(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物６、化合物７及び化合物８から選ばれる化合物又はその薬学的に許容される塩。
【化１】
0005525612.tif 000010
【請求項２】
請求項１記載のいずれかの化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する医薬。
【請求項３】
請求項１記載のいずれかの化合物又はその薬学的に許容される塩を含有するASK1（Apoptosis signal-regulating kinase 1）阻害剤。
【請求項４】
請求項１記載のいずれかの化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する筋萎縮性側索硬化症（Amyotrophic lateral sclerosis）の予防及び／又は治療剤。
【請求項５】
請求項１記載のいずれかの化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する肝炎の予防及び／又は治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Apoptosis signal-regulating kinase 1（以下、ASK1と表す場合もある）阻害活性を有し、例えば、筋萎縮性側索硬化症（Amyotrophic lateral sclerosis、以下、ALSと表す場合もある）の予防及び／又は治療剤として有用な含窒素複素環誘導体又はその薬学的に許容される塩等に関する。
【背景技術】
【０００２】
MAPキナーゼ(mitogen-activated protein kinase、以下、MAPKと表す)カスケードは、サイトカインレセプター刺激や物理化学ストレス等の多様な刺激により活性化したMAPKキナーゼキナーゼ(以下、MAPKKKと表す)が下流のMAPKキナーゼ(以下、MAPKKと表す)をリン酸化することによりMAPKKを活性化し、活性化したMAPKKが更に下流のMAPKをリン酸化するという、真核生物に共通かつ普遍的に存在するシグナル伝達系である。MAPKカスケードは、細胞においては増殖や生存、分化、アポトーシス等、種々の細胞応答を誘導すると共に、個体レベルでは、癌、炎症、虚血性疾患、神経変性疾患等の様々な病態において重要な役割を果たしている。【０００３】
ASK1はMAPKKKの一つであり、サイトカインレセプター刺激のほか、酸化ストレスや小胞体ストレス等の物理化学ストレスによっても強く活性化される。構成的活性化型ASK1を細胞に過剰発現させると、SEK1-JNK経路とMKK3/6-p38経路を選択的に活性化すると共にアポトーシスを惹起する。一方、上皮細胞や未分化な神経細胞においては、ASK1の活性化を介してp38を活性化する経路が分化や生存を誘導することも報告されている。従って、ASK1は細胞の生死を制御するだけでなく、分化においても重要な役割を果たしていると考えられる。【０００４】
ALSは、運動神経が特異的に障害される進行性疾患である。ALSは、主に壮年期に発症し、筋萎縮が徐々に全身に広がり、歩行困難、言語障害、嚥下障害、呼吸障害に及び、気管切開/人工呼吸器装着等を施さなければ発症後3〜5年で死に至るきわめて重篤な疾患である。ALSは、「難病性疾患克服研究事業対象疾患」に指定されているにもかかわらず、日本国内での患者数は約7000人と、他の神経変性疾患(アルツハイマー病、パーキンソン病等)に比べて患者数が少ないため、治療薬開発への取り組みが遅れている。現在の治療法は、適度なリハビリテーションによる筋力低下予防と、唯一の保険適応薬剤であるリルゾール（グルタミン酸の神経終末放出を抑制する薬物）による一時的な病態進行の遅延だけであり、ALSの病態分子メカニズムに基づく根本的な治療法は皆無である。【０００５】
ALSの原因を解明する上でのブレイクスルーは、家族性ALSの原因遺伝子として1993年にRosenらによって同定されたCu/Zn superoxide dismutase 1（SOD1）の遺伝子変異の発見である。全ALS患者のうち約10％が家族性であり、そのうちの約20％がSOD1遺伝子変異による。原因遺伝子であるSOD1の発見は、家族性ALSのみならず孤発性ALSの病態解明にも飛躍的な進歩をもたらすものと期待されているが、ALSに共通する病態を説明しうる分子メカニズムは明らかにされていない。SOD1遺伝子上には、これまで100種類以上の点変異が報告されており、それらの多くが優性遺伝形式をとること、幾つかの変異型SOD1トランスジェニックマウスがALSと類似した症状を呈すること、ならびにSOD1タンパク質の機能喪失によっては病態を発症しないこと等から、変異型SOD1タンパク質が何らかの獲得性神経細胞毒性を発揮し、運動神経細胞死とそれに伴う個体の神経症状をもたらすものと考えられている。しかし、その際に変異型SOD1が細胞内でどのようなシグナルを発信し、どのようなメカニズムで細胞を傷害するかという点については不明である。【０００６】
一條らは、ALSにおける変異型SOD1による神経細胞死分子メカニズムとして、小胞体ストレスが深く関与していることを明らかにしている(Genes Dev. 2008年, Jun 1;22(11):1451-64頁)。すなわち、変異型SOD1が特異的に結合する標的タンパク質の一つとして、小胞体の品質管理に重要な役割を担う小胞体膜タンパク質Derlin-1を同定し、その結合が神経細胞の小胞体品質管理機構の破綻をきたし、小胞体ストレスを惹起することを見出した。さらに、変異型SOD1依存的小胞体ストレス誘導による神経細胞死のメディエーターとして、ストレス応答性MAPキナーゼの一つであるASK1が関与することを明らかにしている。従って、ASK1の阻害剤は、ALSの予防及び／又は治療剤になり得る可能性がある。【０００７】
1−アルキル置換キノリン−4−オン誘導体（特許文献1、2）、ATP-binding cassettes transporterの調節作用を有するキノリン−4−オン誘導体（特許文献3）、PGD2産生抑制作用、PGD2合成酵素阻害活性を有する複素環誘導体（特許文献4）、及び1−フェニル置換キノリン−4−オン誘導体（特許文献5）が知られている。【０００８】
更に、以下の化合物A（CAS Registry 番号：1091987-46-0）、化合物B（CAS Registry 番号：1115424-11-7）、化合物C（CAS Registry 番号：929844-56-4）、化合物D（CAS Registry 番号：743441-24-9）、化合物E（CAS Registry 番号：440656-72-4）、及び化合物F（非特許文献1）が知られている。【０００９】
【化１】
0005525612.tif 000002
【００１０】
【化２】
0005525612.tif 000003
【００１１】
【化３】
0005525612.tif 000004
【００１２】
【化４】
0005525612.tif 000005
【００１３】
【化５】
0005525612.tif 000006
【００１４】
【化６】
0005525612.tif 000007
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】国際公開第97／04775号パンフレット
【特許文献２】国際公開第97／04779号パンフレット
【特許文献３】国際公開第2006／002421号パンフレット
【特許文献４】国際公開第2005／094805号パンフレット
【特許文献５】国際公開第2003／018579号パンフレット
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】「バイオオーガニック・メディシナル・ケミストリー・レターズ（Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．）」、2008年、第18巻、pp3369−3375
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明の目的は、ASK1阻害活性を有し、例えば、ALSの予防及び／又は治療剤として有用な含窒素複素環誘導体又はその薬学的に許容される塩等を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は、以下の（１）〜（５）に関する。
（１）以下の化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物６、化合物７及び化合物８から選ばれる化合物又はその薬学的に許容される塩。【００１９】
【化７】
0005525612.tif 000008
【００２０】
（２）前記（１）記載のいずれかの化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する医薬。
（３）前記（１）記載のいずれかの化合物又はその薬学的に許容される塩を含有するASK1阻害剤。
（４）前記（１）記載のいずれかの化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する筋萎縮性側索硬化症（Amyotrophic lateral sclerosis）の予防及び／又は治療剤。
（５）前記（１）記載のいずれかの化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する肝炎の予防及び／又は治療剤。
【発明の効果】
【００２１】
本発明により、ASK1阻害活性を有し、例えば、ALSの予防及び／又は治療剤として有用な含窒素複素環誘導体又はその薬学的に許容される塩等が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、野生型SOD1及び変異型SOD1（G93A）レンチウィルスを感染させた初代培養運動神経細胞に対する薬物の作用を表す。横軸は、溶媒投与群（ジメチルスルホキシド、以下、ジメチルスルホキシドをDMSOと表す）、及び化合物６投与群（0.1μM、0.3μM、1μM、3μM）を表し、縦軸は、生存する運動神経細胞数（SMI-32抗体陽性かつDAPI陽性細胞）を表す。また、各投与群において、左側カラム（白色カラム）は野生型SOD1を表し、右側カラム（斜線カラム）は変異型SOD1（G93A）を表す。
【図２】図２は、野生型SOD1及び変異型SOD1（G93A）レンチウィルスを感染させた初代培養運動神経細胞に対する薬物の作用を表す。横軸は、溶媒投与群（DMSO）、及び化合物６投与群（0.1μM、0.3μM、1μM、3μM）を表し、縦軸は、生存するグリア細胞数（抗GFAP抗体陽性かつDAPI陽性細胞）を表す。また、各投与群において、左側カラム（白色カラム）は野生型SOD1を表し、右側カラム（斜線カラム）は変異型SOD1（G93A）を表す。
【図３】図３は、化合物６及び化合物７の肝炎治療作用を表す。図３Ａにおいて、横軸の0h及び5hは各々0時間後及び5時間後の血清中のアラニンアミノトランスフェラーゼ（以下、ALTと表す）値を表し、5hにおける左カラムは薬物非投与群、右カラムは化合物６投与群を表す。縦軸は血清中のALT値を表す。図３Ｂにおいて、横軸の0h、3.5h及び5hは各々0時間後、3.5時間後及び5時間後の血清中のALT値を表し、3.5h及び5hにおける左カラムは薬物非投与群、右カラムは化合物７投与群を表す。縦軸は血清中のALT値を表す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
化合物の薬学的に許容される塩は、例えば薬学的に許容される酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩等を包含する。化合物の薬学的に許容される酸付加塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩等の有機酸塩等が挙げられ、薬学的に許容される金属塩としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等が挙げられ、薬学的に許容されるアンモニウム塩としては、例えばアンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩等の塩が挙げられ、薬学的に許容される有機アミン付加塩としては、例えばモルホリン、ピペリジン等の付加塩が挙げられ、薬学的に許容されるアミノ酸付加塩としては、例えばリジン、グリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸等の付加塩が挙げられるがこれらに限定されるものではない。
【００２４】
次に代表的な化合物の薬理作用について、試験例により具体的に説明する。なお、以下の試験例における％は体積％を表す。
【００２５】
試験例１：ASK1阻害活性
GenBankにアクセッション番号NM_005923で登録されているASK1のアミノ酸配列６４９から９４６までをコードする遺伝子をpGEX-6P1(GEヘルスケア)に導入し、BL21(GEヘルスケア)にトランスフォームした。２８℃で培養、IPTG（イソプロピル-β-チオガラクトピラノシド）で発現誘導して菌体回収後、超音波破砕した上清から、GSH-sepharose (GEヘルスケア)によりGST-ASK1（GST(glutathione S-transferase)融合ASK1（アミノ酸配列649から946）蛋白質）を精製した。
【００２６】
96穴の黒色プレート(住友ベークライト)にGST-ASK1（50-100 ng）と3 μM ATPを含む45μLの反応溶液(40 mM MOPS (3-Morpholinopropanesulfonic acid)/NaOH pH 7.9, 0.1 mM EDTA（ethylenediaminetetraacetic acid）)に試験化合物のDMSO溶液（10%）5 μLを添加し、室温で60分間保温した。反応後、50 μLのKinase-Glo (プロメガ)を加え、室温で10分間保温してトップカウント（パーキンエルマー）で化学発光を測定した。Kinase-Gloのプロトコールに従って、化合物のASK1活性の阻害値を計算した。
なお、化合物５は化合物３の塩酸塩である。
【００２７】
【表１】
0005525612.tif 000009
【００２８】
以上の結果より、本発明の化合物はASK1阻害活性を有することが分かった。
【００２９】
試験例２：SOD1(G93A)の過剰発現による運動神経細胞死に対する抑制作用
＜初代運動神経細胞培養＞
C57BL/6マウスの妊娠12.5日後の胎仔より脊髄を摘出し、0.05%トリプシン溶液中で37℃、15分間静置した。トリプシン処理した細胞を0.1% ポリエチレンイミンでコートしたカバーガラス(直径13 mm)に6×105cells/cm2の密度で播種し、DMEM/F12Ham (Sigma) (10% Fetal bovine serum (FBS), 1% G5-supplement(Gibco))中で培養した。1時間後、7倍量のDMEM/F12Ham (2% Horse Serum, 10 mg/ml Bovine serum albumin (BSA), 10 mg/ml Insulin, 26 ng/ml sodium selenite, 20 ng/ml Triiodothyronine (T3), 100 mg/ml conalbumin, 20 mg/ml hydrocortisone, 13 ng/ml progesterone, 100 pg/ml Brain-derived neurotrophic factor (BDNF), 10 ng/ml Ciliary neurotrophic factor (CNTF), 100 pg/ml neurotrophin-3 (NT-3), 100 U/ml penicillin/streptomycin)をさらに加えて一晩培養した。1日後と3日後に全量、6日後に半量をDMEM/F12Ham培地(2% Horse Serum, 10 mg/ml BSA, 10 mg/ml Insulin, 26 ng/ml sodium selenite, 20 ng/ml T3, 100 mg/ml conalbumin, 20 mg/ml hydrocortisone, 13 ng/ml progesterone, 100 pg/ml BDNF, 10 ng/ml CNTF, 100 pg/ml NT-3, 100 U/ml penicillin/streptomycin)で培地交換を行い培養した。
【００３０】
＜SOD1レンチウィルス感染およびASK1阻害剤(化合物６)投与＞
上記の初代運動神経細胞培養の開始から7日後に、野生型SOD1レンチウイルス又は変異型SOD1(G93A)レンチウィルスを感染させ、12時間後に化合物６（DMSO溶液)を各濃度にて投与した。溶媒投与群（DMSO投与群）をコントロール群とした。レンチウィルス投与72時間後に、細胞免疫染色を行った。
【００３１】
＜細胞免疫染色＞
運動神経細胞をリン酸緩衝生理食塩水（PBS）で洗い、3.7% ホルムアルデヒド(in PBS)で処置して細胞を固定した。再びPBSで洗った後、0.2% Triton X 100 (in PBS) で処置し、PBSで洗浄した。1% FBS (in PBS) によりブロッキングを60分間行った後、一次抗体として抗非リン酸化Neurofilament H(SMI-32抗体:COVANCE社)と抗glial fibrillary acidic protein (GFAP)抗体(DAKO社)を、二次抗体としてmouse IgG-FITC抗体と抗rabbit IgG-Texas Red抗体を用いて染色した。PBSで洗浄後、Prolong Gold antifade reagent with 4',6-diamino-2-phenylindole (DAPI)(invitrogen)を核染色剤および抗退色剤として加え封入した後、蛍光顕微鏡で観察した。
【００３２】
＜生細胞測定＞
SMI-32抗体陽性かつDAPI陽性細胞を生運動神経細胞として、抗GFAP抗体陽性かつDAPI陽性細胞を生グリア細胞として数えた。
結果を図１、図２に示す。
【００３３】
レンチウィルスを用いたSOD1(G93A)の過剰発現によって約80%の運動神経細胞死が起こることが示されている(Genes Dev. 2008年, Jun 1;22(11):1451-64頁)。一方、支持細胞であるGFAP陽性のグリア細胞は、SOD1(G93A)によって影響を受けない。これらの結果とほぼ同様の結果が、図１及び図２のコントロール群（溶媒DMSO投与群）において観察された。この運動神経細胞死実験系にASK1活性阻害剤（化合物６）を作用させたところ、0.1μM、0.3μM、1μMと濃度依存的に運動神経細胞死の抑制が観察された（図１）。しかしながら、3μMにおいては野生型SOD1を発現させた細胞においても、約70%の運動神経細胞死が観察され、化合物６による運動神経細胞毒性が認められた（図１）。また、グリア細胞においても、3μMでは約40%の細胞死が観察された（図２）。
【００３４】
従って、in vitro初代運動神経細胞培養の実験系においては、1μMまでの濃度において化合物６は変異型SOD1(G93A)依存的運動神経細胞死抑制効果があることが明らかとなった。
【００３５】
以上の結果より、本発明の化合物は、変異型SOD1(G93A)依存的運動神経細胞死抑制効果を介し、ALSの予防及び／又は治療剤として有望であることが示唆された。
【００３６】
試験例３：肝炎への治療作用
＜化合物６のFasによる肝障害に対する影響＞
マウス（C57BL/6、オス）17匹を2群に分け、一方の群（9匹）に化合物６を100 mg/kgで経口投与し（薬物投与群）、他方の群（8匹）には溶媒（10% DMSO, 10% Cremophore EL）を投与した（薬物非投与群）。薬物投与群及び薬物非投与群に90分後に0.4 μg/gの抗Fas抗体(Jo2, BD PharMingen社)を腹腔内投与した。各群の抗Fas抗体投与の0時間後および5時間後の血清中のALT値を測定した。薬物投与群は、0時間後は3匹、5時間後は6匹の、薬物非投与群は、0時間後は3匹、5時間後は5匹の平均を取り、データは平均+/- SEMで示した。
【００３７】
＜化合物７のFasによる肝障害に対する影響＞
マウス（C57BL/6、オス）20匹を2群に分け、一方の群（10匹）に化合物７を100 mg/kgで経口投与し（薬物投与群）、他方の群（10匹）には溶媒（10% DMSO, 10% Cremophore EL）を投与した（薬物非投与群）。薬物投与群及び薬物非投与群に90分後に0.4 μg/gの抗Fas抗体(Jo2, BD PharMingen社)を腹腔内投与した。各群の抗Fas抗体投与の0時間後、3.5時間後及び5時間後の血清中のALT値を測定した。薬物投与群は、0時間後は3匹、3.5時間後は3匹、5時間後は4匹の、薬物非投与群は、0時間後は3匹、3.5時間後は4匹、5時間後は3匹の平均を取り、データは平均+/- SEMで示した。
結果を図３Ａ（化合物６）、図３Ｂ（化合物７）に示す。
【００３８】
C57BL/6マウスにJo2を投与するとALTが上昇し、肝障害が惹起された。しかしながら、Jo2投与の90分前に100 mg/kgの化合物６あるいは化合物７を投与すると、ALTが低下していることから肝障害が軽減されたことが分かった。従って、抗Fas抗体誘発肝障害実験系においては、化合物６および化合物７に肝障害軽減効果があることが明らかとなった。
以上の結果より、本発明の化合物は、肝炎の予防及び／又は治療剤として有望であることが示唆された。
【００３９】
本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩は、そのまま単独で投与することも可能であるが、通常各種の医薬製剤として提供するのが望ましい。また、それら医薬製剤は、動物（人又は人以外の動物、特に哺乳動物）に使用されるものである。
【００４０】
本発明に係わる医薬製剤は、活性成分として本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩を単独で、又は任意の他の治療のための有効成分との混合物として含有することができる。また、それら医薬製剤は、活性成分を薬学的に許容される一種又はそれ以上の担体（例えば、希釈剤、溶剤、賦形剤等）と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られている任意の方法により製造される。
【００４１】
投与経路としては、治療に際し最も効果的なものを使用するのが望ましく、経口又は、例えば静脈内等の非経口を挙げることができる。
投与形態としては、例えば錠剤、注射剤等が挙げられる。
錠剤は、乳糖等の賦形剤、澱粉等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、ヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤等を用いて製造でき、経口投与に適当である。
注射剤等は、塩溶液、ブドウ糖溶液又は塩水とブドウ糖溶液の混合液等の希釈剤又は溶剤等を用いて製造できる。
【００４２】
本発明の化合物及びその薬学的に許容される塩の投与量及び投与回数は、投与形態、患者の年齢、体重、治療すべき症状の性質もしくは重篤度等により異なるが、通常経口投与の場合、成人一人あたり、0.01〜1000 mg、好ましくは0.05〜100 mgの範囲で、1日1回ないし数回投与する。静脈内投与等の場合、成人一人あたり0.001〜1000 mg、好ましくは0.01〜100 mgを1日1回ないし数回投与する。しかしながら、これら投与量及び投与回数に関しては、前述の種々の条件により変動する。
【００４３】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されることはない。
なお、実施例で用いられるプロトン核磁気共鳴スペクトル（1H-NMR）においては、化合物及び測定条件によって交換性プロトンが明瞭には観測されないことがある。なお、シグナルの多重度の表記としては通常用いられるものを用いるが、bsとは見かけ上幅広いシグナルであることを表す。
【実施例１】
【００４４】
Ｎ−［４−（６，７−ジメトキシキノリン−４−イルオキシ）フェニル］−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物１）
文献［ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．），２００６年，４９巻，７０−７９頁］に従って合成した４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸エチル（４．３６ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）にエタノール（１００ｍＬ）、水（５ｍＬ）、水酸化カリウム（１２ｇ、１８２ｍｍｏｌ）を順に加え、加熱還流下、２時間攪拌した。反応液を室温に冷却し、１mol/L塩酸を加えｐＨ３にした。析出した沈殿を濾取し、真空下で乾燥することにより４−ヒドロキシキノリン−３−カルボン酸（３．６６ｇ、収率９６％）を得た。【００４５】
４−ヒドロキシキノリン−３−カルボン酸（１．５ｇ、７．９８ｍｍｏｌ）、文献［バイオオーガニック・メディシナル・ケミストリー（Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．），２００３年，１１（２３）巻，５１１７−５１３４頁］に従って合成した４−（６，７−ジメトキシキノリン−４−イルオキシ）アニリン（２．１５ｇ、７．２５ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（２．７８ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（２．２２ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）にクロロホルム（７３ｍＬ）、トリエチルアミン（３．６４ｇ、３６．３ｍｍｏｌ）を順に加え、加熱還流下、３時間攪拌した。反応液を冷却後、水を加えて分液した。水層をクロロホルムで２回抽出した後、有機層を合わせて水、食塩水で順に洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去して得られた残渣をクロロホルム／メタノール系のカラムクロマトグラフィーで精製し、得られた粗結晶をクロロホルム／メタノール／ジエチルエーテルで再結晶することにより標題の化合物（１．７７ｇ、収率５２％）を得た。【００４６】
1H-NMR (CDCl3, 270 MHz): δ 12.60 (s, 1H), 11.72 (bs, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.55 - 8.46 (m, 2H), 7.93 - 7.85 (m, 2H), 7.73 - 7.64 (m, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.55 - 7.46 (m, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.24 - 7.17 (m, 2H), 6.51 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 4.01 (s, 3H)
質量分析値(ESI-MS, m/z): 468(M+1)+, 466(M-1)-
【実施例２】
【００４７】
Ｎ−［４−（６，７−ジメトキシキノリン−４−イルオキシ）フェニル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物２）
文献［バイオオーガニック・メディシナル・ケミストリー・レターズ（Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．），２００３年，１３巻，１１８７−１１８９頁］に従って合成した２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（９７ｍｇ、０．５１３ｍｍｏｌ）を実施例１と同様の方法でアミド化反応に付した。加熱還流下で終夜攪拌した後、室温に冷却し、析出した結晶を濾取することにより標題の化合物（９５ｍｇ、収率６５％）を得た。【００４８】
1H-NMR (DMSO-d6, 300 MHz): δ 12.69 (bs, 1H), 12.27 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.49 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.93 - 7.86 (m, 2H), 7.76 - 7.67 (m, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.50 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.39 - 7.28 (m, 3H), 6.51 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.94 (s, 3H)
質量分析値(ESI-MS, m/z): 468(M+1)+, 466(M-1)-
【実施例３】
【００４９】
Ｎ−｛３−フルオロ−４−［６−メトキシ−７−（２−モルホリノエトキシ）キノリン−４−イルオキシ］フェニル｝−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物３）
特許文献（国際公開第０３／０００６６０号パンフレット）に従って合成した４−（７−ベンジルオキシ−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ）−３−フルオロアニリン（１０ｇ、２５．６ｍｍｏｌ）にトリフルオロ酢酸（１５０ｍＬ）及びメタンスルホン酸（１ｍＬ）を加え、加熱還流下で２時間攪拌した。室温に冷却後、減圧下で溶媒を留去し、得られた残渣に水酸化ナトリウム水溶液を加えてアルカリ性にした。不溶物を濾取し、水で洗浄後に真空下で乾燥することにより４−（４−アミノ−２−フルオロフェノキシ）−６−メトキシキノリン−７−オール（７．２０ｇ、収率９４％）を得た。【００５０】
４−（４−アミノ−２−フルオロフェノキシ）−６−メトキシキノリン−７−オール（４．５ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）、炭酸カリウム（１０．４ｇ、７５．０ｍｍｏｌ）及び１−ブロモ−２−クロロエタン（６．２３ｍＬ、７５．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で終夜攪拌した後、炭酸カリウム（２ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）を追加して室温でさらに１日攪拌した。反応液に水を加え酢酸エチルで３回抽出し、有機層を合わせて飽和食塩水で３回洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、得られた残渣を酢酸エチルに懸濁させ、濾取することにより、４−［７−（２−クロロエトキシ）−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ］−３−フルオロアニリン（２．６１ｇ、収率４８％）を得た。【００５１】
４−［７−（２−クロロエトキシ）−６−メトキシキノリン−４−イルオキシ］−３−フルオロアニリン（２．６１ｇ、７．１９ｍｍｏｌ）にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）、炭酸カリウム（５．０ｇ、３６．０ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（２．１６ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）及びモルホリン（３．１４ｍＬ、３６．０ｍｍｏｌ）を加え、７０℃で２日間攪拌した。更に炭酸カリウム（１ｇ、７．２３ｍｍｏｌ）及びモルホリン（０．６ｍＬ、６．８８ｍｍｏｌ）を追加して７０℃で終夜攪拌した。室温に冷却し、水を加えて酢酸エチルで２回抽出した。有機層を合わせて、飽和食塩水で２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後に減圧下で溶媒を留去した。得られた残渣を酢酸エチルに懸濁させ、濾取することにより３−フルオロ−４−［６−メトキシ−７−（２−モルホリノエトキシ）キノリン−４−イルオキシ］アニリン（１．７４ｇ、５８％）を得た。【００５２】
３−フルオロ−４−［６−メトキシ−７−（２−モルホリノエトキシ）キノリン−４−イルオキシ］アニリン（５０．０ｍｇ、０．１２１ｍｍｏｌ）、４−ヒドロキシキノリン−３−カルボン酸（２５ｍｇ、０．１３２ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（４７．０ｇ、０．２４５ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（３７．５ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ）にクロロホルム（８ｍＬ）、トリエチルアミン（８４μＬ、０．６０６ｍｍｏｌ）を順に加え、加熱還流下、終夜攪拌した。反応液を冷却後、食塩水で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去して得られた残渣を酢酸エチルに懸濁させて濾取することにより標題の化合物（５２．０ｍｇ、収率７４％）を得た。【００５３】
1H-NMR (CDCl3/CD3OD, 300 MHz): δ12.72 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.48 - 8.39 (m, 2H), 8.00 (dd, J = 2.2, 12.5 Hz, 1H), 7.73 - 7.65 (m, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.53 - 7.40 (m, 3H), 7.36 (s, 1H), 7.27 - 7.16 (m, 1H), 6.44 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.31 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.77 - 3.69 (m, 4H), 2.93 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.67 - 2.57 (m, 4H)
質量分析値(ESI-MS, m/z): 585(M+1)+, 583(M-1)-
【実施例４】
【００５４】
Ｎ−［４−（６，７−ジメトキシキノリン−４−イルオキシ）フェニル］−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物４）
文献［テトラへドロンレターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．），２００７年，４８（１５）巻，２７６５−２７６８頁］に従って合成したＮ−エチル−４−フルオロアニリン（２．３７ｇ、１７．０ｍｍｏｌ）に２−プロパノール（５ｍＬ）及び５−（メトキシメチレン）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン（３．８０ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）を加えて１００℃で４０分間攪拌した。室温に冷却後、減圧下で溶媒を留去した。残渣をジエチルエーテルに懸濁させ濾取した残渣をさらに精製することなく次の反応に用いた。【００５５】
上記反応で得られた残渣にトルエン（４０ｍＬ）及びポリリン酸（７．５６ｇ）を加え１００℃で４０分間攪拌した。室温に冷却後、トルエンをデカントで除いた。残渣を水に懸濁させ濾取し、水、ジエチルエーテルで順に洗浄し、減圧下で乾燥することにより１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（０．９４ｇ、２段階収率１５％）を得た。【００５６】
１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（０．９４ｇ、４．００ｍｍｏｌ）を実施例１と同様の方法でアミド化することにより標題の化合物（１．３５ｇ、収率６６％）を得た。【００５７】
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 12.30 (s, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.50 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 8.25 (dd, J = 2.9, 8.8 Hz, 1H), 7.94 - 7.82 (m, 2H), 7.65 - 7.50 (m, 3H), 7.43 (s, 1H), 7.24 - 7.18 (m, 2H), 6.51 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.41 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 4.06 (s, 3H), 4.06 (s, 3H), 1.62 (t, J = 7.3 Hz, 3H)
質量分析値(ESI-MS, m/z): 536(M+23)+, 512(M-1)-
【実施例５】
【００５８】
Ｎ−｛３−フルオロ−４−［６−メトキシ−７−（２−モルホリノエトキシ）キノリン−４−イルオキシ］フェニル｝−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド塩酸塩（化合物５）
実施例３で得られた化合物３［Ｎ−｛３−フルオロ−４−［６−メトキシ−７−（２−モルホリノエトキシ）キノリン−４−イルオキシ］フェニル｝−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド］（２０ｍｇ）に塩酸−メタノール溶液（１ｍＬ）を室温で加え、３０分間攪拌した。減圧下で溶媒を留去し、アセトンに懸濁させて濾取することにより標題の化合物（２２．４ｍｇ、収率１００％）を得た。【００５９】
1H-NMR (DMSO-d6, 300 MHz): δ 13.55 - 13.28 (m, 1H), 12.86 (s, 1H), 12.00 - 11.50 (m, 1H), 8.94 - 8.85 (m, 2H), 8.34 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.24 - 8.16 (m, 1H), 7.89 - 7.78 (m, 4H), 7.70 - 7.53 (m, 3H), 7.06 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.82 - 4.70 (m, 2H), 4.40 - 3.10 (m, 13 H)
【実施例６】
【００６０】
Ｎ−［４−（６，７−ジメトキシシンノリン−４−イルオキシ）フェニル］−１−イソプロピル−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物６）
２−フルオロ安息香酸（１０．０ｇ、７１．４ｍｍｏｌ）にトルエン（７０ｍＬ）を加え、塩化チオニル（１７．０ｇ、１４２ｍｍｏｌ）を室温で滴下し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３滴）を加えて加熱還流下２．５時間攪拌した。減圧下で濃縮し、トルエンを加えて減圧下で留去する操作を２回繰り返すことにより２−フルオロ安息香酸クロリド（１１．５ｇ）を得た。【００６１】
別フラスコで３−（ジメチルアミノ）アクリル酸エチル（７１．４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（７０ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（１４．４ｇ、１４２ｍｍｏｌ）を加えた後、２−フルオロ安息香酸クロリド（１１．５ｇ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）溶液を室温で滴下し、加熱還流下３時間攪拌した。反応液を室温に冷却後、減圧下で溶媒を留去して得られた残渣にジクロロメタンを加えて濾過した。濾液から減圧下で溶媒を留去し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン／酢酸エチル系の溶媒で展開後、ｎ−ヘプタン／アセトン系の溶媒で展開）で精製することにより３−（ジメチルアミノ）−２−（２−フルオロベンゾイル）アクリル酸エチル（１２．５ｇ、収率６６％）を得た。【００６２】
３−（ジメチルアミノ）−２−（２−フルオロベンゾイル）アクリル酸エチル（１２．５ｇ、４７．１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）に溶解し、室温でイソプロピルアミン（８．１３ｍＬ、９４．２ｍｍｏｌ）を加えて２．５時間攪拌した。減圧下、溶媒を留去し、得られた残渣に炭酸カリウム（１３．０ｇ、９４．２ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８０ｍＬ）を加え、１００℃で１７時間攪拌した。減圧下、溶媒を留去して得られた残渣を水に加え、クロロホルムで３回抽出した。有機層を合わせて飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去することにより得られた残渣にメタノール（１４０ｍＬ）、水（４．７ｍＬ）及び水酸化リチウム一水和物（５．９３ｇ、１４１ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、氷冷下で１mol/L塩酸を加えてｐＨ１にし、析出した沈殿を濾取した。濾液はクロロホルムで２回抽出し、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。先の濾取物を加え、減圧下で溶媒を留去することにより１−（２−プロピル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（１０．２ｇ、収率９４％）を得た。【００６３】
文献［ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．），１９５２年，１７巻，１５７１−１５７４頁］に従い合成した４−クロロ−６，７−ジメトキシシンノリン（２．０ｇ、９．０ｍｍｏｌ）とｐ−ニトロフェノール（２．５ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）にクロロベンゼン（４．５ｍＬ）を加え、１１５℃で９時間攪拌した。反応液を１mol/L水酸化カリウム水溶液に加え、クロロホルムで５回抽出した。有機層を合わせて、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後に減圧下で溶媒を留去した。残渣にメタノールを加えて濾過後、濾取物を減圧下で乾燥することにより６，７−ジメトキシ−４−（４−ニトロフェノキシ）シンノリン（１．７２ｇ、収率５８％）を得た。【００６４】
水酸化パラジウム（０．１７ｇ、２０％、ｗｅｔ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６０ｍＬ）に加え、６，７−ジメトキシ−４−（４−ニトロフェノキシ）シンノリン（１．７２ｇ、５．２６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）溶液を室温で加えた。水素気流下、室温で２１時間攪拌した後、水酸化パラジウム（０．１７ｇ、２０％、ｗｅｔ）を追加し、室温で４０時間攪拌した。さらに水酸化パラジウム（０．８５ｇ、２０％、ｗｅｔ）を追加し、室温で４時間攪拌した。反応液を濾過し、減圧下で溶媒を留去して得られた残渣にクロロホルムを加え、飽和重曹水、飽和食塩水で順に洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、得られた残渣にメタノールを加えて濾過し、濾取物を減圧下で乾燥することにより４−（６，７−ジメトキシシンノリン−４−イルオキシ）アニリン（１．１９ｇ、収率７６％）を得た。【００６５】
４−（６，７−ジメトキシシンノリン−４−イルオキシ）アニリン（０．４１ｇ、１．３８ｍｍｏｌ）、１−（２−プロピル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（０．４７ｇ、２．０７ｍｍｏｌ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸（０．９６ｇ、２．０７ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．００６ｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．７ｍＬ、５．０５ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）に加え、室温で７２時間攪拌した後、反応液から減圧下で溶媒を留去した。得られた残渣に水を加えて、クロロホルムで３回抽出し、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。得られた残渣をクロロホルム／メタノール系のカラムクロマトグラフィーで精製し、さらにクロロホルム／アセトン系のカラムクロマトグラフィーで精製することにより、標題の化合物（０．５５ｇ、収率７８％）を得た。【００６６】
1H-NMR (CDCl3, 270 MHz): δ 12.53 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.67 - 8.61 (m, 2H), 7.99 - 7.89 (m, 2H), 7.88 - 7.66 (m, 3H), 7.61 - 7.52 (m, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.25 - 7.17 (m, 2H), 5.05 (heptet, J = 6.6 Hz, 1H), 4.12 (s, 3H), 4.10 (s, 3H), 1.70 (d, J = 6.6 Hz, 6H)
質量分析値(ESI-MS, m/z): 533(M+23)+, 509(M-1)-
【実施例７】
【００６７】
Ｎ−［４−（６，７−ジメトキシキノリン−４−イルオキシ）フェニル］−１−イソプロピル−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物７）
１−（２−プロピル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２６２ｍｇ、０．８０４ｍｍｏｌ）を実施例１と同様にしてアミド化することにより標題の化合物を得た。【００６８】
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 12.48 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.64 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.94 - 7.87 (m, 2H), 7.85 - 7.77 (m, 1H), 7.73 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.56 (dd, J = 7.8, 7.8 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.23 - 7.17 (m, 2H), 6.52 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 5.04 (heptet, J = 6.8 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 4.06 (s, 3H), 1.70 (d, J = 6.8 Hz, 6H)
質量分析値(ESI-MS, m/z): 532 (M+23)+, 508(M-1)-
【実施例８】
【００６９】
Ｎ−［４−（６，７−ジメトキシシンノリン−４−イルオキシ）フェニル］−１−イソプロピル−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−１，７−ナフチリジン−３−カルボキサミド（化合物８）
実施例６と同様にして、２−フルオロ安息香酸の代わりに３−フルオロイソニコチン酸を原料として用い合成した１−（２−プロピル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−１，７−ナフチリジン−３−カルボン酸（２４ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）と、４−（６，７−ジメトキシシンノリン−４−イルオキシ）アニリン（３０．６ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）を用いて、実施例６と同様にしてアミド化することにより標題の化合物（３４．２ｍｇ、収率６５％）を得た。【００７０】
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 12.17 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 9.14 (s, 1H), 8.77 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.39 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.95 - 7.88 (m, 2H), 7.74 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 2H), 5.19 (heptet, J = 6.8 Hz, 1H), 4.12 (s, 3H), 4.10 (s, 3H), 1.75 (d, J = 6.6 Hz, 6H)
質量分析値(ESI-MS, m/z): 534(M+23)+, 510(M-1)-
【産業上の利用可能性】
【００７１】
本発明により、ASK1阻害活性を有し、例えば、ALSの予防及び／又は治療剤として有用な含窒素複素環誘導体又はその薬学的に許容される塩等が提供される。【００７２】
本出願は、日本で出願された特願２０１０−１６５５１４を基礎としており、その内容は本明細書にすべて包含される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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