(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（ａ）乃至（ｄ）からなる特徴を有する、式（ＩＶ）及び式（Ｖ）に示されるポリヌクレオチドからなる、２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩：
５’−（α−β）９−αｐ−λｍ−３’（ＩＶ）
５’−δｓ−（α−β）９−υｎ−３’（Ｖ）
（ａ）α及びβは異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡ、δ及びλは同一又は異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡ、υは同一又は異なってはＤＮＡ及び２’−ＯＭｅＲＮＡから選択されるいずれかのヌクレオチドを示す；
（ｂ）ｐは０又は１の整数を示し、ｍはｐが０のときは０であり、ｐが１のときは０〜５のいずれかの整数を示す。ｓは０又は1の整数を示し、ｎは０〜５のいずれかの整数を示す。；
（ｃ）式（ＩＶ）で示されるポリヌクレオチドのうち、（α−β）９−αｐは標的遺伝子と同一のヌクレオチド配列からなる；
（ｄ）式（ＩＶ）における（α−β）９と式（Ｖ）における（α−β）９は互いに相補的なヌクレオチド配列からなる。
【請求項２】
αがＤＮＡ、βが２’−ＯＭｅＲＮＡであることを特徴とする、請求項１に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩。
【請求項３】
λｍ及びυｎが同一又は異なってチミン塩基、アデニン塩基又はグアニン塩基を有するＤＮＡ、又は、ウラシル塩基、アデニン塩基又はグアニン塩基を有する２’−ＯＭｅＲＮＡのいずれかであることを特徴とする、請求項１又は２に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩。
【請求項４】
ｍが０、ｎが２であることを特徴とする、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩。
【請求項５】
ｐ及びｍが０、ｓが１、ｎが２であることを特徴とする、請求項１乃至４のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩。
【請求項６】
２’−ＯＭｅＲＮＡの任意の１〜４残基がＥＮＡ又は２’，４’−ＢＮＡ／ＬＮＡに置換されていることを特徴とする、請求項１乃至５のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩。
【請求項７】
ＤＮＡの任意の１〜４残基がＥＮＡ又は２’，４’−ＢＮＡ／ＬＮＡに置換されていることを特徴とする、請求項１乃至６のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩。
【請求項８】
各ヌクレオチドがリン酸ジエステル結合又はホスホロチオエート結合で結合していることを特徴とする、請求項１乃至７のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩。
【請求項９】
少なくともいずれか一つのポリヌクレオチドの５’末端にリン酸基が付加されていることを特徴とする、請求項１乃至８のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩。
【請求項１０】
アンチセンス鎖の５’末端にリン酸基が付加されている、請求項１乃至９のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩。
【請求項１１】
請求項１乃至１０のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩を有効成分として含有する医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＲＮＡ分解酵素に対して安定でかつ、ＲＮＡ干渉作用を有する新規２本鎖ポリヌクレオチド、該２本鎖ポリヌクレオチドの使用、該２本鎖ポリヌクレオチドを用いた遺伝子発現抑制方法、該２本鎖ポリヌクレオチドを含有する医薬等に関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞、組織、あるいは個体内の標的遺伝子の発現を阻害する方法として、当該細胞、組織、あるいは個体内に２本鎖ＲＮＡを導入する手法がある。２本鎖ＲＮＡの導入によって、その配列に相同性を持つｍＲＮＡが分解され、標的遺伝子の発現が阻害される。この効果は「ＲＮＡ干渉」または「ＲＮＡｉ」と呼ばれている。ＲＮＡ干渉は最初に線虫で報告され（例えば、非特許文献１参照。）、その後に植物でも報告されている（例えば、非特許文献２参照。）。【０００３】
３’末端に２ヌクレオチドのオーバーハングを有する、センス鎖、アンチセンス鎖それぞれ２１ヌクレオチドからなる２本鎖ＲＮＡ（ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ：ｓｉＲＮＡ）は、脊椎動物の培養細胞において、ＲＮＡ干渉作用を有することが報告されている（例えば、非特許文献３参照。）。【０００４】
ｓｉＲＮＡは遺伝子機能の同定、有用物質生産に適した細胞株のスクリーニング、疾患に関与する遺伝子の制御等に有用であるが、ＲＮＡ分解酵素によって容易に分解されるという欠点を有する（例えば、非特許文献４参照。）。ＲＮＡ合成は、ＤＮＡ合成に比較して困難であるために、合成コストが５〜１０倍高いと言われている（例えば、非特許文献５参照。）。その理由として、２’−水酸基の保護基の必要性、その保護基の脱保護の必要性、及び保護基の立体障害に由来する縮合収率の低下によるＲＮＡ合成収率の悪さが挙げられている（例えば、非特許文献６参照。）。【０００５】
したがって、ＲＮＡ分解酵素に対する安定性が高く、安価に製造できる、ＲＮＡｉ活性を保持したポリヌクレオチドの開発が望まれていた。【０００６】
ＲＮＡ分解酵素に対して安定性を有するｓｉＲＮＡを取得するために、ｓｉＲＮＡを構成するＲＮＡの全部又は一部を２’−デオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）に置換する方法が検討されている（例えば、特許文献１、非特許文献７，８、９、１０、１１参照。）。しかしながら、ＲＮＡ分解酵素に対する安定性と天然型のｓｉＲＮＡと同等のＲＮＡ干渉作用の両方を有するｓｉＲＮＡは得られていない。【０００７】
オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合のリン酸基の非架橋酸素原子を硫黄原子に置き換えたホスホロチオエート（ＰＳ）結合は、ヌクレアーゼに耐性になることが知られている（例えば、非特許文献１２参照。）。ｓｉＲＮＡの中のリン酸ジエステル結合をＰＳ結合に置き換えた場合、未修飾ｓｉＲＮＡと同程度のＲＮＡ干渉を示すことが報告されている（例えば、非特許文献９、１３、１４参照。）。しかしながら、オリゴヌクレオチド中のＰＳ結合の数を増やすと２本鎖ＲＮＡの熱力学的不安定化及び非特異的なタンパク質との結合が起きるので好ましくないと考えられている（例えば、非特許文献１５参照。）。【０００８】
天然型のＲＮＡを修飾ＲＮＡに置換することによって安定なｓｉＲＮＡを取得する試みもなされている。ＲＮａｓｅの分解反応にはＲＮＡの２’−ＯＨ基が必須であるので、この２’−ＯＨ基をアルキル化しＲＮａｓｅの基質にならないようにした２’−Ｏ−アルキルヌクレオシドとした数多くの誘導体が報告されている。２’−Ｏ−メチルヌクレオチドはｔＲＮＡの中にも見られる天然に存在する修飾ヌクレオチドで、アンチセンス研究の初期の頃から研究されている（例えば、非特許文献１６参照。）。【０００９】
ｓｉＲＮＡのセンス鎖またはアンチセンス鎖の一方、または両方を２’−Ｏ−メチルヌクレオチドで置換するとＲＮＡｉが完全に失われるとの報告（例えば、非特許文献７、非特許文献１７、１８参照。）や、ｓｉＲＮＡのセンス鎖またはアンチセンス鎖のすべてのリボヌクレオチドを２’−Ｏ−メチルヌクレオチドに置換した場合のみ弱いＲＮＡｉが観察されて、両鎖を置換した場合はＲＮＡｉが完全に失われるとの報告がある（例えば、非特許文献９参照。）。【００１０】
なお、センス鎖の全てのＲＮＡを２’−Ｏ−メチルヌクレオチドで置換した場合、未修飾のｓｉＲＮＡと比較して、同程度のＲＮＡｉが得られるとの報告があるが、これは当該実験で用いられたｓｉＲＮＡの配列の影響を受ける（例えば、非特許文献１９参照。）。【００１１】
ｓｉＲＮＡの末端に４つの２’−Ｏ−メチルヌクレオチドを導入した場合、ＲＮＡｉを保持すること（例えば、非特許文献１４参照。）及び、２’−Ｏ−メチルヌクレオチドを１つおきにｓｉＲＮＡのセンス鎖及びアンチセンス鎖の両鎖に導入した場合に未修飾ｓｉＲＮＡと比較して同程度のＲＮＡｉが得られること（例えば、非特許文献１８参照。）が報告されている。また、２’−Ｏ−メチルヌクレオチドを３つ連続して導入するとセンス鎖への導入では活性低下が見られないが、アンチセンス鎖への導入では、活性低下が認められて、特にセンス鎖の５’末端に導入した場合に著しく活性が低下することが報告されている（例えば、非特許文献２０参照。）。【００１２】
また、センス鎖の３’，５’−末端付近を２’−デオキシリボヌクレオチド、中央部を２’−Ｏ−メチルヌクレオチドとしたｓｉＲＮＡが報告されているが、未修飾ｓｉＲＮＡとのＲＮＡｉ活性の比較はなされていない（例えば、非特許文献２１参照。）。【００１３】
人工的に合成された修飾ＲＮＡである、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド（２’−Ｆ）を有するオリゴヌクレオチドは、リボヌクレオチドと同じＮ型配座を優先して形成し、ＲＮＡとの親和性も高くなる（例えば、非特許文献２２参照。）。しかしながら、リン酸ジエステル結合からなるものはヌクレアーゼ抵抗性がないので、ホスホロチオエート結合とし、ヌクレアーゼ抵抗性を持たせる必要がある（例えば、非特許文献２２参照。）。【００１４】
ｓｉＲＮＡ中のピリミジンヌクレオチドを２’−Ｆに置き換えた場合、未修飾ｓｉＲＮＡと同程度のＲＮＡｉを示すことが報告されている（例えば、非特許文献９、１４参照。）。２’−Ｆを３つ連続して導入することとした場合、アンチセンス鎖への導入であまり活性低下が見られていない。（例えば、非特許文献２０参照。）。また、センス鎖のピリミジンヌクレオチドまたはプリンヌクレオチドのいずれか一方、アンチセンス鎖のピリミジンヌクレオチドまたはプリンヌクレオチドのいずれか一方を２’−Ｆに置き換えた場合、さらに修飾された両鎖の組み合わせにおいて、未修飾ｓｉＲＮＡと同程度のＲＮＡｉを示すことが報告されている（例えば、非特許文献２３参照。）。【００１５】
しかしながら、これらの中でＲＮＡ干渉作用を示したものは、リボヌクレオチドを含んでおり、ＲＮＡ分解酵素によって分解される。ｓｉＲＮＡ中のピリミジンヌクレオチドを２’−Ｆに置き換えた場合、動物モデルにおいてＲＮＡｉの増強や効果の延長は認められなかったとの報告がある（例えば、非特許文献２４参照。）。また、非天然ヌクレオシドである、２’−デオキシ−２’−フルオロシチジン及び２’−デオキシ−２’−フルオロウリジンは、ラット、Ｗｏｏｄｃｈｕｃｋに投与した場合、毒性は示さないとされているものの、細胞内でトリリン酸化され、ＤＮＡポリメラーゼやＲＮＡポリメラーゼの基質となり、様々の臓器のＤＮＡ、ＲＮＡ及びミトコンドリアＤＮＡ内に取り込まれることが報告されている（例えば、非特許文献２５、２６参照）。２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオシドのトリリン酸体は、ＤＮＡポリメラーゼα、γの基質になり、ＤＮＡに取り込まれるが、２’−Ｏ−メチルヌクレオシドトリリン酸体は、ＤＮＡポリメラーゼα、γの基質にならないことが、試験管内で確かめられており（例えば、非特許文献２７参照。）、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオシドの遺伝的な毒性が懸念されている（例えば、非特許文献２８参照。）。【００１６】
ｓｉＲＮＡのヌクレオチドをすべて２’−Ｆに置換した場合、未修飾ｓｉＲＮＡと比較して僅かにＲＮＡｉが低下する程度にすぎないとの報告や、ＲＮＡ分解酵素に耐性があるとの報告がある（例えば、非特許文献２９参照。）。【００１７】
２’−Ｏ−メチルヌクレオチドと２’−Ｆを１つおきにｓｉＲＮＡのセンス鎖、アンチセンス鎖に導入し、未修飾ｓｉＲＮＡと比較して同程度以上のＲＮＡｉが得られ、血清中での比較的安定に保たれることが報告されている（例えば、非特許文献３０参照。）が、非天然核酸が数多く導入された場合には、細胞毒性や副作用が生じると懸念されている。【００１８】
ＥＮＡ（２’−Ｏ，４’−Ｃ−ｅｔｈｙｌｅｎｅ−ｂｒｉｄｇｅｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ）は、ヌクレアーゼに対する安定性を有している修飾核酸である（例えば、非特許文献３１、３２参照。）が、ｓｉＲＮＡのセンス鎖、アンチセンス鎖の一方または両方の３’末端のオーバーハング部位の２ヌクレオチドにＥＮＡを導入した場合、ＲＮＡｉ活性が低下することが報告されている（例えば、非特許文献３３参照。）。【００１９】
化学合成したｓｉＲＮＡを細胞内へ導入すると、センス鎖とアンチセンス鎖の両方の５’末端がリン酸化されることが報告されている（例えば、非特許文献３４参照。）。ヒトの細胞においては、ＲＮＡキナーゼ  ｈＣｌｐ１がｓｉＲＮＡの５’−リン酸化を担っていることが報告されている（例えば、非特許文献３５参照。）。５’末端をリン酸化したｓｉＲＮＡと、５’末端をリン酸化していないｓｉＲＮＡを細胞内に導入しＲＮＡｉ活性を比較すると、両者の活性に差が見られなかったことから、５’末端非リン酸化ｓｉＲＮＡは細胞内で容易にリン酸化を受けると考えられている（例えば、非特許文献１４参照。）。【００２０】
ＲＮＡｉ活性に関与することが知られているＡｒｇｏｎａｕｔｅタンパク質（Ａｇｏ）とアンチセンス鎖の複合体Ｘ線解析から、アンチセンス鎖の５’末端のリン酸基及びその近傍のヌクレオチドがＡｇｏのＰＩＷＩドメインに強く結合していることが示されている（例えば、非特許文献３６参照。）。【００２１】
ｓｉＲＮＡの鎖長は、３’末端に２ヌクレオチドのオーバーハングを有するセンス鎖及びアンチセンス鎖としてそれぞれ２１ヌクレオチドが汎用的に用いられている。アンチセンス鎖を２１ヌクレオチドとし、センス鎖の３’末端または５’末端から鎖長を変えた場合、センス鎖が２１ヌクレオチドの場合が最もＲＮＡｉ活性が強いことが示されている（例えば、非特許文献７、３７参照。）また、センス鎖の３’末端から鎖長を短くし１７または１８ヌクレオチドとした場合、センス鎖が２１ヌクレオチドである場合と同等のＲＮＡｉ活性を示すと報告している（例えば、非特許文献３８参照。）。【００２２】
２１ヌクレオチドからなるｓｉＲＮＡの３’末端オーバーハングの長さが２ヌクレオチドである場合に、最もＲＮＡｉ活性が強いことが示されている（例えば、非特許文献７参照。）。配列として、ＡＡ、ＣＣ，ＧＧ，ＵＵ，ＵＧ（野生型）、ＴｄＧ、ＴＴ（Ｔ、ｄＧは、２’−デオキシリボヌクレオチド）を持つｓｉＲＮＡを用いてＲＮＡｉ活性を調べたところ、いずれの配列でもＲＮＡｉ活性を有していたことが報告されている（例えば、非特許文献７参照。）。また、ｓｉＲＮＡの３’末端オーバーハングとしてＴＴ配列を有したｓｉＲＮＡよりもＵＵ配列を有したｓｉＲＮＡの方が高いＲＮＡｉ活性を示すことが報告されている（例えば、非特許文献１０参照。）
ｐｏｌｙＩ：ｐｏｌｙＣなどの２本鎖ＲＮＡは古くからインターフェロン誘導剤として知られており、そのメカニズムにはＴＬＲ３（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ３）が関与している。ｓｉＲＮＡもＴＬＲ３及びそのサブセットのＴＬＲ７、ＴＬＲ８に認識され、インターフェロンやサイトカインを誘導することが知られている。特にＧＵ配列、ＵＧＵＧＵ配列、ＧＵＣＣＵＵＣＡＡ配列を有するｓｉＲＮＡに免疫応答が起こりやすいという報告がある（例えば、非特許文献３９、４０、４１参照。）。また、ＤＮＡや２’−ＯＭｅＲＮＡなどの化学修飾ヌクレオチドをｓｉＲＮＡに導入するにより、これらの免疫応答を抑制できることが示されている（例えば、非特許文献４１、４２、４３、４３参照。）。
本発明者らは、ＲＮＡ分解酵素に安定でしかも安価に合成可能なＲＮＡ干渉作用を有するポリヌクレオチドを取得すべく、鋭意研究を行ったところ、ＤＮＡと２’−Ｏ−メチルＲＮＡを交互に組み合わせたオリゴヌクレオチドユニットを含む２本鎖ポリヌクレオチドが上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成させた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２３】
【特許文献１】国際公開第２００３／０４４１８８号パンフレット
【特許文献２】米国特許公開公報第ＵＳ２００７／０２６５２２０号
【非特許文献】
【００２４】
【非特許文献１】Ｎａｔｕｒｅ、１９９８年、第３９１巻、ｐ．８０６−８１１
【非特許文献２】Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９９年、第２８６巻、ｐ．９５０−９５２
【非特許文献３】Ｎａｔｕｒｅ、２００１年、第４１１巻、ｐ．４９４−４９８
【非特許文献４】Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００２年、第４８巻、ｐ．１６４７−１６５３
【非特許文献５】関根光雄、多比良和誠編、「ＲＮＡｉ法とアンチセンス法」、講談社、２００５年６月２０日発行、２．４章  ＲＮＡｉ療法―ｓｉＲＮＡのがん治療薬への応用、ｐ．７６−８７
【非特許文献６】Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２００８年、第１１巻、ｐ．２０３−２１６
【非特許文献７】ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ、２００１年、第２０巻、ｐ．６８７７−６８８８
【非特許文献８】Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００２年、第３０巻、ｐ．１７５７−１７６６
【非特許文献９】ＲＮＡ、第９巻、２００３年、ｐ．１０３４−１０４８
【非特許文献１０】ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、２００２年、第５２１巻、ｐ．１９５−１９９
【非特許文献１１】Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００８年、第３６巻、ｐ．２１３６−２１５１
【非特許文献１２】Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２０００年、第１０巻、ｐ．１１７−１２１
【非特許文献１３】Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００３年、第３１巻、ｐ．５８９−５９５
【非特許文献１４】Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２００３年、第１３巻、ｐ．８３−１０５
【非特許文献１５】Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、  ２０００年、第１０巻、ｐ．１１７−１２１
【非特許文献１６】Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９８７年、第１５巻、ｐ．６１３１−６１４８
【非特許文献１７】Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００３年、第４２巻、ｐ．７９６７−７９７５
【非特許文献１８】Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００３年、第３１巻、ｐ．２７０５−２７１６
【非特許文献１９】ＲＮＡ、２００６年、第１２巻、ｐ．１６３−１７６
【非特許文献２０】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００５年、第４８巻、ｐ．４２４７−４２５３
【非特許文献２１】Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ、２００６年、第２５巻、ｐ．８８９−９０７
【非特許文献２２】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９３年、第３６巻、  ｐ．８３１−８４１
【非特許文献２３】Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ、２００７年、第４巻、ｐ．８５８−８７３
【非特許文献２４】ＲＮＡ、２００４年、第１０巻、ｐ．７６６−７７１
【非特許文献２５】Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、１９９９年、第２７巻、ｐ．６０７−６１７
【非特許文献２６】Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ、２００２年、第１５巻、ｐ．９２２−９２６
【非特許文献２７】Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２０００年、第５９巻、ｐ．１０４５−１０５２
【非特許文献２８】Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、２００６年、第１６巻、ｐ．３３７−３５１
【非特許文献２９】Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ、２００７年、第７０巻、ｐ．１１３−１２２
【非特許文献３０】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．、２００５年、第４８巻、ｐ．９０１−９０４
【非特許文献３１】Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．、２００２年、第１２巻、ｐ．７３−７６
【非特許文献３２】Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００３年、第１１巻、ｐ．２２１１−２２２６
【非特許文献３３】Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ａｎｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２００２年、  第１２巻、ｐ．３０１−３０９
【非特許文献３４】Ｃｅｌｌ、２００１年、第１０７巻、ｐ．３０９−３２１
【非特許文献３５】Ｎａｔｕｒｅ、２００７年、第４４７巻、ｐ．２２２−２２６
【非特許文献３６】Ｎａｔｕｒｅ，２００５年、第４３４巻、ｐ．６６３−６６６
【非特許文献３７】ＲＮＡ、２００８年、第１４巻、ｐ．１７１４−１７１９
【非特許文献３８】Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００８年、第３６巻、ｐ．５８１２−５８２１
【非特許文献３９】Ｓｃｉｅｎｃｅ、２００３年、第３０３巻、ｐ．１５２６−１５２９
【非特許文献４０】Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２００５年、第２３巻、ｐ．４５７−４６２
【非特許文献４１】Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００５年、第１１巻、ｐ．２６３−２７０
【非特許文献４２】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２００５年、第３４８巻、ｐ．１０７９−１０９０
【非特許文献４３】Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２００５年、第２３巻、ｐ．１００２−１００７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
本発明の一つの課題は、ＲＮＡ分解酵素に安定なＲＮＡ干渉作用を有する２本鎖ポリヌクレオチドを提供することである。【００２６】
本発明の他の一つの課題は上記２本鎖ポリヌクレオチドによって遺伝子発現を抑制する方法を提供することである。【００２７】
本発明の他の一つの課題は上記２本鎖ポリヌクレオチドを含有する医薬品を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２８】
すなわち、本発明は、
（１）
以下の（ａ）乃至（ｄ）からなる特徴を有する、式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチド及び式（ＩＩ）に示されるポリヌクレオチドからなる、２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩：
５’−Ｘ−（α−β）ｑ−αｐ−λｍ−３’（Ｉ）
５’−δｓ−（α−β）ｒ−Ｙ−υｎ−３’（ＩＩ）
（ａ）α及びβは異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡを示し、δ及びλは同一又は異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡを示し、υは同一又は異なってＤＮＡ、ＲＮＡ及び２’−ＯＭｅＲＮＡから選択されるいずれかのヌクレオチドを示し、Ｘ及びＹはＤＮＡ、ＲＮＡ及び修飾核酸から選択される同一又は異なる種類のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを示す；
（ｂ）ｐは０又は１の整数を示し、ｍはｐが０のときは０であり、ｐが１のときは０〜５のいずれかの整数を示す。ｑは３〜９のいずれかの整数を示し、（α−β）ｑとＸの合計ヌクレオチド数は１７乃至１８である。ｓは０又は１の整数を示し、ｎは０〜５のいずれかの整数を示す。ｒは３〜９のいずれかの整数を示し、（α−β）ｒとＹの合計ヌクレオチド数は１７乃至１８である。
（ｃ）式（Ｉ）で示されるポリヌクレオチドのうち、Ｘ−（α−β）ｑ−αｐは標的遺伝子と同一のヌクレオチド配列からなる；
（ｄ）式（Ｉ）におけるＸ−（α−β）ｑと式（ＩＩ）における（α−β）ｒ−Ｙは互いに相補的なヌクレオチド配列からなる、
（２）
式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｑが３で、Ｘが（γ−β）６、（α−β）−（γ−β）５、（α−β）２−（γ−β）４、（α−β）３−（γ−β）３、（α−β）４−（γ−β）２、（α−β）５−（γ−β）、（α−β）６、β１２、（α−β）−β１０、（α−β）２−β８、（α−β）３−β６、（α−β）４−β４、（α−β）５−β２、β−（γ−β）５、β−（α−β）−（γ−β）４、β−（α−β）２−（γ−β）３、β−（α−β）３−（γ−β）２、β−（α−β）４−（γ−β）、β１１、β−（α−β）−β８、β−（α−β）２−β６、β−（α−β）３−β４、β−（α−β）４−β２、及びβ−（α−β）５（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（３）
式（ＩＩ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｒが３で、Ｙが（γ−β）６、（γ−β）５−（α−β）、（γ−β）４−（α−β）２、（γ−β）３−（α−β）３、（γ−β）２−（α−β）４、（γ−β）−（α−β）５、（α−β）６、α６−（α−β）３、α４−（α−β）４、α２−（α−β）５、（γーβ）５−α、（γ−β）４−（α−β）−α、（γ−β）３−（α−β）２−α、（γ−β）２−（α−β）３−α、（γ−β）−（α−β）４−α、α６−（α−β）２−α、α４−（α−β）３−α、β２−（α−β）４−α、及び（α−β）５−α（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１）又は（２）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（４）
式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｑが３で、（γ−β）６、（α−β）−（γ−β）５、（α−β）２−（γ−β）４、（α−β）３−（γ−β）３、（α−β）４−（γ−β）２、（α−β）５−（γ−β）、（α−β）６、β１２、（α−β）−β１０、（α−β）２−β８、（α−β）３−β６、（α−β）４−β４、（α−β）５−β２、β−（γ−β）５、β−（α−β）−（γ−β）４、β−（α−β）２−（γ−β）３、β−（α−β）３−（γ−β）２、β−（α−β）４−（γ−β）、β１１、β−（α−β）−β８、β−（α−β）２−β６、β−（α−β）３−β４、β−（α−β）４−β２、及びβ−（α−β）５からなる群から選択されるいずれか一つであり、式（ＩＩ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｒが３で、Ｙが（γ−β）６、（γ−β）５−（α−β）、（γ−β）４−（α−β）２、（γ−β）３−（α−β）３、（γ−β）２−（α−β）４、（γ−β）−（α−β）５、（α−β）６、α６−（α−β）３、α４−（α−β）４、α２−（α−β）５、（γーβ）５−α、（γ−β）４−（α−β）−α、（γ−β）３−（α−β）２−α、（γ−β）２−（α−β）３−α、（γ−β）−（α−β）４−α、α６−（α−β）２−α、α４−（α−β）３−α、α２−（α−β）４−α、及び（α−β）５−α（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１）又は（２）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（５）
式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｑが４で、Ｘが（γ−β）５、（α−β）−（γ−β）４、（α−β）２−（γ−β）３、（α−β）３−（γ−β）２、（α−β）４−（γ−β）、（α−β）５、β１０、（α−β）−β８、（α−β）２−β６、（α−β）３−β４、（α−β）４−β２、β−（γ−β）４、β−（α−β）−（γ−β）３、β−（α−β）２−（γ−β）２、β−（α−β）３−（γ−β）、β９、β−（α−β）−β６、β−（α−β）２−β４、β−（α−β）３−β２、及びβ−（α−β）４（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（６）
式（ＩＩ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｒが４で、Ｙが（γ−β）５、（γ−β）４−（α−β）、（γ−β）３−（α−β）２、（γ−β）２−（α−β）３、（γ−β）−（α−β）４、（α−β）５、β６−（α−β）２、β４−（α−β）３、β２−（α−β）４、（γーβ）４−α、（α−β）４−α、（γ−β）３−（α−β）−α、（γ−β）２−（α−β）２−α、（γ−β）−（α−β）３−α、α６−（α−β）−α、α４−（α−β）２−α、α２−（α−β）３−α及び（α−β）４−α（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１）又は（５）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（７）
式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｑが４で、Ｘが（γ−β）５、（α−β）−（γ−β）４、（α−β）２−（γ−β）３、（α−β）３−（γ−β）２、（α−β）４−（γ−β）、（α−β）５、β１０、（α−β）−β８、（α−β）２−β６、（α−β）３−β４、（α−β）４−β２、β−（γ−β）４、β−（α−β）−（γ−β）３、β−（α−β）２−（γ−β）２、β−（α−β）３−（γ−β）、β９、β−（α−β）−β６、β−（α−β）２−β４、β−（α−β）３−β２、及びβ−（α−β）４、からなる群から選択されるいずれか一つであり、式（ＩＩ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｒが４で、Ｙが（γ−β）５、（γ−β）４−（α−β）、（γ−β）３−（α−β）２、（γ−β）２−（α−β）３、（γ−β）−（α−β）４、（α−β）５、α６−（α−β）２、α４−（α−β）３、α２−（α−β）４、（γーβ）４−α、（α−β）４−α、（γ−β）３−（α−β）−α、（γ−β）２−（α−β）２−α、（γ−β）−（α−β）３−α、α６−（α−β）−α、α４−（α−β）２−α、α２−（α−β）３−α、及び（α−β）４−α（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（８）
式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｑが５で、Ｘが（γ−β）４、（α−β）−（γ−β）３、（α−β）２−（γ−β）２、（α−β）３−（γ−β）、（α−β）４、β８、（α−β）−β６、（α−β）２−β４、（α−β）３−β２、β−（γ−β）３、β−（α−β）−（γ−β）２、β−（α−β）２−（γ−β）、β７、β−（α−β）−β４、β−（α−β）２−β２、及びβ−（α−β）３、（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（９）
式（ＩＩ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｒが５で、Ｙが（γ−β）４、（γ−β）３−（α−β）、（γ−β）２−（α−β）２、（γ−β）−（α−β）３、（α−β）４、β６−（α−β）、β４−（α−β）２、β２−（α−β）３、（γーβ）３−α、（γ−β）２−（α−β）−α、（γ−β）−（α−β）２−α、α７、α４−（α−β）−α、α２−（α−β）２−α、及び（α−β）３−α、（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１）又は（８）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（１０）
式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｑが５で、Ｘが（γ−β）４、（α−β）−（γ−β）３、（α−β）２−（γ−β）２、（α−β）３−（γ−β）、（α−β）４、（α−β）−β６、（α−β）２−β４、（α−β）３−β２、β−（γ−β）３、β−（α−β）−（γ−β）２、β−（α−β）２−（γ−β）、β７、β−（α−β）−β４、β−（α−β）２−β２、及びβ−（α−β）３、からなる群から選択されるいずれか一つであり、式（ＩＩ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｒが５で、Ｙが（γ−β）４、（γ−β）３−（α−β）、（γ−β）２−（α−β）２、（γ−β）−（α−β）３、（α−β）４、α６−（α−β）、α４−（α−β）２、α２−（α−β）３、（γーβ）３−α、（γ−β）２−（α−β）−α、（γ−β）−（α−β）２−α、α７、α４−（α−β）−α、α２−（α−β）２−α、及び（α−β）３−α（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（１１）
以下の（ａ）乃至（ｄ）からなる特徴を有する、式（Ｉ）及び式（ＩＩＩ）に示されるポリヌクレオチドからなる、２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩：
５’−Ｘ−（α−β）ｑ−αｐ−λｍ−３’（Ｉ）
５’−δｓ−（β−α）ｒ−Ｙ−υｎ−３’（ＩＩＩ）
（ａ）α及びβは異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡ、δ及びλは同一又は異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡ、υは同一又は異なってはＤＮＡ、ＲＮＡ及び２’−ＯＭｅＲＮＡから選択されるいずれかのヌクレオチドを示し、Ｘ及びＹはＤＮＡ、ＲＮＡ及び修飾核酸から選択される同一又は異なる種類のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを示す；
（ｂ）ｐは０又は１の整数を示し、ｍはｐが０のときは０であり、ｐが１のときは０〜５のいずれかの整数を示す。ｑは３〜９のいずれかの整数を示し、（α−β）ｑとＸの合計ヌクレオチド数は１７乃至１８である。ｓは０又は１の整数を示し、ｎは０〜５のいずれかの整数を示す。ｒは３〜９のいずれかの整数を示し、（α−β）ｒとＹの合計ヌクレオチド数は１７乃至１８である；
（ｃ）式（Ｉ）で示されるポリヌクレオチドのうち、Ｘ−（α−β）ｑ−αｐは標的遺伝子と同一のヌクレオチド配列からなる；
（ｄ）式（Ｉ）におけるＸ−（α−β）ｑと式（ＩＩＩ）における（β−α）ｒ−Ｙは互いに相補的なヌクレオチド配列からなる、
（１２）
式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｑが３で、Ｘが（γ−β）６、（α−β）−（γ−β）５、（α−β）２−（γ−β）４、（α−β）３−（γ−β）３、（α−β）４−（γ−β）２、（α−β）５−（γ−β）、（α−β）６、β１２、（α−β）−β１０、（α−β）２−β８、（α−β）３−β６、（α−β）４−β４、（α−β）５−β２、β−（γ−β）５、β−（α−β）−（γ−β）４、β−（α−β）２−（γ−β）３、β−（α−β）３−（γ−β）２、β−（α−β）４−（γ−β）、β１１、β−（α−β）−β８、β−（α−β）２−β６、β−（α−β）３−β４、β−（α−β）４−β２、及びβ−（α−β）５（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１１）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（１３）
式（ＩＩＩ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｒが３で、Ｙが（β−γ）６、（β−γ）５−（β−α）、（β−γ）４−（β−α）２、（β−γ）３−（β−α）３、（β−γ）２−（β−α）４、（β−γ）−（β−α）５、（β−α）６、β６−（β−α）３、β４−（β−α）４、β２−（β−α）５、（β−γ）５−β、（β−γ）４−（β−α）−β、（β−γ）３−（β−α）２−β、（β−γ）２−（β−α）３−β、（β−γ）−（β−α）４−β、β６−（β−α）２−β、β４−（β−α）３−β、β２−（β−α）４−β、及び（β−α）５−β（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１１）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（１４）
式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｑが３で、Ｘが（γ−β）６、（α−β）−（γ−β）５、（α−β）２−（γ−β）４、（α−β）３−（γ−β）３、（α−β）４−（γ−β）２、（α−β）５−（γ−β）、（α−β）６、β１２、（α−β）−β１０、（α−β）２−β８、（α−β）３−β６、（α−β）４−β４、（α−β）５−β２、β−（γ−β）５、β−（α−β）−（γ−β）４、β−（α−β）２−（γ−β）３、β−（α−β）３−（γ−β）２、β−（α−β）４−（γ−β）、β１１、β−（α−β）−β８、β−（α−β）２−β６、β−（α−β）３−β４、β−（α−β）４−β２、及びβ−（α−β）５からなる群から選択されるいずれか一つであり、式（ＩＩＩ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｒが３で、Ｙが（β−γ）６、（β−γ）５−（β−α）、（β−γ）４−（β−α）２、（β−γ）３−（β−α）３、（β−γ）２−（β−α）４、（β−γ）−（β−α）５、（β−α）６、β６−（β−α）３、β４−（β−α）４、β２−（β−α）５、（β−γ）５−β、（β−γ）４−（β−α）−β、（β−γ）３−（β−α）２−β、（β−γ）２−（β−α）３−β、（β−γ）−（β−α）４−β、β６−（β−α）２−β、β４−（β−α）３−β、β２−（β−α）４−β、及び（β−α）５−β（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１１）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（１５）
式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｑが４で、Ｘが（γ−β）５、（α−β）−（γ−β）４、（α−β）２−（γ−β）３、（α−β）３−（γ−β）２、（α−β）４−（γ−β）、（α−β）５、β１０、（α−β）−β８、（α−β）２−β６、（α−β）３−β４、（α−β）４−β２、β−（γ−β）４、β−（α−β）−（γ−β）３、β−（α−β）２−（γ−β）２、β−（α−β）３−（γ−β）、β９、β−（α−β）−β６、β−（α−β）２−β４、β−（α−β）３−β２、及びβ−（α−β）４、（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１１）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（１６）
式（ＩＩＩ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｒが４で、Ｙが（β−γ）５、（β−γ）４−（β−α）、（β−γ）３−（β−α）２、（β−γ）２−（β−α）３、（β−γ）−（β−α）４、（β−α）５、β６−（β−α）２、β４−（β−α）３、β２−（β−α）４、（β−γ）４−β、（β−α）４−β、（γ−β）３−（β−α）−β、（γ−β）２−（β−α）２−β、（β−γ）−（β−α）３−β、β６−（β−α）−β、β４−（β−α）２−β、β２−（β−α）３−β及び（β−α）４−β（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１１）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（１７）
式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｑが４で、Ｘが（γ−β）５、（α−β）−（γ−β）４、（α−β）２−（γ−β）３、（α−β）３−（γ−β）２、（α−β）４−（γ−β）、（α−β）５、β１０、（α−β）−β８、（α−β）２−β６、（α−β）３−β４、（α−β）４−β２、β−（γ−β）４、β−（α−β）−（γ−β）３、β−（α−β）２−（γ−β）２、β−（α−β）３−（γ−β）、β９、β−（α−β）−β６、β−（α−β）２−β４、β−（α−β）３−β２、及びβ−（α−β）４、からなる群から選択されるいずれか一つであり、式（ＩＩＩ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｒが４で、Ｙが（β−γ）５、（β−γ）４−（β−α）、（β−γ）３−（β−α）２、（β−γ）２−（β−α）３、（β−γ）−（β−α）４、（β−α）５、β６−（β−α）２、β４−（β−α）３、β２−（β−α）４、（β−γ）４−β、（β−α）４−β、（γ−β）３−（β−α）−β、（γ−β）２−（β−α）２−β、（β−γ）−（β−α）３−β、β６−（β−α）−β、β４−（β−α）２−β、β２−（β−α）３−β及び（β−α）４−β（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１１）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（１８）
式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｑが５で、Ｘが（γ−β）４、（α−β）−（γ−β）３、（α−β）２−（γ−β）２、（α−β）３−（γ−β）、（α−β）４、β８、（α−β）−β６、（α−β）２−β４、（α−β）３−β２、β−（γ−β）３、β−（α−β）−（γ−β）２、β−（α−β）２−（γ−β）、β７、β−（α−β）−β４、β−（α−β）２−β２、及びβ−（α−β）３、（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１１）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（１９）
式（ＩＩＩ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｒが５で、Ｙが（β−γ）４、（β−γ）３−（β−α）、（β−γ）２−（β−α）２、（β−γ）−（β−α）３（β−α）４、β６−（β−α）、β４−（β−α）２、β２−（β−α）３、（γーβ）３−β、（β−γ）２−（β−α）−β、（β−γ）−（β−α）２−β、β７、β４−（β−α）−β、β２−（β−α）２−β、及び（β−α）３−β、（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１１）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（２０）
式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｑが５で、Ｘが（γ−β）４、（α−β）−（γ−β）３、（α−β）２−（γ−β）２、（α−β）３−（γ−β）、（α−β）４、（α−β）−β６、（α−β）２−β４、（α−β）３−β２、β−（γ−β）３、β−（α−β）−（γ−β）２、β−（α−β）２−（γ−β）、β７、β−（α−β）−β４、β−（α−β）２−β２、及びβ−（α−β）３からなる群から選択されるいずれか一つであり、式（ＩＩＩ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｒが５で、Ｙが（β−γ）４、（β−γ）３−（β−α）、（β−γ）２−（β−α）２、（β−γ）−（β−α）３（β−α）４、β６−（β−α）、β４−（β−α）２、β２−（β−α）３、（γーβ）３−β、（β−γ）２−（β−α）−β、（β−γ）−（β−α）２−β、β７、β４−（β−α）−β、β２−（β−α）２−β、及び（β−α）３−β、（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする、（１１）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（２１）
式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、ｑが９で、Ｘのヌクレオチド数が０であり、ｐ及びｍが０、ｒが９でＹのヌクレオチド数が０であることを特徴とする、（１）又は（１１）に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（２２）
以下の式（ａ）乃至（ｄ）からなる特徴を有する、式（ＩＶ）及び式（Ｖ）に示されるポリヌクレオチドからなる、２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩：
５’−（α−β）９−αｐ−λｍ−３’（ＩＶ）
５’−δｓ−（α−β）９−υｎ−３’（Ｖ）
（ａ）α及びβは異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡ、δ及びλは同一又は異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡ、υは同一又は異なってはＤＮＡ、ＲＮＡ及び２’−ＯＭｅＲＮＡから選択されるいずれかのヌクレオチドを示す；
（ｂ）ｐは０又は１の整数を示し、ｍはｐが０のときは０であり、ｐが１のときは０〜５のいずれかの整数を示す。ｓは０又は１の整数を示し、ｎは０〜５のいずれかの整数を示す。；
（ｃ）式（ＩＶ）で示されるポリヌクレオチドのうち、（α−β）９−αｐは標的遺伝子と同一のヌクレオチド配列からなる；
（ｄ）式（ＩＶ）における（α−β）９と式（Ｖ）における（α−β）９は互いに相補的なヌクレオチド配列からなる、
（２３）
以下の式（ａ）乃至（ｄ）からなる特徴を有する、式（ＶＩ）及び式（ＶＩＩ）に示されるポリヌクレオチドからなる、２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩：
５’−β−（α−β）８−αｐ−λｍ−３’（ＶＩ）
５’−δｓ−（α−β）８−（α―β）−υｎ−３’（ＶＩＩ）
（ａ）α及びβは異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡ、δ及びλは同一又は異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡ、υは同一又は異なってはＤＮＡ、ＲＮＡ及び２’−ＯＭｅＲＮＡから選択されるいずれかのヌクレオチドを示す；
（ｂ）ｐは０又は１の整数を示し、ｍはｐが０のときは０であり、ｐが１のときは０〜５のいずれかの整数を示す。ｓは０又は１の整数を示し、ｎは０〜５のいずれかの整数を示す；
（ｃ）式（ＶＩ）で示されるポリヌクレオチドのうち、β−（α−β）８−αｐは標的遺伝子と同一のヌクレオチド配列からなる；
（ｄ）式（ＶＩ）における（α−β）８と式（ＶＩＩ）における（α−β）８は互いに相補的なヌクレオチド配列からなる、
（２４）
αがＤＮＡ、βが２’−ＯＭｅＲＮＡであることを特徴とする、（１）乃至（２３）のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（２５）
λｍ及びυｎが同一又は異なってチミン塩基、アデニン塩基又はグアニン塩基を有するＤＮＡ、又は、ウラシル塩基、アデニン塩基又はグアニン塩基を有する２’−ＯＭｅＲＮＡのいずれかであることを特徴とする、（１）乃至（２４）のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（２６）
ｍが０、ｎが２であることを特徴とする、（１）乃至（２５）のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（２７）
ｐ及びｍが０、ｓが１、ｎが２であることを特徴とする、（１）乃至（２６）のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（２８）
２’−ＯＭｅＲＮＡの任意の１〜４残基がＥＮＡ又は２’，４’−ＢＮＡ／ＬＮＡに置換されていることを特徴とする、（１）乃至（２７）のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（２９）
ＤＮＡの任意の１〜４残基がＲＮＡ、ＥＮＡ又は２’，４’−ＢＮＡ／ＬＮＡに置換されていることを特徴とする、（１）乃至（２８）のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（３０）
各ヌクレオチドがリン酸ジエステル結合又はホスホロチオエート結合で結合していることを特徴とする、（１）乃至（２９）のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（３１）
少なくともいずれか一つのポリヌクレオチドの５’末端にリン酸基が付加されていることを特徴とする、（１）乃至（３０）のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（３２）
アンチセンス鎖の５’末端にリン酸基が付加されている、（１）乃至（３１）のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩、
（３３）
（１）乃至（３２）のいずれか１項に記載の２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩を有効成分として含有する医薬、
（３４）
（１）乃至（３３）から選択される２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩を哺乳動物に投与することによる、標的遺伝子の発現抑制方法、
からなる。
【発明の効果】
【００２９】
本発明により、ＲＮＡ分解酵素に対して安定なＲＮＡ干渉作用を有する新規２本鎖ポリヌクレオチドが提供された。該ポリヌクレオチドを用いて各種遺伝子の機能解析が可能になり、また、該２本鎖ポリヌクレオチドを含む医薬品が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。（以下、各図中、センス鎖、アンチセンス鎖の実施例のポリヌクレオチドの組み合わせを示す。シンボルのうち、白四角（□）はＲＮＡ、黒丸（●）はＤＮＡ、白丸（○）は２’−Ｏ−メチルＲＮＡ、白ダイヤモンド（◇）はＥＮＡ、黒ダイヤモンド（◆）は、２’，４’−ＢＮＡ／ＬＮＡを示す。図中のｓはホスホロチオエート結合、ｐはリン酸基、矢印はＡｒｇｏｎａｕｔｅ２による予想切断部位を示す。以下の図でも同じである。）
【図２】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図３】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。図中で「ＣＴ００１／ＣＴ００５」と表記されているのは「ＣＴ−００１／ＣＴ−００５」を意味し、このように２本鎖ポリヌクレオチドの表記において、「ハイフン：−」を省略することがある。以下の図においても同様である。
【図４】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図５】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図６】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図７】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図８】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図９】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図１０】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図１１】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図１２】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図１３】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図１４】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図１５】２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性のウエスタンブロット解析の結果を示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図１６】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図１７】２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性のウエスタンブロット解析の結果を示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図１８】ＲＮａｓｅ分解反応に用いたヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図１９】２本鎖ポリヌクレオチドのＲＮａｓｅ分解反応のポリアクリルアミド電気泳動による解析結果を示す図。矢印は２本鎖ポリヌクレオチドのバンドの位置を示す。
【図２０】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図２１】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図２２】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図２３】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図２４】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図２５】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図２６】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図２７】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図２８】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図２９】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図３０】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図３１】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図３２】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図３３】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図３４】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図３５】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図３６】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図３７】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図３８】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図３９】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図４０】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図４１】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図４２】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図４３】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図４４】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図４５】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図４６】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図４７】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図４８】トランスフェクション試薬を用いない場合の、２本鎖ポリヌクレオチド投与によるＩＦＮ−α産生量の変化を示す図。縦軸は、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  （ＴＬＲ）に作用することが知られている試薬または２本鎖ポリヌクレオチド添加によるＩＦＮ−α産生量を示す。コントロールは、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  （ＴＬＲ）に作用することが知られている試薬または２本鎖ポリヌクレオチドを添加していない場合のＩＦＮ−α産生量を示す。図中で「ＴＬＲ３」はＴｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ３を示し、ＴＬＲ７はＴｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ７を示し、ＴＬＲ８はＴｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ８を示し、ＴＬＲ９はＴｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ９を示す。図４９でも同様である。
【図４９】トランスフェクション試薬を用いた場合の、２本鎖ポリヌクレオチド投与によるＩＦＮ−α産生量の変化を示す図。縦軸は、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  （ＴＬＲ）に作用することが知られている試薬または２本鎖ポリヌクレオチド添加によるＩＦＮ−α産生量を示す。メディウムコントロールは、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  （ＴＬＲ）に作用することが知られている試薬または２本鎖ポリヌクレオチドを添加していない場合のＩＦＮ−α産生量を示す。トランスフェクションコントロールは、トランスフェクション試薬のみを添加した場合のＩＦＮ−α産生量を示す。
【図５０】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図５１】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図５２】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図５３】各種２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の強さをウエスタンブロット解析の結果で示す図。ＣＴＮＮＢ１はヒトβ−カテニンタンパク質の発現を示し、Ａｃｔｉｎはコントロールとして用いたβ−アクチンタンパク質の発現を示す。数字は添加した２本鎖ポリヌクレオチドの濃度を示す。バンドが薄いほどヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が強いことを示す。
【図５４】ＤＤＸ３（ＤＥＡＤ  （Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｓｐ）  ｂｏｘ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ３，  Ｘ−ｌｉｎｋｅｄ）遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図５５】ヒトβ−カテニン遺伝子に対する２本鎖ポリヌクレオチドを示す図。
【図５６】ＤＤ−０１６／ＤＤ−０１７（図中０１６／０１；以下同じ。）、ＤＤ−０２２／ＤＤ−０１７（０２２／０１７）、ＤＤ−０２２／ＤＤ−０２３（０２２／０２３）及びＤＤ−０２２／ＤＤ−０２４（０２２／０２４）及び２本鎖天然型ポリヌクレオチドＤＤＸ３  ｓｉＲＮＡ＃５（＃５）のＤＤＸ３遺伝子発現抑制活性の強さを示す図。リポフェクション試薬のみで処理した細胞の場合をコントロールとして用い、図中「ｎｏｎ」として示す。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
１．用語の説明
本明細書において、「標的遺伝子」とは、これを導入する細胞、組織、あるいは固体（以下これを「被導入体」と称することがある。）においてｍＲＮＡ及び／又はタンパク質を産生するように翻訳され得るものであれば特に制限されない。具体的には、導入する被導入体に内在性のものでも、遺伝子導入等の手法によって導入される外来性のものでもよい。また、染色体上に存在する遺伝子でも、染色体外のものでもよい。外来性の遺伝子としては、例えば、被導入体に感染可能なウイルス、バクテリア、真菌または原生動物由来のものが挙げられるがこれらに制限されない。遺伝子の機能については既知のものでも未知のものでもよい。
【００３２】
そのような標的遺伝子の例としては、ヒトβ−カテニン遺伝子、ＤＤＸ３（ＤＥＡＤ  （Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｓｐ）  ｂｏｘ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ３，  Ｘ−ｌｉｎｋｅｄ）遺伝子を挙げることが出来るがこれらに限定されない。
【００３３】
本明細書において、「天然型のヌクレオシド」とは、２’−デオキシアデノシン、２’−デオキシグアノシン、２’−デオキシシチジン、２’−デオキシ−５−メチルシチジン、チミジン等の２’−デオキシヌクレオシド、アデノシン、グアノシン、シチジン、５−メチルシチジン、ウリジン等のリボヌクレオシドをいう。また、「オリゴヌクレオチド」とは、ヌクレオシドの糖部分がリン酸とエステルを形成している化合物から構成されるオリゴヌクレオチドのことをいう。
【００３４】
本明細書においては２’−デオキシアデノシンをＡｔ、２’−デオキシグアノシンをＧｔ、２’−デオキシシチジンをＣｔ、２’−デオキシ−５−メチルシチジンを５ｍｅＣｔ、チミジンをＴｔ、２’−デオキシウリジンをＵｔ、アデノシンをＡｒｔ、グアノシンをＡｒｔ、シチジンをＣｒｔ、５−メチルシチジンを５ｍｅＣｒｔ、ウリジンをＵｒｔと表すこともある。また、本明細書中においては、２’−デオキシアデノシンヌクレオチドをＡｐ、２’−デオキシグアノシンヌクレオチドをＧｐ、２’−デオキシシチジンヌクレオチドをＣｐ、２’−デオキシ−５−メチルシチジンヌクレオチドを５ｍｅＣｐ、チミジンヌクレオチドをＴｐ、２’−デオキシウリジンヌクレオチドをＵｐ、アデノシンヌクレオチドをＡｒｐ、グアノシンヌクレオチドをＧｒｐ、シチジンヌクレオチドをＣｒｐ、５−メチルシチジンヌクレオチドを５ｍｅＣｒｐ、ウラシルヌクレオチドをＵｒｐと表すこともある。
【００３５】
本明細書においてはヌクレオチドのリン酸エステルの代わりにホスホロチオエートエステルとなっているホスホロチオエートエステルについて、Ａｐに対応するものとしてＡｓ、Ｇｐに対応するものとしてＧｓ、Ｃｐに対応するものとしてＣｓ、５ｍｅＣｐに対応するものとして５ｍｅＣｓ、Ｔｐに対応するものとしてＴｓ、Ｕｐに対応するものとしてＵｓ、Ａｒｐに対応するものとしてＡｒｓ、Ｇｒｐに対応するものとしてＧｒｓ、Ｃｒｐに対応するものとしてＣｒｓ、５ｍｅＣｒｐに対応するものとして５ｍｅＣｒｓ、Ｕｒｐに対応するものとしてＵｒｓと表すこともある。
【００３６】
本明細書における、「糖修飾ヌクレオシド」とは、ヌクレオシドの糖部分が修飾されているヌクレオシドをいう。
【００３７】
このうち、２’−Ｏ−メチル修飾の例としては、Ａｒｔに対応するものとしてＡｍ１ｔ、Ｇｒｔに対応するものとしてＧｍ１ｔ、Ｃｒｔに対応するものとしてＣｍ１ｔ、５ｍｅＣｒｔに対応するものとして５ｍｅＣｍ１ｔ、Ｕｒｔに対応するものとしてＵｍ１ｔ、Ａｒｐに対応するものとしてＡｍ１ｐ、Ｇｒｐに対応するものとしてＧｍ１ｐ、Ｃｒｐに対応するものとしてＣｍ１ｐ、５ｍｅＣｒｐに対応するものとして５ｍｅＣｍ１ｐ、Ｕｒｐに対応するものとしてＵｍ１ｐ、Ａｒｓに対応するものとしてＡｍ１ｓ、Ｇｒｓに対応するものとしてＧｍ１ｓ、Ｃｒｓに対応するものとしてＣｍ１ｓ、５ｍｅＣｓに対応するものとして５ｍｅＣｍ１ｓ、Ｕｒｓに対応するものとしてＵｍ１ｓと表すこともある。
【００３８】
本明細書において２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレンヌクレオチド  ユニット及び「ＥＮＡユニット」とは上記の各ヌクレオシド、各ヌクレオチドにおいてＥＮＡを有するものをいい、Ａｔに対応するものとしてＡ２ｔ、Ａｐに対応するものとしてＡｅ２ｐ、Ａｓに対してはＡｅ２ｓ、Ｇｔに対応するものとしてＧ２ｔ、Ｇｐに対応するものとしてＧｅ２ｐ、Ｇｓに対してはＧｅ２ｓ、５ｍｅＣｔに対応するものとしてＣ２ｔ、５ｍｅＣｐに対応するものとしてＣｅ２ｐ、５ｍｅＣｓに対してはＣｅ２ｓ、Ｔｔに対応するものとしてＴ２ｔ、Ｔｐに対応するものとしてＴｅ２ｐ、Ｔｓに対してはＴｅ２ｓというようにＥＮＡユニットを有するヌクレオシド及びヌクレオチドを表わすこともある。
【００３９】
本明細書において２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレンヌクレオチド  ユニット及び「２’、４’−ＢＮＡ／ＬＮＡユニット」とは上記の各ヌクレオシド、各ヌクレオチドにおいて２’、４’−ＢＮＡ／ＬＮＡを有するものをいい、Ａｔに対応するものとしてＡ１ｔ、Ａｐに対応するものとしてＡｅ１ｐ、Ａｓに対してはＡｅ１ｓ、Ｇｔに対応するものとしてＧ１ｔ、Ｇｐに対応するものとしてＧｅ１ｐ、Ｇｓに対してはＧｅ１ｓ、５ｍｅＣｔに対応するものとしてＣ１ｔ、５ｍｅＣｐに対応するものとしてＣｅ１ｐ、５ｍｅＣｓに対してはＣｅ１ｓ、Ｔｔに対応するものとしてＴ１ｔ、Ｔｐに対応するものとしてＴｅ１ｐ、Ｔｓに対してはＴｅ１ｓというように２’、４’−ＢＮＡ／ＬＮＡユニットを有するヌクレオシド及びヌクレオチドを表わすこともある。
【００４０】
以下に各ヌクレオチドの構造式を示す。
【００４１】
【化１】
0005637849.tif 000002
【００４２】
【化２】
0005637849.tif 000003
【００４３】
【化３】
0005637849.tif 000004
【００４４】
【化４】
0005637849.tif 000005
【００４５】
【化５】
0005637849.tif 000006
【００４６】
【化６】
0005637849.tif 000007
【００４７】
本明細書中における、「相補的なヌクレオチド」とは、ヌクレオチドの塩基部分が相補するヌクレオチドのことをいい、具体的には、塩基部分がアデニンとチミン、グアニンとシトシン、グアニンと５−メチルシトシン及びアデニンとウラシルであるヌクレオチドが互いに相補的なヌクレオチドである。
【００４８】
本明細書中における、「相補的なヌクレオチド配列」とは、対照となるヌクレオチド配列に対して、全てが相補的なヌクレオチドからなるヌクレオチド配列に加え、１又は数個のヌクレオチドが相補的なヌクレオチドではないが、オリゴヌクレオチド及び／又はポリヌクレオチド同士が塩基対を形成するヌクレオチド配列も含む。
【００４９】
本明細書中における、「２本鎖ポリヌクレオチド」は、相補的なヌクレオチド同士がワトソン−クリック塩基対を形成し、２本鎖となっているポリヌクレオチドであるが、、全てのポリヌクレオチドがワトソン−クリック塩基対を形成していなくてもよい。
【００５０】
本明細書中では、２本鎖ポリヌクレオチドのうち、標的遺伝子と同一のヌクレオチド配列を含むものをパッセンジャー鎖（ｐａｓｓｅｎｇｅｒ  ｓｔｒａｎｄ）又はセンス鎖と呼び、標的遺伝子と相補的なヌクレオチド配列を含むものをガイド鎖（ｇｕｉｄｅ  ｓｔｒａｎｄ）又はアンチセンス鎖と呼ぶ。
【００５１】
本明細書中において、「標的遺伝子と同一のヌクレオチド配列からなる」とは、標的遺伝子の少なくとも一部のヌクレオチド配列と同一の配列からなることをいうが、完全に同一の配列に加え、ＲＮＡ干渉作用を有する限りにおいて、実質的に同一な配列も含む。また、標的遺伝子にＳＮＰｓ等が知られている場合、それらの変異を有する配列も同一のヌクレオチド配列に含まれる。
【００５２】
標的遺伝子の少なくとも一部のヌクレオチド配列と同一又は実質的に同一な配列を有するポリヌクレオチドとは、標的遺伝子のヌクレオチド配列のうち、いずれの部分でもよい１８ヌクレオチド以上の配列と同一又は実質的に同一な配列からなるポリヌクレオチドである。ここで、「実質的に同一な配列」とは、標的遺伝子のヌクレオチド配列と７０％以上、好ましくは８０％以上さらに好ましくは９０％以上の相同性を有する配列のことをいう。ヌクレオチド配列の相同性はＢＬＡＳＴ（登録商標）等の公知の遺伝子解析ソフトウエアを用いて計算することが出来る。
【００５３】
本明細書に添付する配列表において、各配列の＜２２３＞の項目中で“ｃｍ”は２’−Ｏ−メチルシチジン（２’−Ｏ−Ｍｅｔｈｙｌｃｙｔｉｄｉｎｅ）を示し、“ｕｍ”は２’−Ｏ−メチルウリジン（２’−Ｏ−Ｍｅｔｈｙｌｕｒｉｄｉｎｅ）を示し、“ｇｍ”は２’−Ｏ−メチルグアノシン（２’−Ｏ−Ｍｅｔｈｙｌｇｕａｎｏｓｉｎｅ）を示す。
【００５４】
２．２本鎖ポリヌクレオチド
本発明における２本鎖ポリヌクレオチドの鎖長は、ＲＮＡ干渉作用を有する限り、１８ヌクレオチドから、標的遺伝子のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の全長までのいかなる長さでもよい。センス鎖としては、１８〜２１の鎖長のものが好ましく、１８〜１９の鎖長のものが更に好ましい。アンチセンス鎖としては、１９〜２１の鎖長のものが好ましく、２１鎖長のものが更に好ましい。２本鎖ポリヌクレオチドはその全体が２本鎖である必要はなく５’及び／又は３’末端が一部突出したものも含み、その突出末端は１〜５ヌクレオチド、好ましくは１〜３ヌクレオチド、さらに好ましくは２ヌクレオチドである。また、最も好ましい例としては、アンチセンス鎖のポリヌクレオチドの３’末端が２ヌクレオチド突出している（オーバーハング構造）構造を有するものが挙げられる。
【００５５】
２−１．
２本鎖ポリヌクレオチドの一例としては、以下の式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドからなるセンス鎖及び式（ＩＩ）に示されるポリヌクレオチドからなるアンチセンス鎖からなる、２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる。
５’−Ｘ−（α−β）ｑ−αｐ−λｍ−３’（Ｉ）
５’−δｓ−（α−β）ｒ−Ｙ−υｎ−３’（ＩＩ）
（ａ）α及びβは異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡを示し、δ及びλは同一又は異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡを示し、υは同一又は異なって、ＤＮＡ、ＲＮＡ及び２’−ＯＭｅＲＮＡから選択されるいずれかのヌクレオチドを示し、Ｘ及びＹはＤＮＡ、ＲＮＡ及び修飾核酸から選択される同一又は異なる種類のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを示す；
（ｂ）ｐは０又は１の整数、ｑは３〜９のいずれかの整数を示し、（α−β）ｑとＸの合計ヌクレオチド数は１７乃至１８である。ｒは３〜９のいずれかの整数を示し、（α−β）ｒとＹの合計ヌクレオチド数は１７乃至１８である。ｎは０〜５のいずれかの整数である。ｍはｐが０のときは０であり、ｐが１のときは０〜５のいずれかの整数である；
（ｃ）式（Ｉ）で示されるポリヌクレオチドのうち、Ｘ−（α−β）ｑ−αｐは標的遺伝子と同一のヌクレオチド配列からなる；
（ｄ）式（Ｉ）におけるＸ−（α−β）ｑと式（ＩＩ）における（α−β）ｒ−Ｙは互いに相補的なヌクレオチド配列からなる。
【００５６】
なお、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｍ、ｎはヌクレオチドの数を示す数字であり、例えば、（α−β）２は（α−β）−（α−β）を意味し、αｐにおいて、ｐが０のときは当該ヌクレオチドがないことを意味し、ｐが１のときはα、ｐが２のときはα−αを示す。
【００５７】
２−２．上記式（Ｉ）及び式（ＩＩ）に示される２本鎖ポリヌクレオチドの一例としては、ｑ及びｒがいずれも９であり、Ｘ及びＹのヌクレオチド数が０である、２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる。
２−３．
２本鎖ポリヌクレオチドの他の一例としては、センス鎖が式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドにおいて：
ｑが３で、Ｘが（γ−β）６、（α−β）−（γ−β）５、（α−β）２−（γ−β）４、（α−β）３−（γ−β）３、（α−β）４−（γ−β）２、（α−β）５−（γ−β）、（α−β）６、β１２、（α−β）−β１０、（α−β）２−β８、（α−β）３−β６、（α−β）４−β４、（α−β）５−β２、β−（γ−β）５、β−（α−β）−（γ−β）４、β−（α−β）２−（γ−β）３、β−（α−β）３−（γ−β）２、β−（α−β）４−（γ−β）、β１１、β−（α−β）−β８、β−（α−β）２−β６、β−（α−β）３−β４、β−（α−β）４−β２、及びβ−（α−β）５からなる群から選択されるいずれか一つであるポリヌクレオチド；ｑが４で、Ｘが（γ−β）５、（α−β）−（γ−β）４、（α−β）２−（γ−β）３、（α−β）３−（γ−β）２、（α−β）４−（γ−β）、（α−β）５、β１０、（α−β）−β８、（α−β）２−β６、（α−β）３−β４、（α−β）４−β２、β−（γ−β）４、β−（α−β）−（γ−β）３、β−（α−β）２−（γ−β）２、β−（α−β）３−（γ−β）、β９、β−（α−β）−β６、β−（α−β）２−β４、β−（α−β）３−β２、及びβ−（α−β）４からなる群から選択されるいずれか一つであるポリヌクレオチド；ｑが５で、Ｘが（γ−β）４、（α−β）−（γ−β）３、（α−β）２−（γ−β）２、（α−β）３−（γ−β）、（α−β）４、β８、（α−β）−β６、（α−β）２−β４、（α−β）３−β２、β−（γ−β）３、β−（α−β）−（γ−β）２、β−（α−β）２−（γ−β）、β７、β−（α−β）−β４、β−（α−β）２−β２、及びβ−（α−β）３、（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであるポリヌクレオチドであり、
アンチセンス鎖が式（ＩＩ）に示されるポリヌクレオチドにおいて：
ｒが３で、Ｙが（γ−β）６、（γ−β）５−（α−β）、（γ−β）４−（α−β）２、（γ−β）３−（α−β）３、（γ−β）２−（α−β）４、（γ−β）−（α−β）５、（α−β）６、α６−（α−β）３、α４−（α−β）４、α２−（α−β）５、（γーβ）５−α、（γ−β）４−（α−β）−α、（γ−β）３−（α−β）２−α、（γ−β）２−（α−β）３−α、（γ−β）−（α−β）４−α、α６−（α−β）２−α、α４−（α−β）３−α、β２−（α−β）４−α、及び（α−β）５−αからなる群から選択されるいずれか一つであるポリヌクレオチド；ｒが４で、Ｙが（γ−β）５、（γ−β）４−（α−β）、（γ−β）３−（α−β）２、（γ−β）２−（α−β）３、（γ−β）−（α−β）４、（α−β）５、β６−（α−β）２、β４−（α−β）３、β２−（α−β）４、（γーβ）４−α、（α−β）４−α、（γ−β）３−（α−β）−α、（γ−β）２−（α−β）２−α、（γ−β）−（α−β）３−α、α６−（α−β）−α、α４−（α−β）２−α、α２−（α−β）３−α及び（α−β）４−αからなる群から選択されるいずれか一つであるポリヌクレオチド；ｒが５で、Ｙが（γ−β）４、（γ−β）３−（α−β）、（γ−β）２−（α−β）２、（γ−β）−（α−β）３、（α−β）４、β６−（α−β）、β４−（α−β）２、β２−（α−β）３、（γーβ）３−α、（γ−β）２−（α−β）−α、（γ−β）−（α−β）２−α、α７、α４−（α−β）−α、α２−（α−β）２−α、及び（α−β）３−αからなる群から選択されるいずれか一つであるポリヌクレオチド（γはＲＮＡを示す。）、からなる２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる。
【００５８】
２−４．
２本鎖ポリヌクレオチドの他の一例としては、以下の式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドからなるセンス鎖及び式（ＩＩＩ）に示されるポリヌクレオチドからなるアンチセンス鎖からなる、２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる。
５’−Ｘ−（α−β）ｑ−αｐ−λｍ−３’（Ｉ）
５’−δｓ−（β−α）ｒ−Ｙ−υｎ−３’（ＩＩＩ）
（ａ）α及びβは異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡ、δ及びλは同一又は異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡ、υは同一又は異なってＤＮＡ、ＲＮＡ及び２’−ＯＭｅＲＮＡから選択されるいずれかのヌクレオチド、Ｘ及びＹはＤＮＡ、ＲＮＡ及び修飾核酸から選択される同一又は異なる種類のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを示す；
（ｂ）ｐは０又は１の整数を示し、ｍはｐが０のときは０であり、ｐが１のときは０〜５のいずれかの整数を示す。ｑは３〜９のいずれかの整数を示し、（α−β）ｑとＸの合計ヌクレオチド数は１７乃至１８である。ｓは０又は１の整数を示し、ｎは０〜５のいずれかの整数を示す。ｒは３〜９のいずれかの整数を示し、（α−β）ｒとＹの合計ヌクレオチド数は１７乃至１８である；
（ｃ）式（ＩＩＩ）で示されるポリヌクレオチドのうち、Ｘ−（α−β）ｑ−αｐは標的遺伝子と同一のヌクレオチド配列からなる；
（ｄ）式（ＩＩＩ）におけるＸ−（α−β）ｑと式（ＩＶ）における（β−α）ｒ−Ｙは互いに相補的なヌクレオチド配列からなる。
【００５９】
２−５．上記式（Ｉ）及び式（ＩＩ）に示される２本鎖ポリヌクレオチドの一例としては、ｑ及びｒがいずれも９であり、Ｘ及びＹのヌクレオチド数が０である、２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる。
【００６０】
２−６．
２本鎖ポリヌクレオチドの他の一例としては、センス鎖が、式（Ｉ）に示されるポリヌクレオチドにおいて；
ｑが３で、Ｘが（γ−β）６、（α−β）−（γ−β）５、（α−β）２−（γ−β）４、（α−β）３−（γ−β）３、（α−β）４−（γ−β）２、（α−β）５−（γ−β）、（α−β）６、β１２、（α−β）−β１０、（α−β）２−β８、（α−β）３−β６、（α−β）４−β４、（α−β）５−β２、β−（γ−β）５、β−（α−β）−（γ−β）４、β−（α−β）２−（γ−β）３、β−（α−β）３−（γ−β）２、β−（α−β）４−（γ−β）、β１１、β−（α−β）−β８、β−（α−β）２−β６、β−（α−β）３−β４、β−（α−β）４−β２、及びβ−（α−β）５からなる群から選択されるいずれか一つであるポリヌクレオチド；ｑが４で、Ｘが（γ−β）５、（α−β）−（γ−β）４、（α−β）２−（γ−β）３、（α−β）３−（γ−β）２、（α−β）４−（γ−β）、（α−β）５、β１０、（α−β）−β８、（α−β）２−β６、（α−β）３−β４、（α−β）４−β２、β−（γ−β）４、β−（α−β）−（γ−β）３、β−（α−β）２−（γ−β）２、β−（α−β）３−（γ−β）、β９、β−（α−β）−β６、β−（α−β）２−β４、β−（α−β）３−β２、及びβ−（α−β）４、からなる群から選択されるいずれか一つであるポリヌクレオチド；ｑが５で、Ｘが（γ−β）４、（α−β）−（γ−β）３、（α−β）２−（γ−β）２、（α−β）３−（γ−β）、（α−β）４、β８、（α−β）−β６、（α−β）２−β４、（α−β）３−β２、β−（γ−β）３、β−（α−β）−（γ−β）２、β−（α−β）２−（γ−β）、β７、β−（α−β）−β４、β−（α−β）２−β２、及びβ−（α−β）３（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つであるポリヌクレオチドであり、
アンチセンス鎖が式（ＩＩＩ）に示されるポリヌクレオチドにおいて：
ｒが３で、Ｙが（β−γ）６、（β−γ）５−（β−α）、（β−γ）４−（β−α）２、（β−γ）３−（β−α）３、（β−γ）２−（β−α）４、（β−γ）−（β−α）５、（β−α）６、β６−（β−α）３、β４−（β−α）４、β２−（β−α）５、（β−γ）５−β、（β−γ）４−（β−α）−β、（β−γ）３−（β−α）２−β、（β−γ）２−（β−α）３−β、（β−γ）−（β−α）４−β、β６−（β−α）２−β、β４−（β−α）３−β、β２−（β−α）４−β、及び（β−α）５−βからなる群から選択されるいずれか一つのポリヌクレオチド；ｒが４で、Ｙが（β−γ）５、（β−γ）４−（β−α）、（β−γ）３−（β−α）２、（β−γ）２−（β−α）３、（β−γ）−（β−α）４、（β−α）５、β６−（β−α）２、β４−（β−α）３、β２−（β−α）４、（β−γ）４−β、（β−α）４−β、（γ−β）３−（β−α）−β、（γ−β）２−（β−α）２−β、（β−γ）−（β−α）３−β、β６−（β−α）−β、β４−（β−α）２−β、β２−（β−α）３−β及び（β−α）４−βからなる群から選択されるいずれか一つのポリヌクレオチド；ｒが５で、Ｙが（β−γ）４、（β−γ）３−（β−α）、（β−γ）２−（β−α）２、（β−γ）−（β−α）３（β−α）４、β６−（β−α）、β４−（β−α）２、β２−（β−α）３、（γーβ）３−β、（β−γ）２−（β−α）−β、（β−γ）−（β−α）２−β、β７、β４−（β−α）−β、β２−（β−α）２−β、及び（β−α）３−β、（γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つのポリヌクレオチド、からなる２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる。
【００６１】
２−７．
２本鎖ポリヌクレオチドの他の一例としては、以下の式（ＩＶ）に示されるポリヌクレオチドからなるセンス鎖及び式（Ｖ）に示されるポリヌクレオチドからなるアンチセンス鎖からなる、２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる。
５’−（α−β）９−αｐ−λｍ−３’（ＩＶ）
５’−δｓ−（α−β）９−υｎ−３’（Ｖ）
（ａ）α及びβは異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡ、δ及びλは同一又は異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡ、υは同一又は異なってＤＮＡ、ＲＮＡ及び２’−ＯＭｅＲＮＡから選択されるいずれかのヌクレオチドを示す；
（ｂ）ｐは０又は１の整数を示し、ｍはｐが０のときは０であり、ｐが１のときは０〜５のいずれかの整数を示す。ｓは０又は１の整数を示し、ｎは０〜５のいずれかの整数を示す。；
（ｃ）式（ＩＶ）で示されるポリヌクレオチドのうち、（α−β）９−αｐは標的遺伝子と同一のヌクレオチド配列からなる；
（ｄ）式（ＩＶ）における（α−β）９と式（Ｖ）における（α−β）９は互いに相補的なヌクレオチド配列からなる。
【００６２】
２−８．
２本鎖ポリヌクレオチドの他の一例としては、以下の式（ＶＩ）に示されるポリヌクレオチドからなるセンス鎖及び式（ＶＩＩ）に示されるポリヌクレオチドからなるアンチセンス鎖からなる、２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる。
５’−β−（α−β）８−αｐ−λｍ−３’（ＶＩ）
５’−δｓ−（α−β）８−（α―β）−υｎ−３’（ＶＩＩ）
（ａ）α及びβは異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡ、δ及びλは同一又は異なってＤＮＡ又は２’−ＯＭｅＲＮＡ、υは同一又は異なってＤＮＡ、ＲＮＡ及び２’−ＯＭｅＲＮＡから選択されるいずれかのヌクレオチドを示す；
（ｂ）ｐは０又は１の整数、ｎは同一又は異なって、０〜５のいずれかの整数である。ｍはｐが０のときは０であり、ｐが１のときは０〜５のいずれかの整数である；
（ｃ）式（ＶＩ）で示されるポリヌクレオチドのうち、β−（α−β）８−αｐは標的遺伝子と同一のヌクレオチド配列からなる；
（ｄ）式（ＶＩ）における（α−β）８と式（ＶＩＩ）における（α−β）８は互いに相補的なヌクレオチド配列からなる。
【００６３】
２−９．
２本鎖ポリヌクレオチドの他の一例としては以下の式（ＶＩＩＩ）及び式（ＩＸ）に示される２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる。
５’−Ｘ−（α−β）ｑ−α−αｍ−３’（ＶＩＩＩ）
５’−β−（α−β）ｒ−Ｙ−αｎ−３’（ＩＸ）
（ａ）αはＤＮＡ、βは２’−ＯＭｅＲＮＡ、Ｘ及びＹはＤＮＡ、ＲＮＡ、修飾核酸から選択される同一又は異なる種類のヌクレオチドからなるオリゴヌクレオチドを示す；
（ｂ）ｑは３〜９の任意の整数を示し、（α−β）ｑとＸの合計ヌクレオチド数は１８である。ｒは３〜９の任意の整数を示し、（α−β）ｒとＹの合計ヌクレオチド数は１８である。ｎ及びｍは同一又は異なって、０〜５の整数である；
（ｃ）式（ＶＩＩＩ）で示されるポリヌクレオチドのうち、Ｘ−（α−β）ｑ−αは標的遺伝子と同一のヌクレオチド配列からなる；
（ｄ）式（ＶＩＩＩ）におけるＸ−（α−β）ｑ−αと式（ＩＸ）におけるβ−（α−β）ｒ−Ｙは互いに相補的なヌクレオチド配列からなる。
【００６４】
上記式（ＶＩＩＩ）及び式（ＩＸ）に示されるポリヌクレオチドにおいて、好ましいｎ及びｍの数としては２である
また、αｍ及びαｎのαの好ましいヌクレオチドとしては、いずれもチミジンであるものを挙げることができる。
【００６５】
式（ＶＩＩＩ）及び式（ＩＸ）に示される２本鎖ポリヌクレオチドの一例としては、ｑ及びｒがいずれも９であり、Ｘ及びＹのヌクレオチド数が０である、２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる。
【００６６】
２本鎖ポリヌクレオチドの他の例としては、式（ＶＩＩＩ）において、ｑが３で、Ｘが（γ−β）６、（α−β）−（γ−β）５、（α−β）２−（γ−β）４、（α−β）３−（γ−β）３、（α−β）４−（γ−β）２、（α−β）５−（γ−β）、（α−β）３−β６、（α−β）４−β４、及び（α−β）５−β２（ここで、αはＤＮＡ、βは２’−ＯＭｅＲＮＡ、γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つである２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる。
【００６７】
２本鎖ポリヌクレオチドの他の例としては、式（ＩＸ）において、ｒが３で、Ｙが（γ−β）６、（γ−β）５−（α−β）、（γ−β）４−（α−β）２、（γ−β）３−（α−β）３、（γ−β）２−（α−β）４、（γ−β）−（α−β）５、α６−（α−β）３、α４−（α−β）４、及びα２−（α−β）５（ここで、αはＤＮＡ、βは２’−ＯＭｅＲＮＡ、γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つである２本鎖ポリヌクレオチド又はその塩を挙げることができる。
【００６８】
２本鎖ポリヌクレオチドの他の例としては、式（ＶＩＩＩ）において、ｑが３で、Ｘが（γ−β）６、（α−β）−（γ−β）５、（α−β）２−（γ−β）４、（α−β）３−（γ−β）３、（α−β）４−（γ−β）２、（α−β）５−（γ−β）、（α−β）３−β６、（α−β）４−β４、及び（α−β）５−β２からなる群から選択されるいずれか一つであり、式（ＩＸ）においてｒが３で、Ｙが（γ−β）６、（γ−β）５−（α−β）、（γ−β）４−（α−β）２、（γ−β）３−（α−β）３、（γ−β）２−（α−β）４、（γ−β）−（α−β）５、α６−（α−β）３、α４−（α−β）４、及びα２−（α−β）５からなる群から選択されるいずれか一つである２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる（ここで、αはＤＮＡ、βは２’−ＯＭｅＲＮＡ、γはＲＮＡを示す。）。
【００６９】
２本鎖ポリヌクレオチド他の例としては、式（ＶＩＩＩ）において、ｑが４で、Ｘが（γ−β）５、（α−β）−（γ−β）４、（α−β）２−（γ−β）３、（α−β）３−（γ−β）２、（α−β）４−（γ−β）、（α−β）２−β６、（α−β）３−β４、及び（α−β）４−β２（ここで、αはＤＮＡ、βは２’−ＯＭｅＲＮＡ、γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つである２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる。
【００７０】
２本鎖ポリヌクレオチドの他の例としては、式（ＩＸ）において、ｒが４で、Ｙが（γ−β）５、（γ−β）４−（α−β）、（γ−β）３−（α−β）２、（γ−β）２−（α−β）３、（γ−β）−（α−β）４、α６−（α−β）２、α４−（α−β）３、及びα２−（α−β）４（ここで、αはＤＮＡ、βは２’−ＯＭｅＲＮＡ、γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つである２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる。
【００７１】
２本鎖ポリヌクレオチドの他の例としては、式（ＶＩＩＩ）において、ｑが４で、Ｘが（γ−β）５、（α−β）−（γ−β）４、（α−β）２−（γ−β）３、（α−β）３−（γ−β）２、（α−β）４−（γ−β）、（α−β）２−β６、（α−β）３−β４、及び（α−β）４−β２からなる群から選択されるいずれか一つであり、式（ＩＸ）において、ｒが４で、Ｙが（γ−β）５、（γ−β）４−（α−β）、（γ−β）３−（α−β）２、（γ−β）２−（α−β）３、（γ−β）−（α−β）４、β６−（α−β）２、β４−（α−β）３、及びβ２−（α−β）４からなる群から選択されるいずれか一つである２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる（ここで、αはＤＮＡ、βは２’−ＯＭｅＲＮＡ、γはＲＮＡを示す。）。
【００７２】
２本鎖ポリヌクレオチドの他の例としては、式（ＶＩＩＩ）において、ｑが５で、Ｘが（γ−β）４、（α−β）−（γ−β）３、（α−β）２−（γ−β）２、（α−β）３−（γ−β）、（α−β）−β６、（α−β）２−β４、及び（α−β）３−β２、（ここで、αはＤＮＡ、βは２’−ＯＭｅＲＮＡ、γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つの２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる。
【００７３】
２本鎖ポリヌクレオチドの他の例としては、式（ＩＸ）において、ｒが５で、Ｙが（γ−β）４、（γ−β）３−（α−β）、（γ−β）２−（α−β）２、（γ−β）−（α−β）３、α６−（α−β）、α４−（α−β）２、及びα２−（α−β）３（ここで、αはＤＮＡ、βは２’−ＯＭｅＲＮＡ、γはＲＮＡを示す。）からなる群から選択されるいずれか一つである２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる。
【００７４】
２本鎖ポリヌクレオチドの他の例としては、式（ＶＩＩＩ）において、ｑが５で、Ｘが（γ−β）４、（α−β）−（γ−β）３、（α−β）２−（γ−β）２、及び（α−β）３−（γ−β）、（α−β）−β６、（α−β）２−β４、及び（α−β）３−β２からなる群から選択されるいずれか一つであり、式（ＩＸ）において、ｒが５で、Ｙが（γ−β）４、（γ−β）３−（α−β）、（γ−β）２−（α−β）２、（γ−β）−（α−β）３、β６−（α−β）、β４−（α−β）２及びβ２−（α−β）３からなる群から選択されるいずれか一つである２本鎖ポリヌクレオチドを挙げることができる（ここで、αはＤＮＡ、βは２’−ＯＭｅＲＮＡ、γはＲＮＡを示す。）。
【００７５】
糖修飾ヌクレオチドには、本発明の属する技術分野で知られている糖修飾の全ての様式を含む。糖修飾ヌクレオチドは、あらゆる複素環塩基部位及びインターヌクレオシド結合を保持することができ、さらに前記糖修飾とは独立したグループを含む。糖修飾ヌクレオチドのグループは、２’−修飾ヌクレオシド、４’−チオ修飾ヌクレオシド、４’−チオ−２’−修飾ヌクレオシド及び二環式糖修飾ヌクレオシドを含む。
【００７６】
２’−修飾ヌクレオチドの例としては、ハロ、アリル、アミノ、アジド、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル、ＯＣＦ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、またはＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）であり、各ＲｍとＲｎが個別にＨ、アミノ保護基、または置換あるいは非置換Ｃ１−Ｃ１０アルキルである。好ましい２’−修飾は−Ｆ、−ＯＣＨ３、又は−Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ３である。さらに好ましくは−ＯＣＨ３である。
【００７７】
４’−チオ修飾ヌクレオシドの例としては、４’−酸素原子が硫黄原子で置換されたβ−Ｄ−リボヌクレオシドを挙げることができる（Ｈｏｓｈｉｋａ，Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．５７９，ｐ．３１１５−３１１８，（２００５）；  Ｄａｎｄｅ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４９，  ｐ．１６２４−１６３４（２００６）；Ｈｏｓｈｉｋａ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ．  ８，  ｐ．２１３３−２１３８，（２００７））。
【００７８】
４’−チオ−２’−修飾ヌクレオシドの例としては、２’−Ｈ、または、２’−Ｏ−メチルを保持する４’−チオ−２’−修飾ヌクレオシドを挙げることができ（Ｍａｔｓｕｇａｍｉ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ３６，  １８０５  （２００８））。
【００７９】
二環式糖修飾ヌクレオシドの例としては、リボース環の２原子を架橋することによって形成された第二の環を保持するヌクレオシドを挙げることができ、そのようなヌクレオシドの例としては、２’−酸素原子と４’−炭素原子をメチレン鎖で架橋した２’，４’−ＢＮＡ／ＬＮＡ（ｂｒｉｄｇｅｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ／ｌｏｃｋｅｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ）（Ｏｂｉｋａ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，  ３８，  ｐ．８７３５−  （１９９７）．；  Ｏｂｉｋａ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，  ３９，  ｐ．５４０１−  （１９９８）．；  Ａ．  Ａ．  Ｋｏｓｈｋｉｎ，  Ａ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，  ５４，  ｐ．３６０７（１９９８）．；  Ｏｂｉｋａ，  Ｓ．  Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  ９，ｐ．１００１（２００１）．）、２’，４’−ＢＮＡ／ＬＮＡのメチレン鎖を一炭素延ばしたエチレン鎖で架橋したＥＮＡ（２’−Ｏ，４’−Ｃ−ｅｔｈｙｌｅｎｅ−ｂｒｉｄｇｅｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ）を挙げることができる（Ｍｏｒｉｔａ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．，  １２，  ｐ．７３（２００２）．；  Ｍｏｒｉｔａ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  １１，ｐ．２２１１（２００３）．）。
【００８０】
２本鎖ポリヌクレオチド中の２’−ＯＭｅＲＮＡの任意の１〜４残基が糖修飾ヌクレオチドで置換されている場合に、より好ましい糖修飾ヌクレオチドは上記の糖修飾ヌクレオチドのうち、同一又は異なってＥＮＡ又は２’，４’−ＢＮＡ／ＬＮＡである。
【００８１】
２本鎖ポリヌクレオチドには、ポリヌクレオチド中のＤＮＡの１〜４残基が同一又は異なって、ＲＮＡ、ＥＮＡ又は２’，４’−ＢＮＡ／ＬＮＡに置換されている２本鎖ポリヌクレオチドも含まれる。
【００８２】
２本鎖ポリヌクレオチドには、上記式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（Ｖ）、（ＶＩＩ）、（ＩＸ）で示されるアンチセンス鎖の５’末端に更にリン酸基が付加しているものも含まれる。
【００８３】
２本鎖ポリヌクレオチドはその一部のリン酸エステル結合の代わりに、ホスホロチオエート結合を有するものも含まれ、ホスホロチオエート結合の数は好ましくは０〜５個である。また、ホスホロチオエート結合の位置は好ましくは各ポリヌクレオチドの５’末端及び３’末端付近である。
【００８４】
２本鎖ポリヌクレオチドを構成する各ポリヌクレオチドの調製方法としては特に制限はないが、既知の化学合成法（リン酸トリエステル法、ホスホロアミダイト法、又は、Ｈ−ホスホネート法等）を用いることができる。例えば、市販の核酸合成機を用いて、市販のＤＮＡ／ＲＮＡ合成に使われる試薬を用いて合成することが出来る。
【００８５】
５’端にリン酸基が付加しているポリヌクレオチドの合成も既知の合成法で合成することができるが、例えば、フォスファリンク（ＡＢＩ製）を用いることにより合成できる。
【００８６】
化学合成は相補性を有する１本鎖ポリヌクレオチドを別個に合成し、これを適当な方法で会合させることにより２本鎖とすることが出来る。会合の方法としては具体的には例えば、合成した１本鎖ポリヌクレオチドを好ましくは少なくとも約３：７のモル比で、より好ましくは約４：６のモル比で、最も好ましくは等モル量（５：５のモル比）で混合し、２本鎖が解離する温度にまで加熱し、その後徐々に冷却する方法等が挙げられる。会合した２本鎖ポリヌクレオチドは、必要に応じてそれ自体公知の通常用いられる方法により精製される。精製方法としては、例えばアガロースゲル等を用いて会合を確認し、残存する１本鎖ポリヌクレオチドを適当な酵素により分解する等して除去する方法を用いることができる。
【００８７】
２本鎖ポリヌクレオチドには、２本鎖ポリヌクレオチドにコレステロールユニット、脂質ユニットまたは、ビタミンＥユニットを導入したもの（例えば、Ｌｏｒｅｎｚ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．，１４，ｐ．４９７５−４９７７（２００４）；Ｓｏｕｔｓｃｈｅｋ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ，４３２，ｐ．１７３−１７８，  （２００４）；  Ｗｏｌｆｒｕｍ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２５，ｐ．１１４９−１１５７，（２００７））Ｋｕｂｏ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，  １７，  ｐ．１−２０，（２００７）；  Ｋｕｂｏ，  Ｔ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍ．  ３６５，ｐ．５４−６１，（２００８）；  Ｎｉｓｈｉｎａ，  Ｋ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  １６，ｐ．７３４−７４０，（２００８）参照。）、及び２本鎖ポリヌクレオチドの末端に、タンパク質に結合する核酸分子であるアプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）を結合したものも含む。
【００８８】
２本鎖ポリヌクレオチドには、２本鎖ポリヌクレオチドとモノクローナル抗体（又はその適切な結合部分）や、タンパク質（又はその適切なオリゴペプチドフラグメント）が結合したものも含む（例えば、Ｓｏｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２３，ｐ．７０９−７１７（２００５）；  Ｘｉａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  ２４，ｐ．２３０９−２３１６（２００７）、Ｋｕｍａｒ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ，４４８，ｐ．３９−４３（２００７）参照。）。
【００８９】
また、２本鎖ポリヌクレオチドには、２本鎖ポリヌクレオチドにカチオニックポリマーを加えることで、正電荷を帯びた複合体としたものも含む（臓器及び細胞への分布を達成することができた例として、Ｌｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｇｅｎ．  Ｍｅｄ．  ７，ｐ．９７７−９８６（２００５），Ｂａｉｇｕｄｅ  ｅｔ  ａｌ．２，ｐ．２３７−２４１，  ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｌ．（２００７），Ｙａｄａｖａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  １７，ｐ．２１３−２２２（２００７）参照）。
【００９０】
２本鎖ポリヌクレオチドには、上記２本鎖ポリヌクレオチドのあらゆる薬学的に許容可能な塩類、エステル、またはそのようなエステルの塩類を含む。
【００９１】
２本鎖ポリヌクレオチドの薬学的に許容可能な塩類としては、好適にはナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩；アンモニウム塩のような無機塩、ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のような有機塩等のアミン塩；弗化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩のようなハロゲン原子化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルカンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩のようなアリ−ルスルホン酸塩、酢酸塩、リンゴ酸塩、フマ−ル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、蓚酸塩、マレイン酸塩等の有機酸塩；及び、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩を挙げることができる。
【００９２】
２本鎖ポリヌクレオチドを含有する組成物は、例えばリポソーム、受容体標的分子、経口、直腸、局所的または取り込み、分配および／または吸収を補助するための他の処方として、他の分子、分子構造または化合物の混合物と混合される、封入される、共役される。
【００９３】
２本鎖ポリヌクレオチドを、疾患の予防薬又は治療薬として使用する場合には、前記ポリヌクレオチド、又は、その薬理学上許容される塩を、それ自体あるいは適宜の薬理学的に許容される、賦形剤、希釈剤等と混合し、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤若しくはシロップ剤等により経口的に、又は、注射剤、坐剤、貼付剤、若しくは、外用剤等により非経口的に投与することができる。
【００９４】
これらの製剤は、賦形剤（例えば、乳糖、白糖、葡萄糖、マンニトール、ソルビトールのような糖誘導体；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、α澱粉、デキストリンのような澱粉誘導体；結晶セルロースのようなセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルランのような有機系賦形剤；及び、軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、珪酸カルシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウムのような珪酸塩誘導体；燐酸水素カルシウムのような燐酸塩；炭酸カルシウムのような炭酸塩；硫酸カルシウムのような硫酸塩等の無機系賦形剤を挙げることができる。）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウムのようなステアリン酸金属塩；タルク；コロイドシリカ；ビーズワックス、ゲイ蝋のようなワックス類；硼酸；アジピン酸；硫酸ナトリウムのような硫酸塩；グリコール；フマル酸；安息香酸ナトリウム；ＤＬロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウムのようなラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物のような珪酸類；及び、上記澱粉誘導体を挙げることができる。）、結合剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール、及び、前記賦形剤と同様の化合物を挙げることができる。）、崩壊剤（例えば、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、内部架橋カルボキシメチルセルロースナトリウムのようなセルロース誘導体；カルボキシメチルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドンのような化学修飾されたデンプン・セルロース類を挙げることができる。）、乳化剤（例えば、ベントナイト、ビーガムのようなコロイド性粘土；水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウムのような金属水酸化物；ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸カルシウムのような陰イオン界面活性剤；塩化ベンザルコニウムのような陽イオン界面活性剤；及び、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステルのような非イオン界面活性剤を挙げることができる。）、安定剤（メチルパラベン、プロピルパラベンのようなパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコールのようなアルコール類；塩化ベンザルコニウム；フェノール、クレゾールのようなフェノール類；チメロサール；デヒドロ酢酸；及び、ソルビン酸を挙げることができる。）、矯味矯臭剤（例えば、通常使用される、甘味料、酸味料、香料等を挙げることができる。）、希釈剤等の添加剤を用いて周知の方法で製造される。
【００９５】
３．２本鎖ポリヌクレオチドの細胞、組織あるいは個体への導入、及び標的遺伝子の発現調節
上記のように調製された２本鎖ポリヌクレオチドを導入する被導入体としては、標的遺伝子がその細胞内でＲＮＡに転写、またはタンパク質に翻訳され得るものであれば、特に制限されない。被導入体としては細胞、組織、あるいは個体を意味する。
【００９６】
２本鎖ポリヌクレオチドが用いられる細胞としては、生殖系列細胞、体性細胞、分化全能性細胞、多分化能細胞、分割細胞、非分割細胞、実質組織細胞、上皮細胞、不滅化細胞、形質転換細胞、神経細胞又は免疫細胞のいずれのものであってもよい。
【００９７】
組織としては単一細胞胚または構成性細胞、または多重細胞胚、胎児組織等を含む。また、上記分化細胞としては、例えば、脂肪細胞、線維芽細胞、筋細胞、心筋細胞、内皮細胞、神経細胞、グリア、血液細胞、巨核球、リンパ球、マクロファージ、好中球、好酸球、効塩基球、マスト細胞、白血球、顆粒球、ケラチン生成細胞、軟骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、肝細胞および内分泌線または外分泌腺の細胞等が挙げられる。このような細胞の例としては、ＣＨＯ−Ｋ１細胞（ＲＩＫＥＮ  Ｃｅｌｌ  ｂａｎｋ）、ショウジョウバエＳ２細胞（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，  ｌ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｍｂｒｙｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｍｏｒｐｈ．，  ２７，ｐ．３５３−３６５（１９７２）、ヒトＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ：ＣＣＬ−２）、あるいは、ヒトＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ：ＣＲＬ−１５７３）等が好ましく用いられる。
【００９８】
さらに２本鎖ポリヌクレオチドの被導入体として用いられる個体として、具体的には、植物、動物、原生動物、ウイルス、バクテリア、または真菌類に属するもの等が挙げられる。植物は単子葉植物、双子葉植物または裸子植物であってよく、動物は、脊椎動物または無脊椎動物であってもよい。脊椎動物としてはマウス、ラット、サル、イヌ及びヒトを含む哺乳類が好ましい。
【００９９】
被導入体への２本鎖ポリヌクレオチドの導入方法としては、被導入体が細胞、あるいは組織の場合は、カルシウムフォスフェート法、エレクトロポレーション法、リポフェクション法、ウイルス感染、２本鎖ポリヌクレオチド溶液への浸漬、あるいは形質転換法等が用いられる。また、胚に導入する方法としては、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション法、あるいはウイルス感染等が挙げられる。被導入体が植物の場合には植物体の体腔または間質細胞等への注入または灌流、あるいは噴霧による方法が用いられる。また、動物個体の場合には、経口、局所、皮下、筋肉内及び静脈内投与、非経口、経膣、経直腸、経鼻、経眼、経膜内投与等によって全身的に導入する方法、あるいはエレクトロポレーション法やウイルス感染等が用いられる。経口導入の方法としては、２本鎖ポリヌクレオチドを生物の食物と直接混合する方法を使うこともできる。
【０１００】
２本鎖ポリヌクレオチドを患者へ導入する方法については、上記に加えてコロイド分散系を用いることができる。
【０１０１】
コロイド分散系は化合物の生体内の安定性を高める効果や、特定の臓器、組織又は細胞へ化合物を効率的に輸送する効果が期待される。
【０１０２】
コロイド分散系は、通常用いられるものであれば限定しないが、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、及び水中油系の乳化剤、ミセル、混合ミセル及びリポソームを包含する脂質をベースとする分散系を挙げる事ができ、好ましくは、特定の臓器、組織又は細胞へ化合物を効率的に輸送する効果のある、複数のリポソーム、人工膜の小胞である（Ｍａｎｎｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９８８，６，ｐ．６８２−；Ｂｌｕｍｅ  ａｎｄ  Ｃｅｖｃ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９０，１０２９，ｐ．９１−；Ｌａｐｐａｌａｉｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．，１９９４，２３，ｐ．１１９−；Ｃｈｏｎｎ  ａｎｄ  Ｃｕｌｌｉｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１９９５，６，ｐ．６９８−）。
【０１０３】
０．２−０．４μｍのサイズ範囲をとる単膜リポソームは、巨大分子を含有する水性緩衝液のかなりの割合を被包化し得、化合物はこの水性内膜に被胞化され、生物学的に活性な形態で脳細胞へ輸送される（Ｆｒａｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，１９８１，６，ｐ．７７−）。
【０１０４】
リポソームの組成は、通常、脂質、特にリン脂質、とりわけ相転移温度の高いリン脂質を１種又はそれ以上のステロイド、特にコレステロールと通常複合したものである。
【０１０５】
リポソーム生産に有用な脂質の例は、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、スフィンゴ脂質、ホスファチジルエタノールアミン、セレブロシド及びガングリオシドのようなホスファチジル化合物を包含する。
【０１０６】
特に有用なのはジアシルホスファチジルグリセロールであり、ここでは脂質部分が１４−１８の炭素原子、特に１６−１８の炭素原子を含有し、飽和している（１４−１８の炭素原子鎖の内部に二重結合を欠いている）。
【０１０７】
代表的なリン脂質は、ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン及びジステアロイルホスファチジルコリンを包含する。
【０１０８】
リポソームを包含するコロイド分散系の標的化は、受動的又は能動的のいずれかであってもよい。
【０１０９】
受動的な標的化は、洞様毛細血管を含有する臓器の網内系細胞へ分布しようとするリポソーム本来の傾向を利用することによって達成される。
【０１１０】
一方、能動的な標的化は、例えば、ウイルスのタンパク質コート（Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．），１９９３，９０，ｐ．８４７４−）、モノクローナル抗体（又はその適切な結合部分）、糖、糖脂質又はタンパク質（又はその適切なオリゴペプチドフラグメント）のような特定のリガンドをリポソームへ結合させること、又は天然に存在する局在部位以外の臓器及び細胞型への分布を達成するためにリポソームの組成を変えることによってリポソームを修飾する手法等を挙げることができる。
【０１１１】
標的化されたコロイド分散系の表面は様々なやり方で修飾され得る。
【０１１２】
リポソームで標的したデリバリーシステムでは、脂質二重層との緊密な会合において標的リガンドを維持するために、リポソームの脂質二重層へ脂質基が取込まれ得る。
脂質鎖を標的リガンドと結びつけるために様々な連結基が使用され得る。
【０１１３】
２本鎖ポリヌクレオチドのデリバリーが所望される細胞の上に支配的に見出される特定の細胞表面分子に結合する標的リガンドは、例えば、（１）デリバリーが所望される細胞によって支配的に発現される特定の細胞受容体と結合している、ホルモン、成長因子又はその適切なオリゴペプチドフラグメント、又は（２）標的細胞上で支配的に見出される抗原性エピトープと特異的に結合する、ポリクローナル又はモノクローナル抗体、又はその適切なフラグメント（例えば、Ｆａｂ；Ｆ（ａｂ’）２）、であり得る。
２種又はそれ以上の生物活性剤は、単一のリポソーム内部で複合し、投与することもできる。
【０１１４】
内容物の細胞内安定性及び／又は標的化を高める薬剤をコロイド分散系へ追加することも可能である。
【０１１５】
２本鎖ポリヌクレオチド又はその薬理学上許容される塩の使用量は症状、年齢等により異なるが、経口投与の場合には、１回当り下限１ｍｇ（好適には、３０ｍｇ）、上限２０００ｍｇ（好適には、１５００ｍｇ）を、静脈内投与の場合には、１回当り下限０．５ｍｇ（好適には、５ｍｇ）、上限５００ｍｇ（好適には、２５０ｍｇ）を成人に対して、１日当り１乃至６回症状に応じて投与することが望ましい。
【０１１６】
局所的投与に対する薬学的組成物および処方は、経皮的パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、飴、坐薬、スプレー、液体および粉末を含む。
【実施例】
【０１１７】
以下、実施例、参考例及び試験例にて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、下記実施例において、遺伝子操作に関する各操作は特に明示がない限り、「モレキュラークローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ）」［Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，  Ｅ．Ｆ．およびＭａｎｉａｔｉｓ，  Ｔ．  著、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓより１９８９年に発刊］に記載の方法により行うか、または、市販の試薬やキットを用いる場合には市販品の指示書に従って使用した。【０１１８】
（実施例１）  
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｒｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号１）（ＣＴ−０９５）の合成
核酸自動合成機（パーキンエルマー社製  ＡＢＩ  ｍｏｄｅｌ  ３９４  ＤＮＡ／ＲＮＡ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）を用い、０．２μｍｏｌスケールのＲＮＡ合成プログラムに従って行った。各合成サイクルにおける溶媒、試薬、ホスホロアミダイトの濃度は天然オリゴデオキシヌクレオチド合成の場合と同じものを用いた。【０１１９】
デオキシヌクレオシドホスホロアミダイトを用いる場合は、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−６−Ｎ−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｎ−イソブチリル−２’−デオキシグアノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−４−Ｎ−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイトをＰｒｏｌｉｇｏ社より購入し適宜調整し用いた。【０１２０】
２’−Ｏ−メチルヌクレオシドホスホロアミダイトを用いる場合は、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−６−Ｎ−ベンゾイル−２’−Ｏ−メチルアデノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｎ−イソブチリル−２’−Ｏ−メチルグアノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−４−Ｎ−アセチル−２’−Ｏ−メチルシチジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチルウリジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイトをＧｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈより購入し適宜調製し用いた。【０１２１】
リボヌクレオシドホスホロアミダイトを用いる場合は、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−６−Ｎ−ベンゾイル−２’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）アデノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｎ−ジメチルホルムアミジン−２’  −Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）グアノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−４−Ｎ−アセチル−２’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）シチジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）ウリジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイトをＰｒｏｌｉｇｏ社より購入し適宜調製し用いた。
２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレンヌクレオシドホスホロアミダイトを用いる場合は、特許３４２０９８４号の実施例１４（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン−６−Ｎ−ベンゾイルアデノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト）、実施例２７（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン−２−Ｎ−イソブチリルグアノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト）、実施例２２（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン−４−Ｎ−ベンゾイル−５−メチルシチジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト）、実施例９（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン−５−メチルウリジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト）、の化合物を適宜調製し用いた。【０１２２】
ホスホロアミダイトは、適宜核酸自動合成機に取り付け、所望の配列を有するポリヌクレオチドを合成した。固相担体として、所望のヌクレオシドが結合したＣＰＧ（コントロールド  ポア  グラス；アプライドバイオシステム製、または、Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ製）０．５μｍｏｌを用い、表記のポリヌクレオチドを合成した。【０１２３】
目的配列を有する保護されたポリヌクレオチド類縁体をアンモニア水：エタノール溶液（３：１ｖ／ｖ）２  ｍＬで５５℃、１６時間処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン酸基の保護基のシアノエチル基と核酸塩基上の保護基をはずした。ＣＰＧをろ過して除き、エタノールで洗浄し、ろ液と洗液と合わせて、溶媒を減圧下留去した。残った残渣に、Ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ  ｔｒｉｈｙｄｒｏｆｌｕｏｒｉｄｅを０．３ｍＬ加え、室温で１９時間放置した。Ｈ２Ｏ  ６０μＬ、ｎ−ブタノール３ｍＬを加え、−２０℃で１時間放置後、遠心して沈殿を回収した。得られた沈殿を２００μＬのＨ２Ｏに溶解し、７Ｍ尿素を含む２０％ポリアクリルアミドゲル電気泳動（１ｘ  ＴＢＥ，６００Ｖ，４時間）で精製した。電気泳動後、ＵＶランプを用いてバンドを可視化し、ナイフを使ってバンドを切り出し、１ｍＬの０．２Ｍ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ７．２）の溶液を加えて、一晩放置し、ポリヌクレオチドをゲル片から溶出させた。エタノールを加え、オリゴヌクレオチドを沈殿させ、遠心し回収した。本ポリヌクレオチドの分子量は、負イオンＥＳＩ質量分析により同定した（計算値：６７２１．４６、測定値：６７２１．１４）。【０１２４】
本ポリヌクレオチドの塩基配列は、ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含むものである。ヒトβ−カテニン遺伝子のヌクレオチド配列は配列表の配列番号２にも示されており、そのアミノ酸配列は配列表の配列番号３に示されている。【０１２５】
（実施例２）
ＨＯ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｕｒｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号４）（ＣＴ−０９６）の合成
実施例１と同様にＣＴ−０９６を合成した。
分子量  計算値：６６３２．２９、測定値：６６３２．１７
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１２６】
（実施例３）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｒｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｒｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号５）（ＣＴ−０９７）の合成
実施例１と同様にＣＴ−０９７を合成し、分子量を測定した。
分子量：計算値：６７３７．４６、測定値：６７３７．３８
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１２７】
（実施例４）
ＨＯ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｕｒｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｕｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号６）（ＣＴ−０９８）の合成
実施例１と同様にＣＴ−０９８を合成した。
分子量：計算値：６６３４．２６、測定値：６６３４．９０
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１２８】
（実施例５）
ＨＯ−Ｇｒｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｒｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｒｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号７）（ＣＴ−０９９）の合成
実施例１と同様にＣＴ−０９９を合成した。
分子量：計算値：６７８５．４６、測定値：６７８５．１２
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１２９】
（実施例６）
ＨＯ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｕｒｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｕｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｒｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号８）（ＣＴ−１００）の合成
実施例１と同様にＣＴ−１００を合成した。
分子量：計算値：６６６６．２６、測定値：６６６５．７１
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１３０】
（実施例７）  ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｅ２ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号９）（ＣＴ−１１２）の合成
実施例１と同様にＣＴ−１１２を合成した。核酸自動合成機の最終工程で、酸処理をしなかった（ジメトキシトリチル基がオリゴヌクレオチド上に結合している）。本ポリヌクレオチドにおいては、アンモニア水：エタノール溶液（３：１ｖ／ｖ）で処理した後、逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製ＬＣ−１０ＶＰ、カラム（Ｍｅｒｃｋ，  Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＲＰ−１８ｅ  （４．６×１００ｍｍ））、Ａ溶液：５％アセトニトリル、０．１Ｍ  酢酸トリエチルアミン水溶液（ＴＥＡＡ），  ｐＨ７．０、Ｂ溶液：アセトニトリル、Ｂ％：１０％→６０％（１０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；６０℃；２ｍｌ／ｍｉｎ；２６０ｎｍ）にて精製し、ジメトキシトリチル基を有する目的物のピークを集めた。水を加え、減圧下留去することで、ＴＥＡＡを除いた。８０％酢酸水溶液（２ｍＬ）を加え、２０分放置することで、ジメトキシトリチル基の脱保護を行った。溶媒を留去したのち、残渣を５００μｌの水に溶解し、酢酸エチルで洗浄し、凍結乾燥後、目的とするオリゴヌクレオチドを得た。
分子量：計算値：６７１５．５０、測定値：６７１４．９２
：塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１３１】
（実施例８）ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｅ２ｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号１０）（ＣＴ−１１３）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１１３を合成した。
分子量：計算値：６７３１．５０、測定値：６７３２．２２
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１３２】
（実施例９）ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｅ２ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号１１）（ＣＴ−１１４）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１１４を合成した。
分子量：計算値：６７０１．４７、測定値：６７０１．０６
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１３３】
（実施例１０）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｅ２ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｅ２ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号１２）（ＣＴ−１１５）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１１５を合成した。
分子量：計算値：６７２７．５１、測定値：６７２８．０７
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１３４】
（実施例１１）
ＨＯ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｅ２ｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号１３）（ＣＴ−１１６）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１１６を合成した。
分子量：計算値：６６５６．３５、測定値：６６５５．９７
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１３５】
（実施例１２）
ＨＯ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｅ２ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号１４）（ＣＴ−１１７）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１１７を合成した。
分子量：計算値：６６４０．３５、測定値：６６４０．８８
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１３６】
（実施例１３）
ＨＯ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｅ２ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｔｅ２ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号１５）（ＣＴ−１１８）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１１８を合成した。
分子量：計算値：６６６６．３９、測定値：６６６６．０４
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１３７】
（実施例１４）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号１６）（ＣＴ−０９１）の合成
実施例７と同様にＣＴ−０９１を合成した。
分子量：計算値：６６８９．４６、測定値：６６８９．８１
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１３８】
（実施例１５）
ＨＯ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号１７）（ＣＴ−０９２）の合成
実施例７のと同様にＣＴ−０９２を合成した。
分子量：計算値：６６１４．３１、測定値：６６１４．８０
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１３９】
（実施例１６）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号１８）（ＣＴ−１０１）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１０１を合成した。
分子量：計算値：６７１９．４９、測定値：６７１９．６７
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１４０】
（実施例１７）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号１９）（ＣＴ−１０２）の合成
実施例１と同様にＣＴ−１０２を合成した。
分子量：計算値：６７０５．４６、測定値：６７０５．５８
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１４１】
（実施例１８）
ＨＯ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号２０）（ＣＴ−１０７）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１０７を合成した。
分子量：計算値：６６４４．３４、測定値：６６４４．４７
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１４２】
（実施例１９）
ＨＯ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号２１）（ＣＴ−１０８）の合成
実施例１と同様にＣＴ−１０８を合成した。
分子量：計算値：６６３０．３１、測定値：６６３０．４８
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１４３】
（実施例２０）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｔ−Ｈ（配列表の配列番号２２）（ＣＴ−１０３）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１０３を合成した。
分子量：計算値：６０８１．０７、測定値：６０８１．０８
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１４４】
（実施例２１）
ＨＯ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号２３）（ＣＴ−１０９）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１０９を合成した。
分子量：計算値：６００５．９２、測定値：６００５．８９
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１４５】
（実施例２２）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号２４）（ＣＴ−１２７）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１２７を合成した。
分子量：計算値：６７４９．５２、測定値：６７４９．２６
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１４６】
（実施例２３）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号２５）（ＣＴ−１２８）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１２８を合成した。
分子量：計算値：６７７９．５４、測定値：６７７９．３１
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１４７】
（実施例２４）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号２６）（ＣＴ−１２９）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１２９を合成した。
分子量：計算値：６８０９．５７、測定値：６８０９．２３
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１４８】
（実施例２５）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号２７）（ＣＴ−１３０）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１３０を合成した。
分子量：計算値：６７４９．５２、測定値：６７４９．２１
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１４９】
（実施例２６）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号２８）（ＣＴ−１３１）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１３１を合成した。
分子量：計算値：６７７９．５４、測定値：６７７９．１７
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。  【０１５０】
（実施例２７）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｅ２ｐ−Ａｐ−Ｔｅ２ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号２９）（ＣＴ−１３２）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１３２を合成した。
分子量：計算値：６７２７．５１、測定値：６７２８．００
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１５１】
（実施例２８）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｅ２ｐ−Ｇｐ−Ａｅ２ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号３０）（ＣＴ−１３３）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１３３を合成した。
分子量：計算値：６７１３．４８、測定値：６７１３．７７
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１５２】
（実施例２９）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｅ２ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｅ２ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号３１）（ＣＴ−１３４）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１３４を合成した。
分子量：計算値：６７２７．５１、測定値：６７２８．０４
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１５３】
（実施例３０）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｅ２ｐ−Ｇｐ−Ａｅ２ｐ−Ａｐ−Ｔｅ２ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号３２）（ＣＴ−１３５）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１３５を合成した。
分子量：計算値：６７３９．５２、測定値：６７４０．４８
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１５４】
（実施例３１）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｅ２ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｅ２ｐ−Ａｐ−Ｔｅ２ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号３３）（ＣＴ−１３７）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１３７を合成した。
分子量：計算値：６７５３．５５、測定値：６７５４．１５
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１５５】
（実施例３２）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｅ２ｐ−Ａｐ−Ａｅ２ｐ−Ｇｐ−Ａｅ２ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号３４）（ＣＴ−１３６）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１３６を合成した。
分子量：計算値：６７３９．５２、測定値：６７３９．５１
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１５６】
（実施例３３）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｅ２ｐ−Ａｐ−Ａｅ２ｐ−Ｇｐ−Ａｅ２ｐ−Ａｐ−Ｔｅ２ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号３５）（ＣＴ−１３８）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１３８を合成した。
分子量：計算値：６７６５．５６、測定値：６７６５．７６
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１５７】
（実施例３４）
ＨＯ−Ｇｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号３６）（ＣＴ−１１９）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１１９を合成した。
分子量：計算値：６７４７．５４、測定値：６７４７．３９
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１５８】
（実施例３５）
ＨＯ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号３７）（ＣＴ−１２０）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１２０を合成した。
分子量：計算値：６５９８．３２、測定値：６５９８．２６
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１５９】
（実施例３６）
ＨＯ−Ｇｓ−Ｃｍ１ｓ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｒｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｒｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｓ−Ａｓ−Ｔｓ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号３８）（ＣＴ−０９７Ｓ）の合成
実施例１と同様にＣＴ−０９７Ｓを合成する。但し、ホスホスホロチオエート結合を有する部分は、よう素／テトラヒドロフラン／ピリジン／Ｈ２Ｏ溶液で酸化する代わりに、０．２  Ｍ  フェニルアセチルジスルフィド／ピリジン−アセトニトリル（１：１  ｖ／ｖ）溶液で３分間処理することにより合成できる（Ｒａｖｉｋｕｍａｒ，  Ｖ．Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．（２００６）１６，ｐ．２５１３−２５１７）。ＣＴ−０９７Ｓ、負イオン質量分析により同定する。
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１６０】
（実施例３７）
ＨＯ−Ｕｍ１ｓ−Ｔｓ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｕｒｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｕｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｓ−Ｃｍ１ｓ−Ｔｓ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号３９）（ＣＴ−０９８Ｓ）の合成
実施例３６と同様にＣＴ−０９８Ｓを合成する。ＣＴ−０９８Ｓは、負イオン質量分析により同定する。
塩基配列：（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。  【０１６１】
（実施例３８）  ＨＯ−Ｇｓ−Ｃｍ１ｓ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｅ２ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｓ−Ａｓ−Ｔｓ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号４０）（ＣＴ−１３９）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１３９を合成した。但し、ホスホスホロチオエート結合を有する部分は、よう素／テトラヒドロフラン／ピリジン／Ｈ２Ｏ溶液で酸化する代わりに、０．２Ｍ  フェニルアセチルジスルフィド／ピリジン−アセトニトリル（１：１  ｖ／ｖ）溶液で３分間処理した（Ｒａｖｉｋｕｍａｒ，  Ｖ．Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．（２００６）  １６，ｐ．２５１３−２５１７）。ＣＴ−１３９は、負イオンＥＳＩ質量分析により同定した。
分子量：計算値：６７８１．７８、測定値：６７８１．８９
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１６２】
（実施例３９）
ＨＯ−Ｕｍ１ｓ−Ｔｓ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｓ−Ｃｍ１ｓ−Ｔｓ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号４１）（ＣＴ−１４１）の合成
実施例３８と同様にＣＴ−１４１を合成した。
分子量：計算値：６８２９．８２、測定値：６８３０．１３
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１６３】
（実施例４０）
ＨＯ−Ｇｓ−Ｃｍ１ｓ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｍ１ｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｓ−Ａｓ−Ｔｓ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号４２）（ＣＴ−１４０）の合成
実施例３８と同様にＣＴ−１４０を合成した。
分子量：計算値：６６９４．６２、測定値：６６９４．７１
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１６４】
（実施例４１）ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｅ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号４３）（ＣＴ−１１４Ｌ）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１１４Ｌを合成する。但し、２’，４’−ＢＮＡ／ＬＮＡ部分は、文献（Ａ．  Ａ．  Ｋｏｓｈｋｉｎ，  Ａ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，  ５４，  ｐ．３６０７−（１９９８））記載の５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレン−６−Ｎ−ベンゾイルアデノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイトを用いることにより合成する。ＣＴ−１１４Ｌは、負イオンＥＳＩ質量分析により同定する。
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０１６５】
（実施例４２）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号１７）（ＣＴ−１４９）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１４９を合成した。但し、５’−末端のリン酸基部分は、フォスファリンク（ＡＢＩ製）を用いた。
分子量：計算値：６６９４．２８、測定値：６６９４．５５
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１６６】
（実施例４３）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｕｒｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号５２）（ＣＴ−１５５）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−１５５を合成した。
分子量：計算値：６６９６．２７、測定値：６６９６．４４
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１６７】
（実施例４４）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号５３）（ＣＴ−１５６）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−１５６を合成した。
分子量：計算値：６７１０．２９、測定値：６７１０．１３
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１６８】
（実施例４５）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号５４）（ＣＴ−１５７）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−１５７を合成した。‘
分子量：計算値：６７１０．２９、測定値：６７１０．３９
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１６９】
（実施例４６）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｕｒｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号５５）（ＣＴ−１５８）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−１５８を合成した。
分子量：計算値：６７１２．２７、測定値：６７１２．５０
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１７０】
（実施例４７）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号５６）（ＣＴ−１５９）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−１５９を合成した。
分子量：計算値：６７２６．２９、測定値：６７２６．４０
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１７１】
（実施例４８）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｒｔ−Ｈ（配列表の配列番号５７）（ＣＴ−１６０）の合成
実施例４２とＣＴ−１６０を合成した。
分子量：計算値：６６９６．２７、測定値：６６９６．２６
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１７２】
（実施例４９）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｕｒｐ−Ｕｒｔ−Ｈ（配列表の配列番号５８）（ＣＴ−１６１）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−１６１を合成した。
分子量：計算値：６６９８．２４、測定値：６６９８．３４
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１７３】
（実施例５０）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｕｒｔ−Ｈ（配列表の配列番号５９）（ＣＴ−１６２）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−１６２を合成した。
分子量：計算値：６７１２．２７、測定値：６７１２．３０
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１７４】
（実施例５１）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号６０）（ＣＴ−１６９）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１６９を合成した。
分子量：計算値：５７６７．８６、測定値：５７６７．７８
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５６の配列を含む。【０１７５】
（実施例５２）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐｔ−Ｈ（配列表の配列番号６１）（ＣＴ−１７０）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１７０を合成した。
分子量：計算値：５４２４．６２、測定値：５４２４．４７
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５５の配列を含む。【０１７６】
（実施例５３）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号６２）（ＣＴ−１７１）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１７１を合成した。
分子量：計算値：５１３５．４４、測定値：５１３４．５３
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５４の配列を含む。【０１７７】
（実施例５４）
ＨＯ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｔ−Ｈ（配列表の配列番号６３）（ＣＴ−１７２）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１７２を合成した。
分子量：計算値：５７５１．８６、測定値：５７５１．８０
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１４０−３１５７の配列を含む。【０１７８】
（実施例５５）
ＨＯ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｔ−Ｈ（配列表の配列番号６４）（ＣＴ−１７３）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１７３を合成した。
分子量：計算値：５４３２．６５、測定値：５４３２．６２
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１４１−３１５７の配列を含む。【０１７９】
（実施例５６）
ＨＯ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｔ−Ｈ（配列表の配列番号６５）（ＣＴ−１７４）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１７４を合成した。
分子量：計算値：５１１９．４４、測定値：５１１９．３９
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１４２−３１５７の配列を含む。【０１８０】
（実施例５７）
ＨＯ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号６６）（ＣＴ−１７５）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１７５を合成した。
分子量：計算値：５４３８．６５、測定値：５４３８．５５
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１４０−３１５６の配列を含む。【０１８１】
（実施例５８）
ＨＯ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐｔ−Ｈ（配列表の配列番号６７）（ＣＴ−１７６）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１７６を合成した。
分子量：計算値：５０９５．４２、測定値：５０９５．２５
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１４０−３１５５の配列を含む。【０１８２】
（実施例５９）
ＨＯ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号６８）（ＣＴ−１７７）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１７７を合成した。
分子量：計算値：５１１９．４４、測定値：５１１９．３３
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１４１−３１５６の配列を含む。【０１８３】
（実施例６０）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号６９）（ＣＴ−２０４）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２０４を合成した。
分子量：計算値：６７１９．３１、測定値：６７１９．９９
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１８４】
（実施例６１）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号７０）（ＣＴ−２０５）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２０５を合成した。
分子量：計算値：６７３５．３１、測定値：６７３５．７９
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１８５】
（実施例６２）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号７１）（ＣＴ−２０６）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２０６を合成した。
分子量：計算値：６６９５．２８、測定値：６６９６．００
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１８６】
（実施例６３）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ａｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号７２）（ＣＴ−２０７）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２０７を合成した。
分子量：計算値：６７３３．３３、測定値：６７３３．９８
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１８７】
（実施例６４）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号７３）（ＣＴ−２０８）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２０８を合成した。
分子量：計算値：６７４９．３３、測定値：６７５０．１１
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１８８】
（実施例６５）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号７４）（ＣＴ−２０９）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２０９を合成した。
分子量：計算値：６７０９．３１、測定値：６７０９．８１
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１８９】
（実施例６６）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号７５）（ＣＴ−２２１）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２２１を合成した。
分子量：計算値：６７３３．２３、測定値：６７３３．００
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５６に相補的な配列を含む。【０１９０】
（実施例６７）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号７６）（ＣＴ−２２２）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２２２を合成した。
分子量：計算値：６７４９．３３、測定値：６７４９．０６
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５６に相補的な配列を含む。【０１９１】
（実施例６８）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号７７）（ＣＴ−２２３）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２２３を合成した。
分子量：計算値：６７０９．３１、測定値：６７０９．００
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５６に相補的な配列を含む。【０１９２】
（実施例６９）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号７８）（ＣＴ−２０２）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２０２を合成した。
分子量：計算値：６３９１．０６、測定値：６３９１．７０
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１４０−３１５７に相補的な配列を含む。【０１９３】
（実施例７０）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号７９）（ＣＴ−２０３）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２０３を合成した。
分子量：計算値：６３９０．１０、測定値：６３９０．７２
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５６に相補的な配列を含む。
（実施例７１）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｇｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号８０）（ＣＴ−２１０）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２１０を合成した。
分子量：計算値：６８４３．５２、測定値：６８４４．２３
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。
（実施例７２）
ＨＯ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｃｔ−Ｈ（配列表の配列番号８１）（ＣＴ−２１１）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２１１を合成した。
分子量：計算値：５９８９．９２、測定値：５９９０．３１
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。
（実施例７３）
ＨＯ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号８２）（ＣＴ−２１２）の合成
実施例７と同様にＣＴ−２１２を合成した。
分子量：計算値：５７００．７４、測定値：５７０１．１５
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１４０−３１５７に相補的な配列を含む。
（実施例７４）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号８３）（ＣＴ−２４３）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２４３を合成した。
分子量：計算値：６７０３．３１、測定値：６７０３．３５
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５６に相補的な配列を含む。
（実施例７５）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｇｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号８４）（ＣＴ−２４４）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２４４を合成した。
分子量：計算値：６７１９．１３、測定値：６７１９．４６
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５６に相補的な配列を含む。
（実施例７６）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｃｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号８５）（ＣＴ−２４５）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２４５を合成した。
分子量：計算値：６６７９．２８、測定値：６６７９．４３
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５６に相補的な配列を含む。
（実施例７７）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｔｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号８６）（ＣＴ−２４６）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２４６を合成した。
分子量：計算値：６６９４．２９、測定値：６６９４．４９
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。
（実施例７８）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号８７）（ＣＴ−２４７）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２４７を合成した。
分子量：計算値：６７５８．３５、測定値：６７５８．４６
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。
（実施例７９）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号８８）（ＣＴ−２４８）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２４８を合成した。
分子量：計算値：６７７４．３５、測定値：６７７４．５５
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。
（実施例８０）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号８９）（ＣＴ−２４９）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２４９を合成した。
分子量：計算値：６７３４．３２、測定値：６７３４．３５
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。
（実施例８１）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｔｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号９０）（ＣＴ−２５３）の合成
実施例４２とＣＴ−２５３を合成した。
分子量：計算値：６７１９．３１、測定値：６７１９．４４
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。
（実施例８２）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｔｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号９１）（ＣＴ−２５４）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２５４を合成した。
分子量：計算値：６７４２．３５、測定値：６７４２．４５
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。
（実施例８３）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｔｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号９２）（ＣＴ−２５５）の合成
実施例４２と同様に目ＣＴ−２５５を合成した。
分子量：計算値：６７５８．３５、測定値：６７５８．６６
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。
（実施例８４）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｔｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号９３）（ＣＴ−２５６）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２５６を合成した。
分子量：計算値：６７１８．３２、測定値：６７１８．５９
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。
（実施例８５）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｔｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号９４）（ＣＴ−２５７）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２５７を合成した。
分子量：計算値：６７２６．３５、測定値：６７２６．５２
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。
（実施例８６）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｔｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｇｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号９５）（ＣＴ−２５８）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２５８を合成した。
分子量：計算値：６７４２．３５、測定値：６７４２．５４
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。
（実施例８７）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号９６）（ＣＴ−２６４）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２６４を合成した。但し、Ｕｐ部分は、ＤＭＴ−ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ−β−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ（ＤＭＴ−ｄＵｒｉｄｉｎｅ  Ａｍｉｄｉｔｅ，  Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ製）を用いた。
分子量：計算値：６６８０．２７、測定値：６６８０．２９
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。
（実施例８８）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−５ｍｅＣｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号９７）（ＣＴ−２６５）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２６５を合成した。但し、５ＭｅＣｐ部分は、ＤＭＴ−５−ｍｅｔｈｙｌ−ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ（ａｃ）−β−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ（５−Ｍｅｔｈｙｌ−ｄＣ（ａｃ）  Ａｍｉｄｉｔｅ，  Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ製）を用いた。
分子量：計算値：６６９３．３１、測定値：６６９３．２３
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５６に相補的な配列を含む。
（実施例８９）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｃｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号９８）（ＣＴ−２６６）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２６６を合成した。
分子量：計算値：６７４３．３４、測定値：６７４３．７８
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５６に相補的な配列を含む。
（実施例９０）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−５ｍｅＣｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号９９）（ＣＴ−２６７）の合成
実施例８８と同様にＣＴ−２６７を合成した。
分子量：計算値：６７５７．３６、測定値：６７５７．５２
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５６に相補的な配列を含む。【０１９４】
（実施例９１）
ＨＯ−Ｇｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｔ−Ｈ（配列表の配列番号１０２）（ＣＴ−２８８）の合成
実施例７と同様にＣＴ−２８８を合成した。
分子量：計算値：５７９５．９１、測定値：５７９５．７６
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５６の配列を含む。【０１９５】
（実施例９２）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号１０３）（ＣＴ−２８９）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２８９を合成した。
分子量：計算値：６６９４．２９、測定値：６６９４．０９
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０１９６】
（実施例９３）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号１０４）（ＣＴ−２７８）の合成
実施例７と同様にＣＴ−２７８を合成した。
分子量：計算値：５８７６．９５、測定値：５８７７．２５
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号２１３７−２１５４の配列を含む。【０１９７】
（実施例９４）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号１０５）（ＣＴ−２７９）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２７９を合成した。
分子量：計算値：６６４５．２６、測定値：６６４５．４４
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号２１３７−２１５５に相補的な配列を含む。【０１９８】
（実施例９５）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｔｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号１０６）（ＣＴ−２８０）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２８０を合成した。
分子量：計算値：６６２９．２６、測定値：６６２９．５１
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号２１３７−２１５５に相補的な配列を含む。【０１９９】
（実施例９６）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｔｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｇｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号１０７）（ＣＴ−２８１）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−２８１を合成した。
分子量：計算値：６６７７．３１、測定値：６６７７．６５
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号２１３７−２１５５に相補的な配列を含む。【０２００】
（実施例９７）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ａｔ−Ｈ（配列表の配列番号１０８）（ＤＤ−０１６）の合成
実施例７と同様にＤＤ−０１６を合成した。
分子量：計算値：６０４０．００、測定値：６０４０．４４
塩基配列：ＤＤＸ３（ＤＥＡＤ  （Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｓｐ）  ｂｏｘ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ３，  Ｘ−ｌｉｎｋｅｄ）遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１３５６．３）のヌクレオチド番号１９２９−１９４７の配列を含む。【０２０１】
（実施例９８）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｕｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号１０９）（ＤＤ−０１７）の合成
実施例７と同様にＤＤ−０１７を合成した。
分子量：計算値：６７７９．４１、測定値：６７８０．２９
塩基配列：ＤＤＸ３遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１３５６．３）のヌクレオチド番号１９２９−１９４７に相補的な配列を含む。【０２０２】
（実施例９９）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号１１０）（ＤＤ−０２２）の合成
実施例７と同様にＤＤ−０２２を合成した。
分子量：計算値：５７２６．７９、測定値：５７２６．８９
塩基配列：ＤＤＸ３遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１３５６．３）のヌクレオチド番号１９２９−１９４６の配列を含む。【０２０３】
（実施例１００）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｔｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号１１１）（ＤＤ−０２３）の合成
実施例４２と同様にＤＤ−０２３を合成した。
分子量：計算値：６７６３．４２、測定値：６７６３．６９
塩基配列：ＤＤＸ３遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１３５６．３）のヌクレオチド番号１９２９−１９４７に相補的な配列を含む。【０２０４】
（実施例１０１）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｔｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｇｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号１１２）（ＤＤ−０２４）の合成
実施例４２と同様にＤＤ−０２４を合成した。
分子量：計算値：６８１１．４７、測定値：６８１１．６６
塩基配列：ＤＤＸ３遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１３５６．３）のヌクレオチド番号１９２９−１９４７に相補的な配列を含む。【０２０５】
（実施例１０２）
ＨＯ−Ｇｓ−Ｃｍ１ｓ−Ａｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｓ−Ａｍ１ｓ−Ｃｓ−Ａｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号１１３）（ＣＴ−１６９Ｓ）の合成
実施例３６と同様にＣＴ−１６９Ｓを合成する。ＣＴ−１６９Ｓは、負イオン質量分析により同定する。
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５６の配列を含むものである。【０２０６】
（実施例１０３）
ＨＯ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）  −Ｏ−Ｕｍ１ｓ−Ｔｓ−Ｇｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｓ−Ｃｍ１ｓ−Ｔｓ−Ｕｍ１ｔ−Ｈ（配列表の配列番号１１４）（ＣＴ−１５７Ｓ）の合成
実施例４２と同様にＣＴ−１５７Ｓを合成する。但し、ホスホスホロチオエート結合を有する部分は、ヨウ素／テトラヒドロフラン／ピリジン／Ｈ２Ｏ溶液で酸化する代わりに、０．２Ｍ  フェニルアセチルジスルフィド／ピリジン−アセトニトリル（１：１  ｖ／ｖ）溶液で３分間処理する（Ｒａｖｉｋｕｍａｒ，  Ｖ．Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．（２００６）  １６，  ｐ．２５１３−２５１７）。ＣＴ−１５７Ｓは、負イオン質量分析により同定する。
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０２０７】
（参考例１）
ＨＯ−Ｇｒｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ａｍ１ｐ−Ｇｒｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｒｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｒｐ−Ａｍ１ｐ−Ｃｒｐ−Ａｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号４４）（ＣＴ−００１）の合成
実施例１と同様にＣＴ−００１を合成した。
分子量：計算値：６８４９．４６、測定値：６８５０．８
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０２０８】
（参考例２）
ＨＯ−Ｕｍ１ｐ−Ｕｒｐ−Ｇｍ１ｐ−Ｕｒｐ−Ｇｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｃｒｐ−Ｃｍ１ｐ−Ａｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｕｒｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｕｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｒｐ−Ｕｍ１ｐ−Ｇｒｐ−Ｃｍ１ｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号４５）（ＣＴ−００５）の合成
実施例１と同様にＣＴ−００５を合成した。
分子量：計算値：６７０２．２０、測定値：６７０２．２
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０２０９】
（参考例３）
ＨＯ−Ｇｒｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ａｒｐ−Ｇｒｐ−Ａｒｐ−Ａｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ｇｒｐ−Ａｒｐ−Ｕｒｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ａｒｐ−Ｕｒｐ−Ｕｒｔ−Ｈ（配列表の配列番号４６）（ＣＴ−１０６）の合成
実施例１と同様にＣＴ−１０６を合成した。
分子量：計算値：６７２７．１６、測定値：６７２６．７３
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０２１０】
（参考例４）
ＨＯ−Ｕｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ａｒｐ−Ｕｒｐ−Ｃｒｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ｕｒｐ−Ｕｒｐ−Ｃｒｐ−Ｕｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ｃｒｐ−Ｕｒｐ−Ｕｒｔ−Ｈ（配列表の配列番号４７）（ＣＴ−０４１）の合成
実施例１と同様にＣＴ−０４１を合成した。
分子量：計算値：６５６５．８８、測定値：６５６５．３４
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０２１１】
（参考例５）
ＨＯ−Ｇｒｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ａｒｐ−Ｇｒｐ−Ａｒｐ−Ａｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ｇｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｃｐ−Ａｐ−Ｃｐ−Ａｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号４８）（ＣＴ−１０４）の合成
実施例１と同様に目ＣＴ−１０４を合成した。
分子量：計算値：６６０９．２５、測定値：６６０８．９８
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０２１２】
（参考例６）
ＨＯ−Ｔｐ−Ｔｐ−Ｇｐ−Ｔｐ−Ｇｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｃｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ｕｒｐ−Ｕｒｐ−Ｃｒｐ−Ｕｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ｃｒｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号４９）（ＣＴ−１１０）の合成
実施例１と同様にＣＴ−１１０を合成した。
分子量：計算値：６４９０．０５、測定値：６４８９．６１
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０２１３】
（参考例７）
ＨＯ−Ｇｐ−Ｃｐ−Ａｐ−Ｃｐ−Ａｐ−Ａｐ−Ｇｐ−Ａｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｇｐ−Ｇｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｃｐ−Ａｐ−Ｃｐ−Ａｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号５０）（ＣＴ−１０５）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１０５を合成した。
分子量：計算値：６４４７．２８、測定値：６４４７．５８
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０２１４】
（参考例８）
ＨＯ−Ｔｐ−Ｔｐ−Ｇｐ−Ｔｐ−Ｇｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｃｐ−Ｃｐ−Ａｐ−Ｔｐ−Ｔｐ−Ｃｐ−Ｔｐ−Ｔｐ−Ｇｐ−Ｔｐ−Ｇｐ−Ｃｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号５１）（ＣＴ−１１１）の合成
実施例７と同様にＣＴ−１１１を合成した。
分子量：計算値：６３８４．１９、測定値：６３８４．０５
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０２１５】
（参考例９）
ＨＯ−Ｇｒｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ａｒｐ−Ｇｒｐ−Ａｒｐ−Ａｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ｇｒｐ−Ａｒｐ−Ｕｒｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ａｒｔ−Ｈ（配列表の配列番号１００）（ＣＴ−１２５）の合成
実施例１と同様にＣＴ−１２５を合成した。
分子量：計算値：６１１４．８２、測定値：６１１４．５９
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７の配列を含む。【０２１６】
（参考例１０）
ＨＯ−Ｕｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ａｒｐ−Ｕｒｐ−Ｃｒｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ｕｒｐ−Ｕｒｐ−Ｃｒｐ−Ｕｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ｃｒｔ−Ｈ（配列表の配列番号１０１）（ＣＴ−１２６）の合成
実施例１と同様にＣＴ−１２６を合成した。
分子量：計算値：５９５３．５４、測定値：５９５３．３８）。
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．  ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号３１３９−３１５７に相補的な配列を含む。【０２１７】
（参考例１１）
ＨＯ−Ｇｒｐ−Ｇｒｐ−Ａｒｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ａｒｐ−Ｇｒｐ−Ｇｒｐ−Ａｒｐ−Ａｒｐ−Ｇｒｐ−Ｃｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ｇｒｐ−Ａｒｐ−Ａｒｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号１１５）（ＣＴ−１６５）の合成
実施例１と同様にＣＴ−１６５を合成した。
分子量：計算値：６８１８．２８、測定値：６８１８．２７
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号２１３７−２１５５の配列を含む。【０２１８】
（参考例１２）
ＨＯ−Ｕｒｐ−Ｕｒｐ−Ｃｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ｃｒｐ−Ａｒｐ−Ｇｒｐ−Ｃｒｐ−Ｕｒｐ−Ｕｒｐ−Ｃｒｐ−Ｃｒｐ−Ｕｒｐ−Ｕｒｐ−Ｇｒｐ−Ｕｒｐ−Ｃｒｐ−Ｃｒｐ−Ｔｐ−Ｔｔ−Ｈ（配列表の配列番号１１６）（ＣＴ−１６６）の合成
実施例１と同様にＣＴ−１６６を合成した。
分子量：計算値：６４９６．９０、測定値：６４９６．９９
塩基配列：ヒトβ−カテニン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００１９０４．３）のヌクレオチド番号２１３７−２１５５に相補的な配列を含む。【０２１９】
（実施例１０４）２本鎖ポリヌクレオチド形成のためのアニーリング
上記、実施例及び参考例において合成したポリヌクレオチドを表１及び表２に示す組み合わせで、センス鎖及びアンチセンス鎖を３００ｐｍｏｌずつ１つのチューブに入れて、減圧下乾燥し、３０μＬのｓｉＲＮＡ  ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ（ＱＩＡＧＥＮ）を加え、６５℃、１分間加温した後、室温に５分間放置し、センス鎖及びアンチセンス鎖をアニーリングさせ、１０μＭの２本鎖ポリヌクレオチド溶液を得た。
（参考例１３）Ａｍｂｉｏｎ社  Ｓｉｌｅｎｃｅｒ  Ｐｒｅ−ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｓｉＲＮＡ，  Ｇｅｎｅ  Ｓｙｍｂｏｌ：  ＤＤＸ３Ｘ，  Ｌｏｃｕｓ  ＩＤ：  １６５４  ［Ａｍｂｉｏｎ］  ｓｉＲＮＡ  ＩＤ  ＃  １４５８０４  より２本鎖ＲＮＡを購入して、使用した。以後ＤＤＸ３  ｓｉＲＮＡ＃５と呼ぶ。【０２２０】
【表１】
0005637849.tif 000008
【０２２１】
【表２】
0005637849.tif 000009
【０２２２】
【表３】
0005637849.tif 000010
（試験例１）
（１）トランスフェクション
ヒト大腸癌ＳＷ４８０細胞株（ヒト大腸腺癌由来）を、１０％  Ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍを含むＲＰＭＩ１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で培養した。１０００００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度になるように、ＳＷ４８０の培養液を１２穴プレートに播種し、一晩培養した。次に各ウェルにリポフェクション試薬ＨｉＰｅｒＦｅｃｔ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を最終濃度０．５％、２本鎖ポリヌクレオチド溶液を最終濃度が、３０、３、０．３、および０．０３ｎＭ（または、３０、３、１、０．３、０．１、および０．０３ｎＭ）となるよう添加して、更に３日間培養を継続した。その後、培地を除いてＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）で細胞を洗浄後、５％  ２−メルカプトエタノール含有Ｌａｅｍｍｌｉ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｂｕｆｆｅｒ  １００μＬを直接添加して細胞を溶解させた。細胞溶解液をチューブに回収後、１００℃で５分間加熱して蛋白質を変性させた。２本鎖ポリヌクレオチドの構造及びそのヌクレオチド配列は図１、図２、図４、図６、図７、図８、図９、図１３、図１４、図１６、図１８、図２０、図２１に示している。【０２２３】
（２）ウエスタンブロット解析
各サンプル（蛋白質量として１μｇ分）をポリアクリルアミドゲル電気泳動（５−２０％  グラジエントゲル）によって分離し、ニトロセルロース膜に電気的に転写した。５％スキムミルク液でブロッキング後、一次抗体としてウサギ抗β−カテニン抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を二次抗体としてＨＲＰ標識抗ウサギＩｇＧ抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いてβ−カテニン蛋白質を検出した。陰性対象としてβ−アクチン蛋白質を抗β−アクチンモノクローナル抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧ抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて検出した。各蛋白質の検出は、Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を基質として使用した時に生じた化学発光によってＨｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｆｉｌｍ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を感光させることで可視化して実施した。【０２２４】
（３）ウエスタンブロット解析結果
（ａ）参考例として合成した２本鎖ポリヌクレオチドの遺伝子発現抑制活性
２本鎖ポリヌクレオチドの全てのヌクレオチドがＲＮＡからなるＣＴ−１０６／ＣＴ−０４１の組み合わせからなる２本鎖ポリヌクレオチド（以下、２本鎖ポリヌクレオチドは、センス鎖、アンチセンス鎖の組み合わせのみで表すこともある。すなわち、例えば、ＣＴ−１０６／ＣＴ−０４１の組み合わせからなる２本鎖ポリヌクレオチドは、単に、「ＣＴ−１０６／ＣＴ−０４１」とも表す。）及び、２本鎖ポリヌクレオチドを構成するＲＮＡの一部又は全てをＤＮＡに置換した２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０４／ＣＴ−１１０、ＣＴ−１０５／ＣＴ−１１１、ＣＴ−１０５／ＣＴ−０４１、ＣＴ−１０６／ＣＴ−１１１について実験を行った。これらの２本鎖ポリヌクレオチドの構造は図１に示している。【０２２５】
図３に示すように、ＣＴ−１０６／ＣＴ−０４１は、ヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。一方、ＣＴ−１０４／ＣＴ−１１０、ＣＴ−１０５／ＣＴ−１１１，  ＣＴ−１０５／ＣＴ−０４１、ＣＴ−１０６／ＣＴ−１１１は、β−カテニン遺伝子の発現を抑制しないか、わずかに抑制していた。これらのことから、２本鎖ポリヌクレオチドのセンス鎖あるいはアンチセンス鎖の一方の鎖、両方の鎖、センス鎖の３’側あるいはアンチセンス鎖の５’側をＤＮＡに置き換えると、遺伝子の発現を強く抑制する作用が失われることが明らかとなった。この結果は、既に報告されている結果（ＥＭＢＯ  Ｊ．，  ２０，ｐ．６８７７−６８８８（２００１）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ３０，  ｐ．１７５７−１７６６（２００２）、ＲＮＡ，９，ｐ．１０３４−１０４８，（２００３））とほぼ一致していた。【０２２６】
（ｂ）２本鎖ポリヌクレオチドの遺伝子抑制活性解析１
ＲＮＡを１つおきに２’−Ｏ−メチルＲＮＡに置き換え、ｏｖｅｒｈａｎｇ部分はＤＮＡとしたＣＴ−００１／ＣＴ−００５（図２参照。）は、全てのヌクレオチドがＲＮＡからなるＣＴ−１０６／ＣＴ−０４１と同程度にヒトβ−カテニン遺伝子の発現を抑制していた（図３）。以後の実験では、ＣＴ−００１／ＣＴ−００５を、対照として利用した。【０２２７】
ＣＴ−００１／ＣＴ−００５のＲＮＡを末端から部分的にまたはすべてＤＮＡに置き換えた２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２、ＣＴ−０９５／ＣＴ−０９６、ＣＴ−０９７／ＣＴ−０９８及び、ＣＴ−０９９／ＣＴ−１００（構造は図４参照。）の遺伝子発現抑制活性を調べた。【０２２８】
図５に示すように、ＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２、ＣＴ−０９５／ＣＴ−０９６、ＣＴ−０９７／ＣＴ−０９８、ＣＴ−０９９／ＣＴ−１００は、ヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。特にＣＴ−０９５／ＣＴ−０９６、ＣＴ−０９７／ＣＴ−０９８、ＣＴ−０９９／ＣＴ−１００は、ＣＴ−００１／ＣＴ−００５と同程度に遺伝子の発現を抑制していた。このことは、２’−Ｏ−メチルＲＮＡまたはＤＮＡを１つおきに配置し、ＲＮＡを部分的に有している（またはＲＮＡを有していない場合もある）２本鎖ポリヌクレオチドが強い遺伝子の発現抑制活性を有することを示す。【０２２９】
（ｃ）２本鎖ポリヌクレオチドの遺伝子抑制活性解析２
２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２、ＣＴ−０９７／ＣＴ−０９２とＣＴ−０９１／ＣＴ−０９８（図６参照。）についての実験結果を図１０に示す。【０２３０】
２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−０９７／ＣＴ−０９２とＣＴ−０９１／ＣＴ−０９８は、ともにβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制した。特にＣＴ−０９７／ＣＴ−０９２は、２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−０９１／ＣＴ−０９８よりも強く遺伝子の発現を抑制し、ＣＴ−００１／ＣＴ−００５に匹敵した。これらのことから、ＣＴ−０９７／ＣＴ−０９２に見られるように、２本鎖ポリヌクレオチドのセンス鎖の中央部以外を、２’−Ｏ−メチルＲＮＡまたはＤＮＡに置き換えても強い遺伝子発現抑制活性を保持することができることが明らかになった。【０２３１】
（ｄ）２本鎖ポリヌクレオチドの遺伝子抑制活性解析３
２本鎖ポリヌクレオチドのセンス鎖の中央部以外は、２’−Ｏ−メチルＲＮＡまたはＤＮＡであり、センス鎖の中央部を２’−Ｏ−メチルＲＮＡに置き換えた２本鎖ポリヌクレオチド、ＣＴ−１２７／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１２８／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１２９／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１０１／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１３０／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１３１／ＣＴ−０９２（図７参照。）についての結果を図１０、１１に示す。【０２３２】
２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１２７／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１２８／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１２９／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１０１／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１３０／ＣＴ−０９２及びＣＴ−１３１／ＣＴ−０９２は、β−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。特にＣＴ−１３０／ＣＴ−０９２は、２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２よりも強い遺伝子発現抑制活性を示し、ＣＴ−００１／ＣＴ−００５に匹敵する活性であった。【０２３３】
（ｅ）２本鎖ポリヌクレオチドの遺伝子抑制活性解析４
２本鎖ポリヌクレオチドのセンス鎖の中央部以外は、２’−Ｏ−メチルＲＮＡまたはＤＮＡであって、さらにセンス鎖の中央部にＥＮＡを導入した２本鎖ポリヌクレオチド、ＣＴ−１１２／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１１４／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１３２／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１３３／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１３４／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１１５／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１３５／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１３７／ＣＴ−０９２（図８参照。）、ＣＴ−１３６／ＣＴ−０９２及びＣＴ−１３８／ＣＴ−０９２（図１６参照。）についての結果を図１１、図１２、及び図１７に示す。【０２３４】
２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１１４／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１３２／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１３３／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１３４／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１１５／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１３５／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１３７／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１３６／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１３８／ＣＴ−０９２は、β−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。特にＣＴ−１１４／ＣＴ−０９２は、図１０記載の２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２よりも強く、β−カテニン遺伝子の発現を抑制し、図１０記載の２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−００１／ＣＴ−００５に匹敵した。【０２３５】
（ｆ）２本鎖ポリヌクレオチドの遺伝子抑制活性解析５
２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２内の一部分をＲＮＡ、ＥＮＡまたは２’−Ｏ−メチルＲＮＡに置き換えた２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０２／ＣＴ−０９２、ＣＴ−０９１／ＣＴ−１０７、ＣＴ−０９１／ＣＴ−１０８（図２参照。）、ＣＴ−０９１／ＣＴ−１１６、ＣＴ−０９１／ＣＴ−１１７、ＣＴ−０９１／ＣＴ−１１８（図１３参照。）、ＣＴ−１１３／ＣＴ−０９２、ＣＴ−１１５／ＣＴ−１１８（図１４参照）のヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性の解析結果を図３及び図１５に示す。全ての２本鎖ポリヌクレオチドがＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２と同程度のヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性を示した。【０２３６】
（ｇ）２本鎖ポリヌクレオチドのｏｖｅｒｈａｎｇ部分の有無による活性の比較
２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２及びそのｏｖｅｒｈａｎｇ部分を有していない２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−１０９（図２参照。）の遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。図３に示すように、ｏｖｅｒｈａｎｇ部分を有しているＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２の方がｏｖｅｒｈａｎｇ持たないＣＴ−１０３／ＣＴ−１０９よりもヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。このことは、２本鎖ポリヌクレオチドの設計においてｏｖｅｒｈａｎｇが重要であることを示している。【０２３７】
（ｈ）２本鎖ポリヌクレオチドの遺伝子抑制活性解析６
２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２、ＤＮＡ及び２’−Ｏ−メチルＲＮＡの配列の順番を変えたＣＴ−１１９／ＣＴ−１２０、さらに、ＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２及びＣＴ−１１９／ＣＴ−１２０のセンス鎖、アンチセンス鎖を組み替えたＣＴ−１１９／ＣＴ−０９２、ＣＴ−０９１／ＣＴ−１２０（図９参照。）のヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性を図１２に示す。ＣＴ−１１９／ＣＴ−１２０、ＣＴ−１１９／ＣＴ−０９２及びＣＴ−０９１／ＣＴ−１２０は、β−カテニン遺伝子の発現を抑制したが、ＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２（図１０参照。）の方がより強く遺伝子の発現を抑制していた。【０２３８】
（試験例２）
試験例１と同様の方法で、以下のように２本鎖ポリヌクレオチドの遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。
（ａ）２本鎖ポリヌクレオチドのｏｖｅｒｈａｎｇ部分及び５’−リン酸基の有無による活性の比較
試験例１と同様の方法で２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２、両鎖の３’末端にｏｖｅｒｈａｎｇ部分を有していない２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−１０９、アンチセンス鎖のみ３’末端にｏｖｅｒｈａｎｇ部分を有するＣＴ−１０３／ＣＴ−０９２、センス鎖のみ３’末端にｏｖｅｒｈａｎｇ部分を有するＣＴ−０９１／ＣＴ−１０９、両鎖にｏｖｅｒｈａｎｇ部分を有しアンチセンス鎖５’末端にリン酸基を有する２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−０９１／ＣＴ−１４９、及び、アンチセンス鎖の３’末端にｏｖｅｒｈａｎｇ部分を有しさらに５’末端リン酸基を有する２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−０９１／ＣＴ−１４９（図２２参照。）の遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。【０２３９】
図２３に示すように、アンチセンス鎖の３’末端にｏｖｅｒｈａｎｇ部分を有しているＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２、及び、ＣＴ−１０３／ＣＴ−０９２の方がアンチセンス鎖の３’末端にｏｖｅｒｈａｎｇ持たないＣＴ−１０３／ＣＴ−１０９、及び、ＣＴ−０９１／ＣＴ−１０９よりもヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。また、アンチセンス鎖５’末端にリン酸基を有する２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−０９１／ＣＴ−１４９は、５’末端リン酸基を有していない２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２よりもヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。アンチセンス鎖の５’末端にリン酸基を有するＣＴ−１０３／ＣＴ−１４９は、５’末端リン酸基を有していない２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−０９２よりもヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。このことは、２本鎖ポリヌクレオチドの設計においてアンチセンス鎖の５’末端リン酸基、及び、アンチセンス鎖の３’末端のｏｖｅｒｈａｎｇが重要であることを示している。【０２４０】
（ｂ）２本鎖ポリヌクレオチドのアンチセンス鎖３’−ｏｖｅｒｈａｎｇ部分のヌクレオチドの違いによる活性の比較
アンチセンス鎖の５’末端リン酸基を有する２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−１４９は、アンチセンス鎖（ＣＴ−１４９）３’−ｏｖｅｒｈａｎｇ部分にＤＮＡのＴＴ２量体の配列を有する。アンチセンス鎖（ＣＴ−１４９）３’−ｏｖｅｒｈａｎｇ部分のＤＮＡチミジン２量体を、ウリジン、チミジン、または２’−Ｏ−メチルウリジンで組み合わせうる２量体に変換した２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−１５５、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１５６、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１５７、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１５８、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１５９、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１６０、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１６１、及び、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１６２（図２４参照。）の遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。【０２４１】
図２５及び２６に示すように、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１５５、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１５６、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１５７、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１５８、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１５９、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１６０、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１６１、及び、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１６２は、ヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。特に３’末端がウリジン、または２’−Ｏ−メチルウリジンであるＣＴ−１０３／ＣＴ−１５７、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１５８、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１５９、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１６０、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１６１、及び、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１６２は、ヒトβ−カテニン遺伝子の発現をより強く抑制していた。【０２４２】
（ｃ）センス鎖の３’−または、５’−末端から短くした２本鎖ポリヌクレオチドの活性の比較
２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−１４９のセンス鎖の３’−末端から１乃至３ヌクレオチドを欠損させた２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／ＣＴ−１４９、ＣＴ−１７０／ＣＴ−１４９、及びＣＴ−１７１／ＣＴ−１４９（図２７参照。）の遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。図２９に示すように、センス鎖の３’−末端から１ヌクレオチドを欠損させた２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／ＣＴ−１４９は、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１４９と同様にヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。しかしながら、センス鎖の３’−末端から２乃至３ヌクレオチドを欠損させた２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１７０／ＣＴ−１４９、及びＣＴ−１７１／ＣＴ−１４９は、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１４９と比較してヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が低下した。【０２４３】
２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−１４９のセンス鎖の５’−末端から１乃至３ヌクレオチドを欠損させた２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１７２／ＣＴ−１４９、ＣＴ−１７３／ＣＴ−１４９、及びＣＴ−１７４／ＣＴ−１４９（図２７参照。）の遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。図２９、３０に示すように、センス鎖の５’−末端から１ヌクレオチドを欠損させた２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１７２／ＣＴ−１４９は、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１４９と同様にヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。しかしながら、センス鎖の５’−末端から２乃至３ヌクレオチドを欠損させた２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１７３／ＣＴ−１４９、及びＣＴ−１７４／ＣＴ−１４９は、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１４９と比較してヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が低下した。【０２４４】
２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−１４９のセンス鎖の３’−末端及び５’−末端から１または２ヌクレオチドを欠損させた２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１７５／ＣＴ−１４９、ＣＴ−１７６／ＣＴ−１４９、及びＣＴ−１７７／ＣＴ−１４９（図２８参照。）の遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。図２９，３０に示すように、センス鎖の３’−末端及び５’−末端から１ヌクレオチドずつを欠損させた２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１７５／ＣＴ−１４９は、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１４９と同様にヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。しかしながら、センス鎖の３’−末端及び５’−末端から１または２ヌクレオチドを欠損させた２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１７６／ＣＴ−１４９、及びＣＴ−１７７／ＣＴ−１４９は、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１４９と比較してヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性が低下した。【０２４５】
このことから、２本鎖ポリヌクレオチドの設計においてセンス鎖の３’−末端または５’−末端のいずれかから１ヌクレオチド、または両末端から１ヌクレオチドずつを欠損させた１８または１７塩基対であっても遺伝子発現抑制活性を示すことが明らかになった。【０２４６】
（ｄ）２本鎖ポリヌクレオチドのアンチセンス鎖３’−ｏｖｅｒｈａｎｇ部分のヌクレオチド配列の違いによる活性の比較
アンチセンス鎖の５’末端リン酸基を有する２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−１５７は、アンチセンス鎖（ＣＴ−１５７）の３’−ｏｖｅｒｈａｎｇ部分にチミジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる２量体の配列を有する。アンチセンス鎖（ＣＴ−１５７）の３’−ｏｖｅｒｈａｎｇ部分２量体の配列を変換した２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−２０４、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２０５、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２０６、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２０７、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２０８、及び、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２０９（図３１参照。）の遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。【０２４７】
図３２及び３３に示すように、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２０４、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２０５、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２０６、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２０７、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２０８、及び、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２０９は、ヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。【０２４８】
（ｅ）２本鎖ポリヌクレオチドのアンチセンス鎖５’−末端のヌクレオチド配列の違いによる活性の比較
２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−１５７は、アンチセンス鎖（ＣＴ−１５７）の５’末端に２’−Ｏ−メチルウリジンを有する。アンチセンス鎖（ＣＴ−１５７）５’末端の２’−Ｏ−メチルウリジンの塩基部を変換した２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−２２１、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２２２、及び、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２２３（図３４参照。）の遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。【０２４９】
図３５に示すように、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２２１、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２２２、及び、ＣＴ−１０３／ＣＴ−２２３は、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１５７と同程度にヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。【０２５０】
さらに、２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−１５７のセンス鎖の３’末端の１ヌクレオチドを欠損したＣＴ−１６９／ＣＴ−１５７（図３４参照。）は、２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−１５７と同程度にヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた（図３５参照。）。２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／ＣＴ−１５７のアンチセンス鎖（ＣＴ−１５７）５’末端の２’−Ｏ−メチルウリジンの塩基部を変換した２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／ＣＴ−２２１、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２２２、及び、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２２３（図３４参照。）の遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。【０２５１】
図３５に示すように、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２２１、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２２２、及び、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２２３は、ＣＴ−１６９／ＣＴ−１５７と同程度にヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。【０２５２】
（ｆ）１８塩基対からなる２本鎖ポリヌクレオチドの遺伝子抑制活性
アンチセンス鎖の５’末端リン酸基を有する２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−１５７は、１９塩基対の２本鎖構造を有する。センス鎖の５’末端及びアンチセンス３’末端から１塩基対を欠損させた２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１７２／ＣＴ−２０２、及び、センス鎖の３’末端及びアンチセンス鎖の５’末端から１塩基対を欠損させた２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／ＣＴ−２０３（図３６参照。）の遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。【０２５３】
図３７に示すように、ＣＴ−１７２／ＣＴ−２０２、及び、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２０３は、ヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。【０２５４】
（ｇ）非対称２本鎖ポリヌクレオチドのｏｆｆ−ｔａｒｇｅｔ回避
アンチセンス鎖の５’末端リン酸基を有する２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−１５７は、末端の構造に着目すると、センス鎖−アンチセンス鎖が非対称になっている。即ち、２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／ＣＴ−１５７の場合、アンチセンス鎖は、５’末端にリン酸基を有し、３’末端ｏｖｅｒｈａｎｇ構造を有しているが、センス鎖では、５’末端にリン酸基を有さず、３’末端はｏｖｅｒｈａｎｇ構造を有さない。そこで、センス鎖に５’末端にリン酸基、及び、３’末端ｏｖｅｒｈａｎｇ構造を有するようにし、アンチセンス鎖に５’末端にリン酸基、及び、３’末端ｏｖｅｒｈａｎｇ構造を持たないようにした２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−２１０／ＣＴ−２１１を合成し（図３８参照。）、５’末端にリン酸基、及び、３’末端ｏｖｅｒｈａｎｇ構造を持たないアンチセンス配列による遺伝子発現抑制活性を調べた。図３９に示すように、ＣＴ−２１０／ＣＴ−２１１は、ＣＴ−１０３／ＣＴ−１５７の場合と比較して若干の活性低下にとどまった。【０２５５】
２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／ＣＴ−１５７の場合、アンチセンス鎖は、５’末端にリン酸基、及び、３’末端ｏｖｅｒｈａｎｇ構造を有しているが、センス鎖には、それらを持たない。さらに、センス鎖（ＣＴ−１６９）の３’末端から１ヌクレオチド欠損しているために１８塩基対になっている。ＣＴ−１０３／ＣＴ−１５７の場合と同様に、センス鎖に５’末端にリン酸基、及び、３’末端ｏｖｅｒｈａｎｇ構造を有するようにし、アンチセンス鎖に５’末端にリン酸基、及び、３’末端ｏｖｅｒｈａｎｇ構造を持たないようにした２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−２１０／ＣＴ−２１２を合成し（図３８参照。）、５’末端にリン酸基、及び、３’末端ｏｖｅｒｈａｎｇ構造を持たないアンチセンス配列による遺伝子発現抑制活性をＣＴ−１６９／ＣＴ−１５７と比較した。【０２５６】
図３９に示すように、ＣＴ−２１０／ＣＴ−２１２は、ＣＴ−１６９／ＣＴ−１５７の場合と比較して著しく活性低下した。このことは、一方の鎖のみが５’末端にリン酸基、及び、３’末端ｏｖｅｒｈａｎｇ構造を持ち、他方の鎖は１ヌクレオチドを短くした、１８塩基対からなる２本鎖ポリヌクレオチドのうち、５’末端にリン酸基、及び、３’末端ｏｖｅｒｈａｎｇ構造を有するポリヌクレオチド鎖による遺伝子発現抑制活性が認められるが、５’末端にリン酸基、及び、３’末端ｏｖｅｒｈａｎｇ構造を持たないポリヌクレオチド鎖による遺伝子発現抑制活性が認められないことを示している。【０２５７】
（ｈ）非対称２本鎖ポリヌクレオチドのアンチセンス鎖５’−末端ヌクレオチドをＤＮＡに置換した場合の活性の比較
非対称２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／ＣＴ−１５７は、アンチセンス鎖（ＣＴ−１５７）の５’末端に２’−Ｏ−メチルウリジンを有する。アンチセンス鎖（ＣＴ−１５７）５’末端の２’−Ｏ−メチルウリジンをＤＮＡに変換した２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／ＣＴ−２４３、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２４４、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２４５、及び、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２２６（図４０参照。）の遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。【０２５８】
図４１に示すように、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２４３、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２４４、及び、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２４５は、ＣＴ−１６９／ＣＴ−１５７、及び、ＣＴ−００１／ＣＴ−００５と同程度にヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。また、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２４６は、ＣＴ−１６９／ＣＴ−１５７、及び、ＣＴ−００１／ＣＴ−００５よりも強くヒトβ−カテニン遺伝子の発現を抑制していた。【０２５９】
（ｉ）非対称２本鎖ポリヌクレオチドのアンチセンス鎖３’−ｏｖｅｒｈａｎｇ部分のヌクレオチド配列の違いによる活性の比較
非対称２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／ＣＴ−１５７は、アンチセンス鎖の３’−ｏｖｅｒｈａｎｇ部分にチミジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる２量体の配列を有する。アンチセンス鎖（ＣＴ−１５７）３’−ｏｖｅｒｈａｎｇ部分２量体の配列を変換した２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／ＣＴ−２０５、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２４７、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２４８、及び、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２４９（図４２参照。）の遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。【０２６０】
図４３に示すように、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２０５、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２４７、及び、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２４９は、ＣＴ−１６９／ＣＴ−１５７、及び、ＣＴ−００１／ＣＴ−００５と同程度にヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。また、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２４８は、ＣＴ−１６９／ＣＴ−１５７、及び、ＣＴ−００１／ＣＴ−００５よりも強くヒトβ−カテニン遺伝子の発現を抑制していた。【０２６１】
（ｊ）非対称２本鎖ポリヌクレオチドのアンチセンス鎖５’−末端ヌクレオチドをＤＮＡに置換し、３’−ｏｖｅｒｈａｎｇ部分のヌクレオチド配列の違いによる活性の比較
非対称２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／ＣＴ−２４６は、アンチセンス鎖（ＣＴ−２４６）の５’末端にチミジンを有する。アンチセンス鎖（ＣＴ−２４６）３’−ｏｖｅｒｈａｎｇ部分２量体の配列を変換した２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／ＣＴ−２５３、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２５４、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２５５、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２５６、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２５７、及び、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２５８（図４４参照。）の遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。【０２６２】
図４５に示すように、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２５３、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２５４、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２５５、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２５６、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２５７、及び、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２５８は、ＣＴ−００１／ＣＴ−００５と同程度またはそれ以上にヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。【０２６３】
また、アンチセンス鎖（ＣＴ−２４６）の５’−末端ヌクレオチドをＤＮＡを２’−ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ、２’−ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ、或いは、５−ｍｅｔｈｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅに置換し、３’−ｏｖｅｒｈａｎｇ部分２量体の配列を変換した２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／ＣＴ−２６４、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２６５、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２６６、及び、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２６７（図４６参照。）の遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。【０２６４】
図４７に示すように、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２６４、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２６５、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２６６、及び、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２６７は、ＣＴ−００１／ＣＴ−００５と同程度またはそれ以上にヒトβ−カテニン遺伝子の発現を強く抑制していた。【０２６５】
（試験例３）末梢血単核球に対するｓｉＲＮＡによるＩＦＮ−α産生試験
（ａ）トランスフェクション試薬を用いない場合
健常人の末梢血単核球をＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離により調製した。調製したヒト末梢血単核球（２×１０５  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）は９６穴プレートを用いて２本鎖ポリヌクレオチド存在下で２４時間培養し、回収した上清中のＩＦＮ−αをＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（Ｈｕｍａｎ  ＩＦＮ−α  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ、Ｐｅｓｔｋａ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．）で測定した。各種２本鎖ポリヌクレオチドは、ＰｏｌｙＩ：Ｃ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）：２μｇ／ｍｌ、ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）：１０−５Ｍ、ｓｓＲＮＡ４０（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）：２μｇ／ｍｌ、ｓｓＲＮＡ４１（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）：２μｇ／ｍｌ、ＯＤＮ  ２３３６（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）：１０−５  Ｍ、ＯＤＮ  ２３３６  ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）：１０−５  Ｍ、未修飾ｓｉＲＮＡ  ＣＴ−１０６／０４１、２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／１５７、２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／１５７：１０−７−１０−５  Ｍの溶液を用いた。【０２６６】
図４８に示すように、未修飾ｓｉＲＮＡであるＣＴ−１０６／０４１は、１０−５  ＭにおいてＩＦＮ−α産生が認められたが、２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／１５７、及びＣＴ−１６９／１５７は、ＩＦＮ−α産生が認められなかった。この結果は２本鎖ポリヌクレオチドが、ＩＦＮ−α産生を低減し、より副作用の少ないポリヌクレオチドを提供できることを示している。【０２６７】
（ｂ）トランスフェクション試薬を用いた場合
健常人の末梢血単核球をＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離により調製した。調製したヒト末梢血単核球（１．１×１０６  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）は２４穴プレートを用いて２本鎖ポリヌクレオチド存在下で２４時間培養し、回収した上清中のＩＦＮ−αをＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（Ｈｕｍａｎ  ＩＦＮ−α  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ、Ｐｅｓｔｋａ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．）で測定した。トランスフェクション試薬を用いる場合は、実施例及び参考例に記載の２本鎖ポリヌクレオチド（ＣＴ−１０３／１５７及びＣＴ−１６９／１５７）及び（ＣＴ−１０６／０４１）を予めＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）と混和したものを細胞培養液に添加した。標準化合物は、ＰｏｌｙＩ：Ｃ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）：２μｇ／ｍｌ、ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）：１０−５Ｍ、ｓｓＲＮＡ４０（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）：２μｇ／ｍｌ、ｓｓＲＮＡ４１（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）：２μｇ／ｍｌ、ＯＤＮ  ２３３６（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）：１０−５Ｍ、ＯＤＮ  ２３３６  ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）：１０−５Ｍの溶液を、トランスフェクション試薬を用いずに使用した。未修飾ｓｉＲＮＡ  ＣＴ−１０６／０４１・２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／１５７・２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／１５７：１０−７Ｍの溶液としてトランスフェクション試薬を用いて試験を行った。【０２６８】
図４９に示すように、未修飾ｓｉＲＮＡであるＣＴ−１０６／０４１は、明らかなＩＦＮ−α産生が認められたが、２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１０３／１５７、及びＣＴ−１６９／１５７は、ＩＦＮ−α産生が認められなかった。本実施例のポリヌクレオチドは、ＩＦＮ−α産生を低減し、より副作用の少ないポリヌクレオチドを提供できる可能性を示している。【０２６９】
（試験例４）ＲＮａｓｅに対する安定性試験
２本鎖ポリヌクレオチド、ＣＴ−１０６／ＣＴ−０４１、ＣＴ−１０５／ＣＴ−１１１、ＣＴ−００１／ＣＴ−００５、ＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２、ＣＴ−０９５／ＣＴ−０９６、ＣＴ−０９７／ＣＴ−０９８、ＣＴ−０９９／ＣＴ−１００、ＣＴ−００１／ＣＴ−０９２及びＣＴ−１０４／ＣＴ−１１０（図１８参照。）のそれぞれ５０ｐｍｏｌをＲＮａｓｅ  Ｏｎｅ  ｂｕｆｆｅｒ  （１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５，  ５ｍＭ  ＥＤＴＡ，  ２００ｍＭ  ＤＴＴ，  ２００ｍＭ  ｓｏｄｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ，プロメガ）で総容量を１４．５μＬとし、５Ｕ  ＲＮａｓｅ  Ｏｎｅ（０．５μＬ、プロメガ）を加え、３７℃で処理した。【０２７０】
３時間及び２０時間経過後に反応液より４μＬを取り、ｌｏａｄｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  （５０％  ｇｌｙｃｅｒｏｌ，  １ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ８．０，  ０．２５％  ｂｒｏｍｏｐｈｅｎｏｌ  ｂｌｕｅ，  ０．２５％  ｘｙｌｅｎｅ  ｃｙａｎｏｌ  ＦＦ）  １．０μＬを加え、分析するまで−２０℃に保存した。【０２７１】
ＲＮａｓｅ  Ｏｎｅによる２本鎖ポリヌクレオチドの分解反応の解析は、２０％ポリアクリルアミド電気泳動（１ｘ  Ｔｒｉｓ−Ｂｏｒａｔｅ−ＥＤＴＡ，  ２００Ｖ、２時間）を用い、ＳＹＢＲ  Ｇｏｌｄ（インビトロジェン）で染色した。２本鎖核酸のサイズを示すマーカーは、タカラバイオ社製ｓｉＲＮＡ  Ｌａｄｄｅｒ  Ｍａｒｋｅｒｓを用いた。染色したゲルはＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ＦＸ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｉｍａｇｅｒ  ｓｙｓｔｅｍ  （Ｂｉｏ−Ｒａｄ製）を用いて可視化した。【０２７２】
２本鎖ポリヌクレオチドを構成するヌクレオチドが全てＤＮＡからなるＣＴ−１０５／  ＣＴ−１１１は、ＲＮａｓｅに全く分解されなかった（図１９）。しかしながら、ＣＴ−１０５／  ＣＴ−１１１は試験例１に示したようにβ−カテニンの発現を抑制しない。【０２７３】
試験例１でβ−カテニンの発現抑制を示した、２本鎖ポリヌクレオチドを構成するヌクレオチドの全てがＲＮＡからなるＣＴ−１０６／ＣＴ−０４１及び２本鎖領域がＲＮＡまたは２’−Ｏ−メチルＲＮＡからなるＣＴ−００１／００５は、ＲＮａｓｅで容易に分解された（図１９参照）。【０２７４】
一方、ＷＯ２００３／０４４１８８で用いられている修飾方法である、センス鎖の３’末端付近及びアンチセンス鎖の５’末端付近がＤＮＡである２本鎖ＲＮＡ（ＣＴ−１０４／ＣＴ−１１０）も、ＲＮａｓｅで簡単に分解された。更に、ＷＯ２００４／０４４１３６で用いられている２本鎖領域の修飾方法である、センス鎖がＲＮＡまたは２’−Ｏ−メチルＲＮＡで構成され、アンチセンス鎖がＤＮＡまたは２’−Ｏ−メチルＲＮＡで構成される２本鎖核酸（ＣＴ−００１／ＣＴ−０９２）も、ＲＮａｓｅで簡単に分解された。【０２７５】
それらと比較して、ＣＴ−００１／ＣＴ−００５のＲＮＡを部分的にＤＮＡに置き換えたものに相当するＣＴ−０９９／ＣＴ−１００は、わずかにＲＮａｓｅに分解されたに過ぎず、さらにＤＮＡに置き換えたＣＴ−０９５／ＣＴ−０９６，  ＣＴ−０９７／ＣＴ−０９８、及び完全にＲＮＡをＤＮＡに置き換えたＣＴ−０９１／ＣＴ−０９２は、ＲＮａｓｅに全く分解されなかった。【０２７６】
（試験例５）
試験例１と同様の方法で、以下のように２本鎖ポリヌクレオチドの遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。
（ａ）ＤＮＡ及び２’−Ｏ−メチルＲＮＡ修飾位置の異なる非対称２本鎖ポリヌクレオチドによる活性の比較
２本鎖ポリヌクレオチドＣＴ−１６９／ＣＴ−１５７、ＤＮＡ及び２’−Ｏ−メチルＲＮＡ修飾の順番を変えたＣＴ−２８８／ＣＴ−２８９、さらに、ＣＴ−１６９／ＣＴ−１５７及びＣＴ−２８８／ＣＴ−２８９のセンス鎖、アンチセンス鎖を組み替えたＣＴ−２８８／ＣＴ−１５７、ＣＴ−１６９／ＣＴ−２８９（図５０参照。）のヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性を図５１に示す。ＣＴ−２８８／ＣＴ−２８９及びＣＴ−１６９／ＣＴ−２８９よりも、ＣＴ−１６９／ＣＴ−１５７及びＣＴ−２８８／ＣＴ−１５７の方がより強く遺伝子の発現を抑制していた。
（ｂ）ヒトβ−カテニン遺伝子の別の配列を標的とした２本鎖ポリヌクレオチドの遺伝子発現抑制活性
試験例１及び２で用いた標的配列とは異なる配列をヒトβ−カテニン遺伝子内から選択し、２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトβ−カテニン遺伝子の発現抑制活性を検討した。３’末端のｏｖｅｒｈａｎｇ部分がＴＴであって、残り全てのヌクレオチドがＲＮＡからなるＣＴ−１６５／ＣＴ−１６６（図５２参照。）は、図５３に示すように、ヒトβ−カテニン遺伝子の発現を抑制していた。２本鎖ポリヌクレオチドを２’−Ｏ−メチルＲＮＡまたはＤＮＡとしたＣＴ−２７８／ＣＴ−２７９、ＣＴ−２７８／ＣＴ−２８０及びＣＴ−２７８／ＣＴ−２８１は、ＣＴ−１６５／ＣＴ−１６６と同様にヒトβ−カテニン遺伝子の発現を抑制した。
（試験例６）
以下のように２本鎖ポリヌクレオチドによるＤＤＸ３遺伝子発現抑制活性の強さを比較した。【０２７７】
（１）トランスフェクション
ヒト肺癌ＮＣＩ−Ｈ３２２細胞株（ヒト細気管支肺胞上皮癌由来）を、１０％  Ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍを含むＲＰＭＩ１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）中に２０００００ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に調製した。そして、９６穴平底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）に１００μＬずつ播種し、３７℃、５．０％炭酸ガス下で１日間培養した。リポフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を０．３μＬ、２本鎖ポリヌクレオチド溶液を最終濃度が、５ｎＭとなるようにＲＰＭＩ１６４０培地中で混合し、２０分室温で静置した。各ウェルに混合液を添加して、さらに３日間培養を継続した。【０２７８】
（２）リアルタイムＰＣＲ
トランスフェクション後、ウェルより培養上清を除いて、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｃｒｏ  ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）でｍＲＮＡを抽出した。リアルタイムＰＣＲのためにＤＤＸ３に対するＴａｑＭａｎプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）と、内部標準として、β―アクチンに対するＴａｑＭａｎプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）、それからＰＣＲに必要な薬剤を含むリアルタイムＰＣＲキット（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて次のようにｍＲＮＡの定量を行った。９６穴ＰＣＲプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）１ウェルあたり、リアルタイムＰＣＲキットに含まれるＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  Ｐｒｏｂｅ  ＲＴ−ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘを１０μＬ、ＲＮａｓｅ―Ｆｒｅｅ  Ｗａｔｅｒを４．８μＬ、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  ＲＴ  Ｍｉｘを０．２μＬ注入した。さらにＴａｑＭａｎプローブを１μＬ、抽出したｍＲＮＡ溶液を４μＬ添加して総量を２０μＬとし、Ｍｘ３０００Ｐ（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ社製）にセットし、以下の条件でＰＣＲを実施した。
逆転写反応  ５０℃、３０分間
ＰＣＲ初期活性化  ９５℃、１５分間
ＰＣＲ  ９４℃、１５秒間
６０℃、１分間
このＰＣＲサイクルは４８回繰り返した。検量線は、リポフェクション試薬のみで処理した細胞から抽出したｍＲＮＡをＵＶ定量したもので作製した。検量線を元に、各トランスフェクタントのＤＤＸ３とβ―アクチンを定量し、ＤＤＸ３量をβ―アクチン量で割った商をグラフにプロットした。リアルタイムＰＣＲはＮ＝３で実施し、グラフにはＳＥを示した（２本鎖ポリヌクレオチドの構造及びそのヌクレオチド配列は図１、図２、図４、図６、図７、図８、図９、図１３、図１４、図１６、図１８、図２０、図２１に示している。）
（３）リアルタイムＰＣＲ解析結果
ヒトＤＤＸ３遺伝子に対する２本鎖天然型ポリヌクレオチド（ＤＤＸ３  ｓｉＲＮＡ＃５）２本鎖ポリヌクレオチドによるヒトＤＤＸ３遺伝子の発現抑制活性をリアルタイムＰＣＲにより検討した。２本鎖ポリヌクレオチドを２’−Ｏ−メチルＲＮＡまたはＤＮＡとしたＤＤ−０１６／ＤＤ−０１７、ＤＤ−０２２／ＤＤ−０１７、ＤＤ−０２２／ＤＤ−０２３及びＤＤ−０２２／ＤＤ−０２４（図５４参照。）は、図５６に示すように、２本鎖天然型ポリヌクレオチド（ＤＤＸ３  ｓｉＲＮＡ＃５）と同程度にヒトＤＤＸ３遺伝子の発現を抑制した。
【産業上の利用可能性】
【０２７９】
本発明により、ＲＮＡ分解酵素に対して安定で、しかも安価な遺伝子干渉作用を有する２本鎖ポリヌクレオチドを提供することができた。【０２８０】
該２本鎖ポリヌクレオチドは遺伝子の機能解析、医薬品等に利用することが可能であるが、本２本鎖ポリヌクレオチドが利用できる限りにおいてその産業分野は制限されない。
【図１】
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【図２】
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【図４】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１６】
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【図１８】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２４】
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【図２７】
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【図２８】
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【図３１】
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【図３４】
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【図３６】
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【図３８】
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【図４０】
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【図４２】
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【図４４】
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【図４６】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５２】
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【図５４】
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【図５５】
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【図３】
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【図５】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１５】
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【図１７】
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【図１９】
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【図２３】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３５】
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【図３７】
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【図３９】
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【図４１】
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【図４３】
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【図４５】
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【図４７】
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【図５１】
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【図５３】
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【図５６】
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【配列表】
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