(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管内皮細胞成長因子受容体（vascular endothelial growth factor receptor、ＶＥＧＦＲ）経路阻害物質を有効成分として含有する、ＩＬ(interleukin)−６或いはＩＬ(interleukin)−１７を媒介とするＴｈ１７(T helper type 17)炎症疾患の治療又は予防のための薬学的組成物であって、
該Ｔｈ１７炎症疾患が、非好酸球性或いは好中球性炎症を特徴とする炎症性腸炎、アトピー性皮膚炎、リウマチ性疾患又は自己免疫疾患であり、
該血管内皮細胞成長因子受容体経路阻害物質が、セマキサニブ（semaxanib、ＳＵ５４１６）、ＣＴ−３２２ペプチド、バタラニブ（vatalanib、ＰＴＫ７８７）又はａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１モノクローナル抗体である、薬学的組成物。
【請求項２】
血管内皮細胞成長因子受容体経路阻害物質（vascular endothelial growth factor receptor、ＶＥＧＦＲ）を有効成分として含有する薬学的組成物を哺乳動物（人を除く）に投与する段階を含む、ＩＬ(interleukin)−６或いはＩＬ(interleukin)−１７を媒介とするＴｈ１７(T helper type 17)炎症疾患の治療又は予防方法であって、
該Ｔｈ１７炎症疾患が、非好酸球性或いは好中球性炎症を特徴とする炎症性腸炎、アトピー性皮膚炎、リウマチ性疾患又は自己免疫疾患であり、
該血管内皮細胞成長因子受容体経路阻害物質が、セマキサニブ（semaxanib、ＳＵ５４１６）、ＣＴ−３２２ペプチド、バタラニブ（vatalanib、ＰＴＫ７８７）又はａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１モノクローナル抗体である、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非好酸球性或いは好中球性炎症を特徴とするＴｈ１７炎症疾患治療または予防方法、およびこのための薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
呼吸器炎症性疾患、たとえば喘息や慢性閉塞性肺疾患（chronic obstructive pulmonary disease、ＣＯＰＤ）などの治療において、炎症を抑制することは非常に重要である。
【０００３】
喘息は免疫体系の過剰反応による呼吸器炎症である。１９８０年代後半に、ヘルパーＴ細胞(helper T cell)として、細胞性免疫を活性化するＴｈ１細胞および体液性免疫を活性化するＴｈ２細胞があることが発見され、Ｔｈ１、Ｔｈ２細胞が互いに拮抗作用をすることが知られている。これにより、喘息はアレルギー抗原に反応する抗体ＩｇＥにより刺激されたＴｈ２細胞が分泌するサイトカインによって好酸球(eosinophile)が主に関与する炎症であると理解されている（非特許文献１）。Ｔｈ２が分泌するＩＬ−１３がマウス喘息モデルで喘息を誘発することが確認された（非特許文献２、非特許文献３）。
【０００４】
ところが、喘息の中でも、相当数を占める非好酸球性喘息(non-eosinophilic asthma)はＴｈ２細胞で説明することができない（非特許文献４、非特許文献５）。非好酸球性或いは好中球性喘息では好酸球より好中球(neutrophils)が一層多く発見され、喘息の度合いがさらに激しい。コルチコステロイドと偽薬(placebo)の吸入治療効果を比較した臨床研究においても、非好酸球性喘息は好酸球性喘息とは顕著に区分され、ステロイドによる治療効果が殆どなかった（非特許文献６）。
【０００５】
最近、Ｔｈ１、Ｔｈ２と区分される新しいヘルパーＴ細胞としてのＴｈ１７細胞が発見されており、ＣＤ４＋細胞またはＣＤ８＋細胞がＩＬ−１７を分泌することが知られている（非特許文献７、非特許文献８、非特許文献９）。Ｔｈ１７細胞が好中球性炎症に関連するという予想はあるが、Ｔｈ１７細胞またはＴｈ１７細胞が分泌するＩＬ−１７と喘息との関連は知られていない（非特許文献１０）。さらに興味深い事実は、Ｔｈ１７炎症反応が持続したとき、粘膜に大腸癌が発生するという事実が最近報告された（非特許文献１１）。
【０００６】
一方、過多発現した血管内皮細胞成長因子（vascular endothelial growth factor、ＶＥＧＦ）は気道リモデリング(airway remodeling)を起こし、アレルギー炎症において内皮細胞とともにＴｈ２細胞がＶＥＧＦを分泌すると報告された（非特許文献１２）。ところが、Ｔｈ１７細胞とＶＥＧＦまたはその受容体（vascular endothelial growth factor、ＶＥＧＦ）との関係は知られていない。
【０００７】
ＶＥＧＦＲ群にはＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３の３つの受容体がある。これらの中でも、ＶＥＧＦＲ−１はＦｌｔ−１という名称で、ＶＥＧＦＲ−２はＫＤＲまたはＦｌｋ−１という名称で、ＶＥＧＦＲ−３はＦｌｔ−４という名称で呼ばれることもある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ＤＳ，  Ｈａｍｉｄ  Ｑ，  Ｙｉｎｇ  Ｓ，  Ｔｓｉｃｏｐｏｕｌｏｓ  Ａ，  Ｂａｒｋａｎｓ  Ｊ，  Ｂｅｎｔｌｅｙ  ＡＭ，  Ｃｏｒｒｉｇａｎ  Ｃ，  Ｄｕｒｈａｍ  ＳＲ，  Ｋａｙ  ＡＢ．  Ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ  Ｔｈ２−ｌｉｋｅ  ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ  Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｔｏｐｉｃ  ａｓｔｈｍａ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  １９９２；３２６：２９８−３０４
【非特許文献２】Ｇｒｕｎｉｇ  Ｇ，  Ｗａｒｎｏｃｋ  Ｍ，  Ｗａｋｉｌ  ＡＥ，  Ｖｅｎｋａｙｙａ  Ｒ，  Ｂｒｏｍｂａｃｈｅｒ  Ｆ，  Ｒｅｎｎｉｃｋ  ＤＭ，  Ｓｈｅｐｐａｒｄ  Ｄ，  Ｍｏｈｒｓ  Ｍ，  Ｄｏｎａｌｄｓｏｎ  ＤＤ，  Ｌｏｃｋｓｌｅｙ  ＲＭ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ＩＬ−１３  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ  ｏｆ  ＩＬ−４  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｓｔｈｍａ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９８；２８２：２２６１−２２６３
【非特許文献３】Ｗｉｌｌｓ−Ｋａｒｐ  Ｍ，  Ｌｕｙｉｍｂａｚｉ  Ｊ，  Ｘｕ  Ｘ，  Ｓｃｈｏｆｉｅｌｄ  Ｂ，  Ｎｅｂｅｎ  ＴＹ，  Ｋａｒｐ  ＣＬ，  Ｄｏｎａｌｄｓｏｎ  ＤＤ．  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１３：  ｃｅｎｔｒａｌ  ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｏｆ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ａｓｔｈｍａ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９８；２８２：２２５８−２２６１
【非特許文献４】Ｄｏｕｗｅｓ  Ｊ，  Ｇｉｂｓｏｎ  Ｐ，  Ｐｅｋｋａｎｅｎ  Ｊ，  Ｐｅａｒｃｅ  Ｎ．  Ｎｏｎ−ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ  ａｓｔｈｍａ：  ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．  Ｔｈｏｒａｘ．  ２００２；５７：６４３−８
【非特許文献５】Ｆａｈｙ  ＪＶ．  Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ  ａｎｄ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｓｔｈｍａ：  ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｆｒｏｍ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ．  Ｐｒｏｃ  Ａｍ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｓｏｃ．  ２００９；６：２５６−９
【非特許文献６】Ｂｅｒｒｙ  Ｍ，  Ｍｏｒｇａｎ  Ａ，  Ｓｈａｗ  ＤＥ，  Ｐａｒｋｅｒ  Ｄ，  Ｇｒｅｅｎ  Ｒ，  Ｂｒｉｇｈｔｌｉｎｇ  Ｃ，  Ｂｒａｄｄｉｎｇ  Ｐ，  Ｗａｒｄｌａｗ  ＡＪ，  Ｐａｖｏｒｄ  ＩＤ．  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｆｅａｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｈａｌｅｄ  ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｏｆ  ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ  ａｎｄ  ｎｏｎ−ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ  ａｓｔｈｍａ．  Ｔｈｏｒａｘ．  ２００７；６２（１２）：１０４３−９
【非特許文献７】Ｌａｎｇｒｉｓｈ  ＣＬ，  Ｃｈｅｎ  Ｙ，  Ｂｌｕｍｅｎｓｃｈｅｉｎ  ＷＭ，  Ｍａｔｔｓｏｎ  Ｊ，  Ｂａｓｈａｍ  Ｂ，  Ｓｅｄｇｗｉｃｋ  ＪＤ，  ＭｃＣｌａｎａｈａｎ  Ｔ，  Ｋａｓｔｅｌｅｉｎ  ＲＡ，  Ｃｕａ  ＤＪ．  ＩＬ−２３  ｄｒｉｖｅｓ  ａ  ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｔｈａｔ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００５；  ２０１：２３３−２４０
【非特許文献８】Ｃｕｒｔｉｓ  ＭＭ，  Ｗａｙ  ＳＳ，  Ｗｉｌｓｏｎ  ＣＢ．  ＩＬ−２３  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｔｈｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−１７  ｂｙ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｂｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ＩＬ−１２  ａｎｄ  ｔｙｐｅ−Ｉ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００９；１：３８１−７
【非特許文献９】Ｃｉｒｉｃ  Ｂ，  Ｅｌ−ｂｅｈｉ  Ｍ，  Ｃａｂｒｅｒａ  Ｒ，  Ｚｈａｎｇ  ＧＸ，  Ｒｏｓｔａｍｉ  Ａ．  ＩＬ−２３  ｄｒｉｖｅｓ  ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ＩＬ−１７−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００９；１８２：５２９６−３０５
【非特許文献１０】モジフン著、Ｔ細胞の分化とＴｈ１７、大韓耳鼻咽喉科学会誌２００８；５１：６８８−９３
【非特許文献１１】Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｌｏｎｉｃ  ｃｏｍｍｅｎｓａｌ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｃｏｌｏｎ  ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ  ｖｉａ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ  ｈｅｌｐｅｒ  ｔｙｐｅ  １７  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．  Ｎａｔ  Ｍｅｄ．  ５（９）：１０１６−２２  （２００９）
【非特許文献１２】Ｌｅｅ  ＣＧ，  Ｌｉｎｋ  Ｈ，  Ｂａｌｕｋ  Ｐ，  Ｈｏｍｅｒ  ＲＪ，  Ｃｈａｐｏｖａｌ  Ｓ，  Ｂｈａｎｄａｒｉ  Ｖ，  Ｋａｎｇ  ＭＪ，  Ｃｏｈｎ  Ｌ，  Ｋｉｍ  ＹＫ，  ＭｃＤｏｎａｌｄ  ＤＭ，  Ｅｌｉａｓ  ＪＡ．  Ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  （ＶＥＧＦ）  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ＴＨ２−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌｕｎｇ．  Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２００４；１０：１０９５−１１０３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、Ｔｈ１７細胞と血管内皮細胞成長因子またはその受容体の関連性と、Ｔｈ１７細胞と炎症性疾患との関連性を解明することにより、Ｔｈ１７炎症性疾患を治療および／予防する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
前述した課題を達成するための技術的手段として、本発明の第１側面は、血管内皮細胞成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）の経路阻害物質を有効成分として含有する、ＩＬ(interleukin)−６或いはＩＬ−１７を媒介とするＴｈ１７炎症性疾患を治療および／または予防するための薬学的組成物を提供する。
【００１１】
本発明の第２側面は、血管内皮細胞成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）の経路阻害物質を有効成分として含有する薬学的組成物を哺乳動物に投与する段階を含む、ＩＬ−６或いはＩＬ−１７を媒介とするＴｈ１７(T helper type 17)炎症性疾患を治療および／または予防する方法を提供する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明に係る血管内皮細胞成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）の経路阻害物質を有効成分とする薬学的組成物は、ＩＬ−６或いはＩＬ−１７を媒介とするＴｈ１７炎症性疾患を効果的に治療することができる。特に、非好酸球性または好中球性炎症を特徴とする喘息或いは慢性閉塞性肺疾患の治療および予防に優れた効能を持つことができる。
【００１３】
これに加えて、本発明に係るＶＥＧＦＲ−２経路の選択的な阻害物質を介してＴｈ−１７細胞免疫反応を選択的に減少させることにより、非好酸球性或いは好中球性炎症疾患を効果的に治療することができるとともに、Ｔｈ−１細胞の免疫反応を阻害しないことにより細菌感染などの副作用を減らすことができるという利点がある。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】アレルゲンと内毒素で鼻腔を介して感作して６時間、２４時間後に血管内皮細胞成長因子とＩＬ−６の分泌量をＢＡＬ ｆｌｕｉｄで確認した結果である。
【図２】アレルゲンと内毒素或いはアレルゲンと組み換え血管内皮成長因子で感作し、アレルゲンを投与して喘息動物モデルを作った後、ＢＡＬ ｆｌｕｉｄ内で炎症反応を確認した結果である。
【図３】アレルゲンと内毒素或いはアレルゲンと組み換え血管内皮成長因子で感作した後、アレルゲンを投与して６時間後に肺組織からＴｈ１、Ｔｈ１７免疫反応を確認した結果である。
【図４】アレルゲンと内毒素或いは血管内皮成長因子で感作し、アレルゲンを投与して作った喘息動物モデルにアレルゲンを投与した後、表示された時間でＢＡＬ ｆｌｕｉｄを確認することを図式化した図である。
【図５】図４で表示された時間にＢＡＬ ｆｌｕｉｄ内の炎症反応とＩＬ−１７分泌量を測定した結果である。
【図６】ＩＬ−１７欠乏マウスで喘息動物モデルを作り、ＢＡＬ ｆｌｕｉｄ内の炎症反応を確認した結果である。
【図７】ＩＬ−６欠乏マウスで喘息動物モデルを作り、ＢＡＬ ｆｌｕｉｄ内の炎症反応とＩＬ−１７の分泌量を測定した結果である。
【図８】実施例１の喘息動物モデル製造プロトコルを示す図である。
【図９】ＳＵ５４１６を感作時期に処理した後、喘息動物モデルを作り、炎症反応を確認した結果である。
【図１０】ＳＵ５４１６を感作時期に処理し、アレルゲンを投与して６時間後にＢＡＬ ｆｌｕｉｄ内でガンマインターフェロンとＩＬ−１７の分泌量を確認した結果、および局所リンパ節からＴｈ１、Ｔｈ１７免疫反応を確認した結果を示す。
【図１１】ＳＵ５４１６を感作時期に処理し、ＢＡＬ ｆｌｕｉｄでＩＬ−６の分泌量を確認した結果である。
【図１２】実施例２の喘息動物モデル製造プロトコルを示す。
【図１３】ａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１を感作時期に処理し、感作時にＢＡＬ ｆｌｕｉｄで炎症反応とＩＬ−６の分泌量を測定した結果である。
【図１４】ａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１を感作時期に処理し、アレルゲンを投与して喘息動物モデルを作り、ＢＡＬ ｆｌｕｉｄにおける炎症反応と局所リンパ節におけるＴｈ１７免疫反応を確認した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、添付図面を参照して、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が容易に実施し得るように本発明の具現例および実施例を詳細に説明する。
【００１６】
ところが、以下の説明は、本発明を特定の実施形態について限定しようとするものではなく、本発明の思想および技術範囲に含まれるすべての変換、均等物ないし代替物を含むものと理解されるべきである。
【００１７】
本発明の第１側面によれば、血管内皮細胞成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）の経路阻害物質を有効成分として含有する、ＩＬ−６或いはＩＬ−１７を媒介とするＴｈ１７炎症性疾患の治療または予防のための薬学的組成物が提供される。
【００１８】
前記血管内皮細胞成長因子受容体は、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２およびＶＥＧＦＲ−３を含み、好ましくはＶＥＧＦＲ−２でありうる。また、前記血管内皮細胞成長因子受容体の経路阻害物質は、好ましくはＶＥＧＦＲ−２の経路を選択的に阻害するものでありうる。
【００１９】
本発明の一具現例として、前記Ｔｈ１７炎症性疾患は、非好酸球性或いは好中球性喘息または慢性閉塞性肺疾患を含む。
【００２０】
本発明の一具現例として、前記Ｔｈ１７炎症性疾患は、非好酸球性或いは好中球性炎症を特徴とする炎症性腸炎、アトピー性皮膚炎、リウマチ性疾患、または自己免疫疾患でありうる。
【００２１】
本発明の一具現例として、前記Ｔｈ１７炎症性疾患は、ＩＬ−６或いはＩＬ−１７によって媒介される大腸癌、胃癌または肺癌でありうる。
【００２２】
前記ＶＥＧＦＲ経路阻害物質は、ＶＥＧＦＲに直接作用して経路(pathway)を阻害する物質であり、或いはキナーゼ阻害剤のようにＶＥＧＦＲの経路を遮断することが可能な物質を含む意味である。また、ＶＥＧＦＲ−２経路阻害物質も同様に、ＶＥＧＦＲ−２に直接作用して経路を阻害する物質であり、或いはキナーゼ阻害剤のようにＶＥＧＦＲ−２の経路を遮断することが可能な物質を含む意味である。
【００２３】
前記ＶＥＧＦＲ−２経路阻害物質は、Ｔｈ−１７細胞免疫反応を減少させるものであってもよく、Ｔｈ−１７細胞が分泌するサイトカインＩＬ−１７の分泌を減少させるものであってもよい。
【００２４】
本発明の一具現例によれば、前記血管内皮細胞成長因子受容体の経路阻害物質は、ＶＥＧＦＲ−２を抑制する水溶性ＶＥＧＦＲ組み換えタンパク質でありうる。
【００２５】
本発明の一具現例によれば、前記血管内皮細胞成長因子受容体の経路阻害物質はセマキサニブ（ＳＵ５４１６）、ａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１抗体、ＣＴ−３２２ペプチド、ＫＲ−３１８３１、バタラニブ（ＰＴＫ７８７）およびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれるものであり、好ましくは、前記血管内皮細胞成長因子受容体の経路阻害物質はＶＥＧＦＲ−２の経路を選択的に阻害するａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１抗体、ＣＴ−３２２ペプチド、ＫＲ−３１８３１、バタラニブ（ＰＴＫ７８７）およびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれるものでありうるが、これに限定されるものではない。
【００２６】
前記セマキサニブ(semaxanib)は、セマキシニブ(semaxinib)またはＳＵＳ５４１６ともいわれる、下記化学式１で表される化合物であって、血管新生抑制による抗腫瘍効果があるものと知られている。
【化１】
0005513620.tif 000002
【００２７】
前記ａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１抗体は、ＶＥＧＦＲ−２（Ｆｌｋ−１ともいわれる）に特異的な抗体であって、ＶＥＧＦＲ−２の経路を特異的に阻害する物質である。本発明の一実施例によれば、市販する多様な種類のａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１抗体（たとえば、ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ ＶＥＧＦＲ２（Ｆｌｋ−１）ａｎｔｉｂｏｄｙ、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用することが可能である。
【００２８】
前記ＣＴ−３２２ペプチドは、ヒトのフィブロネクチンドメインに由来した小型タンパク質であり、ＶＥＧＦＲ−２の経路を特異的に阻害する血管新生抑制剤であって、抗腫瘍効果が知られている物質である。本発明の一実施例によれば、ＡｎｇｉｏｃｅｐｔＴＭ（Ａｄｎｅｘｕｓ）などの市販中のＣＴ−３２２を使用することが可能である。
【００２９】
前記ＫＲ−３１８３１は、下記化学式２で表される化合物であって、ＶＥＧＦＲ−２の経路を特異的に阻害する血管新生抑制剤であって、抗腫瘍効果が知られている物質である［Ｐａｒｋ  ＳＹ，  Ｓｅｏ  ＥＨ，  Ｓｏｎｇ  ＨＳ，  Ｊｕｎｇ  ＳＹ，  Ｌｅｅ  ＹＫ，  Ｙｉ  ＫＹ，  Ｙｏｏ  ＳＥ，  Ｋｉｍ  ＹＪ．  ＫＲ−３１８３１，  ｂｅｎｚｏｐｙｒａｎ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ，  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ＶＥＧＦ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ＨＵＶＥＣｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ  ＫＤＲ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ．  ２００８；３２：１３１１−５］。
【化２】
0005513620.tif 000003
【００３０】
前記バタラニブ(vatalanib)は、ＰＴＫ７８７またはＰＴＫ／ＺＫともいわれる、下記化学式３で表される化合物であって、ＶＥＧＦＲ−２に対する選択性に優れたタンパク質キナーゼ阻害剤であり、血管新生抑制剤として抗腫瘍効果が知られている物質である。
【化３】
0005513620.tif 000004
【００３１】
本発明の第２側面によれば、血管内皮細胞成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）の経路阻害物質を有効成分として含有する薬学的組成物を哺乳動物に投与する段階を含む、ＩＬ−６或いはＩＬ−１７を媒介とするＴｈ１７炎症疾患の治療または予防方法が提供される。
【００３２】
ここで、前記投与は、全身投与、経口投与または呼吸器を介しての吸入投与よりなる群から選ばれる方法で行われるが、これに限定されるものではなく、その他の多様な投与方法で投与することが可能である。
【００３３】
本発明の第１側面に係るＩＬ−６或いはＩＬ−１７を媒介とするＴｈ１７炎症疾患の治療または予防のための薬学的組成物に関連して説明した前記血管内皮細胞成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、前記ＶＥＧＦＲ経路阻害物質、前記ＶＥＧＦＲ−２経路の選択的阻害物質などに対する記載は、本発明の第２側面に係るＩＬ−６或いはＩＬ−１７を媒介とするＴｈ１７炎症疾患の治療または予防方法に関連しても同様に適用できる。
【００３４】
以下、本発明の理解を助けるために好適な実施例によってさらに具体的に説明する。ところが、下記実施例は本発明をより容易に理解するために提供されるものに過ぎず、実施例によって本発明の内容を限定するものではない。
【実施例】
【００３５】
Ｔｈ１７免疫反応を特徴として炎症を起こす喘息動物モデルを用いて、ＶＥＧＦＲ阻害剤の効能を評価した。
【００３６】
喘息動物モデルを作るために、Ｃ５７ＢＬ／６（雌、６週）マウスに対して、実験群と対照群各５匹に０、１、２及び７日にアレルゲンとしてオボアルブミン（ＯＶＡ）７５μｇ、補強剤として内毒素（リポ多糖類、ＬＰＳ）１０μｇを麻酔後に鼻腔投与して感作した。一部の実験群に属したマウスは、鼻腔内にＯＶＡとＬＰＳを投与する３０分前に腹腔にそれぞれＳＵ５４１６（Ｓｉｇｍａから収得）１ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇ又はａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓから収得）０．１、１及び１０μｇを注射して投与した。１４、１５、２１日および２２日にＯＶＡ（５０μｇ）を麻酔後に鼻腔投与した。
【００３７】
最後のＯＶＡ投与６時間（２２日）、４８時間（２４日）後に肺炎症を測定した。ケタミン(ketamin)とキシラジン(xylazine)とを混合した麻酔液をマウスの腹腔に投与して麻酔した後、胸部を切開し気管を露出させてカテーテルを気道に挿入し結紮させた。無菌性生理食塩水を１ｍＬずつ２回注入し、気道を洗浄して気管支肺胞洗浄液（bronchoalveolar lavage、ＢＡＬ ｆｌｕｉｄ）を得た。そして、肺組織内Ｔリンパ球の分析のために肺を摘出し、局所リンパ節から細胞を抽出した。
【００３８】
ＢＡＬ ｆｌｕｉｄを４℃で３０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離した後、細胞ペレット(cell pellet)をＰＢＳ(phosphate buffered saline)溶液に溶かした。前記細胞ペレットをサイトスピン(cytospin)してスライドに塗抹し、Ｄｉｆｆ Ｑｕｉｃｋ染色を行って光学顕微鏡１０００倍の視野で３００個以上の炎症細胞を観察し、マクロファージ細胞、リンパ球、好中球、好酸球に分類して各炎症細胞の数を測定した。また、ＢＡＬ ｆｌｕｉｄでＴｈ１炎症反応を反映するサイトカインとしてのガンマインターフェロン、Ｔｈ１７炎症反応を反映するＩＬ−１７及びＩＬ−６をＥＬＩＳＡ方法で測定した。
【００３９】
摘出した肺組織をコラゲナーゼタイプＩＶ（collagenase type ＩＶ、Ｓｉｇｍａ）で処理して細胞を分離した。細胞の表面を蛍光物質付きａｎｔｉ−ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８（ＢＤ ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）抗体で染色した後、ホルマリンで細胞膜に穿孔し、ａｎｔｉ−ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１７で細胞内サイトカイン染色(intracellular cytokine staining)を行った。ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒＴＭ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて、肺に流入したＴ細胞の種類を判断し、Ｔ細胞の発現を測定した。
【００４０】
リンパ節から得た細胞を、ＯＶＡ １００μｇ／ｍＬ濃度のＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）、１０％ ＦＢＳおよび抗生物質が入っている溶液で７２時間培養した後、溶液に含まれたＴｈ１、Ｔｈ１７及びＴｈ２炎症反応を反映するサイトカインをそれぞれＥＬＩＳＡ方法で測定した。
【００４１】
図１ａは、ＯＶＡとＬＰＳを共に投与して６時間と２４時間後に、ＢＡＬ ｆｌｕｉｄに含まれたＶＥＧＦの量を測定した結果を示す。図１ｂは同じ実験条件でＢＡＬ ｆｌｕｉｄに含まれたＩＬ−６の量を測定した結果を示す。ＬＰＳ１０μｇを投与した場合、ＢＡＬ ｆｌｕｉｄでＶＥＧＦの量が初期の６時間に増加した（図１ａ）。ＬＰＳ１０μｇを投与した場合、ＢＡＬ ｆｌｕｉｄで炎症の程度を示すＩＬ−６の量は６時間目と２４時間目の両方ともに増加した（図１ｂ）。
【００４２】
ＯＶＡと組み換えＶＥＧＦ、又はＯＶＡとＬＰＳを鼻腔内投与した後でＯＶＡを投与した実験群（ＯＶＡ／ＶＥＧＦ及びＯＶＡ／ＬＰＳ）と、ＰＢＳ或いはＶＥＧＦのみを処理した後でＯＶＡを投与した対照群（ＰＢＳ及びＶＥＧＦ）とを比較し、実験群（ＯＶＡ／ＬＰＳ及びＯＶＡ／ＶＥＧＦ）のＢＡＬ ｆｌｕｉｄ内の炎症細胞数を図２に示し、肺組織から分離したＴ細胞におけるガンマインターフェロン（ＩＮＦ−γ）の量とＩＬ−１７の量をそれぞれ図３ａと図３ｂに示した。
【００４３】
組み換えＶＥＧＦを単独で投与したときは、炎症細胞の数が増加しなかったが、組み換えＶＥＧＦをＯＶＡと共に投与したときは、（ＯＶＡ／ＶＥＧＦ）炎症細胞の数が増加した（図２参照）。組み換えＶＥＧＦを単独で投与したときは、炎症の程度を示すＩＮＦ−γの量とＩＬ−１７の量が増加しなかったが、組み換えＶＥＧＦをＯＶＡとともに投与したときは、ＩＮＦ−γの量とＩＬ−１７の量が増加した（図３ａ及び図３ｂ参照）。
【００４４】
図４のプロトコルに従い、ＯＶＡとＬＰＳで感作した後、ＯＶＡを投与して作った炎症モデルにおいて、１４、１５及び２１日に麻酔の後にＯＶＡを鼻腔内投与した後、図４に示した時間帯別にＢＡＬ ｆｌｕｉｄ内の炎症細胞の数とＩＬ−１７の量を測定し、その結果を図５ａ及び図５ｂにそれぞれ示した。
【００４５】
ＩＬ−１７の量は最後のＯＶＡ投与４時間後から増加し（図５ｂ参照）、炎症細胞の数は１２時間後に増加した（図５ａ参照）。
【００４６】
また、同じ実験条件でＩＬ−１７欠乏マウスを使用した場合、正常マウス（ＷＴ＿ＯＶＡ／ＬＰＳ）と比較して、ＩＬ−１７欠乏マウス（ＩＬ−１７−／−＿ＯＶＡ／ＬＰＳ）では、炎症細胞の数が一層少なく増加した（図６参照）。
【００４７】
同じ実験条件でＩＬ−６欠乏マウスを使用した場合、正常マウス（ＩＬ−１６−／−＿ＯＶＡ／ＬＰＳ）と比較して、ＩＬ−６欠乏マウス（ＩＬ−６−／−＿ＯＶＡ／ＬＰＳ）では炎症細胞の数が一層少なく増加し（図７ａ）、ＩＬ−１７の量が増加しなかった（図７ｂ）。
【００４８】
実施例１：ＶＥＧＦＲ−１及びＶＥＧＦＲ−２を同時に抑制するＳＵＳ５４１６の効能評価
Ｃ５７ＢＬ／６（雌、６週）マウスを実験群と対照群５匹ずつ使用して図８のプロトコルにしたがって喘息動物モデルを作った。実験群としては、有機溶媒のＤＭＳＯ(dimethyl sulfoxide)に溶かしたＶＥＧＦＲ−１とＶＥＧＦＲ−２のチロシンキナーゼ作用を阻害する化合物（ＳＵ５４１６）１ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇをそれぞれ腹腔に注射し、３０分後にＯＶＡとＬＰＳを鼻腔投与したマウス（０、１、２及び７日）を用い、対照群としては、有機溶媒ＤＭＳＯのみを腹腔投与した後、ＯＶＡとＬＰＳを鼻腔投与したマウスを用いた。１４、１５、２１及び２２日に麻酔の後にＯＶＡを鼻腔投与し後、最後の投与２４時間後（２４日）にＢＡＬ ｆｌｕｉｄの炎症細胞の数を図９に示した。
【００４９】
図９に示すように、初期感作時期にＳＵ５４１６を使用して血管内皮細胞成長因子の全ての受容体を介した信号伝達を阻害したとき、ＳＵ５４１６の濃度に依存的に炎症細胞数の増加が抑制されることが分かる。
【００５０】
図１０は、感作の後、３回ＯＶＡ投与６時間後（２１日）に免疫反応を評価した結果を示す。感作の際にＳＵ５４１６で治療したマウス（ＯＶＡ／ＬＰＳ＿ＳＵ）は、ＢＡＬ ｆｌｕｉｄでガンマインターフェロンとＩＬ−１７の分泌量が顕著に減少し（図１０ａ参照）、局所リンパ節から分離した免疫細胞においても、アレルゲンで刺激したときに分泌されるガンマインターフェロンとＩＬ−１７が顕著に減少するものと示された（図１０ｂ及び図１０ｃ参照）。
【００５１】
また、ＯＶＡとＬＰＳで３回感作して６時間後にＢＡＬ ｆｌｕｉｄでＩＬ−６の量を測定した結果を図１１に示した。１０ｍｇ／ｋｇのＳＵ５４１６を投与したマウス（ＯＶＡ／ＬＰＳ＿ＳＵ）は、対照群（ＯＶＡ／ＬＰＳ＿ｓｈａｍ）に比べてＩＬ−６の分泌量が減少するものと示された（図１１参照）。
【００５２】
実施例２：ＶＥＧＦＲ−２を阻害するモノクローナル抗体の効能評価
Ｃ５７ＢＬ／６（雌、６週）マウスを実験群と対照群各５匹ずつ使用して図１２のプロトコルにしたがって喘息動物モデルを作った。
【００５３】
具体的に、ＶＥＧＦ−２を阻害するモノクローナル抗体（ａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）０．１、１．０及び１０μｇをそれぞれ腹腔に注射したマウスを実験群として用い、ＰＢＳを腹腔内に注射したマウスを対照群として用いた。ａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１或いはＰＢＳの注射後から３０分が経過したときにＯＶＡとＬＰＳを鼻腔投与し、２４時間後（１日）にＢＡＬ ｆｌｕｉｄの炎症細胞の数及びＩＬ−６の量を測定した結果を図１３に示した。
【００５４】
Ａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１の濃度に依存的にＢＡＬ ｆｌｕｉｄ内の炎症細胞数の増加が抑制された（図１３ａ参照）。ａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１を１０μｇ腹腔に注射した場合（ＯＶＡ／ＬＰＳ＿ａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１）は、対照群（ＯＶＡ／ＬＰＳ＿ｓｈａｍ）と比較してＢＡＬ ｌｕｉｄ内のＩＬ−６量の増加が抑制された（図１３ｂ参照）。
【００５５】
また、図１２の喘息モデルでａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１を１０μｇ腹腔投与したマウスを実験群として用い、偽薬（ｓｈａｍ）を腹腔投与したマウスを対照群として用いた。０、１、２及び７日にａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１又は偽薬を腹腔投与し、その３０分後にＯＶＡとＬＰＳを鼻腔投与し、１４、１５、２１及び２２日にＯＶＡを鼻腔内注射し、４回ＯＶＡを投与して４８時間後に肺炎症と免疫反応を評価した結果を図１４に示した。
【００５６】
Ａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１で治療した場合（ＯＶＡ／ＬＰＳ＿ａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１）は、偽薬を投与したマウス（ＯＶＡ／ＬＰＳ＿ｓｈａｍ）と比較して、ＢＡＬ ｆｌｕｉｄ内の炎症細胞の数が顕著に減少し（図１４ａ参照）、局所リンパ節から分離したＴ細胞における、ＩＬ−１７を分泌するＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞が顕著に減少した（図１４ｂ参照）。
【００５７】
以上の結果をまとめると、非特異的ＶＥＧＦ受容体抑制剤としてのＳＵ５４１６を投与したマウスと、ＶＥＧＦＲ−２抑制剤としてのａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１モノクローナル抗体を投与したマウスの両方ともにおいて肺炎症を抑制する効果が優れた。
【００５８】
免疫学的な作用メカニズムによって、ＳＵ５４１６を投与した場合にはＴｈ１とＴｈ１７免疫反応を減少させ、ａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１を投与した場合にはＴｈ１７免疫反応を減少させた。ところが、Ｔｈ１は、細胞性免疫を担当するため、ＳＵ５４１６のようにＴｈ１とＴｈ１７の免疫反応を全て減少させる薬剤を長期的に投与すると、細菌感染に脆弱となる副作用がある。Ａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１でＶＥＧＦＲ−２のみを阻害する場合、細菌感染を減らすＴｈ１免疫反応は維持し、Ｔｈ１７免疫反応による慢性炎症反応のみを減らすことができるという利点がある。よって、非好酸球性或いは好中球性呼吸器炎症を治療する目的では、ＶＥＧＦＲ−２のみを選択的に阻害する方がさらに好ましい。
【００５９】
ＳＵ５４１６とａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１を使用する実施例を示したが、ＶＥＧＦＲ又はＶＥＧＦＲ−２に直接作用し、或いはキナーゼ阻害剤のようにＶＥＧＦＲ又はＶＥＧＦＲ−２経路を遮断する他の物質も本発明の目的に使用することができる。ＶＥＧＦＲ−２を選択的に阻害する物質としては、モノクローナル抗体としてのａｎｔｉ−Ｆｌｋ−１以外にも、フィブロネクチン(fibronectin)ドメインに由来したＣＴ−３２２などのタンパク質が知られている。ＶＥＧＦＲ−２を阻害すると知られたＫＲ−３１８３１を使用することもできる。また、全てのＶＥＧＦＲに作用するが、ＶＥＧＦＲ−２に対する選択性に優れたバタラニブ(vatalanib)、ＰＴＫ７８７又はＰＴＫ／ＺＫとして知られているキナーゼ阻害剤を使用することもできる。
【００６０】
これに加えて、ＶＥＧＦＲ−２を選択的に抑制するアプタマー(aptamer)、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなどを開発して使用することも予想することができる。
【００６１】
注射で全身投与する実施例を示したが、ＶＥＧＦＲ又はＶＥＧＦＲ−２阻害剤を経口投与してもよく、吸入、皮膚塗布などの方法で投与してもよい。
【００６２】
前述した本発明の説明は例示のためのものに過ぎず、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者は、本発明の技術的思想又は必須的な特徴を変更することなく、他の具体的な形態に容易に変形可能であることを理解することができる。したがって、上述した実施例は全ての面で例示的なもので、限定的なものではないと理解すべきである。
【産業上の利用可能性】
【００６３】
本発明に係る血管内皮細胞成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）経路阻害物質を有効成分とする薬学的組成物を用いて、ＩＬ−６或いはＩＬ−１７を媒介とするＴｈ１７炎症性疾患を効果的に治療することができ、特にＶＥＧＦＲ−２経路の選択的な阻害物質を含有する組成物を用いて非好酸球性或いは好中球性炎症疾患を効果的に治療することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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