(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一の治療剤が、式
【化１】
0005439363.tif 000015
で示される、［４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル]−５−クロロチオフェン−２−イル−スルホニルウレア又はその薬学的に許容される塩であり；
第二の治療剤が、ベトリキサバン又はその薬学的に許容される塩、ＹＭ−１５０、Ｄａｉｉｃｈｉ  ＤＵ−１７６ｂ、Ｎ-｛（１Ｒ）−２−［４−（１−メチル−４−ピペリジニル）−１−ピペラジニル］−２−オキソ−１−フェニルエチル｝−１Ｈ−インドール−６−カルボキサミド、アピキサバン、リバロキサバン、オタミキサバン、ラザクサバン、ＡＺＤ０８３７、ＲＢ２００６、キシメラガトラン、ダビガトラン、ビバリルジン、アルガトロバン、レピルジン、フェノクマロール、フォンダパリヌクス、イドラパリナクス、ビオチン化イドラパリナクス、ダナパロイド、エノキサパリン、ダルテパリン、抗第ＸＩ因子抗体、アブシキシマブ、エプチフィバチド、チロフィバン、ジピリダモール、アグレノックス、シロスタゾール、イフェトロバン、イスボグレル、フレグレラート、レスベラトロール、オザグレル、
【化２】
0005439363.tif 000016
及びそれらの組合せから選択されるものであり；
望ましくない血栓症により特徴づけられるホ乳類の病態を治療するために、第二の治療剤と共に用いるための第一の治療剤を含む医薬組成物。
【請求項２】
第二の治療剤が、ＹＭ−１５０、Ｄａｉｉｃｈｉ  ＤＵ−１７６ｂ、Ｎ-｛（１Ｒ）−２−［４−（１−メチル−４−ピペリジニル）−１−ピペラジニル］−２−オキソ−１−フェニルエチル｝−１Ｈ−インドール−６−カルボキサミド、アピキサバン、リバロキサバン、オタミキサバン、ラザクサバン、
【化３】
0005439363.tif 000017
からなる群から選択されるものである請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
第二の治療剤が、ベトリキサバン又はその薬学的に許容される塩である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項４】
ベトリキサバンの薬学的に許容される塩が、マレイン酸塩である請求項３記載の医薬組成物。
【請求項５】
第二の治療剤が、ＡＺＤ０８３７、ＲＢ２００６、キシメラガトラン、ダビガトラン、ビバリルジン、アルガトロバン、レピルジン、フェノクマロール、フォンダパリヌクス、イドラパリナクス、ビオチン化イドラパリナクス、ダナパロイド、エノキサパリン、ダルテパリン、及び抗第ＸＩ因子抗体からなる群から選択される請求項１記載の医薬組成物。
【請求項６】
第二の治療剤がビバリルジンである請求項１記載の医薬組成物。
【請求項７】
第二の治療剤が抗第ＸＩ因子抗体である請求項１記載の医薬組成物。 
【請求項８】
第二の治療剤が、アブシキシマブ、エプチフィバチド、チロフィバン、ジピリダモール、アグレノックス、シロスタゾール、イフェトロバン、イスボグレル、フレグレラート、レスベラトロール及びオザグレルからなる群から選択されるものである請求項１記載の医薬組成物。
【請求項９】
第二の治療剤が、ビバリルジン、イフェトロバン、リバロキサバン及びアピキサバンからなる群から選択される請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１０】
第二の治療剤が、イフェトロバンである請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１１】
第一の治療剤が、式
【化４】
0005439363.tif 000018
で示される、［４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル]−５−クロロチオフェン−２−イル−スルホニルウレア又はその薬学的に許容される塩であり；
第二の治療剤が、ベトリキサバン又はその薬学的に許容される塩である；
望ましくない血栓症により特徴づけられるホ乳類の病態を治療するために、第二の治療剤と共に用いるための第一の治療剤を含む医薬組成物。
【請求項１２】
ベトリキサバンの薬学的に許容される塩が、マレイン酸塩である請求項１１記載の医薬組成物。
【請求項１３】
少なくとも一つの治療剤が、治療量以下の用量である請求項１ないし１２のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項１４】
両方の治療剤が、治療量以下の用量である請求項１ないし１２のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項１５】
二つの治療剤を、同時に投与する請求項１ないし１２のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項１６】
二つの治療剤を、連続して投与する請求項１ないし１２のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項１７】
更に第三の治療剤であるアセチルサリチル酸と共に用いるための、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１８】
第二の治療剤が、ベトリキサバン又はその薬学的に許容される塩である請求項１７記載の医薬組成物。
【請求項１９】
ベトリキサバンの薬学的に許容される塩が、マレイン酸塩である請求項１８記載の医薬組成物。
【請求項２０】
少なくとも一つの治療剤が、治療量以下の用量である請求項１７ないし１９のいずれか記載の医薬組成物。 
【請求項２１】
三つの治療剤を、同時又は連続的に投与する請求項１７ないし１９のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項２２】
［４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル]−５−クロロチオフェン−２−イル−スルホニルウレアの薬学的に許容される塩が、カリウム塩又はナトリウム塩である請求項１ないし２１のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項２３】
該血栓症関連疾患が、急性心筋梗塞、不安定狭心症、慢性安定狭心症、一過性脳虚血発作、脳卒中、末梢血管疾患、子癇前症／子癇、深部静脈血栓症、塞栓症、播種性血管内凝固及び血小板減少性紫斑病、血栓症及び再狭窄合併症(侵襲的手技、例えば、血管形成、頚動脈内膜剥離術、ＣＡＢＧ(冠動脈バイパス移植)術後、血管移植術、ステント留置、並びに血管内装置及び人工器官の挿入によるものを含む)からなる群から選択されるものである請求項１ないし２１のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項２４】
薬学的に許容される担体及び以下の治療剤：
（１）式
【化５】
0005439363.tif 000019
で示される、［４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル]−５−クロロチオフェン−２−イル−スルホニルウレア又はその薬学的に許容される塩である第一の治療剤；及び
（２）ベトリキサバン又はその薬学的に許容される塩、ＹＭ−１５０、Ｄａｉｉｃｈｉ  ＤＵ−１７６ｂ、Ｎ-｛（１Ｒ）−２−［４−（１−メチル−４−ピペリジニル）−１−ピペラジニル］−２−オキソ−１−フェニルエチル｝−１Ｈ−インドール−６−カルボキサミド、アピキサバン、リバロキサバン、オタミキサバン、ラザクサバン、ＡＺＤ０８３７、ＲＢ２００６、キシメラガトラン、ダビガトラン、ビバリルジン、アルガトロバン、レピルジン、フェノクマロール、フォンダパリヌクス、イドラパリナクス、ビオチン化イドラパリナクス、ダナパロイド、エノキサパリン、ダルテパリン、抗第ＸＩ因子抗体、アブシキシマブ、エプチフィバチド、チロフィバン、ジピリダモール、アグレノックス、シロスタゾール、イフェトロバン、イスボグレル、フレグレラート、レスベラトロール、オザグレル、
【化６】
0005439363.tif 000020
及びそれらの組合せからなる群から選択される第二の治療剤；
を含む医薬組成物。
【請求項２５】
第二の治療剤が、ＹＭ−１５０、Ｄａｉｉｃｈｉ ＤＵ-１７６ｂ、Ｎ-｛（１Ｒ）−２−［４−（１−メチル−４−ピペリジニル）−１−ピペラジニル］−２−オキソ−１−フェニルエチル｝−１Ｈ−インドール−６−カルボキサミド、アピキサバン、リバロキサバン、オタミキサバン、ラザキサバン、フォンダパリヌクス、イドラパリナクス、ビオチン化イドラパリナクス、ダナパロイド、エノキサパリン、ダルテパリン、抗第ＸＩ因子抗体、ＡＺＤ０８３７、ＲＢ２００６、キシメラガトラン、ダビガトラン、ビバリルジン、アルガトロバン、レピルジン、フェノクマロールからなる群、又は以下の群：
【化７】
0005439363.tif 000021
から選択されるものである請求項２４記載の医薬組成物。 
【請求項２６】
第二の治療剤が、ベトリキサバン又はその薬学的に許容される塩である請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項２７】
ベトリキサバンの薬学的に許容される塩が、マレイン酸塩である請求項２６記載の医薬組成物。
【請求項２８】
第二の治療剤が、抗第ＸＩ因子抗体である請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項２９】
第二の治療剤が、アブシキシマブ、エプチフィバチド、チロフィバン、ジピリダモール、アグレノックス、シロスタゾール、イスボグレル、イフェトロバン、レスベラトロール、フレグレラート及びオザグレルからなる群から選択されるものである請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項３０】
第二の治療剤がビバリルジンである、請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３１】
第二の治療剤がイフェトロバンである、請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３２】
薬学的に許容される担体及び以下の治療剤：
（１）式
【化８】
0005439363.tif 000022
で示される、［４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル]−５−クロロチオフェン−２−イル−スルホニルウレア又はその薬学的に許容される塩；及び
（２）ベトリキサバン又はその薬学的に許容される塩；
を含む医薬組成物。
【請求項３３】
ベトリキサバンの薬学的に許容される塩がマレイン酸塩である、請求項３２記載の医薬組成物。
【請求項３４】
二つのうち少なくとも一つの治療剤が、治療量以下の用量である請求項２４ないし３３のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項３５】
二つの治療剤が、いずれも治療量以下の用量である請求項２４ないし３３のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項３６】
組成物が更にアセチルサリチル酸を含有する、請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項３７】
第二の治療剤が、ベトリキサバン又はその薬学的に許容される塩である、請求項３６記載の医薬組成物。
【請求項３８】
ベトリキサバンの薬学的に許容される塩が、マレイン酸塩である請求項３７記載の医薬組成物。
【請求項３９】
少なくとも一つの治療剤が、治療量以下の用量である請求項３６ないし３８のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項４０】
すべての治療剤が、治療量以下の用量である請求項３６ないし３８のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項４１】
［４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル]−５−クロロチオフェン−２−イル−スルホニルウレアの薬学的に許容される塩が、カリウム塩又はナトリウム塩である、請求項２４ないし３８のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項４２】
望ましくない血栓症により特徴づけられるホ乳類の病態を治療するための請求項２４ないし３８のいずれか記載の医薬組成物。
【請求項４３】
（１）第一の容器に、式
【化９】
0005439363.tif 000023
で示される、［４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル]−５−クロロチオフェン−２−イル−スルホニルウレア、又はそれらの薬学的に許容される塩である第一の治療剤を含む第一の容器；及び
（２）第二の容器に、ベトリキサバン又はその薬学的に許容される塩、ＹＭ−１５０、Ｄａｉｉｃｈｉ  ＤＵ−１７６ｂ、Ｎ-｛（１Ｒ）−２−［４−（１−メチル−４−ピペリジニル）−１−ピペラジニル］−２−オキソ−１−フェニルエチル｝−１Ｈ−インドール−６−カルボキサミド、アピキサバン、リバロキサバン、オタミキサバン、ラザクサバン、ＡＺＤ０８３７、ＲＢ２００６、キシメラガトラン、ダビガトラン、ビバリルジン、アルガトロバン、レピルジン、フェノクマロール、フォンダパリヌクス、イドラパリナクス、ビオチン化イドラパリナクス、ダナパロイド、エノキサパリン、ダルテパリン、抗第ＸＩ因子抗体、アブシキシマブ、エプチフィバチド、チロフィバン、ジピリダモール、アグレノックス、シロスタゾール、イフェトロバン、イスボグレル、フレグレラート、レスベラトロール、オザグレル、
【化１０】
0005439363.tif 000024
及びそれらの組合せから選択される第二の治療剤を含む第二の容器；
を含むキット。
【請求項４４】
二つの治療剤が同時に使用可能であることを記載した説明書が含まれている請求項４３記載のキット。
【請求項４５】
第２の治療剤が、ビバリルジン、イフェトロバン、リバロキサバン又はアピキサバンである請求項４４に記載のキット。
【請求項４６】
（１）第一の容器に、
【化１１】
0005439363.tif 000025
である［４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル]−５−クロロチオフェン−２−イル−スルホニルウレア、又はそれらの薬学的に許容される塩である第一の治療剤を含む第一の容器；及び
（２）第二の容器に、ベトリキサバン又はその薬学的に許容される塩である第二の治療剤を含む第二の容器；
を含むキット。
【請求項４７】
ベトリキサバンの薬学的に許容される塩が、マレイン酸塩である請求項４６記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願のクロスレファレンス
本願は、２００５年９月１２日に出願された６０／９１５，６４９、２００７年５月３日に出願された６０／９１５，９１１、２００７年７月３日に出願された６０／９４７，９２１および２００７年１０月９日に出願された６０／９７８，７００の米国仮特許出願について、３５ＵＳＣ第１１９条（e）による利益を主張し、その全体が本明細書で引用される。
【０００２】
本発明は、血小板ＡＤＰ受容体阻害剤である[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア（化合物Ａ）と抗凝血剤または他の抗血小板剤を併用する新規な血栓症治療用医薬組成物および方法に関する。本発明は、また、化合物Ａと抗凝血剤および他の抗血小板剤とを併用する新規な血栓症治療用医薬組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
血栓性合併症は、先進工業国における主な死因である。これらの合併症の例には、急性心筋梗塞、不安定狭心症、慢性安定狭心症、一過性脳虚血発作、脳卒中、末梢血管疾患、子癇前症／子癇、深部静脈血栓症、塞栓症、播種性血管内凝固および血小板減少性紫斑病が含まれる。血栓症および再狭窄合併症はまた、侵襲的手技、例えば、血管形成、頚動脈内膜剥離術、ＣＡＢＧ（冠動脈バイパス移植）術後、血管移植術、ステント留置、並びに血管内装置および人工器官の挿入の後に起こるものを含む。一般に血小板凝集は、これらの疾患において重要な役割を果たすと考えられている。血小板は、通常血管中を自由に循環しているが、活性化され、アテローム性動脈硬化症によって、または血管形成といった侵襲性の手技によって血流が断絶することにより凝集して血栓を形成し、血管閉塞につながる。
【０００４】
血小板活性化および凝集の重要な媒体はＡＤＰ（アデノシン ５−二リン酸）である。ここで、ＡＤＰは、様々な媒体、例えば、コラーゲンおよびトロンビン、および傷ついた血液細胞、内皮細胞または組織によって活性化され、血管中の血小板から放出される。ＡＤＰの活性化によって、より多くの血小板が動員され、すでに存在する血小板凝集体の安定化をもたらす。アデノシンヌクレオチドは、血小板膜上に発現するＰ２プリン受容体を通じて血小板活性化シグナルによって放出される（Mills， D.C. Thromb. Haemost. １９９６， ７６：８３５−５６； Gachet， C. Annu Rev Pharmacol Toxicol ２００６， ４６：２７７−３００）。Ｐ２受容体は、イオンチャネル内蔵型受容体（Ｐ２Ｘ）またはＰ２Ｙ受容体と呼ばれるＧタンパク共役受容体に分類される（Abbrachio， M.P.， Burnstock， G. Pharmacol Ther １９９４， ６４：４４５−７５）。初期には、単一の受容体を介してのみ効果を及ぼすと考えられてきたが（Ｐ２ＹＡＤＰと呼ぶ（Fredholm， B.B. et al， TIPS １９９７， １８：７９−８２））、近時ＡＤＰは、２つのＧＰＣＲ、すなわち、Ｇｑタンパク質共役型Ｐ２Ｙ１受容体およびＧｉタンパク質共役型Ｐ２Ｙ１２受容体を通じて血小板に作用することが示された。Ｐ２Ｙ１２受容体は発現クローニングを通じて特定され（Hollopter， G. et al， Nature ２００１， ４０９：２０２−０７）、血栓症の安定化に重要な役割を果たすことが示された（Andre， P. et al， J Clin Inves， ２００３， １１２：３９８−４０６）。そして、Ｐ２Ｙ１２受容体はチエノピリジン薬例えば、チクロピンおよびクロピドグレルといった薬物の標的となっている。一方、ＡＴＰは、血小板に発現するイオンチャネル内臓型受容体Ｐ２Ｘ１受容体を介して作用する（Gachet， C. Annu Rev Pharmacol Toxicol ２００６， ４６：２７７−３００）。
【０００５】
２００６年１２月３日に出願された、発明の名称が「[４−（６−ハロ−７−置換−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア」および剤形およびそれらに関する方法」の米国特許公報ＵＳ２００７／０１２３５４７については、ここにその内容全体を引用する。それには、以下の化学構造：
【化１】
0005439363.tif 000002
を有する血小板ＡＤＰ受容体阻害剤の化合物[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア（化合物Ａ）が示されており、これは特異的Ｐ２Ｙ１２アンタゴニストとして作用する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
急性冠症候群の治療には、抗血小板および抗凝血剤の同時投与が必要となる。併用により有効性が上がり、安全性プロフィールが改善する。このように、抗血小板剤および抗凝血剤を組み合わせた効果の促進された併用治療が必要とされている。また、併用治療により改善された安全性プロフィールを示すであろうため、それぞれの薬剤の投与量をより低容量（例えば、治療量以下）とする併用治療も必要とされている。
【０００７】
また、異なるメカニズムで働く二つの抗血小板剤の組み合わせ（例えば、Ｐ２Ｙ１２アンタゴニスト（化合物Ａ）およびcox−１阻害剤（アスピリン））を、他の抗凝血剤と組み合わせる、例えば、三剤併用剤（クロピドグレル、アスピリンおよびヘパリン）が、近時病院では血管形成手術において用いられている（別々の形態で）、他のいずれの単剤またはこれらのうちの二つの併用剤よりも有効であることがわかった。
発明の概要
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、以下の化学構造：
【化２】
0005439363.tif 000003
を有するＰ２Ｙ１２アンタゴニストを含む併用治療剤の方法および医薬組成物を提供する。その化学名は、[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレアであり、本明細書中「化合物Ａ」と呼ぶ。
【０００９】
化合物Ａと抗凝血剤、例えば、第Ｘａ因子阻害剤、および／または、他の抗血小板剤、例えばシクロオキシゲナーゼ阻害剤、との組み合わせは、いずれの単剤よりも改善された抗血栓効果を示すという実験的な結果に基づいて設計されている。
【００１０】
本発明は、哺乳類の好ましくない血栓症の病態の治療において、当該哺乳類に治療上の有効量の化合物Ａ（[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア）またはその薬学的に許容される塩、および治療上有効な量の他の治療剤を投与することを含む新規な治療方法を提供する。他の治療上有効な薬剤は、抗凝血剤、抗血小板剤、またはそれらの併用剤から選択される。
【００１１】
本発明の一つの目的は、[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア（化合物Ａ）、またはその薬学的に許容される塩、および抗凝血剤の治療上の有効量を該哺乳類に投与することを含む血栓症または血栓関連疾患の新規な予防または治療方法を提供することである。具体例としては、抗凝血剤は、第Ｘａ因子の特異的阻害剤、［２−(｛４−［（ジメチルアミノ）イミノメチル］フェニル｝カルボニルアミノ）−５−メトキシフェニル]−Ｎ−（５−クロロ（２−ピリジル））カルボキサミド（ベトリキサバン、後述参照）、またはその薬学的に許容される塩である。
【化３】
0005439363.tif 000004
【００１２】
本発明の他の目的は、[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩、および他の抗血小板剤の治療上の有効量を哺乳類に対して投与することを含む血栓症および／または関連する病態の新規な予防または治療方法を提供することである。
【００１３】
更に別の本発明の目的は、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩、および抗凝血剤および他の抗血小板剤の治療上の有効量を哺乳類に対して投与することを含む血栓症および／または血栓症に関連する病態の新規な予防または治療方法を提供することである。
【００１４】
本発明は、薬学的に許容される担体、化合物Ａ、[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレアまたはその薬学的に許容される塩、および治療上有効な量の他の治療剤を含む新規な医薬組成物を提供することである。他の治療上有効な薬剤は、抗凝血剤、抗血小板剤、またはそれらの併用剤から選択される。
【００１５】
本発明の別の目的は、薬学的に許容される担体、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩、および抗凝血剤を含む新規な医薬組成物を提供することである。具体的態様としては、抗凝血剤には、ベトリキサバンまたはその薬学的に許容される塩がある。
【００１６】
本発明の別の目的は、薬学的に許容される担体、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩、および他の抗血小板剤を含む新規な医薬組成物を提供することである。
【００１７】
本発明の更に別の目的は、薬学的に許容される担体、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩、抗凝血剤、および他の抗血小板剤を含む新規な医薬組成物を提供することである。
【００１８】
本発明は、新規なキットを提供する。キットの最初の容器には、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩、および２つ目の容器には、抗凝血剤、化合物Ａ以外の抗血小板剤およびそれらの併用剤から選択される他の治療剤を含む。
【００１９】
本発明の、これらおよび他の具体例は、文脈に従いさらに詳述する。
【００２０】
本発明の医薬組成物は、以下に示す一つまたはそれ以上の効果に関して、相乗効果を意図して提供される。それは、治療結果の改善、安全性の改善、一つまたはそれ以上の薬剤の併用によって、それぞれを単独で用いたときに同じ効果を得るのに必要とされる薬剤の用量に比べ、同等の効果をより少ない用量で達成することである。
図面の簡単な説明
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、血栓形成阻害率を示す。１．１μＭの化合物Ａおよび血液凝固第Ｘａ因子阻害剤であるベトリキサバンを用い、灌流チャンバーアッセイにより、ベトリキサバンの濃度を１００ｎＭないし１.１μＭに変化させて行った。
【００２２】
【図２】図２は、用量依存的な血栓症の阻害効果を示す。コラーゲンコーティングしたヒトの全血を用いた灌流において、化合物Ａの濃度を固定し、併用するベトリキサバンの濃度を３ｎＭないし１.１μＭに変化させて行った。
【００２３】
【図３】図３は、用量依存的な血栓症の阻害効果を示す。コラーゲンコーティングしたヒトの全血を用いた灌流において、併用する化合物Ａの濃度を変化させ、ベトリキサバンの濃度を固定して行った。
【００２４】
【図４】図４は、血小板を介したトロンビン生成の阻害効果を示す。化合物Ａによる血小板Ｐ２Ｙ１２受容体阻害、および、第Ｘａ因子阻害剤ベトリキサバンによる血液凝固阻害の、両薬剤の併用による効果を示す。
【００２５】
【図５】図５は、血液凝固第ＸＩ因子阻害剤（抗第ＸＩ因子抗体）および化合物Ａの併用による血小板血栓形成阻害効果を示す。いずれか単剤の投与では、阻害効果を示さなかった。
【００２６】
【図６】図６は、化合物Ａおよび血液凝固第ＸＩ因子阻害剤（抗ＸＩ因子抗体）の併用によるコラーゲン組織因子表面における血小板血栓形成阻害効果を示す。化合物Ａ単剤または化合物Ａおよびベトリキサバンの併用では、阻害効果を示さなかった。
【００２７】
【図７】図７は、動脈せん断条件下での、化合物Ａを直接的トロンビン阻害剤ビバリルジン（１２μｇ／ｍＬ）と併用した場合における血栓形成の阻害効果を示す。
【００２８】
【図８】図８は、全血灌流チャンバーアッセイによる、第Ｘａ因子阻害剤（５μＭのＣ９２１−７８（参考文献は、Betz A.， Wong P.W.， Sinha U. Inhibition of factor Ｘａ by a peptidyl−alpha−ketothiazole involves ２ steps： evidence for a stabilizing conformational change. Biochemistry １９９９； ３８： １４５８２−１４５９１であり、全体をここに組み込む。））存在下、化合物Ａおよびアスピリンの併用による血栓形成阻害効果を示す。
【００２９】
【図９】図９は、第Ｘａ因子阻害剤（５μＭのＣ９２１−７８）存在下、化合物ＡによるＰ２Ｙ１２の阻害およびイフェトロバンによるＴＰ受容体阻害による効果を示す。ヒトの全血灌流チャンバーアッセイによる血栓形成阻害効果である。
【００３０】
【図１０】図１０−１３は、化合物Ａの生体顕微鏡検査モデルにおける効果を示す。図１０は、化合物Ａが生体顕微鏡検査モデルにおいて、最初の血栓の出現時間を遅らせたことを示す。
【００３１】
【図１１】図１１は、化合物Ａの最初の血栓形成の遅延時間に関する薬物速度論および薬物動態（ＰＫ／ＰＤ）相関を示す。
【図１２】図１２は、化合物Ａによる血管閉塞の阻害効果を示す。
【図１３】図１３は、化合物Ａによる血管閉塞阻害効果に関する薬物速度論および薬物動態（ＰＫ／ＰＤ）相関を示す。
【図１４】図１４−１７は、化合物Ａおよびベトリキサバンの併用による、同じ生体顕微鏡検査モデルによる効果を示す。図１４および１５は、化合物Ａおよびベトリキサバンの非有効用量を併用した場合における顕著な最初の血栓の出現時間の遅延を示す。
【図１５】図１４−１７は、化合物Ａおよびベトリキサバンの併用による、同じ生体顕微鏡検査モデルによる効果を示す。図１４および１５は、化合物Ａおよびベトリキサバンの非有効用量を併用した場合における顕著な最初の血栓の出現時間の遅延を示す。
【図１６】図１４−１７は、化合物Ａおよびベトリキサバンの併用による、同じ生体顕微鏡検査モデルによる効果を示す。図１６および１７は、化合物Ａおよびベトリキサバンの非有効用量を併用した場合における血栓症の顕著な阻害効果を示す。
【図１７】図１４−１７は、化合物Ａおよびベトリキサバンの併用による、同じ生体顕微鏡検査モデルによる効果を示す。図１６および１７は、化合物Ａおよびベトリキサバンの非有効用量を併用した場合における血栓症の顕著な阻害効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
発明の詳細な説明
本発明は、化合物Ａを同時投与する薬剤と併用することによる哺乳類の血栓症および血栓症関連疾患の予防および治療の方法および医薬組成物に関する。詳述する前に、以下の言葉を定義する。
【００３３】
Ｉ．定義
本明細書および特許請求の範囲において、単数形の用語、不定冠詞の「ある（ａ）、（an）」および「その（ｔｈｅ）」は、文中で明らかに指示しない限り複数の指示対象を含む。例えば、「ある（ａ）薬学的に許容される担体」とは、組成物中２つまたはそれ以上の薬学的に許容される担体を含むこと、等がある。
【００３４】
意図した使用または作用メカニズムに基づく特定の治療剤の分類は、当業者における一般的な知識に基づいて行ったのであり、分類の目的のためだけに行っている。主張したメカニズムは、文中で明らかに指示しない限り、その治療剤が限定的に使用されることを意図しているのではない。いくつかの治療剤は、２つまたはそれ以上のメカニズムを通して、２つまたはそれ以上の病態の治療に作用する。それぞれのカテゴリーに加えられる特定の薬剤は例示であり、本発明の範囲を限定することを意図しているのではない。
【００３５】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」とは、該構成物を列挙した要素を含め、構成物および方法を意味するが、その他を除くものではない。「本質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、構成物および方法を特定する場合に用い、意図した用途の併用に本質的に重要な組み合わせ以外の他の要素は、除いてもよい。それゆえ、ここに定義されている要素から本質的になる組成物は、他の微量混入物質を除くものではない。ここで混入物質とは、単離および精製からの混入物質および薬学的に許容される担体、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、生理食塩水、保存料などがある。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」とは、他の内容物の微量の要素を含まず、本発明の組成物を投与するための本質的な方法手段をいう。これらの変異用語で定義される態様は、本発明の範囲に含まれる。
【００３６】
「治療」または「治療する」とは、対象（例えば哺乳類）の疾患または病態の処置を含む。例えば、１）疾患または病態を予防または保護すること、つまり、臨床症状の進行をさせないこと、２）疾患または病態を阻害すること、つまり、臨床症状の進行を阻害するまたは抑制すること、および／または、３）疾患または病態を緩和すること、つまり、臨床症状を軽減させることをいう。
【００３７】
本明細書中、用語「予防する」とは、患者に予防的な処置をすることをいう。予防的な処置は、適切な用量の治療剤を疾患に罹患するおそれのある対象に投与することを含む。それにより、実質的に疾患の発症を防ぐことをいう。
【００３８】
当業者であれば理解することができることであるが、ヒトの治療剤は、「予防」および「抑制」を区別することが常に可能なわけではない。完全に誘因が知られていないこと、潜伏期間、または患者がいつ発症したか、発症してからずいぶん経つまで認識していないこともある。そこでここでは、「予防」は「治療」の要素であり、「予防」および「抑制」の要素を含み、「保護」には「予防」を含むこととする。
【００３９】
用語「哺乳類」は、ヒト、サル、ウサギ、ネズミ、家畜（例えば、イヌおよびネコ）、牧場の家畜（例えば、乳牛、ウマ、またはブタ）および実験動物を含み、これに限られない。
【００４０】
用語「病態」は、本発明の方法および組成物を用いるための疾患の状態を示す。
【００４１】
本明細書中「血栓症および血栓症関連疾患」とは、以下のものであってもよいが、それに限定されるものではない。あらゆる血栓症、特に血小板−依存性血栓症、例えば、急性心筋梗塞、不安定狭心症、慢性不安定狭心症、一過性脳虚血発作、脳卒中、末梢血管疾患、子癇前症／子癇、深部静脈血栓症、塞栓症、播種性血管内凝固および血小板減少性紫斑病が含まれる。血栓症および再狭窄合併症はまた、侵襲的手技、例えば、血管形成、頚動脈内膜剥離術、ＣＡＢＧ（冠動脈バイパス移植）術後、血管移植術、ステント留置、並びに血管内装置および人工器官の挿入によるもの、および素因遺伝子または癌に関連した凝固能高進状態を含む。
【００４２】
「[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア」または「化合物Ａ」は、以下の
【化４】
0005439363.tif 000005
の構造およびその互変異性体を含む化合物をいう。
【００４３】
「治療上の有効量」とは、標的とする疾患または病態の治療に、化合物Ａまたは本発明において同時投与した薬剤を併用投与した場合に、有効な量をいう。治療上の有効量は、以下の要素の特異的な組み合わせにより変化する。治療すべき対象および疾患の状態、対象の体重および年齢、疾患の状態の重症度、投与計画、投与のタイミング、投与の方法等であるが、これらはすべて、通常の当業者であれば速やかに決定できる。
【００４４】
いくつかの具体的態様としては、化合物Ａまたは同時投与した薬剤を併用する場合における治療上の有効量は、それぞれを単剤で投与した場合の有効量よりも少ないことがある。この場合、治療上の有効量を、「治療量以下の投与量」という。それゆえ、「治療量以下の投与量」とは、単剤で用いた場合の最適投与量よりも低容量であることを意味するが、併用した場合には治療効果を有することを本明細書中では意味する。
【００４５】
「抗凝血薬剤(Anticoagulant agents)」または「抗凝血剤(anticoagulants)」は、凝血塊の形成を妨げる薬剤である。抗凝血薬剤の例は、これに限られるものでないが、トロンビン、第ＩＸａ因子、第Ｘａ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子または第ＶＩＩａ因子の特異的阻害剤、ヘパリンおよび誘導体、ビタミンＫアンタゴニスト、および、抗組織因子抗体、これだけでなく、Ｐ−セレクチンおよびＰＳＧＬ−１阻害剤がある。トロンビン特異的阻害剤には、ヒルジン、ビバリルジン（アンジオマックス（登録商標））、アルガトロバン、キシメラガトラン（エグザンタ（登録商標）、構造式は後述を参照）、ダビガトラン（構造式は後述を参照）、ＡＺＤ０８３７（ＡＺＤ０８３７は、経口の直接的トロンビン阻害剤であり、経口徐放性製剤として、臨床試験Ａにあり、対照臨床試験、無作為化臨床試験、並行群間比較、他施設共同安全性確認試験が行われている。Ｔａｋｅ ＶＫＡ治療の適性はあるが受けられない／受けることを望まない心房細動の患者の脳卒中および収縮性塞栓症の予防について行われている。臨床試験政府識別番号：ＮＣＴ００６２３７７９。）、ＲＢ２００６（一本鎖、核酸アプタマー、レガドバイオサイエンス社製、Durham, NC。参考文献は、Dyke， C.K. et al.， First−in−Human Experience of an Antidote−Controlled Anticoagulant Using RNA Aptamer Technology， Circulation ２００６；１１４：２４９０−２４９７。）、およびレピルジン（レフルダン（登録商標））がある。ヘパリンおよび誘導体の例としては、未分画ヘパリン（ＵＦＨ）、低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）、たとえばエノキサパリン（ラブノックス（登録商標））、ダルテパリン（フラグミン（登録商標））、およびダナパロイド（オルガラン（登録商標））；および合成五糖、例えば、フォンダパリヌクス（アリクストラ（登録商標））、イドラパリナクス、および、ビオチン化イドラパリナクスがある。ビタミンＫアンタゴニストの例としては、ワルファリン（クマジン（登録商標））、フェノクマロール、アセノクマロール（シントロン（登録商標））、クロリンジオン、ジクマロール、ジフェナジオン、エチルビスクムアセテート、フェンプロクモン、フェニンジオン、および、チオクロマロールがある。
【化５】
0005439363.tif 000006
【００４６】
用語「第Ｘａ因子阻害剤」または「第Ｘａ因子の阻害剤」とは、インビトロおよび／またはインビボで、血液凝固第Ｘａ因子がプロトロンビンからトロンビンへと変換する触媒活性を阻害する化合物をいう。第Ｘａ因子は、血液凝固経路における酵素であり、プロトロンビンをトロンビンに変換するのを触媒するプロトロンビナーゼ複合体中の活性成分である。トロンビンは、フィブリノーゲンからフィブリンへの変換に関与し、凝血塊を形成する。それゆえ、第Ｘａ因子の阻害は、血栓症の治療および予防に効果的な戦略となる。好ましい第Ｘａ因子阻害剤は、インビトロおよびインビボでトロンビンの形成を阻害する。より好ましい第Ｘａ因子阻害剤は、インビボで抗凝血作用を有する。用語「第Ｘａ因子の特異的阻害剤」または「特異的第Ｘａ因子阻害剤」は、同一の哺乳類において、他の酵素または受容体よりも第Ｘａ因子に、より顕著に高い阻害活性を持つことを意図している。好ましくは、特異的第Ｘａ因子阻害剤は、その治療効果のある濃度で、同一の哺乳類系において他の知られている酵素または受容体を阻害活性を顕著に有しないことである。
【００４７】
知られている第Ｘａ因子阻害剤の例は、これらに限られるものではないが、フォンダパリヌクス、イドラパリナクス、ビオチン化イドラパリナクス、エノキサパリン、フラグミン、ＮＡＰ−５、ｒＮＡＰｃ２、組織因子経路阻害剤、ＬＹ５１７７１７（イーライリリー・アンド・カンパニー，Indianapolis, Indiana, USA。化学構造は、Ｎ−｛（１Ｒ）−２−[４−（１−メチル−４−ピペリジニル）−１−ピペラジニル］−２−オキソ−１−フェニルエチル｝−１Ｈ−インドール−６−カルボキサミドであり、例えば、A Phase II Study of the Oral Factor Xa Inhibitor for the Prevention of Venous Thromboembolism after Hip or Knee Replacement, Agnelli G. et al, J. Thromb. Haemost. 2007, 5(4):746-53に記載されている。臨床試験としては、人工股関節全置換手術(ＴＨＲ)および人工膝関節全置換手術（ＴＫＲ）後の静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）の抑制効果を見るために経口抗凝血剤ＬＹ５１７７１７ジフマレートと皮下注射によるエノキサパリンと比較した。臨床試験政府識別番号：ＮＣＴ０００７４８２８。）、ＹＭ−１５０（例えば、Eriksson, B.I. et al, J. Thromb. Haemost. 2007, 5:1660-65に記載されている。臨床試験としては、直接的因子Ｘａ阻害剤として、ＹＭ１５０を人工股関節全置換手術の施行患者において静脈血栓塞栓症の予防効果を見る試験に用いられた。オープンラベル試験によるエノキサパリンと比較するために二重盲検、並行試験、用量設定試験を行った。臨床試験政府識別番号：ＮＣＴ００３５３６７８に記載されている。）、Ｄａｉｉｃｈｉ  ＤＵ−１７６ｂ（例えば、 E. Hylek, DU-176b, An Oral, Direct Factor Xa Antagonist, Current Opinion in Investigational Drugs 2007 8:778-783に記載されている。臨床試験としては、ＤＵ−１７６ｂについて、第ＩＩｂ相における、無作為試験、並行群試験、二重盲検、ダブルダミー試験、多施設試験、多国籍試験、複数回投与試験を行い、ダルテパリンと比較した。人工股関節全置換手術の施行患者において静脈血栓塞栓症の予防のために用いる試験を行った。臨床試験政府識別番号：ＮＣＴ００３５３６７８）、ベトリキサバン（後述する）、およびその他の化合物で表１に挙げられているものおよびその誘導体がある。
【表１】
0005439363.tif 000007
【表２】
0005439363.tif 000008
【００４８】
用語「[２−（｛４−[（ジメチルアミノ）イミノメチル］フェニル｝カルボニルアミノ）−５−メトキシフェニル］−Ｎ−（５−クロロ（２−ピリジル））カルボキサミド」は、以下の構造式
【化６】
0005439363.tif 000009
の化合物またはその互変異性体を示し、ここではベトリキサバンと呼ぶ。
【００４９】
ベトリキサバンは、米国特許出願公報ＵＳ２００７／０１１２０３９に記載されており、米国仮出願シリアル番号６０／７３５，２２４（２００５年１１月８日出願）の利益を主張しており、これらはその全体が本明細書で引用される。ベトリキサバンは、第Ｘａ因子の特異的阻害剤として知られている。
【００５０】
用語「第ＸＩ因子阻害剤」または「第ＸＩ因子の阻害剤」は、血液凝固第ＸＩ因子を阻害することができる化合物をいう。タンパク質分解活性化に当たり、第ＸＩ因子は活性型酵素第ＸＩａ因子に変換され、第ＩＸ因子を第ＩＸａ因子に変換する。続いて第ＩＸａ因子は、第Ｘ因子を第Ｘａ因子に変換する。これが血液凝固反応の開始となり、上述したような、凝血塊に結びつく。抗第ＸＩ因子抗体は、免疫応答によって生産されるタンパク質であり、第ＸＩ因子に特異的に結合し、その阻害活性をもたらす。いくつかの因子は、Haematologic Technologies社，Essex Junction，VT，USAで入手可能である。
【００５１】
「注射可能な抗凝血剤」は、哺乳類に対し、注射によって投与可能な抗凝血剤をいう。注射可能な抗凝血剤の例としては、未分画ヘパリン、低分子量ヘパリン、および合成五糖がある。
【００５２】
「抗血小板剤」または「血小板阻害剤」は、血小板凝集を妨げることによって凝血塊の形成を阻害する薬剤である。活性に基づいて、いくつかのクラスの抗血小板剤があり、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａアンタゴニスト、例えば、アブシキシマブ（レオプロ（登録商標））、エプチフィバチド（インテグリリン（登録商標））、およびチロフィバン（アグラスタット（登録商標））；Ｐ２Ｙ１２受容体アンタゴニスト、例えば、クロピドグレル（プラビックス（登録商標））、チクロピジン（チクリッド（登録商標））、カングレロール、チカグレロール、および、プラスグレル；ホスホジエステラーゼＩＩＩ（ＰＤＥＩＩＩ）阻害剤、例えば、シロスタゾール（プレタール（登録商標））、ジピリダモール（ペルサンチン（登録商標））、および、アグレノックス（登録商標）（アスピリン／徐放性ジピリダモール）；トロンボキサン合成酵素阻害剤、例えば、フレグレラート、オザグレル、リドグレルおよびイスボグレル；トロンボキサンＡ２受容体アンタゴニスト（ＴＰアンタゴニスト）、例えば、イフェトロバン、ラマトロバン、テルボグレル、（３−｛６−[（４−クロロフェニルスルホニル）アミノ］−２−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフト−１−イル｝プロピオン酸（セルビールＳ１８８８６としても知られている。Recherches Internationales Servier社製，Courbevoie，France）；トロンビン受容体アンタゴニスト、例えば、ＳＣＨ５３０３４８（化学名、エチル（１Ｒ，３ａＲ，４ａＲ，６Ｒ，８ａＲ，９Ｓ，９ａＳ）−９−（（Ｅ）−２−（５−（３−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル）ビニル）−１−メチル−３−オキソドデカヒドロナフト[２，３−Ｃ］フラン−６−イルカルバメート、シェリングプラウ社製，New Jersey，USA，がある。ＵＳ２００４０１９２７５３Ａ１およびＵＳ２００４／０１７６４１８Ａ１に記載がある。臨床試験としては、他施設試験、無作為試験、二重盲検、プラセボ対照試験をＳＣＨ５３０３４８の安全性を評価するために非緊急の経皮的冠動脈インターベンションの患者に行った。臨床試験政府識別番号：ＮＣＴ００１３２９１２。）；Ｐ−セレクチン阻害剤、例えば、２−（４−クロロベンジル）−３−ヒドロキシ−７，８，９，１０−テトラヒドロベンゾ［Ｈ］キノリン−４−カルボン酸（ＰＳＩ−６９７としても知られる、ワイス社製、New Jersey， USA）；および、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤＳ）、例えば、アセチルサリチル酸（アスピリン（登録商標））、レスベラトロール、イブプロフェン（アドヴィル（登録商標）、モトリン（登録商標））、ナプロキセン（アレブ（登録商標）、ナプロシン（登録商標））、スリンダク（クリノリル（登録商標））、インドメタシン（インドシン（登録商標））、メフェナメート、ドロキシカム、ジクロフェナク（カタフラム（登録商標）、ボルタレン（登録商標））、スルフィンピラゾン（アンツラン（登録商標））、および、ピロキシカム（フェルデン（登録商標））がある。ＮＳＡＩＤｓ、アセチルサリチル酸（ＡＳＡ）、レスベラトロールおよびピロキシカムが好ましい。いくつかのＮＳＡＩＤｓは、シクロオキシゲナーゼ−１（ｃｏｘ−１）および、シクロオキシゲナーゼ−２（ｃｏｘ−２）の両方を阻害し、それ��はアスピリンおよびイブプロフェンがある。いくつかは、ｃｏｘ−１を選択的に阻害し、それにはレスベラトロールがあり、それは可逆的ｃｏｘ−１阻害剤で、ｃｏｘ−２をわずかに阻害するのみである。後述するが、ベータブロッカーおよびカルシウムチャンネルブロッカーも、血小板阻害効果がある。
【００５３】
「薬学的に許容される塩」は、ここに記載される特異的治療剤に含まれる特異的置換基によって比較的毒性のない酸または塩基から調製された活性化合物の塩を含む。本発明中の治療剤が比較的酸性の官能基を有する場合、ニートでまたは適切な不活性溶媒中、望ましい塩基の十分な量をその化合物の中性の形態に加えることにより、塩基付加塩が得られる。薬学的に許容される無機塩基から得られる塩の例は、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、マンガン（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、カリウム、ナトリウム、亜鉛等がある。薬学的に許容される有機塩基から得られる塩は、一級、二級および三級アミン、例えば、置換アミン、環状アミン、天然のアミン等、例えば、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミン等がある。
【００５４】
本発明中の治療剤が比較的塩基性の官能基を有する場合、ニートでまたは適切な不活性溶媒中、望ましい酸の十分な量をその化合物の中性の形態に加えることにより、酸付加塩が得られる。薬学的に許容される無機酸から得られる塩の例は、無機酸、例えば、塩化水素酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸水素、リン酸（phosphic）、リン酸水素、リン酸二水素、硫酸、硫酸水素、ヨウ化水素酸、または亜リン酸等だけでなく、比較的非毒性の有機酸から得られた塩、例えば、酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸等がある。また、アミノ酸の塩、例えば、アルギニン酸等、および有機酸の塩、例えば、グルクロン酸またはガラクツロン酸等がある（例えば、Berge， S.M.， et al， "Pharmaceutical Salts"， Journal of Pharmaceutical Science， １９７７， ６６：１−１９参照）。特定の特異的治療剤は、塩基性および酸性官能基の両方を含み、塩基または酸付加塩に変換することができる。
【００５５】
化合物Ａの特定の塩の形態は、発明の名称が「[４−（６−ハロ−７−置換−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレアおよびそれらに関連する形態および方法」である米国特許出願公報ＵＳ２００７／０１２３５４７（２００６年１１月３日出願）、および、２００５年１１月３日出願の米国仮出願シリアル番号６０／７３３，６５０から優先権を主張した出願に記載されており、両方の全体を参考文献としてここに組み込む。化合物Ａは、式Ｉ
【化７】
0005439363.tif 000010
に示すカリウム塩の形態、または式ＩＩ
【化８】
0005439363.tif 000011
に示すナトリウム塩が好ましい。
【００５６】
式Ｉ示すカリウム塩および式ＩＩに示すナトリウム塩の、いくつかの結晶質または非晶質の形態も米国特許出願公報ＵＳ２００７／０１２３５４７に記載されている。いくつかの式Ｉに示すカリウム塩の結晶質は、以下の少なくとも一つの性質を持つ。（１）赤外線スペクトルのピークが３３８９ｃｍ−１および約１６９８ｃｍ−１に現れる；（２）粉末Ｘ線回折パターンの２θが約２５.５°である；および（３）示差走査熱量測定による最大吸熱温度が約２４６℃であることである。これらの形態は赤外線スペクトルのピークが、約３５５９、３３８９、３３２４、１６９８、１６２３、１５６３、１５１０、１４４８、１４３１、１４０３、１３８３、１３０８、１２６９、１２０６、１１７４、１１２３、１０９１、１０７２、１０３０、９８７、９３９、９０９、８７１、８４２、７８７、７８０、７６９、７４７、７１８、７０１、６９０および６６７ｃｍ−１に現れる。カリウム塩の他の結晶質は、以下の少なくとも一つの性質を持つ。（１）赤外線スペクトルが約３３２７ｃｍ−１および約１６３０ｃｍ−１に現れる；（２）粉末Ｘ線回折のパターンの２θが約２０.３および約２５.１°である；および（３）示差走査熱量測定による最大吸熱温度が約２９３℃であることである。これらのうちのいくつかの形態は赤外線スペクトルのピークが、約３５８４、３３２７、３１８９、２９３５、２２５７、２０６７、１９７９、１９０３、１７０３、１６５４、１６３０、１５９０、１５５７、１５１２、１４４４、１４２９、１４０６、１３７５、１３１７、１３４６、１３１７、１２８８、１２７６、１２４３、１２１７、１１８２、１１３３、１１８２、１１３３、１０９３、１０７２、１０３３、９８７、９４３、９０７、８８３、８４５、８３１、８０５、７７６、７２７、６９４および６７４ｃｍ−１に現れる。いくつかの式ＩＩに示すナトリウム塩の非晶質は、以下の少なくとも一つの性質を持つ。（１）赤外線スペクトルが約３３６０、１７１１、１６３２、１５１２、１２２７、１１３３および７７０ｃｍ−１；および（２）粉末Ｘ線回折のパターンの２θが約１５および約３０°の間でブロードなピークを示す。これらのうちのいくつかの形態は赤外線スペクトルのピークが、約３３６０、１７１１、１６３２、１５５６、１５１２、１４４５、１４０７、１３７５、１３０９、１２８０、１２２７、１１３３、１０９２、１０３２、９８７、９０５、７８１、７７０および６９１ｃｍ−１に現れる。
【００５７】
好ましいベトリキサバンの塩の形態は、米国特許出願公報ＵＳ２００７／０１１２０３９に記載されている。特に当該出願は、ベトリキサバンの酸の塩の形態を開示する。酸は、塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、アジピン酸、アスコルビン酸、ショウノウ酸、グルコン酸、リン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ゲンチジン酸およびベンゼンスルホン酸から選択されるものが好ましい。好ましくは、塩酸、乳酸、マレイン酸、フェノキシ酢酸、プロピオン酸、およびコハク酸から選択されるものである。最も好ましくは、マレイン酸から、ベトリキサバンのマレイン酸塩を形成することである。ベトリキサバンのマレイン酸塩の一つの具体的態様は、式ＩＩＩ
【化９】
0005439363.tif 000012
である。
式ＩＩＩの塩は、米国特許出願公報ＵＳ２００７／０１１２０３９に開示されている通り、結晶の多形体として存在する。式ＩＩＩの一つの結晶多形の形態は、粉末Ｘ線回折パターンが少なくとも四つの、および好ましくは八つの以下のうちのピーク位置の特徴を持つ。２θが４.９、９.７、１３.８、１４.１、１５.２、１７.６、１８.５、２０.８、２１.６、２２.７、２４.１、２６.３、２６.８°である。より好ましい結晶多形の特徴は、粉末Ｘ線回折パターンの２θが約４.９、９.７、１１.８、１３.８、１４.１、１５.２、１７.６、１８.５、１９.９、２０.８、２１.６、２２.７、２４.１、２５.０、２６.３、２６.８°である。
【００５８】
治療剤の中性の形態は、塩に塩基または酸を加え、親治療剤を従来の方法で単離することで再生できる。当該治療剤の親形態は、例えば、極性溶媒に対する溶解性など、特定の物理的性質を持つ様々な塩の形態により異なるが、それ以外の点では、本発明の目的においては、塩の親形態は等価である。
【００５９】
塩形態に加え、特定の治療剤はプロドラッグの形態で存在する。治療剤のプロドラッグは、生理的条件下において速やかに化学変化を起こし、治療活性を有する化合物となる。加えて、プロドラッグは、生体外の条件下、化学的または生物学的方法により活性化合物に変換される。例えば、プロドラッグは、経皮パッチリザーバーに適切な酵素または化学薬品を蓄えておくことにより、ゆっくりと本発明の活性化合物に変換される。
【００６０】
本発明の特定の治療剤は、非溶媒和の形態でも水和といった溶媒和の形態でも存在することができる。一般に、溶媒和の形態は非溶媒和の形態と等価であり、本発明の範囲に含まれる。特定の治療剤は、複数の結晶質または非晶質の形態で存在することができる。一般に、特定の治療剤はすべての物理的形状が本発明において意図する使用において等価であり、本発明の範囲に含まれる。
【００６１】
「薬学的に許容される担体」は、本発明の構成において用いられるであろうあらゆる希釈剤、賦形剤または担体を含む。薬学的に許容される担体は、イオン交換樹脂、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、たとえば、ヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物油の部分的なグリセリド混合物、水、塩、または、電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三珪酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース−ベースの物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリロナトリウム、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−阻害ポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂がある。適切な薬学的な担体については、Remington's Pharmaceutical Sciences， Mack Publishing Company，があり、この分野において標準的に参照される本である。それらは、投与形態に沿って選択され、具体的には、経口の錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ等、および従来の医薬技術において用いられてきたものを含む。
ＩＩ．具体的態様の詳細な説明
ａ．治療方法
【００６２】
本発明は、哺乳類の望ましくない血栓症による病態の治療のため、以下の治療剤：
（１）[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア、またはその薬学的に許容される塩；および
（２）二つめの治療剤治療剤が、抗凝血剤、抗血小板剤、およびそれらの併用剤から選択されるものの治療上の有効量を当該哺乳類に投与することを含む新規な方法を提供する。
【００６３】
本発明の一つの目的は、哺乳類の血栓症および／または血栓症−関連疾患の予防または治療のため、以下の二つの治療剤：
（１）[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア、またはその薬学的に許容される塩；および
（２）抗凝血剤の治療上の有効量を当該哺乳類に投与することを含む新規な方法を提供することである。
【００６４】
具体的態様としては、抗凝血剤は、第Ｘａ因子阻害剤である。具体的態様としては、第Ｘａ因子阻害剤は、特異的第Ｘａ因子阻害剤である。
【００６５】
具体的態様としては、第Ｘａ因子阻害剤は、ＹＭ−１５０、Ｄａｉｉｃｈｉ  ＤＵ−１７６ｂ、ＬＹ５１７７１７、または表１から選択される化合物である。
【００６６】
具体的態様としては、第Ｘａ因子阻害剤は、リバロキサバンである。
【００６７】
具体的態様としては、第Ｘａ因子の特異的阻害剤は、ベトリキサバン、またはその薬学的に許容される塩である。さらに具体的態様としては、ベトリキサバンの薬学的に許容される塩はマレイン酸塩である。
【００６８】
具体的態様としては、抗凝血剤はトロンビン、第ＩＸａ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩａ因子または第ＶＩＩａ因子特異的阻害剤である。具体的態様としては、抗凝血剤は、ビバリルジン、アルガトロバン、レピルジン、ワルファリン、キシメラガトラン、ＡＺＤ０８３７、ＲＢ２００６、ダビガトランおよびフェノクマロールから選択されるものである。
【００６９】
他の具体的態様としては、抗凝血剤は注射可能な抗凝血剤である。具体的態様としては、抗凝血剤は、合成五糖および低分子量ヘパリンから選択されるものである。具体的態様としては、抗凝血剤は、フォンダパリヌクス、ダナパロイド、エノキサパリン、ダルテパリン、および、未分画のヘパリンである。
【００７０】
他の具体的態様としては、抗凝血剤は抗第ＸＩ因子抗体である。他の具体的態様としては、抗凝血剤はビバリルジンである。
【００７１】
本発明の他の目的は、哺乳類における望ましくない血栓症の病態を治療するために以下の２つの治療剤：
（１）[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレアまたはその薬学的に許容される塩；および
（２）他の抗血小板剤の治療上の有効量を当該哺乳類に投与することを含む方法を提供することである。
【００７２】
具体的態様としては、抗血小板剤は、ＴＰ受容体のアンタゴニストである。具体的態様としては、ＴＰ受容体のアンタゴニストは、イフェトロバンである。他の具体的態様としては、抗血小板剤は、シクロオキシゲナーゼ阻害剤である。具体的態様としては、シクロオキシゲナーゼ阻害剤は、アセチルサリチル酸である。具体的態様としては、抗血小板剤は、可逆的シクロオキシゲナーゼ−１阻害剤である。具体的態様としては、可逆的シクロオキシゲナーゼ−１阻害剤は、レスベラトロールである。
【００７３】
具体的態様としては、他の抗血小板剤は、アブシキシマブ、エプチフィバチド、チロフィバン、ジピリダモール、アグレノックス、シロスタゾール、イスボグレル、フレグレラートおよびオザグレルから選択されるものを含む。
【００７４】
具体的態様としては、少なくとも一つの治療剤が、治療量以下の投与量である。
【００７５】
具体的態様としては、両方の治療剤が、治療量以下の投与量である。
【００７６】
具体的態様としては、２つの治療剤を同時に投与することである。
【００７７】
具体的態様としては、２つの治療剤を連続的に投与することである。
【００７８】
本発明の別の目的としては、本発明は血栓症および／または血栓症−関連する病態予防または治療に対し、以下の３つの治療剤：
（１）[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア、またはその薬学的に許容される塩；
（２）他の抗血小板剤；および
（３）抗凝血剤の治療上の有効量を該哺乳類に投与することを含む。具体的には、
【００７９】
具体的態様としては、抗血小板剤は、シクロオキシゲナーゼ阻害剤である。具体的態様としては、抗血小板剤は、シクロオキシゲナーゼ阻害剤である。具体的態様としては、抗血小板剤は、アセチルサリチル酸である。他の具体的態様としては、抗血小板剤は、ＴＰ受容体アンタゴニストである。具体的態様としては、イフェトロバンである。具体的態様としては、抗凝血剤は、第Ｘａ因子阻害剤である。具体的態様としては、ベトリキサバンである。
【００８０】
具体的態様としては、少なくとも一つの治療剤が、治療量以下の投与量である。具体的態様としては、すべての治療剤が、治療量以下の投与量である。
【００８１】
具体的態様としては、３つの治療剤を同時に投与することである。具体的態様としては、３つの治療剤を連続的に投与することである。
【００８２】
具体的態様としては、[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレアの薬学的に許容される塩がカリウム塩である。
【００８３】
具体的態様としては、[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレアの薬学的に許容される塩がナトリウム塩である
【００８４】
具体的態様としては、血栓症−関連疾患は、急性心筋梗塞、不安定狭心症、慢性安定狭心症、一過性脳虚血発作、脳卒中、末梢血管疾患、子癇前症／子癇、深部静脈血栓症、塞栓症、播種性血管内凝固および血小板減少性紫斑病、血栓症および再狭窄合併症（侵襲的手技、例えば、血管形成、頚動脈内膜剥離術、ＣＡＢＧ（冠動脈バイパス移植）術後、血管移植術、ステント留置、並びに血管内装置および人工器官の挿入の後に起こるものを含む）から選択されるものを含む。
【００８５】
ｂ．医薬組成物
本発明は、薬学的に許容される担体、[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア、またはその薬学的に許容される塩、および、抗凝血剤、抗血小板剤、およびその併用剤から選択される少なくとも一つの別の治療剤を含む医薬組成物を提供する。
【００８６】
本発明の一つの目的は、以下の二つの治療剤
（１）[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア、またはその薬学的に許容される塩；および
（２）抗凝血剤；
およびその薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供することである。
【００８７】
具体的態様としては、抗凝血剤は、第Ｘａ因子阻害剤である。
【００８８】
具体的態様としては、第Ｘａ因子阻害剤は、特異的第Ｘａ因子阻害剤である。
【００８９】
具体的態様としては、第Ｘａ因子阻害剤は、ＹＭ−１５０、Ｄａｉｉｃｈｉ  ＤＵ−１７６ｂ、ＬＹ５１７７１７、または表１から選択される化合物である。
【００９０】
具体的態様としては、第Ｘａ因子阻害剤は、リバロキサバンである。
【００９１】
具体的態様としては、第Ｘａ因子の特異的阻害剤は、ベトリキサバン、またはその薬学的に許容される塩である。さらなる具体的態様としては、ベトリキサバンの薬学的に許容される塩は、マレイン酸塩である。
【００９２】
具体的態様としては、抗凝血剤は、トロンビンの特異的阻害剤は第ＩＸａ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩａ因子または第ＶＩＩａ因子である。具体的態様としては、抗凝血剤は、ビバリルジン、アルガトロバン、レピルジン、ワルファリン、およびフェノクマロールから選択されるものである。
【００９３】
具体的態様としては、抗凝血剤は、注射可能な抗凝血剤である。
【００９４】
具体的態様としては、抗凝血剤は、合成五糖および低分子量ヘパリンから選択されるものである。
【００９５】
具体的態様としては、抗凝血剤は、フォンダパリヌクス、ダナパロイド、エノキサパリン、ダルテパリンおよび未分画ヘパリンから選択されるものである。
【００９６】
具体的態様としては、抗凝血剤は、第ＸＩ因子阻害剤である。具体的態様としては、第ＸＩ因子の阻害剤は、抗−第ＸＩ因子抗体である。
【００９７】
さらなる具体的態様としては、抗凝血剤は、ビバリルジンである。
【００９８】
さらなる具体的態様としては、抗凝血剤は、キシメラガトラン、ＡＺＤ０８３７またはダビガトランである。
【００９９】
本発明の他の目的は、以下の二つの治療剤：
（１）[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア、またはその薬学的に許容される塩；および
（２）他の抗血小板剤；
および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供することである。
【０１００】
具体的態様としては、抗血小板剤は、ＴＰ受容体のアンタゴニストである。具体的態様としては、ＴＰ受容体のアンタゴニストはイフェトロバンである。
【０１０１】
他の具体的態様としては、抗血小板剤は、シクロオキシゲナーゼ阻害剤である。具体的態様としては、シクロオキシゲナーゼ阻害剤は、アセチルサリチル酸である。具体的態様としては、抗血小板剤は可逆的シクロオキシゲナーゼ−１阻害剤である。具体的態様としては、可逆的シクロオキシゲナーゼ−１阻害剤は、レスベラトロールである。
【０１０２】
具体的態様としては、抗血小板剤は、アブシキシマブ、エプチフィバチド、チロフィバン、ジピリダモール、アグレノックス、シロスタゾール、イスボグレル、フレグレラートおよびオザグレルから選択されるものである。
【０１０３】
本発明の他の目的は、薬学的に許容される担体および以下の３つの治療剤：
（１）[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア、またはその薬学的に許容される塩；
（２）他の抗血小板剤；および
（３）抗凝血剤を含む医薬組成物を提供することである。
【０１０４】
具体的態様としては、抗血小板剤は、シクロオキシゲナーゼ阻害剤である。具体的態様としては、抗血小板剤は、アセチルサリチル酸である。他の具体的態様としては、抗血小板剤はＴＰ受容体のアンタゴニストである。具体的態様としては、イフェトロバンである。具体的態様としては、抗凝血剤は第Ｘａ因子阻害剤である。具体的態様としては、ベトリキサバンである。
【０１０５】
具体的態様としては、少なくとも一つの治療剤が、治療量以下の投与量である。
【０１０６】
具体的態様としては、すべての治療剤が、治療量以下の投与量である。
【０１０７】
具体的態様としては、[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレアの薬学的に許容される塩はカリウム塩である。
【０１０８】
具体的態様としては、[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレアの薬学的に許容される塩はナトリウム塩である。
【０１０９】
c．キット
本発明は、
（１）最初の容器（そこには、[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア、またはその薬学的に許容される塩を含む）；および
（２）二つめの容器（そこには、抗凝血剤、抗血小板剤、およびそれらの併用剤から選択される治療剤を含む）を含む新規なキットを提供する。
【０１１０】
本発明の一つの目的は、
（１）最初の容器（[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレアまたはその薬学的に許容される塩を含む）；および（２）二つめの容器（抗凝血剤を含む）を含むキットを提供することである。
【０１１１】
本発明の別の目的は、
（１）最初の容器（[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア、またはその薬学的に許容される塩）；および
（２）二つめの容器（他の抗血小板剤を含む）を含むキットを提供することである。
【０１１２】
具体的態様としては、少なくとも一つの治療剤が、治療量以下の投与量である。
【０１１３】
具体的態様としては、両方の治療剤が、治療量以下の投与量である。
【０１１４】
具体的態様としては、キットは二つの治療剤が同時に使用可能であることを記載した説明書を含む。
【０１１５】
本発明の別の目的は、
（１）最初の容器（[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア、またはその薬学的に許容される塩を含む）；
（２）二つめの容器（抗凝血剤を含む）；および
（３）三つ目の容器（他の抗血小板剤を含む）を含むキットを提供することである。
【０１１６】
具体的態様としては、最初の容器は、[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレアのカリウム塩を含む。
【０１１７】
具体的態様としては、最初の容器は、[４−（６−フルオロ−７−メチルアミノ−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレアのナトリウム塩を含む。
【０１１８】
具体的態様としては、二つめの容器は、ベトリキサバン、またはその薬学的に許容される塩を含む。
【０１１９】
具体的態様としては、二つめの容器は、ベトリキサバンのマレイン酸塩である。
【０１２０】
ＩＩＩ．併用療法
化合物Ａと第Ｘａ因子阻害剤（例えば、ベトリキサバン）の併用は、二つの治療剤を単独で投与するよりも、追加的な抗血栓効果を示すと考えられる。実施例３は、様々な濃度のベトリキサバンを１.１μＭの化合物Ａに加えた場合、灌流チャンバーアッセイにおいて、用量依存的に追加的な血栓阻害効果を示したことを表す。同様に実施例４においても、様々な濃度の化合物Ａを固定濃度のベトリキサバンに加えたところ、追加的な血栓形成阻害効果が用量依存的に見られた。同様に、実施例５でも、追加的な実験結果が血小板由来の血栓形成アッセイにおいて見られ、化合物Ａおよびベトリキサバンの併用は、それぞれの単独投与よりも、より大きな阻害効果を示した。
【０１２１】
他の凝集酵素の阻害剤、例えば、第ＸＩ因子阻害剤または直接的トロンビン阻害剤も、化合物Ａと併用され、改善された抗血栓効果を示した。実施例６は、第ＸＩ因子抗体を化合物Ａと併用し、それぞれの単独投与では検出可能な血栓形成阻害効果が見られなかったアッセイ条件下、血栓形成阻害効果を示した。実施例７は、灌流アッセイにおいて、化合物Ａを第ＸＩ因子抗体と併用した場合、化合物Ａ単独または化合物Ａおよびベトリキサバンの併用では得られない、より大きな血栓形成阻害効果を示した。実施例８は、化合物Ａを直接的トロンビン阻害剤、例えば、ビバリルジン（アンギオマックス（登録商標））と併用した場合における抗血栓効果を示した。
【０１２２】
化合物Ａと抗凝血剤との併用における場合だけでなく、化合物Ａを他のクラスの抗血小板剤と併用することにより、抗血小板剤もＰ２Ｙ１２アンタゴニスト作用を通じて、より大きな追加的抗血栓効果を得られると考えられる。実施例９および１０に示すように、化合物Ａをシクロオキシゲナーゼ阻害剤（例えばアセチルサリチル酸（実施例９））と、またはＴＰアンタゴニスト（例えばイフェトロバン（実施例１０））とを、第Ｘａ因子阻害剤の存在下、併用することにより追加的抗血栓効果が得られた。
【０１２３】
化合物Ａおよび同時投与された薬剤の併用による治療方法は、単独投与の場合と比べ、望ましくない薬物−薬物相互作用または他の追加的な副作用を示さないと考えられる。好ましくは、併用は改善効果および／または安全性における利点を、単独投与に比べて得られることである。治療結果を得るために、少量の投与が必要な場合に好ましい。そのような場合、併用治療における当該薬剤の治療上の有効量は、単独投与された場合の効果量または最適量よりも少なくてもよいことがある。より少量の投与量によって、薬剤の副作用の可能性を最小限にすることができ、改善された安全性プロフィールを示すと考えられる。このように、併用することで、治療剤の一つを投与量以下にすることができると考えられる。より好ましくは、併用によって、両方の治療剤を投与量以下にすることができることである。
【０１２４】
同様に、化合物Ａを抗凝血剤および他の抗血小板剤と併用する治療方法では、単独投与の場合に見られるような望ましくない薬物−薬物相互作用または他の追加的な副作用を示さないと考えられる。好ましくは、三つの薬剤を組み合わせることで有効性または安全性における利点を、どの単剤よりも得ることができることである。より好ましくは、組み合わせることによって一つの治療剤の使用が、単独投与において必要な投与量よりも、より少なくなることである。例えば、治療量以下の投与量となることである。より好ましくは、併用した治療剤すべてが治療量以下の投与量となることである。
【０１２５】
化合物Ａおよび同時投与される薬剤は、二つの別の医薬組成物に製剤化されてもよい。それらは、同時にまたはどのような順序で連続して投与されてもよい。連続的に投与された場合には、好ましくは、二つの薬剤は時間的に十分に近接していることにより望ましい治療効果が得られる。化合物Ａおよび同時投与される薬剤は、一つの医薬組成物に製剤化されてもよい。化合物Ａ、抗凝血剤および他の抗血小板剤は、同時にまたはどのような順序で連続して投与されてもよい。連続的に投与された場合には、三つの薬剤は時間的に十分に近接していることにより望ましい治療効果が得られる。また、一つの医薬組成物またはどの二つが単剤の医薬組成物に製剤化されてもよい。
【０１２６】
上記のいずれの投与形態においても含まれる効果量は、通常の実験の境界用量の範囲内にあり、本発明の範囲に含まれる。治療効果のある用量は、投与経路および投与形態によって変化する。本発明の併用剤は、高い治療指標を示す形態が好ましい。治療指標は、毒性および治療効果の間の投与割合であり、ＬＤ５０およびＥＤ５０の間の割合とされる。ＬＤ５０は群の５０％が死に至る用量であり、ＥＤ５０は群の５０％が治療効果のある用量である。ＬＤ５０およびＥＤ５０は、動物細胞培養または実験動物によって標準的な薬学的手法によって決定される。本発明の併用治療剤は、１日に１回または数回投与されてもよく、他の投与管理も役立つ。本発明の併用治療剤は、１日１回投与または２、３または４回投与が好ましい。本発明の併用治療剤は、１日１または２回投与がより好ましい。
【０１２７】
典型的には、約０.５ないし５００ｍｇの化合物Ａ、またはその塩または塩の混合物を生理学的に許容できる媒体、担体、賦形剤、結合剤、保存剤、安定化剤、染料、香料等、許容される医薬技術と言われているものと混合することである。本発明の一つの目的は、化合物Ａは静脈内投与に適切なように製剤化されているものを提供することである。具体的態様としては、静脈内投与製剤の一単位の容量が１ないし５０ｍｇの化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩を含んでいることである。他の具体的態様としては、一単位が５ないし４０ｍｇ、１０ないし３０ｍｇ、１５ないし２５ｍｇ、２５ないし４５ｍｇ、または約２０ｍｇ、３０、４０、または５０ｍｇの化合物Ａまたはその塩を含んでいることである。
【０１２８】
本発明の他の目的としては、化合物Ａが、経口投与に適切なように製剤化されているものを提供することである。具体的態様としては、投与形態の一単位が１ないし８００ｍｇ、２０ないし２００ｍｇ、５０ないし１５０ｍｇ、１０ないし５０ｍｇ、または２０ないし４０ｍｇの化合物Ａまたはその塩を含んでいることである。具体的態様としては、投与形態の一単位が約３０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、または２００ｍｇの化合物Ａまたはその塩を含んでいることである。
【０１２９】
化合物Ａおよびそれと同時投与される薬剤は、単一の医薬組成物に製剤化される場合には、約０.５ないし５００ｍｇの同時投与される薬剤を上記の組成物に含んでいてもよい。化合物Ａおよび他の薬剤が静脈内投与用に製剤化される場合、化合物Ａまたはその塩は、１ないし５０ｍｇ、５ないし４０ｍｇ、１０ないし３０ｍｇ、１５ないし２５ｍｇ、２５ないし４５ｍｇ、または約２０ｍｇ、３０、４０、または５０ｍｇ含んでいることが好ましい。化合物Ａおよび他の薬剤が経口投与用に製剤化される場合、化合物Ａまたはその塩は、１ないし８００ｍｇ、２０ないし２００ｍｇ、５０ないし１５０ｍｇ、１０ないし５０ｍｇ、または２０ないし４０ｍｇまたは約３０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、または２００ｍｇ含んでいることが好ましい。化合物Ａおよびベトリキサバンを含む併用剤の上述のどの用量であっても、化合物Ａまたはその塩またはその塩の混合物は、生理学的に許容される媒体、担体、賦形剤、結合剤、保存剤、安定化剤、染料、香料等、許容される医薬技術と言われているものと混合することができる。これらの組成物中の活性成分の用量は、指示の範囲内で適切な用量を含む。
【０１３０】
化合物Ａの併用治療における典型的な投与量は、約０.００１ｍｇ／ｋｇないし約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０.０１ｍｇ／ｋｇないし約１１.４ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０.０１ｍｇ／ｋｇないし約２.８５ｍｇ／ｋｇ、および更に好ましくは約０.０１ｍｇ／ｋｇないし約１.４３ｍｇ／ｋｇである。化合物Ａおよびベトリキサバンを含む併用治療において、典型的なベトリキサバンの投与量は、約０.００１ｍｇ／ｋｇないし約１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０.０１ｍｇ／ｋｇないし約２.０ｍｇ／ｋｇ、および、より好ましくは約０.１ｍｇ／ｋｇないし約１.５ｍｇ／ｋｇ、または約０.４ｍｇ／ｋｇないし約１.２ｍｇ／ｋｇ、および、さらに好ましくは約０.５ｍｇ／ｋｇないし約１.０ｍｇ／ｋｇである。さらに好ましくは、ベトリキサバンは、併用治療剤中０.５ｍｇ／ｋｇより少ないことである。
【０１３１】
本明細書中に記述される他の同時投与される薬剤が単独投与されたときの典型的な用量は、当業者であれば知っている。これらの薬剤の用量は、化合物Ａと併用した場合にそれぞれの用量の最大量を超えないものとする。好ましくは、併用治療において、最大用量を超えず、より好ましくは、治療量以下の用量であることである。投与量は、併用による改善した利点を得るために、この発明に適合させられる。
【０１３２】
ＩＶ．医薬組成物
本発明は、化合物Ａを含む新規な医薬組成物、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩、抗凝血剤または他の抗血小板剤、およびその薬学的に許容される担体を含む。
【０１３３】
本発明の医薬組成物は、従来の方法とりわけ、顆粒化、混合、溶解、カプセル化、凍結乾燥、またはエマルジョン化工程といった、当業者によく知られた方法で、製造される。医薬組成物は、顆粒剤、沈殿、または微粒子化、散剤、凍結乾燥、回転乾燥またはスプレー乾燥した散剤、多形体の散剤、錠剤、カプセル剤、シロップ、座剤、注射、乳濁液、エリキシル剤、懸濁液または溶液を含む様々な形態にすることができる。製剤は、任意に、安定化剤、ｐＨ変更剤、界面活性剤、またはバイオアベイラビリティを改善するもの、および、これらの併用剤を含んでいてもよい。
【０１３４】
医薬品製剤は、滅菌溶液、例えば、油脂、水、アルコール、およびこれらの組み合わせを用いて液体の懸濁液または溶液として製造することができる。薬学的に適切な表面活性剤、懸濁剤またはエマルジョン化剤を経口または非経口投与のために加えることができる。懸濁液は、油脂を含んでいてもよく、例えば、落花生油、ゴマ油、綿実油、コーン油およびオリーブオイルであってもよい。懸濁製剤は、脂肪酸エステル、例えば、エチルオレイン酸、ミリスチン酸イソプロピル、脂肪酸グリセリドおよびアセチル化脂肪酸グリセリドがある。懸濁製剤は、アルコール、例えば、エタノール、イソプロピルアルコール、ヘキサデシルアルコール、グリセロールおよびプロピレングリコールを含んでいてもよい。エーテル、例えば、ポリ（エチレングリコール）、石油炭化水素、例えば、鉱油およびペトロラタム、および水も懸濁製剤に用いることができる。
【０１３５】
本発明の組成物は、哺乳類、好ましくはヒトに投与するための薬剤に製剤化される。そのような医薬組成物は、経口、非経口、吸入スプレー、局所、経直腸、経鼻、バッカル、経膣、または埋込型リザーバーによる投与がある。用語「非経口」は、ここでは皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下腔内、肝内、病巣内および脳内への注射または点滴による投与が含まれる。好ましくは、組成物は経口または静脈内投与されることである。本発明の製剤は、短時間作用型、即時放出型、長時間作用型、徐放型にデザインされうる。また、化合物は、全身投与ではなく局所投与、例えば、注射による徐放性製剤としての投与が望ましい。
【０１３６】
本発明の組成物の滅菌の注射剤は、水溶性または油性の懸濁液であってよい。これらの懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて当業者にとって知られた方法で製剤化される。滅菌の注射剤は、非毒性の非経口投与可能な希釈液または溶媒（例えば、１，３−ブタンジオールの溶液中）中、滅菌の注射溶液または懸濁液によって製造できる。許容される媒体および溶媒には、水、リンガー溶液および生理食塩水がある。加えて、滅菌、固定油が従来から溶媒または懸濁媒体として用いられてきた。この目的であれば、合成モノ−またはジ−グリセリドを含み、どこの製品であっても固定油として用いることができる。脂肪酸、例えば、オレイン酸およびそのグリセリド誘導体は、それらが天然に薬学的に許容される油脂であるため、注射可能な製剤の製造に用いられる。薬学的に許容される油脂、例えば、オリーブオイルやヒマシ油、特にポリオキシエチル化バージョンがある。
【０１３７】
これらの油脂溶液または懸濁液は長鎖アルコール希釈剤または分散剤、例えば、カルボキシメチルセルロースまたは同様の分散剤を含んでいてもよい。ここでそれは、通常薬学的に許容される投与形態（マルジョン製剤および懸濁製剤を含む）への製剤化に用いられるものである。他の通常用いられる界面活性剤、（例えば、Ｔｗｅｅｎｓ、Ｓｐａｎｓおよびエマルジョン化剤またはバイオアベイラビリティの促進剤）ここでそれらは、通常薬学的に許容される固体、液体、または、他の投与形態が、医薬品の製造の目的で用いられる。化合物は、非経口製剤として、例えば、ボーラス投与または持続点滴の形態に製剤化できる。注射による投与形態のユニットは、アンプルまたは他のマルチドーズ可能な容器に入っている。
【０１３８】
本発明の医薬組成物は、いずれカプセル剤、錠剤、水性の懸濁液または溶液の形態を含む経口投与の形態でも投与可能である。錠剤の経口投与の場合、担体は通常乳糖およびトウモロコシでんぷんを含む。滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムは典型例である。カプセル製剤としては、希釈剤、（乳糖および乾燥したトウモロコシでんぷんを含む）と水溶性の懸濁剤としての経口製剤が必要とされる場合、活性な内容物をエマルジョンおよび懸濁剤と組み合わせるとよい。必要であれば、甘味料、香料または着色料が加えられる。
【０１３９】
本発明の医薬組成物は直腸投与においては座剤であってもよい。これらは、適切な非−刺激性の賦形剤を薬剤とともに混合することによって製造されるが、賦形剤は室温では固体であるが直腸温度では液体であり、それゆえ、直腸で融解して薬物を放出する。そのような材料にはココアバター、密ロウおよびポリエチレングリコールがある。
【０１４０】
本発明の医薬組成物は、特に、局所投与によって速やかに適用することのできる領域または臓器、例えば、目、皮膚、または下部小腸管では、局所投与してもよい。これらの領域または臓器に適用する適切な局所投与製剤を容易に製造することができる。
【０１４１】
下部小腸管への局所投与は、直腸の座剤（上述参照）または適切な浣腸製剤が効果がある。局所経皮パッチも用いられる。局所投与には、医薬組成物が活性成分が懸濁または溶解した一つまたはそれ以上の担体中に含まれる適切な軟膏剤を含んでいてもよい。本発明の化合物の局所投与の担体は、これに限られるものではないが、鉱油、液体ペトロラタム、白色ペトロラタム、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、エマルジョン化ワックスおよび水がある。医薬組成物は、活性成分が一つまたはそれ以上の薬学的に許容される担体に懸濁または溶解されて含まれる適切なローションまたはクリームに製剤化される。適切な担体は、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステル、ワックス、セチルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水がある。
【０１４２】
目への適用には、医薬組成物は、ミクロ化された、等張、ｐＨを適合した滅菌生理食塩水の懸濁液、または、好ましくは、等張、ｐＨを適合した滅菌生理食塩水の溶液、および保存剤（例えば塩化ベンジルアルコニウム）を含みまたは含まず製剤化される。目への適用には、医薬組成物は、ペトロラタムといった軟膏剤に製剤化される。
【０１４３】
本発明の医薬組成物は、経鼻エアロゾルまたは吸入剤によって投与される。そのような組成物は、製材技術の分野において知られた方法によって製造される。生理食塩水の溶液中、ベンジルアルコールまたは他の適切な保存剤、バイオアベイラビリティの促進のための吸収促進剤、フッ化炭素、および／または他の従来からの溶解剤または分散剤を用いて製造する。
【０１４４】
上述した投与形態に加え、薬学的に許容される賦形剤および担体および投与形態は当業者にとって一般に明らかなものは本発明に含まれる。あらゆる特定の患者に特異的な投与量および治療計画は、様々な因子によっており、用いられる特異的な化合物の活性、年齢、体重、全身の健康状態、性別および食事、患者の腎臓および肝臓の機能および投与時間、排泄速度、併用薬物、担当医または獣医の判断および治療しようとしている特定の疾患の重症度による。活性成分の量は、化合物Ａと併用した治療剤による。
【０１４５】
Ｖ．成分のキット
本発明は、新規なキットまたはパッケージを提供する。具体的態様としては、本発明のキットは、(ａ)最初の容器は、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩を含む；および（ｂ）二つ目の容器は、抗凝血剤または他の抗血小板剤を含む。他の具体的態様としては、キットは、(ａ)最初の容器は、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩を含む；(ｂ)二つ目の容器は、抗凝血剤を含む；および（c）および三つ目の容器はその他の抗血小板剤を含む。具体的態様としては、キットには、望ましくない血栓症の治療のために、二つの薬剤が同時に使用可能であることを記載した説明書が含まれる。
【０１４６】
最初、二つめ、または三つ目の容器は、ボトル、ジャー、バイアル、フラスコ、シリンジ、チューブ、バッグ、または、医薬品の製造、貯蔵または頒布において用いられるその他の容器であってよい。説明書は、ラベル、タグ、マーカー等であって、キットの医薬組成物に関連する情報を記載することができるものであればよい。記載される情報は通常当該医薬組成物が販売される地域の政府機関（例えば、米国食品医薬品局）によって決められている。説明書には、当該医薬組成物が承認された特異的な適用が記載されていることが好ましい。説明書は、そこに記載してある情報を読み取ることのできる材料からできていればよい、例えば、紙、裏に接着剤のついたボール紙、アルミ箔またはプラスチック等、望む情報をプリントまたは、記載できるものであればよい。
【０１４７】
ＶＩ．実施例
特に述べない限り、本明細書を通して、省略形は以下の意味を有する。
ＡＣＮ        =        アセトニトリル
ＡＰＩ        =        活性成分
ａｑ．        =        水性の
Ｂｏｃ        =        ターシャリーブトキシカルボニル
ＤＣＭ        =        ジクロロメタン
ＤＭＳＯ      =        ジメチル スルホキシド
ｅｑ．        =        当量
ＥｔＯＨ      =        エタノール
ｇ            =        グラム
ＨＰＬＣ      =        高速液体クロマトグラフィー
ｈｒ          =        時間
ｋｇ          =        キログラム
ＫＯＨ        =        水酸化カリウム
Ｌ            =        リットル
ＬＯＤ        =        検出限界
Ｍ            =        モル
Ｍｅ          =        メチル
ＭｅＯ        =        メトキシ
ＭｅＯＨ      =        メタノール
ｍｇ          =        ミリグラム
ｍｉｎ        =        分
ｍＬ          =        ミリリットル
ｍｍ          =        ミリメータ
Ｎ            =        ノルマル
ｎｇ          =        ナノグラム
ｎＭ          =        ナノモーラー
ＮＭＲ        =        核磁気共鳴
ｐｇ          =        ピコグラム
ｐＭ          =        ピコモーラー
ｐｓｉ        =        平方インチ当りの重量ポンド
ｓｅｃ        =        秒
ＴＨＦ        =        テトラヒドロフラン
ＴＬＣ        =        薄層クロマトグラフィー
ＷＦＩ        =        注射用水
μΜ          =        マイクロモーラー
μｇ          =        マイクログラム
Z−gly−gly−arg−AMC =        カルボベンジルオキシ−グリシン−グリシン−
アルギニン−４−アミノメチルクマリン
ＶＣ          =        溶媒対照
ＮＳ          =        有意でない
【実施例１】
【０１４８】
化合物Ａの製造および式Ｉに示されるそのカリウム塩
【化１０】
0005439363.tif 000013
【０１４９】
ステップ１：
メチル２−アミノ−４，５−ジフルオロベンゾエート（１）（３８ｋｇ、１.０当量）およびジクロロメタン（５６０ｋｇ、８Ｘ、ＡＣＳ＞９９.５）を２０００ＬのＧＬ反応容器に入れた。反応液を５分間攪拌した。４−ニトロフェニルクロロホルホルメート（４９.１ｋｇ、１.２当量）を２００Ｌ反応容器に加え、続いてジクロロメタン（１８５ｋｇ）を加え、５分間攪拌した。２００Ｌ反応容器を加圧した後、化合物１のジクロロメタン溶液を含む４−ニトロフェニルクロロホルメート溶液を２０００Ｌ容器に移した。窒素ガスを注入しながら、反応液を４０±５℃で３時間反応（還流）した。代表のＴＬＣ分析により、反応の完了を確認した（製造過程のＴＬＣでは化合物１は残っていなかった。展開溶媒９９：１のＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ）。溶液を３０℃に冷却し、４６０ｋｇのジクロロメタンを真空下留去した。２０００Ｌ反応容器に５２０ｋｇのヘキサンを加え、反応容器を０±５℃に冷却し、４時間攪拌した。精製した固体をＧＦヌッチェで濾過した（ＧＦヌッチェフィルターに、Ｔ−５１５ＬＦタイパーフィルター紙およびＭｅｌ−Ｔｕｆ１１４９−１２フィルター紙を用いた）。フィルターケーキを２０ｋｇのヘキサンで洗浄し、重量が一定になるまで３５℃で真空乾燥した。乾燥した生成物は、９８％（７０.１５ｋｇ）で得られた。生成物２は、１Ｈ  ＮＭＲおよびＴＬＣ分析によって構造確認した。
【０１５０】
ステップ２：
２０００Ｌ  ＧＬ反応容器に化合物２（６４.４ｋｇ、１.０当量）、無水テトラヒドロフラン（５５７ｋｇ）およびトリエチルアミン（２.２ｋｇ、０.１当量）を加えた。２０００Ｌ  ＧＬ反応容器の注入ラインは、テトラヒドロフラン（１０ｋｇ）で洗い込んだ。反応容器の内容物を、反応が終了するまでの２５分攪拌した。２００Ｌ  ＨＰ反応容器にＮ−Boc−ｐ−フェニレンジアミン（３８ｋｇ、１.０当量）、テトラヒドロフラン（８９ｋｇ）を加え、反応が終了するまでの３０分間攪拌した。化合物２を含む２００Ｌ  ＨＰ反応容器の内容物を２０００Ｌ  ＧＬ反応容器に移し、６５±５℃で２時間攪拌した。反応は、出発物質が反応液中１％よりも少なくなるまで消失したのをＨＰＬＣで確認した。
【０１５１】
２０００Ｌ  ＧＬ反応容器を２０±５℃まで冷却し、ナトリウムメトキシド（２５％メタノール溶液、４１.５ｋｇ、１.０５当量）を３０℃に保つようにし、２０分以上かけて加えた。注入ラインは、テトラヒドロフラン（１０ｋｇ）で洗い込んだ。内容物を２５±５℃で４時間攪拌した。製造過程において化合物３ａが、反応液中１％よりも少なくなるまで消失したのをＨＰＬＣ分析により確認した。この反応液に濾過水（５００ｋｇ）を加え、２０００Ｌ  ＧＬ反応容器の内容物を真空下、２００Ｌ  ＧＬ受容容器で受けながら、溶媒が３００ｋｇ蒸留されるまで蒸留した。得られた固体をＧＬヌッチェフィルターで濾過し、濾過水で３ｂの固体が白色から灰色になるまで洗浄した。
【０１５２】
２０００Ｌ  ＧＬ反応容器に湿気を含んだ３ｂのフィルターケーキおよびジオキサン（３４０  ｋｇ）を加え、内容物を１時間攪拌した。濾過できる固体をＧＬヌッチェフィルターで濾過した（Ｔ−５１５ＬＦタイパーフィルター紙）。固体のケーキを２時間風乾し、ジオキサン（２００ｋｇ）を２０００Ｌ  ＧＬ反応容器に加えた。内容物に４Ｎ  ＨＣｌのジオキサン溶液（９１４ｋｇ）を加え、反応液が３０℃以下に維持して３時間以上攪拌した。注入ラインは追加のジオキサン（１０ｋｇ）で洗い込み、反応容器の内容物を６時間２５±５℃で攪拌した。化合物３ｂから化合物３への反応の完了は、ＨＰＬＣでモニターした（製造過程において反応混合物中３ｂが１％よりも少なくなるのを確認した）。反応容器の内容物を５+５℃に冷却し、２時間後得られた固体をＧＬヌッチェフィルターで濾過し、ジオキサン（５０ｋｇ）で洗浄した。フィルターケーキを８±７psiの窒素で３０分間風乾し、ＨＰＬＣで濃度を分析した。固体を濾過し、真空オーブンで一定重量になるまで４５ ℃で４８時間放置した。化合物３（６５.８ｋｇ、実験収量１１０.６％）を取り、１Ｈ  ＮＭＲおよびＨＰＬＣで分析した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１.７５ （s， １H）， ７.８８ （dd， １H）， ７.３２ （m， ４H）， ７.２１ （dd， １H）。
【０１５３】
ステップ３：
２００Ｌ  ＨＰ反応容器に化合物３（１８ｋｇ、１.０当量）を加え、窒素で１００±５psiに加圧した。反応容器からの窒素は、大気圧排出ラインからコンデンサーバルブを開けることにより排出した。アルゴン雰囲気下、ジメチルスルホキシド（＞９９.７％、１０５ ｋｇ）を反応容器に注入した。反応容器を１５分間２２℃（１９−２５℃）で攪拌し、２００Ｌ  ＨＰ反応容器において可能な最大限の真空状態として、バルブを閉じた。そのような真空状態下、窒素雰囲気下、内部の温度が２５±５℃に保たれるようにメチルアミン（無水エタノール溶液、３３重量％、３７.２ｋｇ）を２００ＬＨＰ反応容器に注入した。注入ラインをジメチルスルホキシド（５ｋｇ）で洗浄した後、少なくとも５時間１１０±５℃で反応容器の内容物を攪拌した。５時間４０分経過後、製造過程において、化合物３は０.０９％となり反応が完了した（製造過程仕様書に従い、化合物３≦１％でなければならない）。
【０１５４】
２００Ｌ  ＨＰ反応容器の内容物を２５±５℃に冷却した。２００Ｌ反応容器の冷却中、２０００Ｌ  ＧＬ反応容器のすべてのバルブは閉じておき、濾過水（５５０ｋｇ）を注入した。２００Ｌ  ＨＰ反応容器の内容物を２０００Ｌ  ＧＬ反応容器に１５分以上かけて移し、濾過水（５０ｋｇ）で注入ラインを洗浄した。２０００Ｌ  ＧＬ反応容器の内容物を２時間５±５℃で攪拌した。得られた濾過可能な固体を、真空下ＧＬヌッチェフィルターで濾過した（Ｍｅｌ−Ｔｕｆ１１４９−１２フィルター紙を用いた）。湿気を含んだフィルターケーキを取り、デュポン  フルオロカーボンフィルム（ＫＩＮＤ１００Ａ）および特殊なオーブン紙（ＫＡＶＯＮ９９２）を有し、あらかじめ備え付けられている真空オーブントレイ乾燥機に移した。オーブンの温度は５５℃でセットし化合物４を、一定重量になるまで乾燥させた。化合物４は、１２．７０ｋｇ、収率７６.５ ％で得られた。化合物４は、室温を５５℃にまで１２時間かけて、化合物を乾燥し、ＨＰＬＣでは、９８.９６ ％の純度で、１Ｈ  ＮＭＲで化学構造を確認した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１.１（s， １H）， ７.３６ （d， １H）， ６.７８ （d， ２H）， ６.７５ （m， １H）， ６.５６ （d， ２H）， ６.２０ （d， １H）， ５.１８ （d， ２H）， ２.７６ （d， ３H）。
【０１５５】
ステップ４：
２００Ｌ  ＨＰ反応容器に化合物４（２０.７ｋｇ、１.０当量）、エチル５−クロロチオフェン−２−イルスルホニルカルバメート（３７.５ｋｇ、２.０当量＞９５％）およびジメチルスルホキシド（＞９９％、７５ｋｇ）を加え１５分間攪拌した。２００Ｌ ＨＰ反応容器において可能な最大限の真空状態として、化合物４が０.９％よりも少なくなるまで、６５±５℃で１５時間反応させた（製造過程基準では化合物４の残量が１ ％より少なくなければならない）。８００Ｌ反応容器に濾過水（６５０ｋｇ）を加え、続いて、２００Ｌ  ＨＰ反応容器の内容物を、内部の温度が２５℃以下に保たれるようにしつつ移しかえた。２００Ｌ  ＨＰ反応容器をはジメチルスルホキシド（１５ｋｇ）で洗浄し、８００Ｌ  反応容器に加え、２時間５±５℃で攪拌した。得られた固体は、真空下フィルターで濾過し、２００Ｌ  ＧＬ受容容器で受け、フィルターケーキは濾過水（６０ｋｇ）で洗浄した。湿気のある代表サンプルのＨＰＬＣ分析によれば、純度は９５％より少なかった。これは、製造過程制御のためのジクロロメタン粉砕が必要であったことを示している。８００Ｌ  ＧＬ反応容器に湿気を含んだ化合物Ａ、ジクロロメタン（３１５ｋｇ）を加え、内容物を３時間攪拌した。Ｔ−５１５ＬＦタイパーフィルター紙Ｔ５１５ＬＦタイパーフィルター紙を用いて固体はＧＬヌッチェフィルターで真空下濾過した。フィルターケーキは、ジクロロメタン（５０ｋｇ）で洗浄し、ケーキは８±７psiの窒素で１５分間風乾した。フィルターケーキは、あらかじめラインがつけられ、デュポン社製フッ化炭素フィルムを有する真空トレイに移し、６０℃で１２時間以上乾燥させた。ＨＰＬＣ濃度は９３.５％であり、４.３％のスルホンアミドの乾燥後の化合物Ａが単離された（３３.６ｋｇ，収率９３％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１.２０ （s， １H）， ９.１５ （s， １H）， ７.６８ （d， １H）， ７.４２ （d， ２H）， ７.３６ （d， １H）， ７.２６ （m， １H）， ７.１６ （d， ２H）， ６.７８ （m， １H）， ６.２４ （d， １H）， ２.７８ （d， ３H）。
【０１５６】
ステップ５：
８００Ｌ  ＧＬ反応容器にアセトニトリル（１３４ｋｇ）、ＷＦＩ級水（１５６ｋｇ）を加え、５分間攪拌した。ここに化合物Ａ（３３.６ｋｇ、１.０当量）を加えたが、この時点で懸濁液であった。懸濁液に水酸化カリウム（４.１４ｋｇ、１.１５当量，＞８５％）の水溶液（ＷＦＩ水，３５ｋｇ）を内部の温度が３０℃よりも低く保たれるようにしながら加えた。注入ラインをＷＦＩ級水（２ｋｇ）で洗浄し、８００Ｌ  ＧＬ反応容器の内容物を５０±５℃で１時間攪拌した。内容物はバッグフィルターで熱時濾過した後、ＨＤＰＥドラムを洗浄するために、７カートリッジ０.２μポリッシュフィルターを通した。溶液から物質が失われないように、熱時濾過システムは濾過中を通して維持された。化合物Ａの熱時濾過、とラベルされたドラムに、混合したアセトニトリル（８.５ｋｇ）およびＷＦＩ級水（１０ｋｇ）で、８００ＬＧＬ  反応容器を洗浄する前に、８００Ｌ  ＧＬ反応容器のジャケットを２５±５℃に冷却した。圧力容器を用いて、８００Ｌ  ＧＬ反応容器をＷＦＩ級水（２０ｋｇ）に続きアセトン（２０ｋｇ）で洗浄し、窒素気流で乾燥させた（３+２psi）。８００Ｌ  ＧＬ反応容器の底面のバルブを閉め、２０+１０インチ水銀の真空にし、化合物Ａの熱時濾過とラベルされたドラムを、反応容器に接続した。８００Ｌ  ＧＬ反応容器の内容物は２０±５℃に冷却し、ポリッシュフィルターを用いて、内容物が３０℃より低くなるように保ちつつ、反応容器にメタノール（３７３ｋｇ、＞９９％）を加えた。８００Ｌ  ＧＬ反応容器を１５±５℃に冷却し、続いて１２時間この温度で攪拌した。反応容器を加圧し、きれいな２００Ｌ  ＧＬ受容器に、きれいなフィルター装置を用いて、フィルター／受容体およびフィルターの内容物を２０+１０インチ水銀の真空にし、このときに濾過できる固体を濾過した。
【０１５７】
フィルターケーキは、メタノール（３０ｋｇ）で洗浄し、８+７psiの窒素気流で１０分間乾燥した。湿気を含んだ式Ｉの塩のケーキを加える前に、真空オーブントレイのドライヤーの温度を８０℃に設定した。湿気を含んだフィルターケーキを、デュポン  フルオロカーボンフィルム（Ｋｉｎｄ  １００Ａ）および特殊なオーブン紙（Ｋａｖｏｎ  Ｍｅｌ  Ｔｕｆ紙）を有し、あらかじめ取り付けられている真空トレイに移し、真空のオーブントレイ乾燥機で、８０℃で一定重量が得られるようになるまで乾燥した（一定重量とは、トレイを少なくとも１時間の間隔をあけて読取り、+５０ｇまでの範囲で一定となることをいう）。（ＡＰＩの残留溶媒の仕様に従い）代表サンプルを分析し、残留溶媒は仕様に適合することを示した。最終ＡＰＩは、ＷＦＩ級水のトレイ存在下、水（５−６％）との平衡に１２時間曝され、その後完全に変化させて１２時間試験され、最後にＫＦ（カールフィッシャー）水分析（５.５％の水分量）を行った。式Ｉの塩（２１.８０ｋｇ，収率６０.６％）は、二重重量負荷ポリバッグに移され、二次的な容器に貯蔵された。ＨＰＬＣでは、９９.７％の純度を示し、化合物Ａの構造は１Ｈ  ＮＭＲで確認した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：δ１１.１４ （s， １H）， ８.６０ （s， １H）， ７.４８ （m， ２H）， ７.３５ （d， １H）， ７.２２ （d， １H）， ６.９５ （m， ３H）， ６.７５ （m， １H）， ６.２２ （d， １H）， ２.７８ （d， ３H）。
【０１５８】
化合物Ａおよびその塩の追加的な製造または分析方法は、２００６年１１月３日に出願された米国特許公報ＵＳ２００７／０１２３５４７「[４−（６−ハロ−７−置換−２，４−ジオキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−キナゾリン−３−イル）−フェニル］−５−クロロ−チオフェン−２−イル−スルホニルウレア」および剤形およびそれらに関する方法」と題される特許に記載されており、ここにその内容全体を引用する。
【実施例２】
【０１５９】
ベトリキサバンの製造
【化１１】
0005439363.tif 000014
ステップ１：
５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸（５）（２５.０ｋｇ、１.０当量）、２−アミノ−５−クロロピリジン（６）（１６.３ｋｇ、１.０当量）およびアセトニトリル（８７.５ｋｇ、３.５倍量）を３８０Ｌ  ＧＬＭＳ反応容器に加えた。反応混合物を２２℃（１９ないし２５℃）とし、無水ピリジン（３０.０ｋｇ、３.０当量）を加えた。ポンプおよびラインは、アセトニトリル（２２.５ｋｇ、０.９倍量）で洗い込み、反応容器の内容物は１９−２２℃とした。温度を２５℃（２２−２８℃）に保ちつつ、オキシ塩化リン（２３.３ｋｇ、１.２０当量）を定量ポンプを用いて反応容器の内容物に加えた。温度を２５℃（２２−２８℃）に保ち、定量ポンプおよびラインをアセトニトリル（１２.５ｋｇ、０.５倍量）で洗浄した。反応混合物は、オキシ塩化リンを約３分の１加えたところで、通常スラリーから透明な溶液に変化した。添加の最後に、懸濁液となった。添加の後、反応混合物を２５℃で約１時間、ＨＰＬＣ分析により反応の収量を確認するまで攪拌した（２２−２８℃）。溶液を、１５℃（１２−１８℃）に冷却し、飲料水（１５６.３ｋｇ、６.２５倍量）を、反応液が１２ないし３０℃に保たれるようにゆっくりと加えた。反応混合物を２２℃（１９ないし２５℃）にし、約５時間、発熱が終了するまで攪拌した。形成されたスラリーが視覚的に明らかに確認されたので、内容物を布を敷いた圧力ヌッチェによって濾過した。反応容器、ポンプおよびラインを圧力ヌッチェに飲料水によって２回洗い込んだ（６２.５ｋｇ、それぞれ２.５倍量）。濾液のｐＨは７だった。生成物（４１.８ｋｇ）は、真空中、水浴（温熱乾燥機のジャケット）の最高温度である５０℃で乾燥させた。約１２時間後、製造過程のＬＯＤ分析により溶媒量が０．７２％となった。乾燥製品７は、収率８８.２％（３４.４ｋｇ）で、ＨＰＬＣ純度は９９.１％となった。
ステップ２：
７８０Ｌ  ハステロイ反応容器に、化合物７（３３ｋｇ、１.０当量）、５％白金炭素（スルフィド、０.３３ｋｇ、０.０１０倍量）およびジクロロメタン（５７８ｋｇ、１７.５倍量）を加えた。攪拌を始め、反応容器は２２℃（１９ないし２５℃）とした。反応容器を約３０psiの水素で加圧し、反応液を緩やかに２８℃（２５ないし３１℃）に加熱した。反応容器中での水素化は、約３０psi、２８℃（２５ないし３１℃；最高温度が３１℃）において、ＨＰＬＣで反応の終了を確認するまで行った。１６．５時間後、出発物質の消失を確認し、反応が終了したと見られた（０.４７２％）。白金触媒を除くため、反応容器の内容物を、８”スパークラーフィルターにおいて調製されたセライトパッド（０.２−０.５ｋｇのセライトを２０−５５ｋｇジクロロメタンで調製した）中に循環させた。反応容器およびセライト床を２回、ジクロロメタンで洗浄した（８３ｋｇ、それぞれ２.５倍量）。濾液は、５７０Ｌ  ＧＬＭＳ反応容器に移し、大気圧中で約１３２Ｌ（４倍量容積）まで濃縮した。エタノール（６９ｋｇ、２.１倍量）を加え、大気圧中で約９９Ｌになるまで濃縮した（３倍量容積）。製造過程でのＮＭＲでは、ジクロロメタンの含量は３９％だった。エタノール（６９ｋｇ、２.１倍量）を再び加え、大気圧中で約９９Ｌになるまで濃縮した（３倍量容積）。製造過程でのＮＭＲでは、ジクロロメタンの含量は５％だった。反応混合物を３℃（０ないし６℃）とし、約１時間攪拌し、得られたスラリーを、布を敷いたジャケット圧力ヌッチェで濾過した。反応容器、ポンプおよびラインは冷却したエタノール（３℃（０−６℃））で洗い込んだ（２６ｋｇ、０.８倍量）。湿気を含んだフィルターケーキを真空中、（ドライヤージャケットを加熱する）最高温度が５０℃である水浴で４０−５０℃で乾燥した。１２.５時間後、ＬＯＤ分析では溶媒含量は０.１％だった。乾燥した生成物８は、収率８９.５％（２６.４ｋｇ）で得られた。ＨＰＬＣ純度は９８.４％であり、０.０８３％の脱塩素化した不純物が得られた。
【０１６０】
７８０Ｌ  ハステロイ反応容器に４−シアノ塩化ベンゾイル（９）（１７.２ｋｇ、１.１当量）およびＴＨＦ（９２ｋｇ、３.５倍量）を加えた。反応容器の内容物を２２℃（１９ないし２５℃）で、すべての固体が溶解するまで攪拌した。得られた溶液を下位にある受容容器に移し、反応容器をＴＨＦ（２６ｋｇ、１倍量）で洗い込んだ。化合物８（２６.４ｋｇ、１当量）、ＴＨＦ（３９６ｋｇ、１５倍量）およびピリジン（２.９０ｋｇ、０.４当量）をきれいな反応容器に加えた。ポンプおよびラインをＴＨＦ（３４ｋｇ、１.３倍量）で洗い込んだ。計量ポンプを用いて、４−シアノ塩化ベンゾイル／ＴＨＦ溶液を３０℃以下になるように反応容器に注いだ（約１０ｋｇ）。生成した黄色いスラリーを２２℃（１９ないし２５℃）で約２時間攪拌した。製造工程においてＨＰＬＣでは、２時間後には化合物８は０％となり、反応が終了した。スラリーは、布を敷いた圧力ヌッチェで濾過した。反応容器、ポンプ、ラインおよび湿気を含んだケーキは３回エタノールで洗浄した（それぞれ約１５ｋｇ）。フィルターケーキ（６５.４ｋｇ）が得られ、２２℃（１９ないし２５℃）のエタノール（３１７ｋｇ、１２倍量）でスラリーを洗浄するために反応容器に戻し、約１時間洗浄した。スラリーは圧力ヌッチェで濾過し、反応容器、ポンプ、ラインおよび湿気を含んだフィルターケーキを２回エタノール（それぞれ約１５ｋｇ）で、および２回ＴＨＦ（それぞれ約１５ｋｇ）で洗浄した。湿気を含んだフィルターケーキは真空中、温熱グリコール浴の最大温度の４０℃で乾燥した（反応容器のジャケットを熱する）。１４.５時間乾燥後、ＬＯＤは０.７５％となった。乾燥物質をミル（スクリーン０.１２５”）にかけ、３１.８ｋｇの化合物１０を得、さらに１０.５時間真空下で乾燥した。乾燥後のＬＯＤは１.８％となり、生成物は収率７４.８％（３１.５ｋｇ）で得られた（期待値６０−９０％）。ＨＰＬＣ純度は１００％だった。
【０１６１】
ステップ４：
化合物１０のスラリーに（４５５ｇ、１.０当量）ＴＨＦ（４.６７ｋｇ、１０.３倍量）を加え、溶液を＜１０℃とした。リチウムジメチルアミドを以下の通りに調製した。ヘキシルリチウム（２.３Ｎ／ヘキサン、２.４５Ｌ、５.５当量）にジメチルアミン溶液（２Ｎ／ＴＨＦ、２.８Ｌ、５.５当量）を＜１０℃を保ちつつ加えた。反応容器が＜１０℃に保たれるようにしつつ、リチウムジメチルアミド溶液にスラリーを含む化合物１０を加えた。反応過程は、製造過程ＨＰＬＣでモニターし、化合物１０の残量が＜１.０％になるのを確認した。ＮａＨＣＯ３（４９０g、１.１倍量、５.７当量）およびＮａ２ＣＯ３（４９０g、１.１倍量、４.５当量）の緩衝溶液の脱イオン水（６.６ｋｇ、１４.５１倍量）を調製し、上記反応混合物を＜５℃に保ちつつこの水溶液に移した。生成物は沈殿し、得られたスラリーは１２時間以上をかけて２０℃とした。固体を濾過し、生じた湿気のあるケーキを３.５ｋｇ（７.７倍量）の脱イオン水で洗浄した。固体は、粗い目のグラスベンチフィルターを用いて濾過し、冷却した（０−５℃）無水エタノール（６２８g、１.４倍量）で洗浄した。生成したベトリキサバンは３０−３５℃で乾燥した。乾燥製品は４５８g（収率７３％）得られた。
【実施例３】
【０１６２】
灌流チャンバー血栓症アッセイ（Ｉ）における化合物Ａおよびベトリキサバンの併用
リアルタイム灌流チャンバーアッセイは、臨床試験における薬物活性をモニターするのに適したアッセイを作るために、生体顕微鏡を用いる動物の血栓症モデルの特徴と灌流チャンバー技術の特徴を結びつけた。このアッセイは、全血を動脈毛細血管に灌流し、血管形成性のタイプＩＩＩコラーゲンにせん断速度で曝して行う。血栓の析出が灌流チャンバーの内部の蛍光の強度の測定によって分析できるように、灌流の前に、血小板を蛍光染料（ローダミン６Ｇ）でラベルした。定量は、血栓の高さの測定によって行った（蛍光強度（ピクセル数）／総面積（μｍ２））。
【０１６３】
化合物Ａは、このアッセイでは、ヒト血小板豊富な血漿、特にクロピドグレルが標的とする血小板凝集により誘導されたＡＤＰを阻害するレベルと等価の濃度でアッセイされた。ここで、クロピドグレルは、広く抗血小板剤として用いられ、その抗血栓活性は血小板Ｐ２Ｙ１２受容体阻害を介している。図１に示すように、血小板凝集を有意に阻害しうる１.１μＭの化合物Ａで血液を処理した場合には、血栓症をほんの部分的に阻害した（２３％±１４％、ｐ＞０.０５、ｎ＝４）。血液を化合物Ａで処理したものに、ベトリキサバンを追加した場合には、有意な血栓症の阻害効果が見られた（６８％±３％、５９％±１４％，および５７％±１１の阻害％、ベトリキサバンはそれぞれ１μＭ、３００ｎＭおよび１００ｎＭ、ｐ＜０．０１、ｎ＝４）。図２は、ベトリキサバン濃度が１μＭおよび３ｎＭの間である場合の血栓症の用量依存的阻害効果を示す。
【実施例４】
【０１６４】
化合物Ａおよびベトリキサバンを併用したリアルタイム血栓症アッセイ（ＩＩ）
血液は、健康なボランティアから静脈穿刺によって集め、メトリキサバン５μＭを加えた。試験管内で化合物Ａの濃度を増加させた。２０分の培養に続き、コラーゲンをコーティングした毛細管を通じて血液を灌流させた（タイプＩＩＩコラーゲン、１６００秒−１）。図３に見られるように、化合物Ａの濃度の増加によって、用量依存的に血栓症の阻害を示した（１０μＭの化合物Ａによる一層の血小板において）。
【実施例５】
【０１６５】
トロンビン生成アッセイにおける化合物Ａおよびベトリキサバンの併用
全血を健康なボランティアから静脈穿刺によって集め、抗凝血剤として３.２％クエン酸・三ナトリウム塩（バキュテナー、ベクトン・ディッキンソン社）を加えた。遠心分離によって血小板豊富な血漿を調製し、血小板数を１５０，０００／μＬとした。９６ウェルプレートにおいて、コンバルキシンを加えることにより血小板を活性化し（２００ｎｇ／ｍＬ）、３７℃で３分培養した。血小板の活性化に続き、２３ｐＭ組織因子（イノビン、デイドベーリング社）および１５ｍＭカルシウムを加えることにより、トロンビン生成を開始した。トロンビンの活性は、蛍光プレートリーダーによって、特異的蛍光発生基質（Ｚ−ｇｌｙ−ｇｌｙ−ａｒｇ−ＡＭＣ、バッケム社）の開裂をモニターした。
【０１６６】
ヒト由来の血小板においては、化合物ＡによるＡＤＰ誘導性血小板凝集阻害の５０％阻害濃度は、４.７±５.１μＭ（ｎ＝１９）だった。第Ｘａ因子阻害剤であるベトリキサバンでは、治療薬である抗凝血剤（五糖  フォンダパリヌクス）によって行われるトロンビン生成の等価な阻害には、３１.２５ｎＭで十分であった。図４に見られるように、化合物Ａは血小板凝集の最大阻害濃度（１０μＭ）においても、相当なトロンビン生成が生体外において行われている。同様の結果が第Ｘａ因子阻害剤であるベトリキサバンの治療濃度においても得られた。しかし、二剤の併用では、トロンビン生成の阻害がより大きく見られた。トロンビン活性は、血栓症の病態のメディエーターとなっているため、それぞれの単剤投与よりも二剤の併用は、よりすぐれた活性を持つ可能性がある。
【実施例６】
【０１６７】
化合物Ａおよび抗第ＸＩ因子抗体の併用（I）
この実施例では、非−抗凝血性の全血が健康なボランティアから集められ、ローダミン６Ｇ（血小板を蛍光標識できる物質）を第ＸＩ因子の抗体（ヘメテック社）および化合物Ａとともに加えた。その後、コラーゲン（タイプＩコラーゲン）をコーティングした動脈毛細管を通じてせん断速度（１０００秒−１）で血液を灌流させた。灌流後、血小板の血栓の大きさを蛍光によって測定した。図５に示すように、抗第ＸＩ因子抗体単独では、アッセイ条件下では濃度１０μｇ／ｍＬまでは血栓の大きさを減少させなかった。化合物Ａ単独では、１０μＭでは血小板血栓の大きさに有意な差は見られなかった。しかし、化合物Ａ１０μＭを第ＸＩ因子抗体と併用した場合には、用量依存的な血栓の大きさの変化が見られた。５０％阻害濃度は、第ＸＩ因子抗体が１０μg／ｍＬとなった。
【実施例７】
【０１６８】
化合物Ａおよびベトリキサバンの抗第ＸＩ因子抗体（II）の併用
毛細管をタイプＩコラーゲンおよび組織因子（イノビン（ベイド−ベーリング社）に対し、１／１００のコラーゲン））でコーティングした。毛細管で灌流する前に、非−抗凝集性血をローダミン６Ｇ、１０μＭの化合物Ａおよびベトリキサバンまたは第ＸＩ因子の抗体を加えた。図６に示すように、１０μＭの化合物Ａおよび第ＸＩ因子抗体を組み合わせた場合に、化合物Ａ単独、または、化合物Ａとベトリキサバンを組み合わせた場合よりも、有意に血栓形成を阻害することがわかった。
【実施例８】
【０１６９】
化合物Ａおよびビバリルジン（直接的トロンビン阻害剤）の併用
以下のアッセイにあるとおり、追加的な抗血栓剤は、化合物Ａが直接のトロンビン阻害剤、例えば、ビバリルジンと組み合わせた場合に有益である。血液には、１２μｍ／ｍＬのビバリルジン（標準的な治療濃度）を追加し、化合物Ａの様々な血液濃度の中で培養した。様々な濃度の化合物Ａ（０．１、１または１０μＭ）と２０分間、ローダミン６Ｇ（血小板を蛍光標識できる物質）存在下、培養し、灌流させた。コラーゲン（タイプＩＩＩ）をコーティングした毛細管を通じて動脈性のせん断速度（１６００秒−１）で血液を灌流させた。これらの条件下、ビバリルジン単独では有意に凝血過程を阻害しなかったが、化合物Ａと併用すると、用量依存的に血栓症阻害が見られた。図７では、化合物Ａおよびビバルジンの併用の場合の抗血栓の有効性を示す。
【実施例９】
【０１７０】
Ｐ２Ｙ１２アンタゴニストである化合物Ａおよびアスピリン（シクロオキシゲナーゼ阻害剤）および第Ｘａ因子阻害剤の併用
リアルタイム灌流チャンバーアッセイを用いて、健康なドナーの血栓のプロフィールを評価するため、アスピリンを投与されたヒトの全血を静脈穿刺により集め（８１ｍｇまたは３２５ｍｇ／日、３日）、化合物Ａに加え、アスピリンの添加による抗血栓効果を評価した。このアッセイでは、ガラスキャピラリーは、タイプＩコラーゲンによってコーティングされ、ヒトの全血（２０分間攪拌し、ローダミン−６Ｇ（（１６００秒−１）血小板を蛍光標識できる物質）が集められて、第Ｘａ因子阻害剤であるＣ９２１−７８を加えられ、固定のせん断速度で灌流した。（Betz A， Wong PW， Sinha U. Inhibition of factor Ｘａ by a peptidyl-alpha-ketothiazole involves ２ steps： evidence for a stabilizing conformational change. Biochemistry １９９９； ３８： １４５８２−１４５９１を参照。ここに参考文献として、そのすべてを組み込む。）。灌流中、血栓症は、蛍光を測定することによって行った（臨床の蛍光強度／面積μ／ｍ２）。それは、コラーゲン表面の血小板を測定することになる。
【０１７１】
図８に示すように、試験管内の全血に加えた場合（毛細管で灌流する１５分前に培養した。）、化合物Ａの濃度を増加するにつれて、用量依存的な血栓形成阻害効果を示した。統計的に化合物Ａは、０.３７μＭの場合に、アスピリンおよび第Ｘａ因子阻害剤の存在下、顕著な抗血栓効果を有するのに対し、アスピリンを含まない場合のＰ２Ｙ１２アンタゴニスト単独では検出可能な抗血栓活性は見られなかった。
【実施例１０】
【０１７２】
化合物Ａおよびイフェトロバン（ＴＰ阻害剤）および第Ｘａ因子阻害剤の併用
【０１７３】
前述の実施例に示したのと同様に、化合物ＡおよびＴＰアンタゴニスト（例イフェトロバン）および第Ｘａ因子阻害剤を併用した場合には、さらなる抗血栓効果を示した。
この例では、血液は健康なボランティアから静脈穿刺により集められ、第Ｘａ因子阻害剤Ｃ９２１−７８（上述参照）を加えた。このアッセイでクロピドグレルと類似の阻害活性を有する化合物Ａも血液サンプルに加えられた。図９に示されるように、コラーゲンでコーティングした毛細管（タイプＩコラーゲン、１６００秒−１）で灌流する３０分前に、イフェトロバンを全血に加え、化合物Ａ(１．１μＭ)とあらかじめ培養した。その結果、第Ｘａ因子阻害剤存在下、１．１μＭの化合物Ａおよび３０ｎＭのイフェトバンの併用により、用量依存的に血栓阻害効果が観測された。これは、クロピドグレルとアスピリンまたは化合物Ａとアスピリンの併用の場合と同程度の阻害効果であった。
【実施例１１】
【０１７４】
化合物Ａおよび第因子Ｘａ阻害剤の併用によるリアルタイム血栓症アッセイ
上述の通りに、血液を健康なボランティアから静脈穿刺により集め、様々な濃度（５−２０μＭ）の第Ｘａ因子阻害剤を加えた。化合物Ａの濃度を増加させたものを試験管内に加えた。２０分の培養の後、実施例４で述べたとおりにコラーゲンでコーティングした毛細管（タイプＩコラーゲン、１６００秒−１）で灌流した。化合物Ａの濃度を増加させたものと選択された固定濃度の第Ｘａ因子阻害剤（例えば、リバロキサバン、アピキサバン）の併用は、用量依存的な血栓阻害効果を示すと考えられる。
【実施例１２】
【０１７５】
化合物Ａおよび第Ｘａ因子阻害剤のトロンビン生成アッセイ
健康なボランティアから全血を静脈穿刺によって集め、抗凝血剤として３.２ ％クエン酸・三ナトリウム塩（バキュテナー、ベクトン・ディッキンソン社）を加えた。遠心分離によって血小板豊富な血漿を調製し、血小板数を１５０，０００／μＬとした。９６ウェルプレートにおいて、コンバルキシンを加えることにより血小板を活性化し（２００ｎｇ／ｍＬ）、３７℃で３分培養した。血小板の活性化に続き、２３ｐＭ組織因子（イノビン、デイドベーリング社）および１５ｍＭカルシウムを加えることにより、トロンビン生成を開始した。トロンビンの活性は、以下の参考文献に従い、蛍光プレートリーダーによって、特異的蛍光発生基質（Ｚ−ｇｌｙ−ｇｌｙ−ａｒｇ−ＡＭＣ、バッケム社）の開裂をモニターした。Sinha U. et al,  Inhibition of purified factor Xa amidolytic activity may not be predictive of inhibition of in vivo thrombosis.  Implications for identification of therapeutically active inhibitors. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2003, 23:1098-1104。実施例５と同様、化合物Ａを第Ｘａ因子阻害剤（例えば、リバロキサバン、アピキサバンまたは他の第Ｘａ因子阻害剤）と併用すると、それぞれの化合物を単独で、同一の濃度で投与するよりも、大きな割合でトロンビン生産を阻害する。
【実施例１３】
【０１７６】
化合物Ａおよび第Ｘａ因子阻害剤の併用による腸間膜動脈の血栓症モデルのマウスにおける阻害効果
腸間膜動脈血栓症モデルのマウスによるアッセイ（せん断速度１０００−１３００秒−１）は、前述したAndre, P. et al., Anticoagulants (thrombin inhibitors) and aspirin synergize with P2Y12 receptor antagonism in thrombosis. Circulation, 2003, 108(21):2697-703  に示されたものをわずかに変更して行い、記録した。血小板は、ローダミン６Ｇ（０.２ ｍｇ／ｍＬ）を尾静脈を通じてそのまま（in situ）投与してラベルした。血管の可視化の１０分前に行った。血管壁の傷害は、５％ ＦｅＣｌ３溶液で飽和した１×１−ｍｍフィルター紙によって発生させた。５分後、腸間膜のフィルター紙をはずし、腸管壁を暖かい生理食塩水（３７℃）で洗浄し、血小板と血管壁の相互作用は４０分間、または完全に閉塞が起こった後４０秒以上にわたり記録した。Ｃ５７Ｂｌ６Ｊマウスは、コントロール物質、化合物Ａ（７.５、２０、６０ ｍｇ／ｋｇ）または、ベトリキサバン（４、４０、４００ ｍｇ／ｋｇ）を血管障害の２時間前に強制経口投与された。血栓症は、リアルタイムで分析され、Simple PCIソフトウエアを用いて、Andre, P. et al., P2Y12 regulates platelet adhesion/activation, thrombus growth, and thrombus stability in injured arteries. J Clin Invest, 2003, 112(3):398-406.  に記載されている通りに行った。蛍光強度を２Hzで４０分間記録し、経過時間でプロットした。閉塞の時間（血流の停止）を分析した。
【０１７７】
２０および６０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの投与により、化合物Ａは、観測時間中４０分以上にわたり、血管障害を防いだ。７.５ｍｇ／ｋｇの投与量では、動脈血管の閉塞を遅らせた。化合物Ａの投与量により血漿中濃度が１μｇ／ｍＬ以上であれば、血管閉塞を防いだのに対し、１μｇ／ｍＬより少ない場合には、閉塞を防げなかった。２００ng／mL以下では、効果的でなかった。ベトリキサバンの血漿中濃度が、１μｇ／ｍＬ以上では、血栓を防いだ。１００ｎｇ／ｍＬより少ないと効果がない。非効果的な投与量の化合物Ａおよびベトリキサバンを併用すると、強力な抗血栓活性が得られることが考えられる。同様に、マウスの生体顕微鏡血栓モデルにおいて、他の第Ｘａ因子阻害剤（例えば、リバロキサバン、アピキサバン）も顕著な抗血栓活性を示すことが予想される。非効果的な用量のリバロキサバンまたは他の第Ｘａ因子阻害剤を上述したように、非効果的な用量の化合物Ａと併用した場合に、強力な相乗的抗血栓効果が観測されることが予測される。
【実施例１４】
【０１７８】
化合物Ａおよびベトリキサバンの併用による腸間膜動脈の血栓症モデルのマウスにおける阻害効果
マウスの腸間膜動脈血栓症（せん断速度１０００−１３００秒−１）を、前述したAndre, P. et al., Anticoagulants (thrombin inhibitors) and aspirin synergize with P2Y12 receptor antagonism in thrombosis. Circulation, 2003, 108(21):2697-703  に示されたものをわずかに変更して形成させ、記録した。ローダミン６Ｇ（０.２ｍｇ／ｍＬ）を尾静脈を通じて投与し、血管の可視化の１０分前に血小板をラベルした。血管壁の傷害は、１×１−ｍｍフィルター紙を飽和１０％ＦｅＣｌ３溶液によって発生させた。血管壁の傷害は、腸間膜のフィルター紙をはずし、腸管壁を暖かい生理食塩水（３７℃）で洗浄し、血小板と血管壁の相互作用は４０分間、または完全に閉塞が起こった後４０秒以上にわたり記録した。Ｃ５７Ｂｌ６Ｊマウスは、コントロール物質、化合物Ａ（０．８３、２．５、７．５、２０、６０ｍｇ/kg）または、ベトリキサバン（２、４、１０ｍｇ／ｋｇ）を血管障害の２時間前に強制経口投与された。血栓症は、リアルタイムで分析され、Simple PCIソフトウエアを用いて、Andre, P. et al., P2Y12 regulates platelet adhesion/activation, thrombus growth, and thrombus stability in injured arteries. J Clin Invest, 2003, 112(3):398-406  に記載されている通りに行った。蛍光強度を２Hzで４０分間記録し、経過時間でプロットした。閉塞の時間（血流の停止）を分析した。
【０１７９】
このモデルでは、化合物Ａの投与量が０.８３および２.５ｍｇ／ｋｇでは、効果はなかった。化合物Ａの投与量が７.５、２０および６０ｍｇ／ｋｇの場合には、最初の血栓の出現時間（図１０−１３）および血管閉塞が遅れた。化合物Ａの投与量が２０および６０ｍｇ／ｋｇの場合には、血管障害による閉塞は、観測時間中４０分以上にわたり見られなかった。化合物Ａの血漿レベルが１ μg／ｍＬより高い場合には、血管閉塞を防ぐが、血漿中濃度が、１μｇ／ｍＬより低いと、閉塞を防がなかった（図１３）。このモデルでは、血漿中濃度が２００ｎｇ／ｍＬより低くなると、非効果的であることがわかった（図１３）。ベトリキサバンの投与量が２および４ｍｇ／ｋｇの場合には、効果がなかったのに対し、ベトリキサバン１０ｍｇ／ｋｇでは、最初の血栓の出現時間および閉塞時間がともに顕著に遅れた（図１４−１７）。化合物Ａ（２.５ｍｇ／ｋｇ）およびベトリキサバン（２および４ｍｇ／ｋｇ）を併用した場合には、抗血栓活性の強力な相乗効果が得られた（図１４−１７）。
【０１８０】
化合物Ａおよびベトリキサバンの血漿中濃度は、閉塞から２分または血管傷害を発生させてから４２分後の採血により測定した。
【０１８１】
本発明は、上述の具体例と合わせて理解されるが、前述の記述および実施例は、説明のために用いられたものであり、発明の範囲を限定するものではない。また、発明の範囲における付随する利点および変更は、当業者にとっては、明らかである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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