(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式（１）で表されるプロスタグランジンＩ２誘導体、またはその薬学的に許容できる塩。
【化１】
0005468007.tif 000009
ただし、式中の記号は以下の意味を示す。
Ｒ1、Ｒ2：それぞれ独立に、水素原子、または炭素数１〜３の直鎖アルキル基。
Ｒ3：水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、アルコキシアルキル基、アリール基、ハロゲン原子、またはハロゲン化アルキル基。
【請求項２】
Ｒ1がメチル基である請求項１に記載のプロスタグランジンＩ２誘導体、またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項３】
Ｒ3がメチル基である請求項１または２に記載のプロスタグランジンＩ２誘導体、またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項４】
Ｒ2が水素原子である請求項１〜３のいずれかに記載のプロスタグランジンＩ２誘導体、またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項５】
Ｒ1がメチル基であり、Ｒ2が水素原子である請求項１〜４のいずれかに記載のプロスタグランジンＩ２誘導体、またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項６】
Ｒ3がｍ−メチル基である請求項１〜５のいずれかに記載のプロスタグランジンＩ２誘導体、またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項７】
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3はメチル基である請求項１に記載のプロスタグランジンＩ２誘導体、またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項８】
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3はメチル基である請求項１に記載のプロスタグランジンＩ２誘導体、またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載のプロスタグランジンＩ２誘導体、またはその薬学的に許容できる塩を有効成分とする医薬。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれかに記載のプロスタグランジンＩ２誘導体、またはその薬学的に許容できる塩を有効成分とする消化管疾患の予防または治療のための医薬。
【請求項１１】
消化管疾患が、消化管の炎症性疾患である請求項１０に記載の医薬。
【請求項１２】
消化管の炎症性疾患が、炎症性腸疾患である請求項１１に記載の医薬。
【請求項１３】
炎症性腸疾患が、潰瘍性大腸炎またはクローン病である請求項１２に記載の医薬。
【請求項１４】
炎症性腸疾患が、腸管ベーチェット病または単純性潰瘍である請求項１２に記載の医薬。
【請求項１５】
消化管疾患が、消化管の潰瘍性疾患である請求項１０に記載の医薬。
【請求項１６】
消化管の潰瘍性疾患が、胃炎・胃潰瘍である請求項１５に記載の医薬。
【請求項１７】
胃炎・胃潰瘍が、薬剤性の胃炎・胃潰瘍である請求項１６に記載の医薬。
【請求項１８】
薬剤性の胃炎・胃潰瘍が、非ステロイド性抗炎症剤に起因する胃炎・胃潰瘍である請求項１７に記載の医薬。
【請求項１９】
胃炎・胃潰瘍が、アルコールに起因する胃炎・胃潰瘍である請求項１６に記載の医薬。
【請求項２０】
消化管の潰瘍性疾患が、小腸潰瘍である請求項１５に記載の医薬。
【請求項２１】
小腸潰瘍が、薬剤性小腸潰瘍である請求項２０に記載の医薬。
【請求項２２】
薬剤性小腸潰瘍が、非ステロイド性抗炎症剤に起因する小腸潰瘍である請求項２１に記載の医薬。
【請求項２３】
小腸潰瘍が、アルコールに起因する小腸潰瘍である請求項２０に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロスタグランジンの１位のカルボキシ基がテトラゾール基に置き換わり、かつ、７位に２個のフッ素原子が結合した７，７−ジフルオロプロスタグランジンＩ２誘導体、及び該プロスタグランジンＩ２誘導体を有効成分とする医薬、特に炎症性腸疾患の予防または治療のための医薬、に関する。
本出願は、参照によりここに援用されるところ、日本特許出願番号2008-232133及び2009-168193からの優先権を請求する。
【背景技術】
【０００２】
消化管の炎症は、口腔、食道、胃、小腸、大腸、肛門で認められ、急性的な炎症と慢性的な炎症がある。粘膜上皮が物理的または化学的な刺激や細菌やウイルスの感染を受けると炎症が生じ、その程度によりびらんや潰瘍病変を生じる。ストレスによる過度の胃酸分泌は、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍を生じる。また、アルコールの過剰摂取は、粘膜血流のうっ滞や胃運動の低下による胃酸の逆流を招き、胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍や食道炎を生じる。整形外科患者や関節リウマチ患者などでは、非ステロイド性抗炎症剤の長期服薬により、薬剤性の胃潰瘍や十二指腸潰瘍が生じる。また、癌患者では放射線治療に付随して発症する放射性腸炎や抗癌剤治療に付随して発症する薬剤性腸炎が生じる。さらに、結核やアメーバ赤痢などの感染患者では、腸結核やアメーバ性大腸炎などの感染性胃腸炎が生じる。これら以外にも、血流障害に基づく虚血により生じる虚血性腸炎などもある。消化管の炎症性疾患の患者に免疫異常があると、原因を取り除いても、臓器の修復を妨げられ、病態を慢性化させる。これらの消化管の炎症性疾患のうち、炎症が腸管で生じるものは広義の炎症性腸疾患と言われる。
一方、原因が明らかでない炎症性腸疾患もある。潰瘍性大腸炎とクローン病の二つが良く知られ、狭義の炎症性腸疾患である。さらに、類似した疾患である腸管ベーチェット病や単純性潰瘍もある。寛解と再燃を繰り返す難治性の慢性消化管疾患であり、病因の主体は、腸管上皮の防御力の低下、腸管組織に進入する腸内細菌に対する腸管免疫反応の異常によると考えられている。
潰瘍性大腸炎は、直腸から連続して大腸粘膜にびらん、潰瘍を形成する慢性の大腸疾患であり、その症状は、腹痛、下痢、粘血便、発熱等である。一方、クローン病は、口腔から大腸、肛門までのすべての消化管に病変が起こりうる。本症の特徴は、消化管の非連続性の縦走（縦長）潰瘍と敷石像であり、その症状は、腹痛、下痢、発熱や栄養の吸収障害による低栄養や貧血等である。
消化管の炎症性疾患における炎症の予防及び/または治療は、原因が分かる場合、原因の除去や抑制を行う。例えば、胃炎、胃・十二指腸潰瘍などの炎症に対しては、胃酸分泌やその作用を抑制する目的で制酸剤、抗コリン剤、抗ヒスタミンＨ２受容体拮抗剤、プロトンポンプ阻害剤などが使われる。また、非ステロイド性抗炎症剤が原因の炎症には、その薬剤により産生が阻害されるプロスタグランジンＥを補う目的でプロスタグランジンＥ誘導体などが使われる。
一方、狭義の炎症性腸疾患の予防または治療は、薬物療法、栄養（食事）療法、手術療法がある。薬物療法としては5-アミノサリチル酸製剤（ペンタサ、サラゾピリン）、ステロイド（プレドニゾロン）、免疫抑制剤（アザチオプリン、メルカプトプリン、タクロリムス）、抗TNF-α抗体（インフリキシマブ）などが使われる。【０００３】
プロスタグランジン（以下、プロスタグランジンをＰＧと記す）の１位のカルボキシ基の代わりにテトラゾール基を有するＰＧ誘導体については、下記の特許文献１、特許文献２及び非特許文献１に報告されている。
さらに、７，７−ジフルオロＰＧＩ２類やその製造方法についての報告がある（特許文献３、特許文献４）。また、７，７−ジフルオロＰＧＩ２類は、循環器系疾患の予防剤あるいは治療剤として有用であると記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】ＤＥ２４０５２５５号明細書
【特許文献２】国際公開０３／１０３６６４号パンフレット
【特許文献３】特開平７−３３０７５２号公報
【特許文献４】特開２００４−２５６５４７号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９７９，２２，１３４０．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、上記記載の公知のＰＧＩ２類とは異なる、新規なプロスタグランジンＩ２誘導体、またはその薬学的に許容できる塩を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するために、フッ素原子の有する特異な性質を付与した新規なＰＧ類を合成し、その物性や生理活性を明らかにすべく検討を行った。その結果、プロスタン酸骨格の１位のカルボキシ基がテトラゾール基に置き換わり、２個のフッ素原子が結合した、新規な７，７−ジフルオロＰＧＩ２誘導体が、非常に優れた物性及び薬理作用を有すること、さらに、医薬として極めて優れた化合物であることを見いだし、本発明を完成した。
なお、本発明者らの知るところでは、ＰＧの１位のカルボキシ基の代わりにテトラゾール基を有するＰＧＩ２類については、報告されていない。さらに、１位がテトラゾール基で、７位に２個のフッ素原子を有するＰＧＩ２類については、その合成例、物性、生理活性等について、全く報告されていない。【０００８】
すなわち本発明は、下記式（１）で表される７，７−ジフルオロＰＧＩ２誘導体、その薬学的に許容できる塩、及び、それらを有効成分とする医薬を提供する。【０００９】
【化１】
0005468007.tif 000002
ただし、式中の記号は以下の意味を示す。
Ｒ1、Ｒ2：それぞれ独立に、水素原子、または炭素数１〜３の直鎖アルキル基。
Ｒ3：水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、アルコキシアルキル基、アリール基、ハロゲン原子、またはハロゲン化アルキル基。
【発明の効果】
【００１０】
本発明が提供する新規７，７−ジフルオロＰＧＩ２誘導体は、非経口投与または経口投与によって長時間血中濃度を維持し薬理作用を発揮し、炎症性腸疾患における消化管の炎症及び下痢・血便の発症を予防及び治療、胃炎、胃潰瘍や小腸潰瘍などにおける潰瘍を予防及び治療する医薬を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】マウスＤＳＳ大腸炎モデルにおける排便障害に対する効果
【図２】マウスＤＳＳ大腸炎モデルにおける大腸短縮に対する効果
【図３】ラットＤＳＳ大腸炎モデルにおける排便障害に対する効果
【図４】ラットＤＳＳ大腸炎モデルにおける大腸短縮に対する効果
【図５】ラットＤＳＳ大腸炎モデルにおける大腸組織傷害に対する効果
【図６】マウスＤＳＳ大腸炎の寛解／再燃モデルにおける排便障害に対する効果
【図７】マウスＴリンパ球移入腸炎モデルにおける軟便スコアに対する効果
【図８】マウスＴリンパ球移入腸炎モデルにおける便潜血スコアに対する効果
【図９】マウスＴリンパ球移入腸炎モデルにおける体重減少スコアに対する効果
【図１０】マウスＴリンパ球移入腸炎モデルにおけるＤＡＩスコアに対する効果
【図１１】ラットエタノール誘発胃粘膜傷害モデルにおける胃潰瘍に対する効果
【図１２】ラットインドメタシン誘発小腸傷害モデルにおける小腸潰瘍に対する効果
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（本発明の化合物の定義）
本明細書における化合物の命名において、ＰＧ骨格の位置を示すために用いる数字は、プロスタン酸骨格の数字に対応する数字を用いる。本明細書において、アルキル基の水素原子が置換された基を、置換アルキル基とも記す。他の基においても同様である。
また、アルキル基等の有機基が「低級」とはその炭素数が６以下であることをいう。なお、「低級」有機基の炭素数は４以下が好ましい。
【００１３】
「アルキル基」は、直鎖であっても分岐であってもよい。アルキル基は特に記載しないかぎり炭素数が１〜６である低級アルキル基が好ましく、炭素数１〜４の低級アルキル基が特に好ましい。アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、またはヘキシル基等が挙げられる。
【００１４】
「アルコキシ基」は、炭素数が１〜６である低級アルコキシ基が好ましく、炭素数１〜４のアルコキシ基が特に好ましい。アルコキシ基は直鎖であっても分岐であってもよい。アルコキシ基の例としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、またはブトキシ基等が挙げられる。
【００１５】
「アルコキシアルキル基」は、アルコキシ基で置換されたアルキル基をいう。アルコキシアルキル基のアルコキシ基は炭素数１〜４の低級アルコキシ基が好ましく、アルコキシアルキル基のアルキル基は炭素数１〜４の低級アルキル基が好ましい。アルコキシアルキル基は低級アルコキシアルキル基であること（すなわち、アルコキシアルキル基全体の炭素数は６以下であること）が好ましく、炭素数４以下の低級アルコキシアルキル基であることがより好ましい。アルコキシアルキル基の例としては、メトキシメチル基、エトキシメチル基、プロポキシメチル基、エトキシエチル基等が挙げられる。
【００１６】
「アリール基」とは、置換基を有していてもよい１価の芳香族炭化水素基をいう。置換基を有しないアリール基としてはフェニル基が好ましい。
「置換アリール基」（置換基を有するアリール基をいう）としては、アリール基中の水素原子の１個以上が、低級アルキル基、ハロゲン原子、ハロゲン化（低級アルキル）基、または低級アルコキシ基等で置換された基が好ましい。置換アリール基としては置換フェニル基が好ましく、特にモノハロフェニル基（たとえばクロロフェニル基、フルオロフェニル基、ブロモフェニル基等）、（ハロゲン化低級アルキル）置換フェニル基（たとえばトリフルオロメチルフェニル基等）、または（低級アルコキシ）フェニル基（たとえばメトキシフェニル基、エトキシフェニル基等が挙げられる。
【００１７】
「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子をいう。
「ハロゲン化アルキル基」とは、アルキル基中の水素原子の１個以上がハロゲン原子で置換された基をいい、炭素数が１〜６である低級ハロゲン化アルキル基が好ましい。ハロゲン化アルキル基の例としては、フルオロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロエチル基、ペンタフルオロエチル基、クロロメチル基、またはブロモメチル基等が挙げられる。
【００１８】
本発明の式（１）で表される７，７−ジフルオロＰＧＩ２誘導体（以下、本発明のＰＧＩ２誘導体（１）ともいう）としては、生理活性や物性の観点より以下の化合物が好ましい。
すなわち、Ｒ1、Ｒ2は、それぞれ独立に水素原子または炭素数１〜３の直鎖アルキル基であり、それぞれ独立に水素原子またはメチル基が好ましい。特にＲ1、Ｒ2の一方が水素原子で他方がメチル基であることが好ましい。
Ｒ3は、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、アルコキシアルキル基、アリール基、ハロゲン原子、またはハロゲン化アルキル基であり、さらに水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、メトキシメチル基などの低級アルコキシアルキル基、塩素原子、フッ素原子などのハロゲン原子、または低級フルオロアルキル基などの低級ハロゲン化アルキル基が好ましい。特に、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、塩素原子または炭素数１〜４のハロゲン化アルキル基が好ましい。なお、炭素数１〜４のアルキル基としては、メチル基とエチル基が好ましく、炭素数１〜４のハロゲン化アルキル基としてはトリフルオロメチル基が好ましい。
なお、Ｒ3としては、水素原子、メチル基、トリフルオロメチル基が最も好ましい。
加えて、Ｒ3はプロスタグランジン骨格の主鎖がベンゼン環に置換している位置に対して、オルト（ｏ）、メタ（ｍ）、あるいはパラ（ｐ）のいずれの位置に置換していてもよい。Ｒ3は特にメタ（ｍ）位に置換していることが好ましい。
【００１９】
（本発明の好ましい化合物の態様）
加えて、本発明の化合物における好ましいＲ1，Ｒ2及びＲ3の組み合わせは、以下の通りである。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3は水素原子である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3はメチル基である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3は塩素原子である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3はトリフルオロメチル基である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3は水素原子である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3はメチル基である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3は塩素原子である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3はトリフルオロメチル基である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3は水素原子である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3はメチル基である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3は塩素原子である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3はトリフルオロメチル基である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3は水素原子である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3はメチル基である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3は塩素原子である。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3はトリフルオロメチル基である。
さらに、上記の中でも好ましい組み合わせは、以下の通りである。
Ｒ1はメチル基であり、Ｒ2は水素原子であり、Ｒ3はメチル基である。
Ｒ1は水素原子であり、Ｒ2はメチル基であり、Ｒ3はメチル基である。
【００２０】
（本発明のＰＧＩ２誘導体の製造方法）
本発明のＰＧＩ２誘導体（１）は、たとえば本発明者らの発明に係わる特開平０７−３２４０８１号公報や特開平０８−２１７７７２号公報に記載の方法を基にして製造できる。たとえば、コーリーラクトンを出発原料として、ω鎖をまず導入したのち、フッ素化により、ω鎖付ジフルオロコーリーラクトンに変換する。次いで、末端にテトラゾール基を有する有機金属反応剤の付加反応と脱水反応、あるいは、末端にテトラゾール基を有するホスホニウム塩を用いるウィティッヒ反応、などによりα鎖ユニットを導入し、所望により水酸基の脱保護を行うことにより、合成することができる。
【００２１】
または、コーリーラクトンを出発原料として、フッ素化によりジフルオロコーリーラクトンとしたのち、まず末端にテトラゾール基を有する有機金属反応剤の付加反応と脱水反応、あるいは、末端にテトラゾール基を有するホスホニウム塩を用いるウィティッヒ反応などによりα鎖ユニットを導入し、次にω鎖を導入して所望により水酸基の脱保護を行うことにより合成することができる。
または、特開平０７−３２４０８１号公報に記載のカルボン酸誘導体からカルボキシ基をシアノ基に変換したのちテトラゾール誘導体に変換することによっても合成することができる。
【００２２】
これらの製造法の中で代表的な方法を以下の化学式を用いて具体的に説明する。
【００２３】
【化２】
0005468007.tif 000003
【００２４】
たとえば、コーリーラクトン（７）を出発原料としてω鎖をまず導入したのち、得られたω鎖付コーリーラクトン類（６）にフッ素化反応を行ってカルボニル基のα位にフッ素原子２個を有するω鎖付ジフルオロコーリーラクトン類（３）を製造し、次いで、このジフルオロラクトン類（３）にホスホラン類（４）を反応させてα鎖ユニットを導入することにより、水酸基が保護されたＰＧＩ２誘導体（２）が得られる。そして、水酸基の保護基を脱保護して本発明のＰＧＩ２誘導体（１）が得られる。
なお、ホスホラン類（４）はホスホニウム塩類（５）より得られる。
【００２５】
Ｒ1〜Ｒ3が特定の置換基である場合を除き、上記ラクトン類（６）は公知の化合物である。Ｒ1〜Ｒ3が特定の置換基である新規な上記ラクトン類（６）は、公知のラクトン類（６）と同様の方法で製造できる。たとえば、３−アリール−２−オキソアルキルホスホン酸ジエステルを、ホルミル基を有するコーリーラクトンと反応させて新規なラクトン類（６）を製造できる。ここでアルキルホスホン酸のアルキル鎖は炭素数３以上である。
Ｒ4、Ｒ5及びＲ7はそれぞれ独立に水酸基の保護基である。Ｒ4、Ｒ5、及びＲ7は同一の保護基であってもよい。保護基としては、たとえば「新実験化学講座１４、有機化合物の合成と反応（Ｖ）」（丸善）、「プロテクティブ／グループス／イン／オーガニック／シンセシス」（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ著、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）などに記載の水酸基の保護基を用いることができる。具体的には、トリオルガノシリル基、アルコキシアルキル基、環状エーテル構造を有する１価基等が挙げられる。トリオルガノシリル基としては、アルキル基、アリール基、アルアルキル基、またはアルコキシ基がケイ素原子に３個結合した基が好ましく、特に低級アルキル基またはアリール基がケイ素原子に３個結合した基が好ましい。保護基の具体例としては、テトラヒドロピラニル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、トリエチルシリル基、トリフェニルシリル基、またはトリイソプロピルシリル基等が好ましい。特にテトラヒドロピラニル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基などが好ましい。
【００２６】
水酸基の保護基は、容易に脱保護できる。保護された水酸基の脱保護の方法は、常法が採用できる。たとえば、「新実験化学講座１４有機化合物の合成と反応（Ｉ）、（ＩＩ）、（Ｖ）」（丸善）、「プロテクティブ／グループス／イン／オーガニック／シンセシス」（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ著、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ）等に記載の方法が採用できる。
【００２７】
ラクトン類（６）にフッ素化反応を行ってジフルオロラクトン類（３）とするには、種々の公知のフッ素化法が適用できる。たとえば、種々の求電子的フッ素化剤を用い不活性溶媒中で反応させる方法が採用される。本発明者らの発明に係わる特開平０７−３２４０８１号公報や特開平０９−１１０７２９号公報に記載の方法によってもフッ素化できる。
ラクトン類（６）のフッ素化反応では、求電子的フッ素化剤を使用するのが好ましい。求電子的フッ素化剤としては、公知または周知の求電子的フッ素化剤を使用できる。たとえば、北爪智也、石原孝、田口武夫著「フッ素の化学」（講談社サイエンティフィック）等に記載される求電子的フッ素化剤が挙げられる。具体的には、Ｎ−フルオロスルホンアミド類、Ｎ−スルホンイミド類、アセチルハイポフルオライト、フッ素ガスなどが挙げられる。
【００２８】
求電子的フッ素化剤は、不活性溶媒の存在下で用いるのが好ましい。不活性溶媒としては、エーテル系溶媒、炭化水素系溶媒、極性溶媒またはこれらの混合溶媒等が挙げられる。
フッ素化反応で得られたジフルオロラクトン類（３）は、次にホスホラン類（４）と反応させて水酸基が保護されたＰＧＩ２誘導体（２）とする。ホスホラン類（４）は、対応するホスホニウム塩類（５）より、不活性溶媒中、塩基の存在下に製造され、生成したホスホラン類（４）は、単離せずにそのままジフルオロラクトン類（３）とのウィッティヒ反応に用いるのが好ましい。ホスホラン類（４）及びホスホニウム塩類（５）の製造方法は、ＤＥ２２４２２３９号明細書、ＤＥ２４０５２５５号明細書等に記載の方法等を採用できる。ホスホラン類（４）やホスホニウム塩類（５）におけるＲ6としては、フェニル基、トリル基などのアリール基が好ましく、フェニル基が特に好ましい。不活性溶媒としては、エーテル系溶媒、炭化水素系溶媒、極性溶媒、水系溶媒、アルコール系溶媒、またはこれらの混合溶媒等が挙げられる。
【００２９】
以上の方法で得た水酸基が保護されたＰＧＩ２誘導体（２）の水酸基の保護基を脱保護することにより、ＰＧＩ２誘導体（１）を得る。
なお、本発明のＰＧＩ２誘導体（１）はその構造中に不斉炭素を有するため、各種の立体異性体、光学異性体が存在するが、本発明においては、これらすべての立体異性体、光学異性体、及びそれらの混合物を包含する。
本発明のＰＧＩ２誘導体（１）の具体例としては、下記式（８）で表される化合物が挙げられる。
【００３０】
【化３】
0005468007.tif 000004
【００３１】
（本発明のＰＧＩ２誘導体の例）
また、式（８）においてＲ1、Ｒ2、及びＲ3が下記表１に示す構造である化合物が挙げられる。
【００３２】
【表１】
0005468007.tif 000005
【００３３】
（本発明のＰＧＩ２誘導体の特性）
本発明のＰＧＩ２誘導体（１）は、生体内において代謝を受けにくく安定性を向上した誘導体である。ＰＧ骨格のカルボキシ基がテトラゾール基に変換されているため、ＰＧなどの脂肪酸の一般的な代謝経路として知られているβ酸化による代謝を受けにくい。このため、ＰＧ骨格にカルボキシ基を有する化合物に比べて、血中半減期が長く、有効血中濃度を長く維持することができる。また、このように代謝的な安定性が向上していることにより、薬物のバイオアベイラビリティーを改善することができる。
【００３４】
（本発明のＰＧＩ２誘導体またはその薬学的に許容できる塩を有効成分とする医薬）
本発明の医薬は、ＰＧＩ２誘導体（１）及び／又は薬学的に許容されるＰＧＩ２誘導体（１）の塩を含み、さらに薬剤として許容される担体、及び場合によっては他の治療成分も含めてもよい。
加えて、本発明の医薬は、ＰＧＩ２誘導体（１）及び／又は薬学的に許容されるＰＧＩ２誘導体（１）の塩、またはそれらの水和物を含み、さらに薬剤として許容される担体、及び場合によっては他の治療成分も含めてもよい。
【００３５】
本発明の予防・治療剤を患者に投与する場合、１日の投与量は患者の年齢、体重、病態及び重症度などにより異なるが、通常は０．０００１〜１０ｍｇを、好ましくは０．０１〜１ｍｇを１乃至数回に分けて投与することが望ましい。例えば、経口投与では、０．００１〜３ｍｇが好ましく、特に０．０１〜０．５ｍｇが好ましい。静脈内投与では、０．０００１〜１ｍｇが好ましく、特に０．００１〜０．１ｍｇが好ましい。疾患や病態によって適宜増減することができ、また注射剤の場合は点滴持続投与を行うことが望ましい場合もある。
【００３６】
医薬として使用する場合、経口的投与、非経口的投与（例えば血管（静脈、動脈）内投与、皮下投与、直腸内投与等）によって生体内に投与することができる。投与形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、シロップ剤等の経口投与形態、溶液、乳剤、懸濁剤等の液状の注射剤、点滴剤、坐薬、点鼻剤、貼付剤、吸入剤等の非経口投与形態が例示される。特に経口的に投与されることが望ましい。
【００３７】
前記投与形態の製剤は、本発明のＰＧＩ２誘導体（１）またはその薬学的に許容できる塩に、通常の担体、賦形剤、結合剤、安定化剤等の製剤上必要な添加剤を配合し、常法によって製剤化することにより製造できる。例えば製剤が粉末、顆粒、錠剤等の場合、固形製剤を製造するのに好適な任意の製薬担体、例えば賦形剤、滑沢剤、崩壊剤、結合剤等を用いて製造することができる。
これらの賦形剤は例えば、不活性希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、またはリン酸ナトリウム；グラニュール化剤及び崩壊剤、例えばコーンスターチ、またはアルギン酸；結合剤、例えばデンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム、及び潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであってもよい。これらの錠剤は、コーティングされていなくてもよく、またはこれらは、胃腸管における崩壊及び吸収を遅らせ、これによってより長時間にわたって持続作用を与えるために、公知技術によってコーティングされてもよい。例えば、時間遅延材料、例えばグリセリルモノステアレート、またはグリセリルジステアレートが用いられてもよい。
【００３８】
また、本発明のＰＧＩ２誘導体（１）が、不活性固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、またはカオリンと混合されているハードゼラチンカプセルであってもよい。あるいは、水混和性溶媒、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール及びエタノール、または油媒質、例えばピーナッツオイル、液体パラフィン、またはオリーブ油と混合されているソフトゼラチンカプセルとして提供されてもよい。
【００３９】
また、製剤がシロップや液剤の場合、例えば安定化剤、懸濁化剤、矯味剤、芳香剤等を適宜に選択して製造することができる。注射剤を製造するには、有効成分を塩酸、水酸化ナトリウム、乳糖、乳酸ナトリウム、酢酸、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムなどのpH調整剤、塩化ナトリウム、ブドウ糖などの等張化剤とともに注射用蒸留水に溶解し、無菌的に調製する。プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油、エタノール、ポリソルベート８０などの不活性な非水性の希釈剤を用いて調製してもよい。さらにマンニトール、デキストリン、シクロデキストリン、ゼラチンなどを加えて、真空凍結乾燥し、用時溶解用注射剤としてもよい。また、安定化及び病巣到達性を改善するため公知の方法により、リポソーム製剤、脂肪乳剤を調製して注射剤として用いることもできる。
【００４０】
また、カカオ脂、脂肪酸のトリ、ジ、モノグリセリド、ポリエチレングリコールなどの坐剤用基剤を用いて直腸内投与製剤を調製してもよい。さらにポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリセリン、グリセロゼラチン等の水溶性基剤、白色ワセリン、ハードファット、パラフィン、流動パラフィン、プラスチベース、ラノリン、精製ラノリン等の油性基剤等を用いて適当な粘度に調製し直腸内注入軟膏を調製することもできる。
【００４１】
本発明のＰＧＩ２誘導体（１）またはその薬学的に許容できる塩は局所的に皮膚または粘膜に、すなわち経皮または経粘膜投与することができる。この目的のための通常の剤型として、ゲル、ハイドロゲル、ローション、溶液、クリーム、軟膏、散布剤、ドレシング剤、泡製剤、フィルム剤、スキンパッチ、オブラート、インプラント、スポンジ、繊維、バンデージ、及びマイクロエマルジョンなどが挙げられる。通常の担体としては、アルコール、水、鉱物油、流動パラフィン、白色ワセリン、グリセリン、ポリエチレングリコール及びプロピレングリコールなどが挙げられる。
【００４２】
前述の投与形態のいずれかにおいて使用するため、その溶解度、溶解速度、バイオアベイラビリティー及び安定性を改善するために、本発明のＰＧＩ２誘導体（１）は、シクロデキストリン及びその適切な誘導体またはポリエチレングリコール含有ポリマーなどの可溶性高分子単位と混合することができる。たとえば、薬物−シクロデキストリン複合体などは、一般的に大半の剤型及び投与経路に有用であることが確認されている。包接及び非包接複合体のいずれも使用することができる。薬物との直接の複合体化の別法として、シクロデキストリンを補助的添加剤、すなわち担体、賦形剤または可溶化剤として用いることもできる。これらの目的のために、α−、β−及びγ−シクロデキストリンなどが一般的に使用される。
【００４３】
（本発明のＰＧＩ２誘導体の薬学的に許容できる塩）
本発明のＰＧＩ２誘導体（１）の薬学的に許容できる塩は、該誘導体のテトラゾール基部分と塩基性物質の塩であり、テトラゾール基の水素原子が陽イオンに置換された化合物である。
この陽イオンとしては、たとえばＮａ＋、Ｋ＋、などのアルカリ金属カチオン、１／２Ｃａ２＋、１／２Ｍｇ２＋、１／２Ｚｎ２＋、１／３Ａｌ３＋などのアルカリ金属以外の金属カチオン、ＮＨ４＋、及びトリエタノールアミン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、トロメタミン、リジン、アルギニンなどの有機アミンやアミノ酸のアンモニウムカチオンなどがある。好ましい陽イオンはナトリウムイオンとカリウムイオンである。
【００４４】
より詳しくは、許容できる塩とは、無機塩基及び有機塩基を含む薬剤として許容される無毒の塩基から調製した塩をさす。薬学的に許容される無毒無機塩基由来の塩としては、前記ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、亜鉛塩、アルミニウム塩、アンモニウム塩などの他、リチウム塩、銅塩、第二鉄塩、第一鉄塩、第二マンガン塩、第一マンガン塩などの塩も挙げられる。これらのうち、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩及びアンモニウム塩が好ましく、ナトリウム塩及びカリウム塩が特に好ましい。薬学的に許容される無毒有機塩基由来の塩には、第１級、第２級、及び第３級アミン、自然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、及び塩基性イオン交換樹脂の塩が含まれる。前記した有機アミンやアミノ酸の具体例以外としては、例えば、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、エチレンジアミン、Ｎ，Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、モルホリン、Ｎ−エチル−モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ベタイン、カフェイン、コリン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラブアミン、メチルグルカミン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミンなどが挙げられる。
【００４５】
（本発明のＰＧＩ２誘導体またはその薬学的に許容できる塩を有効成分とする医薬用途）
本発明のＰＧＩ２誘導体（１）またはその薬学的に許容できる塩を有効成分とする医薬は、消化管疾患の薬剤として優れた効果を示す。
本発明の消化管疾患とは、物理的刺激、胃液などの化学的刺激、非ステロイド性抗炎症剤やステロイドなどの薬物性刺激、原因が不明な免疫疾患や自己免疫疾患、精神疾患などが原因で消化管の上皮、粘膜、下部組織が炎症や潰瘍、粘膜上皮の異常増殖、機能障害を有する疾患であり、消化管の炎症性疾患及び潰瘍性疾患を含む。
該炎症性疾患は、炎症性腸疾患、特に潰瘍性大腸炎、線維化あるいは潰瘍を伴う非特異性の肉芽腫性炎症性疾患であるクローン病、腸管ベーチェット病または単純性潰瘍を含む。また、本発明の該潰瘍性疾患は、口腔炎、口腔アフタ、食道炎、食道潰瘍、胃炎、胃潰瘍、小腸潰瘍を含む。
さらに、胃炎、胃潰瘍は、薬剤性の胃炎、胃潰瘍、アルコールに起因する胃炎、胃潰瘍を含み、該薬剤性の胃炎、胃潰瘍は非ステロイド性抗炎症剤に起因する胃炎・胃潰瘍を含む。
また、小腸潰瘍は、薬剤性の小腸潰瘍、アルコールに起因する小腸潰瘍を含み、該薬剤性の小腸潰瘍は非ステロイド性抗炎症剤に起因する小腸潰瘍を含む。
特に、本発明の医薬は、潰瘍性大腸炎、クローン病、胃炎・胃潰瘍、小腸潰瘍の予防または治療のための医薬として有用である。
【００４６】
以下に具体例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの例に限定されない。
【実施例１】
【００４７】
(2R)-2-(m-トリル)プロピオン酸メチルエステルの合成
(2R)-2-(m-トリル)プロピオン酸１２．４５ｇにメタノール１４．８３ｇ、濃硫酸６．４６ｇを加え，還流下で６時間撹拌した。続いて、１０％炭酸ナトリウム水溶液で中和し、ヘキサンで抽出した。さらに、硫酸マグネシウムで乾燥後，減圧濃縮して標題化合物１２．７９ｇを得た。なお、構造特性は以下の通りである。【００４８】
1H-NMR(CDCl3)：δ 1.49(d,J=7.0Hz,3H),2.33(s,3H),3.64(s,3H),3.69(dd,J=14.4,7.3Hz,1H),7.06-7.22(m,4H)．
【実施例２】
【００４９】
(3R)-2-オキソ-3-(m-トリル)ブチルホスホン酸ジメチルの合成
メチルホスホン酸ジメチルエステル１．９７ｇにテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）２５ｍＬを加え、−７８℃に冷却後にｎ−ブチルリチウム（１．５Ｍヘキサン溶液）１０ｍＬを加え、１時間攪拌した。次に、実施例１で合成したメチルエステル｛(2R)-2-(m-トリル)プロピオン酸メチルエステル｝１．３４ｇのＴＨＦ（３．８ｍＬ）溶液を−７８℃で加え、２時間攪拌した。２５ｍＬ飽和重曹水で反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。さらに、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル  ５：１〜１：５）で精製して、標題化合物１．６３ｇを合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００５０】
1H-NMR(CDCl3)：δ 1.39(d,J=6.7Hz,3H),2.34(s,3H),2.84(ddd,J=22.3,14.1,0.6Hz,1H),3.18(dd,J=22.3,14.1Hz,1H),3.76(dd,J=19.3,11.1Hz,6H),4.0(dd,J=13.8,7.0Hz,1H),7.01-7.24(m, 4H)．
【実施例３】
【００５１】
(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,4R)-3-オキソ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ベンゾイルオキシ-2-オキサ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オンの合成
水素化ナトリウム（５５％）８．７５ｇを1,2-ジメトキシエタン（ＤＭＥ）３００ｍＬに分散させ氷冷し、そこに実施例２で合成したホスホナート｛(3R)-2-オキソ-3-(m-トリル)ブチルホスホン酸ジメチル｝５４．７ｇのＤＭＥ（５０ｍＬ）溶液を加え、１時間攪拌した。上記の溶液に(1S,5R,6R,7R)-6-ホルミル-7-ベンゾイルオキシ-2-オキサ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オン５０．０ｇのＤＭＥ（４００ｍＬ）溶液を加え、１時間攪拌した後、３５０ｍＬの１０％食塩水で反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。さらに、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。濃縮した粗生成物をｔ−ブチルメチルエーテルから再結晶して、標題化合物６４．７ｇを合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００５２】
1H-NMR(CDCl3)：δ 1.39(d,J=7.0Hz,3H),2.20-2.28(m,1H),2.30(s,3H),2.34-2.41(m,1H),2.49-2.57(m,1H),2.76-2.85(m,3H),3.80(q,J=7.0Hz,1H), 5.03(t,J=5.3Hz,1H),5.23(q,J=5.3Hz,1H),6.19(d,J=15.5Hz,1H),6.69(dd,J=15.6,7.6Hz,1H),6.94-7.19(m,4H),7.42-7.95(m, 5H)．
【実施例４】
【００５３】
(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4R)-3-ヒドロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ベンゾイルオキシ-2-オキサ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オンの合成
実施例３で合成したエノン｛(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,4R)-3-オキソ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ベンゾイルオキシ-2-オキサ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オン｝１４７．０ｇのＴＨＦ（１４８０ｍＬ）溶液を−４０℃まで冷却し、（−）−Ｂ−クロロジイソピノカンフェイルボラン（１．７Mヘキサン溶液）７２１ｍＬを加えた後、氷冷下で２０時間攪拌した。アセトン１８３ｍＬを加え３時間攪拌した後に、重曹水を加え、ｔ−ブチルメチルエーテルで抽出した。そして、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、粗製の標題化合物６４９．９ｇを得た。
【実施例５】
【００５４】
(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4R)-3-ヒドロキシ-4-（m-トリル）-1-ペンテニル］-7-ヒドロキシ-2-オキサ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オンの合成
実施例４で合成した粗製アルコール｛(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4R)-3-ヒドロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ベンゾイルオキシ-2-オキサ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オン｝６４９．９ｇをメタノール７４０ｍＬに溶解し、炭酸カリウム１１６．３ｇを加え、室温で１７時間撹拌した。酢酸でpHを７にした後にメタノールを留去し、水を加え、酢酸エチルで抽出した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝４／１〜０／１）で精製し、標題化合物２２．３ｇを得た。なお、構造特性は以下の通りである。【００５５】
1H-NMR(CDCl3)：δ 1.33(d,J=7.0Hz,3H),1.70(s,1H(OH)),1.86(ddd,J=11.3,7.8,3.2Hz,1H),2.07(d,J=4.4Hz,1H(OH)),2.13-2.23(m,2H),2.34(s,3H),2.35-2.44(m,3H),2.47(d,J=3.8Hz,1H),2.56(dd,J=18.2,9.7Hz,1H),2.80(q,J=7.0Hz,1H),3.79-3.85(m,1H),4.12-4.16(m,1H),4.81(dt,J=7.0,3.2Hz,1H),5.27(ddd,J=15.7,8.5,0.6Hz,1H),5.50(dd,J=15.2,6.8Hz,1H),6.94-7.20(m,4H)．
【実施例６】
【００５６】
(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4R)-3-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-2-オキサ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オンの合成
実施例５で合成したジオール｛(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4R)-3-ヒドロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ヒドロキシ-2-オキサ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オン｝９８８ｍｇのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（１０ｍＬ）溶液に室温でｔ−ブチルジメチルシリルクロリド１．１７ｇ、イミダゾール１．０８ｇを加え、２時間半撹拌した。反応液を飽和重曹水に注ぎ、ヘキサン／酢酸エチル＝２／１混合物で抽出した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル  ２０：１〜１０：１）で精製して、標題化合物１．５６ｇを合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００５７】
1H-NMR(CDCl3)：δ-0.09(d,J=6.4Hz,6H),0.02(d,J=2.4Hz,6H),0.86(s,9H),0.89(s,9H),1.27(d,J=7.0Hz,3H),1.86-1.92(m,1H),1.96-2.02(m,1H),2.32(s,3H),2.31-2.47(m,3H),2.62-2.73(m,2H),3.82(q,J=4.7Hz,1H),4.05(t,J=6.4Hz,1H),4.86(dt,J=8.0,2.4Hz,1H),5.16(dd,J=15.5,7.4Hz,1H),5.30(dd,J=15.7,6.3Hz,1H),6.90-7.16(m,4H)．
【実施例７】
【００５８】
(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4R)-3-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-2-オキサ-4,4-ジフルオロ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オンの合成
臭化マンガン１．４８ｇ、N−フルオロベンゼンスルホンイミド２．４８ｇをテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１９ｍＬを加え３０分攪拌したのち、−７８℃に冷却した。実施例６で合成したラクトン｛(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4R)-3-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-2-オキサ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オン｝０．５ｇのＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を加え、その後カリウムビス（トリメチルシリル）アミドのトルエン溶液（０．５Ｍ、１３ｍＬ）を加えて３時間半かけて０℃まで昇温させた。反応液を飽和重曹水に注ぎ、ヘキサン／酢酸エチル＝１／１混合物で抽出した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル  ２０：１）で精製して、標題化合物０．３２ｇを合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００５９】
1H-NMR(CDCl3)：δ-0.08-0.03(m,12H),0.82(s,9H),0.89(s,9H),1.28(d,J=7.0Hz,3H),1.70-1.77(m,1H),1.96-2.04(m,1H),2.31(s,3H),2.60-2.91(m,3H),3.82-3.87(m,1H),3.99-4.23(m,1H),5.00(t,J=6.4Hz,1H),5.06(dd,J=15.7,7.8Hz,1H),5.33(ddd,J=15.9,6.7,1.2Hz,1H),6.88-7.16(m,4H)．
19F-NMR(CDCl3)：-113.1(d,J=279.3Hz),-91.0(dd,J=279.3,25.9Hz)。
【実施例８】
【００６０】
4-［(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4R)-3-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-2-オキサ-4,4-ジフルオロ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-イリデン］-1-（テトラゾール-5-イル）ブタンの合成
4-(テトラゾール-5-イル)ブチルトリフェニルホスホニウム  ブロミド１４．０ｇのトルエン（３９０ｍＬ）懸濁液に、カリウムビス（トリメチルシリル）アミドのトルエン溶液（０．５Ｍ、１２０ｍＬ）を加え、６０℃で１時間撹拌した。実施例７で合成したジフルオロラクトン｛(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4R)-3-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-2-オキサ-4,4-ジフルオロ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オン｝４．３２ｇのトルエン（１３０ｍＬ）溶液を−１０℃で加え、室温まで昇温させながら１８時間撹拌した。重曹水を加えて反応を停止し、ヘキサン／酢酸エチル＝１／１混合物で抽出した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝５／１〜０／１）で精製し、標題化合物４．１ｇを得た。なお、構造特性は以下の通りである。【００６１】
1H-NMR(CDCl3)：δ-0.14-0.01(m,12H),0.82(s,9H),0.89(s,9H),1.23-1.27(m,3H),1.82-2.09(m,5H),2.21-2.28(m,1H),2.31(s,3H),2.45-2.53(m,1H),2.64-2.73(m,2H),2.93-2.97(m,2H),3.90(dd,J=11.7,5.3Hz,1H),4.08-4.09(m,1H),4.84-4.87(m,2H),5.27(dd,J=15.5,7.8Hz,1H),5.44(dd,J=15.6,6.2Hz,1H),6.92-7.16(m,4H).
19F-NMR(CDCl3): -112.3(d,J=253.4Hz),-81.4(dd,J=253.4,18.7Hz)。
【実施例９】
【００６２】
4-［(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4R)-3-ヒドロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ヒドロキシ-2-オキサ-4,4-ジフルオロ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-イリデン］-1-（テトラゾール-5-イル）ブタンの合成
実施例８で合成した化合物４．１ｇにＴＨＦ８１ｍＬ、水８１ｍＬ、酢酸２４４ｍＬを加え、３５℃で４６時間攪拌した。水５００ｍＬを加えクロロホルムで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１／５〜０／１）で精製し、ジエチルエーテルで再結晶を行い、標題化合物１．１ｇを得た。なお、構造特性は以下の通りである。【００６３】
1H-NMR(CD3OD)：δ 1.30(d,J=7.0Hz,3H),1.69(dddd,J=14.6,7.6,3.0,2.6Hz,1H),1.82-1.95(m,2H),2.10-2.16(m,2H),2.29(s,3H),2.31-2.41(m,2H),2.48-2.56(m,1H),2.72(q,J=7.0Hz,1H),2.93(t,J=7.6Hz,2H),3.78(q,J=7.6Hz,1H),4.04-4.10(m,1H),4.69(dt,J=6.48,2.96Hz,1H),4.79(dt,J=7.6,5.0Hz,1H),5.36-5.46(m,2H),6.95-7.13(m,4H)．
19F-NMR(CD3OD)：-116.6(d,J=250.5Hz),-84.8(ddd,J=251.9,17.3,14.4Hz)。
【実施例１０】
【００６４】
2-オキソ-3-(m-トリル)ブチルホスホン酸ジメチルの合成
ラセミ体の2-(m-トリル)プロピオン酸を用いて実施例１〜２の方法と同様にして表題の化合物を合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００６５】
1H-NMR(CDCl3)：δ 1.39(d,J=7.2Hz,3H),2.34(s,3H),2.83(dd,J=22.4,14.4Hz,1H),3.18(dd,J=22.4,14.0Hz,1H),3.76(dd,J=19.6,11.2Hz,6H),3.99(dd,J=14.0,6.8Hz,1H),7.01-7.27(m,4H)．
【実施例１１】
【００６６】
(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4RS)-3-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-2-オキサ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オンの合成
ラセミ体の2-オキソ-3-(m-トリル)ブチルホスホン酸ジメチルを用い実施例３〜６の方法と同様にして表題の化合物を合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００６７】
1H-NMR(CDCl3)：δ -0.20-0.10(m,12H),0.80-0.90(m,18H),1.18-1.28(m,3H),1.85-2.20(m,2H),2.31(s,3H),2.30-2.80(m,5H),3.80-4.15(m,2H),4.81-4.95(m,1H),5.12-5.42(m,2H),6.88-7.20(m,4H)．
【実施例１２】
【００６８】
(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4RS)-3-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-2-オキサ-4,4-ジフルオロ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オンの合成
実施例１１で合成した(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4RS)-3-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-2-オキサ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オンを用いて実施例７の方法と同様にして表題の化合物を合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００６９】
1H-NMR(CDCl3)：δ -0.20-0.05(m,12H),0.80-0.90(m,18H),1.19-1.29(m,3H),1.70-2.10(m,2H),2.31(s,3H),2.60-3.05(m,3H),3.84-4.12(m,2H),4.95-5.50(m,3H),6.85-7.20(m,4H).
19F-NMR(CDCl3)：-113.6--112.8(m),-91.7--90.6(m)。
【実施例１３】
【００７０】
4-［(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4RS))-3-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-2-オキサ-4,4-ジフルオロ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-イリデン］-1-（テトラゾール-5-イル）ブタンの合成
実施例１２で合成した(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4RS)-3-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-2-オキサ-4,4-ジフルオロ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オンを用いて実施例８の方法と同様にして表題の化合物を合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００７１】
1H-NMR(CDCl3)：δ -0.15-0.05(m,12H),0.80-0.89(m,18H),1.20-1.28(m,3H),1.80-3.05(m,14H),3.90-4.15(m,2H),4.85-4.95(m,2H),5.23-5.58(m,2H),6.90-7.20(m,4H)．
19F-NMR(CDCl3)：-113.0--111.3(m),-82.0--80.7(m)。
【実施例１４】
【００７２】
4-［(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4RS)-3-ヒドロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ヒドロキシ-2-オキサ-4,4-ジフルオロ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-イリデン］-1-（テトラゾール-5-イル）ブタンの合成
実施例１３で合成した4-［(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4RS)］-3-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-2-オキサ-4,4-ジフルオロ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-イリデン］-1-（テトラゾール-5-イル）ブタンを用いて実施例９の方法と同様にして表題の化合物を合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００７３】
1H-NMR(CDCl3)：δ 1.15-1.35(m,3H),1.80-3.00(m,11H),2.29(s,3H),4.05-4.20(m,2H),4.75-4.85(m,2H),5.35-5.70(m,2H),6.95-7.25(m,4H).
19F-NMR(CDCl3):-114.5--112.7(m),-83.5--81.8(m)。
【実施例１５】
【００７４】
5-［(Z)-(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4RS)-3-ヒドロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ヒドロキシ-2-オキサ-4,4-ジフルオロ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-イリデン］ペンタン酸（カルボン酸体）の合成
実施例１２で合成した(1S,5R,6R,7R)-6-［(1E,3R,4RS)-3-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-4-(m-トリル)-1-ペンテニル］-7-ｔ-ブチルジメチルシロキシ-2-オキサ-4,4-ジフルオロ-ビシクロ［3.3.0］オクタン-3-オンと（４−カルボキシブチル）トリフェニルホスホニウムブロミドから、実施例８〜９と同様にして表題の化合物を合成した。なお、構造特性は以下の通りである。【００７５】
1H-NMR(CD3OD)：δ 1.17-1.30(m,3H),1.63-2.79(m,11H),2.29(s,3H),3.75-4.12(m,2H),4.66-4.85(m,2H),5.40-5.58(m,2H),6.95-7.15(m,4H).
19F-NMR(CD3OD):-118.3--117.7(d,J=250.4Hz),-86.1-85.3(m)。
【実施例１６】
【００７６】
本発明の化合物のインビトロ代謝的安定性
表１記載の本発明の化合物Ｆと化合物Ｊの混合物（52:41で含有、実施例１４で合成）、化合物Ｆと化合物Ｊの１位のテトラゾール基がカルボン酸に置換された化合物の混合物（カルボン酸体と呼ぶ、54:34で含有、実施例１５で合成）を試験した。
まず、ラット肝臓より下記文献Ａに準じてミトコンドリア画分を調製した。下記文献Ｂ，Ｃに記載のＹＡＭＡＧＵＣＨＩらの方法を参考にＮＡＤＰＨ非依存型β酸化の反応を検討した。反応は、３７℃で３０分間とし、適当な内部標準物質を加えたメタノール溶液で停止させた。各化合物は、高分解能液体クロマトグラフ質量分析装置（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を用いて内部標準法で定量した。化合物Ｆ、Ｊ及びそれぞれのカルボン酸体のラットミトコンドリア画分における代謝反応後の化合物残存率を下記表２に３回実施の平均±標準偏差で示した。【００７７】
【表２】
0005468007.tif 000006
【００７８】
上記表２で明らかなように本発明で代表される化合物Ｆや化合物Ｊは、ミトコンドリア画分でのβ酸化を受けないことが示された。【００７９】
文献
Ａ）社団法人日本生化学会編集、生化学実験講座１２ エネルギー代謝と生体酸化（上）、東京化学同人、Ｐ２１７−２１８、第１版第２刷１９７９年７月１１日発行.
Ｂ）Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ａｎｄ Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  ２３(11)： １１９５−１２０１， １９９５．
Ｃ）Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃａ ２６（６）: ６１３−６２６， １９９６.
【実施例１７】
【００８０】
ラット静脈内投与後の血中薬物動態
本発明の化合物のインビボでの代謝的安定性を確認する為に、ラットに静脈内投与し血中薬物動態を評価した。６週齡の雄性ラット（体重160〜180ｇ）を１週間馴化し、健康と判断された動物を使用した。表１記載の本発明の化合物Ｆと化合物Ｊの混合物（52:41で含有）、化合物Ｆと化合物Ｊのカルボン酸体（54:34で含有）、化合物Ｆ（実施例９で合成）を少量のエタノールで溶解し、さらに生理食塩液を添加し、被験化合物溶液を調製した。その被験化合物溶液を軽いエーテル麻酔を施した非絶食ラットに大腿静脈から１ｍＬ／ｋｇで瞬時静脈内投与した。投与後５、１５、３０、４５、６０、９０及び１２０分に尾静脈より静脈血を採取した。ヘパリンを混合し、遠心分離（３０００ｒｐｍ, ４℃, １５分）で血漿を得た。血漿中化合物濃度は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いた内標準法により測定した。本分析法の定量範囲は０．１〜１００ｎｇ／ｍＬであった。得られた化合物濃度を薬物動態解析ソフトウエアＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（ｖｅｒ.３．３）で個体ごとに非モデル解析し、各群３匹の平均±標準偏差を得た。消失相におけるみかけの半減期（ｔ１／２）を、下記表３に示す。【００８１】
【表３】
0005468007.tif 000007
【００８２】
上記表３から明らかなように、本発明の化合物Ｆや化合物Ｊのｔ１／２は、約１〜２時間であり、カルボン酸体の１０分未満に比べて大きく延長し、優れた代謝安定性を示した。
【実施例１８】
【００８３】
マウスデキストラン硫酸ナトリウム誘発大腸炎モデルに対する予防効果
化合物Ｆの潰瘍性大腸炎に対する予防効果をデキストラン硫酸ナトリウム誘発大腸炎モデルで検討した。本モデルは、大腸に限局した炎症をもたらし、下痢や血便を誘発させ、臨床的な潰瘍性大腸炎と酷似した病態である（参照：文献Ｄ、Ｅ）。【００８４】
ＢＡＬＢ／ｃ系マウス、雌性、６週齢（日本エスエルシー）を購入し、１週間馴化飼育した後、試験に使用した。正常群を除いて、２．２ｗ／ｖ％に調製したデキストラン硫酸ナトリウム（DSSと略す。MP Biochemicals, M.W. 36,000 - 50,000, Lot No. 3439J）溶液を９日間自由飲水させることにより大腸炎を誘発した。化合物Ｆを、０．１、０．３及び１ｍｇ／ｋｇの用量で、ＤＳＳ飲水開始日（０日目）から剖検日（９日目）の前日まで連日１日１回、経口投与した。対照群には、溶媒（１vol％エタノール液）を１０ｍＬ／ｋｇを同様に経口投与した。
マウスの便は、糞の水分量とその形状が相関することが予備的検討で分かった。そこで、下痢の度合いを示すために、便を６段階、すなわち、正常（０点）、球状の糞が５割以上（１点）、バナナ状の糞が５割未満（２点）、バナナ状の糞が５割以上（３点）、泥状便（４点）、水様便（５点）で評点した（軟便スコア）。便潜血スコアは、便潜血スライド５シオノギII（塩野義製薬）を用いて、その程度を５段階、すなわち、陰性（スライドの色が黄色から全く変化しない、０点）、弱陽性（わずかに青緑色、１点）、陽性（青緑色、２点）、中等度陽性（はっきりした青緑色、３点）、強陽性（発色試薬で瞬時に濃青色、４点）で評点した。軟便スコアと潜血スコアの合計値を排便障害スコアとした。各群８〜１０匹の動物を使用し、結果は平均±標準偏差で表現した。【００８５】
その結果、体重はいずれの群も差はなく終始、緩やかに増加した。対照群はＤＳＳ飲水開始４日目以降、明らかな軟便及び潜血便を示した。剖検日（９日目）の大腸の長さは、正常群に比して明らかな短縮を示した。化合物Ｆは、排便障害スコアの上昇に対して用量依存的な抑制効果を示し、０．１ｍｇ／ｋｇで抑制傾向にあり、０．３及び１ｍｇ／ｋｇで有意であった（図１）。また、大腸短縮に対しても同様に用量依存的な抑制効果を認めた（図２）。このように、化合物Ｆは、明確に潰瘍性大腸炎の発症を予防した。【００８６】
文献
Ｄ）Lab. Invest. 69(2): 238-249, 1993
Ｅ）Inflamm Res. 45(4): 181-191, 1996
【実施例１９】
【００８７】
ラットデキストラン硫酸ナトリウム誘発大腸炎に対する予防効果
化合物Ｆの大腸炎に対する予防効果をラットでも検討を行った。ＳＤ系ラット、雄性、７週齢、体重２１０ｇ〜２４０ｇ前後（チャールス  リバー）を購入し、１週間馴化飼育した後、試験に使用した。正常群を除いて、5.5w/v％に調製したDSS（MP Biochemicals, M.W. 36,000 - 50,000, Lot No. 4556J）溶液を８日間自由飲水させることにより大腸炎を誘発した。化合物Ｆは、０．３ ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇの用量で、ＤＳＳ飲水開始前日から剖検日前日（ＤＳＳ飲水７日目）まで連日１日１回、経口投与した。対照群には溶媒（１vol％エタノール溶液）を５ｍＬ／ｋｇで経口投与した。【００８８】
ＤＳＳ飲水開始８日目に１．２５ｗ／ｖ％のエバンスブルー溶液を０．２ｍＬ／１００ｇで尾静脈より投与し、３０分後にエ−テル麻酔下で開腹して放血致死させた。その後、盲腸直下から肛門までの大腸を摘出して、ノギスでその長さを測定した。大腸は、内容物を除去後、肛門から７ｃｍの組織を生理食塩液で３回洗浄した後、真空ポンプを用いて一晩乾燥させた。翌日、乾燥重量を測定した後、ホルムアミドを２ｍＬ添加して、５０℃で一晩かけて色素抽出し、その程度を６２０ｎｍで測定した。エバンスブルー標準液で検量線を作成し、１ｇ中の大腸組織におけるエバンスブルーの量（ｍｇ）として算出し、その程度を大腸組織傷害として評価した。【００８９】
下痢の度合いを示すために、便の形状を６段階、すなわち、正常（０点）、棒状が５割未満（１点）、棒状が５割以上（２点）、棒状と一部泥状 （３点）、泥状（４点）、水様（５点）と評点した（軟便スコア）。潜血スコアは、実施例１８に記載の方法で評価した。軟便スコアと潜血スコアの合計値を排便障害スコアとした。各群７〜１０匹の動物を使用し、結果は平均±標準偏差で表現した。【００９０】
その結果、対照群の体重は、終始、緩やかに増加したが、正常群に比して有意に低値を推移した。排便障害スコアは、ＤＳＳ飲水開始１日目から有意に増加した。また、剖検日（８日目）では、大腸は明らかな組織傷害を認め、有意な短縮も認められた。これに対して、化合物Ｆは、１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇ投与でこれらいずれに対しても有意抑制傾向または有意な抑制効果を示した（図３、４、５）。すなわち、化合物Ｆは、大腸の潰瘍発生を予防し、臓器機能を正常化することで、下痢や血便の症状を抑制することがわかった。
【実施例２０】
【００９１】
マウスデキストラン硫酸ナトリウム誘発大腸炎の寛解／再燃モデルにおける治療効果
次に慢性モデルで、化合物Ｆの大腸炎に対する治療効果を検討した。ＢＡＬＢ／ｃ系マウス、雌性、６週齢、体重２０ｇ前後（日本エスエルシー）を購入し、１週間馴化飼育した後、試験に使用した。マウスを大腸炎誘発群と正常群に群分けした後、大腸炎誘発群に２．６ｗ／ｖ％のDSS（MP Biochemicals, M.W. 36,000 - 50,000, Lot No. 4556J）溶液を自由飲水させて大腸炎を誘発した。実施例１８で定義した大腸炎誘発群の排便障害スコアが約４．５に達した８日目に、マウスは対照群、化合物Ｆの１ｍｇ／ｋｇ投与群、サラゾスルファピリジン（ＳＩＧＭＡ、Ｌｏｔ Ｎｏ．０８５Ｋ１９３０、以下ＳＡＳＰと略す）１００ｍｇ／ｋｇ投与群に分け、ＤＳＳ溶液を蒸留水に交換してその後９日間飲水させた（これを寛解期とした）。群分け後は、３〜４日毎に一度排便スコアを評価し、対照群のスコアが約１になった時点で再びＤＳＳ溶液を飲水させ病態を再発させた（これを再燃期とした）。この寛解と再燃を１サイクルとし、これを５サイクル繰り返した。ただし、５サイクル目は寛解期のみ実施した。【００９２】
化合物Ｆの１ｍｇ／ｋｇ及びＳＡＳＰの１００ｍｇ／ｋｇは初回寛解期（２．６ｗ／ｖ％ＤＳＳの飲水開始８日目）から５回目の寛解期（２．６ｗ／ｖ％ＤＳＳの飲水開始５７日目）までの５０日間、連日１日１回、経口投与した。対照群には溶媒（１vol％エタノール液）を１０ｍＬ／ｋｇで経口投与した。寛解率は各寛解期最終日の軟便スコア及び潜血スコアがともに０に至った個体を寛解とし、各群における寛解個体数の割合を寛解率（％）として算出した。各群８〜１０匹を使用し、結果は平均値で表現した。【００９３】
その結果、対照群の排便障害スコアは、再燃期に上昇、寛解期に低下したが、正常群に比して終始ほぼ有意に高かった（図６）。寛解率は、寛解期５回の平均が３５．５％であった（表４）。化合物Ｆは、寛解期の排便スコアを早期に低下させ、また再燃期ではスコア上昇を抑制した。また、寛解率はいずれの寛解期でも６０％以上を示し、平均６６．０％と対照群に比して明らかに高かった。一方、ＳＡＳＰは、寛解期及び再燃期のいずれにおいても排便スコアに対する明らかな効果を示さなかった。また、寛解率は、１、３及び４サイクル目で対照群より僅かに高値を示したが、２及び５サイクル目では逆に低く、平均値は対照群と同等であった。
以上のように、化合物Ｆは、予防効果のみならず、治療効果があり、寛解維持効果を示した。さらに、その効果は、臨床的に使用されているＳＡＳＰに比べてはるかに優れていると考えられる。【００９４】
【表４】
0005468007.tif 000008
【実施例２１】
【００９５】
マウスＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞移入腸炎に対する予防効果
炎症性腸疾患のもう一つの病態であるクローン病に対する効果を検討した。Ｔリンパ球移入モデルは、クローン病モデルとしてよく知られ、慢性的な胃炎や腸炎を発症する（参照：文献Ｆ、Ｇ、Ｈ）。また、Tリンパ球の活性化が知られ類似した腸潰瘍を生じる腸管ベーチェット病・単純性潰瘍の病態モデルともみなすことができる（参照：文献Ｉ、Ｊ）。【００９６】
ＢＡＬＢ／ｃＡ  Ｊｃｌ系マウス、雌性、６週齢、体重19〜23ｇ（日本クレア）及びＣ.Ｂ−１７／Ｉｃｒ-ｓｃｉｄ系マウス、雌性、６週齢（日本クレア）を購入し、１週間馴化飼育した後、試験に使用した。
ＢＡＬＢ／ｃＡ  Ｊｃｌ系マウスをエーテル麻酔下で開腹後、腹部大動静脈から放血致死させ、脾臓を摘出した。脾臓から脾細胞を調製し、CD4+T cell  Isolation Kit （No.130-090-860、ミルキーバイオテク株式会社）及びCD25-Biotin antibodies（No.130-092-569、ミルキーバイオテク株式会社）を用いて、ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞を調製した。細胞の分離は、The  autoMACS Separator（ミルキーバイオテク株式会社）を用いて行った。分離したＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞は、生理リン酸緩衝液に懸濁し、Ｃ.Ｂ−１７／Ｉｃｒ-ｓｃｉｄマウスに１匹あたり２．５×１０５細胞を腹腔内投与し、大腸炎を誘発した。【００９７】
化合物Ｆあるいはプレドニゾロンは、それぞれ１ｍｇ／ｋｇで、ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞の移入５時間前に初回投与し、以後２０日間、連日１日１回、経口投与した。対照群には溶媒（１vol％エタノール液）を１０ｍＬ／ｋｇで経口投与した。病態評価項目は、軟便スコア（０〜５点）、便潜血スコア（０〜４点）及び体重減少スコア（０〜５点）を評点し、その総計をDisease Activity Indexスコア（以下、DAIスコアと略す：最高スコア１４）とした。軟便スコアは、便の硬さを正常（０点）、わずかに柔らかい（１点）、やや柔らかい（２点）、柔らかい（３点）、かなり柔らかい（４点）及び下痢（５点）と評点した。便潜血スコアは、実施例１８と同様に評価した。体重減少スコアは、体重の変化を体重の増加 （０点）、３％未満の減少（１点）、３％以上６％未満の減少（２点）、６％以上９％未満の減少（３点）、９％以上１２％未満の減少（４点）、１２％以上の減少（５点）と評点した。各群８〜１０匹を使用し、結果は平均値で表現した。【００９８】
その結果、対照群の軟便スコア及び便潜血スコアはＴ細胞移入１２日後から明らかな増加を認め、また体重減少スコアは１９日目で明らかな増加を示し、２１日後にはいずれもほぼ最大となった。化合物Ｆは、図７に示すように軟便スコア及び図８に示すように便潜血スコアの増加をほぼ半分まで抑制し、図９に示すように体重減少スコアの増加を、ほぼ完全に抑制した。一方、プレドニゾロンは、図８に示すように便潜血スコアの増加に対して化合物Ｆ投与とほぼ同程度の抑制を示したが、図７に示すように軟便スコアに対して２１日目では明確な効果を示さなかった。また、図９に示すように体重減少スコアは、終始、対照群より高値に推移し、プレドニゾロンは、明らかに悪化させた。図１０に示すように、ＤＡＩスコアは、化合物Ｆが、プレドニゾロンに比べ、総合的に優れていることを示した。
このように化合物Ｆは、潰瘍性大腸炎のみならず、クローン病、腸管ベーチェット病・単純性潰瘍の病態を既存の治療薬に比べて優れて抑制する。【００９９】
文献
Ｆ）Immunol Rev., 182:190-200, 2001.
Ｇ）Int. Immunopharmacol., 6(8):1341-1354, 2006.
Ｈ）J. Immunol. 160(3):1212-1218, 1998.
Ｉ）Clin. Exp. Immunol 139(2): 371- 378, 2005.
Ｊ）Histopathology 45(4):377-383, 2004.
【実施例２２】
【０１００】
ラットエタノール誘発胃粘膜傷害モデルに対する効果
化合物Ｆの胃粘膜傷害に対する抑制効果をラットエタノール誘発胃粘膜傷害モデルで検討した。本モデルは、うっ血性粘膜傷害を伴うヒトの急性胃炎の動物モデルとして繁用されている（文献Ｋ）。
ＳＤ系ラット、雄性、７週齢（チャールス・リバー）を、オリエンタルバイオサービスを通じて購入し、１週間馴化飼育した後、試験に使用した。ラットは、体重を指標に群分けし、試験前日から金網を敷いたクリーンケージに移して１９時間絶食（絶食１６時間後から３時間は絶水）させた後、全ての群にエタノール（特級、ナカライテスク、Ｌｏｔ Ｎｏ.Ｖ８Ａ５８６２）１．５ｍＬを経口投与して胃粘膜傷害を誘発した。化合物Ｆは、０．０１、０．１及び１ｍｇ／ｋｇの用量で、胃粘膜傷害誘発３０分前にそれぞれ５ｍＬ／ｋｇの容量で経口投与した。対照群には、溶媒（１ｖｏｌ％エタノール液）を５ｍＬ／ｋｇで同様に経口投与した。各群８匹の動物を使用した。
ラットは、エタノール投与１時間後にエーテル麻酔下で腹部大動静脈より放血致死させ、胃を摘出した。摘出した胃は、直ちに２ｖｏｌ％中性ホルマリン溶液６ｍＬを充填し１５分間固定した。その胃を噴門部から幽門部まで大弯中央部に沿って切開し、塩化ビニル板に伸展させた。実体顕微鏡下にて各潰瘍の長さと幅を測定し、面積を算出して、これらの合計を総潰瘍面積とした。【０１０１】
その結果、対照群の総潰瘍面積の平均は１０３ｍｍ２であった。化合物Ｆは、０.０１ｍｇ／ｋｇから用量依存的に総潰瘍面積を有意に縮小し、１ｍｇ／ｋｇ投与ではほぼ完全に縮小した（図１１）。このように化合物Ｆは胃粘膜傷害を抑制した。【０１０２】
文献
Ｋ）Ｄｉｇ Ｄｉｓ Ｓｃｉ. ３１(２ Ｓｕｐｐｌ),８１Ｓ-８５Ｓ.１９８６
【実施例２３】
【０１０３】
ラットインドメタシン誘発小腸傷害モデルに対する効果
化合物Ｆの小腸傷害に対する抑制効果をラットインドメタシン誘発小腸傷害モデルで検討した。非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）の投与はヒトにおいて小腸に出血性の傷害を惹起することが知られている。本モデルは、ラットに非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）であるインドメタシンを投与することにより誘発される小腸粘膜傷害を特徴とし、ヒトＮＳＡＩＤｓ起因性小腸傷害あるいはクローン病に類似の病態を示す（文献Ｌ、Ｍ）。
ＳＤ系ラット、雄性、７週齢（チャールス・リバー）を購入し、１週間馴化飼育した後、試験に使用した。ラットは、体重を指標に群分けし、全ての群にインドメタシン（ＳＩＧＭＡ、Ｌｏｔ Ｎｏ.１９Ｆ００１８）を１５ｍｇ／５ｍＬ／ｋｇで皮下投与し、小腸傷害を誘発した。化合物Ｆは、０．０１、０．１及び１ｍｇ／ｋｇの用量で、インドメタシン皮下投与の３０分前と６時間後にそれぞれ５ｍＬ／ｋｇの容量で経口投与した。対照群には、溶媒（１ｖｏｌ％エタノール液）を５ｍＬ／ｋｇで同様に経口投与した。各群８匹の動物を使用した。
ラットは、インドメタシン投与２３．５時間後にエーテル麻酔下に２ｍＬの１０ｍｇ／ｍＬエバンスブルー溶液を静脈内投与した。その３０分後にエーテル麻酔下で腹部大動静脈より放血致死させ、小腸を摘出した。摘出した小腸は、２ｖｏｌ％中性ホルマリン溶液を適当量（約３５ｍＬ）充填し、約１５分間固定した。その後、腸管膜付着部位に沿って全小腸を切開し、塩化ビニル板に伸展させて実体顕微鏡下にて各潰瘍の長さと幅を測定し、面積を算出して、これらの合計を総潰瘍面積とした。【０１０４】
その結果、対照群では、小腸の総潰瘍面積は約７３０ｍｍ２であった。これに対して、化合物Ｆ投与群は０．１ｍｇ／ｋｇ投与から用量依存的に有意に潰瘍面積を縮小し、１ｍｇ／ｋｇ投与では完全であった（図１２）。このように化合物Ｆは、小腸傷害を強く抑制した。【０１０５】
文献
Ｌ）Ａｌｉｍｅｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ. ７（１）、２９−３９、１９９３
Ｍ）Ａｃｔａ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｂｅｌｇ.５７（５-６）、３０６−３０９、１９９４【０１０６】
以上により、化合物Ｆは、アルコール等による消化管粘膜への直接傷害やＮＳＡＩＤｓ等による粘膜再生障害に対し優れた抑制作用を示した。すなわち、化合物Ｆは消化管粘膜の傷害に対する防御効果と組織修復効果が期待される。
上記実施例に示したとおりに、化合物Ｆに認められるように本発明の化合物は、免疫が関与する消化管炎症、薬剤性消化管粘膜傷害、薬剤性粘膜再生障害に基づく消化管傷害や治癒の遅延に対して有効である。具体的には、潰瘍性大腸炎、クローン病などの炎症性腸疾患、アルコール性胃炎・胃潰瘍や小腸潰瘍などにおいて有用であるが、例示疾患に限定されるものではない。
【産業上の利用可能性】
【０１０７】
本発明のＰＧＩ２誘導体は、医薬の有効成分として有用である。本発明のＰＧＩ２誘導体を有効成分とする医薬は、消化管の炎症性疾患及び潰瘍性疾患の予防及び治療のための医薬として、特に、潰瘍性大腸炎、クローン病、胃炎・胃潰瘍または小腸潰瘍の予防または治療のための医薬として有用である。
なお、２００８年９月１０日に出願された日本特許出願２００８−２３２１３３号及び２００９年７月１６日に出願された日本特許出願２００９−１６８１９３号の明細書、特許請求の範囲、図面及び要約書の全内容をここに引用し、本発明の明細書の開示として、取り入れるものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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