(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）１またはそれ以上のホスファチジルコリン，（２）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（３）標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（４）薬剤または標識された化合物，および（５）コレステロールまたはコレステロール誘導体を含む標的化リポソームであって，
ここで，（３）の標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは，標的化因子と（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンとは別の第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのカルボキシル基との共有結合反応により生成した第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化因子を含み；および
（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化１】
0005438317.tif 000033
で表され，第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式３：
【化２】
0005438317.tif 000034
［式中，Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6は，それぞれ１２−２２個の炭素原子を有する飽和または不飽和脂肪族カルボン酸から誘導されるアシル基であり，Ｒ1およびＲ2は同じであり，かつＲ5およびＲ6は同じであり，および
ｍおよびｐは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；
標的化因子は１−５０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）であり；および，
リポソームは誘導化されていないホスファチジルエタノールアミン，卵ホスファチジルコリン，または親水性ポリマーを含まず，かつ標的化因子は無傷の抗体ではない，
ことを特徴とする標的化リポソーム。
【請求項２】
標的化リポソームは，１０−５０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）を含む，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項３】
標的化リポソームは，１０−２５μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）を含む，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項４】
ホスファチジルコリンは飽和脂肪酸の成分を含む，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項５】
１またはそれ以上のホスファチジルコリンは，ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ），ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ），パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）である，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項６】
リポソームは，ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびコレステロール，ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）およびコレステロール，パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）およびコレステロール，またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）およびコレステロールを含む，請求項５記載の標的化リポソーム。
【請求項７】
リポソームはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびコレステロールを含む，請求項６記載の標的化リポソーム。
【請求項８】
標的化因子は，トランスフェリン，葉酸，ヒアルロン酸，糖鎖，およびモノクローナル抗体のフラグメントからなる群より選択される，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項９】
標的化因子は，トランスフェリン，葉酸，ヒアルロン酸および糖鎖からなる群より選択される，請求項８記載の標的化リポソーム。
【請求項１０】
標的化因子はトランスフェリンである，請求項９記載の標的化リポソーム。
【請求項１１】
トランスフェリンはホロ形でありアポ形ではない，請求項１０記載の標的化リポソーム。
【請求項１２】
リポソームの平均直径が５０ｎｍ−２５０ｎｍである，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項１３】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6は，オレオイルまたはステアロイルであり，およびｍおよびｐは３である，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項１４】
１またはそれ以上のホスファチジルコリンは，ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）またはジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）であり，およびコレステロールまたはコレステロール誘導体はコレステロールである，請求項１３記載の標的化リポソーム。
【請求項１５】
ｍおよびｐはそれぞれ独立して，２−４の整数である，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項１６】
ｍおよびｐは等しく，２−４の整数である，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項１７】
ｍおよびｐは等しく，３である，請求項１６記載の標的化リポソーム。
【請求項１８】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6は，独立して，オレオイルまたはステアロイルである，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項１９】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6は同じである，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項２０】
標的化因子はトランスフェリンである，請求項１３記載の標的化リポソーム。
【請求項２１】
薬剤が存在する，請求項２０記載の標的化リポソーム。
【請求項２２】
薬剤はオキザリプラチンである，請求項２１記載の標的化リポソーム。
【請求項２３】
コレステロールまたはコレステロール誘導体はコレステロールである，請求項２２記載の標的化リポソーム。
【請求項２４】
標識された化合物が存在する，請求項２０記載の標的化リポソーム。
【請求項２５】
薬剤は抗癌剤である，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項２６】
薬剤は細胞毒性薬剤である，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項２７】
薬剤はトポイソメラーゼＩ阻害剤である，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項２８】
トポイソメラーゼＩ阻害剤はトポテカンまたはイリノテカンである，請求項２７記載の標的化リポソーム。
【請求項２９】
薬剤はビンカアルカロイドである，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項３０】
ビンカアルカロイドは，ビンクリスチン，ビンブラスチン，ビンレウロシン，ビンロジシン，ビノレルビンまたはビンデシンである，請求項２９記載の標的化リポソーム。
【請求項３１】
薬剤は核酸である，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項３２】
核酸は，アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはリボザイムである，請求項３１記載の標的化リポソーム。
【請求項３３】
薬剤は白金化合物である，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項３４】
白金化合物は，ビプラチン，シスプラチン，カルボプラチン，オルマプラチン，オキザリプラチン，ゼニプラチン，エンロプラチン，ロバプラチンまたはスピロプラチンである，請求項３３記載の標的化リポソーム。
【請求項３５】
白金化合物はオキザリプラチンである，請求項３４記載の標的化リポソーム。
【請求項３６】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6はオレオイルであり，ｍおよびｐは３であり，標的化因子はトランスフェリンであり，１またはそれ以上のホスファチジルコリンはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）であり，およびコレステロールまたはコレステロール誘導体はコレステロールである，請求項３５記載の標的化リポソーム。
【請求項３７】
薬剤はアルキル化剤である，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項３８】
薬剤はタキサンである，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項３９】
薬剤は代謝性アンタゴニストである，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項４０】
薬剤は抗腫瘍抗生物質である，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項４１】
薬剤はホルモン療法薬剤である，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項４２】
薬剤は分子標的薬である，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項４３】
オキザリプラチンは，トレハロース，マルトース，スクロース，マンノース，ラクトース，マンニトール，グリセロールおよびデキストロースからなる群より選択される糖の水性溶液に溶解されている，請求項３５記載の標的化リポソーム。
【請求項４４】
糖は，３００ｍＭの濃度である，請求項４３記載の標的化リポソーム。
【請求項４５】
リポソーム中のオキザリプラチンの濃度は，０．１ｍｇ／ｍｌ−２５ｍｇ／ｍｌである，請求項３５記載の標的化リポソーム。
【請求項４６】
リポソームはカチオン性脂質を含まない，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項４７】
リポソームはアニオン性脂質を含まない，請求項１記載の標的化リポソーム。
【請求項４８】
請求項１記載の標的化リポソームを製造する方法であって，
ａ）（１）１またはそれ以上のホスファチジルコリン，（２）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（３）（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンとは別の第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化因子を含む標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，および（５）コレステロールまたはコレステロール誘導体を混合して脂質混合物を形成し；
ｂ）工程（ａ）で形成された脂質混合物に（４）薬剤または標識された化合物を加え；そして
ｃ）リポソームを形成する
の各工程を含む方法。
【請求項４９】
さらに，工程（ｃ）のリポソームを精製する工程（ｄ）を含む，請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
工程（ｂ）の薬剤または標識された化合物を水性溶液として脂質混合物に加える，請求項４８記載の方法。
【請求項５１】
工程（ｃ）は超音波処理または撹拌を含む，請求項４８記載の方法。
【請求項５２】
工程（ｃ）は押し出しを含む，請求項４８記載の方法。
【請求項５３】
請求項１記載の標的化リポソームを製造する方法であって，
ａ）（１）１またはそれ以上のホスファチジルコリン，（２）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（６）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル，および（５）コレステロールまたはコレステロール誘導体を混合して脂質混合物を形成し，
ここで，（６）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは式２：
【化３】
0005438317.tif 000035
［式中，Ｒ3およびＲ4は，それぞれ１２−２２個の炭素原子を有する飽和または不飽和脂肪族カルボン酸から誘導されるアシル基であり，Ｒ3およびＲ4は同じであり，およびｎは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；
ｂ）工程（ａ）で形成された脂質混合物に（４）薬剤または標識された化合物を加え；
ｃ）リポソームを形成し；そして
ｄ）（６）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルのスクシニルカルボキシル基に標的化因子のアミノ基を反応させ、カルボン酸アミド結合で連結させて、（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンとは別の第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化因子を形成する，
の各工程を含む方法。
ここで第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式３：
【化４】
0005438317.tif 000036
［式中，Ｒ5およびＲ6は，それぞれＲ3およびＲ4と同じで，かつＲ5およびＲ6は同じであり，および
ｐはｎと同じである］
で表される。
【請求項５４】
さらに工程（ｄ）のリポソームを精製する工程（ｅ）を含む，請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
工程（ｂ）における薬剤または標識された化合物を水性溶液として脂質混合物に加える，請求項５３記載の方法。
【請求項５６】
工程（ｃ）は超音波処理または撹拌を含む，請求項５３記載の方法。
【請求項５７】
工程（ｃ）は押し出しを含む，請求項５３記載の方法。
【請求項５８】
請求項１記載の標的化リポソーム，および１またはそれ以上の薬学的に許容しうる担体，賦形剤，希釈剤，安定化剤，または保存剤を含む医薬処方物。
【請求項５９】
トランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンであって，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式３：
【化５】
0005438317.tif 000037
［式中，Ｒ5およびＲ6は，それぞれ１２−２２個の炭素原子を有する飽和または不飽和脂肪族カルボン酸から誘導されるアシル基であり，ここでＲ5およびＲ6は同じであり，およびｐは１−１０の整数である］
で表され，
およびトランスフェリンは、Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのカルボキシル基との共有結合反応により連結されていることを特徴とする，トランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン。
【請求項６０】
ｐは２−４の整数である，請求項５９記載のトランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン。
【請求項６１】
ｐは３である，請求項６０記載のトランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン。
【請求項６２】
Ｒ5およびＲ6はオレオイルである，請求項６０記載のトランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン。
【請求項６３】
Ｒ5およびＲ6はオレオイルまたはステアロイルである，請求項６０記載のトランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン。
【請求項６４】
Ｒ5およびＲ6はオレオイルまたはステアロイルであり，ｐは３である，請求項６０記載のトランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン。
【請求項６５】
請求項６０または６４記載のトランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，および１またはそれ以上の薬学的に許容しうる担体，賦形剤，希釈剤，安定化剤，または保存剤を含む医薬処方物。
【請求項６６】
（１）１またはそれ以上のホスファチジルコリン，（２）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（３）標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，および（５）コレステロールまたはコレステロール誘導体を含む空リポソームであって，
ここで，（３）の標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは，標的化因子と（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンとは別の第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンとの共有結合反応により生成した第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化因子を含み；および
（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化６】
0005438317.tif 000038
で表され，および
第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式３：
【化７】
0005438317.tif 000039
［式中，Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6は，それぞれ１２−２２個の炭素原子を有する飽和または不飽和脂肪族カルボン酸から誘導されるアシル基であり，Ｒ1およびＲ2は同じであり，かつＲ5およびＲ6は同じであり，およびｍおよびｐは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；
標的化因子は１−５０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）であり；および，
リポソームは誘導化されていないホスファチジルエタノールアミン，卵ホスファチジルコリン，または親水性ポリマーを含まず，および標的化因子は無傷の抗体ではない，
ことを特徴とする空リポソーム。
【請求項６７】
ホスファチジルコリンは飽和脂肪酸から誘導されるアシル基を含む，請求項６６記載の空リポソーム。
【請求項６８】
１またはそれ以上のホスファチジルコリンはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ），ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ），パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）である，請求項６６記載の空リポソーム。
【請求項６９】
混合物は，ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびコレステロール，ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）およびコレステロール，パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）およびコレステロール，またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）およびコレステロールを含む，請求項６８記載の空リポソーム。
【請求項７０】
混合物はジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびコレステロールを含む，請求項６９記載の空リポソーム。
【請求項７１】
標的化因子は，トランスフェリン，葉酸，ヒアルロン酸，糖鎖，およびモノクローナル抗体のフラグメントからなる群より選択される，請求項６６記載の空リポソーム。
【請求項７２】
標的化因子は，トランスフェリン，葉酸，ヒアルロン酸および糖鎖からなる群より選択される，請求項７１記載の空リポソーム。
【請求項７３】
標的化因子はトランスフェリンである，請求項７２記載の空リポソーム。
【請求項７４】
トランスフェリンはホロ形でありアポ形ではない，請求項７３記載の空リポソーム。
【請求項７５】
リポソームの平均直径は５０ｎｍ−２５０ｎｍである，請求項６６記載の空リポソーム。
【請求項７６】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6はオレオイルまたはステアロイルであり，およびｍおよびｐは３である，請求項６６記載の空リポソーム。
【請求項７７】
１またはそれ以上のホスファチジルコリンはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）またはジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）であり，およびコレステロールまたはコレステロール誘導体はコレステロールである，請求項７６記載の空リポソーム。
【請求項７８】
ｍおよびｐは，それぞれ独立して，２−４の整数である，請求項６６記載の空リポソーム。
【請求項７９】
ｍおよびｐは等しく，２−４の整数である，請求項６６記載の空リポソーム。
【請求項８０】
ｍおよびｐは等しく，３である，請求項７９記載の空リポソーム。
【請求項８１】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6は，独立して，オレオイルまたはステアロイルである，請求項６６記載の空リポソーム。
【請求項８２】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6は同じである，請求項６６記載の空リポソーム。
【請求項８３】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6はオレオイルである，請求項７６記載の空リポソーム。
【請求項８４】
標的化因子はトランスフェリンである，請求項７６記載の空リポソーム。
【請求項８５】
トランスフェリンはホロ形である，請求項８４記載の空リポソーム。
【請求項８６】
リポソームはカチオン性脂質を含まない，請求項６６記載の空リポソーム。
【請求項８７】
リポソームはアニオン性脂質を含まない，請求項６６記載の空リポソーム。
【請求項８８】
請求項６６記載の空リポソームを製造する方法であって，
ａ）（１）１またはそれ以上のホスファチジルコリン，（２）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（３）（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンとは別の第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化因子を含む標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，および（５）コレステロールまたはコレステロール誘導体を混合して脂質混合物を形成し；そして
ｂ）リポソームを形成する，
の各工程を含む方法。
【請求項８９】
さらに，工程（ｂ）のリポソームを精製する工程（ｃ）を含む，請求項８８記載の方法。
【請求項９０】
工程（ｂ）は超音波処理または撹拌を含む，請求項８８記載の方法。
【請求項９１】
工程（ｂ）は押し出しを含む，請求項８８記載の方法。
【請求項９２】
請求項６６記載の空リポソームを製造する方法であって，
ａ）（１）１またはそれ以上のホスファチジルコリン，（２）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（６）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル，および（５）コレステロールまたはコレステロール誘導体を混合して脂質混合物を形成し，
ここで，（６）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは式２：
【化８】
0005438317.tif 000040
［式中，Ｒ3およびＲ4は，それぞれ１２−２２個の炭素原子を有する飽和または不飽和脂肪族カルボン酸から誘導されるアシル基であり，Ｒ3およびＲ4は同じであり，ｎは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；
ｂ）リポソームを形成し；そして
ｃ）（６）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルのスクシニルカルボキシル基に標的化因子のアミノ基を反応させ、カルボン酸アミド結合で連結させて，（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンとは別の第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化因子を形成する，
の各工程を含む方法。
ここで第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式３：
【化９】
0005438317.tif 000041
［式中，Ｒ5およびＲ6は，それぞれＲ3およびＲ4はと同じでかつＲ5およびＲ6は同じであり，およびｐはｎと同じである］
で表される。
【請求項９３】
さらに，工程（ｃ）のリポソームを精製する工程（ｄ）を含む，請求項９２記載の方法。
【請求項９４】
工程（ｂ）は超音波処理または撹拌を含む，請求項９２記載の方法。
【請求項９５】
工程（ｂ）は押し出しを含む，請求項９２記載の方法。
【請求項９６】
標的化因子はトランスフェリンである，請求項９２記載の方法。
【請求項９７】
治療用リポソームを製造する方法であって，
ａ）請求項６６記載の空リポソーム中に薬剤を封入する，
の工程を含む方法。
【請求項９８】
診断用リポソームを製造する方法であって，
ａ）請求項６６記載の空リポソーム中に標識された化合物を封入する，
の工程を含む方法。
【請求項９９】
治療用リポソームを製造する方法であって，
ａ）請求項７０記載の空リポソーム中に薬剤を封入する，
の工程を含む方法。
【請求項１００】
診断用リポソームを製造する方法であって，
ａ）請求項７０記載の空リポソーム中に標識された化合物を封入する，
の工程を含む方法。
【請求項１０１】
請求項６６記載の空リポソーム，および１またはそれ以上の薬学的に許容しうる担体，賦形剤，希釈剤，安定化剤，または保存剤を含む医薬処方物。
【請求項１０２】
（１）１またはそれ以上のホスファチジルコリン，（２）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（６）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル，および（５）コレステロールまたはコレステロール誘導体の混合物を含む脂質混合物であって，
（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化１０】
0005438317.tif 000042
で表され，
（６）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは式２：
【化１１】
0005438317.tif 000043
［式中，Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3およびＲ4は，それぞれ１２−２２個の炭素原子を有する飽和または不飽和脂肪族カルボン酸から誘導されるアシル基であり，Ｒ1およびＲ2は同じであり，かつＲ3およびＲ4は同じであり，およびｍおよびｎは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；および，
混合物は誘導化されていないホスファチジルエタノールアミン，卵ホスファチジルコリン，または親水性ポリマーを含まない，
ことを特徴とする脂質混合物。
【請求項１０３】
１またはそれ以上のホスファチジルコリンは，ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ），ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ），パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）である，請求項１０２記載の脂質混合物。
【請求項１０４】
混合物は，ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびコレステロール，ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）およびコレステロール，パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）およびコレステロール，またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）およびコレステロールを含む，請求項１０３記載の脂質混合物。
【請求項１０５】
混合物はジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびコレステロールを含む，請求項１０４記載の脂質混合物。
【請求項１０６】
ｍおよびｎは，それぞれ独立して，２−４の整数である，請求項１０２記載の脂質混合物。
【請求項１０７】
ｍおよびｎは等しく，２−４の整数である，請求項１０２記載の脂質混合物。
【請求項１０８】
ｍおよびｎは等しく，３である，請求項１０７記載の脂質混合物。
【請求項１０９】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3およびＲ4は，それぞれ独立して，オレオイルまたはステアロイルである，請求項１０２記載の脂質混合物。
【請求項１１０】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3およびＲ4は同じである，請求項１０２記載の脂質混合物。
【請求項１１１】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3およびＲ4はオレオイルまたはステアロイルである，請求項１１０記載の脂質混合物。
【請求項１１２】
ｍおよびｎは３であり，１またはそれ以上のホスファチジルコリンはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）またはジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）であり，コレステロールまたはコレステロール誘導体はコレステロールである，請求項１１１記載の脂質混合物。
【請求項１１３】
（１）１またはそれ以上のホスファチジルコリン，（２）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（３）標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，および（５）コレステロールまたはコレステロール誘導体の混合物を含む脂質混合物であって，
（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化１２】
0005438317.tif 000044
で表され，
（３）の標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは、標的化因子と（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンとは別の第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのカルボキシル基との共有結合反応により生成した第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化因子を含み；および
第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式３：
【化１３】
0005438317.tif 000045
［式中，Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6は，それぞれ１２−２２個の炭素原子を有する飽和または不飽和脂肪族カルボン酸から誘導されるアシル基であり，Ｒ1およびＲ2は同じであり，かつＲ5およびＲ6は同じであり，およびｍおよびｐは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；
標的化因子は１−５０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（脂質混合物中に含まれる総脂質）であり；および，
混合物は誘導化されていないホスファチジルエタノールアミン，卵ホスファチジルコリン，または親水性ポリマーを含まず，および標的化因子は無傷の抗体ではない，
ことを特徴とする脂質混合物。
【請求項１１４】
脂質混合物は，１０−５０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（脂質混合物中に含まれる総脂質）を含む，請求項１１３記載の脂質混合物。
【請求項１１５】
脂質混合物は，１０−２５μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（脂質混合物中に含まれる総脂質）を含む，請求項１１３記載の脂質混合物。
【請求項１１６】
１またはそれ以上のホスファチジルコリンは，ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ），ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ），パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）である，請求項１１３記載の脂質混合物。
【請求項１１７】
混合物は，ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびコレステロール，ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）およびコレステロール，パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）およびコレステロール，またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）およびコレステロールを含む，請求項１１６記載の脂質混合物。
【請求項１１８】
混合物はジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびコレステロールを含む，請求項１１７記載の脂質混合物。
【請求項１１９】
ｍおよびｐは，それぞれ独立して，２−４の整数である，請求項１１３記載の脂質混合物。
【請求項１２０】
ｍおよびｐは等しく，２−４の整数である，請求項１１３記載の脂質混合物。
【請求項１２１】
ｍおよびｐは等しく，３である，請求項１２０記載の脂質混合物。
【請求項１２２】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6は，オレオイルである，請求項１１３記載の脂質混合物。
【請求項１２３】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6は同じである，請求項１１３記載の脂質混合物。
【請求項１２４】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6はオレオイルまたはステアロイルである，請求項１２３記載の脂質混合物。
【請求項１２５】
標的化因子は，トランスフェリン，葉酸，ヒアルロン酸，糖鎖，およびモノクローナル抗体のフラグメントからなる群より選択される，請求項１１３記載の脂質混合物。
【請求項１２６】
標的化因子は，トランスフェリン，葉酸，ヒアルロン酸および糖鎖からなる群より選択される，請求項１２５記載の脂質混合物。
【請求項１２７】
標的化因子はトランスフェリンである，請求項１２６記載の脂質混合物。
【請求項１２８】
トランスフェリンはホロ形であってアポ形ではない，請求項１２７記載の脂質混合物。
【請求項１２９】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6はオレオイルまたはステアロイルであり，ｍおよびｐは３であり，１またはそれ以上のホスファチジルコリンはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）またはジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）であり，コレステロールまたはコレステロール誘導体はコレステロールであり，および標的化因子はトランスフェリンである，請求項１１３記載の脂質混合物。
【請求項１３０】
請求項１０２記載の脂質混合物を製造する方法であって，１またはそれ以上のホスファチジルコリン，コレステロールまたはコレステロール誘導体，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルを混合する，の工程を含む方法。
【請求項１３１】
請求項１１３記載の脂質混合物を製造する方法であって，１またはそれ以上のホスファチジルコリン，コレステロールまたはコレステロール誘導体，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンを混合する，の工程を含む方法。
【請求項１３２】
（１）１またはそれ以上のホスファチジルコリン，（２）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（６）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル，および（５）コレステロールまたはコレステロール誘導体を含むリポソームを含むリポソーム含有組成物であって，
ここで，（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化１４】
0005438317.tif 000046
で表され，
（６）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは式２：
【化１５】
0005438317.tif 000047
［式中，Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3およびＲ4は，それぞれ１２−２２個の炭素原子を有する飽和または不飽和脂肪族カルボン酸から誘導されるアシル基であり，Ｒ1およびＲ2は同じであり，かつＲ3およびＲ4は同じであり，およびｍおよびｎは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；および，
組成物は誘導化されていないホスファチジルエタノールアミン，卵ホスファチジルコリン，または親水性ポリマーを含まない，
ことを特徴とするリポソーム含有組成物。
【請求項１３３】
１またはそれ以上のホスファチジルコリンは，ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ），ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ），パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）である，請求項１３２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１３４】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3およびＲ4はオレオイルまたはステアロイルであり，およびｍおよびｎは３である，請求項１３３記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１３５】
リポソームは，ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびコレステロール，ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）およびコレステロール，パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）およびコレステロール，またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）およびコレステロールを含む，請求項１３３記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１３６】
リポソームはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびコレステロールを含む，請求項１３５記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１３７】
ｍおよびｎは，それぞれ独立して，２−４の整数である，請求項１３２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１３８】
ｍおよびｎは等しく，２−４の整数である，請求項１３２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１３９】
ｍおよびｎは等しく，３である，請求項１３８記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１４０】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3およびＲ4は，独立して，オレオイルまたはステアロイルである，請求項１３２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１４１】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3およびＲ4は同じである，請求項１３２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１４２】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3およびＲ4はオレオイルまたはステアロイルである，請求項１４１記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１４３】
（１）１またはそれ以上のホスファチジルコリン，（２）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（３）標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，および（５）コレステロールまたはコレステロール誘導体を含むリポソームを含むリポソーム含有組成物であって，
ここで，（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化１６】
0005438317.tif 000048
で表され，
（３）の標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは，標的化因子と（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンとは別の第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのカルボキシル基との共有結合反応により生成した第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化因子
を含み；および
第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式３：
【化１７】
0005438317.tif 000049
［式中，Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6は，それぞれ１２−２２個の炭素原子を有する飽和または不飽和脂肪族カルボン酸から誘導されるアシル基であり，Ｒ1およびＲ2は同じであり，かつＲ5およびＲ6は同じであり，およびｍおよびｐは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；
標的化因子は１−５０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム含有組成物中に含まれる総脂質）であり；および，
組成物は誘導化されていないホスファチジルエタノールアミン，卵ホスファチジルコリン，または親水性ポリマーを含まず，および標的化因子は無傷の抗体ではない，
ことを特徴とするリポソーム含有組成物。
【請求項１４４】
リポソーム含有組成物は，１０−５０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム含有組成物中に含まれる総脂質）を含む，請求項１４３記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１４５】
リポソーム含有組成物は，１０−２５μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム含有組成物中に含まれる総脂質）を含む，請求項１４３記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１４６】
１またはそれ以上のホスファチジルコリンはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ），ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ），パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）である，請求項１４３記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１４７】
リポソームは，ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびコレステロール，ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）およびコレステロール，パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）およびコレステロール，またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）およびコレステロールを含む，請求項１４６記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１４８】
リポソームはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびコレステロールを含む，請求項１４７記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１４９】
ｍおよびｐは，それぞれ独立して，２−４の整数である，請求項１４３記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１５０】
ｍおよびｐは等しく，２−４の整数である，請求項１４３記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１５１】
ｍおよびｐは等しく，３である，請求項１５０記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１５２】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6は，オレオイルである，請求項１４３記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１５３】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6は同じである，請求項１４３記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１５４】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3およびＲ6はオレオイルまたはステアロイルである，請求項１４３記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１５５】
標的化因子は，トランスフェリン，葉酸，ヒアルロン酸，糖鎖，およびモノクローナル抗体のフラグメントからなる群より選択される，請求項１４３記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１５６】
標的化因子は，トランスフェリン，葉酸，ヒアルロン酸および糖鎖からなる群より選択される，請求項１５５記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１５７】
標的化因子はトランスフェリンである，請求項１５５記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１５８】
トランスフェリンはホロ形であってアポ形ではない，請求項１５７記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１５９】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6はオレオイルまたはステアロイルであり，コレステロールまたはコレステロール誘導体はコレステロールであり，および標的化因子はトランスフェリンである，請求項１４６記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１６０】
１またはそれ以上のホスファチジルコリンはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）またはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）である，請求項１５９記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１６１】
Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6はオレオイルまたはステアロイルであり，１またはそれ以上のホスファチジルコリンはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）またはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）であり，コレステロールまたはコレステロール誘導体はコレステロールであり，および標的化因子はトランスフェリンである，請求項１４３記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１６２】
さらに薬剤を含む，請求項１３２，１３３，１４３または１４６のいずれかに記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１６３】
薬剤は抗癌剤である，請求項１６２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１６４】
薬剤は細胞毒性薬剤である，請求項１６２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１６５】
薬剤はトポイソメラーゼＩ阻害剤である，請求項１６２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１６６】
トポイソメラーゼＩ阻害剤はトポテカンまたはイリノテカンである，請求項１６５記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１６７】
薬剤はビンカアルカロイドである，請求項１６２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１６８】
ビンカアルカロイドは，ビンクリスチン，ビンブラスチン，ビンレウロシン，ビンロジシン，ビノレルビンまたはビンデシンである，請求項１６７記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１６９】
薬剤は核酸である，請求項１６２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１７０】
核酸はアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはリボザイムである，請求項１６９記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１７１】
薬剤は白金化合物である，請求項１６２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１７２】
白金化合物は，ビプラチン，シスプラチン，カルボプラチン，オルマプラチン，オキザリプラチン，ゼニプラチン，エンロプラチン，ロバプラチンまたはスピロプラチンである，請求項１７１記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１７３】
白金化合物はオキザリプラチンである，請求項１７２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１７４】
少なくとも１つまたはそれ以上のホスファチジルコリンはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）またはジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）である，請求項１７３記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１７５】
リポソーム中のオキザリプラチンの濃度は０．１ｍｇ／ｍｌ−２５ｍｇ／ｍｌである，請求項１７３記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１７６】
薬剤はアルキル化剤である，請求項１６２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１７７】
薬剤はタキサンである，請求項１６２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１７８】
薬剤は代謝性アンタゴニストである，請求項１６２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１７９】
薬剤は抗腫瘍抗生物質である，請求項１６２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１８０】
薬剤はホルモン療法薬剤である，請求項１６２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１８１】
薬剤は分子標的薬である，請求項１６２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１８２】
オキザリプラチンは，トレハロース，マルトース，スクロース，ラクトース，マンノース，マンニトール，グリセロールおよびデキストロースからなる群より選択される糖の水性溶液に溶解されている，請求項１７３記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１８３】
標的化因子が存在する場合には，これはトランスフェリンである，請求項１６２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１８４】
１またはそれ以上のホスファチジルコリンはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）またはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）であり，Ｒ1，Ｒ2，および存在する場合にはＲ5およびＲ6は，オレオイルまたはステアロイルであり，ｍおよび，存在する場合にはｐは３であり，コレステロールまたはコレステロール誘導体はコレステロールであり，薬剤はオキザリプラチンであり，および標的化因子が存在する場合にはこれはトランスフェリンである，請求項１６２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１８５】
糖は３００ｍＭの濃度である，請求項１８２記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１８６】
さらに標識された化合物を含む，請求項１３２，１３３，１４３または１４６のいずれかに記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１８７】
標識された化合物は放射性同位体成分を含む，請求項１８６記載のリポソーム含有組成物。
【請求項１８８】
請求項１６２記載のリポソーム含有組成物を製造する方法であって，
ａ）（１）１またはそれ以上のホスファチジルコリン，（２）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（３）標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンまたは（６）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル，および（５）コレステロールまたはコレステロール誘導体を混合して脂質混合物を形成し；そして
ｂ）工程（ａ）で形成された脂質混合物に薬剤を加え；そして
ｃ）リポソーム含有組成物を形成する，
の各工程を含む方法。
【請求項１８９】
請求項１８６記載のリポソーム含有組成物を製造する方法であって，
ａ）（１）１またはそれ以上のホスファチジルコリン，（２）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（３）標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンまたは（６）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル，および（５）コレステロールまたはコレステロール誘導体を混合して脂質混合物を形成し；そして
ｂ）工程（ａ）で形成された脂質混合物に標識された化合物を加え，
ｃ）リポソーム含有組成物を形成する，
の各工程を含む方法。
【請求項１９０】
請求項１４３記載のリポソーム含有組成物を製造する方法であって，
ａ）（１）１またはそれ以上のホスファチジルコリン，（２）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（３）標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，および（５）コレステロールまたはコレステロール誘導体を混合して脂質混合物を形成し；そして
ｂ）工程（ａ）で形成された混合物に溶媒を加えてリポソーム含有組成物を形成する，
の各工程を含む方法。
【請求項１９１】
混合する工程（ａ）が有機溶媒の存在下で行われる，請求項１９０記載の方法。
【請求項１９２】
工程（ｂ）における溶媒が，水性溶液または水性溶液と水混和性溶媒との混合物である，請求項１９０記載の方法。
【請求項１９３】
工程（ｂ）は超音波処理または撹拌を含む，請求項１９０記載の方法。
【請求項１９４】
工程（ｂ）は押し出しを含む，請求項１９０記載の方法。
【請求項１９５】
工程（ａ）において，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルが存在する，請求項１８８記載の方法。
【請求項１９６】
工程（ａ）において，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンが存在する，請求項１８８記載の方法。
【請求項１９７】
コレステロールまたはコレステロール誘導体はコレステロールであり，薬剤が存在し，これは抗癌剤であり，標的化因子はトランスフェリンである，請求項１３記載の標的化リポソーム。
【請求項１９８】
コレステロールまたはコレステロール誘導体はコレステロールであり，標的化因子はトランスフェリンである，請求項７６記載の空リポソーム。
【請求項１９９】
さらに薬剤を含み，これは抗癌剤である，請求項１５９記載のリポソーム含有組成物。
【請求項２００】
（１）１またはそれ以上のホスファチジルコリン，（２）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（３）標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，（４）薬剤または標識された化合物，および（５）コレステロールまたはコレステロール誘導体である少なくとも１つの追加の脂質を含む標的化リポソームであって，
ここで，（３）の標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは，標的化因子と（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンとは別の第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンとのカルボキシル基との共有結合反応により生成した第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化因子を含み；および
（２）のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化１８】
0005438317.tif 000050
で表され，第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式３：
【化１９】
0005438317.tif 000051
［式中，Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6は，それぞれアシル基であり，ここで，アシル基は１８−２２個の炭素原子を有する飽和または不飽和脂肪族カルボン酸由来のアシル基であり，Ｒ1およびＲ2は同じであり，かつＲ5およびＲ6は同じであり，および
ｍおよびｐは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；および，
リポソームは誘導化されていないホスファチジルエタノールアミン，卵ホスファチジルコリン，または親水性ポリマーを含まず，かつ標的化因子は無傷の抗体ではない，
ことを特徴とする標的化リポソーム。
【請求項２０１】
標的化リポソームは１μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）から５０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）を含む，請求項２００記載の標的化リポソーム。
【請求項２０２】
薬剤はオキザリプラチンであり，Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6はオレオイルであり，ｍおよびｐは３であり，標的化因子はトランスフェリンであり，１またはそれ以上のホスファチジルコリンはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）であり，および標的化リポソームは１μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）から５０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）を含む，請求項２００記載の標的化リポソーム。
【請求項２０３】
標的化リポソームは１０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）から５０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）を含む，請求項２００記載の標的化リポソーム。
【請求項２０４】
薬剤はオキザリプラチンであり，Ｒ1，Ｒ2，Ｒ5およびＲ6はオレオイルであり，ｍおよびｐは３であり，標的化因子はトランスフェリンであり，１またはそれ以上のホスファチジルコリンはジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）であり，および標的化リポソームは１０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）から５０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）を含む，請求項２００記載の標的化リポソーム。
【請求項２０５】
空リポソームは１０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）から５０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）を含む，請求項６６記載の空リポソーム。
【請求項２０６】
標的化リポソームは１０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）から２５μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）を含む，請求項２００記載の標的化リポソーム。
【請求項２０７】
空リポソームは，１０μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）から２５μｇ標的化因子／ｍｇ脂質（リポソーム中に含まれる総脂質）を含む，請求項６６記載の空リポソーム。
【請求項２０８】
癌を治療するための医薬組成物であって，
請求項１−２３,２５,４７，１９７，２００，２０２，２０３，２０４および２０６のいずれかに記載の標的化リポソームを癌を治療するのに有効な量で含み，ここで，標的化リポソームは薬剤を含み，
および薬剤は抗癌剤であることを特徴とする医薬組成物。
【請求項２０９】
癌を診断するための組成物であって，
請求項１−２０,２３,２４，４６，４７，２００，２０１，２０３および２０６のいずれかに記載の標的化リポソームを検出に有効な量で含み，ここで，標的化リポソームは標識された化合物を含むことを特徴とする組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の参照
本出願は，日本特許出願２００５−６７４６９（２００５年３月１０日出願，この開示の全体を本明細書の一部としてここに引用する）に基づく優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
過去数十年の間に，癌等の多くの疾病の治療の有効性は劇的に改良されたが，多くの治療計画は，有害な副作用，例えば，脱毛症，悪心，嘔吐，疲労感等を有する薬剤の使用を必要とする。いくつかの治療計画はまた，生理学的条件下で不安定な薬剤，例えばバイオ医薬品（例えば，遺伝子および遺伝子産物）および／または所望の治療結果を達成する前に容易に分解されるかまたは投与に際して変化し，このことによりその有効性を失う他の薬剤の使用を必要とする。このような不安定性はまた，薬剤を保存し投与用に調製することをより困難で費用がかかるものとする。
【０００３】
１００種類近くの個別の薬剤を包含する多くの種類の抗癌剤，ならびに多くの薬剤組み合わせ療法，デリバリー方法および治療計画が存在する。抗癌剤は，いくつかの基準，例えば化合物の種類および治療する疾病の状態にしたがって分類することができる。ある種の薬剤は，癌細胞の急速な分裂を利用して，細胞サイクルの特定の期を標的として開発されており，これは別の分類法を与える。薬剤はまた，その副作用のタイプおよび重篤度またはデリバリー方法にしたがって分類することができる。しかし，非バイオ医薬品に基づく抗癌剤の最も一般的な分類は，化学化合物の種類によるものであり，これは，これらの化合物の作用のメカニズムを広く包含する。
【０００４】
参考にした参考文献によって，抗癌剤の分類にはわずかの相違がある。Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅには化合物の種類が以下のように記載されている：アルカロイド；アルキル化剤；抗腫瘍抗生物質；代謝拮抗剤；ホルモンおよびホルモン類似体；免疫調節剤；感光剤；および種々の他の薬剤。
【０００５】
また，アルカロイドの部類の化合物は，細胞サイクルの期特異的であり，有糸分裂を阻害するか，または有糸分裂に必要な酵素を阻害するよう働くため，有糸分裂阻害剤とも称される。これらは，一般に植物アルカロイドおよび他の天然産物に由来し，細胞サイクルのＭ期の間に作用する。この部類の化合物はしばしば，急性リンパ芽球性白血病，ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫；神経芽細胞腫および肺，乳および精巣の癌などの新生物の治療に用いられる。
【０００６】
アルキル化剤は化学療法剤の大きな部類を形成しており，それぞれが多数の個々の薬剤を示す以下のサブクラスを含む：アルキルスルホネート；アジリジン；エチレンイミンおよびメチルメラミン；ナイトロジェンマスタード；ニトロソウレア；および白金化合物等の他のもの。アルキル化剤は，細胞のＤＮＡを直接アルキル化し，したがってＤＮＡが複製できないようにすることにより新生物細胞を攻撃する。この部類の化合物は，一般に，慢性白血病，非ホジキンリンパ腫，ホジキンリンパ腫，多発性骨髄腫およびある種の肺，乳および卵巣癌等の種々の疾病の治療に用いられている。
【０００７】
ニトロソウレアはしばしばアルキル化剤として分類され，類似する作用メカニズムを有しているが，ＤＮＡを直接アルキル化するのではなく，ＤＮＡ修復酵素を阻害し，複製ができないようにする。これらの化合物は，血液脳関門を超えることができ，したがって脳腫瘍の治療に用いることができるという利点を有する。
【０００８】
抗腫瘍抗生物質は，抗微生物活性および細胞毒性を有し，また，酵素および有糸分裂を化学的に阻害することにより，または細胞膜を変化させることによりＤＮＡを妨害する。これらは細胞サイクル期特異的ではなく，種々の癌の治療に広く用いられている。
【０００９】
代謝拮抗物質の部類の抗癌剤は，ＤＮＡおよびＲＮＡの成長を阻害し，細胞サイクルのＳ期に特異的である。これらは，化合物のタイプによりさらに小分類することができ，これには，葉酸類似体，プリン類似体，およびピリミジン類似体が含まれる。これらはしばしば，慢性白血病，乳，卵巣，および胃腸腫瘍の治療に用いられている。
【００１０】
抗癌剤として用いられているホルモンまたはホルモン類似体には２つの部類，すなわち，コルチコステロイドホルモンおよび性ホルモンがある。ある種のコルチコステロイドホルモンは，癌細胞を殺すことと，腫瘍の成長を遅らせることの両方を行うことができ，リンパ腫，白血病等の治療に用いられている。性ホルモンは，主として，乳，前立腺および子宮内膜癌の成長を遅らせるよう機能する。多数のサブクラスのホルモンおよびホルモン類似体が存在し，これには，アンドロゲン，抗副腎剤，抗アンドロゲン，抗エストロゲン，アロマターゼ阻害剤，エストロゲン，黄体ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）類似体およびプロゲスチンが含まれる。
【００１１】
別のより小さい部類の抗癌剤は，免疫療法と分類される。これらは，免疫系を刺激してより有効に新生物（癌性）細胞を攻撃することを意図したものである。この療法はしばしば，他の療法と組み合わせて用いられている。
【００１２】
一般に"他の"抗癌剤にリストされ，種々の新生物の治療に用いることができる，カンポテクチンなどの多数の化合物が存在する。
【００１３】
抗癌剤の組み合わせも，多数の癌の治療に用いられている。例えば，Ｓａｎｏｆｉ  Ｓｙｎｔｈｏｌａｂｏは，結腸直腸癌の治療用に５−フルオロウラシルおよびロイコボリンと組み合わせて用いるためのＥＬＯＸＡＴＩＮ（（登録商標）（注射用オキザリプラチン）を販売している。この薬剤の組み合わせは，しばしば，結腸直腸癌の治療において外科手術と併用して用いられている。オキザリプラチンは，ＤＮＡ複製および転写の両方を阻害することにより作用すると考えられているアルキル化剤である。他の白金剤と異なり，オキザリプラチンは，耐性の発現を低下させることが示されている。オキザリプラチンは，米国特許４，１６９，８４６；５，３３８，８７４；５，２９８，６４２；５，９５９，１３３；５，４２０，３１９；５，７１６，９８８；５，２９０，９６１；およびＷｉｌｋｅｓＧＭ．"Ｎｅｗ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｏｐｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｎｃｅｒ：ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ"Ｃｌｉｎ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ  Ｎｕｒｓ．（２００２）６：１３１−１３７にさらに記述されている。
【００１４】
多数の抗癌剤が存在するが，しばしば，薬剤により生ずる副作用が重篤であることがこれらの化合物の利点を上回る。この比較はしばしば，治療指数で表される。治療指数は，癌細胞の破壊を達成するのに必要な投与量と，その物質が個体にとって許容しえない毒性を有する投与量とを比較したバランスを表す。ほとんどの抗癌剤の欠点は，治療指数（すなわち，個体に許容し得ない毒性を与えずに癌細胞を破壊する狭い投与量範囲）が比較的小さいことである。この特徴は，薬剤が有用な場合には頻度および投与量を制限し，しばしば，癌を完全に根絶することができる前に副作用が耐えられないものとなる。
【００１５】
ほとんどの癌化学療法剤について経験される重篤な副作用は，これらの薬剤の非特異的な性質の結果である。これらの薬剤は，健康な細胞と癌性細胞とを区別せず，そのかわりに両方を破壊する。ある種の細胞サイクル特異的薬剤は，これらの影響を少なくするために，細胞サイクルの細胞複製および分裂に関与する期を標的とする。しかし，これらの薬剤は，癌性の細胞と正常な細胞分裂を行う健康な細胞とを区別しない。このようなタイプの化学療法のリスクを最も受ける細胞は，頻繁に細胞分裂を行う細胞，例えば，血液細胞，毛包細胞，および生殖および消化管の細胞である。
【００１６】
抗癌剤の最も一般的な副作用は悪心および嘔吐である。多数の個体は骨髄抑制，すなわち赤血球，白血球および血小板を産生する骨髄の抑制に罹患する。また，これらのおよび他の副作用は，白血球が破壊されその産生がなくなることに付随する免疫抑制により悪化し，日和見感染のリスクが伴う。
【００１７】
広範な範囲の抗癌剤に共通する他の副作用としては，以下のものが挙げられる：脱毛（脱毛症）；食欲減少；体重減少；味覚変化；口内炎および食道炎（炎症および痛み）；便秘；下痢；倦怠感；心臓障害；神経系変化；肺障害；生殖組織障害；肝臓障害；腎臓および泌尿系障害。
【００１８】
ほとんどの抗癌剤には広範な範囲の副作用がともなうこと，および疾病のためにすでに衰弱し，おそらくは免疫機能が低下している個体においてこれが重篤であることから，研究者達は，治療の効力を維持しながら副作用のいくつかを軽減しうるメカニズムを研究してきた。この問題に対するいくつかのアプローチが行われている。これには，複数の抗癌剤を一緒に投与する組み合わせ化学療法；抗癌剤とともに追加の薬剤を処方して抗癌剤の副作用と戦うアジュバント療法；化学療法を放射線照射および／または外科手術と組み合わせる組み合わせモダリティー治療；および抗癌剤の投与のための代替デリバリーベヒクル，例えば抗癌剤をリポソームに封入することが含まれる。
【００１９】
リポソームは，リン脂質およびその誘導体を水中に分散させたときに形成される。水中に分散されると，リン脂質は"リポソーム"と称される閉じたベシクルを形成し，これは水性のコアを封入した脂質二重層により特徴づけられる。種々のリポソームが，医学，薬学および生化学において用いるために，封入された治療用薬剤，例えば，薬剤，酵素および遺伝子配列の担体として用いられてきた。
【００２０】
リポソーム組成物の例としては，米国特許４，９８３，３９７；６，４７６，０６８；５，８３４，０１２；５，７５６，０６９；６，３８７，３９７；５，５３４，２４１；４，７８９，６３３；４，９２５，６６１；６，１５３，５９６；６，０５７，２９９；５，６４８，４７８；６，７２３，３３８；６，６２７２１８；米国特許公開２００３／０２２４０３７；２００４／００２２８４２；２００１／００３３８６０；２００３／００７２７９４；２００３／００８２２２８；２００３／０２１２０３１；２００３／０２０３８６５；２００４／０１４２０２５；２００４／００７１７６８；国際出願ＷＯ００／７４６４６；ＷＯ９６／１３２５０；ＷＯ９８／３３４８１；Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｌｕｌｏｓ  Ｄ，Ａｌｌｅｎ  ＴＭ，Ｇｂｉｚｏｎ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．"Ｓｔｅｒｉｃａｌｌｙ  ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｅｆｆｉｃａｃｙ"Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９１）８８：１１４６０−１１４６４；Ａｌｌｅｎ  ＴＭ，Ｍａｒｔｉｎ  ＦＪ．"Ａｄｖａｎｔａｇｅｓ  ｏｆ  ｌｉｐｏｓｏｍａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅｓ"Ｓｅｍｉｎ  Ｏｎｃｏｌ（２００４）３１：５−１５（ｓｕｐｐｌ  １３）．Ｗｅｉｓｓｉｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．（１９９８）１５：１５５２−１５５６が挙げられる。
【００２１】
リポソームの開発の初期段階においては，天然に生ずる細胞膜のリン脂質，例えば，卵黄リン脂質および大豆リン脂質が用いられた。しかし，静脈内に投与する場合には，これらのリン脂質を利用したリポソームは，肝臓または脾臓の細網内皮系に取り込まれやすく，血液滞留時間が短いため，薬剤の効力が低下するという問題を引き起こす。その後，この問題点を解決する手段として，リポソーム膜を硬くするために，リポソーム膜の構成成分として，その脂質部分が飽和結合のみを含む合成リン脂質が用いられた。
【００２２】
リポソームの循環半減期を長くし，細網内皮系による取り込みを回避することを目的として，研究者達は，ポリエチレングリコールまたは他の親水性ポリマーを取り込ませることにより修飾したリポソーム（例えば，構成脂質の１またはそれ以上がＰＥＧの結合により修飾されているＰＥＧリポソーム）を開発した。ＰＥＧで修飾されたリポソームはしばしば"シールドされた"リポソームとも称される。Ｄｏｘｉｌ（商標）（ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射）はリポソーム中に封入されたドキソルビシンであり，付加されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は細網内皮系（ＲＥＳ）を回避し，薬剤循環時間を長くするために利用されている。Ｖａｉｌ  ＤＭ，Ａｍａｎｔｅａ  ＭＡ，Ｃｏｌｂｅｒｎ  ＧＴら，"Ｐｅｇｙｌａｔｅｄ  Ｌｉｐｏｓｏｍａｌ  Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ：Ｐｒｏｏｆ  ｏｆ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ  Ｕｓｉｎｇ  Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｄｅｌｓ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  Ｓｔｕｄｉｅｓ．"Ｓｅｍｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．（２００４）３１（Ｓｕｐｐｌ  １３）：１６−３５を参照。しかし，有害な影響は長期の血液滞留によっても引き起こされ（例えば，手足症候群，Ｄｏｘｉｌ（登録商標）の末梢系に及ぼす有害な影響等），問題として認識されるようになった。
【００２３】
リポソームの例としては，米国特許４，９８３，３９７；５，０１３，５５６；６，３１６，０２４；６，０５６，９７３；５，９４５，１２２；５，８９１，４６８；６，１２６，９６６；５，５９３，６２２，５，６７６，９７１；６，５８６，５５９；および５，８４６，４５８，米国特許公開２００３／０２２４０３７；２００４／００２２８４２；２００３／０１１３２６２；２００２／０１３６７０７；国際出願ＷＯ９９／３０６８６；ＷＯ０２／４１８７０，Ａｌｉｍｉｎａｎａ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｅｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．（２００４）３４（１）：７７−９６が挙げられる。リポソームはまた，米国特許６，２２８，３９１；６，１９７，３３３；６，０４６，２２５；５，２９２，５２４；および米国特許公開２００５０２７１５８８；２００４０２１３８３３；２００４００２９２１０；２００３０１７５２０５；２００３０１６２７４８；２００３０１３０１９０；２００３００５９４６１；および２００２００３４５３７にも記載されている。
【００２４】
ＰＥＧで修飾されたリポソームに加えて，研究者達は，種々の他の誘導化脂質を開発した。これらの誘導化脂質もまたリポソーム中に取り込ませることができる。例えば，国際公開ＷＯ９３／０１８２８；Ｐａｒｋ  ＹＳ，Ｍａｒｕｙａｍａ  Ｋ，Ｈｕａｎｇ  Ｌ．"Ｓｏｍｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  ｃｈａｒｇｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｐｒｏｌｏｎｇ  ｔｈｅ  ｌｉｐｏｓｏｍｅ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．"Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ（１９９２）１１０８：２５７−２６０；Ａｈｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ（１９９７）１３２９：３７０−３８２を参照。
【００２５】
さらに別の脂質組成物は，米国特許６，９３６，２７２；６，８９７，１９６；６，０７７，８３４；および米国特許公開２００５０１３６０６４；２００４０２３４５８８；２００３０２１５４９０；２００３０１６６６０１；および２００１００３８８５１に記載されている。
【００２６】
リポソームをＰＥＧおよび他の親水性ポリマーで修飾することに加えて，研究者達はまた特定の細胞タイプ用の標的化因子（標的化リガンドとも称される）を取り込ませることにより特定の細胞タイプを特異的に標的化することを目的としたリポソームを開発した。標的化因子／リガンドの例としては，アシアロ糖蛋白質，葉酸，トランスフェリン，抗体等が挙げられる。場合によっては，構成脂質の１またはそれ以上に標的化因子を結合させることにより修飾することができる。
【００２７】
標的化因子を含む脂質組成物の例としては，米国特許５，０４９，３９０；５，７８０，０５２；５，７８６，２１４；６，３１６，０２４；６，０５６，９７３；６，２４５，４２７；６，５２４，６１３；６，７４９，８６３；６，１７７，０５９；６，５３０，９４４；米国特許公開２００４／００２２８４２；２００３／０２２４０３７；２００３／１４３７４２；２００３／０２２８２８５；２００２／０１９８１６４；２００３／０２２０２８４；２００３／０１６５９３４；２００３／００２７７７９；国際公開ＷＯ９５／３３８４１；ＷＯ９５／１９４３４；ＷＯ２００１０３７８０７；ＷＯ９６／３３６９８；ＷＯ２００１／４９２６６；ＷＯ９９４０７８９；ＷＯ９９２５３２０；ＷＯ９１０４０１４；ＷＯ９２／０７９５９；ＥＰ１３６９１３２；ＪＰ２００１００２５９２；Ｉｉｎｕｍａ  Ｈ，Ｍａｒｕｙａｍａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ，"Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｃｉｓｐｌａｔｉｎ−ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｆｅｒｉｎ−ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ  ｌｉｐｏｓｏｍｅ  ｏｎ  ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ"Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ（２００２）９９１３０−１３７；Ｉｓｈｉｄａ  Ｏ，Ｍａｒｕｙａｍａ  Ｋ，Ｔａｎａｈａｓｈｉ  Ｈ，Ｉｗａｔｓｕｒｕ  Ｍ，Ｓａｓａｋｉ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ，"Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  ｂｅａｒｉｎｇ  ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｔｒａｎｓｆｅｒｉｎ  ｗｉｔｈ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｐｒｏｐｅｒｔｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．"Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００１）１８：１０４２−１０４８；Ｈｏｌｍｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．（１９８９）１６５（３）：１２７２−１２７８；Ｎａｍ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（１９９８）３１（１）：９５−１００；Ｎａｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔ．（１９９９）６（６）：４２７−４３８が挙げられる。
【００２８】
特に，Ｉｉｎｕｍａらは，リポソームの表面にトランスフェリン（Ｔｆ）を結合させたＴｆ−ＰＥＧ−リポソームを開発した。Ｉｉｎｕｍａらは，ＰＥＧ−リポソームと比較してＴｆ−ＰＥＧ−リポソームについては，腫瘍細胞の表面により多い数のリポソームが結合しており，腫瘍細胞によりより多くのリポソームが取り込まれたことを示した（Ｉｎｕｍａ  ｅｔ  ａｌ，上掲；Ｉｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ，上掲）。
【００２９】
しかし，リポソーム組成物の使用などの，薬剤および標識された化合物のデリバリーの分野における最近の進歩にもかかわらず，治療または診断効果を達成する薬剤および標識された化合物を特定の細胞および／または組織にデリバリーするための改良されたリポソーム組成物がなお求められている。特に，癌の分野においては，正常細胞に有害な影響を与えることなく治療上の有益性を確実にするために改良された特異性および低下した毒性を有し，治療している個体にとって有害な副作用を示さない薬剤処方物が求められている。同様に，状態，特に生命を脅かす状態を初期段階で（例えば，高い特異度および／または高い感度で）検出し，さらにその状態の重篤度／程度（例えば，治療した場合または治療しない場合の進行および／または退縮）を正確にモニターすることができる標識された化合物も，療法の質および成功率を顕著に改良するであろう。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００３０】
発明の概要
本発明は，任意に薬剤または標識された化合物を取り込んでいてもよく，薬剤または標識された化合物を取り込んだ処方物の製造に用いられる，新規脂質含有組成物（リポソーム（例えば，標的化リポソーム，空リポソーム），脂質混合物およびリポソーム含有組成物を含む）に関し，ここで，脂質含有組成物は，薬剤または標識された化合物からの副作用を軽減する利点を与え，および／または薬剤または標識された化合物の分解および／または失効を防止する。本発明はまた，本明細書に記載される脂質含有組成物を製造する方法および使用する方法を含む。本発明のある観点においては，脂質含有組成物は，癌（例えば，乳癌，胃癌，結腸直腸癌，結腸癌，膵臓の癌，非小細胞肺癌，小細胞肺癌，脳癌，肝臓癌，腎臓癌，前立腺癌，膀胱癌，卵巣癌，または血液悪性腫瘍（例えば，白血病，リンパ腫，多発性骨髄腫等））の治療または診断に用いることができる。
【００３１】
ある態様においては，１またはそれ以上のリン脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，封入された薬剤または標識された化合物，および任意に少なくとも１つの追加の脂質を含む標的化リポソームが提供され，ここで，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは，第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化リガンドを含み，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化１６】
0005438317.tif 000002
で表され，第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式３：
【化１７】
0005438317.tif 000003
［式中，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は，それぞれ独立してアシル基であり，ｍおよびｐは，独立して，１−１０の整数である］
で表され，リポソームは非誘導化ホスファチジルエタノールアミンまたはポリエチレングリコールを含まず，標的化リガンドは無傷の抗体ではない。
【００３２】
別の態様においては，１またはそれ以上のリン脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，および任意に少なくとも１つの追加の脂質を含む空リポソームが提供され，ここで，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは，第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化リガンドを含み；Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化１８】
0005438317.tif 000004
で表され；
第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは，存在する場合には，式３：
【化１９】
0005438317.tif 000005
［式中，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は，それぞれ独立してアシル基であり，ｍおよびｐは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；リポソームは誘導化されていないホスファチジルエタノールアミン，ポリエチレングリコール，薬剤または標識された化合物を含まず，標的化リガンドは無傷の抗体ではない。
【００３３】
標的化リポソームおよび空リポソームのある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は，オレオイルまたはステアロイルであり，ｍおよびｐは３である。ある態様においては，標的化リガンドはトランスフェリンである。特定の態様においては，１またはそれ以上のリン脂質は，ＤＭＰＣまたはＤＳＰＣであり，少なくとも１つの追加の脂質が存在し，これはコレステロールである。標的化リポソームおよび空リポソームのある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６はオレオイルであり，ｍおよびｐは３であり，１またはそれ以上のリン脂質はＤＭＰＣであり，追加の脂質はコレステロールである。
【００３４】
標的化リポソームおよび空リポソームのある態様においては，ｍおよびｐは，それぞれ独立して，２−４の整数である。ある態様においては，ｍおよびｐは等しく，２−４の整数である。特定の態様においては，ｍおよびｐは等しく，３である。ある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は，それぞれ独立して，オレオイル，ステアロイル，パルミトイルまたはミリストイルである。ある態様においては，Ｒ１およびＲ２は同じであり，Ｒ５およびＲ６は同じである。別の態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は同じである。特定の態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は，オレオイルまたはステアロイルである。ある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６はオレオイルである。
【００３５】
さらに別の態様においては，１またはそれ以上のリン脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル，および任意に少なくとも１つの追加の脂質の混合物を含む脂質混合物が提供され，ここで，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化２０】
0005438317.tif 000006
で表され，
Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは式２：
【化２１】
0005438317.tif 000007
［式中，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は，それぞれ独立してアシル基であり，ｍおよびｎは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；
混合物は非誘導化ホスファチジルエタノールアミンまたはポリエチレングリコールを含まない。
【００３６】
脂質混合物のある態様においては，ｍおよびｎは，それぞれ独立して，２−４の整数である。ある態様においては，ｍおよびｎは等しく，２−４の整数である。特定の態様においては，ｍおよびｎは等しく，３である。
【００３７】
脂質混合物のある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は，それぞれ独立して，オレオイル，ステアロイル，パルミトイルまたはミリストイルである。ある態様においては，Ｒ１およびＲ２は同じであり，Ｒ３およびＲ４は同じである。特定の態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は同じである。ある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４はオレオイルまたはステアロイルである。ある態様においては，ｍおよびｎは３であり，１またはそれ以上のリン脂質はＤＭＰＣまたはＤＳＰＣであり，少なくとも１つの追加の脂質が存在し，これはコレステロールである。脂質混合物のある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４はオレオイルであり，ｍおよびｎは３であり，１またはそれ以上のリン脂質はＤＭＰＣであり，追加の脂質はコレステロールである。
【００３８】
さらに別の態様においては，１またはそれ以上のリン脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，および任意に少なくとも１つの追加の脂質の混合物を含む脂質混合物が提供され，ここで，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化２２】
0005438317.tif 000008
で表され，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは，第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化リガンドを含み；第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式３：
【化２３】
0005438317.tif 000009
［式中，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は，それぞれ独立してアシル基であり，ｍおよびｐは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；混合物は非誘導化ホスファチジルエタノールアミンまたはポリエチレングリコールを含まず，標的化リガンドは無傷の抗体ではない。
【００３９】
標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンが存在する脂質混合物の特定の態様においては，ｍおよびｐは，それぞれ独立して，２−４の整数である。ある態様においては，ｍおよびｐは等しく，２−４の整数である。ある態様においては，ｍおよびｐは等しく，３である。
【００４０】
標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンが存在する脂質混合物の特定の態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は，それぞれ独立して，オレオイル，ステアロイル，パルミトイルまたはミリストイルである。ある態様においては，Ｒ１およびＲ２は同じであり，Ｒ５およびＲ６は同じである。さらに別の態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は同じである。ある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６はオレオイルまたはステアロイルである。ある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６はオレオイルまたはステアロイルであり，ｍおよびｐは３であり，１またはそれ以上のリン脂質はＤＭＰＣまたはＤＳＰＣであり，少なくとも１つの追加の脂質はコレステロールであり，標的化リガンドはトランスフェリンである。脂質混合物のある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６はオレオイルであり，ｍおよびｐは３であり，１またはそれ以上のリン脂質はＤＭＰＣであり，追加の脂質はコレステロールであり，標的化リガンドはトランスフェリンである。
【００４１】
ある態様においては，１またはそれ以上のリン脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル，および，任意に少なくとも１つの追加の脂質を含むリポソームを含むリポソーム含有組成物が提供され，ここで，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化２４】
0005438317.tif 000010
で表され，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは式２：
【化２５】
0005438317.tif 000011
［式中，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は，それぞれ独立してアシル基であり，ｍおよびｎは，独立して，１−１０の整数である］
で表され，そして，組成物は非誘導化ホスファチジルエタノールアミンまたはポリエチレングリコールを含まない。
【００４２】
リポソーム含有組成物のある態様においては，ｍおよびｎは，それぞれ独立して，２−４の整数である。ある態様においては，ｍおよびｎは等しく，２−４の整数である。特定の態様においては，ｍおよびｎは等しく，３である。
【００４３】
リポソーム含有組成物のある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は，それぞれ独立して，オレオイル，ステアロイル，パルミトイルまたはミリストイルである。特定の態様においては，Ｒ１およびＲ２は同じであり，Ｒ３およびＲ４は同じである。ある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は同じである。ある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４はオレオイルまたはステアロイルである。ある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４はオレオイルまたはステアロイルであり，ｍおよびｎは３であり，１またはそれ以上のリン脂質は，ＤＭＰＣ，ＤＳＰＣ，ＰＯＰＣまたはＤＰＰＣである。ある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４はオレオイルであり，ｍおよびｎは３であり，１またはそれ以上のリン脂質はＤＭＰＣであり，追加の脂質はコレステロールである。
【００４４】
リポソーム含有組成物のさらに別の態様においては，１またはそれ以上のリン脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，および任意に少なくとも１つの追加の脂質を含むリポソームを含むリポソーム含有組成物が提供され，ここで，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化２６】
0005438317.tif 000012
で表され，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは，第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化リガンドを含み；第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式３：
【化２７】
0005438317.tif 000013
［式中，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は，それぞれ独立してアシル基であり，ｍおよびｐは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；組成物は非誘導化ホスファチジルエタノールアミンまたはポリエチレングリコールを含まず，標的化リガンドは無傷の抗体ではない。
【００４５】
ターゲティング因子で修飾したＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンが存在するある種のリポソーム含有組成物においては，ｍおよびｐは，それぞれ独立して，２−４の整数である。特定の態様においては，ｍおよびｐは等しく，２−４の整数である。ある態様においては，ｍおよびｐは等しく，３である。
【００４６】
ターゲティング因子で修飾したＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンが存在するある種のリポソーム含有組成物においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は，それぞれ独立して，オレオイル，ステアロイル，パルミトイルまたはミリストイルである。特定の態様においては，Ｒ１およびＲ２は同じであり，Ｒ５およびＲ６は同じである。ある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は同じである。ある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６はオレオイルまたはステアロイルである。特定の態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６はオレオイルまたはステアロイルであり，１またはそれ以上のリン脂質はＤＭＰＣまたはＤＳＰＣであり，少なくとも１つの追加の脂質はコレステロールであり，標的化リガンドはトランスフェリンである。ある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６はオレオイルであり，ｍおよびｐは３であり，１またはそれ以上のリン脂質はＤＭＰＣであり，追加の脂質はコレステロールであり，標的化リガンドはトランスフェリンである。
【００４７】
リポソーム含有組成物のさらに別の態様においては，薬剤が含まれる。ある態様においては，１またはそれ以上のリン脂質はＤＭＰＣまたはＤＳＰＣであり，Ｒ１，Ｒ２，および存在する場合にはＲ５およびＲ６は，オレオイルまたはステアロイルであり，ｍおよび存在する場合にはｐは３であり，少なくとも１つの追加の脂質は，存在する場合にはコレステロールであり，薬剤はオキザリプラチンであり，標的化リガンドは，存在する場合にはトランスフェリンである。ある態様においては，組成物はさらに，糖を約１−約２０％パーセント糖（ｖ／ｖ）の濃度で含む。ある態様においては，１またはそれ以上のリン脂質はＤＭＰＣまたはＤＳＰＣであり，Ｒ１，Ｒ２，および存在する場合にはＲ５およびＲ６はオレオイルであり，ｍおよび存在する場合にはｐは３であり，少なくとも１つの追加の脂質が存在する場合には，これはコレステロールであり，薬剤はオキザリプラチンであり，標的化リガンドが存在する場合には，これはトランスフェリンである。
【００４８】
リポソーム含有組成物のさらに別の態様においては，標識された化合物が含まれる。ある態様においては，標識された化合物は放射性同位体成分を含む。
【００４９】
標的化リポソーム，空リポソーム，脂質混合物およびリポソーム含有組成物のある態様においては，少なくとも１つの追加の脂質が存在する。特定の態様においては，少なくとも１つの追加の脂質はコレステロールまたはコレステロール誘導体である。
【００５０】
標的化リポソーム，空リポソーム，脂質混合物およびリポソーム含有組成物の特定の態様においては，１またはそれ以上のリン脂質は，ホスファチジルコリン，ホスファチジン酸，ホスファチジルセリンまたはホスファチジルグリセロールである。特定の態様においては，１またはそれ以上のリン脂質は中性リン脂質である。ある態様においては，１またはそれ以上のリン脂質はホスファチジルコリンである。特定の態様においては，ホスファチジルコリンは，飽和脂肪酸の成分を含む。ある態様においては，１またはそれ以上のリン脂質は，ＤＭＰＣ，ＤＳＰＣ，ＰＯＰＣまたはＤＰＰＣである。これらの態様の特定のものにおいては，少なくとも１つの追加の脂質が存在する。これらのあるものにおいては，少なくとも１つの追加の脂質はコレステロールまたはコレステロール誘導体である。特定の態様においては，ＤＭＰＣおよびコレステロール，ＤＳＰＣおよびコレステロール，ＰＯＰＣおよびコレステロール，またはＤＰＰＣおよびコレステロールが取り込まれている。ある態様においては，ＤＭＰＣおよびコレステロールが取り込まれている。
【００５１】
標的化リポソーム，空リポソーム，脂質混合物およびリポソーム含有組成物の特定の態様においては，標的化リガンドが存在する場合には，これは標的細胞に向けられている。ある態様においては，標的化リガンドは標的細胞の細胞表面レセプターに向けられている。特定の態様においては，標的化リガンドは，トランスフェリン，葉酸，ヒアルロン酸，糖鎖またはモノクローナル抗体のフラグメントである。ある態様においては，標的化リガンドは，トランスフェリン，葉酸，ヒアルロン酸または糖鎖である。別の態様においては，標的化リガンドは，トランスフェリン，葉酸，ヒアルロン酸または糖鎖である。ある態様においては，標的化リガンドはトランスフェリンである。特定の態様においては，トランスフェリンはホロ形であって，アポ形ではない。ある態様においては，トランスフェリンはホロ形である。
【００５２】
標的化リポソームおよび空リポソームのある態様においては，リポソームの平均直径は，約５０ｎｍ−約２５０ｎｍである。別の態様においては，リポソームの平均直径は約９０ｎｍ−約２００ｎｍである。
【００５３】
標的化リポソームおよび空リポソームの特定の態様においては，リポソームのゼータ電位は負である。ある態様においては，ゼータ電位は約−７５ｍＶから約−９０ｍＶである。別の態様においては，ゼータ電位は約−８０ｍＶから約−８５ｍＶである。
【００５４】
リポソーム含有組成物，標的化リポソームおよび空リポソームのある態様においては，処方物はさらに溶液を含む。
【００５５】
標的化リポソームおよびリポソーム含有組成物の特定の態様においては，薬剤が存在する。
【００５６】
標的化リポソームおよびリポソーム含有組成物の特定の態様においては，薬剤はオキザリプラチンである。薬剤がオキザリプラチンであるある態様においては，標的化リガンドはトランスフェリンである。ある態様においては，少なくとも１つの追加の脂質が存在し，これはコレステロールである。
【００５７】
ある態様においては，薬剤は抗癌剤である。特定の態様においては，薬剤は細胞毒性薬剤である。ある態様においては，薬剤はトポイソメラーゼＩ阻害剤である。特定の態様においては，トポイソメラーゼＩ阻害剤はトポテカンまたはイリノテカンである。別の態様においては，薬剤はビンカアルカロイドである。特定の態様においては，ビンカアルカロイドはビンクリスチン，ビンブラスチン，ビンレウロシン，ビンロジシン，ビノレルビンまたはビンデシンである。ある態様においては，薬剤は核酸である。ある態様においては，核酸はアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはリボザイムである。ある態様においては，薬剤はアルキル化剤である。特定の態様においては，薬剤はタキサンである。別の態様においては，薬剤は代謝性アンタゴニストである。ある態様においては，薬剤は抗腫瘍抗生物質である。ある態様においては，薬剤はホルモン療法薬剤である。ある態様においては，薬剤は分子標的薬である。
【００５８】
標的化リポソームおよびリポソーム含有組成物のある態様においては，薬剤は白金化合物である。特定の態様においては，白金化合物は，ビプラチン，シスプラチン，カルボプラチン，オルマプラチン，オキザリプラチン，ゼニプラチン，エンロプラチン，ロバプラチンまたはスピロプラチンである。ある態様においては，白金化合物はオキザリプラチンである。
【００５９】
薬剤がオキザリプラチンであるある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６はオレオイルまたはステアロイルであり，ｍおよびｐは３であり，標的化リガンドはトランスフェリンであり，１またはそれ以上のリン脂質はＤＭＰＣまたはＤＳＰＣであり，少なくとも１つの追加の脂質が存在し，これはコレステロールである。薬剤がオキザリプラチンであるある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６はオレオイルであり，ｍおよびｐは３であり，標的化リガンドはトランスフェリンであり，１またはそれ以上のリン脂質はＤＭＰＣであり，少なくとも１つの追加の脂質が存在し，これはコレステロールである。特定の態様においては，標的化リポソームおよびリポソーム含有組成物は他の脂質成分を含まない。
【００６０】
薬剤がオキザリプラチンであるある態様においては，オキザリプラチンは，トレハロース，マルトース，スクロース，マンノース，ラクトース，マンニトール，グリセロールおよびデキストロースからなる群より選択される糖の水性溶液中に溶解されている。ある態様においては，糖は，約１−約２０％パーセント糖（ｖ／ｖ）の濃度である。特定の態様においては，オキザリプラチンの濃度は，リポソーム中で約０．１ｍｇ／ｍｌ−約２５ｍｇ／ｍｌである。別の態様においては，オキザリプラチンの濃度は，リポソーム中で約０．５ｍｇ／ｍｌ−約１０ｍｇ／ｍｌである。さらに別の態様においては，オキザリプラチンの濃度は約０．５ｍｇ／ｍｌ−約３ｍｇ／ｍｌである。
【００６１】
標的化リポソームおよびリポソーム含有組成物の特定の態様においては，標識された化合物が存在する。ある態様においては，標識された化合物は放射性同位体成分を含む。特定の態様においては，放射性同位体成分は１２５Ｉを取り込んだものである。
【００６２】
標的化リポソームおよびリポソーム含有組成物の特定の態様においては，リポソーム中に取り込まれている標的化リガンドの濃度は約１．０ｍｇ／ｍｌ−約３．０ｍｇ／ｍｌである。別の態様においては，リポソーム中に取り込まれている標的化リガンドの濃度は約１．０ｍｇ／ｍｌ−約２．５ｍｇ／ｍｌである。
【００６３】
薬剤が存在しこれがオキザリプラチンである，標的化リポソームおよびリポソーム含有組成物の特定の態様においては，標的化リガンドはトランスフェリンである。特定の態様においては，トランスフェリンはホロ形である。ある態様においては，鉄イオンは約０．４−約３．０μｇ／ｍｌの濃度である。別の態様においては，鉄イオンは，約０．４−約１．５μｇ／ｍｌの濃度である。
【００６４】
標的化リポソーム，空リポソーム，脂質混合物およびリポソーム含有組成物の特定の態様においては，リポソーム，脂質混合物またはリポソーム含有組成物はカチオン性脂質を含まない。特定の態様においては，リポソーム，脂質混合物またはリポソーム含有組成物はアニオン性脂質を含まない。ある態様においては，リポソーム，脂質リポソーム，脂質混合物またはリポソーム含有組成物はアニオン性脂質およびカチオン性脂質のいずれも含まない。
【００６５】
標的化リポソーム，空リポソーム，脂質混合物およびリポソーム含有組成物の特定の態様においては，処方物はさらに溶液を含む。ある態様においては，脂質混合物は溶液を含まない。特定の態様においては，溶液は水性溶液または水性溶液と水混和性溶媒との混合物である。
【００６６】
標的化リポソーム，空リポソーム，脂質混合物およびリポソーム含有組成物の特定の態様においては，処方物はさらにスクロースを含む。
【００６７】
本発明のさらに別の観点においては，本明細書に記載される脂質含有組成物の医薬処方物が提供される。リポソーム含有組成物，標的化リポソームおよび空リポソームの特定の態様は，本明細書に記載されるリポソーム含有組成物，標的化リポソームまたは空リポソームおよび１またはそれ以上の薬学的に許容しうる担体，賦形剤，希釈剤，安定化剤，または保存剤を含む。
【００６８】
本発明のさらに別の観点においては，本明細書に記載される脂質含有組成物を含むキットが提供される。リポソーム含有組成物，標的化リポソームおよび空リポソームのある態様は，本明細書に記載されるリポソーム含有組成物，標的化リポソームまたは空リポソーム，包装および使用説明書を含む。
【００６９】
キットのある態様においては，本明細書に記載されるリポソーム含有組成物，標的化リポソームまたは空リポソームは，第１の容器中に含まれ，１またはそれ以上の薬学的に許容しうる担体，賦形剤，希釈剤，安定化剤，または保存剤は第２の容器中に含まれる。
【００７０】
特定の態様においては，本明細書に記載される医薬処方物，包装および使用説明書を組み込んだキットが提供される。
【００７１】
本発明の別の観点においては，本明細書に希釈される脂質含有組成物を製造する方法が提供される。
【００７２】
特定の態様においては，本明細書に記載される標的化リポソームを製造する方法が提供され，この方法は，
ａ）１またはそれ以上のリン脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，および任意に少なくとも１つの追加の脂質を混合して脂質混合物を形成し；
ｂ）薬剤または標識された化合物を工程（ａ）で形成された脂質混合物に加え；
ｃ）リポソームを形成する
の各工程を含む。
【００７３】
この方法のさらに別の態様においては，工程（ｃ）のリポソームを精製する工程（ｄ）が提供される。特定の態様においては，工程（ｂ）の薬剤は混合する前に水性溶液中に存在する。ある態様においては，工程（ｃ）は超音波処理または撹拌を含む。ある態様においては，工程（ｃ）は押し出しを含む。
【００７４】
別の態様においては，本明細書に記載される標的化リポソームを製造する方法が提供され，この方法は，
ａ）１またはそれ以上のリン脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル，および任意に少なくとも１つの追加の脂質を混合して脂質混合物を形成し，
ここで，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは式２：
【化２８】
0005438317.tif 000014
［式中，Ｒ３およびＲ４は，それぞれ独立してアシル基であり，ｎは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；
ｂ）薬剤または標識された化合物を工程（ａ）で形成された脂質混合物に加え；
ｃ）リポソームを形成し；そして
ｄ）標的化リガンドをＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルに連結させる
の各工程を含む。
【００７５】
上述の方法のある態様においては，この方法はまた，工程（ｄ）のリポソームを精製する工程（ｅ）を含む。
【００７６】
特定の態様においては，工程（ｂ）の薬剤は混合前に水性溶液中に存在する。ある態様においては，工程（ｃ）は超音波処理または撹拌を含む。ある態様においては，工程（ｃ）は押し出しを含む。特定の態様においては，工程（ｃ）は撹拌を含む。
【００７７】
ある態様においては，本明細書に記載される空リポソームを製造する方法が提供され，この方法は，
ａ）１またはそれ以上のリン脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，および任意に少なくとも１つの追加の脂質を混合して脂質混合物を形成し；そして
ｂ）リポソームを形成する
の各工程を含む。
【００７８】
空リポソームを製造する方法のある態様においては，この方法はさらに，工程（ｂ）のリポソームを精製する工程（ｃ）を含む。
【００７９】
特定の態様においては，工程（ｂ）は超音波処理または撹拌を含む。ある態様においては，工程（ｂ）は押し出しを含む。
【００８０】
別の態様においては，本明細書に記載される空リポソームを製造する方法が提供され，この方法は，
ａ）１またはそれ以上のリン脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，およびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル，および任意に少なくとも１つの追加の脂質を混合して脂質混合物を形成し，
ここで，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは式２：
【化２９】
0005438317.tif 000015
［式中，Ｒ３およびＲ４は，それぞれ独立してアシル基であり，ｎは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；
ｂ）リポソームを形成し；そして
ｃ）標的化リガンドをＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルと連結させて，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンを形成する
の各工程を含む。
【００８１】
空リポソームを製造する方法のあるものにおいては，この方法はさらに，工程（ｃ）のリポソームを精製する工程（ｄ）を含む。
【００８２】
特定の態様においては，工程（ｂ）は超音波処理または撹拌を含む。ある態様においては，工程（ｂ）は押し出しを含む。
【００８３】
別の態様においては，本明細書に記載される脂質含有組成物を製造する方法が提供され，この方法は，１またはそれ以上のリン脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルを混合する工程を含む。
【００８４】
さらに別の態様においては，本明細書に記載される少なくとも１つの追加の脂質が存在する脂質含有組成物を製造する方法が提供され，この方法は，１またはそれ以上のリン脂質，少なくとも１つの追加の脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルを混合する工程を含む。
【００８５】
別の態様においては，本明細書に記載される脂質含有組成物を製造する方法が提供され，この方法は，１またはそれ以上のリン脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンを混合する工程を含む。
【００８６】
さらに別の態様においては，本明細書に記載されるように少なくとも１つの追加の脂質が存在する脂質含有組成物を製造する方法が提供され，この方法は，１またはそれ以上のリン脂質，少なくとも１つの追加の脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンを混合する工程を含む。
【００８７】
また，本明細書に記載されるリポソーム含有組成物を製造する方法も提供され，この方法は，
ａ）１またはそれ以上のリン脂質脂質，およびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，および存在する場合にはＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンまたはターゲティング因子で修飾したＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル，および任意に存在する場合には少なくとも１つの追加の脂質を混合して脂質混合物を形成し；そして
ｂ）工程（ａ）で形成された脂質混合物に薬剤を加え；そして
ｃ）リポソームを形成する
の各工程を含む。
【００８８】
薬剤が存在する種々の脂質含有組成物（標的化リポソーム，空リポソーム，リポソーム含有組成物）を製造する方法のある態様においては，薬剤は水性溶液中に存在する。ある態様においては，工程ａ）は有機溶媒の存在下で行う。ある態様においては，水性溶液はさらに糖を含む。ある態様においては，水性溶液は水混和性有機溶媒を含んでいてもよい。
【００８９】
別の態様においては，リポソーム含有組成物を製造する方法が提供され，この方法は，
ａ）１またはそれ以上のリン脂質脂質，およびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，および存在する場合にはＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンまたはターゲティング因子で修飾したＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル，および任意に存在する場合には少なくとも１つの追加の脂質を混合して脂質混合物を形成し；そして
ｂ）工程（ａ）で形成された脂質混合物に標識された化合物を加え；
ｃ）リポソームを形成する
の各工程を含む。
【００９０】
標識された化合物が存在する種々の脂質含有組成物（標的化リポソーム，空リポソーム，リポソーム含有組成物）を製造する方法のある態様においては，標識された化合物は水性溶液中に存在する。ある態様においては，工程ａ）は有機溶媒の存在下で行う。ある態様においては，水性溶液は水混和性有機溶媒を含んでいてもよい。
【００９１】
ある態様においては，リポソーム含有組成物が標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンを含む，本明細書に記載されるリポソーム含有組成物を製造する方法も提供され，この方法は，
ａ）１またはそれ以上のリン脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，および任意に少なくとも１つの追加の脂質を混合して脂質混合物を形成し；そして
ｂ）工程（ａ）で形成された混合物に溶媒を加えてリポソーム含有組成物を形成する
の各工程を含む。
【００９２】
特定の態様においては，混合工程（ａ）は，有機溶媒の存在下で行う。特定の態様においては，工程（ｂ）の溶媒は水性溶液または水性溶液と水混和性溶媒との混合物である。
【００９３】
ある態様においては，工程（ｂ）は超音波処理または撹拌を含む。ある態様においては，工程（ｂ）は押し出しを含む。
【００９４】
脂質含有組成物を製造する方法の特定の態様においては，工程（ａ）において少なくとも１つの追加の脂質が存在する。
【００９５】
脂質含有組成物を製造する方法のある態様においては，工程（ａ）においてＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルが存在する。
【００９６】
脂質含有組成物を製造する方法のある態様においては，工程（ａ）において標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンが存在する。
【００９７】
本発明のさらに別の観点においては，本明細書に記載される脂質含有組成物を用いる治療または診断の方法が提供される。
【００９８】
特定の態様においては，癌を治療する方法が提供され，この方法は，ａ）治療を必要とする個体に本明細書に記載される標的化リポソームを癌を治療するのに有効な量で投与することを含み，ここで，標的化リポソームは薬剤を含み，薬剤は抗癌剤である。
【００９９】
治療または診断の方法のある態様においては，個体は哺乳動物である。特定の態様においては，個体はヒトである。
【０１００】
治療の方法のある態様においては，癌は，乳，胃，結腸，結腸直腸癌，膵臓の癌，非小細胞肺癌，小細胞肺癌，脳癌，肝臓癌，腎臓癌，前立腺癌，膀胱癌，卵巣癌，または血液悪性腫瘍である。
【０１０１】
治療の方法のある態様においては，工程（ａ）は，組み合わせモダリティー癌療法の前に，同時に，または後に行われる。特定の態様においては，組み合わせモダリティー癌療法は，化学療法，放射線療法，または外科手術を含む。
【０１０２】
治療の方法の特定の態様においては，工程（ａ）は，癌補助療法の前に，同時に，または後に行われる。特定の態様においては，癌補助療法は，１またはそれ以上の薬剤を投与して，脱毛，嘔吐，免疫抑制，悪心，下痢，発疹，感覚障害，貧血，倦怠感，口内炎，または手足症候群を低減することを含む。ある態様においては，工程（ａ）は，１またはそれ以上の別の抗癌剤の投与の前に，同時に，または後に行われる。ある態様においては，１またはそれ以上の別の抗癌剤には，５−フルオロウラシル，ロイコボリン，カペシタビン，ＵＦＴ／ＬＶ（テガフール−ウラシルおよびロイコボリン），イリノテカン，抗ＥＧＦＲ抗体，抗ＶＥＧＦ抗体，チロシンキナーゼ阻害剤，またはこれらの組み合わせが含まれる。
【０１０３】
治療の方法のある態様においては，標的化リポソームは非経口投与により投与される。特定の態様においては，非経口投与は注射または静脈内注入による。
【０１０４】
また，診断の方法も提供され，この方法は，
ａ）本明細書に記載される標的化リポソームを診断を必要とする個体に，検出に有効な量で投与し，ここで，標的化リポソームは標識された化合物を含み；そして
ｂ）標識された化合物を検出する，
の各工程を含む。
【０１０５】
診断の方法の別の態様においては，この方法はさらに，標識された化合物の検出されたレベルと，標識された化合物の先の時点で検出された量とを比較する工程（ｃ）を含む。
【０１０６】
診断の方法のさらに別の態様においては，工程（ｂ）はガンマカウンターにより検出することを含む。
【０１０７】
本発明のさらに別の観点においては，トランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンが提供され，ここで，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式３：
【化３０】
0005438317.tif 000016
［式中，Ｒ５およびＲ６は，それぞれ独立してアシル基であり，ｐは１−１０の整数である］で表され，トランスフェリンはＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに結合している。
【０１０８】
トランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのある態様においては，ｐは２−４の整数である。特定の態様においては，ｐは３である。
【０１０９】
トランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのある態様においては，Ｒ５およびＲ６は，それぞれ独立して，オレオイル，ステアロイル，パルミトイルまたはミリストイルである。特定の態様においては，Ｒ５およびＲ６は同じである。ある態様においては，Ｒ５およびＲ６は，オレオイルまたはステアロイルである。ある態様においては，Ｒ５およびＲ６はオレオイルであり，ｐは３である。
【０１１０】
別の観点においては，本明細書に記載されるトランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび１またはそれ以上の薬学的に許容しうる担体，賦形剤，希釈剤，安定化剤，または保存剤を含む医薬処方物が提供される。
【０１１１】
ある態様においては，少なくとも２つの異なる中性脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルの混合物を含む脂質混合物が提供され，ここで，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化３１】
0005438317.tif 000017
で表され，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは式２：
【化３２】
0005438317.tif 000018
［式中，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は，それぞれ独立してアシル基であり，ｍおよびｎは，独立して，１−１０の整数である］
で表され，混合物は誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンまたはポリエチレングリコールを含まない。
【０１１２】
ある態様においては，少なくとも２つの異なる中性脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルおよび封入された薬剤または標識された化合物を含むリポソーム含有組成物が提供され，ここで，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化３３】
0005438317.tif 000019
で表され，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは式２：
【化３４】
0005438317.tif 000020
［式中，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は，それぞれ独立してアシル基であり；ｍおよびｎは，独立して，１−１０の整数である］
で表され，混合物は誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンまたはポリエチレングリコールを含まない。
【０１１３】
リポソーム含有組成物および脂質混合物の特定の態様においては，ｍおよびｎは，それぞれ独立して，２−４の整数である。ある態様においては，ｍおよびｎは等しく，２−４の整数である。別の態様においては，ｍおよびｎは等しく，３である。
【０１１４】
リポソーム含有組成物および脂質混合物のある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は，それぞれ独立して，オレオイル，ステアロイル，パルミトイルまたはミリストイルである。ある態様においては，Ｒ１とＲ２は同じであり，Ｒ３とＲ４は同じである。特定の態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は同じであり，ある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４はオレオイルである。
【０１１５】
リポソーム含有組成物および脂質混合物の特定の態様においては，中性脂質：Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン：Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルのモル比は約９５：４：１である。
【０１１６】
中性脂質がＤＭＰＣおよびコレステロールであるリポソーム含有組成物および脂質混合物のある態様においては，ＤＭＰＣ：コレステロール：（Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン＋Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン）のスクシンイミジルエステルのモル比は５０：４５：５である。これらの態様のあるものにおいては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮＧ−ＤＯＰＥであり，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルはＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥである。
【０１１７】
ある態様においては，少なくとも２つの異なる中性脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび封入された薬剤または標識された化合物を含む標的化リポソームが提供され，ここで，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは，第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化リガンドを含み；Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化３５】
0005438317.tif 000021
で表され，
第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式３：
【化３６】
0005438317.tif 000022
［式中，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は，それぞれ独立してアシル基であり，ｍおよびｐは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；
リポソームは誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンまたはポリエチレングリコールを含まず，標的化リガンドは無傷の抗体ではない。
【０１１８】
特定の態様においては，中性ホスファチジルコリン，コレステロールまたはコレステロール誘導体，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，トランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび封入されたオキザリプラチンを含む標的化リポソームが提供され，ここで，トランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは，カルボン酸アミド結合により第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結されたトランスフェリンを含み；
Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１：
【化３７】
0005438317.tif 000023
で表され，
Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは式２で表され，
第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式３：
【化３８】
0005438317.tif 000024
［式中，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は，それぞれ独立してアシル基であり，ｍおよびｐは，独立して，１−１０の整数である］
で表され；
リポソームは誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンまたはポリエチレングリコール含まない。ある態様においては，標的化リポソームはＥＤＣおよび／またはＤＣＣを実質的に含まない。
【０１１９】
標的化リポソームのある態様においては，ｍおよびｐは，それぞれ独立して，２−４の整数である。ある態様においては，ｍおよびｐは等しく，２−４の整数である。特定の態様においては，ｍおよびｐは等しく，３である。
【０１２０】
標的化リポソームのある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は，それぞれ独立して，オレオイル，ステアロイル，パルミトイルまたはミリストイルである。ある態様においては，Ｒ１およびＲ２は同じであり，Ｒ５およびＲ６は同じである。特定の態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ５およびＲ６は同じである。ある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は，オレオイルまたはステアロイルである。ある態様においては，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４はオレオイルである。
【０１２１】
標的化リポソームのある態様においては，標的化リガンドは標的細胞に向けられている。特定の態様においては，標的化リガンドは標的細胞の細胞表面レセプターに向けられている。ある態様においては，標的化リガンドは，トランスフェリン，葉酸，ヒアルロン酸，糖鎖またはモノクローナル抗体のフラグメントである。ある態様においては，標的化リガンドは，トランスフェリン，葉酸，ヒアルロン酸または糖鎖である。特定の態様においては，標的化リガンドはトランスフェリンである。これらの態様のあるものにおいては，トランスフェリンはホロ形であってアポ形ではない。別の態様においては，トランスフェリンはアポ形である。
【０１２２】
脂質混合物，リポソーム含有組成物および標的化リポソームのある態様においては，処方物はアニオン性脂質を含まない。ある態様においては，処方物はカチオン性脂質を含まない。ある態様においては，処方物はカチオン性脂質またはアニオン性脂質を含まない。ある態様においては，処方物はホスファチジルグリセロールまたはその誘導体を含まない。特定の態様においては，処方物は卵ホスファチジルコリンを含まない。
【０１２３】
脂質混合物，リポソーム含有組成物および標的化リポソームのある態様においては，少なくとも２つの異なる中性脂質は，１またはそれ以上のリン脂質およびコレステロールまたはコレステロール誘導体である。ある態様においては，少なくとも２つの異なる中性脂質の少なくとも１つはリン脂質である。脂質混合物，リポソーム含有組成物および標的化リポソームのある態様においては，少なくとも２つの異なる中性脂質は，ホスファチジルコリンおよびコレステロールである。特定の態様においては，少なくとも２つの異なる中性脂質の１つは，ＤＭＰＣ，ＤＳＰＣまたはＤＰＰＣである態様においては，少なくとも２つの異なる中性脂質の１つはコレステロールまたはコレステロール誘導体である。特定の態様においては，少なくとも２つの異なる中性脂質は，ＤＭＰＣおよびコレステロール，ＤＳＰＣおよびコレステロール，またはＤＰＰＣおよびコレステロールである。特定の態様においては，少なくとも２つの異なる中性脂質はＤＭＰＣおよびコレステロールである。
【０１２４】
標的化リポソームのある態様においては，リポソームの平均直径は約５０ｎｍ−約２５０ｎｍである。ある態様においては，リポソームの平均直径は，約９０ｎｍ−約２００ｎｍである。特定の態様においては，リポソームの平均直径は約１００ｎｍ−約１４０ｎｍである。
【０１２５】
標的化リポソームのある態様においては，リポソームのゼータ電位は負である。特定の態様においては，ゼータ電位は約−７５ｍＶから約−９０ｍＶである。ある態様においては，ゼータ電位は約−８０ｍＶから約−８５ｍＶである。
【０１２６】
脂質混合物，リポソーム含有組成物および標的化リポソームのある態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮＧ−ＤＯＰＥ（ここで，ＮＧ−ＤＯＰＥは，Ｒ１およびＲ２がオレオイルでありｍが３であるものと等しい）であり，存在する場合には，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルはＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥ（ここで，ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥは，Ｒ３およびＲ４がオレオイルであり，ｎが３であるものと等しい）であるか，または存在する場合には，ターゲティング因子で修飾したＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＴＦ−ＮＧ−ＤＯＰＥ（ここで，ＴＦ−ＮＧ−ＤＯＰＥは，Ｒ５およびＲ６がオレオイルであり，ｐが３であるものと等しい）である。
【０１２７】
リポソーム含有組成物および標的化リポソームのある態様においては，処方物はさらに溶液を含む。
【０１２８】
標的化リポソームのある態様においては，中性脂質：Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン：標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのモル比は約９５：４：１である。
【０１２９】
標的化リポソームのある態様においては，ＤＭＰＣ：コレステロール：（Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン＋標的因子で修飾したＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン）のモル比は５０：４５：５である。
【０１３０】
リポソーム含有組成物および標的化リポソームの特定の態様においては，標識された化合物が存在する。ある態様においては，標識された化合物は放射性同位体成分を含む。特定の態様においては，標識された化合物は１２５Ｉを含む。
【０１３１】
リポソーム含有組成物および標的化リポソームのある態様においては，薬剤が存在する。特定の態様においては，薬剤は抗癌剤である。ある態様においては，薬剤は細胞毒性剤である。ある態様においては，薬剤はトポイソメラーゼＩ阻害剤である。特定の態様においては，トポイソメラーゼＩ阻害剤は，トポテカンまたはイリノテカンである。別の態様においては，薬剤はビンカアルカロイドである。ある態様においては，ビンカアルカロイドは，ビンクリスチン，ビンブラスチン，ビンレウロシン，ビンロジシン，ビノレルビンまたはビンデシンである。別の態様においては，薬剤は核酸である。これらの態様のあるものにおいては，核酸はアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはリボザイムである。特定の態様においては，薬剤は白金化合物である。ある態様においては，白金化合物は，ビプラチン，シスプラチン，カルボプラチン，オルマプラチン，オキザリプラチン，ゼニプラチン，エンロプラチン，ロバプラチンまたはスピロプラチンである。特定の態様においては，白金化合物はオキザリプラチンである。ある態様においては，薬剤はアルキル化剤である。特定の態様においては，薬剤はタキサンである。別の態様においては，薬剤は代謝性アンタゴニストである。ある態様においては，薬剤は抗腫瘍抗生物質である。ある態様においては，薬剤はホルモン療法剤である。特定の態様においては，薬剤は分子標的薬である。
【０１３２】
オキザリプラチンが存在する特定の態様においては，オキザリプラチンは，トレハロース，マルトース，スクロース，ラクトース，マンノース，マンニトール，グリセロールおよびデキストロースからなる群より選択される糖の水性溶液中に溶解されている。ある態様においては，糖は約１−約２０％パーセント糖（ｖ／ｖ）の濃度である。ある態様においては，オキザリプラチンの濃度はリポソーム中で約０．１ｍｇ／ｍｌ−約２５ｍｇ／ｍｌである。別の態様においては，オキザリプラチンの濃度はリポソーム中で約０．５ｍｇ／ｍｌ−約１０ｍｇ／ｍｌである。さらに別の態様においては，オキザリプラチンの濃度は約０．５ｍｇ／ｍｌ−約３ｍｇ／ｍｌである。
【０１３３】
ターゲティング因子で修飾したＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンが存在する特定の態様においては，リポソーム中に取り込まれている標的化リガンドの濃度は約１．０ｍｇ／ｍｌ−約３．０ｍｇ／ｍｌである。ある態様においては，リポソーム中に取り込まれている標的化リガンドの濃度は約１．０ｍｇ／ｍｌ−約２．５ｍｇ／ｍｌである。
【０１３４】
ターゲティング因子で修飾したＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンが存在するある態様においては，標的化リガンドはトランスフェリンである。ある態様においては，トランスフェリンはホロ形であってアポ形ではない。ある態様においては，トランスフェリンはホロ形である。ある態様においては，鉄イオンは約０．４−約３．０μｇ／ｍｌの濃度である。別の態様においては，鉄イオンは約０．４−約１．５μｇ／ｍｌの濃度である。
【０１３５】
脂質混合物，リポソーム含有組成物および標的化リポソームのある態様においては，処方物は２つの異なる中性脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよびターゲティング因子で修飾したＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン以外の脂質成分を含まない。特定の態様においては，処方物はホスファチジルコリン，コレステロールまたはコレステロール誘導体，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよびトランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン以外の脂質成分を含まない。
【０１３６】
別の観点においては，本明細書に記載される標的化リポソームまたはリポソーム含有組成物および１またはそれ以上の薬学的に許容しうる担体，賦形剤，希釈剤，安定化剤，または保存剤を含む医薬処方物が提供される。
【０１３７】
さらに別の観点においては，本明細書に記載される脂質混合物，リポソーム含有組成物または標的化リポソーム，包装および使用説明書の１またはそれ以上を含むキットが提供される。
【０１３８】
ある態様においては，キットは標的化リポソームを含む。特定の態様においては，標的化リポソームは第１の容器に含まれ，１またはそれ以上の薬学的に許容しうる担体，賦形剤，希釈剤，安定化剤，または保存剤は第２の容器に含まれる。
【０１３９】
特に記載しない限り，本明細書に記載される脂質含有組成物は，本明細書に記載される治療および診断の方法に用いることが意図され，本明細書に記載される医薬処方物およびキット中に組み込まれる。本明細書に記載される脂質含有組成物（脂質混合物，リポソーム含有組成物を含む），リポソーム（標的化リポソーム，空リポソーム等を含む））は，特に記載しない限り，本明細書に記載される製造方法により製造される。
【０１４０】
別の観点においては，本明細書に記載される脂質含有組成物を製造する方法が提供され，この方法は，少なくとも２つの異なる中性脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルを混合する工程を含む。
【０１４１】
ある態様においては，本明細書に記載されるリポソーム含有組成物を製造する方法が提供され，この方法は，
ａ）少なくとも２つの異なる中性脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルを混合して脂質混合物を形成し；
ｂ）工程（ａ）で形成された脂質混合物に薬剤を加え；そして
ｃ）リポソームを形成する
の各工程を含む。
【０１４２】
ある態様においては，混合工程（ａ）は，有機溶媒の存在下で行う。
【０１４３】
ある態様においては，工程（ｂ）の薬剤は，混合前に水性溶液中に存在する。
【０１４４】
ある態様においては，工程（ｃ）は超音波処理または撹拌を含む。特定の態様においては，工程（ｃ）は押し出しを含む。
【０１４５】
さらに別の態様においては，本明細書に記載される標的化リポソームを製造する方法が提供され，この方法は，
ａ）少なくとも２つの異なる中性脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルを混合して脂質混合物を形成し；
ｂ）工程（ａ）で形成された脂質混合物に薬剤または標識された化合物を加え；
ｃ）リポソームを形成し；そして
ｄ）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルに標的化リガンドを連結させる
の各工程を含む。
【０１４６】
上述の方法のある態様においては，この方法はさらに，工程（ｄ）のリポソームを精製する工程（ｅ）を含む。特定の態様においては，工程（ｂ）の薬剤は混合前に水性溶液中にある。ある態様においては，工程（ｃ）は超音波処理または撹拌を含む。ある態様においては，工程（ｃ）は押し出しを含む。
【０１４７】
また，標的化リポソームを製造する別の方法が提供され，この方法は，
ａ）ホスファチジルコリン，コレステロールまたはコレステロール誘導体，およびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンを混合して脂質混合物を形成し；
ｂ）工程（ａ）で形成された脂質混合物にオキザリプラチンを加え；
ｃ）リポソームを形成し；そして
ｄ）Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンの一部を機能化して，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルを形成し；そして
ｅ）トランスフェリンをＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルに結合させる，
の各工程を含む。
【０１４８】
ある態様においては，この方法はさらに，工程（ｅ）のリポソームを精製する工程（ｆ）を含む。
【０１４９】
この方法の特定の態様においては，工程（ｂ）における薬剤は混合前に水性溶液中に存在する。
【０１５０】
この方法のある態様においては，工程（ｃ）は超音波処理または撹拌を含む。
【０１５１】
本発明のさらに別の観点においては，本明細書に記載される脂質含有組成物（標的化リポソームを含む）およびその処方物の，医薬品の製造，特に，本明細書に記載される状態の治療または診断において用いるための医薬品の製造における使用が提供される。さらに，本明細書に種々に説明されるその医薬処方物は，特に記載しないかぎり，本明細書に記載される方法にしたがってその状態の治療および診断において用いるための医薬品の製造における使用が意図される。
【０１５２】
本発明のさらに別の観点においては，癌を治療する方法が提供され，この方法は，ａ）本明細書に記載される標的化リポソームを癌を治療するのに有効な量で，治療を必要とする個体に投与する工程を含み，ここで，薬剤は抗癌剤である。
【０１５３】
ある態様においては，個体は哺乳動物である。特定の態様においては，個体はヒトである。
【０１５４】
ある態様においては，癌は，乳，胃，結腸，結腸直腸癌，膵臓の癌，非小細胞肺癌，小細胞肺癌，脳癌，肝臓癌，腎臓癌，前立腺癌，膀胱癌，卵巣癌，または血液悪性腫瘍である。
【０１５５】
治療方法のある態様においては，工程（ａ）は，組み合わせモダリティー癌療法の前に，同時に，または後に行われる。特定の態様においては，組み合わせモダリティー癌療法は，化学療法，放射線療法，または外科手術を含む。
【０１５６】
治療の方法のある態様においては，工程（ａ）は，癌補助療法の前に，同時に，または後に行われる。特定の態様においては，癌補助療法は，１またはそれ以上の薬剤を投与して，脱毛，嘔吐，免疫抑制，悪心，下痢，発疹，感覚障害，貧血，倦怠感，口内炎，または手足症候群を低減することを含む。ある態様においては，工程（ａ）は，１またはそれ以上の別の抗癌剤の投与の前に，同時にまたは後に行われる。特定の態様においては，１またはそれ以上の別の抗癌剤には，５−フルオロウラシル，ロイコボリン，カペシタビン，ＵＦＴ／ＬＶ（テガフール−ウラシルおよびロイコボリン），イリノテカン，抗ＥＧＦＲ抗体，抗ＶＥＧＦ抗体，チロシンキナーゼ阻害剤，またはこれらの組み合わせが含まれる。
【０１５７】
治療の方法のある態様においては，標的化リポソームは，非経口投与により投与される。特定の態様においては，非経口投与は注射または静脈内注入による。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１５８】
図面の簡単な説明
図１は，標的化リポソームの略図を示す。
【０１５９】
図２は，標的化リポソームを用いる腫瘍細胞の活性薬剤ターゲティングの略図を示す。
【０１６０】
図３は，オキザリプラチンを含む標的化リポソームの提唱される作用モードの略図を示す。
【０１６１】
図４は，標的化リポソームの製造プロセスＡの概略図を示す。
【０１６２】
図５は，標的化リポソームの製造プロセスＢの概略図を示す。
【０１６３】
図６は，種々のオキザリプラチン濃度におけるオキザリプラチンのＡｓＰＣ−１細胞に対する細胞毒性を示す。
【０１６４】
図７は，正常白血球および腫瘍由来細胞株の細胞表面に存在するトランスフェリンレセプターの数を示す。
【０１６５】
図８は，実施例６で調製し，ＱＥＬＳにより得たリポソーム含有混合物のサイズ分布の結果を示す。Ａ）エントリー１，Ｂ）エントリー２，Ｃ）エントリー３，Ｄ）エントリー４，Ｅ）エントリー５，Ｆ）エントリー６。
【０１６６】
図９は，血中のリポソームの濃度を示す。図中，（◆）は実施例６で調製したＴｆ−ＰＥＧ−リポソームを示し，（Ｂ）は実施例５で調製したＴｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥ：ＮＧ−ＤＳＰＥ：ＤＳＰＣ：ＣＨリポソームを示し，（Ｏ）は実施例６で調製したＴｆ／ＰＥＧ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームを示す。
【０１６７】
図１０は，癌組織におけるリポソームの濃度を示す。図中，（◆）は実施例６で調製したＴｆ−ＰＥＧ−リポソームを示し，（■）は実施例５で調製したＴｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥ：ＮＧ−ＤＳＰＥ：ＤＳＰＣ：ＣＨリポソームを示し，（Ｏ）は実施例６で調製したＴｆ／ＰＥＧ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームを示す。
【０１６８】
図１１は，実施例１３に記載されるようにして製造したＮＧ−ＰＥリポソームの静脈内注射後の腫瘍組織における蓄積を示し，１２５Ｉで標識されたチラミニルイヌリンを封入したＮＧＰＥリポソームをＣｏｌｏｎ２６腫瘍担持マウスに注射した。データは平均値で示される。データは平均±ＳＤ（ｎ＝５）で示される。（□）０ｍｏｌ％（−）；（■）１ｍｏｌ％（＋）Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ．＊０ｍｏｌ％（−）からの有意な相違。
【０１６９】
図１２は，腫瘍成長比対最初の治療後の日数のプロットにより，腫瘍成長に及ぼすリポソームの阻害効果を示す。図中，（◆）は実施例９において調製したＴｆ−ＰＥＧ−リポソームを示し；（■）は実施例６において調製したＴｆなしのＰＥＧ−リポソームを示し；（黒三角）は実施例８において調製したＴｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥ：ＮＧ−ＤＳＰＥ：ＤＳＰＣ：ＣＨリポソームを示し；（ｏ）は実施例８において調製したＴｆなしのＮＧ−ＤＳＰＥ：ＮＧ−ＤＳＰＥ：ＤＳＰＣ：ＣＨリポソームを示し；（＊）は実施例９において調製したＴｆ／ＰＥＧ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームを示し；（●）は，実施例９において調製したＴｆなしのＰＥＧ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームを示し；（＋）はｌ−ＯＨＰ溶液を示し；（−）は処置なしを示す。
【０１７０】
図１３は，血液中で検出された薬剤用量のパーセントに及ぼすＮＧ−ＰＥ（ＮＧ−ＤＳＰＥ）の種々の濃度の影響を示す。図中，ＮＧ−ＤＳＰＥの濃度（総脂質含有量の％）は以下のとおりである：（◆）０％，（■）１％；（黒三角）３％；（ｘ）６％；（○）１２％。脂質は以下のとおりである：（●）ＭＰＢ６％；（＋）ＰＤＰ６％。
【０１７１】
図１４は，種々のジカルボン酸リンカーを有し，Ｔｆを有するかまたは有しないリポソームの血液滞留を示す。図中，（◆）Ｔｆ−ＮＧＰＥ，（■）Ｔｆ−ＮＳＰＥ；（黒三角）ＴＦ−ＭＰＢ；（ｘ）ＮＧＰＥ（Ｔｆなし），（＊）ＭＰＢ（Ｔｆなし）。
【０１７２】
図１５は，電気泳動によるリポソームの例示的分析を示す。レーン６（トランスフェリン−Ｎ−グルタリル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−リポソーム（Ｔｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソーム））；レーン５（トランスフェリン−ポリエチレングリコール−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−リポソーム（Ｔｆ−ＰＥＧ−ＤＳＰＥリポソーム））。レーン１−４は，それぞれ，ｈ−ａｐｏ−Ｔｆ（２４０ｎｇ），ｈ−ａｐｏ−Ｔｆ（１２０ｎｇ），ｈ−ａｐｏ−Ｔｆ（６０ｎｇ），およびｈ−ａｐｏ−Ｔｆ（３０ｎｇ）を含む。
【０１７３】
図１６は，リポソーム中に取り込まれた非ＮＧ−ＤＳＰＥあり（レーン５）およびなし（レーン４）で，Ｔｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームに結合したトランスフェリンの量を示す。レーン１−３は，それぞれ，ｈ−ａｐｏ−Ｔｆ（４００ｎｇ），ｈ−ａｐｏ−Ｔｆ（２００ｎｇ），およびｈ−ａｐｏ−Ｔｆ（５０ｎｇ）を含む。
【０１７４】
図１７は，（■）ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームを５ｍｇ／ｋｇで，（●）Ｔｆ−ＰＥＧリポソームを５ｍｇ／ｋｇで投与した後の血中のオキザリプラチンの蓄積を示す。
【０１７５】
図１８は，（■）ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームを５ｍｇ／ｋｇで，（●）Ｔｆ−ＰＥＧリポソームを５ｍｇ／ｋｇでマウスＣｏｌｏｎ２６腫瘍に投与したときの，Ｃｏｌｏｎ２６腫瘍中のオキザリプラチンの蓄積を示す。
【０１７６】
図１９は，Ｃｏｌｏｎ２６腫瘍担持マウスにおけるＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームの抗腫瘍効果を示す。図中，（●）はベヒクル対照（９％スクロース）を示し；（黒三角）はｌ−ＯＨＰ溶液，５ｍｇ／ｋｇを示し，（◆）はＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム，５ｍｇ／ｋｇを示し，（■）はＴｆ−ＰＥＧリポソーム，５ｍｇ／ｋｇを示す。
【０１７７】
図２０は，ＨＣＴ−１１６ヒト結腸腫瘍異種移植片担持マウスにおけるＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームの抗腫瘍効果を示す。図中，（●）はベヒクル対照（３００ｍＭ（１０．２７％）スクロース）を示し；（Ｏ）ブランク（薬剤なし）リポソームを示し，（黒三角）はｌ−ＯＨＰ溶液，１５ｍｇ／ｋｇを示し，（◆）はＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム，１０ｍｇ／ｋｇを示し，（■）はＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム，１５ｍｇ／ｋｇを示す。すべてのリポソームは，正確な体重にしたがって，０．１０３ｍＬ／１０ｇ体重の注射量で投与した。
【０１７８】
図２１は，ＨＴ−２９ヒト結腸腫瘍異種移植片担持マウスにおけるＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームの抗腫瘍効果を示す。図中，（●）はベヒクル対照（３００ｍＭ（１０．２７％）スクロース）を示し，（黒三角）はＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム，１５ｍｇ／ｋｇを示し，（■）はＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム，１０ｍｇ／ｋｇを示し，（◆）はＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム，６．７ｍｇ／ｋｇを示す。
【０１７９】
図２２は，ＭＫＮ４５胃ヒト腫瘍異種移植片担持マウスにおけるＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームの抗腫瘍効果を示す。図中，（●）はベヒクル対照（３００ｍＭ（１０．２７％）スクロース）を示し，（黒三角）はＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム，１５ｍｇ／ｋｇを示し，（■）は，ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム，１０ｍｇ／ｋｇを示し，（◆）はＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム，６．７ｍｇ／ｋｇを示す。
【０１８０】
図２３は，ＣＯＬＯ２０５ヒト腫瘍異種移植片担持マウスにおけるＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームの抗腫瘍効果を示す。図中，（●）はベヒクル対照（９％スクロース）を示し；（黒三角）は，ｌ−ＯＨＰ溶液，５ｍｇ／ｋｇ，ｑ４ｄｘ３（１６日），１０ｍｇ／ｋｇ，ｑ２ｄｘ２（４７日），２ｍｇ／ｋｇ，ｑ２ｄｘ６（５１日）を示し；（◆）はＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム，５ｍｇ／ｋｇ，ｑ４ｄｘ３（１６日），１０ｍｇ／ｋｇ，ｑ２ｄｘ２（４７日），２ｍｇ／ｋｇ，ｑ２ｄｘ６（５１日）を示し；（■）はＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム，１０ｍｇ／ｋｇ，ｑ４ｄｘ３（１６日），１５ｍｇ／ｋｇ，ｑ２ｄｘ２（４７日），４ｍｇ／ｋｇ，ｑ２ｄｘ６（５１日）を示す。
【０１８１】
図２４は，２−メルカプトエタノールで還元した後のＳＤＳ−ＰＡＧＥのパターンを示す。図中，レーン１は分子量マーカーであり，レーン２はホロ−トランスフェリンであり，レーン３−５はＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームであり，レーン６はＴｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥである。
【０１８２】
図２５は，システムに適合した例示的ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【０１８３】
発明の詳細な説明
本発明においては，脂質含有組成物（例えば，標的化リポソーム，空リポソーム，リポソーム含有組成物，脂質混合物等），および本明細書に記載される脂質含有組成物を製造し使用する方法が提供される。脂質含有組成物，特に本明細書に提供されるリポソームは，医薬処方物の製造に，および種々の状態，例えば癌の治療または診断における使用に適している。組成物，例えば医薬処方物は，個体にデリバリーされる薬剤または標識された化合物に伴う有害な影響が低減した，より有効な治療および診断計画を提供する。効力の増加および有害な影響の低減は，薬剤処方物の治療指数を上昇させ，癌などの種々の状態の首尾よい治療の機会を提供するはずであり，また，診断に伴う効力を増加させ，有害な影響を低減させるはずである。薬剤処方物の特異性が増加し，同時に有害な影響が低減することにより，治療中の個体のより多い数および範囲に治療上の有益性が与えられ，治療を必要とする個体の生存期間が長くなり，生活の質が改善されるはずである。標識された化合物の処方物の特異性が増加し，同時に有害な影響が低減することにより，正しく診断されることができる個体，診断処方物に対する許容性を有する個体の数が増加し，診断の正確性（例えば，感度等）が高まり，状態のより早期の診断および疾病の重篤度のより有効なモニタリング（例えば，治療したまたはしない場合の進行または退縮）が可能となるはずである。
【０１８４】
本明細書に記載される組成物には，脂質含有組成物の医薬処方物が含まれる。本明細書に記載される脂質含有組成物には，限定されないが，薬剤および標識された化合物を封入し，疾病あるいは治療または診断を必要とする状態，例えば癌（例えば，乳，胃，結腸直腸または結腸癌）の治療または診断において用いることができるリポソームが含まれる。
【０１８５】
慣用の抗癌剤（例えば細胞毒性剤）を静脈内に投与すると，身体全体が非特異的に薬剤に暴露され，その影響を受ける。その結果，多くの有害な反応が起こりうるか，癌が標的とされないか，および／または薬剤の影響が循環プロセス中に失われる。投与前にリポソーム組成物中に薬剤を封入すると，１またはそれ以上の有益性が得られる。例えば，薬剤が正常細胞に及ぼす有害な影響を低減させ，薬剤が不安定な場合には薬剤が標的病原細胞に到達するまでこれを保護し，循環系における薬剤の存在を長くして，病原細胞へのデリバリーを可能とし，および／または，薬剤を特定の標的病原細胞にデリバリーすることを容易にする。薬剤のより特異的なターゲティングおよびＲＥＳへの取り込みによる薬剤の損失の低減により，投与する必要がある薬剤の量が低下し，このことにより治療のコストが低減するという有益性，ならびに本明細書に記載される他の有益性も得られる。
【０１８６】
同様に，多くの標識された化合物は有害な影響を有するかもしれず，および／または投与と診断（例えば，診断手法，例えば，放射性同位体検出，磁気共鳴イメージング，超音波照射等が行われる時）との間の時間に分解するかもしれない。本明細書に記載される脂質含有組成物中に標識された化合物を取り込ませることにより標識された化合物の効力が増加し，例えば，より少ない投与量の標識された化合物で検出の閾値に到達し，薬剤の有害な影響を低減させることができ，および／または診断を行うことができる時間のウインドウを長くすることができる。
【０１８７】
脂質含有組成物はまた，標的化リガンドで修飾した脂質（例えば，標的化リポソーム，空リポソーム，リポソーム含有組成物，脂質混合物）または他の誘導化を含む。例えば，標的化因子（例えば，トランスフェリン，葉酸等）および誘導化脂質（例えば，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン）を取り込んだリポソーム組成物が開発され，血漿中の薬剤の循環時間を長くすることにより（溶液のみで投与された薬剤と比較して），および腫瘍細胞上の標的化因子特異的レセプターにより，抗癌剤（例えば，オキザリプラチン等）の安全性および効力が改善されている。この改善された生物利用性および腫瘍ターゲティングにより，安全性が改善され，抗腫瘍活性が増加し，したがって，治療を必要とする個体に有効な治療が与えられる可能性が高くなる一方で，多くの薬剤に伴う有害な影響，特にほとんどの抗癌剤に伴う重い有害な影響が低減するはずである。同様に，そのような誘導化および標的化因子はまた，標識された化合物をデリバリーするために特定の部位（例えば，腫瘍のタイプ，臓器，組織等）を効率的に標的化するためにも用いることができる。
【０１８８】
本発明はまた，トランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンを提供し，これは，本明細書に記載される脂質含有組成物およびその処方物中で用いることができる。
【０１８９】
脂質含有組成物，例えば本明細書に記載されるリポソームは，本明細書に記載される方法，ならびに当業者に知られ，本明細書に提供される教示に基づいて明らかなリポソーム製造の方法により製造することができる。特に記載しない限り，本明細書に記載されるリポソームおよびリポソーム含有組成物は，限定されないが，本明細書に記載される医薬処方物および／またはキット，ならびに本明細書に提供される教示に基づいて当業者には明らかなものなどの医薬処方物および／またはキット中に組み込むことができる。同様に，リポソームおよびリポソーム含有組成物を組み込んだリポソームおよびリポソーム含有組成物および医薬処方物は，限定されないが，特に記載しないかぎり，本明細書の全体に提供される記載と一致し，本明細書の教示に基づいて当業者の実務にしたがう治療または診断の方法において用いることができる。
【０１９０】
薬剤（オキザリプラチン）を取り込んだ例示的標的化リポソームの概略図を図１に示す。標的化リポソームの取り込みおよび作用モードの提唱されているメカニズムを図２および３に示す。本明細書において用いる場合，"標的化リポソーム"との用語は，一般に，少なくとも１つまたはそれ以上のリン脂質，ＮωＰＥ，ＴＦ−ＮωＰＥ等の成分を含み，本明細書に記載される薬剤または標識された化合物をも取り込んだリポソームを表す。本明細書の全体を通して記載されるこれらの成分のそれぞれは，限定されないが，本明細書に記載される教示に沿って，本発明の標的化リポソーム中に取り込ませることができる。空リポソーム（本明細書にさらに詳細に説明される）もまた，ＴＦで修飾されたＮωＰＥを取り込むことができる点において，"標的化"することができるが，一般にはこれらには薬剤または標識された化合物が取り込まれていない。
【０１９１】
Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン
本明細書に記載される脂質含有組成物には，以下の式１：
【化３９】
0005438317.tif 000025
式１
［式中，Ｒ１およびＲ２は，独立してアシル基であり，ｍは１−１０の整数である］
に少なくとも１つのＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンが取り込まれている。
【０１９２】
本明細書において用いる場合，"Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン"との用語およびその同族語は，本明細書に記載される式１に包含されるＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンを表す。同様に，略号ＮωＰＥは，式１に包含されるＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンを表すために用いられ（例えば，Ｎω−ＤＯＰＥ，Ｎω−ＤＳＰＥ，ＮＧ−ＤＯＰＥ等），例えば，特に記載しない限り，ＮＧ−ＰＥは式１のＮ−グルタリルホスファチジルエタノールアミンを表す。
【０１９３】
本明細書に記載される脂質含有組成物（標的化リポソームを含む）中に取り込まれる唯一のホスファチジルエタノールアミンが，式１のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，または式２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル，または式３の標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンであることが意図され，これは以下にさらに詳細に説明する。本明細書において用いる場合，"誘導化されていないホスファチジルエタノールアミン"との用語およびその同族語は，式１，式２または式３に包含されないホスファチジルエタノールアミン，半合成ホスファチジルエタノールアミン，合成ホスファチジルエタノールアミンおよび／またはその誘導体を表す。
【０１９４】
当業者にはよく理解されるように，Ｒ１およびＲ２で表される広範な種類のアシル基を式１において用いることができる。
【０１９５】
ある態様においては，アシル基は，１２−２２個の炭素原子を有する飽和または不飽和脂肪族カルボン酸から誘導される。例示的アシル基としては，限定されないが，ラウリン酸，トリデカン酸，ミリスチン酸，ペンタデカン酸，パルミチン酸，マルガリン酸，ステアリン酸，ノナデカン酸，アラキジン酸，ヘンエイコサン酸，ベヘン酸，２−ラウロレイン酸，５−ラウロレイン酸，１１−ラウロレイン酸，５−ミリストレイン酸，ミリストレイン酸，２−パルミトレイン酸，７−パルミトレイン酸，ｃｉｓ−９−パルミトレイン酸，ｔｒａｎｓ−９−パルミトレイン酸，ペトロセリン酸，ペトロセリジン酸，オレイン酸，エライジン酸，バクセン酸，ゴンドイン酸，ｔｒａｎｓ−ゴンドイン酸，エルカ酸，リノール酸，リノエライジン酸，α−エレオステアリン酸，β−エレオステアリン酸，リノレン酸，シュードエレオステアリン酸，アラキドン酸，エイコサペンタエン酸，またはドコサヘキサエン酸から誘導されるアシル基が挙げられる。
【０１９６】
ある態様においては，アシル基は，１４−１８個の炭素原子を有する飽和または不飽和脂肪族カルボン酸由来である。このタイプの例示的アシル基としては，限定されないが，オレイン酸（１８炭素），パルミチン酸（１６炭素），ステアリン酸（１８炭素），またはミリスチン酸（１４炭素）に由来するものが挙げられる。当業者には理解されるように，対応するアシル基は，それぞれ，オレオイル，パルミトイル，ステアロイル，およびミリストイルである。
【０１９７】
別の態様においては，アシル基は，１４−１８，１４−２０，１４−２２，１６−１８，１６−２０，１６−２２，１８−２０，１８−２２，１２，１４，１６，１８，２０または２２個の炭素を有する飽和または不飽和脂肪族カルボン酸由来である。ある態様においては，アシル基は偶数の炭素を有する飽和または不飽和脂肪族カルボン酸由来である。
【０１９８】
ある態様においては，アシル基はオレイン酸（オレオイル），ステアリン酸（ステアロイル），パルミチン酸（パルミトイル），リノール酸（リノレオイル，１８炭素），またはミリスチン酸（ミリストイル）由来である。別の態様においては，アシル基はオレイン酸（オレオイル）由来である。ある態様においては，アシル基はステアリン酸（ステアロイル）由来である。さらに別の態様においては，アシル基はパルミチン酸（パルミトイル）由来である。別の態様においては，アシル基はミリスチン酸（ミリストイル）由来である。
【０１９９】
ある態様においては，アシル基は，飽和脂肪族カルボン酸，例えば，限定されないが，パルミチン酸（１６炭素），ステアリン酸（１８炭素），またはミリスチン酸（１４炭素）由来である。
【０２００】
別の態様においては，アシル基は不飽和脂肪族カルボン酸，例えば，限定されないが，オレイン酸（オレオイル，１８炭素），リノール酸（リノレオイル，１８炭素）またはリノレン酸（リノレノイル，１８炭素）に由来する。ある態様においては，アシル基リノール酸に由来する。
【０２０１】
ある態様においては，ｍは，１，２，３，４，５，６，７，８，９，または１０である。別の態様においては，ｍは，１−８，１−６，１−５，１−７，１−３，１−２，２−８，２−６，２−５，２−４，２−３，３−４，３−５，または３−６の整数である。ある態様においては，ｍは２−４の整数である。別の態様においては，ｍは１，２または３である。
【０２０２】
ある態様においては，ｍは１−４の整数である。当業者には理解されるように，ｍ＝１は，ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）のマロン酸誘導体に対応し，ｍ＝２，３，または４は，それぞれ，ＰＥのコハク酸，グルタル酸，およびアジピン酸誘導体を表す。ある態様においては，ｍは３（グルタル酸）である。
【０２０３】
ある態様においては，Ｒ１およびＲ２は同じアシル基である。別の態様においては，Ｒ１およびＲ２は異なるアシル基である。ある態様においては，Ｒ１およびＲ２は，オレオイル，ステアロイル，パルミトイルまたはミリストイルである。ある態様においては，Ｒ１およびＲ２はオレオイルである。別の態様においては，Ｒ１およびＲ２はステアロイルである。特定の態様においては，Ｒ１およびＲ２はパルミトイルである。別の態様においては，Ｒ１およびＲ２はミリストイルである。
【０２０４】
ある態様においては，式１のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮ−グルタリル−ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＮＧ−ＤＯＰＥ（すなわち，Ｒ１およびＲ２はオレオイルであり，ｍは３である））である。別の態様においては，これはＮ−グルタリル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＮＧ−ＤＳＰＥ（すなわち，Ｒ１およびＲ２はステアロイルであり，ｍは３である）である。別の態様においては，これはＮ−グルタリル−ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＮＧ−ＤＭＰＥ（すなわち，Ｒ１およびＲ２はミリストイルであり，ｍは３である））である。別の態様においては，これはＮ−グルタリル−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＮＧ−ＤＰＰＥ（すなわち，Ｒ１およびＲ２はパルミトイルであり，ｍは３である））である。別の態様においては，これはＮ−スクシニル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＮＳ−ＤＳＰＥ（すなわち，Ｒ１およびＲ２はステアロイルであり，ｍは２である））である。別の態様においては，これはＮ−アジピニル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＮＡ−ＤＳＰＥ（すなわち，Ｒ１およびＲ２はステアロイルであり，ｍは４である））である。ある態様においては，式１のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮＧ−ＤＯＰＥまたはＮＧ−ＤＳＰＥである。
【０２０５】
Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンの製造
本明細書に記載されるＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは，ホスファチジルエタノールアミンのアミノ基にジカルボン酸を結合させることにより得ることができる。
【０２０６】
本明細書に記載される目的で使用されるリン脂質，例えばホスファチジルエタノールアミンおよびその誘導体は，高純度のものでなければならず，理想的には均一であるべきである。高純度のリン脂質を製造するための既知の方法には，バッファ溶液からの脂質の抽出およびカラムクロマトグラフィーを用いる精製が含まれる。例えば，Ｎ−スクシニルジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンの製造方法は，国際公開ＷＯ９３／０１８２８（ＪＰＡＨ７−５０１３１６）および米国特許５，８０４，５５２および５，５５４，７２８（これらの内容はその全体を本明細書の一部としてここに引用する）に記載されている。これらの製造方法は，反応混合物のシリカゲル６０カラムクロマトグラフィーにより反応混合物からリン脂質誘導体を精製することを含む。ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）をトリエチルアミン触媒を用いて室温で窒素ガス下で無水コハク酸と１６時間反応させる。
【０２０７】
Ｎ−（ω−カルボキシ）アシルアミド−ホスファチジルエタノールアミンリン脂質誘導体の別の製造方法は，日本特許公開ＪＰＡ２００１−２６１６８８に記載されており，これはｐＨ３．５−７．５バッファ溶液を反応混合物に加えた後に液体層を分離することにより精製することを含み，その全体を本明細書の一部としてここに引用する。この場合，ＰＥをトリエチルアミンアルカリ触媒を用いて４℃で１時間無水ジカルボン酸と反応させる。この方法はすべてのホスファチジルエタノールアミン誘導体について有効というわけではない。
【０２０８】
また，ＤＯＰＥ（ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン）は市販されており，または当業者に知られる方法により製造することができる。例えば，簡単には，レシチン（ＡＰＩ出発物質）を化学的に加水分解してグリセロール−ホスホ−コリンを生成し，沈殿によりこれを単離する。次に活性化オレイン酸を用いて脂質をアシル化し，ＤＯＰＣ（ジオレオイル−ホスファチジルコリン）を順相カラムクロマトグラフィーにより単離し，イオン交換カラムを通して精製する。ＤＯＰＥは，ＤＯＰＣから，ホスホリパーゼＤを用いてエタノールアミンと反応させることにより製造することができる。
【０２０９】
Ｎ−（ω−カルボキシ）アシルアミド−ホスファチジルエタノールアミンリン脂質誘導体は，例えば，米国特許４，５３４，８９９（その全体を本明細書の一部としてここに引用する）に記載されるようにして製造することもできる。簡単には，無水ジカルボン酸をリン脂質，例えば，ホスファチジルエタノールアミンと反応させて，ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンを得る。
【０２１０】
Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル
本明細書に記載されるＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは，以下の式２：
【化４０】
0005438317.tif 000026
［式中，Ｒ３およびＲ４は，独立してアシル基であり，ｎは１−１０の整数である］
で表される。
【０２１１】
本明細書において用いる場合，"Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル"との用語およびその同族語は，本明細書に記載される式２に包含されるＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルを表す。同様に，略号ＳｕｃｃＮωＰＥは，式２に包含されるＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルを表すために用いることができ（例えば，ＳｕｃｃＮω−ＤＯＰＥ，ＳｕｃｃＮω−ＤＳＰＥ，ＳｕｃｃＮＧ−ＤＯＰＥ等），例えば，ＮＨＳ−ＮＧ−ＰＥは，特に記載しないかぎり，ＮＨＳとの反応により形成される式２のＮ−グルタリルホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルを表す。
【０２１２】
Ｒ３およびＲ４で表される広範な種類のアシル基を用いることができ，これは当業者にはよく理解され，Ｒ１およびＲ２について上述したものと同様である。本明細書において特に明記しないかぎり，式１に関してアシル基について本明細書に提供される記述（例えば，Ｒ１およびＲ２），特に"Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン"と題する節の記載は，式２に関してアシル基についても同じく適用されることが明示的に意図される（例えば，Ｒ３およびＲ４）。
【０２１３】
ある態様においては，Ｒ３およびＲ４は同じアシル基である。別の態様においては，Ｒ３およびＲ４は異なるアシル基である。ある態様においては，Ｒ３およびＲ４は，オレオイル，ステアロイル，パルミトイルまたはミリストイルである。ある態様においては，Ｒ３およびＲ４はオレオイルである。別の態様においては，Ｒ３およびＲ４はステアロイルである。ある態様においては，Ｒ３およびＲ４はパルミトイルである。別の態様においては，Ｒ３およびＲ４はミリストイルである。
【０２１４】
ある態様においては，ｎは，１，２，３，４，５，６，７，８，９，または１０である。別の態様においては，ｎは，１−８，１−６，１−５，１−７，１−３，１−２，２−８，２−６，２−５，２−４，２−３，３−４，３−５，または３−６の整数である。ある態様においては，ｎは２−４の整数である。別の態様においては，ｎは１，２または３である。
【０２１５】
ある態様においては，ｎは１−４の整数である。当業者には理解されるように，ｎ＝１はホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）のマロン酸誘導体に対応し，ｎ＝２，３，または４は，それぞれ，ＰＥのコハク酸，グルタル酸，およびアジピン酸誘導体を表す。ある態様においては，ｎは３（グルタル酸）である。
【０２１６】
ある態様においては，式２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは，Ｎ−グルタリル−ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＮＧ−ＤＯＰＥ）のスクシンイミジルエステルである。別の態様においては，これはＮ−グルタリル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＮＧ−ＤＳＰＥ）のスクシンイミジルエステルである。ある態様においては，式２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは，ＮＧ−ＤＯＰＥまたはＮＧ−ＤＳＰＥのスクシンイミジルエステルである。
【０２１７】
ある態様においては，式２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは，Ｎ−グルタリル−ジオレオイルホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル（ＳｕｃｃＮＧ−ＤＯＰＥ（すなわち，Ｒ３およびＲ４はオレオイルであり，ｎは３である））である。別の態様においては，これはＮ−グルタリル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル（ＳｕｃｃＮＧ−ＤＳＰＥ（すなわち，Ｒ３およびＲ４はステアロイルであり，ｎは３である）である。別の態様においては，これはＮ−グルタリル−ジミリストイルホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル（ＳｕｃｃＮＧ−ＤＭＰＥ（すなわち，Ｒ３およびＲ４はミリストイルであり，ｎは３である））である。別の態様においては，これはＮ−グルタリル−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル（ＳｕｃｃＮＧ−ＤＰＰＥ（すなわち，Ｒ３およびＲ４はパルミトイルであり，ｎは３である））である。別の態様においては，これはＮ−スクシニル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル（ＳｕｃｃＮＳ−ＤＳＰＥ（すなｗち，Ｒ３およびＲ４はステアロイルであり，ｎは２である））である。別の態様においては，これはＮ−アジピニル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル（ＳｕｃｃＮＡ−ＤＳＰＥ（すなわち，Ｒ３およびＲ４はステアロイルであり，ｎは４である））である。ある態様においては，式２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルはＳｕｃｃＮＧ−ＤＯＰＥまたはＳｕｃｃＮＧ−ＤＳＰＥである。
【０２１８】
ある態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮω−ＤＯＰＥであり，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルはＳｕｃｃＮω−ＤＯＰＥである。別の態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮω−ＤＳＰＥであり，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルはＳｕｃｃＮω−ＤＳＰＥである。さらに別の態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮω−ＤＯＰＥであり，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルはＳｕｃｃＮω−ＤＳＰＥである。ある別の態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮω−ＤＳＰＥであり，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルはＳｕｃｃＮω−ＤＯＰＥである。これらの態様のあるものにおいては，スクシンイミジルエステルはＮＨＳ（例えば，ＮＨＳ−Ｎω−ＤＯＰＥ，ＮＨＳ−Ｎω−ＤＳＰＥ等）であることができる。
【０２１９】
ある態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮＧ−ＤＯＰＥであり，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルはＳｕｃｃＮＧ−ＤＯＰＥである。別の態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮＧ−ＤＳＰＥであり，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルはＳｕｃｃＮＧ−ＤＳＰＥである。さらに別の態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮＧ−ＤＯＰＥであり，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルはＳｕｃｃＮＧ−ＤＳＰＥである。ある別の態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮＧ−ＤＳＰＥであり，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルはＳｕｃｃＮＧ−ＤＯＰＥである。これらの態様のあるものにおいては，スクシンイミジルエステルはＮＨＳ（例えば，ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥ，ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＳＰＥ等）であることができる。
【０２２０】
Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルの製造
本明細書に記載されるＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは，当該技術分野において知られ本明細書に記載されるようにして製造されるＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンを，本明細書に記載されるようにして誘導化することにより得ることができる。Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルの製造もまた，以下に，例えば実施例においてより詳細に説明されている。当業者は，本明細書に提供される教示を考慮して，本明細書に記載される方法を改変することも可能である。
【０２２１】
本発明のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルを製造する方法は以下のとおりである：本明細書において式２で表されるＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン１当量に，約０．７−１．３当量のＮＨＳを加え，これを活性水素を有しない有機溶媒に溶解させる。次に混合物を約０．７−１．３当量のカルボジイミド化合物と０−５０℃で約１−７日間反応させる。
【０２２２】
例えば，活性水素を有しない有機溶媒としては，限定されないが，エステル（例えば，酢酸エチル，酢酸ブチル等），脂肪族炭化水素（例えば，ヘキサン，ヘプタン等），芳香族炭化水素（例えば，トルエン，キシレン等），ハロゲン化炭化水素（例えば，クロロホルム，ジクロロメタン，ジクロロエタン等），エーテル（例えば，ＴＨＦ，ジオキサン，ジエチルエーテル等），環状炭化水素（例えば，シクロヘキサン等），ＤＭＦおよびＤＭＳＯが挙げられる。有機溶媒は脱水してもよい。
【０２２３】
化合物がカルボジイミド基（−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−）を有する限り，広範な種類のカルボジイミド化合物を用いることができる。例えば，用いることができるカルボジイミド化合物としては，限定されないが，カルボジイミド基，例えば，Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル−カルボジイミド（ＤＣＣ），Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−カルボジイミド，Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）等が挙げられる。ある態様においては，ＤＣＣが用いられ，別の態様においてはＥＤＣが用いられる。
【０２２４】
上述の反応は，副生成物の生成を最小限にするかまたは排除する条件下で行うこともできる。望ましくない副生成物としては，尿素化合物（例えば，Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルウレア，Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）ウレア等），Ｎ−アシル化尿素化合物，無水カルボン酸化合物および５−オキサゾロン化合物が挙げられる。副生成物の形成に不利なまたはこれを最小限にする条件および材料としては，１）カルボジイミド化合物を有機溶媒にゆっくり溶解させる，２）反応を０℃以下で行って反応による発熱を防止する，などが挙げられる。反応を最適化し，副生成物の生成を最小限にするための他の手段は，特に本明細書に提供される教示を考慮することにより，当業者には理解されるであろう。
【０２２５】
カルボジイミド化合物を溶解することができる有機溶媒は，上述した活性水素を含まない有機溶媒と同じである。カルボジイミドを溶解するために用いられる溶媒と活性水素を含まない有機溶媒とは，同じであっても異なっていてもよい。
【０２２６】
反応の進行は，薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）システム，高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ），および／または蒸着光散乱検出器によりモニターすることができる。反応の進行をモニターするための他の方法も当業者に知られている。
【０２２７】
精製は，シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより，クロロホルムとメタノールとの混合物を用いて行うことができる。別の精製方法は当業者に知られている。
【０２２８】
完全に脱水した有機溶媒中では，および強酸または強アルカリがない条件では，本明細書に記載されるＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは通常は安定である。
【０２２９】
標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン
標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンには，第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化リガンドが含まれ，ここで，第２のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式３：
【化４１】
0005438317.tif 000027
［式中，Ｒ５およびＲ６は，独立してアシル基であり，ｐは１−１０の整数である］
で表される。
【０２３０】
本明細書において用いる場合，"標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン"との用語およびその同語源の語は，式３に包含され，本明細書に説明されるように標的化因子で修飾されているＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンを表す。同様に，ＴＦ−ＮωＰＥとの略号は，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン（例えば，ＴＦ−Ｎω−ＤＯＰＥ，ＴＦ−Ｎω−ＤＳＰＥ，ＴＦ−ＮＧ−ＤＯＰＥ等）を表すために用いることができ，例えば，ＴＦ−ＮＧ−ＰＥは式３のＮ−グルタリルホスファチジルエタノールアミンに連結された標的化リガンドを表す。
【０２３１】
当業者にはよく理解されるように，そしてＲ１およびＲ２について上述されるように，Ｒ５およびＲ６により表される広範な種類のアシル基を用いることができる。特に記載しない限り，式１に関して本明細書に提供されるアシル基（例えば，Ｒ１およびＲ２）の説明は，特に，上述の"Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン"と題する節における説明は，式３に関するアシル基（例えば，Ｒ５およびＲ６）にも等しく適用されることが明示的に意図される。
【０２３２】
ある態様においては，Ｒ５およびＲ６は同じアシル基であり，別の態様においては，Ｒ５およびＲ６は異なるアシル基である。ある態様においては，Ｒ５およびＲ６は，オレオイル，ステアロイル，パルミトイルまたはミリストイルである。ある態様においては，Ｒ５およびＲ６はオレオイルである。別の態様においては，Ｒ５およびＲ６はステアロイルである。ある態様においては，Ｒ５およびＲ６はパルミトイルである。別の態様においては，Ｒ５およびＲ６はミリストイルである。
【０２３３】
ある態様においては，ｐは，１，２，３，４，５，６，７，８，９，または１０である。別の態様においては，ｐは，１−８，１−６，１−５，１−７，１−３，１−２，２−８，２−６，２−５，２−４，２−３，３−４，３−５，または３−６の整数である。ある態様においては，ｐは２−４の整数である。別の態様においては，ｐは１，２，または３である。
【０２３４】
ある態様においては，ｐは１−４の整数である。当業者には理解されるように，ｐ＝１はホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）のマロン酸誘導体に対応し，ｐ＝２，３，または４は，それぞれ，ＰＥのコハク酸，グルタル酸，およびアジピン酸誘導体を表す。ある態様においては，ｐは３（グルタル酸）である。
【０２３５】
ある態様においては，式３の標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは，標的化因子で修飾されたＮ−グルタリル−ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＴＦ−ＮＧ−ＤＯＰＥ）である。別の態様においては，これは標的化因子で修飾されたＮ−グルタリル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＴＦ−ＮＧ−ＤＳＰＥ）である。ある態様においては，式３の標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＴＦ−ＮＧ−ＤＯＰＥまたはＴＦ−ＮＧ−ＤＳＰＥである。
【０２３６】
ある態様においては，式３のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮ−グルタリル−ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＮＧ−ＤＯＰＥ（すなわち，Ｒ５およびＲ６はオレオイルであり，ｐは３である））である。別の態様においては，これはＮ−グルタリル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＮＧ−ＤＳＰＥ（すなわち，Ｒ５およびＲ６はステアロイルであり，ｐは３である）である。別の態様においては，これはＮ−グルタリル−ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＮＧ−ＤＭＰＥ（すなｗち，Ｒ５およびＲ６はミリストイルであり，ｐは３である））である。別の態様においては，これはＮ−グルタリル−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＮＧ−ＤＰＰＥ（すなわち，Ｒ５およびＲ６はパルミトイルであり，ｐは３である））である。別の態様においては，これはＮ−スクシニル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＮＳ−ＤＳＰＥ（すなわち，Ｒ５およびＲ６はステアロイルであり，ｐは２である））である。別の態様においては，これはＮ−アジピニル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＮＡ−ＤＳＰＥ（すなわち，Ｒ５およびＲ６はステアロイルであり，ｐは４である））である。ある態様においては，式３のＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮＧ−ＤＯＰＥまたはＮＧ−ＤＳＰＥである。
【０２３７】
ある態様においては，標的化リガンドはトランスフェリン（Ｔｆ）であり，これは以下に詳細に説明され，トランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン中に取り込まれる，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは本明細書に記載される式３のものである。
【０２３８】
ある態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮω−ＤＯＰＥであり，標的化リガンドはトランスフェリン（Ｔｆ）であり，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＴｆ−Ｎω−ＤＯＰＥである。別の態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮω−ＤＳＰＥであり，標的化リガンドはトランスフェリン（Ｔｆ）であり，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＴｆ−Ｎω−ＤＳＰＥである。さらに別の態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮω−ＤＯＰＥであり，標的化リガンドはトランスフェリン（Ｔｆ）であり，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＴｆ−Ｎω−ＤＳＰＥである。ある別の態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮω−ＤＳＰＥであり，標的化リガンドはトランスフェリン（Ｔｆ）であり，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＴｆ−Ｎω−ＤＯＰＥである。これらの態様のあるものにおいては，ｍは３であることができ，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは式１にしたがうＮＧ−ＰＥである。
【０２３９】
ある態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮＧ−ＤＯＰＥであり，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＴＦ−ＮＧ−ＤＯＰＥである。別の態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮＧ−ＤＳＰＥであり，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＴＦ−ＮＧ−ＤＳＰＥである。さらに別の態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮＧ−ＤＯＰＥであり，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＴＦ−ＮＧ−ＤＳＰＥである。ある別の態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮＧ−ＤＳＰＥであり，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＴＦ−ＮＧ−ＤＯＰＥである。
【０２４０】
ターゲティング因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは，ＳｕｃｃＮωＰＥから，標的化リガンドおよび他の反応物との反応により製造することができ，これは本明細書にさらに詳細に記載される。ＴＦ−ＮωＰＥは，本明細書に記載される脂質含有組成物の他の脂質成分と混合する前に製造してもよく（そして任意に精製してもよく），または脂質含有組成物中に取り込まれている予め製造したＳｕｃｃＮωＰＥの反応からその場で製造してもよい。
【０２４１】
追加の脂質成分
本明細書に記載される脂質含有組成物は，本明細書に記載されるＮωＰＥ，ＳｕｃｃＮωＰＥおよび／またはＴＦ−ＮωＰＥに加えて，１またはそれ以上の追加の脂質成分をも含む。種々の追加の脂質成分を用いることができるが，"追加の脂質成分"との用語は，式１，２または３に示されるような，誘導化されていないホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）またはＰＥの誘導体を含むことを意図しない。ある態様においては，１またはそれ以上の追加の脂質成分は，リン脂質または１またはそれ以上のリン脂質であることができる。ある態様においては，１またはそれ以上の追加の脂質成分は，少なくとも２つの中性脂質を含むことができる。別の態様においては，１またはそれ以上のリン脂質が存在していてもよく，任意に"追加の脂質"（これはリン脂質ではない）が存在していてもよい。種々の中性脂質を用いることができるが，少なくとも２つの中性脂質は式１，２または３におけるような非誘導化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）またはＰＥの誘導体を含まないことが意図される。本明細書において用いる場合，"リン脂質"との用語は，式１，２または３におけるようなＰＥまたはその誘導体を含むことは意図されない。同様に，"追加の脂質"との用語は，式１，２または３におけるようなＰＥまたはその誘導体を含まず，他のリン脂質も含まない。
【０２４２】
特定の態様においては，本明細書に記載される脂質含有組成物および処方物において，リン脂質を用いることができる。例えば，１種類またはそれ以上の，少なくとも２種類の，少なくとも３種類の，少なくとも４種類のリン脂質；または，２，３，または４種類のリン脂質を用いることができる。特定の態様においては，１種類のリン脂質が存在する。ある態様においては，組成物の脂質成分は１種類のリン脂質，ＮωＰＥ，およびＳｕｃｃＮωＰＥ（または標的化因子との反応が行われた場合にはＴＦで修飾されたＮωＰＥ）に限定される。
【０２４３】
特定の態様においては，本明細書に記載される脂質含有組成物および処方物において，２またはそれ以上の中性脂質を用いてもよい。例えば，少なくとも２種類，少なくとも３種類，少なくとも４種類の中性脂質；または，２，３，または４種類の中性脂質を用いることができる。特定の態様においては，２種類の中性脂質が存在する。ある態様においては，組成物の脂質成分は，２つの中性脂質，すなわちＮωＰＥおよびＳｕｃｃＮωＰＥ（または標的化因子との反応が行われた場合にはＴＦで修飾されたＮωＰＥ）に限定される。
【０２４４】
追加の脂質成分がリン脂質を含む態様においては，リン脂質はホスファチジルコリンであってもよく，これには，天然に生ずる，半合成の，または合成のホスファチジルコリン（例えば，ＤＳＰＣ，ＤＭＰＣ等）が含まれる。ある態様においては，ホスファチジルコリンは天然に生じないホスファチジルコリンである（例えば，卵ホスファチジルコリンではない）。特定の態様においては，ホスファチジルコリンはアシルホスファチジルコリン（例えば，ＤＭＰＣ，ＤＰＰＣ，ＰＯＰＣ，ＤＳＰＣ等）である。ある態様においては，リン脂質はカチオン性である。別の態様においては，リン脂質はアニオン性である。さらに別の態様においては，リン脂質は中性である。特定の態様においては，１またはそれ以上のリン脂質はアニオン性ではなく，別の態様においては，１またはそれ以上のリン脂質はカチオン性ではない。２以上のリン脂質が存在する態様においては，アニオン性および中性脂質を含めることができる。例示的リン脂質としては，限定されないが，ホスファチジルコリン（ＰＣ），ホスファチジン酸，ピロホスファチジルセリン，ホスファチジルグリセロール，等が挙げられる。ある態様においては，脂質含有組成物はホスファチジルセリンまたはホスファチジルグリセロールを含まない。
【０２４５】
ある態様においては，少なくとも２つの中性脂質の少なくとも１つはリン脂質であることができる。ある態様においては，リン脂質はホスファチジルコリン，例えば，天然に生ずる，半合成のまたは合成のホスファチジルコリン（例えば，ＤＳＰＣ，ＤＭＰＣ等）であってもよい。ある態様においては，ホスファチジルコリンは天然に生じないホスファチジルコリンである（例えば，卵ホスファチジルコリンではない）。特定の態様においては，ホスファチジルコリンはアシルホスファチジルコリン（例えば，ＤＭＰＣ，ＤＰＰＣ５ＰＯＰＣ，ＤＳＰＣ等）である。
【０２４６】
ある態様においては，少なくとも２つの中性脂質の少なくとも１つは放射性同位体（例えば，３Ｈ，１４Ｃ，１２５Ｉ，１３１Ｉ等）の成分を取り込んだ，官能成分（例えば，蛍光成分等）を有するコレステロールまたはコレステロール誘導体（例えば，コレステロールプルラン，正に荷電したコレステロール（例えば，ＤＣ−Ｃｈｏｌ））であることができる。
【０２４７】
脂質含有組成物が１またはそれ以上のリン脂質を含む態様においては，組成物はさらに，追加の中性の非リン脂質，例えば，上述のコレステロールまたはコレステロール誘導体を追加の脂質として含んでいてもよい。
【０２４８】
本明細書に記載される脂質含有組成物中で用いるためのリン脂質（非ＰＥ）としては，合成の，半合成のおよび天然に生ずるリン脂質が挙げられる。例示的リン脂質としては，限定されないが，ホスファチジルコリン（ＰＣ），ホスファチジン酸，ホスファチジルセリン，ホスファチジルグリセロール等が挙げられる。別の態様においては，１またはそれ以上のリン脂質はホスファチジルコリン（ＰＣ）またはホスファチジン酸を含み，ホスファチジルセリンまたはホスファチジルグリセロールを含まない。
【０２４９】
ある態様においては，リン脂質はホスファチジルコリンである。ある態様においては，ホスファチジルコリンは，例えば，ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ），ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ），ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ），パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ），卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ），水素添加大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）等であることができる。特定の態様においては，少なくとも１つのリン脂質はホスファチジルコリンである。これらの態様のあるものにおいては，ホスファチジルコリンはＤＭＰＣである。別の態様においては，ホスファチジルコリンはＤＳＰＣである。別の態様においては，ホスファチジルコリンはＤＰＰＣである。別の態様においては，ホスファチジルコリンはＰＯＰＣである。別の態様においては，ホスファチジルコリンはＥＰＣである。別の態様においては，ホスファチジルコリンはＨＳＰＣである。ある態様においては，１つのリン脂質が含まれ，これはＤＭＰＣ，ＤＳＰＣ，ＤＰＰＣ，ＰＯＰＣ，ＥＰＣまたはＨＳＰＣである。特定の態様においては，脂質含有組成物が単一のリン脂質（非ＰＥリン脂質）を含む場合，リン脂質はＤＭＰＣである。別の態様においては，脂質含有組成物が単一のリン脂質（非ＰＥリン脂質）を含む場合，リン脂質はＤＳＰＣである。別の態様においては，脂質含有組成物が単一のリン脂質（非ＰＥリン脂質）を含む場合，リン脂質はＤＰＰＣである。別の態様においては，脂質含有組成物が単一のリン脂質（非ＰＥリン脂質）を含む場合，リン脂質はＰＯＰＣである。別の態様においては，脂質含有組成物が単一のリン脂質（非ＰＥリン脂質）を含む場合，リン脂質はＥＰＣである。別の態様においては，脂質含有組成物が単一のリン脂質（非ＰＥリン脂質）を含む場合，リン脂質はＨＳＰＣである。
【０２５０】
ある態様においては，追加の脂質成分は，少なくとも１つのリン脂質，および任意に追加の脂質，例えばコレステロールまたはコレステロール誘導体を含むことができる。特定の態様においては，追加の脂質成分は単一のリン脂質およびコレステロールである。ある態様においては，追加の脂質成分は，少なくとも１つのホスファチジルコリンおよびコレステロールを含む。特定の態様においては，追加の脂質成分は，単一のホスファチジルコリンおよびコレステロールを含む。ある態様においては，コレステロールが含まれる場合，リン脂質は，ＤＳＰＣ，ＤＭＰＣ，ＤＰＰＣ，ＰＯＰＣ，ＥＰＣまたはＨＳＰＣである。ある態様においては，追加の脂質成分は，コレステロールおよびＤＭＰＣを含む。別の態様においては，追加の脂質成分は，コレステロールおよびＤＳＰＣを含む。ある態様においては，追加の脂質成分は，コレステロールおよびＤＭＰＣまたはＤＳＰＣの１つである。ある態様においては，追加の脂質成分は，コレステロールおよびＤＭＰＣである。別の態様においては，追加の脂質成分はコレステロールおよびＤＳＰＣである。別の態様においては，追加の脂質成分は，コレステロールおよびＤＰＰＣを含む。別の態様においては，追加の脂質成分は，コレステロールおよびＰＯＰＣを含む。別の態様においては，追加の脂質成分は，コレステロールおよびＥＰＣを含む。別の態様においては，追加の脂質成分は，コレステロールおよびＨＳＰＣを含む。ある態様においては，追加の脂質成分は，コレステロールおよびＤＭＰＣ，ＤＳＰＣ，ＤＰＰＣ，ＰＯＰＣ，ＥＰＣまたはＨＳＰＣの１つである。ある態様においては，追加の脂質成分は，コレステロールおよびＤＭＰＣである。別の態様においては，追加の脂質成分は，コレステロールおよびＤＳＰＣである。別の態様においては，追加の脂質成分は，コレステロールおよびＤＰＰＣである。別の態様においては，追加の脂質成分は，コレステロールおよびＰＯＰＣである。別の態様においては，追加の脂質成分は，コレステロールおよびＥＰＣである。別の態様においては，追加の脂質成分は，コレステロールおよびＨＳＰＣである。
【０２５１】
特定の態様においては，１つのリン脂質が存在し，リン脂質はＨＳＰＣまたはＥＰＣではない。
【０２５２】
特定の態様においては，１またはそれ以上のリン脂質が存在する。ある態様においては，１またはそれ以上のリン脂質はホスファチジルコリンを含む。特定の態様においては，１またはそれ以上のリン脂質およびコレステロール（またはコレステロール誘導体）が含まれる。ある態様においては，リン脂質はホスファチジルコリンであり，組成物はさらにコレステロール（またはコレステロール誘導体）を含む。特定の態様においては，ホスファチジルコリンは，飽和脂肪酸（例えば，ＤＭＰＣ，ＤＳＰＣまたはＤＰＰＣ）の成分を含むホスファチジルコリンである。ある態様においては，ホスファチジルコリンは卵ホスファチジルコリンではない。特定の態様においては，ホスファチジルコリンはＨＳＰＣではない。
【０２５３】
特定の態様においては，２つの中性脂質が存在し，ある態様においては，２つの中性脂質はコレステロール（またはコレステロール誘導体）およびホスファチジルコリンである。特定の態様においては，ホスファチジルコリンは飽和脂肪酸（例えば，ＤＭＰＣ，ＤＳＰＣまたはＤＰＰＣ）の成分を含むホスファチジルコリンである。ある態様においては，ホスファチジルコリンは卵ホスファチジルコリンではない。
【０２５４】
本明細書に記載され，当業者に知られる追加の脂質成分は，多くの供給元，例えば，Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．（Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＫ），Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｌｉｐｉｄ  Ｉｎｃ．（Ｃａｎａｄａ），Ｌｉｐｏｉｄ  ＧｍｂＨ（Ｇｅｒｍａｎｙ），ＮＯＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｊａｐａｎ），Ｎｉｐｐｏｎ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ（Ｊａｐａｎ）から市販されている。
【０２５５】
薬剤
広範な種類の薬剤，例えば化合物または遺伝子を本発明の脂質含有組成物に含ませることができる。ある態様においては，薬剤は，抗癌剤，例えば，リポソーム中に封入するのに適した抗癌剤であってもよい。本明細書に記載される脂質含有組成物およびその処方物に含有させるべき薬剤の量は，本明細書に提供される教示を参照し，選択された薬剤および組成物または処方物の意図される用途に応じて，薬剤および治療する個体の両方に特有の因子を考慮して，当業者が容易に決定することができ，これは本明細書にさらに詳細に記載される。
【０２５６】
ある態様においては，薬剤は，核酸，例えば，抗癌特性を有する配列をコードする核酸であってもよい。例えば，限定されないが，アンチセンスオリゴヌクレオチド，リボザイム等が挙げられる。
【０２５７】
ある態様においては，抗癌剤は，当業者および開業医に知られる細胞毒性薬剤であることができる。例示的抗癌剤としては，トポイソメラーゼＩ阻害剤，ビンカアルカロイド，アルキル化剤（白金化合物等），タキサンおよび当業者に知られる他のものが挙げられる。
【０２５８】
ある態様においては，抗癌剤は，トポイソメラーゼＩ阻害剤，例えば，限定されないが，トポテカン，イリノテカン等であってもよい。
【０２５９】
抗癌剤はまた，ビンカアルカロイド，例えば，ビンクリスチン，ビンブラスチン，ビンレウロシン，ビンロジシン，ビノレルビン，ビンデシン等であってもよい。
【０２６０】
さらに，抗癌剤はまた白金化合物であってもよい。白金化合物の非限定的例としては，ビプラチン，シスプラチン，カルボプラチン，オルマプラチン，オキザリプラチン，ゼニプラチン，エンロプラチン，ロバプラチン，スピロプラチン等が挙げられる。
【０２６１】
オキザリプラチン（トランス−１−１，２−ジアミノシクロヘキサンの白金（ＩＩ）シス−オキサラト錯体）は，下記の式で表される構造を有する白金，より詳細には有機白金の錯体である。オキザリプラチンはまた下記のものとしても知られる：ジアミノシクロヘキサン白金，ＤＡＣＨ−白金，およびｃｉｓ−［（ｌＲ，２Ｒ）−１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ’］［オキサラト（２）−０，０’］白金（Ｃ８Ｈ１４Ｎ２Ｏ４Ｐｔ；ＭＷ３９７．４ｇ／ｍｏｌ）。先に記載したように，オキザリプラチンはＥｌｏｘａｔｉｎ（商標）の活性薬理成分である。
【化４２】
0005438317.tif 000028
【０２６２】
オキザリプラチンは，シスプラチンと類似の治療活性を有し，腎毒性および催吐性（嘔吐）が比較的低いため，抗腫瘍剤として有用である。オキザリプラチンの製造方法は当該技術分野においてよく知られている（例えば，ＪＰ−Ａ−９−４０６８５；米国特許４，１６９，８４６，５，３３８，８７４；５，９５９，１３３；５，２９８，６４２；および５，２９０，９６１（これらの開示はその全体を本明細書の一部としてここに引用する）。オキザリプラチンは，Ｃｈａｎｅｙ  ＳＧら"Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｏｆ  ｃｉｓｐｌａｔｉｎ−ａｎｄ  Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ−ＤＮＡ  ａｄｄｕｃｔｓ．"Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｏｎｃｏｌ  Ｈｅｍａｔｏｌ．（２００５）５３：３−１１（その全体を本明細書の一部としてここに引用する）にも記載されている。
【０２６３】
ある態様においては，リポソーム中に封入されるオキザリプラチンの濃度は約１ｍｇ／ｍｌ，例えば約０．８ｍｇ／ｍｌである。
【０２６４】
一般に，本発明のリポソーム組成物は，約１−約５０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および約１−約１５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，例えば，約１０−約５０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および１０−約１５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質を含む。
【０２６５】
ある態様においては，組成物は，約１−約４５μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約１−約４０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約１−約３５μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約１−約３０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約１−約２５μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約１−約２０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約１−約１５μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約１−約１０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約１−約５μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約５−約５０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約５−約４５μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約５−約３５μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約５−約２５μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約５−約２０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約５−約１５μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約５−約１０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約１μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約２μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約４μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約５μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約１０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約１５μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約２０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約３０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，約４０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質，または約５０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質を含む。
【０２６６】
ある態様においては，組成物は，約１−約１４５μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１−約１２０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１−約１１５μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１−約１００μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１−約９０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１−約７０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１−約６０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１−約５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１−約２５μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１０−約１５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１０−約１４０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１０−約１２５μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１０−約１００μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１０−約８０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１０−約５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１０−約２５μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約５μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約２５μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約４０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約７０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１００μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１２０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，約１４０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質，または約１５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質を含む。
【０２６７】
ある態様においては，約０．５−約５０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および約１−約１５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質である。ある態様においては，約５−約５０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および約１０−約１００μｇのＴＦ／ｍｇである。ある態様においては，約２−約５０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および約５−約１５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質；約３−約５０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および約５−約１５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質；約４−約５０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および約５−約１５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質；約２−約４０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および約５−約１５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質；約３−約４０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および約５−約１５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質；約４−約４０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および約５−約１５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質；約２−約５０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および約１０−約１５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質；約３−約５０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および約１０−約１５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質；約４−約５０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および約１０−約１５０μｇのＴＦ／ｍｇ脂質；約５−約５０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および約５−約１００μｇのＴＦ／ｍｇ脂質；約５−約５０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および約５−約１００μｇのＴＦ／ｍｇ脂質；または約０．５−約５０μｇのオキザリプラチン／ｍｇ脂質および約５−約１００μｇのＴＦ／ｍｇ脂質である。
【０２６８】
ある態様においては，リポソーム処方物中のオキザリプラチン濃度は０．８＋／−１０％ｍｇ／ｍｌである。
【０２６９】
ある態様においては，薬剤がオキザリプラチンである場合，オキザリプラチンは，溶液（例えば，水性溶液）に溶解することができる。ある態様においては，溶液は糖（例えば，トレハロース，マルトース，スクロース，ラクトース，マンノース，マンニトール，グリセロール，デキストロース，フルクトース等）を含む。糖の濃度は数パーセントであることができる。例えば，糖濃度（ｖ／ｖ）は，約０．１−１２％；０．５−１２％，１％−１２％，２％−８％，２％−６％，２％−５％，２％−４％，２％−５％，２％−６％，２％−８％，２％−９％，２％−１０％，４％−１０％，４％−９％，４％−８％，４％−６％，３％−４％，約２％，約３％，約４％，約５％，約６％，約７％，約８％，約９％または約１０％である。ある態様においては，溶液は糖を含み，水性である。オキザリプラチンが溶解している溶液が別の成分，例えば当業者に知られるものをも含むことが意図される。
【０２７０】
ある態様においては，糖濃度は，約５％，約７％，約８％，約９％または約１０％である。別の態様においては，糖濃度は，約５％−約１０％である。ある態様においては，糖はデキストロースであり，オキザリプラチン溶液中のデキストロースの濃度は約５％である。ある態様においては，糖はデキストロースであり，オキザリプラチン溶液中のデキストロースの濃度は約９％である。ある態様においては，糖はスクロースであり，オキザリプラチン溶液中のスクロースの濃度は約９％である。ある態様においては，糖はスクロースであり，オキザリプラチン溶液中のスクロースの濃度は約１０％である。
【０２７１】
ある態様においては，溶液中の糖の濃度は，例えば，約５０ｍｇ／ｍｌ−約１５０ｍｇ／ｍｌ，約５０ｍｇ／ｍｌ−約１３０ｍｇ／ｍｌ，約５０ｍｇ／ｍｌ−約１２０ｍｇ／ｍｌ，約５０ｍｇ／ｍｌ−約１００ｍｇ／ｍｌ，約８０ｍｇ／ｍｌ−約１００ｍｇ／ｍｌ，約９０ｍｇ／ｍｌ−約１５０ｍｇ／ｍｌ，約９０ｍｇ／ｍｌ−約１３０ｍｇ／ｍｌ，約６０ｍｇ／ｍｌ，約８０ｍｇ／ｍｌ，約９０ｍｇ／ｍｌ，約１００ｍｇ／ｍｌ，約１１０ｍｇ／ｍｌ，約１０５ｍｇ／ｍｌ，約１２０ｍｇ／ｍｌ，または約１４０ｍｇ／ｍｌであることができる。
【０２７２】
溶液はまた，当業者に知られる他の成分，例えば，限定されないが，塩，バッファ，糖アルコール等を含むことができる。ある態様においては，オキザリプラチンが溶解している溶液は，リン酸ナトリウム（例えば，一塩基および／または二塩基リン酸ナトリウム）を含むことができる。
【０２７３】
ある態様においては，リン酸ナトリウムの濃度は，約５−約１５ｍＭであることができる。例えば，約５−約１２ｍＭ，約５−約１０ｍＭ，約５−約７ｍＭ，約７−約１２ｍＭ，約７−約１５ｍＭ，約９−約１２ｍＭ，約５ｍＭ，約７ｍＭ，約１０ｍＭ，約１２ｍＭまたは約１５ｍＭであることができる。
【０２７４】
ある態様においては，糖溶液はさらに約１．０−約１．５ｍｇ／ｍｌのリン酸ナトリウムを含むことができる。例えば，約１．２−約１．５ｍｇ／ｍｌ，１．０−約１．７ｍｇ／ｍｌ，１．０−約２ｍｇ／ｍｌ，１．０−約２．５ｍｇ／ｍｌ，１．０−約３ｍｇ／ｍｌ，０．５−約３．５ｍｇ／ｍｌリン酸ナトリウムを含むことができる。
【０２７５】
ある態様においては，溶液のｐＨは，約６．５−約７．５，約６．７−約７．５，約７−約７．５，約７，約７．５，約６．８，または約６．５であることができる。
【０２７６】
ある態様においては，薬剤はオキザリプラチンであり，約９％スクロースの溶液中に含まれる。ある態様においては，薬剤はオキザリプラチンであり，約９％スクロースの溶液中に約１ｍｇ／ｍｌのオキザリプラチン濃度で含まれる。ある態様においては，薬剤はオキザリプラチンであり，約１０５ｍｇ／ｍｌスクロースの溶液中に含まれる。ある態様においては，薬剤はオキザリプラチンであり，約１０５ｍｇ／ｍｌスクロースの溶液中に含まれ，リポソーム溶液中のオキザリプラチン濃度は約１ｍｇ／ｍｌである。これらの態様のあるものにおいては，溶液はさらにリン酸ナトリウムを含む。ある態様においては，オキザリプラチンはリポソーム溶液中約０．８＋／−１０％ｍｇ／ｍｌの濃度である。
【０２７７】
標識された化合物
種々の標識された化合物もまた，本発明の脂質含有組成物に含めることができる。一般に，標識された化合物は，インビボ診断方法を実施するのに有用な薬剤である。
【０２７８】
本明細書に記載される薬剤の取り込みおよび使用に関しては，本明細書に記載される脂質含有組成物およびその処方物中に含めるべき標識された化合物の量は，本明細書に提供される教示に基づき，選択された標識された化合物および組成物または処方物について意図される用途に応じて，標識された化合物および診断する個体の両方について特定の因子を考慮して，当業者が容易に決定することができ，これは本明細書にさらに説明される。
【０２７９】
例示的な標識された化合物としては，例えば，放射性同位体（例えば，３Ｈ，１４Ｃ，６７Ｇａ，１１１Ｉｎ，１２５Ｉ，１３１Ｉ，１３３Ｘｅ等）を含む物質，蛍光成分（例えば，フルオレセイン，フルオレセインイソチオシアネート等）を含む物質，酵素（例えば，ペルオキシダーゼ，アルカリホスファターゼ等）を含む物質，ならびに当業者に知られる別の標識された化合物が挙げられる。
【０２８０】
当業者には理解されるように，診断において用いられる標識された化合物および方法の選択は，調べるべき臓器（例えば，肝臓，膵臓，前立腺等），組織（例えば，悪性または非悪性または組織タイプ（例えば，乳等））によって異なる。例えば，１２５Ｉを取り込んだ脂質含有組成物（例えば，標的化リポソーム，リポソーム含有組成物等）は，ガンマカウンターによって種々の癌（例えば，乳癌，胃癌，結腸直腸癌，結腸癌等）の存在を同定し重篤度を判定するのに（例えば，初期，治療経過の間，治療後），特に有用である。
【０２８１】
標的化因子
特に記載しない限り，"標的化因子"および"標的化リガンド"との用語は本明細書において互換的に用いられる。
【０２８２】
本明細書に記載される脂質含有組成物は，特定の標的細胞に向けられた標的化因子で修飾したＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン（例えばＴＦ−ＮωＰＥ）を取り込んでいることを特徴とする。"標的化因子"との用語は，標的細胞の表面上に存在するレセプターまたは表面抗原に結合することができる成分を表す。ある態様においては，標的化因子は，特定の標的細胞上の細胞表面レセプターに向けられたものである。標的化因子はしばしば，脂質含有組成物の脂質成分に結合させることができる蛋白質またはペプチドである。
【０２８３】
最も有効な場合には，標的化因子は，標的とするレセプターまたは抗原が薬剤または標識された化合物のデリバリーの標的である細胞（例えば病原細胞）にのみ存在し，正常細胞には存在しないように選択される。あるいは，標的細胞（例えば病原性細胞または疾病細胞）では非標的細胞（例えば正常細胞）と比較してより多い数のレセプターまたは抗原が発現されている。好ましくは，標的化因子を結合させるレセプターまたは抗原は，標的化因子との結合が高頻度で生じないように，正常細胞では存在しないか少ない数で存在する。すなわち，標的化因子は，本明細書に記載されるリポソーム（封入された薬剤を含む）を標的細胞（例えば，病原性細胞，不健康な細胞等）に選択的にデリバリーする必要がある。すなわち，封入された薬剤の標的細胞への選択的デリバリーは，封入された薬剤または標識された化合物が非標的（例えば，正常）細胞に及ぼす影響に起因する有害な影響を低下させ，このことにより，組成物またはその処方物が投与される個体が経験する有害な影響も低下させる。
【０２８４】
例示的標的化因子としては，限定されないが，トランスフェリン，葉酸，葉酸塩，ヒアルロン酸，糖鎖（例えば，ガラクトース，マンノース等），モノクローナル抗体のフラグメント，アシアロ糖蛋白質等，ならびに当業者に知られる他の標的化因子が挙げられる。
【０２８５】
特定の態様においては，標的化因子は，細胞表面レセプターに向けられた蛋白質またはペプチド（例えば，トランスフェリン，葉酸塩，葉酸，アシアロ糖蛋白質等）である。
【０２８６】
別の態様においては，標的化因子は，抗原（例えば，モノクローナル抗体のフラグメント（例えば，Ｆａｂ，Ｆａｂ’，Ｆ（ａｂ’）２，Ｆｃ等））に向けられている。標的化因子は無傷または全モノクローナル抗体を含まないことが意図される。本明細書において用いる場合，"全抗体"または"無傷の抗体"との用語，およびこれらの同族語は，一般に免疫グロブリンの抗体ＩｇＧを表す。モノクローナル抗体のフラグメントは，一般に，モノクローナル抗体の分解産物，例えば，ペプシン等のプロテアーゼ消化を用いることにより得られるフラグメントを表す。
【０２８７】
ある態様においては，標的化因子は抗原に向けられたものではない（例えば，モノクローナル抗体のフラグメント，例えばＦａｂ，Ｆａｂ’，Ｆ（ａｂ’）２，Ｆｃ等ではない）。
【０２８８】
ある態様においては，標的化因子はトランスフェリンである。
【０２８９】
トランスフェリン（Ｔｆ）は，分子量８０，０００の鉄結合蛋白質であり，肝細胞において合成され，血液中に見いだされる。トランスフェリンは各細胞の表面上のＴｆレセプターを介して細胞に鉄（Ｆｅ）を供給する。トランスフェリンレセプターは一般に，腫瘍のタイプにかかわらず，腫瘍組織において正常組織より大量に発現される。腫瘍細胞膜は，細胞増殖を維持するためにトランスフェリンレセプターを過剰発現することが知られている。Ｓｈｉｎｄｅｌｍａｎ  ＪＥ，Ｏｒｔｍｅｙｅｒ  ＡＥ，Ｓｕｓｓｍａｎ  ＨＨ．"Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｉｓｓｕｅ．  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｍａｒｋｅｒ  ｆｏｒ  ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ  ｄｉｖｉｄｉｎｇ  Ｃｅｌｌｓ．"Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．（１９８１）２７（３）：３２９−３４；Ｌｌｏｙｄ  ＪＭ，Ｏ’Ｄｏｗｄ  Ｔ，Ｄｒｉｖｅｒ  Ｍ，Ｔｅｅ  ＤＥ．"Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｒｖｉｃａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ−−ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ  ｕｓｅｆｕｌ  ｃｅｌｌ  ｍａｒｋｅｒ．"Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ．（１９８４）３７（２）：１３１−５；および  Ｈａｂｅｓｈａｗ  ＪＡ，Ｌｉｓｔｅｒ  ＴＡ，Ｓｔａｎｓｆｅｌｄ  ＡＧ，Ｇｒｅａｖｅｓ  ＭＦ．"Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｌａｓｓ  ａｎｄ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．"Ｌａｎｃｅｔ．（１９８３）１（８３２３）：４９８−５０１を参照。したがって，治療剤をトランスフェリンに結合させることにより，トランスフェリンレセプターを介する薬剤の腫瘍細胞内への取り込みが増強されるであろう。作用メカニズムに限定されるものではないが，本明細書に記載されるトランスフェリンリポソームの取り込みの予想経路を図２および３に概説する。トランスフェリンは市販されており，または例えば，米国特許５，０２６，６５１（その全体を本明細書の一部としてここに引用する）に記載されるように組換え的に製造することができる。
【０２９０】
理論に拘束されるものではないが，トランスフェリン（Ｔｆ）のＮωＰＥへのコンジュゲーションは，１級アミンとＮωＰＥとの反応により生じ，これにより脂質アンカーと蛋白質との間にカルボン酸アミド結合が形成されると考えられる。
【０２９１】
ある態様においては，標的化リポソーム生成物中に存在する総脂質に対するＴｆのモル比は約０．０００１４：１ｍｏｌ／ｍｏｌ（Ｔｆ：総脂質）（０．０１５，ｗｔ／ｗｔ）である。別の態様においては，Ｔｆ：総脂質のモル比は約０．０１６−約０．０２９：約１２６−約１５８ｍＭ／ｍＭである。
【０２９２】
脂質含有組成物
本明細書に記載される脂質含有組成物には，誘導化脂質，追加の脂質および封入された薬剤または標識された化合物を取り込んだ標的化リポソーム，ならびに標的化リポソームを製造するために用いられる中間体，例えば本明細書に記載される脂質混合物およびリポソーム含有組成物が含まれ，ここで，脂質含有組成物（例えば標的化リポソーム）は，誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンおよび親水性ポリマー，例えば，限定されないが，ポリエチレングリコールを含まない。脂質含有組成物はまた，ＴＦを取り込んでいるが，薬剤または標識された化合物を含まないリポソーム（例えば，空リポソーム）を含む。
【０２９３】
本明細書において用いる場合，"親水性ポリマー"との用語およびその同族語は，リポソームの技術分野において，リポソームの循環半減期を増加させる目的でリポソームを遮断するために用いられるポリマー，例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および他のポリエトキシル化ポリマーを表す。この用語は，非共有結合的にリポソームと会合した遊離の親水性ポリマー，ならびに何らかの形でリポソームの特定の成分とコンジュゲートしているか共有結合している親水性ポリマー（例えば，ＰＥＧで修飾された脂質等）を包含することが意図される。そのような親水性ポリマーは，当該技術分野においては，"水溶性"ポリマーとも称される。さらに別の例示的親水性ポリマーとしては，限定されないが，ポリビニルアルコール，ポリ乳酸，ポリグリコール酸，ポリビニルピロリドン，ポリアクリルアミド，ポリグリセロール，ポリアクソゾリン等が挙げられる。
【０２９４】
本明細書において用いる場合，"脂質混合物"との用語およびその同族語は，本明細書に記載される脂質成分の混合物を表し，ここで，脂質混合物は，溶液，例えば，水性溶液（例えば，水，バッファまたは水と混和性溶媒（例えば，糖（例えば，トレハロース，スクロース，ラクトース，マンノース，デキストロース，フルクトース等），糖アルコール（例えば，ソルビトール，マルチトール，ラクチトール，グリセロール，マンニトール等），アルコール（例えば，エタノール，ｔ−ブタノール等）等））または有機溶媒との混合物）を取り込んでいない。
【０２９５】
"リポソーム含有組成物"との用語およびその同族語は，脂質，および任意のに薬剤または標識された化合物の混合物であって，水性溶液（例えば，水，バッファ（例えば，酢酸バッファ，リン酸バッファ，クエン酸バッファ，ホウ酸バッファ，酒石酸バッファ等）または水と水混和性溶媒との混合物）が混合（例えば，撹拌，振盪等の１またはそれ以上）により取り込まれているものを表す。水性溶液はまた，追加の成分，例えば，１またはそれ以上の糖（例えば，トレハロース，マルトース，スクロース，ラクトース，マンノース，デキストロース，フルクトース等），糖アルコール（例えば，ソルビトール，マルチトール，ラクチトール，マンニトール，グリセロール等），アルコール（例えば，エタノール，ｔ−ブタノール等）等を含んでいてもよい。水性溶液はまた，有機溶媒（（例えば，エステル（例えば，酢酸エチル，酢酸ブチル等），脂肪族炭化水素（例えば，ヘキサン，ヘプタン等），芳香族炭化水素（例えば，トルエン，キシレン等），ハロゲン化炭化水素（例えば，クロロホルム，ジクロロメタン，ジクロロエタン等），エーテル（例えば，ＴＨＦ，ジオキサン，ジエチルエーテル，イソプロピルエーテル等），環状炭化水素（例えば，シクロヘキサン等），ＤＭＦ，ＤＭＳＯ等）またはこれらの混合物）を含んでいてもよい。リポソーム含有組成物は，一般に，脂質，水性溶液，および約１００−１０，０００ｎｍの広い分布および５００−２，０００ｎｍの平均直径を有するリポソームの非均一混合物を含む。例示的リポソーム含有組成物の特性決定は，実施例においてさらに説明する。
【０２９６】
ある態様においては，脂質含有組成物は親水性ポリマーが組み込まれているものではない。特定の態様においては，脂質含有組成物はＰＥＧが組み込まれているものではない。
【０２９７】
ある態様においては，中間体脂質混合物は，少なくとも２つの異なる中性脂質または１またはそれ以上のリン脂質，およびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンを含み，ここで，脂質成分は本明細書においてさらに詳細に説明されており，混合物は，誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンおよび親水性ポリマー，例えばポリエチレングリコールを含まない。任意に，本明細書に記載される水性溶液を脂質成分と混合してリポソーム含有組成物を形成することができる。ある態様においては，脂質混合物は薬剤または標識された化合物を含まない。特定の態様においては，脂質混合物を処理して，リポソーム含有組成物またはリポソーム処方物を形成することができる。
【０２９８】
ある態様においては，中間体脂質混合物は，少なくとも２つの異なる中性脂質または１またはそれ以上のリン脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび薬剤または標識された化合物を含み，ここで，脂質成分および薬剤／標識された化合物は本明細書においてさらに詳細に説明されており，混合物は誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンおよび親水性ポリマー，例えばポリエチレングリコールを含まない。任意に，本明細書に記載される水性溶液を脂質成分と混合して，リポソーム含有組成物を形成することができ，例えば，薬剤または標識された化合物は，薬剤／標識された化合物の水性溶液として加えることができる。ある態様においては，リポソーム含有組成物は，（例えば，押し出し，サイズ排除クロマトグラフィー等または当該技術分野において知られる方法の１またはそれ以上で）処理してリポソームを形成することができる。
【０２９９】
ある態様においては，脂質混合物は，１またはそれ以上のリン脂質または少なくとも２つの異なる中性脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルを含み，ここで，脂質成分は，本明細書においてさらに詳細に説明されており，混合物は，誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンおよび親水性ポリマー，例えばポリエチレングリコールを含まない。混合物はまた，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルの合成に伴う非ＮＨＳ出発物質，副生成物および／または分解産物（例えば，カルボジイミド（例えば，ＤＣＣ，ＥＤＣ等），アシル化尿素化合物等）を実質的に含まない。任意に，本明細書に記載される水性溶液を脂質成分と混合してリポソーム含有組成物を形成することができる。
【０３００】
ある態様においては，中間体脂質混合物は，１またはそれ以上のリン脂質または少なくとも２つの異なる中性脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンを含み，ここで，脂質成分は本明細書においてさらに詳細に説明されており。混合物は誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンおよび親水性ポリマー，例えばポリエチレングリコールを含まない。混合物はまた，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルの合成に伴う非ＮＨＳ出発物質，副生成物および／または分解産物（例えば，カルボジイミド（例えば，ＤＣＣ，ＥＤＣ等），アシル化尿素化合物等）を実質的に含まない。任意に，本明細書に記載される水性溶液を脂質成分と混合してリポソーム含有組成物を形成することができる。ある態様においては，脂質混合物は薬剤または標識された化合物を含まない。脂質混合物を処理して，リポソーム含有組成物またはリポソーム処方物を形成することができる。
【０３０１】
ある態様においては，中間体脂質混合物は，１またはそれ以上のリン脂質または少なくとも２つの異なる中性脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル，および薬剤または標識された化合物を含み，ここで，脂質および薬剤／標識された化合物成分は，本明細書においてさらに詳細に説明されており，組成物は誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンおよび親水性ポリマー，例えばポリエチレングリコールを含まない。混合物はまた，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルの合成にともなう非ＮＨＳ出発物質，副生成物および／または分解産物（例えば，カルボジイミド（例えば，ＤＣＣ，ＥＤＣ等），アシル化尿素化合物等）を実質的に含まない。任意に，本明細書に記載される水性溶液を脂質成分と混合して，リポソーム含有組成物を形成することができる。
【０３０２】
ある態様においては，中間体脂質含有組成物は，１またはそれ以上のリン脂質または少なくとも２つの異なる中性脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル，および封入された薬剤を含むリポソームを含み，ここで，脂質および薬剤成分は本明細書においてさらに詳細に説明されており，リポソームは誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンおよび親水性ポリマー，例えばポリエチレングリコールを含まない。リポソームはまた，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルの合成にともなう非ＮＨＳ出発物質，副生成物および／または分解産物（例えば，カルボジイミド（例えば，ＤＣＣ，ＥＤＣ等）アシル化尿素化合物等）を実質的に含まないことができる。ある態様においては，脂質混合物は薬剤または標識された化合物を含まない。脂質混合物を処理して，リポソーム含有組成物またはリポソーム処方物を形成することができる。
【０３０３】
ある態様においては，脂質混合物は，１またはそれ以上のリン脂質または少なくとも２つの異なる中性脂質，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，ターゲティング因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび封入された薬剤または標識された化合物を含み，ここで，脂質，標的化因子および薬剤／標識された化合物成分は本明細書においてさらに詳細に説明されており，リポソームは誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンおよび親水性ポリマー，例えばポリエチレングリコールを含まない。脂質混合物のある態様においては，リポソームは，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルの合成に伴う非ＮＨＳ出発物質，副生成物または分解産物（例えば，カルボジイミド（例えば，ＤＣＣ，ＥＤＣ等），アシル化尿素化合物等）を実質的に含まない。特定の態様においては，脂質混合物はリポソーム含有組成物である（例えば，薬剤または標識された化合物が水性溶液として加えられる場合）。任意に，本明細書に記載される水性溶液を脂質成分と混合してリポソーム含有組成物を形成してもよい。
【０３０４】
ある態様においては，標的化リポソームは，１またはそれ以上のリン脂質または少なくとも２つの異なる中性脂質を含むリポソーム，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび封入された薬剤または標識された化合物を含み，ここで，脂質，標的化因子および薬剤または標識された化合物の各成分については本明細書において詳細に説明されるとおりであり，リポソームは誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンおよび親水性ポリマー，例えば，ポリエチレングリコールを含まない。標的化リポソームのある態様においては，リポソームは，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルの製造にともなう非ＮＨＳ出発物質，副生成物または分解産物（例えば，カルボジイミド（例えば，ＤＣＣ，ＥＤＣ等），アシル化尿素化合物等）を実質的に含まない。しかし，ある態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルが標的化リポソーム（例えば，ＮＨＳ−ＮＧ−ＰＥｓ（例えば，ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥ，ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＳＰＥ等）の製造の初期段階，例えば，スクシンイミジルエステルの加水分解の前において存在してもよく，このことにより最終処方物中に例えば，ＮＨＳおよびＮＧ−ＤＯＰＥが生ずる。ＳｕｃｃＮωＰＥがリポソームの内部に取り込まれていないある態様においては，ＴＦ−ＮωＰＥを予め形成して出発物質として用いた場合におけるように，リポソームまたはリポソーム含有組成物は，ＮＨＳも含まないかまたは実質的に含まない。特定の態様においては，標的化リポソームはＤＣＣおよびＥＤＣを実質的に含まない。ある態様においては，標的化リポソームはＤＣＣを実質的に含まない。
【０３０５】
さらに，本明細書に記載されるそれぞれのリポソーム含有組成物を処理して，リポソームを製造することができる。リポソームの製造は，当該技術分野においてよく知られており，さらに，本明細書に記載される方法，例えば，製造方法ＡおよびＢについて以下により詳細に記載される方法にしたがって実施することができる。リポソーム含有組成物からのリポソームの製造方法としては，限定されないが，押し出し，超音波処理，逆相ベシクル，凍結融解，サイズ排除クロマトグラフィー，限外濾過等，およびこれらの組み合わせが挙げられる。本明細書に記載されるリポソーム含有組成物から形成されるリポソームは，薬剤または標識された化合物を取り込んでもよく，または薬剤または標識された化合物を含まなくてもよい（例えば，本明細書において"空リポソーム"とも称されるリポソームの場合）。特定の態様においては，リポソーム含有組成物，リポソーム（空リポソームを含む）および標的化リポソームは，医薬処方物として処方することができ，さらに本明細書に記載される治療または診断方法および／またはキットにおいて使用することができる。
【０３０６】
"実質的に含まない"との用語は，当該技術分野において用いられている日常的な分析方法，例えば，ＨＰＬＣ（例えば，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈｍａｒａｃｏｐｏｅｉａ  ５ｔｈ  Ｅｄ．を参照），ＴＬＣ，ガスクロマトグラフィー等，ならびに当業者に知られる他の分析方法によって検出されないかまたは最小限に検出される物質のレベルを表す。
【０３０７】
例えば，脂質含有組成物は，総脂質含量に対して，約０．１重量％未満，約０．５重量％未満，約１重量％未満，約２重量％未満，約３重量％未満，約４重量％未満，約５重量％未満，または約６重量％未満の，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルの合成に伴う特定の出発物質，副生成物または分解産物を含むことができる。特定の態様においては，組成物は，合計で約１０％未満，約７％未満，約５％未満，約３％未満，約２％未満，または約１％未満の不純物（例えば，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルの合成に伴う出発物質，副生成物および分解産物の合計パーセント）を含むであろう。
【０３０８】
ある態様においては，標的化リポソームは，ホスファチジルコリン（例えば，中性，アニオン性またはカチオン性），コレステロールまたはコレステロール誘導体，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび封入された薬剤または標識された化合物を含むリポソームを含み，ここで，脂質，標的化因子および薬剤成分は本明細書においてさらに詳細に説明されており，リポソームは，誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンおよび親水性ポリマー，例えばポリエチレングリコールを含まない。特定の態様においては，ホスファチジルコリンは中性ホスファチジルコリンである。
【０３０９】
特定の態様においては，標的化リポソームは，ホスファチジルコリン（例えば，中性，アニオン性またはカチオン性），コレステロールまたはコレステロール誘導体，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，トランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび封入された薬剤または標識された化合物を含むリポソームを含み，ここで，脂質成分および薬剤または標識された化合物は本明細書においてさらに詳細に説明されており，リポソームは誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンおよび親水性ポリマー，例えばポリエチレングリコールを含まない。特定の態様においては，ホスファチジルコリンは中性ホスファチジルコリンである。
【０３１０】
特定の態様においては，標的化リポソームは，ホスファチジルコリン｛例えば，中性，アニオン性またはカチオン性），コレステロールまたはコレステロール誘導体，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，トランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび封入されたオキザリプラチンを含むリポソームを含み，ここで，脂質成分は本明細書においてさらに詳細に説明されており，リポソームは，誘導化されていないホスファチジルエタノールアミンおよび親水性ポリマー，例えばポリエチレングリコールを含まない。特定の態様においては，ホスファチジルコリンは中性ホスファチジルコリンである。
【０３１１】
ある態様においては，本明細書に記載される脂質含有組成物（標的化リポソームおよび空リポソームを含む），およびその処方物はさらに，ホスファチジルグリセロール，スフィンゴシン，セラミド，コレステロール誘導体等をジカルボン酸で誘導化することにより得られる脂質を含むことができる。これらのジカルボン酸−誘導体は，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンについて本明細書に記載されるように，および当業者に知られる製造方法について記載されるようにして，製造することができる。
【０３１２】
ある態様においては，本明細書に記載される脂質含有組成物（標的化リポソームおよび空リポソームを含む），およびその処方物は，アニオン性脂質｛例えば，ホスファチジルセリン，ホスファチジルイノシトール，ホスファチジルグリセロール等）またはカチオン性脂質｛例えば，スフィンゴシン，ＤＯＴＡＰ，ＤＯＴＭＡ，ＤＣ−ＣＨＯＬ等）を含まない。特定の態様においては，組成物はアニオン性脂質を含まず，別の態様においては，組成物はカチオン性脂質を含まない。ある態様においては，組成物はカチオン性およびアニオン性脂質を含まない。
【０３１３】
脂質含有組成物のある態様においては，組成物は薬剤を含む。別の態様においては，脂質含有組成物は標識された化合物を含む。
【０３１４】
脂質含有組成物のある態様においては，薬剤はオキザリプラチンであり，標的化因子（ＴＦ）はトランスフェリン（Ｔｆ）であり，脂質成分は，ＤＭＰＣまたはＤＳＰＣ，およびコレステロールまたはコレステロール誘導体，およびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン，およびトランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンを含み，ここで，トランスフェリンで修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンは，カルボン酸アミド結合によりＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンに結合したトランスフェリンを含む。
【０３１５】
ある態様においては，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよび標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンはＮＧ−ＤＯＰＥまたはＮＧ−ＤＳＰＥである。
【０３１６】
特定の態様においては，脂質含有組成物の脂質成分は，ＤＭＰＣ，コレステロール，ＮＧ−ＤＯＰＥおよびＴＦで修飾されたＮＧ−ＤＯＰＥである。別の態様においては，脂質成分は，ＤＳＰＣ，コレステロール，ＮＧ−ＤＯＰＥおよびＴＦで修飾されたＮＧ−ＤＯＰＥである。さらに別の態様においては，脂質成分は，ＤＭＰＣ，コレステロール，ＮＧ−ＤＳＰＥ，およびＴＦで修飾されたＮＧ−ＤＳＰＥである。ある別の態様においては，脂質成分は，ＤＳＰＣ，コレステロール，ＮＧ−ＤＳＰＥ，およびＴＦで修飾されたＮＧ−ＤＳＰＥである。これらの態様のあるものにおいては，標的化因子（ＴＦ）はトランスフェリンであり，薬剤はオキザリプラチンである。
【０３１７】
特定の態様においては，脂質成分は，ＤＰＰＣ，コレステロール，ＮＧ−ＤＯＰＥおよびＴＦで修飾されたＮＧ−ＤＯＰＥである。別の態様においては，脂質成分は，ＰＯＰＣ，コレステロール，ＮＧ−ＤＯＰＥおよびＴＦで修飾されたＮＧ−ＤＯＰＥである。さらに別の態様においては，脂質成分は，ＤＰＰＣ，コレステロール，ＮＧ−ＤＳＰＥ，およびＴＦで修飾されたＮＧ−ＤＳＰＥである。ある別の態様においては，脂質成分は，ＰＯＰＣ，コレステロール，ＮＧ−ＤＳＰＥ，およびＴＦで修飾されたＮＧ−ＤＳＰＥである。これらの態様のあるものにおいては，標的化因子（ＴＦ）はトランスフェリンであり，薬剤はオキザリプラチンである。
【０３１８】
特定の態様においては，脂質成分は，ＨＳＰＣ，コレステロール，ＮＧ−ＤＯＰＥおよびＴＦで修飾されたＮＧ−ＤＯＰＥである。別の態様においては，脂質成分は，ＥＰＣ，コレステロール，ＮＧ−ＤＯＰＥおよびＴＦで修飾されたＮＧ−ＤＯＰＥである。さらに別の態様においては，脂質成分は，ＨＳＰＣ，コレステロール，ＮＧ−ＤＳＰＥ，およびＴＦで修飾されたＮＧ−ＤＳＰＥである。ある別の態様においては，脂質成分は，ＥＰＣ，コレステロール，ＮＧ−ＤＳＰＥ，およびＴＦで修飾されたＮＧ−ＤＳＰＥである。これらの態様のあるものにおいては，標的化因子（ＴＦ）はトランスフェリンであり，薬剤はオキザリプラチンである。
【０３１９】
脂質成分の比率
一般に，出発物質であるＮＧ−ＤＯＰＥのモルパーセントは，総脂質含量に対して約２．５ｍｏｌｅ％−約４．５ｍｏｌ％であろう。さらに，出発物質であるＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥのモルパーセントは，総脂質含量と比較して約０．５ｍｏｌｅ％−約２．５ｍｏｌ％であろう。ある態様においては，ＮＧ−ＤＯＰＥ対ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥの相対的モル比は，約３．４：１である。ある態様においては，ＮＧ−ＤＯＰＥ対ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥの相対的モル％比は，約４：１である。中性リン脂質および中性脂質が存在する特定の態様においては，（例えば，ＤＭＰＣ：Ｃｈｏｌ：ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥ）のモル比は，４３．０：３８．５：３．４２：１であり，これはまた，モル％で５０：４５：４：１と表すことができる。
【０３２０】
ある態様においては，追加の脂質対ＮωＰＥ対ＳｕｃｃＮωＰＥ（例えば，少なくとも２つの中性脂質：ＮωＰＥ：ＳｕｃｃＮωＰＥまたは１またはそれ以上のリン脂質：ＮωＰＥ：ＳｕｃｃＮωＰＥまたは（１またはそれ以上のリン脂質＋中性脂質（ｓ））：ＮωＰＥ：ＳｕｃｃＮωＰＥ）の相対的ｍｏｌ％は，約９８ｍｏｌ％−約８７ｍｏｌ％の追加の脂質：約１ｍｏｌ％−約１２ｍｏｌ％のＮωＰＥ：約０．５ｍｏｌ％−約１％のＳｕｃｃＮωＰＥであることができ，ここで，全成分の合計ｍｏｌ％は１００ｍｏｌ％である。例えば，追加の脂質：ＮωＰＥ：ＳｕｃｃＮωＰＥは，およそ９５：４：１，９０：９：１，９２：７：１，９３：６：１等であることができる。
【０３２１】
特定の態様においては，追加の脂質がリン脂質および別の脂質，例えばコレステロール，コレステロール誘導体等を含む場合，各脂質成分のｍｏｌ％の範囲は約３０ｍｏｌ％−約６４％であり，追加の脂質の合計は約９８ｍｏｌ％−約８７ｍｏｌ％である。
【０３２２】
追加の脂質が２つの異なる中性脂質であるある態様においては，各中性脂質のｍｏｌ％の範囲は，約３０ｍｏｌ％−約６４％であり，ここで，中性脂質の総量は約９８ｍｏｌ％−約８７ｍｏｌ％である。
【０３２３】
１つの追加の脂質がホスファチジルコリンであり，第２の追加の脂質がコレステロールまたはコレステロール誘導体である例示的態様においては，ホスファチジルコリンのｍｏｌ％は約３０−約７０ｍｏｌ％（例えば，約５０−約６４ｍｏｌ％，約４０−約６５ｍｏｌ％，約４０−約６０ｍｏｌ％，約５０−約６２ｍｏｌ％，約５５−約６０ｍｏｌ％，約３５−約５５ｍｏｌ％，約３０ｍｏｌ％，約４０ｍｏｌ％，約４５ｍｏｌ％，約５０ｍｏｌ％，約５５ｍｏｌ％，約６０ｍｏｌ％，約６５ｍｏｌ％，約７０ｍｏｌ％）であり，コレステロールまたはコレステロール誘導体のｍｏｌ％は約３０−約６０ｍｏｌ％（例えば，約３２−約４５ｍｏｌ％，約３２−約４２ｍｏｌ％，約３２−約４０ｍｏｌ％，約４０−約６０ｍｏｌ％，約３５−約５５ｍｏｌ％，約３５−約６０ｍｏｌ％，約４５−約６０ｍｏｌ％，約３５−約４５ｍｏｌ％，約３０ｍｏｌ％，約３５ｍｏｌ％，約４０ｍｏｌ％，約４５ｍｏｌ％，約５０ｍｏｌ％，約５５ｍｏｌ％ｏｒ約６０ｍｏｌ％）である。ある態様においては，ホスファチジルコリンは，約５０ｍｏｌ％，約５２ｍｏｌ％，約５５ｍｏｌ％，約５８ｍｏｌ％，約６０ｍｏｌ％，約６２ｍｏｌ％であり，コレステロールまたはコレステロール誘導体は，約３０ｍｏｌ％，約３２ｍｏｌ％，約３４ｍｏｌ％，約３５ｍｏｌ％，約３７ｍｏｌ％，約３８ｍｏｌ％，約４０ｍｏｌ％，約４２ｍｏｌ％，約４３ｍｏｌ％，約４５ｍｏｌ％である。
【０３２４】
特定の態様においては，ＮωＰＥのｍｏｌ％は約１−約１１ｍｏｌ％，約１−約１０ｍｏｌ％，約１−約８ｍｏｌ％，約１−約６ｍｏｌ％，約１−約５ｍｏｌ％，約１−約４ｍｏｌ％，約１−約３ｍｏｌ％，約１−約２ｍｏｌ％，約２−約１０ｍｏｌ％，約２−約５ｍｏｌ％，約１ｍｏｌ％，約２ｍｏｌ％，約３ｍｏｌ％，約４ｍｏｌ％，約５ｍｏｌ％，約７ｍｏｌ％，約８ｍｏｌ％，約９ｍｏｌ％約１０ｍｏｌ％，約１１ｍｏｌ％，または約１２ｍｏｌ％である。
【０３２５】
ある態様においては，第１の追加の脂質：第２の追加の脂質：ＮωＰＥ：ＳｕｃｃＮωＰＥの相対的ｍｏｌ％は，例えば，５０：４５：４：１である。ある態様においては，第１の追加の脂質はホスファチジルコリン（例えば，ＤＭＰＣ，ＤＯＰＣ，ＤＰＰＣ，ＤＳＰＣ等）であり，第２の追加の脂質はコレステロールである。ある態様においては，ＮωＰＥのＰＥはＤＯＰＥまたはＤＳＰＥである。特定の態様においては，ＮωＰＥはＮＧ−ＤＯＰＥまたはＮＧ−ＤＳＰＥである。ある態様においては，脂質はＤＭＰＣ：Ｃｈｏｌ：ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥであり，その相対的ｍｏｌ％は５０：４５：４：１である。別の態様においては，脂質は：Ｃｈｏｌ：ＮＧ−ＤＳＰＥ：ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＳＰＥであり，その相対的ｍｏｌ％は５０：４５：４：１である。別の態様においては，脂質は：Ｃｈｏｌ：ＮＧ−ＤＳＰＥ：ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＳＰＥであり，その相対的ｍｏｌ％は６２：３３：４：１である。
【０３２６】
ある態様においては，ＮωＰＥおよびＴＦ−ＮωＰＥ（ＮωＰＥ＋ＴＦ−ＮωＰＥ）の合計ｍｏｌ％は，総脂質含有量に対して約２−約１３ｍｏｌ％であり，例えば，約２−約１２ｍｏｌ％，約２−約１０ｍｏｌ％，約２−約８ｍｏｌ％，約２−約６ｍｏｌ％，約２−約４ｍｏｌ％，約２ｍｏｌ％，約３ｍｏｌ％，約４ｍｏｌ％，約５ｍｏｌ％，約６ｍｏｌ％，約７ｍｏｌ％，約８ｍｏｌ％，約９ｍｏｌ％，約１０ｍｏｌ％，約１１ｍｏｌ％，または約１２ｍｏｌ％である。
【０３２７】
一般に，ＴＦ−ＮωＰＥの合計ｍｏｌ％は総脂質含有量に対して約０．００２−約０．２ｍｏｌ％である。例えば，ある態様においては，ＴＦ−ＮωＰＥの合計ｍｏｌ％は，約０．００２−約０．１５ｍｏｌ％であり，ＴＦ−ＮωＰＥの合計ｍｏｌ％は，約０．００２−約０．１ｍｏｌ％，０．００２−約０．０５ｍｏｌ％，約０．０１−約０．０３ｍｏｌ％，約０．００５−約０．２ｍｏｌ％，約０．００７−約０．２ｍｏｌ％，約０．００７−約０．０５ｍｏｌ％，約０．０１−約０．０２５ｍｏｌ％，約０．０１５−約０．０２５ｍｏｌ％，約０．０１−約０．２ｍｏｌ％，約０．０２−約０．２ｍｏｌ％，約０．０４−約０．２ｍｏｌ％，約０．０６−約０．２ｍｏｌ％，約０．０８−約０．２ｍｏｌ％，約０．００２ｍｏｌ％，約０．００８ｍｏｌ％，約０．０１ｍｏｌ％，約０．０２ｍｏｌ％，約０．０３ｍｏｌ％，約０．０２５ｍｏｌ％，約０．０１５ｍｏｌ％，約０．０６ｍｏｌ％，約０．０８ｍｏｌ％，約０．１ｍｏｌ％，約０．１５ｍｏｌ％，または約０．２ｍｏｌ％である。
【０３２８】
リポソームおよびリポソーム含有組成物の特徴付け
脂質含有組成物を成分の比率（例えば，脂質の比率，薬剤／標識された化合物の脂質に対する比率等）により特徴づけることに加えて，本明細書に記載されるリポソーム含有組成物は，当業者には理解されるように，標準的な分析方法を用いて，例えば，物理化学的特性等により特徴づけることができる。そのような分析方法としては，限定されないが，適当な場合には，平均直径，封入された体積，正味電荷（ゼータ電位），取り込まれた（すなわち封入された）薬剤の量，粒子サイズ，種々の条件下における安定性（例えば，保存中，投与用に調製された場合，インビトロで），浸透圧特性，コンジュゲート化した標的化因子の量等を測定することが挙げられる。そのような特徴決定のための例示的分析方法は，下記ならびに実施例に記載されており，当業者に知られる追加の方法を用いて組成物を特徴づけることができる。
【０３２９】
当業者には理解されるように，リポソームの薬剤含有量は，ＨＰＬＣ分析用に確立された方法を用いて，適当な対照を用いて，当該技術分野において日常的に実施されているように，そして実施例に記載されているようにして，測定することができる。適当な対照を用いれば，封入された薬剤の種類もまた，ＨＰＬＣにより，あるいはある種の薬剤（例えば，白金含有薬剤）については，当業者に実施されているように，ＩＣＰ−ＭＳ（Ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ  Ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｐｌａｓｍａ−質量分析）などの分析方法により，決定することができる。
【０３３０】
ある態様においては，リポソームまたはリポソーム含有組成物中に封入された薬剤（例えば，オキザリプラチン等）または標識された化合物の量は，リポソーム中約０．１ｍｇ／ｍｌ−約１５ｍｇ／ｍｌでありうる。例えば，薬剤濃度は，リポソーム中，約０．５ｍｇ／ｍｌ−約１５ｍｇ／ｍｌ，約０．５ｍｇ／ｍｌ−約１０ｍｇ／ｍｌ，約０．１ｍｇ／ｍｌ−約１０ｍｇ／ｍｌ，約０．５ｍｇ／ｍｌ−約５ｍｇ／ｍｌ；約０．５ｍｇ／ｍｌ−約３ｍｇ／ｍｌ，約０．５ｍｇ／ｍｌ−約２ｍｇ／ｍｌ，約０．５ｍｇ／ｍｌ−約１．５ｍｇ／ｍｌ，約０．８ｍｇ／ｍｌ−約３ｍｇ／ｍｌ，約０．８ｍｇ／ｍｌ−約２ｍｇ／ｍｌ，約０．８ｍｇ／ｍｌ−約１．５ｍｇ／ｍｌ，約０．７ｍｇ／ｍｌ−約３ｍｇ／ｍｌ，約０．７ｍｇ／ｍｌ−約２ｍｇ／ｍｌ，約０．７ｍｇ／ｍｌ−約１．７ｍｇ／ｍｌ，約０．７ｍｇ／ｍｌ−約１．５ｍｇ／ｍｌ，約０．７ｍｇ／ｍｌ−約１．４ｍｇ／ｍｌ，約０．７ｍｇ／ｍｌ−約１．３ｍｇ／ｍｌ，約０．５ｍｇ／ｍｌ，約０．７ｍｇ／ｍｌ，約０．８ｍｇ／ｍｌ，約０．９ｍｇ／ｍｌ，約１ｍｇ／ｍｌ，約１．１ｍｇ／ｍｌ，約１．２ｍｇ／ｍｌ，約１．３ｍｇ／ｍｌ，約１．４ｍｇ／ｍｌ，約１．５ｍｇ／ｍｌ，約１．６ｍｇ／ｍｌ，約２ｍｇ／ｍｌ，約３ｍｇ／ｍｌ，約４ｍｇ／ｍｌ，約５ｍｇ／ｍｌ，約６ｍｇ／ｍｌ，約７ｍｇ／ｍｌ，約８ｍｇ／ｍｌ，約９ｍｇ／ｍｌ，約１０ｍｇ／ｍｌまたは約１５ｍｇ／ｍｌであることができる。
【０３３１】
リポソームの剪断面における電位はゼータ電位と称される。当業者には知られるように，リポソームのゼータ電位は，適当な装置を用いて，例えば，レーザードップラーマイクロ電気泳動法を用いるＥＬＳ−６０００（Ｏｔｓｕｋａ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，Ｊａｐａｎ）または他の装置，および当業者に利用可能なプロトコルを用いて，実験的に測定することができる。例えば，Ｊ．Ｃｏｌｌｏｉｄ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  Ｓｃｉ，３９，６７０−６７５（１９７２），ｎｉｔｉｏｎ．ｃｏｍ／ｅｎ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｚｅｅｃｏｍ＿ｓ．ｈｔｍ等。
【０３３２】
ある態様においては，本明細書に記載されるリポソーム（標的化リポソームおよびリポソーム含有組成物のリポソームを含む）は，全体として正味負のゼータ電位を示す。ある態様においては，ゼータ電位は約−１０ｍＶ〜約−２００ｍＶである。例えば，約−５０ｍＶ〜約−１５０ｍＶ，約−５０ｍＶ〜約−１３０ｍＶ，約−６０〜約−１２０ｍＶ，約−５０〜約−１００ｍＶ，約−７５ｍＶ〜約−９０ｍＶ，約−８０ｍＶ〜約−９０ｍＶ，約−８０ｍＶ〜約−８５ｍＶ，約−８５ｍＶ〜約−９０ｍＶ，約−７５ｍＶ〜約−８５ｍＶ，約−７０ｍＶ〜約−９０ｍＶ，約−７５ｍＶ，約−８０ｍＶ，約−８５ｍＶ，約−８３ｍＶ，約−９０ｍＶ，約−１００ｍＶ，約−１２０ｍＶである。
【０３３３】
小さなリポソームは，静脈内注射の後，肝臓類洞の小窩を通過して，急速に肝細胞と接触すると考えられている。中程度のサイズのリポソームは，血液コンパートメント中に保持され，相当な時間循環することができる。しかし，大きなリポソームは肝臓類洞をよりゆっくりと通過し，クッパー細胞に急速に取り込まれる。すなわち，リポソームのサイズはインビボでの挙動を判定するのに非常に重要である。例えば，Ｌｉｕｅｔａｔ，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ（１９９２）１１０４（ｌ）：９５−１０１；Ｈａｒａｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔ．（１９９５）３（４）：２５３−２６１；（その全体を本明細書の一部としてここに引用する）等を参照。
【０３３４】
リポソームの粒子サイズは，光子相関分光法（ＰＣＳ；動的光散乱または準弾性光散乱（ＱＥＬＳ））を用いて，種々のアルゴリズムを用いることにより，相関関数から求めることができる。これらの手法により求められた粒子サイズは，ＰＣＳにより決定される平均直径と同程度である。ＰＣＳは，標準偏差およびχ２を用いてサイズ分布を記述する。ＰＣＳシステムにおいては，χ２はそのシステムがユニモダール（ガウス分布）であるか，マルチモダール（ＮＩＣＯＭＰ分布）であるかを決定する。平均粒子サイズは，強度重み付け測定値を用いて決定することができ，χ２＜５であればガウス分布から，χ２＞５であれば，ＮＩＣＯＭＰ分布の主ピークの平均から求めることができる。そのような分析は，当業者にはよく知られており，適当なハードウエア，例えば，Ｎｉｃｏｍｐ  ＱＥＬＳ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｓｉｚｅｒ，ＰＳＳ  Ｍｏｄｅｌ  ３８０  ＺＬＳ，Ｓ／Ｎ０１０３３０１；ｐｓｓｎｉｃｏｍｐ．ｃｏｍ／ｚｅｔａｓｐｅｃ．ｈｔｍ．もよく知られている。
【０３３５】
リポソーム，特に本明細書に記載される標的化リポソームのある態様においては，リポソームの平均直径は，約５０−約２７５ｎｍである。例えば，リポソームの平均直径は，約５０−約２００ｎｍ，約５０−約２６５ｎｍ，約５０−約２５０ｎｍ，約５０−約２２５ｎｍ，約５０−約１７５ｎｍ，約５０−約１５０ｎｍ，約５０−約１２０ｎｍ，約５０−約１００ｎｍ，約７５−約２５０ｎｍ，約７５−約２００ｎｍ，約７５−約１７５ｎｍ，約７５約１５０ｎｍ，約７５−約１２０ｎｍ，約７５−約１００ｎｍ，約９０−約１００ｎｍ，約９０−約１２０ｎｍ，約９０−約１５０ｎｍ，約９０−約２００ｎｍ，約９５−約１００ｎｍ，約９５−約１２０ｎｍ，約９５−約１２５ｎｍ，約９５−約１３０ｎｍ，約９５−約１５０ｎｍ，約９５−約１７５ｎｍ，約９０ｎｍ，約９５ｎｍ，約１００ｎｍ，約１２０ｎｍ，約１３０ｎｍ，または約１５０ｎｍである。特定のリポソーム組成物については，標的化リポソームの直径は同じ成分から形成されるが標的化因子が取り込まれていないリポソームよりおよそ約１５−約２５ｎｍ大きい。
【０３３６】
本明細書に記載されるリポソーム（例えば，標的化リポソーム，空リポソーム，リポソーム含有組成物中のリポソーム）はまた，リポソーム中に取り込まれた標的化リガンドの濃度により特徴づけてもよい。選択された標的化リガンドによって，標的化リガンドの量を定量する種々の手段が当業者には明らかである。例えば，実施例に記載されるように，リポソームのトランスフェリン（Ｔｆ）含有量は，電気泳動の移動度（例えば，ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより測定）を用いて，リポソームを適当な対照と比較することにより決定することができる。
【０３３７】
簡単には，リポソーム中のトランスフェリン含有量の確認は，リポソームにコンジュゲート化したトランスフェリンについて，含有量および／または同一性の２つのアッセイを用いて評価することができる。まず，ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析したリポソーム中のトランスフェリンの電気泳動の移動度を，精製したコンジュゲート化したトランスフェリン，例えば，ＴＦ−ＮωＰＥの移動パターンと比較することができる。さらに，コンジュゲート化したトランスフェリンの電気泳動の移動度を遊離トランスフェリン参照標準物質と比較することができる。リポソーム中のトランスフェリンの同一性のさらなる裏付けは，抗トランスフェリン抗体の標的化リポソームへの特異的結合を示すＥＬＩＳＡ，すなわち実験室等級の処方物を用いて得ることができる。トランスフェリン−標的化リポソームの濃度は，発色蛋白質定量アッセイ，例えばＢＣＡ（当業者によく知られるアッセイ）を用いて測定することができる。当業者はまた，本明細書の教示にしたがって，同様の方法ならびに種々の標的化因子の量を決定する当該技術分野において知られる他の方法を理解することができる。
【０３３８】
簡単には，リポソーム中のトランスフェリンの量は，ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイ試薬を用いて分析することができる。アルカリ条件下で，蛋白質により銅（ＩＩ）が還元されて銅（Ｉ）となる。生成した銅（Ｉ）イオンはＢＣＡと可溶性の強く発色した複合体を形成する。微粒子に結合した蛋白質の総量は，既知の量の微粒子懸濁液とＢＣＡ試薬との反応により測定することができる。発色が認められれば，微粒子を濾過により除去し，分光光度計で発色を測定する。
【０３３９】
ある態様においては，リポソーム中に取り込まれた標的化リガンドの濃度は，約０．５ｍｇ／ｍｌ−約５．０ｍｇ／ｍｌ，約０．５ｍｇ／ｍｌ−約２．０ｍｇ／ｍｌ，約１．０ｍｇ／ｍｌ−約２．０ｍｇ／ｍｌ，約１．０ｍｇ／ｍｌ−約３．０ｍｇ／ｍｌ，約１．０ｍｇ／ｍｌ−約２．５ｍｇ／ｍｌ，約１．０ｍｇ／ｍｌ−約２．０ｍｇ／ｍｌ，または約１．３ｍｇ／ｍｌ−約２．５ｍｇ／ｍｌである。
【０３４０】
トランスフェリンの腫瘍細胞の表面への結合においては，第二鉄イオンの役割が非常に重要である。したがって，Ｔｆを取り込んだ標的化リポソームの第二鉄イオンの含有量は，リポソームを特徴づける別の有意義な方法である。当業者には鉄イオン含有量を測定する多数の方法が知られているが，１つの方法はＩＣＰ−ＭＳである。
【０３４１】
リポソームがトランスフェリンを含む場合，リポソームの第二鉄イオンの含有量は，例えば，約０．２５μｇ／ｍＬ−約３μｇ／ｍＬ，０．４μｇ／ｍＬ−約３μｇ／ｍＬ，０．２５μｇ／ｍＬ−約２μｇ／ｍＬ，０．２５μｇ／ｍＬ−約１．５μｇ／ｍＬ，０．２５μｇ／ｍＬ−約１μｇ／ｍＬ，０．４μｇ／ｍＬ−約２μｇ／ｍＬ，０．４μｇ／ｍＬ−約１．５μｇ／ｍＬ，０．５μｇ／ｍＬ−約２μｇ／ｍＬ，約０．５μｇ／ｍＬ−約１．４μｇ／ｍＬ，または約０．５μｇ／ｍＬ−約１．５μｇ／ｍＬでありうる。
【０３４２】
リポソーム（標的化リポソームおよび空リポソームを含む）はまた，所定の温度における浸透圧により特徴づけることができる。所定の温度における浸透圧は糖（スクロース）溶液のモル濃度により異なる。また，これは溶液中の総イオン密度および分子のサイズによっても異なる。通常は，浸透圧は，浸透圧を適当な圧力単位で測定する浸透圧計として知られる装置を用いて測定することができ，これは当業者には理解される。
【０３４３】
ある態様においては，リポソーム，特に標的化リポソームおよび空リポソームの室温における浸透圧は，約３１０−約４１０ｍＯｓｍ／ｋｇである。例えば，浸透圧は，室温で約約３１０−約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ，約３１０−約３８０ｍＯｓｍ／ｋｇ，約３２０−約３６０ｍＯｓｍ／ｋｇ，約３１５−約３７５ｍＯｓｍ／Ｋｇ，約３２０−約３７５ｍＯｓｍ／Ｋｇ，約３１５−約３７０ｍＯｓｍ／Ｋｇ，約３２０−約３７０ｍＯｓｍ／Ｋｇ，約３６０ｍＯｓｍ／Ｋｇ，約３５０ｍＯｓｍ／Ｋｇ，約３４０ｍＯｓｍ／Ｋｇ，約３７０ｍＯｓｍ／Ｋｇまたは約３８０ｍＯｓｍ／Ｋｇであることができる。
【０３４４】
本明細書に記載される種々の条件下で（例えば，保存の条件，投与用の準備および／またはインビトロ条件），浸透圧は，本明細書に記載される種々の条件で，特定の期間にわたってモニターしたときに，約２５％未満，約２０％未満，約１５％未満と様々であり得る。例えば，３６０＋／−５０ｍＯｓｍ／ｋｇであることができる。
【０３４５】
脂質含有組成物の製造
治療の間に個体に投与することが意図される薬剤および標識された化合物については，３つの主要な要件があり，すなわち，効力，安全性および品質の保証である。証明された効力および安全性にもかかわらず，薬剤を療法において用いることができる能力は，製造および流通の間にその品質（例えば，純度，均一性，用量の再現性，経時安定性等）を一貫して保証することができなければ低下する。薬剤または標識された化合物の製造方法が一貫して高品質の薬剤を確実にしない場合にも，薬剤を投与する個体における有害な反応の可能性が増加する。薬剤または標識された化合物の寿命の全体を通して，製造され流通される製品が，最初に規制機関の認可を受けた製品と同じ水準に合致することが重要である。すなわち，安全な薬剤または標識された化合物製品を製造するためには，高い品質の薬剤または標識された化合物を一貫して製造する能力が必要であり，日常的にかつ容易に製造し精製しうる薬剤または標識された化合物は，商業的および安全性の両方の観点から有益である。例えば，標識された化合物の効力が，特定の診断用方法と組み合わせて特定の疾病または状態の診断において有用でありうる能力を表す場合（例えば，標識された化合物の活性（例えば，ガンマカウンター等により可視化されうる能力））には，これはバッチ間でまたは保存の間に許容されないレベルで弱められない。
【０３４６】
以下の記載は，本明細書に記載される組成物を，高品質（例えば，高純度，均一性等）の標的化リポソーム（およびその中間体）および空リポソームを一貫して製造するために用いることができる一般的方法である。これらの方法はまた，図４（製造方法Ａ）および図５（製造方法Ｂ）に図示される。
【０３４７】
本明細書に記載されるＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは，リン脂質複合体，例えば，リポソーム，ポリマーミセル，マイクロスフェアおよびナノスフェア，エマルジョンおよび水溶性ポリマーの成分として有用である。これらのＰＥ誘導体の製造は本明細書に記載されており，その製造方法は上述したように当該技術分野において知られている。
【０３４８】
特に，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンおよびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルは，本明細書に記載される脂質含有組成物の成分としても有用である。脂質含有組成物は，本明細書に記載される方法にしたがって製造することができるが，これらの方法の改変は当業者には明らかである。例えば，当業者に知られる種々の方法を用いて，脂質成分からリポソームを形成することができる（例えば，超音波処理，撹拌，押し出し，脱水等）。例えば，米国特許公開２００４／０１４２０２５（その内容はその全体を本明細書の一部としてここに引用する）を参照。
【０３４９】
標的化リポソームを製造するための，本明細書の実施例等に記載される一般的方法の使用は，本明細書に記載される他の脂質含有組成物（例えば，脂質混合物，リポソーム含有組成物，空リポソーム，および中間体リポソーム）を製造する方法も包含する。
【０３５０】
製造方法Ａ
製造方法Ａは図４に図示される。
【０３５１】
Ａ：ＮωＰＥ：ＳｕｃｃＮωＰＥ：追加の脂質混合物（中間体１）の製造
本明細書に記載されるＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステル（ＳｕｃｃＮωＰＥ）およびＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン（ＮωＰＥ）を，追加の脂質（（例えば，少なくとも１つのリン脂質（例えば，ＰＣ（例えば，ＤＭＰＣ，ＤＳＰＣ等），ＰＩ，スフィンゴミエリン，ホスファチジン酸等）および少なくとも１つの他の追加の脂質（例えば，コレステロール））と混合し，次に適当な溶媒（例えば，エタノール，ｔ−ＢｕＯＨ，クロロホルム，イソプロピルエーテル等）に溶解する。溶媒の量は，一般に，１−１００ｖ／ｗ（総脂質重量に対して）である。ある態様においては，これは２−２０ｖ／ｗである。
【０３５２】
上の段落で記載されるように使用されるＳｕｃｃＮωＰＥおよびＮωＰＥは，本明細書に記載される方法により，または当業者に知られる方法により，製造し精製することができる。ＳｕｃｃＮωＰＥおよびＮωＰＥ，ならびに標的化リポソームおよびその中間体を製造するための本明細書に記載される他の成分は，最終的に，標的化リポソームを個体に投与するための規制ガイドラインを満たし，医薬品安全性試験実施基準（ＧＬＰ）および医薬品適正製造基準（ＧＭＰ）のガイドラインにしたがうような，十分な純度および均一性の標的化リポソームを得るのに十分な純度および均一性のものでなければならない。
【０３５３】
追加の脂質（１またはそれ以上のリン脂質に加えて）をリン脂質と組み合わせて用いる場合には，リン脂質の他の追加の脂質に対する比率は約２：１である。ＳｕｃｃＮｏＰＥ誘導体のリン脂質に対する混合比は，（ＮＨＳ−ＮＧＰＥ＋ＮＧＰＥ）対（ＣＨＯＬ＋リン脂質）の合計濃度または比率の約１−約１２％（１：９９−１２：８８），または約３−６％（３：９７−６：９４）である。例えば，例示的比率としては，５０：４５：４：１（例えば，ＰＣ：Ｃｈｏｌ：ＮＧ−ＰＥ：ＮＨＳ−ＮＧ−ＰＥ）が挙げられ，この場合には，例えば，１ｇの混合物中に１７．５ｍｇのＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥ，６３．１ｍｇのＮＧ−ＤＯＰＥ，３１２ｍｇのＣｈｏｌおよび６０７ｍｇのリン脂質が含まれる。
【０３５４】
Ｂ：薬剤：ＮωＰＥ：ＳｕｃｃＮωＰＥ：追加の脂質混合物（中間体２）の製造
次に，工程Ａで製造したＮωＰＥ：ＳｕｃｃＮωＰＥ：追加の脂質混合物を，封入されるべき薬剤または標識された化合物（例えば，抗癌剤（例えば，オキザリプラチン，トポイソメラーゼＩ阻害剤，ビンカアルカロイド等））を含む水性溶液（例えば，バッファ等）と混合して，薬剤：ＮωＰＥ：ＳｕｃｃＮωＰＥ：中性脂質混合物（中間体２）を得る。
【０３５５】
薬剤がオキザリプラチン（ｌ−ＯＨＰ）である場合，オキザリプラチン溶液の濃度は，約９％スクロース溶液中約８ｍｇ／ｍｌである。例えば，標的化リポソーム中のオキザリプラチンの濃度は約０．８ｍｇ／ｍＬ＋／−１０％である。
【０３５６】
Ｃ：薬剤：ＮωＰＥ：ＳｕｃｃＮωＰＥ：追加の脂質リポソーム（中間体３）の製造
次に，工程Ｂで得られた薬剤：ＮωＰＥ：ＳｕｃｃＮωＰＥ：追加の脂質混合物（中間体２）を超音波処理するかまたは撹拌し，次に，溶媒を蒸発させて，薬剤：ＮωＰＥ：ＳｕｃｃＮωＰＥ：追加の脂質リポソーム（中間体３）を形成する。超音波処理，撹拌および蒸発を行う方法および条件，およびこれらの工程を行うための手段は，当業者にはよく理解されており，さらに実施例にも記載される。例えば，逆相ベシクル（ＲＥＶ）法による製造方法，米国特許４，２３５，８７１（その全体を本明細書の一部としてここに引用する）を参照。一般的なリポソーム製造方法，例えば，当業者に知られる単純な水和法およびエタノール注入法を用いてもよい。
【０３５７】
次に，上述のようにして形成された薬剤：ＮωＰＥ：ＳｕｃｃＮωＰＥ：追加の脂質リポソームをサイズにより押し出し，薬剤：ＮωＰＥ：ＳｕｃｃＮωＰＥ：追加の脂質リポソームを単離する。任意に，次に限外濾過を用いてリポソーム溶液を濃縮してもよい。
【０３５８】
リポソームがｌ−ＯＨＰ（薬剤），ＤＭＰＣ（追加の脂質／リン脂質（中性）），コレステロール（ＣＨＯＬ，追加の脂質／中性脂質），Ｎ−グルタリル−ＤＯＰＥ（ＮＧ−ＤＯＰＥ）およびＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥを含有する場合には，約０．２マイクロメートル（２００ｎｍ）の平均直径を有するリポソームを単離することができる。同様にも，ｌ−ＯＨＰ（薬剤），ＤＳＰＣ（追加の脂質／リン脂質（中性），コレステロール，Ｎ−グルタリル−ＤＳＰＥ（ＮＧ−ＤＳＰＥ）およびＮＨＳ−ＮＧ−ＤＳＰＥを含有するリポソームについても，サイジングされたリポソームを得ることができる。脂質成分の標的の量の例は，例えば，約４０ｍｇ／ｍＬのＤＭＰＣ（追加の脂質／ホスファチジルコリン／リン脂質／中性脂質），約２０ｍｇ／ｍＬのＣＨＯＬ（追加の脂質／中性脂質）および約５ｍｇ／ｍＬのＮＧ−ＤＯＰＥ（ＮＧ−ＰＥとＮＨＳ−ＮＧ−ＰＥを合わせた量）である。脂質成分の比率の例は，５０：４５：５（追加の脂質１（例えば，ホスファチジルコリン））：追加の脂質２（例えば，ＣＨＯＬ）：ＮＧ−ＰＥ（例えば，ＮＧ−ＤＯＰＥ＋ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥ）である。
【０３５９】
Ｄ：薬剤：ＮωＰＥ：ＴＦ−ＮωＰＥ：追加の脂質リポソーム（標的化リポソーム）の製造
次に，工程Ｃで記載されるようにして形成した薬剤：ＮωＰＥ：ＳｕｃｃＮωＰＥ：追加の脂質リポソームを，選択された標的化因子で機能化して，薬剤：ＮωＰＥ：ＴＦ−ＮωＰＥ：追加の脂質リポソーム（"標的化リポソーム"とも称される）を生成することができる。
【０３６０】
標的化因子（ＴＦ）の結合（例えば，中間体リポソーム（中間体３）の標的化因子による機能化）は，スクシンイミジル成分と標的化因子との反応によって標的化因子をＳｕｃｃＮωＰＥに共有結合させることにより行うことができる。適当な反応条件で，リポソームの表面に暴露されたスクシンイミジル基（脂質二重層の外側，薬剤または標識された化合物はリポソームの内部に封入されている）を共有結合的に修飾して，標的化因子で修飾されたＮ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミン（ＴＦ−ＮωＰＥ）を生成することができる。標的化因子のリポソームへの結合により，薬剤：ＮωＰＥ：ＴＦ−ＮωＰＥ：追加の脂質リポソーム（標的化リポソーム）が形成される。
【０３６１】
より詳細には，適当な条件下で，本明細書に記載されるＳｕｃｃＮωＰＥのスクシニルカルボキシル成分を機能化する。標的化因子がアミノ基を有する場合には，標的化因子のアミノ基をスクシニルカルボキシル成分と反応させて，カルボン酸アミド結合を形成する。この反応に適した条件は，本明細書の実施例等においてさらに説明され，当業者にはよく理解されるであろう。当業者はまた，標的化因子とリポソームの特定の組み合わせについて，本明細書の教示にしたがって，反応条件を改変して過度の実験を行うことなく条件を最適化することができる。
【０３６２】
本明細書に記載され当業者に知られる種々の標的化因子は，市販されているか，または当業者に知られる方法により製造することができる。
【０３６３】
例えば，トランスフェリンを標的化因子として選択する場合，トランスフェリンは，精製した蛋白質として，例えば，Ｃｅｌｌｉａｎｃｅ  Ｃｏｒｐ．，ＧＡ，ＵＳＡから商業的に入手することができる。トランスフェリンはまた，当該技術分野においてよく知られている組換え方法を用いて（例えば，原核生物細胞（Ｅ．ｃｏｌｉ等）を用いることにより，真核生物細胞（ＣＨＯ，ＢＨＫ等）を用いることにより）得ることができる。よく理解されているように，トランスフェリンは，アポ形またはホロ形のいずれかで入手して標的化リポソーム中で使用することができる。あるいは，アポ−トランスフェリンを取り込ませた標的化リポソームをクエン酸第二鉄，塩化鉄（ＩＩＩ）等の鉄化合物で処理して，ホロ−トランスフェリン誘導化リポソームを取り込んだ標的化リポソームを製造することができる。
【０３６４】
標的化因子としてのトランスフェリンの例示的な量は，例えば，約２ｍｇ／ｍＬトランスフェリンである。このような量は，約４０ｍｇ／ｍＬＤＭＰＣ，約２０ｍｇ／ｍＬＣＨＯＬおよび約５ｍｇ／ｍＬＮＧ−ＤＯＰＥ（ＮＧ−ＰＥおよびＮＨＳ−ＮＧ−ＰＥを合わせた量）を含む例示的標的化リポソームに適しているであろう。
【０３６５】
上述のようにしてリポソーム（中間体３）を標的化因子で機能化して標的化リポソームを得た後，当業者に知られる方法を用いて，例えば，本明細書に記載される精製方法，特に工程Ｃについて上述した方法を用いて，得られたリポソームを任意にさらに精製することができる。
【０３６６】
リポソームがｌ−ＯＨＰ（薬剤），ＤＭＰＣ，コレステロール（ＣＨＯＬ），Ｎ−グルタリル−ＤＯＰＥ（ＮＧ−ＤＯＰＥ）およびＴｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥを含む場合，約０．０５マイクロメートル−約０．２マイクロメートル（約５０ｎｍ−約２００ｎｍ）の平均直径を有するリポソームを単離することができる。同様のサイズのリポソームはまた，ｌ−ＯＨＰ（薬剤），ＤＳＰＣ，コレステロール，Ｎ−グルタリル−ＤＳＰＥ（ＮＧ−ＤＳＰＥ）およびＮＨＳ−ＮＧ−ＤＳＰＥを含むリポソームについて取得することができる。
【０３６７】
上述の方法（便宜のために製造方法Ａと称する）による標的化リポソームの製造により，高い純度および均一性の標的化リポソームを再現性をもって製造することができる。特に，標的化リポソームは，非ＮＨＳ出発物質（本明細書に記載される）およびＳｕｃｃＮωＰＥの生成にともなう副生成物（例えば，アシル化尿素化合物等）を実質的に含まない。特に，リポソーム形成の前にＳｕｃｃＮωＰＥの製造および精製を行うことにより，ＮωＰＥを機能化してＳｕｃｃＮωＰＥを形成するために用いられるカルボジイミド出発物質（例えば，ＤＣＣ，ＥＤＣ等）を実質的に含まないリポソーム（中間体３）および標的化リポソームを得ることができる。先に記載したように，治療または診断の経過において個体に投与することが意図される薬剤および標識された化合物，例えば薬剤または標識された化合物を取り込んだ標的化リポソームは，高い品質のものでなければならない。
【０３６８】
任意に，Ａに記載される脂質混合物（中間体１）を標的化因子で処理して，ＴＦ−ＮωＰＥを含有する脂質混合物を形成することができる。さらに，この脂質混合物を水性溶液と混合して，リポソーム含有組成物を形成することができる。最後に，リポソーム含有組成物を処理してリポソーム処方物を生成する。任意に，水性溶液は薬剤または標識された化合物を含むことができる。
【０３６９】
別の製造方法（方法Ｂ）
製造方法Ｂを図５に図示する。
【０３７０】
Ａ．薬剤：ＮωＰＥ：追加の脂質リポソームの製造
本明細書に記載される標的化リポソームはまた追加の脂質およびＮωＰＥを適当な溶媒（例えば，エタノール，ｔ−ＢｕＯＨ，クロロホルム，イソプロピルエーテル等）に溶解し，得られた溶液を，薬剤または標識された化合物を任意に含んでいてもよい水性溶液中に分散させ，次に得られた分散液を超音波処理または逆相ベシクル処理してリポソーム（薬剤：ＮωＰＥ：中性脂質）を形成することにより製造することができる。リポソーム溶液を限外濾過により濃縮してもよい。
【０３７１】
非限定的例としては，リポソームは，逆相ベシクル（ＲＥＶ）法（米国特許４，２３５，８７１，本明細書の一部としてここに引用する）により製造することができる。もちろん，一般的なリポソーム組成法，例えば，単純水和法およびエタノール注入法も用いることができる。
【０３７２】
脂質二重層中にＮωＰＥを安定に保持させるためには，ＮωＰＥを製造し精製し，次にＮωＰＥを追加の脂質（例えば，リン脂質，コレステロール等）とともに用いて，当業者に知られる方法にしたがって，リポソームを製造する。
【０３７３】
非限定的例として，追加の脂質（例えば，１またはそれ以上のリン脂質（例えば，ＤＳＰＣ，ＤＭＰＣ等），および任意に他の追加の脂質（例えば，コレステロール等）および少なくとも１つのＮωＰＥを一緒に混合し，適当な有機溶媒に溶解させる。
【０３７４】
追加の脂質がリン脂質およびコレステロールである場合，リン脂質とコレステロールとの混合比は，例えば，約１：１，例えば，約１．１：１，約１．２：１，約０．９：１（例えば，ＤＭＰＣおよびコレステロール，５０：４５（ｍｏｌ％）であることができる。総脂質含量の比率としてのＮωＰＥの含有量は，例えば，リン脂質に対して６％である。次に，得られた溶液を水性バッファ中のオキザリプラチンの溶液と混合する。ＮωＰＥは総脂質含量に対して約０．８ｍｏｌ％−約１２ｍｏｌ％であることができる。例えば，約１ｍｏｌ％−約１０ｍｏｌ％，約１ｍｏｌ％−約８ｍｏｌ％，約１ｍｏｌ％−約６ｍｏｌ％，約１ｍｏｌ％−約５ｍｏｌ％，約１ｍｏｌ％−約４ｍｏｌ％，約１ｍｏｌ％−約３ｍｏｌ％，約１ｍｏｌ％−約２ｍｏｌ％，約２ｍｏｌ％−約１２ｍｏｌ％，約２ｍｏｌ％−約１０ｍｏｌ％，約３ｍｏｌ％−約８ｍｏｌ％，約１ｍｏｌ％，約２ｍｏｌ％，約３ｍｏｌ％，約４ｍｏｌ％，約５ｍｏｌ％，約６ｍｏｌ％，約８ｍｏｌ％，約１０ｍｏｌ％，または約１２ｍｏｌ％である。
【０３７５】
薬剤または標識された化合物の溶液中の濃度は，本明細書に記載されるとおりであることができ，特に，製造方法Ａについて上述されるとおりである。同様に，薬剤または標識された化合物を含む溶液は，本明細書に記載される溶液成分を含む。
【０３７６】
この方法により製造される，ｌ−ＯＨＰ（薬剤），ＤＳＰＣ，コレステロールおよびＮ−グルタリル−ＤＳＰＥ（ＮＧ−ＤＯＰＥ）を取り込んだリポソームを単離して，約０．２μｍの平均直径を有するオキザリプラチン含有リポソームを得ることができる（例えば，ゲル濾過により，サイズ排除クロマトグラフィーにより，限外濾過により，超遠心分離により等）。
【０３７７】
Ｂ．薬剤：ＳｕｃｃＮωＰＥ：ＮωＰＥ：追加の脂質リポソームの製造
工程Ａの後に，工程Ａで製造したリポソーム（薬剤：ＮωＰＥ：追加の脂質リポソーム）中に存在するＮωＰＥの一部を機能化して，ＳｕｃｃＮωＰＥを取り込んだリポソーム（すなわち，薬剤：ＳｕｃｃＮωＰＥ：ＮωＰＥ：追加の脂質リポソーム）を取得し，次にこれを修飾してＴＦ−ＮωＰＥを形成する。
【０３７８】
ＳｕｃｃＮωＰＥを形成するためには，ＮωＰＥの末端のカルボキシル基を改変してスクシンイミジル基を形成する。そのような機能化は，ＳｕｃｃＮωＰＥの製造について記載される方法を用いて行うことができる。
【０３７９】
例えば，カルボジイミド（例えば，ＥＤＣ，ＤＣＣ等）およびＮ−ヒドロキシスルホスクシンイミド（ＮＨＳ）をリポソームの存在下で反応させて，薬剤：ＳｕｃｃＮωＰＥ：ＮωＰＥ：追加の脂質リポソームを得る。
【０３８０】
Ｃ．薬剤：ＴＦ−ＮωＰＥ：ＮωＰＥ：追加の脂質リポソームの製造
工程Ｂの後に，工程Ｂで製造した薬剤：ＳｕｃｃＮωＰＥ：ＮωＰＥ：追加の脂質リポソームを標的化因子と反応させて，薬剤：ＴＦ−ＮωＰＥ：ＮωＰＥ：追加の脂質リポソームを製造する。方法および反応条件は製造方法Ａの工程Ｄにおいて記載されるとおりである。
【０３８１】
製造方法Ｂにより得られる薬剤：ＴＦ−ＮωＰＥ：ＮωＰＥ：追加の脂質リポソームは，本明細書に記載され，当業者に知られる方法を用いて，精製および濃縮することができる。
【０３８２】
製造方法の比較
製造方法Ａは製造方法Ｂよりいくつかの有利な点を有するが，いずれの方法も薬剤：ＴＦ−ＮωＰＥ：ＮωＰＥ：追加の脂質リポソーム（標的化リポソーム，任意に薬剤または標識された化合物を含んでいてもよい）を得るために使用することができる。最も注目すべきことには，方法Ａにより得られるリポソームは，ＳｕｃｃＮωＰＥの製造に関連する不純物（例えば，非ＮＨＳ出発物質および／または副生成物）を含まないかまたは実質的に含まない。特に，上述したように，製造方法Ａにより製造した標的化リポソームは，例えば，カルボジイミド（例えば，ＥＤＣ５ＤＣＣ等），およびアシル化尿素を含まないかまたは実質的に含まないであろう。ある態様においては，ＳｕｃｃＮωＰＥがリポソームの内部に取り込まれていない場合，リポソームまたはリポソーム含有組成物はまた，ＮＨＳを含まないかまたは実質的に含まないことができる。さらに，反応のスケールが大きければ大きいほど，製造時間長くなる。製造方法Ａの時間は製造方法Ｂより実質的に短い。
【０３８３】
製造方法Ｂにより製造した薬剤：ＴＦ−ＮωＰＥ：ＮωＰＥ：追加の脂質リポソームの精製により，そのような不純物の量は減るであろうが，リポソーム（例えば，製造方法Ｂの工程Ｂで得られる薬剤：ＳｕｃｃＮωＰＥ：ＮωＰＥ：追加の脂質リポソーム）を精製することは，脂質（例えば，製造方法Ａの工程Ａの前にＳｕｃｃＮωＰＥｓを製造し精製する）より困難である。ＳｕｃｃＮωＰＥのあるものはリポソームの内側に向いているため（例えば，スクシンイミジルエステル官能基は，脂質二重層の内部に存在し，標的化因子との反応にはアクセス可能ではない），製造方法Ａにより製造した標的化リポソームは，その中に取り込まれた残留ＳｕｃｃＮωＰＥをある程度有するであろう。
【０３８４】
製造方法Ａの別の利点は，製造方法Ａを用いた場合には，最終的な薬剤：ＴＦ−ＮωＰＥ：ＮωＰＥ：追加の脂質リポソーム中のＴＦ−ＮωＰＥ対ＮωＰＥの相対的含有量をより正確に制御しうることである。これらの脂質の相対的含有量は，製造方法Ａの工程Ａで出発物質として用いるＳｕｃｃＮωＰＥおよびＮωＰＥの相対的量に直接関連する。したがって，ＴＦ修飾ＳｕｃｃＮωＰＥの量も，より正確に制御することができる。
【０３８５】
製造方法Ｂを用いる場合には，ＮωＰＥ対ＳｕｃｃＮωＰＥの相対的含有量は，方法Ｂの工程Ｂの反応の効率に依存する。この反応は，リポソーム中に存在するＮωＰＥの約１０％が完了するまで進行すると考えられるが，バッチごとに実験による変動が予測される。低い反応効率は，部分的には，予め形成されたリポソームの立体障害によるものであると考えられる。ＳｕｃｃＮωＰＥが単離されたＮωＰＥ（脂質のみ）から形成される場合には，立体障害がはるかに少なく，反応はさらに進んで完了する。また，ＳｕｃｃＮωＰＥ（脂質のみの形で）の形成の後に，得られた生成物を反応混合物から精製することができ，このことにより，未反応ＮωＰＥ，カルボジイミドおよびＮＨＳ，ならびに反応の間に形成したかもしれない他の副生成物が除去される。
【０３８６】
いずれの方法により形成されたリポソームも，ＰＥＧまたは他の親水性ポリマー，例えば，本明細書の発明の背景に記載したものを取り込んだリポソームより均一であるようである（したがって，より再現性の高い薬剤／診断用製品を製造するために用いることができる）。一般に，ＰＥＧまたは他の親水性ポリマーを用いて，リポソームの循環時間を増加させると（例えば，リポソームをＲＥＳによる取り込みから遮断する），ＰＥＧまたは親水性ポリマーそれ自体が広い分布をもつため，これらの使用により，分子サイズの分布を有するリポソームが得られる。この分布は，製造に伴う困難性（例えば，再現性および／または精製）を増加させ，臨床的効力の変動性も増加するかもしれない。方法ＡまたはＢのいずれかにより製造した標的化リポソームは，これらの観点からみて優れているはずである。
【０３８７】
別の製造方法
脂質混合物およびリポソーム含有組成物（これらを用いてリポソームを製造することができる）は，製造方法ＡおよびＢの改変法により製造してもよい。例えば，ある態様においては，追加の脂質成分：ＮωＰＥ：ＴＦ−ＮωＰＥまたは追加の脂質成分：ＮωＰＥ：ＴＦ−ＮωＰＥ：薬剤／標識された化合物（ここで，"追加の脂質成分"は，１またはそれ以上のリン脂質（例えば，１またはそれ以上の中性，１またはそれ以上のアニオン性，１またはそれ以上のカチオン性リン脂質または２またはそれ以上の上述のものの組み合わせを表す））を取り込み，さらに任意に本明細書に記載される１またはそれ以上の追加の脂質（例えば，コレステロールまたはその誘導体）；または本明細書に記載される少なくとも２つの異なる中性脂質（例えば，少なくとも１つのリン脂質（例えば，ＰＣｓ（例えば，ＤＭＰＣ，ＤＳＰＣ等），ＰＩ，スフィンゴミエリン，ホスファチジン酸等）および少なくとも１つの他の中性脂質（例えば，コレステロール））を含んでいてもよい脂質混合物およびリポソーム含有組成物は，以下に記載される製造方法，ならびに当業者が本明細書の教示を考慮して想定する他の改変法により製造することができる。追加の脂質，ＮωＰＥ，ＴＦ−ＮωＰＥ，および存在する場合には薬剤または標識された化合物の各成分は，本明細書の全体に記載されたとおりである。同様に，各成分の相対量も本明細書の全体に記載されたとおりである。
【０３８８】
ある態様においては，製造方法Ｂの第１の工程で生成した脂質混合物（追加の脂質およびＮωＰＥを適当な有機溶媒に溶解することにより製造される脂質混合物）は，ＮＨＳを取り込むように修飾し，次にＴＦで修飾して，追加の脂質成分：ＮωＰＥ：ＴＦ−ＮωＰＥ脂質混合物を生成することができる。次にこの脂質混合物を水性溶液（任意に薬剤または標識された化合物を含んでいてもよい）と混合して，リポソーム含有組成物を形成することができる。あるいは，薬剤または標識された化合物は，リポソーム含有組成物を調製した後に取り込ませてもよい。ある態様においては，水性溶液を含まない薬剤または標識された化合物をＮＨＳおよびＴＦで修飾した後に形成された脂質混合物に取り込ませて，追加の脂質成分：ＮωＰＥ：ＴＦ−ＮωＰＥ：薬剤／標識された化合物の脂質混合物を形成することができる。この脂質混合物は，次に水性溶液と混合してリポソーム含有組成物を形成することができる。
【０３８９】
ある態様においては，製造方法Ｂの第１の工程で生成した脂質混合物（追加の脂質成分およびＮωＰＥを適当な溶媒に溶解することにより製造された脂質混合物）を水性溶液と混合して，リポソーム含有組成物（追加の脂質成分：ＮωＰＥ）を形成することができる。次に，このリポソーム含有組成物を，ＮＨＳおよびＴＦで処理し，次に薬剤または標識された化合物と混合して追加の脂質成分：ＮωＰＥ：ＴＦ−ＮωＰＥ：薬剤／標識された化合物リポソーム含有組成物を形成することができる。あるいは，追加の脂質成分：ＮωＰＥリポソーム含有組成物を薬剤または標識された化合物で処理し，次にＮＨＳで，次にＴＦで修飾することができる。
【０３９０】
ある態様においては，製造方法Ｂの第１の工程で生成した脂質混合物（追加の脂質成分およびＮωＰＥを適当な溶媒に溶解することにより製造された脂質混合物）を，次に薬剤または標識された化合物（任意に水性溶液を含む）と混合して，脂質混合物（この場合，薬剤または標識された化合物は水性溶液を含まない）またはリポソーム含有組成物を形成することができる。脂質混合物を形成した後，脂質混合物をＮＨＳおよびＴＦで処理して，追加の脂質成分：ＮωＰＥ：ＴＦ−ＮωＰＥ：薬剤／標識された化合物脂質混合物を形成することができ，次にこれを水性溶液と混合してリポソーム含有組成物を形成することができる。あるいは，リポソーム含有組成物を形成した後，（例えば，薬剤または標識された化合物を水性溶液中に取り込ませたとき），次にこのリポソーム含有組成物をＮＨＳおよびＴＦで処理して，この場合にも，追加の脂質成分：ＮωＰＥ：ＴＦ−ＮωＰＥ：薬剤／標識された化合物リポソーム含有組成物を得ることができる。
【０３９１】
さらに別の製造方法である方法Ｃにおいては，個々の成分を有機溶媒中で同時に混合して，脂質混合物（Ｃ−１）（例えば，成分：追加の脂質成分；ＮωＰＥ；ＴＦ−ＮωＰＥまたは成分：追加の脂質成分：ＮωＰＥ：ＴＦ−ＮωＰＥ：薬剤または標識された化合物）を形成し，ここで，ＴＦ−ＮωＰＥは，混合する前に製造し，任意に精製する。次に，脂質混合物Ｃ−１を水性溶液と混合して，リポソーム含有組成物Ｃ−２（追加の脂質成分：ＮωＰＥ：ＴＦ−ＮωＰＥ（任意に薬剤または標識された化合物を含む）を形成することができる。このようにして形成されたリポソーム含有組成物が薬剤または標識された化合物を含まない場合には，リポソーム含有組成物（Ｃ２−Ａ）が形成された後に薬剤または標識された化合物を加えることができる。あるいは，水性溶液を含む薬剤または標識された化合物を出発成分として用いる場合には，リポソーム含有組成物は，出発成分をすべて同時に混合することにより形成することができる。
【０３９２】
次に，Ｃ−２（任意に薬剤または標識された化合物を含む）またはＣ２−Ａを処理して，リポソーム（Ｃ−３）を形成する。Ｃ−３が薬剤または標識された化合物を含まない場合には，上に記載されるようにリポソームは空リポソームである（例えば，追加の脂質成分：ＮωＰＥ：ＴＦ−ＮωＰＥリポソーム）。Ｃ−３が薬剤または標識された化合物を含む場合には，リポソームは，本明細書に記載される標的化リポソームである。Ｃ−３が空リポソームである場合，上に記載されるように，次の工程で薬剤または標識された化合物を空リポソームに加えて，標的化リポソームを形成することができる。これは，Ｃ−３の製造の直後に行ってもよく，後に行ってもよく，この場合にはＣ−３空リポソームをある時間保存することが含まれる。
【０３９３】
さらに別の製造方法である方法Ｄにおいては，個々の成分を有機溶媒中で同時に混合して脂質混合物（Ｄ−１）を形成する（例えば，成分：追加の脂質成分；ＮωＰＥ；または成分：追加の脂質成分：ＮωＰＥ：薬剤または標識された化合物）。次に，脂質混合物Ｄ−１を水性溶液と混合して，リポソーム含有組成物Ｄ−２（追加の脂質成分：ＮωＰＥ：（任意に薬剤または標識された化合物を含む）を形成することができる。次に，リポソーム含有組成物Ｄ−２をＴＦ−ＮωＰＥと混合して，リポソーム含有組成物Ｄ−３（追加の脂質成分：ＮωＰＥ：ＴＦ−ＮωＰＥ（任意に薬剤または標識された化合物を含む））を形成し，ここで，ＴＦ−ＮωＰＥは混合前に製造し任意に精製する。このようにして形成されたリポソーム含有組成物が薬剤または標識された化合物を含まない場合には，リポソーム含有組成物の形成後に薬剤または標識された化合物を加えることができる（Ｄ３−Ａ）。あるいは，水性溶液を含む薬剤または標識された化合物を出発成分として用いる場合には，リポソーム含有組成物は，すべての成分を混合する際に同時に形成することができる。
【０３９４】
次に，Ｄ−３（任意に薬剤または標識された化合物を含む）またはＤ３−Ａを処理してリポソーム（Ｄ−４）を形成する。Ｄ−４が薬剤または標識された化合物を含まない場合には，リポソームは上で記載されるような空リポソームである（例えば，追加の脂質成分：ＮωＰＥ：ＴＦ−ＮωＰＥリポソーム）。Ｄ−４が薬剤または標識された化合物を含む場合には，リポソームは本明細書に記載される標的化リポソームである。Ｄ−４が空リポソームである場合には，次の工程において，上で記載されるようにして薬剤または標識された化合物を空リポソームに加えて，標的化リポソームを形成することができる。これはＤ−４の製造の直後に行ってもよく，または後に行ってもよく，この場合にはＤ−４空リポソームをある時間保存することが含まれる。
【０３９５】
製造方法Ａにより形成された脂質混合物，リポソーム含有組成物，およびリポソーム（標的化リポソーム，空リポソーム等を含む）と同様に，製造方法Ｃまたは方法Ｄにより製造された脂質含有組成物は，出発物質（例えば，ＴＦ−ＮＧ−ＰＥ）が製造方法Ｃまたは方法Ｄの最初の工程の前にこれらの物質を実質的に含まない限り，Ｎ−（ω）−ジカルボン酸誘導化ホスファチジルエタノールアミンのスクシンイミジルエステルの合成に伴う非ＮＨＳ出発物質，副生成物および／または分解産物（例えば，カルボジイミド（例えば，ＤＣＣ，ＥＤＣ等），アシル化尿素化合物等）を実質的にを含まない。ＳｕｃｃＮωＰＥが出発物質として含まれない（したがって，リポソームの内部に取り込まれない）場合には，ＴＦ−ＮωＰＥを予め形成して出発物質として用いる場合と同様に，リポソームまたはリポソーム含有組成物はまた，ＮＨＳを含まないかまたは実質的に含まないことができる。特定の態様においては，製造方法Ｃまたは方法Ｄにより製造される脂質含有組成物は実質的にＤＣＣおよびＥＤＣを含まない。ある態様においては，製造方法Ｃまたは方法Ｄにより製造される脂質含有組成物は実質的にＤＣＣを含まない。
【０３９６】
ある態様においては，追加の脂質成分は，１またはそれ以上のリン脂質（例えば，ホスファチジルコリン等）およびコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む。特定の態様においては，ホスファチジルコリンは，本明細書に記載されるように，ＤＭＰＣ，ＰＯＰＣ，ＤＳＰＣ等である。ある態様においては，ホスファチジルコリンはＤＭＰＣまたはＤＳＰＣである。特定の態様においては，追加の脂質はリン脂質およびコレステロールである。ある態様においては，リン脂質は中性リン脂質である。
【０３９７】
ある態様においては，追加の脂質成分は少なくとも２つの異なる中性脂質を含み，これには，リン脂質（例えば，ホスファチジルコリン等）およびコレステロールまたはコレステロール誘導体が含まれる。特定の態様においては，ホスファチジルコリンは，本明細書に記載されるようにＤＭＰＣ，ＰＯＰＣ，ＤＳＰＣ等である。ある態様においては，ホスファチジルコリンはＤＭＰＣまたはＤＳＰＣである。特定の態様においては，少なくとも２つの異なる中性脂質はリン脂質およびコレステロールである。
【０３９８】
ある態様においては，ＮωＰＥはＮＧ−ＰＥである。特定の態様においては，ＮωＰＥはＮω−ＤＯＰＥまたはＮω−ＤＳＰＥである。ある態様においては，ＮωＰＥはＮＧ−ＤＯＰＥまたはＮＧ−ＤＳＰＥである。
【０３９９】
特定の態様においては，ＴＦは，例えば，アシアロ糖蛋白質，葉酸，トランスフェリン等である。ある態様においては，ＴＦはトランスフェリン（Ｔｆ）である。ある態様においては，ＴＦ−ＮωＰＥはＴｆ−ＮωＰＥ（例えば，Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥまたはＴｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥ）である。
【０４００】
特定の態様においては，薬剤は，例えば，抗癌剤（例えば，オキザリプラチン，トポイソメラーゼＩ阻害剤，ビンカアルカロイド等）である。別の態様においては，脂質混合物またはリポソーム含有組成物は，標識された化合物を含有する。ある態様においては，脂質混合物またはリポソーム含有組成物は標識された化合物または薬剤を含有しない。
【０４０１】
先に記載したように，それぞれの脂質混合物を水性溶液と混合してリポソーム含有組成物を形成することができ，それぞれのリポソーム含有組成物を本明細書に詳細に記載されるようにして処理して，対応するリポソーム（例えば，標的化リポソーム（例えば，薬剤または標識された化合物を取り込んだもの），中間体リポソーム，空リポソーム等）を形成することができる。
【０４０２】
本明細書に記載される製造方法の変形法に関しては，ＮＨＳによるＮωＰＥの修飾，ＴＦによるＮＨＳ−ＮωＰＥの修飾，脂質混合物からのリポソーム含有組成物の製造，およびリポソーム含有組成物からのリポソームの製造は，本明細書に提供される教示，特に製造方法ＡおよびＢの詳細な説明および実施例に示される記載があれば，当業者が過度の実験なしに行うことができることが意図される。
【０４０３】
医薬処方物
別の観点においては，本発明は，これを必要とする個体の治療または診断のための医薬処方物を提供し，これは，本明細書に記載される脂質含有組成物および１またはそれ以上の薬学的に許容しうる担体，賦形剤，希釈剤，安定化剤，保存剤，または他の不活性成分，例えば，上述したものの組み合わせを含み，これは当業者に知られており，本明細書にさらに記載される。
【０４０４】
医薬処方物のある態様においては，脂質含有組成物は本明細書に記載される標的化リポソームである。別の態様においては，脂質含有組成物はリポソーム含有組成物である。ある態様においては，脂質含有組成物は空リポソームである。ある態様においては，組成物は薬剤を含む。別の態様においては，組成物は標識された化合物を含む。
【０４０５】
ある態様においては，担体は，滅菌水，バッファ溶液または食塩水，希釈剤の１またはそれ以上，およびこれらの組み合わせを含むことができる。
【０４０６】
医薬処方物はさらに，種々の塩，糖，蛋白質，デンプン，ゼラチン，植物油，ポリエチレングリコール等の１またはそれ以上，およびこれらの２またはそれ以上の組み合わせを含んでいてもよい。
【０４０７】
本発明のさらに別の観点は，本明細書に記載される組成物およびこれらの処方物の，医薬品の製造，特に，本明細書に記載される状態の治療または診断において用いるための医薬品の製造における使用を含む。さらに，本明細書に種々に記載される活性な組成物およびその処方物はまた，特に記載しない限り本明細書に記載される方法にしたがって病気の治療または診断において用いるための薬剤の製造における使用が意図される。
【０４０８】
組成物の使用
投与
上述したように，１つの観点においては，本明細書に記載される薬剤または標識された化合物を含有する脂質含有組成物（例えば，標的化リポソーム，薬剤−／標識された化合物含有リポソーム含有組成物）および医薬処方物を用いて，本明細書に記載される状態を治療または診断する方法が提供される。
【０４０９】
１つの態様においては，この方法は，本明細書に記載される状態の治療に向けた治療的アプローチとして実施することができる。すなわち，特定の態様においては，薬剤を含有する脂質含有組成物または医薬処方物は，治療を必要とする個体，例えばヒトにおいて，本明細書に記載される状態を治療するために用いることができる。この方法は一般に，その状態を治療するのに有効な量の本明細書に記載される組成物または処方物を個体に投与することを含む。
【０４１０】
別の態様においては，この方法は，本明細書に記載される状態の診断に向けた診断的アプローチとして実施することができる。すなわち，特定の態様においては，標識された化合物を含有する脂質含有組成物または医薬処方物は，診断を必要とする個体，例えばヒトにおいて，本明細書に記載される状態を診断するために用いることができる。この方法は一般に，その状態を診断するのに有効な量の本明細書に記載される組成物または処方物を個体に投与することを含む。そのような投与は一般に，その状態を検出する方法と組み合わせて行われる。
【０４１１】
ある態様においては，個体は哺乳動物，例えば，限定されないが，ヒト，ウシ，ウマ，ネコ，イヌ，齧歯類または霊長類である。別の態様においては，個体はヒトである。
【０４１２】
"薬学的有効量"または"治療上有効量"との用語は，特定の疾患，状態または疾病，またはその症状の１またはそれ以上を治療するのに，および／または疾病または疾患の発症を予防するのに十分な量の組成物を表す。癌に関しては，薬学的または治療上有効量は，例えば，腫瘍の縮小を引き起こすか腫瘍の成長速度が低下するのに十分な量を表す。
【０４１３】
"診断上有効量"または"診断的有効量"または"診断に有効な量"との用語およびこれらの同族語は，特定の疾患，状態または疾病，および／またはその徴候の１またはそれ以上を診断するのに十分な量の組成物を表し，ここで，診断には，疾病の存在の同定，および／または疾病の程度または重篤度の検出が含まれる。例えば，癌に関しては，"診断的有効量"とは，例えば，１またはそれ以上の悪性細胞，腫瘍または癌の他の徴候の存在および／または濃度を検出するのに有効な量を含む。しばしば，診断は，その状態を有しない個体について観察されるベースラインまたはバックグラウンド検出レベルを参照して行われる。バックグラウンドまたはベースラインレベルより高いレベルの検出（上昇したレベルの検出）は，その状態の存在を，または場合によっては重篤度を示す。
【０４１４】
治療方法および薬剤含有脂質含有組成物の使用に関して用いる場合，"治療を必要とする個体"とは，治療すべき状態について診断されているかまたは以前に治療している個体である。診断方法および標識された化合物含有組成物の使用に関して，"診断を必要とする個体"は，その状態を有すると疑われる個体，その状態を有するリスクを有する個体（例えば，その状態の家族歴，その状態のリスクを示すライフスタイル因子（例えば，肺癌のリスク因子としての喫煙等）），または以前にその状態であると診断された個体（例えば，診断は，疾病の重篤度（例えば，進行／退縮）の経時的モニタリング，および／または治療との組み合わせを含みうる）でありうる。
【０４１５】
ある態様においては，治療または診断すべき状態は癌である。ある態様においては，癌は，胃，結腸，結腸直腸または乳の癌でありうる。ある態様においては，癌は結腸癌である。別の態様においては，癌は乳癌である。さらに別の態様においては，癌は胃癌である。ある態様においては，癌は，膵臓の癌，非小細胞肺癌，小細胞肺癌，脳癌，肝臓癌，腎臓癌，前立腺癌，膀胱癌，卵巣癌，または悪性血液腫瘍（例えば，白血病，リンパ腫，多発性骨髄腫等）である。
【０４１６】
薬剤含有組成物，例えば本明細書に記載される処方物は，単独でまたは他の治療モード（例えば，癌補助療法，組み合わせモダリティー治療）と組み合わせて（例えば，前に，同時に，または後に）用いることができる。例えば，他の治療剤（例えば，本明細書に記載され当業者に知られる癌化学療法剤（例えば，アルキル化剤，タキサン，代謝性アンタゴニスト，抗腫瘍抗生物質，植物アルカロイド，ホルモン療法薬剤，分子標的薬等）），外科手術，および／または放射線療法と組み合わせることができる。治療している状態が癌である場合，本明細書に記載される組成物は，本明細書に記載され当該技術分野において知られる他の抗癌剤または細胞毒性化合物の１またはそれ以上，有害な反応および／またはその臨床的発現の発症および／または重篤度を低減する１またはそれ以上の追加の薬剤，外科手術（例えば，腫瘍またはリンパ節の除去等）または放射線照射と組み合わせて投与することができる。外科手術または放射線照射の１またはそれ以上が治療計画の一部である場合には，組成物は，放射線療法または外科手術の前に，同時に，または後に投与することができる。同様に，本明細書に記載される組成物およびその処方物は，１またはそれ以上の抗癌剤を投与する前に，同時に，または後に投与することができる。本明細書に記載される標的化リポソームおよび処方物はまた，状態または治療計画に伴う症状（例えば，嘔吐，脱毛，免疫抑制，下痢，発疹，感覚障害，貧血，倦怠感，口内炎，手足症候群等を低下させる薬剤）を軽減するための薬剤と組み合わせて（例えば，前に，同時に，または後に）投与することができる。標的化リポソームはまた，治療計画の２以上の段階（全範囲を含む）（例えば，外科手術の後，および放射線療法と同時またはその後等）で投与してもよい。
【０４１７】
標識された化合物を含有する組成物，例えば，本明細書に記載される処方物は，単独で用いてもよく，治療モード（例えば，癌補助療法，組み合わせモダリティー治療）と組み合わせて（例えば，前に，同時に，または後に）用いてもよい。例えば，組成物は，治療の進行をモニターするために用いることができる。例えば，治療計画の前に，後に，または同時に，治療している状態が検出可能であるか否かを判定することができる（治療方法に関して上述したように）。
【０４１８】
ある態様においては，組成物は，外科手術（例えば，腫瘍またはリンパ節の除去等）の前にまたは後に投与される。別の態様においては，組成物は，外科手術の後に，および放射線療法の前に，同時に，または後に投与される。外科手術および／または放射線療法の１またはそれ以上と本明細書に記載される組成物，および任意に追加の１またはそれ以上の化学療法剤の投与との最適な組み合わせは，個体に基づいて，特定の個体に影響を及ぼす種々の因子，例えば本明細書に記載されるものを考慮して，担当医師により決定される。
【０４１９】
特定の態様においては，薬剤含有組成物または医薬処方物は，５−フルオロウラシルおよび／またはロイコボリンの一方または両方との組み合わせで投与することができる。別の態様においては，薬剤含有組成物または医薬処方物は，１またはそれ以上の他の抗癌剤，例えば，カペシタビン，ＵＦＴ／ＬＶ（テガフール−ウラシルおよびロイコボリン），イリノテカン，抗ＥＧＦＲ抗体（例えば，セツキシマブ等），抗ＶＥＧＦ抗体（例えば，アバスチン等），チロシンキナーゼ阻害剤（例えば，エルロチニブ）等と組み合わせて投与することができる。このような投与はまた，放射線療法および／または外科手術等の治療計画と組み合わせてもよい。ある態様においては，標的化リポソーム中に封入される薬剤はオキザリプラチンである。
【０４２０】
本明細書に記載される使用方法と併せて，本発明の脂質含有組成物または医薬処方物は非経口的に投与してもよい。非経口的投与は，ボーラス注射（ＩＶ），注入（ＩＶ），腹腔内注射，または局所注射（例えば頭蓋内注射）によって行うことができる。ある態様においては，投与はボーラス注射または連続注入により行う。
【０４２１】
連続静脈内注入は，数分間または数時間，例えば，限定されないが，約１０分間−約５時間，約１５分間−約４時間；約３０分間−約４時間；約４５分間−約４時間，約６０分間−約４時間，約４５分間−約３時間，約６０分間−約２時間，約９０分間−約３時間，約９０分間−約２時間，約１０分間，約１５分間，約２０分間，約３０分間，約４５分間，約５０分間，約６０分間，８０分間，約１．５時間，約２時間，約２．５時間，約３時間，約３．５時間，約４時間，約５時間，約１２時間，約２４時間，約３６時間，または約４８時間にわたり投与することができる。
【０４２２】
処方物および投与量
上述したように，本明細書に記載される脂質含有組成物および医薬処方物は，本明細書に記載される使用方法と併せて，本明細書に記載される状態の治療または診断のために，これを必要とする個体に投与することができる。
【０４２３】
本明細書に記載される脂質含有組成物，特に本明細書に記載される標的化リポソームは，一般に意図される結果を達成するのに有効な量で，例えば，治療している特定の状態を治療または予防するのに有効な量で用いられる。組成物は，治療上の利益を達成するように治療的に投与することができる。治療上の利益とは，患者が依然として基礎疾患に罹患しているとしても，患者が感覚または状態の改善を報告するように，治療している基礎疾患が根絶または改善されるか，および／または基礎疾患に伴う症状の１またはそれ以上が根絶または改善されることを意味する。治療上の利益はまた，改善が実現されるか否かにかかわらず，疾病の進行の停止または遅延をも含む。
【０４２４】
ある態様においては，治療している状態が癌である場合，有効量は，腫瘍成長を低下させるのに十分な量である（例えば，治療の前および／または後の平均腫瘍体積の増加率により測定して）。ある態様においては，有効量は，平均腫瘍体積を減少させるのに十分な量である（例えば，治療後の平均腫瘍体積が治療前の平均腫瘍体積より減少している場合）。
【０４２５】
有効量の封入される薬剤（例えば，オキザリプラチン）を投与するために投与される組成物の量は，種々の因子，例えば，治療している特定の状態，投与のモード，治療している状態の重篤度，および患者の年齢および体重，組成物の生物利用性，治療を受けている個体が経験する有害な影響等により異なる。有効量の判定は，本明細書に提供される教示を考慮して，十分に当業者の能力の範囲内である。
【０４２６】
ある態様においては，特定の時点で投与される封入されたオキザリプラチンの投与量は，約１−約４００ｍｇ／ｍ２／日の範囲内であることができる。例えば，約１−約３５０ｍｇ／ｍ２／日，１−約３００ｍｇ／ｍ２／日，１−約２５０ｍｇ／ｍ２／日，１−約２００ｍｇ／ｍ２／日，１−約１５０ｍｇ／ｍ２／日，１−約１００ｍｇ／ｍ２／日，約５−約８０ｍｇ／ｍ２／日，約５−約７０ｍｇ／ｍ２／日，約５−約６０ｍｇ／ｍ２／日，約５−約５０ｍｇ／ｍ２／日，約５−約４０ｍｇ／ｍ２／日，約５−約２０ｍｇ／ｍ２／日，約１０−約８０ｍｇ／ｍ２／日，約１０−約７０ｍｇ／ｍ２／日，約１０−約６０ｍｇ／ｍ２／日，約１０−約５０ｍｇ／ｍ２／日，約１０−約４０ｍｇ／ｍ２／日，約１０−約２０ｍｇ／ｍ２／日，約２０−約４０ｍｇ／ｍ２／日，約２０−約５０ｍｇ／ｍ２／日，約２０−約９０ｍｇ／ｍ２／日，約３０−約８０ｍｇ／ｍ２／日，約４０−約９０ｍｇ／ｍ２／日，約４０−約１００ｍｇ／ｍ２／日，約８０−約１５０ｍｇ／ｍ２／日，約８０−約１４０ｍｇ／ｍ２／日，約８０−約１３５ｍｇ／ｍ２／日，約８０−約１３０ｍｇ／ｍ２／日，約８０−約１２０ｍｇ／ｍ２／日，約８５−約１４０ｍｇ／ｍ２／日，約８５−約１３５ｍｇ／ｍ２／日，約８５−約１３５ｍｇ／ｍ２／日，約８５−約１３０ｍｇ／ｍ２／日，または約８５−約１２０ｍｇ／ｍ２／日の範囲内であることができる。特定の時点で投与される投与量はまた，約１３０ｍｇ／ｍ２／日，約１２０ｍｇ／ｍ２／日，約１００ｍｇ／ｍ２／日，約９０ｍｇ／ｍ２／日，約８５ｍｇ／ｍ２／日，約８０ｍｇ／ｍ２／日，約７０ｍｇ／ｍ２／日，約６０ｍｇ／ｍ２／日，約５０ｍｇ／ｍ２／日，約４０ｍｇ／ｍ２／日，約３０ｍｇ／ｍ２／日，約２０ｍｇ／ｍ２／日，約１５ｍｇ／ｍ２／日，または約１０ｍｇ／ｍ２／日であってもよい。
【０４２７】
投与される用量は，本明細書に記載される投与量の範囲より高くても低くてもよく，組成物の生物利用性，有害な副作用に対する個体の耐性，投与のモード，および上述した種々の因子を初めとする因子によって異なる。投与量および投与間隔は，担当医師の判断にしたがって，治療効果を維持するのに十分な組成物の血漿レベルを与えるように個々に調節することができる。当業者は，本明細書に提供される教示を考慮して，過度の実験を行うことなく，有効な局所投与量を最適化することができるであろう。
【０４２８】
投与量はまた，当業者には理解されるように，インビボ動物モデルを用いて見積もることができる。
【０４２９】
多数回投与量（例えば，連続またはボーラス）の本明細書に記載される組成物をこれを必要とする個体に，数時間，数日，数週，または数月にわたって投与してもよい。例えば，限定されないが，毎日，２日に１回，１０日に１回，週に１回，月に１回，週に２回，週に３回，月に２回，月に３回，月に４回，月に５回，２ヶ月に１回，３ヶ月に１回，４ヶ月に１回等。
【０４３０】
キット
本明細書に記載される組成物，および組成物を含む医薬処方物を投与するためのキットも提供される。
【０４３１】
ある態様においては，キットは，１回投与量（例えば，治療または診断に用いるための）の，本明細書に記載される少なくとも１つの脂質含有組成物，またはその医薬処方物を含むことができる。キットはさらに，適当な包装および／または組成物の使用の指針を含むことができる。キットはまた，組成物，またはその医薬処方物をデリバリーするための手段，例えば，注射用シリンジまたは本明細書に記載され当業者に知られる他のデバイスを含むことができる。
【０４３２】
ある態様においては，キットは，１回投与量（例えば，治療または診断に用いるための）の，本明細書に記載される空リポソーム，またはその医薬処方物を含むことができる。キットはさらに，適当な包装および／または組成物の使用の指針を含むことができる。キットはまた，組成物またはその医薬処方物をデリバリーするための手段，例えば，注射用シリンジまたは本明細書に記載され当業者に知られる他のデバイスを含むことができる。さらに，ある態様においては，キットは，空リポソーム中に取り込むべき薬剤または標識された化合物の別々の投与量を含むことができる。
【０４３３】
さらに，脂質含有組成物，またはその医薬処方物は，キットの形として組み立てることができる。キットは，脂質含有組成物，またはその医薬処方物および投与用の組成物を調製するための試薬を提供する。組成物は，乾燥または凍結乾燥の形，または溶液，特に滅菌溶液中の形でありうる。組成物が乾燥形である場合，試薬は液体処方物を調製するための薬学的に許容しうる希釈剤を含むことができる。そのような希釈剤としては，当業者に知られるもの，例えば，糖溶液，例えば，デキストロース，スクロース等が挙げられる。ある態様においては，キットは，約１％−約２０％，約１％−約１８％，約１％−約１５％，約１％−約１０％，約３％−約１０％，約３％−約６％，約１％，約２％，約３％，約４％，約５％，約６％，約７％，約８％，約９％，約１０％，約１２％，約１５％，約１８％，または約２０％糖の糖溶液を含むことができる。ある態様においては，溶液は，デキストロース溶液（例えば，約１％，約２％，約５％デキストロース等）であることができる。ある態様においては，脂質含有組成物は，例えば，標的化リポソーム，空リポソーム，脂質混合物，またはリポソーム含有組成物（任意に薬剤または標識された化合物を含む）であることができる。
【０４３４】
キットはまた，組成物を投与または分配するためのデバイス，例えば，限定されないが，シリンジ，ピペット，または当業者に知られる他のデバイスを含むことができる。湿った形の組成物は，アンプルまたは他の滅菌密封容器，例えば当業者に知られる容器に保存することができる。
【０４３５】
キットは，本明細書に記載される化合物と組み合わせて用いるための他の治療用化合物を含むことができる。１つの態様においては，治療用薬剤は，他の抗癌剤である。これらの約ジアは，別々の形で提供されてもよく，または本発明の化合物と混合してもよく，ただし，そのような混合は，追加の治療用薬剤または本明細書に記載される組成物および処方物の有効性を低下させない。同様に，キットは補助療法用の追加の薬剤を含むことができる。例えば，薬剤の有害な作用を低下させる薬剤（例えば，制嘔吐剤，抗脱毛剤，免疫増強剤等）を含むことができる。
【０４３６】
キットは，組成物の調製および投与，組成物の副作用，および他の任意の関連する情報のための適当な指針を含む。指針は，任意の適当なフォーマット，例えば，限定されないが，印刷物，ビデオテープ，コンピュータ読み取り可能なディスク，または光学的ディスクの形であることができる。
【０４３７】
本発明の別の観点においては，本明細書に記載される状態に罹患しているかまたは罹患しやすい個体を治療するためのキットが提供され，これは，１回投与量の本明細書に記載される脂質含有組成物またはその処方物を含む第１の容器および使用の指針を含む。容器は当業者に知られ，静脈内処方物の保存および運搬に適当な任意の物であることができる。ある態様においては，キットはさらに組成物を個体に投与すべく調製するための薬学的に許容しうる担体，希釈剤，アジュバント等を含む第２の容器を含む。
【０４３８】
キットはまた，個体に有効な治療を長期間，例えば，１週間，２週間，３，週間，４週間，６週間，８週間，３か月，４か月，５か月，６か月，７か月，８か月，９か月またはそれ以上提供するのに十分な投与量の本明細書に記載される組成物またはその処方物を含むよう提供することができる。
【０４３９】
キットはまた，多数回投与量の脂質含有組成物またはその処方物および使用の指針を含み，薬局，例えば，医院薬局および複合薬局で保存し使用するのに十分な量で包装することができる。
【０４４０】
本明細書において参照されるすべての特許，特許出願および刊行物は，その全体を本明細書の一部としてここに引用する。
【実施例】
【０４４１】
以下の実施例を参照して本発明をさらに詳細に説明するが，これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【０４４２】
実施例１：オキザリプラチンの細胞毒性試験
オキザリプラチン（ｌ−ＯＨＰ）溶液は，オキザリプラチンを９％スクロース溶液（スクロース／蒸留水）に８ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解することにより調製した。細胞の生存率は，市販の細胞毒性アッセイキット（ＷＳＴ−Ｉキット，Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）を用いて測定した。
【０４４３】
ＡｓＰＣ−１細胞（Ｄｒ．Ｈｉｒｏｎｏｂｕ  Ｙａｎａｇｉｅ，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎより供与）を１０％ＦＣＳ（ウシ胎児血清；ＳＩＧＭＡ，ＵＳＡ）を補充したＲＰＭＩ１６４０培地で培養し，種々の濃度のｌ−ＯＨＰ溶液［２００ｘ（１／２）（０−１０）ｎＭ］で，３７℃で５％ＣＯ２で４８時間処理した。次に，培地を除去し，基質（ＷＳＴ−Ｉ，細胞係数キット，Ｄｏｊｉｎｄｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｊａｐａｎ）を細胞に加え，これを３７℃で５％ＣＯ２で２時間インキュベートして，着色生成物を発色させた。発色は，Ｉｍｍｕｎｏ  Ｍｉｎｉ  ＮＪ−２３００（Ｃｏｓｍｏ  ＢｉｏＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）を用いて，４５０ｎｍ（参照波長：６２０ｎｍ）の吸収により測定した。
【０４４４】
結果を図６に示す。ｌ−ＯＨＰの細胞毒性はＬＤ５０＞８μｇ／ｍｌであった。
【０４４５】
実施例２：細胞表面上のトランスフェリンレセプターの数の決定
実験には，ヒト正常白血球およびヒト悪性腫瘍由来細胞株（Ｋ５６２，ＭＫＮ４５ＰおよびＨＬ６０）を用い，以下の結果を得た。
Ｋ５６２：ＴＫＧ０２１０（Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｔｏｈｏｋｕ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊａｐａｎ）；ＭＫＮ４５Ｐ（Ｄｒ．ＨｉｓａｅＩｉｎｕｍａ，Ｔｅｉｋｙｏ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊａｐａｎ）；ＨＬ６０：ＴＫＧ０３４５（Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｔｏｈｏｋｕ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊａｐａｎ）。
【０４４６】
各細胞の細胞表面上のＴｆ（トランスフェリン）レセプターの数は，スキャッチャード分析により求めた（Ｃｏｍｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１１６Ｂ，１３７−１６０（１９４９），Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌを使用）。１２５Ｉ−標識Ｔｆ（Ｎａ−１２５Ｉ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｊａｐａｎ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）の溶液およびｈ−Ｔｆ（Ｔ−４１３２，ＳＩＧＭＡ，ＵＳＡ）ｗｅｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄｂｙヨードゲン法（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１２２，３１９−３２５（１９８４））により組み合わせて，４℃で［３００ｘ（１／２）（０−９）ｎＭ］の範囲の種々の濃度で各細胞培養物に加え，１時間インキュベートした。
【０４４７】
１２５Ｉ−標識Ｔｆの濃度は，ローリー法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９３，２６５−２７０（１９５１））を用いる蛋白質定量アッセイにより決定し，放射活性はガンマカウンター（Ａｕｔｏ  Ｗｅｌｌ  Ｇａｍｍａ  Ｓｙｓｔｅｍ  ＡＲＣ−３００，Ａｌｏｋａ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）を用いて測定した。簡単には，溶液を遠心分離して細胞を沈殿させ，細胞画分を氷冷ＰＢＳ（１８０ｘｇ（重力）で３分間洗浄し，これを３回繰り返し，次に，ガンマカウンターで放射活性を測定して，細胞表面に結合したＴｆの濃度を決定した。細胞の数は，ローリー法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９３，２６５−２７０（１９５１））を用いる蛋白質定量アッセイにより決定した。
【０４４８】
各データ点について，未結合Ｔｆの濃度は，結合したＴｆの濃度を加えたＴｆの既知の濃度から差し引くことにより決定した。スキャタードプロットは，結合したＴｆの濃度を横軸に，結合したＴｆの濃度対未結合Ｔｆの濃度の比率を縦軸にしてプロットすることにより描いた。結合したＴｆの数（すなわちレセプターの数）は，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８０２２６３−２２６６（１９８３）；Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ，１３２，４９２−５００（１９８７）；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９２３３１８−３３２２（１９９５）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ，８４，２１６−２２０（１９９５）；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１８６，３６７−３７３（１９８９）；Ｊ．Ｂｉｏｌ，Ｃｈｅｍ．，２５８，４７１５−４７２４（１９８３）（その全体を本明細書の一部としてここに引用する）に記載されるようにして，グラフのｘ切片から求めた。
【０４４９】
異なる細胞タイプにおける細胞表面に結合した１２５Ｉ−Ｔｆの数を図７に示す。ヒト悪性腫瘍に由来する細胞株の細胞表面上のトランスフェリン（Ｔｆ）レセプターの数は，正常白血球におけるより有意に多いことが判明した。
【０４５０】
実施例３：ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥの製造
重さ２００ｍｇのＮＧ−ＤＯＰＥ（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）（Ｃａｔ．Ｎｏ．８７０２４２，ＭＷ８８０．１３））を秤量して，２口三角フラスコに入れた。このフラスコに３９．２ｍｇのＮＨＳ（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ，ＭＷ＝１１５．０９）を加えた。次に，５ｍＬのクロロホルム／酢酸エチル（１：１（ｖ／ｖ），Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）を加え，フラスコを回してＮＧ−ＤＯＰＥおよびＮＨＳを溶解させ始めた。わずかな濁りが観察された。
【０４５１】
最初の混合の後，攪拌棒を加え，フラスコを設定（窒素ガスを満たした風船）して，フラスコの一方の口に窒素ガスを穏やかに吹き込み，ゴム栓で密封した。撹拌棒および撹拌プレートを用いて窒素下での撹拌を行った。他方の口を管で密封した。反応は周囲温度（２０−２３℃）で行った。混合物を５−１０分間撹拌した。液体＋ＮＨＳ反応混合物の２０μＬのサンプルをＴＬＣ対照として取り分けておいた。
【０４５２】
別のフラスコ中で，７０ｍｇのＤＣＣを５ｍＬの酢酸エチルに溶解することにより，ＤＣＣ（９９％，Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ，ＭＷ：２０６．３３ｇ／ｍｏｌ）の溶液を調製した。ＤＣＣは溶媒中で急速に溶解して，透明な溶液が得られた。次に，このようにして調製したＤＣＣ溶液（約５ｍＬ）を脂質／ＮＨＳ反応混合物に１０−１５分間かけて滴加した。ＤＣＣを加えると反応混合物はさらに濁った。
【０４５３】
ＴＬＣは，対照（脂質／ＮＨＳ）および脂質／ＮＨＳ／ＤＣＣのアリコートについて，時刻０を参照として以下のようにして行った。サンプルは５０μｇ（２０ｍｇ／ｍＬを２．５μＬ）をＴＬＣプレート（アルミニウムシート−シリカゲル６０Ｆ２５４，ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ，ＵＳＡ）ＣａｔＮｏ．ＳＰ０５５５４Ｍ）にスポットし，乾燥し，次に展開槽に入れて，ここで溶媒（７０％クロロホルム，２８％メタノール，２％水）を移動させた。溶媒の先端に印をつけ，次にＴＬＣプレートをモリブデン酸アンモニウム（５％モリブデン酸アンモニウム，１０％Ｈ２ＳＯ４中）に浸漬し，乾燥機で乾燥させた。
【０４５４】
脂質／ＮＨＳ／ＤＣＣ反応混合物を窒素気流下で撹拌し，生成物の形成を経時的にモニターした（Ｒｆ０．３−０．４）。
【０４５５】
１８時間後，ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥへの変換は完全ではなく，さらにＮＨＳ（２６ｍｇ，２ｍＬ酢酸エチル中）およびＤＣＣ（４７ｍｇ，１ｍＬ酢酸エチル中）を加えた。反応の進行をＴ＝２０ｈｒにＴＬＣで再び調べた。
【０４５６】
週末の間，窒素気流中撹拌しながら周囲温度で反応を進行させた（光から保護）。精製前にいくつかの出発物質が残っていた。
【０４５７】
精製：反応混合物を氷上で約３０分間冷却した。次に，冷却した反応混合物ををブフナー漏斗で濾過し，２ｘ５ｍＬクロロホルムで３回洗浄した。得られた液体をすべて回収し，回転蒸発により乾燥した。蒸発の後，半固体ペーストが得られた。次にペーストを２−３ｍＬのクロロホルムに再懸濁した。
【０４５８】
懸濁したペーストを精製するためのシリカゲルは，シリカ（４００メッシュ）４ｇ−クロロホルム中で水和−を用いて調製した。シリカゲルは，活栓を有する１ｃｍｘ２８ｃｍカラムに充填した。床のおよそのサイズは１ｃｍｘ１４ｃｍであった。カラムをクロロホルムで平衡化した（重力充填）。
【０４５９】
サンプルを平衡化した（ただし乾燥していない）シリカゲルカラムに負荷した。１０ｍＬのクロロホルムをカラム（５ｘ２ｍＬ）に加えた。５ｘ２ｍＬの画分を回収した。流速は重力の関数であったが，１０−２０分間で５ｘ１０ｍＬの画分を回収し，これを画分１−５と名付けた。
【０４６０】
次に，５０ｍＬクロロホルム／メタノール（９０／１０，ｖｏｌ／ｖｏｌ）をカラム（５ｘ１０ｍＬ）に加えた。５ｘ１０ｍＬの画分を回収し，これを画分６−１０と名付けた。
【０４６１】
画分６−１０を回収した後，１００ｍＬのクロロホルム／メタノール（５／１（ｖ／ｖ））をカラム（１０ｘ１０ｍＬ）に加えた。追加の１０ｘ１０ｍＬの画分を回収し，これを画分１１−１５と名付けた。
【０４６２】
画分６−１５をＴＬＣで上述したようにアッセイした（５μｌのアリコート）。
【０４６３】
画分６−１５のＴＬＣ後，画分７−１１をプールし，回転蒸発機を用いて乾燥して薄層とした。蒸発後に得られた最終生成物は，ＴＬＣにより判定して，未精製反応生成物に対して，１３０ｍｇ（収率６５％）であり，ＮＯＦ（Ｊａｐａｎ）から得られた標準物質（ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥ）と比較した。
【０４６４】
実施例４：ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥの製造
予め調製し精製したＮＧ−ＤＯＰＥ（２００ｍｇ）（ＮＯＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｊａｐａｎ）およびＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミド；３４ｍｇ）を秤量し，５ｍＬの２口三角フラスコに入れた。一方の口をゴム栓で密封し，他方の口から撹拌棒を入れた。
【０４６５】
次にフラスコを減圧下に置き，窒素ガスを穏やかに流して充填した（３回繰り返し）。次に窒素風船を用いてフラスコを窒素下に保持した。
【０４６６】
窒素下に置いた後，２．５ｍＬの乾燥クロロホルムをフラスコに入れ，撹拌棒および撹拌プレートを用いて撹拌した。反応は周囲温度で約３０分間行い，渦巻きを用いて出発物質を溶解した。脂質＋ＮＨＳの２０μＬのサンプルを，ＴＬＣ対照／反応のモニタリングにおいて用いるために取り分けた。
【０４６７】
２．５ｍＬの乾燥クロロホルムに溶解した６１ｍｇのＤＣＣ（１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド）の溶液（透明，急速に溶解）を調製した。ＤＣＣ溶液を脂質／ＮＨＳ混合物に１５分間かけて滴加した。溶液はＤＣＣを加えると濁った。
【０４６８】
時間０で，脂質／ＮＨＳおよび脂質／ＮＨＳ／ＤＣＣのＴＬＣ（７０％クロロホルム，３０％メタノール，５％水）を行って，５０ｍｇのクロロホルムをＴＬＣプレートにスポットし，乾燥させ，次にこれを反応チャンバ（７０％クロロホルム，３０％メタノール，５％水）中に入れて移動させることにより，反応をモニターした。
【０４６９】
反応混合物は，窒素気流下で撹拌を続け，生成物の形成（Ｒｆ０．３−０．４）を経時的にモニターした。
【０４７０】
反応は，窒素気流および撹拌下で室温で２−３日間進行させた。
【０４７１】
次に，反応混合物をブフナー漏斗を通して濾過し，２ｘ５ｍＬのクロロホルムで洗浄した。全溶液を回収し，回転蒸発機で乾燥した。半固体ペーストが得られた。
【０４７２】
半固体ペーストを２ｘ３ｍＬのクロロホルムに再懸濁し，次に濾過し，乾燥した。この工程を３回繰り返した。３回の後，最後に生成物を２ｘ３ｍＬクロロホルムに再懸濁した。
【０４７３】
シリカゲルカラムは，シリカをクロロホルム中で混合し，次にこれを活栓を有する１ｃｍｘ２８ｃｍのカラムに充填することにより調製した。カラム床のおよそのサイズは１ｃｍｘ１４ｃｍであった。カラムをクロロホルムで平衡化した（重力充填）。
【０４７４】
サンプルを，平衡化した（ただし乾燥していない）シリカゲルカラムに負荷した。次に，１００ｍＬのクロロホルムをカラムに加え，１００ｍＬ画分ごとにアリコートを回収した。流速は重力の関数であった（画分１）。
【０４７５】
１００ｍＬのクロロホルム／メタノール（９０／１０，ｖｏｌ／ｖｏｌ）をカラムに加えた。１００ｍＬ画分を回収した（画分２）。
【０４７６】
２００ｍＬのクロロホルム／メタノール（５０／１０，ｖｏｌ／ｖｏｌ）をカラム（２０ｘ１０ｍＬ）に加えた。２０ｘ１０ｍＬの画分を回収した（画分３−２３）。
【０４７７】
画分１−２３を，５ｍＬのアリコートを用いてＴＬＣによりアッセイした。
【０４７８】
画分９−２２をプールし，回転蒸発機で乾燥して薄層とし，凍結乾燥した。これらの画分からのＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥの最終重量は６１．９ｍｇ（収率２７．９％）であった。
【０４７９】
実施例５：脂質混合物（ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨ）の製造
５８３ｍｇのＤＭＰＣ（ＮＯＦ  ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｊａｐａｎ），２９９ｍｇのコレステロール（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）および７５．７ｍｇのＮＧ−ＤＯＰＥ（ＮＯＦ  ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｊａｐａｎ）を混合し，４５−５０℃でｔ−ＢｕＯＨ（１０ｖ／ｗｖｓ．脂質（１０ｍＬ））に溶解した。
【０４８０】
得られた溶液をバイアルに注加し，棚上で−４０℃で約８時間凍結させた。これを約０．１ｍｍＨｇまで減圧し，温度を−４０℃から２５℃まで段階的に上昇させながら減圧下で２日間保持した。この工程により凍結乾燥した脂質混合物が得られた。
【０４８１】
上述で得られた凍結乾燥した脂質混合物の粉体を２０ｍｇの粉体Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ（実施例２９に記載されるようにして製造）と混合し，破砕した。このようにして，脂質混合物の均一粉体が得られ，脂質比は５０：４５：５（ＤＭＰＣ：Ｃｈｏｌ：ＮＧ−ＤＯＰＥ＋Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ）であった。
【０４８２】
実施例６：リポソーム含有組成物の製造
液体混合物は，先の実施例にしたがって調製し，その成分の詳細は以下のとおりである。
エントリー１：ＤＭＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＮＧ−ＤＯＰＥ（１５５ｍｇ／７９．４ｍｇ／１６．１ｍｇ）
エントリー２：ＤＭＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＮＧ−ＤＯＰＥ（１５５ｍｇ／７９．４ｍｇ／ｌ６．ｌｍｇ）
エントリー３：ＤＭＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＮＧ−ＤＯＰＥ／ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥ（ｌ５２ｍｇ／７７．９ｍｇ／１５．８ｍｇ／４．３８ｍｇ）
エントリー４：ＤＭＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＮＧ−ＤＯＰＥ／ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥ（１５２ｍｇ／７７．９ｍｇ／１５．８ｍｇ／４．３８ｍｇ）
エントリー５：ＤＭＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＮＧ−ＤＯＰＥ／Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ（１４８ｍｇ／７６．０ｍｇ／１５．４ｍｇ／４．８ｍｇ）
エントリー６：ＤＭＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＮＧ−ＤＯＰＥ／Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ（１４８ｍｇ／７６．０ｍｇ／１５．４ｍｇ／４．８ｍｇ）
【０４８３】
エントリー１，３および５をそれぞれ水和させ，３００ｍＭの水性スクロース溶液（２０ｖ／ｗ対脂質（５ｍＬ）（５ｍＬのスクロース溶液（２０ｖ／ｗ）を乾燥脂質混合物に加えて撹拌した）とともに４０−４５℃で３０分間撹拌した。エントリー２，４および６をそれぞれ水和させ，ｌ−ＯＨＰ（３００ｍＭスクロース溶液中，８ｍｇｌ−ＯＨＰ／ｍＬ，２０ｖ／ｗ対脂質（５ｍＬ））の水性溶液とともに４０−４５℃で３０分間撹拌した。このようにして，リポソーム含有混合物を得た。
【０４８４】
リポソームの直径をＱＥＬＳにより測定し，結果を図８に示す。リポソーム含有混合物中に存在するリポソームは，５００−２，０００ｎｍの平均直径を有し，約１００−１０，０００ｎｍの広いサイズ分布を有する。
【０４８５】
実施例７：オキザリプラチン含有リポソーム（ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨ）の製造
リポソームの組成は以下のとおりであった：
ジミリストイルホスファチジルコリン（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン：ＤＭＰＣ）（ＮＯＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｊａｐａｎ）
コレステロール（ＣＨ）（Ｓｏｌｖａｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｂ．Ｖ．，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）
Ｎ−グルタリル−ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（Ｎ−グルタリル−１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン，ナトリウム塩：ＤＯＰＥ−ＣＯ−（ＣＨ２）３−ＣＯＯＨ；以下，ＮＧ−ＤＯＰＥと称する）（ＮＯＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｊａｐａｎ）
Ｓｕｃｃ−Ｎ−グルタリル−ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（Ｎ−（スクシンイミジル−グルタリル）−１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン，ナトリウム塩：ＤＯＰＥ−ＣＯ−（ＣＨ２）３−ＣＯ−ＯＳｕ；以下，ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥと称する）（ＮＯＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｊａｐａｎ）
ＤＭＰＣ：ＣＨ：ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥ＝５０：４５：４：１（ｍ／ｍ）。
【０４８６】
水性相として，ｌ−ＯＨＰの水性溶液（８ｍｇ／ｍｌ，３００ｍＭスクロース溶液中）を用いた。
【０４８７】
ＤＭＰＣ，ＣＨ，ＮＧ−ＤＯＰＥおよびＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥの混合物（モル比５０：４５：４：１）を４ｖ／ｗ（総脂質重量に対して）の温エタノール／ｔ−ブタノール／水溶媒に溶解した。脂質溶液を約４５℃で約８ｍｇ／ｍｌのｌ−ＯＨＰを含有する３００ｍＭスクロース溶液に注入し，これにより，溶媒の濃度は約１４％ｖ／ｖとなった。
【０４８８】
懸濁液を，約２００−８００ｐｓｉの圧力下で約４５℃で，５片の１００ｎｍフィルタ（Ｃａｔ．Ｎｏ．１１２１０５，Ｗｈａｔｍａｎｐｉｃ，ＵＫ）で覆った押し出し機を通した。このようにして，１００ｎｍ付近の平均直径を有するリポソームを得た。リポソーム直径はＱＥＬＳを用いて測定した。
【０４８９】
６Ｌのリン酸緩衝化食塩水（ｐＨ７．９），６Ｌのトランスフェリン（Ｃａｔ．Ｎｏ．４４５５，Ｓｅｌｏｒｏｇｉｃａｌｓ，ＧＡ，ＵＳＡ）溶液（２０ｍｇ／ｍｌ），および１８Ｌのリポソーム懸濁液を混合し，３０℃で１５−６０分間撹拌した。これにより，４ｍｇ／ｍｌのトランスフェリンおよび２０ｍｇ／ｍｌの脂質を含む反応混合物が得られた。
【０４９０】
トランスフェリンの定量分析は，ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイにより，販売元により供給された指針にしたがって行った。
【０４９１】
トランスフェリンを取り込んだ後の分子量の増加を，ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動）により調べた。ＮＧ−ＤＯＰＥの分析は，高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により，シリカゲルカラム（ＹＭＣＰＶＡシリカカラム，４．６ｘ２５０ｍｍ，５μｍ）を用いて，蒸発光スキャッタリング検出器（ＥＬＳＤ２０００，Ａｌｌｔｅｃｈ，ＭＤ，ＵＳＡ）で行った。
【０４９２】
実施例８：オキザリプラチン含有リポソーム（ＮＧ−ＤＳＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥ：ＤＳＰＣ：ＣＨ）の製造
リポソームの組成は以下のとおりである：
ジステアロイルホスファチジルコリン（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン：ＤＳＰＣ）
コレステロール（ＣＨ）
Ｎ−グルタリル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（Ｎ−グルタリル−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン，ナトリウム塩：ＤＳＰＥ−（ＣＨ２）３−ＣＯＯＨ；以下，ＮＧ−ＤＳＰＥと称する）
ＤＳＰＣ：ＣＨ：ＮＧ−ＤＳＰＥ＝２：１：０．２（ｍｏｌ／ｍｏｌ）
【０４９３】
水性相としては，実施例１に記載されるように，ｌ−ＯＨＰの水性溶液（８ｍｇ／ｍｌ，９％スクロース溶液中）を用いた。
【０４９４】
ＤＳＰＣ（ＭＣ８０８０，ＮＯＦ，Ｊａｐａｎ），コレステロール（０３８−０３００５，Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）およびＮＧ−ＤＳＰＥ（Ｄｒ．Ｋａｚｕｏ  Ｍａｒｕｙａｍａ，Ｔｅｉｋｙｏ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆａｃｕｌｔｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｒｃｅｓ，Ｊａｐａｎ）の２：１：０．２（ｍ／ｍ）の混合物をクロロホルムおよびイソプロピルエーテルに溶解した。
【０４９５】
得られた溶液に，ｌ−ＯＨＰの溶液（９％スクロース溶液中）を加え，得られた混合物を約１５−３０分間超音波処理した。次に溶液を回転蒸発機で６０℃で蒸発させて溶媒を除去し，凍結／融解を５回繰り返した。懸濁液を凍結し（ドライアイス／アセトン浴に浸漬することにより），溶解した（放置しぬるま湯に浸漬することにより）。これを５回繰り返した。
【０４９６】
次に，得られた生成物を６０℃でＥＸＴＲＵＤＥＲフィルタ（４００ｎｍで２回，次に１００ｎｍで５回），（Ｌｉｐｅｘ（登録商標）Ｅｘｔｒｕｄｅｒ，Ｍｏｄｅｌ  Ｎｏ．Ｔ−００１，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｌｉｐｉｄｓ  Ｉｎｃ．，Ｃａｎａｄａ）を用いてサイジングし，超遠心分離した（２００，０００ｘｇ，６０分間，約４℃）。沈殿物を９％スクロース溶液またはＭＥＳバッファ（ｐＨ５．５）（ＭＥＳバッファ．Ｃａｔ．Ｎｏ．３４５−０１６２５，Ｄｏｊｉｎｄｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｊａｐａｎ）に再懸濁して，ｌ−ＯＨＰ−封入ＮＧ−ＤＳＰＥ：ＤＳＰＣ：ＣＨリポソームを得た。
【０４９７】
続いて，ｌ−ＯＨＰ−封入ＮＧ−ＤＳＰＥ：ＤＳＰＣ：ＣＨリポソームをトランスフェリン（Ｔｆ）で誘導化した。このようにして得られたｌ−ＯＨＰ−封入ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームに，１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ；Ｃａｔ．Ｎｏ．＃２２９８０，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）（脂質の重量に対して２．７％の量）およびＮ−ヒドロキシスルホスクシンイミド（Ｓ−ＮＨＳ；０３８−０４３２，Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）（脂質の重量に対して７．３％の量）を加え，混合物を室温で１０分間放置した。
【０４９８】
次に，得られた溶液に，トランスフェリン（Ｔｆ）（脂質の重量に対して２０％の量；（Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｔ４１３２，ＳＩＧＭＡ，ＵＳＡ）を加え，室温で３時間撹拌した。トランスフェリン（Ｔｆ）の１ｍＭＰＢＳ（リン酸緩衝化食塩水）溶液（（総反応混合物の容量に対して２０％の量）および１ｍＭＰＢＳを加え（総反応混合物の容量に対して２０％の量），得られた溶液を室温で１時間撹拌した。
【０４９９】
このようにして得られたアポ形のＴｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームに，１０−４０当量（トランスフェリンに対して）のクエン酸鉄−クエン酸ナトリウム（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）を懸濁液に加え，室温で１５分間撹拌した。得られた溶液を上述のようにして限外濾過した。次に沈殿物を９％スクロース溶液に再懸濁し，このことによりホロ形のＴｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームを得た。溶液を超遠心分離し（２００，０００ｘｇ，６０分間，約４℃），次に沈殿物を９％スクロース溶液に再懸濁した。
【０５００】
トランスフェリンの定量的分析は，ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイを用いて，供給元の指針にしたがって行った（Ｃａｔ．Ｎｏ．２３２２７，ＢＣＡ（登録商標）蛋白質アッセイキット，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）。
【０５０１】
誘導化による分子量の増加は，ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）により調べた。ＮＧ−ＤＳＰＥの分析は，高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により，蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ２０００，Ａｌｌｔｅｃｈ，ＭＤ，ＵＳＡ）を用い，シリカゲルカラム（ＹＭＣ  ＰＶＡシリカカラム，４．６ｘ２５０ｍｍ，５／ｘｍ）を用いて行った。
【０５０２】
実施例９：ＰＥＧ化オキザリプラチン含有リポソームの製造
実施例８の実験プロトコルにしたがって，ＤＳＰＣ：コレステロール：ＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２Ｋ）−ＯＭｅ：ＤＳＰＥ−ＰＥＧ（３．４Ｋ）−ＣＯＯＨリポソーム（Ｔｆ−ＰＥＧ−リポソーム）を製造した。これらのリポソーム中では，成分の比率は以下のとおりであった：ＤＳＰＣ：コレステロール：ＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２Ｋ）−ＯＭｅ：ＤＳＰＥ−ＰＥＧ（３．４Ｋ）−ＣＯＯＨ−２：１：０．１６：０．０３。
【０５０３】
このリポソームは，６モル％のＰＥＧ−脂質および１モル％のＰＥＧ−ＣＯＯＨ−脂質を含んでおり，ＴｆがＰＥＧ−ＣＯＯＨを介してリポソームに結合している。
【０５０４】
また，実施例８の方法により，Ｔｆ／ＰＥＧ−ＤＳＰＥリポソーム（Ｔｆ／ＰＥＧ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソーム）を製造した。
【０５０５】
これらのリポソームにおいては，成分の比率は以下のとおりであった：ＤＳＰＣ：コレステロール：ＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２Ｋ）−ＯＭｅ：ＮＧ−ＤＳＰＥ＝２：１：０．１６：０．０３。
【０５０６】
このリポソームをＰＥＧで誘導化し，ＴｆをＮＧ−ＤＳＰＥを介してリポソームに結合させた。ＰＥＧ誘導化リポソームは，米国特許公開２００３／０２２４０３７および２００４／００２２８４２（この開示はその全体を本明細書の一部としてここに引用する）に記載される方法によっても製造することができる。
【０５０７】
実施例１０：空リポソームの調製
ＤＭＰＣ，Ｃｈｏｌ（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ），ＮＧ−ＤＯＰＥ（ＮＯＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｊａｐａｎ）およびＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥ（ＮＯＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｊａｐａｎ）の混合物（モル比５０：４５：４：１；それぞれ，４１０ｇのＤＭＰＣ，２１１ｇのＣｈｏｌ，４３ｇのＮＧ−ＤＯＰＥおよび１２ｇのＮＨＳ−ＮＧ−ＤＯＰＥ）を，４ｖ／ｗ（対総脂質重量）の温エタノール／ｔ−ブタノール／水溶媒に溶解した。得られた２０Ｌの懸濁液を撹拌しながら４５℃でインキュベートし，５枚重ねたポリカーボネートの１００ｎｍフィルタ（Ｃａｔ．Ｎｏ．１１２１０５，Ｗｈａｔｍａｎ  ｐｌｃ，ＵＫ）で覆った押し出し機（Ｓｔｅｖｅｓｔｅｄ  Ｍａｃｈｉｎｅｒｙ  ＆  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌｔｄ．，Ｃａｎａｄａ）を約２００−８００ｐｓｉの圧力で約４５℃で通した。このようにして，１００ｎｍ付近の平均直径を有するリポソームを得た。リポソーム直径はＱＥＬＳにより決定した。
【０５０８】
リポソーム懸濁液，ＰＢＳバッファ（ｐＨ７．９）およびトランスフェリンのＰＢＳ溶液（Ｃａｔ．Ｎｏ．４４５５，Ｓｅｌｏｒｏｇｉｃａｌｓ，ＧＡ，ＵＳＡ）（ｐＨ７．０）を３：１：１（ｖ／ｖ）で混合し，３０℃で１５−６０分間撹拌した。このようにして約６Ｌの空リポソームを得た。
【０５０９】
２０ｇ（約１９ｍＬ）のリポソーム溶液をバイアルに入れ，棚上で−４０℃で約８時間凍結した。これを約０．１ｍｍＨｇに減圧し，温度を２日間かけて−４０℃から２５℃に段階的に上昇させながら，２日間減圧下に保持した。この工程が完了したとき，約３．５ｇの凍結乾燥空リポソームが得られた。次に，リポソームを４℃で保存した。
【０５１０】
実施例１１：予め調製した空リポソームへのオキザリプラチンの封入
ｌ−ＯＨＰの水性溶液（８ｍｇ／ｍＬ，３００ｍＭスクロース溶液中）を約３．５ｇの凍結乾燥した空リポソームに加え，４０℃で２時間撹拌することにより再水和させた。撹拌後，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５（φ１ｘ４５ｃｍ）を用いて分画することによりリポソームｌ−ＯＨＰを遊離ｌ−ＯＨＰから分離した。リポソームｌ−ＯＨＰおよび遊離ｌ−ＯＨＰは，それぞれＶＩＳ６００ｎｍおよびＵＶ２１０ｎｍでモニターした。
【０５１１】
ｌ−ＯＨＰおよびコレステロールの量を測定した。ｌ−ＯＨＰ濃度は，リポソーム画分が最後に元のコレステロール濃度に凝縮された場合について計算し，リポソームのｌ−ＯＨＰ濃度とｌ−ＯＨＰの仕込み濃度を比較することにより，ｌ−ＯＨＰの収率を測定した。
【０５１２】
リポソーム画分を元のコレステロール濃度に凝縮させた場合の総ｌ−ＯＨＰ濃度は２１０μｇ／ｍＬであった。ｌ−ＯＨＰの収率は２．６％であった。
【０５１３】
このことは，凍結乾燥空リポソーム中に２１０μｇ／ｍＬのｌ−ＯＨＰが封入されたことを示す。
【０５１４】
実施例１２：血液および臓器中のリポソームレベルの比較
腫瘍担持マウスにおけるｌ−ＯＨＰを封入したＴｆ修飾リポソーム組成物の血液滞留および臓器における蓄積を評価するために，比較実験を行った。５週齢の雄ＢＡＬＢ／ｃマウスを動物モデルとして用い，Ｃｏｌｏｎ２６細胞（マウス結腸癌由来）を腫瘍細胞として用いた。細胞はＬａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，Ｔｅｉｋｙｏ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｊａｐａｎから入手した。
【０５１５】
インビトロで培養したＣｏｌｏｎ２６細胞（２ｘ１０６個）をマウス背部の皮下に移植した。直径約８−１０ｍｍの腫瘍を有するマウス（平均で８−１０日間成長させた後）を結腸癌をもつマウスとして用いた。実施例５および６で製造したリポソームのそれぞれの溶液またはｌ−ＯＨＰ（８ｍｇ／ｍｌ，９％スクロース溶液中）を尾静脈に注入した。それぞれの場合について，オキザリプラチンの濃度は５ｍｇｌ−ＯＨＰ／ｋｇ体重に調節した。リポソームとしては，Ｔｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソーム（（■）；実施例５），Ｔｆ／ＰＥＧ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソーム（（○）；実施例６）およびＴｆ−ＰＥＧ−ＤＳＰＥリポソーム（（◆）；実施例６）を用いた。
【０５１６】
各群について，投与後１，３，６，２４，４８および７２時間の各時点において，３匹のマウスから血液，血漿，肝臓，脾臓，腎臓，心臓，肺および腫瘍組織を回収した。血液，各臓器および腫瘍組織中のＰｔ濃度は原子吸光度（ＡＡ）を用いて測定し，ｌ−ＯＨＰ濃度を計算し，投与量に対する比率（％）として表した。血液中の濃度を図９に示す。
【０５１７】
Ｔｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームは，Ｔｆ−ＰＥＧ−ＤＳＰＥリポソームおよびＴｆ／ＰＥＧ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームと比較して，投与の３時間後まで実質的に同じ血液滞留を示した。しかし，６時間後，Ｔｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームはある程度の血液滞留を示したが，ＰＥＧリポソームと比較して血液からより急速に消失した。腫瘍組織における濃度を図１０に示す。Ｔｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームは，血中で長期間より低い濃度で維持されていたにもかかわらず，Ｔｆ−ＰＥＧ−ＤＳＰＥリポソームおよびＴｆ／ＰＥＧ−ＤＳＰＥリポソームと実質的に同じ腫瘍組織蓄積を示した。
【０５１８】
上述の結果から，マウスにおいて有意なレベルまたはそれより高いレベルの十分な濃度の薬剤を腫瘍組織にデリバリーするためには，投与後約６時間の血中での保持時間が必要でありかつ十分であることがわかった。これより長い血中での保持時間は，正常組織に対する有害な影響を引き起こす可能性を増加させかもしれないと考えられる。
【０５１９】
実施例１３：診断用リポソームの調製および腫瘍組織における１２５Ｉの蓄積
リポソームを実施例７と同様にして製造したが，ただし，ｌ−ＯＨＰの代わりに［１２５Ｉ］−チラミニルイヌリン（ＰＢＳ溶液中）を用いて，ＤＭＰＣ／ＣＨ／ＮＧ−ＤＯＰＥ／Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ／［１２５Ｉ］−チラミニルイヌリンリポソームを得た。脂質成分も実施例７と同様にして得た。以下に示す成分を有する２つのリポソーム処方物を調製した。リポソームを欠失したＴｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥをリポソームの非標的化分布の対照として用いた。
標的化リポソーム：ＤＭＰＣ／ＣＨ／ＮＧ−ＤＯＰＥ／Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ（６３．３／３１．７／４／１（ｍ／ｍ））
非標的化リポソーム（対照）：ＤＭＰＣ／ＣＨ／ＮＧ−ＤＯＰＥ（６３．３／３１．７／５（ｍ／ｍ））
【０５２０】
Ｎａ−１２５Ｉ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｊａｐａｎ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）とチラミニルイヌリン（Ｄｒ．Ｋａｚｕｏ  Ｍａｒｕｙａｍａ，Ｔｅｉｋｙｏ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆａｃｕｌｔｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｊａｐａｎ）とをヨードゲン法（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１２２，３１９−３２５（１９８４），その全体を本明細書の一部としてここに引用する）を用いて組み合わせることにより，チラミニルイヌリンに１２５Ｉを結合させた。このようにして，１２５Ｉ−チラミニルイヌリンを得た。次に，実施例７に記載されるようにして，１２５Ｉ−チラミニルイヌリン／ＰＢＳ（−）溶液を約１ｍｇ／ｍＬの濃度でリポソーム中に封入した。
【０５２１】
１００μｌの各リポソーム溶液を，実施例１２に記載されるネズミ結腸癌担持マウスの尾静脈に注射した。投与後１，６，２４および４８時間の各時点において，各群について５匹のマウスから腫瘍組織および尾部を回収した。腫瘍組織の重量を測定し，腫瘍組織および尾部中の放射活性（単位：ｃｐｍ）をガンマカウンター（Ａｌｏｋａ  Ａｕｔｏ  Ｇａｍｍａ  Ｓｙｓｔｅｍ  ＡＲＣ−３００，Ｊａｐａｎ）を用いて測定した。結果は，腫瘍組織における分布量（投与量の％／ｇ腫瘍）＝［（腫瘍組織におけるカウント値）−（ｂ．ｇ．の値）］ｘ１００／［（Ｓｔｄ．のカウント値）−（尾部におけるカウント値）］／（腫瘍組織の重量（ｇ））として評価した。１２５Ｉの放射活性の半減期は約６０日である。
【０５２２】
１００μｌの投与した溶液（標準：Ｓｔｄ．）の放射活性を１００％と定義し，空の試験管のカウント値をバックグラウンド（ｂ．ｇ．）の値と定義した。結果を図１１に示す。図１１から明らかなように，Ｔｆで修飾されたリポソームは腫瘍組織への高い蓄積を示したが，一方，非標的化リポソームは高い蓄積を示さなかった。これらの結果は，放射活性化合物を封入したリポソームが腫瘍組織の検出に有用であることを示す。
【０５２３】
実施例１４：リポソームの抗腫瘍効果の比較
ｌ−ＯＨＰを封入したＴｆで修飾されたリポソーム組成物（実施例９で製造したＴｆ−ＰＥＧ−リポソーム，実施例８で製造したＴｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥ：ＮＧ−ＤＳＰＥ：ＤＳＰＣ：ＣＨリポソーム，実施例９で製造したＴｆ／ＰＥＧ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソーム；各群につき９匹のマウス），およびトランスフェリンが結合していない各リポソーム組成物（（−）ＴＦ；各群につき６匹のマウス）について，結腸癌Ｃｏｌｏｎ２６担持マウスに対する抗腫瘍効果を評価するために，比較実験を行った。
【０５２４】
腫瘍担持マウスは，実施例１２と同様にして調製した。対照としては，ｌ−ＯＨＰの溶液（８ｍｇ／ｍｌ，９％スクロース溶液中）を用いた。５ｍｇ／ｋｇの投与量のｌ−ＯＨＰを投与した日を開始日とし，４日にｌ−ＯＨＰを５ｍｇ／ｋｇの用量で再び投与した。０日の腫瘍のサイズを１とし，サイズをこの開始サイズに基づく比率で表した。第０，２，５，７，１０，１３，１５，１８および２１日に腫瘍のサイズを測定し，生存日数を調べた。
【０５２５】
結果を図１２に示す。
【０５２６】
図１２からわかるように，トランスフェリンを結合したリポソーム組成物は，腫瘍成長に対して阻害的影響を示した。一方，トランスフェリンが結合していないリポソーム組成物は，トランスフェリンが結合しているリポソーム組成物と比較して，より弱い腫瘍成長阻害効果を有していた。図９および１０に示される結果から，トランスフェリンが結合しているリポソームが腫瘍成長に及ぼす阻害効果を有し，腫瘍組織に蓄積される薬剤の濃度を有意かつ実質的に同じレベルにするためには，投与後の約６時間の血中保持時間が必要でありかつ十分であることがわかった。これより長い血中保持時間は，正常組織への有害な影響を引き起こす可能性を増大させかもしれないと考えられる。
【０５２７】
実施例１５：ＮＧ−ＤＳＰＥ含有量の最適化
ＮＧ−ＤＳＰＥのリポソーム中の最適ブレンド比を決定するために，抗癌剤が封入されていないＮＧ−ＤＳＰＥの血液滞留を正常マウスで調べた。抗癌剤を封入していないリポソーム組成物は，実施例８と同様にして，ただし，水性相としてｌ−ＯＨＰの溶液の代わりに水を用いて異なる量のＮＧ−ＤＳＰＥで調製した。
【０５２８】
リポソームを構成する総脂質成分の総モル量を１００％と定義し，ＮＧ−ＤＳＰＥの含有量を，ＮＧ−ＤＳＰＥの総脂質成分に対する比率（モル％）で示す。さらに，６モル％のＭＰＢ脂質（ＭＰＢ−ＤＳＰＥ）またはＰＤＰ脂質（ＰＤＰ−ＤＳＰＥ）を構成脂質として含有するリポソームも製造した。ＭＰＢリポソームは，マレイミド−フェニルブチレート（ＭＰＢ）を脂質のエタノールアミンのアミノ基に結合させることによりリポソームを形成し，ＭＰＢを介してＴｆをリポソームに結合させることにより得た（８７００１３（１６：０），Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ，ＵＳＡ）。ＰＤＰ（８７０２０５（１６：０，Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ，ＵＳＡ）リポソームは，２−ピリジルチオプロピオネート（ＰＤＰ）を脂質のエタノールアミンのアミノ基に結合させることによりリポソームを形成し，ＰＤＰを介してＴｆをリポソームに結合させることにより得た。
【０５２９】
この実験では，１０５匹のマウス（ＩＣＲ雄，６週齢）（Ｔｏｋｙｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  ＳｃｉｅｎｃｅＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）を用いた。トレーサーとして，１２５Ｉをチラミニル−イヌリン，（実施例１３に記載されるようにして製造）に結合させ，このイヌリン溶液を約１ｍｇ／ｍｌの濃度でリポソーム中に封入した。各場合について回収した血液および臓器の重量を測定し，リポソームマーカーの放射活性（単位：ｃｐｍ）をガンマカウンター（Ａｌｏｋａ  Ａｕｔｏ  Ｇａｍｍａ  ＳｙｓｔｅｍＡＲＣ−３００，Ｊａｐａｎ）を用いて測定した。さらに，尾静脈に投与されたそれぞれの溶液（１００μｌ）の放射活性を測定した。投与された溶液１００μｌの放射活性（標準：Ｓｔｄ．）を１００％と定義し，各臓器についての値を（投与量の％）をパーセンテージとして表した。総血液量は体重の７．３％と見積もり，血液中のリポソーム量を総血液の量として表した。空の試験管の計数値をバックグラウンド値（ｂ．ｇ．）と定義し，これを各サンプルの計数値から差し引いた。
血液中の分布量（％）＝［（血液の計数値）−（ｂ．ｇ．の値）］ｘ（マウスの体重（ｇ））ｘ０．０７３ｘ１００／［（Ｓｔｄ．の計数値）−（尾部の計数値）ｘ（血液の重量（ｇ））］
【０５３０】
結果を図１３に示す。６時間後の血中の濃度に関しては，ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームは脂質含有量が３モル％またはそれ以上のとき，高い血中保持率を示す。マレイミド−リポソーム（ＭＰＢ６％）については，血中保持率は低かった。
【０５３１】
実施例１６：血中保持率に及ぼすＴｆおよびジカルボン酸の影響
リポソーム結合トランスフェリンの存在または非存在およびジカルボン酸の種類（例えば，グルタリル，スクシニル等）の影響を調べるため，抗癌剤が封入されていないトランスフェリン結合リポソームの血中保持率を正常マウスで調べた。実験方法は実施例１５に記載したものと同じである。
【０５３２】
グルタル酸のかわりにコハク酸が結合しているリン脂質を含むリポソームを調製した。
【０５３３】
ＮＧ−ＤＳＰＥ（グルタル酸）は，以下のようにして調製した。暗所で窒素気流下で，ＤＳＰＥ（ＭＥ−８０８０，ＮＯＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｊａｐａｎ）をＤＳＰＥの１０倍容量の脱水クロロホルムに懸濁した。次に，１．３当量のトリエチルアミン（２０８−０２６４３，Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）を加え，無水グルタル酸（Ｇ００７１，Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｊａｐａｎ）の脱水クロロホルム溶液（ＤＳＰＥと同じ容量の脱水クロロホルムに溶解）を室温で滴加した。完了後，溶液を撹拌しながら３０℃で２時間反応させた。
【０５３４】
次に，反応溶液を酢酸バッファ（ｐＨ４．５）で３回洗浄し，有機層を硫酸マグネシウムで脱水し，水流アスピレーターを用いる吸引濾過により濾過した。次に，濾液を減圧下で３０℃で濃縮した。油状になったとき（ＤＳＰＥの約２倍の体積），メタノールを加えて結晶を形成させ，次に濾過した。これを再びクロロホルムに溶解し，この工程を２回繰り返した。次に，結晶を減圧下で室温で乾燥して，目的とする生成物を白色結晶として得た。ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームは実施例８と同じ方法で製造した。
【０５３５】
結果を図１４に示す。トランスフェリンがジカルボン酸（ＮＧ−ＤＳＰＥ：Ｎ−グルタリル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン，ＮＳ−ＤＳＰＥ：Ｎ−スクシニル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン）を介して結合しているリポソームは，高い血液滞留を示す。しかし，トランスフェリンがマレイミド（ＭＰＢ）によりＳ−Ｓ結合を介して結合しているリポソームの場合には，同じリガンドであるトランスフェリンが結合しているにもかかわらず，血液滞留が低かった。
【０５３６】
実施例１７：リポソームの電気泳動分析
リポソームを特性決定するための分析法の１つの例として，電気泳動の例を示す。リポソームを２．５％のＳＤＳおよび５％の２−メルカプトエタノールを含むサンプルバッファに溶解し，９５℃で５分間変性させた。約７．５％−１０％のポリアクリルアミドゲル（Ｆｕｎａｋｏｓｈｉ，Ｅａｓｙｇｅｌ（ＩＩ），プレキャストゲル，Ｊａｐａｎ）を用いて，５μｌの各サンプルをゲルに負荷し，２０ｍＡの定電流で１−２時間電気泳動した。
【０５３７】
電気泳動後，銀染色キット（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｔａｉｎｉｎｇ  ＩＩ  Ｋｉｔ  Ｗａｋｏ，Ｊａｐａｎ）を用いてゲルを銀染色した。以下のリポソームについての結果を図１５に示す：レーン６（トランスフェリン−Ｎ−グルタリル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−リポソーム（Ｔｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソーム））；レーン５（トランスフェリン−ポリエチレングリコール−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−リポソーム（Ｔｆ−ＰＥＧ−ＤＳＰＥリポソーム））が示されている。レーン１−４は，それぞれｈ−ａｐｏ−Ｔｆ（２４０ｎｇ），ｈ−ａｐｏ−Ｔｆ（１２０ｎｇ），ｈ−ａｐｏ−Ｔｆ（６０ｎｇ），ｈ−ａｐｏ−Ｔｆ（３０ｎｇ）を含む。
【０５３８】
比較例であるＴｆ−ＰＥＧ−ＤＳＰＥリポソームの場合には，ポリエチレングリコールはある程度の分子量分布を有するため，いくつかのバンドを有する複雑な電気泳動画像が現れる。Ｔｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームの場合には，単一のバンドが現れ，これははるかに容易に分析することができ，リポソームの精製が促進される。これらの結果は，本発明にしたがうリポソーム組成物については，ＰＥＧ誘導化リポソーム組成物についてよりも，分析的アッセイ法が簡単であることを示す。
【０５３９】
実施例１８：遊離ＰＥがリポソーム組成物に及ぼす影響
リポソーム中の遊離ホスファチジルエタノールアミン（非ＮＧ−ＰＥ）の存在の影響を調べるために，Ｔｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームおよびジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）（ＮＧは存在しない）を加えることにより調製したリポソームについてＴｆの結合能力を測定した。Ｔｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームはＤＳＰＣ（６４部），ＣＨ（３２部）およびＮＧ−ＤＳＰＥ（４部）から，Ｔｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥ＋ＤＳＰＥリポソームはＤＳＰＣ（６４部），ＣＨ（３２部），ＮＧ−ＤＳＰＥ（４部）およびＤＳＰＥ（１０部）から，実施例８と同様にして調製した。
【０５４０】
次に，１０当量のＮＨＳおよびＥＣＤ／ＨＣｌおよび０．０５当量のＴｆを用いてＴｆをＮＧ−ＤＳＰＥに結合させた。次に，１ｍｇの脂質に相当する量のリポソームサンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し，実施例１７に記載されるようにして銀染色によりバンドを可視化した。
【０５４１】
結果を図１６に示す。１０％モルのＤＳＰＥを加えたＮＧ−ＤＳＰＥ＋ＤＳＰＥリポソームの場合には，非ＮＧ−ＤＳＰＥを含まないＮＧ−ＤＳＰＥリポソームと比較して，結合したＴｆの量は有意に少なかったことが見いだされた。これは，ＴｆがＮＧ−ＤＳＰＥのカルボキシル基に結合する反応においてＴｆのアミノ基とＤＳＰＥのアミノ基とが互いに競合したためであると考えられる。
【０５４２】
実施例１９：血液および臓器におけるリポソームレベルの比較
実施例１２に記載されるプロトコルを用いて，血液および腫瘍におけるＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨ（Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＮＧ−ＤＯＰＥ）リポソーム（実施例７と同様にして調製）およびＴｆ−ＰＥＧ−ＤＳＰＥリポソーム（実施例９と同様にして調製）のレベルを比較した。結果は，血中に滞留したリポソームの量を図１７に，腫瘍中で検出されたリポソームの量を図１８に示す。
【０５４３】
図１７および１８の結果は，Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＮＧ−ＤＯＰＥリポソームはＴｆ−ＰＥＧ−ＤＳＰＥリポソームより血液中の蓄積が少ないが（図１７），より多くの量のオキザリプラチンを腫瘍にデリバリーすることができることを示す（図１８）。リポソームの血液中の蓄積が少ないことにより，オキザリプラチンの有害な全身的影響が低下すると考えられる。
【０５４４】
実施例２０：Ｃｏｌｏｎ２６腫瘍担持マウスにおけるリポソーム抗腫瘍効果の比較
実施例１４に記載されるプロトコルを用いて，ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム（実施例７と同様にして調製）およびＴｆ−ＰＥＧ−ＤＳＰＥリポソーム（実施例９と同様にして調製）がマウスにおけるＣｏｌｏｎ２６腫瘍に与える影響を比較した。結果を図１９に示す。
【０５４５】
図１９に示されるように，リポソームは両方ともオキザリプラチン溶液と比較して腫瘍成長の阻害を示したが，実施例１９に記載したように，ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣｒＣＨの血液（血漿）中のの蓄積が少ないことは，これらのリポソームがこれを投与した個体においてより許容されることを意味すると考えられる。
【０５４６】
実施例２１：異種移植片ＨＣＴ−１１６Ｃｏｌｏｎ腫瘍モデルに対するリポソームの抗腫瘍効果
皮下に移植したＨＣＴ−１１６ヒト結腸腫瘍異種移植片に対して投与されたときのＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム（実施例７におけるようにして製造）の抗腫瘍効力を調べた。試験は，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＡＬ，ＵＳＡにおいて，雄無胸腺ＮＣｒ−ｎｕマウス（０２／Ａ／０８Ｆ１７Ｔ９，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｃｅｎｔｅｒ，ＭＤ，ＵＳＡ；５０ｍｉｃｅ）を用いて行い，溶液中のオキザリプラチンを参照化合物として用いた。ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームの抗腫瘍活性を図２０にまとめる。
【０５４７】
ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームを，４日ごとに４回，（ｑ４ｄｘ４），１５および１０ｍｇ／ｋｇ／注射の容量で静脈内（ｉ．ｖ．）に投与した。オキザリプラチンは１５ｍｇ／ｋｇ／注射の投与量で同じスケジュールで投与した。ベヒクル（約１０．３％スクロース）および空リポソーム対照群も同じスケジュールで注射した。
【０５４８】
ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームで４日ごとに処置した後のＨＣＴ−１１６結腸腫瘍モデルの平均腫瘍体積は，１５ｍｇ／ｋｇ群については対照腫瘍体積の２８．９％，１０ｍｇ／ｋｇ群については対照腫瘍体積の３５．９％であった。また，ＨＣＴ−１１６モデルにおいてＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームの抗腫瘍活性を非リポソームオキザリプラチンと比較した。ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームは，４日ごとに（４ｘ）１５ｍｇ／ｋｇで投与したときに，相対的腫瘍体積について，より高い効力を示した（対照腫瘍体積の２８．９％）。１５ｍｇ／ｋｇで４日ごとに（４ｘ）投与した非リポソームオキザリプラチンでは，対照腫瘍体積の３９．３％であった。
【０５４９】
実施例２２：異種移植片ＨＴ−２９結腸腫瘍モデルに対するリポソームの抗腫瘍効果
ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム（実施例７と同様に製造）を，皮下に移植したＨＴ−２９ヒト結腸腫瘍異種移植片に対して投与したときの抗腫瘍効力を調べた。試験はＰａｎａｐｈａｒｍ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎで，雌無胸腺ＢＡＬＢ／ｃ  ＡＪｃｌ−ｎｕマウス（ＣＬＥＡ  Ｊａｐａｎ，Ｉｎｃ．，Ｊａｐａｎ；５０マウス）で行い，結果を図２１にまとめる。４匹のマウスの群に，ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームを，６．７，１０または１５ｍｇ／ｋｇの投与量で，またはベヒクル対照を投与した。ベヒクルおよび６．７および１０ｍｇ／ｋｇ処置群は，１０，１４および１９日に注射し，１５ｍｇ／ｋｇ処置群には１０および１４日に注射した。
【０５５０】
ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームによる処置の後のＨＴ−２９結腸腫瘍モデルの平均腫瘍体積は，６．７ｍｇ／ｋｇ群では対照腫瘍体積の６６．３％，１０ｍｇ／ｋｇ群では対照腫瘍体積の３９．５％であった（ｐ値＜０．０１）。
【０５５１】
実施例２３：異種移植片ＭＫＮ４５胃腫瘍モデルに対するリポソームの抗腫瘍効果
皮下に移植したＭＫＮ４５ヒト胃腫瘍異種移植片に対して投与したときのＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム（実施例７と同様に製造）
の抗腫瘍効力を調べた。実験は，Ｐａｎａｐｈａｒｍ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎで行い，雄無胸腺ＢＡＬＢ／ｃＡＪｃｌ−ｎｕマウス（ＣＬＥＡ  Ｊａｐａｎ，Ｉｎｃ．，Ｊａｐａｎ；５０マウス）で試験し，これを図２２にまとめる。
【０５５２】
４匹のマウスの群にＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームを，６．７，１０または１５ｍｇ／ｋｇの投与量で，またはベヒクル対照を投与した。ベヒクルおよび６．７および１０ｍｇ／ｋｇ処置群には，７，１２および２４日に注射し，１５ｍｇ／ｋｇ処置群には，７および２４日に投与した。ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームで処置した後のＭＫＮ４５胃腫瘍モデルの平均腫瘍体積は，６．７ｍｇ／ｋｇ群については対照腫瘍体積の６５．４％（ｐ値＜０．０５），１０ｍｇ／ｋｇ群については対照腫瘍体積の４９．６％（ｐ値＜０．０１），１５ｍｇ／ｋｇ群については対照腫瘍体積の４８．５％（ｐ値＜０．０１；１７日ごとにデリバリー）であった。
【０５５３】
実施例２４：異種移植片ＣＯＬＯ２０５結腸腫瘍に対するリポソームの抗腫瘍効果
皮下に移植したＣＯＬＯ２０５ヒト結腸腫瘍異種移植片に対して投与したときのＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム（実施例７と同様に製造）の抗腫瘍効力を調べた。実験は，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＡＬ，ＵＳＡで行い，雄無胸腺ＮＣｒ−ｎｕマウス（０１／Ａ／０９Ｆ３Ｔ８，Ｆｅｄｅｒｉｃ  Ｃａｎｄｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｃｅｎｔｅｒ，ＭＤ，ＵＳＡ）で，参照化合物として溶液中のオキザリプラチンを用いて試験し，これを図２３にまとめる。
【０５５４】
４０匹のマウスに，ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームを，４日ごとに３回の注射（ｑ４ｄｘ３）で，１０および５ｍｇ／ｋｇ／注射の投与量で，静脈内注射により投与した。オキザリプラチンは，５ｍｇ／ｋｇ／注射の投与量で同じスケジュールで投与した。対照群には，同じスケジュールで注射した。進行癌については，全ての群について，４７日に再治療を始めた。
【０５５５】
ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームを２日ごとに２回，１５および１０ｍｇ／ｋｇ／注射の投与量で投与し，その後，それぞれ４および２ｍｇ／ｋｇ／注射の投与量で２日ごとに６回の注射により処置した。オキザリプラチンは，同じスケジュールで，１０および２ｍｇ／ｋｇ／注射の投与量で投与した。対照群は同じスケジュールで処置した。
【０５５６】
ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームを最初に１０および５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与し，続いて先に治療した腫瘍の進行癌をＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームで，１５および１０ｍｇ／ｋｇの投与量で，続いてＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームを４および２ｍｇ／ｋｇの投与量で，種々の治療スケジュールを用いて処置したときのＣＯＬＯ２０５結腸腫瘍モデルの平均腫瘍体積は，対照腫瘍体積の５３．２％−６９．５％（ｐ値＜０．０５または０．０１）であった。
【０５５７】
実施例２５：標的化リポソームへのオキザリプラチンの封入
実施例７と同様にして製造したＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨ（Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＮＧ−ＤＯＰＥ）リポソーム中に封入されたオキザリプラチンの比率を測定するために，以下の方法を用いた。
【０５５８】
封入の程度は，サンプルのアリコートを３，０００ＭＷＣＯ（分子量カットオフ）スピンカラム（３０Ｋ  ＭＷＣＯセルロース限外濾過膜カラム，Ｃａｔ．Ｎｏ．４２４１０，ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＣｏｒｐ．，ＵＳＡ）に通し，溶出物中のオキザリプラチン濃度をＨＰＬＣを用いて希釈リン酸水溶液（ｐＨ３．０）中１％アセトニトリルのアイソクラチック溶出で測定することにより決定した。
【０５５９】
膜濾過後にＨＰＬＣ分析でオキザリプラチンのレベルを決定して，封入されていない（遊離）薬剤のレベルを定量した。実施例７と同様に製造した３バッチの捕集効率は９８％より高かった（表１を参照）。
【０５６０】
【表１】
0005438317.tif 000029
【０５６１】
実施例２６：標的化リポソームのｐＨ
標的化リポソームのｐＨは，本発明のリポソームを蒸留水に加え，標準的なｐＨメータで下記のようにして測定することができる。
【０５６２】
ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム（実施例７と同様に製造）のｐＨは，ｐＨメーター（ＶＷＲ  Ｍｏｄｅｌ８０００）で，Ａｇ／ＡｇＣｌゲル充填電極で測定した。４ロットのリポソームのｐＨ値は，ｐＨ７．１７−７．２３の範囲であり，下記の表２に示す。
【０５６３】
【表２】
0005438317.tif 000030
【０５６４】
種々のｐＨにおけるリポソームの外観を表３にまとめる。これらの結果は，低いｐＨは凝集，堆積および沈殿を引き起こすことを示し，これはＮＧ−ＤＯＰＥおよびＴｆのプロトン化，続く二重層の凝集およびトランスフェリンの変性によるものであろう。
【０５６５】
【表３】
0005438317.tif 000031
【０５６６】
実施例２７：コンジュゲートしたトランスフェリンの同定および標的化リポソーム中のトランスフェリンのＳＤＳ−ＰＡＧＥパターン
この実験は，実施例７で製造したＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソーム中のＮＧ−ＤＯＰＥへのトランスフェリンのコンジュゲーションを確認するために行った。トランスフェリンをＮＧ−ＤＯＰＥとコンジュゲート化すると，複合体はこの方法でコンジュゲート化してないトランスフェリンより高い分子量を示す。
【０５６７】
リポソームを溶解し，２．５％のＳＤＳおよび５％の２−メルカプトエタノールを含むサンプルバッファ中で９５℃で５分間変性させた。次にこのサンプルを５−１０％勾配ポリアクリルアミドゲルに負荷し，ＳＤＳの存在下で電気泳動した。移動した蛋白質バンドは，ブリリアントブルーＧ−コロイド（Ｂ２０２５，ＳＩＧＭＡ５ＵＳＡ）を用いて可視化した。
【０５６８】
リポソーム中のトランスフェリンはＮＧ−ＤＯＰＥとコンジュゲート化させたトランスフェリンとして検出し，これは無傷のトランスフェリンより高い分子量を示した（図２４を参照）。より低い分子量を有する小さいバンドが遊離トランスフェリンとして検出された。
【０５６９】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける遊離トランスフェリン対ＮＧ−ＤＯＰＥとコンジュゲート化したトランスフェリンの比率（図２４）は，Ｓｃｉｏｎ  Ｉｍａｇｅソフトウエア（ｗｗｗ．ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ．ｃｏｍ．ＤｉｒｅｃｔＸで自由に入手可能）を用いてピークの面積として計算した。ＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームの総Ｔｆ中の遊離Ｔｆの比率は約４．７％であった。
【０５７０】
実施例２８：浸透圧の分析
所定の温度における浸透圧は，スクロースおよび塩，例えば塩化ナトリウムおよびリン酸バッファによって異なる。これは溶質には依存しないが，総イオン密度および溶液中の分子のサイズに依存する。通常は，浸透圧は，浸透圧計として知られる，適当な圧力単位で浸透圧を測定する装置を用いて測定することができる。
【０５７１】
実施例７において調製したＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームの室温における浸透圧を，浸透圧計（Ｖａｐｒｏ  Ｖａｐｏｒ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒ  Ｍｏｄｅｌ  ５５２０，Ｗｅｓｃｏｒ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）を用いて測定した。リポソームの３つの調製物の浸透圧の値は，表４に示されるように，３６０−３７０ｍＯｓｍ／ｋｇであった。
【０５７２】
【表４】
0005438317.tif 000032
【０５７３】
実施例２９：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥの単離
９００ｍＬのＥｔＯＨを１００ｍＬの空リポソーム（ＤＭＰＣ／Ｃｈｏｌ／ＮＧ−ＤＯＰＥ／Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ）（実施例１０で製造，凍結乾燥前）に加え，完全に撹拌した。次に，混合物を遠心分離して（９，０００ｒｐｍ，１０分間，２０℃；ＣＦｌ６ＲＸ，Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｋｏｋｉ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ），ペレットを得た。
【０５７４】
次に，これに１００ｍＬのＥｔＯＨを加え，完全に撹拌した。混合物を再び遠心分離し（９，０００ｒｐｍ，１０分間，２００Ｃ；ＣＦ１６ＲＸ，Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｋｏｋｉ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ），灰白色（淡橙色）ペレットを得た。この洗浄工程をさらに１回繰り返した。
【０５７５】
上で得られたペレットをＮ２ガスで３０分間乾燥させた。次に，乾燥した物質を１０ｍＬの蒸留水に溶解し，滅菌フィルタ（０．２２μｍ）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ）を通した。
【０５７６】
濾液をバイアルに入れ，棚上で−４０℃で約８時間凍結した。サンプルを約０．１ｍｍＨｇに減圧し，温度を−４０℃から２５℃まで段階的に上昇させながら２日間減圧下で保持した。このようにして，約４４４ｍｇのＴｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ（約４５％のトランスフェリン含有量の空リポソーム）を得た。
【０５７７】
実施例３０：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥの調製
２００μＬのＮＨＳ（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）水性溶液（０．１ｍｏｌ／Ｌ），２００μＬのＥＤＣ（Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩）（Ｔｏｋｙｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＩｎｄｕｓｔｒｙＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）の水性溶液（０．２５ｍｏｌ／Ｌ）および２％（ｗ／ｖ）のＯＧ（ｎ−オクチル−Ｄ−グルコピラノシド）（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）を含む１ｍＬのＮＧ−ＤＳＰＥ溶液（２ｍｍｏｌ／Ｌ）を，５０ｍｍｏｌ／ＬのＭＥＳバッファ（ｐＨ５．５）中で混合し，１０分間撹拌した。
【０５７８】
ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−１５カラム（１．５ｃｍｘ２０ｃｍ，５０ｍｍｏｌ／ＬＨＥＰＥＳバッファ（ｐＨ８．０）中０．１％（ｗ／ｖ）のＯＧ，ＧＥ  ＨｅａｌｔｈｃａｒｅＢ  ｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ）によりＳｕｒｐｌｕｓ試薬を除去し，約１ｍＬ／チューブに分画した。
【０５７９】
５ｍＬの１％トランスフェリン（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ）水性溶液を，ＮＧ−ＤＳＰＥを含む画分に滴加し，４℃で２０時間穏やかに撹拌した。各画分はＭＳ判定により同定した。
【０５８０】
次に，反応生成物をＴＯＹＯＰＥＡＲＬ  ＨＷ−５５Ｓカラム（１．５ｃｍｘ４５ｃｍ，０．９％ＮａＣｌ，Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＬＬＣ，ＵＳＡ）で約１．７ｍＬ／チューブに分画した。Ｔｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥは，質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ）およびＳＤＳ−ＰＡＧＥとＣＢＢ染色（Ｃｏｏｍａｓｉｅ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｂｌｕｅ，Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）により評価した。
【図面の簡単な説明】
【０５８１】
【図１】図１は，標的化リポソームの略図を示す。
【図２】図２は，標的化リポソームを用いる腫瘍細胞の活性薬剤ターゲティングの略図を示す。
【図３】図３は，オキザリプラチンを含む標的化リポソームの提唱される作用モードの略図を示す。
【図４】図４は，標的化リポソームの製造プロセスＡの概略図を示す。
【図５】図５は，標的化リポソームの製造プロセスＢの概略図を示す。
【図６】図６は，種々のオキザリプラチン濃度におけるオキザリプラチンのＡｓＰＣ−１細胞に対する細胞毒性を示す。
【図７】図７は，正常白血球および腫瘍由来細胞株の細胞表面に存在するトランスフェリンレセプターの数を示す。
【図８Ａ】図８Ａは，リポソーム含有混合物のサイズ分布の結果を示す。
【図８Ｂ】図８Ｂは，リポソーム含有混合物のサイズ分布の結果を示す。
【図８Ｃ】図８Ｃは，リポソーム含有混合物のサイズ分布の結果を示す。
【図８Ｄ】図８Ｄは，リポソーム含有混合物のサイズ分布の結果を示す。
【図８Ｅ】図８Ｅは，リポソーム含有混合物のサイズ分布の結果を示す。
【図８Ｆ】図８Ｆは，リポソーム含有混合物のサイズ分布の結果を示す。
【図９】図９は，血中のリポソームの濃度を示す。
【図１０】図１０は，癌組織におけるリポソームの濃度を示す。
【図１１】図１１は，ＮＧ−ＰＥリポソームの静脈内注射後の腫瘍組織における蓄積を示す。
【図１２】図１２は，腫瘍成長に及ぼすリポソームの阻害効果を示す。
【図１３】図１３は，血液中で検出された薬剤用量のパーセントに及ぼすＮＧ−ＰＥ（ＮＧ−ＤＳＰＥ）の種々の濃度の影響を示す。
【図１４】図１４は，リポソームの血液滞留を示す。
【図１５】図１５は，電気泳動によるリポソームの例示的分析を示す。
【図１６】図１６は，Ｔｆ−ＮＧ−ＤＳＰＥリポソームに結合したトランスフェリンの量を示す。
【図１７】図１７は，血中のオキザリプラチンの蓄積を示す。
【図１８】図１８は，Ｃｏｌｏｎ２６腫瘍中のオキザリプラチンの蓄積を示す。
【図１９】図１９は，Ｃｏｌｏｎ２６腫瘍担持マウスにおけるＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームの抗腫瘍効果を示す。
【図２０】図２０は，ＨＣＴ−１１６ヒト結腸腫瘍異種移植片担持マウスにおけるＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームの抗腫瘍効果を示す。
【図２１】図２１は，ＨＴ−２９ヒト結腸腫瘍異種移植片担持マウスにおけるＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームの抗腫瘍効果を示す。
【図２２】図２２は，ＭＫＮ４５胃ヒト腫瘍異種移植片担持マウスにおけるＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームの抗腫瘍効果を示す。
【図２３】図２３は，ＣＯＬＯ２０５ヒト腫瘍異種移植片担持マウスにおけるＮＧ−ＤＯＰＥ：Ｔｆ−ＮＧ−ＤＯＰＥ：ＤＭＰＣ：ＣＨリポソームの抗腫瘍効果を示す。
【図２４】図２４は，２−メルカプトエタノールで還元した後のＳＤＳ−ＰＡＧＥのパターンを示す。
【図２５】図２５は，システムに適合した例示的ＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図１】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２】
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