(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症性疾患の治療および／または予防用の医薬の製造における、ＩＬ−１レセプター拮抗剤（ＩＬ−１Ｒａ）との、ＩＬ−１８結合性タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）の使用。
【請求項２】
ＩＬ−１ＲａがヒトＩＬ−１Ｒａの組換え型であるアナキンラである請求項１記載の使用。
【請求項３】
ＩＬ−１８ＢＰがペグ化されている請求項１または２記載の使用。
【請求項４】
ＩＬ−１８結合性タンパク質が、免疫グロブリンに融合させたＩＬ−１８ＢＰを含有する融合タンパク質であり、該融合タンパク質がＩＬ−１８に結合する請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
融合タンパク質が、免疫グロブリンの定常領域を含有する請求項４記載の使用。
【請求項６】
免疫グロブリンがＩｇＧ１またはＩｇＧ２アイソタイプである請求項５記載の使用。
【請求項７】
ＩＬ−１８ＢＰおよびＩＬ−１Ｒａを、同時に、または逐次使用する医薬の製造のための請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
ＩＬ−１８ＢＰを、約０．０００１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重または約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重または約０．１〜３ｍｇ／ｋｇ体重または約１〜２ｍｇ／ｋｇ体重の量で使用する医薬の製造のための請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
ＩＬ−１８ＢＰを、約０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重または１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重または約１０〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の量で使用する医薬の製造のための請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
ＩＬ−１Ｒａを、０．０００１〜１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重または約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重または約０．１〜３ｍｇ／ｋｇ体重または約０．５〜２ｍｇ／ｋｇ体重または約１ｍｇ／ｋｇ体重から選択される量で使用する医薬の製造のための請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
ＩＬ−１Ｒａを約１ｍｇ／ｋｇ体重で使用する医薬の製造のための請求項１０記載の使用。
【請求項１２】
ＩＬ−１８ＢＰが皮下投与のために使用される医薬の製造のための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
ＩＬ−１８ＢＰが筋肉内投与のために使用される医薬の製造のための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
ＩＬ−１Ｒａが皮下投与のために使用される医薬の製造のための請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
ＩＬ−１Ｒａが筋肉内投与のために使用される医薬の製造のための請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
ＩＬ−１８ＢＰが毎日使用される医薬の製造のための請求項１〜１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】
ＩＬ−１８ＢＰが１週間に３回使用される医薬の製造のための請求項１〜１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１８】
ＩＬ−１８ＢＰが１週間に１回使用される医薬の製造のための請求項１〜１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１９】
ＩＬ−１Ｒａが毎日使用される医薬の製造のための請求項１〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２０】
ＩＬ−１Ｒａが１週間に３回使用される医薬の製造のための請求項１〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２１】
ＩＬ−１Ｒａが１週間に１回使用される医薬の製造のための請求項１〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２２】
炎症性疾患の治療および／または予防用の医薬の製造における、ＩＬ−１Ｒａ、またはＩＬ−１Ｒａのコード配列を含む発現ベクター、およびＩＬ−１８ＢＰ、またはＩＬ−１８ＢＰのコード配列を含む発現ベクターの使用。
【請求項２３】
遺伝子治療のための請求項２２記載の使用。
【請求項２４】
炎症性疾患が、関節リウマチ、アレルギー、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＩＢＤ、敗血症性ショックおよび変形性関節症から選択される請求項１〜２３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２５】
炎症性疾患が関節リウマチである請求項２４記載の使用。
【請求項２６】
治療有効量の、
（ｉ）ＩＬ−１Ｒａ、ＩＬ−１Ｒａのコード配列を含む発現ベクターまたはＩＬ−１Ｒａを産生するように遺伝子操作された細胞、および
（ii）ＩＬ−１８ＢＰ、ＩＬ−１８ＢＰのコード配列を含む発現ベクターまたはＩＬ−１８ＢＰを産生するように遺伝子操作された細胞
を含有する医薬組成物。
【請求項２７】
ＩＬ−１ＲａがヒトＩＬ−１Ｒａの組換え型であるアナキンラである請求項２６記載の医薬組成物。
【請求項２８】
炎症性疾患の治療および／または予防のための請求項２６または２７記載の医薬組成物。
【請求項２９】
炎症性疾患が、関節リウマチ、アレルギー、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＩＢＤ、敗血症性ショックおよび変形性関節症から選択される請求項２８記載の医薬組成物。
【請求項３０】
炎症性疾患が関節リウマチである請求項２９記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症性疾患（たとえば関節リウマチ）におけるインターロイキン−１拮抗剤／阻害剤およびインターロイキン−１８結合性タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）の併用に関する。
【背景技術】
【０００２】
自己免疫疾患および炎症性疾患は、いくつかの炎症誘発性（pro-inflammatory）サイトカイン（ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３およびインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）が挙げられる）によって媒介される。これらのサイトカインの１種類以上をブロックすることが、これらの疾患の経過および症状に対して有意な効果を有し得る。
【０００３】
関節リウマチは、関節（通常、手および足のものを含む）が炎症を起こし、関節の腫脹、痛み、そして多くの場合、破壊をもたらす炎症性の関節炎である。世界的には、関節リウマチは、民族や出生国とは無関係に、人口の約１％に発症しており、女性は男性よりも２〜３倍高い頻度で罹患している。通常、関節リウマチは、２５〜５０歳の年齢で最初に現れるが、あらゆる年齢で起こり得る。関節リウマチは、小児にも起こり得、この場合、該疾患は、若年性関節リウマチと呼ばれ、症状および予後は、いくぶん異なる。
【０００４】
関節リウマチは、自己免疫疾患と考えられている。免疫系の構成成分が関節の内側を覆う軟組織を攻撃し、身体の多くの他の部分（たとえば、血管および肺など）の結合組織をも攻撃し得る。最終的に、関節の軟骨、骨および靱帯が破壊され、関節において変形、不安定性および瘢痕形成（scarring）が引き起こされる。関節は、非常に変動的な速度で崩壊する。
【０００５】
いったん自己反応性Ｔ細胞が、外来抗原との接触により「抗原刺激を受ける（primed）」と、これらは、ＴＮＦ、インターロイキン−１（ＩＬ−１）および他の免疫細胞を刺激して関節を攻撃させる他の物質を含む数種類のサイトカインを放出する。
【０００６】
一般に炎症における、特にＲＡにおけるＩＬ−１の中心的な役割により、現在、ＩＬ−１に対する拮抗薬の開発への取り組みに投資されている。
【０００７】
ＩＬ−１レセプター拮抗剤（ＩＬ−１Ｒａ）は、ＩＬ−１分子の天然に存在する可溶性形態であり、これは、両ＩＬ−１レセプターに結合するが、生物学的効果を誘導しない。したがって、両ＩＬ−１バリアントの天然の活性と拮抗する。ＩＬ−１Ｒａは、インビボでのＩＬ−１活性の天然調節因子としての機能を果たすと考えられている。ＩＬ−１レセプター拮抗剤および補体レセプター拮抗剤の概説については、Mantovaniら（１８）を参照のこと。
【０００８】
Ｋｉｎｅｒｅｔ−アナキンラ（anakinra）は、ヒトインターロイキン−１レセプター拮抗剤（ＩＬ−１Ｒａ）の組換え型である。Ｋｉｎｅｒｅｔは、関節リウマチ（ＲＡ）の治療に承認されている。これは、炎症誘発性サイトカインＩＬ−１αおよびβ（これらは、炎症部位で免疫細胞および局所組織細胞によって放出される）の競合的阻害剤として作用する。Ｋｉｎｅｒｅｔは、炎症プロセスに起因する軟骨および骨に対する損傷を予防することが示された臨床試験に基づいて、関節リウマチの治療に承認された。
【０００９】
ＩＬ−１レセプターはクローン化されており、ＩＬ−１の拮抗剤、すなわち可溶性ＩＬ−１レセプター１および２型として、関節リウマチ、アレルギー、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＩＢＤ、敗血症性ショック、変形性関節症および他の炎症性疾患の治療の可能性について開発中である（Biotechnology 編集 Rehm, Reed, Puhler および Stadler 第５ａ巻、第ｌ５０頁）。
【００１０】
インターロイキン−１８結合性タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）は、ＩＬ−１８の特異的阻害剤（１６）であり、関節炎と関連し（１９）、多くの他の炎症性および／または自己免疫疾患と関連する（２０、２１、２２）。ＩＬ−１８ＢＰは、いくつかの実験的自己免疫疾患の重篤度を低減した（１９）。したがって、ＩＬ１８ＢＰは、天然の抗炎症性および免疫抑制性分子の機能を果たし、炎症中の高ＩＬ１８レベルの効果を中和すると考えられている。ＩＬ−１８ＢＰは、ＩＦＮ−γによって、ＩＬ−１８によるＩＦＮ−γの誘導を調節する負のフィードバックループの一部として特異的に誘導される。
【発明の開示】
【００１１】
本発明は、炎症性疾患、たとえば、アレルギー、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＩＢＤ、敗血症性ショック、変形性関節症および、好ましくは関節リウマチなどの治療および／または予防用の医薬の製造のための、ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤との、ＩＬ−１８結合性タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）、またはそのムテイン、機能性誘導体、画分、円順列変異誘導体、融合タンパク質、アイソフォームもしくは塩の使用に関する。
【００１２】
より詳しくは、ＩＬ−１の拮抗剤／阻害剤は、カスパーゼ−１（ＩＣＥ）阻害剤、ＩＬ−１に対する抗体、任意のＩＬ−１レセプターサブユニットに対する抗体、ＩＬ−１シグナル伝達経路の阻害剤、ＩＬ−１と競合し、かつＩＬ−１レセプターをブロックするＩＬ−１の拮抗剤、ＩＬ−１レセプター拮抗剤（ＩＬ−１Ｒａ）およびＩＬ−１結合性タンパク質、またはそのアイソフォーム、ムテイン、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分もしくは円順列変異誘導体、またはアンチセンスｍＲＮＡ、可溶性ＩＬ−１レセプター、およびＩＬ−１Ｒ抗体から選択される。
【００１３】
本発明の好ましい実施態様において、ＩＬ−１拮抗剤はＩＬ−１レセプター拮抗剤（ＩＬ−１Ｒａ）であり、より好ましくは、Ｋｉｎｅｒｅｔである。
【００１４】
本発明の別の実施態様において、ＩＬ−１８ＢＰはペグ化されており、免疫グロブリンの全部または一部に、好ましくは免疫グロブリンの定常領域に融合させており、ここで、該融合タンパク質は、なおＩＬ−１８に結合することができる。より具体的には、免疫グロブリンは、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２アイソタイプであり得る。
【００１５】
ある側面において、本発明は、ＩＬ−１８ＢＰとＩＬ−１拮抗剤／阻害剤の同時または逐次使用に関する。
【００１６】
別の側面において、本発明は、約０．０００１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重または約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重または約０．１〜３ｍｇ／ｋｇ体重または約１〜２ｍｇ／ｋｇ体重の量でのＩＬ−１８ＢＰの使用に関する。好ましくは、本発明は、約０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重または１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重または約１０〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の量でのＩＬ−１８ＢＰの使用に関する。
【００１７】
ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤は、本発明にしたがって、０．０００１〜１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重（or body weight）または約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重または約０．１〜３ｍｇ／ｋｇ体重または約０．５〜２ｍｇ／ｋｇ体重または約１ｍｇ／ｋｇ体重から選択される量で、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ体重で使用する。
【００１８】
本発明の一実施態様によれば、ＩＬ−１８ＢＰおよび／またはＩＬ−１拮抗剤／阻害剤は、皮下投与、筋肉内投与のために、毎日、１週間に３回および／または１週間に１回使用され得る。
【００１９】
本発明は、炎症性疾患、たとえば、アレルギー、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＩＢＤ、敗血症性ショック、変形性関節症および、好ましくは関節リウマチなどの治療および／または予防用の医薬の製造のための、ＩＬ−１の拮抗剤／阻害剤、またはＩＬ−１の拮抗剤／阻害剤のコード配列を含む発現ベクター、およびＩＬ−１８ＢＰ、またはＩＬ−１８ＢＰのコード配列を含む発現ベクターの使用を提供する。かかる医薬は、たとえば、遺伝子治療に使用され得る。
【００２０】
加えて、本発明は、炎症性疾患、たとえば、アレルギー、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＩＢＤ、敗血症性ショック、変形性関節症および、好ましくは関節リウマチなどの治療および／または予防用の医薬の製造のための、ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤または細胞内でのＩＬ−１拮抗剤／阻害剤の内生的産生を誘導または増強するためのベクター、およびＩＬ−１８ＢＰまたはＩＬ−１８ＢＰの内生的産生を誘導または増強するためのベクターの使用を提供する。
【００２１】
本発明の一実施態様によれば、炎症性疾患、たとえば、アレルギー、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＩＢＤ、敗血症性ショック、変形性関節症および、好ましくは関節リウマチなどの治療および／または予防用の医薬の製造のための、ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤、またはＩＬ−１拮抗剤／阻害剤を産生するように遺伝子操作された細胞、およびＩＬ−１８ＢＰ、またはＩＬ−１８ＢＰを産生するように遺伝子操作された細胞の使用が提供される。
【００２２】
加えて、本発明は、治療有効量のＩＬ−１拮抗剤／阻害剤、好ましくはＩＬ−１Ｒａ（たとえば、Kineretなど）、またはそのムテイン、機能性誘導体、画分、円順列変異誘導体、融合タンパク質、アイソフォームもしくは塩、および治療有効量のＩＬ−１８ＢＰ、またはそのムテイン、機能性誘導体、画分、円順列変異誘導体、融合タンパク質、アイソフォームもしくは塩を含有する医薬組成物を提供する。
【００２３】
また、本発明によれば、治療有効量のＩＬ−１の拮抗剤／阻害剤、またはＩＬ−１の拮抗剤／阻害剤のコード配列を含む発現ベクターと、ＩＬ−１８ＢＰ、またはＩＬ−１８ＢＰのコード配列を含む発現ベクターとを含有する医薬組成物が提供される。
【００２４】
本発明はまた、治療有効量のＩＬ−１拮抗剤／阻害剤または細胞内でのＩＬ−１拮抗剤／阻害剤の内生的産生を誘導および／または増強するためのベクターと、ＩＬ−１８ＢＰまたはＩＬ−１８ＢＰの内生的産生を誘導および／または増強するためのベクターとを含有する医薬組成物を提供する。
【００２５】
別の実施態様において、本発明は、治療有効量のＩＬ−１拮抗剤／阻害剤、またはＩＬ−１拮抗剤／阻害剤を産生するように遺伝子操作された細胞と、ＩＬ−１８ＢＰ、またはＩＬ−１８ＢＰを産生するように遺伝子操作された細胞とを含有する医薬組成物を提供する。
【００２６】
加えて、本発明は、阻害有効量のＩＬ−１８ＢＰ、またはそのムテイン、機能性誘導体、画分、円順列変異誘導体、融合タンパク質、アイソフォームもしくは塩、およびＩＬ−１拮抗剤／阻害剤、またはそのムテイン、機能性誘導体、画分、円順列変異誘導体、融合タンパク質、アイソフォームもしくは塩を、その必要性がある宿主に投与することを含む、炎症性疾患、たとえば、アレルギー、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＩＢＤ、敗血症性ショック、変形性関節症および、好ましくは関節リウマチなどの治療および／または予防方法を提供する。
【００２７】
本発明によれば、ＩＬ−１の拮抗剤／阻害剤は、たとえば、カスパーゼ−１（ＩＣＥ）阻害剤、ＩＬ−１に対する抗体、任意のＩＬ−１レセプターサブユニットに対する抗体、ＩＬ−１シグナル伝達経路の阻害剤、ＩＬ−１と競合し、かつＩＬ−１レセプターをブロックするＩＬ−１の拮抗剤（ＩＬ−１Ｒａ、好ましくはＫｉｎｅｒｅｔなど）、または野生型ＩＬ−１結合性タンパク質と本質的に同じ活性を有するそのアイソフォーム、ムテイン、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分もしくは円順列変異誘導体であり得る。他のＩＬ−１阻害剤は、たとえば、ＩＬ−１アンチセンスｍＲＮＡ、可溶性ＩＬ−１レセプターおよびＩＬ−１抗体であり得る。
【００２８】
本発明によれば、提供する方法におけるＩＬ−１８ＢＰは、ペグ化されていてもよく、および／または別のタンパク質、たとえば免疫グロブリンに、好ましくは、免疫グロブリンのＩｇＧ１アイソタイプまたはその断片、たとえば定常部分に融合させてもよい。
【００２９】
加えて、本発明の治療方法は、ＩＬ−１８ＢＰとＩＬ−１拮抗剤／阻害剤の同時または逐次の共投与を想定する。
【００３０】
より具体的には、本発明の方法は、約０．０００１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重または約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重または約０．１〜３ｍｇ／ｋｇ体重または約１〜２ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与されるＩＬ−１８ＢＰを提供する。
【００３１】
また、ＩＬ−１８ＢＰは、約０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重または１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重または約１０〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与され得る。
【００３２】
本発明の方法によれば、ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤は、０．０００１〜１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重（or body weight）または約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重または約０．１〜３ｍｇ／ｋｇ体重または約０．５〜２ｍｇ／ｋｇ体重または約１ｍｇ／ｋｇ体重から選択される量で投与され得、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ体重で投与され得る。
【００３３】
本発明のある側面において、ＩＬ−１８ＢＰおよび／またはＩＬ−１拮抗剤／阻害剤は、毎日、１週間に３回および／または１週間に１回、皮下投与および／または筋肉内投与される。
【００３４】
加えて、本発明は、阻害有効量のＩＬ−１拮抗剤／阻害剤、またはＩＬ−１の拮抗剤／阻害剤のコード配列を含む発現ベクター、およびＩＬ−１８ＢＰ、またはＩＬ−１８ＢＰのコード配列を含む発現ベクターを、その必要性がある宿主に投与することを含む、炎症性疾患、たとえば、アレルギー、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＩＢＤ、敗血症性ショック、変形性関節症および、好ましくは関節リウマチなどの治療および／または予防方法を提供する。本発明による方法の１つは、たとえば、遺伝子治療であり得る。
【００３５】
別の実施態様において、本発明は、阻害有効量のＩＬ−１拮抗剤／阻害剤または細胞内でのＩＬ−１拮抗剤／阻害剤の内生的産生を誘導および／または増強するためのベクター、ならびにＩＬ−１８ＢＰまたはＩＬ−１８ＢＰの内生的産生を誘導および／または増強するためのベクターを、その必要性がある宿主に投与することを含む、炎症性疾患、たとえば、アレルギー、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＩＢＤ、敗血症性ショック、変形性関節症および、好ましくは関節リウマチなどの治療および／または予防方法を提供する。
【００３６】
また、本発明は、阻害有効量のＩＬ−１拮抗剤／阻害剤、またはＩＬ−１拮抗剤／阻害剤を産生するように遺伝子操作された細胞、およびＩＬ−１８ＢＰ、またはＩＬ−１８ＢＰを産生するように遺伝子操作された細胞を、その必要性がある宿主に投与することを含む、炎症性疾患、たとえば、アレルギー、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＩＢＤ、敗血症性ショック、変形性関節症および、好ましくは関節リウマチなどの治療および／または予防方法を提供する。
【００３７】
本発明を、添付の図面を参照しながら、単に例示のために本明細書において記載する。次に、詳細な図面に特に関連して、示した特定の内容は、例示のため、および本発明の好ましい実施態様の実例の検討を目的とするにすぎず、本発明の原理および概念的側面の最も有用かつ容易に理解される記載と考えられるものを提供する理由で示したことを強調する。これに関連し、本発明の構造的詳細を、本発明の基本的な理解に必要とされる以上に詳細に示す試みはしておらず、本記載内容は、図面と合わせると、本発明のいくつかの態様がどのようにして実際に具現化され得るかが当業者に明らかになる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３８】
本発明は、炎症性疾患の治療および／または予防用の医薬の製造のための、ＩＬ−１８結合性タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）、またはそのムテイン、機能性誘導体、活性画分、円順列変異誘導体、融合タンパク質、アイソフォームおよび塩と、ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤との併用に関する。
【００３９】
本発明の少なくとも１つの実施態様を詳細に説明する前に、本発明は、その適用が、以下の説明に記載された詳細事項または実施例に例示された詳細事項に限定されないことを理解されたい。本発明は、他の実施態様が可能であり、または種々の様式で実施もしくは実行することが可能である。また、本明細書で使用する表現および専門用語は、説明を目的としたものにすぎず、限定するものとみなされるべきでないことを理解されたい。
【００４０】
本発明は、ＩＬ−１は、インターフェロンγによるＩＬ−１８ＢＰの誘導に必須であるという、予期しない所見に基づく。かかる驚くべき結果に鑑み、本発明者らは、ＩＬ−１の阻害を標的化する目的の薬物療法を受けている炎症性疾患の患者にＩＬ−１８ＢＰを補給することの必要性を考え出した。
【００４１】
本発明者らは、ＩＦＮ−γの免疫調節活性の多くがＩＬ−１の存在に依存することを見出した。したがって、ＩＦＮ−γ活性の効率的な誘導のためには、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βのいずれかが存在しなくてはならない。本発明者らは、ＩＬ−１ＲａまたはＩＬ−１に対する抗体により内因性ＩＬ−１をブロックすると、ＩＦＮ−γ誘導性の活性の有意な低下がもたらされることを見出した。ＩＦＮ−γの活性のほとんどは炎症誘発性であり、ＩＬ−１Ｒａによるその阻害は、患者にとって有益である。しかしながら、抗炎症性であるＩＦＮ−γの活性が少なくとも１つあり、それはＩＬ−１８ＢＰの誘導である。実際、得られた実験データは、ＩＬ−１Ｒａもまた、ＩＦＮ−γによるＩＬ−１８ＢＰの誘導をブロックしたことを示す。
【００４２】
したがって、本発明は、抗炎症性剤としてのＩＬ−１拮抗剤／阻害剤の有効性を改善するために、ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤での治療にＩＬ−１８ＢＰを補足することに関する。
【００４３】
当初は抗ウイルス剤として見出されたため（１）、ＩＦＮ−γは、多形質発現性の免疫学的機能を有するサイトカインとして特徴付けされた。ＩＦＮ−γは、主に、活性化Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって分泌され、マクロファージ活性化の促進、抗ウイルス免疫および抗菌性免疫の媒介、抗原提示の増強、先天性免疫系の活性化の組織化（orchestrate）、リンパ球／内皮相互作用の調整、Ｔｈｌ細胞媒介性応答に対するＴｈｌ／Ｔｈ２バランスの調節、および細胞増殖およびアポトーシスの制御を行い得る（２，３）。概して、ＩＦＮ−γ作用の機序は、充分確立されている。その細胞表面レセプター、シグナル伝達経路およびＩＦＮ誘導性の遺伝子は、充分特性付けされている（４，５，６）。
【００４４】
ＩＦＮ−γによって誘導される生物学的応答および遺伝子は、ＴＮＦおよびＩＬ−１によって増大する。かかる相乗効果は、たとえば、誘導性ＮＯシンターゼ（７）、ケモカイン（８）接着分子ＥＬＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１（９）、ＩＰ−１０（１０）、ＴＬＲ−２および−４（１１）ならびにＭＨＣクラスＩＩ抗原（１２）の誘導について報告された。相乗効果は、プロモーターレベルで、ＧＡＳ（ＩＦＮ−γ活性化応答エレメント）とＴＮＦ／ＩＬ−１活性化ＮＦ−κＢ応答エレメントとの協同性と関連した（１３）。
【００４５】
ＩＬ−１は、多くの細胞型によって内生的に産生され、媒体（medium）に分泌されるか（ＩＬ−１β）または細胞表面上に存在するか（ＩＬ−１α）のいずれかである。対照的に、ＴＮＦは、免疫細胞によってのみ産生される。その結果、ＩＦＮ−γの生物学的活性を報告する研究の多くは、実際には、ＩＬ−１の存在下で行なわれた。
【００４６】
これまでに、ＩＦＮ−γの生物学的活性を意図的にＩＬ−１の非存在下で測定した実験データは存在しない。本発明者らは、ここに、ＩＦＮ−γのいくつかの生物学的活性を、ＩＬ−１に対する抗体またはＩＬ−１レセプター拮抗剤（ＩＬ−１Ｒａ）（これは、ＩＬ−１レセプターに結合し、ＩＬ−１に応答するのをブロックする）のいずれかの存在下で測定した。意外なことに、ＩＬ−１は、ＩＦＮ−γ作用を相乗的に増大させるだけでなく、ＩＦＮ−γの多くの生物学的活性およびＩＦＮ−γによる遺伝子の誘導に必須であることがわかった。たとえば、本発明者らが、ヒトＷＩＳＨ細胞を用いて水疱性口内炎ウイルスに対するＩＦＮ−γの抗ウイルス性活性を測定したとき、ＩＬ−１の非存在下では、ＩＦＮ−γの抗ウイルス効力は約９０％低下することがわかった（図１）。したがって、ＩＬ−１活性の非存在下では、ＩＦＮ−γの比活性は、大きさが２桁低下し、１０7ＩＵ／ｍｇから１０5ＩＵ／ｍｇとなった。これは、ＩＬ−１の非存在下では、ＩＦＮ−γは、ＩＦＮ−α／β（Ｉ型ＩＮＦ）（その比活性は１０8ＩＵ／ｍｇである）よりも１０００倍効力が小さいことを意味する。対照的に、ＩＬ−１Ｒａの存在下では、Ｉ型ＩＮＦの抗ウイルス性活性の低下は見られなかった。
【００４７】
ＩＦＮ−γがいくつかの遺伝子（ＩＬ−１８ＢＰ、ＩＲＦ−１、ＣＩＩＴＡおよびＨＬＡ−ＤＲが挙げられる）を誘導する能力に対するＩＬ−１Ｒａの効果を、さらに詳しく調べた。この目的のため、特異的プライマーを使用し、β−アクチンとの比較を行なう半定量的ＲＴ−ＰＣＲを用いた。観察された結果（図２）は、ＩＬ−１ＲａによりＩＬ−１活性をブロックすると、ＩＦＮ−γによるこれらの遺伝子の誘導が停止されることを示した。
【００４８】
ＩＦＮ−γ作用のＩＬ−１に対する依存性をさらに確立するため、特異的ＥＬＩＳＡ（１４）によりＩＬ−１８ＢＰの発現を測定した。得られた結果は、ＲＴ−ＰＣＲの結果を確認するものであり、ＩＦＮ−γによるＩＬ−１８ＢＰの誘導は、ＩＬ−１Ｒａの存在下でブロックされた（図３）。
【００４９】
ＩＦＮ−γの活性のほとんどは炎症誘発性であり、ＩＬ−１Ｒａによるその阻害は、患者にとって有益である。しかしながら、抗炎症性であるＩＦＮ−γの活性が少なくとも１つあり、それはＩＬ−１８ＢＰの誘導である。ＩＬ−１Ｒａは、関節リウマチ（ＲＡ）の治療に承認されている（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標））。本発明によれば、ＩＬ−１ＲａはＩＬ−１８ＢＰの誘導を阻害し、ＩＬ−１８の唯一の既知の特異的誘導物質はＩＦＮ−γである（１５）。かかる阻害は、ＩＬ−１８ＢＰが炎症誘発性サイトカインＩＬ−１８の活性を阻害するため問題である（１６）。実際、ＩＬ−１８は、炎症性疾患および自己免疫疾患（関節リウマチなど）において重要な役割を果たす物質である（１７）。したがって、ＩＬ−１Ｒａの投与によるＩＬ−１８発現の阻害は不利益なことである。
【００５０】
本発明は、ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤と有効量のＩＬ−１８との併用療法を提供し、ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤、たとえばＩＬ−１Ｒａを単独療法として炎症性疾患および自己免疫疾患に使用することにおける不利益を克服する。特に、本発明は、炎症性疾患、たとえばＲＡにおけるインターロイキン−１拮抗剤／阻害剤、たとえばＩＬ−１ＲａとＩＬ−１８との併用療法に関する。
【００５１】
用語「ＩＬ−１の阻害剤」は、本発明の文脈において、ＩＬ−１産生および／または作用が、減衰、低下、または一部、実質的にもしくは完全に阻止もしくはブロックされるような様式で、ＩＬ−１産生および／または作用をモジュレートする任意の分子をいう。用語「ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤」は、ＩＬ−１産生の阻害剤およびＩＬ−１作用阻害剤を包含することを意味する。
【００５２】
産生の阻害剤は、ＩＬ−１の合成、プロセッシングまたは成熟に負の影響を与える任意の分子であり得る。本発明が該阻害剤とみなすものは、たとえば、インターロイキンＩＬ−１の遺伝子発現の抑制物質、ＩＬ−１  ｍＲＮＡの転写を低減または抑制するか、または該ｍＲＮＡの分解を導くアンチセンスｍＲＮＡ、正しいフォールディングを障害するか、またはＩＬ−１の分泌を一部もしくは実質的に阻止するタンパク質、ＩＬ−１を分解するプロテアーゼ（いったん合成されると、プロテアーゼの阻害剤がプロＩＬ−１を切断し、成熟ＩＬ−１を生成させる（たとえば、カスパーゼ−１の阻害剤））などであり得る。
【００５３】
ＩＬ−１作用の阻害剤は、たとえば、ＩＬ−１拮抗剤であり得る。拮抗剤は、充分な親和性および特異性を伴ってＩＬ−１分子それ自体に結合するか、またはこれを捕捉（sequester）し、ＩＬ−１またはＩＬ−１のそのリガンド（たとえば、そのレセプターなど）への結合を担うＩＬ結合性部位（１つまたは複数）を一部または実質的に中和し得る。拮抗剤はまた、ＩＬ−１／レセプター結合時に細胞内で活性化されるＩＬ−１シグナル伝達経路を阻害し得る。
【００５４】
ＩＬ−１作用の阻害剤はまた、可溶性ＩＬ−１レセプターもしくは該レセプターを模擬する分子、またはＩＬ−１レセプターブロックする薬剤、またはＩＬ−１抗体（ポリクローナルもしくはモノクローナル抗体など）、またはＩＬ−１のその標的への結合を妨げ、したがって、ＩＬ−１によって媒介される細胞内反応もしくは細胞外反応の誘発を減衰または阻止する任意の他の薬剤もしくは分子であり得る。
【００５５】
ＩＬ−１の拮抗剤／阻害剤は、カスパーゼ−１（ＩＣＥ）阻害剤、ＩＬ−１に対する抗体、任意のＩＬ−１レセプターサブユニットに対する抗体、ＩＬ−１シグナル伝達経路の阻害剤、ＩＬ−１と競合し、かつＩＬ−１レセプターをブロックするＩＬ−１の拮抗剤、ＩＬ−１レセプター拮抗剤（ＩＬ−１Ｒａ）およびＩＬ−１結合性タンパク質、またはそのアイソフォーム、ムテイン、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分もしくは円順列変異誘導体から選択され得る。
【００５６】
好ましい拮抗剤は、本発明によれば、ＩＬ−１Ｒａおよび組換えＩＬ−１Ｒａ、たとえば、Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）、またはそのアイソフォーム、ムテイン、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分もしくは円順列変異誘導体である。
【００５７】
用語「インターロイキン−１８結合性タンパク質」は、ＩＬ−１８ＢＰのムテイン、機能性誘導体、画分、円順列変異誘導体、融合タンパク質、アイソフォームおよびその塩もまた含む。
【００５８】
本明細書で使用する場合、用語「ムテイン」は、ＩＬ−１８ＢＰのアナログまたはウイルス系ＩＬ−１８ＢＰのアナログであって、野生型のＩＬ−１８ＢＰまたはウイルス系ＩＬ−１８ＢＰと比べて得られる生成物の活性を大幅に変化させることなく、天然のＩＬ−１８ＢＰのまたはウイルス系ＩＬ−１８ＢＰのアミノ酸残基の１個以上が、異なるアミノ酸残基で置き換わっているか、もしくは欠損しているか、または１個以上のアミノ酸残基がＩＬ−１８ＢＰまたはウイルス系ＩＬ−１８ＢＰの天然の配列に付加されているものをいう。これらのムテインは、公知の合成により、および／または部位特異的突然変異誘発技術、あるいは、これに適当な任意の他の公知の手法により調製される。
【００５９】
任意のかかるムテインは、好ましくは、ＩＬ−１８ＢＰのものと充分に重複性（duplicative）の、またはウイルス系ＩＬ−１８ＢＰのものと充分に重複性のアミノ酸配列を有する（たとえば、ＩＬ−１８ＢＰと実質的に類似する活性を有する）。ＩＬ−１８ＢＰの活性の１つは、ＩＬ−１８に結合できるその能力である。ムテインがＩＬ−１８に対する実質的な結合活性を有するならば、これは、ＩＬ−１８の精製（たとえば、アフィニティークロマトグラフィーにより）において使用され得、したがって、これは、ＩＬ−１８ＢＰと実質的に類似した活性を有するとみなされ得る。したがって、任意の所与のムテインがＩＬ−１８ＢＰと実質的に同じ活性を有するか否かは、かかるムテインを、たとえば、単純なサンドイッチ競合アッセイに供し、これが、適切に標識されたＩＬ−１８に結合するか否かを調べることを含む常套的な実験法（たとえば、ラジオイムノアッセイまたはＥＬＩＳＡアッセイなど）によって決定され得る。
【００６０】
本発明にしたがって使用され得るＩＬ−１８ＢＰポリペプチドのムテインまたはウイルス系ＩＬ−１８ＢＰのムテイン、またはこれらをコードする核酸としては、本明細書に示した教示および手引きに基づき、必要以上の実験をせずに、当業者により常套的に得られ得る置換ペプチドまたはポリヌクレオチドに実質的に対応する有限な一群の配列が挙げられる。
【００６１】
本発明によるムテインに対する好ましい変化は、「保存的」置換として知られるものである。ＩＬ−１８ＢＰポリペプチドもしくはタンパク質またはウイルス系ＩＬ−１８ＢＰの保存的アミノ酸置換には、充分に類似した物理化学的特性を有し、かつ群の構成要素間での置換が該分子の生物学的機能を保存する一群内の同義アミノ酸が含まれ得る（Grantham, 1974）。特に、挿入または欠失が数個のアミノ酸（たとえば３０個未満、好ましくは１０個未満）のみを伴い、かつ機能的コンホメーションに必須のアミノ酸（たとえば、システイン残基）が除去または置換されない場合、アミノ酸の挿入および欠失もまた、その機能を改変することなく前記規定配列において行なわれ得ることは明白である。かかる欠失および／または挿入によって生じるタンパク質およびムテインは、本発明の範囲に含まれる。
【００６２】
好ましくは、同義アミノ酸群は表Ｉに規定されるものである。より好ましくは、同義アミノ酸群は表ＩＩに規定されるものであり、最も好ましくは、同義アミノ酸群は表ＩＩＩに規定されるものである。
【００６３】
【表１】
0005420151.tif 000002
【００６４】
【表２】
0005420151.tif 000003
【００６５】
【表３】
0005420151.tif 000004
【００６６】
本発明における使用のための、ＩＬ−１８ＢＰポリペプチドもしくはタンパク質のムテイン、またはウイルス系ＩＬ−１８ＢＰのムテインを得るのに使用され得るタンパク質内でのアミノ酸置換の生成の例としては、任意の公知の方法の工程（たとえば、米国特許再審査請求（ＲＥ）第３３，６５３号、Markらの米国特許第４，９５９，３１４号、同第４，５８８，５８５号および同第４，７３７，４６２号；Kothsらの同第５，１１６，９４３号、Ｎａｍｅｎらの同第４，９６５，１９５号；Chongらの同第４，８７９，１１１号；およびＬｅｅらの同第５，０１７，６９１号に示されるものなど）ならびに米国特許第４，９０４，５８４号（Shawら）に示されたリシン置換タンパク質が挙げられる。
【００６７】
用語「融合タンパク質」は、ＩＬ−１８ＢＰもしくはウイルス系ＩＬ−１８ＢＰ、またはムテインもしくはその断片を、別のタンパク質と融合された状態で含有するポリペプチドをいい、これは、体液中で長期の滞留時間を有する。したがって、ＩＬ−１８ＢＰまたはウイルス系ＩＬ−１８ＢＰは、別のタンパク質、ポリペプチドなど（たとえば、免疫グロブリンまたはその断片）と融合されたものであり得る。
【００６８】
「機能性誘導体」は、本明細書で使用する場合、残基の側鎖またはＮまたはＣ末端基として存在する官能基から、当該技術分野において公知の手段により調製され得る、ＩＬ−１８ＢＰまたはウイルス系ＩＬ−１８ＢＰの誘導体ならびにそのムテインおよび融合タンパク質を包含し、薬学的に許容され得る状態を維持している（すなわち、ＩＬ−１８ＢＰまたはウイルス系ＩＬ−１８ＢＰの活性と実質的に類似した該タンパク質の活性を破壊せず、かつこれを含有する組成物に対して毒性を付与しない）限り、本発明に含まれる。
【００６９】
このような誘導体としては、たとえば、ポリエチレングリコール側鎖が挙げられ得、これは、抗原性部位をマスクし、体液中でのＩＬ−１８ＢＰまたはウイルス系ＩＬ−１８ＢＰの滞留時間を延長し得る。他の誘導体としては、カルボキシル基の脂肪族エステル、アンモニアもしくは第一級または第二級アミンとの反応によるカルボキシル基のアミド、アシル部分と形成されるアミノ酸残基の遊離アミノ基のＮ−アシル誘導体（たとえば、アルカノイルまたは炭素環式アロイル基）またはアシル部分と形成される遊離ヒドロキシル基のＯ−アシル誘導体（たとえば、セリル残基もしくはスレオニル残基のもの）が挙げられる。
【００７０】
ＩＬ−１８ＢＰまたはウイルス系ＩＬ−１８ＢＰの誘導体、ムテインおよび融合タンパク質の画分として、本発明は、該タンパク質分子のポリペプチド鎖の任意の断片または前駆体（単独のもの、または分子と会合したもの、または残基（たとえば、糖残基もしくはリン酸残基）に結合したもの）またはタンパク質分子同士または糖残基との凝集体を包含する。ただし、前記断片はＩＬ−１８ＢＰと実質的に類似した活性を有するものとする。
【００７１】
用語「塩」は、本明細書において、ＩＬ−１８ＢＰ分子またはそのアナログのカルボキシル基の塩およびアミノ基の酸付加塩の両方をいう。カルボキシル基の塩は、当該技術分野において公知の手段により形成され得、無機塩（たとえば、ナトリウム、カルシウム、アンモニウム、鉄または亜鉛の塩など）、および有機塩基との塩（たとえば、トリエタノールアミンなどのアミン、アルギニンまたはリシン、ピペラジン、プロカインなどと形成されるものなど）が挙げられる。酸付加塩としては、たとえば、鉱酸（たとえば、塩酸酸または硫酸など）との塩および有機酸（たとえば、酢酸またはシュウ酸など）との塩が挙げられる。もちろん、任意のかかる塩は、ＩＬ−１８ＢＰの生物学的活性（たとえば、ＩＬ−１８に結合する能力）を維持していなければならない。
【００７２】
ＩＬ−１８ＢＰの「アイソフォーム」は、ＩＬ−１８に結合することができるタンパク質、または選択的スプライシングによって生成し得るその断片である。
【００７３】
用語「円順列変異」は、本明細書で使用する場合、末端同士を直接またはリンカーを介してのいずれかで互いに結合して環状分子を作製し、次いで該環状分子を別の位置で開裂して末端が元の分子の末端と異なる新たな線状分子が作製された線状分子をいう。円順列変異のものとしては、その構造が、環化した後開裂された分子に相当する分子が挙げられる。したがって、円順列変異分子は、線状分子として最初から合成され、環化工程および開裂工程を経ないものであってもよい。円順列変異誘導体の調製は、Ｗ０９５／２７７３２に記載されている。
【００７４】
これらのアイソフォーム、ムテイン、融合タンパク質または機能性誘導体は、ＩＬ−１８ＢＰの生物学的活性、特にＩＬ−１８への結合性を保持しており、好ましくは、本質的に少なくともＩＬ−１８ＢＰと類似する活性を有する。理想的には、かかるタンパク質は、非修飾（unmodified）ＩＬ−１８と比べてさらに増大した生物学的活性を有する。好ましい活性画分は、ＩＬ−１８ＢＰの活性よりも優れた活性、またはさらなる利点を有する活性（より良好な安定性、またはより低い毒性もしくは免疫原性）を有するか、または大量に作製するのがより容易であるか、もしくは精製がより容易である。
【００７５】
ＩＬ−１８ＢＰの配列およびそのスプライスバリアント／スプライスアイソフォームは、国際公開第９９／０９０６３号パンフレットまたはNovickら, 1999（16）、および（24）から取得され得る。
【００７６】
ＩＬ−１８ＢＰの機能性誘導体は、該タンパク質の性質、たとえば、安定性、半減期、バイオアベイラビリティ、ヒト身体による耐容性または免疫原性を改善するために、高分子に結合させてもよい。この目的を達成するため、ＩＬ−１８ＢＰは、たとえば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に連結され得る。ペグ化は、公知の方法、たとえば、国際公開第９２／１３０９５号パンフレットに記載のものなどにより行い得る。
【００７７】
したがって、本発明の好ましい実施態様では、ＩＬ−１８ＢＰはがペグ化されている。本発明のさらに好ましい実施態様では、ＩＬ−１８ＢＰは、免疫グロブリンの全部または一部に融合させたＩＬ−１８ＢＰの全部または一部を含有する融合タンパク質である。当業者には、得られる融合タンパク質が、ＩＬ−１８ＢＰの生物学的活性（特にＩＬ−１８ＢＰへの結合性）を保持していることが理解されよう。融合は、直接であってもよく、または短鎖のリンカーペプチド（これは、長さ１〜３個のアミノ酸残基またはそれ以上、たとえば、長さ１３個のアミノ酸残基であり得る）を介したものであってもよい。前記リンカーは、たとえば、Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）の配列のトリペプチドであり得、またはＧｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔを含む１３アミノ酸リンカー配列がＩＬ−１８ＢＰ配列と免疫グロブリン配列とのあいだに導入され得る。得られる融合タンパク質は、改善された性質（たとえば、体液中での滞留時間（半減期）の延長、比活性の増大、発現レベルの増加など）を有し、または該融合タンパク質の精製が促進される。
【００７８】
好ましい実施態様では、ＩＬ−１８ＢＰは、Ｉｇ分子の定常領域に融合される。好ましくは、たとえばヒトＩｇＧ１の重鎖領域（ＣＨ２およびＣＨ３ドメインなど）と融合させ得る。ＩＬ−１８ＢＰおよび免疫グロブリンの一部を含有する特定の融合タンパク質の作製は、たとえば、国際公開第９９／０９０６３号パンフレットの実施例１１に記載されている。Ｉｇ分子の他のアイソフォームもまた、本発明による融合タンパク質の作製に適する（たとえば、アイソフォームＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４、または他のＩｇクラス（ＩｇＭもしくはＩｇＡ）など）。融合タンパク質は、単量体または多量体、ヘテロ多量体もしくはホモ多量体であり得る。
【００７９】
ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤は、炎症性疾患、たとえばＲＡにおいて、ＩＬ−１８ＢＰと同時、逐次または独立して使用され得る。好都合には、ＩＬ−１８ＢＰとＩＬ−１阻害剤（好ましくはＩＬ−１Ｒａ、より好ましくはＫｉｎｅｒｅｔ（登録商標））の組合せを、ＲＡに罹患した患者のための医薬の製造に使用するのがよい。ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤とＩＬ−１８ＢＰの組合せは、関節炎、特に関節リウマチの治療および／または予防に好適である。活性成分は、同時、逐次または独立して使用され得る。
【００８０】
本発明の好ましい実施態様では、ＩＬ−１８ＢＰを、約０．０００１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重または約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重または約０．１〜３ｍｇ／ｋｇ体重または約１〜２ｍｇ／ｋｇ体重の量で使用する。またさらに好ましい実施態様では、ＩＬ−１８の阻害剤を、約０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重または１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重または約１０〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の量で使用する。
【００８１】
本発明は、さらに、関節炎状態または関節炎、特に関節リウマチの予防および／または治療のため、および炎症性疾患の治療のための医薬の調製における、ＩＬ−１の拮抗剤／阻害剤、またはＩＬ−１の拮抗剤／阻害剤のコード配列を含む発現ベクターと、ＩＬ−１８ＢＰ、またはＩＬ−１８ＢＰのコード配列を含む発現ベクターとの組合せに関する。したがって、遺伝子治療アプローチが、該疾患の治療および／または予防に使用される。好都合には、このとき、ＩＬ−１８ＢＰおよび／またはＩＬ−１拮抗剤／阻害剤の発現はインサイチュであり得、したがって、該疾患に罹患した組織（１種類または複数種類）および／またはＩＬ−１または細胞において、直接、ＩＬ−１８が効率的にブロックされる。
【００８２】
炎症、好ましくは関節炎を治療および／または予防するため、ＩＬ−１８ＢＰおよび／またはＩＬ−１拮抗剤／阻害剤の配列を含有する遺伝子治療用ベクターを、疾患組織、たとえば疾患のある関節内に直接注射し得、したがって、遺伝子治療用ベクターの全身性投与に伴う問題（ベクターの希釈）、標的細胞または組織への到達および標的化に伴う問題、および副作用の問題が回避される。
【００８３】
通常ＩＬ−１８ＢＰに関してサイレントな細胞、またはＩＬ−１拮抗剤／阻害剤および／またはＩＬ−１８ＢＰをそれぞれ充分でない量で発現する細胞における、ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤、または内因性ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤を誘導または増強するベクターと、ＩＬ−１８ＢＰ、またはＩＬ−１８ＢＰの内生的産生を誘導および／または増強するためのベクターとの併用もまた、本発明にしたがって想定される。該ベクターは、ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤および／またはＩＬ−１８ＢＰを発現することが所望される細胞において機能性の調節配列を含有し得る。かかる調節配列は、たとえば、プロモーターまたはエンハンサーであり得る。調節配列は、このとき、相同組換えによってゲノムの正しい遺伝子座内に導入され得、したがって、該調節配列が、その発現が誘導または増強されることが必要な遺伝子と作動可能に連結される。この手法は、通常、「内在（内因性）遺伝子活性化」（ＥＧＡ）と呼ばれ、たとえば、国際公開第９１／０９９５５号パンフレットに記載されている。
【００８４】
本発明は、さらに、炎症性疾患、たとえば関節リウマチの治療および／または予防用の医薬の製造のための、ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤、またはＩＬ−１拮抗剤／阻害剤を産生するように遺伝子操作された細胞と、ＩＬ−１８ＢＰ、またはＩＬ−１８ＢＰの阻害剤を産生するように遺伝子操作された細胞との併用に関する。
【００８５】
本発明は、さらに、炎症性疾患、たとえば、関節リウマチ、アレルギー、喘息、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＩＢＤ、敗血症性ショックおよび変形性関節症から選択されるもの予防および／または治療に特に有用な、治療有効量のＩＬ−１８ＢＰおよび治療有効量のＩＬ−１拮抗剤／阻害剤（たとえばＩＬ−１Ｒａ、好ましくはＫｉｎｅｒｅｔ（登録商標））を含有する医薬組成物に関する。ＩＬ−１の阻害剤として、該組成物は、カスパーゼ−１阻害剤、ＩＬ−１に対する抗体、任意のＩＬ−１レセプターサブユニットに対する抗体、ＩＬ−１シグナル伝達経路の阻害剤、ＩＬ−１と競合し、かつＩＬ−１レセプターをブロックするＩＬ−１の拮抗剤、および結合性タンパク質、同じ活性を有するそのアイソフォーム、ムテイン、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列変異誘導体を含有し得る。
【００８６】
前記にあるようにＩＬ−１８ＢＰおよびそのアイソフォーム、ムテイン、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分または円順列変異誘導体、ならびにＩＬ−１の阻害剤、たとえば、カスパーゼ−１阻害剤、ＩＬ−１に対する抗体、任意のＩＬ−１レセプターサブユニットに対する抗体、ＩＬ−１シグナル伝達経路の阻害剤、ＩＬ−１と競合し、かつＩＬ−１レセプターをブロックするＩＬ−１の拮抗剤、ＩＬ−１レセプター拮抗剤、ならびにＩＬ−１結合性タンパク質またはそのアイソフォーム、ムテイン、融合タンパク質、機能性誘導体、活性画分もしくは円順列変異誘導体（それぞれ、野生型分子と類似するか、または増強されたＩＬ−１８およびＩＬ−１活性を有する）は、医薬組成物の好ましい活性成分である。
【００８７】
医薬組成物に含有されるＩＬ−１拮抗剤／阻害剤は、好ましくは、ＩＬ−１Ｒａであり、より好ましくはＫｉｎｅｒｅｔ（登録商標）である。
【００８８】
「薬学的に許容され得る」の定義は、活性成分の生物学的活性の有効性を妨げず、かつ投与対象の宿主に対して毒性でない任意の担体を包含することを意味する。たとえば、非経口投与では、タンパク質（１種類または複数種類）は、ビヒクル（たとえば、生理食塩水、デキストロース溶液、血清アルビミンおよびリンゲル溶液）中にて注射用の単位投薬形態に製剤化され得る。
【００８９】
本発明による医薬組成物の活性成分は、個体に、種々の様式で投与され得る。投与経路としては、皮内、経皮（たとえば、低速放出製剤にて）、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、経口、硬膜外、局所および鼻腔内経路が挙げられる。任意の他の治療上有効な投与経路が使用され得、たとえば、上皮または内皮の組織からの吸収、または活性剤をコードするＤＮＡ分子を患者に投与し（たとえば、ベクターにより）、インビボで該活性剤の発現および分泌を引き起こす遺伝子治療によるものである。加えて、本発明による活性タンパク質（１種類または複数種類）は、生物学的に活性な薬剤の他の成分（たとえば、薬学的に許容され得る界面活性剤、賦形剤、担体、希釈剤およびビヒクルなど）とともに投与してもよい。
【００９０】
非経口（たとえば、静脈内、皮下、筋肉内）投与のためには、活性タンパク質（１種類または複数種類）のバイオアベイラビリティーは、薬学的に許容され得る非経口用ビヒクル（たとえば、水、生理食塩水、デキストロース溶液）ならびに等張性を維持する添加剤（たとえば、マンニトール）または化学的安定性を維持する添加剤（たとえば、保存剤およびバッファー）と組み合せて、液剤、懸濁剤、乳剤または凍結乾燥した散剤として製剤化され得る。製剤は、一般的に用いられる手法によって滅菌する。
【００９１】
本発明による活性タンパク質（１種類または複数種類）は、コンジュゲート手順を用いることによって改善され得、これにより、ヒト身体内での該分子の半減期が増大する。たとえば、国際公開第９２／１３０９５号パンフレットに記載のようにして、該分子ポリエチレングリコールに連結させる。
【００９２】
活性タンパク質の治療有効量は、たとえば、拮抗剤型、ＩＬ−１に対する拮抗剤の親和性、拮抗剤により示されるいくらかの残存する細胞傷害活性、投与経路、患者の臨床症状（内在ＩＬ−１８活性の非毒性レベルの維持の望ましさを含む）など多くの変数の関数である。
【００９３】
「治療有効量」は、投与した場合、ＩＬ−１８ＢＰがＩＬ−１８の生物学的活性の阻害をもたらす、およびＩＬ−１拮抗剤／阻害剤がＩＬ−１の生物学的活性の阻害をもたらすようなものである。
【００９４】
個体に、各々、単回用量または反復用量として投与されるＩＬ−１８ＢＰおよびＩＬ−１拮抗剤／阻害剤の投薬は、種々の要因（ＩＬ−１８ＢＰおよびＩＬ−１拮抗剤／阻害剤の薬物動態学的性質、投与経路、患者の状態および特徴（性別、年齢、体重、健康状態、体格）、症状の程度、併用療法、治療の頻度ならびに所望の効果が挙げられる）に応じて異なる。確立された投薬範囲の調整および操作は、充分、当業者の能力の範囲であり、個体におけるＩＬ−１８の阻害のインビトロおよびインビボ測定方法も同様である。
【００９５】
本発明によれば、ＩＬ−１８ＢＰを、約０．０００１〜１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重（or body weight）または約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重または約０．１〜３ｍｇ／ｋｇ体重または約１〜２ｍｇ／ｋｇ体重の量で使用する。ＩＬ−１８阻害剤のさらに好ましい量は、約０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重または約１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重または約１０〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の量である。ＩＬ−１拮抗剤は、約０．０００１〜１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重（or body weight）または約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ体重または約０．１〜３ｍｇ／ｋｇ体重または約０．５〜２ｍｇ／ｋｇ体重の量で、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ体重で使用する。
【００９６】
ＩＬ−１８ＢＰおよび／またはＩＬ−１拮抗剤／阻害剤投与の経路は、本発明にしたがって好ましいのは、皮下経路による投与である。筋肉内投与は、本発明によれば、さらに好ましい。
【００９７】
さらに好ましい実施態様では、ＩＬ−１８ＢＰおよび／またはＩＬ−１拮抗剤／阻害剤を、毎日、１日おき、１週間に３回または１週間に１回投与する。
【００９８】
日用量は、通常、分割量で、または所望の成績を得るのに有効な徐放性形態で与える。第２回目またはその後の投与は、個体に投与した最初の投与量または前回の投与量と同じ、それより少ない、またはそれより多い用量で行い得る。第２回目またはその後の投与は、疾患の発症時、またはその前に行ない得る。
【００９９】
本発明によれば、ＩＬ−１８阻害剤は、個体に、ＩＬ−１拮抗剤／阻害剤の前、これと同時、または順次（たとえば、反復投薬計画）、治療有効量で、予防的または治療的に投与し得る。他の治療剤と同時に投与される活性剤は、同じまたは異なる組成物にて投与し得る。
【０１００】
加えて、本発明は、阻害有効量のＩＬ−１８ＢＰ、またはそのムテイン、機能性誘導体、画分、円順列変異誘導体、融合タンパク質、アイソフォームもしくは塩、およびＩＬ−１拮抗剤／阻害剤を、その必要性がある宿主に投与することを含む炎症性疾患の治療および／または予防方法に関する。
【０１０１】
本発明は、さらに、有効量のＩＬ−１８  ＢＰおよびＩＬ−１拮抗剤／阻害剤（好ましくはＩＬ−１Ｒａ）を薬学的に許容され得る担体と混合することを含む、医薬組成物の調製方法に関する。
【０１０２】
本発明を記載してきたが、例示のために提供し、本発明を限定することを意図しない以下の実施例を参照することにより、より容易に理解されよう。
【実施例】
【０１０３】
一般的に、本明細書において使用する命名法および本発明において用いる実験手順は、分子的、生化学的、微生物学的および組換えＤＮＡ技術を含む。かかる技術は、文献に充分に説明されている。たとえば、“Molecular Cloning: A laboratory Manual” Sambrookら, (1989); “Current Protocols in Molecular Biology”第I〜III巻 Ausubel, R. M.編 (1994); Ausubelら, “Current Protocols in Molecular Biology”, John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1989);Perbal, “A Practical Guide to Molecular Cloning”, John Wiley & Sons, New York (1988);Watsonら, “Recombinant DNA”, Scientific American Books, New York;Birrenら, (編) “Genome Analysis: A Laboratory Manual Series”, 第１〜４巻, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1998);米国特許第４，６６６，８２８号;同第４，６８３，２０２号；同第４，８０１，５３１号；同第５，１９２，６５９号および同第５，２７２，０５７号に記載の方法論；“Cell Biology: A Laboratory Handbook”, 第I〜III巻 Cellis, J. E.編 (1994); “Current Protocols in Immunology”第I〜III巻 Coligan J. E.編 (1994); Stitesら, (編), “Basic and Clinical Immunology” (第8版), Appleton & Lange, Norwalk, CT (1994);Mishell および Shiigi (編), “Selected Methods in Cellular Immunology”, W. H. Freeman and Co., New York (1980) を参照のこと;利用可能なイムノアッセイは特許文献および科学文献にさらに記載されている。たとえば、米国特許第３，７９１，９３２号；同第３，８３９，１５３号；同第３，８５０，７５２号；同第３，８５０，５７８号；同第３，８５３，９８７号；同第３，８６７，５１７号；同第３，８７９，２６２号；同第３，９０１，６５４号；同第３，９３５，０７４号；同第３，９８４，５３３号；同第３，９９６，３４５号；同第４，０３４，０７４号；同第４，０９８，８７６号；同第４，８７９，２１９号；同第５，０１１，７７１号；および同第５，２８１，５２１号；“Olignucleotide Synthesis” Gait, M. J.編 (1984); “Nucleic Acid Hybridization” Hames, B. D., および Higgins S. J.編 (1985); “Transcription and Translation” Hames, B. D.および Higgins S. J.編 (1984); “Animal Cell Culture” Freshney, R. I.編 (1986); “Immobilized Cells and Enzymes” IRL Press, (1986); “A Practical Guide to Molecular Cloning” Perbal, B., (1984) および “Methods in Enzymology”第1-317巻, Academic Press ; “PCR Protocols: A Guide To Methods And Applications”, Academic Press, San Diego, CA (1990);Marshakら, “Strategies for Protein Purification and Characterization - A Laboratory Course Manual” CSHL Press (1996）を参照のこと；これらのすべては、引用により、本明細書に完全に記載されたかのように本明細書に組み込まれる。他の一般的な参考文献は、本明細書中に提供されている。本発明における手順は、当該技術分野において周知であると考え、読み手の便益のために提供する。
【０１０４】
特に記載のない限り、本明細書において使用するすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または均等な方法および材料が、本発明の実施および試験において使用され得るが、好適な方法および材料は以下に記載するものである。
【０１０５】
実施例１：
ＩＬ−１ＲａはＩＦＮ−γの抗ウイルス活性を阻害する
ＩＦＮ−γの抗ウイルス性活性の誘導にＩＬ−１が存在するはずであるか否かを調べるため、インターフェロンγの保護的抗ウイルス性効果における、内因性および／または外因性ＩＬ−１をブロックする効果を、ＩＬ−１ＲａまたはＩＬ−１特異的抗体を用いて調べた。
【０１０６】
ヒトＷＩＳＨ細胞（４×１０4細胞／ウェル；ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２５）を、９６ウェルプレート内の０．１ｍｌ  ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ中に播種した。ＩＦＮ−γ（０．１ｍｌ、２０００ＩＵ／ｍｌ）を、第１（上側）の列の各ウェルに添加し、次いで、段階的に２倍希釈した。次いで、種々の試薬を、所与の各ウェルに、以下のとおりに添加した。カラム１、添加なし；カラム２、抗ＩＬ−１β抗体（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ  Ｉｎｃ．  Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ  ＮＪ、０．５μｇ／ｍｌ）；カラム３、ＩＬ−１Ｒａ  ０．１ｍｇ／ｍｌ；カラム４、ＩＬ−１Ｒａ  ０．０１ｍｇ／ｍｌ；カラム５、ＩＬ−１β  ２００ＩＵ／ｍｌおよびＩＬ−１Ｒａ  １ｍｇ／ｍｌ；カラム６、ＩＬ−１β  ２００ＩＵ／ｍｌおよびＩＬ−１Ｒａ  ０．１ｍｇ／ｍｌ；カラム７、ＩＬ−１  β２００ＩＵ／ｍｌおよびＩＬ−１Ｒａ  ０．０１ｍｇ／ｍｌ；カラム８、ＩＬ−１β  ２００ＩＵ／ｍｌ。培養物を一晩、３７℃および５％ＣＯ2でインキュベートした。翌日、培養物は水疱性口内炎ウイルスを検証し、２０時間後、プレートをクリスタルバイオレットで染色し、細胞変性作用の程度を顕微鏡により評価した（２３）。
【０１０７】
図１からわかるように、ＩＦＮ−γ単独は、ウェル番号５において５０％保護をもたらし、１０００ＩＵ／ｍｌを表す。ＩＬ−１βに対する抗体（カラム２）またはＩＬ−１Ｒａ（カラム３）の添加により、ＩＦＮ−γの抗ウイルス性活性が低下し、終点（ウイルス系細胞変性作用からの５０％保護）は、すでにウェル番号２で見られた。これは、１２５ＩＵ／ｍｌ、またはＩＦＮ−γ単独と比べて約９０％不活化に相当する。対照的に、外因性ＩＬ−１βの添加（第８列）により、ＩＦＮ−γの抗ウイルス効力は約３倍増大した。したがって、ＩＦＮ−γの抗ウイルス性活性は、内因性または外因性ＩＬ−１の存在に大きく依存する。
【０１０８】
実施例２：
ＩＬ−１Ｒａは、ＩＦＮ−γによるいくつかの転写物の誘導を阻害する
ＩＦＮ−γがいくつかの遺伝子、たとえば、ＩＬ−１８ＢＰ、ＩＲＦ−１、ＣＩＩＴＡおよびＨＬＡ−ＤＲを誘導する能力に対するＩＬ−１Ｒａの効果をさらに詳しく調べた。この目的のため、特異的プライマーを使用し、β−アクチンとの比較を行なう半定量的ＲＴ−ＰＣＲを用いた。
【０１０９】
ヒトＷＩＳＨ細胞またはヒトＨａＣａｔ細胞（１０6）を、それぞれ、１０％ＦＢＳ（２ｍｌ）を加えた６ウェルプレート内のＭＥＭおよびＤＭＥＭ中にプレーティングした。プレートを一晩、３７℃および５％ＣＯ2でインキュベートした。翌日、細胞を洗浄し、後続の処理を、２％ＦＢＳを含有する培地中で行なった。細胞は、ＩＦＮ−γ（１００ＩＵ／ｍｌ）、ＩＬ−１−β（２００ＩＵ／ｍｌ）、ＩＬ−１Ｒａ（１０マイクログラム／ｍｌ）および抗ヒトＩＬ−１ｂ  ０．０５ｍｇ／ｍｌの種々の組合せで処理した（ＩＮＦ−γの１時間前に添加）。
【０１１０】
６時間後、細胞を回収し、全ＲＮＡをＴＲＩ試薬（シグマ）を用いて抽出した。ｃＤＮＡを、該ＲＮＡから、ランダムヘキサマーおよびＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＩＩ（インビトロジェン（登録商標）、リーク（Leek）、オランダ）を用い、製造業者の使用説明書にしたがって調製した。
【０１１１】
半定量ＰＣＲは、下記のプライマー：
ｈＩＬ−１８ＢＰ、５’ＣＡＣＧＴＣＧＴＣＡＣＴＣＴＣＣＴＧＧおよび５’ＣＧＡＣＧＴＧＡＣＧＣＴＧＧＡＣＡＡＣ；
ｈＩＲＦ−１、５’ＧＡＣＣＣＴＧＧＣＴＡＧＡＧＡＴＧＣＡＧおよび５’ＧＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＴＣＣＡＴＣＡＧ；
ｈＣＩＩＴＡ、５’ＣＴＧＡＡＧＧＡＴＧＴＧＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＧＡＡＡＧＣおよび
５’ＧＴＣＣＣＣＧＡＴＣＴＴＧＴＴＣＴＣＡＣＴＣ；
ｈＨＬＡ−ＤＲ、５’ＧＡＧＴＴＴＧＡＴＧＣＴＣＣＡＡＧＣＣＣＴＣＴＣＣＣＡおよび
５’ＣＡＧＡＧＧＣＣＣＣＣＴＧＣＧＴＴＣＴＧＣＴＧＣＡＴＴ；
ヒトβアクチン，５’ＧＴＧＧＧＧＣＧＣＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＡおよび
５’ＣＴＣＣＴＴＡＡＴＧＴＣＡＣＧＣＡＣＧＡＴＴＴＣ
を用いて行った。
【０１１２】
増幅は、初期変性（９２℃、２分間）、２３サイクルの変性（９２℃、４５秒間）、アニーリング（６２℃、４５秒間）および伸長（７２℃、４５秒間）、ならびに最終伸長（７２℃、１０分間）により行なった。得られたＰＣＲ産物は、アガロース（１％）ゲル電気泳動によって分離した。
【０１１３】
図２からわかるように、ＩＬ−１Ｒａは、ＩＬ−１８ＢＰ、ＩＲＦ−１、ＣＩＩＴＡおよびＨＬＡ−ＤＲ（これらはすべて、確立されたＩＦＮ−γ誘導性の遺伝子である）のｍＲＮＡの誘導を完全にブロックした。
【０１１４】
実施例３：
ＩＬ−１Ｒａは、ＩＦＮ−γによるＩＬ−１８ＢＰの誘導を阻害する
ＩＦＮ−γの作用のＩＬ−１に対する依存性をさらに確立するため、特異的ＥＬＩＳＡ（１４）によりＩＬ−１８ＢＰの発現を測定した。
【０１１５】
ＩＦＮ−γによるＩＬ−１８ＢＰの誘導に対するＩＬ−１Ｒａの効果を、ＨａＣａｔ細胞において調べた。ＨａＣａｔ細胞の培養物を、ＩＦＮ−γ（１００ＩＵ／ｍｌ）により、ＩＬ−１Ｒａの存在下または非存在下で、実施例２に記載のようにして処理した。培養上清みを４８時間後に回収し、ＩＬ−１８ＢＰの濃度を、（１４）に記載の二抗体（double antibody）ＥＬＩＳＡにより測定した。簡単には、モノクローナル抗体Ｎｏ５８２．１０をＩＬ−１８ＢＰの捕捉に使用し、ヒトＩＬ−１８ＢＰに対するウサギ抗血清を検出に使用した。組換えヒトＩＬ−１８ＢＰの調製物（セロノ  ファーマシューティカル  リサーチ  インスティチュート（Serono Pharmaceutical Research Institute）（ジュネーブ、スイス）により提供）を標準として使用した。図３からわかるように、対照培養物の培養上清み中のＩＬ−１８ＢＰのレベルは、０．３９±０．０３ｎｇ／ｍｌであった。ＩＦＮ−γにより誘導されると、そのレベルは、２．７７±０．０２４ｎｇ／ｍｌまで上昇したが、ＩＬ−１Ｒａの存在下ではＩＦＮ−γによる誘導は得られなかった（０．３５±０．００３ｎｇ／ｍｌ）。
【０１１６】
得られた結果により、ＲＴ−ＰＣＲの結果を確認し、ＩＦＮ−γによるＩＬ−１８ＢＰの誘導がＩＬ−１Ｒａの存在下でブロックされた。
【０１１７】
実施例４：
関節リウマチ患者におけるＩＬ−１ＲａとＩＬ−１８ＢＰの共投与
Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）を、使い捨て保存剤不含の１ｍｌ容充填済み（prefilled）ガラスシリンジ（２７ゲージ針を有する）内に加える。各充填済みガラスシリンジは、０．６７ｍｌ（１００ｍｇ）のアナキンラ／Ｋｉｎｅｒｅｔを含む。Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）を、７個のシリンジを含むパック（ＮＤＣ  ５５５１３−１７７−０７）に分配する。また、４×７シリンジの２８個のシリンジを含む分配用パック（ＮＤＣ  ５５５１３−１７７−２８）も入手可能である。
【０１１８】
Ｋｉｎｅｒｅｔで治療した関節リウマチの成人患者（１００ｍｇを毎日投与）に、ＩＬ−１８ＢＰをさらに投与する。米国リウマチ学会（The American College of Rheumatology）（ＡＣＲ）による応答を、かかる患者において、ＩＬ−１８ＢＰ治療の開始前、開始時および開始後に測定する。
【０１１９】
リウマチ患者に、ＫｉｎｅｒｅｔとＩＬ−１８ＢＰの両方を、毎日、皮下注射により、以下のとおり：Ｋｉｎｅｒｅｔを１００ｍｇ／日およびＩＬ−１８ＢＰを０．０１〜１０００ｍｇ／日の範囲内の投与量で投与する。
【０１２０】
血液検査および／または滑液検査、および／または軟組織Ｘ線検査は、併用治療を受けている患者における改善を調べるのに役立つ。
【０１２１】
米国リウマチ学会（ＡＣＲ）による応答基準には、腫脹関節の数の変化、関節の圧痛、医師による疾患の国際的評価、患者による疾患の国際的評価、患者による痛みの評価、Ｃ反応性タンパク質、赤血球沈降得度、および健康状態評価のアンケートスコアが含まれる。
【０１２２】
ＩＬ−１８ＢＰおよびＫｉｎｅｒｅｔを含む併用治療を受けている患者では、Ｋｉｎｅｒｅｔ単独で治療した患者よりも良好なＡＣＲ応答を有することが期待される。
【０１２３】
ＡＣＲ２０応答は、患者が腫脹関節および関節の圧痛の数の２０％低下、ならびに以下の５つの指標：医師による疾患の国際的評価、患者による疾患の評価、痛み、Ｃ反応性タンパク質、赤血球沈降得度および健康状態評価のアンケートスコアのうち３つの２０％の低下を有することを要する。
【０１２４】
ＡＣＲ５０応答は、患者が腫脹関節および関節の圧痛の数の５０％低下、ならびに以下の５つの指標：医師による疾患の国際的評価、患者による疾患の評価、痛み、Ｃ反応性タンパク質、赤血球沈降得度および健康状態評価のアンケートスコアのうち３つの５０％の低下を有することを要する。
【０１２５】
ＡＣＲ７０応答は、患者が腫脹関節および関節の圧痛の数の７０％低下、ならびに以下の５つの指標：医師による疾患の国際的評価、患者による疾患の評価、痛み、Ｃ反応性タンパク質、赤血球沈降得度および健康状態評価のアンケートスコアのうち３つの７０％の低下を有することを要する。
【０１２６】
実施例５：
ＩＬ−１Ｒａでの治療前および治療後のＲＡ患者における血清ＩＬ−１８ＢＰａおよびＩＬ−１８のレベル
健常者および疾患者における特定の循環サイトカインおよびその天然阻害剤の測定は、疾患の進行および重篤度におけるこれらの関与に関する情報を提供する。ＩＬ−１８およびその天然阻害剤であるＩＬ−１８ＢＰのスプライスバリアントａのレベルを、ＲＡ患者およびＫｉｎｅｒｅｔ（登録商標）で治療したＲＡ患者（１００ｍｇの投与量を毎日）においてモニターし、健常な非処置被験体で見られるレベルと、特異的ＥＬＩＳＡｓ（１４）を用いて比較する。
【０１２７】
Ａ．健常被験体におけるＩＬ−１８およびＩＬ−１８ＢＰａのレベル
１０７例の健常なドナーにおけるＩＬ−１８の平均レベルは６４±１７ｐｇ／ｍｌである（１４）。ＩＬ−１８ＢＰａのレベルは、０．５ｎｇ／ｍｌから７ｎｇ／ｍｌの高値までの範囲であり、平均値は２．１５±０．１５ｎｇ／ｍｌである（１４）。ＩＬ−１８およびＩＬ−１８ＢＰａは、ともに血清中に同時に存在するため、ＩＬ−１８の一部は、ＩＬ−１８ＢＰａとの複合体として存在し得る。遊離のＩＬ−１８のレベルを、全ＩＬ−１８の平均レベル（２．１５ｎｇ／ｍｌ）に基づいて計算する。遊離のＩＬ−１８は、質量作用の法則にしたがって調べた。計算は、下記のパラメータ：ＥＣＬアッセイによって測定される全ＩＬ−１８の濃度；ＥＬＩＳＡによって測定される全ＩＬ−１８ＢＰａの濃度；ＩＬ−１８ＢＰａとＩＬ−１８の複合体における１：１  化学量論および０．４ｎＭの解離定数（Ｋｄ）に基づく（１６および２４）。Ｌ＋Ｒ＝ＬＲ（式中、ＬはＩＬ−１８を表し、ＲはＩＬ−１８ＢＰを表す）である平衡系では、以下の等式が適用可能である：
１．Ｋｄ＝［ＬＲ］／［遊離Ｌ］［遊離Ｒ］
２．遊離Ｌ＝全Ｌ−ＬＲ
３．遊離Ｒ＝全Ｒ−ＬＲ
全Ｌ＝６４±１７ｐｇ／ｍｌ（平均レベル）、全Ｒ＝２．１５±０．１５ｎｇ／ｍｌ（平均値）およびＫｄ＝０．４ｎＭを代入することにより、健常被験体では、約５１．２ｐｇ／ｍｌのＩＬ−１８（全量の約８０％）がその遊離形態であることがわかった（１４）。
【０１２８】
Ｂ．ＲＡ患者におけるＩＬ−１８およびＩＬ−１８ＢＰａのレベル
ＩＬ−１８およびＩＬ−１８ＢＰａのレベルを、６０例のＲＡ患者由来血清試料において試験する。ＩＬ−１８およびＩＬ−１８ＢＰａのレベルはともに、健常被験体と比べてＲＡ患者において有意により高値であり得、値の広範囲の分布が観察され得る。これらの血清において、クレアチニンレベルと、ＩＬ−１８またはＩＬ−１８ＢＰａのいずれかの濃度とのあいだに統計学的に有意な相関性が観察されない場合（APACHE II スコア(Knausら 1993）により評価する）、これは、これらの患者におけるＩＬ−１８とＩＬ−１８ＢＰａのレベルの上昇は、腎不全によるものではないことを示唆する。
【０１２９】
ＲＡ患者において血清中のＩＬ−１８とＩＬ−１８ＢＰａのレベルが大きく異なる場合、個々の試料中の遊離の血清ＩＬ−１８のレベルを計算し得る。計算は、先に記載のようにして、同じ３つの等式を用い、実験によりわかったＫｄ、全Ｌ、全Ｒの値の代入を用いて行なう（１４）。計算値により、ＩＬ−１８ＢＰａは、ほとんどのＲＡ患者において遊離のＩＬ−１８のレベルを低下させることが示され得る。この効果は、全ＩＬ−１８が非常に高値である場合に特に強くなり得る。したがって、かかる場合では、血清ＩＬ−１８のほとんどが循環ＩＬ−１８ＢＰａによってブロックされる。
【０１３０】
Ｃ．ＩＬ−１Ｒで治療したＲＡ患者におけるＩＬ−１８およびＩＬ−１８ＢＰａのレベル
ＩＬ−１Ｒでの治療前および治療後に、ＩＬ−１８およびＩＬ−１８ＢＰａのレベルを、６０例のＲＡ患者由来血清試料において試験する。ＩＬ−１８ＢＰａのレベルは、治療前のＲＡ患者（Ｂ）のＩＬ−１８ＢＰａのレベルと比べ、ＩＬ−１８ＢＰａで治療したＲＡ患者では、上昇が有意に低減され得る。同じ３つの等式を用い、実験によりわかったＫｄ、全Ｌ、全Ｒの値の代入を用い（１４）、遊離のＩＬ−１８のレベルを計算し得、これらは、遊離のＩＬ−１８のレベルがＩＬ−１８ＢＰａで治療した患者において増加することを示し得る。また、計算値は、ほとんどのＩＬ−１Ｒａ治療ＲＡ患者において遊離のＩＬ−１８のレベルを低下させるために、循環系内におけるＩＬ−１８ＢＰａが非常に低いことを示し得る。
【０１３１】
したがって、ＩＬ−１８ＢＰａで治療したＲＡ患者への外因性ＩＬ−１８ＢＰａの投与により、遊離の循環ＩＬ−１８レベルがさらに低下し、疾患の転帰（outcome）の緩和がもたらされることが期待される。
【０１３２】
参考文献
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【図面の簡単な説明】
【０１３３】
【図１】ＩＦＮ−γの抗ウイルス性活性に対するＩＬ−１ＲＡの効果を示す。各カラムは、ＩＦＮ−γの２倍希釈列を表す。以下の試薬を添加した：カラム１、対照；２、ＩＬ−１−βに対する抗体；３、ＩＬ−１ＲＡ  ０．１ｍｇ／ｍｌ；４、ＩＬ−１ＲＡ  ０．０１ｍｇ／ｍｌ；５、ＩＬ−１  ２００ＩＵ／ｍｌ＋ＩＬ−１Ｒａ  １ｍｇ／ｍｌ；６、ＩＬ−１  ２００ＩＵ／ｍｌ＋ＩＬ−１Ｒａ  ０．１ｍｇ／ｍｌ；７、ＩＬ−１  ２００ＩＵ／ｍｌ＋ＩＬ−１Ｒａ  ０．０１ｍｇ／ｍｌ；８、ＩＬ−１  ２００ＩＵ／ｍｌ。
【図２】ヒトＨａＣａｔ細胞における、いくつかのＩＦＮ−γ誘導性の転写物のレベルに対するＩＬ−１Ｒａの効果を示す（半定量的逆転写ＰＣＲにより測定）。βアクチンを対照として使用した。
【図３】ＨａＣａｔ細胞における、ＩＦＮ−γによるＩＬ−１８ＢＰの誘導に対するＩＬ−１ＲＡの効果を示す（細胞上清をＥＬＩＳＡにより測定）。
【図１】
0005420151.tif 000005
【図２】
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【図３】
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