(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における統合失調症の治療における非定型抗精神病薬の使用の効力を予測する方法であって、
ｒｓ１１８５１８９２の一塩基多型（ＳＮＰ）座位における個体の遺伝子型を個体の生体サンプルから決定するステップと、
ｒｓ１１８５１８９２のＳＮＰ座位における個体の遺伝子型が非ＧＧである場合に、減少用量のイロペリドン又は４−［３−［４−（６−フルオロ−１，２−ベンズイソキサゾール−３−イル）−１−ピペリジニル］プロポキシ］−３−メトキシ−α−メチルベンゼンメタノールによる個体の治療が有効であろうと予測するステップとを含み、
減少用量は、ｒｓ１１８５１８９２のＳＮＰ座位が非ＧＧ遺伝子型を有さない個体を治療するのに使用される用量よりも低い用量である、方法。
【請求項２】
減少用量が２ｍｇ／日〜２４ｍｇ／日である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
減少用量が５ｍｇ／日〜２０ｍｇ／日である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
減少用量が１０ｍｇ／日〜１５ｍｇ／日である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ｒｓ１１８５１８９２のＳＮＰ座位における個体の遺伝子型が非ＧＧでない場合に、増加用量のイロペリドン又は４−［３−［４−（６−フルオロ−１，２−ベンズイソキサゾール−３−イル）−１−ピペリジニル］プロポキシ］−３−メトキシ−α−メチルベンゼンメタノールでの個体の治療が有効であろうと予測するステップをさらに含み、増加用量が２４ｍｇ／日〜５０ｍｇ／日である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
増加用量が３０ｍｇ／日〜５０ｍｇ／日である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
増加用量が４０ｍｇ／日〜５０ｍｇ／日である、請求項６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
統合失調症は、人口の約１％が罹患している精神病性障害である。これは、陽性症状（幻覚及び妄想を含む、異常な考え又は知覚）、陰性症状（引きこもり、毎日の生活における満足感の欠如）及び認知機能（言語記憶、情報処理）の障害の存在を特徴とする。このような症状は、例えば双極性障害などの他の障害の指標となり得る。
【０００２】
統合失調症を治療するいくつかの薬物が認可されている。しかし、治療に対する患者の応答は非常に変化しやすいままであり、抗精神病薬治療の中断率は高い。統合失調症を有する全ての患者に最適な効果を提供する単一の統合失調症治療剤は存在しない。最も適切な薬物療法の選択及び個々の患者に対する治療特異性の改善において、臨床医及び患者を導くのに利用可能なデータはほとんどない。薬理ゲノミクスは、応答を予測する遺伝子マーカーを発見する機会を提供する。その患者の遺伝子構成に基づいて、統合失調症を有する患者が特定の治療に如何に応答し得るかを知ることにより、臨床医は、より少ない試行錯誤で、最適な薬物及び投薬量を選択することが可能となり得る。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明は、抗精神病薬応答と関連する少なくとも１つの一塩基多型（ＳＮＰ）座位における個体の遺伝子型に基づく抗精神病薬での個体の治療、並びに１つ又は複数のこのようなＳＮＰ座位における個体の遺伝子型に基づいて個体が如何に良く抗精神病薬に応答するかの予測に関する。より具体的には、本発明は、ｒｓ１１８５１８９２、ｒｓ９６４３４８３、ｒｓ８７５３２６、ｒｓ２５１３２６５、ｒｓ７８３７６８２及びｒｓ４５２８２２６からなる群より選択される１つ又は複数のＳＮＰ座位における個体の遺伝子型に基づく、非定型抗精神病薬による個体の治療及び／又はこのような治療の効力の予測に関する。非定型抗精神病薬には、例えば、イロペリドン、クロザピン、リスペリドン、オランザピン、クエチアピン、シプラシドン（siprasidone）、アリピプラゾール、パリペリドン、アセナピン、セルチンドール、ゾテピン、アミスルプリド、ビフェプルノックス、メルペロン、それらの医薬的に許容可能な塩、それらの代謝産物、及びそれらの代謝産物の医薬的に許容可能な塩が含まれる。
【０００４】
本発明の一態様は、個体における少なくとも１つの精神病性症状の治療における、イロペリドン、イロペリドン代謝産物、又はイロペリドン若しくはイロペリドン代謝産物の医薬的に許容可能な塩の使用の効力を予測する方法を提供し、この方法は、ｒｓ１１８５１８９２、ｒｓ９６４３４８３、ｒｓ８７５３２６、ｒｓ２５１３２６５、ｒｓ７８３７６８２及びｒｓ４５２８２２６からなる群より選択される少なくとも１つの一塩基多型（ＳＮＰ）座位における個体の遺伝子型を決定するステップと、少なくとも１つのＳＮＰ座位における個体の遺伝子型がより高いイロペリドン効力と関連する場合に、イロペリドンによる個体の治療が有効であろうと予測するステップとを含む。
【０００５】
本発明の別の態様は、精神病性障害又は双極性障害を有するヒトの、非定型抗精神病薬での治療に対する応答性を決定する方法を提供し、この方法は、ｒｓ１１８５１８９２、ｒｓ９６４３４８３、ｒｓ８７５３２６、ｒｓ２５１３２６５、ｒｓ７８３７６８２及びｒｓ４５２８２２６からなる群より選択される少なくとも１つの一塩基多型（ＳＮＰ）座位における個体の遺伝子型を決定するステップと、少なくとも１つのＳＮＰ座位における個体の遺伝子型がより高いイロペリドン効力と関連する場合に、イロペリドンによる個体の治療が有効であろうと予測するステップとを含む。
【０００６】
本発明のなお別の態様は、精神病性障害、統合失調症又は双極性障害の１つ又は複数の症状について患者を治療する方法を提供し、この方法は、ｒｓ１１８５１８９２、ｒｓ９６４３４８３、ｒｓ８７５３２６、ｒｓ２５１３２６５、ｒｓ７８３７６８２及びｒｓ４５２８２２６からなる群より選択される少なくとも１つの一塩基多型（ＳＮＰ）座位の両方のコピーにおいて、患者の遺伝子型を決定するステップと、患者が少なくとも１つのＳＮＰ座位においてイロペリドン効力と関連する遺伝子型を有する場合に、有効量のイロペリドン、イロペリドン代謝産物、又はイロペリドン若しくはイロペリドン代謝産物の医薬的に許容可能な塩を患者に投与するステップとを含む。
【０００７】
本発明の別の態様は、ｒｓ１１８５１８９２、ｒｓ９６４３４８３、ｒｓ８７５３２６、ｒｓ２５１３２６５、ｒｓ７８３７６８２及びｒｓ４５２８２２６からなる群より選択される少なくとも１つのＳＮＰ座位において、イロペリドン効力と関連する遺伝子型を有する患者における、精神病性障害、統合失調症又は双極性障害の１つ又は複数の症状に罹患している患者の治療における使用のための、イロペリドン、イロペリドンの活性代謝産物、又はイロペリドン若しくはイロペリドンの活性代謝産物の塩を提供する。
【０００８】
本発明のなお別の態様は、精神病性障害、統合失調症又は双極性障害を有する患者に対する治療戦略を決定する際に使用するためのキットを提供し、このキットは、（ａ）請求項１で同定された遺伝子座を少なくとも１つ含むＤＮＡ配列のある部分を認識しそれに結合できるポリヌクレオチドと、（ｂ）前記ポリヌクレオチド及び前記個体由来の染色体ＤＮＡのサンプルを入れるのに適した容器であって、ポリヌクレオチドが染色体ＤＮＡと接触し得る容器と、（ｃ）前記ポリヌクレオチドと前記染色体ＤＮＡ配列との組合せを検出し、それにより６つの座位のうち１つ又は複数においてその個体の遺伝子型が何であるかを確認するための手段とを備える。
【０００９】
本発明の別の態様は、非定型抗精神病薬を上市する方法を提供し、この方法は、その非定型抗精神病薬が、増加したイロペリドン効力と関連する遺伝子型を有する個体においてより有効であることを、処方者、患者又はその両方に通知するステップを含む。
【００１０】
本発明のなお別の態様は、臨床試験について個体を選択する方法を提供し、この方法は、ｒｓ１１８５１８９２、ｒｓ９６４３４８３、ｒｓ８７５３２６、ｒｓ２５１３２６５、ｒｓ７８３７６８２及びｒｓ４５２８２２６からなる群より選択される少なくとも１つの一塩基多型（ＳＮＰ）座位における個体の遺伝子型を決定するステップと、１つ又は複数のＳＮＰ座位における個体の遺伝子型に基づいて、臨床試験に個体を含める又は臨床試験から個体を除外するステップとを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】統合失調症を有する患者の治療におけるイロペリドン応答についての結果のゲノム表示を示す図である。１染色体当たりの単相アプローチ分析の全ゲノム関連解析（ＷＧＡＳ）結果を示す：ＭＭＲＭ（上）及びＬＯＣＦ（下）。各点は、そのＳＮＰの最も簡潔な遺伝子モデルを使用したＰＡＮＳＳ−Ｔにおける変化の関連についての、１つのＳＮＰのＰ値（縦軸上の対数目盛り）及びゲノム位置（横軸）を示す。矢印は、本明細書中に記載される選択されたＳＮＰを指す。
【図２ａ】図２ａ〜図２ｆは、ＮＰＡＳ３、ＸＫＲ４、ＴＮＲ、ＧＲＩＡ４、ＧＦＲＡ２及びＮＵＤＴ９Ｐ１遺伝子領域中の、ＰＡＮＳＳ−Ｔにおける変化とＳＮＰとの間の遺伝的関連を示す図である。ＳＮＰの物理的位置（横軸）の順に、ＮＰＡＳ３（図２ａ）、ＸＫＲ４（図２ｂ）、ＴＮＲ（図２ｃ）、ＧＲＩＡ４（図２ｄ）、ＧＦＲＡ２（図２ｅ）及びＮＵＤＴ９Ｐ１（図２ｆ）を含むゲノム領域について、ＭＭＲＭ分析からのＰ値（縦軸）が示される。セントロメア（ｃｅｎ）及びテロメア（ｔｅｌ）に対するマップの方向が、水平方向の矢印で示される。０．０１以下のＰを有するＳＮＰを四角で囲んでいる。統合失調症を有する家族における、Ｋａｍｎａｓａｒａｎらが記載した切断点のＮＰＡＳ３におけるおよその位置が、アスタリスク（＊）で示される。
【図２ｂ】図２ａ〜図２ｆは、ＮＰＡＳ３、ＸＫＲ４、ＴＮＲ、ＧＲＩＡ４、ＧＦＲＡ２及びＮＵＤＴ９Ｐ１遺伝子領域中の、ＰＡＮＳＳ−Ｔにおける変化とＳＮＰとの間の遺伝的関連を示す図である。ＳＮＰの物理的位置（横軸）の順に、ＮＰＡＳ３（図２ａ）、ＸＫＲ４（図２ｂ）、ＴＮＲ（図２ｃ）、ＧＲＩＡ４（図２ｄ）、ＧＦＲＡ２（図２ｅ）及びＮＵＤＴ９Ｐ１（図２ｆ）を含むゲノム領域について、ＭＭＲＭ分析からのＰ値（縦軸）が示される。セントロメア（ｃｅｎ）及びテロメア（ｔｅｌ）に対するマップの方向が、水平方向の矢印で示される。０．０１以下のＰを有するＳＮＰを四角で囲んでいる。統合失調症を有する家族における、Ｋａｍｎａｓａｒａｎらが記載した切断点のＮＰＡＳ３におけるおよその位置が、アスタリスク（＊）で示される。
【図２ｃ】図２ａ〜図２ｆは、ＮＰＡＳ３、ＸＫＲ４、ＴＮＲ、ＧＲＩＡ４、ＧＦＲＡ２及びＮＵＤＴ９Ｐ１遺伝子領域中の、ＰＡＮＳＳ−Ｔにおける変化とＳＮＰとの間の遺伝的関連を示す図である。ＳＮＰの物理的位置（横軸）の順に、ＮＰＡＳ３（図２ａ）、ＸＫＲ４（図２ｂ）、ＴＮＲ（図２ｃ）、ＧＲＩＡ４（図２ｄ）、ＧＦＲＡ２（図２ｅ）及びＮＵＤＴ９Ｐ１（図２ｆ）を含むゲノム領域について、ＭＭＲＭ分析からのＰ値（縦軸）が示される。セントロメア（ｃｅｎ）及びテロメア（ｔｅｌ）に対するマップの方向が、水平方向の矢印で示される。０．０１以下のＰを有するＳＮＰを四角で囲んでいる。統合失調症を有する家族における、Ｋａｍｎａｓａｒａｎらが記載した切断点のＮＰＡＳ３におけるおよその位置が、アスタリスク（＊）で示される。
【図２ｄ】図２ａ〜図２ｆは、ＮＰＡＳ３、ＸＫＲ４、ＴＮＲ、ＧＲＩＡ４、ＧＦＲＡ２及びＮＵＤＴ９Ｐ１遺伝子領域中の、ＰＡＮＳＳ−Ｔにおける変化とＳＮＰとの間の遺伝的関連を示す図である。ＳＮＰの物理的位置（横軸）の順に、ＮＰＡＳ３（図２ａ）、ＸＫＲ４（図２ｂ）、ＴＮＲ（図２ｃ）、ＧＲＩＡ４（図２ｄ）、ＧＦＲＡ２（図２ｅ）及びＮＵＤＴ９Ｐ１（図２ｆ）を含むゲノム領域について、ＭＭＲＭ分析からのＰ値（縦軸）が示される。セントロメア（ｃｅｎ）及びテロメア（ｔｅｌ）に対するマップの方向が、水平方向の矢印で示される。０．０１以下のＰを有するＳＮＰを四角で囲んでいる。統合失調症を有する家族における、Ｋａｍｎａｓａｒａｎらが記載した切断点のＮＰＡＳ３におけるおよその位置が、アスタリスク（＊）で示される。
【図２ｅ】図２ａ〜図２ｆは、ＮＰＡＳ３、ＸＫＲ４、ＴＮＲ、ＧＲＩＡ４、ＧＦＲＡ２及びＮＵＤＴ９Ｐ１遺伝子領域中の、ＰＡＮＳＳ−Ｔにおける変化とＳＮＰとの間の遺伝的関連を示す図である。ＳＮＰの物理的位置（横軸）の順に、ＮＰＡＳ３（図２ａ）、ＸＫＲ４（図２ｂ）、ＴＮＲ（図２ｃ）、ＧＲＩＡ４（図２ｄ）、ＧＦＲＡ２（図２ｅ）及びＮＵＤＴ９Ｐ１（図２ｆ）を含むゲノム領域について、ＭＭＲＭ分析からのＰ値（縦軸）が示される。セントロメア（ｃｅｎ）及びテロメア（ｔｅｌ）に対するマップの方向が、水平方向の矢印で示される。０．０１以下のＰを有するＳＮＰを四角で囲んでいる。統合失調症を有する家族における、Ｋａｍｎａｓａｒａｎらが記載した切断点のＮＰＡＳ３におけるおよその位置が、アスタリスク（＊）で示される。
【図２ｆ】図２ａ〜図２ｆは、ＮＰＡＳ３、ＸＫＲ４、ＴＮＲ、ＧＲＩＡ４、ＧＦＲＡ２及びＮＵＤＴ９Ｐ１遺伝子領域中の、ＰＡＮＳＳ−Ｔにおける変化とＳＮＰとの間の遺伝的関連を示す図である。ＳＮＰの物理的位置（横軸）の順に、ＮＰＡＳ３（図２ａ）、ＸＫＲ４（図２ｂ）、ＴＮＲ（図２ｃ）、ＧＲＩＡ４（図２ｄ）、ＧＦＲＡ２（図２ｅ）及びＮＵＤＴ９Ｐ１（図２ｆ）を含むゲノム領域について、ＭＭＲＭ分析からのＰ値（縦軸）が示される。セントロメア（ｃｅｎ）及びテロメア（ｔｅｌ）に対するマップの方向が、水平方向の矢印で示される。０．０１以下のＰを有するＳＮＰを四角で囲んでいる。統合失調症を有する家族における、Ｋａｍｎａｓａｒａｎらが記載した切断点のＮＰＡＳ３におけるおよその位置が、アスタリスク（＊）で示される。
【図３】ＮＰＡＳ３（ａ）、ＸＫＲ４（ｂ）、ＴＮＲ（ｃ）、ＧＲＩＡ４（ｄ）、ＧＦＲＡ２（ｅ）及びＮＵＤＴ９Ｐ１（ｆ）遺伝子中の同定されたＳＮＰにおける、イロペリドンに対する最も高い応答及び最も低い応答を有する遺伝子型を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
イロペリドン（１−［４−［３−［４−（６−フルオロ−１，２−ベンズイソキサゾール−３−イル）−１−ピペリジニル］プロポキシ］−３−メトキシフェニル］エタノン）は、参照により本明細書中に組み込まれる米国再発行特許第３９１９８号明細書中に開示されている。イロペリドンの活性代謝産物は、本発明において有用である。例えば、参照により本明細書中に組み込まれる国際公開第０３／０２０７０７号パンフレットを参照のこと。イロペリドン代謝産物には、４−［３−［４−（６−フルオロ−１，２−ベンズイソキサゾール−３−イル）−１−ピペリジニル］プロポキシ］−３−メトキシ−α−メチルベンゼンメタノール、１−［４−［３−［４−（６−フルオロ−１，２−ベンズイソキサゾール−３−イル）−１−ピペリジニル］プロポキシ］−３−ヒドロキシフェニル］エタノン、１−［４−［３−［４−（６−フルオロ−１，２−ベンズイソキサゾール−３−イル）−１−ピペリジニル］プロポキシ］−３−メトキシフェニル］−２−ヒドロキシエタノン、４−［３−［４−（６−フルオロ−１，２−ベンズイソキサゾール−３−イル）−１−ピペリジニル］プロポキシ］−３−ヒドロキシ−α−メチルベンゼンメタノール、４−［３−［４−（６−フルオロ−１，２−ベンズイソキサゾール−３−イル）−１−ピペリジニル］プロポキシ］−２−ヒドロキシ−５−メトキシ−α−メチルベンゼンメタノール、１−［４−［３−［４−（６−フルオロ−１，２−ベンズイソキサゾール−３−イル）−１−ピペリジニル］プロポキシ］−２−ヒドロキシ−５−メトキシフェニル］エタノン及び１−［４−［３−［４−（６−フルオロ−１，２−ベンズイソキサゾール−３−イル）−１−ピペリジニル］プロポキシ］−２，５−ジヒドロキシフェニル］エタノンが含まれる。参照により本明細書中に組み込まれる、米国再発行特許第３９１９８号明細書、国際公開第９３／０９２７６号パンフレット及び国際公開第９５／１１６８０号パンフレットを参照のこと。
【００１３】
有効量のイロペリドン又はその活性代謝産物は、被験体動物（典型的にはヒトであるが、他の動物、例えば、家畜、ペット及びレース用動物もまた治療できる）に、いくつかの経路によって投与することができる。有効量は、治療の過程の間に、精神病性障害（例えば、統合失調症又はその症状、或いは双極性障害の症状）に対する予防効果又は寛解効果を有するであろう量である。有効量は、例えば、患者、治療される障害又は症状の重篤度、及び投与経路に依存して、量的に変動し得る。
【００１４】
実際に投与されるイロペリドン又はその活性代謝産物の量を含む投薬プロトコルは、関連する状況（例えば、治療すべき状態、選択された投与経路、個々の患者の年齢、体重及び応答、並びに患者の症状の重篤度が含まれる）を考慮して、医師により決定されるであろうことが、理解されよう。患者は当然、可能性のある有害事象についてモニタリングされるべきである。
【００１５】
治療的使用又は予防的使用のために、イロペリドン又はその活性代謝産物は、標準的な従来の技術を使用して、その（又はある）必須活性成分として、少なくとも１つのこのような化合物を、固体又は液体の医薬的に許容可能な担体、並びに任意選択で医薬的に許容可能なアジュバント及び賦形剤と関連して含む医薬組成物として、通常は投与されるであろう。
【００１６】
本発明の実施に有用な医薬組成物には、経口、非経口（皮下、筋内、皮内及び静脈内が含まれる）、経皮、気管支又は経鼻投与に適した剤形が含まれる。従って、固体担体が使用される場合、製剤を錠剤にし、散剤若しくはペレットの形態で硬ゼラチンカプセルに入れ、又はトローチ剤若しくはロゼンジ剤の形態にすることができる。固体担体は、例えば結合剤、充填剤、錠剤化滑沢剤、崩壊剤、湿潤剤などの、従来の賦形剤を含み得る。錠剤は、所望の場合、従来の技術によりフィルムコーティングしてもよい。液体担体が使用される場合、製剤は、シロップ剤、エマルジョン、軟ゼラチンカプセル、注射用の無菌ビヒクル、水性又は非水性の液体懸濁物の形態であってもよく、或いは使用前の水又は他の適切なビヒクルでの再構成のための乾燥製品であってもよい。液体製剤は、懸濁剤、乳化剤、湿潤剤、非水性ビヒクル（食用油が含まれる）、防腐剤、並びに香味剤及び／又は着色剤などの、従来の添加剤を含み得る。非経口投与のために、ビヒクルは通常、少なくとも大部分は無菌水を含むであろうが、生理食塩水、グルコース溶液などを使用してもよい。注射可能な懸濁物もまた使用され得、この場合、従来の懸濁剤が使用され得る。従来の防腐剤、緩衝剤などもまた、非経口剤形に添加され得る。医薬組成物は、適切な量のイロペリドン又はその活性代謝産物を含む所望の製剤に適した従来の技術によって製剤化され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、第１７版、１９８５を参照のこと。
【００１７】
本発明で使用するための医薬組成物の製造において、活性成分（複数可）は、通常、担体と混合されるか、又は担体で希釈されるか、又はカプセル、サシェ剤、紙若しくは他の容器の形態であり得る担体内に封入されるかであろう。担体が希釈剤として機能する場合、この担体は、その活性成分のためのビヒクル、賦形剤又は媒体として機能する固体、半固体又は液体の材料であり得る。従って、この組成物は、錠剤、丸剤、散剤、ロゼンジ剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁物、エマルジョン、溶液、シロップ剤、エアロゾル（固体として又は液体媒体中）、例えば活性化合物を１０重量％まで含む軟膏、軟及び硬ゼラチンカプセル、坐剤、無菌注射溶液並びに無菌包装散剤の形態にできる。
【００１８】
適切な担体及び希釈剤のいくつかの例には、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチル及びヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム並びに鉱油が含まれる。製剤は、滑沢剤、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、保存剤、甘味剤又は香味剤をさらに含むことができる。本発明の組成物は、患者への投与後に、活性成分の迅速な放出、持続性の放出（徐放）又は遅延した放出を提供するように、製剤化することができる。
【００１９】
これらの組成物は、好ましくは、単位剤形で製剤化される。用語「単位剤形」とは、ヒト被験体及び他の哺乳動物のための単位投薬量として適切な物理的に別個な単位をいい、各単位は、必要とされる医薬的担体と関連して、治療期間の過程にわたって所望の予防効果又は治療効果を生じるように計算された、所定の量の活性物質を含む。
【００２０】
イロペリドン及びその活性代謝産物もまた、放出制御形態（例えば、遅延性、持続性又は拍動性の放出）で製剤化できる。
【００２１】
イロペリドン及び／又はその誘導体を投与する種々の製剤及び方法が記載されている。例えば、国際公開第２００４／００６８８６Ａ２号パンフレットは、イロペリドン結晶を含む注射可能なデポー製剤を記載しており、イロペリドン及びポリグリコリドポリラクチドグルコーススターポリマーのマイクロカプセル化デポー製剤は、米国特許出願第２００３００９１６４５号明細書に記載されており、とりわけ増加した濃度のイロペリドン又はイロペリドン誘導体と関連する補正心電図ＱＴ（ＱＴｃ）間隔の延長の排除又は最小化のためのイロペリドンの投与方法は、国際公開第２００６／０３９６６３Ａ２号パンフレットに記載されている（これらは全て、参照により本明細書中に組み込まれる）。
【００２２】
いくつかの一塩基多型（ＳＮＰ）が、イロペリドンの第３相臨床試験において実施された全ゲノム関連解析（ＷＧＡＳ）に従って、イロペリドンに対する改善された応答と関連することが見出された。この臨床試験は、統合失調症と診断された患者の治療におけるイロペリドンの効力を評価したものである。
【００２３】
イロペリドン治療に対する患者の応答を予測するものとして同定されたＳＮＰは、ニューロンＰＡＳドメインプロテイン３遺伝子（ＮＰＡＳ３）、ＸＫ，Ｋｅｌｌ血液型複合体サブユニット関連ファミリー、メンバー４遺伝子（ＸＫＲ４）、テネイシン−Ｒ遺伝子（ＴＮＲ）、グルタミン酸受容体，イオンチャネル型，ＡＭＰＡ４遺伝子（ＧＲＩＡ４）、グリア細胞株由来神経栄養因子受容体α２遺伝子（ＧＦＲＡ２）、及びセロトニン受容体７遺伝子（ＨＴＲ７）の染色体領域中に位置するＮＵＤＴ９Ｐ１偽遺伝子内に見出された。
【００２４】
Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ、第４版に従って統合失調症と診断された１８歳〜６５歳の患者が、イロペリドンの有効性及び安全性の、２８日間のランダム化二重盲検プラセボ及びシプラシドン対照試験への参加に適格であった。患者を、１日２回のイロペリドン１２ｍｇ、１日２回のシプラシドン８０ｍｇ（活性対照）又はプラセボに、ランダムに割り当てた。主要な効力変数は、ベースラインから、短期の二重盲検相からのデータを使用する陽性陰性症状評価尺度合計スコア（ＰＡＮＳＳ−Ｔ）における最後の予定された観察までの変化とした。副次的な目的は、イロペリドンに対する応答を予測する遺伝子マーカーを同定することであった。
【００２５】
血液サンプルを収集し、ＤＮＡを、任意選択のＷＧＡＳに同意した４５７人の患者のうち４３２人から抽出した（イロペリドンが投与された２１８人の患者及びプラセボが投与された１０２人の患者を含む）。
【００２６】
イロペリドン効力のバイオマーカーを独立して発見及び確認するために、イロペリドンが投与された患者を、等しいサイズの２つの群（群１（発見相）及び群２（確認相））にランダムに分け、ＷＧＡＳのために遺伝子型決定した。プロックサーベイセレクト（ＰＲＯＣ  ＳＵＲＶＥＹＳＥＬＥＣＴ）（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃａｒｙ、Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ）を使用して、ほぼ等しい数の各人種及び各性別の患者を有するように、群を階層化した。
【００２７】
群１において、各ＳＮＰを、２８日目の、最終観測値代用法（ｌａｓｔ  ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ−ｃａｒｒｉｅｄ−ｆｏｒｗａｒｄ）（ＬＯＣＦ）データの分布の、低いほう３０％及び高いほう３０％の極端な値にある患者について、遺伝子型とＰＡＮＳＳ−Ｔにおける変化との間の潜在的な関連について試験した。グループ分け変数として遺伝子型を用いた、Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定に基づく打ち切りノンパラメトリック測定分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して、分析を実施した。有意なオムニバス検定及びアドホックコントラストに基づいて、最も簡潔な遺伝子モデル（例えば、１つの対立遺伝子についてホモ接合体対全ての他の遺伝子型（例えば、ＡＡ対ＡＢ及びＢＢ）、ヘテロ接合体対ホモ接合体遺伝子型（ＡＢ対ＡＡ及びＢＢ））を生じた結果は、確認相において試験した遺伝子モデルを決定付けた。全体的な説明を容易にするため、各ＳＮＰが異なる簡潔なモデルを有し得ることを考慮して、陽性のイロペリドン応答と関連する全てのＳＮＰの遺伝子型は、遺伝子型クラスＣ１と呼び、そのＳＮＰについての残りの遺伝子型は、遺伝子型クラスＣ２と呼んだ。簡潔な遺伝子モデルが、あるＳＮＰについて得られなかった場合、それはそれ以上試験しなかった。Ｃ１及びＣ２を規定するコントラストについて最も低いＰ値を有する１００のＳＮＰのサブセットのみを、確認相において試験した。
【００２８】
２つの別個の方法を適用した。２８日目のＰＡＮＳＳ−ＴについてのＬＯＣＦデータを、各ＳＮＰの一元配置ＡＮＯＶＡにおいて使用し、組み合わせた他の２つの遺伝子型クラスに対して、各遺伝子型クラスを試験した。ＡＮＯＶＡからの結果は、さらなる試験のために使用すべき簡潔な遺伝子モデルを決定付けた。引き続いて、臨床試験結果の分析のために使用されるように、混合モデル反復測定（ＭＭＲＭ）モデルにおいて各ＳＮＰの簡潔な遺伝子モデルを使用して、ＭＭＲＭ分析を実施した。ＭＭＲＭ分析において、ＡＮＯＶＡ  ＬＯＣＦデータ分析で決定した、各ＳＮＰについての最良の遺伝子モデルのみを使用した。
【００２９】
２相アプローチの確認ステップにおいて、α＝０．０５／１００のＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ補正を適用した。偽発見率（ＦＤＲ）補正も、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ及びＨｏｃｈｂｅｒｇ（ＢＨ）手順を使用して計算した。この２つの単相分析のそれぞれにおいて、ＢＨ手順を使用した。最も低いＰ値を有するＳＮＰを、いずれの特定の閾値も用いずに分析した。ＦＤＲ補正を、元の分析的Ｐ値へのＢＨ調整を生成するプロックマルチテスト（ＰＲＯＣ  ＭＵＬＴＴＥＳＴ）（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）から得た。
【００３０】
ＤＮＡサンプルを、マイクロアレイセット（ジーンチップヒューマンマッピング５００Ｋアレイセット（ＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｍａｐｐｉｎｇ  ５００Ｋ  Ａｒｒａｙ  Ｓｅｔ）；Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ、Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を製造業者の指示に従って使用して、５００，０００より多いＳＮＰについて遺伝子型決定した。このセットは、それぞれが平均して２５０，０００のＳＮＰを遺伝子型決定することが可能な２つのアレイ（Ｎｓｐアレイについては約２６２，０００及びＳｔｙアレイについては２３８，０００）からなった。
【００３１】
ＤＮＡサンプルを、統合失調症又は抗精神病薬治療との関連について以前に研究されたが、マイクロアレイセット（ジーンチップヒューマンマッピング５００Ｋアレイセット；Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）上には提示されていない、さらなる多型についても遺伝子型決定した。これらのＳＮＰを、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）とその後の制限断片長多型（ＲＦＬＰ）検出、又は対立遺伝子特異的プライマー（ＡＳＰ）ＰＣＲのいずれかを使用して、遺伝子型決定した（表１を参照のこと）。
【００３２】
各ＰＣＲ反応は、２５μＬの総容量中に、６０ｎｇのＤＮＡ、ＭｇＳＯ４（０．５ｍＭ）を含む１×ＰＣＲ反応緩衝液、ＤＮＡポリメラーゼ（アンプリタック（ＡｍｐｌｉＴａｑ）；Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、５ｐｍｏｌのｄＮＴＰミックス（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）及び１０ｐｍｏｌの各特異的プライマーを含んだ。ＡＳＰアッセイのために、ホットスタータック（ＨｏｔＳｔａｒＴａｑ）（登録商標）ポリメラーゼ（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用し、２つのＰＣＲ反応を各サンプルについて実施した（各対立遺伝子について１つ）。ＰＣＲ条件は以下のとおりであった：９５℃の最初の変性１０分間、次いで（９５℃で３０秒間の変性、３０秒間のアニーリング（ＳＮＰに特異的な温度）、７２℃で１分間の伸長）×３５サイクル、及び最後に７２℃で１０分間の伸長。ＰＣＲ産物を適切な制限酵素で消化し、標準ＤＮＡラダーに対して４％アガロースゲル上で分離して、フラグメントサイズを決定した。
【００３３】
ＤＮＡアレイから収集したデータの完全性を確実にするために、以下の品質制御ステップを実施した：
【００３４】
アルゴリズム
各マイクロアレイ（ジーンチップ（ＧｅｎｅＣｈｉｐ）（登録商標）ヒューマン５００Ｋアレイセット；Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を、動的モデルベースの遺伝子型決定アルゴリズム及び０．５の信頼度閾値でＭａｈａｌａｎｏｂｉｓ距離分類指標を用いる最新のＢａｙｅｓｉａｎロバスト線形モデル（ＢＲＬＭＭ）によって分析した。これらの条件下で、失われた遺伝子型はランダムに失われたと仮定し、インピュテーションはいずれの遺伝子データについても行わなかった。ＢＲＬＭＭアナリシスツール（ＢＲＬＭＭ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｔｏｏｌ）２．０及びＳＮＰシグナルツール（ＳＮＰ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｏｏｌ）１．０．０．１２．（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を使用して、個々のＳＮＰの遺伝子型コールの分布及び分離を分析及び可視化した。
【００３５】
コールレート
コールレートを、ＢＲＬＭＭアルゴリズムによりＡＡ、ＡＢ又はＢＢとコールされたＳＮＰの割合として、単一のアレイについて規定した。９３％以上のコールレートを有するアレイのみを、さらなる分析のために維持した。
【００３６】
アレイ間の一致
遺伝子型決定した５００，０００より多いＳＮＰのうち、５０は、Ｓｔｙアレイ及びＮｓｐアレイの両方に共通していた。これらのＳＮＰについて＞９０％の一致を有するアレイのみを、さらなる分析に使用した。
【００３７】
サンプルの独自性
各アレイ（Ｓｔｙ又はＮｓｐ）上のサンプル当たりの得られた約２５０，０００のＳＮＰデータを、全ての他のサンプルの遺伝子型と比較して、潜在的な重複サンプルを同定した。遺伝子型の＞９０％が２つのアレイ間で同一であった場合、ＤＮＡを再試験して遺伝子型を確認し、必要に応じて重複サンプルを排除した。
【００３８】
ＤＮＡ汚染の欠如
別のサンプルによるあるサンプルのＤＮＡ汚染の欠如を、動的モデルベースのアルゴリズムによって計算されるように、ヘテロ接合体コールを有するＳＮＰの全体的割合を決定することによって、各アレイについて評価した。＜３０％のヘテロ接合体コールを有するアレイからの遺伝子型コールを、純粋なＤＮＡサンプルに由来しているとみなした。＜３０％のヘテロ接合体コールを有するアレイのみを、さらなる分析に使用した。
【００３９】
性別決定
各ＤＮＡサンプルについて、性別を、Ｘ染色体上のＳＮＰのヘテロ接合性の割合に基づいて、ＢＲＬＭＭアルゴリズムによって盲検的に決定した。結果を、予測された性別と比較した。不一致のデータの場合、アメロゲニン遺伝子（ＡＭＥＬＸ）についてのＰＣＲベースのアッセイを、元のサンプル及び新たなＤＮＡアリコートに対して実施した。新たな遺伝子型決定実験を、Ｓｔｙアレイ及びＮｓｐアレイを用いて実施した。不適合の結果を有するサンプルを、ＷＧＡＳから排除した。
【００４０】
対立遺伝子頻度
１０％以上のマイナー対立遺伝子頻度を有するＳＮＰを選択することによって、最も一般的な多型に焦点を当てた。
【００４１】
ＳＮＰ選択
マイクロアレイセット（ジーンチップヒューマン５００Ｋアレイ；Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）上のＳＮＰについて利用可能な遺伝子型を有する参照ＤＮＡ（ヒューマンゲノミックＤＮＡ  １０３コントロール（Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ  １０３  Ｃｏｎｔｒｏｌ）；Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を、患者サンプルと平行して体系的に試験した。Ｓｔｙアレイ及びＮｓｐアレイについて８つのＤＮＡ  １０３複製を得て分析した。コール（ＡＡ、ＡＢ、ＢＢ）が８つの複製にわたって同一であり、且つＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘが提供する参照コールと同一であった場合、個々のＳＮＰアッセイを、正確で再現性のあるコール（一致コール）生じたとみなした。ＤＮＡ  １０３について１００％の一致を有するＳＮＰのみを、ＷＧＡＳのために維持した。Ｙ染色体とクロスハイブリダイズした５つのＳＮＰ及びＸ染色体上の全てのＳＮＰは使用しなかった。このＷＧＡＳにおいて分析したＳＮＰの総数は、３３４，５６３であった。
【００４２】
ＤＮＡ配列決定
目的の各ＳＮＰについて、ホモ接合体遺伝子型及びヘテロ接合体遺伝子型のそれぞれについて少なくとも５つのサンプルを含む、最少１５のＤＮＡサンプルを配列決定した。以下のプライマーをＰＣＲ増幅（５５℃のアニーリングを用いた、「遺伝子型決定法」に記載したとおりのもの）に使用し、その後配列決定した：
【００４３】
ｒｓ１１８５１８９２について５’−ＣＡＴ  ＧＣＡ  ＧＣＴ  ＡＴＧ  ＴＴＴ  ＧＧＧ  ＡＧ−３’（フォワード；配列番号１）及び５’−ＧＣＣ  ＡＡＡ  ＡＴＡ  ＡＴＧ  ＴＧＴ  ＡＧＣ  ＡＡＴ  Ｃ−３’（リバース；配列番号２）；
ｒｓ９６４３４８３について５’−ＧＡＴ  ＴＧＧ  ＣＴＴ  ＴＧＧ  ＧＴＴ  ＴＧＣ  ＣＴＴ  Ｇ−３’（フォワード；配列番号３）及び５’−ＧＡＣ  ＣＣＣ  ＡＴＣ  ＴＴＴ  ＡＧＣ  ＧＧＡ  ＡＣ−３’（リバース；配列番号４）；
ｒｓ８７５３２６について５’−ＧＡＡ  ＧＧＧ  ＴＣＴ  ＡＣＣ  ＴＣＧ  ＡＴＴ  ＣＣ−３’（フォワード；配列番号５）及び５’−ＧＡＴ  ＣＡＧ  ＣＴＴ  ＡＴＴ  ＣＡＡ  ＣＣＣ  ＴＣ−３’（リバース；配列番号６）；
ｒｓ２５１３２６５について５’−ＣＴＡ  ＡＡＧ  ＧＣＧ  ＡＡＡ  ＣＡＴ  ＧＴＧ  ＴＡＴ  Ｇ−３’（フォワード；配列番号７）及び５’−ＣＡＴ  ＡＧＣ  ＡＧＣ  ＴＧＡ  ＣＣＡ  ＡＣＡ  ＴＴＣ  Ｃ−３’（リバース；配列番号８）；
ｒｓ７８３７６８２について５’−ＣＡＡ  ＴＣＴ  ＧＣＴ  ＴＴＣ  ＡＣＣ  ＴＣＡ  ＡＣＣ  Ｃ−３’（フォワード；配列番号９）及び５’−ＣＴＧ  ＣＣＡ  ＣＣＣ  ＴＡＣ  ＴＣＡ  ＡＣＡ  ＣＣ−３’（リバース；配列番号１０）；並びに
ｒｓ４５２８２２６について５’−ＧＡＧ  ＣＡＧ  ＡＴＡ  ＡＡＴ  ＴＴＧ  ＣＣＴ  ＧＧ−３’（フォワード；配列番号１１）及び５’−ＧＴＴ  ＧＡＡ  ＣＣＣ  ＡＡＡ  ＧＡＣ  ＡＣＣ  ＣＣＴ  Ｇ−３’（リバース；配列番号１２）。
【００４４】
配列決定を、２５μＬの反応について、製造業者の指示に従って試薬キット（アンプリタック（ＡｍｐｌｉＴａｑ）（登録商標）ＤＮＡポリメラーゼを含むジーンアンプ（ＧｅｎｅＡｍｐ）（登録商標）ＰＣＲ試薬キット；Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて実施した。ヌクレオチド配列を、製造業者の指示に従って、自動キャピラリーＤＮＡシーケンサー（アバント（Ａｖａｎｔ）３１００；Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びサイクル配列決定キット（ビッグダイ（ＢｉｇＤｙｅ）（登録商標）ターミネーターバージョン３．１サイクル配列決定キット（ＢｉｇＤｙｅ  Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．１  Ｃｙｃｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  Ｋｉｔ）；Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して決定した。
【００４５】
結果
統合失調症の治療のためのイロペリドンの有効性を、ＰＡＮＳＳを使用して評価した。ベースラインと２８日目との間でのＰＡＮＳＳ−Ｔにおける変化との遺伝的関連を、３３４，５６３のＳＮＰについて試験した。このような多数のＳＮＰを用いた関連研究において、最良の候補の選択は、極端なＰ値に基づく。これらは、使用した統計的方法の個々の項目に対して通常よりも高感度な場合がある。従って、イロペリドンの効力の最も可能性の高いマーカーを選択するために、いくつかの分析方法を使用し、異なる方法にわたって不変に低いＰ値を有するＳＮＰに対して焦点を当てた。
【００４６】
３つの分析を実施した。分析１は、ＤＮＡサンプルを２つの群に分けた２相アプローチであった。第１群は、発見相のための５０％のサンプルからなり（ＰＡＮＳＳ−Ｔにおける変化（ＬＯＣＦデータ）の上位３０％及び下位３０％のみを使用した）、第２群は、確認相のための残りの５０％からなるホールドアウト群であった。発見相において最も低いＰ値を有する１００のＳＮＰのみを、引き続いて試験した。
【００４７】
分析２は、単相アプローチにおける全てのイロペリドン治療患者のＬＯＣＦデータのＡＮＯＶＡであった。
【００４８】
分析３は、各ＳＮＰの最も簡潔な遺伝子モデルを使用した、全ての患者のＭＭＲＭ分析であった。２つの単相アプローチ（分析２及び分析３）は、全ての利用可能なサンプルを利用することによって、有意な関連を検出するためのさらなる力を提供した。
【００４９】
ＬＯＣＦ及びＭＭＲＭの単相アプローチからの全体的な全ゲノム関連結果を図１に示す。最も低いＰ値を有する１００のＳＮＰのうち４５は、これら２つの分析の間で共通していた。これらのＳＮＰのうち６つはまた、２相分析の上位１００のＳＮＰの中に存在した。これら６つのＳＮＰ（ｒｓ１１８５１８９２、ｒｓ９６４３４８３、ｒｓ８７５３２６、ｒｓ２５１３２６５、ｒｓ７８３７６８２、ｒｓ４５２８２２６）及びイロペリドン応答とのそれらの関連に関するさらなる詳細を、表２に示す。異なる治療群からのデータを、ＭＭＲＭ統計モデルにおいて使用し、イロペリドン治療とプラセボとの間の遺伝子型効果の比較を可能にした。特に指定した場合を除いて、本明細書中で考察した結果は、ＰＡＮＳＳ−Ｔデータ及びＭＭＲＭ分析から生成されたＰ値をいう。
【００５０】
ＮＰＡＳ３及びイロペリドン応答
ＳＮＰ  ｒｓ１１８５１８９２は、ニューロンＰＡＳドメインプロテイン３をコードするＮＰＡＳ３遺伝子のイントロン３内の染色体１４ｑ１２〜ｑ１３上に位置する。この遺伝子内の他の３つのＳＮＰもまた、Ｐ＜０．０１のレベルで有意であった（図２ａを参照のこと）。
【００５１】
非ＧＧのｒｓ１１８５１８９２遺伝子型（これは３１％の頻度を有する）が、全てのイロペリドン治療患者の平均応答（−１２．０１［±１．０３］）よりも６８％高い、ＰＡＮＳＳ−Ｔにおいてベースラインから平均＞２０ポイント（−２０．１２［±３．６９］）改善したイロペリドン治療患者群に存在した（表３を参照のこと）。非ＧＧ遺伝子型を保有する患者は、ＧＧ遺伝子型を保有する患者よりも、２０％の改善が生じる可能性が約３倍高かった（オッズ比［ＯＲ］＝２．７４、Ｐ＝０．００１１；表４を参照のこと）。
【００５２】
ＮＰＡＳ３遺伝子は、以前から統合失調症と関連するとされていた。Ｋａｍｎａｓａｒａｎらは、染色体転座ｔ（９；１４）（ｑ３４；ｑ１３）の保有者であった統合失調症を有する母親及び娘を記載している。ＷＧＡＳにおいてＰＡＮＳＳ−Ｔにおける変化と関連する２つのＳＮＰ（ｒｓ１１８５１８９２、ｒｓ１７５８３６６７）は、この家族において観察された切断点と同じ、ＮＰＡＳ３のイントロン３内に位置した（図２ａを参照のこと）。
【００５３】
ＸＫＲ４及びイロペリドン応答
ＳＮＰ  ｒｓ９６４３４８３は８ｑ１２．１中に位置する。そのＧＧ遺伝子型は、イロペリドン治療患者の約２２％中に存在し、これらの患者は、異なる遺伝子型（それぞれ、−３．３０［±３．９３］対−１５．０２［±４．３４］）を有する患者及びプラセボを受けた患者よりも小さいＰＡＮＳＳ−Ｔにおける変化を、平均して生じた（表３）。非ＧＧ遺伝子型を保有する患者は、ＧＧ遺伝子型を保有する患者よりも、２０％の改善が生じる可能性が約３．５倍高かった（オッズ比［ＯＲ］＝３．４２、Ｐ＝０．０００９；表４）。
【００５４】
ＳＮＰ  ｒｓ９６４３４８３は、ＸＫ−Ｋｅｌｌ血液型複合体サブユニット関連ファミリー、メンバー４（ＸＫＲ４）遺伝子（約２２０ｋｂ離れている）と網膜色素変性症１（ＲＰ１）遺伝子（約２５０ｋｂ離れている）との間に存在する。その領域中の他のＳＮＰには、Ｐ＜０．０１のレベルで有意なものは存在しなかった（図２ｂ）。
【００５５】
ＸＫＲ４遺伝子は、ＸＫタンパク質と関連するタンパク質をコードする。Ｋｅｌｌ及びＸＫは、Ｋｅｌｌ血液型複合体を形成する２つの別個の赤血球膜タンパク質である（図２ｂ）。ＸＫは、その基質が未知である推定膜トランスポーターであるが、このタンパク質の非存在は、ＭｃＬｅｏｄ症候群と関連する。この稀な遺伝性のＸ連鎖疾患は、赤血球の有棘赤血球増加症並びに遅発型の中枢神経系（ＣＮＳ）及び神経筋の異常を特徴とする。ＣＮＳの症状には、認知障害、精神病理、癲癇及び舞踏病様の動きが含まれる。１つの報告が、ＭｃＬｅｏｄ症候群の症状として統合失調症に言及している。ＲＰ１遺伝子中の変異は、優性の網膜色素変性症を引き起こすと報告されている。この遺伝子がコードするタンパク質の具体的な役割はなお未知であるが、光受容体生物学において重要であると考えられている。精神病の特徴と網膜色素変性症との関連は、Ｕｓｈｅｒ症候群を有する患者において報告されているが、充分には理解されていない。ＸＫＲ４又はＲＰ１と統合失調症又は抗精神病薬治療に対する応答との間の関連についての報告は、公表されていない。
【００５６】
ＴＮＲ及びイロペリドン応答
目的の別のＳＮＰは、それぞれテネイシン−Ｒタンパク質及びテネイシン−Ｎタンパク質をコードするＴＮＲ遺伝子（約２．５ｋｂ離れている）とＴＮＮ遺伝子（約１７０ｋｂ離れている）との間に位置する、１ｑ２５．１上のｒｓ８７５３２６である。ＴＮＲとＴＮＮとの間のゲノム領域は、なお機能が未知のＫＩＡＡ００４０座位も含む（図２ｃ）。ｒｓ８７５３２６ホモ接合体遺伝子型は、イロペリドン治療に対する最も高い応答と関連し、ヘテロ接合体遺伝子型を有する患者についての−６．２１（±４．５１；Ｐ＝０．００００２１）の平均変化と比較して、−１６．３９（±４．３５）のＰＡＮＳＳ−Ｔにおける平均変化を有した（表３）。ｒｓ８７５３２６についてホモ接合体のイロペリドン治療患者の６３％より多くが、ＡＧ遺伝子型を保有する患者よりも、２０％の改善が生じる可能性が約３．５倍高かった（ＯＲ＝３．５７、Ｐ＜０．０００１；表４）。
【００５７】
テネイシン−Ｒは、主にＣＮＳで発現される細胞外マトリックスタンパク質であり、脊髄、小脳、海馬及び嗅球中の運動神経の周囲及び運動軸索上に局在する。テネイシン−Ｒは、ヒトにおける少なくとも３つの他の遺伝子（１ｑ上のＴＮＮ、９ｑ３３上のＴＮＣ及び６ｐ２１．３上のＴＮＸＢ）を含む、テネイシン遺伝子ファミリーのメンバーである。ＴＮＸＢ欠損は、重篤な結合組織障害であるＥｈｌｅｒｓ−Ｄａｎｌｏｓ症候群の、臨床的に異なる常染色体劣性形態を導く。ＴＮＸＢ遺伝子中の２つのＳＮＰは、イギリス人集団において統合失調症と関連している。今日まで、統合失調症又は抗精神病薬治療に対する応答においてＴＮＲ又はＴＮＮが関与するという直接的な証拠はない。
【００５８】
ＧＲＩＡ４及びイロペリドン応答
ＳＮＰ  ｒｓ２５１３２６５は、グルタミン酸受容体，イオンチャネル型，ＡＭＰＡ４（ＧＲＩＡ４）遺伝子の５’末端から約５８ｋｂの、染色体１１ｑ２２上に位置する（図２ｄ）。ｒｓ２５１３２６５のＴＴ遺伝子型は、異なる遺伝子型を有する患者のものよりも低く（それぞれ、−３３０［±４．１１］対−１５．２２［±４．２６］）、プラセボを受けた患者のものと匹敵するＰＡＮＳＳ−Ｔ変化を平均して生じたイロペリドン治療患者の約２３％中に存在した（表３）。非ＴＴ遺伝子型を保有する患者は、ＴＴ遺伝子型を保有する患者よりも、２０％の改善が生じる可能性が約２．５倍高かった（オッズ比［ＯＲ］＝２．４３、Ｐ＝０．０１１；表４）。約８ｋｂの間隔内に位置する２つの他のＳＮＰ、ｒｓ７９３０３７２及びｒｓ４１４２５７９もまた、Ｐ＜０．０１で有意であった（図２ｄ）。興味深いことに、ＧＲＩＡ４遺伝子のいくつかのハプロタイプは、日本人集団において統合失調症との正の関連を示した。
【００５９】
ＧＦＲＡ２及びイロペリドン応答
ＳＮＰ  ｒｓ７８３７６８２は、ＳＣＺＤ６と呼ばれる統合失調症感受性の座位がいくつかの正の遺伝的関連研究によってマッピングされている、８ｐ２１領域中に位置する。ｒｓ７８３７６８２のＡＡ遺伝子型は、イロペリドン治療に対する最も高い応答と関連し、異なる遺伝子型を有する患者についての−６．０８（±４．２８；Ｐ＝０．０００１８）の平均変化と比較して、−１５．９５（±４．２３）のＰＡＮＳＳ−Ｔにおける平均変化を有した（表３）。ｒｓ７８３７６８２についてホモ接合体ＡＡであるイロペリドン治療患者の５８％より多くが、異なる遺伝子型を保有する患者よりも、２０％の改善が生じる可能性が約３倍高かった（ＯＲ＝２．９５；Ｐ＝０．０００４、表４）。
【００６０】
ｒｓ７８３７６８２から最も近い既知の遺伝子は、約３６０ｋｂ離れて位置する、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）受容体α２（ＧＦＲＡ２）である。この遺伝子の下流の６つの他のＳＮＰも、Ｐ＜０．０１のレベルで有意であり、約１５ｋｂ内に４つのＳＮＰが含まれた（図２ｅ）。ＧＦＲＡ２は、ＧＤＮＦ受容体β（ＧＤＮＦＲ−β）をコードする。ＧＤＮＦは、ニューロンの生存及び分化の制御において重要な役割を果たす。イタリア人集団における研究からの結果は、３’ＵＴＲ  ＧＤＮＦ反復の多型が統合失調症と関連することを示唆している。
【００６１】
ＮＵＤＴ９Ｐ１及びイロペリドン応答
ＳＮＰ  ｓ４５２８２２６は、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ法又はＦＤＲ法のいずれかを使用した複数の試験についての補正後に、Ｐ＜０．０５のレベルで、２相アプローチ分析において統計的に有意な関連を示した唯一のＳＮＰであった（表２）。このＳＮＰはまた、ＬＯＣＦ法又はＭＭＲＭ法のいずれかを用いて、イロペリドン治療群由来の全てのサンプルを使用した場合に、最も統計的に有意な関連を示した（表２）。ｒｓ４５２８２２６のＧＴ遺伝子型は、イロペリドン治療に対する最も高い応答と関連し、異なる遺伝子型を有する患者についての−６．６１（±４．２９；Ｐ＝０．００００００７８）の平均変化と比較して、−１８．７３（±３．９９）のＰＡＮＳＳ−Ｔにおける平均変化を有した（表３）。ｒｓ４５２８２２６についてヘテロ接合体のイロペリドン治療患者の４７％より多くが、ホモ接合体患者よりも、２０％の改善が生じる可能性が３倍高かった（ＯＲ＝３．００、Ｐ＝０．０００１；表４）。
【００６２】
ＳＮＰ  ｒｓ４５２８２２６は、アンキリン反復ドメイン（ＡＮＫＲＤ１）遺伝子とポリコーム群リングフィンガー５（ＰＣＧＦ５）遺伝子との間の、ＮＵＤＴ９Ｐ１偽遺伝子に近い染色体１０ｑ２３．３１上に位置し、セロトニン受容体７（ＨＴＲ７）遺伝子から約２００ｋｂ離れている（図２ｆ）。同じ染色体領域中の他のＳＮＰはいずれも、３．５ｋｂ及び６．３ｋｂ離れて位置する最も近い隣接ＳＮＰを含めて、Ｐ＜０．０１のレベルで統計的に有意な関連を示さなかった。ＨＴＲ７遺伝子（これは、可能性のある統合失調症感受性因子と考えられている）は、日本人集団において統合失調症と関連している。統合失調症又は抗精神病薬治療に対する応答と、ＮＵＤＴ９Ｐ１、ＡＮＫＲＤ１又はＰＣＧＦ５との間には、関連性は報告されていない。
【００６３】
性別及び人種の分析
ＳＮＰ対立遺伝子頻度は人種間で変動し得、組換え率は性別に依存する。従って、これらの潜在的な交絡要因のアドホック分析を実施した。本明細書中で報告される全てのＳＮＰについて、より高い又はより低い応答と特定の遺伝子型との関連は、男性と女性との間で、及び人種にわたって一貫しており、このことは、観察された有意な関連が、研究した患者集団の不均一性から生じるバイアスに起因しないことを示している。
【００６４】
選択されたＳＮＰのオッズ比、感度、特異度及び予測値
イロペリドンに対する応答を予測する際のマーカーの潜在的な臨床的価値をよりよく理解するために、各選択されたマーカーのオッズ比（ＯＲ）及び感度、特異度、並びに予測値を計算した（表４）。ＳＮＰ  ｒｓ１１８５１８９２（ＮＰＡＳ３）は、優れたイロペリドン応答を有する患者の３１％を差別化し、最も高い特異度（７９％）及び最も強い陽性予測値（６５％）を有した。ＰＡＮＳＳ−Ｔにおける最も低い変化を有するイロペリドン治療患者の小さい群（＜２３％）を差別化した２つのＳＮＰ、ｒｓ９６４３４８３（ＸＫＲ４）及びｒｓ２５１３２６５（ＧＲＩＡ４）は、最も高い感度（それぞれ、８８％及び８５％）を有した。他のＳＮＰは中間の値を有した。
【００６５】
遺伝子型コールの検証
マイクロアレイセットにより生成された遺伝子型コールもまた、イロペリドン治療患者のＤＮＡサンプルのランダムサブセットに対して配列決定することによって決定した。１００％の確度が、ｒｓ１１８５１８９２（ＮＰＡＳ３）、ｒｓ９６４３４８３（ＸＫＲ４）、ｒｓ８７５３２６（ＴＮＲ）、ｒｓ２５１３２６５（ＧＲＩＡ４）及びｒｓ４５２８２２６（ＮＵＤＴ９Ｐ１）について観察され、９５％の確度（３７のうち３５）がｒｓ７８３７６８２（ＧＲＦＡ２）について観察された。ｒｓ７８３７６８２について検出された２つの誤ったコールは、このＳＮＰ（ＡＡ対非ＡＡ）の分析に影響を与えない同じ遺伝子型クラス（非ＡＡ）内の遺伝子型の変化（ＡＧ対ＧＧ）に関係した。
【００６６】
ＮＰＡＳ３遺伝子内のＳＮＰ  ｒｓ１１８５１８９２は、ＰＡＮＳＳ−Ｔにおけるより高い改善を生じたイロペリドン治療患者の３１％の群を同定した。２つの独立した連鎖研究により、統合失調症についての感受性の座位が、染色体１４ｑ１３中に存在することが示唆されている。１４ｑ１３．１上に位置するＮＰＡＳ３遺伝子は、この病気を有する母親及び娘が、イントロン３中に切断点を有する、ｔ（９；１４）（ｑ３４；ｑ１３）転座の保有者である家族において、統合失調症と既に関連するとされていた。上記研究においてＰＡＮＳＳ−Ｔにおける変化と有意に関連するＮＰＡＳ３  ＳＮＰのうち、２つはイントロン３中に存在し、これには、その領域について最も有意な関連（ＡＮＯＶＡ  ＬＯＣＦについてＰ＝０．００００２８；ＭＭＲＭについてＰ＝０．００００９３）を有したｒｓ１１８５１８９２が含まれる。ＮＰＡＳ３タンパク質は、塩基性ヘリックス−ループ−ヘリックス領域と、その後に続くピリオド／アリール炭化水素受容体／シングルマインディド（ｓｉｎｇｌｅ−ｍｉｎｄｅｄ）（ＰＡＳ）ドメインとを含む、転写因子のファミリーに属する。Ｋａｍｎａｓａｒａｎらは、海馬、視床及び皮質を含む複数の成体脳組織においてＮＰＡＳ３タンパク質が発現されることを示している。彼らは、ＮＰＡＳ３のハプロ不全が、イントロン３の切断点を有する家族における統合失調症において役割を果たしていることを提唱した。統合失調症におけるＮＰＡＳ３の潜在的な役割を支持するさらなる証拠が、マウスの最近の研究から得られている。Ｐｉｅｐｅｒらは、ＮＰＡＳ３欠損マウスが、統合失調症を暗示する挙動異常及び神経解剖学的異常を現すことを示した。Ｅｒｂｅｌ−Ｓｉｅｌｅｒらは、ＮＰＡＳ３ホモ接合体の成体マウスが、皮質、歯状回及び扁桃体におけるリーリンの顕著な減少を有することを実証した。リーリンは、脳の発生の間の細胞の位置決定及び神経細胞移動に重要な細胞−細胞相互作用を制御すると考えられる細胞外マトリックスタンパク質である。１つの遺伝学的研究において、リーリンは治療抵抗性の統合失調症と関連することが示唆されており、リーリン及びそのｍＲＮＡのレベルが、未分化型又は妄想型の統合失調症を有する患者のいくつかの脳領域において顕著に減少することが示されている。上記研究の結果は、ＮＰＡＳ３と抗精神病薬治療の効力との間の可能性のある関連の最初の証拠を提供している。
【００６７】
イロペリドン治療患者におけるＰＡＮＳＳ−Ｔにおける変化と関連する他のＳＮＰのうち、ＧＲＩＡ４遺伝子の上流のＳＮＰを含むいくつかのＳＮＰが特に興味深かった。ＧＲＩＡ４は、速いシナプス興奮性神経伝達を媒介するＬ−グルタミン酸依存性イオンチャネルのメンバーである。この型の受容体は、シナプスにおいてグルタミン酸放出を阻害することによって、脳におけるグルタミン酸作動性の伝達を調節すると考えられている。特定のＡＭＰＡ４グルタミン酸受容体は大規模に研究されていないが、ＧＲＩＡ４ハプロタイプと統合失調症との間の関連が、日本人集団において報告されている。この知見は、中国人集団においては見られておらず、他の集団での研究は報告されていない。精神異常発現性剤のフェンサイクリジン（ＰＣＰ）及びケタミンが、ＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体における神経伝達を遮断することによって、統合失調症のものと類似の精神病性症状及び認知神経科学的障害を誘導するという観察に基づいて、統合失調症におけるグルタミン酸の潜在的な役割が、初めて提唱された。それ以来、統合失調症におけるグルタミン酸調節不全の証拠はますます増加している。
【００６８】
さらに、イロペリドン効力と関連するいくつかのＳＮＰが、８ｐ２１．３上に位置するＧＦＲＡ２遺伝子の上流に見出された。異なる集団における多数の研究により、統合失調症と染色体８ｐ、特に８ｐ２１領域中との間の遺伝的関連が示されている。この統合失調症感受性の座位は、ＳＣＺＤ６と呼ばれる。この領域中の候補遺伝子には、ニューレグリン１（ＮＲＧ１）、アドレナリン作動性α−１Ａ受容体（ＡＤＲＡ１Ａ）及びフリッツルドホモログ３（ＦＺＤ３）が含まれる。上記研究の知見は、統合失調症及び抗精神病薬治療において役割を果たし得るこの領域中の遺伝子のリストに、ＧＦＲＡ２が加わることを示唆している。ＧＦＲＡ２タンパク質は、ＧＤＮＦ及びニュールツリンに対する細胞表面受容体である。いくつかの研究が、ＧＤＮＦを統合失調症と関連付けている。ＰＣＰがラットに注射されて統合失調症様の症状を生じさせた動物実験において、Ｓｅｍｂａらは、ＰＣＰが、ドパミン細胞体が位置する腹側中脳においてＧＤＮＦの機能を変化させることを示した。上記結果は、統合失調症の病因及び抗精神病薬治療に対する応答における、ＧＤＮＦ、ニュールツリン及びＧＲＦＡ２の相互作用を調査する新たな研究を開始すべきであることを示唆している。
【００６９】
上記研究で同定されたいくつかのＳＮＰは、時折いずれの既知の遺伝子からも遠く離れた、遺伝子間領域中に存在する。１つのこのようなＳＮＰはｒｓ４５２８２２６であり、これは、全ての分析において、ＰＡＮＳＳ−Ｔにおける変化と、最も統計的に有意な関連を示した（表２、図１及び図２ｆ）。このＳＮＰは、ＨＴＲ７遺伝子の約２００ｋｂ上流に位置する。興味深いことに、イロペリドンは、５−ＨＴ７受容体に対する高い親和性を有することが示されている。遺伝子間ＤＮＡ中に位置するＳＮＰの生物学的な関連性は、現在評価が困難である。ほとんどの遺伝学的研究が、遺伝子のコード配列及び近傍のプロモーター領域に対して歴史的に焦点を当ててきたが、比較ゲノム学研究は、イントロン中、及び時折それらが調節する遺伝子から数百キロベース又は数千キロベース離れた遺伝子が乏しい「砂漠」領域中に位置し得る他の機能的ゲノムエレメントを発見している。上記研究で試験した遺伝子間ＳＮＰは、未だ同定されていない、調節エレメント、応答エレメント、転位性エレメント、非コードＲＮＡ、コード配列又はスプライス部位内に存在する可能性がある。或いは、それらは、これらのエレメント又は配列と、連鎖不均衡であってもよい。これまでに、長距離のＨＴＲ７のシス調節エレメントは同定されていない。上記結果は、ｒｓ４５２８２２６のゲノム領域を、このようなエレメントの存在について徹底的に試験すべきであることを示唆している。
【００７０】
ＷＧＡＳの結果は、イロペリドン又はイロペリドン代謝産物での治療に対する個体の応答を予測するだけでなく、このような治療をより効果的なものにする可能性を提供する。例えば、上記１つ又は複数のＳＮＰ座位における個体の遺伝子型に基づいてイロペリドン又はイロペリドン代謝産物での治療に充分に応答すると予測された個体に、他の場合で投与される投薬量よりも低い投薬量（例えば、約２ｍｇ／日〜約２４ｍｇ／日、約５ｍｇ／日〜約２０ｍｇ／日、又は約１０ｍｇ／日〜約１５ｍｇ／日）を投与でき、それにより、このような治療の任意の有害な副作用の可能性が最小化される。同様に、イロペリドン若しくはイロペリドン代謝産物での治療に充分に応答しないと予測された個体に、より高い投薬量（例えば、約２４ｍｇ／日〜約５０ｍｇ／日、約３０ｍｇ／日〜約５０ｍｇ／日、又は約４０ｍｇ／日〜約５０ｍｇ／日）を投与することもでき、又は、イロペリドン若しくはイロペリドン代謝産物の代わりに又はそれに加えて、別の化合物で個体を治療することもできる。
【００７１】
或いは、投薬量は、特定のＳＮＰ座位における患者の遺伝子型に基づいてもよい。例えば、一実施形態において、本発明は、精神病性障害、統合失調症又は双極性障害の１つ又は複数の症状について患者を治療する方法を提供し、この方法は、ｒｓ１１８５１８９２、ｒｓ９６４３４８３、ｒｓ８７５３２６、ｒｓ２５１３２６５、ｒｓ７８３７６８２及びｒｓ４５２８２２６からなる群より選択される１つの一塩基多型（ＳＮＰ）座位の両方のコピーにおいて、患者の遺伝子型を決定するステップと、患者が選択されたＳＮＰ座位においてイロペリドン効力と関連する遺伝子型を有する場合に、患者のｓ１１８５１８９２、ｒｓ９６４３４８３、ｒｓ８７５３２６、ｒｓ２５１３２６５、ｒｓ７８３７６８２、又はｒｓ４５２８２２６の遺伝子型に基づいて、有効量の非定型抗精神病薬を患者に投与するステップとを含む。
【００７２】
１つ又は複数の上記ＳＮＰ座位における個体の遺伝子型は、任意の多数の方法によって決定することができる。例えば、遺伝子型（複数可）は、上記のように、ＤＮＡ配列を直接分析することによって決定することができる。或いは、遺伝子型（複数可）は、当業者が認識するように、ＲＮＡ転写物（例えば、ｍＲＮＡ）又は遺伝子発現産物（例えば、タンパク質）を分析することによって決定することができる。遺伝子型決定は、好ましくはｅｘ  ｖｉｖｏで実施される。
【００７３】
本発明のさらなる態様は、精神病性障害又は双極性障害を有する患者に対する治療戦略を決定するためのキットである。このようなキットは、例えば、非定型抗精神病薬（例えば、イロペリドン）での治療に対する患者の応答を予測すること、及びこのような予後に基づいて、より低い又はより高い用量の非定型抗精神病薬で患者を治療すること、他の治療（例えば、定型抗精神病薬）と併用して非定型抗精神病薬で患者を治療すること、又は全体として異なる治療を選択すること、において有用である。
【００７４】
本発明のキットは、特に本明細書中に記載される遺伝子座中に存在する対立遺伝子を同定するための、物理的要素（例えば、プローブ）（限定ではなく、特異的プライマー、標識化核酸プローブ、抗体、タンパク質捕捉剤（複数可）、試薬（複数可）、指示シート（複数可）及び本発明の実施に有用な他の要素が含まれる）の組合せである。
【００７５】
本発明のキットは、本明細書中の別の箇所に記載したような、関連性のある遺伝子座の少なくとも１つにおける患者の遺伝子型を検出するために限定された少なくとも１つの試薬を備えてもよい。検出は、例えばヒトの染色体ＤＮＡの関連する部分を直接配列決定することによって直接的であり得、又は、例えばメッセンジャーＲＮＡ転写物を配列決定すること若しくは遺伝子発現産物（即ち、ポリペプチド）を配列決定することによって間接的であり得る。従って、試薬は例えば、ポリヌクレオチド、又はポリヌクレオチドのアレイ、又は抗体若しくは抗体のパネルであってもよい。
【００７６】
このキットはまた、１つ又は複数の遺伝子特異的遺伝子型決定プライマー組成物を備えてもよい。このプライマー組成物は、少なくとも１つの遺伝子特異的遺伝子型決定ポリヌクレオチドを含むことができる。この組成物は、対立遺伝子特異的プライマー対の２つ以上のセットを含むことができる。２つの対立遺伝子特異的遺伝子型決定オリゴヌクレオチドは、別個の容器中に包装してもよい。いくつかの実施形態において、変性プライマーセットが、増幅のために提供される。
【００７７】
別の実施形態において、このキットは任意選択で、遺伝子発現産物を検出及び識別するための等電点電気泳動法のための指示書を備えてもよい。
【００７８】
抗体ベースのキットは、例えば、所与の対立遺伝子の遺伝子発現産物に特異的な、固体支持体に結合された抗体と、遺伝子発現産物に結合し、検出可能な基にコンジュゲートした第二の抗体とを備えることができる。
【００７９】
このキットはまた、緩衝剤、ハイブリダイゼーション緩衝液及びタンパク質安定化剤又は核酸安定化剤（例えば、多糖類など）などの試薬も備え得る。例えばＰＣＲによるＤＮＡ又はＲＮＡの増幅を必要とするアッセイを実施する場合、このキットは、ポリメラーゼ又は反応緩衝液も備え得る。このキットは、任意の適切な様式で包装してもよく、典型的には、試験を実施するため又は結果を解釈するための印刷された指示シートと共に、単一の容器中に全ての要素を備える。
【００８０】
本発明の種々の態様の上記説明は、例示及び説明の目的で提示されている。上記説明は、網羅的であることも、本発明を開示された正確な形態に限定することも意図せず、明らかに、多数の改変及び変形が可能である。当業者に明らかであり得るこのような改変及び変形が、添付の特許請求の範囲により規定される本発明の範囲内に含まれることが意図される。
【００８１】
【表１】
0005535914.tif 000002
【００８２】
【表２】
0005535914.tif 000003
【００８３】
【表３】
0005535914.tif 000004
【００８４】
【表４】
0005535914.tif 000005
【００８５】
（関連出願の相互参照）
本出願は、同時係属中の２００７年９月１０日に出願された米国特許仮出願第６０／９７１，２２７号明細書及び２００８年１月２日に出願された米国特許仮出願第６１／０１８，５４８号明細書の利益を主張し、これらはそれぞれ、参照により本明細書中に組み込まれる。
【００８６】
（配列表）
４ＫＢを占める、２００８年９月１０日に作成した表題「ＶＡＮＤ−００５６−ＰＣＴ＿Ｓｅｑ＿ＩＤｓ．ｔｘｔ」の電子ファイル中に含まれる配列表は、本明細書中に組み込まれる。
【図２ｂ】
0005535914.tif 000006
【図２ｃ】
0005535914.tif 000007
【図２ｄ】
0005535914.tif 000008
【図２ｅ】
0005535914.tif 000009
【図２ｆ】
0005535914.tif 000010
【図１】
0005535914.tif 000011
【図２ａ】
0005535914.tif 000012
【図３】
0005535914.tif 000013
【配列表】
0005535914000001.app