(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造
５´  （Ｎ）ｘ−Ｚ  ３´  （アンチセンス鎖）
３´  Ｚ´−（Ｎ´）ｙ  ５´  （センス鎖）
を有する２本鎖ｓｉＲＮＡ化合物であって、式中、ＮおよびＮ´のそれぞれは、その糖残基において修飾され得る、または未修飾であり得る、リボヌクレオチドであり、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙのそれぞれは、それぞれの連続したＮまたはＮ´が、共有結合により次のＮまたはＮ´に接合される、オリゴマーであり、
ｘおよびｙのそれぞれは、１９から４０の間の整数であり、
ＺおよびＺ´のそれぞれは、存在し得る、または不在であり得るが、存在する場合は、それが存在する前記鎖の３´末端に共有結合的に付着した、１〜５つの連続したヌクレオチドであり、かつ（Ｎ）ｘの配列は、
５´  ＡＧＧＡＧＵＵＣＣＡＣＡＵＵＣＵＧＧＣ  ３´  （アンチセンス鎖）  （配列番号１４０）
を含み、（Ｎ´）ｙの配列は、
５´  ＧＣＣＡＧＡＡＵＧＵＧＧＡＡＣＵＣＣＵ  ３´  （センス鎖）  （配列番号１３９）
を含む、化合物。
【請求項２】
それぞれの連続したＮまたはＮ´を接合する前記共有結合は、ホスホジエステル結合である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ｘ＝ｙ＝１９である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
少なくとも１つのリボヌクレオチドは、その糖残基において修飾を含む、請求項１から３のうちのいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
前記修飾は、２´位において修飾を含み、前記修飾は、アミノ基、フルオロ基、アルコキシ基、またはアルキル基からなる群から選択される、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
前記修飾は、メトキシ（２´−Ｏ−メチル）基であるアルコキシ基の存在を含む、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
前記アンチセンス鎖および／または前記センス鎖における交互リボヌクレオチドは、それらの糖残基において修飾される、請求項４に記載の化合物。
【請求項８】
前記アンチセンス鎖の５´および３´末端におけるそれぞれのリボヌクレオチドは、その糖残基において修飾され、前記センス鎖の５´および３´末端におけるそれぞれのリボヌクレオチドは、その糖残基において修飾されない、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
前記アンチセンス鎖および前記センス鎖の両方は、それらの３´および５´末端においてリン酸化されないか、又は、前記アンチセンス鎖および前記センス鎖の両方は、それらの３´末端においてリン酸化される、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
ｘ＝ｙ＝１９であり、２´−Ｏ−メチル基が前記アンチセンス鎖の第１、第３、第５、第７、第９、第１１、第１３、第１５、第１７、および第１９のリボヌクレオチド上に存在し、かつ、２´−Ｏ−メチル基が前記センス鎖の第２、第４、第６、第８、第１０、第１２、第１４、第１６、および第１８のリボヌクレオチド上に存在する、請求項６に記載の化合物。
【請求項１１】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１２】
虚血再灌流障害の治療用医薬の調製のための、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００６年１０月２５日出願の米国暫定特許出願第６０／８５４，５０３号、２００７年５月１５日出願の米国暫定特許出願第６０／９３０，４９３号の利益を主張し、それらの両方は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本願を通じて、様々な特許および刊行物が引用される。これらの文献の開示は、その全体において、本発明に関連する技術水準をより完全に説明するために、参照により本願に組み込まれる。
【０００３】
本発明は、アポトーシス促進遺伝子を含む、特定の遺伝子を阻害するための、化合物、それを含有する医薬組成物、およびその使用方法に関する。
【０００４】
したがって、本化合物および組成物は、遺伝子発現が有害事象を有する疾病もしくは状態、および／またはそのような疾病もしくは状態に関連する症状に罹患する対象の治療に有用である。特定の実施形態において、本発明は、音響外傷および老人性難聴を含む聴力損失、急性腎不全（ＡＲＦ）、緑内障、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）および他の急性肺および呼吸器損傷、肺移植、肺、肝臓、心臓、膵臓、および腎臓移植を含む、臓器移植後の虚血再灌流（Ｉ／Ｒ）障害、腎臓および神経毒性、脊髄損傷、褥瘡、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、ドライアイ症候群、口腔粘膜炎、ならびに慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療における、ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチド、それを含有する組成物、およびその使用方法を提供する。
【背景技術】
【０００５】
ｓｉＲＮＡおよびＲＮＡ干渉
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、二重鎖（ｄｓ）ＲＮＡ依存性の遺伝子特異的転写後サイレンシングが関与する現象である。本現象について研究し、哺乳動物細胞を実験的に操作する最初の試みは、長いｄｓＲＮＡ分子に応答して活性化された活性非特異的抗ウイルス防衛機構によって失敗した（Ｇｉｌ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，２０００．５：１０７−１１４）。その後、２１ヌクレオチドＲＮＡの合成２本鎖が、一般の抗ウイルス防衛機構を刺激せずに、哺乳動物細胞において遺伝子特定のＲＮＡｉを仲介し得ることが発見された（Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ２００１，４１１：４９４−４９８およびＣａｐｌｅｎ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ ２００１，９８：９７４２−９７４７）。結果として、短い２本鎖ＲＮＡである低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、遺伝子発現を阻害し、遺伝子機能を理解するために広く使用されている。
【０００６】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）（Ｆｉｒｅ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ １９９８，３９１：８０６）、またはミクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）（Ａｍｂｒｏｓ Ｖ．Ｎａｔｕｒｅ ２００４，４３１：３５０−３５５、およびＢａｒｔｅｌ ＤＰ．Ｃｅｌｌ．２００４ １１６（２）：２８１−９７）によって仲介される。対応するプロセスは一般に、植物で観察される場合、特異的転写後遺伝子サイレンシングと呼ばれ、菌類で観察される場合、クエリングと呼ばれる。
【０００７】
ｓｉＲＮＡは、内因性または外因性遺伝子／ｍＲＮＡの発現を下方制御またはサイレンスする（すなわち、完全または部分的に阻害する）２本鎖ＲＮＡである。ＲＮＡ干渉は、特定のｄｓＲＮＡ種が、特異的なタンパク質複合体に入る能力に基づき、その後、相補的細胞ＲＮＡに対する標的とされ、特異的に分解する。したがって、ＲＮＡ干渉応答は、ｓｉＲＮＡを含むエンドヌクレアーゼ複合体を特徴とし、一般に、ＲＮＡ誘発性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と呼ばれ、ｓｉＲＮＡ２本鎖のアンチセンス鎖に相補的な配列を有する１本鎖ＲＮＡの開裂を仲介する。標的ＲＮＡの開裂は、ｓｉＲＮＡ２本鎖のアンチセンス鎖に相補的な領域の中央で生じ得る（Ｅｌｂａｓｈｉｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，２００１，１５：１８８）。より詳細には、より長いｄｓＲＮＡは、ＩＩＩ型ＲＮＡ分解酵素によって、短い（１７〜２９ｂｐ）ｄｓＲＮＡフラグメント（短い阻害ＲＮＡまたは「ｓｉＲＮＡ」とも呼ばれる）に消化される（ＤＩＣＥＲ，ＤＲＯＳＨＡ等（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２００１，４０９：３６３−６およびＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２００３，４２５：４１５−９を参照）。ＲＩＳＣタンパク質複合体は、これらのフラグメントおよび相補ｍＲＮＡを認識する。全体のプロセスは、最終的に、標的ｍＲＮＡのエンドヌクレアーゼ開裂を生じる（ＭｃＭａｎｕｓ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ Ｇｅｎｅｔ，２００２，３：７３７−４７、Ｐａｄｄｉｓｏｎ ａｎｄ Ｈａｎｎｏｎ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００３，５（３）：２１７−２４）。（これらの用語および提案される機構に関する追加情報については、例えば、Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，ｅｔ ａｌ．，ＲＮＡ．２００１，７（１１）：１５０９−２１、Ｎｉｓｈｉｋｕｒａ，Ｃｅｌｌ．２００１，１０７（４）：４１５−８およびＰＣＴ広報第ＷＯ ０１／３６６４６号を参照）。
【０００８】
研究によって、ｓｉＲＮＡが哺乳動物およびヒトの両方において、体内において有効であり得ることが明らかになった。具体的に、Ｂｉｔｋｏらは、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）ヌクレオカプシドＮ遺伝子を対象とする特定のｓｉＲＮＡが、経鼻的に投与される場合、マウスの治療に有効であることを示した（Ｂｉｔｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２００５，１１（１）：５０−５５）。ｓｉＲＮＡの治療用途に関する概説については、Ｂａｒｉｋ（Ｍｏｌ．Ｍｅｄ ２００５，８３：７６４−７７３）およびＣｈａｋｒａｂｏｒｔｙ（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ２００７ ８（３）：４６９−８２）を参照。さらに、ＶＥＧＦＲ１受容体を標的とする短いｓｉＲＮＡを用いて、加齢関連の黄斑変性（ＡＭＤ）を治療する臨床研究が、ヒト患者において行われた。研究では、硝子体内（眼球内）注射によって投与されたそのようなｓｉＲＮＡは、試験した１４人の患者において有効かつ安全であることが分かった（Ｋａｉｓｅｒ，Ａｍ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２００６ １４２（４）：６６０−８）。
【０００９】
アポトーシス促進遺伝子
アポトーシス促進遺伝子は、概して、アポトーシス細胞死において役割を果たす遺伝子として定義される。本発明において有用なアポトーシス促進遺伝子の限定されないリストは、以下のとおりである。腫瘍タンパク質ｐ５３結合タンパク質２（ＴＰ５３ＢＰ２）、ロイシンリッチリピートおよび死ドメイン含有（ＬＲＤＤ）、シトクロムｂ−２４５，αポリペプチド（ＣＹＢＡ、ｐ２２ｐｈｏｘ）、活性化転写因子３（ＡＴＦ３）、カスパーゼ２、アポトーシス関連システインペプチド（ＣＡＳＰ２）、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ３（ＮＯＸ３）、ｈａｒａｋｉｒｉ，ＢＣＬ２相互作用タンパク質（ＨＲＫ、ＢＩＤ３）、補体成分１，ｑサブコンポーネント結合タンパク質（Ｃ１ＱＢＰ）、ＢＣＬ２／アデノウイルスＥ１Ｂ １９ｋＤａ相互作用タンパク質３（ＢＮＩＰ３）、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ８（ＭＡＰＫ８、ＪＮＫ１）、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ１４（ＭＡＰＫ１４、ｐ３８）、ｒａｓ関連Ｃ３ボツリヌス毒性基質１（ｒｈｏファミリー、小ＧＴＰ結合タンパク質ＲＡＣ１）、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３Ｂ）、プリン受容体Ｐ２Ｘ、イオンチャネル内蔵型受容体、７（Ｐ２ＲＸ７）、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー２（ＴＲＰＭ２）、ポリ（ＡＤＰ−リボース）グリコヒドロラーゼ（ＰＡＲＧ）、ＣＤ３８分子（ＣＤ３８）、ＳＴＥＡＰファミリーメンバー４（ＳＴＥＡＰ４）、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ２）、ギャップ結合タンパク質、α１，４３ｋＤａ（コネキシン４３，ＧＪＡ１）、ＴＹＲＯタンパク質チロシンキナーゼ結合タンパク質（ＴＹＲＯＢＰ）、結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）、分泌性リンタンパク質１（オステオポンチン、ＳＰＰ１）、網状４受容体（ＲＴＮ４Ｒ）、アネキシンＡ２（ＡＮＸＡ２）、ｒａｓ相同遺伝子ファミリー、メンバーＡ（ＲＨＯＡ）、および２つのオキシダーゼ１（ＤＵＯＸ１）。
【００１０】
聴覚損失：
［化学的に誘発された耳毒性］
聴覚細胞およびらせん神経節ニューロンに対する様々な治療薬の耳毒性の影響は、それらの治療有用性を限定する要因である場合が多い。一般に使用される耳毒性薬物は、広く用いられる化学療法薬シスプラチンおよびその類似体、アミノグリコシド抗生物質、例えば、ゲンタマイシン、キニーネおよびその類似体、サリチル酸およびその類似体、およびループ利尿薬を含む。
【００１１】
例えば、ゲンタマイシン、ストレプトマイシン、カナマイシン、トブラマイシン等の抗菌性アミノグリコシドは、治療薬としてのそれらの価値を下げる、深刻な毒性副作用、特に耳毒性および腎臓毒性を有することが知られる（Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ′ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，６ｔｈ ｅｄ．，Ａ．Ｇｏｏｄｍａｎ Ｇｉｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ；Ｍａｃｍｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，１９８０．ＮＹ，ｐｐ．１１６９−７１を参照）。したがって、耳毒性は、抗生物質投与の認識された用量制限副作用である。研究では、１日当たり１グラムを１週間以上投与された患者の４％から１５％が、測定可能な聴覚損失を発症し、それは、徐々に悪化して、治療を継続すると、永久的な難聴に至る可能性があることを示した。
【００１２】
聴器毒性は、睾丸、卵巣、膀胱、および頭頸部の癌を含む種々のヒト癌への有効性が証明されている、シスプラチン、プラチナ調整複合体に対する深刻な用量制限副作用でもある。シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））は、聴覚系および前庭器官を損傷させる。アスピリン等のサリチル酸は、それらの抗炎症、鎮痛、抗発熱、および抗血栓効果のために、最も一般に使用される薬物である。残念ながら、それらも聴器毒性副作用を有し、耳鳴り（「耳の中での共鳴」）および一時的な聴覚損失を含む。さらに、薬物を高用量で長期間使用すると、聴覚障害が永続的かつ不可逆的になり得る。
【００１３】
理論に束縛されるわけではないが、シスプラチン薬および他の耳毒性の可能性のある薬物は、内耳組織、特に内耳有毛細胞におけるアポトーシスを介して、耳毒性の影響を誘発すると考えられる（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ２００３，１２０（１）：１９１−２０５、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，２３（２４）：８５９６−８６０７）。哺乳動物において、聴覚有毛細胞は、胚発生中にのみ産生され、出生後生活中に損失しても再生しない。したがって、有毛細胞の損失は、深刻な不可逆的難聴をもたらす。残念ながら、現在、蝸牛を治療し、この状態を反転させるための有効な治療法はない。したがって、聴覚有毛細胞の細胞死を阻止するための有効な治療法は、優れた治療価値となり得る。本発明の出願人に譲渡された米国特許出願第１１／６５５，６１０号は、対象において聴覚障害を治療するための方法に関し、有効量のｐ５３ポリヌクレオチド阻害剤、および任意でアポトーシス促進遺伝子の阻害剤を含む組成物を対象に投与するステップを含む。
【００１４】
［老年性難聴］
別の種類の聴覚損失は老年性難聴であり、大部分の個人において、加齢に伴って徐々に生じる聴覚損失である。６５歳から７５歳の成人の約３０％から３５％、および７５歳以上の人々の４０％から５０％は、聴覚損失を経験する。したがって、内耳組織、特に内耳有毛細胞が関与する内耳障害および聴覚障害の発生および／または重篤性を防止、低減、または治療する手段が必要とされる。
【００１５】
［音響外傷］
音響外傷は、大きな騒音に対する長時間の曝露によってもたらされる聴覚損失の一種である。理論に束縛されるわけではないが、大きな騒音に対する曝露によって、蝸牛上の有毛細胞の感度が低下する。より重度の曝露を伴うと、損傷は、隣接する支持細胞の損失からコルチ器の完全な崩壊へと進行し得る。感覚細胞の死は、進行性のウォラー変性および主要な聴覚神経線維の損失をもたらし得る。
【００１６】
特に興味深いのは、シスプラチンおよびその類似体、アミノグリコシド抗体、サリチル酸およびその類似体、またはループ利尿薬を含む治療薬の副作用として生じるそれらの有害状態である。したがって、より高い用量、ひいてはより有効な用量を可能にする一方で、これらの薬物によって引き起こされる耳毒性の影響を阻止または低減する治療方法が必要とされる。したがって、特に耳毒素誘発性、特に内耳有毛細胞が関与する内耳組織の損傷、損失、または変性に関連する聴覚障害を予防または治療するための安全、有効かつ長期的な手段を提供する組成物および方法が必要とされる。哺乳動物において、聴覚有毛細胞は、胚発生中にのみ産生され、出生後生活中に損失しても再生しないため、有毛細胞の損失は、深刻な不可逆的難聴をもたらす。残念なことに、現在、蝸牛を治療し、この状態を反転させるための有効な治療法はない。したがって、聴覚有毛細胞の細胞死を阻止するための有効な治療法は、優れた治療価値となり得る。
【００１７】
［急性腎不全］
急性腎不全（ＡＲＦ）は、数日以内に生じる腎機能の急速な悪化によって特徴付けられる臨床的な症候群である。ＡＲＦの主たる特徴は、糸球体ろ過量（ＧＦＲ）の急激な減少であり、窒素性廃棄物（尿素、クレアチニン）の保持をもたらす。世界的に、重症のＡＲＦは、毎年１００万人当たり約１７０〜２００人で生じる。今日、確立したＡＲＦに対する特異的治療法はない。動物モデルにおける血清クレアチニンレベルの低下、組織学的損傷の減少および腎機能の急速な回復によって現わされる、毒性および虚血性の試験的ＡＲＦを緩和するためのいくつかの薬物が発見されている。これらの薬物には、抗酸化剤、カルシウムチャネル遮断薬、利尿薬、血管刺激物質、成長因子、抗炎症剤等が含まれる。しかしながら、これらの薬物を治験で試験した場合、利益が示されず、ＡＲＦを治療するためのそれらに使用は承認されなかった。
【００１８】
入院したＡＲＦ患者の大部分において、ＡＲＦは、急性腎尿細管壊死（ＡＴＮ）によって引き起こされ、ＡＴＮは、虚血性および／または腎毒性損傷からもたらされる。腎血流量の低下は、血液量減少性、心臓発生、および敗血性ショックによって、血管収縮薬の投与または腎血管損傷によって引き起こされる。腎毒素には、造影剤およびアミノグリコシド等の外因性毒素、ならびにミオグロビン等の内因性毒素が含まれる。最近の研究では、腎臓組織におけるアポトーシスは、大部分のヒト症例のＡＲＦにおいて顕著であることが提案される。アポトーシス細胞死の主たる部位は、末梢腎単位である。虚血性障害の初期位相中、アクチン細胞骨格の統合性の損失によって上皮が平坦化し、刷子縁の損失、巣状細胞接触の損失、およびそれに続いて、下層基体からの細胞の遊離を伴う。アポトーシス管状細胞死は、壊死細胞死よりも機能変化の前兆でありうることが示唆されている（Ｋｏｍａｒｏｖ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９９，２８５（５４３４）：１７３３−７）、Ｓｕｐａｖｅｋｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．２００３，６３（５）：１７１４−２４）。最後に、現在、急性腎不全の予防および／または治療のための十分な治療モードはなく、この目的のために、新規の化合物を開発する明確な必要性がある。
【００１９】
腎移植
［遅延移植機能］
遅延移植機能（ＤＧＦ）は、腎移植において、手術直後の期間の最も一般的な合併症であり、不良な移植転帰をもたらす（Ｍｏｒｅｓｏ ｅｔ ａｌ．１９９９．Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１４（４）：９３０−３５）。ＤＧＦの発生および定義は、移植センター間で異なるが、結果は以下のとおり不変である：長期の入院、追加の侵襲的手技、および患者と医療システムにかかる追加費用。
【００２０】
［急性移植拒絶反応］
移植拒絶反応は、移植破壊の開始によって、３つのサブセットに分類されている。超急性拒絶とは、通常、最初の４８時間以内に起こる極めて早期の移植破壊に適用される用語である。急性拒絶は、移植後数日から数ヶ月、または数年を経て開始し、体液および／または細胞機構が関与する。慢性拒絶は、慢性の同種反応性免疫応答に関する。
【００２１】
［緑内障］
緑内障は、世界中で失明の主な原因の１つである。全世界で約６，６８０万人に影響する。少なくとも１２，０００人のアメリカ人が、毎年この疾患によって失明している（Ｋａｈｎ ａｎｄ Ｍｉｌｔｏｎ，Ａｍ Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１９８０，１１１（６）：７６９−７６）。緑内障は、主に高い眼圧（ＩＯＰ）による、視神経頭部の軸索の変性によって特徴付けられる。原発開放隅角緑内障（ＰＯＡＧ）として知られる緑内障の最も一般的な形態の１つは、小柱網（商標）における房水の流出抵抗が高まることによって生じ、ＩＯＰの上昇をもたらし、最終的に視神経を損傷する。Ｍｕｃｋｅ（ＩＤｒｕｇｓ ２００７，１０（１）：３７−４１）は、眼性疾患、例えば、加齢関連黄斑変性（ＡＭＤ）および緑内障を治療するための種々の標的に対するｓｉＲＮＡを含む、現在の治療薬を再検討している。
【００２２】
［急性呼吸窮迫症候群］
呼吸窮迫症候群（ＲＤＳ）または成人呼吸窮迫症候群（幼児呼吸窮迫症候群（ＩＲＤＳ）と対照的に）とも呼ばれる急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）は、種々の形態の肺への損傷に対する深刻な反応である。これは、浸透圧の高い肺水腫をもたらす、最も重要な疾病である。
【００２３】
ＡＲＤＳは、多様な直接的および間接的損傷によって引き起こされる重症肺疾患である。炎症、低酸素血症を引き起こし、頻繁に多臓器不全をもたらす炎症仲介物質の全身性放出を伴う、ガス交換障害に至る肺実質の炎症によって特徴付けられる。この状態は、命にかかわり、死を招く場合も多く、通常は機械的人口換気および集中治療室に入る必要がある。重症度の低い形態は、急性肺損傷（ＡＬＩ）と呼ばれる。
【００２４】
急性肺移植拒絶反応
急性同種移植拒絶反応は、免疫抑制薬の進化にもかかわらず、依然として肺移植における重大な問題である。拒絶反応、および最終的には早期罹患および死亡が、虚血虚血再灌流（Ｉ／Ｒ）障害および低酸素損傷に起因し得る。
【００２５】
脊髄損傷
脊髄損傷または脊髄症は脊髄の障害であり、感覚および／または可動性の損失をもたらす。２つの最も一般的な種類の脊髄損傷は、外傷および疾患による。外傷性損傷は、自動車事故、落下、砲撃、ダイビング事故等による場合が多い。脊髄に影響し得る疾患には、ポリオ、二分脊椎、腫瘍、およびフリードライヒ失調症が含まれる。
【００２６】
臓器移植後の虚血再灌流損傷
虚血再灌流損傷（ＩＲＩ）は、臓器同種移植の被提供者の主な死亡原因の１つである。重大なＩＲＩは、死亡した提供者からのすべての臓器移植において、また生きた提供者からの一部の臓器移植において生じる。急性拒絶反応の増大および長期の同種移植機能不全に寄与する。末期段階肺疾患の多数の患者にとって唯一の根治治療である肺移植は、個体同種移植の被提供者すべてにおいて、乏しい生存率を有する。
【００２７】
褥瘡
床擦れ（ｂｅｄｓｏｒｅｓまたはｐｒｅｓｓｕｒｅ ｕｌｃｅｒｓ）として知られる場合が多い褥瘡は、損傷した皮膚および組織の領域である。軽減されない圧力がかかると、組織虚血が進行し、間質組織内に代謝廃棄物が蓄積して、酸素欠乏症および細胞死をもたらし得る。この圧力に誘発された虚血は、過剰な組織低酸素にもつながり、細菌の増殖および組織の破壊をさらに進行させる。
【００２８】
加齢関連黄斑変性
アメリカにおける６５歳以上の個人において、最善矯正視力の低下の最も一般的な原因は、加齢関連黄斑変性（ＡＭＤ）として知られる網膜疾患である。ＡＭＤに罹患した眼の領域は、網膜の中心にある小領域であり、主に光受容細胞で構成される黄斑である。ＡＭＤが進行するにつれて、疾患は、はっきりした中心視野の損失によって特徴付けられる。いわゆる「乾性」ＡＭＤは、ＡＭＤ患者の約８５％から９０％を占め、細胞の全体萎縮による眼色素分布の変化、光受容体の損失、および網膜機能の消失を伴う。「湿性」ＡＭＤは、異常な脈絡膜血管の増殖を伴い、網膜下空間に血栓または傷痕をもたらす。したがって、「湿性」ＡＭＤは、神経網膜下に異常な脈絡膜血管新生ネットワーク（脈絡膜新血管形成，ＣＮＶ）が形成されるため生じる。新しく形成された血管は、過度に漏れやすい。これにより、網膜下液および血液が蓄積し、視力の損失に至る。最終的に、脈絡膜および網膜を含む大きい円盤上の傷痕が形成されるにつれて、関係領域における機能的網膜が完全に損失する。乾性ＡＭＤの患者は低下した視力を維持し得るが、湿性ＡＭＤは、失明をもたらす場合が多い。（Ｈａｍｄｉ&Ｋｅｎｎｅｙ，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ｅ３０５−３１４，Ｍａｙ ２００３）。
【００２９】
糖尿病性網膜症
糖尿病性網膜症（ＤＲ）は、過度の毛細血管浸透性、血管閉鎖、および新しい血管の増殖を呈する網膜血管障害として認識される。ＤＲは、２つの段階、すなわち非増殖的および増殖的段階で生じる。非増殖段階において、疾患は、網膜毛細血管周皮細胞の損失、基底膜の肥厚化、および微細動脈瘤、点状出血、硬性白斑点の進行によって特徴付けられる。増殖段階において、疾患は、広範な新血管形成、硝子体への血管侵入、その後のけん引性網膜剥離による出血および線維症（重度の視覚障害に至る）によって特徴付けられる。本発明の出願人に対する米国特許第６，７４０，７３８号および関連特許ならびに出願は、網膜症に関与するＲＴＰ８０１遺伝子およびタンパク質の阻害を対象とする。
【００３０】
口腔粘膜炎
口内炎とも呼ばれる口腔粘膜炎は、化学療法および放射線治療レジメンの一般的かつ消耗性の副作用であり、口および咽頭の紅斑および有痛性の潰瘍性病巣として現れる。重度の口腔粘膜炎を持つ対象の場合、食べる、飲む、飲み込む、および話す等の日常活動が困難または不可能になり得る。緩和療法には、鎮痛剤および局所洗浄を含む。
【００３１】
ドライアイ症候群
ドライアイ症候群は、通常、眼を潤滑化する涙液膜の産生の減少に起因する一般的な問題である。ドライアイ患者の大部分は、不快感を経験し、失明は経験しないが、重症例では、角膜が損傷または感染し得る。湿潤点眼剤（人口涙液）を治療に使用してもよいが、より重症例には潤滑軟膏が役立ち得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００３２】
【特許文献１】ＷＯ ０１／３６６４６号
【特許文献２】米国特許出願第１１／６５５，６１０号
【特許文献３】米国特許第６，７４０，７３８号
【非特許文献】
【００３３】
【非特許文献１】Ｇｉｌ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，２０００．５：１０７−１１４
【非特許文献２】Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ２００１，４１１：４９４−４９８
【非特許文献３】Ｃａｐｌｅｎ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ ２００１，９８：９７４２−９７４７
【非特許文献４】Ｆｉｒｅ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ １９９８，３９１：８０６
【非特許文献５】Ａｍｂｒｏｓ Ｖ．Ｎａｔｕｒｅ ２００４，４３１：３５０−３５５
【非特許文献６】Ｂａｒｔｅｌ ＤＰ．Ｃｅｌｌ．２００４ １１６（２）：２８１−９７
【非特許文献７】Ｅｌｂａｓｈｉｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，２００１，１５：１８８
【非特許文献８】Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２００１，４０９：３６３−６
【非特許文献９】Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２００３，４２５：４１５−９
【非特許文献１０】ＭｃＭａｎｕｓ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ Ｇｅｎｅｔ，２００２，３：７３７−４７
【非特許文献１１】Ｐａｄｄｉｓｏｎ ａｎｄ Ｈａｎｎｏｎ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００３，５（３）：２１７−２４
【非特許文献１２】Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，ｅｔ ａｌ．，ＲＮＡ．２００１，７（１１）：１５０９−２１
【非特許文献１３】Ｎｉｓｈｉｋｕｒａ，Ｃｅｌｌ．２００１，１０７（４）：４１５−８
【非特許文献１４】Ｂｉｔｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２００５，１１（１）：５０−５５
【非特許文献１５】Ｂａｒｉｋ（Ｍｏｌ．Ｍｅｄ ２００５，８３：７６４−７７３）
【非特許文献１６】Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙ（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ２００７ ８（３）：４６９−８２）
【非特許文献１７】Ｋａｉｓｅｒ，Ａｍ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２００６ １４２（４）：６６０−８
【非特許文献１８】Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ′ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，６ｔｈ ｅｄ．，Ａ．Ｇｏｏｄｍａｎ Ｇｉｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ；Ｍａｃｍｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，１９８０．ＮＹ，ｐｐ．１１６９−７１
【非特許文献１９】Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ２００３，１２０（１）：１９１−２０５
【非特許文献２０】Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，２３（２４）：８５９６−８６０７
【非特許文献２１】Ｋｏｍａｒｏｖ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９９，２８５（５４３４）：１７３３−７
【非特許文献２２】Ｓｕｐａｖｅｋｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．２００３，６３（５）：１７１４−２４
【非特許文献２３】Ｍｏｒｅｓｏ ｅｔ ａｌ．１９９９．Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１４（４）：９３０−３５
【非特許文献２４】Ｋａｈｎ ａｎｄ Ｍｉｌｔｏｎ，Ａｍ Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１９８０，１１１（６）：７６９−７６
【非特許文献２５】Ｍｕｃｋｅ（ＩＤｒｕｇｓ ２００７，１０（１）：３７−４１）
【非特許文献２６】Ｈａｍｄｉ&Ｋｅｎｎｅｙ，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ｅ３０５−３１４，Ｍａｙ ２００３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３４】
上述の疾患および疾病を治療するためのより有効な治療法は、優れた治療価値となり得る。
【課題を解決するための手段】
【００３５】
本発明は、ＴＰ５３ＢＰ２、ＬＲＤＤ、ＣＹＢＡ、ＡＴＦ３、ＣＡＳＰ２、ＮＯＸ３、ＨＲＫ、ＣＩＱＢＰ、ＢＮＩＰ３、ＭＡＰＫ８、ＭＡＰＫ１４、ＲＡＣ１、ＧＳＫ３Ｂ、Ｐ２ＲＸ７、ＴＲＰＭ２、ＰＡＲＧ、ＣＤ３８、ＳＴＥＡＰ４、ＢＭＰ２、ＣＸ４３、ＴＹＲＯＢＰ、ＣＴＧＦ、ＳＰＰ１、ＲＴＮ４Ｒ、ＡＮＸＡ２、ＲＨＯＡ、およびＤＵＯＸ１から成る群から選択されるアポトーシス促進遺伝子の阻害剤を提供する（遺伝子の詳細については以下表Ａを参照）。様々な実施形態において、阻害剤は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アプタマー、アンチセンス分子、ｍｉＲＮＡ、リボザイム、および抗体から成る群から選択される。ここでの好ましい実施形態において、阻害剤は、ｓｉＲＮＡ．である。
【００３６】
したがって、一態様において、本発明は、ＴＰ５３ＢＰ２、ＬＲＤＤ、ＣＹＢＡ、ＡＴＦ３、ＣＡＳＰ２、ＮＯＸ３、ＨＲＫ、ＣＩＱＢＰ、ＢＮＩＰ３、ＭＡＰＫ８、ＭＡＰＫ１４、ＲＡＣ１、ＧＳＫ３Ｂ、Ｐ２ＲＸ７、ＴＲＰＭ２、ＰＡＲＧ、ＣＤ３８、ＳＴＥＡＰ４、ＢＭＰ２、ＣＸ４３、ＴＹＲＯＢＰ、ＣＴＧＦ、ＳＰＰ１、ＲＨＯＡ、およびＤＵＯＸ１から成る群から選択されるアポトーシス促進遺伝子の発現を阻害する、新規の２本鎖オリゴリボヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態において、遺伝子は、ＴＰ５３ＢＰ２、ＣＡＳＰ２、ＮＯＸ３、ＲＡＣ１、ＲＨＯＡ、またはＤＵＯＸ１のうちの１つである。他の実施形態において、遺伝子は、ＬＲＤＤ、ＣＹＢＡ、ＨＲＫ、ＢＮＩＰ３、ＣＤ３８、ＢＭＰ２、またはＳＰＰ１のうちの１つである。本発明は、１つ以上のそのようなオリゴリボヌクレオチド、または該オリゴリボヌクレオチドを発現することができるベクターを含有する、医薬組成物もまた提供する。本発明は、さらに、それを必要とする対象における、様々な疾病または状態の発生または重篤性の治療または阻止方法であって、該疾病もしくは状態および／またはそれらに関連する症状は、聴力損失、急性腎不全（ＡＲＦ）、緑内障、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）および他の急性肺および呼吸器損傷、移植、肺、肝臓、心臓、膵臓、および腎臓移植を含む、臓器移植後の虚血再灌流障害、腎臓および神経毒性、脊髄損傷、褥瘡、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、ドライアイ症候群、口腔粘膜炎、ならびに慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）から成る群から選択される、方法に関する。そのような方法は、そのような治療を必要とする哺乳動物に、少なくとも１つのそのような遺伝子の発現または活性を阻害または低減する、予防上または治療上有効な量の、１つ以上のそのような化合物を投与するステップを伴う。
【００３７】
一態様において、本発明は、構造
５´  （Ｎ）ｘ−Ｚ  ３´  （アンチセンス鎖）
３´  Ｚ´−（Ｎ´）ｙ  ５´  （センス鎖）
を有する化合物であって、式中、ＮおよびＮ´のそれぞれは、その糖残基において修飾され得る、または未修飾であり得る、ヌクレオチドであり、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙのそれぞれは、それぞれの連続したＮまたはＮ´が、共有結合により次のＮまたはＮ´に接合される、オリゴヌクレオチドであり、
ｘおよびｙのそれぞれは、１８から４０の間の整数であり、
ＺおよびＺ´のそれぞれは、存在し得る、または不在であり得るが、存在する場合は、それが存在する鎖の３´末端に共有結合的に付着した、１〜５つの連続したヌクレオチドであり、
（Ｎ´）ｙの配列は、その配列が、配列番号１〜４８のうちのいずれか１つに記載される、ｍＲＮＡ内に存在する、化合物を提供する。１つの実施形態において（Ｎ´）ｙの配列は、その配列が、配列番号１〜４１、または配列番号４６〜４８のうちの１つに記載される、ｍＲＮＡ内に存在する。ここで好ましい遺伝子は、ＴＰ５３ＢＰ２（配列番号１〜２）、ＬＲＤＤ（配列番号３〜５）、ＣＹＢＡ（配列番号６）、ＣＡＳＰ２（配列番号１０〜１１）、ＮＯＸ３（配列番号１２）、ＨＲＫ（配列番号１３）、ＢＮＩＰ３（配列番号１５）、ＲＡＣ１（配列番号２４〜２６）、ＣＤ３８（配列番号３２）、ＢＭＰ２（配列番号３４）、ＳＰＰ１（配列番号３９〜４１）、ＲＨＯＡ（配列番号４６）、およびＤＵＯＸ１（配列番号４７〜４８）から成る群から選択される、哺乳類遺伝子である。配列番号は、列挙した遺伝子のｍＲＮＡ配列を表す。
【００３８】
いくつかの実施形態において、それぞれの連続したＮまたはＮ´を接合する共有結合は、ホスホジエステル結合である。様々な実施形態において全ての共有結合は、ホスホジエステル結合である。
【００３９】
様々な実施形態において、本化合物は、ｘ＝ｙであり、ｘおよびｙのそれぞれは、１９、２０、２１、２２または２３である、リボヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、ｘ＝ｙ＝２３である。他の実施形態において、ｘ＝ｙ＝１９である。
【００４０】
いくつかの実施形態において、本化合物は、平滑末端化され、例えば、ＺおよびＺ´の両方は不在である。代替の実施形態において、本化合物は、ＺまたはＺ´のうちの少なくとも１つは存在する、少なくとも１つの３´オーバーハングを含む。ＺおよびＺ´は、１つ以上の共有結合的に連結された修飾または非修飾ヌクレオチド、例えば逆位ｄＴもしくはｄＡ、ｄＴ、ＬＮＡ、鏡映ヌクレオチド等を独立して含み得る。いくつかの実施形態において、ＺおよびＺ´のそれぞれは、ｄＴおよびｄＴｄＴから独立して選択される。
【００４１】
いくつかの実施形態において、ＮまたはＮ´は、１つ以上のリボヌクレオチドの糖残基において修飾を含む。他の実施形態において、本化合物は、糖残基において修飾される少なくとも１つのリボヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、本化合物は、糖残基の２´位において修飾を含む。いくつかの実施形態において、２´位における修飾は、アミノ、フルオロ、アルコキ、またはアルキル部分の存在を含む。特定の実施形態において、２´修飾は、メトキシ部分を含む。ここで好ましい一つの修飾は、糖残基の２´メトキシである（２´−Ｏ−メチル、２´−Ｏ−Ｍｅ、２´−Ｏ−ＣＨ３）。
【００４２】
いくつかの実施形態において、本化合物は、アンチセンス鎖およびセンス鎖のうちの１つまたは両方において、修飾交互リボヌクレオチドを含む。特定の実施形態において、本化合物は、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、修飾交互リボヌクレオチドを含む。他の実施形態において、本化合物は、アンチセンス鎖のみにおいて、修飾交互リボヌクレオチドを含む。特定の実施形態において、アンチセンス鎖の中間リボヌクレオチド、例えば１９ｍｅｒ鎖では１０位、または２３ｍｅｒ鎖では１２位のリボヌクレオチドは、修飾されない。
【００４３】
さらなる実施形態において、本化合物は、交互位置において修飾リボヌクレオチドを含み、そこでは（Ｎ）ｘの５´および３´末端におけるそれぞれのＮは、それらの糖残基において修飾され、（Ｎ´）ｙの５´および３´末端におけるそれぞれのＮ´は、それらの糖残基において修飾されない。いくつかの実施形態において、（Ｎ）ｘまたは（Ｎ´）ｙのいずれも、３´および５´末端においてリン酸化されない。他の実施形態において、（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙのいずれかまたは両方は、３´末端においてリン酸化される。
【００４４】
様々な実施形態において、本化合物は、表Ｂ１〜Ｂ７６（配列番号２７７から５０９７０および５０９９３〜６８６５４）に示すアンチセンス配列を含む。他の実施形態において、本発明は、表Ｂ１〜Ｂ７６（配列番号２７７から５０９７０および５０９９３〜６８６５４）に示すアンチセンス配列を含む、哺乳類発現ベクターを提供する。特定の実施形態において、ＮおよびＮ´は、表Ｃ１、Ｃ２、またはＣ３（配列番号９７〜２７６および配列番号５０９７１〜５０９９２）のうちのいずれか１つに記載されるオリゴマーから選択される。
【００４５】
特定の実施形態において、本発明は、構造
５´  （Ｎ）ｘ−Ｚ  ３´  （アンチセンス鎖）
３´  Ｚ´−（Ｎ´）ｙ  ５´  （センス鎖）
を有する化合物であって、式中、ＮおよびＮ´のそれぞれは、その糖残基において修飾され得る、または未修飾であり得る、リボヌクレオチドであり、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙのそれぞれは、それぞれの連続したＮまたはＮ´が、共有結合により次のＮまたはＮ´に接合される、オリゴマーであり、
ｘおよびｙのそれぞれは、１９から４０の間の整数であり、
ＺおよびＺ´のそれぞれは、存在し得る、または不在であり得るが、存在する場合は、それが存在する鎖の３´末端に共有結合的に付着した、１〜５つの連続したヌクレオチドであり、
（Ｎ´）ｙの配列が、その配列が、配列番号４６、配列番号１〜４１、または配列番号４７〜４８のうちの１つに記載される、ｍＲＮＡ内に存在する、化合物を提供する。
【００４６】
特定の実施形態において、本発明は、構造
５´  （Ｎ）ｘ−Ｚ  ３´  （アンチセンス鎖）
３´  Ｚ´−（Ｎ´）ｙ  ５´  （センス鎖）
を有する化合物であって、式中、ＮおよびＮ´のそれぞれは、その糖残基において修飾され得る、または未修飾であり得る、リボヌクレオチドであり、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙのそれぞれは、それぞれの連続したＮまたはＮ´が、共有結合により次のＮまたはＮ´に接合される、オリゴマーであり、
ｘおよびｙのそれぞれは、１９から４０の間の整数であり、
ＺおよびＺ´のそれぞれは、存在し得る、または不在であり得るが、存在する場合は、それが存在する鎖の３´末端に共有結合的に付着した、１〜５つの連続したヌクレオチドであり、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙの配列は、配列番号２７７から５０９７０および５０９９３〜６８６５４のうちのいずれか１つに記載される、化合物を提供する。
【００４７】
特定の好ましい実施形態において、（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙのそれぞれは、配列番号９７〜２７６（表Ｃ１、Ｃ２）および配列番号５０９７１〜５０９９２（表Ｃ３）のうちのいずれか１つに記載される。
【００４８】
特定の実施形態において、本発明は、構造
５´  （Ｎ）ｘ  ３´  アンチセンス鎖
３´  （Ｎ´）ｙ  ５´  センス鎖
を有する化合物であって、式中、ＮおよびＮ´のそれぞれは、その糖残基において修飾され得る、または未修飾であり得る、ヌクレオチドであり、
ｘ＝ｙ＝１９であり、（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙの配列は、完全に相補的であり、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙにおける交互リボヌクレオチドは、修飾されて、リボヌクレオチドの糖残基において２´−Ｏ−メチル修飾をもたらし、
（Ｎ）ｘの５´および３´末端におけるリボヌクレオチドは、修飾され、
（Ｎ）ｙの５´および３´末端におけるリボヌクレオチドは、修飾されず、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙは、３´および５´末端においてリン酸化されるか、またはリン酸化されず、
ＮおよびＮ´のそれぞれは、表Ｂ１〜Ｂ２５またはＢ７６（配列番号２７７から１５１１４および配列番号６８６４７〜６８６５４）に記載されるオリゴマーの群から選択される、化合物を提供する。特定の実施形態において、ＮおよびＮ´は、表Ｃ１およびＣ３（配列番号９７〜２６６（表Ｃ１）および配列番号５０９７１〜５０９９２（表Ｃ３）のうちのいずれか１つに記載されるオリゴマーから選択される。
【００４９】
特定の実施形態において、本発明は、構造
５´  （Ｎ）ｘ  ３´  アンチセンス鎖
３´  （Ｎ´）ｙ  ５´  センス鎖
を有する化合物であって、式中、ｘ＝ｙ＝２３であり、（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙの配列は、完全に相補的であり、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙにおける交互リボヌクレオチドは、修飾されて、リボヌクレオチドの糖残基において２´−Ｏ−メチル修飾をもたらし、
（Ｎ）ｘの５´および３´末端におけるリボヌクレオチドは、修飾され、
（Ｎ）ｙの５´および３´末端におけるリボヌクレオチドは、修飾されず、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙは、３´および５´末端においてリン酸化されるか、またはリン酸化されず、
ＮおよびＮ´のそれぞれは、表Ｂ５１〜Ｂ７５（配列番号３０９３９から６８６４６）に記載されるオリゴマーの群から選択される、化合物を提供する。特定の実施形態において、ＮおよびＮ´は、表Ｃ２（配列番号２６７〜２７６）に記載されるオリゴマーから選択される。
【００５０】
第２の態様において、本発明は、遺伝子が、ＴＰ５３ＢＰ２、ＬＲＤＤ、ＣＹＢＡ、ＡＴＦ３、ＣＡＳＰ２、ＮＯＸ３、ＨＲＫ、ＣＩＱＢＰ、ＢＮＩＰ３、ＭＡＰＫ８、ＭＡＰＫ１４、ＲＡＣ１、ＧＳＫ３Ｂ、Ｐ２ＲＸ７、ＴＲＰＭ２、ＰＡＲＧ、ＣＤ３８、ＳＴＥＡＰ４、ＢＭＰ２、ＣＸ４３、ＴＹＲＯＢＰ、ＣＴＧＦ、ＳＰＰ１、ＲＴＮ４Ｒ、ＡＮＸＡ２ ＲＨＯＡ、およびＤＵＯＸ１から成る群から選択されるヒト遺伝子の発現を阻害するのに有効な量の、本発明の１つ以上の化合物と、医薬的に許容される担体とを含有する、医薬組成物を提供する。
【００５１】
別の態様において、本発明は、ＴＰ５３ＢＰ２、ＬＲＤＤ、ＣＹＢＡ、ＡＴＦ３、ＣＡＳＰ２、ＮＯＸ３、ＨＲＫ、ＣＩＱＢＰ、ＢＮＩＰ３、ＭＡＰＫ８、ＭＡＰＫ１４、ＲＡＣ１、ＧＳＫ３Ｂ、Ｐ２ＲＸ７、ＴＲＰＭ２、ＰＡＲＧ、ＣＤ３８、ＳＴＥＡＰ４、ＢＭＰ２、ＣＸ４３、ＴＹＲＯＢＰ、ＣＴＧＦ、ＳＰＰ１、ＲＴＮ４Ｒ、ＡＮＸＡ２、
ＲＨＯＡ、およびＤＵＯＸ１から選択される遺伝子の発現に関連する、疾病もしくは疾患、または該疾病もしくは疾患に関連する症状の治療を必要とする対象の治療のための方法であって、それらのアポトーシス促進遺伝子のうちの少なくとも１つの発現を低減または阻害する量のｓｉＲＮＡを、対象に投与するステップを含む、方法に関する。
【００５２】
より具体的には、本発明は、急性腎不全（ＡＲＦ）、聴力損失、緑内障、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）および他の急性肺および呼吸器損傷、肺、腎臓、骨髄、心臓、膵臓、角膜、または肝臓移植を含む臓器移植における損傷（例えば虚血再灌流障害）、腎臓毒性、脊髄損傷、褥瘡、ドライアイ症候群、口腔粘膜炎、ならびに慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）に罹患する対象の治療に有用である方法および組成物を提供する。
【００５３】
本発明の方法は、ＴＰ５３ＢＰ２、ＬＲＤＤ、ＣＹＢＡ、ＡＴＦ３、ＣＡＳＰ２、ＮＯＸ３、ＨＲＫ、ＣＩＱＢＰ、ＢＮＩＰ３、ＭＡＰＫ８、ＭＡＰＫ１４、ＲＡＣ１、ＧＳＫ３Ｂ、Ｐ２ＲＸ７、ＴＲＰＭ２、ＰＡＲＧ、ＣＤ３８、ＳＴＥＡＰ４、ＢＭＰ２、ＣＸ４３、ＴＹＲＯＢＰ、ＣＴＧＦ、ＳＰＰ１、ＲＴＮ４Ｒ、ＡＮＸＡ２、ＲＨＯＡ、およびＤＵＯＸ１から成る群から選択される遺伝子の発現を低減、阻害、または下方制御する１つ以上の阻害化合物、特に治療上有効な用量のｓｉＲＮＡを対象に投与し、それにより患者を治療するステップを含む。
【００５４】
一実施形態において、本発明は、それを必要とする対象における、聴力損失、急性腎不全、緑内障、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、臓器移植拒絶反応、虚血再灌流障害、腎臓毒性、神経毒性、脊髄損傷、褥瘡、変形性関節症、ドライアイ症候群、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）から選択される疾病または状態の治療方法であって、該疾病または状態の治療に有効な量の、そのｍＲＮＡ配列が配列番号１〜４１または４６〜４８のうちのいずれか１つに記載される遺伝子の発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、対象に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００５５】
一実施形態において、本発明は、それを必要とする対象における、急性腎不全の治療方法であって、急性腎不全の治療に有効な量の、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１〜２に記載される）、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＹＢＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号６に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１５に記載される）、またはＲＡＣ１（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、対象に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００５６】
一実施形態において、本発明は、それを必要とする対象における脊髄損傷の治療方法であって、脊髄損傷の治療に有効な量の、ＲＨＯＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号４６に記載される）、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１〜２に記載される）、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＹＢＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号６に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１５に記載される）、ＲＡＣ１（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）、ＣＤ３８（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３２に記載される）、またはＢＭＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３４に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、対象に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００５７】
一実施形態において、本発明は、それを必要とする対象における聴力損失の治療方法であって、聴力損失の治療に有効な量の、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号ｌ〜２に記載される）、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＹＢＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号６に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、ＮＯＸ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１２に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１５に記載される）、ＲＡＣ１（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）、ＣＤ３８（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３２に記載される）、またはＢＭＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３４に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、対象に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００５８】
一実施形態において、本発明は、それを必要とする対象における、慢性閉塞性肺疾患、急性呼吸窮迫症候群、および急性肺損傷から選択される疾病または状態の治療方法であって、該疾病または状態の治療に有効な量の、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＹＢＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号６に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１５に記載される）、ＲＡＣ１（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）、ＣＤ３８（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３２に記載される）、ＢＭＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３４に記載される）、ＳＰＰ１（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３９〜４１に記載される）、またはＤＵＯＸ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号４７〜４８に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、対象に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００５９】
一実施形態において、本発明は、臓器移植被提供者または臓器移植提供者である対象の治療方法であって、移植の拒絶反応の阻止に有効な量の、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１〜２に記載される）、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＹＢＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号６に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１５に記載される）、ＲＡＣ１（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）、ＧＳＫ３Ｂ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２７に記載される）、Ｐ２ＲＸ７（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２８に記載される）、ＴＲＰＭ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３０に記載される）、またはＰＡＲＧ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３１に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、対象に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００６０】
一実施形態において、本発明は、それを必要とする対象における緑内障の治療方法であって、緑内障の治療に有効な量の、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号ｌ〜２に記載される）、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＹＢＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号６に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１５に記載される）、ＲＡＣ１（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）、ＳＰＰ１（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３９〜４１に記載される）、またはＲＨＯＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号４６に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、対象に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００６１】
一実施形態において、本発明は、それを必要とする対象における口腔粘膜炎の治療方法であって、口腔粘膜炎の治療に有効な量の、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１〜２に記載される）、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、またはＡＴＦ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号７〜９に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、対象に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００６２】
一実施形態において、本発明は、それを必要とする対象における変形性関節症の治療方法であって、変形性関節症の治療に有効な量の、ＳＰＰｌ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３９〜４１に記載される）の発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、対象に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００６３】
一実施形態において、本発明は、それを必要とする対象におけるドライアイ症候群の治療方法であって、当該症候群の治療に有効な量の、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が、配列番号１〜２に記載される）、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＹＢＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号６に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号 １０〜１１に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号 １５に記載される）、またはＲＡＣ１（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、対象に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００６４】
一実施形態において、本発明は、それを必要とする対象における褥瘡の治療方法であって、褥瘡の治療に有効な量の、ＣＩＱＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１４に記載される）、ＲＡＣ１（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）、ＧＳＫ３Ｂ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２７に記載される）、Ｐ２ＲＸ７（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２８に記載される）、ＴＲＰＭ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３０に記載される）、ＰＡＲＧ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３１に記載される）、ＣＤ３８（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３２に記載される）、ＳＴＥＡＰ４（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３３に記載される）、ＢＭＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３４に記載される）、ＧＪＡ１（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３５に記載される）、またはＴＹＲＯＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３６〜３７に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、対象に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００６５】
ｓｉＲＮＡ化合物の調製に有用な１９ｍｅｒ、２１ｍｅｒ、および２３ｍｅｒのセンスおよび対応するアンチセンス配列のリストは、配列番号２７７から５０９７０および５０９９３〜６８６５４に記載され、表Ｂ、表Ｂ１〜Ｂ７６において配列対として示される。
【００６６】
一実施形態において、本発明は、それを必要とする対象における、聴力損失、急性腎不全、緑内障、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、臓器移植拒絶反応、虚血再灌流障害、腎臓毒性、神経毒性、脊髄損傷、褥瘡、変形性関節症、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）から選択される疾病または状態の治療方法であって、該疾病または状態の治療に有効な量の、その配列が配列番号９０〜９３のうちのいずれか１つに記載されるポリペプチドを阻害する抗体を、対象に投与するステップを含む、方法を提供する。
【００６７】
一実施形態において、本発明は、その配列が配列番号９０〜９３のうちのいずれか１つに記載されるポリペプチドを阻害するのに有効な量の、該ポリペプチドを阻害する抗体と、医薬的に許容される担体とを含有する、医薬組成物を提供する。
【００６８】
一実施形態において、本発明は、聴力損失、急性腎不全、緑内障、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、臓器移植拒絶反応、虚血再灌流障害、腎臓毒性、神経毒性、脊髄損傷、褥瘡、変形性関節症、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）から選択される、疾病または状態に罹患する対象を治療するための組成物の調製のための、治療上有効な用量のオリゴヌクレオチドの使用であって、該オリゴヌクレオチドは、そのｍＲＮＡ配列が配列番号１〜４１または４６〜４８のうちのいずれか１つに記載される遺伝子の発現を阻害する、使用に関する。
【００６９】
一実施形態において、本発明は、聴力損失、急性腎不全、緑内障、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、臓器移植拒絶反応、虚血再灌流障害、腎臓毒性、神経毒性、脊髄損傷、褥瘡、変形性関節症、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）から選択される、疾病または状態に罹患する対象を治療するための組成物の調製のための、治療上有効な用量の抗体の使用であって、該抗体は、その配列が配列番号９０〜９３のうちのいずれか１つに記載されるポリペプチドを阻害する、使用に関する。
【００７０】
［特定実施態様１］
ある特定の実施態様において、本発明は、
構造
５´  （Ｎ）ｘ−Ｚ  ３´  （アンチセンス鎖）
３´  Ｚ´−（Ｎ´）ｙ  ５´  （センス鎖）
を有する化合物であって、式中、ＮおよびＮ´のそれぞれは、その糖残基において修飾され得る、または未修飾であり得る、リボヌクレオチドであり、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙのそれぞれは、それぞれの連続したＮまたはＮ´が、共有結合により次のＮまたはＮ´に接合される、オリゴマーであり、
ｘおよびｙのそれぞれは、１９から４０の間の整数であり、
ＺおよびＺ´のそれぞれは、存在し得る、または不在であり得るが、存在する場合は、それが存在する前記鎖の３´末端に共有結合的に付着した、１〜５つの連続したヌクレオチドであり、
（Ｎ´）ｙの配列は、その配列が、配列番号４６、配列番号１〜４１、または配列番号４７〜４８のうちの１つに記載される、ｍＲＮＡ内に存在する、化合物である。
【００７１】
［特定実施態様２］
ある特定の実施態様において、本発明は、
それぞれの連続したＮまたはＮ´を接合する前記共有結合は、ホスホジエステル結合である、特定実施態様１に記載の化合物である。
【００７２】
［特定実施態様３］
ある特定の実施態様において、本発明は、
ｘ＝ｙである、特定実施態様１から２のうちのいずれかに記載の化合物である。
【００７３】
［特定実施態様４］
ある特定の実施態様において、本発明は、
ｘおよびｙのそれぞれは、１９、２１、または２３である、特定実施態様１から３のうちのいずれかに記載の化合物である。
【００７４】
［特定実施態様５］
ある特定の実施態様において、本発明は、
ＺおよびＺ´が不在である、特定実施態様１から４のうちのいずれかに記載の化合物である。
【００７５】
［特定実施態様６］
ある特定の実施態様において、本発明は、
ＺまたはＺ´のうちの１つが存在する、特定実施態様１から４のうちのいずれかに記載の化合物である。
【００７６】
［特定実施態様７］
ある特定の実施態様において、本発明は、
ＮまたはＮ´のそれぞれは、その糖残基において修飾されない、特定実施態様１から６のうちのいずれかに記載の化合物である。
【００７７】
［特定実施態様８］
ある特定の実施態様において、本発明は、
少なくとも１つのＮまたはＮ´は、その糖残基において修飾を含む、特定実施態様１から６のうちのいずれかに記載の化合物である。
【００７８】
［特定実施態様９］
ある特定の実施態様において、本発明は、
前記修飾は、２´位において修飾を含む、特定実施態様８に記載の化合物である。
【００７９】
［特定実施態様１０］
ある特定の実施態様において、本発明は、
２´位における前記修飾は、アミノ基、フルオロ基、アルコキシ基、またはアルキル基の存在を含む、特定実施態様９に記載の化合物である。
【００８０】
［特定実施態様１１］
ある特定の実施態様において、本発明は、
前記修飾は、アルコキシ基の存在を含む、特定実施態様８から１０のうちのいずれかに記載の化合物である。
【００８１】
［特定実施態様１２］
ある特定の実施態様において、本発明は、
前記アルコキシ基は、メトキシ（２´−Ｏ−メチル）基である、特定実施態様１１に記載の化合物である。
【００８２】
［特定実施態様１３］
ある特定の実施態様において、本発明は、
（Ｎ）ｘにおける交互リボヌクレオチドは、修飾され、（Ｎ´）ｙにおける交互リボヌクレオチドは、修飾される、特定実施態様１から６および８から１２のうちのいずれかに記載の化合物である。
【００８３】
［特定実施態様１４］
ある特定の実施態様において、本発明は、
（Ｎ）ｘの５´および３´末端におけるそれぞれのＮは、それらの糖残基において修飾され、（Ｎ´）ｙの５´および３´末端におけるそれぞれのＮ´は、それらの糖残基において修飾されない、特定実施態様１３に記載の化合物である。
【００８４】
［特定実施態様１５］
ある特定の実施態様において、本発明は、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙの両方は、それらの３´および５´末端の両方においてリン酸化されないか、又は、（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙの両方は、３´末端においてリン酸化される、特定実施態様１３から１４のうちのいずれかに記載の化合物である。
【００８５】
［特定実施態様１６］
ある特定の実施態様において、本発明は、
特定実施態様１に記載の化合物を発現することができる、ベクターである。
【００８６】
［特定実施態様１７］
ある特定の実施態様において、本発明は、
特定実施態様１から１５のうちのいずれかに記載の化合物、または前記遺伝子の阻害に有効な量のそのような化合物を発現することができるベクターと、医薬的に許容される担体とを含有する、医薬組成物である。
【００８７】
［特定実施態様１８］
ある特定の実施態様において、本発明は、
それを必要とする対象における、聴力損失、急性腎不全、緑内障、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、臓器移植拒絶反応、虚血再灌流障害、腎臓毒性、神経毒性、脊髄損傷、褥瘡、変形性関節症、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）から選択される疾病または状態の治療方法であって、前記疾病または状態の治療に有効な量の、そのｍＲＮＡ配列が、配列番号１〜４１または４６〜４８のうちのいずれか１つに記載される、遺伝子の発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、前記対象に投与するステップを含む、方法である。
【００８８】
［特定実施態様１９］
ある特定の実施態様において、本発明は、
前記オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡである、特定実施態様１８に記載の方法である。
【００８９】
［特定実施態様２０］
ある特定の実施態様において、本発明は、
前記ｓｉＲＮＡは、その配列が、配列番号９７〜６８６５４のうちのいずれか１つに記載される、オリゴマーを含む、特定実施態様１９に記載の方法である。
【００９０】
［特定実施態様２１］
ある特定の実施態様において、本発明は、
前記ｓｉＲＮＡは、その配列が、配列番号９７〜２７６（表Ｃ１、Ｃ２）、および配列番号５０９７１〜５０９９２（表Ｃ３）のうちのいずれか１つに記載される、オリゴマーを含む、特定実施態様１９に記載の方法である。
【００９１】
［特定実施態様２２］
ある特定の実施態様において、本発明は、
それを必要とする対象における急性腎不全の治療方法であって、前記急性腎不全の治療に有効な量の、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１〜２に記載される）、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＹＢＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号６に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１５に記載される）、またはＲＡＣｌ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、前記対象に投与するステップを含む、方法である。
【００９２】
［特定実施態様２３］
ある特定の実施態様において、本発明は、
前記オリゴヌクレオチドは、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１〜２に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、またはＲＡＣｌ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害する、特定実施態様２２に記載の方法である。
【００９３】
［特定実施態様２４］
ある特定の実施態様において、本発明は、
それを必要とする対象における脊髄損傷の治療方法であって、前記脊髄損傷の治療に有効な量の、ＲＨＯＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号４６に記載される）、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１〜２に記載される）、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＹＢＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号６に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１５に記載される）、ＲＡＣｌ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）、ＣＤ３８（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３２に記載される）、またはＢＭＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３４に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、前記対象に投与するステップを含む、方法である。
【００９４】
［特定実施態様２５］
ある特定の実施態様において、本発明は、
前記オリゴヌクレオチドは、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１５に記載される）、またはＲＨＯＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号４６に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害する、特定実施態様２４に記載の方法である。
【００９５】
［特定実施態様２６］
ある特定の実施態様において、本発明は、
それを必要とする対象における聴力損失の治療方法であって、前記聴力損失の治療に有効な量の、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１〜２に記載される）、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＹＢＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号６に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、ＮＯＸ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１２に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１５に記載される）、ＲＡＣｌ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）、ＣＤ３８（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３２に記載される）、またはＢＭＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３４に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、前記対象に投与するステップを含む、方法である。
【００９６】
［特定実施態様２７］
ある特定の実施態様において、本発明は、
前記オリゴヌクレオチドは、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号ｌ〜２に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１５に記載される）、ＮＯＸ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１２に記載される）、またはＲＡＣｌ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害する、特定実施態様２６に記載の方法である。
【００９７】
［特定実施態様２８］
ある特定の実施態様において、本発明は、
前記聴力損失は、化学療法薬の投与の結果である、特定実施態様２６から２７のうちのいずれかに記載の方法である。
【００９８】
［特定実施態様２９］
ある特定の実施態様において、本発明は、
前記化学療法薬は、シスプラチン、シスプラチン類似体、アミノグリコシド系抗生物質、キニーネ、キニーネ類似体、サリチル酸塩、サリチル酸塩類似体、またはループ利尿薬である、特定実施態様２８に記載の方法である。
【００９９】
［特定実施態様３０］
ある特定の実施態様において、本発明は、
前記聴力損失は、老人性難聴である、特定実施態様２６から２９のうちのいずれかに記載の方法である。
【０１００】
［特定実施態様３１］
ある特定の実施態様において、本発明は、
前記聴力損失は、音響外傷の結果である、特定実施態様２６から２９のうちのいずれかに記載の方法である。
【０１０１】
［特定実施態様３２］
ある特定の実施態様において、本発明は、
それを必要とする対象における、慢性閉塞性肺疾患、急性呼吸窮迫症候群、および急性肺損傷から選択される疾病または状態の治療方法であって、前記疾病または状態の治療に有効な量の、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＹＢＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号６に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１５に記載される）、ＲＡＣｌ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）、ＣＤ３８（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３２に記載される）、ＢＭＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３４に記載される）、ＳＰＰｌ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３９〜４１に記載される）、またはＤＵＯＸ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号４７〜４８に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、前記対象に投与するステップを含む、方法である。
【０１０２】
［特定実施態様３３］
ある特定の実施態様において、本発明は、
前記急性肺損傷は、虚血再灌流障害である、特定実施態様３２に記載の方法である。
【０１０３】
［特定実施態様３４］
ある特定の実施態様において、本発明は、
臓器移植被提供者または臓器移植提供者である対象の治療方法であって、前記移植の拒絶反応の阻止に有効な量の、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１〜２に記載される）、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＹＢＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号６に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１５に記載される）、ＲＡＣｌ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）、ＧＳＫ３Ｂ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２７に記載される）、Ｐ２ＲＸ７（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２８に記載される）、ＴＲＰＭ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３０に記載される）、またはＰＡＲＧ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３１に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、前記対象に投与するステップを含む、方法である。
【０１０４】
［特定実施態様３５］
ある特定の実施態様において、本発明は、
前記臓器は、腎臓または肺である、特定実施態様３４に記載の方法である。
【０１０５】
［特定実施態様３６］
ある特定の実施態様において、本発明は、
それを必要とする対象における緑内障の治療方法であって、緑内障の治療に有効な量の、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１〜２に記載される）、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＹＢＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号６に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１５に記載される）、ＲＡＣｌ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）、ＳＰＰｌ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３９〜４１に記載される）、またはＲＨＯＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号４６に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、前記対象に投与するステップを含む、方法である。
【０１０６】
［特定実施態様３７］
ある特定の実施態様において、本発明は、
それを必要とする対象における口腔粘膜炎の治療方法であって、口腔粘膜炎の治療に有効な量の、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１〜２に記載される）、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）またはＡＴＦ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号７〜９に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、前記対象に投与するステップを含む、方法である。
【０１０７】
［特定実施態様３８］
ある特定の実施態様において、本発明は、
それを必要とする対象における変形性関節症の治療方法であって、変形性関節症の治療に有効な量の、ＳＰＰｌ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３９〜４１に記載される）の発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、前記対象に投与するステップを含む、方法である。
【０１０８】
［特定実施態様３９］
ある特定の実施態様において、本発明は、
それを必要とする対象におけるドライアイ症候群の治療方法であって、前記症候群の治療に有効な量の、ＴＰ５３ＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１〜２に記載される）、ＬＲＤＤ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３〜５に記載される）、ＣＹＢＡ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号６に記載される）、ＣＡＳＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１に記載される）、ＢＮＩＰ３（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１５に記載される）、またはＲＡＣｌ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、前記対象に投与するステップを含む、方法である。
【０１０９】
［特定実施態様４０］
ある特定の実施態様において、本発明は、
それを必要とする対象における褥瘡の治療方法であって、前記褥瘡の治療に有効な量の、ＣＩＱＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１４に記載される）、ＲＡＣｌ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２４〜２６に記載される）、ＧＳＫ３Ｂ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２７に記載される）、Ｐ２ＲＸ７（そのｍＲＮＡ配列が配列番号２８に記載される）、ＴＲＰＭ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３０に記載される）、ＰＡＲＧ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３１に記載される）、ＣＤ３８（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３２に記載される）、ＳＴＥＡＰ４（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３３に記載される）、ＢＭＰ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３４に記載される）、ＧＪＡｌ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３５に記載される）、またはＴＹＲＯＢＰ（そのｍＲＮＡ配列が配列番号３６〜３７に記載される）のうちのいずれか１つの発現を阻害するオリゴヌクレオチドを、前記対象に投与するステップを含む、方法である。
【０１１０】
［特定実施態様４１］
ある特定の実施態様において、本発明は、
それを必要とする対象における、聴力損失、急性腎不全、緑内障、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、臓器移植拒絶反応、虚血再灌流障害、腎臓毒性、神経毒性、脊髄損傷、褥瘡、変形性関節症、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）から選択される疾病または状態の治療方法であって、前記疾病または状態の治療に有効な量の、その配列が、配列番号９０〜９３のうちのいずれか１つに記載される、ポリペプチドを阻害する抗体を、前記対象に投与するステップを含む、方法である。
【０１１１】
［特定実施態様４２］
ある特定の実施態様において、本発明は、
その配列が配列番号９０〜９３のうちのいずれか１つに記載されるポリペプチドを阻害するのに有効な量の、前記ポリペプチドを阻害する抗体と、医薬的に許容される担体とを含有する、医薬組成物である。
【０１１２】
［特定実施態様４３］
ある特定の実施態様において、本発明は、
それを必要とする対象における脊髄損傷の治療方法であって、前記脊髄損傷の治療に有効な量の、特定実施態様４２に記載の医薬組成物を、前記対象に投与するステップを含む、方法である。
【０１１３】
［特定実施態様４４］
ある特定の実施態様において、本発明は、
それを必要とする対象における、急性腎不全、聴力損失、および慢性閉塞性肺疾患から選択される疾病または状態の治療方法であって、前記疾病または状態の治療に有効な量の、特定実施態様４２に記載の医薬組成物を、前記対象に投与するステップを含む、方法である。
【０１１４】
［特定実施態様４５］
ある特定の実施態様において、本発明は、
聴力損失、急性腎不全、緑内障、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、臓器移植拒絶反応、虚血再灌流障害、腎臓毒性、神経毒性、脊髄損傷、褥瘡、変形性関節症、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）から選択される疾病または状態に罹患する対象を治療するための組成物の調製のための、治療上有効な用量のオリゴヌクレオチドの使用であって、前記オリゴヌクレオチドは、そのｍＲＮＡ配列が配列番号１〜４１または４６〜４８のうちのいずれか１つに記載される遺伝子の発現を阻害する、方法である。
【０１１５】
［特定実施態様４６］
ある特定の実施態様において、本発明は、
聴力損失、急性腎不全、緑内障、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、臓器移植拒絶反応、虚血再灌流障害、腎臓毒性、神経毒性、脊髄損傷、褥瘡、変形性関節症、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）から選択される、疾病または状態に罹患する対象を治療するための組成物の調製のための、治療上有効な用量の抗体の使用であって、前記抗体は、その配列が配列番号９０〜９３のうちのいずれか１つに記載されるポリペプチドを阻害する、使用である。
【０１１６】
［特定実施態様４７］
ある特定の実施態様において、本発明は、
構造
５´  （Ｎ）ｘ−Ｚ  ３´  （アンチセンス鎖）
３´  Ｚ´−（Ｎ´）ｙ  ５´  （センス鎖）
を有する化合物であって、式中、ＮおよびＮ´のそれぞれは、その糖残基において修飾され得る、または未修飾であり得る、リボヌクレオチドであり、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙのそれぞれは、それぞれの連続したＮまたはＮ´が、共有結合により次のＮまたはＮ´に接合される、オリゴマーであり、
ｘおよびｙのそれぞれは、１９から４０の間の整数であり、
ＺおよびＺ´のそれぞれは、存在し得る、または不在であり得るが、存在する場合は、それが存在する前記鎖の３´末端に共有結合的に付着した、１〜５つの連続したヌクレオチドであり、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙの配列は、配列番号９７から６８６５４のうちのいずれか１つに記載される、化合物である。
【０１１７】
［特定実施態様４８］
ある特定の実施態様において、本発明は、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙの前記配列は、配列番号９７〜２７６（表Ｃ１、Ｃ２）および配列番号５０９７１〜５０９９２（表Ｃ３）のうちのいずれか１つに記載される、特定実施態様４７に記載の化合物である。
【０１１８】
［特定実施態様４９］
ある特定の実施態様において、本発明は、
それを必要とする対象における、聴力損失、急性腎不全、緑内障、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、臓器移植拒絶反応、虚血再灌流障害、腎臓毒性、神経毒性、脊髄損傷、褥瘡、変形性関節症、ドライアイ症候群、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）から選択される疾病または状態の治療方法であって、前記疾病または状態の治療に有効な量の、特定実施態様４７から４８のうちのいずれかに記載の化合物を、前記対象に投与するステップを含む、方法である。
【０１１９】
［特定実施態様５０］
ある特定の実施態様において、本発明は、
聴力損失、急性腎不全、緑内障、急性呼吸窮迫症候群、急性肺損傷、臓器移植拒絶反応、虚血再灌流障害、腎臓毒性、神経毒性、脊髄損傷、褥瘡、変形性関節症、ドライアイ症候群、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）から選択される、疾病または状態に罹患する対象を治療するための組成物の調製のための、治療上有効な用量の、特定実施態様４７から４８のうちのいずれかに記載の化合物の使用である。
【発明を実施するための形態】
【０１２０】
本発明は、概して、アポトーシス促進遺伝子を含む種々の遺伝子の発現を下方制御する化合物に関し、特に新規の低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、および種々の疾患および病状の治療におけるこれらの新規ｓｉＲＮＡの使用に関する。治療される特定の疾患および状態は、聴力損失、急性腎不全（ＡＲＦ）、緑内障、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、および他の急性肺および呼吸器損傷、肺移植に続く虚血再灌流障害、肺、肝臓、心臓、骨髄、膵臓、角膜および腎臓移植を含む臓器移植、脊髄損傷、褥瘡、加齢関連黄斑変性（ＡＭＤ）、ドライアイ症候群、口腔粘膜炎、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。他の兆候は、化学的に誘発された腎臓毒性および化学的に誘発された神経毒性、例えば、シスプラチンおよびシスプラチン様化合物によって、アミノグリコシドによって、ループ利尿薬によって、およびヒドロキノンおよびそれらの類似体によって誘発される毒性を含む。
【０１２１】
本発明で使用される好ましいｓｉＲＮＡのリストは、表Ｂにおいて、配列番号２７７から５０９７０および５０９９３から６８６５４で提供される。各遺伝子について、１９ｍｅｒ、２１ｍｅｒ、および２３ｍｅｒ配列の個別のリストがあり、独占的なアルゴリズムにおけるそれらのスコアに基づいて、ヒト遺伝子発現を標的とするための最善な配列として優先順位が付けられる。２１または２３ｍｅｒｓｉＲＮＡ配列もまた、本明細書で開示される１９ｍｅｒ配列の５′および／または３′拡張によって生成され得る。そのような拡張は、好ましくは、対応するｍＲＮＡ配列に相補的である。特定の２３ｍｅｒオリゴマーは、優先の順序が対応する１９ｍｅｒの順序である本方法によって考案された。
【０１２２】
本発明のアポトーシス促進遺伝子を阻害する方法、分子、および組成物を、本明細書において十分に考察するが、該分子および／または組成物のうちのいずれも、該状態のうちのいずれかに罹患する対象の治療において、有益に用いられ得る。
【０１２３】
本発明の態様または実施形態が、Ｍａｒｋｕｓｈ群または代替の他の群に関して説明される場合、当業者は、本発明が、それにより群の任意の個別構成員または構成員の下位群に関しても説明されることを認識するであろう。
【０１２４】
アポトーシス促進遺伝子
「アポトーシス促進遺伝子」は、概して、アポトーシス細胞死において積極的な役割を果たす遺伝子として定義される。本出願の目的で、好ましいアポトーシス促進遺伝子、およびこれらのアポトーシス促進遺伝子のｓｉＲＮＡまたは他の阻害剤の好ましい使用を、以下の表Ａに列挙する。本発明の化合物は、列挙した兆候の治療に有用であるが、特定の化合物は、別の組織よりも特定の組織においてより有効であり得る。それらの好ましい兆候を、以下の表Ａに列挙する。
【表Ａ−１】
0005628271.tif 000002
【表Ａ−２】
0005628271.tif 000003
【表Ａ−３】
0005628271.tif 000004
【０１２５】
表Ａは、本発明の化合物によって標的される遺伝子のｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列番号を含む（配列番号１〜４８として記載される）。対応するポリペプチドは、配列番号４９〜９６に記載される。上で表Ａに列挙した遺伝子は、以下のとおり詳細に説明される。
【０１２６】
（１）腫瘍タンパク質ｐ５３結合タンパク質、２（ＴＰ５３ＢＰ２）：
遺伝子別名：ＢＢＰ、５３ＢＰ２、ＡＳＰＰ２、ｐ５３ＢＰ２、ＰＰＰ１Ｒ１３Ａ、ＡＩ７４６５４７、Ｘ９８５５０
この遺伝子は、ｐ５３相互作用タンパク質のＡＳＰＰ（ｐ５３のアポトーシス刺激タンパク質）ファミリーのメンバーをコードする。対応するタンパク質は、４つのアンキリンリピートおよびタンパク質−タンパク質相互作用に関与するＳＨ３ドメインを含む。当該遺伝子は、シトプラズムの核周囲領域に局在し、ｐ５３ファミリーのメンバーを含む、他の規制分子との相互作用を通じてアポトーシスおよび細胞成長を規制する。異なるアイソフォームをコードする複数の転写変異体が、この遺伝子に対して発見された。ヒトＴＰ５３ＢＰ２ ｍＲＮＡ転写変異体１および２のポリヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号１および２であり、対応するポリペプチド配列は、それぞれ配列番号４９〜５０に記載される。
【０１２７】
（２）ロイシンの豊富なリピートおよび死ドメイン含有（ＬＲＤＤ）
遺伝子別名：ＰＩＤＤ、ＭＧＣ１６９２５、ＤＫＦＺｐ４３４Ｄ２２９、１２０００１１Ｄ０９Ｒｉｋ、ＡＵ０４２４４６
この遺伝子によってコードされるタンパク質は、ロイシンの豊富なリピートおよび死ドメインを含有する。本タンパク質は、Ｆａｓ（ＴＮＦＲＳＦ６）関連死ドメイン（ＦＡＤＤ）およびＭＡＰキナーゼ活性化死ドメイン含有タンパク質（ＭＡＤＤ）等の他の死ドメインタンパク質と相互作用し、したがって、細胞死関連のシグナル伝達プロセスにおいて、アダプタータンパク質として機能し得ることが示されている。本遺伝子のマウス対照の発現は、腫瘍抑制因子ｐ５３によって陽性に規制され、ＤＮＡの損傷に応答して細胞アポトーシスを誘発することが分かり、本遺伝子のｐ５３依存性アポトーシスのエフェクターとしての役割を示唆する。異なるアイソフォームをコードする３つの代替スプライス転写変異体が報告されている。ヒトＬＲＤＤ転写変異体２、１および３のポリヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号３〜５に記載され、対応するポリペプチド配列は、それぞれ配列番号５１〜５３に記載される。
【０１２８】
国際特許広報第ＷＯ ０１／１８０３７号は、ＬＲＤＤポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列を開示する。国際特許広報ＷＯ ０３／０８７３６８号は、遺伝子を抑制するための組成物および方法を教示する。
【０１２９】
（３）シトクロムｂ−２４５、αポリペプチド（ＣＹＢＡ）
遺伝子別名：シトクロムｂ軽鎖、シトクロムｂ（５５８）αサブユニット、シトクロムｂ、αポリペプチド、フラボシトクロムｂ−５５８αポリペプチド、ｐ２２−ｐｈｏｘ
シトクロムｂは、軽鎖（α）および重鎖（β）から成る。本遺伝子は、食細胞の殺菌オキシダーゼ系の主成分として提案されている軽鎖αサブユニットをコードする。本遺伝子における突然変異は、常染色体劣性の慢性肉芽腫症（ＣＧＤ）に関連し、活性化食細胞が、これらの細胞の殺菌活性に重要な過酸化物の生成に失敗することに特徴付けられる。ヒトＣＹＢＡ ｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列は、配列番号６として記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号５４に記載される。
【０１３０】
国際特許広報ＷＯ ２００５／１０３２９７は、ｐ２２ｐｈｏｘ活性の調節を教示する。
【０１３１】
（４）活性化転写調節因子３（ＡＴＦ３）
遺伝子別名：ＡＴＦ３δＺｉｐ２、ＡＴＦ３δＺｉｐ２ｃ、ＡＴＦ３δＺｉｐ３、ＬＲＧ−２１、ＬＲＦ−１
ＡＴＦ３は、転写調節因子の哺乳動物活性化転写調節因子／ｃＡＭＰ反応要素結合（ＣＲＥＢ）タンパク質ファミリーのメンバーである。２つの異なるアイソフォームをコードする複数の転写変異体が、この遺伝子に対して発見されている。より長いアイソフォームは、ＡＴＦ結合要素を持つプロモーターからの転写を活性化するのではなく、抑制する。より短いアイソフォーム（δＺｉｐ２）は、ロイシンジッパータンパク質二量化モチーフを欠失し、ＤＮＡに結合せず、推定上、抑制共同因子をプロモーターから離すことによって、転写を刺激する。ＡＴＦ３遺伝子の代替スプライシングが、標的遺伝子の規制において、生理学的に重要である可能性がある。ヒトＡＴＦ３転写変異体３、１、および２のポリヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号７〜９に記載され、対応するポリペプチド配列は、それぞれ配列番号５５〜５７に記載される。
【０１３２】
米国特許広報第２００３／０１２５２７７号は、ＡＴＦ３に対するアンチセンスを教示する。国際特許広報第ＷＯ ２００５／１０３２９７号は、ニューロン疾患を治療する方法に関する。
【０１３３】
（５）カスパーゼ２、アポトーシス関連システインペプチダーゼ（神経前駆体細胞発現、発達上下方制御された）２（ＣＡＳＰ２）
遺伝子別名：ＣＡＳＰ−２、ＩＣＨ−ＩＬ、ＩＣＨ−１Ｌ／１Ｓ、ＩＣＨ１、ＮＥＤＤ２、ＩＣＨ−１プロテアーゼ、ＮＥＤＤ２アポトーシス調節遺伝子、カスパーゼ２、アポトーシス関連システインプロテアーゼ
本遺伝子は、システインアスパラギン酸プロテアーゼ（カスパーゼ）ファミリーのメンバーであるタンパク質をコードする。カスパーゼの連続活性化は、細胞アポトーシスの実行段階において中心的役割を果たす。カスパーゼは、不活性プロ酵素として存在し、保存されているアスパラギン残基において、タンパク質分解処理を受け、二量化して活性酵素を形成する大小２つのサブユニットを産生する。本タンパク質のタンパク質分解的開裂は、様々なアポトーシス刺激によって誘発される。本遺伝子の代替スプライシングは、異なるアイソフォームをコードする複数の転写変異体をもたらす。ヒトＣＡＳＰ２転写変異体１および３のポリヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号１０〜１１に記載され、対応するポリペプチド配列は、それぞれ配列番号５８〜５９に記載される。
【０１３４】
米国特許第６，０８３，７３５号は、Ｃａｓｐ２の代替スプライシング産生物に関する。米国特許番号５，９２９，０４２および７，２２３，８５６は、神経変性疾患の治療のための特異的Ｃａｓｐ２アンチセンス化合物を開示する。国際特許広報第ＷＯ ０２／０２４７２０号は、Ｃａｓｐ２アンチセンスを教示する。国際特許広報第ＷＯ ０２／０３４２０１号は、糖尿病性網膜症を治療する方法を開示し、第ＷＯ ０３／０５８２１号は、アポトーシス関連遺伝子の抑制に関し、第ＷＯ ２００４／００９７９７号は、Ｃａｓｐ２アンチセンスを教示し、第ＷＯ ２００４／１０３３８９号は、細胞死を阻止するための方法に関する。
【０１３５】
（６）ＮＡＰＨオキシダーゼ３（ＮＯＸ３）
遺伝子別名：ＧＰ９１−３、ＭＧＣ１２４２８９、ｈｅｔ、ｎｍｆ２５０、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ触媒サブユニット様３、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ１、頭位傾斜
ＮＯＸ３等のＮＡＤＰＨオキシダーゼは、多数の細胞種において見出されるプラズマ細胞膜関連酵素である。それらは、ＮＡＤＰＨを電子提供者として使用し、酸素の１電子還元によって過酸化物の産生を触媒する。ヒトＮＯＸ３ ｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列は、配列番号１２に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号６０に記載される。
【０１３６】
国際特許広報第ＷＯ ２００５／１１９２５１号は、聴覚損失を治療する方法に関する。
【０１３７】
（７）Ｈａｒａｋｉｒｉ、ＢＣＬ２相互作用タンパク質（ＢＨ３度メインのみを含有する）（ＨＲＫ）
遺伝子別名：ＤＰ５、Ｂｉｄ３、ＢＣＬ２相互作用タンパク質、アポトーシスＨｒｋの活性剤、ＢＨ３相互作用（ＢＣＬ２ファミリーとの）ドメイン、アポトーシス作用薬
アポトーシスの活性剤として、Ｈｒｋは、死抑制タンパク質Ｂｃｌ−２およびＢｃｌ−Ｘ（Ｌ）との相互作用を通じてアポトーシスを制御する。ＨＲＫタンパク質は、ＢＩＫのＢＣＬ２相同ドメイン３（ＢＨ３）モチーフに類似する８アミノ酸領域を除いて、他のＢＣＬ２ファミリーメンバーに対する有意な相同性を欠失する。ＨＲＫは、ＢＨ３ドメインを介してＢＣＬ２およびＢＣＬＸＬと相互作用するが、死促進ＢＣＬ２関連タンパク質ＢＡＸ、ＢＡＫ、またはＢＣＬＸＳとは相互作用しない。ＨＲＫは、ＢＣＬ２およびＢＣＬＸＬに関して以前に報告されたものに類似するパターンで、細胞内顆粒の膜に局在する。ヒトＨＲＫ ｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列は、配列番号１３に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号６１に記載される。
【０１３８】
（８）補体成分１、ｑ下位成分結合タンパク質（Ｃ１ＱＢＰ）
遺伝子別名：ＧＣｌＱＢＰ、ＨＡＢＰ１、ＳＦ２ｐ３２、ｇＣｌＱ−Ｒ、ｇＣｌｑＲ、ｐ３２、ＲＰ２３−８３１１３．１、ＡＡ４０７３６５、ＡＡ９８６４９２、Ｄ１１Ｗｓｕｌ８２ｅ、ＭＧＣ９１７２３、ＣＩｑ球形ドメイン結合タンパク質、ヒアルロナン結合タンパク質１、スプライシング因子ＳＦ２関連タンパク質
ヒト補体下位成分Ｃｌｑは、ＣｌｒおよびＣｌｓと関連し、血清補体系の第１成分を産出する。本遺伝子によってコードされるタンパク質は、Ｃｌｑ分子の球状頭部に結合し、Ｃｌ活性化を阻害することが知られる。本タンパク質は、プレｍＲＮＡスプライシング因子ＳＦ２のｐ３２サブユニット、ならびにヒアルロン酸結合タンパク質としても同定されている。ヒトＣｌＱＢＰ ｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列は、配列番号１４に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号６２に記載される。
【０１３９】
（９）ＢＣＬ２／アデノウイルスＥ１Ｂ １９ｋＤａ相互作用タンパク質３（ＢＮＩＰ３）
遺伝子別名：ＮＩＰ３、ＭＧＣ９３０４３、ＢＣＬ２／アデノウイルスＥ１Ｂ １９ｋＤ相互作用タンパク質３、ミトコンドリア産生物のＢＣＬ２／アデノウイルスＥ１Ｂ １９ｋＤａ相互作用タンパク質３核遺伝子
本遺伝子は、ＢＣＬ２／アデノウイルスＥ１Ｂ １９ｋｄ相互作用タンパク質（ＢＮＩＰ）ファミリーのメンバーである。本遺伝子は、ウイルスに誘発された細胞死の保護に関与するＥ１Ｂ １９ｋＤａタンパク質、ならびにこれもアポトーシスプロテクターであるＢＣＬ２のＥ１Ｂ １９ｋＤａ様配列と相互作用する。本遺伝子は、アポトーシス促進機能に関連づけられているＢＨ３ドメインおよび膜貫通型ドメインを含有する。本遺伝子によってコードされる二量体ミトコンドリアタンパク質は、ＢＣＬ２の存在下であっても、アポトーシスを誘発することが知られる。ヒトＢＮＩＰ３ ｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列は、配列番号１５に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号６３に記載される。
【０１４０】
米国特許第５，８５８，６７８号は、ＢＮＩＰ３ポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列に関する。国際特許広報第ＷＯ ２００４／００９７８０号は、虚血に誘発される細胞損傷を阻止する方法を開示する。
【０１４１】
（１０）マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ８（ＭＡＰＫ８）
遺伝子別名：ＪＮＫ、ＪＮＫ１、ＰＲＫＭ８、ＳＡＰＫ１、ＪＮＫ１Ａ２、ＪＮＫ２１Ｂ１／２、ＪＮＫ１αタンパク質キナーゼ、ＪＮＫ１βタンパク質キナーゼ、ｃ−Ｊｕｎ Ｎ−終端キナーゼ１、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ８転写変異体２、タンパク質キナーゼＪＮＫ１、ストレス活性化タンパク質キナーゼＪＮＫ１
本遺伝子によってコードされるタンパク質は、ＭＡＰキナーゼファミリーのメンバーである。ＭＡＰキナーゼは、複数の生化学的シグナルに関する積分点として作用し、増殖、分化、転写制御および発達等の多種多様な細胞過程に関与する。本キナーゼは、様々な細胞死激によって活性化し、特定の転写因子を標的とし、したがって細胞刺激に応答する即時の早期遺伝子発現を仲介する。腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）による本キナーゼの活性化は、ＴＮＦ−αに誘発されたアポトーシスに必要であることが明らかにされている。本キナーゼは、シトクロムｃに仲介された細胞死経路に関連すると考えられる、紫外線放射に誘発されるアポトーシスにも関与する。本遺伝子のマウスにおける相当する遺伝子に関する研究は、Ｔ細胞増殖、アポトーシス、および分化におけるその役割を示唆した。異なるアイソフォームをコードする４つの代替スプライス転写変異体が報告されている。ＭＡＰＫ転写変異体２、１、３、および４のポリヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号１６〜１９に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号６４〜６７に記載される。
【０１４２】
国際特許広報第ＷＯ ９９／０９２１４号および米国特許第５，８７７，３０９号は、ＪＮＫファミリーメンバーに対するアンチセンスを開示する。
【０１４３】
（１１）マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ１４（ＭＡＰＫ１４）
遺伝子別名：ＣＳＢＰ１、ＣＳＢＰ２、ＣＳＰＢ１、ＥＸＩＰ、Ｍｘｉ２、ＰＲＫＭ１４、ＰＲＫＭ１５、ＲＫ、ＳＡＰＫ２Ａ、ｐ３８、ｐ３８ＡＬＰＨＡ、ＭＧＣ１０２４３６、ｐ３８ＭＡＰＫ、ＣＳＢＰ、Ｅｘｉｐ、Ｈｏｇ、ＭＧＣ１０５４１３、ｐ３８Ｈｏｇ、Ｃｓａｉｄｓ結合タンパク質、ＭＡＰキナーゼＭｘｉ２、ＭＡＸ−相互作用タンパク質２、サイトカイン抑制抗炎症薬タンパク質、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ、ｐ３８マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ、ｐ３８α Ｅｘｉｐ、ストレス活性化タンパク質キナーゼ２Ａ、ｔＲＮＡシンテターゼ共同因子ｐ３８
本遺伝子によってコードされるタンパク質は、ＭＡＰキナーゼファミリーのメンバーであり、複数の生化学的シグナルに関する積分点として作用し、増殖、分化、転写制御および発達等の多種多様な細胞過程に関与する。本キナーゼは、種々の環境ストレスおよび炎症性サイトカインによって活性化する。活性化は、ＭＡＰキナーゼキナーゼ（ＭＫＫ）によるそのリン酸化、またはＭＡＰ３Ｋ７ＩＰｌ／ＴＡＢｌタンパク質とのその相互作用によって誘発されるその自己リン酸化を必要とする。本キナーゼの基質には、転写制御因子ＡＴＦ２、ＭＥＦ２Ｃ、およびＭＡＸ、細胞サイクル制御因子ＣＤＣ２５Ｂ、および腫瘍抑制因子ｐ５３が含まれ、ストレス関連の転写および細胞サイクル制御、ならびに遺伝毒性ストレス反応におけるその役割を示唆する。異なるアイソフォームをコードする本遺伝子の４つの代替スプライス転写変異体が報告されている。ヒトＭＡＰＫｌ４転写変異体２、４、１、および３のポリヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号２０〜２３に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号６８〜７１に記載される。
【０１４４】
国際特許広報第ＷＯ ２０００／５９９１９号および第ＷＯ ２００５／０１６９４７号、および米国特許第６，１４０，１２４号および第６，４４８，０７９号は、ｐ３８のアンチセンス阻害を教示する。
【０１４５】
（１２）Ｒａｓ関連Ｃ３ボツリヌス菌毒素基質１（ｒｈｏファミリー，小ＧＴＰ結合タンパク質Ｒａｃ１；ＲＡＣ１）
遺伝子別名：ＭＧＣ１１１５４３、ＭＩＧ５、ＴＣ−２５、ｐ２１−Ｒａｃｌ、移動誘発遺伝子５、移動誘発タンパク質５、ｒａｓ関連Ｃ３ボツリヌス毒素基質１、ｒｈｏファミリー、小ＧＴＰ結合タンパク質Ｒａｃｌ、ｒａｓ関連Ｃ３ボツリヌス毒素基質１（ｒｈｏファミリー小ＧＴＰ結合タンパク質Ｒａｃ１）
本遺伝子によってコードされるタンパク質は、ＧＴＰアーゼであり、小ＧＴＰ結合タンパク質のＲＡＳスーパーファミリーに属する。本スーパーファミリーのメンバーは、多様な数々の細胞事象を制御し、それには、細胞成長の制御、細胞骨格再編成、およびタンパク質キナーゼの活性化が含まれる。本遺伝子のいくつかの代替スプライス転写変異体が記載されているが、これらの変異体の一部の全体的な性質は判明されていない。ヒトＲＡＣｌ転写変異体１ｃ、１ｂ、および１のポリヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号２４〜２６に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号７２〜７４に記載される。
【０１４６】
米国特許第６，１８０，５９７号は、内皮細胞の一酸化窒素シンターゼレベルを増加させるｒｈｏ ＧＴＰアーゼ阻害因子に関する。国際特許広報第ＷＯ ０１／１５７３９号は、Ｒｈｏファミリーメンバーのアンチセンス調節を教示する。国際特許広報第ＷＯ ２００４／０４２０５２号は、ＴＮＦ−α分泌を抑制する方法を教示する。
【０１４７】
（１３）グリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３Ｂ）
遺伝子別名：７３３０４１４Ｆ１５Ｒｉｋ、８４３０４３ｌＨ０８Ｒｉｋ、Ｃ８６１４２、ＧＳＫ−３、ＧＳＫ−３β、ＧＳＫ３
グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）は、リン酸化および不活性化グリコーゲンシンターゼとして最初に同定された、ピロリン対象のセリントレオニンキナーゼである。２つのアイソフォーム、α（ＧＳＫ３Ａ；ＭＩＭ６０６７４）およびβは、高度のアミノ酸相同を示す（Ｓｔａｍｂｏｌｉｃ ａｎｄ Ｗｏｏｄｇｅｔｔ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．１９９４ ３０３（Ｐｔ ３）：７０１−４）。ＧＳＫ３Ｂは、エネルギー代謝、ニューロン細胞発達、および身体パターン形成に関与する（Ｐｌｙｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．１９９２．１１１４（２−３）：１４７−６２）。ヒトＧＳＫ３Ｂ ｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列は、配列番号２７に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号７５に記載される。
【０１４８】
米国特許第６，３２３，０２９号は、ＧＳＫ３Ｂのアンチセンス阻害に関する。
【０１４９】
（１４）プリン受容体Ｐ２Ｘ、リガンド開口型イオンチャネル，７（Ｐ２ＲＸ７）
遺伝子別名：ＭＧＣ２００８９、Ｐ２Ｘ７，ＡＩ４６７５８６、ＡＴＰ受容体、Ｐ２Ｘプリノセプター７、Ｐ２Ｘ７受容体、Ｐ２Ｚ受容体、プリン受容体Ｐ２Ｘ７
本遺伝子の産生物は、ＡＴＰのプリノセプターのファミリーに属する。本受容体は、リガンド開口型イオンチャネルとして機能し、大分子に浸透可能な膜孔の形成を介して、マクロファージのＡＴＰ依存性溶解に関与する。細胞質におけるＡＴＰによる本核内受容体の活性化は、細胞活性が遺伝子発現における変化に連結することができる機構であり得る。異なるアイソフォームをコードする複数の代替スプライス変異体が同定されているが、一部はナンセンス変位依存分解機構（ＮＭＤ）の基準に適合する。ヒトＰ２ＲＸ７ ｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列は、配列番号２８に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号７６に記載される。
【０１５０】
（１５）一過性受容器電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー２（ＴＲＰＭ２）
遺伝子別名：ＥＲＥＧ１、ＫＮＰ３、ＬＴＲＰＣ２、ＭＧＣ１３３３８３、ＮＵＤＴ９Ｈ、ＮＵＤＴ９Ｌ１、ＴＲＰＣ７、９８３０１６８Ｋｌ６Ｒｉｋ、Ｃ７９１３３、Ｔｒｐ７、Ｔｒｒｐ７、エストロゲン応答要素関連遺伝子１、長い一過性受容器電位チャネル２、一過性受容器電位チャネル７、一過性受容器電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー２（Ｔｒｐｍ２）、一過性受容器電位チャネル７、一過性受容体タンパク質７
本遺伝子によってコードされたタンパク質は、自由な細胞内ＡＤＰリボースによって制御される、カルシウム浸透可能なカチオンチャネルである。コードされたタンパク質は、酸化ストレスによって活性化され、細胞死への感受性を授与する。ヒトＴＲＰＭ２のポリヌクレオチド配列は、配列番号２９に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号７７に記載される（異なるアイソフォームをコードする２つの転写変異体ＳおよびＬが、この遺伝子に関して発見された。Ｓ変異体は、配列エラーを含有するためＮＣＢＩによって除去され、存在しなかった）。
【０１５１】
（１６）ポリ（ＡＤＰリボース）グリコヒドロラーゼ（ＰＡＲＧ）
遺伝子別名：ＰＡＲＧ９９、ポリ（ＡＤＰリボース）グリコヒドロラーゼ
ポリ（ＡＤＰリボース）グリコヒドロラーゼ（ＰＡＲＧ）は、染色体タンパク質の可逆電子対共有修飾因子であるポリ（ＡＤＰリボース）の異化に関与する主要酵素である。本タンパク質は、多数の組織において見出され、より小さい活性産生物を生成するタンパク質分解を受け得る。ヒトＰＡＲＧ ｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列は、配列番号３１に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号７９に記載される。
【０１５２】
（１７）ＣＤ３８分子（ＣＤ３８）
遺伝子別名：ＴｌＯ、Ｃｄ３８−ｒｓｌ、ＡＤＰ−リボシルシクラーゼ／環状ＡＤＰリボースヒドロラーゼ、ＣＤ３８抗原、ＣＤ３８抗原（ｐ４５）、環状ＡＤＰリボースヒドロラーゼ
ＣＤ３８は、細胞および組織、特に白血球において広く発現した新規の多機能外酵素である。ＣＤ３８は、細胞接着、シグナル形質導入、およびカルシウムシグナリングにおいても機能する。ヒトＣＤ３８ ｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列は、配列番号３２に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号８０に記載される。
【０１５３】
（１８）ＳＴＥＡＰファミリーメンバー４（ＳＴＥＡＰ４）
遺伝子別名：ＤＫＦＺｐ６６６Ｄ０４９、ＦＬＪ２３１５３、ＳＴＡＭＰ２、ＴＩＡＲＰ、ＴＮＦＡＩＰ９、１１１００２１Ｏ１７Ｒｉｋ、ＡＩ４８１２１４、ｄｕｄｕｌｉｎ４、６膜貫通型前立腺タンパク質２、腫瘍壊死因子、α誘発性タンパク質９、腫瘍壊死−α誘発性脂肪関連タンパク質、ｍ ＴＮＦａ誘発性脂肪関連タンパク質、腫瘍壊死因子，α誘発性タンパク質９
脂肪組織においてＴＮＦ−αおよびＩＬ−６に誘発される膜タンパク質。ＩＬ−６およびＴＮＦ−αの両方は、脊髄損傷モデルにおいて制御されないことが示されており（Ａｈｎ，ｅｔ ａｌ．，ＢＢＲＣ ２００６ ３４８（２）：５６０−７０）、アポトーシス事象を促進すると考えられる。ヒトＳＴＥＡＰ４ ｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列は、配列番号３３に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号８１に記載される。
【０１５４】
（１９）骨モルフォゲンタンパク質２（ＢＭＰ２）
遺伝子別名：ＢＭＰ２Ａ、ＡＩ４６７０２０、ＢＣ０６９２１４ＣＲ６１８４０７、Ｍ２２４８９
本遺伝子によってコードされるタンパク質は、変換成長因子β（ＴＧＦＢ）スーパーファミリーに属する。コードされたタンパク質は、ジスルフィド結合したホモ二量体として作用し、骨および軟骨形成を誘発する。ヒトＢＭＰ２ ｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列は、配列番号３４に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号８２に記載される。
【０１５５】
本出願の出願人に共同譲渡された国際特許広報第ＷＯ ２００５／０４１８５７号は、虚血および神経系疾患の治療のためのＢＭＰ阻害に関する。
【０１５６】
（２０）ギャップ結合タンパク質、α１、４３ｋＤａ（コネキシン４３，ＧＪＡ１）
遺伝子別名：ＣＸ４３、ＤＦＮＢ３８、ＧＪＡＬ、ＯＤＤ、ＯＤＤＤ、ＯＤＯＤ、ＳＤＴＹ３、ＭＧＣ９３６１０、ＡＵ０４２０４９、ＡＷ５４６２６７、Ｃｎｘ４３、Ｃｘ４３ａｌｐｈａｌ、Ｇｊａ−１、Ｎｐｍ１、ギャップ結合タンパク質、α様、眼歯指形成異常（多合指症ＩＩＩ型）、ギャップ結合タンパク質、α１ ４３ｋＤ、ギャップ結合タンパク質、α１、４３ｋＤ、α１コネキシン
ギャップ結合タンパク質，α１は、タンパク質のコネキシン遺伝子ファミリーのメンバーであり、心臓におけるギャップ結合の成分であり、心臓の同期収縮および肺発生において重要な役割を有すると考えられる。コネキシン４３は、心筋細胞−細胞結合を制御するいくつかのタンパク質キナーゼによって標的とされる。関連イントロンを含まないコネキシン４３偽遺伝子、ＧＪＡ１Ｐは、染色体５にマップされている。ヒトＧＪＡ１ ｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列は、配列番号３５に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号８３に記載される。米国特許第７，０９８，１９０号は、特に、外傷および脊髄損傷を治療するためのアンチセンス化合物を教示する。
【０１５７】
（２１）ＴＹＲＯタンパク質チロシンキナーゼ結合タンパク質（ＴＹＲＯＢＰ）
遺伝子別名：ＤＡＰ１２、ＫＡＲＡＰ、ＰＬＯＳＬ、Ｌｙ８３、ＤＮＡＸ活性化タンパク質１２、キラー活性化受容体関連タンパク質
本遺伝子は、その細胞質ドメインにおいて、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する、膜貫通型シグナリングポリペプチドをコードする。本タンパク質は、膜糖タンパク質のキラー細胞阻害受容体（ＫＩＲ）ファミリーに関連し、活性化シグナル形質導入要素として作用し得る。本タンパク質は、ゼータ鎖（ＴＣＲ）関連タンパク質キナーゼ７０ｋＤａ（ＺＡＰ−７０）および膵臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）を結合し、シグナル形質導入、骨モデリング、脳髄鞘形成、および炎症において役割を果たしている可能性がある。遺伝子内の突然変異は、Ｎａｓｕ−Ｈａｋｏｌａ症とも呼ばれる、硬化白質脳症（ＰＬＯＳＬ）を伴う脂肪膜性多発嚢胞性骨異形成症に関連づけられている。その推定上の受容体、骨髄性細胞２上で発現したトリガ受容体（ＴＲＥＭ２）もＰＬＯＳＬを引き起こす。異なるアイソフォームをコードする２つの代替転写変異体が、この遺伝子に関して同定されている。他の代替スプライス変異体が記載されているが、それらの全体性質は判明されていない。ヒトＴＹＲＯＢＰ転写変異体１および２のポリヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号３６〜３７に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号８４〜８５に記載される。
【０１５８】
（２２）結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）
遺伝子別名：ＣＣＮ２、ＨＣＳ２４、ＩＧＦＢＰ８、ＭＧＣ１０２８３９、ＮＯＶ２、ＣＴＧＲＰ、Ｆｉｓｐ１２、Ｈｃｓ２４、ｆｉｓｐ−１２、肥大性軟骨細胞特異的タンパク質２４、インシュリン様成長因子結合タンパク質８、ＦＩＳＰ−１２タンパク質、線維芽細胞誘発可能な分泌タンパク質、線維芽細胞誘発可能な分泌タンパク質、肥大性軟骨細胞特異的遺伝子産生物２４
血管内皮細胞によって分泌される腫瘍結合組織ミト誘引物質であり、軟骨細胞の増殖および分化を促進する。ヒトＣＴＧＦ ｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列は、配列番号３８に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号８６に記載される。
【０１５９】
（２３）分泌リンタンパク質１（ＳＰＰ１）
遺伝子別名：ＡＡ９６０５３５、ＡＩ７９０４０５、Ａｐ１−１、ＢＮＳＰ、ＢＳＰＩ、Ｂｓｐ、ＥＴＡ−１、Ｅｔａ、ＯＰ、Ｏｐｎ、Ｏｐｎｌ、Ｒｉｃ、Ｓｐｐ−１、ミノポンチン、ＯＳＰ、４４ｋＤａ骨リンタンパク質、４４ｋＤａ骨リンタンパク質、骨シアロタンパク質Ｉ、オステオポンチン、早期Ｔリンパ球活性化１
ＳＳＰ１は、インターフェロンγおよびインターロイキン１２の産生の強化、およびインターロイキン１０の産生の低減に関与するサイトカインとして作用し、Ｉ型免疫に至る経路に不可欠な分泌タンパク質である。ヒトＳＰＰ１転写変異体１、２、および３のポリヌクレオチド配列は、配列番号３９〜４１に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号８７〜８９に記載される。
【０１６０】
米国特許第６，４５８，５９０号および米国特許広報第２００４／０１４２８６５号ならびに第２００６／０２５２６８４号は、オステオポンチンの阻害に関する。
【０１６１】
（２４）レチキュロン４受容体（ＲＴＮ４Ｒ）
遺伝子別名：ＮＧＲ、ＮＯＧＯＲ、ＮｇＲ１、ノゴ６６受容体、ＵＮＱ３３０／ＰＲＯ５２６、ノゴ受容体、レチキュロン４受容体前駆体
本遺伝子は、レチキュロン４、乏突起膠細胞ミエリン糖タンパク質およびミエリン関連糖タンパク質の受容体をコードする。本受容体は、軸索成長阻害を仲介し、成人の中枢神経系において軸索の再生および可塑性の制御において役割を果たしている可能性がある。ヒトＲＴＮ４Ｒ ｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列は、配列番号４２に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号９０に記載される。
【０１６２】
（２５）アネキシンＡ２（ＡＮＸＡ２）
遺伝子別名：ＡＮＸ２、ＡＮＸ２Ｌ４、ＣＡＬ１Ｈ、ＬＩＰ２、ＬＰＣ２、ＬＰＣ２Ｄ、Ｐ３６、ＰＡＰ−ＩＶ、アネキシンＩＩ、カルパクチンＩ重鎖ポリペプチド、クロモビンジン８、リポコルチンＩＩ、胎盤抗凝結剤タンパク質ＩＶ
本遺伝子は、アネキシンファミリーのメンバーをコードする。本カルシウム依存性リン脂質結合タンパク質ファミリーのメンバーは、細胞成長の制御およびシグナル形質導入経路において役割を果たす。本タンパク質は、自己分泌因子として機能し、破骨細胞形成および骨吸収を高める。本遺伝子は、３つの偽遺伝子を有し、それぞれ染色体４、９、および１０上に位置する。異なるアイソフォームをコードする複数の代替スプライス転写変異体が、この遺伝子に関して発見されている。ヒトＡＮＸＡ２転写変異体１、３、および２のポリヌクレオチド配列は、配列番号４３〜４５に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号９１〜９３に記載される。
【０１６３】
（２６）ｒａｓホモログ遺伝子ファミリー、メンバーＡ（ＲＨＯＡ）
遺伝子別名：ＡＲＨ１２、ＡＲＨＡ、ＲＨＯ１２、ＲＨＯＨ１２、アプリシアｒａｓ関連ホモログ１２、腫瘍遺伝子ＲＨＯ Ｈ１２、小ＧＴＰ結合タンパク質ＲｈｏＡ
ＲＨＯＡは、小ＧＴＰアーゼタンパク質であり、ストレス線維の形成において、アクチン細胞骨格を制御することが知られる。これは、エフェクタータンパク質：Ｒｈｏキナーゼ（ＲＯＣＫ）に作用し、軸索再生を阻害する。Ｒｈｏ−Ａ拮抗薬Ｃ３トランスフェラーゼを使用した体外研究は、ミエリン基質上の軸索成長を強化するが、体内研究では有効でなかった。ヒトＲＨＯＡ ｍＲＮＡのポリヌクレオチド配列は、配列番号４６に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号９４に記載される。
【０１６４】
（２７）２本鎖オキシダーゼ１（ＤＵＯＸ１）
遺伝子別名：ＬＮＯＸ１、ＭＧＣ１３８８４０、ＭＧＣ１３８８４１、ＮＯＸＥＦ１、ＴＨＯＸ１、ＮＡＤＰＨ甲状腺オキシダーゼ１、フラボタンパク質ＮＡＤＰＨオキシダーゼ、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸オキシダーゼ
本遺伝子によってコードされるタンパク質は、糖タンパク質およびＮＡＤＰＨオキシダーゼファミリーのメンバーである。甲状腺ホルモンの合成は、甲状腺卵胞細胞の頂端膜に位置するタンパク質複合体によって触媒される。本複合体は、ヨウ化物トランスポーターである、甲状腺ペルオキシダーゼ、およびコードされた本タンパク質およびＤＵＯＸ２を含む過酸化物生成系を含有する。本タンパク質は、ペルオキシダーゼ相同ドメインおよびｇｐ９１ｐｈｏｘドメインの両方を有する。同一タンパク質をコードする２つの代替スプライス転写変異体が、この遺伝子に関して記載されている。ヒトＤＵＯＸ１転写変異体１および２のポリヌクレオチド配列は、配列番号４７〜４８に記載され、対応するポリペプチド配列は、配列番号９５〜９６に記載される。
【０１６５】
「アポトーシス促進ポリペプチド」は、上で列挙した遺伝子のうちのいずれかによってコードされるポリペプチドを意味し、スプライス変異体、アイソフォーム、オーソログ、またはパラログ等を含む。
【０１６６】
「阻害因子」は、遺伝子の発現またはそのような遺伝子の産生物の活性を、望ましい生物学的または生理学的硬化を得るために十分な程度まで阻害できる化合物である。本明細書で使用される「阻害因子」という用語は、１つ以上のオリゴヌクレオチド阻害因子を意味し、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アプタマー、アンチセンス分子、ｍｉＲＮＡおよびリボザイム、ならびに抗体を含む。本阻害因子は、完全または部分的阻害をもたらし得る。
【０１６７】
本明細書で使用される「阻害する」という用語は、遺伝子の発現またはそのような遺伝子の産生物の活性を、望ましい生物学的または生理学的硬化を得るために十分な程度まで低減することを意味する。阻害は、完全または部分的であり得る。
【０１６８】
本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」および「核酸」という用語は、同義的に使用され得、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）およびリボ核酸（ＲＮＡ）を含むヌクレオチド配列を意味する。本用語は、同等物として、ヌクレオチド類似体から形成されたＲＮＡまたはＤＮＡのいずれかの類似体を含むことも理解されるべきである。本出願全体を通じて、ｍＲＮＡ配列は、対応する遺伝子を表すものとして記載される。
【０１６９】
「オリゴヌクレオチド」は、約２から約５０ヌクレオチドのデオキシリボヌクレオチドおよび／またはリボヌクレオチドを含む化合物を参照する。各ＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオチドは、独立して天然または合成、および／または修飾または未修飾であり得る。修飾は、オリゴヌクレオチドにおける糖部分、塩基部分、および／またはヌクレオチド間の結合への変更を含む。
【０１７０】
本発明は、体内における標的アポトーシス促進遺伝子の発現を阻害するための方法および組成物を提供する。一般に、本方法は、アポトーシス促進遺伝子から転写されたｍＲＮＡを標的とするオリゴリボヌクレオチド、特に低分子干渉ＲＮＡ（すなわち、ｓｉＲＮＡ）または細胞内でｓｉＲＮＡを産生できる核酸物質の、ＲＮＡ干渉機構によって標的遺伝子を下方制御するために十分な量を投与するステップを含む。特に、対象の方法を使用して、疾患の治療のためのアポトーシス促進遺伝子の発現を阻害することができる。
【０１７１】
本発明に従って、様々な病気を治療するために、アポトーシス促進遺伝子のｓｉＲＮＡ分子または阻害因子を薬物として使用する。
【０１７２】
ｓｉＲＮＡオリゴリボヌクレオチド
表Ｂ（Ｂ１−Ｂ７６）は、対応するｓｉＲＮＡ化合物の調製に有用なセンスオリゴマーおよび対応するアンチセンスオリゴマーの核酸配列を含む。表Ｃ１、Ｃ２、およびＣ３は、対応するｓｉＲＮＡ化合物の調製に有用なセンスオリゴマーおよび対応するアンチセンスオリゴマーの特定の現在好ましい核酸を含む。
【０１７３】
周知の遺伝子に対応するｓｉＲＮＡの選択および合成は、広く報告されている。例えば、Ｕｉ−Ｔｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｍｅｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００６；６５０５２；Ｃｈａｌｋ ｅｔ ａｌ．，ＢＢＲＣ．２００４，３１９（１）：２６４−７４；Ｓｉｏｕｄ ａｎｄ Ｌｅｉｒｄａｌ，Ｍｅｔ．ＭｏＩ Ｂｉｏｌ．；２００４，２５２：４５７−６９；Ｌｅｖｅｎｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍ．２００４，２０（３）：４３０−２；Ｕｉ−Ｔｅｉ ｅｔ ａｌ．，ＮＡＲ ２００４，３２（３）：９３６−４８を参照。例えば、修飾されたｓｉＲＮＡの使用および産生については、Ｂｒａａｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２００３，４２（２６）：７９６７−７５、Ｃｈｉｕ ｅｔ ａｌ．，ＲＮＡ，２００３，９（９）：１０３４−４８、国際特許広報第ＷＯ ２００４／０１５１０７号（ａｔｕｇｅｎ）、第ＷＯ ０２／４４３２１（Ｔｕｓｃｈｌ ｅｔ ａｌ）、および米国特許第５，８９８，０３１号および第６，１０７，０９４号を参照。
【０１７４】
いくつかのグループは、細胞内でｓｉＲＮＡを生成できるＤＮＡベースのベクターの開発について説明している。本方法は、概して、効率的に処理され、細胞内でｓｉＲＮＡを形成する短いヘアピンＲＮＡの転写を伴う（Ｐａｄｄｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ ＵＳＡ ２００２，９９：１４４３−１４４８、Ｐａｄｄｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅｓ & Ｄｅｖ ２００２，１６：９４８−９５８；Ｓｕｉ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ ＵＳＡ ２００２，８：５５１５−５５２０、およびＢｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００２，２９６：５５０−５５３）。これらの報告は、多数の内因的および外因的に発現した遺伝子を特異的に標的とすることができるｓｉＲＮＡを生成する方法について説明する。
【０１７５】
本発明は、本発明に従うアポトーシス促進遺伝子の発現を下方制御する、２本鎖オリゴリボヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ）を提供する。本発明の一つのｓｉＲＮＡは、２本鎖オリゴリボヌクレオチドであり、そこで、センス鎖はアポトーシス促進遺伝子のｍＲＮＡ配列から生じ、アンチセンス鎖はセンス鎖に相補的である。一般に、標的ｍＲＮＡ配列からのある程度の逸脱は、ｓｉＲＮＡ活性を低下させることなく許容される（例えば、Ｃｚａｕｄｅｒｎａ ｅｔ ａｌ．，２００３，ＮＡＲ ３１（１１），２７０５−２７１６を参照）。本発明の一つのｓｉＲＮＡは、ｍＲＮＡを破壊、または破壊せずに、転写後レベルでの遺伝子発現を阻害する。理論に束縛されるわけではないが、ｓｉＲＮＡは、特定の開裂および変性のためのｍＲＮＡを標的とし、および／または標的とされたメッセージからの翻訳を阻害し得る。
【０１７６】
本明細書で使用される、「リボヌクレオチド」という用語は、天然および合成、非修飾および修飾リボヌクレオチドを包含する。修飾は、オリゴヌクレオチドにおける糖部分、塩基部分、および／またはリボヌクレオチド間の連鎖への変更を含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、本発明に従うオリゴリボヌクレオチドは、修飾ｓｉＲＮＡを含む。様々な実施形態において、ｓｉＲＮＡは、第１鎖および第２鎖を含むＲＮＡ２本鎖を含み、それにより、第１鎖は、標的核酸の約１８から約４０の連続したヌクレオチドに対して少なくとも部分的に相補的なリボヌクレオチド配列を含み、第２鎖は、第１鎖に対して少なくとも部分的に相補的なリボヌクレオチド配列を含み、該第１鎖および／または該第２鎖は、糖部分の２´位置に修飾を有する、複数の修飾リボヌクレオチドの群を含み、それにより、各鎖内で、修飾リボヌクレオチドの各群は、側面リボヌクレオチドの群によって、１つまたは両方の側面に位置し、それにより、側面リボヌクレオチドの群を形成する各リボヌクレオチドは、修飾リボヌクレオチドの群の修飾とは異なる修飾を有する、非修飾リボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドから選択される。
【０１７８】
一実施形態において、修飾リボヌクレオチドの群および／または側面リボヌクレオチドの群は、１から１２の整数から成る群から選択される数のリボヌクレオチドを含む。したがって、本群は、１ヌクレオチド、２ヌクレオチド、３ヌクレオチド、４ヌクレオチド、５ヌクレオチド、６ヌクレオチド、７ヌクレオチド、８ヌクレオチド、９ヌクレオチド、１０ヌクレオチド、１１ヌクレオチド、または１２ヌクレオチドを含む。
【０１７９】
修飾ヌクレオチドおよび側面ヌクレオチドの群は、鎖のうちの少なくとも１つ上で、パターンで組織化され得る。いくつかの実施形態において、第１および第２鎖は、修飾ヌクレオチドパターンを含む。別の実施形態において、１つの鎖のみが、修飾ヌクレオチドパターンを含む。様々な実施形態において、該第１鎖の修飾ヌクレオチドパターンは、第２鎖の修飾ヌクレオチドパターンに対して同一である。
【０１８０】
他の実施形態において、該第１鎖の修飾ヌクレオチドパターンは、第２鎖の修飾ヌクレオチドパターンに対して１つ以上のヌクレオチドだけずれている。
【０１８１】
いくつかの好ましい実施形態において、アンチセンス鎖における中間リボヌクレオチドは、非修飾ヌクレオチドである。例えば、１９オリゴマーアンチセンス鎖において、リボヌクレオチド番号１０は修飾されず、２１オリゴマーアンチセンス鎖において、リボヌクレオチド番号１１は修飾されず、２３オリゴマーアンチセンス鎖において、リボヌクレオチド番号１２は修飾されない。ｓｉＲＮＡの修飾または修飾パターンは、もしあれば、これを可能にするように計画されなければならない。
【０１８２】
糖残基の２´部分上の修飾には、例えば、特に欧州特許第ＥＰ０５８６５２０Ｂ１号または第ＥＰ０６１８９２５Ｂ１号に記載されるように、アミノ、フルオロ、アルコキシ（例えばメトキシ）、アルキル、アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、ＣＮ、ＣＦ、イミダゾール、カルボキシレート、チオエート、Ｃ１からＣ１０低アルキル、置換低アルキル、アルカリルまたはアラルキル、ＯＣＦ３、ＯＣＮ、Ｏ−、Ｓ−、またはＮ−アルキル、Ｏ−、Ｓ−、またはＮ−アルケニル、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ヘテロジクロアルキル、ヘテロジクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノまたは置換シリルが含まれる。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、ｓｉＲＮＡは、一端または両端が平滑末端である。より具体的には、ｓｉＲＮＡは、第１鎖の５´末端および第２鎖の３´末端によって定義される末端、または第１鎖の３´末端および第２鎖の５´末端によって定義される末端上で平滑末端となり得る。他の実施形態において、２つの鎖のうちの少なくとも１つは、５´末端において少なくとも１つのヌクレオチドのオーバーハングを有し得る。鎖のうちの少なくとも１つは、任意で３´末端において少なくとも１つのヌクレオチドのオーバーハングを有し得る。オーバーハングは、約１から約５の連続したヌクレオチドから成り得る。オーバーハングのヌクレオチドは、修飾または非修飾リボヌクレオチド、あるいはデオキシリボヌクレオチドであり得る。
【０１８４】
ＲＮＡ２本鎖の長さは、約１８から約４０リボヌクレオチド、好ましくは、１９、２１、または２３リボヌクレオチドである。さらに、各鎖の長さは、独立して、約１５から約４０塩基、好ましくは、１８から２３塩基、より好ましくは１９、２１、または２３リボヌクレオチドから成る群から選択された長さを有し得る。
【０１８５】
さらに、該第１鎖と標的核酸との間の相補は完璧であり得る。いくつかの実施形態において、鎖は本質的に相補であり、すなわち、該第１鎖と標的核酸との間に１つ、２つ、または最大３つの不一致を有する。本質的に相補とは、別の配列に対して、約８４％より高い相補性を意味する。例えば、１９塩基対から成る２本鎖領域において、１つの不一致は９４．７％の相補性をもたらし、２つの不一致は約８９．５％の相補性をもたらし、３つの不一致は約８４．２％の相補性をもたらし、２本鎖領域に本質的な相補性を与える。したがって、本質的に同一とは、別の配列に対して約８４％より高い同一性を意味する。
【０１８６】
特定の実施形態において、第１鎖および第２鎖はそれぞれ、少なくとも１つの修飾リボヌクレオチドの群および少なくとも１つの側面リボヌクレオチドの群を含み、それにより、修飾リボヌクレオチドの各群は、少なくとも１つのリボヌクレオチドを含み、かつそれにより、側面リボヌクレオチドの各群は、少なくとも１つのリボヌクレオチドを含み、そこでは、第１鎖の修飾リボヌクレオチドの各群は、第２鎖上の側面リボヌクレオチドと整列し、また、５´最終端リボヌクレオチドは、修飾リボヌクレオチドの群から選択され、第２鎖の３´最終端リボヌクレオチドは、側面リボヌクレオチドの群から選択される。いくつかの実施形態において、修飾リボヌクレオチドの各群は、単一のリボヌクレオチドから成り、側面リボヌクレオチドの各群は、単一のヌクレオチドから成る。
【０１８７】
さらに他の実施形態において、第１鎖上に側面リボヌクレオチドの群を形成するリボヌクレオチドは、修飾リボヌクレオチドの群を形成するリボヌクレオチドに対して、３´方向に配列される非修飾リボヌクレオチドであり、第２鎖上に修飾リボヌクレオチドの群を形成するリボヌクレオチドは、側面リボヌクレオチドの群を形成するリボヌクレオチドに対して、５´方向に配列される修飾リボヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、ｓｉＲＮＡの第１鎖は、５から約２０、８から１２、好ましくは９から１２の修飾リボヌクレオチドの群を含み、第２鎖は、７から１１、好ましくは８から１１の修飾リボヌクレオチドの群を含む。
【０１８８】
第１鎖および第２鎖は、特にポリエチレングリコール等の非核酸ポリマーから成り得るループ構造によって連結される。代替として、ループ構造は、修飾および非修飾リボヌクレオチド、ならびに修飾および非修飾デオキシリボヌクレオチドから成り得る。
【０１８９】
さらに、ｓｉＲＮＡの第１鎖の５´末端が、第２鎖の３´末端に連結され得るか、または第１鎖の３´末端が、第２鎖の５´末端に連結され、該連結は、核酸リンカーまたは非核酸リンカーを介する。特定の実施形態において、核酸リンカーは、約２から１００核酸、好ましくは、約２から約３０核酸の間の長さを有する。
【０１９０】
様々な実施形態において、本発明は、以下の構造を有する化合物を提供する。
【０１９１】
５´  （Ｎ）ｘ−Ｚ  ３´  （アンチセンス鎖）
３´  Ｚ´−（Ｎ´） ｙ  ５´  （センス鎖）
ＮおよびＮ´はそれぞれ、その糖残基において修飾され得るか、または修飾されないリボヌクレオチドであり、（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙのそれぞれは、オリゴマーであって、それぞれ連続するＮまたはＮ´は、共有結合によって次のＮまたはＮ´に結合され、
ｘおよびｙのそれぞれは、１８から４０の間の整数であり、
ＺおよびＺ´のそれぞれは、存在し得る、または不在であり得るが、存在する場合は、それが存在する鎖の３´末端において共有結合される１から５の連続するヌクレオチドであり、
（Ｎ´）ｙの配列は、配列番号１から４８のうちの１つに記載されるｍＲＮＡにおける、約１８から約４０の連続するリボヌクレオチドに対して略同一性を有するセンス配列を含む。好ましい実施形態において、センス配列は、表Ｂ（Ｂ１−Ｂ７６；配列番号２７７から５０９７０および５０９９３〜６８６５４）または表Ｃ１、Ｃ２、およびＣ３（配列番号９７〜２７６および５０９７１〜５０９９２）のうちのいずれか１つに示す配列から選択される。
【０１９２】
いくつかの実施形態において、本化合物はリン酸ジエステル結合を含む。
【０１９３】
様々な実施形態において、本化合物はリボヌクレオチドを含み、ｘはｙに等しく、ｘは１８、１９、２０、２１、２２、および２３から成る群から選択される整数である。特定の実施形態において、ｘ＝ｙ＝１９またはｘ＝ｙ＝２３である。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、本化合物は平滑末端であり、例えば、ＺおよびＺ´の両方は不在である。代替の実施形態において、本化合物は、少なくとも１つの３´オーバーハングを含み、ＺまたはＺ´のうちの少なくとも１つが存在する。ＺおよびＺ´は、独立して、以下に記載されるような１つ以上の共有結合された修飾または非修飾ヌクレオチド、例えば、ｄＴまたはｄＡ、ＬＮＡ（ロックド核酸）、鏡映ヌクレオチド等のを含む。いくつかの実施形態において、ＺおよびＺ´のそれぞれは、ｄＴおよびｄＴｄＴから独立して選択される。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、本化合物は、それらの糖残基において修飾されない１つ以上のリボヌクレオチドを含む。他の実施形態において、本化合物は、糖残基において修飾される少なくとも１つのリボヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、本化合物は、糖残基の２´位置に修飾を含む。糖残基の２´位置における修飾は、アミノ、フルオロ、アルコキシ、およびアルキル部分を含む。特定の好ましい実施形態において、アルコキシ修飾は、糖残基の２´位置におけるメトキシ部分である（２´−Ｏ−メチル、２´−Ｏ−Ｍｅ、２´−Ｏ−ＣＨ３）。
【０１９６】
いくつかの実施形態において、本化合物は、アンチセンス鎖およびセンス鎖の１つまたは両方において、修飾された交互リボヌクレオチドを含む。特定の実施形態において、本化合物は、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、修飾された交互リボヌクレオチドを含む。いくつかの好ましい実施形態において、アンチセンス鎖の中間リボヌクレオチド、例えば、１９ｍｅｒ鎖における１０位置のリボヌクレオチドは修飾されない。
【０１９７】
様々な実施形態において、本化合物は、表Ｂ（配列番号２７７から５０９７０および５０９９３〜６８６５４）に示すアンチセンス配列を含む。他の実施形態において、本発明は、表Ｂ（配列番号２７７から５０９７０および５０９９３〜６８６５４）に示すアンチセンス配列を含む哺乳動物発現ベクターを提供する。特定の現在好ましい化合物が、表Ｃ１、Ｃ２、およびＣ３に列挙され、それらの配列は、配列番号９７〜２７６および配列番号５０９７１〜５０９９２に記載される。
【０１９８】
特定の実施形態において、本発明は、以下の構造を有する化合物を提供する。
【０１９９】
５´  （Ｎ）ｘ  ３´  アンチセンス鎖
３´  （Ｎ´）ｙ  ５´  センス鎖
ｘおよびｙはそれぞれ１９であり、（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙは完全に相補的であり、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙにおける代替リボヌクレオチドは、修飾されて、リボヌクレオチドの糖残基において２´−Ｏ−メチル修飾をもたらし、
（Ｎ）ｘの５´および３´末端における各Ｎは修飾され、
（Ｎ´）ｙの５´および３´末端における各Ｎ´は修飾されず、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙのそれぞれは、表Ｂに記載されるオリゴマーの群（Ｂ１−Ｂ２５およびＢ７６；配列番号２７７〜１５１１４および６８６４７〜６８６５４）から選択される。
【０２００】
特定の現在好ましい化合物が表Ｃ１およびＣ３に列挙され、それらの配列は、配列番号９７〜２６６および配列番号５０９７１〜５０９９２に記載される。
【０２０１】
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙは、３´および５´末端においてリン酸化され得るか、またはリン酸化されない。
【０２０２】
本発明の特定の実施形態において、交互リボヌクレオチドは、化合物のアンチセンス鎖およびセンス鎖の両方において、糖残基の２´位置で修飾される。特に、典型的なｓｉＲＮＡは、２´−Ｏ−メチル（Ｍｅ）群が、アンチセンス鎖の第１、第３、第５、第７、第９、第１１、第１３、第１５、第１７、および第１９ヌクレオチド上に存在するように修飾され、それによって、まさに同一の修飾、すなわち、２´−Ｏ−Ｍｅ群は、センス鎖（Ｎ´）ｙの第２、第４、第６、第８、第１０、第１２、第１４、第１６、および第１８ヌクレオチドにおいて存在する。さらに、これら特定のｓｉＲＮＡ化合物も平滑末端であることに留意されたい。
【０２０３】
特定の実施形態において、本発明は、以下の構造を有する化合物を提供する。
【０２０４】
５´  （Ｎ）ｘ  ３´  アンチセンス鎖
３´  （Ｎ´）ｙ  ５´  センス鎖
ｘおよびｙはそれぞれ２３であり、（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙは完全に相補的であり、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙにおける代替リボヌクレオチドは、修飾されて、リボヌクレオチドの糖残基において２´−Ｏ−メチル修飾をもたらし、
（Ｎ）ｘの５´および３´末端における各Ｎは修飾され、
（Ｎ´）ｙの５´および３´末端における各Ｎ´は修飾されず、
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙのそれぞれは、表Ｂに記載されるオリゴマーの群（Ｂ５１−Ｂ７５；配列番号３０９３９〜６８６４６）から選択される。
【０２０５】
（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙは、３´および５´末端においてリン酸化され得るか、またはリン酸化されない。本発明の特定の実施形態において、代替リボヌクレオチドは、化合物のアンチセンス鎖およびセンス鎖の両方において修飾される。特に、典型的なｓｉＲＮＡは、２´−Ｏ−メチル（２´−ＯＭｅ）群が、アンチセンス鎖（Ｎ）ｘの第１、第３、第５、第７、第９、第１１、第１３、第１５、第１７、第１９、第２１、および第２３ヌクレオチド上に存在するように修飾され、それによって、まさに同一の修飾、すなわち、２´−ＯＭｅ群は、センス鎖（Ｎ´）ｙの第２、第４、第６、第８、第１０、第１２、第１４、第１６、第１８、第２０、および第２２ヌクレオチドにおいて存在する。さらに、これら特定のｓｉＲＮＡ化合物も平滑末端であることに留意されたい。
【０２０６】
化合物のアンチセンス鎖およびセンス鎖の１つまたは両方において修飾された代替リボヌクレオチドを有する、本発明の化合物の特定の実施形態において、１９ｍｅｒおよび２３ｍｅｒの場合、アンチセンス鎖の５´および３´末端におけるリボヌクレオチドは、それらの糖残基において修飾され、センス鎖の５´および３´末端におけるリボヌクレオチドは、それらの糖残基において修飾されない。２１ｍｅｒの場合、センス鎖の５´および３´末端におけるリボヌクレオチドは、それらの糖残基において修飾され、アンチセンス鎖の５´および３´末端におけるリボヌクレオチドは、それらの糖残基において修飾されない。上述のように、アンチセンス鎖の中間ヌクレオチドは、修飾されないことが好ましい。
【０２０７】
さらに、本発明は、表Ｂに記載される核酸配列（Ｂ１−Ｂ７６；配列番号２７７〜５０９７０および５０９９３〜６８６５４）を含むｓｉＲＮＡを提供し、１つの鎖または両方の鎖におけるヌクレオチドの１つ、２つ、または３つが置換されることにより、少なくとも１つの塩基対の不一致を提供する。各鎖における置換ヌクレオチドは、好ましくは、１つの鎖または両方の鎖の終端領域内にある。
【０２０８】
ここで好ましい実施形態において、ｓｉＲＮＡのリボ核酸配列は、表Ｃ１、Ｃ２、およびＣ３の配列番号９７〜２７６および配列番号５０９７１〜５０９９２である。特定のここで好ましい実施形態において、ｓｉＲＮＡのリボ核酸配列は、表Ｃ１で示されるとおり、配列番号９９〜１００、配列番号１３３〜１３４、配列番号１３７〜１３８、配列番号２１１〜２１２、配列番号２１３〜２１４で記載される。
【０２０９】
本発明の好ましい一実施形態に従って、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖およびセンス鎖は、３´末端においてのみでリン酸化され、５´末端ではリン酸化されない。本発明の別の好ましい実施形態に従って、アンチセンス鎖およびセンス鎖はリン酸化されない。本発明のさらに別の好ましい実施形態に従って、センス鎖における５´最終端リボヌクレオチドを修飾し、体内における５´リン酸化反応のいかなる可能性をもなくす。
【０２１０】
本発明は、さらに、前述のオリゴリボヌクレオチドのいずれかを、その後、適切な修飾が行われ得る非修飾形態で細胞中に発現できるベクターを提供する。好ましい実施形態において、細胞は哺乳動物細胞、好ましくはヒト細胞である。
【０２１１】
医薬組成物
本発明の化合物を、原化学物質として投与することが可能であり得るが、それらを医薬組成物の形態にすることが好ましい。したがって、本発明は、本発明の１つ以上の化合物、および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。本組成物は、２つ以上の異なるｓｉＲＮＡの混合物を含み得る。一実施形態において、本組成物は、ＲｈｏＡに対するｓｉＲＮＡおよび本発明の１つ以上のアポトーシス促進遺伝子に対するｓｉＲＮＡの混合物を含み得る。より特定の実施形態において、本組成物は、ＲｈｏＡに対するｓｉＲＮＡおよびＣａｓｐ２に対するｓｉＲＮＡの混合物を含み得る。理論に束縛されるわけではないが、ＲｈｏＡは、活性化すると神経突起伸長を阻害する小ＧＴＰアーゼである。その阻害は、脊髄損傷に関連し、本兆候の場合、本発明の抗アポトーシスｓｉＲＮＡと組み合わせることができる。後者は再生を保護し、ＲｈｏＡに対するｓｉＲＮＡは促進するため、複合効果または、さらに相乗効果も生じる。
【０２１２】
本発明は、本発明のアポトーシス促進遺伝子の阻害に有効な量の本発明の１つ以上の化合物に共役または非共役結合した本発明の少なくとも１つの化合物を含む医薬組成物、および医薬的に許容される担体をさらに提供する。本化合物は、内因性細胞複合体によって細胞内で処理され、本発明の１つ以上のオリゴリボヌクレオチドを産生し得る。
【０２１３】
本発明は、本発明のヒトアポトーシス促進アポトーシス細胞における発現の阻害に有効な量の、医薬的に許容される担体、および１つ以上の本発明の化合物を含む医薬組成物をさらに提供し、本化合物は、（Ｎ）ｘの配列に略相補である配列を含む。
【０２１４】
略相補とは、別の配列に対して約８４％より高い相補性を意味する。例えば、１９塩基対から成る２本鎖領域において、１つの不一致は、９４．７％の相補性をもたらし、２つの不一致は、約８９．５％の相補性をもたらし、３つの不一致は、約８４．２％の相補性をもたらし、２本鎖領域に略相補性を与える。したがって、略同一とは、別の配列に対して約８４％より高い同一性を意味する。
【０２１５】
したがって、本発明は、本発明のアポトーシス促進遺伝子のｍＲＮＡ転写を１つ以上の本発明の化合物と接触させることを含む対照と比較した場合に、本発明のアポトーシス促進遺伝子の発現を、少なくとも２０％、好ましくは３０％、より好ましくは４０％、または５０％まで阻害する方法を提供する。
【０２１６】
一実施形態において、オリゴリボヌクレオチドは、本発明の１つ以上のアポトーシス促進遺伝子を阻害し、それにより、阻害は、遺伝子機能の阻害、ポリペプチドの阻害、およびｍＲＮＡ発現の阻害を含む群から選択される。
【０２１７】
一実施形態において、本化合物は、アポトーシス促進ポリペプチドを阻害し、それにより、阻害は、機能の阻害（特に天然の遺伝子／ポリペプチドの相互作用因子を用いて、周知の酵素アッセイまたは結合アッセイによって試験され得る）、タンパク質の阻害（特にウェスタンブロット法、ＥＬＩＳＡまたは免疫沈澱によって試験され得る）、およびｍＲＮＡ発現の阻害（特にノーザンブロット法、定量ＲＴ−ＰＣＲ、原位置ハイブリダイゼーションまたはマイクロアレイハイブリダイゼーションによって試験され得る）を含む群から選択される。
【０２１８】
さらなる実施形態において、本発明は、高レベルの本発明のアポトーシス促進遺伝子を伴う疾患に罹患する対象を治療する方法を提供し、本方法は、治療上有効な用量の、本発明の化合物を対象に投与するステップを含み、それにより対象を治療することを含む。
【０２１９】
より具体的には、本発明は、１つの鎖が、表Ｂにも示される配列番号２７７〜５０９７０および５０９９３〜６８６５４および５０９９３〜６６５４のいずれか１つに記載される５´から３´の配列を有する連続ヌクレオチドを含む、オリゴリボヌクレオチド、または各終端領域における最大２つのリボヌクレオチドが改変される、そのホモログを提供する。
【０２２０】
さらに、本発明に従うさらなる核酸は、表Ｂ（配列番号２７７〜５０９７０および５０９９３〜６８６５４）におけるポリヌクレオチドのいずれか１つの少なくとも１４の隣接するヌクレオチド、およびより好ましくは、上述のように第１鎖および第２鎖から成る２本鎖構造の任意の末端において、１４の隣接するヌクレオチド塩基対を含む。
【０２２１】
本発明に従う核酸、特に本発明に従いそのような核酸を形成する個別の鎖の可能な長さを考慮すると、本発明のアポトーシス促進遺伝子のコーディング配列に対して、各側面へのいくつかのシフトが可能であり、それにより、そのようなシフトは、両方向に最大１、２、３、４、５、および６であってよく、またそれにより、そのように、生成された２本鎖核酸分子も本発明の範囲内であることが、当業者に理解されるだろう。
【０２２２】
送達
本発明のｓｉＲＮＡ分子は、担体または希釈剤を用いて調整された裸の分子を直接適用することによって、標的組織に送達され得る。
【０２２３】
「裸のｓｉＲＮＡ」という用語は、細胞への進入を支援、促進、または容易化するように作用する、ウイルス配列、ウイルス分子、リポソーム製剤、リポフェクチンまたは沈殿剤等を含む、いかなる送達媒体をも含まないｓｉＲＮＡ分子を意味する。例えば、ＰＢＳ中のｓｉＲＮＡは、「裸のｓｉＲＮＡ」である。
【０２２４】
しかしながら、いくつかの実施形態において、本発明のｓｉＲＮＡ分子は、リポソーム製剤およびリポフェクチン製剤等において送達され、当業者によく知られた方法によって調製することができる。そのような方法は、例えば、米国特許第５，５９３，９７２号、第５，５８９，４６６号、および第５，５８０，８５９号に記載され、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２２５】
特に哺乳動物細胞へのｓｉＲＮＡの強化および改善された送達を目的とする送達系が開発されている（例えば、Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔ．２００３，５３９：１１１−１１４；Ｘｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２００２，２０：１００６−１０１０；Ｒｅｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｖｉｓｉｏｎ ２００３，９：２１０−２１６；Ｓｏｒｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２００３．３２７：７６１−７６６；Ｌｅｗｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎ．２００２，３２：１０７−１０８およびＳｉｍｅｏｎｉ ｅｔ ａｌ．，ＮＡＲ ２００３，３１，１１：２７１７−２７２４を参照）。ｓｉＲＮＡは、最近、霊長類において、遺伝子発現の阻害に成功裏に使用されている（例えば、Ｔｏｌｅｎｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｔｉｎａ ２４（４）：６６０を参照）。
【０２２６】
医薬的に許容される担体、溶媒、希釈剤、賦形剤、アジュバント、および媒体、ならびに埋め込み担体は、概して、不活性の非毒性固体または液体充填剤、希釈剤、または本発明の活性成分と反応しないカプセル化物質を意味し、それらはリポソームおよびミクロスフィアを含む。本発明に有用な送達系の例は、米国特許第５，２２５，１８２号、第５，１６９，３８３号、第５，１６７，６１６号、第４，９５９，２１７号、第４，９２５，６７８号、第４，４８７，６０３号、第４，４８６，１９４号、第４，４４７，２３３号、第４，４４７，２２４号、第４，４３９，１９６号、および第４，４７５，１９６号を含む。多数の他のそのような埋め込み、送達系、およびモジュールは、当業者によく知られている。本発明の特定の一実施形態において、局所および経皮製剤が選択され得る。本発明のｓｉＲＮＡまたは医薬組成物は、個別対象の病状、治療される疾患、投与の部位および方法、投与スケジュール、患者の年齢、性別、体重および医療実践者に知られる他の要素を考慮し、良好な医療行為に従って投与および投薬される。
【０２２７】
本明細書の目的において、「治療上有効な用量」は、したがって、当技術分野で知られるそのような考慮事項によって決定される。用量は、これらに限定されないが、生存率の改善またはより早急な回復、または症状の改善あるいは消滅、および当業者によって適切な測定値として選択される他の指標を含む、改善を得るために有効でなければならない。
【０２２８】
一般に、ヒトに対する化合物の活性用量は、１週間から４週間以上の期間に、１日あたり１回または１日当たり２回あるいは３回以上の投与レジメンにおいて、１日に体重１ｋｇ当たり１ｎｇから約２０〜１００ｍｇ、好ましくは、１日に体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇから約２〜１０ｍｇの範囲内である。本発明の化合物は、従来の投与経路のいずれよっても投与することができる。本化合物は、その化合物または医薬的に許容される塩として投与することができ、単独で、または医薬的に許容される担体、溶媒、希釈剤、賦形剤、アジュバント、および媒体と組み合わされた活性成分として投与することができることに留意されたい。本化合物は、経口、皮下、または非経口投与することができ、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、および鼻腔内投与、ならびに髄腔内および注入手技を含む。化合物の埋め込みも有用である。液体形状は、注射用に調製することができ、注射という用語は、皮下、経皮、静脈内、筋肉内、髄腔内、および他の経口投与経路を含む。液体組成物は、有機共同溶媒を含む、またはそれを含まない水溶液、水性または油性懸濁液、食用油を用いた乳液、ならびに同様の薬理学的担体を含む。特定の実施形態において、本投与は、静脈内投与を含む。別の実施形態において、本投与は、局所または局部投与を含む。さらに、特定の実施形態において、本発明の新規治療に使用するための組成物は、例えば、鼻腔内投与のためのエアロゾルとして形成され得る。特定の実施形態において、経口組成物（例えば、錠剤、懸濁液、溶液）は、例えば、口腔粘膜炎の治療のためのうがい薬に適切な経口組成物等の、口腔への局部送達に有効であり得る。
【０２２９】
治療方法
別の態様において、本発明は、表Ａのアポトーシス促進遺伝子の異常発現に関連する疾病または疾患の治療を必要とする対象の治療のための方法であって、これらの遺伝子の発現を低減または阻害する量の阻害剤を、対象に投与するステップを含む、方法に関する。
【０２３０】
好ましい実施形態において、治療される対象は、温血動物および、特にヒトを含む哺乳動物である。
【０２３１】
本発明の方法は、表Ａのアポトーシス促進遺伝子の発現を下方制御する１つ以上の阻害化合物、および特に治療上有効な用量のｓｉＲＮＡを対象に投与し、それにより対象を治療するステップを含む。
【０２３２】
様々な実施形態において、阻害剤は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アプタマー、アンチセンス分子、ｍｉＲＮＡ、リボザイム、および抗体から成る群から選択される。ここでの好ましい実施形態において、阻害剤は、ｓｉＲＮＡである。
【０２３３】
「治療」という用語は、医薬的治療および予防もしくは阻止措置の両方を指し、その目的は、上記に列挙したようなアポトーシス促進関連疾患を阻止または減速（緩和）することである。治療を必要とするものには、該疾病または状態をすでに経験しているもの、該疾病または状態になりやすいもの、該疾病または状態が阻止されるべきものを含む。本発明の化合物は、該疾病もしくは状態またはそれらに関連する症状の発症前、その間、またはその後に投与され得る。治療が阻止目的である場合には、本発明は、該疾病または疾患の発症を遅延させる、またはそれらの進行を回避する方法に関する。
【０２３４】
本発明は、アポトーシス促進遺伝子の発現の阻害が有益である、以下の疾病または状態の治療における、本発明のアポトーシス促進遺伝子の発現を下方制御する化合物の使用に関し、特に新規の低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）に関する：聴力損失、急性腎不全（ＡＲＦ）、緑内障、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）および他の急性肺および呼吸器損傷、肺移植後の虚血再灌流障害、肺、肝臓、心臓、骨髄、膵臓、角膜、および腎臓移植を含む、臓器移植、脊髄損傷、褥瘡、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、ドライアイ症候群、口腔粘膜炎、ならびに慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）。他の兆候には、化学的に誘発された腎臓毒性および化学的に誘発された神経毒性、例えば、シスプラチンおよびシスプラチン様化合物により、アミノグリコシドにより、ループ利尿薬により、ならびにヒドロキノンおよびそれらの類似体により誘発される毒性を含む。
【０２３５】
本発明のアポトーシス促進遺伝子を阻害する方法、分子、および組成物を、本明細書において十分に考察するが、該分子および／または組成物のうちのいずれも、該状態のうちのいずれかに罹患する対象の治療において、有益に用いられ得る。選択されたアポトーシス促進遺伝子を対象とするｓｉＲＮＡの調製に有用な好ましいオリゴマー配列は、表Ｂに列挙した、配列番号２７７〜５０９７０および５０９９３〜６８６５４に記載されている。
【０２３６】
本発明の方法は、治療上有効な量の、アポトーシス促進遺伝子の発現を下方制御する１つ以上の化合物、特に本発明の新規のｓｉＲＮＡ、本明細書に説明するアポトーシス促進遺伝子の小分子阻害剤、またはアポトーシス促進タンパク質に対する抗体を投与するステップを含む。
【０２３７】
いくつかの好ましい実施形態において、本発明の方法は、聴力損失の様々な状態に適用される。理論に束縛されるわけではないが、聴力損失は、アポトーシス性の内耳有毛細胞障害または損失のためであり得、該障害または損失は、感染、機械的損傷、大きな音、老化（老年性難聴）、または化学的に誘発された聴器毒性により引き起こされる。耳毒素（Ｏｔｏｔｏｘｉｎ）には、抗腫瘍薬、サリチル酸塩、キニーネ、およびアミノグリコシド系抗生物質を含む治療薬物、食べ物または医薬品における汚染要因物、ならびに環境または産業性汚染物質を含む。典型的には、治療は、特に治療薬物の投与から生じた、またはその投与から生じることが予期される聴器毒性を、阻止または低減するために実行される。好ましくは、治療上有効な組成物は、耳毒性の影響を阻止または低減するために、曝露直後に与えられる。より好ましくは、治療は、耳毒性調合薬または耳毒素への曝露の前、またはそれと同時のうちのいずれかの本組成物の投与により、予防的に提供される。
【０２３８】
本発明の文脈において、「耳毒素」は、その化学作用を通じて、聴覚に関連する神経系の音受容体成分の活性を損傷、悪化、または阻害し、ひいては、聴覚（および／またはバランス）を害する物質を意味する。本発明の文脈において、耳毒性は、内耳有毛細胞に対する悪影響を含む。聴覚障害を引き起こす耳毒性薬剤は、それに限定されないが、抗がん剤、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、シスプラチンおよびシスプラチン様化合物、タクソールおよびタクソール様化合物、例えば、ジデオキシイノシン、アルコール、金属、職業または環境曝露に関与する工業毒、食品または薬の汚染物質、およびビタミンまたは治療薬の過剰摂取、例えば、ペニシリンまたはクロラムフェニコール等の抗生物質、およびビタミンＡ、Ｄ、またはＢ６の大量投与、サリチル酸、キニーネ、ループ利尿薬、およびホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥ５）阻害剤、例えば、クエン酸シルデナフィル（Ｖｉａｇｒａ（登録商標））を含む。
【０２３９】
「耳毒性薬剤への曝露」は、耳毒性薬剤が利用可能になる、または哺乳動物と接触することを意味する。耳毒性薬剤への曝露は、直接投与によって、例えば、食品、医薬、または化学療法薬等の治療薬の消化または投与によって、偶発的な汚染によって、または空気あるいは水性曝露等の環境曝露によって生じ得る。
【０２４０】
聴覚障害は、内耳有毛細胞を含む終末器官損傷、例えば、音響外傷、ウイルス性咽頭内内耳炎、メニエール病に起因し得る。聴覚障害は、聴覚刺激の不在下での音認識である耳鳴りを含み、断続的または連続的であって、感覚神経の損失と診断され得る。聴覚損失は、耳帯状疱疹、急性から中耳炎から生じる化膿性迷路炎、化膿性髄膜炎、慢性中耳炎、ウイルス起源の急性難聴、例えば、流行性耳下腺炎、はしか、インフルエンザ、水疱瘡、単核症、およびアデノウイルスを含むウイルスによって引き起こされたウイルス性リンパ内内耳炎における細菌またはウイルス感染に起因し得る。聴覚損失は、風疹、出生時の酸素欠乏症、出産中の外傷による内耳への出血、母親に投与された耳毒性薬物、胎児赤芽球症、およびワーデンバーグ症候群およびハーラー症候群を含む遺伝性疾患によって引き起こされるように、先天性であり得る。
【０２４１】
聴覚損失は、騒音誘発、概して、内耳を損傷する８５デシベル（ｄｂ）以上の騒音に起因し得る。本発明の特定の態様において、聴覚損失は、内耳の聴覚部分、特に内耳有毛細胞に影響する耳毒性薬物によって引き起こされる。参照により本明細書に組み込まれるのは、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，１４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８２），Ｍｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ & Ｄｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＮＪの１９６、１９７、１９８および１９９章、および２０７および２１０章を含む最新の第１６版の対応するチ章）であり、聴覚障害およびバランス障害に関する記述および診断に関する。
【０２４２】
本発明の目的は、哺乳動物を治療する方法および組成物を提供すること、聴覚障害、疾患、または不均衡、好ましくは耳毒素に誘発された聴覚状態を、そのような治療を必要とする哺乳動物に本発明の組成物を投与することによって、予防、軽減、または治療することである。本発明の一実施形態は、聴覚疾患または障害を治療するための方法であって、治療上有効量の耳毒性医薬の投与によって中毒性難聴が生じる。局所的耳毒性薬物は、化学療法薬、例えば、抗がん剤および抗生物質である。他の可能な候補は、ループ利尿薬、キニーネまたはキニーネ様化合物、およびサリチル酸またはサリチル酸様化合物を含む。
【０２４３】
本発明の方法および組成物は、耳毒性化号物が抗生物質、好ましくはアミノグリコシド抗生物質である場合、特に有効である。耳毒性アミノグリコシド抗生物質は、それに限定されないが、ネオマイシン、パロモマイシン、リボスタマイシン、リビドマイシン、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、ビオマイシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ストレプトマイシン、ジベカシン、フォルティマイシン、およびジヒドロストレプトマイシン、またはそれらの組み合わせを含む。特定の抗生物質は、ネオマイシンＢ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、ゲンタマイシンＣ１、ゲンタマイシンＣ１ａ、およびゲンタマイシンＣ２を含む。
【０２４４】
本発明の方法および組成物は、耳毒性化合物が、ビンクリスチン、ビンブラスチン、シスプラチンおよびシスプラチン様化合物、タクソールおよびタクソール様化合物等の抗がん剤である場合にも有効である。
【０２４５】
本発明の方法および組成物は、聴覚外傷または機械的外傷、好ましくは、内耳有毛細胞損失に至る聴覚または機械的外傷の治療にも有効である。本発明において治療される聴覚外傷は、極めて大きな音に対する単一曝露、または８５デシベルを超える大きな音に毎日長期間曝露されることによって引き起こされ得る。本発明において治療される機械的内耳外傷は、例えば、内耳への電子装置の挿入操作に続く内耳外傷である。本発明の組成物は、操作に関連する内耳有毛細胞への損傷を阻止または最小化する。
【０２４６】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、耳毒素と共同投与される。例えば、アミノグリコシド抗生物質を投与することによって、哺乳動物の感染を治療するための改善された方法が提供され、本改善には、アポトーシス促進遺伝子の発現を下方制御する１つ以上の化合物（特に、新規のｓｉＲＮＡ）の治療上有効量を、そのような治療を必要とする対象に投与し、抗生物質に関連する耳毒素誘発性聴覚障害を低減または阻止することを含む。アポトーシス促進遺伝子の発現を下方制御する化合物、特に新規のｓｉＲＮＡは、好ましくは内耳内で局部的に投与される。
【０２４７】
さらに別の実施形態において、化学療法化合物を投与することによって、哺乳動物における癌を治療するための改善された方法が提供され、本改善には、本発明の組成物の治療上有効量を、そのような治療を必要とする対象に投与し、化学療法薬に関連する耳毒素誘発性聴覚障害を低減または阻止することを含む。耳毒素誘発性聴覚障害を低減または阻止する化合物、例えば、特に新規のｓｉＲＮＡは、好ましくは内耳内で局部的に投与される。
【０２４８】
別の実施形態において、本治療方法は、化学療法薬の投与に起因する聴覚損失の治療に適用され、その耳毒性副作用を治療する。本発明の方法に影響され得る耳毒性化学療法薬は、それに限定されないが、シスプラチンまたはシスプラチン様化合物、タクソールまたはタクソール様化合物、および耳毒素誘発性聴覚障害を引き起こすと考えられる他の化学療法薬、例えば、ビンクリスチン、血液系悪性腫瘍および肉腫の治療に使用される抗がん剤を含む抗がん剤を含む。シスプラチン様化合物は、特にカルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、テトラプラチン、オキサリプラチン、アロプラチン、およびトランスプラチンを含む。
【０２４９】
別の実施形態において、本発明の方法は、典型的にマラリアの治療に使用されるキニーネおよびその合成置換物の投与に起因する聴覚障害に適用され、その耳毒性副作用を治療する。
【０２５０】
別の実施形態において、本発明の方法は、利尿剤の投与に起因する聴覚障害に適用され、その耳毒性副作用を治療する。利尿薬、特に「ループ」利尿薬、すなわち、ヘンレループにおいて主に作用する利尿薬は、候補耳毒素である。本発明の方法に限定されない例示的実施例は、フロセミド、エタクリル酸、および水銀剤を含む。利尿薬は、典型的に水腫の阻止または除去に使用される。利尿薬は、非水腫状態、例えば、高血圧、高カルシウム血、特発性高カルシウム尿、および腎性尿崩症にも使用される。
【０２５１】
別の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、急性腎不全、特に、手術後の患者における虚血に起因する急性腎不全、およびシスプラチン投与等の化学療法に起因する急性腎不全、またはセプシス関連急性腎不全の治療に使用される。本発明の化合物は、好ましくは、心臓または血管の大手術を受ける高リスクの患者における急性腎不全を阻止するために使用される。急性腎不全を発症するリスクの高い患者は、様々な採点法、例えば、クリーブランドクリニックアルゴリズム、または米国アカデミックホスピタルによって開発されたもの（ＱＭＭＩ）、および復員軍人援護局によって開発されたもの（ＣＩＣＳＳ）を使用して特定することができる。本発明の化合物は、好ましくは、腎移植患者において、虚血性急性腎不全を阻止するため、または化学療法を受けている患者において、毒性急性腎不全を阻止するために使用される。
【０２５２】
別の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、緑内障を治療するために使用される。緑内障の主なタイプは、原発開放隅角緑内障（ＰＯＡＧ）、閉鎖隅角緑内障、正常眼圧緑内障および小児緑内障である。これらは、眼内圧力（ＩＯＰ）、言い換えれば眼内での圧力の増大によって明らかになる。眼神経損傷が正常ＩＯＰにもかかわらず生じた場合、これは正常眼圧緑内障と呼ばれる。二次緑内障は、別の疾患が高い眼圧を引き起こすか、または起因し、眼神経損傷および視覚損失をもたらす任意の症例を意味する。
【０２５３】
別の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、利尿剤、β遮断薬、血管拡張薬、ＡＣＥ阻害剤、シクロスポリン、アミノグリコシド抗生物質（例えば、ゲンタマイシン）、アンフォテリシンＢ、シスプラチン、放射線造影剤、免疫グロブリン、マンニトール、ＮＳＡＩＤ（例えば、アスピリン、イブプロフェン、ジクロフェナク）、シクロホスファミド、メトトレキサート、アシクロビル、ポリエチレングリコール、β−ラクタム抗生物質、バンコマイシン、リファンピシン、スルホンアミド、シプロフロキサチン、ラニチジン、シメチジン、フロセミド、チアジド、フェニトイン、ペニシラミン、リチウム塩、フルオリド、デメクロサイクリン、ホスカルネット、アリストロキン酸等の腎毒素によって引き起こされる損傷を治療または阻止するために使用される。
【０２５４】
別の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、脊椎損傷によって引き起こされる損傷、特に自動車事故、落下、スポーツ負傷、工業事故、銃創によって引き起こされた脊椎外傷、脊椎軟化（例えば、関節リウマチまたは骨粗鬆症）によって引き起こされた脊椎外傷、または通常の加齢過程により脊髄を保護する脊柱管が狭くなった場合（脊椎の狭窄）、脊椎が引張される、横に押される、または圧縮された場合に生じる直接損傷、出血、液体貯留、および脊椎内または脊椎外（但し、脊柱管内）の膨張に続く脊椎損傷を治療または阻止するために使用される。本発明の化合物は、ポリオまたは二分脊椎等の疾患による脊髄損傷によって引き起こされた損傷を治療または阻止するためにも使用される。
【０２５５】
他の実施形態において、本発明の化合物および方法は、急性肺損傷、特に虚血／再潅流障害または酸化ストレスに起因する状態の発生または重篤性を治療または阻止するために有用である。例えば、コロナウイルス感染または内毒素による急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、肺移植に関連した虚血再潅流障害および他の急性肺損傷。
【０２５６】
他の実施形態において、本発明の化合物および方法は、肺、肝臓、心臓、骨、膵臓、腸、皮膚、血管、心臓弁、骨および腎臓移植を含む臓器移植に続く損傷を治療または阻止するための有用である。
【０２５７】
「臓器移植」という用語は、特に、肺、腎臓、心臓、皮膚、静脈、骨、軟骨、肝臓移植を含む、以下の臓器の任意の１つ以上の移植を包含することを意味する。異種移植は、特定の状況において熟考されるが、通常は同種移植が好まれる。自家移植は、骨髄、皮膚、骨、軟骨および血管移植に関して考慮され得る。
【０２５８】
本発明のｓｉＲＮＡ化合物は、特に、潅流障害の緩和、治療、または阻止することを含む、臓器移植の副作用を経験する対象の治療に有用である。
【０２５９】
臓器移植の場合、提供者または被提供者のいずれか、または両方は、本発明の化合物または組成物で治療され得る。したがって、本発明は、臓器提供者または臓器被提供者を治療する方法に関し、臓器提供者または臓器被提供者に、治療上有効量の本発明に従う化合物を投与するステップを含む。
【０２６０】
本発明は、臓器を保存するための方法にさらに関連し、臓器を有効量の本発明の化合物と接触させるステップを含む。手術中の臓器損傷（特に、再灌流障害）を低減または阻止するための方法も提供され、および／または対象から臓器を除去した後に臓器保存液に臓器を入れるステップを含み、本液は、本発明に従う化合物を含む。
【０２６１】
他の実施形態において、本発明の化合物および方法は、患者における他の疾患および状態の発生または重症度を治療または阻止するために有用である。これらの疾患および状態は、発作および発作様状態（例えば、脳、腎、心不全）、ニューロン細胞死、再灌流問題を伴う、または伴わない脳損傷、慢性変性疾患、例えば、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄延髄萎縮、プリオン病、および外傷性脳損傷（ＴＢＩ）に起因するアポトーシスを含む神経変性疾患を含む。
【０２６２】
本発明の化合物および方法は、神経防護作用を提供すること、または脳保護作用を提供すること、あるいは自己免疫疾患および移植拒絶反応に関連する細胞毒性Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞仲介アポトーシスを阻止および／または治療すること、心不全、心筋症、心臓のウイルス感染または細菌感染、心筋虚血、心筋梗塞、心筋虚血、冠動脈バイパス移植を含む心臓細胞の細胞死を阻止すること、例えば、化学療法またはＨＩＶ治療の結果として起こるミトコンドリア薬物毒性の阻止および／または治療すること、ウイルス感染または細菌感染中の細胞死を阻止すること、または炎症あるいは炎症性疾患、炎症性腸疾患、敗血および敗血ショックを阻止および／または治療すること、または卵胞から卵細胞段階、卵細胞から成熟卵段階および精子の細胞死を阻止する（例えば、卵巣組織の凍結および移植、人口受精の方法）、または、化学療法後の哺乳動物、特にヒト哺乳動物における受精率を保存すること、または黄斑変性を阻止および／または治療すること、あるいは急性肝炎、慢性活性肝炎、Ｂ型肝炎、およびＣ型肝炎を阻止および／または治療すること、または脱毛（例えば、男性型はげ頭症による脱毛、または放射線、化学療法または感情的ストレスによる脱毛）を阻止すること、または高レベルの放射線、熱、化学物質、太陽への曝露による皮膚損傷、または熱傷および自己免疫疾患による皮膚損傷）を治療または緩和すること、または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）における骨髄の細胞死を阻止すること、膵炎を治療すること、関節リウマチ、乾癬、糸球体腎炎、アテローム性動脈硬化、および植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療すること、または網膜周皮細胞アポトーシス、虚血、糖尿病性網膜症に起因する網膜損傷を治療すること、アポトーシス細胞死の増加に関連する任意の疾患状態を治療することを対象とする。
【０２６３】
本方法は、治療上有効な用量の、本発明の少なくとも１つの遺伝子を阻害する１つ以上の阻害因子（例えば、ｓｉＲＮＡ）を含む組成物を対象に投与し、それによって対象を治療するステップを含む。好ましい一実施形態において、２つのアポトーシス促進遺伝子を対象とするｓｉＲＮＡ化合物が組み合わされ、相乗治療効果を得るようにする。特異的な一実施例において、ＲｈｏＡ（そのｍＲＮＡ配列は配列番号４６として記載される）を対象とするｓｉＲＮＡ化合物は、表Ａの任意の他のアポトーシス促進遺伝子を対象とするｓｉＲＮＡ化合物、好ましくは、Ｃａｓｐ２（そのｍＲＮＡ配列が配列番号１０〜１１として記載される）を対象とするｓｉＲＮＡ化合物と組み合わされる。
【０２６４】
本発明はまた、
本発明の１つ以上の２本鎖化合物を提供するステップと、
化合物を医薬的に許容される担体と混合するステップと、を含む、医薬組成物を調製するプロセスを提供する。
【０２６５】
本発明はまた、本発明の１つ以上の化合物を医薬的に許容される担体と混合するステップを含む、医薬組成物を調製するプロセスを提供する。
【０２６６】
好ましい実施形態において、医薬組成物の調製に使用される本化合物は、医薬的に有効な用量の担体と混合される。特定の実施形態において、本発明の本化合物は、ステロイドまたは脂質、あるいは別の適切な分子、例えば、コレステロールに共役される。
【０２６７】
修飾
ヌクレオチドの修飾または類似体を、ヌクレオチドの治療特性を向上させるために、導入することができる。特性の向上には、ヌクレアーゼ耐性の向上および／または細胞膜に浸透する能力の向上を含む。
【０２６８】
したがって、本発明は、ポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドの機能に実質的に影響を及ぼさない、本発明のオリゴヌクレオチドの全ての類似体、またはそれらへの修飾もまた含む。好ましい実施形態において、そのような修飾は、ヌクレオチドの塩基部分、ヌクレオチドの糖部分、および／またはヌクレオチドのリン酸塩部分に関連する。
【０２６９】
一実施形態において、本修飾は、リン酸塩部分の修飾であり、それにより修飾されたリン酸塩部分は、ホスホチオエートを含む群から選択される。
【０２７０】
本発明の化合物は、リボ核（またはデオキシリボ核）オリゴヌクレオチドの合成のための、当技術分野において周知である、任意の方法により合成することができる。そのような合成は、とりわけ、Ｂｅａｕｃａｇｅ ａｎｄ Ｉｙｅｒ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９２；４８：２２２３−２３１１、Ｂｅａｕｃａｇｅ ａｎｄ Ｉｙｅｒ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９３；４９：６１２３−６１９４、およびＣａｒｕｔｈｅｒｓ，ｅｔ．ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９８７；１５４：２８７−３１３で説明され、チオエートの合成は、とりわけ、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８５；５４：３６７−４０２で説明され、ＲＮＡ分子の合成は、Ｓｐｒｏａｔ，ｉｎ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ ２００５ ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ Ｐ．；Ｋａｐ．２：１７−３１で説明され、それぞれの下流プロセスは、とりわけ、Ｐｉｎｇｏｕｄ ｅｔ．ａｌ．，ｉｎ ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ １９８９ ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｏｌｉｖｅｒ Ｒ．Ｗ．Ａ．；Ｋａｐ．７：１８３−２０８に説明されている。
【０２７１】
例えばＵｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１０９，７８４５；Ｓｃａｒｉｎｇｅ ｅｔ ａｌ．，１９９０，ＮＡＲ．，１８，５４３３；Ｗｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，ＮＡＲ．２３，２６７７−２６８４；およびＷｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．，７４，５９で説明される手順のような、他の合成手順が当技術分野において既知であり、これらの手順は、５´末端のジメトキシトリチル、および３´末末端のホスホルアミダイト等の、一般的な核酸保護基または連結基を利用し得る。修飾された（例えば２´−Ｏ−メチル化）ヌクレオチドおよび非修飾ヌクレオチドが、所望に応じて組み込まれる。
【０２７２】
本発明のオリゴヌクレオチドは、独立して合成し、例えば、ライゲーションにより（Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６，９９２３；Ｄｒａｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，国際特許広報第ＷＯ ９３／２３５６９号；Ｓｈａｂａｒｏｖａ ｅｔ ａｌ．，１９９１，ＮＡＲ １９，４２４７；Ｂｅｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ & Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１６，９５１；Ｂｅｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．８，２０４）、または合成および／もしくは脱保護後のハイブリダイゼーションにより、合成後に共に接合することができる。
【０２７３】
市販の機械（とりわけ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから入手可能）を使用して、本明細書に開示される配列に従い、該オリゴヌクレオチドを調製できることに留意されたい。化学的に合成されたフラグメントの重複対は、当技術分野において周知の方法を使用して、結紮することができる（例えば米国特許第６，１２１，４２６号を参照）。該鎖は、独立して合成され、その後管内で、互いにアニールされる。その後、２本鎖ｓｉＲＮＡを、ＨＰＬＣにより、（例えばそれらのうちの１つの余剰のために）アニールされなかった１本鎖オリゴヌクレオチドから分離する。本発明のｓｉＲＮＡまたはｓｉＲＮＡフラグメントに関して、２つ以上のそのような配列を、本発明で使用するために、合成し、合わせて連結することができる。
【０２７４】
本発明の化合物は、例えば米国特許広報第ＵＳ ２００４／００１９００１号（ＭｃＳｗｉｇｇｅｎ）で説明されるような、タンデム合成法を介して合成することもでき、ここでは、両方のｓｉＲＮＡ鎖が、開裂可能なリンカーにより分離される、単一の隣接するオリゴヌクレオチドフラグメントもしくは鎖として合成され、それは、その後開裂して、ｓｉＲＮＡ２本鎖をハイブリッド形成し、その精製を可能にする、独立したｓｉＲＮＡフラグメントまたは鎖を提供する。リンカーは、ポリヌクレオチドリンカーまたは非ヌクレオチドリンカーであり得る。
【０２７５】
本発明は、本明細書で言及した疾病または状態のうちのいずれかの治療のための、２つ以上のｓｉＲＮＡ分子を含有する医薬組成物をさらに提供し、該２つの分子は、同等の、またはそれ以外の有益な活性を生成する量で、医薬組成物中に物理的に混合されてもよく、または２〜１００、好ましくは、２〜５０もしくは２〜３０ヌクレオチドの範囲の長さの核酸リンカーにより、共有もしくは非共有結合、あるいは共に接合され得る。一実施形態において、ｓｉＲＮＡ分子は、本明細書に記載される２本鎖核酸構造を含み、２つのｓｉＲＮＡ配列は、表Ｂに記載の核酸から選択される。
【０２７６】
したがって、ｓｉＲＮＡ分子は、リンカーにより共有もしくは非共有結合、あるいは接合され、タンデムｓｉＲＮＡ化合物を形成することができる。２つのｓｉＲＮＡ配列を含むそのようなタンデムｓｉＲＮＡ化合物は、典型的には３８〜１５０ヌクレオチド長、より好ましくは３８もしくは４０〜６０ヌクレオチド長であり、２つを超えるｓｉＲＮＡ配列がタンデム分子に含まれる場合は、それに応じてさらに長くなる。２つ以上のｓｈＲＮＡをコードするタンデム分子のような、内部細胞過程、例えば長鎖ｄｓＲＮＡにより産生されたｓｉＲＮＡをコードする、２つ以上のより長い配列を含む、より長いタンデム化合物もまた想定される。そのようなタンデム分子もまた、本発明の一部とみなされる。本発明の２つ以上のｓｉＲＮＡ配列を含むタンデム化合物が、想定される。特定の実施形態において、タンデムは、本発明の１つ以上の他のｓｉＲＮＡに共有結合的に連結されるＲｈｏＡ ｓｉＲＮＡを含む。より特定の実施形態において、タンデム化合物は、ＲｈｏＡに対するｓｉＲＮＡを含む配列と、Ｃａｓｐ２に対するｓｉＲＮＡを含む配列とを含み得る。理論に束縛されるわけではないが、ＲｈｏＡは、活性化されると神経突起伸長を阻害し、その阻害が脊髄損傷に関連する、低分子量ＧＴＰアーゼである。したがって、本適応症に対するタンデム化合物は、本発明の抗アポトーシスｓｉＲＮＡに対するＲｈｏＡ ｓｉＲＮＡ配列および１つ以上のｓｉＲＮＡ配列を含み得る。後者は再生を保護し、ＲｈｏＡに対するｓｉＲＮＡは、それを促進するため、複合またはさらに相乗効果が生み出される。
【０２７７】
本発明のアポトーシス促進遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ分子は、医薬組成物における主要な活性成分であってもよく、または２つ以上のｓｉＲＮＡ（あるいは２つ以上のｓｉＲＮＡをコードする分子の混合物または１つ以上のタンデム分子である場合は、２つ以上のｓｉＲＮＡをコードする、または内因的に産生する分子）を含有する医薬組成物の１つの活性成分であってもよく、該医薬組成物は、さらに、１つ以上のさらなる遺伝子を標的とする、１つ以上のさらなるｓｉＲＮＡ分子から構成される。該さらなる遺伝子の同時阻害は、本明細書に開示される疾病の治療にさらなるまたは相乗効果をもたらす可能性が高い。
【０２７８】
さらに、本明細書に開示されるアポトーシス促進ｓｉＲＮＡ、またはそのようなｓｉＲＮＡを含むまたはコードする任意の核酸分子を、標的細胞上に発現した細胞表面内在可能分子に対する（アプタマー分子を含む）抗体に、（共有結合的にまたは非共有結合的に）連結または結合し、本明細書に開示される疾病の治療のためのターゲティング強化を達成することができる。例えば抗Ｆａｓ抗体（好ましくは、中和抗体）は、任意のアポトーシス促進ｓｉＲＮＡと、（共有結合的にまたは非共有結合的に）組み合わせることができる。別の実施例において、リガンド／抗体様に作用し得るアプタマーを、任意のアポトーシス促進ｓｉＲＮＡと、（共有結合的にまたは非共有結合的に）組み合わせることができる。
【０２７９】
本発明の化合物は、直接、またはウイルスもしくは非ウイルスベクターと共にのいずれかで送達することができる。直接送達される場合、配列には、該してヌクレアーゼ耐性が与えられる。代替として、該配列は、該配列が、本明細書で以下に考察するように細胞中で発現されるように、発現カセットまたは構築体に組み込むことができる。概して、該構築体は、該配列が標的細胞中で発現するのを可能にする、適切な制御配列またはプロモーターを含有する。本発明の化合物の送達に任意で使用されるベクターは市販されており、当業者に既知の方法により、本発明の化合物の送達のために修飾され得る。
【０２８０】
ステム領域が本発明のオリゴヌクレオチドの配列を含む、１つ以上のステムループ構造を含む長鎖オリゴヌクレオチド（典型的には２５〜５００ヌクレオチド長）が、担体、好ましくは、医薬的に許容される担体において送達され得、内因性細胞複合体（例えば上述のＤＲＯＳＨＡおよびＤＩＣＥＲ）により、細胞内で処理され、本発明のオリゴヌクレオチドである１つ以上の２本鎖オリゴヌクレオチド（ｓｉＲＮＡ）を産生し得ることもまた想定される。このオリゴヌクレオチドは、タンデムｓｈＲＮＡ構築体と称することができる。本長鎖オリゴヌクレオチドは、それぞれのステム領域が、本発明のアポトーシス促進遺伝子のセンスおよび対応するアンチセンスｓｉＲＮＡ配列を含む、１つ以上のステムループ構造を含む１本鎖オリゴヌクレオチドであることが想定される。特に、本オリゴヌクレオチドは、表Ｂに示し、配列番号２７７〜５０９７０および５０９９３〜６８６５４に記載するセンスおよびアンチセンスｓｉＲＮＡ配列を含むことが想定される。
【０２８１】
ヌクレオチド／オリゴヌクレオチドの全ての類似体およびそれらへの修飾が、本発明に用いられ得るが、但し、該類似体または修飾は、ヌクレオチド／オリゴヌクレオチドの機能に実質的に影響を及ぼさないことを条件とする。ヌクレオチドは、天然に存在するまたは合成の修飾塩基から選択され得る。天然に存在する塩基には、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルを含む。ヌクレオチドの修飾塩基には、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチル、２−プロピルおよび他のアルキルアデニン、５−ハロウラシル、５−ハロシトシン、６−アザシトシンおよび６−アザチミン、擬ウラシル、４−チオウラシル、８−ハロアデニン、８−アミノアデニン、８−チオールアデニン、８−チオールアルキルアデニン、８−ヒドロキシルアデニンおよび他の８−置換アデニン、８−ハログアニン、８−アミノグアニン、８−チオールグアニン、８−チオールアルキルグアニン、８−ヒドロキシルグアニンおよび他の置換グアニン、他のアザおよびデアザアデニン、他のアザおよびデアザグアニン、５−トリフルオロメチルウラシル、ならびに５−トリフルオロシトシンを含む。いくつかの実施形態において、オリゴマー中の１つ以上のヌクレオチドが、イノシンと置換される。
【０２８２】
さらに、ポリヌクレオチドの類似体は、１つ以上のヌクレオチドの構造が、根本的に変えられ、治療用または実験用試薬により適した、ポリヌクレオチドの類似体を調製することができる。ヌクレオチド類似体の一例は、ＤＮＡ（またはＲＮＡ）内のデオキシリボース（またはリボース）リン酸塩骨格が、ペプチド内に見られるものと類似のポリアミド骨格と置き換えられる、ペプチド核酸（ＰＮＡ）である。ＰＮＡ類似体は、酵素分解に対する耐性があり、体内および体外において、長期の安定性を有することが示されている。オリゴヌクレオチドに行うことができる他の修飾には、ポリマー骨格、環状骨格、非環状骨格、チオリン酸塩−Ｄ−リボース骨格、トリエステル骨格、チオエート骨格、２´−５´架橋骨格、人工核酸、モルホリノ核酸、ロックド核酸（ＬＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、アラビノシド、および鏡映ヌクレオシド（例えばβ−Ｄ−デオキシヌクレオシドの代わりにβ−Ｌ−デオキシヌクレオシド）を含む。ＬＮＡヌクレオチドを含むｓｉＲＮＡ化合物の実施例は、Ｅｌｍｅｎら（ＮＡＲ ２００５，３３（ｌ）：４３９−４４７）に開示されている。
【０２８３】
本発明の化合物は、例えば逆位チミジンまたは逆位アデニンのような、１つ以上の逆位ヌクレオチドを使用して合成することができる（例えばＴａｋｅｉ，ｅｔ ａｌ．，２００２，ＪＢＣ ２７７（２６）：２３８００−０６を参照）。
【０２８４】
「鏡映」ヌクレオチドは、天然に存在するまたは一般的に用いられるヌクレオチドと反対のキラリティーを有するヌクレオチド、つまり天然に存在するもの（Ｄ−ヌクレオチド）の鏡像（Ｌ−ヌクレオチド）である。ヌクレオチドは、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドであり得、少なくとも１つの糖、塩基、および／または骨格修飾をさらに含み得る。米国特許第６，６０２，８５８号は、少なくとも１つのＬ−ヌクレオチド置換を含む、核酸触媒を開示している。
【０２８５】
本発明の阻害剤は、ｓｉＲＮＡ分子であることが好ましいが、アポトーシス促進遺伝子を阻害し、本明細書で説明した疾病および状態を治療するために、本発明の方法で使用されることが企図される他の阻害剤は、とりわけ、１本鎖抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ分子、リボザイム、タンパク質、ペプチド模倣薬およびドミナントネガティブ型を含むポリペプチドおよびペプチド、ならびに上記すべてを発現する発現ベクターを含む、抗体、好ましくは、中和抗体またはそれらのフラグメントである。さらなる阻害剤は、概して、２０００ダルトン未満、より好ましくは、１０００ダルトン未満、さらにより好ましくは、５００ダルトン未満の分子量を有する、小化学分子であり得る。これらの阻害剤は、以下の作用を有し得る。小分子は、発現および／または活性に影響を及ぼし得る、抗体は、活性に影響を及ぼし得る、全ての種類のアンチセンスは、アポトーシス促進遺伝子発現に影響を及ぼし得る、ドミナントネガティブポリペプチドおよびペプチド模倣薬は、活性に影響を及ぼし得る、発現ベクターは、とりわけ、アンチセンス、またはドミナントネガティブポリペプチド、または抗体の送達に使用され得る。
【０２８６】
抗体
「抗体」という用語は、とりわけ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥ抗 体を指す。その定義には、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を含む。本用語は、完全な抗体、または抗原結合ドメイン、例えばＦｃ部分が除かれた抗体、１本鎖抗体、ミニ抗体、本質的に変形物のみから成るフラグメント、抗体の抗原結合ドメイン等を含む、抗体のフラグメントを指す。「抗体」という用語は、ｃＤＮＡの予防接種により得られたポリヌクレオチド配列に対する抗体もまた指す場合がある。本用語は、それらの抗原または受容体と選択的に結合する能力を保持し、とりわけ、以下のように例示される、抗体フラグメントもまた包含する。
【０２８７】
（１）Ｆａｂ、酵素パパインによる完全な抗体の消化により産生され、軽鎖および重鎖の一部分をもたらし得る、抗体分子の１価の抗原結合フラグメントを含む、フラグメント。
【０２８８】
（２）（Ｆａｂ´）２、その後の還元なしに、酵素ペプシンで完全な抗体を処理することにより得ることができる、抗体のフラグメント。Ｆ（ａｂ´２）は、２つのジスルフィド結合により共に維持される２つのＦａｂフラグメントの２量体である。
【０２８９】
（３）Ｆｖ、２つの鎖として発現される、軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域を含む、遺伝子組換えフラグメントとして定義される。
【０２９０】
（４）１本鎖抗体（ＳＣＡ）、遺伝的に融合された１本鎖分子として、好適なポリペプチドリンカーにより連結される、軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域を含む、遺伝子組換え分子として定義される。
【０２９１】
所望の疾病の治療のために、特異的抗体を使用して、好ましく阻害される本発明の遺伝子は、レチキュロン４受容体（ＲＴＮ４Ｒ）およびアネキシンＡ２（ＡＮＸＡ２）である。
【０２９２】
アンチセンス分子
「アンチセンス」（ＡＳ）または「アンチセンスフラグメント」という用語は、阻害的なアンチセンス活性を有する、ポリヌクレオチドフラグメント（デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチドのいずれか、またはその両方の混合物を含む）を意味し、該活性は、対応する遺伝子の内因性ゲノムコピーの発現の減少をもたらす。ＡＳポリヌクレオチドは、ＡＳの遺伝子へのハイブリダイゼーションを可能にするための、標的遺伝子の配列内に存在する配列に対して十分な長さおよび相同性の配列を有する、連続したヌクレオチドを含む、ポリヌクレオチドである。多くの総説が、アンチセンス（ＡＳ）技術の主要な態様およびその非常に大きな治療可能性を対象としている（Ａｂｏｕｌ−Ｆａｄｌ，Ｃｕｒｒ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．２００５．１２（１９）：２１９３−２１４、Ｃｒｏｏｋｅ，Ｃｕｒｒ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．２００４．４（５）：４６５−８７；Ｃｒｏｏｋｅ，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｍｅｄ．２００４；５５：６１−９５、Ｖａｃｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．２００３．６０（５）：８２５−３３；Ｃｈｏ−Ｃｈｕｎｇ，Ａｒｃｈ Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．２００３．２６（３）：１８３−９１。本技術の化学的（Ｃｒｏｏｋｅ，１９９５；Ｕｈｌｍａｎｎ ｅｔ ａｌ，１９９０）、細胞的（Ｗａｇｎｅｒ，１９９４．Ｎａｔｕｒｅ．２４；３７２（６５０４）：３３３−５）、および治療的（Ｈａｎａｎｉａ，ｅｔ ａｌ，１９９５；Ｓｃａｎｌｏｎ，ｅｔ ａｌ，１９９５；Ｇｅｗｉｒｔｚ，１９９３）態様に関する、多くの論説が存在する。特異的遺伝子の発現におけるアンチセンス介入は、合成ＡＳオリゴヌクレオチド配列の使用により達成され得る（例えばＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ．２００５ ５（１）：４３−９を参照）。
【０２９３】
ＡＳオリゴヌクレオチド配列は、ＤＮＡの短配列、典型的には、１５〜３０ｍｅｒであり得るが、関心の標的ｍＲＮＡを補完し、ＲＮＡ：ＡＳ２本鎖を形成するように考案された、７ｍｅｒほどの小ささでもよい（Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ，１９９６ Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４（７）：８４０−４）。該２本鎖形成により、関連するｍＲＮＡのプロセシング、スプライシング、輸送、または翻訳を阻止することが可能である。さらに、特定のＡＳヌクレオチド配列は、それらの標的ｍＲＮＡとハイブリッド形成されると、細胞のＲＮアーゼＨ活性を引き出すことが可能であり、ｍＲＮＡ分解をもたらす（Ｃａｌａｂｒｅｔｔａ ｅｔ ａｌ，１９９６ Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２３（１）：７８−８７）。その場合、ＲＮアーゼＨは、２本鎖のＲＮＡ成分を開裂し、標的ＲＮＡのさらなる分子とさらにハイブリッド形成するように、ＡＳを遊離できる可能性がある。さらなる作用モードは、転写的に不活性であり得る三重らせん体を形成する、ＡＳのゲノムＤＮＡとの相互作用によって生じる。
【０２９４】
アンチセンスオリゴヌクレオチドに対する配列標的セグメントは、配列が、それらの相補的鋳型を用いたオリゴヌクレオチドの２本鎖形成に重要な、好適なエネルギー関連の特徴を呈し、自己２量体化または自己相補性の低い可能性を示す（Ａｎａｚｏｄｏ ｅｔ ａｌ．，１９９６ ＢＢＲＣ．２２９（１）：３０５−９）ように、選択される。例えばコンピュータプログラムＯＬＩＧＯ（Ｐｒｉｍｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、３．４版）を使用して、アンチセンス配列の融解温度、自由エネルギー性質を決定し、自己２量体形成および自己相補性の可能性を推定することができる。該プログラムにより、これらの２つのパラメータ（自己２量体形成および自己相補性の可能性）の定性的推定の決定が可能になり、「可能性なし」、または「いくらかの可能性」、または「本質的に完全な可能性」の目安を提供する。このプログラムを使用して、概して、これらのパラメータにおける可能性なしの推定値を有する標的セグメントが、選択される。しかし、カテゴリーの１つでは、「いくらかの可能性」を有するセグメントを使用することができる。パラメータの均衡が、当技術分野において既知であるように、選択において使用される。さらに、オリゴヌクレオチドは、また、類似体置換が実質的に機能に影響を及ぼさないように、必要に応じて選択される。
【０２９５】
ホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドは、動物において効果的であり、十分な薬力学的半減期を呈し（Ａｇａｒｗａｌ ｅｔ ａｌ．，１９９６）、ヌクレアーゼ耐性のある濃度において、通常顕著な毒性は示さない。細胞発達に関連する、アンチセンス誘発の機能喪失表現型が、インテグリンを含む様々な異なる遺伝子（Ｇａｌｉｌｅｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ．１９９２ ９（６）：１１１７−３１．）、およびＮ−ｍｙｃタンパク質（Ｒｏｓｏｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０ Ｐｒｏｇ Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｌ Ｒｅｓ．３６６：２９−３６）に関して示された。分裂促進性および血管新生性質を有する、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）のアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害は、飽和可能かつ特異的様式で、グリオーマ細胞の成長の８０％を抑制した（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，ＪＢＣ １９９１ ２６６（２）：７２８−３４）。疎水性であるため、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、リン脂質膜と相互に良好に作用する（Ａｋｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＮＡＲ．．１９９１，１９：５５５１−５５５９）。細胞原形質膜との相互作用の後、それらは、特異受容体に関与することが予測される飽和機構で（Ｙａｋｕｂｏｖ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，１９８９ ８６（１７）：６４５４−５８）、生細胞中に能動的に（または受動的に）輸送される（Ｌｏｋｅ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １９８９，８６（１０）：３４７４−８）。
【０２９６】
リボザイム
「リボザイム」は、ＲＮＡ触媒能を持つＲＮＡ分子であり（総説については、Ｃｅｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ．２００２ Ｎｏｖ；３０（Ｐｔ ６）：１１６２−６を参照）、標的ＲＮＡの特異的部位を開裂する。本発明に従い、ｍＲＮＡを開裂するリボザイムを、阻害剤として利用することができる。アンチセンス療法が、化学量論的考慮により制限される場合、これが必要であり得る（Ｓａｒｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｇｅｎｅ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｉｄｓ，ｐｐ．３０５−３２５）。その場合、骨髄疾患に関連する遺伝子を標的とするリボザイムを使用することができる。リボザイムにより開裂されるＲＮＡ分子数は、量論的化学（Ｓｔｏｉｃｈｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）により予測される数より大きい（Ｈａｍｐｅｌ ａｎｄ Ｔｒｉｔｚ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８９，２８（１２）：４９２９−３３；Ｕｈｌｅｎｂｅｃｋ，Ｎａｔｕｒｅ．１９８７ ３２８（６１３１）：５９６−６００）。
【０２９７】
リボザイムは、ＲＮＡのリン酸ジエステル結合開裂を触媒する。もともとタバコ輪斑ウイルスサテライトＲＮＡ（ｓＴＲＳＶ）のマイナス鎖に由来する、グループＩイントロン、ＲＮアーゼＰ、デルタ肝炎ウイルスリボザイム、ハンマーヘッド型リボザイム、およびヘアピン型リボザイムを含む、いくつかのリボザイム構造ファミリーが同定されている（Ｓｕｌｌｉｖａｎ，１９９４；米国特許第５，２２５，３４７号）。後の２つのファミリーは、リボザイムが、ローリングサークル複製中に作られたオリゴマーから単量体を分離すると考えられている、ウイロイドおよびウイルソイドに由来する（Ｓｙｍｏｎｓ，１９８９ ａｎｄ １９９２）。ハンマーヘッド型およびヘアピン型リボザイムモチーフが、遺伝子療法のためのｍＲＮＡのトランス開裂に、最も一般的に適合される（Ｓｕｌｌｉｖａｎ，１９９４）。概して、リボザイムは、約３０〜１００ヌクレオチド長を有する。リボザイムの送達は、ＡＳフラグメントおよび／またはｓｉＲＮＡ分子のものと同様である。
【０２９８】
アポトーシス促進遺伝子に対する不活性化化合物のスクリーニング：
本発明の化合物および組成物のいくつかを、アポトーシス促進遺伝子の活性を調節する化合物、特に本発明の、アポトーシス促進遺伝子のレベルの上昇に付随して起こる疾患を調節する化合物を、同定および単離するためのスクリーニングアッセイに使用することができる。スクリーニングされる化合物は、とりわけ、小化学分子およびアンチセンスオリゴヌクレオチド等の物質を含む。
【０２９９】
例えば、さらなる化合物が、アポトーシス促進遺伝子の阻害に対して本発明のオリゴヌクレオチドと競合する、あるいはさらなる化合物が該阻害を救う場合、アポトーシス促進遺伝子への本発明の化合物の阻害活性、または本発明の化合物のアポトーシス促進遺伝子への結合を使用して、さらなる化合物のアポトーシス促進ポリペプチドとの相互作用を判定することができる。阻害または活性は、とりわけ、放射もしくは蛍光競合アッセイにおいて、アポトーシス促進ポリペプチドの活性の産物に対して、または結合化合物のアポトーシス促進ポリペプチドからの変位に対する検定等の、様々な手段により試験することができる。
【０３００】
本発明は、実施例を参照して以下に詳細に例証するが、それらに限定されるものとして解釈されるべきではない。
【０３０１】
本明細書におけるいかなる文献の引用も、そのような文献が該当する先行技術であること、あるいは本願のいかなる請求項の特許性に対しても不可欠であるとみなされることへの承認であるとは意図していない。いずれの文献の内容または日付に関するいかなる言及も、出願時に出願人に入手可能な情報に基づいており、そのような言及の正確性に関する承認とはならない。
【実施例】
【０３０２】
分子生物学における一般法
当技術分野において既知であり、具体的に説明されていない、標準的な分子生物学技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８９）、およびＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）、およびＰｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ & Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）、およびＷａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ａｎｄ ｉｎ Ｂｉｒｒｅｎ ｅｔ ａｌ（ｅｄｓ）Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ，ＶｏＩｓ．１−４ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９８）において見られるように、ならびに米国特許第４，６６６，８２８号、同第４，６８３，２０２号、同第４，８０１，５３１号、同第５，１９２，６５９号、および同第５，２７２，０５７号に記載される方法論に、概して従ったが、それらは参照により本明細書に組み込まれる。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）は、概して、ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）の通り行われた。フローサイトメトリーと組み合わせた原位置（細胞内）ＰＣＲが、特異的ＤＮＡおよびｍＲＮＡ配列を含有する細胞の検出に使用され得る（Ｔｅｓｔｏｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｂｌｏｏｄ ８７：３８２２．）。ＲＴ−ＰＣＲを実行する方法もまた、当技術分野において周知である。
【０３０３】
実施例１：アポトーシス促進遺伝子に対するｓｉＲＮＡ化合物の体外試験
１． 概要
６ウェルプレートに、ウェル当たり約１．５〜２×１０５試験細胞（ヒト遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡに対するＨｅＬａ細胞または２９３Ｔ細胞、およびラット／マウス遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡに対するＮＲＫ５２細胞またはＮＭＵＭＧ細胞）を播種した（７０〜８０％集密）。
【０３０４】
２４時間後、細胞は、５００ｐＭ、５ｎＭ、２０ｎＭ、または４０ｎＭの最終濃度で、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎｅ）を使用して、ｓｉＲＮＡオリゴマーと共に形質移入された。細胞を、７２時間、３７℃のＣＯ２インキュベーターで培養した。
【０３０５】
形質移入細胞に対する陽性対照として、ＰＴＥＮ−Ｃｙ３標識ｓｉＲＮＡオリゴを使用した。ｓｉＲＮＡ活性に対する陰性対象として、ＧＦＰ ｓｉＲＮＡオリゴを使用した。
【０３０６】
形質移入の約７２時間後、細胞を採取し、細胞からＲＮＡを抽出した。蛍光顕微鏡法により、形質移入効率を試験した。
【０３０７】
実施例１で説明する体外実験で使用されたｓｉＲＮＡは、本化合物のアンチセンスおよびセンス鎖の両方において修飾される交互リボヌクレオチドを有する、１９ｍｅｒまたは２３ｍｅｒであった。１９ｍｅｒについては、修飾は、２´−Ｏ−メチル（Ｍｅ）基が、アンチセンス鎖の１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、および１９番目のヌクレオチドに存在し、それにより、全く同一の修飾、つまり２´−Ｏ−Ｍｅ基が、センス鎖の２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、および１８番目のヌクレオチドに存在するようにした。これらの特定のｓｉＲＮＡ化合物は、やはり平滑末端化され、終端においてリン酸化されなかったが、比較実験は、３´−末端においてリン酸化されたｓｉＲＮＡが類似の活性を有することを示した。
【０３０８】
結果：
特異的ｓｉＲＮＡを使用した遺伝子発現の阻害の百分率は、内在性遺伝子を発現する細胞における標的遺伝子のｑＰＣＲ分析を使用して測定された。以下の表Ｃ１、Ｃ２、およびＣ３のデータは、特異的ｓｉＲＮＡ分子での治療後の、細胞中の標的遺伝子の残存発現の百分率を示す（表Ｃ１およびＣ３：１９ｍｅｒのｓｉＲＮＡ化合物、表Ｃ２：２３ｍｅｒのｓｉＲＮＡ化合物）。概して、体外試験用に選択された特異的配列を有するｓｉＲＮＡは、ヒトおよびラット／ラビット遺伝子の両方に対して特異的であった。特異的遺伝子の発現の低減の類似結果が、他のｓｉＲＮＡでも得られ、その配列を、表Ｂに列挙する。
【表Ｃ１−１】
0005628271.tif 000005
【表Ｃ１−２】
0005628271.tif 000006
【表Ｃ１−３】
0005628271.tif 000007
【表Ｃ１−４】
0005628271.tif 000008
【表Ｃ１−５】
0005628271.tif 000009
【表Ｃ１−６】
0005628271.tif 000010
【表Ｃ１−７】
0005628271.tif 000011
【表Ｃ１−８】
0005628271.tif 000012
【表Ｃ２】
0005628271.tif 000013
【０３０９】
表Ｃ３：１９ｍｅｒのｓｉＲＮＡ分子を使用した細胞における、標的ヒト遺伝子の発現のノックダウンの百分率。
【表Ｃ３】
0005628271.tif 000014
【０３１０】
実施例２：急性腎不全（ＡＲＦ）のモデルシステム
ＡＲＦは、数日間のうちに起こる、腎機能の急激な悪化を特徴とした、臨床的症候群である。理論に束縛されるわけではないが、急性腎臓損傷は、大きな心臓手術等の大手術を受ける患者における腎虚血再灌流障害等の、腎虚血再灌流障害の結果であり得る。ＡＲＦの主な特徴は、窒素性廃棄物（尿素、クレアチニン）の滞留を招く、糸球体濾過率（ＧＦＲ）の突然の低下である。最近の研究は、腎組織におけるアポトーシスが、ＡＲＦのほとんどのヒトの症例において顕著であることを支持している。アポトーシス細胞死の腫瘍な部位は、末端のネフロンである。虚血障害の初期段階では、アクチン細胞骨格の完全性の消失が、刷子縁の消失、細胞の接触点の消失、そしてその後の細胞の基礎を成す基層からの離脱を伴う、上皮の扁平化の消失に至る。
【０３１１】
活性ｓｉＲＮＡ化合物の試験は、虚血再灌流誘発性のＡＲＦのための動物モデルを使用して実行された。
【０３１２】
［特異的Ｒａｃ１、ＴＰ５３ＢＰ２、およびＣａｓｐ２ ｓｉＲＮＡ化合物を使用した、虚血再灌流障害誘発性ＡＲＦに対する保護］
４５分間、両側の腎臓動脈をクランプし、その後クランプを解除して２４時間再灌流させ、ラットに虚血再灌流障害を誘発した。クランプの３０分前およびその４時間後、個々の実験動物の頸静脈に、１２ｍｇ／ｋｇの用量の以下のｓｉＲＮＡ化合物を注入した。ＡＲＦの進行は、手術前（ベースライン）および２４時間後、血清クレアチニン値の測定により、監視した。
【０３１３】
Ｒａｃｌ＿２：
センス配列：ＧＡＧＵＣＣＵＧＣＡＵＣＡＵＵＵＧＡＡ、配列番号２１３、
アンチセンス配列：ＵＵＣＡＡＡＵＧＡＵＧＣＡＧＧＡＣＵＣ、配列番号２１４
ＴＰ５３ＢＰ２＿２：
センス配列：ＣＡＣＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＵＵＵＡＵＵ、配列番号９９、
アンチセンス配列：ＡＡＵＡＡＡＵＧＵＵＣＵＣＵＧＧＧＵＧ、配列番号１００
Ｃａｓｐ２＿４：
センス配列：ＧＣＣＡＧＡＡＵＧＵＧＧＡＡＣＵＣＣＵ、配列番号１３９、
アンチセンス配列：ＡＧＧＡＧＵＵＣＣＡＣＡＵＵＣＵＧＧＣ、配列番号１４０。
【０３１４】
実験の最後に、ラットを、留置大腿ラインを介して、温かいＰＢＳ、その後４％のパラホルムアルデヒドで灌流させた。左腎は、外科的に除去し、その後の組織学的分析のために、４％のパラホルムアルデヒド中に保存した。急性腎不全は、血清クレアチニン値のベースラインからの急激な上昇として、しばしば定義される。１ｄＬ当たり少なくとも０．５ｍｇ、または１Ｌ当たり４４．２μｍｏｌの血清クレアチニンの上昇が、急性腎不全の兆候であるとみなされる。血清クレアチニンは、手術前ゼロ時およびＡＲＦ手術の２４時間後に測定した。以下の表Ｄ１〜Ｄ３は、ラットのＡＲＦモデルで得られた結果を示す。結果から明らかなように、ＲＡＣ１、ＴＰ５３ＢＰ２、およびＣａｓｐ２ ｓｉＲＮＡ化合物は、実験的ラットモデルにおける、虚血再灌流誘発性ＡＲＦ後に、クレアチニン値を減少させた。
【０３１５】
表Ｄ１：Ｒａｃｌ＿２ ｓｉＲＮＡ（配列番号２１３〜２１４）を用いた治療
値は、虚血再灌流誘発性ＡＲＦの前（ベースライン）およびその２４時間後のプラセボ群（ＰＢＳ）、虚血障害の３０分前のＲＡＣ１＿２ ｓｉＲＮＡ治療ラット（−３０´）、および虚血障害の４時間後のＲＡＣ１＿２ ｓｉＲＮＡ治療ラット（＋４ｈ）におけるクレアチニン値［ｍｇ／ｄＬ］を表す。
【表Ｄ１】
0005628271.tif 000015
【０３１６】
表Ｄ２：ＴＰ５３ＢＰ２＿２ ｓｉＲＮＡ（配列番号９９〜１００）を用いた治療。値は、虚血再灌流誘発性ＡＲＦの２４時間後のプラセボ群（ＰＢＳ）、虚血障害の４時間後の非関連ＧＦＰ ｓｉＲＮＡ治療ラット（ＧＦＰ ｓｉＲＮＡ（＋４ｈ）、虚血障害の３０分前のＴＰ５３ＢＰ２＿２ ｓｉＲＮＡ治療ラット（ＴＰ５３ＢＰ２＿２ ｓｉＲＮＡ（−３０´）、および虚血障害の４時間後のＴＰ５３ＢＰ２＿２ ｓｉＲＮＡ治療ラット（ＴＰ５３ＢＰ２＿２ ｓｉＲＮＡ（＋４ｈ）における、クレアチニン値を表す。
【表Ｄ２】
0005628271.tif 000016
【０３１７】
表Ｄ３：Ｃａｓｐ２＿４ ｓｉＲＮＡ（配列番号１３９〜１４０）を用いた治療。値は、虚血再灌流誘発性ＡＲＦの前（ベースライン）およびその２４時間後のプラセボ群（ＰＢＳ）、虚血障害の３０分前のＣａｓｐ２＿４ ｓｉＲＮＡ治療ラット（−３０´）、および虚血障害の４時間後のＣａｓｐ２＿４ ｓｉＲＮＡ治療ラット（＋４ｈ）における、クレアチニン値を表す。
【表Ｄ３】
0005628271.tif 000017
【０３１８】
表Ｂからの他のｓｉＲＮＡ化合物、特に特定の遺伝子、ＴＰ５３ＢＰ２、ＬＲＤＤ、ＣＹＢＡ、ＡＴＦ３、ＣＡＳＰ２、ＨＲＫ、ＣＩＱＢＰ、ＢＮＩＰ３、ＭＡＰＫ８、ＭＡＰＫ１４、ＲＡＣ１、ＧＳＫ３Ｂ、Ｐ２ＲＸ７、ＴＲＰＭ２、ＰＡＲＧ、ＣＤ３８、ＳＴＥＡＰ４、ＢＭＰ２、ＣＸ４３、ＴＹＲＯＢＰ、ＣＴＧＦ、およびＳＰＰ１ｌを対象としたｓｉＲＮＡの投与後、類似した結果が得られる。
【０３１９】
実施例３：褥瘡または床ずれのモデルシステム
糖尿病性潰瘍を含む褥瘡または床ずれは、（通常ベッドまたは車椅子からの）持続的な圧力が、身体の脆弱部、特に臀部、腰、および踵の皮膚の循環を遮る場合に起こる、損傷した皮膚および組織の部位である。適切な血流の欠如が、影響を受けた組織の虚血性壊死および潰瘍形成を導く。褥瘡は、感覚の低下または無感覚を伴う患者、または衰弱した、やつれた、麻痺した、または長く寝たきりの患者において、最もしばしば生じる。仙骨、坐骨、大転子、外踝、および踵上の組織が特に罹患しやすいが、患者の状況により、他の部位も関与し得る。
【０３２０】
褥瘡、床ずれ、および類似の外傷を治療するための、本発明の活性阻害剤（ｓｉＲＮＡ化合物等）の試験を、Ｒｅｉｄら（Ｊ Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１１６：１７２−１８０， ２００４）で説明されるマウスモデルで実行する。
【０３２１】
本発明のｓｉＲＮＡ化合物を試験するために、さらなるラビットモデル（Ｍｕｓｔｏｅら（ＪＣＩ， １９９１． ８７（２）：６９４−７０３；Ａｈｎ ａｎｄ Ｍｕｓｔｏｅ， Ａｎｎ Ｐｌ Ｓｕｒｇ， １９９１． ２４（ｌ）：１７−２３で説明）を使用する。これらのｓｉＲＮＡ化合物が褥瘡および床ずれを治療および阻止することを示す動物モデルにおいて、表ＢによるｓｉＲＮＡ、具体的には遺伝子ＣＩＱＢＰ、ＲＡＣ１、ＧＳＫ３Ｂ、Ｐ２ＲＸ７、ＴＲＰＭ２、ＰＡＲＧ、ＣＤ３８、ＳＴＥＡＰ４、ＢＭＰ２、ＣＸ４３、またはＴＹＲＯＢＰを試験する。
【０３２２】
ＥＸＡＭＰＬＥ ４：慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）のモデルシステム
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、主に、終末細気管支の遠位の末梢の気腔の永久的な破壊である、気腫を特徴とする。気腫は、細気管支および胞状構造中のマクロファージおよび好中球等の、炎症細胞の蓄積もまた特徴とする。気腫および慢性気管支炎は、ＣＯＰＤの一部として、または独立して発生し得る。
【０３２３】
ＣＯＰＤ／気腫／慢性気管支炎を治療するための、本発明の活性阻害剤（ｓｉＲＮＡ化合物等）の試験を、以下のように開示するもの等の、動物モデルで実行する：
Ｓｔａｒｃｈｅｒ ａｎｄ Ｗｉｌｌｉａｍｓ， １９８９． Ｌａｂ． Ａｎｉｍａｌｓ， ２３：２３４−２４０；Ｐｅｎｇ， ｅｔ ａｌ．， ２００４．；Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ， １６９：１２４５−１２５１；Ｊｅｙａｓｅｅｌａｎ ｅｔ ａｌ．， ２００４． Ｉｎｆｅｃｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ， ７２：７２４７−５６。さらなるモデルが、本願の譲受人に譲渡されたＰＣＴ特許広報第ＷＯ ２００６／０２３５４４号で説明されており、ここで、参照により、本願に組み込まれる。
【０３２４】
表ＢによるｓｉＲＮＡ、および特に遺伝子ＣＩＱＢＰ、ＢＮＩＰ３、ＧＳＫ３Ｂ、Ｐ２ＲＸ７、ＴＲＰＭ２、ＰＡＲＧ、ＣＤ３８、ＳＴＥＡＰ４、ＢＭＰ２、ＣＸ４３、ＴＹＲＯＢＰ、ＣＴＧＦ、およびＤＵＯＸ１に対するｓｉＲＮＡを、これらの動物モデルで試験し、これらのｓｉＲＮＡ化合物が、気腫、慢性気管支炎、およびＣＯＰＤを治療および／または阻止し得ることが示される。
【０３２５】
実施例５：脊髄損傷のモデルシステム
脊髄損傷、または脊髄症は、感覚および／または機動力の消失をもたらす、脊髄の障害である。２つの一般的な種類の脊髄損傷は、外傷および疾病に起因する。外傷性損傷は、とりわけ、自動車事故、転倒、銃撃、ダイビング中の事故に起因する場合があり、脊髄に影響を及ぼし得る疾病には、ポリオ、脊椎披裂、腫瘍、およびフリードライヒ失調症が含まれる。
【０３２６】
［損傷脊髄への注入後の、ｓｉＲＮＡ分子のニューロンへの取り込み］：
異なる種類の細胞中の、（損傷脊髄への注入により送達された）Ｃｙ３標識ｓｉＲＮＡの取り込みを、１８匹のラットにおける脊髄挫傷後、無傷のラット（９匹）と共に検査した。矢状の凍結切片を産生し、ニューロン、星状膠細胞、乏突起膠細胞、および／またはマクロファージ／小膠細胞への取り込みが生じたかどうかを判定するために、４つの異なる群の抗体を使用して、免疫染色を実行した。ニューロンのマーカーは、ＮｅｕＮまたはＧＡＰ４３、星状膠細胞および潜在的な神経幹細胞のマーカーは、ＧＦＡＰ、ネスチン、またはビメンチン、乏突起膠細胞のマーカーは、ＮＧ２またはＡＰＣ、マクロファージ／小膠細胞のマーカーは、ＥｄｌまたはＩｂａ−１であった（Ｈａｓｅｇａｗａ ｅｔ ａｌ．， ２００５． Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ １９３ ３９４−４１０）。
【０３２７】
６匹のラットに、異なる２つの用量のＣｙ３標識ｓｉＲＮＡ（１μｇ／μｌ、１０μｇ／μｌ）を注入し、致死まで１および３日間放置した。組織学的分析は、多くの長い糸状特性が、標識化ｓｉＲＮＡ、ならびに他のプロセスおよび細胞体を吸収したことを示唆する。ＭＡＰ２への抗体での免疫染色により、運動ニューロンを含むニューロンの樹状突起および細胞体へのラベルの取り込みが同定された。星状細胞またはマクロファージに特異的な他の抗体での染色により、ニューロンと比較して、Ｃｙ３標識ｓｉＲＮＡの低い取り込みが判明した。これらの結果は、損傷脊髄へ注入されたｓｉＲＮＡ分子が、運動ニューロンを含むニューロンの細胞体および樹状突起に達することを示唆する。
【０３２８】
［特異的ＲｈｏＡ ｓｉＲＮＡ化合物を使用した、脊髄損傷に対する保護：
脊髄損傷動物モデル］：
６匹の雌のスプラーグドーリー生体ラットに、４０ｍｇ／ｋｇのペントバルビタールで麻酔し、胸髄Ｔ９−１０を、椎弓切除により、露出した。ＭＡＳＣＩＳ（多施設動物脊髄損傷研究；Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ Ａｎｉｍａｌ Ｓｐｉｎａｌ Ｃｏｒｄ Ｉｎｊｕｒｙ Ｓｔｕｄｙ）衝突体を使用して、１２．５ｍｍの高さから、露出した脊髄上に１０グラムの棒を落下させて、打撲損傷を生じさせた（Ｂａｓｓｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ Ｖｏｌ １２ （１）， ｐ １−２１ １９９５ およびＢａｓｓｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ Ｖｏｌ １３ （７）， ｐ ３４３−５９ １９９６に説明）。損傷前、１／μｇ／μｌの濃度で、ＲｈｏＡ＿４ ｓｉＲＮＡ（センス配列：ＧＣＣＡＣＵＵＡＡＵＧＵＡＵＧＵＵＡＣ、配列番号２３５、アンチセンス配列：ＧＵＡＡＣＡＵＡＣＡＵＵＡＡＧＵＧＧＣ、配列番号２３６）の３点注入を、損傷中心点、中心点の２ｍｍ頭側および尾側に実行した（総用量３０／μｇ）。対照として、さらに５匹のラットにＧＦＰ ｓｉＲＮＡを注入した。各注入は、Ｔｌ０の脊柱（約１ｍｍの深さ）に、１０分間かけてゆっくりと行った。注入後、筋肉および皮膚は、別々に閉じた。術後７日間、セファゾリン（２５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。脊髄挫傷後の回復の行動評価を、Ｂａｓｓｏらにより説明される開放地歩行運動試験を使用して実行した（ＢＢＢ歩行運動評価尺度）。
【０３２９】
以下の表Ｄ４は、ラットにおける脊髄損上後の開放地歩行運動試験で得られた結果を論証する。以下の表Ｄ４で要約されるように、ＲｈｏＡ ｓｉＲＮＡ化合物は、ＲｈｏＡ ｓｉＲＮＡ治療ラットにおいて、損傷後６週間まで有意に高いＢＢＢ歩行運動得点から明らかなように、実験ラットモデルにおける脊髄損傷を保護する。
【０３３０】
表Ｄ４：ＲｈｏＡ＿４ ｓｉＲＮＡ（配列番号２３５〜２３６）を用いた治療。値は、プラセボ群（ＧＦＰ ｓｉＲＮＡ）およびＲｈｏＡ＿４ ｓｉＲＮＡ治療群における、脊髄損傷後の平均ＢＢＢ歩行運動得点を表す。
【表Ｄ４】
0005628271.tif 000018
【０３３１】
表ＢによるｓｉＲＮＡ化合物、および特に遺伝子ＬＲＤＤ、ＣＹＢＡ、ＡＴＦ３、ＣＡＳＰ２、ＨＲＫ、ＣＩＱＢＰ、ＢＮＩＰ３、ＭＡＰＫ８、ＭＡＰＫ１４、ＲＡＣ１、ＧＳＫ３Ｂ、Ｐ２ＲＸ７、ＴＲＰＭ２、ＰＡＲＧ、ＣＤ３８、ＳＴＥＡＰ４、ＢＭＰ２、ＣＸ４３、ＴＹＲＯＢＰ、ＣＴＧＦ、およびＲＨＯＡを対象とするｓｉＲＮＡを、本動物モデルにおいて試験し、これらのｓｉＲＮＡ化合物が、脊髄損傷後の機能回復を促進し、それにより脊髄損傷の治療に使用され得ることを示す。
【０３３２】
実施例６：緑内障のモデルシステム
緑内障を治療または阻止するための、本発明の活性阻害剤（ｓｉＲＮＡ等）の試験を、例えばＰｅａｓｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｇｌａｕｃｏｍａ， ２００６， １５（６）：５１２−９ （（Ｍａｎｏｍｅｔｒｉｃ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ＴｏｎｏＬａｂ ａｎｄ ＴｏｎｏＰｅｎ ｔｏｎｏｍｅｔｅｒｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｇｌａｕｃｏｍａ ａｎｄ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｍｉｃｅ実験のための緑内障を有するラット、および正常なマウスにおける、ナノメータ検定、およびＴｏｎｏＬａｂとＴｏｎｏＰｅｎの比較））により説明されるような、動物モデルにおいて行う。
【０３３３】
特に遺伝子ＴＰ５３ＢＰ２、ＬＲＤＤ、ＣＹＢＡ、ＡＴＦ３、ＣＡＳＰ２、ＨＲＫ、ＢＮＩＰ３、ＭＡＰＫ８、ＭＡＰＫ１４、ＲＡＣ１、およびＲＨＯＡに対する、表ＢによるｓｉＲＮＡを、動物モデルにおいて試験し、これらのｓｉＲＮＡ化合物が緑内障を治療および／または阻止することを示す。
【０３３４】
実施例７：ラットにおける肺移植後の虚血再灌流障害のモデルシステム
肺移植後の虚血再灌流障害または低酸素障害を治療または阻止するための、本発明の活性阻害剤（ｓｉＲＮＡ等）の試験を、例えばＭｉｚｏｂｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２００４． Ｊ． Ｈｅａｒｔ Ｌｕｎｇ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ， ２３：８８９−９３）；Ｈｕａｎｇ， ｅｔ ａｌ．， （１９９５． Ｊ． Ｈｅａｒｔ Ｌｕｎｇ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ． ． １４：Ｓ４９）、Ｍａｔｓｕｍｕｒａ， ｅｔ ａｌ．， （１９９５． Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５９：１５０９−１５１７）；Ｗｉｌｋｅｓ， ｅｔ ａｌ．， （１９９９． Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６７：８９０−８９６）、Ｎａｋａ， ｅｔ ａｌ．， （１９９６． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７９：７７３− ７８３）で説明される、１つ以上の実験動物モデルにおいて行う。
【０３３５】
表Ｂによる、特にＴＰ５３ＢＰ２、ＬＲＤＤ、ＣＹＢＡ、ＣＡＳＰ２、ＢＮＩＰ３、ＲＡＣ１、およびＤＵＯＸ１に対するｓｉＲＮＡを、動物モデルで試験し、これらのｓｉＲＮＡ化合物が、肺移植後の虚血再灌流障害を治療および／または阻止し、したがって移植手術と併用され得ることを示す。
【０３３６】
実施例８：急性呼吸窮迫症候群のモデルシステム
急性呼吸窮迫症候群を治療するための本発明の活性阻害剤（ｓｉＲＮＡ等）の試験を、Ｃｈｅｎら（Ｊ Ｂｉｏｍｅｄ Ｓｃｉ．２００３；１０（６ Ｐｔ ｌ）：５８８−９２）により説明されるような動物モデルにおいて行う。特に遺伝子ＣＹＢＡ、ＨＲＫ、ＢＮＩＰ３、ＭＡＰＫ８、ＭＡＰＫ１４、ＲＡＣ１、ＧＳＫ３Ｂ、Ｐ２ＲＸ７、ＴＲＰＭ２、ＰＡＲＧ、ＳＰＰ１、およびＤＵＯＸ１に対する表ＢによるｓｉＲＮＡ化合物を、本動物モデルにおいて試験し、これらのｓｉＲＮＡが急性呼吸窮迫症候群を治療および／または阻止し、したがってこの状態の治療に使用され得ることを示す。
【０３３７】
実施例９：聴力損失状態のモデルシステム
（ｉ）耳の正円窓への局所適用後の、蝸牛内のＣｙ３−ＰＴＥＮ ｓｉＲＮＡの分配：
１μｇ／１００ μｌのＣｙ３−ＰＴＥＮ ｓｉＲＮＡ（合計０．３〜０．４μｇ）ＰＢＳの溶液を、チンチラの正円窓に塗布した。治療蝸牛内のＣｙ３−標識細胞を、チンチラの殺処理後、ｓｉＲＮＡの正円窓への塗布の２４〜４８時間後に分析した。蝸牛内の標識化のパターンは、２４時間および４８時間後で同様であり、蝸牛の基底回転、蝸牛の中回転、および蝸牛の頂回転での標識化を含む。鼓室階へのＣｙ３−ＰＴＥＮ ｓｉＲＮＡの塗布により、主に蝸牛の基底回転および蝸牛の中回転における標識化が明らかになった。Ｃｙ３シグナルは、Ｃｙ３−ＰＴＥＮ ｓｉＲＮＡの塗布後１５日間まで持続した。これらの結果は、正円窓内へのｓｉＲＮＡ分子の局所塗布が、ｓｉＲＮＡ分子の蝸牛の基底回転、中回転、および頂回転への有意な浸透に至ったことを初めて示唆した。本発明のｓｉＲＮＡ化合物を本動物モデルにおいて試験し、これらのｓｉＲＮＡ化合物の、蝸牛の基底回転、中回転、および頂回転への有意な浸透があり、これらの化合物が聴力損失の治療に使用され得ることを示す。
【０３３８】
（ｉｉ）カルボプラチン誘発性またはシスプラチン誘発性の、蝸牛の有毛細胞死のチンチラモデル。各動物の左耳に、生理食塩水中で特異的ｓｉＲＮＡを直接投与することにより、チンチラを前治療する。プラセボとして、各動物の右耳に生理食塩水を与える。本発明の特異的ｓｉＲＮＡ化合物の投与から２日後、該動物を、カルボプラチン（７５ｍｇ／ｋｇ腹腔内）またはシスプラチン（３０分を超える１３ｍｇ／ｋｇの腹腔内注入）で処置する。チンチラの殺処理後（カルボプラチン治療の２週間後）、左耳（ｓｉＲＮＡ治療）および右耳（生理食塩水治療）の、内有毛細胞（ＩＨＣ）および外有毛細胞（ＯＨＣ）の死細胞の割合を計算する。内有毛細胞（ＩＨＣ）および外有毛細胞（ＯＨＣ）の死細胞の割合は、右耳（生理食塩水治療）よりも、左耳（ｓｉＲＮＡ治療）の方が低いことが計算される。
【０３３９】
（ｉｉｉ）音響誘発性の蝸牛の有毛細胞死のチンチラモデル：
音響外傷モデルにおける特異的ｓｉＲＮＡの活性を、チンチラにおいて研究する。該動物を、２．５時間１０５ｄＢで、４ｋＨｚを中心とした騒音のオクターブ帯域に曝露する。騒音に曝露させたチンチラの左耳を、約１０μＬの生理食塩水中の３０μｇのｓｉＲＮＡで前処置し（音響外傷の４８時間前）、右耳は、媒体（生理食塩水）で前処置する。複合活動電位（ＣＡＰ）は、蝸牛から伝達される神経活動を測定するための、便利かつ信頼性のある電気生理学的方法である。クリック音またはトーンバースト等の音刺激が突然作動するときに生成される局所電位を検出するために、電極を蝸牛の基底付近に設置して、ＣＡＰを記録する。音響外傷の２．５週間後、それぞれの耳の機能状態を評価する。具体的に、ｓｉＲＮＡ治療耳の閾値が、非治療（生理食塩水）耳よりも低い（良い）かどうかを決定するために、正円窓から記録された複合活動電位の平均閾値を、音響外傷の２．５週間後に測定する。さらに、内および外有毛細胞消失量を、ｓｉＲＮＡ治療および対照耳において測定する。
【０３４０】
表Ｂによる、特に遺伝子ＴＰ５３ＢＰ２、ＬＲＤＤ、ＣＹＢＡ、ＡＴＦ３、ＣＡＳＰ２、ＮＯＸ３、ＨＲＫ、ＣＩＱＢＰ、ＢＮＩＰ３、ＭＡＰＫ８、ＭＡＰＫ１４、ＲＡＣ１、ＧＳＫ３Ｂ、Ｐ２ＲＸ７、ＴＲＰＭ２、ＰＡＲＧ、ＣＤ３８、ＳＴＥＡＰ４、ＢＭＰ２、ＣＸ４３、ＴＹＲＯＢＰ、およびＣＴＧＦに対するｓｉＲＮＡ分子を、本動物モデルにおいて試験し、ｓｉＲＮＡ治療耳の閾値が、非治療（生理食塩水）耳よりも低い（良い）ことを示す。さらに、内および外有毛細胞消失量は、対照耳よりもｓｉＲＮＡ治療耳においての方が低い。
【０３４１】
実施例１０．変形性関節症（ＯＡ）の動物モデル
コラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）：マウスにおけるＣＩＡは、Ｔｒｅｎｔｈａｍら（１９７７． Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １４６：８５７−８６８）に説明されている。アジュバント誘発関節炎（ＡＡ）：ＡＡは、Ｋｏｎｇら（１９９９． Ｎａｔｕｒｅ， ４０２：３０４−３０８）に説明されている。半月版切除術モデルは、Ｈａｎら（１９９９． Ｎａｇｏｙａ Ｊ Ｍｅｄ Ｓｃｉ ６２（３−４）：１１５−２６）に説明されている。
【０３４２】
軟骨細胞増殖、最終分化、および関節炎の進行等のＯＡに関連する異なるパラメータに関する、ＳＳＰ１に対するｓｉＲＮＡ等の、異なるｓｉＲＮＡ阻害剤の効果を、当技術分野において既知の体外モデルに加えて、上記モデルのうちの１つ以上を使用して評価する。表Ｂによる、特にＳＳＰ１に対するｓｉＲＮＡ化合物をこれらの動物モデルにおいて試験し、これらのｓｉＲＮＡがＯＡを治療および／または阻止し、したがってこの状態の治療に使用され得ることを示す。
【０３４３】
本明細書で説明した体内実験において使用されたｓｉＲＮＡは、全て、本化合物のアンチセンスおよびセンス鎖の両方において修飾された交互リボヌクレオチドを有する、１９ｍｅｒであった。修飾は、２´−Ｏ−メチル（Ｍｅ）基が、アンチセンス鎖の１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、および１９番目のヌクレオチドに存在し、それにより、全く同一の修飾、つまり２´−Ｏ−Ｍｅ基が、センス鎖の２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、および１８番目のヌクレオチドに存在するようにした。これらの特定のｓｉＲＮＡ化合物は、やはり平滑末端化され、終端においてリン酸化されなかったが、比較実験は、３´−末端においてリン酸化されたｓｉＲＮＡが類似の活性を有することを示した。
【０３４４】
実施例１１．アポトーシス促進遺伝子に対する活性ｓｉＲＮＡ化合物のための配列の生成および該ｓｉＲＮＡの産生
アポトーシス促進遺伝子の独自のアルゴリズムおよび既知の配列を使用して、可能性のある多くのｓｉＲＮＡの配列を生成した。当該アルゴリズムに加えて、２３ｍｅｒのオリゴマー配列のいくつかは、１９ｍｅｒの配列の５´および／または３´の延長により生成した。本方法を使用して生成した配列は、対応するｍＲＮＡ配列と完全に相補的である。
【０３４５】
表Ｂ（配列番号２７７〜５０９７０および５０９９３〜６８６５４）は、以下のアポトーシス促進遺伝子に対するｓｉＲＮＡを提供する：ＴＰ５３ＢＰ２、ＬＲＤＤ、ＣＹＢＡ、ＡＴＦ３、ＣＡＳＰ２、ＮＯＸ３、ＨＲＫ、ＣＩＱＢＰ、ＢＮＩＰ３、ＭＡＰＫ８、ＭＡＰＫ１４、ＲＡＣ１、ＧＳＫ３Ｂ、Ｐ２ＲＸ７、ＴＲＰＭ２、ＰＡＲＧ、ＣＤ３８、ＳＴＥＡＰ４、ＢＭＰ２、ＣＸ４３、ＴＹＲＯＢＰ、ＣＴＧＦ、ＳＰＰ１、ＲＨＯＡ、およびＤＵＯＸ１。それぞれの遺伝子に関して、１９ｍｅｒ、２１ｍｅｒ、および２３ｍｅｒのｓｉＲＮＡ配列の独立したリストがあり、ヒト遺伝子の発現を標的にする最良の配列として、独自のアルゴリズムにおけるそれらの得点に基づき、優先順位が付けられる。
【０３４６】
本明細書の表Ｂにおいて、以下の略語を使用する：「ｏｔｈｅｒ ｓｐｅｃまたはＳｐ．」は、異種間同定を指し、ｃｈｎ：チンチラ、ｃｈｐ：チンパンジー、ｃｈｋ：ニワトリ、ｇｐ：モルモット、ｍｎｋ：サル、ｍｓ：マウス、ｒｔ：ラット、ｓｐ：ヒツジ、ｒｂ：ラビット、ＯＲＦ：読み取り枠。１９ｍｅｒ、２１ｍｅｒ、および２３ｍｅｒは、１９、２１、および２３のリボ核酸の長さのオリゴマーを指す。
【表Ｂ−Ｂ１−１】
0005628271.tif 000019
【表Ｂ−Ｂ１−２】
0005628271.tif 000020
【表Ｂ−Ｂ１−３】
0005628271.tif 000021
【表Ｂ−Ｂ１−４】
0005628271.tif 000022
【表Ｂ−Ｂ１−５】
0005628271.tif 000023
【表Ｂ−Ｂ１−６】
0005628271.tif 000024
【表Ｂ−Ｂ１−７】
0005628271.tif 000025
【表Ｂ−Ｂ１−８】
0005628271.tif 000026
【表Ｂ−Ｂ１−９】
0005628271.tif 000027
【表Ｂ−Ｂ１−１０】
0005628271.tif 000028
【表Ｂ−Ｂ１−１１】
0005628271.tif 000029
【表Ｂ−Ｂ１−１２】
0005628271.tif 000030
【表Ｂ−Ｂ１−１３】
0005628271.tif 000031
【表Ｂ−Ｂ１−１４】
0005628271.tif 000032
【表Ｂ−Ｂ１−１５】
0005628271.tif 000033
【表Ｂ−Ｂ１−１６】
0005628271.tif 000034
【表Ｂ−Ｂ２−１】
0005628271.tif 000035
【表Ｂ−Ｂ２−２】
0005628271.tif 000036
【表Ｂ−Ｂ２−３】
0005628271.tif 000037
【表Ｂ−Ｂ２−４】
0005628271.tif 000038
【表Ｂ−Ｂ３】
0005628271.tif 000039
【表Ｂ−Ｂ４−１】
0005628271.tif 000040
【表Ｂ−Ｂ４−２】
0005628271.tif 000041
【表Ｂ−Ｂ４−３】
0005628271.tif 000042
【表Ｂ−Ｂ４−４】
0005628271.tif 000043
【表Ｂ−Ｂ４−５】
0005628271.tif 000044
【表Ｂ−Ｂ４−６】
0005628271.tif 000045
【表Ｂ−Ｂ４−７】
0005628271.tif 000046
【表Ｂ−Ｂ４−８】
0005628271.tif 000047
【表Ｂ−Ｂ４−９】
0005628271.tif 000048
【表Ｂ−Ｂ５−１】
0005628271.tif 000049
【表Ｂ−Ｂ５−２】
0005628271.tif 000050
【表Ｂ−Ｂ５−３】
0005628271.tif 000051
【表Ｂ−Ｂ５−４】
0005628271.tif 000052
【表Ｂ−Ｂ５−５】
0005628271.tif 000053
【表Ｂ−Ｂ５−６】
0005628271.tif 000054
【表Ｂ−Ｂ５−７】
0005628271.tif 000055
【表Ｂ−Ｂ５−８】
0005628271.tif 000056
【表Ｂ−Ｂ５−９】
0005628271.tif 000057
【表Ｂ−Ｂ５−１０】
0005628271.tif 000058
【表Ｂ−Ｂ５−１１】
0005628271.tif 000059
【表Ｂ−Ｂ５−１２】
0005628271.tif 000060
【表Ｂ−Ｂ５−１３】
0005628271.tif 000061
【表Ｂ−Ｂ５−１４】
0005628271.tif 000062
【表Ｂ−Ｂ５−１５】
0005628271.tif 000063
【表Ｂ−Ｂ５−１６】
0005628271.tif 000064
【表Ｂ−Ｂ６−１】
0005628271.tif 000065
【表Ｂ−Ｂ６−２】
0005628271.tif 000066
【表Ｂ−Ｂ６−３】
0005628271.tif 000067
【表Ｂ−Ｂ６−４】
0005628271.tif 000068
【表Ｂ−Ｂ６−５】
0005628271.tif 000069
【表Ｂ−Ｂ６−６】
0005628271.tif 000070
【表Ｂ−Ｂ６−７】
0005628271.tif 000071
【表Ｂ−Ｂ６−８】
0005628271.tif 000072
【表Ｂ−Ｂ６−９】
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【表Ｂ−Ｂ６−１０】
0005628271.tif 000074
【表Ｂ−Ｂ６−１１】
0005628271.tif 000075
【表Ｂ−Ｂ６−１２】
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【表Ｂ−Ｂ６−１３】
0005628271.tif 000077
【表Ｂ−Ｂ６−１４】
0005628271.tif 000078
【表Ｂ−Ｂ７】
0005628271.tif 000079
【表Ｂ−Ｂ８−１】
0005628271.tif 000080
【表Ｂ−Ｂ８−２】
0005628271.tif 000081
【表Ｂ−Ｂ８−３】
0005628271.tif 000082
【表Ｂ−Ｂ８−４】
0005628271.tif 000083
【表Ｂ−Ｂ８−５】
0005628271.tif 000084
【表Ｂ−Ｂ８−６】
0005628271.tif 000085
【表Ｂ−Ｂ８−７】
0005628271.tif 000086
【表Ｂ−Ｂ８−８】
0005628271.tif 000087
【表Ｂ−Ｂ９−１】
0005628271.tif 000088
【表Ｂ−Ｂ９−２】
0005628271.tif 000089
【表Ｂ−Ｂ９−３】
0005628271.tif 000090
【表Ｂ−Ｂ９−４】
0005628271.tif 000091
【表Ｂ−Ｂ９−５】
0005628271.tif 000092
【表Ｂ−Ｂ９−６】
0005628271.tif 000093
【表Ｂ−Ｂ９−７】
0005628271.tif 000094
【表Ｂ−Ｂ１０−１】
0005628271.tif 000095
【表Ｂ−Ｂ１０−２】
0005628271.tif 000096
【表Ｂ−Ｂ１０−３】
0005628271.tif 000097
【表Ｂ−Ｂ１０−４】
0005628271.tif 000098
【表Ｂ−Ｂ１０−５】
0005628271.tif 000099
【表Ｂ−Ｂ１０−６】
0005628271.tif 000100
【表Ｂ−Ｂ１０−７】
0005628271.tif 000101
【表Ｂ−Ｂ１０−８】
0005628271.tif 000102
【表Ｂ−Ｂ１０−９】
0005628271.tif 000103
【表Ｂ−Ｂ１０−１０】
0005628271.tif 000104
【表Ｂ−Ｂ１０−１１】
0005628271.tif 000105
【表Ｂ−Ｂ１１−１】
0005628271.tif 000106
【表Ｂ−Ｂ１１−２】
0005628271.tif 000107
【表Ｂ−Ｂ１１−３】
0005628271.tif 000108
【表Ｂ−Ｂ１１−４】
0005628271.tif 000109
【表Ｂ−Ｂ１１−５】
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【表Ｂ−Ｂ１１−６】
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【配列表】
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