(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト被験者において慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性繊維症、ステロイド耐性喘息、および重度の喘息よりなる群から選択される慢性呼吸器疾患を治療するための組成物の製造におけるメチルキサンチン化合物およびコルチコステロイドの使用であって、該組成物が、肺への送達を行うべく吸入経路により投与され、かつ該メチルキサンチン化合物が、０．１〜２５ｍｇ／日の用量で投与され、かつ該組成物中で使用されるメチルキサンチン化合物が、テオフィリン、アミノフィリン、およびオクストリフィリンよりなる群から選択される、上記使用。
【請求項２】
組成物が、１種以上の製薬上許容される添加剤、希釈剤、および／または担体を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
メチルキサンチン化合物が、１ｐｇ／Ｌ〜１ｍｇ／Ｌの血漿中レベルを達成する用量で投与される、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記メチルキサンチン化合物が、テオフィリンである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
投与される吸入コルチコステロイドが、ブデソニド、フルチカゾン、およびシクレソニドよりなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
吸入ステロイドがブデソニドであり、かつこのコルチコステロイドが１日当たり２００ｍｃｇ〜１６００ｍｃｇの用量で投与される、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
吸入ステロイドがフルチカゾンであり、かつこのコルチコステロイドが１日当たり４４ｍｃｇ〜１０００ｍｃｇの用量で投与される、請求項５に記載の使用。
【請求項８】
吸入ステロイドがシクレソニドであり、かつ投与されるこのコルチコステロイドが１日当たり４０ｍｃｇ〜５００ｍｃｇの用量である、請求項５に記載の使用。
【請求項９】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性繊維症、ステロイド耐性喘息、および重度の喘息よりなる群から選択される慢性呼吸器疾患の治療において同時使用、同時個別使用、または逐次使用を行うためのメチルキサンチン化合物およびコルチコステロイドであって、この組成物が、肺への送達を行うべく吸入経路による投与に適合化され、かつ該メチルキサンチン化合物が、０．１〜２５ｍｇ／日の用量で投与され、かつ該組成物中で使用されるメチルキサンチン化合物が、テオフィリン、アミノフィリン、およびオクストリフィリンよりなる群から選択される、上記組成物。
【請求項１０】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性繊維症、ステロイド耐性喘息、および重度の喘息よりなる群から選択される慢性呼吸器疾患の治療に使用するためのメチルキサンチン化合物とコルチコステロイドとを含む医薬組成物であって、該組成物が、肺への送達を行うべく吸入経路による投与に適合化され、かつ該メチルキサンチン化合物が、０．１〜２５ｍｇ／日の用量で投与され、かつ該組成物中で使用されるメチルキサンチン化合物が、テオフィリン、アミノフィリン、およびオクストリフィリンよりなる群から選択される、上記組成物。
【請求項１１】
メチルキサンチン化合物がテオフィリンであり、かつ組成物のユニット用量当たり０．１〜２５ｍｇまたは０．０５〜１３ｍｇまたは０．０３３〜９ｍｇの量で提供され、該ユニット用量が、それぞれ、１日１回、１日２回、または１日３回の治療を行う場合の用量に対応する、請求項９または請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
コルチコステロイドがブデソニドであり、かつ組成物のユニット用量当たり２００ｍｃｇ〜１６００ｍｃｇまたは１００ｍｃｇ〜８００ｍｃｇまたは６５ｍｃｇ〜５２５ｍｃｇの量で提供され、該ユニット用量が、それぞれ、１日１回、１日２回、または１日３回の治療を行う場合の用量に対応する、請求項９または請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
コルチコステロイドがフルチカゾンであり、かつ組成物のユニット用量当たり４４ｍｃｇ〜１０００ｍｃｇまたは２２ｍｃｇ〜５００ｍｃｇまたは１１ｍｃｇ〜３３５ｍｃｇの量で提供され、該ユニット用量が、それぞれ、１日１回、１日２回、または１日３回の治療を行う場合の用量に対応する、請求項９または請求項１０に記載の組成物。
【請求項１４】
コルチコステロイドがシクレソニドであり、かつ組成物のユニット用量当たり４０ｍｃｇ〜５００ｍｃｇまたは２０ｍｃｇ〜２５０ｍｃｇまたは１４ｍｃｇ〜１７０ｍｃｇの量で提供され、該ユニット用量が、それぞれ、１日１回、１日２回、または１日３回の治療を行う場合の用量に対応する、請求項９または請求項１０に記載の組成物。
【請求項１５】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性繊維症、ステロイド耐性喘息、および重度の喘息よりなる群から選択される慢性呼吸器疾患を治療するためのキットであって、肺への送達を行うべく吸入経路による投与に適合化されたユニット投与形態中にメチルキサンチン化合物とコルチコステロイドとを含み、かつ該メチルキサンチン化合物が、０．１〜２５ｍｇ／日の用量で投与され、かつ該組成物中で使用されるメチルキサンチン化合物が、テオフィリン、アミノフィリン、およびオクストリフィリンよりなる群から選択される、上記キット。
【請求項１６】
メチルキサンチン化合物およびコルチコステロイドが、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載のユニット投与量で提供される、請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
キットが吸入器の形態である、請求項１５または請求項１６に記載のキット。
【請求項１８】
メチルキサンチン化合物およびコルチコステロイドが別々の吸入器ボトルに含まれる、請求項１７に記載のキット。
【請求項１９】
メチルキサンチン化合物およびコルチコステロイドが単一の吸入器ボトルに含まれる、請求項１７に記載のキット。
【請求項２０】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性繊維症、ステロイド耐性喘息、および重度の喘息よりなる群から選択される慢性呼吸器疾患の治療薬であって、コルチコステロイドとテオフィリンとを組み合わせてなることを特徴とし、該治療が、それを必要とする被験者に、該被験者の肺疾患を治療するのに有効な量のコルチコステロイドを、肺への送達を行うべく吸入経路により投与することを含み、かつ同様に該吸入経路により被験者にテオフィリンを投与することによりステロイドの効力を増大させることを含み、テオフィリンが、０．１〜２５ｍｇ／日の用量で投与されることを特徴とする前記治療薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）のような慢性呼吸器疾患の治療における医薬を製造すべく相乗的に併用される、テオフィリンのようなメチルキサンチン誘導体およびステロイド剤の吸入使用を提供する。肺への送達を行うべく吸入経路を介して投与されるメチルキサンチンおよびステロイドの併用投与の結果として、治療上の相乗的肺抗炎症反応が起こる。
【背景技術】
【０００２】
テオフィリンは、喘息やＣＯＰＤのような慢性呼吸器疾患用の経口剤として使用される安価な白色結晶性粉末である。アミノフィリンすなわちテオフィリンエチレンジアミンは、テオフィリンとエチレンジアミンとの併用物であり、類似の性質を有する。テオフィリンは、弱い非選択的ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤としての活性を有することもあって、気管支拡張作用および緩和な抗炎症作用を有することが知られている。この薬剤は、これまで、治療指数が狭いことが特徴であった。また、胃腸障害、振戦、心不整脈、および他の合併症によって特徴付けられるこの薬剤の毒性は、実際の臨床で多く見受けられる。その有害作用を回避するために、多くの場合、慢性呼吸器疾患用の他の薬剤、例えば、吸入ベータアゴニスト、吸入抗コリン作動剤、および吸入ステロイドが、経口テオフィリンの代わりに処方される。しかしながら、現在までのところ、ＣＯＰＤや喘息のような慢性呼吸器疾患の治療における吸入テオフィリンの治療的可能性に関する研究は限られている。
【０００３】
テオフィリンは長年にわたり臨床的に使用されてきたが、その分子的作用機序およびその作用部位は、不明確なままである。以下のようないくつかの分子的作用機序が提案されている。
【０００４】
テオフィリンは、細胞内の環状ヌクレオチドを破壊するホスホジエステラーゼの弱い非選択的阻害剤であり、それにより、細胞内の環状ＡＭＰおよび環状ＧＭＰの濃度の増加を引き起こす。テオフィリンは、ＰＤＥ活性（ＰＤＥ３、ＰＤＥ４、およびＰＤＥ５）を阻害することにより気道平滑筋を弛緩させるが、最大の弛緩を得るには、比較的高い濃度を必要とする（非特許文献１）。ＰＤＥ阻害度は、治療に適したテオフィリン濃度では非常に小さい。いずれかの特定のイソ酵素、例えば、気道における抗炎症作用を媒介する炎症細胞内で優位なＰＤＥイソ酵素であるＰＤＥ４Ｂなどに対してテオフィリンがいくらかでも選択性を有するという証拠は、全く存在しない。
【０００５】
テオフィリンは、インターロイキン−１０の放出を増大させることにより、広範にわたる抗炎症作用を有する。この作用は、ＰＤＥ阻害により媒介され得るが、これは、喘息に有効な用量では観測されていない（非特許文献２）。
【０００６】
テオフィリンは、炎症誘発性転写因子核因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）の核内移行を妨害することにより、喘息およびＣＯＰＤにおいて炎症性遺伝子の発現を減少させる可能性がある（非特許文献３）。これらの作用は、高濃度で観測され、これらの場合もＰＤＥを阻害することにより媒介され得る。したがって、低経口用量（＜１０ｍｇ／Ｌ）で投与した場合、ＰＤＥ阻害は、テオフィリンの作用機序ではない可能性がある。
【０００７】
テオフィリンはまた、Ａ１およびＡ２レセプターの拮抗作用を有して治療濃度でアデノシンレセプターの強力な阻害剤であるが、Ａ３レセプターに対してはそれほど有効でない（非特許文献４）。吸入テオフィリン単独療法は、喘息患者において吸入アデノシンの気管支収縮活性に拮抗し得るという報告がある（非特許文献５）。その他、吸入テオフィリン（アミノフィリンとして与えられる）はまた、喘息患者において気管支拡張剤として作用することが明らかにされている（非特許文献６）。
【０００８】
テオフィリンは、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）を活性化することが最近明らかにされた。ヒストンタンパク質のアセチル化は、遺伝子機能の活性化に関連しており、炎症性遺伝子を活性化する炎症誘発性転写因子もまた、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ活性の増加を引き起こすと考えられる。ＨＤＡＣ活性を増大させることにより、したがって、ヒストンタンパク質を脱アセチル化することにより、テオフィリンは、炎症性遺伝子の発現を抑制すると考えられる（非特許文献７を参照されたい）。テオフィリンは、ＨＤＡＣ活性の増大を引き起こす分子経路の主要な調節キナーゼ酵素または調節ホスファターゼ酵素と相互作用すると考えられるが、これは、まだ解明されていない。
【０００９】
≦１０ｍｇ／Ｌ（ただし≧５ｍｇ／Ｌ）の血漿中レベルを与える用量のテオフィリンを用いてＣＯＰＤ患者において経口テオフィリン単独療法を行うことにより、ごくわずかではあるが有意な肺抗炎症活性が実証されている（非特許文献８、非特許文献９）。
【００１０】
グルココルチコイド剤（ステロイド）は、喘息の治療剤として選択されるようになってきており、通常は吸入形態でＣＯＰＤの治療に広く使用されている。吸入ステロイドは、投与されるステロイドの性質に依存する一定の投与量で通常１日１回または２回投与される。例えば、ブデソニドは、典型的には、２００ｍｃｇ、４００ｍｃｇ、または８００ｍｃｇの用量で１日１回または２回投与される。フルチカゾンは、典型的には、５０ｍｃｇ、１００ｍｃｇ、２５０ｍｃｇ、または５００ｍｃｇの用量で１日１回または２回投与される。シクレソニドは、典型的には、８０ｍｃｇ、１６０ｍｃｇ、または３２０ｍｃｇの用量で１日１回または２回投与される。肺に送達される絶対用量は、多くの因子（例えば、使用されるステロイドの性質、吸入装置の特性、吸入製剤、患者の特質、および吸入法）に依存するが、通常は全投与量よりもかなり少ない。
【００１１】
しかしながら、吸入ステロイドが喘息患者の大多数に有効であるとはいえ、喀痰サンプルにおける抗炎症作用が実証性に欠けたり（非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２)、疾患の進行に対して明らかに作用しなかったこと（非特許文献１２）から、それをＣＯＰＤに使用することには異論が多い。喀痰を検査する他の試験からは、特に高用量の吸入ステロイドを用いて治療期間を長くすると一部の患者でごくわずかではあるが測定可能な肺抗炎症作用を確かに生じることが示唆されている（非特許文献１３、非特許文献１４、非特許文献１５）。
【００１２】
しかしながら、ＣＯＰＤ患者の喀痰ではなく気管支生検試料を調べることにより抗炎症活性を評価した場合にも、期待はずれの結果になっている。喘息患者で実証されたこととは対照的に、Ｈａｔｔａｔｏｗａら（非特許文献１６）は、吸入ステロイド（５００ｍｃｇのフルチカゾンを１日２回投与した）で３ヶ月間治療した後、ＣＯＰＤにおいて主要な炎症細胞の有意な減少は検出しなかった。全体的にごくわずかの肺抗炎症活性であるにも関わらず、ＩＣＳは、ＣＯＰＤ患者において増悪の頻度を確かに２０〜３０％減少させる。
【００１３】
吸入ステロイドのこのごくわずかの肺抗炎症活性を改善すれば、結果的に、健康状態の改善、肺機能の改善、呼吸困難度の改善、さらには増悪頻度の減少が達成され、ＣＯＰＤ患者に多大な利益がもたらされる可能性がある。
【００１４】
低用量のステロイドに反応しない喘息患者には、より高用量で、ブデソニドの場合には１日１６００ｍｃｇまでの用量で投与される。非特許文献１７によれば、高用量の吸入ステロイドは、喘息に使用する場合、低用量の経口テオフィリンと一緒に通常のグルココルチコイド用量の投与を行うことで代替可能であることが示唆される。２５０もしくは３７５ｍｇのテオフィリンと一緒に４００ｍｃｇのブデソニド（標準用量）が、または８００ｍｃｇのブデソニド＋プラセボが、１日２回患者に投与された。この試験で達成されたテオフィリンの血漿中濃度は、２．５〜１７．１ｍｇ／ｌの範囲内であり、メジアン値は、８．７ｍｇ／ｌであった。これらの２つの治療パラダイムの効果が類似していたことから、テオフィリンは、ステロイドと共に与えた場合に用量節約効果を有することが示唆される。しかしながら、使用した用量で、患者は、薬剤による副作用、例えば、胃腸障害、動悸、咽頭痛、並びにステロイド療法および／またはテオフィリン療法に伴う他の副作用を起こした。著者らは、炎症に及ぼす薬剤併用の効果をなんら調べなかった。経口テオフィリンによる吸入ステロイドの用量節約の可能性を検討する類似の試験は、ＣＯＰＤ患者では行われていない。
【００１５】
非特許文献１８では、気管支拡張性サルメテロールとステロイドフルチカゾンとの併用が、４ヶ月間にわたりＣＯＰＤ患者で経口テオフィリンと吸入フルチカゾン（５００ｍｃｇ、１日２回）との併用と比較された。経口テオフィリンの用量は、１０〜２０ｍｇ／Ｌの血漿中濃度を達成するように用量調整された。気管支拡張に関して臨床効能を得るには、これらの血漿中レベルが必要とされる。いずれの療法を用いた場合にも、これらの患者の炎症状態については調べなかった。
【００１６】
特許文献１には、喘息または他の炎症性疾患を治療するための薬剤様化合物を同定するためのスクリーニング法が開示されている。それは、キサンチンまたはＨＤＡＣの活性もしくは発現をモジュレートする関連化合物を含む。この発明には、炎症性遺伝子の抑制におけるステロイドの役割が記載されている。それによると、テオフィリンは、グルココルチコイドに作用して増大された活性を有するＨＤＡＣを動員することにより、グルココルチコイドの作用を増強すると予想される。テオフィリンは、ステロイドのデキサメタゾンおよびブデソニドと併用すると相乗効果を伴ってｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞のＨＤＡＣ活性および炎症性遺伝子の抑制を増強する。
【００１７】
特許文献２には、喘息の長期予防的抗炎症治療を行うために、アドオン療法としてまたはコルチコステロイドを用いた治療の完全なもしくは部分的な代替として、１ｍｇ／Ｌ〜５ｍｇ／Ｌ未満の平均定常状態血漿中レベルを提供するようにテオフィリンを使用することが開示されている。血漿中レベルは、５０〜６００ｍｇ／日で服用するのに適した剤形で経口経路により投与されるようにテオフィリンを調剤化することによって達成される。
【００１８】
Ｂａｒｎｅｓ（非特許文献１９）は、ＣＯＰＤに対しテオフィリンとステロイドとを併用使用することについて論じており、この併用により相乗効果を伴って炎症を減少させ得ることを示唆している。しかしながら、投与レジームは提供されておらず、吸入経路によりテオフィリンを投与する使用も開示されていない。
【００１９】
明確にするために、投与されたメチルキサンチン類の経口用量および患者で検出された対応するテオフィリン血漿中レベルに関して先行技術のまとめを表１に示す。
【００２０】
明確にするために、投与されたメチルキサンチン類の吸入用量および喘息患者で検出された対応するテオフィリン血漿中レベルに関して先行技術の限られたデータのまとめを表２に示す。
【表１】
0005579368.tif 000002
【表２】
0005579368.tif 000003
【非特許文献１】Rabe, et al. Eur Respir J 1999, 8: 637-42
【非特許文献２】Oliver, et al. Allergy 2001, 56: 1087-90
【非特許文献３】Tomita, et al. Arch Pharmacol 1999, 359: 249-55
【非特許文献４】Pauwels & Joos, Arch Int Pharmacodyn Ther 1995, 329: 151-60
【非特許文献５】Cushley et al, Am Rev Resp Disease 1984, 129, 380-4
【非特許文献６】Kokubu H. Arerugi. 1995, 44(12): 1379-86
【非特許文献７】Barnes PJ, Am J Respir Crit Care Med, 2003, 167: 813-818
【非特許文献８】Culpitt et al. Am.J.Respir.Crit Care Med, 2002, 165(10): 1371-1376
【非特許文献９】Kobayashi et al, Respirology 2004, 9: 249-254
【非特許文献１０】Keatings et al. Am.J Respir. Crit Care Med, 1997, 155(2): 542-8
【非特許文献１１】Culpitt et al. Am. J Respir. Crit Care Med. 1999, 160, 5(1): 1635-1639
【非特許文献１２】Loppow et al. Respir.Med. 2001, 95(2): 115-121
【非特許文献１３】Confalonieri et al. Thorax, 1998, 53(7): 583-585
【非特許文献１４】Mirici et al. Clinical Drug Investigation. 2001, 21: 835-842
【非特許文献１５】Yildiz et al. Respiration. 2000, 67: 71-76
【非特許文献１６】Am J Respir Crit Care Med. 2002, 165: 1592-1596
【非特許文献１７】Evans et al., (2004) NEJM 337: 1412
【非特許文献１８】Cazzola et al, (2004) Pulm Pharm Ther 17: 141-145
【非特許文献１９】Am J Respir Crit Care Med, 2003, 167: 813-818
【特許文献１】米国特許出願公開第２００３／０１３４８６５号明細書
【特許文献２】米国特許第６０２５３６０号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
したがって、有効な抗炎症活性を提供しかつ既存の療法に伴う副作用を回避するＣＯＰＤの治療レジームが医療に必要とされている。医薬の製造における吸入テオフィリンと吸入ステロイドとの併用については、我々の同時係属国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ０５／００３０３９に開示されているが、既刊の文献には記載されていない。そのような医薬は、ＣＯＰＤおよび他の慢性呼吸器疾患に対して吸入ステロイドの肺抗炎症活性を改善し得る併用療法を提供する。この吸入併用では、ごくわずかのメチルキサンチン全身暴露（血漿中レベル＜１ｍｇ／Ｌ）が行われるので、長期経口投与と比較して魅力的な副作用プロファイルを生じる。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本発明者らは、ＣＯＰＤの動物モデルにおいてタバコの煙（ＴＳ）により引き起こされた炎症を治療する上で単独では有効でない用量で吸入経路によりメチルキサンチン化合物と一緒に投与されたステロイドは、該モデルにおいて相乗効果を伴って炎症を著しく減少させ得ることを確認した。例えば、以下に示される試験で４４％以上減少させ得ることを確認した。ＴＳ暴露は、ヒトにおいてＣＯＰＤの主原因であることが広く認められている。
【００２３】
したがって、第１の態様では、ヒト被験者において慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性繊維症、ステロイド耐性喘息、重度の喘息、および小児喘息よりなる群から選択される慢性呼吸器疾患を治療するための組成物の製造におけるメチルキサンチン化合物およびステロイドの使用を提供する。ただし、組成物は、肺への送達を行うべく吸入経路により投与され、かつメチルキサンチン化合物は、０．１〜２５ｍｇ／日の用量で投与される。
【００２４】
有利には、吸入ステロイドは、該呼吸器疾患に伴う炎症を減少させる上で単独では有効でない用量で投与される。吸入ステロイドはまた、該呼吸器疾患の治療における肺機能および炎症の改善に関して単独でごくわずかの効力を有する用量で投与することも可能である。
【００２５】
また、該呼吸器疾患の治療における肺機能および炎症の改善に関して単独で有意な効力を有する用量よりも少ない用量で吸入ステロイドを投与する吸入併用の使用を提供する（ステロイド節約）。
【発明の効果】
【００２６】
吸入メチルキサンチン（例えば、テオフィリン）を併用使用して吸入ステロイド（例えば、ブデソニド、フルチカゾン、またはシクレソニド）のこのごくわずかの肺抗炎症活性を改善すれば、結果的に、健康状態の改善、肺機能の改善、呼吸困難度の改善、さらには増悪頻度の減少が達成され、ＣＯＰＤのような慢性呼吸器疾患を患う患者に多大な利益がもたらされる。
【００２７】
本発明によれば、メチルキサンチン化合物とステロイド剤との間に相乗的活性が認められ、結果として、極めて高い肺抗炎症活性が達成される。この相乗効果は、単独で投与したときには有効でない用量の薬剤を用いて達成可能である。ほとんどもしくは全く効果を有していない２種の薬剤を同時に投与することにより炎症反応のかなり顕著な阻害を達成し得るという点で、この効果は、相加的ではなく相乗的である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
本明細書中で使用されるメチルキサンチン化合物は、テオフィリンおよびその薬理学的等価化合物並びにそれらの塩を意味し、アミノフィリンおよびオクストリフィリンを包含する。そのような化合物は、メチルキサンチン類であり、カフェイン、アセピフィリン、バミフィリン、ブフィリン、カファミノール、カフェドリン、ジプロフィリン、ジヒドロキシプロピルテオフィリン、ドキソフィリン、エンプロフィリン、エタミフィリン、エトフィリン、プロキシフィリン、スキサミドフィリン、テオブロミン、フラフィリン、７−プロピルテオフィリンドーパミン、ペントキシフィリン、レプロテロール、デンブフィリン、ＩＢＭＸ、アロフィリン、シパンフィリン、ＨＷＡ ４４８、ＳＤＺ ＭＫＳ ４９２、ＢＢ−１５０２などを包含する。
【００２９】
ステロイド剤は、グルココルチコイド類、コルチコステロイド類、およびミネラルコルチコイド類、例えば、デキサメタゾンおよびブデソニド、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、フルニソリド、フルチカゾン、シクレソニド、モメタゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ナフロコルト、デフラザコルト、酢酸ハロプレドン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、クロコルトロン、チプレダン、プレドニカルベート、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、ハロメタゾン、リメキソロン、プロピオン酸デプロドン、トリアムシノロン、ベタメタゾン、フルドロコルチゾン（fludrocoritisone）、デスオキシコルチコステロン、ロフレポニド、エチプレドノールジクロアセテート（etiprendnol dicloacetate）などを包含する。ステロイド剤は、呼吸器疾患用として臨床開発段階または前臨床開発段階にあるステロイド、例えば、ＧＷ−６８５６９８、ＧＷ−７９９９４３、ＮＣＸ−１０１０、ＮＣＸ−１０２０、ＮＯ−デキサメタゾン、ＰＬ−２１４６、ＮＳ−１２６（以前のＳＴ−１２６）、並びに国際特許出願である国際公開第０２／１２２６５号パンフレット、国際公開第０２／１２２６６号パンフレット、国際公開第０２／１００８７９号パンフレット、国際公開第０３／０６２２５９号パンフレット、国際公開第０３／０４８１８１号パンフレット、および国際公開第０３／０４２２２９号パンフレットで言及されている化合物をさらに包含する。ステロイド剤はまた、副作用減少プロファイルを有する開発段階にある次世代分子、例えば、ＺＫ−２１６３４８並びに国際特許出願である国際公開第００／０３２５８５号パンフレット、国際公開第００／０２１０１４３号パンフレット、国際公開第０５／０３４９３９号パンフレット、国際公開第０５／００３０９８号パンフレット、国際公開第０５／０３５５１８号パンフレット、および国際公開第０５／０３５５０２号パンフレットで言及されている化合物をはじめとする選択的グルココルチコイドレセプターアゴニスト（ＳＥＧＲＡ）をさらに包含する。
【００３０】
好ましくは、メチルキサンチンは、テオフィリンである。
【００３１】
好ましくは、ステロイドは、ブデソニド、フルチカゾン、またはシクレソニドである。
【００３２】
本発明によれば、ステロイドは、標準用量またはメチルキサンチン化合物とは独立して個人に投与した場合にごくわずかの効果を有する用量で投与可能である。
【００３３】
有利には、ステロイドは、使用用量で該呼吸器疾患において炎症を減少させる上で有効でない。ＣＯＰＤをはじめとする特定の呼吸器疾患は、ステロイド治療に対して耐性があり、ステロイド剤は、肺の炎症を減少させる上でごくわずかに有効であるに過ぎない。しかしながら、テオフィリンのようなメチルキサンチン化合物と併用すれば、肺抗炎症作用が観察される。
【００３４】
長時間作用性気管支拡張剤を併用してまたは併用せずに目標用量の吸入メチルキサンチン化合物および吸入ステロイドを摂取する患者の便宜を図って、投与は、単一のデバイスから吸入経路を介して行われる。典型的には、長時間作用性気管支拡張剤は、サルメテロールやホルモテロールのような長時間作用性βアゴニストまたはチオトロピウムのような長時間作用性抗ムスカリン剤のいずれかであろう。ステロイドの投与はまた、吸入により与えられるメチルキサンチン化合物と併用して経口経路により行うことも可能である。
【００３５】
本発明に係る併用は、場合により、呼吸器障害の治療に有用であることが知られている１種以上の追加の活性物質、例えば、ＰＤＥ４阻害剤、ＰＤＥ５阻害剤、ＰＤＥ７阻害剤、ロイコトリエンＤ４阻害剤、ロイコトリエンＢ４阻害剤、ｅｇｆｒキナーゼの阻害剤、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＮＦ−κＢ経路阻害剤（例えばＩκＫ阻害剤）、Ａ２Ａアデノシンレセプターアゴニスト、ＴＮＦαシグナリング阻害剤（例えば、リガンド結合剤、レセプターアンタゴニスト）、インターロイキン１シグナリング阻害剤、ＣＲＴＨ２レセプターアンタゴニスト、プロテアーゼ阻害剤（例えば、好中球エラスターゼ阻害剤、ＭＭＰ阻害剤、カテプシン阻害剤）、ＩＬ−８シグナリング分子、ＣＸＣＲ１阻害剤、ＣＸＣＲ２阻害剤、ｉＮＯＳモジュレーター、ＰＰＡＲアゴニスト、抗酸化剤（Ｎ−アセチルシステインおよびスーパーオキシドジスムターゼ模倣剤を包含する）、および／またはＮＫ−１レセプターアンタゴニストを含み得る。
【００３６】
他の態様では、本発明は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性繊維症、ステロイド耐性喘息、重度の喘息、および小児喘息よりなる群から選択される慢性呼吸器疾患の治療に使用するためのメチルキサンチン化合物とステロイドとを含む医薬組成物を提供する。ただし、組成物は、肺への送達を行うべく吸入経路による投与に適合化され、かつメチルキサンチン化合物は、０．１〜２５ｍｇ／日の用量で投与される。
【００３７】
さらに、本発明は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性繊維症、ステロイド耐性喘息、重度の喘息、および小児喘息よりなる群から選択される慢性呼吸器疾患の治療において同時使用、同時個別使用、または逐次使用を行うためのメチルキサンチン化合物およびステロイドを提供する。ただし、組成物は、肺への送達を行うべく吸入経路による投与に適合化され、かつメチルキサンチン化合物は、０．１〜２５ｍｇ／日の用量で投与される。
【００３８】
好ましくは、メチルキサンチン化合物は、組成物のユニット用量当たり０．１〜２５ｍｇまたは０．０５〜１３ｍｇまたは０．０３３〜９ｍｇの量で提供される。ただし、該ユニット用量は、それぞれ、１日１回、１日２回、または１日３回の治療を行う場合の用量に対応する。好ましくは、一日用量は、１〜２４ｍｇ、１〜２３ｍｇ、１〜２２ｍｇ、１〜２１ｍｇ、または１〜２０ｍｇである。例えば、一日用量は、５、１０、１５、１６、１７、１８、または１９ｍｇであり得る。ユニット投与量は、１日１回、２回、または３回の適用に応じて計算可能である。
【００３９】
好ましくは、メチルキサンチン化合物は、テオフィリンである。有利には、テオフィリンは、以上に記載したような投与量で投与される。
【００４０】
テオフィリン以外のメチルキサンチンは、以上の投与量でまたは当業者により以上に基づいて適合化され得る投与量で投与可能である。
【００４１】
ステロイドは、一般的には、１日１回用量または合計すると指定の用量になるマルチプルユニット用量のいずれかで、約４０ｍｃｇ〜１６００ｍｃｇの投与量で提供可能である。例えば、ステロイドは、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、７５０、８００、９００、または１０００ｍｃｇの一日用量で提供可能である。
【００４２】
有利には、ステロイドは、ブデソニドであり、かつ組成物のユニット用量当たり２００ｍｃｇ〜１６００ｍｃｇまたは１００ｍｃｇ〜８００ｍｃｇ ｍｇまたは６５ｍｃｇ〜５２５ｍｃｇの量で提供される。ただし、該ユニット用量は、それぞれ、１日１回、１日２回、または１日３回の治療を行う場合の用量に対応する。好ましくは、一日用量は、２００ｍｃｇ〜１６００ｍｃｇ、２００ｍｃｇ〜１５００ｍｃｇ、２００ｍｃｇ〜１４００ｍｃｇ、２００ｍｃｇ〜１３００ｍｃｇ、２００ｍｃｇ〜１２００ｍｃｇ、２００ｍｃｇ〜１１００ｍｃｇ、または２００ｍｃｇ〜１０００ｍｃｇである。例えば、一日用量は、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、または９００ｍｃｇである。ユニット投与量は、１日１回、２回、または３回の適用に応じて計算可能である。
【００４３】
さらなる実施形態では、ステロイドは、フルチカゾンであり、かつ組成物のユニット用量当たり４４ｍｃｇ〜１０００ｍｃｇまたは２２ｍｃｇ〜５００ｍｃｇまたは１５ｍｃｇ〜３３５ｍｃｇの量で提供される。ただし、該ユニット用量は、それぞれ、１日１回、１日２回、または１日３回の治療を行う場合の用量に対応する。好ましくは、一日用量は、４４ｍｃｇ〜９０００ｍｃｇ、４４ｍｃｇ〜８８００ｍｃｇ、４４ｍｃｇ〜８０００ｍｃｇ、４４ｍｃｇ〜７０００ｍｃｇ、４４ｍｃｇ〜６６００ｍｃｇ、４４ｍｃｇ〜６０００ｍｃｇ、または４４ｍｃｇ〜５００ｍｃｇである。例えば、用量は、５０、６０、８８、１００、１１０、１２５、１５０、２００、２２０、２５０、３００、３５０、３７５、４００、４４０、または４５０ｍｃｇであり得る。ユニット投与量は、１日１回、２回、または３回の適用に応じて計算可能である。
【００４４】
さらに、ステロイドは、シクレソニドであり得る。かつ組成物のユニット用量当たり４０ｍｃｇ〜５００ｍｃｇまたは２０ｍｃｇ〜２５０ｍｃｇ ｍｇまたは１７ｍｃｇ〜１７０ｍｃｇの量で提供可能である。ただし、該ユニット用量は、それぞれ、１日１回、１日２回、または１日３回の治療を行う場合の用量に対応する。一日用量は、好ましくは、４０ｍｃｇ〜４８０ｍｃｇ、４０ｍｃｇ〜４５０ｍｃｇ、４０ｍｃｇ〜４００ｍｃｇ、４０ｍｃｇ〜３５０ｍｃｇ、４０ｍｃｇ〜３２０ｍｃｇ、または４０ｍｃｇ〜３００ｍｃｇである。例えば、用量は、８０、１００、１２０、１５０、１６０、２００、または２５０ｍｃｇである。ユニット投与量は、１日１回、２回、または３回の適用に応じて計算可能である。
【００４５】
そのようなユニット投与量をパッケージ化することにより、該呼吸器疾患を治療するためのキットを提供することが可能である。ただし、該キットは、肺への送達を行うべく吸入経路により組成物が投与されるユニット投与製剤の形態でメチルキサンチン化合物とステロイドとを含む。例えば、本発明に係るキットは、併行投与すべく適正比でメチルキサンチン化合物とステロイドとを混合状態で含み得る。他の選択肢として、同時個別投与すべくまたは逐次投与すべく、化合物を個別の組成物として提供することが可能である。
【００４６】
特に好ましい実施形態では、メチルキサンチン化合物およびステロイドは、吸入経路を介して投与すべく吸入器の形態で提供される。吸入器は、混合状態で化合物が提供されるシングルボトル吸入器または別々に化合物が提供されるが一緒に投与されるツインボトル吸入器であり得る。
【００４７】
そのようなキットは、例えば、結果として医薬が患者の身体、特に肺に同時に存在する状態にすべく医薬を実質的に同時に投与するようにユーザーに指示する使用説明書を含み得る。
【００４８】
本発明に係るキット中またはユニット投与量中、ステロイドは、好ましくは、独立して投与した場合に該呼吸器疾患の治療で効果を発揮するには不十分な用量で存在する。
【００４９】
重要なこととして、使用される用量（全一日投与量０．１〜２５ｍｇ）のメチルキサンチン化合物、例えばテオフィリンにより達成される血漿中レベルは、現時点で臨床効能に必要であると考えられるレベル（１０〜２０ｍｇ／ｌ）（Cazzola et al, Pulmonary Pharmacology & Therapeutics, 2004, 17, 141-145）を下回り、かつ抗炎症活性を実証するために使用されたレベル（５ｍｇ／Ｌ）（Culpitt et al. Am.J.Respir.Crit Care Med, 2002, 165(10): 1371-1376, Kobayashi et al, Respirology, 2004, 9:249-254）を下回る。送達されると伝えられる公称用量は、使用される装置や製剤の特性により、この数値を上回るかも知れない。しかしながら、本発明によれば、投与の１時間後に測定したときのメチルキサンチンの血漿中レベルが１ｐｇ／Ｌ〜１ｍｇ／Ｌになる有効用量は、肺への送達を行うべく吸入経路によりステロイド剤と併用投与した場合、呼吸症状を治療するのに有効である。
【００５０】
好ましくは、以上に記載したように達成されるメチルキサンチン化合物の血漿中レベルは、１ｍｃｇ／Ｌ〜１ｍｇ／Ｌ、有利には、１００ｍｃｇ／Ｌ〜１ｍｇ／Ｌ、２５０ｍｃｇ／Ｌ〜１ｍｇ／Ｌ、５００ｍｃｇ／Ｌ〜１ｍｇ／Ｌ、または７５０ｍｃｇ／Ｌ〜１ｍｇ／Ｌである。有利には、９５０ｍｃｇ／Ｌ以下、９００ｍｃｇ／Ｌ以下、８５０ｍｃｇ／Ｌ以下、または８００ｍｃｇ／Ｌ以下である。
【００５１】
本発明の以上の態様では、ＣＯＰＤの動物モデルで明らかな薬理効果をなんら発揮しないステロイドの投与量は、有利には０．５ｍｇ／ｋｇ未満、好ましくは０．１〜０．４ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは０．１〜０．３ｍｇ／ｋｇである。有利には、ステロイドの用量は、０．１ｍｇ／ｋｇ以下である。
【００５２】
さらに、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性繊維症、ステロイド耐性喘息、重度の喘息、および小児喘息よりなる群から選択される慢性呼吸器疾患を治療する方法を提供する。この方法は、それを必要とするヒト患者に本発明の以上の態様に係る組成物を投与することを含む。
【００５３】
治療の有効性は、炎症を評価し得る任意の方法により本発明に従ってアッセイ可能である。好ましい実施形態では、呼吸器疾患の治療は、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）により回収された細胞を計数することにより評価される。炎症はまた、喀痰または気管支上皮生検試料で評価することも可能である（Rutgers et al. Eur Respir J. 2000, 15(1): 109-15）。陽電子放射断層撮影および１８Ｆ−フルオロデオキシグルコース取込みを用いて、肺の炎症の非侵襲的評価を行うことも可能である（Jones et al. Eur Respir J, 2003, 21: 567-573）。
【００５４】
有利には、肺細胞は、マクロファージ、好中球、およびリンパ球よりなる群から選択される。
【００５５】
本発明によれば、呼吸器疾患において炎症を実質的に減少させることが可能である。有利には、メチルキサンチン化合物およびステロイドを投与したときに、細胞数は、４０％以上、好ましくは、４４％以上、５０％以上、６０％以上減少する。
【００５６】
それと同時に、個別用量のメチルキサンチン化合物およびステロイドでは、細胞数は、合計したときの全数で、有利には３１％以下、好ましくは３０％以下、理想的には２０％以下の減少を示し得る。メチルキサンチン化合物およびステロイドを投与したときの細胞数の相乗的減少が４０％以上、好ましくは４４％以上、有利には５０％以上である場合、個別の薬剤の相加効果は、好ましくは３１％以下、有利には２０％以下である。
【００５７】
以下でより詳細に説明されるように、本発明では、薬理学および生化学の標準的方法を利用する。本発明との関連では、特定の用語は、以下のような特定の意味を有する。
【００５８】
本発明では、テオフィリンとステロイド剤との併用投与を記述し、併用投与を該薬剤単独の個別投与と比較する。したがって、「単独」とは、テオフィリンの前、テオフィリンと同時、またはテオフィリンの後にステロイドが投与されるかどうかに関係なく、ステロイドを併用しないテオフィリンの投与またはその逆の投与を意味する。その意図は、標的生物において同時にまたは個別に薬理活性を発揮し得るように投与されたテオフィリンおよびステロイドを区別することである。
【００５９】
本発明の目的の範囲内で「併用使用」または「組合せ」とは、個別成分が同時に（組合せ医薬の形態で）、個別ではあるが実質的に同時に（例えば個別用量で）、または逐次的に（両薬剤が被験者において同時に活性であることを条件として、連続して逐次的にもしくは好適な時間間隔で）投与され得ることを意味すると解釈されるものとする。
【００６０】
炎症性病状および／または呼吸器疾患の治療に関して「有効」とは、呼吸器疾患において炎症を測定するアッセイで反応を得ることを意味する。好ましいアッセイは、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）の後で細胞を計数するものであり、この場合、細胞の存在により肺の炎症が示唆される。ヒト患者では、ＢＡＬ、誘導喀痰、および気管支生検が、炎症を評価する好ましい方法である。炎症は、任意の所望の手段により、例えば、タバコの煙の吸入、ＬＰＳのような刺激物の投与などにより誘導可能である。英国特許出願０４１７４８１．９号ですでに明らかにされているように、ＬＰＳを使用するとＣＯＰＤに見られるステロイド耐性の炎症反応が忠実に再現されないので、タバコの煙の吸入が好ましい。ＢＡＬ／細胞計数アッセイとの関連では、「有効」とは、好ましくは、薬剤が投与されない対照と比較して細胞数が３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上減少することを包含する。
【００６１】
「有効でない」とは、同一のアッセイにおいて、はるかに低いレベルの反応を意味する。好ましくは、ＢＡＬ／細胞計数アッセイにおいて、「有効でない」とは、細胞数の減少が３０％未満、有利には２８％未満、２７％未満、２６％未満、２５％未満、２４％未満、２３％未満、２２％未満、または２１％未満、好ましくは２０％未満であることと意味する。いくつかの場合には、「有効でない」とは、例えば細胞数の増加として観測される炎症の増加を包含し得る。
【００６２】
「相乗的」とは、所与のアッセイにおいて２種の薬剤の有効性がそれらのそれぞれの個別の有効性の合計により期待されるよりも大きいことを意味する。例えば、テオフィリンおよびステロイドを単独で投与したときにＢＡＬアッセイにおいて細胞数がそれぞれ１０％および２０％減少する場合、同一用量で同一薬剤を併用投与したときに細胞数の減少が３０％超、３５％超、４０％超、５０％超、もしくはそれ以上であったならば、相乗的反応が観測されたことになろう。
【００６３】
「投与される」とは、対象の被験者にボーラス用量などで全用量の薬剤が投与されることを意味する。本発明との関連では、投与量は、好ましくは、達成される血漿中レベル（＜５ｍｇ／Ｌ；６〜９ｍｇ／Ｌ；１０〜２０ｍｇ／Ｌ）により表現され、血漿中レベルは、好ましくは５ｍｇ／Ｌ未満、最も好ましくは１ｍｇ／Ｌ未満である。
【００６４】
「用量」とは、以上に記載したように投与される薬剤の量のことである。
【００６５】
「ユニット投与」形態とは、本発明に従ってそれぞれ一回用量を含有する１つ以上のパッケージ化された量の医薬組成物の調剤のことである。
【００６６】
メチルキサンチン類およびステロイド類
【００６７】
テオフィリンおよびアミノフィリン
テオフィリンは、以下に示される構造：
【化１】
0005579368.tif 000004
【００６８】
を有し、Ａｃｃｕｒｂｒｏｎ、Ａｅｒｏｂｉｎ、Ａｅｒｏｌａｔｅ、Ａｆｏｎｉｌｕｍ、Ａｑｕａｐｈｙｌｌｉｎ、Ａｒｍｏｐｈｙｌｌｉｎｅ、Ａｓｍａｌｉｘ、Ａｕｓｔｙｎ、Ｂｉｌｏｒｄｙｌ、Ｂｒｏｎｃｈｏｒｅｔａｒｄ、Ｂｒｏｎｋｏｄｙｌ、Ｃｅｔｒａｐｈｙｌｌｉｎｅ、Ｃｏｎｓｔａｎｔ Ｔ、Ｄｕｒａｐｈｙｌｌｉｎ、Ｄｉｆｆｕｍａｌ、Ｅｌｉｘｏｍｉｎ、Ｅｌｉｘｏｐｈｙｌｌｉｎ、Ｅｔｈｅｏｐｈｙｌ、Ｅｕｐｈｙｌｌｉｎ、Ｅｕｐｈｙｌｏｎｇ、ＬａＢＩＤ、Ｌａｎｏｐｈｙｌｌｉｎ、Ｌａｓｍａ、Ｎｕｅｌｉｎ、Ｐｈｙｓｐａｎ、Ｐｒｏ−Ｖｅｎｔ、ＰｕｌｍｉＤｕｒ、Ｐｕｌｍｏ−Ｔｉｍｅｌｅｔｓ、Ｑｕｉｂｒｏｎ、Ｒｅｓｐｉｄ、Ｓｌｏ−Ｂｉｄ、Ｓｌｏ−Ｐｈｙｌｌｉｎ、Ｓｏｌｏｓｉｎ、Ｓｕｓｔａｉｒｅ、Ｔａｌｏｔｒｅｎ、Ｔｅｏｓｏｎａ、Ｔｈｅｏｂｉｄ、Ｔｈｅｏｃｌｅａｒ、Ｔｈｅｏｃｈｒｏｎ、Ｔｈｅｏ−Ｄｕｒ、Ｔｈｅｏｌａｉｒ、Ｔｈｅｏｎ、Ｔｈｅｏｐｈｙｌ、Ｔｈｅｏｇｒａｄ、Ｔｈｅｏ−Ｓａｖ、Ｔｈｅｏｓｐａｎ、Ｔｈｅｏｓｔａｔ、Ｔｈｅｏｖｅｎｔ、Ｔ−Ｐｈｙｌ、Ｕｎｉｆｙｌ、Ｕｎｉｐｈｙｌ、Ｕｎｉｐｈｙｌｌｉｎ、およびＸａｎｔｈｉｕｍをはじめとするさまざまなブランド名で市販されている。テオフィリンの化学名は、３，７−ジヒドロ−１，３−ジメチル−１Ｈ−プリン−２，６−ジオンまたは１，３−ジメチルキサンチンであり、その一般化学式は、Ｃ７Ｈ８Ｎ４Ｏ２である。
【００６９】
アミノフィリン
テオフィリン誘導体、これはテオフィリンエチレンジアミンと同義である。アミノフィリンは、テオフィリンの誘導体である。いずれも、メチルキサンチン類であり、キサンチン類から誘導される。薬剤アミノフィリンは、エチレンジアミンさらにはより多くの水分子を含有する点で、テオフィリンといくらか構造が異なる。アミノフィリンは、テオフィリンよりも効力が弱くかつより短期間作用する傾向がある。その構造は、以下に示される。
【化２】
0005579368.tif 000005
【００７０】
吸入用量の大部分は嚥下され得るので、テオフィリンが９０〜１００パーセントまでの生物学的利用能を有して胃腸管から十分に吸収されることに注目することが重要である。ピークレベルは、摂取後１〜２時間以内に達成されるが、これは、食品の存在により緩徐化される。テオフィリンは、約６０パーセントが血漿タンパク質に結合され、０．５Ｌ／ｋｇの平均分布容積を有する。血漿タンパク質結合は、乳児および肝硬変症患者では低減される。テオフィリンの平均血漿中半減期は、成人では約８時間であるが、大きい個体内変動および個体間変動が存在し、年齢によってもかなり異なり、未熟新生児では約３０時間、生後６ヶ月以内では１２時間、生後１年までは５時間、２０歳までは約３．５時間であり、その後は再び徐々に増加する。
【００７１】
テオフィリンは、シトクロムＰ４５０系を用いて脱メチル化または酸化により肝臓で主に代謝される。ごく少量が変化を受けずに腎臓により排泄されるに過ぎないので、腎不全における投与量調整は、不要である。しかしながら、同様にシトクロム系により代謝される他の薬剤を使用するときには、注意を払う必要があり、その場合には、血漿中レベルの測定とともに投与量調整を行う必要がある。多くの薬剤は、テオフィリンの代謝を妨害する可能性がある。特定の抗生物質を用いる場合、テオフィリン代謝に及ぼす影響を考慮することなく気道閉塞の急性感染性増悪を有する患者に不注意にそれを与えてしまう可能性があるので、特に注意を払わなければならない。この例としては、マクロライド類（例えばエリスロマイシン）およびキノロン類（例えばシプロフロキサシン）の抗生物質が挙げられる。これらはいずれも、さまざまな程度でテオフィリンクリアランスを減少させる。テオフィリンクリアランスを減少させる他の薬剤としては、シメチジン、アロプリノール、およびプロパノロールが挙げられる（ただし、これは、かなり異常な治療的併用である）。テオフィリン代謝を増大させる薬剤としては、リファンピシン、フェノバルビトン、特定的にはフェニトインおよびカルバマゼピンが挙げられるが、経口避妊剤は除かれる。テオフィリンの代謝の速度は、シガレット喫煙者では実質的に増大されるが（半減期が半分になることもある）、１０回／日未満の喫煙者では有意でない可能性がある。マリファナを吸うことは、高タンパク質食を食べることにより生じる可能性のある作用と類似の作用を有する。肝機能不全、心不全、および肺性心は全て、テオフィリンの排除を減少させ、しかも低アルブミン状態は、血液中のタンパク質結合薬剤の量を減少させるので、血漿中レベルの結果は、注意して解釈する必要がある。したがって、心不全または肺性心を伴う呼吸不全の患者の臨床状態が改善するにつれて、テオフィリンのクリアランスが変化するので、投与量調整が必要になる可能性がある。
【００７２】
肺への送達を行うべく吸入経路によりメチルキサンチンを投与することは、吸入ステロイドを用いて局所媒介肺抗炎症相乗効果を最大化する上で望ましいだけでなく、ごくわずかの全身暴露（＜１ｍｇ／Ｌ）を引き起こす、より少ない用量（＜２５ｍｇ）のメチルキサンチンを投与する上でも望ましい。極めて低いメチルキサンチン血漿中レベルを用いて、以上に記載した標準的経口メチルキサンチン療法の全身性副作用の発生率を有意に減少させることが可能である。
【００７３】
メチルキサンチン類
テオフィリンおよびアミノフィリンを包含するメチルキサンチン化合物は、一般式
【化３】
0005579368.tif 000006
【００７４】
〔式中、
Ｘは、水素、脂肪族炭化水素基、または−ＣＯ−ＮＲ３Ｒ４を表し；
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、脂肪族炭化水素基を表し；
Ｒ４は、水素または脂肪族炭化水素基を表し、かつＲ３およびＲ４はまた、窒素原子と一緒になって５〜６個の環員を有するアルキレンイミノ基またはモルホリノ基を表してもよく；そして
Ｒ５は、水素または脂肪族炭化水素基を表す〕
を有する。
【００７５】
そのような化合物は全て、本発明の範囲内にある。しかしながら、テオフィリン自体が特に好ましい。
【００７６】
ステロイド類
ステロイド剤全般が本発明で使用するのに好適である。特定のステロイドを以下に示す。
【００７７】
一般的な吸入ステロイドとしては、以下のものが挙げられる：
・Ｐｕｌｍｉｃｏｒｔ（登録商標）（ブデソニド）
・Ｆｌｏｖｅｎｔ（登録商標）（フルチカゾン）
・Ａｓｍａｎｅｘ（登録商標）（モメタゾン）
・Ａｌｖｅｓｃｏ（登録商標）（シクレソニド）
・Ａｅｒｏｂｉｄ（登録商標）（フルニソリド）
・Ａｚｍａｃｏｒｔ（登録商標）（トリアムシノロン）
・Ｑｖａｒ（登録商標）（ベクロメタゾンＨＦＡ）
・ステロイド類はまた、β２アドレナリン作動性アゴニスト（例えばホルモテロールもしくはサルメテロール）および／またはムスカリンアンタゴニスト（例えばイプラトロピウムおよびチオトロピウム）をはじめとする、ある範囲内の機序を有する長時間作用性気管支拡張剤との併用形態で投与することも可能である。ステロイド併用に組み込まれる気管支拡張剤は、同一分子中にβ２アドレナリン作動性アゴニスト活性とムスカリンアンタゴニスト活性とを有し得る。  
・Ａｄｖａｉｒ（登録商標）（Ｆｌｏｖｅｎｔ（登録商標）およびＳｅｒｅｖｅｎｔ（登録商標））。注記：Ｓｅｒｅｖｅｎｔ（登録商標）は、長時間作用性βアゴニストのサルメテロールである。  
・Ｓｙｍｂｉｃｏｒｔ（登録商標）（Ｐｕｌｍｉｃｏｒｔ（登録商標）およびＯｘｉｓ（登録商標））。注記：Ｏｘｉｓは、長時間作用性βアゴニストのホルモテロールである。  
・他のステロイド／β２アゴニストの組合せ、例えば、シクレソニドとホルモテロール、およびフルチカゾンとホルモテロール（Ｆｌｕｔｉｆｏｒｍ）は、臨床開発段階にある。これらの製品はまた、吸入テオフィリンとの併用療法が有益となり得る。
【００７８】
一般的なステロイド丸剤およびステロイドシロップ剤としては、以下のものが挙げられる：
・Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）（プレドニゾン）
・Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）（メチルプレドニゾロン）
・Ｏｒａｐｒｅｄ（登録商標）、Ｐｒｅｌｏｎｅ（登録商標）、Ｐｅｄｉａｐｒｅｄ（登録商標）（プレドニゾロン）
【００７９】
ブデソニド
【化４】
0005579368.tif 000007
【００８０】
化学名：Ｃ２５Ｈ３４Ｏ６：４３０．５４
（＋）−［（ＲＳ）−１６ａ，１７ａ−ブチリデンジオキシ−１１ｂ，２１−ジヒドロキシ−１，４−プレグナジエン−３，２０−ジオン］
ＣＡＳ登録番号：５１３３３−２２−３
【００８１】
ブデソニドは、当初は、１６ａ−ヒドロキシプレドニゾロンから合成された。分子のユニークな構造は、高い局所抗炎症効力と比較的低い全身性副作用の可能性とを兼備する上で重要である。その他、ブデソニドは、粘膜液中に容易に溶解されるのに十分な程度に水溶性であるとともに、粘膜により急速に取り込まれるのに十分な程度に脂溶性である。アセタール基が非対称的であるので、ブデソニドは、２２Ｒおよび２２Ｓとして知られる２種のエピマーの１：１混合物として存在する。
【００８２】
フルチカゾン
【化５】
0005579368.tif 000008
【００８３】
ブランド名：Ｃｕｔｉｖａｔｅ、Ｆｌｉｘｏｎａｓｅ、Ｆｌｉｘｏｔｉｄｅ、Ｆｌｏｎａｓｅ、Ｆｌｏｖｅｎｔ、Ｆｌｕｎａｓｅ
化学名：（６（，１１（，１６（，１７（）−６，９−ジフルオロ−１１−ヒドロキシ−１６−メチル−３−オキソ−１７−（１−オキソプロポキシ）アンドロスタ−１，４−ジエン−１７−カルボチオ酸Ｓ−（フルオロメチル）エステル
化学式：Ｃ２５Ｈ３１Ｆ３Ｏ５Ｓ
ＣＡＳ番号：８０４７４−１４−２
【００８４】
シクレソニド
【化６】
0005579368.tif 000009
【００８５】
ブランド名：Ａｌｖｅｓｃｏ
化学名：（Ｒ）−１１β，１６α，１７，２１−テトラヒドロキシプレグナ−１，４−ジエン−３，２０−ジオン、シクロヘキサンカルボキサルデヒドとの環状１６，１７−アセタール、２１−イソブチレート
化学式：Ｃ３２−Ｈ４４−Ｏ７
ＣＡＳ番号：１４１８４５−８２−１
【００８６】
ベクロメタゾン
【化７】
0005579368.tif 000010
【００８７】
化学名：（１１（，１６（）−９−クロロ−１１，１７，２１−トリヒドロキシ−１６−メチルプレグナ−１，４−ジエン−３，２０−ジオン
化学式：Ｃ２２Ｈ２９ＣｌＯ５
ＣＡＳ番号：４４１９−３９−０
【００８８】
ブランド名（バリアント）
Ａｅｒｏｂｅｃ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ａｌｄｅｃｉｎ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ａｎｃｅｒｏｎ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ａｎｄｉｏｎ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｂｅｃｌａｃｉｎ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｂｅｃｌｏｆｏｒｔｅ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｂｅｃｌｏｍｅｔ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｂｅｃｌｏｒｈｉｎｏｌ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｂｅｃｌｏｖａｌ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｂｅｃｌｏｖｅｎｔ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｂｅｃｏｄｉｓｋｓ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｂｅｃｏｎａｓｅ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｂｅｃｏｎａｓｏｌ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｂｅｃｏｔｉｄｅ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｃｌｅｎｉｌ−Ａ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｅｎｔｙｄｅｒｍａ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｉｎａｌｏｎｅ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｋｏｒｂｕｔｏｎｅ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｐｒｏｐａｄｅｒｍ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｑｖａｒ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｒｉｎｏ−Ｃｌｅｎｉｌ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｓａｎａｓｔｈｍａｘ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｓａｎａｓｔｈｍｙｌ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｖａｎｃｅｎａｓｅ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｖａｎｃｅｒｉｌ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、Ｖｉａｒｅｘ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、およびＶｉａｒｏｘ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン）。
【００８９】
トリアムシノロン
【化８】
0005579368.tif 000011
【００９０】
ブランド名：Ａｒｉｓｔｏｃｏｒｔ、Ａｒｉｓｔｏｓｐａｎ、Ａｚｍａｃｏｒｔ、Ｋｅｎａｌｏｇ、Ｎａｓａｃｏｒｔ
化学名：（１１（，１６（）−９−フルオロ−１１，２１−ジヒドロキシ−１６，１７−［１−メチルエチリデンビス（オキシ）］プレグナ−１，４−ジエン−３，２０−ジオン
化学式：Ｃ２４Ｈ３１ＦＯ６
ＣＡＳ番号：７６−２５−５
【００９１】
サルメテロール／Ａｄｖａｉｒ
ブランド名：＊１−ヒドロキシ−２−ナフトエート＊１−ヒドロキシ−２−ナフトエート：Ａｒｉａｌ、Ｓａｌｍｅｔｅｄｕｒ、Ｓｅｒｅｖｅｎｔ
化学名：（（）−４−ヒドロキシ−（’−［［［６−（４−フェニルブトキシ）ヘキシル］アミノ］メチル］−１，３−ベンゼンジメタノール
化学式：Ｃ２５Ｈ３７ＮＯ４
ＣＡＳ番号：８９３６５−５０−４
【化９】
0005579368.tif 000012
【００９２】
メチルプレドニゾロン
【化１０】
0005579368.tif 000013
【００９３】
化学名：（６（，１１（）−１１，１７，２１−トリヒドロキシ−６−メチルプレグナ−１，４−ジエン−３，２０−ジオン
化学式：Ｃ２２Ｈ３０Ｏ５
ＣＡＳ番号：８３−４３−２
ブランド名：Ｍｅｄｒａｔｅ、Ｍｅｄｒｏｌ、Ｍｅｄｒｏｎｅ、Ｍｅｔａｓｔａｂ、Ｍｅｔｒｉｓｏｎｅ、Ｐｒｏｍａｃｏｒｔｉｎｅ、Ｓｕｐｒａｍｅｔｉｌ、Ｕｒｂａｓｏｎ
【００９４】
プレドニゾン
【化１１】
0005579368.tif 000014
【００９５】
ブランド名：Ａｎｃｏｒｔｏｎｅ、Ｃｏｌｉｓｏｎｅ、Ｃｏｒｔａｎｃｙｌ、Ｄａｃｏｒｔｉｎ、Ｄｅｃｏｒｔａｎｃｙｌ、Ｄｅｃｏｒｔｉｎ、Ｄｅｌｃｏｒｔｉｎ、Ｄｅｌｔａｃｏｒｔｏｎｅ、Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ、Ｄｅｌｔｉｓｏｎ、Ｄｉ−Ａｄｒｅｓｏｎ、Ｅｎｃｏｒｔｏｎ、Ｍｅｔｉｃｏｒｔｅｎ、Ｎｕｒｉｓｏｎ、Ｏｒａｓｏｎｅ、Ｐａｒａｃｏｒｔ、Ｐｒｅｄｎｉｌｏｎｇａ、Ｐｒｏｎｉｓｏｎ、Ｒｅｃｔｏｄｅｌｔ、Ｓｏｎｅ、Ｕｌｔｒａｃｏｒｔｅｎ
化学名：１７，２１−ジヒドロキシプレグナ−１，４−ジエン−３，１１，２０，トリオン
化学式：Ｃ２１Ｈ２６Ｏ５
ＣＡＳ番号：５３−０３−２
【００９６】
製剤
テオフィリンやアミノフィリンのようなキサンチン誘導体は、さまざまな医薬調剤の形態で入手可能である。同様に、ステロイド剤は、さまざまな製剤の形態で入手可能である。本明細書に記載の実施例で使用される製剤について以下でさらに詳述するが、所望の投与量で薬剤を被験者に吸入送達（経口吸入または経鼻吸入）し得る任意の製剤を本発明で使用することが可能である。
【００９７】
本発明に従って使用される好ましい組成物は、好適には、錠剤、ブリスター剤、カプセル剤、顆粒剤、スフェロイド剤、粉末剤、または液体調剤の形態をとり得る。
【００９８】
本発明では、テオフィリンは、吸入形態で投与される。エアロゾル発生は、例えば、圧力駆動式ジェットアトマイザーまたは超音波アトマイザーにより実施可能であるが、有利には、噴射剤駆動式計量エアロゾルまたは例えば吸入カプセルもしくは他の「乾燥粉末」送達システムからのマイクロ粒子化活性化合物の噴射剤なしの投与により実施可能である。ステロイド剤は、経口経路または吸入経路のいずれかにより投与可能である。有利には、ステロイド剤は、吸入経路により投与される。
【００９９】
活性化合物は、使用される吸入器システムに応じて記載のごとく投与され、投与製剤は、活性化合物に加えて、噴射剤（例えば、計量エアロゾルの場合のＦｒｉｇｅｎ）、界面活性物質、乳化剤、安定化剤、保存剤、風味剤、充填剤（例えば、粉末吸入器の場合のラクトース）などのような所要の賦形剤、または適切であれば、さらなる活性化合物を追加的に含有する。
【０１００】
吸入の目的では、最適粒子サイズのエアロゾルを発生させて患者に適した吸入法によって投与し得る多数の装置が入手可能である。アダプター（スペーサー、エキスパンダー）と洋梨形容器（例えば、Ｎｅｂｕｌａｔｏｒ（登録商標）、Ｖｏｌｕｍａｔｉｃ（登録商標））、およびパッファースプレーを放出する自動装置（Ａｕｔｏｈａｌｅｒ（登録商標））の使用に加えて、計量エアロゾルの場合、特定的には粉末吸入器の場合、いくつかの技術的解決手段が利用可能である（例えば、Ｄｉｓｋｈａｌｅｒ（登録商標）、Ｒｏｔａｄｉｓｋ（登録商標）、Ａｃｃｕｈａｌｅｒ（登録商標）、Ｔｕｒｂｏｈａｌｅｒ（登録商標）、Ｃｌｉｃｋｈａｌｅｒ（登録商標）、Ｄｕｏｈａｌｅｒ（登録商標）、Ｅｖｏｈａｌｅｒ（登録商標）、Ｔｗｉｓｔｈａｌｅｒ（登録商標）、Ａｅｒｏｂｅｃ、Ａｉｒｍａｘ、ＳｋｙｅＨａｌｅｒ、ＨａｎｄｉＨａｌｅｒ（登録商標）、Ｒｅｓｐｉｍａｔ（登録商標） Ｓｏｆｔ Ｍｉｓｔ（商標）Ｉｎｈａｌｅｒ、または例えば欧州特許出願である欧州特許出願公開第０５０５３２１号明細書、欧州特許出願公開第４０７０２８号明細書、欧州特許出願公開第６５０４１０号明細書、欧州特許出願公開第６９１８６５号明細書、もしくは欧州特許出願公開第７２５７２５号明細書に記載されるような他の吸入器）。
【０１０１】
本発明により治療される呼吸器疾患としては、特定的には、本発明に係る組合せにより治療し得るＣＯＰＤ（気管支炎、閉塞性気管支炎、痙攣性気管支炎、肺気腫）、嚢胞性繊維症、ステロイド耐性喘息（喫煙喘息患者を包含する）、および小児喘息が挙げられる。本発明に係る相乗的組合せは、従来の単独療法のときよりも少ない量の薬剤しか必要とされないので、特に長期療法で効能を示す。
【実施例】
【０１０２】
１．材料
化合物は、外部供給業者から購入した。カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）（Ｎａ塩）（製品コードＣ−４８８８）は、Ｓｉｇｍａから入手した。リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）は、Ｇｉｂｃｏから入手した。滅菌生理食塩水（０．９５ｗ／ｖのＮａＣｌ）およびＥｕｔｈａｔａｌ（ペントバルビトンナトリウム）は、それぞれ、Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｌｔｄ．およびＴｈｅ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｍｐａｎｙから入手した。
【０１０３】
タバコの煙は、米国のケンタッキー大学タバコ研究所（The Institute of Tobacco Research）から購入した１Ｒ１シガレットを用いて発生させた。
【０１０４】
マウス
雌近交系Ａ／Ｊマウス（使用開始日の体重：約２０ｇ）をＨａｒｌａｎから入手し、完全バリヤー飼育を行い、かつ受け取り時に指定の微生物を含まないことを証明した。グレード８のアスペンチップ敷料を有する個別換気式ポリカーボネート中実底ケージ（ＩＶＣ）中に、１ケージ当たり５匹までのマウスを収容した。ケージ内の環境（エアフロー、温度、および湿度）をＩＶＣシステム（Ｔｅｃｈｎｉｐｌａｓｔ）により制御した。食料（ＲＭ１、Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｄｉｅｔ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）および水は、適宜提供した。尾部にユニークに着色された「ｐｅｎｔｅｌ」マークにより個々の動物を特定し、体重測定し、そしてランダムに治療群に割り当てた。
【０１０５】
２．製剤化
製剤化の頻度：それぞれの鼻腔内（ｉ．ｎ．）投与または経口投与の前に、化合物を新たに毎日製剤化した。
【０１０６】
３．０  方法
連続１１日間のＴＳ暴露の最終ＴＳ暴露の２４時間後にＢＡＬ中に回収された全細胞数が有意に増大することを事前の試験で確認した。ここで報告した試験では、この時点を用いた。
【０１０７】
マウスをＴＳに暴露し、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）を取得し、示差的細胞数を調べるためのサイトスピンスライドを作製するためのプロトコルについて以下に概説する。
【０１０８】
連続１１日間にわたり毎日行われるＴＳへの動物の暴露
この暴露プロトコルでは、個々の透明ポリカーボネートチャンバー（２７ｃｍ×１６ｃｍ×１２ｃｍ）内の５匹よりなる群のマウスを暴露した。シガレットからのＴＳが１００ｍｌ／ｍｉｎの流量で暴露チャンバーに進入するようにした。高レベルのＴＳ（６本のシガレット）に至るまでの反復暴露により引き起こされる可能性のあるいかなる問題をも最小限に抑えるべく、ＴＳへのマウスの暴露を暴露期間にわたり最大６本のシガレットまで徐々に増大させた。この試験で使用した暴露スケジュールは、次のとおりであった：
１日目：２本のシガレット（約１６分間の暴露）
２日目：３本のシガレット（約２４分間の暴露）
３日目：４本のシガレット（約３２分間の暴露）
４日目：５本のシガレット（約４０分間の暴露）
５〜１１日目：６本のシガレット（約４８分間の暴露）
【０１０９】
さらなる群のマウスを対照として等価な時間にわたり空気に毎日暴露した（ＴＳ暴露なし）。
【０１１０】
気管支肺胞洗浄およびサイトスピン分析
【０１１１】
気管支肺胞洗浄は、以下のように行った：
約８ｍｍの長さまで短くしたＰｏｒｔｅｘナイロン静脈内カニューレ（ピンクルアーフィッティング）を用いて、気管にカニューレを挿入した。ヘパリン（１０単位／ｍｌ）を含有するリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を洗浄液として使用した。０．４ｍｌの体積を徐々に注入し、１ｍｌ注射器を用いて３回吸引し、次に、エッペンドルフ管中に配置し、そして後に続く測定の前に、氷上に保持した。
【０１１２】
細胞数：
洗浄液を遠心分離により細胞と分離し、上清をデカントし、そして後続の分析に供すべく凍結させた。細胞ペレットを既知体積のＰＢＳ中に再懸濁させ、そして血球計数器を用いて顕微鏡下で染色（Ｔｕｒｋｓ染色）アリコートを計数することにより全細胞数を求めた。
【０１１３】
示差的細胞数を以下のように求めた：
１ｍｌ当たり約１０５個の細胞になるように残留細胞ペレットを希釈した。５００μｌの体積をサイトスピンスライドのファネル中に配置し、８００ｒｐｍで８分間遠心分離した。スライドを空気乾燥させ、専用の使用説明書に従って「Ｋｗｉｋ−Ｄｉｆｆ」溶液（Ｓｈａｎｄｏｎ）を用いて染色した。乾燥させてカバースリップを載せてから、光学顕微鏡法を用いて示差的細胞を計数した。光学顕微鏡法を用いて４００個までの細胞を中立的なオペレーターにより計数した。標準的な形態計測法を用いて細胞を区別した。
【０１１４】
ＴＳ暴露Ａ／Ｊマウスにおける経口投与後または鼻腔内投与後のテオフィリンの血漿中レベルの薬動学的評価
【０１１５】
最後にマウスに麻酔をかけ、そして５μｌ中２０単位のリチウムヘパリンを含有するシリンジ中に心臓穿刺により血液を捕集した。捕集された血液を混合し、デカントしてエッペンドルフ管に入れ、その後、マイクロ遠心分離機による遠心分離にかけた。血漿を捕集し、−８０℃で貯蔵し、その後、ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法による分析にかけた。血漿中レベルの測定に使用した装置は、Ｍｉｃｒｏｍａｎｎ  Ｑｕａｔｒｏ  Ｍｉｃｒｏ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＵＫ  Ｌｉｍｉｔｅｄ）およびＷａｔｅｒｓ  ２７９５  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ＨＴ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ（Ｗａｔｅｒｓ  ＵＳＡ）であった。
【０１１６】
メタノールに溶解されたストック濃度のテオフィリンでマウス血漿をスパイクすることにより、６つの比較標準濃度を調製した。２００μｌのアセトニトリル（内部標準として０．２５ｍｇ／ｌのデキストロルファンを含有する）を各５０μｌの解凍サンプルおよび標準に添加することにより分析用のサンプルを調製して激しく混合した。次に、それぞれのサンプルおよび標準を１００００ｇで２分間遠心分離し、そして上清を取り出してＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析にかけた。
【０１１７】
逆相ＨＰＬＣをタンデム質量分析検出と併用して（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）、テオフィリンおよびデキストロルファンの分析を行った。Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＭａｓｓＬｙｎｘソフトウェアバージョン４．０を備えたＭｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｑｕａｔｒｏ  Ｍｉｃｒｏ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒを用いてＭｕｌｔｉｐｌｅ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇモードで親化合物および特定のフラグメント生成物の正イオンをモニターした。それぞれのサンプルおよび標準の２５μｌアリコートを液体クロマトグラフィーシステムに注入した。定量下限（ＬＯＱ）は、０．０１６ｍｇ／Ｌであり、検出限界は、０．００３ｍｇ／Ｌであることが明らかにされた。
【０１１８】
３．１  治療レジーム
経口用量試験では、マウスは、１１日間毎日、タバコの煙への暴露の１時間前および６時間後（−１ｈおよび＋６ｈ）、媒体（１％カルボキシメチルセルロース）、テオフィリン（３ｍｇ／ｋｇ）、デキサメタゾン（０．３ｍｇ／ｋｇ）、テオフィリン／デキサメタゾンの組合せ（それぞれ３および０．３ｍｇ／ｋｇ）、またはテオフィリン／デキサメタゾンの組合せ（それぞれ１および０．３ｍｇ／ｋｇ）を摂取した。その他、ステロイドまたはステロイド併用を摂取した動物は、最初のＴＳ暴露の２０時間前にステロイドが投与された。１２日目の終了日、屠殺の１時間前（最後の暴露の２３時間後）、マウスに追加投与が行われた。対照群のマウスは、１〜１２日目、媒体を摂取し、かつ１日当たり最大時間５０分間にわたり空気に毎日暴露した。１２日目、１１回目の最終ＴＳ暴露の２４時間後、ＢＡＬおよび血漿の捕集を行った。
【０１１９】
鼻腔内用量試験では、マウスは、１１日間毎日、タバコの煙への暴露の１時間前、媒体（ＰＢＳ）、テオフィリン（０．５ｍｇ／ｋｇ）、デキサメタゾン（０．１ｍｇ／ｋｇ）、テオフィリン／デキサメタゾンの組合せ（それぞれ０．５および０．１ｍｇ／ｋｇ）、テオフィリン／デキサメタゾンの組合せ（それぞれ０．２５および０．１ｍｇ／ｋｇ）、またはテオフィリン／デキサメタゾンの組合せ（それぞれ０．１および０．１ｍｇ／ｋｇ）を摂取した。その他、ステロイドまたはステロイドの組合せを摂取した動物は、最初のＴＳ暴露の２０時間前にステロイドが投与された。１２日目の終了日、屠殺の１時間前（最後の暴露の２３時間後）、マウスに追加投与が行われた。対照群のマウスは、１〜１２日目、媒体を摂取し、かつ１日当たり最大時間５０分間にわたり空気に毎日暴露した。１２日目、１１回目の最終ＴＳ暴露の２４時間後、ＢＡＬおよび血漿の捕集を行った。
【０１２０】
３．２  データ測定および統計解析
全ての結果を各動物に対する個別データ点として示し、各群に対して平均値を計算した。
【０１２１】
正規性の検定に合格したので、データを一元配置分散分析検定（ＡＮＯＶＡ）に付し、続いて、治療群間の有意性の検定を行うべく多重比較のＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ補正を行った。＜０．０５の「ｐ」値は、統計学的に有意であるとみなした。以下の式：
阻害％＝１−〔（治療群の結果−シャム群の結果）／（ＴＳ媒体群の結果−シャム群の結果）〕×１００
を用いて細胞データに対してＥｘｃｅｌスプレッドシート内で阻害パーセントを自動計算した。以上の式を用いて、他のパラメーターに対する阻害データを手計算した。
【０１２２】
４．０  結果
【０１２３】
４．１  連続１１日間にわたりＴＳに毎日暴露することにより引き起こされる気管支肺胞洗浄液における炎症反応（最終暴露の２４時間後）
この試験では、連続１１日間にわたるＴＳへの暴露により、最終暴露の２４時間後、炎症反応を引き起こした。これは、空気暴露されたマウスと比較したときのＢＡＬにおける好中球、マクロファージ、およびリンパ球の有意な増加から構成される（いずれもＰ＜０．００１）。
【０１２４】
４．２  連続１１日間にわたりＴＳに毎日暴露することにより気管支肺胞洗浄液に引き起こされる炎症反応に及ぼすテオフィリン、デキサメタゾン、およびテオフィリン／デキサメタゾン組合せの効果（最終暴露の２４時間後）
経口的にまたは鼻腔内経路により投与した場合、テオフィリン単独療法でもデキサメタゾン単独療法でも、ＴＳ暴露により誘導されてＢＡＬ中に回収された細胞の全数は、有意に阻害されることはなかった（図１）。特定の細胞タイプのいずれについても、統計学的に有意な阻害作用は、見られなかった（図３〜５）。
【０１２５】
これとは対照的に、テオフィリン／デキサメタゾンの併用では、経口的に投与したか鼻腔内経路により投与したかに関わらず、調べた全ての用量において、ＢＡＬ中に回収された細胞の全数は、有意に４４〜６３％阻害された（ｐ＜０．００１）（図１）。全細胞に及ぼすこの効果は、マクロファージ、好中球、およびリンパ球の阻害から構成されるものであった（図３〜５）。
【０１２６】
併用療法によるＴＳ起因性炎症細胞浸潤の阻害の全内訳を表１に示す。
【０１２７】
４．３  薬物動態学的分析
マウスは、屠殺の１時間前、それぞれのテオフィリン／デキサメタゾン併用療法の最後の用量を摂取し、テオフィリン含有量に関してこれらのマウスの血漿が検査された。経口併用療法で投与されたマウスは、鼻腔内併用療法で摂取したマウスと比較して、より高い平均テオフィリン血漿中含有量を有していた（図２）。
【０１２８】
０．３ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾンと併用して３ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇのテオフィリンを使用した経口併用療法では、それぞれ、１．３７±０．１９２ｍｇ／Ｌおよび０．４７９±０．０４７ｍｇ／Ｌの平均テオフィリン血漿中レベルを生じた。０．１ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾンと併用して０．５ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、または０．１ｍｇ／ｋｇのテオフィリンを使用した鼻腔内併用療法では、それぞれ、０．０７４±０．０１３ｍｇ／Ｌ、０．０４５±０．０１０ｍｇ／Ｌ、および０．０２２±０．００９ｍｇ／Ｌの平均テオフィリン血漿中レベルを生じた。使用した用量で、テオフィリンを鼻腔内投与したとき、投与の１時間後、極めて少ない（＜０．１ｍｇ／Ｌ）全身性テオフィリン暴露を生じた。
【０１２９】
５．０  考察
この試験では、テオフィリン単独療法またはステロイド単独療法で毎日治療しても、ＣＯＰＤのこの肺炎症モデルにおいて、なんら阻害活性をもたらすことはできなかった。単独療法を経口経路により行うか吸入の代替経路（鼻腔内投与）により行うかに関わらず、このような肺抗炎症活性の欠如が観測された。しかしながら、単独で与えたときと同一の用量で化合物を共投与した場合（経口経路または鼻腔内経路のいずれでも）、有意な抗炎症活性が実証された。さらに、より低用量のテオフィリンをデキサメタゾンと併用しても、効力を示した。
【０１３０】
さらに、併用療法を鼻腔内経路により行ったときに観測された効力は、テオフィリンおよびデキサメタゾンのいずれについてもより低用量で使用したにも関わらず、併用療法を経口経路により行ったときに観測された効力と等価であった。このことから、効力は、局所（肺特異的）抗炎症活性によりもたらされることが示唆される。鼻腔内投与では極めて低い全身性レベル（＜０．１ｍｇ／Ｌ）を生じるので、この［仮説］は、血漿中のテオフィリン含有量を調べることによりさらに裏付けられる。具体例として、経口併用療法（１ｍｇ／ｋｇのテオフィリン／０．３ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン）を用いたときにＢＡＬ中の全細胞に関して観測された効力（４７％阻害）は、ステロイドを１／３の用量で投与しかつテオフィリンを１／１０の用量で投与したときの鼻腔内併用療法（０．１ｍｇ／ｋｇのテオフィリン／０．１ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン）で観測された効力（４４％阻害）と類似していた。さらに、全身性テオフィリンレベルは、この実施例では、約１／１７であった。まとめると、テオフィリンとステロイドとの併用療法により、ｉｎ ｖｉｖｏで、特定的には肺内で媒介される相乗的肺抗炎症反応が引き起こされることがこのデータから示唆される。
【０１３１】
これらのデータから、マウス亜慢性ＴＳモデルのステロイド非感受性が実証され、さらにＣＯＰＤの治療パラダイムとして治療用量のステロイドを不活性用量のテオフィリンと併用することによる相乗効果が裏付けられる。重要なこととして、抗炎症活性に通常関連付けられるレベル（５ｍｇ／Ｌ）よりもはるかに低い血漿中レベルを生じる非常に低い用量のテオフィリンの投与を可能にする吸入経路の代替経路により併用療法を行ったときに、この効果が達成される。
【表３】
0005579368.tif 000015
【０１３２】
鼻腔内投与を用いてテオフィリンとステロイドのデキサメタゾンとの肺送達併用の相乗的抗炎症活性を実証する、以上に詳述したｉｎ ｖｉｖｏ試験を、フルチカゾン、ブデソニド、またはシクレソニドを含む他のステロイドを用いて反復した。ステロイドの投与量は、１ｍｃｇ／ｋｇ／日〜１ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内である。
【０１３３】
動物に投与される吸入薬剤の効力に必要とされる用量は、ヒト個体における効力に必要とされる用量とは有意に異なり得ることが、当業者に広く受け入れられている。吸入ステロイドの場合が特にこれに該当する。呼吸器疾患の患者に投与される吸入ステロイドの有効用量は、使用されるステロイドおよび多くの他の因子にもよるが、典型的には４０ｍｃｇ〜１６００ｍｃｇの範囲内である（個人の体重に関係ない全用量）。動物に投与される吸入ステロイドの用量については、絶対用量ではなく単位体重当たりの質量（例えばｍｇ／ｋｇ）で記述される。臨床使用用量をｍｃｇ／ｋｇに変換すれば、ヒトの用量と動物の用量との比較が可能になり、有意差が実証される。例えば、ブデソニドは、典型的には、１日当たり２００ｍｃｇ〜１６００ｍｃｇの範囲内で患者に投与され、これは、平均的患者（７０ｋｇ）では２．９ｍｃｇ／ｋｇ〜２２．９ｍｃｇ／ｋｇに相当する。喘息のマウスモデルでは、ブデソニドは、鼻腔内投与の場合、３５０ｍｃｇ／ｋｇの用量で効力を示したが、３５ｍｃｇ／ｋｇまたは３．５ｍｃｇ／ｋｇの用量では、効力を示さなかった（Shen et al. Am.J.Respir.Crit Care Med. 2002, 166(2): 146-153）。
【０１３４】
以上の説明で引用した刊行物は全て、参照により本明細書に組み入れられるものとする。本発明に係る記載の方法およびシステムの種々の修正形態および変更形態は、本発明の範囲および精神から逸脱することなく当業者に自明なものであろう。特定の好ましい実施形態に関連させて本発明について説明してきたが、当然のことながら、特許請求された本発明は、そのような特定の実施形態に過度に限定されるものではない。実際上、本発明を実施するための記載の形態の種々の修正形態のうち、生化学、分子生物学、および生物工学、またはそれらの関連分野の当業者に自明な修正形態は、次の特許請求の範囲内に包含されるものとみなされる。
【図面の簡単な説明】
【０１３５】
【図１】最終暴露の２４時間後にＢＡＬ中に回収された全細胞数に及ぼす経口投与または鼻腔内投与されたテオフィリン、デキサメタゾン、またはそれらの組合せの効果。
【図２】ＴＳ暴露マウスにおいて経口経路または鼻腔内経路のいずれかによりデキサメタゾンと併用投与したときの投与の１時間後におけるテオフィリンの血漿中レベル。
【図３】最終暴露の２４時間後にＢＡＬ中に回収されたマクロファージの数に及ぼす経口投与または鼻腔内投与されたテオフィリン、デキサメタゾン、またはそれらの組合せの効果。
【図４】最終暴露の２４時間後にＢＡＬ中に回収された好中球の数に及ぼす経口投与または鼻腔内投与されたテオフィリン、デキサメタゾン、またはそれらの組合せの効果。
【図５】最終暴露の２４時間後にＢＡＬ中に回収されたリンパ球の数に及ぼす経口投与または鼻腔内投与されたテオフィリン、デキサメタゾン、またはそれらの組合せの効果。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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