(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
0005398709.tif 000009
［式中、Ｍ１及びＭ２は各々独立に、Ｈ、Ａｇ又Ｃｕを示す。但し、Ｍ１及びＭ２は同時にＨでない。］
で表される単塩又は複塩を有効成分とする抗菌剤。
【請求項２】
式（Ｉ）：
0005398709.tif 000010
［式中、Ｍ１及びＭ２は各々独立に、Ｈ、Ａｇ又Ｃｕを示す。但し、Ｍ１及びＭ２は同時にＨでない。］
で表される単塩又は複塩を有効成分とする殺菌剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は優れた抗菌・殺菌作用を有し、かつ安全性が高く、環境に対する負荷がほとんど無い抗菌剤及び殺菌剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年では、銀イオンを利用した防菌剤、あるいは抗菌スプレー等が開発され、生活用品の中にも有機化合物系の抗菌剤を添加した抗菌シート等が幅広く普及してきている。しかしながら、銀イオンを利用したものの中には、実際の効果が疑われるものも散見される。また、有機化合物系の抗菌剤については、安全性の問題等で使用できる物質、あるいは使用対象が限定されているのが実情である。
細菌（例えばサルモネラ菌）、酵母、カビ等の不快な微生物を抑制する目的で動物の飼料製造、養鶏場で使用される抗菌剤の中にギ酸、プロピオン酸を含む商品があるが、ギ酸の毒性、プロピオン酸、ギ酸の不快臭が作業上問題となっている。また、ｐＨも低いため、金属等の腐食の可能性もある。
また、安全性の高い天然物由来の抗菌剤も知られているが、コストや製造法に問題点を有するものが多い。天然物由来の抗菌剤としては、柑橘類由来の抗菌剤が知られている（特開平８−３１７７８２号公報）。これはレモン果皮を圧搾して得られる精油を濃縮した残渣を精製して得られる化合物を有効成分とするものであるが、所望の抗菌剤とするには濃度を調整しなければならないため、製造法が煩雑で経済的でない。
また、マメ科植物のクロバナエンジュ抽出物を含む抗菌剤が報告されているが（特開２００４−２５６４３７号公報）、クロバナエンジュは栽培系の植物ではなく、かつ溶媒抽出を要するため経済的ではない。特開２００２−１６１０７５号公報には、本発明と同様なタンニン由来の没食子酸を原料とする抗菌剤が記載されているが、クラウンエーテルのような毒性の高い物質を用いる必要がある。
また、抗菌剤の有効成分として、天然物系のフェルラ酸を原料とするフェルラ酸エステル化合物も報告されているが（特開２００２−１６１００４号公報）、米糠から得られるフェルラ酸自体が高価であり、かつエステル化合物の安全性も確認されていない。
【発明の概要】
【０００３】
従って、本発明は上記課題を解決し、安全性が極めて高く、環境に対する負荷がほとんどない抗菌剤及び殺菌剤を提供することを目的とする。
本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意検討した結果、下記式（Ｉ）で表される２Ｈ−ピラン−２−オン−４，６−ジカルボン酸（以下、「ＰＤＣ」と称する）の単塩又は複塩が、グラム陰性菌、グラム陽性菌等の細菌類、酵母、カビ等の真菌類に対して、抗菌・殺菌作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、（１）本発明は、式（Ｉ）：
0005398709.tif 000002
［式中、Ｍ１及びＭ２は各々独立に、Ｈ、Ａｇ又Ｃｕを示す。但し、Ｍ１及びＭ２は同時にＨでない。］
で表される単塩又は複塩を有効成分とする抗菌剤を提供するものである。
（２）本発明はまた、式（Ｉ）：
0005398709.tif 000003
［式中、Ｍ１及びＭ２は各々独立に、Ｈ、Ａｇ又Ｃｕを示す。但し、Ｍ１及びＭ２は同時にＨでない。］
で表される単塩又は複塩を有効成分とする殺菌剤を提供するものである。
本発明によれば、式（Ｉ）で表される単塩又は複塩は優れた抗菌・殺菌作用を有する。従って、式（Ｉ）で表される単塩又は複塩は、天然物由来物質を出発物質としているために安全性が極めて高く、環境に対する負荷がほとんど無い抗菌剤及び殺菌剤の成分として工業的に有用である。
【発明を実施するための形態】
【０００４】
本発明の抗菌剤及び殺菌剤は、式（Ｉ）で表されるＰＤＣの単塩又は複塩を有効成分とする。この単塩又は複塩には、銀（Ｉ）、銅（Ｉ）、及び銅（ＩＩ）から選ばれる金属の塩が挙げられる。このような金属塩には、ＰＤＣ  １分子中の１つのカルボキシルイオンと上記の金属から選ばれる１つの金属イオンとで形成されるカルボン酸塩（単塩）が含まれる。該単塩は、ＰＤＣ  １分子中の２つのカルボキシルイオンがいずれも金属イオンと塩を形成しているものでもよく、その場合には、金属イオンの種類は互いに異なっていてもよい。
また、式（Ｉ）で表される金属塩には、複塩構造の金属塩も含まれる。本明細書において、「複塩」とは、２つ以上のＰＤＣの２Ｈ−ピラン−２−オン環のカルボニル基と１つ以上の上記金属イオンとで形成される複塩を意味し、その構造としては、例えば、下記式で表される、ＰＤＣ  ２分子それぞれの該カルボニル基が１つの金属イオンに配位した八面体６配位構造（Ｍは金属原子を示す）が挙げられる。
0005398709.tif 000004
本発明における式（Ｉ）で表される金属塩の製造方法は特に限定されないが、例えば、バニリン、シリンガアルデヒド、バニリン酸、シリンガ酸又はプロトカテク酸を出発物質として、シュードモナス属細菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ  ＰｂＹ１１００）にＰＤＣの発酵生産プラスミドｐＫＴＶＬＡＢＣを導入した形質転換細胞を培養する方法（特開２００５−２７８５４９号公報）を用いてＰＤＣを製造した後、常法によりＰＤＣの金属塩とすることにより、簡便かつ高純度で得ることができる。
本発明の抗菌剤及び殺菌剤中の式（Ｉ）で表されるＰＤＣの金属塩の含有量は、通常、０．００５〜５０質量％であり、好ましくは０．０１〜２質量％である。
本発明における抗菌・殺菌の対象は、特に限定されるものではないが、例えば細菌類、真菌類などを含む広義の微生物である。細菌類としては、ブドウ球菌（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌を含む）、レンサ球菌等のグラム陽性球菌や、バシラス属、クロストリジウム属、コリネバクテリウム属、リステリア属、プロピオニバクテリウム属、アクチノミセス属のグラム陽性桿菌、を含むグラム陽性菌；ナイセリア属、ブランハメラ属等のグラム陰性球菌や、シュードモナス属、腸内細菌科（大腸菌（腸管出血性大腸菌を含む））、サルモネラ、赤痢菌、ペスト菌、クレブシエラ属）由来、ヘモフィルス属、ブルセラ属、ボルデテラ属等のグラム陰性桿菌、を含むグラム陰性菌；ビブリオ属等のらせん状桿菌；リケッチア；クラミジア；マイコプラズマなどが挙げられる。真菌類としては、カンジタ等の酵母や、アルペルギルス、クラドスポリウム、トリコフィトン等のカビ類などが挙げられる。
具体的には、スタフィロコッカス・アウレウス亜種アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｓｕｂｓｐ． ａｕｒｅｕｓ）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、シュードーモナス・アエルギノサ（Ｐｓｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、サルモネラ・エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）、ビブリオ・パラハエモリティカス（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、アスペルギルス・ニゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、クラドスポリウム・クラドスポリオイデス（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）、及びトリコフィトン・ルブルム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｒｕｂｕｒｕｍ）からなる群より選ばれる微生物が挙げられる。
本発明の抗菌剤及び殺菌剤は、飲食品、洗剤、香粧品、口腔用品、医薬品、医薬部外品等に添加して微生物の増殖を防ぐことができ、またこれらの包装材料、抗菌シート、抗菌加工品、抗菌スプレー等にも適用できる。
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例になんら限定されるものではない。
【実施例】
【０００５】
実施例１
１．材料
＜被験物質１＞
ＰＤＣ（１．０５ｇ、５．７ｍｍｏｌ）の水溶液に硝酸銀（２．１１ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）の水溶液を作用させ白色沈殿（２．１２ｇ，５．１３ｍｍｏｌ、収率９０％）を得た。これを熱水から再結晶し、被験物質１とした。
＜対照及び試薬＞
滅菌精製水（日本薬局方精製水：日本新薬株式会社製、高圧蒸気滅菌処理）
滅菌リン酸緩衝液（ＰＲｏ−ｍｅｄｉａ  ＭＶ２−１０００、（株）エルメックス）
＜被験物質１の０．１％、０．０５％、０．０２５％の各水溶液の調製＞
０．１％水溶液：被験物質１  ０．１ｇを秤量し、滅菌精製水で１００ｍＬにした。
０．０５％水溶液：０．１％水溶液を滅菌精製水で２倍希釈した。
０．０２５％水溶液：０．０５％水溶液を滅菌精製水で２倍希釈した。
なお、比較のために、比較物質１としてＰＤＣの０．１％、０．０５％、０．０２５％の各水溶液も調製した。
＜菌株＞
スタフィロコッカス・アウレウス亜種アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ  ｓｕｂｓｐ． ａｕｒｅｕｓ）（ＮＢＲＣ  １３２７６）
エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）（ＮＢＲＣ  ３９７２）
サルモネラ・エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）（ＮＢＲＣ  ３３１３）
括弧内は標準菌株番号を示す。
＜培地＞
トリプケースソイ寒天培地（ＳＣＤ培地、日本ビオメリュー社製）
＜滅菌シャーレ＞
滅菌ＮＥシャーレ（栄研器材株式会社製）
＜接種菌液の調製＞
上記菌株をＳＣＤ寒天培地で３５±２℃で１８〜２４時間培養後、滅菌精製水に懸濁し、ＭａｃＦａｒｌａｎｄ  Ｎｏ．１の濁度に合わせたものを接種菌液とした。寒天培地を用いて寒天平板混釈法に準じて接種菌液濃度を測定した。
【表１】
0005398709.tif 000005
２．方法
＜試験手順＞
被験物質１の０．１％、０．０５％、０．０２５％の各水溶液及び滅菌精製水（対照）をそれぞれ５ｍＬ準備した（ｎ＝１）。各試験液に０．０５ｍＬの上記接種菌液を室温で接種した。１５分及び２４時間、室温で接種した後に、試験液０．５ｍＬに滅菌リン酸緩衝液（ＰＲｏ−ｍｅｄｉａ  ＭＶ２−１０００、（株）エルメックス）４９．５ｍＬを加えて混和した（ｐＨ６〜８）。次いで、各混和液の１０倍希釈系列を作製し、生菌数を測定し、試料又は対象１ｍＬ中の菌数に換算した。生菌数の測定は、「第十五改正  日本薬局方  生菌測定  カンテン平板法」に準じて行った（ｎ＝２）。結果を表２に示す。
【表２】
0005398709.tif 000006
実施例２：最小殺菌濃度の測定
１．材料
＜被験物質２＞
６５℃に調整したＰＤＣ（８．０８ｇ、４３．９ｍｍｏｌ）の水溶液３００ｍＬに硝酸銀（６．７９ｇ、３９．９７ｍｍｏｌ）の水溶液１００ｍＬを加え、５分間撹拌した。その後、反応液を熱時ろ過し、室温で１日静置し、更に０℃で１日静置すると無色の板状結晶が析出した（９．２１ｇ、７．９ｍｍｏｌ、収率７４．６％、Ａｇ（ＨＰＤＣ）・Ｈ２Ｏとして計算）。これを被験物質２とした。
＜被験物質３＞
６５℃に調整したＰＤＣ（３．６８ｇ、２０ｍｍｏｌ）の水溶液８０ｍＬに硫酸銅（２．５０ｇ、１０ｍｍｏｌ）の水溶液２０ｍＬを加え、中和剤として水酸化バリウム水溶液を硫酸銅に対し１等量加えると、硫酸バリウムの沈殿が析出してきた。１時間程度撹拌した後、析出した硫酸バリウムの沈殿をろ別した後、反応液を室温で静置すると淡緑色沈殿が析出した（３．０２ｇ、７．０ｍｍｏｌ、７０％、Ｃｕ（ＨＰＤＣ）２として計算）。これを被験物質３とした。
２．方法
＜最小殺菌濃度＞
殺菌効果を確認するため、最小殺菌濃度（ＭＢＣ）の測定を行い、その性能を評価した。
＜対照及び試薬＞
滅菌精製水（日本薬局方精製水；日本新薬株式会社製、高圧蒸気滅菌処理）
滅菌リン酸緩衝液（Ｐｒｏ−ｍｅｄｉａ  ＭＶ２−１０００、株式会社エルメックス製）
＜使用培地＞
ＳＣＤ寒天培地（株式会社日本ビオメリュー製）
サブロー・ブドウ糖寒天培地（日水製薬株式会社製）
＜滅菌シャーレ＞
滅菌ＮＥシャーレ（栄研化学株式会社）
＜被検物質水溶液の調製＞
被験物質２の５０、２５、１２．５、６．２５、３．１３ｐｐｍ水溶液、被験物質３の１００、５０、２５ｐｐｍ水溶液および滅菌精製水（対照）をそれぞれ５ｍＬ用意した（ｎ＝１）。
＜使用菌株＞
スタフィロコッカス・アウレウス亜種アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｓｕｂｓｐ． ａｕｒｅｕｓ）（ＮＢＲＣ  １３２７６）
エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）（ＮＢＲＣ  ３９７２）
エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）０１５７：Ｈ７（ＡＴＣＣ  ３５１５０）
シュードモナス・アエルギノザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（ＮＢＲＣ  １３２７５）
サルモネラ・エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）（ＮＢＲＣ  ３３１３）
ビブリオ・パラハエモリティカス（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）（ＮＢＲＣ  １２７１１）
カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）（ＮＢＲＣ  １５９４）
クラドスポリウム・クラドスポリオイデス（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）（ＮＢＲＣ  ６３４８）
＜接種用菌液の調製＞
細菌はＳＣＤ寒天培地（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓはＳＤＣ寒天培地セルに１．５％の食塩を添加して培養した）で３５±２℃、１８〜２４時間培養した。真菌は、サブロー・ブドウ糖寒天培地で５〜１０日間培養した寒天平板上の集落を滅菌リン酸緩衝液でＭａｃＦａｒｌａｎｄ  Ｎｏ．１（細菌は約１０８ｃｆｕ／ｍＬ、真菌は約１０６ｃｆｕ／ｍＬ）相当の濁度に懸濁して接種菌液とした。接種菌液濃度は寒天平板混釈法に準じて測定した。
＜試験手順＞
上記で調製した被験物質２、被験物質３の水溶液に０．０５ｍＬの各種接種菌液を接種し、２４時間、室温で作用させた。その後、試験液０．１ｍＬに滅菌リン酸緩衝液９．９ｍＬを加え混和（中和）し、ｐＨが６〜８であることを確認した。ついで、各中和液の１０倍希釈系列を作製し、生菌数を１ｍｌ中の菌数に換算して測定した。生菌数の測定については、細菌はＳＣＤ寒天培地（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓは１．５％の食塩を添加）で、真菌は、サブロー寒天培地を用いて「第十五改正日本薬局方  生菌測定  寒天平板混釈法」に準じて行った。（ｎ＝２）これらの測定結果を表３に示す。
【表３】
0005398709.tif 000007
実施例３：発育阻止濃度の測定
１．材料
被験物質１および被験物質２を用いた。
２．方法
＜発育阻止濃度＞
抗菌効果を確認するため、発育阻止濃度の測定を行い、その性能を評価した。試験は、日本化学療法学会ＭＩＣ（最小発育阻止濃度）測定法  寒天平板希釈法に準じておこなった。
＜対称及び試薬＞
滅菌精製水（シオエ製薬株式会社製）
滅菌生理食塩水（大塚生食注２５０ｍＬ、大塚製薬株式会社製）
＜使用培地＞
ミュラーヒントンＩＩ寒天培地（ベクトン・ディッキンソン社製）
サブロー・ブドウ糖寒天培地「ダイゴ」（日水製薬株式会社製）
＜使用菌株＞
スタフィロコッカス・アウレウス亜種アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｓｕｂｓｐ． ａｕｒｅｕｓ）ＭＲＳＡ（ＡＴＣＣ  ４３３００）
エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）０１５７：Ｈ７（ＡＴＣＣ  ３５１５０）
シュードモナス・アエルギノザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（ＮＢＲＣ  １３２７５）
サルモネラ・エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）（ＮＢＲＣ  ３３１３）
ビブリオ・パラハエモリティカス（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）（ＮＢＲＣ  １２７１１）
アスペルギルス・ニゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）（ＮＢＲＣ  ９４５５）
カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）（ＮＢＲＣ  １５９４）
クラドスポリウム・クラドスポリオイデス（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）（ＮＢＲＣ  ６３４８）
トリコフィトン・ルブラム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｕｒｕｍ）（ＮＭＲＣ３２４０９）
＜接種用菌液の調製＞
細菌は、ミュラーヒントンＩＩ寒天培地にて一夜培養、真菌はサブロー寒天倍地で５〜１０日間培養した。寒天平板上の被検菌体を滅菌生理食塩水でＭａｃＦａｒｌａｎｄ  Ｎｏ．１（細菌は約１０８ｃｆｕ／ｍＬ、真菌は約１０６ｃｆｕ／ｍＬ）相当の濁度に懸濁して接種用菌液とした。
＜被検物質１、被検物質２の希釈及び被検物質含有感受性培地の作製＞
被検物質１、被検物質２を０．１６ｇ秤量し、滅菌精製水で１００ｍＬにして０．１６％水溶液を作製した（薬剤原液）。薬剤原液について、約４５℃に保った感受性測定用培地（細菌はミュラーヒントンＩＩ寒天培地、真菌はサブロー寒天培地）を用いて８倍希釈系列（０．０２、０．００２５％）を調製した。さらにそれぞれを感受性測定用培地で１０倍、２０倍、４０倍に希釈して、０．０１６〜０．００００６２５％の薬剤系列を各２枚ずつ作製し、滅菌シャーレに固化したものを被検物質含有感受性培地とした。この際、薬液を調製する滅菌ピペットはその都度交換した。
対照として薬剤原液の代わりに滅菌精製水を使用したものについて、同様に各濃度１枚作製し、薬剤不含培地とした。
＜試験手順＞
被検物質含有感受性培地及び薬剤不含培地の寒天培地表面に、接種用菌液を白金耳で２ｃｍ程度画線塗抹した（被検物質含有感受性培地はｎ＝２、薬剤不含培地はｎ＝１）。細菌は３７±３℃で１８〜２０時間、真菌は２５±３℃で３〜５日間、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｕｒｕｍは５±３℃で１４日間、それぞれ好気培養を行った。培養後、各被検物質含有感受性培地及び薬剤不含培地について菌の発育の有無を判定した。これらの測定結果を表４に示す。
比較物質１としてＰＤＣを２．０ｇ秤量し、滅菌精製水で１０ｍＬにして２０％水溶液を作製した（薬剤原液）。実施例３と同様に８倍希釈系列（２．５、０．３１％）を調製し、さらにそれぞれを感受性測定用培地で１０倍、２０倍、４０倍に希釈して、２．０〜０．００７８％の薬剤系列を各２枚ずつ作製し、滅菌シャーレに固化したものを比較物質含有感受性培地とした。
この比較物質１含有感受性培地に実施例３と同様に接種用菌液画線塗抹し、菌の発育の有無を判定した。この測定結果を表４に示す。
【表４】
0005398709.tif 000008
被検物質１及び被検物質２はそのＭＩＣ値が比較物質１に比べて著しく低く、抗菌力が著しく高いことが明らかとなった。また、文献（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，６８（１），ｐ．３９−４４，１９９７）では、硝酸銀のＭＩＣ値は、Ｅｓｈｅｒｉｃｈｉａ Ｃｏｌｉ：６．３ｐｐｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ：＞１，６００ｐｐｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ：＞１，６００ｐｐｍ、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ：＞１，６００ｐｐｍと報告されている。従って、ＰＤＣの銀塩は、硝酸銀又は遊離ＰＤＣと比較して顕著な抗菌効果を示し、特にカビ等の真菌類への抗菌力が高いことが明らかとなった。
実施例４
１．材料
＜被験物質２＞
実施例２で調製したものを用いた。
＜比較物質２＞
５０℃に調整したＰＤＣ（１．８４ｇ、１０ｍｍｏｌ）の水溶液８ｍＬに硫酸鉄七水和物（１．３９ｇ、５ｍｍｏｌ）の水溶液５ｍＬを加え、中和剤として水酸化バリウム水溶液を硫酸鉄七水和物に対し１等量加えると、硫酸バリウムの沈殿が析出してきた。３０分程度撹拌した後、析出した硫酸バリウムの沈殿をろ別した後、反応液を０℃で静置すると黄色沈殿が析出した（１．５４ｇ、３．７ｍｍｏｌ、７３％、Ｆｅ（ＨＰＤＣ）２として計算）。これを比較物質２とした。
＜比較物質３＞
５０℃に調整したＰＤＣ（１．８４ｇ、１０ｍｍｏｌ）の水溶液８ｍＬに硫酸コバルト七水和物（１．４１ｇ、５ｍｍｏｌ）の水溶液５ｍＬを加え、中和剤として水酸化バリウム水溶液を硫酸コバルト七水和物に対し１等量加えると、硫酸バリウムの沈殿が析出してきた。３０分程度撹拌した後、析出した硫酸バリウムの沈殿をろ別した後、反応液を０℃で静置すると淡赤色沈殿が析出した（１．４５ｇ、３．４ｍｍｏｌ、６８％、Ｃｏ（ＨＰＤＣ）２として計算）。これを比較物質３とした。
＜比較物質４＞
５０℃に調整したＰＤＣ（１．８４ｇ、１０ｍｍｏｌ）の水溶液８ｍＬに硫酸亜鉛七水和物（１．４４ｇ、５ｍｍｏｌ）の水溶液５ｍＬを加え、中和剤として水酸化バリウム水溶液を硫酸亜鉛七水和物に対し１等量加えると、硫酸バリウムの沈殿が析出してきた。３０分程度撹拌した後、析出した硫酸バリウムの沈殿をろ別した後、反応液を０℃で静置すると白色沈殿が析出した（１．３６ｇ、３．２ｍｍｏｌ、６３％、Ｚｎ（ＨＰＤＣ）２として計算）。これを比較物質４とした。
２．方法（殺菌試験の比較）
被検物質２と比較物質２〜４の０．１、０．０１、０．００１、０．０００１％水溶液５ｍＬを調製し、そこにＣｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓをＭａｃＦａｒｌａｎｄ  Ｎｏ．１相当の濁度に懸濁した接種菌液を０．０５ｍＬ接種し、２４時間、室温で作用させた。その後、試験液０．１ｍＬに滅菌リン酸緩衝液９．９ｍＬを加え混和（中和）し、ｐＨが６〜８であることを確認した。ついで、各中和液の１０倍希釈系列を作製し、生菌の可否を判断した。生菌判定については、ポテトデキストローズ寒天培地（Ｄｉｆｃｏ（登録商標）Ｐｏｔａｔｏ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅ  Ａｇａｒ、Ｂｅｃｔｏｎ．Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ製）を用いて、目視で判定した。
被検物質２では、０．０００１％（１ｐｐｍ）で殺菌効果が認められたが、比較物質２〜４では、０．１％でも菌の生育が認められた。従って、ＰＤＣの銀、銅以外の金属塩に比べ、ＰＤＣの銀塩は抗菌・殺菌性が著しく高いことがわかった。これらの結果より、ＰＤＣの銀塩及び銅塩は、優れた抗菌・殺菌効果があることが確認できた。