(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）１００ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ−１３抗体ＩＭＡ−６３８； 
（ｂ）１０ｍＭのヒスチジン；
（ｃ）５％のスクロース；
（ｄ）０．０１％のＴｗｅｅｎ−８０；および
（ｅ）０．１％から２％のアルギニン
を含み、ｐＨが６．０である液体製剤。
【請求項２】
前記製剤が、さらに、１％〜１０％のソルビトール、０．１％〜２％のグリシン、５ｍＭ〜１５０ｍＭのメチオニン、および５ｍＭ〜１００ｍＭの塩化ナトリウムの少なくとも１つを含む請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
前記製剤が、さらに、第２抗体または該抗体の抗原結合性フラグメントを含み、前記第２抗体は、前記製剤の前記ＩＬ−１３抗体とは異なるエピトープ特異性を有する抗ＩＬ−１３抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗Ｃ５抗体、抗ＩＬ−４抗体、抗ＴＮＦ−α抗体、および抗ＩＬ−９抗体からなる群から選択される請求項１に記載の製剤。
【請求項４】
前記製剤が、さらに、抗ヒスタミン薬、抗炎症剤、長時間作用型気管支拡張薬（ＬＡＢＡ）、吸入コルチコステロイド薬（ＩＣＳ）、およびロイコトリエン阻害剤からなる群から選択された炎症性疾患を処置する場合に有効である第２の治療上または薬理学的に活性な薬剤を含む請求項１に記載の製剤。
【請求項５】
注入可能なシリンジであって、請求項１に記載の前記製剤の充填ずみ溶液を含むシリンジ。
【請求項６】
経鼻投与する装置であって、請求項１に記載の前記製剤および薬学的に容認できる分散剤を含む装置。
【請求項７】
経皮貼布であって、請求項１に記載の前記製剤を含み、薬学的に容認できる担体を任意に含む経皮貼布。
【請求項８】
静注バッグであって、請求項１に記載の前記製剤および任意に生理食塩水または５％デキストロースを含む静注バッグ。
【請求項９】
キットであって、請求項１に記載の前記製剤を含む少なくとも１つの容器および取扱い説明書を含むキット。
【請求項１０】
前記容器がガラスバイアルまたは注入可能なシリンジである請求項９に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００７年１月９日に出願された米国仮特許出願第６０／８７９，５００号の利益を主張する。米国仮特許出願第６０／８７９，５００号の内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
本出願は、抗体の分野、特に抗体の貯蔵に関する。
【背景技術】
【０００３】
抗体および抗体から導かれたたんぱく質には多くの用途がある。この種の用途における抗体の使用は、製剤中の抗体の貯蔵により促進され、該製剤は比較的単純な製剤を用いた多様な状態における抗体の安定性を助長する。製剤が治療に使われるならば、該製剤は、活性成分の活性を、容認できないほど喪失することなく貯蔵を可能にし、不活性凝集物などの望ましくない生成物の蓄積を最小限に抑制し、活性成分の適切な濃度に適応し、治療への応用に適合しない成分を含まないことが重要である。下流処理で使われるたんぱく質、例えば、１つの治療薬を作る別々の実体に結合される予定のたんぱく質を貯蔵している製剤は、この製造プロセスを妨げるであろう。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、抗ＩＬ−１３抗体を貯蔵する製剤に関する。これらの製剤は、例えば、医薬品として有効である。したがって、１つの態様では、本発明は、（ａ）抗ＩＬ−１３抗体、（ｂ）抗凍結剤、および（ｃ）該製剤のｐＨが約５．５〜６．５になるような緩衝液を含む抗ＩＬ−１３抗体製剤に関する。一部の実施形態では、該製剤は液状製剤、凍結乾燥製剤、再構成凍結乾燥製剤またはエアロゾル製剤である。特定の実施形態では、該製剤中の抗ＩＬ−１３の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約４５ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌ、または約５０ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌの範囲にある。該製剤の一部の実施態様では、抗ＩＬ−１３抗体はヒト化抗体（例えば、部分ヒト化抗体または完全ヒト化抗体）である。場合によっては、この抗体はカッパ軽鎖構築抗体である。一部の実施態様では、この抗体は、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、またはＩｇＧ４抗体である。特定の実施態様では、該製剤中の抗ＩＬ−１３抗体はモノクローナル抗体である。場合によっては、該製剤中の抗ＩＬ−１３抗体は、米国特許出願第１１／１４９，３０９号（米国特許出願公開第２００６００７３１４８号）、米国特許出願第１１／１５５，８４３号（米国特許出願公開第２００６００６３２２８号）、または国際公開第２００６／０８５９３８号に記載されている。具体的な実施態様では、抗ＩＬ−１３抗体はＩＭＡ−６３８（図３４を参照のこと）またはＩＭＡ−０２６（図３５を参照のこと）である。
【０００５】
該製剤の抗凍結剤は、例えば、約２．５％〜約１０％（重量／容量）のスクロースまたはトレハロースでよい。場合によっては、該製剤の抗凍結剤はヒスチジンではない。一部の実施態様では、該製剤の緩衝液は、約４ｍＭ〜約６０ｍＭのヒスチジン緩衝液、約５ｍＭ〜約２５ｍＭのコハク酸塩緩衝液、または約５ｍＭ〜約２５ｍＭの酢酸塩緩衝液である。該製剤の緩衝液のｐＨは、一般に、約５．０と７．０との間にある。一部の具体的な実施態様では、該製剤の緩衝液のｐＨは、５．０、５．５、６．０または６．５である。本発明の製剤は、抗凍結剤および緩衝液以外に他の賦形剤を含んでもよい。一部の実施態様では、該製剤は、約０％〜０．２％の濃度の界面活性剤を含む。場合によっては、該製剤は、０％から約０．２％までのポリソルベート−２０、ポリソルベート−４０、ポリソルベート−６０、ポリソルベート−６５、ポリソルベート−８０またはポリソルベート−８５を含む。具体的な実施態様では、該製剤は、０．００１％、０．００２％、０．００３％、０．００４％、０．００５％、０．００６％、０．００７％、０．００８％、０．００９％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１％、０．１１％、０．１２％、０．１３％、０．１４％、０．１５％、０．１６％、０．１７％、０．１８％、０．１９％または０．２％のポリソルベート−８０を含む。該製剤は、約０．０１％〜約５％のアルギニンも含むことができる。具体的な実施態様では、該製剤は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１％、０．１１％、０．１２％、０．１３％、０．１４％、０．１５％、０．１６％、０．１７％、０．１８％、０．１９％または０．２％、０．３％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１．０％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、２％、２．５％、３％、３．５％、４．０％、４．５％または５％のアルギニンを含む。一部の実施態様では、該製剤は、約０．００１％〜約０．０５％のＴｗｅｅｎ２０またはＴｗｅｅｎ８０も含む。具体的な実施態様では、該製剤は、０．００５％、０．００８％、０．０１％、０．２％、０．０３％、０．０４％、または０．０５％のＴｗｅｅｎ２０またはＴｗｅｅｎ８０も含む。特定の実施態様では、本発明の製剤は、界面活性剤およびアルギニン、アルギニンおよびＴｗｅｅｎ、またはアルギニン、Ｔｗｅｅｎ、およびＴｗｅｅｎ以外の界面活性剤を含むことができる。他の実施態様では、該製剤は、約１％〜約１０％のソルビトール、約０．１％〜約２％のグリシン、約５ｍＭ〜約１５０ｍＭのメチオニン、約５ｍＭ〜約１００ｍＭの塩化ナトリウムの１つ以上を含んでもよい。
【０００６】
該製剤は、第２抗体または該抗体の抗原結合性フラグメントも含むことができる。例えば、第２抗体は、抗ＩＬ−１３抗体または該抗体のＩＬ−１３結合性フラグメントでよく、該第２ＩＬ−１３抗体は、該製剤の第１のＩＬ−１３抗体とは異なるエピトープ特異性を有する。抗ＩＬ−１３抗体と同時処方することができる抗体の限定されない他の例には、抗ＩｇＥ抗体または該抗体のＩｇＥ結合性フラグメント、抗ＩＬ−４抗体または抗ＩＬ−４抗体のＩＬ−４結合性フラグメント、抗ＴＮＦ−α抗体または抗ＴＮＦ−α抗体のＴＮＦ−α結合性フラグメント、抗Ｃ５抗体または抗Ｃ５抗体の相補体結合性フラグメント、および抗ＩＬ−９抗体または抗ＩＬ−９抗体のＩＬ−９結合性フラグメントがある。該製剤は、炎症性疾患を処置するのに有効な第２の治療上または薬理学的に活性な薬剤も含むことができる。
【０００７】
該製剤の特定の実施態様では、（ａ）該抗体はヒト化マウス抗ＩＬ−１３抗体であり、（ｂ）抗凍結剤は約０．０２％〜約１０％（重量／容量）のスクロースまたはトレハロースであり、および（ｃ）緩衝液は約４ｍＭ〜約６０ｍＭのヒスチジン緩衝液である。場合によっては、この製剤は、約０．０１％〜約５％のアルギニンも含む。特定の場合には、この製剤は、約０．００１％〜約０．０５％のＴｗｅｅｎも含む。他の場合には、この製剤は、約０．０１％〜約５％のアルギニンおよび約０．００１％〜約０．０５％のＴｗｅｅｎを含む。一部の実施態様では、該製剤は、さらに、約１％〜約１０％のソルビトール、約０．１％〜約２％のグリシン、約５ｍＭ〜約１５０ｍＭのメチオニン、約５ｍＭ〜約１００ｍＭの塩化ナトリウム、の１つ以上を含む。場合によっては、この製剤は、０％から約０．２％までの界面活性剤（例えば、ポリソルベート−２０、−４０、−４５、−６０、−６５、−８０、−８５）も含む。
【０００８】
該製剤の特定の実施態様では、（ａ）抗体はＩＭＡ−６３８またはＩＭＡ−０２８であり、（ｂ）抗凍結剤は約０．０２％〜約１０％（重量／容量）のスクロースまたはトレハロースであり、および（ｃ）緩衝液は約１０ｍＭのコハク酸塩緩衝液で、ｐＨ６．０である。該製剤の他の実施態様では、（ａ）抗体はＩＭＡ６３８またはＩＭＡ−０２８抗体であり、（ｂ）抗凍結剤は約０．０２％〜約１０％（重量／容量）のスクロースまたはトレハロースであり、および（ｃ）緩衝液は約１０ｍＭの酢酸塩緩衝液で、ｐＨ６．０である。
【０００９】
別の態様では、（ａ）抗ＩＬ−１３抗体、（ｂ）約５％〜約１０％（重量／容量）のスクロースまたはトレハロース、および（ｃ）約５．５〜６．５のｐＨを有する緩衝液を含むエアロゾル製剤が提供される。場合によっては、この製剤は約０．０１％〜約５％のアルギニンも含む。特定のケースでは、この製剤は約０．００１％〜約０．０５％のＴｗｅｅｎも含む。他のケースでは、この製剤は、約０．０１％〜約５％のアルギニンおよび約０．００１％〜約０．０５％のＴｗｅｅｎを含む。一部の実施態様では、該製剤は、約１％〜約１０％のソルビトール、約０．１％〜約２％のグリシン、約５ｍＭ〜約１５０ｍＭのメチオニン、約５ｍＭ〜約１００ｍＭの塩化ナトリウムの１つ以上を含む。場合によっては、この製剤は、０％から約０．２％までの界面活性剤（例えば、ポリソルベート−２０、−４０、−６０、−６５、−８０、−８５）を含む。場合によっては、エアロゾル製剤は、ぜんそくまたは慢性閉塞性肺疾患の処置において有効な薬剤も含む。
【００１０】
別の態様では、（ａ）抗ＩＬ−１３抗体、（ｂ）約５％〜約１０％（重量／容量）のスクロースまたはトレハロース、および（ｃ）約５．５〜６．５のｐＨを有する緩衝液を含む乾燥凍結製剤が提供される。場合によっては、この製剤は、約０．０１％〜約５％のアルギニンも含む。特定のケースでは、この製剤は、約０．００１％〜約０．０５％のＴｗｅｅｎも含む。他のケースでは、この製剤は、約０．０１％〜約５％のアルギニンおよび約０．００１％〜約０．０５％のＴｗｅｅｎを含む。一部の実施態様では、該製剤は、さらに、約１％〜約１０％のソルビトール、約０．１％〜約２％のグリシン、約５ｍＭ〜約１５０ｍＭのメチオニン、および約５ｍＭ〜約１００ｍＭの塩化ナトリウム、の１つ以上を含む。場合によっては、この製剤は、０％から約０．２％までの界面活性剤（例えば、ポリソルベート−２０、−４０、−６０、−６５、−８０、−８５）を含む。場合によっては、エアロゾル製剤は、ぜんそくまたは慢性閉塞性肺疾患の処置において有効な薬剤も含む。
【００１１】
特定の実施態様では、該抗体の品位は、−８０℃で少なくとも１８ヶ月間、−８０℃で少なくとも２４ヶ月間、−２０℃で少なくとも１８ヶ月間、−２０℃で少なくとも２４ヶ月間、２℃〜８℃で少なくとも１８ヶ月間、２℃〜８℃で少なくとも２４ヶ月間、２５℃で少なくとも１８ヶ月間、または２５℃で少なくとも２４ヶ月間貯蔵後該製剤中に保持される。場合によっては、該製剤は、−８０℃で少なくとも１８ヶ月後、−８０℃で少なくとも２４ヶ月後、−２０℃で少なくとも１８ヶ月後、−２０℃で少なくとも２４ヶ月後、２℃〜８℃で少なくとも１８ヶ月後、２℃〜８℃で少なくとも２４ヶ月後、２５℃で少なくとも１８ヶ月後、２５℃で少なくとも２４ヶ月後、該製剤は、１０％未満の高分子量（ＨＭＷ）種を含む。本発明は、サイズ排除高速液体クロマトグラフィ（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）を用いてＨＭＷ種がアッセイされる実施態様を含む。本発明は、該製剤が、−８０℃で少なくとも１８ヶ月後、−８０℃で少なくとも２４ヶ月後、−２０℃で少なくとも１８ヶ月後、−２０℃で少なくとも２４ヶ月後、２℃〜８℃で少なくとも１８ヶ月後、２℃〜８℃で少なくとも２４ヶ月後、２５℃で少なくとも１８ヶ月後、２５℃で少なくとも２４ヶ月後、１０％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む実施態様も含む。特定のケースでは、ＬＭＷ種は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣを用いてアッセイされる。該製剤の一部の実施形態では、凍結乾燥された抗体製剤を再構成すると、凍結乾燥前の該製剤に比べて、少なくとも９０％の抗体構造を保持する。抗体構造は、例えば、結合アッセイ、表面電荷アッセイ、バイオアッセイ、またはＨＭＷ種とＬＭＷ種との比により決められる。
【００１２】
別の態様では、本発明は、ＩＬ−１３関連疾患の処置のための医薬組成物に関する。該医薬組成物は、本明細書で説明した抗ＩＬ−１３抗体製剤、例えば、ヒト化抗体、および本明細書で説明した他の特徴を含む製剤を含む。
【００１３】
さらに別の態様では、本発明は、医薬組成物の製造に関し、該組成物は、（ａ）抗ＩＬ−１３抗体、（ｂ）抗凍結剤、および（ｃ）該製剤のｐＨが約５．５〜６．５になるような緩衝液を含む抗体製剤を含む。場合によっては、該医薬組成物の抗ＩＬ−１３抗体は、米国特許出願第１１／１４９，３０９号（米国特許出願公開第２００６００７３１４８号）、米国特許出願第１１／１５５，８４３号（米国特許出願公開第２００６００６３２２８号）、または国際公開第２００６／０８５９３８号に記載されている抗体である。具体的な実施態様では、抗ＩＬ−１３抗体はＩＭＡ−６３８またはＩＭＡ−０２６である。場合によっては、該医薬組成物は約０．０１％〜約５％のアルギニンも含む。特定のケースでは、該医薬組成物は約０．００１％〜約０．０５％のＴｗｅｅｎも含む。他のケースでは、該医薬組成物は約０．０１％〜約５％のアルギニンおよび約０．００１％〜約０．０５％のＴｗｅｅｎを含む。一部の実施形態では、該医薬組成物は、約１％〜約１０％のソルビトール、約０．１％〜約２％のグリシン、約５ｍＭ〜約１５０ｍＭのメチオニン、約５ｍＭ〜約１００ｍＭの塩化ナトリウムの１つ以上を含む。場合によっては、この製剤は、０％から約０．２％までの界面活性剤（例えば、ポリソルベート−２０、−４０、−６０、−６５、−８０、−８５）を含む。
【００１４】
別の態様では、本発明は、医学的に有効量のＩＬ−１３抗体製剤を投与することを含む、ＩＬ−１３関連疾患を処置する方法に関する。該製剤は、（ａ）抗ＩＬ−１３抗体、（ｂ）抗凍結剤、および（ｃ）該製剤のｐＨが約５．５〜６．５になるような緩衝液を含む。場合によっては、該製剤の抗ＩＬ−１３抗体は、米国特許出願第１１／１４９，３０９号（米国特許出願公開第２００６００７３１４８号）、米国特許出願第１１／１５５，８４３号（米国特許出願公開第２００６００６３２２８号）、または国際公開第２００６／０８５９３８号に記載されている抗体である。具体的な実施態様では、抗ＩＬ−１３抗体はＩＭＡ−６３８またはＩＭＡ−０２６である。場合によっては、該製剤は約０．０１％〜約５％のアルギニンも含む。特定のケースでは、該製剤は約０．００１％〜約０．０５％のＴｗｅｅｎも含む。他のケースでは、該製剤は、約０．０１％〜約５％のアルギニンおよび約０．００１％〜約０．０５％のＴｗｅｅｎを含む。一部の実施態様では、該製剤は、約１％〜約１０％のソルビトール、約０．１％〜約２％のグリシン、約５ｍＭ〜約１５０ｍＭのメチオニン、および約５ｍＭ〜約１００ｍＭの塩化ナトリウムの１つ以上を含む。場合によっては、この製剤は、０％から約０．２％までの界面活性剤（例えば、ポリソルベート−２０、−４０、−６０、−６５、−８０、−８５）を含む。一部の実施形態では、本発明の方法は併用療法を含む。併用療法は、予め投与された治療化合物が体内でまだ有効な間に、第２の化合物が投与されるような２つ以上の治療化合物を併用投与する方法を意味している（例えば、２つの化合物が患者の体内で同時に有効であり、これには２つの化合物の相乗効果を含めてもよい）。併用療法は、１つ以上の追加の治療薬と同時投与および／または同時処方された抗ＩＬ−１３抗体を含むことができる。なお、上記追加の治療薬には、例えば、１つ以上のサイトカインおよび成長因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤（例えば、全身性抗炎症剤、）、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または細胞傷害性薬物または細胞分裂阻害剤がある。ＩＬ−１３結合剤および他の治療薬も別々に投与することもできる。
【００１５】
本発明の方法の特定の実施態様では、ＩＬ−１３関連疾患は炎症性疾患である。一部の実施態様では、炎症性疾患は、関節炎、ぜんそく、炎症性腸疾患、炎症性皮膚疾患、多発性硬化症、骨粗しょう症、腱炎、アレルギー性疾患、宿主の傷害に反応した炎症、敗血症、リウマチ性関節炎、変形性関節炎、過敏性腸疾患、潰瘍性大腸炎、乾癬、系統的エリテマトーデス、および他の自己免疫性疾患からなる群から選択される。この方法の特定の実施態様では、ＩＬ−１３関連疾患は、アレルギー性ぜんそく、非アレルギー性ぜんそく、アレルギー性および非アレルギー性ぜんそくの混合型、運動誘発性ぜんそく、薬剤誘発性ぜんそく、職業性ぜんそく、後期ぜんそく、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ細胞ＣＬＬ）、ホジキン病、住血吸虫病における組織の線維化、自己免疫リューマチ性疾患、炎症性腸疾患、リューマチ性関節炎、気道炎症を含む状態、好酸球増加症、線維症および過剰粘液産生（例えば、のう胞性線維症および肺線維症）、アトピー性疾患（例えば、アレルギー性鼻炎）、皮膚の炎症および自己免疫状態（例えば、アトピー性皮膚炎）、消化器官の炎症および／または自己免疫状態（例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ））、肝臓の炎症および／または自己免疫状態（例えば、肝硬変）、ウイルス性感染、強皮症および肝臓線維症など他の臓器の線維症、アレルギー性結膜炎、湿疹、じんましん、食物アレルギー、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、潰瘍性大腸炎、ラウス肉腫ウイルス感染、ぶどう膜炎、強皮症、または骨粗しょう症である。この方法の一部の実施態様では、該抗体製剤は、吸入、噴霧、または注射により投与される。
【００１６】
一部の実施態様では、本明細書で説明した製剤を予め満たした溶液を含むシリンジを用意する。具体的な実施態様では、薬液充填済みシリンジは、１００ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ−１３抗体（例えば、ＩＭＡ−０２６、ＩＭＡ−６３８）、１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０１％のＴｗｅｅｎ−８０、４０ｍＭのＮａＣｌを含み、ｐＨは６．０である。別の具体的な実施態様では、薬液充填済みシリンジ中の該製剤は、さらに、約０．１％〜約２％のアルギニンを含む。場合によっては、該シリンジは自動注入装置を備えている。他の実施態様では、本明細書で説明した製剤を鼻から投与する装置が用意されている。場合によっては、本明細書で説明した製剤を投与する経皮貼布が用意されている。さらに他の場合には、本明細書で説明した製剤を投与する静注用バッグが用意されている。具体的な実施態様では、静注用バッグには生理食塩水または５％デキストロースが入れられている。
【００１７】
他の実施態様では、本明細書で説明した製剤の容器を含むキットが用意されている。該キットは、随意に使用説明書を含む。場合によっては、キット内の容器はプラスチックまたはガラスのバイアル、あるいは注入可能なシリンジである。
【００１８】
特に明記しない限り、本明細書で使われるすべての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が普通に理解する意味と同じ意味を有する。方法および物質は、本明細書で説明した方法および物質と類似しているか、同等であるものが、本発明の実施またはテストにおいて使用することができるが、適切な方法および物質は以下で説明する。本明細書で言及したすべての刊行物、特許出願、特許、および他の文献は、引用により全体が本明細書に組み込まれている。さらに、物質、方法、および実施例は、説明のみのためのものであり、範囲を限定する意図はない。
【００１９】
本発明の他の特徴および利点は、詳細な説明、図面、および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
抗ＩＬ−１３抗体製剤であって、
（ａ）抗ＩＬ−１３抗体と、
（ｂ）抗凍結剤と、
（ｃ）前記製剤のｐＨが約５．５〜約６．５の範囲にある緩衝液と、
を含む製剤。
（項目２）
前記製剤が液体製剤、凍結乾燥製剤、液体として再構成される凍結乾燥製剤、またはエアロゾル製剤である項目１に記載の製剤。
（項目３）
前記製剤中の前記抗ＩＬ−１３抗体が、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約４５ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌ、または約５０ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌの濃度にある項目１に記載の製剤。
（項目４）
前記抗ＩＬ−１３抗体がヒト化抗体である項目１に記載の製剤。
（項目５）
前記抗体がカッパ軽鎖構築抗体である項目４に記載の製剤。
（項目６）
前記抗体が、ＩｇＧ１抗体、およびＩｇＧ２抗体、およびＩｇＧ４抗体からなる群から選択される項目４に記載の製剤。
（項目７）
前記抗ＩＬ−１３抗体がモノクローナル抗体である項目１に記載の製剤。
（項目８）
前記抗ＩＬ−１３抗体がＩＭＡ−６３８またはＩＭＡ−０２６である項目１に記載の製剤。
（項目９）
前記抗凍結剤が約２．５％〜約１０％（重量／容量）のスクロースまたはトレハロースである項目１に記載の製剤。
（項目１０）
前記緩衝液が、約４ｍＭ〜約６０ｍＭのヒスチジン緩衝液、約５ｍＭ〜約２５ｍＭのコハク酸塩緩衝液、または約５ｍＭ〜約２５ｍＭの酢酸塩緩衝液である項目１に記載の製剤。
（項目１１）
前記製剤が、さらに、約０％〜約０．２％の濃度の界面活性剤を含む項目１に記載の製剤。
（項目１２）
前記界面活性剤が、ポリソルベート−２０、ポリソルベート−４０、ポリソルベート−６０、ポリソルベート−６５、ポリソルベート−８０、ポリソルベート−８５、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される項目４に記載の製剤。
（項目１３）
前記製剤が、さらに、約０．０１％〜約５％のアルギニンを含む項目１に記載の製剤。
（項目１４）
前記製剤が、さらに、約０．００１％〜約０．０５％のＴｗｅｅｎを含む項目１に記載の製剤。
（項目１５）
前記製剤が、さらに、約１％〜約１０％のソルビトール、約０．１％〜約２％のグリシン、約５ｍＭ〜約１５０ｍＭのメチオニン、および約５ｍＭ〜約１００ｍＭの塩化ナトリウムの少なくとも１つを含む項目１に記載の製剤。
（項目１６）
前記製剤が、さらに、第２抗体または該抗体の抗原結合性フラグメントを含み、前記第２抗体は、前記製剤の前記ＩＬ−１３抗体とは異なるエピトープ特異性を有する抗ＩＬ−１３抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗Ｃ５抗体、抗ＩＬ−４抗体、抗ＴＮＦ−α抗体、および抗ＩＬ−９抗体からなる群から選択される項目１に記載の製剤。
（項目１７）
前記製剤が、さらに、抗ヒスタミン薬、抗炎症剤、長時間作用型気管支拡張薬（ＬＡＢＡ）、吸入コルチコステロイド薬（ＩＣＳ）、およびロイコトリエン阻害剤からなる群から選択された炎症性疾患を処置する場合に有効である第２の治療上または薬理学的に活性な薬剤を含む項目１に記載の製剤。
（項目１８）
（ａ）前記抗体がヒト化マウス抗ＩＬ−１３抗体であり、
（ｂ）前記抗凍結剤が約０．０２％〜約１０％（重量／容量）のスクロースまたはトレハロースであり、
（ｃ）前記緩衝液が約４ｍＭ〜約６０ｍＭのヒスチジン緩衝液であり、ｐＨ６．０である、
項目１に記載の製剤。
（項目１９）
前記製剤が、さらに、約０．０１％〜約５％のアルギニンを含む項目１８に記載の製剤。
（項目２０）
前記製剤が、さらに、約０．００１％〜約０．０５％のＴｗｅｅｎを含む項目１８に記載の製剤。
（項目２１）
前記製剤が、さらに、約１％〜約１０％のソルビトール、約０．１％〜約２％のグリシン、約５ｍＭ〜約１５０ｍＭのメチオニン、および約５ｍＭ〜約１００ｍＭの塩化ナトリウムの少なくとも１つを含む項目１８に記載の製剤。
（項目２２）
さらに、０％より多く約０．２％までのポリソルベート８０を含む項目１８に記載の製剤。
（項目２３）
（ａ）前記抗体がＩＭＡ−６３８またはＩＭＡ−０２６であり、
（ｂ）前記抗凍結剤が約０．０２％〜約１０％（重量／容量）のスクロースまたはトレハロースであり、
（ｃ）前記緩衝液が１０ｍＭのコハク酸塩緩衝液であり、ｐＨ６．０である、
項目１に記載の製剤。
（項目２４）
（ａ）前記抗体がＩＭＡ−６３８またはＩＭＡ−０２６であり、
（ｂ）前記抗凍結剤が約０．０２％〜約１０％（重量／容量）のスクロースまたはトレハロースであり、
（ｃ）前記緩衝液が１０ｍＭの酢酸塩緩衝液であり、ｐＨ６．０である、
項目１に記載の製剤。
（項目２５）
抗ＩＬ−１３抗体のエアロゾル製剤であって、
（ａ）抗ＩＬ−１３抗体と、
（ｂ）約５％〜約１０％（重量／容量）のスクロースまたはトレハロースと、
（ｃ）約５．５〜６．５のｐＨを有する緩衝液と、
を含む製剤。
（項目２６）
前記製剤が、さらに、約０．０１％〜約５％のアルギニンを含む項目１に記載の製剤。
（項目２７）
前記製剤が、さらに、約０．００１％〜約０．０５％のＴｗｅｅｎを含む項目１に記載の製剤。
（項目２８）
前記製剤が、さらに、約１％〜約１０％のソルビトール、約０．１％〜約２％のグリシン、約５ｍＭ〜約１５０ｍＭのメチオニン、および約５ｍＭ〜約１００ｍＭの塩化ナトリウムの少なくとも１つを含む項目１に記載の製剤。
（項目２９）
ぜんそくまたは慢性閉塞性肺疾患を処置する場合に有効である治療薬をさらに含む項目２５に記載のエアロゾル製剤。
（項目３０）
抗ＩＬ−１３抗体の凍結乾燥製剤であって、
（ａ）抗ＩＬ−１３抗体と、
（ｂ）約５％〜約１０％（重量／容量）のスクロースまたはトレハロースと、
（ｃ）約５．５〜６．５のｐＨを有する緩衝液と、
を含む製剤。
（項目３１）
元の製剤に比べて高分子量（ＨＭＷ）種および低分子量（ＬＭＷ）種のパーセントの増加が、−８０℃で少なくとも１８ヶ月、−８０℃で少なくとも２４ヶ月、−２０℃で少なくとも１８ヶ月、−２０℃で少なくとも２４ヶ月、２℃〜８℃で少なくとも１８ヶ月、２℃〜８℃で少なくとも２４ヶ月、２５℃で少なくとも１８ヶ月、２５℃で少なくとも２４ヶ月後５％未満である項目１に記載の製剤。
（項目３２）
ＨＭＷおよびＬＭＷの種が、サイズ排除高速液体クロマトグラフィ（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）を用いてアッセイされる項目３１に記載の製剤。
（項目３３）
前記ＩＬ−１３抗体の少なくとも９０％が、２℃〜８℃で少なくとも１８ヶ月、または２℃〜８℃で少なくとも２４ヶ月、前記抗体を貯蔵した後、モノマー性抗体である項目１に記載の製剤。
（項目３４）
前記抗体のモノマー性が、結合アッセイ、表面電荷アッセイ、バイオアッセイ、またはＨＭＷ種とＬＭＷ種の比により測定される項目３３に記載の製剤。
（項目３５）
ＩＬ−１３関連疾患を処置するための医薬組成物であって、前記医薬組成物が項目１に記載の抗ＩＬ−１３抗体製剤を含む医薬組成物。
（項目３６）
前記組成物が、さらに、約０．０１％〜約５％のアルギニンを含む項目３５に記載の医薬組成物。
（項目３７）
前記組成物が、さらに、約０．００１％〜約０．０５％のＴｗｅｅｎを含む項目３５に記載の医薬組成物。
（項目３８）
前記組成物が、さらに、約１％〜約１０％のソルビトール、約０．１％〜約２％のグリシン、約５ｍＭ〜約１５０ｍＭのメチオニン、約５ｍＭ〜約１００ｍＭの塩化ナトリウム、および０％より多く約０．２％までの界面活性剤の少なくとも１つを含む項目３５に記載の医薬組成物。
（項目３９）
前記組成物がヒト化ＩＬ−１３抗体を含む項目３５に記載の医薬組成物。
（項目４０）
医薬組成物の製品であって、前記組成物が、
（ａ）抗ＩＬ−１３抗体と、
（ｂ）抗凍結剤と、
（ｃ）前記製剤のｐＨが約５．５〜６．５の範囲にある緩衝液と、
を含む抗体製剤を含む製品。
（項目４１）
ＩＬ−１３関連疾患を処置する方法であって、前記方法が、
（ａ）抗ＩＬ−１３抗体と、
（ｂ）抗凍結剤と、
（ｃ）前記製剤のｐＨが約５．５〜６．５の範囲にある緩衝液と、
を含む薬学的に有効量の抗体製剤を投与することを含む方法。
（項目４２）
前記ＩＬ−１３関連疾患が、アレルギー性ぜんそく、非アレルギー性ぜんそく、アレルギー性および非アレルギー性ぜんそくの混合型、運動誘発性ぜんそく、薬剤誘発性ぜんそく、職業性ぜんそく、後期ぜんそく、慢性閉塞性肺疾患、関節炎、炎症性腸疾患、炎症性皮膚疾患、多発性硬化症、骨粗しょう症、腱炎、アレルギー性疾患、宿主の傷害に反応した炎症、敗血症、リューマチ性関節炎、変形性関節炎、過敏性腸疾患、潰瘍性大腸炎、乾癬、系統的エリテマトーデス、自己免疫疾患、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ細胞ＣＬＬ）、ホジキン病、住血吸虫病における組織の線維化からなる群から選択される項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記抗体製剤が、経口、経鼻、デポー、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、のう内、軟骨内、腔内、腹部内、小脳内、脳室内、結腸内、頚部内、胃内、肝臓内、心筋内、眼球内、骨内、骨盤内、心膜内、腹膜内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液のう内、胸腔内、子宮内、膀胱内、病巣内、急速投与、膣、直腸、ほほ側、舌下、経皮的（局所的）、経粘膜の各投与または徐放投与からなる群から選択される方法により投与される項目４１に記載の方法。
（項目４４）
注入可能なシリンジであって、項目１に記載の前記製剤充填ずみ溶液を含むシリンジ。
（項目４５）
経鼻投与する装置であって、項目１に記載の前記製剤および薬学的に容認できる分散剤を含む装置。
（項目４６）
経皮貼布であって、項目１に記載の前記製剤を含み、薬学的に容認できる担体を任意に含む経皮貼布。
（項目４７）
静注バッグであって、項目１に記載の前記製剤および任意に生理食塩水または５％デキストロースを含む静注バッグ。
（項目４８）
キットであって、項目１に記載の前記製剤を含む少なくとも１つの容器および取扱い説明書を含むキット。
（項目４９）
前記容器がガラスバイアルまたは注入可能なシリンジである項目４８に記載のキット。
（項目５０）
充填済みの注入可能なシリンジであって、製剤：
（ａ）１００ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ−１３抗体と、
（ｂ）１０ｍＭのヒスチジンと、
（ｃ）５％のスクロースと、
（ｄ）０．０１％のＴｗｅｅｎ−８０と、
（ｅ）４０ｍＭのＮａＣｌと、
を含み、前記製剤のｐＨは６．０であるシリンジ。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】適切な時点で再構成した、乾燥凍結し、貯蔵した抗ＩＬ−１３抗体製剤中のＨＭＷ種のパーセンテージを、サイズ排除クロマトグラフィ−高速液体クロマトグラフィ（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）を用いて測定した実験結果を示すグラフである。パーセンテージＨＭＷ＝ＨＭＷ種中の総たんぱく質のパーセンテージ。試料は、再構成前最長２４ヶ月間、４℃、２５℃、および４０℃で貯蔵した。
【図２】適切な時点で再構成した、凍結乾燥し、貯蔵した抗ＩＬ−１３抗体製剤の生物活性を、抗ＩＬ−１３抗体スタンダードのパーセンテージとして測定した実験結果を示すグラフである。データは、たんぱく質のミリグラムあたりの単位比活性として表している。試料は、再構成前最長２４ヶ月間、４℃、２５℃、および４０℃で貯蔵した。
【図３】１００ｍｇ／ｍｌの液体抗ＩＬ−１３抗体製剤中のＨＭＷ種のパーセンテージを、最長２４ヶ月間、４℃、１５℃、２５℃、および４０℃で貯蔵後、ＳＥＣ−ＨＰＬＣを用いて測定した実験結果を示すグラフである。
【図４】１００ｍｇ／ｍｌの液体抗ＩＬ−１３抗体製剤中のＬＭＷ種のパーセンテージを、最長２４ヶ月間、４℃、１５℃、２５℃、および４０℃で貯蔵後、ＳＥＣ−ＨＰＬＣを用いて測定した実験結果を示すグラフである。
【図５】液体製剤中の抗ＩＬ−１３抗体のパーセント結合活性を最長６ヶ月間、４℃、１５℃、２５℃、および４０℃で貯蔵後、アッセイした実験結果を示すグラフである。結合活性は、スタンダードに対するパーセンテージとして表している。
【図６】１００ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ−１３抗体製剤の生物活性を、抗ＩＬ−１３抗体スタンダードのパーセンテージとして測定した実験結果を示すグラフである。データは、たんぱく質ミリグラムあたりの単位比活性として表している。試料は、最長２４ヶ月間、４℃、１５℃、２５℃、および４０℃で貯蔵した。
【図７】最長２４ヶ月間、４℃、１５℃、２５℃、および４０℃で貯蔵した液体製剤中のたんぱく質濃度をアッセイしている実験結果を示すグラフである。
【図８】冷凍濃縮したアモルファス相のガラス転移温度を測定するために行った準環境変調示差走査熱量測定（ｍＤＳＣ）のグラフである。
【図９Ａ】抗ＩＬ−１３抗体の−２５℃における冷凍乾燥顕微鏡画像の複写である。
【図９Ｂ】−２５℃から−１５℃に上げた抗ＩＬ−１３抗体の冷凍乾燥顕微鏡画像の複写である。
【図９Ｃ】−１５℃から−１８℃に下げた抗ＩＬ−１３抗体の冷凍乾燥顕微鏡画像の複写である。
【図９Ｄ】−１８℃から−８℃に上げた抗ＩＬ−１３抗体の冷凍乾燥顕微鏡画像の複写である。
【図９Ｅ】−８℃から−４℃に上げた抗ＩＬ−１３抗体の冷凍乾燥顕微鏡画像の複写である。
【図９Ｆ】−４℃から−１６℃に下げた抗ＩＬ−１３抗体の冷凍乾燥顕微鏡画像の複写である。
【図１０】積極的凍結乾燥サイクルのサイクル・トレースを示すグラフである。２つの異なる抗体組成物（ＭＹＯ−０２９およびＩＭＡ−６３８と指定された）について貯蔵棚（棚）、および露点の温度が示されている。静電容量圧力計およびピラニ真空計を用いてアッセイされた圧力が示されている。
【図１１】対照凍結乾燥サイクルのサイクル・トレースを示すグラフである。温度および圧力測定の試料は、図１０の試料である。
【図１２】アニーリング凍結乾燥サイクルのサイクル・トレースを示すグラフである。温度および圧力測定の試料は、図１０の試料である。
【図１３】積極的な凍結乾燥サイクル、対照凍結乾燥、およびアニーリング凍結乾燥サイクルの、それぞれ、図１０−１２に対応する一次乾燥の間の生成物温度を示すグラフである。
【図１４】対照試料の変調示差走査熱量測定サーモグラムを示すグラフである。２つのガラス転移温度（逆進熱流について測定された）が観測され、１つは５１．３℃、他は７４．５℃で開始する。
【図１５】アミドＩ領域における３つの試料（対照、積極的、およびアニーリング）のフーリエ変換赤外分光の結果を示すグラフである。
【図１６】試料の再構成時間を貯蔵時間の関数として示すグラフである。試料は、対照、積極的、およびアニーリングの３つであり、５℃または５０℃で貯蔵した。
【図１７】ＵＶ−可視光分光（Ａ２８０）を用いてアッセイしたたんぱく質濃度を示すグラフである。試料は図１６の試料と同じである。
【図１８】ＵＶ−可視光分光（Ａ４２０）によりアッセイした溶液光散乱を示すグラフである。試料は図１６の試料と同じである。
【図１９】ＳＥＣ−ＨＰＬＣを用いたＨＭＷ種のアッセイの結果を示している。試料は図１６の試料と同じである。
【図２０】テストした抗体の結合親和性を貯蔵時間の関数として示すグラフである。試料は図１６の試料と同じである。
【図２１】バイアルおよびシリンジ中で行われたＩＭＡ−６３８賦形剤の選別における回収率（％）を示す棒グラフであり、ＩＭＡ−６３８抗体濃度は、ＵＶ／可視により測定した。
【図２２】バイアルおよびシリンジ中で、４０℃でｔ＝０〜６週間行われたＩＭＡ−６３８賦形剤の選別におけるＨＭＷ種のパーセント変化を示す棒グラフである。
【図２３】バイアルおよびシリンジ中で、４０℃でｔ＝０〜６週間行われたＩＭＡ−６３８賦形剤の選別におけるＬＭＷ種のパーセント変化を示す棒グラフである。
【図２４】約２００ｒｐｍにおいて２４時間ゲル・シェーカー上で室温において振とう後、Ｔｗｅｅｎ有無の両方の場合の製剤中のＩＭＡ−６３８の濃度を示す棒グラフである。
【図２５】約２００ｒｐｍにおいて２４時間ゲル・シェーカー上で室温において振とう後、Ｔｗｅｅｎ有無の両方の場合の製剤中のＩＭＡ−６３８のＨＭＷ種のパーセントを示す棒グラフである。
【図２６】１（ＦＴ１）、３（ＦＴ３）、および５（ＦＴ５）冷凍−解凍サイクル（−８０℃における冷凍サイクル；３７℃における解凍サイクル）の後、Ｔｗｅｅｎ有無の両方について製剤中のＩＭＡ−６３８の濃度を示す棒グラフである。
【図２７】１（ＦＴ１）、３（ＦＴ３）、および５（ＦＴ５）冷凍−解凍サイクル（−８０℃における冷凍サイクル；３７℃における解凍サイクル）の後、Ｔｗｅｅｎ有無の両方について製剤中のＩＭＡ−６３８のＨＭＷ種のパーセントを示す棒グラフである。
【図２８】４℃で最長７ヶ月間シリンジ内に貯蔵したＩＭＡ−６３８液体製剤中のＨＭＷ種のパーセントを示すグラフである。
【図２９】２５℃で最長７ヶ月間シリンジ内に貯蔵したＩＭＡ−６３８液体製剤中のＨＭＷ種のパーセントを示すグラフである。
【図３０】４０℃で最長７ヶ月間シリンジ内に貯蔵したＩＭＡ−６３８液体製剤中のＨＭＷ種のパーセントを示すグラフである。
【図３１】４０℃で最長２８週間シリンジ内に貯蔵した０．０１％のＴｗｅｅｎおよび０％〜２％のアルギニンを含むＩＭＡ−６３８液体製剤中のＨＭＷ種のパーセントを示すグラフである。
【図３２】凍結乾燥し後最長１２ヶ月間４℃、２５℃、および４０℃で貯蔵した、再構成したＩＬ−１３抗体、ＩＭＡ−０２６のＨＭＷ種のパーセントを示すグラフである。
【図３３】凍結乾燥し、最長１２ヶ月間４℃、２５℃、および４０℃で貯蔵後再構成したＩＭＡ−０２６抗体の生物活性を示すグラフである。
【図３４】ＩＭＡ−６３８抗体の重鎖（配列番号：１）および軽鎖（配列番号：２）からなるアミノ酸配列を提示している。重鎖ＤＮＡ配列によりコード化された最後のアミノ酸残基、Ｌｙｓ４４８は、ごく少量の、成熟した分泌型のＩＭＡ−６３８において認められ、おそらく、チャイニーズ・ハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞プロテアーゼによる細胞内処理の間にモノクローナル抗体のバルクから除去される。したがって、ＩＭＡ−６３８重鎖のカルボキシ末端はＧｌｙ４４７である。カルボキシ末端リジン処理は、組み換えおよび血漿由来抗体において認められ、これらの機能に対して影響はないように思われる。
【図３５Ａ】ＩＭＡ−０２６抗体の重鎖（配列番号：３）および軽鎖（配列番号：４）からなるアミノ酸配列を提示している。
【図３５Ｂ】ＩＭＡ−０２６抗体の重鎖（配列番号：３）および軽鎖（配列番号：４）からなるアミノ酸配列を提示している。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
抗ＩＬ−１３抗体を含む製剤は、抗ＩＬ−１３抗体（「製剤」）の貯蔵に適していることが確認された。該製剤中の抗体の品位は、一般に、液体としてまたは種々の条件下で凍結乾燥製品として長期の貯蔵後でも維持されている。例えば、該抗体の品位は、広範囲の貯蔵温度（例えば、−８０℃〜４０℃）、剪断応力（例えば、振とう）および界面応力（冷凍−解凍サイクル）にさらした後でも十分維持される。さらに、凍結乾燥物質では、再構成の処理の間も、抗体の品位は十分維持される。さらに、抗体の品位は、ＬＭＷ種およびＨＭＷ種の蓄積が比較的低いこと、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの生物活性、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの結合活性および噴霧後の安定性により実証されているように、薬剤として使用するのに十分な品位が維持されている。
製剤
本明細書で説明した抗ＩＬ−１３抗体製剤は、抗凍結剤、および緩衝液として役立ちうる化合物である、抗ＩＬ−１３抗体を含む。該製剤のｐＨは、一般に、ｐＨ５．５〜６．５である。一部の実施態様では、製剤は液体として貯蔵される。他の実施態様では、製剤は、液体として調製され、次いで、貯蔵する前に、例えば、凍結乾燥またはスプレー乾燥により乾燥される。乾燥製剤は、乾燥化合物として、例えば、エアロゾルまたは粉末とし使用、あるいは例えば水、緩衝液、または適切な液体を用いて、その元のまたは別の濃度に再構成することができる。該抗体精製プロセスは、冷凍液体として長期の貯蔵、次いで、冷凍−乾燥（例えば、ヒスチジン／スクロース製剤を用いて）に適した製剤中に該抗体を移動させることができるようにデザインされる。該製剤は、特定の濃度のたんぱく質と共に凍結乾燥される。凍結乾燥された製剤は、次いで、必要により適切な希釈剤（例えば、水）を用いて製剤の元の成分を望ましい濃度（一般に、凍結乾燥する前の濃度に比べて同じか高い濃度）で再構成することができる。凍結乾燥製剤は、最初に冷凍乾燥した液体の容積に比べて凍結乾燥物に加えた水または希釈剤の量により元の濃度（すなわち、凍結乾燥する前）と異なる濃度を有する製剤を作るために再構成してよい（例えば、実施例６、後出）。
【００２２】
適切な抗ＩＬ−１３抗体製剤は、抗体品位の１つ以上のパラメータをアッセイすることにより確認することができる。アッセイされたパラメータは、一般に、ＨＭＷ種のパーセンテージまたはＬＭＷ種のパーセンテージである。ＨＭＷ種またはＬＭＷ種のパーセンテージは、製剤中のＨＭＷの製剤中の総たんぱく質含有量のパーセンテージとしてまたは時間（すなわち、貯蔵中）によるパーセンテージ増加の変化として測定される。許容できる製剤のＨＭＷ種の総パーセンテージは、少なくとも１年間２℃〜４０℃（例えば、２℃〜２５℃、２℃〜１５℃、２℃〜８℃において、約２℃において、または約２５℃において）において凍結乾燥物または液体として貯蔵後、ＨＭＷ種は１０％ＨＭＷ種未満であるか、あるいは、少なくとも１年間２℃〜４０℃で凍結乾燥物または液体として貯蔵後は、約１０％ＬＭＷ種未満である。「約」は、言及された数値の±２０％を意味している。したがって、「約２０℃」は、１６℃〜２４℃を意味している。通常、安定性の特徴は、冷凍製品では２℃〜８℃において、および室温製品では２５℃において、ＨＭＷ／ＬＭＷが１０％未満である。ＨＭＷ種またはＬＭＷ種は、凍結乾燥物が再構成された後凍結乾燥物として貯蔵された製剤においてアッセイされる。４０℃は、例えば、出荷中に製品を移送する間に起こりうる非貯蔵条件に短期間さらされた間の安定性を測定し、安定性をテストする場合に一般に使われる加速条件である。
【００２３】
アッセイされたパーセンテージは、ＨＭＷ種またはＬＭＷ種におけるパーセンテージの変化であり、貯蔵後の両種の総たんぱく質のパーセントは、貯蔵前（例えば、該製剤の調製時に）の１種または両種の総たんぱく質のパーセントに比較される。パーセンテージのこの差は測定される。一般に、液体製剤中のＨＭＷ種またはＬＭＷ種中のたんぱく質のパーセンテージ変化は、約１８〜２４ヶ月間２℃〜８℃または２５℃において貯蔵後、１０％未満、例えば、約８％未満、約７％未満、約６％未満、約５％未満、約４％未満、または約３％未満である。「約」は、言及された数値の±２０％を意味している。したがって、約１０％は、８％〜１２％を意味している。凍結乾燥製品として貯蔵した製剤は、一般に、約１８〜２４ヶ月間２℃〜８℃（例えば、４℃）にて貯蔵し、次いで、再構成後、約５％未満、約４％未満、約３％未満、または約２％未満のＨＭＷ種あるいは約５％未満、約４％未満、約３％未満、または約２％未満のＬＭＷ種を有する。
【００２４】
製剤は、凍結乾燥物として、例えば、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも４年、または少なくとも５年貯蔵することができる。１つの例では、抗ＩＬ−１３抗体製剤は、１００ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ−１３抗体、１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロースを含み、６．０のｐＨを有する。別の実施例では、該製剤は、１００ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ−１３抗体、１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０１％のＴｗｅｅｎ  ８０、２％のアルギニンを含み、６．０のｐＨを有する。別の例では、該製剤は、０．５ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ−１３抗体、１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロースを含み、６．０のｐＨを有する。さらに別の例では、該製剤は、０．５ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ−１３抗体、１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０１％のＴｗｅｅｎ  ８０、２％のアルギニンを含み、６．０のｐＨを有する。
【００２５】
製剤の成分および製剤中の抗ＩＬ−１３抗体の品位をアッセイする方法については、後に詳細に説明する。
抗体
抗ＩＬ−１３抗体は、本明細書で説明した製剤の１つの成分である。本明細書で使われる用語「抗体」は、特に明記しない限り、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、生体分子特異的抗体、ダイアボディ、抗体の一部を形成する単一鎖分子、完全にまたは部分的にヒト化された抗体などのハイブリッド抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦｖフラグメントなどの抗原結合抗体フラグメント、および前述の抗体などの変態（例えば、ペグ化された抗体または抗体フラグメント）を含む。該製剤中で使われる抗ＩＬ−１３抗体分子は、有効なヒト、ヒト化、相補性決定領域（ＣＤＲ）で接合された、キメラ、変異した、親和性により成熟した、脱免疫された、合成、または別にｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生された各たんぱく質であってよい。１つの実施態様では、該ＩＬ−１３抗体はヒト化抗体である。１つの実施態様では、該ＩＬ−１３抗体はヒトでは抗原性ではなく、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）反応を生じない。
【００２６】
抗ＩＬ−１３抗体分子は、少なくとも１つのＩＬ−１３関連活性をｉｎ  ｖｉｖｏで調節する（例えば、抑制する）のに使用することができる。該ＩＬ−１３抗体は、ＩＬ−１３関連疾患を処置または予防し、またはこれらの疾患の少なくとも１つの症状を改善するのに使用することができる。典型的なＩＬ−１３関連疾患には、炎症性疾患（例えば、肺炎）、呼吸器系疾患（例えば、アレルギー性および非アレルギー性ぜんそくを含むぜんそく、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））、並びに気道炎症を含む状態、好酸球増加症、線維性疾患（例えば、のう胞性線維症、肝線維症および肺線維症）、強皮症、過剰粘液産生、アトピー性疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、じんましん、湿疹、アレルギー性鼻炎、アレルギー性胃腸炎）、ＩＬ−１３関連癌（例えば、白血病、グリア芽腫、またはリンパ腫、例えば、ホジキンのリンパ腫）、消化器官系疾患（例えば、炎症性腸疾患）、肝臓疾患（例えば、肝硬変）、およびウイルス性感染がある。
【００２７】
製剤中の抗体濃度は、一般に、約０．１ｍｇ／ｍｌと約２５０ｍｇ／ｍｌとの間、例えば、約０．５ｍｇ／ｍｌと約１００ｍｇ／ｍｌとの間、約０．５ｍｇ／ｍｌと約１．０ｍｇ／ｍｌとの間、約０．５ｍｇ／ｍｌと約４５ｍｇ／ｍｌとの間、約１ｍｇ／ｍｌと約１０ｍｇ／ｍｌとの間、約１０ｍｇ／ｍｌと約４０ｍｇ／ｍｌとの間、約１０ｍｇ／ｍｌと約５０ｍｇ／ｍｌとの間、約５０ｍｇ／ｍｌと約１００ｍｇ／ｍｌとの間、約１００ｍｇ／ｍｌと約２００ｍｇ／ｍｌとの間、約２００ｍｇ／ｍｌと約２５０ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ−１３との間にある。範囲との関連で、「約」は、下限値の２０％低い数値と上限値の２０％高い数値との間の範囲を意味している。範囲との関連で、例えば、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌは、８ｍｇ／ｍｌと１２０ｍｇ／ｍｌとの間を意味している。場合によっては、製剤中の抗体濃度は、例えば、０．１ｍｇ／ｍｌと２００ｍｇ／ｍｌとの間、例えば、０．５ｍｇ／ｍｌと１００ｍｇ／ｍｌとの間、０．５ｍｇ／ｍｌと１．０ｍｇ／ｍｌとの間、０．５ｍｇ／ｍｌと４５ｍｇ／ｍｌとの間、１ｍｇ／ｍｌと１０ｍｇ／ｍｌとの間、１０ｍｇ／ｍｌと４０ｍｇ／ｍｌとの間、１０ｍｇ／ｍｌと５０ｍｇ／ｍｌとの間、５０ｍｇ／ｍｌと１００ｍｇ／ｍｌとの間、１００ｍｇ／ｍｌと２００ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ−１３との間にあり得る。この種の抗体製剤は、治療薬として使用することができる。したがって、製剤中の抗体の濃度は、処置を受ける対象が許容し、投与方法に適している製剤の容量においてこのような用量を与えるのに十分である。限定されない実施例の１つにおいて、皮下に高用量を注入するために、容量制限は小さく（例えば、注射につき約１ｍｌ〜１．２ｍｌ）、抗体の濃度は、一般に、１００ｍｇ／ｍｌ以上、例えば、１００ｍｇ／ｍｌ〜５００ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ〜２５０ｍｇ／ｍｌ、または１００ｍｇ／ｍｌ〜１５０ｍｇ／ｍｌである。このような高濃度は、例えば、適切な容量の希釈剤（例えば、注射用滅菌水、緩衝食塩水）において凍結乾燥した製剤を再構成することにより達成することができる。場合によっては、該再構成製剤は、約１００ｍｇ／ｍｌと５００ｍｇ／ｍｌとの間の濃度（例えば、１００ｍｇ／ｍｌ、１２５ｍｇ／ｍｌ、１５０ｍｇ／ｍｌ、１７５ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌ、２５０ｍｇ／ｍｌ、２７５ｍｇ／ｍｌ、３００ｍｇ／ｍｌ、３５０ｍｇ／ｍｌ、３７５ｍｇ／ｍｌ、４００ｍｇ／ｍｌ、４２５ｍｇ／ｍｌ、４５０ｍｇ／ｍｌ、４７５ｍｇ／ｍｌおよび５００ｍｇ／ｍｌ）を有する。吸入により送達する場合、該製剤は、一般に、吸気のエアロゾルの限定された容量における十分な用量を与えられるように、幾分濃縮（例えば、約１００ｍｇ／ｍｌと５００ｍｇ／ｍｌとの間の）されている。場合によっては、低濃度（例えば、約０．０５ｍｇ／ｍｌと１ｍｇ／ｍｌとの間の）が使われる。送達された用量を、送達の方法、例えば、ジェット噴霧器またはメーターで測定したエアロゾルに適合させる方法は、当該技術分野において周知である。
【００２８】
抗ＩＬ−１３抗体製剤において使用することができる抗体には、例えば、マウスおよびヒト化マウスの抗ＩＬ−１３抗体がある。これらの抗体類は、カッパ軽鎖抗体であってよい。これらの抗体類は、上で説明した自然操作または遺伝子操作したＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＭ抗体またはＩＬ−１３結合性フラグメントであってよい。場合によっては、これらの抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４抗体である。本発明において使用する抗ＩＬ−１３抗体の例は、米国特許出願第１１／１５５，８４３号、米国特許出願第１１／１４９，３０９号、および国際公開第２００６／０８５９３８号に記載されており、これらの内容は引用により本明細書に組み込まれている。本発明で使用することができる抗ＩＬ−１３抗体の限定されない例には、ＩＭＡ−６３８（図３４）およびＩＭＡ−０２６（図３５）がある。一部の実施態様では、抗ＩＬ−１３抗体重鎖は、配列番号：１に対して約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％の配列相同性を有し、該軽鎖は、配列番号：２に対して約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％の配列相同性を有し、該抗体はＩＬ−１３に結合する。一部の実施態様では、抗ＩＬ−１３抗体重鎖は、配列番号：３に対して約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％の配列相同性を有し、該軽鎖は、配列番号：４に対して約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％の配列相同性を有し、該抗体はＩＬ−１３に結合する。特定の実施態様では、抗ＩＬ−１３抗体は、５×１０−７Ｍ、１×１０−７Ｍ、５×１０−８Ｍ、１×１０−８Ｍ、５×１０−９Ｍ、１×１０−９Ｍ未満の、より典型的には５×１０−１０Ｍ、１×１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１×１０−１１Ｍ未満の、またはよりよいＫＤに対応する親和力によりＩＬ−１３に結合する。たんぱく質に置換基を導入する方法は、当該技術分野では周知である。１つの実施態様では、該ＩＬ−１３抗体は、１０３〜１０８Ｍ−１ｓ−１の範囲、典型的には１０４〜１０７Ｍ−１ｓ−１の範囲の反応速度でＩＬ−１３と結びつけることができる。さらに別の実施態様では、該ＩＬ−１３結合剤は、１０−２〜１０−６ｓ−１の範囲、典型的には１０−２〜１０−５ｓ−１の範囲の解離速度を有する。１つの実施態様では、該ＩＬ−１３結合剤は、親和力および／またはモノクローナル抗体ＭＪ２−７またはＣ６５（米国特許出願公開第２００６００７３１４８号を参照のこと）またはこれらの変態形、例えば、キメラ形またはこれらのヒト化形（例えば、本明細書で説明したヒト化形）に類似した反応速度によりＩＬ−１３、例えば、ヒトＩＬ−１３に結合する。ＩＬ−１３結合剤の親和力および結合反応速度は、例えば、バイオセンサ技術（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標））を用いてテストすることができる。
緩衝液および抗凍結剤
本明細書で説明した製剤のｐＨは、一般に、約ｐＨ５．０〜約７．０の間にあり、例えば、約ｐＨ５．５〜約６．５、約ｐＨ５．５〜約６．０、約ｐＨ６．０〜約６．５、ｐＨ５．５、ｐＨ６．０、またはｐＨ６．５である。一般に、溶液をｐＨ５．５〜６．５に維持できる緩衝液、例えば、約６．０のｐＫＡを有する緩衝液が製剤の調製に使われる。適切な緩衝液は、限定されないが、ヒスチジン緩衝液、２−モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、カコジル酸塩、リン酸塩、酢酸塩、コハク酸塩、およびクエン酸塩である。緩衝液の濃度は、約４ｍＭと約６０ｍＭとの間にあり、例えば、約５ｍＭ〜約２５ｍＭであり、例えば、ヒスチジンは一般に最高６０ｍＭの濃度で使われる。場合によっては、ヒスチジン緩衝液は、約５ｍＭまたは約１０ｍＭの濃度で使われる。別のケースでは、酢酸塩またはコハク酸塩緩衝液が、約５ｍＭまたは約１０ｍＭの濃度で使われる。
【００２９】
抗ＩＬ−１３抗体製剤は、抗凍結剤を含む。抗凍結剤は、当該技術分野で周知であり、例えば、スクロース、トレハロース、およびグリセロールを含む。生物系においては、低毒性を示す抗凍結剤が一般に使われる。該抗凍結剤は、約０．５％〜１５％、約０．５％〜２％、約２％〜５％、約５％〜１０％、約１０％〜１５％、および約５％（重量／容量）の濃度にて該製剤に含まれる。
【００３０】
抗ＩＬ−１３抗体製剤において緩衝液として使用することができるヒスチジン緩衝液は、抗凍結剤特性を有する。本発明の一部の実施態様では、ヒスチジン緩衝液は、砂糖、例えば、スクロースなどの抗凍結剤と併用される。本発明の製剤は、かなりの量のヒスチジンの使用を特に排除することができ、例えば、該製剤の緩衝液の成分も抗凍結剤の成分もヒスチジンではない。
【００３１】
一般に、製剤の粘度は、該製剤の投与ルートに適合する、１である。一部の実施態様では、該製剤の粘度は、１ｃＰと２ｃＰとの間にあるか、または水（約１ｃＰ）に似ている。他の実施態様では、該製剤の粘度は、約５ｃＰと約４０ｃＰとの間にある。具体的な実施態様では、該製剤の粘度は、１ｃＰ、２ｃＰ、３ｃＰ、４ｃＰ、５ｃＰ、１０ｃＰ、１５ｃＰ、２０ｃＰ、２５ｃＰ、３０ｃＰ、３５ｃＰ、または４０ｃＰである。
界面活性剤
特定の実施態様では、該製剤には界面活性剤が含まれている。界面活性剤の例は、限定されないが、非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート（例えば、ポリソルベート−２０、ポリソルベート−４０、ポリソルベート−６０、ポリソルベート−６５、ポリソルベート−８０、またはポリソルベート−８５）、ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）、Ｔｒｉｔｏｎ（商標）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ラウレル硫酸ナトリウム、オクチルグリコシド・ナトリウム、ラウリル−スルホベタイン、ミリスチル−スルホベタイン、リノレイル−スルホベタイン、ステアリル−スルホベタイン、ラウリル−サルコシン、ミリスチル−サルコシン、リノレイル−サルコシン、ステアリル−サルコシン、リノレイル−ベタイン、ミリスチル−ベタイン、セチル−ベタイン、ラウロアミドプロピル−ベタイン、コカミドプロピル−ベタイン、リノレアミドプロピル−ベタイン、ミリスタミドプロピル−ベタイン、パルミドプロピル−ベタイン、イソステアラミドプロピル−ベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）、ミリスタルニドプロピル−、パルミドプロピル−、またはイソステアラミドプロピル−ジメチルアミン、メチルココイルタウレート・ナトリウム、またはメチルオレフィルタウレート・ナトリウム、およびＭｏｎａｑｕａｔ（商標）シリーズ（ニュージャージー州Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｍｏｎａ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、およびエチレンとプロピレングリコールとのコポリマー（例えば、ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ，ＰＦ６８）がある。
【００３２】
添加した界面活性剤の量は、例えば、ＳＥＣ−ＨＰＬＣを用いてＨＭＷ種またはＬＭＷ種をアッセイした時に再構成たんぱく質の凝集物を界面活性剤が容認できるレベルに低減し、抗ＩＬ−１３抗体製剤の凍結乾燥物の再構成後微粒子の形成を最小限にするような量である。界面活性剤を添加すると、抗ＩＬ−１３抗体の凍結乾燥製剤の再構成時間を低減し、溶液の脱ガスを助長することも示した。例えば、製剤（液体または凍結乾燥する前の）中に約０．００１％〜０．５％、例えば、約０．００５％〜０．０５％、約０．００５％〜約０．２％および約０．０１％〜０．２％の量にて存在することができる。
抗ＩＬ−１３製剤への添加
製剤は、無菌溶液または無菌の凍結乾燥物として貯蔵される。製剤中の微生物の作用の予防は、製剤中に少なくとも１つの抗菌剤および／または抗真菌薬、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどを含むことによっても達成することができる。場合によっては、凍結乾燥物は静菌性の水（例えば、０．９％のベンジルアルコールを含む水）を用いて再構成される。製剤に防腐剤を含めることは、特定の製剤と適合する防腐剤を確認する方法および送達方法として当該技術分野において周知である（例えば、Ｇｕｐｔａ，ｅｔ  ａｌ．（２００３），ＡＡＰＳ  Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．５：ａｒｔｉｃｌｅ８，ｐ．１−９を参照のこと）。
【００３３】
場合によっては、該製剤は等張性である。一般に、溶液のオスモル濃度／浸透圧に寄与することが、当該技術分野で周知の成分を製剤に添加することができる（例えば、塩類、糖類、ポリアルコールまたはこれらの併用）。等張性は、等張性濃度の塩基性製剤（スクロースなどの）の１つの成分を用いるか、または砂糖、マニトールまたはソルビトールなどの多価アルコール、または塩化ナトリウムなどの塩を添加することにより達成される。
【００３４】
場合によっては、例えば、等張性を達成するためにまたは該製剤の抗ＩＬ−１３抗体の品位を上げるために、抗ＩＬ−１３抗体製剤において塩が使われる。使用するのに適した塩類は、上で、論じている。塩の濃度は、０ｍＭ〜約３００ｍＭであってよい。
【００３５】
特定の場合には、該製剤は、界面劣化を低減するために、Ｔｗｅｅｎ（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）を用いて調製する。該Ｔｗｅｅｎ濃度は、約０．００１％〜約０．０５％であってよい。１つの例では、製剤中０．０１％の濃度でＴｗｅｅｎ８０が使われる。
【００３６】
他の特定の場合には、該製剤は、アルギニンを用いて調製する。該製剤中のアルギニン濃度は、約０．０１％〜約５％でよい。１つの例では、該製剤中２％の濃度でアルギニンが使われる。場合によっては、本明細書で説明した該ＩＬ−１３製剤に、Ｔｗｅｅｎとアルギニンの両方が添加される。
【００３７】
さらに、他の場合には、該製剤は、ソルビトール、グリシン、メチオニン、または塩化ナトリウムの少なくとも１つを用いて調製することができる。ソルビトールが該製剤に含まれる場合は、ソルビトールは、濃度が約１％と約１０％との間になるように添加することができる。１つの例では、ソルビトールは、製剤中５％の濃度で存在する。該製剤にグリシンが含まれる場合は、グリシンは、約０．１％〜約２％の範囲の濃度になるように添加することができる。１つの例では、該製剤中のグリシン濃度は１％である。該製剤にメチオニンが含まれる場合は、メチオニンは、約５ｍＭと約１５０ｍＭとの間の濃度になるように添加することができる。１つの例では、メチオニンは該製剤中の濃度が１００ｍＭになるように添加される。別の例では、メチオニンは該製剤中の濃度が７０ｍＭになるように添加される。該製剤に塩化ナトリウムが含まれる場合は、塩化ナトリウムは、約５ｍＭと約１００ｍＭとの間の濃度になるように添加することができる。１つの例では、塩化ナトリウムは該製剤中の濃度が５５ｍＭになるように添加される。
貯蔵および調製方法
冷凍
場合によっては、抗体を含む製剤は貯蔵するために冷凍する。したがって、該製剤は、冷凍−解凍のサイクルを含むような条件下で比較的安定であることが望ましい。製剤の適合性を測定する１つの方法は、製剤試料を冷凍（例えば、−２０℃または−８０℃において）および解凍（例えば、３７℃水浴における速い解凍または２℃〜８℃における遅い解凍）の少なくとも２回、例えば、３回、４回、５回、８回、１０回、またはそれ以上の回数のサイクルを受けさせ、冷凍−解凍サイクル後に蓄積しているＬＭＷ種および／またはＨＭＷ種の量を測定し、冷凍−解凍操作の前の試料中に存在するＬＭＷ種またはＨＭＷ種の量と比較する方法である。ＬＭＷ種またはＨＭＷ種の増加は安定性の低下を示している。
凍結乾燥
製剤は凍結乾燥後に貯蔵することができる。したがって、凍結乾燥後の該製剤のたんぱく質成分の安定性について製剤をテストすることは、製剤の適合性を決めるために有効である。この方法では、試料製剤は冷凍する代わりに凍結乾燥され、その元の容量に再構成し、ＬＭＷ種および／またはＨＭＷ種の存在をテストすることを除いて、上で説明した冷凍する場合の方法に似ている。凍結乾燥製剤試料は、凍結乾燥されなかった対応している製剤試料と比較される。対応している試料と比較して凍結乾燥試料中のＬＭＷ種またはＨＭＷ種の増加は、凍結乾燥試料の安定性が低下したことを示している。凍結乾燥手順をテストする適切な方法の例は、下の実施例５にも提示している。
【００３８】
一般に、凍結乾燥手順には、凍結乾燥器への試料の装填、予備冷却期間、冷凍、真空開始、一次乾燥温度への昇温、一次乾燥、二次乾燥温度への昇温、二次乾燥、および試料の密封がある。凍結乾燥手順について選択可能な追加のパラメータは、真空（例えば、ミクロン単位で）およびコンデンサ温度がある。適切な温度の上昇速度は、約０．１℃／分〜２℃／分の間、例えば、０．１℃／分〜１．０℃／分、０．１℃／分〜０．５℃／分、０．２℃／分〜０．５℃／分、０．１℃／分、０．２℃／分、０．３℃／分、０．４℃／分、０．５℃／分、０．６℃／分、０．７℃／分、０．８℃／分、０．９℃／分、および１．０℃／分である。凍結乾燥サイクルの冷凍の間の適切な棚温度は、一般に、約−５５℃〜−５℃、−２５℃〜−５℃、−２０℃〜−５℃、−１５℃〜−５℃、−１０℃〜−５℃、−１０℃、−１１℃、−１２℃、−１３℃、−１４℃、−１５℃、−１６℃、−１７℃、−１８℃、−１９℃、−２０℃、−２１℃、−２２℃、−２３℃、−２４℃、または−２５℃である。棚温度は、一次乾燥と二次乾燥とで異なってよく、例えば、一次乾燥は二次乾燥より比較的低い温度で行ってよい。限定されない例において、一次乾燥は０℃で、二次乾燥は２５℃で行うことができる。
【００３９】
場合によっては、冷凍および真空開始の前にアニーリング手順が使われる。このような場合、アニーリング時間は選択する必要があり、温度は、一般に、該組成物のガラス転移温度より高い。一般に、アニーリング時間は、約２〜１５時間、約３〜１２時間、約２〜１０時間、約３〜５時間、約３〜４時間、約２時間、約３時間、約５時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、または１５約時間である。アニーリング温度は、一般に、約−３５℃〜約−５℃、例えば、約−２５℃〜約−８℃、約−２０℃〜約−１０℃、約−２５℃、約−２０℃、約−１５℃、約０℃、または約−５℃である。場合によっては、アニーリング温度は、一般に、−３５℃〜５℃、例えば、２５℃〜−８℃、−２０℃〜−１０℃、−２５℃、−２０℃、−１５℃、約０℃、または約５℃である。
【００４０】
１つの例では、本明細書で説明した製剤中の抗ＩＬ−１３抗体は、ガラス転移温度（Ｔｇ’）より上の予備真空熱処理（アニーリング）ステップの有無、−２５℃〜３０℃の範囲の一次乾燥棚温度、および２５℃〜３０℃において２時間〜９時間の二次乾燥期間を含む種々の凍結乾燥パラメータに対して頑強であることが実証された。
【００４１】
限定されない例の１つで、５０ｍｇ／ｍＬのＩＬ−１３のたんぱく質濃度において、１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、ｐＨ６．０の製剤を、バルクで処方し、凍結乾燥した。凍結乾燥後、該製品は充填容量の約半分を用いて再構成し、１００ｍｇ／ｍｌにてたんぱく質を送達した。ＩＬ−１３抗体は、製品温度の極限に対して凍結乾燥は頑強であることが実証された（下記実施例および図１０−１２を参照のこと）。５０℃で４週間貯蔵した場合の安定性プロフィルは、多種多様な冷凍−乾燥サイクル（例えば、図１６−２０を参照のこと）を用いて調製された物質では同一であった。該サイクルの一部は、一次乾燥の間に製品温度の差異がほぼ１０℃であった（例えば、図１３）。一般に、凍結乾燥サイクルは、１０時間〜１００時間、例えば、２０時間〜８０時間、３０時間〜６０時間、４０時間〜６０時間、４５時間〜５０時間、５０時間〜６５時間にすることができる。
【００４２】
抗体製剤を貯蔵する温度範囲の限定されない例は、約−２０℃〜約５０℃、例えば、約−１５℃〜約３０℃、約−１５℃〜約２０℃、約５℃〜約２５℃、約５℃〜約２０℃、約５℃〜約１５℃、約２℃〜約１２℃、約２℃〜約１０℃、約２℃〜約８℃、約２℃〜約６℃、２℃、３℃、４℃、５℃、６℃、７℃、８℃、１０℃、１５℃または２５℃である。ある場合には、貯蔵温度にも関わらず、試料は、貯蔵中に一時的に起きる可能性がある温度変化の下で安定であり、この種の組成物について予期することができる輸送条件下で安定である。
噴霧乾燥
場合によっては、製剤は噴霧乾燥し、次いで、貯蔵する。噴霧乾燥は、当該技術分野で周知の方法を用いて行われ、変更して液体または冷凍噴霧乾燥を使用することができる（例えば、Ｎｉｒｏ  Ｉｎｃ．（ウィスコンシン州Ｍａｄｉｓｏｎ）、Ｕｐｐｅｒｔｏｎ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（英国ノッチンガム）またはＢｕｃｈｉ（ニューヨーク州Ｗｅｓｔｂｕｒｙ，Ｂｒｉｎｋｍａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．）または米国特許出願公開第２００３００７２７１８および２００３００８２２７６号からの噴霧乾燥などの方法を用いて）。
抗体品位の測定
ＬＭＷ種およびＨＭＷ種の蓄積は、抗体安定性の有効な尺度になる。製剤におけるＬＭＷかＨＭＷいずれかの蓄積が、製剤の一部として貯蔵されたたんぱく質の不安定性の指標である。ＬＭＷおよびＨＭＷ種の存在を決めるためにＨＰＬＣを備えたサイズ排除クロマトグラフィを使用することができる。この種の測定用の適切なシステム、例えば、ＨＰＬＣシステム（マサチューセッツ州ＭｉｌｆｏｒｄのＷａｔｅｒｓ）が当該技術分野で周知である。当該技術分野で周知の他のシステムは、製剤中の抗体の品位を評価するために使用することができ、これらのシステムには、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＨＭＷおよびＬＭＷ種をモニタリングする）、抗体活性のバイオアッセイ、酵素免疫測定吸着法、精製ＩＬ−１３たんぱく質を結合する能力、およびカチオン交換ＨＰＬＣ（変異体を検出し、表面電荷を観測するＣＥＸ−ＨＰＬＣ）がある。１つの例では、バイオアッセイは、細胞に基づいたアッセイであり、生物活性、すなわち、細胞からのＩＬ−１３を結合し、隔離する能力を実証するために処方された種々の濃度の抗体の存在下で、ＩＬ−１３依存性細胞増殖の抑制が調べられる。
製造品
本出願は、本明細書で説明した製剤を含む製造品および該製剤を使用するための取扱い説明書を提供する。該製造品は、該製剤を収納するのに適した容器を含むことができる。適切な容器は、無制限にあり、例えば、瓶、バイアル、シリンジ、試験管、噴霧器（例えば、超音波または振動メッシュ噴霧器）、静注溶液バッグ、または吸入器（例えば、定量吸入器（ＭＤＩ）または乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ））がある。該容器は、ガラス、金属などの適切な材料、あるいはポリカーボネート、ポリスチレン、またはポリプロピレンなどのプラスチックから形成することができる。一般に、該容器は、該製剤からたんぱく質をあまり吸収せず、該製剤の成分と反応しない材料から作られている。一部の実施態様では、該容器は、Ｗｅｓｔ  ４４３２／５０  １３１９シリコン処理した灰色の栓またはＷｅｓｔ  Ｄｕｒａｆｌｕｏｒ栓をつけた透明なガラスのバイアルである。一部の実施態様では、該容器はシリンジである。具体的な実施態様では、該製剤は、１００ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ−１３抗体（例えば、ＩＭＡ−０２６，ＩＭＡ−６３８）、１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０１％のＴｗｅｅｎ−８０、４０ｍＭのＮａＣｌを含み、充填済みのシリンジ内の溶液のｐＨは６．０である。特定の実施態様では、シリンジは自動注射装置と共に使用するのに適している。
【００４３】
噴霧器の例は限定されるものではないが、例えば、ジェット噴霧器、超音波噴霧器、および振動メッシュ噴霧器がある。これらの種のものは、液体からエアロゾルを作るために種々の方法を用いる。一般に、これらの製剤中のたんぱく質の品位を維持することができるエアロゾル発生装置は、本明細書で説明した製剤の送達に適している。
【００４４】
薬剤として対象に投与する場合に使用する製剤は、無菌である必要がある。これは、当該技術分野で周知の方法を用いて、例えば、液体の処方または凍結乾燥および再構成の前または後に無菌のろ過膜を通してろ過することにより達成される。あるいは、それが製剤の構造、成分にダメージを与えるおそれがない場合は、該製剤の成分は、加圧滅菌器により滅菌し、次いで、フィルターまたは放射線で滅菌した成分と合わせて該製剤を製造することができる。
処置方法
抗ＩＬ−１３抗体製剤は、ＩＬ−１３の活性または望ましくない発現に関連した疾患を処置する場合に有効である。この種の疾患には、関節炎、ぜんそく、炎症性腸疾患、炎症性皮膚疾患、多発性硬化症、骨粗しょう症、腱炎、アレルギー性疾患、宿主の傷害に反応した炎症、敗血症、リウマチ性関節炎、変形性関節炎、過敏性腸疾患、潰瘍性大腸炎、乾癬、系統的エリテマトーデス、および他の自己免疫性疾患などの炎症性疾患がある。この方法の特定の実施態様では、ＩＬ−１３関連疾患は、アレルギー性ぜんそく、非アレルギー性ぜんそく、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ細胞ＣＬＬ）、ホジキン病、住血吸虫病における組織の線維化、自己免疫リューマチ性疾患、炎症性腸疾患、リューマチ性関節炎、気道炎症を含む状態、好酸球増加症、線維症および過剰粘液産生（例えば、のう胞性線維症および肺線維症）、アトピー性疾患（例えば、アレルギー性鼻炎）、皮膚の炎症および自己免疫状態（例えば、アトピー性皮膚炎）、消化器官の炎症および／または自己免疫状態（例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ））、肝臓の炎症および／または自己免疫状態（例えば、肝硬変）、ウイルス性感染、強皮症および肝臓線維症などの他の臓器の線維症、アレルギー性結膜炎、湿疹、じんましん、食物アレルギー、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、潰瘍性大腸炎、ラウス肉腫ウイルス感染、ぶどう膜炎、強皮症、または骨粗しょう症である。そこで、抗ＩＬ−１３抗体製剤は、医薬組成物として使用することができる。
【００４５】
本発明は、疾患のリスクのある（または感受性が高い）対象または異常なまたは不必要なＩＬ−１３の発現または活性に関連した疾患の合併症または疾患を有する対象を処置する予防方法と治療薬方法との両方を提供する。本明細書で使われている用語「処置」は対象に治療薬を適用または投与、あるいは対象から摘出した組織または株細胞に治療薬を適用または投与することであると定義されている。該対象は、疾患、疾患の症状、または該疾患、該疾患の症状または疾患に対する素因、すなわち、治療、治癒、緩和、軽減、変質、治療、緩解、改善、または発症するために、疾患に対する素因を有する。
【００４６】
抗ＩＬ−１３抗体製剤は、経口、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、のう内、軟骨内、腔内、腹部内、小脳内、脳室内、結腸内、頚部内、胃内、肝臓内、心筋内、眼球内、骨内、骨盤内、心膜内、腹膜内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液のう内、胸腔内、子宮内、膀胱内、病巣内、急速投与、膣、直腸、ほほ側、舌下、鼻腔内、経皮的（局所的）、または経粘膜投与を含む当該技術分野で周知の方法を用いて処置する必要がある対象に投与することができる。吸入による投与では、これらの化合物は、加圧容器または適切な噴霧剤、例えば、二酸化炭素などのガスを含むディスペンサーまたは噴霧器からエアロゾル・スプレーの形で送達される。特定の実施態様では、該製剤は、除放、持続放出(extended-release)、持続放出(timed-release)、制御放出、または連続的放出製剤として投与される。一部の実施態様では、該抗体の投与を必要とする対象に該抗体を投与するために、デポー製剤が使われる。
【００４７】
経口または非経口組成物では、製剤は、均一で容易に投与できる単位剤形として調製することができる。本明細書で使われる「単位剤形」は、処置を受ける対象に対して単位製剤として適した物理的に分離した単位を意味しており、各単位は、選択された医薬担体と連携して所望の治療効果を生じるように計算された活性化合物を所定量含む。定量吸入器などの吸入方法の場合には、装置は、適切な量の製剤を送達するように設計される。
【００４８】
製剤の毒性および治療効果は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に対して治療効果のある用量）を測定する場合に、例えば、細胞培養または実験動物を用いる当該技術分野において周知の薬学操作により決めることができる。毒性効果と治療効果との間の用量比が治療指数であり、この指数は、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。
【００４９】
細胞培養アッセイと動物試験から得られたデータは、ヒトで使用する場合の用量の範囲を定式化するのに使用することができる。この種の製剤の用量は、一般に、毒性が小さいか、無毒の場合のＥＤ５０を含む血中濃度の範囲内にある。該用量は、用いた剤形および投与ルートによりこの範囲内で変動する。本発明の方法で使われる製剤では、治療効果のある用量は、細胞培養アッセイからまず推算することができる。細胞培養で測定したＩＣ５０（すなわち、症状の最大半量抑制を達成するテスト化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するために、用量は動物モデルで定式化することができる。この種の情報を使用すると、ヒトの有効用量をより正確に決めることができる。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィまたは特異的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）により測定することができる。当該技術分野で周知の適切な動物モデルは、限定されないが、例えば、抗原チャレンジおよび抗原チャレンジ後の抗原感受性ヒツジ、およびモルモットに反応して有効性が実証されたヒト以外の霊長類がある。
【００５０】
製剤は、一般に、用量が、体重ｋｇあたり抗ＩＬ−１３抗体が少なくとも約０．１ｍｇ（一般に、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ）になるように送達される。該抗体が脳で作用するならば、５０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの用量が適切かもしれない。作用部位に直接送達された場合、例えば、吸入により肺組織に直接投与された場合は、用量は下げてよい（非経口投与に比べて）。本明細書で説明した製剤は、本明細書で説明したあらゆる処置方法で使用する薬物の調製に使用できる。
併用療法
本発明の特定の態様では、本明細書で説明した製剤は修正して、他の薬剤との併用療法の一部として投与するようにすることができる。併用療法は、予め投与した治療化合物がまだ体内で有効な間に第２化合物が投与されるような２種類以上の治療化合物を併用投与する形を意味している（例えば、これら２つの化合物は患者体内で同時に有効であり、これら２つの化合物の相乗効果を含む）。例えば、種々の治療化合物が同じ製剤か別の製剤であり、あるいは同時にまたは逐次的に投与することもできる。したがって、この種の処置を受ける個体は、種々の治療薬の複合効果の恩恵を受けることができる。ＩＬ−１３抗体と同時投与および／または同時処方することができる好ましい追加の治療薬の例には、吸入ステロイド、ベータ作動薬、例えば、短時間作用型または長時間作用型のベータ作動薬、ロイコトリエンまたはロイコトリエン受容体の拮抗薬、ＡＤＶＡＩＲ（登録商標）などの複合薬、ＩｇＥ阻害剤、例えば、抗ＩｇＥ抗体（例えば、ＸＯＬＡＩＲ（登録商標））、ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、ＰＤＥ４阻害剤）、キサンチン、抗コリン薬、クロモリンなどの肥満細胞安定剤、ＩＬ−４阻害剤、ＩＬ−５阻害剤、エオタキシン／ＣＣＲ３阻害剤、および抗ヒスタミン薬がある。この種の併用は、ぜんそくおよび他の呼吸器疾患を処置するために使用することができる。ＩＬ−１３抗体と同時に投与および／または同時に処方することができる治療薬の例には、他に１つ以上のＴＮＦ拮抗薬（例えば、ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント、例えば、ｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体またはこれらの誘導体、例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合体たんぱく質，ＥＮＢＲＥＬ（商標）））、ＴＮＦ酵素拮抗薬、例えば、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、ムスカリン受容体拮抗薬、ＴＧＦ−β拮抗薬、インターフェロンガンマ、ペルフェニドン、化学治療薬、例えば、メトトレキサート、レフルノミド、またはシロリマス（ラパマイシン）またはこれらの類似体、例えば、ＣＣＩ−７７９、ＣＯＸ２およびｃＰＬＡ２阻害剤、ＮＳＡＩＤ、免疫調節薬、とりわけ、ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２およびＮＦκＢ阻害剤がある。
【００５１】
例えば、炎症状態の場合、本明細書で説明した抗ＩＬ−１３抗体製剤は、炎症性疾患または炎症状態の処置において、１つ以上の有効な他の薬剤と併用して投与することもできる。これらの薬剤は、抗ＩＬ−１３抗体と一緒に処方するか、または別の製剤とほぼ同時にまたは逐次的に投与してよい。場合によっては、該薬剤は、該製剤の抗ＩＬ−１３抗体とは異なるエピトープを有するＩＬ−１３抗体であってよい。炎症性疾患または状態の処置において、有効な他の薬剤には、抗炎症性薬剤、または消炎剤があるが、これらに限定されない。消炎剤には、例えば、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニソロン、フルオルコルトロン、トリアムシノロン、メチルプレドニソロン、プレドニリデン、パラメタゾン、デキサメタゾン、ベータメタゾン、ベクロメタゾン、フルプレドニリデン、デソキシメタゾン、フルオシノロン、フルネタゾン、ジフルコルトロン、クロコルトロン、クロベタゾール、およびフルオコルチン・ブチルエステルなどのグルココルチコイド；抗ＴＮＦ剤（例えば、エタネルセプト、インフリキシマブ）およびＩＬ−１阻害剤などの免疫抑制剤；ペニシラミン；抗炎症薬、鎮痛薬を含む非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、およびサリチル酸、セレコキシブ、ジフニサルなどの解熱薬、およびアルクロフェナク、イブテナク、イブプロフェン、クリンダナック、フェンクロラック、ケトプロフェン、フェノプロフェン、インドプロフェン、フェンクロフェナク、ジクロフェナク、フルルビプロフェン、ピプロフェン、ナプロキセン、ベノキサプロフェン、カルプロフェンおよびシクロプロフェンなどの置換フェニル酢酸塩または２−フェニルプロピオン酸塩から；ピロキシカンなどのオキシカン誘導体；メフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸およびメクロフェナム酸などのアントラニル酸誘導体、ニフルミン酸フェナメート、クロニキシンおよびフルニキシンなどのアニリノ置換ニコチン酸誘導体；ヘテロアリールが、インドメタシン、オキサメタシン、イントラゾール、アセメタジン、シンメタシン、ゾメピラク、トルメチン、コルピラクおよびチアプロフェン酸などの２−インドール−３−イルまたはピロール−２−イル基であるヘテロアリール酢酸；ベンザダックなどの鎮痛機能のあるヘテロアリールオキシ酢酸；フェニルブタゾン；エトドラ；ナブネトン；およびメトトレキサート、金塩、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、シクロスポリン、アザチオプリン、およびレフルノミドなどの疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）がある。
【００５２】
炎症性疾患または状態の処置に有効な他の治療薬には、抗酸化剤がある。抗酸化剤は、天然品でも合成品でもよい。抗酸化剤は、例えば、スーパーオキサイド・ジスムターゼ（ＳＯＤ）、２１−アニノステロイド／アミノクロマン、ビタミンＣまたはＥ、などである。他の多くの抗酸化剤は、当業者には周知である。
【００５３】
本明細書で説明した抗ＩＬ−１３抗体製剤は、炎症状態の治療計画の一部として役立つ可能性がある。該計画は、多種多様な抗炎症剤を併用することができる。例えば、本明細書で説明した抗ＩＬ−１３抗体製剤は、ＩＬ−４阻害剤、ＩＬ−５阻害剤、ＩｇＥ阻害剤、ＩＬ−９阻害剤、ＴＮＦ拮抗薬、エオタキシン／ＣＣＲ３拮抗薬、ＮＳＡＩＤ、ＤＭＡＲＤ、免疫抑制剤、ホスホジエステラーゼ阻害剤、または抗ヒスタミン薬の１つ以上と併用し投与してよい。本出願の１つの実施態様では、本明細書で説明した抗ＩＬ−１３抗体製剤は、メトトレキサートと併用し投与することができる。別の実施態様では、本明細書で説明した抗ＩＬ−１３抗体製剤は、ＴＮＦ−α阻害剤と併用し投与することができる。ぜんそくの場合、本明細書で説明した抗ＩＬ−１３抗体製剤は、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、ロイコトリエン修飾因子、長時間作用型ベータアドレナリン作動薬、テオフィリン、抗ヒスタミン薬、およびクロモリンの１つ以上と併用して投与してよい。
【００５４】
癌の場合、本明細書で説明した抗ＩＬ−１３抗体製剤は、抗血管新生因子、化学療法剤の１つ以上、または放射線療法の免疫賦活剤として、併用し投与することもできる。さらに、本明細書で説明した抗ＩＬ−１３抗体製剤の投与は、多種多様な癌の治療薬を併用してよい癌の処置方法の一部として役立つであろうと想定する。過敏性腸疾患（ＩＢＤ）の場合、本明細書で説明した抗ＩＬ−１３抗体製剤は、１つ以上の抗炎症薬と投与することもでき、さらに、改変食餌療法と併用してよい。
【実施例】
【００５５】
以下の実施例により本発明についてさらに詳細に説明する。これらの実施例は、例示のみを目的として提示している。これらの実施例は、本発明の範囲または内容を限定するものと解釈すべきではない。
（実施例１）
凍結乾燥した抗ＩＬ−１３製剤の安定性
例えば、治療への応用のために使用されるべき抗体を貯蔵する１つの方法は、凍結乾燥により調製された乾燥粉末である。したがって、凍結乾燥した抗ＩＬ−１３製剤の長期安定性を調べた。つまり、ヒト化抗ＩＬ−１３抗体（５０ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭヒスチジン、５％スクロース（重量／容量）、ｐＨ６．０を含む製剤は、無菌ろ過により調製し、発熱物質を除いた５ｍｌのチューブ状ガラスバイアル内で約３．２ｍｌを調剤し、次いで、凍結乾燥した。該製剤は、４℃、２５℃、または４０℃で、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、および１２ヶ月、並びに４℃および２５℃で１８ヶ月および２４ヶ月貯蔵し、次いで、１．３ｍｌの無菌水（ＵＳＰ）を用いて再構成し、製剤が１００ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ−１３抗体、２０ｍＭヒスチジン、および１０％スクロース、ｐＨ６．０になるように再構成した製剤を約１．６ｍｌにした。
【００５６】
ＨＭＷ種のパーセンテージは、ＳＥＣ−ＨＰＬＣを用いてアッセイした。凍結乾燥および再構成前の該製剤中のＨＭＷ種のパーセンテージは、該製剤中の総たんぱく質の１％〜１．５％の間にあり、４℃および２５℃で貯蔵したすべての試料において約１％〜２％の間にあった（図１）。４０℃で１２ヶ月貯蔵後、該製剤のＨＭＷ種は約３．５％であった（図１）。したがって、５℃および２５℃で２４ヶ月貯蔵した試料中のＨＭＷ種のレベルの増加は実質的になかった。
【００５７】
凍結乾燥した抗ＩＬ−１３抗体製剤は、細胞に基づくアッセイを用いて生物活性についてもアッセイした。該アッセイでは、ＩＬ−１３依存性細胞増殖の抑制は、生物活性、すなわち、ＩＬ−１３が、細胞に結合し、細胞から隔離する能力を実証するために種々の濃度の処方された抗体の存在下で調べた。アッセイの結果は、貯蔵されなかった種々の抗ＩＬ−１３抗体を用いた結果と比較する。図２は、この種の一組のバイオアッセイからのデータを示している。概して、あらゆる試料において２４ヶ月の貯蔵後、生物活性の量には実質的な変化はなかった。したがって、該製剤は、生物活性により測定したように、少なくとも２４ヶ月凍結乾燥した製剤の貯蔵に適している。
【００５８】
これらのデータは、本明細書で説明した凍結乾燥した抗ＩＬ−１３製剤は、少なくとも２４ヶ月の貯蔵に適することを実証している。
（実施例２）
高濃度の液体製剤の安定性
場合によっては、抗ＩＬ−１３抗体製剤は、液体フォーマットで貯蔵するのが望ましい。したがって、比較的高濃度の抗ＩＬ−１３抗体を含む液体抗ＩＬ−１３製剤の長期安定性について調べた。つまり、ヒト抗ＩＬ−１３抗体（１００ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース（重量／容量）を含み、ｐＨ６．０である製剤は、発熱物質を除いたガラスのバイアルに該製剤を無菌ろ過して調製し、貯蔵した。該製剤は、２℃〜８℃、１５℃または２５℃において、約６週間、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、および２４ヶ月あるいは４０℃において約６週間、３ヶ月、および６ヶ月貯蔵し、ＨＭＷ種、ＬＭＷ種の存在、生物活性、および各時間における濃度についてアッセイした。
【００５９】
ＨＭＷ種のパーセンテージは、ＳＥＣ−ＨＰＬＣを用いてアッセイした。貯蔵前の製剤中の高分子量種のパーセンテージは、製剤中の総たんぱく質の２％〜３％の間にあり、最長９ヶ月２℃〜８℃、１５℃および２５℃において貯蔵した試料では約２％〜４％の間にあり（図３）、２℃〜８℃および１５℃で最長２４ヶ月の場合は約２％〜４％の間にあつた。４０℃で９ヶ月貯蔵後、該製剤のＨＭＷ種含有量は９％未満であった（図３）。したがって、比較的低温条件で２４ヶ月貯蔵した試料中のＨＭＷ種では、レベルの実質的な増加はなかった。
【００６０】
抗ＩＬ−１３抗体製剤中のＬＭＷ種のパーセンテージは、１００ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ−１３抗体製剤についてもアッセイした。貯蔵前の製剤中のＬＭＷ種のパーセンテージは、貯蔵前の製剤中の総たんぱく質の約１％〜２％の間にあり、２℃〜８℃、１５℃、および２５℃で最長９ヶ月貯蔵した試料では約１％〜３％の間にあり（図４）、さらに、２℃〜８℃で最長２４ヶ月の場合は約１％〜３％の間であった。４０℃で６ヶ月貯蔵後、該製剤のＬＭＷ種の濃度は、１１％未満であった（図４）。したがって、比較的低温条件で２４ヶ月貯蔵した試料中のＬＭＷ種では、レベルの実質的な増加はなかった。
【００６１】
さらに、別の安定性パラメータは、１００ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ−１３抗体製剤を用いて調べた結合活性の該パラメータであった。これらの実験では、該製剤の結合活性のパーセンテージは、２℃〜８℃、１５℃、２５℃および４０℃において、約１ヶ月、３ヶ月、および６ヶ月、および２℃〜８℃と２５℃のみで９ヶ月貯蔵後測定し、対照と比較した。該アッセイは、標識付きの抗ＩＬ−１３サイトカイン試薬に対する抗ＩＬ−１３の結合親和性を明確に観測する。
【００６２】
該製剤の初期結合活性は、標準試料の約１２０％であり、６ヶ月のテスト期間ではいずれの試料でもほとんど変わらなかった（図５）。測定した結合活性は、標準の最高約２００％であり、これは、一般に、このアッセイでエラーと観察され、時間による試料の結合活性の変化は本質的にはないことを反映し、結合結果には温度に関連したトレンドはなかった。
【００６３】
１００ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ−１３抗体製剤の安定性パラメータとしてバイオアッセイも用いた。該アッセイは、上の実施例１で説明したように行った。試料は、２℃〜８℃、１５℃または２５℃において、約６週間、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、および２４ヶ月あるいは４０℃において約６週間、３ヶ月、および６ヶ月貯蔵した。データは、ｍｇあたりの結合ユニットとして表記した（図６）。
【００６４】
試料は、貯蔵前は約４．５×１０７Ｕ／ｍｇであり、培養後は４．５〜７．５×１０７Ｕ／ｍｇであった。これは、本質的には、貯蔵中試料の生物活性に変化がないことを反映している。値の変動は、アッセイに内在する変動を反映している。試料内の生物活性の量は低下していないので、これらのデータは、抗ＩＬ−１３の貯蔵に関する該製剤の適合性をさらに支持している。
【００６５】
２℃〜８℃、１５℃または２５℃において、約６週間、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、および２４ヶ月あるいは４０℃において約６週間、３ヶ月、および６ヶ月貯蔵した１００ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ−１３抗体製剤の濃度は、ＵＶ／可視によってもアッセイした。研究したすべての温度における液体製剤の濃度は、ほぼ類似した濃度であった（図７）。
（実施例３）
低濃度液体製剤の貯蔵
本発明の製剤および抗ＩＬ−１３抗体の貯蔵への該製剤の適合性をさらに調べるために、、比較的低濃度の抗ＩＬ−１３を含む製剤についてテストした。該製剤は、０．５ｍｇ／ｍｌのヒト化抗ＩＬ−１３抗体、１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロースを含み、ｐＨ６．０の液体製剤であった。これらの試料は、５℃で６ヶ月および１２ヶ月貯蔵後にテストし、次いで、種々の安定性パラメータ、すなわち、ＨＭＷ種およびＬＭＷ種、たんぱく質濃度、および結合活性についてテストした。ＨＭＷ種およびＬＭＷ種は、上で説明した方法を用いてアッセイした。たんぱく質濃度は２８０ｎｍにおける光学密度を測定し、３２０ｎｍにおける散乱を差し引くことによりＵＶ−可視分光法を用いてアッセイし、該たんぱく質のモル吸光係数を用いて計算した。結果は表１に要約している。
【００６６】
【表１】
0005419709.tif 000002
これらのデータは、アッセイした安定性パラメータにはいずれも実質的な変化はなく、比較的低濃度の抗ＩＬ−１３抗体を含む抗ＩＬ−１３抗体製剤の適合性を支持していることを実証している。
（実施例４）
エアロゾル化した抗ＩＬ−１３製剤の適合性
抗ＩＬ−１３抗体製剤の１つの用途は、例えば、噴霧により肺全体に直接投与することである。製剤噴霧の適合性をテストするために、０．５ｍｇ／ｍｌのヒト化抗ＩＬ−１３抗体、１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロースを含み、ｐＨ６．０である製剤を、市販の噴霧器を用いてエアロゾル化し、該エアロゾルを回収し、分解し（ＨＭＷ種の形成）、ＳＥＣ−ＨＰＬＣを用いた回収、および結合活性をアッセイして品位をテストした。結果は表２に要約している。
【００６７】
【表２】
0005419709.tif 000003
これらのデータは、アッセイした安定性パラメータにはいずれも実質的な変化はなく、噴霧剤形として用いる抗ＩＬ−１３抗体製剤の適合性を支持していることを実証している。
（実施例５）
混合およびろ過
上で説明した製剤中の抗ＩＬ−１３抗体は、２つの普通の製造ユニット操作である混合とろ過とに対して頑強であることが実証された。つまり、抗ＩＬ−１３抗体は５０ｍｇ／ｍｌのたんぱく質濃度で、製造中に用いた条件に匹敵する上昇インペラー速度および時間にて混合した。集めた各試料は、出発物質に比べて濃度（ＵＶ−可視分光法を用いてアッセイした）、高分子量種（ＳＥＣ−ＨＰＬＣを用いてアッセイした）および生物活性（結合アッセイを用いてアッセイした）に変化を示さなかった。
【００６８】
混合試験の後、抗ＩＬ−１３抗体は窒素加圧下で普通の０．２２μｍの無菌フィルターに通した。一般に、窒素圧力は、約３０ｐｓｉｇ以下である。ろ過後、濃度（ＵＶ−可視分光法を用いてアッセイした）、ＨＭＷ種（ＳＥＣ−ＨＰＬＣを用いてアッセイした）および生物活性（結合アッセイを用いてアッセイした）は、出発物質に比べて変化を示さなかった。
（実施例６）
凍結乾燥および再構成
抗体の凍結乾燥および再構成条件に関わる手順の限定されない実施例の１つで、製剤中５０ｍｇ／ｍｌの濃度の３．２ｍｌの抗体、１０ｍＭのヒスチジン、５％（５０ｍｇ／ｍｌ）のスクロースを含み、ｐＨ６．０である製剤を、透明なガラス管バイアル（Ｗｅｓｔ４４３２／５０１３１９シリコン処理した灰色の栓を付けた）内で調剤し、冷凍乾燥する。冷凍乾燥すると、該バイアルの乾燥内容物は、抗体１６０ｍｇ、ヒスチジン３．２×１０−５モル、およびスクロース１６０ｍｇである。冷凍乾燥から得られる固体ケーキは、固体の密度（約１ｇ／ｍｌの密度において約３２０ｍｇ）に基づいて約０．３２ｍｌになる。該試料を再構成するために、該バイアルの内容物に１．３ｍｌの水を加える。該バイアルの内容物は、希釈容量（１．３ｍｌ）、並びに固体自身の容量（０．３ｍＬ）、全部で約１．６ｍｌに溶解し、該製剤の濃度は、抗体約１００ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン約２０ｍＭ、およびスクロース約１０％で、ｐＨ６．０である。
（実施例７）
試料の調製および凍結乾燥
抗ＩＬ−１３抗体試料の調製
２０ｍＭのヒスチジン、１０％スクロース、ｐＨ６．０の約８５ｍｇ／ｍｌの濃度において、ヒト化抗ＩＬ−１３抗体の冷凍試料を３７℃の水浴中で解凍した。解凍物質を等分した１２５ｍＬを、分子量６ｋＤ〜８ｋＤの遮断スペクトル／ポル透析管を用いてヒスチジン１０ｍＭ、スクロース５％、ｐＨ６．０に対して透析した。得られた溶液は、１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロースを用いて５０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ６．０を目標にして希釈した（薬剤として用いる抗ＩＬ−１３抗体製剤）。
凍結乾燥の実施
すべてのランにおいて、ドアの前にアルミニウム遮蔽板および高さ６３ｍｍの棚を用いて凍結乾燥器内の放射線を最小限に抑制した。すべてのランにおいて、凍結乾燥器に一貫した荷重をかけるために１つのトレイを完全に満たした。栓は、加圧熱処理し、たんぱく質のバイアルはすべて乾燥した。たんぱく質試料のすべてのバイアルは、脱イオン水ですすぎ、発熱物質を除去した。残りのトレイを満たすために使われたバイアルと栓とは、放置した。
【００６９】
抗ＩＬ−１３抗体製剤を播種したバイアルは、１６０ｍｇ／バイアルを目標にしてバイオセーフティー・キャビネット内で無菌で調製した。安定性試験用のバイアルは、各ランの前に実施例６で説明した３．２ｍｌのフレッシュな製剤で満たした（予め凍結乾燥しなかった物質）。凍結乾燥の間に、追加のバイアルは、凍結乾燥器に対して一貫した荷重を維持するために目標の凍結乾燥サイクルと相性がいい適切な緩衝液を満たした。凍結乾燥は、プロテインアレイ内に熱電対を取り付けて観測した。
変調示差走査熱量測定（ｍＤＳＣ）
ｍＤＳＣ用のすべての試料は、０．５℃の振幅および１００秒の時間で変調モードにて測定した。凍結乾燥後の粉末では、試料は２℃／分で１５０℃まで加熱した。すべての粉末試料は、窒素パージしたグローブ・ボックスを用いて調製した。液体試料では、昇温はすべて０．５℃／分で行い、温度は凍結乾燥サイクルにおいて使用する温度に一致させた。最終昇温速度は、２℃／分で行い、ガラス転移を大きく見せるようにした。液体試料は、実験作業台で調製した。
冷凍乾燥顕微鏡撮影
冷凍乾燥顕微鏡撮影を行うために、凍結乾燥を模倣して、試料は０．５℃／分で−４０℃まで冷却した。真空開始後、温度は徐々に上げて昇華中温度の関数として試料中の構造変化を観察した。凍結乾燥顕微鏡では、圧力調節ができないので、試料は完全真空下で乾燥した。
水分分析
凍結乾燥試料中の水分をアッセイするためにカールフィッシヤー滴定を用いた。凍結乾燥試料は、３ｍｌのメタノールを用いて再構成した。５００μＬの注入を２度または３度行った。水分１％の標準液を、適合性のチェックとして使用後に注入した。
フーリエ変換赤外分光法（ＦＴＩＲ）
ＦＴＩＲは、乾燥粉末状態の抗体の二次構造を測定した。約１ｍｇの処方、乾燥したたんぱく質を含むペレットを、３００ｍｇのＫＢｒ内に分散させ、押圧し、２００回走査した。データ収集後の分析には、スクロース・プラセボのスペクトルの差し引き、基準線補正、平滑化、二次導関数、およびエリアの正規化があった。
安定性
製剤中の凍結乾燥抗体の安定性は、貯蔵時間および温度の関数として評価した。凍結乾燥した抗ＩＬ−１３抗体の試料は、凍結乾燥後、２℃〜８℃で４週間貯蔵後および５０℃で２週間と４週間貯蔵後アッセイした。冷蔵試料は、人が立って入れる大きさの冷蔵冷却室に貯蔵した。高温試料は、５０℃にセットしたＬａｂ  Ｌｉｎｅ  Ｉｍｐｅｒｉａｌ  Ｉｎｃｕｂａｔｏｒで貯蔵した。適切な時点で、試料は貯蔵庫から取りだし、アッセイする前に室温まで加温または冷却した。
再構成および外観
凍結乾燥後の分析および貯蔵安定性分析の両方からの凍結乾燥製剤のバイアルは、注入用の１．２ｍｌの無菌水を用いて再構成する前、その間、およびその後に目視で調べた。バイアルは、ケーキ色、品位、水分、微粒子、および再構成する前の欠陥について、黒と白との両方の背景に対してライトボックス内で調べた。凍結乾燥ケーキを目視で調べた後、キャップとクリンプシールとはデクリンパーを用いてバイアルから外した。この栓は取り外し、注入する無菌水をピペットを用いてバイアル内に徐々に入れた。ケーキの十分な湿りを確実にするために渦運動を用いて、希釈液を分注した。希釈液を完全に分注したら、標準ラボタイマーを用いて再構成の開始を計時し、該バイアルに再び栓をした。最後の固体片が溶解した時に、再構成は完了した。両手の間でバイアルを回転させ再構成を促進した。凍結乾燥したケーキを再構成する過程で、透明性、泡立ち、発泡、などの溶解溶液の状態について観察し、記録した。一旦、再構成が完了したら再構成時間を記録し、バイアルを数時間台上に置き、得られた溶液を安定させると、再構成の間に形成された気泡は大部分消散した。再構成した溶液は、次いで、黒と白との両方の背景に対して、ライトボックスの中で色、透明性、および微粒子を検査した。
高速サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）
抗ＩＬ−１３抗体製剤の２μＬの純試料をガードカラム（ＴｏｓｏＨａａｓ  ＰａｒｔＮｏ．０８５４１およびＮｏ．０８５４３）を備えたＧ３０００ｓｗｘｌカラムに注入した。移動相には、２５０ｍＭの塩化ナトリウムと共にりん酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）を加えた。流速は、０．７５ｍｌ／分、処理時間は３０分であった。紫外吸光度を、波長２８０ｎｍで観測した。主な抗ＩＬ−１３抗体ピークをＷａｔｅｒｓ  Ｅｍｐｏｗｅｒ（商標）ソフトウエアを用いて高低両分子量種から分離し、クロマトグラムを積分した。
濃度測定のための紫外−可視吸光度分光法（Ａ２８０）
１００ｍｇ／ｍｌの濃度において抗体を有する製剤の試料１０μｌを、それぞれ、１０ｍＭヒスチジン、５％スクロース、ｐＨ６．０からなる１９９０μｌおよび３９９０μｌに添加することにより、約０．５ｍｇ／ｍｌおよび０．２５ｍｇ／ｍｌに希釈した。得られた溶液２００μｌを、９６ウエルのマイクロプレートの個々のウエルに入れ、ブランクとして緩衝液も入れた。このプレートは、紫外吸光度については、波長３２０ｎｍおよび２８０ｎｍで、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ（登録商標）Ｐｌｕｓプレートリーダーで読みとった。２８０ｎｍの吸光度から３２０ｎｍの吸光度を差し引き、吸光係数（１．４０５ｍＬ／ｍｇ−ｃｍ）により割り、経路長（１ｃｍ）を掛けて各ウエルの溶液のたんぱく質濃度を測定した。適切な希釈因子を適用し、平均たんぱく質濃度を決めた。
光散乱に関する紫外−可視吸光度分光法（Ａ４２０）
分析対象の各抗ＩＬ−１３抗体試料の２００μｌを、９６ウエルのマイクロプレート上の個々のウエルに入れた。緩衝液ブランクは、対照として用いた。このプレートは、可視吸光度については波長４２０ｎｍで、Ｓｐｅｃｔｒｏｍａｘ  Ｐｌｕｓプレートリーダーで読みとった。
電気化学発光（ＥＣＬ）結合アッセイ
試料は、大腸菌Ｆｌａｇ抗ＩＬ−１３抗体結合アッセイフォーマット（メリーランド州Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＢｉｏＶｅｒｉｓ）を利用して結合分析を受けた。該アッセイは、９６ウエルのプレートフォーマットに分配した試料について行った。
抗ＩＬ−１３抗体バイオアッセイ
試料は、ＴＦ−１細胞増殖バイオアッセイを用いて生物活性についてテストした。抗ＩＬ−１３抗体は、アレルギー性疾患およびぜんそくの発症に関与した受容体を有する細胞の活性化をｉｎ  ｖｉｖｏで予防する細胞表面受容体へのＩＬ−１３サイトカインの結合を妨害する。この研究で用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏバイオアッセイ・モデルは、ＩＬ−１３受容体を発現し、ＩＬ−１３サイトカインの存在下で増殖する株細胞（ヒトＴＦ１赤白血病株細胞；ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２００３）からなる。
【００７０】
ＩＬ−１３抗体によるＴＦ１細胞のＩＬ−１３反応の抑制は、パラメータ４つのロジスティック方程式を用いて一致した。生物活性（相対力）は、アッセイのスタンダードとして用いた標準物質の抑制曲線とＩＬ−１３抗体テスト試料の抑制曲線を比較することにより測定できる。
サイクル開発戦略
一連の逐次ステップ（下で説明する）を用いて、凍結乾燥サイクルを開発した。
臨界製品温度の確認
抗ＩＬ−１３抗体に関する臨界製品温度は、２つの直交法、すなわち、変調示差走査熱量計（ｍＤＳＣ）および冷凍乾燥顕微鏡により確認した。これら２つの方法は、冷凍製品のガラス転移温度（ｍＤＳＣ）および得られる崩壊の確認に使われる（冷凍乾燥顕微鏡）。一次乾燥の間に製品をこの温度以下に維持する凍結乾燥サイクルは、無傷のケーキ構造を生じるはずである。最低温度適切温度は、−２５℃であると推測され、したがって、この温度は、一般に、本明細書で説明した抗体の凍結乾燥方法および製剤を開発する時に、テスト条件および製剤をデザインした操作に含まれる。
凍結乾燥サイクルの実行
上で説明した試験結果に基づいて、貯蔵または他の操作に適した凍結乾燥製剤を調製するのに適した凍結乾燥操作を開発する場合に興味深い３つのパラメータを調べるために３種類の凍結乾燥サイクルがなされた。調べた第１のパラメータは、以前の安定性試験からのサイクルを反復する対照サイクルであった。事前の開発的安定性サイクルは、すべて、このサイクルを利用したので、第１のパラメータはこの分析の出発点として役立った。
【００７１】
テストした第２のパラメータは、アニーリングの影響であった。上の対照サイクルを用いて凍結乾燥した抗ＩＬ−１３抗体製剤の再構成時間は、かなり長く、例えば、約１００秒〜５００秒である（図１６）。冷凍溶液のガラス転移温度より上で、冷凍熱処理の間の追加ステップとしてアニーリングを組み込むと、真空を開始する前に氷の結晶サイズを大きくするのに役立つ。このように、結晶サイズが大きくなると、凍結乾燥の最後に乾燥ケーキの気孔サイズが大きくなる。比較的大きな気孔は、凍結乾燥ケーキ内への水の浸透を改善し、再構成を改善することができる。
【００７２】
テストした第３のパラメータは、積極的なサイクルであった。一次乾燥温度を対照サイクル設定点よりもかなり顕著に上げると、一次乾燥の間に抗ＩＬ−１３抗体製剤製品の温度が顕著に上げることになる。この凍結乾燥サイクルは、凍結乾燥の間の製品温度に対する抗ＩＬ−１３抗体製剤の感受性の評価として役立ち、公式の凍結乾燥ロバスト性試験を行う前の早期臨床ロット間の製造の本筋からの逸脱の評価に使用することができる。
凍結乾燥サイクルの評価
抗ＩＬ−１３抗体製剤に関する選択された凍結乾燥サイクルの評価は、２つの態様に分かれ、すなわち、凍結乾燥後に行われたテストに基づいた即時比較、および加速条件下で培養後生じた潜在的な長期の影響の２つである。
臨界製品温度の確認
抗ＩＬ−１３抗体製剤製品は、ほぼ５０％のたんぱく質を含んだ。そこで、該たんぱく質は、冷凍および凍結乾燥状態の物理特性を支配するものと予期された。凍結乾燥する前に、準環境変調示差走査熱量測定（ｍＤＳＣ）で、該製剤の冷凍濃縮アモルファス相ガラス転移温度を調べた。この実験では、抗ＩＬ−１３抗体は、５％スクロース中５０ｍｇ／ｍｌの濃度、１０ｍＭヒスチジン、ｐＨ６．０であった。これらの条件下では、最低確認転移は−１１℃であった（図８）。臨界温度は、冷凍乾燥顕微鏡温度進行をアッセイして確認した（図９Ａ−９Ｆ）。これらの実験では、構造は、−２５℃から−１５℃へ加熱することにより失われ、−１８℃へ冷却して再獲得した。構造は、さらに、−１０℃から溶融開始温度である−４℃に加熱して失われた。該試料を−１６℃に冷却して観察された類似の構造により示したように、すべての変化は可逆的であった。したがって、可逆転移は、約−１５℃、および−１０℃と−６℃との間の別の転移で観察された。温度を−１６℃以下に下げると、最初の構造に匹敵する乾燥構造になる。この情報に基づいて、凍結乾燥間以下に留める臨界温度として−１５℃の製品温度が選択された。この方法は、凍結乾燥の臨界温度を選択する方法を例示している。
【００７３】
３つの凍結乾燥サイクルを連続して行った。サイクル・トレースは、図１０−１２に示している。すべてのサイクルは、一次および二次の乾燥の間チェンバーの圧力を１００ｍＴに維持した。昇温速度は、図１１と図１２の一次乾燥と二次乾燥との間を除いてすべて０．５℃／分であった。両図の場合は、これらのサイクルでは０．２℃／分であった。多様なパラメータは、表３に要約している。
【００７４】
【表３】
0005419709.tif 000004
凍結乾燥サイクルの評価：凍結乾燥後
３サイクルの各々（対照、積極的、およびアニーリング）の場合の一次乾燥の間の製品（抗ＩＬ−１３抗体）温度プロフィルは、図１３に示している。アニーリングおよび対照製品の熱電対は類似していたが、積極的なサイクルの棚温度は上昇し、一次乾燥中にほぼ１０℃上がった。
【００７５】
凍結乾燥後、３つの凍結乾燥サイクルの各々からの抗ＩＬ−１３抗体製剤のバイアルは、２つは固体としておよび再構成した液体として、生化学的品位についてテストした。固体状態は、次の方法、すなわち、ｍＤＳＣ（ガラス転移温度を測定する）、ＢＥＴによる表面積測定、カール・フィッシャー水分滴定、フーリエ変換赤外分光（たんぱく質の二次構造を測定する）、およびケーキの外観を用いて評価した。再構成液体は、再構成時間、外観、たんぱく質濃度に関わる２８０ｎｍにおける紫外吸光度、光散乱に関わる４２０ｎｍにおける可視部吸光度、高分子量部分の計量に関わるＳＥＣ−ＨＰＬＣ、表面電荷不均一性およびＩＧＥＮ結合に関わるＣＥＸ−ＨＰＬＣ、および生物活性に関わるＴＦ−１により評価した。
【００７６】
３つのサイクルは、すべて、微粒子または水分を含めて、見かけ上欠陥のない白い固体ケーキを生じた。対照サイクルのｍＤＳＣサーモグラムは、図１４に示している。表５は、一次熱転移の各サイクルに関する結果を要約している。５３℃における転移は、大きくはないが、他の２つの凍結乾燥サイクルではなお検出可能であった。この転移は、５０℃における加速貯蔵では、たんぱく質の安定性には影響はないようであった。
【００７７】
凍結乾燥後の製剤の二次構造を比較すると、該たんぱく質の二次構造は３試料間では同等であることが判明した（表４、図１５）。試料抗体のアミドＩ領域において粉末フーリエ変換赤外分光（ＦＴＩＲ）の２次導関数を示す図１５では、各走査の累積エリアは１に正規化した。表４に含まれている情報は、試料間の比較の根拠としてβ−シート帯（１６２４〜１６５７ｃｍ−１）における総面積の画分を示している。乾燥状態の二次構造を液体状態の該製剤と比較すると、相対的なβ−シートエリアの差が目立った（液体として０．３７に対して、凍結乾燥粉末として０．２５〜０．２７）。この差は、ほとんどは、凍結乾燥状態では水が存在しないこと、およびたんぱく質の立体配座の対応する変化によるものである。
【００７８】
【表４】
0005419709.tif 000005
各サイクルからの１つのバイアルは、１．２ｍｌの注入用の無菌水を用いて再構成した。再構成中の外見、再構成時間、および再構成６０分後の外見は、各サイクルについて記録し、表６に要約している。３つのサイクルはすべて、ケーキを溶解するために物理的かくはん（両手の間の回転）を必要とする。積極的なサイクル（サイクル１）および対照サイクル（サイクル２）のケーキは、製造に使える期間内に壊れて、溶解し始めた。再構成時間は、それぞれ、１４０秒と７３秒であった。再構成時間は、多くが、比較的短く、より頑固なケーキ片の溶解に費やされた。アニーリング・サイクル（サイクル３）の試料は、再構成に最も長い時間がかかった。その結果は、アニーリング・ステップは、より多孔性のケーキが形成されるので、再構成時間が短くなるであろうという説に異議を唱えている。該ケーキは、再構成したときに無傷のままであり、３７３秒かけて徐々にとけるところは、Ｌｉｆｅｓａｖｅｒ（商標）の溶解に似ている。３つのサイクルはすべて、再構成の間に種々の量の泡を生じた。対照サイクルが泡の量が最も多く、次いで、４２０ｎｍにおけるＵＶ／可視により溶液散乱を観察すると、アニーリング・サイクル、積極的サイクルの順番であった（表５を参照のこと）。一旦再構成すると、試料は６０分間安定させることができた。その時間で、泡の多くは消散し、３つの溶液はすべて、黒と白両方の背景に対してライトボックスを用いて調べた場合外観は似ていた。３つのサイクルはすべて、色合いは黄色で、わずかに乳白色に着色し、アニーリング試料がいく分強い乳白色であった。
【００７９】
３つの試料はすべて、本明細書で説明したアッセイを用いて生化学的品位についてアッセイした。これらのデータにより、凍結乾燥サイクルの関数として、再構成後抗ＩＬ−１３抗体製剤の品位には見かけ上の差はないことが実証された。該製剤中の抗体の濃度を測定することにより実証されたように、回収されたたんぱく質の量は、３つのすべてのサイクルで本質的には同等であった。サイズ排除クロマトグラフィにより測定した製剤中の高分子量化合物の量およびカチオン交換クロマトグラフィにより測定した表面電荷不均一性は、３つのすべてのサイクルで本質的には同等であった。凍結乾燥サイクルの関数として、ＩＧＥＮ結合アッセイおよびＴＦ−１バイオアッセイにより測定した分子の機能性の変化は、確認されなかった。
【００８０】
【表５】
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安定性
本明細書で説明した製剤中の抗ＩＬ−１３抗体の品位に対して、調べた凍結乾燥サイクルの関数として、凍結乾燥後直ぐに影響があるとは思われないが、貯蔵安定性が凍結乾燥サイクルの関数として変わるか否かを評価することは重要である。これをテストするために、上の「安定性」のセクションにおいて概要を述べたように短期の加速安定性試験を行った。試料は、再構成時間の間、２８０ｎｍにおけるＵＶ／可視によるたんぱく質濃度の変化、４２０ｎｍにおけるＵＶ／可視による溶液光散乱の変化、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによる高分子量凝集物における変化、およびＩＧＥＮ結合アッセイによる結合活性の変化を観測した。
【００８１】
図１６は、再構成時間を貯蔵時間および貯蔵温度の関数として示すために、プロットしている。再構成時間の絶対数には変動があるが、積極的サイクルおよび５℃で貯蔵したアニーリング・サイクルの例外はあるが、トレンドは凍結乾燥後の分析で観察されたものと類似している。対照サイクルの試料は、再構成が最も迅速に行われ、次に速いのは積極的サイクルの試料である。アニーリング・サイクルの試料は再構成が最も遅い。時点による変動、５℃で貯蔵した積極的およびアニールした試料の凍結乾燥後のトレンドからの逸脱は、変数の１つ以上の調節がうまくいかないことによるものと考えられる。これらには、再構成中ケーキが湿る速度、注入用の水がバイアル内に分配される時にケーキがどれくらいおよびどの部分が湿るか、および再構成中バイアルがどのようにして激しく撹拌されるか、が含まれる。これらの変数は、すべて、主観的であり、オペレーター依存性であり、および再構成時間および光散乱に影響を与える可能性がある。
【００８２】
図１７に示したたんぱく質濃度は、貯蔵中（０〜４週間）テストした３つのサイクルの間で、または温度（５℃および５０℃）の関数として、大きな変動はなかった。最初の時点から２週間までの濃度の上昇は、１つの時点から次の時点までの再構成容量の測定の精度の違いによるものかもしれない。
【００８３】
図１８に示した溶液散乱は、貯蔵の途中で、または温度の関数として３つのサイクルの間で大きく変わることはなかった。対照サイクルの開始時点における結果の上昇は、サイクルの差の結果よりむしろ、試料取扱いによる泡同伴が追加されたためであった。
【００８４】
試料は、貯蔵中存在するＨＭＷ種のパーセンテージについてもアッセイした。これらのアッセイは、ＳＥＣ−ＨＰＬＣを用いて行った。図１９に示したように、データは、高分子量凝集物のパーセンテージは、３つの凍結乾燥サイクルの間で貯蔵中大きな変動はなかったことを実証している。
【００８５】
これらの試料は、９６ウエル・フォーマット（ＩＧＥＮ）におけるプレート・アッセイを用いて結合についてもアッセイした。図２０は、該製剤中の抗ＩＬ−１３抗体の結合は２℃〜８℃かまたは５０℃において４週間のコース中凍結乾燥サイクルの関数として大きく変動しなかったことを示している。
【００８６】
これらのデータは、該製剤中の抗ＩＬ−１３抗体が、調べた３つの凍結乾燥サイクルの関数として同等の安定性を有することを実証している。アニーリング・ステップの追加は、再構成を改善するよりむしろ再構成を悪化するように見える。積極的サイクルは、一次乾燥中製品温度をほぼ１０℃上げることが認められたことによりロバスト性評価として作用するであろう。
結論
該製剤中の抗ＩＬ−１３抗体は、凍結乾燥中の製品温度の極端な上昇に対して頑強であることが実証された。５０℃で４週間貯蔵すると安定性は、一次乾燥中に製品温度にほぼ１０℃の差がある物質とほぼ同等であった。
（実施例８）
ＩＬ−１３抗体製剤
ＩＬ−１３抗体液体製剤の使用可能な賦形剤を選別するために、短期加速安定性試験を、貯蔵温度４０℃で６週間、Ｗｅｓｔ４４３２／５０の栓を備えた１３ｍｍのＷｅｓｔガラス・バイアルか、またはＢＤ  Ｈｙｐａｋ（商標）である予め充填可能なシリンジに１００ｍｇ／ｍｌのＩＭＡ−６３８抗体の０．５ｍｌを用いて行った。該抗体の安定性は、次いで、２８０ｎｍにおける吸光度を用いた濃度測定およびＳＥＣ−ＨＰＬＣによりテストした。
【００８７】
テストした製剤には、ｐＨを５．０から５．５へ、さらに、６．０へ変えたヒスチジン、コハク酸ナトリウム、および酢酸ナトリウムなどの種々の緩衝液、種々の濃度（０％、２．５％、５．０％、および１０％）のスクロース、およびソルビトール、グリシン、アルギニン、およびメチオニンなどの他の添加剤が含まれていた。下の表６には、この選別でテストした製剤を提示している。
【００８８】
【表６−１】
0005419709.tif 000007
【００８９】
【表６−２】
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４０℃で６週間貯蔵した場合の回収率（％）は、ＵＶ／可視により抗体の濃度を測定して評価し、図２１に示している。回収率は製剤間ではほぼ類似していたが、最高回収率は製剤４と８とで得られた。
【００９０】
４０℃で６週間貯蔵している間の高分子量種のパーセントの増加は、図２２に示している。薬液充填済みシリンジは、バイアルに比べて高分子量凝集物の含有量が少なかった（図２２、製剤４を参照のこと）。製剤６、８、１４および１５は、高分子量種の増加が最小であった（０．５％と１．２５％との間）。
【００９１】
４０℃で６週間貯蔵している間の低分子量種のパーセントの増加は、図２３に示している。ＨＭＷとは対照的に、薬液充填済みのシリンジは、ガラスバイアルに比べてＬＭＷ種の増加が少なかった。製剤１−１３の％ＬＭＷの変化は約３％〜４％であった。
【００９２】
結論として、大抵の製剤は、許容できる安定性を示し、最適ｐＨは５〜６．５であることを確認し、種々の適切な賦形剤の添加が可能であり、すなわち、賦形剤がないことはたんぱく質の安定性にとって有害であった。
（実施例９）
該製剤のＴｗｅｅｎ必要性の評価
界面劣化との関連において実施例８から主要な候補製剤においてＴｗｅｅｎが必要であるか、どうかを検討するために、振とう試験および冷凍−解凍試験を、表７に載せた８つの主要な候補を用いて行った。
【００９３】
【表７】
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振とう試験は、ガラスバイアル中の１００ｍｇ／ｍｌのＩＭＡ−６３８液体製剤を０．２５ｍｌ用い、ゲルシェーカー上約２００ｒｐｍにて２４時間該ガラスバイアルを室温で振とうして行った。振とうした試料の濃度は、振とうしなかった試料（対照）と比較した。種々の抗体製剤の振とう後のＩＭＡ−６３８の濃度は、図２４に示している。濃度は製剤間でほとんど差はなかった。図２５は、ＩＭＡ−６３８製剤の振とう後ＨＭＷ種（％）を提示している。該製剤のＨＭＷ種は、約１．２％〜約１．５％の範囲内にあった。
【００９４】
冷凍−解凍試験は、ポリプロピレン・チューブ中で１００ｍｇ／ｍｌのＩＭＡ−６３８液体製剤を０．２５ｍｌ用いて行った。冷凍サイクルは−８０℃で、解凍サイクルは３７℃で行った。冷凍−解凍サイクルは、１回（ＦＴ１）、３回（ＦＴ３）、または５回（ＦＴ５）行った。冷凍−解凍サイクルを受けなかった対照に比べて、冷凍−解凍サイクル後の試料の濃度は、図２６に示している。冷凍−解凍後のＨＭＷ種（％）も測定し、図２７に示している。冷凍−解凍後の製剤中のＨＭＷ種（％）は、約１．２％〜約１．５％の範囲内にあった。
【００９５】
Ｔｗｅｅｎの存在は、これらの条件の場合、剪断感受性に対して保護する効果を明確に証明しなかった。
（実施例１０）
薬液充填済みシリンジにおける液体ＩＬ−１３抗体製剤の評価
下の表８に載せた１００ｍｇ／ｍｌのＩＭＡ−６３８抗体製剤の安定性は、Ｗｅｓｔ  ４４３２／５０の栓をつけた薬液充填済みのＢＤ  Ｈｙｐａｋ（商標）シリンジに１ｍｌの製剤を詰めて、７ヶ月にわたり４℃、２５℃、および４０℃においてＨＭＷ種（％）を測定して評価した。これらの試験の結果は、図２８、２９、および３０に示している。
【００９６】
【表８】
0005419709.tif 000010
４℃では、ｔ＝０ヶ月からｔ＝７ヶ月まで、ＨＭＷ種は０．７０％と０．９０％との間にあった。２５℃では、ＨＭＷ種は約０．７５％と約２．００％との間にあり、凝集物は時間と共に増加した。４０℃では、凝集物は、すべての製剤において時間と共に増加し、製剤１〜３および５では７ヶ月目に、４．５％と６．５％との間にあった。凝集物の増加が最も少なかったのは、製剤４であった（７ヶ月で約３％）。
【００９７】
１０ｍＭのヒスチジンと５％のスクロースからなる製剤にアルギニンとＴｗｅｅｎとを添加すると、試験したすべての温度で薬液充填済みシリンジとの関連でＩＬ−１３抗体の安定性を改善するように見える。
【００９８】
したがって、これらの賦形剤の１つまたは両方が、抗ＩＬ−１３製剤の安定性を、さらに、高めると考えられる。
（実施例１１）
薬液充填済みシリンジにおけるＩＭＡ−６３８液体製剤に対するアルギニンの効果
１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、および０．０１％のＴｗｅｅｎ８０で処方した１００ｍｇ／ｍｌのＩＭＡ−６３８抗体製剤の安定性に対する低濃度のアルギニン（０．１％〜２％）の添加効果を、Ｗｅｓｔ  Ｗ４０２３  Ｄｕｒａｆｌｕｏｒ栓をつけた、薬液充填済みの１ｍｌのＢＤ  Ｈｙｐａｋ（商標）ＳＣＦシリンジを４０℃で４週間、８週間、１２週間、および２８週間貯蔵後、ＨＭＷ種のパーセント変化により調べた。この試験の結果は、図３１に示している。
【００９９】
このデータは、アルギニンを添加すると時間と共に形成されたＨＭＷ凝集物の量が低下することを示している。
（実施例１２）
ＰＡＲＩＬＣ  Ｐｌｕｓ噴霧器からのＩＭＡ−６３８エアロゾルの特徴付け
本発明のＩＬ−１３抗体製剤は、エアロゾルとして含む種々の手段により対象に投与することができる。エアロゾルは、液体または固体の粒子が空気に懸濁したものである。本発明の一部の実施態様では、ＩＬ−１３抗体製剤は、肺への送達に使われる。肺送達に関わる薬剤粒子は、通常、幾何学的直径よりも空気力学的直径により特徴付けられる。空気力学的直径は、問題の粒子と同じ重力沈降速度を有する単位密度（１ｇ／ｍｌ）の球の直径である。空気力学的直径は、密度および形状などの空気中の粒子の挙動に影響を及ぼす物理特性を考慮に入れている。粒子が沈降する速度は、空気力学的直径に比例する。空気力学的直径に関する空中浮遊粒子量の分布の中央値は、質量中央値空気力学的直径（ＭＭＡＤ）と呼ばれる。幾何学的標準偏差（ＧＳＤ）は、ＭＭＡＤに関する分散の尺度である。最後に、微粒子画分（ＦＰＦ）は、特定の空気力学的直径（４．７μｍ未満）以下である粒子の画分である。ＭＭＡＤ、ＧＳＤおよびＦＰＦは、Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｃａｓｃａｄｅ  Ｉｍｐａｃｔｏｒ（ＡＣＩ）により測定する。ＡＣＩは、噴霧器、定量吸入器、乾燥粉末吸入器、環境など、から生じた液滴／粒子のサイズ分布を測定する。
【０１００】
この実験では、ＰＡＲＩＬＣ  Ｐｌｕｓ噴霧器により５０ｍｇ／ｍｌおよび０．５ｍｇ／ｍｌのＩＭＡ−６３８製剤（１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、ｐＨ６．０）から作られたエアロゾルのＭＭＡＤ、ＧＳＤおよびＦＰＦを測定した。表９はこの試験の結果を提示している。
【０１０１】
【表９】
0005419709.tif 000011
評価したＩＭＡ−６３８製剤は、噴霧により抗ＩＬ−１３抗体の肺への送達に適しているエアロゾル特性（粒子サイズおよびたんぱく質の品位を含む）を有する。
（実施例１３）
凍結乾燥したＩＬ−１３抗体、ＩＭＡ−０２６の安定性
凍結乾燥した抗ＩＬ−１３抗体製剤の長期安定性を調べた。つまり、抗ＩＬ−１３抗体、ＩＭＡ−０２６（５０ｍｇ／ｍｌ）、１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース（重量／容量）、ｐＨ６．０を含む製剤は、無菌ろ過により調製し、約３．２ｍｌはＷｅｓｔ  ４４３２／５０  １３１９シリコン処理した灰色の栓を有する５ｍｌの発熱物質を除いたガラス管バイアルに分配し、次いで、凍結乾燥した。該製剤は、４℃、２５℃、または４０℃で、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、および１２ヶ月貯蔵し、次いで、凍結乾燥物は、１．３ｍｌの無菌水（ＵＳＰ）を用いて再構成し約１．６ｍｌにしたので、該製剤は、１００ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ−１３抗体、２０ｍＭのヒスチジン、および１０％のスクロース、ｐＨ６．０であった。
【０１０２】
ＨＭＷ種のパーセンテージは、ＳＥＣ−ＨＰＬＣを用いてアッセイした。凍結乾燥および再構成の前の該製剤中のＨＭＷ種のパーセンテージは、製剤中の総たんぱく質の約１％であり、４℃および２５℃で貯蔵したすべての試料中でも約１％であった（図３２）。４０℃で１２ヶ月貯蔵後、該製剤のＨＭＷ種は約３．０％であった（図３２）。したがって、５℃および２５℃で１２ヶ月貯蔵した試料中のＨＭＷ種のレベルの増加はほとんどなかった。
【０１０３】
凍結乾燥した抗ＩＬ−１３抗体製剤は、細胞を基礎にしたアッセイを用いて生物活性についてもアッセイした。該アッセイでは、ＩＬ−１３依存性の細胞増殖の抑制を、生物活性を証明するために、すなわち、細胞に結合する能力およびＩＬ−１３を細胞から隔離する能力を実証するために種々の濃度の処方された抗体の存在下で調べた。アッセイの結果は、貯蔵しなかった抗ＩＬ−１３抗体を用いた結果と比較している。図３３は、この種の１組のバイオアッセイからのデータを示している。全般的に見れば、あらゆる試料において１２ヶ月の貯蔵後、生物活性の量の変化はほとんどなかった。したがって、生物活性により測定したように、該製剤は、少なくとも１２ヶ月間凍結乾燥した製剤の貯蔵に適している。
【０１０４】
これらのデータは、本明細書で説明した凍結乾燥抗ＩＬ−１３製剤は、少なくとも１２ヶ月間の貯蔵に適していることを実証している。
（実施例１４）
凍結乾燥した抗ＩＬ−１３製剤、ＩＭＡ−０２６の安定性
この実験は、用いた抗体がＩＭＡ−０２６であったことを除いて、実施例１で説明したとおりに行った。用いたＩＭＡ−０２６製剤は、５０ｍｇ／ｍｌのＩＭＡ−０２６、１０ｍＭのヒスチジン、５％のスクロース、０．０１％のＴｗｅｅｎ−８０、ｐＨ６．０であった。これらの結果は、実施例１で得られた結果とほぼ類似していた。したがって、凍結乾燥したＩＭＡ−０２６は、凍結乾燥したＩＭＡ−６３８のように安定な製剤である。
（実施例１５）
Ｔｗｅｅｎがある場合とない場合のＩＭＡ−０２６のエアロゾル化
この実験では、ＨＭＷ（％）、回収率（％）、および生物活性に対するＩＭＡ−０２６エアロゾル化の効果を調べた。この実験のデータは、下の表１０に示している。
【０１０５】
【表１０】
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表１０から分かるように、ＩＭＡ−０２６のプレおよびポスト噴霧化特性は、Ｔｗｅｅｎの有無とは関係なく、ほぼ類似している。したがって、ＩＭＡ−０２６はエアロゾル製剤として適切である。
他の実施態様
本発明は、その詳細な説明と併せて説明しているが、前述の説明は例示することを意図しており、本発明の範囲を限定するものではない。本発明の範囲は、添付した特許請求の範囲により規定されている。他の態様、利点、および変形例は、次の特許請求の範囲内にある。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ−９Ｆ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５Ａ】
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【図３５Ｂ】
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【配列表】
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