(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
三環系ジテルペンまたはその誘導体の、損なわれた神経伝達と関係がある障害を治療するための医薬組成物の製造のための使用であって、
前記三環系ジテルペンまたはその誘導体が、カルノシン酸、カルノシン酸１２−メチルエーテル、７−オキソカリトリシン酸、トタロール、１６−ヒドロキシトタロール、トタロール−１９−カルボン酸メチルエステル、２０−デオキソ−カルノソール、７−メチルロスマノール、セージョン、８，１１，１３−アビエタトリエン−１１，１２，２０−トリオール、ロイルエアノン酸、およびフェルギノールからなる群から選択される、使用。
【請求項２】
前記医薬組成物は、抗うつ薬、気分／活力改良剤、ストレス緩和剤、病状改良剤、不安低下剤、強迫性行動低下剤、弛緩薬、睡眠改良剤および／または不眠症軽減薬である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記三環系ジテルペンは、カルノシン酸、７−オキソカリトリシン酸または２０−デオキソ−カルノソールである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
獣医学用途である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
三環系ジテルペンまたはその誘導体を含む、損なわれた神経伝達と関係がある障害を治療するための薬剤であって、前記三環系ジテルペンまたはその誘導体が、カルノシン酸、カルノシン酸１２−メチルエーテル、７−オキソカリトリシン酸、トタロール、１６−ヒドロキシトタロール、トタロール−１９−カルボン酸メチルエステル、２０−デオキソ−カルノソール、７−メチルロスマノール、セージョン、８，１１，１３−アビエタトリエン−１１，１２，２０−トリオール、ロイルエアノン酸、およびフェルギノールからなる群から選択される、薬剤。
【請求項６】
抗うつ薬、気分／活力改良剤、ストレス緩和剤、病状改良剤、不安低下剤、強迫性行動低下剤、弛緩薬、睡眠改良剤および／または不眠症軽減薬である、請求項５に記載の薬剤。
【請求項７】
前記三環系ジテルペンは、カルノシン酸、７−オキソカリトリシン酸または２０−デオキソ−カルノソールである、請求項５または６に記載の薬剤。
【請求項８】
獣医学用途である、請求項５〜７のいずれか一項に記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の簡単な説明］
本発明は、特に損なわれたまたは低下した神経伝達と関係がある障害を治療するための薬物として使用するための三環系ジテルペンおよびそれらの誘導体、ならびにこのような三環系ジテルペンおよびそれらの誘導体を含有する食品および医薬組成物およびそれらの使用に言及する。
【０００２】
［発明の背景］
例えば神経伝達物質レベル低下などの損なわれた神経伝達は、うつ病および全般性不安障害（ＧＡＤ）、およびストレスに対する感受性増大などの精神疾患と関係があることがよく知られている。
【０００３】
脳内の神経伝達物質レベルを増大させ、ひいてはそれらの伝達を増強する化合物は、抗うつ特性ならびに多様なその他の精神障害に対する有益な効果を示すことができる（「神経伝達物質、薬剤および脳機能（Ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ，ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｂｒａｉｎ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ）」、Ｒ．Ａ．ウェブスター（Ｗｅｂｓｔｅｒ）編、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２００１年、１８７〜２１１頁、２８９〜４５２頁、４７７〜４９８頁）。主要な神経伝達物質は、セロトニン、ドーパミン、ノルアドレナリン（＝ノルエピネフリン）、アセチルコリン、グルタメート、γ−アミノ−酪酸、ならびに神経ペプチドである。気分関連障害に特有の関連性がある神経伝達物質としては、セロトニン、ノルアドレナリンおよびドーパミンが挙げられる。増強または延長された神経伝達は、シナプス前神経終末内への再取り込みの阻害を通じて、またはモノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）−Ａおよび−Ｂなどの分解酵素の阻害により神経伝達物質異化作用を防止することによって、シナプス間隙中の神経伝達物質濃度を増大させることで達成される。
【０００４】
［抗うつ薬および気分関連障害］
イミプラミン、アミトリプチリンおよびクロミプラミンなどの三環系抗うつ薬化合物（ＴＣＡ）は、セロトニンおよびノルアドレナリンの再取り込みを阻害する。それらは入手できる最も効果的な抗うつ薬として一般に認識されるが、それらはムスカリン様アセチルコリン−、ヒスタミン−、およびセロトニン−受容体とさらに反応するため、いくつかの不都合を有する。このような活性に起因する副作用としては、起立性低血圧に加えて、口渇、かすみ目、便秘、および尿貯留が挙げられる。最も重要なことには、過量に摂取されるとＴＣＡは安全でなく、急性心臓毒性を示すことが多い。
【０００５】
別のクラスの抗うつ薬は、セロトニンの再取り込みによってセロトニン作動性神経伝達を終結する、高親和性塩化ナトリウム−依存神経伝達物質輸送体であるセロトニン輸送体（ＳＥＲＴ）をブロックする、フルオキセチン、パロキセチン、セルトラリン、シタロプラム、およびフルボキサミンを含む、いわゆるＳＳＲＩ（選択的セロトニン再取り込み阻害剤）である。これらはＴＣＡと同様、うつ病および不安の治療において効果的であることが立証されているが、通常、耐容性がより良い。これらの薬物投与は、典型的に低投薬量で開始され、それらが治療的レベルに達するまで増大される。一般的な副作用は悪心である。その他の可能な副作用としては、食欲減退、口渇、発汗、感染症、便秘、振戦、あくび、眠気、および性機能障害が挙げられる。
【０００６】
さらにＭＡＯ−Ａおよび−Ｂを阻害することでより広範に神経伝達物質の異化作用を防止する化合物も抗うつ効果を示す。ＭＡＯはセロトニン、ノルアドレナリン、およびドーパミンなどのアミン基含有神経伝達物質の酸化を触媒する。
【０００７】
さらに神経伝達調節因子は、精神および認知機能に対して多面発現効果を発揮する。
【０００８】
既知の抗うつ薬のネガティブな副作用を示さない、精神疾患および／または障害を治療または予防するための化合物に対する必要性がある。多くの患者は、高用量の薬剤と関連付けられている副作用を最小限に抑えて、相加的な臨床上の利点を生じることができる代案の治療法に関心を持っている。重度のうつ病は長期にわたる再発性の疾患であり、それは通常不十分に診断される。さらに多くの患者は、軽度のまたは中度のうつ病を患う。したがってリスクがある人々に使用されて、うつ病および気分変調などの精神疾患／障害を治療し、または精神疾患／障害の発生を予防し、気分を安定化して情動の均衡を達成するかもしれない化合物ならびに医薬品および／または食品組成物の開発に対する関心が高まっている。
【０００９】
さらに患者は、うつ病の併存疾患として、またはそれ自体として全般性不安症候群（ＧＡＤ）を患うことが多い。ＧＡＤは一次医療において高度に蔓延している不安病状および慢性病である（患者の約１０％）（Ｗｉｔｔｃｈｅｎら、２００５年、Ｅｕｒ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍ．１５：３５７〜３７６頁）。患者は複数の身体的症状を持って彼らの一次医療医師のもとを訪れる。ＧＡＤは日常生活に支障を来たし制御不能であり、（情動不安、筋肉緊張、および睡眠問題を含む）特徴的な過覚醒状態症候群を伴う、慢性的緊張、および不安懸念および緊張（＞６か月）によって特徴づけられる。治療されない場合、ＧＡＤは慢性の変動する経過を取り、加齢に伴ってより重度になる傾向がある。ＧＡＤ患者は亜症候群性うつを患い、あらゆる不安およびうつ病性障害の内、全体的に最も高い直接および間接的健康経済的負担に寄与する。高いＧＡＤ発生率にもかかわらず、診断され、薬物療法を処方され、または精神科医への紹介を受ける患者はわずかであり、患者認識およびモニタリングを助ける単純な診断ツールが必要である。特定の診断にかかわらず、医師は効果的なＧＡＤ−症状の治療法を必要とする。パロキセチンなどのＳＳＲＩは、ＧＡＤの治療に効果的である（ストッキ（Ｓｔｏｃｃｈｉ）ら２００３年、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｓｙｃｈ、６３（３）：２５０〜２５８頁）。また系統的レビューおよびプラセボ対照ＲＣＴ（無作為化臨床試験）は、いくつかのＳＳＲＩ（エスシタロプラム、パロキセチンおよびセルトラリン）、ＳＮＲＩ（選択的ノルエピネフリン再取り込み阻害剤）ベンラファキシン、いくつかのベンゾジアゼピン（アルプラゾラムおよびジアゼパム）、三環系イミプラミン、および５−ＨＴ１Ａ部分作用薬ブスピロンが、急性処置において全て有効であることを示唆する。一般的には、治療効果は中程度であることが多く、治療期間が中断すると症状が再出現する。したがってＳＳＲＩよりも副作用が少なく、長期にわたって服用できる化合物を用いた連続的な長期療法または予防が、薬物療法よりも好ましいかもしれない。
【００１０】
気分障害および職業上のストレスもまた、継続性睡眠障害、不眠症、低い睡眠の質、概日リズムの撹乱をもたらす。これらの病状は慢性であることが多く、長期にわたって持続し得る。また長時間飛行（時差ぼけ）ならびに交代勤務によって誘発される概日リズムの調節解除は、同様の症状および困難を引き起こすことがある。したがって認知機能および記憶障害、精神および身体的疲労、夢想などの睡眠障害と関連付けられている症状を改善し、予防するための食餌補給を用いた治療は、それを必要とする個人の全体的な生活の質を改善して、活力のためになることは確実である。
【００１１】
［発明の詳細な説明］
式ＩおよびＩＩ、
【化１】
0005500522.tif 000002
（式中、
Ｒ１は水素またはＣ１〜６−アルキルであり、
Ｒ２はヒドロキシ、Ｃ３〜５−アシルオキシ、ヒドロキシメチル、１，３−ジヒドロキシプロピルまたはＣ１〜６−アルキルであり、
Ｒ３およびＲ４は互いに独立して水素、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル（−ＣＨ２−ＯＨ）、Ｃ１〜５−アシルオキシまたはＣ１〜６−アルコキシであり、
Ｒ５はＣ１〜６−アルキル、ヒドロキシメチル、カルボキシ（ＣＯ２Ｈ）またはメトキシカルボニル（ＣＯ２ＣＨ３）であり、
Ｒ９は水素、ヒドロキシメチル、メトキシ、オキソまたはＣ１〜５−アシルオキシであり、
Ｒ１０は水素であり、または
Ｒ５およびＲ９は一緒になって−ＣＨ２−Ｏ−または−Ｏ−ＣＨ２−であり、
またはＲ５およびＲ１０は一緒になって−ＣＯ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＨ２−Ｏ−または−Ｏ−ＣＨ２−であり、
Ｒ６は水素であり、またはＲ５およびＲ６は一緒になって結合を形成し、
Ｒ７およびＲ８は互いに独立してＣ１〜６−アルキル、カルボキシ、ｘ−ヒドロキシ−Ｃｘ−アルキル（ｘは１〜６の整数である）またはＣ１〜６−アルコキシカルボニル（−ＣＯ２（Ｃ１〜６−アルキル））であるが、ただしＲ７およびＲ８の少なくとも１つはＣ１〜６−アルキルであり、
Ｒ１１およびＲ１２はどちらも水素であり、またはＲ１１およびＲ１２は一緒になってオキソであり、
さらにただし式ＩではＲ２がヒドロキシであれば、Ｒ１はＣ１〜６−アルキルである）
の三環系ジテルペンおよびそれらの誘導体は、損なわれたまたは低下した神経伝達の治療のための薬物に使用できることが発見された。
【００１２】
好ましいのは、ヒトセロトニン輸送体を形質移入された形質移入細胞内への、ｈＳＥＲＴ依存トリチウム化セロトニン取り込みの阻害について、ポジティブな結果を与える三環系ジテルペンおよびそれらの誘導体である。
【００１３】
特に好ましいのは、式ＩおよびＩＩ、
（式中、
Ｒ１は水素またはイソ−プロピルであり、
Ｒ２はヒドロキシまたはイソ−プロピルであり、
Ｒ３およびＲ４は互いに独立して水素、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ５はメチルまたはカルボキシであり、
Ｒ９は水素、オキソまたはメトキシであり、
Ｒ１０は水素であり、または
Ｒ５およびＲ９は一緒になって−ＣＨ２−Ｏ−または−Ｏ−ＣＨ２−であり、またはＲ５およびＲ１０は一緒になって−ＣＯ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＨ２−Ｏ−または−Ｏ−ＣＨ２−であり、
Ｒ６は水素であり、またはＲ５およびＲ６は一緒になって結合を形成し、
Ｒ７およびＲ８は互いに独立してメチル、カルボキシ、ヒドロキシメチルまたはメトキシカルボニルであるが、ただしＲ７およびＲ８の少なくとも１つはメチルであり、
さらにただし式ＩではＲ２がヒドロキシであれば、Ｒ１はイソ−プロピルである）
の三環系ジテルペンおよびそれらの誘導体である。
【００１４】
したがって一態様では、本発明は、損なわれたまたは低下した神経伝達と関係がある障害を治療するための薬物として使用するための、式ＩおよびＩＩ、
【化２】
0005500522.tif 000003
（式中、
Ｒ１は水素またはＣ１〜６−アルキルであり、
Ｒ２はヒドロキシ、Ｃ１〜５−アシルオキシ、ヒドロキシメチル、１，３−ジヒドロキシプロピルまたはＣ１〜６−アルキルであり、
Ｒ３およびＲ４は互いに独立して水素、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、Ｃ１〜５−アシルオキシまたはＣ１〜６−アルキルオキシであり、
Ｒ５はＣ１〜６−アルキル、ヒドロキシメチルまたはカルボキシであり、
Ｒ９は水素、ヒドロキシメチル、メトキシ、オキソまたはＣ１〜５−アシルオキシであり、
Ｒ１０は水素であり、または
Ｒ５およびＲ９は一緒になって−ＣＨ２−Ｏ−または−Ｏ−ＣＨ２−であり、
またはＲ５およびＲ１０は一緒になって−ＣＯ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＨ２−Ｏ−または−Ｏ−ＣＨ２−であり、
Ｒ６は水素であり、またはＲ５およびＲ６は一緒になって結合を形成し、
Ｒ７およびＲ８は互いに独立してＣ１〜６−アルキル、カルボキシ、ｘ−ヒドロキシ−Ｃｘ−アルキル（ｘは１〜６の整数である）、またはＣ１〜６−アルコキシカルボニルであるが、ただしＲ７およびＲ８の少なくとも１つはＣ１〜６−アルキルであり、
Ｒ１１およびＲ１２はどちらも水素であり、またはＲ１１およびＲ１２は一緒になってオキソであり、
さらにただし式ＩではＲ２がヒドロキシであれば、Ｒ１はＣ１〜６−アルキルである）の三環系ジテルペンおよびそれらの誘導体に関し、
好ましくは式ＩおよびＩＩ、
（式中、
Ｒ１は水素またはイソ−プロピルであり、
Ｒ２はヒドロキシまたはイソ−プロピルであり、
Ｒ３およびＲ４は互いに独立して水素、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ５はメチルまたはカルボキシであり、
Ｒ９は水素、オキソまたはメトキシであり、
Ｒ１０は水素であり、または
Ｒ５およびＲ９は一緒になって−ＣＨ２−Ｏ−または−Ｏ−ＣＨ２−であり、
またはＲ５およびＲ１０は一緒になって−ＣＯ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＨ２−Ｏ−または−Ｏ−ＣＨ２−であり、
Ｒ６は水素であり、またはＲ５およびＲ６は一緒になって結合を形成し、
Ｒ７およびＲ８は互いに独立してメチル、カルボキシ、ヒドロキシメチルまたはメトキシカルボニルであるが、ただしＲ７およびＲ８の少なくとも１つはメチルであり、
およびさらにただし式ＩではＲ２がヒドロキシであれば、Ｒ１はイソ−プロピルである）
の三環系ジテルペンおよびそれらの誘導体に関し、
より好ましくは式ＩＩＩ〜ＶＩＩおよびＸ〜ＸＶ（下の図１、２、および３参照）の化合物、
最も好ましくはカルノシン酸（式ＩＩＩの化合物）および７−オキソカリトリシン酸（式ＩＶの化合物）に関する。
【００１５】
別の態様では、本発明は、損なわれたまたは低下した神経伝達と関係がある障害を治療するための組成物の製造、特に抗うつ薬、気分／活力改良剤、ストレス緩和剤、病状改良剤、不安低下剤、強迫性行動低下剤、弛緩薬、睡眠改良剤および／または不眠症軽減薬の製造のための上記の式ＩおよびＩＩの三環系ジテルペンおよびその誘導体の使用に関する。
【００１６】
さらに別の態様では、本発明は、上記の式ＩおよびＩＩの少なくとも１つの三環系ジテルペンまたはその誘導体を含有する食品組成物、ならびに上記の式ＩおよびＩＩの少なくとも１つの三環系ジテルペンまたはその誘導体と従来の薬学的キャリアとを含有する医薬組成物に関する。
【００１７】
さらに本発明は、上記の式ＩおよびＩＩで表される効果的な用量の三環系ジテルペンおよび／またはその誘導体を、それを必要とするヒトを含む動物に投与するステップを含んでなる、ヒトを含む動物において損なわれたまたは低下した神経伝達と関係がある障害を治療する方法に関する。
【００１８】
本発明の文脈で動物とは、ヒトを含み、哺乳類、魚類、および鳥類を包含する。好ましい「動物」は、ヒト、ペットおよびコンパニオンアニマル、および家畜である。ペットおよびコンパニオンアニマルの例は、イヌ、ネコ、鳥、観賞魚、モルモット、（ジャック）ウサギ、野ウサギ、およびフェレットである。家畜の例は、水産養殖魚、ブタ、ウマ、反芻動物（畜牛、ヒツジ、およびヤギ）、および家禽である。
【００１９】
本発明の好ましい態様では、式Ｉの三環系ジテルペンおよびその誘導体は、
カルノシン酸（式ＩＩＩの化合物、図１参照）、
７−オキソカリトリシン酸（式ＩＶの化合物、図１参照）、
トタロール（式Ｖの化合物、図１参照）、
１６−ヒドロキシトタロール（式ＶＩの化合物、図１参照）、
トタロール−１９−カルボン酸メチルエステル（式ＶＩＩの化合物、図１参照）、
２０−デオキソ−カルノソール（式Ｘの化合物、図２参照）、
７−メチルロスマノール（式ＸＩの化合物、図２参照）、
セージョン（式ＸＩＩの化合物、図２参照）、
８，１１，１３−アビエタトリエン−１１，１２，２０−トリオール（式ＸＩＩＩの化合物、図２参照）、
ロイルエアノン酸（式ＸＩＶの化合物、図３参照）、
フェルギノール（式ＸＶの化合物、図３参照）、および
カルノシン酸１２−メチルエーテル（式ＸＶＩの化合物、図１参照）からなる群から選択される。
【００２０】
式Ｉのより好ましい三環系ジテルペンは、カルノシン酸、７−オキソカリトリシン酸、および２０−デオキソ−カルノソールである。さらにより好ましいのは、カルノシン酸および７−オキソカリトリシン酸であり、最も好ましいのは（４ａＲ，１０ａＳ）−カルノシン酸である。
【００２２】
「カルノシン酸」とは、ラセミ混合物、ならびに純粋な（４ａＲ，１０ａＳ）−カルノシン酸または純粋な（４ａＳ，１０ａＲ）−カルノシン酸、またはそれらの任意の混合物またはジアステレオ異性体を意味する。カルノシン酸はローズマリーおよびセージなどであるが、これに限定されるものではない植物から単離できる。「カルノシン酸」とは、「天然」（単離された）および「合成」（製造された）カルノシン酸の双方を意味する。カルノシン酸合成については、Ｃｈｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ  ２００１年、１２（３）、２０３〜２０４頁（ＩＳＳＮ：１００１−８４１７）に記載される。
【００２４】
「カルノシン酸１２−メチルエーテル」とは、ラセミ混合物、ならびに純粋な（４ａＲ，１０ａＳ）−カルノシン酸１２−メチルエーテルまたは純粋な（４ａＳ，１０ａＲ）−カルノシン酸１２−メチルエーテル、またはそれらの任意の混合物またはジアステレオ異性体を意味する。カルノシン酸１２−メチルエーテルは、セージ、ローズマリー、ヒプティス・マルティウシ（Ｈｙｐｔｉｓ  ｍａｒｔｉｕｓｉｉ）などであるが、これに限定されるものではない植物から単離できる。「カルノシン酸１２−メチルエーテル」とは、「天然」（単離された）および「合成」（製造された）カルノシン酸１２−メチルエーテルの双方を意味する。
【００２６】
「７−オキソカリトリシン酸」とは、ラセミ混合物、ならびに純粋な（１Ｓ，４ａＳ，１０ａＲ）−７−オキソ−カリトリシン酸または純粋な（１Ｒ，４ａＲ，１０ａＳ）−７−オキソカリトリシン酸、またはそれらの任意の混合物またはジアステレオ異性体を意味する。７−オキソカリトリシン酸は、カルドン（Ｃｙｎａｒａ ｃａｒｄｕｎｃｕｌｕｓ ｓｐｐ．Ｃａｒｄｕｎｃｕｌｕｓ）およびビャクシン（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）などであるが、これに限定されるものではない植物から単離できる。「７−オキソカリトリシン酸」とは、「天然」（単離された）および「合成」（製造された）７−オキソカリトリシン酸の双方を意味する。
【００２７】
「トタロール」とは、ラセミ混合物、ならびに純粋な（４ｂＳ，８ａＳ）（（＋）−トタロール、トランス−トタロール）または純粋な（４ｂＲ，８ａＲ）−トタロール、またはそれらの任意の混合物またはジアステレオ異性体を意味する。トタロールは、セージ、杜松、およびマキ属（Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｓｐ）などであるが、これに限定されるものではない植物から単離できる。
【００２８】
「トタロール」とは「天然」（単離された）および「合成」（製造された）トタロールの双方を意味する。トタロール合成については、いくつかの論文、すなわちＴｅｔｒａｈ．Ｌｅｔｔ．２００３、４４（４９）：８８３１〜８８３５に記載される。
【００２９】
「１６−ヒドロキシトタロール」とは、ラセミ混合物、ならびに純粋な（１Ｓ，４ａＳ，１０ａＲ）−１６−ヒドロキシトタロールまたは純粋な（１Ｒ，４ａＲ，１０ａＳ）−１６−ヒドロキシトタロール、またはそれらの任意の混合物またはジアステレオ異性体を意味する。１６−ヒドロキシトタロールは、マキ属（Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）およびその他の植物から単離できる。「１６−ヒドロキシトタロール」とは、「天然」（単離された）および「合成」（製造された）１６−ヒドロキシトタロールの双方を意味する。１６−ヒドロキシトタロール合成については、いくつかの論文、すなわちＪ．Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ、１９６３年、（抄録）、１５５３〜１５６０頁、およびＣｈｅｍ＆Ｉｎｄ １９６３年、４４：１７６０〜１７６１頁に記載される。
【００３０】
「トタロール−１９−カルボン酸メチルエステル」とは、ラセミ混合物、ならびに純粋な（４ａＲ，１０ａＳ）−トタロール−１９−カルボン酸メチルエステルまたは純粋な（４ａＲ，１０ａＳ）−トタロール−ｌ９−カルボン酸メチルエステル、またはそれらの任意の混合物またはジアステレオ異性体を意味する。トタロール−１９−カルボン酸メチルエステルは、マキ属（Ｐｏｄｏｃａｒｐｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）の木材およびその他の植物からから単離できる。「トタロール−１９−カルボン酸メチルエステル」とは「天然」（単離された）および「合成」（製造された）トタロール−１９−カルボン酸メチルエステルの双方を意味する。トタロール−１９−カルボン酸メチルエステルは、Ｃｈｅｍ＆Ｉｎｄ １９６３年、４４：１７６０〜１７６１頁に記載される工程に従って調製できる。
【００３１】
「２０−デオキソ−カルノソール」とは、ラセミ混合物ならびに純粋な（４ａＲ，９Ｓ，１０ａＳ）−２０−デオキソ−カルノソールまたは純粋な（４ａＳ，９Ｒ，１０ａＲ）−２０−デオキソ−カルノソールまたはそれらの任意の混合物またはジアステレオ異性体を意味する。２０−デオキソ−カルノソールは、レペキニア・ウルバニアナ（Ｌｅｐｅｃｈｉｎｉａ ｕｒｂａｎｉａｎａ）、および野生セージなどであるが、これに限定されるものではない植物から単離できる。「２０−デオキソ−カルノソール」とは、「天然」（単離された）および「合成」（製造された）２０−デオキソ−カルノソールの双方を意味する。
【００３２】
「７−メチルロスマノール」とは、ラセミ混合物、ならびに純粋な（４ａＲ，９Ｓ，１０Ｓ，１０ａＳ）−７−メチルロスマノールまたは純粋な（４ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１０ａＲ）−７−メチルロスマノール、またはそれらの任意の混合物またはジアステレオ異性体を意味する。７−メチルロスマノールは、ローズマリー、ヒプチス・ジラタタ（Ｈｙｐｔｉｓ ｄｉｌａｔａｔａ）、サリビア（Ｓａｌｉｖｉａ）種、およびレペチニア（Ｌｅｐｅｃｈｉｎｉａ）種などであるが、これに限定されるものではない植物から単離できる。「７−メチルロスマノール」とは、「天然」（単離された）および「合成」（製造された）７−メチルロスマノールの双方を意味する。７−メチルロスマノールの合成については、例えばＪ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．２００２年、６５（７）：９８６〜９８９頁に記載される。
【００３３】
セージョンは、セージおよびその他のサルビア（Ｓａｌｖｉａ）種などの植物から単離できる。「セージョン」とは、「天然」（単離された）および「合成」（製造された）セージョンの双方を意味する。セージョン合成については例えばＪ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ １９９７年、６２（２０）：６９２８〜６９５１頁に記載される。
【００３４】
「８，１１，１３−アビエタトリエン−１１，１２，２０−トリオール」とは、ラセミ混合物、ならびに純粋な（４ｂＲ，８ａＳ）−８，１１，１３−アビエタトリエン−１１，１２，２０−トリオールまたは純粋な（４ｂＳ，８ａＲ）−８，１１，１３−アビエタトリエン−１１，１２，２０−トリオール、またはそれらの任意のジアステレオ異性体または混合物を意味する。８，１１，１３−アビエタトリエン−１１，１２，２０−トリオールは、サリビア（Ｓａｌｉｖｉａ）種を含む植物から単離できる。「８，１１，１３−アビエタトリエン−１１，１２，２０−トリオール」とは、「天然」（単離された）および「合成」（製造された）８，１１，１３−アビエタトリエン−１１，１２，２０−トリオールの双方を意味する。
【００３５】
「ロイルエアノン酸」とは、ラセミ混合物、ならびに純粋な（４ａＲ，１０ａＳ）−ロイルエアノン酸または純粋な（４ａＳ，１０ａＲ）−ロイルエアノン酸、またはそれらの任意のジアステレオ異性体または混合物を意味する。ロイルエアノン酸はセージ（サルビア（Ｓａｌｖｉａ）種）などを含むが、これに限定されるものではない植物から単離できる。
【００３６】
「ロイルエアノン酸」とは、「天然」（単離された）および「合成」（製造された）ロイルエアノン酸の双方を意味する。
【００３７】
「フェルギノール」とは、純粋な（４ｂＳ，８ａＳ）−フェルギノールまたは純粋な（４ｂＲ，８ａＲ）−フェルギノールまたはそれらの任意の立体異性体または混合物を意味する。フェルギノールは、日本杉（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｓｐ．）、ジュニペルス（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ）種、およびサルビア（Ｓａｌｖｉａ）種を含むが、これに限定されるものではない植物から単離できる。
【００３８】
「フェルギノール」とは、「天然」（単離された）および「合成」（製造された）フェルギノールの双方を意味する。フェルギノール合成については、Ｏｒｇ Ｌｅｔ．２００１年、３（１１）：１７３７〜１７４０頁に記載される。
【００３９】
カルノシン酸、カルノシン酸１２−メチルエーテル、７−オキソカリトリシン酸、トタロール、１６−ヒドロキシトタロール、トタロール−１９−カルボン酸メチルエステル、２０−デオキソ−カルノソール、７−メチルロスマノール、セージョン、８，１１，１３−アビエタトリエン−ｌ１，１２，２０−トリオール、ロイルエアノン酸、およびフェルギノールの（純粋な）化合物が好ましい。
【００４１】
本発明の文脈で「治療」とはまた、同時治療ならびに予防も包含する。「予防」は、最初の発生の予防（一次予防）または再発の予防（二次予防）であることができる。
【００４２】
したがって本発明はまた、効果的な用量の式ＩおよびＩＩの三環系ジテルペンまたはその誘導体を、それを必要とするヒトを含む動物に投与するステップを含んでなる、ヒトを含む動物において損なわれた神経伝達と関係がある障害を予防する方法にも関する。この点において、効果的なとは、特に精神の健康を維持し、均衡の取れた認知機能を維持し、気分変動リスクの低下を助け、前向きな気分の維持を助け、認知性の健康を支持し、良好な睡眠の質の維持を助けるために使用されてもよい。
【００４３】
本発明の文脈では、「障害」という用語はまた、疾患も包含する。
【００４４】
損なわれた神経伝達と関係がある障害を治療するための薬物／組成物は、抗うつ薬、気分／活力改良剤、ストレス緩和剤、病状改良剤、不安低下剤および強迫性行動低下剤、弛緩薬、睡眠改良剤および／または不眠症軽減薬を包含する。それらは全て、特に中枢神経系において、生理学的神経伝達を改善し、増強し、支持するので、精神機能障害を改善する。
【００４５】
抗うつ薬は、例えば単極性うつ病、双極性うつ病、急性うつ病、慢性うつ病、亜慢性うつ病、気分変調、分娩後うつ病、月経前不快気分／症候群（ＰＭＳ）、更年期うつ症状、攻撃性、注意欠陥障害（ＡＤＳ）、社会不安障害、季節性気分障害、全般性不安障害（ＧＡＤ）などの不安（障害）、線維筋肉痛症候群、心的外傷後ストレス障害、パニック障害、強迫性障害、むずむず脚症候群、神経質、片頭痛／原発性頭痛および一般的疼痛、嘔吐、過食症、神経性食欲不振症、過食症障害、胃腸障害、燃え尽き症候群、および被刺激性などの精神、行動および情動／感情、神経性、神経変性、摂食およびストレス関連障害を治療するための薬物／組成物である。
【００４６】
抗うつ薬はまた、神経認知障害の一次および二次予防および／または治療（のための組成物の製造）のためにも使用できる。さらにそれらはまた、心臓血管疾患、卒中、癌、アルツハイマー病、パーキンソン病、およびその他の慢性疾患における併存疾患として発生する神経伝達障害に関連したうつ症状またはその他の症状の治療においても効果的である。
【００４７】
したがってＲ１〜Ｒ１２の定義および選択が上の通りである、式ＩおよびＩＩの三環系ジテルペンまたはそれらの誘導体は、一般にヒトを含む動物、好ましくはヒト、愛玩動物、および家畜のための抗うつ薬として使用できる。
【００４８】
本発明のさらに別の実施態様では、三環系ジテルペンまたはそれらの誘導体は、一般的気分改良剤としての、ならびにこのような使用のための組成物製造のための用途がある。「気分改良剤」または「情緒的健康増幅剤」または「活力改良剤」とは、それによって治療された個人の気分が向上して、自尊心が高まりおよび／またはネガティブな思考および／またはネガティブな緊張が減少することを意味する。それはまた、情動の均衡が取れおよび／または一般的な、特に精神の健康および活力が改善または維持され、ならびに気分変動のリスクが低下される（のを助け）、前向きな気分が保たれる（のを助ける）ことも意味する。
【００４９】
Ｒ１〜Ｒ１２の定義および選択が上の通りである、式ＩおよびＩＩの三環系ジテルペンまたはそれらの誘導体はまた、一般にヒトを含む動物、好ましくはヒト、愛玩動物、および家畜のための「不安低下剤」および／または「強迫性行動低下剤」としても使用できる。
【００５０】
「不安低下剤」とは、慢性的緊張および不安懸念および緊張が改善または緩和されることを意味する。情動不安、筋肉緊張、および睡眠問題を含む過覚醒状態症候群は、低下または緩和される。社会恐怖症およびその他の恐怖症は、低下または緩和される。一般的には、社会環境がより威嚇的でないものとして経験される。個人は情動的にリラックスして、快適さを経験し、仲間およびその他の人々との接触を楽しむ。
【００５１】
「弛緩薬」、「睡眠改良剤」または「不眠症軽減薬」とは、睡眠開始を改善して個人が容易に眠りにつけるよう助け、夜通し乱されない睡眠を維持することを意味する。これはまた、時差ぼけまたは交代勤務に起因する概日リズム関連睡眠障害が正されて、不眠と関連付けられている症状、すなわち認知機能および記憶の障害、精神および身体的疲労、夢想が消滅しまたは緩和されて、全体的に生活の質および活力が改善されることも意味する。
【００５２】
さらに式ＩおよびＩＩの三環系ジテルペンまたはそれらの誘導体は、ストレス関連症状の治療、予防、および改善のため、作業過負荷、疲労および／または燃え尽きに関連する症状の治療、予防、および改善のため、ストレスに対する抵抗性または耐性増大のため、および／または正常な健康な個人におけるリラクセーションを支持して容易にするために有用であり、すなわちこのような組成物は「ストレス緩和剤」としての効果を有する。
【００５３】
本発明のさらに別の実施態様は、「病状改良剤」としての、すなわち疾患のあるまたは正常な個人において、被刺激性および倦怠感を低下させ、肉体および精神疲労を低下させまたは防止または改善し、およびより総括的にエネルギーを増大させ、特に脳エネルギー産生を増大させる手段としての、式ＩおよびＩＩの三環系ジテルペンまたはそれらの誘導体の使用に関する。さらに一般的認知力改善のため、特に注意および集中力と、記憶および想起能力と、学習能力と、言語処理と、問題解決と、知的機能とを維持または改善するため、短期記憶を改善するため、精神的敏捷性を増大させるため、精神的覚醒を増強するため、精神疲労を低下させるため、認知健康を支持するため、均衡が取れた認知機能を維持するため、空腹および満腹感を制御するため、ならびに運動能を制御するため。
【００５４】
［獣医学用途］
愛玩動物および家畜は、本発明によって提供できる増強されたまたは改善された神経伝達を必要とする病状であることができる。動物はストレス性の状況に対する有害行動および／または生理学的反応を示すことがあり、量産環境で飼育される、または好ましくない条件で輸送される動物は、肉またはミルクの量または質に減退を示すことがあり、ストレスがたまった家禽は、毛引き、産卵低下、および共食いに訴えることがある。多くの動物は、有害な収容条件または輸送条件下で攻撃的になり、または常同的−、不安−、および強迫性−行動を示すことがある。
【００５５】
したがって本発明の別の態様は、式ＩおよびＩＩの三環系ジテルペンまたはそれらの誘導体の食品／医薬組成物の獣医学用途である。
【００５６】
本発明の好ましい実施態様では、食肉処理への輸送中の家畜および量産家畜飼育ストレスを予防するため、および／またはこのような状況下における前記家畜の肉質の損失を防止するために、式ＩおよびＩＩの三環系ジテルペンまたはそれらの誘導体が投与される。家畜は、好ましくは家禽、畜牛、ヒツジ、ヤギ、およびブタである。
【００５７】
本発明の別の好ましい実施態様では、例えば肉質および産卵数の損失をもたらす毛引きおよび共食いを防止するために、式ＩおよびＩＩの三環系ジテルペンまたはそれらの誘導体が家禽に投与される。
【００５８】
本発明の別の態様は、式ＩおよびＩＩの三環系ジテルペンまたはそれらの誘導体を、それを必要とする動物に投与するステップを含んでなる、水産養殖におけるストレスを予防および／または改善する方法であり、動物は魚またはエビである。
【００５９】
本発明の別の好ましい実施態様では、離別、飼い主の変更または喪失、休暇中の離別、およびいわゆる「動物ホテル」における飼育および動物シェルターまたは避難所における飼育などのストレス性の条件下において、示されるストレス、緊張および攻撃性および強迫性行動を低下させるために、式ＩおよびＩＩの三環系ジテルペンまたはそれらの誘導体が、ペットまたはコンパニオンアニマルに投与される。
【００６０】
本発明のさらに別の態様は、好ましくはミンク、キツネ、およびノウサギである、毛皮産業で使用される動物において、ストレス性条件と関連付けられている症状を防止する／減少させる方法である。
【００６１】
「食品組成物」という用語は、臨床栄養、および栄養補助食品もまた含む、任意のタイプの（強化）食物／飼料および飲料を含んでなる。本発明に係る食品組成物はまた、保護親水コロイド、バインダー、フィルム形成剤、封入剤／材料、壁／シェル材料、マトリックス化合物、コーティング、乳化剤、表面活性剤、可溶化剤（油、脂肪、ワックス、レシチンなど）、吸着材、キャリア、充填材、共化合物、分散剤、湿潤剤、加工助剤（溶剤）、流動剤、味覚マスキング剤、増量剤、ゲル化剤、ゲル形成剤、抗酸化剤、および抗菌剤もさらに含んでもよい。
【００６２】
薬学的に許容可能なキャリアおよび式ＩおよびＩＩで表される少なくとも１つの三環系ジテルペンまたはその誘導体の他に、本発明に係る医薬組成物は、従来の製薬添加剤およびアジュバント、賦形剤または希釈剤、着香剤、保存料、安定剤、乳化剤、緩衝液、潤滑剤、着色剤、湿潤剤、充填材、などを含有してもよい。キャリア材料は、経口／非経口／注射投与に適した有機または無機不活性キャリア材料であることができる。
【００６３】
本発明に係る食品および医薬組成物は、人体を含む動物身体への投与に適した任意のガレヌス形態であってもよく、特に例えば食物または飼料（のための添加剤／栄養補給剤）、食物または飼料プレミックス、強化食物または飼料、錠剤、丸薬、顆粒、糖衣丸、カプセル、および粉末および錠剤などの発泡性製剤などの固形形態、または例えば飲料、ペースト、および油性懸濁液などの溶液、エマルジョンまたは懸濁液などの液体形態など、経口投与のために慣習的な任意の形態であってもよい。ペーストは、硬質または軟質シェルカプセルに充填されてもよい。その他の適用形態の例は、経皮、非経口または注射投与のための形態である。食品および医薬組成物は、制御（遅延）放出製剤の形態であってもよい。
【００６４】
強化食物の例は、シリアルバー、およびケーキおよびクッキーなどのベーカリー製品である。
【００６５】
飲料は、非アルコールおよびアルコール飲料、ならびに飲用水および液体食物への添加用の液体調製品を包含する。非アルコール飲料は、例えば清涼飲料、スポーツ飲料、果汁、レモネード、ニアウォーター飲料（すなわち低カロリーを含有する水ベースの飲料）、茶およびミルクベースの飲料である。液体食物は、例えばスープおよび乳製品（例えばミューズリー飲料）である。
【００６６】
ヒトのために適切な一日量は、１日あたり０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内であってもよい。より好ましいのは、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重の一日量であり、特に好ましいのは、約０．０５〜５．０ｍｇ／ｋｇ体重の一日量である。式ＩおよびＩＩで表されるこのような三環系ジテルペンまたはその誘導体を含有する植物材料または植物抽出物の量は、適宜に計算できる。
【００６７】
ヒトのための固形投薬単位製剤では、式ＩおよびＩＩで表される三環系ジテルペンまたはその誘導体は、適切に、投薬単位あたり約０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇの範囲内、好ましくは約１ｍｇ〜約５００ｍｇの範囲内の量で存在する。
【００６８】
食品組成物中では、特にヒト用食物および飲料中では、式ＩおよびＩＩで表される三環系ジテルペンまたはその誘導体は、適切に、食物または飲料の総重量を基準にして、約０．０００１（１ｍｇ／ｋｇ）〜約５重量％（５０ｇ／ｋｇ）、好ましくは約０．００１％（１０ｍｇ／ｋｇ）〜約１重量％、（１０ｇ／ｋｇ）より好ましくは約０．０１（１００ｍｇ／ｋｇ）〜約０．５重量％（５ｇ／ｋｇ）の範囲内である量で存在する。
【００６９】
本発明の好ましい実施態様中の食物および飲料中では、式ＩおよびＩＩで表される三環系ジテルペンまたはその誘導体の量は、一食あたり１０〜３０ｍｇ、すなわち食物または飲料１ｋｇあたり１２０ｍｇの範囲内である。
【００７０】
ヒトを除く動物では、式ＩおよびＩＩで表される三環系ジテルペンまたはその誘導体の適切な一日量は、１日あたり０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜約１０００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内であってもよい。より好ましいのは約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内の一日量であり、特に好ましいのは約１ｍｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内の一日量である。
【００７１】
本発明を、続く実施例によってさらに例示する。
【００７２】
［実施例］
下述の実験で使用したカルノシン酸は、英国ＳＫ１３  ７ＲＹダービーシャー州オールドグロソップ、ウェスリー通り（Ｗｅｓｌｅｙ  Ｓｔｒｅｅｔ，Ｏｌｄ  Ｇｌｏｓｓｏｐ，Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ  ＳＫ１３  ７ＲＹ，ＵＫ）のＦｌｕｏｒｏｃｈｅｍから得た。７−オキソカリトリシン酸は、独国１４４７３ポツダム（１４４７３  Ｐｏｔｓｄａｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）Ｈｅｒｍａｎｎｓｗｅｒｄｅｒ  Ｈａｕｓ  １７のＡｎａｌｙｔｉＣｏｎ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＧｍｂＨから、トタロールは米国ウィスコンシン州５３２３３ミルウォーキー、ウェスト・セント・ポール通り１００１のアルドリッチ・ケミカル・カンパニー・インコーポレーテッド（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．（１００１  Ｗｅｓｔ  Ｓａｉｎｔ  Ｐａｕｌ  Ａｖｅｎｕｅ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ  ５３２３３，ＵＳＡ））から得た。１６−ヒドロキシトタロールおよびトタロール−１９−カルボン酸メチルエステルは、米国コネチカット州ゲイローズビル、ジョージ・ワシントン・プラザ２１（２１  Ｇｅｏｒｇｅ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｐｌａｚａ，Ｇａｙｌｏｒｄｓｖｉｌｌｅ，ＣＴ  ０６７５５  ＵＳＡ）のＭｉｃｒｏＳｏｕｒｃｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．から得た。
【００７３】
モノアミン神経伝達物質、セロトニンおよびドーパミンの作用は、原形質膜輸送タンパク質によって、それらの迅速な取り込みおよびシナプスの接合部からのクリアランスを通じて調節される。中枢モノアミン作動性ニューロン中のモノアミン輸送体は９０％までの放出神経伝達物質回収率の原因であり、コカイン、アンフェタミン、および抗うつ薬などのいくつかの向精神剤の高親和性標的である。これらの薬剤は輸送体をブロックし、結果的にニューロンの取り込みを防止することで、中枢および末梢神経系の双方における細胞外神経伝達物質濃度のレベルを上昇させ、それらの行動効果および自律神経系効果に寄与する。したがって対象とする１つ以上の化合物による、セロトニンおよびドーパミン取り込みの阻害が、以下の２つの実施例によって例示される。
【００７４】
［実施例１］
［式Ｉの三環系ジテルペンおよびそれらの誘導体によるセロトニン取り込み阻害］
ヒトセロトニン再取り込み輸送体（ｈＳＥＲＴ）を安定して発現するＨＥＫ−２９３細胞を米国のバンダービルト大学（Ｖａｎｄｅｒｂｉｌｔ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）のＲ．ブレイクリー（Ｂｌａｋｅｌｙ）から得た。細胞を１０％ウシ胎仔血清、ペニシリン、ストレプトマイシン、Ｌ−グルタミン、および抗生物質Ｇ４１８を含有するダルベッコの修正イーグル培地（Ｂｉｏｃｏｎｃｅｐｔ）中で慣例的に生育させ、トリプシン処理によって継代培養した。アッセイの当日、８０％集密のフラスコからの細胞を暖かいリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）での穏やかな洗浄によって収集した。次に遠心分離によって細胞を１回洗浄し、１６０μｌの緩衝液中に細胞１０，０００個の濃度で、シグマ（Ｓｉｇｍａ）からの３５μＭパージリン、２．２ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭアスコルビン酸、および５ｍＭ  Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸を添加したクレブスリンゲル炭酸水素塩緩衝液（「Ｈｅｐｅｓ」と称される緩衝液）に再懸濁し、コーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）からの丸底ポリプロピレン９６ウェルマイクロタイタープレート内でウェルあたり１０，０００個の細胞に等分した。放射性標識［３Ｈ］セロトニン（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を２０ｎＭの濃度で添加し、穏やかに振盪しながら３７℃で４０分間インキュベーションして、細胞内へのセロトニン取り込みを判定した。この期間の終わりに、Ｔｏｍｔｅｃ  Ｍａｃｈ  ＩＩＩ  Ｍ細胞収穫器を使用して、パーキン・エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）からのＵｎｉｆｉｌｔｅｒ  ９６  ＧＦ／Ｂプレートを通した濾過によって、組み込まれなかった標識を除去した。プレート上に保持された組み込みセロトニンをパーキン・エルマーからのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−４０／Ｔｏｐｃｏｕｎｔを使用して液体シンチレーション計数によって定量化した。
【００７５】
［３Ｈ］セロトニンの添加１０分前および添加最中の特定濃度範囲（三環系ジテルペンでは０．００３〜１００μＭ、フルオキセチンでは０．０３ｎＭ〜１μＭ）におけるアッセイで、式Ｉの三環系ジテルペンおよびそれらの誘導体、および基準化合物フルオキセチンのセロトニン取り込みに対する効果をそれらの包含によって判定した。輸送体を通じたセロトニン取り込みは、式Ｉの三環系ジテルペンおよびそれらの誘導体によって用量に応じて阻害された。式Ｉの三環系ジテルペンおよびそれらの誘導体、およびフルオキセチンによるセロトニン取り込み阻害について計算したＩＣ５０値を表１に示す。
【００７６】
【表１】
0005500522.tif 000004
【００７７】
［実施例２］
［カルノシン酸によるドーパミン取り込み阻害］
ヒトドーパミン輸送体（ｈＤＡＴ）を発現するＣＨＯ−Ｋｉ／ｈＤＡＴ細胞をアッセイ前に播種した。５０ｎＭ［３Ｈ］ドーパミンの添加２０分前に、細胞（２×ｌ０５／ｍｌ）を修正トリス−ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．１中でカルノシン酸および／またはビヒクルと共に２５℃で１０分間インキュベートした。１０μＭのノミフェンシン（ドーパミン再取り込み阻害剤）存在下で、特異的シグナルを判定した。次に細胞を１％ＳＤＳ溶解緩衝液で可溶化した。ビヒクル対照と比較して５０％以上（≧５０％）の［３Ｈ］ドーパミン取り込みの低下は、顕著な阻害活性を示唆した。化合物（ノミフェンシンおよびカルノシン酸）を０．００３１６、０．０１、０．０３１６、０．１、０．３１６、１、３．１６、１０、３１．６および１００μＭの１０種の１００μＭまでの濃度でスクリーニングした。これらの同一濃度を別々の細胞群に同時に適用し、顕著な取り込み阻害が観察された場合にのみ、可能な化合物誘発性細胞毒性について評価した。
【００７８】
【表２】
0005500522.tif 000005
【００７９】
［実施例３］
［式Ｉの三環系ジテルペンおよびそれらの誘導体によるモノアミンオキシダーゼ阻害］
モノアミンオキシダーゼＡ（ＭＡＯ−Ａ）およびＢ（ＭＡＯ−Ｂ）酵素の基質として、有機アミンであるｐ−チラミンまたはベンジルアミンをそれぞれ使用した。西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）により触媒されるバニリン酸との反応により、この反応によって生成されるＨ２Ｏ２を定量化した。
【００８０】
反応はポリスチレンマイクロタイタープレート内で実施した。ＭＡＯ酵素（最終濃度２Ｕ／ｍｌ）を必要に応じてシグマからのｐ−チラミン（最終濃度０．５ｍＭ）またはシグマからのベンジルアミン（最終濃度０．５ｍＭ）のどちらか、および０．２Ｍカリウムリン酸緩衝液、ｐＨ７．６中の色素産生溶液（フルカ（Ｆｌｕｋａ）からのバニリン酸、フルカからの４−アミノアンチピリン、およびシグマからの西洋わさびペルオキシダーゼをそれぞれ最終濃度０．２５ｍＭ、０．１２５ｍＭ、および１Ｕ／ｍｌで含有する）と混合した。反応を例えばＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからのＳｐｅｃｔｒａｍａｘ  Ｍ５などのマイクロタイタープレート吸光度読取り装置内で追跡した。４０分間にわたり１５秒毎に４９５ｎｍでの吸光度を読取り、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからのＳＯＦＴｍａｘＰｒｏを使用して、直線回帰によって初期反応速度を計算した。
【００８１】
基質とのインキュベーション１０分前および添加最中の０．０３〜１００μＭの特定濃度範囲におけるアッセイで、式Ｉで表される三環系ジテルペンおよびそれらの誘導体のモノアミンオキシダーゼ酵素に対する効果をそれらの包含によって判定した。反応のＨＲＰ触媒部分に対する化合物の効果を判定するために、ＭＡＯ酵素をモレキュラープローブス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）からのＨ２Ｏ２（最終濃度０．２ｍＭ）で置換した。ＭＡＯ−ＡおよびＭＡＯ−Ｂを含有する反応はどちらも、式Ｉで表される三環系ジテルペンおよびそれらの誘導体によって用量に応じて阻害されたのに対し、対照反応は影響されなかった。カルノシン酸、カルノシン酸−１２−メチルエーテル、および２０−デオキソ−カルノソールによるモノアミンオキシダーゼ活性阻害について測定されたＩＣ５０値を表３に示す。
【００８２】
【表３】
0005500522.tif 000006
【００８３】
［実施例４］
［Ｐｏｒｓｏｌｔ水泳試験］
強制水泳試験（ＦＳＴ）は、ラットにおける抗うつ薬様化合物のスクリーニングのために１９７７年に最初に報告され（Ｐｏｒｓｏｌｔら、１９７７年、Ｎａｔｕｒｅ  ２６６：７３０〜７３２頁）、後にマウスを試験するために修正された（Ｐｏｒｓｏｌｔら、Ａｒｃｈ．Ｉｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｅ、２２９：３２７〜３３６頁）。ラットまたはマウスは、逃げられない水の入ったシリンダー内で泳ぐことを強制されると最初は活発な逃避に向けた活動を示すが、次第に頭を水の上に保つのに必要な最少の動きだけするようになるという「絶望行動」が実証された。試験は、うつ病に対して既知の治療的活性がある一連の薬剤に感応性であることが示され、そのいくつかは、それまで既存の行動モデルにおいて有効性が示されていなかった。
【００８４】
［カルノシン酸］
マウスを個別に、１３．５ｃｍの深さの水（２２±０．５℃）を含有するシリンダー（２４．５ｃｍ高さ、１９．５ｃｍ内径）に６分間入れ、最初の２分間は活発な活動を含むので、試験の最後の４分間において対象とする行動パラメーターを分析した。６本のシリンダーをパースペックス（Ｐｅｒｓｐｅｘ）箱に入れることで、６匹のマウスを同時に試験できるようにした。
【００８５】
ドイツ国バートホンブルク（Ｂａｄ  Ｈｏｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）のＴＳＥ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ  ＧｍｂＨからのＶｉｄｅｏＭｏｔ２ソフトウェアの使用を通じて、水泳試験の自動モニタリングを可能にした。全ての実験はモノクロＣＣＤカメラを通じて観察した。ソフトウェアプログラム中に設定されたパラメーターにより判定される休息：移動運動、および停止：開始閾値は、動きが記録されるために変化しなくてはならないピクセル数を判定して、マウスが泳いでいるかまたは休息しているかをソフトウェアが判定できるようにした。自動的に記録されるパラメーターには、休息時間および移動運動時間（ｍｓ）、％休息および％移動運動、移動距離（ｃｍ）、移動速度（ｃｍ／ｓ）、および停止数が含まれる。
【００８６】
カルノシン酸は、１０、２０、および３０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．、試験３０分前）および２００ｍｇ／ｋｇ（ｐ．ｏ．、試験２４、５、および１時間前）で評価し、ビヒクル対照群および選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）フルオキセチン（１０ｍｇ／ｋｇ）および三環系抗うつ薬イミプラミン（３２ｍｇ／ｋｇ）の２種の基準化合物と比較した。米国ノースカロライナ州カリーのＳＡＳインスティテュート・インコーポレーテッド（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ．（Ｃａｒｙ，ＮＣ，ＵＳＡ））からのフィッシャー（Ｆｉｓｈｅｒ）のＰＬＳＤ法（Ｓｔａｔ  Ｖｉｅｗ）を使用して、処置群と未処置対照群とを比較してデータを分析した。
【００８７】
［結果］
【００８８】
【表４】
0005500522.tif 000007
【００８９】
したがってＦＳＴで試験した全ての用量のカルノシン酸は、ｉ．ｐ．およびｐ．ｏ．双方の投与に続いて、双方の基準化合物と比較できる程度に不動行動を顕著に低下させ、したがって抗うつ薬様活性が示唆された。
【００９０】
［実施例５］
［ガラス玉覆い隠し試験］
「防御的覆い隠し」行為は、不快な味の液体で充填された給水口（Ｗｉｌｋｉｅら、１９７９年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ａｎａｌ  Ｂｅｈａｖ、３１：２９９〜３０６頁）または電気ショック棒（Ｐｉｎｅｌら、１９７８年、Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｐｈｙｓ．Ｐｈｙｓｃｈｏｌ．９２：７０８〜７１２頁）などの侵害性の対象物を埋めるラットによって示される。ガラス玉覆い隠し試験は、このような試験の修正法として考案された。Ｐｏｌｉｎｇら、１９８１年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ａｎａｌ．ｏｆ  Ｂｅｈａｖ．３５：３１〜４４頁では、１０または２１日間連続して、ラットを毎日それぞれ２５個のガラス玉を入れた個々のケージに曝露した。１０日間にわたり毎日、または２１日間の曝露の２４時間後に埋められたガラス玉の数を数えた。著者らは、ガラス玉の覆い隠しが、目新しさによって、またはあらゆる侵害性の刺激に起因して決まるのではないことを報告した。
【００９１】
マウスによるガラス玉覆い隠し行為は、鎮静を誘発しない用量において、ＳＳＲＩ（例えばフルボキサミン、フルオキセチン、シタロプラム）、三環系抗うつ薬（例えばイミプラミン、デシプラミン）、および選択的ノルアドレナリン取り込み阻害剤（例えばレボキセチン）に加えて、一連のマイナー（例えばジアゼパム）およびメジャー（例えばハロペリドール）トランキライザーに感応性であることが報告されている（Ｂｒｏｅｋｋａｍｐら、１９８６年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａ．１２６：２２３〜２２９頁）。モデルは、不安様または強迫性行動のどちらかを反映してもよい（ＤＥ  ＢＯＥＲら、２００３年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４６３：１４５〜１６１頁参照）。
【００９２】
ここで適用される方法は、前出のＢｒｏｅｋｋａｍｐらに記載される方法に従う。床上に５ｃｍのおがくず、ケージ中央にまとめて２５個のガラス玉（直径１ｃｍ）を入れた透明プラスチックケージ（３３×２１×１８ｃｍ）に、マウス（処置群あたりｎ＝１５匹）を個別に入れた。第２のひっくり返されたケージを蓋にした。３０分の試験期間の終わりに、おがくずで（少なくとも３分の２）覆われたガラス玉の数を数えた。試験は、薬剤処置プロトコルに関して何も知らない研究者によって実施された。
【００９３】
試験の前に、１０匹の未感作マウスを各ケージに１５分間入れておくことで、全ての試験ケージおよびガラス玉を「含浸」した。
【００９４】
カルノシン酸（３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇ）および２０−デオキシ−カルノソール（３０、１００、および２００ｍｇ／ｋｇ）を試験の３０分前に腹腔内投与（ｉ．ｐ．）して、ビヒクル対照群と比較した。同一実験条件下で、選択的セロトニン／ノルアドレナリン再取り込み阻害剤であるフルオキセチン（３２ｍｇ／ｋｇ）およびベンラファキシン（１６ｍｇ／ｋｇ）を投与し、基準物質として使用した。
【００９５】
独立スチューデントｔ検定を使用して処置群とビヒクル対照とを比較し、データを分析した。
【００９６】
［結果］
【００９７】
【表５】
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【００９８】
試験したカルノシン酸の最高用量（３０ｍｇ／ｋｇ）は、ＳＳＲＩフルオキセチンと同様にガラス玉覆い隠し行為を明らかにかつ顕著に低下させたので、抗不安薬様活性が示唆された。
【００９９】
【表６】
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【０１００】
２０−デオキシ−カルノソールはガラス玉覆い隠し行為をＳＳＲＩフルオキセチンと同様に、および選択的セロトニン／ノルアドレナリン−再取り込み阻害剤であるベンラファキシンと同程度に、用量に応じてかつ顕著に低下させたので、抗不安薬様活性が示唆される。
【０１０１】
［実施例６］
［マウスの明暗箱試験における、亜慢性経口胃管栄養法後のカルノシン酸の効果］
抗不安活性を検出する本方法は、Ｃｒａｗｌｅｙ、１９８１年、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｅｈａｖ．、１５：６９５〜６９９頁に記載された方法に従う。抗不安薬は明区画で過ごされる時間を増大させる。
【０１０２】
動物を半分（２５×２７×２７ｃｍ）が明るく開放され、別の半分（２０×２７×２７ｃｍ）が暗く閉鎖された２区画箱の明区画に入れた。３分間の試験中に、各区画で過ごされる時間ならびに動物が横断して別の側に行く回数を評点した。群あたり１５匹のマウスを試験した。試験は盲検で実施した。
【０１０３】
試験の２４、５、および１時間前に経口胃管栄養法（ｐ．ｏ．）によって投与される３種の用量（１００、２００、４００ｍｇ／ｋｇ体重）でカルノシン酸を評価し、ビヒクル対照群（コーン油）と比較した。カルノシン酸をコーン油（「ビヒクル」）に溶解させた。試験の１時間前にクロバザム（３２ｍｇ／ｋｇ、ｐ．ｏ．）を投与して基準物質として使用した。実験の盲検化を維持するために、この群のマウスは試験の２４および５時間前にビヒクルの追加的投与を受けた。
【０１０４】
【表７】
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【０１０５】
カルノシン酸（１００、２００および４００ｍｇ／ｋｇ）は、ビヒクル対照（それぞれ＋１９％、＋１０％、および＋３８％）と比較して、明区画で過ごされる時間を全体的に増大させ、４００ｍｇ／ｋｇ（ｐ＜０．０５）で顕著に増大させた。これは横断数に影響しなかった。
【０１０６】
［実施例７］
［軟ゼラチンカプセルの調製］
次の成分を含んでなる軟ゼラチンカプセル（５００ｍｇ）を調製する。
【０１０７】
【表８】
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【０１０８】
軽度慢性気分変調の治療のために、３ヶ月間にわたり毎日２個のカプセルをヒト成人に投与してもよい。
【０１０９】
［実施例８］
［軟ゼラチンカプセルの調製］
次の成分を含んでなる軟ゼラチンカプセル（６００ｍｇ）を調製する。
【０１１０】
【表９】
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【０１１１】
月経前症候群および月経前不快気分障害の治療のために、月経サイクルの好ましくは後半に、１４日間にわたり毎日１個のカプセルを服用すべきである。
【０１１２】
［実施例９］
［錠剤の調製］
次の成分を含んでなる４００ｍｇの錠剤を調製する。
【０１１３】
【表１０】
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【０１１４】
一般的健康、元気づけ、およびストレス改善のためには、３ヶ月間にわたり毎日２回１個の錠剤を服用する。
【０１１５】
［実施例１０］
［即席着香清涼飲料の調製］
【０１１６】
【表１１】
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【０１１７】
全ての成分を混合して５００μｍのふるいを通した。得られた粉末を適切な容器に入れて、管状配合機上で少なくとも２０分間混合した。飲料を調製するために、１２５ｇの得られた混合粉末を取って水を充填して１リットルの飲料にする。
【０１１８】
即席飲料清涼飲料は、一食あたり（２５０ｍｌ）約３０ｍｇのカルノシン酸を含有する。
【０１１９】
一般的健康のための強化剤として、１日あたり２食（２４０ｍｌ）を飲用すべきである。
【０１２０】
［実施例１１］
［強化ノンベークドシリアルバーの調製］
【０１２１】
【表１２】
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【０１２２】
カルノシン酸を脱脂粉乳と予め混合して、遊星形ボールミキサーに入れた。コーンフレークおよびライスクリスピーを添加して、全てを穏やかに混合した。次に乾燥させ切断したリンゴを添加した。第１の調理鍋中で、糖、水、および塩を上記の量で混合した（溶液１）。第２の調理鍋中で、グルコース、転化糖シロップ、およびソルビトールシロップを上記の量で混合した（溶液２）。ベーキング油脂、パーム核油、レシチン、および乳化剤の混合物が脂肪相である。溶液１を１１０℃に加熱する。溶液２を１１３℃に加熱して、次に冷水浴中で冷却する。その後溶液１および２を合わせる。脂肪相を水浴中で７５℃で溶解する。脂肪相を溶液１および２を合わせた混合物に添加する。リンゴ香料およびクエン酸を液体糖−脂肪ミックスに添加する。液体塊を乾燥成分に添加して、遊星形ボールミキサー内で良く混合する。塊を大理石板上にのせて、所望の厚さに伸ばす。塊を室温に冷却して裁断する。ノンベークドシリアルバーは、一食（３０ｇ）あたり約２５ｍｇのカルノシン酸を含有する。一般的健康および元気づけのために、１日あたり１〜２個のシリアルバーを摂食すべきである。
【図面の簡単な説明】
【０１２３】
【図１】式ＩＩＩ〜ＶＩＩおよびＸＶＩの化合物を示す。
【図２】式Ｘ〜ＸＩＩＩの化合物を示す。
【図３】式ＸＩＶおよびＸＶの化合物を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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