(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
パラミクソウイルス、ヒトインフルエンザＡ型ウイルスおよびサブタイプＢ型のアデノ
ウイルスからなる群から選ばれる呼吸器系ウイルスによる感染症によって引き起こされる病的状態の予防または治療のための医薬組成物であって、
抗ウイルス性の有効成分としてイオタカラギーナンを含み、そして、
前記病的状態が、急性気管支炎、慢性気管支炎、鼻炎、副鼻腔炎、偽膜性喉頭炎、急性細気管支炎、咽頭炎、扁桃炎、喉頭炎、気管炎、喘息および肺炎からなる群から選ばれる、医薬組成物。
【請求項２】
前記パラミクソウイルスが、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）１型、ヒトパ
ラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）２型、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）
３型、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）４型、および、ＲＳウイルスからなる
群から選ばれる請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記医薬組成物が、前記呼吸器系ウイルスによる感染症によって引き起こされる症状の治療又は予防のための医薬組成物であり、そして、
前記症状が、熱、痛み、めまい、悪寒、発汗および脱水からなる群から選ばれることを
特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記医薬組成物が、局所的皮膚施用または粘膜施用に用いられ、スキンローション、クリーム、軟膏、ジェル、吸入粉末、粉末、スプレー、泡沫、液体ドロップまたはうがい薬液として調合されていることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記医薬組成物が、経口投与用であり、溶液として、または、乾燥粉末、タブレット、カプセルおよび糖衣錠を含む半固形または固形製剤として、調合されることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記医薬組成物が、液体または半固形とされ、かつ、前記医薬組成物が、使用準備完了とされた製剤として、製剤総容積に対して０．０１〜１０重量パーセント、０．０１〜５重量パーセント、又は、０．１〜２重量パーセントのイオタカラギーナンを含有していることを特徴とする請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記医薬組成物が固形とされ、かつ、前記医薬組成物が、使用準備完了とするための製剤として、０．０１〜１０重量パーセント、０．０１〜５重量パーセント、又は、０．１〜２重量パーセントのカラギーナンを含有していることを特徴とする請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記医薬組成物がカッパカラギーナンをさらに含有していることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記医薬組成物が、該組成物内に存在するカラギーナンの総重量に対して乾燥重量で５０パーセント以上、７０パーセント以上、又は、９５パーセント以上のイオタカラギーナンを含有していることを特徴とする請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
１パーセント以下、又は、０．６パーセント以下の量の塩化ナトリウムまたは塩化カリウムを更に含有することを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記医薬組成物が、前記カラギーナンの一部またはそのすべてを、ナトリウム塩として含有していることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記医薬組成物が、衛生用品の固体表面に、コーティングまたは含浸によって付着されるか、リップスティックの中に含有されていることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記衛生用品が、衛生手袋、衛生繊維または紙、衛生鼻紙、綿棒、防塵マスク、衛生用または医療用顔パックからなる群から選ばれることを特徴とする請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記医薬組成物が、伝染性疾患、炎症性疾患、アレルギー諸症状、および、障害または阻害された免疫系に起因する症状からなる群から選ばれた少なくとも一つの治療又は予防のために典型的に適用される非カラギーナン系の生理活性化合物をさらに含有することを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記病的状態が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）患者、喘息患者、アレルギー症患者、免疫、心臓または肺システムに障害をもつ患者、および、臓器移植患者からなる群から選ばれる個体における病的状態であることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カラギーナン（ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）およびフコイダン（ｆｕｃｏｉｄａｎ）からなる群から選ばれる硫酸化多糖（ｓｕｌｆａｔｅｄ  ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ）、ならびに、この硫酸化多糖で構成された薬学的組成物に関するものである。ここで、硫酸化多糖は、気道をとおして個人の体内に侵入するウイルスであって、オルソミクソウイルス、パラミクソウイルス、アデノウイルスおよびコロナウイルスからなる群から選ばれるウイルスに起因するまたはそれに関連して生じる疾患の予防または治療のために、医療用または動物用に用いられる抗ウイルス性の有効成分として存在するものである。
【背景技術】
【０００２】
オルソミクソウイルス科（ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）はインフルエンザウイルスを、代表的なものとして含むＲＮＡウイルスである。ヒトの流行性疾患を引き起こすインフルエンザウイルスとしては、インフルエンザＡ型ウイルスおよびインフルエンザＢ型ウイルスの２つのタイプがある。これらのインフルエンザウイルスは、主に呼吸器飛沫感染によりヒトからヒトへ広がる。
【０００３】
パラミクソウイルス科（ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）には、ＲＳウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｓｙｎｃｙｔｉａｌ  ｖｉｒｕｓ；ＲＳＶ）、パラインフルエンザウイルス（ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｖｉｒｕｓ）およびメタニューマウイルス（ｍｅｔａｐｎｅｕｍａｖｉｒｕｓ）が含まれる。ＲＳウイルスおよびパラインフルエンザウイルスによる感染は、幼児・小児の重篤な呼吸感染症を引き起こすが、免疫系に障害のある高齢者や成人にも重症疾患を引き起こすことがある。
【０００４】
ヒトのパラインフルエンザウイルスは、重篤な小児呼吸器疾患を引き起こすウイルスであって効果的な予防または治療が現在のところ確立されていないウイルスとして、４つのウイルス、すなわち、パラインフルエンザウイルス１型、２型、３型および４型が知られている。パラインフルエンザウイルスおよびＲＳウイルスが大流行すれば入院患者数および死亡率の相当な上昇が発生すると考えられている。また、免疫系、心臓系または肺系統に障害をもつ患者の場合、パラミクソウイルスへの感染後に重篤な合併症にみまわれるリスクが高くなるので、抗ウイルス療法から受ける利益はとりわけ大きい。
【０００５】
ＲＳウイルス（ＲＳＶ）は、世界各地で多くの幼児・小児が罹患する最も一般的な呼吸器病原体であり、冬から春の初めにかけて、肺炎および細気管支炎の発生を毎年引き起こしている。ＲＳウイルスによる細気管支炎と肺炎によって、毎年何十万人もの幼児が入院している。報告されているところによると、抗RSウイルスヒト化モノクローナル抗体であるパリビズマブ（Ｓｙｎａｇｉｓ）を毎月筋内注射することによって、５５パーセントの確率でＲＳウイルスに対する受動的な予防を行うことができる。
【０００６】
コロナウイルス科（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）には、コロナウイルス属（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）およびトロウイルス属（ｔｏｒｏｖｉｒｕｓ）が含まれる。コロナウイルス科は、哺乳類・鳥類の上気道および胃腸管に感染することが知られている。コロナウイルスは、ヒトの成人のあらゆる一般的な風邪の症状を高い確率で引き起こすと考えられている。
【０００７】
アデノウイルス科（ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）は、一般的に上気道に感染するＤＮＡウイルスである。現在、ヒトアデノウイルスの血清型は５０以上知られており、Ａ〜Ｆの６つのサブタイプにグループ化されている。アデノウイルスは、小児上気道感染症の５〜１０パーセントの原因となっている。
【０００８】
前述した内容からみると、適用が容易であり、パラミクソウイルス科、オルソミクソウイルス科、コロナウイルス科およびアデノウイルス科に属するウイルスに起因するウイルス性呼吸器感染症の予防および治療に効果的である強力な抗ウイルス性の薬学的組成物が強く求められている。
【０００９】
カラギーナンおよびフコイダンなどの硫酸化多糖が抗ウイルス効果を有していること自体については何十年も前から知られているので、先行技術としてのカラギーナンの抗ウイルス効果に関する科学的な論考は多数にのぼる。非常に興味深い評論誌において、Ｍ．Ｅ．ゴンザレスほか（１９８７，  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  ３１，  １３８８−１３９３）によれば、いくつかの動物ウイルスに対する、イオタカラギーナン（ｉｏｔａ‐ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）を含む複数種の硫酸化多糖の抗ウイルス効果について報告している。イオタカラギーナンは、エンベロープをもつウイルスとして単純ヘルペスウイルスＨＳＶ‐１、ＨＳＶ‐２、セムリキ森林ウイルス（Ｓｅｍｌｉｋｉ  ｆｏｒｅｓｔ  ｖｉｒｕｓ；ＳＦＶ）、ワクシニアウイルス（ｖａｃｃｉｎｉａ  ｖｉｒｕｓ）およびアフリカ豚コレラウイルス（Ａｆｒｉｃａｎ  ｓｗｉｎｅ  ｆｅｖｅｒ  ｖｉｒｕｓ；ＡＳＦＶ）に対して抗ウイルス活性を示し、また、エンベロープをもたないネイキッドなウイルスとして脳心筋炎（ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ；ＥＭＣ）ウイルスに対して抗ウイルス活性を示している。イオタカラギーナンは、エンベロープをもつウイルスとして水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）およびはしかウイルスに対して、ならびに、エンベロープをもたないネイキッドなウイルスとしてポリオウイルス１型およびアデノウイルス５型に対しては全く効果をもたなかった。
【００１０】
米国特許４，７８３，４４６号は、レトロウイルスによる感染、特に、ヒトT細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）ＩＩＩによる感染に対するイオタカラギーナン、カッパカラギーナン（ｋａｐｐａ  ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）およびラムダカラギーナン（ｌａｍｂｄａ‐ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）の抗ウイルス活性を開示している。
【００１１】
国際特許公開ＷＯ８８／０６３９６号は、カラギーナンまたは複数種のカラギーナンの混合物を投与することによるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染を含むレトロウイルス感染の治療方法を開示している。
【００１２】
非特許文献１（Ｇｉｒｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．；『Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｉｒｏｌ．』、１９９１年、第１４２号、２６１−２７０頁）は、イオタカラギーナン、カッパカラギーナンおよびラムダカラギーナンのような硫酸化多糖にはＡ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）の複製に対する阻害活性があることを開示している。
【００１３】
非特許文献２（Ｂａｂａ  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．；『Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．』、１９８８年、第３２号、１７４２−１７４５頁）は、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、シンドビスウイルスおよびＨＩＶ−１に対する強力な阻害物質として、硫酸デキストラン、ペントサンポリ硫酸、フコイダンおよびカラギーナンを含む数種の硫酸化多糖を開示している。他方、これらの硫酸化多糖は、コクサッキーウイルス（Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ  ｖｉｒｕｓ）、ポリオウイルスおよびパラインフルエンザウイルスに対して不活性であることが実験により判明している。
【００１４】
欧州特許０２９３８２６号は、インビトロで、ＨＩＶ−１を阻害するためのフコイダンおよびカラギーナンを含む硫酸化多糖の治療的および予防的適用について開示している。
【００１５】
米国特許５，６５８，８９３号は、ロタウィルス（Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ）をラムダカラギーナンに接触させることにより、ヒト細胞のロタウィルス感染を予防する方法を開示している。また、イオタカラギーナンおよびカッパカラギーナンが抗ロタウィルス活性を示さなかったことが開示されている。
【００１６】
米国特許公開２００３／１８１４１５Ａ号は、硫酸セルロースを含む硫酸化多糖が様々なエンベロープをもつウイルス、特に単純性疱疹ウイルス（ＨＳＶ）、パピローマウイルスおよびＨＩＶに対して有効であることが知られていることを開示している。
【００１７】
フコイダンは、主に複数種の褐海藻から抽出される硫酸多糖である。薬理学的等級のフコイダンとしては２つのタイプ、すなわち、約１，０００，０００〜２，０００，０００ダルトン（Ｄａ）の平均分子量を有する高分子フコイダン（ＨＭＷＦ）画分（例えばＫｒａｅｂｅｒ、独国）と８，２００Ｄａの平均分子量を有する低分子フコイダン（ＬＭＷＦ）画分が一般に入手可能である。Ｆ‐フコイダンは主としてフコースの硫酸化エステルで構成され、Ｕ‐フコイダンは約２０パーセントのグルクロン酸を含んでいる。
【００１８】
カラギーナンは、海藻（紅藻網；ｒｈｏｄｏｐｈｙｃｅａｅ）から抽出される直鎖状の硫酸化ガラクトース系の多糖の総称である。カラギーナンは、主に医薬品用・食品用に増粘剤、ゲル化剤、安定薬または乳化剤として用いられている。由来する海藻の種類によって性質が異なる、構造的に異なるカラギーナンが１０以上存在する。イオタカラギーナン、カッパカラギーナンおよびラムダカラギーナンが３つの主なタイプである。これらのカラギーナンは、硫酸化の構造と程度とにおいて互いにわずかに相違している。イオタカラギーナンは、赤い海藻である、ギガルチナステラータ（Ｇｉｇａｒｔｉｎａ  ｓｔｅｌｌａｔａ）とコンドルスクリスプス（Ｃｈｏｎｄｒｕｓ  ｃｒｉｓｐｕｓ）とから主として抽出される、軟質ゲルをなす硫酸化ガラクタンである。カッパカラギーナンは、より強く堅いゲルをなすもので、オオキリンサイ属（Ｋａｐｐａｐｈｙｃｕｓ  ｃｏｔｔｏｎｉｉ）から主として生成される。ラムダカラギーナンが最も一般的な形であり、酪農製品を濃くするために多用されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】米国特許４，７８３，４４６号
【特許文献２】国際特許公開ＷＯ８８／０６３９６号
【特許文献３】欧州特許０２９３８２６号
【特許文献４】米国特許５，６５８，８９３号
【特許文献５】米国特許公開２００３／１８１４１５Ａ号
【特許文献６】米国特許公開２００５／０２６１２４０号
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】Ｇｉｒｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（『Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ』１９９１年、第１４２号、２６１頁〜２７０頁）
【非特許文献２】Ｂａｂａ  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．（『Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ』１９８８年、第３２号、１７４２頁〜１７４５頁）
【非特許文献３】Ｄａｍｏｎｔｅ  Ｅ．  Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．（『Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ』２００４年、第１１号、２３９９頁〜２４１９頁）
【非特許文献４】Ｇｏｎｚａｌｅｚ  Ｍ．  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．（『Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ』１９８７年、第３１号、１３８８〜１３９３頁）
【非特許文献５】Ｔｕｒｎｅｒ  Ｅ．  Ｖ．，  Ｓｏｎｎｅｎｆｅｌｄ  Ｇ．（『Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ』１９７９年、第２５号、４６７頁〜４６９頁）
【非特許文献６】Ｆｕｊｉｓａｗａ  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．（『Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ』１９８７年、第６８号、４２５〜４２３頁）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
ＨＩＶ、単純ヘルペスウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ＨＴＬＶまたはＨＰＶなどのウイルスに対するカラギーナンの抗ウイルス活性が知られるようになって久しいにもかかわらず、カラギーナンが抗ウイルス活性を示すメカニズムについては、さらなる解明が必要とされている。
【００２２】
例えば、非特許文献１（Ｍ．ババほか、１９８８年、『Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．』第３２号１７４２〜１７４５頁）は、カッパカラギーナンおよびラムダカラギーナンを含む硫酸化多糖が宿主細胞表面への複数の外膜ウイルスのウイルス吸着を阻害するか、少なくとも阻害に寄与すると推測している。同様に、米国特許出願公開２００５／０２６１２４０号明細書は、カラギーナンがウイルスと非特異的に結合し、それによりウイルス受容体部位をブロックしているのかもしれないと推測している。非特許文献３（Ｅ．Ｂ．Ｄａｍｏｎｔｅほか、２００４年、『Ｃｕｒｒ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．』第１１号２３９９〜２４１９頁）は、硫酸化多糖が細胞ヘパリン硫酸エステルを模倣し、したがって、ウイルスと宿主細胞との初期相互作用の原因となるウイルス受容体部位をブロックすることを開示している。他方、非特許文献４（Ｍ．Ｅ．ゴンザレスほか、１９８７年、『Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．』第３１号１３８８〜１３９３頁）によれば、標識されたウイルス粒子を用いて、ＨＳＶ‐１ウイルス粒子がイオタカラギーナンの高濃度が現在している状態であっても取り込まれることが判明している。ゴンザレスほかは、少なくともＨＳＶ‐１については、カラギーナンが、ウイルスの細胞への付着および侵入後で、かつ、ウイルスタンパクの合成の前に、ウイルス複製のステップを抑制することを示唆している。
【００２３】
非特許文献５（Ｅ．Ｖ．ターナー、Ｇ．ソネンフェルド、１９７９年、『Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ』第２５号４６７〜４６９頁）は、ウシ水疱性口内炎ウイルスに対するカッパカラギーナンでなくラムダカラギーナンの抗ウイルス活性を開示している。その抗ウイルス活性は、免疫調節、すなわち、インターフェロン誘導による。
【００２４】
結論として、米国特許５，６５８，８９３号の表現を用いて要約すれば、『硫酸化多糖に対する反応がウイルスによって異なることを考慮すると、特定のウイルスが示すところのラギーナンに対する反応が実験を実施することなしに確実性をもって予測できないことは明らかである。異なるウイルスと細胞型で働くとき異なる調査者が矛盾している調査結果を報告したように、硫酸化多糖、特にカラギーナンがウイルス複製とその感染を抑制するメカニズムは、異なるウイルスおよび細胞型を用いる場合に複数の報告者の間で互いに矛盾する発見が報告されていることから、均一なものではないかもしれない。あるウイルスに対して効果的な抑制剤である硫酸化多糖のような物質が、他のウイルスに対して類似した有効性を示すことは、当業者にとって自明でないであろう。』となる。
【００２５】
上記に照らして、本発明は、パラミクソウイルス科、オルソミクソウイルス科、アデノウイルス科およびコロナウイルス科のいずれかに属するウイルスに起因する呼吸器ウイルス感染症の予防または治療に適した、カラギーナンおよびフコイダンを用いた抗ウイルス性組成物を提供することにある。非特許文献６（藤沢ほか、１９８７年『Ｊ．ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．』第６８号４２５〜４２３頁）の開示によれば、マウスに対するカラギーナンの鼻腔内処方が、インフルエンザＡのウイルス力価を減少させず、逆に感染したウイルスの用量に応じてウイルスに対する動物の感染しやすさが強まったことが報告されているのであるから、カラギーナン、特にイオタカラギーナンおよびカッパカラギーナンが、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アデノウイルス科およびコロナウイルス科に属する様々なウイルスに対して実際に抗ウイルス効果をもっていることが判明したのは驚くべきことである。
【００２６】
その上、驚くべきことに、フコイダン、特に高分子フコイダン（ＨＷＭＦ）の画分がオルソミクソウイルス科およびパラミクソウイルス科に属する様々なウイルスに対して抗ウイルス効果をもつことが判明した。
【００２７】
したがって、本発明は、オルソミクソウイルス、パラミクソウイルス、アデノウイルスおよびコロナウイルスからなる群から選ばれるウイルスに起因する気道感染症の予防または治療に適しているとともに、かかる一次ウイルス感染に関連して生じる病気または病的状態（すなわち、二次ウイルス感染・細菌感染、これらの一次感染・二次感染に典型的に関連した身体的症状（この症状は熱、痛み、めまい、寒気、発汗や脱水などである））の予防または治療に適した、抗ウイルス性の薬学的組成物を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００２８】
本発明の第一実施例は、呼吸器系ウイルスによる感染症によってまたはそれに関連して引き起こされる病的状態または疾患の予防または治療のために薬学的組成物の製造に用いる抗ウイルス性の有効成分としてのカラギーナンの使用に関するものである。ここで、前記呼吸器系ウイルスが、少なくとも１つの糖成分を有する宿主細胞の受容体を介して宿主細胞と結合することができる、該呼吸器系ウイルスのウイルス膜に付着しているかまたは該ウイルス膜に組み込まれている少なくとも一つのタンパク質を有し、前記呼吸器系ウイルスがオルソミクソウイルスおよびパラミクソウイルスからなる群から選ばれ、そして、前記カラギーナンがイオタカラギーナンおよびカッパカラギーナンからなる群から選ばれるものである。
【００２９】
ここにいう「宿主細胞」は、自然的に（すなわち、自然またはそれに準じる状況のもとで）以下に述べるいずれかのウイルスの標的となるかまたは該ウイルスによって浸透されるすべての真核細胞をさす。実験目的および研究利用目的のために、生理的に活性を有する物質の効果をテストするための試験管内モデルに典型的に適しているとされ、比肩しうる人体への適用結果についてのある程度の予測性を少なくとも与える宿主細胞株を用いることは、技術分野において公知である。
【００３０】
また、本発明は、抗ウイルス活性成分としてイオタカラギーナンおよび／またはカッパカラギーナンを含む医薬組成物に関し、気道を介して人体に侵入するウイルスに起因してまたはそれに関連して引き起こされる疾患の予防または治療における前記医薬組成物の適用に関する。ここで、前記ウイルスは、少なくとも１つの糖成分を有する宿主細胞の受容体を介して宿主細胞と結合することができる、該ウイルスのウイルス膜に付着しているかまたは該ウイルス膜に組み込まれている少なくとも一つのタンパク質を有し、そして、このウイルスは、オルソミクソウイルスおよびパラミクソウイルスからなる群から選ばれる。
【００３１】
「抗ウイルス活性成分（ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ａｃｔｉｖｅ  ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ）」なる用語は、真核細胞へのウイルスの浸透、真核細胞におけるウイルスの複製、ウイルス形成、および感染した真核細胞からのウイルスの放出からなる群から選ばれる少なくとも一つのウイルス活動に対して特異的に干渉するために直接的または間接的に有効な化合物、あるいは、ウイルス力価の増大を非特異的に抑制する、または、成熟核または哺乳類の宿主系におけるウイルス力価レベルを非特異的に低減させるのに直接的または間接的に有効な化合物をいう。また、「抗ウイルス活性成分」は、ウイルス感染の可能性を防ぐまたは低減させる化合物も意味する。
【００３２】
本発明に係る医薬組成物は、場合により、ウイルス感染の発生前または発生後に処方される、すなわち、予防的治療または治療処置の目的のために処方される、あるいは、予防的および治療的投与される。
【００３３】
ここにいう「予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）」または「予防的治療（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」なる用語は、健常者のウイルス感染しやすさを低減させるために本発明に係る医薬組成物を健常者に対して投与することをいう。また、ここにいう「治療（ｔｈｅｒａｐｙ）」または「治療処置（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」なる用語は、症状の重篤度および発生頻度を低減させ、症状および／または症状の原因を除去し、症状および／または症状の原因の発生を防止し、および／または、ウイルス感染により直接的に引き起こされた障害あるいはウイルス感染に関連して発生した（すなわち二次感染により発生した）障害の改善および／または治癒のために、本発明に係る医薬組成物を投与することをいう。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】ＭＤＣＫ細胞におけるインフルエンザＡ／Ｃｈｉｌｅ／１／９３Ｈ１Ｎ１ウイルスのプラーク形成を低減させるイオタカラギーナンの有効性を、最終濃度０．１から１００μｇ／ｍｌまでの最終濃度範囲の異なるイオタカラギーナン投与量について示した図である（図中、縦軸はイオタカラギーナンが存在しないインフルエンザＡ／Ｃｈｉｌｅ／１／９３Ｈ１Ｎ１ウイルス懸濁液に感染したＭＤＣＫ細胞のプラーク形成（１００パーセントとする）に対する、異なる濃度のイオタカラギーナンを含有するインフルエンザＡ／Ｃｈｉｌｅ／１／９３Ｈ１Ｎ１型ウイルス懸濁液へのＭＤＣＫ細胞の感染後におけるプラーク形成のパーセンテージを示し、横軸は、ウイルス懸濁液中におけるイオタカラギーナンの異なる最終濃度（単位はμｇ／ｍｌ）を示す）。
【図２】ＭＤＣＫ細胞におけるインフルエンザＡ／Ａｉｃｈｉ２／６８Ｈ３Ｎ２ウイルスのプラーク形成を低減させるイオタカラギーナンの有効性を、最終濃度７５から３００μｇ／ｍｌの範囲の異なるイオタカラギーナン投与量について示した図である（図中、縦軸は、イオタカラギーナンが存在しないインフルエンザＡ／Ａｉｃｈｉ２／６８Ｈ３Ｎ２ウイルス懸濁液に感染したＭＤＣＫ細胞のプラーク形成（１００パーセントとする）に対する、異なる濃度のイオタカラギーナンを含有するインフルエンザＡ／Ａｉｃｈｉ２／６８Ｈ３Ｎ２ウイルス懸濁液へのＭＤＣＫ細胞の感染後におけるプラーク形成のパーセンテージを示し、横軸は、ウイルス懸濁液中における、異なる最終濃度のイオタカラギーナン（単位はμｇ／ｍｌ）を示す）。
【図３】Ｈｅｐ‐２細胞におけるパラインフルエンザウイルス３のプラーク形成を低減させるイオタカラギーナンの有効性を、最終濃度０．１から１００μｇ／ｍｌの範囲の異なる投与量について示した図である（図中、縦軸は、イオタカラギーナン（１００パーセントとする）を含まないパラインフルエンザウイルス３懸濁液に感染したＨｅｐ‐２細胞のプラーク形成に対する、異なる濃度のイオタカラギーナンを含むパラインフルエンザウイルス３懸濁液へのＨｅｐ‐２細胞の感染後におけるプラーク形成のパーセンテージを示し、横軸は、ウイルス懸濁液中における異なる最終濃度のイオタカラギーナン（単位はμｇ／ｍｌ）を示す）。
【図４】ＨｅＬａ細胞におけるパラインフルエンザウイルス３のプラーク形成を低減させる際のイオタカラギーナン前処理の効果を、最終濃度１３〜４００μｇ／ｍｌの範囲の異なる投与量について示した図である（図中、縦軸は、前処理を行わないＨｅＬａ細胞（イオタカラギーナンによるプレインキュベーションなし）のプラーク形成（１００パーセントとする）に対する、パラインフルエンザウイルス３懸濁液による感染後における前処理したＨｅＬａ細胞（イオタカラギーナンによるプレインキュベーションを３時間行った後でポリマーを除去）におけるプラーク形成のパーセンテージを示し、横軸は、プレインキュベートした培地中における異なる最終濃度のイオタカラギーナン（単位はμｇ／ｍｌ）を示し、Ｃは、ポリマーカルボキシメチルセルロース（陰性対照）でプレインキュベートした細胞を示す）。
【図５】ネコ腎臓（ＣＫ）細胞における、コロナウイルスに起因した細胞死阻害実験の結果を示した図である（図中、縦軸は、対照細胞に対する、感染後において感染していない細胞のパーセンテージを示し、横軸は、ウイルス懸濁液（図５ａ）またはプレインキュベートした培地（図５ｂ）中に存在する異なる最終濃度のカラギーナン（単位はμｇ／ｍｌ）、（ａ）はイオタカラギーナン、カッパカラギーナンまたはラムダカラギーナンが存在する状態で、ネココロナウイルス（ＦＩＰ）に感染した細胞、（ｂ）は、３時間の間、イオタカラギーナン、カッパカラギーナンまたはラムダカラギーナンでプレインキュベートされ、その後ＰＢＳで３回洗浄され、そして、ポリマーがない状態でネココロナウイルスＦＩＰに感染させた細胞である）。
【図６】ＨｅＬａ細胞におけるＨＲＶ８に起因した細胞死阻害実験の結果を示した図である（図中、縦軸は、感染していない対照細胞に対する感染後に感染していない細胞のパーセンテージを示し、横軸は、（ａ）に示すウイルス懸濁液または（ｂ）に示すプレインキュベートした培地中における異なる最終濃度のイオタカラギーナン（単位はμｇ／ｍｌ）を示し、（ａ）はイオタカラギーナンが存在する状態でヒトライノウイルス８型（ＨＲＶ８）に感染した細胞、（ｂ）は、細胞をイオタカラギーナンで３時間プレインキュベートされ、その後ＰＢＳで３回洗浄され、イオタカラギーナンが存在しない状態で、ＨＲＶ８に感染した細胞を示す）。
【図７】ＰＢＳによる洗浄の完了後における、ＦＩＴＣでラベルされたイオタカラギーナンのＨｅＬａ細胞への結合を示した図である（図中、縦軸は、算出されたμｇ／ｍｌイオタカラギーナン（検量線を用いて蛍光灯単位からμｇ／ｍｌ単位に変換）を示し、横軸は、ＰＢＳによる細胞の洗浄回数、０は上澄み液を含むＦＩＴＣでラベルされたイオタカラギーナンが細胞から除去された状態を示し、１はＰＢＳによる１回目の細胞の洗浄を、２はＰＢＳによる２回目の細胞の洗浄を、そして、３はＰＢＳによる３回目の細胞の洗浄を示す）。
【図８】ベロ細胞における、ＲＳウイルスに起因する細胞死阻害実験の結果を示した図である（図中、縦軸は、感染していない対照細胞に対する、感染後において感染していない細胞のパーセンテージを示し、図中、横軸は、ウイルス懸濁液（濃い棒）またはプレインキュベートした培地（薄い棒）中における異なる最終濃度のイオタカラギーナン（単位はμｇ／ｍｌ）、濃い棒は、イオタカラギーナンが存在する状態でＲＳウイルスに感染した細胞、薄い棒は、イオタカラギーナンで３時間の間プレインキュベートされ、その後ＰＢＳで３回洗浄され、そして、イオタカラギーナンが存在しない状態でＲＳウイルスに感染した細胞を示す）。
【図９】ＨＮｅｐ細胞におけるＲＳウイルスに起因した細胞死阻害実験の結果を示した図である（図中、縦軸は、感染していない対照細胞に対する、感染後かつインキュベーションから５日経過後において感染していない細胞のパーセンテージを示し、横軸は、最終濃度１００μｇ／ｍｌとしたイオタカラギーナンをインキュベーション培地に添加した時点（単位は感染後経過時間）を示す）。
【図１０】ＨＮｅｐ細胞におけるＲＳウイルスに起因した細胞死阻害実験の結果を示した図である（図中、縦軸は、感染していない対照細胞に対する、感染後かつインキュベーションから５日経過後において感染していない細胞のパーセンテージを示し、横軸は、ウイルス懸濁液中における異なる最終濃度のイオタカラギーナン（単位はμｇ／ｍｌ）を示す）。
【図１１】ＨＥｐ‐２細胞におけるＲＳウイルスに起因した細胞死阻害実験の結果を示した図である（図中、縦軸は、感染していない対照細胞に対する、感染後かつインキュベーションから６日経過後において摂氏３７度で感染していない細胞のパーセンテージを示し、横軸は、ウイルス懸濁液中における異なる最終濃度のイオタカラギーナン、カッパカラギーナンまたはラムダカラギーナン（単位はμｇ／ｍｌ）を示す）。
【図１２】ＨＮｅｐ細胞におけるＲＳウイルスに起因する細胞死阻害実験の結果を示した図である（図中、縦軸は、感染していない対照細胞に対する、感染後において感染していない細胞のパーセンテージを示し、横軸は、ウイルス懸濁液中における異なる最終濃度のイオタカラギーナン（濃い棒）およびフコイダン（薄い棒）（いずれも単位はμｇ／ｍｌ）を示す）。
【図１３】ＨＮｅｐ細胞におけるパラインフルエンザウイルス３に起因する細胞死阻害実験の結果を示した図である（図中、縦軸は、感染していない対照細胞に対する、感染後において感染していない細胞のパーセンテージを示し、横軸は、ウイルス懸濁液中における異なる最終濃度のイオタカラギーナン、カッパカラギーナンまたはラムダカラギーナンまたはフコイダン（単位はμｇ／ｍｌ）を示す）。
【図１４】ＨＮｅｐ細胞におけるインフルエンザウイルスＨ３Ｎ２（ＦＬＵ）に起因した細胞死阻害実験の結果を示した図である（図中、縦軸は、感染していない対照細胞に対する、感染後において感染していない細胞のパーセンテージを示し、横軸は、ウイルス懸濁液中における異なる最終濃度のイオタカラギーナン、カッパカラギーナンまたはラムダカラギーナンまたはフコイダン（単位はμｇ／ｍｌ）を示す）。
【図１５】ＭＤＣＫ細胞におけるインフルエンザＡＨ５Ｎ１ウイルスのプラーク形成を低減させるイオタカラギーナン、カッパカラギーナンおよびラムダカラギーナンおよびフコイダンの効果を、用量４００μｇ／ｍｌおよび４４μｇ／ｍｌについて示した図である（図中、縦軸は、ＭＤＣＫ細胞が、異なる濃度のイオタカラギーナン、カッパカラギーナンおよびラムダカラギーナンまたはフコイダンを含有する鳥インフルエンザＨ５Ｎ１ウイルス懸濁液に感染した後におけるプラーク形成の、ポリマーを含有しないインフルエンザＨ５Ｎ１ウイルス懸濁液（１００パーセントとする）に感染したＭＤＣＫ細胞のプラーク形成に対するパーセンテージを示し、横軸はウイルス懸濁液中における異なる最終濃度のイオタカラギーナン、カッパカラギーナンおよびラムダカラギーナンまたはフコイダン（単位はμｇ／ｍｌ）を示す）。
【図１６】ＨＮｅｐ細胞におけるアデノウイルス５０型（Ａｄ５０）に起因した細胞死阻害実験の結果を示した図である（図中、縦軸は、感染していない対照細胞に対する、感染後における感染していない細胞のパーセンテージを示し、横軸は、ウイルス懸濁液中における異なる最終濃度のイオタカラギーナン（単位はμｇ／ｍｌ）を示す）。
【図１７】ＨＮｅｐ細胞におけるＡｄ５０に起因した細胞死阻害実験の結果を示した図である（図中、縦軸は、感染していない対照細胞に対する、感染後の感染していない細胞のパーセンテージを示し、横軸は、ウイルス懸濁液（濃い棒）中またはプレインキュベーション液（薄い棒）中における異なる最終濃度のイオタカラギーナン（単位はμｇ／ｍｌ）であり、濃い棒は、イオタカラギーナンが存在している状態におけるＡｄ５０に感染した細胞そして、薄い棒は、３時間の間、イオタカラギーナンでプレインキュベートされ、その後ＰＢＳで３回洗浄され、そして、イオタカラギーナンが存在しない状態でＡｄ５０に感染した細胞を示す）。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
オルソミクソウイルスおよびパラミクソウイルスならびにその他の若干のウイルスは、宿主細胞の表面に存在している受容体と結合することによって宿主細胞に付着することが知られている。なお、この受容体は、典型的には、シアル酸残基（Ｎ‐アセチルノイラミン酸）およびヘパラン硫酸残基を含む糖残基を有する糖タンパク質または糖脂質である。オルソミクソウイルス、例えばインフルエンザウイルスの場合、ウイルス粒子はシアル酸残基と結合する。ヒトインフルエンザウイルスは、好ましくは、α２‐６結合を有するシアル酸残基と結合するが、鳥インフルエンザウイルスの場合には、α２‐３結合を有するシアル酸残基と結合する。
【００３６】
パラミクソウイルスの細胞取り込みは、その不可欠の膜糖タンパク質のうち少なくとも２つが関与する。その一方は、糖タンパク質ＨＮ、ＨおよびＧの群から選ばれて、細胞付着に関与し、他方の糖タンパク質、すなわち、糖タンパク質Ｆは、ウイルスエンベロープと宿主細胞の膜とのｐＨ非依存的融合の媒介となる。例えば、レスピロウイルス属およびルブラウイルス属は、糖タンパク質または糖脂質の宿主細胞受容体のシアル酸残基と結合する。ＲＳウイルスの付着の仕組みは完全には解明されていないが、宿主細胞への付着は、多くの場合、細胞外マトリクスの一部であるヘパラン硫酸、グリコサミノグリカンとの相互作用が関与している。
【００３７】
本発明の開示によれば、宿主細胞をカラギーナン、特に、イオタカラギーナンおよび／またはカッパカラギーナンに暴露すると、前記宿主細胞の細胞表面の構造が、おそらく、ある細胞表面受容体の立体配座の変化を発生させることにより、あるいは、前記受容体をマスキングまたは変更させることにより、変化することが観察された。
【００３８】
驚くべきことに、宿主細胞表面におけるこの変化が、宿主細胞からカラギーナンを取り除いた後でも、オルソミクソウイルスおよびパラミクソウイルスが宿主細胞に付着することを妨げたのである、つまり、インビトロ植菌による感染を人工的に引き起こした時点においてカラギーナンが存在していなかった場合でも、妨げたのである。
【００３９】
カラギーナンのこの特有の抗ウイルス効果は、人工的に惹起した感染が開始してポリマーを宿主細胞から取り除いてから２時程度経った時点においても観察された。これは、カラギーナンとの相互作用による細胞表面における変化が比較的長時間にわたり持続する効果を有することを示している。
【００４０】
パラミクソウイルスおよびオルソミクソウイルスとは対照的に、感染惹起時におけるカラギーナンが存在しない状態での保護効果は、ライノウイルスおよびコロナウイルスを含む他のウイルスについて観察されなかった。一方、保護効果は、カラギーナンが存在するときにのみ達成された。
【００４１】
したがって、ライノウイルス感染に対するカラギーナンの抗ウイルス効果が実験的に証明されていることに鑑みると、ライノウイルスおよびおそらく他のウイルスについて、抗ウイルス効果は、ポリマーと宿主細胞受容体との化学的または物理的相互反応というよりは、むしろ、カラギーナンポリマーのビリオンへの付着が原因であるかもしれない。
【００４２】
前述のとおり、本発明のカラギーナン組成物は、前記インフルエンザＡ型ウイルスまたはＢ型ウイルスが２‐６シアル酸結合を介して宿主細胞と結合するヒト感染ウイルスであるので、インフルエンザＡ型ウイルスまたはＢ型ウイルスによって引き起こされた感染を含むオルソミクソウイルス感染に対しても成功裏に適用することができる。ヒトインフルエンザウイルス感染は、抗ウイルス活性成分としてイオタカラギーナンまたはフコイダンを主成分としてまたはもっぱらイオタカラギーナンまたはフコイダンを用いて最良に治療することができる。
【００４３】
カラギーナンは、しかしながら、前記インフルエンザＡ型ウイルスが２‐３シアル酸結合により宿主細胞と結合する鳥ウイルスである場合にも成功裏に適用することができる。この後者の場合、カッパカラギーナンは、最も効果的なカラギーナンであることが判明しており、その利用は、したがって、鳥ウイルスの予防処置または治療処置との関連で好ましいものである。他方、鳥インフルエンザＡウイルスに対するイオタカラギーナンおよびフコイダンの効果があまり高くないかまたは全く効果がないことが発見されている。
【００４４】
カラギーナン治療に反応的であることが発見されたパラミクソウイルス種は、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）１型、ＨＰＶ２型、ＨＰＶ３型、ＨＰＶ４型およびＲＳウイルスからなる群から選ばれるウイルスである。選択されたパラミクソウイルスがＲＳウイルスである場合、イオタカラギーナンまたはフコイダンを予防的または治療的投与のための主要または唯一の硫酸化多糖として含むものを適用することが好ましい。その理由は、イオタカラギーナンおよびフコイダンが、実験設定条件下において最良の結果を示しているからである。
【００４５】
カラギーナンの予防的または治療的投与に関連してここに言及するところの病態または疾患は、急性気管支炎、慢性気管支炎、鼻炎、副鼻腔炎、偽膜性喉頭炎、深刻な細気管支炎、咽頭炎、扁桃炎、喉頭炎、気管炎、喘息および肺炎を含む。
【００４６】
カラギーナンは、皮膚または粘膜の炎症を治療するための局所施用に特に適している。本発明における皮膚または粘膜に対する局所施用に適したカラギーナンは、約１５，０００Ｄａから約５，０００，０００Ｄａの範囲の分子量を有し、画分が５０，０００Ｄａを超える平均分子量を有し、そして、５０，０００Ｄａから３，０００，０００Ｄａの間の範囲の平均分子量を有する画分が特に好ましい。
【００４７】
特に１５，０００Ｄａから１００，０００Ｄａの範囲の平均分子量を有する低分子量のポリマーを用いれば、全身投与、例えば、非経口投与または経口投与も可能である。
【００４８】
非経口用途のために調整された本発明に係る医薬組成物は、スキンローション、クリーム、軟膏、ジェル、吸入粉末、スプレー、泡、液滴またはうがい薬からなる群から選ばれる製剤として提供されることができる。カラギーナン製剤は、しかしながら、経口投与のために調整することができ、例えば、溶液、または、乾燥粉末、錠剤、カプセル、糖衣錠その他の経口消化できる生薬などの半固形または固形製剤であってもよい。粘膜投与のための医薬組成物には、点鼻薬またはドロップおよび技術分野において公知のその他の経鼻医薬投与システム（例えば米国特許６，３９１，４５２号）が含まれる。
【００４９】
組成物が局所施用のためのものであり、かつ、液体または半固形である場合には、組成物は、典型的には、使用準備完了とされた形態のカラギーナンとして、組成物全量に対して重量０．０１パーセントから１０パーセントの間、好ましくは０．０１パーセントから５パーセントの間、最も好ましくは０．１パーセントから２パーセントの間のカラギーナンを有している。組成物が固形である場合には、組成物は、典型的には、使用準備完了とされた形態のカラギーナンとして、組成物全量に対して重量０．０１パーセントから１０パーセントの間、好ましくは０．０１パーセントから５パーセントの間、最も好ましくは０．１パーセントから２パーセントの間のカラギーナンを有している。
【００５０】
本発明において有用なカラギーナンは、一般に市販されているものであるが、技術分野において公知の抽出手順にしたがって海藻植物から抽出して調合してもよい。特に断らないかぎり、本明細書にいう「カラギーナン」なる用語は、イオタカラギーナン、カッパカラギーナンまたはそれらの混合物をいうものとする。
【００５１】
本発明のカラギーナンは、さらに、ホモポリマー（同種重合体）またはヘテロポリマー（異種重合体）であってもよい。カラギーナン・ホモポリマーは、イオタカラギーナンまたはカッパカラギーナンから選ばれる一種類のカラギーナンで構成されたサブユニットからなるが、カラギーナン・ヘテロポリマーは、イオタカラギーナンおよびカッパカラギーナンの両方を含むサブユニットからなる。
【００５２】
カラギーナンの「混合物」は、複数種のカラギーナンのサブユニットの混合物を含む物質の合成物であって、少なくとも１つのヘテロポリマーカラギーナンを有する合成物をいう。
【００５３】
典型的には、本発明に係る抗ウイルス性の医薬組成物は、イオタカラギーナンおよびカッパカラギーナン以外のカラギーナンを実質的に含まない、つまり、当該組成物中におけるすべてのカラギーナンの乾燥重量に対して８０パーセント（ｗ／ｗ）以上の割合、好ましくは９０パーセント（ｗ／ｗ）以上の割合、最も好ましくは９９パーセント（ｗ／ｗ）以上の割合で、イオタカラギーナンまたはカッパカラギーナンのいずれか一方もしくはそれらの混合物で構成されている。
【００５４】
用途によっては、組成物は、実質的にもっぱらイオタカラーゲンで構成されているが、他の施用用途においては、組成物は、該組成物中に存在する全カラギーナンの総乾燥重量に対して乾燥重量で５０パーセントを超える、好ましくは７０パーセントを超える、および最も好ましくは９５パーセント相当（ｗ／ｗ）のイオタカラギーナンで構成される。
【００５５】
さらに、他の用途においては、組成物が、該組成物中に存在する全カラギーナンの総乾燥重量に対して乾燥重量で５０パーセントを超える、好ましくは７０パーセントを超える、および特に９５パーセント（ｗ／ｗ）を超えるカッパカラギーナンで構成されることが有用である。
【００５６】
組成物が少なくとも１つのヘテロポリマーカラギーナンを有する場合には、前記数値は、各カラギーナンサブユニットのパーセンテージに係るものである。
【００５７】
本発明に係る抗ウイルス性のカラギーナン組成物は、さらに、医療用途に適したかつ許容される、少なくとも１つの医薬的に許容しうる担体および／または添加剤を有してもよい。担体は、水および生理食塩水などの希釈剤、選択的にはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、賦形剤、または組成物の投与を助ける他の媒剤であってよい。組成物が固形、半固形または流体である場合には、それぞれ担体および添加剤の群は、二酸化ケイ素（ＳｉＯ2）、二酸化チタン（ＴｉＯ2）、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、ゼラチン、澱粉、ラクトース、ラクトース一水和物、アルギン酸またはトウモロコシ澱粉などの結合剤；ステアリン酸マグネシウムまたはドデシル硫酸ナトリウムなどの潤滑剤または界面活性剤；コロイド二酸化ケイ素などの流動促進剤；蔗糖またはサッカリンなどの甘味剤を有してよい。
【００５８】
さらなる添加剤は、生理学的に許容しうる防腐剤、医薬的に許容しうる、ナトリウム、カリウム、リチウムまたは塩化アンモニウムなどのアルカリ金属塩；クエン酸、酢酸、フマル酸、塩酸、リンゴ酸、硝酸、リン酸、プロピオン酸、硫酸と酒石酸およびこれらの組み合せなどの緩衝材またはｐＨ調整剤からなる群から選ばれてもよい。
【００５９】
多くの施用において、組成物が添加剤として塩化ナトリウムを含むことが有用である。
【００６０】
典型的には、１パーセント以下、好ましくは０．６パーセント（ｗ／ｖ）以下の量の医薬的に許容しうる塩が組成物中に存在している。
【００６１】
本発明の組成物において、カラギーナンそれ自体は塩または好ましくはナトリウム塩として存在していてもよい。
【００６２】
本発明に係る予防的または治療的医療用途の組成物は、無菌であり（ｓｔｅｒｉｌｅ）、細菌がなく（ｇｅｒｍ‐ｆｒｅｅ）、病原菌がなく（ｐａｔｈｏｇｅｎ‐ｆｒｅｅ）、発熱物質がなく（ｐｙｒｏｇｅｎ‐ｆｒｅｅ）および／またはアレルゲンがない（ａｌｌｅｒｇｅｎ‐ｆｒｅｅ）製剤として提供されることが好ましい。
【００６３】
カラギーナンは、非常な高用量にて経口投与、経皮投与または吸入しても毒性がないことが判明している。カラギーナン、特にイオタカラギーナンは、したがって、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって、「一般に安全と認められる（ｇｅｎｅｒａｌｌｙｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄａｓｓａｆｅ；ＧＲＡＳ）」に分類されている。
【００６４】
カラギーナン、特にイオタカラギーナンは、様々な医薬品において、オルソミクソウイルスおよびパラミクソウイルスの感染に対して有効な抗ウイルス剤として、主有効成分として他の生理学的に活性を示す化合物または薬品を主要有効成分とあわせて用いることができる。そこにおいて、カラギーナンの役割には、担体としての使用または乳化剤または粘性変性剤などの添加剤としての使用を含む。カラギーナンは、副作用をきたすことなく大半の医薬製剤と両立的に用いることができる。
【００６５】
カラギーナンを添加剤として含む医薬組成物を提供すること、より具体的には、感染性および／または炎症性疾患、アレルギー性疾患、および／または障害または抑圧された免疫系の諸症状の予防または治療のために典型的に適用される薬剤に補助的に使用される、抗ウイルス性の特に抗パラミクソウイルス性または抗オルソミクソウイルス性の添加剤として提供することは、本発明の範囲に属する事柄である。特に、カラギーナン、好ましくはイオタカラギーナンを、抗インフルエンザウイルス活性を示すアジュバントとして、感染性および／または炎症性疾患の予防または治療、アレルギーおよび／または障害または抑圧された免疫系の諸症状に有用な薬剤と組み合せて用いることも本発明の範囲に属する事柄である。
【００６６】
カラギーナンが免疫調節活性も有することが観察されており、特に、免疫強化活性（ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）を有することが観察されている。しかしながら、この活性が物質の生理学的な干渉に直接関連しているのか、あるいは、その抗ウイルス効果をとおして間接的に生じているのか、明らかにはされていない。
【００６７】
本発明に係る組成物は、局所的または粘膜的利用のための製剤に適用されることが多いであろうが、好ましくは、スプレー、特に点鼻薬、粉末、ドロップ、うがい薬液、泡、ジェル、クリーム、軟膏、ローション、トローチなどから選ばれる。しかしながら、本発明の医薬組成物は、衛生用品の固体表面にコーティングすることもできる。かかる衛生用品には、例えば、典型的には口および／または鼻部分に用いられる顔用衛生物品（鼻用ティッシュペーパー、ハンカチなどを含むがこれらに限定されない）が含まれる。
【００６８】
より具体的には、医薬組成物は、消毒剤に良く似ているのであるが、手袋、鼻紙を含む衛生用ティッシュ紙等に噴霧するなどして、少なくともある程度の殺ウイルス的効果を発揮して、汚染した指先による個人の反復的自己感染を低減させ、および、近い異なる個人間、すなわち、近接して互いに接触した異なる個人間のウイルス拡散を低減させるべく、適用されることができる。
【００６９】
また、カラギーナンをベースとして医薬組成物でコーティング、含浸または浸漬された用品としては、綿棒、防塵マスクまたは衛生用・医療用マスクなどが含まれる。リップスティックでさえも、カラギーナンの抗ウイルス活性を含むものとして構成することができる。これらの衛生・殺菌用品は、ウイルス感染に対する予防的または治療的な処置として用いることができ、感染のリスクの予防または低減を支援することができる。
【００７０】
本発明の目的は、オルソミクソウイルスまたはパラミクソウイルス感染の増大したリスクに特に曝されている個人の予防または治療処置のためのカラギーナンをベースとした抗ウイルス性の組成物を提供することにある。ここにいうハイリスク患者は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）患者、喘息患者、アレルギー症患者、免疫系、心臓系または肺系統の疾患を有する個人、および、臓器移植患者からなる群から選ばれる。
【００７１】
本発明によれば、カラギーナンは、呼吸器系ウイルスによる感染が原因でまたはそれに関連して生じた病態または疾患の予防または治療処置のための医薬組成物の製造における抗ウイルス活性成分としても用いることができる。この呼吸器系ウイルスは、アデノウイルスおよびコロナウイルスからなる群から選ばれる。また、アデノウイルスは、好ましくは、アデノウイルスＢ型（Ａｄ５０）である。
【００７２】
アデノウイルスおよびコロナウイルス感染は、イオタカラギーナンが唯一のまたは主たる抗ウイルス活性成分であるところの組成物を用いることで最善に治療することができる。
【００７３】
実験により確認されたところによれば、フコイダンもまた、呼吸器系ウイルスによる感染が原因でまたはそれに関連して生じた病態または疾患の予防または治療処置に有効な医薬組成物の製造における抗ウイルス活性成分として用いることができる。（呼吸器系ウイルスは、オルソミクソウイルスおよびパラミクソウイルスからなる群から選ばれる。この観点から、オルソミクソウイルスは、典型的にはインフルエンザウイルスＡ型またはＢ型であり、そして、パラミクソウイルスは、典型的にはＲＳウイルスである。
【００７４】
局所投与または経口投与のために使用準備完了とされた形態におけるフコイダン系組成物は、０．０１〜１０パーセント、好ましくは０．０１〜５パーセント、最も好ましくは０．１〜２パーセント（ｗ／ｖ）または（ｗ／ｗ）（組成物が液体または半固形であればｗ／ｖパーセント、固形であればｗ／ｗパーセント）の量のフコイダンを有する。それはまた、さらに、少なくとも１つの医薬的に許容しうる担体および／または添加剤、ならびに、その他の生理学的に活性を有する物質または薬物を有してもよい、例えば、塩化ナトリウムは、しばしば、添加剤として用いられている。一般的には、医薬的に許容しうる塩は、１パーセント以下、好ましくは０．６パーセント以下の量だけ、フコイダン組成物中に存在している。
【００７５】
ここに記載された発明がより完全に理解されるために、以下に実施例を述べる。実施例はもっぱら説明を目的とするものであり、いかなる点においても、本発明を限定するものと解釈されるべきではない。また、本発明は、発明が属する技術分野における通常の知識を有する者によって想定される程度において、明示的に開示された実施例の変形を含んでもよい。
【００７６】
［実施例１］
ＭＤＣＫ細胞におけるインフルエンザＡウイルスのプラーク形成に対する、異なる濃度のイオタカラギーナンの効果
インフルエンザウイルスＡ／Ｃｈｉｌｅ／１／９３Ｈ１Ｎ１を６０〜８０ｐｆｕ（プラーク形成単位）含有するウイルス懸濁液を、イオタカラギーナン原液と混合して最終濃度０．１、１、１０、２５、５０または１００μｇ／ｍｌとした。コンフルエントな単層イヌ腎臓細胞株（ＭＤＣＫ）を６ウエルプレートにて、摂氏３４度、６０分間前記ウイルス懸濁液に感染させた。感染接種材料を除去し、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、そして、アガロースを０．６パーセント含有するアガロースオーバレイを添加した。プレートを、摂氏３６度、５％ＣＯ2混合加湿空気でインキュベートした。感染から４８〜６０時間後、アガロースオーバレイを取り除き、細胞をオーバレイ着色剤で着色して、視認できるプラークをカウントした。感染した対照（イオタカラギーナン処理なし）に対するプラーク形成のパーセンテージを、各イオタカラギーナン濃度について判定した。
【００７７】
図１に示すように、イオタカラギーナンが、用量依存的に、ＭＤＣＫ細胞におけるインフルエンザＡ／Ｃｈｉｌｅ／１／９３Ｈ１Ｎ１ウイルスのプラーク形成を阻害することが判明した。プラーク数（ＩＣ５０）の５０パーセント減少が、イオタカラギーナン濃度５０μｇ／ｍｌで達成された。
【００７８】
［実施例２］
ＭＤＣＫ細胞におけるインフルエンザＡウイルスのプラーク形成に対する異なる濃度のイオタカラギーナンの効果
インフルエンザウイルスＡ／Ａｉｃｈｉ２／６８Ｈ３Ｎ２を６０〜８０ｐｆｕ（プラーク形成単位）含有するウイルス懸濁液をイオタカラギーナン原液と混合して最終濃度７５、１５０または３００μｇ／ｍｌとした。コンフルエント状態としたイヌ腎臓細胞株ＭＤＣＫの複数の単分子層を、６ウエルプレートにて、摂氏３４度、６０分間、ウイルス懸濁液に感染させた。感染接種材料を除去し、細胞をＰＢＳで洗浄し、そして、アガロースを０．６パーセント含有するアガロースオーバレイを添加した。プレートを、摂氏３７度で、５％ＣＯ2混合加湿大気中でインキュベートした。感染後４８〜６０時間、アガロースオーバレイを除去し、細胞をクリスタルバイオレット着色剤で着色して、視認できるプラークをカウントした。感染した対照（イオタカラギーナンなし）に対する、プラーク形成のパーセンテージを、各イオタカラギーナン濃度について判定した。
【００７９】
図２に示すように、イオタカラギーナンが、用量依存的に、ＭＤＣＫ細胞におけるインフルエンザＡ／Ａｉｃｈｉ／２／６８Ｈ３Ｎ２ウイルスのプラーク形成を阻害したことが判明した。
【００８０】
［実施例３］
Ｈｅｐ‐２細胞におけるパラインフルエンザウイルス３のプラーク形成に対する異なる濃度のイオタカラギーナンの効果
パラインフルエンザウイルス３を６０〜８０ｐｆｕ（プラーク形成単位）含有するウイルス懸濁液をイオタカラギーナン原液と混合して最終濃度０．１、１、１０、２５、５０および１００μｇ／ｍｌとした。混合液を摂氏３４度で１時間インキュベートした。コンフルエント状態としたＨｅｐ‐２細胞の複数の単分子層を、６ウエルプレートにて、前記ウイルス懸濁液によって摂氏３４度、６０分間感染させた。感染接種材料を除去し、細胞をＰＢＳで洗浄して、アガロースを０．６パーセント含有するアガロースオーバレイを添加した。トレーを５％ＣＯ2混合加湿空気中でインキュベートした。感染後４８〜６０時間経過後、アガロースオーバレイを除去し、細胞をクリスタルバイオレット着色剤で着色して、視認できるプラークをカウントした。感染した対照（イオタカラギーナンなし）プレートに対するプラーク形成のパーセンテージを、各イオタカラギーナン濃度について判定した。
【００８１】
図３に示すように、イオタカラギーナンが、用量依存的に、Ｈｅｐ‐２細胞Ａにおけるパラインフルエンザウイルス３のプラーク形成を阻害することが判明した。プラーク数（ＩＣ５０）の５０パーセント減少が、イオタカラギーナン濃度１０μｇ／ｍｌで達成された。
【００８２】
［実施例４］
ＨｅＬａ細胞におけるパラインフルエンザウイルス３のプラーク形成に対するイオタカラギーナンによるプレインキュベーションの効果
コンフルエント状態としたＨｅＬａ細胞の複数の単分子層を、イオタカラギーナンによって、３時間、濃度１３、４０、１３３および４００μｇ／ｍｌでインキュベートした。イオタカラギーナン含有上澄み液を除去し、細胞をＰＢＳで３回洗浄して、実施例３にて説明したようにパラインフルエンザウイルス３で感染させたが、ここでは、ウイルス懸濁液へのイオタカラギーナンの添加は行わなかった。感染した対照（イオタカラギーナン前処理なし）に対する、プラーク形成のパーセンテージを、各イオタカラギーナン濃度について判定した。
【００８３】
図４に示すように、細胞をイオタカラギーナンで３時間プレインキュベートしたが、イオタカラギーナンが感染の時点およびその後の全プレインキュベーション期間において摂氏３７度で全く存在していなかった状態において、イオタカラギーナンが、濃度４００μｇ／ｍｌおよび１３３μｇ／ｍｌにおいて、パラインフルエンザウイルス３のプラーク形成を阻害したことが判明した。この結果が示すところは、変性剤としてのカラギーナンが存在しない場合において受容体を介したパラインフルエンザウイルス３の宿主細胞への結合が防止または阻止されるように、イオタカラギーナンが宿主細胞の表面の受容体を化学的または構造的に変化させている、ということである。これはまたイオタカラギーナンの強い予防的効果の証拠でもある。
【００８４】
［実施例５］
コロナウイルスを介した細胞死阻害に対する複数種のカラギーナンによる真核細胞前処理の効果
サブコンフルエント状態としたＣＫ細胞を、イオタカラギーナン、カッパカラギーナンまたはラムダカラギーナンが濃度４、４０および４００μｇ／ｍｌにて存在している状態で、ネココロナウイルス（ＦＩＰＶ）に、感染多重度０．１で感染させた（図５ａ参照）。比較のため、サブコンフルエント状態としたＣＫ細胞を、イオタカラギーナン、ラムダカラギーナンまたはカッパカラギーナンによって３時間インキュベートした（カラギーナン濃度は４、４０および４００μｇ／ｍｌ）。カラギーナン含有上澄み液を除去し、細胞をＰＢＳで３回洗浄して、ポリマーが存在しない状態でネココロナウイルス（ＦＩＰV
に感染多重度０．１で感染させた（図５ｂ参照）。感染していない対照に対する生存している細胞のパーセンテージを、各カラギーナンおよび各濃度について判定した。
【００８５】
図５の（ａ）に示すように、カラギーナンの３タイプすべてが、ＣＫ細胞におけるコロナウイルスを介した細胞死を、最高濃度４００μｇ／ｍｌにて阻害した。イオタカラギーナンは、濃度４μｇ／ｍｌでも依然として有意な阻害を示しているが、カッパカラギーナンおよびラムダカラギーナンはこの濃度では有効でない。図５の（ｂ）からみると、糖受容体（前の実施例を参照）を介して細胞に侵入するウイルスとは対照的に、最も高いカラギーナン試験濃度４００μｇ／ｍｌおよび３時間に及ぶプレインキュベーション期間の場合であっても３５パーセント阻害のレベルを超えて宿主細胞の保護を増大させることができなかったので、コロナウイルス感染は、宿主細胞の表面におけるコロナウイルス特異的な受容体の、カラギーナンによる化学的または構造的な変化によって阻害されないものと思われる。また、宿主細胞をカラギーナンで前処理することが、コロナイルス感染に対する細胞保護を有意に改善しなかった。この結果が示唆するのは、コロナウイルス感染に対する有意な保護を実現するには、抗ウイルス活性剤すなわちカラギーナンが、感染の時点、すなわち、ウイルスと宿主細胞との相互作用が生じようとしているときに存在していなければならないということである。
【００８６】
［実施例６］
ＨＲＶ８を介した細胞死阻害に対するイオタカラギーナンによる真核細胞前処理の効果
サブコンフルエント状態としたＨｅＬａ細胞を、ヒトライノウイルス８型（ＨＲＶ８；感染多重度＝０．１）に、イオタカラギーナンが存在する状態で、濃度４、４０および４００μｇ／ｍｌにて感染させた（図６ａ参照）。比較のため、サブコンフルエント状態としたＨｅＬａ細胞を、濃度４、４０および４００μｇ／ｍｌにて、イオタカラギーナンによって、感染に先立って３時間インキュベートした。イオタカラギーナンを含有する上澄み液を除去し、細胞をＰＢＳで３回洗浄して、ポリマーがない状態でＨＲＶ８に感染させた（図６ｂ参照）。感染していない対照に対する生存している細胞のパーセンテージを、各イオタカラギーナン濃度について判定した。
【００８７】
図６の（ａ）に示すように、イオタカラギーナンは、ＨＲＶ８を介した細胞死を阻害した。図６の（ｂ）からみると、糖受容体を介して侵入するウイルスとは対照的に、ＨＲＶ８を介した細胞死は、イオタカラギーナンが濃度４００μｇ／ｍｌでありかつ細胞をイオタカラギーナンで３時間プレインキュベートした場合であっても、５パーセント未満しか阻害されなかったということになる。この結果は、これまでの判明内容（データは不図示）と整合的であり、ＨＲＶ８ウイルスについては、対象とする細胞のカラギーナンによるプレインキュベーションは、感染時点でカラギーナンが失われていれば、対象となる細胞を感染から有意に防護しないということを示唆している。この結果は、ＨＲＶ８の受容体、ＬＤＬ受容体が、イオタカラギーナンによる処理によっては変化またはマスキングされないということを示唆している。
【００８８】
［実施例７］
細胞をＰＢＳで洗浄してＨｅＬａ細胞からイオタカラギーナンを定量的に除去した場合
ＨｅＬａ細胞を、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）ラベルしたイオタカラギーナンによって、濃度４００、１３３、４および０．４μｇ／ｍｌにて、１０分間インキュベートし、上澄み液が除去し、そして、細胞をＰＢＳで３回洗浄した。残存するＦＩＴＣラベル付きカラギーナンの量を、ＦＩＴＣラベルしたイオタカラギーナンを含有する上澄み液を除去した後かつ各洗浄ステップ後に、蛍光検出リーダ（ＢＭＧ‐ＬＡＢＴＥＣＨ社Ｏｍｅｇａ）で判定した。蛍光照明単位は、検量線を用いてカラギーナン濃度値μｇ／ｍｌに変換された。
【００８９】
図７に示すように、ＦＩＴＣラベルしたイオタカラギーナンは、細胞を少なくとも３回ＰＢＳで洗浄して、ＨｅＬａ細胞から定量的に除去した（＞９５パーセント）。この結果は、カラギーナンが細胞表面に共有結合しないことを示している。この結果は、第２の試験環境によって確認された、そこでは、同一の検出方法を用いつつ、インキュベーション期間が１０分から３時間に拡大された。これらの結果は、したがって、カラギーナンが、対象とする対照細胞の表面に存在する、ウイルス粒子の結合に関連する糖受容体の変化を誘起するとともに、変化がポリマーを対象となる細胞表面から除去した後でも存在している、という、ここに導出した結論および関連する実施例を支持するものである。
【００９０】
［実施例８］
ＲＳウイルスを介した細胞死阻害に対するイオタカラギーナンによる真核細胞前処理の効果
サブコンフルエント状態としたベロ細胞を、濃度０．４、４および４０μｇ／ｍｌにてイオタカラギーナンが存在する状態で、ＲＳウイルス（感染多重度＝０．１）に感染させた。比較のため、サブコンフルエント状態としたベロ細胞を、濃度０．４、４および４０／ｖｇ／ｍｌのイオタカラギーナンにより３時間インキュベートした。イオタカラギーナン含有上澄み液を除去し、細胞をＰＢＳで３回洗浄して、カラギーナンが存在しない状態でＲＳウイルスに感染させた（感染多重度＝０．１）。感染していない対照に対する生存している細胞のパーセンテージを、各カラギーナン濃度について判定した。
【００９１】
図８に示すように、イオタカラギーナンは、ポリマーが感染の時点および感染中において存在しないとしても、すべての濃度において、ＲＳウイルスを介した細胞死を阻害している。ＲＳウイルスは、上皮細胞表面に存在する糖分子であるヘパラン硫酸を介して細胞に付着することが知られている。この結果が示すところは、この受容体がイオタカラギーナンによって変化し、細胞表面へのＲＳウイルスの付着およびそれに続くウイルス複製がブロックされたということである。
【００９２】
［実施例９］
感染後の異なる時点における、ＨＮｅｐ細胞におけるＲＳウイルスを介した細胞死阻害に対するイオタカラギーナンを用いた真核細胞処理の効果
サブコンフルエント状態としたＨＮｅｐ細胞を、ＲＳウイルスに感染させた（感染多重度＝０．１）。イオタカラギーナンを、最終濃度４０μｇ／ｍｌにて、図９に示すように、感染後の異なる時点（感染後０、８、２４、３２、４８、５６および７２時間）において添加して、感染していない対照に対する生存しているＨＮｅｐ細胞のパーセンテージを各時点について判定した。図９に示すように、ポリマーが感染後２４時間経過したのみの段階で添加されたときに、イオタカラギーナンは、濃度１００μｇ／ｍｌにおいて有意にＲＳウイルスを介した細胞死を阻害した。この結果が示すところは、イオタカラギーナンは、予防的にのみ利用できるのではなく、ウイルス感染の初期段階で適用される場合には、治療的措置の一環としても抗ウイルス効果を発揮することができるということである。
【００９３】
［実施例１０］
ＨＮｅｐ細胞におけるＲＳウイルスに媒介された細胞死阻害に対するイオタカラギーナンを用いた予防的治療の効果
サブコンフルエント状態としたＨＮｅｐ細胞を、濃度４００、１３３、４４、１５、５、２および１μｇ／ｍｌのイオタカラギーナンが存在する状態でＲＳウイルスに感染させた（感染多重度＝０．１）。感染していない対照に対する生存しているＨＮｅｐ細胞のパーセンテージを、各イオタカラギーナン濃度について判定した。
【００９４】
図１０に示すように、イオタカラギーナンはすべての濃度について、ポリマーが感染中に存在しているときに１／ｖｇ／ｍｌの低濃度であっても、ＲＳウイルスを介した細胞死を有意に阻害した。この結果は、イオタカラギーナンが、予防的介入戦略に効果的に用いることができることを実証している。
【００９５】
［実施例１１］
ＨＥｐ‐２細胞におけるＲＳウイルスを介した細胞死阻害に対する複数種のカラギーナンによる真核細胞処理の効果
６ウエルプレートのＨＥｐ‐２細胞を、イオタカラギーナン、カッパカラギーナンまたはラムダカラギーナンが濃度０．０１、０．１、１、１０および１００／ｖｇ／ｍｌ存在している状態で、ＲＳウイルスＡ２ウイルスに感染させた（感染多重度＝０．００１）。感染していない対照に対する生存している細胞のパーセンテージを、各カラギーナンおよび各濃度について判定した。
【００９６】
図１１に示すように、カラギーナンの３タイプすべてが、ＨＥｐ‐２細胞におけるＲＳウイルスを介した細胞死を阻害し、特にイオタカラギーナンが最も強い効果を示した。
【００９７】
［実施例１２］
ＲＳウイルスを介した細胞死阻害に対するイオタカラギーナンおよびフコイダンによる真核細胞処理の効果の比較
サブコンフルエント状態としたＨＮｅｐ細胞を、イオタカラギーナンおよびフコイダンが濃度４００、１３３、４４、１５、４、１．３および０．４存在する状態でＲＳウイルス（感染多重度＝０．１）に感染させた。感染していない対照に対する、生存しているＨＮｅｐ細胞のパーセンテージを、各イオタカラギーナンおよび各フコイダン濃度について判定した。
【００９８】
図１２に示すように、フコイダンは、ＨＮｅｐ細胞におけるＲＳウイルスを介した細胞死を、ポリマーが感染中に存在している場合に濃度０．４μｇ／ｍｌで有意に阻害した。フコイダンは、したがって、ＲＳウイルス感染の予防および治療のための製品の開発の候補として興味深い。
【００９９】
［実施例１３］
パラインフルエンザウイルス３を介した細胞死阻害における複数種のカラギーナンおよびフコイダンによる真核細胞処置の効果
サブコンフルエント状態としたＨＮｅｐ細胞を、イオタカラギーナン、カッパカラギーナン、ラムダカラギーナンまたはフコイダンのいずれかが濃度４００、１３３．３、４４．４、１４．８、４、１．３および０．４μｇ／ｍｌ存在している状態で、パラインフルエンザウイルス３型に感染させた。感染していない対照に対する生存している（したがって感染していない）ＨＮｅｐ細胞のパーセンテージを、各ポリマーおよび各ポリマー濃度について判定した。
【０１００】
図１３に示すように、カラギーナンの３つのタイプすべてがＨＮｅｐ細胞におけるパラインフルエンザウイルス３を介した細胞死を阻害し、このうちイオタカラギーナンが最も強い効果を示した。フコイダンもまた、カッパカラギーナンおよびラムダカラギーナンの阻害効果に比肩しうる程度に、ＨＮｅｐ細胞におけるパラインフルエンザウイルス３を介した細胞死を阻害した。
【０１０１】
［実施例１４］
インフルエンザウイルスＨ３Ｎ２を介した細胞死阻害に対する複数種のカラギーナンおよびフコイダンによる真核細胞処理の効果
サブコンフルエント状態としたＨＮｅｐ細胞を、イオタカラギーナン、カッパカラギーナン、ラムダカラギーナンおよびフコイダンが濃度４００、１３３．３、４４．４、１４．８、４、１．３および０．４／ｖｇ／ｍｌ存在している状態で、インフルエンザウイルスＨ３Ｎ２に感染させた。感染していない対照に対する生存しているＨＮｅｐ細胞のパーセンテージを、各ポリマーおよび各ポリマー濃度について判定した。
【０１０２】
図１４に示すように、カラギーナンの３タイプすべてが、ＨＮｅｐ細胞におけるインフルエンザウイルスＨ３Ｎ２を介した細胞死を阻害した。加えて、フコイダンが、ＨＮｅｐ細胞におけるインフルエンザウイルスＨ３Ｎ２を介した細胞死を、イオタカラギーナンのそれと比肩しうる程度に阻害することが判明した。
【０１０３】
［実施例１５］
ＭＤＣＫ細胞における鳥インフルエンザウイルスＨ５Ｎ１プラーク形成に対する複数種のカラギーナンおよびフコイダンの効果
鳥インフルエンザウイルスＨ５Ｎ１を６０〜８０ｐｆｕ（プラーク形成単位）含有するウイルス懸濁液は、イオタカラギーナン、カッパカラギーナン、ラムダカラギーナンまたはフコイダンのいずれかのポリマー原液と混合し、、最終ポリマー濃度４００または４４．４μｇ／ｍｌとした。コンフルエント状態としたイヌ腎臓細胞株ＭＤＣＫの複数の単分子層を、６ウエルプレートにて、摂氏３４度、６０分間ウイルス懸濁液に感染させた。感染接種材料を除去し、細胞をＰＢＳで洗浄して、アガロースを０．６パーセント含有するアガロースオーバレイが添加された。プレートを、摂氏３６度で、５％ＣＯ2混合加湿大気中でインキュベートした。感染後４８〜６０時間、アガロースオーバレイを除去した。細胞を、クリスタルバイオレット着色剤で着色して、視認できるプラークをカウントした。感染した対照（ポリマー処理なし）に対するプラーク形成のパーセンテージを、各ポリマーおよび各ポリマー濃度について判定した。
【０１０４】
図１５に示すように、鳥インフルエンザウイルスＨ５Ｎ１のプラーク形成は、イオタカラギーナン、ラムダカラギーナンおよびフコイダンによっては影響を受けなかったことが判明した。しかしながら、カッパカラギーナンは、用量依存的に、ＭＤＣＫ細胞における鳥インフルエンザウイルスＨ５Ｎ１のプラーク形成を阻害した。鳥インフルエンザウイルスは好ましくはシアル酸残基に対してα２‐３結合で結合するのであるから、実験結果は、カッパカラギーナンが、好ましくはかかるα２‐３結合を有するシアル酸残基を変化させていることが考えられるのかもしれないということを示唆している。
【０１０５】
［実施例１６］
アデノウイルスＢ型（Ａｄ５０）を介した細胞死阻害に対するイオタカラギーナンによる予防的真核細胞処理の効果
サブコンフルエント状態としたＨＮｅｐ細胞を、イオタカラギーナンが濃度４００、１３３．３、４４．４、１４．８、４、１．３および０．４μｇ／ｍｌ存在する状態で、Ａｄ５０に感染させた。感染していない対照に対する生存しているＨＮｅｐ細胞のパーセンテージを、各イオタカラギーナン濃度について判定した。
【０１０６】
図１６に示すように、４μｇ／ｍｌという低い濃度であっても、イオタカラギーナンは、ポリマーが感染時および感染中に存在しているときには有意にＡｄ５０を介した細胞死を阻害した。この結果は、イオタカラギーナンが、サブタイプＢ（例えばＡｄ５０）のアデノウイルスに対する効果的な予防的介入戦略として用いることができることを示唆している。しかしながら、サブタイプＡ、ＣおよびＤに属する他のアデノウイルスを前述した試験環境で試験したところ、イオタカラギーナンの有意な効果は検出されなかった（データは不図示とする）。
【０１０７】
［実施例１７］
Ａｄ５０を介した細胞死阻害に対するイオタカラギーナンによる予防的真核細胞処理の効果の比較
サブコンフルエント状態としたＨＮｅｐ細胞を、濃度４００、４０および４／ｖｇ／ｍｌのイオタカラギーナンが存在する状態で、Ａｄ５０に感染させた。比較のため、サブコンフルエント状態としたＨＮｅｐ細胞を、感染に先立って濃度４００、４０および４μｇ／ｍｌとしたカラギーナンで３時間インキュベートした。イオタカラギーナンを含有する上澄み液を除去し、細胞をＰＢＳで３回洗浄して、カラギーナンが存在しない状態でＡｄ５０に感染させた。感染していない対照に対する生存しているＨＮｅｐ細胞のパーセンテージを、各イオタカラギーナン濃度について判定した。
【０１０８】
図１７に示すように、イオタカラギーナンは、濃度４００および４０μｇ／ｍｌにて、感染の時点および観察された感染期間中イオタカラギーナンが存在する状態および存在しない状態で、有意にＡｄ５０を介した細胞死を阻害した。これらのデータは、イオタカラギーナンがサブタイプＢに属するアデノウイルスに対する細胞表面の受容体（これは糖受容体であることが知られている）を変化させ、一方、他のサブタイプに属するアデノウイルスは、おそらく異なる受容体から細胞に侵入することを示唆している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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