(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記〔化２〕または〔化３〕の一般式で示されるアゾベンゼン誘導体を有効成分として含むマトリックスメタロプロテイナーゼ（以下、「ＭＭＰ」という。）阻害剤。
【化２】
0005419582.tif 000055
【化３】
0005419582.tif 000056
（ただし、式中Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、メチル基、メトキシ基またはカルボキシル基であり、Ｒ２〜Ｒ４は、それぞれに独立して水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、または炭素数１〜８のアルキル基もしくはアルコキシ基（いずれの位置で枝分かれしているものを含む）である。）
【請求項２】
前記アゾベンゼン誘導体が下記〔化４〕の一般式で示される請求項１記載のＭＭＰ阻害剤。
【化４】
0005419582.tif 000057
（ただし、式中Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、メチル基、メトキシ基またはカルボキシル基である。）
【請求項３】
前記アゾベンゼン誘導体が下記〔化１７〕，〔化１８〕〔化１９〕または〔化２０〕で示される請求項２記載のＭＭＰ阻害剤。
【化１７】
0005419582.tif 000058
【化１８】
0005419582.tif 000059
【化１９】
0005419582.tif 000060
【化２０】
0005419582.tif 000061
【請求項４】
前記アゾベンゼン誘導体が下記〔化５〕の一般式で示される請求項１記載のＭＭＰ阻害剤。
【化５】
0005419582.tif 000062
（ただし、式中Ｒ１は、水素原子またはハロゲン原子である。）
【請求項５】
前記アゾベンゼン誘導体が下記〔化２５〕または〔化２６〕で示される請求項４記載のＭＭＰ阻害剤。
【化２５】
0005419582.tif 000063
【化２６】
0005419582.tif 000064
【請求項６】
下記〔化２〕の一般式で示されるアゾベンゼン誘導体。
【化２】
0005419582.tif 000065
（ただし、式中Ｒ１は、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、メチル基、メトキシ基またはカルボキシル基であり、Ｒ２〜Ｒ４は、それぞれに独立して水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、または炭素数１〜８のアルキル基もしくはアルコキシ基（いずれの位置で枝分かれしているものを含む）である。）
【請求項７】
前記アゾベンゼン誘導体が下記〔化９〕，〔化１１〕〜〔化１２〕，〔化１４〕〜〔化１６〕，〔化１８〕〜〔化２０〕のいずれかである請求項６記載のアゾベンゼン誘導体。
【化９】
0005419582.tif 000066
【化１１】
0005419582.tif 000067
【化１２】
0005419582.tif 000068
【化１４】
0005419582.tif 000069
【化１５】
0005419582.tif 000070
【化１６】
0005419582.tif 000071
【化１８】
0005419582.tif 000072
【化１９】
0005419582.tif 000073
【化２０】
0005419582.tif 000074
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤およびこれに用いる新規なピリジルアゾベンゼン誘導体に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
マトリックスメタロプロテイナーゼ（以下「ＭＭＰ」という。）は、コラーゲン、ゼラチンのような高分子蛋白質の加水分解に関わっている酵素であり、現在までに２３種類確認されている。ＭＭＰは様々な病気に関わっており、癌においてはMMPの過剰発現が知られている。なかでもＭＭＰ−２（血管新生）、ＭＭＰ−９(転移)、ＭＭＰ−１４（proＭＭＰ−２の活性化）が重要な役割を果たしているとされている。そのため、ＭＭＰは新たな抗がん剤のターゲットとして注目されている（非特許文献１）。
【０００３】
ところで、ＭＭＰは亜鉛を含む酵素であるため、これまでに開発されてきた低分子ＭＭＰ阻害剤の多くは、亜鉛とキレートする官能基をその分子内に有している。官能基の具体例としては、カルボン酸、ヒドロキサム酸、リン酸、チオール、ジチオールなどがある。その中でもヒドロキサム酸は亜鉛と強く作用するため，最も多く用いられている基である。第３相試験まで進んだ代表的なＭＭＰ阻害剤を以下〔化３３〕〜〔化３６〕に示す。
【０００４】
【化３３】
0005419582.tif 000002
【０００５】
【化３４】
0005419582.tif 000003
【０００６】
【化３５】
0005419582.tif 000004
【０００７】
【化３６】
0005419582.tif 000005
【０００８】
しかしヒドロキサム酸はサブタイプ選択性が乏しいために、ＭＭＰ−１を同時に阻害することにより関節痛を引き起こしてしまうこと、並びに体内動態が悪いこと等の欠点を有している。そのため、ヒドロキサム酸に変わる亜鉛結合グループ（Zn-binding group：ＺＢＧ)を有する、新たなＭＭＰ阻害剤が求められている。
【０００９】
ヒドロキサム酸以外の活性部位に関する阻害活性評価に関しては、前述のカルボン酸、ヒドロキサム酸、リン酸、チオール、ジチオール以外にもアミノ基、ヒドロキシル基、カルボニル基等が提案され、検証されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Faith. E. Jacobson, ChemBioChem., 2008, 9, 2087-2095
【００１１】
【非特許文献２】P. J. Hajduk, J. Am. Chem. Soc.,1997, 119, 5818-5827
【００１２】
【非特許文献３】Philip. J. Hajduk, J. Med. Chem.,2002, 45, 5628-5639
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
しかしながら、これら報告されているＭＭＰ阻害剤においても、不安定な活性部位を有するため、ＭＭＰ−１を阻害することなくＭＭＰ−２のみを阻害するという選択性（ＭＭＰ−２選択性）において満足できるものが得られていないのが現状である。
【００１４】
また薬の適合性は被験者によって異なり、ある被験者には、有効成分が化合物Ａである薬品が最も効果が認められるが、別の被験者には大きく構造の異なる化合物Ｂを有効成分とする薬品が最も効果が認められる現象はしばしば見受けられる。このことからは、従来の化合物の構造と大きく異なる構造を持つ化合物を有効成分とするＭＭＰ阻害剤が求められる。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
上記課題を解決するため、本発明では下記〔化２〕または〔化３〕で示される一般式で示されるアゾベンゼン誘導体をＭＭＰ阻害剤の有効成分として用いることを最も主要な特徴とする。
【００１６】
【化２】
0005419582.tif 000006
【化３】
0005419582.tif 000007
【００１７】
【化２】
0005419582.tif 000008
【００１８】
【化３】
0005419582.tif 000009
【００１９】
ただし、式中Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、メチル基、メトキシ基またはカルボキシル基であり、Ｒ２〜Ｒ４は、それぞれに独立して水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、または炭素数１〜８のアルキル基もしくはアルコキシ基（いずれの位置で枝分かれしているものを含む）である。
【００２０】
なかでも、下記〔化４〕の一般式で示される前記アゾベンゼン誘導体を含むＭＭＰ阻害剤であることが好ましい。
【００２１】
【化４】
0005419582.tif 000010
ただし、式中Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、メチル基、メトキシ基またはカルボキシル基である。
【００２２】
具体的には、前記アゾベンゼン誘導体が下記〔化１７〕，〔化１８〕〔化１９〕または〔化２０〕で示されるＭＭＰ阻害剤である。
【００２３】
【化１７】
0005419582.tif 000011
【００２４】
【化１８】
0005419582.tif 000012
【００２５】
【化１９】
0005419582.tif 000013
【００２６】
【化２０】
0005419582.tif 000014
【００２７】
もしくは、下記〔化５〕の一般式で示される前記アゾベンゼン誘導体を含むＭＭＰ阻害剤であることが好ましい。
【００２８】
【化５】
0005419582.tif 000015
【００２９】
ただし、式中Ｒ１は、水素原子またはハロゲン原子である。
【００３０】
具体的には、前記アゾベンゼン誘導体が下記〔化２５〕または〔化２６〕で示されるＭＭＰ阻害剤である。
【００３１】
【化２５】
0005419582.tif 000016
【００３２】
【化２６】
0005419582.tif 000017
【００３３】
また本発明は、上記ＭＭＰ阻害剤に用いる新規化合物である上記〔化２〕のピリジルアゾベンゼン誘導体の発明でもある。
【００３４】
具体的には下記〔化９〕，〔化１１〕〜〔化１２〕，〔化１４〕〜〔化１６〕，〔化１８〕〜〔化２０〕で示されるピリジルアゾベンゼン誘導体である。
【００３８】
【化９】
0005419582.tif 000018
【００４０】
【化１１】
0005419582.tif 000019
【００４１】
【化１２】
0005419582.tif 000020
【００４３】
【化１４】
0005419582.tif 000021
【００４４】
【化１５】
0005419582.tif 000022
【００４５】
【化１６】
0005419582.tif 000023
【００４７】
【化１８】
0005419582.tif 000024
【００４８】
【化１９】
0005419582.tif 000025
【００４９】
【化２０】
0005419582.tif 000026
【発明の効果】
【００５０】
本発明の化合物は、構造が安定しておりＭＭＰ−１よりもＭＭＰ−２に対して大きな阻害活性を示す活性部位として有用である。また構造上、体内で代謝されにくく、従来のヒドロキサム酸活性部位と比較して安定であるので体内動態においても優れていると考えられる。
【００５１】
本発明のＭＭＰ阻害剤は、その活性部位として２-ニトロフェニルアゾピリジンという従来知られているヒドロキサム酸のような活性部位とは大きく構造の異なる部位を持つ化合物である。かかる活性部位がＭＭＰ阻害効果、なかでもＭＭＰ−１に対するＭＭＰ−２選択性を持つことは本発明によって初めて明らかにされた。これにより、ＭＭＰ阻害剤という薬品として提供できる種類の幅が広がり、従来のＭＭＰ阻害剤では効果を得にくかった、或いは得られなかった患者に対し、新たなＭＭＰ阻害剤を提供できる可能性を広げた。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】本発明実施例で合成した化合物1aのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図２】本発明実施例で合成した化合物1bのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図３】本発明実施例で合成した化合物1cのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図４】本発明実施例で合成した化合物1dのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図５】本発明実施例で合成した化合物1eのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図６】本発明実施例で合成した化合物1fのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図７】本発明実施例で合成した化合物1gのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図８】本発明実施例で合成した化合物1hのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図９】本発明実施例で合成した化合物1iのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図１０】本発明実施例で合成した化合物1jのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図１１】本発明実施例で合成した化合物1lのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図１２】本発明実施例で合成した化合物1mのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図１３】本発明実施例で合成した化合物1nのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図１４】本発明実施例で合成した化合物1oのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図１５】本発明実施例で合成した化合物2aのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図１６】本発明実施例で合成した化合物2cのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図１７】本発明実施例で合成した化合物2dのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図１８】本発明実施例で合成した化合物2eのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図１９】本発明実施例で合成した化合物2gのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図２０】本発明実施例で合成した化合物2hのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図２１】本発明実施例で合成した化合物2iのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図２２】本発明実施例で合成した化合物2jのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図２３】本発明実施例で合成した化合物2kのＦＴ-ＩＲチャートである。
【図２４】本発明実施例で合成した化合物2lのＦＴ-ＩＲチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
本発明は下記〔化２〕及び／または〔化３〕の２種の一般式によって示されるピリジルアゾベンゼン誘導体を有効成分とするＭＭＰ阻害剤である。このうち〔化２〕の一般式で表されるピリジルアゾベンゼン誘導体は、Ｒ１が水素原子のものを除き、本発明のＭＭＰ阻害剤に用いるために、はじめて合成された新規化合物である。
【００５５】
【化２】
0005419582.tif 000027
【００５６】
【化３】
0005419582.tif 000028
【００５７】
なお上記各一般式中において式中Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、メチル基、メトキシ基またはカルボキシル基であり、Ｒ２〜Ｒ４は、それぞれに独立して水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、または炭素数１〜８のアルキル基もしくはアルコキシ基（いずれの位置で枝分かれしているものを含む）である。
【００５８】
具体的には、各任意の置換基としてＲ１は、水素原子のほか、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等のハロゲン原子、ヒドロキシル基、メチル基、メトキシ基、カルボキシル基やそのエステルなどである。
【００５９】
また各任意の置換基としてＲ２〜Ｒ４は、それぞれに独立して水素原子、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、iso−ブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、iso-ペンチル基、n-ヘキシル基、iso-ヘキシル基、n-ヘプチル基、iso-ヘプチル基、n-オクチル基、iso-オクチル基、tert-オクチル基、メトキシ基、エトキシ基、n-プロポキシ基、iso-プロポキシ基、n-ブトキシ基、iso-ブトキシ基、sec-ブトキシ基、tert-ブトキシ基、n-ヘキシルオキシ基、iso-ヘキシルオキシ基、n-ペンチルオキシ基、iso-ペンチルオキシ基、n-オクチルオキシ基、イソオクチルオキシ基、tert-オクチルオキシ基などである。
【００６０】
一般式〔化２〕で示される化合物は、例えば下記〔化３２〕に示した反応式を経て合成することが出来る。
【００６１】
【化３２】
0005419582.tif 000029
【００６２】
水の中にニトロアニリン誘導体などを分散させ、塩酸や硫酸等で酸性塩化する。酸としては酢酸等も使用することができる。亜硝酸ソーダを低温下で滴下してジアゾニウム塩とし、これをピリジノール誘導体などのカップラーに徐々に加えることでカップリング反応が生じ、赤色もしくは暗赤色のモノアゾ体が生成する。これを濾し取り、アルコールやベンゼン、トルエン等にて一旦溶解させて不溶解分を取り除き、再結晶すれば目的の精製物が得られる。なお３-ピリジノールのように反応段階で異性体を生成する場合は、さらにカラムクロマトグラフィーにより分割する。
【実施例】
【００６３】
以下、実施例によって本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は実施例の様態のみに限られるものではない。
【００６４】
（化合物1a，1bの合成）
化合物1a：
化合物1b：5-ヒドロキシ-2-(2-ニトロフェニルアゾ)ピリジン
5-Hydroxy-2-(2-nitrophenylazo)pyridine  〔化７〕
【化７】
0005419582.tif 000030
【００６５】
Ａ．ジアゾニウム塩の合成
500mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、o-ニトロアニリン(o-nitroaniline) 20.72g（0.150mol）、水95.6mLおよび分散剤（商品名「リパール８６０Ｋ」ライオン社製）0.1gを加えて室温で撹拌した。濃硫酸30.0g(0.300mol)を少しずつ加えた後、70℃で１時間撹拌し、氷水で0℃まで冷却し、36%亜硝酸ナトリウム水溶液31.1g(0.162mol)を0〜5℃に保ちながら0.5時間かけて滴下した。同じ温度を保ちながら２時間反応させ、スルファミン酸1.0gを加えて過剰の亜硝酸イオンを消失させた。ブフナーロートで濾過して未反応のo-ニトロアニリンと重合物を除去し、約２００ｍLの黄色透明であるジアゾニウム塩水溶液を得た。
【００６６】
Ｂ．カップラーの調製
1000mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、3-ピリジノール(3-pyridinol) 15.0g (0.158mol)、水210mL、１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム(1-naphthalenesulfonic acid sodium salt)1.5g及びトルエン6mLを加えて撹拌し、3-ピリジノール溶液とした。一方、ビーカーに水酸化ナトリウムを28.06g (0.702mol)加えて水125mLで溶解させた水酸化ナトリウム水溶液を51g測りとって、前記3-ピリジノール溶液に加え、カップリング反応に用いるカップラーを得た。前記カップラーはアイスバスにて0℃まで冷却した。
【００６７】
Ｃ．カップリング反応
上記Ａの工程で合成したジアゾニウム塩水溶液も0〜10℃に冷却して保存しておき、これを、チューブポンプを用いて前記カップラーに滴下することでカップリング反応させた。ジアゾニウム塩水溶液の滴下は残りの水酸化ナトリウム水溶液とともに２時間をかけてゆっくりと滴下し、赤色のアゾ色素が徐々に生成されるのが確認できた。滴下終了後、0〜10℃で2時間撹拌し、その後室温下で一夜放置し、さらに反応を進行させた。濾紙上でＲ酸と赤く反応しないことによってジアゾニウム塩が消失しているのを確認し、反応終了とした。反応生成液は、希硫酸でＰＨ８まで中和し、ブフナーロートで赤色結晶を濾過し取り、1000mLの水で洗浄して無機塩を除去した後、恒温乾燥機で乾燥させた。収量は26.1g、粗収率71.3％で、化合物1aと化合物1bの混合物を得た。HPLCにて混合比を確認したところ、化合物1a：化合物1b＝約２：８であった。
【００６８】
Ｄ．再結晶による精製
200mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、上記Ｃの工程で得た混合物であるアゾ色素3.0g(0.0123mol)、トルエン100mLを加えて100℃まで加熱して溶解させ、１μmのメンブランフィルターで不溶解物を濾過して除き、トルエンを減圧留去し、n-ヘキサン／酢酸エチル=１／１(vol./vol.)の混合溶媒30mlを加えて析出した結晶を濾取した。前記結晶は、さらにn-ヘキサン／酢酸エチル=１／１(vol./vol.)の混合溶媒50mlで洗浄し、恒温乾燥機で乾燥させて精製したところ、暗赤色の混合物結晶1.28gを得た。o-ニトロアニリンからの収率は30.4%であった。
【００６９】
Ｅ．混合物の分割
フラッシュクロマトグラフィー(移動層：n-ヘキサン／酢酸エチル=１／１(vol./vol.))で各々の成分を分画し、溶媒を回収して乾燥後、化合物1aおよび化合物1bをそれぞれ得た。
【００７０】
化合物1aは、濃赤色の粉末状結晶であり、上記Ｃの工程で得られた混合体結晶0.5gから45mgを得られた。o-ニトロアニリンからの収率は2.74%であった。ＨＰＬＣによる純度は９７．３％であった。なお、ＨＰＬＣによる測定条件は次のとおりである。
装置：ＬＣ−６Ａ  （株）島津製作所製
使用カラム：ＳＵＭＩＰＡＸ  ＯＤＳ  Ａ−２１２  ５μｍ  ６ｍｍφ×１５ｃｍ
カラム温度：３０℃
移動相：メタノール／水：７０／３０  、  測定方法：面積百分率法による
【００７１】
１H  NMR（300MHz, DMSO-d6）で測定されたピークは次のとおりである。
δ11.2 (s,OH), 8.28 (d, 1H, J=3 Hz, pyridine-H)，8.12 (d, 1H, J=8.1 Hz, Ph-H)，7.85 (dd, 1H, J=7.2 Hz, Ph-H)，7.78 (dd, 1H, J=8.1 Hz,Ph-H)，7.71 (dd, 1H, J=8.1 Hz, J=1.5 Hz, Ph-H)，7.67 (d, 1H, J=8.7 Hz, pyridine-H)，7.40 (dd, 1H, J=2.7 Hz,  J=8.7 Hz, pyridine-H)，
【００７２】
また、ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、２９２０（Ｃ−Ｈ）、１５２０（Ｃ＝Ｃ）、１４３０（ＮＯ２）、１２８０（ＮＯ２）、１２４０（Ｐｈ−Ｏ）
【００７３】
化合物1bは、微褐赤色の粉末状結晶であり、上記Ｃの工程で得られた精製混合体結晶0.5gから170mgを得られた。o-ニトロアニリンからの収率は10.3%であった。ＨＰＬＣによる純度は９６．９％であった。なお測定条件は化合物１ａの条件と同じである。
【００７４】
１H  NMR （300 MHz, DMSO-d6）で測定されたピークは次のとおりである。δ11.2 (s,OH)，8.21 (m, 1H, J=4.2 Hz, pyridine-H), 8.16 (d, 1H, J=7.5 Hz, Ph-H)，7.91 (t, 1H, J=8.1 Hz, J=7.5 Hz, Ph-H)，7.86 (dd, 1H, J=1.2 Hz, J=7.5 Hz, Ph-H)，7.59 (m, 1H, J=8.1 Hz, pyridine-H)，7.52 (q, 1H, J=4.2 Hz, J=8.7 Hz, pyridine-H)
【００７５】
また、ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、２８９０（Ｃ−Ｈ）、１５２０（Ｃ＝Ｃ）、１４８０（ＮＯ２）、１２６０（ＮＯ２）、１２４０（Ｐｈ−Ｏ）
【００７６】
（化合物1c，1dの合成）
化合物1c： 
化合物1d：5-ヒドロキシ-2-(4-メチル-2-ニトロフェニルアゾ)ピリジン
5-Hydroxy-2-(4-methyl-2-nitrophenylazo)pyridine   〔化９〕
【化９】
0005419582.tif 000031
【００７７】
Ａ．ジアゾニウム塩の合成
500mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、4-メチル-2-ニトロアニリン(4-methyl-2-nitroaniline) 22.82g（0.150mol）、水136mLおよび分散剤（商品名「リパール８６０Ｋ」ライオン社製）0.1gを加えて室温で撹拌した。濃硫酸30.6g(0.306mol)を少しずつ加えた後、30〜40℃で１時間撹拌し、氷水で0℃まで冷却し、36%亜硝酸ナトリウム水溶液29.7g(0.155mol)を0〜5℃に保ちながら0.5時間かけて滴下した。同じ温度を保ちながら２時間反応させ、スルファミン酸1.0gを加えて過剰の亜硝酸イオンを消失させた。ブフナーロートで濾過して未反応の4-メチル-2-ニトロアニリンと重合物を除去し、約２００ｍLの濃黄色透明であるジアゾニウム塩水溶液を得た。
【００７８】
Ｂ．カップラーの調製
1000mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、3-ピリジノール(3-pylidinol)14.61g(0.154mol)、水217mL、１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム(1-naphthalenesulfonic acid sodium salt)3.24g及びトルエン3mLを加えて撹拌し、3-ピリジノール溶液とした。一方、ビーカーに水酸化ナトリウムを20.44g(0.511mol)加えて水146mLで溶解させた水酸化ナトリウム水溶液を56g測りとって、前記3-ピリジノール溶液に加え、カップリング反応に用いるカップラーを得た。前記カップラーはアイスバスにて0℃まで冷却した。
【００７９】
Ｃ．カップリング反応
上記Ａの工程で合成したジアゾニウム塩水溶液も0〜10℃に冷却して保存しておき、これを、チューブポンプを用いて前記カップラーに滴下することでカップリング反応させた。ジアゾニウム塩水溶液の滴下は残りの水酸化ナトリウム水溶液とともに２時間をかけてゆっくりと滴下し、赤色のアゾ色素が徐々に生成されるのが確認できた。滴下終了後、0〜10℃で2時間撹拌し、その後室温下で一夜放置し、さらに反応を進行させた。濾紙上でＲ酸と赤く反応しないことによってジアゾニウム塩が消失しているのを確認し、反応終了とした。反応生成液は、希硫酸でＰＨ８まで中和し、ブフナーロートで赤色結晶を濾過し取り、1000mLの水で洗浄して無機塩を除去した後、恒温乾燥機で乾燥させた。収量は36.9g、粗収率95.3％で化合物1cと化合物1dの混合物を得た。HPLCにて混合比を確認したところ、化合物1c：化合物1d＝２３：７６であった。
【００８０】
Ｄ．再結晶による精製
200mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、上記Cの工程で得た混合物であるアゾ色素3.0g(0.0123mol)、トルエン100mLを加えて100℃まで加熱して溶解させ、１μmのメンブランフィルターで不溶解物を濾過して除き、トルエンを減圧留去しn-ヘキサン／酢酸エチル=１／１(vol./vol.)の混合溶媒30mlを加えて析出した結晶を濾取した。前記結晶は、さらにn-ヘキサン／酢酸エチル=１／１(vol./vol.)の混合溶媒50mlで洗浄し、恒温乾燥機で乾燥させて精製したところ、暗赤色の混合物結晶1.6gを得た。5-メチル-2-ニトロアニリンからの収率は53.3%であった。
【００８１】
Ｅ．混合物の分割
フラッシュクロマトグラフィー(移動層：n-ヘキサン／酢酸エチル=１／１(vol./vol.))で各々の成分を分画し、溶媒を回収して乾燥後、化合物1cおよび化合物1dをそれぞれ得た。
【００８２】
化合物1cは、濃赤色の粉末状結晶であり、上記Ｃの工程で得られた混合体結晶0.5gから120mgが得られた。4-メチル-2-ニトロアニリンからの収率は12.8%であった。
ＨＰＬＣによる純度は８３．５％であった。なお測定条件は化合物１ａの条件と同じである。
【００８３】
１H  NMR （300 MHz, DMSO-d6）で測定されたピークは次のとおりである。δ11.2 (s,OH)， 8.21 (d, 1H, J=3.0Hz, pyridine-H)，8.0 (s, 1H, Ph-H), 7.84 (d, 1H, J=8.4 Hz, Ph-H), 7.70 (d, 1H, J=8.1 Hz, Ph-H)，7.58 (d, 1H, J=8.1 Hz, pyridine-H)，7.52 (dd, 1H, J=4.2 Hz, J=8.4 Hz, pyridine-H)，3.34 (s, 3H, CH3)
【００８４】
また、ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、２９２０（Ｃ−Ｈ）、１５６０、１５２０（Ｃ＝Ｃ）、１４３０（ＮＯ２）、１３００（ＮＯ２）、１２６０（Ｐｈ−Ｏ）
【００８５】
化合物1dは、濃赤色の粉末状結晶であり、上記Ｃの工程で得られた混合体結晶0.5gから110mgが得られた。4-メチル-2-ニトロアニリンからの収率は11.7%であった。ＨＰＬＣによる純度は９８．９％であった。
測定条件は１ａに同じ。
１H  NMR （300 MHz, DMSO-d6）で測定されたピークは次のとおりである。δ11.0 (s, OH)，8.27 (d, 1H, J=2.4 Hz, pyridine-H)，7.95 (s, 1H, Ph-H), 7.64 (d, 1H, J=9Hz,
pyridine-H)，7.39 (dd, 1H, J=2.7 Hz, J=8.7 Hz, pyridine-H)，3.34 (s, 3H, CH3),
【００８６】
また、ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、２９００（Ｃ−Ｈ）、１５６０、１５２０（Ｃ＝Ｃ）、１４８０（ＮＯ２）、１３００（ＮＯ２）、１２６０（Ｐｈ−Ｏ）
【００８７】
（化合物1e，1fの合成）
化合物1e： 
化合物1f：2-(4-クロロ-2-ニトロフェニルアゾ)-5-ヒドロキシピリジン
2-(4-Chloro-2-nitrophenylazo)-5-hydroxypyridine  〔化１１〕
【化１１】
0005419582.tif 000032
【００８８】
Ａ．ジアゾニウム塩の合成
1000mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、4-クロロ-2-ニトロアニリン(4-chloro-2-nitroaniline)51.77g（0.300mol）、水292mLおよび分散剤（商品名「リパール８６０Ｋ」ライオン社製）0.2gを加えて室温で撹拌した。濃硫酸88.2g(0.882mol)を少しずつ加えた後、30〜40℃で１時間撹拌し、氷水で0℃まで冷却し、36%亜硝酸ナトリウム水溶液62.4g(0.0.326mol)を0〜5℃に保ちながら1時間かけて滴下した。同じ温度を保ちながら２時間反応させ、スルファミン酸2.0gを加えて過剰の亜硝酸イオンを消失させた。ブフナーロートで濾過して未反応の4-クロロ-2-ニトロアニリンと重合物を除去し、約５００ｍLの濃黄色透明であるジアゾニウム塩水溶液を得た。
【００８９】
Ｂ．カップラーの調製
2000mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、3-ピリジノール(3-pyridinol)30.0g(0.316mol)、炭酸ナトリウム47.8g(0.250mol)、水167mL、2-プロパノール220mL，１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム(1-naphthalenesulfonic acid sodium salt) 9.0gを加えて撹拌し、3-ピリジノール溶液とした。一方、ビーカーに水酸化ナトリウムを40.0g(1.00mol)加え、水140mLで溶解させた水酸化ナトリウム水溶液を60g測りとって、前記3-ピリジノール溶液に加え、カップリング反応に用いるカップラーを得た。前記カップラーは氷浴にて0℃まで冷却した。
【００９０】
Ｃ．カップリング反応
上記Ａの工程で合成したジアゾニウム塩水溶液も0〜10℃に冷却して保存しておき、これを、チューブポンプを用いて前記カップラーに滴下することでカップリング反応させた。ジアゾニウム塩水溶液の滴下は残りの水酸化ナトリウム水溶液とともに２時間をかけてゆっくりと滴下し、赤色のアゾ色素が徐々に生成されるのが確認できた。滴下終了後、0〜10℃で2時間撹拌し、その後室温下で一夜放置し、さらに反応を進行させた。濾紙上でＲ酸と赤く反応しないことによってジアゾニウム塩が消失しているのを確認し、反応終了とした。反応生成液は、希硫酸でＰＨ８まで中和し、ブフナーロートで赤色結晶を濾過し取り、2000mLの水で洗浄して無機塩を除去した後、恒温乾燥機で乾燥させた。収量は55.4g、粗収率66.3％で化合物1eと化合物1fの混合物を得た。HPLCにて混合比を確認したところ、化合物1e：化合物1f＝１：３であった。
【００９１】
Ｄ．再結晶による精製
200mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、Ｃの工程で得た混合物であるアゾ色素15.0g(0.054mol)、メタノール150mLを加えて沸点まで加熱して溶解させ、１μmのメンブランフィルターで不溶解物を濾過して除き、メタノールを減圧留去し、n-ヘキサン／酢酸エチル=１／１(vol./vol.)の混合溶媒30mlを加えて析出した結晶を濾取した。前記結晶は、さらにn-ヘキサン／酢酸エチル=１／１(vol./vol.)の混合溶媒50mlで洗浄し、恒温乾燥機で乾燥させて精製したところ、暗赤色の混合物結晶5.6gを得た。4-クロロ-2-ニトロアニリン（4-chloro-2-nitroaniline）からの収率は24.8%であった。
【００９２】
Ｅ．混合物の分割
フラッシュクロマトグラフィー(移動層：n-ヘキサン／酢酸エチル=１／１(vol./vol.))で各々の成分を分画し、溶媒を回収して乾燥後、化合物1eおよび化合物1fをそれぞれ得た。
【００９３】
化合物1eは、暗赤色の粉末状結晶であり、上記Ｃの工程で得られた混合体結晶0.5gから160mgが得られた。４-クロロ-2-ニトロアニリンからの収率は7.92%であった。ＨＰＬＣによる純度は９８．２％であった。なお測定条件は化合物１ａの条件と同じである。
【００９４】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、３０８０（Ｃ−Ｈ）、１５６０、１５２０（Ｃ＝Ｃ）、１４７０（ＮＯ２）、１２８０（ＮＯ２）、１２４０（Ｐｈ−Ｏ）
【００９５】
化合物1fは、赤色の粉末状結晶であり、上記Ｃの工程で得られた混合体結晶0.5gから320mgが得られた。４-クロロ-2-ニトロアニリンからの収率は15.8%であった。ＨＰＬＣによる純度は８８．０％であった。なお測定条件は化合物１ａの条件と同じである。
【００９６】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、２９２０（Ｃ−Ｈ）、１５７０、１５２０（Ｃ＝Ｃ）、１４７０（ＮＯ２）、１２８０（ＮＯ２）、１２４０（Ｐｈ−Ｏ）
【００９７】
（化合物1gの合成）
化合物1g：5-ヒドロキシ-2-(4-メトキシ-2-ニトロフェニルアゾ)ピリジン
5-Hydroxy-2-(4-methoxy-2-nitrophenylazo)pyridine  〔化１２〕
【化１２】
0005419582.tif 000033
【００９８】
Ａ．ジアゾニウム塩の合成
500mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、4-メトキシ-2-ニトロアニリン(4-methoxy-2-nitroaniline 25.22g（0.150mol）、水 136mLおよび分散剤（商品名「リパール８６０Ｋ」ライオン社製）0.11gを加えて室温で撹拌した。濃硫酸30.6g(0.306mol)を少しずつ加えた後、30〜40℃で１時間撹拌し、氷水で0℃まで冷却し、36%亜硝酸ナトリウム水溶液29.7g(0.155mol)を0〜5℃に保ちながら1時間かけて滴下した。同じ温度を保ちながら２時間反応させ、スルファミン酸1.0gを加えて過剰の亜硝酸イオンを消失させた。ブフナーロートで濾過して未反応の4-メトキシ-2-ニトロアニリンと重合物を除去し、約２００ｍLの濃黄色透明であるジアゾニウム塩水溶液を得た。
【００９９】
Ｂ．カップラーの調製
1000mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、3-ピリジノール(3-pyridinol)14.6g(0.154mol)、炭酸ナトリウム17.8g(0.168mol)、水85mL、2-プロパノール110mL、トルエン1mL,１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム(1-naphthalenesulfonic acid sodium salt)4.5gを加えて撹拌し、3-ピリジノール溶液とした。一方、ビーカーに水酸化ナトリウムを14.9g(0.372mol)加え、水70mLで溶解させた水酸化ナトリウム水溶液を29g測りとって、前記3-ピリジノール溶液に加え、カップリング反応に用いるカップラーを得た。前記カップラーは氷浴にて0℃まで冷却した。
【０１００】
Ｃ．カップリング反応
上記Ａの工程で合成したジアゾニウム塩水溶液も0〜10℃に冷却して保存しておき、これを、チューブポンプを用いて前記カップラーに滴下することでカップリング反応させた。ジアゾニウム塩水溶液の滴下は残りの水酸化ナトリウム水溶液とともに２時間をかけてゆっくりと滴下し、赤色のアゾ色素が徐々に生成されるのが確認できた。滴下終了後、0〜10℃で2時間撹拌し、その後室温下で一夜放置し、さらに反応を進行させた。濾紙上でＲ酸と赤く反応しないことによってジアゾニウム塩が消失しているのを確認し、反応終了とした。反応生成液は、希硫酸でＰＨ８まで中和し、ブフナーロートで赤色結晶を濾過し取り、1000mLの水で洗浄して無機塩を除去した後、恒温乾燥機で乾燥させた。収量は32.0g、粗収率77.8％で3-ヒドロキシ-2-(4-メトキシ-2-ニトロフェニルアゾ)ピリジン 3-Hydroxy-2-(4-methoxy-2-nitrophenylazo)pyridineと5-ヒドロキシ-2-(4-メトキシ-2-ニトロフェニルアゾ)ピリジン5-Hydroxy-2-(4-methoxy-2-nitrophenylazo)pyridineの混合物を得た。
【０１０１】
Ｄ．再結晶による精製
200mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、Ｃの工程で得た混合物であるアゾ色素3.0g(0.011mol)、メタノール150mLを加えて沸点まで加熱して溶解させ、１μmのメンブランフィルターで不溶解物を濾過して除き、メタノールを減圧留去し、さらに蒸発乾固させて析出ところ、暗赤色結晶1.6gを得た。4-メトキシ-2-ニトロアニリン（4-methoxy-2-nitroanilineからの収率は41.5%であった。
【０１０２】
Ｅ．混合物の分割
フラッシュクロマトグラフィー(移動層：n-ヘキサン／酢酸エチル=１／１(vol./vol.))で各々の成分を分画し、溶媒を回収して乾燥後、化合物1gを得た。
【０１０３】
化合物1gは、濃赤色の粉末状結晶であり、上記Ｃの工程で得られた精製混合体結晶0.5gから120mgが得られた。4-メトキシ-2-ニトロアニリンからの収率は9.96%であった。ＨＰＬＣによる純度は９２．８％であった。なお測定条件は化合物１ａの条件と同じである。
【０１０４】
１H  NMR （300 MHz, DMSO-d6）で測定されたピークは次のとおりである。δ11.3 (b, OH), 8.19 (dd, 1H, J=4.2 Hz, J=1.5 Hz, Ph-H)，8.02 (dd, 1H, J=9.0Hz, J=0.9Hz, pyridine-H)，7.73 (d, 1H, J=2.7 Hz, Ph-H)，7.47 (dd, 1H, J=8.4 Hz, J=4.2 Hz, Ph-H)，7.43 (dd, 1H, J=8.7 Hz, J=3.0 Hz, Ph-H)，3.96 (s, 3H, OCH3)
【０１０５】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、２９２０（Ｃ−Ｈ）、１６１０、１５６０（Ｃ＝Ｃ）、１４５０（ＮＯ２）、１２８０（ＮＯ２）
【０１０６】
（化合物1hの合成）
化合物1h：2,3-ジヒドロキシ-6-(2-ニトロフェニルアゾ)ピリジン
2,3-Dihydroxy-6-(2-nitrophenylazo)pyridine  〔化１３〕
【化１３】
0005419582.tif 000034
【０１０７】
Ａ．ジアゾニウム塩の合成
500mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、o-ニトロアニリン(o-nitroaniline)15.19g（0.11mol）、水 70mLおよび分散剤（商品名「リパール８６０Ｋ」ライオン社製）0.2gを加えて室温で撹拌した。濃硫酸22.0g(0.22mol)を少しずつ加えた後、70℃で１時間撹拌し、氷水で0℃まで冷却し、36%亜硝酸ナトリウム22.8g(0.119mol)を0〜5℃に保ちながら0.5時間かけて滴下した。同じ温度を保ちながら２時間反応させ、スルファミン酸1.0gを加えて過剰の亜硝酸イオンを消失させた。ブフナーロートで濾過して未反応のo-ニトロアニリンと重合物を除去し、約130ｍLの黄色透明であるジアゾニウム塩水溶液を得た。
【０１０８】
Ｂ．カップラーの調製
1000mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、2,3-ジヒドロキシピリジン(2,3-dihydroxypyridine)12.83g(0.116mol)、水154mL、１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム(1-naphthalenesulfonic
acid sodium salt)1.1gとトルエン4.4mLを加えて撹拌し、2,3-ジヒドロキシピリジン溶液とした。一方、ビーカーに水酸化ナトリウムを20.53g(0.513mol)加え、水91.4mLで溶解させた水酸化ナトリウム水溶液を37.3g測りとって、前記2,3-ジヒドロキシピリジン溶液に加え、カップリング反応に用いるカップラーを得た。前記カップラーはアイスバスにて0℃まで冷却した。
【０１０９】
Ｃ．カップリング反応
上記Ａの工程で合成したジアゾニウム塩水溶液も0〜10℃に冷却して保存しておき、これを、チューブポンプを用いて前記カップラーに滴下することでカップリング反応させた。ジアゾニウム塩水溶液の滴下は調製した残りの水酸化ナトリウム水溶液とともに２時間をかけてゆっくりと滴下し、赤色のアゾ色素が徐々に生成されるのが確認できた。滴下終了後、0〜10℃で2時間撹拌し、その後室温下で一夜放置し、さらに反応を進行させた。濾紙上でＲ酸と赤く反応しないことによってジアゾニウム塩が消失しているのを確認し、反応終了とした。反応生成液は、希硫酸でＰＨ７〜８まで中和し、ブフナーロートで赤色結晶を濾過し取り、1000mLの水で洗浄して無機塩を除去した後、恒温乾燥機で乾燥させた。得られた化合物1hは、濃赤色粉末状結晶であり、収量は23.5g、粗収率82.1％であった。これをさらに精製して濃赤色粉末状結晶を収率62.0%で得た。
【０１１０】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、３５９０（ＯＨ）、３２６０（ＯＨ）、３０７０（Ｃ−Ｈ）、１５６０（Ｃ＝Ｃ）、１４４０（ＮＯ２）、１２８０（ＮＯ２）
【０１１１】
（化合物1iの合成）
化合物1i：6-(4-クロロ-2-ニトロフェニルアゾ)-2,3-ジヒドロキシピリジン
6-(4-Chloro-2-nitrophenylazo)-2,3-dihydroxypyridine  〔化１４〕
【化１４】
0005419582.tif 000035
【０１１２】
Ａ．ジアゾニウム塩の合成
500mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、4-クロロ-2-ニトロアニリン(4-chloro-2-nitroaniline)18.98g（0.11mol）、水107mLおよび分散剤（商品名「リパール８６０Ｋ」ライオン社製）0.3gを加えて室温で撹拌した。濃硫酸32.3g(0.323mol)を少しずつ加えた後、撹拌しながら氷水で0℃まで冷却し、36%亜硝酸ナトリウム22.9g(0.119mol)を0〜5℃を保ちながら0.5時間かけて滴下した。同じ温度を保ちながら２時間反応させ、スルファミン酸1.0gを加えて過剰の亜硝酸イオンを消失させた。ブフナーロートで濾過して未反応の4-クロロ-2-ニトロアニリンと重合物を除去し、約180ｍLの黄色透明であるジアゾニウム塩水溶液を得た。
【０１１３】
Ｂ．カップラーの調製
1000mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、2,3-ジヒドロキシピリジン(2,3-dihydroxypyridine)12.85g(0.116mol)、炭酸ナトリウム17.52g(0.165mol)、水61mL、2-プロパノール80.7mL、１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム(1-naphthalenesulfonic acid sodium salt)3.3gを加えて撹拌し、2,3-ジヒドロキシピリジン溶液とした。一方、ビーカーに水酸化ナトリウムを14.66g(0.367mol)加え、水51.3mLで溶解させた水酸化ナトリウム水溶液を22g測りとって、前記2,3-ジヒドロキシピリジン溶液に加え、カップリング反応に用いるカップラーを得た。前記カップラーは氷浴にて0℃まで冷却した。
【０１１４】
Ｃ．カップリング反応
上記Ａの工程で合成したジアゾニウム塩水溶液も0〜10℃に冷却して保存しておき、これを、チューブポンプを用いて前記カップラーに滴下することでカップリング反応させた。ジアゾニウム塩水溶液の滴下は残りの水酸化ナトリウム水溶液とともに２時間をかけてゆっくりと滴下し、赤色のアゾ色素が徐々に生成されるのが確認できた。滴下終了後、0〜10℃で2時間撹拌し、その後室温下で一夜放置し、さらに反応を進行させた。濾紙上でＲ酸と赤く反応しないことによってジアゾニウム塩が消失しているのを確認し、反応終了とした。反応生成液は、希硫酸でＰＨ８まで中和し、ブフナーロートで赤色結晶を濾過し取り、1000mLの水で洗浄して無機塩を除去した後、恒温乾燥機で乾燥させた。得られた化合物1iは、暗赤色粉末状結晶であり、収量は33.0g、粗収率101.8％であった。これをさらに精製して濃赤色粉末状結晶を収率79.9%で得た。
【０１１５】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、３５８０（ＯＨ）、３４３０（ＯＨ）、３０８０（Ｃ−Ｈ）、１５６０（Ｃ＝Ｃ）、１４３０（ＮＯ２）、１３００（ＮＯ２）、１２５０（Ｐｈ−Ｏ）
【０１１６】
（化合物1jの合成）
化合物1j： 2,3-ジヒドロキシ-6-(4-メチル-2-ニトロフェニルアゾ)ピリジン
2,3-Dihydroxy-6-(4-methyl-2-nitrophenylazo)pyridine  〔化１５〕
【化１５】
0005419582.tif 000036
【０１１７】
Ａ．ジアゾニウム塩の合成
500mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、4-メチル-2-ニトロアニリン(4-methyl-2-nitroaniline)15.22g（0.100mol）、水97.4mLおよび分散剤（商品名「リパール８６０Ｋ」ライオン社製）0.3gを加えて室温で撹拌した。濃硫酸30.0g(0.300mol)を少しずつ加えた後、撹拌しながら氷水で0℃まで冷却し、36%亜硝酸ナトリウム20.82g(0.109mol)を0〜5℃に保ちながら0.5時間かけて滴下した。同じ温度を保ちながら２時間反応させ、スルファミン酸1.0gを加えて過剰の亜硝酸イオンを消失させた。ブフナーロートで濾過して未反応の5-メチル-2-ニトロアニリンと重合物を除去し、約170ｍLの黄色透明であるジアゾニウム塩水溶液を得た。
【０１１８】
Ｂ．カップラーの調製
1000mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、2,3-ジヒドロキシピリジン(2,3-dihydroxypyridine)11.68g(0.105mol)、炭酸ナトリウム15.93g(0.150mol)、水55.6mL、2-プロパノール73.4mL、１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム(1-naphthalenesulfonic acid sodium salt)3.0gを加えて撹拌し、2,3-ジヒドロキシピリジン溶液とした。一方、ビーカーに水酸化ナトリウムを14.66g(0.367mol)加え、水51.3mLで溶解させた水酸化ナトリウム水溶液を22g測りとって、前記2,3-ジヒドロキシピリジン溶液に加え、カップリング反応に用いるカップラーを得た。前記カップラーは氷浴にて0℃まで冷却した。
【０１１９】
Ｃ．カップリング反応
上記Ａの工程で合成したジアゾニウム塩水溶液も0〜10℃に冷却して保存しておき、これを、チューブポンプを用いて前記カップラーに滴下することでカップリング反応させた。ジアゾニウム塩水溶液の滴下は残りの水酸化ナトリウム水溶液とともに２時間をかけてゆっくりと滴下し、赤色のアゾ色素が徐々に生成されるのが確認できた。滴下終了後、0〜10℃で2時間撹拌し、その後室温下で一夜放置し、さらに反応を進行させた。濾紙上でＲ酸と赤く反応しないことによってジアゾニウム塩が消失しているのを確認し、反応終了とした。反応生成液は、希硫酸でＰＨ８まで中和し、ブフナーロートで赤色結晶を濾過し取り、1000mLの水で洗浄して無機塩を除去した後、恒温乾燥機で乾燥させた。得られた化合物1jは、濃赤色粉末状結晶であり、収量は27.34g、粗収率99.66％であった。これをさらに精製して濃赤色粉末状結晶を収率82.9%で得た。
【０１２０】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、３６１０（ＯＨ）、３４００（ＯＨ）、３０７０（Ｃ−Ｈ）、１５６０（Ｃ＝Ｃ）、１４００（ＮＯ２）、１３１０（ＮＯ２）、１２６０（Ｐｈ−Ｏ）
【０１２１】
（化合物1kの合成）
化合物1k：2,3-ジヒドロキシ-6-(4-メトキシ-2-ニトロフェニルアゾ)ピリジン
2,3-Dihydroxy-6-(4-methoxy-2-nitrophenylazo)pyridine  〔化１６〕
【化１６】
0005419582.tif 000037
【０１２２】
Ａ．ジアゾニウム塩の合成
500mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、4-メトキシ-2-ニトロアニリン(4-methoxy-2-nitroaniline)16.82g（0.100mol）、水97.4mLおよび分散剤（商品名「リパール８６０Ｋ」ライオン社製）0.3gを加えて室温で撹拌した。濃硫酸30.0g(0.300mol)を少しずつ加えた後、撹拌しながら氷水で0℃まで冷却し、36%亜硝酸ナトリウム20.82g(0.109mol)を0〜5℃に保ちながら0.5時間かけて滴下した。同じ温度を保ちながら２時間反応させ、スルファミン酸0.5gを加えて過剰の亜硝酸イオンを消失させた。ブフナーロートで濾過して未反応の4-メトキシ-2-ニトロアニリンと重合物を除去し、約170ｍLの黄色透明であるジアゾニウム塩水溶液を得た。
【０１２３】
Ｂ．カップラーの調製
1000mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、2,3-ジヒドロキシピリジン(2,3-dihydroxypyridine)11.68g(0.105mol)、炭酸ナトリウム
15.93g(0.150mol)、水55.6mL、2-プロパノール73.4mL、１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム(1-naphthalenesulfonic acid sodium salt)3.0gを加えて撹拌し、2,3-ジヒドロキシピリジン溶液とした。一方、ビーカーに水酸化ナトリウムを14.66g(0.367mol)加え、水51.3mLで溶解させた水酸化ナトリウム水溶液を22g測りとって、前記2,3-ジヒドロキシピリジン溶液に加え、カップリング反応に用いるカップラーを得た。前記カップラーは氷浴にて0℃まで冷却した。
【０１２４】
Ｃ．カップリング反応
上記Ａの工程で合成したジアゾニウム塩水溶液も0〜10℃に冷却して保存しておき、これを、チューブポンプを用いて前記カップラーに滴下することでカップリング反応させた。ジアゾニウム塩水溶液の滴下は残りの水酸化ナトリウム水溶液とともに２時間をかけてゆっくりと滴下し、赤色のアゾ色素が徐々に生成されるのが確認できた。滴下終了後、0〜10℃で2時間撹拌し、その後室温下で一夜放置し、さらに反応を進行させた。濾紙上でＲ酸と赤く反応しないことによってジアゾニウム塩が消失しているのを確認し、反応終了とした。反応生成液は、希硫酸でＰＨ８まで中和し、ブフナーロートで赤色結晶を濾過し取り、1000mLの水で洗浄して無機塩を除去した後、恒温乾燥機で乾燥させた。得られた化合物は、濃赤色粉末状結晶であり、収量は２８．５g、粗収率 ９８．３％であった。これをさらに精製して濃赤色粉末状結晶を収率67.5%で得た。
【０１２５】
（化合物1lの合成）
化合物1l：2-クロロ-3-ヒドロキシ-6-(2-ニトロフェニルアゾ)ピリジン
2-Chloro-3-hydroxy-6-(2-nitrophenylazo)pyridine  〔化１７〕
【化１７】
0005419582.tif 000038
【０１２６】
o-ニトロアニリン(o-nitroaniline)の9.67g（0.07mol）スケールにおいて、2,3-ジヒドロキシピリジンの替わりに2-クロロ-3-ヒドロキシピリジン(2-chloro-3-hydroxypyridine)を9.52g(0.0735mol)使用したこと以外は、化合物1hの合成と同様の方法で化合物1lの合成を行った。得られた化合物1lは、渇赤色粉末状結晶であり、収量は16.6g、粗収率は85.1％であった。これをさらに精製して赤色粉末状結晶を収率69.8%で得た。
【０１２７】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、３６２０（ＯＨ）、２９６０（Ｃ−Ｈ）、１５３０（Ｃ＝Ｃ）、１４３０（ＮＯ２）、１２８０（ＮＯ２）、１２４０（Ｐｈ−Ｏ）、１０８０（Ｐｈ−Ｃｌ）
【０１２８】
（化合物1mの合成）
化合物1m：2-クロロ-6-(4-クロロ-2-ニトロフェニルアゾ)-3-ヒドロキシピリジン
2-Chloro-6-(4-chloro-2-nitrophenylazo)-3-hydroxypyridine  〔化１８〕
【化１８】
0005419582.tif 000039
【０１２９】
4-クロロ-2-ニトロアニリン(4-chloro-2-nitroaniline)の12.08g（0.07mol）スケールにおいて、2,3-ジヒドロキシピリジンの替わりに2-クロロ-3-ヒドロキシピリジン(2-chloro-3-hydroxypyridine)を9.54g(0.074mol)使用したこと以外は、化合物1iの合成と同様の方法で化合物1mの合成を行った。得られた化合物1mは、渇赤色粉末状結晶であり、収量は16.6g、粗収率は85.3％であった。これをさらに精製して、暗赤色粉末状結晶を収率78.9%で得た。これをさらに精製して濃赤色粉末状結晶を収率60.5%で得た。
【０１３０】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、３０８０（ＯＨ）、２８８０（Ｃ−Ｈ）、１５３０（Ｃ＝Ｃ）、１４３０（ＮＯ２）、１２８０（ＮＯ２）、１２６０（Ｐｈ−Ｏ）、１０７０（Ｐｈ−Ｃｌ）
【０１３１】
（化合物1nの合成）
化合物1n：2-クロロ-3-ヒドロキシ-6-(4-メチル-2-ニトロフェニルアゾ)ピリジン
2-Chloro-3-hydroxy-6-(4-methyl-2-nitrophenylazo)pyridine  〔化１９〕
【化１９】
0005419582.tif 000040
【０１３２】
4-メチル-2-ニトロアニリン(4-methyl-2-nitroaniline)の7.61g（0.05mol）スケールにおいて、2,3-ジヒドロキシピリジンの替わりに2-クロロ-3-ヒドロキシピリジン(2-chloro-3-hydroxypyridine)を6.80g(0.0525mol)使用したこと以外は化合物1jの合成と同様の方法で化合物1nの合成を行った。得られた化合物1nは、渇赤色粉末状結晶であり、収量は12.1g、粗収率は82.7％であった。これをさらに精製して濃赤色粉末状結晶を収率65.8%で得た。
【０１３３】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、２９６０（Ｃ−Ｈ）、１５３０（Ｃ＝Ｃ）、１４２０（ＮＯ２）、１３００（ＮＯ２）、１２４０（Ｐｈ−Ｏ）、１０８０（Ｐｈ−Ｃｌ）
【０１３４】
（化合物1oの合成）
化合物1o：2-クロロ-3-ヒドロキシ-6-(4-メトキシ-2-ニトロフェニルアゾ)ピリジン
2-Chloro-3-hydroxy-6-(4-methoxy-2-nitrophenylazo)pyridine  〔化２０〕
【化２０】
0005419582.tif 000041
【０１３５】
4-メトキシ-2-ニトロアニリン(4-methoxy-2-nitroaniline)の8.41g（0.05mol）スケールにおいて、2,3-ジヒドロキシピリジンの替わりに2-クロロ-3-ヒドロキシピリジン(2-chloro-3-hydroxypyridine)を6.80g(0.0525mol)使用したこと以外は化合物1nの合成と同様の方法で化合物1oの合成を行った。得られた結晶を単離し、そのまま2-プロパノールにて再結晶法で精製した。得られた化合物1oは暗赤色粉末状結晶であり、収率は63.9%であった。これをさらに精製して赤色粉末状結晶を収率52.1%で得た。
【０１３６】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、２９６０（Ｃ−Ｈ）、１６１０（Ｐｈ−Ｏ−ＣＨ３）、１５６０（Ｃ＝Ｃ）、１４２０（ＮＯ２）、１２８０（ＮＯ２）、１２４０（Ｐｈ−Ｏ）、１０４０（Ｐｈ−Ｃｌ）
【０１３７】
（化合物2aの合成）
化合物2a：4-メチル-2-(2-ニトロフェニルアゾ)フェノール
4-Methyl-2-(2-nitrophenylazo)phenol  〔化２１〕
【化２１】
0005419582.tif 000042
【０１３８】
Ａ．ジアゾニウム塩の合成
500mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、o-ニトロアニリン(o-nitroaniline) 27.6g（0.200mol）、水 95.6mLおよび分散剤（商品名「リパール８６０Ｋ」ライオン社製）0.2gを加えて室温で撹拌した。62.5%硫酸47.0g(0.300mol)を少しずつ加えた後、70℃で１時間撹拌し、氷水で0℃まで冷却し、36%亜硝酸ナトリウム水溶液41.4g(0.216mol)を0〜5℃に保ちながら0.5時間かけて滴下した。同じ温度を保ちながら２時間反応させて透明の水溶液となった後、ブフナーロートで濾過して未反応のo-ニトロアニリンと重合物を除去し、約３５０ｍLの黄色透明であるジアゾニウム塩水溶液を得た。
【０１３９】
Ｂ．カップラーの調製
1000mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、p-クレゾール(p-cresol) 22.6g(0.209mol)、水120mL、48%水酸化ナトリウム12.3gを加えて撹拌し、p-クレゾール溶液とした。得られたp-クレゾール溶液をアイスバスにて0℃まで冷却し、炭酸ナトリウム30.7g(0.290mol)と水100mLを加え、カップリング反応に用いるカップラーを得た。
【０１４０】
Ｃ．カップリング反応
上記Ａの工程で合成したジアゾニウム塩水溶液も0〜10℃に冷却して保存しておき、これを、チューブポンプを用いて前記カップラーに２時間で滴下することでカップリング反応させた。赤色のアゾ色素が徐々に生成されるのが確認できた。滴下終了後、0〜10℃で2時間撹拌し、濾紙上でＲ酸と赤く反応しないことによってジアゾニウム塩が消失しているのを確認し、反応終了とした。反応生成液からブフナーロートで赤色結晶を濾過し取り、1000mLの水で洗浄して無機塩を除去した後、恒温乾燥機で乾燥させた。収量は47.5g、粗収率92.5％で化合物2aを得た。
【０１４１】
Ｄ．再結晶による精製
200mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、Ｃの工程で得たアゾ色素のクルード3.0g(0.012mol)、2-プロパノール150mLを加えて加熱して溶解させ、１μmのメンブランフィルターで不溶解物を濾過して除き、2-プロパノールを120mL減圧留去し、析出した暗赤色結晶1.8gを濾過紙取った。o-ニトロアニリンからの収率は60.0%であった。
【０１４２】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、２９２０（Ｃ−Ｈ）、１５７０、１５２０（Ｃ＝Ｃ）、１４９０（ＮＯ２）、１２８０（ＮＯ２）
【０１４３】
（化合物2bの合成）
化合物2b： 2-tert-ブチル-6-(4-クロロ-2-ニトロフェニルアゾ)-4-メチルフェノール
2-tert-Butyl-6-(4-chloro-2-nitrophenylazo)-4-methylphenol  〔化２２〕
【化２２】
0005419582.tif 000043
【０１４４】
Ａ．ジアゾニウム塩の合成
500mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、4-クロロ-2-ニトロアニリン(4-chloro-2-nitroaniline)33.0g（0.191mol）、水40mLおよび分散剤（商品名「リパール８６０Ｋ」ライオン社製）0.2gを加えて室温で撹拌した。62.5%硫酸89.8g(0.573mol)を少しずつ加えた後、氷水で0℃まで冷却し、36%亜硝酸ナトリウム水溶液39.2g(0.204mol)を0〜5℃に保ちながら0.5時間かけて滴下した。同じ温度を保ちながら２時間反応させて透明の水溶液となった後、ブフナーロートで濾過して未反応の4-クロロ-2-ニトロアニリンと重合物を除去し、約３５０ｍLの濃黄色透明であるジアゾニウム塩水溶液を得た。
【０１４５】
Ｂ．カップラーの調製
1000mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、4-メチル-2-tert-ブチルフェノール(4-methyl-2-tert-butylphenol)33.0g(0.201mol)、トルエン5mL,水10mL加え、4-メチル-2-tert-ブチルフェノール溶液とした。一方、ビーカーに水酸化ナトリウムを49.0g(1.225mol)加え、203mLで溶解させた水酸化ナトリウム水溶液を84gを測りとって、前記4-メチル-2-tert-ブチルフェノール溶液に加え、カップリング反応に用いるカップラーを得た。前記カップラーはアイスバスにて0℃まで冷却した。
【０１４６】
Ｃ．カップリング反応
上記Ａの工程で合成したジアゾニウム塩水溶液も0〜10℃に冷却して保存しておき、これと残りの水酸化ナトリウム水溶液をチューブポンプにて0〜10℃において２時間で滴下し、カップリング反応させた。赤色のアゾ色素が徐々に生成されるのが確認できた。滴下終了後、0〜10℃で2時間撹拌し、濾紙上でＲ酸と赤く反応しないことによってジアゾニウム塩が消失しているのを確認し、反応終了とした。反応生成液からブフナーロートで暗赤色結晶を濾過し取り、1000mLの水で洗浄して無機塩を除去した後、恒温乾燥機で乾燥させた。収量は61.8g、粗収率93％で化合物2bを得た。
【０１４７】
Ｄ．再結晶による精製
200mLの四つ口フラスコに温度計と還流冷却管および攪拌機をとりつけ、Ｃの工程で得たアゾ色素の粗生成物3.0g(0.009mol)、2-プロパノール150mLを加えて加熱して溶解させ、1μmのメンブランフィルターで不溶解物を濾過して除き、2-プロパノールを120mL減圧留去し、析出した暗赤色結晶2.0gを濾過し取った。4-クロロ-2-ニトロアニリンからの収率は66.6%であった。
【０１４８】
（化合物2cの合成）
化合物2c：2,4-ジネオペンチル-6-(2-ニトロフェニルアゾ)フェノール
2,4-Dineopentyl-6-(2-nitrophenylazo)phenol  〔化２３〕
【化２３】
0005419582.tif 000044
【０１４９】
3-ピリジノールの替わりに2,4-ジネオペンチルフェノール(2,4-dineopentylphenol)49.38g(0.211mol)にて実施した以外は、化合物1e,1fの工程A〜Ｃまでと同様の条件で化合物2cの合成を行った。収量72.0g(収率96%)の赤色結晶であった。得られた粗生成物5.0gより化合物1e,1fの工程Ｄの条件と同様に再結晶を行い、2.5gの暗赤色精製結晶を得た。
【０１５０】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、２９６０（Ｃ−Ｈ）、１５４０、１５３０（Ｃ＝Ｃ）、１４７０（ＮＯ２）、１２９０（ＮＯ２）
【０１５１】
（化合物2dの合成）
化合物2d：2,4-ジ-tert-ブチル-6-(4-クロロ-2-ニトロフェニルアゾ)フェノール
2,4-Di-tert-butyl-6-(4-chloro-2-nitrophenylazo)phenol  〔化２４〕
【化２４】
0005419582.tif 000045
【０１５２】
3-ピリジノールの替わりに2,4-ジ-tert-ブチルフェノール(2,4-di-tert-butylphenol)40.36g(0.211mol)にて実施した以外は、化合物1e,1fの工程A〜Ｃまでと同様の条件にて合成を行った。収量52.6g (収率89.5%)の赤色結晶であった。得られた粗生成物5.0gより化合物1e,1fの工程Ｄの条件と同様に再結晶を行い、2.1gの暗赤色精製結晶を得た。
【０１５３】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、２９６０（Ｃ−Ｈ）、１５７０、１５３０（Ｃ＝Ｃ）、１４７０（ＮＯ２）、１３００（ＮＯ２）
【０１５４】
（化合物2eの合成）
化合物2e：4-(4-クロロ-2-ニトロフェニルアゾ)レソルシノール
4-(4-Chloro-2-nitrophenylazo)resorcinol  〔化２５〕
【化２５】
0005419582.tif 000046
【０１５５】
3-ピリジノールの替わりにレソルシノール（resorcinol）23.23g(0.211mol)にて実施した以外は、化合物1e,1fの工程A〜Ｃまでと同様の条件で合成を行った。収量52.6g (収率89.5%)の赤色結晶であった。得られた粗生成物5.0gより化合物1e,1fの工程Ｄの条件と同様に再結晶を行い、2.1gの暗赤色精製結晶を得た。
【０１５６】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、３１００（Ｃ−Ｈ）、１６００、１５３０（Ｃ＝Ｃ）、１４５０（ＮＯ２）、１２８０（ＮＯ２）
【０１５７】
（化合物2fの合成）
化合物2f：4-(2-ニトロフェニルアゾ)レソルシノール
4-(2-Nitrophenylazo)resorcinol  〔化２６〕
【化２６】
0005419582.tif 000047
【０１５８】
3-ピリジノールの替わりにレソルシノール（resorcinol）23.23g(0.211mol)にて実施した以外は、化合物1a,1bの工程A〜Ｃまでと同様の条件で合成を行った。収量46.7g(収率90%)の濃赤色結晶であった。得られた粗生成物5.0gより化合物1a,1bの工程Ｄの条件と同様に再結晶を行い、1.9gの暗赤色精製結晶を得た。
【０１５９】
（化合物2gの合成）
化合物2g：2-イソプロピル-4-(2-ニトロフェニルアゾ)レソルシノール
2-Isopropyl-4-(2-nitrophenylazo)resorcinol  〔化２７〕
【化２７】
0005419582.tif 000048
【０１６０】
3-ピリジノールの替わりに2-イソプロピルレソルシノール(2-isopropylresorcinol) 32.11g(0.211mol)にて実施した以外は、化合物1a,1bの工程A〜Ｃまでと同様の条件で合成を行った。収量50.0g (収率83%)の赤色結晶であった。得られた粗生成物5.0gより化合物1a,1bの工程Ｄの条件と同様に再結晶を行い、2.2gの赤色精製結晶を得た。
【０１６１】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、３２８０（ＯＨ）、２９６０（Ｃ−Ｈ）、１５２０（Ｃ＝Ｃ）、１４３０（ＮＯ２）、１２８０（ＮＯ２）
【０１６２】
（化合物2hの合成）
化合物2h：4-(4-ヒドロキシ-2-ニトロフェニルアゾ)レソルシノール
4-(4-Hydroxy-2-nitrophenylazo)resorcinol  〔化２８〕
【化２８】
0005419582.tif 000049
【０１６３】
3-ピリジノールの替わりにレソルシノール（resorcinol）23.23g(0.211mol)にて実施した以外は、化合物1a,1bの工程A〜Ｃまでと同様の条件で合成を行った。収量41.3g(収率75%)の赤色結晶であった。得られた粗生成物5.0gより化合物1a,1bの工程Ｄの条件と同様に再結晶を行い、1.8gの赤色精製結晶を得た。
【０１６４】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、３０８０（Ｃ−Ｈ）、１６１０、１５００（Ｃ＝Ｃ）、１４５０（ＮＯ２）、１３１０（ＮＯ２）
【０１６５】
（化合物2jの合成）
化合物2j：3-ニトロ-4-(2-ヒドロキシ-4-tert-オクチルフェン-2-イルアゾ)安息香酸            
3-Nitro-4-(2-hydroxy-4-tert-octylphen-2-ylazo)benzoic Acid  〔化２９〕
【化２９】
0005419582.tif 000050
【０１６６】
3-ピリジノールの替わりに4-tert-オクチルフェノール(4-tert-octylphenol)43.53g(0.211mol)、o-ニトロアニリンの替わりに4-アミノ-3-ニトロ安息香酸(4-amino-3-nitrobenzoic acid) 36.43gにて実施した以外は、化合物1a,1bの工程A〜Ｃまでと同様の条件にて合成を行った。収量75.9g (収率95%)の赤色結晶であった。得られた粗生成物5.0gより化合物1a,1bの工程Ｄの条件と同様に再結晶を行い、1.5gの暗赤色精製結晶を得た。
【０１６７】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、２９６０（Ｃ−Ｈ）、１６８０（Ｃ＝Ｏ）、１５２０（Ｃ＝Ｃ）、１４２０（ＮＯ２）、１２８０（ＮＯ２）、１２４０（Ｐｈ−Ｏ）
【０１６８】
（化合物2kの合成）
化合物2k：4-(4-メトキシ-2-ニトロフェニルアゾ)レソルシノール
4-(4-Methoxy-2-nitrophenylazo)resorcinol  〔化３０〕
【化３０】
0005419582.tif 000051
【０１６９】
3-ピリジノールの替わりにレソルシノール（resorcinol）23.23g(0.211mol)、o-ニトロアニリンの替わりに4-メトキシ-2-ニトロアニリン(4-methoxy-2-nitroaniline)33.63gにて実施した以外は、化合物1a,1bの工程A〜Ｃまでと同様の条件にて合成を行った。収量52.06g (収率90%)の赤色結晶であった。得られた粗生成物5.0gより化合物1a,1bの工程Ｄの条件と同様に再結晶を行い、3.7gの暗赤色精製結晶を得た。
【０１７０】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、２９７０（Ｃ−Ｈ）、１５３０（Ｃ＝Ｃ）、１４３０（ＮＯ２）、１２８０（ＮＯ２）、１２４０（Ｐｈ−Ｏ）
【０１７１】
（化合物2lの合成）
化合物2l：2-ヒドロキシメチル-4-メチル-6-(2-ニトロフェニルアゾ)フェノール
2-Hydroxymethyl-4-methyl-6-(2-nitrophenylazo)phenol  〔化３１〕
【化３１】
0005419582.tif 000052
【０１７２】
3-ピリジノールの替わりに2-ヒドロキシメチル-4-メチルフェノール(2-hydroxymethyl-4-methylphenol)35.49g(0.211mol)にて実施した以外は、化合物1a,1bの工程A〜Ｃまでと同様の条件にて合成を行った。収量48.8g(収率85%)の暗赤色結晶であった。得られた粗生成物5.0gより化合物1a,1bの工程Ｄの条件と同様に再結晶を行い、3.2gの暗赤色精製結晶を得た。
【０１７３】
ＦＴＩＲの測定結果を以下に示す。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−１  、２９５０（Ｃ−Ｈ）、１６００、１５２０（Ｃ＝Ｃ）、１４７０（ＮＯ２）、１３１０（ＮＯ２）
【０１７４】
〔MMP阻害活性の評価方法〕
市販されているMMP Inhibitor Profiling Kit,「Fluorimetric」(BIOMOL社製)を用いて活性評価を行った。活性評価の作業手順は以下に示す。
（１）凍っている測定用緩衝液, バイアルに入っているN-イソブチル-N-(4-メトキシフェニルスルホニル)グリコールヒドロキサム酸（以下「NNGH」という。：positive control)を解凍し、NNGH  1μLに対して測定用緩衝液を200 μLを加えて希釈液を別の容器に作る。
（２）96 穴マイクロプレートを用い，測定用緩衝液をその内の検定用の3穴に99μLを加え、Control用の穴に79μL，NNGH用の穴に59μL，残りの穴は評価したい化合物用に用い、評価する濃度によって加える測定用緩衝液の量を変化させる。
（３）MMPを解凍した後に下に示す比率で希釈する。
（３）MMPを解凍した後に下に示す比率で希釈する。
MMP-1:  1/40  MMP-9:  1/60
MMP-2:  1/70  MMP-10:  1/100
MMP-3:  1/70  MMP-12:  1/285
MMP-7:  1/70  MMP-13:  1/50
MMP-8:  1/100  MMP-14:  1/100
（４）上記（３）で希釈した酵素を20μLずつcontrol，NNGH，評価したい化合物の穴に加えていく。
（５）上記（１）で希釈したNNGH溶液をNNGH用穴のみに加える。
（６）control用の穴のみDMSO  5μL加える。
（７）評価したい化合物を評価したい濃度になるように計算した溶液を所定の穴に加える。
（８）酵素と評価化合物とを反応させるため1時間、37℃でインキュベートする。
（９）1時間後、まず、検定用の3穴に蛍光ペプチド基質を1μL加えて蛍光を測定し、値が一定になるまで測定する。このときの値をブランクとして使う。
（１０）ブランクの測定が終わったら、残りの穴全てに蛍光ペプチド基質を1μLずつ加えて、蛍光を測定する。2分ごとに測定し，測定ポイントは10点取る。
（１１）（１０）で得られた結果を時間、蛍光強度を軸とした座標軸上にプロットし，最小自乗法にて得られた近似直線及びその傾きをcontrol，NNGH，評価したい化合物のそれぞれについて求める。
（１２）得られた傾きから阻害率を計算する。その計算式は、次の〔式１〕で求められる。
〔１−(評価したい化合物の傾き)／(controlの傾き)〕×100(%)      〔式１〕
【０１７５】
上記測定キットの作業手順にしたがって合成した化合物のMMP阻害活性を測定した。〔表１〕及び〔表２〕にその結果を示す。
【０１７６】
【表１】
0005419582.tif 000053
【０１７７】
【表２】
0005419582.tif 000054
【０１７８】
表１、表２に表記の数値は、２回のアッセイ評価における平均値で示した。表１より、原料のカップラーとしてピリジン系化合物を用いた化合物のうちでは、カップラーとして2-クロロ-3-ヒドロキシピリジンを用いた、化合物1l，1m，1n，1oについて特にＭＭＰ２選択阻害活性が高いことが分かる。また表２より、原料のカップラーとしてピリジン誘導体以外を用いた化合物のうちでは、レソルシノールを用いた化合物2e，2fについて特にＭＭＰ２選択阻害性が高いことが分かる。
【産業上の利用可能性】
【０１７９】
本発明の化合物は、ＭＭＰ−１に対するＭＭＰ−２の阻害活性が強く、また構造上、従来のヒドロキサム酸活性部位と比較して安定であるので体内動態においても優れていると考えられる。より快適な生活の質（Quality of Life）を踏まえた副作用の少ない抗癌剤として好適に利用できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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