(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リゾホスファチジルグリセロールを有効成分として含むことを特徴とする抗カビ剤。
【請求項２】
さらに、ブチレングリコールを含むことを特徴とする請求項１記載の抗カビ剤。
【請求項３】
リゾホスファチジルグリセロールと、エタノール及びリゾチームからなる群から選択される少なくとも一つの成分とを含むことを特徴とする抗細菌剤。
【請求項４】
リゾホスファチジルグリセロールと、エタノール及びリゾチームからなる群から選択される少なくとも一つの成分とを含むことを特徴とする抗酵母剤。
【請求項５】
請求項１又は２記載の抗カビ剤、請求項３記載の抗細菌剤、又は請求項４記載の抗酵母剤を用いて飲食物、化粧品、医薬品又は医薬部外品を処理することからなる抗菌方法。
【請求項６】
請求項１又は２記載の抗カビ剤、請求項３記載の抗細菌剤、又は請求項４記載の抗酵母剤を含む飲食物、化粧品、医薬品又は医薬部外品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な抗リステリア症菌剤、抗酸性菌剤及び抗カビ剤に関し、より詳しくは、リゾホスファチジルグリセロール（ＬＰＧ）を有効成分として含む抗リステリア症菌剤、抗酸性菌剤及び抗カビ剤に関する。本発明は、また、新規な抗菌剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
食品の腐敗防止、および食品の腐敗による食中毒の防止を目的とした食品の保存方法には、ｐＨ低下による保存、加熱殺菌による保存、防腐剤や保存料による保存などがある。
近年、思考をこらした様々な食品が市場にあふれてきており、保存期間、保存状態、および食品の形態に応じて、前述の保存方法を組み合わせた方法が用いられている。特に、食品の安全性に関心が集中し、一般消費者の天然志向が強まり、防腐剤や保存料による保存では、合成保存料よりも天然保存料が求められている。また、コンビニエンスストア（ＣＶＳ）を中心とした市場でも保存料の使用を控える傾向があり、保存料に替わり、食品の保存期間を延ばす日持ち向上剤が注目されている。【０００３】
防腐剤や保存料は、安息香酸、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、ソルビン酸カリウムなどの合成保存料と、エタノール、有機酸、プロタミン、リゾチームなどの天然保存料に分類される。近年の市場における天然志向の傾向から、より安全性の高い抗菌性のある天然保存料の開発が望まれている。また、天然保存料が必要とされる背景には、合成保存料の添加量などの制限、イメージの悪化、安全性の問題、不十分な抗菌効果もある。【０００４】
現在、食品用保存料の市場では、麺類、ハム、ソーセージ、水産練り製品などにおいて、エタノール、有機酸、ポリリジン、プロタミン、低級脂肪酸モノグリセリド、リゾチームなどが利用されている。また、缶コーヒー飲料には、耐熱性芽胞菌の発芽抑制作用を持つショ糖脂肪酸エステルやポリグリセリン脂肪酸エステルが利用されている。しかし、エタノールはアルコール臭による風味への影響、酢酸などの有機酸は酸臭による風味への影響、低級脂肪酸モノグリセリドは特有の刺激味を伴うことが知られている。ポリリジン、プロタミン、リゾチームは、食品のｐＨが抗菌性に影響し、抗菌性が不十分であるなどの問題が生じている。【０００５】
そこで近年、市場拡大の著しい惣菜などでは、前述の保存料にグリシンや酢酸ナトリウムなどを併用した食品の日持ち向上剤が利用されている。また、リゾチームをショ糖脂肪酸エステルと併用することで、リゾチーム単独では抗菌性を示さない黄色ブドウ球菌やセレウス菌に対して抗菌性を示す相乗効果が報告されており（特許文献１）、保存料による新たな保存方法の開発も盛んに行われている。【０００６】
リゾレシチン類を用いた保存料の開発では、缶コーヒー飲料でフラットサワーの原因となる耐熱性芽胞菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓの発芽抑制作用が報告されている（特許文献２）。特に、リゾレシチンの一種であるリゾホスファチジルグリセロールには、耐熱性芽胞菌だけではなく、細菌、酵母に対して抗菌性をもつことが報告されている（特許文献３）。しかしながらＢａｃｉｌｌｕｓ属などのグラム陽性細菌には比較的強い抗菌性を示すことが報告されているが、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓに対する抗菌性はまったく知られていない。【０００７】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓはリステリア症の原因菌として知られ、低温での増殖が可能であるとともに、耐塩性がある。そのため、冷蔵保存や食塩による保存などでＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓが増殖して感染の原因になる場合がある。近年、食品の保存技術の向上や輸送技術の発達に伴い、冷蔵輸送や長期冷蔵保存が増えたことが、リステリア症の発生に関係している。
Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓの増殖抑制を示す天然保存料として、ナイシン、ホップ酸（特許文献４）、ローズマリー抽出物（特許文献５）などが知られている。しかし、ナイシンは食品への使用に制限があり、ホップ酸、ローズマリー抽出物は水に溶けにくく、用途が限られているため、用途が十分な天然保存料は数少ない。【０００８】
Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓは果汁飲料や清涼飲料水などの酸性飲料において異臭や混濁させることが知られている。Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓは収穫果実などの原材料や製造ラインから汚染し、低温でも発育し、加熱殺菌でも死滅しないことから酸性飲料に混入し、それらの腐敗の原因菌として問題となっている。そのため、これらの菌に対して抗菌性を有することは非常に有用である。
また、ＬＰＧは酵母に対する弱い抗真菌性も報告されているが、カビへの抗真菌性は報告されておらず、食品、および食品以外で利用用途が限定されると考えられる。【０００９】
食品以外の化粧品や医薬部外品などの分野においても、開封後の雑菌混入を防ぐために抗菌剤が利用されている。一般的に、化粧品、医薬部外品ではパラベンなどの防腐剤が利用されている。しかしながら、防腐剤を配合した製品を使用することで、皮膚刺激を感じる場合やアレルギーを引き起こす場合があり、より安全な製品を提供するために天然成分による防腐や防腐剤無添加化が求められている。そのため、天然保存料は食品だけではなく、化粧品、および医薬部外品など多様な分野での利用が期待できる。【００１０】
前述の通り、安全性の高い抗菌剤が望まれている中で、開発されている天然保存料は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属を中心としたグラム陽性菌に対して強い抗菌性を示す。一方で、グラム陰性菌や酵母、カビなどの真菌に対して強い抗菌性を示す天然保存料は数少ない。また、食品のｐＨが抗菌性に影響し、抗菌性が不十分であるなどの問題がある。
ＬＰＧは細菌、酵母に対して抗菌性をもつことが報告されている。しかしながらＢａｃｉｌｌｕｓ属などのグラム陽性細菌には比較的強い抗菌性を示すことが報告されているが、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓに対する抗菌性はまったく知られていない。これらの菌に対して抗菌性を有することは、前述したように非常に有用である。また、ＬＰＧはグラム陰性菌、および酵母に対する抗菌性が弱く、抗真菌性は酵母に対してのみ知られており、カビに対しての抗真菌性はまったく知られていない。
【特許文献１】特開２００２−２３４８０８号公報
【特許文献２】特開平１−８５０４３号公報
【特許文献３】特開平３−１１８３０５号公報
【特許文献４】特許第２７３１６３２号明細書
【特許文献５】特開２００７−７０３１７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明者らは、リステリア症の原因といわれるＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ等の酸性菌、およびカビに対する抗菌剤の開発、従来用いられているリゾチームなどと比較して、広範で強い抗菌効果を有する抗菌剤の開発を課題とした。これらの抗菌剤の開発にあたって、さらに詳しくは、有効成分が天然由来のものであり、ｐＨの影響を受けにくい抗菌効果を課題とした。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者は、鋭意研究を行った結果、リン脂質の１種であるリゾホスファチジルグリセロールに優れた抗リステリア症菌効果、抗酸性菌効果及び抗カビ効果があること、リゾホスファチジルグリセロールと公知の抗菌剤、好ましくは水溶性抗菌剤を併用することにより、単独では抗菌効果を示さない多くの種類の菌類に強い抗菌効果を示すこと、当該抗菌効果が酸性条件下でも発揮されることを見出し、本発明に至った。
すなわち本発明は、リゾホスファチジルグリセロールを有効成分として含むことを特徴とする抗リステリア症菌剤、抗酸性菌剤、及び抗カビ剤である。
上記抗菌剤は、リゾホスファチジルグリセロールと、アルコール、有機酸、リゾチーム、ムラミダーゼ、グリシン及び有機酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの成分とを含むことが好ましい。
上記アルコールは、エタノール又は多価アルコールであることが好ましい。
上記多価アルコールは、ブチレングリコールであることがより好ましい。
本発明は、また、上記抗リステリア症菌剤、抗酸性菌剤、抗カビ剤、又は抗菌剤を用いて飲食物、化粧品、医薬品又は医薬部外品を処理することからなる抗菌方法である。
本発明は、また、上記の抗菌剤を含む飲食物、化粧品、医薬品又は医薬部外品である。【００１３】
以下に本発明を詳細に説明する。
本明細書においては、酵母、カビを真菌に分類し、グラム陰性桿菌、グラム陽性球菌、グラム陽性桿菌などを細菌に分類する。真菌と細菌の上位概念として菌、または菌類と記載することがある。【００１４】
本発明の抗リステリア症菌剤、抗酸性菌剤及び抗カビ剤は、リゾホスファチジルグリセロール（ＬＰＧ）を有効成分として含むものである。
本発明で用いるＬＰＧは、レシチンにホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）を作用させて得られるリゾレシチンの一種である。ＬＰＧを得る方法としては特に限定されず、従来公知の方法を用いることができ、例えば、大豆レシチン、卵黄レシチン等の天然物から抽出分離されたレシチンにホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）とグリセロールを作用させてホスファチジルグリセロール（ＰＧ）を得、得られたＰＧにＰＬＡ２を作用させて、ＰＧの２位の脂肪酸エステル結合を加水分解してＬＰＧを製造する方法や、レシチンにＰＬＡ２を作用させて得られる酵素分解レシチン中のＬＰＧを抽出する方法等が挙げられる。レシチンにＰＬＤやＰＬＡ２を反応させる際、これらの反応系は水系であってもよいし、二相系でもよく、特に限定されない。
なお、生成したリゾホスファチジルグリセロールは、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等により分析することができる。【００１５】
本発明の抗リステリア症菌剤、抗酸性菌剤及び抗カビ剤は、ＬＰＧ以外に他のリン脂質やリゾリン脂質を１０重量％程度含んでいてもよい。好ましくは２重量％以下であり、より好ましくは１重量％以下である。他のリン脂質及びリゾリン脂質としては、例えば、ホスファチジン酸、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、リゾホスファチジン酸、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルコリンなどが挙げられる。【００１６】
本発明の抗リステリア症菌剤は、リステリア症の原因といわれるＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓに対して優れた抗菌効果を有する。Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓは、低温でも増殖可能で、かつ耐塩性があるという性質を有するが、ＬＰＧを有効成分とする本発明の抗リステリア症菌剤を用いると、その増殖を抑制することができる。【００１７】
本発明の抗酸性菌剤は、Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ属などの、酸性条件下でも増殖可能な菌に対して優れた抗菌効果を有する。これまで、Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ属と同じグラム陽性桿菌である耐熱性芽胞菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ等に対して、ＬＰＧが抗菌効果を有することは知られていたが、本発明により、ＬＰＧが耐熱性でかつ耐酸性であるＡｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物等に対しても抗菌効果を有することが分かった。
Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ属微生物としては、Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ、Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｃａｒｄａｒｉｕｓ、Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｙｃｌｏｈｅｐｔａｎｉｃｕｓ等がある。【００１８】
本発明の抗カビ剤は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ属、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ属などのカビに対して優れた抗菌効果を有する。これまで、酵母に対してＬＰＧが抗菌効果を有することは知られていたが、本発明により、ＬＰＧがカビに対しても抗菌効果を有することが分かった。これまで、カビに対して抗菌効果を有する天然の抗菌剤や保存料はほとんど知られていないので、継続的に摂取しても副作用の心配がないＬＰＧからなる本発明の抗カビ剤は非常に有用である。
カビの具体例としては、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｖｉｒｅｎｓ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｐｉｎｏｐｈｉｌｕｍ、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ等が挙げられる。【００１９】
本発明の抗リステリア症菌剤、抗酸性菌剤又は抗カビ剤におけるＬＰＧの含有量の下限及び上限は特に限定されず、それぞれ独立して、下限は、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．１重量％以上、より好ましくは１重量％以上であり、上限は、例えば１００重量％以下である。本発明のＬＰＧを含有する抗リステリア症菌剤、抗酸性菌剤又は抗カビ剤を作製する際のＬＰＧの含有量、剤型、保存方法および保存形態は、飲食物、化粧品、医薬品、医薬部外品などの用途に応じて適宜決定できる。【００２０】
本発明の抗菌剤は、ＬＰＧと、アルコール、有機酸、リゾチーム、ムラミダーゼ、グリシン及び有機酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの成分とを含むことを特徴とする。
本発明の抗菌剤は、ＬＰＧと上記の成分、好ましくは水溶性成分を併用することにより、ＬＰＧ単独、又は、上記の成分を単独で用いる場合と比較して、グラム陰性菌、グラム陽性菌、酵母、およびカビに対して非常に優れた抗菌効果を示す。これまで細菌、酵母、カビ等の全てに抗菌効果を有する単一成分はほとんど知られておらず、抗菌成分を数種類用いることにより、他の成分にない抗菌効果を補って多くの種類の菌に対して抗菌剤として用いられてきた。しかしながら、本発明の抗菌剤は、多くの種類の菌に対して抗菌作用を示すだけでなく、ＬＰＧと上記の他の成分をそれぞれ単独で用いた時と比較して、非常に少量で強い抗菌作用を示す相乗効果を有する。【００２１】
本発明の抗菌剤は、上述の抗リステリア症菌剤等と同様に、ＬＰＧ以外に他のリン脂質やリゾリン脂質を１０重量％程度含んでいてもよい。好ましくは２重量％以下であり、より好ましくは１重量％以下である。【００２２】
アルコールとしては、飲食物、化粧品、医薬品、医薬部外品等に用いうる保存料や日持向上剤などに含まれるアルコールが好ましく、具体的には、エタノール等の１価アルコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、ペンチレングリコール、ヘキシレングリコール等の多価アルコールなどが挙げられる。中でも、エタノール、ブチレングリコール、プロピレングリコールなどがより好ましい。【００２３】
有機酸、有機酸塩としては、例えば、飲食物、化粧品、医薬品、医薬部外品等に用いうる保存料や日持向上剤などに含まれる有機酸、有機酸塩が挙げられ、カルボン酸、カルボン酸塩が好ましい。より好ましくは、酢酸、酢酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウムである。【００２４】
上記リゾチームとしては、飲食物への使用許可されているものや化粧品として使用可能なものであれば良く、通常のリゾチームの他にも、化学的、物理的に改良されたリゾチームも用いることが出来る。具体的に本発明で使用されるものとして、卵白由来、魚類の体表粘液由来、微生物由来、バクテリオファージ由来等の各種由来精製リゾチームや遺伝子操作技術を利用して調製されたリゾチーム、及び、これらのリゾチームを酸やアルカリ、加熱、加圧等により化学的・物理的に処理した改良リゾチーム等も挙げられる。上記リゾチームは市場で入手可能であり、市販されているリゾチームとしては、卵白リゾチーム（キューピー社製、エーザイ社製、太陽化学社製他）、うずら卵リゾチーム等が挙げられる。【００２５】
本発明の抗菌剤におけるＬＰＧの含有量の下限及び上限は特に限定されず、それぞれ独立して、下限は、例えば０．００１重量％以上、好ましくは０．１重量％以上、より好ましくは１重量％以上であり、上限は、例えば９９．９重量％以下である。本発明の抗菌剤を作製する際のリゾホスファチジルグリセロールの含有量、剤型、保存方法および保存形態は、飲食物、化粧品、医薬部外品などの用途に応じて適宜決定できる。また、アルコール、有機酸、リゾチーム、ムラミダーゼ、グリシン及び有機酸塩の含有量は、リゾチーム、ムラミダーゼについては、ＬＰＧに対して重量比で（ＬＰＧ）：（リゾチーム及び／又はムラミダーゼ）が１００：１〜１：１００が好ましく、１０：１〜１：１０がより好ましい。リゾチーム、ムラミダーゼ以外の成分については、ＬＰＧに対して重量比で（ＬＰＧ）：（他の成分）が１０００：１〜１：１０００が好ましく、１０：１〜１：１０がより好ましい。【００２６】
本発明の抗リステリア症菌剤、抗酸性菌剤、抗カビ剤及び抗菌剤は、広い範囲のｐＨで用いることができ、ｐＨ３．５〜８の範囲で優れた抗菌効果を発揮する。特に、細菌に対してはｐＨ５．５〜８の範囲で効果がよく、カビに対してはｐＨ３．５〜８の範囲で効果がよい。なお、飲食物及び化粧品は酸性であることが多いが、本発明の抗リステリア症菌剤、抗酸性菌剤、抗カビ剤及び抗菌剤は酸性でも抗菌効果を有するため、飲食物や化粧品への適用も十分に可能である。ｐＨ３．５〜６．５の飲食物への適用が好ましく、ｐＨ３．５〜５．５の飲食物への適用がより好ましい。ｐＨ５〜７の化粧品への適用が好ましく、ｐＨ５〜６の化粧品への適用がより好ましい。【００２７】
本発明の抗リステリア症菌剤、抗酸性菌剤、抗カビ剤及び抗菌剤には、更に、上記ＬＰＧを他の成分の他に、薬剤学的、食品衛生学的に許容される他の素材を常法により適宜添加混合してもよい。このようなものとしては特に限定されず、例えば、デキストリン、でんぷん、塩、トレハロース、単糖類、多糖類、タンパク質等が挙げられる。その他、化粧品、薬剤および飲食物に通常利用される賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、コーティング剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤、健康食品素材、栄養補助食品素材、ビタミン、漢方薬（生薬エキス）を含む薬剤ならびにこれらの組み合わせなどが挙げられる。【００２８】
また、本発明の抗リステリア症菌剤、抗酸性菌剤、抗カビ剤及び抗菌剤を化粧品（皮膚化粧料、洗浄用化粧料、頭髪用化粧料、浴用化粧料、口腔用組成物等）に用いる場合は、更に、化粧料成分として一般的に使用される油分、界面活性剤、アルコール類、キレート剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、増粘剤、色素類、香料等の他、紫外線吸収剤、美白剤、しわ改善剤、保湿剤、皮脂分泌抑制剤、柔軟剤、角質保護剤、薬効剤、酸化防止剤、溶剤等の成分を任意に組み合わせ配合することもできる。【００２９】
ここで、化粧品としては、クリーム、ローション、乳液、軟膏、美容液、オイル、パックなどの基礎化粧料、ひげ剃り用剤、洗顔料、皮膚洗浄料、シャンプー、リンス、ヘアートリートメント、整髪料、パーマ剤、ヘアートニック、染毛料、育毛・養毛料などの頭髪化粧料、ファンデーション、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ、チークなどのメークアップ化粧料、香水類、皮膚用消臭剤、制汗剤、歯みがき剤、洗口剤、口臭予防剤、口臭消臭剤、口中清涼剤、含嗽剤等の口腔用剤、入浴剤、サンスクリーンなどが挙げられる。好ましくは、ローション、クリーム、乳液、美容液、洗顔料、石鹸、クレンジング、サンスクリーンである。【００３０】
本発明の抗リステリア症菌剤、抗酸性菌剤、抗カビ剤及び抗菌剤を飲食物に用いる場合は、更に、飲食物成分に一般的に使用される可食性担体、食品素材、食品添加物、ｐＨ調整剤、有機酸、糖アルコール、甘味料、香料、ビタミン類、骨代謝ビタミン類、抗酸化剤、賦形剤、可溶化剤、結合剤、滑沢剤、懸濁剤、湿潤剤、皮膜形成物質、矯味剤、矯臭剤、着色料、保存剤等が適宜配合できる。【００３１】
本発明の飲食物には、飲料品及び食料品が挙げられる。飲料品としては、コーヒー飲料、清涼飲料水、茶飲料、果物ジュース、野菜ジュース、乳飲料、酒類、乳清飲料、みそ汁、スープなどが挙げられ、食料品としてはガム、キャンディー等の嗜好品、かまぼこ、ちくわ等の加工水産ねり製品、ソーセージ、ハム等の畜産製品、洋菓子類、和菓子類、生めん、中華めん、ゆでめん、ソバ等のめん類、ソース、醤油、タレ、砂糖、ハチミツ、粉末あめ、水あめ等の調味料、カレー粉、からし粉、コショウ粉等の香辛料、ジャム、マーマレード、チョコレートスプレッド、漬物、そう菜、ふりかけ、又は各種野菜・果実の缶詰・瓶詰等の加工野菜・果実類、チーズ、バター、ヨーグルト等の乳製品などが挙げられる。【００３２】
本発明の抗リステリア症菌剤、抗酸性菌剤、抗カビ剤及び抗菌剤の形態としては特に限定されないが、粉末、水溶液、油脂分散液等にすることができる。上記油脂分散液に用いうる油脂としては特に限定されず、大豆油、菜種油、パーム油、コーン油等の植物油、あるいは、魚油等の動物油及び、それらの硬化油、エステル交換油、分別油等の食用油脂が挙げられる。更に、乳化を安定させる等の目的で、液糖、蔗糖、オリゴ糖、澱粉分解糖化物、水飴等の糖類、ソルビトール、還元澱粉糖化物、グリセリン等の多価アルコール類、キサンタンガム、アラビアガム、ジェランガム、ペクチン、カラギーナン、セルロース、おから粉末、デキストリン等の増粘剤、あるいは、乳清タンパク質、卵黄、全卵、卵白、カゼインタンパク質、小麦蛋白、大豆蛋白、血漿蛋白、各種の蛋白分解物、蛋白酵素処理物等のタンパク質、ペプチド類等を１種または２種以上組み合わせて使用してもよい。
このような粉末、水溶液、油脂分散液等を飲食物、化粧品、医薬品、医薬部外品の材料に混ぜてもよいし、製造途中に添加してもよい。完成品を水溶液、油脂分散液等に浸漬してもよいし、スプレー等で完成品に水溶液、油脂分散液等を塗布することもできる。【００３３】
本発明の抗リステリア症菌剤、抗酸性菌剤、抗カビ剤及び抗菌剤の、飲食物などへの添加量は特に限定されないが、ＬＰＧに換算して、飲食物、化粧品、医薬品、医薬部外品中の濃度が０．００１〜１０重量％となるように添加するのが好ましい。より好ましくは０．０１〜１重量％である。
【発明の効果】
【００３４】
本発明では、リゾホスファチジルグリセロールを用いることにより、少量でリステリア症の原因であるＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ等の酸性菌、およびカビに対する抗菌効果を有する抗菌剤を提供することが可能となった。
また、リゾホスファチジルグリセロールをリゾチームなどの従来用いられている抗菌剤と併用することにより、広範で非常に強い抗菌効果を有する抗菌剤を提供することが可能となった。これらの抗菌剤は、有効成分が天然由来のものであり、ｐＨの影響を受けにくいので、飲食物、化粧品、医薬品、医薬部外品などに幅広く用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３５】
以下に実施例を示して本発明の抗菌剤を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、以下において単に％と表記されている場合はすべて重量％を意味する（生菌数に関する％は除く）。また、以下の実施例で用いるＬＰＧは、ナガセケムテックス社製リゾＰＧナガセ（商品名、リゾホスファチジルグリセロール８０重量％含有）である。【００３６】
１．リゾホスファチジルグリセロールの抗菌効果および抗カビ効果について
各試験菌株の前培養、および抗菌試験検定用の培地、培養条件は表１に示す。【００３７】
【表１】
0005468385.tif 000002
【００３８】
表１中の略号は、以下のとおりである。
ＴＳＢ：トリプトソーヤブイヨン（ニッスイ社製）
ＴＳＢ＋ＮａＣｌ：トリプトソーヤブイヨン（ニッスイ社製）、塩化ナトリウム３０ｇ／Ｌ
ＧＡＭ：ＧＡＭブイヨン（ニッスイ社製）
ＭＨＢ：ミュラーヒントンブイヨン（Ｏｘｆｏｒｄ社製）、塩化カルシウム５０ｍｇ／Ｌ、塩化マグネシウム２５ｍｇ／Ｌ
ＭＨＢ（ｐＨ４．０）：ミュラーヒントンブイヨン（Ｏｘｆｏｒｄ社製）、寒天２０ｇ／Ｌ、塩酸によりｐＨ４．０に調製
ＹＭ：Ｂａｃｔｏ  Ｐｅｐｔｏｎｅ（ＢＤ社製）５ｇ、Ｂａｃｔｏ  Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ（ＢＤ社製）３ｇ、Ｂａｃｔｏ  Ｍａｌｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ（ＢＤ社製）３ｇ、グルコース  ２ｇ／Ｌ
ＰＤＡ：ポテトデキストロース寒天培地（ＢＤ社製）
前培養に用いる際には２％の寒天を添加し、寒天培地とする。【００３９】
（実施例１）リステリア症菌に対するリゾホスファチジルグリセロールの抗菌効果
前培養したＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓを生理食塩水で懸濁し、１×１０７ｃｆｕ／ｍＬの菌液を作製した。２倍濃度で作製した表１に示す抗菌検定用培地５０μＬと、様々な濃度に調製したリゾホスファチジルグリセロール水溶液５０μＬを９６ウェルプレートに入れた。培地を添加した各ウェルに調整した菌液を５μＬ移植し、表１に示す培養温度および培養時間で静置培養を行った。培養後、菌の増殖を肉眼観察により判定した。菌の増殖が見られないリゾホスファチジルグリセロールの最小濃度を最小発育阻止濃度として、表２に示した。【００４０】
（実施例２）酸性菌に対するリゾホスファチジルグリセロールの抗菌効果
前培養したＡｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓを生理食塩水で懸濁し、１×１０７ｃｆｕ／ｍＬの菌液を作製した。表１に示す抗菌検定用培地を９割の水で溶解した３．６ｍＬの培地と、様々な濃度に調製したリゾホスファチジルグリセロール水溶液０．４ｍＬを６ウェルプレートに入れた。培地を添加した各ウェルに調整した菌液から内径１ｍｍの白金耳で画線塗抹し、表１に示す培養温度、および培養時間で静置培養を行った。培養後、菌の増殖を肉眼観察により判定した。菌の増殖が見られないリゾホスファチジルグリセロールの最小濃度を最小発育阻止濃度として、表２に示した。【００４１】
（実施例３）リゾホスファチジルグリセロールの抗カビ効果
０．１％Ｔｗｅｅｎ８０を含む生理食塩水により、前培養したカビの胞子を懸濁し、１×１０６ｃｆｕ／ｍＬの胞子液を作成した。表１に示す抗菌検定用培地を９割の水で溶解した３．６ｍＬの培地と、様々な濃度に調製したリゾホスファチジルグリセロール水溶液０．４ｍＬを６ウェルプレートに入れた。培地を添加した各ウェルに調整した胞子液から内径１ｍｍの白金耳で画線塗抹し、表１に示す培養温度、および培養時間で静置培養を行った。培養後、菌の増殖を肉眼観察により判定した。菌の増殖が見られないリゾホスファチジルグリセロールの最小濃度を最小発育阻止濃度として、表２に示した。【００４２】
【表２】
0005468385.tif 000003
【００４３】
表２から明らかなように、リゾホスファチジルグリセロールはＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ、カビに対して抗菌性を示すことがわかった。【００４４】
（実施例４）リゾホスファチジルグリセロールとの併用効果
下記に示す抗菌検定条件のうち、１から９および１２、１３では、次に示す方法で試験を行った。前培養した各種試験菌株を生理食塩水で懸濁し、１×１０７ｃｆｕ／ｍＬの菌液を作製した。２倍濃度で作製した表１に示す抗菌検定用培地５０μＬと、抗菌検定条件１から９および１２、１３に示す水溶性抗菌剤５０μＬを９６ウェルプレートに入れた。培地を添加した各ウェルに調整した菌液を５μＬ移植し、表１に示す培養温度、および培養時間で静置培養を行った。培養後、菌の増殖を肉眼観察により判定し、結果を表３に示した。
下記に示す抗菌検定条件１０、１１では、次の方法により併用効果を判定した。
前培養した各種試験菌株を生理食塩水で懸濁し、１×１０６ｃｆｕ／ｍＬの菌液を作製した。表１に示す抗菌検定用培地に２％の寒天を入れ、９割の水で溶解した３．６ｍＬの培地と、様々な濃度に調製した下記条件に示す抗菌検定条件の１０、１１に示す抗菌剤水溶液０．４ｍＬを６ウェルプレートに入れた。調整した菌液を内径１ｍｍの白金耳で画線塗抹した。表１に示す培養温度、および培養時間で静置培養を行った。培養後、菌の増殖を肉眼観察により判定し、結果を表３に示した。
＜抗菌検定条件＞
１：１０００ｐｐｍリゾホスファチジルグリセロール、５％グリシン、１００ｐｐｍ卵白リゾチーム（生化学工業社製、以下リゾチームと記載）
２：１０００ｐｐｍリゾホスファチジルグリセロール
３：５％グリシン、１００ｐｐｍリゾチーム
４：１０００ｐｐｍリゾホスファチジルグリセロール、５％グリシン、１％酢酸ナトリウム
５：５％グリシン、１％酢酸ナトリウム
６：１０００ｐｐｍリゾホスファチジルグリセロール、１０００ｐｐｍ酢酸
７：１０００ｐｐｍ酢酸
８：１０００ｐｐｍリゾホスファチジルグリセロール、３％酢酸ナトリウム
９：３％酢酸ナトリウム
１０：２００ｐｐｍリゾホスファチジルグリセロール、２００ｐｐｍ  Ｎ−アセチルムラミダーゼ（生化学工業社製、以下ムラミダーゼと記載）
１１：１０００ｐｐｍムラミダーゼ
１２：１０００ｐｐｍリゾホスファチジルグリセロール、５％グリシン
１３：５％グリシン【００４５】
【表３】
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【００４６】
表３から明らかなようにＬＰＧはグリシン、リゾチーム、ムラミダーゼ、酢酸ナトリウム、および酢酸との併用効果があることがわかった。【００４７】
（実施例５）リゾホスファチジルグリセロールとリゾチームの併用効果
前培養したＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅを生理食塩水で懸濁し、１×１０７ｃｆｕ／ｍＬの菌液を作製した。２倍濃度で作製した表１に示す抗菌検定用培地５０μＬと、様々な濃度に調製した抗菌剤の水溶液５０μＬを９６ウェルプレートに入れた。培地を添加した各ウェルに調整した菌液を５μＬ移植し、表１に示す培養温度、および培養時間で静置培養を行った。培養後、菌の増殖を肉眼観察により判定した。菌の増殖が見られない抗菌剤における併用の最小濃度を最小発育阻止濃度として、表４に示した。【００４８】
【表４】
0005468385.tif 000005
【００４９】
（実施例６）リゾホスファチジルグリセロールとエタノールの併用効果
前培養した各種試験菌株を生理食塩水で懸濁し、１×１０７ｃｆｕ／ｍＬの菌液を作製した。２倍濃度で作製した表１に示す抗菌検定用培地５０μＬと、様々な濃度に調製した抗菌剤の水溶液５０μＬを９６ウェルプレートに入れた。培地を添加した各ウェルに調整した菌液を５μＬ移植し、表１に示す培養温度、および培養時間で静置培養を行った。培養後、菌の増殖を肉眼観察により判定した。菌の増殖が見られない抗菌剤における併用の最小濃度を最小発育阻止濃度として、表５に示した。【００５０】
【表５】
0005468385.tif 000006
【００５１】
表４、表５から明らかなように、ＬＰＧとリゾチーム又はエタノールを併用することにより、それぞれを単独で用いる場合と比較して非常に少ない添加量で同等な抗菌効果を示すことが分かった。【００５２】
（実施例７）リゾホスファチジルグリセロールの抗菌性に対するｐＨ影響
細菌、酵母の菌液の調整、抗菌検定試験、および判定方法は実施例１に従い、カビの胞子液の作製、検定試験、および判定方法は実施例３に従った。ただし、培地のｐＨは塩酸、ならびに水酸化ナトリウム水溶液により調製した。判定結果は表６に示した。【００５３】
【表６】
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【００５４】
表６から明らかなように、ＬＰＧはｐＨ６−８の範囲において細菌に対する抗菌性を有し、ｐＨ５．５−８の範囲においてカビおよび酵母に対する抗菌性を有していることがわかった。【００５５】
（参考例１）ｐＨが抗菌性に影響を及ぼす抗菌剤
有効成分としてプロタミンを用いた場合の、ｐＨの影響を表７に示す。
表７における培養条件は、ＢＨＩ：ブレインハートフュージョンブロース、ＮＡ：ニュートリエント寒天である。【００５６】
【表７】
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【００５７】
（参考例２）酵母に抗菌性を示し、カビに抗菌性を示さない抗菌剤
有効成分として、トウガラシ抽出物（トウガラシ水性抽出物から分離精製したギトゲニン配糖体）とペクチン分解物であるノイペクチンＬ（アサマ化成社製）を用いた場合の抗菌効果を表８（ギトゲニン配糖体）、表９（ノイペクチンＬ）に示す。
表８における培養条件は、ＹＭ液体培地、ｐＨ６．０、２５℃、４８時間培養である。
表９における培養条件は、トリプトソイ寒天培地、３０℃、７２時間培養である。【００５８】
【表８】
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【００５９】
【表９】
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【００６０】
２．リゾホスファチジルグリセロールの抗菌効果および抗カビ効果について
実施例８〜１０で用いる試験菌株の前培養、および抗菌試験検定用の培地、培養条件を表１０に示す。【００６１】
【表１０】
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【００６２】
（実施例８）リゾホスファチジルグリセロールの飲料における静菌効果【００６３】
（前培養）
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ＪＣＭ５５４６（カビ）を試験菌として用い表１０に示す条件で前培養を行った。【００６４】
（飲料）
市販されているコーヒー飲料、スポーツ飲料、日本茶飲料、オレンジジュースに対する抗菌性を試験した。各飲料４０ｍＬにリゾホスファチジルグリセロールを０、０．１又は０．５重量％の濃度で溶解させ、各飲料を作製した。各飲料のｐＨは、コーヒー飲料が６．４、スポーツ飲料が３．８、茶飲料が６．０、オレンジジュースが３．５であった。【００６５】
（抗菌試験）
前培養用寒天培地にて成育させたカビ胞子を使用して胞子懸濁液を調製した（０．１％Ｔｗｅｅｎ８０、０．９％ＮａＣｌ）。上記飲料に、胞子の懸濁液を４００μＬ接種し、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒは１×１０５ｃｆｕを接種した。その後、２５℃で０、１、３、７、１４日間放置した。生菌数は、胞子を接種した市販飲料を寒天培地に希釈し、１０μＬスポットし、生育の有無により確認した。寒天培地希釈法により測定した生育数を表１１に示す。【００６６】
【表１１】
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【００６７】
表１１から明らかなように、各飲料において、リゾホスファチジルグリセロールによりＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒに対する静菌効果が観察された。【００６８】
（実施例９）化粧用クリームにおける、リゾホスファチジルグリセロールとブチレングリコールの併用効果【００６９】
（前培養）
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＮＢＲＣ３９７２、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＮＢＲＣ１３７２５、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ＮＢＲＣ１３２７６、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ  ＮＢＲＣ１５９４、及びＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ＪＣＭ５５４６を試験菌として用い、表１０に示す条件で前培養を行った。なお、これら５種類の菌類は保存効果試験で一般的に使用されている菌類である。
細菌・酵母を前培養した寒天培地より０．９％生理食塩水に懸濁した。カビは胞子懸濁液（０．１％Ｔｗｅｅｎ８０、０．９％ＮａＣｌ）で懸濁した。その後、生菌数を細菌は１×１０８ｃｆｕ、真菌は１×１０７ｃｆｕに調製した。【００７０】
（化粧用クリーム）
各成分の配合量を表１２に示した。まず、所定量の水相を計量し、８５℃に加温しておき、別途、油相を計量し、８５℃に加温し溶解させた。水相に油相を添加し、ホモミキサーを使用して５，０００ｒｐｍで５分間乳化を行った。その後、４０℃まで攪拌しながら冷却した。添加相を添加し、室温まで攪拌しながら冷却した後に、真空ポンプにより脱泡を行って、化粧用クリームを作製した。
試料Ｃが本願発明の化粧品であって、試料ＡとＢはコントロールである。試料Ａは試料ＣからＬＰＧの代わりに合成抗菌剤として知られるｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルを使用し、ブチレングリコールを除いた化粧品であって、試料ＢはＬＰＧとｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルを用いなかった化粧品である。【００７１】
【表１２】
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【００７２】
（抗菌試験）
化粧用クリーム２０ｇに菌、及び胞子の懸濁液を０．０２ｇ接種し、細菌は１×１０６ｃｆｕ、真菌は１×１０５ｃｆｕを化粧用クリームに接種した。放置日数０、１、３、７、１４、２１、２８日の生菌数を寒天培地希釈法により測定した。
表１３に試料Ａ、表１４に試料Ｂ、表１５に試料Ｃの生菌数を示す。生菌数の経時変化は、接種菌数（細菌は１×１０６ｃｆｕ、真菌は１×１０５ｃｆｕ）を１００％として示した。【００７３】
【表１３】
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【００７４】
【表１４】
0005468385.tif 000015
【００７５】
【表１５】
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【００７６】
表１３〜１５から明らかなように、リゾホスファチジルグリセロールは、化粧品用クリームにおける静菌効果を示す。リゾホスファチジルグリセロールをブチレングリコールと併用した場合、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒに対して効果的な抗菌作用が認められた。この抗菌作用は従来抗菌剤として用いられてきたｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルと同等であった。【００７７】
（実施例１０）ローションにおける、リゾホスファチジルグリセロールとエタノール又はブチレングリコールの併用効果【００７８】
（前培養）
実施例９と同様にして前培養を行った。【００７９】
（ローション）
各成分の配合量を表１６に示した。各成分を所定量計量し、室温で撹拌してローションを作製した。ローションのｐＨは全て５．５とした。試料Ｂ、ＥおよびＧが本発明の化粧品であって、試料Ａ、Ｃ、ＤおよびＦはコントロールである。試料ＡおよびＤでは、ＬＰＧもｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルも使用せず、試料ＣおよびＦではｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルのみを使用した化粧品である。【００８０】
【表１６】
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【００８１】
（抗菌試験）
化粧用ローション５０ｍＬに菌、及び胞子の懸濁液を５００μＬ接種し、細菌は１×１０６ｃｆｕ、真菌は１×１０５ｃｆｕを化粧用ローションに接種した。
放置日数０、１、２、３、７、１４日の生菌数を測定した結果を表１７〜２３に示す。【００８２】
【表１７】
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【００８３】
【表１８】
0005468385.tif 000019
【００８４】
【表１９】
0005468385.tif 000020
【００８５】
【表２０】
0005468385.tif 000021
【００８６】
【表２１】
0005468385.tif 000022
【００８７】
【表２２】
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【００８８】
【表２３】
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【００８９】
表１７〜２３において、生菌数の経時変化は接種菌数(細菌は１×１０６ｃｆｕ、真菌は１×１０５ｃｆｕ）を１００％として示した。ブチレングリコール、あるいはエタノールを併用することにより、リゾホスファチジルグリセロールは広範な抗菌スペクトルを示す。
特に、リゾホスファチジルグリセロールはｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルよりもＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓに対して高い活性を示す。また、リゾホスファチジルグリセロールはカビに対してもｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルと同等の活性を示す。【００９０】
図１において、試料Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ及びＧにおけるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒの１日後の生菌数（ｃｆｕ）を示す。リゾホスファチジルグリセロールをブチレングリコールあるいはエタノールと併用することにより、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒに対する抗菌作用が強かった。
【産業上の利用可能性】
【００９１】
本発明では、リゾホスファチジルグリセロールを用いることにより、少量でＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ等の酸性菌、およびカビに対する抗菌効果を有する抗菌剤を提供することが可能となった。
また、リゾホスファチジルグリセロールをリゾチームやアルコールなどの従来用いられている抗菌剤と併用することにより、広範で非常に強い抗菌効果を有する抗菌剤を提供することが可能となった。これらの抗菌剤は、有効成分が天然由来のものであり、ｐＨの影響を受けにくいので、飲食物、化粧品、医薬品、医薬部外品などに幅広く用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００９２】
【図１】図１は、試料Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ及びＧの生菌数をプロットした図である。
【図１】
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