(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（ＩＩＩ）
【化１】
0005544357.tif 000019
［式中、Ｒ１は水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し、Ｒ２は結合基を示し、Ｒ３は水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アシル基を示し、
Ｒ４は一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）
【化２】
0005544357.tif 000020
［式中、Ｒ８、Ｒ９はそれぞれ独立して水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し、Ｒ１０は水素原子、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アルキル基、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アラルキル基、置換基を有していてもよい芳香族基、カルボキシ基が保護されたアミノ酸残基又は置換基を有していてもよい糖残基を示し、ＣＸ−ＣＹはＣＨ−ＣＨ若しくはＣ＝Ｃ（二重結合）を示し、Ａは、ひとつ以上の水酸基を有する生理活性物質から前記ひとつ以上の水酸基のうちのいずれかひとつの水酸基を除いた残基を示す］で表わされる置換基を示し、
Ｒ５は一般式（ＩＶ）あるいは一般式（Ｖ）
【化３】
0005544357.tif 000021
［式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、ＣＸ−ＣＹは前記と同じ意味を示し、Ｒ１１は水酸基、置換基を有していてもよい芳香族アミノ基、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ３０）アルコキシ基、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ３０）アラルキルオキシ基、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基、置換基を有していてもよいジ（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基、カルボキシ基が保護されたアミノ酸及びＮＲ１２ＣＯＮＨＲ１３からなる群から選ばれるひとつ以上の置換基を示し、Ｒ１２、Ｒ１３は同一でも異なっていてもよく（Ｃ３〜Ｃ６）環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示す］で表わされる置換基を示し、
Ｒ６は一般式（ＶＩ）
【化４】
0005544357.tif 000022
［式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、ＣＸ−ＣＹは前記と同じ意味を示す］で表わされる置換基を示し、
Ｒ７は（Ｃ１〜Ｃ３０）アルコキシ基、（Ｃ１〜Ｃ３０）アラルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基、ジ（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基、カルボキシ基が保護されたアミノ酸及びＮＲ１２ＣＯＮＨＲ１３からなる群から選ばれる置換基を示し、Ｒ１２、Ｒ１３は同一でも異なっていてもよく（Ｃ３〜Ｃ６）環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、ｂは５〜１１５００の整数を示し、ｉは１〜２００の整数を示し、ｊ、ｋ、ｍ、ｎは各々０〜２００の整数を示し、且つｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎは２〜２００の整数を示す］
で表される、生理活性物質の高分子結合体。
【請求項２】
Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル基であり、Ｒ２が（Ｃ２〜Ｃ６）アルキレン基であり、Ｒ３が（Ｃ１〜Ｃ３）アシル基であり、ｂが１００〜３００の整数であり、ｉが１〜９０の整数を示し、ｊ、ｋ、ｍ、ｎが各々０〜９０の整数を示し、且つｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎは６〜９０の整数である請求項１に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項３】
Ｒ１がメチル基、Ｒ２がトリメチレン基、Ｒ３がアセチル基、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６におけるＲ８、Ｒ９が共に水素原子であり、ＣＸ−ＣＹがＣＨ−ＣＨである請求項１又は２に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項４】
前記ひとつ以上の水酸基を有する生理活性物質が抗癌剤である請求項１〜３のいずれか一項に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項５】
抗癌剤がタキサン類である請求項４に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項６】
タキサン類がパクリタキセル又はドセタキセルである請求項５に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項７】
抗癌剤がポドフィロトキシン類である請求項４に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項８】
ポドフィロトキシン類がポドフィロトキシン、エトポシド又はテニポシドである請求項７に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項９】
抗癌剤がコンブレタスタチン類である請求項４に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項１０】
コンブレタスタチン類がコンブレタスタチンＡ１又はコンブレタスタチンＡ４である請求項９に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項１１】
抗癌剤が核酸系抗癌剤である請求項４に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項１２】
核酸系抗癌剤がゲムシタビン、カペシタビン、ドキシフルリジン、シタラビン、又は３’−エチニルシチジンである請求項１１に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項１３】
抗癌剤がカンプトテシン又はその類縁体である請求項４に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項１４】
抗癌剤がドキソルビシン、アムルビシン又はアクラシノマイシンである請求項４に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項１５】
前記ひとつ以上の水酸基を有する生理活性物質が抗炎症剤である請求項１〜３のいずれか一項に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項１６】
抗炎症剤がステロイド系抗炎症剤である請求項１５に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項１７】
前記ひとつ以上の水酸基を有する生理活性物質が鎮痛剤、育毛剤又は心筋梗塞サイズ縮小効果による心筋保護剤である請求項１〜３のいずれか一項に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項１８】
鎮痛剤、育毛剤又は心筋梗塞サイズ縮小効果による心筋保護剤がアデノシンである請求項１７記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項１９】
水中でミセルを形成することを特徴とする請求項１〜１８のいずれか一項に記載の生理活性物質の高分子結合体。
【請求項２０】
請求項５、６、９及び１０のいずれか一項に記載の生理活性物質の高分子結合体を有効成分とする抗癌剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリエチレングリコール構造部分と２以上のカルボキシ基を有するポリマーとのブロック共重合体における側鎖に、特定のリンカーを介して水酸基を有する生理活性物質が結合している生理活性物質の高分子結合体及びその用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗癌剤や抗炎症剤等の生理活性物質、特に水に溶けにくい該生理活性物質を高分子担体と結合させて得られる高分子結合体については、生理活性物質自体の生体内薬物動態や水溶性等の改善、有効性の向上を期待して研究されてきた。中でも親水性と疎水性のポリマーが結合したブロック共重合体は、生理活性物質を担持させた疎水性ポリマーを内殻とし、その表面を親水性ポリマーが覆うミセルを形成することによって、薬剤の担持量を増やしてもポリマー全体の水溶性を維持できるという特性を有している。【０００３】
特許文献１にはミセルを形成し水溶性を示すポリエチレングリコールとポリアスパラギン酸のブロック共重合体にリンカーを介さずに薬剤を結合した化合物が記載されており、特許文献２にはポリエチレングリコール類とポリグルタミン酸とのブロック共重合体の側鎖カルボキシ基と、カンプトテシン類のフェノール性水酸基とをエステル結合させたカンプトテシン類の高分子誘導体が記載されている。【０００４】
特許文献３にはポリエチレングリコール類とポリアスパラギン酸のブロック共重合体の側鎖カルボキシ基と、タキサン類のアルコール性水酸基とを結合した化合物が記載されており、ポリアスパラギン酸鎖を構成するコハク酸モノアミド構造部分がイミドを形成するとともにエステル結合が切断されタキサン類を放出することが記載されている。又、特許文献４には同様にポドフィロトキシン類を結合した化合物が記載され、特許文献５には同様にコンブレタスタチン類を結合した化合物が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特許第２６９４９２３号公報
【特許文献２】国際公開第２００４／３９８６９号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００７／１１１２１１号パンフレット
【特許文献４】国際公開第２００７／１３５９１０号パンフレット
【特許文献５】国際公開第２００８／１０４６３号パンフレット
【特許文献６】国際公開第２００６／１２０９１４号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
特許文献１には生理活性物質としてドキソルビシンについて記載されているが、この高分子結合体はブロック共重合体とドキソルビシンが直接アミド結合で結合されている。一般に、アミド結合は化学的に安定な結合様式であり、生体内の加水分解によるドキソルビシンの放出は極めて遅いと考えられ、該高分子結合体の薬効には疑問がある。【０００７】
特許文献２に記載されているカンプトテシン類の高分子結合体は、高反応性を有するフェノール性水酸基とポリグルタミン酸のカルボキシ基とを結合させることにより、生理活性物質が解離しやすいエステル結合を形成させることを特徴としている。特許文献６に記載されているシチジン系代謝拮抗剤の高分子結合体は、高反応性を有する芳香族アミノ基とポリグルタミン酸のカルボキシ基とを結合させることにより、生理活性物質が解離しやすい結合を形成させることを特徴としている。従って、ポリグルタミン酸に低反応性のアルコール性水酸基等を有する生理活性物質を直接結合させた高分子結合体から十分な量の該生理活性物質を放出させることは容易なことではない。【０００８】
特許文献３、４及び５の高分子結合体は、アルコール性水酸基や反応性の低いフェノール性水酸基を有する生理活性物質の高分子結合体であっても、主鎖にコハク酸モノアミド構造部分を持つことにより十分な量の生理活性物質の放出をさせることが可能となっている。【０００９】
しかしながら、高分子結合体の物性、多様な薬剤に対する選択肢の拡大、代謝や分布の違いによる薬効の向上や副作用等の低減等の観点から、新しい医薬品となる高分子結合体が求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者等は前記の課題を解決すべく鋭意努力した結果、ポリエチレングリコール構造部分と２以上のカルボキシ基を有するポリマーとのブロック共重合体、特に、ポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体における側鎖に、コハク酸モノアミド構造を有する特定のリンカーを介して水酸基を有する生理活性物質をエステル結合した化合物が、ポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体の側鎖に直接生理活性物質を結合した化合物よりも高い治療効果を示す場合があること、更に該リンカーの構成要素であるアミン成分を適宜選択することによって、結合している生理活性物質に適した放出速度の調節が可能となることを見出し、本発明を完成した。【００１１】
即ち、本発明は以下の（１）〜（２５）に関する。【００１２】
（１）ポリエチレングリコール構造部分と２以上のカルボキシ基を有するポリマーとのブロック共重合体の側鎖カルボキシ基のうちの少なくともひとつに、一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）【００１３】
【化１】
0005544357.tif 000002
［式中、Ｒ８、Ｒ９はそれぞれ独立して水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し、Ｒ１０は水素原子、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アルキル基、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アラルキル基、置換基を有していてもよい芳香族基、カルボキシ基が保護されたアミノ酸残基又は置換基を有していてもよい糖残基を示し、ＣＸ−ＣＹはＣＨ−ＣＨ若しくはＣ＝Ｃ（二重結合）を示し、Ａは、ひとつ以上の水酸基を有する生理活性物質から前記ひとつ以上の水酸基のうちのいずれかひとつの水酸基を除いた残基を示す］で表わされる置換基がアミド結合している生理活性物質の高分子結合体。【００１４】
（２）２以上のカルボキシ基を有するポリマーがポリアミノ酸又はその誘導体である前記（１）に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００１５】
（３）ポリアミノ酸がポリグルタミン酸である前記（２）に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００１６】
（４）生理活性物質の高分子結合体が一般式（ＩＩＩ）【００１７】
【化２】
0005544357.tif 000003
［式中、Ｒ１は水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し、Ｒ２は結合基を示し、Ｒ３は水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アシル基を示し、
Ｒ４は一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）【００１８】
【化３】
0005544357.tif 000004
［式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、ＣＸ−ＣＹ、Ａは前記と同じ意味を示す］で表わされる置換基を示し、
Ｒ５は一般式（ＩＶ）あるいは一般式（Ｖ）【００１９】
【化４】
0005544357.tif 000005
［式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、ＣＸ−ＣＹは前記と同じ意味を示し、Ｒ１１は水酸基、置換基を有していてもよい芳香族アミノ基、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ３０）アルコキシ基、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ３０）アラルキルオキシ基、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基、置換基を有していてもよいジ（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基、カルボキシ基が保護されたアミノ酸及びＮＲ１２ＣＯＮＨＲ１３からなる群から選ばれるひとつ以上の置換基を示し、Ｒ１２、Ｒ１３は同一でも異なっていてもよく（Ｃ３〜Ｃ６）環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示す］で表わされる置換基を示し、
Ｒ６は一般式（ＶＩ）【００２０】
【化５】
0005544357.tif 000006
［式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、ＣＸ−ＣＹは前記と同じ意味を示す］で表わされる置換基を示し、
Ｒ７は（Ｃ１〜Ｃ３０）アルコキシ基、（Ｃ１〜Ｃ３０）アラルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基、ジ（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基、カルボキシ基が保護されたアミノ酸及びＮＲ１２ＣＯＮＨＲ１３からなる群から選ばれる置換基を示し、Ｒ１２、Ｒ１３は同一でも異なっていてもよく（Ｃ３〜Ｃ６）環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、ｂは５〜１１５００の整数を示し、ｉは１〜２００の整数を示し、ｊ、ｋ、ｍ、ｎは各々０〜２００の整数を示し、且つｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎは２〜２００の整数を示す］
で表される化合物である前記（１）〜（３）のいずれか一項に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００２１】
（５）Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル基であり、Ｒ２が（Ｃ２〜Ｃ６）アルキレン基であり、Ｒ３が（Ｃ１〜Ｃ３）アシル基であり、ｂが１００〜３００の整数であり、ｉが１〜９０の整数を示し、ｊ、ｋ、ｍ、ｎが各々０〜９０の整数を示し、且つｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎは６〜９０の整数である前記（４）記載の生理活性物質の高分子結合体。【００２２】
（６）Ｒ１がメチル基、Ｒ２がトリメチレン基、Ｒ３がアセチル基、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６におけるＲ８、Ｒ９が共に水素原子であり、ＣＸ−ＣＹがＣＨ−ＣＨである前記（４）又は（５）に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００２３】
（７）前記ひとつ以上の水酸基を有する生理活性物質が抗癌剤である前記（１）〜（６）のいずれか一項に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００２４】
（８）抗癌剤がタキサン類である前記（７）に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００２５】
（９）タキサン類がパクリタキセル又はドセタキセルである前記（８）に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００２６】
（１０）抗癌剤がポドフィロトキシン類である前記（７）に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００２７】
（１１）ポドフィロトキシン類がポドフィロトキシン、エトポシド又はテニポシドである前記（１０）に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００２８】
（１２）抗癌剤がコンブレタスタチン類である前記（７）に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００２９】
（１３）コンブレタスタチン類がコンブレタスタチンＡ１又はコンブレタスタチンＡ４である前記（１２）に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００３０】
（１４）抗癌剤が核酸系抗癌剤である前記（７）に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００３１】
（１５）核酸系抗癌剤がゲムシタビン、カペシタビン、ドキシフルリジン、シタラビン、又は３’−エチニルシチジンである前記（１４）に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００３２】
（１６）抗癌剤がカンプトテシン又はその類縁体である前記（７）に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００３３】
（１７）抗癌剤がドキソルビシン、アムルビシン又はアクラシノマイシンである前記（７）に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００３４】
（１８）前記ひとつ以上の水酸基を有する生理活性物質が抗炎症剤である前記（１）〜（６）のいずれか一項に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００３５】
（１９）抗炎症剤がステロイド系抗炎症剤である前記（１８）に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００３６】
（２０）前記ひとつ以上の水酸基を有する生理活性物質が鎮痛剤、育毛剤又は心筋梗塞サイズ縮小効果による心筋保護剤である前記（１）〜（６）のいずれか一項に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００３７】
（２１）鎮痛剤、育毛剤又は心筋梗塞サイズ縮小効果による心筋保護剤がアデノシンである前記（２０）記載の生理活性物質の高分子結合体。【００３８】
（２２）水中でミセルを形成することを特徴とする前記（１）〜（２１）のいずれか一項に記載の生理活性物質の高分子結合体。【００３９】
（２３）前記（１）〜（２２）のいずれか一項に記載の生理活性物質の高分子結合体を有効成分とする医薬品。【００４０】
（２４）前記（７）〜（１７）のいずれか一項に記載の生理活性物質の高分子結合体を有効成分とする抗癌剤。【００４１】
（２５）前記（１８）又は（１９）に記載の生理活性物質の高分子結合体を有効成分とする抗炎症剤。
【発明の効果】
【００４２】
本発明の生理活性物質の高分子結合体は、特にポリエチレングリコールとポリグルタミン酸とのブロック共重合体における側鎖に、特定のリンカーを介して水酸基を有する生理活性物質を結合した化合物であり、高い生物学的効果を発揮することができる。又、本発明の高分子結合体は生理的条件下、生体の加水分解酵素に依存することなく生理活性物質を放出することが可能であるため、個体差に影響されることなく有効な生物学的効果が期待される。更に、該リンカーの構成要素であるアミン成分を適宜選択することによって結合している生理活性物質に適した放出速度の調節が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】実施例の化合物２０〜化合物２５及び比較化合物（ＰＥＧ−Ｇｌｕ−ＣＡ４及びＰＥＧ−Ａｓｐ−ＣＡ４）のＰＢＳ溶液（リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．１）中、３７℃でのコンブレタスタチンＡ４（ＣＡ４）の放出量の全結合量に対する割合を示す。
【図２】実施例の化合物２６〜化合物３０及び比較化合物（ＰＥＧ−Ａｓｐ−ＤＴＸ）のＰＢＳ溶液（ｐＨ７．１）中、３７℃でのドセタキセル（ＤＴＸ）の放出量の全結合量に対する割合を示す。
【図３】実施例の化合物３１〜化合物３５のＰＢＳ溶液（ｐＨ７．１）中、３７℃での各薬剤の放出量の各薬剤の全結合量に対する割合を示す。
【図４】実施例の化合物３６〜化合物３７のＰＢＳ溶液（ｐＨ７．１）中、３７℃でのカペシタビンの放出量の全結合量に対する割合を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
本発明の生理活性物質の高分子結合体は、ポリエチレングリコール構造部分と２以上のカルボキシ基を有するポリマーとのブロック共重合体の側鎖カルボキシ基のうちの少なくともひとつに、前記一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）［式中、Ｒ８、Ｒ９はそれぞれ独立して水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し、Ｒ１０は水素原子、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アルキル基、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アラルキル基、置換基を有していてもよい芳香族基、カルボキシ基が保護されたアミノ酸残基又は置換基を有していてもよい糖残基を示し、ＣＸ−ＣＹはＣＨ−ＣＨ若しくはＣ＝Ｃ（二重結合）を示し、Ａはひとつ以上の水酸基を有する生理活性物質から前記ひとつ以上の水酸基のうちのいずれかひとつの水酸基を除いた残基を示す］で表わされる置換基がアミド結合している。
【００４５】
本発明の生理活性物質の高分子結合体において、ポリエチレングリコール構造部分と２以上のカルボキシ基を有するポリマーとのブロック共重合体における２以上のカルボキシ基を有するポリマーとしては、側鎖にカルボキシ基を有する低分子モノマーが重合して構成されたポリマー、あるいは水酸基等カルボキシ基以外の官能基を有する低分子モノマーの重合体に、例えば、ハロゲノ酢酸等を用いてカルボキシ基を導入したポリマーでもよい。
【００４６】
該ポリマーとしては、例えば、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ポリセリン、ポリシステイン、ポリチロシン、ポリリジン、ポリリンゴ酸、デキストラン又はその部分酸化体、ポリウロン酸等が挙げられる。中でも好ましくはポリグルタミン酸やポリアスパラギン酸等のポリ酸性アミノ酸が挙げられる。
【００４７】
ポリエチレングリコール構造部分と２以上のカルボキシ基を有するポリマーとしては、ポリエチレングリコール構造部分とポリグルタミン酸のブロック共重合体が特に好ましい。
【００４８】
本発明の生理活性物質の高分子結合体における一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）で表わされるリンカーにおいて、Ｒ８、Ｒ９としてはそれぞれ独立して水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基が挙げられ、該置換基としては、例えば、メチル基、エチル基、イソプロピル基等が挙げられる。Ｒ８、Ｒ９として特に好ましくは、両者共に水素原子である。
【００４９】
Ｒ１０としては水素原子、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アルキル基、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アラルキル基、置換基を有していてもよい芳香族基、カルボキシ基が保護されたアミノ酸残基又は置換基を有していてもよい糖残基が挙げられる。
【００５０】
置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アルキル基における（Ｃ１〜Ｃ４０）アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓ−ブチル基、イソブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−ステアリル基等が挙げられ、該置換基としては、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェニルメチル基、メトキシ基、エトキシ基、ジメチルアミノ基等が挙げられる。
【００５１】
置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４０）アラルキル基における（Ｃ１〜Ｃ４０）アラルキル基としては、例えば、ベンジル基、ナフチルメチル基、フェネチル基、４−フェニルブチル基等が挙げられ、置換基としては、例えば、メチル基、エチル基、ニトロ基、塩素原子、臭素原子、ジメチルアミノ基等が挙げられる。
【００５２】
置換基を有していてもよい芳香族基としては、例えば、アニリン、ニトロアニリン、クロロアニリン、アミノフルオロベンゾニトリル、アミノナフタレン、アミノフラボン、アミノフルオレン等から導かれる置換基が挙げられる。
【００５３】
なお、置換基の置換位置は置換可能であれば特に限定されず、置換基数も特に限定されない。
【００５４】
カルボキシ基が保護されたアミノ酸残基のアミノ酸としては、通常のペプチド合成で用いられるカルボキシ基が保護されたアミノ酸が挙げられ、該アミノ酸のカルボキシ基がエステルあるいはアミドにより保護されている化合物が望ましく、例えば、アラニンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル、アスパラギン酸のα若しくはβ（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル、グルタミン酸のα若しくはγ（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル、フェニルアラニンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル、システインの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル、グリシンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル、ロイシンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル、イソロイシンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル、ヒスチジンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル、プロリンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル、セリンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル、スレオニンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル、バリンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル、トリプトファンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル，チロシンの（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルエステル等が挙げられ、特に、フェニルアラニンメチルエステル、グリシンメチルエステル、グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル、ロイシンメチルエステル、フェニルアラニンベンジルエステル、フェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル等が好ましい。該アミノ酸はＤ体でもＬ体でもそれらの混合物であってもよい。
【００５５】
置換基を有していてもよい糖残基の糖としては、例えば、グルコサミン、ガラクトサミン、マンノサミン等が挙げられ、置換基としてはアセチル基、ピバロイル基、ベンジル基、メチル基等が挙げられる。該糖としてはＤ体でもＬ体でもそれらの混合物であってもよい。又、置換基の置換位置及び置換数は可能であれば位置や数は限定されない。
【００５６】
本発明の生理活性物質の高分子結合体においてリンカーとなる一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）におけるＣＸ−ＣＹは、リンカー部分が環状イミド中間体を形成できればよく、ＣＨ−ＣＨ若しくはＣ＝Ｃ（二重結合）であり、例えば、コハク酸モノアミド誘導体やマレイン酸モノアミド誘導体等が挙げられる。
【００５７】
本発明の生理活性物質の高分子結合体においてリンカーにエステル結合している水酸基を有する生理活性物質残基の生理活性物質としては特に限定されないが、フェノール性水酸基、一級水酸基若しくは二級水酸基を有する生理活性物質が好ましい。生理活性物質の残基とは、ひとつ以上の水酸基を有する生理活性物質から、リンカーと結合している水酸基を除いた化合物の部分である。フェノール性水酸基、一級水酸基若しくは二級水酸基の置換位置は特に限定されず、一分子中で単一でも異なっていてもよく、又、分子間で同じでも異なっていてもよい。生理活性物質が複数の水酸基を有する場合、それらの水酸基が同一又は異なるブロック共重合体と結合してもよく、それらも本発明に含まれる。
【００５８】
該生理活性物質としては、例えば、抗癌剤としてタキサン類のパクリタキセルやドセタキセル等、ポドフィロトキシン類のポドフィロトキシン、エトポシド又はテニポシド等、コンブレタスタチン類のコンブレタスタチンＡ１、コンブレタスタチンＡ４等、核酸類のゲムシタビン、カペシタビン、ドキシフルリジン、シタラビン、３’−エチニルシチジン等、アンスラサイクリン系配糖体類のドキソルビシン、アムルビシン、アクラシノマイシン等、その他のカンプトテシンやその類縁体が挙げられ、抗炎症剤としてフェノール性水酸基若しくはアルコール性水酸基を有するステロイド類等が挙げられ、例えば、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、クロベタゾール、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、フルオキシノロンアセトニド、ヒドロコルチゾン、ジフルプレドナード、ベクロメタゾン、トリアムシノロン、アルクロメタゾン等が挙げられ、あるいは、鎮痛剤、育毛剤又は心筋梗塞サイズ縮小効果による心筋保護剤としてアデノシンが挙げられる。
【００５９】
以下に、ドセタキセル、エトポシド、コンブレタスタチンＡ４、ゲムシタビン、プレドニゾロン、パクリタキセル、アデノシン、カペシタビン、３’−エチニルシチジンについて構造式を示す。
【００６０】
ドセタキセル
【００６１】
【化６】
0005544357.tif 000007
【００６２】
エトポシド
【００６３】
【化７】
0005544357.tif 000008
【００６４】
コンブレタスタチンＡ４
【００６５】
【化８】
0005544357.tif 000009
【００６６】
ゲムシタビン
【００６７】
【化９】
0005544357.tif 000010
【００６８】
プレドニゾロン
【００６９】
【化１０】
0005544357.tif 000011
【００７０】
パクリタキセル
【００７１】
【化１１】
0005544357.tif 000012
【００７２】
アデノシン
【００７３】
【化１２】
0005544357.tif 000013
【００７４】
カペシタビン
【００７５】
【化１３】
0005544357.tif 000014
【００７６】
３’−エチニルシチジン
【００７７】
【化１４】
0005544357.tif 000015
【００７８】
本発明の生理活性物質の高分子結合体としては前記一般式（ＩＩＩ）［式中、Ｒ１は水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し、Ｒ２は結合基を示し、Ｒ３は水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ６）アシル基を示し、
Ｒ４は前記一般式（Ｉ）あるいは一般式（ＩＩ）［式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、ＣＸ−ＣＹ、Ａは前記と同じ意味を示す］で表わされる置換基を示し、
Ｒ５は前記一般式（ＩＶ）あるいは一般式（Ｖ）［式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、ＣＸ−ＣＹは前記と同じ意味を示し、Ｒ１１は水酸基、置換基を有していてもよい芳香族アミノ基、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ３０）アルコキシ基、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ３０）アラルキルオキシ基、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基、置換基を有していてもよいジ（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基、カルボキシ基が保護されたアミノ酸及びＮＲ１２ＣＯＮＨＲ１３からなる群から選ばれるひとつ以上の置換基を示し、Ｒ１２、Ｒ１３は同一でも異なっていてもよく（Ｃ３〜Ｃ６）環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示す］で表わされる置換基を示し、
Ｒ６は前記一般式（ＶＩ）［式中、式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、ＣＸ−ＣＹは前記と同じ意味を示す］で表わされる置換基を示し、
Ｒ７は（Ｃ１〜Ｃ３０）アルコキシ基、（Ｃ１〜Ｃ３０）アラルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基、ジ（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基、カルボキシ基が保護されたアミノ酸及びＮＲ１２ＣＯＮＨＲ１３からなる群から選ばれる置換基を示し、Ｒ１２、Ｒ１３は同一でも異なっていてもよく（Ｃ３〜Ｃ６）環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、ｂは５〜１１５００の整数を示し、ｉは１〜２００の整数を示し、ｊ、ｋ、ｍ、ｎは各々０〜２００の整数を示し、且つｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎは２〜２００の整数を示す］で表される化合物が好ましい。
【００７９】
一般式（ＩＩＩ）中のＲ１における（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基としては、（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が挙げられ、好ましくは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基が挙げられ、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基等が挙げられ、中でもメチル基が特に好ましい。
【００８０】
一般式（ＩＩＩ）中のＲ２の結合基としては（Ｃ２〜Ｃ６）アルキレン基が好ましく、例えば、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基等が挙げられ、中でもトリメチレン基が特に好ましい。
【００８１】
一般式（ＩＩＩ）中のＲ３における（Ｃ１〜Ｃ６）アシル基としては特に限定されず、好ましくは（Ｃ１〜Ｃ３）アシル基が挙げられ、例えば、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基等が挙げられ、中でもアセチル基が特に好ましい。
【００８２】
一般式（ＩＩＩ）中のＲ４における一般式（Ｉ）若しくは一般式（ＩＩ）中のＲ８、Ｒ９としては、前記した一般式（Ｉ）若しくは一般式（ＩＩ）のＲ８、Ｒ９と同じ基が挙げられ、好ましい基も同様に水素原子である。
【００８３】
一般式（ＩＩＩ）中のＲ４における一般式（Ｉ）若しくは一般式（ＩＩ）中のＲ１０としては、前記した一般式（Ｉ）若しくは一般式（ＩＩ）のＲ１０と同じ基が挙げられる。
【００８４】
一般式（ＩＩＩ）中のＲ４における一般式（Ｉ）若しくは一般式（ＩＩ）中の生理活性物質残基Ａとしては、前記した一般式（Ｉ）若しくは一般式（ＩＩ）のＡと同じ生理活性物質残基が挙げられる。
【００８５】
一般式（ＩＩＩ）中のＲ５における一般式（ＩＶ）あるいは一般式（Ｖ）中のＲ８、Ｒ９、Ｒ１０、ＣＸ−ＣＹとしては前記した一般式（Ｉ）若しくは一般式（ＩＩ）のＲ８、Ｒ９、Ｒ１０、ＣＸ−ＣＹと同じ基が挙げられる。
【００８６】
一般式（ＩＩＩ）中のＲ５において一般式（ＩＶ）あるいは一般式（Ｖ）中のＲ１１としての置換基を有していてもよい芳香族アミノ基としては、アニリノ基、ナフチルアミノ基、ピリジルアミノ基、アデノシンのアミノ基、シチジンのアミノ基、核酸のアミノ基等が挙げられる。
【００８７】
一般式（ＩＩＩ）中のＲ５において一般式（ＩＶ）あるいは一般式（Ｖ）中のＲ１１としての置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ３０）アルコキシ基における（Ｃ１〜Ｃ３０）アルコキシ基としては、直鎖又は分岐鎖の（Ｃ１〜Ｃ３０）アルコキシ基が挙げられ、直鎖又は分岐鎖の（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ基が好ましく、例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基等が挙げられ、置換基としては、例えば、フェニル基、ナフチル基、フェニルメチル基、メトキシ基、エトキシ基、ジメチルアミノ基等が挙げられる。
【００８８】
置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ３０）アラルキルオキシ基における（Ｃ１〜Ｃ３０）アラルキルオキシ基としては、直鎖又は分岐鎖の（Ｃ１〜Ｃ３０）アラルキルオキシ基が挙げられ、直鎖又は分岐鎖の（Ｃ１〜Ｃ１２）アラルキルオキシ基が好ましく、例えば、ベンジルオキシ基、４−フェニルブトキシ基等が挙げられ、置換基としては、例えば、メチル基、エチル基、ニトロ基、クロル基、ブロモ基、ジメチルアミノ基等が挙げられる。
【００８９】
置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基又はジ（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基における（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基又はジ（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基としては、直鎖又は分岐鎖の（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基又はジ（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基が挙げられ、直鎖又は分岐鎖の（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキルアミノ基又はジ（Ｃ１〜Ｃ２０）アルキルアミノ基が好ましく、例えば、メチルアミノ基、エチルアミノ基、ｎ−プロピルアミノ基、ｉ−プロピルアミノ基、ｎ−ブチルアミノ基、ｔ−ブチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジ（ｎ−ブチル）アミノ基等が挙げられ、置換基としては例えばフェニル基、ナフチル基、フェニルメチル基、メトキシ基、エトキシ基、ジメチルアミノ基等が挙げられる。
【００９０】
カルボキシ基が保護されたアミノ酸としては、前記した一般式（Ｉ）若しくは一般式（ＩＩ）のＲ１０におけるカルボキシ基が保護されたアミノ酸と同じアミノ酸が挙げられ、好ましいアミノ酸も同様である。
【００９１】
一般式（ＩＩＩ）中のＲ５における一般式（ＩＶ）あるいは一般式（Ｖ）中のＲ１１としてのＮＲ１２ＣＯＮＨＲ１３［Ｒ１２、Ｒ１３は同一でも異なっていてもよく（Ｃ３〜Ｃ６）環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基である］としては特に限定されないが、例えば、シクロヘキシルアミノカルボニルシクロヘキシルアミノ基、イソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基等が好ましい。
【００９２】
一般式（ＩＩＩ）中のＲ６における一般式（ＶＩ）中のＲ８、Ｒ９、Ｒ１０、ＣＸ−ＣＹとしては前記した一般式（Ｉ）若しくは一般式（ＩＩ）のＲ８、Ｒ９、Ｒ１０、ＣＸ−ＣＹと同じ基が挙げられ、好ましい基も同様である。
【００９３】
一般式（ＩＩＩ）中のＲ７における（Ｃ１〜Ｃ３０）アルコキシ基、（Ｃ１〜Ｃ３０）アラルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基、ジ（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基としては、一般式（ＩＩＩ）中のＲ５における一般式（ＩＶ）あるいは一般式（Ｖ）中のＲ１１として前記している各々の基が挙げられ、好ましい基も同様である。又、カルボキシ基が保護されたアミノ酸としは、一般式（ＩＩＩ）中のＲ５における一般式（ＩＶ）あるいは一般式（Ｖ）中のＲ１１として前記しているアミノ酸が挙げられる。ＮＲ１２ＣＯＮＨＲ１３［Ｒ１２、Ｒ１３は同一でも異なっていてもよく（Ｃ３〜Ｃ６）環状アルキル基若しくは三級アミノ基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基である］としては一般式（ＩＩＩ）中のＲ５における一般式（ＩＶ）あるいは一般式（Ｖ）中のＲ１１として前記している基が挙げられ、好ましい基も同様である。
【００９４】
本発明の上記一般式（ＩＩＩ）で表される生理活性物質の高分子結合体における全グルタミン酸数はｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎで表され、３〜２００個程度であり、好ましくは６〜９０個程度であり、特に好ましくは６〜６０個であり、１３〜４０個が殊更好ましい。
【００９５】
全グルタミン酸数（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対する生理活性物質の結合したグルタミン酸数（ｉ）の割合は１〜１００％、好ましくは３〜１００％、更に好ましくは４〜１００％である。又、グルタミン酸数（ｉ）として１〜２００個、好ましくは１〜９０個程度、特に好ましくは２〜６０個程度である。
【００９６】
上記一般式（ＩＩＩ）で表される生理活性物質の高分子結合体におけるグルタミン酸構造の各構成部分は、その結合順は限定されず、ブロック型でもランダム型でもよい。
【００９７】
上記一般式（ＩＩＩ）のｂとしては５〜１１５００程度の整数であるが、好ましくは８〜２３００程度の整数であり、更に好ましくは１００〜３００程度の整数である。
【００９８】
上記一般式（ＩＩＩ）のポリエチレングリコール構造部分の分子量としては３００〜５０００００程度であり、好ましくは５００〜１０００００程度、更に好ましくは１０００〜５００００程度である。
【００９９】
本発明の生理活性物質の高分子結合体の分子量は５００〜６０００００程度、好ましくは６００〜１１００００程度、更に好ましくは１１００〜８００００程度である。
なお、本発明における分子量とはＧＰＣ法で測定した重量平均分子量である。
【０１００】
本発明の生理活性物質の高分子結合体は、水中でポリエチレングリコール構造部分を外殻とし、生理活性物質がリンカーを介して結合している疎水性ポリマーを内殻とするミセルを形成してもよい。
【０１０１】
本発明の生理活性物質の高分子結合体の製造は、特にポリエチレングリコール構造部分とポリグルタミン酸とのブロック共重合体の側鎖カルボキシ基と、リンカー部分となる例えばアミノ基を有しカルボキシ基を保護したコハク酸モノアミド誘導体又はアミノ基を有しカルボキシ基を保護したフマル酸モノアミド誘導体とを、有機溶媒中、脱水縮合剤を用いてアミド結合させ、保護基を脱保護して生成するカルボキシ基と水酸基を有する生理活性物質の水酸基とを有機溶媒中、脱水縮合剤を用いてエステル結合させることを特徴とする。
【０１０２】
即ち、例えば、国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載の方法によって調製されるメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体と、アミノコハク酸モノアミドのカルボキシ基をベンジル基等で保護した化合物とを両者が溶解する有機溶媒、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＩ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）等の非プロトン性極性溶媒に溶解し、０〜１８０℃、好ましくは５〜５０℃でジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＷＳＣ）塩酸塩、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキシキノリノン（ＥＥＤＱ）等の脱水縮合剤を用いた反応に付して縮合した後、カルボキシ基の保護基を脱保護し、次いで水酸基を有する生理活性物質を上記と同様な溶媒中、上記と同様な脱水縮合剤を用いて結合させる方法である。
【０１０３】
縮合反応の際には、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）や１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）等の反応補助剤を用いてもよい。
【０１０４】
又、Ｒ７あるいはＲ１１におけるＮＲ１２ＣＯＮＨＲ１３は、上記のカルボジイミド類を縮合剤として用いる反応によっても得られる。
【０１０５】
一般式（ＩＩＩ）中のＲ７、あるいは、一般式（ＩＩＩ）中のＲ５の一般式（ＩＶ）あるいは一般式（Ｖ）中のＲ１１における（Ｃ１〜Ｃ３０）アルコキシ基、（Ｃ１〜Ｃ３０）アラルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基、ジ（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基又はカルボキシ基が保護されたアミノ酸である化合物の製造は、ブロック共重合体のカルボキシ基を通常の脱水縮合反応で用いられる方法にて活性化した後に、結合したい量の対応するアルコール、対応するアミンやカルボキシ基が保護されたアミノ酸等を塩基性条件下に反応させればよい。又、対応するアルコール、対応するアミンやカルボキシ基が保護されたアミノ酸等を通常の脱水縮合反応で用いられる方法にて活性化させてからポリマーに反応させる方法等でもよい。
【０１０６】
その後にアミノ基を有しカルボキシ基を保護したコハク酸モノアミド誘導体又はアミノ基を有しカルボキシ基を保護したコハク酸モノアミド誘導体と脱水縮合反応させ、保護基を脱保護して生成するカルボキシ基と水酸基を有する生理活性物質の水酸基とを脱水縮合剤を用いてエステル結合させればよい。
【０１０７】
あるいは、ポリエチレングリコール構造部分とカルボキシ基を有するポリマーとのブロック共重合体の側鎖カルボキシ基と、アミノ基を有しカルボキシ基を保護したコハク酸モノアミド誘導体又はアミノ基を有しカルボキシ基を保護したコハク酸モノアミド誘導体とを脱水縮合反応させ、残余のカルボキシ基を活性化し、ここに（Ｃ１〜Ｃ３０）アルコキシ基、（Ｃ１〜Ｃ３０）アラルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基、ジ（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基又はカルボキシ基が保護されたアミノ酸等を導入し、次いで前記と同様に水酸基を有する生理活性物質と反応させてもよい。
【０１０８】
更に、異なるアルコール、アミン等を繰り返し反応させて種々の置換基を導入してもよい。
【０１０９】
なお、水酸基を有する生理活性物質がカルボキシ基と反応する他の官能基を有している場合は、必要に応じて該官能基を保護し、縮合反応後に適当な段階で脱保護すればよい。
【０１１０】
ただし、本発明の生理活性物質の高分子結合体の製造方法はこれらに限定されるわけではない。
【０１１１】
本発明の生理活性物質の高分子結合体は、担持する生理活性物質の薬効に相当する疾患を適応症とする医薬として使用できる。例えば、抗癌剤、抗炎症剤等である。該高分子誘導体は、注射剤、錠剤、散剤等の通常使用されている剤型にて使用され得る。製剤化に当たり通常使用されている薬学的に許容される担体、例えば、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、溶剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定化剤、懸濁化剤、保存剤、無痛化剤、色素、香料等が使用できる。
【０１１２】
本発明の生理活性物質の高分子結合体は注射剤としての使用が好ましく、通常、例えば、水、生理食塩水、５％ブドウ糖又はマンニトール液、水溶性有機溶媒（例えば、グリセロール、エタノール、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール、クレモホール等及びそれらの混合液）並びに水と該水溶性有機溶媒の混合液等が使用される。
【０１１３】
本発明の生理活性物質の高分子結合体の投与量は、その生理活性物質の特性、患者の性別、年齢、生理的状態、病態等により当然変更され得るが、非経口的に、通常、成人１日当たり、活性成分として０．０１〜５００ｍｇ／ｍ２、好ましくは０．１〜２５０ｍｇ／ｍ２を投与する。注射による投与は、静脈、動脈、患部（腫瘍部）等に行われる。
【実施例】
【０１１４】
以下、本発明を実施例により更に説明する。ただし、本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。なお、本発明品が水溶液中で構成する粒子の大きさ（粒径）を示すガウス分布分析は、ＺｅｔａＰｏｔｅｎｔｉａｌ／Ｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｒ  ＮＩＣＯＭＰＴＭ  ３８０ＺＬＳ（Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｓｉｚｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）にて行った。【０１１５】
合成例１  化合物１（グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル）の合成
グリシン塩酸塩（和光純薬製）１．０ｇと、４−フェニル−１−ブタノール（東京化成製）６．７ｇをジオキサン５ｍｌに懸濁後、４Ｎ−塩酸／ジオキサン５ｍｌを加え、室温にて３日間攪拌した。不溶物を濾別しジオキサン５ｍｌで洗浄した。濾液と洗液を合わせた溶液にジエチルエーテル１００ｍｌを加え、室温にて１時間攪拌した。析出した沈殿を濾取して減圧下乾燥し化合物１の塩酸塩１．７ｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）：１．６３（ｍ，４Ｈ）、２．６１（ｍ，２Ｈ）、３．８０（ｓ，２Ｈ）、４．１８（ｍ，２Ｈ）、７．１−７．３（ｍ，５Ｈ）、８．０−８．６（ｂｒ，２Ｈ）【０１１６】
合成例２  化合物２（フェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル）の合成
フェニルアラニン塩酸塩（国産化学製）１．５ｇと、４−フェニル−１−ブタノール（東京化成製）６．７ｇをジオキサン５ｍｌに懸濁後、４Ｎ−塩酸／ジオキサン５ｍｌを加え、室温にて３日間攪拌した。次いで、実施例１と同様な操作で化合物２の塩酸塩１．６ｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）：１．４６（ｍ，４Ｈ）、２．５３（ｍ，２Ｈ）、２．９７−３．１８（ｍ，２Ｈ）、４．０６（ｍ，２Ｈ）、４．２７（ｄｄ，１Ｈ）、７．２−７．４（ｍ，１０Ｈ）、８．０−８．８（ｂｒ，２Ｈ）【０１１７】
合成例３  化合物３（アスパラギン酸β−ベンジルエステル−グリシンメチルエステル）の合成
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸β−ベンジルエステル（国産化学製）０．９７ｇと、グリシンメチルエステル塩酸塩（国産化学製）０．３８ｇをＤＭＦ１９ｍｌに溶解後、トリエチルアミン０．４２ｍｌ、ＨＯＢｔ０．５１ｇ、ＷＳＣ塩酸塩０．６３ｇを加え、室温にて一夜攪拌した。反応液を酢酸エチルにて抽出し、冷水、希塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄した。減圧下、酢酸エチルを留去し真空乾燥して固形物１．２ｇを得た。得られた固形物を酢酸エチル１５ｍｌに溶解後、４Ｎ−ＨＣｌ／酢酸エチル１５ｍｌを加え、室温にて１時間攪拌した。反応液にジエチルエーテル１２０ｍｌを加え、室温にて２時間攪拌後、傾斜法にて溶媒を除去し、続いてジエチルエーテルで固形物を洗浄した。オイル状の固形物を減圧下乾燥し化合物３の塩酸塩０．８６ｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）：２．９４（ｍ，４Ｈ）、３．６３（ｓ，３Ｈ）、３．９２（ｄｄｄ，２Ｈ）、４．１８（ｄｄ，１Ｈ）、５．１５（ｍ，２Ｈ）、７．３−７．４（ｍ，５Ｈ）、８．３（ｂｒ，２Ｈ）、８．９３（ｔ，１Ｈ）【０１１８】
合成例４  化合物４（アスパラギン酸β−ベンジルエステル−フェニルアラニンメチルエステル）の合成
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸β−ベンジルエステル（国産化学製）１．３ｇと、フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（国産化学製）０．８６ｇをＤＭＦ２３ｍｌに溶解後、トリエチルアミン０．５６ｍｌ、ＨＯＢｔ０．７３ｇ、ＷＳＣ塩酸塩０．８４ｇを加え、室温にて一夜攪拌した。次いで、実施例３と同様な操作にて固形物２．０ｇを得た。得られた固形物を酢酸エチル２０ｍｌに溶解後、４Ｎ−塩酸／酢酸エチル２０ｍｌを加え、室温にて１時間攪拌し、次いで、実施例３と同様な操作にて得られた固形物を減圧下乾燥し化合物４の塩酸塩１．６５ｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）：２．６４（ｍ，２Ｈ）、２．９８（ｄｄ，２Ｈ）、３．０９（ｄｄ，２Ｈ）、３．６４（ｓ，３Ｈ）、４．０７（ｄｄ，１Ｈ）、４．６０（ｍ，１Ｈ）、５．１２（ｍ，２Ｈ）、７．１−７．３（ｍ，１０Ｈ）、８．０（ｂｒ，２Ｈ）、８．９６（ｄ，１Ｈ）【０１１９】
合成例５  化合物５（アスパラギン酸β−ベンジルエステル−ロイシンメチルエステル）の合成
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸β−ベンジルエステル（国産化学製）１．３ｇと、ロイシンメチルエステル塩酸塩（国産化学製）０．７３ｇをＤＭＦ２３ｍｌに溶解後、トリエチルアミン０．５６ｍｌ、ＨＯＢｔ０．７３ｇ、ＷＳＣ塩酸塩０．８４ｇを加え、室温にて一夜攪拌した。次いで、実施例３と同様な操作にて固形物１．９ｇを得た。得られた固形物を酢酸エチル２０ｍｌに溶解後、４Ｎ−塩酸／酢酸エチル２０ｍｌを加え、室温にて１時間攪拌し、次いで、実施例３と同様な操作にて得られた固形物を減圧下乾燥し化合物５の塩酸塩１．５１ｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）：０．８８（ｄｄ，６Ｈ）、１．５−１．８（ｍ，３Ｈ）、２．８４（ｄｄ，２Ｈ）、２．９５（ｄｄ，２Ｈ）、３．６２（ｓ，３Ｈ）、４．１５（ｄｄ，１Ｈ）、４．３２（ｍ，１Ｈ）、５．１７（ｍ，２Ｈ）、７．３−７．４（ｍ，５Ｈ）、８．０（ｂｒ，２Ｈ）、８．７９（ｄ，１Ｈ）【０１２０】
合成例６  化合物６（アスパラギン酸β−ベンジルエステル−グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル）の合成
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸β−ベンジルエステル（国産化学製）１．３ｇと、合成例１で得られた化合物１の塩酸塩０．９７ｇをＤＭＦ２３ｍｌに溶解後、トリエチルアミン０．５６ｍｌ、ＨＯＢｔ０．７３ｇ、ＷＳＣ塩酸塩０．８４ｇを加え、室温にて一夜攪拌した。次いで、実施例３と同様な操作にて固形物２．０ｇを得た。得られた固形物を酢酸エチル２０ｍｌに溶解後、４Ｎ−塩酸／酢酸エチル２０ｍｌを加え、室温にて１時間攪拌し、次いで、実施例３と同様な操作にて得られた固形物を減圧下乾燥し化合物６の塩酸塩１．７２ｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）：１．５９（ｍ，４Ｈ）、２．５９（ｍ，２Ｈ）、２．８０（ｄｄ，２Ｈ）、２．９３（ｄｄ，２Ｈ）、３．９１（ｄｄｄ，２Ｈ）、４．０７（ｍ，３Ｈ）、５．１５（ｍ，２Ｈ）、７．２−７．４（ｍ，１０Ｈ）、８．８（ｂｒ，１Ｈ）【０１２１】
合成例７  化合物７（アスパラギン酸β−ベンジルエステル  ｎ−ブチルアミド）の合成
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸β−ベンジルエステル（国産化学製）１．３ｇと、ｎ−ブチルアミン０．４０ｇをＤＭＦ２３ｍｌに溶解後、ＨＯＢｔ０．７３ｇ、ＷＳＣ塩酸塩０．８４ｇを加え、室温にて一夜攪拌した。次いで、実施例３と同様な操作にて固形物１．５４ｇを得た。得られた固形物を酢酸エチル２０ｍｌに溶解後、４Ｎ−塩酸／酢酸エチル２０ｍｌを加え、室温にて１時間攪拌し、次いで、実施例３と同様な操作にて得られた固形物を減圧下乾燥し化合物７の塩酸塩１．２４ｇを得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）：０．８５（ｔ，３Ｈ）、１．２７（ｍ，２Ｈ）、１．３７（ｍ，２Ｈ）、２．９１（ｄｄｄ，２Ｈ）、３．０９（ｍ，２Ｈ）、４．０２（ｄｄ，２Ｈ）、５．１４（ｍ，２Ｈ）、７．３９（ｍ，５Ｈ）、８．１５（ｂｒ，２Ｈ）、８．４３（ｔ，１Ｈ）【０１２２】
合成例８  化合物８（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と、アスパラギン酸β−ベンジルエステル−グリシンメチルエステルとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ（メチル基）、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ（アセチル基）、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシンメチルエステル残基、Ｒ１１＝ベンジルオキシ基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法によって調製したメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体２．０ｇと、合成例３で得られた化合物３（０．８６ｇ）をＤＭＦ４０ｍｌに溶解し、２５℃にてトリエチルアミン０．３６ｍｌ、ＤＭＡＰ０．０４ｇ、ＤＩＰＣ０．９０ｍｌを加えて、２５℃にて２０時間撹拌した。反応液にエタノール８０ｍｌ及びジイソプロピルエーテル３２０ｍｌを加えて室温にて２時間攪拌し、沈析物を濾取してエタノール／ジイソプロピルエーテル（１／４（ｖ／ｖ）、４０ｍｌ）で洗浄した。得られた沈析物をアセトニトリル４４ｍｌ及び水１１ｍｌに５℃にて溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、５ｍｌ）に通塔し、アセトニトリル／水（５／１（ｖ／ｖ）、１５ｍｌ）にて溶出した。得られた溶出画分に７５ｍｌの水を加え、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物８（２．７１ｇ）を得た。【０１２３】
化合物８に結合したアスパラギン酸β−ベンジルエステル−グリシンメチルエステルの含量は、化合物８に２Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液を加えて４０℃で１時間攪拌後、遊離したベンジルアルコールをＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）で分析し、市販のベンジルアルコールにて得られた検量線から求めたベンジルアルコール量から計算した。その結果、結合したアスパラギン酸β−ベンジルエステル−グリシンメチルエステルの含量は２８．３％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｊの割合は９３％だった。残りのグルタミン酸の側鎖のカルボニル基にはイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミド基若しくは水酸基が結合している。【０１２４】
合成例９  化合物９（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と、アスパラギン酸β−ベンジルエステル−フェニルアラニンメチルエステルとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝フェニルアラニンメチルエステル残基、Ｒ１１＝ベンジルオキシ基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法によって調製したメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体３．０９ｇと、合成例４で得られた化合物４（１．６５ｇ）をＤＭＦ５５ｍｌに溶解し、２５℃にてトリエチルアミン０．５５ｍｌ、ＤＭＡＰ０．０５ｇ、ＤＩＰＣ１．３７ｍｌを加えて、２５℃にて２０時間撹拌した。次いで、化合物８と同様な操作にて得られた沈析物を、アセトニトリル７０ｍｌ及び水２０ｍｌに５℃にて溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、１０ｍｌ）に通塔し、アセトニトリル／水（５／１（ｖ／ｖ）、３０ｍｌ）にて溶出した。得られた溶出画分に１３０ｍｌの水を加え、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物９（４．５２ｇ）を得た。【０１２５】
化合物９に結合したアスパラギン酸β−ベンジルエステル−フェニルアラニンメチルエステルの含量は、前記化合物８と同様の操作にて求めたベンジルアルコール量から計算した。その結果、結合したアスパラギン酸β−ベンジルエステル−フェニルアラニンメチルエステルの含量は３４．０％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｊの割合は９３％だった。残りのグルタミン酸の側鎖にはイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミド基若しくは水酸基が結合している。【０１２６】
合成例１０  化合物１０（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と、アスパラギン酸β−ベンジルエステル−ロイシンメチルエステルとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝ロイシンメチルエステル残基、Ｒ１１＝ベンジルオキシ基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法によって調製したメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体３．０８ｇと、合成例５で得られた化合物５（１．５１ｇ）をＤＭＦ５４ｍｌに溶解し、２５℃にてトリエチルアミン０．５４ｍｌ、ＤＭＡＰ０．０５ｇ、ＤＩＰＣ１．３６ｍｌを加えて、２５℃にて２０時間撹拌した。次いで、前記化合物８と同様な操作にて得られた沈析物を、アセトニトリル７０ｍｌ及び水２０ｍｌに５℃にて溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、１０ｍｌ）に通塔し、アセトニトリル／水（５／１（ｖ／ｖ）、３０ｍｌ）にて溶出した。得られた溶出画分に１３０ｍｌの水を加え、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物１０（４．２６ｇ）を得た。【０１２７】
化合物１０に結合したアスパラギン酸β−ベンジルエステル−ロイシンメチルエステルの含量は、前記化合物８と同様の操作にて求めたベンジルアルコール量から計算した。その結果、結合したアスパラギン酸β−ベンジルエステル−ロイシンメチルエステルの含量は２８．９％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｊの割合は８１％だった。残りのグルタミン酸の側鎖にはイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミド基若しくは水酸基が結合している。【０１２８】
合成例１１  化合物１１（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と、アスパラギン酸β−ベンジルエステル−グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル残基、Ｒ１１＝ベンジルオキシ基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法によって調製したメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体２．８４ｇと、合成例６で得られた化合物６（１．７２ｇ）をＤＭＦ５０ｍｌに溶解し、２５℃にてトリエチルアミン０．５４ｍｌ、ＤＭＡＰ０．０５ｇ、ＤＩＰＣ１．２６ｍｌを加えて、２５℃にて２０時間撹拌した。次いで、前記化合物８と同様な操作にて得られた沈析物を、アセトニトリル７０ｍｌ及び水２０ｍｌに５℃にて溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、１０ｍｌ）に通塔し、アセトニトリル／水（５／１（ｖ／ｖ）、３０ｍｌ）にて溶出した。得られた溶出画分に１３０ｍｌの水を加え、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物１１（４．２５ｇ）を得た。【０１２９】
化合物１１に結合したアスパラギン酸β−ベンジルエステル−グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルの含量は、前記化合物８と同様の操作にて求めたベンジルアルコール量から計算した。その結果、結合したアスパラギン酸β−ベンジルエステル−グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルの含量は３６．３％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｊの割合は９５％だった。残りのグルタミン酸の側鎖にはイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミド基若しくは水酸基が結合している。【０１３０】
合成例１２  化合物１２（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と、アスパラギン酸β−ベンジルエステル  ｎ−ブチルアミドとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝ｎ−ブチル基、Ｒ１１＝ベンジルオキシ基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法によって調製したメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体２．９２ｇと、合成例７で得られた化合物７（１．２４ｇ）をＤＭＦ５２ｍｌに溶解し、２５℃にてトリエチルアミン０．５５ｍｌ、ＤＭＡＰ０．０５ｇ、ＤＩＰＣ１．３０ｍｌを加えて、２５℃にて２０時間撹拌した。次いで、前記化合物８と同様な操作にて得られた沈析物を、アセトニトリル６０ｍｌ及び水１５ｍｌに５℃にて溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、１０ｍｌ）に通塔し、アセトニトリル／水（５／１（ｖ／ｖ）、３０ｍｌ）にて溶出した。得られた溶出画分に１００ｍｌの水を加え、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物１２（３．８９ｇ）を得た。【０１３１】
化合物１２に結合したアスパラギン酸β−ベンジルエステル  ｎ−ブチルアミドの含量は、前記化合物８と同様の操作にて求めたベンジルアルコール量から計算した。その結果、結合したアスパラギン酸β−ベンジルエステル  ｎ−ブチルアミドの含量は２８．４％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｊの割合は９５％だった。残りのグルタミン酸の側鎖にはイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミド基若しくは水酸基が結合している。【０１３２】
合成例１３  化合物１３（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と、アスパラギン酸β−ベンジルエステル−グリシンメチルエステル及びフェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ７＝フェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルのアミノ基、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシンメチルエステル残基、Ｒ１１＝ベンジルオキシ基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法によって調製したメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体２．１７ｇと、合成例２で得られた化合物２（０．１ｇ）及び合成例３で得られた化合物３（０．８７ｇ）をＤＭＦ３８ｍｌに溶解し、２５℃にてトリエチルアミン０．４１ｍｌ、ＤＭＡＰ０．０４ｇ、ＤＩＰＣ０．９７ｍｌを加えて、２５℃にて２０時間撹拌した。次いで、前記化合物８と同様な操作にて得られた沈析物を、アセトニトリル５０ｍｌ及び水１３ｍｌに５℃にて溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、１０ｍｌ）に通塔し、アセトニトリル／水（５／１（ｖ／ｖ）、３０ｍｌ）にて溶出した。得られた溶出画分に８０ｍｌの水を加え、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物１３（２．９４ｇ）を得た。【０１３３】
化合物１３に結合したアスパラギン酸β−ベンジルエステル−グリシンメチルエステルの含量は、前記化合物８と同様の操作にて求めたベンジルアルコール量から計算した。その結果、結合したアスパラギン酸β−ベンジルエステル−グリシンメチルエステルの含量は２６．３％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｊの割合は８４％だった。又、化合物１３に結合したフェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルの含量は、化合物１３に２Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液を加えて４０℃で１時間攪拌後、遊離した４−フェニル−１−ブタノールをＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）で分析し、市販の４−フェニル−１−ブタノールにて得られた検量線から求めた４−フェニル−１−ブタノール量から計算した。その結果、結合したフェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルの含量は３．４％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するフェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルのアミノ基が結合しているｍの割合は１１％だった。残りのグルタミン酸の側鎖にはイソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミド基若しくは水酸基が結合している。【０１３４】
合成例１４  化合物１４（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と、アスパラギン酸−グリシンメチルエステルとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシンメチルエステル残基、Ｒ１１＝水酸基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
合成例８で得られた化合物８（２．７３ｇ）をＤＭＦ６８ｍｌに溶解し、５％パラジウム炭素（水分含量５０％）０．２７ｇを加え、２５℃で一夜加水素分解反応に供した。５％パラジウム炭素を濾過し酢酸エチル８０ｍｌで洗浄後、濾液にヘプタン４００ｍｌ及び酢酸エチル１２０ｍｌを加えて室温にて２時間攪拌した。沈析物を濾取し真空乾燥して化合物１４（２．３１ｇ）を得た。【０１３５】
合成例１５  化合物１５（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と、アスパラギン酸−フェニルアラニンメチルエステルとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝フェニルアラニンメチルエステル残基、Ｒ１１＝水酸基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
合成例９で得られた化合物９（４．５１ｇ）をＤＭＦ１１３ｍｌに溶解し、５％パラジウム炭素（水分含量５０％）０．４５ｇを加え、２５℃で一夜加水素分解反応に供した。次いで、化合物１４と同様な操作にて化合物１５（３．８１ｇ）を得た。【０１３６】
合成例１６  化合物１６（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と、アスパラギン酸−ロイシンメチルエステルとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝ロイシンメチルエステル残基、Ｒ１１＝水酸基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
合成例１０で得られた化合物１０（４．２１ｇ）をＤＭＦ１０５ｍｌに溶解し、５％パラジウム炭素（水分含量５０％）０．４２ｇを加え、２５℃で一夜加水素分解反応に供した。次いで、化合物１４と同様な操作にて化合物１６（３．６１ｇ）を得た。【０１３７】
合成例１７  化合物１７（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と、アスパラギン酸−グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル残基、Ｒ１１＝水酸基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
合成例１１で得られた化合物１１（４．２０ｇ）をＤＭＦ１０５ｍｌに溶解し、５％パラジウム炭素（水分含量５０％）０．４２ｇを加え、２５℃で一夜加水素分解反応に供した。次いで、化合物１４と同様な操作にて化合物１７（３．５８ｇ）を得た。【０１３８】
合成例１８  化合物１８（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と、アスパラギン酸  ｎ−ブチルアミドとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝ｎ−ブチル基、Ｒ１１＝水酸基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
合成例１２で得られた化合物１２（３．８４ｇ）をＤＭＦ９６ｍｌに溶解し、５％パラジウム炭素（水分含量５０％）０．３８ｇを加え、２５℃で一夜加水素分解反応に供した。次いで、化合物１４と同様な操作にて化合物１８（３．２９ｇ）を得た。【０１３９】
合成例１９  化合物１９（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体と、アスパラギン酸−グリシンメチルエステル及びフェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルとのアミド結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ７＝フェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルのアミノ基、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシンメチルエステル残基、Ｒ１１＝水酸基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
合成例１３で得られた化合物１３（２．８９ｇ）をＤＭＦ７２ｍｌに溶解し、５％パラジウム炭素（水分含量５０％）０．２９ｇを加え、２５℃で一夜加水素分解反応に供した。次いで、化合物１４と同様な操作にて化合物１９（２．４８ｇ）を得た。【０１４０】
実施例１  化合物２０（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、アスパラギン酸−グリシンメチルエステルのアミド結合リンカーを介してコンブレタスタチンＡ４がエステル結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシンメチルエステル残基、Ａ＝コンブレタスタチン残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３８，１６６６−１６７２（１９９５）記載の方法で作成したコンブレタスタチンＡ４（０．１３ｇ）及び合成例１４で得られた化合物１４（０．９７ｇ）をＤＭＦ７ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．０１３ｇ、ＤＩＰＣ０．３２ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。反応液に酢酸エチル２０ｍｌ及びジイソプロピルエーテル８０ｍｌを加え、室温にて２時間攪拌後、沈析物を濾取して酢酸エチル／ジイソプロピルエーテル（１／４（ｖ／ｖ）、２０ｍｌ）で洗浄した。得られた沈析物をアセトニトリル３０ｍｌ及び水３ｍｌに５℃にて溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、３ｍｌ）に通塔し、アセトニトリル／水（１０／１（ｖ／ｖ）、２０ｍｌ）にて溶出した。得られた溶出画分に１００ｍｌの水を加え、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物２０（１．０９ｇ）を得た。【０１４１】
化合物２０中の遊離のコンブレタスタチンＡ４は未検出であり、反応液中の未反応コンブレタスタチンＡ４の量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物２０中のコンブレタスタチンＡ４含量は１０．５％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は３２％だった。
化合物２０の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、１８ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物２０は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１４２】
実施例２  化合物２１（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、アスパラギン酸−フェニルアラニンメチルエステルのアミド結合リンカーを介してコンブレタスタチンＡ４がエステル結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝フェニルアラニンメチルエステル残基、Ａ＝コンブレタスタチン残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
コンブレタスタチンＡ４（０．１３ｇ）及び合成例１５で得られた化合物１５（１．０６ｇ）をＤＭＦ７ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．０１３ｇ、ＤＩＰＣ０．３２ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。次いで、前記化合物２０と同様の操作にて化合物２１（１．１７ｇ）を得た。【０１４３】
化合物２１中の遊離のコンブレタスタチンＡ４は未検出であり、反応液中の未反応コンブレタスタチンＡ４の量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物２１中のコンブレタスタチンＡ４含量は１１．０％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は３７％だった。【０１４４】
化合物２１の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、３３ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物２１は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１４５】
実施例３  化合物２２（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、アスパラギン酸−ロイシンメチルエステルのアミド結合リンカーを介してコンブレタスタチンＡ４がエステル結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝ロイシンメチルエステル残基、Ａ＝コンブレタスタチン残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
コンブレタスタチンＡ４（０．１３ｇ）及び合成例１６で得られた化合物１６（１．１５ｇ）をＤＭＦ７ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．０１３ｇ、ＤＩＰＣ０．３２ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。次いで、前記化合物２０と同様の操作にて化合物２２（１．２６ｇ）を得た。【０１４６】
化合物２２中の遊離のコンブレタスタチンＡ４は未検出であり、反応液中の未反応コンブレタスタチンＡ４の量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物２２中のコンブレタスタチンＡ４含量は１０．３％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は３２％だった。【０１４７】
化合物２２の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、３５ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物２２は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１４８】
実施例４  化合物２３（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、アスパラギン酸−グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルのアミド結合リンカーを介してコンブレタスタチンＡ４がエステル結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル残基、Ａ＝コンブレタスタチン残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
コンブレタスタチンＡ４（０．１３ｇ）及び合成例１７で得られた化合物１７（１．０７ｇ）をＤＭＦ７ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．０１３ｇ、ＤＩＰＣ０．３２ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。次いで、前記化合物２０と同様の操作にて化合物２３（１．１７ｇ）を得た。【０１４９】
化合物２３中の遊離のコンブレタスタチンＡ４は未検出であり、反応液中の未反応コンブレタスタチンＡ４の量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物２３中のコンブレタスタチンＡ４含量は１０．２％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は３５％だった。
化合物２３の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、３９ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物２３は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１５０】
実施例５  化合物２４（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、アスパラギン酸  ｎ−ブチルアミドのアミド結合リンカーを介してコンブレタスタチンＡ４がエステル結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝ｎ−ブチル基、Ａ＝コンブレタスタチン残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
コンブレタスタチンＡ４（０．１３ｇ）及び合成例１８で得られた化合物１８（０．９１ｇ）をＤＭＦ７ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．０１３ｇ、ＤＩＰＣ０．３２ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。次いで、前記化合物２０と同様の操作にて化合物２４（０．９３ｇ）を得た。【０１５１】
化合物２４中の遊離のコンブレタスタチンＡ４は未検出であり、反応液中の未反応コンブレタスタチンＡ４の量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物２４中のコンブレタスタチンＡ４含量は１２．７％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は４０％だった。
化合物２４の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、１６ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物２４は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１５２】
実施例６  化合物２５（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、フェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル、及びアスパラギン酸−グリシンメチルエステルのアミド結合リンカーを介してコンブレタスタチンＡ４がエステル結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ７＝フェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルのアミノ基、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシンメチルエステル残基、Ａ＝コンブレタスタチン残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
コンブレタスタチンＡ４（０．１３ｇ）及び合成例１９で得られた化合物１９（１．０５ｇ）をＤＭＦ７ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．０１３ｇ、ＤＩＰＣ０．３２ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。次いで、前記化合物２０と同様の操作にて化合物２５（１．１４ｇ）を得た。【０１５３】
化合物２５中の遊離のコンブレタスタチンＡ４は未検出であり、反応液中の未反応コンブレタスタチンＡ４の量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物２５中のコンブレタスタチンＡ４含量は９．９％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は３１％だった。【０１５４】
化合物２５の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、２２ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物２５は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１５５】
実施例７  化合物２６（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、アスパラギン酸−グリシンメチルエステルのアミド結合リンカーを介してドセタキセルがエステル結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシンメチルエステル残基、Ａ＝ドセタキセル残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
市販のドセタキセル（０．１３ｇ）及び合成例１４で得られた化合物１４（０．４５ｇ）をＤＭＦ３ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．００６ｇ、ＤＩＰＣ０．１５ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。反応液にエタノール４．５ｍｌ、酢酸エチル４．５ｍｌ及びジイソプロピルエーテル３６ｍｌを加え、室温にて２時間攪拌後、沈析物を濾取してエタノール／ジイソプロピルエーテル（１／４（ｖ／ｖ）、１０ｍｌ）で洗浄した。得られた沈析物をアセトニトリル２０ｍｌ及び水２ｍｌに５℃にて溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、２ｍｌ）に通塔し、アセトニトリル／水（１０／１（ｖ／ｖ）、１０ｍｌ）にて溶出した。得られた溶出画分に５０ｍｌの水を加え、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物２６（０．５４ｇ）を得た。【０１５６】
化合物２６中の遊離のドセタキセルは未検出であり、反応液中の未反応ドセタキセルの量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物２６中のドセタキセル含量は１７．２％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は２２％だった。【０１５７】
化合物２６の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、２４ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物２６は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１５８】
実施例８  化合物２７（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、アスパラギン酸−フェニルアラニンメチルエステルのアミド結合リンカーを介してドセタキセルがエステル結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝フェニルアラニンメチルエステル残基、Ａ＝ドセタキセル残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
ドセタキセル（０．１３ｇ）及び合成例１５で得られた化合物１５（０．４８ｇ）をＤＭＦ３ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．００６ｇ、ＤＩＰＣ０．１５ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。次いで、前記化合物２６と同様の操作にて化合物２７（０．５８ｇ）を得た。【０１５９】
化合物２７中の遊離のドセタキセルは未検出であり、反応液中の未反応ドセタキセルの量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物２７中のドセタキセル含量は１６．１％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は２３％だった。【０１６０】
化合物２７の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、５４ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物２７は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１６１】
実施例９  化合物２８（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、アスパラギン酸−ロイシンメチルエステルのアミド結合リンカーを介してドセタキセルがエステル結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝ロイシンメチルエステル残基、Ａ＝ドセタキセル残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
市販のドセタキセル（０．１３ｇ）及び合成例１６で得られた化合物１６（０．５２ｇ）をＤＭＦ３ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．００６ｇ、ＤＩＰＣ０．１５ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。次いで、化合物２６と同様の操作にて化合物２８（０．６４ｇ）を得た。【０１６２】
化合物２８中の遊離のドセタキセルは未検出であり、反応液中の未反応ドセタキセルの量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物２８中のドセタキセル含量は１７．２％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は２３％だった。【０１６３】
化合物２８の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、３６ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物２８は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１６４】
実施例１０  化合物２９（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、アスパラギン酸−グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルのアミド結合リンカーを介してドセタキセルがエステル結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル残基、Ａ＝ドセタキセル残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
ドセタキセル（０．１３ｇ）及び合成例１７で得られた化合物１７（０．４９ｇ）をＤＭＦ３ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．００６ｇ、ＤＩＰＣ０．１５ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。次いで、化合物２６と同様の操作にて化合物２９（０．５８ｇ）を得た。【０１６５】
化合物２９中の遊離のドセタキセルは未検出であり、反応液中の未反応ドセタキセルの量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物２９中のドセタキセル含量は１７．３％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は２６％だった。【０１６６】
化合物２９の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、３１ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物２９は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１６７】
実施例１１  化合物３０（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、フェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル、及びアスパラギン酸−グリシンメチルエステルのアミド結合リンカーを介してドセタキセルがエステル結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ７＝フェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルのアミノ基、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシンメチルエステル残基、Ａ＝ドセタキセル残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
ドセタキセル（０．１３ｇ）及び合成例１９で得られた化合物１９（０．４８ｇ）をＤＭＦ３ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．００６ｇ、ＤＩＰＣ０．１５ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。次いで、化合物２６と同様の操作にて化合物３０（０．５８ｇ）を得た。【０１６８】
化合物３０中の遊離のドセタキセルは未検出であり、反応液中の未反応ドセタキセルの量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物３０中のドセタキセル含量は１９．５％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は２７％だった。【０１６９】
化合物３０の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、６６ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物３０は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１７０】
実施例１２  化合物３１（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、アスパラギン酸−フェニルアラニンメチルエステルのアミド結合リンカーを介してゲムシタビンが結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝フェニルアラニンメチルエステル残基、Ａ＝ゲムシタビン残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
市販のゲムシタビン（０．１３ｇ）及び合成例１５で得られた化合物１５（１．０２ｇ）をＤＭＦ７ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．０１２ｇ、ＤＩＰＣ０．３１ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。反応液にエタノール２０ｍｌ及びジイソプロピルエーテル８０ｍｌを加え、室温にて２時間攪拌後、沈析物を濾取しエタノール／ジイソプロピルエーテル（１／４（ｖ／ｖ）、３０ｍｌ）で洗浄した。得られた沈析物をアセトニトリル３０ｍｌ及び水６ｍｌに５℃にて溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、３ｍｌ）に通塔し、アセトニトリル／水（１０／１（ｖ／ｖ）、３０ｍｌ）にて溶出した。得られた溶出画分に１１０ｍｌの水を加えた後、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物３１（１．１３ｇ）を得た。【０１７１】
化合物３１中の遊離のゲムシタビンは未検出であり、反応液中の未反応ゲムシタビンの量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物３１中のゲムシタビン含量は１０．０％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は３５％だった。【０１７２】
化合物３１の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、２０ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物３１は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１７３】
実施例１３  化合物３２（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、アスパラギン酸−グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルのアミド結合リンカーを介してエトポシドがエステル結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル残基、Ａ＝エトポシド残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
市販のエトポシド（０．０４５ｇ）及び合成例１７で得られた化合物１７（０．２ｇ）をＤＭＦ１．３ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．００２ｇ、ＤＩＰＣ０．０６ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。反応液に酢酸エチル４ｍｌ及びジイソプロピルエーテル１６ｍｌを加え、室温にて２時間攪拌後、沈析物を濾取し、酢酸エチル／ジイソプロピルエーテル（１／４（ｖ／ｖ）、５ｍｌ）で洗浄した。得られた沈析物をアセトニトリル１２ｍｌ及び水２ｍｌに５℃にて溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、０．５ｍｌ）に通塔し、アセトニトリル／水（１０／１（ｖ／ｖ）、２ｍｌ）にて溶出した。得られた溶出画分に１２ｍｌの水を加え、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することによって化合物３２（０．２３３ｇ）を得た。【０１７４】
化合物３２中の遊離のエトポシドは未検出であり、反応液中の未反応エトポシドの量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物３２中のエトポシド含量は１５．９％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は３２％だった。【０１７５】
化合物３２の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、４２ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物３２は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１７６】
実施例１４  化合物３３（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、アスパラギン酸−グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルのアミド結合リンカーを介してプレドニゾロンがエステル結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル残基、Ａ＝プレドニゾロン残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
市販のプレドニゾロン（０．０４８ｇ）及び合成例１７で得られた化合物１７（０．２ｇ）をＤＭＦ１．３ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．００２ｇ、ＤＩＰＣ０．０６ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。反応液にエタノール４ｍｌ及びジイソプロピルエーテル１６ｍｌを加え、室温にて２時間攪拌後、沈析物を濾取し、エタノール／ジイソプロピルエーテル（１／４（ｖ／ｖ）、５ｍｌ）で洗浄した。得られた沈析物をアセトニトリル１２ｍｌ及び水２ｍｌに５℃にて溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、０．５ｍｌ）に通塔し、アセトニトリル／水（１０／１（ｖ／ｖ）、２ｍｌ）にて溶出した。得られた溶出画分に１２ｍｌの水を加え、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することによって化合物３３（０．２３９ｇ）を得た。【０１７７】
化合物３３中の遊離のプレドニゾロンは未検出であり、反応液中の未反応プレドニゾロンの量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物３３中のプレドニゾロン含量は１８．１％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は６０％だった。
化合物３３の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、５０ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物３３は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１７８】
実施例１５  化合物３４（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、フェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル、及びアスパラギン酸−グリシンメチルエステルのアミド結合リンカーを介してパクリタキセルがエステル結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ７＝フェニルアラニン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルのアミノ基、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシンメチルエステル残基、Ａ＝パクリタキセル残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
市販のパクリタキセル（０．０２９ｇ）及び合成例１９で得られた化合物１９（０．１０ｇ）をＤＭＦ０．７ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．００１２ｇ、ＤＩＰＣ０．０３１ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。反応液にエタノール２ｍｌ及びジイソプロピルエーテル８ｍｌを加え、室温にて２時間攪拌後、沈析物を濾取しエタノール／ジイソプロピルエーテル（１／４（ｖ／ｖ）、３ｍｌ）で洗浄した。得られた沈析物をアセトニトリル６ｍｌ及び水１．５ｍｌに５℃にて溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、０．５ｍｌ）に通塔し、アセトニトリル／水（１０／１（ｖ／ｖ）、６ｍｌ）にて溶出した。得られた溶出画分に１２ｍｌの水を加えた後、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物３４（０．１２１ｇ）を得た。【０１７９】
化合物３４中の遊離のパクリタキセルは未検出であり、反応液中の未反応パクリタキセルの量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物３４中のパクリタキセル含量は２２．０％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は３４％だった。【０１８０】
化合物３４の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、３９ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物３４は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１８１】
実施例１６    化合物３５（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、アスパラギン酸−フェニルアラニンメチルエステルのアミド結合リンカーを介してアデノシンが結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝フェニルアラニンメチルエステル残基、Ａ＝アデノシン残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
市販のアデノシン（０．０１２３ｇ）及び合成例１５で得られた化合物１５（０．１１９ｇ）をＤＭＦ０．８ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．００１４ｇ、ＤＩＰＣ０．０３６ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。反応液にエタノール２．３ｍｌ及びジイソプロピルエーテル９．２ｍｌを加え、室温にて２時間攪拌後、沈析物を濾取しエタノール／ジイソプロピルエーテル（１／４（ｖ／ｖ）、３ｍｌ）で洗浄した。得られた沈析物をアセトニトリル６ｍｌ及び水１．５ｍｌに５℃にて溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、０．５ｍｌ）に通塔し、アセトニトリル／水（１０／１（ｖ／ｖ）、６ｍｌ）にて溶出した。得られた溶出画分に１２ｍｌの水を加えた後、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物３５（０．１２７ｇ）を得た。【０１８２】
化合物３５中の遊離のアデノシンは未検出であり、反応液中の未反応アデノシンの量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物３５中のアデノシン含量は８．４％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は３５％だった。【０１８３】
化合物３５の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、２９ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物３５は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１８４】
実施例１７    化合物３６（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、アスパラギン酸−フェニルアラニンメチルエステルのアミド結合リンカーを介してカペシタビンが結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝フェニルアラニンメチルエステル残基、Ａ＝カペシタビン残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
市販のカペシタビン（０．０１３８ｇ）及び合成例１５で得られた化合物１５（０．０９９ｇ）をＤＭＦ０．６ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．００１７ｇ、ＤＩＰＣ０．０３ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。反応液にエタノール２ｍｌ及びジイソプロピルエーテル８ｍｌを加え、室温にて２時間攪拌後、沈析物を濾取しエタノール／ジイソプロピルエーテル（１／４（ｖ／ｖ）、３ｍｌ）で洗浄した。得られた沈析物をアセトニトリル４ｍｌ及び水１ｍｌに５℃にて溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、０．２ｍｌ）に通塔し、アセトニトリル／水（１０／１（ｖ／ｖ）、６ｍｌ）にて溶出した。得られた溶出画分に１１ｍｌの水を加えた後、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物３６（０．１１２ｇ）を得た。【０１８５】
化合物３６中の遊離のカペシタビンは未検出であり、反応液中の未反応カペシタビンの量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物３６中のカペシタビン含量は１１．４％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は３７％だった。【０１８６】
化合物３６の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、４３ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物３６は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１８７】
実施例１８  化合物３７（分子量１２０００のメトキシポリエチレングリコール部分と重合数が２１のポリグルタミン酸部分からなるブロック共重合体に、アスパラギン酸−グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステルのアミド結合リンカーを介してカペシタビンがエステル結合している高分子結合体：一般式（ＩＩＩ）のＲ１＝Ｍｅ、Ｒ２＝トリメチレン基、Ｒ３＝Ａｃ、Ｒ８及びＲ９＝水素原子、Ｒ１０＝グリシン（４−フェニル−１−ブタノール）エステル残基、Ａ＝カペシタビン残基、ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ＝２１、ｂ＝２７３）の合成
市販のカペシタビン（０．０１４ｇ）及び合成例１７で得られた化合物１７（０．１ｇ）をＤＭＦ０．６ｍｌに溶解し、２０℃にてＤＭＡＰ０．００１ｇ、ＤＩＰＣ０．０３ｍｌを加え、２０℃で２０時間撹拌した。反応液にエタノール２ｍｌ及びジイソプロピルエーテル８ｍｌを加え、室温にて２時間攪拌後、沈析物を濾取し、エタノール／ジイソプロピルエーテル（１／４（ｖ／ｖ）、３ｍｌ）で洗浄した。得られた沈析物をアセトニトリル４ｍｌ及び水１ｍｌに５℃にて溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、０．２ｍｌ）に通塔し、アセトニトリル／水（１０／１（ｖ／ｖ）、６ｍｌ）にて溶出した。得られた溶出画分に１１ｍｌの水を加え、アセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することによって化合物３７（０．１１１ｇ）を得た。【０１８８】
化合物３７中の遊離のカペシタビンは未検出であり、反応液中の未反応カペシタビンの量をＨＰＬＣで計量した結果、化合物３７中のカペシタビン含量は１０．９％（ｗ／ｗ）、全グルタミン酸（ｉ＋ｊ＋ｋ＋ｍ＋ｎ）に対するｉの割合は３５％だった。【０１８９】
化合物３７の水溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、５５ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物３７は水中でミセルを形成しているものと考えられた。【０１９０】
試験例１  コンブレタスタチンＡ４結合体の酵素非存在下での薬剤放出
化合物２０〜化合物２５、比較化合物として国際公開第２００８／１０４６３号パンフレット記載の方法で作成したポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体のコンブレタスタチン結合体（ＰＥＧ−Ｇｌｕ−ＣＡ４）及びポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体のコンブレタスタチン結合体（ＰＥＧ−Ａｓｐ−ＣＡ４）をそれぞれＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水；ｐＨ７．１）に１ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解し、３７℃にてインキュベートした。該高分子結合体より放出されたコンブレタスタチンＡ４を、ＨＰＬＣにて分析し標準曲線を用いて定量した。定量値と高分子結合体の薬剤含有量から求めた全薬剤量との比を図１に示した。【０１９１】
図１から明らかなように、本発明の高分子結合体（化合物２０〜化合物２５）は加水分解酵素が存在しなくてもコンブレタスタチンＡ４を放出し、放出速度はいずれもＰＥＧ−Ｇｌｕ−ＣＡ４よりも速かった。又、アスパラギン酸に結合しているＲ１０置換基の違いによって、放出速度を大きく変化させることができた。これらの結果は、本発明の高分子結合体が薬剤放出速度の調整能に優れていることを示している。【０１９２】
試験例２  ドセタキセル結合体の酵素非存在下での薬剤放出
化合物２６〜化合物３０、比較化合物として国際公開第２００７／１１１２１１号パンフレット記載の方法で作成したポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体のドセタキセル結合体（ＰＥＧ−Ａｓｐ−ＤＴＸ）をそれぞれＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水；ｐＨ７．１）に１ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解し、３７℃にてインキュベートした。該高分子結合体より放出されたドセタキセルを、ＨＰＬＣにて分析し標準曲線を用いて定量した。定量値と高分子結合体の薬剤含有量から求めた全薬剤量との比を図２に示した。【０１９３】
図２から明らかなように、本発明の高分子結合体はアスパラギン酸に結合しているＲ１０置換基によって放出速度を大きく変化させることができ、特に化合物２６、化合物３０は、ＰＥＧ−Ａｓｐ−ＤＴＸよりも速くドセタキセルを放出することができた。これらの結果は、本発明の高分子結合体が薬剤放出速度の調整能に優れていることを示している。【０１９４】
試験例３  ゲムシタビン、エトポシド、プレドニゾロン、パクリタキセル、アデノシンが結合した高分子結合体の酵素非存在下での薬剤放出
化合物３１（ゲムシタビン結合体）、化合物３２（エトポシド結合体）、化合物３３（プレドニゾロン結合体）、化合物３４（パクリタキセル結合体）、化合物３５（アデノシン結合体）をそれぞれＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水；ｐＨ７．１）に１ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解し、３７℃にてインキュベートした。該高分子結合体より放出された各薬剤を、ＨＰＬＣにて分析し標準曲線を用いて定量した。定量値と高分子結合体の薬剤含有量から求めた全薬剤量との比を図３に示した。【０１９５】
図３から明らかなように、本発明の生理活性化合物の高分子結合体は加水分解酵素がなくても生理活性物質を放出できることを示している。【０１９６】
試験例４  カペシタビンが結合した高分子結合体の酵素非存在下での薬剤放出
化合物３６、化合物３７をそれぞれＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水；ｐＨ７．１）に１ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解し、３７℃にてインキュベートした。該高分子結合体より放出された各薬剤を、ＨＰＬＣにて分析し標準曲線を用いて定量した。定量値と高分子結合体の薬剤含有量から求めた全薬剤量との比を図４に示した。【０１９７】
図４から明らかなように、本発明の生理活性化合物の高分子結合体は加水分解酵素がなくても生理活性物質を放出できることを示している。さらに、Ｒ１０を変えることによって、放出速度を調整することができることを示している。【０１９８】
試験例５  コンブレタスタチンＡ４結合体の抗腫瘍活性試験
マウス皮下で継代しているマウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ２６を約２ｍｍ角のブロックにし、套管針を用いて雌性ＣＤＦ１マウスの背側部皮下に移植した。腫瘍移植後８日目から本発明の高分子結合体（化合物２２）又は対照薬（コンブレタスタチンＡ４リン酸エステル；ＣＡ４Ｐ、ＰＥＧ−Ｇｌｕ−ＣＡ４又はＰＥＧ−Ａｓｐ−ＣＡ４）を、各々コンブレタスタチンＡ４換算で体重あたり同量をマウス尾静脈内に単回投与した。各化合物は５％ブドウ糖溶液で溶解して使用した。【０１９９】
投与後、腫瘍の長径（Ｌｍｍ）及び短径（Ｗｍｍ）をノギスで計測し、腫瘍体積を（ＬｘＷ２）／２により計算して無処置群（コントロール）の腫瘍体積に対する相対腫瘍体積比として表１に示した。【０２００】
【表１】
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【０２０１】
試験例６  コンブレタスタチンＡ４結合体の心筋に対する影響
コンブレタスタチン類の副作用として心筋障害が知られていることから、心筋や神経に多量に含まれる酵素で障害を受けると血液中に放出されるクレアチニンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）の力価推移を観測し、本発明の化合物の副作用の程度を公知化合物と比較した。【０２０２】
無処置ＣＤＦ１雌マウスに、本発明の化合物として化合物２２、比較化合物としてＣＡ４Ｐ、ＰＥＧ−Ｇｌｕ−ＣＡ４、ＰＥＧ−Ａｓｐ−ＣＡ４を単回尾静脈内投与し，６及び２４時間後に各群３匹をエーテル麻酔下で腹部大動脈より採血し、血漿中のクレアチニンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）を測定した。平均力価（ＩＵ／Ｌ）の推移を表２に示した。【０２０３】
【表２】
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【０２０４】
表１及び表２から明らかなように、本発明の高分子結合体（化合物２２）は、投与量２５ｍｇ／ｋｇにおいてＣＰＫ上昇無しに抗腫瘍効果を示した。投与量５０ｍｇ／ｋｇにおいては２５ｍｇ／ｋｇよりも更に強い抗腫瘍効果を示し、ＣＰＫも６時間で上昇があるものの２４時間で回復する一過性なものだった。【０２０５】
一方、対照薬であるコンブレタスタチンＡ４リン酸エステルは、投与量２００ｍｇ／ｋｇにおいてＣＰＫ上昇が顕著にもかかわらず、弱い抗腫瘍効果しか示さなかった。【０２０６】
ＰＥＧ−Ｇｌｕ−ＣＡ４は、投与量５０ｍｇ／ｋｇにおいて強い抗腫瘍効果を示したが、ＣＰＫが２４時間でも回復せず上昇したままであり、投与量２５ｍｇ／ｋｇにおいては抗腫瘍効果を示さなかった。【０２０７】
ＰＥＧ−Ａｓｐ−ＣＡ４は、投与量１２．５ｍｇ／ｋｇにおいて，化合物２２の投与量２５ｍｇ／ｋｇに近い抗腫瘍効果を示したが、この投与量においてもＣＰＫが上昇し、ＣＰＫ上昇と抗腫瘍効果を乖離することができなかった。【０２０８】
試験例７  ドセタキセル結合体の抗腫瘍活性試験
マウス皮下で継代しているマウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ２６を約２ｍｍ角のブロックにし、套管針を用いて雌性ＣＤＦ１マウスの背側部皮下に移植した。腫瘍移植後８日目から本発明の高分子結合体（化合物３０）又は対照薬（ドセタキセル；ＤＴＸ又はＰＥＧ−Ａｓｐ−ＤＴＸ）を、各々ドセタキセル換算で体重当たり同量をマウス尾静脈内に単回投与した。ドセタキセルは無水エタノールとクレモホール（シグマ社製）に溶解し、使用時に生理食塩液で希釈して用いた。他の化合物は５％ブドウ糖注射液で溶解し用いた。投与後、腫瘍の長径（Ｌｍｍ）及び短径（Ｗｍｍ）をノギスで計測し、腫瘍体積を（ＬｘＷ２）／２により計算し、無処置群（コントロール）の腫瘍体積に対する相対腫瘍体積比として表３に示した。【０２０９】
【表３】
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【０２１０】
表３から明らかなように、本発明の高分子結合体（化合物３０）は、ドセタキセルの半分の投与量（５０ｍｇ／ｋｇ）においてもドセタキセルよりも強い抗腫瘍効果を示し、１００ｍｇ／ｋｇにおいて更に強い抗腫瘍効果を示した。【０２１１】
一方、対照薬であるＰＥＧ−Ａｓｐ−ＤＴＸは、投与量１００ｍｇ／ｋｇにおいては強い抗腫瘍効果を示すものの、投与量５０ｍｇ／ｋｇではＤＴＸと同等以下の効果しか示さなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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