(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
図１に示される式ＩＩＩの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の水溶液の製造方法であって、
ここで対応する（６Ｒ）−ジアステレオ異性体の含量が４重量％〜８重量％の範囲内である、図１に示される式ＩＩの（６Ｓ）−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸は、水中でメチル化され、
−  得られたメチル化反応混合物に、ＴＨＦの使用量に対して０．７０〜０．８２当量の塩化カルシウムを添加し、
−  そのようにして得られた水溶液から、（６ＲＳ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−葉酸のカルシウム塩を選択的に結晶化して分離し、および
−  対応する（６Ｒ）−ジアステレオ異性体の含量が２重量％以下である、式ＩＩＩの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸カルシウム塩の水溶液を得る
ことを特徴とする、前記製造方法。
【請求項２】
塩化カルシウムを固体の形態または水溶液の形態で添加することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（６ＲＳ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の選択的結晶化が、（６ＲＳ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の予め製造した結晶を入れ（ｓｅｅｄｉｎｇ）、その後温度を室温から３℃〜５℃の範囲内の温度に低下させることにより実施されること、および、この温度を１６〜１８時間維持すること、を特徴とする請求項１〜２のうちの１項に記載の方法。
【請求項４】
図１に示される式ＩＶの安定な、結晶性（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の製造方法であって、
−  対応する（６Ｒ）−ジアステレオ異性体の含量が２重量％以下である、図１に示される式ＩＩＩの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の水溶液に、ｐＨ値５．５が得られるまでの量の酢酸またはスルホン酸を添加し、
−  そのようにして得られた溶液を４４℃〜４６℃の範囲内の温度に加温し、
−  この加温した溶液に、ｐＨ値が４．３〜４．４の範囲内になるまでの量の酢酸またはスルホン酸を添加し、それにより、式ＩＶの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の結晶化が始まり、ここでこの結晶化の間、酢酸またはスルホン酸を連続的に添加することによってｐＨ値を４．３〜４．４の範囲内に維持し、および、
−  そのようにして得られた結晶性固体を、４４℃〜４６℃の範囲内の温度で濾別し、そして単離する
ことを特徴とする、前記方法。
【請求項５】
得られた結晶性固体を、約４０℃の温度の水で洗浄することを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
スルホン酸がｐ−トルエンスルホン酸であることを特徴とする、請求項４〜５のうちの１項に記載の方法。
【請求項７】
対応する（６Ｒ）−ジアステレオ異性体の含量が２重量％以下である、式ＩＩＩの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の水溶液が、請求項１〜３のうちの１項に記載の方法によって製造されることを特徴とする、請求項４〜６のうちの１項に記載の方法。
【請求項８】
ジアステレオ異性体純度が少なくとも９９％である、図１に示される式ＩＶの安定な、（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の結晶。
【請求項９】
−  図２ａに示される“示差走査熱量測定”プロファイル、ＤＳＣ、
−  図２ｂに示される熱重量測定プロファイル、ＴＧＡ、
−  図３ａに示されるＸ線粉末回折図、および
−  図３ｂに示される、約±０．２度の誤差を有する２シータ値
を有することを特徴とする、請求項８に記載の安定な、（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の結晶。
【請求項１０】
対応するＸ線粉末回折図が以下の特徴的な２シータ値：
１５．０
１５．６
１７．４
１８．７
１９．９
２２．２
２４．３および
２９．５
を有することを特徴とする、請求項８〜９のうちの１項に記載の安定な、（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の結晶。
【請求項１１】
請求項８〜１０のうちの１項に記載の、図１に示される式ＩＶの安定な、（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の結晶を有効成分として含む栄養補助食品。
【請求項１２】
請求項８〜１０のうちの１項に記載の、図１に示される式ＩＶの安定な、（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の結晶を有効成分として含む医薬品。
【請求項１３】
図１に示される式Ｖの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の安定な、非晶質カルシウム塩の製造方法であって、
−  請求項４〜７のうちの１項に記載の方法によって製造された、図１に示される式ＩＶの結晶性（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸を、水中に懸濁させ、ここで水の温度は３５℃〜４１℃であり、
−  この懸濁液に、ｐＨ値が６．７〜６．９の範囲内になるまでの量のＮａＯＨ溶液を分割して添加し、
−  そのようにして製造した溶液に、式ＩＶの化合物の使用量に対して０．９０当量の塩化カルシウムを添加し、
−  そのようにして製造した溶液において、式ＩＶの化合物の濃度を、水の添加または除去のいずれかによって、１４重量％〜１６重量％の範囲内の値に調節し、
−  式Ｖの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の沈殿を、予め製造した少量の式Ｖの化合物を添加することによって開始し、
−  そのようにして製造した混合物を１時間、４０℃の温度に保ち、
−  次に、２時間以内に、温度を４０℃から２３℃の温度に低下させ、
−  前記の２３℃の温度を１６〜１８時間維持し、および
−  得られた固体を単離する
ことを特徴とする、前記方法。
【請求項１４】
得られた固体を、約１０℃の温度の水で洗浄し、洗浄した固体を室温で９４％水性エタノール中に懸濁させた後、そのように処理した固体を濾過によって単離することを特徴とする、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
塩化カルシウムを固体の形態または水溶液の形態で添加することを特徴とする、請求項１３〜１４のうちの１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式Ｖの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の安定な、非晶質カルシウム塩の製造方法に関する。
【０００２】
また、本発明は、式ＩＶの安定な、結晶性（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の製造方法に関する。
【０００３】
また、本発明は、式ＩＩＩの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の水溶液の製造方法に関する。
【０００４】
本発明において、５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸は、ＴＨＦと略記されることがある。
【背景技術】
【０００５】
Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸−本明細書ではＮ（５）−メチル−ＴＨＦと略記されることがある−およびその誘導体の薬理学的重要性についての概略が、ＥＰ  ０  ４５５  ０１３  Ａ１の記載の冒頭にある。この文献では、Ｎ（５）−メチル−ＴＨＦの（６Ｓ）−および（６Ｒ）−ジアステレオ異性体のそれぞれの重要性も指摘されている。ここには、Ｎ（５）−メチル−ＴＨＦの純粋な（６Ｓ）−および（６Ｒ）−ジアステレオ異性体の製造に関する従来技術も記載されている。
【０００６】
ＥＰ  １  ０４４  ９７５  Ａ１には、Ｎ（５）−メチル−ＴＨＦの安定な結晶性塩が記載されている。ここには、（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−ＴＨＦの結晶性カルシウム塩類も記載されているが、これら塩類は、各Ｘ線粉末回折図において、明確な２−シータ値を有する。
【０００７】
これら塩類の製造方法では、原料として、（６ＲＳ）−ジアステレオ異性体混合物、または、既に分離された（６Ｓ）−または（６Ｒ）−ジアステレオ異性体が使用される。この方法は、６０℃、好ましくは８５℃を超える温度処理を含み、実施例では、９０℃〜１００℃の温度が記載されている。
【０００８】
このような温度処理は当然、これら塩類の個々の製造に対する好適性に劣る。
【０００９】
ＥＰ  １  ０４４  ９７５  Ａ１には、Ｎ（５）−メチル−ＴＨＦの個々の（６Ｓ）−または（６Ｒ）−ジアステレオ異性体を得る方法は記載されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】ＥＰ  ０  ４５５  ０１３  Ａ１
【特許文献２】ＥＰ  １  ０４４  ９７５  Ａ１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、式Ｖの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の安定なカルシウム塩の製造のための、工業的に適用可能な方法を提供することにある。
【００１２】
この方法で得られる生成物は、少なくとも９９％のジアステレオ異性体純度を有するであろう。
【００１３】
この方法は簡便であり、特に、熱処理を含まないであろう。
【００１４】
本発明のさらなる目的は、式ＩＶの安定な、結晶性（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の製造方法を提供することにある。
【００１５】
本発明のさらなる目的は、式ＩＩＩの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の水溶液の製造方法を提供することにある。この方法によって、Ｎ（５）−メチル−ＴＨＦのカルシウム塩の水溶液が得られるであろう。ここで（６Ｓ）−ジアステレオ異性体は高度に濃縮される（９８％以上）。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明によって、これらの目的は達成される。
【００１７】
本発明の、式ＩＩＩの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の水溶液の製造方法であって、ここで対応する（６Ｒ）−ジアステレオ異性体の含量が４重量％〜８重量％の範囲内である、式ＩＩの（６Ｓ）−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸は、水中でメチル化される方法は、
− 得られたメチル化反応混合物に、ＴＨＦの使用量に対して０．７０〜０．８２当量の塩化カルシウムを添加し、
− そのようにして得られた水溶液から、（６ＲＳ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−葉酸のカルシウム塩を選択的に結晶化して分離し、および
− 対応する（６Ｒ）−ジアステレオ異性体の含量が２重量％以下である、式ＩＩＩの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸カルシウム塩の水溶液を得る
ことを特徴とする。
【００１８】
本発明の、式ＩＶの安定な、結晶性（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の製造方法は、
−  対応する（６Ｒ）−ジアステレオ異性体の含量が２重量％以下である、式ＩＩＩの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の水溶液に、ｐＨ値５．５が得られるまでの量の酢酸またはスルホン酸を添加し、
−  そのようにして得られた溶液を４４℃〜４６℃の範囲内の温度に加温し、
−  この加温した溶液に、ｐＨ値が４．３〜４．４の範囲内になるまでの量の酢酸またはスルホン酸を添加し、それにより、式ＩＶの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の結晶化が始まり、ここでこの結晶化の間、酢酸またはスルホン酸を連続的に添加することによってｐＨ値を４．３〜４．４の範囲内に維持し、および、
−  そのようにして得られた結晶性固体を、４４℃〜４６℃の範囲内の温度で濾別し、そして単離する
ことを特徴とする。
【００１９】
本発明の、式Ｖの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の安定な、非晶質カルシウム塩の製造方法は、
−  請求項４〜７のうちの１項に記載の方法によって製造された、式ＩＶの結晶性（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸を、水中に懸濁させ、ここで水の温度は３５℃〜４１℃であり、
−  この懸濁液に、ｐＨ値が６．７〜６．９の範囲内になるまでの量のＮａＯＨ溶液を分割して添加し、
−  そのようにして製造した溶液に、式ＩＶの化合物の使用量に対して０．９０当量の塩化カルシウムを添加し、
−  そのようにして製造した溶液において、式ＩＶの化合物の濃度を、水の添加または除去のいずれかによって、１４重量％〜１６重量％の範囲内の値に調節し、
−  式Ｖの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の沈殿を、予め製造した少量の式Ｖの化合物を添加することによって開始し、
−  そのようにして製造した混合物を１時間、４０℃の温度に保ち、
−  次に、２時間以内に、温度を４０℃から２３℃の温度に低下させ、
−  前記の２３℃の温度を１６〜１８時間維持し、および
−  得られた固体を単離する
ことを特徴とする。
【００２０】
本発明の好ましい態様は、従属項に規定される。
【００２１】
以下の部分に、本発明の可能な態様を記載する。
【００２２】
それに関して、図面についても言及する。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、式Ｉの化合物から開始して、式Ｖの化合物で終了する、反応スキームを示す。
【図２ａ】図２ａは、式ＩＶの化合物の“示差走査熱量測定”プロファイル、ＤＳＣを示す。横座標には温度を℃でプロットし、縦座標には吸熱流量をｍＷでプロットする。
【図２ｂ】図２ｂは、式ＩＶの化合物の熱重量測定プロファイル、ＴＧＡを示す。横座標には温度を℃でプロットする。左の縦座標には重量％をプロットし、右の縦座標には時間ｔ（分）に対するこれらの重量％の微分係数をプロットする。実線は左の縦座標に言及し、破線は右の縦座標に言及する。
【図３ａ】図３ａは、式ＩＶの化合物のＸ線粉末回折図を示す。横座標には２シータ値をプロットし、縦座標には強度（カウント）をプロットする。
【図３ｂ】図３ｂは、図３ａに示されるＸ線粉末回折図の、約±０．２度の誤差を有する２シータ値を示す。
【図４ａ】図４ａは、式Ｖの化合物の“示差走査熱量測定”プロファイル、ＤＳＣを示す。横座標には温度を℃でプロットし、縦座標には吸熱流量をｍＷでプロットする。
【図４ｂ】図４ｂは、式Ｖの化合物の熱重量測定プロファイル、ＴＧＡを示す。横座標には温度を℃でプロットする。左の縦座標には重量％をプロットし、右の縦座標には時間ｔ（分）に対するこれらの重量％の微分係数をプロットする。実線は左の縦座標に言及し、破線は右の縦座標に言及する。
【図５】図５は、式Ｖの化合物のＸ線粉末回折図を示す。横座標には２シータ値をプロットし、縦座標には強度（カウント）をプロットする。
【図６】図６は、化合物Ｖの化合物のラマンスペクトルを示す。横座標には波数をｃｍ-1でプロットし、縦座標にはラマン強度をプロットする。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
対応する（６Ｒ）−ジアステレオ異性体の含量が４重量％〜８重量％の範囲である、式ＩＩの（６Ｓ）−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸は、ＥＰ  ０  ６００  ４６０号に従って製造した。
【００２５】
ジアステレオ異性体塩の１：１混合物を溶液から選択的に結晶化することにより、（６Ｓ）−異性体の含量を高めた、式ＩＩＩの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の水溶液が得られたことは、非常に驚くべきことであった。
【００２６】
いつも(Routinely)、（６Ｓ）−異性体の含量が少なくとも９８％である溶液を単離することができた。
【００２７】
上記溶液から対応する式ＩＶの安定な、結晶性遊離酸を得ることも、非常に驚くべきことであったが、さらに、この工程の間に、ジアステレオ異性体純度がさらに上昇して少なくも９９％の純度が達成された。
【００２８】
式ＩＶの安定な、結晶性（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸を、この酸を栄養補助食品または医薬品において少なくとも一つの有効成分として使用し得るようなジアステレオ異性体純度で単離することができた。
【００２９】
式ＩＶの酸から、式Ｖの、驚くほど安定な、非晶質カルシウム塩が製造される。
【００３０】
式Ｖの化合物のＸ線粉末回折図（図５を参照）より、この化合物が実際に非晶質であることは明らかである。
【実施例】
【００３１】
本発明を以下の実施例によって説明する。
【００３２】
実施例１（式ＩＩＩの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の水溶液の製造）
【００３３】
ＥＰ  ０  ６００  ４６０号に従って製造した、ジアステレオ異性体純度が（６Ｓ）：（６Ｒ）＝９２：８の、式ＩＩの（６Ｓ）−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸１００ｇを、窒素雰囲気下、７℃の温度の水に懸濁させた。
【００３４】
２０％（ｗ／ｗ）ＮａＯＨ水溶液６５ｍｌを添加することにより、式ＩＩの化合物を溶解させた。その時のｐＨ値は９．０５であった。
【００３５】
この溶液に、撹拌下、８℃の温度で、３６％（ｗ／ｗ）ホルムアルデヒド水溶液２３．７ｇを５分以内に添加した。
【００３６】
１５分後、２１．３ｇのＮａＢＨ4を５０ｍｌの水および１ｍｌの２０％（ｗ／ｗ）ＮａＯＨ水溶液に溶解することにより調製した、ＮａＢＨ4水溶液を、撹拌下、８℃の温度で１時間の間、添加した。
【００３７】
この混合物を８℃の温度で３０分間、その後、６１℃の温度で２０分間、撹拌した。
【００３８】
その後、反応温度を２時間以内に２０℃に下げた。
【００３９】
次に、７９ｍｌの１８％（ｗ／ｗ）ＨＣｌ水溶液を滴下した。その時のｐＨ値は８．０３であった。
【００４０】
ホウ酸塩を沈殿させるため、混合物を４℃の温度に冷却した。２時間後、濾過によりホウ酸塩を除去した。
【００４１】
得られた溶液のｐＨ値を、１０ｍｌの１８％（ｗ／ｗ）ＨＣｌ水溶液を添加することにより調節して、７．０３とした。
【００４２】
この溶液を２０℃の温度に加温し、その後、まず１．６２ｇのＥＤＴＡジナトリウム、次に０．８２当量（２５．４４ｇ）のＣａＣｌ2．２Ｈ2Ｏを加えた。
【００４３】
次に、２ｍｌの２０％（ｗ／ｗ）ＮａＯＨ水溶液を添加することにより、ｐＨ値を６．９に調節した。
【００４４】
（６ＲＳ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の選択的結晶化は、（６ＲＳ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の予め製造した結晶１００ｍｇを溶液に入れ(seeding)、その後４０分以内に温度を室温から４℃の温度に下げることによって実施した。
【００４５】
得られた懸濁液を、撹拌下、４℃の温度で１８時間維持した。
【００４６】
得られた結晶を濾別した。
【００４７】
そのようにして得られた、式ＩＩＩの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の水溶液は、キラルカラムでのＨＰＬＣによって示されるように、対応する（６Ｒ）−ジアステレオ異性体の含量が２重量％以下であった。
【００４８】
実施例２（式ＩＶの結晶性（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の製造）
【００４９】
上記の実施例１に従って製造された、対応する（６Ｒ）−ジアステレオ異性体の含量が２重量％以下である、式ＩＩＩの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩水溶液に、ｐＨ値が５．５になるまで、６ｍｌの１００％酢酸を２０分以内に添加した。
【００５０】
その後、温度を４５℃に上げた。
【００５１】
この温度で、１．３５ｇの亜ジチオン酸ナトリウムおよび１．９ｇのＥＤＴＡジナトリウムを連続して添加した。
【００５２】
この溶液に、２５ｍｌの１００％酢酸を１５分以内に添加した。
【００５３】
ｐＨ値４．５で、式ＩＶの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸の結晶化が始まった。
【００５４】
１００％酢酸（１０ｍｌ）を連続的に添加することにより、ｐＨ値を４．３〜４．４の範囲内に維持した。
【００５５】
この懸濁液を３０分間撹拌し、その後濾別した。
【００５６】
そのようにして得られた結晶性固体を、４０℃の温度の水で洗浄した。
【００５７】
１０６．９ｇの湿った結晶性固体が得られた。
【００５８】
純度およびジアステレオ異性体の比率を測定するため、式ＩＶの化合物のサンプルを９４％（ｖ／ｖ）水性エタノールで洗浄し、その後減圧下で乾燥させた。それにより、以下の結果が得られた：
ＨＰＬＣ純度：９６．４５％
（６Ｓ）／（６Ｒ）比＝９９．１：０．９（キラルＨＰＬＣによって測定）
【００５９】
そのようにして得た式ＩＶの生成物の安定性データは以下の通りであった（４℃の温度で保存）：
【表１】
0005552422.tif 000002
【００６０】
実施例３（式Ｖの非晶質（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の製造）
【００６１】
上記の実施例２に従って製造された、１０６．９ｇの湿った結晶性固体を、４０℃の温度の４００ｍｌの水に懸濁させた。
【００６２】
この懸濁液に、６５ｍｌの２０％（ｗ／ｗ）ＮａＯＨ水溶液を、ｐＨ値６．８の透明溶液が得られるまで、ゆっくりと添加した。
【００６３】
この溶液に、０．９０当量のＣａＣｌ2．２Ｈ2Ｏ（２２．７ｇ、式ＩＶの単離した乾燥化合物の量に対して）を添加した。
【００６４】
（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のＨＰＬＣ測定により、溶液中の濃度はｃ＝１４．７％ｗ／ｗであった。
【００６５】
１ｍｌの２０％（ｗ／ｗ）ＮａＯＨ水溶液を添加することにより、ｐＨ値を６．８に調節した。
【００６６】
予め製造した１００ｍｇの式Ｖの化合物を添加することにより、式Ｖの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の沈殿が開始された。
【００６７】
そのようにして製造した混合物を、４０℃の温度で１時間保持した。
【００６８】
次に、２時間以内に、４０℃の温度を２３℃の温度に下げ、そして２３℃の温度を１８時間維持した。
【００６９】
母液中の式Ｖの（６Ｓ）−Ｎ（５）−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の濃度が７．５％未満(below)になった後、懸濁液を濾別した。
【００７０】
得られた固体を、１０℃の温度の水５０ｍｌで洗浄した。
【００７１】
式Ｖの湿った化合物を２２℃の温度で２５０ｍｌの９４％（ｖ／ｖ）水性エタノール中に懸濁させ、３０分間撹拌した。
【００７２】
次に、この懸濁液を濾別し、５０ｍｌの９４％（ｖ／ｖ）水性エタノールで２回洗浄した。
【００７３】
９５ｇの湿った固体が得られ、それを減圧下で乾燥させた。４７．３ｇの式Ｖの化合物が得られた。
【００７４】
それについて、以下の分析データを得た：
ＨＰＬＣ純度：９８．７５％
（６Ｓ）／（６Ｒ）比＝９９．７５：０．２５（キラルＨＰＬＣによって測
定）
【００７５】
そのようにして得た式Ｖの生成物の安定性データは以下の通りであった（真
空下［２ｍｂａｒ］、２５℃の温度で保存）：
【表２】
0005552422.tif 000003
【図１】
0005552422.tif 000004
【図２ａ】
0005552422.tif 000005
【図２ｂ】
0005552422.tif 000006
【図３ａ】
0005552422.tif 000007
【図３ｂ】
0005552422.tif 000008
【図４ａ】
0005552422.tif 000009
【図４ｂ】
0005552422.tif 000010
【図５】
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【図６】
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