(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)：
【化１】
0005405820.tif 000270
［式中、
R1は、カルボン酸基(-COOH)又は1又は複数の細胞内カルボキシエステラーゼ酵素によりカルボン酸基に加水分解され得るエステル基であり；
R2は、シクロヘキシルメチル、シクロヘキシル、ピリジン-3-イルメチル、sec-ブチル、tert-ブチル、1-ベンジルチオ-1-メチルエチル、1-メチルチオ-1-メチルエチル、1-メルカプト-1-メチルエチル、フェニル、ベンジル、フェニルエチル、tert-ブトキシメチル又はイソブチルであり；
Yは、結合手、-C(=O)-、-S(=O)2-、-C(=O)O-、-C(=O)NR3-、-C(=S)-NR3、-C(=NH)NR3又は-S(=O)2NR3- (式中、R3は水素又はC1〜C6アルキルである)であり；
L1は、式-(Alk1)m(Alk2)p-の二価の基であり、ここで、
m及びpは独立して0又は1であり、
Alk1及びAlk2は独立して、二価のC3〜C7シクロアルキル基、又は直鎖若しくは分岐鎖のC1〜C6アルキレン、C2〜C6アルケニレン又はC2〜C6アルキニレン基を表し、これらはエーテル(-O-)、チオエーテル(-S-)又はアミノ(-NRA-)結合(式中、RAは、水素又はC1〜C3アルキルである)を任意に含むか又はこれらの結合が末端をなしていてもよく；
X1は、結合手；-C(=O)；又は-S(=O)2-；-NR4C(=O)-、-C(=O)NR4-、-NR4C(=O)NR5-、-NR4S(=O)2-、又は-S(=O)2NR4- (式中、R4及びR5は独立して、水素又はC1〜C6アルキルである)を表し；
zは、0又は1であり；
Aは、任意に置換されていてもよい単環式の炭素環式又は複素環式の環系を表し、ここで、R1R2NH-Y-L1-X1-[CH2]z-の基とHONHCO-[リンカー]-の基とは異なる環原子に結合しており；
-[リンカー]-は、式-(CH2)x-Z-L2-
(式中、
xは0であり；
Zは、結合手、-NR3C(=O)-、-C(=O)NR3-、-C(=S)-NR3、-C(=NH)-NR3 -NR3S(=O)2-、又は-S(=O)2NR3- (式中、R3は、水素又はC1〜C6アルキルである)；-C(=O)；又は-S(=O)2-であり；
L2は、直鎖のC4〜C7アルキレン、C4〜C6アルケニレン又はC4〜C6アルキニレン基を表し、これらはエーテル(-O-)、チオエーテル(-S-)又はアミノ(-NRA-)結合(式中、RAは、水素又はC1〜C3アルキルである)を任意に含むか又はこれらの結合が末端をなしていてもよい)
の二価の基を表し、
基Aの任意の置換基は、(C1〜C6)アルキル、(C1〜C6)アルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシ(C1〜C6)アルキル、メルカプト、メルカプト(C1〜C6)アルキル、(C1〜C6)アルキルチオ、フェニル、ハロ (フルオロ、ブロモ及びクロロを含む)、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、ニトリル(-CN)、オキソ、-COOH、-COORA、-CORA、-SO2RA、-CONH2、-SO2NH2、-CONHRA、-SO2NHRA、-CONRARB、-SO2NRARB、-NH2、-NHRA、-NRARB、-OCONH2、-OCONHRA、-OCONRARB、-NHCORA、-NHCOORA、-NRBCOORA、-NHSO2ORA、-NRBSO2OH、-NRBSO2ORA、-NHCONH2、-NRACONH2、-NHCONHRB、-NRACONHRB、-NHCONRARB、又は-NRACONRARB （ここで、RA及びRBは独立して(C1〜C6)アルキル、(C3〜C6)シクロアルキル、フェニル又は5若しくは6個の環原子を有する単環式ヘテロアリールである）から独立して選択される1〜4つまでの置換基である］
の化合物、又はその塩、N-酸化物、水和物若しくは溶媒和物。
【請求項２】
Zが-C(=O)-、-NHC(=O)-又は-C(=O)NH-である請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
L2が-(CH2)5-、-(CH2)6-、又は-(CH2)7-である請求項1又は2に記載の化合物。
【請求項４】
Aが、任意に置換されていてもよい：
【化２】
0005405820.tif 000271
の1つである請求項1〜3のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項５】
Aが、任意に置換されていてもよいフェニルまたはピリジルである請求項1〜3のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項６】
Aが、任意に置換されていてもよい
【化３】
0005405820.tif 000272
である請求項4に記載の化合物。
【請求項７】
zが0である請求項1〜６のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項８】
Yが、-S(=O)2-、-C(=S)-NR3、-C(=NH)-NR3又は-S(=O)2NR3- (式中、R3は、水素又はC1〜C6アルキルである)である請求項1〜7のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項９】
Yが結合手である請求項1〜8のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項１０】
L1基において、Alk1及びAlk2が存在する場合に、これらが-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、並びに二価のシクロプロピル、シクロペンチル及びシクロヘキシル基から選択される請求項1〜9のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項１１】
L1基において、m及びpが0である請求項1〜10のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項１２】
L1基において、pが0であり、mが1である請求項1〜10のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項１３】
-Y-L1-X1-[CH2]z-の基が、-C(=O)-、-C(=O)NH-、-(CH2)v-、-(CH2)vO-、-C(=O)-(CH2)v-、-C(=O)-(CH2)vO-、-C(=O)-NH-(CH2)w-、-C(=O)-NH-(CH2)wO-
【化４】
0005405820.tif 000273
(式中、vは1、2、3又は4であり、wは1、2又は3である)
から選択される請求項1〜6及び12のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項１４】
-Y-L1-X1-[CH2]z-の基が、-CH2-、-CH2O-、-C(=O)-CH2-、-C(=O)-CH2O-、-C(=O)-NH-CH2-、又は-C(=O)-NH-CH2O-である請求項1〜7、12及び13のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項１５】
R1が、式-(C=O)OR9
(式中、R9は：
(i) R7R8CH- (式中、R7は、(C1〜C3)アルキル-(Z1)a-(C1〜C3)アルキル-、又は(C2〜C3)アルケニル-(Z1)a-(C1〜C3)アルキル- (式中、aは0又は1であり、Z1は-O-、-S-又は-NH-である)であり、R8は、水素又は(C1〜C3)アルキル-であるか、又はR7とR8はそれらが結合している炭素と一緒に、C3〜C7シクロアルキル環又は5若しくは6環原子の複素環式環を形成する)；或いは
(ii)フェニル又は5若しくは6環原子の単環式の複素環
である)
のエステル基である請求項1〜14のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項１６】
R1が、式-(C=O)OR9
(式中、R9は、エチル、n-若しくはイソ-プロピル、n-若しくはsec-ブチル、シクロヘキシル、アリル、フェニル、ベンジル、2-, 3-若しくは4-ピリジルメチル、N-メチルピペリジン-4-イル、テトラヒドロフラン-3-イル又はメトキシエチルである)のエステル基である請求項1〜14のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項１７】
R9がシクロペンチルである請求項15に記載の化合物。
【請求項１８】
R2が、フェニル、ベンジル、フェニルエチル、tert-ブトキシメチル又はイソブチルである請求項1〜17のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項１９】
式(I)：
【化５】
0005405820.tif 000274
［式中、
R1は、式-(C=O)OR9
(式中、R9は：
(i) R7R8CH- (式中、R7は、(C1〜C3)アルキル-(Z1)a-(C1〜C3)アルキル-、又は(C2〜C3)アルケニル-(Z1)a-(C1〜C3)アルキル- (式中、aは0又は1であり、Z1は-O-、-S-又は-NH-である)であり、R8は、水素又は(C1〜C3)アルキル-であるか、又はR7とR8はそれらが結合している炭素と一緒に、C3〜C7シクロアルキル環又は5若しくは6環原子の複素環式環を形成する)；或いは
(ii)フェニル又は5若しくは6環原子の単環式の複素環
である)
のエステル基であり、
R2は、フェニル、ベンジル、フェニルエチル、tert-ブトキシメチル又はイソブチルであり、
-Y-L1-X1-[CH2]z-の基は、-C(=O)-、-C(=O)NH-、-(CH2)v-、-(CH2)vO-、-C(=O)-(CH2)v-、-C(=O)-(CH2)vO-、-C(=O)-NH-(CH2)w-、-C(=O)-NH-(CH2)wO-
【化６】
0005405820.tif 000275
(式中、vは1、2、3又は4であり、wは1、2又は3である)
から選択され、
Aは、
【化７】
0005405820.tif 000276
であり、
-[リンカー]-は、式-(CH2)x-Z-L2-
(式中、
xは0であり；
Zは、-C(=O)-、-NHC(=O)-又は-C(=O)NH-であり；
L2は、-(CH2)5-、-(CH2)6-、又は-(CH2)7-である)
の二価の基を表す］
の、請求項1に記載の化合物、又はその塩、N-酸化物、水和物若しくは溶媒和物。
【請求項２０】
式(I)が、
(S)-3-tert-ブトキシ-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-プロピオン酸 シクロペンチルエステル、
(S)-3-tert-ブトキシ-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-プロピオン酸、
(S)-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル、
(S)-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸、
(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステル、又は
(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-4-メチル-ペンタン酸
である請求項1に記載の化合物。
【請求項２１】
式(I)が、(S)-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル又はその医薬的に許容される塩である請求項1に記載の化合物。
【請求項２２】
式(I)が、(S)-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸である請求項1に記載の化合物。
【請求項２３】
請求項1〜22のいずれか1項に記載の化合物を、医薬的に許容される担体と共に含む医薬組成物。
【請求項２４】
細胞増殖性疾患、ポリグルタミン病、神経変性疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、臓器
移植拒絶、糖尿病、血液学的疾患又は感染の治療のための請求項23に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
化合物が、Yが結合手、-S(=O)2又は-S(=O)2NR3- (式中、R3は、水素又はC1〜C6アルキルである)であるものである請求項23又は24に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
癌細胞増殖、ハンチントン病又はアルツハイマー病の治療のための請求項23に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
リウマチ性関節炎の治療のための請求項23に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
局所投与用であり、請求項1〜22のいずれか1項に記載の化合物においてR2がメチレン基-CH2-を介して炭素原子に結合している、請求項23に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酵素のヒストン脱アセチル化酵素ファミリーのメンバーを阻害する化合物、及び癌を含む細胞増殖性疾患、ポリグルタミン病、例えばハンチントン病、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、自己免疫疾患、例えばリウマチ性関節炎、並びに臓器移植拒絶、糖尿病、血液学的疾患、炎症性疾患、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、感染の炎症性後遺症の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
真核細胞内では、DNAはヒストンと共にパッケージされてクロマチンを形成する。約150塩基対のDNAが、ヒストンのオクタマー(ヒストン2A、2B、3及び4がそれぞれ2つずつ)の周囲に2回巻きついて、クロマチンの基本単位であるヌクレオソームを形成する。クロマチンの規則正しい構造は、関連する遺伝子の転写を可能にするために改変される必要がある。転写調節は、分化、増殖及びアポトーシスの鍵であり、よって厳密に制御される。クロマチン構造の変化(よって転写)の制御は、ヒストン、最も顕著にはN-末端尾部への共有結合形の改変により媒介される。アミノ酸の側鎖の共有結合形の改変(例えばメチル化、アセチル化、リン酸化及びユビキチン化)は、酵素により媒介される(ヒストンの共有結合形の改変及び転写調節におけるそれらの役割についての総説は、Berger SL 2001 Oncogene 20, 3007〜3013に見出される；ヒストンのアセチル化及び転写の総説についてはGrunstein, M 1997 Nature 389, 349〜352; Wolffe AP 1996 Science 272, 371〜372;及びWade PAら 1997 Trends Biochem Sci 22, 128〜132を参照)。
【０００３】
ヒストンのアセチル化は、転写的に活性なクロマチンの領域に関連するが、アセチル化レベルの低いヌクレオソームは、典型的には、転写的に不活動である。ヒストンのアセチル化状態は、対抗する活性の2つの酵素クラス：ヒストンアセチルトランスフェラーゼ(HAT)及びヒストン脱アセチル化酵素(HDAC)により制御される。形質転換された細胞においては、HDACの不適切な発現が、腫瘍抑制遺伝子の不活動をもたらすと考えられる(腫瘍形成におけるHDACの潜在的役割の総説については、Gray SG及びTeh BT 2001 Curr Mol Med 1, 401〜429を参照)。HDAC酵素の阻害剤は、文献に記載されており、ある遺伝子の転写の再活性化を誘発して、動物における癌細胞増殖の阻害、アポトーシスの誘発及び腫瘍成長の阻害をもたらすことが示されている(総説として、Kelly, WKら 2002 Expert Opin Investig Drugs 11, 1695〜1713を参照)。このような発見は、HDAC阻害剤が癌のような増殖性疾患の治療に治療的可能性があることを示唆する(Kramer, OHら 2001 Trends Endocrinol 12, 294〜300, Vigushin DM及びCoombes RC 2002 Anticancer Drugs 13, 1〜13)。
【０００４】
さらに、異常なHDAC活性又はヒストンアセチル化は、以下の疾患及び障害に関係していることを提唱する者もいる；ポリグルタミン病、例えばハンチントン病(Hughes RE 2002 Curr Biol 12, R141〜R143; McCampbell Aら 2001 Proc Soc Natl Acad Sci 98, 15179〜15184; Hockly Eら 2003 Proc Soc Natl Acad Sci 100, 2041〜2046)、その他の神経変性疾患、例えばアルツハイマー病(Hempen B及びBrion JP 1996, J Neuropathol Exp Neurol 55, 964〜972)、自己免疫疾患及び臓器移植拒絶(Skov Sら 2003 Blood 101, 1430〜1438; Mishra Nら 2003 J Clin Invest 111, 539〜552)、糖尿病(Mosley AL及びOzcan S 2003 J Biol Chem 278, 19660〜19666)、並びに糖尿病合併症、感染(原虫感染を含む(Darkin-Rattray, SJら 1996 Proc Soc Natl Acad Sci 93, 13143〜13147))、並びにサラセミアを含む血液学的疾患(Witt Oら 2003 Blood 101, 2001〜2007)。これらの原稿に含まれる知見は、HDAC阻害がこれらの及びその他の関連する疾患における治療的利点を有するはずであることを示唆する。
【０００５】
多くの種類のHDAC阻害剤化合物が示唆されており、これらの化合物のいくつかは、現在、癌の治療について臨床評価されている。例えば、以下の特許文献がそのような化合物を開示している。
【０００６】
【表１】
0005405820.tif 000002
【０００７】
当該技術において知られるHDAC阻害剤は、式(A)のように表され得る構造鋳型を有する：
【化１】
0005405820.tif 000003
【０００８】
(式中、環Aは、任意の置換基Rを有する炭素環式又は複素環式の環系であり、[リンカー]は、種々のタイプのリンカー基である)。ヒドロキサメート基は、金属結合基として作用し、折り畳まれた酵素構造内のポケットの底にある、HDAC酵素の活性部位の金属イオンと相互作用する。環又は環系Aは、金属イオンを含むポケットの入口又はその内部に存在し、-[リンカー]-基が、ポケットのさらに奥に伸びてAを金属結合性ヒドロキサム酸基に連結する。当該技術において、及び場合によっては本明細書において、環又は環系Aは、時折非公式的に、阻害剤の「頭基(head group)」と呼ばれる。
【０００９】
標的の臓器又は組織への送達を増強するか、又は親の薬剤の乏しい薬理学的特性を克服するためのプロドラッグの使用は、公知の薬品化学的アプローチである。例えば、血清カルボキシエステラーゼにより活性な親の酸にインビボで加水分解されるエステルプロドラッグの投与は、酸自体を投与するよりも高い血清中の親の酸のレベルをもたらし得る。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
発明の簡単な説明
本発明は、上記のHDAC阻害剤分子鋳型(A)にαアミノ酸エステル基を導入することにより、薬剤の細胞膜を通しての浸透が促進され、それにより細胞内カルボキシエステラーゼ活性がエステルを加水分解して親の酸を放出することを可能にすることを見出したことに基づく。荷電していると、酸は細胞の外へ輸送されにくいので、酸が蓄積して、活性HDAC阻害剤の細胞内濃度が増加する。このことは、作用の有効性及び持続性の増加を導く。よって、本発明は、HDAC阻害剤分子鋳型及び対応する脱エステル化された親の酸に共有結合した、細胞内カルボキシエステラーゼの基質であるαアミノ酸エステル部分(本明細書中では「エステラーゼモチーフ」ともいう)を有することを特徴とする構造を有する化合物のクラスを入手可能にする。このような化合物は、HDACの細胞内阻害により恩恵を受ける癌のような疾患の治療において医薬的な利用性を有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
発明の詳細な説明
本発明によると、式(I)の化合物、又はその塩、N-酸化物、水和物又は溶媒和物が提供される：
【化２】
0005405820.tif 000004
【００１２】
［式中、
R1は、カルボン酸基(-COOH)、又は1種又は複数種の細胞内カルボキシエステラーゼ酵素によりカルボン酸基に加水分解され得るエステル基であり；
R2は、天然又は非天然のαアミノ酸の側鎖であり；
Yは、結合手、-C(=O)-、-S(=O)2-、-C(=O)O-、-C(=O)NR3-、-C(=S)-NR3、-C(=NH)NR3又は-S(=O)2NR3- (式中、R3は水素又は任意に置換されていてもよいC1〜C6アルキルである)であり；
【００１３】
L1は、式-(Alk1)m(Q)n(Alk2)p-の二価の基であり、ここで、
m、n及びpは独立して0又は1であり、
Qは、(i) 5〜13員環の任意に置換されていてもよい二価の単環式若しくは二環式の炭素環式又は複素環式の基、或いは(ii) m及びpが共に0である場合に、式-X2-Q1-若しくは-Q1-X2- (式中、X2は-O-、S-又はNRA- (式中、RAは水素又は任意に置換されていてもよいC1〜C3アルキルである)であり、Q1は、5〜13員環の任意に置換されていてもよい二価の単環式若しくは二環式の炭素環式又は複素環式の基である)の二価の基であり；
Alk1及びAlk2は独立して、任意に置換されていてもよい二価のC3〜C7シクロアルキル基、又は任意に置換されていてもよい直鎖若しくは分岐鎖のC1〜C6アルキレン、C2〜C6 アルケニレン又はC2〜C6アルキニレン基を表し、これらはエーテル(-O-)、チオエーテル(-S-)又はアミノ(-NRA-)結合(式中、RAは、水素又は任意に置換されていてもよいC1〜C3アルキルである)を任意に含むか又はこれらの結合が末端をなしていてもよく；
【００１４】
X1は、結合手；-C(=O)；又は-S(=O)2-；-NR4C(=O)-、-C(=O)NR4-、-NR4C(=O)NR5-、-NR4S(=O)2-、又は-S(=O)2NR4- (式中、R4及びR5は独立して、水素又は任意に置換されていてもよいC1〜C6アルキルである)を表し；
zは、0又は1であり；
Aは、任意に置換されていてもよい単環式、二環式若しくは三環式の炭素環式又は複素環式の環系を表し、ここで、R1R2NH-Y-L1-X1-[CH2]z-の基とHONHCO-[リンカー]-の基とは異なる環原子に結合しており；
-[リンカー]-は、A中の環原子をヒドロキサム酸基-CONHOHに連結する二価のリンカー基を表し、Aの環原子に結合する末端原子からヒドロキサム酸基に連結する末端原子までのリンカー基の長さが、3〜10炭素原子の分岐していない飽和炭化水素鎖の長さと等しい］。
【００１５】
上記の定義は、高分子量の分子を潜在的に含むが、薬品化学のプラクティスの一般的な原理に従って、本発明が関係する化合物は600以下の分子量を有することが好ましい。
【００１６】
別の広い態様において、本発明は、HDAC酵素の活性の阻害のための組成物の製造における、上記で定義される式(I)の化合物、又はそのN-酸化物、塩、水和物若しくは溶媒和物の使用に関する。
【００１７】
本発明が関係する化合物は、HDAC活性、特にHDAC1活性のエクスビボ又はインビボでの阻害のために用いることができる。
【００１８】
本発明のある態様において、本発明の化合物は、細胞増殖性疾患、例えば癌細胞増殖、ポリグルタミン病、例えばハンチントン病、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、自己免疫疾患、例えばリウマチ性関節炎、及び臓器移植拒絶、糖尿病、血液学的疾患、感染(限定されないが原虫及び真菌を含む)、炎症性疾患、及びアテローム性動脈硬化症を含む心血管疾患の治療用の組成物の製造において用いることができる。
【００１９】
別の態様において、本発明は、上記の種類の疾患の治療方法を提供し、該方法は、このような疾患を罹患している対象に、上記で定義される式(I)の化合物の有効量を投与することを含む。
【００２０】
用語「エステル」又は「エステル化されたカルボキシル基」は、R9O(C=O)-基(式中、R9は、概念的にアルコールR9OHに由来するエステルを特徴付ける基である)を意味する。
本明細書において、用語「(Ca〜Cb)アルキル」(a及びbが整数である)は、a〜b個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基である。つまり、例えばaが1でありbが6である場合、この用語はメチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、t-ブチル、n-ペンチル及びn-ヘキシルを含む。
【００２１】
本明細書において、用語「二価の(Ca〜Cb)アルキレン基」(a及びbが整数である)は、a〜b個の炭素原子と2つの不飽和原子価(unsatisfied valences)を有する飽和炭化水素鎖のことである。
【００２２】
本明細書において、用語「(Ca〜Cb)アルケニル」(a及びbが整数である)は、a〜b個の炭素原子を有し、適用可能である場合にE又はZの立体化学の少なくとも1つの二重結合をする直鎖又は分岐鎖のアルケニル部分のことである。この用語は、例えばビニル、アリル、1-及び2-ブテニル及び2-メチル-2-プロペニルを含む。
本明細書において、用語「二価の(Ca〜Cb)アルケニレン基」は、a〜b個の炭素原子、少なくとも1つの二重結合、及び2つの不飽和原子価を有する炭化水素鎖のことである。
【００２３】
本明細書において、用語「Ca〜Cbアルキニル」(a及びbが整数である)は、2〜6個の炭素原子を有し、さらに1つの三重結合を有する直鎖又は分岐鎖の炭化水素基のことである。この用語は、例えばエチニル、1-プロピニル、1-及び2-ブチニル、2-メチル-2-プロピニル、2-ペンチニル、3-ペンチニル、4-ペンチニル、2-ヘキシニル、3-ヘキシニル、4-ヘキシニル及び5-ヘキシニルを含み得る。
本明細書において、用語「二価の(Ca〜Cb)アルキニレン基」(a及びbが整数である)は、2〜6個の炭素原子及び少なくとも1つの三重結合を有する二価の炭化水素鎖である。
【００２４】
本明細書において、用語「炭素環式」は、全て炭素の16個までの環原子を有する単環式、二環式又は三環式の基のことであり、アリール及びシクロアルキルを含む。
本明細書において、用語「シクロアルキル」は、3〜8炭素原子を有する単環式の飽和炭素環式基のことであり、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクチルを含む。
【００２５】
本明細書において、限定しない用語「アリール」は、単環式、二環式又は三環式の炭素環式芳香族基のことであり、共有結合により直接連結された2つの単環式の炭素環式芳香族環を有する基を含む。このような基の例は、フェニル、ビフェニル及びナフチルである。
【００２６】
本明細書において、限定しない用語「ヘテロアリール」は、S、N及びOから選択される1又は複数のヘテロ原子を含む単環式、二環式又は三環式の芳香族基のことであり、そのような単環式環を2つ有する基、又はそのような単環式環1つと1つの単環式アリール環とが共有結合により直接連結された基を含む。そのような基の例は、チエニル、ベンズチエニル、フリル、ベンズフリル、ピロリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、チアゾリル、ベンズチアゾリル、イソチアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、ベンズオキサゾリル、イソキサゾリル、ベンズイソキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、ベンズトリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、インドリル及びインダゾリルである。
【００２７】
本明細書において、限定しない用語「ヘテロシクリル」又は「複素環式」は、上記で定義される「ヘテロアリール」を含み、その非芳香族の意味は、S、N及びOから選択される1又は複数のヘテロ原子を含む単環式、二環式又は三環式の非芳香族基、及びこのような1又は複数のへテロ原子を含む単環式の非芳香族基からなり、該非芳香族基が別のそのような基又は単環式の炭素環式基に共有結合した基に関する。そのような基の例は、ピロリル、フラニル、チエニル、ピペリジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピリミジニル、モルホリニル、ピペラジニル、インドリル、モルホリニル、ベンズフラニル、ピラニル、イソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、メチレンジオキシフェニル、エチレンジオキシフェニル、マレイミド及びスクシンイミド基である。
【００２８】
その用語を用いるときの関係において特に言及しない限りは、いずれの部分に適用される用語「置換」は、4つまでの適合性の置換基で置換されていることを意味する。該置換基はそれぞれ独立して、例えば(C1〜C6)アルキル、(C1〜C6)アルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシ(C1〜C6)アルキル、メルカプト、メルカプト(C1〜C6)アルキル、(C1〜C6)アルキルチオ、フェニル、ハロ (フルオロ、ブロモ及びクロロを含む)、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、ニトリル(-CN)、オキソ、-COOH、-COORA、-CORA、-SO2RA、-CONH2、-SO2NH2、-CONHRA、-SO2NHRA、-CONRARB、-SO2NRARB、-NH2、-NHRA、-NRARB、-OCONH2、-OCONHRA、-OCONRARB、-NHCORA、-NHCOORA、-NRBCOORA、-NHSO2ORA、-NRBSO2OH、-NRBSO2ORA、-NHCONH2、-NRACONH2、-NHCONHRB、-NRACONHRB、-NHCONRARB、又は-NRACONRARB （ここで、RA及びRBは独立して(C1〜C6)アルキル、(C3〜C6)シクロアルキル、フェニル又は5若しくは6個の環原子を有する単環式ヘテロアリールである）であり得る。「任意の置換基」は、上記の置換基の1つであり得る。
【００２９】
用語「天然又は非天然のαアミノ酸の側鎖」は、式NH2-CH(R1)-COOHの天然又は非天然アミノ酸のR1基のことである。
天然αアミノ酸の側鎖の例は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、シスチン、グルタミン酸、ヒスチジン、5-ヒドロキシリジン、4-ヒドロキシプロリン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、α-アミノアジピン酸、α-アミノ-n-酪酸、3,4-ジヒドロキシフェニルアラニン、ホモセリン、α-メチルセリン、オルニチン、ピペコリン酸、及びチロキシンのものを含む。
【００３０】
それらの特徴的な側鎖中に機能的置換基、例えばアミノ、カルボキシル、ヒドロキシ、メルカプト、グアニジル、イミダゾリル、又はインドリル基を含む天然のα-アミノ酸は、アルギニン、リジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、トリプトファン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、チロシン及びシステインを含む。本発明の化合物のR2がこれらの側鎖の一つである場合に、機能的置換基は任意に保護されていてもよい。
【００３１】
天然αアミノ酸の側鎖における機能的官能基の関係において用いる場合の用語「保護された」は、実質的に機能的でないこのような置換機の誘導体を意味する。例えば、カルボキシル基はエステル化されることができ(例えばC1〜C6アルキルエステルとして)、アミノ基はアミド(例えばNHCOC1〜C6アルキルアミドとして)、又はカルバメート(例えばNHC(=O)OC1〜C6アルキルカルバメート又はNHC(=O)OCH2Phカルバメートとして)に変換でき、ヒドロキシル基は、エーテル (例えばOC1〜C6アルキルエーテル又はO(C1〜C6アルキル)フェニルエーテル)又はエステル(例えばOC(=O)C1〜C6アルキルエステル)に変換でき、チオール基は、チオエーテル(例えばtert-ブチルチオエーテル又はベンジル チオエーテル)又はチオエステル(例えばSC(=O)C1〜C6アルキルチオエステル)に変換できる。
【００３２】
非天然αアミノ酸の側鎖の例は、本発明の化合物に用いるための適切なR2基の説明において以下で述べるものを含む。
【００３３】
本明細書において、用語「塩」は、塩基付加塩、酸付加塩、及び四級塩を含む。酸性である本発明の化合物は、アルカリ金属水酸化物、例えば水酸化ナトリウム及び水酸化カリウム；アルカリ土類金属水酸化物、例えば水酸化カルシウム、水酸化バリウム及び水酸化マグネシウムのような塩基；例えばN-メチル-D-グルカミン、コリン トリス(ヒドロキシメチル)アミノ-メタン、L-アルギニン、L-リジン、N-エチルピペリジン、ジベンジルアミンなどの有機塩基と医薬的に許容される塩を含む塩を形成できる。塩基性であるこれらの化合物(I)は、例えば塩化水素酸又は臭化水素酸のようなハロゲン化水素酸、硫酸、硝酸又はリン酸のような無機酸；酢酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、サリチル酸、クエン酸、メタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、グルタミン酸、乳酸及びマンデル酸などの有機酸と医薬的に許容される塩を含む塩を形成できる。
【００３４】
不斉炭素原子が存在するので1又は複数の実際の若しくは潜在的なキラル中心を有する本発明の化合物は、各キラル中心にてR又はSの立体化学を有するいくつかのジアステレオ異性体として存在できる。本発明は、全てのこのようなジアステレオ異性体及びそれらの混合物を含む。
【００３５】
上記のように、本発明のエステルは、まず、細胞内カルボキシエステラーゼにより変換される対応するカルボン酸のプロドラッグである。しかし、それらが加水分解されないままである限りは、エステルはそれ自体でHDAC阻害活性を有し得る。本発明の化合物はエステルのみではなく、対応するカルボン酸加水分解生成物も含む。
【００３６】
ヒドロキサメート基C(=O)NHOH
本発明の化合物において、ヒドロキサメート基官能基は、折り畳まれた酵素構造内のポケットの底に存在する、HDAC酵素の活性部位にある金属イオンと相互作用する金属結合基として機能する。
【００３７】
環又は環系A 
環又は環系Aは、任意に置換されていてもよい単環式、二環式若しくは三環式の炭素環式又は複素環式の環系である。本発明の化合物において、HDAC酵素の活性部位に結合したときに、環又は環系Aは、金属イオンを含むポケットの入口又はその内部に存在し、-[リンカー]-基は、そのポケットの奥に伸びてAを金属結合ヒドロキサム酸基に連結する。当該技術において、環又は環系Aは、時折非公式に、阻害剤の「頭基」と呼ばれる。環系Aの例は、以下のものを含む。
【化３−１】
0005405820.tif 000005
【化３−２】
0005405820.tif 000006
【００３８】
（式中、R10は、水素又は任意に置換されていてもよいC1〜C6アルキルであり、波線が横切る結合は、化合物(I)中のリンカー基に結合し、化合物(I)中のR1R2CHNHYL1X1[CH2]z基は、示される環系のいずれの適切な環原子に連結される。）
【００３９】
-[リンカー]-基
-[リンカー]-は、A中の環原子をヒドロキサム酸基CONHOHに連結する二価のリンカー基を示し、Aの環原子に連結する末端原子からヒドロキサム酸基に連結する末端原子までのリンカー基の長さは、3〜10個の炭素原子の分岐していない飽和の炭化水素鎖の長さに等しい。3個の炭素原子の分岐していない飽和の炭化水素鎖は、約2.5Åの長さであり、10個の炭素原子のものは、約11.3Åの長さである。いずれの所定の-[リンカー]-基の長さは、文献中の原子半径と結合長さのデータから決定できるか、又はDS ViewerPro (Accelrys, Inc)のような化学構造モデリングソフトウェアを用いて決定できる。-[リンカー]-基の規定された長さは、頭基Aが、酵素の活性部位での金属イオン含有ポケットの入口にあり得るか又はその中にあり得るかという事実を反映し、よって、該ポケットの深さに厳密ではなく関係する。多くの場合、リンカーの長さは、4〜9炭素原子、例えば5、6又は７炭素原子の分岐していない飽和の炭化水素鎖の長さに等しい。-[リンカー]-基の特定の総合的な種類は、以下に「タイプ1」、「タイプ2」及び「タイプ3」リンカーとして説明する。
【００４０】
タイプ1リンカー
このタイプにおいては、-[リンカー]-は、式-(CH2)x-Z-L2-の二価の基を表し、ここで、
xは、0又は1であり；
Zは、結合手、-NR3-, -NR3C(=O)-、-C(=O)NR3-、-NR4C(=O)-NR3-、-C(=S)-NR3、-C(=N)-NR3 -NR3S(=O)2-又は-S(=O)2NR3- （式中、R3は、水素又はC1〜C6アルキルである）；-C(=O)；若しくは-S(=O)2-であり；
L2は、任意に置換されていてもよい直鎖又は分岐鎖のC4〜C7アルキレン、C4〜C6アルケニレン又はC4〜C6アルキニレン基を表し、これらは、エーテル (-O-)、チオエーテル(-S-)又はアミノ (-NRA-)結合(式中、RAは、水素又は任意に置換されていてもよいC1〜C3アルキルである)を任意に含むか又はこれらの結合が末端をなしていてもよい。
【００４１】
このタイプのリンカーのあるサブクラスにおいて、いずれの適合する組み合わせにおいて、xは0であり；Zは、-NH-、-C(=O)-、-NHC(=O)-又は-C(=O)NH-であり、L2は-(CH2)5-、-(CH2)6-又は-(CH2)7-である。
【００４２】
タイプ2リンカー
このタイプにおいて、-[リンカー]-は、式-(CH2)x-L3-Ar1-L4-の二価の基を表し、ここで、
xは0又は1であり；
L3は、Z又はL2又はZ-L2 (式中、Zはタイプ1リンカーについて定義されたとおりであり、L2は、結合手又は任意に置換されていてもよい二価のC1〜C3アルキレン基であり；
Ar1は、二価のフェニル基又は5〜13員環の二価の単環式若しくは二環式のヘテロアリール基であり、
L4は、結合手又は任意に置換されていてもよい-CH2-若しくは-CH=CH-である。
【００４３】
このタイプのリンカーのあるサブクラスにおいて、いずれの適合する組み合わせにおいて、xは、0又は1であり；L3はZ又はZ-L2 (式中、Zは-NH-、-NHS(=O)2-、-S(=O)2NH-又は-S(=O)2-であり；L2は、-CH2-であり、L4は、結合手又は-CH2-であり；Ar1は、以下から選択される二価の基である：
【００４４】
【化４】
0005405820.tif 000007
【００４５】
(式中、XはO、S又はNHである)。
【００４６】
上記のAr1基のうち、ベンゾ[b]チオフェン-6-イル基：
【化５】
0005405820.tif 000008
が特定の例である。
【００４７】
このタイプのリンカーの別のサブクラスにおいて、いずれの適合する組み合わせにおいて、xは0であり；L3はL2 (式中、L2は直鎖C3〜C5アルキレン基であり、これはエーテル (-O-)、チオエーテル(-S-)又はアミノ(-NRA-)結合(式中、RAは、水素又は任意に置換されていてもよいC1〜C3アルキル、例えばヒドロキシエチルである)を任意に有していてもよい)であり；Ar1は、上記の段落に列挙するものから選択される二価の基である。
【００４８】
このタイプのさらに別のサブクラスにおいて、xは0であり、L3及びL4は結合手であり、Ar1は、例えば以下から選択される二価のフェニル基又は9〜13員環の二価の二環式ヘテロアリール基である：
【化６】
0005405820.tif 000009
【００４９】
(式中、Xは、O、S及びNHから選択され、P、Q及びUは、N及びCHから独立して選択され、**を付した結合はCONHOH基に連結し；*を付した結合は、環又は環系Aに連結する)。
【００５０】
タイプ3リンカー
このタイプにおいて、-[リンカー]-は、式-(CH2)x-L3-B-Ar1-L4-の二価の基を表し、ここで、x、Ar1、L3及びL4は、上記のタイプ2リンカーについて説明したとおりであり；Bは、単環式又は二環式の複素環式環系である。
リンカーのこのタイプのあるサブクラスにおいて、Bは、以下の一つである：
【００５１】
【化７】
0005405820.tif 000010
(式中、XはNであり、WはNH、O又はSである)。
【００５２】
エステル基R1
エステル基R1は、本発明の化合物において、1種又は複数種の細胞内カルボキシエステラーゼ酵素によりカルボン酸基に加水分解され得るものでなければならない。本発明の化合物のエステル基を対応する酸に加水分解できる細胞内カルボキシエステラーゼ酵素は、3種の既知のヒト酵素アイソタイプhCE-1、hCE-2及びhCE-3を含む。これらは主要な酵素と考えられるが、その他の酵素、例えばビフェニルヒドロラーゼ(BPH)はエステルの加水分解に役割を有し得る。一般的に、カルボキシエステラーゼが遊離のアミノ酸エステルを親の酸に加水分解するならば、これは、以下で説明するhCE-2及びhCE-3のN-カルボニル依存性を条件として、HDAC阻害剤に共有的に共役しているエステルモチーフも加水分解する。よって、本明細書において記載する破砕(broken)細胞アッセイは、所望の加水分解プロフィールを有するエステルについての直接的で迅速かつ単純な最初のスクリーニングを提供する。このようにして選択されるエステルモチーフは、次いで、選択された共役化学を介して調節物質(modulator)に共役されたときに、同じカルボキシエステラーゼアッセイにおいて再び分析されて、そのバックグラウンドにおいてもまだカルボキシエステラーゼ基質であることを確かめることができる。
【００５３】
それらが細胞内カルボキシエステラーゼ酵素により加水分解され得るという要件を条件として、特定のエステル基R1の例は、式-(C=O)OR9のものを含み、ここで、R9は、(i) R7R8CH- (式中、R7は、任意に置換されていてもよい(C1〜C3)アルキル-(Z1)a-(C1〜C3)アルキル-、又は(C2〜C3)アルケニル-(Z1)a-(C1〜C3)アルキル- (式中、aは0又は1であり、Z1は-O-、-S-又は-NH-である)であり、R8は、水素又は(C1〜C3)アルキル-であるか、或いはR7及びR8は、それらが結合する炭素原子と共に、任意に置換されていてもよいC3〜C7シクロアルキル環又は任意に置換されていてもよい5又は6の環原子の複素環式環を形成する)；又は(ii) 任意に置換されていてもよいフェニル又は5若しくは6の環原子の単環式の複素環である。これらのクラスにおいて、R9は、例えばメチル、エチル、n-若しくはイソプロピル、n-若しくはsec-ブチル、シクロヘキシル、アリル、フェニル、ベンジル、2-、3-若しくは4-ピリジルメチル、N-メチルピペリジン-4-イル、テトラヒドロフラン-3-イル又はメトキシエチルであり得る。現在好ましいものは、R9がシクロペンチルである。
【００５４】
マクロファージは、サイトカイン、特にTNFα及びIL-1の放出により炎症性疾患において鍵となる役割を演じることが知られている(van Roonら Arthritis and Rheumatism, 2003, 1229〜1238)。リウマチ性関節炎において、これらは、関節炎症及び関節破壊の維持における主要な貢献物質である。マクロファージは、腫瘍成長及び進行にも関与する(Naldini及びCarraro Curr Drug Targets Inflamm Allergy ,2005, 3〜8)。よって、マクロファージ細胞増殖を選択的に標的する物質は、癌及び自己免疫疾患の治療において価値があり得る。特定の細胞タイプを標的することは、副作用の低減を導くと期待される。本発明者らは、エステラーゼモチーフがHDAC阻害剤に連結する様式が、それが加水分解されるか否かを決定し、よってそれが異なるタイプの細胞内に蓄積するか否かを決定するという知見に基づく、HDAC阻害剤をマクロファージに標的する方法を見出した。特に、マクロファージはヒトカルボキシエステラーゼhCE-1を含有するが、その他のタイプの細胞は含有しないことが見出されている。エステラーゼモチーフR1R2CHNH-の窒素がカルボニル(-C(=O)-)に直接結合しない、すなわちYが-C(=O)基でも-C(=O)O-基でも-C(=O)NR3-基でもない場合の一般式(I)において、エステルはhCE-1によってのみ加水分解され、よって、HDAC阻害剤は、マクロファージ内でのみ蓄積する。本明細書において、「単球」と明示しない限り、「マクロファージ」の用語はマクロファージ(腫瘍関連マクロファージを含む)及び／又は単球のことをいうのに用いる。
【００５５】
アミノ酸側鎖R2
エステル基R1が細胞内カルボキシエステラーゼ酵素により加水分解できるという要件を条件として、側鎖基R2が何であるかは重大ではない。
アミノ酸側鎖の例は、以下のものを含む。
C1〜C6アルキル、フェニル、2-、3-若しくは4-ヒドロキシフェニル、2-、3-若しくは4-メトキシフェニル、2-、3-若しくは4-ピリジルメチル、ベンジル、フェニルエチル、2-、3-若しくは4-ヒドロキシベンジル、2-、3-若しくは4-ベンジルオキシベンジル、2-、3-若しくは4- C1〜C6アルコキシベンジル及びベンジルオキシ(C1〜C6アルキル)-基；
【００５６】
天然αアミノ酸を特徴付ける基であって、いずれの官能基が保護されていてもよい；
-[Alk]nR6基、ここでAlkは、-O-若しくは-S-原子又は-N(R7)-基[式中、R7は、水素原子又は(C1〜C6)アルキル基である]の1つ又は複数が任意に介在していてもよい(C1〜C6)アルキル又は(C2〜C6)アルケニル基であり、nは0又は1であり、R6は、任意に置換されていてもよいシクロアルキル又はシクロアルケニル基である；
【００５７】
フェニル環において式-OCH2COR8の基で置換されたベンジル基（式中、R8は、ヒドロキシル、アミノ、(C1〜C6)アルコキシ、フェニル(C1〜C6)アルコキシ、(C1〜C6)アルキルアミノ、ジ((C1〜C6)アルキル)アミノ、フェニル(C1〜C6)アルキルアミノ、アミノ酸又はその酸ハロゲン化物、エステル若しくはアミド誘導体の残基であり、該残基はアミド結合により連結されており、該アミノ酸は、グリシン、α若しくはβアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、リジン、ヒスチジン、アルギニン、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選択される）；
【００５８】
置換されていないか、又はハロ、ニトロ、カルボキシ、(C1〜C6)アルコキシ、シアノ、(C1〜C6)アルカノイル、トリフルオロメチル(C1〜C6)アルキル、ヒドロキシ、ホルミル、アミノ、(C1〜C6)アルキルアミノ、ジ-(C1〜C6)アルキルアミノ、メルカプト、(C1〜C6)アルキルチオ、ヒドロキシ(C1〜C6)アルキル、メルカプト(C1〜C6)アルキル又は(C1〜C6)アルキルフェニルメチルで複素環式環において1置換若しくは2置換された複素環式(C1〜C6)アルキル基；及び
【００５９】
-CRaRbRc基、ここで：
Ra、Rb及びRcのそれぞれは独立して、水素、(C1〜C6)アルキル、(C2〜C6)アルケニル、(C2〜C6)アルキニル、フェニル(C1〜C6)アルキル、(C3〜C8)シクロアルキルであるか；又は
Rcは水素であり、かつRa及びRbは独立してフェニル又はヘテロアリール、例えばピリジルであるか；又は
Rcは水素、(C1〜C6)アルキル、(C2〜C6)アルケニル、(C2〜C6)アルキニル、フェニル(C1〜C6)アルキル、又は(C3〜C8)シクロアルキルであり、かつRa及びRbは、それらが結合している炭素原子と共に3〜8員のシクロアルキル又は5若しくは6員の複素環式環を形成するか；又は
Ra、Rb及びRcは、それらが結合している炭素原子と共に三環(例えばアダマンチル)を形成するか；又は
【００６０】
Ra及びRbはそれぞれ独立して、(C1〜C6)アルキル、(C2〜C6)アルケニル、(C2〜C6)アルキニル、フェニル(C1〜C6)アルキル、又はRcについて以下で定義される水素以外の基であるか、或いはRa及びRbは、それらが結合している炭素原子と共にシクロアルキル又は複素環式環を形成し、かつRcは、水素、-OH、-SH、ハロゲン、-CN、-CO2H、(C1〜C4)ペルフルオロアルキル、-CH2OH、-CO2(C1〜C6)アルキル、-O(C1〜C6)アルキル、-O(C2〜C6)アルケニル、-S(C1〜C6)アルキル、-SO(C1〜C6)アルキル、-SO2(C1〜C6)アルキル、-S(C2〜C6)アルケニル、-SO(C2〜C6)アルケニル、-SO2(C2〜C6)アルケニル、又は-Q-W基（式中、Qは、結合手、又は-O-、-S-、-SO-若しくは-SO2-を表し、Wは、フェニル、フェニルアルキル、(C3〜C8)シクロアルキル、(C3〜C8)シクロアルキルアルキル、(C4〜C8)シクロアルケニル、(C4〜C8)シクロアルケニルアルキル、ヘテロアリール又はヘテロアリールアルキル基を表し、W基は、ヒドロキシル、ハロゲン、-CN、-CO2H、-CO2(C1〜C6)アルキル、-CONH2、-CONH(C1〜C6)アルキル、-CONH(C1〜C6アルキル)2、-CHO、-CH2OH、(C1〜C4)ペルフルオロアルキル、-O(C1〜C6)アルキル、-S(C1〜C6)アルキル、-SO(C1〜C6)アルキル、-SO2(C1〜C6)アルキル、-NO2、-NH2、-NH(C1〜C6)アルキル、-N((C1〜C6)アルキル)2、-NHCO(C1〜C6)アルキル、(C1〜C6)アルキル、(C2〜C6)アルケニル、(C2〜C6)アルキニル、(C3〜C8)シクロアルキル、(C4〜C8)シクロアルケニル、フェニル又はベンジルから独立して選択される1つ又は複数の置換基で任意に置換されていてもよい）。
【００６１】
具体的なR2基の例は、水素(グリシン「側鎖」)、ベンジル、フェニル、シクロヘキシルメチル、シクロヘキシル、ピリジン-3-イルメチル、tert-ブトキシメチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、1-ベンジルチオ-1-メチルエチル、1-メチルチオ-1-メチルエチル、1-メルカプト-1-メチルエチル及びフェニルエチルを含む。現在好ましいR2基は、フェニル、ベンジル及びイソブチルを含む。
【００６２】
全身的に投与される本発明の化合物について、カルボキシエステラーゼ切断の速度が遅いエステルが好ましい。なぜなら、これらはプレ全身性(pre-systemic)代謝に対して影響されにくいからである。無傷でそれらの標的組織に到達するそれらの能力は、よって、増加し、エステルは標的組織の細胞の内部で酸生成物に変換され得る。しかし、エステルが標的組織に直接適用されるか又は例えば吸入により標的組織に向けられる局所投与について、エステルは、エステラーゼ切断の速度が速く、全身性の曝露及びそれによる望まれない副作用を最小限にすることがしばしば所望される。本発明の化合物において、αアミノ酸エステルのα炭素に隣接する炭素が1置換されている場合、すなわちR2がCH2Rz (Rzは1置換基である)である場合、該エステルは、R2が例えばフェニル又はシクロヘキシルである場合のような該炭素が2置換又は3置換されている場合よりも、迅速に切断される傾向にある。
【００６３】
-Y-L1-X1-[CH2]z-基
この基(又は結合手)は、阻害剤のアミノ酸エステルモチーフR1CH(R2)NH-を、頭基Aに連結するように選択された特定の化学ストラテジにより生じる。明らかに、このカップリングのための化学ストラテジは広く変動でき、よって、可変部Y、L1、X1及びzの多くの組み合わせが可能である。しかし、上記のように、阻害剤が酵素の活性部位にてHDAC酵素に結合するとき、頭基Aは、酵素の金属イオン含有ポケットの頂部又はその中に位置するので、アミノ酸エステルモチーフを頭基に連結することにより、それはポケットから離れている方向に通常は伸びるので、阻害剤鋳型A-[リンカー]-CONHOHの結合態様との干渉を最小限にするか又は回避する。よって、アミノ酸エステルモチーフと頭基Aとの連結化学を作り上げる可変部の正確な組み合わせは、化合物全体としての最初の結合態様にはしばしば不適切であり得る。一方、この連結化学は、金属イオン含有ポケットの頂部又はその近傍での酵素との付加的な結合相互作用をおこす場合があり、よって、結合を増強する。
【００６４】
上記のアミノ酸エステルモチーフの利点(細胞内への容易な侵入、細胞内でのカルボキシエステラーゼ加水分解、及び細胞内での活性カルボン酸加水分解生成物の蓄積)は、アミノ酸エステルモチーフと頭基との連結が細胞内でのペプチダーゼ活性に対する基質でない場合に最良に達成され、これは分子からのアミノ酸の切断をもたらし得る。もちろん、細胞内ペプチダーゼに対する安定性は、化合物を細胞破砕内容物とインキュベートし、そのような切断を分析することにより簡単に試験される。
【００６５】
上記の一般的な知見を念頭において、-Y-L1-X1-[CH2]z-基を作り上げる可変部は、
次のものも採用される：
zは0又は1であってよく、それにより頭基Aに連結するメチレン基は任意である；
マクロファージの選択性が必要でない場合に特に好ましいYの例は、-(C=O)-、-(C=O)NH-及び-(C=O)O-を含み；マクロファージ選択性が必要である場合は、Yが結合手である場合も含んでYについてのその他の選択肢のいずれも適切である。
【００６６】
L1基において、存在する場合にAlk1基及びAlk2基の例は、
-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH=CH-、-CH=CHCH2-、-CH2CH=CH-、CH2CH=CHCH2-C≡C-、-C≡CCH2-、CH2C≡C-、及びCH2C≡CCH2を含む。Alk1及びAlk2のさらなる例は、-CH2W-、-CH2CH2W-、-CH2CH2WCH2-、-CH2CH2WCH(CH3)-、-CH2WCH2CH2-、-CH2WCH2CH2WCH2-、及び-WCH2CH2- (式中、Wは-O-、-S-、-NH-である)、-N(CH3)-、又は-CH2CH2N(CH2CH2OH)CH2-を含む。Alk1及びAlk2のさらなる例は、二価のシクロプロピル、シクロペンチル及びシクロヘキシル基を含む。
【００６７】
L1において、nが0である場合、該基は炭化水素鎖である(任意に置換されていてもよく、おそらくエーテル、チオエーテル又はアミノ結合を有する)。現在、L1にはいずれの任意の置換基も存在しないことが好ましい。m及びpの両方が0である場合、L1は、5〜13環原子の二価の単環式若しくは二環式の炭素環式又は複素環式基である(任意に置換されていてもよい)。nが1であり、m及びpの少なくとも一方が1である場合、L1は、1つ又は複数の炭化水素鎖と5〜13環原子の単環式若しくは二環式の炭素環式又は複素環式基(任意に置換されていてもよい)とを含む二価の基である。存在する場合に、Qは、例えば二価のフェニル、ナフチル、シクロプロピル、シクロペンチル又はシクロヘキシル基、又は5〜13環原子の単環式若しくは二環式の複素環式基、例えばピペリジニル、ピペラジニル、インドリル、ピリジル、チエニル若しくはピロリル基であり得るが、現在は1,4-フェニレンが好ましい。
【００６８】
本発明のある実施形態において、特に、L1、m及びpは0、nは1であり得る。別の実施形態において、n及びpは0、mは1であり得る。さらに別の実施形態において、m、n及びpは全て0であり得る。さらなる実施形態において、mは0であり得、nは1であり得、Qは単環式の複素環式基であり、pは0又は1であり得る。存在する場合に、Alk1及びAlk2は、-CH2-、-CH2CH2-、及び-CH2CH2CH2-から選択でき、Qは1,4-フェニレンであり得る。
【００６９】
-Y-L1-X1-[CH2]z-基の具体的な例は、-C(=O)-及び-C(=O)NH-、並びに-(CH2)v-、-(CH2)vO-、-C(=O)-(CH2)v-、-C(=O)-(CH2)vO-、-C(=O)-NH-(CH2)w-、-C(=O)-NH-(CH2)wO-
【化８】
0005405820.tif 000011
(式中、vは1、2、3又は4であり、wは1、2又は3である)、例えば-CH2-、-CH2O-、-C(=O)-CH2-、-C(=O)-CH2O-、-C(=O)-NH-CH2-及び-C(=O)-NH-CH2O-を含む。
【００７０】
本発明の化合物の特定の部分集合の例は、式(IA)〜(IM)のものを含む。
【化９】
0005405820.tif 000012
【００７１】
【化１０】
0005405820.tif 000013
【００７２】
【化１１】
0005405820.tif 000014
【００７３】
(式中、z、R1、R2、R3、L1及びX1及びYは、式(I)について定義したとおりであり、上記のように、それについての好ましいものを含む)。
【００７４】
本発明の具体的な化合物の例は、以下のものを含む。
(S)-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-4-フェニル-酪酸 シクロペンチルエステル
(S)-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステル
【００７５】
(S)-[2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-フェニル]-エチルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
(S)-2-[3-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-フェノキシ]-プロピルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル
(S)-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-3-(4-ヒドロキシ-フェニル)-プロピオン酸 シクロペンチルエステル
(S)-3-tert-ブトキシ-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-プロピオン酸 シクロペンチルエステル
【００７６】
(S)-1-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジル)-ピロリジン-2-カルボン酸 シクロペンチルエステル
(S)-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-プロピオン酸 シクロペンチルエステル
(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-酢酸 シクロペンチルエステル
【００７７】
本発明の化合物は、例えば、以下及び本明細書中の実施例に記載される方法により製造できる。
例えば、本発明の化合物は、対応するカルボン酸(II)
【化１２】
0005405820.tif 000015
から、その活性化誘導体、例えば酸塩化物のヒドロキシルアミン又はヒドロキシルアミンの保護された形との反応により製造できる。
【００７８】
あるいは、所望の化合物(I)のN-若しくはO-保護、又はN,O-二保護された前駆体を脱保護できる。この方法の有用な形において、O-保護は樹脂支持体により提供され、これから所望のヒドロキサム酸(I)を、例えば酸加水分解により切断できる。
【００７９】
化合物(II)のカルボキシル保護された誘導体、又は本発明の化合物(II)のO-連結樹脂支持誘導体は、所望の化合物の特定の構造に従って選択される文献の方法により、段階で合成できる。この関係において、上記の特許文献は、本発明の阻害剤に構造が類似するHDAC阻害剤の合成についての情報を提供する。
【００８０】
化合物(I) (式中、Zはスルホンアミド基-NHSO2-である)に適するあるアプローチにおいて、アミン(III)：
【化１３】
0005405820.tif 000016
は、スルホン酸HOSO2-L2-Z2 (式中、Z2は保護されたカルボキシル基、例えば切断可能なエステル、又はO-連結樹脂支持ヒドロキサム酸基である)の活性化された誘導体、例えば酸塩化物と反応させ得る。
【００８１】
化合物(I) (式中、Zはアミド基-NHC(=O)-である)に適する別のアプローチにおいて、アミン(III)は、カルボン酸 HOC(=O)-L-Z2 (ここで、Z2は前の段落で定義されたとおりである)と、カルボジイミドカップリング剤の存在下に反応させ得る。
【００８２】
環又は環系Aが-リンカー-CONHOH部分に環窒素を介して連結しており、かつZが-(C=O)-又は-SO2-である化合物(I)の場合、適切なN-複素環(IV)：
【化１４】
0005405820.tif 000017
は、対応するカルボン酸又はスルホン酸(すなわち、HOOC-L2-Z2又はHOSO2-L2-Z2 (式中、Z2は上記で定義したとおりである))と、その活性化誘導体、例えば塩化物として、又はカルボジイミドカップリング剤の存在下に反応させ得る。
【００８３】
上記の式(I)の範囲内の化合物の合成についての文献の方法を用いるさらなる例として、以下の反応スキーム1〜6を示す。これらのスキームにおいて、R基は、本発明の化合物に存在する基：
【化１５】
0005405820.tif 000018
を表すか、又は文献の方法を用いてそれから該基を作り上げることができる官能基を表す。
【００８４】
また、以下のスキームにおいて、
【化１６】
0005405820.tif 000019
の印は、固相樹脂支持体を表す。
【００８５】
【化１７】
0005405820.tif 000020
【００８６】
【化１８】
0005405820.tif 000021
【００８７】
【化１９】
0005405820.tif 000022
【００８８】
【化２０】
0005405820.tif 000023
【００８９】
【化２１】
0005405820.tif 000024
【００９０】
【化２２】
0005405820.tif 000025
【００９１】
上記のように、本発明が関係する化合物は、HDAC阻害剤であり、よって、ヒト及びその他の哺乳動物における細胞増殖性疾患、例えば癌の治療において有用であり得る。
【００９２】
いずれの特定の患者に対する具体的な用量レベルは、用いる具体的な化合物の活性、年齢、体重、全身の健康、性別、食餌、投与時間、投与経路、排泄経路、薬剤の組み合わせ及び治療を受ける特定の疾患の重篤度を含む種々の因子に依存することが理解されるだろう。最適用量レベル及び投与頻度は、臨床試験により決定される。
【００９３】
本発明が関係する化合物は、薬理学的特性に矛盾しないいずれの経路による投与のために製造できる。経口投与可能な組成物は、錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒、ロゼンジ、液体又はゲル調製物、例えば経口、局所、又は滅菌非経口の溶液若しくは懸濁液の形であり得る。経口投与用の錠剤及びカプセル剤は、単位用量提示形態であり得、従来の賦形剤、例えば結合剤、例えばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント又はポリビニルピロリドン；充填剤、例えばラクトース、砂糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトール又はグリシン；打錠滑沢剤(tabletting lubricant)、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール又はシリカ；崩壊剤、例えばバレイショデンプン、或いは許容される湿潤剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムを含み得る。錠剤は、通常の製薬のプラクティスにおいて公知の方法に従って被覆され得る。経口液体調製物は、例えば水性又は油性の懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップ又はエリキシルの形であり得るか、或いは使用前に水又はその他の適切なビヒクルで再構築するための乾燥物として提示されることができる。このような液体調製物は、従来の添加物、例えば懸濁化剤、例えばソルビトール、シロップ、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン硬化食用脂質(gelatin hydrogenated edible fats)；乳化剤、例えばレシチン、ソルビタンモノオレエート又はアカシア；非水性ビヒクル(食用油も含み得る)、例えばアーモンド油、ヤシ油、グリセリン、プロピレングリコール又はエチルアルコールのような油性のエステル；保存剤、例えばメチル若しくはプロピルp-ヒドロキシベンゾエート又はソルビン酸、及び所望により従来の調味剤若しくは着色剤を含み得る。
【００９４】
皮膚への局所投与のために、薬剤は、クリーム、ローション剤又は軟膏として作ることができる。薬剤として用い得るクリーム又は軟膏の製剤は、例えば英国薬局方のような製薬の標準的な参考書に記載されているように、当該技術において公知の従来の製剤である。
【００９５】
吸入による局所投与のために、薬剤は、例えば圧力駆動噴射アトマイザ若しくは超音波アトマイザによるか、又は噴射剤駆動計量(metered)エアロソル又は微粉末の噴射剤フリーの投与、例えば吸入カプセル若しくはその他の「乾燥粉末」送達システムによる、エアロソル送達用に処方され得る。例えば噴射剤(例えば計量エアロソルの場合はFrigen)、界面活性物質、乳化剤、安定剤、保存剤、調味剤及び充填剤(例えば粉末吸入器の場合はラクトース)のような賦形剤は、このような吸入製剤に存在し得る。吸入の目的のために、患者に適する吸入技術を用いた、それを用いて最適な粒子サイズのエアロソルを発生させて投与できる多くの装置が利用可能である。アダプタ(スペーサ、エキスパンダ)及び洋ナシ形の容器(例えばNebulator (登録商標), Volumatic (登録商標))、及び特に粉末吸入器の場合の計量エアロソルのための吹き付ける(puffer)スプレーを発射する自動化デバイス(Autohaler (登録商標))に加えて、いくつかの技術的解決が利用可能である(例えばDiskhaler (登録商標)、Rotadisk (登録商標)、Turbohaler (登録商標)又は例えば欧州特許出願EP 0 505 321に記載されるような吸入器)。
【００９６】
眼への局所投与のために、薬剤は、適切な滅菌の水性又は非水性のビヒクル中の溶液又は懸濁液にすることができる。添加剤、例えば緩衝剤、例えばメタ重亜硫酸ナトリウム(sodium metabisulphite)又はエデト酸二ナトリウム；殺菌剤及び抗真菌剤、例えば酢酸フェニル水銀又は硝酸フェニル水銀、塩化ベンザルコニウム又はクロルヘキシジン、及び増粘剤、例えばヒプロメロース(hypromellose)も含み得る。
【００９７】
活性成分は、滅菌媒体中で非経口投与もできる。用いるビヒクル及び濃度に応じて、薬剤は、ビヒクル中に懸濁又は溶解できる。有利には、局所麻酔剤のようなアジュバント、保存剤及び緩衝剤をビヒクルに溶解できる。
【００９８】
以下の実施例は、本発明の特定の化合物の製造、及びそのHDAC阻害特性を説明する。実施例において：
市販の試薬及び溶媒(HPLCグレード)は、さらなる精製を行わずに用いた。
マイクロ波照射は、CEM Discover集束(focused)マイクロウェーブ反応器を用いて行った。
溶媒は、加熱せずにGeneVac Series Iを用いるか、又は30℃にてVacRampを備えるGenevac Series IIを用いるか、又はBuchiロータリーエバポレータを用いて除去した。
フラッシュクロマトグラフィーカラムによる化合物の精製は、Silicycleから得た粒子サイズ40〜63μm (230〜400メッシュ)のシリカゲルを用いて行った。分取(preparative) HPLCによる化合物の精製は、逆相ThermoHypersil-Keystone Hyperprep HS C18カラム(12μm、100×21.2 mm)、9.5分でのグラジエント20〜100% B ( A= 水/ 0.1% TFA、B= アセトニトリル/ 0.1% TFA)、流速= 30 ml/分、注入溶媒2：1 DMSO：アセトニトリル (1.6 ml)、215 nmでのUV検出を用いるGilsonシステムで行った。
【００９９】
1H NMRスペクトルは、重水素化溶媒中でのBruker 400 MHz AV分光計で記録した。ケミカルシフト(δ)は、百万分率である。薄層クロマトグラフィー(TLC)分析は、Kieselgel 60 F254 (Merck)プレートで行い、UV光を用いて視覚化した。
【０１００】
分析HPLCMSは、Agilent HP1100, Waters 600又はWaters 1525 LCシステムで、逆相Hypersil BDS C18カラム(5μm, 2.1×50 mm)、2.10分でのグラジエント0〜95% B (A= 水/ 0.1% TFA, B= アセトニトリル/0.1% TFA)、流速= 1.0 ml/分を用いて行った。UVスペクトルは、215 nmにて、Gilson G1315Aダイオードアレイ検出器、G1214A単一波長UV検出器、Waters 2487二波長UV検出器、Waters 2488二波長UV検出器、又はWaters 2996ダイオードアレイUV検出器を用いて記録した。質量スペクトルは、1秒当たり2スキャン又は1.2秒当たり1スキャンのサンプリング速度にてm/z 150〜850の範囲で、Z-スプレーインターフェースを有するMicromass LCT、又はZ-スプレー若しくはMUXインターフェースを有するMicromass LCTを用いて得た。データは、OpenLynx及びOpenLynx Browserソフトウェアを用いて積分して報告した。
【０１０１】
以下の略称を用いる。
MeOH = メタノール
EtOH = エタノール
EtOAc = 酢酸エチル
Boc = tert-ブトキシカルボニル
Cbz = カルボベンジルオキシ
DCM = ジクロロメタン
DCE= ジクロロエタン
DMF = ジメチルホルムアミド
DMSO = ジメチルスルホキシド
【０１０２】
TFA = トリフルオロ酢酸
THF = テトラヒドロフラン
Na2CO3 = 炭酸ナトリウム
HCl = 塩化水素酸
DIPEA = ジイソプロピルエチルアミン
NaH = 水素化ナトリウム
NaOH = 水酸化ナトリウム
NaHCO3 = 炭酸水素ナトリウム
Pd/C = パラジウム炭素
TBME = tert-ブチルメチルエーテル
DMAP = 4-ジメチルアミノピリジン
N2 = 窒素
【０１０３】
PyBop = ベンゾトリアゾール-1-イル-オキシ-トリス-ピロリジノ-ホスホニウム ヘキサフルオロリン酸
Na2SO4 = 硫酸ナトリウム
Et3N = トリエチルアミン
NH3 = アンモニア
TMSCl = トリメチルクロロシラン
NH4Cl = 塩化アンモニウム
LiAlH4 = 水素化リチウムアルミニウム
pyBrOP = ブロモ-トリス-ピロリジノ ホスホニウムヘキサフルオロリン酸
MgSO4 = 硫酸マグネシウム
MnO2 = 二酸化マンガン
nBuLi = n-ブチルリチウム
【０１０４】
CO2 = 二酸化炭素
EDCI = N-(3-ジメチルアミノプロピル)-N'-エチルカルボジイミド 塩酸塩
Et2O = ジエチルエーテル
LiOH = 水酸化リチウム
HOBt = 1-ヒドロキシベンゾトリアゾール
DIAD = ジイソプロピル アゾジカルボキシレート
HATU = O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロリン酸
【０１０５】
ELS = 蒸発光散乱
TLC = 薄層クロマトグラフィー
ml = ミリリットル
g = グラム
mg = ミリグラム
mol = モル
mmol = ミリモル
eq = モル等量
LCMS = 高性能液体クロマトグラフィー／質量分析
NMR = 核磁気共鳴
r.t. = 室温
【０１０６】
樹脂化学の標準洗浄手順
樹脂を、以下の順序で洗浄した：DMF、MeOH、DMF、MeOH、DCM、MeOH、DCM、MeOH×2、TBME×2。
【０１０７】
樹脂試験切断
官能化ヒドロキシルアミン2-クロロトリチル樹脂(反応混合物約0.3ml、樹脂約10mg)を、2% TFA/DCM (0.5ml)で、10分間、室温にて処理した。樹脂をろ過し、ろ過物をN2ガス流を吹き付けることにより濃縮した。残渣のLCMSを得た。
(注：官能化ヒドロキシルアミンWang樹脂について、試験切断を50% TFA/ DCMを用いて行った。)
【０１０８】
スベリン酸誘導体化ヒドロキシルアミン2-クロロトリチル樹脂の製造
【化２３】
0005405820.tif 000026
【０１０９】
第1段階−2-クロロトリチル-O-NH2樹脂への固定化
【化２４】
0005405820.tif 000027
【０１１０】
2-クロロトリチル-O-NH2樹脂(6 g、ローディング1.14 mmol/g、6.84 mmol)及びDCM (60 ml)を投入した丸底フラスコに、ジイソプロピルエチルアミン (5.30、41.0 mmol、6 eq)を加えた。メチル8-クロロ-8-オキソオクタノエート(4.2 g、20.5 mmol、3 eq)を、環状振とう(orbital shaking)しながら反応混合物に徐々に加え、反応混合物を48時間振とうした。樹脂をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥した。LCMS純度をELS検出により決定した、100%, m/z 204 [M++H]+。
【０１１１】
第2段階−けん化
【化２５】
0005405820.tif 000028
【０１１２】
第１段階の樹脂(4 g、ローディング1.14 mmol/g、4.56 mmol)を投入した丸底フラスコに、THF (16 ml)及びMeOH (16 ml)を加えた。反応物に、NaOH (0.91 g、22.8 mmol、5 eq)の水溶液(16 ml)を加えた。反応混合物を48時間振とうした。樹脂をろ過し、水×2、MeOH×2、次いで標準洗浄手順で洗浄した。樹脂を真空乾燥した。LCMS純度をELS検出により決定した、100% m/z 190 [M++H]+。
【０１１３】
シクロペンチルエステルの製造
エステルは、以下の方法の１つを用いて製造した。
方法A− (S)-2-アミノ-3-tert-ブトキシ-プロピオン酸 シクロペンチルエステルの合成
【化２６】
0005405820.tif 000029
【０１１４】
第1段階：(S)-2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-3-tert-ブトキシ-プロピオン酸 シクロペンチルエステル
【化２７】
0005405820.tif 000030
(S)-2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-3-tert-ブトキシ-プロピオン酸 (4g、0.014mol)を、DMF (40ml)に溶解した。シクロペンタノール(2.54ml、0.027mol)及びジメチルアミノピリジン(0.165g, 0.014mol)を加えた。溶液を、氷浴を用いて0℃に冷却し、N-(3-ジメチルアミノプロピル)-N'-エチルカルボジイミド 塩酸塩(2.73g、0.014mol、1.05eq.)を加えた。混合物を0℃にて10分間撹拌し、次いで、r.t.まで温め、さらに18時間撹拌した。反応混合物に、水(20〜30ml)、続いてEtOAc (40 ml)を加えた。相を分離し、水相をEtOAc (15 ml)で再抽出した。合わせた有機相を水(4×20 ml)で洗浄し、乾燥し(MgSO4)、溶媒を真空除去して残渣を得た。カラムクロマトグラフィー(1:1 EtOAc/ヘプタン)による精製により、生成物を無色の油として得た(3.82g、収率78%)。1H NMR (300 MHz, CDCl3), δ: 1.15 (9H, s, CH3 x 3), 1.50-1.90 (8H, m, CH2 x 4), 3.57 (1H, dd, J = 7.4, 1.2Hz, CH), 3.85 (1H, dd, J = 7.4, 1.2Hz, CH), 4.45 (1H, m, CH), 5.15 (2H, s, CH2), 5.25 (1H, m, CH), 5.65 (1H, d, CH, J = 7.6Hz), 7.30-7.50 (5H, m, ArH x 5).
【０１１５】
第2段階：(S)-2-アミノ-3-tert-ブトキシプロピオン酸 シクロペンチルエステル
【化２８】
0005405820.tif 000031
【０１１６】
(S)-2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-3-tert-ブトキシ-プロピオン酸 シクロペンチルエステル(3.82g、0.011mol)を、EtOH (50ml)に溶解した。20重量%の水酸化パラジウム(湿潤)を、注意しながら溶液に加えた。系を排出し、水素雰囲気下に4時間置いた。系を排出し、パラジウム残渣をセライトを通してろ過した。セライトをEtOHで充分に洗浄した(3×5ml)。ろ過物の溶媒を真空除去して、生成物を無色の油として得た(2.41g、収率100%)。1H NMR (300 MHz, CDCl3), δ: 1.15 (9H, s, CH3 x 3), 1.50-1.90 (10H, m, CH2 x 4, NH2), 3.50-3.70 (3H, m, CH2, CH), 5.22 (1H, s, CH).
【０１１７】
方法B−(S)-アミノ-シクロヘキシル-酢酸 シクロペンチルエステルの合成
【化２９】
0005405820.tif 000032
【０１１８】
第1段階：(S)-tert-ブトキシカルボニルアミノ-シクロヘキシル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化３０】
0005405820.tif 000033
【０１１９】
これは、(S)-2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-3-tert-ブトキシ-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (方法A、第1段階)と同じ様式で、(S)-tert-ブトキシカルボニルアミノ-シクロヘキシル酢酸から得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3), δ: 1.00-1.40 (10H, m, CH x 10), 1.45 (9H, s, C(CH3)3), 1.60-2.00 (8H, m, 4 x CH2), 4.15 (1H, m, CH), 5.05 (1H, d, NH, J = 7.6Hz), 5.25 (1H, m, CH).
【０１２０】
第2段階：(S)-アミノ-シクロヘキシル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化３１】
0005405820.tif 000034
【０１２１】
(S)-tert-ブトキシカルボニルアミノ-シクロヘキシル-酢酸 シクロペンチルエステル(1.17g、3.60mmol)を、TFA/DCM混液(1：1、10ml)中に、0℃にて溶解した。溶液を90分間撹拌し、溶媒を真空除去した。残渣を、DCM / ヘプタン混液(2×)と共沸させて(azetroped)、ガムを得た。ガムを、DCM (10ml)に再溶解し、飽和NaHCO3水溶液で洗浄し(3×10ml)、乾燥して(MgSO4)ろ過した。ろ過物の溶媒を真空除去して、生成物を油として得た(0.780g、収率78%)。1H NMR (300 MHz, CDCl3), δ: 1.00-1.40 (10H, m, CH x 10), 1.50-2.00 (8H, m, CH x 8), 3.25 (1H, d, CH, J = 7.2Hz), 5.20 (1H, m, CH).
【０１２２】
方法C−(S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステルの合成
【化３２】
0005405820.tif 000035
【０１２３】
第1段階：(S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステル トルエン-4-スルホン酸
【化３３】
0005405820.tif 000036
【０１２４】
シクロヘキサン(400ml)中の(S)-ロイシン (15g、0.11mol)の懸濁物中に、シクロペンタノール(103.78ml、1.14mmol)及びp-トルエンスルホン酸(23.93g、0.13mol)を加えた。懸濁物を還流まで加熱し、溶媒化させた。溶液を16時間還流した後に、冷却して白色の懸濁物を得た。ヘプタン(500ml)を混合物に加え、懸濁物をろ過して、生成物を白色固体として得た(35g、収率85%)。1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.01 (6H, t, CH3 x 2, J = 5.8Hz), 1.54-2.03 (11H, m, 11 x CH), 2.39 (3H, s, CH3), 3.96 (1H, t, CH, J = 6.5Hz), 5.26-5.36 (1H, m, CH), 7.25 (2H, d, ArH x 2, J = 7.9Hz), 7.72 (2H, d, ArH x 2, J = 8.3Hz).
【０１２５】
第2段階：(S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステルの合成
【化３４】
0005405820.tif 000037
【０１２６】
(S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステル トルエン-4-スルホン酸 (2.57g、0.013mol)のDCM溶液(5ml)を、飽和NaHCO3水溶液で洗浄した(2×3ml)。合わせた水相を、DCM (3×4ml)で逆抽出した。合わせた有機相を乾燥し(MgSO4)、溶媒を真空除去して、無色の油を得た(1.10g、収率80%)。1H NMR (300 MHz, CDCl3), δ: 0.90 (6H, t, CH3 x 2, J = 6.4Hz), 1.23-1.94 (11H, m, 5 x CH2, CH), 3.38 (1H, dd, CH, J = 8.4, 5.9Hz), 5.11-5.22 (1H, m, CH).
【０１２７】
方法D−(S)-2-アミノ-3-tert-ブチルスルファニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステルの合成
【化３５】
0005405820.tif 000038
【０１２８】
第1段階：(S)-3-tert-ブチルスルファニル-2-(9H-フルオレン-9-イルメトキシカルボニルアミノ)-プロピオン酸 シクロペンチルエステル
【化３６】
0005405820.tif 000039
【０１２９】
これは、(S)-2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-3-tert-ブトキシ-プロピオン酸 シクロペンチルエステル(方法A、第1段階)と同様の方法で、(S)-3-tert-ブチルスルファニル-2-(9H-フルオレン-9-イルメトキシカルボニルアミノ)-プロピオン酸から得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3), δ: 1.30 (9H, s, (CH3)3), 1.55-1.95 (8H, m, CH2 x 4), 3.05 (2H, d, CH2, J = 4.8Hz), 4.20-4.30 (1H, m, CH), 4.40 (2H, d, CH2, J = 7.5Hz), 4.65 (1H, m, CH), 5.25 (1H, m, CH), 5.70 (1H, d, NH, J = 7.8Hz), 7.30-7.50 (4H, m, ArH x 4), 7.65 (2H, d, J = 7.5Hz, ArH x 2), 7.80 (2H, d, J = 7.5Hz, ArH x 2).
【０１３０】
第2段階：(S)-2-アミノ-3-tert-ブチルスルファニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル
【化３７】
0005405820.tif 000040
【０１３１】
(S)-3-tert-ブチルスルファニル-2-(9H-フルオレン-9-イルメトキシカルボニルアミノ)-プロピオン酸 シクロペンチルエステル(1.63g、3.50mmol)を、CH3CN (25ml)に0℃にて溶解した。ピペリジン(21ml)を溶液に加えた。30分間撹拌した後に、溶媒を真空除去して、残渣を得た。カラムクロマトグラフィー(EtOAc溶出液)による精製により、生成物を無色の油として得た(628mg、収率73%)。1H NMR (300 MHz, CDCl3), δ: 1.30 (9H, s, (CH3)3), 1.55-1.95 (8H, m, CH2 x 4), 2.75 (1H, dd, CH, J = 7.2, 12.3Hz), 2.95 (1H, dd, CH, J = 4.8, 12.3Hz), 5.25 (1H, m, CH).
【０１３２】
以下のN-Cbz保護アミノ酸は、方法A (上記)に従って、シクロペンチルエステルに変換した。
(S)-2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-コハク酸 4-tert-ブチルエステル
(S)-2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-スクシンアミド酸
(S)-2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-4-カルバモイル-酪酸
(S)-2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-3-(4-tert-ブトキシ-フェニル)-プロピオン酸
(S)-2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-3-ヒドロキシ-酪酸
(S)-2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-3,3-ジメチル-酪酸
(S)-2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-3-(1H-インドール-2-イル)-プロピオン酸
(S)-2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-6-tert-ブトキシカルボニルアミノ-ヘキサン酸
【０１３３】
以下のN-Boc保護アミノ酸は、方法B (上記)に従って、シクロペンチルエステルに変換した。
tert-ブトキシカルボニルアミノ-酢酸
(S)-2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-3-メチル-ペンタン酸
(S)-ピロリジン-1,2-ジカルボン酸 1-tert-ブチルエステル
(S)-2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-3-メチル-酪酸
(S)-2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-4-メチルスルファニル-酪酸
【０１３４】
以下の遊離のアミノ酸は、方法C (上記)に従って、シクロペンチルエステルに変換した。
(S)-アミノ-フェニル-酢酸
(S)-2-アミノ-3-フェニル-プロピオン酸
(S)-2-アミノ-プロピオン酸
(S)-2-アミノ-4-メチル-ペンタン酸
【０１３５】
6-ホルミル-ベンゾ[b]チオフェン-2-カルボン酸 (1-イソブトキシ-エトキシ)アミドの製造
合成は、以下のスキーム7に概説する。
この経路の関連するさらなる参考文献は、Tetrahedron Letters, 35, 2, 219〜222及びWO 05/034880に見出すことができる。
【化３８】
0005405820.tif 000041
【０１３６】
第1段階: 4-(2-ジメチルアミノ-ビニル)-3-ニトロ安息香酸 メチルエステル
【化３９】
0005405820.tif 000042
【０１３７】
メチル 4-メチル-3-ニトロベンゾエート(5 g、25.6 mmol)を、DMF (25 mL、5 vol)に溶解し、ここに、N,N-ジメチルホルムアミド ジメチルアセタール(4.4 mL、33.3 mmol)を加えた。混合物を140℃にて3時間撹拌した。得られた深紅の溶液を冷却して、真空下で濃縮した。残渣をメタノールで粉砕してろ過した。混合物をメタノールで洗浄し、シンターで乾燥して、4-(2-ジメチルアミノ-ビニル)-3-ニトロ安息香酸 メチルエステル(5.2g、80%)を得た。1H NMR (300 MHz, DMSO), δ：2.98 (6H, s, 2 x CH3), 3.87 (3H, s, CH3), 5.58 (1H, m, CH), 7.72-7.83 (3H, m, ArH), 8.32 (1H, m, CH).
【０１３８】
第2段階：4-ホルミル-3-ニトロ安息香酸 メチルエステル
【化４０】
0005405820.tif 000043
【０１３９】
エナミン(5 g、20.0 mmol)のTHF (50 mL、10 vol)及び水(50 mL、10 vol)の溶液に、過ヨウ素酸ナトリウム(12.8g、60.0 mmol)を加え、混合物を2時間撹拌した。混合物をろ過し、得られた固体をEtOAc (500 mL)で洗浄した。有機相を単離し、NaHCO3で洗浄し(3×100 mL)、乾燥した(MgSO4)。真空下で濃縮することにより、4-ホルミル-3-ニトロ安息香酸 メチルエステルを得た(3.9g、93%)。LCMS m/z 210 [M++H]+,  1H NMR (300 MHz, DMSO), δ: 3.96 (3H, s, OMe), 8.01 (1H, d, ArH), 8.39 (1H, d, ArH), 8.54 (1H, s, ArH), 10.31 (1H, s, CHO). 
【０１４０】
第3段階：ベンゾ[b]チオフェン-2,6-ジカルボン酸 2-エチルエステル 6-メチルエステル
【化４１】
0005405820.tif 000044
【０１４１】
4-ホルミル-3-ニトロ安息香酸 メチルエステル (3.9 g、18.7 mmol)、メルカプト-酢酸 エチルエステル (2.2 mL、20.4 mmol)及びK2CO3 (3.3 g、24 mmol)のDMF (40 ml、10 vol)中の混合物を、50℃に一晩加熱した。r.t.に冷却した後に、混合物を氷冷却水(250 mL)に注ぎ、得られた混合物を40分間撹拌した。形成された固体をろ過により単離し、水で洗浄し(4×50 mL)、真空乾燥して、表題の化合物を得た(3.9 g、80%)。LCMS m/z 265 [M++H]+,  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 1.40 (3H, t J = 6.8 Hz, CH3), 3.95 (3H, s, OMe), 4.40 (2H, q J = 7.2 Hz, CH2), 7.88 (1H, d J = 8.0 Hz, ArH), 7.97 − 8.09 (2H, m. ArH), 8.56 (1H, s, ArH).
【０１４２】
第4段階：ベンゾ[b]チオフェン-2,6-ジカルボン酸 2-エチルエステル
【化４２】
0005405820.tif 000045
【０１４３】
ベンゾ[b]チオフェン-2,6-ジカルボン酸 2-エチルエステル 6-メチルエステル (3.9 g、14.77 mmol)及びヨウ化リチウム(10 g、74.6 mmol)の無水ピリジン(30 ml、9 vol)中の混合物を、還流にて16時間撹拌した。r.t.に冷却した後に、混合物を(溶融物として又は砕いたものとして)、氷冷2N HCl (200 mL)に加えた。形成された固体をろ過により単離し、水で洗浄した(3×50 mL)。生成物を、メタノールからの再結晶化により精製して、表題の化合物を得た(1.8 g、49%)。LCMS m/z 251 [M++H]+ ,1H NMR (300 MHz, DMSO), δ: 1.35 (3H, t J=6.9 Hz, CH3), 4.38 (2H, q J=7.1 Hz, CH2), 7.99 (1H, d J=8.3 Hz, ArH), 8.12 (1H, d J=8.3 Hz, ArH), 8.27 (1H, s, ArH), 8.70 (1H, s, ArH).
【０１４４】
第5段階：6-ヒドロキシメチル-ベンゾ[b]チオフェン-2-カルボン酸 エチルエステル
【化４３】
0005405820.tif 000046
【０１４５】
ベンゾ[b]チオフェン-2,6-ジカルボン酸 2-エチルエステル (1.6g、6.4 mmol)の無水THF (40 mL、25 vol)溶液を、0℃に冷却した。ここに、BH3 (THF中に1M、30 mL、30.0 mmol)をゆっくりと加えた。反応物を、r.t.まで温め、3時間撹拌した。溶液を、次いで、0℃に冷却し、1N HCl (7.5 mL)を用いてクエンチした。反応混合物を真空濃縮して、全てのTHFを除去し、得られた固体をろ過により単離して、真空乾燥して、6-ヒドロキシメチル-ベンゾ[b]チオフェン-2-カルボン酸 エチルエステル (1.3g、87%)を得た。LCMS m/z 237 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, DMSO), δ: 1.34 (3H, t J=6.9 Hz, CH3),  4.35 (2H, q J=7.1 Hz, CH2), 4.65 (2H, s, CH2), 6.53 (1H, br s, OH), 7.42 (1H, d J=9.4 Hz),  7.98 (3H, m, ArH), 8.18 (1H, s, ArH). 
【０１４６】
第6段階：6-ヒドロキシメチル-ベンゾ[b]チオフェン-2-カルボン酸
【化４４】
0005405820.tif 000047
【０１４７】
6-ヒドロキシメチル-ベンゾ[b]チオフェン-2-カルボン酸 エチルエステル (2.4 g、9.6 mmol、1 eq)を、THF (10 mL、4 vol)に溶解し、水(10 mL)をLiOH (0.69 g、28.8 mmol)とともに加えた。反応混合物を、50℃にて3時間撹拌し、次いで、濃縮乾燥して、精製せずに次の工程に用いた。
【０１４８】
第7段階：6-ヒドロキシメチル-ベンゾ[b]チオフェン-2-カルボン酸 (1-イソブトキシ-エトキシ)アミド
【化４５】
0005405820.tif 000048
【０１４９】
6-ヒドロキシメチル-ベンゾ[b]チオフェン-2-カルボン酸(1.76 g、8.4 mmol、1 eq)のDMF溶液に、PyBrOP (4.3 g, 9.2 mmol)、O-(イソブトキシ-エチル)-ヒドロキシルアミン(11.5 mL、84.0 mmol) (WO0160785の手順により調製)、及びDIPEA (2.9 mL、16.7 mmol)を加えた。反応混合物を、r.t.にて2時間撹拌し、水(40 mL)及びEtOAc (40 mL)で希釈した。有機相を単離し、塩水(50 mL)で洗浄し、濃縮した。残渣を、EtOAc/ヘプタン (1：1)で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、表題の化合物を得た(1.8g、2工程で67%)。LCMS m/z 322 [M+-H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 0.83 (6H, d J = 6.6Hz, 2 x CH3), 1.32 (3H, d J= 5.9 Hz, CH3), 1.75 (1H, m, CH), 3.38 (2H, m, CH2), 4.63 (2H, s, CH2), 4.95 (1H, m, CH), 7.32 (1H, d J = 8.2Hz, ArH), 7.77 (3H, m, ArH).
【０１５０】
第8段階：6-ホルミル-ベンゾ[b]チオフェン-2-カルボン酸 (1-イソブトキシ-エトキシ)アミド
【化４６】
0005405820.tif 000049
【０１５１】
6-ヒドロキシメチル-ベンゾ[b]チオフェン-2-カルボン酸 (1-イソブトキシ-エトキシ)アミド(600 mg、1.86 mmol)のDCM (3 mL)溶液に、MnO2 (2.1 g、24.1 mmol)を加えた。混合物を周囲温度にて30分間撹拌し、次いでセライトを通してろ過した。ろ過物を濃縮して、表題の化合物を得た(435 mg、82%)。LCMS m/z 320 [M+-H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 0.94 (6H, d J = 6.7 Hz, 2 x CH3), 1.45 (3H, d J = 5.3 Hz, CH3), 1.87 (1H, m, CH), 3.40 (2H, m, CH2), 5.08 (1H, dd J = 5.2, 10.6 Hz, CH),  7.89-8.09 (3H, m, ArH), 8.55 (1H, s, ArH), 10.11 (1H, s, CHO).
【０１５２】
化合物(1)及び化合物(2)で例示される図1の化合物の合成
【化４７】
0005405820.tif 000050
【０１５３】
構成要素(building blocks) A〜Gの製造
構成要素A及びB
【化４８】
0005405820.tif 000051
【０１５４】
MeOH (50ml)中のN-Boc-D-テトラヒドロ-ベータ-カルボリン-3-カルボン酸(5.0g、15.8mmol)及びTMSCl (20ml、158mmol)を、還流で2時間加熱した。反応混合物を蒸発乾燥して、(R)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-3-カルボン酸 メチルエステル(構成要素 A)を得た。LCMS純度 100%。m/z 231 [M++H]+, 461 [2M++H]+.  構成要素Aは、さらなる精製を行わずに用いた。
【０１５５】
(S)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-3-カルボン酸 メチルエステル(構成要素B)は、要素Aと同じ手順で、N-boc-L-テトラヒドロ-ベータ-カルボリン-3-カルボン酸を用いて得た。
【０１５６】
【化４９】
0005405820.tif 000052
【０１５７】
構成要素 C
【化５０】
0005405820.tif 000053
【０１５８】
第1段階：グリオキシル酸一水和物(1.51g、16.4mmol)の水溶液(10ml)を、撹拌しているトリプタミン.HCl (3.0g、15.3mmol)の水溶液(200ml)に滴下した。水(10ml)中のKOH (0.827g、14.7mmol)を加えた。反応混合物を室温にて1時間撹拌し、その後に沈殿が発生した。減圧ろ過の後に、テトラヒドロ-ベータ-カルボリン-1-カルボン酸を回収し、水で洗浄した。収率1.9g (58%); m/z 217 [M++H]+.
【０１５９】
第2段階：テトラヒドロ-ベータ-カルボリン-1-カルボン酸 (7.4g)のMeOH (250ml)溶液を、HClガスで20分間飽和させた。反応混合物を室温にて18時間穏やかに撹拌し、約80%の変換を観察した。反応混合物をHClガスで再び処理し、さらに18時間撹拌した。反応の完了時に、混合物を真空濃縮して、2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-1-カルボン酸 メチルエステル (構成要素C)を得た。LCMS純度 95%。m/z 231 [M++H]+.  生成物は、さらなる精製を行わずに用いた。
【０１６０】
構成要素D
【化５１】
0005405820.tif 000054
【０１６１】
6-メトキシ-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-1-カルボン酸 メチルエステル(構成要素D)は、構成要素Cについての手順を用いて、6-メトキシ-テトラヒドロ-ベータ-カルボリン-1-カルボン酸のエステル化により得た。構成要素D：LCMS純度98%, m/z 261 [M++H]+.  構成要素Dは、さらなる精製を行わずに用いた。
【０１６２】
構成要素E
【化５２】
0005405820.tif 000055
【０１６３】
4-ピペラジン-1-イル-ベンゾニトリル(1.5g、8.0mmol)のMeOH (150ml)溶液を、HClガスで飽和させた。水(0.17ml)を加え、混合物を還流下で18時間加熱した。反応混合物をr.t.に冷却し、HClガスで再飽和させた。これをさらに24時間還流させた。混合物を減圧濃縮して、4-ピペラジン-1-イル-安息香酸 メチルエステル(構成要素E)を得た。LCMS純度90%, m/z 221 [M++H]+.  構成要素Eは、さらなる精製を行わずに用いた。.
【０１６４】
構成要素F
【化５３】
0005405820.tif 000056
【０１６５】
1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-7-カルボン酸 メチルエステル(構成要素F)は、構成要素Eと同様の手順に従って製造した。LCMS純度89%. m/z 193 [M++H]+.  この生成物は、さらなる精製を行わずに用いた。
【０１６６】
構成要素G
【化５４】
0005405820.tif 000057
【０１６７】
4-アミノ-安息香酸 メチルエステル(構成要素G)は、市販で入手可能である。
【０１６８】
化合物(1)及び化合物(2)
【化５５】
0005405820.tif 000058
【０１６９】
第1段階：構成要素とのカップリング
【化５６】
0005405820.tif 000059
【０１７０】
スベリン酸で誘導体化したヒドロキシルアミン 2-クロロトリチル樹脂(4.6g、ローディング1.14mmol、5.24mmol)を、無水DCM (50ml)中で膨潤させた。構成要素A (4.76g、15.72mmol)を加え、続いてpyBOP (8.18g、15.72mmol、3eq)及びDIPEA (6.77g、52.4mmol、10eq)を加えた。反応物を18時間振とうし、ろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０１７１】
注：構成要素Gについて、上記の条件を用いるカップリングは、約10%の変換をもたらした。よって、代替の条件を用いた：第2段階の樹脂(1.0g、ローディング1.14mmol)を、無水DCM (100ml)中で膨潤させた。1-クロロ-N,N-2-トリメチルプロペニルアミン (Ghosez試薬)1 (7.53ml、57.0mmol、50eq)を0℃にてN2雰囲気下で加えた。混合物を室温まで温め、1〜2時間穏やかに振とうした。アニリン構成要素G (8.6g、57.0mmol、50 eq)を、20分かけて少しずつ加えた。Et3N (8.0ml、57.0mmol、50eq)を加えた。混合物を18時間振とうした。試験切断の後のLCMSは、70%変換を示した。m/z 323 [M++H]+, 645 [2M++H]+. 樹脂はろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０１７２】
第2段階：けん化
【化５７】
0005405820.tif 000060
第1段階の樹脂(4.8g、ローディング1.14mmol、5.47mmol)を、MeOH (17.5ml)及びTHF (17.5ml)に懸濁した。NaOH (1.1g、27.5 mmol、5eq)の水溶液(17.5ml)を加えた。混合物を、18時間振とうした。試験切断のLCMSにより、反応の完了を確認した。m/z 388 [M++H]+, 775 [2M++H]+。樹脂をろ過し、水×2、MeOH×2、次いで標準洗浄手順により洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
注：構成要素Eについて、けん化は、10eq.の2.7M NaOHを用いて行い、72時間振とうした。
【０１７３】
第3段階：L-フェニルグリシン シクロペンチルエステルとのカップリング
【化５８】
0005405820.tif 000061
【０１７４】
第2段階の樹脂(2.4g、ローディング1.14mmol、2.7mmol)を、無水DCM (30ml)に懸濁した。L-フェニルグリシン シクロペンチルエステル トシル塩(3.2g、8.1mmol、3eq)、その後、pyBOP (4.2g、8.1mmol、3eq)及びDIPEA (3.5g、27.0mmol、10eq)を加えた。混合物を18時間振とうした。試験切断(すなわち、少量の樹脂を標準洗浄手順を用いて洗浄し、乾燥し、2% TFA/DCM中で切断した。樹脂をろ過し、ろ過物を濃縮乾燥した。LCMSを得た)のLCMSにより、反応の完了を確認した。m/z 589 [M++H]+. 樹脂のサンプル全体をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
注：
化合物5〜8について、L-フェニルアラニン エチルエステル(3eq)を用いた。
化合物19について、L-フェニルグリシン t-ブチルエステル(3eq)を用いた。
【０１７５】
第4段階：(S)-[[(R)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-3-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル(1)
【化５９】
0005405820.tif 000062
【０１７６】
第3段階の樹脂(1.0g、ローディング1.14mmol)を、2% TFA/DCM (10ml)中で20分間、穏やかに振とうした。樹脂をろ過した。ろ過物を回収し、室温にて減圧下で蒸発させた。樹脂を2% TFA/DCM (10ml)で20分後、再び処理した。合わせたろ過物をr.tにて減圧下で蒸発乾燥させ、残渣(約300mg)を、分取HPLCにより精製して、化合物(1)を得た。m/z 589 [M++H]+; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 1.3-1.7(16 H, m, CH2), 2.1-2.3 (2 H, m, CH2), 2.5 (2 H, m, CH2), 3.0-3.5 (2 H, m, CH2), 4.5-4.8 (2 H, m, CH2), 5.1 (1 H, m, CO2CH), 5.2 (1 H, dd, CH2CHNCO), 5.5-5.9 (1 H, d, CONHCHPh), 7.0-7.5 (9 H, m, Ar).
対応するカルボン酸は、次の手順により得た。
【０１７７】
第5段階：けん化
【化６０】
0005405820.tif 000063
【０１７８】
第3段階の樹脂(1.0g、ローディング1.14mmol)を、MeOH (4ml)及びTHF (4ml)中に懸濁した。NaOH (0.23g、5.7mmol)の水溶液(4ml)を加えた。混合物を18時間振とうした。試験切断のLCMSにより、反応の完了を確認した。m/z 521 [M++H]+. 樹脂をろ過し、水×2、MeOH×2、次いで標準洗浄手順により洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０１７９】
第6段階：(S)-[[(R)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-3-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 (2)
【化６１】
0005405820.tif 000064
【０１８０】
第5段階の樹脂(1.0g、ローディング1.14mmol)を、化合物(2)を得た第6段階で概説した手順を用いて切断した。m/z 521 [M++H]+; 1H NMR (400 MHz, CD3OD), δ: 1.3-1.5 (4 H, 2 x CH2), 1.6-1.8 (4 H, 2 x CH2), 2.1-2.2 (2 H, m, CH2), 2.4-2.7 (2 H, m, CH2), 3.0-3.2 (1 H, m), 3.5 (1H, m), 4.55 (m), 4.9 (m), 5.1- 5.35 (2 H, m), (2 H, m, CH2NCO), 5.75-5.8 (1 H, 2 x d, NHCHPh), 7.0-7.5 (9 H, m, Ar), 7.6 (d), 7.7 (d), 8.35 (d), 8.95 (s), 9.05 (s).
【０１８１】
次の化合物は、化合物(1)及び化合物(2)について記載した手順に従って製造した。
(S)-[[(S)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-3-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (3)
構成要素Bを用いた
LCMS純度98%, m/z 589 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.20-1.40 (8 H, m, 4 x CH2), 1.40-1.80 (8 H, m, 4 x CH2), 2.10 (2 H, m, CH2), 3.45 (2 H, m, CH2), 5.0 (2 H, m, CH2 D2Oピークと重複), 5.25-5.45 (2 H, m, 2 x CH), 5.50 (1 H, s, CONHCHPh), 7.00-7.50 (9 H, m, Ar).
【０１８２】
(S)-[[(S)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-3-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 (4)
構成要素Bを用いた
LCMS純度100%, m/z 521 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ 1.30-1.50 (4 H, m, 2 x CH2), 1.55-1.80 (4 H, m, 2 x CH2), 2.15 (2 H, m, CH2), 2.60 (2 H, m, CH2), 3.00 -3.25 (2 H, m, CH2), 3.40-3.55 (2 H, m, CH2), 5.20-5.30 (1 H, m, CHCON), 5.35 (1 H, s, NHCHPh), 7.05-7.50 (9 H, m, Ar).
【０１８３】
(S)-2-[[(R)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-3-カルボニル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 エチルエステル (5)
構成要素Aを用いた
LCMS純度100% m/z 563 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ 1.00 (3 H, t, CH3), 1.20-1.24 (4 H, m, 2 x CH2), 1.50-1.70 (4 H, m, 2 x CH2), 2.00 (2 H, m, CH2), 2.30-2.50 (2 H, m, CH2), 2.80-3.00 (2 H, m, CH2), 4.05 (2 H, q, CO2CH2), 4.35-4.50 (1 H, m, CH), 4.80-5.05 (2 H, m, CH2), 5.40 (1 H, s, NHPhCO), 6.80-7.30 (9 H, m, Ar).
【０１８４】
(S)-2-[[(R)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-3-カルボニル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 (6)
構成要素Aを用いた
LCMS純度100%, m/z 534 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ 1.30-1.50 (4 H, m, 2 x CH2), 1.60-1.80 (4 H, m, 2 x CH2), 2.15 (2 H, m, CH2), 2.50 (2 H, m, CH2), 3.00 (2 H, m, CH2), 3.20 (2 H, m, CH2), 4.30-4.80 (2 H, m, CH2), 5.15 (1 H, m, CH), 6.90-7.50 (9 H, m, Ar).
【０１８５】
(S)-2-[[(S)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-3-カルボニル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 エチルエステル (7)
構成要素Bを用いた
LCMS純度100%, m/z 563 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ 1.00 (3 H, t, CH3), 1.30-1.50 (4 H, m, 2 x CH2), 1.60-1.70 (4 H, m, 2 x CH2), 2.10 (2 H, m, CH2), 2.30-2.65 (2 H, m, CH2), 2.95-3.20 (2 H, m, CH2), 3.45 (1 H, m, CH), 4.05 (2 H, q, CO2CH2), 4.35-4.50 (1 H, m, CH), 4.80-5.05 (2 H, m, CH2), 5.50 (1 H, s, NHPhCO), 6.90-7.50 (9 H, m, Ar).
【０１８６】
(S)-2-[[(S)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-3-カルボニル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 (8)
構成要素Bを用いた
LCMS純度100%, m/z 534 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ 1.30-1.50 (4 H, m, 2 x CH2), 1.60-1.80 (4 H, m, 2 x CH2), 2.15 (2 H, m, CH2), 2.50 (2 H, m, CH2), 2.95- 3.15 (2 H, m, CH2), 3.20-3.50 (2 H, m, CH2), 4.30-4.50 (2 H, m, 2 x CH), 4.80-5.20 (2 H, m, CH2), 6.90-7.50 (9 H, m, Ar).
【０１８７】
(S)-[[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-1-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (9)
構成要素Cを用いた
LCMS純度100%, m/z 589 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, CDCl3), δ 1.30-1.80 (16 H, m, 8 x CH2), 2.15 (2 H, m, CH2), 2.45-2.70 (2 H, m, CH2), 2.95 (2 H, m, CH2), 3.55 (1 H, m, CH), 4.35 (1 H, m, CH), 5.15 (1 H, m, CO2CH),  5.45 (1 H, m, CH), 6.20 (1 H, d, PhCHNH)  7.00-7.80 (9 H, m, Ar), 8.80-9.20 (1 H, ブロードm, CHNHOH).
【０１８８】
(S)-[[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-1-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 (10)
構成要素Cを用いた
LCMS純度100%, m/z 521 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ 1.30-1.50 (4 H, m, 2 x CH2), 1.60-1.80 ( 4 H, m, 2 x CH2), 2.15 (2 H, m, CH2), 2.50-2.65 (2 H, m, CH2), 2.95 (2 H, m, CH2), 3.70 (1 H, dd, CH), 4.30 (1 H, dd, CH),  5.50 (1 H, m, CH), 6.10及び6.20 (各0.5 H, s, PhCHNH)  7.00-7.50 (9 H, m, Ar).
【０１８９】
(S)-[[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-6-メトキシ-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-1-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (11) 
構成要素Dを用いた
LCMS純度100%, m/z 619 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, CDCl3), δ 1.30-1.80 (16 H, m, 8 x CH2), 2.15 (2 H, m, CH2), 2.50-2.65 (2 H, m, CH2), 2.85 (2 H, m, CH2), 3.70 (1 H, dd, CH), 3.80 (3 H, s, OMe), 4.30 (1 H, dd, CH),  5.20 (1 H, m, CO2CH), 5.30-5.50 (1 H, m, CH), 6.15-6.20 (1 H, d, PhCHNH) 6.80-7.80 (8 H, m, Ar), 8.80-9.00 (1 H, m, CONHOH). 
【０１９０】
(S)-[[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-6-メトキシ-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-1-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 (12)
構成要素Dを用いた
LCMS純度100%, m/z 551 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ 1.30-1.60 (8 H, m, 4 x CH2), 2.05 (2 H, m, CH2), 2.50-2.65 (2 H, m, CH2), 2.80 (2 H, m, CH2), 3.55 (1 H, dd, CH), 3.70 (3 H, s, OMe), 4.30 (1 H, dd, CH), 5.30-5.50 (1 H, m, CH), 5.90-6.10 (各0.5 H, s, PhCHNH), 6.65 (1 H, m, Ar), 6.80 (1 H, m, Ar), 7.10 (1 H, m, Ar), 7.35 (5 H, m, Ar).
【０１９１】
(S)-[[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-6-メトキシ-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-1-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (13) 
構成要素Eを用いた
LCMS純度95%, m/z 579 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, CDCl3), δ 1.40-1.90 (16 H, m, 8 x CH2), 2.15 (2 H, m, CH2), 2.45 (2 H, m, CH2), 3.40 (4 H, m, 2 x CH2N), 3.60-3.80 (4 H, m, 2 x CH2N), 5.30 (1 H, m, CO2CH), 5.70 (1 H, d, PhCHNH), 6.90 (2 H, d, Ar), 7.30-7.50 (6 H, m, Ar), 7.80 (2 H, d, Ar).
【０１９２】
(S)-[[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-6-メトキシ-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-1-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 (14) 
構成要素Eを用いた
LCMS純度100%, m/z 511 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ 1.30 (4 H, m, 2 x CH2), 1.50 (4 H, m, 2 x CH2), 2.00 (2 H, t, CH2), 2.35 (2 H, t, CH2), 3.30 (4 H, m, 2 x CH2N), 3.70 (4 H, m, 2 x CH2N), 5.55 (1 H, s, PhCHNH), 6.90 (2 H, d, Ar), 7.30 (3 H, m, Ar), 7.40 (2 H, m, Ar), 7.70 (2 H, d, Ar).
【０１９３】
(S)-[[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-7-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチル エステル (15)
構成要素Fを用いた
LCMS純度100%, m/z 550 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, CDCl3), δ 1.30-1.80 (16 H, m, 8 x CH2), 2.15 (2 H, m, CH2), 2.45 (2 H, m, CH2), 2.95 (2 H, m, 2 x CH2), 3.70-3.90 (2 H, m, 2 x CH2), 4.60-4.70 (2 H, m, CH2), 5.25 (1 H, m, CO2CH), 5.70 (1 H, m, PhCHNH), 7.20-7.70 (8 H, m, Ar).
【０１９４】
(S)-[[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-7-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 (16)
構成要素Fを用いた
LCMS純度87%, m/z 482 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ 1.30-1.50 (4 H, m, 2 x CH2), 1.60-1.70 (4 H, m, 2 x CH2), 2.15 (2 H, m, CH2), 2.50 (2 H, m, CH2), 2.95 (2 H, m, 2 x CH2), 3.70 (2 H, m, CH2), 4.80 (2 H, m, CH2), 5.70 (1 H, s, PhCHNH), 7.20-7.80 (8 H, m, Ar).
【０１９５】
(S)-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンゾイルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル(17)
構成要素Gを用いた
LCMS純度94%, m/z 510 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ 1.30-1.80 (16 H, m, 8 x CH2), 2.00-2.20 (4 H, m, 2 x CH2), 5.10-5.30 (1 H, m, CO2CH), 5.70 (1 H, m, PhCHNH), 7.30-7.80 (9 H, m, Ar).
【０１９６】
(S)-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンゾイルアミノ]-フェニル-酢酸 (18)
構成要素Gを用いた
LCMS純度100%, m/z 442 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ 1.30-1.40 (4 H, m, 2 x CH2), 1.50-1.70 (4 H, m, 2 x CH2), 2.20 (2 H, t, CH2), 2.35 (2 H, t, CH2), 5.70 (1 H, s,  PhCHNH), 7.25-7.40 (3 H, m, Ar), 7.50 (2 H, d, Ar), 7.65 (2 H, d, Ar), 7.80 (2 H, d, Ar). 
【０１９７】
(S)-[[(R)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-3-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 tert-ブチルエステル (19)
構成要素Aを用いた
LCMS純度100%, m/z 577 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, CDCl3), δ 1.20-1.40 (17 H, m, 4 x CH2及びC(CH3)3), 2.10 (2 H, m, CH2), 2.45 (2 H, m, CH2), 3.15-3.60 (2 H, m, CH2), 4.75 (2 H, m, CH2), 5.35 (2 H, m, PhCHNH及びCH), 6.90-7.50 (9 H, m, Ar).
【０１９８】
化合物(20)及び化合物(21)の合成
【化６２】
0005405820.tif 000065
【０１９９】
第1段階：(S)-(4-ニトロ-ベンジルアミノ)-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化６３】
0005405820.tif 000066
【０２００】
臭化4-ニトロベンジル(15g、69.4mmol)、L-フェニルグリシンシクロペンチルエステルトシル塩(27.1g、60.4mmol)、及び炭酸カリウム(19.6g、138.8mmol)のDMF (250ml)中の混合物を、室温にて18時間撹拌した。反応混合物を、EtOAc (300ml)で希釈し、水(3×200ml)で洗浄した。EtOAc層を単離し、乾燥し(Na2SO4)、ろ過し、濃縮乾燥して、オレンジ色の油を得た。21gの重量の粗物質を単離した。LCMS純度81%, m/z 355 [M++H]+. この物質は、さらなる精製を行わずに用いた。
【０２０１】
第2段階: (S)-[tert-ブトキシカルボニル-(4-ニトロ-ベンジル)-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化６４】
0005405820.tif 000067
【０２０２】
第1段階の生成物(15g、42.37mmol)のTHF (150ml)溶液に、K2CO3 (6.9g、50.8mmol)、次いでジ-t-ブチルジカーボネート(22.2g、101.7mmol)を加えた。水(150ml)を加え、反応物を室温にて36時間撹拌した。反応混合物を蒸発乾燥した。残渣をEtOAc (300ml)に再溶解し、0.1 M HCl (150ml)、飽和NaHCO3水溶液及び水(150 ml)で連続的に洗浄した。EtOAc層を乾燥させ(Na2SO4)、ろ過し、濃縮乾燥させて黄色の油を得た。カラムクロマトグラフィー(10% EtOAc/ヘキサン)による精製の後に、生成物を澄んだ黄色の油として得た(12g、収率62%)。LCMS純度95%, m/z 455 [M++H]+, 496 [M++H+41]+.   
【０２０３】
第3段階：(S)-[(4-アミノ-ベンジル)-tert-ブトキシカルボニル-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化６５】
0005405820.tif 000068
【０２０４】
第2段階の生成物(12g, 26.4mmol)、及び10% Pd/C (2.0g)のEtOAc (350ml)中の混合物を、室温にて18時間水素化した。Pd/C触媒を、セライトパッドを通してろ去した。ろ過物を減圧下に濃縮して、白色固体を得た(10.1g、収率90%)。LCMS純度100%, m/z 425 [M++H]+, 466 [M++H+41]+. 
【０２０５】
第4段階：第3段階のアニリンのカップリング
【化６６】
0005405820.tif 000069
【０２０６】
スベリン酸で誘導体化したヒドロキシルアミン2-クロロトリチル樹脂(1.0g、ローディング0.94mmol)を、無水DCM (100ml)中で膨潤させた。1-クロロ-N,N-2-トリメチルプロペニルアミン(Ghosez試薬)1 (0.373ml、2.82mmol、3eq)を、0℃にてN2雰囲気下で加えた。混合物を室温まで温め、1〜2時間穏やかに振とうした。第3段階のアニリン(1.2g、2.82mmol、3eq)を20分かけて少しずつ加えた。Et3N (0.53ml、3.76mmol、4eq)を加えた。混合物を1時間振とうした。試験切断の後のLCMSは、70%の変換を示した。m/z 596 [M++H]+. 樹脂をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０２０７】
第5段階：(S)-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (20)
【化６７】
0005405820.tif 000070
【０２０８】
第4段階の樹脂(1.5g、ローディング0.94mmol)を、2% TFA/DCM (10ml)中で20分間穏やかに振とうした。樹脂をろ過した。ろ過物を回収し、減圧下で室温にて蒸発させた。樹脂を2% TFA/DCM (10ml)で再処理し、20分後にろ過した。合わせたろ過物を減圧下でr.t.にて蒸発乾燥させて、残渣を得た。残渣を20% TFA/DCM中に40分間放置した。減圧下でr.t.にて蒸発乾燥させた後に、残渣を分取HPLCで精製して、化合物(20)をTFA塩として得た。LCMS純度95%, m/z 496 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, DMSO), δ: 1.30-1.50 (6 H, m, 3 x CH2), 1.50-1.70 (8 H, m, 4 x CH2), 1.80 (2 H, m, CH2), 2.10 (2 H, t, CH2), 2.45 (2 H, t, CH2), 4.1 (2 H, dd, CH2NH), 5.25 (1 H, m, CHOCO), 5.35 (1 H, m, OCOCHPh), 7.45 (2 H, d, Ar), 7.60 (5 H, m, Ar), 7.80 (2 H, d, Ar), 10.00-10.10 (2 H, br s), 10.50 (1 H, s).
【０２０９】
第6段階：シクロペンチルエステルのけん化
【化６８】
0005405820.tif 000071
【０２１０】
第4段階の樹脂(2.5g、ローディング0.94mmol、2.35mmol)を、MeOH (8.7ml)及びTHF (8.7ml)中に懸濁した。2.7 N NaOHの水溶液(8.8ml、10eq、23.5mmol)を加えた。混合物を36時間振とうした。試験切断のLCMSにより、反応の完了を確認した。 m/z 528 [M++H]+. 樹脂をろ過し、水×2、MeOH×2、次いで標準洗浄手順により洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０２１１】
第7段階：(S)-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 (21)
【化６９】
0005405820.tif 000072
【０２１２】
第6段階の樹脂(2.5g、ローディング0.94mmol、2.35mmol)を切断し、第5段階で概説した手順を用いてbocを脱保護した。粗生成物(0.40g)を、分取HPLCにより精製して、化合物(21)をTFA塩として得た。LCMS純度100%, m/z 428 [M++H], 1H NMR (400 MHz, CD3OD), δ: 1.30 (4 H, 2 x CH2), 1.55 (4 H, 2 x CH2), 2.00 (2 H, t, CH2), 2.30 (2 H, t, CH2), 3.90 (1 H, s, NHCH2), 4.05 (2 H, dd, NHCH2), 4.95 (1 H, s, CHPh), 7.35 (2 H, d, Ar), 7.40 (5 H, m, Ar), 7.55 (2 H, d, Ar).
【０２１３】
化合物(22)及び化合物(23)の合成
【化７０】
0005405820.tif 000073
【０２１４】
第1段階：(S)-(4-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-フェニル-酢酸
【化７１】
0005405820.tif 000074
【０２１５】
L-フェニルグリシン(0.227g、1.5mmol)の水(5 ml)及びジオキサン(5ml)の溶液に、トリエチルアミン(0.42ml、3.0mmol)を加え、次いで、ジオキサン(5ml)中の4-ニトロベンゼンスルホニルクロリド(0.5g、2.3mmol)を0℃にてゆっくり加えた。45分間の撹拌の後に、反応混合物を蒸発乾燥させ、EtOAc中に再溶解し、飽和NaHCO3溶液(2×20ml)及び水(10ml)で洗浄した。EtOAc層をNa2SO4で乾燥し、ろ過し、蒸発乾燥させた。LCMS純度75% (分子イオンは観察されなかった) 収率0.58g (76%)。この物質は、いずれの精製を行わずに用いた。
【０２１６】
第2段階：(S)-(4-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化７２】
0005405820.tif 000075
【０２１７】
第1段階の酸(4.32g、12.8mmol)のシクロペンタノール(60ml)溶液に、0℃にて、塩化チオニル(9.3ml、128mmol)をゆっくり加えた。反応混合物を撹拌し、還流下で70℃にて2時間加熱した。過剰の塩化チオニルを、真空蒸発により除去し、反応混合物をEtOAc中に抽出し、飽和NaHCO3溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過し、蒸発乾燥させた。DCMを用いるフラッシュカラムクロマトグラフィー精製により、所望の生成物を得た(3.6g、収率70%)。LCMS純度 100% (分子イオンは観察されなかった)。
【０２１８】
第3段階：(S)-(4-アミノ-ベンゼンスルホニルアミノ)-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化７３】
0005405820.tif 000076
【０２１９】
(S)-(4-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル(5.29g、13.1mmol)、及び10% Pd/C (5.0g)のEtOAc (350ml)中の混合物を、バルーン圧力下で室温にて24時間水素化した。Pd/C触媒を、セライトパッドを通してろ去した。ろ過物を減圧下で濃縮して、所望の生成物を得た(4.54g、収率92%)。LCMS純度100%, m/z 375 [M++H]+.
【０２２０】
第4段階：アニリンのカップリング
【化７４】
0005405820.tif 000077
【０２２１】
スベリン酸で誘導体化したヒドロキシルアミン2-クロロトリチル樹脂(0.39g、ローディング1.14mmol/g)を、無水DCM (25ml)中で膨潤させ、0℃にてN2雰囲気下に、1-クロロ-N,N, 2-トリメチルプロペニルアミン(0.175ml、1.33mmol)を滴下した。反応混合物を1.5時間振とうした。第3段階のアニリン(0.5g、1.33mmol)のDCM (25ml)溶液、次いでトリエチルアミン(0.25ml、1.76mmol)を加えた。反応混合物をさらに10分間振とうした。試験切断の後のLCMSは、61%の変換を示した。m/z 546 [M++H]+. 樹脂をろ過し、標準洗浄手順により洗浄した。樹脂を真空乾燥し、次の工程で用いた。
【０２２２】
第5段階：(S)-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンゼンスルホニルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (22)
【化７５】
0005405820.tif 000078
【０２２３】
第4段階の樹脂(1.12g、ローディング1.14mmol/g)を、2% TFA/DCM (10ml)中で20分間穏やかに振とうした。樹脂をろ過した。ろ過物を回収し、減圧下で室温にて蒸発させた。樹脂を2% TFA/DCM (10ml)で再処理し、20分後にろ過した。合わせたろ過物を減圧下で室温にて蒸発乾燥させて、残渣を得た。残渣を分取HPLCにより精製して、化合物(22)を得た。LCMS純度93%, m/z 546 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, DMSO), δ: 1.20-1.68 (16 H, m, 8 x CH2), 1.93 (2 H, t, CH2), 2.33 (2H, t, CH2), 4.80 (1 H, m, CHOCO), 4.81 (1 H, d, OCOCHPh), 7.27 (5 H, m, Ar), 7.65 (2 H, d, Ar), 7.71 (2 H, d, Ar), 8.67 (1 H, br s), 8.75 (1 H, d), 10.24 (1 H, s), 10.34 (1 H, s).
【０２２４】
第6段階：シクロペンチルエステルのけん化
【化７６】
0005405820.tif 000079
【０２２５】
第4段階の樹脂(1.2g、ローディング1.14mmol/g)を、THF (8ml)及びメタノール(8ml)中に懸濁し、2.7M 水酸化ナトリウム(5.1ml、13.68mmol)を加えた。混合物を48時間振とうした。試験切断のLCMSにより反応の完了を確認した。m/z 478 [M++H]+. 樹脂をろ過し、水×2、MeOH×2、次いで標準洗浄手順により洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０２２６】
第7段階：(S)-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンゼンスルホニルアミノ]-フェニル-酢酸 (23)
【化７７】
0005405820.tif 000080
【０２２７】
第6段階の樹脂(1.2g、ローディング1.14mmol/g)を、2% TFA/DCM (10ml)中で20分間穏やかに振とうした。樹脂をろ過した。ろ過物を回収し、減圧下で室温にて蒸発させた。樹脂を2% TFA/DCM (10ml)で再処理し、20分後にろ過した。合わせたろ過物を減圧下で室温にて蒸発乾燥させて、残渣を得た。残渣を分取HPLCにより精製して、化合物(23)を得た。LCMS純度91%, m/z 478 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.44 (4 H, m, 2 x CH2), 1.62-1.74 (4 H, m, 2 x CH2), 2.12 (2 H, t, CH2), 2.34 (1 H, m, OCOCHPh), 2.41 (2 H, t, CH2), 7.25 (5 H, m, Ar), 7.69 (2 H, d, Ar), 7.72 (2 H, d, Ar).
【０２２８】
化合物(24)及び化合物(25)の合成
【化７８】
0005405820.tif 000081
【０２２９】
第1段階：(2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-6-イルオキシ)-酢酸 メチルエステル
【化７９】
0005405820.tif 000082
【０２３０】
5-カルボキシメトキシトリプタミン(1.24g、4.56mmol)、36%ホルムアルデヒド水溶液及びMeOH (25ml)の混合物を、還流下で1.5時間加熱した。反応混合物を蒸発乾燥させた。MeOH (50ml)及びTMSCl (1.24ml)を連続して加えた。還流を1時間継続した。反応混合物を蒸発乾燥させ、精製せずに次の段階で用いた。
【０２３１】
第2段階：アミド化
【化８０】
0005405820.tif 000083
【０２３２】
スベリン酸で誘導体化したヒドロキシルアミン2-クロロトリチル樹脂(2.0g、ローディング1.14mmol/g, 2.28mmol)を、DCM (40ml)中に懸濁した。pyBOP (3.56g)、続いて第1段階のアミン(4.56mmol)のDCM(40ml)溶液及びDIPEA (3.9ml、22.8mmol)を加えた。反応物を、室温にて18時間振とうした。試験切断の後のLCMSにより、反応の完了を確認した。樹脂をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄して、充分に乾燥させた。
【０２３３】
第3段階：メチルエステルのけん化
【化８１】
0005405820.tif 000084
【０２３４】
第2段階の樹脂(2.0g、1.14 mmol/g、2.28 mmol)を、THF (10ml)及びMeOH (10ml)の混液中に懸濁した。1.4M NaOH (10ml)を5分かけて加えた。混合物を18時間振とうした。試験切断の後のLCMSにより、反応の完了を確認した。樹脂をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄した。
【０２３５】
第4段階：L-フェニルグリシン シクロペンチルエステルとのカップリング
【化８２】
0005405820.tif 000085
【０２３６】
第3段階の樹脂(2.0g、ローディング1.14mmol/g、2.28mmol)を、DCM (30ml)中に懸濁した。pyBOP (3.56g、6.84mmol)、次いでL-フェニルグリシン シクロペンチルエステル(2.59g、6.84mmol)及びDIPEA (3.9ml、22.8mmol)を加えた。混合物を18時間振とうした。試験切断の後のLCMSにより、反応の完了を確認した。樹脂をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄し、真空乾燥させた。
【０２３７】
第5段階：(S)-[2-[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-6-イルオキシ]-アセチルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (24)
【化８３】
0005405820.tif 000086
【０２３８】
第4段階の樹脂(0.8g、ローディング1.14mmol/g、0.91mmol)を、2% TFA/DCMを用いて切断した(3×10ml)。ろ過物を減圧下で室温にて蒸発乾燥させて、油状の残渣(200mg)を得て、これを分取HPLCにより精製して、化合物(24)をTFA塩として得た。LCMS純度95%, m/z 619 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, DMSO), δ: 1.05-1.66 (16 H, m, 8 x CH2), 1.79 (2 H, m, CH2), 2.16-2.31 (2 H, m, 2.41-2.56 (2 H, m, CH2), 3.60 (2 H, m, CH2), 4.42 (2 H, s, CH2), 4.49 (2 H, s, CH2), 4.93 (1 H, m, CHOCO), 5.28 (1 H, m, OCOCHPh), 6.59 (1 H, d, Ar), 6.65 (1 H, s, Ar), 7.04 (1 H, d, Ar), 7.21 (5 H, m, Ar), 8.57 (1 H, m), 10.17 (1 H, s), 10.58 (1 H, s, Ar).
【０２３９】
第6段階：シクロペンチルエステルのけん化
【化８４】
0005405820.tif 000087
【０２４０】
第4段階の樹脂(1.0g、ローディング1.14mmol/g、1.14mmol)を、第3段階に記載される手順に従ってけん化した。
【０２４１】
第7段階：(S)-[2-[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-6-イルオキシ]-アセチルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (25)
【化８５】
0005405820.tif 000088
【０２４２】
第6段階の樹脂(1.0g、ローディング1.14mmol/g、1.14mmol)を、第5段階で説明した手順を用いて切断して精製した。化合物(25): LCMS純度97%, m/z 551 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.33-1.49 (4 H, m, 2 x CH2), 1.58-1.75 (4 H, m, 2 x CH2), 2.06-2.17 (2 H, m, CH2), 2.51-2.60 (2 H, m, CH2), 2.70-2.83 (2 H, m, CH2), 3.85-3.96 (2 H, m, CH2), 4.61 (2 H, m, CH2), 4.78 (2 H, m, CH2), 5.56 (1 H, s, OCOCHPh), 6.89 (1 H, m, Ar), 7.00 (1 H, s, Ar), 7.26 (1 H, m, Ar), 7.35 (5 H, m, Ar).
【０２４３】
化合物(26)及び化合物(27)により例示される図2に示す化合物の合成
【化８６】
0005405820.tif 000089
【０２４４】
化合物(26)及び化合物(27)の合成
【化８７】
0005405820.tif 000090
【０２４５】
第1段階：(S)-2-(3-ニトロ-ベンジルアミノ)-3-フェニル-プロピオン酸 エチルエステル
【化８８】
0005405820.tif 000091
【０２４６】
臭化3-ニトロベンジル(10.0g、46mmol)をDMF (180ml)に溶解し、炭酸カリウム(12.7g、92mmol)、次いでL-フェニルアラニン エチルエステル塩酸塩(10.6g、46mmol)を加えた。反応物を室温にて17時間撹拌し、その後、蒸発乾燥させた。残渣をEtOAc (150ml)に再溶解し、水(3×80ml)で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、ろ過して濃縮乾燥させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー(30% EtOAc/ヘキサン)による精製の後に、生成物を得た(3.7g、収率24%)。LCMS純度86%, m/z 329 [M++H]+.
【０２４７】
第2段階：(S)-2-[tert-ブトキシカルボニル-(3-ニトロ-ベンジル)-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 エチルエステル
【化８９】
0005405820.tif 000092
【０２４８】
第1段階のアミン(13.4g、40.9mmol)をTHF (250ml)に溶解し、その後、炭酸カリウム(8.46g、61.4mmol)及び水(150ml)を加えた。ジ-tブチル-ジカーボネート(35.6. 163mmol)を加え、反応混合物を50℃まで18時間加熱した。DCMを加え、得られた混合物を0.1 M HCl (150ml)、飽和NaHCO3水溶液及び水(150 ml)で連続的に洗浄した。DCM層を乾燥し(Na2SO4)、ろ過し、濃縮乾燥させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー(5% EtOAc/ヘキサン)による精製の後に、生成物を単離した(9.4g、収率54%)。LCMS純度95%, m/z 428 [M++H]+.
【０２４９】
第3段階：(S)-2-[(3-アミノ-ベンジル)-tert-ブトキシカルボニル-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸エチルエステル
【化９０】
0005405820.tif 000093
【０２５０】
第2段階のカルバメート(4.92g、11.5mmol)をEtOAc (150ml)に溶解し、その後、Pd/C (10%湿潤)触媒(0.8g)を加え、バルーン圧力で室温にて18時間水素化した。反応混合物をセライトのパッドを通してろ過し、蒸発乾燥させて赤い固体を得た(4.0g、収率89%)。LCMS純度100%, m/z 399 [M++H]+.
【０２５１】
第4段階：樹脂へのカップリング
【化９１】
0005405820.tif 000094
【０２５２】
スベリン酸で誘導体化したヒドロキシルアミン2-クロロトリチル樹脂(1.0 g、ローディング0.83mmol/g)をDMF (15ml)中で膨潤させ、PyBOP (1.36g、2.61mmol)、次いでDIPEA (1.5ml、8.7mmol)を加えた。第3段階のアニリン(1.04g、2.61mmol)をDCM (15ml)中に溶解し、反応混合物に加えた。反応物を室温にて24時間振とうした。試験切断の後のLCMSは、86%の変換を示した。m/z 570 [M++H]+. 樹脂をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥させた。
【０２５３】
第5段階：(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 エチルエステル (26)
【化９２】
0005405820.tif 000095
【０２５４】
第4段階の樹脂(1.3g、ローディング0.83mmol)を、2% TFA/DCM (10ml)中で20分間穏やかに振とうした。樹脂をろ過した。ろ過物を減圧下で室温にて蒸発させた。樹脂を2% TFA/DCM (10ml)で再処理し、20分後にろ過した。合わせたろ過物を減圧下で室温にて蒸発乾燥させて、油状の残渣を得た。残渣を20% TFA/DCM中に40分放置した。減圧下で室温にて蒸発乾燥させた後に、粗生成物を分取HPLCにより精製して、化合物(26)を得た。LCMS純度100%, m/z 470 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.08 (3 H, t, CH3), 1.35-1.45 (4 H, m, 2 x CH2), 1.60-1.80 (4 H, m, 2 x CH2), 2.10 (2 H, t, CH2), 2.40 (2 H, t, CH2), 3.13 (1 H, dd, PhCHH), 3.40 (1 H, dd, PhCHH), 4.11 (2 H, q, CH2CH3), 4.14-4.22 (3 H, m), 7.20-7.48 (8 H, m, Ar), 7.92 (1 H, s, Ar).
【０２５５】
第6段階：けん化
【化９３】
0005405820.tif 000096
【０２５６】
第4段階の樹脂(1.4g、ローディング0.83mmol)を、THF (8.6ml)及びメタノール(8.6 ml)に懸濁し、1.4M 水酸化ナトリウム溶液(8.6ml、5.98mmol)を加えた。混合物を24時間振とうし、その後、試験切断により所望の酸への83%の変換が明らかになった。m/z 541 [M++H] 樹脂をろ過し、水×2、MeOH×2、次いで標準洗浄手順により洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０２５７】
第7段階：(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 (27)
【化９４】
0005405820.tif 000097
【０２５８】
第6段階の樹脂(1.44g、ローディング0.83mmol)を、2% TFA/DCM (10ml)中で20分間穏やかに振とうした。樹脂をろ過した。ろ過物を減圧下で室温にて蒸発させた。樹脂を2% TFA/DCM (10ml)で再処理し、20分後にろ過した。 合わせたろ過物を減圧下で室温にて蒸発乾燥させて、油状の残渣を得た。残渣を20% TFA/DCM中に40分間放置した。減圧下で室温にて蒸発乾燥させた後に、粗生成物を分取HPLCにより精製して、化合物(27)を得た。LCMS純度100%, m/z 442 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.35-1.48 (4 H, m, 2 x CH2), 1.60-1.78 (4 H, m, 2 x CH2), 2.10 (2 H, t, CH2), 2.40 (2 H, t, CH2), 3.20 (1 H, dd, PhCHH), 3.28 (1 H, dd, PhCHH), 3.90 (1 H, t, OCOCH), 4.14 (2 H, m), 7.15 (1 H, d, Ar), 7.26 (6 H, m, Ar), 7.51 (1 H, d, Ar), 7.73 (1 H s, Ar).
【０２５９】
以下の化合物は、化合物(26)及び化合物(27)について記載される手順に従って製造した。
(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (28)
LCMS純度100%, m/z 510 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.00-1.61 (16 H, m, 8 x CH2), 1.90 (2 H, t, CH2), 2.20 (2 H, d, CH2), 2.90 (1 H, dd, PhCHH), 3.20 (1 H, dd, PhCHH), 4.00-4.11 (3 H, m), 4.91 (1 H, m), 7.00-7.25 (8 H, m, Ar), 7.75 (1 H, s, Ar).
【０２６０】
(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-4-フェニル-酪酸 エチルエステル (29)
LCMS純度100%, m/z 484 [M++H]+, 1H NMR (400MHz, MeOD), δ: 1.23-1.29 (7 H, m, CH3, 2 x CH2), 1.53 (2 H, t, CH2), 1.62 (2 H, t, CH2), 1.99 (2 H, t, CH2), 2.11-2.16 (2 H, m, CH2), 2.28 (2 H, t, CH2), 2.53-2.61 (1 H, m, CH), 2.65-2.76 (1 H, m, CH), 3.80-3.90, (1 H, m, CHCO2Et), 4.05 (2H, s, CH2), 4.21 (2 H, q, CH2), 7.05-7.15 (4 H, m, Ar), 7.15-7.22 (2 H, m, Ar), 7.25-7.39 (2 H, m, Ar), 7.75 (1 H, s, Ar).
【０２６１】
(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-4-フェニル-酪酸 (30)
LCMS純度100%, m/z 456 [M++H]+, 1H NMR (400MHz, MeOD), δ: 1.27-1.32 (4 H, m, 2 x CH2), 1.53 (2 H, t, CH2), 1.62 (2 H, t, CH2), 1.99 (2 H, t, CH2), 2.11-2.16 (2 H, m, CH2), 2.29 (2 H, t, CH2), 2.57-2.64 (1 H, m, CH), 2.69-2.77 (1 H, m, CH), 3.84-3.87 (1 H, m, CHCO2H), 4.12 (2 H, q, CH2), 7.09-7.11 (4 H, m, Ar), 7.16-7.20 (2 H, m, Ar), 7.27-7.35 (2 H, m, Ar), 7.78 (1 H, s, Ar).
【０２６２】
(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-4-フェニル-酪酸 シクロペンチルエステル (31)
LCMS純度100%, m/z 524 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.20-1.35 (4 H, m), 1.45-1.62 (10 H, m), 1.85 (2 H, m), 2.00 (2 H, t, CH2), 2.10 (2 H, m), 2.28 (2 H, t, CH2), 2.55 (1 H, m), 2.68 (1 H, m), 3.88 (1 H, t, OCOCHNH), 4.11 (2 H, s, CH2Ph), 5.24 (1 H, m) 7.02-7.12 (4 H, m, Ar), 7.18 (2 H, m, Ar), 7.30 (2 H, m, Ar), 7.80 (1 H, s, Ar).
【０２６３】
(S)-3-tert-ブトキシ-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-プロピオン酸 エチルエステル (32)
LCMS純度90%, m/z 466 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.25 (9 H, s, C(CH3)3), 1.35 (3 H, t, CH2CH3), 1.35-1.45 (4 H, m, 2 x CH2), 1.62-1.76 (4 H, m, 2 x CH2), 2.12 (2 H, t, CH2), 2.40 (2 H, t, CH2), 3.89 (1 H, m), 3.98 (1 H, m), 4.20-4.40 (5 H, m), 7.25 (1 H, d, Ar), 7.39-7.50 (2 H, m, Ar), 7.90 (1 H, s, Ar).
【０２６４】
(S)-3-tert-ブトキシ-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-プロピオン酸 (33)
LCMS純度86%, m/z 438 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.20 (9 H, s, C(CH3)3), 1.38 (4 H, m, 2 x CH2), 1.57-1.75 (4 H, m ,2 x CH2), 2.10 (2 H, t, CH2), 2.39 (2 H, t, CH2), 3.78-3.85 (3 H, m), 4.26 (2 H, s, CH2Ph), 7.21 (1 H, d, Ar), 7.39 (1 H, t, Ar), 7.50 (1 H, d, Ar), 7.80 (1 H, s, Ar).
【０２６５】
(S)-3-tert-ブトキシ-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (34)
LCMS純度94%, m/z 506 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.25 (9 H, s, C(CH3)3), 1.33-1.50 (4 H, m, 2 x CH2), 1.60-2.00 (12 H, m), 2.13 (2 H, t, CH2), 2.42 (2 H, t, CH2), 3.83-4.00 (2 H, m), 4.18 (1 H, m), 4.28 (2 H, s, CH2Ph), 5.35 (1 H, m), 7.25 (1 H, m, Ar), 7.45 (2 H, m, Ar), 7.90 (1 H, s, Ar).
【０２６６】
(S)-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 tert-ブチルエステル (35)
LCMS純度97%, m/z 484 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.30 (13 H, m, 2 x CH2, C(CH3)3), 1.45-1.65 (4 H, m, CH2 x 2), 1.93-2.05 (2 H, m, CH2), 2.20-2.40 (2 H, m, CH2), 3.99 (2 H, q, CH2), 4.65-4.95 (1 H, m, CH, マスクされたシグナル) 7.05 (1 H, d, Ar), 7.25-7.33 (2 H, m, Ar), 7.35-7.50 (5 H, m, Ar), 7.75 (1 H, s, Ar).
【０２６７】
(S)-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (36)
LCMS純度100%, m/z 496 [M++H]+, 1H NMR (400MHz, MeOD), δ: 1.30-1.70 (16 H, m, 8 x CH2), 2.00 (2 H, t, CH2), 2.30 (2 H, t, CH2), 4.05 (2 H, dd, CH2NH), 5.00 (1 H, m, OCOCHPh), 5.15 (1 H, m, CHOCO), 7.05 (1 H, m, Ar), 7.30 (2 H, m, Ar), 7.40 (5 H, m, Ar), 7.75 (1H, m, Ar).
【０２６８】
(S)-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 (37)
LCMS純度100%, m/z 428 [M++H]+, 1H NMR (400MHz, MeOD), δ: 1.20-1.35 (4 H, m, 2 x CH2), 1.50-1.65 (4 H, m, 2 x CH2), 2.00 (2 H, m, CH2), 2.30 (2 H, m, CH2), 4.00 (2 H, dd, CH2NH), 4.90 (1 H, m, OCOCHPh), 7.05 (1 H, m, Ar), 7.25-7.50 (7 H, m, Ar), 7.70 (1 H, m, Ar).
【０２６９】
(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-4-メチル-ペンタン酸 (38)
LCMS純度91%, m/z 408 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 0.78 (3 H, d, J = 6.6 Hz, CH3), 0.84 Hz (3 H, d, J = 6.6 Hz, CH3), 1.26 − 1.40 (6 H, m, アルキル), 1.49 - 1.70 (5 H, m, CH + 2 x CH2), 1.95 (2 H, t, J = 7.32, CH2), 2.25 (2 H, t, J = 7.36, CH2), 3.00 (1 H, t, J = 6.88 Hz, NHCHCO), 3.42 (1 H, d, J = 12.7 Hz, CH), 3.68 (1 H, d, J = 12.5 Hz, CH), 7.00 (1 H, d, J = 7.6 Hz, Ar), 7.15 (1 H, t, J = 7.8 Hz, Ar), 7.30 (1 H, s. Ar), 7.47 (1 H, br d, Ar)
【０２７０】
(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステル (39)
LCMS純度100%, m/z 476 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 0.85 − 0.95 (6 H, 2 x d, 2 x CH3), 1.30 (4 H, m, 2 x CH2), 1.50 − 1.70 (13 H, m, アルキル), 1.75 (2 H, m, CH2), 2.00 (2 H, t, CH2), 2.30 (2 H, t, CH2), 3.90 (1 H, NHCHCO), 4.10 (2 H, q, CH2), 5.25, (1 H, m, CH), 7.10 (1 H, d, Ar), 7.30 (2 H, m), 7.80 (1 H, s, Ar)
【０２７１】
化合物(40)及び化合物(41)の合成
【化９５】
0005405820.tif 000098
【０２７２】
第1段階：(S)-(2-ニトロ-ベンジルアミノ)-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化９６】
0005405820.tif 000099
【０２７３】
臭化2-ニトロベンジル(15g、69.4mmol)、L-フェニルグリシン シクロペンチルエステルトシル塩(27.2g、69.4mmol)、及び炭酸カリウム(19.2g、138.8mmol)のDMF (300ml)中の混合物を、室温にて18時間撹拌した。反応混合物をEtOAc (300ml)で希釈し、水(3×200ml)で洗浄した。EtOAc層を単離し、乾燥し(Na2SO4)、ろ過し、濃縮乾燥してオレンジ色の油を得た。24gの重量の粗物質を単離した。LCMS純度81%, m/z 355 [M++H]+. この生成物を、さらなる精製を行わずに用いた。
【０２７４】
第2段階：(S)-[tert-ブトキシカルボニル-(2-ニトロ-ベンジル)-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化９７】
0005405820.tif 000100
【０２７５】
(S)-(2-ニトロ-ベンジルアミノ)-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (24.4g、69.1mmol)のTHF (150ml)溶液に、K2CO3 (7.6g、69.1mmol)、続いてジ-tert-ブチルジカーボネート(30.1g、138.1mmol)を加えた。水(150ml)を加え、反応物を、さらなるジ-tert-ブチルジカーボネート(45.1g、206.6mmol)とともに、室温にて8日間撹拌した。反応混合物を蒸発乾燥させた。残渣をEtOAc (300ml)に再溶解し、0.1 M HCl (150ml)、飽和NaHCO3水溶液及び水(150 ml)で洗浄した。EtOAc層を乾燥させ(Na2SO4)、ろ過し、濃縮乾燥させて黄色の油を得た。カラムクロマトグラフィー(20% EtOAc/ヘキサン)による精製の後に、生成物を澄んだ黄色の油として得た(15g、収率48%)。
【０２７６】
第3段階: (S)-[(2-アミノ-ベンジル)-tert-ブトキシカルボニル-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化９８】
0005405820.tif 000101
【０２７７】
第2段階のカルバメート(4.44g、9.78mmol)及び10% Pd/C (0.7g)のEtOAc (130ml)中の混合物を、室温にて18時間、バルーン圧力下で水素化した。Pd/C触媒を、セライトパッドを通してろ去した。ろ過物を減圧下で濃縮して、白色固体を得た(4.25g)。LCMS純度100%, m/z 425 [M++H]+,
【０２７８】
第4段階：第3段階のアニリンのカップリング
【化９９】
0005405820.tif 000102
【０２７９】
スベリン酸で誘導体化したヒドロキシルアミン2-クロロトリチル樹脂(1.6g、ローディング0.83mmol)を、無水DCM (100ml)中で膨潤させた。1-クロロ-N,N-2-トリメチルプロペニルアミン(Ghosez試薬)1 (0.56ml、3.3mmol、3eq)を0℃にて、N2雰囲気下に加えた。混合物を室温まで温め、1〜2時間穏やかに振とうした。第3段階のアニリン(1.4g、3.3mmol、3eq)を20分かけて少しずつ加えた。Et3N (0.76ml、4.4mmol、4eq)を加えた。混合物を1時間振とうした。試験切断の後のLCMSは、97%の変換を示した。m/z 596 [M++H]+. 樹脂をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥させた。
1.    Ghosezら, J. C. S. Chem. Comm., 1979, 1180.
【０２８０】
第5段階：(S)-[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (40)
【化１００】
0005405820.tif 000103
【０２８１】
第4段階の樹脂(1.34g、ローディング0.83mmol)を、2% TFA/DCM (10ml)中で20分間、穏やかに振とうした。樹脂をろ過した。ろ過物を回収し、減圧下で室温にて蒸発させた。樹脂を2% TFA/DCM (10ml)で再処理し、20分後にろ過した。合わせたろ過物を減圧下で室温にて蒸発乾燥させて、残渣を得た。残渣を20% TFA/DCM中に40分間放置した。減圧下で室温にて蒸発乾燥した後に、残渣を分取HPLCにより精製して、化合物40をTFA塩として得た。LCMS純度100%, m/z 496 [M++H]+, 1H NMR (400MHz, MeOD), δ: 1.40-2.00 (16 H, m, 8 x CH2), 2.15 (2 H, m, CH2), 2.45 (2 H, m, CH2), 3.95 (1 H, d, CH2NH), 4.20 (1 H, d, CH2NH), 5.20 (1 H, m, OCOCHPh), 5.35 (1 H, m, CHOCO), 7.25 (1 H, m, Ar), 7.40 (1 H, m, Ar), 7.50-7.60 (7 H, m, Ar).
【０２８２】
第6段階：けん化
【化１０１】
0005405820.tif 000104
【０２８３】
第4段階の樹脂(2.0g、ローディング0.83mmol、2.35mmol)を、MeOH (6.1)及びTHF (6.1ml)に懸濁した。2.7 N NaOH (aq、6.1ml)を加えた。混合物を5日間振とうした。試験切断のLCMSにより、反応の完了を確認した。m/z 528 [M++H]+. 樹脂をろ過し、水×2、MeOH×2、次いで標準洗浄手順により洗浄した。樹脂を真空乾燥させた。
【０２８４】
第7段階：(S)-[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 化合物 (41)
【化１０２】
0005405820.tif 000105
【０２８５】
第6段階の樹脂(2.0g、ローディング0.83mmol)を、第5段階で概説した手順を用いて切断し、bocを脱保護した。粗生成物を分取HPLCにより精製して、化合物(41)をTFA塩として得た。LCMS純度98%, m/z 428 [M++H]+, 1H NMR (400MHz, MeOD), δ: 1.25-1.35 (4 H, m, 2 x CH2), 1.50-1.65 (4 H, m, 2 x CH2), 2.00 (2 H, m, CH2), 2.30 (2 H, m, CH2), 3.80 (1 H, d, CH2NH), 4.10 (1 H, d, CH2NH), 5.00 (1 H, m, OCOCHPh), 7.10 (1 H, m, Ar), 7.30 (1 H, m, Ar), 7.40-7.50 (7 H, m, Ar).
【０２８６】
化合物(42)及び化合物(43)の合成
【化１０３】
0005405820.tif 000106
【０２８７】
第1段階：1,3,4,9-テトラヒドロ-ベータ-カルボリン-1,2-ジカルボン酸 2-ベンジルエステル
【化１０４】
0005405820.tif 000107
【０２８８】
1,2,3,4-テトラヒドロカルボリン-1-カルボン酸(5g、23.1mmol)のジオキサン(25ml)及び2M NaOH (23ml、46mmol)中の溶液を、0℃に冷却した。ベンジルクロロホルメート(3.95ml、27mmol)をゆっくりと加えた。室温にて1時間撹拌した後に、さらにベンジル クロロホルメート(1.4ml、9.5mmol)を加えた。2.5時間後に、反応混合物をエーテルで洗浄した。水層をpH 2に酸性化し、DCMで抽出し、乾燥させ(MgSO4)、ろ過し、蒸発乾燥させて、物質の最初の収穫物を黄色の固体として得た。LCMS純度79%, m/z 351 [M++H]+. 最初の収穫物を、さらなる精製を行わずに用いた。物質の第二の収穫物は、エーテル層を濃縮した後に得られ、さらなる粗生成物を得た。粗物質は、DCMから20% 2M メタノール性NH3、80% DCMで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、さらなるCbz保護化合物を得た(収率49%) LCMS純度82%, m/z 351 [M++H]+。
【０２８９】
第2段階：1-(メトキシ-メチル-カルバモイル)-1,3,4,9-テトラヒドロ-ベータ-カルボリン-2-カルボン酸 ベンジルエステル
【化１０５】
0005405820.tif 000108
【０２９０】
1,3,4,9-テトラヒドロ-ベータ-カルボリン-1,2-ジカルボン酸 2-ベンジルエステル(3g、8.4mmol)を無水DCM (30ml)に溶解し、トリエチルアミン(5.22ml、37.8mmol)を加えた。この溶液に、HOBt (2.848g、21.4mmol)、EDCI (4.08g、21.4mmol)及びN, O-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(1.86g、19.1.mmol)を加えた。室温にて2時間撹拌した後に、反応混合物を蒸発乾燥させ、EtOAcに再溶解し、飽和NaHCO3溶液(2×100ml)及び水(50ml)で洗浄した。EtOAc層を乾燥させ(Na2SO4)、ろ過し、蒸発乾燥させた。DCMからメタノール/DCMを用いるカラムクロマトグラフィーによる精製により、所望のWeinrebアミドを得た(収率40%)。LCMS純度85%, m/z 394 [M++H]+.
【０２９１】
第3段階：1-ホルミル-1,3,4,9-テトラヒドロ-ベータ-カルボリン-2-カルボン酸 ベンジルエステル
【化１０６】
0005405820.tif 000109
【０２９２】
1,3,4,9-テトラヒドロ-ベータ-カルボリン-1,2-ジカルボン酸 2-ベンジル エステル(3.7mg、9.4mmol)のTHF (100ml)溶液を、N2の下で-78℃に冷却した。トルエン溶液中の1.5M DIBAL (31.2ml、47mmol)を2時間かけて加えた。4時間撹拌した後に、反応混合物をメタノール及び水でクエンチし、EtOAc中に抽出し、希HCl水溶液で洗浄した。有機層をNa2SO4で乾燥し、ろ過し、蒸発乾燥させた。LCMS純度50%, m/z 335 [M++H]+ 物質は、さらなる精製を行わずに次の段階で用いた。
【０２９３】
第4段階：1-[[((S)-シクロペンチルオキシカルボニル-フェニル-メチル)-アミノ]-メチル]-1,3,4,9-テトラヒドロ-ベータ-カルボリン-2-カルボン酸 ベンジルエステル
【化１０７】
0005405820.tif 000110
【０２９４】
1-ホルミル-1,3,4,9-テトラヒドロ-ベータ-カルボリン-2-カルボン酸 ベンジルエステル(1g、3mmol)、酢酸ナトリウム(0.68g、87.4mmol)、L-フェニルグリシン シクロペンチルエステルトシル塩(1.16g、3mmol)、ナトリウムシアノボロハイドライド(0.26g、4.2mmol)及びモレキュラーシーブのIPA (100ml)中の混合物を、室温にて1時間撹拌した。反応混合物を蒸発乾燥させ、EtOAc中に再溶解し、飽和NaHCO3溶液及び塩水で連続的に洗浄した。EtOAc層をMgSO4で乾燥させ、ろ過し、蒸発乾燥させた。LCMS純度39%, m/z 538 [M++H]+. 粗生成物を、さらなる精製を行わずに次の段階に用いた。
【０２９５】
第5段階: 1-[[tert-ブトキシカルボニル-((S)-シクロペンチルオキシカルボニル-フェニル-メチル)-アミノ]-メチル]-1,3,4,9-テトラヒドロ-ベータ-カルボリン-2-カルボン酸 ベンジルエステル
【化１０８】
0005405820.tif 000111
【０２９６】
撹拌している第4段階のアミン(1.08g、2.0mmol)のTHF (20ml)溶液に、炭酸カリウム(0.42g、3.0mmol)及びジ-tert-ブチルジカーボネート(1.75g、8.0mmol)を加えた。反応混合物を50℃にて96時間撹拌し、室温まで冷却し、DCM (50ml)で希釈し、0.1M HCl溶液(25ml)、飽和NaHCO3溶液(2×25ml)及び水(15ml)で洗浄した。DCM層を乾燥し、Na2SO4、ろ過し、蒸発乾燥させた。10% EtOAc/ヘプタンを用いるカラムクロマトグラフィーによる精製により、生成物を得た(0.89g 収率70%)。LCMS純度79%, m/z 638 [M++H]+.
【０２９７】
第6段階：(S)-[tert-ブトキシカルボニル-(2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-1-イルメチル)-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化１０９】
0005405820.tif 000112
【０２９８】
第5段階のジカルバメート(0.5g、0.78mmol)のエタノール(40ml)溶液を、水素雰囲気下に10% Pd/C (0.4g)の存在下で2時間、バルーン圧力下で撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通してろ過し、蒸発乾燥させて所望の生成物を得た(0.35g、90%)、LCMSによる純度91%, m/z 504 [M++H]+.
【０２９９】
第7段階：第6段階のアミンのカップリング
【化１１０】
0005405820.tif 000113
【０３００】
スベリン酸で誘導体化したヒドロキシルアミン2-クロロトリチル樹脂(703mg、ローディング0.83mmol/g)を、DCM (12ml)中で膨潤させた。PyBOP (912mg、1.75mmol)、次いで第6段階のアミン(325mg、0.64mmol)及びDIPEA (1.01ml、5.8mmol)を加えた。反応混合物を18時間振とうした。試験切断の後の物質のLCMSは、80%の変換を示した。m/z 675 [M++H]+. 樹脂をろ過し、標準洗浄手段を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥させた。
【０３０１】
第8段階：(S)-[[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-1-イルメチル]-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (42)
【化１１１】
0005405820.tif 000114
【０３０２】
第7段階の樹脂(135mg、ローディング0.83mmol)を、2% TFA/DCM (10ml)中で20分間穏やかに振とうした。樹脂をろ過した。ろ過物を減圧下で室温にて蒸発させた。樹脂を2% TFA/DCM (10ml)で再処理し、20分後にろ過した。合わせたろ過物を減圧下で室温にて蒸発乾燥させて、油状の残渣を得た。樹脂を20% TFA/DCM中に40分間放置した。減圧下で室温にて蒸発乾燥させた後に、粗生成物を分取HPLCにより精製して、化合物(42)をTFA塩として得た。LCMS純度91%, m/z 575 [M++H]+, 1H NMR (400MHz, MeOD), δ: 1.30-1.70 (16 H, m, 8 x CH2), 2.00 (2 H, m, CH2), 2.50 (2 H, m, CH2), 2.75 (2 H, m, CH2), 3.30-3.50 (2 H, m, CH2), 4.15 (1 H, m, CH2CH), 4.80 (2 H, m, CH2NH, マスクされたシグナル), 5.25 (1 H, m, CHOCO), 6.00 (1 H, m, OCOCHPh), 6.90 (1 H, m, Ar), 7.00 (1 H, m, Ar), 7.20 (1 H, m, Ar), 7.30 (1H, m, Ar), 7.45 (5 H, m, Ar).
【０３０３】
第9段階：シクロペンチルエステルのけん化
【化１１２】
0005405820.tif 000115
【０３０４】
第7段階の樹脂(395mg、ローディング0.83mmol)を、THF (1.5ml)及びメタノール(1.5 ml)中に懸濁し、1.4M 水酸化ナトリウム(aq)溶液(1.17ml、1.6mmol)を加えた。混合物を8日間振とうした。試験切断は、酸への86%の変換を示した。m/z 607 [M++H]. 樹脂をろ過し、水×2、MeOH×2、次いで標準洗浄手順により洗浄した。樹脂を真空乾燥させた。
【０３０５】
第10段階：(S)-[[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-1-イルメチル]-アミノ]-フェニル-酢酸 (43)
【化１１３】
0005405820.tif 000116
【０３０６】
第9段階の樹脂(100mg、ローディング0.83mmol)を切断し、化合物(42)について概説した手順を用いてbocを脱保護した。分取HPLCによる精製により、化合物(43)をTFA塩として得た。LCMS純度96%, m/z 507 [M++H]+, 1H NMR (400MHz, MeOD), δ: 1.25-1.40 (4 H, m, 2 x CH2), 1.50-1.65 (4 H, m, 2 x CH2), 2.00 (2 H, m, CH2), 2.50 (2 H, m, CH2), 2.70 (2 H, m, CH2), 3.40 (2 H, m, CH2), 4.15 (1 H, m, CH2CH), 4.80 (2 H, m, CH2NH, マスクされたシグナル), 6.00 (1 H, m, OCOCHPh), 6.90 (1 H, m, Ar), 7.00 (1 H, m, Ar), 7.20 (1 H, m, Ar), 7.30-7.50 (6 H, m, Ar).
【０３０７】
化合物(44)及び化合物(45)で例示される図3の化合物の合成
【化１１４】
0005405820.tif 000117
【０３０８】
【化１１５】
0005405820.tif 000118
【０３０９】
構成要素H〜Lの製造
構成要素H
【化１１６】
0005405820.tif 000119
【０３１０】
(S)-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-3-カルボン酸(10g、56mmol)、TMSCl (39ml、310mmol)及びメタノール(500ml)を一緒に2時間還流した(70℃にて)。反応混合物を蒸発乾燥させ、LCMS分析は、(S)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボン酸 メチルエステルへの100%の変換を示した。m/z 192 [M++H]+.
【０３１１】
構成要素I
【化１１７】
0005405820.tif 000120
【０３１２】
DL-プロリン(10g、87mmol)、TMSCl (51ml、430 mmol)及びメタノール(500ml)を一緒に2時間還流した(70℃にて)。反応混合物を蒸発乾燥させ、LCMS分析は、所望の生成物ピロリジン-2-カルボン酸 メチルエステルへの100%の変換を示した。m/z 130 [M++H]+.
【０３１３】
構成要素J
【化１１８】
0005405820.tif 000121
【０３１４】
第1及び2段階
(R)-2-Fmoc-1,2,3,4-テトラヒドロノルハルマン-3-カルボン酸(2.0g、9.25mmol)を、TMSCl (6ml、47.17mmol)のメタノール(100ml)溶液に加え、還流下で2時間加熱した。反応混合物を蒸発乾燥させて、1.7gの生成物を得た(LCMSによる100%の変換, m/z 453 [M++H]+)。第1段階のエステル(1.7g)を、DCM (100ml)中の20%ピペリジンで30分間処理して、fmocを除去した。粗反応混合物を蒸発乾燥させ、DCM中に溶解し、飽和NaHCO3溶液で洗浄した。DCM層を単離し、乾燥させ(Na2SO4)、ろ過し、濃縮乾燥した。カラムクロマトグラフィーによる精製を3% MeOH/DCMを用いて行い、(S)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-4-カルボン酸 メチルエステルを得た。LCMS 100%, m/z 231 [M++H]+.
【０３１５】
構成要素K
【化１１９】
0005405820.tif 000122
【０３１６】
メチル-3-アミノベンゾエートは、市販で入手した。
構成要素L
【化１２０】
0005405820.tif 000123
【０３１７】
第1段階
グリオキシル酸一水和物(1.51g、16.4mmol)の水溶液(10ml)を、撹拌しているトリプタミン.HCl (3.0g、15.3mmol)の水溶液(200ml)に滴下した。水(10ml)中のKOH (0.827g、14.7mmol)を加えた。反応混合物を室温にて1時間撹拌し、その後、沈殿が発生した。減圧下でろ過した後に、白色固体を回収し、水で洗浄して2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-1-カルボン酸を得た。収率1.9g (58%); m/z 217 [M++H]+.
【０３１８】
第2段階
1,2,3,4-テトラヒドロ-ベータ-カルボリン-1-カルボン酸(7.4g)のMeOH (250ml)溶液を、HClガスで20分間飽和させた。反応混合物を、室温にて18時間穏やかに撹拌した。反応混合物をHClガスで再処理し、さらに18時間撹拌した。反応の完了の際に、混合物を真空濃縮して構成要素Lを得た。LCMS純度95%, m/z 231 [M++H]+.  生成物(2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-1-カルボン酸 メチルエステル)を、さらなる精製を行わずに用いた。
【０３１９】
化合物(44、R = シクロペンチル)及び化合物(45、R = H)で例示される図3に示す化合物の合成
【化１２１】
0005405820.tif 000124
【０３２０】
第1段階：樹脂へのアミンのローディング
【化１２２】
0005405820.tif 000125
【０３２１】
スベリン酸で誘導体化したヒドロキシルアミン2-クロロトリチル樹脂(6.6g、ローディング0.83mmol)を、無水DCM (65ml)中で膨潤させた。PyBOP (8.6g、16.43mmol)、アミン構成要素A (3.7g、16.43mmol)及びDIPEA (9.5ml、58.4mmol)を加えた。反応物を室温にて24時間振とうした。試験切断物質のLCMSは、反応の完了を示した。樹脂をろ過し、標準洗浄手段を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０３２２】
第2段階：メチルエステルのけん化
【化１２３】
0005405820.tif 000126
【０３２３】
樹脂に結合した第1段階のエステル(6.95g、ローディング0.83mmol/g)を、THF (25ml)及びメタノール(25ml)に懸濁した。水酸化ナトリウムの1.4M水溶液(25ml)を加えた。混合物を48時間振とうし、24時間後にさらに水酸化ナトリウム(25ml)を加えた。試験切断物質のLCMSは、酸への65%の変換を示した。m/z 349 [M++H]+. 樹脂をろ過し、水×2、MeOH×2、次いで標準洗浄手段で洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０３２４】
第3段階：L-フェニルグリシンシクロペンチルエステルとのカップリング
【化１２４】
0005405820.tif 000127
【０３２５】
樹脂に結合した第2段階のカルボン酸(2.2g、ローディング0.83mmol/g)を、無水DCM (25ml)中で膨潤させた。PyBOP (2.85g、5.48mmol)、L-フェニルグリシンシクロペンチルエステルトシル塩(2.14g、5.48mmol)、及びDIPEA (3.17ml、18.3mmol)を加えた。混合物を室温にて24時間振とうした。試験切断の後のLCMSにより、52%の変換が明らかになった。m/z 550 [M++H]+. 樹脂をろ過し、標準洗浄手段を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０３２６】
第4段階：(S)-[[(S)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (44)
【化１２５】
0005405820.tif 000128
【０３２７】
第3段階の樹脂(2.2g、ローディング0.83mmol)を、2% TFA/DCM (10ml)中で20分間穏やかに振とうした。樹脂をろ過した。ろ過物を回収し、減圧下で室温にて蒸発させた。樹脂を2% TFA/DCM (10ml)で再処理し、20分後にろ過した。合わせたろ過物を減圧下で室温にて蒸発乾燥させて、残渣を得た。残渣を分取HPLCにより精製して、化合物(44)をTFA塩として得た。LCMS純度95%, m/z 550 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ:1.12-1.75 (16 H, m, 8 x CH2), 1.92-2.02 (2 H, m, CH2), 2.09-2.30 (1 H, m), 2.48 (1 H, m), 3.10 (2 H, m, CH2), 4.58-4.66 (2 H, m, CH2), 4.82 (1 H, m), 5.04 (1 H, m), 5.20 (1 H, s, OCOCHPh), 6.95-7.20 (9 H, m, Ar).
【０３２８】
第5段階−シクロペンチルエステルのけん化
【化１２６】
0005405820.tif 000129
【０３２９】
第3段階の樹脂(1.3g、1.13mmol)を、THF (4.6ml)及びメタノール(4.6 ml)中に懸濁した。水酸化ナトリウムを、1.4M水溶液(4.6ml)として加えた。混合物を24時間振とうした。試験切断した物質のLCMSにより、所望の酸への変換を確認した。樹脂をろ過し、水×2、MeOH×2、次いで標準洗浄手段で洗浄した。樹脂を真空乾燥させた。
【０３３０】
第6段階：(S)-[[(S)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 (45)
【化１２７】
0005405820.tif 000130
【０３３１】
第5段階の樹脂(1.3g、ローディング0.83mmol)を、2% TFA/DCM (10ml)中で20分間穏やかに振とうした。樹脂をろ過した。ろ過物を回収し、減圧下で室温にて蒸発させた。樹脂を2% TFA/DCM (10ml)で再処理し、20分後にろ過した。合わせたろ過物を減圧下で室温にて蒸発乾燥させて、残渣を得た。残渣を分取HPLCにより精製して、化合物(45)を得た。LCMS純度96%, m/z 482 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.12-1.38 (4 H, m, 2 x CH2), 1.45-1.61 (4 H, m, CH2), 1.98 (2 H, m, CH2), 2.10-2.58 (2 H, m, CH2), 3.04-3.20 (2 H, m, CH2), 4.48-4.65 (2 H, m), 4.85 (1 H, m), 5.20 ( 1 H, m), 6.92-7.25 (9 H, m, Ar).
【０３３２】
以下の化合物は、化合物(44)及び化合物(45)について記載した手順に従って製造した。
(S)-[[(S)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 エチルエステル (46)
構成要素Hを用いた
LCMS純度97%, m/z 510 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.19 (3 H, t, CH3), 1.32-1.48 (4 H, m, 2 x CH2), 1.54-1.73 (4 H, m, 2 x CH2), 2.02-2.15 (2 H, m, CH2), 2.50-2.70 (2 H, m, CH2), 3.10-3.30 (2 H, m, CH2), 4.10 (2 H, m, CH2), 4.70 (2 H, m), 4.95 (1 H, m), 5.35 (1 H, s, OCOCHPh), 7.10-7.40 (9 H, m, Ar).
【０３３３】
(S)-2-[[(S)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボニル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 エチルエステル (47)
構成要素Hを用いた
LCMS純度100%, m/z 524 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.20 (3 H, m, CH3), 1.30-1.49 (4 H, m, 2 x CH2), 1.55-1.70 (4 H, m, CH2), 2.10 (2 H, m, CH2), 2.60 (2 H, m), 2.88-3.25 (4 H, m), 4.08-4.20 (2 H, m, CH2), 4.45-4.62 (2 H, m), 4.75 (1 H, m), 5.03 (1 H, m), 7.09-7.32 (9 H, m, Ar).
【０３３４】
(S)-2-[[(S)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボニル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 (48)
構成要素Hを用いた
LCMS純度100%, m/z 564 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.25-1.85 (16 H, m, 8 x CH2), 2.10 (2 H, m, CH2), 2.55 (2 H, t, CH2), 2.85-3.20 (4 H, m), 4.40-4.60 (2 H, m), 4.75 (1 H, m), 4.95-5.15 (2 H, m), 7.05-7.30 (9 H, m, Ar).
【０３３５】
(S)-2-[[(S)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン3-カルボニル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 (49)
構成要素Hを用いた
LCMS純度100%, m/z 496 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.10-1.31 (4 H, m, 2 x CH2), 1.40-1.55 (4 H, m, 2 x CH2), 1.98 (2 H, m, CH2), 2.43 (2 H, m, CH2), 2.75-3.10 (4 H, m), 4.30-4.75 (3 H, m), 4.90 (1 H, m), 6.90-7.15 (9 H, m, Ar).
【０３３６】
(S)-2-[[(S)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボニル]-アミノ]-4-メチル-ペンタン酸 エチルエステル (50)
構成要素Hを用いた
LCMS純度98%, m/z 490 [M++H]+, 1H NMR (400MHz, MeOD), δ: 0.60 (1 H, m, CH), 0.70-0.85 (6 H, m, 2 x CH3), 1.25 (3 H, t, CH2CH3), 1.38-1.65 (10 H, m, 5 x CH2), 2.10 (2 H, m, CH2), 2.60 (2 H, m, CH2), 3.20 (2 H, m, CH2), 4.10 (2 H, q, CH2CH3), 4.35 (1 H, m, CH), 4.70-4.80 (2 H, m, CH2), 4.95 (1 H, m, CH), 7.23-7.25 (4 H, m, Ar).
【０３３７】
(S)-2-[[(S)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボニル]-アミノ]-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステル (51)
構成要素Hを用いた
LCMS純度96%, m/z 530 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 0.75 (3 H, d, CH3), 0.88 (3 H, d, CH3), 1.30-1.90 (19 H, m), 2.10 (2 H, t, CH2), 2.60 (2 H, m, CH2), 3.15-3.30 (2 H, m, CH2), 4.30 (1 H, m), 4.65-4.85 (2 H, m), 4.95 (1 H, m), 5.10 (1 H, m), 7.15-7.28 (4 H, m, Ar).
【０３３８】
(S)-2-[[(S)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボニル]-アミノ]-4-メチル-ペンタン酸 エチルエステル (52)
構成要素Hを用いた
LCMS純度100%, m/z 462 [M++H]+, 1H NMR (400MHz, MeOD), δ: 0.60 (1 H, m, CH), 0.70-0.85 (6 H, m, 2 x CH3), 1.38-1.65 (10 H, m, 5 x CH2), 2.10 (2 H, m, CH2), 2.40-2.60 (2 H, m, CH2), 3.20 (2 H, m, CH2), 4.35 (1 H, m, CH), 4.70-4.80 (2 H, m, CH2), 4.95 (1 H, m, CH, マスクされたシグナル), 7.23-7.25 (4 H, m, Ar).
【０３３９】
(S)-[[1-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-ピロリジン-2-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (53)
構成要素Iを用いた
LCMS純度100%, m/z 488 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.30-2.45 (24 H, m), 3.50-3.70 (2 H, m, CH2), 4.55 (1 H, m, CH), 5.18 (1 H, m, CH), 5.40 (1 H, m, CH), 7.40 (5 H, m, Ar).
【０３４０】
(S)-[[1-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-ピロリジン-2-カルボニル]-アミノ]-フェニル-酢酸 (54)
構成要素Iを用いた
LCMS純度90%, m/z 420 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.20-1.20 (4 H, m, 2 x CH2), 1.45-1.56 (4 H, m, CH2), 1.75-2.35 (8 H, m), 3.35-3.60 (2 H, m), 4.45 (1 H, m), 5.35 (1 H, m), 7.18-7.35 (5 H, m, Ar).
【０３４１】
(S)-2-[[1-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-ピロリジン-2-カルボニル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 エチルエステル (55)
構成要素Iを用いた
LCMS純度100%, m/z 462 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.20-2.20 (19 H, m), 2.94-3.20 (2 H, m, CH2Ph), 3.48-3.69 (2 H, m, CH2N), 4.10-4.25 (2 H, m, CH2CH3), 4.33-4.49 (1 H, m), 4.60-4.79 (1 H, m), 7.20-7.35 (5 H, m, Ar).
【０３４２】
(S)-2-[[1-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-ピロリジン-2-カルボニル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (56)
構成要素Iを用いた
LCMS純度100%, m/z 502 [M++H]+, 1H NMR (400MHz, MeOD), δ: 1.27-2.23 (22 H, m, 11 x CH2), 2.35 (2 H, m, CH2), 2.97-3.27 (2 H, m, CH2Ph), 3.53-3.63 (2 H, m, CH2), 4.35-4.45 (1 H, m, CH), 4.60-4.70 (1 H, m, CHCH2Ph), 5.10-5.20 (1 H, m, CHOCO), 7.23-7.30 (5 H, m, Ar).
【０３４３】
(S)-2-[[1-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-ピロリジン-2-カルボニル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 (57)
構成要素Iを用いた
LCMS純度90%, m/z 434 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.30-1.41 (4 H, m, 2 x CH2), 1.55-1.69 (4 H, m, 2 x CH2), 1.80-1.90 (8 H, m), 2.91-3.26 (2 H, m), 3.45-3.70 (2 H, m), 4.40 (1 H, m), 4.72 (1 H, m), 7.16-7.30 (5 H, m, Ar).
【０３４４】
(S)-2-[[(S)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-4-カルボニル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (58)
構成要素Jを用いた
LCMS純度100%, m/z 563 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz MeOD), δ: 1.10-1.30 (3H, m, CH3), 1.35-1.80 (8H, m, 4 X CH2), 2.15 (2H, m, CH2), 2.4-2.65 (2H, m, CH2), 2.95-3.20 (3H, m), 4.0-4.2 (2H, m CH2O), 4.3-5.0 (4H, m マスクされたシグナル), 5.05-5.20 (1H, m CHOCO), 6.90-7.50 (9H, m, Ar).
【０３４５】
(S)-2-[[(S)-2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-4-カルボニル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 (59)
構成要素Jを用いた
LCMS純度100%, m/z 535 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz MeOD), δ: 1.20-1.40 (4H, m, 2 X CH2), 1.45-1.65 (4H, m, 2 X CH2), 1.90-2.10 (2H, m, CH2), 2.30-2.50 (2H, m, CH2), 2.70-3.15 (3H, m), 4.2-4.9 (4H, m マスクされたシグナル), 5.00 (1H, m CHOCO), 6.75-7.40 (9H, m, Ar)
【０３４６】
(S)-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンゾイルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (60)
構成要素Kを用いた
LCMS純度100%, m/z 510 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ1.28 (4 H, m, 2 x CH2), 1.40-1.80 (12 H, m, 6 x CH2), 1.98 (2 H, t, CH2), 2.27 (2 H, t, CH2), 5.12 (1 H, m), 5.50 (1 H, s, OCOCHPh), 7.21-7.32 (4 H, m, Ar), 7.36 (2 H, m, Ar), 7.45 (1 H, d, Ar), 7.61 (1 H, d, Ar), 7.90 (1 H, s, Ar).
【０３４７】
(S)-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンゾイルアミノ]-フェニル-酢酸 (61)
構成要素Kを用いた
LCMS純度100%, m/z 442[M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.21-1.34 (4 H, m, 2 x CH2), 1.48-1.63 (4 H, m, 2 x CH2), 1.98 (2 H, t, CH2), 2.26 (2 H, t, CH2), 5.55 (1 H, s, OCOCHPh), 7.20-7.32 (4 H, m, Ar), 7.40 (2 H, d, Ar), 7.48 (1 H, d, Ar), 7.64 (1 H, d, Ar), 7.89 (1 H, s, Ar).
【０３４８】
(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンゾイルアミノ]-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステル (62)
構成要素Kを用いた
LCMS純度93%, m/z 490 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 0.84 (3 H, d, CH(CH3)), 0.88 (3 H, d, CH(CH3)), 1.20-1.40 (4 H, m, 2 x CH2), 1.40-1.85 (15 H, m, 6 x CH2, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2), 2.00 (2 H, t, CH2), 2.25 (2 H, t, CH2), 4.45 (1 H, m, OCOCHCH2), 5.10 (1 H, m, CHOCO), 7.25 (1 H, m Ar), 7.40 (1 H, d, Ar), 7.60 (1 H, d, Ar), 7.90 (1 H, s, Ar).
【０３４９】
(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンゾイルアミノ]-4-メチル-ペンタン酸 (63)
構成要素Kを用いた
LCMS純度97%, m/z 422 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.03 (3 H, d, CH(CH3)), 1.06 (3 H, d, CH(CH3)), 1.40-1.55 (4 H, m, 2 x CH2), 1.65-1.95 (7 H, m, 2 x CH2, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2), 2.15 (2 H, t, CH2), 2.45 (2 H, t, CH2), 4.70 (1 H, m, OCOCHCH2), 7.45 (1 H, m, Ar), 7.60 (1 H, d, Ar), 7.80 (1 H, d, Ar), 8.05 (1 H, s, Ar).
【０３５０】
(S)-2-[[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-1-カルボニル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル(64)
構成要素Lを用いた
LCMS純度100%, m/z 603 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.18-1.71 (16 H, m, 8 x CH2), 2.00 (2 H, t, CH2), 2.45 (2 H, m), 2.70 (2 H, m), 2.90-3.11 (2 H, m), 3.40 (1 H, m), 4.10 (1 H, m), 4.50 (1 H, m), 5.00 (1 H, m), 5.95 (1 H, m), 6.90-7.11 (7 H, m, Ar), 7.25 (1 H, d, Ar), 7.34 (1 H, d, Ar).
【０３５１】
(S)-2-[[2-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイル)-2,3,4,9-テトラヒドロ-1H-ベータ-カルボリン-1-カルボニル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 (65)
構成要素Lを用いた
LCMS純度91%, m/z 535 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD δ: 1.15-1.32 (4 H, m, 2 x CH2), 1.40-1.60 (4 H, m, 2 x CH2), 1.98 (2 H, t, CH2), 2.41 (2 H, m), 2.69 (2 H, m), 2.90-3.11 (2 H, m), 3.30 (1 H, m), 4.06 (1 H, m), 4.60 ( 1H, m), 5.92 (1 H, m), 6.84 (7 H, m, Ar), 7.20 (1 H, d, Ar), 7.31 (1 H, d, Ar).
【０３５２】
化合物(66)及び化合物(67)の合成
【化１２８】
0005405820.tif 000131
【０３５３】
第1段階：5-アミノ-ニコチン酸 メチルエステル
【化１２９】
0005405820.tif 000132
【０３５４】
5-アミノニコチン酸(1g、7.2mmmol)を、メタノール(100ml)中に懸濁し、塩化チオニル(4.22ml、57.9mmol)を0℃にて滴下した。反応混合物を室温にて18時間撹拌した。反応混合物を蒸発乾燥させ、得られた黄色の油をメタノール/エーテル (1：1)に再溶解し、黄色の結晶(HCl塩)を得て、これをろ過により回収した。収率1.2g (85%)。LCMS純度91%, m/z 153 [M++H]+,
【０３５５】
第2段階：(5-アミノ-ピリジン-3-イル)-メタノール
【化１３０】
0005405820.tif 000133
【０３５６】
5-アミノ-ニコチン酸メチルエステル(5.7g、30.2mmol)をTHF (150ml)に懸濁し、LiAlH4 (1MのTHF溶液133ml、133mmol)を0℃にてゆっくり加えた。反応混合物を室温にて21時間撹拌した。反応混合物をクエンチし、希HClを用いてpH 3に酸性化し、固体Na2CO3を用いて塩基性に(pH 8)した。溶媒を減圧下に除去した。残渣を、20% MeOH/DCMを用いてシリカゲルを通してろ過して、生成物3.8gを得た(100%)。LCMS純度97%, ELS によるm/z 125 [M++H]+.
【０３５７】
第3段階：第2段階の酸の樹脂へのカップリング
【化１３１】
0005405820.tif 000134
【０３５８】
スベリン酸で誘導体化したヒドロキシルアミン-2-クロロトリチル樹脂(0.49g、0.86 mmol/g、0.42mmol)を、無水DCM (6ml)中で膨潤させ、PyBOP (0.67g、1.3mmol)を加えた。第2段階のアニリン(0.16g、1.3mmol)を、DMF (6ml)に加え、次いでDIPEA (0.75ml、4.2mmol)を加えた。試験切断の後のLCMSは、27%の変換を示した。m/z 296 [M++H]+. 樹脂をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０３５９】
第4段階：メシル化
【化１３２】
0005405820.tif 000135
【０３６０】
樹脂に結合した第3段階のアルコール(1.8g、1.57mmol)を、無水DCM (30ml)中で膨潤させ、DIPEA (1.62ml、9.42mmol)を0℃にて加え、次いで塩化メシル(0.23ml、3.14mmol)を加えた。反応混合物を0℃にて30分間振とうした。試験切断の後のLCMSは、21%の変換を示し、m/z 374 [M++H]+、及びメシレートの塩化物置換による9%の副産物m/z 314 [M++H]+。樹脂をろ過し、標準洗浄手段を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０３６１】
第5段階：メシレートのL-フェニルアラニン エチルエステルでの置換
【化１３３】
0005405820.tif 000136
【０３６２】
樹脂に結合した第4段階の生成物(0.5g、0.43mmol)を、無水DMF (4ml)中で膨潤させ、ヨウ化ナトリウム(0.05g、10%w/v)を加えた。無水DMF (4ml)中のL-フェニルアラニン エチルエステル塩酸塩(0.3g、1.29mmol)、次いでDIPEA (0.75ml、4.3mmol)を加えた。3時間振とうした後に、試験切断物質のLCMSは、35%の変換を示した。m/z 471[M++H]+. 樹脂をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０３６３】
第6段階：(S)-2-[[5-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ピリジン-3-イルメチル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 エチルエステル (66)
【化１３４】
0005405820.tif 000137
【０３６４】
第5段階の樹脂(2g、ローディング0.87mmol)を、2% TFA/DCM (20ml)中で20分間穏やかに振とうした。樹脂をろ過した。ろ過物を回収し、減圧下で室温にて蒸発させた。樹脂を2% TFA/DCM (20ml)で再処理し、10分後にろ過した。合わせたろ過物を減圧下で室温にて蒸発乾燥させて、粗生成物を得た。粗物質を分取HPLCにより精製して、化合物(66)をTFA塩として得た。LCMS純度100%, m/z 471 [M++H]+, 1H NMR (400MHz, MeOD), δ: 1.10 (3H, t, CO2CH2CH3), 1.31-1.50 (4 H, m, 2 x CH2), 1.58-1.80 (4 H, m, 2 x CH2), 2.05-2.15 (1 H, m, CH), 2.24-2.38 (1 H, m, CH), 2.45 (2 H, t, CH2), 3.10-3.20 (1 H, m, CH), 3.38-3.49 (1 H, m, CH), 4.12 (2 H, q, CH2), 4.35 (3H, m, CH2, CH) 7.20-7.40 (5 H, m, Ar), 8.30-9.00 (3 H, m, Ar).
【０３６５】
第7段階：(S)-2-[[5-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ピリジン-3-イルメチル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 (67)
【化１３５】
0005405820.tif 000138
【０３６６】
第6段階の生成物(30mg、ローディング1.8mmol/g)のTHF (1ml)溶液に、1.4M水酸化ナトリウム(1 ml)を加えた。反応混合物を30分間撹拌した。LCMSは75%の変換を示した。m/z 442[M++H]+. 反応混合物を蒸発乾燥させ、分取HPLCにより精製して、所望の化合物をTFA塩、化合物(67)として得た。LCMS純度100%, m/z 443 [M++H]+. 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.30 (4 H, m, 2 x CH2), 1.50-1.70 (4 H, m, 2 x CH2), 2.00 (2 H, t, CH2), 2.30 (2 H, t, CH2), 3.20 (2 H, m, CH2Ph, マスクされたシグナル), 4.20 (3 H, m), 7.20 (5 H, m, Ar), 8.30 (1 H, br s, Ar), 8.40 (1 H, s, Ar), 8.65 (1 H, br s, Ar).
【０３６７】
化合物(68)の合成
【化１３６】
0005405820.tif 000139
【０３６８】
(S)-2-[[5-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ピリジン-3-イルメチル]-アミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 tert-ブチルエステル(68)は、化合物(66)の製造について概説した手順を用いて製造した: LCMS純度100%, m/z 499 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.20 (9 H, s, C(CH3)3), 1.25-1.35 (4 H, m, 2 x CH2), 1.49-1.65 (4 H, m, 2 x CH2), 2.00 (2 H, t, CH2), 2.35 (3 H, t, CH2), 3.00 (1 H, m), 3.32 (1 H, m), 4.15-4.30 (3 H, m), 7.15-7.30 (5 H, m, Ar), 8.30 (1 H, br s, Ar), 8.45 (1 H, s, Ar), 8.65 (1 H, br s, Ar).
【０３６９】
化合物(69)及び化合物(70)の合成
【化１３７】
0005405820.tif 000140
【０３７０】
第1段階：Fmocアミノカプロン酸の樹脂へのローディング
【化１３８】
0005405820.tif 000141
【０３７１】
無水DCM (10ml)中のヒドロキシルアミン 2-クロロトリチル樹脂(2.5g、ローディング0.94mmol/g)の混合物に、1,3-ジイソプロピルカルボジイミド(1.1ml、7.05mmol)及び6-(Fmoc-アミノ)カプロン酸(2.5g、7.05mmol)の無水DCM (10ml)溶液を加えた。DMF (5ml)を加え、反応物を室温にて1時間振とうした。試験切断により、所望の生成物への96%の変換が明らかになった。樹脂をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０３７２】
第2段階：Fmoc脱保護
【化１３９】
0005405820.tif 000142
【０３７３】
第1段階のFmoc保護アミン樹脂(2.0g、ローディング0.94mmol/g)を、20% ピペリジンのDMF溶液(25ml、過剰)に溶解し、室温にて30分間振とうした。試験切断は、LCMSにより、100% (ELS検出)の完全な変換を示した。樹脂をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄し、真空乾燥させた。
【０３７４】
第3段階：カップリング反応
【化１４０】
0005405820.tif 000143
【０３７５】
無水DCM (10ml)及びDMF (10ml)中の樹脂に結合した第2段階のアミン(2.0 g、ローディング0.94mmol/g)に、DIC (0.71ml、5.64mmol)及び3-(クロロメチル)安息香酸(0.96g、5.64mmol)を加えた。混合物を1時間振とうした後に試験切断し、LCMSにより49%の変換が明らかになった。m/z 219 [M++H]+. 樹脂をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０３７６】
第4段階：塩化物のL-フェニルグリシンシクロペンチルエステルでの置換
【化１４１】
0005405820.tif 000144
【０３７７】
無水DMF (5ml)中の樹脂に結合した第3段階の塩化物(0.5g、0.47mmol)に、L-フェニルグリシンシクロペンチルエステルトシル塩(0.57g、1.41mmol)、DIPEA (0.24ml、1.41mmol)及び触媒量のヨウ化ナトリウムを加えた。反応混合物を60℃で1時間加熱した。試験切断の後のLCMSにより、45%の変換が明らかになった。m/z 482 [M++H]+. 樹脂をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０３７８】
第5段階：(S)-[3-(5-ヒドロキシカルバモイル-ペンチルカルバモイル)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (69)
【化１４２】
0005405820.tif 000145
【０３７９】
第4段階の樹脂(1.0g、ローディング0.94mmol/g)を、2% TFA/DCM (10ml)中で20分間穏やかに振とうした。樹脂をろ過した。ろ過物を回収し、減圧下で室温にて蒸発させた。樹脂を2% TFA/DCM (10ml)で再処理し、20分後にろ過した。合わせたろ過物を減圧下で室温にて蒸発乾燥させて、残渣を得た。残渣を分取HPLCにより精製して、化合物(69)を得た。LCMS純度89%, m/z 482 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.24-1.82 (14 H, m, 7 x CH2), 2.03 (2 H, t, CH2), 3.30 (2 H, t, CH2), 4.08 (1 H, d, CHHPh), 2.20 (1 H, d, CHHPh), 5.09 (1 H, s, OCOCHPh), 5.18 (1 H, m, CHOCO), 7.39-7.54 (7 H, m, Ar), 7.77 (2 H, m, Ar).
【０３８０】
第6段階：シクロペンチルエステルのけん化
【化１４３】
0005405820.tif 000146
【０３８１】
第4段階の樹脂(1.35g、ローディング0.94mmol/g)を、THF (4.7ml)及びメタノール(4.7ml)に懸濁した。1.4M水酸化ナトリウムを加えた(9.4ml、12.66mmol)。混合物を48時間振とうした。試験切断のLCMSは、酸への49%の変換を示した。m/z 414 [M++H]+. 樹脂をろ過し、水×2、MeOH×2、次いで標準洗浄手順で洗浄した。樹脂を真空乾燥した。
【０３８２】
第7段階：(S)-[3-(5-ヒドロキシカルバモイル-ペンチルカルバモイル)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 (70)
【化１４４】
0005405820.tif 000147
【０３８３】
第6段階の樹脂(1.35g、ローディング0.94mmol/g)を、2% TFA/DCM (10ml)中で20分間穏やかに振とうした。樹脂をろ過した。ろ過物を回収し、減圧下で室温にて蒸発させた。樹脂を2% TFA/DCM (10ml)で再処理し、20分後にろ過した。合わせたろ過物を減圧下で室温にて蒸発乾燥させて、残渣を得た。残渣を分取HPLCにより精製して化合物 (70)を得た。LCMS純度100%, m/z 414 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.30 (2 H, m, CH2), 1.57 (4 H, m, 2 x CH2), 2.20 (2 H, t, CH2), 3.30 (2 H, t, CH2), 4.05 (1 H, d, CHHPh), 4.18 (1 H, d, CHHPh), 4.90 (1 H, s, OCOCHPh), 7.35-7.52 (7 H, m, Ar), 7.78 (2 H, m, Ar).
【０３８４】
化合物(71)及び化合物(72)で例示される図4の化合物の合成
【化１４５】
0005405820.tif 000148
【０３８５】
構成要素M、N、Oの製造
構成要素M
【化１４６】
0005405820.tif 000149
【０３８６】
第1段階：2-(3-アミノ-フェニル)-エタノール
ニトロフェネチルアルコール(8.0g、0.047mol)及び10% Pd/C (0.6g)のエタノール(100ml)中の混合物を、水素雰囲気下で(バルーン圧力)18時間撹拌した。反応混合物を、セライトパッドを通してろ過し、Pd/C触媒を除去した。ろ過物を減圧下で濃縮し、明るい茶色の固体6.1gを得た(収率95%)。LCMS純度98%, m/z 138 [M+H]+. 
【０３８７】
第2段階：3-(2-ブロモ-エチル)-フェニルアミン
2-(3-アミノ-フェニル)-エタノール(2.0g)の48% HBr水溶液(20ml)中の溶液を、90℃で18時間加熱した。混合物を室温まで冷却し、形成された沈殿物をろ過により回収した。固体を真空乾燥して構成要素M 1.8gを得た(収率61%)。LCMS純度90%, m/z 200/202 [M+H]+.
【０３８８】
構成要素N
【化１４７】
0005405820.tif 000150
【０３８９】
第1段階：2-(3-ニトロ-フェノキシ)-エタノール
3-ニトロフェノール(10g、71.9mmol)のDMF (40ml)溶液に、NaOHペレット(3.16g、79.1mmol)及び2-ブロモエタノール (5.6ml、79.1mmol)を加えた。反応混合物を60℃にて18時間加熱した。LCMSは、所望の生成物への65%の変換を示した。反応混合物を水(10ml)で希釈し、2M HClでゆっくりと中和した。反応混合物をEtOAc (50ml)で抽出し、水 (50ml)で洗浄した。EtOAc層を乾燥させ(Na2SO4)、ろ過し、蒸発乾燥させた。30% EtOAc/ヘプタンで溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィー精製により、所望の生成物を得た(8.2g、収率62%)。LCMS純度100%, m/z 184 [M+H]+.
【０３９０】
第2段階：2-(3-アミノ-フェノキシ)-エタノール
還元を、構成要素Mについて概説した手順を用いて行った。
【０３９１】
第3段階：3-(2-ブロモ-エトキシ)-フェニルアミン
臭素化を、構成要素Mについて記載した手順を用いて行った。
【０３９２】
構成要素O
【化１４８】
0005405820.tif 000151
【０３９３】
構成要素Oは、構成要素Gについて記載したようにして、2-ブロモエタノールの代わりに3-ブロモ-1-プロパノールを用いて製造した。
【０３９４】
化合物(71、R = シクロペンチル)及び化合物(72、R =H)で例示される図4の化合物の合成
【化１４９】
0005405820.tif 000152
【０３９５】
第1段階：アニリン誘導体のカルボン酸官能化樹脂へのカップリング
【化１５０】
0005405820.tif 000153
【０３９６】
スベリン酸で誘導体化したヒドロキシルアミン2-クロロトリチル樹脂(1.0g、0.94mmol、ローディング0.94mmol)のDCM/DMF (10ml/10ml)中の懸濁物に、DIPEA (1.75ml)、次いで構成要素M、0.8g、2.82mmolを加えた。PyBrOP (0.53g、3.76mmol)を加え、懸濁物を18時間振とうした。樹脂を、標準洗浄手順を用いて洗浄し、充分に乾燥させた。
【０３９７】
第2段階：臭化物のL-フェニルグリシンシクロペンチルエステルでの置換
【化１５１】
0005405820.tif 000154
【０３９８】
バイアル中の第1段階の樹脂(0.4g、0.38mmol)のDMF (4ml)中の懸濁物に、L-フェニルグリシンシクロペンチルエステルトシル塩(0.44g、1.12mmol)及びDIPEA (0.67ml、3.76mmol)、続いてNaI (50mg)を加えた。反応物を65℃にて8時間放置した。樹脂を、標準洗浄手順を用いて充分に洗浄した。
【０３９９】
第3段階：(S)-[2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-フェニル]-エチルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (71)
【化１５２】
0005405820.tif 000155
【０４００】
第2段階の樹脂を、2% TFA/ DCM (10ml×3)で切断した。ろ過物を濃縮乾燥し、残渣を分取HPLCにより精製して、化合物(71)をTFA塩として得た。収率21mg (全体で11%)。LCMS純度99%, m/z 510 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.35-1.95 (16 H, m 8 x CH2), 2.10 (2 H, t, CH2), 2.38 (2 H, t, CH2), 2.91-3.29 (4 H, m), 5.18 (1 H, s, OCOCHPh), 5.32 (1 H, m, CHOCO), 6.98 (1 H, m, Ar), 7.30 (2 H, m, Ar), 7.47-7.56 (5 H, m, Ar), 7.62 (1 H, s, Ar).
【０４０１】
第4段階：けん化
【化１５３】
0005405820.tif 000156
【０４０２】
第2段階の樹脂(1.2g、1.12mmol)を、THF/MeOH (12ml/12ml)中に懸濁した。2.7M NaOH溶液を加え、混合物を室温にて18時間振とうした。反応の完了の際に、樹脂を充分に洗浄した(標準洗浄手順)。
【０４０３】
第5段階：(S)-[2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-フェニル]-エチルアミノ]-フェニル-酢酸 (72)
【化１５４】
0005405820.tif 000157
【０４０４】
第4段階の樹脂(0.8g、0.76mmol)を、2% TFA/DCM (10ml×3)で切断した。ろ過物を濃縮乾燥し、残渣を分取HPLCにより精製して、化合物(72)をTFA塩として得た。収率40mg (全体で10%)。LCMS純度100%, m/z 442 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz  MeOD), δ: 1.20-1.35 (4 H, m, 2 x CH2), 1.45-1.70 (4 H, m, 2 x CH2), 1.95 (2 H, t, CH2), 2.25 (2 H, t, CH2), 2.80-3.20 (4 H, m CH2NH, CH2Ph), 5.00 (1 H, s, CHCOOH), 6.85 (1 H, m, Ar), 7.15 (2 H, m, Ar), 7.40 (5 H, s, Ar), 7.50 (1 H, s, Ar).
【０４０５】
以下の化合物は、化合物(71)及び化合物(72)について記載した手順に従って製造した。
(S)-2-[2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-フェノキシ]-エチルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (73) 
構成要素Nを用いた
LCMS純度94%, m/z 540 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.26-1.82 (16 H, m, 8 x CH2), 2.11 (2 H, t, CH2), 2.39 (2 H, t, CH2), 3.15 (1 H, dd, CHHPh), 3.44 (1 H, dd, CHHPh), 3.56 (2 H, m, CH2), 4.30 (2 H, t, CH2), 4.40 (1 H, m), 5.13 (1 H, m, CHOCO), 6.76 (1 H, d, Ar), 7.00 (1 H, d, Ar), 7.24-7.41 (6 H, m, Ar), 7.57 (1 H, s, Ar).
【０４０６】
(S)-2-[2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-フェノキシ]-エチルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 (74)
構成要素Nを用いた
LCMS純度100%, m/z 472 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.35-1.46 (4 H, m, 2 x CH2), 1.61-1.77 (4 H, m, 2 x CH2), 2.11 (2 H, t, CH2), 2.40 (2 H, t, CH2), 3.28-3.40 (2 H, m, CH2, マスクされたシグナル), 3.53 (2 H, t, CH2), 4.29 (2 H, t, CH2), 4.38 (1 H, t, OCOCHCH2), 6.75 (1 H, d, Ar), 7.00 (1 H, d, Ar), 7.25 (1 H, t, Ar), 7.30-7.41 (5 H, m, Ar), 7.53 (1 H, s, Ar).
【０４０７】
(S)-2-[3-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-フェノキシ]-プロピルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (75)
構成要素Oを用いた
LCMS純度100%, m/z 554 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.29-1.87 (16 H, m, 8 x CH2), 2.10 (2 H, t, CH2), 2.21 (2 H, m, CH2), 2.37 (2 H, t, CH2), 3.12 (1 H, dd, CHHPh), 3.25-3.43 (3 H, m, CHHPh, CH2), 4.11 (2 H, t, CH2), 4.33 (1 H, m, OCOCHCH2), 5.18 (1 H, m, CHOCO), 6.78 (1 H, d, Ar), 7.00 (1 H, d, Ar), 7.22 (1 H, t, Ar), 7.24-7.39 (5 H, m, Ar), 7.44 (1 H, s, Ar).
【０４０８】
(S)-2-[3-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-フェノキシ]-プロピルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 (76)
構成要素Oを用いた
LCMS純度100%, m/z 486 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.34-1.47 (4 H, m, 2 x CH2), 1.60-1.75 (4 H, m, 2 x CH2), 2.10 (2 H, t, CH2), 2.19 (2 H, m, CH2), 2.38 (2 H, t, CH2), 3.25-3.40 (4 H, m, 2 x CH2, マスクされたシグナル), 4.09 (2 H, t, CH2), 4.35 (1 H, OCOCHCH2), 6.75 (1 H, d, Ar), 6.98 (1 H, d, Ar), 7.20 (1 H, t, Ar), 7.28-7.39 (5 H, m, Ar), 7.41 (1 H, s, Ar).
【０４０９】
(S)-[3-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-フェノキシ]-プロピルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (77)
構成要素Oを用いた
LCMS純度100%, m/z 540 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.20-1.50 (8 H, m, 4 x CH2), 1.50-1.80 (8 H, m, 4 x CH2), 1.80-1.90 (2 H, m, NHCH2CH2), 2.00 (2 H, t, CH2), 2.25 (2 H, t, CH2), 2.55-2.70 (2 H, m, NHCH2), 3.90 (2 H, t, CH2CH2O), 4.25 (1H, s, OCOCHPh), 5.05 (1 H, m, CHOCO), 6.55 (1 H, m, Ar), 6.95 (1 H, m, Ar), 7.00-7.10 (1 H, m, Ar), 6.15-6.35 (6 H, m, Ar)
【０４１０】
(S)-[3-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-フェノキシ]-プロピルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (78)
構成要素Oを用いた
LCMS純度100%, m/z 472 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, DMSO), δ: 1.20-1.40 (4 H, m, 2 x CH2), 1.45-1.65 (4 H, m, 2 x CH2), 1.90 (2 H, m, NHCH2CH2), 2.00-2.20 (2 H, m, CH2), 2.20-2.35 (2 H, m, CH2), 2.80-3.10 (2 H, m, NHCH2 マスクされたシグナル), 3.90-4.00 (2 H, m, CH2CH2O), 4.60-4.85 (1 H, br s, OCOCHPh), 6.55 (1 H, d, Ar), 7.05 (1 H, d, Ar), 7.15 (1 H, m, Ar), 7.30-7.60 (6 H, m, Ar), 8.50-8.85 (1H, br s), 9.85 (1 H, s), 10.35 (1 H, s).
【０４１１】
化合物79及び化合物80で例示される図5の化合物の合成
【化１５５】
0005405820.tif 000158
【０４１２】
化合物79 (R = シクロペンチル)及び化合物80 (R = H)の合成
【化１５６】
0005405820.tif 000159
【０４１３】
第1段階: 3-ニトロ-ベンジルアミン
【化１５７】
0005405820.tif 000160
【０４１４】
臭化3-ニトロベンジル(10g、46.3mmol)をエタノール(200ml)に溶解し、室温にて撹拌した。濃NH3 (aq) (200ml)のエタノール(300ml)溶液を反応物に30分かけて滴下した。反応物を室温にて18時間撹拌した後に、蒸発乾燥させた。水(350ml)を残渣に加え、溶液をEtOAc (2×200ml)で洗浄した。水層を1M NaOHで塩基性にし、EtOAc (2×200ml)で抽出した。塩基性層の有機抽出物を合わせて、乾燥させ(Na2SO4)、蒸発乾燥させた。生成物をオレンジ色の油として得た(4.6g、収率65%)。LCMS純度100%, m/z 153 [M++H]+.
【０４１５】
第2段階：1-イソシアナートメチル-3-ニトロ-ベンゼン
【化１５８】
0005405820.tif 000161
【０４１６】
3-ニトロ-ベンジルアミン(2.3g、15.1mmol)を、無水ジオキサン(50ml)に、N2雰囲気下で溶解した。ジホスゲン(2.2ml、18.2mmol)を加え、沈殿物が形成され、これは75℃に加熱すると溶解した。反応物を75℃にて3時間撹拌し、冷却し、蒸発乾燥させて、粗物質3.4gを得て、これをさらなる精製を行わずに次の工程で用いた。
【０４１７】
第3段階：(S)-[3-(3-ニトロ-ベンジル)-ウレイド]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化１５９】
0005405820.tif 000162
【０４１８】
L-フェニルグリシンシクロペンチルエステルトシル塩(7.47g、19.1mmol)を、DMF (70ml)に溶解した。トリエチルアミン(5.8ml、42.0mmol)を加え、混合物を0℃に冷却した。1-イソシアナートメチル-3-ニトロ-ベンゼンの溶液(3.4g、30mlのDMF中に19.1mmol)を反応混合物に、N2雰囲気下でゆっくりと加えた。撹拌を18時間継続して、反応物を室温まで温めた。混合物を水(200ml)で希釈し、EtOAc (2×200ml)で抽出した。有機抽出物を水(3×100ml)及び塩水(100ml)で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、蒸発乾燥させた。粗尿素をカラムクロマトグラフィー(1% MeOH/DCM)により精製して、淡黄色の油を得た(4.6g、収率65%)。LCMS純度85%, m/z 398 [M++H]+.
【０４１９】
第4段階：(S)-[3-(3-アミノ-ベンジル)-ウレイド]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化１６０】
0005405820.tif 000163
【０４２０】
(S)-[3-(3-ニトロ-ベンジル)-ウレイド]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル(3.6g、9.0mmol)をエタノール(50ml)に溶解した。Pd/C (10%湿潤)触媒(100mg)を加え、混合物をH2雰囲気下に(バルーン圧力)、18時間撹拌した。反応混合物をセライトの栓を通してろ過し、蒸発乾燥させて紫色の油を得た(2.34g、収率71%)。LCMS純度90%, m/z 368 [M++H]+.
【０４２１】
第5段階：樹脂へのカップリング
【化１６１】
0005405820.tif 000164
【０４２２】
スベリン酸で誘導体化したヒドロキシルアミン2-クロロトリチル樹脂(1.5g、ローディング0.94mmol/g)を、DMF (15ml)中で膨潤させ、PyBOP (2.2g、4.23mmol)、次いでDIPEA (2.4ml、14.1mmol)を加えた。第4段階のアニリン(1.3g、3.53mmol)をDCM (15ml)に溶解し、反応混合物に加えた。反応物を室温にて42時間振とうした後に、標準の樹脂の洗浄及び乾燥を行った。
【０４２３】
第6段階：(S)-[3-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジル]-ウレイド]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (79)
【化１６２】
0005405820.tif 000165
【０４２４】
第5段階の樹脂に結合したシクロペンチルエステル(1.75g)を、2%TFA/DCM (15ml)と共に10分間振とうし、その後、樹脂をろ過して減圧下で室温にて溶媒を蒸発させた。この手順を繰り返し(×3)、合わせた粗生成物を分取HPLCにより精製して、化合物(79)を得た。LCMS純度100%, m/z 539 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.34-1.90 (16 H, m, 8 x CH2), 2.11 (2 H, t, CH2), 2.38 (2 H, t, CH2), 4.30 (2 H, s, CH2), 5.18 (1 H, m, CHOCO), 5.30 (1 H, s, OCOCHPh), 7.05 (1 H, d, Ar), 7.26 (1 H, t, Ar), 7.34-7.40 (5 H, m, Ar), 7.47 (2 H, m, Ar).
【０４２５】
第7段階：(S)-[3-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジル]-ウレイド]-フェニル-酢酸 (80)
【化１６３】
0005405820.tif 000166
【０４２６】
化合物 (79) (75mg)をTHF (1ml)に溶解し、2M NaOH (aq,1ml)を加えた。反応物を室温にて2時間撹拌した。THFをN2流の下で除去し、水層(約1ml)を分取HPLCにより精製して、化合物(80)を得た。LCMS純度99%, m/z 471 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.20-1.35 (4 H, m, 2 x CH2), 1.45-1.65 (4 H, m, 2 x CH2), 2.00 (2 H, t, CH2), 2.25 (2 H, t, CH2), 4.20 (2 H, s CH2NH), 5.25 (1 H, s CHPh), 6.90 (1 H, d, Ar), 7.10 (1 H, t, Ar), 7.15-7.40 (7 H, m, Ar).
【０４２７】
以下の化合物は、化合物(79)及び化合物(80)について記載した手順に従って製造した。
(S)-2-[3-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジル]-ウレイド]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (81)
LCMS純度95%, m/z 553 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.20-1.40 (4 H, m, 2 x CH2), 1.40-1.80 (12 H, m, 6 x CH2), 2.00 (2 H, t, CH2), 2.25 (2 H, t, CH2), 2.90 (2 H, m, CHCH2Ph), 4.15 (2 H, s CH2NH), 4.40 (1 H, m, OCOCHCH2), 5.00 (1 H, m, CHOCO), 6.85 (1 H, d, Ar), 7.00-7.25 (6 H, m, Ar), 7.35 (2 H, br s, Ar).
【０４２８】
(S)-2-[3-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジル]-ウレイド]-3-フェニル-プロピオン酸 (82)
LCMS純度94%, m/z 485 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.30-1.50 (4 H, m, 2 x CH2), 1.60-1.80 (4 H, m, 2 x CH2), 2.10 (2 H, t, CH2), 2.35 (2 H, t, CH2), 2.95-3.25 (2 H, m, CHCH2Ph), 4.25 (2 H, s, CH2NH), 4.60 (1 H , m OCOCHCH2), 7.00 (1 H, d, Ar), 7.15-7.35 (6 H, m, Ar), 7.45 (2 H, m, Ar)
【０４２９】
化合物(83)及び化合物(84)で例示される図6に記載された化合物の合成
【化１６４】
0005405820.tif 000167
【０４３０】
第1段階：7-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ヘプタン酸 メチルエステル
【化１６５】
0005405820.tif 000168
【０４３１】
スベリン酸モノメチル(25.0 g、13.3 mmol、1.0 eq)を、THF (300 mL)及びDCM (300 mL)に溶解した。EDC.HCl (25.46 g、13.3 mmol、1.0 eq)を撹拌している溶液に加え、次いで、HOBt (17.95 g、13.3 mmol、1.0 eq)及びトリエチルアミン(48.5 mL、34.5 mmol、2.6 eq)を加えた。O-(1-イソブトキシ-エチル)-ヒドロキシルアミン(21.9 mL、15.9 mmol、1.2 eq)を粘性の溶液に加え、反応物を室温にて一晩撹拌した。反応混合物を真空濃縮し、DCM (350 mL)を加え、水(250 mL)及び塩水(200 mL)で洗浄した。有機層を単離し、乾燥させ(MgSO4)、ろ過し、真空濃縮した。生成物を白色固体として得た(36.6 g、収率91%)。LCMS純度88%, m/z 302 (M++H)+. これを、さらなる精製を行わずに次の工程で用いた。
【０４３２】
第2段階：7-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ヘプタン酸
【化１６６】
0005405820.tif 000169
【０４３３】
7-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ヘプタン酸 メチルエステル(36.6 g、12.1 mmol、1.0 eq)を、水酸化リチウム(8.68 g、36.2 mmol、3.0 eq)の存在下で50℃にて3時間、THF (200 mL)及び水(200 mL)中で撹拌した。THFを真空蒸発させ、水(100 mL)及び酢酸エチル(200 mL)の混液を加えた。混合物を、1N HClの添加によりpH 3まで注意深く酸性化した。有機層を単離し、水層を酢酸エチル(150 mL)で再抽出した。有機相を合わせ、乾燥させ(MgSO4)、ろ過し、真空濃縮した。生成物を白色固体として得て(29.0 g、収率83%)、m/z 288 [M++H]+ 、さらなる精製を行わずに第4段階で用いた。
【０４３４】
第3段階：4-トリメチルシラニルオキシメチル-フェニルアミン
【化１６７】
0005405820.tif 000170
【０４３５】
撹拌している4-アミノベンジルアルコール(16.0 g、13.0 mmol、1.0 eq)のTHF (400 mL)溶液に、トリエチルアミン(18.9 mL、13.6 mmol、1.05 eq)、次いでトリメチルクロロシラン(17.2 mL、13.6 mmol、1.05 eq)を加えた。反応混合物を窒素雰囲気下に、室温にて一晩撹拌した。THFを真空蒸発させ、混合物を酢酸エチル(300 mL)及び水(300 mL)で分画した。有機相を単離し、水層を酢酸エチル(2×100 mL)で再抽出した。合わせた有機相を塩水で洗浄し(2×150 mL)、乾燥させ(MgSO4)、ろ過して真空濃縮した。生成物を黄色の油として得て(24.0 g、収率95%)、さらなる精製を行わずに第4段階で用いた。
【０４３６】
第4段階：オクタン二酸 (4-ヒドロキシメチル-フェニル)-アミド(1-イソブトキシエトキシ)-アミド
【化１６８】
0005405820.tif 000171
【０４３７】
7-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ヘプタン酸(5.0 g、1.72 mmol、1.0 eq)及び4-トリメチルシラニルオキシメチル-フェニルアミン(3.38 g、1.72 mmol、1.0 eq)を、DMF (140 mL)中で一緒に撹拌した。混合物にPyBroP (10.5 g、2.25 mmol、1.3 eq)及びDiPEA (3.9 mL、2.25 mmol、1.3 eq)を加えた。反応物を窒素雰囲気下に、室温にて一晩撹拌した。酢酸エチル(200 mL)及び水(200 mL)を加えた。水相を単離し、酢酸エチル(2×100 mL)で再抽出した。合わせた有機相を水(2×50 mL)及び塩水(50 mL)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、ろ過し、真空濃縮した。粗生成物を最少量の酢酸エチルに溶解し、シリカのパッドを通して精製した。生成物をシリカを通して酢酸エチルを用いて充分に洗浄し、LCMS分析により溶出が終わるまで100 mLのコニカルフラスコに回収した。精製により黄色の油を得た(3.59 g、収率53%)。LCMS純度61%, m/z 417 [M++Na]+
【０４３８】
第5段階：オクタン二酸 (4-ホルミル-フェニル)-アミド(1-イソブトキシ-エトキシ)-アミド
【化１６９】
0005405820.tif 000172
【０４３９】
オクタン二酸 (4-ヒドロキシメチル-フェニル)-アミド(1-イソブトキシエトキシ)-アミド(100 mg、0.025 mmol、1.0 eq)を、DCM (5 mL)に溶解した。反応混合物に、MnO2 (286 mg、0.33 mmol、13.0 eq)を加え、室温にて1.5時間撹拌した。反応混合物をセライトを通してろ過し、DCMで洗浄し、その後、溶媒を蒸発させて黄色の油を得た(78.6 mg、収率79%)。LCMS純度53%, m/z 415 [M++Na]+. 生成物を、さらなる精製を行わずに後続の工程で用いた。
【０４４０】
第6段階：(R)-[4-[7-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ヘプタノイルアミノ]-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化１７０】
0005405820.tif 000173
【０４４１】
オクタン二酸 (4-ホルミル-フェニル)-アミド(1-イソブトキシ-エトキシ)-アミド(276 mg、0.70 mmol、1.0 eq)及びD-フェニルグリシン シクロペンチルエステル(170 mg、0.77 mmol、1.1 eq)を、DCE (15 mL)中で10分間撹拌した。酢酸 (65μL)を加え、2分間撹拌した。ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(448 mg、0.21 mmol、3.0 eq)を導入し、反応混合物を窒素雰囲気下に、室温にて1時間撹拌した。炭酸水素ナトリウムを加えて、反応をクエンチした。次いで、DCMを加え、有機層を単離した。水層をDCMで再抽出し、有機層を合わせ、乾燥させ(MgSO4)、ろ過し、真空濃縮して、粗生成物を得た(100 mg、24%)。LCMS純度94.0%, m/z 496 [m++H]+ これを、さらなる精製を行わずに用いた。
【０４４２】
第7段階：(R)-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (83)
【化１７１】
0005405820.tif 000174
【０４４３】
(R)-[4-[7-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ヘプタノイルアミノ]-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (50 mg、0.08 mmol、1 eq)を、DCM (0.5 mL)に溶解し、ジオキサン (0.2 mL)中の4M HClと共に30分間撹拌した。得られた塩を濃縮し、メタノールに溶解し、分取HPLCにより精製して、化合物(83)を得た。LCMS純度94%, m/z 496 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.41-1.95 (16H, m, 8 x CH2), 2.15-2.17 (2H, m, CH2), 2.40 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2), 4.16 (2H, q, J = 13.5 Hz, CH2), 5.12 (1H, s, CH), 5.27-5.30 (1H, m, CH), 7.40 (2H, d, J = 8.7 Hz, Ar-H), 7.50-7.56 (5H, m, Ar-H), 7.67 (2H, d, J = 8.7 Hz, Ar-H).
【０４４４】
第8段階：(R)-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-フェニル-酢酸 (84)
【化１７２】
0005405820.tif 000175
【０４４５】
CHR-003644 (50 mg、0.008 mmol、1.0 eq)のTHF (2 mL)及び水(2 mL)中の溶液に、LiOH (8.0 mg、0.033 mmol、4.0 eq)を加えた。反応物を窒素雰囲気下に40℃にて一晩撹拌した。THFを真空蒸発させ、残った水性反応溶媒を酢酸エチルで洗浄した。溶液をpH 3まで酸性化し、生成物を真空濃縮した。得られた塩をメタノールに溶解し、生成物を分取HPLCにより精製して、化合物(84)を得た。LCMS純度97%, m/z 428 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.39-1.41 (4H, m, 2 x CH2), 1.62-1.74 (4H, m, 2 x CH2), 2.13-2.15 (2H, m, CH2), 2.40 (2H, t, J = 7.5 Hz, CH2), 4.14 (2H, q, J = 12.9 Hz, CH2), 5.06 (1H, s, CH), 7.39 (2H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H), 7.54 (5H, s, Ar-H), 7.67 (2H, d, J = 8.7 Hz, Ar-H)
【０４４６】
以下の化合物は、化合物(83)及び化合物(84)と同様の方法で、適切な中間体を用いて製造した。
【０４４７】
(S)-2-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステル (85)
LCMS純度97%, m/z 476 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 0.98-1.03 (6H, m, 2 x CH3), 1.41-1.42 (4H, m, 2 x CH2), 1.71-1.96 (14H, m, 7 x CH2), 2.10-2.15 (2H, m, CH2), 2.40 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2), 3.96-4.01 (1H, m, CH), 4.15-4.26 (2H, m, CH2), 4.81 (1H, s, CH), 5.31-5.34 (1H, m, CH), 7.44 (2H, d, J = 8.7 Hz, Ar-H), 7.70 (2H, d, J = 8.7 Hz, Ar-H)
【０４４８】
(S)-シクロヘキシル-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-酢酸 (87)
LCMS純度95%, m/z 434 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.23-1.96 (18H, m, 9 x CH2), 2.10-2.15 (2H, m, CH2), 2.39 (2H, m, CH2), 3.71 (1H, m, CH), 4.12 (2H, q, J = 7.2 Hz, CH2), 4.80 (1H, s, CH), 7.43 (2H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H), 7.68 (2H, d, J = 8.7 Hz, Ar-H)
【０４４９】
(S)-3-tert-ブトキシ-2-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-酪酸 シクロペンチルエステル (88)
LCMS純度83%, m/z 520 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.19 (9H, s, 3 x CH3), 1.29 (3H, d, J = 7.8 Hz, CH3), 1.37-1.41 (4H, m, CH2), 1.64-1.89 (12H, m, CH2), 2.09-2.15 (2H, m, CH2), 2.40 (2H, t, J = 7.2 Hz, CH2), 3.36-3.37 (1H, m, CH), 3.70-3.71 (1H, m, CH), 4.24-4.27 (2H, m, CH2), 5.17-5.19 (1H, m, CH), 7.42 (2H, d, J = 6.9 Hz, Ar-H), 7.68 (2H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H)
【０４５０】
(S)-3-tert-ブトキシ-2-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (89)
LCMS純度95%, m/z 506 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.23 (9H, s, C(CH3)3), 1.36-2.09 (16H, m, 8 x CH2),  1.66 (2H, t, J=7.7Hz, CH2), 1.75 (2H, t, J=7.4Hz, CH2), 2.11 (2H, t, J=7.4Hz, CH2), 2.40 (2H, t, J=7.3Hz, CH2), 3.92 (2H, m, CH2), 4.16 (1H, m, CH), 4.26 (2H, s, CH2), 5.32 (1H, m, CH), 7.45 (2H, d, J=8.5Hz, ArH), 7.67 (2H, dd, J=3.2, 8.3Hz, ArH).
【０４５１】
(S)-3-tert-ブトキシ-2-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-プロピオン酸 (90)
LCMS純度95%, m/z 438 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.25 (9H, s, C(CH3)3), 1.39-1.42 (4H, m, 2 x CH2), 1.62-1.69 (4H, m, 2 x CH2), 2.08-2.17 (2H, m, CH2), 2.40 (2H, t, J = 7.5 Hz, CH2), 3.85-3.96 (2H, m, CH2), 4.01-4.04 (1H, m, CH), 4.26 (2H, s, CH2), 7.46 (2H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H), 7.68 (2H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H)
【０４５２】
(S)-2-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (91)
LCMS純度95%, m/z 510 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.17- 2.43 (22H, m, 11 x CH2), 4.19- 4.30 (2H, m, CH2), 5.08 (1H, s, CH), 5.20- 5.26 (1H, m, CH), 7.24 - 7.71 (9H, m, Ar-H)
【０４５３】
化合物(86)は、代替の方法で製造し、改変した条件は以下に説明する。
第6b段階：(S)-シクロヘキシル-[4-[7-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ヘプタノイルアミノ]-ベンジルアミノ]-酢酸 シクロペンチルエステル
【化１７３】
0005405820.tif 000176
【０４５４】
オクタン二酸 (4-ホルミル-フェニル)-アミド (1-イソブトキシ-エトキシ)-アミド(220 mg、0.056 mmol、1.0 eq)及びL-シクロヘキシル-グリシンシクロペンチルエステル(138.9 mg、0.062 mmol、1.1 eq)を、メタノール(8 mL)中で、室温にて一晩撹拌した。水素化ホウ素ナトリウム(31.8 mg、0.084 mmol、1.5 eq)を導入し、反応混合物を15分間撹拌した。反応混合物を氷浴に移し、2滴の水酸化ナトリウム(2M)を加えた。ジエチルエーテルを加え、有機相を単離した。水層をジエチルエーテルで再抽出し、有機層を合わせて塩水で洗浄した。有機相を乾燥させ(MgSO4)、ろ過し、真空濃縮して粗物質を得て、これをさらなる精製を行わずに次の工程に用いた。
【０４５５】
第7b段階：(S)-シクロヘキシル-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルアミノ]-酢酸 シクロペンチルエステル (86)
【化１７４】
0005405820.tif 000177
【０４５６】
第6b段階からの物質(50 mg、0.083 mmol、1 eq)を、DCM/メタノール(2 mL：2 mL)に溶解し、TFA (1.0 mL)と共に2時間撹拌した。得られた塩を濃縮し、メタノールに溶解し、分取HPLCにより精製して、化合物(86)を得た。LCMS純度100%, m/z 502 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.28-1.98 (26H, m, 13 x CH2), 2.10-2.15 (2H, m, CH2), 2.40 (2H, t, J = 7.8 Hz, CH2), 3.81 (1H, d, J = 3.9 Hz, CH), 4.21 (2H, m, CH2), 5.01 (1H, s, CH), 5.23-5.25 (1H, m, CH), 7.43 (2H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H), 7.68 (2H, d, J = 8.7 Hz, Ar-H)
【０４５７】
92及び93の合成
【化１７５】
0005405820.tif 000178
【０４５８】
第1段階：4-(3-ニトロ-フェノキシ)-酪酸 メチルエステル
【化１７６】
0005405820.tif 000179
【０４５９】
3-ニトロフェノール(8.35g、60mmol)のDMF (50ml)溶液に、K2CO3 (16.56g、120mmol)及びメチル1,4-ブロモブチレート(11.95g、66mmol)を加えた。反応物を室温にて16時間撹拌した。反応物を酢酸エチル及び水で希釈した。有機相を分離し、水(2×200ml)で洗浄した。有機相をNa2SO4で乾燥し、真空濃縮した。所望のエーテルを、クロマトグラフィー(酢酸エチル：ヘプタン, 1：9)の後に淡黄色の固体として得た(12.2g、収率85%)。LCMS純度100%, m/z 240 [M++H]+.
【０４６０】
第2段階：4-(3-アミノ-フェノキシ)-酪酸 メチルエステル
【化１７７】
0005405820.tif 000180
【０４６１】
第1段階のニトロエステル(250mg、1mmol)を、エタノール(3ml)に溶解した。Pd/炭素(40mg)を加え、反応物を水素雰囲気下に(バルーン圧力)、16時間撹拌した。反応混合物をセライトを通してろ過した。セライトパッドをエタノールで洗浄し、合わせた有機画分を真空濃縮して、所望の生成物をオレンジ色の油として得た(210mg、収率100%)。LCMS純度89%, m/z 210 [M++H]+. アニリンを、さらなる精製を行わずに次の段階で用いた。
【０４６２】
第3段階：樹脂へのカップリング
【化１７８】
0005405820.tif 000181
【０４６３】
スベリン酸で誘導体化したヒドロキシルアミン2-クロロトリチル樹脂(8g、7.52mmol、ローディング0.94 mmol/g)を、DCM/DMF (80ml/80ml)中で膨潤させた。PyBOP (11.8g、22.6mmol)及びジイソプロピルエチルアミン(13.1ml、75.2mmol)をフラスコに加え、次いで4-(3-アミノ-フェノキシ)-酪酸 メチルエステル(4.73g、22.6mmol)を加えた。反応物を室温にて72時間振とうし、その後、標準洗浄を行い、乾燥した。
【０４６４】
第4段階：エステル加水分解
【化１７９】
0005405820.tif 000182
【０４６５】
第3段階の樹脂(9.5 g)を、THF/MeOH (34 ml/34ml)中に懸濁した。NaOH (1.4 M、aq、34 ml)を加え、反応物を室温にて16時間振とうした。樹脂を、標準洗浄手順を用いて洗浄した後に、風乾させた。
【０４６６】
第5段階：アミノ酸エステルカップリング
【化１８０】
0005405820.tif 000183
【０４６７】
第4段階の樹脂(2.1g)を、DCM/DMF (20ml/20ml)中に懸濁した。PyBOP (3.1g、5.92mmol)、N-フェニルグリシン(phenlglycine) シクロペンチルエステル(2.4g、5.92mmol)及びジイソプロピルエチルアミン(3.4ml、19.7mmol)を連続的に加え、反応物を室温にて72時間振とうした。樹脂を標準洗浄に付し、乾燥させた。
【０４６８】
第6段階：(S)-[4-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-フェノキシ]-ブチリルアミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (92) 
【化１８１】
0005405820.tif 000184
【０４６９】
第5段階の樹脂に結合したシクロペンチルエステル(1.1g)を、2%TFA/DCM (10ml)とともに10分間振とうし、その後、樹脂をろ過し、減圧下で室温にて溶媒を蒸発させた。この手順を繰り返し(×3)、合わせた粗生成物を分取HPLCにより精製して、化合物(92) (114mg)を得た。LCMS純度99%, m/z 568 [M++H]+,  1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.40 (4 H, m, 2 x CH2), 1.45 − 1.90 (13 H, m, アルキル), 2.10 (4 H, m, 2 x CH2), 2.40 (2 H, t, CH2), 2.50 (2 H, m, CH2), 4.00 (2 H, m, CH2), 5.15 (1 H, m, ), 5.40 (1 H, s, NHCHCO), 6.65 (1 H, m, Ar) 7.15 (1 H, m, Ar), 7.20 (1 H, t, Ar), 7.30 (1 H, s, Ar), 7.40 (5 H, s, Ar).
【０４７０】
第7段階：(S)-[4-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-フェノキシ]-ブチリルアミノ]-フェニル-酢酸 (93)
【化１８２】
0005405820.tif 000185
【０４７１】
第6段階のシクロペンチルエステル樹脂(500mg)を、THF (15ml)中に懸濁した。懸濁物に、NaOH (1.4M aq.、1.6 ml)を加え、反応物を室温にて16時間振とうした。ろ過物を除去し、樹脂を洗浄し、乾燥し、その後切断した。切断は、2%TFA/DCM (5ml)と10分間振とうすることにより行い、その後、樹脂をろ過し、減圧下で室温にて溶媒を蒸発させた。この手順を繰り返し(×3)、合わせた粗生成物を分取HPLCにより精製して、化合物(93)を得た(62mg)。LCMS純度99%, m/z 500 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.40 (4 H, m, 2 x CH2), 1.60 − 1.80 (4 H, m, アルキル), 2.10 (4 H, m, 2 x CH2), 2.40 (2 H, t, CH2), 2.50 (2 H, t, CH2), 4.00 (2 H, m, CH2), 5.45 (1 H, s, NHCHCO), 6.65 (1 H, d, Ar) 7.10 (1 H, m, Ar), 7.20 (1 H, t, Ar), 7.25 (1 H, s, Ar), 7.30-7.45 (5 H, m, Ar).
【０４７２】
94及び95の合成
【化１８３】
0005405820.tif 000186
【０４７３】
第1段階：3-ニトロ-ベンジル-クロロホルメートの形成
【化１８４】
0005405820.tif 000187
【０４７４】
3-ニトロベンジルアルコール(10g、65mmol)のジオキサン(無水、100ml)溶液に、トリクロロメチルクロロホルメート(9.47ml、78mmol)を加えた。反応物を窒素の下で75℃にて16時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残渣をジオキサンに再懸濁し、蒸発させた。この手順を繰り返した(×3)。粗クロロホルメートを、さらなる精製を行わずに次の段階に用いた。
【０４７５】
第2段階：(S)-2-(3-ニトロ-ベンジルオキシカルボニルアミノ)-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル
【化１８５】
0005405820.tif 000188
【０４７６】
L-Phe-シクロペンチルエステル.TsOH塩(9.42g、23mmol)を、DCM (40ml)中に懸濁した。トリエチルアミン(6.5ml、47mmol)を加え、反応物を室温にて5分間撹拌した。DCM (10ml)中に溶解した第1段階のクロロホルメート(5g、23mol)を、反応混合物に冷却しながら(氷浴)滴下した。反応物を室温にて16時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣をEtOAc (100ml)に溶解し、水(50ml×3)で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、その後、真空濃縮した。粗物質をクロマトグラフィー(EtOAc：ヘプタン、1：9)により精製して、所望のカルバメートを得た(6.4g、収率67%)。m/z 413 [M++H]+
【０４７７】
第3段階：(S)-2-(3-アミノ-ベンジルオキシカルボニルアミノ)-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル
【化１８６】
0005405820.tif 000189
【０４７８】
第2段階のニトロカルバメート(6.4g、15.5mmol)を、エタノール(64ml)に溶解した。塩化錫二水和物(17.5g、77mmol)を加え、反応物を室温にて16時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をEtOAc (60ml)に溶解した。酒石酸ナトリウムカリウムの飽和溶液(60ml)を加え、次いで炭酸水素ナトリウムの飽和溶液(120ml)を加えた。二相の溶液を15分間撹拌した。有機層を分離し、水相をEtOAc (60ml×1)で抽出した。有機層を合わせ、乾燥させ、溶媒を蒸発させて粗生成物を得て、これをクロマトグラフィー(EtOAc：ヘプタン 1：3 → 1：1)により精製した。所望の生成物を単離した(3.5g、収率59%)。LCMS純度100%, m/z 383 [M++H]+. 
【０４７９】
第4段階：樹脂へのカップリング
【化１８７】
0005405820.tif 000190
【０４８０】
スベリン酸で誘導体化したヒドロキシルアミン2-クロロトリチル樹脂(2.0g、1.88mmol、ローディング0.94 mmol/g)を、DMF (20ml)中に膨潤させた。PyBOP (2.93g、5.64mmol)及びジイソプロピルエチルアミン(3.25ml、18.8mmol)を加えた。DCM (20ml)中に溶解した第3段階のアニリノカルバメート(1.8g、4.7mmol)を加え、反応物を4日間振とうし、その後、ろ過物を除去し、樹脂を標準洗浄し、風乾させた。
【０４８１】
第5段階：(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルオキシカルボニルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (94)
【化１８８】
0005405820.tif 000191
【０４８２】
第4段階の樹脂に結合したシクロペンチルエステル(2g)を、2%TFA/DCM (15ml)と共に10分間振とうし、その後、樹脂をろ過し、減圧下で室温にて溶媒を蒸発させた。この手順を繰り返し(×3)、合わせた粗生成物を分取HPLCにより精製して、化合物(94)を得た。LCMS純度95%, m/z 554 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.30  (4 H, m, 2 x CH2), 1.40 − 1.90 (13 H, m, アルキル), 2.00 (2 H, t, CH2), 2.30 (2 H, t, CH2), 2.90 (2 H, ddd, CH2), 3.80 (1 H, m), 4.25 (1 H, dd, NHCHCO), 4.90 (2 H, s, CH2), 5.05 (1 H, m), 5.35 (1 H, m), 6.95 (1 H, d, Ar) 7.05-7.25 (6 H, m, Ar), 7.35 -7.75 (2 H, m, Ar).
【０４８３】
第6段階：(S)-2-[3-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンジルオキシカルボニルアミノ]3-フェニル-プロピオン酸 (95)
【化１８９】
0005405820.tif 000192
【０４８４】
化合物(94) (100mg、0.18mmol)を、THF (1ml)に溶解し、2M NaOH (1ml)を加えた。反応バイアルを4時間振とうし、その後、THFを窒素流により除去した。水性の残渣を分取HPLCにより精製して、化合物(95) (62mg)を得た。LCMS純度95%, m/z 486 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.35  (4 H, m, 2 x CH2), 1.55 − 1.75 (4 H, m, アルキル), 2.10 (2 H, t, CH2), 2.35 (2 H, t, CH2), 2.95 (2 H, dd, CH), 3.20 (1 H, dd, CH), 4.45 (1 H, dd, NHCHCO), 5.00 (2 H, s, CH2), 7.05 (1 H, d, Ar), 7.20-7.35 (6 H, m, Ar), 7.55 (2 H, m, Ar).
【０４８５】
化合物(96)及び化合物(97)の合成
【化１９０】
0005405820.tif 000193
【０４８６】
第1段階：(S)-7-ニトロ-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボン酸
【化１９１】
0005405820.tif 000194
【０４８７】
Tett Letts 42, 2001, 3507に記載されるようにして製造した。
【０４８８】
第2段階：(S)-7-ニトロ-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2,3-ジカルボン酸-2-tert-ブチルエステル
【化１９２】
0005405820.tif 000195
【０４８９】
(S)-7-ニトロ-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボン酸(7g、31.5mmol)を、THF：水(1：1、350 ml)に溶解した。K2CO3を加え(5.2g、37mmol)、次いで無水boc (13.7g、63 mmol)を加え、溶液を40℃にて1時間加熱した。THFを蒸発により除去し、水層をpH = 7に調整し、その後、EtOAcで抽出した。有機層を0.1 M HCl (×3)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させた後に真空濃縮した。所望のN-保護された生成物を、カラムクロマトグラフィー(EtOAc：ヘプタン 2：3 → EtOAc)の後に得た(7.5g、74%)。LCMS純度92%。分子イオンは観察されなかった。
【０４９０】
第3段階：(S)-3-((S)-1-シクロペンチルオキシカルボニル-3-メチル-ブチルカルバモイル)-7-ニトロ-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボン酸 tert-ブチルエステル
【化１９３】
0005405820.tif 000196
【０４９１】
(S)-7-ニトロ-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2,3-ジカルボン酸-2-tert-ブチルエステル(2.5g、7.76mmol)を、DCM (100ml)中に溶解した。HOBt (1.16g、8.53mmol)を加え、L-ロイシン シクロペンチルエステル(3.19g、8.53mmol)を加え、次いでトリエチルアミン(2.38ml、17.1mmol)を加えた。EDCI.HCl (1.46g、8.5mmol)を加え、反応物を室温にて16時間撹拌した。反応物にDCM (100ml)を加え、有機層を水(3×300ml)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、溶媒を真空除去した。粗生成物を、クロマトグラフィー(EtOAc：ヘプタン 1：2 → EtOAc)により精製して、所望の生成物3.14gを得た(収率82%)。LCMS純度100%, m/z 504 [M++H]+
【０４９２】
第4段階：(S)-7-アミノ-3-((S)-1-シクロペンチルオキシカルボニル-3-メチル-ブチルカルバモイル)-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボン酸 tert-ブチルエステル
【化１９４】
0005405820.tif 000197
【０４９３】
(S)-3-((S)-1-シクロペンチルオキシカルボニル-3-メチル-ブチルカルバモイル)-7-ニトロ-3,4-ジヒドロ-1H-イソキノリン-2-カルボン酸 tert-ブチルエステル(3.14g、6.24mmol)、及びPd/炭素(0.4g)を、EtOAc (20ml)中に懸濁した。反応物を水素雰囲気下で(バルーン圧力)、16時間撹拌した。溶液をセライトのパッドを通してろ過し、溶媒を除去した。粗生成物(3.04g)を、さらなる精製を行わずに次の工程で用いた。LCMS純度83%, m/z 474 [M++H]+
【０４９４】
第5段階：樹脂へのカップリング
【化１９５】
0005405820.tif 000198
【０４９５】
スベリン酸で誘導体化したヒドロキシルアミン2-クロロトリチル樹脂(2.2g、ローディング0.94mmol/g)を、DCM/DMF (1：1, 80ml)中で膨潤させた。PyBOP (3.20g、6.15mmol)及びジイソプロピルエチルアミン(3.54ml、20.7mmol)を加えた。DMF (40ml)中に溶解した第3段階のアニリノアミド(3.04g、6.43mmol)を加え、反応物を3日間振とうした後に、ろ過物を除去し、樹脂を標準洗浄し、風乾させた。
【０４９６】
第6段階：(S)-2-[[(S)-7-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボニル]-アミノ]-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステル (96)
【化１９６】
0005405820.tif 000199
【０４９７】
第5段階の樹脂に結合したシクロペンチルエステル(600mg)を、2%TFA/DCM (8ml)と共に30分間振とうし、その後、樹脂をろ過し、減圧下で室温にて溶媒を蒸発させた。粗生成物を分取HPLCにより精製して、(S)-2-[[(S)-7-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボニル]-アミノ]-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステル (17.5mg)を得た。樹脂の切断に加えて、boc基を除去した。LCMS純度98%, m/z 545 [M++H]+,  1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 0.85 − 0.88 (6 H, 2 x d, J = 6.4 Hz, J = 6.5 Hz, 2 x CH3), 1.30 (4 H, m, アルキル), 1.50 − 1.65 (13 H, m, アルキル), 1.80 (2 H, m, CH2), 1.95 (2 H, t, CH2), 2.25 (2 H, t, CH2), 3.00 (1H, m, CH), 3.25 (1H, m, CH), 4.10 (1 H, m, CH), 4.25 (2H, s, CH2), 4.29 (1H, m, CH), 5.10 (1 H, m, CH), 7.11 (1H, d, J = 8.4 Hz, Ar), 7.25 (1H, d, J = 8.3 Hz, Ar ), 7.55 (2H, m, Ar).
【０４９８】
第7段階：(S)-2-[[(S)-7-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボニル]-アミノ]-4-メチル-ペンタン酸 (96)
【化１９７】
0005405820.tif 000200
【０４９９】
第5段階のシクロペンチルエステル樹脂(1.55g)を、THF/MeOH (10ml/10ml)中に懸濁した。懸濁物に、NaOH (1.4 M aq.、5ml)を加え、反応物をr.t.にて16時間振とうした。ろ過物を除去し、樹脂を洗浄し(標準)、切断の前に乾燥させた。切断(600mgの樹脂)は、2%TFA/DCM (8ml)と30分間振とうすることにより行い、その後、樹脂をろ過して溶媒を減圧下で室温にて蒸発させた。粗生成物を分取HPLCにより精製して、化合物(97) (73.4mg)を得た。樹脂の切断に加えて、boc基を除去した。LCMS純度96%, m/z 477 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 0.98 − 1.02 (6 H, 2 x d, J = 6 Hz, J = 6.1 Hz, 2 x CH3), 1.40 (4 H, m, アルキル), 1.60 − 1.80 (7 H, m, アルキル), 2.10 (2 H, t, J = 7.4 Hz, CH2), 2.39 (2 H, t, 7.6 Hz, CH2), 3.15 (1 H, dd, J = 12.5 Hz, J = 16.6 Hz, CH), 3.45 (1 H, dd, J = 4.9 Hz, J = 17 Hz, CH) 4.00 (1 H, s, CH), 4.20 (1 H, dd, J = 4.7 Hz, J = 12.2 Hz, CH), 4.40 (2 H, m, CH2), 4.55 (1 H, dd, J = 4.7 Hz, J = 10 Hz, CH), 7.25 (1 H, d, J = 8.4 Hz, Ar), 7.25 (1 H, d, J = 8 Hz, Ar ), 7.55 (1 H, J = 7 Hz, Ar).
【０５００】
化合物(98)及び化合物(99)の合成
【化１９８】
0005405820.tif 000201
【０５０１】
第1段階：(S)-4-メチル-2-(4-ニトロ-ベンゾイルアミノ)-ペンタン酸 シクロペンチルエステル
【化１９９】
0005405820.tif 000202
【０５０２】
L-ロイシンシクロペンチルエステル.TsOH塩(7.98g、21.51mmol)を、THF (40ml)中に溶解して、トリエチルアミン(6ml、21.5mmol)を加えた。塩化4-ニトロベンゾイル(4g、21.5mmol)を、氷浴で冷却しながら少しずつ加えた。反応物を室温にて16時間撹拌した後に、蒸発乾燥させた。残渣をDCM (100ml)に溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム(3×100ml)、1 M HCl (3×100ml)及び塩水で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、溶媒を真空除去して、所望の生成物5.25gを得て(収率70%)、これをさらなる精製を行わずに次の工程で用いた。LCMS純度100%, m/z 349 [M++H]+
【０５０３】
第2段階：(S)-2-(4-アミノ-ベンゾイルアミノ)-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステル
【化２００】
0005405820.tif 000203
【０５０４】
第1段階のニトロアミド(5.25g、15.1mmol)を、エタノール(100ml)に溶解した。Pd/炭素(200mg)を加え、反応物を室温にて、水素の下で(バルーン圧力)16時間撹拌した。反応混合物をセライトを通してろ過し、蒸発させて、所望のアミンアミド 3.9gを得て(収率81%)、これをさらなる精製を行わずに次の工程で用いた。LCMS純度100%, m/z 319 [M++H]+
【０５０５】
第3段階：樹脂へのカップリング
【化２０１】
0005405820.tif 000204
【０５０６】
スベリン酸で誘導体化したWangのヒドロキシルアミン樹脂(1.6g、ローディング1.8mmol/g)を、DCM (無水、20ml)中で膨潤させた。1-クロロ-N,N-2-トリメチルプロペニルアミン(1.15ml、8.64mmol)を滴下した後に、室温にて1時間振とうした。(S)-2-(4-アミノ-ベンゾイルアミノ)-4-メチル-ペンタン酸シクロペンチルエステル(2.75g、8.64mmol)を加え、次いでトリエチルアミン(2.4ml、17.63mmol)を加え、反応物を室温にて16時間振とうした。樹脂を洗浄し(標準)、風乾させた。
【０５０７】
第4段階：(S)-2-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンゾイルアミノ]-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステル (98)
【化２０２】
0005405820.tif 000205
【０５０８】
第3段階の樹脂に結合したシクロペンチルエステルを、2%TFA/DCM (10ml)と共に10分間振とうした後に、樹脂をろ過し、溶媒を減圧下に室温にて蒸発させた。この手順を繰り返し(×3)、合わせた粗生成物を分取HPLCにより精製して、化合物(98)を得た(36mg)。LCMS純度91%, m/z 490 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 0.80 − 0.95 (6 H, 2 x CH3), 1.25 (4 H, m, アルキル), 1.40 − 1.85 (15 H, m, アルキル), 2.00 (2 H, t, CH2), 2.30 (2 H, t, CH2), 4.45 (1 H, m, CH), 5.05 (1 H, m, CH), 7.60 (2 H, d, Ar), 7.75 (2 H, d, Ar).
【０５０９】
第5段階：(S)-2-[4-(7-ヒドロキシカルバモイル-ヘプタノイルアミノ)-ベンゾイルアミノ]-4-メチル-ペンタン酸 (99)
【化２０３】
0005405820.tif 000206
【０５１０】
化合物(98) (21mg、0.043mmol)をTHF (1ml)中に溶解し、2M NaOH (1ml)を加えた。反応バイアルを16時間振とうした後に、THFを、溶液の表面にN2ガス流を吹き付けることにより除去した。水性の残渣を分取HPLCにより精製して、化合物(99)を得た(5.2mg)。LCMS純度92%, m/z 422 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 0.95 − 1.05 (6 H, m, 2 x CH3), 1.30 − 1.50 (4 H, m, アルキル), 1.55 − 1.85 (7 H, m, アルキル), 2.10 (2 H, t, CH2), 2.40 (2 H, t, CH2), 4.65 (1 H, m, CH), 7.65 (2 H, d, Ar), 7.80 (2 H, d, Ar).
【０５１１】
化合物(100)及び化合物(101)の合成
【化２０４】
0005405820.tif 000207
【０５１２】
第1段階：5-((E)-2-エトキシカルボニル-ビニル)-1H-インドール-2-カルボン酸
【化２０５】
0005405820.tif 000208
【０５１３】
5-ブロモインドール-2-カルボン酸(400mg、1.66mmol)、及びトリ-O-トリルホスフィン(96mg、0.32mmol)を、マイクロウェーブ試験管に入れた。アクリル酸エチル(0.56ml、5.6mmol)、Et3N (0.92ml、6.6mmol)、アセトニトリル(2.5ml)、及びPd(OAc)2 (40mg、0.18mmol)を加えた。反応物を、150WのCEMマイクロウェーブに、5分の遅延時間で90℃にて30分間入れた。EtOAcを加え、反応混合物をセライトを通してろ過した。セライトパッドをDCMで洗浄し、合わせた有機画分を除去して、黄色の固体を得た。固体をDCMに再溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム中に抽出した。水層をDCM及びジエチルエーテルで洗浄した。塩基性の水層を2M HClで酸性にし(pH=5)、生成物をEtOAc中に抽出した。溶媒を除去して、所望の生成物を得た(370 mg、収率86%)。LCMS純度86%, m/z 260 [M++H]+
【０５１４】
第2段階：5-((E)-2-エトキシカルボニル-ビニル)-1H-インドール-2-カルボン酸
【化２０６】
0005405820.tif 000209
【０５１５】
5-((E)-2-エトキシカルボニル-ビニル)-1H-インドール-2-カルボン酸(430mg、1.66mmol)を、EtOAc (100ml)中に溶解した。Pd/炭素(100mg)を加え、反応物を水素雰囲気下に(バルーン圧力)、18時間撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通してろ過し、EtOAcで洗浄した。溶媒を除去して、所望の生成物を得て、これをさらなる精製を行わずに次の工程で用いた(0.47g)。LCMS純度92%, m/z 262 [M++H]+
【０５１６】
第3段階：3-[2-[6-(テトラヒドロ-ピラン-2-イルオキシカルバモイル)-ヘキシルカルバモイル]-1H-インドール-5-イル]-プロピオン酸 エチルエステル
【化２０７】
0005405820.tif 000210
【０５１７】
5-((E)-2-エトキシカルボニル-ビニル)-1H-インドール-2-カルボン酸(0.427g、1.6mmol)を、無水DMF (20ml)中に溶解した。EDCI.HCl (0.38g、2mmol)、Et3N (0.59 ml、4.3mmol)、HOBt (0.27 g、2mmol)及び7 アミノヘプタン酸(テトラヒドロピラン-2-イルオキシ)アミド* (0.4 g、無水DMF 20ml中に1.6mmol)を加え、反応物を室温にて窒素の下で16時間撹拌した。水を加え、反応混合物をpH = 6〜7に酸性化し(10%クエン酸)、DCMで抽出した。有機層を10%クエン酸及び飽和炭酸水素ナトリウム(×2)で洗浄した。溶媒を真空除去して粗生成物を得、これをクロマトグラフィー(EtOAc：ヘキサン 1：2 → EtOAc)により精製して、所望の生成物を黄色の固体として得た(550mg、収率69%)。LCMS純度93%, m/z 488 [M++H]+
【０５１８】
第4段階：3-[2-[6-(テトラヒドロ-ピラン-2-イルオキシカルバモイル)-ヘキシルカルバモイル]-1H-インドール5-イル]-プロピオン酸
【化２０８】
0005405820.tif 000211
【０５１９】
3-[2-[6-(テトラヒドロ-ピラン-2-イルオキシカルバモイル)-ヘキシルカルバモイル]-1H-インドール-5-イル]-プロピオン酸 エチルエステル(550mg、1.13mmol)を、THF/メタノール(50ml/ 25ml)中に溶解した。1.4 M NaOH溶液(50ml)を加え、反応物を室温にて4時間撹拌した。溶媒を約50%の容量まで低減させ、1M HClをpH 6〜7まで加えた。混合物をDCMで抽出し、さらにEtOAcで抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、Na2SO4、溶媒を真空除去して、所望の生成物357mg (収率69%)を黄色の粉末として得て、これを、さらなる精製を行わずに次の工程で用いた。LCMS純度94%, m/z 460 [M++H]+
【０５２０】
第5段階：(S)-3-フェニル-2-(3-[2-[6-(テトラヒドロ-ピラン-2-イルオキシカルバモイル)-ヘキシル-カルバモイル]-1H-インドール-5-イル]-プロピオニルアミノ)-プロピオン酸 シクロペンチルエステル
【化２０９】
0005405820.tif 000212
【０５２１】
3-[2-[6-(テトラヒドロ-ピラン-2-イルオキシカルバモイル)-ヘキシルカルバモイル]-1H-インドール-5-イル]-プロピオン酸(0.357g、0.78mmol)を、DCM/DMF (20ml/20ml)中に溶解した。EDCI.HCl (0.163mg、0.86mmol)、トリエチルアミン(0.24ml、1.7mmol)、HOBt (0.116mg、0.88mmol)、及びL-フェニルアラニンシクロペンチルエステル.TsOH塩(0.346 mg、0.88mmol)を加え、反応混合物を室温にて窒素の下で16時間撹拌した。溶媒の容量を低減させ(約10ml)、DCMを加え、有機層を水で洗浄した(×3)。有機層を乾燥させ(Na2SO4)、溶媒を除去して、所望の生成物を得て(500mg、収率95%)、これをさらなる精製を行わずに用いた。LCMS純度77%, m/z 675 [M++H]+
【０５２２】
第6段階：(S)-2-[3-[2-(6-ヒドロキシカルバモイル-ヘキシルカルバモイル)-1H-インドール-5-イル]-プロピオニルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (100)
【化２１０】
0005405820.tif 000213
【０５２３】
(S)-3-フェニル-2-(3-[2-[6-(テトラヒドロ-ピラン-2-イルオキシカルバモイル)-ヘキシル-カルバモイル]-1H-インドール-5-イル]-プロピオニルアミノ)-プロピオン酸シクロペンチルエステル(200mg、0.297mmol)を、室温にてTFA/DCM/MeOH (1.5ml/15ml/15ml)中で3.5時間撹拌した。TFA (0.3 ml)をさらに加え、反応物をさらに30分間撹拌した。溶液を真空濃縮し、DCM中に再溶解し、溶媒を除去した(×3)。粗物質を分取HPLCにより精製して、純粋な化合物(100)を得た(19.3mg)。LCMS純度100%, m/z 591 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.27 − 1.70 (16 H, m, アルキル), 1.97 (2 H, t, CH2), 2.40 (2 H, t, J = 7.84 Hz, CH2), 2.76 − 2.85 (4 H, m, 2 x CH2), 3.25 (2 H, t, J = 7 Hz, CH2), 4.41 (1 H, m, NHCHCO,  4.95 (1 H, m, CH), 6.85 (1 H, s, CH), 6.95 (3 H, m, Ar), 7.05 (3 H, m, Ar), 7.20 − 7.26 (2 H, s + d, J = 8.5 Hz, Ar)
【０５２４】
第7段階：(S)-2-[3-[2-(6-ヒドロキシカルバモイル-ヘキシルカルバモイル)-1H-インドール-5-イル]-プロピオニルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 (101)
【化２１１】
0005405820.tif 000214
【０５２５】
化合物 (100) (80mg、0.14mmol)を、THF/MeOH (1ml/0.5ml)中に溶解し、1.4 M NaOH (0.5ml)を加えた。反応物を室温にて2時間撹拌した。THFを、溶液の表面にN2ガス流を吹き付けることにより除去し、残存物質を分取HPLCにより精製して、化合物(101)を得た(34.9mg)。LCMS純度95%, m/z 523 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 1.35 − 1.50 (4 H, m, アルキル), 1.60 − 1.75 (4 H, m, アルキル), 2.15 (2 H, br t, CH2), 2.55 (2 H, br t, CH2), 2.95 (3 H, m, CH + CH2),  3.10 (1H, dd, CH), 4.65, (1 H, m, NHCHCO), 7.00 − 7.15 (7 H, m, Ar), 7.35 − 7.41 ( 2  H, m, Ar)
【０５２６】
* 7アミノヘプタン酸(テトラヒドロピラン-2-イルオキシ)アミドの製造
第1段階：6-(テトラヒドロ-ピラン-2-イルオキシカルバモイル)-ヘキシル]-カルバミン酸 9H-フルオレン-9-イルメチルエステル
【化２１２】
0005405820.tif 000215
【０５２７】
7-(9H-フルオレン-9-イルオキシカルボニルアミノ)ヘプタン酸(1g、2.72 mmol)の無水DCM/THF (15ml/15ml)溶液に、EDCI. HCl (627mg、3.27mmol)、HOBt (442mg、3.27mmol)及びO-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-ヒドロキシルアミン(383mg、3.27mmol)を加え、これを窒素の下で48時間撹拌した。EDCI. HCl (260mg、1.36mmol)、HOBt (184mg、1.36mmol)、及びO-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-ヒドロキシルアミン(159mg、1.36mmol)を加え、反応をさらに24時間継続した。反応混合物をDCM (100 ml)で希釈し、水(3×100ml)、塩水(100ml)で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、ろ過し、真空濃縮した。クロマトグラフィー(MeOH：DCM 2：98)による精製により、白色固体を得た(1.03g、81%)。
【０５２８】
第2段階：7-アミノ-ヘプタン酸テトラヒドロ-ピラン-2-イルエステル
【化２１３】
0005405820.tif 000216
【０５２９】
6-(テトラヒドロ-ピラン-2-イルオキシカルバモイル)-ヘキシル]-カルバミン酸 9H-フルオレン-9-イルメチルエステル(300mg、0.644mmol)を、20% ピペリジン/DCM (30ml)中に溶解し、反応物を0.5時間撹拌した。反応物を蒸発乾燥させ、DCM中に再溶解し、蒸発させた(×3)。所望の生成物を、クロマトグラフィー(MeOH：DCM：NH3)の後に得た。 120mg。LCMS純度98%, m/z 245 [M++H]+.
【０５３０】
化合物(102)及び化合物(103)の合成
【化２１４】
0005405820.tif 000217
【０５３１】
第1段階：樹脂ローディング
【化２１５】
0005405820.tif 000218
【０５３２】
Wangのヒドロキシルアミン樹脂(3.72g、1.8 mmol/g)を、DMF (50ml)中で膨潤させた。HATU (7.5g、19.7mmol)、5-ニトロ-1-ベンゾチオフェン-2-カルボン酸(3g、DMF 150ml中に溶解した13.45mmol)、及びジイソプロピルエチルアミン(4.65ml、26.7 mmol)を加え、樹脂を室温にて4日間振とうした。樹脂をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄し、風乾させた。
【０５３３】
第2段階：ニトロ還元
【化２１６】
0005405820.tif 000219
【０５３４】
第1段階の樹脂(4.9g、1.8mmol/g)を、DMF (200ml)中で膨潤させ、塩化錫二水和物(19.9g、88mmol)を加えた。反応物を室温にて16時間振とうした。樹脂をろ過し、標準洗浄手順を用いて洗浄し、風乾させた。
【０５３５】
第3段階：4-(4-ベンジルオキシカルボニルメチル-フェノキシ)-酪酸 メチルエステル
【化２１７】
0005405820.tif 000220
【０５３６】
ベンジル 4-ヒドロキシフェニルアセテート(9g、37mmol)を、DMF (300ml)に溶解した。粉砕した水酸化ナトリウム(2.23g、56mmol)及び4-メチルブロモブチレート(6.4 ml、56mmol)を加え、反応物を60℃にて16時間加熱した。冷却した反応混合物に水を加え、溶液を、1M HClを用いて酸性にした(pH = 5/6)。水層をEtOAcで抽出し、有機層を水で洗浄し(×2)、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、蒸発乾燥させた。所望のジエステルを、クロマトグラフィー(EtOAc：ヘプタン 1：2)の後に得た(9.56g、75%) LCMS純度90%, m/z 343 [M++H]+.
【０５３７】
第4段階：4-(4-カルボキシメチル-フェノキシ)-酪酸 メチルエステル
【化２１８】
0005405820.tif 000221
【０５３８】
4-(4-ベンジルオキシカルボニルメチル-フェノキシ)-酪酸 メチルエステル(1.4g、4.09mmol)を、EtOAc (60ml)中に溶解した。Pd/炭素(100mg)を加え、反応物を水素雰囲気下に(バルーン)、室温にて16時間撹拌した。反応混合物を、セライトパッドを通してろ過し、パッドをEtOAcで洗浄した。ろ過物を蒸発乾燥して、白色固体を得た(1.03g、収率100%)。LCMS純度93%, m/z 253 [M++H]+.
【０５３９】
第5段階：樹脂へのカップリング
【化２１９】
0005405820.tif 000222
【０５４０】
第2段階の樹脂(0.18 g、1.8mmol/g)を、DMF (5ml)中で膨潤させた。HATU (0.37g、0.96mmol)、4-(4-カルボキシメチル-フェノキシ)-酪酸 メチルエステル(0.247g、DMF 10ml中に溶解した0.96mmol)、及びジイソプロピルアミン(0.56ml、3.3mmol)を加え、反応物を室温にて16時間振とうした。反応物をろ過し、樹脂を標準洗浄手順を用いて洗浄し、風乾させた。
【０５４１】
第6段階：エステル加水分解
【化２２０】
0005405820.tif 000223
【０５４２】
第5段階のメチルエステル(280mg、1.8mmol/g)を、THF/MeOH (4ml/ 4ml)に溶解し、1.4 M NaOH (8ml)を加えた。反応物をr.t.にて16時間振とうした。樹脂をろ過し、標準洗浄を用いて洗浄し、風乾させた。
【０５４３】
第7段階：アミノ酸カップリング
【化２２１】
0005405820.tif 000224
【０５４４】
第6段階の樹脂(1.6g、1.8mmol/g)を、無水DMF (120ml)中で膨潤させた。HATU (3.3g、8.6mmol)、L-フェニルアラニン シクロペンチルエステル TsOH塩(3.4g、8.6mmol)、及びジイソプロピルアミン(5ml、2.9mmol)を加え、反応物を室温にて16時間振とうした。反応物をろ過し、樹脂を標準洗浄手順を用いて洗浄し、風乾させた。
【０５４５】
第8段階：(S)-2-(4-[4-[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-5-イルカルバモイル)-メチル]-フェノキシ]-ブチリルアミノ)-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (102)
【化２２２】
0005405820.tif 000225
【０５４６】
第7段階の樹脂に結合したシクロペンチルエステルを、2%TFA/DCM (10ml)と10分間振とうした後に、樹脂をろ過し、減圧下で室温にて溶媒を蒸発させた。この手順を繰り返し(×3)、合わせた粗生成物を分取HPLCにより精製して、化合物(102)を得た(22.5mg)。LCMS純度99%, m/z 644 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, MeOD), δ: 45 − 1.80 (6 H, m, アルキル), 1.95 (2 H, pent, CH2), 2.34 (2 H, t, J = 7.3 Hz, CH2), 2.90 (1 H, dd, CH), 3.04 (1 H, dd, CH), 3.62 (2 H, s, CH2), 3.86, (2 H, m, CH2), 4.55 (1 H, m, NHCHCO), 5.07 (1 H, br s, CH), 6.83 (2 H, d, J = 8.3 Hz, Ar), 7.14 − 7.18 (5 H, m, Ar), 7.25 (2 H, d, J = 8 Hz, Ar), 7.47 (1 H, d, J = 9 Hz, Ar), 7.73 (1 H, s, Ar), 7.81 (1 H, d, J = 8.8 Hz), 8.25 (1 H, s, Ar)
【０５４７】
第9段階：(S)-2-(4-[4-[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-5-イルカルバモイル)-メチル]-フェノキシ]-ブチリルアミノ)-3-フェニル-プロピオン酸 (103)
【化２２３】
0005405820.tif 000226
【０５４８】
第7段階のシクロペンチルエステル樹脂(200mg)を、THF/MeOH (2ml/2ml)中で膨潤させ、1.4 M NaOH (2ml)を加えた。反応物を室温にて16時間振とうした。樹脂をろ過し、標準洗浄を用いて洗浄した。樹脂に結合したカルボン酸を、2%TFA/DCM (3ml)と10分間振とうした後に、樹脂をろ過し、減圧下で室温にて溶媒を蒸発させた。この手順を繰り返し(×3)、合わせた粗生成物を分取HPLCにより精製して、化合物(103)を得た(33.7mg)。LCMS純度88%, m/z 576 [M++H]+, 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO), δ: 1.93  (2 H, m, CH2), 2.30 (2 H, m, CH2), 2.91 (1 H, dd, J = 9.9 Hz, J = 13.8 Hz, CH), 3.13 (1 H, dd, J = 4.8 Hz, J = 13.9 Hz, CH), 3.67 (2 H, s, CH2), 3.91, (2 H, m, CH2), 4.50 (1 H, m, NHCHCO), 6.92 (2 H, d, J = 8.7 Hz, Ar), 7.24 − 7.34 (7 H, m, Ar), 7.61 (1 H, m), 7.92 (1 H, br s, Ar), 8.00 (1 H, d, J = 8.8 Hz, Ar), 8.31 (1 H, d, J = 8.1 Hz, Ar), 8.39 (1 H, s), 9.36 (1 H, br s), 10.36 (1 H, s), 11.52 (1 H, s), 12.76 (1 H, br s)
【０５４９】
化合物(104)及び化合物(105)で例示される図7の化合物の合成
【化２２４】
0005405820.tif 000227
【０５５０】
第1工程：4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-メチル)-安息香酸
【化２２５】
0005405820.tif 000228
【０５５１】
4-アミノメチルベンジルアルコール(1.0 g、6.60 mmol)を、THF (10 mL)及び水(10 mL)の混液中でスラリーにした。飽和炭酸水素ナトリウム溶液を、溶液のpHが＞pH 9になるまで加えた。混合物を0℃に冷却し、ジ-tert-ブチルジカーボネート(2.89 g、13.23 mmol)を加えた。反応物を一晩撹拌し、次いでTHFを真空除去した。水性の混合物をEtOAc (20 mL)で抽出し、次いで1N HClの添加によりpH 3まで酸性にした。これをEtOAcで抽出し(2×10 mL)、有機層を合わせ、乾燥させ(MgSO4)、蒸発乾燥させて、所望の生成物を得た(1.60 g、97%). m/z 252 [M++H]+
【０５５２】
第2工程：(4-ヒドロキシメチル-ベンジル)-カルバミン酸 tert-ブチルエステル
【化２２６】
0005405820.tif 000229
【０５５３】
LiAl4 (227 mg、5.97 mmol)を、THF (5 mL)及びジオキサン(5 mL)の混液中でスラリーにし、N2雰囲気下で0℃に冷却した。4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-メチル)-安息香酸を、THF (5 mL)及びジオキサン(5 mL)の混液に溶解し、冷却した溶液に15分かけて滴下した。反応混合物をr.tまで温め、16時間撹拌した。水(1 mL)を反応混合物に加え、これを次いでセライトを通してろ過した。ろ過物を蒸発乾燥させ、残渣をEtOAc (25 mL)と水(25 mL)に分配した。水層をEtOAC (2×25 mL)で抽出し、有機層を合わせ、乾燥させ(Na2SO4)、蒸発乾燥させて、所望の生成物を得た(460 mg、100%)。m/z 260 [M++Na]+
【０５５４】
第3工程：(4-ホルミル-ベンジル)-カルバミン酸 tert-ブチルエステル
【化２２７】
0005405820.tif 000230
【０５５５】
(4-ヒドロキシメチル-ベンジル)-カルバミン酸 tert-ブチルエステル(480 mg、0.71 mmol)をDCM (3 mL)中に溶解し、-78℃に冷却した(ドライアイス/アセトン)。Dess-Martinペルヨージナン(331 mg、0.78 mmol)を反応混合物に加え、これをr.tまで温め、3時間撹拌した。飽和重炭酸ナトリウムと亜硫酸ナトリウムの1：1溶液(20 mL)を加え、反応混合物を15分間激しく撹拌した。有機層を単離し、飽和重炭酸ナトリウム(10 mL)で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、蒸発乾燥させて、所望の化合物を得た(480 mg、100%)。m/z 258 [M++Na]+
【０５５６】
第4工程：(S)-2-[4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-メチル)-ベンジルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル
【化２２８】
0005405820.tif 000231
【０５５７】
(4-ホルミル-ベンジル)-カルバミン酸 tert-ブチルエステル(200 mg、0.85 mmol)を、DCE (10 mL)中に溶解し、ここにフェニルアラニンシクロペンチルエステル(214 mg、0.94 mmol)を加えた。反応物をr.t.にて15分間撹拌した。ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(538 mg、2.55 mmol)及び酢酸 (60μL)を加え、反応物をさらに1時間撹拌した。飽和重炭酸ナトリウム(10 ml)を加え、溶液をDCM (20 mL)で希釈した。有機層を単離し、濃縮して所望の生成物を得、これをさらなる精製を行わずに次の工程に用いた。m/z 453 [M++H+
【０５５８】
第5工程：(S)-2-(4-アミノメチル-ベンジルアミノ)-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル
【化２２９】
0005405820.tif 000232
【０５５９】
(S)-2-[4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-メチル)-ベンジルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステルを、ジオキサン中の4M HCl (1 mL、0.25 mmol)で処理し、r.t.にて1時間撹拌した。混合物を蒸発乾燥させ、EtOAc (20 mL)と水(20 mL)に分配した。飽和重炭酸ナトリウム(20 mL)を水層に加え、これをEtOAcで抽出した(3×20 mL)。有機層を合わせ、乾燥させ(Na2SO4)、蒸発乾燥させて、所望の生成物を得た(263 mg、2工程で79%)。m/z 353 [M++H]+
【０５６０】
第6工程：(S)-2-[4-([[2-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル]-アミノ]-メチル)-ベンジルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル
【化２３０】
0005405820.tif 000233
【０５６１】
6-ホルミル-ベンゾ[b]チオフェン-2-カルボン酸(1-イソブトキシ-エトキシ)アミド(スキーム7) (220 mg、0.68 mmol)、及び(S)-2-(4-アミノメチル-ベンジルアミノ)-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル(263 mg、0.75 mmol)を、N2雰囲気下でDCE (10 mL)に溶解した。ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(430 mg、2.04 mmol)及び酢酸 (50μL)を加え、反応物をr.tにて3時間撹拌した。炭酸水素ナトリウム(20 mL)を加え、反応混合物をジクロロメタンで抽出した(3×50 mL)。有機層を合わせ、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(50%-100% EtOAc/ヘプタン)により精製して、保護された化合物を得た(80 mg、21%)。m/z 658 [M++H]+
【０５６２】
第7工程：(S)-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (104)
【化２３１】
0005405820.tif 000234
【０５６３】
(S)-2-[4-([[2-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル]-アミノ]-メチル)-ベンジルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステルを、DCM (2 mL)及びMeOH (2 mL)に溶解し、TFA (1 mL)で処理した。混合物をr.tにて1時間撹拌し、濃縮乾燥させ、DCM (5 mL)及びヘプタン (5 mL)を加えた。混合物を蒸発乾燥させた。この手順を3回繰り返して、化合物(104)を油として得た(20 mg、59%)。LCMS純度95%, m/z 558 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.25-1.91 (8H, m, 4xCH2), 3.12-3.47 (2H, m, CH2), 4.26 (1H, m, CH), 4.33 (2H, d, J=5.5 Hz, CH2), 4.36 (2H, s, CH2), 4.43 (1H, s, CH2), 5.16 (1H, s, CH), 5.13 (1H, m, CH), 7.25-7.37 (6H, m, ArH), 7.54-7.63 (4H, m, ArH), 7.94 (2H,m, ArH), 8.09 (1H, s, ArH). 
【０５６４】
第8工程：(S)-2-[4-([[2-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル]-アミノ]-メチル)-ベンジルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸
【化２３２】
0005405820.tif 000235
【０５６５】
(S)-2-[4-([[2-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル]-アミノ]-メチル)-ベンジルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸 シクロペンチルエステル(40 mg、0.06 mmol)を、THF (2 mL)及び水(2 mL)に溶解した。LiOH (8 mg、0.30 mmol)を加え、反応混合物を50℃まで36時間加熱した。THFを蒸発により除去し、残渣を水(10 mL)とEtOAc (10 mL)に分配した。水層を単離し、pHを、1M HClの添加により3に調整した。これをEtOAcで抽出し(3×20 mL)、有機層を合わせ、蒸発乾燥させた。
【０５６６】
第9工程：(S)-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-3-フェニル-プロピオン酸 (105)
【化２３３】
0005405820.tif 000236
【０５６７】
(S)-2-[4-([[2-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル]-アミノ]-メチル)-ベンジルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸を、MeOH (2 mL)及びTHF (2 mL)に溶解した。TFA (1 mL)を、撹拌している混合物にr.t.にて1時間加えた。反応混合物を濃縮乾燥し、DCM (5 mL)及びヘプタン(5 mL)を加えた。混合物を蒸発乾燥させた。この手順を3回繰り返して、化合物(105)をピンク色の固体として得た(17 mg、57%)。LCMS純度90%, m/z 490 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 3.33 (2H, m, CH2), 4.19 (1H, m, CH2), 4.29 (2H, s, CH2), 4.35 (2H, s, CH2), 4.42(2H, s, CH2), 7.29-7.39 (5H, m, ArH), 7.54-7.72 (5H, m, ArH), 7.88 (1H, s, ArH), 8.00 (1H, d J=8.0Hz, ArH), 8.08 (1H, s, ArH)
【０５６８】
以下の化合物は、化合物(104)及び化合物(105)について記載した手順に従って製造した。
(S)-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-3-(4-ヒドロキシ-フェニル)-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (106)
LCMS純度98%, m/z 574 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.30-1.87 (8H, m, 4 x CH2), 2.97-3.35 (2H, m, CH2), 4.17 (1H, m, CH), 4.31 (2H, d, J = 5.4 Hz, CH2), 4.36 (2H, s, CH2), 4.42 (2H, s, CH2), 5.11-5.16 (1H, m, CH), 6.77 (2H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H), 7.06 (2H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H), 7.54-7.65 (5H, m, Ar-H), 7.87 (1H, s, Ar-H), 7.99 (1H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H), 8.08 (1H, s, Ar-H)
【０５６９】
(S)-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-3-(4-ヒドロキシ-フェニル)-プロピオン酸 (107)
LCMS純度90%, m/z 505 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 3.09-3.27 (2H, m, CH2), 4.03 (1H, m, CH), 4.24 (2H, s , CH2), 4.34 (2H, s, CH2), 4.42 (2H, s, CH2), 6.76 (2H, d J = 8.3 Hz, Ar-H), 7.11 (2H, d J = 8.5 Hz, Ar-H), 7.56-7.59 (5H, m, Ar-H), 7.89 (1H, s, Ar-H), 8.02 (1H, d, J = 8.4 Hz, Ar-H), 8.08 (1H, s, Ar-H)
【０５７０】
(S)-3-tert-ブトキシ-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-酪酸 シクロペンチルエステル (108)
LCMS純度99%, m/z 568 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.20 (9H, s, 3 x CH3), 1.29 (3H, d, J = 6.6 Hz, CH3), 1.67-1.94 (8H, m, 4 x CH2), 3.75 (1H, d, J = 2.7 Hz, CH), 4.29-4.32 (1H, m, CH), 4.36 (4H, d, J = 2.4 Hz, 2 x CH2), 4.43 (2H, s, CH2), 5.22-5.25 (1H, m, CH), 7.54-7.65 (5H, m, Ar-H), 7.88 (1H, s, Ar-H), 8.01 (1H, d, J = 8.1 Hz, Ar-H), 8.08 (1H, s, Ar-H)
【０５７１】
(S)-3-tert-ブトキシ-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (109)
LCMS純度95%, m/z 554 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.23 (9H, s, 3x CH3), 1.67-1.98 (8H, m, 4 x CH2), 3.87-3.98 (2H, m, CH2), 4.19-4.22 (1H, m, CH), 4.34-4.36 (4H, m, 2xCH2), 4.42 (2H, s, CH2), 5.31-5.35 (1H, m, CH), 7.54-7.62 (5H, m, Ar-H), 7.87 (1H, s, Ar-H), 8.00 (1H, d, J = 8.1 Hz, Ar-H), 8.08 (1H, s, Ar-H)
【０５７２】
(S)-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-4-メチルスルファニル-酪酸 シクロペンチルエステル (110)
LCMS純度90%, m/z 541 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.70-1.98 (8H, m, 4 x CH2), 2.11 (3H, s, CH3), 2.17-2.34 (2H, m, CH2), 2.54-2.73 (2H, m, CH2), 4.19-4.23 (1H, m, CH), 4.27-4.42 (6H, m, 3 x CH2), 5.35-5.39 (1H, m, CH), 7.54-7.63 (5H, m, Ar-H), 7.87 (1H, s, Ar-H), 7.97-8.00 (1H, m, Ar-H), 8.08 (1H, s, Ar-H)
【０５７３】
(S)-1-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジル)-ピロリジン-2-カルボン酸 シクロペンチルエステル (111)
LCMS純度96%, m/z 508 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.66-2.29 (12H, m, 6 x CH2), 3.59-3.67 (2H, m, CH2), 4.38-4.46 (6H, m, 3 x CH2), 4.62 (1H, d, J = 12.3 Hz, CH), 5.21 (1H, m, CH), 7.61-7.68 (5H, m, Ar-H), 7.88 (1H, s, Ar-H), 8.00-8.02 (1H, m, Ar-H), 8.13 (1H, s, Ar-H)
【０５７４】
(S)-1-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジル)-ピロリジン-2-カルボン酸 (112)
LCMS純度100%, m/z 440 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.96-2.09 (2H, m, CH2), 2.14-2.23 (2H, m, CH2), 2.52-2.65 (1H, m, CH2), 3.56-3.67 (1H, m, CH2), 4.19-4.25 (1H, m, CH), 4.36-4.57 (6H, m, 3 x CH2), 7.55-7.64 (5H, m, Ar-H), 7.88 (1H, s, Ar-H), 7.99-8.01 (1H, m, Ar-H), 8.09 (1H, s, Ar-H)
【０５７５】
(R)-3-tert-ブチルスルファニル-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-プロピオン酸 シクロペンチルエステル(113)
LCMS純度97%, m/z 570 [M+H]+, 1H NMR (300MHz, MeOD), δ: 1.36(9H, s), 1.79 (8H, m), 3.16 (2H, d,5.3Hz), 4.25(2H, t, J=5.6Hz), 4.31(2H, s), 4.36(2H,s), 4.42(2H, s), 5.34(1H, m), 7.56(1H, d, J=8.1Hz), 7.62( 4H, s), 7.89(1H, s), 8.09 (1H, s),  8.51(1H, d, J=8.1Hz),
【０５７６】
(R)-3-tert-ブチルスルファニル-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-プロピオン酸 (114)
LCMS純度97%, m/z 502 [M]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.35 (9H, s, 3 x CH3), 3.09 (2H, m, CH2), 3.22 (2H, m, CH2), 3.83 (1H, t, J = 8.8 Hz, CH), 4.34 (2H, s, CH2), 4.42 (2H, s, CH2), 7.57 (1H, d, J = 10.0 Hz, ArH), 7.62 (4H, s, ArH x 4), 7.89 (1H, s, ArH), 8.02 (1H, d, J = 8.1 Hz, ArH), 8.09 (1H, s, ArH).
【０５７７】
(S)-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-3,3-ジメチル-酪酸 シクロペンチルエステル (115)
LCMS純度94%, m/z 546 [M+Na]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.08 (9H, s, 3 x CH3), 1.80 (8H, m, 4 x CH2), 3.49 (1H, s, CH), 4.29 (2H, d, J = 13.5 Hz, CH2), 4.29 (2H, d, J = 13.5 Hz, CH2), 4.36 (2H, s, CH2), 4.44 (2H, s, CH2), 5.19 (1H, t, J = 5.7Hz), 7.59 (5H, m, ArH x 5), 7.88 (1H, ArH), 8.00 (1H, d, J = 8.3Hz), 8.09 (1H, s, ArH).
【０５７８】
(S)-シクロヘキシル-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-酢酸 シクロペンチルエステル (116)
LCMS純度100%, m/z 550 [M+H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 0.86-1.95 (18H, m, 9xCH2), 3.73 (1H, m, CH), 4.11 (1H, d J = 5.7 Hz, CH), 4.19 (2H, s, CH2), 4.26 (2H, s, CH2), 4.36 (2H, s, CH2), 7.53 (5H, m, ArH), 7.77 (1H, s, CH), 7.82 (1H, d J = 11.6 Hz, ArH), 8.02 (1H, s, ArH)
【０５７９】
(S)-シクロヘキシル-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-酢酸 (117)
LCMS純度100%, m/z 482 [M+H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 0.72-1.60 (10H, m, 9xCH2), 3.89 (1H, m, CH), 4.11 (3H, m, CH), 4.23 (2H, s, CH2), 4.31 (2H, s, CH2), 7.48 (5H, m, ArH), 7.76 (1H, s, CH), 7.88 (1H, d J = 11.6 Hz, ArH), 7.98 (1H, s, ArH).
【０５８０】
(S)-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステル (122)
LCMS純度94%, m/z 524 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.01 (6H, s, 2xCH3), 1.28 (1H, m, CH), 1.56-1.95 (10H, m, 4xCH2, CH2), 4.00 - 4.43 (6H, m, 3xCH2), 4.88 (1H, m, CH), 5.36 (1H, br s, CH), 7.47-7.62 (5H, m, ArH), 7.94 (2H, t, ArH), 8.08 (1H, s, ArH).
【０５８１】
(S)-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-4-メチル-ペンタン酸 (123)
LCMS純度98%, m/z 456 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.00 (6H, m, 2xCH3), 1.86 (2H, m , CH2), 3.86 (1H, m, CH), 4.29 (2H, s, CH2), 4.36 (2H, s, CH2), 4.43 (2H, s, CH2), 7.56 (1H, m, ArH), 7.89 (1H, s, CH), 8.02 (1H, d J=8.2 Hz, ArH), 8.09 (1H, s, ArH).
【０５８２】
(S)-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (124)
LCMS純度90%, m/z 544 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.31-1.91 (10H, m, 4xCH2, CH2), 4.22 (2H, dd J=13.1 Hz, CH2), 4.35 (2H, s, CH2), 4.42 (1H, s, CH2), 5.16 (1H, s, CH), 5.30 (1H, m, CH), 7.47-7.62 (9H, m, ArH), 7.94 (2H,m, ArH), 8.08 (1H, s, ArH).
【０５８３】
(S)-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-フェニル-酢酸 (125)
LCMS純度100%, m/z 476 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 4.08 - 4.24 (3H, m, CH, CH2), 4.35 (2H, s, CH2), 4.43 (1H, s, CH2), 7.46-7.75 (10H, m, ArH), 7.89 (1H, s, ArH), 8.01 (1H,  d J=7.9 Hz, ArH), 8.09 (1H, s, ArH)
【０５８４】
以下の化合物は、化合物(104)及び化合物(105)について記載した手順に従って、以下に概説する代替の第3及び4工程を用いて製造した。
【０５８５】
第3b工程：(4-ブロモメチル-ベンジル)-カルバミン酸 tert-ブチルエステル
【化２３４】
0005405820.tif 000237
【０５８６】
N-ブロモスクシンイミド(5.13 g、28.8 mmol)を、DCM (80 mL)中に溶解し、0℃に冷却した。トリフェニルホスフィン(7.18 g、27.0 mmol)のDCM (20 mL)溶液を調製し、冷却した溶液に加え、次いでピリジン(1.0 mL、1.26 mmol)を加えた。第2工程からの物質(2.14 g、9.0 mmol)をDCM (20 mL)中に溶解して加え、反応物をr.t.まで温め、16時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー(50%/50% EtOAc/ヘプタン)により精製して、所望の化合物(864 mg、32%)を得た。m/z 301 [M++Na]+
【０５８７】
第4b工程：(S)-2-[4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-メチル)-ベンジルアミノ]-プロピオン酸 シクロペンチルエステル
【化２３５】
0005405820.tif 000238
【０５８８】
L-アラニンシクロペンチルエステル(463 mg、1.41 mmol)を、DMF (9 mL)中に溶解し、これにDIPEA (0.74 mL、4.24 mmol)を加えた。混合物をr.t.にて15分間撹拌し、次いで第3b工程からの物質(212 mg、0.706 mmol)のDMF (5 mL)溶液を、1時間かけて滴下した。反応物をr.t.にて16時間撹拌し、水(50 mL)及びEtOAc (50 mL)で希釈した。有機層を塩水(2×50 mL)で洗浄し、乾燥し、濃縮して粗物質を得て(0.26 g、100%)、これをさらなる精製を行わずに次の工程で用いた。m/z 377 [M++Na]+
【０５８９】
工程5〜9は、化合物(104)及び化合物(105)について記載したとおりである。
【０５９０】
【化２３６】
0005405820.tif 000239
【０５９１】
(S)-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (118)
LCMS純度95%, m/z 482 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.61 (3H, d, J = 7.2 Hz, CH3), 1.71-1.97 (8H, m, 4 x CH2), 4.13 (1H, q, J = 7.2 Hz, CH), 4.30 (2H, s, CH2), 4.36 (2H, s, CH2), 4.43 (2H, s, CH2), 5.33-5.36 (1H, m, CH), 7.54-7.63 (5H, m, Ar-H), 7.88 (1H, s, Ar-H), 8.00 (1H, d, J = 8.1 Hz, Ar-H), 8.08 (1H, s, Ar-H)
【０５９２】
【化２３７】
0005405820.tif 000240
【０５９３】
(S)-2-(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-プロピオン酸 (119)
LCMS純度95%, m/z 414 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.64 (3H, d, J = 7.1 Hz,CH3), 4.06 - 4.14(1H, m,CH), 4.31 (2H, s,CH2), 4.36 (2H, s, CH2), 4.43 (2H, s, CH2), 7.55-7.63 (5H, m, Ar-H), 7.88 (1H, s, Ar-H), 8.00 (1H, d, J = 8.1 Hz, Ar-H), 8.09 (1H, s, Ar-H)
【０５９４】
以下の化合物は、以下の代替／追加の工程を組み込んで、化合物(118)及び化合物(119)について概説した手順に従って製造した。
第4b工程：[4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-メチル)-ベンジルアミノ]-酢酸 シクロペンチルエステル
【化２３８】
0005405820.tif 000241
【０５９５】
第4a工程のような手順(シクロペンチルエステルのHCl塩を用いる) 
生成物：m/z 363 [M++H]+
【０５９６】
第4c工程：[[4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-メチル)-ベンジル]-(9H-フルオレン-9-イルメトキシ-カルボニル)-アミノ]-酢酸 シクロペンチルエステル
【化２３９】
0005405820.tif 000242
【０５９７】
[4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-メチル)-ベンジルアミノ]-酢酸 シクロペンチルエステル(0.2 g、0.55 mmol)及び1 M Na2CO3 (1.1 mL、1.1 mmol)のDCM (2 mL)溶液に、撹拌及び氷浴で冷却しながら、9-フルオレニルメチルクロロホルメート(0.14 g、0.55 mmol)のジオキサン(1.4 mL)溶液をゆっくりと加えた。混合物を氷浴中で4時間、及び室温にて一晩撹拌した。混合物を水(90 mL)に注ぎ、ジエチルエーテルで抽出した。有機抽出物を合わせ、乾燥させ(MgSO4)、蒸発乾燥させて、所望の生成物を得た(0.32 g、100%)。m/z 607 [M++Na]+
【０５９８】
第5a工程：[(4-アミノメチル-ベンジル)-(9H-フルオレン-9-イルメトキシカルボニル)-アミノ]-酢酸 シクロペンチルエステル
【化２４０】
0005405820.tif 000243
【０５９９】
第5工程で記載した手順。
生成物 m/z 485 [M++H]+
【０６００】
第6a工程：[(9H-フルオレン-9-イルメトキシカルボニル)-[4-([[2-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル]-アミノ]-メチル)-ベンジル]-アミノ]-酢酸 シクロペンチルエステル
【化２４１】
0005405820.tif 000244
【０６０１】
第6工程で記載したような手順。
生成物 m/z 790 [M++H]+
【０６０２】
第7a工程：(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-酢酸 シクロペンチルエステル (120)
【化２４２】
0005405820.tif 000245
【０６０３】
[(9H-フルオレン-9-イルメトキシカルボニル)-[4-([[2-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル]-アミノ]-メチル)-ベンジル]-アミノ]-酢酸 シクロペンチルエステル(0.11 g、0.14 mmol)を、アセトニトリル(3 mL)に溶解し、これにピペリジン(1.5 mL)を加えた。得られた混合物を室温にて1時間撹拌した。溶媒を蒸発乾燥させ、生成物を2つの部分に分けた。一方の部分は、シクロペンチルエステルの加水分解に用い、他方の部分はDCM (1.5 mL)に溶解し、ジオキサン中の4M HCl (1.0 mL)と2時間撹拌した。溶媒を蒸発乾燥させ、生成物を分取HPLCにより精製して、所望の生成物をTFA塩として得た。LCMS純度99%, m/z 468 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 8.09 (1H, s, ArH), 8.00 (1H, d, J = 8.3 Hz, ArH), 7.88 (1H, s, ArH), 7.54-7.65 (5H, m, ArH), 5.31-5.35 (1H, m, CH), 4.43 (2H, s, CH2), 4.35 (2H, s, CH2), 4.31 (2H, s, CH2), 3.96 (2H, s, CH2), 1.65-1.93 (8H, m, 4 x CH2)
【０６０４】
第9a工程：(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-ベンジルアミノ)-酢酸 (121)
【化２４３】
0005405820.tif 000246
【０６０５】
第9工程で記載したような手順。
LCMS純度99%, m/z 400 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 8.09 (1H, s, ArH), 8.00 (1H, d, J = 8.3 Hz, ArH), 7.89 (1H, s, ArH), 7.54-7.62 (5H, m, ArH), 4.43 (2H, s, CH2), 4.35 (2H, s, CH2), 4.32 (2H, s, CH2), 3.93 (2H, s, CH2)
【０６０６】
化合物(126)及び化合物(127)で例示される図8の化合物の合成
【化２４４】
0005405820.tif 000247
【０６０７】
第1段階：4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-メチル-シクロヘキサンカルボン酸
【化２４５】
0005405820.tif 000248
【０６０８】
トランス-4-(アミノメチル)シクロヘキサンカルボン酸(1g、6.4mmol)及び水酸化ナトリウム(256mg、6.4mmol)の40ml ジオキサン及び40ml 水の中の溶液を、撹拌しながら氷水浴中で冷却した。ジ-tert-ブチルジカーボネート(1.39g、6.4mmol)を加え、混合物をr.t.にて5時間攪拌し、一晩放置した。溶液を真空濃縮し、2N HClでpH 2まで酸性化した。酸性にした水層をEtOAcで3回抽出した。有機層をプールし、塩水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発乾燥させた。生成物を白色固体として得た(1.1g、収率64%)。1H NMR (300 MHz, CDCl3), δ: 0.86 - 1.07 (2 H, m, CH2), 1.34 - 1.53 (11 H, m, boc及びCH2), 1.84 (2 H, dd, J=13.0, 2.3 Hz, CH2), 2.05 (2 H, dd, CH2), 2.18 - 2.35 (1 H, m, CHCH2), 2.99 (2 H, t, J=6.3 Hz, CH2NH), 4.59 (1 H, br. s, CHCOOH), 11.0 (1 H, br. s, COOH).
【０６０９】
第2段階：(4-ヒドロキシメチル-シクロヘキシルメチル)-カルバミン酸 tert-ブチルエステル
【化２４６】
0005405820.tif 000249
【０６１０】
水素化リチウムアルミニウム(465mg、12.2mmol)を無水THF (10ml)中に懸濁し、N2雰囲気下で0℃に冷却した。4-(tert-ブトキシ-カルボニル-アミノ-メチル-シクロヘキサンカルボン酸(1.1g、4.1mmol)のTHF及びジオキサン(10ml、1：1)中の溶液をゆっくりと加え、混合物を室温にて一晩撹拌した。過剰の水素化リチウムアルミニウムを、水を滴下することによりクエンチした。ケーキをろ過し、THF (10ml)及びMeOH (10ml)で洗浄した。ろ過物を真空濃縮し、1N HClでpH 2まで酸性化した。水層をEtOAcで2回抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、蒸発乾燥させて、964mgの生成物を得た(収率97%)。1H NMR (300 MHz, CDCl3), δ: 0.81-1.08 (4 H, m, 2 x CH2), 1.33-1.60 (10 H, m, boc及びCH), 1.82 (4 H, d, J=5.7 Hz, 2 x CH2), 2.98 (2 H, t, J=6.4 Hz, CH2NH ), 3.46 (2 H, d, J=6.4 Hz, CH2OH), 4.60 (1 H, br. s, CH)
【０６１１】
第3段階：(4-ホルミル-シクロヘキシルメチル)-カルバミン酸 tert-ブチルエステル
【化２４７】
0005405820.tif 000250
【０６１２】
(4-ヒドロキシメチル-シクロヘキシルメチル)-カルバミン酸 tert-ブチルエステル(965mg、4.0mmol)をDCM (20ml)に溶解し、-78℃まで冷却した。Dess Martin試薬(2.52g、6.0mmol)をDCM (30ml)に溶解し、溶液中の第2段階のアルコールにゆっくりと加えた。反応混合物をr.t.にて3時間撹拌した。得られた溶液を、激しく撹拌しているNaHCO3及びNa2S2O3の溶液(1：1、100ml)に注いだ。有機層を分離し、塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発乾燥させて、生成物を得た(786mg、収率82%)。1H NMR (300 MHz, CDCl3), δ: 0.83 - 1.01 (2 H, m, CH2), 1.15 - 1.24 (2 H, m, CH2), 1.34 (9 H, s, Boc), 1.75 - 1.88 (2 H, m, CH2), 1.90 - 2.00 (2 H, m, CH2), 2.05 - 2.18 (1 H, m, CH), 2.93 (2 H, t, J=6.4 Hz, CH2NH), 4.53 (1 H, br. s, CHCHO), 9.55 (1 H, s, CHO)
【０６１３】
第4段階：(S)-[[4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-メチル)-シクロヘキシルメチル]-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化２４８】
0005405820.tif 000251
【０６１４】
(4-ホルミル-シクロヘキシルメチル)-カルバミン酸 tert-ブチルエステル(390mg、1.6mmol)及び(S)-アミノ-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル(394mg、1.8mmol)を、DCE (6ml)中でr.t.にて25分間撹拌した。酢酸(9.6μl、0.16mmol)及びナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(1.0g、4.8mmol)を加え、得られた混合物をr.t.にて1時間30分間撹拌した。DCM (10ml)及びNaHCO3飽和溶液(10ml)を加え、相を分離した。水相をEtOAc (2×10ml)で抽出し、有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、蒸発乾燥させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー(8：2 ヘプタン/EtOAc)により精製して、223mgの純粋なアミンを得た。(収率31%)。 LCMS純度100%, m/z 445 [M++H]+.
【０６１５】
第5段階：(S)-[(4-アミノメチル-シクロヘキシルメチル)-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化２４９】
0005405820.tif 000252
【０６１６】
(S)-[[4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-メチル)-シクロヘキシルメチル]-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル(223mg、0.5mmol)をDCM (4ml)中で撹拌し、TFA (1ml)を加え、混合物をr.tにて2時間撹拌した。溶液を真空濃縮し、DCM中に採取し、NaHCO3の飽和溶液で2回、及び塩水の飽和溶液で1回洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、蒸発させて予想されるアミンを黄色の油として得た(130mg、収率75%)。LCMS純度100%, m/z 345 [M++H]+.
【０６１７】
第6段階：(S)-[(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-シクロヘキシルメチル)-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (126)
【化２５０】
0005405820.tif 000253
【０６１８】
第5段階のアミン(130mg、0.38mmol)を、6-ホルミル-ベンゾ[b]チオフェン-2-カルボン酸(1-イソブトキシ-エトキシ)アミド(スキーム7) (110mg、0.34mmol)と共に、DCE中でr.t.にて30分間撹拌した。酢酸(2.1μl、0.03mmol)及びナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(218mg、1.0mmol)を加え、得られた混合物をr.t.にて一晩撹拌した。混合物を真空濃縮し、EtOAc中に採取し、NaHCO3の飽和溶液(10ml)及び塩水(10ml)で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、蒸発乾燥させた。粗生成物(167mg)を分取HPLCにより精製して、化合物(126)を明るいピンク色の固体として得た。LCMS純度86%, m/z 550 [M++H]+, 約10%カルボン酸. 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.08 (4 H, m, 2 x CH2), 1.76 (14 H, m, 6 x CH2及び2 x CH), 2.81 (4 H, m, 2 x CH2NH), 4.35 (2 H, s, CH2NH), 5.12 (1 H, s, CHNH), 5.30 (1 H, m, OCH), 7.51 (6 H, m, Ar), 7.85 (1 H, s, Ar), 7.96 (1 H, d, Ar), 8.08 (1 H, s, Ar).
【０６１９】
((S)-[(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-シクロヘキシルメチル)-アミノ]-フェニル-酢酸 (127)の合成
【化２５１】
0005405820.tif 000254
【０６２０】
第1段階：(S)-[[4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-メチル)-シクロヘキシルメチル]-アミノ]-フェニル-酢酸 tert-ブチルエステル
【化２５２】
0005405820.tif 000255
【０６２１】
(4-ホルミル-シクロヘキシルメチル)-カルバミン酸 tert-ブチルエステル(899mg、3.7mmol)及び(S)-tert-ブチルフェニルグリシンエステル(850mg、4.1mmol)を、DCE (20ml)中で30分間撹拌した。酢酸(20μl、0.37mmol)及びナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(2.37g、11.1mmol)を加え、反応混合物をr.t.にて3時間撹拌した。DCM (10ml)及びNaHCO3の飽和溶液(20ml)を加え、相を分離した。水相をEtOAc (20ml)で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、真空濃縮した。粗生成物(2.4g)をカラムクロマトグラフィー(7：3 ヘプタン/EtOAc)により精製して、予想された生成物を得た(385mg、収率24%)。LCMS純度100%, m/z 433 [M++H]+.
【０６２２】
第2段階：(S)-[[4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-メチル)-シクロヘキシルメチル]-アミノ]-フェニル-酢酸 tert-ブチルエステル
【化２５３】
0005405820.tif 000256
【０６２３】
(S)-[[4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-メチル)-シクロヘキシルメチル]-アミノ]-フェニル-酢酸 tert-ブチルエステル(385mg、0.9mmol)を、DCM (5ml)中で撹拌し、TFA (2ml)を加え、混合物をr.t.にて30分間撹拌した。溶液を真空濃縮し、EtOAc (5ml)中に採取し、NaHCO3の飽和溶液で2回(2×5ml)、及び塩水の飽和溶液(5ml)で1回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、蒸発させて、予想されたアミンを黄色の油として得た(290mg、収率97%)。LCMS純度100%, m/z 333 [M++H]+.
【０６２４】
第3段階：(S)-[[4-([[2-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル]-アミノ]-メチル)-シクロヘキシルメチル]-アミノ]-フェニル-酢酸 tert-ブチルエステル
【化２５４】
0005405820.tif 000257
【０６２５】
(S)-[[4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-メチル)-シクロヘキシルメチル]-アミノ]-フェニル-酢酸 tert-ブチルエステル(290mg、0.9mmol)及び6-ホルミル-ベンゾ[b]チオフェン-2-カルボン酸(1-イソブトキシ-エトキシ)アミド(スキーム7) (255mg、0.8mmol)を、DCE (8ml)中で30分間撹拌した。酢酸(4μl、0.08mmol)及びナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(504mg、2.4mmol)を加え、反応混合物をr.t.にて1時間30分間撹拌した。DCM (5ml)及びNaHCO3の飽和溶液(10ml)を加え、相を分離した。水相をEtOAc (15ml)で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、真空濃縮した。粗生成物(543mg)をカラムクロマトグラフィー(DCM 中に5から10% MeOH)により精製して、予想された純粋な生成物を得た(172mg、収率34%)。LCMS純度100%, m/z 638 [M++H]+.
【０６２６】
第4段階：(S)-[[4-([[2-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル]-アミノ]-メチル)-シクロヘキシルメチル]-アミノ]-フェニル-酢酸 tert-ブチルエステル (127)
【化２５５】
0005405820.tif 000258
【０６２７】
(S)-[[4-([[2-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル]-アミノ]-メチル)-シクロヘキシルメチル]-アミノ]-フェニル-酢酸 tert-ブチルエステル(172mg、0.27mmol)を、4M HClのジオキサン溶液(2ml)中でr.t.にて30分間撹拌した。溶液を蒸発乾燥させて、化合物(127)をベージュの固体として得た(123mg、収率95%)。LCMS純度98%, m/z 482 [M++H]+. 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.10 (4 H, m, 2 x CH2), 1.80 (6 H, m, 2 x CH2及び2 x CH), 2.88 (2 H, dd, CH2NH), 2.94 (2 H, d, CH2NH), 4.36 (2 H, s, CH2NH), 5.07 (1 H, s, CH), 7.53 (6 H, m, Ar), 7.87 (1 H, s, Ar), 7.97 (1 H, d, Ar), 8.12 (1 H, s, Ar).
【０６２８】
以下の化合物は、化合物(126)及び化合物(127)について記載した手順に従って製造した。
(S)-2-[(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-シクロヘキシルメチル)-アミノ]-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステル (128)
LCMS純度86%, m/z 530 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 0.99 (6 H, t, J= 6Hz, 2 x CH3), 1.11 (4 H, t, J= 8.1 Hz, 2 x CH2), 1.76 (20 H, m, 2 x CH及び9 x CH2), 2.80 (1 H, m, CH), 2.97 (4 H, m, 2 x CH2NH), 3.95 (1 H, m, CH), 4.35 (2 H, s, CH2NH), 5.32 (1 H, m, OCH), 7.54 (1 H, d, J= 6 Hz, Ar), 7.84 (1 H, s, Ar), 7.94 (1 H, d, J=9 Hz, Ar), 8.08 (1 H, s, Ar).
【０６２９】
(S)-2-[(4-[[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-メチル]-シクロヘキシルメチル)-アミノ]-4-メチル-ペンタン酸 (129)
LCMS純度95%, m/z 462 [M++H]+, 1H NMR (300 MHz, MeOD), δ: 1.00 (6 H, t, J=6.3 Hz, 2 x CH3), 1.10 (4 H, m, 2 x CH2), 1.85 (8 H, m, 2 x CH及び3 x CH2), 2.94 (4 H, m, 2 x CH2NH), 3.91 (1 H, m, CHNH), 4.36 (2 H, s, CH2NH), 7.54 (1 H, d, J=7.8 Hz, Ar), 7.85 (1 H, s, Ar), 7.95 (1H, d, J=8.1 Hz, Ar), 8.08 (1H, s).
【０６３０】
化合物(130)で例示される図9の化合物の合成
【化２５６】
0005405820.tif 000259
【０６３１】
第1段階：(S)-[(3-ニトロ-ベンジル)-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化２５７】
0005405820.tif 000260
【０６３２】
フェニルグリシンシクロペンチルエステルトシル酸塩(3.08 g、7.8 mmol)のDCE (120 ml)溶液に、3-ニトロベンズアルデヒド(1.01 g、6.7 mmol)、次いでナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(3.03 g)を加えた。混合物を3.5時間撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム溶液(200 ml)の添加によりクエンチした。生成物をDCM (250 ml)で抽出し、有機抽出物を乾燥させた(MgSO4)。生成物を、さらなる精製を行わずに次に用いた。
【０６３３】
第2段階：(S)-[(3-ニトロ-ベンジル)-tert-ブトキシカルボニル-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化２５８】
0005405820.tif 000261
【０６３４】
(S)-[(3-ニトロ-ベンジル) -アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステルのDCM (50 ml)中の粗混合物を、ジ-ter-ブチルジカーボネート(3.38 g、15.6 mmol)に加えた。混合物を50℃にて一晩加熱し、次いでrtに冷却した。N,N,N'-トリメチルエチレンジアミン(2 ml)を加え、混合物を2時間撹拌した。混合物を酢酸エチル(150 ml)に注ぎ、1M HCl (3回、50 ml)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濃縮して、所望の生成物を無色の油として得た(1.509 g、収率42%)。LCMS純度98%, m/z 477 (M+Na+). 1H NMR (300MHz, d6-DMSO), δ: 7.97 (1H, dd, J=2.1, 9 Hz), 7.15-7.45 (8H, m), 5.60-6.00 (1H, m), 5.20-5.35 (1H, m), 4.65-4.82 (1H, m), 4.21 (1H, d, J=16 Hz), 1.30-1.95 (17H, m)
【０６３５】
第3段階：(S)-[(3-アミノ-ベンジル)-tert-ブトキシカルボニル-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化２５９】
0005405820.tif 000262
【０６３６】
(S)-[(3-ニトロ-ベンジル)-tert-ブトキシカルボニル-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル(1.509 g、3.32 mmol)のエタノール(10 ml)中の溶液に、パラジウムカーボン(10%、0.38g、0.36 mmol)を加えた。フラスコを排出し、水素ガスを充填しなおした。混合物を一晩撹拌し、セライトを通してろ過し、エタノール(150 ml)で洗浄し、濃縮して、所望の生成物を無色の油として得た(1.351 g、収率96%)。1H NMR (300 MHz, CDCl3), δ:7.19-7.42 (5H, m), 6.97 (1H, t, J=7.5 Hz), 6.46 (2H, dd, J=8.1, 16.5 Hz), 6.29 (1H, br s), 5.58 (1H,br s), 5.29 (1H, br s), 4.69 (1H, br s), 4.00 (1H, d, J=15.9 Hz), 3.74 (1H, q, J=6.9 Hz), 3.51 (2H, br s), 1.20-2.00 (17H, m)
【０６３７】
第4段階：(S)-[tert-ブトキシカルボニル-(3-[[2-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ベンゾ[b]-チオフェン-6-イルメチル]-アミノ]-ベンジル)-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル
【化２６０】
0005405820.tif 000263
【０６３８】
(S)-[(3-アミノ-ベンジル)-tert-ブトキシカルボニル-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル(0.317g、0.75 mmol)に、DCE (8 ml)中の6-ホルミル-ベンゾ[b]チオフェン-2-カルボン酸(1-イソブトキシ-エトキシ)-アミド(スキーム7) (0.210 g、0.65 mmol)を加えた。氷酢酸2滴を加え、次いでナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(0.170 g、0.8 mmol)を加えた。混合物を2時間撹拌し、次いで、DCM (150 ml)に注いだ。溶液を飽和重炭酸ナトリウム(50 ml)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物を淡黄色のフォームとして得た(0.346 g、収率73%)。1H NMR (300 MHz, CDCl3), δ: 8.35-8.43 (1H, m), 7.56-8.05 (2H, m), 7.01-7.41 (8H, m), 6.90-7.01 (1H, m), 6.42 (1H, dd, J=2.6, 7.9 Hz), 5.25-5.31 (1H, m), 5.12 (1H, q, J=5.2 Hz), 4.40 (1H, d, J 5.4 Hz), 4.00 (1H, dd, J=3.1, 15.8 Hz), 3.60-3.70 (1H, m), 3.35-3.40 (1H, m), 1.33-1.94 (21H, m), 0.98 (3H, d, J=6.6 Hz), 0.97 (3H, d, J=6.6 Hz)
【０６３９】
第5段階：(S)-[3-[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-ベンジル-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル (130)
【化２６１】
0005405820.tif 000264
【０６４０】
(S)-[tert-ブトキシカルボニル-(3-[[2-(1-イソブトキシ-エトキシカルバモイル)-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル]-アミノ]-ベンジル)-アミノ]-フェニル-酢酸 シクロペンチルエステル(0.100 g、0.14 mmol)のDCM/MeOH (1ml：1ml)溶液に、TFA (8 ml)を加えた。溶液を2時間撹拌し、DCM (200 ml)で希釈した。溶液を飽和重炭酸ナトリウム(100 ml)で洗浄した。溶液を乾燥させ(Na2SO4)、濃縮し、逆相HPLCにより精製して、所望の生成物を得た(8.1 mg、収率11%)。LCMS純度98%, m/z 531 (M+H)+ 300 MHz, DMSO, δ:1.26-1.85 (8H, m), 3.47 (2H, s), 4.21 (1H, s), 4.38 (2H, d, J 5.8 Hz), 5.02-5.07 (1H, m), 6.32 (1H, t, J 6.0 Hz), 6.45 (2H, d, J 7.9 Hz), 6.57 (1H, s), 6.97 (1H, t, J 7.8 Hz), 7.23-7.35 (5H, m), 7.42 (1H, dd, J 1.2, 8.3 Hz), 7.84 (1H, s), 7.87 (1H, s), 7.93 (1H, s), 9.23 (1H, br s), 11.4 (1H, br s)
【０６４１】
以下の化合物は、化合物(130)について記載した手順に従って製造した。
(S)-[3-[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-ベンジルアミノ]-シクロヘキシル-酢酸 シクロペンチルエステル (131)
LCMS純度＞98%, m/z 536.25 (M+H)+, 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO), δ: 0.7-1.25 (8H, m), 1.50-1.95 (14H, m), 3.69 (1H, br s), 3.98 (2H, br s), 4.43 (2H, br s), 5.14 (1H, t, J 5.4 Hz), 6.60-6.71 (2H, m), 7.05-7.28 (3H, m), 7.43 (1H, d, J 8.5 Hz), 7.83-7.98 (2H, m), 9.25 (1H, br s), 11.45 (1H, br s)
【０６４２】
(S)-3-tert-ブトキシ-2-[3-[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-ベンジルアミノ]-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (132)
LCMS純度＞98%, m/z 540.25 (M+H)+, 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO), δ: 1.05 (9H, s), 1.50-1.78 (8H, m), 3.15-3.67 (5H, m), 4.38 (2H, d, J 5.8 Hz), 5.05-5.15 (1H, m), 6.31 (1H, t, J 5.9 Hz), 6.40-6.48 (2H, m), 6.56 (1H, s), 6.96 (1H, t, J 7.8 Hz), 7.42 (1H, d, J 8.2 Hz), 7.87 (1H, s), 7.93 (1H, s), 9.24 (1H, br s), 11.43 (1H, br s)
【０６４３】
(S)-2-[3-[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-ベンジルアミノ]-4-メチル-ペンタン酸 シクロペンチルエステル (133)
LCMS純度98%, m/z 510.25 (M+H)+, 1H NMR (300 MHz, d6-DMSO), δ: 0.87 (6H, d, J 6.4 Hz), 1.50-1.94 (10H, m), 3.57-4.20 (3H, m), 4.44 (2H, s), 5.20 (1H, t, J 5.8 Hz), 6.58-6.74 (3H, m), 7.11 (1H, t, J 7.7 Hz), 7.43 (1H, d J 8.3 Hz), 7.85-7.96 (3H, m), 9.38 (2H, br s), 11.46 (1H, br s)
【０６４４】
(S)-3-tert-ブトキシ-2-[4-[(2-ヒドロキシカルバモイル-ベンゾ[b]チオフェン-6-イルメチル)-アミノ]-ベンジルアミノ]-プロピオン酸 シクロペンチルエステル (134)
LCMS純度98%, m/z 540.25 (M+H)+ ,1H NMR (300 MHz, d4-MeOD), δ: 7.64-7.77 (2H, m), 7.28 (1H, d, J=7.2 Hz), 6.99 (2H, d, J=6.6 Hz), 6.53 (2H, d, J=6.6 Hz), 5.06-5.08 (1H, m), 4.35 (2H, s), 3.40-3.75 (5H, m), 1.50-1.82 (8H, m), 1.04 (9H, s)
【０６４５】
生物学的活性の測定
ヒストン脱アセチル化酵素活性
化合物がヒストン脱アセチル化酵素活性を阻害する能力を、Biomolから市販で入手可能なHDAC蛍光活性アッセイを用いて測定した。簡単に、Fluor de Lys (商標)基質、ε-アミノがアセチル化されたリジンを、ヒストン脱アセチル化酵素活性の源(HeLa核抽出物)と、阻害剤の存在下又は非存在下でインキュベートする。基質の脱アセチル化は、基質をFluor de Lys (商標)デベロッパーに感作させ、これが蛍光体を発生する。よって、基質をHDAC活性の源とインキュベートすると、HDAC阻害剤の存在下で減少されるシグナルの増加をもたらす。
【０６４６】
データは、以下のように、全てのサンプルからバックグラウンドシグナルを減じて、阻害剤の非存在下で測定したコントロールのパーセンテージとして表す。
%活性 = ((Si − B) ／ (S0 − B)) × 100
(式中、Siは、基質、酵素及び阻害剤の存在下でのシグナルであり、S0は基質、酵素及び阻害剤を溶解するビヒクルの存在下でのシグナルであり、Bは、酵素の非存在下で測定されたバックグラウンドシグナルである)
【０６４７】
IC50値は、Graphpad Prismソフトウェアを用いて、8個のデータ点の結果を可変の傾きを有するシグモイドの用量応答の等式に適合させた後に(化合物のlog濃度に対する%活性)、非線形回帰分析により決定した。
【０６４８】
HeLa細胞由来の核粗抽出物からのヒストン脱アセチル化酵素活性を、スクリーニングに用いた。4C (Seneffe, Belgium)から購入した調製物は、対数増殖期に回収したHeLa細胞から調製した。核抽出物は、Dignam JD1983 Nucl. Acid. Res. 11, 1475〜1489に従って調製し、液体窒素中で素早く凍結させ(snap frozen)、-80℃にて保存した。最終のバッファーの組成は、20 mM Hepes、100 mM KCl、0.2 mM EDTA、0.5 mM DTT、0.2 mM PMSF及び20 % (v/v) グリセロールであった。
【０６４９】
IC50の結果は、以下の3つの範囲の1つに割り当てた。
範囲A：IC50＜100nM；
範囲B：IC50が101nMから1000nMまで；
範囲C：IC50＞1001nM。
NT = 試験せず。
このアッセイにおける実施例の化合物の試験の結果は、以下の表2の2つ目の欄に示す。
【０６５０】
細胞阻害アッセイ
対数増殖期に増殖している対応する癌細胞系統(Hela、U937及びHUT)を回収し、1000細胞／ウェル(最終容量200μl)で96ウェル組織培養プレートに播種した。細胞増殖24時間後に、細胞を化合物(最終濃度20μM)で処理した。次いで、プレートをさらに72時間インキュベートした後に、スルホローダミンB (SRB)細胞生存アッセイをSkehan 1990 J Natl Canc Inst 82, 1107〜1112に従って行った。
【０６５１】
データは、以下のようにして、阻害剤の非存在下で測定したコントロールのパーセンテージ阻害として表した。
%阻害 = 100−((Si/S0)×100)
(式中、Siは阻害剤の存在下でのシグナルであり、S0はDMSOの存在下でのシグナルである)
【０６５２】
IC50値は、Graphpad Prismソフトウェアを用いて、8個のデータ点の結果を可変の傾きを有するシグモイドの用量応答の等式に適合させた後に(化合物のlog濃度に対する%活性)、非線形回帰分析により決定した。
【０６５３】
IC50の結果は、以下の3つの範囲の1つに割り当てた。
範囲A：IC50＜330nM；
範囲B：IC50が330nMから3300nMまで；
範囲C：IC50＞3301nM。
NT= 試験せず。
このアッセイにおける実施例の化合物の試験の結果は、以下の表2の3〜5つ目の欄に示す。
【０６５４】
【表２−１】
0005405820.tif 000265
【０６５５】
【表２−２】
0005405820.tif 000266
【０６５６】
【表２−３】
0005405820.tif 000267
【０６５７】
【表２−４】
0005405820.tif 000268
【０６５８】
【表２−５】
0005405820.tif 000269
【０６５９】
破砕細胞カルボキシエステラーゼアッセイ
細胞抽出物の調製
U937又はHct116腫瘍細胞(約109を4容量のDulbeccos PBS (約1リットル)中で洗浄し、160gで10分間、4℃にてペレットにした。これを2回繰り返し、最終の細胞ペレットを35mlの冷ホモジナイズバッファー(Trizma 10mM、NaCl 130mM、CaCl2 0.5mM PH 7.0)に25℃にて再懸濁した。ホモジネートは、窒素キャビテーション(700psi、4℃にて50分)により調製した。ホモジネートを氷上に保持し、以下の最終濃度を与えるように設計された阻害剤のカクテルを補った。
ロイペプチン  1μM
アプロチニン  0.1μM
E64  8μM
ペプスタチン  1.5μM
ベスタチン  162μM
キモスタチン  33μM
【０６６０】
細胞ホモジネートを360 rpmにて10分間の遠心分離により清澄にした後に、得られた上清をエステラーゼ活性の源として用い、必要になるまで-80℃にて保存可能であった。
【０６６１】
エステル切断の測定
エステルの対応するカルボン酸への加水分解は、この細胞抽出物を用いて測定できる。このために、細胞抽出物(約30μg／0.5mlの全アッセイ容量)を37℃にて、25℃のTris-HCl 25mM、125mM NaClバッファー PH 7.5中でインキュベートした。ゼロ時間において、関連するエステル(基質)を、最終濃度2.5μMで加え、サンプルを37℃にて適切な時間(通常、0〜80分)インキュベートした。反応を、3×容量のアセトニトリルの添加により停止した。ゼロ時間サンプルについて、アセトニトリルを、エステル化合物に先立って加えた。12000gで5分間の遠心分離の後に、サンプルを親のエステル及びその対応するカルボン酸について、室温にてLCMSにより分析した(Sciex API 3000, HP1100 バイナリポンプ, CTC PAL)。用いたクロマトグラフィー条件は、AceCN (75*2.1mm)カラム、及び水/0.1%ギ酸中の5〜95%アセトニトリルの移動相に基づくものであった。