(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌の治療のための、必要とするヒト患者への投与で使用するために、パクリタキセル１回量ユニット０．０１ｍｇ〜１．１ｍｇ／前記患者体重ｋｇで投与するための、少なくとも１つのカチオン脂質３０〜９９．９モル％、少なくとも０．１モル％の量でパクリタキセル及び少なくとも１つの中性及び／又はアニオン脂質０〜７０モル％を含有するカチオンリポソーム製剤を含有する医薬組成物であって、
前記カチオンリポソーム製剤の投与が、
（ｉ）最初の週に３〜５回、その後に投与なしで１〜３週間の間隔、及びこのプロトコルの１回または複数回の繰り返し、
（ｉｉ）最初の週に１回、その後に投与なしで１〜３週間の間隔、及びこのプロトコルの１回または複数回の繰り返し、又は
（ｉｉｉ）１週又は連続した複数週にわたって１週間に１回
である医薬組成物。
【請求項２】
薬剤耐性細胞の発生に関連しまたは付随する疾病の予防又は治療をして、薬剤耐性腫瘍の予防又は治療をするための、必要とするヒト患者への投与で使用するために、パクリタキセル１回量ユニット０．０１ｍｇ〜１．７ｍｇ／前記患者体重ｋｇで投与するための、少なくとも１つのカチオン脂質３０〜９９．９モル％、少なくとも０．１モル％の量でパクリタキセル及び少なくとも１つの中性及び／又はアニオン脂質０〜７０モル％を含有するカチオンリポソーム製剤を含有する医薬組成物であって、
前記カチオンリポソーム製剤の投与が、
（ｉ）最初の週に３〜５回、その後に投与なしで１〜３週間の間隔、及びこのプロトコルの１回または複数回の繰り返し、
（ｉｉ）最初の週に１回、その後に投与なしで１〜３週間の間隔、及びこのプロトコルの１回または複数回の繰り返し、又は
（ｉｉｉ）１週又は連続した複数週にわたって１週間に１回
である医薬組成物。
【請求項３】
腫瘍の疾病に関連しまたは付随する転移の発現又は進行の予防又は治療のための、必要とするヒト患者への投与で使用するために、パクリタキセル１回量ユニット０．０１ｍｇ〜１．７ｍｇ／前記患者体重ｋｇで投与するための、少なくとも１つのカチオン脂質３０〜９９．９モル％、少なくとも０．１モル％の量でパクリタキセル及び少なくとも１つの中性及び／又はアニオン脂質０〜７０モル％を含有するカチオンリポソーム製剤を含有する医薬組成物であって、
前記カチオンリポソーム製剤の投与が、
（ｉ）最初の週に３〜５回、その後に投与なしで１〜３週間の間隔、及びこのプロトコルの１回または複数回の繰り返し、
（ｉｉ）最初の週に１回、その後に投与なしで１〜３週間の間隔、及びこのプロトコルの１回または複数回の繰り返し、又は
（ｉｉｉ）１週又は連続した複数週にわたって１週間に１回
である医薬組成物。
【請求項４】
一月量が、パクリタキセル１．０〜１５ｍｇ／体重ｋｇである請求項１から３までのいずれか１項記載の組成物。
【請求項５】
一月量が、パクリタキセル１〜７．５ｍｇ／体重ｋｇである請求項１から４までのいずれか１項記載の組成物。
【請求項６】
前記パクリタキセル１回量ユニットが、パクリタキセル０．２７５ｍｇ／体重ｋｇ、０．５５〜１．１ｍｇ／体重ｋｇ及び１．６５ｍｇ／体重ｋｇから選択される請求項２から５までのいずれか１項記載の組成物。
【請求項７】
前記パクリタキセル１回量ユニットが、０．２７５〜０．５５ｍｇ／体重ｋｇである請求項１から５までのいずれか１項記載の組成物。
【請求項８】
少なくとも１つの更なる活性成分の有効量及び／又は温熱療法及び／又は放射線療法及び／又は寒冷療法と共同での、同時の、別々の又は一連の併用療法のための請求項１から７までのいずれか１項記載の組成物であって、
前記更なる活性成分は、細胞毒性の及び細胞分裂抑制性の物質、化学療法剤並びに免疫学的活性物質の群から選択されたものであって、パクリタキセル、アルキル化剤である白金含有化合物であるシスプラチン及びカルボプラチン、ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤であるカンプトテシン及びドキソルビシン並びにＲＮＡ／ＤＮＡ代謝拮抗物質である５−フルオロウラシル及びゲムシタビンの群から選択された、抗腫瘍剤若しくは有糸分裂阻害剤、または、
前記更なる活性成分は、致命的なアナフィラキシー反応を妨げるための、ステロイド、抗ヒスタミン剤、Ｈ２レセプターアンタゴニスト及びこれらの組み合わせの群から選択された過敏反応を減少させるか若しくは消去する化合物である、ラニチジン、デキサメタゾン、ジフェンヒドラミン、ファモチジン、ヒドロコルチゾン、クレマスチン、シメチジン、プレドニゾロン、クロルフェニラミン、クロルフェナミン、マレイン酸ジメチンデン及びプロメタジンの群から選択され、または、
前記更なる活性成分は、細胞周期調節剤、薬剤耐性を戻す物質であるベラパミル、血管作動性物質である抗高血圧剤及びカチオンリポソームと血液成分との相互作用を変更する物質であるプロタミンの群から選択された化学増感剤から選択される組成物。
【請求項９】
前記カチオンリポソーム製剤が、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＰＣ、及びパクリタキセル、５０：４７：３モル％を含有する、請求項１から８までのいずれか１項記載の組成物。
【請求項１０】
膵癌、手術不可能な膵癌、消化管癌、肺癌、結腸直腸癌又は胃癌、乳癌、前立腺癌、及びメラノーマからなる群から選択された癌の治療のための、請求項１から９までのいずれか１項記載の組成物。
【請求項１１】
前記カチオンリポソーム製剤は、平均粒子直径１００ｎｍ〜３００ｎｍを有するリポソームを含有する、請求項１から１０までのいずれか１項記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の詳細な説明
本発明は、必要とするヒト患者への投与のための、パクリタキセルを含有する医薬組成物の使用に関する。
【０００２】
増強した有糸分裂に関連する疾病に苦しむヒト患者のための治療薬としての、有糸分裂阻害剤、例えばタキサンの使用は公知技術において公知である。
【０００３】
パクリタキセルは、独特の作用機構及び広い範囲の抗増殖性活性を有し、これはパクリタキセルが微小管に結合し、チューブリン重合を促進し、この構築された微小管を安定化するためである。この結果、パクリタキセルは細胞周期を前期でブロックし、Ｇ２／Ｍ期での細胞の蓄積を生じる。
【０００４】
残念ながら、パクリタキセルは水中での極めて低い溶解性を有し、これにより適した剤形を提供することが困難になる。最近では、パクリタキセルはクレモホールＥＬ（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ）（ポリエトキシル化されたひまし油）及びエタノールを５０：５０（ｖｏｌ／ｖｏｌ）の比で含有する媒体中で処方され、投与される。前記溶液を１：１０で食塩水中で、ヒトに投与する前に希釈する。しかし、様々な深刻な副作用、例えば過敏反応及び高血圧性反応、腎毒性及び神経毒性などが、クレモホールＥＬ処方のせいで患者で報告されてきた。
【０００５】
更に、パクリタキセルは（その他の抗腫瘍剤のうちで）、有効な、確立した標準的な抗腫瘍剤（｛Ｒｏｗｉｎｓｋｙ，  １９９５＃１｝，｛Ａｗａｄａ，  ２００２＃２｝，｛Ｓｅｉｄｍａｎ，  ２００３＃３｝，｛Ｒｏｍａｎｉｎｉ，  ２００３＃４｝）ではあるが、薬剤不応答性の腫瘍及び転移がしばしば癌患者で観察される（{Ｂｌｏｍ，  １９９６＃５｝，｛Ｍｏｄｉ，  ２００２＃６｝，｛Ｏｚｏｌｓ，  ２００３＃７｝）。遺伝的に不安定な、急速に分裂する腫瘍細胞は、この選択された抗癌剤の成長阻害効果を克服する能力を獲得する（｛Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ，１９８８＃８｝，｛Ｋｅｒｂｅｌ，１９９１  ＃９｝）。前記能力は通常は単独の薬剤（二次治療）に限定されずに、この最初の耐性の発生後に使用されるその他の薬剤にまで及ぶ。従って、この現象は多剤耐性（ＭＤＲ）と呼ばれる。利用可能でかつ承認された抗腫瘍剤の数が多数の癌の種類に関わらず非常に限定されているために、多数の患者は、彼らの癌組織がＭＤＲを示し屈する。この明白な問題は従って、既にそれぞれの薬剤に対して耐性のある、薬剤耐性腫瘍、特に薬剤耐性細胞を致死するための方法及び手段を見出すことである。
【０００６】
いくつかのアプローチが、上述の問題を取り扱うために試みられた。従来の戦略は、最大耐量（ＭＴＤ）にまで用量を上昇させ、かつ全ての腫瘍細胞を可能な限り素早くかつ完全に根絶することを試みることである（｛Ｓｃｈｕｅｎｅｍａｎｎ，  １９９９＃１０｝，｛Ｈｅｉｄｅｍａｎｎ，  １９９７＃１１｝）。前記戦略が深刻な副作用を引き起こし、より長期間へと延長可能でないことは明白である。従って、前記治療スケジュールは、ＭＴＤでの１つの短い治療期間（通常１日間〜１週間）と、患者を不可避な副作用から回復させるための数週間（通常３〜４週間）の治療なしの間隔との周期からなる（｛Ｓｃｈｕｅｎｅｍａｎｎ，  １９９９＃１０｝，｛Ｈｅｉｄｅｍａｎｎ，  １９９７＃１１｝，｛Ｒｏｍａｎｉｎｉ，  ２００３＃４｝）。多数の場合に、腫瘍成長はこの薬剤なしの期間の間に再開してもよい。最も重要なことに、腫瘍細胞が高レベルの耐性を発生し、これにより前記腫瘍細胞がＭＴＤでの薬剤濃度を収容することが可能である多数の患者では前記アプローチは失敗する。この患者は、治療抵抗性になる。
【０００７】
最も一般的な解決法は、治療を第２の薬剤で開始することである（｛Ｂｌｏｍ，  １９９６＃５｝，  ｛Ａｗａｄａ，  ２００２＃２｝，  ｛Ｓｅｉｄｍａｎ，  ２００３＃３｝，  ｛Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ，  ２００３＃１２｝，  ｛Ｔｈｉｇｐｅｎ，  ２００３＃１３｝）。最も良好な場合では、この二次治療は奏功し、かつこの患者は治癒する。一般的な経験ではしかしながら、腫瘍が一定の時間の間応答し、これにより前記腫瘍の一時的な退縮を生じるのみである。この後では腫瘍は前記の第２の薬剤に対しても耐性になってしまう。前記戦略を続行すると、全ての使用可能な抗癌剤に対して抵抗性である、多剤耐性腫瘍の発生を最終的に生じる（｛Ｂｌｏｍ，  １９９６＃５｝，｛Ｓｅｉｄｍａｎ，  ２００３＃３｝，｛Ｔｈｉｇｐｅｎ，  ２００３＃１３｝）。その他の可能性は、患者をすぐさま２以上の薬剤の併用により処置することである（｛Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ，  ２００３＃１２｝，｛Ｋｕｅｎｅｎ，  ２００２＃１４｝，｛Ｓｌｅｄｇｅ，  ２００３＃１５｝，｛Ｏｚｏｌｓ，  ２００３＃７｝，｛Ｒｅｃｋ，  ２００３＃１７｝，｛Ｒｏｍａｎｉｎｉ，  ２００３＃４｝）。前記戦略はより成功する可能性があり、というのは二重の薬剤耐性の発生の見込みを減少させるからである。しかし前記戦略は、時間及び費用集中的に適した薬剤の組み合わせを調査する必要がある。第２の不利な点は、この副作用は上昇する可能性もあることである（｛Ｋｕｅｎｅｎ，  ２００２＃１４｝，｛Ｏｚｏｌｓ，  ２００３＃７｝）。前記の治療窓口は同時に小さくなり、この毒性作用は前記のイメージした治療上の利点をカバーしてしまう可能性がある。この場合にも、多剤耐性が生じ、前記の治療は無効になる可能性がある（｛Ｚｉｍｐｆｅｒ−Ｒｅｃｈｎｅｒ，２００３＃１８｝，｛Ｓｌｅｄｇｅ，２００３＃１５｝，｛Ｓｌｅｄｇｅ，２００３＃１６｝，｛Ｏｚｏｌｓ，２００３  ＃７｝）。
【０００８】
前記の従来の治療戦略でのネガティブな経験の結果は、上述の治療の選択肢を拡大するためのより多くの新規の薬剤を開発することである。明らかにこれは、結局は多くの場合で治療抵抗性の腫瘍を生じる、より有効な薬剤のための極めて時間及び費用集中的なレースである。近年ではこの認識により、腫瘍の耐性を回避するための新規のアプローチが導かれた。これは前記ＭＤＲが、細胞に化学療法剤を排出させる酵素の過剰発現により引き起こされるという仮定に基づく。前記酵素のカテゴリーのうち最も有名なメンバーは、ｐ−糖タンパク質（ｐ−ｇｐ）と呼ばれる。これは細胞質膜に存在し、ＡＴＰにより駆動された方法（｛Ｎｏｂｍａｎｎ，  ２００１＃１９｝，｛Ｔｈｏｍａｓ，  ２００３＃２０｝）で、パクリタキセル又はドキソルビシンなどの化合物を排出する（｛Ｈａｒｋｅｒ，  １９８５＃２１｝，｛Ｆｅｌｌｎｅｒ，  ２００２＃２２｝，｛Ｋｉｅｓｅｗｅｔｔｅｒ，  ２００３＃２３｝）。この概念は、ｐ−ｇｐ媒介薬剤耐性を逆転させるためのｐ−ｇｐ阻害剤の開発を導いた。従って、前記の種類の分子に対して化学増感剤（ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ）との用語が造語される。試験した最初の例の１つは、ベラパミルである。臨床試験はしかしながら、ことによると低い比活性のせいである、不十分な結果を示した（｛Ｔｈｏｍａｓ，  ２００３＃２０｝，  ｛Ｋｏｈｌｅｒ，  ２００３＃２４｝）。更なる研究により第２世代の化合物が生じ、これはやはり臨床的に適用可能でないことが見出された（｛Ｌｅｏｎａｒｄ，  ２００２＃２５｝，｛Ｔｈｏｍａｓ，  ２００３＃２０｝）。今日、第３世代のいくつかの物質（１つはタリキダール（ｔａｒｉｑｕｉｄａｒ）として公知である）が臨床試験にある（｛Ａｇｒａｗａｌ，  ２００３＃２６｝，｛Ｃａｌｌｉｅｓ，  ２００３＃２７｝）。前記化合物の有用性及び広い適用性はしかし、未だ不明である（｛Ｌｅｏｎａｒｄ，  ２００２＃２５｝，  ｛Ｔｈｏｍａｓ，  ２００３＃２０｝）。第１世代の化学増感剤に比較してより改善してはいても、第３世代化合物もまた副作用を引き起こし、全身に対して予期せぬ結果を有する可能性がある。大規模な臨床試験が必要とされ、これまでのところ将来に前記アプローチが一般的な実施となるかは不明瞭である（｛Ｌｅｏｎａｒｄ，  ２００２＃２５｝，｛Ｔｈｏｍａｓ，  ２００３＃２０｝）。
【０００９】
様々なデリバリー系がパクリタキセルの効果を促進するため及び／又は毒性を減少させるために使用されてきた。リポソームは、水溶性、かくしてより低い毒性と組み合わさった効率を促進するために開発された多数のキャリヤーのうちの１つである。
【００１０】
Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，６４８，０９０，Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，４２４，０７３及びＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．６，１４６，６５９（Ｒａｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．）は、哺乳類の癌の治療方法のために、リポソームによりカプセル化したパクリタキセルを提供する。前記特許はリポソームの治療有効量の医薬組成物をこのホストに投与する方法を開示し、前記医薬組成物はリポソーム形成材料、カルジオリピン、及びパクリタキセルのような薬剤、又はパクリタキセルの抗腫瘍性誘導体、又はこの混合物を、医薬的に許容可能な添加物と共に含む。Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．６，１４６，６５９では、タキサンを一時間より短い時間にわたって７５〜３００ｍｇ／ｍ２の量で投与する（その際、前記タキサンはリポソームによりカプセル化されている）ことによるタキサンの患者への投与方法が提供される。前記特許中で開示されたリポソームは負に帯電している。
【００１１】
ＭｃＤｏｎａｌｄ  ｅｔａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，８３７，２８３，の開示から、正に帯電したリポソームは血管新生内皮細胞を特異的に標的とすることが公知である。ヒト患者に関する臨床データは提示されていない。
【００１２】
従って、本発明の基礎をなす課題は、パクリタキセルの、これを必要とする被験体への治療有効量での、深刻な副作用のない投与方法を提供することである。特に、公知技術の製剤、例えばクレモホール製剤の適用におけるパクリタキセルの高い初期治療量を用いる必要性によって引き起こされる副作用の発生は、避けることが望ましい。
【００１３】
本出願発明において、パクリタキセルを含有するカチオンリポソーム製剤の投与のヒトに関する臨床データが提示される。
【００１４】
意外にも、活性成分であるパクリタキセルの高含量を有するカチオンリポソーム製剤の投与が、これを必要とするヒト患者の血管新生内皮細胞に選択的に影響を与えることが見出された。従って本発明は前記患者への、パクリタキセル約０．２５〜約１００ｍｇ、特に〜約６０ｍｇ／前記患者体重ｋｇの一月量での、カチオン脂質約３０〜約９８モル％、少なくとも約２モル％の量でパクリタキセル及び中性及び／又はアニオン脂質約０〜約７０モル％を含有するカチオンリポソーム製剤の投与を含む。
【００１５】
本発明の更なる観点は、パクリタキセル約０．２５〜約６０ｍｇ／前記患者体重ｋｇの一月量での、少なくとも１つのカチオン脂質約３０モル％〜約９９．９モル％、少なくとも約０．１モル％の量でパクリタキセル及び少なくとも１つの中性及び／又はアニオン脂質約０〜約７０モル％を含有するカチオンリポソーム製剤の、これを必要とするヒト患者への投与を含む。
【００１６】
本明細書で使用された用語「約」は、所定の値からの±５％のずれを表す。
【００１７】
上述した製剤は、多剤耐性の腫瘍及び／又は腫瘍転移の予防及び／又は治療に、場合により、その他の治療プロトコルと併用した多剤耐性の腫瘍及び／又は腫瘍転移の予防及び／又は治療に特に適する。
【００１８】
本発明の利点は以下のようである：
−多量の活性成分
−選択的ターゲティング
−改善した有効性
−多剤耐性の回避（様々な標的）
−耐性細胞を直接的に致死させることにより薬剤耐性に影響を与える
−転移に影響を与える
−従来の化学療法、又は中性又はアニオンリポソームに比較してより低い副作用
−疾病に関連した痛みの減少
−生活の質の改善
−治療の間の体重の安定化
−従来の治療方式との協力効果。
【００１９】
本発明の医薬組成物は、約０．２５〜約１００ｍｇ、特に〜約６０ｍｇのリポソーム状パクリタキセル／患者体重ｋｇ（ｂｗ）、有利には約０．５〜約３０ｍｇのリポソーム状パクリタキセル／ｋｇ  ｂｗ、より有利には約１．０〜約１５ｍｇのリポソーム状パクリタキセル／ｋｇ  ｂｗの一月量で投与されてよい。平均的にヒト患者は約７０ｋｇ体重を有し、約１７２ｃｍの高さである。
【００２０】
投与計画は、１日間に複数回から１ヶ月間に複数回の範囲にあってよく、このそれぞれの回は１日間〜３週間の間隔により隔てられている。この全治療期間は有利には少なくとも１ヶ月間である。
【００２１】
前記医薬組成物はまた、少なくとも３ヶ月間の、少なくとも４ヶ月間の、少なくとも６ヶ月間の、又は少なくとも１２ヶ月間の、及び６ヶ月間までの、１２ヶ月間までの、１８ヶ月間までの、２４ヶ月間までの、またはより長期の長期投与にも適している。
【００２２】
長期治療においてさえも、薬剤耐性又は有害な副作用、例えば脱毛症、腎症、又はその他は通常は生じない。更に、通常は前投薬、コルチコステロイド又は抗ヒスタミン剤などの前投薬は必要でない。
【００２３】
本発明による医薬組成物は、約０．０１〜１００ｍｇ、特に〜約６０ｍｇのリポソーム状パクリタキセル／体重ｋｇの１回量ユニット（ｓｉｎｇｌｅ  ｄｏｓｅ  ｕｎｉｔ）方式で投与されてよい。本発明の有利な実施態様において、約０．０１〜約１０ｍｇ、例えば約０．０５〜約５ｍｇのリポソーム状パクリタキセル／体重ｋｇが１回量ユニットで投与される。有利には、１回量ユニットにつき０．１〜２．５ｍｇのリポソーム状パクリタキセル／体重ｋｇが投与される。
【００２４】
更なる有利な実施態様において、一月量につき約１〜約１０ｍｇのリポソーム状パクリタキセル／ｂｗ  ｋｇが投与される。また更なる有利な実施態様において、一月量につき約２０〜約６０ｍｇのリポソーム状パクリタキセル／ｋｇ  ｂｗが投与される。更なる有利な実施態様において、一月量につき約１〜約７．５ｍｇのリポソーム状パクリタキセル／ｂｗ  ｋｇが投与される。
【００２５】
ヒト患者に対する適用のためのリポソーム状パクリタキセルの適した用量は、約０．０１〜２．５、有利には０．０２〜１．７、より有利には０．０５〜０．５ｍｇ／ｋｇ  ｂｗの量で、少なくとも１日１回、例えば１日につき２回、３回、又はそれ以上；隔日で、約０．０１〜５．０、有利には０．０２〜２．５、より有利には０．０５〜１．７ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ；１週間に１回で、約０．０１〜１０、有利には０．０２〜５．０、より有利には０．０５〜２．５ｍｇ／ｋｇ  ｂｗである。
【００２６】
一月量は有利には複数回の１回量ユニットで投与される。低用量の複数回の投与は、単回の高用量の投与と少なくとも同じくらい効果的であってよい。前記治療間隔の間に、前記の用量ユニット及び投与間隔は、一定のままであってよい。その一方で、前記用量ユニットは前記治療間隔の間に増加してよく、例えば開始用量で始め、一段階又は複数段階で、前記開始用量の３又は４倍より高くてよい固定用量へと漸増させる。付加的に又は代替的に、前記の単回投与の間の治療間隔を変化させてよく、例えば前記治療期間の間に減少させるか上昇させてよい。
【００２７】
単回投与のための有利な用量は約０．２５〜約１．７５ｍｇ／ｋｇ  ｂｗである。
【００２８】
前記カチオンリポソーム製剤の投与を含む更なる有利な治療プロトコルは、
（ｉ）最初の週に少なくとも３回、特に３〜５回、その後に投与なしで１〜３週間の間隔、及び場合によりこのプロトコルの１回又は複数回の繰り返し、その際、この一月量は有利には約１〜約１０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ、特に約５〜約７．５ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ、
（ｉｉ）最初の週に１回、その後に投与なしで少なくとも１週間、特に１〜３週間の間隔、及び場合によりこのプロトコルの１回又は複数回の繰り返し、その際、この一月量は有利には約２０〜約１００ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ、特に約２０〜約６０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗである。
（ｉｉｉ）１週又は連続した複数週にわたって、有利には少なくとも４週にわたって、１週間に１回、その際、この一月量は有利には約１〜約７．５ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ、特に約３〜約６ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ、又は
（ｉｖ）  （ｉ）、（ｉｉ）、及び／又は（ｉｉｉ）の組み合わせ
である。
【００２９】
ヒト医薬品での適用のために、本発明の医薬組成物は有利には、有利には約９ｍｇ〜約３７００ｍｇ、特に〜約２２３７ｍｇ／ヒト体表（ｂｓ）ｍ２、有利には約１８〜約１１６８ｍｇ／ｍ２  ｂｓ、特に有利には約３７〜約５８４ｍｇ／ｍ２  ｂｓの一月量で投与されてよい。平均的に、ヒト患者は約１．８４ｍ２の体表を有する。従って、体重７０ｋｇ及び身長１７２ｃｍの平均的な人間に対して、一月量、１回量その他のための有利な値は、上記ではｍｇ／体重（ｂｗ）ｋｇで示されてきたが、ヒト適用のためには公知の方法により、種特異的な因数でのかけ算によってｍｇ／ヒト体表（ｂｓ）ｍ２の相応する値に変換されてよい。
【００３０】
更なる観点において、本発明の前記カチオンリポソーム製剤は、少なくとも１つのカチオン脂質約３０〜約９９．９モル％、有利には〜約９８モル％、少なくとも約０．１モル％、有利には少なくとも約２モル％の量でパクリタキセル及び少なくとも１つの中性及び／又はアニオン脂質約０〜約７０モル％を含有し、少なくとも１つの更なる活性成分の有効量及び／又は温熱療法及び／又は放射線療法及び／又は寒冷療法との共同での、同時の、別々の又は一連の併用療法のための医薬組成物の製造のために便利である。
【００３１】
有利な実施態様において、前記リポソーム製剤はパクリタキセルを、約０．１モル％〜、特に約２モル％〜約８モル％の量で、有利には約０．５モル％〜、特に約２モル％〜約５モル％の量で、より有利には約１モル％〜約４モル％の量で、最も有利には約２．５モル％〜約３．５モル％の量で含有する。本発明のカチオンリポソーム製剤は、パクリタキセル結晶をほぼ含有しない。
【００３２】
本発明のリポソーム製剤は、約３０モル％〜約９９．９モル％、特に〜約７０モル％、有利には約４０モル％〜約６０モル％、最も有利には約４５モル％〜約５５モル％の量でカチオン脂質を含有するカチオンリポソーム製剤である。前記製剤及び前記カチオン脂質は、正のゼータ電位を、約ｐＨ７．５の約０．０５Ｍ  ＫＣｌ溶液中で、室温で有することにより特徴付けられている。
【００３３】
前記リポソーム製剤の有利なカチオン脂質は、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイロキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム塩、例えば、このメチルスルファート（ＤＯＴＡＰ）である。その他の本発明のために有利な脂質は以下を含んでよい：ＤＤＡＢ、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド；１，２−ジアシルオキシ−３−トリメチルアンモニウムプロパン、（以下を含むがこれに限定されない：ジオレオイル、ジミリストイル、ジラウロイル、ジパルミトイル及びジステアロイル；２つの異なるアシル鎖も前記グリセロール骨格に結合していてよい）；Ｎ−［１−（２，３−ジオロイロキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミン（ＤＯＤＡＰ）；１，２−ジアシルオキシ−３−ジメチルアンモニウムプロパン（以下を含むがこれに限定されない：ジオレオイル、ジミリストイル、ジラウロイル、ジパルミトイル、及びジステアロイル；２つの異なるアシル鎖も、前記グリセロール骨格に結合していてよい）；Ｎ−［１−（２，３−ジオレイロキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）；１，２−ジアルキルオキシ−３−ジメチルアンモニウムプロパン、（以下を含むがこれに限定されない；ジオレイル、ジミリスチル、ジラウリル、ジパルミチル、及びジステアリル；２つの異なるアルキル鎖も、前記グリセロール骨格に結合していてよい）；ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）；３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）；２，３−ジオレオイロキシ−Ｎ−（２−（スペルミンカルボキサミド）−エチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセタート（ＤＯＳＰＡ）；β−アラニルコレステロール；セチルトリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）；ジＣ１４アミジン；Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ’−テトラデシル−３−テトラデシルアミノプロピオンアミジン；１４Ｄｅａ２；Ｎ−（アルファ−トリメチルアンモニオアセチル）ジドデシル−Ｄ−グルタマートクロリド（ＴＭＡＧ）；Ｏ，Ｏ’−ジテトラデカノイル−Ｎ−（トリメチルアンモニオ−アセチル）ジエタノールアミンクロリド；１，３−ジオレオイロキシ−２−（６−カルボキシ−スペルミル）−プロピルアミド（ＤＯＳＰＥＲ）；Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２，３−ジオレオイロキシ−１，４−ブタンジアンモニウムヨージド；１−［２−（アシルオキシ）エチル］２−アルキル（アルケニル）−３−（２−ヒドロキシエチル）−イミダゾリニウムクロリド誘導体（Solodin et al. (1995) Biochem. 43: 13537-13544によって述べられたもの）、例えば１−［２−（９（Ｚ）−オクタデセノイルオキシ）エチル］−２−（８（Ｚ）ーヘプタデセニル−３−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド（ＤＯＴＩＭ）、１−［２−（ヘキサデカノイルオキシ）エチル］−２−ペンタデシル−３−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド（ＤＰＴＩＭ）、第四級アミンにヒドロキシアルキル部を含有する、２，３−ジアルキルオキシプロピル第四級アンモニウム化合物誘導体（例えばFelgner et al[Felgner et al. J. Biol. Chem. 1994,269, 2550-2561]によって説明されたとおり）、例えば：１，２−ジオレオイル−３−ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩ）、１，２−ジオレイロキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、１，２−ジオレイロキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシプロピルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ−ＨＰ）、１，２−ジオレイロキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシブチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ−ＨＢ）、１，２−ジオレイロキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシペンチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ−Ｈｐｅ）、１，２−ジミリスチロキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、１，２−ジパルミチロキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＰＲＩＥ）、１，２−ジステリロキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＳＲＩＥ）；Santaniello et al.  ［ＵＳ５４９８６３３］によって報告されたアシルカルニチンのカチオンエステル；ホスファチジルコリンのカチオントリエステル、例えば１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロール−３−エチルホスホコリン、その際この炭化水素は飽和又は不飽和であってよく、及び分枝又は非分枝であってよく、Ｃ１２〜Ｃ２４の鎖長を有し、この２つのアシル鎖は必ずしも同一でない。
【００３４】
有利な実施態様において、前記リポソーム製剤は場合により、少なくとも１つの中性及び／又はアニオン脂質を含有する。中性脂質は、中性の正味の電荷を有する脂質である。アニオン脂質又は両親媒性物質は、負の実効電荷を有する分子である。これらは中性又は負の実効電荷を有する、ステロール又は脂質、例えば、コレステロール、リン脂質、リゾ脂質、リゾリン脂質、スフィンゴ脂質又はペグ化（ｐｅｇｙｌａｔｅｄ）脂質から選択されてよい。有利な中性及びアニオン脂質はこの際以下を含む：カルボン酸基を含む、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール（特定の糖に限定されない）、脂肪酸、ステロール、例えばコレステロール、１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンであり、ＤＯＰＥ、１，２−ジアシル−グリセロ−３−ホスホコリン及びスフィンゴミエリンを含むがこれに限定されない。グリセロール骨格に結合した脂肪酸は、特定の長さ又は二重結合の数に限定されない。リン脂質は、２つの異なる脂肪酸をも有してよい。有利には、この更なる脂質は室温で液状の結晶状態にあり、かつ前記脂質は前記の使用したカチオン脂質と、これらが適用される割合で混合可能である（即ち、均一な相が形成されてよく、相分離又は分域形成は生じない）。有利な実施態様において、前記中性脂質はＤＯＰＣである。
【００３５】
更なる有利な実施態様において、前記リポソーム製剤は、場合により中性及び／又はアニオン脂質を、有利にはＤＯＰＣを、約３０〜約７０モル％、有利には約４０〜約６０モル％、特に有利には約４５〜約５５モル％の量で含有する。
【００３６】
本発明の更なる対象は、本発明において使用される前記カチオンリポソーム製剤を脱水し、脱水したまま長期間の間貯蔵し、次に、前記脱水、貯蔵及び再水和の工程の間にこの内容物の大部分を失うことなしに、これを使用すべき時に及び場で再水和することである。後者を達成するために、１つ又はそれ以上の保護剤、例えば凍結保護防止剤が存在してよい。このように、本発明によるカチオンリポソーム製剤は有利には凍結防止剤を含有し、その際前記凍結保護防止剤を糖又はアルコール又はこの組み合わせから選択する。有利には、前記凍結保護防止剤を、トレハロース、マルトース、スクロース、グルコース、ラクトース、デキストラン、マンニトール、又はソルビトールから選択する。
【００３７】
更なる有利な実施態様において、前記リポソーム製剤はトレハロースを、前記製剤の総体積に対して、約５％（ｍ／ｖ）〜約１５％（ｍ／ｖ）の範囲で含有する。
【００３８】
本発明の前記カチオンリポソームの処方は変化してよい。特に有利な実施態様において、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＰＣ、及びパクリタキセルのモル比は、５０：４７：３モル％である。この処方は、ＭＢＴ−０２０６又はＥｎｄｏＴＡＧ−１とも命名される。
【００３９】
様々なサイズのリポソームが本発明において使用される。本発明の有利な実施態様において、カチオンリポソームは約２５ｎｍ〜約５００ｎｍ、有利には約５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、より有利には約１００ｎｍ〜約３００ｎｍの平均粒子直径を有する。
【００４０】
本発明のリポソーム製剤は、全身に、有利には静脈内に投与されてよい。
【００４１】
本発明のカチオンリポソームは、増加した血管新生に関連した全て形態の症状、例えば癌を処置するために使用されてよい。
【００４２】
本発明の医薬組成物は、ヒト患者における腫瘍、例えば膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、白血病、肺癌、リンパ腫、メラノーマ、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌を治療するために、及び、小児癌、例えば脳幹部神経膠腫、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫、上衣細胞腫、ユーイング肉腫／腫瘍ファミリー、胚細胞腫瘍、頭蓋外の、ホジキン病、白血病、急性リンパ芽球性、白血病、急性骨髄性の、肝臓癌、髄芽腫、神経芽腫、ホジキン病でないリンパ腫、骨の骨肉腫／悪性の線維性組織球腫、網膜芽腫、横紋筋肉腫、軟部組織肉腫、テント上性原始性、神経外胚葉性及び松果体部の腫瘍、普通でない小児癌、視覚路及び視床下部膠腫、ウィルムス腫瘍、及びその他の小児の腎臓癌の治療、及びこれらより一般的でない、以下を含む癌、急性リンパ性白血病、成人の急性骨髄性白血病、成人のホジキン病でないリンパ腫、脳腫瘍、子宮頸癌、小児癌、小児肉腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、食道癌、ヘアリーセル白血病、腎臓癌、肝臓癌、多発性骨髄腫、神経芽腫、口頭癌、膵癌、原発性中枢神経系リンパ腫、皮膚癌、小細胞肺癌、頭頸部癌、胆嚢及び胆管癌、胃癌、消化管癌、カポシ肉腫、尿路上皮細胞癌腫、甲状腺癌腫、精巣癌腫、膣癌、血管肉腫、軟部組織肉腫、及び中皮腫を処置するために特に有利である。特に、前記癌は転移性癌及び／又は標準的な（化学）療法耐性癌であってよい。本発明の組成物の投与は、疾病の進行を遅めるか又は停止させ、又は部分的な又は完全な寛解を導いてよい。更なる症状は、創傷治癒、又は炎症性疾患又は慢性的な炎症性疾患、例えば関節リウマチ、皮膚炎、子宮内膜症、又は乾癬であってよい。
【００４３】
本発明のカチオンリポソーム製剤は、上述した癌、特に膵癌、手術不可能な膵癌、消化管癌、肺癌、結腸直腸癌又は胃癌、乳癌、前立腺癌、及びメラノーマの治療に、単独療法として、又は更なる治療療法、例えば以下に詳細に示した更なる活性成分との、特に化学療法剤、例えばＤＮＡ／ＲＮＡ代謝拮抗産物、例えばゲムシタビンとの併用療法として、特に適する。
【００４４】
意外にも、カチオンリポソーム中に負荷した活性成分は、内皮性又は非内皮性薬剤耐性細胞、特に薬剤耐性の内皮性又は非内皮性腫瘍細胞に対して直接的に作用することが見出された。従って、この新しい知見は非内皮性薬剤耐性細胞を更なる標的として定義し、これによりカチオンリポソームの抗腫瘍性の適用を強める。これは本発明の更なる観点である。
【００４５】
従って、活性成分を含有するカチオンリポソーム製剤を、内皮性又は非内皮性の薬剤耐性細胞に対する医薬品の製造のために使用することは本発明の更なる観点である。本発明は、活性成分を含有するカチオンリポソーム製剤の、これを必要とする被験体の薬剤耐性細胞へと、疾病、例えば癌に作用するための治療有効量で投与する方法も提供する。
【００４６】
前記観点の更なる実施態様は、薬剤耐性細胞の発生に関連しかつ／または付随する疾病の予防又は治療のための、例えば薬剤耐性腫瘍の予防又は治療のための医薬組成物の製造のための、少なくとも１つのカチオン脂質約３０〜約９９．９モル％、少なくとも約０．１モル％の量で活性成分及び少なくとも１つの中性及び／又はアニオン脂質約０〜約７０モル％を含有するカチオンリポソーム製剤の使用に関し、特に、癌、特に膵癌、手術不可能な膵癌、消化管癌、肺癌、結腸直腸癌又は胃癌、乳癌、前立腺癌及びメラノーマのための二次治療又は三次治療としての使用を意味する。
【００４７】
初期治療の失敗の主な原因は、薬剤耐性細胞クローンの出現である。二次治療は、この開始投与が失敗した後に投与される。二次化学療法は、様々な作用様式を有する様々な化学療法剤を用いた単独療法又は複数の更なる薬物又は治療の併用であってよい。しかし、二次治療は、多剤耐性細胞クローンの発生により、同様に失敗する可能性もある。従って、このような腫瘍再発のために三次治療が存在してよい。前記カチオンリポソーム製剤は上述したように二次治療又は三次治療として特に適する。
【００４８】
本発明の前記観点のカチオンリポソーム製剤は、少なくとも１つのカチオン脂質約３０〜薬９９．９モル％、特に〜約９８モル％、少なくとも約０．１モル％、特に少なくとも約２モル％の量で活性成分及び少なくとも１つの中性及び／又はアニオン脂質約０〜約７０モル％を含有し、薬剤耐性細胞の発生に関連しかつ、または付随する疾病を軽減する（退縮を引き起こして）か、又は最終的に治癒するように、薬剤耐性細胞に作用するための医薬組成物の製造のために有利である。
【００４９】
本発明のうちの更なる意外な知見は、活性成分を含有するカチオンリポソームが単独で、又は転移形成に対する少なくとも１つのその他の治療療法との併用で作用することである。
【００５０】
従って本発明の更なる対象は、活性成分を含有するカチオンリポソーム製剤を、転移に対する医薬品を準備するために使用することである。本発明はまた、活性成分を含有するカチオンリポソーム製剤を、これを必要とする被験体に、転移形成の発現及び／又は進行に作用するための、例えば転移性疾病を遅延するか及び／又は回避する、治療有効量で投与する方法をも提供する。「作用する」との用語は本発明において一般的に、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果、例えば疾病の発現及び／又は進行を、遅延及び／又は回避する効果が得られることを意味する。有利な実施態様において、本発明は肝臓の転移形成の遅延及び／又は回避のために使用される。
【００５１】
また更なる観点においても、本発明のカチオンリポソーム製剤は、少なくとも１つのカチオン脂質約３０〜約９９．９モル％、特に〜約９８モル％、少なくとも約０．１モル％、特に少なくとも約２モル％の量で第１の活性成分、例えばパクリタキセル、及び少なくとも１つの中性及び／又はアニオン脂質約０〜約７０モル％を含有し、転移形成の遅延及び／又は回避のための、少なくとも１つの更なる活性成分の有効量、例えば第２の非リポソーム状活性成分及び／又は温熱療法及び／又は放射線療法及び／又は寒冷療法との共同での、同時の、別々の又は一連の併用療法のための医薬組成物の製造のために有利である。
【００５２】
前記カチオンリポソーム製剤中に負荷した活性成分、例えば単独療法のための活性成分又は、併用療法のための第１の活性成分は、細胞毒性の又は細胞分裂抑制性の物質、例えば抗腫瘍性の又は抗内皮細胞性の活性物質、化学療法剤又は免疫学的活性物質から選択されてよい。より有利な実施態様においては、前記活性成分は、タキサン、カンプトテシン、スタチン、デプシペプチド、サリドマイド、微小管と相互作用するその他の薬剤、例えばジスコデルモリド（ｄｉｓｃｏｄｅｒｍｏｌｉｄｅ）、ラウリマリド（ｌａｕｌｉｍａｌｉｄｅ）、イソラウリマリド（ｉｓｏｌａｕｌｉｍａｌｉｄｅ）、エレウレテロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）、サルコジクチン（Ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）Ａ及びＢから選択され、最も有利な実施態様においては、パクリタキセル、ドセタキセル、カンプトテシン又はこれらの全ての誘導体から選択される。
【００５３】
従って、本発明の有利な実施態様において、前記リポソーム製剤は、タキサン、有利にはパクリタキセル又はドセタキセル、又はこれらの誘導体を、約０．１モル％〜約２０モル％の量で、有利には約０，５モル％〜約１０モル％の量で、より有利には約１モル％〜約５モル％の量で、最も有利には約２モル％〜約４モル％の量で含有する。
【００５４】
前記の少なくとも１つの更なる活性成分は、上述したように細胞毒性の又は細胞分裂抑制性の、例えば抗腫瘍性の又は抗内皮細胞性の活性物質、化学療法剤又は免疫学的活性物質、過敏反応又は化学増感剤を減少させるか又は消去する化合物であってよい。有利には、前記の少なくとも１つの更なる活性成分は、非リポソーム製剤中に存在する。更に、前記活性成分及び前記の更なる活性成分が異なることが有利である。
【００５５】
有利な実施態様において、前記の更なる活性成分は、抗腫瘍剤、特に有糸分裂阻害剤、例えばパクリタキセル、アルキル化剤、特に白金含有化合物、特にシスプラチン、カルボプラチン、ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤、例えばカンプトテシン、又はドキソルビシン、ＲＮＡ／ＤＮＡ代謝拮抗物質、特に５−フルオロウラシル又はゲムシタビン、及び／又はその他の抗腫瘍活性を有する化合物から選択される。特に有利なのは、シスプラチン又はカルボプラチンとの、又は５−フルオロウラシル又はゲムシタビンとの併用療法である。
【００５６】
更なる有利な実施態様において、過敏反応を減少させるか又は消去する化合物は、致命的なアナフィラキシー反応を妨げるために十分な量にある、ステロイド、抗ヒスタミン剤、Ｈ２レセプターアンタゴニスト、及びこれらの組み合わせを含む（しかしこれらに限定されない）グループから選択される。より更に有利な実施態様において、前記化合物は、ラニチジン、デキサメタゾン、ジフェンヒドラミン、ファモチジン、ヒドロコルチゾン、クレマスチン、シメチジン、プレドニゾロン、プレドニゾン、クロルフェニラミン、クロルフェナミン、マレイン酸ジメチンデン、インドメタジン、及びプロメタジン又はこれらの全ての誘導体を含むグループから選択される。
【００５７】
有利な実施態様において、前記化学増感剤は、細胞周期調節剤、薬剤耐性を戻す物質、例えばベラパミル、血管作動性物質、例えば抗高血圧剤、カチオンリポソームと血液成分との電荷に関連した相互作用を変更する物質、例えばプロタミンを含む（しかしこれらに限定されない）グループから選択される。
【００５８】
１つ又は複数の本発明の観点に対して論じられた全ての有利な実施態様は、その他全ての観点にも関することに留意されたい。これは特に、カチオン脂質の量及び種類、中性及び／又はアニオン脂質の量及び種類、活性成分の量及び種類、併用療法のための更なる活性成分の量及び種類、及び処置すべき疾病の種類を指す。
【００５９】
図の説明
図１：治療後の腫瘍体積
治療開始後１９日目のＬ３．６ｐｌ膵臓腫瘍の腫瘍サイズ。１０％トレハロース、パクリタキセル、ＭＢＴ−０２０６、Ｇｅｍｚａｒ（ゲムシタビン）及びＭＢＴ−０２０６とＧｅｍｚａｒとの両方の併用での治療を腫瘍細胞接種後８日目に開始した。Ｇｅｍｚａｒをｉ．ｐ．で１００ｍｇ／ｋｇの用量で、１週間に２回（月、木）適用した。パクリタキセル及びＭＢＴ−０２０６は、ｉ．ｖ．で、月、水、金スケジュールで、５ｍｇ／ｋｇ  ｂｗのパクリタキセル用量で適用した。前記併用グループは、それぞれのスケジュールでＭＢＴ−０２０６及びＧｅｍｚａｒ両方を得た。腫瘍をキャリパーを用いた触診によって、２３日目及び２７日目に測定した。平均±ＳＥＭ；グループにつきｎ＝９。
【００６０】
図２：治療後の転移
治療開始後１９日目の転移。１０％トレハロース、パクリタキセル、ＭＢＴ−０２０６、Ｇｅｍｚａｒ（ゲムシタビン）及びＭＢＴ−０２０６とＧｅｍｚａｒとの両方の併用での治療を腫瘍細胞接種後８日目に開始した。Ｇｅｍｚａｒをｉ．ｐ．で１００ｍｇ／ｋｇ  ｂｗの用量で、１週間に２回（月、木）適用した。パクリタキセル及びＭＢＴ−０２０６は、ｉ．ｖ．で、月、水、金スケジュールで、５ｍｇ／ｋｇ  ｂｗのパクリタキセル用量で適用した。前記併用グループは、それぞれのスケジュールでＭＢＴ−０２０６及びＧｅｍｚａｒ両方を得た（グループにつきｎ＝９）。
【００６１】
図３〜５：成長阻害アッセイを２４ウェルプレート中で、各薬剤濃度でもって二重に実施した（ｎ＝２ウェル）。４×１０４細胞／ウェルを２４ウェルプレート中に播き、一晩インキュベートした。翌日、それぞれの製剤の１０〜１１つの濃度を７２ｈの間加え、それぞれのグラフに記した範囲を包含した。最後に、前記細胞の生存率をミトコンドリアの脱水素酵素活性を測定する標準的なＭＴＴアッセイにより決定した。
図３：極めて薬剤耐性である子宮肉腫系Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５ＭＢＴに対するＭＢＴ−０２０６及びパクリタキセルの阻害能力
図４：適度に薬剤耐性である子宮肉腫系Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５に対するＭＢＴ−０２０６及びパクリタキセルの阻害能力。
図５：薬剤感受性であるヒト子宮肉腫系Ｍｅｓ−ＳＡに対するＭＢＴ−０２０６及びパクリタキセルの阻害能力。
【００６２】
図６〜７：成長阻害アッセイを２４ウェルプレート中で、各薬剤濃度でもって二重に実施した（ｎ＝２ウェル）。４×１０４細胞／ウェルを２４ウェルプレート中に播き、一晩インキュベートした。翌日、それぞれの製剤の１０〜１１つの濃度を７２ｈの間加え、それぞれのグラフに記した範囲を包含した。最後に、前記細胞の生存率をミトコンドリアの脱水素酵素活性を測定する標準的なＭＴＴアッセイにより決定した。
図６：極めて薬剤耐性であるマウス結腸癌腫系Ｃｏｌｏｎ−２６ＭＢＴに対するＭＢＴ−０２０６及びパクリタキセルの阻害能力
図７：親系統の薬剤感受性であるマウス結腸癌腫系Ｃｏｌｏｎ−２６に対するＭＢＴ−０２０６及びパクリタキセルの阻害能力。
【００６３】
図８：薬剤感受性であるヒト内皮系統ＥＡ．ｈｙ９２６に対するＭＢＴ−０２０６及びパクリタキセルの阻害能力
成長阻害アッセイを２４ウェルプレート中で、各薬剤濃度でもって二重に実施した（ｎ＝２ウェル）。４×１０４細胞／ウェルを２４ウェルプレート中に播き、一晩インキュベートした。翌日、それぞれの製剤の１１つの濃度を７２ｈの間加え、それぞれのグラフに記した範囲を包含した。最後に、前記細胞の生存率をミトコンドリアの脱水素酵素活性を測定する標準的なＭＴＴアッセイにより決定した。
【００６４】
図９：前記感受性親系統Ｍｅｓ−ＳＡ及び前記耐性誘導体Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５ＭＢＴに対するパクリタキセルのｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害能力。成長阻害アッセイを２４ウェルプレート中で、各薬剤濃度でもって二重に試験した（ｎ＝２ウェル）。４×１０４細胞／ウェルを２４ウェルプレート中に播き、一晩インキュベートした。翌日、それぞれの製剤の１０〜１１つの濃度を７２ｈの間加え、それぞれのグラフに記した範囲を包含した。最後に、前記細胞の生存率をミトコンドリアの脱水素酵素活性を測定する標準的なＭＴＴアッセイにより決定した。
【００６５】
図１０：薬剤耐性ヒト皮膚メラノーマ系統Ｓｋ−Ｍｅｌ２８に対するパクリタキセルの阻害能力。成長阻害アッセイを２４ウェルプレート中で、各薬剤濃度でもって二重に試験した（ｎ＝２ウェル）。４×１０４細胞／ウェルを２４ウェルプレート中に播き、一晩インキュベートした。翌日、それぞれの製剤の１１つの濃度を７２ｈの間加え、それぞれのグラフに記した範囲を包含した。最後に、前記細胞の生存率をミトコンドリアの脱水素酵素活性を測定する標準的なＭＴＴアッセイにより決定した。
【００６６】
以下の実施例は、本発明の範囲を単に説明するものであり制限する意図はないものとする。その他の一般的な及び特定の構成は当業者に公知である。
【００６７】
実施例
１．ヒト治療法プロトコル
この実施例は、開示した製剤を使用するヒト治療プロトコルに関する。治療は、増強した血管新生活性に関連する様々なヒト疾病及び障害を予防及び／又は処置するために使用される。これは抗腫瘍療法において、例えば充実性腫瘍及び血液の悪性腫瘍を有する患者の処置において、様々な慢性的な炎症性疾患、例えば関節リウマチ又は乾癬に対する治療において、特に有利であると考えられる。
【００６８】
本発明の特徴は、様々な分類の疾病及び／又は異常が、前記異常に関係する組織又は細胞を直接的にターゲッティングすることなしに直接的に血管新生内皮細胞を標的とすることで治療されてよいことであり、例えば血管新生を阻害することにより腫瘍へのこの血液供給は遮断され、全く前記腫瘍細胞を直接的にターゲッティングすることなしに前記腫瘍は致死する。疾病及び／又は異常のその他の分類は、血管新生内皮細胞を直接的にターゲッティングすることにより、かつ前記異常に関係する組織又は細胞を直接的に標的とすることにより治療されてよい。
【００６９】
その他の適用において、薬剤耐性細胞、例えば薬剤耐性癌細胞、又は関節リウマチにおけるきわめて増殖性の滑膜細胞に、直接的に作用してよい。
【００７０】
臨床試験の実施（患者の治療及び観察を含む）の様々な要素は、本発明の開示の観点において、当業者に公知である。
【００７１】
規定の承認目的のために、試験のために選択された患者が、従来の治療法の少なくとも１クールに応答しないであろうこと、かつ理学的検査、実験室技術、又はＸ線撮影方法により決定される客観的に測定可能な疾病を有することが検討された。前記患者は心臓又は腎疾患の履歴を有さず、かついかなる化学療法も前記試験の開始少なくとも２週間前に停止すべきものである。
【００７２】
適用の前に、前記製剤が凍結乾燥されている場合には、これを水溶液中に再構成してよい。以上に概略したように、必要な適用体積は、患者の体重及び投与スケジュールから計算した。
【００７３】
開示した製剤を、短い注入時間の間に投与してよい。いかなる用量レベルでも、投与される注入は、それぞれの注入後に達成される毒性に依存すべきものである。従って、いかなる単独注入後にも、又は一定の割合の注入のための特定の期間にも、ＩＩグレードの毒性に達する場合には、更なる用量を控えるか又は前記の一定の割合の注入を、毒性が改善しない限り停止すべきものである。患者の約６０％が全てのカテゴリーにおいて許容不可能なＩＩＩ又はＩＶグレードの毒性を示すまで、増加用量を患者グループ投与する。この値の２／３の用量を、安全用量として定義する。
【００７４】
理学的検査、腫瘍測定及び実験室試験を無論、治療以前に、及び約３〜４週間後の間隔の際に実施するものである。実験室試験は、全血球計算、血清クレアチニン、クレアチンキナーゼ、電解質、尿素、窒素、ＳＧＯＴ、ビリルビン、アルブミン及び総血清タンパク質を含むものである。
【００７５】
臨床反応は、許容可能な測定又は実験室値、例えば腫瘍マーカーの変化によって定義される。例えば、完全寛解は、全ての測定可能な疾病の少なくとも一ヶ月間の消滅により定義されてよく、その一方で部分寛解は５０％又はそれ以上の減少によって定義されてよい。
【００７６】
本発明において開示及び請求された全ての組成物及び方法は、本発明の開示の観点において過度の実験なしに製造され、かつ実施されてよい。本発明の組成物及び方法は、有利な実施態様の観点において説明されているが、本発明の概念、趣旨及び範囲から逸脱することなく、本発明において説明された組成物に、方法に及び方法の工程において、又は一連の方法の工程において、変形を適用してよいことが当業者には明白である。より詳細には、同等の又は類似の結果が達成される一方で、化学的にも生理学的にも関連するある種の薬剤が、本発明において説明された薬剤の代わりに代用されてよいことが明白である。当業者に公知であるこのような類似の代用物及び修正の全ては、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨、範囲及び概念のうちにあると考えられる。
【００７７】
用量におけるいくつかの変形は、処置される被験体の状態に依存して必然的に生じる。投与の責任者は、いかなる場合においても、この個々の被験体にとって適した用量を決定する。更に、ヒトへの適用に対しては、製剤は、ｔｈｅ  ＦＤＡ  Ｏｆｆｉｃｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ  ｓｔａｎｄａｒｄｓが要求する無菌性、発熱原性、一般的な安全性及び純度水準を満たすものである。
【００７８】
本発明は、活性成分の本発明の製剤の医薬有効量を、これを必要とする被験体の標的部位、例えば血管新生性の血管標的部位へと、投与する方法も含む。「これを必要とする被験体」とは、哺乳類、例えばヒトを指す。
【００７９】
投与経路は有利には、腹膜又は非経口適用を含む。
【００８０】
本発明での使用のために、これを必要とする被験体へ投与される化合物の「薬理学的有効量」は、様々な範囲の因子に依存して変化する。前記化合物の量は、この患者の大きさ、年齢、性別、重量及び状態にも、投与される前記物質の効力にも依存する。投与に関して様々な変形が存在することを示してきたが、当業者は、本発明の開示を用いて容易に、極めて少量を最初に投与し、所望の結果が得られるまで前記用量を増分して上昇させることによる、適切な投与を決定することが可能であると考えられている。前記投与量は上述した因子によって非常に変化するが、一般的には、病的組織を標的とするに過ぎない、例えばこの腫瘍細胞自体を標的とするに過ぎないデリバリー系に比較して、大幅に少ない量でいかなる物質をも投与することが本発明により可能になる。
【００８１】
２．単独療法プロトコル
【００８２】
【表１】
0005645340.tif 000002
【００８３】
【表２】
0005645340.tif 000003
有効性
応答を、ＷＨＯ又はＲＥＣＩＳＴ判定基準に従って評価した。
【００８４】
３．併用療法プロトコル
【００８５】
【表３】
0005645340.tif 000004
【００８６】
更に計画された試験は、リポソーム状パクリタキセル、例えば０．５又は１．０又は１．５ｍｇ／ｋｇ及びゲムシタビン、例えば１０００ｍｇ／ｍ２を、週に１回、３週間の間、その後に治療なしで１週間、有利には少なくとも１年間の間隔の投与を含む。
【００８７】
リポソーム状パクリタキセルの前記治療スケジュールは上述したように進行中の試験のためである。
【００８８】
有効性
応答を、ＷＨＯ又はＲＥＣＩＳＴ判定基準に従って評価した。
【００８９】
４．症例報告＃１
患者：
−喉頭の粘膜表皮癌の、大きな治療耐性再発を有する４９歳の患者
−頸部、鎖骨上、腋窩、縦隔及び肺の転移
−最初の腫瘍切除の５年後、頸部腫瘍切開及び補助放射線療法
−複数回の切除、形成外科手術、放射線療法及び化学療法を用いた再発の繰り返した治療後。
投与スケジュール：
−ＭＢＴ−０２０６：５０／４７／３（ＤＯＴＡＰ／ＤＯＰＣ／パクリタキセル）
−リポソーム状パクリタキセル  ０．０６、０．２５、０．５及び１．０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗの投与、ｉ．ｖ．
−１週間に３回の１サイクル（１、３、及び５日目）
結果：
−注入時及び後の心臓血管、肺、及び血清のパラメーター観察の間の良好な認容性
−急性又は慢性毒性の徴候なし
−腫瘍の血液循環の減少
−３ヶ月の間、腫瘍成長の強力に減少した進行。
【００９０】
５．症例報告＃２
多重化学療法後に疾病進行を有した、肝臓細胞癌腫を有する一患者をＭＢＴ−０２０６で治療した。
【００９１】
凍結乾燥したＭＢＴ−０２０６を、注射のために水により再構成し、総注入体積３００〜４００ｍｌのＭＢＴ−０２０６（リポソーム状パクリタキセル１．０ｍｇ／体重ｋｇの用量に相当）を、中心又は末梢静脈注入により２〜４ｈの期間にわたり投与した。この注入率を、最大速度２．５ｍｌ／ｍｉｎにまでゆっくりと上昇させた。前投薬は、前記患者の性別、年齢又は条件に依存した。上述した患者の特定の場合には、デキサメタゾン及び抗ヒスタミン剤が投与されている。
【００９２】
ＭＢＴ−０２０６を、１週間に１回、２回のリポソーム状パクリタキセル０．２５ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ  １回のリポソーム状パクリタキセル０．５ｍｇ／ｋｇ  ｂｗ）で開始し、次に１９回のリポソーム状パクリタキセル１．０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗの強化用量にする、用量漸増スケジュールでもって投与した。前記治療は２２週間の投与後にいまだ進行中であり、かつ今現在まで、薬物有害反応は報告されていない。好ましい安全特性の他に、肝臓のＣＴ−スキャンによって実施された腫瘍サイズの最後の評価では、安定した疾病を示した。
【００９３】
６．症例報告＃３
その他の症例において、ホルモン療法に治療抵抗性になった前立腺癌患者を、リポソーム状パクリタキセル１．０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗで、週に３回、３日毎に、上述した製剤及び投与と同様の条件下で処置した。この前投薬は、デキサメタゾン及び抗ヒスタミン剤を含有した。前記患者に対するリポソーム状パクリタキセルの蓄積用量は、リポソーム状パクリタキセル３．０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗであった。
【００９４】
７．リポソーム状パクリタキセルでの低用量スケジュール
不死化内皮細胞（ＥＡ．ｈｙ９２６）を２４ウェルプレート（４×１０４細胞／ウェル）中に播き、一晩育てた。翌日、９つのウェルを１ｈの間、ＭＢＴ−０２０６として処方した５１．２ｎｇ／ｍｌ（６０ｎＭ）のリポソーム状パクリタキセルの低用量で処理した。更に、処方につき３ウェルを、ＭＢＴ−０２０６として処方した１５３．７ｎｇ／ｍｌの高用量（１８０ｎＭ）で１ｈ処理し、３ウェルは未処理のままにした。約２４ｈ後に、９つの低用量処理ウェルのうち６つを、再度同様の低用量ＭＢＴ−０２０６で１ｈ処置した（即ち：２×処理群）。再度２４ｈ後、前記６つの２回処理したウェルのうち３つを、ＭＢＴ−０２０６として処方した５１．２ｎｇ／ｍｌのパクリタキセルで３度目に、１ｈの間処置した（３×処置群）。前記の３度目の処理の約９６ｈ後に、全てのウェルの細胞生存率を定量化した。この目的のために、テトラゾリウム塩の３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を用いたミトコンドリア脱水素酵素の活性を測定するアッセイを、標準的なプロトコルに従って適用した（例えば、わずかに改変した｛Ｌｉｎｄｌ，  １９９４＃２８｝）。
【００９５】
この結果は、３回の低用量ＭＢＴ−０２０６で処理した細胞の生存率は、高用量で１回のみ処理した細胞の生存率と少なくとも同じくらい強力に減少していたことを示す。１回又は２回低用量ＭＢＴで処理した細胞は、幾分上昇した生存率を示したが、これは未処理細胞に比較すると減少している。
【００９６】
結論
高用量のＭＢＴ−０２０６での処理を、より高い頻度での低用量を用いて置き換えてよい。治療密度（１週間における治療の数）と治療有効性との間には相関がある。低用量での１週間に３回の治療は、１週間に１又は２回の治療よりも優れていている。この最適化した投与治療方式は、高用量治療により引き起こされる毒性副作用を潜在的に減少させる。
【００９７】
８．Ｌ３．６ｐｌ膵臓腫瘍中での、ゲムシタビン（５０ｍｇ／ｋｇ）と併用したＭＢＴ−０２０６の抗腫瘍有効性
動物モデル
種：雄Ｂａｌｂ／ｃ  ｎｕ／ｎｕマウス
腫瘍モデル：正所性Ｌ３．６ｐｌ膵臓充実性腫瘍（極めて転移性：Bruns CJ, Harbison MT, Kuniyasu H, Eue I, Fidler IJ. In vivo selection and characterization of metastatic variants from human pancreatic adenocarcinoma by using orthotopic implantation in nude mice. Neoplasia 1999;1(1) : 50-62.）
供給者：Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｆｒａｎｃｅ。
【００９８】
治療
治療開始：腫瘍接種後７日目
最後の治療：腫瘍接種後２６日目
用量：適用につきパクリタキセル５ｍｇ／ｋｇ  ｂｗを有するＭＢＴー０２０６
：適用につきパクリタキセル５ｍｇ／ｋｇ  ｂｗのパクリタキセル
：適用につき５０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ）
スケジュール：
ＭＢＴ−０２０６、パクリタキセル、トレハロース：ｄ７、１０、１２、１４、１７、１９、２１、２４、２６
ゲムシタビン：ｄ７、１１、１４、１８、２１、２５
併用：併用した単独治療
適用経路：ＭＢＴ−０２０６、パクリタキセル、トレハロース：尾静脈中へのｉ．ｖ．ボーラス
ゲムシタビン：ｉ．ｐ．ボーラス。
【００９９】
【表４】
0005645340.tif 000005
【０１００】
前記死亡率は２１日目前では低かった：対照動物１匹及びＭＢＴ−０２０６動物１匹が死んだのみであった。２４日目には、不明の理由により死亡率が上昇した：３匹のＭＢＴ−０２０６、１匹のＧｅｍｚａｒ、及び４匹の対照動物が２４日目に死んだ。
【０１０１】
前記体重はいずれの治療によっても影響を受けなかったが、対照腫瘍の重量がこの最後の週の間に１８％だけ減少した。
【０１０２】
観察パラメーター
−接種後１０、１２、１４、１７、１９、２１、２４日目に触診した、及び回収後２６、２８日目の腫瘍体積
−２６、及び２８日目に回収後に剖検。
【０１０３】
結果
いかなる治療の効果も、治療の開始後３日間、触診によっては観察されなかった。強力な抗腫瘍効果が、触診により１週間後及び２４日目に、以下の有効性の順位で観察された。Ｇｅｍｚａｒ−５０＝パクリタキセル＜ＭＢＴ−０２０６＜ＭＢＴ−０２０６＋Ｇｅｍｚａｒ。しかし、２６日目の回収後、全ての群のこの測定した腫瘍体積は、２４日目に比較して明らかに小さかった。この大きさの差は、回収前の不正確な触診のためのようである。２４日目に、この対照群（ｎ＝２）に比較して単独治療により腫瘍サイズは〜３０％に減少した。ＭＢＴ−０２０６＋Ｇｅｍｚａｒの併用は、１３％へとこの腫瘍サイズの最も強力な減少を生じ、これはパクリタキセル、Ｇｅｍｚａｒ及びＭＢＴ−０２０６単独に比較して、有意に（ｐ＜０．０５）より有効であった。２８日目の前記対照群（ｎ＝２）を示さないのは、この２つの腫瘍のうち１つが、その他の腫瘍（２４、２６、２８日目）に比較して極めて小さく、従って代表とは見なされないからである。前記単独療法後の腫瘍は、２６日目（パクリタキセル：５３６ｍｍ３；ＭＢＴ−０２０６：３９２ｍｍ３；Ｇｅｍｚａｒ：３９８ｍｍ３）に比較して腫瘍サイズに微弱な増加を示したが、その一方で前記併用療法は、２６日目と２８日目の間に８８ｍｍ３とわずかな腫瘍の退縮を生じた。
【０１０４】
前記データは前記モデル中でのパクリタキセル、Ｇｅｍｚａｒ及びＭＢＴ−０２０６の強力な抗腫瘍性効能を示す。ＭＢＴ−０２０６の抗腫瘍作用は、パクリタキセルよりわずかに強力であるが、Ｇｅｍｚａｒと類似している。ＭＢＴ−０２０６とＧｅｍｚａｔとの併用は、顕著な抗腫瘍性効能を示した。
【０１０５】
９．Ｌ３．６ｐｌ膵臓腫瘍中のゲムシタビン（１００ｍｇ／ｋｇ）と併用したＭＢＴ−０２０６の抗腫瘍性効能
動物モデル
種：雄Ｂａｌｄ／ｃ  ｎｕ／ｎｕマウス
腫瘍モデル：正所性Ｌ３．６ｐｌ膵臓充実性腫瘍（極めて転移性）
供給者：Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｆｒａｎｃｅ。
【０１０６】
治療
治療開始：腫瘍接種後８日目（０１．０５．０３）
最後の治療：腫瘍接種後２６日目（１９．０５．０３）
スケジュール：
ＭＢＴ−０２０６、パクリタキセル、トレハロース：ｄ９、１２、１４、１６、１９、２１、２３、２６
ゲムシタビン：ｄ８、１２、１５、１９、２２、２６
併用：併用した単独治療。
【０１０７】
【表５】
0005645340.tif 000006
観察パラメーター
−接種後２３、２６日目に触診した及び回収後の腫瘍体積
−１、７、１２、１６、１９、２１、２３、２７日目の体重
−２７日目に回収後の剖検。
【０１０８】
結果（図１及び２参照）
全ての治療的療法の明らかな抗腫瘍効果が、併用療法の顕著な効能と共に、腫瘍接種後２３日目に観察された（図１）。腫瘍阻害の順位：パクリタキセル＜ＭＢＴ−０２０６＝Ｇｅｍｚａｒ−５０＜ＭＢＴ−０２０６＋Ｇｅｍｚａｒ。この対照群と比較して、前記の最終的な腫瘍体積は、ＭＢＴ−０２０６によって４６％（ｐ＜０．０５）にまで、Ｇｅｍｚａｔによって４７％（ｐ＜０．０１）にまで、及び併用療法によって２２％（ｐ＜０．０１）にまで、２７日目には有意に減少した。パクリタキセル治療は、最終的な腫瘍体積を６８％にまで減少させたが、これは有意でなかった。興味深いことに、ＭＢＴ−０２０６及び併用療法の効能は、２３日目でより顕著であった。この原因は、２３日目と２７日目との週末の間に延長した治療間隔である可能性がある。前記データは、パクリタキセル、Ｇｅｍｚａｒ、及びＭＢＴ−０２０６の前記動物モデル中での明らかな抗腫瘍性効能を明らかにした。ＭＢＴ−０２０６の抗腫瘍性作用は、パクリタキセルよりわずかに強力であったが、Ｇｅｍｚａｒに類似していた。ＭＢＴ−０２０６及びＧｅｍｚａｒとの併用の両方共に、転移形成を阻害した（図２）。肝転移は、前記の２つの群でのみ存在しなかった。更に、併用群においてのみ、このリンパ節転移がほとんどなかった。前記データは、ＭＢＴ−０２０６とＧｅｍｚａｒとの併用が、いずれかの単独療法の抗腫瘍性効能を促進することを明らかにした。
【０１０９】
この死亡率は、前記治療群で、特に併用治療の間にわずかに増加した（４匹のマウスが死亡）。回収前にはどの対照動物も死亡しなかった。
【０１１０】
対照マウスの体重は、この最後の１１日間の間に１８％だけ減少した。この期間の間に、一過的な減少もまた前記処置マウスに関して観察され、これはパクリタキセルに関しては２％の、ＭＢＴ−０２０６に関しては１２％の、併用に関しては１９％の、及びＧｅｍｚａｒに関しては２２％の重量損失を生じた。
【０１１１】
１０．パクリタキセル耐性細胞（例えば、腫瘍細胞系）の致死
（多）薬剤耐性を発現している腫瘍を直接的に致死させるためのＭＢＴ−０２０６の能力を実証するために、２つの極めてパクリタキセルに耐性である哺乳類腫瘍細胞系をｉｎ  ｖｉｔｒｏで調査した。前記細胞系を、段階的に上昇するパクリタキセル濃度により培地中で選択した。両方の細胞系は、高い耐性レベルを発現し、これはパクリタキセル約１〜５μＭ（８６７又は５０００ｎｇ／ｍｌ）に対する５０％の成長阻害（ＩＣ５０値）のための濃度により反映されている。両方の場合において、ＭＢＴ−０２０６はパクリタキセルよりも、薬剤耐性腫瘍細胞の致死において明らかに優れていた。対照的に、薬剤耐性の又は耐性の低い細胞系において、ＭＢＴ−０２０６はパクリタキセルと幾分同様の致死能力を有した。
【０１１２】
ＭＢＴ−０２０６とヒト子宮肉腫由来の細胞系Ｍｅｓ−ＳＡとその誘導体の系統
極めてパクリタキセル耐性である誘導体細胞系Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５ＭＢＴを、パクリタキセル濃度の増加により、市販の系Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５（ＡＴＣＣ，｛Ｈａｒｋｅｒ，１９８６  ＃２９｝）から選択した。図３に示したように、前記誘導体細胞系はＩＣ５０値８６７ｎｇ／ｍｌによって示されるように、パクリタキセルに極めて耐性であった。意外にも、ＭＢＴ−０２０６が前記細胞系を、約２０倍低いＩＣ５０値によって反映されるように、より効果的に致死させることが見出された。前記の市販の系Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５は、親系統であるＭｅｓ−ＳＡからドキソルビシンにより選択される（｛Ｈａｒｋｅｒ，  １９８６＃２９｝）が、パクリタキセルに対して低レベルの交差耐性を発現した（図３〜５を比較のこと）。パクリタキセルに対するＩＣ５０値は、Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５ＭＢＴにおける値よりも約７倍低かった。これに伴い、前記細胞系において、パクリタキセルに比較して、ＭＢＴ−０２０６のより高い致死能力のわずかな傾向が存在するにすぎない（図４）。前記親系統Ｍｅｓ−ＳＡは、５．５ｎｇ／ｍｌの低いＩＣ５０値によって示されるように、極めてパクリタキセル感受性であった（図５）。前記薬剤感受性系統に対して、ＭＢＴ−０２０６はパクリタキセルと同様の致死能力を有した。これは、これまで調査した、その他全てのパクリタキセル感受性細胞系にも当てはまった。前記知見に対する例として、ＭＢＴ−０２０６及びパクリタキセルでの、不死化内皮系統、ＥＡ．ｈｙ９２６の治療の結果を図８に示した。
【０１１３】
ＭＢＴ−０２０６と細胞系マウス結腸癌腫由来のＣｏｌｏｎ−２６
Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５ＭＢＴと同様に、マウス結腸癌腫系統Ｃｏｌｏｎ−２６の極めてパクリタキセル耐性である誘導体系統（Ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）を樹立し、Ｃｏｌｏｎ−２６ＭＢＴと呼んだ。パクリタキセルに対するＩＣ５０値は約５μｇ／ｍｌであった（図６）。再度、Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５ＭＢＴと同様に、ＭＢＴ−０２０６はこの細胞系の成長を阻害するための明らかにより高い能力を有した。前記細胞系において、前記ＩＣ５０値は、３倍だけ違っていた。Ｍｅｓ−ＳＡ及びＥＡ．ｈｙ９２６細胞に対して示した前記結果に沿って、この親系統の薬剤感受性Ｃｏｌｏｎ−２６は、ＭＢＴ−０２０６及びパクリタキセルに対して同じ様に感受性であった（図７）。
【０１１４】
結論
極めてパクリタキセル耐性である細胞系において、ＭＢＴ−０２０６はパクリタキセルの致死能力よりも有意により高い致死能力を有した。パクリタキセル感受性系においては、両方のパクリタキセル製剤は匹敵する効能を有した。ＭＢＴ−０２０６は従って、（多）薬剤耐性腫瘍をも直接的にｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで致死させることができる可能性がある。従ってこれは、パクリタキセルに対して不応答性になったヒト腫瘍（又はその他の疾病）を治療する新規のアプローチである可能性がある。
【０１１５】
１１．再発性頭頸部扁平上皮癌の治療
パクリタキセル負荷したカチオンリポソーム（ＭＢＴ−０２０６）の安全性評価を、再発性の治療抵抗性の頭頸部扁平上皮癌を有する患者において実施した。
【０１１６】
試験設計
−再発性の治療抵抗性の頭頸部扁平上皮癌を有する患者
−少なくともスパイラルＣＴ／ＭＲＩスキャンでの次元において、正確に測定されえる、少なくとも１つの障害として定義された測定可能な疾病
−カルノフスキー動作指数＞６０％
−余命＞４ヶ月。
【０１１７】
薬剤投与
−カチオンリポソーム中のカプセル化パクリタキセルを２つの用量で投与した：パクリタキセル０．５５ｍｇ／ｋｇ及びパクリタキセル１．１０ｍｇ／ｋｇ
−スクリーニング期間の後、１、３、及び５日目に前記薬剤を静脈内注射した。
【０１１８】
結論
注射の間及び後には、急性又は慢性の毒性の徴候は観察されなかった；バイタル及び実験室安全パラメーラーはほぼ一定のままであった。
【０１１９】
前記結果は、前臨床毒性学試験から提案された前記用量及びスケジュールが、前記患者により良好に認容されたことを示す。
【０１２０】
カチオンリポソームはヒト頭頸部扁平上皮癌の内皮を選択的に標的とした。レーザードップラーフローメトリーは、前記療法の抗血管新生作用機構を確認した。
【０１２１】
１２．ＭＢＴ−０２０６（ＥｎｄｏＴａｇ  １）は、パクリタキセル耐性腫瘍に対してｉｎ  ｖｉｖｏで効果がある。
パクリタキセルでのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの７２ｈの処理で高い生存率を有する２つの腫瘍細胞系を、マウス腫瘍モデルとして、ＭＢＴ−０２０６の前記能力をｉｎ  ｖｉｖｏで調査するために使用した。前記腫瘍モデルでは、ＭＢＴー０２０６が腫瘍成長を、パクリタキセルよりも、有意により効果的に阻害することが実証されてよい。
【０１２２】
１．極めてパクリタキセル耐性である誘導体（Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５ＭＢＴ、ＩＣ５０、０．８７μｇ／ｍｌ）を、前記の市販のヒト子宮肉腫由来の細胞Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５（ＥＣＡＣＣ）から選択した。前記の適度に耐性である系統は、極めて感受性である親系統のＭｅｓ−ＳＡから生じる。図９に示したとおり、前記系統Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５ＭＢＴは前記親系統のＭｅｓＳＡと比較すると、このそれぞれのＩＣ５０値により評価して、〜１５０倍まで増加したパクリタキセル認容性を示した。ｉｎ  ｖｉｖｏ実験のために、Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５ＭＢＴ細胞をＮＭＲＩヌードマウス中に皮下注射（ｓ．ｃ．）した。ＭＢＴ−０２０６又はパクリタキセルでの治療を１２日目に開始し、２１日目まで、１週間に３回の用量で延長した（５ｍｇ／ｋｇ  ｂ．ｗ．のパクリタキセル）。ＭＢＴ−０２０６処置動物の平均腫瘍サイズを、パクリタキセル処置動物の腫瘍サイズと、この最後の治療後２日目（治療開始後２３日目）に比較した。ＭＢＴ−０２０６が誘導した減少を、パクリタキセルと比較して％で示した（下の表参照）。下記表及び図９中に示したように、ＭＢＴ−０２０６は、パクリタキセルよりも、前記腫瘍モデル中で、前記腫瘍成長を〜１／３だけ減少させることにおいて明らかにより効果があった。
【０１２３】
２．ヒトの皮膚メラノーマ系統Ｓｋ−Ｍｅｌ２８に関して、市販の系統は既に高いパクリタキセル耐性（ＩＣ５０、５．８μｇ／ｍｌ、図１０）を示し、かつ感受性の誘導体の系統は比較のためには使用可能でなかった。ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、前記細胞を、ヒトの皮膚の移植とマウスのアクセプター皮膚との間でのヒトの皮膚の移植を有するＳＣＩＤマウス中に注射した。治療を腫瘍細胞注射後１７日目に開始し、２日毎に用量（１２．５ｍｇ／ｋｇ  ｂ．ｗ．）で２８日目まで延長した。ＭＢＴ−０２０６及びパクリタキセルの治療能力を、治療開始後７日目に比較した（下の表参照）。前記腫瘍モデル中で、ＭＢＴ−０２０６は腫瘍発達をほぼ完全にブロックし、その一方でパクリタキセルは完全に効果がなかった。ＭＢＴ−０２０６で処理すると、腫瘍はパクリタキセル（パクリタキセル）−処理腫瘍の大きさの約１／１０へとほんのわずかになった。
【０１２４】
表
【０１２５】
【表６】
0005645340.tif 000007
Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５ＭＢＴ腫瘍モデル：治療開始後２３日目の腫瘍体積（９つの治療、即ち腫瘍細胞注射後週に３回、１２日目から３１日目まで）
Ｓｋ−Ｍｅｌ腫瘍モデル：治療開始後７日目の腫瘍体積（一日おきの６つの治療、即ち、腫瘍細胞注入後１７日目から２８日目まで）。
【０１２６】
【表７】
0005645340.tif 000008
【０１２７】
【表８】
0005645340.tif 000009
【０１２８】
【表９】
0005645340.tif 000010
【０１２９】
【表１０】
0005645340.tif 000011
【図面の簡単な説明】
【０１３０】
【図１】図１は、治療後の腫瘍体積を示す図である。
【図２】図２は、治療後の転移を示す図である。
【図３】図３は、極めて薬剤耐性である子宮肉腫系Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５ＭＢＴに対するＭＢＴ−０２０６及びパクリタキセルの阻害能力を示す図である。
【図４】図４は、適度に薬剤耐性である子宮肉腫系Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５に対するＭＢＴ−０２０６及びパクリタキセルの阻害能力を示す図である。
【図５】図５は、薬剤感受性であるヒト子宮肉腫系Ｍｅｓ−ＳＡに対するＭＢＴ−０２０６及びパクリタキセルの阻害能力を示す図である。
【図６】図６は、極めて薬剤耐性であるマウス結腸癌腫系Ｃｏｌｏｎ−２６ＭＢＴに対するＭＢＴ−０２０６及びパクリタキセルの阻害能力を示す図である。
【図７】図７は親系統の薬剤感受性であるマウス結腸癌腫系Ｃｏｌｏｎ−２６に対するＭＢＴ−０２０６及びパクリタキセルの阻害能力を示す図である。
【図８】図８は、薬剤感受性であるヒト内皮系ＥＡ．ｈｙ９２６に対するＭＢＴ−０２０６及びパクリタキセルの阻害能力を示す図である。
【図９】図９は、感受性親系統Ｍｅｓ−ＳＡ及び前記耐性誘導体Ｍｅｓ−ＳＡ／Ｄｘ−５ＭＢＴに対するパクリタキセルのｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害能力を示す図である。
【図１０】図１０は、薬剤耐性ヒト皮膚メラノーマ系Ｓｋ−Ｍｅｌ２８に対するパクリタキセルの阻害能力を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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