(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体をインビトロで試験する方法であって、
該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の試料を提供することと、
該試料を指定された分子量カットオフでろ過し、残留部分およびろ液部分を得ることと、
該残留部分を第１のアッセイに加えることと、
該ろ液部分を第２のアッセイに加えることと、
該第１のアッセイおよび該第２のアッセイの各々に、炎症誘発性応答を引き起こす試薬を加えることと、
該第１のアッセイおよび該第２のアッセイの各々の炎症誘発性応答を測定することと、
該第１のアッセイの炎症誘発性応答を該第２のアッセイの炎症誘発性応答と比較することと、
該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体が使用に適するかどうかを判定するために、ｐｇ／ｍＬで表した、該第２のアッセイの炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、該第１のアッセイの炎症誘発性応答の５０％より大きいか、５０％未満であるか、または５０％であるかどうかを決定することと、
を含み、そして、
ｐｇ／ｍＬで表した、該第２のアッセイの炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、該第１のアッセイの炎症誘発性応答の５０％より大きいか、または５０％である場合、該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の使用を許容するステップをさらに含み、そして、
ｐｇ／ｍＬで表した、該第２のアッセイの炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、該第１のアッセイの炎症誘発性応答の５０％未満である場合、該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の使用を拒絶するステップをさらに含み、
該試薬が末梢血単核細胞または単核球細胞系細胞を含む、
方法。
【請求項２】
前記炎症誘発性応答が、インターロイキン−１ａ、インターロイキン−１ｂ、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、腫瘍壊死因子−α、マクロファージ炎症タンパク質１ａ、マクロファージ炎症タンパク質１ｂ、顆粒球コロニー刺激因子および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される応答である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記炎症誘発性応答がインターロイキン−６応答である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記指定された分子量カットオフが約３０ｋＤａを超えるか、または約３０ｋＤａであり、かつ約１００ｋＤａ未満か、または約１００ｋＤａである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記指定された分子量カットオフが約５０ｋＤａを超えるか、または約５０ｋＤａであり、かつ約１００ｋＤａ未満か、または約１００ｋＤａである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体がイコデキストリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体をインビトロで試験する方法であって、
該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の第１の試料を提供することと、
インターロイキン−６応答を引き起こす試薬を該第１の試料に加えることと、
該第１の試料によって誘導されるインターロイキン−６応答を測定することと、
該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の第２の試料を提供することと、
該第２の試料を約３０ｋＤａを超えるか、または約３０ｋＤａ、かつ約１００ｋＤａ未満か、または約１００ｋＤａの分子量カットオフでろ過し、残留部分およびろ液部分を得ることと、
該残留部分および該ろ液部分の各々に該試薬を加えることと、
該残留部分および該ろ液部分の各々によって誘導されるインターロイキン−６応答を測定することと、
該残留部分によって誘導されるインターロイキン−６応答を、該ろ液部分によって誘導されるインターロイキン−６応答と比較することと、
該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体が使用に適するかどうかを判定するために、ｐｇ／ｍＬで表した、該第２のアッセイの炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、該第１のアッセイの炎症誘発性応答の５０％より大きいか、５０％未満であるか、または５０％であるかどうかを決定することと、
を含み、そして、
ｐｇ／ｍＬで表した、該ろ液部分の炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、該残留部分の炎症誘発性応答の５０％より大きいか、または５０％である場合、該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の使用を許容するステップをさらに含み、そして、
ｐｇ／ｍＬで表した、該ろ液部分の炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、該残留部分の炎症誘発性応答の５０％未満である場合、該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の使用を拒絶するステップをさらに含み、
該試薬が末梢血単核細胞または単核球細胞系細胞を含む、
方法。
【請求項８】
前記指定された分子量カットオフが約５０ｋＤａを超えるか、または約５０ｋＤａであり、かつ約１００ｋＤａ未満か、または約１００ｋＤａである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
腹膜透析溶液をインビトロで試験する方法であって、
グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体を含む該腹膜透析溶液の試料を提供することと、
該試料を指定された分子量カットオフでろ過し、残留部分およびろ液部分を得ることと、
該残留部分を第１のアッセイに加えることと、
該ろ液部分を第２のアッセイに加えることと、
該第１のアッセイおよび該第２のアッセイの各々に、炎症誘発性応答を引き起こす試薬を加えることと、
該第１のアッセイおよび該第２のアッセイの各々の炎症誘発性応答を測定することと、
該第１のアッセイの炎症誘発性応答を該記第２のアッセイの炎症誘発性応答と比較することと、
該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体が使用に適するかどうかを判定するために、ｐｇ／ｍＬで表した、該第２のアッセイの炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、該第１のアッセイの炎症誘発性応答の５０％より大きいか、５０％未満であるか、または５０％であるかどうかを決定することと、
を含み、そして、
ｐｇ／ｍＬで表した、該第２のアッセイの炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、該第１のアッセイの炎症誘発性応答の５０％より大きいか、または５０％である場合、該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の使用を許容するステップをさらに含み、そして、
ｐｇ／ｍＬで表した、該第２のアッセイの炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、該第１のアッセイの炎症誘発性応答の５０％未満である場合、該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の使用を拒絶するステップをさらに含み、
該試薬が末梢血単核細胞または単核球細胞系細胞を含む、方法。
【請求項１０】
前記炎症誘発性応答が、インターロイキン−１ａ、インターロイキン−１ｂ、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、腫瘍壊死因子−α、マクロファージ炎症タンパク質１ａ、マクロファージ炎症タンパク質１ｂ、顆粒球コロニー刺激因子および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される応答である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記指定された分子量カットオフが約３０ｋＤａを超えるか、または約３０ｋＤａであり、かつ約１００ｋＤａ未満か、または約１００ｋＤａである、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記指定された分子量カットオフが約５０ｋＤａを超えるか、または約５０ｋＤａであり、かつ約１００ｋＤａ未満か、または約１００ｋＤａである、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体がイコデキストリンである、請求項９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、一般に透析溶液の試験法に関する。より詳細には、本開示は、腹膜透析溶液およびその成分を試験する方法、ならびにそれを用いる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
非経口医薬品は、汚染性の物質、例えば腹膜炎を引き起こす可能性があり得る物質を含まないことが要求される。腹膜炎、すなわち腹膜の炎症は、腹膜透析の主な合併症である。腹膜炎は、腹腔内細菌感染によって起こり得る。あるいは、化学的刺激物または異物刺激物に起因する腹膜炎が、無菌性の腹膜炎（ａｓｅｐｔｉｃ  ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ）または無菌性腹膜炎（ｓｔｅｒｉｌｅ  ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ）として公知である。無菌性腹膜炎には、濁った透析物の発生が付随する。腹膜透析溶液の既存の検査にもかかわらず、無菌性の腹膜炎の発生がまだ出現する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本開示は、腹膜透析溶液成分を試験する方法、およびそれを用いる方法に関する。一実施形態では、本方法は、ろ過工程と組み合わせたサイトカイン検出試験などの炎症誘発性応答を用いて、透析溶液成分中の汚染物の存在について試験する。
【０００４】
一実施形態では、グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体を試験する方法は、グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の試料を提供することを含む。試料を指定された分子量カットオフでろ過し、残留部分およびろ液部分を得る。残留部分を第１のアッセイに加える。ろ液部分を第２のアッセイに加える。第１のアッセイおよび第２のアッセイの各々に試薬を加える。試薬は、炎症誘発性応答を起こさせる。第１のアッセイおよび第２のアッセイの各々の炎症誘発性応答を測定する。第１のアッセイの炎症誘発性応答を第２のアッセイの炎症誘発性応答と比較して、グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体が使用に適するかどうか判定する。
【０００５】
一実施形態では、炎症誘発剤は、インターロイキン−１ａ、インターロイキン−１ｂ、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、腫瘍壊死因子−α、マクロファージ炎症タンパク質１ａ、マクロファージ炎症タンパク質１ｂ、顆粒球コロニー刺激因子および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される。サイトカインは、インターロイキン−６であってよい。
【０００６】
一実施形態では、上記試料は第１の試料であり、上記方法は、グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の第２の試料を提供すること、第１の試料を第３のアッセイに加えること、試薬を第３のアッセイに加えること、および第３のアッセイの炎症誘発性応答を測定することをさらに含む。
【０００７】
一実施形態では、試薬は、末梢血単核細胞または単核球細胞系細胞を含む。
【０００８】
一実施形態では、指定された分子量カットオフは、約３０ｋＤａを超えるか、または約３０ｋＤａであり、かつ約１００ｋＤａ未満か、または約１００ｋＤａである。指定された分子量カットオフは、約５０ｋＤａを超えるか、または約５０ｋＤａでよく、かつ約１００ｋＤａ未満か、または約１００ｋＤａでよい。
【０００９】
一実施形態では、ｐｇ／ｍＬで表した、第２のアッセイの炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、第１のアッセイの炎症誘発性応答の５０％より大きいか、または５０％である場合、グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体は使用が許容される。ｐｇ／ｍＬで表した、第２のアッセイの炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、第１のアッセイの炎症誘発性応答の５０％未満である場合、グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体は使用が拒絶される。
【００１０】
一実施形態では、グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体は、イコデキストリンである。
【００１１】
別の実施形態では、グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体を試験する方法は、グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の第１の試料を提供することを含む。残留部分およびろ液部分の各々に試薬を加える。試薬は、インターロイキン−６応答を起こさせる。第１の試料によって誘導されるインターロイキン−６応答を測定する。グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の第２の試料を提供する。第２の試料を約３０ｋＤａを超えるか、または約３０ｋＤａ、かつ約１００ｋＤａ未満か、または約１００ｋＤａの分子量カットオフでろ過し、残留部分およびろ液部分を得る。残留部分およびろ液部分の各々に試薬を加える。残留部分およびろ液部分の各々によって誘導されるインターロイキン−６応答を測定する。残留部分によって誘導されるインターロイキン−６応答を、ろ液部分によって誘導されるインターロイキン−６応答と比較して、グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体が使用に適するかどうかを判定する。
【００１２】
一実施形態では、ｐｇ／ｍＬで表した、ろ液部分によって誘導される炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、残留部分によって誘導される炎症誘発性応答の５０％より大きいか、または５０％である場合、グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体は使用が許容される。ｐｇ／ｍＬで表した、ろ液部分によって誘導される炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、残留部分によって誘導される炎症誘発性応答の５０％未満である場合、グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体は使用が拒絶される。
【００１３】
一実施形態では、腹膜透析溶液を患者に提供する方法は、グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体が使用に適する場合、そのグルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体を用いて腹膜透析溶液を作製すること、および患者でその腹膜透析溶液を用いることを含む。あるいは、グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体は、それが使用に適していない場合破棄してもよく、グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の第２の試料で試験工程を繰り返すことができる。
【発明の効果】
【００１４】
本開示の利点は、改善された腹膜透析溶液を提供することである。
【００１５】
本開示の別の利点は、腹膜透析溶液中の汚染物の存在を判定するための検出プロトコルを使用する、腹膜透析溶液の改善された製造および使用方法を提供することである。
【００１６】
本開示のさらに別の利点は、腹膜透析療法を受ける患者で腹膜炎を予防するために使用することができる、改善された検査手順を提供することである。
【００１７】
本開示のさらに別の利点は、ペプチドグリカンの存在を判定するための検出手順をその製造で利用する、改善されたイコデキストリン組成物を提供することである。
【００１８】
本開示の追加の特徴および利点は、以下の詳細な説明および図面に記載され、またそれらから明らかとなる。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体を試験する方法であって、
該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の試料を提供することと、
該試料を指定された分子量カットオフでろ過し、残留部分およびろ液部分を得ることと、
該残留部分を第１のアッセイに加えることと、
該ろ液部分を第２のアッセイに加えることと、
該第１のアッセイおよび該第２のアッセイの各々に、炎症誘発性応答を引き起こす試薬を加えることと、
該第１のアッセイおよび該第２のアッセイの各々の炎症誘発性応答を測定して、該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体が使用に適するかどうか判定することと、
該第１のアッセイの炎症誘発性応答を該第２のアッセイの炎症誘発性応答と比較することと
を含む方法。
（項目２）
前記炎症誘発性応答が、インターロイキン−１ａ、インターロイキン−１ｂ、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、腫瘍壊死因子−α、マクロファージ炎症タンパク質１ａ、マクロファージ炎症タンパク質１ｂ、顆粒球コロニー刺激因子および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される応答である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記炎症誘発性応答がインターロイキン−６応答である、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記試料が第１の試料を含み、前記方法が、
前記グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の第２の試料を提供することと、
該第２の試料を第３のアッセイに加えることと、
試薬を該第３のアッセイに加えることと、
該第３のアッセイの炎症誘発性応答を測定することと
をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記試薬が末梢血単核細胞または単核球細胞系細胞を含む、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記指定された分子量カットオフが約３０ｋＤａを超えるか、または約３０ｋＤであり、かつ約１００ｋＤａ未満か、または約１００ｋＤａである、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記指定された分子量カットオフが約５０ｋＤａを超えるか、または約５０ｋＤａであり、かつ約１００ｋＤａ未満か、または約１００ｋＤａである、項目１に記載の方法。
（項目８）
ｐｇ／ｍＬで表した、前記第２のアッセイの炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、前記第１のアッセイの炎症誘発性応答の５０％より大きいか、または５０％である場合、前記グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の使用を許容するステップをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目９）
ｐｇ／ｍＬで表した、前記第２のアッセイの炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、前記第１のアッセイの炎症誘発性応答の５０％未満である場合、前記グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の使用を拒絶するステップをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体がイコデキストリンである、項目１に記載の方法。
（項目１１）
グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体を試験する方法であって、
該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の第１の試料を提供することと、
インターロイキン−６応答を引き起こす試薬を該第１の試料に加えることと、
該第１の試料によって誘導されるインターロイキン−６応答を測定することと、
該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の第２の試料を提供することと、
該第２の試料を約３０ｋＤａを超えるか、または約３０ｋＤａ、かつ約１００ｋＤａ未満か、または約１００ｋＤａの分子量カットオフでろ過し、残留部分およびろ液部分を得ることと、
該残留部分および該ろ液部分の各々に該試薬を加えることと、
該残留部分および該ろ液部分の各々によって誘導されるインターロイキン−６応答を測定することと、
該残留部分によって誘導されるインターロイキン−６応答を、該ろ液部分によって誘導されるインターロイキン−６応答と比較して、該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体が使用に適するかどうかを判定することと
を含む方法。
（項目１２）
前記試薬が末梢血単核細胞または単核球細胞系細胞を含む、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記指定された分子量カットオフが約５０ｋＤａを超えるか、または約５０ｋＤａ、かつ約１００ｋＤａ未満か、または約１００ｋＤａである、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
ｐｇ／ｍＬで表した、前記ろ液部分によって誘導される炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、前記残留部分によって誘導される炎症誘発性応答の５０％より大きいか、または５０％である場合、前記グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の使用を許容するステップをさらに含む、項目１１に記載の方法。
（項目１５）
ｐｇ／ｍＬで表した、前記ろ液部分によって誘導される炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、前記残留部分によって誘導される炎症誘発性応答の５０％未満である場合、前記グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の使用を拒絶するステップをさらに含む、項目１１に記載の方法。
（項目１６）
腹膜透析溶液を試験する方法であって、
グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体を含む該腹膜透析溶液の試料を提供することと、
該試料を指定された分子量カットオフでろ過し、残留部分およびろ液部分を得ることと、
該残留部分を第１のアッセイに加えることと、
該ろ液部分を第２のアッセイに加えることと、
該第１のアッセイおよび該第２のアッセイの各々に、炎症誘発性応答を引き起こす試薬を加えることと、
該第１のアッセイおよび該第２のアッセイの各々の炎症誘発性応答を測定して、該腹膜透析溶液が使用に適するかどうか判定することと、
該第１のアッセイの炎症誘発性応答を該記第２のアッセイの炎症誘発性応答と比較することと
を含む方法。
（項目１７）
前記炎症誘発性応答が、インターロイキン−１ａ、インターロイキン−１ｂ、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、腫瘍壊死因子−α、マクロファージ炎症タンパク質１ａ、マクロファージ炎症タンパク質１ｂ、顆粒球コロニー刺激因子および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子からなる群から選択される応答である、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記指定された分子量カットオフが約３０ｋＤａを超えるか、または約３０ｋＤａであり、かつ約１００ｋＤａ未満か、または約１００ｋＤａである、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記指定された分子量カットオフが約５０ｋＤａを超えるか、または約３０ｋＤａであり、かつ約１００ｋＤａ未満か、または約１００ｋＤａである、項目１６に記載の方法。
（項目２０）
ｐｇ／ｍＬで表した、前記第２のアッセイの炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、前記第１のアッセイの炎症誘発性応答の５０％より大きいか、または５０％である場合、前記腹膜透析溶液の使用を許容するステップをさらに含む、項目１６に記載の方法。
（項目２１）
ｐｇ／ｍＬで表した、前記第２のアッセイの炎症誘発性応答が、ｐｇ／ｍＬで表した、前記第１のアッセイの炎症誘発性応答の５０％未満である場合、前記腹膜透析溶液の使用を拒絶するステップをさらに含む、項目１６に記載の方法。
（項目２２）
前記グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体がイコデキストリンである、項目１６に記載の方法。
（項目２３）
腹膜透析を患者に提供する方法であって、
グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体の試料を提供することと、
該試料を指定された分子量カットオフでろ過し、残留部分およびろ液部分を得ることと、
該残留部分を第１のアッセイに加えることと、
該ろ液部分を第２のアッセイに加えることと、
該第１のアッセイおよび該第２のアッセイの各々に、炎症誘発性応答を引き起こす試薬を加えることと、
該第１のアッセイおよび該第２のアッセイの各々の炎症誘発性応答を測定することと、
該第１のアッセイの炎症誘発性応答を該第２のアッセイの炎症誘発性応答と比較して、該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体が使用に適するかどうか判定することと、
該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体が使用に適する場合、該グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体を用いて腹膜透析溶液を作製することと、
患者の治療で該腹膜透析溶液を用いることと
を含む方法。
（項目２４）
腹膜透析を患者に提供する方法であって、
ａ）グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体を含む第１の腹膜透析溶液成分の試料を提供することと、
ｂ）該試料を指定された分子量カットオフでろ過し、残留部分およびろ液部分を得ることと、
ｃ）該残留部分を第１のアッセイに加えることと、
ｄ）該ろ液部分を第２のアッセイに加えることと、
ｅ）該第１のアッセイおよび該第２のアッセイの各々に、炎症誘発性応答を引き起こす試薬を加えることと、
ｆ）該第１のアッセイおよび該第２のアッセイの各々の炎症誘発性応答を測定することと、
ｇ）該第１のアッセイの炎症誘発性応答を該第２のアッセイの炎症誘発性応答と比較して、該腹膜透析溶液成分が使用に適するかどうか判定することと、
ｈ）使用に適さない場合、該腹膜透析溶液成分を破棄することと、
ｉ）グルコースポリマーまたはグルコースポリマー誘導体を含む第２の腹膜透析溶液成分の試料でステップａ）〜ｇ）を繰り返し、使用に適する場合、該第２の腹膜透析溶液成分を患者に投与することと
を含む方法。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１は、実施例１および２のインターロイキン−６応答を例示するチャートである。
【図２】図２は、実施例３、４および５のインターロイキン−６応答を例示するチャートである。
【図３】図３は、実施例３、４および５のインターロイキン−１ａ応答を例示するチャートである。
【図４】図４は、実施例３、４および５のインターロイキン−１ｂ応答を例示するチャートである。
【図５】図５は、実施例３、４および５の腫瘍壊死因子−α応答を例示するチャートである。
【図６】図６は、実施例３、４および５のインターロイキン−１０応答を例示するチャートである。
【図７】図７は、実施例３、４および５のマクロファージ炎症タンパク質１ａ応答を例示するチャートである。
【図８】図８は、実施例３、４および５のマクロファージ炎症タンパク質１ｂ応答を例示するチャートである。
【図９】図９は、実施例３、４および５の顆粒球コロニー刺激因子応答を例示するチャートである。
【図１０】図１０は、実施例３、４および５の顆粒球マクロファージコロニー刺激因子応答を例示するチャートである。
【図１１】図１１は、実施例６および７のインターロイキン−６応答を例示するチャートである。
【図１２】図１２は、実施例８および９のインターロイキン−６応答を例示するチャートである。
【図１３】図１３は、実施例１０および１１のインターロイキン−６応答を例示するチャートである。
【図１４】図１４は、実施例１２および１３のインターロイキン−６応答を例示するチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本開示は、ろ過工程と組み合わせた炎症誘発性応答試験を用いて、透析溶液成分中の汚染物の存在について試験する方法に関する。試験は、任意の所望の物質で実施することができるが、一般的に透析液またはその成分で実施される。透析溶液は、患者から老廃物を除去するための様々な形態の透析で用いられる。透析溶液は、腹膜透析、血液透析または他の任意の透析療法用に特別に処方されて、それに適したものであり得る。透析溶液は、浸透圧剤、緩衝剤、電解質またはそれらの組合せなどの、１つまたは１つより多くの適する透析成分（例えば透析溶液の成分または構成要素）を含むことができる。本明細書で開示される方法は、任意の種類の透析溶液と用いることができ、特に、イコデキストリンなどのグルコースポリマー、グルコースポリマー誘導体などを含む腹膜透析溶液のために有用である。
【００２１】
細菌細胞壁の主要成分である様々な化合物は、透析溶液製品を汚染し得、従来の方法で検出されない。この点に関しては、腹膜透析溶液を用いる患者で無菌性腹膜炎を予防するために、細菌成分についての試験を用いることができる。炎症誘発性応答は、サイトカインなどのマーカーを用いて測定することができる。サイトカインの分泌は、細菌性および非細菌性の物質を含む多くの物質に対する一般的な細胞応答である。リポポリサッカライド（ＬＰＳ）およびペプチドグリカン（ＰＧ）などの多くの公知の細菌性成分が、ヒト細胞でサイトカインの生成を刺激する。細菌成分への応答に通常関連するサイトカインには、インターロイキン−１ａ（ＩＬ−１ａ）、インターロイキン−１ｂ（ＩＬ−１ｂ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦα）、マクロファージ炎症タンパク質１ａおよびマクロファージ炎症タンパク質１ｂ（ＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ−１ｂ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）が含まれる。サイトカインマーカーおよびその適切な選択は、当分野の技術者に公知である。
【００２２】
細菌成分の存在を検出するために、物質のサイトカイン応答を測定する試験がすでに開発されている。先ず物質をろ過し、それを分子量に基づいて成分に分離し、次に、それらの成分によって誘導される炎症誘発性応答を測定することによって、より精確な結果を得ることができることが見い出されている。特に、患者で無菌性の腹膜炎を引き起こす可能性が高い汚染物を物質が含むかどうかに関して、試験はより良好な指標を提供する。
【００２３】
一般に、試験は、透析溶液成分の試料、例えばグルコースポリマーもしくはグルコースポリマー誘導体、またはその溶液で実施される。試料は、それが炎症誘発性応答を開始するかどうかを判定するために先ず分析することができる。炎症誘発性応答があまり示されない場合、透析溶液成分は患者で使用することが安全であるとみなすことができる。かなりの炎症誘発性応答が示される場合、透析溶液成分が無菌性腹膜炎を誘発する可能性が高いかどうか判定するために、さらなる試験を行うことができる。透析溶液成分の第２の試料を指定された分子量カットオフでろ過し、残留部分およびろ液部分を得る。残留部分およびろ液部分の各々の炎症誘発性応答を測定して、各部分の炎症誘発性試験結果を得る。次に、残留部分の炎症誘発性応答をろ液部分の炎症誘発性応答と比較して、透析溶液が使用に適するかどうかを判定する。
【００２４】
炎症誘発性応答は、任意の適する試験を用いて測定することができる。物質によって誘導される炎症誘発性応答は、アッセイ系を用いて測定することができる。１つのタイプの試験では、サイトカイン応答を引き起こす試薬を、アッセイにおいて透析溶液試料に加える。試薬は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）または単核球細胞系細胞を含むことができる。特定の１つのタイプの適する試験は、アッセイに試験キットを含む。試験物質およびＰＢＭＣを、アッセイに加える。ＰＢＭＣは、健康なドナーの新鮮なヒト血液から好ましくは単離される。次に、アッセイを細胞と一晩インキュベートする。培地を収集し、所望の種類の分泌されたサイトカインを、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）技術を用いて定量化する。そのような試験の使用は、当技術分野で周知である。
【００２５】
一実施形態では、インターロイキン−６応答を測定する試験を試料で実施することができる。試験キットは、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ（ＵＳＡ）などの多数のベンダーから市販品を入手可能である。
【００２６】
ろ過工程を実施するために、任意の適するろ過方法を用いることができる。ろ過を実施するために適する装置は、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−４遠心ろ過器ユニット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（商標）から入手可能）である。ろ過器ユニットは、名目分子量限界（ＮＭＷＬ）と命名される分子量カットオフを含むことができる。分子量カットオフは、指定された分子量を超える分子を保持する装置の能力を示す。例えば、分子量カットオフが５ＫＤａのろ過器は、５ＫＤａより小さな分子種が、装置の遠心分離の後に膜を通過し、ろ液に存在することを可能にする。溶液が分子量カットオフに近い分子を含む場合、これらの分子は部分的にろ過器を通過することができる。試験試料をろ過器ユニットに加えて遠心分離し、ろ液および残留試料を得る。残留物はろ過器媒体に保持され、ろ液は遠心管に収集される。
【００２７】
溶液は、約１０ｋＤａ、１５ｋＤａ、２０ｋＤａ、２５ｋＤａ、３０ｋＤａ、４０ｋＤａ、５０ｋＤａ、６０ｋＤａ、７０ｋＤａ、８０ｋＤａ、９０ｋＤａ、１００ｋＤａの分子量カットオフおよび他の適切な分子量カットオフで、上記のろ過工程にかけることができる。ろ過器の分子量カットオフは、可能な汚染物の大きさに基づいて、または他の要素に基づいて選択することができる。ろ液および残留物は、各レベルで炎症誘発性応答について試験する。透析溶液成分が使用に適するかどうか判定するために、試験結果を比較する。判定をするために、様々な標準を用いることができる。特定の分子量カットオフの試験結果が、ろ液および残留物で同じである（汚染物がろ過器によって優先的に保持されないことを示す）場合、透析溶液成分は患者で無菌性の腹膜炎を引き起こさないことがわかっている。特定の分子量カットオフでの残留物の炎症誘発性応答が、ろ液の炎症誘発性応答より十分に大きい（汚染物の大きさが分子量カットオフより大きいことを示す）場合、透析溶液成分は患者で無菌性の腹膜炎を引き起こすことがあり、したがって拒絶されなければならない。あるいは、大きな分子量を有する種類が残留物に存在するかどうかを判定するために、分子量カットオフろ過器による複数の洗浄またはリンス工程を用いることができる。そのような残留物の試験が高いＩＬ−６応答または他の炎症誘発性応答を引き起こす場合、透析溶液は拒絶される。
【００２８】
３０ｋＤａ〜１００ｋＤａの範囲の汚染物が無菌性の腹膜炎を引き起こす可能性が特に高いと考えられているが、ろ過器によって優先的に保持されない汚染物は無菌性の腹膜炎を引き起こす可能性が低い。例えば、ペプチドグリカンは無菌性腹膜炎を引き起こすことが示されている。本明細書で開示される方法は、汚染された溶液の放出を予防するために、透析溶液またはその成分中のペプチドグリカンを検出することができる。
【００２９】
サイトカイン応答は、一般的にｐｇ／ｍＬで表される。一実施形態では、物質の適合性を判定するために、以下の試験基準を用いることができる。物質の炎症誘発性応答が陰性である（約１００〜２００ｐｇ／ｍＬ未満、または陰性対照とほぼ同じ）場合、その物質は使用に適する。残留部分が陽性の炎症誘発性応答を示し、ろ液部分が陰性の炎症誘発性応答を示す場合、その物質は拒絶される。ろ液および残留部分の両方が陽性の炎症誘発性応答を示し、ろ液の炎症誘発性応答が残留物の炎症誘発性応答よりも大きい場合、その物質は使用が許容される。ろ液および残留部分の両方が陽性の炎症誘発性応答を示し、ろ液の炎症誘発性応答が残留物の炎症誘発性応答未満である場合、残留物の炎症誘発性応答に対するろ液の炎症誘発性応答の比が調べられる。ろ液部分の炎症誘発性応答が残留部分の炎症誘発性応答の５０％より大きいか、または５０％である場合、透析溶液成分は使用が許容されるとみなされる。ろ液部分の炎症誘発性応答が残留部分の炎症誘発性応答の５０％未満である場合、透析溶液成分は使用者において無菌性腹膜炎を引き起こすことがあり、したがって拒絶され、破棄されなければならない。可能な汚染源によって、他の基準を用いることができる。
【００３０】
物質が適するかどうかを判定する基準は、特定の実験パラメータによって変えてもよい。これは、ろ液および残留物中の分子の相対濃度が、サイズおよび容量、回転時間および適用遠心力などの特定の種類の分子量カットオフろ過器によって決まるからである。汚染物由来の用量依存性応答は、Ｓ字型関数を示すことができる。したがって、応答が飽和点に到達した場合、希釈試料を用いなければならないだろう。
【００３１】
一実施形態では、本開示は、腹膜透析溶液の製造方法を提供する。本方法は、任意の適する数および種類の処理段階を含むことができる。例えば、上記処理は、イコデキストリンなどのグルコースポリマーを提供すること、グルコースポリマー試料をろ過して残留部分およびろ液部分を得ること、残留部分およびろ液部分の各々の炎症誘発性応答を測定すること、残留部分の炎症誘発性応答をろ液部分の炎症誘発性応答と比較すること、およびＩＬ−６応答が所定の基準に従っていると判定される場合、グルコースポリマーを用いて腹膜透析溶液を作製することを含む。ＩＬ−６応答が所定の基準に従っていないと判定される場合、汚染物を除去するか、十分に低いレベルの汚染物を達成するためにグルコースポリマーをさらに処理することができる。グルコースポリマーは、任意の適する方法でさらに処理することができる。一実施形態では、グルコースポリマーは、任意の適する数および種類の分離装置、例えばペプチドグリカンおよび／または同様なものに特異的に結合する樹脂を有する親和性カラムで処理することができる。
【００３２】
本開示に従って透析溶液を製造する方法は、他の適する透析原料または透析溶液試験手順と併用することもできる。適する手順の例示的な例は、その開示が参照により本明細書に組み込まれる、２００６年１０月１０日に発行されたＭＥＴＨＯＤＳ  ＡＮＤ  ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳ  ＦＯＲ  ＤＥＴＥＣＴＩＯＮ  ＯＦ  ＭＩＣＲＯＢＩＡＬ  ＣＯＮＴＡＭＩＮＡＮＴＳ  ＩＮ  ＰＥＲＩＴＯＮＥＡＬ  ＤＩＡＬＹＳＩＳ  ＳＯＬＵＴＩＯＮＳと題する米国特許第７，１１８，８５７号に見い出すことができる。例えば、そのような試験手順は、透析原料または透析溶液を試験するために一般に用いることができる。
【００３３】
透析溶液は、腹膜透析、血液透析または他の任意の透析療法用に特別に処方されて、それに適したものであり得る。透析溶液は、例えば、単一容器中の単一の透析溶液として、または別々に収納された容器もしくは多室容器の透析パーツ（ｄｉａｌｙｓｉｓ  ｐａｒｔ）として用いることができる。透析溶液は、任意の適する滅菌技術、例えばオートクレーブ、蒸気、紫外線、高圧、ろ過またはそれらの組合せを用いて滅菌することができる。
【００３４】
透析溶液の即時利用可能な製剤は、いくつかの適する方法で調製することができる。例えば、第１および第２の透析パーツは、混合されて混合溶液を形成するまで互いに別々に、例えば多室容器の油圧で連結された別々の室に保存することができる。この点に関しては、即時利用可能な製剤は、容器の１室内でその別々の透析パーツを混合することによって、容器の中で調製することができる。このことは、透析パーツのすべてまたは少なくとも一部を手動で容器に注入して、混合溶液を形成する必要性を効果的に排除することができ、このように、即時利用可能な製剤を滅菌条件下で容易に調製することができることを保証する。
【００３５】
さらに、混合する前に透析パーツの１つを患者と直接流体連通させることができ、一方で、混合する前に他の透析パーツを患者と直接流体連通させることができないように、容器を構成することができる。物理的に患者と直接流体連通させることができない単一の溶液は、それが最初に他の成分と混合されない限り患者に供給することができないので、このことは、本開示の即時利用可能な製剤の調製および投与に関してさらなる安全レベルを提供することができる。この点に関しては、患者と物理的に直接流体連通させることができない単一の溶液が、カリウム、ナトリウムなどの構成要素の望ましくない濃度を偶然に有する場合、この構成は、望ましくないレベルの構成要素が患者に供給されないか投与されないことを必然的に保証するであろう。
【００３６】
個々の透析パーツを効果的に調製し、投与することができるように、マルチパーツ透析溶液の別々の透析パーツを任意の適する様式で収容または含有させることができることを理解するべきである。２つのパーツを収容するために、適する流体連通機構によって連結される別々の容器（例えば、フラスコまたはバッグ）などの様々な容器を用いることができる。２つまたは２つより多くの別々の透析パーツは、別々に滅菌および保存することができる。
【００３７】
透析溶液は、浸透圧剤、緩衝剤、電解質またはそれらの組合せなどの、１つまたは１つより多くの適する透析成分（例えば透析溶液の成分または構成要素）を含むことができる。多種多様の適する酸性および／または塩基性の剤を、浸透圧、緩衝および／または電解質の溶液または濃縮液のｐＨを調節するために利用することもできる。例えば、塩酸、硫酸、硝酸、臭化水素、ヨウ化水素、水酸化ナトリウムなど、またはそれらの組合せを含む、様々な無機の酸および塩基を利用することができる。
【００３８】
浸透圧剤の例には、グルコース、フルクトース、グルコースポリマー（例えばマルトデキストリン、イコデキストリン、シクロデキストリン、トレハロース）、グルコースポリマー誘導体（例えば改変デンプン、ヒドロキシエチルデンプン）、ポリオール、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、アミノ糖、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＮＡＧ）、グリセロールおよび／または同様なもの、およびそれらの組合せが含まれる。緩衝剤の例には、重炭酸塩、乳酸／乳酸塩、ピルビン酸／ピルビン酸塩、酢酸／酢酸塩、クエン酸／クエン酸塩、アミノ酸、ペプチド、クレブス回路の中間体および／または同様なもの、およびそれらの組合せが含まれる。
【００３９】
電解質の例には、カルシウム、マグネシウム、ナトリウム、カリウム、塩化物および／または同様なもの、およびそれらの組合せが含まれる。例えば、透析溶液は、約１００〜約１４０ｍＥｑ／ＬのＮａ＋、約７０〜約１３０ｍＥｑ／ＬのＣｌ−、０．１〜約４．０ｍＥｑ／ＬのＣａ２＋、０．１〜約４．０ｍＥｑ／ＬのＭｇ２＋および／または０．１〜約４．０ｍＥｑ／ＬのＫ＋の１つまたは１つより多くの電解質を含むことができる。
【００４０】
透析溶液は、溶液の浸透圧を生理的浸透圧より高く（例えば約２８５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇより高く）保つために、浸透圧剤などの透析成分を好ましくは含むことができる。例えば、グルコースは速やかな限外ろ過速度を提供するので、最も一般的に用いられる浸透圧剤である。アミノ酸などの他の適する種類の浸透圧剤は、グルコースに加えて、またはその代用品として用いることができる。
【００４１】
腹膜透析溶液で浸透圧剤の役目を果たすことができる化合物の別のファミリーは、イコデキストリン、マルトデキストリン、ヒドロキシエチルデンプンなどの、グルコースポリマーまたはそれらの誘導体のファミリーである。これらの化合物は浸透圧剤としての使用に適するが、それらは、特に滅菌および長期保管の間、低ｐＨおよび高ｐＨに感受性であり得る。イコデキストリンなどのグルコースポリマーは、腹膜透析溶液でグルコースに加えて、またはその代わりに用いることができる。一般に、イコデキストリンは、トウモロコシデンプンの加水分解から誘導されるグルコースのポリマーである。それは、１２〜２０，０００ダルトンの分子量を有する。イコデキストリン中の大多数のグルコース分子は、α（１−４）グルコシド結合（＞９０％）で直線状に連結されるが、小さな分画（＜１０％）はα（１−６）結合によって連結される。
【００４２】
透析溶液または成分は、重炭酸塩および酸などの緩衝剤を含むこともできる。重炭酸塩は、ガスバリアオーバーパウチなどを使わずに安定なままであることができるように、アルカリ性溶液を含むことができる。個々の重炭酸塩溶液は、約８．６を超えるｐＨ範囲、好ましくは約９を有することができる。重炭酸塩溶液部分のｐＨは、任意の適する種類の成分、例えば水酸化ナトリウムおよび／または同様なもので調節することができる。本開示の重炭酸塩溶液の例示的な例は、その開示が参照により本明細書に組み込まれる、２００１年１０月３０日に公布されたＢＩＣＡＲＢＯＮＡＴＥ−ＢＡＳＥＤ  ＳＯＬＵＴＩＯＮ  ＩＮ  ＴＷＯ  ＰＡＲＴＳ  ＦＯＲ  ＰＥＲＩＴＯＮＥＡＬ  ＤＩＡＬＹＳＩＳ  ＯＲ  ＳＵＢＳＴＩＴＵＴＩＯＮ  ＩＮ  ＣＯＮＴＩＮＵＯＵＳ  ＲＥＮＡＬ  ＲＥＰＬＡＣＥＭＥＮＴ  ＴＨＥＲＡＰＹと題する米国特許第６，３０９，６７３号に見い出すことができる。
【００４３】
酸は、乳酸、ピルビン酸、酢酸、クエン酸、塩酸などの１つまたは１つより多くの生理的に許容される酸を含むことができる。酸は、約５または約５未満、約４または約４未満、約３または約３未満、約２または約２未満、約１または約１未満、および他の任意の適する酸性ｐＨのｐＨを有する個々の溶液であることができる。酸性溶液における、乳酸などの有機酸の単独使用、または別の適する酸、例えば塩酸などの適する無機の酸、別の適する有機酸（例えば乳酸／乳酸塩、ピルビン酸／ピルビン酸塩、酢酸／酢酸塩、クエン酸／クエン酸塩）および同様なものとの併用は、上記溶液をより生理的に許容できるものにすることができる。
【００４４】
前に述べたように、本開示の透析溶液は、様々な適する用途で用いることができる。例えば、透析溶液は、自動化腹膜透析、連続的外来腹膜透析、連続流動腹膜透析などの腹膜透析の間用いることができる。本開示は、腎不全を治療するための多種多様の適する透析療法で用いることができることを理解すべきである。
【００４５】
一実施形態では、慢性の腎不全または疾患を有する患者のために透析療法を提供する方法で本開示を利用することができるが、本開示は、急に透析が必要な場合、例えば緊急救命室の状況で用いることができることを理解するべきである。最後に、当業技術者が理解するように、間欠形態の療法（例えば、血液ろ過、血液透析、腹膜透析および血液透析ろ過）を、施設内、自己／限定看護ならびに家庭場面で用いることができる。
【実施例】
【００４６】
限定ではなく例として、以下の実施例は本開示の様々な実施形態を例示するものであり、腹膜透析溶液で行われた実験的試験をさらに例示する。
【００４７】
実験手順
物質がサイトカイン応答を誘発するかどうかを判定するために、標準のインターロイキン−６（ＩＬ−６）応答を実施した。一般的な実験のために、ドナーにつき合計約７５ｍＬの全血を収集した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離し、細胞濃度を測定した。
【００４８】
ＰＢＭＣ細胞数は細胞カウンターを用いて測定し、約８×１０６細胞数／ｍＬの濃度に調節した。細胞懸濁液の一定分量１００μＬを各ウェルに加え、対照品または試験品で作製した１００μＬの溶液を加えた。４体の血液ドナーによる各実験において、合計４反復の試験（試料または対照溶液につき４個のウェル）を実施した。細胞ならびに試験および対照溶液で調製した９６ウェルプレートを、５％ＣＯ２のＣＯ２インキュベータ内で一晩インキュベートした。
【００４９】
インキュベーションの後、４３０×ｇで１５分間プレートを遠心分離した。上清を収集した。上清中のＩＬ−６の濃度は、ＱｕａｎｔｉＧｌｏ化学発光ＥＬＩＳＡキットを用いて測定した。発光読み取りのために、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ２プレートリーダーをセットした。
【００５０】
ろ過工程を実施するために、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−４ろ過装置を用いた。Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−４ろ過装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（商標）から）は、生体試料の濃縮および高分子成分の精製のために設計されている。Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−４装置は、低タンパク質結合性再生セルロースで作られ、名目分子量限界（ＮＭＷＬ）によって特徴づけられる膜を含む。ＮＭＷＬ等級は、指定された分子量を超える分子を保持する装置の能力を示す。Ｕｌｔｒａ−４ろ過装置は、濃縮された残留物（ろ過器ユニットに収集されたもの）およびろ過器を通ったろ液（遠心管に収集されたもの）の単回遠心回収（ｓｉｎｇｌｅ  ｓｐｉｎ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ）を可能にするように設計されている。
【００５１】
約４ｍＬの試験試料をろ過器ユニットに充填し、約２ｍＬのろ液が得られるように所定時間遠心回転させた。ろ液および残留物の両方を収集し、０．２ｍの注射ろ過器でろ過してからＰＢＭＣ−ＩＬ−６アッセイにかけた。３０ｋＤａ、５０ｋＤａおよび１００ｋＤａでＮＭＷＬろ過器を用いて、各試料を別々に試験した。
【００５２】
結果
上記の手順を用いて試験した試料には、陽性対照（比較例Ａ）および陰性対照（比較例Ｂ）が含まれた。比較例Ａは、０．５ＥＵ／ｍＬのリポポリサッカライド溶液であった。比較例Ｂは、２％血漿を有するＲＰＭＩであった。試験は、異なるバッチのイコデキストリンに基づく腹膜透析溶液から調製された腹膜透析溶液試料でも実施した（実施例１および２）。
【００５３】
実施例１および２で用いた試料は、腹膜透析のために治療した患者で前に用いたイコデキストリンベースの腹膜透析溶液のバッチからのものであった。実施例１の腹膜透析溶液は、腹膜透析溶液を用いた一部の患者で無菌性の腹膜炎を引き起こすことが見出されていた。実施例２で調製した腹膜透析溶液は、腹膜透析溶液を用いた患者で無菌性の腹膜炎を引き起こしていなかった。
【００５４】
各溶液の試料のＩＬ−６応答は、上記の手順を用いて測定した。さらに、３０ｋＤａ、５０ｋＤａおよび１００ｋＤａの分子量カットオフで前述の手順を用いて、実施例１および２の溶液をろ過工程にかけた。ろ液および残留物を、各カットオフレベルでＩＬ−６応答について試験した。結果を、図１に例示する。図１の各バーは、試料のアイデンティティーにより標識されている。ろ過されてない試料のＩＬ−６結果は、「ろ過なし」と表示する。残留物試料のＩＬ−６結果は「Ｒ」と命名し、ろ液試料のものは「Ｆ」と命名した。標識の最後の数字は、試験で用いたろ過器のＮＭＷＬを示す。
【００５５】
図１に例示するように、予想通り比較例Ａが強いＩＬ−６応答を示し、比較例Ｂが事実上ＩＬ−６応答を示さなかったことがわかる。実施例１および２の未ろ過溶液は、両方とも高いＩＬ−６応答（それぞれ約２４，０００ｐｇ／ｍＬおよび３６，０００ｐｇ／ｍＬ）を示した。したがって、試験結果は、実施例１および２の溶液の両方が、ＩＬ−６応答を引き起こしたあるものによって汚染されていたことを示す。実施例１で用いたイコデキストリンだけが無菌性の腹膜炎を引き起こしたので、溶液が無菌性の腹膜炎を引き起こすかどうかを判定するのに、ＩＬ−６試験単独では不十分であったことが明らかである。
【００５６】
実施例１の残留物およびろ液の結果については、ＮＭＷＬレベルに従い、残留物およびろ液のＩＬ−６応答の間にかなりの差が存在することがわかる。３０ｋＤａおよび５０ｋＤａの試料については、残留物のＩＬ−６応答は、ろ液のＩＬ−６応答より数桁高い。１００ｋＤａ試料については、ＩＬ−６応答の差はより小さい。分子量に基づく応答でのこの差は、無菌性の腹膜炎を引き起こした汚染物が３０ｋＤａ〜１００ｋＤａの分子量をおそらく有することを示す。
【００５７】
対照的に、実施例２については、ＮＭＷＬレベルに関係なく、ろ液および残留物の試料についてのＩＬ−６応答結果に小さな差が見られるだけである。これらの結果は、ろ過にもかかわらず残留物およびろ液の間に汚染物が比較的同等に分配されたままであり、この汚染物が３０ｋＤａ未満の分子量を有することを示す。
【００５８】
サイトカイン応答試験は、比較例Ｃ（陽性対照）、比較例Ｄ（陰性対照）、および異なるバッチのイコデキストリンに基づく腹膜透析溶液から調製された追加の透析溶液試料について実施した（実施例３、４および５）。実施例３、４および５で用いた試料は、腹膜透析のために患者で前に用いた、イコデキストリンに基づく腹膜透析溶液のバッチからのものであった。実施例３および４の腹膜透析溶液は、腹膜透析溶液を用いた一部の患者で無菌性の腹膜炎を引き起こすことが見出されていた。実施例５の腹膜透析溶液は、腹膜透析溶液を用いた患者で無菌性の腹膜炎を引き起こしていなかった。
【００５９】
ＩＬ−６、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−１０、ＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ−１ｂ、Ｇ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦのサイトカイン応答は、それぞれ図２〜１０に示す。各場合において、比較例Ｃおよび実施例３、４および５は各々かなりのサイトカイン応答を示し、比較例Ｄ（陰性対照）は非常に低い応答を示したことがわかる。
【００６０】
実施例６および７は、イコデキストリンに基づく腹膜透析溶液の異なるバッチからの透析溶液試料であった。３０ｋＤａ、５０ｋＤａおよび１００ｋＤａの分子量カットオフで前述の方法を用いて、実施例６および７の溶液をろ過工程にかけた。ろ液および残留物を、各カットオフレベルでＩＬ−６応答について試験した。図１１は、実施例６および７の、対数スケール上のＩＬ−６応答を例示する。
【００６１】
実施例６については、ＮＭＷＬレベルに関係なく、ＩＬ−６応答はろ液および残留物試料の両方について極小であった。これらの結果は、ろ過にもかかわらず、残留物およびろ液の間に汚染物が比較的同等に分配されたままであったことを示す。したがって、実施例６の試料は、使用に適していた。
【００６２】
実施例７については、３０ｋＤａでろ過した試料については、残留物のＩＬ−６応答はろ液のＩＬ−６応答よりもかなり大きかったことがわかる。このことは、３０ｋＤａを超える分子量の汚染物が、実施例７の溶液に存在したことを示す。したがって、実施例７の透析液は、使用に適していなかった。
【００６３】
図１２は、実施例８、実施例９、比較例Ｄ、比較例Ｅおよび比較例ＦのＩＬ−６応答を例示する。実施例８および９は、イコデキストリンの異なる試料から調製された液体試料であった。比較例ＤはＲＰＭＩの陰性対照であって、比較例Ｅは汚染されていない腹膜透析液の陰性対照であって、比較例Ｆは汚染された腹膜透析液の陽性対照であった。試料は、１０ｋＤａおよび３０ｋＤａでろ過して試験した。実施例８および９の両方について、両方のろ過レベルで、ろ液のＩＬ−６応答は残留物のＩＬ−６応答よりも大きかったことがわかる。このことは、イコデキストリン中の汚染物がろ過器を通過したこと、したがって１０ｋＤａ未満の分子量を有することを示す。したがって、イコデキストリンは使用に適した。
【００６４】
図１３は、比較例Ｄ、比較例Ｅ、比較例Ｆならびに実施例１０および１１の、対数スケール上のＩＬ−６応答を例示する。実施例１０および１１は、イコデキストリンの異なる試料から調製された液体試料であった。試料は、３０ｋＤａ、５０ｋＤａおよび１００ｋＤａでろ過して試験した。実施例１０については、ＩＬ−６応答は各分画で比較的低く（陰性対照、比較例ＤおよびＥの応答に同等）、各分画は類似した応答を示した。したがって、イコデキストリンは使用に適した。実施例１１については、３０ｋＤａおよび５０ｋＤａで、残留物のＩＬ−６応答はろ液のＩＬ−６応答よりも大きかった。汚染物は３０ｋＤａを超える大きさであったので、イコデキストリンは使用に適していなかった。
【００６５】
図１４は、実施例１２および１３の、対数スケール上のＩＬ−６応答を例示する。実施例１２および１３は、イコデキストリンに基づく腹膜透析溶液の試料であった。試料は、３０ｋＤａ、５０ｋＤａおよび１００ｋＤａでろ過して試験した。実施例１２については、ＩＬ−６応答は各分画で比較的低く、各分画は類似した応答を示した。したがって、実施例１２の腹膜透析液は、使用に適していた。実施例１３については、３０ｋＤａで、残留物のＩＬ−６応答はろ液のＩＬ−６応答よりも大きかった。汚染物は３０ｋＤａを超える大きさであったので、イコデキストリンは使用に適していなかった。
【００６６】
これらの試験結果に基づいて、ろ過工程と一緒にサイトカイン応答試験を用いることは、透析溶液中の汚染物の存在について試験するための改善された方法を提供することがわかる。
【００６７】
本明細書に記載される現在好ましい実施形態への様々な変更および改変が、当分野の技術者に明らかとなることを理解すべきである。そのような変更および改変は、本開示の精神と範囲から逸脱することなく、およびその意図する利点を減らすことなくなされることができる。したがって、そのような変更および改変が、添付の請求項によってカバーされることが意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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