(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
テンプレートフリー及びポリマーフリーの金属ナノスポンジを製造する方法であって、
ａ）金属プリカーサーと還元剤とが１：５の体積比になるように、金属プリカーサー溶液と、該金属プリカーサー溶液における該金属プリカーサーのモル濃度と等しいモル濃度の前記還元剤を含む還元剤溶液とを混合して、スポンジ状固体を得る工程と、
ｂ）前記スポンジ状固体を濾過及び洗浄した後、乾燥して、前記金属ナノスポンジを得る工程と、
を含み、
前記還元剤が水素化ホウ素ナトリウムであり、
前記金属プリカーサーが、硝酸銀、クロロ金酸、ヘキサクロロ白金酸二水素、二塩化パラジウム及び硝酸第一銅を含む群から選択され、
前記金属プリカーサー溶液における前記金属プリカーサーの濃度が０．１Ｍ以上である、方法。
【請求項２】
前記金属プリカーサー溶液における前記金属プリカーサーの濃度が０．１Ｍである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記金属プリカーサー溶液と前記還元剤溶液との前記混合により、発泡と、反応媒体上で浮遊する黒色のスポンジ状固体を形成するように凝集するサイズ３０〜５０ｎｍの金属リガメントで構成された三次元相互ネットワークとが自然形成される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
反応媒体上で浮遊するスポンジ状固体を得る前記プロセシング工程を５分の期間内に完了させる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
請求項１ないし４のいずれか１項に記載される方法により得られ、
サイズが３０〜５０ｎｍの金属リガメントで構成された三次元相互ネットワークを有するスポンジ状多孔質モルフォジーを含む、テンプレートフリー及びポリマーフリーの金属ナノスポンジであって、
前記金属が金、銀、白金、パラジウム及び銅を含む群から選択され、
銀の金属スポンジの表面積が１３ｍ２／ｇ〜１８ｍ２／ｇの範囲であり、
金の金属スポンジが４１ｍ２／ｇ〜４５ｍ２／ｇの範囲であり、
白金の金属スポンジが４０ｍ２／ｇ〜４６ｍ２／ｇの範囲であり、
パラジウムの金属スポンジが７８ｍ２／ｇ〜８４ｍ２／ｇの範囲であり、
銅の金属スポンジが４８ｍ２／ｇ〜５３ｍ２／ｇの範囲である、金属ナノスポンジ。
【請求項６】
表面増強ラマン分光法のための基板としての、及び抗菌活性のための、請求項５に記載のテンプレートフリー及びポリマーフリーの金属ナノスポンジの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はナノテクノロジー分野に関する。より具体的には本発明は、テンプレートフリーの金属ナノスポンジ、及びまたかかる金属ナノスポンジの調製のための単純な製造方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
金属スポンジは、低密度、ガス透過性及び熱伝導性のような特有の特性に関して新規の材料群として特定され、吸着、触媒、燃料電池、膜及びセンサにおいて主要な役割を果たす可能性を有している。高表面積の金属酸化物スポンジの作製及び操作において多大な発展が為されているが、それらの金属スポンジ（counterparts：対応物）に対してはそうではない。多孔質の金属酸化物の合成に使用される最も多目的なテンプレートを基とするアプローチでは、金属、特に産業的により貴重なＡｇ、Ａｕ、Ｐｔ及びＰｄ等の貴金属では所望の結果が得られなかった。例えば、的確なアプローチで、Mann及び共同研究者らは、犠牲（sacrificial）テンプレートとして多糖類、デキストランを使用して、銀及び金の金属発泡体（foam）を合成した（非特許文献１）。しかしながら、得られるマクロ多孔質の銀発泡体の表面積は１ｍ２／ｇ未満でしかない。近年になって、Raoら（非特許文献２）は、５５０℃で銀塩界面活性剤、ｔｒｉｔｏｎＸ−１００コンポジットをか焼することによって、表面積がおよそ１ｍ２／ｇのマクロ多孔質銀発泡体の合成を報告している。セルロース繊維（非特許文献３）及びポリ（エチレンイミン）ヒドロゲル（非特許文献４）は、多孔質の銀フレームワークを調製するための軟テンプレートとしても使用されている。さらに、生物学的に形成された多孔質骨格は、マクロ多孔質の金フレームワークを得るためのテンプレートとして使用された（非特許文献５）。これら全ての場合で、テンプレートの除去には、金属構造を焼結する高温か焼とそれによる表面積の劇的な減少とが必要になる。他方で、低温経路は、シリカ又はラテックス球等のコロイド状結晶テンプレートを使用し（非特許文献６）、これは、有機溶媒又はＨＦ中でのテンプレートの溶解のほかに複合工程プロセスを伴う。Ａｇ−Ａｕ合金からの銀の選択的溶解中のパターン形成の不安定性により、制御されたマルチモーダルな（multi-modal：多岐にわたる）孔径分布を有するナノ多孔質金が得られると報告された（非特許文献７）。本明細書中で本発明者らは、テンプレートフリーで一工程の安価な方法による高表面積の貴金属スポンジの瞬間形成を報告している。非常によく知られているオスワルド成熟プロセスを最適化することにより、本発明者らは、ナノワイヤネットワークで構成された三次元多孔質構造を生成することができた。このプロセスは、水素化ホウ素ナトリウムを用いた金属塩の単純な室温還元を含むため、何れの量にも拡大縮小可能である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Walsh D, Arcelli L, Ikoma T, Tanaka J and Mann S 2003 Nature Mater.2 385
【非特許文献２】Khan F, Eswaramoorthy M and Rao C N R 2007 Solid State Sciences 9 27
【非特許文献３】He J,  Kunitake T and Watanabe T 2005 Chem. Commun. 795
【非特許文献４】Jin  R - H and Yuan J - J 2005 J. Mater. Chem. 15 4513.
【非特許文献５】Seshadri R and Meldrum F 2000 Chem. Commun. 29
【非特許文献６】Kulinowski K M, Jiang P, Vaswani H and Colvin V L 2000 Adv. Mater.12 833
【非特許文献７】Erlebacher J, Aziz M J,  Karma A, Dimitrov N and Sieradzki KNature 410 450
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の主な目的は、金属ナノスポンジ／ナノ構造を提供することである。
【０００５】
本発明の別の目的は、金属ナノスポンジの調製のためにテンプレートフリーの単一工程プロセスを開発することである。
【０００６】
本発明のさらに別の目的は、高表面積、低密度でかつ多孔質の金属ナノスポンジを提供することである。
【０００７】
本発明のさらに別の目的は、表面増強ラマン分光法（ＳＥＲＳ）において使用することができ、抗菌活性にも使用することができるテンプレートフリー及びポリマーフリーの金属ナノスポンジを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
したがって、本発明は、テンプレートフリー及びポリマーフリーの金属ナノスポンジ；等モル濃度の１部の金属プリカーサー及び５部の還元剤の溶液を混合し、スポンジ状固体を得る工程と、スポンジ状固体を濾過及び洗浄した後、乾燥して、金属ナノスポンジを得る工程とを含む、テンプレートフリーの金属ナノスポンジを調製する方法；並びに表面増強ラマン分光法のための基板としての、及び抗菌活性のための、テンプレートフリー及びポリマーフリーの金属ナノスポンジの使用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】銀スポンジ形成プロセスの概略図である。
【図２】銀スポンジの低倍率ＦＥＳＥＭ画像である。
【図３】（ａ）銀スポンジの高倍率ＦＥＳＥＭ画像である。（ｂ）大きさ３０ｎｍ〜５０ｎｍの相互接続された銀リガメント（ligaments）を示すＴＥＭ画像である。（ｃ）多結晶性質を示す電子回折パターンである。
【図４】金スポンジの低倍率ＦＥＳＥＭ画像である。
【図５】金スポンジの高倍率ＦＥＳＥＭ画像である。
【図６】白金スポンジの低倍率ＦＥＳＥＭ画像である。
【図７】（ａ）白金スポンジの低倍率ＦＥＳＥＭ画像である。（ｂ）白金スポンジのＴＥＭ画像である。差込図は白金の多結晶性質に関するＥＤパターンを示す。
【図８】パラジウムスポンジの低倍率ＦＥＳＥＭ画像である。
【図９】パラジウムスポンジの高倍率ＦＥＳＥＭ画像である。
【図１０】銅／酸化銅スポンジの低倍率ＦＥＳＥＭ画像である。
【図１１】銅／酸化銅スポンジの高倍率ＦＥＳＥＭ画像である。
【図１２】室温で真空にした（evacuated）銀スポンジの窒素吸着／脱着の等温線（−１９５℃で）を示す図である。
【図１３】２００℃で加熱した銀スポンジの窒素吸着／脱着の等温線（−１９５℃で）を示す図である。
【図１４】３００℃で加熱した銀スポンジの窒素吸着／脱着の等温線（−１９５℃で）を示す図である。
【図１５】５００℃で加熱した銀スポンジの窒素吸着／脱着の等温線（−１９５℃で）を示す図である。
【図１６】金スポンジの窒素吸着／脱着の等温線（−１９５℃で）を示す図である。
【図１７】白金スポンジの窒素吸着／脱着の等温線（−１９５℃で）を示す図である。
【図１８】パラジウムスポンジの窒素吸着／脱着の等温線（−１９５℃で）を示す図である。
【図１９】銅／酸化銅スポンジの窒素吸着／脱着の等温線（−１９５℃で）を示す図である。
【図２０】１０ｋＮでプレスした銀スポンジペレットの窒素吸着／脱着の等温線（−１９５℃で）を示す図である。
【図２１】１ｋＮでプレスした銀スポンジペレットの窒素吸着／脱着の等温線（−１９５℃で）を示す図である。
【図２２】銀スポンジのＸ線回折パターンを示す図である。
【図２３】金スポンジのＸ線回折パターンを示す図である。
【図２４】白金スポンジのＸ線回折パターンを示す図である。
【図２５】パラジウムスポンジのＸ線回折パターンを示す図である。
【図２６】銅／酸化銅スポンジのＸ線回折パターンを示す図である。
【図２７】（ａ）それぞれ１０ｋＮ及び１ｋＮの圧力でプレスした銀スポンジのペレットを示す写真である。（ｂ）１ｋＮでプレスした銀スポンジペレットの断面図である。
【図２８】（ａ）ローダミン６Ｇ（１０−４Ｍ）（ｂ）銀ナノスポンジでのローダミン６Ｇ（１０−６Ｍ）（ｃ）銀ナノスポンジでのローダミン６Ｇ（１０−４Ｍ）の表面増強ラマンスペクトル（ＳＥＲＳ）を示す図である。
【図２９】（ａ）金ナノスポンジでのローダミン６Ｇ（１０−６Ｍ）及び（ｂ）ローダミン６Ｇ（１０−４Ｍ）の表面増強ラマンスペクトル（ＳＥＲＳ）を示す図である。
【図３０】銀ナノスポンジ−ワットマン濾紙コンポジットのＦＥＳＥＭ画像である。挿入図は紙の上に堆積した銀ナノスポンジの高倍率画像を示す。
【図３１】（ａ）ワットマン濾過膜を示す写真、（ｂ）銀ナノスポンジに埋め込まれているワットマン濾過膜を示す写真、（ｃ）大腸菌に対する銀ナノスポンジ−ワットマン濾過膜コンポジットの抗菌活性を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明はテンプレートフリー及びポリマーフリーの金属ナノスポンジに関する。
【００１１】
本発明の別の実施形態において、上記金属は金、銀、白金、パラジウム及び銅を含む群から選択される。
【００１２】
本発明のさらに別の実施形態において、上記金属ナノスポンジは多孔質で、安定で、黒色で、密度が低く、かつ高表面積である。
【００１３】
本発明のさらに別の実施形態において、多孔率が約５０ｎｍ〜約１００ｎｍの範囲であり、密度が約０．５ｇ／ｃｍ３〜約１ｇ／ｃｍ３の範囲であり、約２５℃〜約３００℃の範囲の温度で安定である。
【００１４】
本発明のさらに別の実施形態において、銀ナノスポンジの表面積は約１３ｍ２／ｇ〜約１８ｍ２／ｇの範囲、好ましくは約１６ｍ２／ｇであり、金ナノスポンジの表面積は約４１ｍ２／ｇ〜約４５ｍ２／ｇの範囲、好ましくは約４３ｍ２／ｇであり、白金ナノスポンジの表面積は約４０ｍ２／ｇ〜約４６ｍ２／ｇの範囲、好ましくは約４４ｍ２／ｇであり、パラジウムナノスポンジの表面積は約７８ｍ２／ｇ〜約８４ｍ２／ｇの範囲、好ましくは約８１ｍ２／ｇであり、銅ナノスポンジの表面積は約４８ｍ２／ｇ〜約５３ｍ２／ｇの範囲、好ましくは約５０ｍ２／ｇである。
【００１５】
本発明は、テンプレートフリー及びポリマーフリーの金属ナノスポンジを調製する方法に関し、当該方法は、等モル濃度の１部の金属プリカーサー及び５部の還元剤の溶液を混合し、スポンジ状固体を得る工程と、スポンジ状固体を濾過及び洗浄した後、乾燥して、金属ナノスポンジを得る工程とを含む。
【００１６】
本発明の別の実施形態において、上記金属プリカーサーは、硝酸銀、クロロ金酸、ヘキサクロロ白金酸二水素、二塩化パラジウム及び硝酸第一銅（cuprous nitrate）を含む群から選択される。
【００１７】
本発明の別の実施形態において、上記等モル濃度は約０．１Ｍである。
【００１８】
本発明のさらに別の実施形態において、上記金属プリカーサーと還元剤とを約１：５の体積比で混合する。
【００１９】
本発明のさらに別の実施形態において、上記還元剤は水素化ホウ素ナトリウムである。
【００２０】
本発明のさらに別の実施形態において、金属プリカーサーの溶液と還元剤との上記混合により、発泡（effervescence）と、反応媒体上で浮遊する黒色のスポンジ状固体を形成するように凝集するナノサイズのリガメント金属ネットワークとが自然（spontaneous）形成される。
【００２１】
本発明のさらに別の実施形態において、反応媒体上で浮遊するスポンジ状固体を得る上記プロセシング工程が約５分の期間内に完了する。
【００２２】
本発明は、表面増強ラマン分光法のための基板としての、及び抗菌活性のための、テンプレートフリー及びポリマーフリーの金属ナノスポンジの使用に関する。
【００２３】
本願の技術を以下の実施例を用いてさらに詳述する。しかしながら、実施例は本発明の範囲を限定するように解釈されるべきではない。
【実施例】
【００２４】
［実施例１］
実験手順：
０．１ＭのＡｇＮＯ３の水溶液１０ｍｌを０．１ＭのＮａＢＨ４の水溶液５０ｍｌに添加することにより、多孔質の銀スポンジを合成した（ＮａＢＨ４／ＡｇＮＯ３溶液の体積比＝５）。ホウ化水素溶液への硝酸銀の添加により、反応媒体上に浮遊する黒色のスポンジ状固体と共に発泡（水素の放出による）の自然形成が起こった。浮遊固体を濾過し、蒸留水で洗浄した後、室温で乾燥させた。全反応を５分以内で完了させることができる。要求されるＮａＢＨ４の最適量を検証するために、異なる体積比（１、２、３及び４）の０．１Ｍの濃度のＮａＢＨ４／ＡｇＮＯ３で実験を行った。同様に、ＮａＢＨ４濃度を一定（０．１Ｍ）に維持して、異なる濃度のＡｇＮＯ３（それぞれ１ｍＭ及び２Ｍ）で同じ合成手順を行った。図１は、銀金属ナノスポンジの形成に関する概略図を提供する。
【００２５】
同様の方法において、０．１ＭのＨＡｕＣｌ４  １０ｍｌを０．１ＭのＮａＢＨ４  ５０ｍｌに添加することにより、金ナノスポンジを合成した。０．１Ｍの金属プリカーサー（白金ではＨ２ＰｔＣｌ６及びパラジウムではＰｄＣｌ２）１０ｍｌを０．１ＭのＮａＢＨ４  ５０ｍｌに添加することにより、白金ナノスポンジ及びパラジウムナノスポンジを合成した。また、これらの貴金属の多孔質スポンジを異なる濃度で形成することが可能である。０．１ＭのＮａＢＨ４溶液５０ｍｌに０．１Ｍの硝酸銅溶液１０ｍｌを添加することにより、Ｃｕ／Ｃｕ２Ｏナノスポンジを調製した。
【００２６】
考察：
単に硝酸銀溶液を最適濃度のホウ化水素と混合することにより、高表面積を有する多孔質の銀スポンジを容易に形成することができる。硝酸銀の濃度がおよそ１．０ｍＭと低い場合、どれだけの量の０．１Ｍの水素化ホウ素ナトリウムを添加しても、多孔質の銀ネットワークは形成されない。硝酸銀の濃度が０．１Ｍである場合、等体積の水素化ホウ素ナトリウム（borohydride）（０．１Ｍの濃度）の添加により、ミクロンサイズのリガメント（ligament）銀ネットワークが得られた。しかしながら、ホウ化水素の濃度の増大（０．２Ｍまで）又は０．１Ｍの水素化ホウ素ナトリウムの体積を倍にすることにより、ナノサイズのリガメント（３０ｎｍ〜５０ｎｍ）で構成された非常に多孔質なネットワークが得られる。硝酸銀及び水素化ホウ素ナトリウム溶液の濃度を０．１Ｍ以上に維持する場合、銀ナノスポンジの形成が期待できる。
【００２７】
１：５の体積比（０．１ＭのＡｇＮＯ３溶液：０．１ＭのＮａＢＨ４溶液に関して）で調製された銀ナノスポンジは１６ｍ２／ｇの表面積を有し、これはこれまでに報告された銀スポンジ（全くテンプレートを用いずに調製された）に関して最も高い表面積である。金属ナノスポンジを形成するために、幾つかの臨界量の金属イオンを溶液中に有することが必要であることが本発明者らの研究から明らかである。金属イオンの濃度が臨界レベルよりも低い場合、溶液中で安定化されたコロイド状のナノ粒子が形成される傾向がある。例えば、粒子表面上での過剰な（excess）ホウ化水素アニオンにより安定化された銀ナノ粒子の分散によって、１．０ｍＭの無色の硝酸銀溶液は、水素化ホウ素ナトリウム（１ｍＭ又は０．１Ｍ濃度）による還元により黄色から暗緑色の溶液を与える。以下の表１は、金属ナノスポンジ及びその表面積のリストを提供する。また表２は、０．１Ｍ及び２Ｍの金属プリカーサー及び還元剤の溶液を使用して調製された金属ナノスポンジの比較を提供する。
【００２８】
【表１】
0005637983.tif 000002
【００２９】
【表２】
0005637983.tif 000003
【００３０】
硝酸銀溶液への水素化ホウ素ナトリウムの添加により、さらなる成長のために核形成中心として作用する多くの銀核（クラスター）が形成される。形成される核形成部位（還元銀部位）の数は、添加するホウ化水素の量に直接比例している。経時的に、オスワルド成熟により、小さいナノ粒子の融合が起こり、銀の鎖状の相互接続ネットワークが形成される（硝酸銀の濃度がおよそ０．１Ｍ以上である場合）。これらのネットワークが凝集し、溶液中に浮遊する黒色のスポンジ状固体を形成する。ナノスポンジにおけるリガメントの大きさは、水素化ホウ素ナトリウムの濃度を変えることにより調整することができる。様々な金属ナノスポンジのＦＥＳＥＭ画像が図２〜図１１に供される。
【００３１】
［実施例２］
（安定性試験）
より高い温度における銀スポンジの安定性を試験するために、本発明者らは、形成されたスポンジを様々な温度で加熱し、これらのサンプルの表面積を測定した。２００℃で処理したサンプルの表面積は１３ｍ２／ｇであり、３００℃で処理したサンプルの表面積は１１ｍ２／ｇであり、５００℃で処理したサンプルの表面積は１ｍ２／ｇである。温度が増大すると、銀スポンジの表面積が減少する。これは、温度が増大すると、ナノ粒子が焼結して、（表面積がさらに低減する）より大きい粒子を形成することに寄与し得る。様々な金属ナノスポンジの窒素吸着／脱着等温線の試験で得られた実験結果が図１２〜図２１に供される。同様に、様々な金属ナノスポンジに関するＸ線回折試験が図２２〜図２６に供される。
【００３２】
また、この多孔質銀スポンジをペレットの形態にプレスし、その表面積をほとんど変えることなくモノリスを得ることができる。２つの異なる圧力、１ｋＮ及び１０ｋＮを付加することによりペレットを作製し、またそれらの表面積を測定した。１ｋＮの圧力で作製されたペレットの表面積は１２ｍ２／ｇであり、１０ｋＮの圧力で作製されたペレットの表面積は９ｍ２／ｇである。ペレットは様々な圧力をかけることにより、異なる大きさ及び形状に形成することができる。付加する圧力が増大するにつれて、表面積はわずかに減少する。この場合、表面積の減少は空隙径の縮小、及び小さい銀ナノリガメントのより大きい銀ナノリガメントへの融合によるものである。それぞれ１０ｋＮ及び１ｋＮでプレスした銀スポンジのペレットを示す写真、及び１ｋＮでプレスした銀スポンジペレットの断面図を図２７に示す。
【００３３】
同様に金、白金及びパラジウムのような他の貴金属の多孔質スポンジを得るために同様の手順を適用した。調製されたこれらの金属スポンジはそれぞれ、これまでに報告された非支持金属よりも高表面積であった。これらの合成手順全てにおいて、金属プリカーサー及び水素化ホウ素ナトリウムの濃度を０．１Ｍに維持し、また金属塩とホウ化水素溶液との体積比を、全体を通して１：５に維持した。存在する金属にかかわらず、得られた金属スポンジは全て、非常に低密度でかつ黒色であった。これらの金属スポンジでの表面積はそれぞれ、多孔質金では３５ｍ２／ｇであり、多孔質白金では４４ｍ２／ｇであり、多孔質パラジウムでは８１ｍ２／ｇである。多孔質の金属スポンジを得るために本明細書中で行われる手順は、これまでに報告された最も単純な手順であり、また所望の量に拡大縮小することができる、安価で単一工程の室温合成である。
【００３４】
［実施例３］
（金属ナノスポンジの用途）
これらの金属ナノスポンジを可能性のある用途に関して試験した。銀ナノスポンジ及び金ナノスポンジは、表面増強ラマン分光法（ＳＥＲＳ）で良好な自己支持基板であることが見出され、また、ワットマン濾過膜に組み込まれた銀ナノスポンジは、有意な抗菌活性を示す。
【００３５】
（表面増強ラマン分光法（ＳＥＲＳ））
このようにして調製された銀ナノスポンジ及び金ナノスポンジをＳＥＲＳ活性に関して試験した。この目的で、ローダミン６Ｇ（１０−４Ｍ及び１０−６Ｍの両方）２０μｌを、ナノスポンジ試料（粉末形態で、又はペレットとして）１０ｍｇを含有するスライドガラス上に滴下した（drop casted）。ラマンスペクトルを、光源として６３２ｎｍのＨｅＮｅレーザを使用して室温で記録した。ローダミン６Ｇに特徴的なシグナルは、Ａｇ基板及びＡｕ基板上で観察される場合、数倍に増強されたのに対し、ナノスポンジを用いないスライドガラス上では、１０−４Ｍ濃度のローダミン６Ｇ染色は検出することができなかった（図２８及び図２９を参照されたい）。
【００３６】
（抗菌試験）
銀の抗菌活性を試験するために、ワットマン濾紙（Whatman Schleicher & Schuellから得られた１２５ｍｍの無灰円形濾紙（Ashless circles））を０．１ＭのＡｇＮＯ３溶液１０ｍｌ中に３０分間浸漬させた後に、それを０．１ＭのＮａＢＨ４溶液５０ｍｌ中に浸漬させることにより、銀ナノスポンジ−ワットマンコンポジット膜を調製した。即時反応により暗灰色の膜が得られた。この膜をＭｉｌｌｉｐｏｒｅ水で数回洗浄し、抗菌活性試験の前に室温で乾燥させた。
【００３７】
大腸菌（ＤＨ５α）を使用して抗菌試験を行った。この細菌をＬＢ（Ｌｕｒｉａ  Ｂｅｒｔａｎｉ）ブロス中で接種し、振盪型インキュベーター内で３７℃にて一晩培養した。細菌細胞を寒天培地（１．５％寒天プレートがこの目的で作製された）上で平板展開させた。コンポジット膜をこれらのプレート上に乗せ、３７℃で一晩インキュベートした。細菌の成長が、コンポジット膜を乗せた部分を除くプレート全体で観察された。阻害部分は、膜領域周辺で明らかに見られた（図３０及び図３１を参照されたい）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７（ａ）】
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【図７（ｂ）】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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