジンを含有する木本植物の樹皮抽出物成分に、スフィンゴ脂質を添加することを特徴としている。
【発明の効果】
【００１４】
本発明のスフィンゴ脂質、特にスフィンゴ糖脂質は、プロアントシアニジンを含有する本木植物の樹皮抽出物成分の吸収促進効果を有し、これらは、経口または皮膚、粘膜などへの経皮へ投与することにより、抗酸化作用または血流改善作用といった樹皮抽出物成分の有する生理活性を増強することから、樹皮抽出物の吸収促進効果を有する。より詳細には、水に対する溶解性が高められたプロアントシアニジン含有樹皮抽出物を利用することにより、より優れた吸収促進効果を得ることができる。このような効果から、プロアントシアニジンを含有する本木植物の樹皮抽出物へスフィンゴ脂質を添加することによって、樹皮抽出物成分の吸収促進の方法としての利用も可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、本発明のスフィンゴ脂質および樹皮抽出物について説明する。なお、以下に説明する構成は、本発明を限定するものでなく、本発明の趣旨の範囲内で種々改変することができることは当業者に明らかである。
【００１６】
（スフィンゴ脂質）
本発明のスフィンゴ脂質とは、スフィンゴシンなどの長鎖塩基を共通構造成分として含む複合脂質であり、グリセロールを共通構造成分として含むグリセロ脂質とは異なる分類の脂質である。このスフィンゴ脂質には、スフィンゴシンに脂肪酸が酸アミド結合したＮ−アシルスンゴイドの１位の水酸基にさらに置換基として糖がグリコシド結合したスフィンゴ糖脂質（例えばセレブロシドなど）やリン酸とコリンなどの塩基が結合したスフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリンなど）に分類される。このようスフィンゴ脂質は、主に動物に見出される成分であるが、小麦、大豆、キノコ、コンニャクイモなどに見出されている。本発明では、このような中でも主に植物由来に多く存在するスフィンゴ糖脂質が好ましく、スフィンゴ糖脂質を植物より抽出した抽出物が好ましく、抽出物中にスフィンゴ糖脂質を０．０５質量％以上、より好ましくは０．１質量％〜９０質量％含有することが好ましい。
【００１７】
このようなスフィンゴ糖脂質を含有する抽出物は、公知の方法で調製することができる。例えば、溶媒（例えば、エタノール、メタノール、アセトン、ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル、２−プロパノールなどを単独あるいは前記の溶媒と水とを含む２種以上の混合溶媒）を用いて、動植物体より抽出することができる。特に、エタノールを溶媒として用いることが好ましい。抽出の温度は、４℃〜１３℃で行うことができるが、加熱を行って抽出する場合は溶媒が揮発するため、加熱還流を行うことが好ましい。また、抽出の時間は、加熱還流の場合は１２〜４８時間であが、溶媒に浸漬して室温で放置する場合は、３日〜１５日程度である。さらに、上記で得られた抽出物からスフィンゴ糖脂質を濃縮するために、必要に応じてアセトン沈殿分画を行う。使用する溶媒は、アセトン単独、またはヘキサン、エタノール、水のいずれか１種以上を５容量％以下の割合で含むアセトンの混合溶媒が挙げられる。アセトン沈殿分画の温度は、３０℃以下であることが好ましく、さらに、０℃以下であることが望ましい。前記のアセトン沈殿物は、デカンテーションあるいは遠心分離により分離してもよい。さらにこの画分は、弱アルカリ分解処理を行うことによりグリセロ糖脂質を除去することでさらにスフィンゴ糖脂質の含量を高めることもできる。弱アルカリ分解は、例えば、水酸化カリウムあるいは水酸化ナトリウムの溶液をとエタノールを混合容量比で、０．０１：９９．９９〜５０：５０で含有する含水エタノールを用いることが好ましい。また、アルカリ溶液濃度は、０．０５〜０．５Ｎであることが好ましい。弱アルカリ分解反応の温度と時間は、３０℃〜５０℃で、１〜６時間程度である。これらの処理の後に減圧濃縮などでスフィンゴ糖脂質を高含有する抽出物を得ることができる。
【００１８】
さらに、弱アルカリ分解後にスフィンゴ糖脂質を抽出することもでき、この場合の溶媒としては、メタノール、エタノール、あるいは含水メタノール、含水エタノールが挙げられる。溶媒の添加量は、抽出物１質量部に対して、１〜２０質量部添加して抽出することが可能である。
【００１９】
（樹皮抽出物）
本発明の樹皮抽出物は、オリゴメリックプロアントシアニジンおよび高分子プロアントシアニジンを含有する。本明細書においては、プロアントシアニジンを重合度によって分類する。すなわちフラバン−３−オール誘導体の２量体〜４量体の化合物をオリゴメリックプロアントシアニジン（ＯＰＣ）と、５量体以上の化合物を高分子プロアントシアニジンとする。フラバン−３−オール誘導体は、フラバン−３−オールを基本骨格とする化合物であり、例えば、フラバン−３−オール、フラバン−３，４−ジオール、フラバン−３，４−ジオール誘導体、カテキン類（ポリヒドロキシフラバン−３−オールの総称）などが挙げられる。
【００２０】
本発明の樹皮抽出物は、上記オリゴメリックプロアントシアニジン（ＯＰＣ）を樹皮抽出物中の固形分に対して２５質量％以上、好ましくは３０質量％以上、より好ましくは３５質量％以上、さらに好ましくは４０質量％以上、最も好ましくは４０質量％〜６０質量％含有する。ＯＰＣの含有量が高い方が、樹皮抽出物の水に対する溶解性は大きくなるという傾向がある。
【００２１】
上記樹皮抽出物は、水に対する溶解性が高い。そのため、水溶液の白濁および沈殿の発生が抑制される。具体的には、樹皮抽出物の溶解率が９０％以上、好ましくは９５％以上、より好ましくは９９％以上、さらに好ましくは９９．５％以上、最も好ましくは９９．７％以上である。なお、「溶解率」とは、樹皮抽出物が１質量／体積％となるように蒸留水に懸濁させ、ボルテックスで攪拌した後、室温（約２５℃）で６０分間放置した場合に濾滓として検出されない固形分の割合をいい、以下の式１で示される。
【００２２】
【数１】
0005398101.tif 000002
【００２３】
上記樹皮抽出物は、特に、高分子プロアントシアニジン１質量部に対して、ＯＰＣを０．９質量部以上の割合で含有することが好ましい。上記所定の比率以上でＯＰＣを含有する場合は、樹皮抽出物の水に対する溶解性が高まるため、水溶液中の白濁および沈殿の発生を顕著に抑制することができる。
【００２４】
本発明の樹皮抽出物は、さらに、カテキン類を含有することが好ましい。カテキン類とは、上述の通り、ポリヒドロキシフラバン−３−オールの総称である。カテキン類としては、（＋）−カテキン、（−）−エピカテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、エピカテキンガレートなどが挙げられる。さらに、天然物由来のアフゼレキン、ならびに（＋）−カテキンまたはガロカテキンの３−ガロイル誘導体も含む。カテキン類は、発癌抑制作用、動脈硬化予防作用、脂肪代謝異常の抑制作用、血圧上昇抑制作用、血小板凝集抑制作用、抗アレルギー作用、抗ウイルス作用、抗菌作用、虫歯予防作用、口臭防止作用、腸内細菌叢正常化作用、活性酸素やフリーラジカルの消去作用、抗酸化作用、血糖の上昇を抑制する抗糖尿病作用などを有することが知られている。カテキン類とＯＰＣとを共存させると、カテキン類の水溶性が増加される。そのため、体内へのカテキン類の吸収を容易にし得、カテキン類の上記作用が活性化されると考えられる。したがって、ＯＰＣとカテキン類とを含有する樹皮抽出物は、水に対する溶解性の高さを保持しつつ、さらに活性化されたカテキン類の生体に対する効果が得られるため、特に有用である。
【００２５】
カテキン類の含量は、特に制限されないが、好ましくは、樹皮抽出物中の固形分に対して５質量％以上含有する。
【００２６】
（樹皮抽出物の製造方法）
次に、樹皮抽出物の製造方法について説明する。樹皮抽出物の製造方法は、（ａ）粗抽出工程、（ｂ）高分子プロアントシアニジン（高分子ＰＣ）減少工程、および（ｃ）プロアントシアニジン濃縮工程を包含する。（ａ）の粗抽出工程は、樹皮から粗抽出物を得る工程であり、（ｂ）の高分子ＰＣ減少工程は、前工程で得られた処理物（例えば、粗抽出物）から高分子ＰＣを減少させる工程であり、（ｃ）のプロアントシアニジン濃縮工程は、前工程で得られた処理物（例えば、高分子ＰＣ減少処理物）から、糖類、有機酸、脂溶性成分などの夾雑物を除去し、かつ溶媒を減少させる工程である。（ｂ）高分子ＰＣ減少工程および（ｃ）プロアントシアニジン濃縮工程の順序は逆であってもよい。
【００２７】
（ａ）粗抽出工程
粗抽出工程は、溶媒中に木本植物の樹皮を浸漬し、必要に応じて、所定温度で保持することによって行われる。
【００２８】
本発明の樹皮抽出物の原料である木本植物の樹皮としては、例えば、針葉樹の樹皮、広葉樹の樹皮が挙げられ、さらに具体的にいえば、松樹皮、樫樹皮、山桃樹皮、モリシマアカシア樹皮、アカシアマンギウム樹皮、ヤナギ属樹木の樹皮、ヒバ樹皮、ラジアータパイン樹皮などが挙げられる。樹皮抽出物は、一般に、プロアントシアニジンを多く含む。そのうち、ＯＰＣを豊富に含有する樹皮抽出物は、優れた生理活性を有する。よって、ＯＰＣ含有量を考慮すれば、本発明の樹皮抽出物の原料としては、松樹皮を選択することが好ましい。
【００２９】
松樹皮としては、フランス海岸松（Pinus Martima）、カラマツ、クロマツ、アカマツ、ヒメコマツ、ゴヨウマツ、チョウセンマツ、ハイマツ、リュウキュウマツ、ウツクシマツ、ダイオウマツ、シロマツ、カナダのケベック地方のアネダなどのマツ目に属する植物の樹皮が好ましく用いられる。中でも、フランス海岸松の樹皮が好ましい。フランス海岸松は、南仏の大西洋沿岸の一部に生育している海洋性松をいう。このフランス海岸松の樹皮は、プロアントシアニジン、有機酸、ならびにその他の生理活性成分などを含有する。フランス海岸松の樹皮抽出物は、特にＯＰＣを豊富に含む。
【００３０】
粗抽出は、抽出効率を考慮して、体積当たりの表面積を大きくするため、樹皮を適当な大きさに破砕して樹皮破砕物を得ることが好ましい。例えば、カッター、スライサーなどで処理された樹皮破砕物、ミキサー、ジューサー、ブレンダー、マスコロイダーなどで処理された樹皮破砕物などが挙げられる。樹皮破砕物の大きさは、特に限定されないが、好ましくは０．１〜１０ｃｍ、より好ましくは０．１〜５ｃｍの細片である。なお、破砕時においては、破砕効率を上げるために、水、あるいはエタノール、メタノール、酢酸エチルなどの有機溶媒、もしくは水と有機溶媒との混合溶媒を加えてもよい。
【００３１】
粗抽出に用いる溶媒としては、例えば、水または有機溶媒が挙げられる。有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、含水エタノール、含水プロピレングリコール、エチルメチルケトン、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、食用油脂、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、および１，１，２−トリクロロエテンが挙げられる。これらの溶媒は、水単独で用いても、有機溶媒単独で用いても、水と有機溶媒とを混合した溶媒を用いても、複数の有機溶媒を混合した溶媒を用いてもよい。
【００３２】
溶媒の選択は、例えば、次のような事項を踏まえて決定すればよい。まず、製造時の廃液処理の観点、または、金属塩などを添加（後述する）するという観点からは、水を用いることが好ましい。また、比較的低い温度で短時間に濃縮を行う場合、水よりも沸点の低い有機溶媒（例えば、エタノール）、または水よりも沸点の低い有機溶媒と水との混合溶媒を用いればよい。このような有機溶媒は、濃縮時に容易に除去することができ、効率よく樹皮抽出物を得ることができる。本発明の樹皮抽出物を食品または医薬品として使用する場合、その使用の安全性を考慮すれば、エタノール、またはエタノールと水との混合溶媒を用いることが好ましい。
【００３３】
溶媒の量は、樹皮粗抽出物中のプロアントシアニジン濃度または抽出効率を考慮して設定すればよい。例えば、水を抽出溶媒として使用する場合は、樹皮と水との比が質量比で１：５〜１：１００、好ましくは１：１０〜１：５０である。水および／または有機溶媒を添加して破砕した場合は、破砕に使用した量を考慮し、添加する抽出溶媒の量を調整すればよい。
【００３４】
抽出温度は、樹皮粗抽出物の抽出効率を考慮すれば、高めの温度に設定することが好ましい。例えば、水を用いる場合、５０〜１２０℃、好ましくは７０〜１００℃で熱水抽出する。この場合、樹皮（または樹皮破砕物）に熱水を加えてもよく、樹皮（または樹皮破砕物）に水を加えた後に加熱してもよい。しかし、プロアントシアニジンの熱変性を防止するためには、比較的低温の水で抽出することが好ましい。
【００３５】
抽出時間は、用いる樹皮（または樹皮破砕物）の大きさ、抽出温度などの抽出条件と抽出効率とを考慮して決定すればよいが、一般的には、１０分間〜２４時間である。
【００３６】
次に、具体的な抽出方法について説明する。抽出方法としては、加温抽出法または超臨界流体抽出法を用いることができる。
【００３７】
加温抽出法としては、加温した溶媒を樹皮に加える方法、または、溶媒中に樹皮を添加して、その溶媒を加温する方法が用いられる。例えば、水とエタノールとの質量比が１：１〜１：９の水−エタノール混合溶媒と、粉砕した樹皮とを用いて、７０〜７５℃で還流させながら、０．５時間〜６時間攪拌する方法が挙げられる。なお、この方法を用いる場合、溶媒の量は、樹皮の１倍〜２０倍量とすればよい。
【００３８】
ところで、溶媒を還流させる温度まで昇温せずに一度加温抽出した後、濾過などにより上清を回収し、さらに残った残渣に再度溶媒を加えて同様に加温抽出する工程を採用することによっても、高い抽出効率が得られる。なお、有機溶媒を使用する場合の抽出温度は、その有機溶媒の沸点以下に設定する必要がある。
【００３９】
超臨界流体抽出法は、物質の気液の臨界点（臨界温度、臨界圧力）を超えた状態の流体である超臨界流体を用いて目的成分を抽出する方法である。超臨界流体としては、二酸化炭素、エチレン、プロパン、亜酸化窒素（笑気ガス）などが用いられ、二酸化炭素が好ましく用いられる。
【００４０】
超臨界流体抽出法は、目的成分を超臨界流体によって抽出する抽出工程および目的成分と超臨界流体とを分離する分離工程からなる。分離工程では、圧力変化による抽出分離、温度変化による抽出分離、または吸着剤・吸収剤を用いた抽出分離のいずれを行ってもよい。
【００４１】
また、エントレーナー添加法による超臨界流体抽出を行ってもよい。この方法は、超臨界流体に、例えば、エタノール、プロパノール、ｎ−ヘキサン、アセトン、トルエン、その他の脂肪族低級アルコール類、脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、またはケトン類を２〜２０Ｗ／Ｖ％程度添加し、得られた抽出流体で超臨界流体抽出を行うことによって、ＯＰＣ、カテキン類（後述）などの目的とする被抽出物の抽出流体に対する溶解度を飛躍的に上昇させる、あるいは分離の選択性を増強させる方法であり、プロアントシアニジンを効率的に抽出する方法である。
【００４２】
抽出には、例えば、回分式、半連続式、または連続式などのいずれの抽出装置を用いてもよい。
【００４３】
得られた粗抽出物は、その後、（ｂ）高分子ＰＣ減少工程または（ｃ）プロアントシアニジン濃縮工程に供されるが、これらの工程の前に、予め粗抽出物から溶媒を減少させる濃縮処理を行うことが好ましい。粗抽出物から溶媒を減少させることによって、その後の工程、特に（ｂ）高分子ＰＣ減少工程で有利な効果が得られる。例えば、（ｂ）高分子ＰＣ減少工程として塩処理を行う場合、塩の使用量を減少させることができる。その結果、重合度の高いプロアントシアニジン（高分子ＰＣ）を効率よく除去することが可能となる。また、粗抽出物に有機溶媒が含まれる場合は、濃縮によって有機溶媒を除去して、水に置換することが可能である。水に置換することにより溶液中の塩の電離が高くなり、塩と高分子ＰＣとが結合して沈澱などが生じ易くなる。したがって、効率よく高分子ＰＣを除去することができる。置換する水の量は、置換後の濃縮物の体積が、濃縮前の粗抽出物の体積の多くとも２倍以下となるように調整され得る。なお、濃縮処理を行う場合は、予め濾過などにより不溶物を除去することが好ましい。このような粗抽出液を利用すれば、不溶物が除去されているので、濃縮を均一に行うことができ、さらに、濃縮率の調整が容易になる。
【００４４】
濃縮方法としては、当業者が通常用いる濃縮方法であれば、特に制限はない。例えば、加熱濃縮、減圧濃縮、凍結濃縮、限外濾過膜による濃縮、透析膜による濃縮、吸着剤を用いた濃縮などが挙げられる。凍結濃縮は、粗抽出物を凍結させ、その凍結物の水蒸気圧以下に減圧して水を昇華させて除去する方法である。好ましくは、プロアントシアニジンの熱変性が少ない減圧濃縮および凍結濃縮であり、より好ましくは、減圧濃縮である。減圧濃縮を行えば、プロアントシアニジンの変性を最小限に抑えることができる。
【００４５】
上記濃縮方法は、１つの方法によってのみ行ってもよいし、複数の方法を組み合わせて行ってもよい。また、加熱濃縮を行う場合は、加熱によるプロアントシアニジンの熱変性を防ぐために、４０℃〜１００℃の温度で行うことが好ましい。
【００４６】
得られた濃縮物の濃縮率は、特に制限されない。一般的には、濃縮物の体積が、濃縮前の粗抽出物の体積と比べて、１／２〜１／１００容量、好ましくは１／５〜１／７０容量、さらに好ましくは１／１０〜１／５０容量となるように濃縮が行われる。
【００４７】
上記濃縮処理は、その後の（ｂ）高分子ＰＣ減少工程として塩処理を行う場合に塩の使用量を減少させるため、コストの低減および環境保全の面からも有用である。具体的には、粗抽出物を直接塩処理する場合に比べて、塩の使用量を約１／２〜約１／１００、好ましくは約１／５〜約１／５０に減少できる。
【００４８】
（ｂ）高分子ＰＣ減少工程
次に、高分子ＰＣ減少工程について説明する。この工程は、上記（ａ）粗抽出工程で得られた粗抽出物（または濃縮物）中の高分子プロアントシアニジン（高分子ＰＣ）を減少させる目的で行われる。あるいは（ａ）粗抽出工程および後述する（ｃ）プロアントシアニジン濃縮工程の後に、高分子ＰＣを減少させる目的で行われる。上記高分子ＰＣ減少工程としては、例えば、（ｂ−１）塩処理および（ｂ−２）吸着剤処理が挙げられる。この高分子ＰＣ減少工程により、高分子ＰＣを減少させ、その結果、得られた高分子ＰＣ減少処理物中のＯＰＣ含有量を相対的に増加させることができる。本発明の樹皮抽出物は、樹皮抽出物に含有される高分子プロアントシアニジン１質量部に対して、ＯＰＣを０．９質量部以上の割合で含有することが好ましい。上記の割合をＯＰＣ比といい、この場合、ＯＰＣ比は０．９である。仮に粗抽出物（または濃縮物）あるいはプロアントシアニジン濃縮物のＯＰＣ比が０．９未満である場合は、高分子ＰＣを減少させることによって、所望のＯＰＣ比に調節することも可能である。
【００４９】
（ｂ−１）塩処理
塩処理は、粗抽出物（または濃縮物）あるいは後述する（ｃ）プロアントシアニジン濃縮工程で得られるプロアントシアニジン濃縮物に、塩を添加することによって、高分子ＰＣを、例えば、沈殿物などの不溶物として生じさせてこの不溶物を除去する処理である。
【００５０】
塩処理に用いられる塩は、溶液中で電離するものであればよい。塩としては、例えば、一価の金属塩、二価の金属塩、および非金属性の塩が挙げられる。
【００５１】
一価の金属塩としては、リチウム、ナトリウム、カリウム、ルビジウム、セシウム、フランシウムなどのアルカリ金属の塩、例えば、ハロゲン化物塩（塩化物塩、臭化物塩など）、リン酸塩、炭酸塩、有機酸塩（酢酸塩などのカルボン酸塩、スルホン酸塩など）などが挙げられる。具体的には、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、酢酸ナトリウムなどが挙げられる。特に塩析に好ましく用いられる硫酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、および塩化ナトリウムが好ましい。
【００５２】
二価の金属塩としては、ベリリウム、マグネシウム、アルカリ土類金属（カルシウム、ストロンチウム、バリウム、ラジウム）などの金属塩が挙げられる。なお、二価の金属塩は、酸化剤として用いられる金属（例えば、銅など）を含む塩を用いると、プロアントシアニジンが酸化される恐れがあるため注意を要する。二価の金属塩は、特にプロアントシアニジンに対して吸着力が強いため、少ない塩の量で高分子ＰＣを、不溶物とすることができる。
【００５３】
非金属性の塩としては、例えば、硫酸アンモニウム（硫安）などが好適に用いられる。
【００５４】
上記の塩の中で、ＯＰＣと塩との結合をできるだけ小さくしてＯＰＣの精製効率を高めるという観点では、一価の金属塩または硫安が好ましい。
【００５５】
上記塩の添加量は、特に制限されないが、粗抽出物（または濃縮物）あるいはプロアントシアニジン濃縮物の全体質量に対し、０．１質量％〜５０質量％、好ましくは３質量％〜５０質量％、より好ましくは５質量％〜４５質量％となるように添加し得る。特に、水に対する塩の飽和量の１０〜７５質量％、好ましくは２０〜６０質量％相当量を、粗抽出物（または濃縮物）あるいはプロアントシアニジン濃縮物に添加することが好ましい。また、塩としてカルシウム塩、マグネシウム塩などの二価の金属塩を用いる場合は、濃縮物中に０．１質量％〜３０質量％となるように添加することが好ましい。
【００５６】
塩処理、特に金属塩による処理に際しては、酸性側で処理を行うことが好ましい。弱〜強アルカリ性ではプロアントシアニジンの安定性が悪くなり分解する恐れがある。そのため、溶液中のｐＨを好ましくは７．５未満、より好ましくは６未満、さらに好ましくは５．５以下となるように調整することが好ましい。特に、二価の金属塩を添加する場合、溶液中のｐＨが上がりやすいため注意を要する。ｐＨの調整は、例えば、プロアントシアニジンを安定化するための助剤（アスコルビン酸などのｐＨ調整剤）などを用いることによって行われる。具体的には、予め金属塩濃度が塩処理時の最終濃度の２〜１０倍濃度となるような金属塩溶液を調製し、この溶液をさらにｐＨが４〜６、好ましくは４〜５．５、より好ましくは４〜５となるように調節することが好ましい。この溶液を粗抽出物（または濃縮物）あるいはプロアントシアニジン濃縮物に加えることによって、プロアントシアニジンの分解を回避することができる。
【００５７】
塩処理工程において、処理温度に特に制限はない。好ましくは１〜４０℃である。処理時間についても特に制限はなく、処理温度に応じて適宜設定され得る。例えば、塩を添加後、１℃〜４０℃で３０分〜４８時間静置し、十分に沈殿物などの不溶物を生じさせる。なお、静置時間は、４８時間以上でもよいが、ＯＰＣが自動酸化し、赤褐色が濃い褐色に変色する前に次工程に移ることが好ましい。
【００５８】
次いで、生じた沈殿物などの不溶物を除去する。不溶物を除去する方法としては、当業者が通常用いる方法、例えば、濾過や遠心分離などを用いればよい。処理時間の点から、濾過が好適に用いられる。濾過は、好ましくは１〜４０℃で行われ得る。低温であるほど、より多くの高分子ＰＣを除去することができ、好ましくは３０℃以下、より好ましくは２５℃以下で行われる。この濾過処理は、塩を添加する前に行ってもよいが、塩添加後にも沈殿物などの不溶物を除去するために行う必要がある。濾過は、ＯＰＣの損失を最小限に抑えるために、濾過後に残った残渣を、飽和濃度が同等の塩の水溶液で繰り返し洗浄することが好ましい。
【００５９】
塩処理工程後の液（高分子ＰＣ減少処理物）に含有される高分子プロアントシアニジンの量は、塩処理前の粗抽出物（または濃縮物）あるいはプロアントシアニジン濃縮物と比べて、１／２以下、好ましくは１／３以下、より好ましくは１／５以下、さらに好ましくは１／６以下である。
【００６０】
塩処理工程（高分子ＰＣ減少工程）の後に、後述する（ｃ）プロアントシアニジン濃縮工程が採用される場合、塩による処理で使用された塩が吸着剤処理工程で除去されるため、特に塩を除去する工程を設ける必要がなく、効率的である。
【００６１】
（ｂ−２）吸着剤処理
（ｂ）高分子ＰＣ減少工程に用いる吸着剤としては、ＯＰＣを効果的に吸着することが可能で、高分子ＰＣを吸着しにくい吸着剤（以下、第１の吸着剤という）を用いることが好ましい。この第１の吸着剤と、（ａ）粗抽出工程で得られた粗抽出物（または濃縮物）あるいは後述する（ｃ）プロアントシアニジン濃縮工程で得られたプロアントシアニジン濃縮物とを接触させ、所定の溶媒で吸着物を回収することによって、吸着されない高分子ＰＣを除去することができる。吸着剤処理の詳細は後述の(ii)吸着剤による処理の項で説明する。
【００６２】
（ｃ）プロアントシアニジン濃縮工程
次に、プロアントシアニジン濃縮工程について説明する。この工程は、上記で得られた樹皮の粗抽出物（またはその濃縮物）あるいは高分子ＰＣ減少処理物を、所定の吸着剤で処理することによって、該処理物から糖類、有機酸、脂溶性成分などの夾雑物を除去する工程である。具体的には、樹皮の粗抽出物（またはその濃縮物）あるいは高分子ＰＣ減少処理物を合成樹脂系吸着剤と接触させて、ＯＰＣおよび高分子ＰＣを含むプロアントシアニジンを吸着剤に吸着させた後、吸着剤を洗浄し、所定の溶媒で溶出することにより、プロアントシアニジン濃縮物（または樹皮抽出物）を得ることができる。この処理に用いる吸着剤を第２の吸着剤という。このようにして得られたプロアントシアニジン濃縮物（または樹皮抽出物）は、夾雑物が除去された結果、プロアントシアニジン（ＯＰＣなど）をより多く含有する。吸着剤処理の詳細は後述の(ii)吸着剤による処理の項で説明する。
【００６３】
（ｃ）のプロアントシアニジン濃縮工程の後に（ｂ）の高分子ＰＣ減少工程を行う場合には、上記工程（ｃ）と工程（ｂ）との間において、減圧濃縮などの溶媒を減少させる濃縮処理を行ってもよい。この濃縮処理によって、例えば、上述のように、その後の（ｂ）高分子ＰＣ減少工程としての塩処理において、塩の使用量を減少させるなどの効果が得られる。なお、この場合、（ｃ）プロアントシアニジン濃縮工程において、粗抽出に使用した溶媒を、揮発性の高い有機溶媒に置換することができる。このように揮発性の高い有機溶媒に置換すれば、水を抽出溶媒とした粗抽出物に比べて濃縮が容易となる。具体的には、水を抽出溶媒とした粗抽出物と吸着剤とを接触させた後、吸着剤に吸着されている成分を脱離させる時に、有機溶媒（例えば無水エタノール）を用いて、カラムから吸着物の全てを溶出させる。このエタノール溶出液は、減圧濃縮などによって、容易に濃縮される。
【００６４】
以下、（ｉ）吸着剤、および(ii)吸着剤による処理について説明し、ついで、（iii）樹皮抽出物について説明する。
【００６５】
（ｉ）吸着剤
（ｂ）高分子ＰＣ減少工程および（ｃ）プロアントシアニジン濃縮工程に用いる、第１の吸着剤および第２の吸着剤は、プロアントシアニジンに対して異なる挙動を示すが、この相違は、吸着剤の材質、細孔半径、比表面積、分子量分画範囲などによるものであると考えられる。そこでまず、一般的にプロアントシアニジンの吸着に用いられる吸着剤について説明し、次に、第１の吸着剤および第２の吸着剤それぞれの好ましい性質について説明する。
【００６６】
上記第１の吸着剤および第２の吸着剤の個々の吸着剤としては、一般にカラムクロマトグラフィーに用いられる吸着剤であれば特に制限はない。本発明に用いられる吸着剤としては、例えば、合成吸着剤、陽イオン交換樹脂系吸着剤、陰イオン交換樹脂系吸着剤、架橋デキストラン誘導体系吸着剤、ポリビニル系樹脂からなる吸着剤、アガロース誘導体系吸着剤、およびセルロース誘導体系吸着剤が挙げられる。ここで、合成吸着剤とは、イオン交換基などの官能基を有さず、多孔性で、かつ微細な連続孔（細孔）を有するものをいい、例えば、ファンデルワールス力で吸着し得る。
【００６７】
合成吸着剤は、さらにその材質によって分類され、芳香族系合成吸着剤、置換芳香族系合成吸着剤、アクリル系合成吸着剤などの合成吸着剤に分類される。これらの合成吸着剤は、材質により親水性および疎水性の程度が異なる。合成吸着剤の安定性、プロアントシアニジン（ＯＰＣ）の吸着効率、および分離・分画能の点から、好ましくは芳香族系合成吸着剤である。
【００６８】
芳香族系合成吸着剤としては、架橋スチレン系樹脂などの多孔質樹脂からなる吸着剤が好ましい。市販の吸着剤としては、例えば、ダイアイオン（登録商標）ＨＰ−１０、ＨＰ−２０
、ＨＰ−２１ 、ＨＰ−３０ 、ＨＰ−４０ 、およびＨＰ−５０、（以上、三菱化学株式会社製）；アンバーライト（登録商標）ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−１６、ＸＡＤ−１１８０、およびＸＡＤ−２０００（以上、株式会社オルガノ製）；ならびにセパビーズ（登録商標）ＳＰ−８２５
、ＳＰ−８００ 、ＳＰ−８５０ 、およびＳＰ−８７５（以上、三菱化学株式会社製）が挙げられる。
【００６９】
置換芳香族系合成吸着剤としては、例えば、芳香族重合体の芳香核に臭素原子などを結合させた、疎水性の強い樹脂からなる吸着剤が挙げられる。市販の吸着剤としては、例えば、セパビーズ（登録商標）ＳＰ−２０５
、ＳＰ−２０６ 、およびＳＰ−２０７（以上、三菱化学株式会社製）が挙げられる。
【００７０】
アクリル系合成吸着剤としては、例えば、メタクリル酸エステル重合体などを骨格とする親水性の強い樹脂からなる吸着剤が挙げられる。市販の吸着剤としては、例えば、ダイアイオン（登録商標）ＨＰ１ＭＧおよびＨＰ２ＭＧ（以上、三菱化学株式会社製）；ならびにアンバーライト（登録商標）ＸＡＤ−７（株式会社オルガノ製）が挙げられる。
【００７１】
上記合成吸着剤は、上記のように、微細な連続孔（細孔）を有する多孔性であるため、溶液中に存在する目的の溶質を分子ふるいの効果により分離することができる。すなわち、合成吸着剤と溶液とを接触させると、小さな溶質分子は、その細孔を通って合成吸着剤の内部まで浸透拡散して吸着する。他方、この細孔のサイズよりも大きな分子は、合成吸着剤内に拡散できず、吸着されない。
【００７２】
陽イオン交換樹脂系吸着剤としては、例えば、官能基としてスルホン酸塩基を有する樹脂である、アンバーライト（登録商標）ＣＧ−４０００、ＣＧ−５０００、ＣＧ−６０００、ＣＧ−８０００、ＩＲ−１１６、ＩＲ−１１８、ＩＲ−１２０Ｂ、ＩＲ−１２２、ＩＲ−１２４、ＸＴ−１００７、ＸＴ−１００９、ＸＴ−１００２（以上、株式会社オルガノ製）などが挙げられる。
【００７３】
陰イオン交換樹脂系吸着剤としては、例えば、官能基として４級アミンを有する弱塩基性陰イオン交換樹脂である、ＯＰＴＩＰＯＲＥ−ＸＵＳ４０２８５．００、ＯＰＴＩＰＯＲＥ−ＸＵＳ
４０３９０．００（以上、ダウケミカル株式会社製）などが挙げられる。
【００７４】
架橋デキストラン誘導体系吸着剤としては、例えば、セファデックス（登録商標）ＬＨ２０
、ＬＨ６０（以上、アマシャムバイオサイエンス株式会社製）などが挙げられる。
【００７５】
ポリビニル系樹脂（ゲル）からなる吸着剤としては、例えば、トヨパールＨＷ−４０、５０（東洋曹達工業株式会社）などが挙げられる。
【００７６】
アガロース誘導体系吸着剤としては、例えば、セファロースＣＬ、４Ｂ、６Ｂ（以上アマシャムバイオサイエンス株式会社）、Ｂｉｏ−ＧｅｌＡ（バイオラッド株式会社）などが挙げられる。
【００７７】
セルロース誘導体系吸着剤としては、セルロファインＣＬ−９０、ＧＣＬ−３００、ＧＣＬ−１０００（以上、生化学工業株式会社）などが挙げられる。
【００７８】
上記の吸着剤の中でも、多孔性で網目状分子構造を有する吸着剤であることが特に好ましい。例えば、ダイアイオンＨＰ−２０、アンバーライトＸＡＤ−４などの合成吸着剤、セファデックスＬＨ２０、ＬＨ６０などの架橋デキストラン誘導体系吸着剤が特に好ましい。
【００７９】
以下、第１の吸着剤および第２の吸着剤について、それぞれ好ましい性状について説明する。
【００８０】
第１の吸着剤および第２の吸着剤を材質を基準に選択する場合、第１の吸着剤としては、好ましくは合成吸着剤、より好ましくは芳香族系合成吸着剤が選択される。第２の吸着剤としては、好ましくは合成吸着剤または架橋デキストラン誘導体が、特に好ましくは芳香族系合成吸着剤または架橋デキストラン誘導体が選択される。
【００８１】
細孔半径を基準に選択する場合、細孔半径によって、吸着される分子の大きさまたはその分子に対する吸着力が異なることを利用する。
【００８２】
第１の吸着剤は、好ましくは９０Å以下、より好ましくは２０〜９０Å、さらに好ましくは３０Å〜８０Åの細孔半径を有することが好ましい（Å＝１×１０−１０ｍ）。細孔半径が小さい程、高分子よりも低分子（分子量数千以下）に対する吸着能力が高い。そのため、低分子量の化合物を吸着する一方、比較的分子量の高い５量体の以上のプロアントシアニジンを吸着することなく除去することが可能である。このような吸着剤としては、例えば、芳香族系合成吸着剤であるセパビーズＳＰ−８２５、セパビーズＳＰ−８５０、アンバーライトＸＡＤ−４、およびＸＡＤ−２０００が好適である。
【００８３】
第２の吸着剤は、好ましくは１００Å以上、より好ましくは１００Å〜５００Å、さらに好ましくは１００Å〜３００Åの細孔半径を有することが好ましい。細孔半径が大きい程、分子量が数千から数万までの広い分子量のプロアントシアニジンを効率的に吸着するが、夾雑物を吸着させる力が弱いため、該夾雑物を吸着させることなく、これを容易に除去し得る。このような吸着剤としては、例えば、芳香族系合成吸着剤であるダイアイオンＨＰ−２０、ダイアイオンＨＰ−２１、およびアンバーライトＸＡＤ−１６、あるいは架橋デキストラン誘導体系吸着剤であるセファデックスＬＨ２０が好適である。
【００８４】
第１の吸着剤および第２の吸着剤を比表面積を基準に選択する場合、吸着力の観点から、第１の吸着剤および第２の吸着剤はいずれも、比表面積が５００ｍ２／ｇ以上であることが好ましい。さらに、ＯＰＣを効率的に吸着する点から、第１の吸着剤としては、比表面積が７００ｍ２／ｇ以上であることがより好ましい。吸着剤の比表面積は、個々の吸着剤のサイズによって、あるいは多孔性の吸着剤の場合は細孔の大きさおよび数によって異なるので、必要とされる比表面積の吸着剤を適宜選択することが可能である。
【００８５】
架橋デキストラン誘導体、ポリビニル系樹脂（ゲル状を使用する）などの吸着剤を用いて、分子量によって分画することも可能である。分子量分画範囲に特に制限はないが、第１の吸着剤は、分子量分画範囲が、１００〜２０，０００、好ましくは１００〜５，０００であることが好ましい。第２の吸着剤は、分子量分画範囲が、１００〜２０，０００、好ましくは１００〜１０，０００であることが好ましい。このような分子量分画範囲を有する吸着剤は、プロアントシアニジンを吸着し、夾雑物を除去し得る。さらに、吸着したプロアントシアニジン中のＯＰＣを溶出させて分取することが可能である。中でもセファデックスＬＨ−２０およびセファデックスＬＨ−６０が好適である。
【００８６】
上記種々の吸着剤のうちで、第１の吸着剤としては、多孔性であり、９０Å以下の細孔半径を有し、比表面積が７００ｍ２／ｇ以上の芳香族系合成吸着剤でなる吸着剤であるアンバーライトＸＡＤ−４ならびにセパビーズＳＰ８２５およびＳＰ８５０が特に好適である。
【００８７】
（ii）吸着剤による処理
吸着剤の量は、被処理物（粗抽出物またはその濃縮物、高分子ＰＣ減少処理物、あるいはプロアントシアニジン濃縮物）に含まれる固形分量、溶媒の種類（後述）、吸着剤の種類などによって適宜設定すればよい。例えば、被処理物に含まれる固形分の乾燥質量１質量部に対して、０．１〜１００質量部、好ましくは０．１〜５０質量部の吸着剤を使用することが好ましい。０．０１質量部より少ないと、プロアントシアニジンの回収率が低下し、１００質量部を超えると、十分吸着することはできるが、吸着剤からの回収率が悪くなる。
【００８８】
第１の吸着剤において、特にＯＰＣの吸着効率が高い吸着剤を用いる場合、より簡便に操作をするために、被処理物中の乾燥質量を測定せずに、処理する前の樹皮の質量を基準として吸着剤の量を設定してもよい。例えば、ダイアイオンＨＰ−２０、セパビーズＳＰ−８２５、アンバーライトＸＡＤ−１６などの芳香族系合成吸着剤を用いる場合は、処理する前の樹皮の乾燥質量１質量部に対して、吸着剤を乾燥質量で０．１〜１０質量部、好ましくは０．２〜５質量部用いることで、被処理物と吸着剤との接触が十分に行われ、効率よく吸着し得る。
【００８９】
被処理物と、吸着剤との接触は、いかなる方法で行ってもよい。例えば、簡易な方法としては、吸着剤をカラムに充填し、そのカラムに被処理物を通過させるカラム法、吸着剤を被処理物に加え、一定時間後、吸着剤を除去するバッチ法などが挙げられる。
【００９０】
カラム法を用いて処理するには、必要に応じて、被処理物の溶媒を、吸着剤との接触に適した溶媒に置換する。この置換は、加熱乾燥、凍結乾燥、減圧濃縮乾固、透析などの当業者が通常用いる工程を含む方法により行われ得る。例えば、ダイアイオンＨＰ−２０などの芳香族系合成吸着剤を用いる場合は、溶媒を水に置換する。また、セファデックスＬＨ２０などの架橋デキストラン誘導体系吸着剤を用いる場合は、溶媒をエタノールに置換する。次いで、例えば、第２の吸着剤（例えば、合成樹脂系吸着剤）をカラムに充填し、そのカラムに被処理物を通液し、吸着剤の体積に対し、例えば５倍〜１０倍の体積の水を通液させる。これにより、夾雑物である糖類および有機酸が除去される。その後、適切な溶媒を用いることによりプロアントシアニジン、特にＯＰＣ高含有プロアントシアニジンを溶出できる。なお、カラム法における種々の条件は、用いる吸着剤により適宜決定すればよく、例えば、イオン交換樹脂でなる吸着剤を用いる場合、カラム温度を１０℃〜１２０℃に設定し、カラム内を常圧または加圧された状態にすることが好ましい。
【００９１】
バッチ法を用いて処理するには、上記カラム法と同様の質量比の吸着剤（例えば、合成樹脂系吸着剤）を被処理物に加え、攪拌しながら１〜３時間接触させた後に、濾過または遠心分離により吸着剤を回収する。例えば、吸着剤として第２の吸着剤を用いた場合には、この操作により夾雑物を除去し得る。次いで、プロアントシアニジンが吸着された第２の吸着剤を、さらに適切な溶媒（後述）で１時間〜３時間攪拌し、プロアントシアニジンを溶出させ、次いで濾過または遠心分離して上清を回収することにより、プロアントシアニジンまたはＯＰＣをより多く含むプロアントシアニジン含有樹皮抽出物を得ることができる。
【００９２】
溶出溶媒は、吸着剤の種類、ならびに吸着または溶出すべき物質の種類により適宜選択すればよい。例えば、第１の吸着剤を用いる場合の溶出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、酢酸エチル、クロロホルム、およびこれらの混合溶媒が挙げられる。安全性の面から、好ましくは水とエタノールとの混合溶媒が用いられる。例えば、アンバーライトＸＡＤ−４、アンバーライトＸＡＤ−２０００、セパビーズＳＰ８２５、セパビーズＳＰ８５０などの高分子ＰＣを除去する芳香族系合成吸着剤を用いた場合、水とエタノールとの混合比は、高分子ＰＣが除去されていることから１０容量％以上、好ましくは３０容量％以上、より好ましくは５０容量％以上の比較的高い濃度のエタノール水溶液を用いることが吸着したＯＰＣを溶出させるときの回収率を高める観点から好ましい。
【００９３】
第２の吸着剤を用いる場合のプロアントシアニジンを多く含む成分を溶出させるのに使用可能な溶媒としては、例えば、水、メタノール、エタノール、酢酸エチル、クロロホルム、およびこれらの混合溶媒が挙げられる。そのうち、樹皮抽出物の安全性という観点からは、好ましくは水とエタノールとの混合溶媒が用いられる。また、吸着剤処理工程において、吸着剤に吸着されている成分から、選択的にＯＰＣを溶出させて分離・分画が可能な溶媒を選択することが好ましい。したがって、水とエタノールとの混合溶媒（エタノール水溶液）を用いるのが好ましい。例えば、ダイアイオンＨＰ−２０、ＨＰ−２１、ＸＡＤ−１６などの芳香族系合成吸着剤を用いた場合は、１０容量％〜５０容量％、好ましくは１０容量％〜３０容量％のエタノール水溶液が好ましい。また、セファデックスＬＨ−２０、セファデックスＬＨ−６０などの架橋デキストラン誘導体系吸着剤の場合は、７０容量％以上、好ましくは８０容量％以上のエタノール水溶液が好ましい。なお、イオン交換樹脂系の吸着剤を用いる場合は、溶出溶媒として水を用いることが好ましい。
【００９４】
上記のような（ａ）粗抽出工程、（ｂ）高分子ＰＣ減少工程、および（ｃ）プロアントシアニジン濃縮工程、あるいは（ａ）粗抽出工程、（ｃ）プロアントシアニジン濃縮工程、および（ｂ）高分子ＰＣ減少工程によって、ＯＰＣ含量が極めて高い樹皮抽出物が得られる。上記の樹皮抽出物は、高分子プロアントシアニジン量が減少され、さらに、樹皮抽出物に含まれる脂溶性成分も減少されているため、樹皮抽出物の水への溶解性がさらに向上するとともに、樹皮抽出物を水に混合した場合における白濁の発生を、大幅に減少させることができる。
【００９５】
（iii）樹皮抽出物
上記の方法で得られた樹皮抽出物は、上述のように、２〜４量体であるＯＰＣを豊富に含み、樹皮抽出物中の固形分に対して２５質量％以上、好ましくは３０質量％以上、より好ましくは３５質量％以上、さらに好ましくは４０質量％以上、最も好ましくは４０質量％〜９５質量％含有する。さらに、樹皮抽出物に含有される全プロアントシアニジン中に占めるＯＰＣの割合は、上述の処理によって、４９質量％以上、好ましくは４９質量％〜１００質量％、より好ましくは４９質量％〜９９質量％である。この全プロアントシアニジン中に占めるＯＰＣの割合は、粗抽出物または濃縮物のＯＰＣの割合に比べて、２倍以上、好ましくは２倍〜５倍、より好ましくは２倍〜４倍である。
【００９６】
得られた樹皮抽出物は、さらに、カテキン類を樹皮抽出物中に乾燥質量換算で、５〜１５質量％含有することが好ましい。
【００９７】
上記方法によって製造される樹皮抽出物は、当業者が通常用いる方法によって、濃縮あるいは希釈され、適宜調整され得る。例えば、濃縮には、膜濃縮、加熱濃縮、真空（減圧）濃縮、凍結濃縮などの種々の方法を用いればよい。また、必要に応じて、樹皮抽出物を、殺菌処理して保存してもよい。殺菌は、気流殺菌、高圧殺菌、加熱殺菌などの、当業者が通常用いる方法で行えばよい。
【００９８】
この用にして得られた樹皮抽出物は、水に対して優れた溶解性を有する。具体的には、樹皮抽出物の溶解率が９０％以上、好ましくは９５％以上、より好ましくは９９％以上、さらに好ましくは９９．５％以上、最も好ましくは９９．７％以上である。このような樹皮抽出物を含有する水溶液は、沈殿および白濁が少なく、スフィンゴ脂質によって、特にＯＰＣ、高分子ＰＣなどのプロアントシアニジンの体内への吸収が促進されるため、摂取後速やかに優れた生理的効果、例えば、抗酸化作用や血流改善効果を発揮し得る。特に、樹皮抽出物が有する抗酸化作用、特にＳＯＤ活性は、アスコルビン酸の作用に比べて、持続性が高いため、美容効果やアンチエイジング効果などにおいて、優れた効果を発揮する。
【００９９】
本発明の樹皮抽出物は、液状であっても、乾燥物（粉末）であってもよい。本発明の樹皮抽出物乾燥物（粉末）は、上記樹皮抽出物に含まれている溶媒（例えば水、エタノールなど）を取り除いて、得ることができる。乾燥は、当業者が通常用いる方法によって行えばよいが、中でも、凍結乾燥、真空乾燥、噴霧乾燥といった方法で行われることが好ましい。得られた乾燥物（粉末）は、上記の松樹皮抽出物と同様、糖質の添加を必要とせずに、水に対して優れた溶解性を発揮する。したがって、水と混合したときの沈殿および白濁の発生も少なく、さらに、樹皮抽出物およびその乾燥物の利用を容易にするという効果を奏する。
【０１００】
（吸収促進剤または吸収促進方法）
本発明のスフィンゴ脂質は、経口または皮膚や粘膜などの経皮投与によって樹皮抽出物成分（例えば、ＯＰＣ、高分子ＰＣなどのプロアントシアニジン、カテキン類など）の生体内への吸収を促進し得、これは、樹皮抽出物成分の有する抗酸化作用や血流改善作用といった生理活性の増強作用を示す。特に、上述のようにして得られた水への溶解性の高い樹皮抽出物を用いることでより高い生理活性の増強作用が得られ、高い吸収促進効果を得ることができる。さらに、本発明のスフィンゴ脂質は、樹皮抽出物（特に樹皮抽出物乾燥物）と共に医薬品、医薬部外品、化粧品、食品といった組成物に配合し得るだけでなく、樹皮抽出物を含有する組成物とは別の組成物に含有させて共に投与することで、樹皮抽物出成分の生理活性増強することから、樹皮抽出物成分の吸収を促進する。このことから、本発明のスフィンゴ脂質は、樹皮抽出物成分の生理活性増強剤または生理活性増強方法としても利用することができる。なお、スフィンゴ糖脂質の組成物中への配合割合は、樹皮抽出物を含有する組成物の総乾燥質量を１００質量部とした場合、乾燥質量で０．００１〜２０質量部、好ましくは０．００３〜１５質量部、より好ましくは０．０１〜１０質量部となるように配合または添加することで、松樹皮抽出物成分の経口または皮膚や粘膜といった経皮へ投与における吸収を促進し得る。また、組成物中における樹皮抽出物の配合割合は特に制限はないが、好ましくは組成物中に０．０００１質量％〜５０質量％、より好ましくは０．００１質量％〜３０質量％である。
【０１０１】
また、これらの組成物は、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、香料、食品添加物、調味料などと混合して、用途に応じて、顆粒、錠剤などの形態に成形されてもよい。例えば、ローヤルゼリー、ビタミン類、プロテイン、カルシウム、キトサン、レシチン、カフェインなどと混合して、さらに調味料により味が整えられてもよい。さらに、ハードカプセルおよびソフトカプセルなどのカプセル剤、丸剤、またはティーバッグ状などにされてもよい。これらは、これらの形状または好みに応じて、そのまま食してもよく、あるいは水、湯、牛乳などに溶いて飲んでもよい。またティーバッグ状などの場合、成分を浸出させてから飲んでもよい。このように、本発明の樹皮抽出物および樹皮抽出物乾燥物は、食品（飲料）、化粧品、医薬部外品、および医薬品の原料として、広く使用することができる。
【０１０２】
なお、本発明は、上記実施の形態に限定されず、本発明の範囲内で種々の応用が可能である。
【実施例】
【０１０３】
以下、本発明の実施例について説明する。なお、下記実施例は、本発明を制限するものではない。下記実施例において、実施例に示す単位（Ｖ／Ｖ）は（容量／容量）を、（Ｗ／Ｗ）は（質量／質量）を示す。
【０１０４】
（実施例１：樹皮抽出物の製造）
松樹皮（フランス海岸松の樹皮）１ｋｇに、精製水５．４Ｌを加え、ワーリングブレンダー（Waring Blender）で破砕した後、１００℃で２４時間還流しながら加熱抽出した。次いで、直ちに濾過し、濾過後の不溶物を精製水１．６Ｌで洗浄し、濾液と洗浄液とを合わせて７Ｌの粗抽出液を得た。この粗抽出液１０ｍＬを凍結乾燥したところ、乾燥質量は７０ｍｇであった。この抽出液を２５℃まで放冷した。
【０１０５】
上記抽出液１Ｌ（抽出物粉末乾燥質量７ｇ）を、比表面積７００ｍ２／ｇ、細孔半径８０Å以下の芳香族系合成吸着剤（アンバーライト（登録商標）ＸＡＤ−４（株式会社オルガノ製））３００ｍＬ（約２００ｇ相当）が充填された直径５ｃｍのカラムに通液した。次いで、このカラムを６００ｍＬの精製水で洗浄後、８０％（Ｖ／Ｖ）−エタノール水溶液８００ｍＬをカラムに通液して吸着物を溶出させた。吸着剤に吸着されている成分は、このエタノールの通液によって溶出させた。この溶出液を減圧濃縮してエタノールを除去した後、水を加えて、体積を５００ｍＬとした。
【０１０６】
次に、上記溶出液５００ｍＬを、さらに比表面積６００ｍ２／ｇ、細孔半径１００〜１２０Åの芳香族系合成吸着剤であるダイアイオン（登録商標）ＨＰ−２０
（三菱化学株式会社製）２００ｍＬ（約１４０ｇ相当）が充填された直径５ｃｍのカラムに通液した。このカラムを６００ｍＬの精製水で洗浄した後、２０％（Ｖ／Ｖ）−エタノール水溶液（７００ｍＬ）を通液して溶出させ、松樹皮抽出液Ａを得た。
【０１０７】
次に、得られた松樹皮抽出液Ａ中の各成分の含有量を調べるために、松樹皮抽出液Ａを、次のような画分に分離した。松樹皮抽出液Ａの分離工程を図１に示す。
【０１０８】
まず、松樹皮抽出液Ａを減圧濃縮により乾燥させて粉末化し、その質量（固形物質量）を測定した。これとは別に、水で膨潤させたセファデックスＬＨ−２０（アマシャムバイオテック株式会社製）２５ｍＬを１５×３００ｍｍのカラムに充填し、５０ｍＬのエタノールで洗浄した。次に、１００ｍｇの上記松樹皮抽出液Ａの乾燥粉末を２ｍＬのエタノールに溶解させ、この溶液をカラムに通液して吸着させた。その後、１００〜８０％（Ｖ／Ｖ）エタノール−水混合溶媒でグラジエント溶出し、１０ｍＬずつ分取した。
【０１０９】
分取の際に、２〜４量体のＯＰＣの標品を指標として、各画分中のＯＰＣの有無を、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により検出した。そして、ＯＰＣよりも先に流出し、ＯＰＣを含まないＯＰＣ非含有画分（画分１）およびＯＰＣ含有画分（画分２）に分画した。
【０１１０】
なお、上記ＴＬＣにおいて、２量体のＯＰＣの標品にはプロアントシアニジンＢ−２（Ｒｆ値：０．６）を、３量体のＯＰＣの標品にはプロアントシアニジンＣ−１（Ｒｆ値：０．４）を、４量体のＯＰＣの標品にはシンナムタンニンＡ２（Ｒｆ値：０．２）を用いた。そして、ＴＬＣは、下記の条件で行った。
（ＴＬＣの条件）
・ＴＬＣ：シリカゲルプレート（Merck & CO., Inc.製）
・展開溶媒：ベンゼン／蟻酸エチル／蟻酸（２／７／１）
・検出試薬：硫酸およびアニスアルデヒド硫酸
・サンプル量：各１０μＬ
【０１１１】
次に、ＯＰＣが検出されなくなった時点で、３００ｍＬの５０％（Ｖ／Ｖ）水−アセトン混合溶媒を通液し、カラム（樹脂）に吸着されている残りの吸着物を溶出させた。これをＯＰＣ非含有画分（樹脂吸着画分：画分３）とした。
【０１１２】
この画分３については、さらにＴＬＣを行い、高分子ＰＣ画分（画分３ａ）とその他の画分（画分３ｂ）とに分けた。ＴＬＣの展開条件および検出方法を上記と同様に行い、４量体の標品（Ｒｆ値：０．２）より小さいＲｆ値で発色する画分を高分子ＰＣ画分（画分３ａ）とし、発色しない画分をその他の画分（画分３ｂ）とした。
【０１１３】
次に、ＯＰＣよりも先に流出し、ＯＰＣを含まないＯＰＣ非含有画分（画分１）については、以下のようにして、カテキン類画分（画分１ａ）とその他の画分（画分１ｂ）とに分離した。まず、画分１を凍結乾燥して粉末を得た。この粉末を３ｍＬの水に溶解させ、水で膨潤させた２０ｍＬのＭＣＩゲル（三菱化学株式会社製）が充填されたカラム（１５×３００ｍｍ）に通液して、成分を吸着させた。次に、このカラムを水で洗浄した後、１０〜１００％（Ｖ／Ｖ）エタノール−水混合溶媒でグラジエント溶出し、７ｍＬずつ分取した。溶出終了後、カテキンを指標として、各画分中のカテキン類をＴＬＣにより検出してカテキン類画分（画分１ａ）とその他の画分（画分１ｂ）とに分けた。
【０１１４】
上記のようにして得た画分１〜３については、それぞれ凍結乾燥により粉末化し、乾燥質量を測定した。なお、樹皮抽出物の乾燥粉末１００ｍｇに対して、画分１〜３の総和は、９９．９ｍｇであった。よって、ほぼ全量が回収されていたことが分かった。そして、樹皮抽出物の各成分の質量から各成分の含有率を算出したところ、ＯＰＣ画分（画分２）は４５．２％、高分子ＰＣ画分（画分３ａ）は２１．２％、カテキン類の画分（画分１ａ）は１４．９％、その他の画分（画分１ｂ＋画分３ｂ）は１８．７％であった。なお、ＯＰＣ比（画分２／画分３ａ）は、２．１３であった。
【０１１５】
（実施例２：樹皮抽出物の製造）
松樹皮９００ｇに、８０（Ｖ／Ｖ）％エタノール水溶液７．２Ｌを加え、ワーリングブレンダー（Waring Blender）で破砕した後、７０℃で１時間還流させながら加熱抽出した。次いで、直ちに濾過し、濾過後の不溶物を８０（Ｖ／Ｖ）％エタノール水溶液１．８Ｌで洗浄し、濾液と洗浄液とを合わせて９Ｌの松樹皮の含水エタノール粗抽出液Ｂを得た。
【０１１６】
このエタノール抽出液１Ｌ（抽出物粉末乾燥質量１０ｇ）を２５℃まで放冷し、濃縮してエタノールを完全に除去した。その後、精製水を添加して容量が５０ｍＬとなるように調整して、抽出液の１／２０容量に相当する濃縮液Ｂ１を得た。
【０１１７】
次に、５０ｍＬの濃縮液Ｂ１に、塩化ナトリウム（約３ｇ）を添加してよく攪拌した。この溶液を４℃で２４時間静置後、析出した不溶物を濾過により除去し、５１ｍＬの濾液Ｂ１を得た。
【０１１８】
次に、濾液Ｂ１を、水で膨潤させた芳香族系合成樹脂（ダイアイオンＨＰ−２０：三菱化学株式会社製）１００ｍＬが充填された３０×３００ｍｍのカラムに通液し、濾液Ｂ中のプロアントシアニジンをカラムに吸着させた。このカラムを１Ｌの精製水で洗浄して、カラムに残存する糖類、有機酸などを除去した。次いで２０％（Ｖ／Ｖ）のエタノール−水混合溶媒でカラムからプロアントシアニジンを溶出させ、２００ｍＬの松樹皮抽出液Ｂ１を得た。次に、松樹皮抽出液Ｂ１を凍結乾燥することによって、乾燥粉末を得た。これを松樹皮抽出液Ｂ１の乾燥粉末とした。実施例１と同様にして、松樹皮抽出液Ｂ１中の各成分の含有量を測定したところ、ＯＰＣが４３．２％、高分子ＰＣが３６．４％、およびその他の成分が２０．４％であった。なお、ＯＰＣ比（画分２／画分３ａ）は、１．１９であった。
【０１１９】
（実施例３：樹皮抽出物の製造）
実施例２と同様にして、松樹皮の含水エタノール粗抽出液Ｂを得、さらに濃縮してエタノールを完全に除去した。その後、精製水を添加して容量が１００ｍＬとなるように調整して、抽出液の１／１０容量に相当する濃縮液Ｂ２を得た。
【０１２０】
次に、１００ｍＬの濃縮液Ｂ２に、塩化ナトリウム（約１５ｇ）を添加してよく攪拌した。この溶液を４℃で２４時間静置後、析出した不溶物を濾過により除去し、９６ｍＬの濾液Ｂ２を得た。
【０１２１】
その後の操作は、実施例２と同様にして、松樹皮抽出液Ｂ２を得、これを乾燥することによって松樹皮抽出液Ｂ２の乾燥粉末を得た。実施例１と同様にして、松樹皮抽出液Ｂ２中の各成分の含有量を測定したところ、ＯＰＣが３９．３％、高分子ＰＣが３９．９％、およびその他の成分が２０．８％であった。なお、ＯＰＣ比（画分２／画分３ａ）は、０．９８であった。
【０１２２】
（比較例１：市販の松樹皮抽出物の成分分析）
市販の松樹皮抽出物の粉末Ｃについて、実施例１と同様にして、抽出物中の各成分の含有量を測定したところ、ＯＰＣが１９．３％、高分子ＰＣが３７．１％、カテキン類の画分が１０．８％、およびその他の成分が３２．８％であった。なお、ＯＰＣ比（画分２／画分３ａ）は、０．５２であった。
【０１２３】
（比較例２：市販の松樹皮抽出物の成分分析）
市販の松樹皮抽出物の粉末Ｄについて、実施例１と同様にして、抽出物中の各成分の含有量を測定したところ、ＯＰＣが１５．９％、高分子ＰＣが３９．６％、カテキン類の画分が１２．９％、およびその他の成分が３１．６％であった。なお、ＯＰＣ比（画分２／画分３ａ）は、０．４０であった。
【０１２４】
（実施例４：溶解性）
実施例１〜３で得られた松樹皮抽出液の乾燥粉末（樹皮抽出物Ａ、Ｂ１、およびＢ２）、ならびに比較例１および２で得られた松樹皮抽出物の粉末（樹皮抽出物ＣおよびＤ）を用いて、水への溶解性試験を行った。
【０１２５】
各松樹皮抽出物が１質量／体積％となるように、蒸留水に懸濁させ、ボルテックスでよく攪拌した。その後、室温（約２５℃）にて静置した。静置６０分後、溶液中の沈殿および濁度を目視により確認し、以下の基準で評価した。結果を表１に示す。
【０１２６】
（沈殿）
＋  ：沈殿が多量に認められる。
±  ：沈殿が若干認められる。
−  ：沈殿は認められない。
【０１２７】
（濁度）
＋  ：白濁が顕著である。
±  ：白濁が若干認められる。
−  ：白濁は認められない。
【０１２８】
さらに、上記目視による確認後、上記各水溶液全量を、ガラス繊維濾紙を用いて濾過した。得られた濾滓の乾燥質量を測定して、前記式１から溶解率を求めた。結果を表１に併せて示す。
【０１２９】
【表１】
0005398101.tif 000003
【０１３０】
表１の結果から、実施例１〜３の松樹皮抽出物（Ａ、Ｂ１、およびＢ２）については、目視により沈殿が認められず、白濁も認めらないことがわかる。一方、比較例１および２の市販の松樹皮抽出物（ＣおよびＤ）については、若干量の沈殿が認められ、白濁していた。さらに、実施例１〜３の松樹皮抽出物（Ａ、Ｂ１、およびＢ２）の溶解率はいずれも、９９．７％であるのに対して、比較例１および２の市販の松樹皮抽出物（ＣおよびＤ）の溶解率は、８５．７％および８９．７％であった。これらのことは、実施例１〜３の松樹皮抽出物（Ａ、Ｂ１、およびＢ２）が、比較例１および２の市販の松樹皮抽出物（ＣおよびＤ）に比べて、水に対する溶解性が高いことを示す。
【０１３１】
実施例１〜３の松樹皮抽出液については、上述の通り、沈殿および白濁が認められず、溶解率も高い値であった。このことは、ＯＰＣが樹皮抽出物中に２５質量％以上、好ましくは３０質量％以上、より好ましくは３５質量％以上、さらに好ましくは４０質量％以上、さらに好ましくは４５質量％以上含有する場合に、その樹皮抽出物の水に対する溶解性が飛躍的に高くなることを示す。また、ＯＰＣ比については、０．９以上であれば、水に対する溶解性が高くなることを示す。
【０１３２】
一方、比較例１および２の市販の松樹皮抽出物ＣおよびＤは、若干量の沈殿が認められ、白濁し、さらに溶解率も低かった。このことは、樹皮抽出物中にＯＰＣの含有割合が小さい場合には、樹皮抽出物の水に対する溶解性は小さいことを示す。また、樹皮抽出物中の高分子プロアントシアニジン含量が、ＯＰＣ含量よりもかなり大きい場合は、樹皮抽出物の水への溶解性は小さくなる傾向にある。
【０１３３】
（実施例５：抗酸化作用（ＳＯＤ活性））
（１）試験用ラットの調製
５週齢の雄性ＳＤラットを購入後、それを６週齢となるまで予備飼育した。予備飼育期間中、ラットを観察し、体重の増加異常などの異常が見られるラットを除去した。なお、予備飼育期間中、ラット用固形飼料ＭＦ（オリエンタル酵母工業株式会社製）および水道水を自由摂取させた。
【０１３４】
上記６週齢のラットを１２時間絶食させ、その後直ちに、ラットの眼窩静脈から血液を採取した。この血液を３０００ｒｐｍ（１７００×Ｇ）にて２０分間遠心分離し、血清を得た。次いで、血清のＳＯＤ活性を測定キット（ＳＯＤテストワコー(Code 435-70601)：和光純薬株式会社）を用いてＮＢＴ還元法により測定した。測定後、ＳＯＤ活性の平均値が均一になるように１群５匹ずつにわけた。
【０１３５】
（２）試験液の調製
実施例３で得られた松樹皮抽出液Ｂ２の乾燥粉末（松樹皮抽出物Ｂ２）の最終濃度が１０ｍｇ／ｍＬとなるように蒸留水に溶解させた（試験液１とする）。松樹皮抽出物Ｂ２の代わりに、比較例１の松樹皮抽出物の粉末（樹皮抽出物Ｃ）、市販の（−）カテキン、市販のビタミンＣ（アスコルビン酸）、および市販のブドウ種子ポリフェノールのいずれかを用いたこと以外は、上記と同様にして試験液を調製した（それぞれ試験液２〜５とする）。なお、対照として蒸留水を試験液６とした。
【０１３６】
（３）ＳＯＤ活性の測定
各試験液（各成分を１０ｍｇ／ｍＬ含有）を１０ｍＬ／ｋｇ体重の割合となるように、上記１群５匹のラットにゾンデを用いて経口投与した（成分として１００ｍｇ／ｋｇ体重）。経口投与後、水道水の自由摂取が可能な環境下でラットを飼育し、経口投与４５分後および９０分後に、再度眼窩静脈から採血し、上記と同様にしてＳＯＤ活性を測定した。そして、投与前のＳＯＤ活性の測定値を１とした場合の投与後のＳＯＤ活性の相対値を求めた。結果を図２に示す：
図２の結果から、ＯＰＣを２０質量％以上含有する松樹皮抽出物Ｂ２を含む試験液１は、ＯＰＣを１９．３％含有する松樹皮抽出物Ｃを含む試験液２あるいは他の抗酸化物質を含有する試験液３〜６に比べて、ＳＯＤ活性が高い傾向にあることがわかる。
【０１３７】
特に、試験液１および４の投与４５分後のＳＯＤ活性は、試験液２、３、および５の投与４５分後のＳＯＤ活性に比べて高いことがわかる。このことは、ＯＰＣを２０質量％以上含有する松樹皮抽出物Ｂ２（試験液１）およびアスコルビン酸（試験液４）が、ＯＰＣを１９．３％含有する松樹皮抽出物Ｃ（試験液２）、カテキン（試験液３）、ブドウ種子ポリフェノール（試験液５）に比べて、速やかに生体内に吸収され、高いＳＯＤ活性を有することを示す。
【０１３８】
さらに、図２において、松樹皮抽出物Ｂ２（試験液１）の投与４５分後〜９０分後のＳＯＤ活性の増加（傾き）は、アスコルビン酸（試験液４）の投与４５分後〜９０分後のＳＯＤ活性の増加に比べて高いことがわかる。このことは、ＯＰＣを２０質量％以上含有する松樹皮抽出物Ｂ２が、アスコルビン酸に比べて、ＳＯＤ活性の持続性に優れることを示す。アスコルビン酸は、速やかにＳＯＤ活性が増加するにもかかわらず、活性の持続性が低かった。アスコルビン酸は、ＯＰＣを１９．３％含有する松樹皮抽出物Ｃ（試験液２）に比べてもＳＯＤ活性の持続性に乏しかった。
【０１３９】
最終的に、試験液１の投与９０分後のＳＯＤ活性が最も高かった。これは、試験液１に含まれるＯＰＣを２０質量％以上含有する松樹皮抽出物Ｂ２が、水に対する溶解性が高く、生体内にすばやく吸収されるためと考えられる。このように、本発明の樹皮抽出物が、他の抗酸化物質に比べて、比較的迅速に、かつ生体内で優れた抗酸化作用、特にＳＯＤ活性を示す傾向にあることがわかる。
【０１４０】
（実施例６：抗酸化作用に基づく生理活性増強作用または吸収促進作用の評価）
実施例３にて得られた松樹皮抽出液Ｂ２の乾燥粉末、比較例１の松樹皮抽出物と小麦由来のスフィンゴ脂質抽出物（スフィンゴ糖脂質を３質量％含有、日本油脂社製）、大豆レシチン（グリセロ脂質、ツルーレシチン工業社製）を用いて、表２に記載の所定の濃度となるように蒸留水に溶解して、試験液を調整した。これらを実施例５と同様にしてラットに投与し、血清のＳＯＤ活性を測定した。結果を図３に示す：
【０１４１】
【表２】
0005398101.tif 000004
【０１４２】
図３の結果から、樹皮抽出物Ｂ２とスフィンゴ脂質を含有する試験液７と、松樹皮抽出物Ｂ２を単独で含有する試験液９とをそれぞれ投与した群との比較から、本発明のスフィンゴ脂質と松樹皮抽出物とを含有する試験液は、優れた血中の抗酸化作用を示すことが分かる。また、試験液７と松樹皮抽出物Ｃとスフィンゴ脂質を含有する試験液８とをそれぞれ投与した群の比較から、ＯＰＣを高含有する樹皮抽出物のほうが、より高い効果を示すことも分かる。すなわち、本発明のスフィンゴ脂質は、樹皮抽出物成分の有する生理活性を増強していることから、吸収促進効果を有することが分かった。
【０１４３】
（実施例７：血流改善効果に基づく生理活性増強作用または吸収促進作用の評価）
実施例６にて調整した試験液７〜１２を用いて、血流改善効果の評価を以下のようにして行った。予め各１０人の被験者（２０〜５０歳の健常人）の前腕部に１．０ｃｍ四方のマーキングを計６箇所行い、その部分の皮下の血流量を試験液塗布前の血流量として血流計（レーザー血流画像化装置ＰＩＭ  ＩＩ；Ｓｗｅｄｅｎ  Ｐｅｒｍｉｅｄ社）を用いて測定した。得られた化粧水塗布前の血流量の平均値をａとした。
【０１４４】
次に、試験液７〜１２を上記マーキング部位にそれぞれ０．０３ｍＬ塗布した。塗布後、０、０．５、１、１．５、および２時間後の皮下の血流量を測定した。得られた試験液塗布後の所定時間経過後の血流量の平均値をｂとした。得られた平均値ａおよびｂから以下の式２によって、血流改善率を算出し、血流改善効果を評価した。結果を図４に示す。なお、図４に示すグラフの横軸（時間）の単位は、時間（ｈｏｕｒ）である。
血流量改善率（％）＝１００×（ｂ−ａ）／ａ        式２
【０１４５】
図４の結果から、樹皮抽出物Ｂ２とスフィンゴ脂質を含有する試験液７と、松樹皮抽出物Ｂ２を単独で含有する試験液９との比較から、本発明のスフィンゴ脂質と樹皮抽出物とを含有する試験液は優れた血流改善効果を有するこが分かる。また、この効果は試験液７と松樹皮抽出物Ｃとスフィンゴ脂質を含有する試験液８との比較から、ＯＰＣを高含有する樹皮抽出物を用いることで、より高い効果が得られることが分かる。すなわち、経皮投与した場合においても、スフィンゴ脂質によって樹皮抽出物成分の有する生理活性が増強されていることから、スフィンゴ脂質は、樹皮抽出物成分の経皮からの吸収を促進し得ることが分かる。
【産業上の利用可能性】
【０１４６】
本発明のスフィンゴ脂質は、樹皮抽出物成分の有する性活性を増強することから、樹皮抽出物成分の吸収を促進しえる。この効果は、水に対する溶解性が高められたプロアントシアニジン（特にＯＰＣ）含有樹皮抽出物によって、より高い効果を得ることができる。したがって、化粧品、医薬部外品、医薬品、食品、飲料などに上記ポリフェノールを用いる場合、本発明の樹皮抽出物と共にスフィンゴ脂質を投与すれば、樹皮抽出物に起因する様々な生理活性をより効果的に得ることができるため、有用である。
【図面の簡単な説明】
【０１４７】
【図１】松樹皮抽出液Ａを種々の画分に分離した図である。
【図２】ラットに試験液を投与した場合のＳＯＤ活性増加率の経時的変化を示すグラフである。
【図３】ラットに樹皮抽出物とスフィンゴ脂質またはレシチンとを組み合わせた試験液を投与した場合のＳＯＤ活性増加率の経時的変化を示すグラフである。
【図４】ヒトの皮膚へ樹皮抽出物とスフィンゴ脂質またはレシチンとを組み合わせた試験液を投与した場合の血流量改善率の経時的変化を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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