(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
肝線維症の治療のための、ＧＨＲＰ−６を含む薬剤組成物。
【請求項２】
肺線維症の治療のための、ＧＨＲＰ−６を含む薬剤組成物。
【請求項３】
腎硬化症の腎線維症の治療のための、ＧＨＲＰ−６を含む薬剤組成物。
【請求項４】
ケロイド及び過増殖の瘢痕を含む皮膚線維症及びβ−アミロイド沈着の治療のための、ＧＨＲＰ−６を含む薬剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、製薬産業及び医薬の分野に関し、より正確には、肝臓、肺、食道、小腸、腎臓、血管、関節、及び他のあらゆる疾病原因の全身性の形態の皮膚性の線維症などの実質性の内部組織における線維性物質の病理学的沈着を予防及び除去する薬剤組成物において繰返し投与する分泌促進ペプチドの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
線維症の事象は、殆ど全ての内部臓器、血管、又は皮膚の実質における細胞外マトリックスの異常な沈着を特徴とする、一群のモノオーガニック（ｍｏｎｏ  ｏｒｇａｎｉｃ）又は全身性の病理学的実体を含む。これらは、複合の自己免疫ベースの事象、又は長期の模倣及び炎症の事象に対する間質性の反応の結果と考えられている。一般に、過剰のコラーゲン性物質が、機能性組織を消し去る介在性のエフェクター細胞又は拡大した間質性の物質によって、実質に沈着する。これらの事象を媒介しているエフェクター細胞は、間葉系起源であり、冒されている組織にしたがってかなり特異的であると思われる。一般に、筋線維芽細胞が、病理学的な線維症をもたらす点で関係づけられている。線維症の確立を媒介するメカニズムは複雑であり、完全に理解されていない。いずれにせよ、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、結合組織由来増殖因子（ＣＴＧＦ）、及び血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）は、標的臓器に関係なくこれらの事象に関わっていると考えられている。長期の線維症は、一般に致死的であり、現在のところ有効な治療がない。次に、いくつかの臓器における線維症の事象についてのいくつかの技術的態様を提示する（Ｄｉｎｇ  Ｊ、Ｙｕ  Ｊ、Ｗａｎｇ  Ｃ、Ｈｕ  Ｗ、Ｌｉ  Ｄ、Ｌｕｏ  Ｙ、Ｌｕｏ  Ｈ、Ｙｕ  Ｈ、「イチョウ抽出物はラットにおいてＣＣｌ４が誘発する肝線維症を軽減する（Ｇｉｎｋｇｏ  ｂｉｌｏｂａ  ｅｘｔｒａｃｔ  ａｌｌｅｖｉａｔｅｓ  ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ＣＣｌ４  ｉｎ  ｒａｔｓ）」、Ｌｉｖｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、２００５年、２５巻、１２２４〜１２３２頁）（Ｆｒｉｅｄｍａｎ  ＳＬ、Ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ−Ｆａｃｔ  ｏｒ  ｆａｎｔａｓｙ？、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、２００６年１月３０日、４３巻（Ｓ１）、Ｓ８２〜Ｓ８８頁）。
【０００３】
肝線維症
肝臓が損傷を受けると、炎症反応及び細胞外マトリックス（ＥＭ）の再構築によって、この臓器における正常の機能及び構造を回復される。しかし、損傷が持続する場合、修復及び問題の解決に関与する要因のミスバランス（ｍｉｓｂａｌａｎｃｅ）により、ＥＭの制御が変更され、その成分の過剰な合成が促進される。肝臓は、代謝の制御、血液のろ過、及びホルモンの制御に関与する主な臓器である。肝星細胞（ＨＳＣ）は、長い細胞質突起を有する内皮細胞を囲む、ディッセ腔又は類洞壁と名付けられた、内皮細胞と肝細胞との間の間隙に配置される。ＨＳＣは、ＥＭの構成成分を合成及び分泌することができ、線維症の事象の重要な出所を代表している。これらは、レチニルエステルを貯蔵し、増殖因子及び他のサイトカインを合成し、類洞の血流を制御する上でさらなる役割を有する。ＨＳＣは、炎症誘発性のサイトカインの傍分泌、活性酸素種の生成、又は細胞の表現型に影響を及ぼすＥＭ構造における変化によって誘発されて、静止状態から活動状態へ移行することができる。これらの活性化の間、ＨＳＣは、形状が細長く、平滑筋のα−アクチンを発現し、貯蔵されているレチノールを全て解放する筋線維芽細胞に分化する。この状態で、ＨＳＣは、これらが炎症反応、即ち、増殖する能力、収縮性、サイトカイン生成、及び主にＥＭの構成成分の合成及び分泌、を持続し、増幅することを助ける新しい性質を獲得する。活性化されたＨＳＣにおいてＥＭタンパク質の生成を促進する主な因子の中には、主に活性化段階におけるクッパー細胞から合成されるＴＧＦ−βがあり、ＴＧＦ−βは、永続化段階においてＨＳＣによって主に生成され、活性化の持続を支持する。一般に、肝臓の線維性の硬結は全て、生存に不適合である（肝不全、最終アップデート２００４年９月３日、編集：Ｄａｖｉｄ  Ｅｒｉｃ  Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ、ＭＤ、Ｃｈｉｅｆ、Ｓｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、Ｎｏｒｔｈ  Ｓｈｏｒｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ、Ｄｉｒｅｃｔｏｒ、Ａｓｓｏｃｉａｔｅ  Ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  Ｔａｌａｖｅｒａ、ＰｈａｒｍＤ、ＰｈＤ、Ｓｅｎｉｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  Ｅｄｉｔｏｒ、ｅＭｅｄｉｃｉｎｅ；Ｏｓｃａｒ  Ｓ  Ｂｒａｎｎ、ＭＤ、Ａｓｓｏｃｉａｔｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ、ＵＣＳＤ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；Ｐｒｏｇｒａｍ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  Ｆｅｌｌｏｗｓｈｉｐ、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｎａｖａｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ；Ａｌｅｘ  Ｊ  Ｍｅｃｈａｂｅｒ、ＭＤ、ＦＡＣＰ、Ｄｉｒｅｃｔｏｒ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｋｉｌｌｓ  Ｐｒｏｇｒａｍ、Ａｓｓｉｓｔａｎｔ  Ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉａ���ｉ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；及びＪｕｌｉａｎ  Ｋａｔｚ、ＭＤ、Ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、ＭＣＰ  Ｈａｈｎｅｍａｎｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）（Ｓａｒｅｍ  Ｍ．、「肝臓星状細胞：正常及び病理学的状態におけるその役割（Ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅｌｌａｔｅ  ｃｅｌｌｓ：ｉｔ’ｓ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．）」、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ．、２００６年２月；２９巻（２）、９３〜１０１頁）。
【０００４】
肺線維症
肺線維症は、やはりいくつかの実体を含んでいる、進行の比較的遅い疾患である。組織学的には、線維芽細胞を支配する病変の一時的な不均一性を特徴とする。肺線維症の病原における一連の事象は十分記載されていても、主な損傷を媒介する正確な機序についての情報は殆どない。主に自己免疫性である、免疫学的因子が関係するとみなされている。遺伝的因子も結びつけられている。顕微鏡的には、寡黙な性質は、核小体が突出し、細胞学的に非定型の、肺胞の上皮細胞における過形成の変化（ＩＩ型肺細胞）を含み、通常ウイルス感染を模倣している。超微細構造の管状の核内封入を見つけることが可能である。肺実質におけるＥＭ及び特にコラーゲンの沈着プロセスにより、肺の構造を潜行性に変質させ、細気管支及び肺胞を崩壊し、最終的に機能障害になり、肺の換気を損傷する。ＴＧＦ−αは、このプロセスを組織化する主なサイトカインの１つとして、やはり関与している。筋線維芽細胞は、ＥＭ生成細胞である。（Ｍｅｄｒａｎｄａ  Ｇｏｍｅｚ  ＭＡ、Ｐａｒｉｃｉｏ  Ｎｕｎｅｚ  Ｐ、Ｔｏｖａｒ  Ｍａｒｔｉｎｅｚ  Ａ、Ｆｅｒｒｅｒ  Ｍａｒｉｎ  Ｆ、Ｇｏｎｚａｌｅｚ  Ｍａｒｔｉｎｅｚ  Ｐ、Ｇａｒｃｉａ  Ｐｕｃｈｅ  ＭＪ．、「肺線維症（Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ．）」、Ｒｅｖ  Ｅｓｐ  Ｅｎｆｅｒｍ  Ｄｉｇ．、２００５年１１月、９７巻（１１）、８４３〜４頁）。
【０００５】
全身性皮膚線維症即ち強皮症
全身性強皮症（ＳＳ）は、特に複雑な疾患である。現在まで、その病原を説明する、真実味ある理論は存在していない。しかし、線維芽細胞、内皮細胞、並びに免疫系の細胞、特にＢ及びＴリンパ球における根本的な異常は記載されている。これらの細胞における機能的な変化は、ＳＳにおける病理学的変化の典型的な三徴候：皮膚及び内臓の進行性の線維症、小動脈及び細動脈の管腔の閉塞、並びに免疫異常を促進する。体液性及び細胞性免疫における変更は、大量の抗体の分泌を引き起こし、そのいくつかは疾患に非常に特異的であり、単核細胞の組織中への浸潤により、サイトカイン及び増殖因子の生成に影響を及ぼし、制御解除する。今までのところ、この変更のどれが疾患の主なトリガリング事象であるか、又は進行性のＳＳの線維症のプロセスを引き起こすためにこの全てが関連しあっているのか否かは明らかになっていない。しかし、主な病原の構成要素は、ＳＳ患者の線維芽細胞においていくつかのタイプのコラーゲン及び他のＥＭタンパク質をコードする遺伝子の、制御解除された、持続的な活性化を含んでいる。これは、正常の傷の治癒が可能である正常の線維芽細胞と、コラーゲンが非制御に生成し、沈着し、冒されている臓器における病理学的な線維症をもたらすＳＳ線維芽細胞との間の主な違いである。再度、ＴＧＦ−βは、ＳＳ組織線維症に明らかに関わっていると思われる成長因子の１つである。最も重要な効果の１つは、いくつかのタイプのコラーゲン、及びフィブロネクチンなどの他のＥＭタンパク質の合成を含んでいる（３１）。ＳＳを有する患者の線維芽細胞は、その表面上に高レベルのＴＣＦ−β受容体を発現しており、ＴＧＦ−β及びコラーゲン生成の増大によって誘発されるシグナルにおける増大を担っている可能性がある（３０）。この疾患も、不可逆的に致死的である（Ｓｔｅｅｎ  Ｖ．、「全身性強皮症に対するターゲット療法（Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．）」、Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ、Ｒｅｖ．、２００６年２月、５巻（２）、１２２〜４頁）。
【０００６】
糖尿病性腎硬化症即ち糖尿病性腎症
殆ど全ての糖尿病患者は、疾患の診断から２から３年後に、糸球体及び尿細管基底膜の腫脹を発症する。その中には、進行性の糖尿病性腎症の病理学的マーカーである、糸球体のメサンギウムの膨張及び間質性線維症も発症する者もいる。この腎症は、臨床的に進行し、タンパク尿、高血圧、及び腎不全も発症する。メサンギウム領域の拡大、間質性線維症の重症度、及びアテローム性動脈硬化の間の相関は良好であり、糸球体ろ過速度も低減する。最終的には、メサンギウムの拡大は、糸球体の毛細管を閉塞し、有効ろ過面積を低減することにより、糸球体の拡大を低減する。同じ様式で、尿細管間質性の線維症は、尿細管の構造及び機能を変化させ、腎不全をもたらす。この疾患では、ＴＧＦ−βの役割は、糖尿病患者の腎臓に生じる線維性のプロセスを組織化する点で解明されている。この疾患は進行性であり、潜行性であり、腎不全によって患者の生命とともに終息する（Ｃｏｈｅｎ、Ｍ．Ｐ．、Ｚｉｙａｄｅｈ、Ｆ．Ｎ．、Ｈｏｎｇ、Ｓ．Ｗ．、Ｓｈｅａｒｍａｎ、Ｃ．Ｗ．、Ｈｕｄ、Ｅ．、Ｌａｕｔｅｎｓｌａｇｅｒ、Ｇ．Ｔ．、Ｉｇｌｅｓｉａｓ−ｄｅ  ｌａ  Ｃｒｕｚ、Ｍ．Ｃ．、及びＣｈｅｎ、Ｓ．、（２００２年）「ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるアルブミンの糖化の阻害によりＴＧＦ−β  η１の糸球体の過剰発現が改善する（Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ａｌｂｕｍｉｎ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｅｔａ１．）」、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ、６１巻、２０２５〜２０３２頁）、（Ｚｉｙａｄｅｈ、Ｆ．Ｎ．、Ｈｏｆｆｍａｎ、Ｂ．Ｂ．、Ｈａｎ、Ｄ．Ｃ．、Ｉｇｌｅｓｉａｓ−ｄｅ  ｌａ  Ｃｒｕｚ、Ｍ．Ｃ．、Ｈｏｎｇ、Ｓ．Ｗ．、Ｉｓｏｎｏ、Ｍ．、Ｃｈｅｎ、Ｓ．、ＭｃＧｏｗａｎ、Ｔ．Ａ．、及びＳｈａｒｍａ、Ｋ．（２０００年）「ｄｂ／ｄｂ糖尿病マウスにおけるモノクローナル抗−ＴＧＦ−β抗体での処置による腎不全、過剰のマトリックス遺伝子発現、及び糸球体間質のマトリックス発現の長期予防（Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｎａｌ  ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ、ｅｘｃｅｓｓ  ｍａｔｒｉｘ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ  ｍｅｓａｎｇｉａｌ  ｍａｔｒｉｘ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉ−ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  ｄｂ／ｄｂ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｍｉｃｅ．）」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９７巻、８０１５〜８０２０頁）。
【０００７】
陰茎線維症即ちペイロニー病
概念上、この疾患は、勃起組織の陰茎の弾性の被覆（白膜）の病理学的瘢痕を含み、安静状態における臓器の退縮、及び勃起中の湾曲及び退縮をもたらす。疾患の開始を記述するのは難しいが、白膜の線維性の変性を炎症プロセスが先行し、血管炎性の、免疫学的な、若しくは外傷性のプロセス、又はコラゲノパシー（ｃｏｌｌａｇｅｎｏｐａｔｈｙ）を引き起こすということに、著者の殆どが一致している。浸潤の第１ピリオドは、勃起又は挿入の間、線維性のプラークが痛みを伴って陰茎の曲線又は退縮を表しながら静かに進行し得るときであると記載されている。主症状は、線維症によって引き起こされる。さらなる関連する線維症が耳たぶの軟骨にも存在する患者もいる。致死的ではないが、この疾患は、患者の生活の質を著しく損なう。再び、ＴＧＦ−βは、疾患の分子ベースを誘発又は増幅する因子として関与する（Ｊａｋｕｔ  Ｍ．、「ペイロニー病の基本的な科学的理解における新発見（Ｎｅｗ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｉｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂａｓｉｃ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｅｙｒｏｎｉｅ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．）」、Ｃｕｒｒ  Ｕｒｏｌ  Ｒｅｐ．、２００４年１２月、５巻（６）、４７８〜８４頁）。
【０００８】
脳微小血管疾患
脈管障害は、アルツハイマー病及び他の痴呆の病原性のマーカーとして、アルツハイマー病に罹患している患者の脳で確認されている。血管の病変の層状及び領域の分布は、神経原線維変化及び老人斑の外観に相関している。１００年以上前は、かつては硬直、無目的、及び湾曲を含めた、高齢者の脳血管における生理学的異常が以前に記載されていた。２０年前以降にこれらの証拠は確認され、主要な血管の老化とともに海馬の老人性毛細血管がさらに歪められることがさらに記載されていた。超微細構造的に、（ａ）基底膜中への膜性の封入、及び（ｂ）基底膜構成成分の微小血管のコラーゲンの貯蔵（線維症）又は腫脹を区別することができる。毛細血管の周皮細胞は、老化とともに、著しく変性する。内側の基底膜におけるコラーゲン線維の沈着が、哺乳動物の脳に観察されている。これらの線維における６４ｎｍ幅の回転により、上皮細胞と周皮細胞との間、又は基底膜の内側表面に位置しているこの微小血管線維症のコラーゲン組成物の同定が可能になっている。基底膜の腫脹及びコラーゲン沈着は、ラット及びヒトにおいて年齢とともに同様に増大し、脳の微小血管系のこれらの線維性硬化症の変性プロセスは、一般に痴呆をもたらすプロセスの解剖学的なベースと考えられている。これらの疾患は、細動脈網の進行性の閉塞とともに臨床的に悪化し、最終的に、全ての社会的関係及び認知活動を抑止する。
【０００９】
痴呆の病原における血管疾患の役割は、現在、再び静まっており、５０％を超える痴呆患者は、あらゆる脳血管疾患の徴候を有すると示唆されている。記憶、学習、及び一般的技能の重大な低下を媒介する、他の神経−脳の、非アルツハイマー性の痴呆プロセスが存在する。最も適切な例は、皮質下梗塞を伴った自律神経性の脳動脈の白質脳症（ＣＡＤＡＳＩＬ）である。この疾患は、分子及び細胞レベルでは、未だ解明されていない。それにも関わらず、好濃性の顆粒物質の進行性の沈着に起因する動脈疾患は、引き続き動脈内腔を閉塞し、脳に虚血性の病巣を確立し、その後梗塞のエピソードが発症する。微小梗塞によるニューロンの生存性の喪失により、脳における主な神経の活動性が悪化し、老衰及び痴呆の状態をもたらす（Ｎａｋａｎａｏ  Ｉ．、「神経血管性の単位の機能及び統合は血管及び炎症細胞系の統合時に休止する（Ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｅｕｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｕｎｉｔ  ｒｅｓｔｓ  ｕｐｏｎ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｅｌｌ  ｓｙｓｔｅｍｓ．）」、Ｃｕｒｒ  Ｎｅｕｒｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ．、２００５年１２月、２巻（５）、４０９〜２３頁；Ｍｏｔｔ  ＲＴ．、Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｕｒｏｉｍａｇｉｎｇ  Ｃｌｉｎ  Ｎ  Ａｍ．、２００５年１１月；１５巻（４）、７５５〜６５頁）。
【００１０】
他の変性プロセス。β−アミロイド沈着。
アルツハイマー病は、最も蔓延している痴呆であり、６５歳を超える高齢者における主な死因の１つである。疾患の起源は知られておらず、アルツハイマー病患者の脳は、ニューロンの内側及び外側にいくつかのタイプのタンパク質の、疾患に関連した沈着を示している。β−アミロイドは、脳及び脳幹における細胞外沈着を形成しているタンパク質の１つである。プラークは、その前駆タンパク質に由来する、β−アミロイドタンパク質の密集したコアからなる。痴呆に罹患する危険性は、アポリポタンパク質Ｅ（Ａｐｏ−Ｅ）における多型に強力に関連している。脳では、Ａｐｏ−Ｅは、β−アミロイドタンパク質と相互作用し、Ａｐｏ−Ｅ４はβ−アミロイド沈着の増大及び神経原線維変化の数の増大に結びついている。
【００１１】
注意、学習、及び記憶のプロセスは、脳の能力の中でもアルツハイマー病において冒され、痴呆疾患の中でモデルとして確立されているこの状態は、β−アミロイド沈着を特徴としている。現在までに、アルツハイマー病の間の認知欠損を処置するためにＦＤＡによって認可されている薬物は１つしかない。β−アミロイドタンパク質は、脳細胞におけるフリーラジカルによって媒介される壊死効果を発症する。脳実質におけるβ−アミロイドの沈着は、アルツハイマー病における特徴的な病原のマーカーであるが、正常の生理学的な老化においては、より率が低い。
【００１２】
β−アミロイドの神経毒性タンパク質の変異体の合成を低減することで、アルツハイマー病におけるニューロンの損傷を支持するプロセスを減弱することができる。同じ様式で、それを脳から除去し、さらに排泄することで、患者における主な神経機能の回復に貢献することができる。アルツハイマー病は、患者における生活の質を著しく損ない、治療は未だ入手不可能である（Ｇｕｒｏｌ  ＭＥ．、「ＡＤ、ＭＣＩ、及び脳のアミロイド血管障害における血漿のβ−アミロイド及び白質領域（Ｐｌａｓｍａ  ｂｅｔａ−ａｍｙｌｏｉｄ  ａｎｄ  ｗｈｉｔｅ  ｍａｔｔｅｒ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ｉｎ  ＡＤ、ＭＣＩ、ａｎｄ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ａｍｙｌｏｉｄ  ａｎｇｉｏｐａｔｈｙ．）」、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．２００６年１月１０日、６６巻（１）、２３〜９頁；Ｈａｎ  ＨＳ．、「神経血管性の単位の機能及び統合は血管及び炎症細胞系の統合時に休止する（Ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｅｕｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｕｎｉｔ  ｒｅｓｔｓ  ｕｐｏｎ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｅｌｌ  ｓｙｓｔｅｍｓ）」．、Ｃｕｒｒ  Ｎｅｕｒｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ．、２００５年１２月、２巻（５）、４０９〜２３頁；Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｅ．、「器質性脳症候群（ＯＢＳ）スケール：系統的レビュー（Ｔｈｅ  Ｏｏｒｇａｎｉｃ  Ｂｒａｉｎ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  （ＯＢＳ）  ｓｃａｌｅ：ａ  ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｒｅｖｉｅｗ．）」、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｇｅｒｉａｔｒ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．、２００６年１月２７日）。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明は、ＧＲＨＰ−６、ＧＲＨＰ−２、ヘキサレリン、及び／又はグレリンを含む薬剤組成物における分泌促進ペプチドの使用に関し、前記薬剤組成物は、前記組成物をレシピエントの生物体に適用する場合に、ヒアリン物質、アミロイド、顆粒形態の好酸性及び好濃性物質の、内部臓器、外部及び血管網臓器；肝臓、肺、食道、小腸、腎臓、血管、関節、及び残りの全身の皮膚などにおける、病理学的な細胞内及び細胞外沈着、あらゆる疾病病因の線維症の変異体を、予防し、コントロールし、根絶する。本発明の薬剤組成物は、液体、半固体、又は固体の組成物であり、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、くも膜下、直腸、及び局所の経路によって、皮膚又は粘膜、上皮又は臓器中への局所浸潤によって、より正確には病巣内、及び／又は病巣周囲に投与することができる。本発明の薬剤組成物は、１投与量あたり５マイクログラム〜１ミリグラムの濃度、より正確には３０〜５００マイクログラムのＧＨＲＰ−６、ＧＨＲＰ−２、ヘキサレリン、及び又はグレリンペプチド、並びに薬学的に許容できるビヒクルを含む。
【実施例】
【００１４】
（実施例１）
ラットにおける肝線維症の復帰。
本実験は、ＧＨＲＰ−６ベースの薬剤組成物の、ラットにおける肝線維症の復帰に対する効果を評価するために行った。外部胆管を結紮することによって、平均体重２５０ｇのウィスター系オスラットに肝線維症を誘発した。この目的のために、ラットをケタミン／キシラジンの併用で麻酔し、開腹して総胆管を露出させた。胆管を、クロム製カットグット４〜０で二重結紮した。手術後、動物を、ラット各２０匹の３つの実験群：（１）生理学的食塩水溶液を投与する、コントロールプラセボ群、（２）１００μｇ／ｋｇ投与量のＧＨＲＰ−６を投与する群、及び（３）４００μｇ／ｋｇ投与量のＧＨＲＰ−６を投与する群に無作為に分配した。肝実質の線維症を誘発した後、処置を３週間の間毎日投与した。処置は全て、線維症が出現した３週間後に開始した。肝損傷の経過観察は、この臓器の突起領域の毎週の超音波検査、ＧＯＴ及びＧＰＴトランスアミナーゼの血清レベル、ガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）レベルの進行、並びに腹水の体積によって行った。ＧＨＲＰ−６又はプラセボでの処置は、１日１回、腹腔内の経路によって適用した。処置が終わったら動物を屠殺し、血清及び肝臓を回収した。肝臓の断片を中性ホルマリンで固定し、ヘマトキシリン／エオシン染色によって、又はマッソントリクローム染色によって処理加工して、全般的な損傷及び線維性の硬化の重症度を評価した。肝臓組織の他の断片を−７０℃で貯蔵し、処理加工して１Ｎ  ＨＣｌにおける酸加水分解によってヒドロキシプロリンの含量を決定し、酸化還元の代謝マーカーの肝臓内レベルも決定した。ブラッドフォード法によって全タンパク質含量を計算することによって、生化学的決定を行った。
【００１５】
表１。プロセスの階級スケール：（０）−＊ゼロ、（１）−中程度、（２）−有限、（３）重症、（４）非常に重症
【表１】
0005426175.tif 000002
【００１６】
表２。処置３週間終了時の肝臓におけるヒドロキシプロリンレベルの評価
【表２】
0005426175.tif 000003
【００１７】
表３。処置３週間終了時の全群におけるＧＯＴ、ＧＰＴ、及びＧＧＴの血清レベル
【表３】
0005426175.tif 000004
【００１８】
表４。処置第３週終了時の肝臓サンプルにおける酸化ストレスマーカーのレベル。
【表４】
0005426175.tif 000005
【００１９】
ＧＨＲＰ−６での処置は、総胆管の結紮によって生成した、肝実質におけるコラーゲン性及び細胞外物質の沈着を根絶し、コントロールするペプチドの能力を、明らかに実証している。処置の関連性は、形態学的及び生化学的データの収束によって実証され、著しく損なわれた管周囲及び門脈周囲の線維性の状態を正したことを支持している。プラセボ群における動物は、自発的寛解を示さなかったことに注目することが重要である。
【００２０】
（実施例２）
ラットにおける肝線維症の復帰
この実験は、ＧＨＲＰ−６を含む薬剤組成物の、ラットにおける肝線維症の復帰に対する効果を評価するために行い、前記肝線維症は、四塩化炭素（ＣＣｌ４）によって誘発した。これは、長期投与後に慢性肝炎及び線維症を引き起こす肝毒性物質である。体重２５０ｇのオスのウィスター系ラットに、４週間の間、１週間に２回、オリーブ油中ＣＣｌ４５０％／５０％（ｖ／ｖ）を腹腔内投与することによって、肝線維症を誘発した。その後、ラットの２５％を屠殺し、血液生化学試験及び病理学的解剖試験を行った。肝線維症のプロセスは、試験した動物全てにおいて実証された。残っている動物を、ラット各１５匹の３つの実験群：（１）生理学的食塩水溶液を投与するコントロールプラセボ群、（２）１００μｇ／ｋｇ投与量のＧＨＲＰ−６を投与する群、及び（３）４００μｇ／ｋｇ投与量のＧＨＲＰ−６を投与する群に無作為に分配した。肝実質における線維症のプロセスを検出した後、処置を４週間の間１日１回適用した。線維症が確立し、ＣＣｌ４懸濁液投与の直後に処置を開始した。処置が終わったら、動物を屠殺し、血清及び肝臓を回収した。肝臓の断片を中性ホルマリンで固定し、ヘマトキシリン／エオシン染色によって、又はマッソントリクローム染色によって処理加工して、全般的な損傷及び線維性の硬化の重症度を評価した。肝臓組織の他の断片を−７０℃で貯蔵し、処理加工して１Ｎ  ＨＣｌにおける酸加水分解によってヒドロキシプロリンの含量を決定し、酸化還元の代謝マーカーの肝臓内レベルも決定した。ブラッドフォード法によって全タンパク質含量を計算することによって、生化学的決定を行った。薬剤組成物での処置に対する反応は、ＧＯＴ及びＧＰＴトランスアミナーゼの血清レベルの決定、定量スケールにおける組織学的判定基準、並びに脂質の過酸化のレベルに特徴であるいくつかのマーカーによって特徴付けられた。
【００２１】
表５。プロセスの階級スケール：（０）−ゼロ、（１）−中程度、スライドの２５％まで、（２）−リミット、スライドの５０％まで、（３）−重症、スライドの７５％まで、（４）−非常に重症スライドの７５％を超える。ゾーンＩＩＩにおける同時発生的な壊死を含む、架橋パターンの線維増殖性反応の組織学的評価。処置終了時の損傷グレードによる１群あたりの動物。
【表５】
0005426175.tif 000006
【００２２】
表６。処置終了時の肝臓におけるヒドロキシプロリンレベルの評価。
【表６】
0005426175.tif 000007
【００２３】
表７。処置終了時の全群におけるＧＯＴ及びＧＰＴの血清レベル。
【表７】
0005426175.tif 000008
【００２４】
表８。処置第３週終了時の肝臓サンプルにおける酸化ストレスマーカーのレベル。
【表８】
0005426175.tif 000009
【００２５】
ＧＨＲＰ−６との処置により、このペプチドが、ＣＣｌ４の繰返し投与の結果としての肝実質において、一般に、コラーゲン性物質及び細胞外マトリックス物質の沈着を根絶及びコントロールする能力が実証されている。この処置は、また、個々の、限局的な、及び周辺小葉中心性の肝細胞の死滅も予防する。処置の関連性は、収束性の形態学的な、酵素的な、及び生化学的なデータによって実証され、集密的な（コンフルエントな）架橋パターンを持つ、確立された、損傷的な重症の拡散した肝線維症が、寛解のない殆ど検出不可能なレベルまで、復帰したことを支持している。再び、プラセボ群の動物は、自発的な寛解を示さなかった。
【００２６】
（実施例３）
ラットにおける腎硬化症の腎線維症の復帰。第３の実験。
この実験は、ラットにおける腎線維症の復帰における、ＧＨＲＰ−６を含む薬剤組成物の効果を評価するために行った。この場合、８週間の間、１週間に２回、２．５ｍｇ／ｋｇの投与量の抗悪性腫瘍薬であるドキソルビシン（ＤＸ）を持続的に投与することによってプロセスを誘発した。門脈周囲における、気管支周囲における、及び腎臓の間質全体にわたる、嚢胞性の結節性のパターンを有する線維性の沈着の発症が、ドキソルビシン中毒のラット集団の２５％におけるこれらの臓器の組織学的試験によって実証された。これより前に、ＤＸ投与を中断し、ＧＨＲＰ−６を含む薬剤組成物での処置を開始した。４週間の間、腹腔内の経路によって、処置を、１日１回、１００及び４００μｇ／ｋｇを体積１ｍｌ適用した。残りの動物を、各ラット２０匹の３つの実験群：（１）生理学的食塩水溶液を投与するコントロールプラセボ群、（２）１００μｇ／ｋｇ投与量のＧＨＲＰ−６を投与する群、及び（３）４００μｇ／ｋｇ投与量のＧＨＲＰ−６を投与する群に無作為に分配した。処置が終わったら、動物を麻酔薬の過剰投与によって屠殺し、肝臓、腎臓、肺、及び血清を回収した。組織の断片を中性ホルマリンで固定し、ヘマトキシリン／エオシン染色によって、又はマッソントリクローム染色によって処理加工して、全般的な損傷及び線維性の硬化の重症度を評価した。他の断片を−７０℃で貯蔵した後、処理加工して、１Ｎ  ＨＣｌにおける酸加水分解によってヒドロキシプロリンの含量を決定し、クレアチニン及び酸化ストレスのマーカーのレベルも決定した。ブラッドフォード法によって全タンパク質含量を計算することによって、生化学的決定を行った。
【００２７】
表９。線維性の損傷の各重症度のレベルにおける１群あたりの動物数。腎臓における線維性のプロセスの階級スケール：グレード（０）−ゼロ、グレード（１）−中程度、尿細管又は糸球体を変形又は封入せずに間質を冒す、グレード（２）−重度、間質全体を冒し、尿細管を変形し、それらの管腔を消失させ、糸球体を外部的に封入する、グレード（３）−非常に重度、尿細管を封入及び崩壊し、糸球体を崩壊する。糸球体間質の沈着も含む。
【表９】
0005426175.tif 000010
【００２８】
表１０。処置終了時の腎臓におけるヒドロキシプロリンレベルの評価。
【表１０】
0005426175.tif 000011
【００２９】
表１１。処置終了時の全群におけるＧＯＴ及びＧＰＴの血清レベル。肝実質の完全性。
【表１１】
0005426175.tif 000012
【００３０】
表１２。第４週の処置終了時の腎組織サンプルにおける酸化ストレスマーカーのレベル。
【表１２】
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【００３１】
（実施例４）
肺線維症のコントロール。
この実験は、ラットにおける腎線維症の復帰における、ＧＨＲＰ−６を含む薬剤組成物の効果を評価するために行った。この場合では、４週間の間、１週間に２回、２．５Ｕ／ｋｇの投与量の、抗悪性腫瘍薬であるブレオマイシン（Ｂｌｅ）を持続的に投与することによって、プロセスを誘発した。線維症は、組織病理学的分析によって、Ｂｌｅ中毒の動物の２５％の肺に実証された。これより前に、Ｂｌｅの投与を中止し、ＧＨＲＰ−６を含む薬剤組成物での処置を開始した。４週間の間、腹腔内の経路によって、１００及び４００μｇ／ｋｇを体積１ｍｌ、１日１回処置を適用した。動物を、各ラット１０匹の３つの実験群：（１）生理学的食塩水溶液を投与するコントロールプラセボ群、（２）１００μｇ／ｋｇ投与量のＧＨＲＰ−６を投与する群、（３）４００μｇ／ｋｇのＧＨＲＰ−６を投与する群に無作為に分配した。処置が終わったら、麻酔薬の過剰投与によって動物を屠殺し、肺及び血清を回収した。組織の断片を中性ホルマリンで固定し、ヘマトキシリン／エオシン染色によって、又はマッソントリクローム染色によって処理加工して、全般的な損傷及び線維性の硬化の重症度を評価した。肺組織の他の断片を−７０℃で貯蔵し、処理加工して１Ｎ  ＨＣｌにおける酸加水分解によってヒドロキシプロリンの含量を決定し、酸化還元の代謝マーカーの肝臓内レベルも決定した。ブラッドフォード法によって全タンパク質含量を計算することによって、生化学的決定を行った。肺における線維−増殖性の反応の組織学的評価には、血管周囲の、気管支周囲の、及び中隔の線維症のプロセスが含まれている。肺線維症の全体的なグレードを、これら３つのセグメントにおけるプロセスの程度及び強度にしたがって確立して、ＧＨＲＰ−６での処置の終了時の罹患又は非罹患の動物のパーセントを決定した。線維症の重症度による、線維性の肺を有する全群における動物数は：
グレード０−線維症の証拠がない、又は薄い、拡散性の線維若しくは輪状の物質の病巣だけが存在し、呼吸の損傷がない。
グレード１−７５％を超える細動脈及び毛細管における主に血管の線維症。
グレード２−７５％を超える細動脈及び毛細管における主に血管の線維症、さらなる気管支周囲の損傷がある。
グレード３−７５％を超える細動脈及び毛細管における主に血管の線維症、さらなる気管支周囲の損傷がある。肺胞中隔に線維性物質がやはり検出される。
【００３２】
表１３。各群において肺線維症の重症度にしたがって分類された動物。
【表１３】
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【００３３】
分かるように、プラセボ群では、グレード０又はグレード１のスケールに含まれる動物はなかった。その大多数は、重症度においてグレード３に分類された。これに反して、投与量ＩＩは、強力な保護効果を示し、５０％を超える動物がグレード０と分類された。
【００３４】
表１４。食塩水又はＧＨＲＰ−６での処置の終了時の、肺におけるヒドロキシプロリンレベルの評価。
【表１４】
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【００３５】
Ｂｌｅによって産生される肺線維症の根絶又は回復に対する効果も、肺組織の乾燥サンプルにおけるヒドロキシプロリン含量によって証明され、上記に記載した組織病理学的結果と一致する。
【００３６】
現在のところ、それぞれ、２つの肝線維症、１つの腎線維症、及び１つの肺線維症の試験を含めた、４つの独立した実験においてＧＨＲＰ−６を含む薬剤組成物の強力な抗線維性の効果を支持する証拠が示されている。これらの結果は繰返し可能及び再現可能であり、その疾病原因に関係なく、１つを超える内部臓器におけるこれらのプロセスをコントロールする上での処置の有効性を示している。
【００３７】
（実施例５）
脳におけるβ−アミロイドタンパク質の沈着をコントロール及び根絶する上でのＧＨＲＰ−６を含む薬剤組成物の効果。
この試験は、β−アミロイド前駆タンパク質を発現するトランスジェニックマウスの脳における、生化学的及び形態学的マーカーに対する、ＧＨＲＰ−６の長期投与（８週間）の影響を評価するために行ったものであり、これらのマーカーは、中枢神経系の損傷の進行も示している。現在の試験用に、β−アミロイド前駆タンパク質を発現する、体重２０〜２５ｇのＡＰＰトランスジェニックオスマウスを得た。動物（Ｎ＝３０）を：
プラセボ群−生理学的食塩水０．９％
投与量Ｉ群−５０μｇ／ｋｇ体重のＧＨＲＰ−６の食塩水溶液
投与量ＩＩ群−１００μｇ／ｋｇ体重のＧＨＲＰ−６の食塩水溶液に無作為に分配した。８週間の間、１週間に５日、１ｍｌにおいて腹腔内の経路によって処置を適用し、動物にＧＨＲＰ−６を４０回投与した。以前の調査的なパイロット試験から、ストレス下の動物における認知及び運動技能を改善するのに、この期間が十分であることが分かっていた。
【００３８】
処置８週間後、マウスを麻酔薬の過剰投与により屠殺し、ｉｎ  ｓｉｔｕで食塩水溶液で潅流した。脳を抽出し、1つの脳をドライアイスで凍結し、その他を４％中性パラホルムアルデヒドで固定した。サンプルを１０μｍの凍結切片にし、切片をヘマトキシリン／エオシン、コンゴーレッドで染色し、又はβ−アミロイドタンパク質に特異的な抗体とともにインキュベートした。形態計測の手順を、顕微鏡に接続したカメラによって、顕微鏡画像キャプチャによって行い、画像をＤＩＧＩＰＡＴソフトウェアで分析した。
【００３９】
試験したマーカー
コンゴーレッド染色に陽性のβ−アミロイドタンパク質の原線維の沈着の数。
β−アミロイドタンパク質を認識する抗体に免疫反応性の病巣の数。
２００Ｘ及び４００Ｘ倍率で認識された、脳におけるβ−アミロイドプラークのサイズ（μｍ２）。
老化及び脳代謝の悪化の指標としてのミオイノシトールの脳濃度（μｍｏｌ／組織ｇ）。
【００４０】
表１５。脳におけるアミロイド沈着除去に対するＧＨＲＰ−６での処置の効果。
【表１５】
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【００４１】
試験したパラメータに対応する結果は全て表１５に示してあり、ＧＨＲＰ−６を含む薬剤組成物の長期間処置の効果を特徴付けている。結果は、１つの脳のデジタル画像の計数を参照していることに注目されたい。この限界を克服するために、計数を、３つの独立した個体によって無分別に行い、結果を５個のスライド観察に対応して示した。表１５は、ＧＨＲＰ−６を含む薬剤組成物の、β−アミロイドの蓄積をコントロールすることにおける及び脳の生化学における効果を示している。分かるように、ＧＨＲＰ−６を含む薬剤組成物で８週間処置後、その様々な形態におけるβ−アミロイドの蓄積をコントロールする上で、及びこの臓器の代謝を正す上でも、ポジティブな影響があった可能性が高い。ミオイノシトールの蓄積の低減を特徴とする著しい効果によって、ニューロンのより高いエネルギーの同化作用と栄養との生化学的経路が正常化されることが証明される。これらは、脳の老化プロセスのコントロールに、好ましい臨床上の影響を有し得る。
【００４２】
以下の表１６では、アルツハイマー病のトランスジェニックマウスの脳における脂質過酸化のコントロールに及ぼす、ＧＨＲＰ−６を含む薬剤組成物の好ましい効果が実証されている。再び、これらの証拠は、この薬剤組成物の好ましい効果が、疾患及び老化における神経組織の悪化を担うプロセスの１つをコントロールすることを示唆している。
【００４３】
表１６。脳組織における酸化ストレスマーカー。
【表１６】
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【００４４】
（実施例６）
血管起源の痴呆のコントロールに及ぼす、ＧＨＲＰ−６及び他のペプチドをベースとする薬剤組成物の効果。脳皮質における好濃性物質の根絶。脳の老化プロセスの予防及びコントロール。
この実験は、血管平滑筋細胞においてＮＯＴＣＨ３遺伝子の突然変異型の１つを過剰発現するトランスジェニックマウスにおける中枢神経機能の萎縮に対する、ＧＨＲＰ−６、ＧＨＲＰ−２、ヘキサレリン、又はグレリンペプチドの１つを不明瞭に含む薬剤組成物の有効性を評価するために行った。これらの動物は、数ヶ月の期間において、記述的な記憶に関連し、血管の痴呆症の主な原因の１つとして起こる、ＣＡＳＡＤＩＬ病の動脈症に類似した動脈症を発症する。これらの動物では、血管の病変には、網膜−大脳の、大脳の、及び蝸牛の脈管障害も含まれる。脳及び血管に存在するβ−アミロイド物質、脳及び髄膜の動脈壁における好濃性の顆粒物質の沈着、並びにその管腔の低減は、組織病理学的に関連がある。蒼白色ゾーン、微小梗塞、及び出血性の病巣のゾーンが、脳及びその主な神経の幹に出現する。
【００４５】
疾患の症状が証明された場合、１８から２０月齢のオスマウスを使用した。動物を以下の実験的処置群：
Ａ−生理学的食塩水溶液を投与するプラセボ群
Ｂ−１００μｇ／ｋｇ投与量のＧＨＲＰ−６を投与する群
Ｃ−１００μｇ／ｋｇ投与量のＧＨＲＰ−２を投与する群
Ｄ−１００μｇ／ｋｇ投与量のグレリンを投与する群
Ｅ−１００μｇ／ｋｇ投与量のヘキサレリンを投与する群
に無作為に割り当てた。
【００４６】
１６週間の間、週２回、腹腔内の経路によって処置を適用した。処置が終了したとき、処置した大多数の動物に証明された臨床的な改善に関係なく、剖検試験を行った。髄膜組織を含む脳組織サンプルを、生化学的及び組織病理学的判定用に回収した。動物に、麻酔を過剰投与し、冷生理学的食塩水溶液での心臓内潅流を受けさせて、脳に存在する血液を洗い流した。脳を抽出し、１つの脳をドライアイスで凍結し、その他を４％中性パラホルムアルデヒドで固定した。サンプルを１０μｍの凍結切片にし、切片をヘマトキシリン／エオシン、コンゴーレッドで染色し、又はβ−アミロイドタンパク質に特異的な抗体とともにインキュベートした。形態計測の手順を、顕微鏡に接続したカメラによって、顕微鏡画像キャプチャによって行い、画像をＤＩＧＩＰＡＴソフトウェアで分析した。
【００４７】
試験したマーカー
血管におけるβ−アミロイドの原線維の沈着の数。
皮質下の梗塞の数。
皮質下の出血の数。
老化及び脳代謝の悪化の指標としてのミオイノシトールの脳濃度（μｍｏｌ／組織ｇ）。
脳の酸化的ストレスマーカー。
【００４８】
表１７。大脳組織における形態学的判定の結果。
【表１７】
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【００４９】
分かるように、各分泌促進ペプチドでの処置により、原線維のアミロイド（コンゴーレッド）に陽性の動脈、細動脈、及び毛細管の数、並びに好濃性物質の顆粒の沈着（ニッスル染色）が有意に低減した。したがって、白質脳症に関連する皮質下の梗塞及び出血性の病巣の存在は、薬剤組成物で処置した各群で、やはり有意に低減した。
【００５０】
表１８。脳における酸化ストレスマーカー。
【表１８】
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【００５１】
ペプチドの効果は、ヒトＣＡＤＳＩＬ病のモデルとしてのトランスジェニックマウスの脳における脂質過酸化のプロセスを試験した場合にも、明らかに証明された。血管の損傷及び梗塞の低減において実証されているように、ここで試験した分泌促進ペプチドは、ヒトの疾患における活性酸素種の生成の増大に関連した神経毒性を低減又は減弱する能力を示し、この生成の増大は、食塩水溶液を投与した動物でも実証されている。この効果は、脳の老化が血管の損傷及び過剰な脂質の過酸化によって媒介される状況にこれらの物質を用いることによって神経保護するという、全般的な神経保護の概念を拡大する。
【００５２】
（実施例７）
ＧＨＲＰ−６、ＧＨＲＰ−２、ヘキサレリン、及び／又はグレリンペプチドの、皮膚における生理学的物質の病理学的沈着を根絶する上での効果。
ＧＨＲＰ−６、ＧＨＲＰ−２、ヘキサレリン、及び／又はグレリンペプチドの、皮膚における生理学的物質の病理学的沈着を根絶する上での効果を試験するために、ヒトのケロイドフラグメントを、胸腺欠損マウスの背部領域中に異種移植した。発展７２時間後、移植及び異種移植の生存性を確証するために、動物（Ｎ＝６）を以下の実験群：
Ａ−食塩水コントロール群（有効成分のビヒクル）
Ｂ−ＧＨＲＰ−６を投与する群
Ｃ−ＧＨＲＰ−２を投与する群
Ｄ−グレリンを投与する群
Ｅ−ヘキサレリンを投与する群
に無作為に分配した。
【００５３】
７日間、２４時間毎に、処置を１回適用した。物質を、５マイクログラムから１ミリグラムの投与量で、有効成分の局所的バイオアベイラビリティー用に、埋め込み（インプラント）における縁に浸潤した。処置期間後、動物を屠殺し、埋め込みを抽出して、全物質に対する薬理学的反応を評価した。サンプルの重量を測定し、組織学的試験、及びコラーゲンの生化学的判定用に断片化した。組織学的試験用の断片を、１０％中性ホルマリンで固定し、生化学的分析用にこれらのフラグメントを−７０℃で貯蔵した。
【００５４】
試験したパラメータは：
ａ−回収した移植片の湿潤重量。
ｂ−組織におけるヒドロキシプロリン含量。
ｃ−ピクロシリウス（ｐｉｃｒｏｓｉｒｉｕｓ）赤染色及びマッソントリクローム染色に陽性の組織での顕微鏡の視野数。画像は、４Ｘ及び１０Ｘ倍率で撮影し、各倍率に対してデータを平均した。
ｄ−２０Ｘ倍率で、アニリンブルー染色に陽性の顕微鏡の視野による肥満細胞の数。
【００５５】
表１９に示すように、試験下のペプチドは全て、コントロールとしてビヒクルを投与した動物に比べた場合、著しい抗線維性の効果を発揮した。
【００５６】
表１９。皮膚における処置の抗線維性効果。
【表１９】
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【００５７】
証明されたように、確立された実験系において、全てのペプチドはアッセイを行った投与量で、過剰なコラーゲン物質及び細胞外マトリックスの急性で、速やかな低減、インデューサ細胞（肥満細胞）並びにエフェクター細胞（線維芽細胞及び筋線維芽細胞）の低減を特徴とする、強力な抗線維性の効果を発揮した。第３の浸潤以降、いずれのペプチドを投与した全ての埋め込みがサイズにおいて顕著な低減を示し、蒼白となり、失活したことは、注目すべきである。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】ＧＨＲＰ−６での処置の終わりに、１群あたりの腎線維症の損傷を有する動物のパーセントを示す図である。食塩水を投与したプラセボ群と、ＧＨＲＰ−６を投与した群との間に存在する差に注目されたい。プラセボ群を、４００μｇ／ｋｇの投与量を投与した群と比べた場合に最も大きな差が観察され、投与量依存性の効果が示唆される。腎間質における線維増殖性反応の組織学的評価には、線維性の尿細管の封入、及び線維性の糸球体も含まれる。このやり方で、処置の終わりに、罹患又は非罹患の動物のパーセント値を決定するのに用いられた腎線維症全体のグレードが確立される。（ａ）−ＧＨＲＰ−６の４００μｇ／ｋｇ投与量を投与した群とプラセボ群との間の、ｐ＜０．００１の統計上の差。
【図１】
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