(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
２つ以上の多量体化クラスターストラドマー単位を含むクラスターストラドマーであって、前記クラスターストラドマー単位が各々、少なくとも１つの多量体化用領域と少なくとも１つのＦｃドメインとを含み、前記２つ以上のクラスターストラドマー単位の前記多量体化用領域が多量体化して前記クラスターストラドマーを形成し、前記クラスターストラドマーが２つ以上のＦｃγ受容体と特異的に結合することができる、クラスターストラドマー。
【請求項２】
前記少なくとも１つの多量体化用領域が各々独立して、ＩｇＧ２のヒンジ、ロイシンジッパー、イソロイシンジッパー、およびジンクフィンガーからなる群から選択される、請求項１に記載のクラスターストラドマー。
【請求項３】
前記多量体化用領域がＩｇＧ２のヒンジである、請求項１に記載のクラスターストラドマー。
【請求項４】
前記少なくとも１つのＦｃドメインが各々、Ｆｃ部分ドメインで構成され、該Ｆｃ部分ドメインが独立して、ＩｇＧ１のヒンジ、ＩｇＧ３のヒンジ、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン、ＩｇＧ３のＣＨ２ドメイン、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメイン、ＩｇＧ３のＣＨ３ドメイン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載のクラスターストラドマー。
【請求項５】
前記クラスターストラドマー単位が１つのＦｃドメインを含み、前記１つのＦｃドメインが、ＩｇＧ１のＣＨ２とＩｇＧ１のＣＨ３を含み、前記多量体化用領域がＩｇＧ２のヒンジである、請求項１に記載のクラスターストラドマー。
【請求項６】
前記クラスターストラドマー単位が各々、ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩＩ、ＦｃγＲＩＶ及びこれらの非ヒト等価物からなる群から選択される少なくとも１つのＦｃγＲと特異的に結合する、請求項１に記載のクラスターストラドマー。
【請求項７】
多量体化した２つ以上のホモ二量体を含む、ストラドボディであって、ホモ二量体が各々、抗原結合活性を有する少なくとも１つのＦａｂドメインと、少なくとも１つのＦｃドメインと、前記ホモ二量体を多量体化可能な少なくとも１つの多量体化用領域とを含み、前記ストラドボディが２つ以上のＦｃγ受容体と特異的に結合することができる、ストラドボディ。
【請求項８】
前記ホモ二量体の各単量体が、共有結合、ジスルフィド結合または化学的架橋によって互いに会合している、請求項７に記載のストラドボディ。
【請求項９】
前記少なくとも１つのＦｃドメインが各々、Ｆｃ部分ドメインで構成され、該Ｆｃ部分ドメインが独立して、ＩｇＧ１のヒンジ、ＩｇＧ３のヒンジ、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン、ＩｇＧ３のＣＨ２ドメイン、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメイン、ＩｇＧ３のＣＨ３ドメイン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項７に記載のストラドボディ。
【請求項１０】
前記Ｆｃγ受容体が、ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩＩ、ＦｃγＲＩＶまたはこれらの非ヒト等価物のうちの１つ以上である、請求項７に記載のストラドボディ。
【請求項１１】
（ａ）クラスターストラドマーと、
（ｂ）Ｆａｂドメインと、を含むストラドボディであって、
前記Ｆａｂドメインが抗原結合活性を有し、前記ストラドボディが２つ以上のＦｃγ受容体と特異的に結合することができる、ストラドボディ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
技術分野
本発明は主に、免疫学、炎症、腫瘍免疫学の分野に関する。特に、本発明は、免疫グロブリンのＦｃドメインを含む生物活性生体模倣分子、このような生体模倣薬を含む組成物、このような生体模倣薬の使用方法に関する。
【０００２】
また、本発明は単球由来細胞が介在する病的状態の治療および予防に関し、特に、このような治療および予防にＩｇＧのＦｃ断片の機能的部分を安定させたものを使用することにも関する。
【背景技術】
【０００３】
背景技術の説明
１９５０年代前半以降の免疫不全症の治療、その後は多くが自己免疫疾患や炎症性疾患の治療に、ヒト血漿由来の免疫グロブリン製品が用いられている。
【０００４】
初期の頃、免疫グロブリン製品は筋肉注射で投与されていた。最近では静注用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）が用いられ、当初は自己免疫疾患である特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）の治療に有効であるとみられていた（Imbach P, Barandun S, d’Apuzzo V, et al: High-dose intravenous gammaglobulin for idiopathic thrombocytopenic purpura in childhood. Lancet 1981 Jun 6; 1(8232): 1228-31）。ヒトＩＶＩＧ（本明細書では「ｈＩＶＩＧ」と呼ぶ）は、一般に９５％を上回る量のＩｇＧそのものと、ごく少ない不定量の免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）または免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）を含有するヒトプール血漿から製造される、無菌状態の精製免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）製品の製剤である（たとえば、Rutter A, Luger TA: High-dose intravenous immunoglobulins: an approach to treat severe immune-mediated and autoimmune diseases of the skin. J Am Acad Dermatol 2001 Jun; 44(6): 1010-24を参照のこと）。現在、ｈＩＶＩＧの最も一般的な１つの臨床用途がＩＴＰの治療における用途である。
【０００５】
ｈＩＶＩＧは有効な臨床治療剤ではあるが、不適切な滅菌の可能性、不純物の混入、入手しにくさ、ロット間のばらつきを含め、ｈＩＶＩＧ製剤にはいくつかの問題がある。特に、ｈＩＶＩＧ調製物では免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）含有量が大幅に異なることがあり、そのことが懸念される場合がある。ＩｇＡが原因でＩｇＡ欠損レシピエントにアレルギー反応やアナフィラキシー反応を生じかねないためである。
【０００６】
ｈＩＶＩＧの負の側面を考慮して、自己免疫疾患および炎症性疾患を治療する手段の改良版に対する需要が存在する。
【０００７】
また、さまざまなタイプの多様な病的状態に単球由来の細胞が介在している。すべてではないにしても、多くのこのような症状に用いられている単純な治療薬および／または予防薬が、非常に貴重であろう。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
発明の概要
ＩＶＩＧの免疫調節特性は、ＩｇＧ分子のＦｃドメインにある。たとえば、ＩＴＰのマウスモデルでは、ＩＶＩＧそのものとＦｃ断片単独のどちらも血小板数の回復に治療効力を示すが、単離したＩＶＩＧのＦａｂ断片は治療的ではない（Samuelsson, A., Towers, T.L. & Ravetch, J.V. Anti-inflammatory Activity of IVIG Mediated Through the Inhibitory Fc Receptor. Science 291, 484-486 (2001)）。さらに、Ｆｃも小児と成人の両方で特発性血小板減少性紫斑病の治療に治療効果があるが、ＩＶＩＧのＦａｂ断片には治療効果がない（Follea, G. et al. Intravenous plasmin-treated gammaglobulin therapy in idiopathic thrombocytopenic purpura. Nouv Rev Fr Hematol 27, 5-10 (1985)；Solal-Celigny, P., Bernard, J., Herrera, A. & Biovin, P. Treatment of adult autoimmune thrombocytopenic purpura with high-dose intravenous plasmin-cleaved gammaglobulins. Scand J Haematol 31, 39-44 (1983)；Debre, M. & Bonnet, M.-C. Infusion of Gcgamma fragments for treatment of children with acute immune thrombocytopenic purpura. Lancet 342, 945-49 (1993)；Burdach, S.E., Evers, K. & Geurson, R. Treatment of acute idiopathic thrombocytopenic purpura of childhood with intravenous immunoglobulin G: Comparative efficacy of 7S and 5S 
preparations. J Pediatr 109, 770-775 (1986)）。
【０００９】
ＩＶＩＧの治療効果は、まずはＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）によって得られ、長期にわたる免疫寛容誘導作用については樹状細胞（ＤＣ）マクロファージの応答のやり取りに依存している。ＩＴＰのマウスモデルでは、イニシエータ段階においてＦｃγＲＩＩＩａが必須の役割を果たし、エフェクター段階になるとＦｃγＲＩＩｂが必要になる（Samuelsson, A., Towers, T.L. & Ravetch, J.V. Anti-inflammatory Activity of IVIG Mediated Through the Inhibitory Fc Receptor. Science 291, 484-486 (2001)；Siragam, V. et al. Intravenous immunoglobulin ameliorates ITP via activating Fc[gamma] receptors on dendritic cells. Nat Med 12, 688 (2006)）。同様に、ヒト試験によって、難治性ＩＴＰの治療に抗Ｆｃγ受容体抗体が有効であることが示されている（Clarkson, S. et al. Treatment of refractory immune thrombocytopenic purpura with an anti-Fc gamma-receptor antibody. N Engl J Med 314, 1236-1239 (1986)）。重要なことに、ＩＴＰのマウスモデルの治療にＩＶＩＧで処理したＤＣの養子移入が有効であるように、長期にわたる免疫寛容誘導作用は細胞間の相互作用によって生じている（Siragam, V. et al. Intravenous immunoglobulin ameliorates ITP via activating Fc[gamma] receptors on dendritic cells. Nat Med 12, 688 (2006)）。
【００１０】
ＩＶＩＧの免疫調節作用が発揮されるためには、ＦｃγＲの凝集が必要である。ＦｃγＲの凝集はＩＶＩＧに存在するＩｇＧ二量体（全ＩＶＩＧの５〜１５％）によるものである（Bleeker, W.K. et al. Vasoactive side effects of intravenous immunoglobulin preparations in a rat model and their treatment with recombinant platelet-activating factor acetylhydrolase. Blood 95, 1856-1861 (2000)）。たとえば、ＩＴＰのマウスモデルでは、「二量体」含有量の多いＩＶＩＧ（完全免疫グロブリン分子の二量体）で処理すると血小板数が増したが、ＩＶＩＧ「単量体」（完全免疫グロブリン分子）は有効ではなかった（Teeling, J.L. et al. Therapeutic efficacy of intravenous immunoglobulin preparations depends on the immunoglobulin G dimers: studies in experimental immune thrombocytopenia. Blood 98, 1095-1099 (2001)）。さらに、ＩＶＩＧの製造ではＩｇＧ凝集体の除去にイオン交換樹脂およびポリエチレングリコールによる分画が常法として用いられているにもかかわらず、ＩＶＩＧの臨床効果は患者の血清に含まれる二量体の存在と相関している（Augener, W., Friedman, B. & Brittinger, G. Are aggregates of IgG the effective part of high-dose immunoglobulin therapy in adult idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)? Blut 50, 249-252 (1985)）。重要なことに、二量体の割合は血管副作用とも相関しているが、これはアセチルヒドロラーゼで治療可能である（Bleeker, W.K. et al. Vasoactive side effects of intravenous immunoglobulin preparations in a rat model and their treatment with recombinant platelet-activating factor acetylhydrolase. Blood 95, 1856-1861 (2000)）。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、生物活性生体模倣分子、これを含む組成物、これを使用する方法に関する。これらの生体模倣薬には、自己免疫疾患を含むがこれに限定されるものではない、免疫疾患および炎症疾患を治療するための多くの用途があり、癌のための生物免疫療法剤としての実用性もある。また、これらの生体模倣薬のうちのいくつかには、免疫細胞機能試験用の免疫学的アッセイや疾患の診断で使用するなどの試薬としての実用性もある。さらに、本発明の生体模倣薬および組成物には、上述したｈＩＶＩＧの制約が解消されるという利点がある。また、本発明は、単球由来細胞が介在する病的状態の治療および予防にも関し、特に、このような治療および予防にＩｇＧのＦｃ断片の機能的部分を安定させたものを使用することにも関する。
【００１２】
第１の実施形態では、本発明は、会合した２つ以上のストラドマー（stradomer)単量体を含む単離されたシリアルストラドマーであって、ストラドマー単量体が各々２つ以上のＦｃドメイン単量体を含み、２つ以上のストラドマー単量体の会合によって２つ以上のＦｃドメインが形成され、シリアルストラドマーが２つ以上のＦｃドメインのうちの１つを介して第１のＦｃγ受容体と特異的に結合し、２つ以上のＦｃドメインのうちの別の１つを介して第２のＦｃγ受容体と特異的に結合する、単離されたシリアルストラドマーに関するものである。好ましい実施形態では、２つ以上のストラドマー単量体が、共有結合、ジスルフィド結合または化学的架橋によって会合している。
【００１３】
本発明の単離されたシリアルストラドマーの好ましい実施形態では、単離されたシリアルストラドマーが会合した２つのストラドマー単量体で構成される。等しく好ましい実施形態では、単離されたシリアルストラドマーが会合した２つのストラドマー単量体で構成され、ストラドマー単量体がともに２つのＦｃドメイン単量体を含み、２つのストラドマー単量体の会合によって２つのＦｃドメインが形成される。単離されたシリアルストラドマーに関するこれらの実施形態の第１の特定の例では、２つのＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧのヒンジとＩｇＧのＣＨ２ドメインとを含む。第２の特定の例では、２つのＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧのヒンジとＩｇＧのＣＨ２ドメインとを含む。第３の特定の例では、２つのＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ２ドメインと、ＩｇＧのＣＨ３ドメインとを含む。第４の特定の例では、２つのＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ２ドメインと、ＩｇＧのＣＨ３ドメインとを含む。第５の特定の例では、２つのＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧ１のヒンジまたはＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。第６の特定の例では、２つのＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧ１のヒンジまたはＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ２ドメインとを含む。第７の特定の例では、２つのＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ１のヒンジまたはＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。第８の特定の例では、２つのＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ１のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインとを含む。第９の特定の例では、２つのＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ３のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。第１０の特定の例では、２つのＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ１のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。
【００１４】
また、この第１の実施形態では、２つ以上のＦｃドメインが各々同じ免疫グロブリンＦｃクラスのものであり、免疫グロブリンＦｃクラスが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。あるいは、２つ以上のＦｃドメインが各々異なる免疫グロブリンＦｃクラスのものであり、前記免疫グロブリンＦｃクラスが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。
【００１５】
さらに、この第１の実施形態では、第１および第２のＦｃγ受容体が各々独立して、Ｆｃγ受容体Ｉ、Ｆｃγ受容体ＩＩ、Ｆｃγ受容体ＩＩＩまたはＦｃγ受容体ＩＶである。好ましくは、第１および第２のＦｃγ受容体が各々Ｆｃγ受容体ＩＩＩａである。
【００１６】
第２の実施形態では、本発明は、会合した２つのストラドマー単量体を含む単離されたシリアルストラドマーであって、ストラドマー単量体が各々２つのＦｃドメイン単量体を含み、２つのストラドマー単量体の会合によって２つのＦｃドメインが形成され、前記２つのＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ２ドメインと、ＩｇＧのＣＨ３ドメインとを含み、シリアルストラドマーが２つのＦｃドメインのうちの１つを介して第１のＦｃγ受容体と特異的に結合し、２つのＦｃドメインのうちの別の１つを介して第２のＦｃγ受容体と特異的に結合する、単離されたシリアルストラドマーに関するものである。好ましい実施形態では、２つ以上のストラドマー単量体が、共有結合、ジスルフィド結合または化学的架橋によって会合している。
【００１７】
この第２の実施形態の第１の特定の例では、２つのＦｃドメインが各々同じ免疫グロブリンＦｃクラスのものであり、免疫グロブリンＦｃクラスが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。第２の特定の例では、２つのＦｃドメインが各々異なる免疫グロブリンＦｃクラスのものであり、前記免疫グロブリンＦｃクラスが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。第３の特定の例では、複数のＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ２ドメインとを含む。第４の特定の例では、Ｆｃドメインが各々独立して、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ２ドメインとを含む。第５の特定の例では、複数のＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ２ドメインと、ＩｇＧのＣＨ３ドメインとを含む。第６の特定の例では、Ｆｃドメインが各々独立して、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ２ドメインと、ＩｇＧのＣＨ３ドメインとを含む。第７の特定の例では、複数のＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧ１のヒンジまたはＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。第８の特定の例では、Ｆｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ１のヒンジまたはＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。第９の特定の例では、Ｆｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ１のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインとを含む。第１０の特定の例では、Ｆｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ３のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。第１１の特定の例では、Ｆｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ１のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。
【００１８】
第３の実施形態では、本発明は、Ｆａｂドメインをさらに含む単離されたシリアルストラドマーであって、ストラドマー単量体が各々Ｆａｂ断片の重鎖と２つのＦｃドメイン単量体とを含み、Ｆａｂ断片の重鎖が２つのＦｃドメイン単量体に対してアミノ末端またはカルボキシ末端の位置にあり、Ｆａｂ断片の軽鎖が独立してＦａｂ断片の各重鎖と会合し、Ｆａｂドメインが抗原結合活性を有する、単離されたシリアルストラドマーに関するものである。好ましい実施形態では、ストラドマー単量体が各々免疫グロブリンのヒンジ単量体をさらに含み、免疫グロブリンのヒンジ単量体がＦａｂ断片の重鎖と２つのＦｃドメイン単量体との間の位置にある。
【００１９】
第４の実施形態では、本発明は、２つ以上のコアストラドマー単位と結合したコア部分を含むコアストラドマーであって、２つ以上のコアストラドマー単位が各々少なくとも１つのＦｃドメインを含み、コアストラドマー単位が各々独立して、
（ａ）会合した２つのＦｃ断片単量体を含むＦｃ断片であって、前記Ｆｃ断片単量体が各々Ｆｃドメイン単量体を含み、２つのＦｃ断片単量体の会合によってＦｃドメインが形成される、Ｆｃ断片と、
（ｂ）会合した２つのＦｃ部分断片単量体を含むＦｃ部分断片であって、前記Ｆｃ部分断片単量体が各々Ｆｃドメイン単量体を含み、２つのＦｃ部分断片単量体の会合によってＦｃドメインが形成される、Ｆｃ部分断片と、
（ｃ）会合した２つのＦｃドメイン単量体を含むＦｃドメインであって、２つのＦｃドメイン単量体の会合によってＦｃドメインが形成される、Ｆｃドメインと、
（ｄ）会合した２つ以上のストラドマー単量体を含むシリアルストラドマーであって、前記ストラドマー単量体が各々２つ以上のＦｃドメイン単量体を含み、２つ以上のストラドマー単量体の会合によって２つ以上のＦｃドメインが形成される、シリアルストラドマーと、
（ｅ）２つ以上の多量体化クラスターストラドマー単位を含むクラスターストラドマーであって、前記クラスターストラドマー単位が各々、多量体化用領域と少なくとも１つのＦｃドメインとを含み、前記クラスターストラドマー単位が各々、会合した２つのクラスターストラドマー単位単量体を含み、前記クラスターストラドマー単位単量体が各々、多量体化用領域単量体と少なくとも１つのＦｃドメイン単量体とを含み、２つのクラスターストラドマー単位単量体の会合によって多量体化用領域と少なくとも１つのＦｃドメインとが形成され、２つ以上のクラスターストラドマー単位の多量体化用領域が多量体化してクラスターストラドマーが形成される、クラスターストラドマーと、からなる群から選択され、
コアストラドマーが、２つ以上のコアストラドマー単位のうちの１つを介して第１のＦｃγ受容体と特異的に結合し、２つ以上のコアストラドマー単位のうちの別の１つを介して第２のＦｃγ受容体と特異的に結合する、コアストラドマーに関するものである。
【００２０】
好ましくは、この第４の実施形態では、コア部分が、免疫グロブリンＪ鎖、アルブミン、リポソーム、ビーズ、ペプチド、ポリエチレングリコールからなる群から選択される。
【００２１】
コアストラドマーに関する好ましい実施形態では、２つ以上のコアストラドマー単位が各々独立してＦｃ断片である。あるいは、２つ以上のコアストラドマー単位が各々独立してシリアルストラドマーである。
【００２２】
コアストラドマーに関する別の好ましい実施形態では、コアストラドマーが２つのコアストラドマー単位を含み、２つのコアストラドマー単位の各々が各々独立してシリアルストラドマーであり、シリアルストラドマーが会合した２つのストラドマー単量体を含み、前記ストラドマー単量体がともに２つのＦｃドメイン単量体を含み、２つのストラドマー単量体の会合によって２つのＦｃドメインが形成される。この実施形態の第１の特定の例では、２つ以上のコアストラドマー単位の複数のＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧ１のヒンジまたはＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。第２の特定の例では、２つ以上の２つのコアストラドマー単位の複数のＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧ１のヒンジまたはＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインとを含む。第３の特定の例では、２つ以上の２つのコアストラドマー単位の複数のＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ１のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインとを含む。第４の特定の例では、２つ以上の２つのコアストラドマー単位の複数のＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ２ドメインとを含む。第５の特定の例では、２つ以上の２つのコアストラドマー単位の複数のＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ２ドメインとを含む。第６の特定の例では、２つ以上の２つのコアストラドマー単位の複数のＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ３のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。第７の特定の例では、２つ以上の２つのコアストラドマー単位の複数のＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ１のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。
【００２３】
この実施形態では、第１および第２のＦｃγ受容体が各々独立して、Ｆｃγ受容体Ｉ、Ｆｃγ受容体ＩＩ、Ｆｃγ受容体ＩＩＩまたはＦｃγ受容体ＩＶである。好ましくは、第１および第２のＦｃγ受容体が各々Ｆｃγ受容体ＩＩＩａである。
【００２４】
第５の実施形態では、本発明は、２つ以上の多量体化クラスターストラドマー単位を含むクラスターストラドマーであって、クラスターストラドマー単位が各々、多量体化用領域と少なくとも１つのＦｃドメインとを含み、クラスターストラドマー単位が各々、会合した２つのクラスターストラドマー単位単量体を含み、クラスターストラドマー単位単量体が各々、多量体化用領域単量体と少なくとも１つのＦｃドメイン単量体とを含み、２つのクラスターストラドマー単位単量体の会合によって多量体化用領域と少なくとも１つのＦｃドメインとが形成され、２つ以上のクラスターストラドマー単位の多量体化用領域が多量体化してクラスターストラドマーが形成され、クラスターストラドマーが、第１のＦｃドメインを介して第１のＦｃγ受容体と特異的に結合し、第２のＦｃドメインを介して第２のＦｃγ受容体と特異的に結合する、クラスターストラドマーに関するものである。
【００２５】
好ましい実施形態では、多量体化用領域が、ＩｇＧ２のヒンジ、ＩｇＥのＣＨ２ドメイン、ロイシン、イソロイシンジッパー、ジンクフィンガーからなる群から選択される。
【００２６】
別の好ましい実施形態では、クラスターストラドマーが、２つ、３つ、４つまたは５つの多量体化クラスターストラドマー単位を含む。
【００２７】
この第５の実施形態の第１の特定の例では、複数のＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧ１のヒンジまたはＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。第２の特定の例では、Ｆｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ１のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインとを含む。第３の特定の例では、複数のＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ２ドメインとを含む。第４の特定の例では、Ｆｃドメインが各々独立して、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ２ドメインとを含む。第５の特定の例では、Ｆｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ３のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。第６の特定の例では、Ｆｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ１のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。第７の特定の例では、Ｆｃドメインが各々独立して、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ２ドメインと、ＩｇＧのＣＨ３ドメインとを含む。第８の特定の例では、クラスターストラドマー単位のうちの少なくとも１つが２つ以上のＦｃドメインを含む。第９の特定の例では、クラスターストラドマー単位が各々２つ以上のＦｃドメインを含む。
【００２８】
この実施形態では、第１および第２のＦｃγ受容体が各々独立して、Ｆｃγ受容体Ｉ、Ｆｃγ受容体ＩＩ、Ｆｃγ受容体ＩＩＩまたはＦｃγ受容体ＩＶである。好ましくは、第１および第２のＦｃγ受容体が各々Ｆｃγ受容体ＩＩＩａである。
【００２９】
第６の実施形態では、本発明は、会合した２つ以上のストラドマー単量体とＦａｂドメインとを含むストラドボディ（stradobody）であって、ストラドマー単量体が各々Ｆａｂ断片の重鎖と２つ以上のＦｃドメイン単量体とを含み、Ｆａｂ断片の重鎖が２つ以上のＦｃドメイン単量体に対してアミノ末端またはカルボキシ末端の位置にあり、２つ以上のストラドマー単量体の会合によって２つ以上のＦｃドメインが形成され、Ｆａｂ断片の軽鎖が独立して各ストラドマー単量体のＦａｂ断片の重鎖と会合し、Ｆａｂドメインが抗原結合活性を有し、ストラドボディが、２つ以上のＦｃドメインのうちの１つを介して第１のＦｃγ受容体と特異的に結合し、２つ以上のＦｃドメインのうちの別の１つを介して第２のＦｃγ受容体と特異的に結合する、ストラドボディに関するものである。
【００３０】
好ましい実施形態では、２つ以上のストラドマー単量体が、共有結合、ジスルフィド結合または化学的架橋によって会合している。
【００３１】
別の好ましい実施形態では、ストラドボディの前記ストラドマー単量体が各々免疫グロブリンのヒンジ単量体をさらに含み、免疫グロブリンのヒンジ単量体がＦａｂ断片の重鎖と２つのＦｃドメイン単量体との間の位置にある。
【００３２】
特定の実施形態では、ストラドボディが会合した２つのストラドマー単量体を含み、前記ストラドマー単量体が各々Ｆａｂ断片の重鎖と２つのＦｃドメイン単量体とを含み、２つのストラドマー単量体の会合によって２つのＦｃドメインが形成される。この実施形態の第１の特定の例では、２つのＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ２ドメインと、ＩｇＧのＣＨ３ドメインとを含む。第２の特定の例では、２つのＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ２ドメインと、ＩｇＧのＣＨ３ドメインとを含む。第３の特定の例では、２つのＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ３ドメインとを含む。第４の特定の例では、Ｆｃの２つのドメインが各々独立して、ＩｇＧのヒンジと、ＩｇＧのＣＨ３ドメインとを含む。第５の特定の例では、２つのＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧ１のヒンジまたはＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。第６の特定の例では、２つのＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ１のヒンジまたはＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。第７の特定の例では、２つのＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ１のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインとを含む。第８の特定の例では、２つのＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ３のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。第９の特定の例では、２つのＦｃドメインが各々独立して、ＩｇＧ１のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ３のＣＨ３ドメインとを含む。第１０の特定の例では、２つのＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧ１のヒンジまたはＩｇＧ３ヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインまたはＩｇＧ３のＣＨ２ドメインとを含む。第１１の特定の例では、２つのＦｃドメインのうちの少なくとも１つが、ＩｇＧ１のヒンジまたはＩｇＧ３のヒンジと、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインとを含む。
【００３３】
この実施形態では、第１および第２のＦｃγ受容体が各々独立して、Ｆｃγ受容体Ｉ、Ｆｃγ受容体ＩＩ、Ｆｃγ受容体ＩＩＩまたはＦｃγ受容体ＩＶである。好ましくは、第１および第２のＦｃγ受容体が各々Ｆｃγ受容体ＩＩＩａである。
【００３４】
第７の実施形態では、本発明は、被検体における免疫応答を変化させる方法であって、それを必要とする被検体に、治療有効量のシリアルストラドマーとキャリアまたは希釈剤とを含む医薬組成物を投与することを含む方法に関するものである。好ましい実施形態では、医薬組成物が、治療有効量のシリアルストラドマーの不均一混合物とキャリアまたは希釈剤とを含む。
【００３５】
第８の実施形態では、本発明は、被検体における免疫応答を変化させる方法であって、それを必要とする被検体に、治療有効量のコアストラドマーとキャリアまたは希釈剤とを含む医薬組成物を投与することを含む方法に関するものである。好ましい実施形態では、医薬組成物が、治療有効量のコアストラドマーの不均一混合物とキャリアまたは希釈剤とを含む。
【００３６】
第９の実施形態では、本発明は、被検体における免疫応答を変化させる方法であって、それを必要とする被検体に、治療有効量のクラスターストラドマーとキャリアまたは希釈剤とを含む医薬組成物を投与することを含む方法に関するものである。好ましい実施形態では、医薬組成物が、治療有効量のクラスターストラドマーの不均一混合物とキャリアまたは希釈剤とを含む。
【００３７】
第１０の実施形態では、本発明は、被検体における免疫応答を変化させる方法であって、それを必要とする被検体に、治療有効量のストラドボディとキャリアまたは希釈剤とを含む医薬組成物を投与することを含む方法に関するものである。好ましい実施形態では、医薬組成物が、治療有効量のストラドボディの不均一混合物とキャリアまたは希釈剤とを含む。
【００３８】
第１１の実施形態では、本発明は、免疫系の細胞における抗体の比活性をスクリーニングする方法であって、（ａ）免疫系の細胞の同種の個体群を候補抗体と接触させることと、（ｂ）（ａ）の細胞の個体群の活性を測定することと、（ｃ）（ａ）と同じ細胞型の細胞の同種の個体群を請求項１に記載のシリアルストラドマーと接触させることと、（ｄ）（ｃ）の細胞の個体群の活性を測定することと、（ｅ）（ｂ）で測定した活性と（ｄ）で測定した活性とを比較することとを含み、これによって免疫系の細胞における抗体の比活性をスクリーニングする方法に関するものである。好ましい実施形態では、候補抗体とシリアルストラドマーが、同一の種かつ同一のアイソタイプのものである。別の好ましい実施形態では、（ｅ）における比較が、（ｄ）で測定した活性と（ｂ）で測定した活性との比である。
【００３９】
第１２の実施形態では、本発明は、単球由来細胞（ＭＤＣ）の活性を阻害する指向方法である。この方法は、Ｆｃ試薬が結合した支持体を含有する組成物と細胞とを接触させるものである。この接触は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで実施可能である。細胞としては、単球由来細胞介在性症状（ＭＤＣＭＣ）に羅患しているまたはこれを発症するリスクのある動物などの動物における細胞が可能である。また、細胞として、樹状細胞、マクロファージ、単球または破骨細胞なども可能である。
【００４０】
第１３の実施形態では、本発明は、単球由来細胞介在性症状（ＭＤＣＭＣ）に羅患しているまたはこれを発症するリスクのある動物に、Ｆｃ試薬が結合した支持体を含む組成物を投与することを含む、指向治療方法である。
【００４１】
以下、これらの２つの方法（第１２および第１３の実施形態）の両方に共通する実施形態をあげておく。
【００４２】
動物としては、ヒトなどが可能である。
【００４３】
Ｆｃ試薬は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ断片、ヒトＩｇＧ３のＦｃ断片、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４のＦｃ断片などのヒトＦｃ断片の機能的部分を含むこともあれば、機能的部分のこともある。さらに、ＩｇＧ分子を含むこともあれば、ＩｇＧ分子のこともある。Ｆｃ試薬はまた、非ヒトＦｃ断片の機能的部分のこともあれば、機能的部分を含むこともある。
【００４４】
支持体は、ナイロン、テフロン（登録商標）、ダクロン、ポリ塩化ビニル、ＰＥＵ（ポリ（エステルウレタン））、ＰＴＦＥ（ポリテトラフルオロエチレン）またはＰＭＭＡ（メタクリル酸メチル）などの合成ポリマーであってもよいし、これを含むものであってもよい。支持体は、ステンレス鋼、白金、イリジウム、チタン、タンタル、ニッケル−チタン合金またはコバルト−クロム合金などの金属または金属合金を含むものであってもよいし、それであってもよい。支持体は、組織または臓器移植片、骨（骨化骨（osteogenic bone）など）または軟骨などの動物組織または動物組織製品を含有するものであってもよいし、それであってもよい。支持体は、コラーゲンまたはケラチンなどのタンパク質を含むものであってもよいし、それであってもよい。また、支持体は、アガロースなどの多糖であってもよいし、これを含有するものであってもよい。さらに、支持体は、無細胞組織マトリックスなどの組織マトリックスを含有するものであってもよいし、それであってもよい。支持体は、動物細胞（線維芽細胞または間葉系幹細胞といった組織修復細胞など）を含有するものであってもよいし、それであってもよい。支持体は、硫酸カルシウムなどの塩を含有するものであってもよいし、それであってもよい。さらに、支持体は、ゲルまたはクリームのこともあれば、これを含有することもある。また、シリコンまたはサイラスティックを含有するものであってもよいし、それであってもよい。さらに、絹、綿または羊毛などの天然繊維を含有するものであってもよいし、それであってもよい。
【００４５】
支持体は植毛プラグであってもよいし、ステント（たとえば、冠動脈ステントなどの血管ステント；気管内ステントまたは経鼻ステントなどの気道ステント；胆管ステントまたは膵管ステントなどの消化管ステント；または尿管ステントなどの尿道ステント）などの植込み型の医療器具であってもよい。また、外科用縫合糸（たとえば、絹縫合糸、腸線縫合糸、ナイロン、プラスチックまたは金属縫合糸または止血鉗子（動脈瘤クリップ（aneurism clip）など））であってもよい。また、支持体は、人工股、人工股関節、人工膝、人工膝関節、人工肩、人工肩関節、人工指関節または足趾関節、骨接合板、骨釘、骨癒合不全用インプラント（bone non-union implant）、椎間板インプラント、骨セメントまたは骨セメントスペーサであってもよい。これは、動静脈シャント、植込み型リード、ペースメーカー、人工心臓、心臓補助装置、人工内耳、植込み型除細動器、脊髄神経刺激装置、中枢神経系刺激装置、末梢神経移植片、義歯または歯冠であってもよい。さらに、支持体は、大血管血栓フィルタ装置またはケージ（cage）、経皮装置、皮膚パッチまたは粘膜下パッチまたは植込み型薬剤送達装置であってもよい。
【００４６】
支持体は大血管グラフトであってもよく、この場合の血管は、頸動脈、大腿動脈または大動脈などである。また、皮下インプラント、角膜移植片、眼内レンズまたはコンタクトレンズであってもよい。
【００４７】
支持体は、たとえば、シート、ビーズ、メッシュ、粉末粒子、撚糸、ビーズまたは繊維の形であってもよい。支持体は、固体、半固体またはゼラチン状物質を含有するものであってもよいし、それであってもよい。このように、支持体は、たとえばリポソームなどの脂溶性脂質といった実質的に水性溶媒不溶性の物質を含む。
【００４８】
ＭＤＣＭＣは、炎症状態、自己免疫疾患、癌、骨密度障害、急性感染症または慢性感染症の場合がある。
【００４９】
また、特発性血小板減少性紫斑病、同種免疫性／自己免疫性血小板減少症、後天性免疫性血小板減少症、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性溶血性貧血、パルボウイルスＢ１９関連赤血球形成不全、後天性抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫疾患、後天性フォンウィルブランド病、多発性骨髄腫および意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症、敗血症、再生不良性貧血、赤芽球痺、ダイアモンド・ブラックファン貧血、新生児溶血性疾患、免疫介在性好中球減少症、血小板輸血不応状態、新生児輸血後紫斑病、溶血性尿毒症症候群、全身性血管炎、血栓性血小板減少性紫斑病またはエバンス症候群などの血液免疫学的なプロセスの場合もある。
【００５０】
あるいは、ＭＤＣＭＣは、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、ＩｇＭ−Ｍ蛋白血症を伴う脱髄性ニューロパチー、ランバート・イートン症候群、重症筋無力症、多巣性運動ニューロパチー、抗ＧＭ１抗体を伴う下位運動ニューロン症候群、脱髄、多発性硬化症および視神経炎、全身硬直症候群、抗Ｙｏ抗体陽性傍腫瘍性小脳変性症、腫瘍随伴脳脊髄症、抗Ｈｕ抗体陽性感覚性ニューロパチー、癲癇、脳炎、脊髄炎、特にヒトＴ細胞性白血病ウイルス１型関連の脊髄症、自己免疫性糖尿病性ニューロパチーまたは急性特発性自律神経ニューロパチーなどの神経免疫学的プロセスの場合もある。
【００５１】
ＭＤＣＭＣは、川崎病、関節リウマチ、フェルティ症候群、ＡＮＣＡ陽性血管炎、特発性多発性筋炎、皮膚筋炎、抗リン脂質症候群、再発性自然流産、全身性紅斑性狼瘡、若年性特発性関節炎、レイノー病、ＣＲＥＳＴ症候群またはブドウ膜炎などのリウマチ性疾患プロセスの場合もある。
【００５２】
さらに、ＭＤＣＭＣは、表皮壊死融解症、脱疽、肉芽腫、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、落葉状天疱瘡を含む自己免疫性で皮膚水疱を呈する疾患、尋常性白斑、連鎖球菌毒素ショック症候群、強皮症、びまん性皮膚硬化型強皮症および限局皮膚硬化型強皮症を含む全身性強皮症、アトピー性皮膚炎またはステロイド依存性アトピー性皮膚炎などの皮膚免疫学的疾患プロセスの場合もある。
【００５３】
また、ＭＤＣＭＣは、封入体筋炎、壊疽性筋膜炎、炎症性ミオパチー、筋炎、抗デコリン（ＢＪ抗原）ミオパチー、傍腫瘍性壊死性ミオパチー（Paraneoplastic Necrotic Myopathy）、Ｘ連鎖性空胞性ミオパチー、ペナシラミン誘導多発性筋炎（Penacillamine-induced Polymyositis）、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患または心筋症などの筋骨格免疫学的疾患の場合もある。
【００５４】
また、ＭＤＣＭＣは、悪性貧血、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、セリアック病、疱疹状皮膚炎、原因不明肝硬変、反応性関節炎、クローン病、ホイップル病、潰瘍性大腸炎，または硬化性胆管炎などの胃腸免疫学的疾患プロセスの場合もある。
【００５５】
ＭＤＣＭＣは、たとえば、移植片対宿主病、抗体による移植片拒絶、骨髄移植後拒絶、感染症後の炎症、リンパ腫、白血病、腫瘍症、喘息、抗β細胞抗体の存在する１型糖尿病、シェーグレン症候群、混合性結合組織病、アジソン病、フォークト・小柳・原田症候群、膜性増殖性糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、橋本甲状腺炎、ウェゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発動脈炎（micropolyarterits）、チャーグ・ストラウス症候群、結節性多発動脈炎または多臓器不全の場合もある。
【００５６】
ＭＤＣＭＣが癌であれば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌腫、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌腫、小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストローム・マクログロブリン血症、骨髄異形成疾患、重鎖病、神経内分泌腫瘍または神経鞘腫（Schwanoma）の場合がある。
【００５７】
ＭＤＣＭＣが骨密度障害であれば、骨粗鬆症、骨減少症、大理石骨病、特発性低ゴナドトロピン性性腺機能低下症、神経性無食欲症、未治癒の骨折、閉経後骨粗鬆症、ビタミンＤ欠乏症または過剰症、原発性副甲状腺機能亢進症または続発性副甲状腺機能亢進症、甲状腺疾患またはビスホスホネート製剤による毒性の場合がある。
【００５８】
ＭＤＣＭＣが急性感染症であれば、カンジダ症、カンジダ血症またはアスペルギルス症を含む真菌性疾患；メチシリン耐性黄色ブドウ球菌を含むブドウ球菌や連鎖球菌による皮膚および中咽頭の症状またはグラム陰性菌敗血症を含む細菌性疾患；結核を含むマイコバクテリア感染；単核球症、ＲＳ（Respiratory Syntitial）ウイルス感染または帯状疱疹感染を含むウイルス感染；マラリア、住血吸虫症またはトリパノソーマ症を含む寄生虫感染の場合がある。
【００５９】
ＭＤＣＭＣが慢性感染症であれば、爪真菌症（onchyomycosis）；ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）を含む細菌性疾患；結核を含むマイコバクテリア感染；エプスタイン・バーウイルス感染、ヒトパピローマウイルス感染または単純ヘルペスウイルス感染を含むウイルス感染；またはマラリアまたは住血吸虫症を含む寄生虫感染の場合がある。
【００６０】
第１４の実施形態では、本発明は、含有する、あるいはＦｃ試薬が結合した植込み型または貼り付け可能な医療器具である、組成物に関するものである。
【００６１】
第１５の実施形態では、本発明は、植込み型または貼り付け可能な医療器具とＦｃ試薬とを含むキットに関するものである。これらの両実施形態では、植込み型または貼り付け可能な医療器具とＦｃ試薬には、本明細書に記載のいずれでも用いることが可能である。キットはさらに、好適な容器を含むことができる。
【００６２】
本発明の他の利点および特徴が、本発明の好ましい実施形態を示す以下の詳細な説明、図面および実施例から明らかであろう。
【００６３】
以上は、後述する本発明の詳細な説明を一層理解しやすくするために、本発明の特徴と技術的な利点の概要をいくぶん広義に説明したものである。本発明の他の特徴および利点については、本発明の特許請求の範囲の主旨をなす下記にて説明する。ここに開示の構想および特定の実施形態を、本発明と同じ目的を実施するための他の構造を改変または設計する上での根拠として容易に利用できる旨は、当業者には自明であろう。また、このような等価な構成が、添付の特許請求の範囲に記載の本発明の趣旨および範囲から逸脱しないことも、当業者であれば分かるはずである。本発明の特徴であると思われる新規な特徴は、その編成と動作方法の両方の観点から、さらに他の目的および利点と併せて、以下の説明を添付の図面との関連でみたときに一層理解されるであろう。しかしながら、例示および説明だけの目的で提供するそれぞれの図は、本発明の限定事項を定義するものではない旨は、明示的に理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１Ａ】ＣＨ３ドメインに結合されたＣＨ２ドメインに結合されたヒンジドメインを有する、ＩｇＧ１の天然のＦｃ断片単量体の構造を概略的に示す。
【図１Ｂ】会合した２つのＦｃ断片単量体で形成される、ＩｇＧ１の自己凝集型の天然Ｆｃ断片を示す。
【図１Ｃ】ＣＨ３ドメインに結合されたＣＨ２ドメインに結合されたヒンジドメインを有する、ＩｇＧ３の天然のＦｃ断片単量体の構造を概略的に示す。
【図１Ｄ】会合した２つのＦｃ断片単量体で形成される、ＩｇＧ３の自己凝集型の天然Ｆｃ断片を示す。
【図２Ａ】図１Ｂに示す天然のＦｃ断片構造の高次の凝集体を示す。Ｆｃ断片は、自然に多量体化して二量体の二量体（すなわち四量体）またはさらに高次の多量体凝集体になることがある。
【図２Ｂ】図１Ｂに示す天然のＦｃ断片構造の高次の凝集体を示す。Ｆｃ断片は、自然に多量体化して二量体の二量体（すなわち四量体）またはさらに高次の多量体凝集体になることがある。
【図３Ａ】Ｆｃ断片のヒンジでＦｃ断片に結合された天然のＦａｂ断片を有する天然のＩｇＧ１抗体の概略を示す。
【図３Ｂ】類似のＩｇＧ３の構造を示す。
【図４Ａ】ＩｇＧ１の２つのＦｃドメイン単量体が直列に並んで構成されるストラドマー単量体を示す。
【図４Ｂ】ＩｇＧ１のＦｃ−ＩｇＧ３のＦｃ−ＩｇＥのＦｃが直列に結合された別のストラドマー単量体構造を示す。
【図５Ａ】構成要素となるＦｃドメイン単量体自体の能力により、図４Ａのストラドマー単量体が自己二量体化してシリアルストラドマーになった状態を示す。
【図５Ｂ】構成要素となるＦｃドメイン単量体自体の能力により、図４Ｂのストラドマー単量体が自己二量体化してシリアルストラドマーになった状態を示す。
【図６Ａ】ＩｇＧ１のＦｃ−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）を含むストラドマー単量体を示す。
【図６Ｂ】ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）−ＩｇＧ３（ヒンジ−ＣＨ２）−ＩｇＥ（ヒンジ−ＣＨ２）由来の配列を含むストラドマーを示す。
【図７Ａ】構成要素となるＦｃドメイン自体の能力により、図６Ａのストラドマー単量体が自己二量体化してシリアルストラドマーになった状態を示す。
【図７Ｂ】構成要素となるＦｃドメイン自体の能力により、図６Ｂのストラドマー単量体が自己二量体化してシリアルストラドマーになった状態を示す。
【図７Ｃ】ＩｇＥ（ヒンジ）−ＩｇＧ１のＦｃ−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）−ＩｇＥ（ＣＨ３）を含むシリアルストラドマーを示す。
【図７Ｄ】ＩｇＧ３のＦｃ−ＩｇＧ１のＦｃを含むシリアルストラドマーを示す。
【図８Ａ】各ストラドマー単量体がＩｇＧ１のＣＨ２−ＣＨ３由来のＦｃドメイン単量体２つとＦａｂとを含むシリアルストラドマー構造を有するストラドボディコンストラクトを示す。
【図８Ｂ】ＩｇＥのＦｃに結合されたＩｇＧ３のＦｃに結合されたＩｇＧ１のＦｃを含むストラドマー構造を有すること以外は、図８Ａと同様のストラドボディコンストラクトを示す。
【図９Ａ】ＩｇＧ１のＦｃ−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）ストラドボディを示す。
【図９Ｂ】ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）−ＩｇＧ３（ヒンジ−ＣＨ２）−ＩｇＥ（ヒンジ−ＣＨ２）３ストラドボディを示す。
【図１０Ａ】ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）−ＩｇＧ３のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４ストラドマー単量体とＪ鎖タンパク質とを示す。
【図１０Ｂ】ＩｇＭのＣＨ４ドメインによるＪ鎖への会合によって形成された、図１０に示すストラドマーの五量体をもとにしたコアストラドマーを示す。
【図１０Ｃ】ＩｇＧ１のＦｃ−ＩｇＧ１のＦｃ−ＩｇＭのＣＨ４ストラドマー単量体とＪ鎖タンパク質とを示す。
【図１０Ｄ】ＩｇＭのＣＨ４ドメインによるＪ鎖への会合によって形成された、図１０Ｃに示すストラドマーの五量体をもとにしたコアストラドマーを示す。
【図１１Ａ】ＩｇＧ１のＦｃ−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）ストラドマー単量体を示す。
【図１１Ｂ】図１１Ａのストラドマー単量体が、どのようにして自己二量体化してシリアルストラドマーを形成するかを示す。
【図１１Ｃ】図１１Ａの同じストラドマー単量体が、自己二量体としてではなく、どのようにして単量体のＦｃドメインを他のストラドマー単量体の同一または類似のＦｃドメイン単量体と整列させて、自己二量体と同じストラドマー単量体で構成されるがジッパー作用の構造を有するストラドマーを形成できるかを示す。
【図１２Ａ】ＩｇＧ３のＦｃ−ＩｇＧ１のＦｃストラドマー単量体を示す。
【図１２Ｂ】自己二量体化後に第２のＩｇＧ３のＦｃを追加することで、ＩｇＧ３のＦｃ−ＩｇＧ１のＦｃ−ＩｇＧ３のＦｃからなる分岐構造のストラドマーを形成できることを示す。
【図１３Ａ】ＩｇＥのＣＨ２−ＩｇＧ１のＦｃ−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）−ＩｇＥのＣＨ４ストラドマー単量体を示す。
【図１３Ｂ】図１３Ａの単量体の自己二量体を示し、形成された２つのＦｃγＲ結合部位がハイライト表示されている。
【図１４Ａ】リンカーで連結されたＩｇＧ１の２つのＦｃドメインで構成されるストラドマーを示す。
【図１４Ｂ】リンカーで連結された２つのシリアルストラドマーで構成されるストラドマー（具体的には、それぞれの場合で２（ＩｇＧ１のＦｃ）ストラドマー）を示す。
【図１５Ａ】（図Ａ）ヒトＩｇＧ１のＦｃ断片の核酸（配列番号１）配列およびアミノ酸（配列番号２）配列を示す。（図Ｂ）ヒトＩｇＧ２のＦｃ断片の核酸（配列番号３）配列およびアミノ酸（配列番号４）配列を示す。
【図１５Ｂ】（図Ｂ）ヒトＩｇＧ２のＦｃ断片の核酸（配列番号３）配列およびアミノ酸（配列番号４）配列を示す。（図Ｃ）ヒトＩｇＧ３のＦｃ断片の核酸（配列番号５）配列およびアミノ酸（配列番号６）配列を示す。
【図１５Ｃ】（図Ｃ）ヒトＩｇＧ３のＦｃ断片の核酸（配列番号５）配列およびアミノ酸（配列番号６）配列を示す。（図Ｄ）ヒトＩｇＧ４のＦｃ断片の核酸（配列番号７）配列およびアミノ酸（配列番号８）配列を示す。
【図１６Ａ】｛ＩｇＫシグナル配列−ＩｇＧ１のＦｃ断片−ＩｇＧ１のＦｃ断片｝を含むコンストラクトの核酸（配列番号１７）配列とアミノ酸（配列番号１８）配列を示す。ＩｇＫシグナルのアミノ酸配列を太字で示してある。第１のＩｇＧ１のＦｃ断片のアミノ酸配列には一重下線を付してある。第２のＩｇＧ１のＦｃ断片のアミノ酸配列には二重下線を付してある。アスタリスクで示したセリンおよびリジンは、変異させてＦｃγ受容体結合を変更できるアミノ酸である。
【図１６Ｂ】｛ＩｇＫシグナル配列−ＩｇＧ１のＦｃ断片−ＩｇＧ１のＦｃ断片｝を含むコンストラクトの核酸（配列番号１７）配列とアミノ酸（配列番号１８）配列を示す。ＩｇＫシグナルのアミノ酸配列を太字で示してある。第１のＩｇＧ１のＦｃ断片のアミノ酸配列には一重下線を付してある。第２のＩｇＧ１のＦｃ断片のアミノ酸配列には二重下線を付してある。アスタリスクで示したセリンおよびリジンは、変異させてＦｃγ受容体結合を変更できるアミノ酸である。
【図１７】｛制限酵素部位−ＩｇＫシグナル配列−制限酵素部位−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−制限酵素部位−エピトープタグ（Ｖ５およびＨｉｓ）−ＳＴＯＰ｝を含むコンストラクトの核酸（配列番号１９）配列とアミノ酸（配列番号２０）配列を示す。ＩｇＫシグナルのアミノ酸配列を太字で示してある。ＩｇＧ１のＦｃ断片のアミノ酸配列には一重下線を付してある。Ｖ５タグのアミノ酸配列には点線で下線を付してある。Ｈｉｓタグのアミノ酸配列には太い下線を付してある。
【図１８Ａ】｛制限酵素部位−ＩｇＫシグナル−制限酵素部位−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＸｂａＩ部位−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＳＴＯＰ）を含むコンストラクトの核酸（配列番号２１）配列とアミノ酸（配列番号２２）配列を示す。ＩｇＫシグナルのアミノ酸配列を太字で示してある。第１のＩｇＧ１のＦｃ断片のアミノ酸配列には一重下線を付してある。第２のＩｇＧ１のＦｃ断片のアミノ酸配列には二重下線を付してある。
【図１８Ｂ】｛制限酵素部位−ＩｇＫシグナル−制限酵素部位−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＸｂａＩ部位−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＳＴＯＰ）を含むコンストラクトの核酸（配列番号２１）配列とアミノ酸（配列番号２２）配列を示す。ＩｇＫシグナルのアミノ酸配列を太字で示してある。第１のＩｇＧ１のＦｃ断片のアミノ酸配列には一重下線を付してある。第２のＩｇＧ１のＦｃ断片のアミノ酸配列には二重下線を付してある。
【図１９Ａ】｛制限酵素部位−ＩｇＫシグナル−制限酵素部位−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＸｂａＩ部位−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−制限酵素部位−エピトープタグ（Ｖ５およびＨｉｓ）−ＳＴＯＰ｝を含むコンストラクトの核酸（配列番号２３）配列とアミノ酸（配列番号２４）配列を示す。ＩｇＫシグナルのアミノ酸配列を太字で示してある。第１のＩｇＧ１のＦｃ断片のアミノ酸配列には一重下線を付してある。第２のＩｇＧ１のＦｃ断片のアミノ酸配列には二重下線を付してある。Ｖ５タグのアミノ酸配列には点線で下線を付してある。Ｈｉｓタグのアミノ酸配列には太い下線を付してある。
【図１９Ｂ】｛制限酵素部位−ＩｇＫシグナル−制限酵素部位−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＸｂａＩ部位−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−制限酵素部位−エピトープタグ（Ｖ５およびＨｉｓ）−ＳＴＯＰ｝を含むコンストラクトの核酸（配列番号２３）配列とアミノ酸（配列番号２４）配列を示す。ＩｇＫシグナルのアミノ酸配列を太字で示してある。第１のＩｇＧ１のＦｃ断片のアミノ酸配列には一重下線を付してある。第２のＩｇＧ１のＦｃ断片のアミノ酸配列には二重下線を付してある。Ｖ５タグのアミノ酸配列には点線で下線を付してある。Ｈｉｓタグのアミノ酸配列には太い下線を付してある。
【図２０】（図Ａ）ＦｃＲγＩＩＩａのＮ末端シグナル配列の核酸（配列番号３１）配列とアミノ酸（配列番号３２）配列を示し、フェニルアラニン（Ｆ）多型を太字に下線を付して示してある。可変（variable）核酸も太字に下線を付して示してある。（図Ｂ）ＦｃＲγＩＩＩａのＮ末端シグナル配列の核酸（配列番号３３）配列とアミノ酸（配列番号３４）配列を示し、バリン（Ｖ）多型を太字に下線を付して示してある。可変核酸も太字に下線を付して示してある。どちらのコンストラクトも精製用のＣ末端ｈｅｘａＨｉｓタグを含む。
【図２１Ａ】｛制限酵素部位−ＩｇＫシグナルＥｃｏＲＶ部位−ＩｇＧ３（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−制限酵素部位−エピトープタグ（Ｖ５およびＨｉｓ）−ＳＴＯＰ｝を含むコンストラクトの核酸（配列番号２５）配列とアミノ酸（配列番号２６）配列を示す。ＩｇＫシグナルのアミノ酸配列を太字で示してある。ＩｇＧ３のＦｃ断片のアミノ酸配列には一重下線を付してある。ＩｇＧ１のＦｃ断片のアミノ酸配列には二重下線を付してある。Ｖ５タグのアミノ酸配列には点線で下線を付してある。Ｈｉｓタグのアミノ酸配列には太い下線を付してある。
【図２１Ｂ】｛制限酵素部位−ＩｇＫシグナルＥｃｏＲＶ部位−ＩｇＧ３（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−制限酵素部位−エピトープタグ（Ｖ５およびＨｉｓ）−ＳＴＯＰ｝を含むコンストラクトの核酸（配列番号２５）配列とアミノ酸（配列番号２６）配列を示す。ＩｇＫシグナルのアミノ酸配列を太字で示してある。ＩｇＧ３のＦｃ断片のアミノ酸配列には一重下線を付してある。ＩｇＧ１のＦｃ断片のアミノ酸配列には二重下線を付してある。Ｖ５タグのアミノ酸配列には点線で下線を付してある。Ｈｉｓタグのアミノ酸配列には太い下線を付してある。
【図２２Ａ】｛制限酵素部位−ＩｇＫシグナル−ＥｃｏＲＶ部位−ＩｇＥ（ＣＨ２）−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）−ＩｇＥ（ＣＨ４）−ＳＴＯＰ｝を含むコンストラクトの核酸（配列番号２７）配列とアミノ酸（配列番号２８）配列を示す。ＩｇＫシグナルのアミノ酸配列を太字で示してある。ＩｇＥ（ＣＨ２）ドメインのアミノ酸配列には一重下線を付してある。ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）ドメインのアミノ酸配列には二重下線を付してある。ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）ドメインのアミノ酸配列には点線で下線を付してある。ＩｇＥ（ＣＨ４）ドメインのアミノ酸配列には波線で下線を付してある。
【図２２Ｂ】｛制限酵素部位−ＩｇＫシグナル−ＥｃｏＲＶ部位−ＩｇＥ（ＣＨ２）−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）−ＩｇＥ（ＣＨ４）−ＳＴＯＰ｝を含むコンストラクトの核酸（配列番号２７）配列とアミノ酸（配列番号２８）配列を示す。ＩｇＫシグナルのアミノ酸配列を太字で示してある。ＩｇＥ（ＣＨ２）ドメインのアミノ酸配列には一重下線を付してある。ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）ドメインのアミノ酸配列には二重下線を付してある。ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）ドメインのアミノ酸配列には点線で下線を付してある。ＩｇＥ（ＣＨ４）ドメインのアミノ酸配列には波線で下線を付してある。
【図２２Ｃ】｛制限酵素部位−ＩｇＫシグナル−ＥｃｏＲＶ部位−ＩｇＥ（ＣＨ２）−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）−ＩｇＥ（ＣＨ４）−ＳＴＯＰ｝を含むコンストラクトの核酸（配列番号２７）配列とアミノ酸（配列番号２８）配列を示す。ＩｇＫシグナルのアミノ酸配列を太字で示してある。ＩｇＥ（ＣＨ２）ドメインのアミノ酸配列には一重下線を付してある。ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）ドメインのアミノ酸配列には二重下線を付してある。ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）ドメインのアミノ酸配列には点線で下線を付してある。ＩｇＥ（ＣＨ４）ドメインのアミノ酸配列には波線で下線を付してある。
【図２３Ａ】（図Ａ）Ｆｃ断片を示し、このようなＦｃ断片が２つのＦｃ断片単量体で構成され、Ｆｃドメイン（点線で囲んだ部分）とＦｃ部分ドメイン（図の場合はヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３）をさらに含むことを示している。（図Ｂ）ストラドマー単量体間結合で接続された２つのストラドマー単量体で構成されるシリアルストラドマーの組成を示す。シリアルストラドマーは、少なくとも２つのＦｃドメイン（点線で囲んで示す）を含み、任意にドメイン結合領域を含むものであってもよい。
【図２３Ｂ】（図Ｃ）各々少なくとも１つのＦｃドメインを含むコアストラドマー単位が結合されたコア部分を含むコアストラドマーの組成を示す。コアストラドマー単位は、Ｆｃ断片、シリアルストラドマーまたはクラスターストラドマー単位であってもよい。（図Ｄ）各々多量体化用領域と少なくとも１つのＦｃドメインを含む領域とを有する多量体化クラスターストラドマー単位を含むクラスターストラドマーの組成を示す。クラスターストラドマー単位は、Ｆｃ断片またはシリアルストラドマーであってもよい。多量体化用領域は、多量体化されると、クラスターストラドマーの頭部を形成する。クラスターストラドマーの脚部は、クラスターストラドマーの多量体化した頭部よりも空間的に制約されないクラスターストラドマー単位のＦｃドメイン領域によって形成される。
【図２４Ａ】表３に示すストラドマーのアミノ酸配列を示す。
【図２４Ｂ】表３に示すストラドマーのアミノ酸配列を示す。
【図２４Ｃ】表３に示すストラドマーのアミノ酸配列を示す。
【図２４Ｄ】表３に示すストラドマーのアミノ酸配列を示す。
【図２４Ｅ】表３に示すストラドマーのアミノ酸配列を示す。
【図２４Ｆ】表３に示すストラドマーのアミノ酸配列を示す。
【図２４Ｇ】表３に示すストラドマーのアミノ酸配列を示す。
【図２４Ｈ】表３に示すストラドマーのアミノ酸配列を示す。
【図２４Ｉ】表３に示すストラドマーのアミノ酸配列を示す。
【図２４Ｊ】表３に示すストラドマーのアミノ酸配列を示す。
【図２４Ｋ】表３に示すストラドマーのアミノ酸配列を示す。
【図２５】ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４のＦｃ部分ドメイン単量体（ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３）のアミノ酸配列を示す（Kabat, EA, Wu, TT, Perry, HM, Gottesman, KS, and Foeller, C. 1991. Sequences of proteins of immunological interest 5th Ed. US Public Health Services, NIH, Bethesda）。
【発明を実施するための形態】
【００６５】
発明の詳細な説明
本明細書に記載のｈＩＶＩＧ代替化合物の合理的分子設計に対する取り組みには、免疫学的に活性な生体模倣薬の組換えおよび／または生化学的創製が含まれる。好ましい方法では、これらの代替化合物をｉｎ  ｖｉｔｒｏでスクリーニングして、それぞれの代替化合物のＦｃγ受容体への結合と免疫機能調節の効率を評価する。さらにｉｎ  ｖｉｖｏでの確認と投与量／投与の最適化のために、特定の代替化合物を選択する。この代替化合物は、たとえば自己免疫疾患、炎症性疾患、骨粗鬆症および癌の治療に役立つ。以下、特定の代表的な実施形態と併せて、それぞれのフェーズについて詳細に説明する。
【００６６】
本明細書において特許請求の範囲および／または明細書での「含む（comprising）」という表現とともに「ａ」または「ａｎ」という単語を使用する場合、「１つ」を意味することもあるが、「１つ以上」、「少なくとも１つ」および「１つまたは複数」の意味にもなる。
【００６７】
本明細書で使用する場合、「生体模倣」、「生体模倣分子」、「生体模倣化合物」という用語ならびに、これに関連する用語は、プールｈＩＶＩＧ、モノクローナル抗体または抗体のＦｃ断片などの化合物の機能を模して人間が作り出した別の化合物を示す。「生物学的に活性な」生体模倣薬とは、天然に生じる対応物と同一または実質的に類似の生物活性を持つ化合物のことである。「免疫学的に活性な」生体模倣薬とは、抗体、サイトカイン、インターロイキン、当該技術分野において周知の他の免疫学的な分子などの天然に生じる免疫学的に活性な分子と同一または実質的に類似の免疫学的活性を呈する生体模倣薬のことである。好ましい実施形態では、本発明の生体模倣薬は、本明細書で定義するように、ストラドマーとストラドボディである。
【００６８】
本発明の免疫学的に活性な生体模倣薬は、ＩｇＧのＦｃドメインの１つ以上の免疫調節活性を持ち、なおかつ少なくとも（ｉ）ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃγＲＩＶを含むＦｃγＲを結合可能な第１のＦｃドメインと、（ｉｉ）ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃγＲＩＶを含むＦｃγＲを結合可能な第２のＦｃドメインとを有するように設計されている。
【００６９】
以下の段落では、本発明による生体模倣薬のビルディングブロックを構造と機能の両方の観点から定義した上で、生体模倣薬自体について定義する。しかしながら、上述したように、本発明の生体模倣薬が各々少なくとも２つのＦｃドメインを有する点に留意しておくとまず助けになる。最低限の前提として、Ｆｃドメインは、会合して機能的Ｆｃγ受容体結合部位を形成する２つのペプチド鎖すなわちアーム（単量体）を含む二量体ポリペプチド（またはそれよりも大きなポリペプチドからなる二量体領域）である。したがって、本明細書で説明する個々の断片およびドメインの機能的形態は通常、二量体の（または多量体の）形で存在する。本明細書で説明する個々の断片およびドメインの単量体は、機能的二量体構造を形成するには第２の鎖またはアームと会合しなければならない単一の鎖またはアームである。
【００７０】
Ｆｃ断片
「Ｆｃ断片」とは、免疫グロブリンのカルボキシ末端に普通に見られるタンパク質領域またはタンパク質の折り畳み構造（図３Ａ〜図３Ｂ参照）を説明するのに用いられる専門用語である。Ｆｃ断片は、不完全かつ不十分なプロセスであるパパイン消化によってモノクローナル抗体のＦａｂ断片から単離可能である（Mihaesco C and Seligmann M. Papain Digestion Fragments Of Human IgM Globulins. Journal of Experimental Medicine, Vol 127, 431-453 (1968)を参照のこと）。Ｆａｂ断片（抗体結合ドメインを含む）との組み合わせで、Ｆｃ断片は、ここでは完全抗体を意味するホロ抗体を構成する。Ｆｃ断片は、抗体重鎖のカルボキシ末端部分からなる。Ｆｃ断片の鎖は各々約２２０〜２６５アミノ酸長であり、鎖同士がジスルフィド結合で結合されていることが多い。また、Ｆｃ断片には、１つ以上の独立した折り畳み構造または機能的サブドメインが含まれることも多い。特に、Ｆｃ断片は、本明細書ではＦｃγ受容体と結合する最小構造（たとえば、図１Ｂおよび図１Ｄを参照のこと）として定義するＦｃドメインを包含する。単離されたＦｃ断片は、２つのＦｃ断片単量体（抗体重鎖の２つのカルボキシ末端部分など；本明細書でさらに定義する）が二量体化して構成される。２つのＦｃ断片単量体が会合すると、得られるＦｃ断片はＦｃγ受容体結合活性を持つことになる。
【００７１】
Ｆｃ部分断片
「Ｆｃ部分断片」とは、抗体のＦｃ断片全体までは含まないが、Ｆｃγ受容体結合活性を含め、Ｆｃ断片と同じ活性を持てるだけの十分な構造が保たれたドメインのことである。したがって、Ｆｃ部分断片では、Ｆｃ部分ドメインが由来する抗体のアイソタイプによって、ヒンジ領域の一部または全部、ＣＨ２ドメインの一部または全部、ＣＨ３ドメインの一部または全部および／またはＣＨ４ドメインの一部または全部が欠けていることがある。Ｆｃ部分断片の一例として、ＩｇＧ３の上側のコアと下側のヒンジ領域に加えてＣＨ２ドメインを含む分子があげられる（Tan, LK, Shopes, RJ, Oi, VT and Morrison, SL, Influence of the hinge region on complement activation, C1q binding, and segmental flexibility in chimeric human immunoglobulins, Proc Natl Acad Sci USA. 1990 January; 87(1): 162-166）。よって、この例のＦｃ部分断片には、ＩｇＧ３のＦｃ断片に存在するＣＨ３ドメインが欠けている。Ｆｃ部分断片は、２つのＦｃ部分断片単量体で構成される。本明細書でさらに定義するように、このような２つのＦｃ部分断片単量体が会合すると、得られるＦｃ部分断片はＦｃγ受容体結合活性を持つことになる。
【００７２】
Ｆｃドメイン
本明細書で使用する場合、「Ｆｃドメイン」とは、Ｆｃγ受容体と結合可能であるかＦｃγ受容体に結合される、最小領域（大きめのポリペプチドの場合）またはタンパク質の最小折り畳み構造（単離されたタンパクの場合）を説明するものである。Ｆｃ断片とＦｃ部分断片のどちらでも、ＦｃドメインはＦｃγ受容体との分子結合を可能にする最小結合領域である。ＦｃドメインがＦｃγ受容体に結合される別個のポリペプチドに限定されることもあるが、このＦｃドメインはＦｃ断片の一部または全部であってもよいし、Ｆｃ部分断片の一部または全部であってもよいことは自明であろう。本発明で「複数のＦｃドメイン」という用語を使用する場合、２つ以上のＦｃドメインを意味することは、当業者であれば分かるであろう。Ｆｃドメインは、２つのＦｃドメイン単量体で構成される。本明細書でさらに定義するように、このような２つのＦｃドメイン単量体が会合すると、得られるＦｃドメインはＦｃγ受容体結合活性を持つことになる。このように、Ｆｃドメインは、Ｆｃγ受容体を機能的に結合可能な二量体構造である。
【００７３】
Ｆｃ部分ドメイン
本明細書で使用する場合、「Ｆｃ部分ドメイン」とは、Ｆｃドメインの一部を説明するものである。Ｆｃ部分ドメインは、免疫グロブリンの異なるクラスおよびサブクラスの個々の重鎖定常領域ドメイン（ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメインなど）とヒンジ領域とを含む。よって、本発明のＦｃ部分ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥのＣＨ１ドメイン、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥのＣＨ２ドメイン、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥのＣＨ３ドメイン、ＩｇＭおよびＩｇＥのＣＨ４ドメイン、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥのヒンジ領域を含む。本発明のＦｃ部分ドメインは、これらのドメインとヒンジとのもう１つよりも多く（more than one more）の組み合わせをさらに含むこともある。しかしながら、本発明の個々のＦｃ部分ドメインとこれらの組み合わせには、ＦｃγＲを結合する機能はない。したがって、Ｆｃ部分ドメインとこれらの組み合わせは、Ｆｃドメインとは言えないものである。Ｆｃ部分ドメイン同士を結合すれば、Ｆｃγ受容体結合活性を有するペプチドが形成されて、Ｆｃドメインとなり得る。本発明では、Ｆｃ部分ドメインをビルディングブロックとして複数のＦｃドメインと併用して、本明細書で定義するような本発明の生体模倣薬を創製する。Ｆｃ部分ドメインは各々２つのＦｃ部分ドメイン単量体で構成される。このような２つのＦｃ部分ドメイン単量体が会合すると、Ｆｃ部分ドメインが形成される。
【００７４】
上述したように、Ｆｃ断片、Ｆｃ部分断片、Ｆｃドメイン、Ｆｃ部分ドメインは各々、二量体タンパク質またはドメインである。このように、これらの分子は各々、会合して二量体タンパク質またはドメインを形成する２つの単量体で構成される。二量体形態の特徴と活性については上述したが、以下では単量体ペプチドについて説明する。
【００７５】
Ｆｃ断片単量体
本明細書で使用する場合、「Ｆｃ断片単量体」とは、他のＦｃ断片単量体と会合したときにＦｃ断片をなす単一鎖タンパク質のことである。よって、Ｆｃ断片単量体は、ホロ抗体のＦｃ断片を構成する抗体重鎖のうちの１つのカルボキシ末端部分である（ＩｇＧのヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインを含む重鎖の連続部分など）（図１Ａおよび図１Ｃ参照））。一実施形態では、Ｆｃ断片単量体は、最低限、ヒンジ領域の１本の鎖（ヒンジ単量体）と、ＣＨ２ドメインの１本の鎖（ＣＨ２ドメイン単量体）と、ＣＨ３ドメインの１本の鎖（ＣＨ３ドメイン単量体）とを含み、これらが連続的に結合されてペプチドを形成している。別の実施形態では、Ｆｃ断片単量体は、少なくとも、連続的に結合されてペプチドを形成している、ヒンジ領域の１本の鎖と、ＣＨ２ドメインの１本の鎖と、ＣＨ３ドメインの１本の鎖と、ＣＨ４ドメインの１本の鎖（ＣＨ４ドメイン単量体）とを含む。
【００７６】
Ｆｃドメイン単量体
本明細書で使用する場合、「Ｆｃドメイン単量体」とは、他のＦｃドメイン単量体と会合したときに、Ｆｃγ受容体と結合可能なＦｃドメインをなす単一鎖タンパク質を説明するものである。２つのＦｃドメイン単量体が会合すると、１つのＦｃドメインが形成される。Ｆｃドメイン単量体単独ではＦｃドメインの片側しか含まれず、Ｆｃγ受容体を結合することができない。
【００７７】
Ｆｃ部分ドメイン単量体
本明細書で使用する場合、「Ｆｃ部分ドメイン単量体」とは、他のＦｃ部分ドメイン単量体と会合したときに、Ｆｃ部分ドメインをなす単一鎖タンパク質を説明するものである。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のＦｃ部分ドメインのヒンジ単量体、ＣＨ２単量体、ＣＨ３単量体のアミノ酸配列を、図２５に示す。２つのＦｃ部分ドメイン単量体が会合すると、１つのＦｃ部分ドメインが形成される。
【００７８】
ストラドマー
特定の実施形態では、本発明の生体模倣薬はストラドマーを含む。ストラドマーは、２つ以上のＦｃγ受容体を結合できる生体模倣化合物である（たとえば、図１３Ｂ参照）。好ましい実施形態では、本発明のストラドマーは、ＮＫ細胞などのエフェクター細胞や未熟樹状細胞、他の単球由来細胞などのＦｃγ受容体を結合するのに用いられる。一実施形態では、Ｆｃγ受容体が低親和性Ｆｃγ受容体である。ストラドマーは、シリアル、クラスター、コアまたはＦｃ断片という４つの異なる物理的コンホメーションを取り得るものであり、そのそれぞれについて以下の段落で説明する。いずれ明らかになるように、上述したＦｃ断片、Ｆｃ部分断片、Ｆｃドメイン、Ｆｃ部分ドメインを利用して、ストラドマーのさまざまなコンホメーションを形成する。さらに、まずは生成され、その後自己会合して本発明のストラドマーである二量体構造を形成するのは、同じく上述した個々のＦｃドメイン単量体およびＦｃ部分ドメイン単量体である。
【００７９】
シリアルストラドマー
「シリアルストラドマー」とは、会合されると２つ以上のＦｃドメインを形成する２つの線状ストラドマー単量体で構成される二量体ポリペプチドのことである。ストラドマーの複数のＦｃドメインは、２つのペプチド鎖（ストラドマー単量体）が会合している場合にのみ機能的になる（すなわち、単量体の状態では非機能的である）。よって、シリアルストラドマーは、２つ以上のＦｃγ受容体を結合できる生体模倣化合物である。異なる実施形態では、シリアルストラドマーは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４またはそれより多くのＦｃドメインならびにＦｃ部分ドメインを有するものであってもよい。シリアルストラドマー内の複数のＦｃドメインおよびＦｃ部分ドメインは、本明細書でさらに定義するように、ドメイン結合によって結合されていてもよい。
【００８０】
本明細書で使用する場合、「ストラドマー二量体」は、２つのストラドマーだけで構成される特定の形態のストラドマーである。一実施形態では、ストラドマー二量体は、関連するストラドマー単量体の自己凝集によって形成される分子である。別の実施形態では、ストラドマー二量体のストラドマー単量体が、本明細書で定義するようなストラドマー単量体間結合を介して物理的に結合されている。「多量体ストラドマー」は、ストラドマー単量体の自己凝集によって、あるいは、本明細書で定義するようなストラドマー単量体間結合を介して形成された３つ以上のストラドマーで構成される。
【００８１】
ストラドマー単量体
本明細書で使用する場合、「ストラドマー単量体」という用語は、少なくとも第２のストラドマー単量体と会合すると、少なくとも２つのＦｃドメインを含むポリペプチドを形成する単一の連続したペプチド分子を示す（たとえば、図６Ａ〜図６Ｂ、図１２Ａ参照）。好ましい実施形態では、シリアルストラドマーは会合した２つのストラドマー単量体で構成される（たとえば、図５Ａ、図５Ｂ、図７Ａ、図７Ｂ、図７Ｃ、図７Ｄ参照）が、シリアルストラドマーは、３つ（図１１Ｃ参照）またはそれよりも多くのストラドマー単量体を含むものであってもよい。ストラドマー単量体は、ストラドマー単量体間結合によって会合してストラドマーを形成することもあれば、自己凝集でストラドマーを形成することもある。
【００８２】
ストラドマー単量体は、別のストラドマー単量体と会合されてストラドマーを形成すると、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４またはそれより多くのＦｃドメインを形成するアミノ酸配列を有するものであってもよい。ストラドマー単量体はさらに、別のストラドマー単量体と会合されてストラドマーを形成すると、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４またはそれより多くのＦｃ部分ドメインを形成するアミノ酸配列を有するものであってもよい。
【００８３】
ストラドマーとの関連で複数のＦｃドメインおよびＦｃ部分ドメインを形成するストラドマー単量体の領域は、ストラドマー単量体分子の連続した領域がカルボキシ末端からアミノ末端に並んでいるだけでもよい（たとえば、図４Ａ〜図４Ｂ参照）。あるいは、ストラドマー単量体の連続した領域が、本明細書で「ドメイン結合」と呼ばれるペプチド配列を介して結合されていてもよい。ストラドマー単量体をなす特定のＦｃドメイン単量体やＦｃ部分ドメイン単量体の配置は重要ではない。しかしながら、２つのストラドマー単量体の会合時に２つの機能的Ｆｃドメインが形成される配置にしておく必要がある。
【００８４】
本発明のストラドマーの一実施形態では、ペプチドのＮ末端に、１つまたは２つのＩｇＥの末端ＣＨ２ドメイン単量体またはＩｇＧ３の部分ヒンジドメイン単量体など、それ自体と強く結合するＦｃドメイン単量体またはＦｃ部分ドメイン単量体を含有するストラドマー単量体を生成し、それぞれＦｃドメインまたはＦｃ部分ドメインを形成する。これらのストラドマー単量体は各々、ストラドマーの形成時に２つのＦｃγ受容体と結合するのに必須のＦｃドメイン単量体および／または部分Ｆｃドメイン単量体の相補体を有する。このようなストラドマー単量体の会合によって得られるストラドマーは、２つ以上のＦｃγ受容体を結合できる生体模倣薬である。好ましい実施形態では、Ｎ末端のＦｃドメインまたはＦｃ部分ドメインが、ＩｇＥのＣＨ２ドメインに存在するものなどの別のグリコシル化部位を含む。
【００８５】
明確にするための一例として、Ｆｃドメイン単量体とＦｃ部分ドメイン単量体のさまざまな組み合わせ（ただし、最低２つのＦｃドメイン単量体を形成する組み合わせ）をコードするポリヌクレオチド分子を調製することで本発明のストラドマー分子を構成してもよいことは、当業者であれば理解できよう。このようなポリヌクレオチド分子を発現ベクターに挿入してもよく、これを用いて細菌の個体群を形質転換することが可能である。その後、形質転換した細菌を適当な培養条件下で培養して、ストラドマー単量体を生成することができる。さらに、ストラドマー単量体は、ストラドマー単量体の自己凝集時またはストラドマー単量体間結合を用いたストラドマー単量体の会合時のいずれかに、機能的ストラドマーを形成可能である。本発明は、個々のアミノ酸配列を有するストラドマー単量体、実質的に類似のアミノ酸配列を有するストラドマー単量体、あるいは似ていない配列を有するストラドマー単量体の会合によって形成されるストラドマーの両方を包含する。後者の実施形態では、ストラドマーをなしているストラドマー単量体のアミノ酸配列は、２つ以上の機能的Ｆｃγ受容体結合部位が形成されるような類似度でありさえすればよい。
【００８６】
上述したように、Ｆｃドメインは、そのＦｃγ受容体を結合する機能によって機能的に定義可能である。結果として、ＦｃドメインをなすＦｃ部分ドメインに応じてＦｃドメインの特定のアミノ酸配列が変化する。しかしながら、本発明の一実施形態では、Ｆｃドメインが免疫グロブリン分子のヒンジ領域とＣＨ２ドメインとを含む。さらに他の実施形態では、Ｆｃドメインが、免疫グロブリン分子のヒンジ領域と、ＣＨ２ドメインと、ＣＨ３ドメインとを含む。さらに他の実施形態では、Ｆｃドメインが、免疫グロブリン分子のヒンジ領域と、ＣＨ２ドメインと、ＣＨ３ドメインと、ＣＨ４ドメインとを含む。さらに別の実施形態では、Ｆｃドメインが、免疫グロブリン分子のヒンジ領域と、ＣＨ２ドメインと、ＣＨ４ドメインとを含む。
【００８７】
ドメイン結合
上述したように、「ドメイン結合」は、本発明のシリアルストラドマーまたはストラドボディ個々のストラドマー単量体各々をなすＦｃドメイン単量体および／またはＦｃ部分ドメイン単量体間のペプチド結合である。ドメイン結合は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれより多くのアミノ酸であってもよい。ドメイン結合は、その天然の配列であるＦｃ部分ドメイン単量体間には生じない。すなわち、ＩｇＧのヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインなど、Ｆｃドメイン単量体の天然の連続結合部分を使用するのであれば、これらのＦｃ部分ドメイン単量体は連続配列を含み、これらの要素間にドメイン結合は必要ない。対照的に、たとえば、天然には生じない形で２つ以上のＦｃドメイン単量体または部分Ｆｃドメイン単量体を結合させて個々のストラドマー単量体を形成する場合、ドメイン結合を用いるようにしてもよい。一例として、ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３／Ｌ／ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３を含むストラドマーの個々のストラドマー単量体を形成する２つのヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３ペプチド間の結合があげられ、ここで、「Ｌ」はドメイン結合（たとえば、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインとＩｇＧ１のヒンジとの間でドメイン結合（図示せず）が起こる図４Ａを参照のこと）である。ここに記載のさまざまな事例では、ドメイン結合が、抗体のＦｃドメイン単量体におけるヒンジとＣＨドメインとを連結する重鎖の天然に生じる部分のうちの１つであってもよい。あるいは、ドメイン結合が、個々のストラドマー単量体のＦｃドメイン単量体と部分Ｆｃドメイン単量体との間に必要な空間や柔軟性を提供し、なおかつ個々のストラドマー単量体が互いに対合して本発明のストラドマーを形成できるようにする他のアミノ酸配列であってもよい。
【００８８】
２つ以上の個々のストラドマー単量体が本発明の生体模倣化合物を形成できるかぎり、ドメイン結合の同一性は特に重要ではなく、得られる化合物が複数のＦｃγＲを架橋させる機能を有することは、当業者であれば理解できよう。免疫学的に活性な生体模倣化合物が各々、シリアルストラドマーまたはストラドボディの各ストラドマー単量体に好ましくは少なくとも１つのドメイン結合を含有し、これが免疫学的に活性な生体模倣薬の複数のＦｃドメインを制限された空間領域内に維持するように機能し、なおかつ免疫学的に活性な生体模倣内の複数のＦｃドメインへの同時結合などによりＦｃγＲを凝集させることで、ＦｃγＲ活性化の活性を促進することが想定される。好ましくは、ドメイン結合が、ＩｇＧ分子のヒンジドメインによって得られるものと同じかそれより大きなコンホメーションのばらつきを可能にするものである。上記の結合はいずれも当該技術分野において周知である。
【００８９】
ストラドマー単量体間結合
本発明の生体模倣化合物に見られる別の結合に、本発明のストラドマーおよびストラドボディをなす２つ以上の個々のストラドマー単量体間に発生する「ストラドマー単量体間結合」がある。ドメイン結合は、生体模倣化合物の個々のストラドマー単量体をなすＦｃドメイン単量体同士や部分Ｆｃドメイン単量体同士を結合するよう機能する短いアミノ酸配列であるが、ストラドマー単量体間結合は、生体模倣化合物をなす２つ以上の個々のストラドマー単量体を連結するよう機能する。ストラドマー単量体間結合は、個々のストラドマー単量体を安定して会合できるものであれば、どのような結合であってもよい。いくつかの実施形態では、ストラドマー単量体間結合は、ストラドマー単量体間の共有結合であってもよい。あるいは、ストラドマー単量体間のストラドマー単量体間結合は、直接的な化学的架橋によるものであってもよい。好ましい実施形態では、ストラドマー単量体構造は、Ｆｃドメイン単量体間の自然な自己凝集特性を利用して、自己会合性ストラドマーを生成する。いくつかの実施形態では、個々のストラドマー単量体間にジスルフィド結合が形成されて、ストラドマーが形成される（たとえば、ストラドマー単量体間結合（図示せず）がストラドマーの２つの個々のストラドマー単量体を連結するよう機能する図５Ａを参照のこと）。ジスルフィド結合は、天然のＦｃドメイン単量体配列に生じるシステイン残基または部位特異的突然変異誘発によってＦｃドメイン単量体に取り込まれたシステイン残基のいずれかを利用して、生体模倣分子をなすＦｃドメイン単量体のシステイン残基間に形成される。また、こうした自然な自己凝集特性を利用して、ストラドマー多量体の個々のストラドマー単量体間にストラドマー単量体間結合を形成することも可能である。別の実施形態では、個々のストラドマー単量体をなすアミノ酸配列に部位特異的突然変異誘発によって導入されたシステイン残基間にジスルフィド結合が形成されるストラドマー単量体間結合を含む。
【００９０】
上述したように、好ましい実施形態では、ストラドマーを形成するストラドマー単量体間結合が、ストラドマー単量体の自己凝集によって生じる結合である。一実施形態では、ストラドマーをなす２つの個々のストラドマー単量体が同一の配列になるように、ストラドマーをなす２つのストラドマー単量体が同一のペプチドである。しかしながら、他の実施形態では、ストラドマー単量体のアミノ酸配列が互いに異なるストラドマーを含むことは、当業者であれば理解できよう。
【００９１】
２つのストラドマー単量体は、たとえば、ストラドマー単量体で等しいＦｃ部分ドメイン単量体間に対合が生じるように平行に整列配置させることで、ストラドマーを形成することができる（たとえば、図５Ａ〜図５Ｂを参照のこと）。しかしながら、本発明はまた、非同一のＦｃ部分ドメイン単量体間で対合が生じる実施形態や、対合はストラドマー単量体の同一のＦｃ部分ドメイン単量体間で生じるが２つのストラドマー単量体のアライメントがずれている実施形態（図１１Ｃ参照）も含む。
【００９２】
ストラドマー単量体の生成と自己二量体とを制御するために、「キャッピング領域」を使用してもよい。たとえば、ストラドマー単量体配列は、以下のＦｃ部分ドメインすなわち、ＩｇＥのＣＨ２／ＩｇＧ１のヒンジ／ＩｇＧ１のＣＨ２／ＩｇＧ１のＣＨ３／ＩｇＧ１のヒンジ／ＩｇＧ１のＣＨ２／ＩｇＥのＣＨ４（図１３Ａ参照）含むものであってもよく、ここで、ＩｇＥドメインが「ジッパー形成作用（zippering effect）」を防止するキャップとして機能する。ジッパー形成作用は、ストラドマー単量体（図１１Ａ参照）が自己二量体化可能（図１１Ｂ参照）であるか、自己二量体化ではなく平行して交互に並ぶ単量体として自らアライメント可能（図１１Ｃ参照）であるときに起こり得る。必要に応じて、任意の免疫グロブリンのヒンジあるいはＩｇＭまたはＩｇＥのＣＨ４ドメインなどの多岐にわたるＦｃ部分ドメインを単独または組み合わせで使用して、ストラドマーを自己二量体化させてジッパー形成作用を防止できることは、当業者であれば理解できよう。他の不連続（non-series）構造が、分岐分子（図１２Ｂ参照）、単純な共有結合やペプチドリンカーまたは非ペプチドリンカーなどのリンカーによって連結された、平行に並ぶ２つ以上のストラドマー（図１４Ａおよび図１４Ｂ参照）を含むものであってもよい。
【００９３】
コアストラドマー
「コアストラドマー」は、２つ以上のコアストラドマー単位が結合されるコア部分で構成され、各コアストラドマー単位が少なくとも１つのＦｃドメインを含むことで、２つ以上のＦｃγ受容体を結合できる生体模倣化合物が形成される。Ｆｃ断片、Ｆｃ部分断片、シリアルストラドマーまたはクラスターストラドマー単位は各々独立して、これらの分子が各々少なくとも１つのＦｃドメインを含むことから、コアストラドマーにおけるコアストラドマー単位の一方または両方（２つのＦｃドメインを含む場合）として機能することができる。よって、コアストラドマーは、少なくとも１つのシリアルストラドマーが結合されるコア部分を含むものであってもよい。
【００９４】
本明細書で使用する場合、コアストラドマーのコア部分は、コアストラドマー単位が結合または共有結合できるものであれば、どのような物理的構造であってもよい。コア部分として機能できる好ましいポリペプチドには、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシ血清アルブミンおよび卵白アルブミンがある。このようなコア部分とコアストラドマー単位（Ｆｃ断片、Ｆｃ部分断片、Ｆｃドメイン、シリアルストラドマーおよびクラスターストラドマー単位）との間の化学的な架橋は、周知の技法を用いて多数の化学物質によって達成できるものである。一般に架橋で使用するのに適した代表的な化学物質としては、グルタルアルデヒド、カルボジイミド、スクシンイミドエステル（ＭＢＳ、ＳＭＣＣなど）、ベンジジン、過ヨウ素酸塩、イソチオシアネート；ビス（ＮＨＳ）ＰＥＯ５、ＤＦＤＮＢ（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）などのＰＥＯ（ポリエチレン）／ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）スペーサ；アルデヒド活性化デキストラン、スベリン酸ビス（スルホスクシンイミジル）、ビス［２−（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン、アジプイミド酸ジメチル・２ＨＣｌ、ピメルイミド酸ジメチル・２ＨＣｌ、スベルイミノ酸ジメチル・２ＨＣｌ、グルタル酸ジスクシンイミジル、プロピオン酸ジチオビス（スクシンイミジル）、スベリン酸ジスクシンイミジル、酒石酸ジスクシンイミジル、ジメチル３，３’−ジチオビスプロピオンイミダート・２ＨＣｌ、３，３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート）、エチレングリコールビス［スクシンイミジルスクシネート］、エチレングリコールビス［スルホスクシンイミジルスクシネート］、β−［トリス（ヒドロキシメチル）ホスフィノ］プロピオン酸およびトリス−スクシンイミジルアミノトリアセテートを含むアミン反応性ホモ二官能性架橋試薬があげられる。当業者であれば、選択する特定のコア部分と、免疫学的に活性な生体模倣薬の形成のために組み合わされるＦｃドメイン含有ポリペプチドの配列とに応じて、適当な架橋用化学物質および条件を選択できるであろう。たとえば、Wong, Shan S. Chemistry of protein conjugation and cross-linking. Boca Raton: CRC Press, c1991（ISBN 0849358868）を参照のこと。
【００９５】
別の好ましい実施形態では、結合（Ｊ）鎖ポリペプチドをコア部分として使用してもよい。Ｊ鎖をコア部分として用いる場合、システイン結合を使用して個々のコアストラドマー単位同士を接続し、コアストラドマーを形成してもよい（図１０Ａ〜図１０Ｄ参照）。コアストラドマーの実施形態では、ＩｇＭのＣＨ４末端ドメインを含むシリアルストラドマー（コアストラドマー単位として機能）がＪ鎖と会合して、コアストラドマーを形成する。ＩｇＭのＣＨ４ドメインを含むことで、Ｊ鎖とこのＦｃ部分ドメインを含むストラドマーの自己凝集が生じ、複数のＦｃγ受容体を結合できる生体模倣薬が形成される。別の代表的なコアストラドマーに、複数のＦｃドメイン（コアストラドマー単位として機能）を含むものがあり、この場合の複数のＦｃドメインはＩｇＧ３のヒンジ／ＩｇＧ３のＣＨ２／ＩｇＧ３のＣＨ３／ＩｇＭのＣＨ４という構造を有する。この分子の構成要素であるＦｃドメインは、個々には１つより多くのＦｃγ受容体を結合できないが、構成要素である複数のＦｃドメインがＪ鎖と会合すると、構造全体でみれば５つのＦｃγ受容体を結合できる。
【００９６】
別の実施形態では、コア部分が非ポリペプチド実体であってもよい。多岐にわたる好適な組成物をコアストラドマー単位と物理的に会合させ、免疫学的に活性な生体模倣薬を生成することができる。無毒のビーズ、高分枝ポリマーおよびデンドリマー、ナノ粒子ならびに、ＦＤＡがGenerally Regarded As Safeとして分類しているさまざまな化合物（プロピレングリコール、ソルビトール、リポソーム、シリケートカルシウム（silicate calcium）など）を使用してもよい。たとえば、Nanoparticulates as Drug Carriers by Vladimir P. Torchilin (Editor), Imperial College Press (Sept. 2006)ISBN: 1860946305/ISBN-13: 9781860946301を参照のこと。
【００９７】
本発明の好ましいコア部分としては、ビーズ、アルブミン、リポソーム、ペプチドおよびポリエチレングリコールがあげられる。
【００９８】
クラスターストラドマー
「クラスターストラドマー」は、中心部分である「頭部」と２つ以上の「脚部」とを有するタコのような形をした生体模倣薬であり、それぞれの脚部が少なくとも１つのＦｃγ受容体を結合できる１つ以上のＦｃドメインを含むため、２つ以上のＦｃγ受容体を結合できる生体模倣薬が形成される。それぞれのクラスターストラドマーは、各々「クラスターストラドマー単位」と呼ばれる複数の二量体タンパク質で構成されている。各クラスターストラドマー単位は、多量体化する領域と、少なくとも１つの機能的Ｆｃドメインを含む「脚部」領域とで構成される。多量体化用領域は、別のクラスターストラドマー単位の多量体化用領域との間で多量体化されると、クラスターストラドマーの「頭部」となる。脚部領域は、各脚部領域のＦｃドメインと同じ数だけのＦｃγ受容体と結合できる。よって、クラスターストラドマーは、２つ以上のＦｃγ受容体と結合できる生体模倣化合物である。
【００９９】
多量体化用領域は、二量体タンパク質をさらに多量体化させるペプチド配列であってもよいし、多量体化用領域が二量体タンパク質の多量体化を促進するグリコシル化であってもよい。ペプチドの多量体化用領域の例として、ＩｇＧ２のヒンジ、ＩｇＥのＣＨ２ドメイン、イソロイシンジッパー、ジンクフィンガーがあげられる。グリコシル化がペプチドの多量体化に対しておよぼす影響は、当該技術分野において十分に説明されている（たとえば、Role of Carbohydrate in Multimeric Structure of Factor VIII/V on Willebrand Factor Protein. Harvey R. Gralnick, Sybil B. Williams and Margaret E. Rick. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, Vol. 80, No. 9, [Part 1: Biological Sciences] (May 1, 1983), pp. 2771-2774；Multimerization and collagen binding of vitronectin is modulated by its glycosylation. Kimie Asanuma, Fumio Arisaka and Haruko Ogawa. International Congress Series Volume 1223, December 2001, Pages 97-101など）。
【０１００】
クラスターストラドマー単位自体が多量体化用領域とともにシリアルストラドマー（２つ以上のＦｃドメインを含む）をなす場合もあることは、熟練した技術者であれば分かるであろう。このため、クラスターストラドマーの「脚部」は、本明細書で説明するどのようなタイプのシリアルストラドマーおよび／またはＩｇＧ１のＦｃ断片および／またはＩｇＧ３のＦｃ断片および／または単一のＦｃドメインのうちの１つ以上で構成されるものであってもよい。このような生体模倣薬のＩｇＧ１のＦｃ断片とＩｇＧ３のＦｃ断片をそれぞれ改変し、任意の免疫グロブリンの部分Ｆｃ断片を含むようにしてもよいことは、当該技術分野において熟練した者であれば分かるであろう。クラスターストラドマー単位を含む単量体（上述したように、２つのペプチドの二量体会合として存在する）が「クラスターストラドマー単位単量体」である。多量体化前にクラスターストラドマー単位が複数の低親和性Ｆｃγ受容体と結合することがない、生成された代表的なクラスターストラドマーは、ＩｇＥのＣＨ２／ＩｇＧ１のヒンジ／ＩｇＧ１のＣＨ２／ＩｇＧ１のＣＨ３である。
【０１０１】
シリアルストラドマーをクラスターストラドマーの「脚部」として使用する場合、それぞれの「脚部」は、（シリアルストラドマーには少なくとも２つのＦｃドメインが存在するため）複数のＦｃγ受容体を結合でき、よって複数のＦｃγ受容体を結合できる生体模倣薬が生成されることは、当該技術分野において熟練した者であれば分かるであろう。脚部を含む個々のクラスターストラドマー単位単量体の末端に、Ｆｃ部分ドメイン、他の免疫グロブリン配列および非免疫グロブリン配列を配置し、それぞれの脚部を１つまたは複数のＦｃγ受容体との結合に利用しやすくするのに好ましい空間的近接性を各脚部が有するクラスターストラドマーを生成してもよい。
【０１０２】
多量体化用領域は、ペプチドを二量体化または多量体化させるペプチド配列であってもよく、ＩｇＧ２のヒンジと、ＩｇＥのＣＨ２ドメインと、イソロイシンジッパーと、ジンクフィンガーとを含む。当該技術分野において周知のように、ヒトＩｇＧ２のヒンジ領域は共有結合二量体を形成できる（Yoo, E.M. et al. J. Immunol. 170, 3134-3138 (2003)；Salfeld Nature Biotech. 25, 1369-1372 (2007)）。ＩｇＧ２の二量体形成がＣ−Ｃ結合によるＩｇＧ２のヒンジ構造を介してなされると思われる（Yoo. et al., 2003）ことから、ヒンジ構造単独で二量体形成に介在する可能性がある。このように、ＩｇＧ２のヒンジを有するシリアルストラドマー（よって、クラスターストラドマー単位として機能する）は、２つのシリアルストラドマーあるいは、場合によっては３つのシリアルストラドマーを含むものであってもよいクラスターストラドマーを形成することになる。
【０１０３】
ヒトＩｇＧ２のヒンジ単量体のアミノ酸配列は以下のとおりである。ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３６）。ヒンジのコア構造は、ヒンジ単量体のＣＸ−Ｘ−Ｃ部分である。よって、本発明のストラドマー単量体は、ＩｇＧ２のヒンジ単量体の１２のアミノ酸からなる完全な配列を含むこともあれば、４つのアミノ酸からなるコアとＦｃドメイン単量体とを含むこともある。コア構造のＸ−Ｘにはどのようなアミノ酸でも可能であるが、好ましい実施形態では、Ｘ−Ｘ配列はＶ−ＥまたはＰＰである。ＩｇＧ２のヒンジ単量体は、コアの４つのアミノ酸からなる構造に加えて、ＩｇＧ２のヒンジ配列すべてとＩｇＧ２のＣＨ２およびＣＨ３ドメイン単量体配列のいくつかまたはすべてを含めて、ヒンジ配列のどのような部分で構成されるものであってもよいことは、当業者であれば理解できよう。考えられるＩｇＧ２のヒンジ−ＩｇＧ１のＦｃドメインシリアルストラドマーコンストラクトの具体例は以下のとおりである。
【０１０４】
【表１】
0005600588.tif 000002
【０１０５】
以上は多くの例のうちのごく一部にすぎない。ＩｇＧ１の複数のＦｃドメインはどれでも、たとえばＩｇＧ３のＦｃドメインで代置可能である。ＩｇＧ２二量体化ドメインを有する別のタンパク質として、ＩｇＭまたはＩｇＥドメイン単量体配列を含むＮ末端配列および／またはＣ末端配列が付加されたＩｇＧ２−ＩｇＧ１キメラタンパク質があげられる。これらのＮ末端配列およびＣ末端配列には、ヒンジ領域、定常ドメインまたはその両方が可能である。
【０１０６】
上述したように、ロイシンジッパーおよびイソロイシンジッパーを多量体化用領域として使用してもよい。ロイシンジッパーおよびイソロイシンジッパー（コイルドコイルドメイン）は、タンパク質の二量体、三量体および四量体の形成を容易にすることが知られている（Harbury et al. Science 262:1401-1407 (1993)；O’Shea et al. Science 243 :538 (1989)）。イソロイシンジッパーが三量体を形成しようとする自然な傾向を利用して、イソロイシンジッパーを含むシリアルストラドマーを用いてクラスターストラドマーを生成してもよい。イソロイシンジッパーを有する３つ以上のシリアルストラドマーの会合（クラスターストラドマー単位として）によって、少なくとも６つのＦｃγ受容体結合領域を有するクラスターストラドマーが形成される。
【０１０７】
異なるタイプのロイシンジッパーおよびイソロイシンジッパーを利用してもよいことは、当業者であれば理解できるであろうが、好ましい実施形態では、（Morris et al., Mol. Immunol. 44:3112-3121 (2007)；Harbury et al. Science 262:1401-1407 (1993)）に記載されているようにして改変したＧＣＮ４転写調節因子由来のイソロイシンジッパーを使用する：YTQKSLSLSPGKELLGGGSIKQIEDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGERGHGGGSNSQVSHRYPRFQSIKVQFTEYKKEKGFILTS（配列番号３７）。このイソロイシンジッパー配列は、Ｆｃドメイン単量体の多量体化に利用可能ないくつかの配列のうちの１つにすぎない。配列番号３７で示す配列全体を用いてもよいが、この配列の下線を付した部分が、本発明のクラスターストラドマーで使用できるイソロイシンジッパーのコア配列を表している。このように、本発明のストラドマー単量体は、イソロイシンジッパー（ＩＬＺ）の８８のアミノ酸からなる完全な配列を含むものであってもよいし、または２８のアミノ酸からなるコアを１つ以上のＦｃドメイン単量体と一緒に含むものであってもよい。また、イソロイシンジッパーは、２８のアミノ酸からなるコア構造に加えてジッパーのどの部分で構成されるものであってもよく、イソロイシンジッパーの２９以上８８未満のアミノ酸で構成されてもよいことは、当業者であれば理解できよう。考えられるＩＬＺ−ＩｇＧ１のＦｃドメインコンストラクトの具体例は以下のとおりである。
【０１０８】
【表２】
0005600588.tif 000003
【０１０９】
以上は多くの例のうちのごく一部にすぎない。ＩｇＧ１のドメインはどれでも、たとえばＩｇＧ３のドメインで代置可能である。ＩＬＺドメインを有する別のタンパク質として、ＩｇＭまたはＩｇＥなどの他のＩｇ分子由来のＮ末端配列および／またはＣ末端配列が付加されたＩｇＧ１キメラタンパク質があげられる。これらのＮ末端配列およびＣ末端配列には、ヒンジ領域、定常ドメインまたはその両方が可能である。
【０１１０】
Ｆｃ断片ストラドマー
「Ｆｃ断片ストラドマー」は複数のＦｃ断片で構成される。Ｆｃ断片の翻訳後修飾に起因する特定の状況下では、Ｆｃ断片が十分な強度で別のＦｃ断片と結合して、複数のＦｃγ受容体と結合する分子の形成を可能にする。このような結合を可能にする翻訳後修飾としては、グリコシル化およびメチル化があげられる。組換えＦｃ断片が生成される細胞系の同一性ならびに、これを生成する条件によって、Ｆｃ断片がＦｃ断片ストラドマーを形成するか否かが左右される。たとえば、FreestyleMax ＣＨＯ一過性形質転換細胞で生成された組換えＦｃ断片は、ウェスタンブロットで可視化できる多量体を形成し、プラズモン共鳴を用いる結合アッセイでの二価フィット（bivalent fit）に基づいて結合し、ＩＶＩＧに匹敵する生物活性を樹状細胞アッセイで呈する。これとは対照的に、安定ＣＨＯ細胞系から生成された同じ組換えＦｃ断片は、ウェスタンブロットでＦｃ断片の多量体を形成せず、プラズモン共鳴を用いる結合アッセイでの一価フィット（univalent fit）に基づいて結合し、同程度の生物活性を呈さない。このように、Ｆｃ断片ストラドマーは、２つ以上のＦｃγ受容体を結合できる生体模倣化合物である。
【０１１１】
また、本発明において、「Ｆｃ二量体」という用語はＦｃ断片の二量体（図２Ａ参照）であり、「Ｆｃ三量体」という用語はＦｃ断片の三量体であり、「Ｆｃ多量体」という用語はＦｃ断片の多量体（図２Ｂ参照）である。
【０１１２】
ストラドボディ
本発明はストラドボディも包含する。本明細書で使用する場合、「ストラドボディ」とは、好ましくは１つ以上のＦａｂドメインが結合されるストラドマー（シリアルストラドマー、コアストラドマー、クラスターストラドマーおよびＦｃ断片ストラドマーを含む）との関連で、２つ以上のＦｃドメインを含む分子を示す（たとえば、図８Ａ〜図８Ｂおよび図９Ａ〜図９Ｂ参照）。よって、このようなＦａｂドメインがゆえに、ストラドボディは抗原結合能とストラドマーＦｃγ受容体結合活性の両方を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃγ受容体結合活性は、天然構造のホロ抗体のＦｃ部分以上のＦｃγＲを結合して架橋できる機能によるものである場合がある。好ましくは、ストラドボディのＦａｂ部分は、重鎖と軽鎖の両方を含む。可変の重鎖および軽鎖は独立して、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４などの適合免疫グロブリンからのものであってもよいし、同じＩｇアイソタイプのからのものであっても異なるＩｇアイソタイプからのものであってもよいが、好ましくは同じＩｇアイソタイプからのものである。軽鎖であるκまたはλも、異なるＩｇアイソタイプからのものであってもよい。ストラドマーのようなストラドボディは、２つ以上のＦｃγＲを結合して、免疫機能を調節することができる。
【０１１３】
一実施形態では、ストラドマーは、ストラドマーのＦｃヒンジ（Ｈ）ドメインに免疫グロブリンのＦａｂが結合されてストラドボディを生成するものであってもよい（図８Ａおよび図８Ｂなど）。別の実施形態では、ストラドボディが、ＩｇＧ１のＦｃ−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）で構成されるものであってもよい（図９Ａなど）。他の実施形態では、ストラドボディは、ＩｇＧ１のドメインおよびヒンジと、ＩｇＧ３のドメインおよびヒンジと、ＩｇＧＥのドメインおよびヒンジとで構成されるものであってもよい（図９Ｂなど）。Ｆａｂは、天然の免疫グロブリン構造（図３Ａ〜図３Ｂ）に見られるような重鎖と軽鎖の両方を含む。
【０１１４】
ストラドボディは、Ｆａｂ部分の抗原結合特性と上述したストラドマーの特性とを持つことになる。このような組み合わせは、特に低エピトープ発現環境（腫瘍がｈｅｒ／２−ｎｅｕ高発現株に分類されない乳癌患者の９０％など）において、ホロ抗体のＦｃ骨格で実現できるよりも高速にエフェクター細胞上のＦｃγ受容体を結合し、架橋し、活性化することで、高い割合の患者でＡＤＣＣを誘導する機能を果たす。上述したように、１つ以上の抗原結合Ｆａｂ断片をストラドマーに加えて、ストラドボディを形成することが可能である。好ましくは、ストラドマーに加えられるポリペプチド（本明細書で説明する結合以外）は、非免疫グロブリンポリペプチドの全部または一部ではないものである。
【０１１５】
Ｆａｂは、ヒト定常領域と、マウス、ラット、ウサギ、サルまたはヤギの抗体由来の可変領域などの非ヒト可変領域とで構成されるキメラ構造の場合がある。当業者であれば、現在利用でき、Ｆａｂキメラ構造の作製について科学文献に記載された方法論を用いて、ストラドボディに組み込むためのさまざまなＦａｂキメラ構造を作製できるであろう。このように、「ヒト化」ストラドボディは、「ヒト化モノクローナル抗体と同様に設計できるものである。
【０１１６】
変異体および相同体
ＩｇＧ１由来の２つのＦｃドメインなどの免疫グロブリンの特定のＦｃドメイン（すなわち、ＩｇＧ１のヒンジ／ＩｇＧ１のＣＨ２／ＩｇＧ１のＣＨ３／ＩｇＧ１のヒンジ／ＩｇＧ１のＣＨ２／ＩｇＧ１のＣＨ３）を含むように本発明のストラドマーおよび他の生体模倣薬を設計可能であることは、当業者であれば理解できよう。このようなストラドマーは、まずＩｇＧ１の２つのＦｃドメイン単量体（すなわち、ＩｇＧ１のヒンジ単量体／ＩｇＧ１のＣＨ２単量体／ＩｇＧ１のＣＨ３単量体／ＩｇＧ１のヒンジ単量体／ＩｇＧ１のＣＨ２単量体／ＩｇＧ１のＣＨ３単量体）をコードするポリヌクレオチドを調製した後、そこからストラドマー単量体を発現させることで構成できよう。このような２つのストラドマー単量体が会合すると、ＩｇＧ１の２つのＦｃドメインを有するシリアルストラドマーが生成される。
【０１１７】
本発明のストラドマーおよび他の生体模倣薬を、複数のＦｃドメインをなす特定の免疫グロブリンＦｃ部分ドメインの同一性に基づいて設計することも可能である。たとえば、２つのＦｃドメインを有するシリアルストラドマーを生成できるが、この場合第１のＦｃドメインがＩｇＧ１のヒンジ／ＩｇＧ３のＣＨ２／ＩｇＧ１のＣＨ３を含み、第２のＦｃドメインがＩｇＧ３のヒンジ／ＩｇＧ１のＣＨ２／ＩｇＧ３のＣＨ３を含む。
【０１１８】
本明細書に開示のストラドマーおよび他の生体模倣分子は、さまざまな種のどれに由来するものであってもよい。特に、本発明のいずれか１種類の生体模倣分子におけるＦｃドメインまたはＦｃ部分ドメインを、複数の（たとえば、２、３、４、５またはそれよりも多くの）種の免疫グロブリンから誘導可能である旨は理解できよう。しかしながら、単一の種から誘導されることのほうが一般的である。また、どの種に対しても本明細書に開示の方法（治療方法など）のどれでも適用可能であることは、自明であろう。通常、該当する種に適用される生体模倣薬の構成要素は、いずれもその種に由来するものになる。しかしながら、すべての構成要素が異なる種に由来する生体模倣薬あるいは、（関連する方法を適用する種を含むまたは含まない）複数の種から得た生体模倣薬を使用することも可能である。
【０１１９】
本発明によるストラドマーおよび他の生体模倣薬のＦｃドメインおよびＦｃ部分ドメインをなす特定のＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４ドメインならびにヒンジ領域は、免疫グロブリンサブクラスならびに、その起源となる生物の両方の観点から、独立して選択できるものである。したがって、本明細書に開示のストラドマーおよび他の生体模倣薬は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥおよびＩｇＭなどのさまざまな免疫グロブリンタイプから独立して得られる複数のＦｃドメインおよび複数の部分Ｆｃドメインを含むものであってもよい。同様に、種特異的またはキメラストラドマー分子を生成するために、各Ｆｃドメインおよび部分Ｆｃドメインは、さまざまな種に由来するものであってもよく、好ましくは、非ヒト霊長類（サル、ヒヒ、チンパンジーなど）、ヒト、ネズミ、クマネズミ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ブタ、ウサギ、ヤギ、シカ、ヒツジ、フェレット、アレチネズミ、モルモット、ハムスター、コウモリ、鳥類（ニワトリ、シチメンチョウ、アヒルなど）を含む哺乳類の種、魚類および爬虫類に由来するものであってもよい。
【０１２０】
個々のＦｃドメインおよび部分Ｆｃドメインは、ヒト化したものであってもよい。異なるＦｃドメインおよび部分Ｆｃドメインによって、異なるタイプの機能が得られることは、当業者であれば自明であろう。たとえば、ＦｃγＲはＩｇＧ免疫グロブリンと特異的に結合し、他のクラスの免疫グロブリンとは結合しない。このため、複合Ｆｃγ受容体結合能を有するストラドマーの設計に関心のある当業者であれば、ＩｇＧのヒンジ領域およびＩｇＧのＣＨ２とＣＨ３ドメインでのものを含め、ＩｇＧの十分にキャラクタライズされたＦｃγ受容体結合配列を少なくとも組み込んだ複数のストラドマーＦｃドメインを設計するであろう。また、特定のＩｇドメインを用いることで、ＩｇＡの点滴に関連するアナフィラキシーなどの多くの有害な結果を伴い得ることも、当業者であれば理解できよう。本明細書に開示の生体模倣薬は通常、このような影響を回避するよう設計すべきものであるが、特定の状況では、このような影響が望ましいこともある。
【０１２１】
また、本発明は、ＦｃドメインまたはＦｃ部分ドメインの天然に生じるアミノ酸配列とはとは異なるアミノ酸を有する複数のＦｃドメインおよびＦｃ部分ドメインを含むストラドマーも包含する。本発明の生体模倣化合物に含めるのに好ましいＦｃドメインは、ホロＦｃγ受容体またはＦｃγＲの可溶性細胞外ドメイン部分のいずれかに対して測定可能な特異的結合親和性を有する。多数のＦｃドメインおよびＦｃドメイン単量体の一次アミノ酸配列およびＸ線結晶学的構造が、当該技術分野において利用できる。たとえば、Woof JM, Burton DR. Human antibody-Fc receptor interactions illuminated by crystal structures. Nat Rev Immunol. 2004 Feb;4(2):89-99を参照のこと。Ｆｃγ受容体結合能のある代表的なＦｃドメインとして、ヒト免疫グロブリンＧアイソタイプ１〜４由来のＦｃドメイン（ｈＩｇＧ１〜４）（それぞれ配列番号１、３、５および７；図１５Ａ〜図１５Ｄも参照）があげられる。（Robert L. Shields, et al. High Resolution Mapping of the Binding Site on Human IgG1 for FcγRI, FcγRII, FcγRIII, and FcRn and Design of IgG1 Variants with Improved Binding to the FcγR. J. Biol. Chem., Feb 2001; 276: 6591-6604の図２参照）。これらの天然配列については、機能的配列の部位特異的突然変異マッピングを含め、詳しい構造機能解析がなされている１４。これらの過去の構造機能研究および利用できる結晶学データに基づいて、当業者であれば、ＦｃドメインのＦｃγ受容体結合能を保ちつつ（配列番号１、３、５および７などの）機能的Ｆｃドメイン配列変異体を設計できよう。
【０１２２】
アミノ酸の変化は、Ｆｃドメインの配列全体に見られることもあるし、Ｆｃドメインをなす特定のＦｃ部分ドメインに限られることもある。本発明のストラドマーおよび他の生体模倣薬に用いられるＦｃドメインの機能的変異体は、天然のＦｃドメインとの配列同一性が、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％になる。同様に、本発明のストラドマーおよび他の生体模倣薬に用いられるＦｃ部分ドメインの機能的変異体は、天然のＦｃ部分ドメインとの配列同一性が、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％になる。
【０１２３】
本発明のＦｃ断片単量体、Ｆｃ部分断片単量体、ストラドマー単量体および他の単量体の作製にあたって、Ｆｃドメイン単量体の機能的変異体を用いることも本発明に包含されることは、当業者であれば自明であろう。Ｆｃドメイン単量体の機能的変異体は、天然のＦｃドメイン単量体配列との配列同一性が、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％になる。
【０１２４】
同様に、本発明は、本発明のＦｃ断片単量体、Ｆｃ部分断片単量体、Ｆｃドメイン単量体、ストラドマー単量体および他の単量体の作製にあたって、Ｆｃ部分ドメイン単量体の機能的変異体を用いることも包含する。Ｆｃ部分ドメイン単量体の機能的変異体は、天然のＦｃ部分ドメイン単量体配列との配列同一性が、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％になる。
【０１２５】
アミノ酸が変化することで、Ｆｃγ受容体に対するストラドマーの結合親和性が低下あるいは増大することもあれば、変化せずに残ることもある。好ましくは、このようなアミノ酸の変化は保存されたアミノ酸置換であるが、このような変化には、欠失、付加、他の置換も含む。保存されたアミノ酸置換は一般に、以下の群内での変化を含む。グリシンおよびアラニン；バリン、イソロイシンおよびロイシン；アスパラギン酸およびグルタミン酸；アスパラギン、グルタミン、セリンおよびトレオニン；リジン、ヒスチジンおよびアルギニン；フェニルアラニンおよびチロシン。
【０１２６】
「機能的変異体」という用語は、本明細書で使用する場合、参照配列と同じ生物学的作用に介在できる（ポリペプチドの場合）か、参照配列がコードするポリペプチドと同じ生物学的作用に介在できるポリペプチドをコードする（ポリヌクレオチドの場合）、相同性の点で参照配列と関連する配列を示す。たとえば、本明細書に記載のいずれかの生体模倣薬の機能的変異体は、指定の相同性または同一性を有し、ＤＣの免疫調節ができるものである。機能的配列変異体には、ポリヌクレオチドとポリペプチドの両方が含まれる。配列同一性は通常、BLAST 2.0（Basic Local Alignment Search Tool）をデフォルトのパラメータすなわち、フィルタ−オン、スコア行列−BLOSUM62、ワードサイズ−３、Ｅ値−１０、ギャップコスト−１１，１およびアライメント−５０で用いて評価される。
【０１２７】
上記から、本発明のストラドマーは、（ａ）天然に生じる複数のＦｃドメインのみ、（ｂ）天然に生じる複数のＦｃドメインとアミノ酸配列を変化させた複数のＦｃドメインとの混合物、（ｃ）アミノ酸配列を変化させた複数のＦｃドメインのみを有するストラドマーを含むことは、自明であろう。必要なのは、天然に生じる配列を有するＦｃドメインを含む対応のストラドマーが２つ以上のＦｃγ受容体を結合する能力の少なくとも２５％；３０％；４０％；５０％；６０％；７０％；８０％；９０％；９５％；９６％；９７％；９８％；９９％；９９．５％；または１００％またはそれより多くを、アミノ酸配列を変化させたストラドマーが有することだけである。
【０１２８】
本発明のストラドマーおよびストラドボディに生じる上述したＦｃγ受容体結合部位の配列を遺伝子操作によって変化させ、天然配列に対する親和性と結合能が変化した結合部位を予想どおりに誘導することもできる。たとえば、ＦｃγＲＩＩＩａに対する結合を増す一方でＦｃγＲＩＩに対する生体模倣化合物のＦｃドメイン結合を低減する特定の残基を変化させるようにしてもよい。ｈＩｇＧのＦｃγ受容体結合配列についての突然変異誘発ベースの詳しい構造機能解析の一例が、Robert L. Shields, et al. High Resolution Mapping of the Binding Site on Human IgG1 for FcγRI, FcγRII, FcγRIII, and FcRn and Design of IgG1 Variants with Improved Binding to the FcγR. J. Biol. Chem., Feb 2001; 276: 6591-6604である。マウスＩｇＧのＦｃ（ｍＩｇＧ  Ｆｃ）でも同様の研究がなされている。種ごとの天然ＩｇＧのＦｃドメインの構造相同性と一次配列相同性とに基づいて、当業者であれば、ｈＩｇＧのＦｃおよびｍＩｇＧのＦｃの構造−機能に関する広範囲にわたる知識を、本発明の生体模倣化合物における天然のすべてのＦｃγ受容体結合部位配列の合理的な突然変異誘発に適用し、特定のＦｃγ受容体特異性および結合親和性を有する結合部位を設計してもよい。
【０１２９】
天然Ｆｃドメインのアミノ酸配列の組成だけでなく、Ｆｃドメインの糖含有量もＦｃドメインの構造およびＦｃγＲとの結合相互作用に重要な役割を果たすことが知られている。たとえば、Robert L. Shields, et al. Lack of Fucose on Human IgG1 N-Linked Oligosaccharide Improves Binding to Human Fc RIII and Antibody-dependent Cellular Toxicity. J. Biol. Chem., Jul 2002; 277: 26733-26740 (doi:10.1074/jbc.M202069200)；Ann Wright and Sherie L. Morrison. Effect of C2-Associated Carbohydrate Structure on Ig Effector Function: Studies with Chimeric Mouse-Human IgG1 Antibodies in Glycosylation Mutants of Chinese Hamster Ovary Cells. J. Immunol., Apr 1998; 160: 3393-3402を参照のこと。糖含有量については、たとえば、特定の細胞系を含む特定のタンパク質発現系またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ酵素修飾を用いて制御してもよい。このように、本発明は、ドメインの起源となったホロ抗体本来の糖含有量の複数のＦｃドメインを含むストラドマーおよびストラドボディを含み、これらの生体模倣化合物の糖含有量が変化している。
【０１３０】
Ｆｃ部分ドメインのポリペプチド鎖だけでなく、多量体化領域すなわちグリコシル化の変化によって、Ｆｃγ受容体へのＦｃドメインの結合増大を可能にするＦｃドメインのコンホメーションの変化が生じる場合がある。よって、ポリペプチドに対する見た目上は小さな変化でも、複数のＦｃγ受容体を結合できるストラドマーを作製できることがある。
【０１３１】
部分ドメインおよび部分断片
さらに、本発明の実施形態で用いられるＦｃドメインおよびＦｃ部分ドメインが全長分でなくてもよいことは、当業者であれば分かるであろう。すなわち、本発明は、本発明のストラドマーおよび他の生体模倣薬をなす特定のＦｃドメイン単量体およびＦｃ部分ドメイン単量体のアミノ末端、カルボキシ末端または中程からアミノ酸を欠いたＦｃドメイン単量体およびＦｃ部分ドメイン単量体を用いることも包含する。
【０１３２】
たとえば、Ｆｃγ受容体に対するヒトＩｇＧ免疫グロブリンの結合部位に関する記述がある（Radaev, S., Sun, P., 2001. Recognition of Immunoglobulins by Fcγ Receptors. Molecular Immunology 38, 1073-1083；Shields, R.L. et. al., 2001. High Resolution Mapping of the Binding Site on Human IgG1 for FcγRI, FcγRII, FcγRIII, and FcRn and Design of IgG1 Variants with Improved Binding to the FcγR. J. Biol. Chem. 276 (9), 6591-6604など）。その知識に基づいて、これらの免疫グロブリンのＦｃドメインからアミノ酸を除去し、Ｆｃドメインと受容体との間の結合相互作用に対する影響を判断してもよい。よって、本発明は、アミノ酸の少なくとも約９０％がRadaev, S., Sun, P., 2001に定義されているような下側のヒンジおよびＣＨ２の２３３位〜３３８位を包含するＩｇＧの複数のＦｃドメインを包含する。
【０１３３】
本発明のＩｇＧ免疫グロブリンのＦｃ部分ドメインは、ヒンジ領域の全部または一部と、ＣＨ２ドメインの全部または一部と、ＣＨ３ドメインの全部または一部とを含む。
【０１３４】
ヒンジ領域の一部、ＣＨ２ドメインの一部またはＣＨ３ドメインの一部しか持たないＩｇＧのＦｃ部分ドメインを、Ｆｃ部分ドメイン単量体から作製する。よって、本発明は、ヒンジ領域のＮ末端由来またはヒンジ領域のＣ末端由来のＩｇＧのヒンジ領域単量体を含む。これらの単量体は、ヒンジ領域のたとえば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１または６２（ＩｇＧ１の場合は最大１５、ＩｇＧ２では最大１２、ＩｇＧ３では最大６２、ＩｇＧ４では最大１２）のアミノ酸を含み得る。
【０１３５】
また、本発明は、ＣＨ２ドメインのＮ末端由来またはＣＨ２ドメインのＣ末端由来のＩｇＧのＣＨ２ドメイン単量体も含む。ここで、これらの単量体は、ＣＨ２ドメインのたとえば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９または１１０（ＩｇＧ１およびＩｇＧ３の場合は最大１１０、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４では最大１０９）のアミノ酸を含み得る。
【０１３６】
本発明はさらに、ＣＨ３ドメインのＮ末端由来またはＣＨ３ドメインのＣ末端由来のＩｇＧのＣＨ３ドメイン単量体を含む。ここで、これらの単量体は、ＣＨ３ドメインのたとえば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６または１０７（ＩｇＧ１およびＩｇＧ３の場合は最大１０６、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４では最大１０７）のアミノ酸を含み得る。
【０１３７】
本発明のＩｇＡ１、ＩｇＡ２およびＩｇＤ免疫グロブリンのＦｃ部分ドメインは、ヒンジ領域の全部または一部と、ＣＨ２ドメインの全部または一部と、ＣＨ３ドメインの全部または一部とを含む。さらに、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２またはＩｇＤ免疫グロブリンのＣＨ１ドメインの全部または一部をＦｃ部分ドメインとして用いることが可能である。
【０１３８】
ヒンジ領域の一部、ＣＨ１ドメインの一部、ＣＨ２ドメインの一部またはＣＨ３ドメインの一部しか持たないＩｇＡ１、ＩｇＡ２およびＩｇＤ部分ドメインを、Ｆｃ部分ドメイン単量体から作製する。よって、本発明は、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２またはＩｇＤのヒンジ領域のＮ末端由来またはヒンジ領域のＣ末端由来のヒンジ領域単量体を含む。ここで、これらの単量体は、ヒンジ領域のたとえば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３または６４（ＩｇＡ１の場合は最大２６、ＩｇＡ２では最大１３、ＩｇＤでは最大６４）のアミノ酸を含み得る。
【０１３９】
本発明は、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２またはＩｇＤのＣＨ２ドメインのＮ末端由来またはＣＨ２ドメインのＣ末端由来のＣＨ２ドメイン単量体を含む。ここで、これらの単量体は、ＣＨ２ドメインのたとえば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６または１０７（ＩｇＡ１の場合は最大１０２、ＩｇＡ２では最大９６、ＩｇＤでは最大１０７）のアミノ酸を含み得る。
【０１４０】
本発明は、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２またはＩｇＤのＣＨ３ドメインのＮ末端由来またはＣＨ３ドメインのＣ末端由来のＣＨ３ドメインを含む。これらのドメインは、ＣＨ３ドメインのたとえば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０または１３１（ＩｇＡ１の場合は最大１１３、ＩｇＡ２では最大１３１、ＩｇＤでは最大１１０）のアミノ酸を含み得る。
【０１４１】
本発明のＩｇＭおよびＩｇＥ免疫グロブリンのＦｃ部分ドメインは、これらの分子のヒンジ／ＣＨ２ドメインの全部または一部と、ＣＨ３ドメインの全部または一部と、ＣＨ４ドメインの全部または一部とを含む。さらに、ＩｇＭおよびＩｇＥ免疫グロブリンのＣＨ１ドメインの全部または一部をＦｃ部分ドメインとして用いることが可能である。
【０１４２】
ヒンジ／ＣＨ２ドメインの一部、ＣＨ３ドメインの一部またはＣＨ４ドメインの一部しか持たないＩｇＭおよびＩｇＥ部分ドメインを、Ｆｃ部分ドメイン単量体から作製する。よって、本発明は、ＩｇＭまたはＩｇＥのヒンジ／ＣＨ２ドメインのＮ末端由来またはヒンジ／ＣＨ２ドメインのＣ末端由来のヒンジ／ＣＨ２ドメイン単量体を含む。ここで、これらの単量体は、ヒンジ／ＣＨ２ドメインのたとえば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１または１１２（ＩｇＭの場合は最大１１２、ＩｇＥでは最大１０９）のアミノ酸を含み得る。
【０１４３】
本発明は、ＩｇＭまたはＩｇＥのＣＨ３ドメインのＮ末端由来またはＣＨ３ドメインのＣ末端由来のＩｇＭおよびＩｇＥのＣＨ３ドメイン単量体を含む。ここで、これらの単量体は、ＣＨ３ドメインのたとえば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５または１０６（ＩｇＭの場合は最大１０６、ＩｇＥでは最大１０５）のアミノ酸を含み得る。
【０１４４】
本発明は、ＩｇＭまたはＩｇＥのＣＨ４ドメインのＮ末端由来またはＣＨ４ドメインのＣ末端由来のＩｇＭおよびＩｇＥのＣＨ４ドメイン単量体を含む。ここで、これらの単量体は、ＣＨ４ドメインのたとえば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９または１３０（ＩｇＭの場合は最大１３０、ＩｇＥでは最大１０５）のアミノ酸を含み得る。しかしながら、ＣＨ４ドメインのＣ末端を含むＩｇＭまたはＩｇＥのＣＨ４ドメインの一部は、１８アミノ酸よりも長いと好ましく、一層好ましくは３０アミノ酸長を超え、最も好ましくは５０アミノ酸長を超える。
【０１４５】
上記から、本発明の異なる実施形態が、（ａ）全長Ｆｃドメイン；（ｂ）全長ＦｃドメインとＦｃ部分ドメインとの混合物；（ｃ）Ｆｃ部分ドメインを含有するストラドマーを含むことは自明であろう。これらの実施形態のそれぞれにおいて、ストラドマーはＣＨ１ドメインをさらに含むものであってもよい。本明細書で説明するように、本発明のストラドマーの各実施形態において、ストラドマーには２つ以上のＦｃγ受容体を結合する能力がある。
【０１４６】
ストラドマーおよびストラドマー単量体の好ましい実施形態
本発明のストラドマー単量体の例を以下にあげておく。
１．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３
２．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３
３．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ３のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３
４．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３
５．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３
６．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ３のＣＨ３
７．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３
８．ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３
９．ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３
１０．ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ３のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ３のＣＨ３
１１．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ３のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３
１２．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ３のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３
１３．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ３のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ２のＣＨ２−ＩｇＧ３のＣＨ３
１４．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ４のヒンジ−ＩｇＧ４のＣＨ２−ＩｇＧ４のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３
【０１４７】
これらの実施形態の各々ならびに本明細書に示す他の実施形態では、ドメイン結合を用いて、ストラドマー単量体を構成するＦｃ部分ドメイン単量体同士を結合してもよい旨は理解できよう。一実施形態では、上記の各々のストラドマー単量体について示すＦｃ部分ドメイン単量体が、ヒトＦｃ部分ドメイン単量体である。
【０１４８】
本発明は、上記にて列挙したストラドマー単量体のうちの２つ以上を含むストラドマーを含む。好ましい実施形態では、本発明は、上記にて提示した等しいストラドマー単量体を２つ含むシリアルストラドマーを含む。
【０１４９】
上述したように、複数のＦｃγ受容体を結合するストラドマーの機能は、天然のＩｇＭ分子またはＩｇＡ分子と同様に、コアストラドマーのコア部分としてＪ鎖を取り込むことによっても達成可能である。天然のＩｇＡおよびＩｇＭ免疫グロブリンでは、結合（Ｊ）鎖は、抗体のＦｃ部分のアミノ酸１８個からなる「分泌テールピース（secretory tailpiece）」とのジスルフィド結合によってＩｇＡ抗体やＩｇＭ抗体の重鎖と軽鎖を連結する１５ｋＤａのペプチドである。Braathen, R., et al., The Carboxyl-terminal Domains of IgA and IgM Direct Isotype-specific Polymerization and Interaction with the Polymeric Immunoglobulin Receptor, J. Bio. Chem. 277(45), 42755-42762 (2002)。
【０１５０】
このようなコアストラドマーは、好ましくはＩｇＭ免疫グロブリン由来の天然に生じるＣＨ４  Ｆｃドメインを含むストラドマー単量体で構成されることで、このようなストラドマー単量体を含むストラドマーとＪ鎖との会合を可能にしたものであってもよい（図１０Ａ〜図１０Ｄ参照）。以下、自己二量体化してストラドマーを形成した後、Ｊ鎖と会合し、複数（たとえば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１５、１８、２０またはそれより多く）のストラドマーで構成されるコアストラドマーを形成可能なストラドマー単量体の例をあげておく。
１．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４（図１０Ｃ〜図１０Ｄ参照）
２．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
３．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ３のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４（図１０Ａ〜図１０Ｂ参照）
４．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
５．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
６．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
７．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ３のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
８．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
９．ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
１０．ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
１１．ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ３のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
【０１５１】
これらの実施形態の各々ならびに本明細書に示す他の実施形態では、ドメイン結合を用いて、ストラドマー単量体を構成するＦｃ部分ドメイン単量体同士を結合してもよい旨は理解できよう。一実施形態では、上記の各々のストラドマー単量体について示すＦｃ部分ドメイン単量体が、ヒトＦｃ部分ドメイン単量体である。
【０１５２】
Ｊ鎖に基づくコアストラドマーは、ＣＨ４  Ｆｃドメインを有する、Ｆｃ断片、Ｆｃ部分断片および／またはＦｃドメインで構成されるものであってもよい。この例では、コア部分に結合されたＣＨ４  Ｆｃドメインを有する、Ｆｃ断片、Ｆｃ部分断片およびＦｃドメインの各々がＦｃγ受容体結合部位を１つしか含まないものであってもよいが、このようなコアストラドマーに関しては、複数のＦｃγ受容体結合部位を含む生物活性生体模倣薬を形成する。異なる天然の免疫グロブリン由来のＦｃ部分ドメインを使用して、このようなコアストラドマーの機能的Ｆｃ断片、Ｆｃ部分断片およびＦｃドメインを生成できることは、当業者であれば分かるであろう。以下、自己二量体化した後、Ｊ鎖と会合してコアストラドマーを形成可能なＦｃ断片、Ｆｃ部分断片およびＦｃドメインの単量体の例をあげておく。
１．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
２．ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
３．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
４．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ３のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
５．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ３のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
６．ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
７．ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
８．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ２のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
９．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ３のＣＨ２−ＩｇＧ２のＣＨ３−ＩｇＭのＣＨ４
１０．ＩｇＧ１のヒンジ−ＩｇＧ１のＣＨ２−ＩｇＧ１のＣＨ３−ＩｇＥのＣＨ４−ＩｇＭのＣＨ４
【０１５３】
これらの実施形態の各々ならびに本明細書に示す他の実施形態では、ドメイン結合を用いて、ストラドマー単量体を構成するＦｃ部分ドメイン単量体同士を結合してもよい旨は理解できよう。一実施形態では、上記の各々のストラドマー単量体について示すＦｃ部分ドメイン単量体が、ヒトＦｃ部分ドメイン単量体である。
【０１５４】
自己凝集またはストラドマー単量体間結合によって第２のストラドマー単量体と会合し、Ｊ鎖と会合して複数のＦｃγ受容体結合部位を含むコアストラドマーを生成する際の目的を達成するのに、ストラドマー単量体ごとに長さや組成が異なっていてもよいことは、上記の例から明らかである。実例は何ら限定するものではなく、ストラドマーにおける他の複数のストラドマー構成が可能であることは、当業者であれば自明であろう。
【０１５５】
Ｆｃγ受容体
「ＦｃγＲ」および「Ｆｃγ受容体」という用語は、本明細書で使用する場合、Nimmerjahn F and Ravetch JV. Fcgamma receptors: old friends and new family members. Immunity. 2006 Jan; 24(1):19-28に記載されているように、あるいは下記で定義できるように、免疫細胞表面で発現されるタンパク質のＦｃγ受容体ファミリの各メンバを含む。本明細書に記載の「ＦｃγＲ」という用語は、ＦｃγＲＩ、ＲＩＩおよびＲＩＩＩファミリのすべてのメンバを包含することを意図している。Ｆｃγ受容体は、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびそのアイソタイプおよびアロタイプＦｃγＲＩＩａ  ＬＲ、ＦｃγＲＩＩａ  ＨＲ、ＦｃγＲＩＩｂおよびＦｃγＲＩＩｃ；ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）およびそのアイソタイプＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂを含むがこれに限定されるものではない、低親和性のＦｃγ受容体と高親和性のＦｃγ受容体とを含む。ＦｃγＲと結合する化合物を含む本発明は、現時点では発見されていないかもしれない将来のＦｃγＲおよび関連のアイソタイプおよびアロタイプにも適用されることは、当業者であれば分かるであろう。
【０１５６】
ＩＶＩＧが新生児Ｆｃ受容体（「ＦｃＲｎ」）と結合し、これを完全に飽和させることや、このようなＦｃＲｎの競合的阻害がＩＶＩＧの生物活性で重要な役割を果たしているかもしれないことが、すでに説明されている（Mechanisms of Intravenous Immunoglobulin Action in Immune Thrombocytopenic Purpura. F. Jin, J. Balthasar. Human Immunology, 2005, Volume 66, Issue 4, Pages 403-410など）。Ｆｃγ受容体と強く結合する免疫グロブリンは、少なくともいくらかはＦｃＲｎとも結合するため、複数のＦｃγ受容体と結合できるストラドマーがＦｃＲｎとも結合し、これを完全に飽和させられることは、当業者であれば分かるであろう。
【０１５７】
「会合した天然ＩｇＧの免疫学的活性」とは、ＩｇＧ凝集体に対する免疫系の曝露時に免疫系が機能することに影響する多量体化したＩｇＧの特性を示す。天然の多量体化ＩｇＧの具体的な特性としては、ＦｃγＲに対する特異的結合の変化、免疫細胞表面でのＦｃγＲの架橋あるいは、抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）、貪食（ＡＤＣＰ）または補体結合などの多量体化ＩｇＧのエフェクター機能があげられる（たとえば、Nimmerjahn F, Ravetch JV. The anti-inflammatory activity of IgG: the intravenous IgG paradox. J Exp Med. 2007; 204:11-15；Augener W, Friedman B, Brittinger G. Are aggregates of IgG the effective part of high-dose immunoglobulin therapy in adult idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)? Blut. 1985;50:249-252；Arase N, Arase H, Park SY, Ohno H, Ra C, Saito T. Association with FcRgamma is essential for activation signal through NKR-P1 (CD161) in natural killer (NK) cells and NK1.1+ T cells. J Exp Med. 1997;186:1957-1963；Teeling JL, Jansen-Hendriks T, Kuijpers TW, et al. Therapeutic efficacy of intravenous immunoglobulin preparations depends on the immunoglobulin G dimers: studies in experimental immune thrombocytopenia. Blood. 2001;98:1095-1099；Anderson CF, Mosser DM. Cutting edge: biasing immune resp
onses by directing antigen to macrophage Fc gamma receptors. J Immunol. 2002;168:3697-3701；Jefferis R, Lund J. Interaction sites on human IgG-Fc for Fc[gamma]R: current models. Immunology Letters. 2002;82:57；Banki Z, Kacani L, Mullauer B, et al. Cross-Linking of CD32 Induces Maturation of Human MonocyteDerived Dendritic Cells Via NF- {kappa}B Signaling Pathway. J Immunol. 2003;170:3963-3970；Siragam V, Brine D, Crow AR, Song S, Freedman J, Lazarus AH. Can antibodies with specificity for soluble antigens mimic the therapeutic effects of intravenous IgG in the treatment of autoimmune disease? J Clin Invest. 2005;115:155160を参照のこと）。これらの特性は通常、単量体ＩｇＧの特性と比較することで評価される。
【０１５８】
「複数の天然に生じる凝集ＩｇＧ免疫グロブリンのエフェクター機能またはＦｃγ受容体の架橋に匹敵するまたはこれよりも優れている」とは、本明細書で使用する場合、ストラドマーのアッセイ値がＩＶＩＧを用いて達成される値の約７０％以上になることを意味する。いくつかの実施形態では、アッセイ値が、ＩＶＩＧを用いて達成されるアッセイ値の少なくとも標準誤差の範囲内である。他の実施形態では、アッセイ値がＩＶＩＧの場合の１１０％以上である。ＦｃγＲ架橋に対するアッセイは当業者間で周知である（たとえば、Falk Nimmerjahn and Jeffrey Ravetch. Fcγ receptors as regulators of immune responses. Nature Reviews Immunology, advanced published on line December 7, 2007を参照のこと）。
【０１５９】
「免疫調節活性」、「免疫応答を調節」、「免疫系を調節」および「免疫調節」とは、細胞型の、その細胞型内または他の細胞型への成熟を含め、１つ以上の免疫細胞の活性、能力および相対数を変えることで免疫系を変化させることを意味する。たとえば、未熟単球の免疫調節によって、成熟単球、樹状細胞、マクロファージまたは破骨細胞（いずれも未熟単球由来である）の数が増えた大きな個体群が得られることがある。たとえば、免疫細胞受容体は、免疫学的に活性な生体模倣薬によって結合され、細胞内シグナル伝達を活性化させて、別途「活性化免疫調節」と呼ぶ多様な免疫細胞の変化を誘導できるものである。受容体の活性化を防ぐ封鎖免疫細胞受容体も「免疫調節」に包含されるが、これを別途「阻害免疫調節」と呼ぶこともある。
【０１６０】
単球の成熟の調節を、単球から成熟ＤＣ、マクロファージまたは破骨細胞への分化と呼ぶ。分化を調節して、成熟速度を加速および／または分化中の単球数を増加させてもよい。あるいは、分化速度および／または分化中の細胞数に関して分化を低下させることもできる。
【０１６１】
「単離された」ポリペプチドまたはペプチドという表現は、本明細書で使用する場合、天然に生じる対応物を持たないか、膵臓、肝臓、脾臓、卵巣、精巣、筋肉、関節組織、神経組織、胃腸組織または乳房組織または腫瘍組織（乳癌組織など）などの組織あるいは、血液、血清または尿などの体液において、自然な状態でこれに付随する成分から分離または精製されたポリペプチドまたはペプチドを示す。一般に、ポリペプチドまたはペプチドは、自然に会合しているタンパク質および他の天然に生じる有機分子が乾燥重量で少なくとも７０％欠けている場合に、「単離された」ものとする。好ましくは、本発明のポリペプチド（またはペプチド）の調製物は、乾燥重量で本発明のポリペプチド（ペプチド）の少なくとも８０％、一層好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９９％である。化学的に合成されるポリペプチドまたはペプチドは、その本質上、自然な状態でこれに付随する成分から分離されるため、合成ポリペプチドまたはペプチドは「単離された」ものである。
【０１６２】
本発明の単離されたポリペプチド（またはペプチド）は、たとえば、天然起源からの（組織または体液などからの）抽出；このポリペプチドまたはペプチドをコードする組換え核酸の発現；または化学合成によって得られる。本来の由来となる起源とは異なる細胞系から産生されるポリペプチドまたはペプチドは、天然の状態でこれに付随する成分を必然的に欠いているため、「単離された」ものである。単離の度合いまたは純度については、カラムクロマトグラフィ、ポリアクリルアミドゲル電気泳動またはＨＰＬＣ分析などの適当な方法で測定可能である。
【０１６３】
医薬組成物
本明細書に記載の免疫学的に活性な生体模倣組成物の投与は、一般的な任意の経路すなわち、経口的、非経口的または局所的になされる。代表的な経路としては、経口、経鼻、頬側、直腸内、膣内、点眼、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、動脈内、腫瘍内、脊髄、くも膜下腔内、関節内、動脈内、くも膜下、舌下、口腔粘膜、経気管支、リンパ管、子宮内、皮下、腫瘍内、植込み型装置に統合、硬膜内、皮質内または経皮があげられるが、これに限定されるものではない。このような組成物は通常、本明細書で説明するような薬学的に許容される組成物として投与される。好ましい実施形態では、免疫学的に活性な単離された生体模倣薬を静脈内投与する。
【０１６４】
「薬学的に許容されるキャリア」という表現は、本明細書で使用する場合、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌薬および抗真菌薬、等張剤および吸収遅延剤などを含む。薬学的活性物質にこのような媒質や作用剤を用いることは、当該技術分野において周知である。従来の媒質または作用剤が本発明のベクターまたは細胞と不適合である場合を除き、これを治療用組成物に用いることも企図される。補助的な有効成分を組成物に取り入れることも可能である。
【０１６５】
本発明の免疫学的に活性な生体模倣組成物は、中性または塩の形態で処方してもよいものである。薬学的に許容可能な塩としては、塩酸またはリン酸などの無機酸あるいは、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸といった有機酸などとの間で形成される酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基との間で形成）があげられる。遊離カルボキシル基との間で形成される塩も、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウムまたは水酸化第二鉄などの無機塩基ならびに、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインといった有機塩基などから誘導可能である。
【０１６６】
免疫学的に活性な生体模倣薬を必要な量で必要に応じて上記にて列挙した他のさまざまな成分と一緒に適当な溶媒に入れた後、濾過滅菌することで、無菌注射剤が調製される。通常、ベースとなる基本分散媒や上記にて列挙したうちの他の必要な成分を含有する滅菌ベシクルにさまざまな滅菌有効成分を入れることで、分散液が調製される。無菌注射剤を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、有効成分に所望の成分を加えたものを事前に滅菌濾過溶液とし、その溶液から粉末を得る真空乾燥法および凍結乾燥法である。
【０１６７】
さらに、一実施形態は、不活性希釈剤を使用してまたは使用せずに薬学的に許容されるキャリア中で提供される経口投与に適した免疫学的に活性な生体模倣組成物である。キャリアは、吸収可能（assimmable）または食用でなければならず、液体、半固体すなわちペーストまたは固体のキャリアを含む。従来の媒質、作用剤、希釈剤またはキャリアが、これに含まれる免疫学的に活性な生体模倣調製物の治療効果またはレシピエントにとって有害である場合を除き、本発明の方法を実施するのに使用する経口投与可能な免疫学的に活性な生体模倣組成物にこれを用いることも、妥当である。キャリアまたは希釈剤の例として、脂、油、水、生理食塩溶液、脂質、リポソーム、樹脂、バインダー、フィラーなどあるいはこれらの組み合わせがあげられる。「経口投与」という用語は、本明細書で使用する場合、経口投与、頬側投与、経腸投与または胃内投与を含む。
【０１６８】
一実施形態では、都合がよく実用的な任意の方法すなわち、溶液、懸濁液、乳化、混合、カプセル化、マイクロカプセル化、吸収などによって、組成物をキャリアと組み合わせる。このような手法は、当業者にとっては常法である。
【０１６９】
特定の実施形態では、粉末状の免疫学的に活性な生体模倣組成物を、半固体または固体のキャリアと完全に混合または組み合わせる。混合については、粉砕などの都合のよい任意の方法で実施できる。組成物が、すなわち胃での変性によって治療活性を失ってしまうのを防ぐ目的で、混合過程で安定化剤を加えることも可能である。経口投与可能な組成物に使用する安定剤の例としては、緩衝液、胃酸の分泌に対する遮断薬、グリシンおよびリジンなどのアミノ酸、デキストロース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、ラクトース、スクロース、マルトース、ソルビトール、マンニトールなどの糖、タンパク分解酵素阻害剤などがあげられる。より好ましくは、経口投与組成物の場合、安定剤には、胃酸の分泌に対する遮断薬も含み得る。
【０１７０】
さらに、半固体または固体のキャリアと混合される経口投与用の免疫学的に活性な生体模倣組成物をさらに、ハードゼラチンカプセルまたはソフトゼラチンカプセル、錠剤または丸剤として処方することも可能である。より好ましくは、ゼラチンカプセル、錠剤または丸剤を腸溶コーティングする。腸溶コーティングは、ｐＨが酸性の胃内または小腸上部での組成物の変性を防止するものである。すなわち、米国特許第５，６２９，００１号を参照のこと。小腸に到達すると、小腸の塩基性ｐＨによってコーティングが溶け、組成物が放出されてパイエル板Ｍ細胞などの腸細胞と相互作用することができる。
【０１７１】
別の実施形態では、粉末状の免疫学的に活性な生体模倣組成物を、内部に免疫学的に活性な生体模倣薬を封入するか、免疫学的に活性な生体模倣薬が結合されるナノ粒子を作り出す材料と完全に混合または組み合わせる。各ナノ粒子は、大きさが１００ミクロン以下である。ナノ粒子は、それがなければ経口的に生物利用可能ではない、免疫学的に活性な生体模倣薬の胃腸吸収を可能にする粘膜付着特性を持つものであってもよい。
【０１７２】
別の実施形態では、粉末状の組成物を、安定化剤を使用してまたは使用せずに液体キャリアすなわち水または生理食塩溶液と組み合わせる。
【０１７３】
使用できる特定の免疫学的に活性な生体模倣製剤は、免疫学的に活性な生体模倣タンパク質を、カリウムを含有しない低張リン酸緩衝液に加えた溶液であり、この緩衝液の組成は以下のとおりである。６ｍＭのリン酸二水素ナトリウム一水和物、９ｍＭのリン酸水素ナトリウム七水和物、５０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．０±０．１。低張緩衝液中での免疫学的に活性な生体模倣タンパク質の濃度は、１０マイクログラム／ｍｌから１００ミリグラム／ｍｌの範囲であってもよい。この製剤は、静脈内投与などであるがこれに限定されるものではない、どのような投与経路でも投与できるものである。
【０１７４】
さらに、半固体のキャリアと組み合わされる局所投与用の免疫学的に活性な生体模倣組成物をさらに、クリームまたはゲル軟膏として処方することも可能である。ゲル軟膏を形成するのに好ましいキャリアは、ゲルポリマーである。本発明のゲル組成物の製造に用いられる好ましいポリマーとしては、カーボポール、カルボキシメチルセルロース、プルロニックポリマーがあげられるが、これに限定されるものではない。具体的には、皮膚表面または皮下の疾患を治療するための皮膚への塗布用に、０．５％〜５％ｗｔ／容量の強度で、Carbopol 980などの重合剤を含む水性ゲルと粉末状Ｆｃ多量体組成物を組み合わせる。「局所用投与」という用語は、本明細書で使用する場合、皮膚、表皮、皮下または粘膜表面への塗布を含む。
【０１７５】
製剤において、この投与製剤と適合する方法で、なおかつ症候を好転または改善するための治療有効量で、溶液を投与する。この製剤は、体内摂取可能な溶液、薬物放出カプセルなどのさまざまな剤形で容易に投与される。治療対象となる被検体の症状に応じて、投与量がいくらか変動する可能性がある。投与に責任のある人は、いずれにしても、被検体ごとに適切な用量を判断することができる。さらに、人間に投与する場合、調製物は、ＦＤＡのOffice of Biologicsにおける基準で求められている滅菌性や一般的な安全性、純度の基準を満たしている。
【０１７６】
投与経路は、治療対象となる疾患の性質と部位によって必然的に変わることになり、たとえば、皮内投与、経皮投与、非経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、皮下投与、経皮投与、気管内投与、腹腔内投与、腫瘍内投与、灌流投与、洗浄投与、直接注射および経口投与を含むものであってもよい。
【０１７７】
「非経口投与」という用語は、本明細書で使用する場合、腸からの吸収を伴わずに化合物が被検体に吸収される、あらゆる投与形態を含む。本発明に用いられる代表的な非経口投与としては、筋肉内投与、静脈内投与、腹腔内投与、腫瘍内投与、眼内投与または関節内投与があげられるが、これに限定されるものではない。
【０１７８】
以下、さまざまな医薬製剤のカテゴリと、適応があれば代表的な具体的疾患に対する好ましい投与経路の具体例をあげておく。
【０１７９】
頬側または舌下崩壊錠：狭心症、結節性多発動脈炎。
【０１８０】
静脈内：特発性血小板減少性紫斑病、封入体筋炎、ＩｇＭ−Ｍ蛋白血症を伴う脱髄性ニューロパチー、壊疽性筋膜炎、天疱瘡、脱疽、皮膚筋炎、肉芽腫、リンパ腫、敗血症、再生不良性貧血、多臓器不全、多発性骨髄腫および意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、炎症性ミオパチー、血栓性血小板減少性紫斑病、筋炎、貧血、腫瘍症、溶血性貧血、脳炎、脊髄炎、特にヒトＴ細胞性白血病ウイルス１型関連の脊髄症、白血病、多発性硬化症および視神経炎、喘息、表皮壊死融解症、ランバート・イートン症候群、重症筋無力症、神経障害、ブドウ膜炎、ギラン・バレー症候群、移植片対宿主病、全身硬直症候群、抗Ｙｏ抗体陽性傍腫瘍性小脳変性症、腫瘍随伴脳脊髄症および抗Ｈｕ抗体陽性感覚性ニューロパチー、全身性血管炎、全身性紅斑性狼瘡、自己免疫性糖尿病性ニューロパチー、急性特発性自律神経ニューロパチー、フォークト・小柳・原田症候群、多巣性運動ニューロパチー、抗／ＧＭ１を伴う下位運動ニューロン症候群、脱髄、膜性増殖性糸球体腎炎、心筋症、川崎病、関節リウマチおよびエバンス症候群ＩＭ−ＩＴＰ、ＣＩＤＰ、ＭＳ、皮膚筋炎、重症筋無力症（mysasthenia gravis）、筋ジストロフィー。「静脈内投与」という用語は、本明細書で使用する場合、本発明の化合物または組成物を静脈注射または点滴によって体循環に送達するためのあらゆる技術を含む。
【０１８１】
皮膚用のゲル、ローション、クリームまたはパッチ：尋常性白斑、帯状疱疹、ざ瘡、口唇炎（chelitis）。
【０１８２】
直腸坐薬、ゲルまたは点滴：潰瘍性大腸炎、痔の炎症。
【０１８３】
丸剤、トローチ、カプセルとして、あるいは腸溶コーティングでの経口：クローン病、セリアック病（celiac spree）、過敏性腸症候群、炎症性肝疾患、バレット食道。
【０１８４】
皮質内：癲癇、アルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病。
【０１８５】
腹腔内注入またはインプラント：子宮内膜症。
【０１８６】
膣用ゲルまたは坐薬：細菌性膣症、トリコモナス膣炎または膣真菌症。
【０１８７】
医療器具：冠動脈ステント、人工関節にコーティング。
【０１８８】
本明細書に記載の免疫学的に活性な生体模倣薬は、体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ〜約３００ｍｇ、特に体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇ〜約３００ｍｇの投与量で投与でき、少なくとも毎日、毎週１回、２週間に１回または毎月１回投与できるものである。第１の投与段階が、第２の投与段階の約０．１％〜約１０％をなす二相性の投与計画を用いてもよい。
【０１８９】
ストラドマーおよびストラドボディの治療への応用
合理的設計ならびに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでの検証結果に基づいて、本発明の免疫学的に活性な生体模倣薬は、癌や炎症性疾患用の生物免疫療法剤などのさまざまな他の状況で自己免疫疾患を治療し、免疫機能を調節するための重要な生物製剤として機能する。本明細書に記載の免疫学的に活性な生体模倣薬で治療するのに適した病状としては、自己免疫性血球減少症、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫疾患、皮膚筋炎、血管炎およびブドウ膜炎など、現在の常法でｈＩＶＩＧによって治療されている病状またはｈＩＶＩＧが臨床的に有用であることが分かっている病状（F. G. van der Meche, P. I. Schmitz, N. Engl. J. Med. 326, 1123 (1992)；P. Gajdos et al., Lancet i, 406 (1984)；Y. Sultan, M. D. Kazatchkine, P. Maisonneuve, U. E. Nydegger, Lancet ii, 765 (1984)；M. C. Dalakas et al., N. Engl. J. Med. 329, 1993 (1993)；D. R. Jayne, M. J. Davies, C. J. Fox, C. M. Black, C. M. Lockwood, Lancet 337, 1137 (1991)；P. LeHoang, N. Cassoux, F. George, N. Kullmann, M. D. Kazatchkine, Ocul. Immunol. Inflamm. 8, 49 (2000)を参照）ならびに、モノクローナル抗体を使用できるか、すでにモノクローナル抗体が臨床利用されている癌または炎症性疾患の症状があげられる。本発明の主旨である化合物によって有効に治療できる症状に含まれるものとして、サイトカインネットワークのバランスが崩れた炎症性疾患、病原性自己抗体または自己攻撃性Ｔ細胞による自己免疫障害あるいは、慢性再発性の自己免疫疾患またはプロセス、炎症性疾患またはプロセスあるいは感染性疾患またはプロセスの急性期または慢性期があげられる。
【０１９０】
また、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、アルツハイマー病、パーキンソン病、心筋梗塞、脳卒中、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス関連炎症、副腎白質ジストロフィーおよび癲癇疾患（特にラスムッセン症候群、ウエスト症候群およびレノックス・ガストー症候群を含むウイルス感染後脳炎と関連しているとされているもの）などの炎症性要素を持つ他の病状でも、免疫学的に活性な生体模倣薬での治療による利益が得られる。
【０１９１】
本明細書に記載の免疫学的に活性な単離された生体模倣薬を用いる一般的な療法として、疾患または症状のある被検体に、治療有効量の免疫学的に活性な単離された生体模倣薬を投与して治療を実施することがある。いくつかの実施形態では、疾患または症状を、サイトカインネットワークのバランスが崩れた炎症性疾患、病原性自己抗体または自己攻撃性Ｔ細胞による自己免疫障害あるいは、慢性再発性疾患またはプロセスの急性期または慢性期という大まかな分類に分けることができる。
【０１９２】
「治療する」および「治療」という表現は、本明細書で使用する場合、被検体の疾患または症状あるいは、疾患または症状の症候が改善されるように、本発明の生体模倣薬を治療有効量で被検体に投与することを示す。改善とは、疾患または症状あるいは、疾患または症状の症候のあらゆる好転または改善のことである。改善は、観察可能または測定可能な改善であるか、被検体が健康な状態であると感じる感覚の改善であってもよい。よって、治療によって疾患の症状が改善されることはあるが、疾患が完全に治癒するとはかぎらないことは、当業者であれば分かるであろう。具体的には、被検体の改善は、以下のうちの１つ以上を含むものであってもよい。炎症の減少；Ｃ反応性タンパク質などの炎症性検査マーカーの減少；自己抗体などの自己免疫マーカーの改善または血小板数、白血球数または赤血球数の改善、発疹または紫斑の減少、脱力感、しびれまたは刺痛の減少、高血糖症患者では血糖値の上昇、関節痛、炎症、腫脹または壊変の減少、腹痛および下痢の頻度と量の低下、狭心症の減少、組織炎症の減少または発作頻度の低下のうちの１つ以上に該当することから明らかな自己免疫の減少；癌腫瘍量の低下、腫瘍が進行するまでの時間の増大、癌疼痛の減少、生存率の増加または生活の質の改善；または骨粗鬆症の進行の遅滞または改善。
【０１９３】
「治療有効量」という用語は、本明細書で使用する場合、疾患または症状の症候の好転または改善につながる量を示す。
【０１９４】
本明細書で使用する場合、「予防」とは、疾患の症候の完全な予防、疾患の症候の発病遅延または後から発症する疾患症候の重篤度の低下を意味する場合がある。
【０１９５】
「被検体」という用語は、本明細書で使用する場合、本明細書に記載の方法で本発明の生体模倣薬を投与する対象となる任意の哺乳類の被検体を意味するものとする。特定の実施形態では、本開示の方法は、被験者の治療に採用される。また、非ヒト霊長類（サル、ヒヒ、チンパンジーなど）、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ブタ、ウサギ、ヤギ、シカ、ヒツジ、フェレット、アレチネズミ、モルモット、ハムスター、コウモリ、鳥類（ニワトリ、シチメンチョウ、アヒルなど）、魚類および爬虫類の治療に本開示の方法を採用し、種特異的またはキメラストラドマー分子を生成してもよい。
【０１９６】
特に、本発明の生体模倣薬は、鬱血性心不全（ＣＨＦ）、血管炎、酒さ（rosecea）、ざ瘡、湿疹、心筋炎および他の心筋症状、全身性紅斑性狼瘡、糖尿病、脊椎症、滑膜線維芽細胞および骨髄間質；骨減少症；パジェット病、骨巨細胞腫；多発性骨髄腫；乳癌；廃用性骨減少症；栄養不良、歯周病、ゴーシェ病、ランゲルハンス細胞組織球症、脊髄損傷、急性化膿性関節炎、骨軟化症、クッシング症候群、単骨性線維性骨異形成症（monoostotic fibrous dysplasia）、多骨性線維性骨異形成症、歯周組織再建および骨折；サルコイドーシス；溶骨性の骨癌、肺癌、腎臓癌および直腸癌；骨転移、骨疼痛管理および腫瘍随伴体液性高カルシウム血症、強直性脊椎炎および他の脊椎関節症；移植拒絶、ウイルス感染、造血器腫瘍（hematologic neoplasisas）および腫瘍様症状、たとえば、ホジキンリンパ腫；非ホジキンリンパ腫（バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫／慢性リンパ球性白血病、菌状息肉腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、有毛細胞白血病およびリンパ形質細胞性白血病）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫およびＴ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫を含むリンパ球前駆細胞の腫瘍、胸腺腫、末梢性Ｔ細胞白血病や成人Ｔ細胞白血病／Ｔ細胞リンパ腫および大顆粒リンパ球性白血病を含む成熟Ｔ細胞およびＮＫ細胞の腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球症、急性骨髄性白血病（成熟型ＡＭＬ、未分化型ＡＭＬ、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病および急性単球性白血病を含む）、骨髄異形成症候群、慢性骨髄増殖性疾患（慢性骨髄性白血病を含む）などの骨髄性腫瘍、中枢神経系の腫瘍、たとえば、脳腫瘍（神経膠腫、神経芽細胞腫、星状細胞腫、髄芽腫、上衣腫および網膜芽細胞腫）、固体腫瘍（上咽頭癌、基底細胞癌、膵臓癌、胆管の癌、カポジ肉腫、精巣癌、子宮癌、膣癌または子宮頸癌、卵巣癌、原発性肝癌または子宮体癌、脈管系の腫瘍（血管肉腫および血管外皮腫（hemagiopericytoma）））または他の癌を含むがこれに限定されるものではない、症状の治療に使用できるものである。
【０１９７】
本明細書における「癌」とは、一般に未制御の細胞成長を特徴とする哺乳動物における生理学的症状を示すまたは説明するものである。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫（脂肪肉腫、骨原性肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、粘液肉腫、軟骨肉腫を含む）、神経内分泌腫瘍、中皮腫、脊索腫、滑膜腫、神経鞘腫、髄膜腫、腺癌、黒色腫および白血病またはリンパ系腫瘍があげられるが、これに限定されるものではない。このような癌のさらに特定の例としては、扁平上皮癌（上皮の扁平上皮癌など）、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌および肺扁平上皮癌、小細胞肺癌腫を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌を含む胃の癌または胃癌、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、肛門癌、陰茎癌、精巣癌、食道癌、胆道の腫瘍、ユーイング腫瘍、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌、ウィルムス腫瘍、精巣腫瘍、肺癌腫、膀胱癌腫、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストローム・マクログロブリン血症、骨髄異形成疾患、重鎖病、神経内分泌腫瘍、神経鞘腫および他の癌腫ならびに頭頸部癌があげられる。
【０１９８】
本発明の生体模倣薬は、自己免疫疾患の治療に用いることのできるものである。「自己免疫疾患」という用語は、本明細書で使用する場合、さまざまな群に分けられる８０を超える疾患と症状を示す。これらの疾患および症状ではいずれも、背景にある問題は身体の免疫系が身体自体を攻撃してしまうことにある。自己免疫疾患は、結合組織、神経、筋肉、内分泌系、皮膚、血液、呼吸器系および消化器系を含むあらゆる主要な体組織に影響を与える。自己免疫疾患としては、たとえば、全身性紅斑性狼瘡、関節リウマチ、多発性硬化症、重症筋無力症、１型糖尿病があげられる。
【０１９９】
本発明の組成物および方法を用いて治療可能な疾患または症状は、特発性血小板減少性紫斑病、同種免疫性／自己免疫性血小板減少症、後天性免疫性血小板減少症、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性溶血性貧血、パルボウイルスＢ１９関連赤血球形成不全、後天性抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫疾患、後天性フォンウィルブランド病、多発性骨髄腫および意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症、敗血症、再生不良性貧血、赤芽球痺、ダイアモンド・ブラックファン貧血、新生児溶血性疾患、免疫介在性好中球減少症、血小板輸血不応状態、新生児輸血後紫斑病、溶血性尿毒症症候群、全身性血管炎、血栓性血小板減少性紫斑病またはエバンス症候群を含むがこれに限定されるものではない、血液免疫学的プロセスの場合がある。
【０２００】
疾患または症状は、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、ＩｇＭ−Ｍ蛋白血症を伴う脱髄性ニューロパチー、ランバート・イートン症候群、重症筋無力症、多巣性運動ニューロパチー、抗／ＧＭ１抗体を伴う下位運動ニューロン症候群、脱髄、多発性硬化症および視神経炎、全身硬直症候群、抗体Ｙｏ抗体陽性傍腫瘍性小脳変性症、腫瘍随伴脳脊髄症、抗Ｈｕ抗体陽性感覚性ニューロパチー、癲癇、脳炎、脊髄炎、特にヒトＴ細胞性白血病ウイルス１型関連の脊髄症、自己免疫性糖尿病性ニューロパチーまたは急性特発性自律神経ニューロパチーを含むがこれに限定されるものではない、神経免疫学的プロセスの場合がある。
【０２０１】
疾患または症状は、川崎病、関節リウマチ、フェルティ症候群、ＡＮＣＡ陽性血管炎、特発性多発性筋炎、皮膚筋炎、抗リン脂質症候群、再発性自然流産、全身性紅斑性狼瘡、若年性特発性関節炎、レイノー病、ＣＲＥＳＴ症候群またはブドウ膜炎を含むがこれに限定されるものではない、リウマチ性疾患プロセスの場合もある。
【０２０２】
疾患または症状は、中毒性表皮壊死融解症、脱疽、肉芽腫、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、落葉状天疱瘡を含む自己免疫性で皮膚水疱を呈する疾患、尋常性白斑、連鎖球菌毒素ショック症候群、強皮症、びまん性皮膚硬化型強皮症および限局皮膚硬化型強皮症を含む全身性強皮症またはアトピー性皮膚炎（特にステロイド依存性）を含むがこれに限定されるものではない、皮膚免疫学的疾患プロセスの場合もある。
【０２０３】
疾患または症状は、封入体筋炎、壊疽性筋膜炎、炎症性ミオパチー、筋炎、抗デコリン（ＢＪ抗原）ミオパチー、傍腫瘍性壊死性ミオパチー、Ｘ連鎖性空胞性ミオパチー、ペナシラミン誘導多発性筋炎、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患または心筋症を含むがこれに限定されるものではない、筋骨格免疫学的疾患プロセスの場合もある。
【０２０４】
疾患または症状は、悪性貧血、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、セリアック病、疱疹状皮膚炎、原因不明肝硬変、反応性関節炎、クローン病、ホイップル病、潰瘍性大腸炎または硬化性胆管炎を含むがこれに限定されるものではない、胃腸免疫学的疾患プロセスの場合もある。
【０２０５】
疾患または症状は、移植片対宿主病、抗体による移植片拒絶、骨髄移植後拒絶、感染症後の炎症、リンパ腫、白血病、腫瘍症、喘息、抗β細胞抗体の存在する１型糖尿病、シェーグレン症候群、混合性結合組織病、アジソン病、フォークト・小柳・原田症候群、膜性増殖性糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、橋本甲状腺炎、ウェゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発動脈炎、チャーグ・ストラウス症候群、結節性多発動脈炎または多臓器不全の場合もある。
【０２０６】
別の実施形態では、患者から血液を抜き、約半時間から約３時間の時間をかけて一時的にストラドマーと接触させた上で、患者の体内に戻す体外循環回路（priming system）で、本明細書に記載のストラドマーを利用することができるだろう。この形の細胞療法では、エフェクター細胞をストラドマーに曝露してエフェクター細胞を調節する目的で、患者自身のエフェクター細胞をｅｘ  ｖｉｖｏにてマトリックスに固定したストラドマーに曝露する。その後、調節後のエフェクター細胞を含む血液を点滴で患者に戻す。このような体外循環回路は、臨床および治療面で応用範囲が極めて広いであろう。
【０２０７】
ストラドボディの腫瘍学における治療への応用
免疫学的な障害を治療するという臨床的な有用性があるだけでなく、ストラドボディには癌および炎症性疾患の治療における治療的な用途もある。ストラドボディは、どのような対応の治療用抗体に対しても基本的には以下の周知のプロトコールに沿って使用できるものである。ストラドボディは通常、癌におけるＡＤＣＣまたは自己免疫疾患でサイトカイン放出量が減少することによる単球およびＤＣ成熟の減少などのモノクローナル抗体によってエフェクター細胞で現れる効果を高め、これによって、ストラドボディのＦａｂ部分に対するソースモノクローナル抗体などを使用して生じ得る免疫応答に比して癌に対する免疫応答を促進するよう設計される。
【０２０８】
ストラドボディを設計する際の起源となり得る代表的なモノクローナル抗体Ｆａｂドメインとしては、セツキシマブ、リツキシマブ、ムロモナブ−ＣＤ３、アブシキシマブ、ダクリズマブ、バシリキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、トラスツズマブ、ゲムツズマブ・オゾガマイシン、アレムツズマブ、イブリツモマブ・チウキセタン、アダリムマブ、オマリズマブ、トシツモマブ、I-131トシツモマブ、エファリズマブ、ベバシズマブ、パニツムマブ、ペルツズマブ、ナタリズマブ、エタネルセプト、IGN101、ボロシキシマブ、抗ＣＤ８０  ｍＡｂ、抗ＣＤ２３  ｍＡｂ、CAT-3888、CDP791、エピラツズマブ（eraptuzumab）、MDX-010、MDX-060、MDX-070、マツズマブ、CP-675、206、CAL、SGN-30、ザノリムマブ、アデカツムマブ、オレゴボマブ、ニモツズマブ、ABT-874、デノスマブ、AM 108、AMC 714、フォントリズマブ、ダクリズマブ、ゴリムマブ、CNTO 1275、オクレリズマブ、HuMax-CD20、ベリムマブ、エピラツズマブ、MLN1202、ビジリズマブ、トシリズマブ、オクレリズマブ（ocrerlizumab）、セルトリズマブペゴール、エクリズマブ、パキセリズマブ、アブシキシマブ、ラニビズマブ（ranibizimumab）、メポリズマブおよびTNX-355、MYO-029があげられる。
【０２０９】
本明細書に開示の免疫学的に活性な生体模倣薬と総称するストラドマーおよびストラドボディには、他にも多数の応用例や用途がある。
【０２１０】
免疫応答の変更
本明細書に開示の免疫学的に活性な生体模倣薬は、さまざまな状況で免疫系の応答の変更に容易に適用して、免疫応答プロファイルの特定の変化に影響を与えられるものである。被検体で免疫応答を変更または調節するというのは、免疫応答の比または構成内容を増大、減少または変化させることを示す。たとえば、適当な組み合わせのＦｃＲを、これらの受容体と相互作用するように設計されたストラドマーを用いて標的することで、サイトカインの産生または分泌レベルを必要に応じて増減することができる。また、抗体の産生量を増減してもよいし、２つ以上のサイトカインまたは免疫細胞受容体の比を変えてもよく、別のタイプのサイトカインまたは抗体を産生させてもよい。免疫応答は、ＦｃγＲを発現している免疫細胞のエフェクターの機能であることもあり、これには、本明細書に開示の免疫学的に活性な生体模倣薬で調節されていない免疫応答と比較して、単球マクロファージ系細胞の潜在的な食作用の増加または減少、破骨細胞の機能の亢進または低減、抗原提示細胞（ＤＣなど）による抗原提示の増大または減少、ＮＫ細胞の機能の亢進または低減、Ｂ細胞の機能の亢進または低減を含む。
【０２１１】
好ましい実施形態では、本明細書に記載の治療有効量の免疫学的に活性な生体模倣薬を被検体に投与することであって、治療有効量の免疫学的に活性な生体模倣薬が被検体の免疫応答を変更することを含む、癌あるいは自己免疫疾患または炎症性疾患の被検体が自己の免疫応答を変更される。理想的には、この介入によって、被検体の疾患または症状を治療する。変更される免疫応答は、応答の増加または減少であってもよいし、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＬ−７、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−αのうちのいずれかのレベルを含むサイトカインレベルの変更に関与するものであってもよい。しかしながら、本発明は、ここに記載の生体模倣薬の特定の作用機序に限定されるものではない。変更される免疫応答が、被検体における自己抗体レベルの変更であってもよい。また、変更される免疫応答が、被検体における自己攻撃性Ｔ細胞レベルの変更であってもよい。
【０２１２】
たとえば、自己免疫疾患でＴＮＦ−αの産生量を低下させると、治療効果が得られる場合がある。これを実用化したものに、尋常性乾癬、関節リウマチ、乾癬性関節炎、クローン病、潰瘍性大腸炎および強直性脊椎炎を治療できることが臨床的に証明された抗ＴＮＦ−α抗体セラピー（REMICADE（登録商標）など）がある。これらの自己免疫疾患にはそれぞれ異なる原因があるが、炎症および免疫細胞活性に関連する疾患プロセスの鍵になる免疫学的な要素は同じである。ＴＮＦ−αの産生を抑えるように設計されたストラドマーは、これらの自己免疫疾患でも同様に有効であり、他の自己免疫疾患でも同様に有効であり得る。また、変更される免疫応答プロファイルは、被検体自身の組織を標的している自己抗体などの抗体の産生を抑える直接または間接的な調節であってもよいし、または被検体における自己攻撃性Ｔ細胞レベルの変更であってもよい。たとえば、多発性硬化症は、インターフェロンβ療法で治療できることもある自己反応性Ｔ細胞が関与する自己免疫障害である。たとえば、Zafranskaya M, et al., Interferon-beta therapy reduces CD4+ and CD8+ T-cell reactivity in multiple sclerosis, Immunology 2007 May;121(1):29-39-Epub 2006 Dec 18を参照のこと。自己反応性Ｔ細胞レベルを下げるためのストラドマーの設計も同様に多発性硬化症に有効であり、自己反応性Ｔ細胞が関与する他の自己免疫疾患にも有効であり得る。
【０２１３】
免疫学的アッセイでの応用
免疫学的に活性な生体模倣薬を設計した際に調節対象とした免疫細胞の機能を試験するための免疫学的アッセイを、本明細書に開示の免疫学的に活性な生体模倣薬を用いて実施することができる。
【０２１４】
低親和性Ｆｃγ受容体経路によるシグナル伝達には、細胞表面での受容体の凝集と架橋が必要である。これらの凝集および架橋のパラメータは、抗原特異的標的とのＦａｂ結合によって、応答細胞表面でのＦｃ領域と低親和性ＦｃγＲとの間の以後の相互作用を受けることが前提になっている。これに関連して、抗体には、１．エピトープ特異的標的とのＦａｂ相互作用／エピトープ特異的標的の遮断と、２．ＦｃとＦｃＲとの相互作用という２通りの経路で細胞応答を惹起する可能性がある。そのことが分かっているにもかかわらず、ｉｎ  ｖｉｖｏで採用されるモノクローナル抗体を用いる治療研究の大半でなされている現在の制御は、観察される機能的効果に対する寄与因子としてのＦｃ：Ｆｃγ受容体相互作用の可能性に適切に対処していない。現在、交絡変数としてのＦｃ：ＦｃＲ相互作用を排除するのに複数の戦略が採用されている。たとえば、エピトープ特異性を保持するがＦｃ領域は欠いているＳｃｖ（単一鎖可変領域）またはＦａｂ断片を採用している研究もある。これらの試薬の半減期が短く、シグナル伝達を誘導する可能性に限りがあるという点で、上記の手法には制約がある。また、Ｆｃ断片に融合した受容体またはリガンドで構成される融合タンパク質を採用している研究もある。これらのタイプの手法は、Ｆａｂ特異的作用を受容体リガンド相互作用のある場合に観察される作用と区別するのには役立つが、Ｆｃが介在する作用を効果的に制御するものではない。動物モデルにおける抗体ベースの治療手順の評価でも、見当違いのＦａｂ結合部位を有するアイソタイプ制御抗体を採用していることがある。この選択は、Ｆａｂ結合特異性または親和性とは無関係に同じアイソタイプの抗体間で推定される機能的類似性を論拠としたものである。しかしながら、このように見当違いのアイソタイプ制御を用いることには、根本的な欠陥がいくつかある。
１．これらの抗体のＦａｂ断片がリガンドまたは抗原エピトープを結合できないと、Ｆｃγ受容体架橋が欠如するため、Ｆｃ断片が低親和性ＦｃＲ相互作用によるシグナル伝達を刺激しなくなりやすい。したがって、実験抗体と対照抗体との間で観察される機能的な差異が、ＦｃγＲを架橋するための手段を欠いたエピトープ特異的標的とのＦａｂ相互作用に正しく起因することはあり得ない。
２．これらのアイソタイプが、親抗体とは糖型が異なるか個々の糖型の相対比率が異なる細胞で産生される場合、Ｆａｂ親和性が同じであったとしても低親和性ＦｃＲと高親和性ＦｃＲの両方に対する結合が変化する。
【０２１５】
この問題を解決するための完璧な制御は存在しないが、１つの選択肢として、親抗体と同じ細胞で産生され、実験抗体が標的するエピトープの発現レベルに比例する用量で投与されるアイソタイプ特異的ストラドマーを用いることがある。たとえば、ラットで産生されるエピトープ特異的抗体を適切に制御するのは、エフェクター細胞の表面でＦｃγ受容体を凝集できるラットのアイソタイプ特異的ストラドマーであろう。
【０２１６】
通常、有効量の免疫学的に活性な生体模倣薬に免疫細胞を曝露して免疫細胞の活性を周知の方法で調節し、この免疫調節を被験化合物または分子と比較して、被験化合物に同様の免疫調節活性があるか否かを判断する。
【０２１７】
別の実施形態では、本明細書に記載し、当業者間で周知のさまざまな免疫学的アッセイにおける実験室での制御用の試薬として、熱凝集ストラドマーおよび凝集免疫グロブリンを用いることができる。
【０２１８】
免疫学的アッセイは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイであってもｉｎ  ｖｉｖｏアッセイでもよく、種が同一または同一ではない免疫学的に活性な生体模倣薬を用いて、ヒト免疫細胞で実施してもよいし、非ヒト免疫細胞で実施してもよいものである。一実施形態では、免疫学的に活性な有効量の生体模倣薬を用いて免疫細胞の活性を調節し、この調節を被験化合物による免疫細胞の調節と比較することで、免疫学的なアッセイを実施する。ストラドマーまたはストラドボディは、他の化合物の免疫学的作用の試験を必要とするアッセイで、陽性対照試薬としての機能を果たすことがある。このアッセイは、受容体発現レベル、サイトカインの放出、混合リンパ球反応を用いることなどの機能の変化に基づいて測定されるエフェクター細胞のＦｃγ受容体結合と機能的応答に対して、ストラドマーと比較して、当該モノクローナル抗体の作用を比較できるものである。このように、モノクローナル抗体と部分的に類似した応答をストラドマー（Ｆａｂを含まない）で得る場合、そのモノクローナル抗体の作用は、ある程度はそのＦａｂの特異性によるものではなく、エフェクター細胞の複数のＦｃγ受容体の結合と架橋に関する一般的な作用によるものである。この同じモノクローナル抗体に由来する同じストラドマーとＦａｂとを含むストラドボディはさらに、エフェクター細胞の複数のＦｃγ受容体の結合と架橋に関する一般的な作用と、モノクローナル抗体のＦａｂの特異性とを区別するのに有用なものともなり得る。
【０２１９】
種特異的抗体とアイソタイプ特異的抗体の生物活性の一部または全部が種特異的ストラドマーおよびアイソタイプ特異的ストラドマーによって複製されれば、Ｆｃ−Ｆｃγ受容体活性が観察される生物活性の種特異的ストラドマーおよびアイソタイプ特異的ストラドマーに起因する部分を担っていることは明らかである。よって、種特異的ストラドマーおよびアイソタイプ特異的ストラドマーは、潜在的な治療抗体を評価して、観察される生物活性が、被験抗体のＦａｂ部分または複数のＦｃγ受容体と結合して架橋する分子のＦｃ部分の非特異的作用のいずれかに起因しているか否か、起因している場合はどの程度なのかを判断する上で有用である。
【０２２０】
一実施形態では、本発明の免疫学的に活性な単離された生体模倣薬は、同じ免疫グロブリンのＦｃクラスに由来する少なくとも２つのＦｃドメインまたはその部分ドメインを含む、少なくとも１つのストラドマーを含み、この免疫グロブリンＦｃクラスは、ＩｇＧ１と、ＩｇＧ２と、ＩｇＧ３と、ＩｇＧ４と、これらの組み合わせとからなる群から選択される。このような生体模倣薬はさらに、ｘ１がＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶである第１のＦｃγＲｘ１と、ｘ２がＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶである第２のＦｃγＲｘ２とに特異的に結合できる。これらの生体模倣薬はさらに、複数の天然に生じる凝集ＩｇＧ免疫グロブリンのＦｃγ受容体の架橋またはエフェクター機能に匹敵するかこれよりも優れている、Ｆｃγ受容体の架橋またはエフェクター機能を含む免疫学的活性を有することを特徴とすることができる。
【０２２１】
別の実施形態では、本発明は、異なる免疫グロブリンクラスに由来する少なくとも２つのＦｃドメインまたはその部分ドメインを含む少なくとも１つのストラドマーを含む免疫学的に活性な単離された生体模倣薬を含み、この生体模倣薬は、ｘ１がＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶである第１のＦｃγＲｘ１と、ｘ２がＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶである第２のＦｃγＲｘ２とに特異的に結合する。この生体模倣薬はさらに、ＦｃγＲに対する複数の天然に生じる凝集ＩｇＧ免疫グロブリンのＦｃγ受容体の架橋またはエフェクター機能に匹敵するか、これよりも優れている、Ｆｃγ受容体の架橋またはエフェクター機能を含む免疫学的活性を有することを特徴とすることができる。
【０２２２】
さらに他の実施形態では、本発明は、各々が独立して３つ以上のＦｃドメインを含む１つ以上のストラドマーを含む免疫学的に活性な単離された生体模倣薬を含み、３つ以上のＦｃドメインが、ａ）第１の免疫グロブリンのＦｃヒンジ（Ｈ）を含む第１のＦｃドメインと、ｂ）第２の免疫グロブリンの定常領域２（ＣＨ２）を含む第２のＦｃドメインであって、ｘ１がＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶであるＦｃγＲｘ１に特異的に結合できる第２のＦｃドメインと、ｃ）第３の免疫グロブリンの定常領域３（ＣＨ３）を含む第３のＦｃドメインであって、ｘ２がＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶであるＦｃγＲｘ２に特異的に結合できる第３のＦｃドメインと、を含む。これらの生体模倣薬は、任意に第４のＦｃドメインを含むものであってもよく、第４のＦｃドメインは、第４の免疫グロブリンＩｇＭの定常領域４（ＣＨ４）を含む。この分子では、Ｆｃヒンジが、少なくとも１つのシステインを含むものであってもよい。
【０２２３】
さらに別の実施形態では、本発明は、
ａ）少なくとも１つのシステインを含む、第１の免疫グロブリン由来のＦｃヒンジ（Ｈ）ドメインを含み、ｘがＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶであるＦｃγＲｘへの特異性の結合に寄与する第１のＦｃドメインまたはそのＦｃ部分ドメインであって、ｉ）第１の免疫グロブリンと同じであっても異なっていてもよい第２の免疫グロブリン由来の定常領域２（ＣＨ２）を含み、ｘがＩ、ＩＩまたはＩＩＩ、ＩＶであるＦｃγＲｘへの結合特異性に寄与する、第２のＦｃドメインまたはその部分ドメインと、任意に、ｉｉ）第３の免疫グロブリン由来の定常領域３（ＣＨ３）を含み、ｘがＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶであるＦｃγＲｘへの結合特異性に寄与する第３のＦｃドメインまたはその部分ドメインと、のうちの少なくとも１つと、を含む、第１のＦｃドメインまたはそのＦｃ部分ドメインと、ｂ）、任意に、ＩｇＭ免疫グロブリン由来の定常領域４（ＣＨ４）を指定する第４のＦｃドメインまたはその部分ドメインと、を含む、免疫学的に活性な単離された生体模倣薬を含む。
【０２２４】
別の実施形態では、免疫学的に活性な単離された生体模倣薬が、複数のＦｃドメインの免疫グロブリン源が同一または異なり、ＩｇＡアイソタイプ、ＩｇＧアイソタイプ、ＩｇＤ、ＩｇＥおよびＩｇＭを含むストラドマーである。他のストラドマーの実施形態は、二次シグナル配列を含む免疫学的に活性な単離された生体模倣薬である。
【０２２５】
好ましい一実施形態では、本発明の免疫学的に活性な単離された生体模倣薬の治療有効量とは、生体模倣薬が、免疫細胞の免疫細胞表面で２つ以上のＦｃγＲｘ（ｘはＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶである）と結合することで、ＦｃγＲｘを凝集させられるだけの十分な量である。免疫細胞は、単球、樹状細胞、マクロファージ、破骨細胞またはＮＫ細胞などのどのような免疫エフェクター細胞であってもよい。免疫エフェクター細胞の成熟は、免疫学的に活性な生体模倣薬で調節できるものである。また、免疫細胞でのＦｃγＲＩＩａとＦｃγＲＩＩｂとの比が変化してもよい。免疫細胞は、血漿、骨髄、腸、骨、リンパ系組織、胸腺、脳、感染部位または腫瘍に所在するものであってもよい。マクロファージ、樹状細胞、破骨細胞またはＮＫ細胞の機能的活性を調節することもできる。
【０２２６】
上述した免疫学的に活性な単離された生体模倣薬を治療有効量で免疫細胞にｅｘ  ｖｉｖｏ投与して、処理済みの免疫細胞を生成し、続いて処理済みの免疫細胞を被検体に点滴することを実施することができる。処理済みの免疫細胞は、樹状細胞、マクロファージ、破骨細胞または単球の場合がある。
【０２２７】
本明細書に記載の任意の免疫学的に活性な単離された生体模倣薬と別の免疫治療剤とを一緒に治療有効量で被検体に投与してもよい。別の免疫治療剤としては、たとえば、共刺激分子、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、融合タンパク質、生体分子特異的抗体、サイトカイン、免疫学的に認識される抗原、小分子抗癌剤または抗増殖剤のうちの１つ以上があげられる。別の免疫治療剤は、免疫学的に活性な生体模倣薬の投与と同時またはそれとは別に投与できるものである。
【０２２８】
サイトカイン（上記にて列挙したものを含む）レベルは、たとえば、該当する１つ以上のサイトカイン、該当する１つ以上のサイトカインのレベルを調節する１つ以上の他のサイトカインおよび／または上記の２つのカテゴリのサイトカインのいずれか１つ以上に対して特異的な抗体（本明細書にて列挙したどのタイプおよびクラスのものであってもよい）を投与することによって、変更可能である。
【０２２９】
本明細書に記載の免疫学的に活性な生体模倣薬を使用して、樹状細胞、マクロファージ、破骨細胞、単球またはＮＫ細胞を含む免疫細胞由来の共刺激分子の発現を調節したり、あるいはこれらの同じ免疫細胞で、分化、成熟またはインターロイキン−１２（ＩＬ−１２）を含むサイトカイン分泌を阻害あるいはインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）またはインターロイキン−６（ＩＬ−６）を含むサイトカイン分泌を亢進したりすることができる。当業者であれば、免疫細胞を免疫学的に活性な生体模倣薬に曝露し、免疫細胞機能の調節を測定して免疫学的に活性な生体模倣薬の薬効を確認できるであろう。この場合、免疫細胞は、樹状細胞、マクロファージ、破骨細胞または単球である。一実施形態では、免疫細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏにて免疫学的に活性な生体模倣薬に曝露し、細胞表面受容体の量またはサイトカイン産生量を判断することをさらに含み、細胞表面受容体の量またはサイトカイン産生量の変化が、免疫細胞機能の調節を表している。別の実施形態では、自己免疫疾患用のモデル動物で免疫細胞をｉｎ  ｖｉｖｏにて免疫学的に活性な生体模倣薬に曝露し、自己免疫疾患の改善の度合いを評価することをさらに含む。
【０２３０】
「ＦｃγＲｘに特異的に結合できる」とは、本明細書で使用する場合、ＦｃγＲＩＩＩなどのＦｃγＲへの結合を示す。特異的結合は通常、後に結合アッセイにおいて過剰量の未標識リガンドで置換可能な標識リガンドの量として定義される。しかしながら、これは当該従来分野において十分に確立された他の特異的結合の評価手段を除外するものではない（たとえば、Mendel CM, Mendel DB, ‘Non-specific’ binding. The problem, and a solution. Biochem J. 1985 May 15;228(1):269-72）。表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（BIACORE（登録商標）として市販されている）などの当該技術分野において周知のさまざまな方法で特異的結合を測定し、免疫学的に活性な生体模倣薬の会合定数と解離定数の両方をキャラクタライズすることができる（Aslan K, Lakowicz JR, Geddes C. Plasmon light scattering in biology and medicine: new sensing approaches, visions and perspectives. Current Opinion in Chemical Biology 2005, 9:538-544）。
【０２３１】
固定（fixed）Ｆｃを用いる方法
Ｆｃ：Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲすなわちＩｇＧのＦｃに対するＦｃ受容体）相互作用の役割と、そのＦｃが免疫グロブリン内で生物学的に固定化されることのＩＶＩＧの機能にとっての重要性を理解するために、本発明者らは、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３ドメインを含む、可溶状態の組換えＩｇＧ１のＦｃ断片（ｓＦｃ）と固定状態の組換えＩｇＧ１のＦｃ断片（ｒＦＣＦ）の両方で、単球が未熟樹状細胞（ｉＤＣ）に分化する過程でＩＶＩＧが単球の機能におよぼす影響を比較した。
【０２３２】
顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）およびインターロイキン−４（ＩＬ−４）にて培養した単球を固定化ｒＦＣＦおよび固定化ＩＶＩＧに曝露し、低用量の可溶性ＩＶＩＧには曝露せずにおいたところ、細胞でのＣＤ８６の発現が亢進され、ＣＤ１１ｃの発現が遅れ、ＣＤ１ａの発現が抑制された。さらに、これらの変化は、プラスチックでのｒＦＣＦの非特異的タンパク質の固定化に対する二次的なものでない可能性が高い。可溶性熱凝集（ｓＨＡ）ＩＶＩＧ、ｓＨＡ  ｒＦＣＦまたは高用量ＩＶＩＧ（多量体Ｆｃを含有することが分かっている）が固定化ｒＦＣＦで観察されるものと類似の変化を誘発したからである。
【０２３３】
これと一致して、本発明者らのデータは、固体、半固体またはゼラチン状の支持体の表面に固定化したＩＶＩＧにｉＤＣを曝露すると、免疫寛容を調整できるＤＣの独特な個体群（高ＣＤ８６、低ＣＤ１ａ）が得られ、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）Ｆｃ断片の機能的部分を含む固定化分子が、ＩＶＩＧの模倣薬として、局所的炎症および全身性炎症ならびに、ｉＤＣなどの単球由来細胞（ＭＤＣ）が直接的または間接的に介在している多種多様な他の病的状態の治療に有用となり得るということを示している。さらに、ＩｇＧのＦｃ断片の機能的部分を含む分子を用いて、動物（人間の患者など）の体内に移植されるか体に貼り付けられる、本明細書では「コーティング装置」と呼ぶ装置に、ＩｇＧのＦｃの機能的部分を固定化することで、このような装置に対する炎症反応を、予防できないにしても減らすことが可能である。
【０２３４】
本発明は、単球由来細胞（ＭＤＣ）の活性を阻害する方法を提供するものである。この方法は、細胞を、Ｆｃ試薬が結合した支持体を含む組成物と接触させることを含む。接触は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏであってもよい。あるいは、細胞には動物のものが可能である。動物には、単球由来細胞介在性症状（ＭＤＣＭＣ）に羅患しているか、これを発症するリスクのある動物が可能である。ＭＤＣには、たとえば、樹状細胞、マクロファージ、単球または破骨細胞が可能である。
【０２３５】
また、本発明は、治療方法または予防方法を提供するものでもある。本方法は、Ｆｃ試薬が結合した支持体を含有する組成物を、ＭＤＣＭＣに羅患しているまたはこれを発症するリスクのある動物に投与することを含む。
【０２３６】
本明細書で使用する場合、「単球由来細胞介在性症状（ＭＤＣＭＣ）」という用語は、直接的または間接的に、部分的または全体的に、単球由来細胞の活性による、あるいは単球由来細胞によって産生された因子による病態を示す。単球由来細胞としては、単球、マクロファージ、指状嵌入樹状細胞（本明細書では広義に、樹状突起様細胞および濾胞樹状様細胞を含む「樹状細胞」と呼ぶ）（成熟および未熟）、破骨細胞、小膠様細胞、単球由来インスリン産生膵島様細胞、単球由来未熟肥満細胞および単球由来微小粒子があげられるが、これに限定されるものではない。
【０２３７】
固定Ｆｃを用いる方法に鑑みて、「Ｆｃ試薬」という用語は、免疫グロブリンＩｇ（ＩｇＧ）Ｆｃ断片の機能的部分を１つ以上（たとえば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、１８、２０またはそれより多く）含む分子または分子錯体を示す。ＩｇＧのＦｃ断片は、互いに結合したＩｇＧ分子の２つのＩｇＧ重鎖のＣ末端部分からなり、互いに結合した両方の重鎖のヒンジ領域と、ＣＨ２ドメインと、ＣＨ３ドメインとで構成される。「ＩｇＧのＦｃ断片の機能的部分」は、ヒンジ領域と、ＣＨ２ドメインと、任意に、互いに結合した両方の重鎖のＣＨ３ドメインの最初の５０個（Ｎ末端から）のアミノ酸のうちの全部または一部（たとえば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８または４９）とから構成される。ヒトでは、（ａ）ＩｇＧ１のヒンジ領域は１５個のアミノ酸を含み、ＣＨ２ドメインは１１０個のアミノ酸を含み、ＣＨ３ドメインは１０６個のアミノ酸を含む；（ｂ）ＩｇＧ２のヒンジ領域は１２個のアミノ酸を含み、ＣＨ２ドメインは１０９個のアミノ酸を含み、ＣＨ３ドメインは１０７個のアミノ酸を含む；（ｃ）ＩｇＧ３のヒンジ領域は６２個のアミノ酸を含み、ＣＨ２ドメインは１０４個のアミノ酸を含み、ＣＨ３ドメインは１０６個のアミノ酸を含む；（ｄ）ＩｇＧ４のヒンジ領域は１２個のアミノ酸を含み、ＣＨ２ドメインは１０９個のアミノ酸を含み、ＣＨ３ドメインは１０７個のアミノ酸を含む。
【０２３８】
野生型ＩｇＧ分子と同様に、上述したＦｃ試薬では、ＩｇＧ重鎖由来の２つのポリペプチド鎖は通常同一であるが、必ずしもそうでなくてもよい。このため、Ｆｃ試薬には、ＩｇＧ分子全体、非免疫グロブリン由来ポリペプチドに結合したＩｇＧ分子全体、ＩｇＧのＦｃ断片、非免疫グロブリン由来ポリペプチドに結合したＩｇＧのＦｃ断片、ＩｇＧのＦｃ断片の機能的部分、非免疫グロブリン由来ポリペプチドに結合したＩｇＧのＦｃ断片の機能的部分あるいは、これらのいずれかの多量体（二量体、三量体、四量体、五量体、六量体、七量体、八量体、九量体または十量体など）が可能であるが、これに限定されるものではない。また、上記のＦｃ試薬の定義に含まれるのであれば、Ｆｃ試薬は上述したストラドマーおよびストラドボディであってもよい。
【０２３９】
固定Ｆｃγでは、Ｆｃ試薬の免疫グロブリン重鎖成分が、野生型のアミノ酸配列を有するものであってもよいし、または野生型アミノ酸配列であってもよいが、アミノ酸置換は２０以下（１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１以下など）とする。このような置換は、好ましくは保存された置換であるが、必ずしもそうでなくてもよい。保存された変化は一般に、以下の群に含まれる変化を含む。グリシンおよびアラニン；バリン、イソロイシン，およびロイシン；アスパラギン酸およびグルタミン酸；アスパラギン、グルタミン、セリンおよびトレオニン；リジン、ヒスチジンおよびアルギニン；フェニルアラニンおよびチロシン。
【０２４０】
本発明の「Ｆｃ試薬」は、Ｆｃ試薬のＩｇＧ重鎖成分の誘導元となったＩｇＧ分子（基準ＩｇＧ分子）が該当するＦｃ受容体を結合する機能の最小２５％（たとえば、少なくとも３０％；４０％；５０％；６０％；７０％；８０％；９０％；９５％；９８％；９９％；９９．５％；または１００％またはさらに多く）を有する。「Ｆｃ試薬」が２タイプ以上のＩｇＧ分子に由来する重鎖成分を有する場合、基準ＩｇＧ分子は、該当する関連のＦｃ受容体に最大の結合力で結合するＩｇＧ分子である。
【０２４１】
本明細書で使用する場合、「固定Ｆｃ」とは、以下で定義するようにして「支持体」に結合したＦｃ試薬を示す。「固定Ｆｃ」、「結合Ｆｃ」および「安定化Ｆｃ」という表現は、同義の表現である。固定Ｆｃは、支持体に付着したＦｃの機能的部分（Ｆｃの機能的部分を含むポリペプチドを含むがこれに限定されるものではない）で構成される。固定Ｆｃとしては、たとえば、Ｆｃのポリマーによる支持体への直接結合ならびに間接結合；単離時におけるＩｇＧのＦｃ全体の取り込み；ＩｇＧのＦｃの機能ドメインのみの取り込み；あるいは、抗体、ストラドマーまたはストラドボディなどの大きなポリペプチドの一部としてのＩｇＧのＦｃまたはＩｇＧのＦｃの機能ドメイン全体の取り込みがあげられる。
【０２４２】
固定Ｆｃに適用する場合、「支持体」という用語は、固体、半固体またはゼラチン状の物質を示す。支持体は、動物の身体に埋め込み、あるいは動物の身体の表面に貼り付け（または付着）可能なものである。支持体としては、たとえば、液体または気体状の成分があげられるが、支持体の少なくとも一部は固体、半固体またはゼラチン状である。このように、支持体は、水性溶媒には実質的に不溶であるが、非水性溶媒には可溶の物質であってもよい。このような物質としては、脂質（リン脂質など）、脂肪酸および他の脂溶性・水性溶媒不溶性化合物があげられる。このことから、支持体がリポソームを含むことは明らかであろう。支持体は多孔性であっても非多孔性であってもよい。特定の実施形態では、支持体は、これを植込み、貼り付ける、あるいは付着させる表面および／または身体に対して不活性である。
【０２４３】
支持体は、ナイロン、テフロン（登録商標）、ダクロン、ポリ塩化ビニル、ＰＥＵ（ポリ（エステルウレタン））、ＰＴＦＥ（ポリテトラフルオロエチレン）、ＰＭＭＡ（メタクリル酸メチル）ＰＥＥＫ、熱可塑性エラストマー、Ｘ線不透過性ポリマー、ポリエーテルスルホン、シリコン、ポリカーボネート、ポリウレタン、ポリイソブチレンおよびその共重合体、ポリエステル、ポリオレフィン、ポリイソブチレン、エチレンαオレフィン共重合体、アクリルポリマーおよび共重合体、ビニルハライドポリマーおよび共重合体（ポリ塩化ビニル、ポリビニルエーテル、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニリデンハライド、ポリフッ化ビニリデン、ポリ塩化ビニリデンなど）、ポリアクリロニトリル、ポリビニルケトン、ポリビニル芳香族、ポリスチレン、ポリビニルエステル、ポリ酢酸ビニル、ビニル単量体の共重合体、ビニル単量体とオレフィンの共重合体、エチレン−メタクリル酸メチル共重合体、アクリロニトリル−スチレン共重合体、ＡＢＳ樹脂、エチレン−酢酸ビニル共重合体、ポリアミド、ナイロン６６、ポリカプロラクトン、アルキド樹脂、ポリオキシエチレン、ポリイミド、ポリエーテル、エポキシ樹脂、レーヨン−トリアセテート、セルロース、酢酸セルロース、セルロースブチレート、セルロースアセテートブチレート、セロファン、硝酸セルロース、プロピオン酸セルロース、セルロースエーテル、カルボキシメチルセルロース、コラーゲン、キチン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸−ポリエチレンオキシド共重合体、ポリシロキサン、置換ポリシロキサン、エチレン酢酸ビニル共重合体、ポリオレフィンエラストマー、ＥＰＤＭゴムおよびこれらの組み合わせなどの合成ポリマーを含有するものであってもよいし、上記の合成ポリマーで作製したものであってもよい。
【０２４４】
また、支持体は、ステンレス鋼、白金、イリジウム、チタン、タンタル、ニッケル−チタン合金またはコバルトクロム合金などの金属または金属合金を含有するものであってもよいし、これで作製したものであってもよい。さらに、支持体は、組織または臓器移植片などの動物組織または動物組織製品を含むものであってもよいし、それであってもよい。動物組織には、骨（骨化骨（osteogenic bone）など）または軟骨が可能である。さらに、支持体は、コラーゲンまたはケラチンなどのタンパク質を含むものであってもよい。また、支持体は、無細胞組織マトリックスなどの組織マトリックスであってもよいし、これを含有するものであってもよい。微粒子および非微粒子無細胞マトリックスが、米国特許第５，３３６，６１６号および同第６，９３３，３２６号（その開示内容全体を本明細書に援用する）などに詳細に説明されている。また、支持体は、動物細胞（線維芽細胞、間葉系幹細胞などの組織修復細胞）であってもよいし、これを含むものであってもよく、植毛プラグなどであってもよい。支持体は、アガロースなどの多糖を含有するものであってもよいし、それであってもよい。さらに、好ましくは硫酸カルシウムなどの比較的不溶性の塩である塩を含有するものであってもよいし、それであってもよい。支持体は、ゲルまたはクリームであってもよい。さらに、シリコンまたはサイラスティックを含有するものであってもよい。また、支持体は、絹、綿または羊毛などの天然繊維を含有するものであってもよい。
【０２４５】
また、支持体は植込み型の医療器具であってもよい。たとえば、ステント（たとえば、冠動脈ステントなどの血管ステント；気管内ステントまたは経鼻ステントなどの気道ステント；胆管ステントまたは膵管ステントなどの消化管ステント；または尿管ステントなどの尿道ステント）であってもよいし、外科用縫合糸（絹縫合糸、腸線縫合糸、ナイロン、プラスチックまたは金属縫合糸など）または止血鉗子（動脈瘤クリップなど）であってもよい。支持体は、たとえば、人工股、人工股関節、人工膝、人工膝関節、人工肩、人工肩関節、人工指関節または足趾関節、骨接合板、骨釘、骨癒合不全用インプラント、椎間板インプラント、骨セメントまたは骨セメントスペーサであってもよい。また、動静脈シャント、植込み型リード、ペースメーカー、人工心臓、心臓補助装置、人工内耳、植込み型除細動器、脊髄神経刺激装置、中枢神経系刺激装置または末梢神経移植片であってもよい。他の支持体に、義歯または歯冠がある。
【０２４６】
他の実施形態では、支持体は、大血管血栓フィルタ装置またはケージ、経皮装置、皮膚パッチまたは粘膜下パッチまたは植込み型薬剤送達装置であってもよい。また、支持体は、大血管グラフトであってもよく、この場合の血管は、たとえば、頸動脈、大腿動脈または大動脈である。さらに、支持体は、皮下インプラント、角膜移植片、眼内レンズまたはコンタクトレンズであってもよい。
【０２４７】
支持体は、シート、ビーズ、メッシュ、粉末粒子、撚糸、ビーズまたは繊維の形であってもよい。また、固体、半固体またはゼラチン状物質を含むものであってもよいし、それであってもよい。
【０２４８】
本発明において有用なポリマーは、特に装置の体内への挿入または植込み時に生体安定性かつ生体適合性で、体組織への刺激のないものであると好ましい。
【０２４９】
Ｆｃ試薬は、さまざまな方法のうちの任意の方法で、支持体にコーティング（すなわち固定または安定）することが可能なものである。たとえば、疎水性の相互作用などによってＦｃ試薬を貼り付けた状態に維持する支持体の表面に、これを直接コーティングすることが可能である。以下、ポリマーの使用を伴ういくつかの他の方法論（（ａ）〜（ｅ））をあげておく。
（ａ）Ｆｃ試薬を混和性ポリマーブレンドと混合し、続いてこれを植込み型の合成材料の表面に積層することで、Ｆｃ試薬を安定させる。ポリマーブレンドを生成するのに当該技術分野において日常的に用いられている単量体としては、ＰＬＭＡ［ポリ（メタクリル酸ラウリル）］；ＰＥＧ［ポリエチレングリコール］、ＰＥＯ［ポリエチレンオキシド］；アルキル官能化メタクリレートポリマーＰＭＭＡ、ＰＥＭＡ、ＰＰＭＡおよびＰＢＭＡ；イタコン酸塩；フマル酸塩；およびスチレン系樹脂があげられる。
（ｂ）ポリマーアンダーコート層またはナノメートル寸法のフィルムを支持体表面に付着させた後、Ｆｃ試薬をポリマーアンダーコート層またはナノメートル寸法のフィルムに付着させることで、Ｆ試薬を安定させる。
（ｃ）ポリマー単量体の薄膜を植込み型の支持体表面に適用した後、単量体を重合させる。このような単量体としては、たとえば、メタン、テトラフルオロエチレン（Tetrafluorethylene）、ベンゼン、メタノール、エチレンオキシド、テトラグリム、アクリル酸、アリルアミン、メタクリル酸ヒドロキシエチル、Ｎ−ビニルピロリジノン、メルカプトエタノールがあげられる。続いて、得られる単量体にＦｃ試薬を貼り付ける。
（ｄ）Ｆｃ試薬に付着するタンパク質Ａまたはアルブミンなどのタンパク質を支持体にコーティングすることで、Ｆｃを支持体の表面で安定させる。
（ｅ）植込み型の合成材料に結合して安定したＦｃを均一に配向させる疎水性アミノ酸の鎖をＦｃ試薬にタグ付けすることが可能である。
【０２５０】
本発明の方法はどのような動物の種にも適用可能であり、Ｆｃ試薬のＩｇＧ由来部分の作製元となったＩｇＧ分子もどのような動物の種のものであってもよい。当然、関連の動物種は、ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子が生じるものである。通常、この方法が適用される種と、Ｆｃ試薬のＩｇＧ由来の部分をこの方法で用いた種は同じである。しかしながら、これらは必ずしも同じでなくてもよい。関連の動物種は、好ましくは哺乳動物であり、ヒト、非ヒト霊長類（サル、ヒヒ、チンパンジーなど）、ウマ、ウシのような動物（去勢されていない雄牛、雌牛または去勢された雄牛など）、ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウサギ、アレチネズミ、ハムスター、ラット、マウスがあげられるが、これに限定されるものではない。哺乳類以外の種としては、たとえば、鳥類（ニワトリ、シチメンチョウ、アヒルなど）および魚類があげられる。
【０２５１】
「治療する」、「治療」および「予防」という表現は、固定Ｆｃを使用してもストラドマーおよびストラドボディで上述したものと同じ意味である。
【０２５２】
固定ＦｃがＦｃ試薬をコーティングした植込み型装置の場合、当該技術分野において周知の方法を用いて、これを関連する被検体の関連の内臓または組織または体表面に植込み、貼り付ける、あるいは付着させることができる。また、これが懸濁液や粉末などとして処方される場合、ストラドマーおよびストラドボディの場合について上述したようにして処方および投与することが可能である。
【０２５３】
本発明の固定Ｆｃ試薬は、癌、鬱血性心不全（ＣＨＦ）、血管炎、酒さ（rosecea）、ざ瘡、湿疹、心筋炎および他の心筋症状、全身性紅斑性狼瘡、糖尿病、脊椎症、滑膜線維芽細胞，および骨髄間質；骨減少症；パジェット病、肥大性骨形成；廃用性骨減少症；栄養不良、歯周病、ゴーシェ病、ランゲルハンス細胞組織球症、脊髄損傷、急性化膿性関節炎、骨軟化症、クッシング症候群、単骨性線維性骨異形成症（monoostotic fibrous dysplasia）、多骨性線維性骨異形成症、歯周組織再建および骨折、骨疼痛管理および腫瘍随伴体液性高カルシウム血症、強直性脊椎炎および他の脊椎関節症；移植拒絶およびウイルス感染を含むがこれに限定されるものではない、症状の治療または予防に使用できるものである。
【０２５４】
自己免疫疾患はすべて、多かれ少なかれＭＤＣＭＤであり得る。「自己免疫疾患」という用語は、本明細書で使用する場合、さまざまな群に分けられる８０を超える慢性病を示す。これらの疾患ではいずれも、背景にある問題は身体の免疫系が身体自体を攻撃してしまうことにある。自己免疫疾患は、結合組織、神経、筋肉、内分泌系、皮膚、血液、呼吸器系および消化器系を含むあらゆる主要な体組織に影響を与える。
【０２５５】
自己免疫疾患または症状は、特発性血小板減少性紫斑病、同種免疫性／自己免疫性血小板減少症、後天性免疫性血小板減少症、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性溶血性貧血、パルボウイルスＢ１９関連赤血球形成不全、後天性抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫疾患、後天性フォンウィルブランド病、多発性骨髄腫および意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症、敗血症、再生不良性貧血、赤芽球痺、ダイアモンド・ブラックファン貧血、新生児溶血性疾患、免疫介在性好中球減少症、血小板輸血不応状態、新生児輸血後紫斑病、溶血性尿毒症症候群、全身性血管炎、血栓性血小板減少性紫斑病またはエバンス症候群を含むがこれに限定されるものではない、血液免疫学的プロセスの場合がある。
【０２５６】
自己免疫疾患または症状は、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、ＩｇＭ−Ｍ蛋白血症を伴う脱髄性ニューロパチー、ランバート・イートン症候群、重症筋無力症、多巣性運動ニューロパチー、抗ＧＭ１抗体を伴う下位運動ニューロン症候群、脱髄、多発性硬化症および視神経炎、全身硬直症候群、抗Ｙｏ抗体陽性傍腫瘍性小脳変性症、腫瘍随伴脳脊髄症、抗Ｈｕ抗体陽性感覚性ニューロパチー、癲癇、脳炎、脊髄炎、特にヒトＴ細胞性白血病ウイルス１型関連の脊髄症、自己免疫性糖尿病性ニューロパチーまたは急性特発性自律神経ニューロパチーを含むがこれに限定されるものではない、神経免疫学的プロセスの場合がある。
【０２５７】
自己免疫疾患または症状は、川崎病、関節リウマチ、フェルティ症候群、ＡＮＣＡ陽性血管炎、特発性多発性筋炎、皮膚筋炎、抗リン脂質症候群、再発性自然流産、全身性紅斑性狼瘡、若年性特発性関節炎、レイノー病、ＣＲＥＳＴ症候群またはブドウ膜炎を含むがこれに限定されるものではない、リウマチ性疾患プロセスの場合がある。
【０２５８】
自己免疫疾患または症状は、中毒性表皮壊死融解症、脱疽、肉芽腫、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、落葉状天疱瘡を含む自己免疫性で皮膚水疱を呈する疾患、尋常性白斑、連鎖球菌毒素ショック症候群、強皮症、びまん性皮膚硬化型強皮症および限局皮膚硬化型強皮症を含む全身性強皮症またはアトピー性皮膚炎（特にステロイド依存性）を含むがこれに限定されるものではない、皮膚免疫学的疾患プロセスの場合がある。
【０２５９】
自己免疫疾患または症状は、封入体筋炎、壊疽性筋膜炎、炎症性ミオパチー、筋炎、抗デコリン（ＢＪ抗原）ミオパチー、傍腫瘍性壊死性ミオパチー、Ｘ連鎖性空胞性ミオパチー、ペナシラミン誘導多発性筋炎、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患または心筋症を含むがこれに限定されるものではない、筋骨格免疫学的疾患プロセスの場合がある。
【０２６０】
自己免疫疾患または症状は、悪性貧血、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、セリアック病、疱疹状皮膚炎、原因不明肝硬変、反応性関節炎、クローン病、ホイップル病、潰瘍性大腸炎または硬化性胆管炎を含むがこれに限定されるものではない、胃腸免疫学的疾患プロセスの場合がある。
【０２６１】
自己免疫疾患または症状は、移植片対宿主病、抗体による移植片拒絶、骨髄移植後拒絶、感染症後の炎症、リンパ腫、白血病、腫瘍症、喘息、抗β細胞抗体の存在する１型糖尿病、シェーグレン症候群、混合性結合組織病、アジソン病、フォークト・小柳・原田症候群、膜性増殖性糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、橋本甲状腺炎、ウェゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発動脈炎、チャーグ・ストラウス症候群、結節性多発動脈炎または多臓器不全の場合がある。
【０２６２】
本明細書における「癌」とは、一般に未制御の細胞成長を特徴とする哺乳動物における生理学的症状を示すまたは説明するものである。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫（脂肪肉腫、骨原性肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、粘液肉腫、軟骨肉腫を含む）、骨巨細胞腫、神経内分泌腫瘍、中皮腫、脊索腫、滑膜腫、神経鞘腫、髄膜腫、腺癌、黒色腫および白血病またはリンパ系腫瘍があげられるが、これに限定されるものではない。このような癌のさらに特定の例としては、扁平上皮癌（上皮の扁平上皮癌など）、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌および肺扁平上皮癌、小細胞肺癌腫を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌を含む胃の癌または胃癌、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、肛門癌、陰茎癌、精巣癌、食道癌、胆道の腫瘍、ユーイング腫瘍、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌、ウィルムス腫瘍、精巣腫瘍、肺癌腫、膀胱癌腫、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストローム・マクログロブリン血症、骨髄異形成疾患、重鎖病、神経内分泌腫瘍、神経鞘腫および他の癌腫、頭頸部癌、急性骨髄性白血病（成熟型ＡＭＬ、未分化型ＡＭＬ、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病および急性単球性白血病を含む）、骨髄異形成症候群、慢性骨髄増殖性疾患（慢性骨髄性白血病を含む）などの骨髄性腫瘍、中枢神経系の腫瘍、たとえば、脳腫瘍（神経膠腫、神経芽細胞腫、星状細胞腫、髄芽腫、上衣腫、および網膜芽細胞腫）、固体腫瘍（上咽頭癌、基底細胞癌、膵臓癌、胆管の癌、カポジ肉腫、精巣癌、子宮癌、膣癌または子宮頸癌、卵巣癌、原発性肝癌または子宮体癌、脈管系の腫瘍（血管肉腫および血管外皮腫（hemagiopericytoma））、造血器腫瘍（hematologic neoplasisas）および腫瘍様症状、たとえば、ホジキンリンパ腫；非ホジキンリンパ腫（バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫／慢性リンパ球性白血病、菌状息肉腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、有毛細胞白血病およびリンパ形質細胞性白血病）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫およびＴ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫を含むリンパ球前駆細胞の腫瘍、胸腺腫、末梢性Ｔ細胞白血病や成人Ｔ細胞白血病／Ｔ細胞リンパ腫および大顆粒リンパ球性白血病を含む成熟Ｔ細胞およびＮＫ細胞の腫瘍、溶骨性の骨癌および骨転移があげられる。
【０２６３】
本明細書で使用する場合、「単球由来細胞介在性疾患（ＭＤＣＭＤ）を発症するリスクのある」被検体とは、ＭＤＣＭＤを発症する素因すなわち、ＭＤＣＭＤを発症する遺伝的素因を有する被検体あるいは、ＭＤＣＭＤにつながり得る条件に曝露された被検体である。「ＭＤＣＭＤに羅患している疑いのある」被検体とは、ＭＤＣＭＤの１つ以上の症候が認められる被検体である。上記から、「ＭＤＣＭＤを発症するリスクのある」被検体と、「ＭＤＣＭＤに羅患している疑いのある」被検体はいずれも、関心の対象となる種に含まれる個体ではないことは明らかであろう。
【０２６４】
上記の方法のいずれにおいても、ＭＤＣＭＣは支持体によって生じるものである可能性があり、Ｆｃ試薬がＭＤＣＭＣを防止または寛解する機能を果たす。
【実施例】
【０２６５】
実施例１−免疫学的に活性な生体模倣薬のコンストラクト設計
ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ断片単量体をコードする配列（配列番号１）を、選択した制限酵素開裂部位と、ＩｇＫシグナル（下記にてさらに定義する）と、エピトープタグとを含む発現ベクター（pCDNA 3.1D/V5 His TOPO  Invitrogen）にクローニングし、図１７（配列番号１９）に示すＩｇＧ１単量体配列｛ＲｅｓｔＥｎｚＳｉｔｅｓ−ＩｇＫシグナル−ＲｅｓｔＥｎｚＳｉｔｅｓ−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＲｅｓｔＥｎｚＳｉｔｅｓ−エピトープタグ（Ｖ５およびＨｉｓ）−ＳＴＯＰ｝を作製した。タンパク質産生のために、このコンストラクトをＣＨＯ細胞（ＣＨＯ−００２）にトランスフェクトした。また、本発明者らは、以下の一般構造を有するいくつかのストラドマーコンストラクトも設計した。
ａ）｛ＲｅｓｔＥｎｚＳｉｔｅｓ−ＩｇＫシグナル−ＲｅｓｔＥｎｚＳｉｔｅｓ−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＸｂａＩ部位−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＳＴＯＰ｝（配列番号２１）（図４Ａおよび図１８も参照）；
ｂ）｛ＲｅｓｔＥｎｚＳｉｔｅｓ−ＩｇＫシグナル−ＲｅｓｔＥｎｚＳｉｔｅｓ−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＸｂａＩ部位−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＲｅｓｔＥｎｚＳｉｔｅｓ−エピトープタグ（Ｖ５およびＨｉｓ）−ＳＴＯＰ｝（配列番号２３）（図１９も参照）；
ｃ）｛ＲｅｓｔＥｎｚＳｉｔｅｓ−ＩｇＫシグナル−ＥｃｏＲＶ部位−ＩｇＧ３（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＲｅｓｔＥｎｚＳｉｔｅｓ−エピトープタグ（Ｖ５およびＨｉｓ）−ＳＴＯＰ｝（配列番号２５）（図２１も参照）；
ｄ）｛ＲｅｓｔＥｎｚＳｉｔｅｓ−ＩｇＫシグナル−ＥｃｏＲＶ部位−ＩｇＥ（ＣＨ２）−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）−ＩｇＧ１（ヒンジ−ＣＨ２）−ＩｇＥ（ＣＨ４）−ＳＴＯＰ｝（配列番号２７）（図２２も参照）
【０２６６】
ＩｇＧ１ストラドマーコンストラクトａ）（配列番号２１；図１８）をＰＣＲで改変した。ＩｇＧ１のヒンジ配列と（５’末端で）相補なプライマー（配列番号２９）と、ＩｇＧ１のＣ末端と（３’末端で）相補なプライマー（配列番号３０）とを用いて、ＩｇＧ１ヒンジ−Ｆｃ領域を増幅した。プライマーに制限部位を加えて、ｐｃＤＮＡクローニングベクター（pCDNA 3.1DN5 His TOPO、Invitrogen）にクローニングした第１のＦｃドメインと一続きでインフレームになるように第２のＦｃドメインをクローニングできるようにした。Ｃ末端プライマーの制限部位の前に停止コドンを加え、このコンストラクトのフランキング配列のリードスルーを防止した。
【０２６７】
ストラドマーコンストラクトｂ）（配列番号２３；図１９）を同様に作製した。このコンストラクトは、上述したようなＩｇＧ１Ｆｃ−ＩｇＧ１Ｆｃを含有するものであるが、Ｃ末端に２つのエピトープタグも加えた。これらのエピトープタグは、タンパク質の同定または精製に用いられる。この第２のコンストラクトでは、２つのエピトープタグであるＶ５とＨｉｓタグが停止コドンの前にインフレームで存在している。
【０２６８】
通常はごく普通に分泌されるタンパク質には、タンパク質のＮ末端に疎水性のシグナル配列が含まれる。ストラドマーコンストラクトの場合、本発明者らは、チャイニーズハムスター卵巣細胞などの哺乳類細胞からの分泌時にタンパク質から取り出したＩｇＫシグナル配列ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号３５）を使用した。予測切断部位は、シグナル部位切断予測用のアルゴリズム（SignalP 3.0）に基づくものであった。
【０２６９】
上述したようなＩｇＧ１Ｆｃ−ＩｇＧ１Ｆｃ構造を（エピトープタグ付きおよびタグなしで）含む上記のａ）およびｂ）と類似の別のストラドマーコンストラクトを作製したが、このコンストラクトにはＩｇＧ３のヒンジドメインを使用して次のとおりとした。ＩｇＧ１Ｆｃ−ＩｇＧ３のヒンジ−ＩｇＧ１（ＣＨ２−ＣＨ３）。
【０２７０】
実施例２−免疫学的に活性な生体模倣薬の設計と試験
コーティングされたＩＶＩＧとコーティングされたＦｃが同様の表現型の変化を刺激する
滅菌プレートのウェルの壁面と底面にコーティングすると、ＩＶＩＧおよびＦｃは未熟ＤＣでＣＤ１ａおよびＣＤ８６レベルのほぼ等しい変化を刺激し、ＣＤ１１ｃの上方制御を遅らせる。ＩＴＰにおけるＤＣの重要な役割であるとされている役割がゆえに、これらのデータによって、ストラドマーなどのＩＶＩＧ模倣薬の機能を評価するための合理的なモデルが得られる。本発明者らは、ＩＶＩＧによって誘導される表現型の変化が組換えＦｃによって完全に再現されることから、ＩＶＩＧがＤＣに対しておよぼす作用にＦｃが介在している可能性が極めて高いであろうという結論にも至っている。
【０２７１】
ストラドマーの生成
本発明者らは、ＩＶＩＧが未熟ＤＣに対しておよぼす作用を模倣するために、４通りのクラスのストラドマーを作製した。特に明記する場合を除いて、以下の表３に示すシリアルストラドマー、クラスターストラドマーを含むクラスターストラドマー単位、コアストラドマーを含むコアストラドマー単位、Ｆｃ断片ストラドマーを各々生成した。以下に示すヒトコンストラクト各々について適切な配列を得るには、ヒトＰＢＭＣから抽出した全ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。他の種からこれらの配列を得るには、これらの種の組織からＲＮＡを精製した。ランダムプライミングを利用して、ｃＤＮＡを生成した。ｃＤＮＡを用いてＰＣＲで所望の断片を増幅し、合成し、クローニングした後、ＤＮＡ断片の配列解析によってキャラクタライズした。最終コンストラクトをオーバーラップエクステンションＰＣＲでの連結によって作製（Horton RM, Hunt HD, Ho SN, Pullen, JK and Pease LR. Engineering hybrid genes without the use of restriction enzymes: gene splicing by overlap extension. Gene 77:6168, 1989）したか、これに適合する既存の制限部位を利用して適当な断片を融合した。
【０２７２】
たとえば、Ｇ−００７のクローニングでは、ＩｇＥのＣＨ４ドメインをタンパク質の３’末端でＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに直接融合させた。これは、ＩｇＧ１のＣＨ２（Ｃ末端）とＩｇＥのＣＨ４のＮ末端アミノ酸とのオーバーラップ配列を有するプライマーを作ることで達成した。ある例では、ハイブリッドプライマーを用いてＩｇＧ１配列のある５’を増幅し、相補的プライマーを用いてＩｇＥのＣＨ４のＣ末端からの３’プライマーで増幅を実施した。これらの２つの反応の産物を混合し、フランキングプライマーを用いて融合タンパク質を増幅した。配列解析によってコンストラクトを確認した。
【０２７３】
多くの例で、連結対象となる分子の末端に都合よく存在する制限部位を利用した。制限部位が融合状態にある場合、結合された配列の末端に検出可能なレムナント制限配列がある。以下の表３に示すほとんどのコンストラクトに、この手法を用いた。表３に示すストラドマーのアミノ酸配列を図２４にあげておく。いくつかの配列については、タンパク質の精製に有用であることが当該技術分野において周知のＨｉｓ−タグと一緒に示してある。
【０２７４】
【表３】
0005600588.tif 000004
【０２７５】
【表４】
0005600588.tif 000005
【０２７６】
【表５】
0005600588.tif 000006
【０２７７】
【表６】
0005600588.tif 000007
【０２７８】
ストラドマータンパク質の発現
ストラドマーのタンパク質を発現させるために、上述したストラドマーをコードするプラスミドＤＮＡをＣＨＯ懸濁細胞（Freestyle（商標）MAX CHO expression system, lnvitrogen CA）にトランスフェクトした。タンパク質発現後、発現されたストラドマーを、タンパク質Ａ親和性カラムまたはタンパク質Ｇ親和性カラムを用いる親和性カラムクロマトグラフィによって、培地から精製した。精製ストラドマーを還元条件下にてＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）で分析した後、クマシーブルー（Coomasie Blue）染色によって、たとえば以下の想定された大きさの単量体タンパク質バンドの存在を確認した。Ｇ−００２：約３５ＫＤのバンド、Ｇ−００４  約７０ＫＤのバンド、Ｇ−０１０：約４５ＫＤのバンド、Ｇ−０１１：約８０ＫＤのバンド、Ｇ−０１２：約８５ＫＤのバンド、Ｇ−０１８  約７０ＫＤのバンド、Ｇ−０１９：約３５ＫＤ、Ｇ−０２８  約３７ＫＤのバンド。ここに記載のストラドマーをコードするプラスミドＤＮＡを、HEK 293、ＢＨＫ細胞、マウスＮＳＯ、マウスSP2/0細胞などの他の哺乳類細胞にトランスフェクトすることも可能である。
【０２７９】
多量体形成
本発明者らの観察によれば、これらのコンストラクトをトランスフェクトし、培養し、精製すると、未変性タンパク質および変性タンパク質の解析で想定された大きさのタンパク質を生成することができる。また、本発明者らの観察によれば、特定の化合物でも、大きさの基準に照らすと想定される二量体タンパク質の多量体であるさらに大きなバンドが認められた。
【０２８０】
選択したストラドマーによる高次化合物の形成を、非還元条件（Ａ）および還元条件（Ｂ）下にて、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析後にウェスタンブロットにて分析した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析では、ストラドマーＧ−００２、Ｇ−０１０およびＧ−０１９の高分子量化合物の形成が示されており、これを非還元条件下と還元条件との対比であげておく。
・Ｇ−００２：還元条件下で約３５ＫＤのバンド−非還元条件下では約７０ＫＤ（二量体）および１３５ＫＤ（四量体）にバンド
・Ｇ−０１０：還元条件下で約４５ＫＤのバンド−非還元条件下では約９０ＫＤ（二量体）および１８０ＫＤ（四量体）にバンド
・Ｇ−０１９：還元条件下で約３５ＫＤのバンド−非還元条件下では約７０ＫＤ（二量体）、１４０ＫＤ（四量体）にバンド
【０２８１】
本発明者らは、二量体化タンパク質の四量体および他の高次の多量体が、未熟樹状細胞アッセイで測定される化合物の生物活性に大きく影響するだろうと予測している（下記参照）。
【０２８２】
ストラドマー単量体、ストラドマーおよびストラドマーの高次の多量体が認識部位を維持する
表３のタンパク質はいずれも、ウサギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）［Thermo Scientific 31789］によって認識される。このことから、本発明者らは、これらのタンパク質が各々この抗体に対する認識部位を維持しているという結論に至っている。
【０２８３】
プラズモン共鳴イメージング
表３のストラドマーがＦｃγＲＩＩＩａを結合する能力を表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（Biacore（登録商標）として市販）で評価した。ｐＨ５．０の酢酸緩衝液にてリガンドを濃度５ｕｇ／ｍｌまで希釈し、ヒトＦｃγＲＩＩＩａをアミンカップリングによってCM5 Biacoreチップに直接固定化した。リガンドをＲＵが２５０になるまで指定のフローセルに５ｕｌ／分の速度で流した。その後、フローセルをエタノールアミンでブロックした。ストラドマーとＩＶＩＧをＨＢＳ−ＥＰ（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４；０．１５Ｍ  ＮａＣｌ；３ｍＭ  ＥＤＴＡ；０．００５％Surfactant P20）で１０００ｎＭまで希釈し、５００ｎＭ、２５０ｎＭ、１２５ｎＭ、最後に６２．５ｎＭに段階希釈した。緩衝液（ＨＢＳ−ＥＰ）のみを含有するベースライン試料も含めた。すべての試料で流速を２０ｕｌ／分とした。３分間の添加時間で合計６０ｕＬの試料を添加した。約１０分間という長めの時間フローセルにランニング緩衝液を流し、再生をおこなった。
【０２８４】
５００ｎＭで、ヒトＦｃγＲＩＩＩａに流した場合のベースラインに対するストラドマーＧ−０１０コンストラクトの実測Ｒｅｑ（平衡）は２４．９ＲＵであり、１：１結合モデルを用いた場合のＫＤは１．９５ｅ−７であった。ヒトＦｃγＲＩＩＩａに流した５００ｎＭのＩＶＩＧでは、Ｒｅｑが６３．６ＲＵ、１：１結合モデルを用いた場合のＫＤが１．８９ｅ−７であった。したがって、Ｇ−０１０はＦｃγＲＩＩＩａに結合すると判断された。他の生体模倣化合物でも同様の結合能を評価した。以下、例をいくつかあげておく。
【０２８５】
【表７】
0005600588.tif 000008
【０２８６】
本発明者らは、これらのタンパク質のプラズモン共鳴解析による組換えＦｃγＲＩＩＩａに対する結合能はさまざまであり、Ｇ−０１０などの特定の化合物は二価のカーブにフィット（bivalent curve fit）するが、これは二価抗体で見られるものと一致し、ストラドマーがＦｃγＲＩＩＩａに多価結合できることを示しているという結論に至っている。
【０２８７】
ストラドマーはＩＶＩＧの生物学的作用を模倣する
これらのストラドマーの生物学的機能を評価した。表３におけるストラドマーそれぞれが、ＩＴＰの個体でＩＶＩＧの機能的有用性を模倣する機能を判断するために、本発明者らは未熟樹状細胞（ｉＤＣ）を用いるｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを開発した。標的細胞としてｉＤＣを選択するにあたり、ＩＶＩＧで処理したマウス由来のＤＣの養子移入によって、未処理の動物がＩＴＰの発症から保護されることを示す公開データをその論拠とした（Siragam, V. et al. Intravenous immunoglobulin ameliorates ITP via activating Fc[gamma] receptors on dendritic cells. Nat Med 12, 688 (2006)）。本発明者らの初期研究において、本発明者らは、コーティングつまりプレートに固定した組換えＦｃ（ｒＦｃ）およびＩＶＩＧが、ＩＬ−４およびＧＭ−ＣＳＦの存在下にて培養したヒトＣＤ１４＋細胞でのさまざまな活性化、成熟および共刺激マーカーの発現に対しておよぼす影響を評価した。サイトカインだけの中で培養した細胞と比較すると、コーティングされたＩＶＩＧまたはコーティングされたｒＦｃに曝露した細胞では、ＣＤ８６発現の著しい増大とＣＤ１ａ発現の下方制御ならびにＣＤ１１ｃ上方制御の遅延が認められた。
【０２８８】
次に、本発明者らは、コーティングされたＩＶＩＧまたはコーティングされたＦｃがｉＤＣに対しておよぼすここに記載の作用を、表３のストラドマーが模倣するか否かを判断した。以下の化合物は、プレートウェルの壁面と底面にコーティングしたときに、その作用を確かに模倣した：Ｇ−００２、Ｇ−００４、Ｇ−００５、Ｇ−０１４、Ｇ−０１８およびＧ−０１９。以下の化合物は、プレートウェルの壁面と底面にコーティングしたときに、その作用を模倣しなかった：Ｇ−０１０、Ｇ−０１１およびＧ−０１２。
【０２８９】
以下の化合物は、可溶性のときに、コーティングされたＩＶＩＧまたはコーティングされたＦｃがｉＤＣに対しておよぼす作用を確かに模倣した：Ｇ−００２、Ｇ−０１０、Ｇ−０１４、Ｇ−０１８およびＧ−０１９。以下の化合物は、可溶性のときに、その作用を模倣しなかった：Ｇ−００４、Ｇ−００５、Ｇ−０１１およびＧ−０１２。
【０２９０】
コーティングされたＩＶＩＧに対するｉＤＣの曝露が炎症促進性刺激に対する以後の応答に影響するか否かを試験することが可能である。
【０２９１】
これらのデータから、本発明者らは以下の結論を導き出した。
ｉ．選択（select）ストラドマーは、組織培養プレートにコーティングすると、コーティングされたＩＶＩＧがＣＤ８６を上方制御し、未熟ＤＣでのＣＤ１ａの発現を抑制する機能的な能力を模倣する
ｉｉ．可溶性の形態にて低用量で投与した選択（select）ストラドマーは、コーティングされたＩＶＩＧがＣＤ８６を上方制御し、ｉＤＣでのＣＤ１ａの発現を抑制する機能的な能力を模倣する
ｉｉｉ．特定のストラドマーが、可溶性の形態とコーティングされた形態の両方で表現型の変化を誘導でき、Ｇ−０１０などの他のストラドマーは、可溶性の形態であれば表現型の変化を誘導できるが、コーティングされた形態では誘導できない
ｉｖ．Ｇ−００２から形成されたＦｃ断片ストラドマーおよびＧ−０１０から形成されたクラスターストラドマーから明らかなように、異なる構造のストラドマーが生物活性となり得る
ｖ．ストラドマー単量体の二量体化によって想定されるよりも大きい構造がタンパク質解析で認められ、これらの多量体構造がＩＶＩＧに匹敵する生物活性に相当することがある
ｖｉ．二量体化ストラドマー単量体から作製したストラドマーは、複数のＦｃγ受容体と結合と一致する二価フィットをプラズモン共鳴で示すことができることから、ストラドマーの多量体三次構造の存在を示唆している。
【０２９２】
実施例３−熱凝集生体模倣薬のほうがＩＶＩＧよりも強力である
ストラドマーは、凝集免疫グロブリン、特にこれらの免疫グロブリンの凝集Ｆｃ断片の生物活性模倣薬である。場合によっては、本明細書に記載の生体模倣薬の熱凝集によって生物活性を高めることが可能である。本発明者らは、本明細書で説明するような熱凝集生体模倣薬が、ＩＶＩＧと同じくらい強力になり得るという結論に至っている。
【０２９３】
実施例４−Ｆｃ断片はいくつかの活性を呈する
Ｆｃ断片は、タンパク質をコーティングすることでプラスチックに固定し、それによってコーティングされたＩＶＩＧを模倣する生物学的挙動を得る、上述した実験における陽性対照として用いられてきている。また、Ｆｃ断片は、リポソーム、ビーズまたはアルブミンなどのコア部分に貼り付けたときなどに、コアストラドマー単位としても使用可能である。さらに、本発明者らは、ＣＨＯ−Ｓ細胞を用いてInvitrogen FreestyleMax一過性形質転換系などの特定の発現系と特定の細胞型でＦｃ断片を培養すると、この断片からタンパク質解析で高次の多量体を形成でき、プラズモン共鳴イメージングで二価結合パターンが得られ、未熟ＤＣアッセイでは可溶性の形態でコーティングされたＩＶＩＧに匹敵する強い生物活性が得られることも実証した。したがって、本発明者らは、特定の慎重に制御した条件下では、Ｆｃ断片がＦｃ断片ストラドマーを形成するという結論に至っている。この作用は、グリコシル化の変化などの翻訳後修飾による場合がある。
【０２９４】
実施例５−Ｆｃをコーティングしたビーズであるコアストラドマーが、コーティングをほどこしていないビーズに比して貪食の可能性を変えることができる
Ficoll Hypaque密度勾配遠心法を利用して、健常なドナーの軟膜からＰＢＭＣを単離する。単離後、ＰＢＭＣをＰＢＳで２回洗浄する。次に、ＭＡＣＳ分離カラム（Miltenyi）を用いてＣＤ１４＋細胞を精製する。精製細胞を計数し、８００ｕｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦと５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４とを含有するＲＰＭＩ完全培地２×１０５／ｍｌに再懸濁させる。次に、６ウェル非組織培養滅菌プレートのウェルに細胞を播種する。ＣＤ１４＋細胞を非組織培養に播種後、飽和量のＦｃまたはＩＶＩＧをコーティングしたか、あるいはこれを使用していないポリスチレンＦＩＴＣマイクロスフェア（０．５２ｕｍ）を１：１の比で細胞に加え、３７℃、５．０％ＣＯ２で６日間インキュベートした後、ＦＡＣＳによりマイクロスフェアの貪食を分析する。
【０２９５】
ＩＶＩＧをコーティングしたビーズとＦｃをコーティングしたビーズの両方ともコアストラドマーとして機能し、よってコーティングをほどこしていないビーズに比して貪食の可能性を変えることができる。
【０２９６】
実施例６−ＦｃγＲＩＩＩ結合親和性を変更した免疫学的に活性な生体模倣薬の設計
ＩｇＧ１の共通の残基の組が、あらゆるＦｃγＲとの結合に関与していることが明らかになっている。また、ＩｇＧ１分子の別の残基がＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩの両方に対する結合に関与していることも実証されている。残基によっては、変化すると１つ以上の受容体の結合を阻害するものもある。興味深いことに、S298A/K334Aの特定の二重変異がＦｃγＩＩＩａの結合を亢進し、ＦｃγＩＩｂの結合を低下させた。これらの残基は、図１６に示すストラドマーコンストラクトについて言及されている（両方のアミノ酸でアスタリスクを使用）。したがって、本発明者らは、部位特異的突然変異誘発を使用して、配列番号１７でコードされるが対応するS298A/K334A変異のある構造を有するストラドマー分子を生成することが可能である。
【０２９７】
実施例７−組換えタンパク質の発現
上述した組成物を生成するのに適した多数の発現系が存在する。特に、真核生物ベースの系を採用して、核酸配列またはその対応するポリペプチド、タンパク質およびペプチドを産生することが可能である。このような系の多くが広く一般に市販されている。
【０２９８】
好ましい実施形態では、標準化プロトコールに準じて免疫グロブリンタンパク質の組換え生成が十分に確立されているチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を用いて本明細書に記載のストラドマーを作製する。あるいは、たとえば、トランスジェニック動物を利用して、一般には十分に確立されたトランスジェニック動物技術を用いる動物の乳への発現によって、本明細書に記載のヒトストラドマーを産生してもよい。Lonberg N. Human antibodies from transgenic animals. Nat Biotechnol. 2005 Sep;23(9):1117-25；Kipriyanov SM, Le Gall F. Generation and production of engineered antibodies. Mol Biotechnol. 2004 Jan;26(1):39-60；また、Ko K, Koprowski H. Plant biopharming of monoclonal antibodies. Virus Res. 2005 Jul;111(1):93-100も参照のこと。
【０２９９】
昆虫細胞／バキュロウイルス系は、米国特許第５，８７１，９８６号、同第４，８７９，２３６号（いずれも全体を本明細書に援用する）に記載されているように異種核酸セグメントのタンパク質を高レベルで発現でき、たとえば、商品名MAXBAC（登録商標）2.0として、INVITROGEN（登録商標）およびBACPACK（商標）BACULOVIRUS EXPRESSION SYSTEM FROM CLONTECH（登録商標）から購入可能である。
【０３００】
発現系の他の例としては、合成エクジソン誘導受容体を利用したSTRATAGENE（登録商標）のCOMPLETE CONTROL（商標）誘導哺乳類発現系があげられる。誘導発現系の別の例が、全長ＣＭＶプロモーターを用いる誘導哺乳類発現系であるT-REX（商標）（テトラサイクリン調節発現）系を有するINVITROGEN（登録商標）から入手可能である。また、INVITROGEN（登録商標）は、ピヒア・メタノリカ（Pichia methanolica）発現系と呼ばれる酵母発現系も提供しているが、これはメチロトローフ酵母のピヒア・メタノリカ（Pichia methanolica）系を利用して組換えタンパク質を高レベルで生成するよう設計されたものである。本明細書に記載の発現コンストラクトなどのベクターをどのように発現させてそのコードされた核酸配列またはその対応するポリペプチド、タンパク質またはペプチドを生成するかは、当業者であれば知っているであろう。概要については、Recombinant Gene Expression Protocols By Rocky S. Tuan, Humana Press (1997)、ISBN 0896033333；Advanced Technologies for Biopharmaceutical Processing By Roshni L. Dutton, Jeno M. Scharer, Blackwell Publishing (2007)、ISBN 0813805171；Recombinant Protein Production With Prokaryotic and Eukaryotic Cells By Otto-Wilhelm Merten, Contributor European Federation of Biotechnology, Section on Microbial Physiology Staff, Springer (2001), ISBN 0792371372を参照のこと。
【０３０１】
実施例８−免疫学的に活性な生体模倣薬の発現と精製
実施例１および２で説明した核酸コンストラクトを、天然の状態ではＩｇを発現しない細胞系にトランスフェクトする。コードされるポリペプチドが、その分泌リーダー配列がゆえに分泌タンパク質として発現されるが、これは通常、細胞から運び出される際に内因性プロテアーゼによって除去されるか、当該技術分野において周知の技術によって後から切断除去できるものである。これらの分泌される免疫学的に活性な生体模倣薬を、タンパク質ＡまたはＨｉｓタグを用いる当該技術分野において周知のクロマトグラフ的な方法で精製し、還元および／または非還元ＳＤＳ  ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）で大きさを確認する。
【０３０２】
実施例９−大規模製造向けの免疫学的に活性な生体模倣薬の発現と精製
細菌、昆虫細胞または酵母を含むさまざまな系を用いて特定のタンパク質を大量に生成可能であるが、哺乳類細胞で発現させると、タンパク質のグリコシル化の変更による問題を最小限にすることができる。ＣＨＯ細胞などの哺乳類細胞が、Ｉｇ骨格に融合したさまざまなタンパク質の過剰生成に用いられている。コンストラクトのＦｃドメインが、タンパク質親和性カラム精製による細胞上清からの以後の精製を可能にするタグになる（Harris, CL, DM Lublin and BP Morgan Efficient generation of monoclonal antibodies for specific protein domains using recombinant immunoglobulin fusion proteins: pitfalls and solutions., J. Immunol. Methods 268:245-258, 2002）。多くの融合タンパク質が、Ｉｇの定常領域、具体的にはＣＨ２およびＣＨ３部分Ｆｃドメイン単量体ととインフレームで直接的にクローニングされる。Ｉｇ発現対象となるインターフェロンγ受容体細胞外ドメインの発現の特定の例が、機能的活性を有するタンパク質を大量に生成するのに用いられている（Fountoulakis, M, C. Mesa, G. Schmid, R. Gentz, M. Manneberg, M. Zulauf, Z. Dembic and G. Garotta, Interferon gamma receptor extracellular domain expressed as IgG fusion protein in Chinese hamster ovary cells: Purification, biochemical, characterization and stoichiometry of binding, J. Biol. Chem.. 270:3958-3964, 1995）。
【０３０３】
実施例１０−Ｆｃグリコシル化を変更した免疫学的に活性な生体模倣薬の設計
ホモ抗体に関してShieldsらが説明している方法と基本的には同じ方法によって、フコースをタンパク質糖鎖に加えるための酵素活性を欠いた突然変異ＣＨＯ細胞に脱フコシル化Ｆｃドメインを作製することが可能である。これらを用いて、同じ分子のフコシル化型よりもＦｃγＲＩＩＩ結合親和性の高いストラドマーを発現させる。（Robert L. Shields, et al. Lack of Fucose on Human IgG1 N-Linked Oligosaccharide Improves Binding to Human Fc RIII and Antibody-dependent Cellular Toxicity. J. Biol. Chem., Jul 2002; 277: 26733-26740 (doi:10.1074/jbc.M202069200)）。
【０３０４】
Ｆｃ  Ｎ−グリカンでのシアリル化が変化することによって、生物活性を高められることが明らかになっている。Kaneko Y, Nimmerjahn F, Ravetch JV. Science. 2006 Aug 4;313(5787):627-8。このように、シアリル化が変化したストラドマー分子を同様の方法で生成することが可能である。
【０３０５】
ストラドマーのＦｃドメインのグリコシル化を変更するための別の手段として、特定のグリコシル化構造を有するポリペプチドを生成するための化学酵素的な技術があげられる。Li, B., Song, H., Hauser, S., and Wang, L. X. 2006. A Highly Efficient Chemoenzymatic Approach Toward Glycoprotein Synthesis. Org. Lett. 8:30813084を参照のこと。また、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ０７／７０８１８号も参照のこと。
【０３０６】
実施例１１−ＦｃγＲＩＩＩａ（１７６Ｖ／Ｆ）多型の融合コンストラクト
上述したように、ＩＶＩＧの抗炎症活性はＦｃドメインとＦｃγＲＩＩＩａとの一次相互作用に依存する。これらの相互作用を（ＳＰＲ）技術で効果的に定量化し、２つの認識されたＦｃγＲＩＩＩａの多型変異体（１７６Ｖ／Ｆ）がある免疫学的に活性な生体模倣薬の会合定数と解離定数の両方をキャラクタライズ可能である。本発明者らのＦｃドメイン単量体対照およびストラドマーコンストラクトの結合親和性と解離を定義するために、１７６位にＶ（配列番号３３）とＦ（配列番号３１）の両方の多型変異体があるＦｃγＲＩＩＩａ  ＨＩＳタグ融合タンパク質を生成する（図２０）。これらの配列をpCDNA 3.1に入れ、ＣＨＯ細胞にトランスフェクトすることが可能である。これらのＦｃγＲＩＩＩａ融合タンパク質を親和性Ｎｉ２＋カラムでトランスフェクト細胞の上清から精製し、タンパク質を精製する。ＦｃγＲＩＩＩａ融合タンパク質をすべて、ｃＤＮＡシーケンシングとＳＤＳ  ＰＡＧＥの両方でキャラクタライズする。
【０３０７】
当該技術分野におけるさまざまな他のプロトコールを利用してＦｃγＲＩＩＩａを発現させ、免疫学的に活性な生体模倣薬との相互作用をキャラクタライズすることが可能である。たとえば、Robert L. Shields, et al. High Resolution Mapping of the Binding Site on Human IgG1 for FcγRI, FcγRII, FcγRIII, and FcRn and Design of IgG1 Variants with Improved Binding to the FcγR. J. Biol. Chem., Feb 2001; 276: 6591-6604 (doi:10.1074/jbc.M009483200)の材料および方法の章を参照のこと。
【０３０８】
実施例１２−免疫学的に活性な生体模倣薬の機能のＩｎ  ｖｉｔｒｏでのスクリーニング
実施例１にあげたものなどの免疫学的に活性な生体模倣薬の機能を試験するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのアッセイを設計して、天然のＦｃドメインがｉｎ  ｖｉｖｏで炎症を抑える機序であると思われる機序を再現する。最近になって、ｈＩＶＩＧがＤＣの成熟を阻害し、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２およびＴＮＦ−αの分泌を変化させることが実証された（Bayry, J, et al., Inhibition of maturation and function of dendritic cells by intravenous immunoglobulin, Blood 101(2):758-765(2003））。本発明者らのストラドマーは、ｈＩＶＩＧと類似のＤＣに対する作用に介在する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのサイトカイン分泌の変化とＤＣの成熟阻害が、多くのストラドマーコンストラクトのいくつかの生物学的活性を定義するための有効な手段として機能し得る。上述したストラドマーコンストラクトを以下の実験パラメータでさらに確認してもよい。
【０３０９】
【表８】
0005600588.tif 000009
【０３１０】
表４に示す好ましい一ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、適当な結合親和性を有する可溶性の免疫学的に活性な生体模倣薬がヒトＤＣ表現型に対しておよぼす影響を測定する。可溶性の非架橋天然配列Ｆｃドメインコンストラクトを対照として用いることが可能である。活性化のマーカー（ＣＤ８０、ＣＤ８３およびＣＤ８６）ならびにＦｃγＲを含め、ＤＣ表面の特定のＤＣマーカーが評価されている。Prechtel AT, Turza NM, Theodoridis AA, Steinkasserer A. CD83 knockdown in monocyte-derived DCs by small interfering RNA leads to a diminished T cell stimulation. J Immunol. 2007 May 1;178(9):5454-64を参照のこと。また、複合解析を採用して本発明者らの免疫学的に活性な生体模倣薬がＤＣでのサイトカイン産生におよぼす影響を評価することが可能である。Jongbloed, Sarah L., et al. Enumeration and phenotypic analysis of distinct dendritic cell subsets in psoriatic arthritis and rheumatoid arthritis. Arthritis Res Ther. 2006; 8(1): R15（２００５年１２月１６日にオンライン発行。doi: 10.1186/ar1864）。最後に、ＤＣが単球と予想どおり相互作用することを確認するために、対照ＤＣならびに、免疫学的に活性な生体模倣薬に曝露したＤＣを精製単球とともに培養し、ＦｃγＲＩＩａ受容体ならびに、単球の活性化状態に関連する他の細胞表面決定因子を活性化するレベルの変化をフローサイトメトリーで評価する。
【０３１１】
特定の実施形態では、ストラドマーによって免疫細胞に存在するＦｃγＲＩＩａ受容体を減らし、これによって、免疫細胞の機能の阻害につながる阻害ＦｃγＲＩＩｂ受容体とＦｃγＲＩＩａ受容体との比を大きくすることができる。
【０３１２】
実施例１３−免疫学的に活性な生体模倣薬の機能のＩｎ  ｖｉｖｏでのスクリーニング
特発性血小板減少性紫斑病、多発性硬化症、喘息、炎症性腸疾患などの多数の自己免疫疾患について、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験用の当該技術分野において周知の動物モデルが確立されている。Wu GF, Laufer TM. The role of dendritic cells in multiple sclerosis. Curr Neurol Neurosci Rep. 2007 May;7(3):245-52；Targan SR, Karp LC. Defects in mucosal immunity leading to ulcerative colitis. Immunol Rev. 2005 Aug;206:296-305。たとえば、現在ＩＴＰの多数のモデルを利用できる。たとえば、Crow AR, et al. IVIG inhibits reticuloendothelial system function and ameliorates murine passive immune thrombocytopenia independent of anti-idiotype reactivity. Br J Haematol. 2001;1 15:679-686を参照のこと。免疫系を調節するよう設計された免疫学的に活性な生体模倣薬を、特定の自己免疫疾患ごとの必要性に応じて、このようなｉｎ  ｖｉｖｏモデルで確認することが可能である。重要なことに、これらのモデルの多くでは、ｈＩＶＩＧを投与すると、抗炎症作用に関連する偽陽性を目立たなくしたり、これを発生させたりする可能性がある外来種（マウスなど）の抗ヒト抗体応答が起こりやすい。
【０３１３】
本発明者らは、以下の方法論に基づいて特発性血小板減少性紫斑病のマウスモデルを確立した。C57BL6マウスの尾静脈から穿刺採血し、血小板数を測定した。血液１０ｕｌを１５ｕｌのクエン酸緩衝液で希釈した。次に、HemaVet 950血球計算器で試料の血小板数の絶対値を分析した。ＩＴＰ対照群のマウスでは、２日目から開始して、毎日午後に、BD Biosciences pharmingenから入手した抗血小板抗体であるラット抗マウスＣＤ４１（MWReg30）２ｕｇを腹腔内注射することで、血小板を減少させた。ＩＶＩＧ前処理対照群のマウスには、毎朝２ｇ／ｋｇ（４０ｍｇ／マウス）のヒトＩＶＩＧと、ＩＴＰ対照群と同じ用量のMWReg30を腹腔内注射した。本発明者らは、この誘導ＩＴＰモデルでは血小板数に対するＩＶＩＧの保護性が極めて高いと判断し、このモデルが血小板数の減少に対する相対的な保護の度合いについてＩＶＩＧとの比較でストラドマーを試験するのに有用であるという結論に至っている。このモデルでは、以下のようにしてさまざまな濃度でストラドマーを評価し、ＩＶＩＧに対する保護を評価することが可能である。
実験群
１）対照−ＩＴＰなし、ＩＶＩＧなし
２）ＩＴＰ対照群−２日目から開始してMWReg30を毎晩２ｕｇ
３）ＩＶＩＧ前処理群−２日目から開始してＩＶＩＧを毎朝４０ｍｇとMWReg30を毎晩２ｕｇ
４）１０１２のＦｃドメインＩＶに相当するストラドマーを毎朝
５）１０１１のＦｃドメインＩＶに相当するストラドマーを毎朝
６）１０１０のＦｃドメインＩＶに相当するストラドマーを毎朝
７）１０９のＦｃドメインＩＶに相当するストラドマーを毎朝
８）１０８のＦｃドメインＩＶに相当するストラドマーを毎朝
９）１０７のＦｃドメインＩＶに相当するストラドマーを毎朝
１０）１０６のＦｃドメインＩＶに相当するストラドマーを毎朝
【０３１４】
実施例１４−ＩＴＰ治療における免疫学的に活性な生体模倣薬のｉｎ  ｖｉｖｏ薬効の確認
ＩＴＰの他のマウスモデルでは、正常なＢ細胞機能を欠損したマウスを用いることが可能である。正常なＢ細胞機能の欠損は、マウスにヒトＦｃ断片またはＦｃ部分断片を投与することで生成されるマウス抗ヒトＦｃ断片抗体のイディオタイプ−抗イディオタイプ作用ならびに、結果としての偽陽性の結果をなくす機能を果たす。Ｂ細胞機能の欠損は、たとえば、抗Ｂ細胞抗体を投与することで生成可能であるか、あるいは成熟Ｂ細胞が欠損したｍ鎖ノックアウトマウス（Jackson Labs株B6.129S2-Igh6tm1Cgn/J）などの遺伝子改変マウスで発生する。
【０３１５】
免疫適格状態の動物由来の未修飾ＰＢＭＣまたはＢ細胞除去ＰＢＭＣのいずれかを用いて、免疫欠損マウスの免疫系を再構成する。続いて、これらの動物を当該技術分野において十分に定義された技法を用いて抗血小板抗体で処置し、ＩＴＰを模倣する。この動物をさらに、以下のスキームに従って免疫学的に活性な生体模倣薬で処置する。
【０３１６】
【表９】
0005600588.tif 000010
【０３１７】
群１および２は、血小板破壊に必要な抗血小板抗体を産生するためのＢ細胞を持たないため、抗体点滴時にＩＴＰを発症しないと思われる。群３および４では、内因性マウス抗体がｈＩｇＧ１  Ｆｃドメインエピトープと反応してｈＩｇＧ１  Ｆｃ単量体ポリペプチドを架橋させるため、｛ｈＩｇＧ１  Ｆｃ−ｈＩｇＧ１  Ｆｃ｝ストラドマーポリペプチドとｈＩｇＧ１  Ｆｃ単量体ポリペプチドが両方ともＩＴＰを効果的に寛解させると想定される。これとは対照的に、内因性マウス抗体の非存在下では、ＩＴＰの寛解にあたって非架橋ＩｇＧ１  Ｆｃ単量体ポリペプチド（群５）よりも｛ｈＩｇＧ１  Ｆｃ−ｈＩｇＧ１  Ｆｃ｝ストラドマーポリペプチド（群６）のほうが効果的である。群７は、治療効果の陽性対照として機能する。
【０３１８】
実施例１５−ストラドマータンパク質の静注製剤を用いたＩＴＰの患者の治療（配列番号１８および２２）
一次免疫応答の血小板減少性紫斑病の診断と管理に関するExecutive Committee of the American Society of Hematologyの実務ガイドラインなどのＩＴＰ  ｈＩＶＩＧ療法の標準的なガイドラインに従う方法で、配列番号１７および２１でコードされる代表的なストラドマータンパク質を用いるＩＴＰの治療プロトコールを利用する。George, JN, et al. Idiopathic thrombocytopenic purpura: a practice guideline developed by explicit methods for the American Society of Hematology. Blood. 1996 Jul 1;88(1):3-40を参照のこと。また、the 2000 guidelines by Italian pediatric hematologists、the 2003 British hematologists guidelines、the 2006 Japanese pediatric hematologists guidelinesも参照のこと。あるいは、治療プロトコールの投与量の約０．１〜約０．００１倍の投与量での初期投与段階をＩＴＰ用のストラドマーＩＶプロトコールに含むようにしてもよい。低用量の初期段階は、長期的な抗炎症作用を十分に誘導できる状態を保ちつつ、ストラドマー投与によるあらゆる短期的な炎症誘発作用を最小限にするよう設計され、これを次の第二段階で上述した標準投与量に高めて維持する。この別の手法は、ストラドマーのいくつかの実施形態には、ＦｃγＲＩＩａの発現が減少することで、短期的な炎症作用と長期的な抗炎症作用の両方が生じる場合があることを論拠としたものである。１つまたは複数の初期の低用量を使用して、短期的な炎症作用を最小限に抑えつつ、長期的な抗炎症作用を刺激することが可能である。
【０３１９】
ストラドマーの有効用量は通常、ｈＩＶＩＧの有効用量の約０．０１％〜約１５％、一層好ましくは、ｈＩＶＩＧの有効用量の約０．１％〜約３％である。ＩＴＰにおけるｈＩＶＩＧの有効用量は通常、１０〜２１日ごとに投与される約１００ｍｇ／Ｋｇ〜約２グラム／Ｋｇの範囲である。
【０３２０】
ストラドマー静注製剤は、ＦＤＡ承認のｈＩＶＩＧ製剤と実質的に同じになるが、いくつかのｈＩＶＩＧ製剤に存在する安定剤が除外されることがある。たとえば、Baxter Healthcare Corporationによって流通され、ＩＴＰ療法用にＦＤＡで承認されているGammagard S/Dの製品インサート（product insert）を参照のこと。
【０３２１】
実施例１６−コアストラドマーの腹腔内投与を用いたＩＴＰの患者の治療
リポソームなどのコア部分に固定されたＦｃ断片に相当する代表的なストラドマータンパク質を用いるＩＴＰの治療プロトコールを、標準的な静脈内ＩＶＩＧプロトコールでの投与量の約１％から約０．００１％の投与量で腹腔内投与して利用する。この別の手法の論拠は、安定した製剤で腹腔に送達される固定Ｆｃ断片で構成されるコアストラドマーによって、ＩＶＩＧよりも実質的に低用量でこれと同様に単球由来のエフェクター細胞に影響する複数のＦｃドメインが得られる点にある。
【０３２２】
実施例１７−免疫学的に活性な生体模倣薬（ストラドボディ）の設計
２つのストラドボディを構成し、トランスフェクトした。それぞれのストラドボディについて、該当する抗体を発現するハイブリドーマ細胞系由来の全ＲＮＡからコードｃＤＮＡを合成した。ハイブリドーマ細胞系の樹立については当該技術分野において周知である。BD SMART（商標） RACE増幅キット（Clontech CA）によって、抗体の重鎖領域と軽鎖領域をコードする該当ｃＤＮＡの増幅を実施した。抗体のさまざまな領域の重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡの生成に、多数の他の方法を利用できる（Sassano, M. et. al., 1994. Nucleic Acids Res. May 11;22(9):1768-9；Jones, S.T., Bendig, M.M., 1991. Biotechnology (NY) Jan: 9(1):88-9）。ストラドボディを生成するには、オーバーラップエクステンションＰＣＲでの連結（HuttonおよびPease）によるか、適当な断片を融合するためのこれに適合する既存の制限部位を利用するかのいずれかの方法で、重鎖可変領域をストラドマーコンストラクトと融合させる。ＣＨＯ−Ｓ細胞でストラドボディタンパク質を発現させ、タンパク質Ａカラムアフィニティ精製によって細胞上清から単離する。該当する抗原に対する精製ストラドボディの結合を、この抗原を発現する細胞系を用いるフローサイトメトリー結合研究で確認する。
【０３２３】
エフェクターとしてＮＫ細胞、標的として抗原発現腫瘍細胞を、さまざまなエフェクター対標的比で用いる標準的なＡＤＣＣアッセイを利用して、同じＦａｂ領域を有するストラドボディとモノクローナル抗体（Ｍａｂ）が高および低抗原発現腫瘍細胞系に対するＡＤＣＣを誘導する潜在性を比較する。高エピトープ発現細胞系に対するＮＫアッセイではペアにしたＭａｂと同様の結果を示すが、低エピトープ発現細胞系に対するＮＫアッセイではペアにしたＭａｂよりも良好な結果を示すストラドボディを開発用に選択する。
【０３２４】
実施例１８−トラスツズマブの抗原結合ドメインを含むストラドボディの静注製剤を用いて乳癌の患者を治療
乳癌療法の標準的なガイドラインに従う方法で、ｈｅｒ２／ｎｅｕエピトープに対する活性を有する市販品のトラスツズマブ由来のＦａｂであるか、またはこれに類似したＦａｂを含む代表的なストラドボディを用いる乳癌用の治療プロトコールを利用する。Romond, EH et. al. Trastuzumab plus Adjuvant Chemotherapy for Operable HER2-Positive Breast Cancer. NEJM. 2005 Oct. 20; 353:1673-1684；Seidman, AD et. al. Weekly Trastuzumab and Paclitaxel Therapy for Metastatic Breast Cancer With Analysis of Efficacy by HER2 Immunophenotype and Gene Amplification. Journal of Clinical Oncology. Vol 19, Issue 10 (May), 2001: 2587- 2595；Vogel, CL et. al. Journal of Clinical Oncology. Vol 20, Issue 3 (February), 2002:719-726を参照のこと。
【０３２５】
ストラドボディの有効用量は通常、そのストラドボディとＦａｂが同じである有効モノクローナル抗体の約１％〜約５００％の範囲、一層好ましくは、モノクローナル抗体の有効用量の約５０％〜約１００％の範囲になると思われる。臨床癌治療でのモノクローナル抗体の有効用量はさまざまである。Ｈｅｒ−２  ｎｅｕモノクローナル抗体の場合、この用量は通常、７〜２１日ごとに投与される約２ｍｇ／Ｋｇ〜約４ｍｇ／Ｋｇの範囲である。
【０３２６】
実施例１９−セツキシマブの抗原結合ドメインを含むストラドボディの静注製剤を用いた頭頸部癌または結腸癌の患者の治療
頭頸部癌療法および結腸癌療法用の標準的なガイドラインに従う方法で、ＥＧＦＲエピトープに対する活性を有する市販品のセツキシマブ由来のＦａｂであるか、またはこれに類似したＦａｂを含む代表的なストラドボディを用いる乳癌用の治療プロトコールを利用できると思われる。Robert, F et. al. Phase I Study of Anti-Epidermal Growth Factor Receptor Antibody Cetuximab in Combination With Radiation Therapy in Patients With Advanced Head and Neck Cancer. Journal of Clinical Oncology, Vol 19, Issue 13 (July), 2001: 3234-3243；Bonner, JA et. al. Cetuximab prolongs survival in patients with locoregionally advanced squamous cell carcinoma of head and neck: A phase III study of high dose radiation therapy with or without cetuximab. Journal of Clinical Oncology, 2004 ASCO Annual Meeting Proceedings (Post-Meeting Edition).Vol 22, No 14S (July 15 Supplement), 2004: 5507；Shin, DM et. al. Epidermal Growth Factor Receptor-targeted Therapy with C225 and Cisplatin in Patients with Head and Neck Cancer. Clinical Cancer Research Vol. 7, 12041213, May 2001；Cunningham, D et al. Cetuximab Monotherapy and Cetuximab plus Irinotecan in Irinotecan-Refractory Metastatic Colorectal Cancer. NEJM. Volume 351:337-345, 2004を参照のこと。
【０３２７】
ＥＧＦＲ／ＨＥＲ１ストラドボディの有効用量は通常、そのストラドボディとＦａｂが同じである有効モノクローナル抗体の約１％〜約５００％の範囲、一層好ましくは、モノクローナル抗体の有効用量の約５０％〜約１００％の範囲になると思われる。臨床癌治療でのモノクローナル抗体の有効用量はさまざまである。ＥＧＦＲモノクローナル抗体の場合、この用量は通常、約２５０〜４００ｍｇ／平方メートルの範囲であり、これは約５ｍｇ／Ｋｇ〜２５ｍｇ／Ｋｇを７〜２１日ごとに投与することになる。
【０３２８】
実施例２０．グリコシル化が変化して多量体化が増えると免疫学的に活性な生体模倣活性を高められる
発現タンパク質のグリコシル化パターンは、タンパク質が発現される細胞系に左右される。タンパク質の発現と精製で一般に用いられているチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）では、たとえば、ヒト由来であって、同じく内因性タンパク質のタンパク質発現で一般に用いられているＨＥＫ２９３細胞とは異なるグリコシル化パターンが得られる。Ｆｃ断片およびクラスターストラドマー単位の結合特性がグリコシル化パターンに影響されることがあるため、ＣＨＯ以外の細胞系あるいは、Ｆｃ断片またはＦｃドメイン含有ペプチド間の凝集増大を促進するＮ−グリカンにグリコシル化パターンが変わるように遺伝子操作されたＣＨＯを含む細胞系での発現によって、多量体化を増し、結果として発現ペプチドの生物活性を高めることが可能である。グリコシル化パターンが変わってＦｃ断片または選択したクラスターストラドマー単位の多量体化が増すと、免疫学的に活性な生体模倣薬がｈＩＶＩＧの作用を模倣する機能が強まることがある。
【０３２９】
実施例２１．成熟ＤＣ（ｍＤＣ）をＩＶＩＧまたはｒＦｃＦ（組換えＦｃ断片）に曝露するとその表現型が変化するか？
この実験で使用予定のヒトＩｇＧ１由来のｒＦＣＦ断片を標準的な組換えタンパク質技術で作製した。ヒトｒＦＣＦの２つの鎖は各々、ヒトＩｇＧ１重鎖のヒンジ領域（１５アミノ酸）、ＣＨ２ドメイン（１１０アミノ酸）、ＣＨ３ドメイン（１０６アミノ酸）で構成されていた。
【０３３０】
Miltenyi ＭＡＣＳ分離カラムを用いて健常なヒトドナーの血液由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からＣＤ１４＋細胞を単離することが可能である。ＧＭＣＳＦ（８００ＩＵ／ｍＬ）およびＩＬ−４（５ｎｇ／ｍＬ）にて３７℃で５日間、細胞を最終濃度２×１０５／ｍＬで培養する。すべての培養で培養３日目に培地を交換する。５日目には、適当な培養にリポ多糖（ＬＰＳ；１０μｇ／ｍｌ）を加え、成熟ＤＣへの成熟を誘導する。成熟ＤＣは、実質的レベルのＣＤ１６、ＣＤ３２またはＣＤ６４を発現しないことが当該技術分野において周知である。続いて、これらの細胞をさらに２日間培養し、二次元蛍光フローサイトメトリー（ＦＦＣ）によって、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＤ１ａ、ＣＤ１４の発現についてアリコートを分析する。次に、ＬＰＳで培養した残りの細胞を可溶性またはコーティングされたＩＶＩＧまたはヒトｒＦｃＦ（すべて１０μｇ／ｍＬ）と一緒に３７℃で２４時間ウェルに入れ、採取し、上記にて列挙したマーカーの発現を二次元ＦＦＣで分析する。
【０３３１】
実験群は以下のとおりである。
（１）ＣＤ１４＋細胞；ＧＭ−ＣＳＦ；ＩＬ−４；ＬＰＳなし（「７ｄ−ＬＰＳ」）
（２）ＣＤ１４＋細胞：ＧＭ−ＣＳＦ；ＩＬ−４；ＬＰＳ（「７ｄ＋ＬＰＳ」）
（３）ＣＤ１４＋細胞；ＧＭ−ＣＳＦ；ＩＬ−４；ＬＰＳ；コーティングされたＩＶＩＧ（「ｃＩＶＩＧ」）
（４）ＣＤ１４＋細胞；ＧＭ−ＣＳＦ；ＩＬ−４；ＬＰＳ；可溶性ＩＶＩＧ（「ｓＩＶＩＧ」）
（５）ＣＤ１４＋細胞；ＧＭ−ＣＳＦ；ＩＬ−４；ＬＰＳ；コーティングされたｒＦｃＦ（「ｃＦｃ」）
（６）ＣＤ１４＋細胞；ＧＭ−ＣＳＦ；ＩＬ−４；ＬＰＳ；可溶性ｒＦｃＦ（「ｓＦｃ」）
（７）ＣＤ１４＋細胞；ＧＭ−ＣＳＦ；ＩＬ−４；ＬＰＳ（「対照」）
【０３３２】
実施例２２．コーティングされたＩＶＩＧにｉＤＣを曝露するとオプソニン化赤血球の貪食を阻害するか？
実施例２１で説明したようにして健常なヒトドナーのヒトＰＢＭＣからＣＤ１４＋細胞を精製し、コーティングされたＩＶＩＧまたは可溶性ＩＶＩＧの存在下または非存在下で、前の実施例で示した濃度にてＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４とともに３７℃で６日間培養する。細胞を採取した後、フルオレセインイソチオシアナート（ＦＩＴＣ）コンジュゲート抗Ｄ抗体をコーティングしていないまたはコーティングしたＲｈｏ陽性のヒト赤血球とともに、３７℃または４℃のいずれかで２時間インキュベートする。赤血球とのインキュベーション後、ＡＰＣコンジュゲートＣＤ１ａ用にＣＤ１４＋細胞を染色する。次に、側方散乱光（ＳＳＣ−Ａ）、前方散乱光（ＦＳＣ−Ａ）、ＦＩＴＣ蛍光（ＦＩＴＣ−Ａ）、ＡＰＣ蛍光（ＣＤ１ａ）を測定する二次元ＦＦＣで貪食を評価する。
【０３３３】
実施例２３．コーティングされたＩＶＩＧに曝露するとｉＤＣが同種異系間の混合リンパ球反応を刺激する能力が低下するか
前の実施例で説明したようにして、健常なヒトドナーの血液からＣＤ１４＋細胞を単離する。次に、これらの細胞を、可溶性ＩＶＩＧおよびコーティングされたＩＶＩＧの存在下または非存在下で、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４とともに３７℃で６日間培養する。すべての試薬の濃度は上述したとおりである。次に、細胞を採取し、９６ウェルのマイクロタイター組織培養プレートのウェルに、さまざまな数（最大用量は１ウェルあたり２．５×１０４）で蒔いた。ＣＤ１４＋細胞を単離したドナーとはＨＬＡ不適合である第２のヒトドナーのＰＢＭＣからＣＤ３＋Ｔ細胞を精製する。９６ウェルの組織培養プレートの各ウェルにＴ細胞を加える（１ウェルあたりＴ細胞１０５個）。５日間の共培養後、各培養ウェルに１μＣｉの３Ｈ−チミジンを加える。次に、培養をさらに６時間インキュベートし、３Ｈ−チミジンの取り込み（「ｃｐｍ」）を、培養での細胞増殖の度合いを示す指標として測定する。３通りのｉＤＣ抗原細胞個体群を試験する。１つは、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４のみを用いた培養によって生成したもの、もう１つはＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、コーティングされたＩＶＩＧを用いた培養によって生成したもの、残りはＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、可溶性ＩＶＩＧを用いた培養によって生成したものである。
【０３３４】
実施例２４．コーティングされたおよび可溶性ｒＦｃＦおよびＩＶＩＧにｉＤＣを曝露することが、ｉＤＣとｍＤＣによるサイトカイン発現に対しておよぼす作用
ＣＤ１４＋細胞、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４と、ｒＦｃＦ（コーティングされたものまたは可溶性）またはＩＶＩＧ（コーティングされたものまたは可溶性）のいずれかとを含む培養を、前の実施例で説明した条件下で準備する。細胞表面マーカーの発現、食細胞能力または同種異系ＭＬＲを刺激する能力の観点で細胞を試験する代わりに、細胞が産生するサイトカインを測定する。コーティングされたｒＦｃＦが、ＩＶＩＧと同様であるが可溶性ｒＦｃＦとは異なる方法で、細胞によるサイトカイン産生を調節すると想定される。よって、コーティングされたｒＦｃＦに細胞を曝露することで、炎症反応を阻害するサイトカイン（たとえば、インターロイキン４、インターロイキン−６、インターロイキン−１２）のレベルが高まると想定される。さらに、コーティングされたｒＦｃＦに細胞を曝露すると、炎症反応を強めるサイトカイン（たとえば、インターフェロン、インターロイキン−２３および腫瘍壊死因子−Ｉ）の細胞による産生レベルが低下すると想定される。
【０３３５】
実施例２５．組換えマウスＦｃ断片
標準的なクローニングおよび組換えタンパク質発現技術を用いて、マウスＩｇＧ２ａ由来の組換えＦｃ断片（ｒＦｃＦ）を産生した。マウスｒＦｃＦの２つの鎖は各々、マウスＩｇＧ２ａ重鎖のヒンジ領域（２１アミノ酸）と、ＣＨ２ドメイン（１１０アミノ酸）と、ＣＨ３ドメイン（１０７アミノ酸）とで構成されていた。マウスＩｇＧ２ａは、プレートウェルの壁面と底面にコーティングした場合に、ヒトｉＤＣアッセイにおいて活性であった。
【０３３６】
以上、本発明とその利点について詳細に説明してきたが、添付の特許請求の範囲に定義された本発明の趣旨および範囲を逸脱することなく、本明細書に対してさまざまな改変、置換および変更が可能であることは理解されたい。さらに、本出願の範囲は、明細書に記載のプロセス、機械、製造物、組成物、手段、方法および工程の特定の実施形態に限定されることを意図したものではない。当業者であれば本発明の開示内容から容易に分かるであろうように、本明細書に記載の対応する実施形態と実質的に同じ機能を果たす、あるいは実質的に同じ結果を達成する、現段階で存在するか、あるいは将来的に開発されるプロセス、機械、製造物、組成物、手段、方法または工程を、本発明に従って利用することができる。よって、添付の特許請求の範囲は、その範囲内に、このようなプロセス、機械、製造物、組成物、手段、方法または工程を含むことを意図している。本明細書で参照または引用したすべての米国特許および外国の特許、特許出願公開ならびに非特許文献（要約、科学雑誌の記事、書籍、製品カタログおよびマニュアルを含むがこれに限定されるものではない）について、その内容全体を本明細書に援用する。
参考文献の一覧
以下の参考文献全文を本明細書に援用する。
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22. 米国特許出願公開第２００６００７４２２５号
【図１Ａ】
0005600588.tif 000011
【図１Ｂ】
0005600588.tif 000012
【図１Ｃ】
0005600588.tif 000013
【図１Ｄ】
0005600588.tif 000014
【図２Ａ】
0005600588.tif 000015
【図２Ｂ】
0005600588.tif 000016
【図３Ａ】
0005600588.tif 000017
【図３Ｂ】
0005600588.tif 000018
【図４Ａ】
0005600588.tif 000019
【図４Ｂ】
0005600588.tif 000020
【図５Ａ】
0005600588.tif 000021
【図５Ｂ】
0005600588.tif 000022
【図６Ａ】
0005600588.tif 000023
【図６Ｂ】
0005600588.tif 000024
【図７Ａ】
0005600588.tif 000025
【図７Ｂ】
0005600588.tif 000026
【図７Ｃ】
0005600588.tif 000027
【図７Ｄ】
0005600588.tif 000028
【図８Ａ】
0005600588.tif 000029
【図８Ｂ】
0005600588.tif 000030
【図９Ａ】
0005600588.tif 000031
【図９Ｂ】
0005600588.tif 000032
【図１０Ａ】
0005600588.tif 000033
【図１０Ｂ】
0005600588.tif 000034
【図１０Ｃ】
0005600588.tif 000035
【図１０Ｄ】
0005600588.tif 000036
【図１１Ａ−Ｃ】
0005600588.tif 000037
【図１２Ａ−Ｂ】
0005600588.tif 000038
【図１３Ａ−Ｂ】
0005600588.tif 000039
【図１４Ａ】
0005600588.tif 000040
【図１４Ｂ】
0005600588.tif 000041
【図１５Ａ】
0005600588.tif 000042
【図１５Ｂ】
0005600588.tif 000043
【図１５Ｃ】
0005600588.tif 000044
【図１６Ａ】
0005600588.tif 000045
【図１６Ｂ】
0005600588.tif 000046
【図１７】
0005600588.tif 000047
【図１８Ａ】
0005600588.tif 000048
【図１８Ｂ】
0005600588.tif 000049
【図１９Ａ】
0005600588.tif 000050
【図１９Ｂ】
0005600588.tif 000051
【図２０】
0005600588.tif 000052
【図２１Ａ】
0005600588.tif 000053
【図２１Ｂ】
0005600588.tif 000054
【図２２Ａ】
0005600588.tif 000055
【図２２Ｂ】
0005600588.tif 000056
【図２２Ｃ】
0005600588.tif 000057
【図２３Ａ】
0005600588.tif 000058
【図２３Ｂ】
0005600588.tif 000059
【図２４Ａ】
0005600588.tif 000060
【図２４Ｂ】
0005600588.tif 000061
【図２４Ｃ】
0005600588.tif 000062
【図２４Ｄ】
0005600588.tif 000063
【図２４Ｅ】
0005600588.tif 000064
【図２４Ｆ】
0005600588.tif 000065
【図２４Ｇ】
0005600588.tif 000066
【図２４Ｈ】
0005600588.tif 000067
【図２４Ｉ】
0005600588.tif 000068
【図２４Ｊ】
0005600588.tif 000069
【図２４Ｋ】
0005600588.tif 000070
【図２５】
0005600588.tif 000071
【配列表】
0005600588000001.app