(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
0005647356.tif 000190
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｇは、
【化２】
0005647356.tif 000191
であり、
Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルであり、
Ｒ２は、フェニル、ナフチル、５から１２員のヘテロアリールまたは８から１２員の縮合複素環式アリールであり、ここで、各Ｒ２基は、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロおよびＣＯＮＨ２から独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ３は、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルである］。
【請求項２】
Ｒ１がイソプロピルまたはｔ−ブチルである、請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項３】
Ｒ２がキノリニルまたはイソキノリニルであり、前記Ｒ２は、１から２個のメチル、メトキシまたはクロロで独立に置換されていてもよい、請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項４】
Ｒ３が水素である、請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
【請求項５】
治療有効量の請求項１に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩と、薬学的に許容できる添加剤、賦形剤または担体とを含む、医薬組成物。
【請求項６】
請求項１に記載の下式の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
0005647356.tif 000192
【請求項７】
請求項１に記載の下式の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
0005647356.tif 000193
【請求項８】
請求項１に記載の下式の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
0005647356.tif 000194
【請求項９】
請求項１に記載の下式の化合物、または薬学的に許容できるその塩。
0005647356.tif 000195
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼの阻害剤として作用する置換ピラゾロスピロケトン化合物、およびアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素の阻害によってモジュレートされる疾患、状態または障害を治療する際のその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）は、ほとんどの種において見られる酵素のファミリーであり、アセチル−ＣｏＡからのマロニル−ＣｏＡの生成を触媒することによって脂肪酸合成および代謝と関連している。哺乳動物においては、ＡＣＣ酵素の２つのアイソフォームが同定されている。脂肪および肝臓等の脂質合成組織において高レベルで発現されるＡＣＣ１は、長鎖脂肪酸の生合成において第一の関与ステップ（ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ  ｓｔｅｐ）を制御する。アセチル−ＣｏＡがカルボキシル化されてマロニル−ＣｏＡを形成しない場合、クレブス回路によって代謝される。肝ＡＣＣの微量成分であるが心臓および骨格筋における主要なアイソフォームであるＡＣＣ２は、ミトコンドリアの細胞質側表面におけるマロニル−ＣｏＡの生成を触媒し、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼを阻害することによりβ−酸化においてどのくらいの量の脂肪酸が利用されるかを調節する。故に、脂肪酸利用を増加させ、デノボ脂肪酸合成の増加を防止することにより、ＡＣＣ阻害剤（ＡＣＣ−Ｉ）の慢性投与は、高または低脂肪食を摂取している肥満対象における肝臓および脂肪組織のトリグリセリド（ＴＧ）貯蔵も枯渇させ、体脂肪の選択的減少をもたらすことができる。
【０００３】
Ａｂｕ−Ｅｔｈｅｉｇａらによって行われた研究は、ＡＣＣ２が脂肪酸酸化を制御する上で重要な役割を果たしており、そのため肥満および２型糖尿病等の肥満関連疾患に対する療法において標的を提供するであろうことを示唆している。Ａｂｕ−Ｅｔｈｅｉｇａ，Ｌ．ら、「Ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｍｕｔａｎｔ  ｍｉｃｅ  ａｒｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ａｎｄ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｈｉｇｈ−ｆａｔ／ｈｉｇｈ−ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｄｉｅｔｓ」ＰＮＡＳ、１００（１８）  １０２０７〜１０２１２（２００３）を参照されたい。Ｃｈｏｉ，Ｃ．Ｓ．ら、「Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｆａｔ  ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｏｔａｌ  ｅｎｅｒｇｙ  ｅｘｐｅｎｄｉｔｕｒｅ，ｒｅｄｕｃｅｓ  ｆａｔ  ｍａｓｓ，ａｎｄ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ」ＰＮＡＳ、１０４（４２）  １６４８０〜１６４８５（２００７）も参照されたい。
【０００４】
肝臓脂質蓄積は、肝臓のインスリン抵抗性を引き起こし、２型糖尿病の発病に寄与することが次第に明らかになりつつある。Ｓａｌｖａｇｅらは、肝細胞における脂肪酸化を調節することにＡＣＣ１およびＡＣＣ２の両方が関与しているのに対し、ラット肝臓における主要なアイソフォームであるＡＣＣ１は、脂肪酸合成の唯一の調節因子であることを実証した。さらに、それらのモデルにおいて、肝臓のマロニル−ＣｏＡレベルを大幅に低下させ、給餌状態での脂肪酸化を増加させ、脂質蓄積を減少させ、インスリン作用をインビボで改良するために、両方のアイソフォームを合わせた減少が必要とされる。故に、肝ＡＣＣ１およびＡＣＣ２阻害剤を示すことは、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および肝臓のインスリン抵抗性の治療において有用となり得る。Ｓａｖａｇｅ，Ｄ．Ｂ．ら、「Ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ｄｉｅｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅａｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｂｙ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅｓ  １  ａｎｄ  ２」Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ｄｏｉ：１０．１１７２／ＪＣＩ２７３００を参照されたい。Ｏｈ，Ｗ．ら、「Ｇｌｕｃｏｓｅ  ａｎｄ  ｆａｔ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ」ＰＮＡＳ、１０２（５）１３８４〜１３８９（２００５）も参照されたい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
結果として、脂肪酸合成を阻害し脂肪酸酸化を増加させることにより、肥満および肥満関連疾患（ＮＡＦＬＤおよび２型糖尿病等）を治療するための、ＡＣＣ１および／またはＡＣＣ２阻害剤を含有する薬剤が必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、式（Ｉ）の構造を有する化合物
【０００７】
【化１】
0005647356.tif 000002
［式中、Ｇは、
【０００８】
【化２】
0005647356.tif 000003
であり、
Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルであり、Ｒ２は、フェニル、ナフチル、５から１２員のヘテロアリールまたは８から１２員の縮合複素環式アリールであり、ここで、各Ｒ２基は、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ  ハロおよびＣＯＮＨ２から独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく、Ｒ３は、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルである］、または薬学的に許容できるその塩に関する。
【０００９】
本発明の好ましい実施形態は、Ｒ１がイソプロピルまたはｔ−ブチルである、式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００１０】
本発明の別の好ましい実施形態は、Ｒ２が、ベンゾイミダゾリル、ピロロピリジニル、ピラゾロピリジニル、インダゾリル、キノリニルまたはイソキノリニルであり、前記Ｒ２は、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシおよびハロから独立に選択される１から２個の置換基で独立に一置換または二置換されていてもよい、式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。本発明のまた別の好ましい実施形態は、Ｒ２が、インダゾリル、ベンゾイミダゾリルまたは１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジニルであり、前記Ｒ２は、１から２個のメチル、メトキシまたはクロロで置換されていてもよい、式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００１１】
本発明の別の好ましい実施形態は、１’−イソプロピル−１−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１’−イソプロピル−１−（２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１’−イソプロピル−１−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；および１’−イソプロピル−１−（１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オンから選択される化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００１２】
本発明の別の好ましい実施形態は、１’−イソプロピル−１−（１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（４，８−ジメトキシキノリン−２−カルボニル）−１’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１’−イソプロピル−１−（１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；および１’−イソプロピル−１−（１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−６−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オンから選択される化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００１３】
本発明の別の好ましい実施形態は、１−（３，７−ジメチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−１’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１’−イソプロピル−１−（７−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−１’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（７−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；および１’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（３，７−ジメチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オンから選択される化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００１４】
本発明の別の好ましい実施形態は、１−（７−クロロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−１’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１’−イソプロピル−１−（４−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（７−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−１’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−１’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；および１’−イソプロピル−１−（３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オンから選択される化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００１５】
本発明の別の好ましい実施形態は、１−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−２’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン；２’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン；２’−イソプロピル−１−（７−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン；１−（３，７−ジメチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−２’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン；２’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（７−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン；２’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（３，７−ジメチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン；および２’−イソプロピル−１−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンから選択される化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００１６】
本発明の別の好ましい実施形態は、１’−イソプロピル−１−（キノリン−３−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１’−イソプロピル−１−（キノリン−６−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１’−イソプロピル−１−（イソキノリン−６−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１’−イソプロピル−１−（イソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；および１’−イソプロピル−１−（キノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オンから選択される化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００１７】
本発明の別の実施形態は、式（Ｉ）の化合物
【００１８】
【化３】
0005647356.tif 000004
または薬学的に許容できるその塩［式中、
Ｇは、
【００１９】
【化４】
0005647356.tif 000005
であり、
Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルであり、Ｒ２は、フェニル、ナフチル、５から１２員のヘテロアリールまたは８から１２員の縮合複素環式アリールであり、ここで、各Ｒ２基は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、ハロ、シアノ、ＣＯＮＲ４Ｒ５、ＮＲ４Ｒ５または３から７員のヘテロシクリルから独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく、ここで、前記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシは、１から５個のフルオロで置換されていてもよく、Ｒ３は、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルであり、各出現時のＲ４およびＲ５は、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは３から７員のヘテロシクリルから独立に選択され、ここで、前記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキルまたは（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルは、１から５個のフルオロで置換されていてもよい］
である。
【００２０】
本発明のまた別の実施形態は、Ｇが、
【００２１】
【化５】
0005647356.tif 000006
であり、
Ｒ１が、イソプロピルまたはｔ−ブチルである、式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００２２】
本発明の別の実施形態は、Ｒ２が、ベンゾイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ピロロピリジニル、ピラゾロピリジニル、インドリル、インダゾリル、キノリニルまたはイソキノリニルであり、前記Ｒ２は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、ハロまたはＮＲ４Ｒ５から独立に選択される１から２個の置換基で置換されていてもよく、ここで、前記（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシは、１から５個のフルオロで置換されていてもよい、式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００２３】
本発明の別の実施形態は、Ｒ２が、インダゾリル、インドリル、ベンゾイミダゾリルまたは１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジニルであり、前記Ｒ２は、１から２個のメチル、メトキシ、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３またはクロロで独立に置換されていてもよい、式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００２４】
本発明のまた別の実施形態は、Ｒ２がキノリニルまたはイソキノリニルであり、前記Ｒ２は、１から２個のメチル、メトキシ、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、ＮＨＣＨ２ＣＨ３、ＮＨＣＨ２ＣＦ３またはクロロで独立に置換されていてもよい、式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００２５】
本発明の好ましい実施形態は、１−（３，７−ジメチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−１’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（３，７−ジメチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−１’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（３，７−ジメチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−２’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（６−メトキシキノリン−３−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（１−メトキシイソキノリン−７−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（３−クロロ−７−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（２−メトキシキノリン−７−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（２−アミノキノリン−７−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（５−メトキシキノリン−３−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（２−アミノ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（２−（メチルアミノ）キノリン−７−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（１−（メチルアミノ）イソキノリン−７−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（３−クロロ−１Ｈ−インドール−６−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（３−クロロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（２−（メチルアミノ）キノリン−７−カルボニル）−１’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；１−（１−（２，２，２−トリフルオロエチルアミノ）キノリン−７−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン；および１−（１−（エチルアミノ）イソキノリン−７−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オンからなる群から選択される化合物、または薬学的に許容できるその塩である。
【００２６】
本発明の別の態様は、ある量の、実施形態のいずれかにおいて記述されている通りの式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩と、薬学的に許容できる添加剤、賦形剤または担体とを含む、医薬組成物である。好ましくは、該組成物は、治療有効量の本発明の化合物を含む。該組成物は、少なくとも１つの追加の薬学的作用物質も含有し得る。好ましい作用物質は、抗糖尿病剤および／または抗肥満剤を含む。
【００２７】
本発明のまた別の態様は、哺乳動物におけるアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素の阻害によって媒介される疾患、状態または障害を治療するための方法であって、そのような治療を必要とする哺乳動物、好ましくはヒトに、治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩、またはその医薬組成物を投与するステップを含む方法である。
【００２８】
アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼの阻害剤によって媒介される疾患、障害または状態は、ＩＩ型糖尿病、ならびに非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝臓のインスリン抵抗性、高血糖症、代謝症候群、耐糖能異常、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、肥満、脂質異常症、高血圧症、高インスリン血症およびインスリン抵抗性症候群等の糖尿病関連疾患を含む。好ましい疾患、障害または状態は、ＩＩ型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝臓のインスリン抵抗性、高血糖症、耐糖能異常、肥満およびインスリン抵抗性症候群を含む。より好ましいのは、ＩＩ型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝臓のインスリン抵抗性、高血糖症および肥満である。最も好ましいのは、ＩＩ型糖尿病である。
【００２９】
好ましい実施形態は、動物における２型糖尿病および糖尿病関連障害を治療する（例えば、その進行または発症を遅延させる）ための方法であって、そのような治療を必要とする動物に、治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩、またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００３０】
別の好ましい実施形態は、動物における肥満および肥満関連障害を治療するための方法であって、そのような治療を必要とする動物に、治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩、またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００３１】
また別の好ましい実施形態は、動物における非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）または肝臓のインスリン抵抗性を治療するための方法であって、そのような治療を必要とする動物に、治療有効量の本発明の化合物もしくは薬学的に許容できるその塩、またはその組成物を投与するステップを含む方法。
【００３２】
本発明の化合物を、他の薬学的作用物質（特に、本明細書において後述される抗肥満剤および抗糖尿病剤）と組み合わせて投与してよい。併用療法は、（ａ）本発明の化合物と、本明細書において記述されている少なくとも１つの追加の薬学的作用物質と、薬学的に許容できる添加剤、賦形剤または担体とを含む単一の医薬組成物として、または（ｂ）（ｉ）本発明の化合物、および薬学的に許容できる添加剤、賦形剤または担体を含む第一の組成物と、（ｉｉ）本明細書において記述されている少なくとも１つの追加の薬学的作用物質、および薬学的に許容できる添加剤、賦形剤または担体を含む第二の組成物とを含む、２つの別個の医薬組成物として、投与され得る。医薬組成物は、同時に、または任意の順序で順次に投与され得る。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
定義
語句「治療有効量」は、（ｉ）特定の疾患、状態もしくは障害を治療もしくは予防する、（ｉｉ）特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症状を和らげる、寛解させるもしくは解消する、または（ｉｉｉ）本明細書において記述されている特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症状の発症を予防するもしくは遅延させる、本発明の化合物または薬学的に許容できるその塩の量を意味する。
【００３４】
用語「動物」は、ヒト（男性または女性）、コンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコおよびウマ）、食物源動物、動物園の動物、海洋動物、鳥類、および他の同様の動物種を指す。「食用動物」は、雌ウシ、ブタ、ヒツジおよび家禽等の食物源動物を指す。
【００３５】
語句「薬学的に許容できる」は、物質または組成物が、製剤を含む他の成分および／またはそれを用いて治療されている哺乳動物と、化学的にかつ／または毒物学的に適合しなくてはならないことを示す。
【００３６】
用語「治療すること」、「治療する」または「治療」は、予防、すなわち予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）治療および緩和治療の両方を包括する。
【００３７】
用語「モジュレートされる」または「モジュレートすること」または「モジュレートする」は、本明細書において使用される場合、別段の指示がない限り、本発明の化合物によるアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）酵素の阻害を指す。
【００３８】
用語「媒介される」または「媒介すること」または「媒介する」は、本明細書において使用される場合、別段の指示がない限り、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）酵素を阻害することによる、（ｉ）特定の疾患、状態もしくは障害の治療もしくは予防、（ｉｉ）特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症状の軽減、寛解もしくは解消、または（ｉｉｉ）本明細書において記述されている特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症状の発症の予防もしくは遅延を指す。
【００３９】
用語「本発明の化合物」は（別段の明確な同定がない限り）、式（Ｉ）の化合物および該化合物の任意の薬学的に許容できる塩、ならびに、すべての立体異性体（ジアステレオ異性体および鏡像異性体を含む）、互変異性体、配座異性体および同位体標識化合物を指す。本発明の水和物および溶媒和物は、本発明の組成物とみなされ、ここで、化合物は、それぞれ水または溶媒と会合している。
【００４０】
用語「（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル」および「（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル」は、直鎖または分枝鎖のいずれであってもよい、指定数の炭素、それぞれ１から６個または１から３個までの炭素のアルキル基である。例えば、用語「（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル」は、１から３個までの炭素を有し、メチル、エチル、ｎ−プロピルおよびイソプロピルからなる。
【００４１】
用語「（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル」は、３から７個の炭素原子を有するシクロアルキル基を意味し、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルからなる。用語「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。用語「（Ｃ６〜Ｃ１０）アリール」は、フェニルまたはナフチル等の６から１０個の炭素原子からなる芳香族炭素環基を意味する。
【００４２】
用語「５から１２員のヘテロアリール」は、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する、５から１２員の芳香族基を意味する。本明細書において使用される場合、「５から１２員のヘテロアリール」基の結合点は、その基の炭素原子上にある。「５から１２員のヘテロアリール」基は、二環式であってもよい。二環式ヘテロアリールの好ましい実施形態は、下記の環系の基を含むがこれらに限定されない。
【００４３】
【化６】
0005647356.tif 000007
【００４４】
用語「８から１２員の縮合複素環式アリール」は、非芳香族複素環式環がアリール環と縮合している８から１２員の環系を意味する。本明細書において使用される場合、「８から１２員の縮合複素環式アリール」基の結合点は、その基の炭素原子上にある。用語「３から７員のヘテロシクリル」は、３から７員の飽和環を意味し、ここで、原子の１から３個は、窒素、酸素および硫黄から独立に選択されるヘテロ原子である。「３から７員のヘテロシクリル」基の例は、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、テトラヒドロ−２Ｈ−チオピラニル、ピペラジニル、モルホリニルおよびチオモルホリニル等の基を含むがこれらに限定されない。「３から７員のヘテロシクリル」の結合点は、特定の基に応じて適切に、炭素または窒素原子上にあってよい。
【００４５】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、下記の構造を有するＮ１ラクタムＡＣＣ阻害化合物：
【００４６】
【化７】
0005647356.tif 000008
［式中、Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルであり、Ｒ２は、フェニル、ナフチル、５から１２員のヘテロアリールまたは８から１２員の縮合複素環式アリールであり、ここで、各Ｒ２基は、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロおよびＣＯＮＨ２から独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく、Ｒ３は、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルである］、または薬学的に許容できるその塩である。
【００４７】
一実施形態において、式Ｉの化合物は、下記の構造を有するＮ２ラクタムＡＣＣ阻害化合物：
【００４８】
【化８】
0005647356.tif 000009
［式中、Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルであり、Ｒ２は、フェニル、ナフチル、５から１２員のヘテロアリールまたは８から１２員の縮合複素環式アリールであり、ここで、各Ｒ２基は、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロおよびＣＯＮＨ２から独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよく、Ｒ３は、水素または（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルである］、または薬学的に許容できるその塩である。
【００４９】
本発明の化合物は、特に本明細書に含有される記述に照らして、化学分野においてよく知られているものに類似するプロセスを含む合成経路によって合成できる。出発材料は、概して、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）等の商業的供給源から入手可能であるか、または当業者によく知られている方法を使用して容易に調製される（例えば、Ｌｏｕｉｓ  Ｆ．ＦｉｅｓｅｒおよびＭａｒｙ  Ｆｉｅｓｅｒ、Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１〜１９巻、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９６７〜１９９９年編）またはＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ  Ｈａｎｄｂｕｃｈ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ、第４版編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ（補足を含む）において概して記述されている方法によって調製される（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースを介しても利用可能である））。
【００５０】
例証を目的として、以下で描写する反応スキームは、本発明の化合物および重要中間体を合成するための潜在的経路を提供する。個々の反応ステップのさらに詳細な記述については、以下の実施例の項を参照されたい。当業者であれば、他の合成経路を使用して発明化合物を合成できることを理解するであろう。特定の出発材料および試薬がスキームにおいて描写され以下で論じられているが、多様な誘導体および／または反応条件を提供するために、他の出発材料および試薬で簡単に代用することができる。加えて、以下に記述する方法によって調製される化合物の多くは、本開示に照らして当業者によく知られている従来の化学を使用し、さらに修飾することができる。
【００５１】
本発明の化合物の調製において、中間体の遠隔官能基（例えば、第一級または第二級アミン）の保護が必要となる場合がある。そのような保護の必要性は、遠隔官能基の性質および調製法の条件に応じて変動することになる。適切なアミノ保護基（ＮＨ−Ｐｇ）は、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）および９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）を含む。同様に、「ヒドロキシ保護基」は、ヒドロキシ官能基をブロックまたは保護するヒドロキシ基の置換基を指す。適切なヒドロキシル保護基（Ｏ−Ｐｇ）は、例えば、アリル、アセチル、シリル、ベンジル、パラ−メトキシベンジル、トリチル等を含む。そのような保護の必要性は、当業者によって容易に決定される。保護基およびそれらの使用の概要については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１を参照されたい。
【００５２】
下記の反応スキーム、反応スキームＩから反応スキームＶは、式（Ｉ）の化合物を調製するために使用される代表的な手順を提供する。これらの反応スキームは非限定的な様式で解釈されるべきであること、および描写されている方法の合理的な変形形態を使用して式（Ｉ）の化合物を調製できることを理解されたい。
【００５３】
反応スキームＩは、式Ｉａを有する本発明のＮ１ラクタムＡＣＣ阻害化合物［式中、Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルであり、Ｒ２は、フェニル、ナフチル、５から１２員のヘテロアリールまたは８から１２員の縮合複素環式アリールであり、ここで、各Ｒ２基は、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロおよびＣＯＮＨ２から独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよい］を提供するために使用することができる一般的手順を概説するものである。
【００５４】
【化９】
0005647356.tif 000010
【００５５】
スキームＩによれば、式ＸＩａの化合物は、メチル２−シアノ−３−エトキシアクリレートを、適切なアルキルヒドラジン（Ｒ１ＮＨＮＨ２）と、炭酸カリウム等の塩基および溶媒の存在下で反応させることによって形成され得る。例えば、式ＸＩａの化合物は、メチル２−シアノ−３−エトキシアクリレートを、適切なアルキルヒドラジン（Ｒ１ＮＨＮＨ２）と、炭酸カリウム（「Ｋ２ＣＯ３」）等の塩基の存在下、還流エタノール中、約２０℃から約８０℃の温度で約２から２４時間反応させて、所望の環化化合物を提供することによって形成され得る。
【００５６】
式Ｘａの化合物は、亜硝酸イソアミル、亜硝酸ナトリウムまたは亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチル等の亜硝酸塩および臭化銅（ＩＩ）等の臭化物源を使用し、アセトニトリル中、約２０℃から約８０℃の温度で約２から約１８時間、式ＸＩａのアリールアミンを臭化アリールに変換して、式Ｘａの化合物を提供することによって形成され得る。
【００５７】
次いで、式Ｘａのエステルを、水素化ジイソブチルアルミニウム（「ＤＩＢＡＬ」）または水素化アルミニウムリチウム（「ＬＡＨ」）等の還元剤で、テトラヒドロフラン（「ＴＨＦ」）、トルエンまたはジエチルエーテル等の非プロトン性溶媒中、約０℃から約８０℃の温度で約１から約１２時間処理することにより、式ＩＸａの化合物を調製することができる。
【００５８】
式ＶＩａの化合物は、式ＩＸａの化合物を、最初に三臭化リン（「ＰＢｒ３」）、または四臭化炭素とトリフェニルホスフィンとの混合物等の臭素化剤と、約−２０℃から約６０℃の温度で約３０から約１２０分間反応させて、式ＶＩＩＩａの化合物を形成することによって形成され得る。次いで、式ＶＩＩＩａの化合物を、式ＶＩＩａの保護されたピペリジン誘導体化合物と、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（「ＬｉＨＭＤＳ」）またはリチウムジイソプロピルアミン（「ＬＤＡ」）等の強塩基の存在下、ＴＨＦ、トルエンまたはジエチルエーテル等の非プロトン性溶媒中、約−７８℃から約２０℃の温度で約１から約１８時間反応させる。基Ｐｇは適切なアミン保護基を表し、好ましくは、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（「ＢＯＣ」）またはカルボベンジルオキシ（「Ｃｂｚ」）である。
【００５９】
次いで、エステル基を、水酸化リチウムまたは水酸化ナトリウム等の強塩基水溶液により、約０℃から約１００℃の温度で約１から約１８時間加水分解することによって式ＶＩａの化合物を脱保護して、式Ｖａのカルボン酸含有化合物を形成する。
【００６０】
次いで、式Ｖａのカルボン酸を、ジフェニルリン酸アジド（「ＤＰＰＡ」）と、トリエチルアミン（「Ｅｔ３Ｎ」）またはジイソプロピルエチルアミン等の塩基の存在下、約６０℃から約１２０℃の温度で約１から約１２時間反応させることにより、式ＩＶａのイソシアネート化合物を形成することができる。次いで、ｎ−ブチルリチウム（「ｎ−ＢｕＬｉ」）またはｔ−ブチルリチウム（「ｔ−ＢｕＬｉ」）等のアルキルリチウムを使用し、約−７８℃から約０℃の温度で約５から約１２０分間、イソシアネート（式ＩＶａ）を環化することにより、式ＩＩＩａのラクタム化合物を形成することができる。
【００６１】
次いで、どの保護基Ｐｇが用いられたかによって決まる標準的な方法を使用し、式（ＩＩＩａ）のラクタム化合物を脱保護して、式（ＩＩａ）の遊離スピロピペリジン誘導体を提供することができる。例えば、ＰｇがＢＯＣを表す場合、ジクロロメタン等の適切な溶媒中、ジオキサンまたはトリフルオロ酢酸中の４Ｎ塩酸等の標準的な強酸脱保護条件を使用して、ＢＯＣ基を除去することができる。ＰｇがＣｂｚを表す場合、エタノール中、パラジウム炭素による水素化、またはエタノールもしくは酢酸エチル中、パラジウム炭素の存在下でのギ酸アンモニウムもしくは１−メチル−１，４−シクロヘキサジエン等の水素源による処理を用いて、脱保護を行うことができる。
【００６２】
次いで、標準的な方法を用いることによって式（ＩＩａ）のスピロピペリジン誘導体をアシル化して、式（Ｉａ）の化合物を提供することができる。例えば、次いで、化合物（Ｉａ）は、所望のカルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）との標準的なペプチドカップリング反応を使用して形成され得る。例えば、スピロピペリジン中間体（ＩＩａ）およびカルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）は、カルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）を、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（「ＨＡＴＵ」）または１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル（ｄｉｍｅｔｈｙｌｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ））カルボジイミド塩酸塩（「ＥＤＣ・ＨＣｌ」）等のペプチドカップリング試薬と、ヒドロキシベンゾトリアゾール（「ＨＯＢｔ」）等の活性化剤の存在下または非存在下、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（「ＤＩＥＡ」）、トリエチルアミンまたはＮ−メチルモルホリン（「ＮＭＭ」）等の適切な塩基の存在下、ＴＨＦおよび／もしくはＤＭＦ、ジメチルアセトアミド（「ＤＭＡ」）またはジクロロメタン等の適切な溶媒中で接触させること等によって、活性化カルボン酸エステルを形成し、次いで該活性化カルボン酸エステルをスピロピペリジン誘導体（ＩＩａ）と接触させることによってカップリングされて、式（Ｉａ）の化合物を形成することができる。
【００６３】
反応スキームＩＩは、式Ｉｂを有する本発明のＮ２ラクタムＡＣＣ阻害化合物［式中、Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルであり、Ｒ２は、フェニル、ナフチル、５から１２員のヘテロアリールまたは８から１２員の縮合複素環式アリールであり、ここで、各Ｒ２基は、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロおよびＣＯＮＨ２から独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよい］を提供するために使用することができる一般的手順を概説するものである。
【００６４】
【化１０】
0005647356.tif 000011
【００６５】
スキームＩＩによれば、ヨウ化メチル、ヨウ化エチル、１−ブロモプロパン、１−ヨードプロパン、２−ブロモプロパン、２ヨードプロパン１−ヨードブタン、２−ヨードブタン、１−ヨード−２−メチルプロパンまたは１−（ブロモメチル）シクロプロパン等の第一級または第二級ハロゲン化アルキルを使用する、式ＸＩｂのピラゾール化合物から式Ｘの化合物へのアルキル化は、炭酸セシウム（「Ｃｓ２ＣＯ３」）または炭酸カリウム（「Ｋ２ＣＯ３」）等の塩基およびジメチルホルムアミド（「ＤＭＦ」）等の溶媒の存在下、約２０℃から約１００℃の温度で約１から約１２時間行われ得る。
【００６６】
次いで、式Ｘｂを、ＤＩＢＡＬまたはＬＡＨ等の還元剤で、ＴＨＦ、トルエンまたはジエチルエーテル等の非プロトン性溶媒中、約−７８℃から約６０℃の温度で約１から約１２時間処理することにより、式ＩＸｂの化合物を調製することができる。
【００６７】
式ＶＩｂの化合物は、式ＩＸｂの化合物を、最初にＰＢｒ３、または四臭化炭素とトリフェニルホスフィンとの混合物等の臭素化剤と、約−２０℃から約６０℃の温度で約３０から約１２０分間反応させて、式ＶＩＩＩｂの化合物を形成することによって形成され得る。次いで、式ＶＩＩＩｂの化合物を、式ＶＩＩｂの保護されたピペリジン誘導体化合物と、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（「ＬｉＨＭＤＳ」）またはリチウムジイソプロピルアミン（「ＬＤＡ」）等の強塩基を使用し、ＴＨＦ、トルエンまたはジエチルエーテル等の非プロトン性溶媒中、約−７８℃から約２０℃の温度で約１から約１８時間反応させる。基Ｐｇは適切なアミン保護基を表し、好ましくは、ＢＯＣまたはＣｂｚである。
【００６８】
次いで、エステル基を、水酸化リチウムまたは水酸化ナトリウム等の強塩基水溶液により、約０℃から約１００℃の温度で約１から約１８時間加水分解することによって化合物式ＶＩｂを脱保護して、式Ｖｂのカルボン酸含有化合物を形成する。次いで、式Ｖｂのカルボン酸を、ＤＰＰＡと、Ｅｔ３Ｎまたはジイソプロピルエチルアミン等の塩基の存在下、約６０℃から約１２０℃の温度で約１から約１２時間反応させることにより、式ＩＶｂのイソシアネート化合物を形成することができる。
【００６９】
次いで、ｎ−ＢｕＬｉまたはｔ−ＢｕＬｉ等のアルキルリチウムを使用し、約−７８℃から約０℃の温度で約５から約１２０分間、イソシアネート（式ＩＶｂ）を環化することにより、式ＩＩＩｂのラクタム化合物を形成することができる。
【００７０】
次いで、どの保護基Ｐｇが用いられたかによって決まる標準的な方法を使用し、式（ＩＩＩｂ）のラクタム化合物を脱保護して、式（ＩＩｂ）の遊離スピロピペリジン誘導体を提供することができる。例えば、ＰｇがＢＯＣを表す場合、ジクロロメタン等の適切な溶媒中、ジオキサンまたはトリフルオロ酢酸中の４Ｎ塩酸等の標準的な強酸脱保護条件を使用して、ＢＯＣ基を除去することができる。ＰｇがＣｂｚを表す場合、エタノール中、パラジウム炭素による水素化、またはエタノールもしくは酢酸エチル中、パラジウム炭素の存在下でのギ酸アンモニウムもしくは１−メチル−１，４−シクロヘキサジエン等の水素源による処理を用いて、脱保護を行うことができる。
【００７１】
次いで、標準的な方法を用いることによって式（ＩＩｂ）のスピロピペリジン誘導体をアシル化して、式（Ｉｂ）の化合物を提供することができる。例えば、次いで、化合物（Ｉｂ）は、所望のカルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）との標準的なペプチドカップリング反応を使用して形成され得る。例えば、スピロピペリジン中間体（ＩＩｂ）およびカルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）は、カルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）を、ＨＡＴＵまたはＥＤＣ・ＨＣｌ等のペプチドカップリング試薬と、ＨＯＢｔ等の活性化剤の存在下または非存在下、ＤＩＥＡ、ＮＭＭ等の適切な塩基の存在下、ＴＨＦおよび／もしくはＤＭＦ、ＤＭＡまたはジクロロメタン等の適切な溶媒中で接触させること等によって、活性化カルボン酸エステルを形成し、次いで該活性化カルボン酸エステルをスピロピペリジン誘導体（ＩＩｂ）と接触させることによってカップリングされて、式（Ｉｂ）の化合物を形成することができる。
【００７２】
反応スキームＩＩＩは、式Ｉｃを有する本発明のＮ２ラクタムＡＣＣ阻害化合物［式中、Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルであり、Ｒ２は、フェニル、ナフチル、５から１２員のヘテロアリールまたは８から１２員の縮合複素環式アリールであり、ここで、各Ｒ２基は、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロおよびＣＯＮＨ２から独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよい］を提供するために使用することができる一般的手順を概説するものである。
【００７３】
【化１１】
0005647356.tif 000012
【００７４】
式ＩＶｃのラクタム化合物は、リチウム２，２，６，６−テトラメチルピペリジド（「ＬＴＭＰ」）、またはマグネシウム２，２，６，６−テトラメチルピペリジド等の強塩基を使用し、約−７８℃から約０℃の温度で約３０分から約６時間、イソシアネート（式ＩＶａ）を環化することによって形成され得る。
【００７５】
次いで、ＰｇがＢＯＣを表す場合、Ｅｔ３Ｎ等の塩基の存在下、エタノール中、パラジウム炭素による水素化、またはＥｔ３Ｎ等の塩基およびパラジウム炭素の存在下、エタノールもしくは酢酸エチル中、約２０℃から約１００℃の温度で約３０分から約６時間にわたる、ギ酸アンモニウムもしくは１−メチル−１，４−シクロヘキサジエン等の水素源による処理により、式（ＩＶｃ）のラクタム化合物を脱ハロゲン化して、式（ＩＩＩｃ）のラクタム化合物を提供することができる。
【００７６】
次いで、ＰｇがＢＯＣを表す場合、ジクロロメタン等の適切な溶媒中、ジオキサンまたはトリフルオロ酢酸中の４Ｎ塩酸等の標準的な強酸脱保護条件を使用してＢＯＣ基を除去し、式（ＩＩＩｃ）のラクタム化合物を脱保護して、式（ＩＩｃ）の遊離スピロピペリジン誘導体を提供することができる。
【００７７】
ＰｇがＣｂｚを表す場合、エタノール中、パラジウム炭素による水素化、またはエタノールもしくは酢酸エチル中、パラジウム炭素の存在下でのギ酸アンモニウムもしくは１−メチル−１，４−シクロヘキサジエン等の水素源による処理により、式（ＩＶｃ）のラクタム化合物を同時に脱ハロゲン化および脱保護することができる。
【００７８】
標準的な方法を用いることによって式（ＩＩｃ）のスピロピペリジン誘導体をアシル化して、式（Ｉｃ）の化合物を提供することができる。例えば、次いで、化合物（Ｉｃ）は、所望のカルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）との標準的なペプチドカップリング反応を使用して形成され得る。例えば、スピロピペリジン中間体（ＩＩｃ）およびカルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）は、カルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）を、ＨＡＴＵまたはＥＤＣ・ＨＣｌ等のペプチドカップリング試薬と、ＨＯＢｔ等の活性化剤の存在下または非存在下、ＤＩＥＡ、トリエチルアミンまたはＮＭＭ等の適切な塩基の存在下、ＴＨＦおよび／もしくはＤＭＦ、ＤＭＡまたはジクロロメタン等の適切な溶媒中で接触させること等によって、活性化カルボン酸エステルを形成し、次いで該活性化カルボン酸エステルをスピロピペリジン誘導体（ＩＩｃ）と接触させることによってカップリングされて、式（Ｉｃ）の化合物を形成することができる。
【００７９】
反応スキームＩＶは、式Ｉｄを有する本発明のＮ２ラクタムＡＣＣ阻害化合物［式中、Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルであり、Ｒ２は、フェニル、ナフチル、５から１２員のヘテロアリールまたは８から１２員の縮合複素環式アリールであり、ここで、各Ｒ２基は、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロおよびＣＯＮＨ２から独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよい］を提供するために使用することができる一般的手順を概説するものである。
【００８０】
【化１２】
0005647356.tif 000013
【００８１】
式ＩＩＩｄのラクタム化合物は、式ＩＶｃの臭化物を、メチルトリ−ｎブチルスタンナンもしくはビニルトリ−ｎブチルスタンナンもしくはアリルトリ−ｎブチルスタンナン等のアルキルもしくはアルケニルトリブチルスタンナン、またはトリメチルボロキシンもしくはトリビニルボロキシン等のトリアルキルボロキシンと、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）等のパラジウム触媒またはプレ触媒ならびに酢酸パラジウム（ＩＩ）および２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニル（「ＳＰｈｏｓ」）等の配位子の組合せの存在下、炭酸カリウム等の塩基の存在下または非存在下、エタノールもしくはｔ−アミルアルコール等のプロトン性溶媒またはテトラヒドロフランもしくはジメチルホルムアミド等の非プロトン性溶媒中、マイクロ波加熱下、約２０℃から約１００℃の温度で約２時間から約１８時間、または約１００℃から約１５０℃の温度で約５分から約６０分間、パラジウム触媒クロスカップリングすることによって形成され得る。Ｒ３基を導入するためにアルケニルトリアルキルスタンナンまたはアルケニルボロキシンが利用されるならば、得られるオレフィンの還元は、エタノール中、パラジウム炭素による水素化、またはエタノールもしくは酢酸エチル中、パラジウム炭素の存在下でのギ酸アンモニウムもしくは１−メチル−１，４−シクロヘキサジエン等の水素源による処理によって影響され得る。
【００８２】
次いで、どの保護基Ｐｇが用いられたかによって決まる標準的な方法を使用し、式（ＩＩＩｄ）のラクタム化合物を脱保護して、式（ＩＩｄ）の遊離スピロピペリジン誘導体を提供することができる。例えば、ＰｇがＢＯＣを表す場合、ジクロロメタン等の適切な溶媒中、ジオキサンまたはトリフルオロ酢酸中の４Ｎ塩酸等の標準的な強酸脱保護条件を使用して、ＢＯＣ基を除去することができる。ＰｇがＣｂｚを表す場合、エタノール中、パラジウム炭素による水素化、またはエタノールもしくは酢酸エチル中、パラジウム炭素の存在下でのギ酸アンモニウムもしくは１−メチル−１，４−シクロヘキサジエン等の水素源による処理を用いて、脱保護を行うことができる。
【００８３】
次いで、標準的な方法を用いることによって式（ＩＩｄ）のスピロピペリジン誘導体をアシル化して、式（Ｉｄ）の化合物を提供することができる。例えば、次いで、化合物（Ｉｄ）は、所望のカルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）との標準的なペプチドカップリング反応を使用して形成され得る。例えば、スピロピペリジン中間体（ＩＩｄ）およびカルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）は、カルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）を、ＨＡＴＵまたはＥＤＣ・ＨＣｌ等のペプチドカップリング試薬と、ＨＯＢｔ等の活性化剤の存在下または非存在下、ＤＩＥＡ、トリエチルアミンまたはＮＭＭ等の適切な塩基の存在下、ＴＨＦおよび／もしくはＤＭＦ、ＤＭＡまたはジクロロメタン等の適切な溶媒中で接触させること等によって、活性化カルボン酸エステルを形成し、次いで該活性化カルボン酸エステルをスピロピペリジン誘導体（ＩＩｄ）と接触させることによってカップリングされて、式（Ｉｄ）の化合物を形成することができる。
【００８４】
反応スキームＶは、式Ｉｄを有する本発明のＮ２ラクタムＡＣＣ阻害化合物［式中、Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルであり、Ｒ２は、フェニル、ナフチル、５から１２員のヘテロアリールまたは８から１２員の縮合複素環式アリールであり、ここで、各Ｒ２基は、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシ、ハロおよびＣＯＮＨ２から独立に選択される１から３個の置換基で置換されていてもよい］を提供するために使用することができる一般的手順を概説するものである。
【００８５】
【化１３】
0005647356.tif 000014
【００８６】
スキームＶによれば、式ＸＩｅの化合物は、式ＸＩＩＩｅのケトエステル化合物を、ｔ−ブチルヒドラジン塩酸塩等の式ＸＩＩｅの適切なアルキルヒドラジン塩酸塩と、トリエチルアミンまたはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン等の第三級アミン塩基の存在下、エタノール等の極性プロトン性溶媒中、約２０℃から約１００℃の温度で約１から約１２時間縮合させることによって調製され得る。
【００８７】
式ＸＩｅの化合物を、（クロロメチレン）ジメチルアンモニウムクロリド（ビルスマイヤー塩、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号２８０９０９）で、ジメチルホルムアミドまたはトルエンまたは１，２−ジクロロエタン等の非プロトン性溶媒中、約０℃から約１２０℃の温度で約１から１２時間処理することにより、式Ｘｅの化合物を調製することができる。
【００８８】
式Ｘｅのアルデヒドを、水素化ホウ素ナトリウム等の還元剤で、メタノールまたはエタノール等のプロトン性溶媒中、約０℃から約６０℃の温度で約１から約６時間処理することにより、式ＩＸｅの化合物を調製することができる。
【００８９】
式ＶＩｅの化合物は、式ＩＸｅの化合物を、最初に三臭化リン（「ＰＢｒ３」）、または四臭化炭素とトリフェニルホスフィンとの混合物等の臭素化剤と、約−２０℃から約６０℃の温度で約３０から約１２０分間反応させて、式ＶＩＩＩｅの化合物を形成することによって形成され得る。次いで、式ＶＩＩＩｅの化合物を、式ＶＩＩａの保護された４−シアノピペリジン誘導体化合物と、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（「ＬｉＨＭＤＳ」）またはリチウムジイソプロピルアミン（「ＬＤＡ」）等の強塩基の存在下、テトラヒドロフラン（「ＴＨＦ」）、トルエンまたはジエチルエーテル等の非プロトン性溶媒中、約−７８℃から約２０℃の温度で約１から約１８時間反応させる。基Ｐｇは適切なアミン保護基を表し、好ましくは、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（「ＢＯＣ」）またはカルボベンジルオキシ（「Ｃｂｚ」）である。
【００９０】
式ＶＩｅのニトリル化合物を、水酸化リチウムまたは水酸化ナトリウム等の水酸化塩基水溶液およびメタノールもしくはエタノールまたはテトラヒドロフラン等の溶媒等の加水分解条件に、約２０℃から約１００℃の温度で約１から１２時間供することにより、式Ｖｅのアミド化合物を調製することができる。代替として、尿素−過酸化水素等の過酸化物複合体を、メタノールまたはエタノール等の溶媒中、約０℃から約６０℃の温度で約１から１２時間、水酸化ナトリウム等の水酸化塩基水溶液と組み合わせて使用してもよい。
【００９１】
式Ｖｅのアミド化合物から式ＩＶｅのイソシアネート化合物への転位は、重炭酸ナトリウム等の無機塩基の存在下、アセトニトリル等の溶媒中、約２０℃から約６０℃の温度で約１から６時間、（ビス（トリフルオロアセトキシ）ヨード）ベンゼン等の試薬で処理することによって行われ得る。
【００９２】
式ＩＶｅのイソシアンテ（ｉｓｏｃｙａｎｔｅ）化合物から式ＩＩＩｅのラクタム化合物への変換は、最初にイソシアネートを、水酸化ナトリウムまたは水酸化リチウム等の水酸化塩基水溶液中、メタノールまたはテトラヒドロフラン等の溶媒中で加水分解することにより、進めることができる。次いで、得られたアミンを、トリエチルアミンまたはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン等のアルキルアミン塩基を加えた１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドまたは２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート等のアミドカップリング試薬により、ジクロロメタンまたはジメチルホルムアミド等の溶媒中、約０℃から約６０℃の温度で約１から２４時間処理して、式ＩＩＩｅのラクタム化合物を得ることができる。
【００９３】
次いで、どの保護基Ｐｇが用いられたかによって決まる標準的な方法を使用し、式（ＩＩＩｅ）のラクタム化合物を脱保護して、式（ＩＩｅ）の遊離スピロピペリジン誘導体を提供することができる。例えば、Ｐｇがｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（「ＢＯＣ」）を表す場合、ジクロロメタン等の適切な溶媒中、ジオキサンまたはトリフルオロ酢酸中の４Ｎ塩酸等の標準的な強酸脱保護条件を使用して、ＢＯＣ基を除去することができる。Ｐｇがカルボベンジルオキシ（「Ｃｂｚ」）を表す場合、エタノール中、パラジウム炭素による水素化、またはエタノールもしくは酢酸エチル中、パラジウム炭素の存在下でのギ酸アンモニウムもしくは１−メチル−１，４−シクロヘキサジエン等の水素源による処理を用いて、脱保護を行うことができる。
【００９４】
次いで、標準的な方法を用いることによって式（ＩＩｅ）のスピロピペリジン誘導体をアシル化して、式（Ｉｅ）の化合物を提供することができる。例えば、次いで、化合物（Ｉｅ）は、所望のカルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）との標準的なペプチドカップリング反応を使用して形成され得る。例えば、スピロピペリジン中間体（ＩＩｅ）およびカルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）は、カルボン酸（Ｒ２ＣＯ２Ｈ）を、ＨＡＴＵまたはＥＤＣ・ＨＣｌ等のペプチドカップリング試薬と、ヒドロキシベンゾトリアゾール（「ＨＯＢｔ」）等の活性化剤の存在下または非存在下、ＤＩＥＡ、ＮＭＭ等の適切な塩基の存在下、ＴＨＦおよび／もしくはＤＭＦ、ＤＭＡまたはジクロロメタン等の適切な溶媒中で接触させること等によって、活性化カルボン酸エステルを形成し、次いで該活性化カルボン酸エステルをスピロピペリジン誘導体（ＩＩｅ）と接触させることによってカップリングされて、式（Ｉｅ）の化合物を形成することができる。
【００９５】
本発明の化合物を単離し、そのまま、またはその薬学的に許容できる塩の形態で使用することができる。本発明に従って、複数の塩基性窒素原子を有する化合物は、様々な当量数（「ｅｑ．」）の酸と塩を形成することができる。そのような塩はすべて本発明の範囲内であることが、実務家には理解されよう。
【００９６】
薬学的に許容できる塩は、本発明の化合物に関して本明細書において使用される場合、化合物の薬学的に許容できる無機および有機塩を含む。これらの塩は、化合物の最終単離および精製中にインサイチュで、またはその化合物を適切な有機または無機酸と別個に反応させ、そのようにして形成された塩を単離することによって調製できる。代表的な塩は、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、シュウ酸塩、ベシル酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、マロン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、六フッ化リン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トシル酸塩、ギ酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩およびラウリル硫酸塩等を含むがこれらに限定されない。これらは、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等のアルカリおよびアルカリ土類金属ならびに非毒性アンモニウム、第四級アンモニウムに基づくカチオン、ならびにアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、トリエチルアンモニウム、エチルアンモニウム等を含むがこれらに限定されないアミンカチオンも含み得る。追加の例については、例えば、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、６６、１〜１９（１９７７）を参照されたい。
【００９７】
本発明の化合物は、複数の結晶形態で存在し得る。式（Ｉ）の化合物およびその塩（溶媒和物および水和物を含む）の多形体は、本発明の一部を形成し、異なる条件下での本発明の化合物の結晶化によって調製できる。例えば、再結晶に異なる溶媒または異なる溶媒混合物を使用すること、異なる温度での結晶化、結晶化における非常に速い冷却から非常に遅い冷却までの範囲の種々の冷却モード。多形体は、本発明の化合物を加熱または融解させ、続いて漸次または急速冷却することによって取得することもできる。多形体の存在は、固体プローブ核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、赤外（ＩＲ）分光法、示差走査熱量測定、粉末Ｘ線回折またはそのような他の技術によって決定することができる。
【００９８】
本発明は、１個または複数の原子が、自然界において通常見られる原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられているという事実を除き、式（１）によって記述されているものと同一である、同位体標識化合物も含む。本発明の化合物に組み込まれ得る同位体の例は、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、１２５Ｉ、１２９Ｉおよび１８Ｆ等、それぞれ水素、炭素、窒素、酸素、硫黄およびフッ素の同位体を含む。本発明のある特定の同位体標識化合物、例えば３Ｈおよび１４Ｃ等の放射性同位体が組み込まれたものは、薬物および／または基質組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム化（すなわち３Ｈ）および炭素−１４（すなわち１４Ｃ）同位体は、それらの調製の容易さおよび検出性によって特に好ましい。さらに、重水素（すなわち２Ｈ）等のより重い同位体による置換は、より優れた代謝安定性から生じるある特定の治療上の利点、例えばインビボ半減期の増大または必要投薬量の低減を生じさせることができ、それ故、いくつかの状況においては好ましいことがある。本発明の同位体標識化合物は、概して、非同位体標識試薬を容易に入手可能な同位体標識試薬で代用することによって、スキームおよび／または以下の実施例において開示されている手順を行うことにより、調製できる。
【００９９】
本発明の化合物は、立体中心を含有し得る。これらの化合物は、鏡像異性体の混合物として、または純粋な鏡像異性体として存在し得る。化合物が立体中心を含む場合、該化合物は、当業者に知られている方法によって、例えば結晶化により分離され得るジアステレオ異性体塩の形成、例えば結晶化、気液もしくは液体クロマトグラフィーによって分離され得る立体異性誘導体もしくは錯体の形成、１つの鏡像異性体と鏡像異性体特異的試薬との選択的反応、例えば酵素的エステル化、または、キラルな環境における、例えばキラル支持体、例えば結合キラル配位子を有するシリカ上での、もしくはキラル溶媒の存在下での気液もしくは液体クロマトグラフィーによって、純粋な鏡像異性体に分割され得る。所望の立体異性体が、上述した分離手順の１つによって別の化学的実態に変換される場合、所望の鏡像異性形態を遊離させるためにさらなるステップが必要とされることが理解されよう。代替として、特定の立体異性体は、光学活性な出発材料を使用することによって、光学活性な試薬、基質、触媒もしくは溶媒を使用する不斉合成によって、または不斉転換により一方の立体異性体を他方の立体異性体に変換することによって合成できる。
【０１００】
本発明の化合物は、分離可能であってよい異なる安定な配座形態で存在し得る。不斉単結合周囲での束縛回転によるねじれ不斉、例えば立体障害または環の歪みを理由とするものは、異なる配座体の分離を可能にし得る。本発明の化合物は、式（１）の化合物の各配座異性体およびそれらの混合物をさらに含む。
【０１０１】
本発明の化合物は、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（特に、ＡＣＣ１およびＡＣＣ２）の阻害によってモジュレートされる疾患、状態および／または障害を治療するために有用である。本発明の別の実施形態は、治療有効量の本発明の化合物と、薬学的に許容できる添加剤、賦形剤または担体とを含む、医薬組成物である。本発明の化合物（その中で使用される組成物およびプロセスを含む）は、本明細書において記述されている治療用途のための薬剤の製造においても使用され得る。
【０１０２】
典型的な製剤は、本発明の化合物と、担体、賦形剤または添加剤とを混合することによって調製される。適切な担体、賦形剤および添加剤は当業者によく知られており、炭水化物、ワックス、水溶性および／または膨潤性ポリマー、親水性または疎水性材料、ゼラチン、油、溶媒、水等の材料を含む。使用される特定の担体、賦形剤または添加剤は、本発明の化合物を適用する手段および目的によって決まることになる。溶媒は、概して、哺乳動物に投与するのに安全（ＧＲＡＳ）として当業者によって認識されている溶媒に基づいて選択される。概して、安全な溶媒は、水等の非毒性水性溶媒および水に可溶性または混和性の他の非毒性溶媒である。適切な水性溶媒は、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００）等およびそれらの混合物を含む。製剤は、１つまたは複数の緩衝剤、安定化剤、界面活性剤、湿潤剤、滑沢剤、乳化剤、懸濁化剤、保存剤、抗酸化剤、不透明化剤、流動促進剤、加工助剤、着色剤、甘味剤、着香剤、香味剤、および整った造形の薬物（すなわち、本発明の化合物またはその医薬組成物）を提供するため、または医薬生成物の製造を支援するための（すなわち、薬剤の調製において使用するための）、他の知られている添加物も含み得る。
【０１０３】
製剤は、従来の溶解および混合手順を使用して調製できる。例えば、原薬（すなわち、本発明の化合物または該化合物の安定化形態（例えば、シクロデキストリン誘導体または他の知られている錯体形成剤との錯体））を、上述した添加剤の１つまたは複数の存在下、適切な溶媒に溶解する。水難溶性化合物の溶解率は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｔａｋｅｕｃｈｉ，Ｈ．ら、「Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒａｔｅ  ｏｆ  ａ  ｐｏｏｒｌｙ  ｗａｔｅｒ−ｓｏｌｕｂｌｅ  ｄｒｕｇ（ｔｏｌｂｕｔａｍｉｄｅ）ｂｙ  ａ  ｓｐｒａｙ−ｄｒｙｉｎｇ  ｓｏｌｖｅｎｔ  ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄ  ａｎｄ  ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｎｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３９、７６９〜７７３（１９８７）、およびＥＰ０９０１７８６Ｂ１（ＵＳ２００２／００９４９４）によって記述されているもの等、噴霧乾燥分散剤の使用によって増強することができる。本発明の化合物は、典型的には、医薬剤形に製剤化されて、容易に制御可能な投薬量の薬物を提供し、整っていて扱い易い製品を患者に届ける。
【０１０４】
医薬組成物は、本発明の化合物の溶媒和物および水和物も含む。用語「溶媒和物」は、式（Ｉ）によって表される化合物（薬学的に許容できるその塩を含む）と１個または複数の溶媒分子との分子錯体を指す。そのような溶媒分子は、レシピエントに無害であることが知られている薬学分野において一般に使用されるもの、例えば、水、エタノール、エチレングリコール等である。用語「水和物」は、溶媒分子が水である場合の錯体を指す。溶媒和物および／または水和物は、好ましくは結晶形態で存在する。メタノール、メチルｔ−ブチルエーテル、酢酸エチル、酢酸メチル、（Ｓ）−プロピレングリコール、（Ｒ）−プロピレングリコール、１，４−ブチン−ジオール等の他の溶媒を、より望ましい溶媒和物の調製における中間溶媒和物として使用してよい。
【０１０５】
塗布用の医薬組成物（または製剤）は、薬物を投与するために使用される方法に応じて、多様な手法で包装され得る。概して、分配用の物品は、適切な形態の医薬製剤をその中に配置した容器を含む。適切な容器は当業者によく知られており、ボトル（プラスチックおよびガラス）、小袋、アンプル、ポリ袋、金属シリンダー等の材料を含む。容器は、包装の内容物への不用意なアクセスを防止するための不正開封防止構築物も含み得る。加えて、容器には、容器の内容物を記述するラベルがその上に貼り付けられている。ラベルは、適切な警告も含み得る。
【０１０６】
本発明は、動物におけるアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素の阻害によってモジュレートされる疾患、状態および／または障害を治療する方法であって、そのような治療を必要とする動物に、治療有効量の本発明の化合物、または有効量の本発明の化合物と薬学的に許容できる添加剤、賦形剤もしくは担体とを含む医薬組成物を投与するステップを含む方法をさらに提供する。該方法は、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ酵素の阻害が有益である疾患、状態および／または障害を治療するために特に有用である。
【０１０７】
本発明の一態様は、肥満、および肥満関連障害（例えば、過体重、体重増加または体重維持）の治療である。
【０１０８】
肥満および過体重は、概してボディマス指数（ＢＭＩ）によって定義され、該指数は、全体脂肪と相関し、疾患の相対リスクを推定するものである。ＢＭＩは、体重（キログラム）を高さ（平方メートル）で割る（ｋｇ／ｍ２）ことによって算出される。過体重は、典型的には２５〜２９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩとして定義され、肥満は、典型的には３０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩとして定義される。例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ，ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｖｅｒｗｅｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔｓ、Ｔｈｅ  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  Ｒｅｐｏｒｔ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ：Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９８〜４０８３（１９９８）を参照されたい。
【０１０９】
本発明の別の態様は、糖尿病、または１型（インスリン依存性真性糖尿病、「ＩＤＤＭ」とも称される）および２型（非インスリン依存性真性糖尿病、「ＮＩＤＤＭ」とも称される）糖尿病、耐糖能異常、インスリン抵抗性、高血糖症、ならびに糖尿病性合併症（アテローム性動脈硬化症、冠動脈性心疾患、脳卒中、末梢血管疾患、腎症、高血圧症、神経障害および網膜症等）を含む糖尿病関連障害の治療（例えば、進行もしくは発症を遅延させる）のためのものである。
【０１１０】
本発明のまた別の態様は、代謝症候群等の肥満共存症の治療である。代謝症候群は、脂質異常症、高血圧症、インスリン抵抗性、糖尿病（例えば２型糖尿病）、冠動脈疾患および心不全等の疾患、状態または障害を含む。代謝症候群についてのさらに詳細な情報は、例えば、Ｚｉｍｍｅｔ，Ｐ．Ｚ．ら、「Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ：Ｐｅｒｈａｐｓ  ａｎ  Ｅｔｉｏｌｏｇｉｃ  Ｍｙｓｔｅｒｙ  ｂｕｔ  Ｆａｒ  Ｆｒｏｍ  ａ  Ｍｙｔｈ−Ｗｈｅｒｅ  Ｄｏｅｓ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ  Ｓｔａｎｄ？」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ＆Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、７（２）、（２００５）；およびＡｌｂｅｒｔｉ，Ｋ．Ｇ．ら、「Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ−Ａ  Ｎｅｗ  Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ」、Ｌａｎｃｅｔ、３６６、１０５９〜６２（２００５）を参照されたい。好ましくは、本発明の化合物の投与は、薬物を含有しないビヒクル対照と比較して、血漿レプチン、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）および／またはコレステロールの低下等、少なくとも１つの心血管疾患危険因子における統計的に有意な（ｐ＜０．０５）低減を提供する。本発明の化合物の投与は、グルコース血清レベルにおける統計的に有意な（ｐ＜０．０５）低減も提供し得る。
【０１１１】
本発明のまた別の態様は、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および肝臓のインスリン抵抗性の治療である。
【０１１２】
約１００ｋｇの体重を有する正常な成人では、典型的には体重１キログラムにつき約０．００１ｍｇから約１０ｍｇまで、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇから約５．０ｍｇ／ｋｇまで、より好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇまでの範囲内の投薬量で十分である。しかしながら、治療されている対象の年齢および重量、意図されている投与経路、投与されている特定の化合物等に応じて、一般的な投薬量範囲における若干の変動性が必要となり得る。特定の患者のための投薬量範囲および最適投薬量の決定は、本開示の利益を有する当業者の能力内に十分入るものである。本発明の化合物は、持続放出、制御放出および遅延放出製剤中に使用され得、これらの形態も当業者によく知られていることにも留意されたい。
【０１１３】
本発明の化合物は、本明細書において記述されている疾患、状態および／または障害の治療用の他の薬学的作用物質と併せて使用してもよい。したがって、本発明の化合物を他の薬学的作用物質と組み合わせて投与するステップを含む治療方法も提供される。本発明の化合物と組み合わせて使用され得る適切な薬学的作用物質は、抗肥満剤（食欲抑制剤を含む）、抗糖尿病剤、高血糖治療剤、脂質低下剤および降圧剤を含む。
【０１１４】
本発明の化合物と組み合わせてよい適切な脂質低下剤は、例えば、ＷＯ２０１１００５６１１の３０頁２０行から３１頁３０行において記述されているものを含む。脂質低下剤は、胆汁酸金属イオン封鎖剤、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、アシル補酵素Ａ−コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤、ＣＥＴＰ阻害剤、スクアレンシンターゼ阻害剤、ＰＰＡＲαアゴニスト、ＦＸＲ受容体モジュレーター、ＬＸＲ受容体モジュレーター、リポタンパク質合成阻害剤、レニンアンジオテンシン（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｓｎ）系阻害剤、ＰＰＡＲδ部分的アゴニスト、胆汁酸再吸収阻害剤、ＰＰＡＲγアゴニスト、トリグリセリド合成阻害剤、ミクロゾームトリグリセリド輸送阻害剤、転写モジュレーター、スクアレンエポキシダーゼ阻害剤、低比重リポタンパク質受容体誘導剤、血小板凝集阻害剤、５−ＬＯまたはＦＬＡＰ阻害剤、ナイアシン結合クロム、および脂質組成に影響を及ぼす他の作用物質を含む。
【０１１５】
本発明の化合物と組み合わせてよい適切な降圧剤は、例えば、ＷＯ２０１１００５６１１の３１頁３１行から３２頁１８行において記述されているものを含む。降圧剤は、利尿薬、ベータアドレナリン遮断薬、カルシウムチャンネル遮断薬、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、中性エンドペプチダーゼ阻害剤、エンドセリンアンタゴニスト、血管拡張剤、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、α／βアドレナリン遮断薬、アルファ１遮断薬、アルファ２アゴニスト、アルドステロン阻害剤、ミネラオコルチコイド（ｍｉｎｅｒａｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ）受容体阻害剤、レニン阻害剤およびアンジオポイエチン−２−結合剤を含む。
【０１１６】
適切な抗糖尿病剤は、ＷＯ２００９１４４５５４、ＷＯ２００３０７２１９７、ＷＯ２００９１４４５５５およびＷＯ２００８０６５５０８において記述されているもの等のアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ−（ＡＣＣ）阻害剤、ＷＯ０９０１６４６２またはＷＯ２０１００８６８２０において記述されているもの等のジアシルグリセロールＯ−アシルトランスフェラーゼ１（ＤＧＡＴ−１）阻害剤、ＡＺＤ７６８７またはＬＣＱ９０８、ジアシルグリセロールＯ−アシルトランスフェラーゼ２（ＤＧＡＴ−２）阻害剤、モノアシルグリセロールＯ−アシルトランスフェラーゼ阻害剤、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）−１０阻害剤、ＡＭＰＫ活性化因子、スルホニル尿素（例えば、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ダイアビニーズ、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド、グリキドン、グリソラミド、トラザミドおよびトルブタミド）、メグリチニド、α−アミラーゼ阻害剤（例えば、テンダミスタット、トレスタチンおよびＡＬ−３６８８）、α−グルコシドヒドロラーゼ阻害剤（例えば、アカルボース）、α−グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アジポシン、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラディマイシン−Ｑおよびサルボスタチン）、ＰＰＡＲγアゴニスト（例えば、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾンおよびトログリタゾン）、ＰＰＡＲα／γアゴニスト（例えば、ＣＬＸ−０９４０、ＧＷ−１５３６、ＧＷ−１９２９、ＧＷ−２４３３、ＫＲＰ−２９７、Ｌ−７９６４４９、ＬＲ−９０、ＭＫ−０７６７およびＳＢ−２１９９９４）、ビグアニド（例えば、メトホルミン）、アゴニスト（例えば、エキセンディン−３およびエキセンディン−４）等のグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）モジュレーター、リラグルチド、アルビグルチド、エキセナチド（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））、アルビグルチド、タスポグルチド、リキシセナチド、デュラグルチド、セマグルチド（ｓｅｍａｇｌｕｔｉｄｅ）、ＮＮ−９９２４、ＴＴＰ−０５４、タンパク質チロシンホスファターゼ−１Ｂ（ＰＴＰ−１Ｂ）阻害剤（例えば、トロズスクエミン、ヒルチオサール抽出物、およびＺｈａｎｇ，Ｓ．ら、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ、１２（９／１０）、３７３〜３８１（２００７）によって開示されている化合物）、ＳＩＲＴ−１阻害剤（例えば、レスベラトロール、ＧＳＫ２２４５８４０またはＧＳＫ１８４０７２）、ジペプチジルペプチダーゼ（ｐｅｐｔｉｄｅａｓｅ）ＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害剤（例えば、ＷＯ２００５１１６０１４におけるもの、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、デュトグリプチン、リナグリプチンおよびサクサグリプチン）、インスリン分泌促進物質（ｓｅｃｒｅａｔａｇｏｇｕｅ）、脂肪酸酸化阻害剤、Ａ２アンタゴニスト、ｃ−ｊｕｎアミノ末端キナーゼ（ＪＮＫ）阻害剤、ＷＯ２０１０１０３４３７、ＷＯ２０１０１０３４３８、ＷＯ２０１００１３１６１、ＷＯ２００７１２２４８２において記述されているもの等のグルコキナーゼ活性化因子（ＧＫａ）、ＴＴＰ−３９９、ＴＴ��−３５５、ＴＴＰ−５４７、ＡＺＤ１６５６、ＡＲＲＹ４０３、ＭＫ−０５９９、ＴＡＫ−３２９、ＡＺＤ５６５８またはＧＫＭ−００１、インスリン、インスリン模倣物質、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤（例えばＧＳＫ１３６２８８５）、ＶＰＡＣ２受容体アゴニスト、ダパグリフロジン、カナグリフロジン、ＢＩ−１０７３３、トフォグリフロジン（ＣＳＧ４５２）、ＡＳＰ−１９４１、ＴＨＲ１４７４、ＴＳ−０７１、ＩＳＩＳ３８８６２６およびＬＸ４２１１を含む、Ｅ．Ｃ．Ｃｈａｏら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ９、５５１〜５５９（２０１０年７月）において記述されているもの、ならびにＷＯ２０１００２３５９４において記述されているもの等のＳＧＬＴ２阻害剤、Ｄｅｍｏｎｇ，Ｄ．Ｅ．ら、Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００８、４３、１１９〜１３７において記述されているもの等のグルカゴン受容体モジュレーター、ＷＯ２０１０１４００９２、ＷＯ２０１０１２８４２５、ＷＯ２０１０１２８４１４、ＷＯ２０１０１０６４５７、Ｊｏｎｅｓ，Ｒ．Ｍ．ら、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００９、４４、１４９〜１７０において記述されているもの（例えば、ＭＢＸ−２９８２、ＧＳＫ１２９２２６３、ＡＰＤ５９７およびＰＳＮ８２１）等のＧＰＲ１１９モジュレーター、特にアゴニスト、Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ，Ａ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ  ２００９、１０（４）３５９〜３６４において記述されているもの等のＦＧＦ２１誘導体または類似体、Ｚｈｏｎｇ，Ｍ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１０、１０（４）、３８６〜３９６において記述されているものおよびＩＮＴ７７７等のＴＧＲ５（ＧＰＢＡＲ１とも呼ばれる）受容体モジュレーター、特にアゴニスト、ＴＡＫ−８７５、ＧＰＲ１２０モジュレーター、特にアゴニスト、高親和性ニコチン酸受容体（ＨＭ７４Ａ）活性化因子を含むがこれらに限定されない、Ｍｅｄｉｎａ，Ｊ．Ｃ．、Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００８、４３、７５〜８５において記述されているもの等のＧＰＲ４０アゴニスト、ならびにＧＳＫ１６１４２３５等のＳＧＬＴ１阻害剤を含む。本発明の化合物と組み合わせることができる抗糖尿病剤のさらなる代表的な一覧は、例えば、ＷＯ２０１１００５６１１の２８頁３５行から３０頁１９行において見ることができる。好ましい抗糖尿病剤は、メトホルミンおよびＤＰＰ−ＩＶ阻害剤（例えば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、デュトグリプチン、リナグリプチンおよびサクサグリプチン）である。他の抗糖尿病剤は、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ酵素の阻害剤またはモジュレーター、フルクトース１，６−ジホスファターゼの阻害剤、アルドースレダクターゼの阻害剤、ミネラルコルチコイド受容体阻害剤、ＴＯＲＣ２の阻害剤、ＣＣＲ２および／またはＣＣＲ５の阻害剤、ＰＫＣアイソフォーム（例えば、ＰＫＣα、ＰＫＣβ、ＰＫＣ）の阻害剤、脂肪酸シンターゼの阻害剤、���リンパルミトイルトランスフェラーゼの阻害剤、ＧＰＲ８１、ＧＰＲ３９、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ１０５、Ｋｖ１．３、レチノール結合タンパク質４、グルココルチコイド受容体、ソマトスタイン（ｓｏｍａｔｏｓｔａｉｎ）受容体（例えば、ＳＳＴＲ１、ＳＳＴＲ２、ＳＳＴＲ３およびＳＳＴＲ５）のモジュレーター、ＰＤＨＫ２またはＰＤＨＫ４の阻害剤またはモジュレーター、ＭＡＰ４Ｋ４の阻害剤、ＩＬ１ベータを含むＩＬ１ファミリーのモジュレーター、ＲＸＲアルファのモジュレーターを含み得る。加えて、適切な抗糖尿病剤は、Ｃａｒｐｉｎｏ，Ｐ．Ａ．、Ｇｏｏｄｗｉｎ，Ｂ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔ、２０１０、２０（１２）、１６２７〜５１によって収載されている機序を含む。
【０１１７】
適切な抗肥満剤（そのいくつかは、抗糖尿病剤としても作用し得る）は、１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ−１（１１β−ＨＳＤ１型）阻害剤、ステアロイル−ＣｏＡデサチュラーゼ−１（ＳＣＤ−１）阻害剤、ＭＣＲ−４アゴニスト、コレシストキニン−Ａ（ＣＣＫ−Ａ）アゴニスト、モノアミン再取り込み阻害剤（シブトラミン等）、交感神経様作用剤、β３アドレナリンアゴニスト、ドーパミンアゴニスト（ブロモクリプチン等）、メラニン細胞刺激ホルモン類似体、５ＨＴ２ｃアゴニスト、メラニン凝集ホルモンアンタゴニスト、レプチン（ＯＢタンパク質）、レプチン類似体、レプチンアゴニスト、ガラニンアンタゴニスト、リパーゼ阻害剤（テトラヒドロリプスタチン、すなわちオルリスタット等）、食欲低下剤（ボンベシンアゴニスト等）、ニューロペプチド−Ｙアンタゴニスト（例えば、ベルネペリット等のＮＰＹ  Ｙ５アンタゴニスト）、ＰＹＹ３−３６（その類似体を含む）、ＢＲＳ３モジュレーター、オピオド（ｏｐｉｏｄ）受容体亜型の混合アンタゴニスト、甲状腺ホルモン様剤、デヒドロエピアンドロステロンまたはその類似体、グルココルチコイドアゴニストまたはアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、グルカゴン様ペプチド−１アゴニスト、毛様体神経栄養因子（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ、ＮＹおよびＰｒｏｃｔｅｒ＆Ｇａｍｂｌｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ、ＯＨから入手可能なＡｘｏｋｉｎｅ（商標）等）、ヒトアグーチ関連タンパク質（ＡＧＲＰ）阻害剤、ヒスタミン３アンタゴニストまたは逆アゴニスト、ニューロメジンＵアゴニスト、ＭＴＰ／ＡｐｏＢ阻害剤（例えば、ジルロタピド、ＪＴＴ１３０、ユシスタピド、ＳＬｘ４０９０等の腸選択的ＭＴＰ阻害剤）、オピオイドアンタゴニスト、ＧＳＫ１５２１４９８を含むがこれに限定されないミューオピオイド受容体モジュレーター、ＺＧＮ−４３３を含むがこれに限定されないＭｅｔＡｐ２阻害剤、グルカゴンの２以上において混合調節活性を持つ作用物質、ＭＡＲ−７０１またはＺＰ２９２９等のＧＩＰおよびＧＬＰ１受容体、ノルエピネフリン輸送体阻害剤、カンナビノイド−１−受容体アンタゴニスト／逆アゴニスト、グレリンアゴニスト／アンタゴニスト、オキシントモジュリンおよび類似体、テソフェンシン等であるがこれに限定されないモノアミン取り込み阻害剤、オレキシンアンタゴニスト、組合せ剤（ブプロピオンとゾニサミド、プラムリンチドとメトレレプチン、ブプロピオンとナルトレキソン、フェンテルミンとトピラマート等）等を含む。
【０１１８】
本発明の併用態様において使用するのに好ましい抗肥満剤は、腸選択的ＭＴＰ阻害剤（例えば、ジルロタピド、ミトラタピドおよびインプリタピド、Ｒ５６９１８（ＣＡＳ番号４０３９８７）およびＣＡＳ番号９１３５４１−４７−６）、ＣＣＫａアゴニスト（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００５／１１６０３４号または米国公開第２００５−０２６７１００Ａ１号において記述されているＮ−ベンジル−２−［４−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５−オキソ−１−フェニル−４，５−ジヒドロ−２，３，６，１０ｂ−テトラアザ−ベンゾ［ｅ］アズレン−６−イル］−Ｎ−イソプロピル−アセトアミド）、５ＨＴ２ｃアゴニスト（例えば、ロルカセリン）、ＭＣＲ４アゴニスト（例えば、ＵＳ６，８１８，６５８において記述されている化合物）、リパーゼ阻害剤（例えば、セチリスタット）、ＰＹＹ３−３６（本明細書において使用される場合、「ＰＹＹ３−３６」は、ペグ化（ｐｅｇｌａｔｅｄ）ＰＹＹ３−３６、例えば、米国公開第２００６／０１７８５０１号において記述されているもの等の類似体を含む）、オピオイドアンタゴニスト（例えば、ナルトレキソン）、オレオイル−エストロン（ＣＡＳ番号１８０００３−１７−２）、オビネピチド（ｏｂｉｎｅｐｉｔｉｄｅ）（ＴＭ３０３３８）、プラムリンチド（Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標））、テソフェンシン（ＮＳ２３３０）、レプチン、ブロモクリプチン、オルリスタット、ＡＯＤ−９６０４（ＣＡＳ番号２２１２３１−１０−３）およびシブトラミンを含む。好ましくは、本発明の化合物および併用療法は、運動および健康的な食習慣と併せて施される。
【０１１９】
列挙されている米国特許および刊行物（実施例において参照されるすべての技術告示を含む）はすべて、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１２０】
本明細書において以下で説明する実施例は、例証のみを目的とするものである。本明細書において反映されている組成物、方法および種々のパラメーターは、本発明の種々の態様および実施形態を例示することのみを意図されており、特許請求されている発明の範囲を何ら限定することは意図されていない。
【０１２１】
以下に記述する調製物を、下記の実施例において例示されている化合物の合成において使用した。
【０１２２】
下記の市販されている出発材料を使用して、以下の実施例において記述されている化合物を調製した：メチル３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（Ａｎｉｃｈｅｍ  ＬＬＣ、Ｎｏｒｔｈ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）、（１Ｒ，５Ｓ）−８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−カルボン酸（ＡｓｔａＴｅｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｂｒｉｓｔｏｌ、ＰＡ）、６−ブロモイソキノリン−３−アミン（Ａｒｋ  Ｐｈａｒｍ，Ｉｎｃ．、Ｌｉｂｅｒｔｙｖｉｌｌｅ、ＩＬ）、３−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（Ａｃｅｓ  Ｐｈａｒｍａ，Ｉｎｃ．、Ｂｒａｎｆｏｒｄ、ＣＴ）、エチルキノリン−７−カルボキシレート（ＡＳＷ  ＭｅｄＣｈｅｍ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）、７−ブロモイソキノリン−１（２Ｈ）−オン（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ、Ｗａｒｄ  Ｈｉｌｌ、ＭＡ）、３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸（ＡＳＷ  ＭｅｄＣｈｅｍ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）、５−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール（Ｊ＆Ｗ  ＰｈａｒｍＬａｂ  ＬＬＣ．、Ｌｅｖｉｔｔｏｗｎ、ＰＡ）、６−ブロモイソキノリン−１（２Ｈ）−オン（Ａｎｉｃｈｅｍ  ＬＬＣ、Ｎｏｒｔｈ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）、メチル１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレート（ＡＣＳ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．、Ｍｅｔｕｃｈｅｎ、ＮＪ）、４−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド（Ｏａｋｗｏｏｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＳＣ）、７−ブロモ−３−クロロイソキノリン（Ａｌｌｉｃｈｅｍ  ＬＬＣ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ）、７−ブロモイソキノリン−３−アミン（Ａｌｌｉｃｈｅｍ  ＬＬＣ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ）、６−ブロモイソキノリン−３−オール（Ａｒｋ  Ｐｈａｒｍ，Ｉｎｃ．、Ｌｉｂｅｒｔｙｖｉｌｌｅ、ＩＬ）、１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸（ＡＳＤＩ  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ）、１−クロロイソキノリン−７−カルボン酸（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｕｓｔｏｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、３，７−ジメチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（Ａｎｎｋｅｒ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．、Ｗｕｈａｎ、Ｃｈｉｎａ）、７−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（Ｊ＆Ｗ  ＰｈａｒｍＬａｂ  ＬＬＣ、Ｌｅｖｉｔｔｏｗｎ、ＰＡ）、２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（Ｂｅｐｈａｒｍ  Ｌｔｄ．、Ｓｈａｎｇｈａｉ、Ｃｈｉｎａ）、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸（Ｓｉｎｏｖａ  Ｉｎｃ．、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ）、７−クロロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（Ａｎｎｋｅｒ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．、Ｗｕｈａｎ、Ｃｈｉｎａ）、４−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸（ＡＳＷ  ＭｅｄＣｈｅｍ  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）、１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（Ｊ＆Ｗ  ＰｈａｒｍＬａｂ  ＬＬＣ、Ｌｅｖｉｔｔｏｗｎ、ＰＡ）、７−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（Ａｎｎｋｅｒ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．、Ｗｕｈａｎ、Ｃｈｉｎａ）、３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（Ａｌｌｉｃｈｅｍ  ＬＬＣ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ）、３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（Ａｒｋ  Ｐｈａｒｍ  Ｉｎｃ．、Ｌｉｂｅｒｔｙｖｉｌｌｅ、ＩＬ）、１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸（Ａｃｅｓ  Ｐｈａｒｍａ  Ｉｎｃ．、Ｂｒａｎｆｏｒｄ、ＣＴ）、キノリン−３−カルボン酸（Ｂｅｔａ  Ｐｈａｒｍａ  Ｉｎｃ．、Ｂｒａｎｆｏｒｄ、ＣＴ）、キノリン−７−カルボン酸（Ａｒｋ  Ｐｈａｒｍ  Ｉｎｃ．、Ｌｉｂｅｒｔｙｖｉｌｌｅ、ＩＬ）、イソキノリン−６−カルボン酸（Ａｒｋ  Ｐｈａｒｍ  Ｉｎｃ．、Ｌｉｂｅｒｔｙｖｉｌｌｅ、ＩＬ）、イソキノリン−７−カルボン酸（Ｉｎｄｏｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ  Ｉｎｃ．、Ｈｉｌｌｓｂｏｒｏｕｇｈ、ＮＪ）、６−メトキシキノリン−３−カルボン酸（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．、Ｍｏｎｍｏｕｔｈ  Ｊｕｎｃｔｉｏｎ、ＮＪ）、４−メトキシ−７−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ａｕｒｏｒａ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＬＬＣ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、２−アミノキノリン−６−カルボン酸（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．、Ｍｏｎｍｏｕｔｈ  Ｊｕｎｃｔｉｏｎ、ＮＪ）、８−メトキシキノリン−３−カルボン酸（ＢｉｏＢｌｏｃｋｓ  Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、２−アミノキノリン−７−カルボン酸（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．、Ｍｏｎｍｏｕｔｈ  Ｊｕｎｃｔｉｏｎ、ＮＪ）、２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸（Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ、Ｇｅｅｌ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）、１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、キノリン−６−カルボン酸（Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ、Ｇｅｅｌ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）、６−メトキシ−２−ナフトエ酸（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−５−カルボン酸（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、３，４−ジアミノ−５−クロロ安息香酸（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  ＢｉｏＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｍｏｎｍｏｕｔｈ  Ｊｕｎｃｔｉｏｎ、ＮＪ）、７−ブロモ−１−クロロイソキノリン（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ、Ｗａｒｄ  Ｈｉｌｌ、ＭＡ）、７−ブロモキノリン（Ａｎｉｃｈｅｍ  ＬＬＣ、Ｎｏｒｔｈ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）。
【０１２３】
下記のカルボン酸（以下の実施例において記述されている化合物を調製するために使用したもの）は、以前に公開された手段によって調製した：３，７−ジメチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００９１４４５５４号）、７−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００９１４４５５４号）、７−メトキシ−２−ナフトエ酸（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００３０１８５８６号）、５−メトキシ−２−ナフトエ酸（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００３０７２５７８号）、４，８−ジメトキシキノリン−２−カルボン酸（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００７０１１８０９号）、３−クロロ−７−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００９１４４５５４号）、３−クロロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００９１４４５５４号）、８−メトキシ−２−ナフトエ酸（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００３０７２５７８号）、３−クロロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００８０６５５０８号）、３−クロロ−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００８０６５５０８号）、７−メトキシ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（ＷＯ２００９１４４５５４）、４，８−ジメトキシキノリン−２−カルボン酸（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００７０１１８０９）。
【実施例】
【０１２４】
以下に記述する化合物および中間体は、ケムドローウルトラ（ＣｈｅｍＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ）、バージョン１１．０．１（ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ  Ｃｏｒｐ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）で提供される命名規則を使用して命名した。ケムドローウルトラ、バージョン１１．０．１で提供される命名規則は、当業者によく知られており、ケムドローウルトラ、バージョン１１．０．１で提供される命名規則は、概して、Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  ＣｈｅｍｉｓｔｒｙのＩＵＰＡＣ（国際純正応用化学連合）勧告およびＣＡＳ  Ｉｎｄｅｘルールに適合すると考えられている。特に断りのない限り、すべての反応物質は市販のものを入手した。本明細書において以下で挙げる参考文献はすべて、参照により組み込まれる。
【０１２５】
フラッシュクロマトグラフィーは、Ｓｔｉｌｌら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９７８、４３、２９２３によって記述されている方法に従って実施した。
【０１２６】
本明細書において論じられているすべてのＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）精製は、ＫＰ−ＳＩＬシリカ（４０〜６３μＭ、６０オングストローム）（Ｂｉｏｔａｇｅ  ＡＢ；Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を含有するＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）ＳＮＡＰカラムを使用して実施した。
【０１２７】
本明細書において論じられているすべてのＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ（登録商標）精製は、充填されたＲｅｄｉＳｅｐ（登録商標）シリカカラムを利用するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）Ｃｏｍｐａｎｉｏｎシステム（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ；Ｌｉｎｃｏｌｎ、Ｎｅｂｒａｓｋａ）を使用して実施した。
【０１２８】
質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．；Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）マイクロマスプラットフォームＩＩ分光計で記録した。別段の指定がない限り、質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）マイクロマスプラットフォームＩＩ分光計で記録した。
【０１２９】
プロトンＮＭＲ化学シフトは、テトラメチルシランから低磁場に１００万分の１単位で記され、Ｖａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ  ３００、４００または５００ＭＨｚ（メガヘルツ）分光計（Ｖａｒｉａｎ  Ｉｎｃ．；Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）で記録した。ＮＭＲ化学シフトは、テトラメチルシラン（プロトンの場合）またはフルオロトリクロロメタン（フッ素の場合）から低磁場に１００万分の１単位で記される。
【０１３０】
ＨＰＬＣ保持時間は、下記の方法を使用して測定した：方法Ａ：カラム：ＷａｔｅｒｓアトランティスｄＣ１８  ４．６×５０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水中０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中０．０５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）；勾配：４．０分間で９５％Ａ／５％Ｂ線形から５％Ａ／９５％Ｂ、５．０分まで５％Ａ／９５％Ｂでホールド；流速：２．０ｍＬ／分。方法Ｂ：カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＣ１８  ４．６×５０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水中０．０３％ＮＨ４ＯＨ（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中０．０３％ＮＨ４ＯＨ（ｖ／ｖ）；勾配：４．０分間で９５％Ａ／５％Ｂ線形から５％Ａ／９５％Ｂ、５．０分まで５％Ａ／９５％Ｂでホールド；流速：２．０ｍＬ／分。
【０１３１】
以下に記述する調製物を、下記の実施例において例示されている化合物の合成において使用した。
【０１３２】
中間体および出発材料の調製
カルボン酸中間体は、市販のものを購入したか、以下に記述する通りに調製したか、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００９／１４４５５４号において記述されている通りに調製したか、当業者によく知られている調製を使用して調製したか、または他のカルボン酸中間体について上述した経路に類似する方式で調製した。
【０１３３】
中間体１：１’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン塩酸塩
【０１３４】
【化１４】
0005647356.tif 000015
ステップ１．エチル５−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート
【０１３５】
【化１５】
0005647356.tif 000016
アセトニトリル（２０ｍＬ）中のエチル５−アミノ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（６７４ｍｇ、３．１９ｍｍｏｌ、Ｌｉら、Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌ．Ｃｈｅｍ．、２００７、４４、７４９）の溶液に、臭化銅（ＩＩ）（７２０ｍｇ、３．１９ｍｍｏｌ）および亜硝酸イソアミル（０．５６ｍＬ、４．１５ｍｍｏｌ）を添加した。金色懸濁液を４５℃で２時間加熱し、次いで室温に冷却し、酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。結果として生じた残留物をフラッシュクロマトグラフィー（５〜４０％酢酸エチル／ヘプタン、１０ｇのシリカゲル）によって精製して、６８５ｍｇのエチル５−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレートを透明油として生成した。+APCI(M+H) 275.0; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.87(s, 1H), 4.32(q, J=7.0Hz, 2H), 1.77(s, 9H), 1.36(t, J=7.1Hz,
3H).
【０１３６】
ステップ２：（５−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メタノール
【０１３７】
【化１６】
0005647356.tif 000017
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のエチル５−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（６８５ｍｇ、２．４９ｍｍｏｌ）の溶液を、−７８℃に冷却し、水素化ジイソブチルアルミニウム（７．４７ｍＬ、７．４７ｍｍｏｌ、１Ｍ  ＴＨＦ）で滴下処理した。混合物を−７８℃で３０分間撹拌し、次いで室温に１８時間加温した。混合物を酢酸エチル１０ｍＬ）でクエンチし、１５分間撹拌した。次いで、混合物を飽和ロッシェル塩水溶液（２５ｍＬ）で処理し、室温で１時間撹拌した。混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、水（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（１０〜８０％酢酸エチル／ヘプタン勾配、２５ｇのシリカゲル）によって精製して、４６０ｍｇの（５−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メタノールを透明油として生成した。+APCI(M+H) 233.1, (M+2+H) 235.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3,
δ): 7.51(s, 1H), 4.53(d, 2H), 1.74(s, 9H), 1.55(t,
J=5.8Hz, 1H).
【０１３８】
ステップ３：５−ブロモ−４−（ブロモメチル）−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール
【０１３９】
【化１７】
0005647356.tif 000018
ジクロロメタン（２５ｍＬ）中の（５−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メタノール（４６０ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却し、次いで、臭化リン（ＩＩＩ）（０．３７ｍＬ、３．４６ｍｍｏｌ）で５分間かけて滴下処理した。混合物を０℃で３０分間、次いで室温で１時間撹拌した。混合物を水（５０ｍＬ）でゆっくりクエンチし、３０分間撹拌し、次いで酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機相を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、３６２ｍｇの５−ブロモ−４−（ブロモメチル）−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾールを透明油として生成した。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.54(s, 1H), 4.39(s, 2H), 1.74(s, 9H).
【０１４０】
ステップ４：１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（（５−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート
【０１４１】
【化１８】
0005647356.tif 000019
ＴＨＦ（１５ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチルピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（０．３７ｍＬ、１．４７ｍｍｏｌ）の溶液を、−７８℃に冷却し、次いで、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１．４８ｍＬ、１．４８ｍｍｏｌ、１Ｍトルエン）で滴下処理した。反応物を−７８℃で１５分間撹拌し、０℃に３０分間加温し、次いで冷却して−７８℃に戻した。ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の５−ブロモ−４−（ブロモメチル）−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール（３３５ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、混合物を−７８℃で１時間撹拌し、次いで室温で１８時間撹拌させた。反応物を飽和塩化アンモニウム水溶液（２０ｍＬ）でクエンチし、室温で３０分間撹拌し、水（５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。結果として生じた残留物をフラッシュクロマトグラフィー（５〜４０％酢酸エチル／ヘプタン、２５ｇのシリカゲル）によって精製して、２５６ｍｇの１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（（５−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレートを透明油として生成した。+ESI(M+H) 474.2,(M+2+H) 476.2; 1H NMR(400MHz, CDCl3,
δ): 7.20(s, 1H), 4.16(q, J=7.2Hz, 2H), 3.93(br. s.,
2H), 2.84(m, 2H), 2.66(s, 2H), 2.10(d, J=12.5Hz, 2H), 1.72(s, 9H), 1.45(m,
11H), 1.25(t, J=7.1Hz, 3H).
【０１４２】
ステップ５：４−（（５−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸
【０１４３】
【化１９】
0005647356.tif 000020
メタノール（１５ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（（５−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（２５６ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）の溶液に、２．５Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（５ｍＬ）を添加し、結果として生じた混合物を１８時間加熱還流した。混合物を室温に冷却し、メタノールを減圧下で除去した。結果として生じたスラリーを２５ｍＬの水に溶かし、１Ｎ  ＨＣｌ水溶液で酸性化し、次いで酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、２４１ｍｇの４−（（５−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸を無色固体として生成した。+APCI(M+H) 444.2,(M+2+H) 446.2; 1H NMR(400MHz, CDCl3,
δ): 7.35(s, 1H), 3.95(br. s., 2H), 2.92(br. s., 2H),
2.71(s, 2H), 2.08(d, J=12.9Hz, 2H), 1.73(s, 9H), 1.50(m, 11H).
【０１４４】
ステップ６：ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−４−イソシアナトピペリジン−１−カルボキシレート
【０１４５】
【化２０】
0005647356.tif 000021
トルエン（１０ｍＬ）中の４−（（５−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸（２４１ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（９１μＬ、０．６５ｍｍｏｌ）およびジフェニルリン酸アジド（０．１４ｍＬ、０．６５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１２０℃で３時間加熱し、反応物を冷却し、揮発物を減圧下で除去した。結果として生じた油をフラッシュクロマトグラフィー（２５ｇのシリカ、７〜６０％酢酸エチル／ヘプタン勾配）によって精製して、２２５ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−４−イソシアナトピペリジン−１−カルボキシレートを透明油として生成した。+APCI(M+H) 385.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.40(s, 1H), 4.03(br. s., 2H), 2.97(br. t, J=12.3, 12.3Hz, 2H),
2.70(s, 2H), 1.74(s, 9H), 1.67(m, 2H), 1.62(m, 2H), 1.46(s, 9H).
【０１４６】
ステップ７：ｔｅｒｔ−ブチル１’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−１’，４’，６’，７’−テトラヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−１−カルボキシレート
【０１４７】
【化２１】
0005647356.tif 000022
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−４−イソシアナトピペリジン−１−カルボキシレート（２２５ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）の溶液を、−７８℃に冷却し、ｔ−ブチルリチウム（０．６ｍＬ、ペンタン中１．７Ｍ）を２分間かけて滴下添加した。混合物を−７８℃で３０分間撹拌し、０℃に加温し、次いで飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）でクエンチした。混合物を室温で３０分間撹拌し、水（２５ｍＬ）で希釈し、次いで酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（１２〜１００％酢酸エチル／ヘプタン、１０ｇのシリカゲル）によって精製して、１３７ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル１’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−１’，４’，６’，７’−テトラヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−１−カルボキシレートを無色固体として生成した。+ESI(M-tBu) 307.2; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 7.74(s, 1H), 7.30(s, 1H), 3.51(m, 2H), 3.20(m, 2H), 2.79(s, 2H),
1.64(s, 9H), 1.56(t, J=5.8Hz, 4H), 1.38(s, 9H).
【０１４８】
ステップ８：１’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン塩酸塩
酢酸エチル（４ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル１’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−１’，４’，６’，７’−テトラヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−１−カルボキシレート（１３７ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン中４Ｎ  ＨＣｌ（２ｍＬ）を添加した。室温で１時間撹拌した後、揮発物を減圧下で除去し、結果として生じた無色固体をヘプタン（１０ｍＬ）から粉砕して、１１２ｍｇの表題化合物を無色固体として生成した。+APCI(M+H) 263.3; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.84(m, 2H), 8.00(s, 1H), 7.29(s, 1H), 3.13(d, J=6.1Hz, 2H),
3.03(br. s., 2H), 2.78(s, 2H), 1.76(m, 4H), 1.60(s, 9H).
【０１４９】
中間体２：以下に示す１’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した。
【０１５０】
【化２２】
0005647356.tif 000023
【０１５１】
ステップ１：５−アミノ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート
【０１５２】
【化２３】
0005647356.tif 000024
９０％エタノール／メタノール（１．５Ｌ）中の、エチル２−シアノ−３−エトキシアクリレート（８４．４ｇ、０．５０ｍｏｌ）、イソプロピルヒドラジン塩酸塩（５５．２ｇ、０．５０ｍｏｌ）および炭酸カリウム（６８．８ｇ、０．５０ｍｏｌ）の混合物を、１６時間加熱還流した。次いで、溶媒を真空で除去し、水および酢酸エチルを添加した。混合物を分離し、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空で除去して、エチル５−アミノ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（９２．４ｇ、９４％）を生成した。+ESI(M+H) 198.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.63(s, 1H), 4.97(br. s., 2H), 4.28(q, 2H), 4.18(m, 1H), 1.45(d,
6H), 1.31(t, 3H).
【０１５３】
ステップ２：５−アミノ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート
【０１５４】
【化２４】
0005647356.tif 000025
アセトニトリル（１Ｌ）中のエチル５−アミノ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（１０７．５ｇ、０．５５ｍｏｌ）の混合物に、臭化銅（ＩＩ）（１８２．６ｇ、０．８２ｍｏｌ）を、アルゴン下室温で添加した。混合物を５０℃に加熱し、亜硝酸イソアミル（１０９．８ｍＬ、０．８２ｍｏｌ）を滴下添加した（発熱が観察され、温度は６５℃に上昇した）。反応物を５０℃で２時間撹拌し、次いで混合物を室温に冷却し、２Ｍ  ＨＣｌ上に注ぎ、１５分間撹拌し、次いで酢酸エチルで２回抽出した。有機層を合わせ、ブライン、次いで飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空で除去してエチル５−ブロモ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（１６３ｇ、定量的）を得、これをさらに精製することなく次のステップにおいて使用した。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.97(s, 1H), 4.77(m, 1H), 4.28(q, 2H), 1.35(t, 3H), 0.90(d, 6H).
【０１５５】
ステップ３：（５−ブロモ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メタノール
【０１５６】
【化２５】
0005647356.tif 000026
２−メチルテトラヒドロフラン（４００ｍＬ）中のエチル５−ブロモ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（１６３ｇ、０．５０ｍｏｌ）の溶液に、ボラン−ＤＭＳ（１４０ｍＬ、１．５０ｍｏｌ）を、アルゴン下０℃で添加した（５０ｍＬを添加した後、泡立ちは停止した）。混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで７０℃に２時間加熱し、その後、１７時間還流した。追加分量のボランＤＭＳ（４０ｍＬ）を添加し、混合物をさらに３時間撹拌還流した。混合物を室温に冷却し、次いで氷冷メタノール（５００ｍＬ）に撹拌しながら３０分間かけて徐々に添加した。混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１．５Ｌ）を添加した。層を分離し、水層を酢酸エチル（２×５００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空で除去した。粗生成物を乾燥フラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン中０〜５０％酢酸エチル）によって精製して、（５−ブロモ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メタノール（２ステップにわたって７０．８ｇ、６５％）を得た。+ESI(M+H) 220.9; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.52(s, 1H), 4.67(m, 1H), 4.47(s, 2H), 2.59(br. s., 1H), 1.41(s,
6H).
【０１５７】
ステップ４：５−ブロモ−４−（ブロモメチル）−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール
【０１５８】
【化２６】
0005647356.tif 000027
ジクロロメタン（２００ｍＬ）中の（５−ブロモ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メタノール（１０．０ｇ、４５．７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＰＢｒ３（６．５ｍＬ、６８．５ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。添加が完了した後、混合物を室温に加温させ、３時間撹拌した。混合物を氷冷水（３００ｍＬ）に注ぎ入れ、振とうし、分離し、次いで氷冷水（２×１００ｍＬ）で２回、その後ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空で除去して、５−ブロモ−４−（ブロモメチル）−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール（１２．２ｇ、９５％）を得た。1H NMR(300MHz, CDCl3, δ): 7.58(s, 1H), 4.64(m, 1H), 4.35(s, 2H), 1.43(d, 6H).
【０１５９】
ステップ５：１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（（５−ブロモ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート
【０１６０】
【化２７】
0005647356.tif 000028
２−メチルテトラヒドロフラン（１２０ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチルピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（１４．５ｇ、５６．３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、テトラヒドロフラン中１Ｍ  ＬｉＨＭＤＳ（５７ｍＬ、５６．３ｍｍｏｌ）を、アルゴン下−７８℃で滴下添加した。２０分後、２−メチルテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中の５−ブロモ−４−（ブロモメチル）−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール（１２．２ｇ、４３．３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温に加温させ、１８時間撹拌した。混合物を水（２００ｍＬ）で希釈し、混合物を分離した。有機相を、１０％クエン酸溶液（２×１００ｍＬ）、次いでブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空で除去した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘプタン中１０〜３０％酢酸エチル）によって精製して、１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（（５−ブロモ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（９．３ｇ）を得た。カラムから、出発エステルと所望生成物との７．１ｇの混合画分も単離された。これを９０％エタノール／メタノール中１当量の水酸化ナトリウムとともに室温で２時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、酢酸エチル（１００ｍＬ）を添加した。混合物を、２Ｎ水酸化ナトリウム（２×５０ｍＬ）、次いでブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空で除去して、１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（（５−ブロモ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレートの第二の収穫物（５．１ｇ）を得た。合わせた収率は１４．４ｇ（７２％）である。+ESI(M+H) 404.0; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 4.62(m, 1H), 4.12(q, 2H), 3.90(br. s., 2H), 2.82(m, 2H), 2.63(s,
2H), 2.08(d, 2H), 1.66(m, 2H), 1.42(s, 9H), 1.21(t, 3H).
【０１６１】
ステップ６：４−（（５−ブロモ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸
【０１６２】
【化２８】
0005647356.tif 000029
メタノール（５０ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（（５−ブロモ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（１４．５ｇ、３１．６ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム（１．５２ｇ、３６．２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を８０℃で１８時間撹拌した。追加分量の水酸化リチウム（２．５５ｇ、６３．３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を激しく還流しながら３時間加熱し、室温に冷却し、溶媒を真空で除去した。残留物を酢酸エチルで洗浄し、濾過し、濾液を保存した。固体を２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（４０ｍＬ）に溶解し、次いで１０％クエン酸溶液でｐＨ５に酸性化した。水溶液を酢酸エチル（３×４０ｍＬ）で抽出し、有機物を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、次いで最初の濾液と合わせた。溶媒を減圧下で濾液から除去し、得られた残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、４−（（５−ブロモ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸（１０．１ｇ、７４％）を無色固体として生じさせた。+ESI(M+H) 429.9; 1H NMR(300MHz, CDCl3, δ): 7.41(s, 1H), 4.64(m, 1H), 3.94(m, 2H), 2.95(m, 2H), 2.68(m, 2H),
2.09(m, 2H), 1.47(m, 17H).
【０１６３】
ステップ７：ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−ブロモ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−４−イソシアナトピペリジン−１−カルボキシレート
【０１６４】
【化２９】
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トルエン（１５ｍＬ）中の、４−（（５−ブロモ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−カルボン酸（２．５４ｇ、５．９ｍｍｏｌ）、ジフェニルリン酸アジド（１．７９ｇ、６．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．９１ｍＬ、６．５ｍｍｏｌ）の混合物を、３時間加熱還流した。次いで、混合物を室温に冷却し、溶媒を真空で除去した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−ブロモ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−４−イソシアナトピペリジン−１−カルボキシレート（２．８ｇ、１００％）を得た。1H NMR(300MHz, CDCl3, δ): 7.47(s, 1H), 4.68(m, 1H), 3.99(m, 2H), 2.95(m, 2H), 2.67(s, 2H),
1.62(m, 4H), 1.45(m, 15H).
【０１６５】
ステップ８：ｔｅｒｔ−ブチル１’−イソプロピル−７’−オキソ−１’，４’，６’，７’−テトラヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−１−カルボキシレート
【０１６６】
【化３０】
0005647356.tif 000031
２−メチルテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−ブロモ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−４−イソシアナトピペリジン−１−カルボキシレート（１．４ｇ、３．３ｍｍｏｌ）の混合物に、ｔ−ブチルリチウム（ヘキサン中１．７Ｍ、４．３ｍＬ、７．２ｍｍｏｌ）を、アルゴン下−７８℃で添加した。添加が完了した後、混合物を室温に加温させ、１８時間撹拌した。混合物を水（１０ｍＬ）でクエンチし、次いで酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈した。層を分離し、有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空で除去した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、ｔｅｒｔ−ブチル１’−イソプロピル−７’−オキソ−１’，４’，６’，７’−テトラヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−１−カルボキシレート（０．７７ｇ、６７％）を得た。+ESI(M+H) 374.1; 1H NMR(300MHz, CDCl3, δ): 7.34(s, 1H), 6.35(s, 1H), 5.45(m, 1H), 3.57(m, 2H), 3.42(m, 2H),
2.79(s, 2H), 1.70(m, 4H), 1.45(m, 15H).
【０１６７】
ステップ９：１’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン
４ｍＬの酢酸エチル中のｔｅｒｔ−ブチル１’−イソプロピル−７’−オキソ−１’，４’，６’，７’−テトラヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−１−カルボキシレート（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン中４Ｎ  ＨＣｌ（２ｍＬ）を添加した。室温で３０分間撹拌した後、メタノール（１ｍＬ）を添加し、結果として生じた溶液を室温で５時間撹拌した。揮発物を減圧下で除去し、結果として生じた無色固体を１：１  アセトニトリル／ジクロロメタンで粉砕して、７１ｍｇの表題化合物を無色固体として生成した。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.72(br. s., 2H), 8.05(s, 1H), 7.37(s, 1H), 5.36(m, 1H), 3.15(m,
2H), 3.05(m, 2H), 2.78(s, 2H), 1.78(m, 4H), 1.33(d, J=6.6Hz, 6H).
【０１６８】
中間体３：以下に示す２’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン塩酸塩は、下記の通りに調製した。
【０１６９】
【化３１】
0005647356.tif 000032
【０１７０】
ステップ１：エチル３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート
【０１７１】
【化３２】
0005647356.tif 000033
２０ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中のエチル３−ヨードピラゾール−４−カルボキシレート（１．５８ｇ、５．９４ｍｍｏｌ、Ｔｒｕｏｎｇら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１９、４９２０（２００９））の溶液に、炭酸セシウム（３．８７ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）および２−ヨードプロパン（０．８９ｍＬ、８．９０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を６０℃で２時間撹拌し、次いで周囲温度に冷却した。反応混合物を１５０ｍＬの水で希釈し、２×１００ｍＬのジエチルエーテルで抽出した。合わせた有機物を５０ｍＬのブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。結果として生じた油をフラッシュクロマトグラフィー（７〜６０％酢酸エチル／ヘプタン勾配、５０ｇのシリカ）によって精製して、３４０ｍｇのエチル５−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレートを静置すると結晶化する透明油として、および７４０ｍｇのエチル３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレートを透明油として生成した。
エチル５−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート：+APCI(M+H)
309.0; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ):
8.05(s, 1H) 4.82(spt, J=6.6Hz, 1H) 4.33(q, J=7.2Hz, 2H) 1.50(d, J=6.6Hz, 6H)
1.37(t, J=7.1Hz, 3H).
エチル３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート：+APCI(M+H)
309.0; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ):
7.84(s, 1H) 4.52(spt, J=6.7Hz, 1H) 4.32(q, J=7.1Hz, 2H) 1.52(d, J=6.6Hz, 6H)
1.37(t, J=7.1Hz, 3H).
【０１７２】
ステップ２：（３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メタノール
【０１７３】
【化３３】
0005647356.tif 000034
テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中のエチル３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（７４０ｍｇ、２．４０ｍｍｏｌ）の溶液を、−７８℃に冷却し、水素化ジイソブチルアルミニウム（トルエン中１．５Ｍ、０．８ｍＬ、７．２１ｍｍｏｌ）で滴下処理した。混合物を−７８℃で１時間撹拌し、次いで室温に２時間加温した。混合物を１０ｍＬの酢酸エチルでクエンチし、１５分間撹拌し、次いで２５ｍＬの飽和ロッシェル塩水溶液で処理した。室温でさらに１時間撹拌した後、混合物を５０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、１００ｍＬの水で洗浄した。水層をさらに５０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。次いで、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（１２〜１００％酢酸エチル／ヘプタン、２５ｇのシリカゲル）によって精製して、６３０ｍｇの（３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メタノールを透明油として生成した。+APCI(M+H) 266.8; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.37(s, 1H), 4.49(m, 3H), 1.67(t, J=5.9Hz, 1H), 1.50(s, 6H).
【０１７４】
ステップ３：４−（ブロモメチル）−３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール
【０１７５】
【化３４】
0005647356.tif 000035
２０ｍＬのジクロロメタン中の（３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メタノール（０．６３ｇ、２．３７ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。臭化リン（ＩＩＩ）（０．６７ｍＬ、７．１０ｍｍｏｌ）を溶液に添加し、混合物を０℃で３０分間、室温で１時間撹拌し、次いで５０ｍＬの水でクエンチし、室温で１５分間撹拌した。混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で処理し、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（１０〜８０％酢酸エチル／ヘプタン、２５ｇのシリカゲル）によって精製して、４００ｍｇの４−（ブロモメチル）−３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾールを無色固体として生成した。+APCI(M+H) 329.0; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.42(s, 1H), 4.47(spt, J=6.7Hz, 1H), 4.35(s, 2H), 1.50(d,
J=6.6Hz, 6H).
【０１７６】
ステップ４：１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（（３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート
【０１７７】
【化３５】
0005647356.tif 000036
窒素下、乾燥した１００ｍＬの丸底フラスコ内、テトラヒドロフラン（１５ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチルピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（０．５４ｍＬ、２．１１ｍｍｏｌ）の溶液を、−７８℃に冷却し、次いでリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１Ｍトルエン、２．１３ｍＬ、２．１３ｍｍｏｌ）で処理した。−７８℃で４５分間撹拌した後、４−（ブロモメチル）−３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール（５３５ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬのテトラヒドロフラン中の懸濁液として添加した。混合物を−７８℃で１時間撹拌し、次いで室温で１８時間撹拌させた。反応混合物を２０ｍＬの飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、室温で３０分間撹拌し、５０ｍＬの水で希釈し、次いで酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（１０〜８０％酢酸エチル／ヘプタン、２５ｇのシリカゲル）によって精製して、１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（（３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（６４５ｍｇ）を透明油として生成した。+ESI(M-tBu) 450.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.02(s, 3H), 4.44(spt, J=6.6Hz, 1H), 4.17(m, 2H), 3.92(m, 2H),
2.86(m, 2H), 2.62(s, 2H), 2.08(m, 2H), 1.46(m, 17H), 1.25(t, J=7.1Hz, 3H).
【０１７８】
ステップ５：１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（（３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−４−カルボン酸
【０１７９】
【化３６】
0005647356.tif 000037
メタノール（２０ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル４−エチル４−（（３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−１，４−ジカルボキシレート（４５５ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）の溶液に、２Ｎ  ＮａＯＨ（５ｍＬ）を添加した。室温で１８時間撹拌した後、メタノールを減圧下で除去し、結果として生じたスラリーを２０ｍＬの水に溶かし、２Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（（３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−４−カルボン酸（４３０ｍｇ）を無色固体として生成した。-APCI(M-H) 476.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.11(s, 1H), 4.45(dquin, J=13.4, 6.7Hz, 1H), 3.95(br. s., 2H),
2.91(m, 2H), 2.69(s, 2H), 2.08(m, 2H), 1.47(m, 8H).
【０１８０】
ステップ６：ｔｅｒｔ−ブチル４−（（３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−４−イソシアナトピペリジン−１−カルボキシレート
【０１８１】
【化３７】
0005647356.tif 000038
トルエン（１０ｍＬ）中の１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−（（３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）ピペリジン−４−カルボン酸（４３０ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．１５ｍＬ、１．０８ｍｍｏｌ）およびジフェニルリン酸アジド（０．２４ｍＬ、１．０８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１２０℃で３時間加熱し、揮発物を減圧下で除去し、結果として生じた油をフラッシュクロマトグラフィー（７〜６０％酢酸エチル／ヘプタン、２５ｇのシリカゲル）によって精製して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（（３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−４−イソシアナトピペリジン−１−カルボキシレート（２８０ｍｇ）を透明油として生成した。FT-IR(cm-1): 2253; 1H NMR(400MHz, CDCl3,
δ): 7.27(s, 1H), 4.50(m, 1H), 4.03(br. s., 2H),
2.97(br. s., 2H), 2.65(s, 2H), 1.65(m, 4H), 1.50(s, 6H), 1.47(s, 9H).
【０１８２】
ステップ７：ｔｅｒｔ−ブチル２’−イソプロピル−７’−オキソ−２’，４’，６’，７’−テトラヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−１−カルボキシレート
【０１８３】
【化３８】
0005647356.tif 000039
テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（（３−ヨード−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−４−イソシアナトピペリジン−１−カルボキシレート（２８０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）の−７８℃溶液に、ｔ−ブチルリチウム（０．７ｍＬ、ペンタン中１．７Ｍ）を滴下添加した。−７８℃で３０分間撹拌した後、混合物を０℃に加温し、２０ｍＬの飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、室温でさらに３０分間撹拌した。反応混合物を２５ｍＬの水で希釈し、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。次いで、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（１２〜１００％酢酸エチル／ヘプタン、１０ｇのシリカゲル）によって精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２’−イソプロピル−７’−オキソ−２’，４’，６’，７’−テトラヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−１−カルボキシレート（１３０ｍｇ）を無色固体として生成した。+ESI(M+H) 349.1; 1H NMR(500MHz, CDCl3, δ): 7.28(s, 1H), 5.78(s, 1H), 4.57(spt, J=6.6Hz, 1H), 3.59(m, 2H),
3.37(m, 2H), 2.82(s, 2H), 1.74(m, 4H), 1.55(d, J=6.6Hz, 6H), 1.47(s, 9H).
【０１８４】
ステップ８：２’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン塩酸塩
酢酸エチル（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２’−イソプロピル−７’−オキソ−２’，４’，６’，７’−テトラヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−１−カルボキシレート（１３０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）の溶液に、１，４−ジオキサン中の４Ｍ塩酸（２ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌し、揮発物を減圧下で除去し、結果として生じた残留物を１０ｍＬのヘプタンで粉砕した。固体を減圧下で乾燥させて、２’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン塩酸塩（１０５ｍｇ）をオフホワイトの固体として生成した。+ESI(M+H) 249.1; 1H NMR(500MHz, DMSO-d6, δ): 7.91(s, 1H) 7.69(s, 1H) 4.48-4.62(m, 1H) 3.02-3.28(m, 4H) 2.78(s,
2H) 1.74-1.89(m, 4H) 1.41(d, J=6.59Hz, 6H).
【０１８５】
中間体４：以下に示す２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン塩酸塩は、下記の通りに調製した。
【０１８６】
【化３９】
0005647356.tif 000040
【０１８７】
ステップ１：（Ｅ）−エチル２−（２−ｔｅｒｔ−ブチルヒドラゾノ）プロパノエート
【０１８８】
【化４０】
0005647356.tif 000041
エタノール（１５０ｍＬ）中のピルビン酸エチル（２０．２２ｇ、１７４．１ｍｍｏｌ）の溶液に、ｔ−ブチルヒドラジン塩酸塩（２１．７ｇ、１７４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３３．４ｍＬ、１９２ｍｍｏｌ）を添加した。１８時間撹拌還流した後、反応物を冷却し、揮発物を減圧下で除去した。結果として生じた金色油を３００ｍＬの酢酸エチルに溶かし、２００ｍＬの水および３００ｍＬの飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、（Ｅ）−エチル２−（２−ｔｅｒｔ−ブチルヒドラゾノ）プロパノエート（２３．１ｇ）を透明淡黄色油として生成した。+APCI(M+H) 187.3; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 5.51(br. s., 1H), 4.25(q, J=7.2Hz, 2H), 1.89(s, 3H), 1.32(t,
J=7.1Hz, 3H), 1.28(s, 9H).
【０１８９】
ステップ２：エチル１−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ホルミル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシレート
【０１９０】
【化４１】
0005647356.tif 000042
トルエン（３００ｍＬ）中の（Ｅ）−エチル２−（２−ｔｅｒｔ−ブチルヒドラゾノ）プロパノエート（２２．９ｇ、１２３ｍｍｏｌ）の黄橙色溶液に、（クロロメチレン）ジメチルアンモニウムクロリド（ビルスマイヤー塩、３４．０ｇ、２５２ｍｍｏｌ）を一度に添加した。懸濁液を室温で３時間撹拌すると、ゆっくり濃橙色油上にトルエンの二相混合物になった。反応混合物を０℃に冷却し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液でゆっくり中和した。層を分離し、水層を追加の酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、２００ｍＬのブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、エチル１−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ホルミル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシレート（１８．６ｇ）を黄褐色〜橙色油として生成し、これを静置すると凝固した。+APCI(M+H) 225.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 10.37(s, 1H), 8.14(s, 1H), 4.48(q, J=7.0Hz, 2H), 1.65(s, 9H),
1.44(t, 3H).
【０１９１】
ステップ３：エチル１−ｔｅｒｔ−ブチル−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシレート
【０１９２】
【化４２】
0005647356.tif 000043
エタノール（５０ｍＬ）中のエチル１−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ホルミル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシレート（２．８７ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（０．９７ｇ、２５．６ｍｍｏｌ）を一度に添加した。室温で３０分間撹拌した後、混合物を１Ｎ塩酸水溶液（１００ｍＬ）でクエンチし、１５分間撹拌し、次いで飽和重炭酸ナトリウム水溶液で中和した。混合物を酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で抽出し、次いで、合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、エチル１−ｔｅｒｔ−ブチル−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシレート（２．５７ｇ）を透明油として生成した。+APCI(M+Na) 249.2; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.49(s, 1H), 4.65(d, J=6.8Hz, 2H), 4.43(q, J=7.2Hz, 2H), 3.62(t,
J=6.9Hz, 1H), 1.59(s, 9H), 1.41(t, J=7.1Hz, 3H).
【０１９３】
ステップ４：エチル４−（ブロモメチル）−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシレート
【０１９４】
【化４３】
0005647356.tif 000044
ジクロロメタン（１２０ｍＬ）中のエチル１−ｔｅｒｔ−ブチル−４−（ヒドロキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシレート（３．９ｇ、１７．２４ｍｍｏｌ）の０℃溶液に、三臭化リン（４．９１ｍＬ、５１．７ｍｍｏｌ）を添加し、結果として生じた混合物を、０℃で３０分間、次いで室温で１時間撹拌した。混合物を５０ｍＬの水でクエンチし、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で中和し、３０分間撹拌し、次いでジクロロメタン（２×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を１００ｍＬのブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィー（７〜６０％酢酸エチル／ヘプタン、５０ｇのシリカゲル）によって精製して、エチル４−（ブロモメチル）−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシレート（４．１２ｇ）を透明油として生成した。+APCI(M+H) 289.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.61(s, 1H), 4.70(s, 2H), 4.41(q, J=7.2Hz, 2H), 1.60(s, 9H),
1.40(t, 3H).
【０１９５】
ステップ５：ｔｅｒｔ−ブチル４−（（１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−４−シアノピペリジン−１−カルボキシレート
【０１９６】
【化４４】
0005647356.tif 000045
テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−シアノピペリジン−１−カルボキシレートピペリジン（１．０ｇ、４．７６ｍｍｏｌ）の−７８℃溶液に、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（４．７６ｍＬ、テトラヒドロフラン中１Ｍ）を添加した。混合物を−７８℃で３０分間撹拌し、０℃に３０分間加温し、次いで−７８℃に冷却した。次いで、テトラヒドロフラン中のエチル４−（ブロモメチル）−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシレート（１．３８ｇ、４．７６ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。−７８℃で３０分間撹拌した後、混合物を室温に加温させ、さらに１８時間撹拌させた。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍＬ）でクエンチし、３０分間撹拌し、水（５０ｍＬ）で希釈し、次いで酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（７〜６０％酢酸エチル／ヘプタン、１００ｇのシリカゲル）によって精製して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（（１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−４−シアノピペリジン−１−カルボキシレート（４５５ｍｇ）を透明油として生成した。+APCI(M+H) 419.3; 1H NMR(500MHz, CDCl3, δ): 7.68(s, 1H), 4.40(q, J=7.2Hz, 2H), 4.13(br. s., 2H), 3.17(s, 2H),
2.97(br. s., 2H), 1.81(d, J=13.2Hz, 2H), 1.63(s, 9H), 1.56(m, 2H), 1.46(s, 9H),
1.41(t, J=7.2Hz, 3H).
【０１９７】
ステップ６：４−（（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−カルバモイルピペリジン−４−イル）メチル）−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸
【０１９８】
【化４５】
0005647356.tif 000046
メタノール（１１ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（（１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−４−シアノピペリジン−１−カルボキシレート（４５５ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）の０℃溶液に、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１０．９ｍＬ）中の尿素−過酸化水素（１．０５ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。室温で１８時間撹拌した後、揮発物を減圧下で除去し、結果として生じたスラリーを水（５０ｍＬ）に溶かし、２Ｎ塩酸水溶液で酸性化し、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、４−（（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−カルバモイルピペリジン−４−イル）メチル）−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（４１８ｍｇ）を無色固体として生成した。-APCI(M-H) 407.3; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.33(br. s., 1H), 7.47(s, 1H), 7.11(br. s., 1H), 6.99(s, 1H),
3.59(d, J=13.3Hz, 2H), 2.89(s, 2H), 2.77(m, 2H), 1.84(m, 2H), 1.44(s, 9H),
1.31(s, 9H), 1.16(m, 2H).
【０１９９】
ステップ７：４−（（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−イソシアナトピペリジン−４−イル）メチル）−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸
【０２００】
【化４６】
0005647356.tif 000047
アセトニトリル（２０ｍＬ）中の４−（（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−カルバモイルピペリジン−４−イル）メチル）−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（３８８ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、重炭酸ナトリウム（３１９ｍｇ、３．８０ｍｍｏｌ）およびビス（トリフルオロアセトキシ）ヨードソベンゼン（６３２ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で９０分間撹拌し、５０ｍＬの水で希釈し、１Ｎ塩酸水溶液で酸性化し、次いで酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィー（１〜１０％メタノール／ジクロロメタン、２５ｇのシリカゲル）によって精製して、４−（（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−イソシアナトピペリジン−４−イル）メチル）−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（１７２ｍｇ）を無色固体として生成した。-APCI(M-H) 405.4; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.52(br. s., 1H), 7.82(s, 1H), 3.83(br. s., 2H), 3.03(s, 2H),
2.82(br. s., 2H), 1.49(m, 13H), 1.36(m, 9H).
【０２０１】
ステップ８：ｔｅｒｔ−ブチル２’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−２’，４’，６’，７’−テトラヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−１−カルボキシレート
【０２０２】
【化４７】
0005647356.tif 000048
テトラヒドロフラン（５ｍＬ）中の４−（（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−イソシアナトピペリジン−４−イル）メチル）−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（１８０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）の溶液を、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．６６４ｍＬ、１．３３ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で３時間撹拌し、テトラヒドロフランおよび水をロータリーエバポレーターで除去し、結果として生じた無色固体をアセトニトリル（１０ｍＬ）中でスラリー化し、次いで濃縮乾固した。粉砕をアセトニトリル（１０ｍＬ）からさらに２回繰り返した。結果として生じた無色固体をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶かし、（３−（ジメチルアミノ）プロピル）エチルカルボジイミド塩酸塩（１７０ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で１８時間撹拌し、次いでジクロロメタン（５０ｍＬ）で希釈し、水（３０ｍＬ）で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。次いで、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（３０〜１００％酢酸エチル／ヘプタン、１０ｇのシリカゲル）によって精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−２’，４’，６’，７’−テトラヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−１−カルボキシレート（７０ｍｇ）を無色固体として生成した。+ESI(M+H) 363.3; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 7.68(s, 1H), 7.57(s, 1H), 3.47(m, 2H), 3.20(m, 2H), 2.73(s, 2H),
1.53(t, J=5.7Hz, 4H), 1.49(s, 9H), 1.36(s, 9H).
【０２０３】
ステップ９：表題化合物、２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン塩酸塩
酢酸エチル（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−２’，４’，６’，７’−テトラヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−１−カルボキシレート（７０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）の溶液に、１，４−ジオキサン中４Ｍ塩酸（２ｍＬ）を添加し、混合物を室温で３時間撹拌した。揮発物を減圧下で除去し、結果として生じた無色固体をヘプタン（１０ｍＬ）から粉砕し、減圧下で乾燥させて、２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン塩酸塩（５６ｍｇ）をオフホワイトの固体として生成した。+ESI(M+H) 263.1; 1H NMR(500MHz, DMSO-d6, δ): 8.72(m, 2H), 7.92(s, 1H), 7.75(s, 1H), 3.20(br. s, 2H), 3.09(br.
s., 2H), 2.78(s, 2H), 1.79(m, 4H), 1.48(s, 9H).
【０２０４】
中間体５：以下に示す２’−ｔｅｒｔ−ペンチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した：
【０２０５】
【化４８】
0005647356.tif 000049
【０２０６】
ステップ１：エチル３−ブロモ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート
【０２０７】
【化４９】
0005647356.tif 000050
アセトニトリル（６５ｍＬ）中のエチル３−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（５．０ｇ、３２ｍｍｏｌ）および臭化銅（ＩＩ）（７．２ｇ、３２ｍｍｏｌ）の０℃溶液に、亜硝酸イソアミル（１２ｍＬ、８６ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した。反応物を５０℃に加熱し、終夜撹拌した。反応物を室温に冷却し、１Ｎ塩酸水溶液（１５０ｍＬ）でクエンチした。混合物を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物を褐色油として得、これを真空下で終夜、部分的に凝固させた（７．１ｇ、１００％）。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 9.78(br. s., 1H), 8.10(br. s., 1H), 4.33(q, J=7.22Hz, 2H),
1.36(m, 3H).
【０２０８】
ステップ２：（３−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ペンチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メタノール
【０２０９】
【化５０】
0005647356.tif 000051
濃硫酸（０．４５ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ）を、エチル３−ブロモ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（１．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−アミルアルコール（３．０ｍＬ、２７ｍｍｏｌ）の混合物に添加した。反応物を１００℃に２．５時間加熱した。次いで、反応物を室温に冷却し、終夜撹拌したまま放置した。反応物を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、エチル３−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ペンチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（１．３ｇ）を粗製褐色油として生成した。
【０２１０】
この粗生成物（１．３ｇ）をテトラヒドロフラン（２４ｍＬ）に溶解し、−７８℃に冷却した。水素化ジイソブチルアルミニウムの溶液（トルエン中１．５Ｍ、９．０ｍＬ、１６０ｍｍｏｌ）をゆっくり添加し、反応物を−７８℃で１時間撹拌した。次いで、反応物を室温に加温させ、さらに２時間撹拌させた。反応物を酢酸エチル（２０ｍＬ）および飽和ロッシェル塩水溶液（２０ｍＬ）で希釈した。混合物を室温で終夜撹拌した。層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜１００％酢酸エチル／ヘプタン）による精製により、表題化合物（６８５ｍｇ、６２％）を淡黄色油として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.45(s, 1H), 4.51(s, 2H), 1.86(q, J=7.41Hz, 2H), 1.66(s, 1H),
1.51(s, 6H), 0.69(m, 3H).
【０２１１】
ステップ３：３−ブロモ−４−（クロロメチル）−１−ｔｅｒｔ−ペンチル−１Ｈ−ピラゾール
【０２１２】
【化５１】
0005647356.tif 000052
ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の（３−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ペンチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メタノール（６７５ｍｇ、２．７３ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。トリエチルアミン（０．５３ｍＬ、３．８ｍｍｏｌ）および塩化メタンスルホニル（０．２８ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を０℃で１５分間撹拌し、次いで室温に加温し、１．５時間撹拌した。反応物を酢酸エチルで希釈し、水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（７２５ｍｇ、１００％）を透明油として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.48(s, 1H), 4.47(s, 2H), 1.86(q, J=7.48Hz, 2H), 1.52(s, 6H),
0.69(m, 3H).
【０２１３】
ステップ４：３−ブロモ−４−（ヨードメチル）−１−ｔｅｒｔ−ペンチル−１Ｈ−ピラゾール
【０２１４】
【化５２】
0005647356.tif 000053
アセトン（２５ｍＬ）中の３−ブロモ−４−（クロロメチル）−１−ｔｅｒｔ−ペンチル−１Ｈ−ピラゾール（７２５ｍｇ、２．７３ｍｍｏｌ）の溶液に、ヨウ化ナトリウム（４．０９ｇ、２７．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を２時間加熱還流し、次いで室温に冷却し、終夜撹拌した。溶媒を真空で除去し、残留物を酢酸エチルと水とに分配した。有機層を飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（８２４ｍｇ、８５％）を褐色油として生成した。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.47(s, 1H), 4.26(s, 2H), 1.83(q, J=7.41Hz, 2H), 1.50(s, 6H),
0.67(t, J=7.51Hz, 3H).
【０２１５】
ステップ５：２’−ｔｅｒｔ−ペンチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
表題化合物は、３−ブロモ−４−（ヨードメチル）−１−ｔｅｒｔ−ペンチル−１Ｈ−ピラゾールを使用し、ステップ４〜８において中間体３について記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 277.3; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 7.67(s, 1H), 3.22-3.37(m, 4H), 2.93(s, 2H), 1.92(q, J=7.61Hz,
2H), 1.88-2.05(m, 4H), 1.57(s, 6H), 0.67(t, J=7.41Hz, 3H).
【０２１６】
中間体６：以下に示す２’−シクロブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オンは、下記の通りに調製した：
【０２１７】
【化５３】
0005647356.tif 000054
【０２１８】
ステップ１：エチル３−ブロモ−１−シクロブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート
【０２１９】
【化５４】
0005647356.tif 000055
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中の、エチル３−ブロモ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（１．００ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）、シクロブチルブロミド（０．６５ｍＬ、６．９ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（２．９７ｇ、９．１３ｍｍｏｌ）の混合物を、６０℃に加熱し、終夜撹拌した。反応物を室温に冷却し、１：１  ヘプタン／酢酸エチルと水とに分配した。水性物を１：１  ヘプタン／酢酸エチルで再度抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製により、２つの生成物位置異性体を無色油として得た。
エチル５−ブロモ−１−シクロブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（２３０ｍｇ、１８％）：+ESI(M+H+1) 275.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.98(s, 1H), 4.98(m, 1H), 4.30(q, J=7.02Hz, 2H), 2.61-2.74(m,
2H), 2.43(m, 2H), 1.84-1.95(m, 2H), 1.34(m, 3H).
エチル３−ブロモ−１−シクロブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（５７０ｍｇ、４６％）：+ESI(M+H+1) 275.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.87(s, 1H), 4.69(m, 1H), 4.29(q, J=7.22Hz, 2H), 2.41-2.61(m,
4H), 1.78-1.98(m, 2H), 1.34(m, 3H).
【０２２０】
ステップ２：（３−ブロモ−１−シクロブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メタノール
【０２２１】
【化５５】
0005647356.tif 000056
テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中のエチル３−ブロモ−１−シクロブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（５６５ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）の溶液を、−７８℃に冷却した。水素化ジイソブチルアルミニウム（４．１３ｍＬ、６．０２ｍｍｏｌ、トルエン中１．５Ｍ）をゆっくり添加し、反応物を−７８℃で１時間撹拌した。次いで、反応物を室温に加温させ、さらに２時間撹拌させた。反応物を酢酸エチル（２０ｍＬ）および飽和ロッシェル塩水溶液（２０ｍＬ）で希釈した。混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を酢酸エチルでさらに希釈し、水で洗浄した。水層を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（４７８ｍｇ、１００％）を無色油として生成した。+APCI(M+H+1) 233.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.40(s, 1H), 4.62-4.71(m, 1H), 4.51(s, 2H), 2.39-2.59(m, 4H),
1.74-1.92(m, 3H).
【０２２２】
ステップ３：２’−シクロブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
表題化合物は、（３−ブロモ−１−シクロブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メタノールを使用し、中間体５、ステップ３〜５について記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 261.3; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 7.62(s, 1H), 4.84-4.92(m, 1H), 3.21-3.36(m, 4H), 2.93(s, 2H),
2.50-2.63(m, 2H), 2.40-2.50(m, 2H), 1.82-2.05(m, 6H).
【０２２３】
中間体７：以下に示す２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロ−８−アザスピロ［ビシクロ［３．２．１］オクタン−３，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン塩酸塩は、下記の通りに調製した：
【０２２４】
【化５６】
0005647356.tif 000057
【０２２５】
ステップ１：エチル３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート
【０２２６】
【化５７】
0005647356.tif 000058
エチル３−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（８６０．０ｍｇ、５．５４ｍｍｏｌ）を、酢酸（５ｍＬ）および水（５ｍＬ）に溶解した。ヨウ化カリウム（９２１ｍｇ、５．５４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をすべての固体が溶解するまで撹拌した。次いで、水（２ｍＬ）中の亜硝酸ナトリウム（３８６ｍｇ、５．５４ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。反応物を室温で２分間撹拌すると、沈殿物形成により撹拌が妨げられた。追加の水（５ｍＬ）を添加し、反応物を終夜撹拌させた。酢酸を減圧下で除去した。褐色残留物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液に溶かし、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（１０〜８０％酢酸エチル／ヘプタン）による精製により、表題化合物（８６３ｍｇ、５９％）を白色固体として得た。+APCI(M+H) 267.2; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 12.63(br. s., 1H), 8.13(s, 1H), 4.34(q, J=7.0Hz, 2H), 1.38(t,
J=7.2Hz, 3H).
【０２２７】
ステップ２：エチル１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート
【０２２８】
【化５８】
0005647356.tif 000059
ｔｅｒｔ−ブタノール（５ｍＬ）中のエチル３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（１．１０ｇ、３．９１ｍｍｏｌ）の溶液に、硫酸（０．４０ｍＬ、４．１８ｍｍｏｌ、１８Ｍ）を添加した。反応物を１００℃に加熱し、３時間撹拌した。反応物を室温に冷却し、酢酸エチル（１００ｍＬ）および水（２５ｍＬ）で希釈した。ｐＨを飽和重炭酸ナトリウム水溶液で８に調整した。層を分離し、有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（７〜６０％酢酸エチル／ヘプタン）による精製により、２つの位置異性体生成物を得た。
エチル１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート：1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.91(s, 1H), 4.32(q, J=7.2Hz, 2H), 1.83(s, 9H), 1.37(t, J=7.1Hz,
3H).
透明油としてのエチル１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（９７６ｍｇ、７３％）：+APCI(M+H) 323.3; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.90(s, 1H), 4.31(q, J=7.0Hz, 2H), 1.59(s, 9H), 1.36(t, J=7.1Hz,
3H).
【０２２９】
ステップ３：１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−ヨード−４−（ヨードメチル）−１Ｈ−ピラゾール
【０２３０】
【化５９】
0005647356.tif 000060
表題化合物は、エチル１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレートを使用し、中間体５、ステップ２〜４について記述されているものに類似する方法によって調製した。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.49(s, 1H), 4.25(s, 2H), 1.56(s, 9H).
【０２３１】
ステップ４：（１Ｒ，５Ｓ）−８−ｔｅｒｔ−ブチル３−メチル８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３，８−ジカルボキシレート
【０２３２】
【化６０】
0005647356.tif 000061
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中の（１Ｒ，５Ｓ）−８−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−カルボン酸（５００ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（５４１ｍｇ、３．９２ｍｍｏｌ）およびヨウ化メチル（０．１８ｍＬ、２．９４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１８時間撹拌した。反応物を酢酸エチル（５０ｍＬ）およびヘプタン（５０ｍＬ）で希釈し、次いで水（１００ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製により、表題化合物（４８６ｍｇ、９２％）を透明油として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 4.17-4.29(m, 2H), 3.65(s, 3H), 2.75-2.86(m, 1H), 1.93-2.01(m,
2H), 1.79-1.92(m, 2H), 1.67-1.76(m, 2H), 1.58-1.66(m, 2H), 1.45(s, 9H).
【０２３３】
ステップ５：２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロ−８−アザスピロ［ビシクロ［３．２．１］オクタン−３，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン塩酸塩
表題化合物は、（１Ｒ，５Ｓ）−８−ｔｅｒｔ−ブチル３−メチル８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３，８−ジカルボキシレートおよび１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−ヨード−４−（ヨードメチル）−１Ｈ−ピラゾールを使用し、中間体３、ステップ４〜８について記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 289.2; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 7.69(s, 1H), 4.03-4.10(m, 2H), 2.74(s, 2H), 2.39-2.46(m, 2H),
2.10-2.25(m, 6H), 1.59(s, 9H).
【０２３４】
中間体８：以下に示す１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０２３５】
【化６１】
0005647356.tif 000062
【０２３６】
ステップ１：ジエチル２−（５−ブロモ−３−ニトロピリジン−２−イル）マロネート
【０２３７】
【化６２】
0005647356.tif 000063
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７５ｍＬ）中の水素化ナトリウム（５．０８ｇ、１２７ｍｍｏｌ）の懸濁液に、マロン酸ジエチル（１９．２６ｍＬ、１２７ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。次いで、溶液を周囲温度で３０分間撹拌し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７５ｍＬ）中の５−ブロモ−２−クロロ−３−ニトロピリジン（３０ｇ、１２７ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。次いで、暗褐色混合物を１００℃で２時間撹拌した後、周囲温度に冷却し、０℃の塩化アンモニウムの飽和溶液（５００ｍＬ）でクエンチした。混合物を酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過した。溶媒を真空で除去して暗褐色油を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製して、ジエチル２−（５−ブロモ−３−ニトロピリジン−２−イル）マロネートを褐色固体（３１．８ｇ、６９％）として生じさせた。1HNMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.86(s, 1H), 8.61(s, 1H), 5.44(s, 1H), 4.29(q, 4H), 1.27(t, 6H).
【０２３８】
ステップ２：５−ブロモ−２−メチル−３−ニトロピリジン
【０２３９】
【化６３】
0005647356.tif 000064
塩酸水溶液（６Ｍ、１．４Ｌ）中のジエチル２−（５−ブロモ−３−ニトロピリジン−２−イル）マロネート（３１．８ｇ、８８ｍｍｏｌ）の混合物を、１８時間撹拌還流した。反応混合物を周囲温度に冷却し、０℃の重炭酸ナトリウム水溶液の飽和水溶液（４Ｌ）に非常にゆっくり添加した。次いで、混合物をジクロロメタン（７Ｌ）で抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を真空で除去して、５−ブロモ−２−メチル−３−ニトロピリジンを橙色油（１３．８ｇ、７２％）として得、これを静置すると凝固した。1HNMR(300MHz, CDCl3, δ): 8.78(s, 1H), 8.43(s, 1H), 2.79(s, 3H).
【０２４０】
ステップ３：５−ブロモ−２−メチルピリジン−３−アミン
【０２４１】
【化６４】
0005647356.tif 000065
４０℃の工業用変性アルコール（３３０ｍＬ）中の５−ブロモ−２−メチル−３−ニトロピリジン（１３．８ｇ、６３．９ｍｍｏｌ）の溶液に、鉄粉（２０ｇ）（凝集を回避するために小分けにして）、続いて濃塩酸水溶液（５ｍＬ）を添加した。暗褐色混合物を２時間激しく撹拌還流し、次いで冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して濾過した（これを１Ｌの工業用変性アルコールで洗浄した）。次いで、溶媒を真空で除去し、残留物を酢酸エチル（２００ｍＬ）に溶かし、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を真空で除去して、５−ブロモ−２−メチルピリジン−３−アミンを橙色固体（１０．７ｇ、９０％）として得た。1HNMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.91(s, 1H), 7.00(s, 1H), 3.75(br. s., 2H), 2.25(s, 3H).
【０２４２】
ステップ４：Ｎ−（５−ブロモ−２−メチルピリジン−３−イル）アセトアミド
【０２４３】
【化６５】
0005647356.tif 000066
ジクロロメタン（５７５ｍＬ）中の５−ブロモ−２−メチルピリジン−３−アミン（１０．７ｇ、５７．５ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で無水酢酸（１２ｍＬ、１２６．５ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（２２ｍＬ、１５８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を周囲温度に加温させ、１８時間撹拌し、この時点でさらなる当量の無水酢酸（６ｍＬ、６３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を周囲温度でさらに７２時間撹拌した。反応混合物を重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（５００ｍＬ）でクエンチし、有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で濃縮して、褐色固体を得た。この固体をヘキサン中３０％酢酸エチルで粉砕して、Ｎ−（５−ブロモ−２−メチルピリジン−３−イル）アセトアミドをオフホワイトの固体（８．２８ｇ、６３％）として生成した。1HNMR(400MHz, CD3OD, δ): 8.31(s, 1H), 8.18(s, 1H), 2.43(s, 3H), 2.18(s, 3H).
【０２４４】
ステップ５：６−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン
【０２４５】
【化６６】
0005647356.tif 000067
周囲温度のクロロホルム（５５０ｍＬ）中のＮ−（５−ブロモ−２−メチルピリジン−３−イル）アセトアミド（８．２８ｇ、３６ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸カリウム（４．３２ｇ、４３．６ｍｍｏｌ）、酢酸（２．５ｍＬ、４３．６ｍｍｏｌ）、続いて無水酢酸（６．８６ｍＬ、７２．６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を周囲温度で１５分間撹拌した後、４０℃に加熱した。次いで、亜硝酸イソアミルを滴下添加した。次いで、反応物を６０℃で４８時間撹拌した。反応混合物を０℃の重炭酸ナトリウムの飽和溶液（５００ｍＬ）にゆっくり注ぎ入れた。有機相を保持し、水相をジクロロメタン（５００ｍＬ）で抽出した。次いで、合わせた有機物を濃縮して褐色油とし、これをメタノール（５００ｍＬ）に溶解した。水酸化ナトリウム水溶液（２Ｍ、５００ｍＬ）を０℃で添加し、混合物を周囲温度で１時間撹拌した後、メタノールを真空で除去した。次いで、水性混合物を酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空で除去して、６−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンを薄褐色固体（５．５ｇ、７７％）として得た。1HNMR(400MHz, CD3OD, δ): 8.55(s, 1H), 8.24(s, 1H), 8.21(s, 1H).
【０２４６】
ステップ６：メチル１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレート
【０２４７】
【化６７】
0005647356.tif 000068
メタノール（１２５ｍＬ）およびアセトニトリル（７５ｍＬ）中の６−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（５．５ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（２２ｍＬ、１５６ｍｍｏｌ）、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（１．９８ｇ、３．０７ｍｍｏｌ）および二塩化パラジウム（１．２３ｇ、６．９８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２０バールの一酸化炭素下に置き、１００℃に加熱し、１８時間激しく撹拌した。反応混合物を周囲温度に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）に通して濾過した後、溶媒を真空で除去して、褐色油を生成した。次いで、この粗油をフラッシュカラムクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製して、メチル１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレートを淡黄色固体（４．５２ｇ、９２％）として得た。1HNMR(400MHz, CDCl3, δ): 10.56(s, 1H), 9.23(s, 1H), 8.35(s, 1H), 8.40(s, 1H), 4.01(s, 3H).
【０２４８】
ステップ７：１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸
０℃のメタノール（２５０ｍＬ）および水（１９０ｍＬ）中のメチル１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレート（３．５２ｇ、２０ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化ナトリウム水溶液（２Ｍ、６４ｍＬ、１２８ｍｍｏｌ）を滴下添加した。次いで、懸濁液を周囲温度に加温させ、１８時間撹拌した。次いで、メタノールを真空で除去し、水性混合物を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で抽出した。水層を２Ｎ塩酸水溶液（７０ｍＬ）で（ｐＨ５〜６に）酸性化した。次いで、凝結したクリーム色固体を濾過除去し、デシケーター内で乾燥させて、表題化合物（０．６７５ｇ、２１％）を生成した。
1HNMR(400MHz,
DMSO-d6, δ): 8.97(s, 1H), 8.45(s, 1H),
8.39(s, 1H).
【０２４９】
中間体９：以下に示す３−カルバモイル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０２５０】
【化６８】
0005647356.tif 000069
【０２５１】
ステップ１．メチル３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート
【０２５２】
【化６９】
0005647356.tif 000070
メチル３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（３０．７ｇ、１０２ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（２０．３ｇ、１７３ｍｍｏｌ）、亜鉛末（４．０５ｇ、６１．９ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−ジクロロパラジウム（ＩＩ）、ジクロロメタンとの錯体（１２ｇ、１５ｍｍｏｌ）、およびヨウ化銅（Ｉ）（１９．７ｇ、１０３ｍｍｏｌ）を、１Ｌの丸底フラスコ内で合わせた。Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（５００ｍＬ）を添加し、反応混合物を窒素で１０分間パージした。反応物を１２０℃に１時間加熱した。反応物を室温に冷却し、酢酸エチル（１Ｌ）で希釈し、２０分間撹拌させた。反応混合物をセライトのプラグに通して濾過し、５００ｍＬの酢酸エチルですすいだ。濾液を、飽和塩化アンモニウムおよび濃水酸化アンモニウムの溶液（２Ｌ）（水酸化アンモニウムを塩化アンモニウムの飽和水溶液にｐＨ＝８になるまで添加することによって調製したもの）に添加し、二相溶液を１時間激しく撹拌した。得られたエマルションをセライトの小型パッドに通して濾過した。層を分離し、水性物を酢酸エチル（１１００ｍＬ）でさらに２回抽出し、１回ごとに得られたエマルションをセライトに通して濾過した。合わせた有機層を水（２×９００ｍＬ）およびブライン（９００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物にメタノール（１００ｍＬ）を添加し、混合物を２０分間撹拌した。得られた沈殿物を濾過除去し、メタノール（１０ｍＬ）で洗浄した。濾液を濃縮して、表題化合物（１３．２ｇ、６５％）を固体として得た。-ESI(M-H) 200.0; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.43-8.45(m, 1H), 8.05(dd, J=8.8, 1.6Hz, 1H), 7.85(dd, J=8.9,
0.9Hz, 1H), 3.88(s, 3H).
【０２５３】
ステップ２．３−カルバモイル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
メタノール（１Ｌ）中のメチル３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（５０．０ｇ、２４９ｍｍｏｌ）の懸濁液を、１０℃に冷却した。水酸化ナトリウム（１Ｌの２．５Ｎ）および水（１００ｍＬ）中の尿素過酸化水素（２４１ｇ、２．４９ｍｏｌ）の溶液を、内部温度を２５℃未満に維持しながら滴下添加した。添加が完了したら、氷浴を除去し、反応物を室温で１６時間撹拌させた。少量の未反応出発材料がＨＰＬＣによって観察された。反応物を１５℃に冷却し、追加の尿素過酸化水素（５０ｇ）を小分けにして添加した。激しい発泡が見られた。反応物をさらに２時間撹拌させた。粗反応物を濾過して存在する固体を除去し、濾液を濃縮してメタノールを除去した。残りの溶液を氷浴中で冷却し、６Ｎ塩酸（４２０ｍＬ）を滴下添加してｐＨを４に調整した。溶液を２０分間撹拌し、得られた黄褐色固体を濾過によって収集し、乾燥させて、５７．２ｇの粗生成物を得た。粗製物にアセトニトリル（７００ｍＬ）およびジクロロメタン（７００ｍＬ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。固体を濾過によって収集し、１：１  アセトニトリル：ジクロロメタン（４００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、表題化合物（３９．５ｇ、７７％）を黄褐色固体として得た。+ESI(M+H) 206.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.81(s, 1H), 12.85(br. s., 1H), 8.82(d, J=0.8Hz, 1H), 7.93(dd,
J=8.8, 1.6Hz, 1H), 7.79-7.85(m, 1H), 7.64(d, J=8.6Hz, 1H), 7.44(s, 1H).
【０２５４】
中間体１０：以下に示す３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０２５５】
【化７０】
0005647356.tif 000071
【０２５６】
メチル３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（５００ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）をメタノール（１２ｍＬ）に溶解し、２Ｎ水酸化リチウム水溶液（３．７ｍＬ、７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を濃縮してメタノールを除去し、残留物を１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝４に酸性化した。得られた黄色沈殿物を濾過によって収集し、水で洗浄し、真空オーブン内で乾燥させて、表題化合物（４４５ｍｇ、９６％）を提供した。-ESI(M-H) 186.4; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.17(br. s., 1H), 8.42(s, 1H), 8.05(dd, J=8.8, 1.6Hz, 1H),
7.83(d, 1H).
【０２５７】
中間体１１：以下に示す３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０２５８】
【化７１】
0005647356.tif 000072
【０２５９】
ステップ１：メチル１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート
【０２６０】
【化７２】
0005647356.tif 000073
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４６ｍＬ）中の１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸（３．００ｇ、１８．５ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸ナトリウム（２．０６ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）、続いてヨードメタン（２．７５ｇ、１．２１ｍＬ、１９．４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を半飽和重炭酸ナトリウムに注ぎ入れ、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、褐色油を生じさせた。この残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（１２〜１００％酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、メチル１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレートを黄色固体（２．９５ｇ、９０％）として生じさせた。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 10.40(br. s., 1H), 8.26(s, 1H), 8.13(s, 1H), 7.84(d, J=8.4Hz,
1H), 7.79(d, J=8.4Hz, 1H), 3.96(s, 3H).
【０２６１】
ステップ２：メチル３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート
【０２６２】
【化７３】
0005647356.tif 000074
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２ｍＬ）中のメチル１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート（８６５ｍｇ、４．９１ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化カリウム（８４０ｍｇ、３．０５ｍｍｏｌ）、続いてヨウ素（１．５４ｇ、５．９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。重硫酸ナトリウム（３０ｍＬの５％水溶液）を添加し、混合物を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（５〜６５％酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、メチル３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレートを無色固体（１．１６ｇ、７８％）として生じさせた。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.84(s, 1H), 8.13(s, 1H), 7.72(d, J=8.4Hz, 1H), 7.54(d, J=8.6Hz,
1H), 3.87(s, 3H).
【０２６３】
ステップ３：メチル３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート
【０２６４】
【化７４】
0005647356.tif 000075
ジメチルアセトアミド（５５ｍＬ）中の、メチル３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート（３．０ｇ、９．９ｍｍｏｌ）、亜鉛末（４００ｍｇ、６．１１ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（２．０ｇ、１７．０ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−ジクロロパラジウム（ＩＩ）、ジクロロメタンとの錯体（１．１５ｇ、１．４１ｍｍｏｌ）、およびヨウ化銅（Ｉ）（１．９０ｇ、９．９７ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素で１５分間パージした。混合物を１２０℃で１５時間撹拌した。反応混合物を冷却し、酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、セライトに通して濾過し、酢酸エチル（１００ｍＬ）ですすいだ。濾液に、飽和塩化アンモニウム水溶液および濃水酸化アンモニウムの約４００ｍＬの溶液（水酸化アンモニウムを塩化アンモニウムの飽和水溶液にｐＨ＝８になるまで添加することによって調製したもの）を添加した。混合物を１時間撹拌した。次いで、層を分離した。有機層を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。残留物にメタノール（４０ｍＬ）を添加し、混合物を終夜撹拌した。混合物を濾過し、固体を真空で乾燥させて、メチル３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレートを黄褐色固体（１．４７ｇ、７３％）として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.40(br. s., 1H), 8.25(s, 1H), 7.94(d, J=8.6Hz, 1H), 7.83(d,
J=8.4Hz, 1H), 3.88(s, 3H).
【０２６５】
ステップ４：３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸
メタノール（３６ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中のメチル３−シアノ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート（１．４７ｇ、７．３１ｍｍｏｌ）の溶液に、２Ｎ水酸化リチウム水溶液（１６ｍＬ、３２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を５０℃に７２時間加熱した。反応物を室温に冷却し、濃縮した。残留物を水で希釈し、ｐＨを１Ｎ塩酸水溶液で４に調整した。得られた沈殿物を濾過除去し、水ですすぎ、真空下で乾燥させて、表題化合物（５００ｍｇ、３７％）を黄褐色固体として提供した。+ESI (M+H) 188.2.
【０２６６】
中間体１２：以下に示す１−メトキシイソキノリン−７−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０２６７】
【化７５】
0005647356.tif 000076
【０２６８】
ステップ１：７−ブロモ−１−メトキシイソキノリン
【０２６９】
【化７６】
0005647356.tif 000077
７−ブロモ−１−クロロイソキノリン（５７０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を、メタノール（１０ｍＬ）およびナトリウムメトキシド（メタノール中２５ｗｔ％、１．５ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）とマイクロ波バイアル中で合わせた。バイアルを密閉し、マイクロ波中、１３０℃に３時間加熱した。反応物を濃縮した。粗残留物を酢酸エチルに溶かし、水および飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。水層を熱酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（５２０ｍｇ、９３％）を得た。+ESI(M+H+1) 240.0; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.25-8.28(m, 1H), 8.04(d, J=5.9Hz, 1H), 7.86-7.89(m, 2H),
7.40(dd, J=6.0, 0.9Hz, 1H), 4.03(s, 3H).
【０２７０】
ステップ２：メチル１−メトキシイソキノリン−７−カルボキシレート
【０２７１】
【化７７】
0005647356.tif 000078
メタノール（３０ｍＬ）中の７−ブロモ−１−メトキシイソキノリン（５２０ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸ナトリウム（５１７ｍｇ、６．３０ｍｍｏｌ）および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−ジクロロパラジウム（ＩＩ）、ジクロロメタンとの錯体（２５７ｍｇ、０．３１５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を排気し、窒素で３回再充填した。次いで、反応容器を２５ｐｓｉに一酸化炭素加圧した。反応物を７０℃に加熱し、２０時間かき混ぜた。反応物を濾過し、メタノールですすいだ。濾液を濃縮した。得られた残留物をジクロロメタンに溶かし、残りの固体を濾過除去した。濾液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜１００％酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、表題化合物（４４３ｍｇ、９３％）を白色固体として得た。+ESI(M+H) 218.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.77(d, J=0.8Hz, 1H), 8.20(dd, J=8.6, 1.8Hz, 1H), 8.13(d,
J=5.9Hz, 1H), 8.00(d, J=8.6Hz, 1H), 7.46(d, J=5.9Hz, 1H), 4.08(s, 3H), 3.90(s,
3H).
【０２７２】
ステップ３：１−メトキシイソキノリン−７−カルボン酸
メタノール（１０ｍＬ）中のメチル１−メトキシイソキノリン−７−カルボキシレート（４４３ｍｇ、２．０４ｍｍｏｌ）の溶液に、２Ｎ水酸化リチウム水溶液（２０ｍＬ）を添加した。反応物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物を１Ｎ塩酸水溶液および酢酸エチルで希釈した。層を分離し、水性物を酢酸エチルでさらに２回抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（４１４ｍｇ、１００％）を固体として生じさせた。+ESI(M+H) 204.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.24(s, 1H), 8.76(d, J=0.8Hz, 1H), 8.18(dd, J=8.6, 1.8Hz, 1H),
8.11(d, J=5.9Hz, 1H), 7.97(d, J=8.4Hz, 1H), 7.45(d, J=5.9Hz, 1H), 4.07(s, 3H).
【０２７３】
中間体１３：以下に示す３−アミノイソキノリン−６−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０２７４】
【化７８】
0005647356.tif 000079
【０２７５】
表題化合物は、６−ブロモイソキノリン−３−アミンを使用し、中間体１２、ステップ２〜３について記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 189.0; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.15(br. s., 1H), 8.94(s, 1H), 8.20(s, 1H), 7.91(m, 1H), 7.62-7.59(m,
1H), 6.78(s, 1H), 6.14(s, 2H).
【０２７６】
中間体１４：以下に示す３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０２７７】
【化７９】
0005647356.tif 000080
【０２７８】
エタノール（６ｍＬ）中の３−シアノ−４−フルオロ安息香酸（９８０．０ｍｇ、５．９４ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドラジン水和物（０．８９ｍＬ、１７．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を３時間加熱還流した。反応物を室温に冷却し、エタノールを減圧下で除去した。結果として生じた黄色油を水（５０ｍＬ）に溶かし、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（５ｍＬ）で塩基性化した。溶液を酢酸エチル（２５ｍＬ）で１回洗浄した。水相を６Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝３に酸性化し、室温で１時間撹拌させた。得られた沈殿物を濾過によって収集し、真空下で乾燥させて、表題化合物（６１２ｍｇ、４８％）を桃色固体として得た。+ESI(M+H) 178.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.42-8.47(m, 1H), 7.76(dd, J=8.8, 1.6Hz, 1H), 7.21(d, J=8.8Hz,
1H).
【０２７９】
中間体１５：以下に示す３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０２８０】
【化８０】
0005647356.tif 000081
【０２８１】
ｎ−ブタノール（９ｍＬ）中の４−シアノ−３−フルオロ安息香酸（５００ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドラジン一水和物（０．５ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１１０℃に終夜加熱した。反応物を室温に冷却し、沈殿物を濾過によって収集した。次いで、固体を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２ｍＬ）に溶解し、酢酸エチル（２×）で抽出した。水層を１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝４に酸性化した。得られた沈殿物を濾過によって収集し、真空下で乾燥させて、表題化合物（１４０ｍｇ、２６％）を赤色固体として提供した。+ESI(M+H) 178.2; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 7.99-8.01(m, 1H), 7.73(dd, J=8.4, 0.8Hz, 1H), 7.61(dd, J=8.5,
1.3Hz, 1H).
【０２８２】
中間体１６：以下に示す２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０２８３】
【化８１】
0005647356.tif 000082
【０２８４】
ステップ１：メチル３−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート
【０２８５】
【化８２】
0005647356.tif 000083
３−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（１．５ｇ、８．４ｍｍｏｌ）をメタノール（１７ｍＬ）に懸濁した。濃塩酸（３．１１ｍＬ、１０１ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を１００℃に６時間加熱した。反応物を濃縮して、表題化合物（１．６０ｇ、９９％）を提供した。+ESI(M+H) 193.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.00(br. s., 1H), 8.35(s, 1H), 7.83(dd, J=8.9, 1.7Hz, 1H),
7.33(dd, J=8.9, 0.7Hz, 1H), 3.82(s, 3H).
【０２８６】
ステップ２：１−エチル５−メチル３−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−１，５−ジカルボキシレート
【０２８７】
【化８３】
0005647356.tif 000084
メチル３−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（１．６０ｇ、８．３３ｍｍｏｌ）をピリジン（１０ｍＬ）に懸濁した。クロロギ酸エチル（０．９０ｍＬ、９．３ｍｍｏｌ）をゆっくり添加し、反応物を室温で１時間撹拌した。追加のクロロギ酸エチル（０．３０ｍＬ、３．１ｍｍｏｌ）を添加し、反応物をさらに３０分間撹拌した。反応物を水（６５ｍＬ）に注ぎ入れ、冷蔵庫内で３時間冷却した。褐色固体を濾過によって収集し、水ですすぎ、真空下で乾燥させて、表題化合物（１．７５ｇ、８０％）を得た。+ESI(M+H) 265.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.56(s, 1H), 8.29(d, J=7.8Hz, 1H), 8.13(br. s., 1H), 4.59(q,
J=7.0Hz, 2H), 3.97(s, 3H), 1.56(t, J=7.0Hz, 3H).
【０２８８】
ステップ３：１−エチル５−メチル２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール−１，５−ジカルボキシレート
【０２８９】
【化８４】
0005647356.tif 000085
１−エチル５−メチル３−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−１，５−ジカルボキシレート（１．７５ｇ、６．６２ｍｍｏｌ）をアセトン（８５ｍＬ）に懸濁した。炭酸セシウム（２．２７ｇ、６．９５ｍｍｏｌ）およびヨウ化メチル（１．３ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を２２時間撹拌還流した。反応物を濃縮乾固し、残留物をジクロロメタン（６０ｍＬ）と水（１００ｍＬ）とに分配した。層を分離し、水性物をジクロロメタン（６０ｍＬ）で再度抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（７〜６０％酢酸エチル／ヘプタン）による精製により、２つの位置異性体生成物を得た。
白色固体としての１−エチル５−メチル３−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−１，５−ジカルボキシレート（５９０ｍｇ、３２％）。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.41(dd, J=1.6, 0.8Hz, 1H), 8.22(dd, J=9.2, 3.5Hz, 1H), 8.14(d,
J=9.2Hz, 1H), 4.57(q, J=7.1Hz, 2H), 4.20(s, 3H), 3.95(s, 3H), 1.51(t, J=7.1Hz,
3H).
黄色固体としての１−エチル５−メチル２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール−１，５−ジカルボキシレート（６９９ｍｇ、３８％）。+ESI(M+H) 279.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.56(dd, J=1.8, 0.6Hz, 1H), 8.30(dd, J=8.8, 1.8Hz, 1H), 7.93(d,
J=8.8Hz, 1H), 4.50(q, J=7.0Hz, 2H), 3.94(s, 3H), 3.67(s, 3H), 1.48(t, J=7.1Hz,
3H).
【０２９０】
ステップ４：２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
１−エチル５−メチル２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール−１，５−ジカルボキシレート（３００ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）をエタノール（４ｍＬ）に溶解した。水酸化カリウム（４８５ｍｇ、８．６２ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で１．５時間撹拌した。ＬＣＭＳは反応が不完全であることを示した。次いで、水酸化カリウムの水溶液（１０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ、１．０Ｍ）を添加し、反応物を６５℃に２時間加熱した。反応物を室温に冷却し、濃縮した。得られた橙色固体を水に溶解し、１Ｎ塩酸水溶液で酸性化した。沈殿物を濾過によって収集し、真空下で乾燥させて、表題化合物（１５８ｍｇ、７６％）を白色固体として得た。+ESI(M+H) 193.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.75(br. s., 1H), 11.06(s, 1H), 8.15(s, 1H), 7.99(dd, J=8.7,
1.5Hz, 1H), 7.28(d, J=8.6Hz, 1H), 3.37(s, 3H).
【０２９１】
中間体１７：以下に示す３−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０２９２】
【化８５】
0005647356.tif 000086
【０２９３】
表題化合物は、ステップ３において形成された位置異性体生成物、１−エチル５−メチル３−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−１，５−ジカルボキシレートを使用し、中間体１６について記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 193.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.65(br. s., 1H), 12.26(s, 1H), 8.18(s, 1H), 7.86(dd, J=8.9,
1.5Hz, 1H), 7.38(d, J=8.8Hz, 1H), 3.99(s, 3H).
【０２９４】
中間体１８：以下に示す７−メトキシ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０２９５】
【化８６】
0005647356.tif 000087
【０２９６】
ステップ１：エチル７−メトキシ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート
【０２９７】
【化８７】
0005647356.tif 000088
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中のエチル７−ヒドロキシ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（ＷＯ２００９１４４５５４）（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（９５．１ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の混合物に、ヨウ化メチル（３２μＬ、０．５１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で終夜撹拌した。反応物を水で希釈し、酢酸エチル（４×）で抽出した。合わせた有機層を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（１０５ｍｇ、１００％）を黄色油として得た。+ESI(M+1-THP) 221.2; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.07-8.10(m, 2H), 7.43(d, J=0.98Hz, 1H), 6.24(dd, J=10.24,
2.44Hz, 1H), 4.38(q, J=7.15Hz, 2H), 4.08(dt, J=11.56, 2.02Hz, 1H), 4.04(s, 3H),
3.70-3.78(m, 1H), 2.54-2.66(m, 1H), 2.09-2.19(m, 1H), 2.01-2.08(m, 1H),
1.71-1.83(m, 2H), 1.55-1.64(m, 1H), 1.41(t, J=7.12Hz, 3H).
【０２９８】
ステップ２：７−メトキシ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
テトラヒドロフラン（２ｍＬ）中のエチル７−メトキシ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（１０２ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｎ水酸化リチウム水溶液（０．６７ｍＬ、０．６７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で終夜撹拌した。ＬＣＭＳは反応が不完全であることを示した。追加の水酸化リチウム（０．３５ｍＬ、２Ｍ、０．７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を４０℃に１時間加熱した。次いで、反応物を室温で７０時間撹拌したまま放置した。テトラヒドロフランを真空で除去し、残留物を１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝４に酸性化した。溶液を酢酸エチル（３×）で抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（８４ｍｇ、９１％）を固体として得た。(M+1-THP) 193.2; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.18(d, J=1.37Hz, 1H), 8.12(s, 1H), 7.46(d, J=1.17Hz, 1H),
6.26(dd, J=10.15, 2.54Hz, 1H), 4.07-4.12(m, 1H), 4.06(s, 3H), 3.65-3.81(m, 1H),
2.54-2.72(m, 1H), 2.10-2.22(m, 1H), 2.01-2.10(m, 1H), 1.71-1.85(m, 2H),
1.57-1.67(m, 1H).
【０２９９】
中間体１９：以下に示す２−メトキシキノリン−７−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３００】
【化８８】
0005647356.tif 000089
【０３０１】
ステップ１：７−（エトキシカルボニル）キノリン１−オキシド
【０３０２】
【化８９】
0005647356.tif 000090
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のエチルキノリン−７−カルボキシレート（１．０２ｇ、５．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、過酢酸（２．１３ｍＬ、１０．１ｍｍｏｌ、酢酸中３２ｗｔ％）を添加した。反応物を室温で終夜撹拌した。反応物を水とジクロロメタンとに分配した。層を分離し、水性物をジクロロメタン（４×）で抽出した。合わせた有機物を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。固体をヘプタンおよび酢酸エチルから数回濃縮し、次いで真空下で乾燥させて、表題化合物（１．０１ｇ、９２％）を黄色固体として得た。+ESI(M+H) 218.2; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 9.40(s, 1H), 8.65(d, J=6.05Hz, 1H), 8.27(dd, J=8.58, 1.56Hz, 1H),
7.95(d, J=8.39Hz, 1H), 7.82(d, J=8.58Hz, 1H), 7.42(dd, J=8.49, 6.15Hz, 1H),
4.47(q, J=7.02Hz, 2H), 1.45(t, J=7.1Hz, 3H).
【０３０３】
ステップ２：エチル２−メトキシキノリン−７−カルボキシレート
【０３０４】
【化９０】
0005647356.tif 000091
メタノール（５ｍＬ）中の７−（エトキシカルボニル）キノリン１−オキシド（１５０ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）およびトルエン−４−スルホニルクロリド（１７１ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）の０℃溶液に、トリエチルアミン（０．１９ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で終夜撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が不完全であることを示した。追加のトリエチルアミン（０．０５ｍＬ）を添加し、反応物をさらに４時間撹拌した。反応物を濃縮し、残留物を酢酸エチルと飽和炭酸ナトリウム水溶液とに分配した。層を分離し、水性物を酢酸エチルでさらに２回抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜４０％酢酸エチル／ヘプタン）による精製により、表題化合物（１３０ｍｇ、８１％）を淡黄色固体として得た。+ESI(M+H) 232.2; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.49-8.60(m, 1H), 7.95-8.05(m, 2H), 7.75(d, J=8.19Hz, 1H),
6.98(d, J=8.78Hz, 1H), 4.43(q, J=7.22Hz, 2H), 4.08(s, 3H), 1.43(t, J=7.12Hz,
3H).
【０３０５】
ステップ３：２−メトキシキノリン−７−カルボン酸
テトラヒドロフラン（１．５ｍＬ）中のエチル２−メトキシキノリン−７−カルボキシレート（１２５ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）の溶液に、２Ｎ水酸化リチウム水溶液（０．８１ｍＬ、１．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で６５時間撹拌した。テトラヒドロフランを真空で除去し、残留物を１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝４に酸性化した。混合物を水で希釈し、得られた沈殿物を濾過によって収集し、真空下で乾燥させて、表題化合物（１０６ｍｇ、９６％）を白色固体として得た。
+ESI(M+H) 204.2; 1H NMR(400MHz,
CDCl3, δ): 8.64(d, J=1.37Hz, 1H),
8.01-8.04(m, 1H), 8.01(s, 1H), 7.79(d, J=8.58Hz, 1H), 7.01(d, J=8.78Hz, 1H),
4.09(s, 3H).
【０３０６】
中間体２０：以下に示す２−（メチルアミノ）キノリン−６−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３０７】
【化９１】
0005647356.tif 000092
【０３０８】
ステップ１：エチルキノリン−６−カルボキシレート
【０３０９】
【化９２】
0005647356.tif 000093
エタノール（１００ｍＬ）中のキノリン−６−カルボン酸（２．８ｇ、１６ｍｍｏｌ）の溶液に、濃硫酸（２ｍＬ）を添加した。反応物を終夜加熱還流した。溶媒を蒸発させて褐色残留物を得、これを酢酸エチル（１５０ｍＬ）に溶かした。混合物を、水（２×３０ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２×３０ｍＬ）およびブライン（２×３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して油とした。フラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製により、表題化合物（２．０ｇ、８１％）を褐色固体として得た。
【０３１０】
ステップ２：６−（エトキシカルボニル）キノリン１−オキシド
【０３１１】
【化９３】
0005647356.tif 000094
ジクロロメタン（１２０ｍＬ）中のエチルキノリン−６−カルボキシレート（３．２ｇ、１６ｍｍｏｌ）に、メタ−クロロ過安息香酸（４．９ｇ、０．０２４ｍｏｌ）を小分けにして添加した。反応物を室温で４時間撹拌した。反応物をジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（３×３０ｍＬ）およびブライン（２×４０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製により、表題化合物（２．４５ｇ、７１％）を褐色固体として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.81-8.79(d, 1H), 8.62(s, 2H), 8.35-8.33(d, 1H), 7.87-7.85(d,
1H), 7.39(s, 1H), 4.49-4.44(q, 2H), 1.47-1.43(t, 3H).
【０３１２】
ステップ３：エチル２−（メチルアミノ）キノリン−６−カルボキシレート
【０３１３】
【化９４】
0005647356.tif 000095
トリフルオロメタンスルホン酸無水物（１．９２ｍＬ、１１．４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１５０ｍＬ）中の６−（エトキシカルボニル）キノリン１−オキシド（２．２５ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）の−７０℃溶液に滴下添加した。混合物を−７０℃で５分間撹拌した。次いで、テトラヒドロフラン中メチルアミンの溶液（３１ｍＬ、６２ｍｍｏｌ、２Ｍ）を滴下添加した。混合物を−７０℃で５分間撹拌した。反応物を水（２０ｍＬ）でクエンチした。層を分離し、水性物をジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製により、表題化合物（８５０ｍｇ、３５％）を黄色固体として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.33(d, 1H), 8.16-8.13(m, 1H), 7.90-7.87(d, 1H), 7.70-7.67(d,
1H), 6.68(d, 1H), 5.30(br. s., 1H), 4.43-4.38(q, 2H), 3.13-3.12(d, 3H),
1.44-1.40(m, 3H).
【０３１４】
ステップ４：２−（メチルアミノ）キノリン−６−カルボン酸
水酸化ナトリウム水溶液（４ｍＬ、８ｍｍｏｌ、２Ｎ）を、エタノール（１０ｍＬ）中のエチル２−（メチルアミノ）キノリン−６−カルボキシレート（８５０ｍｇ、３．７ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を５０℃に終夜加熱した。エタノールを真空で除去し、残留物を１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝５に酸性化した。得られた沈殿物を濾過によって収集し、真空下で乾燥させて、表題化合物（７１０ｍｇ、９６％）を黄色固体として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.26(d, 1H), 7.96-7.93(m, 2H), 7.50(d, 1H), 7.43(d, 1H), 6.81(d,
1H), 2.91(d, 3H).
【０３１５】
中間体２１：以下に示す７−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３１６】
【化９５】
0005647356.tif 000096
【０３１７】
ステップ１：４−ブロモ−２−メチル−６−（トリフルオロメチル）アニリン
【０３１８】
【化９６】
0005647356.tif 000097
アセトニトリル（８５ｍＬ）中の２−メチル−６−（トリフルオロメチル）アニリン（３．０ｇ、１７ｍｍｏｌ）の室温溶液に、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（３．０ｇ、１７ｍｍｏｌ）を３０分間かけて少量ずつ添加した。反応物を１時間撹拌させた。反応物を水／ブライン混合物に注ぎ入れ、酢酸エチル（３×）で抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜４０％酢酸エチル／ヘプタン）による精製により、表題化合物（４．１３ｇ、９５％）を褐色油として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.42(d, J=2.34Hz, 1H), 7.31(s, 1H), 2.17(s, 3H).
【０３１９】
ステップ２：５−ブロモ−７−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール
【０３２０】
【化９７】
0005647356.tif 000098
トルエン（６５ｍＬ）および氷酢酸（１１．２ｍＬ、１９５ｍｍｏｌ）中の４−ブロモ−２−メチル−６−（トリフルオロメチル）アニリン（３．３ｇ、１３ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸カリウム（１０．２ｇ、１０４ｍｍｏｌ）を小分けにして添加した。１５分後、大量の沈殿物が形成され、反応物の撹拌を妨げた。反応物を酢酸（１０ｍＬ）で希釈した。次いで、亜硝酸イソアミル（１．９２ｍＬ、１４．３ｍｍｏｌ）を滴下添加し、反応物を室温で３時間撹拌した。追加の亜硝酸イソアミル（０．５ｍＬ、３．７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を１５時間撹拌したまま放置した。反応物を水（１００ｍＬ）で希釈し、１．５時間撹拌した。溶液を酢酸エチルと飽和重炭酸ナトリウム水溶液とに分配した。層を分離し、有機物をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（５〜５０％酢酸エチル／ヘプタン）による精製により、表題化合物（１．７８ｇ、５２％）を黄色粉末として得た。-ESI(M-H+1) 264.9; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.13(s, 1H), 8.09-8.11(m, 1H), 7.76(dd, J=1.66, 0.88Hz, 1H).
【０３２１】
ステップ３：メチル７−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート
【０３２２】
【化９８】
0005647356.tif 000099
密閉チューブに、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−ジクロロパラジウム（ＩＩ）、ジクロロメタンとの錯体（４５．７ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−７−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール（１００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１０５μＬ、０．７５２ｍｍｏｌ）、およびメタノール（２ｍＬ）を添加した。チューブに蓋をし、一酸化炭素を５分間吹き込んで発泡させた。次いで、反応物を７０℃に５時間加熱した。反応物を室温に冷却し、２日間撹拌したまま放置した。反応物を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜５０％酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、表題化合物（６４ｍｇ、６９％）を白色粉末として得た。-ESI(M-H) 243.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.72(s, 1H), 8.37(s, 1H), 8.28(s, 1H), 3.98(s, 3H).
【０３２３】
ステップ４：７−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
メタノール（２ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（２ｍＬ）中のメチル７−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（６２ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｎ水酸化リチウム水溶液（０．７６ｍＬ、０．７６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６０℃に１７時間加熱した。反応物を濃縮し、残留物を水で希釈し、１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝３に酸性化した。溶液をジクロロメタン（３×）で抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（１７ｍｇ、２９％）をオフホワイトの粉末として得た。+ESI (M+H) 231.1.
【０３２４】
中間体２２：以下に示す３−（メチルアミノ）イソキノリン−６−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３２５】
【化９９】
0005647356.tif 000100
【０３２６】
ステップ１：６−ブロモ−Ｎ−メチルイソキノリン−３−アミン
【０３２７】
【化１００】
0005647356.tif 000101
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中の６−ブロモイソキノリン−３−アミン（５０．０ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（２ｍＬ）を添加した。反応容器を密閉し、Ｂｉｏｔａｇｅスミスシンセサイザーマイクロ波中、１１０℃に２０分間加熱した。次いで、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（５９ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。バイアルを再密閉し、Ｂｉｏｔａｇｅスミスシンセサイザーマイクロ波で１１０℃に１０分間、再度加熱した。反応物を濃縮した。残留物を酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶解し、ブライン（２×２０ｍＬ）で洗浄した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製により、表題化合物（２３ｍｇ、４３％）を白色固体として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.76(s, 1H), 7.74(s, 1H), 7.61(d, 1H), 7.28(d, 1H), 6.40(s, 1H),
5.09-5.07(m, 1H), 2.97(s, 3H).
【０３２８】
ステップ２：３−（メチルアミノ）イソキノリン−６−カルボン酸
メチル３−（メチルアミノ）イソキノリン−６−カルボキシレートは、６−ブロモ−Ｎ−メチルイソキノリン−３−アミンを使用し、中間体２１のステップ３において記述されているものに類似する方法によって調製した。粗材料（５８０ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）に、水（５ｍＬ）、メタノール（５ｍＬ）および水酸化リチウム一水和物（３００ｍｇ、７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で終夜撹拌した。反応物を濃縮し、残留物を１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝５に酸性化した。得られた残留物を真空下で乾燥させ、逆相ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物（５１２ｍｇ、８９％）を白色固体として得た。1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 8.81(s, 1H), 8.23(s, 1H), 7.80(d, 1H), 7.72(d, 1H), 6.70(s, 1H),
2.93(s, 3H).
【０３２９】
中間体２３：以下に示す２−（メチルアミノ）キノリン−７−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３３０】
【化１０１】
0005647356.tif 000102
【０３３１】
表題化合物は、７−（エトキシカルボニル）キノリン１−オキシドを使用し、中間体２０のステップ３〜４において記述されているものに類似する方法によって調製した。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.08(s, 1H), 7.90(d, 1H), 7.71-7.62(m, 2H), 7.21(s, 1H), 6.84(d,
1H), 2.91(d, 3H).
【０３３２】
中間体２４：以下に示す５−メトキシキノリン−３−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３３３】
【化１０２】
0005647356.tif 000103
【０３３４】
水酸化リチウム水溶液を使用して、メチル５−メトキシキノリン−３−カルボキシレート（Ｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７（１２）、２６１２〜２６１８；２００９）を鹸化した。+ESI(M+H) 203.9; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 9.30(d, 1H), 9.03(d, 1H), 7.84-7.80(m, 1H), 7.66(d, 1H), 7.15(d,
1H), 4.04(s, 3H).
【０３３５】
中間体２５：以下に示す２−（メチルアミノ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３３６】
【化１０３】
0005647356.tif 000104
【０３３７】
ステップ１．メチル２−（メチルアミノ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボキシレート
【０３３８】
【化１０４】
0005647356.tif 000105
３，４−ジアミノ安息香酸（１５ｇ、０．０９ｍｏｌ）およびイソチオシアナトメタン（６．６ｇ、０．０９ｍｏｌ）の混合物を、テトラヒドロフラン（９０ｍＬ）に溶解した。反応物を３時間加熱還流し、次いで濃縮した。残留物を氷水に注ぎ入れた。得られた沈殿物を濾過し、水で洗浄し、真空下で乾燥させて、メチル４−アミノ−３−（３−メチルチオウレイド）ベンゾエート（１２．０ｇ、５６％）を得た。
【０３３９】
この固体（１２ｇ、０．０５ｍｏｌ）に、エタノール（２００ｍＬ）、続いてヨウ化メチル（３５．５ｇ、０．２５ｍｏｌ）を添加した。反応物を加熱還流し、終夜撹拌した。反応物を濃縮し、残留物を水酸化アンモニウムで塩基性化した。固体を濾過によって収集し、水で洗浄した。カラムクロマトグラフィー（９〜２５％酢酸エチル／石油エーテル）による精製により、表題化合物（２．９ｇ、２８％）を黄色固体として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.37(s, 1H), 7.92-7.96(m, 1H), 7.51(d, J=8.4Hz, 1H), 3.93(s, 3H),
2.81(s, 3H).
【０３４０】
ステップ２．２−（メチルアミノ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸
３Ｎ塩酸水溶液（１４ｍＬ、４２ｍｍｏｌ）をメチル２−（メチルアミノ）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボキシレート（２．９ｇ、１４ｍｍｏｌ）に添加し、反応物を終夜撹拌還流した。反応物を濃縮して、表題化合物（２．４ｇ、９０％）を黄色固体として得た。1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 7.96-8.00(m, 2H), 7.40(d, J=8.4Hz, 1H), 3.10(s, 3H).
【０３４１】
中間体２６：以下に示す２−アミノ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３４２】
【化１０５】
0005647356.tif 000106
【０３４３】
臭化シアンの溶液（５．０ｍＬ、アセトニトリル中５Ｍ、２５ｍｍｏｌ）を、水（５０ｍＬ）中の３，４−ジアミノ安息香酸メチル（３．０ｇ、１８ｍｍｏｌ）の混合物に添加した。反応物を室温で終夜撹拌した。アンモニア水溶液（２０ｍＬ）および酢酸エチル（１００ｍＬ）を反応混合物に添加し、層を分離した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残留物に２Ｎ塩酸水溶液（１８ｍＬ、３６．０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を終夜加熱還流した。反応物を濃縮して、表題化合物（２．９０ｇ、９７％）を得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.75(s, 2H), 7.84(s, 1H), 7.77(dd, J=1.2, 8.4Hz, 1H), 7.38(d,
J=8.4Hz, 1H).
【０３４４】
中間体２７：以下に示す１−（４−メトキシベンジルアミノ）イソキノリン−７−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３４５】
【化１０６】
0005647356.tif 000107
【０３４６】
ステップ１：１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−７−カルボン酸
【０３４７】
【化１０７】
0005647356.tif 000108
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１Ｌ）中の７−ブロモイソキノリン−１（２Ｈ）−オン（７０ｇ、０．３１ｍｏｌ）の懸濁液に、シアン化銅（５６ｇ、０．６３ｍｏｌ）を添加した。反応物を１８０℃に２時間加熱した。反応物を室温に冷却し、水（１Ｌ）で希釈した。溶液を酢酸エチル（３×）で抽出した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗製の１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−７−カルボニトリル（３７ｇ）を得た。この粗材料をエタノール（５００ｍＬ）に溶かし、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（４００ｍＬ）を添加した。混合物を加熱還流し、２時間撹拌した。反応物を室温に冷却し、１Ｎ塩酸水溶液でｐＨを約２に調整した。固体を濾過によって収集し、水ですすぎ、真空下で乾燥させて、表題化合物（３５ｇ、８５％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.15(br. s., 1H), 11.49(s, 1H), 8.75(s, 1H), 8.17-8.14(m, 1H),
7.75(d, 1H), 7.34-7.29(m, 1H), 6.62(d, 1H).
【０３４８】
ステップ２：１−クロロイソキノリン−７−カルボニルクロリド
【０３４９】
【化１０８】
0005647356.tif 000109
オキシ塩化リン（７４ｍＬ、７９３ｍｍｏｌ）を１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−７−カルボン酸（３．０ｇ、２０ｍｍｏｌ）に添加した。反応物を９０℃に５時間加熱した。反応物を濃縮乾固した。材料をジクロロメタン（２５０ｍＬ）および飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）に溶かした。層を分離し、水性物をジクロロメタン（１００ｍＬ）で再度抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（３．０ｇ、８０％）を黄色固体として得た。+ESI(M+H) 227.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 9.18-9.22(m, 1H), 8.44(d, J=5.7Hz, 1H), 8.32(dd, J=8.8, 1.8Hz,
1H), 7.95(d, J=8.8Hz, 1H), 7.68(d, J=5.7Hz, 1H).
【０３５０】
ステップ３：エチル１−クロロイソキノリン−７−カルボキシレート
【０３５１】
【化１０９】
0005647356.tif 000110
１−クロロイソキノリン−７−カルボニルクロリド（３．０２ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１３５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。エタノール（６．１ｍＬ、９４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２．０５ｍＬ、１４．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温に加温させ、２時間撹拌させた。反応混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）と飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２５０ｍＬ）とに分配した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（３．０ｇ、９６％）を黄色固体として得た。+ESI(M+H) 236.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 9.06(s, 1H), 8.30-8.39(m, 2H), 7.89(d, J=8.6Hz, 1H), 7.63(d,
J=5.7Hz, 1H), 4.48(q, J=7.1Hz, 2H), 1.46(t, J=7.1Hz, 3H).
【０３５２】
ステップ４：エチル１−（４−メトキシベンジルアミノ）イソキノリン−７−カルボキシレート
【０３５３】
【化１１０】
0005647356.tif 000111
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９．３ｍＬ）中のエチル１−クロロイソキノリン−７−カルボキシレート（５４８ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ）の溶液に、４−メトキシ−ベンジルアミン（４．６ｍＬ、３５ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（５．１４ｇ、３７．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を７０℃に加熱し、終夜撹拌した。反応物を室温に冷却し、酢酸エチルおよび水で希釈した。層を分離し、水性物を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機物を水およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜３５％酢酸エチル／ヘプタン）による精製により、表題化合物（４３０ｍｇ、５５％）を帯緑色油として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.49(s, 1H), 8.16(dd, J=8.6, 1.6Hz, 1H), 8.09(d, J=5.9Hz, 1H),
7.69(d, J=8.6Hz, 1H), 7.33-7.40(m, 2H), 6.96(d, J=5.9Hz, 1H), 6.87-6.93(m, 2H),
5.67(br. s., 1H), 4.76(d, J=5.1Hz, 2H), 4.41(q, J=7.2Hz, 2H), 3.81(s, 3H),
1.37-1.43(m, 3H).
【０３５４】
ステップ５：１−（４−メトキシベンジルアミノ）イソキノリン−７−カルボン酸
メタノール（８．５ｍＬ）中のエチル１−（４−メトキシベンジルアミノ）イソキノリン−７−カルボキシレート（４３０ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、６Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１．１ｍＬ、６．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で終夜撹拌した。反応物を濃縮した。残留物を水に溶かし、沈殿物が形成されるまで１Ｎ塩酸水溶液で酸性化した。固体を濾過によって収集し、真空下で乾燥させて、表題化合物（３２８ｍｇ、８３％）を黄色固体として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.92(s, 1H), 8.30(t, J=5.8Hz, 1H), 8.06(dd, J=8.4, 1.4Hz, 1H),
7.88(d, J=5.7Hz, 1H), 7.69(d, J=8.6Hz, 1H), 7.24-7.31(m, 2H), 6.88(d, J=5.7Hz,
1H), 6.79-6.85(m, 2H), 4.62(d, J=5.9Hz, 2H), 3.67(s, 3H).
【０３５５】
中間体２８：以下に示す３−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３５６】
【化１１１】
0005647356.tif 000112
【０３５７】
ステップ１：メチル３−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート
【０３５８】
【化１１２】
0005647356.tif 000113
３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸（１．５ｇ、８．４ｍｍｏｌ）をメタノール（１７ｍＬ）に懸濁した。濃塩酸（３．１ｍＬ、１０１ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を２４時間加熱還流した。反応物を濃縮して、表題化合物（１．６ｇ、１００％）を得た。+ESI(M+H) 193.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 11.98(br. s., 1H), 7.89(s, 1H), 7.72(d, J=8.6Hz, 1H), 7.50(dd,
J=8.5, 1.3Hz, 1H), 3.85(s, 3H).
【０３５９】
ステップ２：１−エチル６−メチル３−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−１，６−ジカルボキシレート
【０３６０】
【化１１３】
0005647356.tif 000114
メチル３−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート（１．６ｇ、８．３ｍｍｏｌ）をピリジン（１０ｍＬ）に懸濁した。クロロギ酸エチル（１．０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）をゆっくり添加し、反応物を室温で２時間撹拌させた。反応物を水（６５ｍＬ）に注ぎ入れ、冷蔵庫内で４時間冷却した。得られた褐色沈殿物を濾過によって収集し、水ですすぎ、真空下で乾燥させて、表題化合物（１．３５ｇ、６１％）をベージュ色の固体として得た。+ESI(M+H) 265.0; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.80(d, J=6.0Hz, 1H), 8.01(dd, J=8.2, 1.2Hz, 1H), 7.88(d,
J=8.6Hz, 1H), 4.60(q, J=7.0Hz, 2H), 3.98(s, 3H), 1.57(t, J=7.1Hz, 3H).
【０３６１】
ステップ３：１−エチル６−メチル３−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−１，６−ジカルボキシレート
【０３６２】
【化１１４】
0005647356.tif 000115
１−エチル６−メチル３−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−１，６−ジカルボキシレート（１．３５ｇ、５．１１ｍｍｏｌ）をアセトン（６５ｍＬ）に懸濁した。炭酸セシウム（１．７５ｇ、５．３６ｍｍｏｌ）およびヨウ化メチル（１．０ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を２３時間加熱還流した。反応物を濃縮乾固した。残留物をジクロロメタン（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）に溶かした。層を分離し、水性物をジクロロメタンで再度抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製により、２つの位置異性体生成物を得た。
白色固体としての１−エチル６−メチル３−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−１，６−ジカルボキシレート（４４４ｍｇ、３１％）。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.78(s, 1H), 7.96(dd, J=8.2, 1.4Hz, 1H), 7.70(dd, J=8.2, 0.8Hz,
1H), 4.57(q, J=7.2Hz, 2H), 4.19(s, 3H), 3.96(s, 3H), 1.51(t, J=7.1Hz, 3H).
黄色固体としての１−エチル６−メチル２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール−１，６−ジカルボキシレート（５１４ｍｇ、３６％）。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.56(s, 1H), 8.00(m, 1H), 7.92(d, J=8.6Hz, 1H), 4.49(q, J=7.2Hz,
2H), 3.97(s, 3H), 3.69(s, 3H), 1.49(t, J=7.1Hz, 3H).
【０３６３】
ステップ４：３−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸
１−エチル６−メチル３−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−１，６−ジカルボキシレート（４４４ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ）をエタノール（５ｍＬ）に懸濁した。水酸化カリウムの水溶液（１６ｍＬ、１６ｍｍｏｌ、１Ｍ）を添加し、反応物を６５℃に加熱し、１．５時間撹拌した。反応物を室温に冷却し、濃縮した。残留物を水に溶かし、溶液を沈殿物が形成されるまで１Ｎ塩酸水溶液で酸性化した。固体を濾過によって収集し、水ですすぎ、真空下で乾燥させて、表題化合物（２３２ｍｇ、７６％）を橙色固体として得た。+ESI(M+H) 193.2; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.22(s, 1H), 7.90-7.94(m, 1H), 7.64(d, J=8.4Hz, 1H), 7.53(dd,
J=8.4, 1.4Hz, 1H), 3.99(s, 3H).
【０３６４】
中間体２９：以下に示す３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３６５】
【化１１５】
0005647356.tif 000116
【０３６６】
表題化合物は、５−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾールを使用し、中間体２１のステップ３〜４において記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI (M+H) 231.1.
【０３６７】
中間体３０：以下に示す１−（４−メトキシベンジルアミノ）イソキノリン−６−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３６８】
【化１１６】
0005647356.tif 000117
【０３６９】
ステップ１：１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−６−カルボン酸
【０３７０】
【化１１７】
0005647356.tif 000118
メタノール（３００ｍＬ）中の、６−ブロモイソキノリン−１（２Ｈ）−オン（３０ｇ、０．１３４ｍｏｌ）、トリエチルアミン（１７．６ｇ、０．１７４ｍｏｌ）、塩化パラジウム（ＩＩ）（０．２４ｇ、１．３４ｍｍｏｌ）および２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（０．８４ｇ、１．３４ｍｍｏｌ）の混合物を、２ＭＰａの一酸化炭素で加圧した。反応物を１００℃に加熱し、１２時間撹拌した。反応混合物をセライトに通して濾過し、濃縮した。残留物を水で洗浄し、固体を真空下で乾燥させて、粗製のメチル１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−６−カルボキシレート（２３．８ｇ、９５．２％）を黄色固体として得た。固体をテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で希釈した。この混合物に水酸化リチウム（１６．８ｇ、０．４ｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（３×）で洗浄し、これらの洗浄液を廃棄した。水層を４Ｎ塩酸水溶液でｐＨ＝５に酸性化した。得られた沈殿物を濾過によって収集し、真空下で乾燥させて、表題化合物（１１．３ｇ、４９％）を黄色固体として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 11.48(s, 1H), 8.24(d, 2H), 7.93(d, 1H), 7.22(d, 1H), 6.68(d, 1H).
【０３７１】
ステップ２：１−（４−メトキシベンジルアミノ）イソキノリン−６−カルボン酸
表題化合物は、１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−６−カルボン酸を使用し、中間体２７のステップ２〜５において記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 309.2; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 8.37(d, J=1.56Hz, 1H), 8.34(d, J=8.78Hz, 1H), 8.12(dd, J=8.68,
1.66Hz, 1H), 7.67(d, J=6.44Hz, 1H), 7.29-7.36(m, 2H), 7.15(d, J=6.24Hz, 1H),
6.86-6.93(m, 2H), 4.73(s, 2H), 3.76(s, 3H).
【０３７２】
中間体３１：以下に示す１−（メチルアミノ）イソキノリン−７−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３７３】
【化１１８】
0005647356.tif 000119
【０３７４】
ステップ１：エチル１−（メチルアミノ）イソキノリン−７−カルボキシレート
【０３７５】
【化１１９】
0005647356.tif 000120
テトラヒドロフラン中メチルアミンの溶液（３０ｍＬ、６０ｍｍｏｌ、２Ｍ）を、密閉チューブ中のエチル１−クロロイソキノリン−７−カルボキシレート（中間体２７のステップ３において形成されたもの）（７０５ｍｇ、２．９９ｍｍｏｌ）に添加した。反応物を６０℃に加熱し、終夜撹拌した。ＬＣＭＳは、反応が完了していないことを示した。追加のメチルアミン（１０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中２Ｍ）を添加し、反応物を６０℃にさらに１８時間加熱した。反応物を室温に冷却し、濃縮した。残留物を水とジクロロメタンとに分配した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（２５〜６５％酢酸エチル／ヘプタン）による精製により、表題化合物（５８４ｍｇ、８５％）を黄色油として得、これを静置すると凝固した。+ESI(M+H) 231.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.83-8.94(m, 1H), 8.07(dd, J=8.58, 1.56Hz, 1H), 7.99(d, J=5.85Hz,
1H), 7.89(d, J=4.49Hz, 1H), 7.77(d, J=8.58Hz, 1H), 6.92(d, J=5.07Hz, 1H),
4.38(q, J=7.02Hz, 2H), 2.97(d, J=4.49Hz, 3H), 1.38(t, J=7.12Hz, 3H).
【０３７６】
ステップ２：１−（メチルアミノ）イソキノリン−７−カルボン酸
表題化合物は、エチル１−（メチルアミノ）イソキノリン−７−カルボキシレートを使用し、中間体１９のステップ３において記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 203.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.03(br. s., 1H), 8.87(s, 1H), 8.06(dd, J=8.51, 1.47Hz, 1H),
7.97(d, J=5.67Hz, 1H), 7.85(d, J=4.50Hz, 1H), 7.75(d, J=8.41Hz, 1H), 6.91(d,
J=5.87Hz, 1H), 2.95(d, J=4.50Hz, 3H).
【０３７７】
中間体３２：以下に示す３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３７８】
【化１２０】
0005647356.tif 000121
【０３７９】
ステップ１：１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２，２，２−トリフルオロエタノール
【０３８０】
【化１２１】
0005647356.tif 000122
テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中の４−ブロモ−２−フルオロベンズアルデヒド（１．００ｇ、４．９３ｍｍｏｌ）の０℃溶液に、トリメチルシリルトリフルオロメタン（０．７７ｍＬ、４．９ｍｍｏｌ）を５分間かけて滴下添加した。反応物を０℃で１０分間撹拌した。次いで、フッ化テトラブチルアンモニウム（０．４９ｍＬ、０．４９ｍｍｏｌ、テトラヒドロフラン中１Ｍ）をゆっくり添加し、反応物を室温に徐々に加温させ、３日間撹拌させた。反応物を濃縮し、残留物をジクロロメタンに溶かした。溶液を１Ｎ塩酸水溶液で１回およびブラインで１回洗浄した。有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（０〜５０％酢酸エチル／ヘプタン）による精製により、表題化合物（１．０ｇ、７５％）を透明油として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.48(d, J=7.61Hz, 1H), 7.39(d, J=1.76Hz, 1H), 7.29(dd, J=9.56,
1.95Hz, 1H), 5.33-5.40(m, 1H), 2.70(d, J=5.46Hz, 1H).
【０３８１】
ステップ２：１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２，２，２−トリフルオロエタノン
【０３８２】
【化１２２】
0005647356.tif 000123
酢酸エチル（３０ｍＬ）中の１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２，２，２−トリフルオロエタノール（１．０９ｇ、３．９９ｍｍｏｌ）の溶液に、２−ヨードキシ安息香酸（２．２８ｇ、７．９７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を終夜加熱還流した。反応物を室温に冷却し、ヘプタン（３０ｍＬ）で希釈した。混合物をセライトに通して濾過し、濾液を濃縮して、表題化合物（１．０３ｇ、９５％）を淡黄色油として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.44(dd, J=10.15, 1.56Hz, 1H), 7.48(m, 1H), 7.76(m, 1H).
【０３８３】
ステップ３：６−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール
【０３８４】
【化１２３】
0005647356.tif 000124
ヒドラジン水和物（３．５ｍＬ、４５ｍｍｏｌ）を、１−ブタノール（１５ｍＬ）中の１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２，２，２−トリフルオロエタノン（１．００ｇ、３．６９ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を５時間加熱還流し、次いで室温に冷却し、終夜撹拌したまま放置した。反応物を水（５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×）で抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜５０％酢酸エチル／ヘプタン）による精製により、表題化合物（３１０ｍｇ、３２％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 7.42(dd, J=8.58, 1.56Hz, 1H), 7.72(d, J=8.58Hz, 1H), 7.75(dd,
J=1.56, 0.78Hz, 1H).
【０３８５】
ステップ４：３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸
表題化合物は、６−ブロモ−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾールを使用し、中間体２１のステップ３〜４において記述されているものに類似する方法によって調製した。-ESI (M-H) 229.1.
【０３８６】
中間体３３：以下に示す２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３８７】
【化１２４】
0005647356.tif 000125
【０３８８】
エタノール（６ｍＬ）中の１−エチル６−メチル２−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダゾール−１，６−ジカルボキシレート（中間体２８のステップ３において形成されたもの）（５１４ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、１Ｎ水酸化カリウム水溶液（１８．５ｍＬ、１８．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６５℃に１．５時間加熱した。反応物を室温に冷却し、濃縮乾固した。残留物を水に溶かし、沈殿物が形成されるまで１Ｎ塩酸水溶液で酸性化した。固体を濾過によって収集し、真空下で乾燥させて、表題化合物（１９６ｍｇ、５５％）を褐色固体として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.12(br. s., 1H), 10.61(br. s., 1H), 7.76(s, 1H), 7.70(d,
J=8.2Hz, 1H), 7.60(dd, J=8.2, 1.2Hz, 1H), 3.38(s, 3H).
【０３８９】
中間体３４：以下に示す３−クロロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３９０】
【化１２５】
0005647356.tif 000126
【０３９１】
ステップ１：メチル３−クロロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレート
【０３９２】
【化１２６】
0005647356.tif 000127
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中のメチル１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレート（１．００ｇ、５．６８ｍｍｏｌ）の０℃溶液に、Ｎ−クロロコハク酸イミド（８９５ｍｇ、５．９６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温に次第に加温させ、終夜撹拌させた。反応物を水（１２５ｍＬ）で希釈し、２０分間撹拌した。得られた固体を濾過によって収集し、水で洗浄し、真空下で乾燥させて、表題化合物（１．１１ｇ、９３％）を橙色粉末として得た。+ESI(M+H) 211.0; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 11.99(br. s., 1H), 8.92(d, J=2.0Hz, 1H), 8.31(d, J=1.8Hz, 1H),
8.08(d, J=3.1Hz, 1H), 3.88(s, 3H).
【０３９３】
ステップ２：３−クロロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボン酸
メチル３−クロロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｂ］ピリジン−６−カルボキシレート（１．１０ｇ、５．２２ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２５ｍＬ）に懸濁し、６Ｎ塩酸水溶液（８．７ｍＬ）を添加した。反応物を室温で終夜撹拌させた。次いで、反応物を濃縮して、表題化合物（１．２ｇ、１００％）を得た。+ESI(M+H) 197.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 12.50(br. s., 1H), 8.92(d, J=1.6Hz, 1H), 8.46(br. s., 1H),
8.19(br. s., 1H).
【０３９４】
中間体３５：以下に示す３−（メチルアミノ）−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０３９５】
【化１２７】
0005647356.tif 000128
【０３９６】
ステップ１：４−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンゾチオアミド
【０３９７】
【化１２８】
0005647356.tif 000129
トルエン（１０ｍＬ）中の４−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド（５００ｍｇ、２ｍｍｏｌ）およびローソン試薬（８７２ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃に加熱し、４時間撹拌した。反応物を室温に冷却し、トルエンで希釈し、濾過した。濾液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜２０％酢酸エチル／ヘプタン）による残留物の精製により、表題化合物（５２０ｍｇ、９７％）を黄色固体として得た。+ESI(M+H+1) 250.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.09(t, J=8.58Hz, 1H), 8.03(br. s., 1H), 7.35(dd, J=8.19, 2.15Hz,
1H), 7.27(dd, J=11.41, 1.85Hz, 1H), 3.36(dd, J=4.88, 0.78Hz, 3H).
【０３９８】
ステップ２：６−ブロモ−Ｎ−メチル−１Ｈ−インダゾール−３−アミン
【０３９９】
【化１２９】
0005647356.tif 000130
無水ヒドラジン（０．２５ｍＬ、８．１ｍｍｏｌ）を、ジメチルスルホキシド（２．５ｍＬ）中の４−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンゾチオアミド（２００ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を１００℃に加熱し、２時間撹拌した。反応物を室温に冷却し、酢酸エチルおよび水で希釈した。層を分離し、水性物を酢酸エチル（３×）で抽出した。合わせた有機物を飽和炭酸ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（２０〜１００％酢酸エチル／ヘプタン）による精製により、表題化合物（９８ｍｇ、５４％）を白色固体として得た。+ESI(M+H+1) 228.0; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 7.52(d, J=8.58Hz, 1H), 7.43(s, 1H), 7.04(d, J=8.39Hz, 1H),
2.94(s, 3H).
【０４００】
ステップ３：メチル３−（メチルアミノ）−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート
【０４０１】
【化１３０】
0005647356.tif 000131
表題化合物は、６−ブロモ−Ｎ−メチル−１Ｈ−インダゾール−３−アミンを使用し、中間体１２のステップ２において記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 206.2; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 7.95(t, J=1.17Hz, 1H), 7.67(dd, J=8.39, 0.78Hz, 1H), 7.55(dd,
J=8.49, 1.27Hz, 1H), 3.90(s, 3H), 2.96(s, 3H).
【０４０２】
ステップ４：３−（メチルアミノ）−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸
１，４−ジオキサン（０．２ｍＬ）中のメチル３−（メチルアミノ）−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート（３０．０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の溶液に、３Ｎ塩酸水溶液（０．２ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１００℃に２時間加熱した。反応物を濃縮し、真空下で乾燥させて、表題化合物（３３ｍｇ、９９％）を黄褐色固体として得た。+ESI(M+H) 192.1; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 8.09(s, 1H), 7.98(dd, J=8.58, 0.78Hz, 1H), 7.85(dd, J=8.58,
1.37Hz, 1H), 3.12(s, 3H).
【０４０３】
中間体３６：以下に示す３−メトキシイソキノリン−７−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０４０４】
【化１３１】
0005647356.tif 000132
【０４０５】
ステップ１：７−ブロモ−３−メトキシイソキノリン
【０４０６】
【化１３２】
0005647356.tif 000133
ジグリム（１ｍＬ）中の７−ブロモ−３−クロロイソキノリン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）およびナトリウムメトキシド（１１３ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）の混合物を、１５０℃に１時間加熱した。反応物を室温に冷却し、トルエンおよび水で希釈した。層を分離し、水層をトルエン（３×）で抽出した。合わせた有機物を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して油とした。この油を終夜真空下で乾燥させて、表題化合物（８３ｍｇ、８５％）を黄色固体として得た。+ESI(M+H+1) 240.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.87(s, 1H), 8.01-8.05(m, 1H), 7.58-7.64(m, 1H), 7.53-7.58(m,
1H), 6.97(s, 1H), 4.02(s, 3H).
【０４０７】
ステップ２：３−メトキシイソキノリン−７−カルボン酸
表題化合物は、７−ブロモ−３−メトキシイソキノリンを使用し、中間体２１のステップ３〜４において記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 204.2; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 9.08(s, 1H), 8.71(s, 1H), 8.14(dd, J=8.78, 1.56Hz, 1H), 7.83(d,
J=8.78Hz, 1H), 7.17(s, 1H), 4.02(s, 3H).
【０４０８】
中間体３７：以下に示す１−（メチルアミノ）イソキノリン−６−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０４０９】
【化１３３】
0005647356.tif 000134
【０４１０】
ステップ１：エチル１−クロロイソキノリン−６−カルボキシレート
【０４１１】
【化１３４】
0005647356.tif 000135
表題化合物は、６−ブロモイソキノリン−１（２Ｈ）−オンを使用し、中間体２７のステップ１〜３において記述されているものに類似する方法によって調製した。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.56(d, J=1.6Hz, 1H), 8.38(d, J=8.8Hz, 1H), 8.34(d, J=5.7Hz, 1H),
8.25(dd, J=8.8, 1.6Hz, 1H), 7.70(d, J=6.0Hz, 1H), 4.47(q, J=7.0Hz, 2H), 1.45(t,
J=7.1Hz, 3H).
【０４１２】
ステップ２：エチル１−（メチルアミノ）イソキノリン−６−カルボキシレート
【０４１３】
【化１３５】
0005647356.tif 000136
表題化合物は、エチル１−クロロイソキノリン−６−カルボキシレートを使用し、中間体３１のステップ１において記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 231.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.39(s, 1H), 8.06-8.14(m, 2H), 8.00(d, J=5.9Hz, 1H), 7.02(d,
J=6.0Hz, 1H), 4.44(q, J=7.3Hz, 2H), 3.25(d, J=4.7Hz, 3H), 1.43(t, J=7.1Hz, 3H).
【０４１４】
ステップ３：１−（メチルアミノ）イソキノリン−６−カルボン酸
エタノール（２．５ｍＬ）中のエチル１−（メチルアミノ）イソキノリン−６−カルボキシレート（１５０ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、１Ｎ水酸化カリウム水溶液（６．５ｍＬ、６．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６５℃に１．５時間加熱した。反応物を室温に冷却し、濃縮乾固した。固体を水に溶解し、溶液を１Ｎ  ＨＣｌで酸性化した。混合物を濃縮した。固体を水（５０ｍＬ）に溶解し、２−ブタノール（５０ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機物をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（９５ｍｇ、７２％）を白色固体として得た。+ESI(M+H) 203.2; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.07(br. s., 1H), 10.25(d, J=4.9Hz, 1H), 8.74(d, J=8.8Hz, 1H),
8.51(s, 1H), 8.15(dd, J=8.6, 1.8Hz, 1H), 7.67(d, J=6.8Hz, 1H), 7.35(d, J=7.0Hz,
1H), 3.15(d, J=4.7Hz, 3H).
【０４１５】
中間体３８：１−メトキシイソキノリン−６−カルボン酸
【０４１６】
【化１３６】
0005647356.tif 000137
ナトリウム金属（８７０ｍｇ、３７ｍｍｏｌ）をメタノール（２５ｍＬ）に撹拌しながらゆっくり添加することにより、ナトリウムメトキシドの溶液を調製した。すべてのナトリウム金属が反応した後、この溶液をエチル１−クロロイソキノリン−６−カルボキシレート（４４０ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）に添加した。得られた懸濁液を加熱還流し、３日間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、濃縮した。残留物を水と酢酸エチルとに分配した。層を分離し、水層を沈殿物が形成されるまで１Ｎ塩酸水溶液で酸性化した。固体を濾過によって収集し、真空下で乾燥させて、表題化合物（２９４ｍｇ、７８％）を白色固体として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.50(d, J=1.2Hz, 1H), 8.23(d, J=8.8Hz, 1H), 8.02-8.10(m, 2H),
7.54(d, J=6.0Hz, 1H), 4.05(s, 3H).
【０４１７】
中間体３９：以下に示す３−（メチルアミノ）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０４１８】
【化１３７】
0005647356.tif 000138
【０４１９】
ステップ１：５−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド
【０４２０】
【化１３８】
0005647356.tif 000139
ジクロロメタン（５ｍＬ）中の５−ブロモ−２−フルオロ安息香酸（２００ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）の混合物に、塩化オキサリル（０．１６ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）、続いて１滴のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを添加した。反応物を室温で１．５時間撹拌した。反応物を濃縮し、得られた残留物をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。メチルアミン（２．３ｍＬ、５ｍｍｏｌ、テトラヒドロフラン中２Ｍ）を添加し、反応物を０℃で３０分間撹拌させた。反応物を水でクエンチし、混合物を濃縮した。残留物を水で希釈し、得られた固体を濾過し、水ですすぎ、真空下で乾燥させて、表題化合物（１９６．６ｍｇ、９３％）を白色固体として得た。+ESI(M+H+1) 234.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ); 8.22(dd, J=6.83, 2.73Hz, 1H), 7.55(ddd, J=8.68, 4.49, 2.63Hz,
1H), 7.00(dd, J=11.32, 8.58Hz, 1H), 6.67(br. s., 1H), 3.02(dd, J=4.88, 1.17Hz,
3H).
【０４２１】
ステップ２：５−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンゾチオアミド
【０４２２】
【化１３９】
0005647356.tif 000140
トルエン（１０ｍＬ）中の５−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンズアミド（５００ｍｇ、２ｍｍｏｌ）およびローソン試薬（８７２ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）の混合物を１００℃に加熱し、３．５時間撹拌した。反応物を室温に冷却し、トルエンで希釈し、濾過した。濾液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜２０％酢酸エチル／ヘプタン）によって精製して、表題化合物（４９４ｍｇ、９２％）を黄色油として得、これを静置すると凝固した。+ESI(M+H+1) 250.1; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.20(dd, J=6.93, 2.63Hz, 1H), 8.06(br. s., 1H), 7.47(ddd, J=8.73,
4.44, 2.63Hz, 1H), 6.95(dd, J=11.12, 8.78Hz, 1H), 3.32(dd, J=4.88, 0.78Hz, 3H).
【０４２３】
ステップ３：５−ブロモ−Ｎ−メチル−１Ｈ−インダゾール−３−アミン
【０４２４】
【化１４０】
0005647356.tif 000141
ジメチルスルホキシド（６ｍＬ）中の５−ブロモ−２−フルオロ−Ｎ−メチルベンゾチオアミド（４８０ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）および無水ヒドラジン（０．６１ｍＬ、１９ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃に加熱し、１時間撹拌した。温度を１００℃に上昇させ、反応物を４０分間撹拌した。温度を１３０℃にさらに上昇させ、反応物をさらに４５分間撹拌した。反応物を室温に冷却し、酢酸エチルおよびブラインで希釈した。層を分離し、水性物を酢酸エチル（４×）で抽出した。合わせた有機物を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（２０〜７０％酢酸エチル／ヘプタン）による精製により、表題化合物（１０３ｍｇ、２３％）を白色固体として得た。+ESI(M+H+1) 228.0; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 7.78(dd, J=1.85, 0.68Hz, 1H), 7.29-7.40(m, 1H), 7.17(dd, J=8.88,
0.68Hz, 1H), 2.94(s, 3H).
【０４２５】
ステップ４：メチル３−（メチルアミノ）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート
【０４２６】
【化１４１】
0005647356.tif 000142
表題化合物は、５−ブロモ−Ｎ−メチル−１Ｈ−インダゾール−３−アミンを使用し、中間体２１のステップ３において記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 206.2; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 8.44(dd, J=1.56, 0.78Hz, 1H), 7.92(dd, J=8.78, 1.56Hz, 1H),
7.26(dd, J=8.78, 0.78Hz, 1H), 3.88(s, 3H), 2.96(s, 3H).
【０４２７】
ステップ５：３−（メチルアミノ）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
メチル３−（メチルアミノ）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（６０．０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（０．５ｍＬ）に溶解した。３Ｎ塩酸水溶液（０．３ｍＬ、０．９ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を１００℃に１１．５時間加熱した。熱を除去し、反応物を室温で終夜撹拌したまま放置した。反応物を濃縮して、表題化合物（６３ｍｇ、９５％）を黄褐色固体として得た。+ESI(M+H) 192.1; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 8.61(d, J=0.78Hz, 1H), 8.19(dd, J=8.80, 1.57Hz, 1H), 7.38(d,
J=8.80Hz, 1H), 3.02(s, 3H).
【０４２８】
中間体４０：以下に示す３−アミノイソキノリン−７−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０４２９】
【化１４２】
0005647356.tif 000143
【０４３０】
表題化合物は、７−ブロモイソキノリン−３−アミンを使用し、中間体２１のステップ３〜４において記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 189.2; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 8.87(s, 1H), 8.52(d, J=0.78Hz, 1H), 7.98(dd, J=8.78, 1.76Hz, 1H),
7.54(d, J=8.78Hz, 1H), 6.77(s, 1H).
【０４３１】
中間体４１：以下に示す３−（メチルアミノ）イソキノリン−７−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０４３２】
【化１４３】
0005647356.tif 000144
【０４３３】
ステップ１：７−ブロモ−Ｎ−メチルイソキノリン−３−アミン
【０４３４】
【化１４４】
0005647356.tif 000145
１−メトキシ−２−（２−メトキシエトキシ）エタン（１ｍＬ）中の、７−ブロモ−３−クロロイソキノリン（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、メチルアミン塩酸塩（１３９ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（４５６ｍｇ、３．３０ｍｍｏｌ）の混合物を、１５０℃に加熱し、６０時間撹拌した。追加のメチルアミン塩酸塩（１００ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（２００ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）を添加し、加熱をさらに４０時間続けた。反応物を室温に冷却し、水で希釈した。混合物を３０分間撹拌した。得られた固体を濾過除去し、水ですすぎ、真空下で乾燥させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（１０〜３０％酢酸エチル／ヘプタン）による精製により、表題化合物（８２ｍｇ）を淡黄色固体として得た。-APCI(M-H+1) 237.8; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.70(s, 1H), 7.84(d, J=1.95Hz, 1H), 7.48(dd, J=8.97, 2.15Hz, 1H),
7.38(d, J=8.97Hz, 1H), 6.39(s, 1H), 2.92(s, 3H).
【０４３５】
ステップ２：３−（メチルアミノ）イソキノリン−７−カルボン酸
表題化合物は、７−ブロモ−Ｎ−メチルイソキノリン−３−アミンを使用し、中間体２１のステップ３〜４において記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 203.1; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 8.87(s, 1H), 8.51(s, 1H), 7.98(dd, J=8.88, 1.66Hz, 1H), 7.58(d,
J=8.78Hz, 1H), 6.60(s, 1H), 2.93(s, 3H).
【０４３６】
中間体４２：以下に示す３−クロロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０４３７】
【化１４５】
0005647356.tif 000146
【０４３８】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中の１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸（２５０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）の懸濁液を、４０℃に加温した。Ｎ−クロロコハク酸イミド（２４３ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を５５℃で５時間撹拌した。反応物を室温に冷却し、２日間撹拌したまま放置した。混合物を水（２０ｍＬ）で希釈し、終夜撹拌した。得られた固体を濾過によって収集し、乾燥させて、表題化合物（１６１ｍｇ、５５％）を得た。+ESI(M+H) 197.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.08(br. s., 1H), 12.39(br. s., 1H), 8.86(d, J=1.8Hz, 1H),
8.40(d, J=1.2Hz, 1H), 7.84(d, J=2.5Hz, 1H).
【０４３９】
中間体４３：以下に示す６−ブロモ−３−メトキシイソキノリンは、下記の通りに調製した：
【０４４０】
【化１４６】
0005647356.tif 000147
【０４４１】
６−ブロモイソキノリン−３−オール（６０６ｍｇ、２．７０ｍｍｏｌ）、炭酸銀（１．５ｇ、５．３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２ｍＬ）の混合物を、室温で１６分間撹拌した。ヨウ化メチル（１８６μＬ、２．９７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を１８時間撹拌したまま放置した。反応物をメタノールで希釈し、セライトに通して濾過した。濾液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（９０ｍｇ、１４％）を得た。+ESI(M+H+1) 240.0; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.91(s, 1H), 7.86(d, J=1.8Hz, 1H), 7.73(d, J=8.8Hz, 1H), 7.43(dd,
J=8.8, 1.8Hz, 1H), 6.90(s, 1H), 4.02(s, 3H).
【０４４２】
中間体４４：以下に示す２−クロロキノリン−７−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０４４３】
【化１４７】
0005647356.tif 000148
【０４４４】
ステップ１：エチル２−クロロキノリン−７−カルボキシレート
【０４４５】
【化１４８】
0005647356.tif 000149
オキシ塩化リン（１．９４ｍＬ、２０．７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１５ｍＬ）中の７−（エトキシカルボニル）キノリン１−オキシド（４５０ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応物を５０℃に３時間加熱した。次いで、反応物を室温に冷却し、２００ｍＬの水に撹拌しながらゆっくり注ぎ入れた。混合物を１時間撹拌させ、次いで１Ｎ水酸化カリウム水溶液で中和した。混合物をジクロロメタン（３×）で抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（０〜２０％酢酸エチル／ヘプタン）による精製により、表題化合物（２５４ｍｇ、５２％）を白色固体として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.70-8.79(m, 1H), 8.13-8.18(m, 2H), 7.87(d, J=8.39Hz, 1H),
7.47(d, J=8.58Hz, 1H), 4.44(q, J=7.02Hz, 2H), 1.43(t, J=7.12Hz, 3H).
【０４４６】
ステップ２：２−クロロキノリン−７−カルボン酸
テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中のエチル２−クロロキノリン−７−カルボキシレート（８００ｍｇ、３．４ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｎ水酸化リチウム水溶液（７ｍＬ、７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で終夜撹拌した。反応物を濃縮し、残留物を水で希釈し、１Ｎ塩酸水溶液で酸性化した。得られた沈殿物を濾過によって収集し、真空下で乾燥させて、表題化合物（６４８ｍｇ、９２％）を白色粉末として得た。+ESI(M+H) 208.1; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 13.43(s, 1H), 8.53(d, J=8.7Hz, 1H), 8.44-8.45(m, 1H), 8.14(d,
J=8.4Hz, 1H), 8.07-8.11(m, 1H), 7.70(d, J=8.5Hz, 1H).
【０４４７】
中間体４４：以下に示す２−（（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ）キノリン−７−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０４４８】
【化１４９】
0005647356.tif 000150
【０４４９】
ステップ１：メチルキノリン−７−カルボキシレート
【０４５０】
【化１５０】
0005647356.tif 000151
表題化合物は、７−ブロモキノリンを出発材料として使用し、中間体２１のステップ３において記述されているものに類似する方法によって調製した。
【０４５１】
ステップ２：以下に示す７−（メトキシカルボニル）キノリン１−オキシドは、下記の通りに調製した：
【０４５２】
【化１５１】
0005647356.tif 000152
【０４５３】
ジクロロメタン（３１５ｍＬ）中のメチルキノリン−７−カルボキシレート（１７．８ｇ、９４．８７ｍｍｏｌ）の溶液に、過酢酸（３９．９ｍＬ、１９０ｍｍｏｌ、酢酸中３２％）を添加した。反応物を室温で終夜撹拌した。過酢酸（１０ｍＬ、４８ｍｍｏｌ、酢酸中３２％）を添加し、混合物を５時間撹拌した。反応混合物を重炭酸ナトリウム水溶液の飽和溶液で希釈した。水相をジクロロメタン（２×１Ｌ）中に抽出した。抽出物を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン中２〜１５％メタノール）による精製により、表題化合物（１７．４ｇ、９０％）を黄色固体として得た。1H NMR(400MHz, クロロホルム-d, δ): 9.41(1H, s), 8.56(1H, dd, J=6.0,
0.8Hz), 8.24(1H, dd, J=8.5, 1.7Hz), 7.93(1H, d, J=8.6Hz), 7.75(1H, d, J=8.6Hz),
7.39(1H, dd, J=8.6, 6.0Hz), 4.01(3H, s)
【０４５４】
ステップ３：以下に示すメチル２−（（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ）キノリン−７−カルボキシレートは、下記の通りに調製した：
【０４５５】
【化１５２】
0005647356.tif 000153
【０４５６】
０℃の７−（メトキシカルボニル）キノリン１−オキシド（２００ｍｇ、０．９８４ｍｍｏｌ）および２，２，２−トリフルオロエチルアミン（２９２ｍｇ、０．２９５ｍｍｏｌ）の溶液に、４−メチルベンゼンスルホン酸無水物（９６４ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ）を４５分間かけて小分けにして添加した。反応物を室温まで加温させ、終夜撹拌した。反応物をジクロロメタンで希釈し、塩化アンモニウムの飽和溶液で洗浄した。水層をジクロロメタン（１×）中に抽出した。有機物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーによる精製により、表題化合物（１７２ｍｇ、６２％）を得た。+ESI (M+H) 285.1
【０４５７】
ステップ４：２−（（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ）キノリン−７−カルボン酸
【０４５８】
【化１５３】
0005647356.tif 000154
テトラヒドロフラン（５ｍＬ）中のメチル２−（（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ）キノリン−７−カルボキシレート（１７２ｍｇ、０．６０５ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム水溶液（１．８２ｍＬ、１．８２ｍｍｏｌ、１Ｍ溶液）を室温で添加した。反応物を２．５日間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留物を１Ｎ塩酸水溶液で酸性化した。得られた沈殿物を濾過し、乾燥させて、表題化合物（６５ｍｇ、４０％）を得た。+ESI(M+H) 271.1, 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 4.31-4.41(m, 2H) 7.01(d, J=8.87Hz, 1H) 7.69-7.80(m, 2H) 8.06(d,
J=8.66Hz, 1H) 8. 14(s, 1H) 13.03(bs, 1H)
【０４５９】
中間体４５：以下に示す２−（（２，２−ジフルオロプロピル）アミノ）キノリン−７−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０４６０】
【化１５４】
0005647356.tif 000155
【０４６１】
表題化合物は、２，２，２−トリフルオロエチルアミンの代わりに２，２−ジフルオロエチルアミンを使用し、中間体４４について記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 267.2; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 1.63(t, J=19.02Hz, 3H) 3.89-3.99(m, 2H) 6.97(d, J=8.97Hz, 1H)
7.54(t, 1H) 7.62-7.68(m, 1H) 7.71(d, J=8.19Hz, 1H) 7.96(d, J=9.10Hz, 1H)
8.06-8.09(m, 1H) 12.95(bs, 1H).
【０４６２】
中間体４６：以下に示す７−クロロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−５−カルボン酸は、下記の通りに調製した：
【０４６３】
【化１５５】
0005647356.tif 000156
【０４６４】
濃硫酸（０．４５ｍＬ）中の３，４−ジアミノ−５−クロロ安息香酸（１２５ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）の溶液に、水（２ｍＬ）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で１時間撹拌した。混合物を終夜撹拌したまま放置した。反応物を水で希釈し、得られた沈殿物を濾過して、表題化合物（１２４ｍｇ、９４％）を褐色固体として得た。+APCI(M+H) 198.0; 1H NMR(400MHz, メタノール-d4, δ): 8.53(d, J=1.2Hz, 1H),
8.10(d, J=1.0Hz, 1H)
【０４６５】
（実施例１）
１’−イソプロピル−１−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン
【０４６６】
【化１５６】
0005647356.tif 000157
ジクロロメタン（２ｍＬ）中の２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸（４２ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の溶液に、１’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１Ｈ）−オン塩酸塩（４２ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０１ｍＬ、０．０７ｍｍｏｌ）および（１Ｈ−７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（５４．８ｍｇ、０．１４４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を真空で濃縮し、結果として生じた固体を酢酸エチルに溶解し、飽和重炭酸ナトリウムで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。残留物をジメチルスルホキシド（１ｍＬ）に溶解し、逆相ＨＰＬＣ（カラム：ＷａｔｅｒｓクロスブリッジＣ１８  １９×１００、５μｍ；移動相Ａ：水中０．０３％ＮＨ４ＯＨ（ｖ／ｖ）；移動相Ｂ：アセトニトリル中０．０３％ＮＨ４ＯＨ（ｖ／ｖ）；勾配：８．５分間で９０％Ａ／１０％Ｂ線形から０％Ａ／１００％Ｂ、０％Ａ／１００％Ｂで１０．０分間ホールド；流量：２５ｍＬ／分によって精製した。+ESI (M+H) 407.2; HPLC保持時間1.74分(方法A)
【０４６７】
（実施例２）
１−（３，７−ジメチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−１’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン
【０４６８】
【化１５７】
0005647356.tif 000158
ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中の１’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン塩酸塩（中間体２、４３０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）および３，７−ジメチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（３０６ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（０．７５ｍＬ、５．４ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（３３ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）および１−プロパンホスホン酸環状無水物（０．５２ｍＬ、１．７４ｍｍｏｌ、酢酸エチル中５０％溶液）を添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、酢酸エチルに溶かし、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して固体とした。固体をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜１５％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、ガラス状固体を生じさせた。ガラス状固体を酢酸エチル中で１６時間撹拌し、得られた固体を真空濾過によって収集して、所望生成物を白色固体（１３８ｍｇ）として生じさせた。+ESI(M+H) 421.0; 1H NMR(400MHz, CD3OD, δ): 7.65(s, 1H) 7.42(s, 1H) 7.21(s, 1H) 5.50(m, 1H) 3.95(br. s., 1H)
3.50-3.62(br. s., 3H) 2.97(s, 2H) 2.56(m, 6H) 1.83(br. s., 4H) 1.44(d, 6H).
【０４６９】
（実施例３）
１’−イソプロピル−１−（２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン
【０４７０】
【化１５８】
0005647356.tif 000159
乾燥ジメチルホルムアミド中の２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−カルボン（ｃａｒｂｏｘｙｌｌｉｃ）酸（２８ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（３７ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２６ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８４μＬ、０．４８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、次いで１’−イソプロピル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン塩酸塩を添加し（中間体２、３０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、反応物を１６時間撹拌した。混合物を冷水に注ぎ入れ、得られた沈殿物を真空濾過によって収集した。得られた固体をジエチルエーテルから粉砕して、１’−イソプロピル−１−（２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（１’Ｈ）−オン（２５ｍｇ）を生じさせた。+ESI(M+H) 407.3; 1H NMR(400MHz, DMSO-d6, δ): 8.41(s, 1H), 7.85(s, 1H), 7.75(s, 1H), 7.63(d, 1H), 7.40(s, 1H),
7.20(s, 1H), 5.40(m, 1H), 4.18(s, 3H), 3.60(br. s., 4H), 2.85(s, 2H), 1.70(br.
s., 4H), 1.35(d, 6H).
【０４７１】
以下の表１に収載されている化合物は、市販されている適切な出発材料を使用する実施例１〜３の化合物の合成について上述したものに類似する手順を使用して調製したか、当業者によく知られている調製を使用して調製したか、または他の中間体について上述した経路に類似する様式で調製した。以下に収載されている化合物は、遊離塩基として最初に単離されたものであり、試験のために薬学的に許容できる塩に変換され得る。
【０４７２】
【表１−１】
0005647356.tif 000160
【０４７３】
【表１−２】
0005647356.tif 000161
【０４７４】
【表１−３】
0005647356.tif 000162
【０４７５】
【表１−４】
0005647356.tif 000163
【０４７６】
以下の表２に収載されている化合物は、市販されている適切な出発材料を使用する実施例１〜３の化合物の合成について上述したものに類似する手順を使用して調製したか、当業者によく知られている調製を使用して調製したか、または他の中間体について上述した経路に類似する様式で調製した。以下に収載されている化合物は、遊離塩基として最初に単離されたものであり、試験のために薬学的に許容できる塩に変換され得る。
【０４７７】
【表２−１】
0005647356.tif 000164
【０４７８】
【表２−２】
0005647356.tif 000165
【０４７９】
【表２−３】
0005647356.tif 000166
【０４８０】
【表２−４】
0005647356.tif 000167
【０４８１】
【表２−５】
0005647356.tif 000168
【０４８２】
【表２−６】
0005647356.tif 000169
【０４８３】
【表２−７】
0005647356.tif 000170
【０４８４】
（実施例９９）
２’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（７−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
【０４８５】
【化１５９】
0005647356.tif 000171
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４ｍＬ）中の２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン塩酸塩（中間体４、２５ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）および７−メトキシ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（中間体１８、２５ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）の混合物に、トリエチルアミン（０．０５ｍＬ、０．３７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を５分間撹拌した。次いで、１−プロパンホスホン酸環状無水物（０．０９ｍＬ、０．１ｍｍｏｌ、酢酸エチル中５０％溶液）を添加し、反応物を室温で終夜撹拌した。反応物を水で希釈し、酢酸エチル（３×）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して黄色ガム状物とした。この粗材料に塩酸（０．１９ｍＬ、０．７５ｍｍｏｌ、ジオキサン中４Ｍ）を添加した。混合物を室温で終夜撹拌した。反応物を濃縮した。逆相ＨＰＬＣによる精製により、表題化合物（３．４ｍｇ、１０％）を得た。+ESI (M+H) 437.3; HPLC保持時間2.12分(方法A)。
【０４８６】
（実施例１００）
１−（１−アミノイソキノリン−７−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
【０４８７】
【化１６０】
0005647356.tif 000172
ステップ１：２’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（１−（４−メトキシベンジルアミノ）イソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
【０４８８】
【化１６１】
0005647356.tif 000173
表題化合物は、２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン塩酸塩（中間体４）および１−（４−メトキシベンジルアミノ）イソキノリン−７−カルボン酸（中間体２７）を使用し、実施例３において記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI (M+H) 553.5.
【０４８９】
ステップ２：１−（１−アミノイソキノリン−７−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
トリフルオロ酢酸（０．５１ｍＬ）中の２’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（１−（４−メトキシベンジルアミノ）イソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン（２８ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）の溶液に、アニソール（８．３μＬ、０．０７６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６５℃に加熱し、１９時間撹拌した。反応物を濃縮した。逆相ＨＰＬＣによる精製により、表題化合物（７．１ｍｇ、３２％）を得た。+ESI (M+H) 433.2; HPLC保持時間1.79分(方法A)。
【０４９０】
（実施例１０１）
１−（１−アミノイソキノリン−６−カルボニル）−２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
【０４９１】
【化１６２】
0005647356.tif 000174
表題化合物は、ステップ１において１−（４−メトキシベンジルアミノ）イソキノリン−６−カルボン酸（中間体３０）を使用し、実施例１００について記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI (M+H) 433.2; HPLC保持時間1.82分(方法A)。
【０４９２】
（実施例１０２）
２’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（３−メトキシイソキノリン−６−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
【０４９３】
【化１６３】
0005647356.tif 000175
１，４−ジオキサン（６ｍＬ）中の６−ブロモ−３−メトキシイソキノリン（中間体４３、８９．９ｍｇ、０．３７８ｍｍｏｌ）の溶液に、２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン塩酸塩（中間体４、２４４ｍｇ、０．７２７ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（１３０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物に窒素ガスを１５分間吹き込んで発泡させた。次いで、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−ジクロロパラジウム（ＩＩ）、ジクロロメタンとの錯体（１０２ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ）を添加し、反応容器に蓋をし、一酸化炭素ガスを５分間吹き込んで発泡させた。次いで、反応物を８０℃に１８時間加熱した。反応物を室温に冷却し、酢酸エチルで希釈した。混合物をセライトに通して濾過し、濾液を濃縮した。逆相ＨＰＬＣによる精製により、表題化合物を得た。+ESI (M+H) 448.1; HPLC保持時間2.26分(方法A)。
【０４９４】
（実施例１０３）
２’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（１−（ジメチルアミノ）イソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
ステップ１：２’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（１−クロロイソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
【０４９５】
【化１６４】
0005647356.tif 000176
表題化合物は、２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン塩酸塩（中間体４）および１−クロロイソキノリン−７−カルボン酸を使用し、４−ジメチルアミノピリジンを省略して、実施例２について記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 452.3; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.37(s, 1H), 8.32(d, J=5.7Hz, 1H), 7.89(d, J=8.4Hz, 1H),
7.75-7.79(m, 1H), 7.62(d, J=5.7Hz, 1H), 7.39(s, 1H), 6.42(s, 1H), 3.43-3.73(m,
4H), 2.87(s, 2H), 1.64-2.01(m, 4H), 1.61(s, 9H).
【０４９６】
ステップ２：２’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（１−（ジメチルアミノ）イソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
メタノール中ジメチルアミンの溶液（１．７５ｍＬ、３．５０ｍｍｏｌ、２Ｍ）を、２’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（１−クロロイソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン（１５８ｍｇ、０．３５０ｍｍｏｌ）に添加した。反応容器を密閉し、混合物を６０℃に加熱し、６５時間撹拌した。反応物を室温に冷却し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（１〜１５％メタノール／ジクロロメタン）による精製により、表題化合物（９９ｍｇ、６１％）を白色固体として得た。+APCI(M+H) 461.4; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.16-8.20(m, 1H), 8.12(d, J=5.9Hz, 1H), 7.75(d, J=8.2Hz, 1H),
7.58-7.64(m, 1H), 7.37(s, 1H), 7.14(d, J=5.9Hz, 1H), 6.00(br. s., 1H),
3.40-3.71(m, 4H), 3.10-3.28(m, 6H), 2.85(s, 2H), 1.64-1.99(m, 4H), 1.60(s, 9H).
【０４９７】
（実施例１０４）
２’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（２−クロロキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
【０４９８】
【化１６５】
0005647356.tif 000177
表題化合物は、２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン塩酸塩（中間体４）および２−クロロキノリン−７−カルボン酸（中間体４４）を使用し、実施例３について記述されているものに類似する方法によって調製した。+ESI(M+H) 452.3; 1H NMR(400MHz, CDCl3, δ): 8.12(d, J=8.2Hz, 1H), 7.98(br. s., 1H), 7.88(dd, J=8.4Hz, 1H),
7.61(dd, J=8.4, 1.6Hz, 1H), 7.44(d, J=8.6Hz, 1H), 7.39(s, 1H), 5.91(br. s.,
1H), 4.06-4.22(m, 1H), 3.38-3.64(m, 3H), 2.85(br. s., 2H), 1.67-1.97(m, 4H),
1.61(s, 9H).
【０４９９】
（実施例１０５）
２’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（２−（ジメチルアミノ）キノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
【０５００】
【化１６６】
0005647356.tif 000178
テトラヒドロフラン中ジメチルアミンの溶液（２．２ｍＬ、４．４ｍｍｍｏｌ、２．０Ｍ）を、２’−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（２−クロロキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン（１００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）に添加した。反応容器を密閉し、混合物を７０℃に１５時間加熱した。反応物を室温に冷却し、濃縮した。逆相ＨＰＬＣによる精製により、表題化合物（２５ｍｇ、２５％）を得た。+ESI (M+H) 461.2; HPLC保持時間1.96分(方法A)。
【０５０１】
以下の表３に収載されている化合物は、市販されている適切な出発材料を使用する実施例１０５の合成について上述したものに類似する手順を使用して調製したか、当業者によく知られている調製を使用して調製したか、または他の中間体について上述した経路に類似する様式で調製した。以下に収載されている化合物は、遊離塩基として最初に単離されたものであり、試験のために薬学的に許容できる塩に変換され得る。
【０５０２】
【表３−１】
0005647356.tif 000179
【０５０３】
【表３−２】
0005647356.tif 000180
【０５０４】
以下の表４に収載されている化合物は、市販されている適切な出発材料を使用する実施例１〜３の化合物の合成について上述したものに類似する手順を使用して調製したか、当業者によく知られている調製を使用して調製したか、または他の中間体について上述した経路に類似する様式で調製した。以下に収載されている化合物は、遊離塩基として最初に単離されたものであり、試験のために薬学的に許容できる塩に変換され得る。
【０５０５】
【表４】
0005647356.tif 000181
【０５０６】
以下の表５に収載されている化合物は、市販されている適切な出発材料を使用する実施例１０３の合成について上述したものに類似する手順を使用して調製したか、当業者によく知られている調製を使用して調製したか、または他の中間体について上述した経路に類似する様式で調製した。以下に収載されている化合物は、遊離塩基として最初に単離されたものであり、試験のために薬学的に許容できる塩に変換され得る。
【０５０７】
【表５】
0005647356.tif 000182
【０５０８】
（実施例１２３）
２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）イソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
【０５０９】
【化１６７】
0005647356.tif 000183
ステップ１：１−クロロイソキノリン−７−カルボン酸
【０５１０】
【化１６８】
0005647356.tif 000184
−７８℃まで冷却したＴＨＦ（１２ｍＬ）およびジエチルエーテル（１２ｍＬ）中の７−ブロモ−１−クロロイソキノリン（２．０００ｇ、８．２４７ｍｍｏｌｅｓ）の懸濁液に、ｎ−ＢｕＬｉ（３．９６ｍＬ、９．９ｍｍｏｌ、ヘキサン中２．５Ｍ）を添加した。５分間撹拌し、次いで針で通気孔を開けながら二酸化炭素をおよそ１分間吹き込んで発泡させた。反応混合物を０℃まで加温し、１５ｍＬの１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加した。混合物をジエチルエーテルで希釈し、１８時間撹拌した。有機層と水層とを分離し、有機物を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液および水で洗浄した。水性画分を合わせ、１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ４に酸性化した。得られた固体を濾過によって収集し、乾燥させて、表題化合物（１．２５２ｇ、７３％）を得た。+ESI(M+H) 208.1  1H NMR(400MHz, DMSO-d6)
d ppm 13.58(br. s., 1H) 8.86(m, 1H) 8.43(d, J=5.67Hz, 1H) 8.33(dd, J=8.61,
1.57Hz, 1H) 8.19(d, J=8.41Hz, 1H) 8.01(dd, 1H)
【０５１１】
ステップ２：２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）イソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン
ジオキサン（０．５ｍＬ）中の、１−クロロイソキノリン−７−カルボン酸（１００ｍｇ、０．４８２ｍｍｏｌ）、ＲｕＰｈｏｓ（６．５ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）、ＢｒｅｔｔＰｈｏｓ（１１．２ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（７０．２ｍｇ、０．７２３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ｔ−ブチルアミン（０．２５４ｍＬ、２．４１ｍｍｏｌ）を添加した。容器を密閉し、混合物を１１０℃に加熱し、終夜撹拌した。反応物を室温まで冷却し、リチウムビストリメチルシリルアミド（０．１３６ｍＬ、０．７２３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１１０℃に加熱し、終夜撹拌したまま放置した。反応混合物を室温まで冷却し、セライトに通して濾過し、メタノールですすいだ。濾液を減圧下で濃縮し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１ｍＬ）を添加した。酢酸エチルと水および１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液の混合物とに分配した。層を分離し、水層をｐＨ４に酸性化した。水層を酢酸エチル中に抽出した。抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、１−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）イソキノリン−７−カルボン酸を得た。
【０５１２】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中の１−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）イソキノリン−７−カルボン酸（２４．７ｍｇ、０．１０１ｍｍｏｌ）および２’−ｔｅｒｔ−ブチル−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン塩酸塩（３３．９ｍｇ、０．１０１ｍｍｏｌ）の懸濁液に、トリエチルアミン（０．０７ｍＬ、０．５０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。次いで、１−プロパンホスホン酸環状無水物（０．０７ｍＬ、０．１２ｍｍｏｌ、酢酸エチル中５０％溶液）を添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧下で除去し、残留物を逆相ＨＰＬＣによって精製して、２’−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（１−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノ）イソキノリン−７−カルボニル）−４’，６’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，５’−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン］−７’（２’Ｈ）−オン（６．１ｍｇ、２４％）を得た。+ESI (m+H) 489.3; HPLC保持時間2.94分(方法B)。
【０５１３】
以下の表６に収載されている化合物は、市販されている適切な出発材料を使用する実施例１〜３の化合物の合成について上述したものに類似する手順を使用して調製したか、当業者によく知られている調製を使用して調製したか、または他の中間体について上述した経路に類似する様式で調製した。以下に収載されている化合物は、遊離塩基として最初に単離されたものであり、試験のために薬学的に許容できる塩に変換され得る。
【０５１４】
【表６】
0005647356.tif 000185
【０５１５】
薬理学的データ
生物学的プロトコール
動物、特に哺乳動物（例えばヒト）の疾患（本明細書において詳述されているもの等）の治療における本発明の化合物の有用性は、以下に記述するインビトロおよびインビボアッセイを含む当業者に知られている従来のアッセイにおいて、その活性により実証され得る。そのようなアッセイは、本発明の化合物の活性を他の知られている化合物の活性と比較することができる手段も提供する。
【０５１６】
ＡＣＣ１およびＡＣＣ２の活性の直接阻害
本発明の化合物のＡＣＣ阻害活性は、標準的な手順に基づく方法によって実証した。例えば、式（１）の化合物についてのＡＣＣ活性の直接阻害は、組換えヒトＡＣＣ１（ｒｈＡＣＣ１）および組換えヒトＡＣＣ２（ｒｈＡＣＣ２）の調製を使用して決定した。アッセイにおいて使用され得る組換えヒトＡＣＣ１およびＡＣＣ２の代表的な配列を、それぞれ図１（配列番号１）および図２（配列番号２）において提供する。
【０５１７】
［１］ｒｈＡＣＣ１の調製。完全長ヒトＡＣＣ１  ｃＤＮＡを含有する組換えバキュロウイルスに感染している２リットルのＳＦ９細胞を、氷冷細胞溶解緩衝液（２５ｍＭトリス、ｐＨ７．５；１５０ｍＭ  ＮａＣｌ；１０％グリセロール；５ｍＭイミダゾール（ＥＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ、ＮＪ）；２ｍＭ  ＴＣＥＰ（ＢｉｏＶｅｃｔｒａ；Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｔｏｗｎ、Ｃａｎａｄａ）；ベンゾナーゼヌクレアーゼ（１００００Ｕ／１００ｇ細胞ペースト；Ｎｏｖａｇｅｎ；Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）；ＥＤＴＡを含まないプロテアーゼ阻害剤カクテル（１ｔａｂ／５０ｍＬ；Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ；Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に懸濁した。細胞を３サイクルの凍結解凍によって溶解させ、４０，０００×ｇで４０分間（４℃）遠心分離した。上清をＨｉｓトラップＦＦ粗製カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）上に直接ロードし、最大０．５Ｍのイミダゾール勾配で２０カラム体積（ＣＶ）にわたって溶離した。ＡＣＣ１含有画分をプールし、２５ｍＭトリス、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＴＣＥＰ、１０％グリセロールで１：５希釈し、ＣａｐｔｏＱ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）カラム上に直接ロードし、最大１ＭのＮａＣｌ勾配で２０ＣＶにわたって溶離した。精製されたＡＣＣ１から、４℃で１４時間のラムダホスファターゼ（１００Ｕ／１０μＭ標的タンパク質；Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ；Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）とのインキュベーションによってリン酸基を除去し、オカダ酸を添加して（１μＭの最終濃度；Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、ホスファターゼを阻害した。精製されたＡＣＣ１を、４℃で６時間の透析によって２５ｍＭトリス、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＴＣＥＰ、１０％グリセロール、０．５Ｍ  ＮａＣｌに交換した。アリコートを調製し、−８０℃で凍結させた。
【０５１８】
［２］ｒｈＡＣＣ１阻害の測定。ｈＡＣＣ１は、トランスクリーナーＡＤＰ検出ＦＰアッセイキット（Ｂｅｌｌｂｒｏｏｋ  Ｌａｂｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）を使用するＣｏｓｔａｒ  ３６７６番（Ｃｏｓｔａｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）３８４ウェルプレート中、５０μＭ  ＡＴＰ反応に対する製造業者の推奨条件を使用してアッセイした。アッセイのための最終条件は、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、７．５ｍＭクエン酸三カリウム、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、３０μＭアセチル−ＣｏＡ、５０μＭ  ＡＴＰおよび１０ｍＭ  ＫＨＣＯ３であった。典型的には、１０μｌの反応物を２５℃で１２０分間流し、１０μｌのトランスクリーナー停止および検出緩衝液を添加し、その組合せを室温でさらに１時間インキュベートした。データは、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰジェネラルデュアルミラー、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰフィルター、６８８発光（Ｓ）および６８８（Ｐ）発光フィルターを使用し、エンビジョン蛍光リーダー（Ｐｅｒｋｉｎｅｌｍｅｒ）で獲得した。
【０５１９】
［３］ｒｈＡＣＣ２の調製。ヒトＡＣＣ２阻害は、精製された組換えヒトＡＣＣ２（ｈｒＡＣＣ２）を使用して測定した。手短に述べると、ＡＣＣ２の完全長サイトマックスクローンを、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄから購入し、配列を決定し、ＰＣＤＮＡ５  ＦＲＴ  ＴＯ−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）にサブクローニングした。ＡＣＣ２をテトラサイクリン誘導によってＣＨＯ細胞内に発現させ、１μｇ／ｍＬのテトラサイクリンとともにグルタミン、ビオチン、ハイグロマイシンおよびブラストサイジンを含む５リットルのＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中に収穫した。次いで、ＡＣＣ２を含有する馴化培地をソフトリンクソフトリリースアビジンカラム（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）に適用し、５ｍＭビオチンで溶離した。４ｍｇのＡＣＣ２を０．０５ｍｇ／ｍＬ（Ａ２８０によって決定）の濃度で溶離し、推定純度は９５％（Ａ２８０によって決定）であった。精製されたＡＣＣ２を、５０ｍＭトリス、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＤＴＴ、２ｍＭ  ＥＤＴＡおよび５％グリセロール中で透析した。プールしたタンパク質を凍結させ、−８０℃で貯蔵したが、解凍時に活性の損失はなかった。ＡＣＣ２活性の測定およびＡＣＣ２阻害の評価のために、試験化合物をＤＭＳＯに溶解し、ｒｈＡＣＣ２酵素に１％の最終ＤＭＳＯ濃度を有する５×ストックとして添加した。
【０５２０】
［４］ヒトＡＣＣ２阻害の測定。ｈＡＣＣ２は、トランスクリーナーＡＤＰ検出ＦＰアッセイキット（Ｂｅｌｌｂｒｏｏｋ  Ｌａｂｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）を使用するＣｏｓｔａｒ  ３６７６番（Ｃｏｓｔａｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）３８４ウェルプレート中、５０ｕＭ  ＡＴＰ反応に対する製造業者の推奨条件を使用してアッセイした。アッセイのための最終条件は、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭクエン酸三カリウム、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、３０μＭアセチル−ＣｏＡ、５０μＭ  ＡＴＰおよび８ｍＭ  ＫＨＣＯ３であった。典型的には、１０μｌの反応物を２５℃で５０分間流し、１０μｌのトランスクリーナー停止および検出緩衝液を添加し、その組合せを室温でさらに１時間インキュベートした。データは、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰジェネラルデュアルミラー、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰフィルター、６８８発光（Ｓ）および６８８（Ｐ）発光フィルターを使用し、エンビジョン蛍光リーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で獲得した。
【０５２１】
上述した組換えｈＡＣＣ１および組換えｈＡＣＣ２トランスクリーナーアッセイを使用した結果を、上記の実施例において例示した式（Ｉ）の化合物についての以下の表にまとめる。
【０５２２】
【表７−１】
0005647356.tif 000186
【０５２３】
【表７−２】
0005647356.tif 000187
【０５２４】
【表７−３】
0005647356.tif 000188
【０５２５】
【表７−４】
0005647356.tif 000189
【０５２６】
配列表１は、トランスクリーナーインビトロアッセイにおいて用いられ得る組換えヒトＡＣＣ１（配列番号１）の配列を提供する。
【０５２７】
配列表２は、トランスクリーナーインビトロアッセイにおいて用いられ得る組換えヒトＡＣＣ２（配列番号２）の配列を提供する。
【０５２８】
実験動物におけるＡＣＣ阻害の急性インビボ評価
本発明の化合物のＡＣＣ阻害活性は、治療されている動物由来の肝臓および筋肉組織におけるマロニル−ＣｏＡレベルを減少させる該化合物の能力の評定によってインビボで確認することができる。
【０５２９】
実験動物におけるマロニル−ＣｏＡ生成阻害の測定は、以下の方法論を用いて決定することができる。
【０５３０】
この方法において、標準的な食餌および水を自由にさせておいた雄スプラーグドーリーラット（２２５〜２７５ｇ）を、研究前に無作為化した。実験の開始前１８時間、動物には給餌するか絶食させるかのいずれかとした。明サイクルが始まって２時間後、動物に、５ｍＬ／ｋｇの体積の（０．５％メチルセルロース；ビヒクル）または適切な化合物（ビヒクル中に調製したもの）を経口投薬した。ベースライン組織マロニル−ＣｏＡレベルを決定するために給餌したビヒクル対照群を含め、一方、マロニル−ＣｏＡレベルに対して絶食が有する影響を決定するために絶食した動物を含めた。化合物投与の１時間後、動物をＣＯ２で窒息させ、組織を取り出した。具体的には、心穿刺によって血液を収集し、ＥＤＴＡを含有するＢＤマイクロテイナーチューブ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＮＪ）に入れ、混合し、氷上に置いた。血漿を使用して、薬物暴露を決定した。肝臓および大腿四頭筋を取り出し、直ちに凍結固定し、ホイルに包み、液体窒素中で貯蔵した。
【０５３１】
組織を液体Ｎ２下で微粉化して、試料採取の均一性を確実にした。ファストプレップＦＰ１２０（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、速度＝５．５；４５秒間）中、５体積の溶解マトリックスＡ中１０％トリカルボン酸（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、ＰＮ６９１０）で、マロニル−ＣｏＡを組織（１５０〜２００ｍｇ）から抽出した。マロニル−ＣｏＡを含有する上清を、１５０００×ｇで３０分間の遠心分離（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心分離機５４０２）後に細胞残屑から除去した。分析が完了するまで、試料を−８０℃で安定に凍結させた。
【０５３２】
肝臓および筋肉組織中のマロニルＣｏＡレベルの分析は、下記の方法論を使用して評定することができる。
【０５３３】
該方法では、下記の材料を利用する：Ｉｓｏｔｅｃ（Ｍｉａｍｉｓｂｕｒｇ、ＯＨ、ＵＳＡ）から購入したマロニル−ＣｏＡテトラリチウム塩およびマロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡトリリチウム塩、過塩素酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号４１０２４１）、トリクロロ酢酸（ＡＣＲＯＳ、カタログ番号４２１４５）、リン酸（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、カタログ番号０２６０−０１）、ギ酸アンモニウム（Ｆｌｕｋａ、カタログ番号１７８４３）、メタノール（ＨＰＬＣグレード、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、カタログ番号９０９３−３３）、ならびに水（ＨＰＬＣグレード、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、４２１８−０３）を使用して、必要な移動相を作製した。ストラータＸオンライン固相抽出カラム、２５μｍ、２０ｍｍ×２．０ｍｍ内径（カタログ番号００Ｍ−Ｓ０３３−Ｂ０−ＣＢ）は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）から入手した。サンファイアＣ１８逆相カラム、３．５μｍ、１００ｍｍ×３．０ｍｍ内径（カタログ番号１８６００２５４３）は、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。
【０５３４】
この方法は、下記の設備を利用して実施することができる。Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００バイナリポンプ、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００クォータナリーポンプおよび２つのＶａｌｃｏケミナート６ポート２ポジションバルブを使用する二次元クロマトグラフィー。試料を、１０℃に維持されたペルチェ冷却スタックおよび２０μＬのサンプリングループ付きのＬＥＡＰ  ＨＴＣ  ＰＡＬオートサンプラーによって導入した。オートサンプラー用の針洗浄液は、洗浄１では水中１０％トリクロロ酢酸（ｗ／ｖ）、および洗浄２では９０：１０  メタノール：水である。ＭｉｃｒｏＴｅｃｈ  ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃマイクロＬＣカラムオーブンを使用して、分析カラム（サンファイア）を３５℃に維持した。溶離液を、ターボイオンスプレー付きのＡＢＩ  Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ３０００三連四重極質量分析計で分析した。
【０５３５】
二次元クロマトグラフィーは、オンライン固相抽出および逆相クロマトグラフィーのための独特な勾配溶離条件を使用し並行して実施した。該方法の一般的設計は、試料クリーンアップおよび関心対象の分析物の捕捉に第一の次元を利用し、続いて第一の次元から第二の次元への溶離に両次元の一時的な連結を利用するようなものであった。次元は、その後連結を解かれて、定量化のために第二の次元からの分析物の勾配溶離を可能にし、一方で、同時に第一の次元には配列中の次の試料のための準備をさせた。両次元が一時的に一緒に連結された場合、第一の次元における移動相の流れは分析物溶離のために第二の次元に反転し、最適なピーク幅、ピーク形状および溶離時間を可能にした。
【０５３６】
ＨＰＬＣシステムの第一の次元は、ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘストラータＸオンライン固相抽出カラムを利用し、移動相は、溶媒Ａについては１００ｍＭ過塩素酸ナトリウム／０．１％（ｖ／ｖ）リン酸、溶媒Ｂについてはメタノールからなるものであった。
【０５３７】
ＨＰＬＣシステムの第二の次元は、ＷａｔｅｒｓサンファイアＣ１８逆相カラムを利用し、移動相は、溶媒Ａについては１００ｍＭギ酸アンモニウム、溶媒Ｂについてはメタノールからなるものであった。勾配の初期条件を２分間維持し、この時間の間に、分析物を分析カラムに移した。初期条件は、分析物を分析的に保持しながら、オンラインＳＰＥカラムから溶離するために十分な強度であることが重要であった。その後、勾配が４．５分で７４．５％Ａに直線的に上昇した後、洗浄および再平衡ステップを行った。
【０５３８】
ＨＰＬＣと連結した場合の質量分析は、複雑なマトリックス中の分析物を定量的に測定するための高選択的かつ高感度な方法となり得るが、依然として干渉および抑制を受ける。二次元ＨＰＬＣを質量分析計と連結することにより、これらの干渉は大幅に減少された。加えて、三連四重極質量分析計の多重反応モニタリング（ＭＲＭ）特色を利用することにより、シグナル対ノイズ比は大幅に改良された。
【０５３９】
このアッセイに、質量分析計は、２２５０Ｖのターボイオンスプレー電圧を有する陽イオンモードで操作した。霧化ガスを４５０℃に加熱した。クラスタ分離電位（ＤＰ）、集束電位（ＦＰ）および衝突エネルギー（ＣＥ）を、それぞれ６０、３４０および４２Ｖに設定した。四重極１（Ｑ１）解像度を単位解像度に設定し、四重極３（Ｑ３）を低に設定した。ＣＡＤガスを８に設定した。モニターされたＭＲＭ遷移は、マロニルＣｏＡでは８５４．１→３４７．０ｍ／ｚ（Ｌ．Ｇａｏら（２００７）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  ８５３、３０３〜３１３）であり、マロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡでは８５７．１→３５０．０ｍ／ｚ、滞留時間は２００ｍｓであった。分析物の予測される溶離時間付近で溶離液を質量分析計のほうへ方向転換させ、そうでない場合は廃棄に回して、ソースを保存し計装のロバスト性を改良するのを助けた。得られたクロマトグラムを、アナリストソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して積分した。マロニルＣｏＡについての組織中濃度を、水中トリクロロ酢酸の１０％溶液において調製した標準曲線から算出した。
【０５４０】
組織抽出物中のマロニル−ＣｏＡの定量化のための標準曲線を含む試料を、１０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）中、０．０１から１ｐｍｏｌ／μＬまでの範囲で調製した。マロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ（０．４ｐｍｏｌ／μＬの最終濃度）を各標準曲線成分および試料に内部標準として添加した。
【０５４１】
６つのイントラアッセイ品質の対照を調製し、３つは絶食した動物から調製したプール抽出物由来のもの、３つは給餌した動物から作製したプール由来のものであった。これらを、０、０．１または０．３ｐｍｏｌ／μＬの１２Ｃ−マロニル−ＣｏＡおよびマロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ（０．４ｐｍｏｌ／μＬ）を混ぜた独立の試料として流した。各イントラアッセイ品質の対照は８５％の水性組織抽出物を含有しており、残りの部分は内部標準（０．４ｐｍｏｌ／μＬ）および１２Ｃ−マロニル−ＣｏＡが寄与したものであった。各実行にインターアッセイ対照が含まれており、該対照は、大腿四頭筋の１つの絶食した試料および１つの給餌したプール試料ならびに／または肝臓の１つの絶食した試料および１つの給餌したプール試料からなる。そのような対照には、いずれもマロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ（０．４ｐｍｏｌ／μＬ）が混ぜられている。
【０５４２】
本明細書において列挙されている、交付済み特許、特許出願および学術論文を含むがこれらに限定されないすべての刊行物は、参照によりその全体がそれぞれ本明細書に組み込まれる。
【０５４３】
開示されている実施形態を参照して本発明を上述したが、当業者であれば、詳述されている特定の実験は本発明の例証にすぎないことを容易に理解するであろう。本発明の趣旨から逸脱することなく、種々の修正が為され得ることを理解すべきである。したがって、本発明は、下記の請求項によってのみ限定される。
【配列表】
0005647356000001.app