(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
0005579165.tif 000065
［式中、
Ｘは、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１は、水素またはシアノを表し、
Ｒ２は、窒素原子を介して結合している飽和４員ないし７員複素環ラジカルを表す
｛ここで、複素環ラジカルは、置換基により置換されていてもよく、置換基は、ヒドロキシル、ヒドロキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ３−アルキル、Ｃ１−Ｃ３−アルキルアミノおよびＣ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択されるか、
または、複素環ラジカルは、１個ないし４個のフッ素置換基により置換されていてもよい｝］
の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは塩の溶媒和物、
但し、式
【化２】
0005579165.tif 000066
【化３】
0005579165.tif 000067
【化４】
0005579165.tif 000068
【化５】
0005579165.tif 000069
【化６】
0005579165.tif 000070
【化７】
0005579165.tif 000071
の化合物、並びにその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物を除く。
【請求項２】
式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１が、水素またはシアノを表し、
Ｒ２が、窒素原子を介して結合している飽和４員ないし７員複素環ラジカル（ここで、複素環ラジカルは、１個ないし４個のフッ素置換基により置換されている）を表すか、
または、Ｒ２が、ピペラジン−１−イル（ここで、ピペラジン−１−イルは、１個の置換基により置換されており、置換基は、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択される）を表すか、
または、Ｒ２が、アゼチジン−１−イル（ここで、アゼチジン−１−イルは、１個の置換基により置換されており、置換基は、ヒドロキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ３−アルキル、Ｃ１−Ｃ３−アルキルアミノおよびＣ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択される）を表すか、
または、Ｒ２が、１,２−オキサジナン−２−イルまたは１,４−オキサゼパン−４−イルを表すことを特徴とする、請求項１に記載の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは塩の溶媒和物。
【請求項３】
式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１が、水素またはシアノを表し、
Ｒ２が、アゼチジン−１−イル、ピロリン−１−イルまたはピペリジン−１−イル（ここで、アゼチジン−１−イル、ピロリン−１−イルおよびピペリジン−１−イルは、１個ないし４個のフッ素置換基により置換されている）を表すか、
または、Ｒ２が、ピペラジン−１−イル（ここで、ピペラジン−１−イルは、１個の置換基により４位で置換されており、置換基は、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択される）を表すか、
または、Ｒ２が、アゼチジン−１−イル（ここで、アゼチジン−１−イルは、１個の置換基により３位で置換されており、置換基は、ヒドロキシカルボニル、メチルおよびジメチルアミノからなる群から選択される）を表すか、
または、Ｒ２が、１,２−オキサジナン−２−イルまたは１,４−オキサゼパン−４−イルを表すことを特徴とする、請求項１または請求項２に記載の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは塩の溶媒和物。
【請求項４】
請求項１に記載の式
【化８】
0005579165.tif 000072
の２−［６−（４−シクロブチルピペラジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン、またはその塩、溶媒和物もしくは塩の溶媒和物。
【請求項５】
請求項１に記載の式
【化９】
0005579165.tif 000073
の２−［６−（４−シクロブチルピペラジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン、またはその塩。
【請求項６】
請求項１に記載の式
【化１０】
0005579165.tif 000074
の２−［６−（４−シクロブチルピペラジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン。
【請求項７】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは塩の溶媒和物の製造方法であって、式
【化１１】
0005579165.tif 000075
（式中、Ｒ１は請求項１に記載の意味を有し、そして、
Ｚ１は、メチルまたはエチルを表す）
の化合物を、式
【化１２】
0005579165.tif 000076
（式中、Ｚ２は、メチルまたはエチルを表す）
の化合物と縮合させ、式
【化１３】
0005579165.tif 000077
（式中、Ｚ１およびＲ１は、上記の意味を有する）
の化合物を得、次いで、酸の存在下、式
【化１４】
0005579165.tif 000078
（式中、Ｒ２は請求項１に記載の意味を有する）
の化合物と反応させ、式
【化１５】
0005579165.tif 000079
（式中、Ｚ１、Ｒ１およびＲ２は、上記の意味を有する）
の化合物を得、これは、これらの反応条件下で既に、または、塩基の影響下の後続の反応段階において、式（Ｉ）の化合物に環化しており、
そして、式（Ｉ）の化合物を、必要に応じて、適当な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基もしくは酸で、その塩、その溶媒和物またはその塩の溶媒和物に変換することを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは塩の溶媒和物の製造方法であって、式
【化１６】
0005579165.tif 000080
の化合物を、溶媒としての水中で、ワンポット工程で、先ず、式
【化１７】
0005579165.tif 000081
（式中、Ｒ２は請求項１に記載の意味を有する）
の化合物と、次いで、式
【化１８】
0005579165.tif 000082
（式中、Ｒ１は請求項１に記載の意味を有し、そして、
Ｚ１は、メチルまたはエチルを表す）
の化合物と反応させ、式（Ｉ）の化合物を得、
そして、式（Ｉ）の化合物を、必要に応じて、適当な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基もしくは酸で、その塩、その溶媒和物またはその塩の溶媒和物に変換することを特徴とする方法。
【請求項９】
疾患の処置および／または予防のための、請求項１ないし請求項６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するための、請求項１ないし請求項６のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１１】
請求項１ないし請求項６のいずれかに記載の化合物を、不活性、非毒性の医薬的に適する補助剤と組み合わせて含む、医薬。
【請求項１２】
ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、ベータ受容体遮断薬、カルシウム拮抗薬、ＰＤＥ阻害剤、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト、利尿剤、アスピリン、鉄サプリメント、ビタミンＢ１２および葉酸サプリメント、スタチン類、ジギタリス（ジゴキシン）誘導体、腫瘍化学療法剤および抗生物質からなる群から選択される１種またはそれ以上のさらなる活性化合物と組み合わせた、請求項１１に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、新規置換ジヒドロピラゾロン誘導体、それらの製造方法、疾患の処置および／または予防のためのそれらの使用、および、疾患、特に、心血管および血液疾患および腎臓疾患の処置および／または予防用、および、創傷治癒の促進用の医薬を製造するためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
人体（human organism）またはその構成部分への不十分な酸素供給であって、その期間および／またはその程度のために人体またはその構成部分の通常の機能を損なうか、または、その機能の完全な破壊を引き起こすものは、低酸素症と呼ばれる。低酸素症は、吸入される空気中の利用可能な酸素の減少（例えば、高地（high altitude）での期間中）により、外呼吸の障害（例えば、肺機能の撹乱または気道の閉塞の結果として）により、心拍出量の減少（例えば、心不全、肺塞栓症を伴う急性右室負荷の場合の）により、低すぎる血液の酸素運搬能（例えば、貧血または例えば一酸化炭素による中毒の結果として）により、血管閉塞の結果としての血流の減少（典型的には例えば心臓、下肢または脳の虚血状態、糖尿病性大血管および微小血管障害）により局所的に区切られて、または、組織の酸素要求の増大（例えば、筋肉活動の増大または局所的炎症の結果として）によっても引き起こされ得る［Eder, Gedigk (ed.), Allgemeine Pathologie und pathologische Anatomie, 33rd ed., Springer Verlag, Berlin, 1990]。
【０００３】
人体は、酸素供給が減少した状況に急性および慢性的にある程度は適応し得る。とりわけ心拍出量および呼吸排出量の増加並びに植物神経制御メカニズムによる血管の局所的拡張を含む即時的反応に加えて、低酸素は、多数の遺伝子の転写の変化をもたらす。それらの遺伝子産物の機能は、ここで、酸素不足を補うように作用する。かくして、いくつかの解糖系の酵素およびグルコーストランスポーター１の発現が増強され、その結果、無気的ＡＴＰ産生が増加し、酸素不足での生存が可能になる［Schmidt, Thews (ed.), Physiologie des Menschen, 27th ed., Springer Verlag, Berlin, 1997; Loeffler, Petrides (ed.), Biochemie und Pathobiochemie, 7th ed., Springer Verlag, Berlin, 2003]。
【０００４】
低酸素は、さらに、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現の増強を導き、その結果、低酸素の組織において血管の再生（血管形成）が刺激される。虚血組織を通る血流は、それにより、長期的に改善される。この対抗的制御は、様々な心血管疾患および血管閉塞疾患の場合には、明らかに非常に不適切なものでしかない［Simons and Ware, Therapeutic angiogenesis in cardiovascular disease, Nat. Rev. Drug. Discov. 2 (11), 863-71 (2003)に概説]。
【０００５】
さらに、全身的低酸素症の場合、腎臓の間質性線維芽細胞において支配的に形成されるペプチドホルモンであるエリスロポエチンの発現が増強される。それにより、骨髄における赤血球細胞の形成が刺激され、従って血液の酸素運搬能が上昇する。この効果は、いわゆる高地トレーニングにおいて、能力の高い運動選手により以前から使用されている。例えば出血後の貧血の結果としての血液の酸素運搬能の低下は、通常、腎臓のエリスロポエチン産生の増加を引き起こす。ある種の形態の貧血では、この制御メカニズムが撹乱されるか、または、その正常値が低く設定されることがある。例えば、腎不全を患っている患者において、エリスロポエチンは確かに腎臓の実質で産生されるが、血液の酸素運搬能に関して有意に少ない量であり、それは、いわゆる腎性貧血をもたらす。特に腎性貧血は、しかし腫瘍およびＨＩＶ感染に起因する貧血も、慣習的に組換えヒトエリスロポエチン（ｒｈＥＰＯ）の非経腸投与により処置されている。この高価な治療に代わる経口で利用可能な医薬による代替治療は、現在のところ存在しない［Eckardt, The potential of erythropoietin and related strategies to stimulate erythropoiesis, Curr. Opin. Investig. Drugs 2(8), 1081-5 (2001); Berns, Should the target hemoglobin for patients with chronic kidney disease treated with erythropoietic replacement therapy be changed?, Semin. Dial. 18 (1), 22-9 (2005) に概説]。最近の研究は、その赤血球新生増加作用に加えて、それとは独立して、エリスロポエチンが低酸素組織、特に心臓および脳に対する保護的（抗アポトーシス）作用も有することを立証している。さらに、最近の研究によると、エリスロポエチンによる治療は、心不全患者における病状の平均的重篤度を下げる［Caiola and Cheng, Use of erythropoietin in heart failure management, Ann. Pharmacother. 38 (12), 2145-9 (2004); Katz, Mechanisms and treatment of anemia in chronic heart failure, Congest. Heart. Fail. 10 (5), 243-7 (2004) に概説]。
【０００６】
低酸素により誘導される上記の遺伝子は、低酸素下でのそれらの発現の増加がいわゆる低酸素誘導転写因子（ＨＩＦ）に起因するという共通の特徴を有する。ＨＩＦは、アルファおよびベータサブユニットを含むヘテロ二量体の転写因子である。３種類のＨＩＦアルファアイソフォームが報告されており、そのうちＨＩＦ−１アルファおよびＨＩＦ−２アルファは相同性が高く、低酸素誘導遺伝子発現に重要である。ＡＲＮＴ（アリール炭化水素受容体核輸送体）とも呼ばれるベータサブユニット（その２種類のアイソフォームが報告された）は構成的に発現されるが、アルファサブユニットの発現は細胞の酸素含有量に依存する。正常酸素圧下では、ＨＩＦアルファタンパク質はポリユビキチン化され、次いでプロテアソームにより分解される。低酸素下では、ＨＩＦアルファがＡＲＮＴと二量体化し、その標的遺伝子を活性化できるように、この分解は阻害される。ＨＩＦ二量体は、ここで、その標的遺伝子の調節配列中にある、いわゆる低酸素応答エレメント（ＨＲＥ）に結合する。ＨＲＥはコンセンサス配列により定義される。機能的ＨＲＥは、多数の低酸素誘導遺伝子の調節エレメント中に検出された［Semenza, Hypoxia-inducible factor 1: oxygen homeostasis and disease pathophysiology, Trends Mol. Med. 7 (8), 345-50 (2001); Wenger and Gassmann, oxygen(es) and the hypoxia-inducible factor-1, Biol. Chem. 378 (7), 609-16 (1997)]。
【０００７】
このＨＩＦアルファの調節の基礎である分子メカニズムは、いくつかの独立した研究者グループの仕事により明らかにされた。このメカニズムは、種間で保存されている：ＨＩＦアルファは、ＰＨＤまたはＥＧＬＮと呼ばれる酸素依存的プロリル４−ヒドロキシラーゼのサブクラスにより２つの特異的プロリル基（ヒトＨＩＦ−１アルファサブユニットのＰ４０２およびＰ５６４）でヒドロキシル化される。ＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼは、鉄依存的２−オキソグルタル酸変換ジオキシゲナーゼである［Epstein et al., C. elegans EGL-9 and mammalian homologs define a family of dioxogenases that regulate HIF by prolyl hydroxylation, Cell 107 (1), 43-54 (2001); Bruick and McKnight, A conserved family of prolyl-4-hydroxylases that modify HIF, Science 294 (5545), 1337-40 (2001); Ivan et al., Biochemical purification and pharmacological inhibition of a mammalian prolyl hydroxylase acting on hypoxia-inducible factor, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (21), 13459-64 (2002)］。これらの酵素は、プロリルヒドロキシラーゼとして２００１年に初めて注釈を付けられた［Aravind and Koonin, The DNA-repair protein AlkB, EGL-9, and leprecan define new families of 2-oxoglutarate- and iron-dependent dioxogenases, Genome Biol. 2 (3), research0007.1-0007.8, Epub 2001 Feb 19]。
【０００８】
エロンギンＢおよびＣと一体となっていわゆるＶＢＣ複合体を形成し、ＨＩＦアルファサブユニットをＥ３ユビキチンリガーゼに適合させるｐＶＨＬ腫瘍抑制因子タンパク質は、プロリル−ヒドロキシル化ＨＩＦアルファサブユニットに結合する。ＨＩＦアルファサブユニットのプロリル４−ヒドロキシル化およびその後の分解は、酸素の細胞内濃度に応じて起こるので、ＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼは、細胞内酸素センサーとも呼ばれてきた。これらの酵素の３種のアイソフォームが同定された：ＥＧＬＮ１／ＰＨＤ２、ＥＧＬＮ２／ＰＨＤ１およびＥＧＬＮ３／ＰＨＤ３。これらの酵素のうち２種（ＥＧＬＮ２／ＰＨＤ１およびＥＧＬＮ３／ＰＨＤ３）は、低酸素下でさえ転写的に誘導され、恐らく、慢性的低酸素下で観察されるＨＩＦアルファレベルの低下を担うものである［Schofield and Ratcliffe, oxygen sensing by HIF hydroxylases, Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 5 (5), 343-54 (2004) に概説］。
【０００９】
ＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼの選択的薬理的阻害は、ＨＩＦ依存的標的遺伝子の遺伝子発現の増加をもたらし、従って多数の疾患や症候群の治療に有益である。特に心血管系の疾患の場合、疾患の経過における改善は、新しい血管の誘導および好気的ＡＴＰ産生から嫌気的ＡＴＰ産生への虚血器官の代謝状況の変化から期待される。慢性的創傷の血管新生における改善は、特に治癒が不十分な下腿潰瘍（ulcera cruris）および他の慢性皮膚創傷の場合に、治癒過程を促進する。ある種の病態における、特に腎性貧血の患者における、内因性エリスロポエチンの誘導は、同様に目標とされる治療目的である。
【００１０】
今日までに科学文献に記載されたＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼ阻害剤は、医薬に負わされる要件を満たさない。これらは、いずれかの競合的オキソグルタル酸類似体（例えば、Ｎ−オキサリルグリシン）であり、非常に低い作用強度を特徴とし、従ってインビボモデルでは、まだＨＩＦ標的遺伝子の誘導の意味で作用を示していない。あるいは、それらはデスフェリオキサミンなどの鉄錯体化剤（キレート剤）であり、鉄含有ジオキソゲナーゼの非特異的阻害剤として作用し、それらはインビボで例えばエリスロポエチンなどの標的遺伝子の誘導をもたらすが、利用可能な鉄の錯体化により、明らかに赤血球新生に対抗する。
【００１１】
殺菌および／または殺真菌作用を有する２−ヘテロアリール−４−アリール−１,２−ジヒドロピラゾロン類は、ＥＰ１６５４４８およびＥＰ２１２２８１に開示されている。２−ヘテロアリール−４−アリール−１,２−ジヒドロピラゾロン類の、呼吸器、心血管および炎症性疾患の処置用のリポキシゲナーゼ阻害剤としての使用は、ＥＰ１８３１５９で特許請求されている。除草活性を有する２,４−ジフェニル−１,２−ジヒドロピラゾロン類は、ＤＥ２６５１００８に記載されている。ある種の２−ピリジル−１,２−ジヒドロピラゾロン類の製造および薬理的特性は、Helv. Chim. Acta 49 (1), 272-280 (1966) で報告されている。ＷＯ９６／１２７０６、ＷＯ００／５１９８９およびＷＯ０３／０７４５５０は、様々な疾患の処置用のジヒドロピラゾロン部分構造を有する化合物を特許請求しており、精神神経疾患の処置用のヒドロキシ−またはアルコキシ−置換ビピラゾール類は、ＷＯ２００６／１０１９０３に開示されている。疼痛および様々なＣＮＳ疾患の処置用のヘテロアリール置換ピラゾール誘導体は、さらに、ＷＯ０３／０５１８３３およびＷＯ２００４／０８９３０３に記載されている。一方、ＷＯ２００６／１１４２１３は、２,４−ジピリジル−１,２−ジヒドロピラゾロン類をＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼの阻害剤として開示した。
【００１２】
化合物３−メチル−１−（ピリジン−２−イル）−４−（１−ピリジン−２−イル−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−２Ｈ−３−ピラゾリン−５（１Ｈ）−オン（他の名称：５,５'−ジメチル−２,２'−ｄｉピリジン−２−イル−１',２'−ジヒドロ−２Ｈ,３'Ｈ−３,４'−ビピラゾール−３'−オン）のＸ線結晶構造は、Acta Crystallogr., Section E: Structure Reports Online E57 (11), o1126-o1127 (2001) [Chem. Abstr. 2001:796190] で報告されている。ある種の３',５−ジメチル−２−フェニル−１'−（１,３−チアゾール−２−イル）−１'Ｈ,２Ｈ−３,４'−ビピラゾール−５'−オール誘導体の合成は、Indian J. Heterocyclic Chem. 3 (1), 5-8 (1993) [Chem. Abstr. 1994:323362] に記載されている。個々の４−（ピラゾール−５−イル）ピラゾリン−５−オン誘導体の製造および互変異性は、J. Heterocyclic Chem. 27 (4), 865-870 (1990) [Chem. Abstr. 1991:428557] に報告されている。これらの刊行物で言及された化合物の治療的使用は、今日までに記載されてこなかった。化合物２−ｔｅｒｔ−ブチル−１'−［４−（４−クロロフェニル）−１,３−チアゾール−２−イル］−３',５−ジメチル−１'Ｈ,２Ｈ−３,４'−ビピラゾール−５'−オールは、ＷＯ２００７／００８５４１で試験例として挙げられている。
【発明の概要】
【００１３】
本発明の目的は、疾患、特に心血管および血液の疾患の処置に用いることができる新規化合物を提供することである。
【００１４】
本発明に関して、この度、ＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼの特異的阻害剤として作用し、この特異的作用メカニズムを基礎として、非経腸または経口投与の後に、インビボで、例えばエリスロポエチンなどのＨＩＦ標的遺伝子の誘導、並びに、例えば赤血球新生などのそれに起因する生物学的過程をもたらす化合物を記載する。
【００１５】
本発明は、式
【化１】
0005579165.tif 000002
［式中、
Ｘは、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１は、水素またはシアノを表し、
Ｒ２は、窒素原子を介して結合している飽和４員ないし７員複素環ラジカルを表す
｛ここで、複素環ラジカルは、置換基により置換されていてもよく、置換基は、ヒドロキシル、ヒドロキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ３−アルキル、Ｃ１−Ｃ３−アルキルアミノおよびＣ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択されるか、
または、複素環ラジカルは、１個ないし４個のフッ素置換基により置換されていてもよい｝］
の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明による化合物は、式（Ｉ）の化合物並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、および、式（Ｉ）に包含され、実施態様の実施例として後述する化合物並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物（式（Ｉ）に包含される後述の化合物が、まだ塩、溶媒和物および塩の溶媒和物ではない場合に）である。
【００１７】
本発明による化合物は、それらの構造次第で、立体異性体（エナンチオマー、ジアステレオマー）で存在できる。従って、本発明は、エナンチオマーまたはジアステレオマーおよびそれらの特定の混合物を含む。立体異性的に均一な構成分は、そのようなエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの混合物から、既知方法で単離できる。
本発明による化合物が互変異性体で存在できるならば、本発明は、全ての互変異性体を含む。
【００１８】
本発明に関して、好ましい塩は、本発明による化合物の生理的に許容し得る塩である。それら自体は医薬的使用に適さないが、例えば本発明による化合物の単離または精製に使用できる塩も含まれる。
【００１９】
本発明による化合物の生理的に許容し得る塩には、無機酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩が含まれる。
【００２０】
本発明による化合物の生理的に許容し得る塩には、また、常套の塩基の塩、例えば、そして、好ましくは、アルカリ金属塩（例えばナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウムおよびマグネシウム塩）およびアンモニアまたは１個ないし１６個のＣ原子を有する有機アミン（例えば、そして、好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リジン、エチレンジアミンおよびＮ−メチルピペリジン）から誘導されるアンモニウム塩が含まれる。
【００２１】
溶媒和物は、本発明に関して、固体または液体状態で溶媒分子との配位により錯体を形成している本発明による化合物の形態であると説明される。水和物は、配位が水と起こる、溶媒和物の特別な形態である。水和物は、本発明に関して好ましい溶媒和物である。
【００２２】
本発明は、さらに、本発明による化合物のプロドラッグも含む。用語「プロドラッグ」には、それら自体は生物学的に活性であっても不活性であってもよいが、それらの体内残存時間中に（例えば代謝的または加水分解的に）本発明による化合物に変換される化合物が含まれる。
【００２３】
本発明に関して、置換基は、断りの無い限り以下の意味を有する：
アルキル自体、および、アルキルアミノ中の「アルキル」は、１個ないし３個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキルラジカル、例えば、そして好ましくは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルを表す。
【００２４】
アルキルアミノは、１個または２個の（相互に独立して選択される）アルキル置換基を有するアルキルアミノラジカル、例えば、そして好ましくは、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノおよびＮ−イソプロピル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノを表す。Ｃ１−Ｃ３−アルキルアミノは、例えば、１個ないし３個の炭素原子を有するモノアルキルアミノラジカルを表すか、または、アルキル置換基毎に１個ないし３個の炭素原子を有するジアルキルアミノラジカルを表す。
【００２５】
シクロアルキルは、一般的に３個ないし６個の炭素原子を有する単環式シクロアルキル基を表し；例えば、そして好ましくは、言及し得るシクロアルキルラジカルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルである。
【００２６】
窒素原子を介して結合している飽和４員ないし７員複素環ラジカルは、それを介して結合している１個の窒素原子および、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２からなる群から選択される２個まで、好ましくは１個までのさらなるヘテロ原子および／またはヘテロ基を含む４個ないし７個の環内原子を有し、窒素原子は、また、Ｎ−オキシドを形成していてもよい、単環式飽和複素環ラジカルを表す。好ましいのは、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から１個までのさらなるヘテロ原子を有する４員ないし７員単環式飽和複素環ラジカル、例えば、そして好ましくは、アゼチジン−１−イル、ピロリン−１−イル、ピペリジン−１−イル、モルホリン−４−イル、チオモルホリン−４−イル、ピペラジン−１−イル、１,２−オキサジナン−２−イル、１,４−オキサゼパン−４−イル、１,４−チアゼパン−４−イルである。
【００２７】
好ましいのは、式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１が、水素またはシアノを表し、
Ｒ２が、窒素原子を介して結合している飽和４員ないし７員複素環ラジカル（ここで、複素環ラジカルは、１個ないし４個のフッ素置換基により置換されている）を表すか、
または、Ｒ２が、ピペラジン−１−イル（ここで、ピペラジン−１−イルは、１個の置換基により置換されており、置換基は、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択される）を表すか、
または、Ｒ２が、アゼチジン−１−イル（ここで、アゼチジン−１−イルは、１個の置換基により置換されており、置換基は、ヒドロキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ３−アルキル、Ｃ１−Ｃ３−アルキルアミノおよびＣ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択される）を表すか、
または、Ｒ２が、１,２−オキサジナン−２−イルまたは１,４−オキサゼパン−４−イルを表す、
式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００２８】
好ましいのは、式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１が、水素またはシアノを表し、
Ｒ２が、アゼチジン−１−イル、ピロリン−１−イルまたはピペリジン−１−イル（ここで、アゼチジン−１−イル、ピロリン−１−イルおよびピペリジン−１−イルは、１個ないし４個のフッ素置換基により置換されている）を表すか、
または、Ｒ２が、ピペラジン−１−イル（ここで、ピペラジン−１−イルは、１個の置換基により４位で置換されており、置換基は、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択される）を表すか、
または、Ｒ２が、アゼチジン−１−イル（ここで、アゼチジン−１−イルは、１個の置換基により３位で置換されており、置換基は、ヒドロキシカルボニル、メチルおよびジメチルアミノからなる群から選択される）を表すか、
または、Ｒ２が、１,２−オキサジナン−２−イルまたは１,４−オキサゼパン−４−イルを表す、
式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００２９】
好ましいのは、また、式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１が、水素またはシアノを表し、
Ｒ２が、窒素原子を介して結合している飽和４員ないし７員複素環ラジカル（ここで、複素環ラジカルは、１個ないし４個のフッ素置換基により置換されている）を表す、
式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００３０】
好ましいのは、また、式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１が、水素またはシアノを表し、
Ｒ２が、アゼチジン−１−イル、ピロリン−１−イルまたはピペリジン−１−イル（ここで、アゼチジン−１−イル、ピロリン−１−イルおよびピペリジン−１−イルは、１個ないし４個のフッ素置換基により置換されている）を表す、
式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００３１】
好ましいのは、また、式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１が、水素またはシアノを表し、
Ｒ２が、アゼチジン−１−イル、ピロリン−１−イルまたはピペリジン−１−イル（ここで、アゼチジン−１−イル、ピロリン−１−イルおよびピペリジン−１−イルは、２個のフッ素置換基により置換されており、これらの置換基は、同じ炭素原子に結合している）を表す、
式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００３２】
好ましいのは、また、式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１が、水素またはシアノを表し、
Ｒ２が、ピペラジン−１−イル（ここで、ピペラジン−１−イルは、１個の置換基により置換されており、置換基は、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択される）を表す、
式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００３３】
好ましいのは、また、式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１が、水素またはシアノを表し、
Ｒ２が、ピペラジン−１−イル（ここで、ピペラジン−１−イルは、１個の置換基により４位で置換されており、置換基は、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択される）を表す、
式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００３４】
好ましいのは、また、式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１が、水素またはシアノを表し、
Ｒ２が、アゼチジン−１−イル（ここで、アゼチジン−１−イルは、１個の置換基により置換されており、置換基は、ヒドロキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ３−アルキル、Ｃ１−Ｃ３−アルキルアミノおよびＣ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択される）を表す、
式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００３５】
好ましいのは、また、式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１が、水素またはシアノを表し、
Ｒ２が、アゼチジン−１−イル（ここで、アゼチジン−１−イルは、１個の置換基により置換されており、置換基は、ヒドロキシカルボニル、メチルおよびジメチルアミノからなる群から選択される）を表す、
式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００３６】
好ましいのは、また、式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１が、水素またはシアノを表し、
Ｒ２が、アゼチジン−１−イル（ここで、アゼチジン−１−イルは、１個の置換基により３位で置換されており、置換基は、ヒドロキシカルボニル、メチルおよびジメチルアミノからなる群から選択される）を表す、
式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００３７】
好ましいのは、また、式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１が、水素またはシアノを表し、
Ｒ２が、１,２−オキサジナン−２−イルまたは１,４−オキサゼパン−４−イルを表す、
式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００３８】
好ましいのは、また、式中、ＸがＮを表す式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、式中、Ｒ１が水素を表す式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、式中、Ｒ１がシアノを表す式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、式中、Ｒ２が４−シクロブチル−ピペラジン−１−イルを表す式（Ｉ）の化合物である。
【００３９】
好ましいのは、また、式中、
Ｘが、ＮまたはＣＨを表し、
Ｒ１が、シアノを表し、
Ｒ２が、窒素原子を介して結合している飽和４員ないし７員複素環ラジカル（ここで、複素環ラジカルは、１個の置換基により置換されており、置換基は、ヒドロキシ、ヒドロキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ３−アルキル、Ｃ１−Ｃ３−アルキルアミノおよびＣ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択されるか、または、複素環ラジカルは、１個ないし４個のフッ素置換基により置換されている）を表す、
式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００４０】
ラジカルの特定の組合せまたは好ましい組合せにおいて詳細に与えられるラジカルの定義は、また、与えられる特定のラジカルの組合せから独立して、所望により他の組合せのラジカルの定義により置き換えられる。
２個またはそれ以上の上述の好ましい範囲の組合せがことさら特に好ましい。
【００４１】
本発明による式（Ｉ）の１,２−ジヒドロピラゾール−３−オン誘導体は、互変異性の１Ｈ−ピラゾール−５−オール形態（Ｉ'）であることもできる（以下のスキーム１参照）；これらの２つの互変異性体は、明示的に本発明の一部とする。
スキーム１
【化２】
0005579165.tif 000003
【００４２】
本発明は、また、式（Ｉ）の化合物、またはそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物の製造方法を提供し、それは、以下の方法に従う；
［Ａ］式
【化３】
0005579165.tif 000004
（式中、Ｒ１は上記の意味を有し、そして、
Ｚ１は、メチルまたはエチルを表す）
の化合物を、不活性溶媒中、必要に応じて酸の存在下、式
【化４】
0005579165.tif 000005
（式中、Ｒ２は上記の意味を有する）
の化合物と反応させ、式
【化５】
0005579165.tif 000006
（式中、Ｚ１、Ｒ１およびＲ２は、上記の意味を有する）
の化合物を得、これらは、これらの反応条件下で既に、または、塩基の影響下の後続の反応段階において、式（Ｉ）の化合物に環化しており、
そして、式（Ｉ）の化合物を、必要に応じて、適当な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基もしくは酸で、それらの塩、それらの溶媒和物またはそれらの塩の溶媒和物に変換する、
または、
【００４３】
［Ｂ］式
【化６】
0005579165.tif 000007
（式中、Ｚ１およびＲ１は、上記の意味を有する）
の化合物を、式
【化７】
0005579165.tif 000008
（式中、Ｚ２は、メチルまたはエチルを表す）
の化合物と縮合させ、式
【化８】
0005579165.tif 000009
（式中、Ｚ１およびＲ１は、上記の意味を有する）
の化合物を得、次いで、酸の存在下、式（ＩＩＩ）の化合物と反応させ、式（ＩＶ）の化合物を得、これらは、これらの反応条件下で既に、または、塩基の影響下の後続の反応段階において、式（Ｉ）の化合物に環化しており、
そして、式（Ｉ）の化合物を、必要に応じて、適当な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基もしくは酸で、それらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物に変換する、
または、
【００４４】
［Ｃ］式
【化９】
0005579165.tif 000010
の化合物を、溶媒としての水中、ワンポット工程で、先ず、式
【化１０】
0005579165.tif 000011
（式中、Ｒ２は上記の意味を有する）
の化合物と、次いで、式（ＶＩＩ）の化合物と反応させ、式（Ｉ）の化合物を得、
そして、式（Ｉ）の化合物を、必要に応じて、適当な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）塩基もしくは酸で、それらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物に変換する。
【００４５】
塩の遊離塩基は、化合物の塩または化合物の塩の溶媒和物を塩基と反応させることにより得ることができる。
適する塩基は、アルカリ金属水酸化物、例えば、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウム、アルカリ金属またはアルカリ土類金属の炭酸塩、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウムまたは炭酸セシウム、または、アンモニア水溶液である。
【００４６】
代替的方法では、塩の遊離塩基は、例えば、逆相カラムのクロマトグラフィーにより、アセトニトリル／水グラジエントを、塩基を添加して使用して、特に、RP18 Phenomenex Luna C18(2) カラムおよび塩基のジエチルアミンを使用することにより、得ることができる。
【００４７】
本発明は、さらに、式（Ｉ）の化合物またはそれらの溶媒和物の製造方法を提供し、その方法では、化合物の塩または化合物の塩の溶媒和物を、塩基との反応により、または、化合物に塩基を添加したクロマトグラフィーにより変換する。
【００４８】
さらなる本発明による化合物は、場合により、上記の方法により得られた式（Ｉ）の化合物から出発して、個々の置換基の官能基、特にＲ１およびＲ２で列挙したものの変換によっても製造できる。これらの変換は当業者に知られている常套の方法により実施され、例えば、求核または求電子置換、酸化、還元、水素化、遷移金属に触媒されるカップリング反応、アルキル化、アシル化、アミノ化、エステル化、エステル開裂、エーテル化、エーテル開裂、カルボキサミド、スルホンアミド、カルバメートおよびウレアの形成、並びに、一時的な保護基の導入および除去などの反応が含まれる。
【００４９】
工程（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）、（ＶＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）および（ＩＶ）→（Ｉ）に適する不活性溶媒は、特に、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、１,２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフランおよびジオキサンなどのエーテル類、または、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノールおよびｔｅｒｔ−ブタノールなどのアルコール類、もしくは、水、または、溶媒の混合物もしくは溶媒と水との混合物である。好ましいのは、メタノール、エタノール、テトラヒドロフランまたは水を使用することである。
【００５０】
工程（Ｖ）＋（ＶＩ）→（ＶＩＩ）は、好ましくは、溶媒のジメチルホルムアミド中、または、過剰の（ＶＩ）の存在下でさらなる溶媒を用いずに実施する。必要に応じて、この反応は、マイクロ波照射下で有利に実施してもよい。この反応は、一般的に、＋２０℃ないし＋１５０℃の温度範囲で、好ましくは＋８０℃ないし＋１２０℃で実施する［J.P. Bazureau et al., Synthesis 1998, 967; ibid. 2001 (4), 581 も参照]。
【００５１】
必要に応じて、工程（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）および（ＶＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）は、酸を添加して有利に実施できる。この目的に適するのは、常套の無機または有機酸、例えば、塩化水素、酢酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸またはカンファー−１０−スルホン酸である。好ましいのは、酢酸、または、特に、トリフルオロ酢酸もしくはｐ−トルエンスルホン酸の使用である。
【００５２】
反応（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）は、一般的に、０℃ないし＋１００℃、好ましくは＋１０℃ないし＋５０℃の温度範囲で実施する。反応（ＶＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）は、一般的に、＋２０℃ないし＋１２０℃の温度範囲で、好ましくは＋５０℃ないし＋１００℃で実施する。
【００５３】
連続工程（ＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）→（Ｉ）および（ＶＩＩ）＋（ＩＩＩ）→（ＩＶ）→（Ｉ）は、２段階の反応として、または、ワンポット反応として、中間体（ＩＶ）を単離せずに実施できる。後者の変法に特に適するのは、マイクロ波照射下での成分の反応である；ここで、反応は、一般的に、＋５０℃ないし＋２００℃の温度範囲で、好ましくは＋１００℃ないし＋１８０℃で実施できる。
【００５４】
（ＩＶ）の製造中でさえ、（Ｉ）への部分的閉環があり得る；この場合、必要であれば、反応混合物をインサイチュで（in situ）塩基で処理することにより、環化を完了させる。
【００５５】
そのような分離した環化段階（ＩＶ）→（Ｉ）に適する塩基は、常套の無機または有機塩基である。これらには、特に、アルカリ金属水酸化物、例えば、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウム、アルカリ金属炭酸塩またはアルカリ土類金属炭酸塩、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウムまたは炭酸セシウム、アルカリ金属アルコキシド、例えば、ナトリウムメトキシドまたはカリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドまたはカリウムエトキシドまたはナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシドまたはカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、または、アルカリ金属水素化物、例えば水素化ナトリウムが含まれる。好ましいのは、ナトリウムメトキシドまたはナトリウムエトキシドの使用である。
塩基に誘導される反応（ＩＶ）→（Ｉ）は、一般的に、０℃ないし＋６０℃の温度範囲で、好ましくは０℃ないし＋３０℃で実施する。
【００５６】
反応（ＶＩＩＩ）＋（ＩＸ）＋（ＶＩＩ）→（Ｉ）は、一般的に、１当量の（ＶＩＩＩ）につき、１.１ないし２.０当量の（ＩＸ）を使用して、必要に応じて、１.１ないし２.０当量の塩基の存在下で実施する。好ましいのは、１.１ないし１.５当量の（ＩＸ）を用いる反応である。
【００５７】
反応（ＶＩＩＩ）＋（ＩＸ）＋（ＶＩＩ）→（Ｉ）に適する塩基は、常套の無機または有機塩基である。これらには、特に、アルカリ金属水酸化物、例えば、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウム、または、アミン塩基、例えば、Ｎ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミンが含まれる。好ましいのは、Ｎ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミンである。
反応（ＶＩＩＩ）＋（ＩＸ）＋（ＶＩＩ）→（Ｉ）は、一般的に、＋２０℃ないし＋１００℃の温度範囲で、好ましくは＋７０℃ないし＋１００℃で実施する。
【００５８】
全工程は、大気圧、加圧または減圧下で実施できる（例えば、０.５ないし５ｂａｒ）。一般に、これらの反応は大気圧で実施する。
【００５９】
式（ＩＩ）の化合物は、カルボン酸エステルのＣ−アシル化のために文献で常套に使用される方法により、式（Ｖ）の化合物から製造できる。式（ＩＩＩ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物は、購入できるか、文献から知られているか、または、文献に記載された方法と同様に製造できる。
【００６０】
本発明による化合物の製造は、下記の反応スキーム２により例示説明できる：
スキーム２
【化１１】
0005579165.tif 000012
［ａ）：ＤＭＦ、１６時間、＋１００℃；ｂ）：エタノール、トリフルオロ酢酸、＋７８℃；ｃ）：ＮａＯＥｔ、エタノール、１時間、室温］。
【００６１】
本発明による化合物は、予見できない価値ある薬理作用スペクトルを示す。
従って、それらは、ヒトおよび動物における疾患の処置および／または予防用の医薬としての使用に適する。
本発明による化合物は、ＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼの特異的阻害剤として卓越している。
【００６２】
この薬理特性を基礎として、本発明による化合物は、心血管疾患、特に、心不全、冠動脈心疾患、狭心症、心筋梗塞、卒中、動脈硬化症、本態性、肺性および悪性高血圧症並びに末梢動脈閉塞性疾患の処置および／または予防に用いることができる。
【００６３】
本発明による化合物は、さらに、血液形成の障害、例えば特発性貧血、腎性貧血および腫瘍疾患に伴う貧血（特に化学療法により誘導される貧血）、感染（特にＨＩＶ感染）または他の炎症性疾患、例えばリウマチ性関節炎の処置および／または予防に適する。本発明による化合物は、さらに、血液喪失の結果としての貧血、鉄欠乏性貧血、ビタミン欠乏性貧血（例えば、ビタミンＢ１２欠乏の結果として、または、葉酸欠乏の結果として）、低形成性および再生不良性貧血、または、溶血性貧血の処置の補助に、または、鉄利用障害の結果としての貧血（鉄非利用性貧血）、または、他の内分泌障害（例えば甲状腺機能低下症（hypothyroidosis））の結果としての貧血の処置の補助に適する。
【００６４】
本化合物は、さらに、手術前に血液の自己供与用の血液を得る目的で、ヘマトクリットを高めるのに適する。
【００６５】
本発明による化合物は、さらに、外科的介入後、特に、心肺装置を使用する心臓への介入（例えばバイパス手術、心臓弁インプラント）、頸動脈への介入、大動脈への介入および機器による開頭術または穿頭術後の、手術に関連する虚血状態およびそれらの続発症の処置および／または予防に使用できる。本化合物は、さらに、創傷の治癒の加速および回復時間の短縮を目的として、外科的介入の場合の全般的な処置および／または予防に適する。
【００６６】
これらの化合物は、さらに、脳の急性および遅延性虚血状態（例えば卒中、出生時仮死）の続発症の処置および予防に適する。
【００６７】
本化合物は、さらに、癌の処置および／または予防のために、そして、癌の処置の過程で起こる健康状態の悪化の処置および／または予防のために、特に、細胞分裂阻害剤、抗生物質および照射による治療後に、用いることができる。
【００６８】
本化合物は、さらに、リウマチ型疾患および自己免疫疾患とみなされる他の形態の疾患の処置および／または予防に、特に、かかる疾患の薬物処置の過程で生じる健康状態の悪化の処置および／または予防に適する。
【００６９】
本発明による化合物は、さらに、眼（例えば緑内障）、脳（例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病、認知症、慢性痛覚）の疾患、慢性腎臓疾患、腎不全および急性腎不全の処置および／または予防、および、創傷治癒の促進に用いることができる。
【００７０】
本化合物は、さらに、カヘキシーまでの全身的衰弱、特に、高齢者で高程度に生じるものの処置および／または予防に適する。
本化合物は、さらに、性機能不全の処置および／または予防に適する。
本化合物は、さらに、真性糖尿病およびその続発症、例えば、糖尿病性大血管および微小血管障害、糖尿病性腎症および神経障害の処置および／または予防に適する。
本発明による化合物は、さらに、例えば、心臓、肺および肝臓の線維性疾患の処置および／または予防に適する。
特に、本発明による化合物は、未熟児の網膜症（未熟児網膜症（retinopathia prematurorum））の予防および処置にも適する。
【００７１】
本発明は、さらに、疾患、特に上述の疾患の処置および／または予防のための、本発明による化合物の使用を提供する。
本発明は、さらに、疾患、特に上述の疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するための、本発明による化合物の使用を提供する。
本発明は、さらに、少なくとも１種の本発明による化合物の有効量を使用する、疾患、特に上述の疾患の処置および／または予防方法を提供する。
【００７２】
本発明による化合物は、単独で、または、必要であれば、他の活性化合物と組み合わせて用いることができる。本発明は、さらに、特に上述の疾患の処置および／または予防のための、少なくとも１種の本発明による化合物および１種またはそれ以上のさらなる活性化合物を含む医薬を提供する。例えば、そして好ましく言及し得る、組合せにおいて適する活性化合物は、ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、ベータ受容体遮断薬、カルシウム拮抗薬、ＰＤＥ阻害剤、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト、利尿剤、アスピリン、鉄サプリメント、ビタミンＢ１２および葉酸サプリメント、スタチン類、ジギタリス（ジゴキシン）誘導体、腫瘍化学療法剤および抗生物質である。
【００７３】
本発明の好ましい実施態様では、本発明による化合物を、ＡＣＥ阻害剤、例えば、そして好ましくは、エナラプリル、カプトプリル、リシノプリル、ラミプリル、デラプリル、ホシノプリル、キノプリル（quinopril）、ペリンドプリルまたはトランドプリル（trandopril）と組み合わせて投与する。
【００７４】
本発明の好ましい実施態様では、本発明による化合物を、アンジオテンシンＡＩＩアンタゴニスト、例えば、そして好ましくは、ロサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、テルミサルタンまたはエンブサルタン（embusartan）と組み合わせて投与する。
【００７５】
本発明の好ましい実施態様では、本発明による化合物を、ベータ−受容体遮断薬、例えば、そして好ましくは、プロプラノロール、アテノロール、チモロール、ピンドロール、アルプレノロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ブプラノロール、メチプラノロール、ナドロール、メピンドロール、カラザロール（carazalol）、ソタロール、メトプロロール、ベタキソロール、セリプロロール、ビソプロロール、カルテオロール、エスモロール、ラベタロール、カルベジロール、アダプロロール（adaprolol）、ランジオロール、ネビボロール、エパノロールまたはブシンドロールと組み合わせて投与する。
【００７６】
本発明の好ましい実施態様では、本発明による化合物を、カルシウム拮抗薬、例えば、そして好ましくは、ニフェジピン、アムロジピン、ベラパミルまたはジルチアゼムと組み合わせて投与する。
【００７７】
本発明の好ましい実施態様では、本発明による化合物を、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤、例えば、そして好ましくは、ミルリノン、アムリノン、ピモベンダン、シロスタゾール、シルデナフィル、バルデナフィルまたはタダラフィルと組み合わせて投与する。
【００７８】
本発明の好ましい実施態様では、本発明による化合物を、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト、例えば、そして好ましくは、スピロノラクトン、エプレレノン、カンレノンまたはカンレノン酸カリウムと組み合わせて投与する。
【００７９】
本発明の好ましい実施態様では、本発明による化合物を、利尿剤、例えば、そして好ましくは、フロセミド、ブメタニド、トルセミド、ベンドロフルメチアジド、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、ヒドロフルメチアジド、メチクロチアジド、ポリチアジド、トリクロルメチアジド、クロルタリドン、インダパミド、メトラゾン、キネタゾン、アセタゾラミド、ジクロフェナミド、メタゾラミド、グリセリン、イソソルビド、マンニトール、アミロライドまたはトリアムテレンと組み合わせて投与する。
【００８０】
本発明の好ましい実施態様では、本発明による化合物を、スタチン類のクラスからのＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、例えば、そして好ましくは、ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ロスバスタチン、セリバスタチンまたはピタバスタチンと組み合わせて投与する。
【００８１】
本発明の好ましい実施態様では、本発明による化合物を、腫瘍化学療法剤、例えば、そして好ましくは、白金錯体、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン、アルキル化剤、例えば、シクロホスファミドおよびクロラムブシル、抗代謝剤、例えば５−フルオロウラシルおよびメトトレキサート、トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、エトポシドおよびカンプトテシン、抗生物質、例えば、ドキソルビシンおよびダウノルビシン、または、キナーゼ阻害剤、例えば、ソラフェニブおよびスニチニブからなる群からのものと組み合わせて投与する。
【００８２】
本発明の好ましい実施態様では、本発明による化合物を、抗生物質、例えば、そして好ましくは、ペニシリン類、セファロスポリン類またはキノロン類、例えば、シプロフロキサシンおよびモキシフロキサシンからなる群からのものと組み合わせて投与する。
【００８３】
本発明は、さらに、少なくとも１種の本発明による化合物を、従来通りに１種またはそれ以上の不活性、非毒性の医薬的に適する補助物質と共に含む医薬、および上述の目的でのそれらの使用を提供する。
【００８４】
本発明による化合物は、全身的および／または局所的に作用できる。この目的で、それらは、適する方法で、例えば、経口で、非経腸で、肺に、鼻腔に、舌下に、舌に、頬側に、直腸に、皮膚に、経皮で、結膜に、耳に、または、インプラントもしくはステントとして、投与できる。
これらの投与経路のために、本発明による化合物を適する投与形で投与できる。
【００８５】
先行技術に準じて機能し、本発明による化合物を迅速かつ／または改変された方法で放出し、本発明による化合物を結晶形および／または無定形および／または溶解形態で含む投与形、例えば、錠剤（非被覆または被覆錠剤、例えば、胃液耐性であるか、または、遅れて溶解するか、または不溶であり、本発明による化合物の放出を制御する被覆）、口腔中で迅速に崩壊する錠剤またはフィルム／オブラート、フィルム／凍結乾燥剤またはカプセル剤（例えば、ハードまたはソフトゼラチンカプセル剤）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール剤または液剤は、経口投与に適する。
【００８６】
非経腸投与は、吸収段階を回避して（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内に）、または吸収を含めて（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）、行うことができる。非経腸投与に適する投与形は、とりわけ、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤または滅菌粉末剤形態の注射および点滴用製剤である。
【００８７】
他の投与経路には、例えば、吸入用医薬形態（とりわけ、粉末吸入器、噴霧器）、点鼻薬、液またはスプレー、舌、舌下または頬側投与用の錠剤、フィルム／オブラートまたはカプセル剤、坐剤、耳または眼用製剤、膣用カプセル剤、水性懸濁剤（ローション、振盪混合物）、親油性懸濁剤、軟膏、クリーム、経皮治療システム（例えば、パッチ）、ミルク、ペースト、フォーム、散布用粉末剤（sprinkling powder）、インプラントまたはステントが適する。
経口および非経腸投与、特に経口および静脈内投与が好ましい。
【００８８】
本発明による化合物は、上述の投与形に変換できる。これは、不活性、非毒性、医薬的に適する補助物質と混合することにより、それ自体既知の方法で行うことができる。これらの補助物質には、とりわけ、担体物質（例えば微結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば液体ポリエチレングリコール類）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えばアルブミン）、安定化剤（例えば抗酸化剤、例えばアスコルビン酸など）、色素（例えば無機色素、例えば酸化鉄など）および香味および／または臭気の矯正剤が含まれる。
【００８９】
一般に、非経腸投与の場合で約０.００１ないし１ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１ないし０.５ｍｇ／体重ｋｇの量を投与するのが、有効な結果を達成するために有利であると明らかになった。経口投与の場合、投与量は、約０.０１ないし１００ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１ないし２０ｍｇ／体重ｋｇ、ことさら特に好ましくは約０.１ないし１０ｍｇ／体重ｋｇである。
【００９０】
それにも拘わらず、特に、体重、投与経路、活性化合物に対する個体の応答、製剤の性質および投与を行う時点または間隔に応じて、上述の量から逸脱することが必要であり得る。従って、上述の最小量より少なくても十分な場合があり得、一方上述の上限を超えなければならない場合もある。比較的大量に投与する場合、これらを１日に亘る数回の個別用量に分配するのが望ましいことがある。
【００９１】
以下の実施態様の実施例は、本発明を例示説明する。本発明は、これらの実施例に限定されない。
以下の試験および実施例における百分率のデータは、断りの無い限り、重量パーセントである；部は、重量部である。液体／液体溶液の溶媒比、希釈比および濃度のデータは、各場合で体積に関するものである。
【実施例】
【００９２】
Ａ. 実施例
略語：
【表１】
0005579165.tif 000013
【００９３】
ＬＣ−ＭＳ、ＧＣ−ＭＳおよびＨＰＬＣの方法：
方法１（ＬＣ−ＭＳ）：装置：HPLC Agilent series 1100 を備えた Micromass Platform LCZ；カラム：Thermo Hypersil GOLD 3μ, 20 mm x 4 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％濃度ギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％濃度ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分１００％Ａ→０.２分１００％Ａ→２.９分３０％Ａ→３.１分１０％Ａ→５.５分１０％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.８ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００９４】
方法２（ＬＣ−ＭＳ）：装置タイプＭＳ：Micromass ZQ；装置タイプＨＰＬＣ：Waters Alliance 2795；カラム：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％濃度ギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％濃度ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分→２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００９５】
方法３（ＬＣ−ＭＳ）：装置タイプＭＳ：Micromass ZQ；装置タイプＨＰＬＣ：Waters Alliance 2795；カラム：Phenomenex Synergi 2.5μ MAX-RP 100A Mercury 20 mm x 4 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％濃度ギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％濃度ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→０.１分９０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.０分５％Ａ→４.０１分９０％Ａ；流速：２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００９６】
方法４（ＬＣ−ＭＳ）：装置：HPLC Agilent series 1100 を備えた Micromass Quattro Micro MS；カラム：Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm x 4 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％濃度ギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％濃度ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分１００％Ａ→３.０分１０％Ａ→４.０分１０％Ａ→４.０１分１００％Ａ（流速２.５ｍｌ／分）→５.００分１００％Ａ；オーブン：５０℃；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００９７】
方法５（ＬＣ−ＭＳ）：装置：Waters UPLC Acquity を備えた Micromass QuattroPremier；カラム：Thermo Hypersil GOLD 1.9μ 50 mm x 1 mm；移動相Ａ：水１ｌ＋５０％濃度ギ酸０.５ｍｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％濃度ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→０.１分９０％Ａ→１.５分１０％Ａ→２.２分１０％Ａ；流速：０.３３ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００９８】
方法６（ＨＰＬＣ）：装置：DAD 検出を備えた HP 1100；カラム：Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm；移動相Ａ：過塩素酸（７０％濃度）５ｍｌ／水１ｌ、移動相Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０分２％Ｂ→０.５分２％Ｂ→４.５分９０％Ｂ→６.５分９０％Ｂ→６.７分２％Ｂ→７.５分２％Ｂ；流速：０.７５ｍｌ／分；カラム温度：３０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００９９】
方法７（ＧＣ−ＭＳ）：装置：Micromass GCT, GC6890；カラム：Restek RTX-35, 15 m x 200 μm x 0.33 μm; 一定のヘリウム流速: 0.88 ml/分；オーブン：７０℃；入口：２５０℃；グラジエント：７０℃、３０℃／分→３１０℃（３分間維持）。
【０１００】
方法８（分取ＨＰＬＣ）：カラム：Kromasil 100 C18 5 μm, 250 mm x 20 mm；移動相Ａ：Milli-Q 水、移動相Ｂ：０.１％濃度トリフルオロ酢酸水溶液、移動相Ｃ：アセトニトリル；グラジエント：０.０分７６％Ａ、５％Ｂ、１９％Ｃ→１５分４％Ａ、９５％Ｂ、１％Ｃ→１５.１分７６％Ａ、５％Ｂ、１９％Ｃ→２０分７６％Ａ、５％Ｂ、１９％Ｃ；オーブン：４０℃；流速：２５ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１０１】
方法９（分取ＨＰＬＣ）：カラム：Sunfire C18 5 μm, 19 mm x 150 mm；移動相Ａ：０.２％濃度トリフルオロ酢酸水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０.０分９５％Ａ→８分５０％Ａ→８.０１分９５％Ａ→１２分９５％Ａ；室温；流速：２５ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１０２】
方法１０（分取ＨＰＬＣ）：カラム：Sunfire C18 5 μm, 19 mm x 150 mm；移動相Ａ：０.２％濃度トリフルオロ酢酸水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル；０分９０％Ａ→１３分９０％Ａ；オーブン：４０℃；流速：２５ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１０３】
方法１１（分取ＨＰＬＣ）：カラム：XBridge C18 5 μm, 19 mm x 150 mm；移動相Ａ：０.２％濃度ギ酸水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル；０分７５％Ａ→６分７５％Ａ；室温；流速：２５ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１０４】
方法１２（分取ＨＰＬＣ）：カラム：XBridge C18 5 μm, 19 mm x 150 mm；移動相Ａ：０.２％濃度ギ酸水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル；０分９３％Ａ→４分９３％Ａ；室温；流速：２５ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１０５】
方法１３（分取ＨＰＬＣ）：カラム：XBridge C18 5 μm, 19 mm x 150 mm；移動相Ａ：０.２％濃度トリフルオロ酢酸水溶液、移動相Ｂ：アセトニトリル；０分９０％Ａ→１２分９０％Ａ；オーブン：４０℃；流速：２５ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１０６】
出発物質
実施例１Ａ
エチル（４−シアノ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）アセテート
【化１２】
0005579165.tif 000014
１Ｈ−イミダゾール−４−カルボニトリル［Matthews et al., J. Org. Chem. 1986, 51, 3228-3231］３.３ｇ（３５.３ｍｍｏｌ）を、先ず、エタノール中の２１％濃度ナトリウムエトキシド溶液１３.２ｍｌ（１１.５ｇ、３５.３ｍｍｏｌ）に加え、エチルブロモアセテート４.３ｍｌ（６.５ｇ、３８.９ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温で１６時間撹拌する。後処理に、沈殿した固体を濾過し、濾過残渣をエタノールで洗浄し、濾液を減圧下で濃縮する。ジイソプロピルエーテルを残渣に添加し、混合物を再度濾過し、濾液をもう一度ロータリーエバポレーターで濃縮し、残渣を減圧下で乾燥させる。収量：３.８ｇ（理論値の６０％）
LC-MS (方法 1): Rt = 1.17 分; MS (ESIpos): m/z = 180 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.12 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.18 (q, 2H), 1.22 (t, 3H).
【０１０７】
実施例２Ａ
エチル２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）アセテート
【化１３】
0005579165.tif 000015
ナトリウム１２９.２ｇ（５.６ｍｍｏｌ）を、エタノール４.０ｌにゆっくりと添加する。次いで、１,２,３−１Ｈ−トリアゾール４００.０ｇ（５.６ｍｏｌ）を添加し、エチルブロモアセテート６２３ｍｌ（９３８.２ｇ、５.６ｍｏｌ）を内部温度２０−２５℃で滴下して添加する。混合物を室温で４８時間撹拌する。沈殿した固体を濾過し、エタノールを減圧下で除去し、混合物を再度濾過する。残渣を酢酸エチルに取り、濾過し、再度減圧下で濃縮し、３０ｃｍカラムでの蒸留により精製する。生成物を浴温度１４０℃、上部温度６０−１１５℃、圧力１ｍｂａｒで得る。収量：４４０.０ｇ（理論値の５０％）
HPLC (方法 6): Rt = 1.58 分;
LC-MS (方法 1): Rt = 0.71 分; MS (ESIpos): m/z = 156 [M+H]+.
【０１０８】
実施例３Ａ
エチル１Ｈ−イミダゾール−１−イルアセテート
【化１４】
0005579165.tif 000016
ナトリウム１１８.２ｇ（５.１ｍｍｏｌ）を、エタノール２.５ｌにゆっくりと添加する。イミダゾール３５０.０ｇ（５.１ｍｏｌ）およびエチルブロモアセテート５７０ｍｌ（８５８.６ｇ、５.１ｍｏｌ）を内部温度２０−２５℃で滴下して添加する。混合物を室温で２４時間撹拌する。沈殿した固体を濾過し、エタノールを減圧下で除去し、混合物を再度濾過する。残渣をカラムクロマトグラフィーによりシリカゲルで精製する（移動相酢酸エチル）。収量：６３９.０ｇ（理論値の８１％）
GC-MS (方法 7): Rt = 4.55 分; MS (ESIpos): m/z = 155 [M+H]+.
【０１０９】
実施例４Ａ
エチル（４−シアノ−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）アセテート
【化１５】
0005579165.tif 000017
エチルアジドアセテート４.１ｇ（３１.９ｍｍｏｌ）および２−クロロアクリロニトリル２.８ｇ（３１.９ｍｍｏｌ）を、水３２ｍｌ中で、浴温度８０℃で１６時間撹拌する。室温に冷却後、溶液を１Ｎ塩酸で酸性化し、酢酸エチルで抽出する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。エタノール５０ｍｌおよび濃硫酸１０滴を残渣に添加し、混合物を還流下で１６時間撹拌する。後処理に、反応混合物を減圧下で濃縮し、酢酸エチルを残渣に添加し、懸濁液を半濃縮重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させる。溶媒をロータリーエバポレーターで完全に除去し、固体を減圧下で乾燥させる。収量：１.５ｇ（理論値の２５％）
LC-MS (方法 3): Rt = 0.96 分; MS (ESIpos): m/z = 181 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.06 (s, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.19 (q, 2H), 1.22 (t, 3H).
【０１１０】
実施例５Ａ
エチル３−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）−２−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）アクリレート
【化１６】
0005579165.tif 000018
実施例３Ａの化合物３８.０ｇ（２４４.９ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドジエチルアセタール１２６ｍｌ（１０８.１ｇ、７３４.７ｍｍｏｌ）中で、浴温度９０℃で１６時間撹拌する。冷却後、混合物を減圧下で濃縮し、残渣をジイソプロピルエーテルで撹拌し、固体を濾過し、最後にジイソプロピルエーテルで洗浄する。収量：４９.０ｇ（理論値の９５％）
LC-MS (方法 2): Rt = 2.42 分; MS (ESIpos): m/z = 211 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.52 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 4.02 (q, 2H), 2.63 (br. s, 6H), 1.12 (t, 3H).
【０１１１】
実施例６Ａ
エチル３−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）−２−（４−シアノ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）アクリレート
【化１７】
0005579165.tif 000019
実施例１Ａの化合物３.８ｇ（２１.４ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミドジエチルアセタール７.４ｍｌ（６.３ｇ、４２.８ｍｍｏｌ）を、浴温度１００℃で１６時間撹拌する。後処理に、冷却した反応溶液をロータリーエバポレーターで濃縮し、残渣を減圧下で乾燥させる。収量：５.０ｇ（純度７３％、理論値の７３％）
LC-MS (方法 1): Rt = 2.69 分; MS (ESIpos): m/z = 235 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.13 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 4.03 (q, 2H), 2.69 (br. s, 6H), 1.12 (t, 3H).
【０１１２】
実施例７Ａ
エチル３−（ジメチルアミノ）−２−（４−シアノ−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）アクリレート
【化１８】
0005579165.tif 000020
実施例４Ａの化合物１.３ｇ（７.５ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミドジエチルアセタール１.４ｍｌ（１.２ｇ、８.２ｍｍｏｌ）を、浴温度１００℃で１６時間撹拌する。後処理に、冷却した反応溶液をロータリーエバポレーターで濃縮し、残渣を減圧下で乾燥させる。収量：１.５ｇ（理論値の８６％）
LC-MS (方法 4): Rt = 1.55 分; MS (ESIpos): m/z = 236 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.14 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 4.04 (q, 2H), 3.15 (br. s, 3H), 2.18 (br. s, 3H), 1.13 (t, 3h).
【０１１３】
実施例８Ａ
エチル３−（ジメチルアミノ）−２−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）アクリレート
【化１９】
0005579165.tif 000021
Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドジエチルアセタール４４.２ｍｌ（３８.０ｇ、２５７.８ｍｍｏｌ）を、実施例２Ａの化合物２０.０ｇ（１２８.９ｍｍｏｌ）に添加し、混合物を１００℃で１６時間撹拌する。室温に冷却後、反応混合物を減圧下で濃縮する。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートし、濾過し、ジエチルエーテルで洗浄する。収量：１８.０ｇ（理論値の６７％）
LC-MS (方法 4): Rt = 1.20 分; MS (ESIpos): m/z = 211 [M+H]+.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.10 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.65 (s, 1H), 4.03 (q, 2H), 3.06 (br. s, 3H), 2.10 (br. s, 3H), 1.12 (t, 3H).
【０１１４】
実施例９Ａ
４−（４−シクロブチルピペラジン−１−イル）−６−ヒドラジノピリミジン
【化２０】
0005579165.tif 000022
【０１１５】
段階ａ）：４−クロロ−６−（４−シクロブチルピペラジン−１−イル）ピリミジン
【化２１】
0005579165.tif 000023
１−シクロブチルピペラジン二塩酸塩（Zaragoza et al., J. Med. Chem. 2004, 47, 2833）１.８ｇ（８.４ｍｍｏｌ）を、先ず、水１８ｍｌに加え、Ｎ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン２.９ｍｌ（２.１ｇ、１６.９ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を室温で３０分間撹拌し、４,６−ジクロロピリミジン１.３ｇ（８.４ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を１１５℃で１時間撹拌し、室温に冷却し、酢酸エチル２５ｍｌを添加し、混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液２５ｍｌで抽出する。有機相を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。粗生成物をカラムクロマトグラフィーによりシリカゲルで精製する（移動相：ジクロロメタン／メタノール１００／３）。収量：１.９ｇ（理論値の８９％）
HPLC (方法 6): Rt = 2.79 分; MS (DCI): m/z = 254 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.32 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 3.65-3.58 (m, 4H), 2.70 (五重線, 1H), 2.27 (t, 4H), 2.00-1.93 (m, 2H), 1.87-1.75 (m, 2H), 1.67-1.55 (m, 2H).
【０１１６】
段階ｂ）：４−（４−シクロブチルピペラジン−１−イル）−６−ヒドラジノピリミジン
【化２２】
0005579165.tif 000024
室温で、ヒドラジン水和物４.４ｍｌ（４.５ｇ、８９.７ｍｍｏｌ）を、撹拌しながら、エタノール２８ｍｌ中の４−クロロ−６−（４−シクロブチルピペラジン−１−イル）ピリミジン１.９ｇ（７.５ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して添加する。反応溶液を８０℃で１６時間撹拌する。後処理に、混合物を減圧下で濃縮し、残渣をジエチルエーテルで繰り返しトリチュレートし、沈殿した固体を濾過し、減圧下で乾燥させる。次いで、残渣をカラムクロマトグラフィーによりシリカゲルで精製する（移動相ジクロロメタン／メタノール１０／２）。収量：１.５ｇ（理論値の８０％）
LC-MS (方法 6): Rt = 1.36 分; MS (ESIpos): m/z = 249 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.92 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 5.90 (NH), 4.09 (s, NH2), 3.45 (t, 4H), 2.69 (五重線, 1H), 2.26 (t, 4H), 2.00-1.93 (m, 2H), 1.82-1.75 (m, 2H), 1.67-1.60 (m, 2H).
【０１１７】
実施例１０Ａ
１−（６−ヒドラジニルピリミジン−４−イル）アゼチジン−３−オール
【化２３】
0005579165.tif 000025
【０１１８】
段階ａ）：１−（６−クロロピリミジン−４−イル）アゼチジン−３−オール
【化２４】
0005579165.tif 000026
４,６−ジクロロピリミジン７.３ｇ（４８.７ｍｍｏｌ）を、水１４０ｍｌに懸濁し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液４７ｍｌを添加する。３−ヒドロキシアゼチジン５.３ｇ（４８.７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を９０℃で３日間撹拌する。室温に冷却後、反応混合物を減圧下で濃縮し、さらに精製せずにさらに反応させる。
LC-MS (方法 5): Rt = 0.36 分; MS (ESIpos): m/z = 1.87 [M+H]+.
【０１１９】
段階ｂ）：１−（６−ヒドラジニルピリミジン−４−イル）アゼチジン−３−オール
【化２５】
0005579165.tif 000027
室温で、ヒドラジン水和物２７.２ｍｌ（２７.９ｇ、２７９.１ｍｍｏｌ）を、エタノール１００ｍｌ中の１−（６−クロロピリミジン−４−イル）アゼチジン−３−オール１０.４ｇ（５５.８ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら滴下して添加する。反応溶液を８０℃で１６時間撹拌する。後処理に、混合物を減圧下で濃縮し、沈殿を濾過し、各１０ｍｌのエタノールで２回洗浄する。収量：２.０ｇ（理論値の１９％）
LC-MS (方法 1): Rt = 2.06 分; MS (ESIpos): m/z = 194 [M+H]+.
【０１２０】
実施例１１Ａ
４−クロロ−６−ヒドラジノピリミジン
【化２６】
0005579165.tif 000028
室温で、ヒドラジン水和物１１.８ｍｌ（１２.１ｇ、２４１.６ｍｍｏｌ）を、エタノール３００ｍｌ中の４,６−ジクロロピリミジン２０.０ｇ（１３４.３ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら滴下して添加する。溶液は、ヒドラジン水和物を量り入れる間に濁り、さらなるエタノール（約４００ｍｌ）を添加する。反応溶液を室温で１２時間撹拌する。後処理に、沈殿した固体を濾過し、濾過残渣を水各１５０ｍｌで２回、そしてジエチルエーテル各１００ｍｌで２回洗浄し、生成物を減圧下で乾燥させる。濃縮した母液から、さらなる結晶性生成物画分を得る。収量：１６.８ｇ（理論値の８７％）
LC-MS (方法 1): Rt = 1.17 分; MS (ESIpos): m/z = 145 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.81 (s, 1H), 8.17 (br. s, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.48 (br. s, 2H).
【０１２１】
実施例１２Ａ
２−（６−クロロピリミジン−４−イル）−４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン塩酸塩
【化２７】
0005579165.tif 000029
実施例８Ａの化合物１０.０ｇ（４７.７ｍｍｏｌ）および実施例１１Ａの化合物８.３ｇ（５７.１ｍｍｏｌ）を、先ず、エタノール１００ｍｌに加え、トリフルオロ酢酸１.５ｍｌ（２.２ｇ、１９.０ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を還流下で１２時間撹拌する。次いで、過剰のジオキサン中の４Ｍ塩化水素溶液を、冷却した反応混合物に添加し、混合物を約１時間撹拌し、沈殿した結晶を濾過し、濾過残渣をジオキサンおよびエタノールで洗浄する。かくして得られる中間体をエタノール１５０ｍｌに溶解し、２５％濃度ナトリウムメトキシドメタノール溶液５０ｍｌを添加し、混合物を室温で２時間撹拌する。次いで、反応混合物を１Ｎ塩酸でｐＨ＝５に調節し、室温でさらに２時間撹拌し、固体を濾過し、濾過残渣をエタノールで洗浄し、生成物を減圧下で乾燥させる。収量：７.０ｇ（理論値の４９％）
LC-MS (方法 5): Rt = 1.20 分; MS (ESIpos): m/z = 264 [M+H]+.
【０１２２】
実施例１３Ａ
２−（６−クロロピリミジン−４−イル）−４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン塩酸塩
【化２８】
0005579165.tif 000030
実施例５Ａの化合物１０.０ｇ（４７.８ｍｍｏｌ）および実施例１１Ａの化合物８.３ｇ（５７.３ｍｍｏｌ）を、先ず、エタノール１００ｍｌに加え、トリフルオロ酢酸１.５ｍｌ（２.２ｇ、１９.０ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を還流下で１２時間撹拌する。沈殿した結晶を濾過し、濾過残渣をエタノールで洗浄する。中間体を減圧下で終夜乾燥させる。次いで、中間体をメタノール２０ｍｌに懸濁し、ジオキサン中の４Ｍ塩化水素溶液１００ｍｌを添加し、混合物を室温で１時間撹拌する。固体を濾過し、濾過残渣をジオキサン、酢酸エチルおよびジイソプロピルエーテルで洗浄し、生成物を減圧下で乾燥させる。収量：４.６ｇ（理論値の３２％）
HPLC (方法 6): Rt = 2.81 分; MS (ESIpos): m/z = 263 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.46 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.51 (d, 1H), 8.07-8.04 (m, 1H), 7.85-7.82 (m, 1H).
【０１２３】
実施例１４Ａ
４−（６−ヒドラジニルピリミジン−４−イル）−１,４−オキサゼパン
【化２９】
0005579165.tif 000031
【０１２４】
段階ａ）：４−（６−クロロピリミジン−４−イル）−１,４−オキサゼパン
【化３０】
0005579165.tif 000032
水４５ｍｌ中の４,６−ジクロロピリミジン３.０ｇ（２０.１ｍｍｏｌ）、１,４−オキサゼパン塩酸塩２.８ｇ（２０.１ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム６.４ｇ（６０.４ｍｍｏｌ）の混合物を、還流下で１６時間撹拌する。室温に冷却後、反応混合物を酢酸エチルで抽出する。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過する。減圧下で、濾液を乾燥するまで濃縮する。生成物を油状物として得る。収量：３.９ｇ（理論値の８６％）
LC-MS (方法 4): Rt = 1.32 分; MS (ESIpos): m/z = 214 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.33 (s, 1H), 6.86 (s, 1H), 3.99-3.52 (m, 8H), 1.84 (m, 2H).
【０１２５】
段階ｂ）：４−（６−ヒドラジニルピリミジン−４−イル）−１,４−オキサゼパン
【化３１】
0005579165.tif 000033
室温で、ヒドラジン水和物８.８ｍｌ（９.０ｇ、１８０.２ｍｍｏｌ）を、エタノール２５ｍｌ中の４−（６−クロロピリミジン−４−イル）−１,４−オキサゼパン３.９ｇ（１８.０ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら滴下して添加する。８０℃で１６時間撹拌した後、反応溶液を減圧下で濃縮する。残渣を冷エタノールでトリチュレートし、沈殿した固体を濾過し、濾過残渣をジエチルエーテル２５ｍｌで洗浄する。生成物を減圧下で乾燥させる。収量：１.４ｇ（理論値の３６％）
HPLC (方法 11): Rt = 2.48 分; MS (ESIpos): m/z = 210 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.91 (s, 1H), 7.56 (br. s, 1H), 5.81 (s, 1H), 4.12 (br. s, 2H), 3.75-3.55 (m, 8H), 1.85 (五重線, 2H).
【０１２６】
実施例
実施例１
２−［６−（４−シクロブチルピペラジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化３２】
0005579165.tif 000034
トリフルオロ酢酸１６μｌ（２３ｍｇ、０.２ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル４ｍｌ中の実施例５Ａの化合物２１１ｍｇ（１.０ｍｍｏｌ）および実施例９Ａの化合物２５０ｍｇ（１.０ｍｍｏｌ）の混合物に添加し、混合物を１００℃で２０時間撹拌する。反応混合物を減圧下で濃縮し、さらなる酢酸エチルおよびトリフルオロ酢酸（上記と同量）を添加し、混合物を１００℃で２０時間撹拌する。反応混合物を室温に冷却し、沈殿した固体を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄する。残渣をカラムクロマトグラフィーによりシリカゲルで予精製し（移動相ジクロロメタン／メタノール／アンモニア１０／２／０.２）、分取ＨＰＬＣにより精製する（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）。収量：１３７ｍｇ（理論値の３６％）
HPLC (方法 6): Rt = 2.73 分; MS (ESIpos): m/z = 367 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.40 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 3.65-3.58 (m, 4H), 2.77 (五重線, 1H), 2.38-2.35 (m, 4H), 2.01-1.96 (m, 2H), 1.89-1.79 (m, 2H), 1.67-1.62 (m, 2H).
【０１２７】
実施例２
２−［６−（４−シクロブチルピペラジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化３３】
0005579165.tif 000035
トリフルオロ酢酸１６μｌ（２３ｍｇ、０.２ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル４ｍｌ中の実施例８Ａの化合物２１１ｍｇ（１.０ｍｍｏｌ）および実施例９Ａの化合物２５０ｍｇ（１.０ｍｍｏｌ）の混合物に添加し、混合物を１００℃で２０時間撹拌する。反応混合物を減圧下で濃縮し、さらなる酢酸エチルおよびトリフルオロ酢酸（上記と同量）を添加し、混合物を１００℃で３日間撹拌する。反応混合物を室温に冷却し、沈殿した固体を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄する。残渣を水２ｍｌに懸濁し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ＝９−１０）の添加により溶解し、分取ＨＰＬＣにより精製する（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）。収量：１９５ｍｇ（理論値の５１％）
HPLC (方法 6): Rt = 2.90 分; MS (ESIpos): m/z = 368 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.41 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 3.70-3.65 (m, 4H), 3.03-2.97 (m, 1H), 2.60-2.57 (m, 4H), 2.06-2.02 (m, 2H), 1.98-1.90 (m, 2H), 1.70-1.64 (m, 2H).
【０１２８】
実施例３
１−｛２−［６−（４−シクロブチルピペラジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−３−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボニトリル
【化３４】
0005579165.tif 000036
トリフルオロ酢酸１６μｌ（２３ｍｇ、０.２ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル４ｍｌ中の実施例６Ａの化合物２３６ｍｇ（１.０ｍｍｏｌ）および実施例９Ａの化合物２５０ｍｇ（１.０ｍｍｏｌ）の混合物に添加し、混合物を１００℃で２０時間撹拌する。反応混合物を減圧下で濃縮し、さらなる酢酸エチルおよびトリフルオロ酢酸（上記と同量）を添加し、混合物を１００℃で３日間撹拌する。反応混合物を室温に冷却し、沈殿した固体を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄する。残渣を水２ｍｌに懸濁し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ＝９−１０）の添加により溶解し、分取ＨＰＬＣにより精製する（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）。収量：２１９ｍｇ（理論値の５６％）
HPLC (方法 6): Rt = 3.10 分; MS (ESIpos): m/z = 392 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.38 (d, 1H), 8.37 (d, 1H), 8.17 (d, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 3.68-3.62 (m, 4H), 3.38-3.30 (m, 4H), 2.96-2.91 (m, 1H), 2.06-2.00 (m, 2H), 1.95-1.85 (m, 2H), 1.70-1.63 (m, 2H).
【０１２９】
実施例４
１−｛２−［６−（３−ヒドロキシアゼチジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−３−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボニトリル
【化３５】
0005579165.tif 000037
トリフルオロ酢酸４６μｌ（６８ｍｇ、０.６ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル１０ｍｌ中の実施例６Ａの化合物７００ｍｇ（３.０ｍｍｏｌ）および実施例１０Ａの化合物５４１ｍｇ（３.０ｍｍｏｌ）の混合物に添加し、混合物を１００℃で１０時間撹拌する。反応混合物を減圧下で濃縮し、エタノール５ｍｌに取り、沈殿を濾過する。固体を水１０ｍｌに懸濁し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ＝９）を、固体が溶解するまで添加する。次いで、１Ｎ塩酸を使用してｐＨを７に調節し、混合物を約５ｍｌの体積に濃縮し、形成された沈殿を濾過する。残渣を水およびジイソプロピルエーテルで洗浄し、分取ＨＰＬＣ（方法８）によりクロマトグラフィーする。次いで、固体を水１０ｍｌに懸濁し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ＝９）を、固体が溶解するまで添加する。次いで、１Ｎ塩酸を使用してｐＨを７に調節し、混合物を約２.５ｍｌの体積に濃縮し、形成される沈殿を濾過する。濾液を約２ｍｌに濃縮し、再度濾過する。両方の残渣を合わせ、水および酢酸エチルで洗浄し、減圧下で乾燥させる。収量：７８ｍｇ（理論値の８％）
HPLC (方法 6): Rt = 2.90 分; MS (ESIpos): m/z = 325 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.35 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 5.80-5.75 (m, 1H), 4.63-4.58 (m, 1H), 4.24-4.20 (m, 2H), 3.75-3.73 (m, 2H).
【０１３０】
実施例５
１−｛６−［４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−オキソ−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝アゼチジン−３−カルボン酸
【化３６】
0005579165.tif 000038
アゼチジン−３−カルボン酸塩酸塩４６ｍｇ（０.３ｍｍｏｌ）を、先ず、水１ｍｌおよびエタノール０.３ｍｌの混合物に加える。実施例１３Ａの化合物１００ｍｇ（０.３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１００℃で１時間撹拌する。次いで、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を使用して、反応混合物をｐＨ＝７に調節し、１００℃で１６時間撹拌する。もう一度、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を使用して混合物をｐＨ＝７に調節し、シングルモードのマイクロ波（Emrys Optimizer）中、１５０℃で１時間反応させる。反応混合物を減圧下で濃縮し、分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）により精製する。収量：２３ｍｇ（理論値の２１％）
LC-MS (方法 8): Rt = 0.86 分; MS (ESIpos): m/z = 328 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.41 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 4.09 (t, 2H), 3.99 (t, 2H).
【０１３１】
実施例６
１−｛６−［５−オキソ−４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ピリミジン−４−イル｝アゼチジン−３−カルボン酸
【化３７】
0005579165.tif 000039
アゼチジン−３−カルボン酸塩酸塩５５ｍｇ（０.４ｍｍｏｌ）を、先ず、水２ｍｌに加える。実施例１２Ａの化合物１００ｍｇ（０.３ｍｍｏｌ）を添加し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を使用してｐＨを７に調節する。混合物を、シングルモードのマイクロ波（Emrys Optimizer）中、１５０℃で１時間反応させる。反応混合物を減圧下で濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製する（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）。収量：１５ｍｇ（理論値の１３％）
HPLC (方法 6): Rt = 2.81 分; MS (ESIpos): m/z = 329 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.42 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 4.05-3.96 (m, 2H and 2H), 3.13-3.07 (m, 1H).
【０１３２】
実施例７
４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−２−［６−（３−メチルアゼチジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化３８】
0005579165.tif 000040
３−メチルアゼチジン塩酸塩４３ｍｇ（０.４ｍｍｏｌ）、実施例１３Ａの化合物１００ｍｇ（０.３ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン１７４μｌ（１３０ｍｇ、１.０ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン２ｍｌに懸濁し、シングルモードのマイクロ波（Emrys Optimizer）中、１２０℃で４.５時間反応させる。反応混合物を減圧下で濃縮し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ＝９−１０）を添加した水に取り、分取ＨＰＬＣにより精製する（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）。収量：３０ｍｇ（理論値の３０％）
HPLC (方法 6): Rt = 3.07 分; MS (ESIpos): m/z = 298 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.25 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 4.10 (t, 2H), 3.54 (dd, 2H), 2.86-2.75 (m, 1H), 1.25 (d, 3H).
【０１３３】
実施例８
２−［６−（３−メチルアゼチジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化３９】
0005579165.tif 000041
３−メチルアゼチジン塩酸塩４３ｍｇ（０.４ｍｍｏｌ）、実施例１２Ａの化合物１００ｍｇ（０.３ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン１７４μｌ（１３０ｍｇ、１.０ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン２ｍｌに懸濁し、シングルモードのマイクロ波（Emrys Optimizer）中、１２０℃で１.５時間反応させる。反応混合物を減圧下で濃縮し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ＝９−１０）を添加した水に取り、分取ＨＰＬＣにより精製する（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）。収量：２５ｍｇ（理論値の２５％）
HPLC (方法 6): Rt = 3.00 分; MS (ESIpos): m/z = 299 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.41 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 4.11 (t, 2H), 3.56 (dd, 2H), 2.86-2.78 (m, 1H), 1.25 (d, 3H).
【０１３４】
実施例９
２−｛６−［３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル］ピリミジン−４−イル｝−４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン二塩酸塩
【化４０】
0005579165.tif 000042
Ｎ,Ｎ−ジメチルアゼチジン−３−アミン二塩酸塩２７１ｍｇ（１.５ｍｍｏｌ）、実施例１２Ａの化合物４００ｍｇ（１.５ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム８４７ｍｇ（６.１ｍｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド８ｍｌに懸濁し、１００℃で１６時間撹拌する。反応混合物を減圧下で濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製する（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％濃度トリフルオロ酢酸を添加）。分取ＨＰＬＣによりさらなる精製を実施する（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント、０.１％濃度ギ酸を添加する）。１Ｎ塩酸２ｍｌを生成物含有画分に添加し、混合物を室温で１時間撹拌する。固体を濾過し、高真空下で乾燥させる。収量：６２ｍｇ（理論値の１７％）
LC-MS (方法 5): Rt = 0.19 分; MS (ESIpos): m/z = 328 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.42 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 4.02 (t, 2H), 3.76 (dd, 2H), 3.24-3.18 (m, 1H), 2.12 (s, 6H).
【０１３５】
実施例１０
２−［６−（４,４−ジフルオロピペリジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化４１】
0005579165.tif 000043
実施例１３Ａの化合物１００ｍｇ（０.３ｍｍｏｌ）、４,４−ジフルオロピペリジン塩酸塩６３ｍｇ（０.４ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン１１６μｌ（８６ｍｇ、０.７ｍｍｏｌ）を、先ず、テトラヒドロフラン２ｍｌに加え、シングルモードのマイクロ波（Emrys Optimizer）中、１２０℃で２.５時間反応させる。減圧下で濃縮した後、残渣をアセトニトリル／水に取り、分取ＨＰＬＣにより精製する（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）。収量：８２ｍｇ（理論値の７１％）
HPLC (方法 6): Rt = 3.37 分; MS (ESIpos): m/z = 348 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.49 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 3.80 (t, 4H), 2.06 (七重線, 4H).
【０１３６】
実施例１１
２−［６−（４,４−ジフルオロピペリジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化４２】
0005579165.tif 000044
実施例１２Ａの化合物２５０ｍｇ（０.８ｍｍｏｌ）、４,４−ジフルオロピペリジン塩酸塩１５８ｍｇ（１.０ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン４３５μｌ（３２３ｍｇ、２.５ｍｍｏｌ）を、先ず、テトラヒドロフラン５ｍｌに加え、シングルモードのマイクロ波（Emrys Optimizer）中、１２０℃で３０分間反応させる。分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）による予精製後、生成物をさらにカラムクロマトグラフィーによりシリカゲルで精製する（移動相ジクロロメタン／メタノール、１０／１）。収量：２９ｍｇ（理論値の１０％）
HPLC (方法 6): Rt = 3.49 分; MS (ESIpos): m/z = 349 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.56 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 3.91-3.81 (m, 4H), 2.09 (七重線, 4H).
【０１３７】
実施例１２
１−｛２−［６−（４,４−ジフルオロピペリジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−３−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボニトリル
【化４３】
0005579165.tif 000045
水３ｍｌ中の実施例１１Ａの化合物２００ｍｇ（１.４ｍｍｏｌ）、４,４−ジフルオロピペリジン塩酸塩２６２ｍｇ（１.７ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン２８９μｌ（２１５ｍｇ、１.７ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で１６時間撹拌する。トリフルオロ酢酸５３μｌ（７９ｍｇ、０.７ｍｍｏｌ）および実施例６Ａの化合物３２４ｍｇ（１.４ｍｍｏｌ）の添加後、反応混合物を１００℃で１６時間撹拌する。沈殿した固体を濾過し、先ず水で、次いでジエチルエーテルで洗浄する。生成物を減圧下で乾燥させる。収量：１１１ｍｇ（理論値の２１％）
LC-MS (方法 4): Rt = 1.69 分; MS (ESIpos): m/z = 373 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.55 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.22 (d, 1H), 7.60 (br. s, 1H), 3.84 (br. s, 4H), 2.09 (七重線, 4H).
【０１３８】
実施例１３
１−｛２−［６−（４,４−ジフルオロピペリジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−３−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−カルボニトリル
【化４４】
0005579165.tif 000046
水３ｍｌ中の実施例１１Ａの化合物２００ｍｇ（１.４ｍｍｏｌ）、４,４−ジフルオロピペリジン塩酸塩２６２ｍｇ（１.７ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン２８９μｌ（２１５ｍｇ、１.７ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で１６時間撹拌する。トリフルオロ酢酸５３μｌ（７９ｍｇ、０.７ｍｍｏｌ）および実施例７Ａの化合物３２５ｍｇ（１.４ｍｍｏｌ）の添加後、反応混合物を１００℃で１６時間撹拌する。沈殿した固体を濾過し、先ず水で、次いでジエチルエーテルで洗浄する。生成物を減圧下で乾燥させる。収量：３４ｍｇ（理論値の７％）
LC-MS (方法 4): Rt = 1.77 分; MS (ESIpos): m/z = 374 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.24 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 3.90 (br. s, 4H), 2.12 (七重線, 4H).
【０１３９】
実施例１４
２−［６−（３,３−ジフルオロピロリジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化４５】
0005579165.tif 000047
実施例１３Ａの化合物１００ｍｇ（０.３ｍｍｏｌ）、３,３−ジフルオロピロリジン塩酸塩５８ｍｇ（０.４ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン１７５μｌ（１３０ｍｇ、１.０ｍｍｏｌ）を、先ず、テトラヒドロフラン２ｍｌに加え、シングルモードのマイクロ波（Emrys Optimizer）中、１２０℃で１時間反応させる。減圧下で濃縮した後、残渣をアセトニトリル／水に取り、分取ＨＰＬＣにより精製する（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）。収量：１１１ｍｇ（理論値の９９％）
HPLC (方法 6): Rt = 3.18 分; MS (ESIpos): m/z = 334 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, メタノール-d4): δ = 8.41 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 3.91 (t, 2H), 3.76 (t, 2H), 2.55 (七重線, 2H).
【０１４０】
実施例１５
２−［６−（３,３−ジフルオロピロリジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化４６】
0005579165.tif 000048
実施例１２Ａの化合物１００ｍｇ（０.８ｍｍｏｌ）、３,３−ジフルオロピロリジン塩酸塩５７ｍｇ（０.４ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン１７４μｌ（１２９ｍｇ、１.０ｍｍｏｌ）を、先ず、テトラヒドロフラン２ｍｌに加え、シングルモードのマイクロ波（Emrys Optimizer）中、１２０℃で３０分間反応させる。減圧下で濃縮した後、残渣をアセトニトリル／水に取り、分取ＨＰＬＣにより精製する（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）。収量：１３ｍｇ（理論値の１２％）
HPLC (方法 6): Rt = 3.33 分; MS (ESIpos): m/z = 335 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.42 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.72-7.66 (m, 3H), 3.87 (t, 2H), 3.65 (t, 2H), 2.64-2.50 (m, 部分的にDMSOシグナルの下, 2H).
【０１４１】
実施例１６
１−｛２−［６−（３,３−ジフルオロピロリジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−３−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボニトリル
【化４７】
0005579165.tif 000049
水３ｍｌ中の、実施例１１Ａの化合物２００ｍｇ（１.４ｍｍｏｌ）、３,３−ジフルオロピロリジン塩酸塩２３８ｍｇ（１.７ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン２８９μｌ（２１５ｍｇ、１.７ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で１６時間撹拌する。トリフルオロ酢酸５３μｌ（７９ｍｇ、０.７ｍｍｏｌ）および実施例６Ａの化合物３２４ｍｇ（１.４ｍｍｏｌ）の添加後、反応混合物を１００℃で１６時間撹拌する。１Ｎ塩酸１ｍｌを反応混合物に添加する。得られる沈殿した粗生成物の塩酸塩を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させる。粗生成物は、依然として未反応の出発物質（実施例１１Ａの化合物）を含有する。従って、粗生成物を、Ｎ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン１０８μｌ（８０ｍｇ、０.６ｍｍｏｌ）、３,３−ジフルオロピロリジン塩酸塩１０ｍｇ（０.１ｍｍｏｌ）および水２ｍｌと、シングルモードのマイクロ波（Emrys Optimizer）中、１７０℃で１５分間反応させる。反応溶液を分取ＨＰＬＣにより精製する（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）。収量：３０ｍｇ（理論値の６％）
LC-MS (方法 4): Rt = 1.58 分; MS (ESIpos): m/z = 359 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.55 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.21 (d, 1H), 7.26 (br. s, 1H), 3.99 (t, 2H), 3.75 (br. s, 2H), 2.66-2.54 (m, 部分的にDMSOシグナルの下, 2H).
【０１４２】
実施例１７
１−｛２−［６−（３,３−ジフルオロピロリジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−３−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−カルボニトリル
【化４８】
0005579165.tif 000050
水３ｍｌ中の実施例１１Ａの化合物２００ｍｇ（１.４ｍｍｏｌ）、３,３−ジフルオロピロリジン塩酸塩２３８ｍｇ（１.７ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン２８９μｌ（２１５ｍｇ、１.７ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で１６時間撹拌する。トリフルオロ酢酸５３μｌ（７９ｍｇ、０.７ｍｍｏｌ）および実施例７Ａの化合物３２５ｍｇ（１.４ｍｍｏｌ）の添加後、反応混合物を１００℃で１６時間撹拌する。沈殿した固体を濾過し、先ず水で、次いでジエチルエーテルで洗浄する。生成物を減圧下で乾燥させる。収量：１３７ｍｇ（理論値の２７％）
LC-MS (方法 4): Rt = 1.66 分; MS (ESIpos): m/z = 360 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.25 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.21 (br. s, 1H), 4.06 (t, 2H), 3.82 (br. s, 2H), 2.69-2.55 (m, 部分的にDMSOシグナルの下, 2H).
【０１４３】
実施例１８
２−［６−（３,３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化４９】
0005579165.tif 000051
実施例１３Ａの化合物１００ｍｇ（０.３ｍｍｏｌ）、３,３−ジフルオロアゼチジン塩酸塩５２ｍｇ（０.４ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン１７５μｌ（１３０ｍｇ、１.０ｍｍｏｌ）を、先ず、テトラヒドロフラン２ｍｌに加え、シングルモードのマイクロ波（Emrys Optimizer）中、１２０℃で３時間反応させる。沈殿した固体を濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。残渣をアセトニトリル／水に取り、分取ＨＰＬＣにより精製する（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）。収量：３６ｍｇ（理論値の３２％）
HPLC (方法 6): Rt = 3.00 分; MS (ESIpos): m/z = 320 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.42 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 4.49 (t, 4H).
【０１４４】
実施例１９
２−［６−（３,３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化５０】
0005579165.tif 000052
実施例１２Ａの化合物１００ｍｇ（０.３ｍｍｏｌ）、３,３−ジフルオロアゼチジン塩酸塩５２ｍｇ（０.４ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン１７４μｌ（１３０ｍｇ、１.０ｍｍｏｌ）を、先ず、テトラヒドロフラン２ｍｌに加え、シングルモードのマイクロ波（Emrys Optimizer）中、１２０℃で３０分間反応させる。減圧下で濃縮した後、残渣をアセトニトリル／水に取り、分取ＨＰＬＣにより精製する（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）。収量：３６ｍｇ（理論値の３４％）
HPLC (方法 6): Rt = 3.20 分; MS (ESIpos): m/z = 321 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.42 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.71 (s, 2H), 7.62 (s, 1H), 4.46 (t, 4H).
【０１４５】
実施例２０
１−｛２−［６−（３,３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−３−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボニトリル
【化５１】
0005579165.tif 000053
水３ｍｌ中の実施例１１Ａの化合物１２０ｍｇ（０.８ｍｍｏｌ）、３,３−ジフルオロアゼチジン塩酸塩１２９ｍｇ（１.０ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン１７４μｌ（１２９ｍｇ、１.０ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で１６時間撹拌する。トリフルオロ酢酸３２μｌ（４７ｍｇ、０.４ｍｍｏｌ）および実施例６Ａの化合物１９４ｍｇ（０.８ｍｍｏｌ）の添加後、反応混合物を１００℃で１６時間撹拌する。沈殿した固体を濾過し、先ず水で、次いでジエチルエーテルで洗浄する。生成物を減圧下で乾燥させる。収量：３２ｍｇ（理論値の１１％）
LC-MS (方法 4): Rt = 1.48 分; MS (ESIpos): m/z = 345 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.80-8.08 (m, 4H), 7.25 (s, 1H), 4.61 (br. s, 4H).
【０１４６】
実施例２１
１−｛２−［６−（３,３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）ピリミジン−４−イル］−３−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−カルボニトリル
【化５２】
0005579165.tif 000054
水３ｍｌ中の実施例１１Ａの化合物１２０ｍｇ（０.８ｍｍｏｌ）、３,３−ジフルオロアゼチジン塩酸塩１２９ｍｇ（１.０ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン１７４μｌ（１２９ｍｇ、１.０ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で１６時間撹拌する。トリフルオロ酢酸３２μｌ（４７ｍｇ、０.４ｍｍｏｌ）および実施例７Ａの化合物１９４ｍｇ（０.８ｍｍｏｌ）の添加後、反応混合物を１００℃で１６時間撹拌する。沈殿した固体を濾過し、先ず水で、次いでジエチルエーテルで洗浄する。生成物を減圧下で乾燥させる。収量：５１ｍｇ（理論値の１８％）
LC-MS (方法 4): Rt = 1.56 分; MS (ESIpos): m/z = 346 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.26 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 4.69 (t, 4H).
【０１４７】
実施例２２
４−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−２−［６−（１,４−オキサゼパン−４−イル）ピリミジン−４−イル］−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン塩酸塩
【化５３】
0005579165.tif 000055
水３ｍｌ中の実施例５Ａの化合物２００ｍｇ（１.０ｍｍｏｌ）、実施例１４Ａの化合物２００ｍｇ（１.０ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸３７μｌ（５４ｍｇ、０.５ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で１６時間撹拌する。分取ＨＰＬＣによる予精製（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）の後、粗生成物を１Ｎ塩酸１ｍｌと撹拌し、濾過し、ジエチルエーテルで洗浄する。生成物を減圧下で乾燥させる。収量：２１ｍｇ（理論値の６％）
LC-MS (方法 4): Rt = 0.95 分; MS (ESIpos): m/z = 364 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.46 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.06 (t, 1H), 7.83 (t, 1H), 7.50-7.33 (m, 1H), 4.05 (br. s, 2H), 3.91-3.70 (m, 4H), 3.68 (t, 2H), 2.04-1.73 (m, 2H).
【０１４８】
実施例２３
２−［６−（１,４−オキサゼパン−４−イル）ピリミジン−４−イル］−４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン塩酸塩
【化５４】
0005579165.tif 000056
プロパン−２−オール４ｍｌ中の実施例１２Ａの化合物４００ｍｇ（１.３ｍｍｏｌ）および１,４−オキサゼパン塩酸塩２２０ｍｇ（１.６ｍｍｏｌ）の混合物を、シングルモードのマイクロ波（Emrys Optimizer）中、１１５℃で３０分間反応させる。Ｎ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン２３２μｌ（１７２ｍｇ、１.３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をシングルモードのマイクロ波（Emrys Optimizer）中、１１５℃で２０分間反応させる。減圧下で濃縮した後、残渣をアセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸に取り、分取ＨＰＬＣによりクロマトグラフィーする（方法９）。ＨＰＬＣ分離から得られるトリフルオロ酢酸塩を凍結乾燥し、１Ｎ塩酸２ｍｌを使用して塩酸塩に変換する。収量：７ｍｇ（理論値の１％）
LC-MS (方法 4): Rt = 1.20 分; MS (ESIpos): m/z = 329 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.54 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.35 (br. s, 1H), 4.14-3.69 (m, 6H), 3.67 (t, 2H), 2.03-1.77 (m, 2H).
【０１４９】
実施例２４
２−［６−（１,４−オキサゼパン−４−イル）ピリミジン−４−イル］−４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化５５】
0005579165.tif 000057
テトラヒドロフラン／エタノール（１／１）１０ｍｌ中の実施例１２Ａの化合物５００ｍｇ（１.７ｍｍｏｌ）、１,４−オキサゼパン塩酸塩６８８ｍｇ（５.０ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン１.４ｍｌ（１０７７ｍｇ、８.３ｍｍｏｌ）の混合物を、シングルモードのマイクロ波（Emrys Optimizer）中、１４０℃で３０分間反応させる。分取ＨＰＬＣによる予精製（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）の後、粗生成物をアセトニトリル／トリフルオロ酢酸に取り、分取ＨＰＬＣ（方法１０）によりクロマトグラフィーする。ＨＰＬＣ分離から得られるトリフルオロ酢酸塩を凍結乾燥し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を使用してｐＨ＝７−８に調節する。生成物を分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）により単離する。収量：１７６ｍｇ（理論値の３１％）
LC-MS (方法 4): Rt = 1.19 分; MS (ESIpos): m/z = 329 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.41 (d, 1H), 8.33 (d, 1H), 7.78 (br. s, 1H), 7.72-7.70 (m, 2H), 3.91-3.65 (m, 6H), 3.62 (t, 2H), 1.95-1.83 (m, 2H).
【０１５０】
実施例２５
１−｛２−［６−（１,４−オキサゼパン−４−イル）ピリミジン−４−イル］−３−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボニトリル
【化５６】
0005579165.tif 000058
水３ｍｌ中の実施例６Ａの化合物２００ｍｇ（０.９ｍｍｏｌ）、実施例１４Ａの化合物１７８ｍｇ（０.９ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸３３μｌ（４９ｍｇ、０.４ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で１６時間撹拌する。沈殿した固体を濾過し、先ず水で、次いでジエチルエーテルで洗浄する。生成物を減圧下で乾燥させる。収量：１２０ｍｇ（理論値の４０％）
HPLC (方法 6): Rt = 3.27 分; MS (ESIpos): m/z = 353 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.52 (s, 1H), 8.42 (d, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.19 (d, 1H), 7.39 (br. s, 1H), 4.14-3.70 (m, 6H), 3.66 (t, 2H), 2.05-1.68 (m, 2H).
【０１５１】
実施例２６
１−｛２−［６−（１,４−オキサゼパン−４−イル）ピリミジン−４−イル］−３−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−カルボニトリル
【化５７】
0005579165.tif 000059
水３ｍｌ中の実施例７Ａの化合物２００ｍｇ（０.９ｍｍｏｌ）、実施例１４Ａの化合物１７８ｍｇ（０.９ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸３３μｌ（４９ｍｇ、０.４ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で１６時間撹拌する。沈殿した固体を濾過し、先ず水で、次いでジエチルエーテルで洗浄する。生成物を減圧下で乾燥させる。収量：８０ｍｇ（理論値の２７％）
LC-MS (方法 4): Rt = 1.40 分; MS (ESIpos): m/z = 354 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.22 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.45-7.26 (m, 1H), 4.06 (br. s, 2H), 3.92-3.71 (m, 4H), 3.68 (t, 2H), 2.06-1.74 (m, 2H).
【０１５２】
実施例２７
２−［６−（１,２−オキサジナン−２−イル）ピリミジン−４−イル］−４−（１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル）−１,２−ジヒドロ−３Ｈ−ピラゾール−３−オン
【化５８】
0005579165.tif 000060
テトラヒドロフラン４ｍｌ中の実施例１２Ａの化合物２００ｍｇ（０.７ｍｍｏｌ）、１,２−オキサジナン塩酸塩［Bhat et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2 2000, 7, 1435-1446］９９ｍｇ（０.８ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン３４８μｌ（２５８ｍｇ、２.０ｍｍｏｌ）の混合物を、１４０℃で、シングルモードのマイクロ波（Emrys Optimizer）中、３０分間反応させる。分取ＨＰＬＣによる予精製（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）の後、粗生成物をアセトニトリル／水／メタノールに取り、分取ＨＰＬＣ（方法１１）によりクロマトグラフィーする。ＨＰＬＣ分離から得られるギ酸塩を凍結乾燥し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を使用してｐＨ＝７−８に調節する。生成物を分取ＨＰＬＣ（ＲＰ１８カラム；移動相：アセトニトリル／水グラジエント）により単離する。収量：２３ｍｇ（理論値の１１％）
LC-MS (方法 4): Rt = 1.38 分; MS (ESIpos): m/z = 315 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.58 (d, 1H), 8.42 (d, 1H), 8.40 (br. s, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.66 (br. s, 1H), 4.09 (t, 2H), 3.98 (t, 2H), 1.86-1.68 (m, 4H).
【０１５３】
実施例２８
１−｛２−［６−（１,２−オキサジナン−２−イル）ピリミジン−４−イル］−３−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボニトリル
【化５９】
0005579165.tif 000061
水３ｍｌ中の実施例１１Ａの化合物２００ｍｇ（１.４ｍｍｏｌ）、１,２−オキサジナン塩酸塩［Bhat et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2 2000, 7, 1435-1446］２０５ｍｇ（１.７ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン２８９μｌ（２１５ｍｇ、１.７ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で１.５時間撹拌する。トリフルオロ酢酸５９μｌ（４９ｍｇ、０.４ｍｍｏｌ）および実施例６Ａの化合物３２４ｍｇ（１.４ｍｍｏｌ）の添加後、反応混合物を１００℃で１６時間撹拌する。沈殿した固体を濾過し、先ず水で、次いでジエチルエーテルで洗浄する。生成物を減圧下で乾燥させる。収量：１９９ｍｇ（理論値の３９％）
LC-MS (方法 5): Rt = 0.87 分; MS (ESIpos): m/z = 339 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.57 (d, 1H), 8.45 (d, 1H), 8.40 (br. s, 1H), 8.23 (d, 1H), 7.70 (br. s, 1H), 4.07 (t, 2H), 3.96 (t, 2H), 1.85-1.65 (m, 4H).
【０１５４】
実施例２９
１−｛２−［６−（１,２−オキサジナン−２−イル）ピリミジン−４−イル］−３−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−カルボニトリル
【化６０】
0005579165.tif 000062
水３ｍｌ中の実施例１１Ａの化合物２００ｍｇ（１.４ｍｍｏｌ）、１,２−オキサジナン塩酸塩［Bhat et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2 2000, 7, 1435-1446］２０５ｍｇ（１.７ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−（プロパン−２−イル）プロパン−２−アミン２８９μｌ（２１５ｍｇ、１.７ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で１.５時間撹拌する。トリフルオロ酢酸５９μｌ（４９ｍｇ、０.４ｍｍｏｌ）および実施例７Ａの化合物３２５ｍｇ（１.４ｍｍｏｌ）の添加後、反応混合物を１００℃で１６時間撹拌する。沈殿した固体を濾過し、先ず水で、次いでジエチルエーテルで洗浄する。生成物を減圧下で乾燥させる。収量：１２２ｍｇ（理論値の２４％）
LC-MS (方法 4): Rt = 1.66 分; MS (ESIpos): m/z = 340 [M+H]+;
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.28 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.60 (br. s, 1H), 4.12 (t, 2H), 4.03 (t, 2H), 1.88-1.70 (m, 4H).
【０１５５】
Ｂ. 薬理活性の評価
本発明による化合物の薬理特性は、以下のアッセイで立証できる：
略号：
【表２】
0005579165.tif 000063
【０１５６】
１. ＨＩＦプロリル４−ヒドロキシラーゼ阻害剤の活性および選択性を決定するためのインビトロ試験
１.ａ）ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼの活性の阻害：
ヒドロキシル化ＨＩＦは、フォンヒッペル・リンダウタンパク質−エロンジンＢ−エロンジンＣ複合体（ＶＢＣ複合体）に特異的に結合する。この相互作用は、保存されているプロリル基でＨＩＦがヒドロキシル化されている場合にのみ生じる。それは、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ活性の生化学的測定の基礎である。本試験は、記載された通りに実施する［Oehme F., Jonghaus W., Narouz-Ott L., Huetter J., Flamme I., Anal. Biochem. 330 (1), 74-80 (2004)]：
【０１５７】
NeutrAvidin HBC (Pierce）で被覆した透明な９６ウェルマイクロタイタープレートを、ブロッカーのカゼインと３０分間インキュベートする。次いで、プレートを、各回ウェル当たり２００μｌの洗浄バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７.５、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１０％（ｖ／ｖ）ブロッカーカゼイン、０.０５％（ｖ／ｖ）Tween 20）で３回洗浄する。ビオチン−ＤＬＤＬＥＭＬＡＰＹＩＰＭＤＤＤＦＱＬ（Eurogentec, 4102 Seraing, Belgium）のペプチドを、４００ｎＭの濃度で、洗浄バッファー１００μｌ中で添加する。このペプチドは、プロリルヒドロキシル化の基質として働き、マイクロタイタープレートに結合する。６０分間インキュベートした後、プレートを洗浄バッファーで３回洗浄し、ブロッカーカゼイン中の１ｍＭビオチンと３０分間インキュベートし、次いで、洗浄バッファーで再度３回洗浄する。
【０１５８】
プロリルヒドロキシラーゼ反応を実施するために、プレートに結合したペプチド基質を、プロリルヒドロキシラーゼを含有する細胞溶解物と共に１ないし６０分間インキュベートする。反応は、１００μｌの反応バッファー（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７.５、５ｍＭ ＫＣｌ、１.５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１μＭ−１ｍＭ ２−オキソグルタレート、１０μＭ ＦｅＳＯ４、２ｍＭアスコルビン酸塩）中、室温で行う。反応混合物は、さらに、様々な濃度の試験しようとするプロリルヒドロキシラーゼ阻害剤を含有する。試験物質は、好ましくは、排他的にではないが、１ｎＭないし１００μＭの濃度で用いる。洗浄バッファーでプレートを３回洗浄することにより、反応を停止する。
【０１５９】
プロリルヒドロキシル化の定量的測定のために、８０μｌの結合バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７.５、１２０ｍＭ ＮａＣｌ）中の大腸菌由来のチオレドキシンおよびＶＢＣ複合体の両方を含有する融合タンパク質を添加する。１５分後、結合バッファー中のウサギ由来ポリクローナル抗チオレドキシン抗体の溶液１０μｌを添加する。さらに３０分後、結合バッファー中のホースラディッシュペルオキシダーゼに結合した抗ウサギ免疫グロブリンの溶液１０μｌを添加する。室温で３０分間インキュベートした後、結合していないＶＢＣ複合体および抗体を除去するために、プレートを洗浄バッファーで３回洗浄する。結合したＶＢＣ複合体の量を測定するために、プレートをＴＭＢと１５分間インキュベートする。呈色反応を、１Ｍ硫酸１００μｌの添加により終わらせる。結合したＶＢＣ複合体の量は、４５０ｎｍでの吸光度の測定により決定する。それは、ペプチド基質中のヒドロキシル化プロリンの量に比例する。
【０１６０】
あるいは、ユーロピウムに結合したＶＢＣ複合体（Perkin Elmer）を、プロリルヒドロキシル化の検出に使用できる。この場合、結合したＶＢＣ複合体の量は、時間に対する蛍光により測定する。［３５Ｓ］−メチオニンで標識されたＶＢＣ複合体の使用もさらに可能である。このために、放射性標識ＶＢＣ複合体を、網状赤血球の溶解物におけるインビトロ転写−翻訳により調製できる。
【０１６１】
実施態様の実施例は、この試験において、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼの活性を＜３０μＭのＩＣ５０値で阻害する。実施態様の実施例についての代表的なＩＣ５０値を、下表１に再現する：
表１
【表３】
0005579165.tif 000064
【０１６２】
１.ｂ）細胞の機能的インビトロ試験：
本発明による化合物の活性を、組換え細胞株を利用して定量する。この細胞は、元々は、ヒト肺癌細胞株（A549、ATCC: American Type Culture Collection, Manassas, VA 20108, USA）に由来する。試験細胞株を、人工最小プロモーターの制御下にフォチナス・ピラリス（Photinus pyralis）ルシフェラーゼ（以下、ルシフェラーゼと呼ぶ）のレポーター遺伝子を含有するベクターで、安定に形質移入する。最小プロモーターは、ＴＡＴＡボックスの上流に２個の低酸素応答エレメントを含む［Oehme F., Ellinghaus P., Kolkhof P., Smith T.J., Ramakrishnan S., Huetter J., Schramm M., Flamme I., Biochem. Biophys. Res. Commun. 296 (2), 343-9 (2002)］。低酸素（例えば、１％酸素の存在下で２４時間培養する）の影響下で、または、非選択的ジオキソゲナーゼ阻害剤（例えば濃度１００μＭのデスフェリオキサミン、濃度１００μＭの塩化コバルトまたは濃度１ｍＭのＮ−オキサリルグリシンジエチルエステル）の作用下で、試験細胞株はルシフェラーゼを産生し、それは、適する生物発光試薬（例えば Steady-Glo（登録商標） Luciferase Assay System, Promega Corporation, Madison, WI 53711, USA）および適当なルミノメーターを利用して検出および定量できる。
【０１６３】
試験方法：試験前日に、３８４−または１,５３６−ウェルマイクロタイタープレート中の正確に算出された量の培養培地（ＤＭＥＭ、１０％ＦＣＳ、２ｍＭグルタミン）に細胞を播き、細胞インキュベーター中で維持する（９６％大気湿度、５％ｖ／ｖＣＯ２、３７℃）。試験当日に、試験物質を漸加的濃度で培養培地に添加する。負の対照に供するバッチの細胞には、試験物質を添加しない。細胞の阻害剤に対する感受性を測定するための正の対照として、例えばデスフェリオキサミンを最終濃度１００μＭで添加する。試験物質をマイクロタイタープレートのウェルに移してから６ないし２４時間後に、得られる光シグナルをルミノメーターで測定する。測定値を利用して用量／効果の関係をプロットする。これは、最大半量の活性濃度（ＥＣ５０値と呼ばれる）決定の基礎として役立つ。
【０１６４】
１.ｃ）遺伝子発現の変化についての細胞の機能的インビトロ試験：
試験物質による処理後のヒト細胞株における特異的ｍＲＮＡの発現の変化を調べるために、以下の細胞株を６または２４ウェルプレートで培養する：ヒト肝臓癌細胞（HUH, JCRB Cell Bank, Japan）、ヒト胎児由来腎臓線維芽細胞（human embryonal kidney fibroblast）（HEK/293, ATCC, Manassas, VA 20108, USA）、ヒト子宮頸癌細胞（HeLa, ATCC, Manassas, VA 20108, USA）、ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC, Cambrex, East Rutherford, New Jersey 07073, USA）。試験物質添加の２４時間後、細胞をリン酸緩衝塩水で洗浄し、適当な方法（例えば Trizol（登録商標）試薬、Invitrogen GmbH, 76131 Karlsruhe, Germany）を使用して、それらから総ＲＮＡを得る。
【０１６５】
典型的な分析実験のために、かくして得られた総ＲＮＡ各１μｇを、ＤＮａｓｅＩで分解し、適する逆転写反応（ImProm-II Reverse Transcription System, Promega Corporation, Madison, WI 53711, USA）を使用して、相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に翻訳する。かくして得られたｃＤＮＡバッチの２.５％を、各場合でポリメラーゼ連鎖反応に使用する。調べようとする遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルを、ABI Prism 7700 配列検出装置（Applied Biosystems, Inc.）を使用して、リアルタイム定量的ポリメラーゼ連鎖反応を利用して調べる [TaqMan-PCR; Heid C.A., Stevens J., Livak K.J., Williams P.M., Genome Res. 6 (10), 986-94 (1996)]。ここで使用するプライマー−プローブの組合せは、Primer Express 1.5 Software (Applied Biosystems, Inc.）を利用して生じさせる。特に、エリスロポエチン、カルボアンヒドラーゼＩＸ、ラクテートデヒドロゲナーゼＡおよび血管内皮細胞増殖因子のｍＲＮＡを調べる。
【０１６６】
本発明による物質は、ヒト起源の細胞において、低酸素誘導遺伝子のｍＲＮＡの有意な用量依存的増加を導く。
【０１６７】
２. 心血管系の作用を検出するためのインビボ試験
２.ａ）遺伝子発現の変化についてのインビボ試験：
適当な溶媒に溶解した試験化合物を、マウスまたはラットに、胃管投与により経口で、腹腔内に、または、静脈内に投与する。典型的な投与量は、体重１ｋｇ当たり投与毎に０.１、０.５、１、５、１０、２０、５０、１００および３００ｍｇの物質である。対照動物は、溶媒のみを受容する。試験物質投与の４、８または２４時間後、動物をイソフルランの過剰投与および続く頸部の骨折により殺し、調べようとする器官を取り出す。器官の各部分を液体窒素中で瞬間凍結（shock-freeze）する。Ｂ.１.ａ）で記載した通りに、器官の各部分から総ＲＮＡを得、これをｃＤＮＡに翻訳する。調べようとする遺伝子のｍＲＮＡ発現レベルを、ABI Prism 7700 配列検出装置 (Applied Biosystems, Inc.）を使用して、リアルタイム定量的ポリメラーゼ連鎖反応［TaqMan-PCR; Heid C.A., Stevens J., Livak K.J., Williams P.M., Genome Res. 6 (10), 986-94 (1996)] を利用して調べる。
【０１６８】
本発明による物質は、経口または非経腸投与の後に、プラセボ対照と比較して、腎臓におけるエリスロポエチンのｍＲＮＡの有意な用量依存的増加を導く。
【０１６９】
２.ｂ）血清中のエリスロポエチンレベルの測定：
適当な溶媒中の試験物質を、マウスまたはラットに、腹腔内または経口で、１日１回または２回投与する。典型的な投与量は、体重１ｋｇ当たり投与毎に０.１、０.５、１、５、１０、２０、５０、１００および３００ｍｇの物質である。プラセボ対照動物は、溶媒のみを受容する。物質投与前および最後の投与の４時間後、血液５０μｌを、眼窩静脈叢または尾静脈から、短時間の麻酔下で動物から採取する。リチウムヘパリンの添加により、血液を非凝固性にする。遠心分離により血漿を得る。血漿中のエリスロポエチン含有量を、エリスロポエチン−ＥＬＩＳＡ（Quantikine（登録商標）mouse Epo Immunoassay, R&D Systems, Inc., Minneapolis, USA）を製造業者の指示に従い利用して測定する。マウスエリスロポエチンについて記録された参照測定を利用して、測定値をｐｇ／ｍｌに変換する。
【０１７０】
本発明による物質は、経口または非経腸投与の後に、開始時の値およびプラセボ対照と比較して、血漿エリスロポエチンの有意な用量依存的増加を導く。
【０１７１】
２.ｃ）末梢血の細胞組成の検定：
適当な溶媒中の試験物質を、マウスまたはラットに、腹腔内または経口で、１日１回または２回、数日間投与する。典型的な投与量は、体重１ｋｇ当たり投与毎に、例えば０.１、０.５、１、５、１０、２０、５０、１００および３００ｍｇの物質である。対照動物は、溶媒のみを受容する。研究終了時に、眼の隅の静脈叢または尾静脈から、短時間の麻酔下で動物から血液を採取し、クエン酸ナトリウムの添加により非凝固性にする。血液サンプル中の赤血球、白血球および血小板の濃度を、適当な電子的測定機器で測定する。網状赤血球の濃度を、各場合で１,０００個の赤血球の顕微鏡によるスクリーニングにより、この目的に適する染色液 (KABE Labortechnik, Nuembrecht）で染色した血液スメアを利用して測定する。ヘマトクリットの決定のために、ヘマトクリット用キャピラリーを利用して血液を眼窩静脈叢から採取し、この目的に適する遠心機におけるキャピラリーの遠心分離後に、ヘマトクリット値を手動で読み取る。
【０１７２】
本発明による物質は、経口および非経腸投与の後に、開始時の値およびプラセボ対照と比較して、ヘマトクリット、赤血球数および網状赤血球の有意な用量依存的増加を導く。
【０１７３】
３. 溶解度の測定
出発溶液（当初溶液）の調製：
少なくとも１.５ｍｇの試験物質を、適合するスクリューキャップおよび隔壁を有するWide Mouth 10 mm Screw V-Vial（Glastechnik Graefenroda GmbH より、Art. No. 8004-WM-H/V15μ）に正確に量り入れ、ＤＭＳＯを添加して５０ｍｇ／ｍｌの濃度とし、混合物を３０分間ボルテックスする。
【０１７４】
較正溶液の調製：
必要とされるピペット操作の段階を、９６ウェルの 1.2 ml Deep Well Plate（ＤＷＰ）中で、液体取扱いロボットを使用して実施する。使用する溶媒は、アセトニトリル／水８：２の混合物である。
較正溶液の出発溶液（原液）の調製：溶媒混合物８３３μｌを、当初溶液（濃度＝６００μｇ／ｍｌ）１０μｌに添加し、混合物をホモジナイズする。各試験物質につき、別々のＤＷＰで１：１００希釈物を調製し、希釈物をホモジナイズする。
較正溶液５（６００ｎｇ／ｍｌ）：溶媒混合物２７０μｌを、原液３０μｌに添加し、混合物をホモジナイズする。
較正溶液４（６０ｎｇ／ｍｌ）：溶媒混合物２７０μｌを、３０μｌの較正溶液５に添加し、混合物をホモジナイズする。
較正溶液３（１２ｎｇ／ｍｌ）：溶媒混合物４００μｌを、１００μｌの較正溶液４に添加し、混合物をホモジナイズする。
較正溶液２（１.２ｎｇ／ｍｌ）：溶媒混合物２７０μｌを、３０μｌの較正溶液３に添加し、混合物をホモジナイズする。
較正溶液１（０.６ｎｇ／ｍｌ）：溶媒混合物１５０μｌを、１５０μｌの較正溶液２に添加し、混合物をホモジナイズする。
【０１７５】
サンプル溶液の調製：
必要とされるピペット操作の段階を、１.２ｍｌの９６ウェルのＤＷＰ中で、液体取扱いロボットを使用して実施する。１０００μｌのＰＢＳバッファーｐＨ６.５を、原液１０.１μｌに添加する。（ＰＢＳバッファーｐＨ６.５：塩化ナトリウム６１.８６ｇ、リン酸二水素ナトリウム３９.５４ｇ、および、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液８３.３５ｇを、１ｌのメスフラスコに量り入れ、フラスコを水で満たし、混合物を約１時間撹拌する。この溶液から、５００ｍｌを５ｌのメスフラスコに添加し、フラスコを水で満たす。１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を使用して、ｐＨを６.５に調節する。）
【０１７６】
実施：
必要とされるピペット操作の段階を、９６ウェルの１.２ｍｌのＤＷＰ中で、液体取扱いロボットを使用して実施する。可変温度シェーカーを使用して、この方法で調製されたサンプル溶液を、２０℃および１４００ｒｐｍで２４時間振盪する。これらの溶液から、各場合で１８０μｌを取り出し、Beckman Polyallomer 遠心管に移す。これらの溶液を約２２３０００ｘｇで１時間遠心分離する。各サンプル溶液から、上清１００μｌを取り出し、ＰＢＳバッファー６.５で１：１０および１：１０００に希釈する。
【０１７７】
分析：
サンプルを、ＨＰＬＣ／ＭＳ−ＭＳにより分析する。試験化合物の５点較正曲線を使用して、定量を実施する。溶解度をｍｇ／ｌで表す。分析順序：１）ブランク（溶媒混合物）；２）較正溶液０.６ｎｇ／ｍｌ；３）較正溶液１.２ｎｇ／ｍｌ；４）較正溶液１２ｎｇ／ｍｌ；５）較正溶液６０ｎｇ／ｍｌ；６）較正溶液６００ｎｇ／ｍｌ；７）ブランク（溶媒混合物）；８）サンプル溶液１：１０００；７）サンプル溶液１：１０。
【０１７８】
ＨＰＬＣ／ＭＳ−ＭＳの方法：
HPLC: Agilent 1100, quat. pump (G1311A)、オートサンプラー CTC HTS PAL、脱気装置 (G1322A) およびカラムサーモスタット (G1316A); カラム: Oasis HLB 20 mm x 2.1 mm, 25 μ；温度：４０℃；移動相Ａ：水＋ギ酸０.５ｍｌ／ｌ；移動相Ｂ：アセトニトリル＋ギ酸０.５ｍｌ／ｌ；流速：２.５ｍｌ／分；停止時間１.５分；グラジエント：０分９５％Ａ,５％Ｂ；勾配：０−０.５分５％Ａ、９５％Ｂ；０.５−０.８４分５％Ａ、９５％Ｂ；勾配：０.８４−０.８５分９５％Ａ、５％Ｂ；０.８５−１.５分９５％Ａ、５％Ｂ。
MS/MS: Waters Quattro Micro Tandem MS/MS; Z-Spray API-interface; HPLC-MS initial splitter 1:20; ESI モードで測定。
【０１７９】
Ｃ. 医薬組成物についての実施態様の実施例
本発明による化合物は、以下の通りに医薬製剤に変換できる。
錠剤：
組成：
本発明による化合物１００ｍｇ、ラクトース（一水和物）５０ｍｇ、トウモロコシデンプン（天然）５０ｍｇ、ポリビニルピロリドン (PVP 25) (BASF, Ludwigshafen, Germany）１０ｍｇおよびステアリン酸マグネシウム２ｍｇ。
錠剤重量２１２ｍｇ。直径８ｍｍ、曲率半径１２ｍｍ。
製造：
本発明による化合物、ラクトースおよびデンプンの混合物を、５％強度ＰＶＰ水溶液（ｗ／ｗ）で造粒する。乾燥後、顆粒をステアリン酸マグネシウムと５分間混合する。この混合物を、常套の打錠機で打錠する（錠剤の形状について、上記参照）。打錠力１５ｋＮを、打錠の推奨値として使用する。
【０１８０】
経口投与用の懸濁剤：
組成：
本発明による化合物１０００ｍｇ、エタノール（９６％）１０００ｍｇ、Rhodigel（登録商標） (FMC, Pennsylvania, USA のキサンタンゴム）４００ｍｇおよび水９９ｇ。
経口用懸濁剤１０ｍｌは、本発明による化合物１００ｍｇの個別用量に相当する。
製造：
Rhodigel をエタノールに懸濁し、本発明による化合物を懸濁液に添加する。撹拌しながら水を添加する。Rhodigel の膨潤が終了するまで、混合物を約６時間撹拌する。
【０１８１】
経口投与用の液剤：
組成：
本発明による化合物５００ｍｇ、ポリソルベート２.５ｇおよびポリエチレングリコール４００ ９７ｇ。経口用液剤２０ｇは、本発明による化合物１００ｍｇの個別用量に相当する。
製造：
本発明による化合物を、ポリエチレングリコールおよびポリソルベートの混合物に撹拌しながら懸濁する。本発明による化合物の溶解が完了するまで、撹拌操作を継続する。
【０１８２】
ｉ.ｖ.液剤：
本発明による化合物を、飽和溶解度より低い濃度で生理的に許容し得る溶媒（例えば、等張塩水、５％グルコース溶液および／または３０％ＰＥＧ４００溶液）に溶解する。溶液を濾過滅菌に付し、無菌かつパイロジェン不含の注射容器に移す。