(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物であって、
【化１】
0005539735.tif 000019
式中、Ｙは３個以上のアリール環を有する縮合されたアリール基であるか、又は、
該化合物の薬学的に許容できる塩。
【請求項２】
前記アリール基が以下の構造を有し、
【化２】
0005539735.tif 000020
該アリール基が置換されるか、又は非置換である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｙが以下の化学式のアリール基であって、
【化３】
0005539735.tif 000021
該アリール基が置換されるか、又は非置換である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物及び薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物。
【請求項５】
局所用組成物である請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
感染細胞からのウイルスを防ぐための薬の製造における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項７】
前記ウイルスが、単純ヘルペスウイルス１型、２型（ＨＳＶ‐１，ＨＳＶ‐２）、インフルエンザウイルス、ＨＩＶ、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）、エプスタイン‐バールウイルス（ＥＢＶ）、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、カポシ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、水疱瘡ウイルス（ＶＺＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ポックスウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、パラインフルエンザウイルス、ヒト呼吸器多核体ウイルス、ヘンドラウイルス、ニパウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、ハンタウイルス、ブニヤウイルス、リフトバレー出血熱ウイルス、シンノンブレウイルスを含むアレナウイルス、狂犬病ウイルス、東部、西部及びベネズエラ脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、デングウイルス、日本及びセントルイス脳炎ウイルス、コロナウイルス、又は風疹ウイルスである請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記ウイルスが、ＳＡＲＳウイルスである請求項６に記載の使用。
【請求項９】
前記ウイルスがエンベロープウイルスである請求項６に記載の使用。
【請求項１０】
被験体の感染からウイルスを防ぐための薬の製造における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
前記化合物が、感染部位又は感染の可能性のある部位に適用される請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記化合物が、前記被験体の前記感染部位に局所的に適用される請求項１０に記載の使用。
【請求項１３】
前記ウイルスが、性行為感染症に由来する請求項１０に記載の使用。
【請求項１４】
前記ウイルスが、呼吸器疾患に由来する請求項１０に記載の使用。
【請求項１５】
ウイルスに感染した被験体を治療する薬の製造における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１６】
前記化合物が前記被験体に経口で投与される請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記化合物が前記被験体に非経口で投与される請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
被験体の感染から環境中のウイルスを防ぐための薬の製造における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１９】
ウイルスを不活性化するための薬の製造における、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項２０】
不活性化された前記ウイルスをワクチンとして被験体に投与できる請求項１９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００７年２月２８日に出願された米国仮出願第６０／８９１，９５４号の優先権を主張する。この出願の全教示は、参照することにより全体が本明細書中に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
抗ウイルス剤の発見における大規模研究の結果、現在では臨床使用のために世界中で４３個の抗ウイルス剤が承認されている。しかしながら、それらのほとんどはウイルスのＤＮＡポリメラーゼをターゲットとしている。そのような偏りは、ＨＳＶ‐１  ＤＮＡポリメラーゼが抗ウイルス剤のために特定された最初のターゲットであったからであろう。発見された２番目のターゲットは、ウイルス粒子の成熟化のために必要なウイルス性のプロテアーゼであった。より最近では、主要な取り組みは他のウイルス性タンパク質をターゲットとする薬剤に置かれている。重点はウイルス感染を阻害する薬剤にあり、その薬剤は、ウイルス感染のかなり初期の事象を妨げるものである。最初に成功した感染阻害物質は、ＨＩＶ融合蛋白の再構成のペプチド阻害剤であるＴ‐２０又はフューゼオン（ｆｕｚｅｏｎ）であった。この薬剤は臨床的に使用されるが、併用療法のみである。さらに、その薬剤には既に耐性によって選択されている。より最近では、ＨＩＶの糖タンパクと細胞のレセプター又はコレセプターとの相互作用もターゲットとされている（例えば、ＣＣＲ５コレセプターをターゲットとするｖｉｃｒｉｖｉｒｏｃ‐ＳＣＨ４１７６９０、ＴＡＫ‐７７９、ＰＲＯ‐１４０、ＵＫ‐４２７，８５７、ＧＷ８７３１４０及びＡＭＤ８８７、又は、ＣＸＣＲ４コレセプターをターゲットとするＡＭＤ３１００及びＡＭＤ０７０）。しかしながら、これらのすべての感染阻害物質は重要な欠点を有する。例えば、ペプチド阻害剤は、生物学的利用率と安定性に乏しい。したがって、それらは使用直前に調製する必要があり、また、非経口投与によってのみ使用できる。コレセプター結合の阻害物質は、特異性が狭い（ＣＣＲ５又はＣＸＣＲ４栄養ウイルスのみ等）。さらに、レセプター結合の阻害物質は重要な細胞レセプターの活性化を阻害することもできる。したがって、主要な取り組みは、依然として、そのような欠点を克服できる新規のウイルス融合阻害物質の発見に注ぎ込まれている。
【０００３】
現在のウイルス融合の阻害物質はウイルスと細胞タンパクとの相互作用をターゲットとしている。実際に、昔から、特異性や安全性を保証する全ての抗ウイルス剤がウイルスタンパクをターゲットとして開発された。これは、臨床で使用される４３の抗ウイルス剤や現在開発中の他の薬剤の開発につながった長い年月をかけて検証された概念である。残念ながら、このアプローチにはいくつかの限界がある。ウイルスタンパクをターゲットとする薬剤にはすぐに耐性によって選択される。例えば、これは既にフューゼオンで起こり、ＣＣＲ５‐ｇｐ４１相互作用阻害剤でも起こっている。また、ヒトパピローマウイルスのような小さなゲノムのウイルスでは可能なウイルスターゲットの数も制限される。新たに特定されたウイルス病原体によってコードされるタンパクが最初に特徴づけされるべきとき、このアプローチはその病原体に対する薬剤の迅速な開発にも貢献しない。
【０００４】
伝統的なアプローチに代わる手段として、最近、細胞タンパクをターゲットとする抗ウイルス剤の開発の可能性が検討されている。このアプローチはいくつかの潜在的な有用性を提供する。例えば、複数のウイルス機能に必要な細胞タンパクの阻害は耐性の選択を最小にするかもしれない。細胞タンパクの多くはウイルスの複製に最小のゲノムが必要である。さらに、細胞タンパクの多くは遠縁のウイルスの複製にも必要である。したがって、細胞タンパクをターゲットとする薬剤は、そのタンパクが完全に特徴付けられる前にでも新規な病原体に対して使用できる。しかしながら、そのようなターゲットは一般的に多くの感染していない細胞でも発現していることから、細胞タンパクをターゲットとすることは、好ましくないネガティブの副作用を導くかもしれない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本明細書には、細胞のウイルス感染を予防するための又はウイルスに感染した対象を治療するための化合物及び方法が記載されている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本明細書に記載された化合物と方法は、ウイルスの耐性を最小にし、ターゲットとするウイルスの数を最大にする。さらに、その化合物と方法は感染していない細胞に対する毒性を最小にする。本発明の利点については、一部は以下の説明中に示され、一部はこの説明から明白となり、又は以下に記載する実施形態により理解される。以下に記載された利点は、添付の特許請求の範囲で特に示された要素と組み合わせの手段によって実現され、達成される。以上の概要及び以下の詳細な説明は双方ともに単に説明のための例示であって、制限するものではないことが理解される。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
本明細書に組み込まれ、その一部を構成する添付図面は、以下に記載のいくつかの実施態様を例示する。
【図１】両親媒性ヌクレオシド誘導体であるｄＵＹ１１がＨＳＶ‐１  ＤＮＡ複製を阻害しないことを示すサザンブロット解析の図である。
【図２】両親媒性ヌクレオシド誘導体であるｄＵＹ１１が子孫ＨＳＶ‐１のＤＮＡの放出を阻害しないことを示すサザンブロット解析の図である。
【図３】ウイルス感染におけるｄＵＹ１１の抑制性を表すプラークアッセイを示す図である。
【図４】代表的な膜脂質と比較した両親媒性ヌクレオシド誘導体の化学構造と三次元構造を示す図である。
【図５】異なる両親媒性ヌクレオシド誘導体濃度に対するＨＳＶ‐１感染力をプロットした線グラフである。
【図６】ＩＣ５０値が２０ｎＭであるｄＵＹ１１濃度に対するＨＳＶ‐１感染力をプロットした線グラフである。
【図７】処理時間に対するＨＳＶ‐１感染力をプロットした線グラフである。
【図８】細胞のタイプに関係なく阻害するｄＵＹ１１濃度に対するＨＳＶ‐１感染力をプロットした線グラフである。
【図９】ｄＵＹ１１で処理し、膜の色素（ＰＫＨ２６）で染色したモック感染細胞を示す図である。
【図１０】ｄＵＹ１１を曝露した時間に対する相対細胞数をプロットした線グラフである。ｄＵＹ１１は細胞傷害性又は細胞増殖抑制性がない。
【図１１】ＨＳＶ‐１の結合性（Ａ）及び感染力（Ｂ）を示す棒グラフ及び画像である。ｄＵＹ１１はＨＳＶ‐１結合を阻害しない。
【図１２】ヘパリンの濃度を増加させたときの細胞に対するＨＳＶ‐１結合の競合を示す線グラフである。ｄＵＹ１１はＨＳＶ‐１ウイルスによる高親和性結合を阻害しない。
【図１３】ＨＳＶ‐１  ＩＣＰ０  ＩＥプロモーター制御下で、細胞ゲノムに再結合した赤色蛍光タンパク（ＲＦＰ）レポータ遺伝子を含むＶｅｒｏ細胞で発現している赤色蛍光タンパクの図（Ａ）及び定量結果（Ｂ）を表す。ｄＵＹ１１はＨＳＶ‐１の細胞内への侵入を抑制する。
【図１４】ｄＵＹ１１濃度に対するＨＳＶ‐１株ＫＯＳ、ＨＳＶ‐２株１８６、ＨＳＶ‐２株３３３、ＶＳＶ又はシンドビスの感染力をプロットした線グラフである。ｄＵＹ１１はＨＳＶ‐１，ＨＳＶ‐２，ＶＳＶ及びシンドビスウイルスの感染を阻害した。
【図１５】ウイルス若しくは細胞の前処理又は感染後のみの細胞の処理に使用したｄＵＹ１１濃度に対するＨＳＶ‐１  ＫＯＳの感染力をプロットした線グラフである。ウイルスの前処理に使用した場合にのみ、ｄＵＹ１１はＨＳＶ‐１感染を完全に阻害した。
【図１６】両親媒性ヌクレオシド誘導体で２４時間又は１時間だけ処理した細胞によって産生されるウイルスの感染力の低下を示し、薬剤の濃度に対してプロットした線グラフである。ｄＵＹ１１は子孫ウイルスの感染を阻害した。
【図１７】異なる薬物で処理した細胞によって産生されるウイルスの感染力（ウイルス力価）の低下を示し、ＡＣＶ，ＰＡＡ又はｄＵＹ１１の濃度に対してプロットした線グラフである。ｄＵＹ１１は薬剤耐性変異ウイルスの感染を阻害した。
【図１８】マウスのＨＳＶ‐２  ｉｎ  ｖｉｖｏ膣感染を防御するｄＵＹ１１の能力を示すグラフである。ｄＵＹ１１を曝露したウイルスはマウスに感染しなかった。
【図１９】ｄＵＹ１１を曝露したＨＳＶ‐２を感染させたマウスの腟領域、会陰領域及び肛門の写真である。ｄＵＹｌｌを曝露したウイルスはマウスに感染しなかった。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
発明の詳細な説明
本発明の化合物、組成及び方法を開示し説明するが、以下で説明する実施形態は、特定の化合物、合成方法又は用途に限定されるものではなく、当然に、様々であることが理解される。また、本明細書で使用される用語は特定の実施形態について説明することのみを目的とし、限定を意図するものではないことも理解される。
【０００９】
この明細書と添付の特許請求の範囲において、下記の意味を有することが定義される多くの用語について示す。
【００１０】
この明細書と、添付の特許請求の範囲において、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文中に特に明示のない限り、対象の複数形も含まれることに注意すべきである。したがって、例えば「医薬キャリア」という場合、そのようなキャリアの２種以上の混合物等が含まれる。
【００１１】
「任意の」又は「任意に」は、その後に記載する事象又は状況が生じても、生じなくてもよいことを意味し、その記載は、その事象又は状況が生じる場合と生じない場合を含む。例えば「任意に低級アルキルを置換する」という句は、低級アルキルを置換しても置換しなくてもよいことを意味し、その記載は、置換されていない低級アルキルと置換された低級アルキルの両方を含む。
【００１２】
組成物又は物における特定の要素又は成分の重量部という明細書及び結論のクレームの記載は、その組成物又は物における当該要素又は成分と、他の要素又は成分との間の重量部によって表される重さ関係を示す。したがって、２重量部の成分Ｘと５重量部の成分Ｙを含む化合物では、ＸとＹは、２：５の重量比で存在しており、追加成分がその化合物に含まれているか否かに関わらず、この比率で存在する。
【００１３】
そうでない旨が特に示されない限り、組成物の重量パーセントは組成物が含まれている製剤又は組成の総重量に基づいている。
【００１４】
「被験体」は個体を意味する。被験体は霊長類又はヒトなどの哺乳動物であってもよい。「被験体」という用語には、限定はされないが、ネコ、イヌなどの飼いならされた動物、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど）、及び実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモットなど）を含むことができる。
【００１５】
「接触」とは１つ以上の物質が別の物質に密接な物理的接触をすることによって曝露される事例を意味する。例えば、接触には薬物などの物質と細胞又はウイルスとの接触を含むことができる。
【００１６】
「治療」又は「治療すること」とは、好ましくない病気の症状を減少させるために、好ましくない病気（例えば、ウイルス感染）を持つ被験体又はシステムに対する組成物の投与を意味する。「予防」又は「予防すること」とは、好ましくない病気にかかる可能性を排除することを意味する。また、「予防」又は「予防すること」には、好ましくない病気にかかる可能性を減少させることが含まれる。
【００１７】
「有効な量」とは、好ましい結果又は結果を得るのに必要な治療上の又は予防のための（予防薬）量を意味する。
【００１８】
明細書及び結論のクレームに使用される化学種の残基は、実際に化学種から得るかどうかにかかわらず、特定の反応スキームやその後の処方で得られた化学種又は化学製品の一部をいう。例えば、１つ以上の‐ＯＨ基を含む糖類は式Ｚ‐ＯＨによって表すことができる。そこでは、Ｚは糖分子の残り（すなわち、残基）である。
【００１９】
本明細書で使用される「アルキル基」という用語は、メチル基、エチル基、ｎ‐プロピル基、イソプロピル基、ｎ‐ブチル基、イソブチル基、ｔ‐ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、デシル基、テトラデシル基、ヘキサデシル基、エイコシル基、テトラコシル基等の炭素原子が１〜２４の分岐又は非分岐の飽和炭化水素基である。「低級アルキル」基は、１〜６の炭素原子を含むアルキル基である。
【００２０】
本明細書で使用される「アリール基」という用語は、これには限定されないが、ベンゼン、ナフタリンなどの任意の炭素系芳香族基である。また、「芳香族」という用語には、芳香族基の環の中に組み込まれる１つ以上のヘテロ原子を有する芳香族基として定義される「ヘテロアリール基」が含まれる。ヘテロ原子の例には、これには限定されないが、窒素、酸素、硫黄、及びリンが含まれる。アリール基は、置換されるか又は非置換とすることができる。アリール基は、これには限定されないが、アルキル、アルキニル、アルケニル、アリール、ハロゲン化物、ニトロ、アミノ、エステル、ケトン、アルデヒド、ヒドロオキシ、カルボン酸、又はアルコキシルを含む１つ以上の基で置換できる。また、「アリール基」という用語には互いに縮合した２つ以上の芳香族基が含まれる。OLE_LINK5例えば、縮合アリール基はOLE_LINK5３、４、５、６、７、又は８個のアリール環で構成されてもよい。縮合アリール基は上で説明した１つ以上の基で置換されるか又は非置換とすることができる。
【００２１】
本明細書で使用される「ポリエーテル基」という用語は、式‐［（ＣＨＲ）ｎＯ］ｍ‐を有する基である。式中、Ｒは水素又は低級アルキル基、ｎは１〜２０の整数、ｍは１〜１００の整数である。ポリエーテル基の例には、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシド、及びポリブチレンオキシドが含まれる。
【００２２】
本明細書で使用される「ポリチオエーテル基」という用語は、OLE_LINK6OLE_LINK7式‐［（ＣＨＲ）ｎＳ］ｍ‐を有する基である。式中、Ｒは水素又は低級アルキル基、ｎは１〜２０の整数、ｍは１〜１００の整数である。
【００２３】
本明細書で使用される「ポリイミノ基」という用語は、式‐［（ＣＨＲ）ｎＮＲ］ｍ‐を有する基である。式中、それぞれのＲは互いに独立して水素又は低級アルキル基であり、ｎは１〜２０の整数、ｍは１〜１００の整数である。
【００２４】
出願書類を通して使用されるＸ，Ｌ，Ｌ’，Ｒ，Ｙ，Ｚ１，Ｚ２，及びＺ３などの変数は、そうでない旨が示されない限り、それまでに定義されたのと同じ変数である。
【００２５】
Ｉ．化合物及びその作製
本明細書には、細胞へのウイルス感染を防ぐか、又は感染の確率を減少させる化合物が記載されている。本発明の一実施形態は、式Ｉ含む化合物又はその薬学的に許容できる塩若しくはエステルである。
Ｘ‐Ｌ‐Ｙ  （Ｉ）
式中、Ｘは糖類の残基を含み；
Ｌは平面状親水基を含むリンカーを含み；そして
Ｙは平面状疎水性基を含み、Ｙは直接又は間接的にＬに結合している。
【００２６】
詳細に式Ｉの各成分について議論する。Ｘに関して、Ｘは糖類の残基を含む。通常、糖類は１つ以上のヒドロキシル基を有する。したがって、Ｘは化合物Ｉの親水部分である。１つの実施形態では、糖類は単糖を含む。単糖は、直鎖の単糖又は環状構造（ヘミアセタール又はヘミケタール）であってもよい。したがって、単糖は単糖のフラノース型とピラノース型を含むことができる。本明細書で有用なペントース糖類の例としては、リボース、アラビノース、デオキシリボース、キシロース、リキソース、リブロース、又はキシルロースを含むが、これには制限されない。ヘキソースの例としては、グルコース、ガラクトース、マンノース、グロース、イドース、タロース、アロース、アルトロース、フラクトース、ソルボース、タガトース、プシコース、フコース、又はラムノースを含むが、これには制限されない。
【００２７】
別の実施形態では、Ｘは二糖である。二糖はグリコシド共有結合によって互いに結合した二つの単糖ユニットで構成される。本明細書で有用な二糖の例には、スクロース、乳糖、トレハロース、又は麦芽糖が含まれるが、これには限定されない。更なる実施形態では、糖類はオリゴ糖又は多糖を含む。オリゴ糖と多糖はグリコシド結合によって互いに結合した単糖ユニットの長い鎖で構成される。二つの区別は鎖に存在する単糖ユニットの数に基づいている。オリゴ糖は２〜９の単糖ユニットを通常含んでおり、多糖は１０以上の単糖ユニットを含んでいる。多糖の例には、グリコーゲン、でんぷん、セルロース、キチン、アミラーゼ、アミロペクチン、スタキオース、イヌリン、又はデキストリンが含まれるが、これには限定されない。また、多糖には、例えば、ヘパリン、コンドロイチン硫酸、ヒアルロナン、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、又はケラタン硫酸などのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）が含まれる。
【００２８】
必要に応じて当技術分野で公知の技術を使用することにより、糖類に存在するヒドロキシル基のいずれも誘導体化することができる。例えば、ヒドロキシル基は、ポリエーテル基、ポリイミノ基、アセチル基、又はポリチオエーテル基で置換できる。したがって、必要に応じて糖類の親水性の量や程度を変えることができる。
【００２９】
糖類ＸはリンカーＬと共有結合している。リンカーＬは平面状親水基である。リンカーは、通常、剛体平面である。例えば、リンカーにはプリン又はピリミジン残基が含まれる。また、リンカーは互いに共有結合した２つ以上の塩基対であってもよいと想定される。１つの実施形態では、Ｘ‐Ｌは以下のヌクレオシドのひとつであってもよい：アデノシン、デオキシアデノシン、グアノシン、デオキシグアノシン、５‐メチルウリジン、デオキシチミジン、ウリジン、デオキシウリジン、シチジン、又はデオキシシチジン。１つの実施形態では、式ＩのＸ‐Ｌは以下に示されるようにデオキシウリジン又はその誘導体の残基ではない。
【００３０】
【化１】
0005539735.tif 000002
【００３１】
式中、Ｒは、例えばアセチル基などの水素基又は保護基である。
【００３２】
別の実施形態では、リンカーには親水性アリール基が含まれる。例えば、アリール基は本明細書に定義されるようにヘテロアリル基であってもよい（例えば、ピリジル基）。他の実施形態では、アリール基の親水性を増加させる１つ以上の基でアリール基を置換できる。例えば、アリール基は、ヒドロキシル化アリール基又はその誘導体であってもよい。本明細書では、ヒドロキシル化アリール基は直接的に又は鎖を介して間接的に芳香族環に結合した１つ以上のヒドロキシル基を有する任意のアリール基と定義される。ヒドロキシル化アリール基の誘導体には、アリール基の親水性を修飾する（すなわち、増減する）任意の基が含まれる。例えば、ヒドロキシル基は、Ｘについて上記で議論したように、ポリエーテル基、ポリイミノ基、又はポリチオエーテル基で置換できる。
【００３３】
式Ｉでは、Ｙには平面状疎水性基が含まれ、Ｙは直接又は間接的にＬに結合している。１つの実施形態では、Ｙにはアリール基が含まれる。Ｙのアリール基にはいくつかの型が想定できる。例えば、アリール基は置換された又は非置換の縮合系であってもよい。縮合されたアリール基の例には、アントラセン、フェナンスレン、ナフタリン、ベンゾナフタレン、フッ素、又はカルバゾールが含まれるが、これには限定されない。他の実施形態では、アリール基は、より大きい分子の一部であってもよい。基の全体の疎水性を修飾するために１つ以上の異なった基でアリール基を置換できる。ｄＵＹ７を除き本明細書で有用なアリール基の例を図４に示す。図５Ｃで示すようにｄＵＹ７はウイルス感染を阻害する能力を全く示さなかった。
【００３４】
リンカーＬは直接的又は間接的にＹに結合できる。ここでの「直接的に結合」という語句は、Ｙがリンカーと共有結合していると定義される。反対に、ここでの「間接的に結合」という語句は、Ｙが二番目のリンカー（Ｌ’）を介してリンカーと共有結合していると定義される。二番目のリンカーＬ’には、アルキル基、アルケニル基、又はエーテル基（例えば、ポリエーテル）を含むことができるが、これには限定されない。１つの実施形態では、Ｌ’はアルキニル基である。例えば、Ｌ’は、プロパルギル基又はプロパルギルエーテル基であってもよい。図４の構造ＡとＢに示すように、アルキニル基ＲＣ≡ＣはチミンのＣ５に結合し、Ｒがアリール基（すなわち、Ｙ基）である。
【００３５】
１つの実施形態では、化合物は式ＩＩを含む化合物又はその誘導体である。
【００３６】
【化２】
0005539735.tif 000003
【００３７】
式中、Ｚ１、Ｚ２及びＺ３は、互いに独立してＨ又はＯＨであり；
Ｌはプリン又はピリミジンを含み；
Ｙはアリール基を含む。
【００３８】
１つの実施形態では、ＺはＯＨであり、Ｌはウラシル残基であり、Ｙは式ＩＩのアリール基を含まれる。別の実施形態では、その化合物は式ＩＩＩＡ又はＩＩＩＢを有する。
【００３９】
【化３】
0005539735.tif 000004
【００４０】
式中、Ｚ１、Ｚ２及びＺ３は、互いに独立してＨ又はＯＨであり、Ｙはアリール基を含む。更なる実施形態では、Ｙは３個以上のアリール環を含む縮合されたアリール基を含む。そのアリール基の一例は、以下の構造を有する。
【００４１】
【化４】
0005539735.tif 000005
【００４２】
式中、アリール基は置換されているか、非置換である。
【００４３】
１つの実施形態では、この化合物は式ＩＩＩＡを有し、式中、Ｚ１がＯＨであり、Ｚ２とＺ３が水素であり、Ｙは以下の化学式を有するアリール基である。
【００４４】
【化５】
0005539735.tif 000006
【００４５】
式中、アリール基は置換されているか、非置換である。この化合物は本明細書ではｄＵＹ１１と呼ばれる。別の実施形態では、その化合物は式ＩＩＩＡを有する。式中、Ｚ１、Ｚ２及びＺ３は水素であり、Ｙは以下の化学式を有するアリール基である。
【００４６】
【化６】
0005539735.tif 000007
【００４７】
式中、アリール基は置換されているか、非置換である。この化合物は本明細書ではｄＵＹ１１と呼ばれる。更なる実施形態では、化合物は式ＩＩＩＡを有する。式中、Ｚ１とＺ３はＯＨであり、Ｚ２は水素であり、Ｙは以下の化学式を有するアリール基である。
【００４８】
【化７】
0005539735.tif 000008
【００４９】
式中、アリール基は置換されているか、非置換である。この化合物は本明細書ではａＵＹ１１と呼ばれる。
【００５０】
本明細書に記載された化合物のいずれもが存在又はその塩に変換することができる。１つの実施形態では、その塩は薬学的に許容できる塩である。その塩は、化学的又は薬学的に許容できる適切な量の塩基で遊離酸を処理することによって調製できる。代表的な化学的又は薬学的に許容できる塩基は、水酸化アンモニウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、リチウム水酸化物、消石灰、水酸化マグネシウム、水酸化第一鉄、亜鉛水酸化物、水酸化銅、水酸化アルミニウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２‐ジメチルアミノエタノール、２‐ジエチルアミノエタノール、リジン、アルギニン、ヒスチジン等である。１つの実施形態では、その反応は水中で、単独で又は不活性物質と組み合わせて、水混和性有機溶媒中で、約０℃〜約１００℃の例えば室温などの温度で行われる。使用される塩基に対する化合物のモル比は、どの特定の塩においても求められる比を提供するように選ばれる。例えば、遊離酸出発物質のアンモニウム塩を調製するためには、塩を得るために、出発物質はおよそ等量の塩基で処理できる。
【００５１】
別の実施形態では、本明細書に記載された化合物のいずれもが存在又はそのルイス塩基で塩に変換できる。化合物は適量のルイス塩基で処理できる。ルイス塩基の代表的なものは、水酸化アンモニウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、リチウム水酸化物、消石灰、水酸化マグネシウム、水酸化第一鉄、亜鉛水酸化物、水酸化銅、水酸化アルミニウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２‐ジメチルアミノエタノール、２‐ジエチルアミノエタノール、リジン、アルギニン、ヒスチジン、テトラヒドロフラン、エーテル、チオール試薬、アルコール類、チオールエーテル、カルボン酸エステル、フェノラート、アルコキシド、水などである。１つの実施形態では、その反応は水中で、単独で又は不活性物質と組み合わせて、水混和性有機溶媒中で、約０℃〜約１００℃の例えば室温などの温度で行われる。使用される塩基に対する化合物のモル比は、どの特定の複合体においても求められる比を提供するように選ばれる。例えば、遊離酸出発物質のアンモニウム塩を調製するためには、複合体を得るために、出発物質はおよそ等量の化学的又は薬学的に許容されるルイス塩基で処理できる。
【００５２】
化合物がカルボン酸基を有する場合、これらの基は当技術分野で公知の技術を用いて薬学的に許容されるエステル又はアミドに変換できる。さらに、エステルが存在している場合、そのエステルはエステル交換反応の技術を用いて薬学的に許容できるエステルに変換できる。
【００５３】
本明細書に記載された化合物は、当技術分野で公知の技術を用いて合成できる。例えば、Ｘ‐Ｌがヌクレオシドであるときには、式Ｉを有する化合物を作るために、Ｙ又はＹ‐Ｌ’にそれを結合できる。
【００５４】
【化８】
0005539735.tif 000009
【００５５】
１つの実施形態では、Ｘ‐Ｌが式ＩＶで表されるヌクレオシドであるときには、化合物Ｖを作るためにカップリング反応を使用できる。
【００５６】
【化９】
0005539735.tif 000010
【００５７】
この実施形態では、Ｘは糖類であり、Ｈａｌはヨウ化物などのハロゲンである。パラジウム触媒は、式Ｖを有する化合物を作るために、アルキンＹ‐Ｃ≡ＣＨを化合物ＩＶと結合するために使用される。
【００５８】
ＩＩ．医薬組成物
１つの実施形態では、上で説明した化合物のすべてが医薬組成物に製剤化できる。これらの医薬組成物は、当技術分野で公知の技術を用いて準備できる。１つの実施形態では、この組成物は、本明細書に記載された化合物と薬学的に許容できる担体を混合することによって調製できる。
【００５９】
特定のケースにおいて、式Ｉを有する活性化合物の実際に好ましい量は、利用される特定の化合物、製剤化される特定の組成、適用方法、特定の部位、治療される被験体によって変化することが理解される。任意の宿主のための用量は、従来の考え、例えば、対象の化合物と既知の薬物の活性の差を普通に比較することや、適切な従来の薬理プロトコールによって決定できる。医薬化合物の用量を決定する技術分野で熟練した医師や調剤者は、標準の勧告（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｂａｒｎｈａｒｔ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ‐１９９９）に従って用量を決定することについて全く問題がない。
【００６０】
本明細書に記載された医薬組成物は、生物学的なシステムや存在が許容できるいずれの賦形剤でも製剤化できる。そのような賦形剤の例には、水、生理食塩水、リンガー液、デキストロース溶液、ハンクス溶液、及び他の水性の生理的にバランスのとれた塩溶液が含まれるが、これには限定されない。また、不揮発性油、オリーブ油や胡麻油などの植物油、トリグリセリド、プロピレン・グリコール、ポリエチレングリコール、及びオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステル等の非水性の媒体も使用できる。他に有用な製剤には、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、又はデキストランなどの粘着性を高める物質を含む懸濁液が含まれる。また、賦形剤は等張性と化学的安定性を高める物質などの少量の添加物を含むことができる。緩衝液の例には、リン酸緩衝液、重炭酸塩緩衝液、及びトリス緩衝液が含まれ、防腐剤の例には、チメロサール、クレゾール、ホルマリン、及びベンジル・アルコールが含まれる。
【００６１】
医薬キャリアは当業者に公知である。これらは概してヒトへ投与するための標準的なキャリアであり、滅菌水、生理食塩水及び生理的ｐＨの緩衝液などの溶液が含まれる。
【００６２】
薬物輸送のための分子は医薬組成物内に製剤化できる。医薬組成物は選択された分子に加えて、キャリア、増粘剤、希釈剤、緩衝液、防腐剤、界面活性剤などを含むことができる。
【００６３】
医薬組成物は、局所投与又は全身投与のどちらが望まれるかということや投与領域によって、多くの方法で投与することができる。投与は局所的（眼科的、膣内、直腸内、鼻腔内、気化を含む）であってもよい。局所投与のための製剤には、軟膏、ローション、クリーム、ジェル、液滴、座薬、スプレー、液体、及び粉末を含むことができる。従来の医薬キャリア、水溶液、粉末又は油性基剤、増粘剤などが必要とされたり望まれたりするであろう。
【００６４】
投与のための調製物には、滅菌された水溶液又は非水溶液、懸濁液及び乳剤が含まれる。水溶性のキャリアの例には、水、アルコール／水溶液、生理食塩水及び緩衝液媒体を含む乳剤又は懸濁液が含まれる。開示された組成物と方法の付随的な使用が必要である場合、非経口用の媒体には、塩化ナトリウム溶液、リンガーデキストロース、デキストロースと塩化ナトリウム、乳酸加リンガー液、又は不揮発性油が含まれる。開示された組成物と方法の付随的な使用が必要である場合、静脈投与用の媒体には、液体及び栄養補充薬、電解質補充薬（リンガーデキストロースに基づくものなど）等が含まれる。また、防腐剤及び他の添加物として、例えば、抗菌剤、酸化防止剤、キレート剤及び不活性ガス等を示すことができる。
【００６５】
また、医薬組成物には他の薬剤や生物活性を有する薬物を含むことができる。生物活性を有する薬物は、生物システムにおいて局所的に又は全身的に生物学的、生理学的又は治療的な効果を提供できる。その薬物はその他の機能として、例えば、感染又は炎症をコントロールしたり、細胞増殖や組織再生を促進したり、腫瘍の成長をコントロールしたり、鎮痛剤として作用したり、そして骨成長を促進したりすることができる。したがって、本明細書に記載された組成物を他の治療効果と組み合わせることによって、ウイルス感染を減少又は妨げる併用療法を想定することができる。
【００６６】
ＩＩＩ．使用方法
ウイルス感染の予防又は治療に関連するさまざまな適用において本明細書に記載した化合物と医薬組成物が使用できる。感染細胞からのウイルスを防ぐための方法には、上で定義された式Ｘ‐Ｌ‐Ｙ（Ｉ）を含む化合物とウイルス又は既に感染した細胞との接触が含まれる。
【００６７】
ウイルスは、外皮が宿主細胞に由来する脂質二重膜（エンベロープ）で覆われているかどうかによってエンベロープ型と非エンベロープ型にクラス分けされる。ウイルスエンベロープは細胞膜に由来しているが、これら２つの脂質二重膜には本質的な違いがある。機能的には、細胞膜は細胞内及び細胞外の環境を分けるために必要な選択性のある物理的なバリアであり、特定の分子の選択的な透過を許す。それに対して、ウイルスエンベロープの主な機能は、細胞膜と融合し、ウイルスタンパクの多くを宿主の免疫システムから隠すことである。ウイルスエンベロープは限られた環境下では物理的な防御を与えるが、エンベロープウイルスは非エンベロープウイルスに比べて物理的又は化学的な損傷に対してたいてい抵抗性が低い。構造的に、ウイルスエンベロープと細胞膜中の脂質組成及びタンパク組成は、曲率や可変性のようにいずれも異なっている。
【００６８】
本明細書に記載された化合物は両親媒性と呼ぶことができ、分子の一部が親水性（Ｘ‐Ｌ）であり、別の部分が疎水性（Ｙ）である。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、本明細書に記載された化合物は細胞膜とエンベロープウイルスの融合を妨げ、最終的にウイルスの細胞内への侵入を防ぐと考えられる。本明細書に記載された化合物の疎水性部分（すなわち、Ｙ）は脂質エンベロープの疎水性中心にそれ自身を挿入できる。親水性部分（すなわち、Ｘ）はエンベロープの表面上の極頭部（ｐｏｌａｒ  ｈｅａｄｓ）と相互作用する。したがって、化合物はリン脂質の模倣物である。しかしながら、本明細書に記載された抗ウイルス化合物は、ウイルスエンベロープの外葉で自然に発生する脂質の形体よりもさらに著しい逆円錐形を有している。エンベロープの外葉の逆円錐形脂質は、膜間の融合に必要な曲率変化を抑制する。したがって、両親媒性化合物はウイルスエンベロープと細胞の原形質膜間の融合を抑制できる。化合物の式Ｉ（Ｙ）の疎水性部分、親水性部分、及び一般的な分子形状は、細胞膜を越えてウイルスエンベロープと優先的に相互作用するために容易に最適化できる。また、本明細書に記載された化合物は、複製ＤＮＡへの取り込みを妨げるようにデザインできる。そのような修飾の例は、化合物ｄｄＵＹｌｌとａＵＹｌｌで見られる（実施例参照）。ｄｄＵＹｌｌの場合には、糖部分のヒドロキシルがｄｄＵＹ１１を作るためにｄＵＹ１１から取り外された。ａＵＹｌｌでは、ｄＵＹｌｌのデオキシリボース糖をアラビノ糖と交換した。
【００６９】
ターゲットとされるウイルスは特定されない。ターゲットとされるウイルスには、例えば、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、２型（ＨＳＶ‐１，ＨＳＶ‐２）、インフルエンザウイルス、ＨＩＶ、ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）、エプスタイン‐バールウイルス（ＥＢＶ）、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、カポシ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、水疱瘡ウイルス（ＶＺＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、パラインフルエンザウイルス、ヒト呼吸器多核体ウイルス、ヘンドラウイルス、ニパウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、ハンタウイルス、ブニヤウイルス、リフトバレー出血熱ウイルス、シンノンブレウイルスを含むアレナウイルス、狂犬病ウイルス、東部、西部及びベネズエラ脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、デングウイルス、日本及びセントルイス脳炎ウイルス、コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳウイルス）、風疹ウイルスがなどのエンベロープウイルスを含むことができる。
【００７０】
本明細書に記載された化合物は、ウイルス感染を防ぐか又は減少させるために使用できる。１つの実施形態では、本明細書に記載されているのは、被験体のウイルス感染を防ぐか又は感染の確率を減少するための方法である。その方法にはそのような治療を必要としている被験体に対して効果的な量の式Ｉを含む化合物を投与することが含まれる。上で説明した技術のいずれかを使用することで化合物を投与できる。１つの実施形態では、化合物は感染部位に適用される。「感染部位」という用語は、ウイルスに感染した被験体のウイルスと接触した体の１部分又はそれ以上の部分である。そのような感染部位の例には粘膜内層が含まれる（例えば、膣、直腸、鼻道）。したがって、１つの実施形態では、本明細書に記載された化合物は性行為感染症の抑制において予防的に用いることができる。この実施形態では、化合物は直接的又は間接的に膣や直腸に適用する局所製剤（例えば、ゲル、ローション、又はクリーム）として製剤化される。もう一つの実施形態では、本明細書に記載された化合物は呼吸器疾患の抑制において予防的に用いることができる。この実施形態では、化合物は呼吸器に適用できるスプレーとして製剤化できる。
【００７１】
本明細書に記載された化合物はウイルス感染した被験体を治療するための治療法として使用できる。１つの実施形態では、その方法には、そのような治療を必要とする被験体に対する式Ｘ‐Ｌ‐Ｙ（Ｉ）を含む有効量の化合物の投与が含まれる。本明細書に記載された化合物は、ウイルス感染の特性を減少させ、最終的に、ウイルスによって発症した疾病の症状と共にウイルスの拡大を減少させることができる。治療として使用されるときには、この化合物は経口、非経口、又は局所を含む多くの方法で投与できる。
【００７２】
本明細書に記載された化合物は、環境において被験体が感染することから、ウイルス感染を防止し、感染確率を減少させるために使用できる。その方法には、式Ｉを含む１つ以上の化合物を用いた環境の汚染除去が含まれる。その環境には、ウイルスに接触したあらゆる装置や基材（例えば、医療用器具）が含まれる。例えば、本明細書に記載された化合物は、ウイルスと接触するところで１個以上のウイルスに曝露している基材にスプレーすることができる。別の例として、化合物は、基材に存在するすべてのウイルスを不活性化するために、基材が浸されている溶液又は基材の中（例えば、チューブ類や他の限られた空間）にある溶液の中に存在することができる。
【００７３】
別の実施形態では、本明細書に記載された化合物はワクチンを生産するためのウイルスの不活性化に使用できる。その方法には、上で定義されるような式Iを含む1つ以上の化合物とウイルスの接触が含まれる。そして、当技術分野で公知の技術を用いて、ワクチンとして不活性化されたウイルスを投与できる。
【実施例】
【００７４】
以下の実施例は、本明細書で説明され、クレームされた化合物、組成物及び方法がどのようにして作られ、評価されたかを、当業者に完全に開示及び説明するために提供される。これらは、純粋な例であることを意図するものであり、発明者が認識する本発明の範囲を限定することを意図するものではない。数値（例えば、量や温度など）に関して精度を確実にする試みがされているが、いくつかの誤りや逸脱は考慮されるべきである。特に断りのない限り、「部」は「重量部」、温度は「℃」又は周囲温度、圧力は大気圧又は大気圧近辺である。多くの反応条件の種類や組み合わせ、例えば、組成の濃度、必要とされる溶媒、溶媒混合物、温度、圧力、他の反応範囲があり、また記載された過程で得られた製品の純度と収量を最適化するために用いることのできる条件がある。そのような過程の条件を最適化するためには、繰り返される適切な実験のみが必要である。
【００７５】
Ｉ．式Ｉを有する化合物の調製
ａ．手順１
【００７６】
【化１０】
0005539735.tif 000011
【００７７】
３‐（トリメリルシリルエチニル）エストロン（１）
ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解した３‐Ｏ‐トリフルオロメチルスルフォニルエストロン（９７２ｍｇ，２．４１ｍｍｏｌ）を真空とアルゴン間を交互することによって3回脱気した。トリメチルシリルアセチレン（０．６８ｍＬ，４．８２ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（２７９ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（９３ｍｇ，０．４８ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．６７ｍＬ，４．８２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を４８時間撹拌した。次いで混合物を水（１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に注ぎ、有機層を水（４×１００ｍＬ）、０．１Ｍ  Ｎａ２ＥＤＴＡ溶液（２×１００ｍｌ）、水（２×１００ｍＬ）、塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＰｈＭｅ中１％から４％ＥｔＯＡｃ）にかけ、無色固体の表記の生産物を得た。収量は、７９０ｍｇ（９４％）、１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．２６（ｓ，９Ｈ），０．９４（ｓ，３Ｈ），１．４０‐１．７１（ｍ，６Ｈ），１．９６‐２．５８（ｍ，７Ｈ），２．８６‐２．９５（ｍ，２Ｈ），７．２１‐７．３０（ｍ，３Ｈ）であった。
【００７８】
３‐エチニルエストロン（２）
テトラブチルアンモニウムフルオリド三水和物（１．２３ｇ，３．９ｍｍｏｌ）をアルゴン存在下で撹拌した３‐（トリメリルシリルエチニル）エストロン（６９７ｍｇ，１．９５ｍｍｏｌ）溶液に加えた。混合物を、室温で４時間撹拌し、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＰｈＭｅ中５％から７％ＥｔＯＡｃ）にかけ、オフホワイト固体の表記の生産物を得た。収量は５３０ｍｇ（９８％）、１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．９４（ｓ，３Ｈ），１．４１‐１．７２（ｍ，６Ｈ），１．９５‐２．５９（ｍ，７Ｈ），２．８８‐２．９６（ｍ，２Ｈ），３．０４（ｓ，１Ｈ），７．２４‐７．３３（ｍ，３Ｈ）であった。
【００７９】
３’，５’‐Ｏ‐テトライソプロピルジシロキサン‐１，３‐ジイル‐５‐（エストロン‐３‐イルエチニル）‐２’‐デオキシウリジン（３）
ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解した３‐エチニルエストロン（６１ｍｇ，０．２１５ｍｍｏｌ）及び３’，５’‐Ｏ‐テトライソプロピルジシロキサン‐１，３‐ジイル‐５‐ヨード‐２’‐デオキシウリジン（１１７ｍｇ，０．１９６ｍｍｏｌ）を真空とアルゴン間を交互することによって３回脱気した。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（２３ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（４ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．１０ｍＬ，０．３９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を４８時間撹拌した。次いで、混合物を水（１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に注ぎ、有機層を水（４×１００ｍＬ）、０．１Ｍ  Ｎａ２ＥＤＴＡ溶液（２×１００ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）、塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＰｈＭｅ中１０％ＥｔＯＡｃ）にかけ、黄色固体の表記の生産物を得た。収量は７９ｍｇ（５４％）、１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８５（ｓ，３Ｈ），０．９２‐１．１８（ｍ，２８Ｈ），１．３３‐１．６２（ｍ，６Ｈ），１．７３‐１．８１（ｍ，１Ｈ），１．９３‐２．５２（ｍ，８Ｈ），２．８４‐２．９７（ｍ，２Ｈ），３．５５‐３．８４（ｍ，１Ｈ），４．２３‐４．２９（ｓ，２Ｈ），６．１４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），７．２０（ｓ，１Ｈ），７．３２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２５），７．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２５），８．３３（ｓ，１Ｈ）であった。
【００８０】
５‐（エストロン‐３‐イルエチニル）‐２’‐デオキシウリジン（４）
３’，５’‐Ｏ‐テトライソプロピルジシロキサン‐１，３‐ジイル‐５‐（エストロン‐３‐イルエチニル）‐２’‐デオキシウリジン（７０ｍｇ，０．０９３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミントリヒドロフルオリド（４６μＬ，０．２８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で２４時間保持し、形成された沈殿を遠心によって分離した。固体をＴＨＦ‐ＭｅＯＨから再結晶し、無色の表記化合物を得た。収量は４４ｍｇ（９４％）、１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）：０．８５（ｓ，３Ｈ），１．３５‐１．６４（ｍ，６Ｈ），１．７５‐１．８４（ｍ，１Ｈ），１．９３‐２．４９（ｍ，８Ｈ），２．８１‐２．９７（ｍ，２Ｈ），３．５６‐３．８５（ｍ，３Ｈ），４．２３‐４．２９（ｓ，２Ｈ），６．１４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），７．２０（ｓ，１Ｈ），７．３２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２５），７．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２５），８．３４（ｓ，１Ｈ）であった。
【００８１】
ｂ．手順２
【００８２】
【化１１】
0005539735.tif 000012
【００８３】
３’，５’‐Ｏ‐テトライソプロピルジシロキサン‐１，３‐ジイル‐５‐（エストロン‐３‐イルエチニル）‐アラビノ‐ウリジン（５）
ＤＭＦ（７ｍＬ）に溶解した３‐エチニルエストロン（１００ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）及び３’，５’‐Ｏ‐テトライソプロピルジシロキサン‐１，３‐ジイル‐５‐ヨード‐アラビノ‐ウリジン（１９７ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）を真空とアルゴン間を交互することによって３回脱気した。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（３８ｍｇ，０．０３２ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（７ｍｇ，０．０６４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．１７ｍＬ，０．６４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を４８時間撹拌した。次いで、混合物を水（１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に注ぎ、有機層を水（４×１００ｍｌ）、０．１Ｍ  Ｎａ２ＥＤＴＡ溶液（２×１００ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）、塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＰｈＭｅ中２０％Ｍｅ２ＣＯ）にかけ、黄色固体の表記の生産物を得た。収量は７０ｍｇ（２９％）であり、１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８５（ｓ，３Ｈ），０．９２‐１．１７（ｍ，２８Ｈ），１．３５‐１．６４（ｍ，６Ｈ），１．７４‐１．８２（ｍ，１Ｈ），１．９２‐２．４９（ｍ，６Ｈ），２．８１‐２．８９（ｍ，２Ｈ），３．６６‐３．８９（ｍ，１Ｈ），３．８８‐４．１６（ｍ，５Ｈ），６．０８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４１Ｈｚ），７．１７（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２５），７．３３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２５），７．６６（ｓ，１Ｈ），１１．７（ｂｒ．ｓ）であった。
【００８４】
５‐（エストロン‐３‐イルエチニル）‐アラビノ‐デオキシウリジン（６）
３’，５’‐Ｏ‐テトライソプロピルジシロキサン‐１，３‐ジイル‐５‐（エストロン‐３‐イルエチニル）‐アラビノ‐ウリジン（７０ｍｇ，０．０９１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミントリヒドロフルオリド（４４μＬ，０．２７ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で２４時間保持し、形成された沈殿を遠心によって分離した。無色固体。収量は４１ｍｇ（８７％）、１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８５（ｓ，３Ｈ），１．３１‐１．６２（ｍ，６Ｈ），１．７４‐１．８３（ｍ，１Ｈ），１．９０‐２．５１（ｍ，６Ｈ），２．８０‐２．９０（ｍ，２Ｈ），３．６６‐３．８９（ｍ，２Ｈ），３．９１‐４．１３（ｍ，６Ｈ），６．０８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４１Ｈｚ），７．１７（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２５），７．３３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２５），７．６２（ｓ，１Ｈ），１１．５（ｂｒ．ｓ）であった。
【００８５】
ｃ．手順３
【００８６】
【化１２】
0005539735.tif 000013
【００８７】
３’，５’‐Ｏ‐テトライソプロピルジシロキサン‐１，３‐ジイル‐５‐（ピレン‐２‐イルエチニル）‐２’‐デオキシウリジン（８）
ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解した２‐エチニルピレン（３４５ｍｇ，１．５３ｍｍｏｌ）及び３’，５’‐Ｏ‐テトライソプロピルジシロキサン‐１，３‐ジイル‐５‐ヨード‐２’‐デオキシウリジン（７５８ｍｇ，１．２７ｍｍｏｌ）を真空とアルゴン間を交互することによって３回脱気した。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１４７ｍｇ，０．１２７ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（４８ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．３５ｍＬ，２．５４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２４時間撹拌した。次いで、混合物を水（１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に注ぎ、有機層を水（４×１００ｍＬ）、０．１Ｍ  Ｎａ２ＥＤＴＡ溶液（２×１００ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）、塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨＣｌ３中０％から５％ＥｔＯＡｃ）にかけ、黄色固体の表記の生産物を得た。収量は４０２ｍｇ（４９％）、１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．９０‐１．１７（ｍ，２８Ｈ），２．１９‐２．３４（ｍ，２Ｈ），３．６４‐３．７８（ｍ，２Ｈ），３．８４‐３．９２（ｍ，１Ｈ），４．３０‐４．３７（ｍ，１Ｈ），６．２２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４２Ｈｚ），８．０９‐８．４９（ｍ，９Ｈ），８．６２（ｓ，１Ｈ），１１．８（ｂｒ．ｓ）であった。
【００８８】
５‐（ピレン‐２‐イルエチニル）‐２’‐デオキシウリジン（９）
ＴＨＦ（１ｍＬ）に３’，５’‐Ｏ‐テトライソプロピルジシロキサン‐１，３‐ジイル‐５‐（ピレン‐２‐イルエチニル）‐２’‐デオキシウリジン（２００ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）を溶解し、トリエチルアミントリヒドロフルオリド（０．１４ｍＬ，０．８６ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で２４時間保持し、沈殿をフィルターで分離した。固体をＥｔＯＨから再結晶し、無色の化合物を産生した。収量は、７４ｍｇ（５６％）、１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：２．１９‐２．３４（ｍ，２Ｈ），３．６４‐３．７６（ｍ，２Ｈ），３．８４‐３．９１（ｍ，１Ｈ），４．２９‐４．３４（ｍ，１Ｈ），５．２３‐５．３２（ｍ，２Ｈ），６．２２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４２Ｈｚ），８．０９‐８．４８（ｍ，９Ｈ），８．６２（ｓ，１Ｈ），１１．９（ｂｒ．ｓ）であった。
【００８９】
【化１３】
0005539735.tif 000014
【００９０】
５‐（ペリレン‐３‐イルエチニル）‐５’‐Ｏ‐ピバロイル‐２’，３’‐ジデオキシウリジン
ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解した５‐ヨード‐５’‐Ｏ‐ピバロイル‐２’，３’‐ジデオキシウリジン（４４２ｍｇ，１ｍｍｏｌ）及び３‐ペリレニルアセチレン（３４５ｍｇ，１．２５ｍｍｏｌ）を真空とアルゴン間を交互することによって３回脱気した。次に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１１５ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（３８ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（０．２７８ｍＬ，２ｍｍｏｌ）を加え、フラスコにアルゴンを満たし再度脱気し、混合物を周囲温度で４３時間撹拌した。混合物を３００ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、２００ｍＬの水で３回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。０から２％のＥｔＯＨ／ＣＨＣｌ３勾配を用いたシリカゲルカラムでクロマトグラフィーを行い、クロマトグラフィー上で均一な（Ｒｆ０．２８，５％ＥｔＯＨ／ＣＨＣｌ３）オレンジ色の泡沫生産物を得た（５４５ｍｇ，９６％）。１Ｈ‐ＮＭＲ（ＤＭＳＯ‐ｄ６）：１１．８５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．４４（ｄ，１Η，Ｊ７．８），８．３９‐８．３５（ｍ，３Η），８．３２（ｄ，ＩＨ，Ｊ８．２）（ペリレニル），８．０６（ｓ，１Ｈ，Ｈ‐６），７．８３‐７．８１（ｍ，２Ｈ），７．６９‐７．６０（ｍ，２Ｈ），７．５８‐７．５３（ｍ，２Ｈ）（ペリレニル），６．００（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１’２’α６．９Ｊ１’２’β４．６，Ｈ‐１’），４．３７‐４．３４（ｍ，１Ｈ，Ｈ‐４’），４．３２‐４．２６（ｍ，２Ｈ，Ｈ‐５’），２．４２‐２．３６（ｍ，１Ｈ，Ｈ‐２’），２．１７‐２．１２（ｍ，１Ｈ，Ｈ‐２’），２．０６‐２．００（ｍ，１Ｈ，Ｈ‐３’），１．９０‐１．８３（ｍ，１Ｈ，Ｈ‐３’），１．１７（ｓ，９Ｈ，１Ｂｕ）であった。
【００９１】
【化１４】
0005539735.tif 000015
【００９２】
５‐（ペリレン‐３‐イルエチニル）‐２’，３’‐ジデオキシウリジン（ｄｄＵＹｌｌ）
８０ｍＬのＭｅＯＨに懸濁した５‐（ペリレン‐３‐イルエチニル）‐５’‐Ｏ‐ピバロイル‐２’，３’‐ジデオキシウリジン（３５０ｍｇ，０．６１３ｍｍｏｌ）に固体のＫＯＨ（３１０ｍｇ，５．５１７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を一晩撹拌した。次に、混合物を酢酸で中和し、ＭｅＯＨを用いて減圧下で２回濃縮し、粗生産物を得た。粗生産物は０から３％のＥｔＯＨ／ＣＨＣｌ３勾配を用いたシリカゲルカラムでクロマトグラフィーにより精製され、クロマトグラフィー上で均一な（Ｒｆ０．４６，３７．５％アセトン／ＣＨＣｌ３）オレンジ色の固体生産物を得た（１３０ｍｇ，４３％）。１Ｈ‐ＮＭＲ（ＤＭＳＯ‐ｄ６）：１１．７４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．７６（ｓ，１Η，Η‐６），８．４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．７），８．４１‐８．３８（ｍ，２Ｈ），８．３６（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．７），８．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．７），７．７１‐７．５４（ｍ，６Ｈ）（ペリレニル），５．９９‐５．９８（ｍ，１Ｈ，Ｈ‐１’），５．３５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，ＯＨ），４．１５‐４．１０（ｍ，１Η，Η‐４’），３．７０（ａｐｐ．ｄ，１Ｈ，Ｈ‐５’），３．６３（ａｐｐ．ｄ，１Ｈ，Ｈ‐５’），２．３８‐２．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ‐２’），２．１７‐２．１３（ｍ，１Ｈ，Ｈ‐２’），２．０１‐１．９４（ｍ，１Ｈ，Ｈ‐３’），１．９１‐１．８６（ｍ，１Ｈ，Ｈ‐３’）であった。
【００９３】
【化１５】
0005539735.tif 000016
【００９４】
５‐（ペリレン‐３‐イルエチニル）‐３’，５’‐Ｏ‐（テトライソプロピルジシロキサン‐１，３‐ジイル）‐アラビノ‐ウリジン
１０ｍＬのＤＭＦに溶解した５‐ヨード‐３’，５’‐Ｏ‐（テトライソプロピルジシロキサン‐ｌ，３‐ジイル）‐アラビノ‐ウリジン（６１２ｍｇ，１ｍｍｏｌ）及び３‐ペリレニルアセチレン（３７３ｍｇ，１．３５ｍｍｏｌ）を真空とアルゴン間を交互することによって３回脱気した。次に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１１５ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（３８ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（０．２７８ｍＬ，２ｍｍｏｌ）を加え、フラスコにアルゴンを満たし再度脱気し、混合物を周囲温度で４３時間撹拌した。混合物を３００ｍＬのＣＨＣｌ３で希釈し、２００ｍＬの水で３回洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し、再度ＣＨＣｌ３を用いて２回濃縮した。０から３％のＥｔＯＨ／ＣＨＣｌ３勾配を用いたシリカゲルカラムでのクロマトグラフィーによる精製によって、クロマトグラフィー上で均一な（Ｒｆ０．６，１０％ＥｔＯＨ／ＣＨＣｌ３）オレンジ色の泡沫生産物を得た（２４５ｍｇ，３２％）。１Ｈ‐ＮＭＲ（ＤＭＳＯ‐ｄ６）：１１．８９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．４６（ｄ，１Η，Ｊ７．３），８．４３‐８．３４（ｍ，３Η），８．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ８．２），７．８４（ｔ，２Ｈ，Ｊ７．３）（ペリレニル），７．８１（ｓ，１Ｈ，Ｈ‐６），７．６９‐７．６４（ｍ，２Ｈ），７．５７（ｔ，２Ｈ，Ｊ７．８）（ペリレニル），６．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ６．４，Ｈ‐１’），６．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ６．０，Ｈ‐２’），４．３９（ａｐｐ．ｑ，１Ｈ，Ｈ‐４’），４．１４（ａｐｐ．ｔ，１Ｈ，Ｈ‐３’），４．０８（ａｐｐ．ｄ，１Ｈ，Ｈ‐５’），３．９３（ａｐｐ．ｄ，１Ｈ，Ｈ‐５’），３．７５（ｂｒ．ｄ，１Ｈ，ＯＨ），１．０７‐０．９５（ｍ，２８Η，ｉＰｒ）であった。
【００９５】
【化１６】
0005539735.tif 000017
【００９６】
５‐（ペリレン‐３‐イルエチニル）‐アラビノ‐ウリジン（ａＵＹｌｌ）
０．８ｍＬのＴＨＦに溶解した５‐（ペリレン‐３‐イルエチニル）‐３’，５’‐Ｏ‐（テトライソプロピルジシロキサン‐１，３‐ジイル）‐アラビノ‐ウリジン（２２０ｍｇ，０．２８９ｍｍｏｌ）に純粋なＥｔ３Ｎ・ＨＦ（０．１１８ｍＬ，０．７２３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を周囲温度で１２時間撹拌した。次いで、生産物を沈殿させるために少量のメタノールを加え、フィルターで分離し、乾燥した。オレンジ色の固体（１００ｍｇ，６７％）で、Ｒｆ０．３０（１０％ＥｔＯＨ／ＣＨＣｌ３）であった。１Ｈ‐ＮＭＲ（ＤＭＳＯ‐ｄ６）：１２．００‐１１．００（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．４６（ｄ，１Η，Ｊ７．７），８．４３‐８．３８（ｍ，２Η），８．３６（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．７），８．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ８．３３）（ペリレニル），８．２６（ｓ，１Ｈ，Ｈ‐６），７．８４（ｔ，２Ｈ，Ｊ７．０），７．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ７．７），７．６９（ｔ，１Ｈ，Ｊ７．７），７．５７（ｔ，２Ｈ，Ｊ７．７）（ペリレニル），６．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ３．９，Ｈ‐１’），５．７７‐５．６８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），５．６０‐５．４８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），５．３２‐５．２０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）（ＯＨ），４．１２‐４．０９（ａｐｐ．ｓ，１Η），４．０３‐３．９８（ａｐ．ｓ，１Η）（Η‐２’，Ｈ‐４’），３．８２（ａｐｐ．ｄ，１Ｈ，Ｈ‐５’），３．７４‐３．６７（ｍ，２Ｈ，Ｈ‐３’，５’）であった。
【００９７】
ＩＩ．両親媒性のヌクレオシド誘導体はＨＳＶ‐１  ＤＮＡの複製又は感染細胞によるウイルスの放出を抑制しない。
ヌクレオシド又はヌクレオチド誘導体は、通常、ウイルスＤＮＡポリメラーゼをターゲットとすることによってＨＳＶ‐１  ＤＮＡの複製を阻害する。両親媒性のヌクレオシド誘導体がウイルスＤＮＡの複製又はウイルス遺伝子の発現のどちらを抑制したかを確認するために、両親媒性のヌクレオシド誘導体がＨＳＶ‐１  ＤＮＡの蓄積を抑制する能力を調べた。１細胞当たり５プラークユニット（ＰＦＵ）の野生型のＨＳＶ‐１を、Ｖｅｒｏ細胞に１時間感染またはモック感染（Ｍ）させ、洗浄し、薬物を含まない（ＮＤ）培養液、４００μＭのホスホノ酢酸（ＰＡＡ）、又は代表的な両親媒性のヌクレオシド誘導体であるｄＵＹｌｌ（１１）２μＭを含む培養液を加えた（図４）。感染後１時間、５時間、１８時間又は２４時間（ｈｐｉ）で細胞を回収し、ＤＮＡを単離して、アガロース電気泳動によって分離し、ニトロセルロース膜に転写し、ＨＳＶ‐１の６ｋｂのＢａｍＫ断片を用いてハイブリダイゼーションを行った。サザンブロット分析（図１）は、感染後１時間、５時間、１８時間と２４時間の細胞内ウイルスＤＮＡレベルを示している。ｄＵＹｌｌはいずれの試験でもウイルスＤＮＡの複製を阻害しなかった。
【００９８】
次に、両親媒性のヌクレオシド誘導体が感染細胞によるＨＳＶ‐１ウイルスの放出を抑制する能力を検討した。１細胞当たり５ＰＦＵの野生型のＨＳＶ‐１を、Ｖｅｒｏ細胞に１時間感染またはモック感染（Ｍ）させ、洗浄し、薬物を含まない（ＮＤ）培養液、４００μＭのホスホノ酢酸、又は代表的な両親媒性のヌクレオシド誘導体であるｄＵＹｌｌ（１１）２μＭを含む培養液を加えた。感染細胞の上清を感染後１時間、５時間、１８時間又は２４時間で回収し、ＤＮＡを単離して、アガロース電気泳動によって分離し、ニトロセルロース膜に転写し、ＨＳＶ‐１の６ｋｂのＢａｍＫ断片を用いてハイブリダイゼーションを行った。サザンブロット分析（図２）は、感染後１時間、５時間、１８時間と２４時間の細胞外ウイルスＤＮＡレベルを示している。ｄＵＹｌｌはウイルスＤＮＡの放出を阻害しなかった。これらの結果に基づくと、これらの両親媒性のヌクレオシド誘導体存在下においてウイルスＤＮＡは複製され、感染した細胞から子孫ウイルスが放出される。
【００９９】
ＩＩＩ．両親媒性のヌクレオシド誘導体は成熟ウイルスの感染力を抑制する。
感染力とプラークアッセイ（図３）によりウイルス感染におけるｄＵＹ１１の阻害特性が明らかとなった。ＨＳＶ‐１接種液を２μＭのｄＵＹ１１（各パネルの左半分）又はＤＭＳＯ媒体（各パネルの右半分）と共に０分間又は５分間、３７℃で培養した。図（上のパネル）で示すように、処理したＨＳＶ‐１を０．５、５、５０、５００、５，０００又は５０，０００ＰＦＵでＶｅｒｏ細胞に感染させ、洗浄し、５％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）と２％のメチルセルロース（ＭＣ）を添加したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を加えた。一番右のパネルに示されたサンプルは、ｄＵＹ１１非存在下で、未処理のウイルスを感染させ、２μＭのｄＵＹ１１を添加した１％ＭＣを含むＤＭＥＭ‐５％ＦＢＳを加えた（ポスト吸着）。ｄＵＹｌ１はウイルス感染力を阻害するが、ウイルス複製には影響がない。
【０１００】
ＩＶ．抗ウイルス性の両親媒性ヌクレオシド誘導体の構造活性相関（ＳＡＲ）試験
構造活性相関（ＳＡＲ）試験には、抗ウイルス薬の発見において良好なモデルである単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ‐１）の感染力における両親媒性、剛性及び分子形状の影響を調べることを適用した。図４は試験化合物の化学構造と三次元構造の直交図を示している。図５は異なる両親媒性ヌクレオシド誘導体の濃度に対してプロットしたＨＳＶ‐１の感染力の線グラフを示す。ＨＳＶ‐１  ＫＯＳ（２００ＰＦＵ）を０、２、７、２０、７０又は２００μＭのｄＵＹ２（黒丸）、ｄＵＹ３（白い正方形）、ｄＵＹ１１（黒三角形）（Ａ）；ｄＵＹ４（黒三角形）、ｄＵＹ５（黒丸）、ｄＵＹ６（白い正方形）、ｄＵＹ８（白丸）（Ｂ）；又は、ｄＵＹ７（白丸）、ｄＵＹ９（黒い正方形）、ｄＵＹｌ（白三角形）、ａＵＹｌ（黒丸）（Ｃ）と共に、３７０Ｃで５分間インキュベートした。次に、事前に処理したウイルスをＶｅｒｏ細胞に１時間感染させ、５％ＦＢＳと２％ＭＣを添加した培養液で洗浄し、浸した。横軸の最大値は、（Ａ）では７０μＭ、（Ｂ）と（Ｃ）では２００μＭである。ｄＵＹｌｌ（Ｃ）で前処理されたウイルスの感染力の割合は、このスケールの軸に近すぎてほとんど見えない。エラーバーは３つ以上の実験の範囲を示している。剛性平面の疎水性部分を持つ逆円錐形の化合物間において、疎水性部分のサイズの減少は活性を低下させた（ｄＵＹｌｌ対ｄＵＹ２，ｄＵＹ３；図５Ａ）。同じ大きさの疎水性誘導体をもつ化合物の活性は、逆円錐形状を弱める疎水性部分内の回転の柔軟性又は非平面性によって低下した（ｄＵＹｌ１対ｄＵＹ４、ｄＵＹ５、ｄＵＹ６、ｄＵＹ８；図５Ａ，５Ｂ）。活性は、膜に逆円錐が適切に位置することを妨げるリンカー又は中心の疎水性部分内の２つの極性基によって壊された（ｄＵＹ７，ｄＵＹ９；図５Ｃ）。また、活性は１つの極性基によって阻害されたが、親水性部分の極性を上げることによって回復した（ａＵＹｌ対ｄＵＹｌ；図５Ｃ）。疎水性部分の平面性と剛性と同様に両親媒性と逆円錐形は抗ウイルス活性のために重要である。
【０１０１】
Ｖ．ＨＳＶ感染力におけるｄＵＹｌｌ活性の特徴
図６は、ｄＵＹｌｌ濃度に対してＨＳＶ‐１感染力をプロットした線グラフである。ＨＳＶ‐１  ＫＯＳ（２００ＰＦＵ）を０，２，７，２０，７０，２００又は７００ｎＭのｄＵＹ１１とともに３７℃で５分間インキュベートした。次に、そのようにして前処理したウイルスをＶｅｒｏ細胞に１時間感染させ、５％ＦＢＳ及び２％ＭＣを添加した培養液で洗浄し、浸した。ＨＳＶ‐１感染を５０％阻害するｄＵＹ１１濃度（ＩＣ５０）は、グラフから２０ｎＭと算出された。エラーバーは１０個の実験の範囲を示している。ｄＵＹｌｌは、培養液中、ナノモル濃度範囲の低濃度で活性を示し、ＩＣ５０は２０ｎＭであった。
【０１０２】
図７は、処理時間に対してＨＳＶ‐１感染力をプロットした線グラフである。ＨＳＶ‐１  ＫＯＳ（２００ＰＦＵ）を２０ｎＭのｄＵＹ１１（ＩＣ５０）とともに３７℃で０，３０，６０，９０，１２０，１８０，２４０又は３００秒間インキュベートした。次に、そのようにして前処理したウイルスをＶｅｒｏ細胞に１時間感染させ、５％ＦＢＳ及び２％ＭＣを添加した培養液で洗浄し、浸した。ＩＣ５０値濃度のｄＵＹｌｌは２２０秒間で５０％の感染を阻害した（図７）。エラーバーは２個の実験の範囲を示しているが、このスケールではほとんどのデータポイントで見えない。
【０１０３】
図８は、ｄＵＹｌ１濃度に対してＨＳＶ‐１感染力をプロットした線グラフである。ＨＳＶ‐１  ＫＯＳ（２００ＰＦＵ）を０，２，７，２０，７０，２００又は７００ｎＭのｄＵＹ１１とともに３７℃で５分間インキュベートした。次に、そのようにして前処理したＨＳＶ‐１ウイルスをヒト包皮線維芽細胞（ＨＦＦ）（黒丸）又はＶｅｒｏ細胞（黒い正方形）に１時間感染させ、５％ＦＢＳ及び２％ＭＣを添加した培養液で洗浄し、浸した。ＩＣ５０値はグラフからＶｅｒｏ細胞では２５ｎＭ、ＨＦＦ細胞では２０ｎＭと算出された（Ａ）。ウイルスが７００ｎＭのｄＵＹ１１で前処理されたときには両細胞への感染は完全に阻害された（Ｂ）。エラーバーは３つ以上の実験の範囲を表す。予想されたように、ｄＵＹｌｌによって処理されたウイルスはＶｅｒｏ細胞とヒト包皮線維芽細胞で等しく非感染性であった。
【０１０４】
ｄＵＹ１１は生殖器感染からマウスを強く防御する非細胞障害性の化合物である（次のセクション参照）が、他にも２つのヌクレオシドベースの化合物が合成され、評価されている。修飾された化合物はｄｄＵＹｌ１及びａＵＹｌ１と名づけられた（セクションＩ参照）。その化合物は培養細胞の感染でテストされた。ａＵＹｌｌ及びｄｄＵＹｌｌともにｄＵＹｌｌとほぼ同じ活性を示し（表１）、いずれも細胞障害性はなかった。
【０１０５】
【表１】
0005539735.tif 000018
【０１０６】
ＶＩ．ｄＵＹｌｌは７，５００以上の安全性指標を有し、主要な細胞増殖抑制作用もない。
２つのシリーズの実験は、ｄＵＹｌ１には細胞傷害又は細胞増殖抑制の作用がないことを明らかにした。最初の実験では、７２時間の処理のうちｄＵＹｌｌを添加した新しい培養液に３０分間だけ置き換えた。しかしながら、ｄＵＹｌｌが細胞膜に局在していることが後で発見された（図９）。その結果、細胞膜あたりのｄＵＹｌｌ分子の数は各細胞複製周期の後に半分減少すると考えられる。したがって、細胞毒性の分析を再度行い、２４時間（これらの細胞のおよその倍加時間）ごとにｄＵＹｌｌを含む新しい培養液を加え、合計７２時間曝露した。
【０１０７】
図１０は、ｄＵＹｌｌを曝露した時間に対して相対的な細胞数をプロットした線グラフである。Ｖｅｒｏ細胞を１時間モック感染させ、洗浄し、０（黒い正方形），７（黒三角），２０（黒丸），７０（白い正方形）又は１５０（白三角形）μＭのｄＵＹ１１を含む培養液で浸した。１５０μＭは培養液中で長期間安定ではない。培養液は２４時間ごとに０，７，２０，７０又は１５０μＭのｄＵＹ１１を添加した新しい培養液に置き換えた（上向きの矢印で示す）。２４、４８及び７２時間に、生存及び非生存細胞をトリパンブルー色素排除試験で測定した。すべての時間のサンプルで非生存細胞の合計数は４％未満であった。エラーバーはOLE_LINK3OLE_LINK4（＊）OLE_LINK3OLE_LINK4を除いて１つの実験の２サンプルの範囲を表す。（＊）では１つの実験の１サンプルを２回数えた範囲を表す。ｄＵＹｌ１には細胞傷害性はなく、そのＩＣ５０値の７，５００倍濃度以上でもわずかに細胞増殖抑制性が認められるだけであった。したがって、安全性指標（ＳＩ）は７，５００以上であったが、ｄＵＹ１１を培養液中で均等に分散できた濃度（７０，０００ｎＭ以下）、又はより高濃度（１５０，０００ｎＭ）でも細胞障害活性は５０％に到達しなかったので、その値は算出できなかった。
【０１０８】
ＶＩＩ．両親媒性ヌクレオシド誘導体はウイルスの結合ではなく、ウイルスの侵入を阻害する。
感染前に両親媒性ヌクレオシド誘導体をＨＳＶ‐１ウイルスに前処理することによって感染は阻害された。したがって、これらのヌクレオシドは、例えば、細胞へのウイルスの結合を妨げることによってＨＳＶ‐１の感染力を阻害するかもしれない。あるいはまた、それらは細胞外ウイルスを破壊するのかもしれない（すなわち、殺ウイルス活性を持つ）。溶解したウイルスは細胞と結合しない。ｄＵＹｌ１で前処理されたＨＳＶ‐１ウイルスの結合性を評価した。図１１は、ＨＳＶ‐１の結合性（Ａ）と感染力（Ｂ）を示す棒グラフとイメージ画像である。併行した試験では、［３５］Ｓ‐メチオニンで標識（２．５×１０５ＰＦＵで、約４×１０５ｃｐｍ）したＨＳＶ‐１  ＫＯＳ（Ａ）又は、非標識のＨＳＶ‐１  ＫＯＳ（Ｂ）を、薬物なし（白棒）、７μＭのｄＵＹｌｌ（縞棒）又は１００μｇ／ｍｌヘパリン（黒棒）を用いて３７℃で５分間、前処理した。次に、サンプルを氷で冷却した。サンプルを、薬物なし、７μＭのｄＵＹｌｌ又は１００μｇ／ｍｌヘパリンを添加した冷却無血清培地で希釈した（１：２０，１：１００）。そのようして前処理したウイルスをＶｅｒｏ細胞に４℃で１時間感染させ、冷却した培養液で３回洗浄し、溶解した。結合したウイルスは液体シンチレーションによって定量化した。エラーバーは３つの実験の範囲を表す（Ａ）。これらの結果に基づき、７μＭのｄＵＹｌｌは感染を抑制した（図１１Ｂ）が、ウイルス結合は阻害しなかった（図１１Ａ）。
【０１０９】
次に、ｄＵＹｌｌの高親和性結合に影響する能力を評価した。図１２は、ヘパリン濃度を増加したときの細胞へのＨＳＶ‐１結合の競合を示した線グラフである。［３５］Ｓ‐メチオニン標識したＨＳＶ‐１（５×１０ＰＦＵで約３．５×１０ｃｐｍ）を７μＭのｄＵＹ１１（黒い正方形）又は薬物なし（黒丸）により３７℃で５分間前処理した。サンプルを氷中で冷却し、次いで、７μＭのｄＵＹｌｌを加えた、又は加えなかった冷却無血清培地で希釈した（１：１０）。Ｖｅｒｏ細胞に１５分間吸着させた後、結合しなかったウイルスを洗浄した。さらに、低親和性結合のみによって結合しているウイルスを取り外すために結合したウイルスを０〜１，０００μｇ／ｍｌのヘパリンを添加した培養液を用いて１時間洗浄した。そして、これらの洗浄によって剥がれたウイルスを液体シンチレーションによって定量化した。エラーバーは２つの実験の範囲を表す。ヘパリンは、７μＭのｄＵＹｌｌで前処理したＨＳＶ‐１ウイルスの結合及び未処理のウイルスの結合に有効に競合しなかった。このことは、前者のウイルスのほとんどが高親和性によって結合していることを示している（図１２）。したがって、ｄＵＹ１１は殺ウイルス性ではなく、低親和性及び高親和性の結合のいずれも阻害しない。したがって、両親媒性ヌクレオシド誘導体は高親和性結合とウイルスＤＮＡ複製の間のステップを阻害する。
【０１１０】
次に、ＨＳＶ‐１ウイルスの侵入におけるｄＵＹｌ１の影響を調べた。ＨＳＶ‐１ウイルスの侵入は、感染細胞へのＶＰ１６侵入などのいくつかの方法によって評価できる。ＶＰ１６は、ＨＳＶの前初期（ＩＥ）遺伝子の転写活性に必要なＨＳＶ固有のウイルスタンパクである。したがって、ＶＰ１６侵入は、ＨＳＶ‐１  ＩＥプロモーターで制御された細胞ゲノムに組み込まれた赤色蛍光タンパク（ＲＦＰ）レポータ遺伝子を含む細胞を用いて評価できる。感染後のＲＦＰ発現は、ＶＰ１６が核に到達したことを示す。したがって、そのことは、またＨＳＶが細胞内に侵入したことを示している。
【０１１１】
図１３は、ＨＳＶ‐１  ＩＣＰ０  ＩＥプロモーターで制御される細胞ゲノムに組み込まれた赤色蛍光タンパク（ＲＦＰ）レポータ遺伝子を含むＶｅｒｏ細胞の赤色蛍光発現の図（Ａ）と定量結果（Ｂ）を示している。ＤＭＳＯ媒体（左のパネル）又は２μＭのｄＵＹ１１（右のパネル）で前処理したＨＳＶ‐１  ＫＯＳウイルスを細胞に感染させた。図１３Ａに、２４ｈｐｉにおける細胞を蛍光（上のパネル）又は可視光（下のパネル）で可視化した結果を示す。図１３Ｂに、薬物なし、又はｄＵＹ１１で前処理したＵＶ不活性化ＨＳＶ‐１  ＫＯＳウイルスを感染させた蛍光細胞の定量を示す（７つの実験のうち代表的な１つの実験で同様の細胞密度がある２つの顕微鏡視野から数えた）。
【０１１２】
ＨＳＶ‐１  ＩＥプロモーターの制御下でＲＦＰを発現し、２μＭのｄＵＹ１１（結合を阻害しなかった濃度より３．５倍低い濃度）で前処理したＨＳＶ‐１ウイルスを感染させた細胞には蛍光は検出されなかった（図１３）。したがって、ｄＵＹ１１は、ウイルス侵入の前で高親和性の結合後のステップを阻害する。この間で唯一知られているステップはウイルスエンベロープと細胞膜の融合である。
【０１１３】
ＶＩＩＩ．両親媒性ヌクレオシド誘導体は、いくつかの他の関連のないエンベロープウイルスの感染を阻害する。
ｄＵＹｌｌのターゲットがいくらかの保存された糖タンパクを有するウイルス間で保存されているかどうかを調べるために、ＨＳＶウイルス２型（ＨＳＶ‐２）の２つの株におけるｄＵＹ１１活性をテストした。ひとつ目は臨床的に単離された株であり、もう１つは実験室で適応させた株である（それぞれ、株１８６と株３３３）。ｄＵＹｌｌのターゲットが遠縁のエンベロープウイルスのみに保存されているかどうかを調べるために、ｄＵＹｌｌ活性を水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）及びシンドビス（ＳＩＮ）でテストした。ＶＳＶとＳＩＮはＨＳＶ‐１又はＨＳＶ‐２で保存されていることが知られている糖タンパクがないＲＮＡウイルスである。また、ＶＳＶとＳＩＮの糖タンパクはＨＳＶ‐１又はＨＳＶ‐２の糖タンパクとは異なった受容体を認識する。ＶＳＶのＧタンパクは特異的な脂質であるホスファチジルセリンを認識し、結合する。一方、ＳＩＮの糖タンパクはありふれた表面タンパクである高親和性ラミニン受容体に結合する。ＨＳＶ‐１又はＨＳＶ‐２と異なり、ＶＳＶとＳＩＮは細胞膜と融合することにより取り込まれ、融合糖タンパク内での低いｐＨにより立体構造変換が誘導される。これらの立体構造変換により融合ペプチドが現れ、次に、融合ペプチドはターゲット膜に挿入され、ウイルスエンベロープ膜と細胞膜間の融合が誘引される。
【０１１４】
図１４は、ｄＵＹｌｌ濃度に対するＨＳＶ‐１株ＫＯＳ（黒丸）、ＨＳＶ‐２株１８６（黒い正方形）、ＨＳＶ‐２株３３３（白い正方形）、ＶＳＶ（黒三角）又はＳＩＮウイルス（白三角）の感染力を示した線グラフである。ウイルス（２００ＰＦＵ）を０，０．００７，０．０２，０．０７，０．２，０．７又は２μＭのｄＵＹｌｌにより３７℃で１時間インキュベートした。次いで、そのように前処理したウイルスをＶｅｒｏ細胞に１時間感染させ、５％ＦＢＳ及び２％ＭＣを添加した培養液で洗浄し、浸した。ＩＣ５０値はグラフより、ＶＳＶが６ｎＭ、ＨＳＶ‐１が２４ｎＭ、ＨＳＶ‐２株１８６が４９ｎＭ、ＳＩＮが５８ｎＭ、ＨＳＶ‐２株３３３が６５ｎＭと算出された。エラーバーは２つ以上の実験の範囲を表す。ｄＵＹｌ１はＨＳＶ‐１と同様のＩＣ５０値で両方のＨＳＶ‐２株の感染を阻害し（図１４）、このことは、ｄＵＹ１１のターゲットが保存された糖タンパク及びエンベロープの脂質組成を持つウイルス間で保存されていることを示している。また、ｄＵＹ１１は遠縁のエンベロープウイルスに対して同様のＩＣ５０値で阻害し、そのことは、ｄＵＹ１１のターゲットが非保存性のエンベロープタンパクを持つウイルス間でも保存されていることを示している。したがって、ｄＵＹ１１はその他の関連性の無いエンベロープウイルス間で保存されているウイルス融合のステップを阻害する。ｄＵＹ１１が高親和性の結合を阻害しないで、関連性の無いエンベロープウイルスの侵入を妨げることから、ｄＵＹ１１のターゲットはエンベロープの脂質二重膜と細胞間との融合であると考えられる。
【０１１５】
ＩＸ．両親媒性ヌクレオシド誘導体の主なターゲットは細胞膜ではなく、ウイルスエンベロープである。
ウイルスの取り込みにはウイルスエンベロープと細胞膜の２つの脂質二重膜間の融合が必要である。ウイルスをｄＵＹ１１で前処理したときにウイルス感染が阻害された。したがって、このことはウイルスエンベロープがターゲットであることを示している。しかしながら、細胞膜もターゲットであるかもしれない。このシナリオにおいてｄＵＹｌ１で前処理したウイルスは細胞膜内のターゲット部位に薬剤を輸送するであろう。そして、前処理した細胞は前処理したウイルスに比べてより効率的に感染を阻害するはずである。
【０１１６】
ｄＵＹｌｌが、ウイルスエンベロープ又は細胞膜のどちらを優先的にターゲットとするかを確認するために実験を行った。図１５は、ｄＵＹ１１濃度に対するＨＳＶ‐１  ＫＯＳ感染力をプロットした線グラフである。ＨＳＶ‐１  ＫＯＳ（２００ＰＦＵ）を０，０．００２，０．００７，０．０２，０．０７，０．２，０．７，２，７，２０又は７０μＭのｄＵＹ１１とともに３７℃で５分間インキュベートした。次に、そのようにして前処理したウイルスをＶｅｒｏ細胞に１時間感染させ、５％のＦＢＳと２％のＭＣを添加した培養液で洗浄し、浸した（黒い正方形）。あるいは、未処理のＶｅｒｏ細胞（黒三角）、又は０，２，７，２０、７０μＭのｄＵＹ１１とともに３７℃で６０分に至るまで前処理したＶｅｒｏ細胞（黒丸）に感染させるために未処理のウイルスサンプルを用いた。そして、前処理しなかった感染細胞を０，２，７，２０又は７０μＭのｄＵＹ１１と５％ＦＢＳ及び２％ＭＣを添加した培養液で浸した。グラフよりＩＣ５０値はウイルスの前処理で２０ｎＭ（これらのスケールでは見えない）、細胞の前処理で５．４μＭ（Ａ）と算出された。最大の阻害はウイルスの前処理で１００％、細胞の前処理で７５％であった（Ｂ）。ｘ軸スケールの最大値は（Ａ）で７μＭ、（Ｂ）で７０μＭである。エラーバーは３つ以上の実験の範囲を表す。
【０１１７】
感染前にウイルスを前処理したときにのみウイルス感染は完全に阻害された（ＩＣ５０，２０ｎＭ‐図１５）。それに対して、細胞の前処理はＨＳＶ‐１の感染を減少させたが、２７０倍以上の高濃度で最大７５％であった（ＩＣ５０，５．４μＭ）。図３で示された結果と一致して、未処理のウイルスを感染させた後に、ｄＵＹ１１で細胞を処理してもＨＳＶ‐１の複製には影響はなかった。これらの結果は、両親媒性ヌクレオシド誘導体がターゲットとする主要な膜はウイルスエンベロープであることを示しており、さらに、これらの化合物がウイルスの複製を阻害しないことを証明する。
【０１１８】
Ｘ．両親媒性ヌクレオシド誘導体は処理された細胞から産生されるウイルスの感染を阻害する。
両親媒性化合物がウイルス膜と同様に細胞に挿入されるなら、それらは処理された細胞によって産生される子孫ウイルスの感染も阻害するかもしれない。図９はｄＵＹ１１で処理され、膜の色素（ＰＫＨ２６）で染色されたモック感染細胞を示す。確かに、ｄＵＹ１１は細胞突起にはないが、原形質膜と細胞内膜に分布している。このことはｄＵＹ１１が膜輸送を阻害しないことを示している。したがって、感染後に前記の化合物によって処理された感染細胞によって産生されたウイルスは未処理の細胞によって産生されるウイルスと同じようには、感染しないはずである。図１６Ａは、両親媒性ヌクレオシド誘導体で２４時間処理した細胞によって産生されるウイルスの感染力低下を示し、薬物濃度に対してプロットした線グラフである。Ｖｅｒｏ細胞に３ＰＦＵ／細胞の感染効率（ＭＯＩ）でＨＳＶ‐１  ＫＯＳを感染させた。ウイルス接種源を除去した後、感染細胞を０，０．１２５，０．２５，０．５，０．７５，１，１．０５，１．５，１．７５又は２μＭのｄＵＹｌｌで処理した。感染後２４時間に細胞を回収し、ウイルス感染を標準のプラークアッセイによって評価した。エラーバーは３つ以上の実験の範囲を表す。ｄＵＹ１１存在下で産生されたウイルスは、未処理の細胞によって産生されたウイルスに比べて８桁低い感染力であった（図１６Ａ）。再度実験を行ったが、感染細胞へのｄＵＹ１１の曝露をウイルス接種源の除去直後１時間だけに制限した（図１６Ｂ）。細胞にＨＳＶ‐１を感染させ、感染細胞にｄＵＹｌｌをエンベロープ糖タンパクが発現する前である１時間だけ加えた。次に、感染細胞を薬物なしで２２時間インキュベートし、子孫ウイルスの感染力を評価した。ｄＵＹ１１処理細胞から出芽したウイルスは、未処理の細胞から出芽したウイルスに比べて６桁低い感染力であった（図１６Ｂ；ＩＣ５０，３．９μＭ）。したがって、ｄＵＹｌｌは膜脂質などウイルスに組み込まれている既存の細胞因子と相互作用する。
【０１１９】
処理された細胞によって産生されるウイルスの感染におけるｄＵＹ１１の効果は、感染したウイルスが従来の抗ウイルス薬に対して感受性（すなわち、野生型）であるか、又は耐性であるかには関係がなかった。ｄＵＹ１１は、野生型、アシクロビル又はホスホノ酢酸耐性のＨＳＶ‐１耐性株（それぞれ、チミジンキナーゼ‐ＴＫ‐欠損株又はＰＡＡｒ５株）に感染させた細胞によって産生されるウイルスの感染に対して等しく重要な抑制効果を持つ。
【０１２０】
図１７は、異なった薬物で処理した細胞によって産生されるウイルスの感染力（又は、ウイルス力価）の低下を示し、ＡＣＶ，ＰＡＡ又はｄＵＹ１１の濃度に対してプロットした線グラフである。３ＰＦＵ／細胞のＨＳＶ‐１野生株（黒丸）、ＡＣＶ耐性株（黒三角）、ＰＡＡ耐性株（黒い正方形）をＶｅｒｏ細胞に１時間感染させ、洗浄し、０，２．５，５，１０，２５又は５０μＭのＡＣＶ（Ａ）、０，２５，５０，１００，２５０又は５００μｇ／ｍｌのＰＡＡ（Ｂ）、０，０．５，１．０５，２又は１０μＭのｄＵＹ１１（Ｃ）を含む培養液を加えた。２４時間後に細胞を回収し、標準のプラークアッセイによりウイルス感染力（又は、ウイルス力価）を評価した。ウイルス感染力（又は、ウイルス力価）の低下は、異なる薬物で処理された細胞によって産生されるウイルスの感染力を、未処理の細胞によって産生されるウイルスの感染力で割ることによって算出した。エラーバーは２つの実験の範囲を表す。
【０１２１】
これらの実験は、さらに、両親媒性ヌクレオシド誘導体が、多くの他のヌクレオシド誘導体のようなウイルスＤＮＡポリメラーゼのＨＳＶ‐１  ＴＫ又はピロリン酸結合部位（ＰＡＡのターゲット）をターゲットとしないことを証明している。
【０１２２】
ＸＩ．両親媒性ヌクレオシド誘導体のｉｎ  ｖｉｖｏ解析
本明細書に記載された両親媒性ヌクレオシド誘導体が、ウイルス伝播を阻害するかどうかを確認するために、性行為伝染ウイルス（ＨＳＶ‐２）を用いた膣感染症モデルを使用した。１群５匹のマウスに７０μＭのｄＵＹ１１又は溶媒に曝露した１０３又は３×ｌ０３のＨＳＶ‐２ウイルスを膣内に感染させた（図１８Ａ‐Ｅ及び図１９Ａ‐Ｂ）。図１８Ａ‐Ｅは、ウイルス排出、平均臨床スコア又は相対重量、溶媒（白い正方形）又はｄＵＹ１１（黒い正方形）に曝露した１，０００（点線）又は３，０００（実線）のＨＳＶ‐２ウイルスを感染させた徴候マウス及び死亡マウスの累積数を示している。図１９Ａ‐Ｂは、すべての感染マウスの膣、会陰部位及び肛門の写真を示している。図１９Ａは、溶媒（左のパネル）又はｄＵＹ１１（右のパネル）に曝露した３，０００のＨＳＶ‐２ウイルスで感染させたマウスを示している。図１９Ｂは、溶媒（左のパネル）又はｄＵＹ１１（右のパネル）に曝露した１，０００のＨＳＶ‐２ウイルスで感染させたマウスを示している。溶媒に曝露したウイルスを感染させたすべてのマウスが、感染後２〜４日目に１０４未満のウイルスを排出し、８日目まで低いレベルで推移し、明らかな感染の臨床的徴候が認められた（図１８Ａ‐Ｄ）。３×ｌ０３のウイルスを感染させた５匹すべてのマウス及び１０３のウイルスを感染させたマウスのうち３匹が病気の進行のため７〜９日目に安楽死させなければならなかった（図１８Ｅと１９Ａ‐Ｂ）。ｄＵＹｌｌに曝露した１０３又は３×ｌ０３のいずれかのウイルスを感染させた１０匹のマウスは、すべて感染性ウイルスの排出は検出されず、臨床的徴候も認められなかった。したがって、ｄＵＹｌｌはＨＳＶ‐２の膣感染を防御する。
【０１２３】
本明細書全体にわたって、様々な刊行物が参照される。これらの刊行物の開示は、本明細書に記載される本発明の化合物、組成物及び方法をより完全に記載するために、参照することによりその全体が本明細書中に組み込まれる。
【０１２４】
様々な変形及び変更を、本明細書に記載される本発明の化合物、組成物及び方法にすることができる。本明細書に記載された本発明の化合物、組成及び方法の他の実施態様は、本明細書に開示された本発明の化合物、組成及び方法の仕様及び実施の考察から明らかである。特定例及び実施例は例示であるとみなされることを意図する。
【図２】
0005539735.tif 000022
【図３】
0005539735.tif 000023
【図４】
0005539735.tif 000024
【図５】
0005539735.tif 000025
【図６】
0005539735.tif 000026
【図７】
0005539735.tif 000027
【図８】
0005539735.tif 000028
【図９】
0005539735.tif 000029
【図１０】
0005539735.tif 000030
【図１１】
0005539735.tif 000031
【図１２】
0005539735.tif 000032
【図１３】
0005539735.tif 000033
【図１４】
0005539735.tif 000034
【図１５】
0005539735.tif 000035
【図１６】
0005539735.tif 000036
【図１７】
0005539735.tif 000037
【図１８】
0005539735.tif 000038
【図１９】
0005539735.tif 000039
【図１】
0005539735.tif 000040