(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペプチドＣ−ＰＥＰの調製のための方法（Ｃ−ＰＥＰ）であって、
Ｃ−ＰＥＰはペプチジルラジカルＰＥＰ−Ｃを含み、ＰＥＰ−Ｃのアミノ酸残基の数は２〜８０であり、そのＣ末端は保護基ＤＫＰ−ＰＧにより保護され、ＤＫＰ−ＰＧはハンドル基ＨＧ、必要に応じてスペーサー基ＳＧ、およびジケトピペラジン残基ＤＫＰを含み；
ＳＧはペプチド化学において従来用いられるスペーサー基であり、ここでＳＧが、式（ＳＧ−Ｉ）のスペーサー基、式（ＳＧ−ＩＩ）のスペーサー基、式（ＳＧ−ＩＩＩ）のスペーサー基、式（ＳＧ−ＩＶ）のスペーサー基、式（ＳＧ−Ｖ）のスペーサー基、式（ＳＧ−ＶＩ）のスペーサー基および式（ＳＧ−ＶＩＩ）のスペーサー基；
【化１】
0005579939.tif 000050
【化２】
0005579939.tif 000051
からなる群より選択されるスペーサー基であり、
式中、
ｍ１、ｍ５、ｍ６、ｍ７、ｍ９、ｍ１０、ｍ１１およびｍ１２は同一であるか、または異なり、互いに独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０であり；
（＊＊＊）は、ＳＧが存在する場合、ＳＧからＨＧへの結合であり、
（＊＊＊＊）は、ＳＧが存在する場合、ＳＧとＸａａ２との間の結合であり、；
ＤＫＰはジペプチド残基ＤＰＲから誘導されたジケトピペラジン残基であり；
ＤＰＲはαアミノ酸残基Ｘａａ１およびＸａａ２からなり；
Ｘａａ１はＤＰＲのＣ末端アミノ酸残基であり；
Ｘａａ２はＤＰＲのＮ末端アミノ酸残基であり、またＸａａ２は側鎖を有し、前記側鎖は官能基ＦＧによって置換されており；
ＦＧはＣＯＯＨ、ＮＨ２、ＯＨおよびＳＨからなる群から選択され；
Ｘａａ１は、天然αアミノ酸残基、α−Ｎ−メチルアミノ酸残基、Ｌ−Ｈｐｒ残基、Ｄ−Ｈｐｒ残基、ＤＬ−Ｈｐｒ残基、２−（Ｃ１〜５−アルキル）−Ｄ−アミノ酸残基、２−（Ｃ１〜５−アルキル）−Ｌ−アミノ酸残基、２−（Ｃ１〜５−アルキル）−ＤＬ−アミノ酸残基および式（ＨｙｐＸ）；
【化３】
0005579939.tif 000052
（式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＣ（Ｒ１３）Ｒ１４であり；
Ｒ５、Ｒ７、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は同一であるか、または異なり、水素、Ｃ１-４アルキルおよびＯ−Ｒ８からなる群より互いに独立に選択され；
Ｒ８は、ペプチド化学において側鎖保護のために従来用いられる保護基、または式（Ｓｕｂ−Ｒ８）；
【化４】
0005579939.tif 000053
（式中、
ｍ８は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
Ｒ９は、Ｃ１-４アルキルである）
の置換基である）
の化合物から誘導された残基からなる群より選択され、ここでＨｐｒはホモプロリンを意味し、
Ｘａａ２は、Ｌ−Ｌｙｓ残基、Ｄ−Ｌｙｓ残基、ＤＬ−Ｌｙｓ残基、Ｌ−Ｏｒｎ残基、Ｄ−Ｏｒｎ残基、ＤＬ−Ｏｒｎ残基、Ｌ−４−アミノプロリン残基、Ｄ−４−アミノプロリン残基、ＤＬ−４−アミノプロリン残基、Ｌ−α，γ−ジアミノブタン酸残基、Ｄ−α，γ−ジアミノブタン酸残基、ＤＬ−α，γ−ジアミノブタン酸残基、Ｌ−α，β−ジアミノプロパン酸残基、Ｄ−α，β−ジアミノプロパン酸残基、ＤＬ−α，β−ジアミノプロパン酸残基、Ｌ−Ｓｅｒ残基、Ｄ−Ｓｅｒ残基、ＤＬ−Ｓｅｒ残基、Ｌ−Ｔｈｒ残基、Ｄ−Ｔｈｒ残基、ＤＬ−Ｔｈｒ残基、Ｌ−Ｃｙｓ残基、Ｄ−Ｃｙｓ残基、ＤＬ−Ｃｙｓ残基、Ｌ−ホモシステイン残基、Ｄ−ホモシステイン残基、ＤＬ−ホモシステイン残基、Ｌ−Ａｓｐ残基、Ｄ−Ａｓｐ残基、ＤＬ−Ａｓｐ残基、Ｌ−Ｇｌｕ残基、Ｄ−Ｇｌｕ残基およびＤＬ−Ｇｌｕ残基からなる群より選択され、ここでＯｒｎはオルニチンを意味し、
ＰＥＰ−ＣはＸａａＣ（１）を介してＨＧに接続しており；
ＸａａＣはＰＥＰ−Ｃのアミノ酸残基であり；
Ｘａａ（１）における指数（１）はＰＥＰ−ＣのＣ末端位置を表し；
ＸａａＣ（１）はＰＥＰ−ＣのＣ末端アミノ酸残基であり；
ＨＧはＦＧに直接接続しているか、またはＳＧが存在する場合、ＨＧはＳＧに接続しており、ＳＧはＦＧに接続しており；
ＨＧは、式（ＨＧＦ−Ｉ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＩ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＩＩ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＶ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−Ｖ）のハンドル基および式（ＨＧＦ−ＶＩ）のハンドル基、
【化５】
0005579939.tif 000054
【化６】
0005579939.tif 000055
からなる群より選択されるハンドル基であり、
式中、
（＊）は、方法（Ｃ−ＰＥＰ）におけるＰＥＰ−ＣのＣ末端のＣ原子と、ＨＧとの間の結合を示し、
または、方法（Ｃ−ＰＥＰ）におけるＰＥＰ−ＣのＣ末端アミノ酸残基が側鎖を有し、この側鎖を介してＨＧに接続している場合、方法（Ｃ−ＰＥＰ）におけるＰＥＰ−ＣのＣ末端アミノ酸残基の側鎖と、ＨＧとの間の結合を示し、
（＊＊）は、ＳＧが存在する場合、ＨＧとＳＧとの間の結合を表すか、もしくはＳＧが存在しない場合、ＨＧとＦＧとの間の結合を表し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１０およびＲ１１は、同一であるか、または異なり、水素およびＯ−Ｃ１-４アルキルからなる群より互いに独立に選択され、
ｓ１−１、ｓ２、ｓ３、ｓ４およびｓ６は、同一であるか、または異なり、１、２、３および４からなる群より互いに独立に選択され、
ｓ５−１は、０、１、２、３または４であり、
ｓ１−２、ｓ５−２およびｓ５−３は、同一であるか、または異なり、互いに独立に０または１であり、
Ｔ１−１は、ＯまたはＮＨであり、
Ｔ１−２およびＴ５−１は、Ｏであり；
方法（Ｃ−ＰＥＰ）は、ステップ（ｉｉｉ）を含み；
ステップ（ｉｉｉ）は反応（ＩＮＲＩＦＯ）を含み；
反応（ＩＮＲＩＦＯ）は、ペプチドＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ中での分子内環形成および同時切断反応を含む反応であり；
樹脂Ａが、ヒドロキシメチルポリスチレン（ＨＭＰＳ）樹脂、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に基づく樹脂、ＰＥＧがＰＥＧ樹脂とは異なる樹脂上にグラフトされた樹脂、ポリスチレン樹脂、ｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール樹脂、クロロメチルポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂、ポリ（ビニルアルコール）グラフトポリ（エチレングリコール）（ＰＶＡ−ｇ−ＰＥＧ）樹脂からなる群より選択され；
ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａは、Ｃ−ＰＥＰの前駆体であり、ＰＥＰ−Ｃおよび樹脂ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａを含み、ＰＥＰ−ＣはＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａに接続しており；
ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａは、樹脂ＡおよびＤＫＰ−ＰＧ形成リンカーＤＫＰ−Ｌを含み、樹脂ＡはＤＫＰ−Ｌに接続しており、
樹脂Ａは、固相ペプチド合成ＳＰＰＳにおける固相として従来用いられる樹脂であり、
ＤＫＰ−Ｌは、ＨＧ、必要に応じてＳＧ、およびＤＰＲを含み、Ｘａａ１のカルボン酸基であるＤＰＲのＣ末端カルボン酸基は樹脂Ａに接続しており；
反応（ＩＮＲＩＦＯ）における分子内環形成は、Ｘａａ２のαアミノ基であるＤＰＲのＮ末端アミノ基と、ＤＰＲのＣ末端カルボン酸基との反応であり、それによってＤＫＰを形成し、それによってＸａａ１が樹脂Ａから同時に切断され、ＤＫＰ−ＰＧが形成される；
前記方法。
【請求項２】
ＰＥＰ−Ｃが、ステップ（ｉｉｉ）の前に固相ペプチド合成ＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）により調製され；樹脂Ａが、樹脂ＡとＸａａ１との間の結合がＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）の間に切断されないように選択される、請求項１に記載の方法（Ｃ−ＰＥＰ）。
【請求項３】
前記固相ペプチド合成ＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）がＦｍｏｃ固相ペプチド合成である請求項２に記載の方法（Ｃ−ＰＥＰ）。
【請求項４】
ＤＫＰ−ＰＧ形成リンカーＤＫＰ−Ｌの調製のための方法（ＤＫＰ−Ｌ）であって、方法（ＤＫＰ−Ｌ）が、ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉ）、ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉｉ）および必要に応じて、ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉ）を含み；
ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉ）において、Ｘａａ２がＸａａ１にカップリングされ；
任意選択のステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉ）において、ＳＧがＤＫＰ−Ｌ中に存在する場合、ＳＧがＸａａ２にカップリングされ；
ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉｉ）において、ＨＧが、ＳＧがＤＫＰ−Ｌに存在する場合はＳＧ、またはＸａａ２のいずれかにカップリングされ；
ＤＫＰ−ＰＧ、ＤＫＰ−Ｌ、ＤＫＰ、Ｘａａ２、Ｘａａ１、ＨＧおよびＳＧが、請求項１に記載の通りである、方法。
【請求項５】
ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａの調製のための方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）であって、方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）が、方法（Ｘ１）または方法（Ｘ２）であり；
方法（Ｘ１）が、ステップ（Ｘ１−ｉ）、ステップ（Ｘ１−ｉｉ）、ステップ（Ｘ１−ｉｖ）および必要に応じてステップ（Ｘ１−ｉｉｉ）を含み；
ステップ（Ｘ１−ｉ）において、アミノ酸Ｘａａ１が樹脂Ａにカップリングされ；
ステップ（Ｘ１−ｉｉ）において、アミノ酸Ｘａａ２がＸａａ１にカップリングされ；
任意選択のステップ（Ｘ１−ｉｉｉ）において、ＳＧがＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ中に存在する場合、ＳＧがＸａａ２の側鎖にカップリングされ；
ステップ（Ｘ１−ｉｖ）において、ＨＧが、ＳＧがＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ中に存在する場合はＳＧ、またはＸａａ２のいずれかにカップリングされ；
方法（Ｘ２）が、ステップ（Ｘ２−ｉ）を含み；
ステップ（Ｘ２−ｉ）において、ＤＰＫ−Ｌが樹脂Ａにカップリングされ；
ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、樹脂Ａ、ＤＫＰ−ＰＧ、ＤＫＰ−Ｌ、ＤＫＰ、Ｘａａ２、Ｘａａ１、ＨＧおよびＳＧが、請求項１に記載の通りである、方法。
【請求項６】
ＨＧが、式（ＨＧＦ−Ｉ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＶ）のハンドル基および式（ＨＧＦ−ＶＩ）のハンドル基からなる群より選択され、式（ＨＧＦ−Ｉ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＶ）のハンドル基および式（ＨＧＦ−ＶＩ）のハンドル基は、請求項１において記載のとおりである、
請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ＨＧは、式（ＨＧ−Ｉａ）のハンドル基、（ＨＧ−Ｉｂ）のハンドル基、（ＨＧ−Ｉｃ）のハンドル基、（ＨＧ−Ｉｄ）のハンドル基、式（ＨＧ−ＩＩ）のハンドル基、式（ＨＧ−ＩＩＩ）のハンドル基、式（ＨＧ−ＩＶａ）のハンドル基、式（ＨＧ−ＩＶｂ）のハンドル基、式（ＨＧ−Ｖａ）のハンドル基、式（ＨＧ−Ｖｂ）のハンドル基および式（ＨＧ−ＶＩ）のハンドル基、
【化７】
0005579939.tif 000056
【化８】
0005579939.tif 000057
【化９】
0005579939.tif 000058
からなる群より選択されるハンドル基であり、
（*）および（**）は請求項１で定義されたとおりである、
請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
Ｘａａ１は、Ｌ−Ｎ−メチルグリシン残基、Ｄ−Ｎ−メチルグリシン残基、ＤＬ−Ｎ−メチルグリシン残基、Ｌ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基、Ｄ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基、ＤＬ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基、Ｌ−Ｐｒｏ残基、Ｄ−Ｐｒｏ残基、ＤＬ−Ｐｒｏ残基、側鎖保護されたＬ4−Ｈｙｐ残基、側鎖保護されたＤ4−Ｈｙｐ残基、側鎖保護されたＤＬ4−Ｈｙｐ残基、Ｌ4−Ｈｐｒ残基、Ｄ−Ｈｐｒ残基およびＤＬ−Ｈｐｒ残基からなる群より選択され、ここでＨｐｒはホモプロリンを意味する；
請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
Ｘａａ２は、Ｌ−Ｌｙｓ残基、Ｄ−Ｌｙｓ残基、ＤＬ−Ｌｙｓ残基、Ｌ−Ｏｒｎ残基、Ｄ−Ｏｒｎ残基、ＤＬ−Ｏｒｎ残基、Ｌ−４−アミノプロリン残基、Ｄ−４−アミノプロリン残基、ＤＬ−４−アミノプロリン残基、Ｌ−α，γ−ジアミノブタン酸残基、Ｄ−α，γ−ジアミノブタン酸残基、ＤＬ−α，γ−ジアミノブタン酸残基、Ｌ−α，β−ジアミノプロパン酸残基、Ｄ−α，β−ジアミノプロパン酸残基、ＤＬ−α，β−ジアミノプロパン酸残基、Ｌ−Ｓｅｒ残基、Ｄ−Ｓｅｒ残基、ＤＬ−Ｓｅｒ残基、Ｌ−Ｔｈｒ残基、Ｄ−Ｔｈｒ残基、ＤＬ−Ｔｈｒ残基、Ｌ−Ｃｙｓ残基、Ｄ−Ｃｙｓ残基、ＤＬ−Ｃｙｓ残基、Ｌ−ホモシステイン残基、Ｄ−ホモシステイン残基、ＤＬ−ホモシステイン残基、Ｌ−Ａｓｐ残基、Ｄ−Ａｓｐ残基、ＤＬ−Ａｓｐ残基、Ｌ−Ｇｌｕ残基、Ｄ−Ｇｌｕ残基およびＤＬ−Ｇｌｕ残基からなる群より選択され、ここでＯｒｎはオルニチンを意味する；
請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ペプチドＰＥＰの調製のための方法（ＰＥＰ−ＨＳＰＰＳ）であって、
方法（ＰＥＰ−ＨＳＰＰＳ）が、ステップ（ｉ−ｐｅｐ）およびステップ（ｉｉ−ｐｅｐ）を含み、
ステップ（ｉ−ｐｅｐ）において、ペプチドＣ−ＰＥＰが請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法（Ｃ−ＰＥＰ）に従って調製され；次いで、
ステップ（ｉｉ−ｐｅｐ）において、ステップ（ｉ−ｐｅｐ）で得られたＣ−ＰＥＰが、均一液相ペプチド合成ＨＳＰＰＳにより、Ｎ末端保護されたアミノ酸またはＮ末端保護されたペプチドＰＥＰ−Ｎとカップリングされ；
Ｃ−ＰＥＰが、請求項１に記載の通りである、方法。
【請求項１１】
Ｃ−ＰＥＰ、ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂ＡおよびＤＫＰ−Ｌが請求項１に記載の通りである、Ｃ−ＰＥＰ、ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂ＡおよびＤＫＰ−Ｌからなる群より選択される化合物。
【請求項１２】
Ｃ−ＰＥＰ、ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、ＤＫＰ−ＬおよびＤＫＰ−ＰＧが請求項１に記載の通りである、ペプチド化学におけるＣ−ＰＥＰ、ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂ＡおよびＤＫＰ−Ｌからなる群より選択される化合物の使用；またはＤＫＰ−ＰＧ形成リンカーとしてのＤＫＰ−Ｌの使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の概要】
【０００１】
本発明は、Ｎ末端ペプチド断片ＰＥＰ−ＮおよびＣ末端ペプチド断片Ｃ−ＰＥＰの均一液相ペプチド合成（ＨＳＰＰＳ：homogeneous solution phase peptide synthesis）のための方法に関し、このＣ−ＰＥＰはＣ特異的ジケトピペラジン（ＤＫＰ）を含むＣ末端保護基を有し、これはハンドル基ＨＧを含有し、ＨＧはペプチド断片のＣ末端に接続しており、それによって、この特異的ＤＫＰを含むＣ末端保護基を、従来用いられるＣ末端保護基として前記ペプチドから選択的に切断することができる、前記方法に関する。このＤＫＰおよびＨＧを含有するＣ末端保護基の使用により、ＨＳＰＰＳと固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）との組合せに基づく収束ペプチド合成における特定のプロセスステップを回避することができる。
【０００２】
本発明は、ペプチド断片Ｃ−ＰＥＰが支持樹脂から切断されるときにリンカーが前記ＤＫＰ基を形成する、成長中のペプチド鎖を樹脂に接続するための特異的ジペプチドおよびＨＧを含むリンカーを使用することによる、ＳＰＰＳによるそのような特異的に保護された断片Ｃ−ＰＥＰの調製のための方法；ならびに前記調製方法の中間体にさらに関する。
【０００３】
本文中、アミノ酸およびペプチドの命名法は、別途記述しない場合、「Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｓｙｍｂｏｌｉｓｍ  ｆｏｒ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｐｕｒｅ  ＆  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．５６，Ｎｏ．５，ｐｐ．５９５〜６２４，１９８４に従って用いられる。
【０００４】
以下の省略形は、別途記述しない場合、以下の一覧に与えられる通りの意味を有する：
ＣＴＣ  クロロトリチルクロリド
Ａｌｌｏｃ  アリルオキシカルボニル
Ｂｏｃ  ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
Ｂｓｍｏｃ  １，１−ジオキソベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イルメチルオキシカルボニル
ＢｚｌまたはＢｎ  ベンジル
ｃＨｘ  シクロヘキシル
Ｃｔ  Ｃ末端
Ｄｐｒ  ２，３−ジアミノプロパン酸
Ｄｄｅ  Ｎ−１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシルイデン）エチル
ｉｖＤｄｅ  １−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシルイデン）３−メチルブチル
Ｄｄｚ  α、α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル
ＤＫＰ  ２，５−ジケトピペラジン
Ｄｍａｂ  ジメチルアミノボラン
Ｆｍ  ９−フルオレニルメチル
Ｆｍｏｃ  Ｎ−（フルオレニル−９−メトキシカルボニル）
Ｈｐｒ  ピペリジン−２−カルボン酸、ホモプロリン
ＨＳＨＳＰＰＳ  ハイブリッド固相および均一液相ペプチド合成
ＨＳＰＰＳ  均一液相ペプチド合成
Ｈｙｐ  ｔｒａｎｓ−４−ヒドロキシプロリン
Ｍｍｔ  ４−メトキシトリチル
Ｍｐｅ  ３−メチルペンタ−３−イル
Ｍｔｔ  ４−メチルトリチル
Ｏｒｎ  オルニチン
Ｐｂｆ  ２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル
ＰＧ  保護基
２−ＰｈｉＰｒ  ２−フェニルイソプロピル
Ｐｍｃ  ２，２，５，７，８−ペンタ−メチルクロマン−６−スルホニル
ｐＮＯ２Ｚ  ニトロベンジルオキシカルボニル
Ｐｙ  ピリジン
ＳＰＰＳ  固相ペプチド合成
ｔＢｕ  ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＥＳ  ＳｉＥｔ３、トリエチルシリル
ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸
Ｔｆａｃ  トリフルオロアセチル
ＴｒｔまたはＴｒ  トリフェニルメチルまたはトリチル
Ｚ  ベンジルオキシカルボニル。
【０００５】
用語「断片」および「ペプチド断片」は、別途記述しない場合、同意語として用いられる。用語「ハンドル」および「ハンドル基」、例えば、「Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋアミドハンドル基」、「Ｒｉｎｋアミドハンドル」または「Ｒｉｎｋアミドハンドル基」ならびに用語「リンカー」、例えば、「Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋアミドリンカー」またはＦｍｏｃ−Ｒｉｎｋ−ＯＨは、別途記述しない場合、同意語として用いられることが多い。
【０００６】
ペプチドは、ハイブリッド固相および均一液相ペプチド合成ＨＳＨＳＰＰＳにより調製されることが多い：まず、２つ以上のペプチド断片を固相ペプチド合成ＳＰＰＳにより調製し、その後、均一液相ペプチド合成ＨＳＰＰＳにより液相中でカップリングさせて、所望の標的ペプチドを提供する。
【０００７】
この手法は、ＳＰＰＳとＨＳＰＰＳの両方の利点を組み合わせたものであるため、大きいペプチドの商業規模での調製にとって特に魅力的である。特に、断片のＳＰＰＳを開発し、迅速にスケールアップすることができ、比較的長い断片のＨＳＰＰＳにおいて遭遇することが多い溶解度の問題の多くを回避する。製造サイクル時間は液相法と比較して短い。さらに、特にカップリング反応中に過剰の試薬を使用するために収率および純度がより高いことが多く、精製を要しない中間体が得られることが多い。ＳＰＰＳにより作製された断片の配列の選択を最適化した後、プロセスの最終段階を従来のＨＳＰＰＳ法によりスケールアップすることができる。プロセスのこれらの最終段階は、断片カップリングおよびアミノ酸残基の最終的な脱保護、すなわち、側鎖ならびにＮおよびＣ末端の脱保護であり、それらは両方とも溶液中で実施される。したがって、ＨＳＨＳＰＰＳ合成を適用する場合、ＳＰＰＳの利点、すなわち、高純度の断片の迅速な合成と、液相合成の利点、すなわち、カップリング反応の完全なモニタリングならびに形成された中間体断片の完全な特徴付けを含む単離および任意選択の精製とを活用して、特に商業規模でペプチドを効率的に製造することができる。
【０００８】
ＨＳＨＳＰＰＳにおいては、ＳＰＰＳにより調製された少なくとも２つの断片ＰＥＰ−ＮおよびＣ−ＰＥＰは常に液相中でカップリングされて、所望のペプチドＰＥＰを提供し、これは最終的なペプチドであるか、または再び、中間ペプチド断片であり、再度その後、第３のペプチド断片などとカップリングされるかのいずれかである。断片ＰＥＰ−Ｎは本明細書では、ペプチドＰＥＰのＮ末端を表し、断片Ｃ−ＰＥＰはペプチドＰＥＰのＣ末端を表し、したがって、断片ＰＥＰ−ＮのＣ末端は断片Ｃ−ＰＥＰのＮ末端とカップリングされて、ペプチドＰＥＰを提供する。断片ＰＥＰ−Ｎと断片ＰＥＰ−Ｎ、断片Ｃ−ＰＥＰと断片Ｃ−ＰＥＰ、または断片Ｃ−ＰＥＰと断片ＰＥＰ−Ｎとの間違った向きでの望ましくないカップリングを回避するためには、液相カップリングの間に断片ＰＥＰ−ＮのＮ末端が保護され、断片Ｃ−ＰＥＰのＣ末端も保護されることが必要である。このＮ末端保護されたペプチド断片ＰＥＰ−Ｎは、別途記述しない場合、以下においてもＰＥＰ−Ｎと呼ばれる。支持樹脂上でＳＰＰＳにより調製された断片Ｃ−ＰＥＰは、最後のアミノ酸残基の付加後にＮ末端保護基を有し、その後最終ステップにおいて支持樹脂から切断される。この切断は通常、無保護のＣ末端を有する断片Ｃ−ＰＥＰをもたらし、これは別のステップにおいて保護しなければならず、その後、断片Ｃ−ＰＥＰをＨＳＰＰＳにおいて断片ＰＥＰ−Ｎとカップリングさせることができる。実際、断片Ｃ−ＰＥＰのＣ末端のこの必要な保護は、１ステップだけでなく、いくつかのステップ、例えば、反応、精製および単離を、おそらくその後の別の精製および単離と共に含む。
【０００９】
調製しようとする標的ペプチドＰＥＰがペプチドアミドＰＥＰ−ＮＨ２である、すなわち、Ｃ末端がカルボキサミド基である場合、ＨＳＰＰＳにおける断片カップリングの間、各断片Ｃ−ＰＥＰ−ＮＨ２のＣ末端は通常、保護する必要はないが、これはカルボキサミド基自体が保護基として作用するからである。Ｃ末端がカルボン酸である断片Ｃ−ＰＥＰ−ＯＨは、切断後にカルボン酸基を形成する樹脂の使用によりＳＰＰＳ後に容易に取得することができる一方、切断後にカルボキサミド基を形成する樹脂、例えば、Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂の使用は、切断中に断片Ｃ−ＰＥＰ−ＮＨ２の部分的側鎖脱保護に起因する問題を引き起こすが、これは、アミド樹脂からの切断が典型的には酸性条件、例えば、溶媒中の３〜５重量％のＴＦＡの使用を必要とし、側鎖保護基、例えば、Ｆｍｏｃ／Ｔｒｔ  ＳＰＰＳの場合はＴｒｔ（例えば、Ｈｉｓ（Ｔｒｔ））またはシュードプロリン誘導体（すなわち、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｔｈｒ（ｐｓｉＭｅ，Ｍｅｐｒｏ）−ＯＨ）においてはアセタールは、そのような切断条件下では完全に安定ではなく、側鎖保護基の部分的喪失をもたらすからである。したがって、断片Ｃ−ＰＥＰ−ＮＨ２を調製するためには、断片Ｃ−ＰＥＰ−ＮＨ２のＣ末端アミノ酸自体ではなく、所望の断片Ｃ−ＰＥＰ−ＮＨ２のＣ末端アミノ酸残基から２番目の位置のアミノ酸でＳＰＰＳを開始し、切断後にＣ末端としてカルボン酸をもたらす樹脂を用いるのが一般的である。したがって、樹脂からの切断は、所望の断片Ｃ−ＰＥＰ−ＮＨ２のＣ末端アミノ酸を含まない断片Ｃ−ＯＨをもたらし、この断片Ｃ−ＯＨのＣ末端は、最終的に望ましい断片Ｃ−ＰＥＰ−ＮＨ２のＣ末端から２番目の位置のアミノ酸であり、カルボン酸基を有する。次いで、断片Ｃ−ＰＥＰ−ＮＨ２の失われるＣ末端アミノ酸は、液相中でそのアミドＨ−Ｘａａ−ＮＨ２の形態で断片Ｃ−ＯＨに別々にカップリングされる。
【００１０】
ＷＯ９０／０９３９５は、ペプチドと支持樹脂との間の切断可能なリンカーの使用を開示しており、樹脂から切断されるときにジケトピペラジン（ＤＫＰ）リンカー基を形成され、ＤＫＰ基がリンカー基中のＬｙｓのイプシロンアミノ基と、ペプチドのＣ末端との間のアミド結合を介して前記ペプチドに接続された前記リンカーの使用を開示している。このＤＫＰリンカー基は、後の段階でペプチドから選択的に除去することができない。かくして、ＨＳＰＰＳにおいては無保護のＮ末端を有する完全に保護されたＣ末端断片を好適に調製することができない。さらに、ＷＯ９０／０９３９５のリンカー基では、天然または非改変ペプチドを調製することができない。それは、樹脂から切断されるペプチドが常にそのＣ末端にＤＫＰリンカー基を有し、これは前記ペプチドの他のペプチド結合を切断することなく切断することができないため、永続的にＣ末端改変されたペプチドの合成にのみ適している。別の欠点は、切断ステップ中のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の使用に対するその切断の制限であり、これはペプチドのアミノ酸残基の側鎖のｔＢｕ、Ｂｏｃ、Ｔｒｔまたはアセタールに基づく保護基のいずれかの部分的または全体的除去を意味し、それによって、無保護の側鎖を有するペプチドまたはｔＢｕ、Ｂｏｃ、Ｔｒｔおよびアセタール以外の側鎖保護基のいずれかの調製に対するその使用を制限する。
【００１１】
反応シーケンスにおけるステップ数を減少させることによりＨＳＨＳＰＰＳの手順を単純化することが必要であった。
【００１２】
驚くべきことに、異なる型の保護基と、断片Ｃ−ＰＥＰへのリンカーの接続の特異的化学的性質との適切な組合せと共に、特異的ジケトピペラジンを含むＣ末端保護基を有する断片Ｃ−ＰＥＰを調製するのに用いられるＳＰＰＳにおいて特異的ジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーを使用し、前記断片からの前記リンカーの特異的切断可能性を提供することによってこれを達成することができる。
【００１３】
保護基（ＰＧ）は、アミノ酸の側鎖中の官能基を保護するためのものであるか、またはアミノ酸もしくはペプチドのＮ末端アミノ基もしくはＣ末端カルボキシ基の保護のためのものであり、本発明の目的のために、４つの異なる群：
１．以下で「塩基型ＰＧ」と呼ばれる、塩基切断型保護基、
２．以下で「強酸型ＰＧ」と呼ばれる、強酸切断型保護基、
３．以下で「弱酸型ＰＧ」と呼ばれる、弱酸切断型保護基、および
４．以下で「還元型ＰＧ」と呼ばれる、還元切断型保護基
に分類され、２つの基「強酸型ＰＧ」および「弱酸型ＰＧ」はまた、「酸切断型保護基」または「酸型ＰＧ」とも総称される。
【００１４】
本発明の意味の範囲内で、ＰＧは全て以下の４つの分類反応条件により分類される。分類は、樹脂１ｇあたり１．５〜１．７ｍｍｏｌの充填能力を有するＣＴＣ樹脂を用いて行われ、この樹脂には分類しようとする各ＰＧを有するただ一つのアミノ酸が充填される。以下の４つの分類手順における用語「部」は、別途記述しない場合、充填されるＣＴＣ樹脂出発材料の重量部の倍数を意味する。
【００１５】
１．以下の本文において「塩基分類条件」と呼ばれる、塩基型ＰＧのための分類反応条件：
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のピペリジンの溶液（２２．５＋／−２．５重量％）からなる切断溶液（７＋／−１部）を用いる、アミノ酸を有する塩基型ＰＧを充填した樹脂の、２５＋／−５℃で２５＋／５ｍｉｎの処理（重量％は切断溶液の総重量に基づく）。
【００１６】
２．以下の本文において「強酸分類条件」と呼ばれる、強酸型ＰＧのための分類反応条件：
ジクロロメタン（ＤＣＭ）中のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の溶液（８５＋／−５重量％）からなる切断溶液（７＋／−１部）を用いる、アミノ酸を有する強酸型ＰＧを充填した樹脂の、２５＋／−５℃で２５＋／５ｍｉｎの処理（重量％は切断溶液の総重量に基づく）。
【００１７】
３．以下の本文において「弱酸分類条件」と呼ばれる、弱酸型ＰＧのための分類反応条件：
ＤＣＭ中のＴＦＡの溶液（２＋／−１重量％）からなる切断溶液（７＋／−１部）を用いる、アミノ酸を有する弱酸型ＰＧを充填した樹脂の、２５＋／−５℃で２５＋／−５ｍｉｎの処理（重量％は切断溶液の総重量に基づく）。
【００１８】
４．以下の本文において「還元分類条件」と呼ばれる、還元型ＰＧのための分類反応条件：
ＤＭＦ中に溶解した、０．１ｍｏｌ当量の可溶性有機Ｐｄ（０）触媒、好ましくはＰｄ［ＰＰｈ３］４を含む、７＋／−１部のＤＭＦを用いる、アミノ酸を有する還元型ＰＧを充填した樹脂の、２５＋／−５℃で３０＋／５ｍｉｎの処理（モル当量は樹脂上に充填した切断可能な基のｍｏｌ数に基づく）。
【００１９】
ＰＧならびにＰＧを切断するための典型的な反応条件およびパラメータおよび試薬は、ペプチド化学において従来用いられるものであり、当業界で公知であり、例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９９；またはＬｌｏｙｄ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｐ．，Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ，Ｆ．，Ｇｉｒａｌｔ，Ｅ．，「Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」ＣＲＣ：Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  Ｆｌｏｒｉｄａ，１９９７を参照されたい。
【００２０】
塩基型ＰＧは好ましくは、以下の本文において「塩基切断条件」と呼ばれる以下の可能な反応条件下で切断される：
塩基切断条件は、塩基切断溶液を用いる各材料の処理を含む。塩基切断溶液は、塩基性試薬および溶媒を含む。好ましくは、塩基切断溶液は塩基性試薬および溶媒からなる。塩基性試薬が、塩基切断が行われる温度で液体である場合、塩基性試薬も溶媒と同時に作用することができる、すなわち、塩基性試薬と異なる溶媒は用いない。塩基性試薬は、好ましくは第二級アミンであり、より好ましくは、塩基性試薬はピペリジン、４−（アミノメチル）ピペリジン、トリス（２−アミノエチル）アミン、モルホリン、ジシクロヘキシルアミン、１，３−シクロヘキサンビス（メチルアミン）ピペラジン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エンおよびそれらの混合物からなる群より選択される。さらにより好ましくは、塩基性試薬はピペリジンである。
【００２１】
塩基切断溶液はまた添加剤を含んでもよく、添加剤は好ましくは、６−クロロ−１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール、２，４−ジニトロフェノール、ピクリン酸、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾールおよびエチル２−シアノ−２−ヒドロキシイミノアセテートおよびそれらの混合物からなる群より選択される。
【００２２】
好ましくは、溶媒はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ピリジン、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ジクロロエタン（ＤＣＥ）、クロロホルム、ジオキサン、テトラヒドロピラン、酢酸エチル、トルエン、アセトニトリルおよびそれらの混合物からなる群より選択され、より好ましくは、溶媒は１−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）またはそれらの混合物である。
【００２３】
塩基切断条件の本明細書における用語「部」は、塩基型ＰＧを有する処理された材料の重量部の倍数であることを意味する。
【００２４】
好ましくは、５〜２０部、より好ましくは、５〜１５部の塩基切断溶液が用いられる。
【００２５】
好ましくは、塩基性試薬の量は、１〜３０重量％、より好ましくは、１０〜２５重量％、さらにより好ましくは、１５〜２０重量％であり、ここで、重量％は塩基切断溶液の総重量に基づく。
【００２６】
好ましくは、塩基切断は、１０〜５０℃、より好ましくは、１０〜３０℃、さらにより好ましくは、１５〜２５℃の温度で行われる。
【００２７】
好ましくは、塩基切断は大気圧で行われる。
【００２８】
好ましくは、塩基切断のための反応時間は、５ｍｉｎ〜２ｈ、より好ましくは、１０ｍｉｎ〜１ｈ、さらにより好ましくは、１５ｍｉｎ〜３０ｍｉｎである。
【００２９】
強酸型ＰＧは、好ましくは以下の本文において「強酸切断条件」と呼ばれる以下の可能な反応条件下で切断される：
強酸切断条件は、強酸切断溶液を用いる各材料の処理を含む。強酸切断溶液は、酸分解試薬を含む。酸分解試薬は、好ましくは、水素酸、例えば、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、塩化水素酸（ＨＣｌ）、水性塩酸（ＨＣｌ）、液体フッ化水素酸（ＨＦ）またはトリフルオロメタンスルホン酸、Ｌｅｗｉｓ酸、例えば、トリフルオロホウ酸ジエチルエーテル付加物またはトリメチルシリルブロミド、およびそれらの混合物からなる群より選択される。
【００３０】
強酸切断溶液は、好ましくは１種以上のスカベンジャーを含み、スカベンジャーはジチオトレイトール（ＤＴＴ）、エタンジチオール（ＥＤＴ）、ジメチルスルフィド（ＤＭＳ）、トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）、トリエチルシラン（ＴＥＳ）、１，３−ジメトキシベンゼン（ＤＭＢ）、フェノール、アニソール、ｐ−クレゾールおよびそれらの混合物からなる群より選択される。
【００３１】
強酸切断溶液はまた、水、溶媒またはそれらの混合物を含んでもよく、溶媒は強酸切断条件下で安定である。
【００３２】
好ましくは、溶媒はジクロロメタン、ジクロロエタン、アセトニトリル、トルエン、テトラヒドロフラン、ＴＦＡ、ジオキサンおよびそれらの混合物からなる群より選択される。より好ましくは、酸分解試薬は溶媒と同時に働き、さらなる溶媒を必要としない。
【００３３】
強酸切断溶液の本明細書における用語「部」は、強酸型ＰＧを有する処理材料の重量部の倍数であることを意味する。
【００３４】
好ましくは、１０〜３０部、より好ましくは１５〜２５部、さらにより好ましくは１９〜２１部の強酸切断溶液が用いられる。
【００３５】
好ましくは、酸分解試薬の量は、３０〜１００重量％、より好ましくは５０〜１００重量％、さらにより好ましくは７０〜１００重量％、特には８０〜１００重量％であり、重量％は強酸切断溶液の総重量に基づく。
【００３６】
好ましくは、１〜２５重量％の総量のスカベンジャー、より好ましくは５〜１５重量％が用いられ、重量％は強酸切断溶液の総重量に基づく。
【００３７】
好ましくは、強酸切断は−１０〜３０℃、より好ましくは−１０〜３０℃、さらにより好ましくは５〜１５℃の温度で行われる。
【００３８】
好ましくは、強酸切断は、大気圧で行われる。
【００３９】
好ましくは、強酸切断のための反応時間は、３０ｍｉｎ〜２０ｈ、より好ましくは１ｈ〜１０ｈ、さらにより好ましくは１ｈ〜５ｈである。
【００４０】
弱酸型ＰＧは、好ましくは以下の本文において「弱酸切断条件」と呼ばれる以下の可能な反応条件下で切断される：
弱酸切断条件は、弱酸切断溶液を用いる各材料の処理を含む。弱酸切断溶液は酸分解試薬を含む。酸分解試薬は、好ましくは、水素酸、例えば、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）、塩酸（ＨＣｌ）、酢酸（ＡｃＯＨ）、それらの混合物および／または水との混合物からなる群より選択される。
【００４１】
弱酸切断溶液はまた、水、溶媒またはそれらの混合物を含み、溶媒は弱酸切断条件下で安定である。
【００４２】
好ましくは、溶媒はジクロロメタン、ジクロロエタン、アセトニトリル、トルエン、テトラヒドロフラン、ＴＦＡ、ジオキサンおよびそれらの混合物からなる群より選択される。
【００４３】
弱酸切断溶液の本明細書における用語「部」は、弱酸型ＰＧを有する処理された材料の重量部の倍数であることを意味する。
【００４４】
好ましくは、４〜２０部、より好ましくは５〜１０部の弱酸切断溶液が用いられる。
【００４５】
好ましくは、酸分解試薬の量は、０．０１〜５重量％、より好ましくは０．１〜５重量％、さらにより好ましくは０．１５〜３重量％であり、重量％は弱酸切断溶液の総重量に基づく。
【００４６】
好ましくは、弱酸切断は、１０〜５０℃、より好ましくは２０〜４０℃、さらにより好ましくは２５〜３５℃の温度で行われる。
【００４７】
好ましくは、弱酸切断は大気圧で行われる。
【００４８】
好ましくは、弱酸切断のための反応時間は、５ｍｉｎ〜２ｈ、より好ましくは１０ｍｉｎ〜１ｈ、さらにより好ましくは１０ｍｉｎ〜３０ｍｉｎである。
【００４９】
弱酸型ＰＧはさらなる群に亜群化することができ、これらの群は互いに異なり、切断に必要な酸の量によって連続的に整列させることができる。弱酸分類条件の上記定義によれば、全ての弱酸型ＰＧを、ＤＣＭ中のＴＦＡの２＋／−１重量％溶液を用いて切断することができ、この重量％は切断溶液の総重量に基づく。ＤＣＭ中のＴＦＡの少なくとも１重量％の溶液によってのみ切断されるが、より少量のＴＦＡを含む溶液によっては切断されない弱酸型ＰＧは、「弱酸１型ＰＧ」と呼ばれ、その切断条件は「弱酸１型切断条件」と呼ばれる；ＤＣＭ中のＴＦＡの少なくとも０．１重量％の溶液によっては既に切断されたが、より少量のＴＦＡを含む溶液によっては切断されない弱酸型ＰＧは、「弱酸２型ＰＧ」と呼ばれ、その切断条件は「弱酸２型条件」と呼ばれる；ＤＣＭ中のＴＦＡの少なくとも０．０１重量％の溶液によって既に切断された弱酸型ＰＧは、「弱酸３型ＰＧ」と呼ばれ、その切断条件は「弱酸３型条件」と呼ばれる；重量％は切断溶液の総重量に基づく。
【００５０】
還元型ＰＧは、好ましくは以下の本文において「還元切断条件」と呼ばれる、以下の可能な反応条件下で切断される：
還元切断条件は、還元切断溶液を用いる各材料の処理を含む。還元切断溶液は、触媒、添加剤および溶媒を含む。
【００５１】
触媒は、好ましくはＰｄ（０）の有機誘導体およびＰｄ（ＩＩ）の有機誘導体からなる群より選択され、より好ましくは、Ｐｄ［ＰＰｈ３］４、ＰｄＣｌ２［ＰＰｈ３］２、Ｐｄ［ＯＡｃ］２［Ｐ（２，４−キシロイル）３］２、Ｐｄ［ＯＡｃ］２［Ｐ（オルト−トリル）３］２、あまり安定でない配位Ｐｄ錯体をリガンド、例えば、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２／ＰＰｈ３、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２／Ｐ（オルト−トリル）３、Ｐｄ（ＤＢＡ）２／Ｐ（オルト−トリル）３またはＰｄ［Ｐ（オルト−トリル）３］２、Ｐｄ（ＯＡｃ）／トリエチル−ホスファイト、Ｐｄ（ＯＡｃ）２／ＰＰｈ３またはＰｄ（ＯＡｃ）２／Ｐ（オルト−トリル）３と混合することにより調製された、ｉｎ  ｓｉｔｕで調製されたＰｄ（０）触媒、およびそれらの混合物からなる群より選択され；さらにより好ましくは、Ｐｄ［ＰＰｈ３］４、ＰｄＣｌ２［ＰＰｈ３］２、Ｐｄ［ＯＡｃ］２［Ｐ（２，４−キシロイル）３］２、Ｐｄ［ＯＡｃ］２［Ｐ（オルト−トリル）３］２およびそれらの混合物からなる群より選択される。
【００５２】
添加剤は、好ましくはジメチルバルビツール酸、チオサリチル酸、Ｎ−メチルアニリン、Ｂｕ４Ｎ＋ＢＨ４−、ＮＨ３ＢＨ３、Ｍｅ２ＮＨＢＨ３、ｔＢｕ−ＮＨ２ＢＨ３、Ｍｅ３ＮＢＨ３、ＰｙＢＨ３、ＨＣＯＯＨ／ＤＩＥＡ、ジエチジチオカルバメートナトリウム、ジメドン、モルホリン、ＡｃＯＨ／ＮＭＭ、フェニルシラン、ＰｈＳＯ２Ｈを含むスルフィン酸、ｔｏｌＳＯ２Ｎａ、ナトリウム２−エチルヘキサノエート（ＳＥＨ）、ナトリウム２−チオフェンスルフィネート（ＳＴＳ）、ナトリウム４−クロロ−３−ニトロベンゼンスルフィネート（ＳＣＮＢＳ）およびｉ−ＢｕＳＯ２Ｎａならびにそれらの混合物からなる群より選択される；より好ましくは、添加剤はｔｏｌＳＯ２Ｎａである。
【００５３】
好ましくは、溶媒はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ピリジン、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ジクロロエタン（ＤＣＥ）、クロロホルム、ジオキサン、テトラヒドロピラン、酢酸エチル、トルエン、アセトニトリルおよびそれらの混合物からなる群より選択される；より好ましくは、溶媒は１−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）またはそれらの混合物である。
【００５４】
好ましくは、触媒は前記溶媒に溶解可能であり、前記溶媒に溶解される。
【００５５】
還元切断条件の本明細書における用語「部」は、還元型ＰＧを有する処理材料の重量部の倍数であることを意味する。
【００５６】
好ましくは、４〜２０部、より好ましくは５〜１０部の還元切断溶液が用いられる。
【００５７】
好ましくは、０．００１〜１ｍｏｌ当量、より好ましくは０．０１〜０．０５ｍｏｌ当量の触媒が用いられ、ｍｏｌ当量は樹脂に充填された還元的に切断可能な基のｍｏｌに基づく。
【００５８】
好ましくは、１〜１０ｍｏｌ当量、より好ましくは１．５〜５ｍｏｌ当量の添加剤が用いられ、ｍｏｌ当量は樹脂に充填された還元的に切断可能な基のｍｏｌに基づく。
【００５９】
好ましくは、還元切断は１０〜６０℃、より好ましくは３０〜５０℃、さらにより好ましくは３５〜４５℃の温度で行われる。
【００６０】
好ましくは、還元切断は大気圧で行われる。
【００６１】
好ましくは、還元切断のための反応時間は、１５ｍｉｎ〜１０ｈ、より好ましくは３０ｍｉｎ〜４ｈ、さらにより好ましくは３０ｍｉｎ〜２ｈである。
【００６２】
好ましくは、還元切断溶液は光から保護しなければならない。好ましくは、還元切断は金属製の容器中で行われる。
【００６３】
塩基型ＰＧは強酸または弱酸切断条件によって切断可能ではない。
【００６４】
好ましくは、塩基型ＰＧは強酸、弱酸または還元切断条件によって切断可能ではない。
【００６５】
強酸型ＰＧは弱酸または塩基切断条件によって切断可能ではない。
【００６６】
好ましくは、強酸型ＰＧは弱酸、塩基または還元切断条件によって切断可能ではない。
【００６７】
弱酸型ＰＧは、塩基切断条件によって切断可能ではないが、それらは強酸切断条件によって切断可能である。
【００６８】
好ましくは、弱酸型ＰＧは塩基または還元切断条件によって切断可能ではないが、それらは強酸切断条件によって切断可能である。
【００６９】
弱酸１型ＰＧは弱酸２型または弱酸３型切断条件によって切断可能ではない；弱酸２型ＰＧは弱酸１型切断条件によって切断可能であるが、弱酸３型切断条件によっては切断可能ではない；弱酸３型ＰＧは弱酸１型および弱酸２型切断条件によって切断可能である。
【００７０】
好ましくは、弱酸１、２および３型ＰＧもまた、塩基または還元切断条件によって切断可能ではない。
【００７１】
好ましくは、還元型ＰＧは、強酸、弱酸および塩基切断条件によって切断可能ではなく、これらのものは「排他的還元型ＰＧ」と呼ばれる。
【００７２】
弱酸および塩基切断条件によって切断可能ではないが、強酸切断条件によって切断可能である還元型ＰＧ；これらのＰＧは「混合型ＰＧ」と呼ばれる。
【００７３】
リンカーのペプチドへの接続も、これらの４つの切断条件の１つの下で切断可能であるように分類することができる。
【００７４】
アミノ酸の樹脂への接続も、これらの４つの切断条件の１つの下で切断可能であるように分類することができる。
【００７５】
好ましくは、塩基型ＰＧは、Ｆｍｏｃ、Ｂｓｍｏｃ、Ｔｆａｃ、Ｄｄｅ、ＤｍａｂおよびｃＨｘからなる群より選択される。
【００７６】
好ましくは、強酸型ＰＧは、Ｂｏｃ、ｔＢｕ、Ｐｍｃ、Ｍｐｅ、Ｐｂｆ、Ｚ、Ｂｚｌ、ｃＨｘ、ｐＮＯ２ＺおよびＤｄｚからなる群より選択される。
【００７７】
好ましくは、弱酸型ＰＧは、Ｔｒｔ、Ｍｍｔ、Ｍｔｔ、アセタールおよび２−ＰｈｉＰｒからなる群より選択される。
【００７８】
弱酸型ＰＧが実際に弱酸１型ＰＧまたは弱酸２型ＰＧである場合、それが保護する側鎖に依存する。
【００７９】
好ましくは、還元型ＰＧはＡｌｌｏｃ、Ａｌｌｙｌ、ｉｖＤｄｅおよびＺからなる群より選択される。
【００８０】
より好ましくは、塩基型ＰＧはＦｍｏｃである。
【００８１】
より好ましくは、強酸型ＰＧはＢｏｃである。
【００８２】
より好ましくは、弱酸型ＰＧはＴｒｔである。
【００８３】
より好ましくは、還元型ＰＧはＡｌｌｏｃである。
【００８４】
従来のＳＰＰＳにおいては、ペプチドはＳＰＰＳが終了した後に樹脂から切断され、その切断によって、樹脂およびＳＰＰＳにおいて用いられる可能なハンドルに応じて、遊離カルボン酸基の形態またはカルボキサミドの形態のＣ末端を有するペプチドが得られる。遊離カルボキシル基をそのＣ末端に有するこのペプチドをＨＳＰＰＳにおいてＣ末端ペプチド断片Ｃ−ＰＥＰとして用いようとする場合、ペプチドをＨＳＰＰＳにおいて用いることができる前に、この遊離カルボン酸基をまず保護しなければならない。遊離Ｃ末端のこの保護は、いくつかのプロセスステップ（反応、単離、おそらく精製）を必要とする。
【００８５】
本発明は、ＳＰＰＳ後の樹脂からの断片の切断の結果得られる断片のＣ末端の遊離カルボン酸を保護するために必要なこれらのステップを減少させるための方法を開示する。これは、ＳＰＰＳが終了し、合成された断片Ｃ−ＰＥＰが樹脂から切断されるときに、リンカーがジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基を形成する、樹脂支持体上の前記リンカーを介して所望の断片Ｃ−ＰＥＰの１番目のアミノ酸ＸａａＣ（１）とＳＰＰＳにおいてカップリングする前記ジケトピペラジン形成ジペプチジルリンカーを用いることにより達成される。ジケトピペラジン形成ジペプチジルリンカーは、ジペプチド部分を含み、その１番目のアミノ酸Ｘａａ１はそのカルボン酸基を介して樹脂に接続しており、その２番目のアミノ酸Ｘａａ２はその側鎖を介してハンドル基ＨＧに接続しており、ハンドル基ＨＧはペプチジルラジカルに接続しており、Ｘａａ２はＮ末端保護基ＰＧ２を有する。
【００８６】
Ｃ末端保護基を含む前記ジケトピペラジン残基の形成は、Ｘａａ２の保護基ＰＧ２を切断し、それによってＸａａ２とＸａａ１との間の分子内閉環を可能にし、閉環が前記ジケトピペラジン残基を形成し、同時に樹脂からＸａａ１を切断することにより達成される。
【００８７】
樹脂からの切断により形成された、Ｃ末端保護基を含むこのジケトピペラジン残基は、樹脂からの切断後も断片Ｃ−ＰＥＰのＣ末端に接続されたままであり、それにより断片Ｃ−ＰＥＰのＣ末端の保護基として作用し、したがって、ＨＳＰＰＳにおいて直接用いることができる。ペプチドＰＥＰを得るためのＨＳＰＰＳによるこのＣ末端断片Ｃ−ＰＥＰとＮ末端ペプチド断片ＰＥＰ−Ｎとのカップリングの後、ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基は、好ましくは断片ＰＥＰ中の保護された側鎖のいずれかの脱保護と同時に、ペプチドＰＥＰから切断される。
【００８８】
ジケトピペラジン形成ジペプチジルリンカーおよび得られるジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基は、ハンドル基ＨＧを含み、これはジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基からのペプチドＰＥＰの切断を可能にする。
【００８９】
この望ましい機能を可能にするために、前記ジケトピペラジン形成ジペプチジルリンカーは、４つの主要な切断ステップ、
１．ＳＰＰＳのサイクル中のアミノ酸のそれぞれのＮ末端保護基の切断、
２．Ｘａａ２から保護基ＰＧ２を切断した後、ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基を形成させることにより樹脂からＸａａ１を切断することによる、樹脂からの断片Ｃ−ＰＥＰの切断、および
３．ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基中のＨＧからのペプチドの切断である、ペプチドＰＥＰからのジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基の切断；
４．任意の側鎖ＰＧの切断；
を、異なる反応条件下で行うことができ、したがって、それぞれの切断を、反応シーケンス中の適切な時点で他の切断とは個別かつ独立に行うことができるように構築される。
【００９０】
この機能を達成するために、反応戦略に含まれる様々なＰＧの化学的性質およびリンカーのハンドル基ＨＧのペプチドへの接続の化学的性質は、ＰＧが４つの型のＰＧの１つに属するように、また、ペプチドへのハンドル基ＨＧの接続がそのような反応条件下で切断可能となるように、保護基のこの群化およびペプチドへのハンドル基ＨＧの接続の性質のこの選択が所望の必要な個別の段階的切断を可能にするように選択される。
【００９１】
所望のペプチドＣ−ＰＥＰ中に１個以上の側鎖ＰＧが存在する場合、１つの好ましい態様は、
強酸切断条件において、または
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成におけるＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが還元型でも混合型ＰＧでもない場合、強酸もしくは還元切断条件において、または
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成におけるＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが弱酸型ＰＧではない場合、弱酸切断条件において、または
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成におけるＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが弱酸１型ＰＧではない場合、弱酸１型切断条件において、
１．いずれかの側鎖保護基が強酸型、還元型もしくは混合型ＰＧである；および
２．いずれの側鎖保護基も還元型でも混合型ＰＧでもない場合、最後の１個を除いて、すなわち、ペプチドＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸のＮ末端ＰＧを除いて、Ｃ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸のいずれかのＮ末端ＰＧが塩基型ＰＧであるか、または最後の１個を除いて、すなわち、ペプチドＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸のＮ末端ＰＧを除いて、Ｃ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸のいずれかのＮ末端ＰＧが塩基性、還元型もしくは混合型ＰＧである；および
３．側鎖保護基および最後の１個を除いて、すなわち、ペプチドＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸のＮ末端ＰＧを除いて、Ｃ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸のＮ末端ＰＧがいずれも、還元型でも混合型ＰＧでもない場合、ＰＧ２が弱酸型、還元型もしくは混合型ＰＧである、またはＰＧ２が弱酸型ＰＧである；および
４．側鎖保護基がいずれも還元型でも混合型ＰＧでもない場合、Ｃ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられる最後のアミノ酸、すなわち、ペプチドＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸のＮ末端ＰＧが塩基型もしくは弱酸型ＰＧであるか、またはＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられる最後のアミノ酸、すなわち、ペプチドＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸のＮ末端ＰＧが塩基型、弱酸型、還元型もしくは混合型ＰＧである；および
５．ＰＥＰもしくはＣ−ＰＥＰのジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基がペプチドＰＥＰもしくはＣ−ＰＥＰから切断可能であるものである。
【００９２】
所望のペプチドＣ−ＰＥＰ中に１個以上の側鎖ＰＧが存在する場合、１つのより好ましい態様は、
強酸切断条件において、または
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが還元型でも混合型ＰＧでもない場合、強酸もしくは還元切断条件において、または
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが弱酸型ＰＧではない場合、弱酸切断条件において、または
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが弱酸１型ＰＧではない場合、弱酸１型切断条件において、
１．いずれかの側鎖保護基が強酸型ＰＧである；および
２．最後の１個を除いて、すなわち、ペプチドＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸のＮ末端ＰＧを除いて、Ｃ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸のいずれかのＮ末端ＰＧが塩基型ＰＧである；および
３．いずれかの側鎖保護基および最後の１個を除いて、すなわち、ペプチドＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸のＮ末端ＰＧを除いて、Ｃ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸のいずれかのＮ末端ＰＧが還元型でも混合型ＰＧでもない場合、ＰＧ２が弱酸型、還元型もしくは混合型ＰＧである；および
４．側鎖保護基がいずれも還元型でも混合型ＰＧでもない場合、Ｃ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられる最後のアミノ酸、すなわち、ペプチドＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸のＮ末端ＰＧが塩基型、弱酸型、還元型もしくは混合型ＰＧである；および
５．ＰＥＰもしくはＣ−ＰＥＰのジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基がペプチドＰＥＰもしくはＣ−ＰＥＰから切断可能であるものである。
【００９３】
所望のペプチドＣ−ＰＥＰ中に１個以上の側鎖ＰＧが存在する場合、別のより好ましい態様は、
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが還元型でも混合型ＰＧでもない場合、強酸もしくは還元切断条件において、または
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが弱酸１型ＰＧではない場合、弱酸１型切断条件において、
１．いずれかの側鎖保護基が強酸型、還元型もしくは混合型ＰＧである；および
２．最後の１個を除いて、すなわち、ペプチドＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸のＮ末端ＰＧを除いて、Ｃ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが塩基型ＰＧである；および
３．ＰＧ２が弱酸型ＰＧである；および
４．Ｃ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられる最後のアミノ酸、すなわち、ペプチドＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸のＮ末端ＰＧが塩基型もしくは弱酸型ＰＧである；および
５．ＰＥＰもしくはＣ−ＰＥＰのジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基がペプチドＰＥＰもしくはＣ−ＰＥＰから切断可能であるものである。
【００９４】
所望のペプチドＣ−ＰＥＰ中に側鎖ＰＧが存在しない場合、１つの好ましい態様は、
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが強酸型ＰＧではない場合、強酸切断条件において、または
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが強酸型、還元型および混合型ＰＧではない場合、強酸もしくは還元切断条件において、または
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが強酸型もしくは弱酸型ＰＧではない場合、弱酸切断条件において、または
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが強酸型もしくは弱酸１型ＰＧではない場合、弱酸１型切断条件において、
１．最後の１個を除いて、すなわち、ペプチドＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸のＮ末端ＰＧを除いて、Ｃ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧを除いてＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸のいずれかのＮ末端ＰＧが塩基型、還元型もしくは混合型ＰＧである；および
２．最後の１個を除いて、すなわち、ペプチドＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸のＮ末端ＰＧを除いて、Ｃ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸のいずれかのＮ末端ＰＧが還元型でも混合型ＰＧでもない場合、ＰＧ２が強酸型、弱酸型、還元型もしくは混合型ＰＧである、またはＰＧ２が強酸型、弱酸型もしくは混合型ＰＧである；および
３．Ｃ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられる最後のアミノ酸、すなわち、ペプチドＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸のＮ末端ＰＧが塩基型、強酸型、弱酸型、還元型もしくは混合型ＰＧである；および
４．ＰＥＰもしくはＣ−ＰＥＰのジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基がペプチドＰＥＰもしくはＣ−ＰＥＰから切断可能であるものである。
【００９５】
所望のペプチドＣ−ＰＥＰ中に側鎖ＰＧが存在しない場合、１つのより好ましい態様は、
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが強酸型ＰＧではない場合、強酸切断条件において、または
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが強酸型、還元型および混合型ＰＧではない場合、強酸もしくは還元切断条件において、または
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが強酸型もしくは弱酸型ＰＧではない場合、弱酸切断条件において、または
ＰＧ２およびＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧが強酸型もしくは弱酸１型ＰＧではない場合、弱酸１型切断条件において、
１．最後の１個を除いて、すなわち、ペプチドＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸のＮ末端ＰＧを除いて、Ｃ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸の任意のＮ末端ＰＧを除いてＣ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられるアミノ酸のいずれかのＮ末端ＰＧが塩基型ＰＧである；および
２．ＰＧ２が強酸型、弱酸型、還元型もしくは混合型ＰＧである、または
３．Ｃ−ＰＥＰの合成においてＳＰＰＳで用いられる最後のアミノ酸、すなわち、ペプチドＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸のＮ末端ＰＧが塩基型、強酸型、弱酸型、還元型もしくは混合型ＰＧである；および
４．ＰＥＰもしくはＣ−ＰＥＰのジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基がペプチドＰＥＰもしくはＣ−ＰＥＰから切断可能であるものである。
【００９６】
本発明の対象は、ペプチドＣ−ＰＥＰの調製のための方法（Ｃ−ＰＥＰ）であって、
Ｃ−ＰＥＰはペプチジルラジカルＰＥＰ−Ｃを含み、ＰＥＰ−ＣのＣ末端は保護基ＤＫＰ−ＰＧにより保護され、ＤＫＰ−ＰＧはハンドル基ＨＧ、必要に応じてスペーサー基ＳＧ、およびジケトピペラジン残基ＤＫＰを含み；
ＳＧはペプチド化学において従来用いられるスペーサー基であり；
ＤＫＰはジペプチド残基ＤＰＲから誘導されたジケトピペラジン残基であり；
ＤＰＲはαアミノ酸残基Ｘａａ１およびＸａａ２を含み；
Ｘａａ１はＤＰＲのＣ末端アミノ酸残基であり；
Ｘａａ２はＤＰＲのＮ末端アミノ酸残基であり、またＸａａ２は側鎖を有し、前記側鎖は官能基ＦＧによって置換されており；
ＰＥＰ−ＣはＸａａＣ（１）を介してＨＧに接続しており；
ＸａａＣはＰＥＰ−Ｃのアミノ酸残基であり；
Ｘａａ（１）における指数（１）はＰＥＰ−ＣのＣ末端位置を表し；
ＸａａＣ（１）はＰＥＰ−ＣのＣ末端アミノ酸残基であり；
ＨＧは、ペプチドのＣ末端を固相に接続するための固相ペプチド合成ＳＰＰＳにおいて従来用いられるハンドル基でありペプチド中の２個のアミノ酸残基を接続するアミド結合を切断しない条件下でＨＧからＣ末端の切断を可能とし；
ＨＧはＦＧに直接接続しているか、またはＳＧが存在する場合、ＨＧはＳＧに接続しており、ＳＧはＦＧに接続しており；
方法（Ｃ−ＰＥＰ）は、ステップ（ｉｉｉ）を含み；
ステップ（ｉｉｉ）は反応（ＩＮＲＩＦＯ）を含み；
反応（ＩＮＲＩＦＯ）は、ペプチドＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ中での分子内環形成および同時切断反応を含む反応であり；
ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａは、Ｃ−ＰＥＰの前駆体であり、ＰＥＰ−Ｃおよび樹脂ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａを含み、ＰＥＰ−ＣはＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａに接続しており；
ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａは樹脂ＡおよびＤＫＰ−ＰＧ形成リンカーＤＫＰ−Ｌを含み、樹脂ＡはＤＫＰ−Ｌに接続しており、
樹脂Ａは、ＳＰＰＳにおける固相として従来用いられる樹脂であり、
ＤＫＰ−ＬはＨＧ、必要に応じてＳＧ、およびＤＰＲを含み、Ｘａａ１のカルボン酸基であるＤＰＲのＣ末端カルボン酸基は樹脂Ａに接続しており；
反応（ＩＮＲＩＦＯ）における分子内環形成は、Ｘａａ２のαアミノ基であるＤＰＲのＮ末端アミノ基と、ＤＰＲのＣ末端カルボン酸基との反応であり、それによってＤＫＰを形成し、それによってＸａａ１が樹脂Ａから同時に切断され、ＤＫＰ−ＰＧが形成され；
ＨＧは、ＨＧとＸａａＣ（１）との間の結合が反応（ＩＮＲＩＦＯ）中に切断されないように選択される、前記方法である。
【００９７】
ＨＧの使用により、ペプチド中の２個のアミノ酸の間のアミド結合を切断することなく選択的に切断することができるＸａａ（１）と樹脂Ａとの間の切断部位が提供される；この切断部位は、ＸａａＣ（１）とＨＧとの間の結合である。この切断により、ＸａａＣ（１）のＣ末端は、ＨＧの化学的性質に応じて、無保護の遊離カルボン酸基の形態で遊離するか、またはＣ末端カルボン酸基はアミド基の形態で、好ましくはＣ（Ｏ）ＮＨ２として遊離する。
【００９８】
ＨＧの使用により、この特異的ＤＫＰを含むＣ末端保護基は、ペプチド化学において従来のように用いられるＣ末端保護基として作用する。
【００９９】
好ましくは、ＰＥＰ−Ｃは固相ペプチド合成ＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）による反応（ＩＮＲＩＦＯ）の前に調製され、より好ましくはＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）は固相としてＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａを使用する。
【０１００】
したがって、本発明のさらなる対象は、方法（Ｃ−ＰＥＰ）であり、方法（Ｃ−ＰＥＰ）は上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み、ＰＥＰ−Ｃは固相ペプチド合成ＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）によるステップ（ｉｉｉ）の前に調製され、より好ましくはＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）は固相としてＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａを使用する。ＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）において、ＰＥＰ−Ｃは、まずは固相にＸａａＣを連続的にカップリングさせた後、ペプチド鎖を増殖させることにより構築される。様々なＸａａＣを個別かつ連続的にカップリングさせることができるが、それらのうちの２個以上を、例えば、ジペプチド、トリペプチドまたはオリゴペプチドとして、固相に、または増殖中のペプチド鎖にカップリングさせることもできる。
【０１０１】
樹脂Ａは、樹脂ＡとＸａａ１との間の結合がＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）の間に切断されないように選択される。
【０１０２】
好ましくは、ＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）は、さらなるステップ（ｉ）およびステップ（ｉｉ）を含む；
ステップ（ｉ）において、ＸａａＣ（１）はＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａに結合される；
ステップ（ｉｉ）において、ＰＥＰ−Ｃの配列に従うさらなるアミノ酸ＸａａＣは、最初はＸａａＣ（１）に、次いで、ＤＫＰ−Ｌを介して樹脂Ａに結合された、増殖中のペプチジル鎖のＮ末端に、ＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）により連続的に接続しており；
ＨＧは、ＨＧとＸａａＣ（１）との間の結合がＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）の間に切断されないように；および
ＨＧとＸａａＣ（１）との間の結合が反応（ＩＮＲＩＦＯ）の間に切断されないように選択される；
Ｃ−ＰＥＰ、樹脂Ａ、ＤＫＰ−ＰＧ、ＨＧ、ＳＧ、ＤＰＲ、ＤＫＰ、Ｘａａ１、ＸａａＣ（１）、ＸａａＣ、ＰＥＰ−Ｃ、ＳＣ−ＰＧ、反応（ＩＮＲＩＦＯ）は、上記で定義された通りであり、またそれらの好ましい全ての態様を含み；
ならびにＰＥＰ−Ｃ、ＨＧ、ＳＧおよびＤＰＲおよび樹脂Ａの間の接続は、上記で定義された通りであり、またそれらの好ましい全ての態様を含む。
【０１０３】
反応（ＩＮＲＩＦＯ）の前に、Ｘａａ２のαアミノ基であるＤＰＲのＮ末端は、保護基ＰＧ２によって保護される。
【０１０４】
したがって、本発明のさらなる対象は、上記で定義された通りであり、またその好ましい態様を含む方法（Ｃ−ＰＥＰ）であって、その中のステップ（ｉｉｉ）は保護基ＰＧ２の切断を含み；
ＰＧ２はペプチド化学において従来用いられるＮ末端保護基であり、塩基切断型保護基、酸切断型保護基および還元切断型保護基からなる群より選択される。
【０１０５】
ＰＧ２は、ステップ（ｉｉｉ）中の反応（ＩＮＲＩＦＯ）の前にＸａａ２から切断される。
【０１０６】
好ましくは、ＰＧ２はＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）の後にＸａａ２から切断される。
【０１０７】
好ましくは、ＰＧ２はステップ（ｉｉ）中のＰＥＰ−ＣのＮ末端アミノ酸残基の付加の後にＸａａ２から切断される。
【０１０８】
Ｘａａ２からのＰＧ２の切断および反応（ＩＮＲＩＦＯ）は、連続的に、または同時的に行ってもよい。
【０１０９】
ＰＧ２は、ＰＧ２とＸａａ２との間の結合がＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）の間に切断されないように選択される。
【０１１０】
ＰＧ２およびＨＧは、ＨＧとＸａａＣ（１）との間の結合がＸａａ２からのＰＧ２の切断の間に切断されないように選択される。
【０１１１】
Ｃ−ＰＥＰまたはＰＥＰ−Ｃの任意の側鎖を、２個以上のＳＣ−ＰＧがＣ−ＰＥＰまたはＰＥＰ−Ｃ中に存在する場合、保護基ＳＣ−ＰＧによってＣ−ＰＥＰまたはＰＥＰ−Ｃの任意の他の側鎖から独立に保護することができ、これらのＳＣ−ＰＧは互いに独立に同一であるか、または異なる。ＳＣ−ＰＧはいずれも、ペプチドのアミノ酸残基の側鎖を保護するため、またはＳＰＰＳもしくはＨＳＰＰＳの間にアミノ酸の側鎖を保護するためにペプチド化学において従来用いられる保護基である。
【０１１２】
好ましくは、ＳＣ−ＰＧはいずれも、ＳＣ−ＰＧがＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）の間に切断されないように選択される。
【０１１３】
好ましくは、ＳＣ−ＰＧはいずれも、ＳＣ−ＰＧが反応（ＩＮＲＩＦＯ）の間に切断されないように選択される。
【０１１４】
好ましくは、ＰＧ２および任意の保護基ＳＣ−ＰＧは、ＳＣ−ＰＧがＸａａ２からのＰＧ２の切断の間に切断されないように選択される。
【０１１５】
説明の複雑性を回避するために、省略形ＸａａＣはＰＥＰ−ＣおよびＣ−ＰＥＰを合成するために用いられるアミノ酸について用いられるか、またはそれはそれぞれＰＥＰ−ＣおよびＣ−ＰＥＰ、もしくはＰＥＰ−Ｎのアミノ酸残基について用いられる；同様に、ＸａａＮはＰＥＰ−Ｎを合成するために用いられるアミノ酸について用いられるか、またはそれはＰＥＰ−Ｎのアミノ酸残基について用いられる。
【０１１６】
したがって、これらの省略形は、アミノ酸とアミノ酸残基とを区別するものではない。当業者であれば、アミノ酸またはアミノ酸残基を意味するかを文脈から一義的に識別することができる。
【０１１７】
接続についてまとめると、以下のようになる。
【０１１８】
ＰＥＰ−ＣはＸａａＣ（１）を介してＨＧに接続している。
【０１１９】
ＨＧはＦＧを介してＸａａ２に直接接続しているか、またはＳＧが存在する場合、ＨＧはＳＧに接続しており、ＳＧはＦＧを介してＸａａ２に接続している。
【０１２０】
Ｘａａ２はペプチド結合を介してＸａａ１と接続しており、ＤＰＲにおいてＸａａ２はＮ末端、Ｘａａ１はＣ末端アミノ酸である。
【０１２１】
ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａにおいて、Ｘａａ１のカルボン酸基は樹脂Ａに接続している。
【０１２２】
樹脂Ａは、樹脂ＡとＸａａ１との間の結合がＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）の間に切断されないように選択される。
【０１２３】
ＨＧは、ＨＧとＸａａＣ（１）との間の結合が反応（ＩＮＲＩＦＯ）の間に切断されないように選択される。
【０１２４】
ＨＧは、ＨＧとＸａａＣ（１）との間の結合がＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）の間に切断されないように選択される。
【０１２５】
ＰＧ２は、ＰＧ２とＸａａ２との間の結合がＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）の間に切断されないように選択される。
【０１２６】
ＰＧ２およびＨＧは、ＨＧとＸａａＣ（１）との間の結合がＸａａ２からのＰＧ２の切断の間に切断されないように選択される。
【０１２７】
好ましくは、ＳＣ−ＰＧはいずれも、ＳＣ−ＰＧがＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）の間に切断されないように選択される。
【０１２８】
好ましくは、ＳＣ−ＰＧはいずれも、ＳＣ−ＰＧが反応（ＩＮＲＩＦＯ）の間に切断されないように選択される。
【０１２９】
好ましくは、ＰＧ２および任意の保護基ＳＣ−ＰＧは、ＳＣ−ＰＧがＸａａ２からのＰＧ２の切断の間に切断されないように選択される。
【０１３０】
好ましくは、Ｃ−ＰＥＰは、Ｃ末端がＤＫＰ−ＰＧにより保護されたＰＥＰ−Ｃである。
【０１３１】
好ましくは、ＤＰＲはアミノ酸残基Ｘａａ１およびＸａａ２からなる。
【０１３２】
Ｘａａ１およびＸａａ２は、それらが反応（ＩＮＲＩＦＯ）によるＤＫＰの形成を可能にするように選択される。
【０１３３】
好ましくは、Ｃ−ＰＥＰの任意の側鎖は、保護基ＳＣ−ＰＧにより保護される。
【０１３４】
ＳＣ−ＰＧがＣ−ＰＥＰ中に存在する場合、好ましくは、ＨＧは、ＨＧ、およびそれによってＤＫＰ−ＰＧが、ＳＣ−ＰＧ、好ましくは全てのＳＣ−ＰＧを切断する反応において同時にＸａａＣ（１）から切断されるように選択される。
【０１３５】
好ましくは、ＳＣ−ＰＧは、塩基切断型保護基、酸切断型保護基および還元切断型保護基からなる群より選択される。
【０１３６】
より好ましくは、任意のＳＣ−ＰＧは強酸型ＰＧである。
【０１３７】
好ましくは、ＦＧは、ＨＧまたはＳＧに接続している場合、接続基ＣＧとして存在する。
【０１３８】
好ましくは、ＦＧは、ＣＯＯＨ、ＮＨ２、ＯＨおよびＳＨ、より好ましくは、ＮＨ２およびＯＨからなる群より選択される；したがって、ＣＧは、好ましくは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｈ）−、−Ｏ−および−Ｓ−、より好ましくは、−Ｎ（Ｈ）−および−Ｏ−からなる群より選択される。
【０１３９】
ＨＧとＦＧとの間の結合、またはＳＧがＤＫＰ−ＰＧ中に存在する場合、ＨＧとＳＧとの間およびＳＧとＦＧとの間の結合は、それらがＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）の間に切断されないように；および
それらが反応（ＩＮＲＩＦＯ）、ステップ（ｉ）、ステップ（ｉｉ）またはステップ（ｉｉｉ）の間に切断されないように；好ましくは、それらがまたいずれかの保護基のいずれかの切断の間に切断されないような化学的性質のものとなるように選択される。好ましくは、ＨＧとＦＧとの間の結合、またはＳＧがＤＫＰ−ＰＧ中に存在する場合、ＨＧとＳＧとの間およびＳＧとＦＧとの間の結合はアミドまたはエステル結合、より好ましくはアミド結合である。特に、これらの結合は、ペプチド中の２個のアミノ酸残基の間の従来のアミド結合と同様の性質または安定性を有する。
【０１４０】
Ｃ−ＰＥＰのＮ末端を、保護基Ｎ−ＰＧにより保護することができ、このＮ−ＰＧはペプチド化学において従来用いられるＮ末端保護基である。
【０１４１】
好ましくは、Ｎ−ＰＧは、塩基切断型保護基、酸切断型保護基および還元切断型保護基からなる群より選択される。
【０１４２】
したがって、Ｃ−ＰＥＰは、Ｎ末端が保護されていない態様と、ＰＥＰ−ＣのＮ末端がＮ−ＰＧにより保護された態様の両方を含む。
【０１４３】
本発明のさらなる対象は、ステップ（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）を特徴とするＣ−ＰＥＰの調製のための方法（Ｃ−ＰＥＰ）であって、ステップが、固相ペプチド合成ＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）およびその後の反応（ＩＮＲＩＦＯ）を含み；
ＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）が、固相支持体として樹脂ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ上で行われ、
ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａが、官能基としてＤＫＰ−ＰＧ形成リンカーＤＫＰ−Ｌを有する樹脂Ａであり、
ＤＫＰ−Ｌが、ＨＧ、必要に応じてＳＧ、およびＤＰＲを含み、ＤＰＲのＸａａ１がそのＣ末端カルボン酸基を介して樹脂Ａに接続しており、
反応（ＩＮＲＩＦＯ）が、ＤＰＲのＮ末端アミノ基と、ＤＰＲのＣ末端カルボン酸基との分子内環形成反応であり、それによってＤＫＰを形成し；
および反応（ＩＮＲＩＦＯ）により、Ｘａａ１が、樹脂Ａから同時に切断され、ＤＫＰ−ＰＧが形成され；
ステップ（ｉ）において、ＸａａＣ（１）が、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａに結合され；
ステップ（ｉｉ）において、ＰＥＰ−Ｃの配列に従うさらなるアミノ酸ＸａａＣが、最初はＸａａＣ（１）に、次いでＤＫＰ−Ｌを介して樹脂Ａに結合された、増殖中のペプチド鎖のＮ末端にＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）により連続的に接続しており；
ステップ（ｉｉ）におけるＰＥＰ−ＣのＮ末端アミノ酸残基の付加後に行われるステップ（ｉｉｉ）において、Ｃ−ＰＥＰが、反応（ＩＮＲＩＦＯ）により形成され、
樹脂Ａが、樹脂ＡとＸａａ１との間の結合がＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）の間に切断されないように選択され；
ＨＧが、ＨＧとＸａａＣ（１）との間の結合がＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）の間に切断されないように；および
ＨＧとＸａａＣ（１）との間の結合が、反応（ＩＮＲＩＦＯ）の間に切断されないように選択され；
Ｃ−ＰＥＰの任意のＳＣ−ＰＧ保護側鎖が、ＳＣ−ＰＧがＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）の間に切断されないように；および
ＳＣ−ＰＧが、反応（ＩＮＲＩＦＯ）の間に切断されないように選択され；
Ｃ−ＰＥＰ、樹脂Ａ、ＤＫＰ−ＰＧ、ＨＧ、ＳＧ、ＤＰＲ、ＤＫＰ、Ｘａａ１、ＸａａＣ（１）、ＸａａＣ、ＰＥＰ−Ｃ、ＳＣ−ＰＧ、反応（ＩＮＲＩＦＯ）が、上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含み；
ならびにＰＥＰ−Ｃ、ＨＧ、ＳＧとＤＰＲとの間の接続および樹脂Ａが、上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含む、前記方法である。
【０１４４】
本発明のさらなる対象は、ＤＫＰ−ＰＧ形成リンカーＤＫＰ−Ｌの調製のための方法（ＤＫＰ−Ｌ）であって、方法（ＤＫＰ−Ｌ）が、ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉ）、ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉｉ）および必要に応じて、ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉ）を含み；
ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉ）において、Ｘａａ２がＸａａ１にカップリングされ；
任意選択のステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉ）において、ＳＧがＤＫＰ−Ｌ中に存在する場合、ＳＧがＸａａ２にカップリングされ；
ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉｉ）において、ＨＧが、ＳＧがＤＫＰ−Ｌに存在する場合はＳＧ、またはＸａａ２のいずれかにカップリングされ；
ＤＫＰ−ＰＧ、ＤＫＰ−Ｌ、ＤＫＰ、Ｘａａ２、Ｘａａ１、ＨＧおよびＳＧが、上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含む、前記方法である。
【０１４５】
ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉ）、（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉｉ）および任意選択のステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉ）は、任意の順序で行うことができる。
【０１４６】
好ましくは、最初にステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉ）を行った後、ＳＧがＤＫＰ−Ｌ中に存在する場合、任意選択のステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉ）を行い、最後のステップとしてステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉｉ）を行う。
【０１４７】
本発明のさらなる対象は、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａの調製のための方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）であって、方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）が、方法（Ｘ１）または方法（Ｘ２）であり；
方法（Ｘ１）が、ステップ（Ｘ１−ｉ）、ステップ（Ｘ１−ｉｉ）、ステップ（Ｘ１−ｉｖ）および必要に応じてステップ（Ｘ１−ｉｉｉ）を含み；
ステップ（Ｘ１−ｉ）において、アミノ酸Ｘａａ１が樹脂Ａにカップリングされ；
ステップ（Ｘ１−ｉｉ）において、アミノ酸Ｘａａ２がＸａａ１にカップリングされ；
任意選択のステップ（Ｘ１−ｉｉｉ）において、ＳＧがＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ中に存在する場合、ＳＧがＸａａ２の側鎖にカップリングされ；
ステップ（Ｘ１−ｉｖ）において、ＨＧが、ＳＧがＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ中に存在する場合はＳＧ、またはＸａａ２のいずれかにカップリングされ；
方法（Ｘ２）が、ステップ（Ｘ２−ｉ）を含み；
ステップ（Ｘ２−ｉ）において、ＤＰＫ−Ｌが樹脂Ａにカップリングされ；
ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、樹脂Ａ、ＤＫＰ−ＰＧ、ＤＫＰ−Ｌ、ＤＫＰ、Ｘａａ２、Ｘａａ１、ＨＧおよびＳＧが、上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含む、前記方法である。
【０１４８】
方法（Ｘ１）において、ステップ（Ｘ１−ｉ）、（Ｘ１−ｉｉ）、（Ｘ１−ｉｖ）および任意選択のステップ（Ｘ１−ｉｉｉ）は、任意の順序で行うことができる。
【０１４９】
好ましくは、最初にステップ（Ｘ１−ｉ）、次いでステップ（Ｘ１−ｉｉ）を行った後、ＳＧがＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ中に存在する場合、任意選択のステップ（Ｘ１−ｉｉｉｉ）を行い、最後のステップとしてステップ（Ｘ１−ｉｖ）を行う。
【０１５０】
方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）または方法（ＤＫＰ−Ｌ）における構成要素として用いられる場合、ＨＧ、任意のＳＧ、Ｘａａ２およびＸａａ１は、保護基を有してもよい：
方法（Ｘ１）または方法（ＤＫＰ−Ｌ）における構成要素として用いられるＸａａ１は、従来のＣ末端保護アミノ酸として用いられ、その保護基は保護基Ｃ−ＰＧである。Ｘａａ１のαアミノ基は保護されず、Ｉカップリング反応におけるカップリング部位である。
【０１５１】
方法（Ｘ１）または方法（ＤＫＰ−Ｌ）における構成要素として用いられるＸａａ２は、従来のＮ末端保護アミノ酸として用いられ、その保護基は保護基Ｎ−ＰＧである。Ｘａａ２の１−カルボン酸基は保護されず、各カップリング反応におけるカップリング部位である。
【０１５２】
また、Ｘａａ１またはＸａａ２の任意の側鎖は、好ましくはＳＣ−ＰＧにより保護される。
【０１５３】
Ｃ−ＰＧは、アミノ酸のカルボン酸基を保護するため、またはペプチドのＣ末端を保護するためのペプチド化学において従来用いられる保護基である。
【０１５４】
好ましくは、Ｃ−ＰＧは、塩基切断型保護基、酸切断型保護基および還元切断型保護基からなる群より選択される。
【０１５５】
各カップリング反応において用いられる個々の構成要素の形態のそれぞれのＨＧおよびＳＧは、少なくとも２個の反応性官能基を有する。第１の反応性官能基は、ペプチド合成におけるアミノ酸構成要素のαアミノ基と似ている官能基として用いられ、好適な保護基により、好ましくは、保護基Ｎ−ＰＧにより保護することができる；好ましくは、この官能基は、ＯＨまたはＮＨ２であり、−Ｏ−または−Ｎ（Ｈ）−として保護された状態で存在する。ＨＧおよびＳＧの他の反応性官能基は、ペプチド合成におけるアミノ酸構成要素のカルボン酸基と似ている官能基として用いられ、通常は保護されず、各カップリング反応におけるカップリング部位である。好ましくは、この保護されない部位は、カルボン酸基である。このカップリング反応の後、第１の反応性官能基の保護基のいずれか、好ましくは前記Ｎ−ＰＧを切断して、この第１の官能基を次のカップリング反応に利用可能にすることができる。
【０１５６】
方法（ＤＫＰ−Ｌ）により得られる、ＤＫＰ−ＰＧ形成リンカーＤＫＰ−Ｌは通常、方法（Ｘ２）における樹脂Ａへのカップリングにおいて使用可能になるためのＨＧの任意の保護基を依然として有する。方法（Ｘ２）におけるカップリングの前に、Ｘａａ１のＣ−ＰＧを切断除去しなければならない。好ましくは、方法（ＤＫＰ−Ｌ）は、Ｘａａ１からのＣ−ＰＧのこの切断を含む。したがって、ＤＫＰ−Ｌは、一方の態様がＸａａ１上に保護基Ｃ−ＰＧを有し、他方の態様がＸａａ１上に保護基Ｃ−ＰＧを有さない両方の態様を含む。
【０１５７】
ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａにおいて、ＨＧは、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａを調製するために用いられた構成要素ＨＧ中に存在していた保護基を依然として有してもよい。ＨＧ上の保護基はいずれも、方法（Ｃ−ＰＥＰ）におけるステップ（ｉ）の前に切断されなければならない。好ましくは、方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）は、ＨＧからのいずれかの保護基のこの切断を含む。したがって、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａは、一方がＨＧ上に任意の保護基を有し、他方がＨＧ上にいずれの保護基も有さない両方の態様を含む。
【０１５８】
本発明のさらなる対象は、ペプチドＰＥＰの調製のための方法（ＰＥＰ−ＨＳＰＰＳ）であって、
方法（ＰＥＰ−ＨＳＰＰＳ）が、ステップ（ｉ−ｐｅｐ）およびステップ（ｉｉ−ｐｅｐ）を含み、
ステップ（ｉ−ｐｅｐ）において、ペプチドＣ−ＰＥＰが方法（Ｃ−ＰＥＰ）に従って調製され；次いで、
ステップ（ｉｉ−ｐｅｐ）において、ステップ（ｉ−ｐｅｐ）で得られたＣ−ＰＥＰが、均一液相ペプチド合成ＨＳＰＰＳにより、Ｎ末端保護されたアミノ酸またはＮ末端保護されたペプチドＰＥＰ−Ｎとカップリングされ；
方法（Ｃ−ＰＥＰ）、Ｃ−ＰＥＰおよびＰＥＰ−Ｎが、上記で定義された通りであり、また、全てのその好ましい態様を含む、前記方法である。
【０１５９】
方法（ＰＥＰ−ＨＳＰＰＳ）は、さらなるステップ（ｉｉ−ｐｅｐ）を含む方法（Ｃ−ＰＥＰ）である。
【０１６０】
ＰＥＰ−Ｎの任意の側鎖を、保護基ＳＣ−ＰＧによりＰＥＰ−Ｎの任意の他の側鎖から独立に保護することができ、２個以上のＳＣ−ＰＧがＰＥＰ−Ｎ中に存在する場合、これらのＳＣ−ＰＧは互いに独立に同一であるか、または異なる；ＳＣ−ＰＧは上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含む。
【０１６１】
方法（ＰＥＰ−ＨＳＰＰＳ）におけるＣ−ＰＥＰは、Ｎ末端保護されていない状態で用いられる。したがって、Ｃ−ＰＥＰのＮ末端を保護する任意の保護基Ｎ−ＰＧは、方法（ＰＥＰ−ＨＳＰＰＳ）のカップリング反応の前に切断される。この切断反応は、好ましくは、方法（Ｃ−ＰＥＰ）に含まれる。ＰＥＰ−ＣはＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）により作られるため、ＳＰＰＳ（Ｃ−ＰＥＰ）において用いられるＰＥＰ−ＣのＮ末端アミノ酸は通常、そのαアミノ基上の保護されたアミノ基Ｎ−ＰＧと共に用いられる。ＰＥＰ−ＣのＮ末端のこの保護基Ｎ−ＰＧの性質に応じて、このＮ−ＰＧを反応（ＩＮＲＩＦＯ）における環形成の条件下で同時にＮ末端から切断することができるか、またはそれを反応（ＩＮＲＩＦＯ）の前にＸａａ２からのＰＧ２の切断と同時にＮ末端から切断することができる。
【０１６２】
本発明のさらなる対象は、以下の方法である：
１．方法（Ｃ−ＰＥＰ）のＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａが方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）により調製された、方法（ＰＥＰ−ＨＳＰＰＳ）；
２．方法（Ｃ−ＰＥＰ）のＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａが方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）の方法（Ｘ１）により調製された、方法（ＰＥＰ−ＨＳＰＰＳ）；
３．方法（Ｃ−ＰＥＰ）のＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａが方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）の方法（Ｘ２）により調製され；および方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）のＤＫＰ−Ｌが方法（ＤＫＰ−Ｌ）により調製された、方法（ＰＥＰ−ＨＳＰＰＳ）；
４．ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａが方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）により調製された、方法（Ｃ−ＰＥＰ）；
５．ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａが方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）の方法（Ｘ１）により調製された、方法（Ｃ−ＰＥＰ）；
６．ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａが方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）の方法（Ｘ２）により調製され；および方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）のＤＫＰ−Ｌが方法（ＤＫＰ−Ｌ）により調製された、方法（Ｃ−ＰＥＰ）。
【０１６３】
本発明のさらなる対象は、Ｃ−ＰＥＰ、ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂ＡおよびＤＫＰ−Ｌからなる群より選択される化合物であり、Ｃ−ＰＥＰ、ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂ＡおよびＤＫＰ−Ｌは上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含む。
【０１６４】
本発明のさらなる対象は、Ｃ−ＰＥＰと、Ｎ末端保護されたアミノ酸またはＮ末端保護されたペプチドＰＥＰ−Ｎとのカップリング反応によるペプチドＰＥＰの調製のための均一液相ペプチド合成ＨＳＰＰＳにおける、上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含む、Ｃ−ＰＥＰの使用である。
【０１６５】
本発明のさらなる対象は、
ペプチド化学における；または
ペプチドの調製のための；または
ペプチドの調製のための方法における；または
ペプチドの調製のための方法のステップにおける；または
ペプチドカップリング反応における；または
ペプチドの調製のためのＳＰＰＳにおける；または
ペプチドの調製のためのＨＳＰＰＳにおける；
Ｃ−ＰＥＰ、ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂ＡおよびＤＫＰ−Ｌからなる群より選択される化合物の使用；またはＤＫＰ−ＰＧ形成リンカーとしてのＤＫＰ−Ｌの使用である；Ｃ−ＰＥＰ、ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、ＤＫＰ−ＬおよびＤＫＰ−ＰＧは上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含む。
【０１６６】
本発明の以下の態様はいずれも、本明細書に記載の本発明の態様に含まれる。
【０１６７】
本発明のさらなる対象は、式（ＩＩＩ−ＰＥＰ−ＰＧ）
【化１】
0005579939.tif 000002
【０１６８】
の化合物の調製のための方法（Ａ）であって、
保護基ＰＧＩＩＩによりＮ末端保護されたアミノ酸、またはＮ末端保護されたペプチド断片ＰＥＰ−Ｎ（このＮ末端保護されたペプチド断片ＰＥＰ−Ｎは、式（ＩＩＩ−ＰＥＰ−Ｎ−ＰＧ）
ＰＧＩＩＩ−（ＸａａＮ（ｉｐｎ））ｐｎ  （ＩＩＩ−ＰＥＮ−Ｎ−ＰＧ）
の化合物である）と、式（ＩＩＩ−Ｈ）
【化２】
0005579939.tif 000003
【０１６９】
の化合物との均一液相カップリングによる前記方法であり、
式中、
ＨＧは、ペプチド中の２個のアミノ酸残基を接続するアミド結合を切断しない条件下で、ＨＧからのＣ末端の切断を可能にする、ペプチドのＣ末端を固相に接続させるための固相ペプチド合成ＳＰＰＳにおいて従来用いられるハンドル基であり；
ｎは、０または１であり；
ＳＧは、ペプチド化学において従来用いられるスペーサー基であり；
Ｘａａ１は、αアミノ酸残基であり；
Ｘａａ２は、２−（Ｃ１〜５アルキル）−αアミノ酸残基（ここで、Ｃ１〜５アルキル基は官能基ＦＧにより置換され、ＦＧはＮＨ２、ＯＨ、ＳＨおよびＣＯＯＨからなる群より選択され；ＦＧは、ｎが１である場合、ＳＧと結合され；ＦＧは、ｎが０である場合、ＨＧに結合され、したがって、ＦＧは−Ｎ（Ｈ）−、−Ｏ−、−Ｓ−および−Ｃ（Ｏ）Ｏ−からなる群より選択される接続基ＣＧとして式（ＩＩＩ−ＰＥＰ−ＰＧ）の化合物中に存在する）であり；
ＰＥＰ−Ｃは、式（ＸａａＣ（ｉｐｃ））ｐｃのペプチジルラジカルであり；
式（ＩＩＩ−Ｈ）において（１）と共に示される水素Ｈは、ＰＥＰ−Ｃの無保護のＮ末端の水素であり；
ＸａａＣは、ペプチジルラジカルＰＥＰ−Ｃのアミノ酸残基であり；
ＸａａＣ（ｉｐｃ）において、（ｉｐｃ）は、位置ｉｐｃでのＰＥＰ−ＣのＸａａＣの指数を表し、その位置はＰＥＰ−ＣのＣ末端から開始して数えたものであり、
ｐｍａｘは、５０２であり；
ｐｃは、２〜（ｐｍａｘ−２）の整数であり、ＰＥＰ−Ｃ中のアミノ酸残基の総数を表し；
ｉｐｃは、１〜ｐｃの整数であり；
式（ＩＩＩ−ＰＥＰ−ＰＧ）および（ＩＩＩ−ＰＥＰ−Ｎ−ＰＧ）中のＰＧＩＩＩは、同一であり、ペプチド化学において一般的に用いられるＮ末端保護基であり；
ＰＥＰは、式（ＸａａＰ（ｉｐ））ｐのペプチジルラジカルであり；
ｐｎは、２〜（ｐｍａｘ−ｐｃ）の整数であり、ＰＥＰ−Ｎ中のアミノ酸残基の総数を表し；
ｐは、ｐｃ＋ｐｎであり；
ＸａａＮは、ペプチド断片ＰＥＰ−Ｎのアミノ酸残基であり；
ＸａａＮ（ｉｐｎ）において、（ｉｐｎ）は位置ｉｐｎでのＰＥＰ−ＮのＸａａＮの指数を表し、その位置はＰＥＰ−ＮのＣ末端から開始して数えたものであり；
ＸａａＰは、アミノ酸残基であり；
ＸａａＰ（ｉｐ）において、（ｉｐ）は位置ｉｐでのＰＥＰのＸａａＰの指数を表し、その位置はＰＥＰのＣ末端から開始して数えたものであり；
ｉｐｎは、１〜ｐｎの整数であり；
ｉｐは、１〜ｐの整数であるが；
但し、ＸａａＰ（ｉｐ）は、１〜ｉｐｃの値を有するｉｐについてＸａａＣ（ｉｐｃ）と同一であり；およびＸａａＰ（ｉｐ）は、値（ｐｃ＋ｉｐｎ）を有するｉｐについてＸａａＮ（ｉｐｎ）と同一であり；
ｐｍａｘ、ｐｃ、ＸａａＣ、ＸａａＣ（ｉｐｃ）、ｉｐｃおよび式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物は、上記で定義された通りであり、また、全てのそれらの好ましい態様を含み；
式（ＩＩＩ−Ｈ）中のＸａａＣおよびＸａａＮは互いに独立に同一であるか、または異なる。
【０１７０】
したがって、ＰＥＰ−Ｃは、ｐｃ個のアミノ酸残基ＸａａＣを有するペプチジルラジカルである。
【０１７１】
好ましくは、Ｘａａ１のαアミノ基は、ペプチド結合によりＸａａ２の１−カルボキシ基にカップリングされる。
【０１７２】
式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物は、上記で定義されたＣ−ＰＥＰの態様である。
【０１７３】
ＨＧ、ＳＧ、Ｘａａ２およびＸａａ１は、上記で定義されたペプチドＣ−ＰＥＰの各ＨＧ、ＳＧ、Ｘａａ２およびＸａａ１の態様である。
【０１７４】
例えば、式（ＩＩＩ−Ｈ）中の環状ジペプチドは、上記のＤＫＰの一態様、すなわち、ＤＰＲから誘導されたジケトピペラジン残基である。
【０１７５】
好ましくは、ＰＥＰ−Ｃは、ＳＰＰＳにより調製される。
【０１７６】
ＰＥＰ−Ｃが調製されるＳＰＰＳは、上記でＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）と呼ばれる。
【０１７７】
好ましくは、ＰＥＰ−Ｃは、式ＰＧＸａａＣ（ｉｐｃ）−ＸａａＣ（ｉｐｃ）−ＯＨのアミノ酸を用いてＳＰＰＳにより合成された、式（ＸａａＣ（ｉｐｃ））ｐｃのペプチジルラジカルである。
【０１７８】
ＰＧＸａａＣは、ＳＰＰＳにおいて従来用いられるＮ末端保護基であり、塩基切断型保護基、酸切断型保護基および還元切断型保護基からなる群より選択される。
【０１７９】
ＰＧＸａａＣ（ｉｐｃ）において、指数（ｉｐｃ）は、アミノ酸ＰＧＸａａＣ（ｉｐｃ）−ＸａａＣ（ｉｐｃ）−ＯＨの保護基としてＰＧＸａａＣ（ｉｐｃ）を定義し、それぞれのＰＧＸａａＣ（ｉｐｃ）は互いに独立に同一であるか、または別のＰＧＸａａＣ（ｉｐｃ）と異なる。
【０１８０】
好ましくは、ＰＧＸａａＣおよびＰＧＸａａＣ（ｉｐｃ）はそれぞれ、ＰＥＰ−Ｃを合成するためにＳＰＰＳにおいてそれぞれ用いられるアミノ酸ＰＧＸａａＣ−ＸａａＣ−ＯＨおよびＰＧＸａａＣ（ｉｐｃ）−ＸａａＣ（ｉｐｃ）−ＯＨのいずれかのαアミノ基を保護するためにＳＰＰＳにおいて従来用いられるＮ末端保護基である。
【０１８１】
説明の複雑性を回避するために、本文における省略形ＰＧＸａａＣは、ＰＥＰ−ＣおよびＣ−ＰＥＰを合成するのに用いられるアミノ酸のアミノ基の保護基について用いられるか、またはそれはＳＰＰＳの間の様々な段階でＰＥＰ−ＣおよびＣ−ＰＥＰのＮ末端アミノ酸残基のＮ末端保護基について用いられる。当業者であれば、２つの意味が意味するところを文脈から一義的に識別することができる。
【０１８２】
したがって、ＰＥＰ−Ｎは、ｐｎ個のアミノ酸残基ＸａａＮを有するペプチジルラジカルである。
【０１８３】
したがって、ＰＥＰは、ｐ個のアミノ酸残基ＸａａＰを有するペプチジルラジカルである。
【０１８４】
例えば、式（ＩＩＩ−ＰＥＰ−ＰＧ）および（ＩＩＩ−Ｈ）に出現する式（ＩＩＩ−ｒｅｓ）
【化３】
0005579939.tif 000004
【０１８５】
の残基は、上記のＤＫＰ−ＰＧの態様である；ここで、
ＨＧ、ＳＧ、ｎ、Ｘａａ２およびＸａａ１は上記で定義された通りであり；
Ｘａａ２およびＸａａ１は上記のＤＫＰを形成し；
および（８）はペプチジルラジカルＰＥＰ−ＣとＨＧとの間の結合を表す。
【０１８６】
式（ＩＩＩ−ＰＥＰ−ＰＧ）の化合物は、上記で定義されたペプチドＰＥＰの態様であり、上記で定義されたＣ−ＰＥＰの態様でもある。
【０１８７】
ＰＥＰ−Ｎは、従来のペプチド合成により、ＳＰＰＳにより、ＨＳＰＰＳにより、またはＳＰＰＳとＨＳＰＰＳとの組合せにより、好ましくはＳＰＰＳにより調製することができる。
【０１８８】
式（ＩＩＩ−ＰＥＰ−ＰＧ）の化合物が、次の断片Ｃ−ＰＥＰとして次の断片ＰＥＰ−Ｎとの方法（Ａ）による次のＨＳＰＰＳカップリングにおいて用いられる場合、方法（Ａ）による前記次のＨＳＰＰＳカップリングのために、前記次の断片Ｃ−ＰＥＰ、すなわち、式（ＩＩＩ−Ｈ）の次の化合物を提供するためには、式（ＩＩＩ−ＰＥＰ−ＰＧ）の前記化合物のＮ末端保護基ＰＧＩＩＩのみを除去する必要がある。
【０１８９】
式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物とＰＥＰ−Ｎは両方とも、それ自体、その調製ステップの１つにおいて方法（Ａ）により調製されたものであるので、それらは液相カップリングが依然として合理的な時間内で作用する限り、実際には任意の数のアミノ酸を有してもよい。
【０１９０】
好ましくは、ｐｍａｘは５００であり、より好ましくは、ｐｍａｘは４００または４０２であり、さらにより好ましくは、３００または３０２であり、特に、２００または２０２であり、より特には１５０または１５２であり、さらにより特には１００または１０２であり、特定すると８０または８２であり、より特定すると５０または５２であり、さらにより特定すると２５または２７である。
【０１９１】
好ましくは、ペプチジルラジカルＰＥＰ−Ｃは線状ペプチジルラジカルであり、好ましくはＰＥＰ−Ｎは線状ペプチジルラジカルＰＥＰをもたらす線状ペプチドである。
【０１９２】
好ましくは、式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物中のＰＥＰ−Ｃおよび／またはＰＥＰ−ＮがＳＰＰＳを用いて調製された場合、それらは互いに独立に２〜１００、より好ましくは２〜５０、さらにより好ましくは２〜４０、特に好ましくは２〜２５個のアミノ酸残基を有する。
【０１９３】
好ましくは、式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物中のＰＥＰ−Ｃおよび／またはＰＥＰ−ＮがＨＳＰＰＳを用いて調製された場合、それらは互いに独立に２〜２５０、より好ましくは２〜２００、さらにより好ましくは２〜１００、特に好ましくは２〜５０、特定すると２〜２５個のアミノ酸残基を有する。
【０１９４】
ペプチジルラジカルＰＥＰ−ＣおよびＰＥＰ−Ｎの個々のアミノ酸残基の側鎖上の官能基のいずれかは、互いに独立に保護基ＳＣ−ＰＧによって保護されるか、または保護されない；
好ましくは、ペプチジルラジカルＰＥＰ−ＣおよびＰＥＰ−Ｎの個々のアミノ酸残基の側鎖上の全ての官能基は、保護基ＳＣ−ＰＧにより保護されるか、または保護されない；
より好ましくは、ペプチジルラジカルＰＥＰ−ＣおよびＰＥＰ−Ｎの個々のアミノ酸残基の側鎖上の全ての官能基は、断片ＰＥＰ−Ｎと式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物との方法（Ａ）による液相カップリングの間に保護される；
さらにより好ましくは、ペプチジルラジカルＰＥＰ−ＣおよびＰＥＰ−Ｎの個々のアミノ酸残基の側鎖上の全ての官能基は、強酸型ＰＧにより保護される。
【０１９５】
好ましくは、ペプチジルラジカルＰＥＰまたはＰＥＰ−ＣのＣ末端、またはＣ末端アミノ酸残基が側鎖を有する場合は、そのＣ末端アミノ酸残基の側鎖はそれぞれ、ＨＧに結合される；
より好ましくは、ペプチジルラジカルＰＥＰまたはＰＥＰ−ＣのＣ末端はそれぞれ、ＨＧに結合される。
【０１９６】
好ましくは、
ＨＧは、ＳＰＰＳにより合成しようとするペプチドのＣ末端アミノ酸残基になるアミノ酸を、前記ＨＧを介して、固相、好ましくは、樹脂Ａに接続するための固相ペプチド合成ＳＰＰＳにおいて従来用いられるハンドル基である。
【０１９７】
ＨＧは、ペプチド中の２個のアミノ酸残基を接続するアミド結合を切断しない条件下でのＨＧからのＣ末端アミノ酸残基の切断を可能にする。
【０１９８】
より好ましくは、
ＨＧは、式（ＨＧＦ−Ｉ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＩ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＩＩ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＶ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−Ｖ）のハンドル基および式（ＨＧＦ−ＶＩ）のハンドル基、
【化４】
0005579939.tif 000005
【化５】
0005579939.tif 000006
【０１９９】
からなる群より選択されるハンドル基であり、
式中、
（＊）は、それぞれのペプチジルラジカル、例えば、式（ＩＩＩ−ＰＥＰ−ＰＧ）のＰＥＰ、式（ＩＩＩ−Ｈ）のＰＥＰ−Ｃもしくは方法（Ｃ−ＰＥＰ）におけるＰＥＰ−ＣのＣ末端のＣ原子と、ＨＧとの間の結合を示し、
または、それぞれのペプチジルラジカル、例えば、式（ＩＩＩ−ＰＥＰ−ＰＧ）のＰＥＰ、式（ＩＩＩ−Ｈ）のＰＥＰ−Ｃもしくは方法（Ｃ−ＰＥＰ）におけるＰＥＰ−ＣのＣ末端アミノ酸残基が側鎖を有し、この側鎖を介してＨＧに接続している場合、それぞれのペプチジルラジカル、例えば、式（ＩＩＩ−ＰＥＰ−ＰＧ）のＰＥＰ、式（ＩＩＩ−Ｈ）のＰＥＰ−Ｃもしくは方法（Ｃ−ＰＥＰ）におけるＰＥＰ−ＣのＣ末端アミノ酸残基の側鎖と、ＨＧとの間の結合を示し、
（＊＊）は、ｎが１である場合、ＨＧとＳＧとの間の結合を表すか、もしくはｎが０である場合、ＨＧとＦＧとの間の結合を表し、ここでＳＧおよびＦＧは上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含み；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１０およびＲ１１は、同一であるか、または異なり、水素およびＯ−Ｃ１〜４アルキルからなる群より互いに独立に選択され、
ｓ１−１、ｓ２、ｓ３、ｓ４およびｓ６は、同一であるか、または異なり、１、２、３および４からなる群より互いに独立に選択され、
ｓ５−１は、０、１、２、３または４であり、
ｓ１−２、ｓ５−２およびｓ５−３は、同一であるか、または異なり、互いに独立に０または１であり、
Ｔ１−１は、ＯまたはＮＨであり、
Ｔ１−２およびＴ５−１は、Ｏであり、
ここでｎ、ＳＧ、ＦＧ、ＰＥＰ−Ｃおよび方法（Ｃ−ＰＥＰ）は、上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含む。
【０２００】
好ましくは、
（＊）は、それぞれのペプチジルラジカル、例えば、式（ＩＩＩ−ＰＥＰ−ＰＧ）のＰＥＰ、式（ＩＩＩ−Ｈ）のＰＥＰ−Ｃもしくは方法（Ｃ−ＰＥＰ）におけるＰＥＰ−ＣのＣ末端のＣ原子と、ＨＧとの間の結合を示す。
【０２０１】
好ましくは、
ＳＧは、ＳＰＰＳにおいて従来用いられる、好ましくは、１個以上の、より好ましくは１〜５００個のエチレンオキシド単位を含むスペーサー基である。
【０２０２】
より好ましくは、
ＳＧは、式（ＳＧ−Ｉ）のスペーサー基、式（ＳＧ−ＩＩ）のスペーサー基、式（ＳＧ−ＩＩＩ）のスペーサー基、式（ＳＧ−ＩＶ）のスペーサー基および式（ＳＧ−Ｖ）のスペーサー基；
【化６】
0005579939.tif 000007
【化７】
0005579939.tif 000008
【０２０３】
からなる群より選択されるスペーサー基であり、
式中、
ｍ１、ｍ５、ｍ６、ｍ７、ｍ９、ｍ１０、ｍ１１およびｍ１２は同一であるか、または異なり、互いに独立に１〜５００の整数であり；
ｍ２、ｍ３およびｍ４は、同一であるか、または異なり、互いに独立に１、２、３または４であり、
（＊＊＊）は、ｎが１である場合、ＳＧからＨＧへの結合であり、
（＊＊＊＊）は、ｎが１である場合、ＳＧとＸａａ２との間の結合である。
【０２０４】
（＊＊＊）は、ｎが１である場合、ＨＧの各態様において（＊＊）により示される結合である。
【０２０５】
（＊＊＊＊）は、ｎが１である場合、ＳＧとＦＧとの間の結合であり；
ここでＨＧ、Ｘａａ２およびｎは上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含む。
【０２０６】
好ましくは、ＸａａＣおよびＸａａＮは、αアミノ酸残基である。
【０２０７】
より好ましくは、ＸａａＣおよびＸａａＮは、天然のαアミノ酸残基である。
【０２０８】
ＸａａＣまたはＸａａＮが官能基を含む側鎖を有する場合、ＸａａＣまたはＸａａＮの側鎖のこの官能基は保護されるか、または保護されないのいずれかであり、好ましくはそれは保護される。
【０２０９】
より好ましくは、ＸａａＣおよびＸａａＮは同一であるか、または異なり、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、ＧｌｕおよびＧｌｎからなる群より互いに独立に選択され；
ここで側鎖中の任意の官能基は保護されるか、または保護されないのいずれかであり、好ましくは保護される。
【０２１０】
好ましくは、ＰＧＩＩＩは、塩基型ＰＧ、強酸型ＰＧ、弱酸型ＰＧおよび還元型ＰＧからなる群より選択される。
【０２１１】
ペプチジルラジカルＰＥＰ−ＣおよびＰＥＰ−Ｎの個々のアミノ酸残基の側鎖上の全ての官能基が強酸切断型保護基により保護される場合、ならびに式（ＩＩＩ−ＰＥＰ−ＰＧ）の化合物が次の断片Ｃ−ＰＥＰとして次の断片ＰＥＰ−Ｎとの方法（Ａ）による次のＨＳＰＰＳカップリングにおいて用いられる場合、ＰＧＩＩＩは、好ましくは塩基型ＰＧ、弱酸型ＰＧおよび還元型ＰＧからなる群より選択される。
【０２１２】
式（ＨＧＦ−Ｉ）のハンドル基および式（ＨＧＦ−ＩＶ）のハンドル基は、強酸切断条件によってＰＥＰ−Ｃから切断可能であり、式（ＨＧＦ−ＩＩ）のハンドル基は、強酸切断条件によって切断可能であり、式（ＨＧＦ−ＩＩＩ）のハンドル基は弱酸または強酸切断条件によって切断可能であり、式（ＨＧＦ−Ｖ）のハンドル基は還元切断条件によって切断可能であり、および式（ＨＧＦ−ＶＩ）のハンドル基は弱酸または強酸切断条件によって切断可能である。
【０２１３】
好ましくは、ＨＧは、式（ＨＧＦ−Ｉ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＶ）のハンドル基および式（ＨＧＦ−ＶＩ）のハンドル基からなる群より選択される。
【０２１４】
好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１０およびＲ１１は同一であるか、または異なり、水素およびＯ−ＣＨ３からなる群より互いに独立に選択される。
【０２１５】
より好ましくは、Ｒ１およびＲ２は同一であり、水素およびＯ−ＣＨ３からなる群より選択される。
【０２１６】
より好ましくは、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１０およびＲ１１はＯ−ＣＨ３である。
【０２１７】
好ましくは、ｓ１−１およびｓ６は、１である。
【０２１８】
好ましくは、ｓ１−２、ｓ５−１、ｓ５−２およびｓ５−３は、互いに独立に０または１である。
【０２１９】
好ましくは、ｓ２およびｓ３は、４である。
【０２２０】
好ましくは、ｓ４は、１または２である。
【０２２１】
好ましくは、Ｔ１−１はＮＨであり、ｓ１−１は１であり、およびｓ１−２は１である。
【０２２２】
好ましくは、Ｔ１−１はＯであり、ｓ１−１は１であり、およびｓ１−２は０である。
【０２２３】
好ましくは、Ｔ１−１はＯであり、ｓ１−１は１であり、およびｓ１−２は１である。
【０２２４】
特に、ＨＧは、式（ＨＧ−Ｉａ）のハンドル基、式（ＨＧ−Ｉｂ）のハンドル基、式（ＨＧ−Ｉｃ）のハンドル基、式（ＨＧ−Ｉｄ）のハンドル基、式（ＨＧ−ＩＩ）のハンドル基、式（ＨＧ−ＩＩＩ）のハンドル基、式（ＨＧ−ＩＶａ）のハンドル基、式（ＨＧ−ＩＶｂ）のハンドル基、式（ＨＧ−Ｖａ）のハンドル基、式（ＨＧ−Ｖｂ）のハンドル基および式（ＨＧ−ＶＩ）のハンドル基、
【化８】
0005579939.tif 000009
【化９】
0005579939.tif 000010
【化１０】
0005579939.tif 000011
【０２２５】
からなる群より選択されるハンドル基であり、
式中、
（＊）は、上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み、
（＊＊）は、上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含む。
【０２２６】
より特には、ＨＧは、式（ＨＧ−Ｉａ）のハンドル基、式（ＨＧ−Ｉｂ）のハンドル基、式（ＨＧ−Ｉｃ）のハンドル基、式（ＨＧ−Ｉｄ）のハンドル基、式（ＨＧ−ＩＶａ）のハンドル基、式（ＨＧ−ＩＶｂ）のハンドル基、および式（ＨＧ−ＶＩ）のハンドル基からなる群より選択されるハンドル基である。
【０２２７】
さらにより特には、ＨＧは、式（ＨＧ−Ｉａ）のハンドル基、式（ＨＧ−ＩＶａ）のハンドル基または式（ＨＧ−ＶＩ）のハンドル基である。
【０２２８】
様々なハンドル基ＨＧが公知のハンドル基であるか、または公知のハンドル基の構造的に密接に関連する誘導体である。各ハンドル基ＨＧに接続されたペプチジルラジカルからこれらのハンドル基ＨＧのいずれかを切断するのに必要な反応条件も、ペプチド化学において公知である。
【０２２９】
式（ＨＧ−Ｉａ）のハンドル基はＲｉｎｋアミドハンドルから誘導され、（ＨＧ−Ｉｂ）、（ＨＧ−Ｉｃ）および（ＨＧ−Ｉｄ）はベンズヒドリルハンドルから誘導され、（ＨＧ−ＩＩ）はＰＡＬハンドルから誘導され、（ＨＧ−ＩＩＩ）はＳｉｅｂｅｒハンドルから誘導され、（ＨＧ−ＩＶａ）はＨＭＰＡ（−Ｗａｎｇ）ハンドルから誘導され、（ＨＧ−ＩＶｂ）はＨＭＰＰ（−Ｗａｎｇ）ハンドルから誘導され、ならびに（ＨＧ−Ｖａ）および（ＨＧ−Ｖｂ）はアリルハンドルから誘導され、（ＨＧ−ＶＩ）はＲａｍａｇｅハンドルから誘導される。
【０２３０】
好ましくは、ｍ１、ｍ５、ｍ６、ｍ７、ｍ９、ｍ１０、ｍ１１およびｍ１２は同一であるか、または異なり、互いに独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０であり；
より好ましくは、ｍ１、ｍ５、ｍ６、ｍ７、ｍ９、ｍ１０、ｍ１１およびｍ１２は同一であるか、または異なり、互いに独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、２３または２７であり；
さらにより好ましくは、ｍ１、ｍ５、ｍ６、ｍ７、ｍ１０、ｍ１１およびｍ１２は同一であるか、または異なり、互いに独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
ｍ９は４、８、１２または２７であり；
特に、ｍ１は３であり；ｍ５は１または２であり；ｍ６およびｍ７は２であり；ｍ９は４、８、１２または２７であり；ｍ１０は１であり；ｍ１１は３である。
【０２３１】
Ｘａａ１は、好ましくは、非天然αアミノ酸、天然αアミノ酸残基からなる群より選択され；
より好ましくは、天然αアミノ酸残基、α−Ｎ−メチルアミノ酸残基、Ｌ−Ｈｐｒ残基、Ｄ−Ｈｐｒ残基、ＤＬ−Ｈｐｒ残基、２−（Ｃ１〜５−アルキル）−Ｄ−アミノ酸残基、２−（Ｃ１〜５−アルキル）−Ｌ−アミノ酸残基、２−（Ｃ１〜５−アルキル）−ＤＬ−アミノ酸残基および式（ＨｙｐＸ）；
【化１１】
0005579939.tif 000012
【０２３２】
（式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＣ（Ｒ１３）Ｒ１４であり；
Ｒ５、Ｒ７、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は同一であるか、または異なり、水素、Ｃ１〜４アルキルおよびＯ−Ｒ８からなる群より互いに独立に選択され；
Ｒ８は、ペプチド化学において側鎖保護のために従来用いられる保護基、または式（Ｓｕｂ−Ｒ８）；
【化１２】
0005579939.tif 000013
【０２３３】
（式中、
ｍ８は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
Ｒ９は、Ｃ１〜４アルキルである）
の置換基である）
の化合物から誘導された残基からなる群より選択される。
【０２３４】
好ましくは、
Ｘは、Ｃ（Ｒ１３）Ｒ１４であり；
Ｒ５、Ｒ７、Ｒ１２およびＲ１４は水素であり；
Ｒ１３は、Ｏ−Ｒ８であり；
Ｒ８は、ペプチド化学において側鎖保護のために従来用いられる保護基である。
【０２３５】
α−Ｎ−メチルアミノ酸残基は、好ましくは、Ｌ−α−Ｎ−メチルアミノ酸残基、Ｄ−α−Ｎ−メチルアミノ酸残基およびＤＬ−α−Ｎ−メチルアミノ酸残基からなる群より選択され；
より好ましくは、Ｎ−メチルグリシン残基（サルコシン）、Ｌ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基、Ｄ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基、ＤＬ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基、Ｌ−Ｎ−メチルアラニン残基、Ｄ−Ｎ−メチルアラニン残基、ＤＬ−Ｎ−メチルアラニン残基、Ｌ−Ｎ−メチルバリン残基、Ｄ−Ｎ−メチルバリン残基、ＤＬ−Ｎ−メチルバリン残基、Ｌ−Ｎ−メチルトリプトファン残基、Ｄ−Ｎ−メチルトリプトファン残基、ＤＬ−Ｎ−メチルトリプトファン残基からなる群より選択される。
【０２３６】
天然αアミノ酸残基は、好ましくは、Ｐｒｏ残基およびＧｌｙ残基からなる群より選択され；より好ましくは、Ｌ−Ｐｒｏ残基、Ｄ−Ｐｒｏ残基、ＤＬ−Ｐｒｏ残基およびＧｌｙ残基からなる群より選択される。
【０２３７】
好ましくは、式（ＨｙｐＸ）の化合物は、Ｌ−Ｈｙｐ、Ｄ−ＨｙｐまたはＤＬ−Ｈｙｐから誘導され、より好ましくは、Ｌ−４Ｈｙｐ、Ｄ−４ＨｙｐまたはＤＬ−４Ｈｙｐから誘導される。
【０２３８】
特に、Ｘａａ１は、Ｌ−Ｎ−メチルグリシン残基、Ｄ−Ｎ−メチルグリシン残基、ＤＬ−Ｎ−メチルグリシン残基、Ｌ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基、Ｄ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基、ＤＬ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基、Ｌ−Ｐｒｏ残基、Ｄ−Ｐｒｏ残基、ＤＬ−Ｐｒｏ残基、側鎖保護されたＬ−Ｈｙｐ残基、側鎖保護されたＤ−Ｈｙｐ残基、側鎖保護されたＤＬ−Ｈｙｐ残基、Ｌ−Ｈｐｒ残基、Ｄ−Ｈｐｒ残基およびＤＬ−Ｈｐｒ残基からなる群より選択され；Ｈｙｐは好ましくは４Ｈｙｐである。
【０２３９】
より特には、Ｘａａ１は、Ｌ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基、Ｄ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基、ＤＬ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基、Ｌ−Ｐｒｏ残基、Ｄ−Ｐｒｐ残基、ＤＬ−Ｐｒｏ残基、側鎖保護されたＬ−Ｈｙｐ残基、側鎖保護されたＤ−Ｈｙｐ残基、側鎖保護されたＤＬ−Ｈｙｐ残基であり；Ｈｙｐは好ましくは４Ｈｙｐである。
【０２４０】
さらにより特には、Ｘａａ１は、Ｄ−Ｐｒｏ残基、Ｄ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基または側鎖保護されたＤ−Ｈｙｐ残基であり；Ｈｙｐは好ましくは４Ｈｙｐである。
【０２４１】
ＦＧは、ｎが１である場合、ＳＧのそれぞれの態様において結合（＊＊＊）を介してＳＧと結合されるか、またはＦＧは、ＨＧのそれぞれの態様において結合（＊＊）を介してＨＧに結合される。
【０２４２】
好ましくは、Ｘａａ２は、Ｌ−Ｌｙｓ残基、Ｄ−Ｌｙｓ残基、ＤＬ−Ｌｙｓ残基、Ｌ−Ｏｒｎ残基、Ｄ−Ｏｒｎ残基、ＤＬ−Ｏｒｎ残基、Ｌ−４−アミノプロリン残基、Ｄ−４−アミノプロリン残基、ＤＬ−４−アミノプロリン残基、Ｌ−α，γ−ジアミノブタン酸残基、Ｄ−α，γ−ジアミノブタン酸残基、ＤＬ−α，γ−ジアミノブタン酸残基、Ｌ−α，β−ジアミノプロパン酸残基、Ｄ−α，β−ジアミノプロパン酸残基、ＤＬ−α，β−ジアミノプロパン酸残基、Ｌ−Ｓｅｒ残基、Ｄ−Ｓｅｒ残基、ＤＬ−Ｓｅｒ残基、Ｌ−Ｔｈｒ残基、Ｄ−Ｔｈｒ残基、ＤＬ−Ｔｈｒ残基、Ｌ−Ｃｙｓ残基、Ｄ−Ｃｙｓ残基、ＤＬ−Ｃｙｓ残基、Ｌ−ホモシステイン残基、Ｄ−ホモシステイン残基、ＤＬ−ホモシステイン残基、Ｌ−Ａｓｐ残基、Ｄ−Ａｓｐ残基、ＤＬ−Ａｓｐ残基、Ｌ−Ｇｌｕ残基、Ｄ−Ｇｌｕ残基およびＤＬ−Ｇｌｕ残基からなる群より選択される。
【０２４３】
好ましくは、ＦＧはＮＨ２またはＯＨであり、より好ましくはＮＨ２である；したがって、ＣＧは好ましくは−Ｎ（Ｈ）−または−Ｏ−であり、より好ましくは、−Ｎ（Ｈ）−である；したがって、Ｘａａ２は、好ましくは従って選択される。
【０２４４】
より好ましくは、Ｘａａ２は、Ｌ−Ｌｙｓ残基、Ｄ−Ｌｙｓ残基、ＤＬ−Ｌｙｓ残基、Ｌ−α、β−ジアミノプロパン酸残基、Ｄ−α、β−ジアミノプロパン酸残基およびＤＬ−α、β−ジアミノプロパン酸残基からなる群より選択される。
【０２４５】
さらにより好ましくは、Ｘａａ２は、Ｌ−Ｌｙｓ残基またはＬ−α、β−ジアミノプロパン酸残基である。
【０２４６】
好ましい態様は、Ｘａａ２がＬ−αアミノ酸残基であり、Ｘａａ１がＤ−αアミノ酸残基であるか、またはあるいは、Ｘａａ２がＤ−であり、Ｘａａ１がＬ−αアミノ酸残基である組合せであり、ここでＸａａ１およびＸａａ２が上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含む。
【０２４７】
より好ましくは、Ｘａａ１はＬ−Ｐｒｏ残基、Ｄ−Ｐｒｏ残基、ＤＬ−Ｐｒｏ残基、Ｌ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基、Ｄ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基およびＤＬ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基からなる群より選択され；ならびにＸａａ２はＬ−Ｌｙｓ残基、Ｄ−Ｌｙｓ残基、ＤＬ−Ｌｙｓ、Ｌ−α，β−ジアミノプロパン酸残基、Ｄ−α，β−ジアミノプロパン酸残基およびＤＬ−α，β−ジアミノプロパン酸残基からなる群より選択される。
【０２４８】
さらにより好ましくは、Ｘａａ１はＤ−ＰｒｏもしくはＤ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基であり、およびＸａａ２はＬ−ＬｙｓもしくはＬ−α，β−ジアミノプロパン酸残基である；またはＸａａ１はＬ−ＰｒｏもしくはＬ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基であり、Ｘａａ２はＤ−ＬｙｓもしくはＤ−α、β−ジアミノプロパン酸残基である。
【０２４９】
特に、Ｘａａ２はＬ−配置、Ｘａａ１はＤ−配置のものであり、ここでＸａａ１およびＸａａ２は上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含む。
【０２５０】
より特には、Ｘａａ１はＤ−ＰｒｏまたはＤ−Ｎ−メチルフェニルアラニン残基であり、Ｘａａ２はＬ−ＬｙｓまたはＬ−α，β−ジアミノプロパン酸残基である。
【０２５１】
方法（Ａ）における均一液相カップリング、すなわち、ＨＳＰＰＳは、ＨＳＰＰＳにとって典型的な従来のプロセスパラメータおよび試薬を用いて実行される。
【０２５２】
ＨＳＰＰＳは、溶媒中で、１種以上のカップリング試薬を用いて従来通り行われ、好ましくは、１種以上のカップリング添加剤の存在下で、および好ましくは１種以上の第三級塩基の存在下で行われる。
【０２５３】
ＨＳＰＰＳにおいて用いられる好ましいカップリング試薬は、ホスホニウムまたはウロニウム塩およびカルボジイミドカップリング試薬である。
【０２５４】
ホスホニウムおよびウロニウム塩は、好ましくはベンゾトリアゾールの誘導体である；より好ましくは、ホスホニウムおよびウロニウム塩は、
ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、
ＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、
ＨＢＴＵ（Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、
ＨＣＴＵ（Ｏ−（１Ｈ−６−クロロ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、
ＴＣＴＵ（Ｏ−（１Ｈ−６−クロロベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート）、
ＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、
ＴＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−ｌ−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート）、
ＴＢＴＵ（Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート）、
ＴＯＴＵ（Ｏ−［シアノ（エトキシカルボニル）メチレンアミノ］−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート）、
ＨＡＰｙＵ（Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）オキシビス−（ピロリジノ）−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート、
ＰｙＡＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、
ＣＯＭＵ（１−［（１−（シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシ）−ジメチルアミノ−モルホリノメチレン）］メタンアミニウムヘキサフルオロホスフェート）、
ＰｙＣｌｏｃｋ（６−クロロ−ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、
ＰｙＯｘＰ（Ｏ−［（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデン）アミノ］−オキシトリ（ピロリジン−１−イル）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）および
ＰｙＯｘＢ（Ｏ−［（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデン）アミノ］−オキシトリ（ピロリジン−１−イル）ホスホニウムテトラフルオロボレート）
からなる群より選択される。
【０２５５】
カルボジイミドカップリング試薬は、好ましくは、ジイソプロピル−カルボジイミド（ＤＩＣ）、ジシクロヘキシル−カルボジイミド（ＤＣＣ）および水溶性カルボジイミド（ＷＳＣＤＩ）、例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）からなる群より選択される。
【０２５６】
他のカップリング技術は、予め形成された活性エステル、例えば、ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）およびｐ−ニトロフェノール（ＨＯＮｐ）エステル、予め形成された対称無水物、非対称無水物、例えば、Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）および酸ハロゲン化物、例えば、アシルフルオリドまたはアシルクロリドを用いる。
【０２５７】
好ましいカップリング試薬は、ホスホニウムまたはウロニウムカップリング試薬、特に、ＴＣＴＵ、ＴＯＴＵまたはＰｙＢｏｐである。
【０２５８】
好ましくは、ＨＳＰＰＳにおいて用いられる前記第三級塩基の共役酸は、７．５〜１５、より好ましくは７．５〜１０のｐＫａ値を有する。前記第三級塩基は、好ましくは、トリアルキルアミン、例えば、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）またはトリエチルアミン（ＴＥＡ）、さらに、Ｎ，Ｎ’−ジ−Ｃ１〜４アルキルアニリン、例えば、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン、２，４，６−トリ−Ｃ１〜４アルキルピリジン、例えば、コリジン（２，４，６−トリメチルピリジン）、またはＮ−Ｃ１〜４アルキル−モルホリン、例えば、Ｎ−メチルモルホリンであり、ここで任意のＣ１〜４アルキルは同一であるか、または異なり、互いに独立に直鎖または分枝Ｃ１〜４アルキルである。
【０２５９】
カップリング添加剤は、好ましくは、活性化エステルを形成することができる、より好ましくは、酸性、求核性Ｎ−ヒドロキシ官能基（ここで、Ｎはイミドであるか、またはＮ−アシルもしくはＮ−アリール置換されたトリアゼノであり、トリアゼノ型カップリング添加剤は、好ましくは、Ｎ−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール誘導体（もしくは１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール誘導体）またはＮ−ヒドロキシベンゾトリアジン誘導体である）を有する、求核性ヒドロキシ化合物である。そのようなカップリング添加剤は、ＷＯ９４／０７９１０およびＥＰ  ４１０  １８２に記載されている。それらはまたスカベンジャーとしても作用するため、それらはスカベンジャーとも呼ばれる。
【０２６０】
好ましいカップリング添加剤は、Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド（ＨＯＳｕ）、６−クロロ−１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（Ｃｌ−ＨｏＢｔ）、Ｎ−ヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＯＢｔ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）およびエチル２−シアノ−２−ヒドロキシイミノアセテート（ＣＨＡ）からなる群より選択される。
【０２６１】
ＣＨＡは、商標名ＯＸＹＭＡＰＵＲＥ（登録商標）の下で入手可能である。ＣＨＡは、ベンゾトリアゾールに基づくスカベンジャーと比較してラセミ化がより抑制されるため、有効なスカベンジャーであることが証明されている。さらに、ＣＨＡは、例えば、ＨＯＢｔまたはＣｌ−ＨＯＢｔよりも爆発性が低いため、その取り扱いが有利であり、また、さらなる利点として、カップリングの進行を、反応混合物の色の変化により視覚的にモニターすることができる。
【０２６２】
好ましくは、ＨＯＢｔまたはＣＨＡ、より好ましくは、ＨＯＢｔが用いられる。
【０２６３】
好ましい態様においては、ＨＳＰＰＳ反応における試薬の組合せは、ＴＣＴＵ／Ｃｌ−ＨＯＢｔ／ＤＩＰＥＡ、ＴＯＴＵ／ＣＨＡ／ＤＩＰＥＡおよびＰｙＢｏｐ／ＨＯＢｔ／ＤＩＰＥＡからなる群より選択される。
【０２６４】
溶媒として、反応物を溶解することができる任意の不活性液体溶媒をＨＳＰＰＳにおいて用いることができる。
【０２６５】
好ましい溶媒は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ピリジン、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ジクロロエタン（ＤＣＥ）、クロロホルム、ジオキサン、テトラヒドロピラン、酢酸エチル、トルエン、アセトニトリルおよびそれらの混合物からなる群より選択される。
【０２６６】
より好ましい溶媒は、ＮＭＰ、ＤＭＦおよびそれらの混合物である。
【０２６７】
好ましくは、ＨＳＰＰＳは、０〜５０℃、より好ましくは、５〜３０℃、さらにより好ましくは、１５〜２５℃の温度で行われる。
【０２６８】
好ましくは、ＨＳＰＰＳは、大気圧で行われる。
【０２６９】
好ましくは、ＨＳＰＰＳの反応時間は、１５ｍｉｎ〜２０ｈ、より好ましくは、３０ｍｉｎ〜５ｈ、さらにより好ましくは、３０ｍｉｎ〜２ｈである。
【０２７０】
ＨＳＰＰＳの反応条件の本明細書における用語「部」は、別途記述されない場合、組み合わされたペプチド材料の重量部の倍数であることを意味する。
【０２７１】
好ましくは、１〜３０部、より好ましくは、５〜１０部の溶媒が用いられる。
【０２７２】
好ましくは、０．９〜５ｍｏｌ当量、より好ましくは、１〜１．５ｍｏｌ当量のカップリング試薬が用いられ、このｍｏｌ当量は反応性Ｃ末端カルボキシ基のｍｏｌ数に基づく。
【０２７３】
好ましくは、０．１〜５ｍｏｌ当量、より好ましくは、０．５〜１．５ｍｏｌ当量のカップリング添加剤が用いられ、このｍｏｌ当量はカップリング試薬のｍｏｌ数に基づく。
【０２７４】
好ましくは、１〜１０ｍｏｌ当量、より好ましくは、２〜３ｍｏｌ当量の第三級塩基が用いられ、このｍｏｌ当量はカップリング試薬のｍｏｌ数に基づく。
【０２７５】
方法（Ａ）に従って調製された、Ｎ末端およびＣ末端保護されたＰＥＰが標的ペプチドである場合、好ましくはＮ末端保護基およびＣ末端保護基および任意の側鎖保護基を、方法（Ａ）に従う調製の後に除去して、無保護のペプチドＰＥＰを提供する。これは通常、包括的脱保護と呼ばれる。
【０２７６】
適用されるのに必要な包括的脱保護条件は、選択されたＰＧの性質に依存する。好ましくは、含まれるＰＧは、ＰＧの性質に応じて、上記で定義された弱酸、強酸または還元切断条件下での包括的脱保護を可能にするように選択される。
【０２７７】
ＰＥＰのＣ末端保護基、すなわち、ＤＫＰ−ＰＧを、ペプチジルラジカルから各ハンドル基ＨＧを切断するために適用可能な条件によって切断することができ、これらの条件はペプチド化学において公知である。通常、その条件は、上記で定義された還元、弱酸または強酸切断条件のいずれかである。
【０２７８】
好ましくは、ハンドル基ＨＧは、ペプチジルラジカルＰＥＰから酸性条件下で切断可能となるように選択され、この場合、断片ＰＥＰ−ＮのＮ末端保護基が塩基切断型保護基または還元切断型保護基である場合、Ｎ末端保護基およびＣ末端保護基および任意の側鎖保護基は、好ましくは２つのステップで方法（Ａ）に従う調製の後に除去される；しかし、断片ＰＥＰ−ＮのＮ末端保護基が酸型除去性保護基である場合、Ｎ末端保護基およびＣ末端保護基および任意の側鎖保護基は、好ましくは１つのステップで方法（Ａ）に従う調製の後に除去される。
【０２７９】
任意の側鎖保護基は、典型的には、ＨＳＰＰＳの終了まで保持される。この脱保護反応は、用いられてきた様々な側鎖保護基に適用可能な条件下で実行することができ、これらの条件はペプチド化学において公知である。異なる型の側鎖保護基が選択される場合、それらを連続的に切断することができる。有利には、側鎖保護基は、それらが同時に切断可能であるように、より有利には、ＰＥＰのＮ末端保護基と同時に切断可能であるように選択される。
【０２８０】
通常、側鎖ＰＧは、上記で定義された強酸、弱酸または還元切断条件により切断される。
【０２８１】
本発明のさらなる対象は、ペプチドＰＥＰの調製のための式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物の使用（Ａ）であり、ここで、式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物は上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み；
好ましくは、式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物と、Ｎ末端保護されたアミノ酸またはＮ−末端保護されたＰＥＰ−Ｎとのカップリング反応によるペプチドＰＥＰの調製のための均一液相ペプチド合成における、式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物の使用（Ａ）であり、ここで、式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物は上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み、ＰＥＰ−Ｎは上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含む。
【０２８２】
使用（Ａ）は、ＨＳＰＰＳにおけるＣ−ＰＥＰの上記で定義された使用の態様である。
【０２８３】
本発明のさらなる対象は、式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物の調製のための方法（Ｂ）であり、ここで式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物は上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み、式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））；
【化１３】
0005579939.tif 000014
【０２８４】
の化合物から保護基ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）を切断することを特徴とし、
式中、
ＰＧＸａａＣは、ＳＰＰＳにおいて従来用いられるＮ末端保護基であり、塩基切断型保護基、酸切断型保護基および還元切断型保護基からなる群より選択され；
ｐｃ、ＸａａＣ、ＰＥＰ−Ｃ、ＨＧ、ｎ、ＳＧ、Ｘａａ１およびＸａａ２は上記と同じ定義を有し、また全てのそれらの好ましい態様を含み、
ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）において、指数（ｐｃ）は、ＰＥＰ−ＣのＮ末端保護基としてＰＧＸａａＣ（ｐｃ）を定義するが；
但し、ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）は、ＨＧからＰＥＰ−Ｃを切断することなくＰＥＰ−ＣからＰＧＸａａＣ（ｐｃ）を切断することができるような切断型の保護基であるように選択される。
【０２８５】
好ましくは、ＰＥＰ−Ｃが側鎖ＰＧを有する場合、ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）は、ＰＥＰ−Ｃから任意の側鎖ＰＧを切断することなく、ＰＥＰ−ＣからＰＧＸａａＣ（ｐｃ）を切断することができるような切断型の保護基であるように選択される。
【０２８６】
したがって、ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）は、ＰＥＰ−ＣのＮ末端アミノ酸残基の保護基であり、これはＮ−ＰＧの態様である。
【０２８７】
方法（Ｂ）は、上記で定義された方法（Ｃ−ＰＥＰ）に含まれる。
【０２８８】
式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物は、上記で定義されたＣ−ＰＥＰの態様である。
【０２８９】
ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）が塩基型ＰＧである場合、それは好ましくはＦｍｏｃである。
【０２９０】
ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）が強酸型ＰＧである場合、それは好ましくはＢｏｃである。
【０２９１】
ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）が弱酸型ＰＧである場合、それは好ましくはＴｒｔである。
【０２９２】
ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）が還元型ＰＧである場合、それは好ましくはＡｌｌｏｃである。
【０２９３】
ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）は、その型に応じて、強酸、弱酸、塩基または還元切断条件により切断され、これらの条件は上記で定義された通りである。
【０２９４】
本発明のさらなる対象は、式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物の調製のための方法（Ｃ）であり、式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物は上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み、方法（Ｃ）は、連続的ステップａ）およびｂ）を含み、ここで、
ステップａ）において、保護基ＰＧ２は、式（ＩＩ−ＰＧ２）
【化１４】
0005579939.tif 000015
【０２９５】
の化合物から切断され、
ここで、式（ＩＩ−ＰＧ２）において、
ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）、ＰＧＸａａＣ、ｐｃ、ＰＥＰ−Ｃ、ＨＧ、ｎ、ＳＧ、Ｘａａ１およびＸａａ２は、上記と同じ定義を有し、また全てのそれらの好ましい態様を含み；
ＰＧ２は、ペプチド化学において従来用いられるＮ末端保護基であり、塩基切断型保護基、酸切断型保護基および還元切断型保護基からなる群より選択され；
Ｘａａ２のαアミノ基は、ＰＧ２により保護され、
樹脂Ａは、ＳＰＰＳにおいて固相として従来用いられる樹脂であり；
Ｘａａ１の１−カルボキシ基は、樹脂Ａの官能基にカップリングされ；
式（ＩＩ−Ｈ）；
【化１５】
0005579939.tif 000016
【０２９６】
の化合物を提供し、
ここで、式（ＩＩ−Ｈ）において、
ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）、ＰＧＸａａＣ、ｐｃ、ＰＥＰ−Ｃ、ＨＧ、ｎ、ＳＧ、Ｘａａ１、Ｘａａ２および樹脂Ａは、上記と同じ定義を有し、また全てのそれらの好ましい態様を含み；
（２）と共に示された水素Ｈは、アミノ酸残基Ｘａａ２の無保護のαアミノ基の水素であるが；
但し、ＰＧ２は、ＨＧからＰＥＰ−Ｃを切断することなく、Ｘａａ２からＰＧ２を切断することができるような切断型の保護基であるように選択され；
ならびに
ステップｂ）において、樹脂Ａは、式（ＩＩ−Ｈ）の化合物のＸａａ２のαアミノ基と、Ｘａａ１のカルボキシル基との間の分子内環形成反応である反応（ＩＮＲＩＦＯ）によりＸａａ１から切断され、反応（ＩＮＲＩＦＯ）はＸａａ１およびＸａａ２の環状ジペプチドを形成して、式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物を提供するが；
但し、樹脂ＡとＸａａ１との間の接続は、ＨＧからＰＥＰ−Ｃを切断することなく、前記反応（ＩＮＲＩＦＯ）によりＸａａ１から樹脂Ａを切断することができるような切断条件下で切断可能であるように選択される。
【０２９７】
これは、ＰＧ２が、ＨＧからＰＥＰ−Ｃを切断することなくＸａａ２からＰＧ２を切断することができるような切断型の保護基であるように選択され、ＨＧが、Ｘａａ２からＰＧ２を切断するのに必要とされるこれらの切断条件とは異なるそのような切断条件下で切断可能であるように選択されることを意味し；
およびこれはまた、樹脂ＡとＸａａ１との間の接続、すなわち、樹脂Ａが、ＨＧからＰＥＰ−Ｃを切断することなく反応（ＩＮＲＩＦＯ）によりＸａａ１から樹脂Ａを切断することができるような切断条件下で切断可能であるように選択されることも意味する。
【０２９８】
好ましくは、ＰＥＰ−Ｃが側鎖ＰＧを有する場合、ＰＧ２は、ＰＥＰ−Ｃからいずれの側鎖ＰＧも切断することなくＸａａ２からＰＧ２を切断することができるような切断型の保護基であるように選択される。
【０２９９】
好ましくは、ＰＥＰ−Ｃが側鎖ＰＧを有する場合、樹脂ＡとＸａａ１との間の接続は、ＰＥＰ−Ｃからいずれの側鎖ＰＧも切断することなく反応（ＩＮＲＩＦＯ）によりＸａａ１から樹脂Ａを切断することができるような切断型の保護基であるように選択される。
【０３００】
式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物は、上記で定義されたＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａの態様である。
【０３０１】
例えば、式（ＩＩ−Ｈ）中のジペプチドは、上記のＤＰＲの一態様であり、これはＤＫＰ、すなわち、ジケトピペラジン残基を形成する。
【０３０２】
ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）およびＰＧ２は異なる反応条件下で切断される異なる保護基であってもよい；この場合、ＰＥＰ−ＣのＮ末端の脱保護およびＸａａ２の脱保護、すなわち、方法（Ｂ）および方法（Ｃ）は連続的に行われる。
【０３０３】
しかし、好ましくは、ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）およびＰＧ２は同一であるか、または少なくとも、同じ反応条件下で切断可能であるような異なる保護基である；この場合、ＰＥＰ−ＣのＮ末端の脱保護およびＸａａ２の脱保護、すなわち、方法（Ｂ）である、式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物からのＰＧＸａａＣ（ｐｃ）の切断、および方法（Ｃ）のステップ（ａ）である、式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物からのＰＧ２の切断は、１ステップで同時に行うことができる。
【０３０４】
ＰＧ２は、その型に応じて、強酸、弱酸、塩基または還元切断条件により切断され、これらの条件は上記で定義された通りである。
【０３０５】
好ましくは、ＰＧ２は、Ｆｍｏｃ、Ａｌｌｏｃ、Ｂｏｃ、Ｔｒｔ、Ｍｔｔ、ＭｍｔおよびＤｄｚからなる群より選択される。
【０３０６】
ＰＧ２が強酸型ＰＧである場合、それは好ましくはＢｏｃである。
【０３０７】
ＰＧ２が弱酸型ＰＧである場合、それは好ましくはＴｒｔである。
【０３０８】
ＰＧ２が還元型ＰＧである場合、それは好ましくはＡｌｌｏｃである。
【０３０９】
ＰＧ２が塩基型ＰＧである場合、それは好ましくはＦｍｏｃである。
【０３１０】
樹脂Ａは、ＳＰＰＳにおいて固相として従来用いられる樹脂であり、樹脂ＡとＸａａ１との間の結合は、ペプチドの２個のアミノ酸残基の間のアミド結合を切断しない条件下で切断することができる。
【０３１１】
好ましくは、樹脂Ａは、ＳＰＰＳにおいて固相支持体として従来用いられる官能基を有する樹脂であり、その官能基はＮＨ２またはＯＨである。
【０３１２】
好ましくは、樹脂Ａは、エステルまたはアミド結合によりＸａａ１の１−カルボン酸基にカップリングされる。
【０３１３】
より好ましくは、樹脂Ａは、エステルまたはアミド結合によりＸａａ１のカルボキシ基のＣ１原子に樹脂Ａがカップリングされるような樹脂であるように選択され、その結合はいずれも塩基、弱酸または還元切断条件下で切断可能ではない。
【０３１４】
好ましくは、樹脂Ａは、ヒドロキシメチルポリスチレン（ＨＭＰＳ）樹脂、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に基づく樹脂、ＰＥＧがＰＥＧ樹脂とは異なる樹脂上にグラフトされた樹脂、ポリスチレン樹脂、ｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール樹脂、クロロメチルポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂、ポリ（ビニルアルコール）グラフトポリ（エチレングリコール）（ＰＶＡ−ｇ−ＰＥＧ）樹脂からなる群より選択される。
【０３１５】
ＰＥＧがＰＥＧ樹脂とは異なる樹脂上にグラフトされた樹脂は、好ましくは、ポリスチレン樹脂、ｐ−ベンジルオキシベンジルアルコールまたはクロロメチルポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂上にグラフトされたＰＥＧである。
【０３１６】
より好ましくは、樹脂Ａは、ＨＭＰＳ樹脂またはクロロメチルポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂である。
【０３１７】
ＨｙｄｒｏｘｙＣｈｅｍＭａｔｒｉｘ（登録商標）樹脂は、ＣｈｅｍＭａｔｒｉｘ（登録商標）支持体を有し、これはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）支持体であり、ポリエチレングリコールに基づく樹脂の一例である。
【０３１８】
ＨｙｄｒｏｘｙＴｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）樹脂は、Ｔｅｎｔａｇｅｌ（登録商標）支持体を有し、これはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）がグラフトされた低架橋ポリスチレンマトリックスからなるグラフトコポリマーであり、ポリスチレンに基づく樹脂の一例である。
【０３１９】
ｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール樹脂は、Ｗａｎｇ樹脂と呼ばれる。
【０３２０】
クロロメチルポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂は、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ樹脂と呼ばれる。
【０３２１】
ステップ（ａ）およびステップ（ｂ）は、異なる反応条件を必要としてもよく、すなわち、ステップ（ａ）およびステップ（ｂ）を連続的に行うことができる。
【０３２２】
好ましくは、ステップ（ａ）およびステップ（ｂ）は同じ反応条件を必要とし、すなわち、ステップ（ａ）およびステップ（ｂ）を１ステップで同時に行う。
【０３２３】
好ましくは、方法（Ｂ）、すなわち、式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物からのＰＧＸａａＣ（ｐｃ）の切断、方法（Ｃ）のステップ（ａ）、すなわち、式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物からのＰＧ２の切断、および方法（Ｃ）のステップ（ｂ）、すなわち、反応（ＩＮＲＩＦＯ）は、同じ反応条件を必要とし、したがって、１ステップで同時に行うことができる。
【０３２４】
好ましくは、樹脂ＡからＸａａ１を切断する、ステップ（ｂ）、反応（ＩＮＲＩＦＯ）は、溶媒（ｂ）中で行われる。
【０３２５】
ステップ（ｂ）は、好ましくは、非プロトン化アミノ基として脱プロトン化状態にあるように、すなわち、アンモニウムイオンとして存在しないように、Ｘａａ２のαアミノ基を提供する条件で行われる。
【０３２６】
より好ましくは、ステップ（ｂ）は、少なくとも１つの塩基（ｂ）の添加により行われる。
【０３２７】
ステップ（ａ）が酸性条件で行われる場合、そのｐＨは好ましくは塩基、好ましくは第三級塩基、より好ましくは、上記のＨＳＰＰＳにおいて用いられるものの１つである第三級塩基の添加により中和される。ステップ（ｂ）の反応（ＩＮＲＩＦＯ）を誘導するために、塩基（ｂ）が添加され、好ましくは、塩基（ｂ）は第二級アミンであり、より好ましくは、前記第二級アミンの共役酸は、５．０〜１５、より好ましくは、７．５〜１０のｐＫａ値を有する。前記第二級アミンは、好ましくは、ジアルキルアミンであり、より好ましくは、それはジメチルアミン、ジ−ｎ−プロピルアミン、ジエチルアミン、α−（ｐ−トリル）ピロリン、ピロリジン、α−エチルピロリジン、α−ベンジルピロリジン、α−シクロヘキシルピロリジン、モルホリン、ピペリジン、２−メチルピペリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルヒドロキシルアミンおよびＮ−Ｃ１〜４アルキルアニリンからなる群より選択され、Ｎ−Ｃ１〜４アルキルアニリン中のＣ１〜４アルキルは、直鎖状または分枝状であり、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチルおよびイソブチルからなる群より選択され、より好ましくは、前記Ｃ１〜４アルキルはエチルである。
【０３２８】
溶媒（ｂ）として、反応物を溶解することができる任意の不活性溶媒を用いることができる。
【０３２９】
好ましくは、溶媒（ｂ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ピリジン、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ジクロロエタン（ＤＣＥ）、クロロホルム、ジオキサン、テトラヒドロピラン、酢酸エチル、トルエン、アセトニトリルおよびそれらの混合物からなる群より選択される。
【０３３０】
より好ましくは、溶媒（ｂ）は、ＮＭＰ、ＤＭＦ、ＴＨＦおよびそれらの混合物からなる群より選択される。
【０３３１】
好ましくは、ステップ（ｂ）は、０〜５０℃、より好ましくは、５〜３０℃、さらにより好ましくは、１５〜２５℃の温度で行われる。
【０３３２】
好ましくは、ステップ（ｂ）は、大気圧で行われる。
【０３３３】
好ましくは、ステップ（ｂ）の反応時間は、１ｍｉｎ〜１ｈ、より好ましくは、１ｍｉｎ〜３０ｍｉｎ、さらにより好ましくは、５ｍｉｎ〜１５ｍｉｎである。
【０３３４】
ステップ（ｂ）の本明細書における用語「部」は、処理される材料の重量部の倍数であることを意味し、これは別途記述しない限り、式（ＩＩ−Ｈ）の化合物である。
【０３３５】
好ましくは、５〜２０部、より好ましくは５〜１５部の溶媒が用いられる。
【０３３６】
好ましくは、塩基（ｂ）の量は、３０〜１重量％、より好ましくは、１５〜２重量％、さらにより好ましくは、１０〜５重量％であり、ここで重量％は式（ＩＩ−Ｈ）の化合物の総重量に基づく。
【０３３７】
本発明のさらなる対象は、式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物の調製のための方法（Ｄ）であり、式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物は上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み、反復的ＳＰＰＳサイクルの必要な、および従来のステップ、例えば、樹脂に結合したＣ末端アミノ酸のＮ末端を脱保護すること、次のアミノ酸をカップリングすること、より多くのアミノ酸をカップリングさせる必要がある場合、かくしてカップリングされたアミノ酸のＮ末端を脱保護することなどを含む、従来の固相ペプチド合成ＳＰＰＳ法による、式（ＩＩ−ＸａａＣ（１））の化合物への、ＰＥＰ−ＣのＣ末端アミノ酸を除く、式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物のＰＥＰ−Ｃのアミノ酸の連続的付加を特徴とし、
Ｘａａ（１）のＮ末端の脱保護およびＰＥＰ−ＣのＣ末端から２番目の位置のアミノ酸のカップリングからＳＰＰＳを開始し、ＰＥＰ−ＣのＣ末端から２番目の位置の前記アミノ酸は式ＰＧＸａａＣ（２）−ＸａａＣ（２）−ＯＨを有し；ならびに
ｐｃが３以上である場合、ＰＥＰ−Ｃの配列による式ＰＧＸａａＣ（ｉｉｐｐｃｃ）−ＸａａＣ（ｉｉｐｐｃｃ）−ＯＨの任意の次のアミノ酸と連続的にＳＰＰＳを継続し、ここでｉｉｐｐｃｃは３〜（ｐｃ−１）の整数であり；ならびに
ＰＥＰ−ＣのＮ末端アミノ酸の付加でＳＰＰＳを終了し、前記Ｎ−末端アミノ酸は式ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）−ＸａａＣ（ｐｃ）−ＯＨを有し；
【化１６】
0005579939.tif 000017
【０３３８】
式中、
ＰＧＸａａＣ（ｐｃ）、ＰＧＸａａＣ、ＸａａＣ、ｐｃ、ＰＥＰ−Ｃ、ＨＧ、ｎ、ＳＧ、ＰＧ２、Ｘａａ１、Ｘａａ２および樹脂Ａは、上記と同じ定義を有し、また全てのそれらの好ましい態様を含み；
ＰＧＸａａＣ（１）、ＰＧＸａａＣ（２）およびＰＧＸａａＣ（ｉｉｐｐｃｃ）において、指数（１）、（２）および（ｉｉｐｐｃｃ）は、ＰＥＰ−Ｃのそれぞれのアミノ酸残基ＸａａＣのアミノ基の保護基としてそれぞれのＰＧＸａａＣを定義し；
ＸａａＣ（１）、ＸａａＣ（２）およびＸａａＣ（ｉｉｐｐｃｃ）において、指数（１）、（２）および（ｉｉｐｐｃｃ）は、ＰＥＰ−Ｃのそれぞれのアミノ酸残基ＸａａＣとしてそれぞれのＸａａＣを定義するが；
但し、ＰＧＸａａＣ（１）、ＰＧＸａａＣ（２）および任意のＰＧＸａａＣ（ｉｉｐｐｃｃ）は、ＰＧ２とは異なる保護基であり、それらはＸａａ２からＰＧ２を切断するのに必要とされるものとは異なる反応条件下で切断可能であり、
さらに但し、ＰＧＸａａＣ（１）を切断するのに用いられる反応条件、前記２番目のアミノ酸のＮ末端保護基ＰＧＸａａＣ（２）を切断するのに用いられる反応条件および前記次のアミノ酸の任意のＮ−末端保護基ＰＧＸａａＣ（ｉｉｐｐｃｃ）を切断するのに用いられる反応条件は、Ｘａａ２からＰＧ２を切断せず；
さらに但し、Ｘａａ１と樹脂Ａとの間の結合は、ＳＰＰＳの間に切断されないような型のものである。
【０３３９】
好ましくは、任意のＸａａＣが側鎖ＰＧを有する場合、任意のＰＧＸａａＣは、任意の側鎖保護されたＸａａＣから任意の側鎖ＰＧを切断することなく、任意のＰＧＸａａＣをそのアミノ酸ＸａａＣから切断することができるような切断型の保護基であるように選択される。
【０３４０】
したがって、ＰＧＸａａＣ（１）およびＰＧＸａａＣ（２）は同一であるか、または異なり、互いに独立にＳＰＰＳにおいて従来用いられるＮ末端保護基であり、それぞれＰＥＰ−Ｃのアミノ酸ＸａａＣ（１）およびＸａａＣ（２）のＮ末端保護基であり、ＰＥＰ−Ｃの次のアミノ酸はＳＰＰＳにより付加され、塩基切断型保護基、酸切断型保護基および還元切断型保護基からなる群より選択される。
【０３４１】
ｐｃが２である場合、ＰＥＰ−Ｃはジペプチジルラジカルであり、式ＰＧＸａａＣ（２）−ＸａａＣ（２）−ＯＨを有する、ＰＥＰ−ＣのＣ末端から２番目の位置の前記アミノ酸はＰＧＸａａＣ（ｐｃ）−ＸａａＣ（ｐｃ）−ＯＨと同一であり、前記アミノ酸ＰＧＸａａＣ（ｉｉｐｐｃｃ）−ＸａａＣ（ｉｉｐｐｃｃ）−ＯＨが用いられない。
【０３４２】
構成要素として個々のアミノ酸のみを用いる代わりに、オリゴペプチド、好ましくは、ジ−またはトリペプチド、より好ましくは、ジペプチドをＳＰＰＳにおける構成要素として用いることもできる。これは、例えば、シュードプロリンが側鎖保護基として用いられる場合に公知であり、この場合、従来のように各ジペプチドが構成要素としてＳＰＰＳにおいて用いられる。
【０３４３】
好ましくは、ＰＧ２はＦｍｏｃまたはＡｌｌｏｃであり、またＰＧＸａａＣ（１）、ＰＧＸａａＣ（２）および任意のＰＧＸａａＣ（ｉｉｐｐｃｃ）はＢｏｃである。
【０３４４】
別の好ましい態様においては、ＰＧ２は、Ｂｏｃ、Ｔｒｔ、Ｍｔｔ、Ｍｍｔ、ＤｄｚおよびＡｌｌｏｃからなる群より選択され、ＰＧＸａａＣ（１）、ＰＧＸａａＣ（２）および任意のＰＧＸａａＣ（ｉｉｐｐｃｃ）はＦｍｏｃである。
【０３４５】
より好ましくは、ＰＧ２はＴｒｔ、ＢｏｃまたはＡｌｌｏｃであり、ＰＧＸａａＣ（１）、ＰＧＸａａＣ（２）および任意のＰＧＸａａＣ（ｉｉｐｐｃｃ）はＦｍｏｃである。
【０３４６】
さらにより好ましくは、ＰＧ２はＴｒｔまたはＡｌｌｏｃであり、ＰＧＸａａＣ（１）、ＰＧＸａａＣ（２）および任意のＰＧＸａａＣ（ｉｉｐｐｃｃ）はＦｍｏｃである。
【０３４７】
ＳＰＰＳのための典型的な反応条件およびパラメータおよび試薬および標準的なプロトコルは当業界で公知であり、例えば、Ｌｌｏｙｄ−Ｗｉｌｌｉａｍｓら、「Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、１９９７またはＣｈａｎら、「Ｆｍｏｃ  ｓｏｌｉｄ  ｐｈａｓｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２０００を参照されたい。
【０３４８】
ＳＰＰＳは、ペプチド化学において公知の標準的な方法により実行することができる。通常、ＳＰＰＳにおいては、アミノ酸はＣ末端からＮ末端に付加される。かくして、所望のペプチド断片のＣ末端アミノ酸またはＣ末端に近いペプチド基が最初に固相支持体、樹脂に付加される。Ｃ末端のカルボキシ基を樹脂支持体上の相補的官能基に反応させることによりこれを行い、Ｎ末端アミノ基は通常、望ましくない副反応を防止するための保護基により保護される。付加しようとする任意のアミノ酸またはペプチド基が側鎖上に反応基を有する場合、それらは同様に望ましくない副反応を回避するために保護基により保護される。１番目のアミノ酸またはペプチド断片を固相支持体にカップリングさせた後、Ｎ末端保護基は除去され、次に、Ｎ末端保護されたアミノ酸またはペプチド断片が１番目のものにカップリングされる。次いで、Ｎ末端保護基の除去およびカップリングの連続サイクルにおいて、アミノ酸またはペプチド基は、所望のペプチジルラジカルが形成されるまで、以前に伸長されたペプチジルラジカルに連続的に結合される。したがって、固相合成の生成物は、固相支持体上に結合したペプチジルラジカルである。
【０３４９】
ＳＰＰＳのための様々な固相支持体が公知である。好ましくは、固相支持体は、１種以上のポリマー、コポリマーまたはポリマーの組合せ、例えば、ポリアミド、ポリスルファミド、置換ポリエチレン、ポリエチレングリコール、フェノール樹脂、多糖、またはポリスチレンから作られた樹脂を含む。
【０３５０】
固相支持体は、ペプチド合成において用いられる溶媒に対して十分に不溶性であり、不活性であるべきである。
【０３５１】
固相支持体は、典型的には、１番目のアミノ酸または１番目のペプチドが最初にカップリングされる官能基を有する連結部分を含む。ペプチジルラジカルは、支持体からペプチドを遊離させるための適切な反応条件下で固相支持体から切断される。好適な固相支持体は、光切断性、好ましくはＴＦＡもしくはＨＦによる酸切断性、フッ素イオン切断性、好ましくはＰｄ（０）触媒による還元切断性；求核切断性またはラジカルによる切断性であるリンカーを有してもよい。好ましくは、固相支持体の連結部分は、ペプチジルラジカルが、ペプチドの側鎖保護基が除去されないような条件下で切断可能であるか、またはペプチジルラジカルが、ペプチドの側鎖保護基が同様に同時に、また完全に除去されるような条件下で切断可能であるように選択される。
【０３５２】
好ましくは、ＳＰＰＳは酸切断性固相支持体を用いて行われ、より好ましくは、固相支持体の連結部分は、トリチル基を含み、例えば、塩素化トリチル樹脂、好ましくは、２−クロロトリチルクロリド（２−ＣＴＣ）樹脂、または４−メチルトリチルクロリド樹脂、４−メトキシトリチルクロリド樹脂、４−アミノブタン１（aminobutanl）−オール２−クロロトリチル樹脂、４−アミノメチルベンゾイル−２−クロロトリチル樹脂、３−アミノプロパン−１−オール２−クロロトリチル樹脂、ブロモ酢酸２−クロロトリチル樹脂、シアノ酢酸２−クロロトリチル樹脂、４−シアノ安息香酸２−クロロトリチル樹脂、グリシノール−２−クロロトリチル樹脂、プロピオニック２−クロロトリチル樹脂、エチレングリコール−２−クロロトリチル樹脂、Ｎ−Ｆｍｏｃヒドロキシルアミン２−クロロトリチル樹脂またはヒドラジン２−クロロトリチル樹脂である。他の好ましい固相支持体は、ポリスチレン樹脂、またはＣ末端カルボキシ基に結合する官能基を有する、スチレンとジビニルベンゼンとのコポリマーに基づく樹脂、好ましくは、４−ヒドロキシメチルフェニルオキシメチル固定基を含むスチレンとジビニルベンゼンとのコポリマーを含むＷａｎｇ樹脂、さらに４−ヒドロキシメチル−３−メトキシフェノキシ酪酸樹脂などの樹脂である。
【０３５３】
好ましい樹脂は、Ｗａｎｇ、（２−ＣＴＣ）および４−ヒドロキシメチル−３−メトキシフェノキシ酪酸樹脂である。
【０３５４】
固相合成のための樹脂を調製するために、樹脂を１種以上の好適な溶媒で予備洗浄することができる。
【０３５５】
ＳＰＰＳにおいて好ましく用いられる溶媒として、ＨＳＰＰＳの下での上記の好ましい溶媒をＳＰＰＳにおいても用いることができる。より好ましい溶媒は、ＮＭＰ、ＤＭＦ、ＤＣＭ、それらの混合物である。
【０３５６】
より好ましい混合物は、９：１〜１：９、より好ましくは、４：１〜１：４の体積比のＤＭＦ：ＤＣＭである。
【０３５７】
ＳＰＰＳは、好ましくは、望ましくない副反応を回避するための側鎖保護基により保護される、反応性官能基を有するアミノ酸の任意の側鎖を用いて行われる。側鎖保護基の性質および使用は、当業界で周知である。
【０３５８】
側鎖保護基の選択は、様々な因子、例えば、実施される合成の型、ペプチドがかけられるプロセス、および所望の中間生成物または最終生成物に依存し得る。側鎖保護基の性質も、アミノ酸自体の性質に依存する。一般に、固相合成の間にα−アミノ基の脱保護中に除去されない側鎖保護基が選択される。したがって、αアミノ基の保護基および任意の側鎖保護基は、典型的には、同じではなく、好ましくは、それらは直交系である。
【０３５９】
用語「直交系」は、Ｂａｒａｎａｙ，Ｇ．およびＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｂ．，ＪＡＣＳ，１９７７，９９，２２，７３６３〜７３６５に定義されている。
【０３６０】
側鎖保護基の例としては、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔＢｕ）、トリフェニルメチル（Ｔｒｔ）、テトラヒドロピラニル、ベンジルエーテル（Ｂｚｌ）、２，６−ジクロロベンジルエーテル（ＤＣＢ）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、４−ニトロベンゼンスルホニル（Ｎｓ）、ｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）、ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル（Ｐｂｆ）、１，２−ジメチルインドール−３−スルホニル（ＭＩＳ）、アダマンチルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、メチルエステル、エチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＯｔＢｕ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、ｔｅｒｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｏｃ）、芳香族または脂肪族ウレタン型保護基、光不安定基、例えば、ニトロベラトリルオキシカルボニル（ＮＶＯＣ）；およびフッ化物不安定基、例えば、トリメチルシリルオキシカルボニル（ＴＥＯＣ）が挙げられる。
【０３６１】
好ましい側鎖基は、ｔＢｕ、Ｔｒｔ、Ｂｏｃ、Ｔｏｓ、Ｐｂｆ、ＯｔＢｕおよびＺである。
【０３６２】
好ましくは、側鎖保護基と共に一般的に用いられるアミノ酸を含有する官能基は、Ａｒｇ（Ｐｂｆ）、Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）、Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）、Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）、Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）、Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ｓｅｒ（ｔＢｕ）、Ｔｈｒ（ｔＢｕ）、Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）およびＴｙｒ（ｔＢｕ）であり、Ａｒｇはまた側鎖保護基なしに用いられることもある。
【０３６３】
例えば、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨは、式（ＡＲＧ−ＰＢＦ）
【化１７】
0005579939.tif 000018
【０３６４】
を有する。
【０３６５】
Ｎ末端保護基は、付加される次のアミノ酸の、増殖中のペプチド鎖への付加の前に、脱保護反応において除去されるが、ペプチドが支持体から切断される場合に維持することができる。Ｎ末端保護基の選択は、様々な因子、例えば、実施される合成の型および所望の中間生成物または最終生成物に依存し得る。
【０３６６】
アミノ末端保護基の例としては、
（１）アシル型保護基、例えば、ホルミル、アクリリル（Ａｃｒ）、ベンゾイル（Ｂｚ）およびアセチル（Ａｃ）；
（２）芳香族ウレタン型保護基、例えば、ベンジルオキシカルボニルＺおよび置換されたＺ、例えば、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル；
（３）脂肪族保護基、例えば、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、２−フェニルプロピル（２）−オキシカルボニル（Ｐｏｃ）、２−（４−ビフェニリル）−プロピル（２）オキシカルボニル（Ｂｐｏｃ）、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）；
（４）シクロアルキルウレタン型保護基、例えば、９−フルオレニル−メチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、およびシクロヘキシルオキシカルボニル；
（５）チオウレタン型保護基、例えば、フェニルチオカルボニル
が挙げられる。
【０３６７】
好ましいＮ末端保護基は、Ｆｍｏｃ、Ｂｐｏｃ、ＰｏｃおよびＢｏｃである。
【０３６８】
樹脂からの保護された状態の得られたペプチドの切断が穏やかな酸性切断剤を用いて実行するのが比較的容易であるため、ＦｍｏｃまたはＦｍｏｃ様化合物が固相ペプチド合成にとって非常に好ましい。この種類の切断反応は、得られる副生成物、不純物などに関して比較的クリーンである。さらに、Ｎ末端のＦｍｏｃ保護基は、直交系であるために上記の側鎖保護基と良好に適合する。
【０３６９】
ＳＰＰＳにおけるカップリングは通常、好ましくは第三級塩基の存在下、さらに好ましくはカップリング添加剤の存在下でカップリング試薬を用いて行われ、さらに好ましくは、カップリング試薬および任意の他の化合物は上記のＳＰＰＳ溶媒中に溶解される。
【０３７０】
ＳＰＰＳおよびＨＳＰＰＳのための反応条件および反応試薬は、類似することが多い。
【０３７１】
ＳＰＰＳにおいて用いられる典型的なカップリング試薬は、ホスホニウムおよびウロニウム塩、混合無水物、カルボジイミド、他のアシル化剤、例えば、活性化エステルまたは酸ハロゲン化物、および活性化ベンゾトリアジン誘導体である。
【０３７２】
ホスホニウムおよびウロニウム塩は、好ましくは上記のＨＳＰＰＳにおいて用いられるものである。
【０３７３】
混合無水物は、例えば、プロパンホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）である。
【０３７４】
カルボジイミドカップリング試薬は、好ましくは、上記のＨＳＰＰＳにおいて用いられるものである。
【０３７５】
活性化エステルは、例えば、イソブチル−クロロホルミエート（ＩＣＢＦ）である。
【０３７６】
活性化ベンゾトリアジン誘導体は、例えば、３−（ジエトキシホスホリルオキシ）−１，２，３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オン（ＤＥＰＢＴ）である。
【０３７７】
第三級塩基は、好ましくは上記のＨＳＰＰＳにおいて用いられるものの１つである。
【０３７８】
ＳＰＰＳにおいて用いられるカップリング添加剤は、上記のＨＳＰＰＳにおいて用いられるものである。
【０３７９】
用いられる２番目およびその後のアミノ酸の量は通常、樹脂支持体上での第１のカップリング反応により達成される充填率と比較して１〜３ｍｏｌ当量、好ましくは、１．３〜３ｍｏｌ当量、より好ましくは、１．５〜３ｍｏｌ当量である。
【０３８０】
好ましくは、ＳＰＰＳは、０〜５０℃、より好ましくは、５〜３０℃、さらにより好ましくは、１５〜２５℃の温度で行われる。
【０３８１】
好ましくは、ＳＰＰＳは、大気圧で行われる。
【０３８２】
好ましくは、ＳＰＰＳのための反応時間は、１５ｍｉｎ〜２０ｈ、より好ましくは、３０ｍｉｎ〜５ｈ、さらにより好ましくは、３０ｍｉｎ〜２ｈである。
【０３８３】
ＳＰＰＳの反応条件の本明細書における用語「部」は、別途記述しない場合、固相支持体材料の重量部の倍数であることを意味する。
【０３８４】
好ましくは、１〜３０部、より好ましくは、５〜１０部の溶媒が用いられる。
【０３８５】
好ましくは、０．９〜５ｍｏｌ当量、より好ましくは、１〜１．５ｍｏｌ当量のカップリング試薬が用いられ、そのｍｏｌ当量は、反応性Ｃ末端カルボキシ基のＳＰＰＳの場合、反応性カルボキシ基のｍｏｌ数に基づく。
【０３８６】
好ましくは、０．１〜５ｍｏｌ当量、より好ましくは、０．５〜１．５ｍｏｌ当量のカップリング添加剤が用いられ、そのｍｏｌ当量はカップリング試薬のｍｏｌ数に基づく。
【０３８７】
好ましくは、１〜１０ｍｏｌ当量、より好ましくは、２〜３ｍｏｌ当量の第三級塩基が用いられ、そのｍｏｌ当量はカップリング試薬のｍｏｌ数に基づく。
【０３８８】
これらのＳＰＰＳ条件は、一般的な条件であり、カルボキシ基を含む構成要素を、アミノ基を含む反応パートナーにカップリングさせるのに適用できる。ＳＰＰＳの場合、カルボキシ基を含む構成要素は、カップリングしようとするＮ末端保護されたアミノ酸であり、アミノ基を含む反応パートナーは、支持体材料に接続された、Ｃ末端アミノ酸または増殖中のペプチド鎖である。
【０３８９】
これは、用いられるカルボキシ基を含む構成要素の量が通常はアミノ基を含む反応パートナーのｍｏｌ数と比較して１〜３ｍｏｌ当量、好ましくは１．３〜３ｍｏｌ当量、より好ましくは１．５〜３ｍｏｌ当量であることを意味する。
【０３９０】
本発明のさらなる対象は、式（ＩＩ−ＸａａＣ（１））の化合物の調製のための方法（Ｅ）であり、式（ＩＩ−ＸａａＣ（１））の化合物は上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み、
アミノ酸ＰＧＸａａＣ（１）−ＸａａＣ（１）−ＯＨの、式（Ｉ−ＨＧ）
【化１８】
0005579939.tif 000019
【０３９１】
の化合物へのカップリングを特徴とし；
式中、
（３）と共に示された水素は、ＨＧの無保護の官能基の水素であり；
ＰＧＸａａＣ（１）、ＸａａＣ（１）、ＰＧＸａａＣ、ＸａａＣ、ＨＧ、ｎ、ＳＧ、ＰＧ２、Ｘａａ１、Ｘａａ２および樹脂Ａは上記と同じ定義を有し、また全てのそれらの好ましい態様を含む。
【０３９２】
式（Ｉ−ＨＧ）の場合、ＨＧの上記定義のいずれかにおける（＊）はここで、式（Ｉ−ＨＧ）においては（３）と共に示された水素とＨＧとの間の結合を示す。
【０３９３】
方法（Ｅ）は、上記で定義されたステップ（ｉ）と同様である。
【０３９４】
ＨＧが、Ｔ１−１がＮＨである場合の式（ＨＧＦ−Ｉ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＩ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＩＩ）のハンドル基および式（ＨＧＦ−ＶＩ）のハンドル基からなる群より選択されるハンドル基である場合、（３）と共に示された水素は、ＨＧの末端窒素に接続しており、方法（Ｅ）のための反応条件およびパラメータおよび試薬および標準的なプロトコルは、好ましくはＳＰＰＳについて上記されたものであり；カルボキシ基を含む構成要素はアミノ酸ＰＧＸａａＣ（１）−ＸａａＣ（１）−ＯＨであり、アミノ基を含む反応パートナーは式（Ｉ−ＨＧ）の化合物であり、これらは支持体材料に接続される。
【０３９５】
ＨＧが、Ｔ１−１がＯである場合の式（ＨＧＦ−Ｉ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＶ）のハンドル基および式（ＨＧＦ−Ｖ）のハンドル基からなる群より選択されるハンドル基である場合、（３）と共に示された水素は、ＨＧの末端酸素に接続しており、好ましくは、方法（Ｅ）によるカップリングは、溶媒（Ｅ−ＯＨ）中で用いる、１種以上のカップリング試薬（Ｅ−ＯＨ）を用いる方法（Ｅ−ＯＨ）に従って行われ、好ましくは、１種以上のカップリング添加剤（Ｅ−ＯＨ）の存在下で行われる。
【０３９６】
好ましいカップリング試薬（Ｅ−ＯＨ）は、カルボジイミドカップリング試薬（Ｅ−ＯＨ）である。
【０３９７】
カルボジイミドカップリング試薬（Ｅ−ＯＨ）は、好ましくは、ジイソプロピル−カルボジイミド（ＤＩＣ）、ジシクロヘキシル−カルボジイミド（ＤＣＣ）および水溶性カルボジイミド（ＷＳＣＤＩ）、例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）からなる群より選択される。
【０３９８】
好ましいカップリング試薬（Ｅ−ＯＨ）は、ＤＩＣである。
【０３９９】
カップリング添加剤（Ｅ−ＯＨ）は、好ましくは、ＤＭＡＰまたは活性化エステルを形成することができる求核ヒドロキシ化合物、より好ましくは、Ｎがイミドであるか、もしくはＮ−アシルもしくはＮ−アリール置換トリアゼノである酸性の求核Ｎ−ヒドロキシ官能基を有する求核ヒドロキシ化合物であり、トリアゼノ型カップリング添加剤は、好ましくは、Ｎ−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール誘導体（もしくは１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール誘導体）またはＮ−ヒドロキシベンゾトリアジン誘導体である。そのようなカップリング添加剤（Ｅ−ＯＨ）は、ＷＯ９４／０７９１０およびＥＰ  ４１０１８２に記載されている。それらはまたスカベンジャーとしても働くため、それらはスカベンジャーとも呼ばれる。
【０４００】
好ましいカップリング添加剤（Ｅ−ＯＨ）は、ＤＭＡＰ、Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド（ＨＯＳｕ）、６−クロロ−１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（Ｃｌ−ＨｏＢｔ）、Ｎ−ヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＯＢｔ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）およびエチル２−シアノ−２−ヒドロキシイミノアセテート（ＣＨＡ）からなる群より選択される。
【０４０１】
ＣＨＡは、商標名ＯＸＹＭＡＰＵＲＥ（登録商標）の下で入手可能である。ＣＨＡは、ベンゾトリアゾールに基づくスカベンジャーと比較してラセミ化がより抑制されるため、有効なスカベンジャーであることが証明されている。さらに、ＣＨＡは、例えば、ＨＯＢｔまたはＣｌ−ＨＯＢｔよりも爆発性が低いため、その取り扱いが有利であり、さらなる利点として、カップリングの進行を反応混合物の色の変化により視覚的にモニターすることができる。
【０４０２】
好ましくは、ＤＭＡＰはカップリング添加剤（Ｅ−ＯＨ）として用いられる。
【０４０３】
溶媒として、任意の不活性液体溶媒（Ｅ−ＯＨ）を用いることができる。
【０４０４】
好ましい溶媒（Ｅ−ＯＨ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ピリジン、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ジクロロエタン（ＤＣＥ）、クロロホルム、ジオキサン、テトラヒドロピラン、酢酸エチル、トルエン、アセトニトリルおよびそれらの混合物からなる群より選択される。
【０４０５】
より好ましい溶媒（Ｅ−ＯＨ）は、ＮＭＰ、ＤＭＦ、ＤＣＭおよびそれらの混合物である。
【０４０６】
好ましくは、方法（Ｅ−ＯＨ）によるカップリングは、０〜５０℃、より好ましくは５〜３０℃、さらにより好ましくは１５〜２５℃の温度で行われる。
【０４０７】
好ましくは、方法（Ｅ−ＯＨ）によるカップリングは、大気圧で行われる。
【０４０８】
好ましくは、方法（Ｅ−ＯＨ）によるカップリングの反応時間は、１５ｍｉｎ〜２０ｈ、より好ましくは、３０ｍｉｎ〜５ｈ、さらにより好ましくは、３０ｍｉｎ〜２ｈである。
【０４０９】
方法（Ｅ−ＯＨ）によるカップリングの反応条件の本明細書における用語「部」は、別途記述しない場合、組み合わされた固相支持体材料の重量部の倍数であることを意味する。
【０４１０】
好ましくは、１〜３０部、より好ましくは５〜１０部の溶媒（Ｅ−ＯＨ）が方法（Ｅ−ＯＨ）によるカップリングにおいて用いられる。
【０４１１】
好ましくは、０．１〜５ｍｏｌ当量、より好ましくは１〜１．５ｍｏｌ当量のカップリング試薬（Ｅ−ＯＨ）が方法（Ｅ−ＯＨ）によるカップリングにおいて用いられ、そのｍｏｌ当量はＨＧの反応基のｍｏｌ数に基づく。
【０４１２】
好ましくは、０．１〜５ｍｏｌ当量、より好ましくは０．５〜１．５ｍｏｌ当量のカップリング添加剤（Ｅ−ＯＨ）が方法（Ｅ−ＯＨ）によるカップリングにおいて用いられ、そのｍｏｌ当量はカップリング試薬（Ｅ−ＯＨ）のｍｏｌ数に基づく。
【０４１３】
それぞれ方法（Ｅ）および方法（Ｅ−ＯＨ）において、好ましくは０．１〜５ｍｏｌ当量、より好ましくは１〜１．５ｍｏｌ当量のＰＧＸａａＣ（１）−ＸａａＣ（１）−ＯＨが用いられ、そのｍｏｌ当量はＨＧの反応基のｍｏｌ数に基づく。
【０４１４】
ＰＧＸａａＣ（１）−ＸａａＣ（１）−ＯＨのカップリング後に未反応のまま残存するＨＧの反応基は、好ましくはキャップされ、好ましくは、そのキャッピングは無水酢酸を用いて行われる。
【０４１５】
方法（Ｅ−ＯＨ）のためのこれらの条件は一般的な条件であり、カルボキシ基を含む構成要素をＯＨまたはＳＨ基を含む反応パートナーにカップリングさせるのに適用できる。方法（Ｅ−ＯＨ）の場合、カルボキシ基を含む構成要素はアミノ酸ＰＧＸａａＣ（１）−ＸａａＣ（１）−ＯＨであり、ＯＨまたはＳＨ基を含む反応パートナーは式（Ｉ−ＨＧ）の化合物である。
【０４１６】
本発明のさらなる対象は、式（Ｉ−ＨＧ）の化合物の調製のための方法（Ｆ）であり、式（Ｉ−ＨＧ）の化合物は上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み、方法（Ｆ）は、ｎが０である場合、ステップ（Ｆ１Ａ）を含むか；または方法（Ｆ）は、ｎが１である場合、ステップ（Ｆ３Ａ）およびステップ（Ｆ３Ｂ）を含み、ステップ（Ｆ３Ｂ）はステップ（Ｆ３Ａ）の後に行われるか；または方法（Ｆ）は、ステップ（Ｆ４）を含み；ここで、ｎは上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み；
ここで、
ステップ（Ｆ３Ａ）は、式（Ｉ−ＰＧ２）
【化１９】
0005579939.tif 000020
【０４１７】
（式中、
ＰＧ２、Ｘａａ１、Ｘａａ２および樹脂Ａは上記と同じ定義を有し、また全てのそれらの好ましい態様を含み；
（４）と共に示されたＨはＦＧの水素であり、ＦＧは上記で定義された通りであり、また上記で定義された全てのその好ましい態様を含む）
の化合物と、化合物ＳＧｒｏｕｐとのカップリング反応（Ｆ３Ａ−Ｃｏｕｐ）を含み；
化合物ＳＧｒｏｕｐは、２個の反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮおよびＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＣを有する、ペプチド化学において用いられる従来の構成要素であり、反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮはＯＨ、ＳＨまたはＮＨ２であり、ペプチド合成におけるアミノ酸構成要素のαアミノ基と似ている官能基として用いられ、好適な保護基ＰＧＳＧにより保護することができ、反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＣはペプチド合成におけるアミノ酸構成要素のカルボン酸基と似ている官能基として用いられ；
ＰＧＳＧは、アミノ酸のαアミノ基またはペプチドのＮ末端を保護するためにペプチド化学において従来用いられる保護基であり、塩基切断型保護基、酸切断型保護基および還元切断型保護基からなる群より選択され；
化合物ＳＧｒｏｕｐは、ＳＧの前駆体であり、ＳＧは上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み；
化合物ＳＧｒｏｕｐの反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮが保護基ＰＧＳＧにより保護される場合、ステップ（Ｆ３Ａ）後の連続ステップ（Ｆ−ＣｏｎＣ）において、ＰＧＳＧはＳＧから切断されるが；
但し、ＰＧＳＧはＰＧ２とは異なり、ＰＧＳＧはＸａａ２からＰＧ２を切断するのに必要とされるものとは異なる反応条件下で切断可能であり、
さらに但し、ＰＧＳＧを切断するのに用いられる反応条件はＸａａ２からＰＧ２を切断せず；
さらに但し、ステップ（Ｆ−ＣｏｎＣ）においてＰＧＳＧを切断するのに用いられる反応条件は樹脂ＡからＸａａ１を切断せず；
式（Ｉ−ＳＧ）；
【化２０】
0005579939.tif 000021
【０４１８】
（式中、
ＳＧ、ＰＧ２、Ｘａａ１、Ｘａａ２および樹脂Ａは上記と同じ定義を有し、また全てのそれらの好ましい態様を含み；
（５）と共に示されたＨは反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮの水素である）
の化合物を提供し、
ステップ（Ｆ３Ｂ）は、式（Ｉ−ＳＧ）の化合物と化合物ＨＧｒｏｕｐとのカップリング反応（Ｆ３Ｂ−Ｃｏｕｐ）であり；
化合物ＨＧｒｏｕｐは、２個の反応性官能基ＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮおよびＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＣを有する、ペプチド化学において用いられる従来の構成要素であり、反応性官能基ＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮはＯＨ、ＳＨまたはＮＨ２であり、ペプチド合成においてアミノ酸構成要素のαアミノ基と似ている官能基として用いられ、好適な保護基ＰＧＨＧにより保護することができ、反応性官能基ＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＣはペプチド合成におけるアミノ酸構成要素のカルボン酸基と似ている官能基として用いられ；
ＰＧＨＧは、アミノ酸のαアミノ基またはペプチドのＮ末端を保護するためにペプチド化学において従来用いられる保護基であり、塩基切断型保護基、酸切断型保護基および還元切断型保護基からなる群より選択され；
化合物ＨＧｒｏｕｐはＨＧの前駆体であり、ＨＧは上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み；
ステップ（Ｆ１Ａ）は、式（Ｉ−ＰＧ２）の化合物と化合物ＨＧｒｏｕｐとのカップリング反応（Ｆ１Ａ−Ｃｏｕｐ）を含み、化合物ＨＧｒｏｕｐは上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み；
化合物ＨＧｒｏｕｐの反応性官能基ＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮが保護基ＰＧＨＧにより保護される場合、ステップ（Ｆ３Ｂ）後またはステップ（Ｆ１Ａ）後の連続ステップ（Ｆ−ＣｏｎＡ）において、ＰＧＨＧはＨＧから切断されるが；
但し、ＰＧＨＧはＰＧ２とは異なる保護基であり、ＰＧＨＧはＸａａ２からＰＧ２を切断するのに必要とされるものとは異なる反応条件下で切断可能であり、
さらに但し、ＰＧＨＧを切断するのに用いられる反応条件はＸａａ２からＰＧ２を切断せず；
さらに但し、ステップ（Ｆ−ＣｏｎＡ）においてＰＧＨＧを切断するのに用いられる反応条件は樹脂ＡからＸａａ１を切断せず；
ステップ（Ｆ４）は、式（ｐＤＫＰ）
【化２１】
0005579939.tif 000022
【０４１９】
（式中、
ＨＧ、ｎ、ＳＧ、ＰＧ２、Ｘａａ１およびＸａａ２は上記と同じ定義を有し、また全てのそれらの好ましい態様を含み；
樹脂Ａは上記と同じ定義を有し、また全てのその好ましい態様を含む）
の化合物と、樹脂Ａとのカップリング反応を含み；
Ｈ−ＰＧＨＧは、反応性官能基ＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮがＯＨまたはＳＨである場合、水素であり；
Ｈ−ＰＧＨＧは、反応性官能基ＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮがＮＨ２である場合、保護基ＰＧＨＧであり；
ＰＧＨＧは上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み；
Ｈ−ＰＧＨＧがＰＧＨＧである場合、反応Ｆ４後の連続ステップ（Ｆ−ＣｏｎＢ）において、ＰＧＨＧはＨＧから切断されるが；
但し、ＰＧＨＧはＰＧ２とは異なり、ＰＧＨＧはＸａａ２からＰＧ２を切断するのに必要とされるものとは異なる反応条件下で切断可能であり、
さらに但し、ＰＧＨＧを切断するのに用いられる反応条件はＸａａ２からＰＧ２を切断せず；
さらに但し、ステップ（Ｆ−ＣｏｎＢ）においてＰＧＨＧを切断するのに用いられる反応条件は樹脂ＡからＸａａ１を切断しない。
【０４２０】
式（ｐＤＫＰ）の化合物は、Ｘａａ１の遊離カルボン酸基でＣ末端で終わる。
【０４２１】
化合物ＨＧｒｏｕｐは、方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）または方法（ＤＫＰ−Ｌ）において構成要素として用いられる上記のＨＧの態様である。
【０４２２】
化合物ＳＧｒｏｕｐは、方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）または方法（ＤＫＰ−Ｌ）において構成要素として用いられる上記のＳＧの態様である。
【０４２３】
式（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ−Ｆ）の化合物および式（Ｉ−ＨＧ）の化合物は、上記で定義されたＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａの態様であり、
【化２２】
0005579939.tif 000023
【０４２４】
（式中、Ｈ−ＰＧＨＧ、ＨＧ、ＳＧ、ｎ、ＰＧ２、Ｘａａ２、Ｘａａ１および樹脂Ａは上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含む）
である。
【０４２５】
式（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ−Ｆ）の化合物は、必要に応じて、連続ステップ（Ｆ−ＣｏｎＡ）もしくは（Ｆ−ＣｏｎＣ）を含む、反応Ｆ１もしくはＦ３の生成物であるか、または必要に応じて、連続ステップ（Ｆ−ＣｏｎＢ）を含む、反応Ｆ４の生成物である。
【０４２６】
式（ｐＤＫＰ）の化合物は、上記で定義されたＤＫＰ−Ｌの態様である。
【０４２７】
式（Ｉ−ＰＧ２）の化合物および式（Ｉ−ＳＧ）の化合物は、上記で定義された方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）の中間体の態様である。
【０４２８】
ステップ（Ｆ３Ａ）の場合またはステップ（Ｆ１Ａ）の場合、およびＦＧがＮＨ２である場合、カップリング反応（Ｆ３Ａ−Ｃｏｕｐ）またはカップリング反応（Ｆ１Ａ−Ｃｏｕｐ）は、好ましくは、ＳＰＰＳについて上記され、また全ての記載された好ましい態様を含む反応条件およびパラメータおよび試薬およびプロトコルの下で行われ、記載のカルボキシ基を含む構成要素はそれぞれ化合物ＳＧｒｏｕｐまたは化合物ＨＧｒｏｕｐであり、アミノ基を含む反応パートナーは式（Ｉ−ＰＧ２）の化合物である。
【０４２９】
ステップ（Ｆ３Ａ）の場合またはステップ（Ｆ１Ａ）の場合、およびＦＧがＯＨまたはＳＨである場合、カップリング反応（Ｆ３Ａ−Ｃｏｕｐ）またはカップリング反応（Ｆ１Ａ−Ｃｏｕｐ）は、好ましくは、方法（Ｅ−ＯＨ）について上記された反応条件およびパラメータおよび試薬およびプロトコルの下で行われ、カルボキシ基を含む構成要素はそれぞれ化合物ＳＧｒｏｕｐまたは化合物ＨＧｒｏｕｐであり、ＯＨまたはＳＨ基を含む反応パートナーは式（Ｉ−ＰＧ）の化合物である。
【０４３０】
ステップ（Ｆ３Ｂ）の場合および反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮがＮＨ２である場合、カップリング反応（Ｆ３Ｂ−Ｃｏｕｐ）は、好ましくは、ＳＰＰＳについて上記され、また全ての記載された好ましい態様を含む反応条件およびパラメータおよび試薬およびプロトコルの下で行われ、記載のカルボキシ基を含む構成要素は化合物ＨＧｒｏｕｐであり、アミノ基を含む反応パートナーは式（Ｉ−ＳＧ）の化合物である。
【０４３１】
ステップ（Ｆ３Ｂ）の場合および反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮがＯＨまたはＳＨである場合、カップリング反応（Ｆ３Ｂ−Ｃｏｕｐ）は、好ましくは、方法（Ｅ−ＯＨ）について上記された反応条件およびパラメータおよび試薬およびプロトコルの下で行われ、カルボキシ基を含む構成要素は化合物ＨＧｒｏｕｐであり、ＯＨまたはＳＨ基を含む反応パートナーは式（Ｉ−ＳＧ）の化合物である。
【０４３２】
式（ｐＤＫＰ）の化合物において、Ｘａａ１のカルボン酸基は保護されない。Ｘａａ１のこの保護されないカルボン酸基は、ステップ（Ｆ４）において樹脂Ａの無保護の官能基と反応される。したがって、ステップ（Ｆ４）におけるカップリング反応は、樹脂、すなわち、固相支持体へのアミノ酸の従来のカップリング反応と同様である。固相支持体へのアミノ酸のカップリングは公知の反応であり、したがって、ステップ（Ｆ４）におけるカップリング反応の反応条件およびパラメータは公知である。
【０４３３】
好ましくは、式（ｐＤＫＰ）の化合物のＸａａ１のカルボン酸基にカップリングさせようとする樹脂Ａの官能基がＮＨ２基である場合、ステップ（Ｆ４）におけるカップリング反応は、好ましくは、ＳＰＰＳについて上記され、また全ての記載された好ましい態様を含む反応条件およびパラメータおよび試薬およびプロトコルの下で行われ、記載のカルボキシ基を含む構成要素は式（ｐＤＫＰ）の化合物であり、アミノ基を含む反応パートナーは樹脂Ａである。
【０４３４】
好ましくは、式（ｐＤＫＰ）の化合物のＸａａ１のカルボン酸基にカップリングさせようとする樹脂Ａの官能基がＯＨまたはＳＨである場合、ステップ（Ｆ４）におけるカップリング反応は、好ましくは、方法（Ｅ−ＯＨ）について上記された反応条件およびパラメータおよび試薬およびプロトコルの下で行われ、記載のカルボキシ基を含む構成要素は式（ｐＤＫＰ）の化合物であり、ＯＨまたはＳＨ基を含む反応パートナーは樹脂Ａである。
【０４３５】
好ましくは、ＰＧ２はＦｍｏｃまたはＡｌｌｏｃであり、可能なＰＧＨＧまたはＰＧＳＧはＢｏｃである。
【０４３６】
別の好ましい態様においては、ＰＧ２はＢｏｃ、Ｔｒｔ、Ｍｔｔ、Ｍｍｔ、ＤｄｚおよびＡｌｌｏｃからなる群より選択され、可能なＰＧＨＧまたはＰＧＳＧはＦｍｏｃである。
【０４３７】
より好ましくは、ＰＧ２はＴｒｔ、ＢｏｃまたはＡｌｌｏｃであり、可能なＰＧＨＧまたはＰＧＳＧはＦｍｏｃである。
【０４３８】
さらにより好ましくは、ＰＧ２はＴｒｔまたはＡｌｌｏｃであり、可能なＰＧＨＧまたはＰＧＳＧはＦｍｏｃである。
【０４３９】
化合物ＳＧｒｏｕｐはＳＧの前駆体であり、ＳＧは上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み、方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）の文脈中で上記で説明された通り、２個の反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮおよびＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＣを有する。反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮは、好ましくはＯＨまたはＮＨ２、より好ましくはＮＨ２である。反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮは、接続基ＣＧ−ＳＧとして保護されたか、またはカップリングされた状態で存在し、ＣＧ−ＳＧは−Ｏ−、−Ｓ−または−Ｎ（Ｈ）−である。反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＣは、無保護であってもよく、または予備活性化することもでき、それぞれのカップリング反応におけるカップリング部位である。好ましくは、反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＣは、それが保護されない場合、またはそれが予備活性化されたカルボン酸基である場合、カルボン酸基である。このカップリング反応の後、反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮの任意の保護基は、次のカップリング反応に利用可能な反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮを作るために切断される。
【０４４０】
反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＣが予備活性化されたカルボン酸基である場合、予備活性化は、好ましくはペプチド化学において一般的な方法である。例えば、再活性化されたカルボン酸基は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドまたはペンタフルオロフェノールとのそのエステルの形態で用いられる。
【０４４１】
化合物ＳＧｒｏｕｐおよびＳＧはそれぞれ、規定の個別数のエチレンオキシド単位を含んでもよく、またはそれらは、ＰＥＧ鎖が同じ長さの個々の分子のその後の分離を行わずにエチレンオキシドの重合により合成された場合のように、エチレンオキシド単位の分布を含んでもよい。分布の場合、化合物ＳＧｒｏｕｐは、およびそれによって間接的にはＳＧもまた、エチレンオキシド単位の個別数によってではなく、むしろその平均分子量により特定される。好ましくは、化合物ＳＧｒｏｕｐの分子量は、１５００〜５０００、好ましくは１５００〜４０００、より好ましくは１５００〜３５００である。
【０４４２】
好ましくは、ＰＧＳＧはＡｌｌｏｃ、Ｆｍｏｃ、ＭｍｔまたはＺである。
【０４４３】
好ましくは、化合物ＳＧｒｏｕｐは、化合物ＳＧｒｏｕｐ１、ＳＧｒｏｕｐ２、ＳＧｒｏｕｐ３、ＳＧｒｏｕｐ４、ＳＧｒｏｕｐ５、ＳＧｒｏｕｐ６、ＳＧｒｏｕｐ７またはＳＧｒｏｕｐ８である；
化合物ＳＧｒｏｕｐ１は式（ＳＧ−Ｉ）の化合物であり、式中、Ｆｍｏｃは式（ＳＧ−Ｉ）において（＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、ＯＨは（＊＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、好ましくはｍ１は３である；
化合物ＳＧｒｏｕｐ２は式（ＳＧ−ＩＩ）の化合物であり、式中、Ｚ、ＦｍｏｃまたはＡｌｌｏｃは式（ＳＧ−ＩＩ）において（＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、ＯＨは（＊＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、好ましくはｍ５は２である；
化合物ＳＧｒｏｕｐ３は式（ＳＧ−ＩＩ）の化合物であり、式中、ＢｏｃまたはＦｍｏｃは式（ＳＧ−ＩＩ）において（＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、ＯＨは（＊＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、好ましくはｍ５は１である；
化合物ＳＧｒｏｕｐ４は式（ＳＧ−ＩＩＩ）の化合物であり、式中、Ｂｏｃは式（ＳＧ−ＩＩＩ）において（＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、ＯＨは（＊＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、好ましくはｍ６およびｍ７は２である；
化合物ＳＧｒｏｕｐ５は式（ＳＧ−ＩＶ）の化合物であり、式中、ＭｍｔまたはＢｏｃは式（ＳＧ−ＩＶ）において（＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、ＯＨは（＊＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、好ましくはｍ９は４、８、１２または２７である；特に、Ｂｏｃとｍ９の組合せは４、８、１２または２７である；またはＭｍｔとｍ９の組合せは４である；
化合物ＳＧｒｏｕｐ６は式（ＳＧ−Ｖ）の化合物であり、式中、ＢｏｃまたはＦｍｏｃは式（ＳＧ−Ｖ）において（＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、ＯＨは（＊＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、好ましくはｍ１０は１であるか、またはその分子量は１５００〜３０００、より好ましくは３０００である；特に、Ｆｍｏｃとｍ１０の組合せは１であるか、またはＢｏｃと分子量の組合せは１５００〜３５００、より好ましくは３０００である；
化合物ＳＧｒｏｕｐ７は式（ＳＧ−ＶＩ）の化合物であり、式中、Ｂｏｃは式（ＳＧ−ＶＩ）において（＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、Ｂｒは（＊＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、好ましくはｍ１１は３である；
化合物ＳＧｒｏｕｐ８は式（ＳＧ−ＶＩＩ）の化合物であり、式中、ＢｏｃまたはＦｍｏｃは式（ＳＧ−ＶＩＩ）において（＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、ＯＨまたはＮ−ヒドロキシスクシンイミドは（＊＊＊＊）と共に示された結合を介して接続しており、好ましくは分子量は１５００〜３５００、より好ましくは３０００であり；ならびに好ましくはＢｏｃおよびＯＨまたはＮ−ヒドロキシスクシンイミド、またはＦｍｏｃおよびＮ−ヒドロキシスクシンイミドである。
【０４４４】
（＊＊＊＊）と共に示された結合を介して接続されたＯＨはＳＧｒｏｕｐを作り、上記でさらに概略されたように、カルボン酸基またはＯＨをその予備活性化された形態で用いることもできる。
【０４４５】
例として、化合物ＳＧｒｏｕｐがＡｌｌｏｃを有するＳＧｒｏｕｐ１またはＳＧｒｏｕｐ２である場合、式（Ｉ−ＳＧ）の化合物はそれぞれ式（Ｉ−ＳＧｒｏｕｐ１−Ｆｍｏｃ）または（Ｉ−ＳＧｒｏｕｐ２−Ａｌｌｏｃ）；
【化２３】
0005579939.tif 000024
【０４４６】
（式中、
ｍ１、ｍ５、ＰＧ２、Ｘａａ１、Ｘａａ２および樹脂Ａは上記と同じ定義を有し、また全てのそれらの好ましい態様を含む）
の化合物である。
【０４４７】
化合物ＨＧｒｏｕｐはＨＧの前駆体であり、ＨＧは上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み、方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）の文脈で上記で説明された通り、２個の反応性官能基ＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮおよびＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＣを有する。反応性官能基ＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮは、好ましくは、ＯＨまたはＮＨ２であり、より好ましくは、ＮＨ２である。反応性官能基ＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮは接続基ＣＧ−ＨＧとして保護されたか、またはカップリングされた状態で存在し、ＣＧ−ＨＧは−Ｏ−、−Ｓ−または−Ｎ（Ｈ）−である。
【０４４８】
反応性官能基ＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＣは通常保護されず、それぞれのカップリング反応におけるカップリング部位である。好ましくは、反応性官能基ＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＣはカルボン酸基である。このカップリング反応の後、反応性官能基ＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮの任意の保護基は、次のカップリングに利用可能な反応性官能基ＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮを作るために切断される。
【０４４９】
好ましくは、化合物ＨＧｒｏｕｐは、式（ＨＧｒｏｕｐＦ−Ｉ）の化合物、式（ＨＧｒｏｕｐＦ−ＩＩ）の化合物、式（ＨＧｒｏｕｐＦ−ＩＩＩ）の化合物、式（ＨＧｒｏｕｐＦ−ＩＶ）の化合物、式（ＨＧｒｏｕｐＦ−Ｖ）の化合物および式（ＨＧｒｏｕｐＦ−ＶＩ）の化合物、
【化２４】
0005579939.tif 000025
【化２５】
0005579939.tif 000026
【０４５０】
からなる群より選択され、
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１０およびＲ１１は上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含み、
ｓ１−１、ｓ２、ｓ３、ｓ４およびｓ６は上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含み、
ｓ５−１は上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み、
ｓ１−２、ｓ５−２およびｓ５−３は上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含み、
Ｔ１−１は上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み、
Ｔ１−２およびＴ５−１は上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含み、
Ｈ−ＰＧＨＧは、化合物ＨＧｒｏｕｐが、Ｔ１−１がＯである場合の式（ＨＧｒｏｕｐＦ−Ｉ）の化合物、式（ＨＧｒｏｕｐＦ−ＩＶ）の化合物および式（ＨＧｒｏｕｐＦ−Ｖ）の化合物からなる群より選択される場合、水素であり；
Ｈ−ＰＧＨＧは、化合物ＨＧｒｏｕｐが、Ｔ１−１がＮＨである場合の式（ＨＧｒｏｕｐＦ−Ｉ）の化合物、式（ＨＧｒｏｕｐＦ−ＩＩ）の化合物、式（ＨＧｒｏｕｐＦ−ＩＩＩ）の化合物および式（ＨＧｒｏｕｐＦ−ＶＩ）の化合物からなる群より選択される場合、保護基ＰＧＨＧである。
【０４５１】
化合物ＨＧｒｏｕｐはＨＧから誘導され、ＨＧは上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含むため、
ＨＧの上記定義のいずれかにおける（＊）は、化合物ＨＧｒｏｕｐの場合、ＨＧが、Ｔ１−１がＯである場合の式（ＨＧＦ−Ｉ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＶ）のハンドル基および式（ＨＧＦ−Ｖ）のハンドル基からなる群より選択されるハンドル基である場合、ＨＧと水素との間の結合を表し；
ＨＧの上記定義のいずれかにおける（＊）は、化合物ＨＧｒｏｕｐの場合、ＨＧが、Ｔ１−１がＮＨである場合の式（ＨＧＦ−Ｉ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＩ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＩＩ）のハンドル基および式（ＨＧＦ−ＶＩ）のハンドル基からなる群より選択されるハンドル基である場合、ＨＧと保護基ＰＧＨＧとの間の結合を表し；ならびに
ＨＧの上記定義のいずれかにおける（＊＊）は、化合物ＨＧｒｏｕｐの場合、ＨＧとＯＨとの間の結合を表す。
【０４５２】
これは、ＨＧの上記定義のいずれかにおける（＊）が、化合物ＨＧｒｏｕｐの場合、ＨＧと保護基ＰＧＨＧとの間の結合を表し、保護ＰＧＨＧは化合物ＨＧｒｏｕｐのカップリング後にＨＧから切断されることを意味する。
【０４５３】
したがって、特に好ましい化合物ＨＧｒｏｕｐは、式（ＨＧ−Ｉａ）の化合物、式（ＨＧ−Ｉｂ）の化合物、式（ＨＧ−Ｉｃ）の化合物、式（ＨＧ−Ｉｄ）の化合物、式（ＨＧ−ＩＩ）の化合物、式（ＨＧ−ＩＩＩ）の化合物、式（ＨＧ−ＩＶａ）の化合物、式（ＨＧ−ＩＶｂ）の化合物、式（ＨＧ−Ｖａ）の化合物、式（ＨＧ−Ｖｂ）の化合物および式（ＨＧ−ＶＩ）の化合物からなる群より誘導され；ＰＧＨＧは上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含む。
【化２６】
0005579939.tif 000027
【化２７】
0005579939.tif 000028
【化２８】
0005579939.tif 000029
【０４５４】
Ｘａａ２残基の側鎖の保護基は、ＰＧ２とは異なり、Ｘａａ２からＰＧ２を切断するのに必要とされるものとは異なる、および樹脂ＡからＸａａ１を切断するのに必要とされるものとは異なる条件下で切断可能である。
【０４５５】
本発明のさらなる対象は、式（ｐＤＫＰ）の化合物の調製のための方法（Ｇ）であり、式（ｐＤＫＰ）の化合物は上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み、式（ｐＤＫＰ−ＣＰＧ）；
【化２９】
0005579939.tif 000030
【０４５６】
（式中、
Ｈ−ＰＧＨＧ、ＨＧ、ｎ、ＳＧ、ＰＧ２、Ｘａａ１およびＸａａ２は上記と同じ定義を有し、また全てのそれらの好ましい態様を含み；
ＣＰＧは、アミノ酸またはペプチドのＣ末端のカルボン酸基を保護するためにペプチド化学において従来用いられる保護基であり、塩基切断型保護基、酸切断型保護基および還元切断型保護基からなる群より選択されるが；
但し、保護基ＣＰＧはＰＧ２とは異なる保護基であり、ＣＰＧはＸａａ２からＰＧ２を切断するのに必要とされるものとは異なる反応条件下で切断可能であり、
および但し、保護基ＣＰＧを切断するのに用いられる反応条件はＸａａ２からＰＧ２を切断せず；
ならびにＨ−ＰＧＨＧが保護基ＰＧＨＧである場合、
但し、保護基ＣＰＧはＰＧＨＧとは異なる保護基であり、ＣＰＧはＨＧからＰＧＨＧを切断するのに必要とされるものとは異なる反応条件下で切断可能であり、
および但し、保護基ＣＰＧを切断するのに用いられる反応条件はＨＧからＰＧＨＧを切断しない）
の化合物からの保護基ＣＰＧの切断反応（ｐＤＫＰ−Ｃｌｅａｖ）を特徴とする。
【０４５７】
ＣＰＧは、Ｃ−ＰＧの態様である。
【０４５８】
式（ｐＤＫＰ−ＣＰＧ）の化合物は、上記で定義されたＤＫＰ−Ｌの態様である。
【０４５９】
好ましくは、ＣＰＧは、アリルエステル、Ｂｚｌ（ベンジル、Ｂｎとも省略される）エステル、Ｆｍ（９−フルオレニルメチル）エステル、Ｍｅ（メチル）エステル、Ｅｔ（エチル）エステル、Ｔｒｔ（トリフェニルメチルまたはトリチルまたはＴｒ）エステル、ｔＢｕエステルおよびＳｉＥｔ３（トリエチルシリルエステルまたはＴＥＳ）からなる群より選択される。
【０４６０】
好ましくは、保護基ＣＰＧが塩基切断型保護基である場合、保護基ＣＰＧはＦｍ、ＭｅおよびＥｔからなる群より選択され；保護基ＣＰＧが酸切断型保護基である場合、保護基ＣＰＧはＴｒｔ、ｔＢｕおよびＳｉＥｔ３からなる群より選択され；ならびに保護基ＣＰＧが還元切断型保護基である場合、保護基ＣＰＧはアリルおよびＢｚｌからなる群より選択される。
【０４６１】
より好ましくは、ＣＰＧはＴｒｔまたはＢｚｌである。
【０４６２】
好ましくは、ＰＧ２はＦｍｏｃであり、ＣＰＧはアリルであり；好ましくは、可能なＰＧＨＧはＢｏｃである。
【０４６３】
別の好ましい態様においては、ＰＧ２はＡｌｌｏｃであり、ＣＰＧはＦｍｏｃであり；好ましくは、可能なＰＧＨＧはｔＢｕ、Ｔｒｔ、Ｍｔｔ、ＭｍｔおよびＤｄｚからなる群より選択される。
【０４６４】
別の好ましい態様においては、ＰＧ２はｔＢｕ、Ｔｒｔ、Ｃｌ−Ｔｒｔ、Ｍｔｔ、ＭｍｔおよびＤｄｚからなる群より選択され；ＣＰＧはアリルであり；好ましくは、可能なＰＧＨＧはＦｍｏｃである。
【０４６５】
より好ましくは、ＰＧ２はＴｒｔであり、ＣＰＧはアリルであり；好ましくは、可能なＰＧＨＧはＦｍｏｃである。
【０４６６】
本発明のさらなる対象は、式（ｐＤＫＰ−ＣＰＧ）の化合物の調製のための方法（Ｈ）であり、式（ｐＤＫＰ−ＣＰＧ）の化合物は上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み、方法（Ｈ）は、ｎが０である場合、ステップ（Ｈ１Ａ）を含むか；または方法（Ｈ）は、ｎが１である場合、ステップ（Ｈ３Ａ）およびステップ（Ｈ３Ｂ）を含み、ステップ（Ｈ３Ｂ）はステップ（Ｈ３Ａ）の後に行われ；
ｎは上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み；
ここで、
ステップ（Ｈ３Ａ）は、式（ｐＤＫＰ−ＰＧ２）
【化３０】
0005579939.tif 000031
【０４６７】
（式中、
ＰＧ２、Ｘａａ１、Ｘａａ２およびＣＰＧは上記と同じ定義を有し、また全てのそれらの好ましい態様を含み；
（６）と共に示されたＨはＦＧの水素であり、ＦＧは上記で定義された通りであり、また上記で定義された全てのその好ましい態様を含む）
の化合物と、化合物ＳＧｒｏｕｐ（化合物ＳＧｒｏｕｐは上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含む）とのカップリング反応（Ｈ３Ａ−Ｃｏｕｐ）であり；
化合物ＳＧｒｏｕｐの反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮが保護基ＰＧＳＧにより保護される場合、ステップ（Ｈ３Ａ）後の連続ステップ（Ｈ−ＣｏｎＣ）において、保護ＰＧＳＧはＳＧから切断されるが；
但し、保護基ＰＧＳＧはＰＧ２とは異なる保護基であり、ＰＧＳＧはＸａａ２からＰＧ２を切断するのに必要とされるものとは異なる反応条件下で切断可能であり；
さらに但し、保護基ＰＧＳＧを切断するのに用いられる反応条件はＸａａ２からＰＧ２を切断せず；
さらに但し、ステップ（Ｈ−ＣｏｎＣ）において保護基ＰＧＳＧを切断するのに用いられる反応条件は樹脂ＡからＸａａ１を切断せず；
式（ｐＤＫＰ−ＳＧ）；
【化３１】
0005579939.tif 000032
【０４６８】
（式中、
ＳＧ、ＰＧ２、Ｘａａ１、Ｘａａ２およびＣＰＧは上記と同じ定義を有し、また全てのそれらの好ましい態様を含み；
（７）と共に示されたＨは反応性官能基ＳＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮの水素である）
の化合物を提供し；
ステップ（Ｈ３Ｂ）は、式（ｐＤＫＰ−ＳＧ）の化合物と化合物ＨＧｒｏｕｐとのカップリング反応（Ｈ３Ｂ−Ｃｏｕｐ）であり、化合物ＨＧｒｏｕｐは上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み；
ステップ（Ｈ１Ａ）は、式（ｐＤＫＰ−ＰＧ２）の化合物と化合物ＨＧｒｏｕｐとのカップリング反応（Ｈ１Ａ−Ｃｏｕｐ）であり、化合物ＨＧｒｏｕｐは上記で定義された通りであり、また全てのその好ましい態様を含み；
化合物ＨＧｒｏｕｐの反応性官能基ＨＧｒｏｕｐ−ＦｕｎＳｉｔｅＮが保護基ＰＧＨＧにより保護される場合、ステップ（Ｈ３Ｂ）後またはステップ（Ｈ１Ａ）後の連続ステップ（Ｈ−ＣｏｎＡ）において、保護ＰＧＨＧはＨＧから切断されるが；
但し、保護基ＰＧＨＧはＰＧ２とは異なる保護基であり、ＰＧＨＧはＸａａ２からＰＧ２を切断するのに必要とされるものとは異なる反応条件下で切断可能であり；
さらに但し、保護基ＰＧＨＧを切断するのに用いられる反応条件はＸａａ２からＰＧ２を切断せず；
さらに但し、ステップ（Ｈ−ＣｏｎＡ）において保護基ＰＧＨＧを切断するのに用いられる反応条件は樹脂ＡからＸａａ１を切断しない。
【０４６９】
方法（Ｈ）は、上記で定義された方法（ＤＫＰ−Ｌ）に含まれる。
【０４７０】
式（ｐＤＫＰ−ＰＧ２）の化合物および式（ｐＤＫＰ−ＳＧ）の化合物は、上記で定義された方法（ＤＫＰ−Ｌ）の中間体の態様である。
【０４７１】
Ｘａａ２残基の側鎖の保護基はＰＧ２とは異なり、Ｘａａ２からＰＧ２を切断するのに必要とされるものとは異なる、およびＸａａ１からＣＰＧを切断するのに必要とされるものとは異なる条件下で切断可能である。
【０４７２】
好ましくは、上記で定義された方法は、連続的に行われ、方法（Ｂ）は方法（Ｃ）の後で行われ、方法（Ｃ）は方法（Ｄ）の後で行われ、方法（Ｄ）は方法（Ｅ）の後で行われ、方法（Ｅ）は方法（Ｆ）の後で行われる；方法（Ｇ）は、必要に応じて方法（Ｆ）の前に行われ、方法（Ｈ）は方法（Ｇ）の前に行われる；上記で定義されたそれぞれの化合物は、この場合、式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物の調製のためのこの一連の方法における中間体である。
【０４７３】
本発明のさらなる対象は、以下の方法である：
１．式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物が方法（Ｂ）により調製された、方法（Ａ）；
２．式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物が方法（Ｂ）により調製され；方法（Ｂ）の式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物が方法（Ｃ）により調製された、方法（Ａ）；
３．式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物が方法（Ｂ）により調製され；方法（Ｂ）の式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物が方法（Ｃ）により調製され；および方法（Ｃ）の式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物が方法（Ｄ）により調製された、方法（Ａ）；
４．式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物が方法（Ｂ）により調製され；方法（Ｂ）の式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物が方法（Ｃ）により調製され；方法（Ｃ）の式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物が方法（Ｄ）により調製され；および方法（Ｄ）の式（ＩＩ−ＸａａＣ（１））の化合物が方法（Ｅ）により調製された、方法（Ａ）；
５．式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物が方法（Ｂ）により調製され；方法（Ｂ）の式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物が方法（Ｃ）により調製され；方法（Ｃ）の式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物が方法（Ｄ）により調製され；方法（Ｄ）の式（ＩＩ−ＸａａＣ（１））の化合物が方法（Ｅ）により調製され；および方法（Ｅ）の式（Ｉ−ＨＧ）の化合物が方法（Ｆ）により調製された、方法（Ａ）；
６．式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物が方法（Ｂ）により調製され；方法（Ｂ）の式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物が方法（Ｃ）により調製され；方法（Ｃ）の式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物が方法（Ｄ）により調製され；方法（Ｄ）の式（ＩＩ−ＸａａＣ（１））の化合物が方法（Ｅ）により調製され；方法（Ｅ）の式（Ｉ−ＨＧ）の化合物が方法（Ｆ）により調製され；および方法（Ｆ）の式（ｐＤＫＰ）の化合物が方法（Ｇ）により調製された、方法（Ａ）；
７．式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物が方法（Ｂ）により調製され；方法（Ｂ）の式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物が方法（Ｃ）により調製され；方法（Ｃ）の式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物が方法（Ｄ）により調製され；方法（Ｄ）の式（ＩＩ−ＸａａＣ（１））の化合物が方法（Ｅ）により調製され；方法（Ｅ）の式（Ｉ−ＨＧ）の化合物が方法（Ｆ）により調製され；方法（Ｆ）の式（ｐＤＫＰ）の化合物が方法（Ｇ）により調製され；および方法（Ｇ）の式（ｐＤＫＰ−ＣＰＧ）の化合物が方法（Ｈ）により調製された、方法（Ａ）。
【０４７４】
方法（Ａ）は、方法（ＰＥＰ−ＨＳＰＰＳ）のステップ（ｉｉ−ｐｅｐ）の態様である。
【０４７５】
方法（Ｂ）は、好ましくは方法（Ｃ−ＰＥＰ）に含まれる。
【０４７６】
方法（Ｃ）のステップ（ｂ）は、方法（Ｃ−ＰＥＰ）のステップ（ｉｉｉ）の態様である。
【０４７７】
方法（Ｃ）のステップ（ａ）は、方法（Ｃ−ＰＥＰ）のステップ（ｉｉｉ）の好ましい態様に含まれる。
【０４７８】
方法（Ｄ）は、方法（Ｃ−ＰＥＰ）のステップ（ｉｉ）の態様である。
【０４７９】
方法（Ｅ）は、方法（Ｃ−ＰＥＰ）のステップ（ｉ）の態様である。
【０４８０】
方法（Ｆ）のステップ（Ｆ４）は、方法（Ｘ２）の態様である。
【０４８１】
方法（Ｆ）のステップ（Ｆ３Ａ）は、方法（Ｘ１）のステップ（Ｘ１−ｉｉｉ）の態様である。
【０４８２】
方法（Ｆ）のステップ（Ｆ３Ｂ）は、方法（Ｘ１）のステップ（Ｘ１−ｉｖ）の態様である。
【０４８３】
方法（Ｆ）のステップ（Ｆ１Ａ）は、方法（Ｘ１）のステップ（Ｘ１−ｉｖ）の態様である。
【０４８４】
方法（Ｇ）は、方法（ＤＫＰ−Ｌ）の態様である。
【０４８５】
方法（ＤＫＰ−Ｌ）のステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉ）、任意選択のステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉ）およびステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉｉ）が連続的に行われる場合、方法（Ｈ）のステップ（Ｈ１）はステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉ）の態様であり、方法（Ｈ）のステップ（Ｈ３Ａ）および（Ｈ３Ｂ）はステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉ）および（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉｉ）の態様である。
【０４８６】
したがって、本発明のさらなる対象は、以下の方法である：
（ａ）ステップ（ｉｉ−ｐｅｐ）が方法（Ａ）である、方法（ＰＥＰ−ＨＳＰＰＳ）；
（ｂ）方法（Ｂ）を含む方法（Ｃ−ＰＥＰ）；
（ｃ）ステップ（ｉｉｉ）が方法（Ｃ）のステップ（ｂ）を含む、方法（Ｃ−ＰＥＰ）；
（ｄ）ステップ（ｉｉｉ）が方法（Ｃ）のステップ（ａ）を含む、方法（Ｃ−ＰＥＰ）；
（ｅ）ステップ（ｉｉ）が方法（Ｄ）を含む、方法（Ｃ−ＰＥＰ）；
（ｆ）ステップ（ｉ）が方法（Ｅ）を含む、方法（Ｃ−ＰＥＰ）；
（ｇ）方法（Ｘ２）が方法（Ｆ）のステップ（Ｆ４）を含む、方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）；
（ｈ）方法（Ｘ１）のステップ（Ｘ１−ｉｉｉ）が方法（Ｆ）のステップ（Ｆ３Ａ）を含む、方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）；
（ｉ）方法（Ｘ１）のステップ（Ｘ１−ｉｖ）が方法（Ｆ）のステップ（Ｆ３Ｂ）を含む、方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）；
（ｊ）方法（Ｘ１）のステップ（Ｘ１−ｉｖ）が方法（Ｆ）のステップ（Ｆ１Ａ）を含む、方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）；
（ｋ）方法（Ｇ）を含む方法（ＤＫＰ−Ｌ）；
（ｌ）ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉ）、任意選択のステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉ）およびステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉｉ）が連続的に行われ、ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉ）が方法（Ｈ）のステップ（Ｈ１）を含み、ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉ）および（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉｉ）が方法（Ｈ）のステップ（Ｈ３Ａ）および（Ｈ３Ｂ）を含む、方法（ＤＫＰ−Ｌ）。
【０４８７】
本発明のさらなる対象は、式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物、式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物、式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物、式（ＩＩ−Ｈ）の化合物、式（ＩＩ−ＸａａＣ（１））の化合物、式（Ｉ−ＨＧ）の化合物、式（Ｉ−ＳＧ）の化合物、式（ｐＤＫＰ）の化合物、式（ｐＤＫＰ−ＣＰＧ）の化合物および式（ｐＤＫＰ−ＳＧ）の化合物であり；
式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物、式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物、式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物、式（ＩＩ−Ｈ）の化合物、式（ＩＩ−ＸａａＣ（１））の化合物、式（Ｉ−ＨＧ）の化合物、式（Ｉ−ＳＧ）の化合物、式（ｐＤＫＰ）の化合物、式（ｐＤＫＰ−ＣＰＧ）の化合物および式（ｐＤＫＰ−ＳＧ）の化合物は上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含む。
【０４８８】
式（Ｉ−ＨＧ）の化合物は、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａの一態様である。
【０４８９】
式（Ｉ−ＰＧ２）の化合物は公知の化合物であり、従来のＳＰＰＳ、次いでＸａａ２残基の側鎖の脱保護により調製することができる。
【０４９０】
式（ｐＤＫＰ−ＰＧ２）の化合物は公知の化合物であり、Ｎ末端および側鎖保護されたアミノ酸ＰＧ２−Ｘａａ２と、Ｃ末端保護されたアミノ酸Ｘａａ１−ＣＰＧとの従来のカップリング、次いで、Ｘａａ２残基の側鎖の脱保護により調製することができる。
【０４９１】
本発明のさらなる対象は、
（ｕ１）ペプチド化学における；ペプチドの調製のための；またはペプチドの調製のための方法における；またはペプチドの調製のための方法のステップにおける；またはペプチドカップリング反応における；またはペプチドの調製のためのＳＰＰＳにおける；またはペプチドの調製のためのＨＳＰＰＳにおける、式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物、式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物、式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物、式（ＩＩ−Ｈ）の化合物、式（ＩＩ−ＸａａＣ（１））の化合物、式（Ｉ−ＨＧ）の化合物、式（Ｉ−ＳＧ）の化合物、式（ｐＤＫＰ）の化合物、式（ｐＤＫＰ−ＣＰＧ）の化合物および式（ｐＤＫＰ−ＳＧ）の化合物からなる群より選択される化合物の使用；またはＤＫＰ−ＰＧ形成リンカーとしての式（ｐＤＫＰ）の化合物もしくは式（ｐＤＫＰ−ＣＰＧ）の化合物の使用；
（ｕ２）式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物の調製のための式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物の使用；
（ｕ３）式（ＩＩ−Ｈ）の化合物または式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物の調製のための式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物の使用；
（ｕ４）式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物の調製のための式（ＩＩ−Ｈ）の化合物の使用；
（ｕ５）式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物の調製のための式（ＩＩ−ＸａａＣ（１））の化合物の使用；
（ｕ６）式（ＩＩ−ＸａａＣ（１））の化合物の調製のための式（Ｉ−ＨＧ）の化合物の使用；
（ｕ７）式（Ｉ−ＨＧ）の化合物の調製のための式（Ｉ−ＳＧ）の化合物の使用；
（ｕ８）式（Ｉ−ＨＧ）の化合物の調製のための式（ｐＤＫＰ）の化合物の使用；
（ｕ９）式（ｐＤＫＰ）の化合物の調製のための式（ｐＤＫＰ−ＣＰＧ）の化合物の使用；
（ｕ９）式（ｐＤＫＰ−ＣＰＧ）の化合物の調製のための式（ｐＤＫＰ−ＳＧ）の化合物の使用；
（ｕ１０）式（ｐＤＫＰ−ＳＧ）の化合物の調製のための、または式（ｐＤＫＰ−ＣＰＧ）の化合物の調製のための式（ｐＤＫＰ−ＰＧ２）の化合物の使用；
（ｕ１１）式（Ｉ−ＳＧ）の化合物の調製のための、または式（Ｉ−ＨＧ）の化合物の調製のための式（Ｉ−ＰＧ２）の化合物の使用；
（ｕ１２）式（ＩＩＩ−Ｈ）の化合物の調製のための、またはそれにおける、式（ＩＩＩ−ＰＧＸａａＣ（ｐｃ））の化合物、式（ＩＩ−ＰＧ２）の化合物、式（ＩＩ−Ｈ）の化合物、式（ＩＩ−ＸａａＣ（１））の化合物、式（Ｉ−ＨＧ）の化合物、式（Ｉ−ＳＧ）の化合物、式（ｐＤＫＰ）の化合物、式（ｐＤＫＰ−ＣＰＧ）の化合物および式（ｐＤＫＰ−ＳＧ）の化合物からなる群より選択される化合物の使用；
（ｕ１３）保護基、好ましくは、ペプチド化学における保護基、好ましくは、Ｃ末端保護基としての残基ＤＫＰ−ＰＧまたは式（ＩＩＩ−ｒｅｓ）の残基の使用
であり、これらの化合物および残基は上記で定義された通りであり、また全てのそれらの好ましい態様を含む。
【０４９２】
本発明は、単一ステップにおいてＳＰＰＳおよびそのＣ末端保護を含むその調製後に、支持樹脂からの所望のペプチドのＣ末端断片の切断を可能にし、これは従来の２ステップ手順、すなわち、第１に支持樹脂から切断することおよび第２にＣ末端を保護することと比較して、より完全な反応および／またはより少ない望ましくない副反応に起因してより高い収率を提供し、保護されたペプチドは有機溶媒中にあまり溶解しないことが多く、ペプチドのエピマー化の危険性がより低いため、追加のプロセスステップ、反応時間、試薬および設備を必要としない、すなわち、全体の手順がより速く、より経済的であり、溶解性の問題がより少ない。
【０４９３】
また、ペプチドアミドのハイブリッド合成に関しても、本発明は、複数ステップの手法、例えば、第１にＣ末端から２位のアミノ酸から出発してＣ末端断片を調製し、別のステップにおいてＣ末端から１位のアミノ酸を付加することを省略する、Ｃ末端断片を調製するための方法を提供する。この方法は、側鎖保護基の部分的喪失を回避し、アミノカルボキサミドのカップリングに起因するペプチドのエピマー化の危険性を回避し、より少ないプロセスステップ、時間、試薬および装備を必要とし、それによってこの方法は、より完全な反応、より少ないプロセスステップおよびより少ない望ましくない副反応に起因してより高い収率を有する。
【０４９４】
本発明のさらなる利点は、ＨＳＨＳＰＰＳにおけるＲｉｎｋアミドハンドルの使用である。通常、Ｒｉｎｋアミドハンドル改変樹脂からＳＰＰＳ後にペプチドを切断する場合、ペプチドの側鎖の全体の脱保護が同時に起こり、それによってＲｉｎｋアミドハンドルはＨＳＨＳＰＰＳにおいては通常用いられない。本発明により、ＲｉｎｋアミドハンドルはＣ末端ＤＫＰリンカー基中に残存し、それによってＨＳＰＰＳにおいてＣ末端断片としてペプチド断片が使用可能になり、Ｒｉｎｋアミドハンドルを含むＣ末端リンカー基は、標的ペプチドを提供する最終ステップにおいて側鎖保護基と一緒に最終的に切断される。
【０４９５】
本発明の方法の別の利点は、Ｃ末端としてアミドを有する、ＨＳＰＰＳにおいて用いられる側鎖保護された断片Ｃ−ＰＥＰを生成する可能性である。そのようなペプチドは通常、Ｓｉｅｂｅｒハンドルを含むＳｉｅｂｅｒ  Ａｍｉｄｅ樹脂を用いて調製される。Ｓｉｅｂｅｒ  Ａｍｉｄｅ樹脂を用いる場合、側鎖脱保護を行わずに樹脂からペプチドを切断するには特異的切断条件が必要であるが、一般的な切断条件はＳｉｅｂｅｒ  Ａｍｉｄｅ樹脂の場合、いくつかの側鎖の少なくとも部分的脱保護も誘導する。Ｓｉｅｂｅｒハンドルはリンカー中のハンドル基ＨＧとして用いられ、リンカーのハンドル基からのペプチドの切断はＨＳＨＳＰＰＳにおける一番最後のステップまで延期され、全体的脱保護条件下で行うことができるが、ＨＳＰＰＳにおいてＣ末端断片として用いられるＤＫＰリンカー基を含むペプチド断片を提供する樹脂からの必要な切断は、側鎖保護基を切断するものとは異なる条件下で行われ、ＤＫＰリンカーの同時生成により樹脂からリンカーを切断するのに用いられるこれらの条件はＳｉｅｂｅｒハンドル部分からのペプチドの切断も側鎖脱保護も誘導しないため、そのＣ末端にアミドを有する断片Ｃ−ＰＥＰの調製のために本発明の方法を用いる場合、Ｓｉｅｂｅｒハンドルの適用性は広がる。これは、特異的切断条件を必要とすることなく側鎖保護されたペプチド断片合成に関してＳｉｅｂｅｒハンドルの使用範囲を広げる。
【０４９６】
Ｘａａ１が式（ＨｙｐＸ）の化合物である場合、ＤＫＰリンカー基を含むペプチジル断片の溶解度を、Ｒ８については式（Ｓｕｂ−Ｒ８）の溶解度増強置換基を用いることにより大きく増強することができ、したがって、長いアミノ酸鎖を有するＣ末端断片を用いるＨＳＰＰＳが可能になり、これは、多くのアミノ酸残基を有する標的ペプチドを多くの断片から合成しようとする場合に必要であり、ＤＫＰリンカー基を含む最初のＣ末端断片は反復的ＨＳＰＰＳによって連続的ＰＥＰ−Ｎ断片に連続的にカップリングされる。
【０４９７】
さらに、スペーサー基ＳＧを用いる可能性は、ＨＳＰＰＳにおいてより高い溶解度の断片Ｃ−ＰＥＰを提供することができ、したがって、長いアミノ酸鎖を有するＣ末端断片を用いるＨＳＰＰＳが可能であり、これは、多くのアミノ酸残基を有する標的ペプチドを多くの断片から合成しようとする場合に必要であり、ＤＫＰリンカー基を含む最初のＣ末端断片は反復的ＨＳＰＰＳによって連続的ＰＥＰ−Ｎ断片に連続的にカップリングされる。
【０４９８】
さらに、スペーサー基ＳＧは、アミノ酸構成要素がＳＰＰＳの間に連続的にカップリングされるＮ末端である反応中心を空間的に固相支持体から遠くに移動し、それによって、溶解された試薬、添加剤、アミノ酸構成要素などへの反応中心の接近性が大きく改善される。
【０４９９】
［実施例］
省略形および原材料
別途記述しない場合、以下の省略形および原材料が以下で用いられた、および用いられている。
【０５００】
Ａｃ  アセチル。
【０５０１】
ＡＣＮ  アセトニトリル。
【０５０２】
ＣＴＣ樹脂  ２−クロロトリチルクロリド樹脂（ビーズ、１００〜２００メッシュ（メッシュはＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ａｎｄ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ＡＳＴＭ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌに従って測定される）、１．５７ｍｍｏｌ／ｇ、「ｍｍｏｌ／ｇ」は「ｍｍｏｌ活性部位／ｇ樹脂」を意味する）。
【０５０３】
ＤＢＦ−付加物  １−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル）ピペリジン。
【０５０４】
ＤＣＭ  ジクロロメタン。
【０５０５】
ＤＩＥＡ  ジイソプロピルエチルアミン。
【０５０６】
ＤＩＰＥ  ジイソプロピルエーテル。
【０５０７】
ＤＩＰＣＤＩ  Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド。
【０５０８】
ＤＭＡＰ  ４−ジメチルアミノピリジン。
【０５０９】
ＤＭＢ  １，３−ジメトキシベンゼン。
【０５１０】
ＤＭＦ  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド。
【０５１１】
ｅｑ  当量。当量は、別途記載しない場合、樹脂の反応部位のｍｏｌ数に関するｍｏｌ当量を指す。
【０５１２】
Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋ−ＯＨ  ４’−｛（Ｒ，Ｓ）−α−［１−（９−フルオレニル）メトキシカルボニルアミノ］−２，４−ジメトキシベンジル｝−フェノキシ酢酸。ｐ−｛（Ｒ，Ｓ）−ａ−［１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メトキシホルムアミド］−２，４−ジメトキシベンジル｝−フェノキシ酢酸とも呼ばれる。Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋアミドハンドルとも呼ばれる。Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋ−ＯＨは、（＊）と共に示された結合がＦｍｏｃの９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基に接続しており、（＊＊）と共に示された結合がＯＨに接続された、式（ＨＧ−Ｉａ）のハンドル基である。Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋ−ＯＨは、式（ＨＧｒｏｕｐ−Ｉａ）の化合物であり、ＰＧＨＧはＦｍｏｃである。
【０５１３】
Ｆｍｏｃ−Ｒａｍａｇｅ−ＯＨ  ［Ｒ，Ｓ］−２−｛［５−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプタン−２−イル］オキシ｝酢酸。Ｆｍｏｃ−Ｓｕｂｅｒｏｌ、ＣＡＳ  ２１２７８３−７５−０とも呼ばれ、Ｆｍｏｃ−Ｒａｍａｇｅハンドルとも呼ばれる。Ｆｍｏｃ−Ｒａｍａｇｅ−ＯＨは、（＊）と共に示された結合がＦｍｏｃの９−フルオレニルメチルオキシカルボニルに接続しており、（＊＊）と共に示された結合がＯＨに接続された、式（ＨＧ−ＶＩ）のハンドル基である。Ｆｍｏｃ−Ｒａｍａｇｅ−ＯＨは、式（ＨＧｒｏｕｐ−ＶＩ）の化合物であり、ＰＧＨＧはＦｍｏｃである。
【０５１４】
Ｆｍｏｃ−ＴＴＤＳ−ＯＨ  ［Ｎ−１［９−フルオレニルメトキシカルボニル］−１，１３−ジアミノ−４，７，１０−トリオキサトリデカン−スクシンアミド酸、ＣＡＳ  １７２０８９−１４−４。ＴＴＤＳは、ｍ１が３である式（ＳＧ−Ｉ）のスペーサー基である。Ｆｍｏｃ−ＴＴＤＳ−ＯＨは、ｍ１が３である化合物ＳＧｒｏｕｐ１である。
【０５１５】
ＨＭＰＡ  ４−ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸、ＣＡＳ  ６８８５８−２１−９。ＨＭＰＡは、（＊）および（＊＊）と共に示された結合がＯＨに接続された、式（ＨＧ−ＩＶａ）のハンドル基である。ＨＭＰＡは、式（ＨＧｒｏｕｐ−ＩＶａ）の化合物である。
【０５１６】
ＨＣＴＵ  ２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスフェート。
【０５１７】
ＨＭＰＳ樹脂  ヒドロキシメチルポリスチレン樹脂（１００〜２００メッシュのビーズ（メッシュはＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ａｎｄ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ＡＳＴＭ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌに従って測定される）、０．９８ｍｍｏｌ／ｇ、「ｍｍｏｌ／ｇ」は「ｍｍｏｌ活性部位／ｇ樹脂」を意味する）。
【０５１８】
ＨＯＢｔ  １−ヒドロキシベンゾトリアゾール。水分含量約１２％（ｗ／ｗ）。
【０５１９】
ｍｉｎ  分。
【０５２０】
ＭＷ  分子量。
【０５２１】
Ｏｘｙｍａ  エチル２−シアノ−２−（ヒドロキシイミノ）アセテート。
【０５２２】
ＰＶＤＦ  ポリビニリデンフルオリド。
【０５２３】
ＲＰ−ＨＰＬＣ  逆相高速液体クロマトグラフィー。
【０５２４】
ＲＰ−ＨＰＬＣ−ＥＳＭＳ  逆相液体クロマトグラフィー電子スプレー質量分析。
【０５２５】
樹脂充填量  樹脂１ｇあたりのペプチドのｍｍｏｌ。
【０５２６】
ＲＴ  室温。
【０５２７】
ｓ  秒。
【０５２８】
配列の省略形：
Ｔ２０  Ａｃ［Ｔ２０−１−３６］ＮＨ２。この配列はＣＡＳ  １５９５１９−６５−０の下で登録されている。
【０５２９】
Ｔ２０Ｃ  Ｈ［Ｔ２０−２７−３６］ＮＨ２。
【０５３０】
ＢｏｃＴ２０Ｎ  Ｂｏｃ［Ｔ２０−１７−２６］ＯＨ。
【０５３１】
ＨＴ２０Ｎ  Ｈ［Ｔ２０−１７−２６］ＯＨ。
【０５３２】
ＨＴ２０Ｆ  Ｈ［Ｔ２０−１７−３６］ＮＨ２。
【０５３３】
ＴＩＳ  トリイソプロピルシラン。
【０５３４】
ＵＶ  紫外線。
【０５３５】
配列表は配列の省略形を配列と関連付ける。例えば、［Ｔ２０−１−３６］は、アミノ酸残基１〜３６からなるＴ２０ペプチドの配列であり、左の数はＮ末端アミノ酸残基を表し、右の数はＣ末端アミノ酸残基を表す。
【０５３６】
方法の説明
Ａ）樹脂充填量の決定
樹脂充填量を、２９０ｎｍでのＵＶ吸光度を測定するＦｍｏｃ基決定により定量した。ＵＶ吸光度測定を、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＵＶ−Ｖｉｓ記録分光光度計（ＵＶ−２５０１  ＰＣ）上で実行した。
【０５３７】
ステップ１  Ｆｍｏｃ基脱保護からの溶液の回収：
Ｆｍｏｃ基を例に記載のように除去した。ＶＡ−ｍｌガラス容量フラスコＡ中、Ｆｍｏｃ脱保護から得られた溶液を回収した。ＶＡ−ｍｌガラス容量フラスコＡにＤＭＦを全体的に充填した。
【０５３８】
ステップ２  ＵＶ測定のための希釈溶液：
ＶＡ−ｍｌガラス容量フラスコＡからのＶＣ−ｍｌアリコートを別のＶＢ−ｍｌガラス容量フラスコＢに移した後、それにＤＭＦを全体的に充填した。３つの異なる希釈されたＶＢ−ｍｌ溶液を調製し、２９０ｎｍでのＵＶ分光分析により測定して、代表的な吸光度値を得た。
【０５３９】
ステップ３  ＵＶ分光分析による定量：
１ｃｍ経路長のＵＶ石英セルにＤＭＦ（参照溶液）を充填し、２９０ｎｍ（ジベンゾフルベンの最大吸収波長）で分光光度計に入れてゼロを得た。ＵＶセルを希釈した溶液Ｂで２回洗浄した後、この溶液で充填し、その吸光度を２９０ｎｍで測定した。
【０５４０】
最後に、樹脂充填量を、式：
【数１】
0005579939.tif 000033
【０５４１】
（式中、
Ａ２９０：測定された吸光度値
セル長：１（ｃｍ）
ＶＡ：ガラス容量フラスコＡの容量（ｍｌ）
ＶＢ：ガラス容量フラスコＢの容量（ｍｌ）
ＶＣ：ＡからＢに移されたアリコートの容量（ｍｌ）
イプシロン２９０：２９０ｎｍでのジベンゾフルベンのモル吸光係数；５８００Ｍ−１ｃｍ−１）
に従って計算する。
【０５４２】
Ｂ）ＲＰ−ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣ−ＥＳＭＳ分析による特徴付け
Ｂ１）ＲＰ−ＨＰＬＣ分析
分析的ＲＰ−ＨＰＬＣを、分離モジュール（Ｗａｔｅｒｓ  ２６９５）、自動注入器（Ｗａｔｅｒｓ  ７１７オートサンプラー）およびＵＶ光ダイオードアレイ検出器（Ｗａｔｅｒｓ  ２９９８）を含むＷａｔｅｒｓ装置上で実行し、移動相Ｂから移動相Ａへの線形勾配を用い、それぞれの場合に特定する。
【０５４３】
ステップ１  試料調製：
移動相Ａ：０．０４５％（ｖ／ｖ）水性ＴＦＡ
移動相Ｂ：ＡＣＮ中の０．０３６％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ。
【０５４４】
０．５〜１ｍｇの範囲の特定量の試料を、約０．５〜１ｍｌのＨ２Ｏ／ＡＣＮ（１：１、（ｖ／ｖ））混合物中に溶解し、溶液を０．４５μｍ孔径、４ｍｍ直径のＰＶＤＦ疎水性フィルターを通して濾過した。
【０５４５】
ステップ２  クロマトグラフィー条件：
カラム：ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８、３．５μｍ、４．６ｘ１００ｍｍ
オーブン：ＲＴ
流量：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
検出器波長：２２０ｎｍ
勾配泳動時間：８ｍｉｎ
勾配組成：例に特定されるようなｘ〜ｙ％（ｖ／ｖ）の移動相Ｂ。
【０５４６】
注入の前に、カラムを３ｍｉｎ初期条件で条件付けし、各泳動後、カラムをＡＣＮで３ｍｉｎ洗浄した。
【０５４７】
ステップ３  クロマトグラフプロフィール分析：
全てのクロマトグラフィーピークの面積の測定値は合成からの生成物と関連していた。面積の割合を、予想される生成物の純度のパーセンテージとして取る。
【０５４８】
Ｂ２）ＲＰ−ＨＰＬＣ−ＥＳＭＳ分析
分析的ＲＰ−ＨＰＬＣ−ＥＳＭＳを、分離モジュール（Ｗａｔｅｒｓ  ２６９５）、自動注入器（Ｗａｔｅｒｓ  ７１７オートサンプラー）およびＵＶ光ダイオードアレイ検出器（Ｗａｔｅｒｓ  ２９９８）を含むＷａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ分光計上で実施し、移動相Ｂから移動相Ａへの線形勾配を用いた。
【０５４９】
ステップ１  試料調製：
移動相Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）水性ギ酸
移動相Ｂ：ＡＣＮ中の０．０７％（ｖ／ｖ）ギ酸。
【０５５０】
０．５〜１ｍｇの範囲の特定量の試料を約０．５〜１ｍｌのＨ２Ｏ／ＡＣＮ（１：１（ｖ／ｖ））混合物に溶解し、この溶液を０．４５μｍ孔径、４ｍｍ直径のＰＶＤＦ疎水性フィルターを通して濾過した。
【０５５１】
ステップ２  クロマトグラフィー−質量分析条件：
カラム：ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８、３．５μｍ、２．１ｘ１００ｍｍ
オーブン：ＲＴ
流量：０．３ｍｌ／ｍｉｎ
検出器波長：２２０ｎｍ
勾配泳動時間：８ｍｉｎ
勾配組成：例に特定されるようなｘ〜ｙ％（ｖ／ｖ）の移動相Ｂ
質量範囲ｍ／ｚ（陽イオンモード）：５００〜２５００Ｄａ。
【０５５２】
注入の前に、カラムを３ｍｉｎ初期条件で条件付けし、各泳動後、カラムをＡＣＮで３ｍｉｎ洗浄した。
【０５５３】
ステップ３  クロマトグラフィー−質量分析
各ピークに関するＵＶおよびＭＳスペクトルを分析して、各ピークに関する分子イオン質量を決定した。
【０５５４】
Ｂ３）ＲＰ−ＨＰＬＣ分析
分析的ＲＰ−ＨＰＬＣを、分離モジュール、自動注入器およびＵＶ光ダイオードアレイ検出器、ならびに移動相ＣおよびＤの勾配を含むＡｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズ装置上で実施した。
【０５５５】
ステップ１  試料調製：
移動相Ｄ：０．１％ｖ／ｖ水性ＴＦＡ
移動相Ｃ：ＡＣＮ中の０．０８５％ｖ／ｖＴＦＡ。
【０５５６】
０．５〜１ｍｇの範囲の特定量の試料を約０．５〜１ｍｌのＨ２Ｏ／ＡＣＮ（１：２（ｖ／ｖ））混合物に溶解した。
【０５５７】
ステップ２  クロマトグラフィー条件：
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘ−Ｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８、３．５μｍ、４．６ｘ１５０ｍｍ
オーブン：３５℃
流量：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
検出器波長：２２０ｎｍ
勾配泳動時間：２５ｍｉｎ
勾配組成：１０〜９７％（ｖ／ｖ）の移動相Ｃ。
【０５５８】
注入の前に、カラムを２ｍｉｎ初期条件で条件付けし、各泳動後、カラムを２ｍｉｎ洗浄した。
【０５５９】
ステップ３  クロマトグラフプロフィール分析：
全てのクロマトグラフィーピークの面積の測定値は合成からの生成物と関連していた。面積の割合を、予想される生成物の純度のパーセンテージとして取る。
【０５６０】
Ｂ４）ＲＰ−ＨＰＬＣ−ＥＳＭＳ分析
分析的ＲＰ−ＨＰＬＣ−ＥＳＭＳをＷａｔｅｒｓ  ２６９０上で実施し、移動相Ａ中への移動相Ｂの勾配を用いた。
【０５６１】
ステップ１  試料調製：
移動相Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）水性トリフルオロ酢酸
移動相Ｂ：ＡＣＮ中の０．０８５％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸。
【０５６２】
０．５〜１ｍｇの範囲の特定量の試料を約０．５〜１ｍｌのＨ２Ｏ／ＡＣＮ（１：１（ｖ／ｖ））混合物に溶解し、この溶液を０．４５μｍ孔径、４ｍｍ直径のＰＶＤＦ疎水性フィルターを通して濾過した。
【０５６３】
ステップ２  クロマトグラフィー−質量分析条件：
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８；１５０ｘ４．６ｍｍ
オーブン：３５℃
流量：１ｍｌ／ｍｉｎ
検出器波長：２２０ｎｍ
泳動時間：３０ｍｉｎ
勾配組成：１０〜９７％（ｖ／ｖ）の移動相Ｂで２０ｍｉｎ、９７％（ｖ／ｖ）の移動相Ｂで２ｍｉｎ、９７〜１０％（ｖ／ｖ）の移動相Ｂで１ｍｉｎ、１０％（ｖ／ｖ）の移動相Ｂで７ｍｉｎ。
【０５６４】
注入の前に、カラムを３ｍｉｎ初期条件で条件付けし、各泳動後、カラムをＡＣＮで３ｍｉｎ洗浄した。
【０５６５】
ステップ３  クロマトグラフィー−質量分析
各ピークに関するＵＶおよびＭＳスペクトルを分析して、各ピークに関する分子イオン質量を決定した。
【０５６６】
質量範囲ｍ／ｚ（陽イオンモード）：５００〜２５００Ｄａ。
【０５６７】
Ｃ）ニンヒドリン試験
試薬溶液の調製
試薬溶液Ａ：フェノール（４０ｇ）をＥｔＯＨ（１０ｍｌ）中に溶解する。水（１００ｍｌ）中のＫＣＮ（６５ｍｇ）の溶液をピリジンに添加する（ニンヒドリン、１００ｍｌ上で新鮮に蒸留）。両方の溶液を、混合床イオン交換樹脂と共に４５ｍｉｎ撹拌し、濾過し、混合した。
【０５６８】
試薬溶液Ｂ：無水ＥｔＯＨ（５０ｍｌ）中のニンヒドリン（２．５ｇ）の溶液を調製し、遮光性容器中、好ましくは不活性雰囲気下で維持した。
【０５６９】
実験手順
樹脂をＤＣＭで洗浄し、１〜５ｍｇを小さいガラス管に移す。この管に６滴の試薬Ａおよび２滴のＢを加える。次いで、管を１００℃で３ｍｉｎ加熱した。
【０５７０】
陰性試験（遊離第一級アミンの非存在）：黄色の溶液および天然色の樹脂ビーズ。
【０５７１】
陽性試験（遊離第一級アミンの存在）：暗青色または紫色の溶液および樹脂ビーズ。
【０５７２】
Ｄ）クロラニル試験
試薬溶液の調製
試薬溶液：トルエン（１００ｍｌ）中のクロラニル（４．１ｇ）の溶液を調製した。
【０５７３】
実験手順
アセトン（１ｍｌ）の小さいガラス管に、１滴の試薬溶液および１滴の試験溶液を加えた。次いで、この管を約１０ｓ混合した。
【０５７４】
陰性試験（ピペリジンの非存在）：無色から明黄色。
【０５７５】
陽性試験（ピペリジンの存在）：青色または紫色。
【０５７６】
例１：ジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーを介する樹脂への結合を用いるＴ２０ＣのＳＰＰＳ（０．１ｍｍｏｌスケール）
ＳＰＰＳを手動で実施した。
【０５７７】
方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍ（Ｆｍｏｃ基除去）
以下の例において、Ｆｍｏｃ基はこれらの手順によって除去された：ＤＭＦ中の２０％（ｖ／ｖ）ピペリジンを用いる樹脂の処理（１ｘ１ｍｉｎ、２ｘ１０ｍｉｎ；例１〜３および例７についてはそれぞれ３ｍｌ、例４〜６についてはそれぞれ１５０ｍｌ、次いで、例１〜３および例７についてはＤＭＦ洗浄（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）、例４〜６についてはＤＭＦ連続洗浄（６００ｍｌ）およびクロラニル試験方法Ｄ。
【０５７８】
例１．１  ジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーの樹脂への結合
ａ）ＨＭＰＳ樹脂の予備処理
ＨＭＰＳ樹脂（１０６．２ｍｇ）を、ＲＴでＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）およびＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）で膨張させた後、濾過した。
【０５７９】
ｂ）樹脂上へのジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーの１番目のアミノ酸（Ｄ−Ｐｒｏ）の導入
ＤＣＭ／ＤＭＦ（１５：１（ｖ／ｖ）、２．５ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ（１３５ｍｇ、４当量）およびＤＩＰＣＤＩ（３１μｌ、２当量）を、例１．１ａ）に従って調製された樹脂に添加した。次いで、ＤＣＭ（０．５ｍｌ）中のＤＭＡＰ（４．９ｍｇ、０．４当量）を添加し、ＲＴで２ｈ静置した。Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨの組込みを、この手順に従って２回実行した。前の２ｈのカップリング時間の後、樹脂をＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）およびＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）で洗浄した。次いで、樹脂を、ＤＭＣ（２．５ｍｌ）中の無水酢酸（４７μｌ、５当量）およびＤＩＥＡ（８５μｌ、５当量）を用いて、ＲＴで３０ｍｉｎキャップした。キャッピング後、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）およびＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）で洗浄した。次いで、Ｆｍｏｃ基を方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍにより除去した。
【０５８０】
０．９５ｍｍｏｌ／ｇの樹脂充填量がＵＶ定量（方法説明Ａ；ＶＡ：１００ｍｌ、ＶＢ：１０ｍｌおよびＶＣ：１．６ｍｌ）により決定された。したがって、１０６．２ｍｇのＨＭＰＳ樹脂は、０．１ｍｍｏｌの活性部位に相当する。
【０５８１】
ｃ）ジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーの２番目のアミノ酸（Ｌ−Ｌｙｓ）の導入
ＤＭＦ（２ｍｌ）中のＴｒｔ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ（１９８ｍｇ、３当量）、ＨＯＢｔ（５０ｍｇ、３当量）およびＤＩＰＣＤＩ（５０μｌ、３当量）の混合物をＲＴで５ｍｉｎ振とうした後、例１．１ｂ）に従って調製された樹脂に添加した。混合物をＲＴで１６ｈ静置した。ニンヒドリン試験（方法Ｃ）によれば、再カップリングは必要なかった。次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）およびＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）で洗浄した。次いで、Ｆｍｏｃ基を方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍにより除去した。
【０５８２】
ｄ）Ｒｉｎｋアミドハンドルの組込み
ＤＭＦ（２ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｒｉｎｋ−ＯＨ（１７５ｍｇ、３当量）、ＨｏＢｔ（５０ｍｇ、３当量）およびＤＩＰＣＤＩ（５０μｌ、３当量）をＲＴで５ｍｉｎ振とうした後、例１．１ｃ）に従って調製された樹脂に添加した。混合物をＲＴで１ｈ静置した。ニンヒドリン試験（方法Ｃ）によれば、再カップリングは必要なかった。前の１ｈのカップリング時間の後、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）およびＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）で洗浄した。次いで、Ｆｍｏｃ基を方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍにより除去した。
【０５８３】
例１．２  ＳＰＰＳによるＴ２０Ｃ
それぞれのアミノ酸を反応サイクル中で反応させた。１アミノ酸の組込みのための１反応サイクルにおける反応ステップは、反応サイクルの説明（ｉ）または（ｉｉ）に従う。
【０５８４】
ａ）反応サイクルの説明（ｉ）
ＤＭＦ（２ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ（３当量）、ＨＣＴＵ（１４０ｍｇ、３当量）およびＤＩＥＡ（１１０μｌ、６当量）の混合物をＲＴで３０ｓ振とうした後、伸長配列において先行するステップに従って調製された樹脂に添加した。混合物をＲＴで１ｈ静置した。ニンヒドリン試験（方法Ｃ）によれば、再カップリングは必要なかった。次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）およびＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）で洗浄した。次いで、Ｆｍｏｃ基を方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍにより除去した。
【０５８５】
ｂ）反応サイクルの説明（ｉｉ）
ＤＭＦ（２ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ（３当量）、ＨＣＴＵ（１４０ｍｇ、３当量）、ＤＩＥＡ（１１０μｌ、６当量）の混合物をＲＴで３０ｓ振とうした後、伸長配列において先行するステップに従って調製された樹脂に添加した。混合物をＲＴで１ｈ静置した。ＤＭＦ（２ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ（３当量）、ＨＣＴＵ（１４０ｍｇ、３当量）、ＤＩＥＡ（１１０μｌ、６当量）の混合物を用いて再カップリングを実行した。この混合物をＲＴで３０ｓ振とうした後、樹脂に添加し、ＲＴで１ｈ静置した。次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）で洗浄し、ＤＭＦ（２．５ｍｌ）中の無水酢酸（４７μｌ、５当量）およびＤＩＥＡ（８５μｌ、５当量）を用いて、ＲＴで１５ｍｉｎ、樹脂をキャップした。次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）およびＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）で洗浄した。次いで、Ｆｍｏｃ基を方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍにより除去した。
【０５８６】
ｃ）伸長配列
１番目のアミノ酸、Ｆｍｏｃ−３６Ｐｈｅ−ＯＨを、例１．１ｄ）に従って調製された、ジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーおよびＲｉｎｋアミドハンドル基を含む樹脂にカップリングさせた後、伸長配列において先行するステップで調製された、アミノ酸／ペプチドＲｉｎｋアミドハンドル基を含む樹脂に、以下のアミノ酸をカップリングさせた。アミノ酸の組込みの配列は、
【表１】
0005579939.tif 000034
【０５８７】
であった。
【０５８８】
例１．３  分析−Ｒｉｎｋアミドハンドル基からのＴ２０Ｃの切断
例１．２に従って調製された、少量のペプチジル−樹脂（５ｍｇ）を、９５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ、２．５％（ｖ／ｖ）ＴＩＳおよび２．５％（ｖ／ｖ）Ｈ２Ｏからなる１ｍｌの混合物で樹脂をＲＴで１ｈ処理することによりＲｉｎｋアミドハンドル基から切断した。ペプチドは８３％の純度で得られた（ＲＰ−ＨＰＬＣ、方法の説明Ｂ１、２５〜５０の移動相Ｂ）。
【０５８９】
例１．４ａ  ジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーのＬ−ＬｙｓのＴｒｔ保護基除去、ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基の形成および樹脂からの切断
第１のステップにおいて、ジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーのＬ−ＬｙｓのＴｒｔ保護基を、例１．２に従って調製されたペプチジル−樹脂（１５ｍｇ）をＤＣＭ（２ｍｌ）中の０．２％（ｖ／ｖ）ＴＦＡでＲＴで２ｘ５ｍｉｎ処理することにより除去した。次いで、第２のステップにおいて、Ｔｒｔからこのように得られた脱保護されたペプチジル−樹脂を、ＤＣＭ（２ｍｌ）中の５％（ｖ／ｖ）ＤＩＥＡを用いてＲＴで２ｘ５ｍｉｎ洗浄することにより中和した。
【０５９０】
第１のステップ後のＲＰ−ＨＰＬＣ分析は、樹脂またはＲｉｎｋアミドハンドル基から切断されたペプチドを示さなかったが、第２のステップ後では、ＤＫＰリンカー基を含むペプチジル−樹脂は観察されなかった（方法の説明Ｂ１、５〜１００の移動相Ｂ）。
【０５９１】
第２のステップ後、第２のステップからのペプチジル−樹脂をＴＨＦ中の５％（ｖ／ｖ）ピペリジンを用いてＲＴで処理することにより（５ｘ５ｍｉｎ、それぞれ２ｍｌ）、ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基を含むペプチドが得られた。
【０５９２】
真空下での蒸発によりＴＨＦを除去し、得られたジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基を含むペプチドをＲＰ−ＨＰＬＣ−ＥＳＭＳにより分析した（方法の説明Ｂ２、８０〜１００の移動相Ｂ、それぞれ［（Ｍ＋２Ｈ）／２］２＋：１３０８．０、ここでＭはＤＫＰリンカー基を含むＴ２０ＣのＭＷである）。Ｒｉｎｋアミドハンドル基に起因して、ラセミ混合物として予想される生成物が得られ、観察された分子量は理論的に予想された質量と一致した。どのぐらいのジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーが樹脂上に残存していたかを定量するために、９５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ、２．５％（ｖ／ｖ）ＴＩＳおよび２．５％（ｖ／ｖ）Ｈ２Ｏからなる２ｍｌの混合物を用いてＲＴで１ｈ、樹脂を処理した。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析により、樹脂中に残存するジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーが１％未満であることが示された（方法の説明Ｂ１、５〜１００の移動相Ｂ）。
【０５９３】
例１．４ｂ
第２のステップ後、樹脂をＴＨＦ中の５％（ｖ／ｖ）ピペリジンを用いて例１．４ａに記載のようにＲＴで処理する（５ｘ５ｍｉｎ、それぞれ２ｍｌ）のではなく、ＤＭＦ中の５％（ｖ／ｖ）ピペリジンを用いてＲＴで処理することにより（５ｘ５ｍｉｎ、それぞれ２ｍｌ）、ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基を含むペプチドを得たことを唯一の違いとして、例１．４ａを繰り返した。真空下でトルエン（５ｘ３ｍｌ）と同時蒸発させることにより、ＤＭＦを除去した。
【０５９４】
例１．４ｃ
第２のステップ後、樹脂をＴＨＦ中の５％（ｖ／ｖ）ピペリジンを用いて例１．４ａに記載のようにＲＴで処理する（５ｘ５ｍｉｎ、それぞれ２ｍｌ）のではなく、ＴＨＦ中の５％（ｖ／ｖ）ピロリジンを用いてＲＴで処理することにより（５ｘ５ｍｉｎ、それぞれ２ｍｌ）、ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基を含むペプチドを得たことを唯一の違いとして、例１．４ａを繰り返した。
【０５９５】
例１．４ｄ
第２のステップ後、樹脂をＴＨＦ中の５％（ｖ／ｖ）ピペリジンを用いて例１．４ａに記載のようにＲＴで処理する（５ｘ５ｍｉｎ、それぞれ２ｍｌ）のではなく、ＤＭＦ中の５％（ｖ／ｖ）ピロリジンを用いてＲＴで処理することにより（５ｘ５ｍｉｎ、それぞれ２ｍｌ）、ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基を含むペプチドを得たことを唯一の違いとして、例１．４ａを繰り返した。真空下でトルエン（５ｘ３ｍｌ）と同時蒸発させることにより、ＤＭＦを除去した。
【０５９６】
３つの例１．４ｂ、１．４ｃおよび１．４ｄの全部において、ＲＰ−ＨＰＬＣ−ＥＳＭＳ分析および樹脂上に残基として残留するジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーの決定に関する同じ分析結果が例１．４ａに記載のように得られた。
【０５９７】
例２  ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基を樹脂への結合として用いるＴ２０ＣのＳＰＰＳ（５ｍｍｏｌスケール）
ＳＰＰＳを手動で実施した。
【０５９８】
例２．１  ＨＭＰＳ樹脂へのジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーの結合
ａ）ＨＭＰＳ樹脂の予備処理
ＨＭＰＳ樹脂（５．０９７７ｇ）を、ＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）およびＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）を用いてＲＴで膨張させた後、濾過した。
【０５９９】
ｂ）樹脂上へのジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーの１番目のアミノ酸（Ｄ−Ｐｒｏ）の導入
ＤＣＭ／ＤＭＦ（１５：１（ｖ／ｖ）、１００ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ（６．６ｇ、４当量）およびＤＩＰＣＤＩ（１．５ｍｌ、２当量）を、例２．１ａ）に従って調製された樹脂に添加した。次いで、ＤＣＭ（５ｍｌ）中のＤＭＡＰ（２４５ｍｇ、０．４当量）を添加し、ＲＴで１６ｈ静置した。１番目のアミノ酸を、ＤＣＭ／ＤＭＦ（１５：１（ｖ／ｖ）、１００ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ（６．６ｇ、４当量）およびＤＩＰＣＤＩ（１．５ｍｌ、２当量）を用いてＲＴで５ｈ再カップリングした。カップリング後、樹脂をＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）およびＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）で洗浄した。次いで、ＤＭＦ（５０ｍｌ）中の無水酢酸（２．４ｍｌ、５当量）およびＤＩＥＡ（４．４ｍｌ、５当量）を用いてＲＴで１ｈ、樹脂をキャップした。キャッピング後、樹脂をＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）およびＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）で洗浄した。次いで、ピペリジン／ＤＭＦ（２０％（ｖ／ｖ）、１ｘ１ｍｉｎ、２ｘ１０ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）を用いる処理により、Ｆｍｏｃ基を除去した。
【０６００】
０．９８ｍｍｏｌ／ｇ樹脂充填量が、ＵＶ定量（方法の説明Ａ；ＶＡ：２５０ｍｌ、ＶＢ：５０ｍｌおよびＶＣ：０．４４ｍｌ）により決定された。したがって、５．０９７７ｇのＨＭＰＳ樹脂は５．０ｍｍｏｌの活性部位である。
【０６０１】
ｃ）ジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーの２番目のアミノ酸（Ｌ−Ｌｙｓ）の導入
ＤＭＦ（１００ｍｌ）中のＴｒｔ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ（９．２ｇ、３当量）、ＨＯＢｔ（２．３ｇ、３当量）およびＤＩＰＣＤＩ（２．３ｍｌ、３当量）の混合物をＲＴで５ｍｉｎ振とうした後、例２．１ｂ）に従って調製された樹脂に添加し、次いで、混合物をＲＴで１６ｈ静置した。ニンヒドリン試験（方法Ｃ）によれば、再カップリングは必要なかった。次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）およびＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）で洗浄した。次いで、ピペリジン／ＤＭＦ（２０％（ｖ／ｖ）、１ｘ１ｍｉｎ、２ｘ１０ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）を用いる処理により、Ｆｍｏｃ基を除去した。
【０６０２】
ｄ）Ｒｉｎｋアミドハンドル基の導入
ＤＭＦ（１００ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｒｉｎｋ−ＯＨ（７．９ｇ、３当量）、ＨＯＢｔ（２．３ｇ、３当量）およびＤＩＰＣＤＩ（２．３ｍｌ、３当量）の混合物をＲＴで５ｍｉｎ振とうした後、例２．１ｃ）に従って調製された樹脂に添加し、次いで、ＲＴで１６ｈ静置した。ニンヒドリン試験（方法Ｃ）によれば、再カップリングは必要なかった。次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）およびＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）で洗浄した。次いで、ピペリジン／ＤＭＦ（２０％（ｖ／ｖ）、１ｘ１ｍｉｎ、２ｘ１０ｍｉｎ；それぞれ１００ｍｌ）を用いる処理により、Ｆｍｏｃ基を除去した。
【０６０３】
例２．２  ＳＰＰＳによるＴ２０Ｃ
それぞれのアミノ酸を反応サイクルにおいて反応させた。１アミノ酸の組込みのための１反応サイクルにおける反応ステップは、反応サイクルの説明（ｉｉｉ）または（ｉｖ）に従う。
【０６０４】
ａ）反応サイクルの説明（ｉｉｉ）
ＤＭＦ（１００ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ（３当量）、ＨＣＴＵ（６．２ｇ、３当量）、ＤＩＥＡ（５．２ｍｌ、６当量）の混合物をＲＴで３０ｓ振とうした後、伸長配列において先行するステップに従って調製された樹脂に添加した。次いで、混合物をＲＴで２ｈ静置した。ニンヒドリン試験（方法Ｃ）によれば、再カップリングは必要なかった。次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１００ｍｌ）およびＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１００ｍｌ）で洗浄した。次いで、ピペリジン／ＤＭＦ（２０％（ｖ／ｖ）、１ｘ１ｍｉｎ、２ｘ１０ｍｉｎ；それぞれ１００ｍｌ）を用いる処理によりＦｍｏｃ基を除去した。
【０６０５】
ｂ）反応サイクルの説明（ｉｖ）
ＤＭＦ（１００ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ（３当量）、ＨｏＢｔ（２．３ｇ、当量）、ＤＩＰＣＤＩ（２．３ｍｌ、３当量）の混合物をＲＴで５ｍｉｎ振とうした後、伸長配列において先行するステップに従って調製された樹脂に添加し、次いで、ＲＴで１６ｈ静置した。ＤＭＦ（１００ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ（３当量）、ＨＣＴＵ（６．２ｇ、３当量）、ＤＩＥＡ（５．２ｍｌ、６当量）の混合物を用いて、再カップリングを実行した。この混合物をＲＴで３０ｓで振とうした後、樹脂に添加し、ＲＴで２ｈ静置した。次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１００ｍｌ）で洗浄し、ＤＭＦ（１００ｍｌ）中の無水酢酸（２．４ｍｌ、５当量）、ＤＩＥＡ（４．４ｍｌ、５当量）を用いてＲＴで１ｈ、樹脂をキャップした。次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１００ｍｌ）およびＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１００ｍｌ）で洗浄した。次いで、ピペリジン／ＤＭＦ（２０％（ｖ／ｖ）、１ｘ１ｍｉｎ、２ｘ１０ｍｉｎ；それぞれ１００ｍｌ）を用いる処理により、Ｆｍｏｃ基を除去した。
【０６０６】
ｃ）伸長配列
第１のアミノ酸、Ｆｍｏｃ−３６Ｐｈｅ−ＯＨを、例２．１ｄ）に従って調製された、Ｒｉｎｋアミドハンドル基およびジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーを含む樹脂にカップリングした後、伸長配列におけるそれぞれの先行するステップで調製された、得られたアミノ酸／ペプチドＲｉｎｋアミドハンドル基およびジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーを含む樹脂と以下のアミノ酸をカップリングさせた。アミノ酸の組込みの配列は表ｃ１）に与えられる。
【表２】
0005579939.tif 000035
【０６０７】
例２．３  分析−Ｒｉｎｋアミドハンドル基からのＴ２０Ｃの切断
例２．２に従って調製された、少量のペプチジル−樹脂（５ｍｇ）を、９５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ、２．５％（ｖ／ｖ）ＴＩＳおよび２．５％（ｖ／ｖ）Ｈ２Ｏの１ｍｌの混合物を用いて、樹脂をＲＴで１ｈ処理することにより、Ｒｉｎｋアミドハンドル基から切断した。分析的ＲＰ−ＨＰＬＣ（方法の説明Ｂ１、２５〜５０の移動相Ｂ）により決定されたように、７２％の純度のペプチドが得られた。
【０６０８】
例２．４  ジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーのＬ−ＬｙｓのＴｒｔ保護基除去、ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基の形成および樹脂からの切断
ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基の形成および樹脂（１．５７ｇ）からの例２．２に従って調製されたペプチド断片の切断を、例１．４ａに記載のものと同様の様式でもたらし、試薬および溶媒の量は多い方の量のペプチジル−樹脂に適合させる。
【０６０９】
ａ）Ｔｒｔ基脱保護
ＤＣＭ中の０．５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ（２ｘ５ｍｉｎ；それぞれ２０ｍｌ）。
【０６１０】
ｂ）中和
ＤＭＦ中の５％（ｖ／ｖ）ＤＩＥＡ（２ｘ５ｍｉｎ；それぞれ２０ｍｌ）。
【０６１１】
ｃ）ＤＫＰリンカー基形成
ＴＨＦ中の５％（ｖ／ｖ）ピペリジン（５ｘ５ｍｉｎ；それぞれ２０ｍｌ）。
【０６１２】
ＴＨＦを真空下で除去し、得られた粗生成物を予め冷却した（４℃）Ｅｔ２Ｏ（５０ｍｌｘ３）で洗浄した。６４２．５ｍｇのジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基を含むＴ２０Ｃが得られた。
【０６１３】
例３  ＨＴ２０Ｆの調製：ａ）ＢｏｃＴ２０ＮのＳＰＰＳ、ｂ）ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基を含むＴ２０ＣとのＨＳＰＰＳカップリング、およびｃ）全体的脱保護
ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基を含むＴ２０Ｃを、例２．４に従って得た。
【０６１４】
例３．１  ＳＰＰＳによるＢｏｃＴ２０Ｎ
ＢｏｃＴ２０ＮのＳＰＰＳを、線状ＦｍｏｃＳＰＰＳにより手動で実施した。最後のＧｌｕアミノ酸のみがＢｏｃ保護されたＢｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨであった。
【０６１５】
ａ）ＣＴＣ樹脂の予備処理
ＣＴＣ樹脂（５．００５４ｇ）を、ＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）およびＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）を用いてＲＴで膨張させた後、濾過した。
【０６１６】
ｂ）ＣＴＣ樹脂上への１番目のアミノ酸（Ｌ−Ｌｅｕ）の導入
ＤＣＭ（５０ｍｌ）中のＦｍｏｃ−２６Ｌｅｕ−ＯＨ（１．８ｇ、１当量）、ＤＩＥＡ（８．７ｍｌ、１０当量）を、例３．１ａ）に従って調製された樹脂に添加し、混合物をＲＴで１ｈ静置した。次いで、樹脂をＭｅＯＨ（０．８μｌ／ｍｇ樹脂；４ｍｌ）を用いてＲＴで１５ｍｉｎ処理することにより、樹脂をキャップした。キャッピング後、樹脂をＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）およびＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）で洗浄した。次いで、樹脂をピペリジン／ＤＭＦ（２０％（ｖ／ｖ）、１ｘ１ｍｉｎ、２ｘ１０ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。Ｆｍｏｃ−２６Ｌｅｕ−ＯＨ組込みの後、０．８９ｍｍｏｌ／ｇの樹脂充填量がＵＶ定量（方法の説明Ａ；ＶＡ：２５０ｍｌ、ＶＢ：５０ｍｌおよびＶＣ：０．３４ｍｌ）により決定された。
【０６１７】
ｃ）ＳＰＰＳによるＢｏｃＴ２０Ｎ
それぞれのアミノ酸を反応サイクルにおいて反応させた。１アミノ酸の組込みのための１反応サイクルにおける反応ステップは反応サイクルの説明（ｖ）に従う。
【０６１８】
ｃ１）反応サイクルの説明（ｖ）
ＤＭＦ（表ｃ２に与えられるようにＶ１ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ（３当量）、Ｏｘｙｍａ（１．９ｇ、３当量）、ＤＩＰＣＤＩ（２．３ｍｌ、３当量）の混合物をＲＴで５ｍｉｎ振とうした後、伸長配列における先行するステップに従って調製された樹脂に添加した。次いで、混合物をＲＴで１６ｈ静置した。ニンヒドリン試験（方法Ｃ）によれば、再カップリングは必要なかった。次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；表ｃ２に与えられるようにＶ２ｍｌ）およびＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；表ｃ２に与えられるようにＶ２ｍｌ）で洗浄した。
【０６１９】
次いで、樹脂をピペリジン／ＤＭＦ（２０％（ｖ／ｖ）、１ｘ１ｍｉｎ、２ｘ１０ｍｉｎ；表ｃ２に与えられるようにＶ３ｍｌ）で処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。
【０６２０】
ｃ２）伸長配列
２番目のアミノ酸、Ｆｍｏｃ−２５Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨを、反応サイクルの説明（ｖ）にしたがって、例３．１ｂ）に従って調製された樹脂にカップリングさせた後、伸長サイクルの先行するステップにおいて調製された得られたアミノ酸／ペプチジル−ＣＴＣ樹脂に、以下のアミノ酸を反応サイクルの説明（ｖ）に従ってカップリングさせた。アミノ酸の組込みの配列は表ｃ２）に与えられる。
【表３】
0005579939.tif 000036
【０６２１】
例３．２  分析−ＣＴＣ樹脂からのＨＴ２０Ｎの切断
ＣＴＣ樹脂からペプチドを切断し、アミノ酸残基を完全に脱保護するために、例３．１ｃ２）に従って調製されたペプチジル−樹脂（５ｍｇ）を、９５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ、２．５％（ｖ／ｖ）ＴＩＳおよび２．５％（ｖ／ｖ）Ｈ２Ｏからなる１ｍｌの混合物でＲＴで１ｈ処理した。ＲＰ−ＨＰＬＣ（方法の説明Ｂ１、５〜１００の移動相Ｂ）により決定されたように、８５．７％純度のＨＴ２０Ｎが得られた。このペプチドをＲＰ−ＨＰＬＣ−ＥＳＭＳ（方法の説明Ｂ２、５〜１００の移動相Ｂ、［Ｍ＋Ｈ］＋：１２４４．７、ここでＭは完全に脱保護されたＨＴ２０Ｎに対応する）により分析した。
【０６２２】
例３．３  側鎖保護されたＢｏｃＴ２０Ｎ
例３．１ｃ２）に従って調製されたペプチジル樹脂（１．０９４ｇ）を、ＤＣＭ中の１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡを用いてＲＴで処理し（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）、５つの混合物を全部、Ｈ２Ｏ（２０ｍｌ）中に注ぎ入れた。次いで、この水性混合物を蒸発させ、粗生成物を凍結乾燥した。完全に側鎖保護されたＢｏｃＴ２０Ｎが得られ（５１０ｍｇ）、これをＲＰ−ＨＰＬＣ−ＥＳＭＳ（方法の説明Ｂ２、９５〜１００の移動相Ｂ、［Ｍ＋Ｈ］＋：２１５３．８）により分析した。ＲＰ−ＨＰＬＣ−ＥＳＭＳ（方法の説明Ｂ１、５０〜１００の移動相Ｂ）により、完全に側鎖保護されたＢｏｃＴ２０Ｎの部分的脱保護は観察されなかった。ＲＰ−ＨＰＬＣにより、１つのピークが示され、純度は８５．７％であった（方法の説明Ｂ２、９５〜１００の移動相Ｂ）。
【０６２３】
例３．４  ＨＳＰＰＳによるＨＴ２０Ｆ
ａ）ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基を含むＴ２０ＣとＢｏｃＴ２０Ｎとの間のＨＳＰＰＳカップリング
例３．３に従って調製された、側鎖保護されたＢｏｃＴ２０Ｎ（１０ｍｇ、４．６μｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（２．２ｍｇ、３当量）をＤＣＭ（３５０μｌ）中に溶解し、ＤＩＰＣＤＩ（２．２μｌ、３当量）を混合物に添加した。混合物をＲＴで５ｍｉｎ振とうした。混合物を、ＤＣＭ（３５０μｌ）中の、例２．４に従って調製されたジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基を含むＴ２０Ｃ（１２ｍｇ、４．６μｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた混合物をＲＴで１６ｈ撹拌した。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析（方法の説明Ｂ１、９５〜１００の移動相Ｂ）によりカップリングをモニターし、全体的な変換を１６ｈ後に観察した。
【０６２４】
溶媒を真空下で蒸発させたところ、ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基にＣ末端接続された断片Ｂｏｃ［Ｔ２０−１７−３６］が得られた。
【０６２５】
ｂ）全体的脱保護によるＨＴ２０Ｆ
例３．４ａ）に従って調製された、ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基にＣ末端接続された断片Ｂｏｃ［Ｔ２０−１７−３６］（１ｍｇ）を、９２．５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ、２．５％（ｖ／ｖ）ＴＩＳおよび５％（ｖ／ｖ）ＤＭＢの１ｍｌの混合物を用いてＲＴで１ｈ処理した。Ｔｒｐ残基の側鎖上の得られたＮ−カルボキシ基を除去するために、０．５％（ｖ／ｖ）の水性ＮＨ３（１ｍｌ）を添加し、混合物をＲＴで１６ｈ静置したところ、完全に脱保護されたＨＴ２０Ｆが得られ、ＲＰ−ＨＰＬＣ（方法の説明Ｂ１、３０〜４０の移動相Ｂ）により決定されたように、その純度は６０．２％であった。ＲＰ−ＨＰＬＣ−ＥＳＭＳにより、標的ペプチド（方法の説明Ｂ２、３０〜４０の移動相Ｂ）が［（Ｍ＋２Ｈ）／２］２＋：１２９０．０（ここで、ＭはＨＴ２０ＦのＭＷである）であることが示された。
【０６２６】
例４  ＳＰＰＳによる式（ｅｘ−４）の化合物の調製
Ａｃ−Ｔｙｒ（ＯｔＢｕ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−ＯＨ  （ｅｘ−４）
ａ）ＣＴＣ樹脂の予備処理
ＣＴＣ樹脂（２０．４ｇ）をＤＣＭ（１ｈ；２００ｍｌ）を用いてＲＴで膨張させた後、濾過した。
【０６２７】
ｂ）ＣＴＣ樹脂上への１番目のアミノ酸（Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ）の導入
ＤＣＭ（１６０ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ（１２．６５ｇ、１．２当量）、ＤＩＥＡ（１４．９０ｇ、３．６当量）を、例４ａ）に従って調製された樹脂に添加し、混合物をＲＴで２ｈ静置した後、濾過した。樹脂をＤＩＥＡ／ＭｅＯＨ（１０％（ｖ／ｖ）、２００ｍｌ）およびＤＭＦ（４０ｍｌ）を用いてＲＴで１ｈ処理した後、濾過した。次いで、方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍに従ってＦｍｏｃ基を除去した。Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ組込みの後、０．９７ｍｍｏｌ／ｇの樹脂充填量が算出された。
【０６２８】
ｃ１）ＳＰＰＳによるアミノ酸の組込み
例４ｂ）に従って調製された樹脂から出発して、各アミノ酸、それぞれ、１．Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨおよび２．Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨを、例４ｃ２）に記載の反応サイクルに従って組み込んだ。
【０６２９】
ｃ２）サイクルの説明
ＤＭＦ（１０３ｇ）中のそれぞれのＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ（１．５当量）、ＨＯＢｔ（９．２ｇ、２．２５当量）、ＤＩＰＣＤＩ（９．３１ｍｌ、２．２５当量）の混合物をＲＴで５ｍｉｎ撹拌した後、例４ｂ）に従って調製された樹脂に添加した後、ＲＴで４５ｍｉｎ静置した。次いで、ＤＩＰＣＤＩ（４．６６ｍｌ、１．２５当量）を添加し、混合物をＲＴで４５ｍｉｎ静置した。ニンヒドリン試験（方法Ｃ）によれば、再カップリングは必要なかった。樹脂をＤＭＦ（３ｘ５ｍｉｎ；それぞれ１１０ｍｌ）で洗浄した。次いで、方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍに従ってＦｍｏｃ基を除去した。クロラニル試験（方法Ｄ）に従って全てのピペリジンを除去した。
【０６３０】
ｄ）樹脂からの切断
例４ｃ１）に従って調製された樹脂を、ＤＣＭ中の２％（ｗ／ｗ）ＴＦＡを用いて約１０℃で洗浄した（４ｘ１５ｍｉｎ；それぞれ１５０ｇ）。次いで、樹脂をＥｔＯＨ／ＤＣＭ（２０％（ｗ／ｗ）、３ｘ３ｍｉｎ；それぞれ１２０ｇ）を用いてＲＴ  １０℃で洗浄した。合わせた溶液を減圧下でＥｔＯＨと同時蒸発させることにより濃縮した（１ｘ４０ｇ）。
【０６３１】
ｅ）単離
例４ｄ）に従って得られた溶液（１０７．６０ｇ）に、水（８００ｇ）を添加した。得られた混合物を濾過し、固体を水（３ｘ３ｍｉｎ；それぞれ８０ｇ）およびＤＩＰＥ（３ｘ２ｍｉｎ；それぞれ１２０ｍｌ）で洗浄した。
【０６３２】
固体を減圧下、３０℃で乾燥したところ、ＲＰ−ＨＰＬＣ（方法Ｂ３）により決定されたように９４．７％の純度の白色の粉末として式（ｅｘ−４）の化合物２０．８０ｇが得られた。
【０６３３】
例５  ＨＭＰＳ樹脂へのジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーの結合、Ｒａｍａｇｅハンドル基の使用、および式（ｅｘ−５ｉ）の化合物の調製
ａ）ＨＭＰＳ樹脂の予備処理
ＨＭＰＳ樹脂（５．０ｇ）をＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１５０ｍｌ）およびＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１５０ｍｌ）を用いて膨張させた。
【０６３４】
ｂ）樹脂上への１番目のアミノ酸の導入
ＤＣＭ／ＤＭＦ（１５：１（ｖ／ｖ）、１２５ｍｌ）中のそれぞれのアミノ酸（Ｎ（Ｍｅ）Ｐｈｅ−ＯＨまたはＦｍｏｃ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ）およびＤＩＰＣＤＩ（２．４３ｇ、３．５当量）を、例５ａ）に従って調製された樹脂に添加した。次いで、ＤＣＭ（２５ｍｌ）中のＤＭＡＰ（０．２７ｇ、０．４当量）を添加し、ＲＴで３または４ｈ静置した。樹脂をＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１５０ｍｌ）およびＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１５０ｍｌ）で洗浄した。次いで、ＤＭＦ（１２５ｍｌ）中の無水酢酸（２．８１ｇ、５当量）およびＤＩＥＡ（３．５６ｇ、５当量）を用いて、ＲＴで３０ｍｉｎ、樹脂をキャップした。キャッピング後、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１５０ｍｌ）で洗浄した。次いで、方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍに従ってＦｍｏｃ基を除去した。１．１０ｍｍｏｌ／ｇの樹脂充填量が算出され、したがって、５．０ｇのＨＭＰＳ樹脂は５．５ｍｍｏｌの活性部位に相当する。
【０６３５】
ｂ１）ＸａａがＮ（Ｍｅ）Ｐｈｅ−ＯＨ（４．８６ｇ、２．２当量）であり、ＲＴで４ｈ静置する例５ｂ）に従う手順。
【０６３６】
ｂ２）ＸａａがＦｍｏｃ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ（７．４５ｇ、４．０当量）であり、ＲＴで３ｈ静置する例５ｂ）に従う手順。
【０６３７】
ｃ）２番目のアミノ酸の導入
ＤＭＦ（１００ｍｌ）中のＴｒｔ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ（１１．２６ｇ、２当量）、ＨＯＢｔ（４．２４ｇ、３当量）およびＤＩＰＣＤＩ（３．４９ｇ、３当量）の混合物を、ＲＴで５ｍｉｎ撹拌した後、例５ｂ１）に従って調製された樹脂に添加した。混合物をＲＴで１７ｈ撹拌した。
【０６３８】
次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１５０ｍｌ）で洗浄し、Ｆｍｏｃ基を方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍに従って除去した。
【０６３９】
ｄ）ＳＰＰＳによるアミノ酸の組込み
例５ｃ）に従って調製された樹脂から開始して、ハンドル基およびそれぞれのアミノ酸、すなわち、１．Ｆｍｏｃ−Ｒａｍａｇｅ−ＯＨ、２．Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、３．Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨおよび４．Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨを、反応サイクルの説明（ｖｉ）に従って組み込んだ。
【０６４０】
ｅ）反応サイクルの説明（ｖｉ）
ＤＭＦ（１００ｍｌ）中のハンドル基またはそれぞれのアミノ酸Ｆｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ（２当量）、ＨＯＢｔ（４．２４ｇ、３当量）、ＤＩＰＣＤＩ（３．４９ｇ、３当量）の混合物をＲＴで５ｍｉｎ撹拌した後、それぞれ、例５ｃ）（ハンドル基の場合）および次いでｄ）（アミノ酸の場合）に従って調製された樹脂に添加し、次いでＲＴで１ｈ静置した。樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１５０ｍｌ）で洗浄し、ＸａａがＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨである場合、ＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１５０ｍｌ）でさらに洗浄した。ＸａａがＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨである場合、樹脂をＤＭＦ（１ｘ１ｍｉｎ；１５０ｍｌ）を用いてＲＴでさらに洗浄した。最後のＸａａ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨを除いて、Ｆｍｏｃ基を方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍに従って除去した。
【０６４１】
ｆ）分析−ハンドル基から、およびそれによってまた樹脂からのペプチドの切断
例５ｄ）に従って得られた少量の樹脂（５ｍｇ）を、９５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ、２．５％（ｖ／ｖ）ＴＩＳおよび２．５％（ｖ／ｖ）水の１ｍｌの混合物を用いてＲＴで１ｈ処理した。式（ｅｘ−５ｆ）の化合物が、分析的ＲＰ−ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ−方法Ｂ３）により決定されたように、８６．４％の純度で得られた。
【０６４２】
Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（ｅｘ−５ｆ）
ｇ）リンカーのＬ−ＬｙｓのＴｒｔ保護基除去、ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基の形成および樹脂からの切断
ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基の形成および例５ｄ）に従って調製された樹脂からのＤＫＰ−ペプチドの切断を、例１．４ａに記載のものと同様の様式でもたらし、試薬および溶媒の量をペプチジル−樹脂の量に適合させる。
【０６４３】
ｇ１）Ｔｒｔ基脱保護
例５ｄ）に従って調製された化合物の、ＤＣＭ中の０．２％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ（２ｘ５ｍｉｎ、それぞれ１００ｍｌ）を用いる処理。
【０６４４】
ｇ２）中和
次いで、ＤＣＭ（２ｘ５ｍｉｎ；それぞれ１００ｍｌ）およびＤＣＭ（２ｘ１ｍｉｎ；それぞれ５０ｍｌ）中の５％（ｖ／ｖ）ＤＩＥＡを用いる処理。ＨＰＬＣを用いて、液相中に生成物が残存していないことを確保した（ＨＰＬＣ−方法Ｂ３）。
【０６４５】
ｇ３）ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基の形成および樹脂からの切断
次いで、ＴＨＦ（５ｘ５ｍｉｎ、それぞれ１００ｍｌ）中の５％（ｖ／ｖ）ピペリジンを用いる処理。次いで、樹脂をＴＨＦ（３ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１００ｍｌ）で洗浄した。ＨＰＬＣを用いて、生成物が合わせた液相中にあることを確保した（ＨＰＬＣ−方法Ｂ３）。
【０６４６】
真空下でトルエン（３ｘ１５０ｍｌ）と同時蒸発させることによりＴＨＦを除去した。ＤＢＦ付加物と式（ｅｘ−５ｇ４）の化合物との混合物の白色の固体１．９６ｇが得られた。方法Ｂ４は予想された質量を与えた。
【化３２】
0005579939.tif 000037
【０６４７】
ｇ４）ＤＢＦ付加物の除去
例５ｇ３）に従って調製された白色の固体を、ＤＩＰＥ（１ｘ２ｍｉｎ、５０ｍｌ；３ｘ２ｍｉｎ、それぞれ１０ｍｌ）で洗浄した。２２３．７ｍｇの式（ｅｘ−５ｇ４）の化合物が白色の固体として得られた。
【０６４８】
ｈ）分析−ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基からのペプチドの切断
例５ｇ４）に従って調製された、少量の式（ｅｘ−５ｇ４）の化合物（５ｍｇ）を、９５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ、２．５％（ｖ／ｖ）ＴＩＳおよび２．５％（ｖ／ｖ）水の１ｍｌの混合物を用いてＲＴで１ｈ処理することにより脱保護した。式（ｅｘ−５ｈ）の化合物が得られ、その構造をＲＰ−ＨＰＬＣ分析方法Ｂ３により確認した。
【０６４９】
Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（ｅｘ−５ｈ）
ｉ）ＨＳＰＰＳによる式（ｅｘ−４）の化合物と式（ｅｘ−５ｇ４）の化合物とのカップリング
ＤＣＭ（２ｍｌ）中の、例４に従って調製された式（ｅｘ−４）の化合物（８４ｍｇ、１当量）、ＨＯＢｔ（５３ｍｇ、３．２当量）およびＤＩＰＣＤＩ（５３μｌ、３．１当量）の混合物をＲＴで１５ｍｉｎ撹拌した後、ＤＣＭ（１ｍｌ）中の、例５ｇ４）に従って調製された式（ｅｘ−５ｇ４）の化合物（１００ｍｇ、１．１当量）の溶液に添加し、次いで、混合物をＲＴで４ｈ撹拌した。カップリングをＨＰＬＣ方法Ｂ３によりモニターした。
【０６５０】
反応混合物を、水性飽和ＮａＨＣＯ３（２ｘ４０ｍｌ）、１Ｍ  ＫＨＳＯ４水性溶液（２ｘ４０ｍｌ）および水性飽和ＮａＣｌ（２ｘ４０ｍｌ）で洗浄した。
【０６５１】
有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮したところ、Ｒａｍａｇｅハンドル基のキラリティにより引き起こされる２つのジアステレオ異性体にそれぞれ起因する２６．８％および２８．２％の２つのピークからなる、分析的ＲＰ−ＨＰＬＣ（方法の説明Ｂ４）により決定されたように５５％の純度の油として３２８．５ｍｇの式（ｅｘ−５ｉ）の化合物が得られた。
【化３３】
0005579939.tif 000038
【０６５２】
例６  ＨＭＰＳ樹脂へのジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーの結合。式（ｅｘ−６ｅ３−ｄ１）、（ｅｘ−６ｅ３−ｄ２）、（ｅｘ−６ｆ１）および（ｅｘ−６ｆ１）の化合物の調製
ａ）２番目のアミノ酸Ｌ−Ｌｙｓの導入
ＤＭＦ（１００ｍｌ）中のＴｒｔ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ（１０．０８ｇ、２当量）、ＨＯＢｔ（３．７９ｇ、３当量）およびＤＩＰＣＤＩ（３．１２ｇ、３当量）の混合物をＲＴで５ｍｉｎ撹拌した後、例５ｂ２）に従って調製された樹脂に添加した。混合物をＲＴで１７ｈ撹拌した。次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１５０ｍｌ）で洗浄し、Ｆｍｏｃ基を方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍに従って除去した。
【０６５３】
ｂ）ＳＰＰＳによるハンドル基、スペーサー基およびアミノ酸の導入
ハンドル基、スペーサー基および各アミノ酸を反応サイクルにおいて反応させた。１アミノ酸の組込みのための１反応サイクルにおける反応ステップは、反応サイクルの説明（ｖｉｉ）に従う。
【０６５４】
ｃ）伸長配列ｄ１）およびｄ２）のための反応サイクルの説明（ｖｉｉ）
毎回、ＤＭＦ（１００ｍｌ）中の、伸長配列による、ｄ１）の場合はＦｍｏｃ−ＴＴＤＳ−ＯＨを提供するスペーサー基、Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋ−ＯＨを提供するハンドル基またはそれぞれのＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨと、ＨＯＢｔ（３．７９ｇ、３当量）およびＤＩＰＣＤＩ（３．１２ｇ、３当量）との混合物をＲＴで５ｍｉｎ撹拌した後、まず例６ａ）に従って調製された樹脂に、次いで、伸長配列における先行するステップで調製された樹脂に添加した。混合物をＲＴで１〜４ｈ撹拌した。次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１５０ｍｌ、Ｆｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨがＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨである場合、５ｘの代わりに６ｘ）で洗浄し、Ｆｍｏｃ基を方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍに従って除去した。
【０６５５】
それぞれの伸長配列ｄ１）またはｄ２）の最後のＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨのＦｍｏｃ基除去の前にのみ、９５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ、２．５％（ｖ／ｖ）ＴＩＳおよび２．５％（ｖ／ｖ）Ｈ２Ｏからなる１ｍｌの混合物を用いてＲＴで１ｈ、樹脂を処理することにより、Ｒｉｎｋアミドハンドル基から少量の得られたペプチジル−樹脂（５ｍｇ）を切断した。伸長配列ｄ１）により４６．７％の純度の式（ｅｘ−６ｃ−ｄ１）の化合物が、伸長配列ｄ２）により６５．４％の純度の式（ｅｘ−６ｃ−ｄ２）の化合物が得られた（ＲＰ−ＨＰＬＣ、方法の説明Ｂ３）。
【０６５６】
Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（ｅｘ−６ｃ−ｄ１）
Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｌｅｕ−ＮＨ２（ｅｘ−６ｃ−ｄ２）
ｄ）ＳＰＰＳによるアミノ酸の組込み
アミノ酸の組込みの配列は以下の通りであった。
【表４】
0005579939.tif 000039
【０６５７】
ｅ）ジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーのＬ−ＬｙｓのＴｒｔ保護基除去、ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基の形成および樹脂からの切断
ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基の形成ならびにそれぞれ例６ｄ１）および例６ｄ２）と共に例６ｃ）に従って調製された樹脂からのＤＫＰ−ペプチドの切断を、例１．４ａに記載のものと同様の様式でもたらし、試薬および溶媒の量をペプチジル−樹脂の量に適合させる。
【０６５８】
ｅ１）Ｔｒｔ基脱保護
それぞれ例６ｄ１）および例６ｄ２）と共に例６ｃ）に従って調製された化合物の、ＤＣＭ中の０．２％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ（２ｘ５ｍｉｎ、それぞれ１００ｍｌ）を用いる処理。
【０６５９】
ｅ２）中和
次いで、ＤＣＭ（２ｘ５ｍｉｎ；それぞれ１００ｍｌ）、ＤＣＭ（２ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１００ｍｌ）およびＴＨＦ（２ｘ１ｍｉｎ；それぞれ１００ｍｌ）中の５％（ｖ／ｖ）ＤＩＥＡを用いる処理。
【０６６０】
ｅ３）ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基の形成および樹脂からの切断
例５ｇ３）の手順に従う処理。例６ｄ１）からの出発材料の場合は０．８３ｇの式（ｅｘ−６ｅ３−ｄ１）の化合物、および例６ｄ２）からの出発材料の場合は２．０３ｇの式（ｅｘ−６ｅ３−ｄ２）の化合物の油が得られた。
【化３４】
0005579939.tif 000040
【０６６１】
ｆ１）ＨＳＰＰＳによる式（ｅｘ−４）の化合物と式（ｅｘ−６ｅ３−ｄ１）の化合物とのカップリング
ＤＣＭ（５ｍｌ）中の、例４に従って調製された式（ｅｘ−４）の化合物（２５５ｍｇ、１当量）、ＨＯＢｔ（１６０ｍｇ、３当量）およびＤＩＰＣＤＩ（１６１μｌ、３当量）の混合物をＲＴで６０ｍｉｎ撹拌した後、ＤＣＭ（１ｍｌ）中の、例６ｅ３）に従って調製された式（ｅｘ−６ｅ３−ｄ１）の化合物（４０１ｍｇ、１．０当量）の溶液に添加し、次いで、ＲＴで２ｈ撹拌した。カップリングをＨＰＬＣ方法Ｂ３によりモニターした。反応混合物を、水性飽和ＮａＨＣＯ３（２ｘ４０ｍｌ）、１Ｍ  ＫＨＳＯ４水性溶液（２ｘ４０ｍｌ）および水性飽和ＮａＣｌ（２ｘ４０ｍｌ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮したところ、油として３６８．５ｍｇの式（ｅｘ−６ｆ１）の化合物が得られた。
【化３５】
0005579939.tif 000041
【０６６２】
ｆ２）ＨＳＰＰＳによる式（ｅｘ−４）の化合物と式（ｅｘ−６ｅ３−ｄ２）の化合物との付加
ＤＣＭ（５ｍｌ）中の、例４に従って調製された式（ｅｘ−４）の化合物（２９５ｍｇ、１当量）、ＨＯＢｔ（１９０ｍｇ、３当量）およびＤＩＰＣＤＩ（１８８μｌ、３当量）の混合物をＲＴで２０ｍｉｎ撹拌した後、ＤＣＭ（１ｍｌ）中の、例６ｅ３）に従って調製された式（ｅｘ−６ｅ３−ｄ２）の化合物（５０２ｍｇ、１．０当量）の溶液に添加し、次いでＲＴで３．５ｈ撹拌した。カップリングをＨＰＬＣ方法Ｂ３によりモニターした。
【０６６３】
反応混合物を、水性飽和ＮａＨＣＯ３（２ｘ４０ｍｌ）、１Ｍ  ＫＨＳＯ４水性溶液（２ｘ４０ｍｌ）および水性飽和ＮａＣｌ（２ｘ４０ｍｌ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮したところ、油として３７２．８ｇの式（ｅｘ−６ｆ２）の化合物が得られた。
【化３６】
0005579939.tif 000042
【０６６４】
例７  ハンドル基ＨＭＰＡの使用。式（ｅｘ−７ｈ３）の化合物の調製
ａ）ＨＭＰＳ樹脂の予備処理
ＨＭＰＳ樹脂（１０３．６ｍｇ）を、ＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）およびＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）を用いてＲＴで膨張させた後、濾過した。
【０６６５】
ｂ）樹脂上へのジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーの１番目のアミノ酸（Ｄ−Ｐｒｏ）の導入
ＤＣＭ／ＤＭＦ（１５：１（ｖ／ｖ）、２．５ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ（１３２ｍｇ、４当量）およびＤＩＰＣＤＩ（３０μｌ、２当量）を、例７ａ）に従って調製された樹脂に添加した。次いで、ＤＣＭ（０．５ｍｌ）中のＤＭＡＰ（４．８ｍｇ、０．４当量）を添加し、ＲＴで２ｈ静置した。１番目のアミノ酸を、ＤＣＭ／ＤＭＦ（１５：１（ｖ／ｖ）、２．５ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ（１３２ｍｇ、４当量）およびＤＩＰＣＤＩ（３０μｌ、２当量）を用いてＲＴで１６ｈ再カップリングした。カップリング後、樹脂をＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）およびＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）で洗浄した。次いで、樹脂を、ＤＭＦ（２．５ｍｌ）中の無水酢酸（４６μｌ、５当量）およびＤＩＥＡ（８６μｌ、５当量）を用いてＲＴで３０ｍｉｎキャップした。キャッピング後、樹脂をＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）およびＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）で洗浄した。次いで、Ｆｍｏｃ基を方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍにより除去した。
【０６６６】
ＵＶ定量（方法の説明Ａ；ＶＡ：１００ｍｌ、ＶＢ：１０ｍｌおよびＶＣ：１．４ｍｌ）により、０．９８ｍｍｏｌ／ｇの樹脂充填量が決定された。
【０６６７】
ｃ）２番目のアミノ酸（Ｌ−Ｄｐｒ）の導入
ＤＭＦ（２ｍｌ）中のＴｒｔ−Ｌ−Ｄｐｒ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ（１７３ｍｇ、３当量）、ＨＯＢｔ（４７ｍｇ、３当量）およびＤＩＰＣＤＩ（４７μｌ、３当量）の混合物をＲＴで５ｍｉｎ振とうした後、例７ｂ）に従って調製された樹脂に添加した。混合物をＲＴで１ｈ静置した。ニンヒドリン試験（方法Ｃ）によれば、再カップリングは必要なかった。次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）およびＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）で洗浄した。次いで、Ｆｍｏｃ基を方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍにより除去した。
【０６６８】
ｄ）ＨＭＰＡハンドル基の導入
ＤＭＦ（２ｍｌ）中のＨＭＰＡ（５５ｍｇ、３当量）、ＨＯＢｔ（４７ｍｇ、３当量）およびＤＩＰＣＤＩ（４７μｌ、３当量）の混合物を、例７ｃ）に従って調製された樹脂に添加した後、ＲＴで１ｈ静置した。ニンヒドリン試験（方法Ｃ）によれば、再カップリングは必要なかった。次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）およびＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）で洗浄した。
【０６６９】
ｅ）ＳＰＰＳによるＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨの導入
例７ｄ）に従って調製された樹脂から出発して、１．Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨを反応サイクルの説明（ｖｉｉｉ）に従って組み込んだ後、それぞれ２．Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨおよび３．Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨを反応の説明（ｉｘ）に従って組み込んだ。
【０６７０】
ｆ１）反応サイクルの説明（ｖｉｉｉ）
ＤＣＭ／ＤＭＦ（１５：１（ｖ／ｖ）、２．５ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（１４４ｍｇ、４当量）およびＤＩＰＣＤＩ（３０μｌ、２当量）を、例７ｄ）に従って調製された樹脂に添加した。次いで、ＤＣＭ（０．５ｍｌ）中のＤＭＡＰ（４．８ｍｇ、０．４当量）を添加し、ＲＴで２ｈ静置した。アミノ酸を、ＤＣＭ／ＤＭＦ（１５：１（ｖ／ｖ）、２．５ｍｌ）中のＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（１４４ｍｇ、４当量）およびＤＩＰＣＤＩ（３０μｌ、２当量）を用いてＲＴで１６ｈ再カップリングした。カップリング後、樹脂をＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）およびＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）で洗浄した。次いで、樹脂を、ＤＭＦ（２．５ｍｌ）中の無水酢酸（４６μｌ、５当量）およびＤＩＥＡ（８６μｌ、５当量）を用いてＲＴで３０ｍｉｎキャップした。キャッピング後、樹脂をＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）およびＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）で洗浄した。次いで、Ｆｍｏｃ基を方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍにより除去した。ＵＶ定量（方法の説明Ａ；ＶＡ：１００ｍｌ、ＶＢ：１０ｍｌおよびＶＣ：１．４ｍｌ）により、０．９４ｍｍｏｌ／ｇの樹脂充填量が決定された。
【０６７１】
ｆ２）反応サイクルの説明（ｉｘ）
ＤＭＦ（２ｍｌ）中のそれぞれのＦｍｏｃ−Ｘａａ−ＯＨ（３当量）、ＨＯＢｔ（４７ｍｇ、３当量）およびＤＩＰＣＤＩ（４７μｌ、３当量）の混合物を樹脂に添加した後、ＲＴで１ｈ静置した。ニンヒドリン試験（方法Ｃ）によれば、再カップリングは必要なかった。次いで、樹脂をＤＭＦ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）およびＤＣＭ（５ｘ１ｍｉｎ；それぞれ３ｍｌ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ基を方法Ｆｍｏｃ−ｇｒ−ｒｅｍに従って除去した。
【０６７２】
ｇ）分析−ハンドル基からの、およびそれによって樹脂からのペプチドの切断
例７ｅ）に従って得られた少量の樹脂（５ｍｇ）を、９５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ、２．５％（ｖ／ｖ）ＴＩＳおよび２．５％（ｖ／ｖ）水の１ｍｌの混合物を用いてＲＴで１ｈ、樹脂を処理することにより、樹脂から切断した。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析により、Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２の同一性を確認した（方法の説明Ｂ１、５〜１００の移動相Ｂ）。
【０６７３】
ｈ）ジケトピペラジン基形成ジペプチジルリンカーのＬ−ＤｐｒのＴｒｔ保護基除去、ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基の形成および樹脂からの切断
ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基の形成および例７ｅ）に従って調製された樹脂からのＤＫＰ−ペプチドの切断を、例１．４ａに記載のものと同様の様式でもたらし、試薬および溶媒の量をペプチジル−樹脂の量に適合させる。
【０６７４】
ｈ１）Ｔｒｔ基脱保護
例７ｅ）に従って調製された化合物の、ＤＣＭ（２ｘ５ｍｉｎ、それぞれ２ｍｌ）中の０．２％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ、２％（ｖ／ｖ）ＴＩＳを用いる処理。
【０６７５】
ｈ２）中和
ＤＣＭ（２ｘ５ｍｉｎ；それぞれ２ｍｌ）中の５％（ｖ／ｖ）ＤＩＥＡを用いる処理。
【０６７６】
ｈ３）ジケトピペラジン残基を含むＣ末端保護基の形成および樹脂からの切断
次いで、ＴＨＦ（２ｘ５ｍｉｎ；それぞれ２ｍｌ）中の５％（ｖ／ｖ）ピペリジンを用いる処理。
【０６７７】
真空下での蒸発によりＴＨＦを除去し、得られた式（ｅｘ−７ｈ３）の化合物をＲＰ−
ＨＰＬＣ−ＥＳＭＳ（方法の説明Ｂ２、５〜１００の移動相Ｂ、［（Ｍ＋Ｈ）／２］＋：
６７９、ここでＭは式（ｅｘ−７ｈ３）の化合物のＭＷである）により分析した。
【化３７】
0005579939.tif 000043
本願発明の実施態様は以下のとおりである。
（１）
ペプチドＣ−ＰＥＰの調製のための方法（Ｃ−ＰＥＰ）であって、
Ｃ−ＰＥＰはペプチジルラジカルＰＥＰ−Ｃを含み、ＰＥＰ−ＣのＣ末端は保護基ＤＫＰ−ＰＧにより保護され、ＤＫＰ−ＰＧはハンドル基ＨＧ、必要に応じてスペーサー基ＳＧ、およびジケトピペラジン残基ＤＫＰを含み；
ＳＧはペプチド化学において従来用いられるスペーサー基であり；
ＤＫＰはジペプチド残基ＤＰＲから誘導されたジケトピペラジン残基であり；
ＤＰＲはαアミノ酸残基Ｘａａ１およびＸａａ２を含み；
Ｘａａ１はＤＰＲのＣ末端アミノ酸残基であり；
Ｘａａ２はＤＰＲのＮ末端アミノ酸残基であり、またＸａａ２は側鎖を有し、前記側鎖は官能基ＦＧによって置換されており；
ＰＥＰ−ＣはＸａａＣ（１）を介してＨＧに接続しており；
ＸａａＣはＰＥＰ−Ｃのアミノ酸残基であり；
Ｘａａ（１）における指数（１）はＰＥＰ−ＣのＣ末端位置を表し；
ＸａａＣ（１）はＰＥＰ−ＣのＣ末端アミノ酸残基であり；
ＨＧは、ペプチドのＣ末端を固相に接続するための固相ペプチド合成ＳＰＰＳにおいて従来用いられるハンドル基であり、ペプチド中の２個のアミノ酸残基を接続するアミド結合を切断しない条件下でＨＧからＣ末端の切断を可能とし；
ＨＧはＦＧに直接接続しているか、またはＳＧが存在する場合、ＨＧはＳＧに接続しており、ＳＧはＦＧに接続しており；
方法（Ｃ−ＰＥＰ）は、ステップ（ｉｉｉ）を含み；
ステップ（ｉｉｉ）は反応（ＩＮＲＩＦＯ）を含み；
反応（ＩＮＲＩＦＯ）は、ペプチドＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ中での分子内環形成および同時切断反応を含む反応であり；
ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａは、Ｃ−ＰＥＰの前駆体であり、ＰＥＰ−Ｃおよび樹脂ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａを含み、ＰＥＰ−ＣはＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａに接続しており；
ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａは、樹脂ＡおよびＤＫＰ−ＰＧ形成リンカーＤＫＰ−Ｌを含み、樹脂ＡはＤＫＰ−Ｌに接続しており、
樹脂Ａは、ＳＰＰＳにおける固相として従来用いられる樹脂であり、
ＤＫＰ−Ｌは、ＨＧ、必要に応じてＳＧ、およびＤＰＲを含み、Ｘａａ１のカルボン酸基であるＤＰＲのＣ末端カルボン酸基は樹脂Ａに接続しており；
反応（ＩＮＲＩＦＯ）における分子内環形成は、Ｘａａ２のαアミノ基であるＤＰＲのＮ末端アミノ基と、ＤＰＲのＣ末端カルボン酸基との反応であり、それによってＤＫＰを形成し、それによってＸａａ１が樹脂Ａから同時に切断され、ＤＫＰ−ＰＧが形成され；
ＨＧは、ＨＧとＸａａＣ（１）との間の結合が反応（ＩＮＲＩＦＯ）中に切断されないように選択される、前記方法。
（２）
ＰＥＰ−Ｃが、ステップ（ｉｉｉ）の前に固相ペプチド合成ＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）により調製され；樹脂Ａが、樹脂ＡとＸａａ１との間の結合がＳＰＰＳ（ＰＥＰ−Ｃ）の間に切断されないように選択される、請求項１に記載の方法（Ｃ−ＰＥＰ）。
（３）
ＤＫＰ−ＰＧ形成リンカーＤＫＰ−Ｌの調製のための方法（ＤＫＰ−Ｌ）であって、方法（ＤＫＰ−Ｌ）が、ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉ）、ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉｉ）および必要に応じて、ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉ）を含み；
ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉ）において、Ｘａａ２がＸａａ１にカップリングされ；
任意選択のステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉ）において、ＳＧがＤＫＰ−Ｌ中に存在する場合、ＳＧがＸａａ２にカップリングされ；
ステップ（ＤＫＰ−Ｌ−ｉｉｉ）において、ＨＧが、ＳＧがＤＫＰ−Ｌに存在する場合はＳＧ、またはＸａａ２のいずれかにカップリングされ；
ＤＫＰ−ＰＧ、ＤＫＰ−Ｌ、ＤＫＰ、Ｘａａ２、Ｘａａ１、ＨＧおよびＳＧが、請求項１に記載の通りである、方法。
（４）
ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａの調製のための方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）であって、方法（ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ）が、方法（Ｘ１）または方法（Ｘ２）であり；
方法（Ｘ１）が、ステップ（Ｘ１−ｉ）、ステップ（Ｘ１−ｉｉ）、ステップ（Ｘ１−ｉｖ）および必要に応じてステップ（Ｘ１−ｉｉｉ）を含み；
ステップ（Ｘ１−ｉ）において、アミノ酸Ｘａａ１が樹脂Ａにカップリングされ；
ステップ（Ｘ１−ｉｉ）において、アミノ酸Ｘａａ２がＸａａ１にカップリングされ；
任意選択のステップ（Ｘ１−ｉｉｉ）において、ＳＧがＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ中に存在する場合、ＳＧがＸａａ２の側鎖にカップリングされ；
ステップ（Ｘ１−ｉｖ）において、ＨＧが、ＳＧがＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ中に存在する場合はＳＧ、またはＸａａ２のいずれかにカップリングされ；
方法（Ｘ２）が、ステップ（Ｘ２−ｉ）を含み；
ステップ（Ｘ２−ｉ）において、ＤＰＫ−Ｌが樹脂Ａにカップリングされ；
ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、樹脂Ａ、ＤＫＰ−ＰＧ、ＤＫＰ−Ｌ、ＤＫＰ、Ｘａａ２、Ｘａａ１、ＨＧおよびＳＧが、請求項１に記載の通りである、方法。
（５）
ＨＧが、式（ＨＧＦ−Ｉ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＩ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＩＩ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−ＩＶ）のハンドル基、式（ＨＧＦ−Ｖ）のハンドル基および式（ＨＧＦ−ＶＩ）のハンドル基、
【化３８】
0005579939.tif 000044
【化３９】
0005579939.tif 000045
からなる群より選択されるハンドル基であり、
式中、
（＊）は、方法（Ｃ−ＰＥＰ）におけるＰＥＰ−ＣのＣ末端のＣ原子と、ＨＧとの間の結合を示すか、または
方法（Ｃ−ＰＥＰ）におけるＰＥＰ−ＣのＣ末端アミノ酸残基が側鎖を有し、この側鎖を介してＨＧに接続される場合、方法（Ｃ−ＰＥＰ）におけるＰＥＰ−ＣのＣ末端アミノ酸残基の側鎖と、ＨＧとの間の結合を示し、
（＊＊）は、ｎが１である場合、ＨＧとＳＧとの間の結合を示すか、またはｎが０である場合、ＨＧとＦＧとの間の結合を示し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１０およびＲ１１は、同一であるか、または異なり、水素およびＯ−Ｃ１〜４アルキルからなる群より互いに独立に選択され、
ｓ１−１、ｓ２、ｓ３、ｓ４およびｓ６は、同一であるか、または異なり、１、２、３および４からなる群より互いに独立に選択され、
ｓ５−１は、０、１、２、３または４であり、
ｓ１−２、ｓ５−２およびｓ５−３は、同一であるか、または異なり、互いに独立に０または１であり、
Ｔ１−１は、ＯまたはＮＨであり、
Ｔ１−２およびＴ５−１は、Ｏであり、
ここで、ｎ、ＳＧ、ＦＧ、ＰＥＰ−Ｃおよび方法（Ｃ−ＰＥＰ）は、請求項１に記載の通りである、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
（６）
ＳＧが、式（ＳＧ−Ｉ）のスペーサー基、式（ＳＧ−ＩＩ）のスペーサー基、式（ＳＧ−ＩＩＩ）のスペーサー基、式（ＳＧ−ＩＶ）のスペーサー基および式（ＳＧ−Ｖ）のスペーサー基；
【化４０】
0005579939.tif 000046
【化４１】
0005579939.tif 000047
からなる群より選択されるスペーサー基であり、
式中、
ｍ１、ｍ５、ｍ６、ｍ７、ｍ９、ｍ１０、ｍ１１およびｍ１２は同一であるか、または異なり、互いに独立に１〜５００の整数であり；
ｍ２、ｍ３およびｍ４は、同一であるか、または異なり、互いに独立に１、２、３または４であり、
（＊＊＊）は、ｎが１である場合、ＳＧからＨＧへの結合であり、
（＊＊＊＊）は、ｎが１である場合、ＳＧとＸａａ２との間の結合であり、
ここで、ＨＧ、Ｘａａ２およびｎは請求項１に記載の通りである、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
（７）
Ｘａａ１が、天然αアミノ酸残基、α−Ｎ−メチルアミノ酸残基、Ｌ−Ｈｐｒ残基、Ｄ−Ｈｐｒ残基、ＤＬ−Ｈｐｒ残基、２−（Ｃ１〜５−アルキル）−Ｄ−アミノ酸残基、２−（Ｃ１〜５−アルキル）−Ｌ−アミノ酸残基、２−（Ｃ１〜５−アルキル）−ＤＬ−アミノ酸残基および式（ＨｙｐＸ）；
【化４２】
0005579939.tif 000048
（式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＣ（Ｒ１３）Ｒ１４であり；
Ｒ５、Ｒ７、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は同一であるか、または異なり、水素、Ｃ１〜４アルキルおよびＯ−Ｒ８からなる群より互いに独立に選択され；
Ｒ８は、ペプチド化学において側鎖保護のために従来用いられる保護基、または式（Ｓｕｂ−Ｒ８）の置換基；
【化４３】
0005579939.tif 000049
（式中、
ｍ８は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；
Ｒ９は、Ｃ１〜４アルキルである））
の化合物から誘導された残基からなる群より選択される、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
（８）
Ｘａａ２が、Ｌ−Ｌｙｓ残基、Ｄ−Ｌｙｓ残基、ＤＬ−Ｌｙｓ残基、Ｌ−Ｏｒｎ残基、Ｄ−Ｏｒｎ残基、ＤＬ−Ｏｒｎ残基、Ｌ−４−アミノプロリン残基、Ｄ−４−アミノプロリン残基、ＤＬ−４−アミノプロリン残基、Ｌ−α，γ−ジアミノブタン酸残基、Ｄ−α，γ−ジアミノブタン酸残基、ＤＬ−α，γ−ジアミノブタン酸残基、Ｌ−α，β−ジアミノプロパン酸残基、Ｄ−α，β−ジアミノプロパン酸残基、ＤＬ−α，β−ジアミノプロパン酸残基、Ｌ−Ｓｅｒ残基、Ｄ−Ｓｅｒ残基、ＤＬ−Ｓｅｒ残基、Ｌ−Ｔｈｒ残基、Ｄ−Ｔｈｒ残基、ＤＬ−Ｔｈｒ残基、Ｌ−Ｃｙｓ残基、Ｄ−Ｃｙｓ残基、ＤＬ−Ｃｙｓ残基、Ｌ−ホモシステイン残基、Ｄ−ホモシステイン残基、ＤＬ−ホモシステイン残基、Ｌ−Ａｓｐ残基、Ｄ−Ａｓｐ残基、ＤＬ−Ａｓｐ残基、Ｌ−Ｇｌｕ残基、Ｄ−Ｇｌｕ残基およびＤＬ−Ｇｌｕ残基からなる群より選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
（９）
樹脂Ａが、ヒドロキシメチルポリスチレン（ＨＭＰＳ）樹脂、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に基づく樹脂、ＰＥＧがＰＥＧ樹脂とは異なる樹脂上にグラフトされた樹脂、ポリスチレン樹脂、ｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール樹脂、クロロメチルポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂、ポリ（ビニルアルコール）グラフトポリ（エチレングリコール）（ＰＶＡ−ｇ−ＰＥＧ）樹脂からなる群より選択される、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
（１０）
ペプチドＰＥＰの調製のための方法（ＰＥＰ−ＨＳＰＰＳ）であって、
方法（ＰＥＰ−ＨＳＰＰＳ）が、ステップ（ｉ−ｐｅｐ）およびステップ（ｉｉ−ｐｅｐ）を含み、
ステップ（ｉ−ｐｅｐ）において、ペプチドＣ−ＰＥＰが請求項１に記載の方法（Ｃ−ＰＥＰ）に従って調製され；次いで、
ステップ（ｉｉ−ｐｅｐ）において、ステップ（ｉ−ｐｅｐ）で得られたＣ−ＰＥＰが、均一液相ペプチド合成ＨＳＰＰＳにより、Ｎ末端保護されたアミノ酸またはＮ末端保護されたペプチドＰＥＰ−Ｎとカップリングされ；
方法（Ｃ−ＰＥＰ）およびＣ−ＰＥＰが、請求項１に記載の通りである、方法。
（１１）
Ｃ−ＰＥＰ、ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂ＡおよびＤＫＰ−Ｌが請求項１に記載の通りである、Ｃ−ＰＥＰ、ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂ＡおよびＤＫＰ−Ｌからなる群より選択される化合物。
（１２）
Ｃ−ＰＥＰ、ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、ＤＫＰ−ＬおよびＤＫＰ−ＰＧが請求項１に記載の通りである、ペプチド化学におけるＣ−ＰＥＰ、ＰＥＰ−Ｃ−ＤＫＰ−Ｌ−樹脂Ａ、ＤＫＰ−Ｌ−樹脂ＡおよびＤＫＰ−Ｌからなる群より選択される化合物の使用；またはＤＫＰ−ＰＧ形成リンカーとしてのＤＫＰ−Ｌの使用。
【配列表のフリーテキスト】
【０６７８】
＜２１０＞１
＜２２３＞配列番号１は［Ｔ２０−１−３６］と省略される。
【０６７９】
＜２１０＞２
＜２２３＞配列番号２は［Ｔ２０−２７−３６］と省略される。
【０６８０】
＜２１０＞３
＜２２３＞配列番号３は［Ｔ２０−１７−２６］と省略される。
【０６８１】
＜２１０＞４
＜２２３＞配列番号４は［Ｔ２０−１７−３６］と省略される。
【０６８２】
＜２１０＞５
＜２２３＞配列番号５は式（ｅｘ−５ｉ）および（ｅｘ−６ｆ１）に含まれる。
【０６８３】
＜２１０＞６
＜２２３＞配列番号６は式（ｅｘ−６ｆ２）に含まれる。
【配列表】
0005579939000001.app