(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リポソームにオキサリプラチンを封入したリポソーム製剤とテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤とを組み合わせてなる抗腫瘍剤であって、
前記リポソームが、
ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］;
水素添加大豆ホスファチジルコリン、コレステロール及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］；又は
ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ポリグリセリン
からなる、抗腫瘍剤。
【請求項２】
テガフール１モルに対するオキサリプラチンの使用割合が、０．１〜５モルである請求項１に記載の抗腫瘍剤。
【請求項３】
テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤中の、テガフール1モルに対するギメラシルの配合割合が0.1〜5モルであり、テガフール1モルに対するオテラシルカリウムの配合割合が0.1〜5モルである請求項１に記載の抗腫瘍剤。
【請求項４】
リポソーム製剤が静脈内、腹腔内、筋肉内及び皮下による投与経路により、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤が経口による投与経路により、投与されることを特徴とする、請求項１に記載の抗腫瘍剤。
【請求項５】
リポソームに抗腫瘍効果増強のために有効な量のオキサリプラチンを封入したリポソーム製剤である、治療に有効な量のテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤の抗腫瘍活性を増強させるための抗腫瘍効果増強剤であって、
前記リポソームが、
ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］;
水素添加大豆ホスファチジルコリン、コレステロール及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］；又は
ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ポリグリセリン
からなる、抗腫瘍効果増強剤。
【請求項６】
テガフール１モルに対するオキサリプラチンの使用割合が、０．１〜５モルである請求項５に記載の抗腫瘍効果増強剤。
【請求項７】
テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤中の、テガフール1モルに対するギメラシルの配合割合が0.1〜5モルであり、テガフール1モルに対するオテラシルカリウムの配合割合が0.1〜5モルである請求項５に記載の抗腫瘍効果増強剤。
【請求項８】
抗腫瘍剤を製造するための、リポソームにオキサリプラチンを封入したリポソーム製剤及びテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤の使用であって、
前記リポソームが、
ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］;
水素添加大豆ホスファチジルコリン、コレステロール及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］；又は
ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ポリグリセリン
からなる、使用。
【請求項９】
治療に有効な量のテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤の抗腫瘍活性を増強させるための抗腫瘍効果増強剤を製造するための、リポソームにオキサリプラチンを封入したリポソーム製剤の使用であって、
前記リポソームが、
ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］;
水素添加大豆ホスファチジルコリン、コレステロール及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］；又は
ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ポリグリセリン
からなる、使用。
【請求項１０】
リポソームにオキサリプラチンを封入したリポソーム製剤及びとテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤を含むキットであって、
前記リポソームが、
ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］;
水素添加大豆ホスファチジルコリン、コレステロール及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］；又は
ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール及び１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ポリグリセリン
からなる、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オキサリプラチンを含有するリポソーム製剤からなる抗腫瘍効果増強剤及び当該リポソーム製剤を含有する抗腫瘍剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在までに癌治療のために多くの薬物が開発され、医療に用いられている。例えばテガフールは、生体内で活性化を受けて活性本体である5−フルオロウラシル（以下、5−FUと称する）を徐々に放出する薬剤であり、5−FUにおける毒性又は副作用を軽減したものである。このテガフールとギメラシル及びオテラシルカリウムの3剤配合剤（商品名：ティーエスワン、テガフール：ギメラシル：オテラシルカリウム（モル比）=1：0.4：1、大鵬薬品工業（株）製、以下、TS−1と称する）は、ギメラシルが5−FUの分解阻害作用を有することから、抗腫瘍効果の更なる増強が見られる。また、この配合剤では、テガフールとギメラシルの2剤による抗腫瘍効果の増強に付随して上昇することが危惧される消化管毒性をオテラシルカリウムが特異的に抑制することにより、治療効果が向上している。このように、TS−1は各種の悪性腫瘍の治療に貢献している（特許文献1参照）。【０００３】
しかし、癌患者の生存期間をより延長させるような更に治療効果の高い薬剤や治療法が必要とされている。この目的で、抗腫瘍作用の発現機構や副作用の種類が異なる複数の薬剤を組み合わせて投与することにより、治療成績を向上させる試み（併用療法）が行われており、いくつかの併用療法は治療成績の向上に貢献している（特許文献2、3及び4参照）。例えば、オキサリプラチンは単剤での抗腫瘍効果が低いため他剤との併用療法で使用されており、併用療法としては5−FU及びホリナート（以下、LVと称す）との併用療法（FOLFOX）が世界的に汎用されている（非特許文献1、2及び3参照）。しかし、FOLFOXは操作が煩雑であることから持続静注に伴う拘束に由来する患者のQOLの低下や、高額な治療費等が問題となっており、オキサリプラチンを用いたより良い併用療法の確立が世界中で検討されている。その一つとして経口フッ化ピリミジン系抗腫瘍剤であるカペシタビン（商品名：ゼローダ）とオキサリプラチンの併用療法（XELOX）はFOLFOXとほぼ同等の抗腫瘍効果を有することが報告されている（非特許文献4参照）。また、新たな試みとして、TS−1とオキサリプラチンを併用することにより、抗腫瘍効果が顕著に増大し、この場合の抗腫瘍効果はカペシタビンを併用した場合と比較しても高い有効性を示す治療法であることが示唆されている（特許文献5参照）が、更により高い治療効果が求められている。【０００４】
先に述べたようにオキサリプラチンは単剤での抗腫瘍効果が低い。このように抗腫瘍剤が十分な治療効果を発揮できない原因の一つとして、抗腫瘍剤の腫瘍組織に対する選択性の低さが挙げられる。抗腫瘍剤を投与した場合、血中から速く消失したり、標的以外の臓器にも分布することがあり、必ずしも効果的に腫瘍組織に集積するとは限らない。このため抗腫瘍剤の多くは、腫瘍組織に対する抗腫瘍作用を十分に発揮できず、また、しばしば望ましくない正常組織への作用（副作用）を伴い、重篤な毒性を引き起こしている。抗腫瘍剤の効果増強は、現在の癌化学療法の重要な課題であり、薬物を腫瘍組織に効率的に集積する薬物送達システム（DDS、Drug Delivery System）の開発が強く求められている。【０００５】
リポソームは生体成分由来のリン脂質を主成分とする閉鎖小胞であり、生体に投与したときの毒性、抗原性が低い特徴を持つ。またリポソーム内に薬物を封入することにより、その薬物の血中安定性及び生体内分布を変化させて標的組織への到達性を改善できることが示されている（特許文献6、7、8及び非特許文献5参照）。また癌組織に多く存在する新生血管の血管壁は既存の血管のそれと比較して透過性が高く、粒子径100〜200 nmのリポソーム等の小胞は癌組織に集積しやすいことが知られている（非特許文献6参照）。
【特許文献１】特許第2614164号公報
【特許文献２】特許第2557303号公報
【特許文献３】特開平8−169825号公報
【特許文献４】特開2002−205945号公報
【特許文献５】国際公開WO2005/120480号公報
【特許文献６】国際公開WO95/24201号公報
【特許文献７】特許第3415131号公報
【特許文献８】特開2006−248978号公報
【非特許文献１】Journal of Clinical Oncology、Vol.22、23−30、2004
【非特許文献２】Journal of Clinical Oncology、Vol.21、2059−2069、2003
【非特許文献３】Journal of Clinical Oncology、Vol.18、2938−2947、2000
【非特許文献４】Journal of Clinical Oncology、Vol.22、2084−2091、2004
【非特許文献５】Journal of Liposome Research、Vol.4、667−687、1994
【非特許文献６】Drug Delivery System、Vol.14、433−447、1999
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤の毒性を上昇させることなく、抗腫瘍効果を高めることを目的とする。本発明はまた、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤とオキサリプラチンとを含む抗腫瘍剤と比較して、より抗腫瘍効果の高い抗腫瘍剤及びキットを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らはこのような現状に鑑み、より患者の生存期間延長に寄与する癌治療法を開発すべく、研究を重ね、白金錯体であるシスオキザラート（1R，2R−ジアミノシクロヘキサン）白金（II）（一般名：オキサリプラチン、商品名：エロキサチン又はエルプラット、以下l−OHPとする）をリポソーム内に安定に封入し、リポソームのサイズ等を適切に調節することによって調製に成功したl−OHP封入リポソームをテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤に併用することにより、副作用を増強することなく抗腫瘍効果を顕著に増強することを見出し、本発明を完成するに至った。【０００８】
即ち、本発明は、下記の抗腫瘍効果増強剤、抗腫瘍剤及び抗腫瘍剤キット等を提供するものである。【０００９】
項１．リポソームにオキサリプラチンを封入したリポソーム製剤とテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤とを組み合わせてなる抗腫瘍剤。【００１０】
項２．前記リポソームを構成する脂質成分の少なくとも１種がリン脂質である項１に記載の抗腫瘍剤。【００１１】
項３．リポソームの膜表面がポリエチレングリコール、ポリグリセリン又はカチオン化脂質で修飾されている項２に記載の抗腫瘍剤。【００１２】
項４．テガフール１モルに対するオキサリプラチンの使用割合が、０．１〜５モルである項１〜３のいずれか一項に記載の抗腫瘍剤。【００１３】
項５．テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤中の、テガフール1モルに対するギメラシルの配合割合が0.1〜5モルであり、テガフール1モルに対するオテラシルカリウムの配合割合が0.1〜5モルである項１に記載の抗腫瘍剤。【００１４】
項６．抗腫瘍剤がオキサリプラチンを含有してなるリポソーム製剤とテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤とからなるキットであることを特徴とする、項１に記載の抗腫瘍剤。【００１５】
項７．リポソーム製剤が静脈内、腹腔内、筋肉内及び皮下による投与経路により、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤が経口による投与経路により、投与されることを特徴とする、項１に記載の抗腫瘍剤。【００１６】
項８．リポソームに抗腫瘍効果増強のために有効な量のオキサリプラチンを封入したリポソーム製剤である、治療に有効な量のテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤の抗腫瘍活性を増強させる抗腫瘍効果増強剤。【００１７】
項９．前記リポソームを構成する脂質成分の少なくとも１種がリン脂質である項８に記載の抗腫瘍効果増強剤。【００１８】
項１０．リポソームの膜表面がポリエチレングリコール、ポリグリセリン又はカチオン化脂質で修飾されている項９に記載の抗腫瘍効果増強剤。【００１９】
項１１．テガフール１モルに対するオキサリプラチンの使用割合が、０．１〜５モルである項８〜１０のいずれか一項に記載の抗腫瘍効果増強剤。【００２０】
項１２．テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤中の、テガフール1モルに対するギメラシルの配合割合が0.1〜5モルであり、テガフール1モルに対するオテラシルカリウムの配合割合が0.1〜5モルである項８に記載の抗腫瘍効果増強剤。【００２１】
項１３．坑腫瘍剤を製造するための、リポソームにオキサリプラチンを封入したリポソーム製剤及びテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤の使用。【００２２】
項１４．抗腫瘍効果増強剤を製造するための、リポソームにオキサリプラチンを封入したリポソーム製剤の使用。【００２３】
項１５．リポソームにオキサリプラチンを封入したリポソーム製剤及びテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤の有効量を癌患者に投与することを特徴とする、癌の治療方法。
【発明の効果】
【００２４】
本発明の抗腫瘍効果増強剤は、l−OHPと比較して、公知の抗腫瘍剤であるテガフール、ギメラシル及びオテラシルカリウムの3剤配合剤の毒性を上昇させることなく、抗腫瘍効果を高めることができる。よって、本発明の抗腫瘍剤及び抗腫瘍剤キットは、テガフール、ギメラシル及びオテラシルカリウムの3剤配合剤とl−OHPとの併用療法と比較して毒性が同等でありながら、高い抗腫瘍効果を示すという格別顕著な効果を示す。従って、本発明は、癌患者の生存期間をより延長させるような治療効果の高い治療法への応用が期待される。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】試験例1の相対腫瘍増殖比を示す図である。
【図２】試験例1のマウスの体重変化を示す図である。
【図３】試験例２の相対腫瘍増殖比を示す図である。
【図４】試験例２のマウスの体重変化を示す図である。
【図５】試験例３のマウスの生存日数を示す図である。
【図６】試験例４のマウスの生存日数を示す図である。
【図７】試験例５の相対腫瘍増殖比を示す図である。
【図８】試験例６の相対腫瘍増殖比を示す図である。
【図９】試験例６のマウスの体重変化を示す図である。
【図１０】試験例７のマウスの生存日数を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
（１）抗腫瘍効果増強剤
本発明は、脂質成分より構成されるリポソームに抗腫瘍効果増強のために有効な量のオキサリプラチン（l−OHP）を封入したリポソーム製剤である、治療に有効な量のテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤の抗腫瘍活性を増強させる抗腫瘍効果増強剤を提供する。【００２７】
（１−１）リポソーム製剤
l−OHP
l−OHPは白金を含有する錯体であり公知の化合物である。l−OHPは癌細胞のDNAに結合することによりDNAの機能障害及びDNA鎖の切断を引き起こし、癌細胞を死滅させる作用を有している。l−OHPは、公知の方法、例えば特公昭60−41077号に記載されている方法に従って製造できる。【００２８】
リポソーム
本発明のリポソーム製剤に用いられるリポソームとは、細胞膜の構成成分であるリン脂質を水中に分散させて形成される脂質二分子膜により囲まれた内水相部分を有する閉鎖小胞であり、そのサイズや脂質二分子の数によって多重相リポソーム（Multilamellar Vesicle：MLV）、大きな一枚膜リポソーム（Large Unilamellar Vesicle：LUV）及び小さな一枚膜リポソーム（Small Unilamellar Vesicle：SUV）の3種類に分類される。本発明ではいずれの種類のリポソームも使用可能である。本発明のリポソームは生体内投与前及び投与後に安定なリポソーム構造を形成しなければならない。リポソームを構成するリン脂質としては、例えば水素添加精製卵黄ホスファチジルコリン（相転移温度50℃、以下HEPCとする）、水素添加精製大豆ホスファチジルコリン（相転移温度約55℃、以下HSPCとする）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（相転移温度約41℃、以下DPPCとする）、ジステアロイルホスファチジルコリン（相転移温度約58℃、以下DSPCとする）及び1−パルミトイル−2−オレオイルホスファチジルコリン（相転移温度−3℃、以下POPC）から選ばれ、より好ましくはHEPC, HSPC, DPPC、DSPCが挙げられる。【００２９】
本明細書において、水素添加卵黄ホスファチジルコリンとは、卵黄由来のホスファチジルコリンに水素添加したものをいう。好ましい実施形態において、水素添加卵黄ホスファチジルコリンとしては、例えば、アシル部分が炭素数１６〜１８の飽和直鎖脂肪酸由来のアシル基であるホスファチジルコリンを主成分とするものを挙げることができる。また、本発明においては、水素添加精製卵黄ホスファチジルコリンとは、水素添加卵黄ホスファチジルコリンを精製したものをいい、例えば、純度８０％以上、好ましくは純度９０％以上のものを用いることができる。【００３０】
本明細書において、水素添加大豆ホスファチジルコリンとは、大豆由来のホスファチジルコリンに水素添加したものをいう。好ましい実施形態において、水素添加大豆ホスファチジルコリンとしては、例えば、アシル部分が炭素数１６〜１８の飽和直鎖脂肪酸由来のアシル基であるホスファチジルコリンを主成分とするものを挙げることができる。また、本発明においては、水素添加精製大豆ホスファチジルコリンとは、水素添加大豆ホスファチジルコリンを精製したものをいい、例えば、純度８０％以上、好ましくは純度９０％以上のものを用いることができる。【００３１】
これらのリン脂質は1種又は2種以上混合して用いることができる。相転移温度の異なるリン脂質を用いることにより、リポソームの脂質二分子膜の流動性を変えることができ、薬物の封入率、製剤中での安定性、投与後の生体内動態などの点から、最適なリン脂質を選択することができる。【００３２】
本発明に用いられるリポソームは、これらリン脂質に加えて、好ましくはリポソームの安定性を改善することが報告されているコレステロールあるいはその誘導体等の安定化剤と混合して使用される。さらにリポソームの膜表面を、必要に応じ、ポリエチレングリコール、ポリグリセリン等の親水性高分子、アミノ基、アミジノ基、グアジニノ基等の塩基性官能基を含む脂質（以下、カチオン化脂質とする）、ペプチド、レクチン、抗体、糖質、糖タンパク、糖脂質等のリガンドで修飾することによって、リポソームの血中での安定性、組織分布、腫瘍組織への移行性等をさらに改善することができる。【００３３】
本発明において、「ポリエチレングリコール」には、未置換のポリエチレングリコールだけでなく、親油性（疎水性）側鎖を共有結合させた誘導体が含まれ、親油性側鎖の具体例として、アルキル鎖、リン脂質、コレステロール等が挙げられる。かかるポリエチレングリコール誘導体としては、リポソームの安定性向上のために通常用いられるものを広く用いることができる。同様に、本発明において、「ポリグリセリン」には、未置換のポリグリセリンだけでなく、親油性（疎水性）側鎖を共有結合させた誘導体が含まれ、親油性側鎖の具体例として、アルキル鎖、リン脂質、コレステロール等が挙げられる。かかるポリグリセリン誘導体としては、リポソームの安定性向上のために通常用いられるものを広く用いることができる。また、等張化剤として、例えば、グリセリン、ブドウ糖、塩化ナトリウム等の添加も可能である。さらに、パラベン類、クロルブタノール、ベンジルアルコール、プロピレングリコール等の防腐剤を加えてもよい。【００３４】
リポソーム製剤
本発明のリポソーム製剤は公知の方法により調製される。公知のリポソーム製剤の調製方法としては、例えば、逆相蒸発法（Proc. Natl. Acad. Sci. USA、Vol.75、4194、1978、国際公開WO97／48398号公報）、凍結融解法（Arch. Biochem. Biophys、Vol.212、186、1981）、pH勾配法（Biochem. Biophys. Acta、Vol.816、294、1985、特開平7−165560号公報）等が挙げられる。【００３５】
これらの中で、逆相蒸発法による本発明のリポソーム製剤の調製方法としては、例えば、脂質成分をクロロホルム、エーテル、エタノール等の溶媒に溶解後、ナス型フラスコに入れ、減圧下溶媒留去し脂質薄膜を形成する。次いで、クロロホルム／ジエチルエーテル= 1／2混液を加え、薄膜を溶解する。ここに薬物の水溶液を添加し、25℃にて15分間超音波処理を行い乳化（エマルション）させる。次いで、ボルテックスを交えながら、エバポレーターにて約１時間減圧下有機溶媒部分を留去させ、w/oエマルションからo/wエマルションに転相させることで、リポソームを形成、同時に薬物をリポソームに封入することができる。以上の操作により、薬物をリポソーム内部に封入することができる。【００３６】
リポソームの粒子サイズは内包されている薬物の生体内分布、腫瘍組織への送達性に大きな影響を与えることが報告されている（Biol.Pharm.Bull、Vol.17、935、1994）。従って、本発明においては、薬物内包リポソームの粒子径を適切かつ均一にするために、サイジング処理を行うのが好ましく、例えば、バイオディスラプター（日本精機社製等）を使用した超音波処理やナノマイザー（吉田機械興業）等を用いた高圧乳化処理を行うことにより、平均粒子径として約100〜200nmになるように調節する。あるいは、窒素加圧下、リポソーム溶液を種々のポリカーボネートメンブレンフィルターを用いてサイジング（0.4μm，0.2μm，0.1μm，0.08μm）することで平均粒子径として約100〜300nmになるように調節する。【００３７】
尚、本発明において、「平均粒子径」とは、NICOMP 370 HPL submicron particle analyzer（Particle Sizing System社製）を用い、光散乱法にて得られる平均粒子径を示す。【００３８】
さらにリポソームの膜表面を、必要に応じ、ポリエチレングリコール、ポリグリセリン、カチオン化脂質、ペプチド、レクチン、抗体、糖質、糖タンパク、糖脂質等のリガンドで修飾することによって、リポソームの血中での安定性、組織分布、腫瘍組織への移行性等をさらに向上させることができる。【００３９】
本発明に係るリポソーム製剤はまた、オキサリプラチン（l−OHP）のリポソーム製剤について開示する特許文献7（特許第3415131号公報）、特許文献8（特開2006−248978号公報）の方法に従い得ることができる。【００４０】
好ましい実施形態において、本発明に係るリポソーム製剤は、l−OHP溶液として、l−OHPを１〜１０%ブドウ糖液に１〜２０mg/mL となるように溶解した液を用いて調製される。【００４１】
上記記載の方法によって調製した、l−OHP封入リポソーム製剤を、必要に応じ、超遠心処理、ゲル濾過処理、限外濾過処理及び透析処理を単独又は適宜組み合わせて行うことによって、リポソームに内包されなかった薬物を除去することができる。【００４２】
上記の方法により得られるl−OHP封入リポソーム製剤はそのままでも使用できるが、保存期間、保存条件等を考慮して、マンニトール、トレハロース、ラクトース、グリシン等の賦形剤を加えて凍結乾燥することもできる。またグリセリン等の凍結保存剤を加え、凍結保存してもよい。【００４３】
好ましい実施形態において、l−OHPのリポソーム製剤は、１〜５０μｇ／ｍｇ脂質、より好ましくは５〜４０μｇ／ｍｇ脂質のオキサリプラチンを含有する。【００４４】
本発明のl−OHP封入リポソーム製剤の平均粒子径は、好ましくは５０〜３００ｎｍ、より好ましくは８０〜２００ｎｍである。【００４５】
l−OHP封入リポソーム製剤は、一般的には、使用時に生理的に許容される水溶液で懸濁又は希釈して注射剤（静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下投与製剤）として用いられるが、経口剤、点鼻剤、吸入剤、坐剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤等として使用することもできる。この場合、適当な製剤用担体を用いて、通常の方法に従い製剤組成物とされる。ここで用いられる担体としては、通常の薬剤に汎用される各種のもの、例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、界面活性剤等を例示できる。【００４６】
本発明の抗腫瘍効果増強剤が抗腫瘍効果を増強させるテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤としては、以下のものが挙げられる。【００４７】
（１−２）テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤
テガフール
テガフール（一般名、化学名：5−フルオロ−1−（2−テトラヒドロフリル）−2，4−（1H，3H）−ピリミジンジオン）は、公知の化合物であり、生体内で活性化を受けて抗腫瘍活性の本体である5−FUを放出する薬剤である。テガフールは、公知の方法、例えば特公昭49−10510号に記載されている方法に従って製造できる。【００４８】
ギメラシル
ギメラシル（一般名、化学名：2，4−ジヒドロキシ−5−クロロピリジン）も、公知の化合物であり、それ自身全く抗腫瘍活性を有さないものであるが、5−FUが生体内において代謝されて不活性化されることを抑制するものであり、抗腫瘍効果を増強させることができる。【００４９】
オテラシルカリウム
オテラシルカリウム（一般名、化学名：モノポタシウム1，2，3，4−テトラヒドロ−2，4−ジオキソ−1，3，5，−トリアジン−6−カルボキシレート）も公知の化合物であり、それ自身は抗腫瘍活性を有さないが、主に消化管に分布してその部位での5−FUの活性化を抑制することにより消化管障害を抑制するものである。【００５０】
テガフール、ギメラシル及びオテラシルカリウムの3成分を有効成分として含有する配合剤の配合割合は、例えば、特許第2614164号公報に記載されている公知の配合剤と同様の範囲で良く、通常、テガフール1モルに対して、ギメラシルを0.1〜5モル程度、好ましくは0.2〜1.5モル程度とすればよく、オテラシルカリウムを0.1〜5モル程度、好ましくは0.2〜2モル程度とすればよい。特に好ましくは、3成分の配合割合は、テガフール：ギメラシル：オテラシルカリウム（モル比）= 1：0.4：1である。【００５１】
テガフール、ギメラシル及びオテラシルカリウムの３成分を有効成分として含有する配合剤は、各成分をそれぞれ単独若しくは任意の組み合わせで含む二個以上の製剤からなる製剤形態、又は全有効成分を含む一つの製剤に調製した形態のいずれであっても良い。いずれの場合も、これらは適当な製剤用担体を用いて、通常の方法に従い製剤組成物とされる。ここで用いられる担体としては、通常の薬剤に汎用される各種のもの、例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、界面活性剤等を例示できる。【００５２】
上記した二個以上の製剤からなる製剤形態の配合剤を用いる場合には、各成分は、同時に、又は一の成分の投与前又は後の任意の時期に他の成分を投与することができる。好ましくは同時に、もしくは一の成分の投与前後４時間以内、より好ましくは２時間以内に他の成分を投与するのがよい。【００５３】
（１−３）投与方法
前述のl−OHP封入リポソーム製剤である抗腫瘍効果増強剤は、各種の投与単位形態に製剤されたテガフール、ギメラシル及びオテラシルカリウムの３成分を有効成分とする配合剤と、それぞれ別々に又は同時に投与することができる。すなわち、本発明の抗腫瘍効果増強剤は、テガフール、ギメラシル及びオテラシルカリウムの３成分を有効成分とする抗腫瘍剤の投与前、後、同時の任意の時期に投与することができる。好ましくは同時に、もしくは抗腫瘍剤の投与前後４時間以内、より好ましくは２時間以内に投与するのが良い。継続して投与する場合は、抗腫瘍剤及び抗腫瘍効果増強剤の投与頻度、投与間隔を適切に設定して使用する。【００５４】
l−OHP封入リポソーム製剤を、上記したテガフール、ギメラシル及びオテラシルカリウムの３成分を有効成分として含有する抗腫瘍剤と別々に又は同時に投与する場合、例えば、テガフール１モルに対して、l−OHPの量が０．１〜５モル程度、好ましくは０．１〜３モル程度、より好ましくは、０．２〜２モル程度となる範囲で投与すればよい。【００５５】
（２）抗腫瘍剤
また、本発明は、テガフール、ギメラシル及びオテラシルカリウムの３成分を有効成分として含有する配合剤に、更に、上記抗腫瘍効果増強剤であるl−OHP封入リポソーム製剤と組み合わせた抗腫瘍剤を提供する。当該抗腫瘍剤は、上記の３成分及びl−OHP封入リポソームの計４成分をそれぞれ単独若しくは任意の組み合わせで含む複数の製剤からなる製剤形態、又は全てを含む一つの製剤からなる製剤形態である。即ち、本発明の抗腫瘍剤は上記の４成分を全て含んだ１剤型の製剤であっても、そのうちの１〜３成分を含んだ製剤とその他の成分を含んだ製剤との多剤型の製剤であってもよい。特に、テガフール、ギメラシル及びオテラシルカリウムの３成分を有効成分とする配合製剤と、l−OHP封入リポソーム製剤とを別個の製剤とする２剤型製剤が好ましい。【００５６】
該抗腫瘍剤では、各成分の配合割合は１剤型であっても多剤型であっても、特に限定的ではないが、通常、テガフール１モルに対して、ギメラシルを０．１〜５モル程度、好ましくは０．２〜１．５モル程度、オテラシルカリウムを０．１〜５モル程度、好ましくは０．２〜２モル程度、l−OHPを０．１〜５モル程度、好ましくは０．１〜３モル程度、より好ましくは０．２〜２モル程度とすればよい。特に、各成分のモル比が、テガフール：ギメラシル：オテラシルカリウム：l−OHP＝１：０．４：１：０．１〜５程度であることが好ましく、１：０．４：１：０．１〜３モル程度であることがより好ましく、１：０．４：１：０．２〜２モル程度であることが更に好ましい。好ましい形態である、上記したテガフール、ギメラシル及びオテラシルカリウムの３成分を有効成分とする配合製剤と、l−OHP封入リポソーム製剤とを別個の製剤とする２剤型製剤である場合には、テガフール：ギメラシル：オテラシルカリウム（モル比）＝１：０．４：１の配合製剤と、テガフール１モルに対して０．１〜５モル程度、好ましくは０．１〜３モル程度、より好ましくは０．２〜２モル程度のl−OHPを含むリポソーム製剤とすることが望ましい。【００５７】
これらの有効成分は適当な製剤用担体を用いて、通常の方法に従い製剤組成物とされる。ここで用いられる担体としては、通常の薬剤に汎用される各種のもの、例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、界面活性剤等を例示できる。【００５８】
上記した二個以上の製剤からなる多剤型の抗腫瘍剤を用いる場合には、各成分は、同時に、又は一の成分の投与前又は後の任意の時期に他の成分を投与することができる。好ましくは同時に、もしくは一の成分の投与前後４時間以内、より好ましくは２時間以内に他の成分を投与するのがよい。【００５９】
（３）キット
また、本発明は、上記したl−OHP封入リポソーム製剤と、テガフール、ギメラシル及びオテラシルカリウムの配合製剤とを組み合わせたキット、具体的には、
（ａ）治療に有効な量のテガフール、抗腫瘍効果増強のために有効な量のギメラシル、及び副作用抑制のために有効な量のオテラシルカリウムを含有する抗腫瘍組成物、並びに
（ｂ）抗腫瘍効果増強のために有効な量のl−OHPを含有するリポソーム
からなる哺乳動物における癌治療のための医薬組成物の組み合わせからなるキットを提供する。【００６０】
該キットでは、これを構成する各組成物は公知の各種の製剤形態とすることができ、一般に各々の組成物は、その製剤形態に応じて、通常用いられる各種の容器に収納される。【００６１】
また、該キットは、例えば、
（i）治療に有効な量のテガフール、
（ii）抗腫瘍効果増強のために有効な量のギメラシル、
（iii）副作用抑制のために有効な量のオテラシルカリウムを含有する抗腫瘍組成物、
並びに
（iv）抗腫瘍効果増強のために有効な量のl−OHPを含有するリポソーム
からなる少なくとも４成分、及びこれらの成分のための少なくとも２個の容器を含み、テガフールとl−OHPとが、異なった容器に収納されるものである哺乳動物における癌治療用キットとすることができる。上記成分（i）〜（iv）は、いずれも薬学的に許容される担体と組み合わせた製剤形態であることが好ましい。上記キットにおいては、（i）成分と（iv）成分とが別の容器に収納されていればよく、（ii）及び（iii）成分は各々、前記２成分と別の容器に収容されていても良いし、（i）又は（iv）成分と混合されて同じ容器に収容されていても良い。（i）〜（iii）成分を含有する製剤を一つの容器に収容し、（iv）成分を含有する製剤を他の容器に収容したキットが好ましい。【００６２】
本発明の抗腫瘍剤を、悪性腫瘍を患った人を含む哺乳動物の治療の目的で使用する際の投与単位形態については特に限定されず、治療目的に応じて適宜選択でき、具体的には注射剤、坐剤、点眼剤、軟膏剤、エアゾール剤等の非経口剤、錠剤、被覆錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、丸剤、懸濁剤、乳剤等の経口剤を例示できる。上記投与剤は、この分野で通常知られた製剤方法により製造される。【００６３】
本発明の抗腫瘍剤における有効成分であるテガフール、ギメラシル、オテラシルカリウム、及びl−OHPの配合量は、剤型、投与経路、投与計画等により変り、特に限定されず適宜選択すれば良いが、通常製剤中の有効成分量を各々１〜７０重量％程度とするのが良い。【００６４】
本発明製剤の投与方法は特に制限されず、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、患者の症状の程度等に応じて決定され、経腸投与、経口投与、直腸投与、口腔内投与、動脈内・静脈内投与、経皮投与等が可能である。例えば、錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤等は経口投与され、注射剤は動脈内又は静脈内投与され、坐剤は直腸内投与され、軟膏剤は、皮膚、口腔内粘膜等に塗布される。本発明製剤において、例えば、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合製剤を経口投与し、l−OHP封入リポソーム製剤を静脈内投与することが可能である。【００６５】
本発明における各有効成分の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度、その他の条件等により適宜選択できる。本発明の抗腫瘍効果増強剤又は抗腫瘍剤は、１日に１〜４回程度に分けて投与することができる。【００６６】
経口投与の場合、テガフールの量が０.１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日程度、好ましくは０．２〜４０ｍｇ／ｋｇ／日程度、より好ましくは０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ／日程度、ギメラシルの量が、０.０２〜３０ｍｇ／ｋｇ／日程度、好ましくは０．０５〜１２ｍｇ／ｋｇ／日程度、より好ましくは０．１〜６ｍｇ／ｋｇ／日程度、オテラシルカリウムの量が０.１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日程度、好ましくは０．２〜４０ｍｇ／ｋｇ／日程度、より好ましくは０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ／日程度、l−OHPの量が０．０８〜２００ｍｇ／ｋｇ／日程度、好ましくは０．１５〜８０ｍｇ／ｋｇ／日程度、より好ましくは０．４〜４０ｍｇ／ｋｇ／日程度の範囲となる量を目安とするのが良い。【００６７】
注射剤の場合、通常成人１日当たりテガフール量として０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ程度、l−OHP量として０．０８〜２００ｍｇ／ｋｇ程度、を必要に応じて５％ブドウ糖溶液で希釈し、５分以上かけて徐々に投与することができる。【００６８】
坐剤の場合、通常成人１日当たりに対し、テガフール量として０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ程度、l−OHP量として０．０８〜２００ｍｇ／ｋｇ程度を１日１〜２回、６〜１２時間の間隔をおいて直腸内に挿入して投与することができる。【００６９】
本発明製剤を投与することにより治療できる悪性腫瘍の種類としては、活性本体である５−ＦＵに感受性を示すものであれば特に制限はなく、例えば肺癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、食道癌、乳癌、頭頸部癌、肝臓癌、胆のう・胆管癌、膵臓癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、腎癌、膀胱癌、前立腺癌、咽頭癌、脳腫瘍、白血病、メラノーマ、悪性リンパ腫等が挙げられる。特に結腸癌、直腸癌、胃癌、食道癌、乳癌、頭頸部癌に対して高い効果が期待できる。更に、典型的に薬剤耐性であるか又は薬剤耐性になり始めている腫瘍に対しても高い効果が期待できる。
【実施例】
【００７０】
以下、実施例及び試験例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例及び試験例に限定されるものではない。【００７１】
実施例1
DPPC（L−α−Dipalmitoyl Phosphatidylcholine、Coatsome MC−6060、日油）、コレステロール（特級、和光純薬工業）、及びmPEG2000−DSPE（1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-n-[methoxy(polyethylene glycol)-2000]、Sunbright DSPE−020CN、日油）を夫々20mM、50mM、及び5mMとなるようにクロロホルムに溶解した。20mM DPPC溶液5mL、50mM コレステロール溶液0.5mL、及び5mM mPEG2000−DSPE溶液1mLをナス型フラスコに入れ、エバポレーターで減圧下、クロロホルムを留去し、ナス型フラスコの底に脂質薄膜を形成させた。次にクロロホルム／ジエチルエーテル混液（1：2）6mLを加え、脂質薄膜を溶解した。l−OHPを5%ブドウ糖液に溶解しl−OHP濃度が8mg/mL となるように調製した液2mLを、上記脂質薄膜を溶解した液に加え、混合した。25℃にて15分間超音波処理した後、ボルテックスを行いながら、エバポレーターにて減圧下有機溶媒部分を留去し、l−OHPをリポソーム内に封入した。バイオディスラプター（日本精機社製）を使用し、超音波処理を行うことにより、薬物内包リポソームの平均粒子径として約200nm弱になるように調節した。さらに、封入されていないl−OHPを除去するために、透析カセット(Slide−A−Lyzer Dialysis Cassettes、 10000 MWCO、PIERCE) を用い、外液に5% ブドウ糖液を使用し、マグネティックスターラーで攪拌しながら4℃で2時間透析した。外液を交換した後、再度攪拌しながら2時間透析し、l−OHP封入リポソーム製剤とした。なお、このl−OHP封入リポソーム製剤の平均粒子径は、185.2±14.9nm（n= 5）であった。【００７２】
本願実施例において、リポソーム製剤の平均粒子径は、NICOMP 370 HPL submicron particle analyzer（Particle Sizing System社製）を用い、光散乱法にて測定した。【００７３】
実施例2
HSPC（Hydrogenated Soy Phosphatidylcholine、Coatsome NC−21、日油）、コレステロール（特級、和光純薬工業）、及びmPEG2000−DSPE（1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-n-[methoxy(polyethylene glycol)-2000]、Sunbright DSPE−020CN、日油）を夫々20mM、50mM、及び5mMとなるようにクロロホルムに溶解した。20mM HSPC溶液5mL、50mM コレステロール溶液1mL、及び5mM mPEG2000−DSPE溶液2mLをナス型フラスコに入れ、エバポレーターで減圧下、クロロホルムを留去し、ナス型フラスコの底に脂質薄膜を形成させた。次にクロロホルム／ジエチルエーテル混液（1：2）6mLを加え、脂質薄膜を溶解した。l−OHPを5%ブドウ糖液に溶解しl−OHP濃度が8mg/mL となるように調製した液2mLを、上記脂質薄膜を溶解した液に加え、混合した。35℃にて15分間超音波処理した後、ボルテックスを交えながら一時間ほどエバポレーターにて減圧下有機溶媒部分を留去し、l−OHPをリポソーム内に封入した。以下、実施例1と同じ方法で、粒子径の調整、未封入薬物の除去を行い、l-OHPリポソーム製剤を調製した。このl−OHP封入リポソーム製剤の平均粒子径は、197.9±22.0nm（n= 5）であった。【００７４】
実施例3
実施例1におけるmPEG2000−DSPEにかわり、PG−DSPE（Sunbright DSPE−PG10G、日油）を用いて、実施例1と同様の方法に従い、l−OHP封入リポソーム製剤を調製した。なお、このl−OHP封入リポソーム製剤の平均粒子径は、130.4±48.3nm（n = 3）であった。【００７５】
実施例4
HSPC（Hydrogenated Soy Phosphatidylcholine、Coatsome NC−21、日油）、コレステロール（特級、和光純薬工業）、カチオン化脂質であるDC-6-14(O,O’-ditetradecanoyl-N-(alpha-trimethyl ammonio acetyl) diethanolamine chloride、相互薬工)、及びmPEG2000−DSPE（1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-n-[methoxy(polyethylene glycol)-2000]、Sunbright DSPE−020CN、日油）を夫々20mM、50mM、5mM及び5mMとなるようにクロロホルムに溶解した。20mM HSPCクロロホルム溶液5mL、50mM コレステロール溶液1mL、5mM DC-6-14及び5mM mPEG2000−DSPEクロロホルム溶液2mLをナス型フラスコに入れ、エバポレーターで減圧下、クロロホルムを留去し、ナス型フラスコの底に脂質薄膜を形成させた。次にクロロホルム／ジエチルエーテル混液（1：2）6mLを加え、脂質薄膜を溶解した。l−OHPを5%ブドウ糖液に溶解しl−OHP濃度が8mg/mL となるように調製した液2mLを、上記脂質薄膜を溶解した液に加え、混合した。35℃にて15分間超音波処理した後、ボルテックスを交えながら一時間ほどエバポレーターにて減圧下有機溶媒部分を留去し、l−OHPをリポソーム内に封入した。以下、実施例1と同じ方法で、粒子径の調整、未封入薬物の除去を行い、l-OHPリポソーム製剤を調製した。このl−OHP封入リポソーム製剤の平均粒子径は、202.4±14.7nm（n= 5）であった。【００７６】
試験例1
投与製剤の調製
l−OHP封入リポソーム製剤は、実施例1で調製されたもの（以下、DPPC liposome l−OHPとする）を用いた。【００７７】
l−OHPを5%ブドウ糖溶液に溶解して、l−OHP製剤（以下、free l−OHPとする）を調製した。【００７８】
TS−1カプセル内容物を水に溶解し、TS−1製剤（以下、TS−1とする）を調製した。【００７９】
製剤の抗腫瘍効果及び副作用
高肺転移性腫瘍細胞株Lewis Lung carcinoma (LLC) 細胞を5%CO2存在下、37℃ 10% FBS−DMEM中で培養した。5×106cells/mLに調製したLLC 細胞を雄性C57BL/6マウス（5週齢、体重20g）の背部皮下に0.1mL注入移植して固形癌担癌マウスを作成した。 LLC 細胞移植6日目に以下の計算式で算出した腫瘍体積が50mm3を超えたことを確認した。【００８０】
DPPC liposome l−OHP又はfree l−OHPを、l−OHPとして4.2mg/kgを尾静脈内に投与した。同様にTS−1をテガフールとして6.9mg/kgを経口投与した。なお、DPPC liposome l−OHP及びfree l−OHPは移植13日目、20日目に投与を行い、TS−1は癌移植6日後から実験終了まで連日投与した。【００８１】
癌移植6日後から腫瘍体積を以下の式を用いて算出し、相対腫瘍体積比を指標として抗腫瘍効果を評価した。【００８２】
腫瘍体積（Tumor volume）=1/2×a×b2
（a：腫瘍部位の長径、b：腫瘍部位の短径）
また、副作用の指標としてマウスの体重変化を調べた。 【００８３】
図1の結果から明らかなように、DPPC liposome l−OHPとTS−1との併用投与は、free l−OHPとTS−1との併用投与と比較して、より高い抗腫瘍効果を示した。一方、図２の結果から明らかなように、DPPC liposome l−OHPとTS−1との併用投与は、free l−OHPとTS−1との併用投与と比較して、体重変化に明らかな差がなく、顕著な毒性の増加は認められなかった。【００８４】
試験例２
l−OHP封入リポソーム製剤は、実施例２で調製されたもの（以下、HSPC liposome l−OHPとする）を用いた以外は、試験例１と同様の方法で抗腫瘍効果と副作用を評価した。【００８５】
図３の結果から明らかなように、HSPC liposome l−OHPとTS−1との併用投与は、free l−OHPとTS−1との併用投与と比較して、より高い抗腫瘍効果を示した。一方、図４の結果から明らかなように、HSPC liposome l−OHPとTS−1との併用投与は、free l−OHPとTS−1との併用投与と比較して、体重変化に明らかな差がなく、顕著な毒性の増加は認められなかった。【００８６】
試験例３
試験例１と同様の方法で投与製剤を調製し、担癌マウスへ投与し、マウスの生存日数を調べた。【００８７】
図５の結果から明らかなように、DPPC liposome l-OHPとTS-1との併用投与は、free l-OHPとTS-1との併用投与に比べ、良好な延命効果が認められた。【００８８】
試験例４
試験例２と同様の方法で投与製剤を調製し、担癌マウスへ投与し、マウスの生存日数を調べた。【００８９】
図６の結果から明らかなように、HSPC liposome l-OHPとTS-1との併用投与は、free l-OHPとTS-1との併用投与に比べ、良好な延命効果が認められた。【００９０】
試験例５
l−OHP封入リポソーム製剤は、実施例3で調製されたリポソーム製剤（以下、PG10 liposome l-OHPとする）を使用した以外は、試験例1と同様の方法に従い、抗腫瘍効果を評価した。【００９１】
図７の結果から明らかなように、PG10 liposome l-OHPとTS-1との併用投与は、free l-OHPとTS-1との併用投与と比較して、より高い抗腫瘍効果を示した。【００９２】
試験例６
投与製剤の調製
試験例２と同様の方法で投与製剤を調製した。【００９３】
製剤の抗腫瘍効果及び副作用
マウス結腸癌細胞株Colon26 細胞を5%CO2存在下、37℃ 10% FBS−DMEM中で培養した。2×107 cells/mLに調製したColon26細胞を雄性BALB/cマウス（5週齢、体重20g）の背部皮下に0.1mL注入移植して固形癌担癌マウスを作成した。 Colon26細胞移植7日目に以下の計算式で算出した腫瘍体積が50mm3を超えたことを確認した。【００９４】
HSPC liposome l−OHP又はfree l−OHPをl−OHPとして4.2mg/kgを尾静脈内に投与した。同様にTS−1をテガフールとして6.9mg/kgを経口投与した。なお、HSPC liposome l−OHP及びfree l−OHPは移植14日目、21日目に投与を行い、TS−1は癌移植7日後から実験終了まで連日投与した。【００９５】
これ以外の抗腫瘍効果及び副作用は、試験例２と同様の方法で評価した。【００９６】
図８の結果から明らかなように、HSPC liposome l−OHPとTS−1との併用投与は、free l−OHPとTS−1との併用投与と比較して、より高い抗腫瘍効果を示した。一方、図９の結果から明らかなように、HSPC liposome l−OHPとTS−1との併用投与は、free l−OHPとTS−1との併用投与と比較して、体重変化に明らかな差がなく、顕著な毒性の増加は認められなかった。【００９７】
試験例７
試験例６と同様の方法で投与製剤を調製し、担癌マウスへ投与し、マウスの生存日数を調べた。【００９８】
図１０の結果から明らかなように、HSPC liposome l-OHPとTS-1との併用投与は、free l-OHPとTS-1との併用投与に比べ、良好な延命効果が認められた。【００９９】
上記の結果より、l−OHPをリポソーム化製剤とすることにより、TS−1併用時の抗腫瘍効果と延命を顕著に増大し、かつ毒性はl−OHPとTS−1との併用時と同等であることが示唆された。抗腫瘍活性の増強の原因は、リポソーム内への安定な封入によってl−OHPの生体内分布が改善され、腫瘍組織への到達性が向上したためと考えられる。【０１００】
本発明において、l−OHPをリポソーム製剤とすることによりテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤併用時の抗腫瘍活性を増強し、かつリポソーム化による毒性は認められないことが示されたことから、癌治療において、l−OHPリポソーム製剤とテガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤併用療法は有用であることが示唆された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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