(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
コレステロール及びスフィンゴミエリンを１：１のモル比で備え、カルジオリピン、Ｌ−β，γ−ジミリストイルフォスファチジン酸から選択されるさらなる脂質を備えるリポソーム、
を備えるアルツハイマー病の治療用の医薬組成物。
【請求項２】
前記さらなる脂質は、コレステロール、スフィンゴミエリン及びさらなる脂質の総量に対してモル濃度で５〜４０％を占める、
請求項１に記載のアルツハイマー病の治療用の医薬組成物。
【請求項３】
前記さらなる脂質は、コレステロール、スフィンゴミエリン及びさらなる脂質の総量に対して、モル濃度で５％を占める、
請求項２に記載のアルツハイマー病の治療用の医薬組成物。
【請求項４】
前記さらなる脂質は、コレステロール、スフィンゴミエリン及びさらなる脂質の総量に対して、１５〜２５ｍｏｌ％を占める、
請求項２に記載のアルツハイマー病の治療用の医薬組成物。
【請求項５】
前記さらなる脂質は、コレステロール、スフィンゴミエリン及びさらなる脂質の総量に対して、２０ｍｏｌ％を占める、
請求項２に記載のアルツハイマー病の治療用の医薬組成物。
【請求項６】
コレステロール及びスフィンゴミエリンを１：１のモル比で備え、カルジオリピン、Ｌ−β，γ−ジミリストイルフォスファチジン酸から選択されるさらなる脂質を備えるリポソーム、
を備える患者におけるベータアミロイドペプチドの過剰生成の抑制用の医薬組成物。
【請求項７】
前記さらなる脂質は、コレステロール、スフィンゴミエリン及びさらなる脂質の総量に対してモル濃度で５〜４０％を占める、
請求項６に記載の患者におけるベータアミロイドペプチドの過剰生成の抑制用の医薬組成物。
【請求項８】
前記さらなる脂質は、コレステロール、スフィンゴミエリン及びさらなる脂質の総量に対して、モル濃度で５％を占める、
請求項７に記載の患者におけるベータアミロイドペプチドの過剰生成の抑制用の医薬組成物。
【請求項９】
前記さらなる脂質は、コレステロール、スフィンゴミエリン及びさらなる脂質の総量に対して、１５〜２５ｍｏｌ％を占める、
請求項７に記載の患者におけるベータアミロイドペプチドの過剰生成の抑制用の医薬組成物。
【請求項１０】
前記さらなる脂質は、コレステロール、スフィンゴミエリン及びさらなる脂質の総量に対して、２０ｍｏｌ％を占める、
請求項７に記載の患者におけるベータアミロイドペプチドの過剰生成の抑制用の医薬組成物。
【請求項１１】
患者から採取した生体試料と請求項１〜１０のいずれかに記載の医薬組成物とをインキュベートすること、
前記医薬組成物を試料から回収すること、及び
それに結合したベータアミロイドペプチドを定量すること、
を備えるインビトロでのアルツハイマー病の判定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、身体における大量のベータアミロイドペプチドの存在と関連する疾患の治療、予防及び診断に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病は、記憶及び認知機能の進行性の低下によって特定される神経変性の異常である。この疾患は、認知症として分類され、それが引き起こす計り知れない経済的及び社会的損害はさておき、先進国において４番目に多い死亡原因である。
【０００３】
解剖学的及び病理学的には、死後のアルツハイマーの患者の脳組織の解剖により、辺縁系及び大脳皮質における老人斑及び神経原線維変化が確認される。老人斑は、細胞外に位置し、アミロイドβ（Aβ）ペプチドをその主成分として含有し、このペプチドは、アミロイド前駆ペプチド（amyloid precursor protein：APP）から、タンパク質分解酵素による一連の開裂によって生じる。Aβペプチドは、アルツハイマー病患者の脳にのみ多量に生産され、健康な人には生じない。このペプチドは、比較的低い分子量（約4500Da）を有し、単量体の状態で生成され、弱い相互作用によって他のAβ分子と結合して、大きな凝集物（オリゴマー、原線維、斑）を形成する傾向がある。単量体及びオリゴマーは、比較的可溶であり、原線維及び斑は、不溶かつアミロイド凝集の状態で脳に沈着し、アルツハイマー患者の脳に見出される。これらの凝集は、ニューロンに有毒であって、その変質を引き起こし、その結果、認知能力の低下及び死を引き起こす。
【０００４】
βアミロイド（Aβ）ペプチドは、アルツハイマー病において異常に大量に生成され、脳に蓄積される。単量体⇔オリゴマー⇔線維⇔斑という動的平衡が存在すると考えられる。この平衡の存在は、アルツハイマー患者の脳における不溶な凝集量の増加の原因となる。これは、単量体生成の異常な増大が、平衡を斑形成に移動させるからである。
【０００５】
平衡状態にあるβアミロイドペプチドは、循環血液中にも見出され、血液脳関門を通って、脳に存在することがある。この後半の平衡が存在することの証明として、他の著者により発表された論文は、血中でAβペプチドに結合する物質の投与及びその除去が、アミロイド斑の除去と同様に、中枢神経系からのAβ流出も間接的に促進することを示した。これは、“シンク”効果として知られる。これらの結合物質の中で最もよく研究されているのが、疾患のモデルとして使われる遺伝子組換えマウスに注入された抗体である。これは、アルツハイマー病の免疫療法として知られる。Aβに結合可能な他の分子（例えば、静脈注射されたGM1ガングリオシド脂質又は皮下注射されたNogo受容体）の使用の可能性も試験され、部分的に成功している。
【０００６】
脂質分子、又は血液循環に注入されたときに“シンク効果”を促進することのできる両親媒性を有するより一般的な分子が使われる場合、これらの分子は、血液循環からのこれらの分子を除去する免疫系又は網内系とのこれらの相互作用能を阻害すると共にAβとの相互作用能を向上させることのできる“小胞”に挿入される。
【０００７】
リポソームは、水性の空洞を内部に有する、両親媒性脂質の二重膜脂質で構成された脂質小胞である。リポソームの製造方法はは、ヒトの他の疾患の治療に用いられる製薬工業によって既に用いられる、単純で、効率よく、かつ拡張可能な、制御された生成物を得ることができる方法である。さらに、天然脂質分子は、生体適合及び生分解が可能な生成物の製造を可能にする。リポソームは、親油性又は両親媒性分子（二重リン脂質膜に含まれる）及び親水性分子（内部の水性の中心部に含まれる）の両方を取り込むことのできる優れたキャリア系として、長く知られており、対象組織を標的とする薬剤及び造影剤の搬送に広く用いられる。薬剤の放出、生体内での安定性及び生体内分布は、その大きさ、表面電荷、表面の疎水性及び粒子膜の流動性によって決定される。さらに、天然の脂質成分に基づいてそれらを構築することで、網内系による迅速な吸収を防ぐことができる。リポソームの特徴のひとつとして、使われる脂質の種類と搬送される活物質との間の相互作用の高い特異性がある。ある特定の種類の分子に対して高い親和性を持つ脂質が、他の分子に結合する効果が全くないことが、実際に確認されている。同時に、リポソームの組成のわずかな違いも、結合する種（標的）に対する活性のレベルを大きく変動させる。さらに、標的種が他の非標的種と平衡状態にあるときは、効果的に機能するリポソームが、前者の種に対して排他的な親和性を示す必要がある。特に、単量体⇔オリゴマー⇔原線維⇔斑という平衡の場合、リポソームが、“単量体”及び“オリゴマー”に対して高い親和性を有することが重要である。様々な種に対して広く親和性を有するリポソームは、平衡を大きく移動させることができないであろう。また、より高い種（原線維、斑）に対する選択的な親和性を有するリポソームは、より大きな病原性を持ち得る種の形成を促進する望ましくない方法で、平衡を移動させるかもしれない。
【０００８】
ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，  ｖｏｌ．５８２，  ｎｏ．２，  ２００７，  ｐａｇｅｓ  ２１５−２２０と、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ｖｏｌ．４２，  ｎｏ．１１，  ２００３，  ｐａｇｅｓ  ３２９５−３３０４は、それぞれ、原線維形成中にプリオンたんぱく質中で引き起こる構造変化、および、ｐＨによる影響を考慮した、リポソームのプリオンたんぱく質との相互作用について議論している。Ｃｏｌｌｏｉｄｓ  ａｎｄ  Ｓｕｒｆａｃｅｓ  Ｂ：  Ｂｉｏｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ，  ｖｏｌ．５８，  ｎｏ．２，  ２００７，  ｐａｇｅｓ  ２３１−２３６には、４つのＤＰＰＧ／ＤＰＰＣ含有リポソームとＡβペプチドの結合に関する記載がある。その結合親和性が１０−５のオーダーの大きさであることが見出された。Ｍｉｃｒｏｎ，  ｖｏｌ．３３，  ｎｏ．７−８，  ２００２  ｐａｇｅｓ  ６０９−６２６は、Ａβペプチドとリポソームとの相互作用により得られたＡβペプチド原線維の顕微鏡観察に関する研究についてである。“シンク効果”の例（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ，  ｖｏｌ．２８６，  ｎｏ．５，  Ｍａｙ  ２００２，  ｐ．１８）が、いくつか実験的に示されているが、ベータアミロイドペプチドに結合することのできる有効かつ信頼性の高い系は、まだ存在していない。また、容易に全身投与することのできる系は、まだ実用化されていない。最終的には、上述した効果と、高額な合成及び半合成物質及び／又は患者の免疫系に作用する物質の使用を含まない、単純で低費用な製造方法とを両立することが必要である。
【発明の概要】
【０００９】
新規のリポソームが同定され、このリポソームは“単量体”及び“オリゴマー”の状態にあるベータアミロイドペプチドに効果的に結合することができ、アルツハイマー病及び身体でのこのペプチドの異常な増加と関連する他の疾患の望ましい治療方法における“シンク効果”を実現するために使用可能である。結合能は、リポソームの製造における出願人によって同定された特定の天然脂質の存在により確保される。これらは、コレステロール及びスフィンゴミエリンで構成される定常成分並びに選択された数種の脂質で構成されるさらなる可変成分を備える。
【００１０】
Aβに結合することができる特定の脂質及びこれらの特定の脂質のAβペプチドに効果的に結合するこれら特定の脂質を含有するリポソームの機能は、発明者により実行された研究の過程で発見された。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】矢印で示される非変性条件下におけるAβペプチド（Aβ 1-42）の様々な凝集状態での一次元電気泳動結果（単量体、オリゴマー及び原線維）。染色はAb 6E10 抗Aβ 1-42による。
【図２】原子間力顕微鏡オリゴマー及び原線維状態における様々な凝集状態でのAβペプチドのイメージである。２A：オリゴマー；２B：原線維。イメージサイズ：10 μm×10 μm
【発明を実施するための形態】
【００１２】
コレステロール及びスフィンゴミエリンを１：１のモル比で含有するリポソームは、血液循環中で高い安定性を示すこと、及び網内系による迅速な吸収を防ぐことが知られている。しかし、出願人によって本書に示されるように、このようなリポソームは、ベータアミロイドペプチドへの結合能が不十分である。
【００１３】
出願人は、コレステロール:スフィンゴミエリン＝１：１と共に構築されたときに、得られたリポソームがAβペプチドに対して非常に高い結合能を有する、いくつかの選択された脂質を同定した。この目的を達成する上で有用なこれらさらなる脂質は、カルジオリピン、L-β,γ-ジミリストイルフォスファチジン酸、ジパルミトイル L-α-ホスファチジル-DL-グリセロール、及びこれらの誘導体から選択される。さらなる脂質は、コレステロール、スフィンゴミエリン 及びさらなる脂質の総モル数に対して、好ましくは5〜４０％のモル濃度であり、より好ましくは15%〜25%であり、例えば2０％である。標準的な分子量を有する上述の他の脂質とは異なり、スフィンゴミエリンは、分子量の違う異なる形態をとることが知られている。しかし、本発明において、スフィンゴミエリンは、Aβペプチドに対する結合能を大きく変動させることなく、上述の比率で用いられる。
【００１４】
リポソームは、Remington's Pharm. Sciences, 21st ed., p. 314に記載されているような公知の方法によって製造可能である。これらの工程の全ては、上述のリポソームの製造に適用され、本発明の一部をなす。好ましい方法の1つは、押出による製造である。つまり、事前に選択された脂質を有機溶媒と混合し；溶媒を除去することで脂質フィルムを得て；フィルムを生理学的緩衝液に再懸濁し、制御された直径を有する孔を持つフィルターを通して、圧力下で押出する。
【００１５】
得られるリポソームは、Aβペプチド、特に単量体及びオリゴマーに対して高い結合能を示す。上述したように、このような結合は、身体における異常な量のAβペプチドの存在に関連する疾患、特にアルツハイマー病の治療及び予防的処置において、強く関心を引く。本発明は、同様に、本書に示されるように、Aβペプチドの異常な産生と関連する疾患の予防及び治療におけるリポソームの使用、及び上記リポソームを含有する適切な医薬組成物を提供する。投与に適した医薬形状は全て、本発明の目的を達成するために使用可能である。特に、例えば静脈注射又は筋肉注射及び点的に用いられる注射剤に適用される。本発明の組成物の投与経路として、脳への直接投与は本発明の重要な部分ではあるが、本発明の組成物は、脳に直接投与される必要はない。実際、上述の効果は、全身投与によっても同様に有効であった。循環する血液からベータアミロイドペプチドを封鎖することにより、リポソームは、脳部分において単量体⇔オリゴマー⇔原線維⇔斑の平衡を左に移行させる濃度勾配をもたらし、それによって、斑の解消を促進すると共に新たな斑の形成を阻害する。
【００１６】
こうして製造されたリポソームは、リポソーム製造に一般的に用いられる標準的な材料を含有してもよい。そのような材料として、例えば、製剤品の循環半減期を延ばすことのできるポリエチレングリコール等のリポソーム安定化分子が挙げられる。リポソームにはまた、アルツハイマー病の治療に使用される薬剤が入れられてもよい。結果として得られる組成物により、リポソーム要素の２つの面が相乗的に引き出される。つまり、一方では封鎖効果が病原性種の存在を低減するために用いられ、他方では、薬剤を作用すべき部位に搬送し、早すぎる代謝を抑制するために有効な、リポソームの薬剤キャリアとしての能力が引き出される。
【００１７】
治療的使用だけでなく、本発明のリポソームは、ベータアミロイドペプチドに結合し、濃縮させることを目的として、インビトロ使用される生物学的試薬として、細胞培養等に用いられてもよい。
【００１８】
特に有効な適用分野として、診断がある。ありがたいことにアミロイドペプチドに対する封鎖効果があるので、リポソームは、上記ペプチドを含有することが疑われる生体試料と共にインキュベートされる。試料から適切に回収された後、リポソームは破壊され、公知の手法に沿って、ペプチドが定量される。リポソームのベータアミロイドへの高い親和性により、天然の状態では測定することができないような少量の上記ペプチドを濃縮して、定量することができる。特定の量のペプチドを回収することは、アルツハイマー病の診断を可能にするか、その重症度を数値化するか、アルツハイマー病の素因を検出することを可能とする。本願は、非常に興味深いものである。なぜなら、認知症の他の原因を排除することで可能性に基づいて診断を形成し、確実にアルツハイマー病を診断することができ、現在実用化されている試験は現在のところ無いからである。診断状況においてアミロイド検出剤としてアミロイド斑Aβに結合することのできる新たなリポソームについて本書で説明するが、その使用は非常に興味深いものである。
【００１９】
我々が見出した脂質の挿入及びこのような脂質を含有するリポソームの製造は、技術的に容易な手法であり、低コストで医薬製品を製造可能とし、容易かつ速やかに製造でき、“シンク効果”の活用を通じてアルツハイマー病の治療のためにヒトのインビボで使用可能であると考えられる。この観点から、この技術は、抗Aβ抗体を用いる又はGM1ガングリオシドを用いる、疾患の免疫療法と比べて、大きく前進している。さらに、上記分子は、免疫応答に付随するリスクを伴うことがある。
【００２０】
特許により提供される製品は、現行の苦痛緩和療法に代わってアルツハイマー病を治療する大きな可能性を持つ。アルツハイマー病は、成人における進行性認知症の７０％を占め、障害が進行すると、アルツハイマー病に罹患した患者は、如何なる独立した行為も行えなくなり、家族や医療スタッフに完全に依存した状態で生活することになる。この疾患の効果的な治療方法、つまり患者の脳におけるアミロイド斑を除去することのできる方法を見出すことは、大きな医学的関心をひく。
【実施例】
【００２１】
１．リポソームの調製
コレステロール/スフィンゴミエリン/更なる脂質を 2/2/1のモル比で含むリポソームを、押出法によって調製した。総量が1.3 μmolの脂質を、有機溶媒（クロロホルム/メタノール 体積比率2:1）に混合し、次いで窒素の緩流下で、さらに少なくとも３時間に渡って真空ポンプで、有機溶媒を除去した。得られた脂質フィルムを生理的緩衝液（10 mM tris-HCl, 150 mMNaCl, 1 mMEDTA pH 7.4）に再懸濁して、押出装置（Lipex Biomembranes社製）を用いて、直径100 nmの孔を持つポリカーボネイトフィルターを通して、圧力（２０バール）下で１０回押出した。
【００２２】
２．リポソームの構成
リポソームは、コレステロール/スフィンゴミエリン（モル比1:1；スフィンゴミエリンは卵黄由来、分子量：703.04）に基づく定常成分及び可変成分からなり、脂質からなる。脂質では、コレステロール/スフィンゴミエリン/可変脂質を40/40/20のモル比で混合した。すなわち、５〜４０モル％の範囲の可変の脂質を用い、定常成分の量を合わせることで、可変成分の割合を変えてさらにリポソームを調製した（30/30/40及び47.5/47.5/5）。
【００２３】
３．Aβペプチド
用いたペプチドは、市販（Sigma社製）のヒト型ベータアミロイドペプチドであり、特に1-42断片、すなわちアルツハイマー病患者の脳中に見られるアミロイド斑の主たる構成要素である。凍結乾燥ペプチドを、調合液中に存在する凝集を解体させることのできる特定の溶媒（ヘキサフルオロイソプロパノール  HFIP、シグマ社製）に再懸濁する。
【００２４】
溶媒は、窒素の緩流下で、次いで少なくとも３時間の真空ポンプで、除去する。これによって、ペプチドが確実に単量体状態とされる。乾燥ペプチドを、後述するように、次に押出しされたリポソームと共に再懸濁し、リポソームと共にインキュベートする。また、ペプチドとリポソームとの相互作用を調べる実験を、文献に記載されているプロトコルに沿って、様々な凝集状態、つまりオリゴマー及び原線維状態にあるペプチドを用いて実行する。非変性状態でのネイティブ電気泳動及び原子間力顕微鏡（atomic force microscopy：AFM）等の対照実験により、明らかにペプチドの凝集状態を調べることが可能となる。
【００２５】
４．結合実験
こうして調製されたリポソームを、リポソームに結合しないペプチドから結合したペプチドを分離する非連続密度勾配超遠心分離を用いて、Aβペプチドと相互作用し、結合する能力を試験に供した。リポソーム（1.3μmolの脂質）を、Aβ 1-42 ペプチド（1.0 μg）と３７℃で９０分間インキュベートし、その後で超遠心に供した。勾配は、試験管の底に、緩衝液に溶解した1350 μLの80%スクロース、450μLの試料（インキュベーション後のリポソーム及びペプチド）、緩衝液に溶解した1350 μLの50%スクロース、及び1350 μLの緩衝液を積層することで形成した。
【００２６】
140,000 g で2時間、4°Cでの遠心後、450μLで10画分をそれぞれ回収し、２つに集約した。すなわち、前半の５画分をリポソームに結合するタンパク質を含むものとして回収し、後半の５画分を未結合タンパク質を含むものとして回収した。Aβペプチドの量は、ELISAアッセイによって決定した。全ての結合実験は、少なくとも３回行った。
【００２７】
５．結果
５．１  Aβペプチドの凝集状態
凍結乾燥ペプチドの極性溶媒（HFIP）への再懸濁によって単量体状態のペプチドを；ジメチルスルホキシド（DMSO）を添加した上述の生理的緩衝液に再懸濁し、24時間4°Cでインキュベートすることでオリゴマー状態のペプチドを得；酸性溶液又は脱イオン水に直接、ペプチドを再懸濁することで、原線維状態のペプチドを得た。
【００２８】
様々な調製物の凝集状態を、非変性電気泳動及びAFMによって調べた。図１は、矢印で示すように、単量体状態、オリゴマー状態及び原線維状態のAβペプチドについて、ネイティブ状態下で行われた電気泳動結果を示す。ウェスタンブロッティングでポリアクリルアミドゲルをニトロセルロース膜に転写した。タンパク質のバンドを、ARに対する特定の抗体と、ペルオキシダーゼ酵素が結合した、一次酵素を認識可能な二次酵素との免疫修飾によって認識した。
【００２９】
化学ルミネッセンスによるシグナル検知
これに対して、図２は、AFMにより得た、オリゴマー状態及び原線維状態におけるAβ化学ルミネッセンスを表す画像を示す。
【００３０】
５．２  リポソームとAβとの間の結合実験
リポソームとAβペプチドとの間の相互作用実験に関連する結果を以下に示す。ヒストグラムは、密度勾配超遠心実験及びその後のELISAアッセイによるペプチドの定量によって決定された、異なる脂質組成物のリポソームに結合するペプチドの割合を表す。
【００３１】
特に、ヒストグラム１は、リポソーム（脂質がコレステロール/スフィンゴミエリン/可変の脂質を40/40/20のモル比である）が結合したAβタンパク質の割合を示す。
【００３２】
これに対して、ヒストグラム２は、可変脂質の割合が、３つの脂質の総量に対する割合が上述範囲である5-40%内で異なるリポソームが結合したAβタンパク質の割合を比較する。
【００３３】
【表１】
0005645813.tif 000002
【００３４】
【表２】
0005645813.tif 000003
【００３５】
ヒストグラムのｘ軸に示される脂質の略称と、その後にその化合物名とを示す：Chol= コレステロール; Sm= スフィンゴミエリン; PI= ホスファチジルイノシトール; CL= カルジオリピン; PA= L-β,γ-ジミリストイル-α-ホスファチジン酸; PE= ホスファチジルエタノールアミン; PG= ホスファチジルグリセロール; GM1= モノシアリル化 GM1 ガングリオシド; GD1a= ジシアリル化GD1a ガングリオシド; SULF= スルファチド; GM3= モノシアリル化GM3 ガングリオシド; GD3= ジシアリル化 GD3 ガングリオシド; PS= ホスファチジルセリン; GM2= モノシアリル化 GM2 ガングリオシド; DPPG= ジパルミトイル L-α-ホスファチジル-DL-グリセロール。
【００３６】
ヒストグラム１及び２に示すように、同一のモル濃度で異なる脂質を比較すると、Aβタンパク質の結合能は、用いられる脂質によって、大きく異なる（ヒストグラム１）。しかし、異なるモル濃度で同じ脂質を比較する試験では（ヒストグラム２）、収率は、ヒストグラム１の40:40:20の比率で得られる値に基づいても全く予測不可能であった。
【００３７】
興味深いことに、より良い結果、つまりコレステロール及びスフィンゴミエリンのみからなるリポソームと比較してより良い結果は、5% DPPG、5% CL 及び20% PAを含有するリポソームによって得られる。
【００３８】
異なる脂質構成を有するナノメータサイズ（直径１００ｎｍ）のリポソームを押出し成形によって調製し、そのAβ 1-42ペプチドへの結合能を調べた。 
リポソームは、5、20又は40%のL-β,γ-ジミリストイルホスファチジン酸又はの誘導体、特にカルジオリピン又はジパルミトイルL-α-ホスファチジル-DL-グリセロール（陰イオンリン脂質）が添加されたコレステロール/スフィンゴミエリン（Chol/Sm=1:1モル比）のマトリックスで形成されていた。リポソームの直径、ｚ電位及び多分散指数は、動的レーザ光核酸（DLS）によって決定された。
【００３９】
アルツハイマー病の患者の脳で見られる異なる凝集状態（単量体、オリゴマー及び原線維）におけるAβペプチドへのリポソームの親和性を、表面プラズモン共鳴（SPR）、非連続密度勾配超遠心分離、及び蛍光性Aの蛍光消光によって調べた。
【００４０】
これらの予備研究は、Chol/Sm/陰イオン性リン脂質で構成されたリポソームが、Chol/Smのみ、Chol/Sm/両性イオンリン脂質又はChol/Sm/スフィンゴ脂質と比較して、Aβペプチドに対して強い結合能を示した。具体的には、陰イオン性リン脂質を含有するリポソームは、試験された全てのAβ凝集物に対して、ナノモル濃度範囲（100-200 nM）での親和定数（Kd）を示した。親和性は、大きい方から、原線維＞オリゴマー＞単量体の順であった。
【００４１】
Aβペプチドへのリポソームの高い親和性は、脳の凝集物への結合（診断的適用）、及びおそらく患者の脳からのそれらの除去／隔離（治療的適用）の手段となりえる。
【００４２】
これらのナノ粒子は、予め、診断用の造影剤又はAβペプチドの凝集を分解する及び／若しくは防止することのできる分子と共に調製され、並びに機能化されてもよい。発明者らは、この目的のために、原子間力顕微鏡（atomic force microscopy：AFM）、チオフラビンT（ThT）アッセイ及び電気泳動法によって、Aβの凝集／分解への上述のリポソームの効果を調べる実験を行った。前段階の結果は、特にカルジオリピン及びL-β,γ-ジミリストイルホスファチジン酸を含有するリポソームが、Aβペプチドの単量体調製物からの原線維の形成を阻害することができることを示す。
【図１】
0005645813.tif 000004
【図２Ａ】
0005645813.tif 000005
【図２Ｂ】
0005645813.tif 000006