(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
細菌を検出するための歯科用組成物であって、
溶媒と、
少なくとも１つの電子受容体構成成分と、
少なくとも１つの電子供与体構成成分と、を含み、
前記組成物は、前記電子受容体構成成分と電子供与体構成成分との間の電子伝達を可能にする又は促進する構成成分を含まず、
前記電子受容体構成成分が、２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムブロマイド、２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロライド、２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムイオダイド、３−（４，５−ジメチル）−２−チアゾリル（−２，５−ジフェニル−２Ｈ）−テトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ）、２，５−ジフェニル−３−（１−ナフチル）テトラゾリウムクロライド（テトラゾリウムバイオレット）及び／又は２，２’−ビフェニル−４，４’−ジヒルビス（dihylbis）−（３，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウム）−ジクロライド（テトラゾールパープル）を含むテトラゾリウム化合物、又はそれらの組み合わせ及び混合物であり、
前記電子供与体構成成分が、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸、還元型フラビンアデニンジヌクレオチド、又は還元型フラビンモノヌクレオチド、及びそれらの組み合わせ又は混合物からなる群より選択される、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、歯科用組成物に関する。本発明は、より詳細には口腔内部位指向的な細菌検出のための組成物の使用に関する。本発明は、更に、口腔内部位指向的な細菌検出の方法に関する。
【０００２】
（関連出願の相互参照）
本願は、２００７年１０月２６日出願の欧州特許出願第０７１１９３５３．６号及び２００８年７月１７日出願の欧州特許出願第０８１６０５９７．４号による優先権を主張する。
【背景技術】
【０００３】
口腔細菌は、歯ぐき、舌、エナメル質、象牙質、歯根セメント質及び歯科修復物等の口腔内の硬質組織及び軟組織にコロニー形成する。エナメル質、象牙質、セメント質及び歯科修復物歯肉縁上及び縁下に存在する口腔細菌は、硬組織の脱ミネラル化、及び歯周組織の破壊の原因となり得る。
【０００４】
う蝕病変を検出するための様々な技術が存在する。これらの技術の殆どは、う蝕病変に関連した脱ミネラル化の部位を検出することを含む。これらの技術は、概して視覚及び触覚的方法、Ｘ線及び電気化学的方法の使用、並びに所定の染料の使用を含む様々な技術のいずれかを介して、脱ミネラル化の程度を分析することを含む。観察可能な脱ミネラル化の程度は、う蝕のプロセスがどのくらい進行して、既に歯を損傷したかを決定する。
【０００５】
一般に、脱ミネラル化の検出によるう蝕の検出に関する技術は、感染した歯組織と、罹患した歯組織とを区別することができず、それにより、う蝕病変の過掘削をもたらす場合がある。罹患した歯組織、即ち感染を示していないが、部分的に脱ミネラル化された硬い歯組織は、感染した硬い歯組織の層の下方に見られる。感染した硬い歯組織は除去される必要があるが、罹患した硬い歯組織は再石灰化のためにとっておく必要がある。例えば、アンサリ（Ansari）、ビーリー（Beeley）、リード（Reid）及びフォイエ（Foye）［口腔リハビリテーションジャーナル（Journal of Oral Rehabilitation）、１９９９年、２６巻、４５３〜４５８頁］は、通常の染料が脱ミネラル化した有機マトリックスを染色し、したがって、感染した再石灰化が不可能な組織と、可逆的な脱灰組織とを区別できないことから、う蝕特異性ではないことを確認した。
【０００６】
更に、脱ミネラル化の程度を介してう蝕を検出する全手順は、う蝕プロセスが未だに活性であるか又は停止されたかを直ちに示すことができない。う蝕病変の活性と停止とを区別するために、大抵数ヶ月後に、進行中の無機質損失をある期間にわたって観察する第２の検査を必要とする。
【０００７】
硬い歯組織の脱ミネラル化は、口腔内で硬い歯組織にコロニー形性するう蝕細菌の作用を原因とする。脱ミネラル化の程度を介してう蝕を検出する全手順は、う蝕細菌が検出可能な程度の無機質の損失をもたらすまで待つ必要がある。対照的に、脱ミネラル化が検出可能となる前に、歯上のう蝕細菌の有害な作用を検出することができる手順は、最も早い段階の初期う蝕でさえも防止できる利点を有すると思われる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
米国特許第３，３３２，７４３号には、唾液サンプル中のジアゾレゾルシノールの色の変化を測定する個人の歯科う蝕リスクを評価するための試験溶液が記載されている。しかしながら、この手順は、歯表面上のう蝕細菌の位置に関する情報は全く提供しない。
【０００９】
他の手順では、歯表面から収集した歯垢を用いて、ブドウ糖、ショ糖又は他の糖を、口腔外で有機酸に代謝する固有の活性を評価する。一態様において、ｐＨ指示薬を用いて、ある時間にわたって生じるｐＨ変化により酸形成が追跡される（米国特許第４，３５９，４５５号）。別の態様では、酵素（即ち、乳酸デヒドロゲナーゼ）を使用することにより、歯垢サンプル中の乳酸形成を評価し、酵素反応がレドックス染料と関連付けられて可視シグナルが形成される（ドイツ特許第１０１０８９００号）。歯垢中のう蝕活性は歯の部位により有意に異なることが周知であるが、両方の手順は、数カ所の歯表面からの歯垢を混合して、炭水化物の存在に応答した酸生成を評価する。
【００１０】
ドイツ特許第１０１  ０８  ９００号（米国特許第２００４／０１４１９６０号に対応）は、唾液又は歯垢サンプル中の炭水化物の存在下での、個人のう蝕のリスクの測定方法に関する。乳酸デヒドロゲナーゼ、ピルビン酸塩、ショ糖及び酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）が加えられ、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）の形成が、電子担体、即ちＰＭＳを使用して、例えばＭＴＴの様なレドックス指示薬により検出される。
【００１１】
米国特許第４，３５１，８９９号及び同第４，２５４，２２２号は、生体液中の乳酸を測定するための手順に言及する。乳酸デヒドロゲナーゼ、ＮＡＤ、電子担体、及びレドックス指示薬としてのテトラゾリウム染料を使用して、乳酸を測定する。生体液が唾液の場合において、歯／歯表面上に存在するう蝕細菌の口腔内部位指向的な検出は不可能である。
【００１２】
日本特許第２００４−１１３１２９号は、歯表面を包囲する乳酸生成領域を特定するための液体を示し、この液体は、あらかじめ調節された量の乳酸デヒドロゲナーゼ、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、電子移動剤、テトラゾリウム塩及び水を含有する。
【００１３】
欧州特許第１  １９１  ９４６号は、歯／歯表面上に存在するう蝕細菌の口腔内指向的な検出のための手順に関し、この手順は、乳酸デヒドロゲナーゼ、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、レドックス染料、例えばＭＴＴ、及び電子担体、例えばＰＭＳで補充された歯科印象材料に基づいている。
【００１４】
［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド］−アッセイ（ＭＴＴ−アッセイ）は、生きた細胞の検出用の試験として広く知られている。試験は様々に修正及び調整され、水溶液中で細胞をＭＴＴと共に通常４〜８時間インキュベーションすることを含む。例えばシュバイクル（Schweikl）及びシュマルツ（Schmalz）は、この試験を用いて「２つの異なる哺乳動物細胞株における歯科材料の細胞毒性試験のための毒性パラメータ」（Ｅｕｒ  Ｊ  Ｏｒａｌ  Ｓｃｉ．１９９６年６月、１０４巻（３）号、２９２〜２９９頁）を決定した。
【００１５】
フライモサー（Freimoser）らは、「ＭＴＴ−アッセイは、真菌細胞密度の比色定量のための迅速かつ信頼できる方法である」（アプライド・アンド・エンバイロンメンタル・マイクロバイオロジー（Applied And Environmental Microbiology）１９９９年８月、６５巻（８）号、３７２７〜３７２９頁）において、ＭＴＴ−アッセイを比色定量法として使用して、細胞密度を測定することを発表した。検出するべき細胞を含むサンプルは、１６時間インキュベートされた。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
したがって、口腔内、硬い歯組織（エナメル質、歯根セメント質及び象牙質）上、並びに歯科修復物上の細菌の存在を迅速かつ確実に検出する組成物、その使用及び検出方法を提供することが望ましいであろう。更に、口腔内部位指向的な細菌検出のための組成物及び方法を提供することが望ましいであろう。
【００１７】
一態様において、本発明は、少なくとも１つの電子受容体及び少なくとも１つの電子供与体の溶液を含む細菌検出歯科用組成物に関する。電子受容体及び電子供与体は、溶液それ自体中で電子供与体が還元等価物を電子受容体に伝達しないように選択される。更に、歯科用組成物は、電子受容体と電子供与体との間の電子伝達を可能にする又は促進する化合物を実質的に含まない。
【００１８】
本発明の別の態様は、口腔内部の細菌検出用の手段を製造するための、本発明の文章に記載されているような組成物の使用に関する。
【００１９】
用語の定義
「組成物」は、２種以上の構成成分の混合物として理解される。
【００２０】
用語「水溶性」は、物質それ自体が周囲条件下で塩と同等に水に可溶であることを意味する。即ち、物質は、２３℃で水中に分散されたとき、ブドウ糖の様に、水中に個々の分子を形成することができる。
【００２１】
「粒子」は、幾何学的に測定できる形状を有する固体である物質を意味する。粒子は、通常、例えば粒径に関して分析され得る。
【００２２】
「歯科用組成物及び歯科用物品」は、歯科矯正学の領域を含む（修復学及び歯科補綴学を含む）歯科分野にて使用される組成物である。この点から、組成物は患者の健康に有害であってはならず、それ故、組成物から移動し得る有害かつ有毒な構成成分を含まない。商業的に入手可能な製品は、ＤＩＮ  ＥＮ  ２１９４２−２に示されるもの等の所定の必要条件を満たす必要がある。
【００２３】
物質は、その物質が２５℃で約１００Ｐａ＊ｓ又は約５０Ｐａ＊ｓ又は約５Ｐａ＊ｓ未満の粘度を有する場合、「液体又は溶媒」として分類される。
【００２４】
用語「本質的に／実質的に物質を含まない」は、所定の物質が通常全く存在しない、又は故意に添加されていないとして理解するべきである。しかしながら、時には、避けられない微量のこの物質が検出され得ることもあり得る。
【００２５】
したがって、「構成成分Ｘを本質的に含まない」は、組成物中の構成成分Ｘ（特に、添加された構成成分Ｘ）の含有率が、全組成物に対して約５重量％未満又は約２重量％未満又は約１重量％未満又は約０．１重量％未満であることを意味する。
【００２６】
用語「可視光」は、約４００〜約１０００ナノメートル（ｎｍ）の波長を有する光を指して用いられる。
【００２７】
「還元電位」（レドックス電位、酸化／還元電位としても知られる）は、化学種が電子を獲得して還元される傾向にある。それぞれの化学種は、その種固有の還元電位を有し、電位がより陽性となると、化学種の電子に対する親和性がより増大し、化学種は還元される傾向になる。
【００２８】
水溶液中で、還元電位は、新しい種の導入により変化に供された際に、電子を獲得するか又は損失する傾向にある。新しい種よりも高い（より陽性の）還元電位を有する溶液は、新しい種から電子を獲得する傾向を有し（即ち新しい種を酸化することにより還元される）、より低い（より陰性の）還元電位を有する溶液は、電子を損失して新しい種へ与える傾向を有するであろう（即ち新しい種を還元することにより酸化される）。ちょうど化学種間の水素イオンの移動が水溶液のｐＨを決定するように、化学種間の電子の移動は、水溶液の還元電位を決定する。
【００２９】
還元電位は、通常、ボルト（Ｖ）又はミリボルト（ｍＶ）で測定される。絶対電位は、時には正確に測定することが困難なため、還元電位は、多くの場合、任意で０．００ボルトの電位を付与される標準水素電極に対して定義される。標準還元電位（Ｅ０）は、標準条件下で測定される：２５℃、反応に関与するそれぞれのイオンに関して濃度１Ｍ、反応の一部であるそれぞれの気体に関して分圧１０１ｋＰａ（１ａｔｍ）、及び純粋状態の金属。
【００３０】
ＮＡＤ＋と略されるニコチンアミドアデニンジヌクレオチドは、生きた細胞内に見出され得る補酵素である。化合物は、それらのリン酸基を介して連結された２つのヌクレオチドから構成されるため、ジヌクレオチドであり、一方のヌクレオチドはアデノシン環を含み、他方はニコチンアミドを含む。
【００３１】
代謝において、ＮＡＤ＋は、通常、レドックス反応に関与し、電子を一方の反応物から他方の反応物に運ぶ。ＮＡＤ＋は、酸化剤であり、他の分子から電子を受容して還元され、この反応はＮＡＤＨを形成し、これは次に還元剤として電子を供与するのに使用され得る。これらの電子移動反応は、ＮＡＤ＋の主な機能である。
【００３２】
「電子供与体」又は「電子供与体構成成分」は、電子を１つの他の構成成分に供与し得る化学的実体である。これは、その供与する電子により、それ自体がプロセス中に酸化される還元剤である。
【００３３】
「電子受容体」又は「電子受容体構成成分」は、１つの他の化合物から移動された電子を受容する化学的実体である。これはその受容する電子によって、それ自体がプロセス中に還元される酸化剤である。
【００３４】
用語「口腔内」は、口腔内領域の外部、例えば研究所内で追加の工程を実施する必要なく、本発明の組成物が患者の口腔内に適用されることを意味する。
【００３５】
用語「部位指向的な」は、う蝕感染した空洞内の残りの感染した象牙質の場所を示すシグナルが形成されることを意味する。これは、う蝕感染した空洞内の残りの感染した象牙質の部位指向的な位置特定を可能にする。部位指向的なシグナルは、一般に更なる処置が必要な部位を示す。
【００３６】
「誘導体」は、対応する参照化合物に密接に関連した化学構造を示し、対応する参照化合物を特徴付ける全ての構造的要素を含むが、例えばＣＨ３、Ｂｒ、Ｃｌ、若しくはＦの様な、対応する参照化合物と比較して、同等に小さい追加の化学基を有し、又は例えばＣＨ３の様な同等に小さい化学基を有さない等、小さい変更を有する化学的化合物である。以下の例は、これを説明し得る：参照化合物、ビスーフェノールＡに対して、４つの追加のメチル基を有するテトラメチルビス−フェノールＡ、及び参照化合物、ビスーフェノールＡに対して、２つの追加のメチル基を有さないビスーフェノールＦは、この定義の意味にてビスーフェノールＡの誘導体である。
【００３７】
「周囲条件」は、本発明の組成物が、貯蔵及び／又は取り扱い中に通常晒される条件を意味する。周囲条件は、例えば、約９０〜約１１０ｋＰａ（約９００〜約１１００ミリバール）の圧力、約−１０〜約６０℃の温度、及び約１０〜約１００％の相対湿度であり得る。研究室での周囲条件は、通常、約２３℃及び約１０１ｋＰａ（１０１３ミリバール）に調整される。
【００３８】
本明細書で使用する時、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、「少なくとも１つの」、及び「１つ以上の」は、同じ意味で使用されている。用語「含む」又は「含有する」及びこれらの変化形は、これらの用語が明細書及び特許請求の範囲で用いられた場合、制限的な意味を有しない。また本明細書において、端点による数の範囲の列挙には、その範囲内に包含される全ての数（例えば、１〜５には、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５等）が包含される。
【００３９】
特に指示がない限り、明細書及び請求項で使用される成分の量、コントラスト比のような特性の測定等を表す全ての数は、全ての場合に用語「約」によって修正されることが理解されるべきである。したがって、特に異議を唱えない限り、先の明細書及び添付した特許請求の範囲に記載した数値パラメータは、当業者により本発明の教示を利用して獲得しようとされる所望の性質に応じて変化し得る近似値である。最低限でも、また特許請求の範囲の範囲と等価物の原則の適用を制限しようとするものではないが、それぞれの数値パラメータは少なくとも、報告された有効数字の数値を考慮して、通常の数値のまるめ方を適用することによって解釈されるべきである。本発明の広範囲で示す数値的範囲及びパラメータは近似値であるが、具体例に記載の数値は可能な限り正確に報告する。しかしながら、いずれの数値もそれらのそれぞれの試験測定値において見られる標準偏差から必然的に生じる特定の誤差を本質的に含む。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
電子受容体構成成分と電子供与体構成成分が、溶液中で互いに反応できないように選択されることは、本発明の一態様である。電子受容体及び電子供与体を含有する溶液を、口腔の異なる部位に適用した後、電子受容体は細菌の存在により還元される。
【００４１】
特定の理論に束縛されるものではないが、細菌は、本発明の歯科用組成物中の電子供与体構成成分から電子受容体構成成分への電子伝達を促進し得る、ある種の電子担体を含有すると仮定される。そのため、本発明の歯科用組成物が細菌と接触したとき、電子供与体構成成分により提供される１つ以上の電子の移動により、電子受容体構成成分の還元が起こる。
【００４２】
電子受容体及び／又は電子供与体構成成分は、一般に、それらが、それらの還元された状態と酸化された状態とで異なる色を有するよう選択される。例えば、少なくともその還元された状態で、電子受容体構成成分は、波長約３８０ｎｍ〜約７８０ｎｍの可視領域内の色を示すしたがって、歯科開業医は組成物中の電子受容体構成成分の、その酸化状態と還元状態との間の色の変化を視覚的に認識することが可能である。
【００４３】
この変化に関して、異なる可能性が存在する。
【００４４】
一方で、組成物は、異なる口腔部位に適用される前は無色である。電子受容体構成成分の還元により、ヒトの眼で見えるように色の変化が生じる。他方では、組成物はその適用前と区別される色を有するように変化し得る。電子受容体構成成分が還元された場合、色は、眼で見ることができ、かつ酸化状態の電子受容体の色とは明らかに区別される色を示すものに変化し得る。
【００４５】
本発明の別の実施形態において、電子受容体構成成分は、その還元状態で約３８０ｎｍ〜約７８０ｎｍの可視波長域内の蛍光を放射し、このことは還元状態の電子受容体構成成分に、それ自体で輝く特性を与える。
【００４６】
本発明の別の実施形態において、電子供与体構成成分が、その酸化状態と還元状態とで異なる色を有するよう選択されることが更に可能である。例えば、酸化状態の電子供与体構成成分は、波長約３８０ｎｍ〜約７８０ｎｍの可視域内の色を示す。したがって、歯科開業医が組成物中の電子供与体構成成分の、その還元状態と酸化状態との間の色の変化を視覚的に認識することが可能である。
【００４７】
電子受容体構成成分及び電子供与体構成成分は、それぞれ、色の変化がヒトの眼で追跡可能な濃度で存在し得る。
【００４８】
好ましい一実施形態において、電子供与体構成成分は、全組成物に対して、約０．５〜約１３ｍｇ／ｍＬ又は約１．０〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。電子供与体が、国際公開第９８／３３９３６号に記載されているように、ＮＡＤＨ−又はＮＡＤＰＨ−類似体のうちの１つの場合、濃度は、全組成物に対して、約１０．０〜約１３．０ｍｇ／ｍＬ又は約９〜約１２ｍｇ／ｍＬの範囲であってよい。
【００４９】
電子受容体構成成分は、全組成物に対して、約１．０〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度又は約１．５〜約２．５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在し得る。
【００５０】
本発明の歯科用組成物の溶媒に対する、組成物中の電子供与体構成成分と電子受容体構成成分の溶解度は、それぞれ、口腔内部位指向的な細菌の検出が可能である程度に高い必要がある。これは、溶解した電子受容体と溶解した電子供与体との濃度が、区別される色が知覚できる程度に高い必要があることを意味する。
【００５１】
電子供与体構成成分及び／又は電子受容体構成成分は、組成物中に、組成物の全重量に対して約０．０１重量％〜約８０重量％又は約０．０５重量％〜約３０重量％の量で存在してもよい。電子受容体構成成分及び電子供与体構成成分が、組成物中に、組成物の全重量に対して約０．０１〜約１０重量％の量で存在すると有利であり得る。
【００５２】
好ましくは、電子受容体構成成分は、それぞれの溶媒でその酸化状態及び還元状態で異なる溶解度を示す。即ち、電子受容体構成成分が還元されたとき、還元された形態の電子受容体構成成分が、電子受容体構成成分が還元された部位において沈殿を形成する程にその溶解度が低下され、それにより口腔内部位指向的な細菌の検出が可能となるであろう。別の実施形態において、電子供与体構成成分は、対応する溶媒中で、その酸化された状態における溶解度の低下を示す。この場合でも、電子供与体構成成分が酸化される部位において沈殿が生じる程度に溶解度は減少させられるべきである。
【００５３】
勿論、例えば組成物が高い粘度を示し、又はフィルムを形成する場合、部位指向的な細菌検出の他の方法が存在する。
【００５４】
一実施形態において、本発明による電子受容体構成成分は、テトラゾリウム化合物、テトラゾリウム誘導体であり、又はテトラゾリウム部分を含む。
【００５５】
このテトラゾリウム化合物又はテトラゾリウム誘導体は、例えば２−（２’−ベンゾチアゾリル）−５−スチリル−３−（４’−フタルヒドラジジル）テトラゾリウムクロライド、２−（２−ベンゾチアゾリル（benzothiaolyl））−３−（４−ニトロフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムブロマイド、２−（２−ベンゾチアゾリル（benzothiaolyl））−３，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド、２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウムクロライド、２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロライド、２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロライド水和物、２，３，５−トリフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムクロライド、２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムブロマイド、２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロライド、２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムイオダイド、２，３，５−トリス（ｐ−トリル）テトラゾリウムクロライド、２，３−ビス（３−クロロフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロライド、２，３−ビス（３−フルオロフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロライド、２，３−ビス（３−メチルフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロライド、２，３−ビス（４−クロロフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロライド、２，３−ビス（４−エチルフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロライド、２，３−ビス（４−フルオロフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロライド、２，３−ビス（４−メトキシフェニル）−５−（４−シアノフェニル）テトラゾリウムクロライド、２，３−ビス（４−メトキシフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロライド、２，３−ビス（４−メチルフェニル）−５−（４−シアノフェニル）テトラゾリウムクロライド、２，３−ビス（４−ニトロフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロライド、２，３−ビス（４−ニトロフェニル）−５−フェニルテトラゾリウムクロライド水和物、２，３−ジ（ｐ−トリル）−５−フェニルテトラゾリウムクロライド、２，３−ジフェニル−５−（２−チエニル）テトラゾリウムクロライド、２，３−ジフェニル−５−（４−クロロフェニル）テトラゾリウムクロライド、２，３−ジフェニル−５−（４−メトキシフェニル）テトラゾリウムクロライド、２，３−ジフェニル−５−（ｐ−ジフェニル）テトラゾリウムクロライド、２，３−ジフェニル−５−（ｐ−トリル）テトラゾリウムクロライド、２，３−ジフェニル−５−アミノテトラゾリウムクロライド、２，３−ジフェニル−５−カルボキシテトラゾリウムクロライド、２，３−ジフェニル−５−エチルテトラゾリウムクロライド、２，３−ジフェニル−５−メチルテトラゾリウムクロライド、２，５−ジ（ｐ−トリル）−３−フェニルテトラゾリウムクロライド、２，５−ジフェニル−３−（２，６−ジメチルフェニル）テトラゾリウムクロライド、２，５−ジフェニル−３−（４−スチリルフェニル）テトラゾリウムクロライド、２，５−ジフェニル−３−（ｐ−ジフェニル）テトラゾリウムクロライド、２−ベンゾチアゾリル−３−（４−カ���ボキシ−２−メトキシフェニル−（５−［４−（２−スルホエチルカルバモイル）フェニル］−２Ｈ−テトラゾリウム、２−フェニル−３−（４−ビフェニルｌイル）−５−メチルテトラゾリウムクロライド、２−フェニル−３−（４−カルボキシフェニル）−５−メチルテトラゾリウムクロライド、３−（３−ニトロフェニル）−５−メチル−２−フェニルテトラゾリウムクロライド、３−（４，５−ジメチル）−２−チアゾリル（−２，５−ジフェニル−２Ｈ）−テトラゾリウムブロマイド、３−（４，５−ジメチル）−２−チアゾリル（−２，５−ジフェニル−２Ｈ）−テトラゾリウムクロライド、３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド、３−（４−ニトロフェニル）−５−メチル−２−フェニルテトラゾリウムクロライド、３，３’−（３，３’−ジメトキシ−４，４’−ジフェニレン）ビス（２−フェニル−５−ベラトリルテトラゾリウムクロライド）、３，３’−（３，３’−ジメトキシ−４，４’−ジフェニレン）ビス［２−（３−ニトロフェニル）−５−フェニル］−２Ｈ−テトラゾリウムクロライド、４−［３−（４−ヨードフェニル）−２−（２，４−ジニトロフェニル）−２Ｈ−５−テトラゾリノ］−１，３−ベンゼンジスルホネート、４−［３−（４−ヨードフェニル）−２−（４−ニトロフェニル）−２Ｈ−５−テトラゾリノ］−１，３−ベンゼンジスルホネート、５−シアノ−２，３−ジ−（ｐ−トリル）テトラゾリウムクロライド、テトラゾリウムブルークロライド（ブルーテトラゾリウム）、シンナミルニトロブルーテトラゾリウムクロライド、ヨードニトロテトラゾリウムクロライド、ｍ−トリルテトラゾリウムレッド、ネオ−テトラゾリウムクロライドジホルマザン、ニトロブルーテトラゾリウム、ニトロブルーテトラゾリウム一水和物、ニトロネオテトラゾリウムクロライド（バイオレット）、ｏ−トリルテトラゾリウムレッド、ｐ−アニシルブルーテトラゾリウムクロライド、ｐ−アニシルブルーテトラゾリウムクロライドジホルマザン、ピペロニルテトラゾリウムブルー、ｐ−トリルテトラゾリウムレッド、テトラニトロブルーテトラゾリウム、２，５−ジフェニル−３−（１−ナフチル）テトラゾリウムクロライド（テトラゾリウムバイオレット）、２，２’−ビフェニル−４，４’−ジヒルビス（dihylbis）−（３，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウム）−ジクロライド（テトラゾールパープル）、チオカルバミルニトロブルーテトラゾリウムクロライド、ベラトリルテトラゾリウムブルーからなる群より選択されてもよい。これらの混合物及び組み合わせも含まれる。
【００５６】
特に好ましい電子受容体としては、２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムブロマイド、２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロライド、２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムイオダイド、３−（４，５−ジメチル）−２−チアゾリル（−２，５−ジフェニル−２Ｈ）−テトラゾリウムブロマイド、テトラゾリウムバイオレット／２，５−ジフェニル−３−（１−ナフチル）テトラゾリウムクロライド及び／又はテトラゾールパープル／２，２’−ビフェニル−４，４’−ジヒルビス−（３，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウム）−ジクロライド及びそれらの混合物又は組み合わせが挙げられる。
【００５７】
本発明に使用し得る特に有用な電子受容体構成成分は、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム−ブロマイド（ＭＴＴ）である。
【００５８】
細胞増殖の測定又は検出にＭＴＴを使用することは、当技術分野にて既知である。しかしながら、以下の実施例に示すように、ＭＴＴを含有する溶液を電子受容体構成成分のみとして使用することは、反応が一般に、色の変化が観察され得るまで、比較的長い時間（例えば約５分まで）を必要とするため、歯科分野では実用的ではない。驚くべきことに、ＮＡＤＨの様な電子供与体構成成分を電子受容体構成成分を含有する組成物に加えることが反応を高めるということ、が見出された。
【００５９】
また更に驚くべきことには、この反応は、電子受容体と、ＰＭＳの様な電子供与体との間の電子伝達を可能にする又は促進する構成成分、即ち電子移動をサポートするために通常必要な構成成分の不在下で、比較的短い時間内に起こる。
【００６０】
所定の理論に束縛されるものではないが、生きた動物又はヒトの口腔内に存在している細菌は、電子移動サポート要素として機能し得る構成成分又は構造を有すると思われる。
【００６１】
したがって、先端技術で既知の、ＭＴＴを含有する組成物とは対照的に、本発明の組成物は、少なくとも１つの電子供与体構成成分を含有する。この電子供与体構成成分は、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸、還元型フラビンアデニンジヌクレオチド、還元型フラビンモノヌクレオチド（リボフラビン−５’−リン酸）及びそれらの混合物又は組み合わせを含む群から選択されてよい。更に、これらの供与体の誘導体の使用、又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第９８／３３９３６号によるＮＡＤＰＨ及びＮＡＤＨ類似体、並びにこの群の２つ以上の供与体の混合物の使用が可能である。
【００６２】
本発明の組成物を細菌に暴露した後、反応が開始する。還元等価物の伝達、及び上述した本発明の組成物の色の変化は、一般に、約４分又はそれ未満後、好ましくは約２分未満後、より好ましくは約１分未満後、更により好ましくは約３０秒未満後、最も好ましくは約２０秒又はそれ未満後に起こることが観察されている。
【００６３】
色の変化が約４分後より後に起こる場合、組成物は、歯科開業医及び／又は患者が、通常、可能な色の変化のために約４分を越えて待つことはないと思われるため、歯科目的に適切ではないと思われる。歯科業務では、患者及び／又は歯科開業医が、例えば費用を節約し、及び／又は状況を患者及び歯科開業医にとってより都合よくするために、待ち時間をできる限り短縮するよう努力しているため、手順が迅速であることは通常有益である。色の変化が測定できる、又はヒトの眼に見えるようになる前に、通常約４〜約１６時間のインキュベーション時間を要する先端技術の組成物とは対照的に、本発明の組成物ははるかに短い時間を要する。
【００６４】
本発明の組成物は溶液であるため、溶媒を含む。使用できる一般的な溶媒としては、水、及びアルコール（例えばメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール及びイソ−プロピルアルコール）及びケトン（例えばアセトン）並びにそれらの組み合わせを含む有機溶媒を挙げることができる。溶媒が水であるか又は水を含む場合、電子受容体及び電子供与体を含有する水溶液が一般に形成される。
【００６５】
１種以上の有機溶媒と水との混合物の場合、有機溶媒の濃度は、全溶液に対して約０．１重量％〜約６０重量％であってよい。一般に、水が好ましい溶媒である。例えば、酸化状態の電子受容体及び還元状態の電子供与体の溶液中の溶解度を調整するために、又は組成物が適用される口腔内の領域の湿潤性を改善するために、１種以上の有機溶媒を加えてよい。
【００６６】
好適な有機溶媒としては、例えば約２〜約１０個のＣ原子を有する線状、分枝状又は環状の飽和又は不飽和アルコール、例えばジアルキルケトンのようなケトン、エステル、カルボン酸、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシエチルメタクリレート又は（２，３−エポキシプロピル）メタクリレート等の低粘度の重合性物質、及びそれらの種類の溶媒の２つ以上の混合物が挙げられる。好ましい溶媒としては、水及び水−アルコール混合物が挙げられる。
【００６７】
特に好ましいアルコール性溶媒は、メタノール、エタノール、イソ−プロパノール及びｎ−プロパノールである。
【００６８】
他の好適な有機溶媒は、グリセリン、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、アセトン、メチルエチルケトン、シクロヘキサノール、トルエン、塩化メチレン、クロロホルム、アルカン及び酢酸アルキルエステル、特に酢酸エチルエステルである。
【００６９】
組成物のｐＨ値は、幅広く変動し得る。例えば、ｐＨ値は、約１〜約１２が可能である。より好ましくは、組成物のｐＨ値は、約７〜約１０である。２つの構成成分系が使用される場合、１つの構成成分は約１０〜約１２のｐＨ値を有してよく、他の構成成分は約１．５〜約４のｐＨ値を有してよい。選択されるｐＨ値は、電子受容体及び電子供与体が、好みに応じて酸化及び還元性を示す状態を提供する必要がある。更に、電子受容体及び電子供与体の色の変化特性及び溶解度が、上述したような範囲内にある必要がある。組成物のｐＨ値は、任意の溶媒又は酸性物質（例えばＨＣｌ若しくは酢酸）、塩基性物質等を含む更なる成分の種類及び量の選択により変動し得る。
【００７０】
組成物は、緩衝液も含み得る。本発明の文脈において、リン酸緩衝液、炭酸緩衝液、酢酸緩衝液、ギ酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液、トリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、グリシルグリシン緩衝液、グリシン緩衝液、リン酸ナトリウム緩衝液、リン酸水素ナトリウム緩衝液、リン酸二水素ナトリウム緩衝液、リン酸カリウム緩衝液、リン酸水素カリウム緩衝液、リン酸二水素カリウム緩衝液、又はピロリン酸緩衝液、又はそれらの混合物等の全ての習慣的な緩衝液が好適である。炭酸ナトリウム緩衝液、炭酸カリウム緩衝液、炭酸水素ナトリウム緩衝液又は炭酸水素カリウム緩衝液も好適である。緩衝液は、トリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン又はグリシルグリシンが特に好ましい。
【００７１】
緩衝液の濃度は、一般に、約０．０１〜約１．０Ｍの範囲内、又は約０．０２〜約０．５Ｍの範囲内、又は約０．０３〜約０．２Ｍの範囲内である。
【００７２】
本発明による組成物は、場合により例えばキノン又はジスルフィド化合物を含む更なる成分を含有してよい。本発明の組成物中に使用し得る好ましいキノンの例は、ナフトキノンである。本発明の組成物中に使用し得る好ましいジスルフィド化合物は、酸化型リポ酸、酸化型グルタチオン及び／又はシスチンである。
【００７３】
キノンが存在する場合、キノンは一般に、本発明の組成物中に、全組成物に対して約０．００５〜約０．５ｍｇ／ｍｌ又は約０．０１〜約０．０５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【００７４】
リポ酸は、全組成物に対して、本発明の組成物中に、例えば約０．０５〜約２．０ｍｇ／ｍｌ又は約０．１〜約０．５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在し得る。
【００７５】
本発明に記載する更なる一実施形態は、１つ以上の補助着色剤(auxiliary colorant(s))を含有する。補助着色剤によって本発明の組成物の色を調整することができ、所望であれば、色の変化をヒトの眼に、より良好に認識できるようにし得る。補助着色剤は、一般に、電子供与体又は電子受容体構成成分のいずれかにより生成され得る色とは異なる色を有する。
【００７６】
適切な補助着色剤は、電子が電子供与体から電子受容体に伝達されたときに、その色が変化しない化合物であり得る。代わりに、補助着色剤は、電子受容体の色の変化の検出を高めると思われる第１の色を、本発明の組成物に提供する。例えば、補助着色剤は背景色を提供して、吸収プロファイルにおける変化の外観を向上させ得る。
【００７７】
例えば、組成物中の補助着色剤には、パテントブルー（Patent Blue）Ｖ、パテントブルーＥ  １３１、エリオグラウシン（Erioglaucine）、ネオザポン（NEOZAPON）ブルー８０７［ビーエーエスエフ（BASF）、ルートビッヒスハーフェン（Ludwigshafen）、ドイツから市販］、メチレンブルー［ヘキスト（Hoechst）から市販］、インジゴカルミン、インジゴカルチン（Ｅ  １３２）、アントシアン（Ｅ  １６３）；クルクミン（Ｅ  １００）、ラクトフラビン（Ｅ  １０１）、タトラジン（Tatrazin）（Ｅ  １０２）、キノリンイエロー（Ｅ  １０４）、イエローオレンジＳ（Ｅ  １１０）；コヘニル（cohenille）（ｅ  １２０）、アゾルビン（Ｅ  １２２）、アマランス（Ｅ  １２３）、エリトロシン（Ｅ１２７）、アルーラレッド（allura red）（Ｅ  １２９）及びルビー顔料（Ｅ  １８０）並びにこれらの混合物又は組み合わせが挙げられるが、それらに限定されない。一般に、約５ｐｐｍ〜約１重量％又は約１０ｐｐｍ〜約１０００ｐｐｍ又は約５０ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍの量の補助着色剤が、所望であれば、本発明の組成物の調製に使用され得る。
【００７８】
本発明の別の実施形態において、本発明の組成物に使用し得る補助着色剤は、電子受容体の還元型により吸収されるが、本発明の歯科用組成物の任意の他の構成成分により吸収されない波長の蛍光を放射する蛍光染料であってよい。本発明によれば、放射される蛍光は、一般に、約３８０ｎｍ〜約７８０ｎｍの範囲内の波長を有する。蛍光染料は、例えばローダミン１１０等のローダミンであってよい。
【００７９】
ローダミン染料は、本発明の組成物中に、全組成物に対して例えば約０．００５〜約０．５ｍｇ／ｍｌ又は約０．０１〜約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度で存在してよい。
【００８０】
本発明の組成物は、レオロジー変性剤、安定剤、充填剤等の１つ以上の添加剤を更に含有してよい。本発明の組成物は、組成物のｐＨ値を調整する１つ以上の添加剤を更に含有してよい。レオロジー変性剤は、歯の表面に留まるように組成物を増粘する。レオロジー変性剤は、例えば、１μｍ未満の粒径を有するヒュームドシリカ、石英及びガラスのような無機材料を包含してよい。特定の材料において、１０〜５００ｎｍの範囲の粒径を有することが望ましい。レオロジー変性剤は、ポリ（メタ）アクリル酸及びその塩；アラビアゴムのような多糖類、及びヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースのようなセルロース誘導体；ヒドロキシエチルデンプン、キサンタネート及びアルギネートのような水溶液を増粘できる有機材料も包含することができる。
【００８１】
一般に、本発明の組成物は、添加剤を、全組成物の重量に対して０重量％〜約３０重量％又は約２重量％〜約１５重量％又は約３重量％〜約１３重量％の量で含有する。
【００８２】
他の任意の添加剤は、安息香酸、安息香酸エステル等の保存剤としての安定剤を通常、約５０ｐｐｍ〜約５重量％の量で含むことができる。
【００８３】
更に、約０．６μｍを越える粒径のガラス、石英及びケイ酸ジルコニア等の充填剤を組成物に加えることができる。これらの充填剤は、０重量％〜約７０重量％又は約５重量％〜約４０重量％又は約１０重量％〜約４０重量％の量で存在してよい。
【００８４】
本発明による歯科用組成物は、１つのコンパートメント系として提供されてよい。したがって、組成物の全構成成分が１つの溶液中に含まれる。溶液は、例えば約０．１〜約１０ｍｌの容積を有する瓶、約０．０１〜約１．０ｍｌの容積の単位用量包装デバイス、又は一体化されたブラシを有する瓶を含む適切な包装デバイス内に詰められてよい。そのようなデバイスの例は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，１０５，７６１号又は同第７，０９７，０７５号に、より詳細に記載されている。
【００８５】
組成物は、更に、２つ以上のコンパートメント系（部分のキット）として提供されてよい。したがって、本発明の更なる実施形態は、部分Ａ及び部分Ｂを含む部分のキットに関し、部分Ａは電子受容体構成成分と場合により溶媒とを含み、部分Ｂは電子供与体構成成分と場合により溶媒とを含み、溶媒と、本発明の文章に記載されている添加剤又は補助着色剤の様な任意の更なる構成成分とが、部分Ａ若しくは部分Ｂ中のいずれか、又は部分Ａ及び部分Ｂ中に存在してよい。
【００８６】
本発明の組成物は、少なくとも１つの電子受容体構成成分及び少なくとも１つの電子供与体構成成分の溶液を含み、電子受容体構成成分及び電子供与体構成成分は、溶液自体中で、電子供与体が還元等価物を電子受容体に伝達できないように選択される。
【００８７】
このことは、例えば電子受容体と電子供与体との間の電子伝達を可能にする又は促進する構成成分を実質的に含まない組成物を提供することにより達成され得る。したがって、本発明の組成物中に通常存在しない構成成分は、フェナジンメトサルフェート（ＰＭＳ）及び／又はメラドラ・ブルー（Meldola's Blue）（ＣＡＳ：７０５７−５７−０）である。
【００８８】
更に、本発明の組成物は、一般に乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、糖、ピルビン酸及びそれらの混合物の様な構成成分をいずれも含まない。
【００８９】
更に、本発明の組成物は、一般にＮＡＤを含まない。例えば、ＮＡＤを本発明の組成物に加えることは、試験が所望通りに適切に機能しない点で有害であろう。
【００９０】
本発明の組成物は、歯科及び歯科矯正領域を含む様々な分野で使用することができる。特に、本発明の組成物は、例えば歯ぐき、エナメル質、象牙質、歯根セメント質及び歯科修復物上の部位指向的な細菌の口腔内検出に使用することができる。口腔内での適用性は、当該技術分野の多数の既知の他の試験が、サンプル、例えば唾液の収集を要求し、かつインビトロで、別個の容器内で細菌の検出を行うことを要求するため、組成物の強力な利点である。更に、組成物及びこの組成物の使用により、部位指向的な細菌検出が可能となる。対照的に、多数の既知の試験は、口腔内に細菌が存在することを暗示するのみであり、特定の領域は暗示しない。本明細書に記載した本発明は、その口腔内での用途において、部位指向的な検出を提供できる。したがって、追加の時間を費やすことなく、細菌の位置に関する更なる情報を入手することができる。
【００９１】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、特に、掘削されたう蝕病変内の代謝的に活性な細菌を開業医が検出できるようにする。
【００９２】
本発明の組成物をう蝕感染した歯組織に適用したときに得られる色の変化の強度を評価することにより、このシグナルをう蝕感染した歯組織内、上に存在する細菌の数に関連付けることも可能である。
【００９３】
歯科用組成物の使用の可能な方法は、
ａ）少なくとも１つの電子受容体及び少なくとも１つの電子供与体の溶液を含む組成物を提供する工程であって、電子受容体及び電子供与体は、溶液自体中で、電子供与体が還元等価物を電子受容体に伝達できないように選択され、かつ組成物は、電子受容体と電子供与体との間の電子伝達を可能にする又は促進する化合物を実質的に含まない、工程と、
ｂ）組成物を（例えば歯ぐき、舌、エナメル質、象牙質、歯根セメントを含む）歯科組織、及び／又は歯科修復物に適用する工程と、
ｃ）約４分又はそれ未満（例えば約３分未満、約２分未満又は約１分間未満）待つ工程と、を含む。
【００９４】
約４分又はそれ未満の時間内での組成物の色の変化は、一般に、細菌が検出されていることを示す。この時間枠内で色の変化が全く生じない場合、それは通常、細菌の不在、特にある種の細菌の不在を暗示する。例えば、それは一般に、還元環境を生成する細菌の不在を暗示する。色の変化を検出した後、歯科開業医は、細菌がう蝕を生じるものか又は生じないものか診断を下す必要がある。したがって、組成物、この組成物の使用及びこの組成物の使用方法は、細菌の検出のみを説明し、これらの細菌が疾患を生じているか否かの情報は全く組み入れていない。細菌の検出それ自体は、口腔内であり、部位指向的である。
【００９５】
本発明の組成物及びその使用の利点の１つは、歯科開業医が結果を得るまでの時間が短縮され、結果に基づき診断を下し、又は更なる工程に着手できることである。
【００９６】
歯科組織の表面（例えば歯表面）上のみでの細菌の検出に加えて、組成物及びこの組成物の使用は、更に掘削したう蝕病変内の細菌の検出に適用することができる。更に、歯科開業医は、本発明による組成物を、掘削処置を行った後の細菌の検出にも使用することができる。
【００９７】
本発明の歯科用組成物は、口腔内で、ある特定の部位上の細菌の検出に使用し得ることが好ましい。例えば、充填物の縁内、歯冠及び橋義歯の縁内、白斑、小窩裂溝、歯垢、歯石及び／又は初期う歯の細菌の検出が可能である。
【００９８】
本発明は、歯科用組成物の製造方法にも関し、この方法は、少なくとも１つの電子受容体構成成分と、少なくとも１つの電子供与体構成成分とを溶媒に溶解又は添加して溶液を調製する工程であって、電子受容体構成成分と電子供与体構成成分とが、溶液それ自体中で、電子供与体が還元等価物を電子受容体に伝達できないように選択され、かつ組成物が電子受容体構成成分と電子供与体構成成分との間の電子伝達を可能にする又は促進する、添加された化合物を含まない、工程を含む。
【００９９】
上述した本発明の組成物は、細菌の口腔内検出のための手段又はデバイス、特に部位指向的に使用され得る手段又はデバイスの製造に使用することができる。
【０１００】
以下の実施例は例示のためのみに与えられるが、本発明の範囲を限定するものではない。特に指示がない限り、部及び百分率の全ては重量に基づき、全試験は周囲条件下（２３℃、湿度５０％及び室温）で行われた。
【０１０１】
実施例
以下の全実施例に関して、使用した化合物を以下に記載する：
【表Ａ】
0005579612.tif 000002
実施例で使用した他の構成成分は、一般に、シグマ・アルドリッチ（Sigma Aldrich）又はアクロス（Acros）の様な会社から得ることができる。
【０１０２】
（実施例１）
構成成分１：
０．１４ｇのβ−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、還元型二ナトリウム塩（Ｎａ２−ＮＡＤＨ）及び１．２２ｇのトリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（トリス）を１００ｍｌの脱イオン水に溶解し、ｐＨ１１．４に調整して、水溶液を調製した。
構成成分２：
１．０ｇの３−（４，５−ジメチルチアゾール−２イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム−ブロマイド（ＭＴＴ）及び０．１５ｇのＫＣｌを脱イオン水に溶解して、第２溶液を調製した。次に、この溶液をＨＣｌでｐＨ２．５に調整した。脱イオン水を、全容積が１００ｍｌとなるまで加えた。
実施例１：構成成分１と構成成分２を、３．６対１の比で混合した。
【０１０３】
（実施例１ａ）
構成成分１：
１．４ｇのアセチル−ＮＡＤＨ及び１．２２ｇのトリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（トリス）を１００ｍｌの脱イオン水に溶解して、ｐＨ１１．４に調整して、水溶液を調製した。
構成成分２：
１．０ｇの３−（４，５−ジメチルチアゾール−２イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム−ブロマイド（ＭＴＴ）及び０．１５ｇのＫＣｌを脱イオン水に溶解して、第２溶液を調製した。次に、この溶液をＨＣｌでｐＨ２．５に調整した。脱イオン水を、全容積が１００ｍｌとなるまで加えた。
実施例１ａ：構成成分１と構成成分２を、３．６対１の比で混合した。
引き抜いたヒトの歯のう蝕病変内に、１〜３滴の実施例１又は実施例１ａを与えた（空洞の寸法に応じて）。１５秒後、沈殿した染料により形成された青紫色の点が可視となった。このように、増大した数の生きた細菌を有する部位を示す、明確に区別されるシグナルが観察できた。
【０１０４】
（実施例２）
構成成分１：
１．４ｇのＮａ２−ＮＡＤＨ及び１．２２ｇのトリスを１００ｍｌの脱イオン水に溶解し、ｐＨ１１．４に調整して、水溶液を調製した。
構成成分２：
１．０ｇの３−（４，５−ジメチルチアゾール−２イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムーブロマイド（ＭＴＴ）及び０．１５ｇのＫＣｌを脱イオン水に溶解して、溶液を調製した。次に、溶液をＨＣｌでｐＨ２．５に調整した。脱イオン水を、全容積が１００ｍｌとなるまで加えた。
構成成分３
１ｍｌのポリ（エチレングリコール）２００と、１．００ｍｇの３−メチル−ナフトキノンとを組み合わせて、溶液を調製した。
混合物１：５ｍｌの構成成分２を、１ｍｌの構成成分３と混合した。
実施例２：混合物１と構成成分１を、１．０対３．６の比で混合した。
引き抜いたヒトの歯のう蝕病変内に、１〜３滴の実施例２を与えた（空洞の寸法に応じて）。１５秒後、沈殿した染料により形成された青紫色の点が可視となった。このように、増大した数の生きた細菌を有する部位を示す、明確に区別されるシグナルが観察できた。
【０１０５】
（実施例３）
構成成分１：
２０ｍｇのＮａ２−ＮＡＤＨを１ｍｌの脱イオン水に溶解して、水溶液を調製した。
構成成分２：
２．００ｍｇのローダミンを、１．００ｍｌのＤＭＳＯに溶解した。
構成成分３
１３．２１４ｇのグリシルグリシンを、脱イオン水に溶解した。次に、溶液をＮａＯＨでｐＨ１１．４に調整した。脱イオン水を、全容積が５００ｍｌとなるまで加えた。
構成成分４
１．０ｇのＭＴＴ及び０．１５ｇのＫＣｌを脱イオン水に溶解して、溶液を調製した。次に、溶液をＨＣｌでｐＨ２．５に調整した。脱イオン水を、全容積が１００ｍｌとなるまで加えた。
構成成分５
１．００ｍｇの３−メチル−ナフトキノンを１ｍｌのポリ（エチレングリコール）２００に溶解して、溶液を調製した。
混合物１：
５ｍｌの構成成分４を、１ｍｌの構成成分５と混合した。
実施例３ａ：構成成分１、２、３及び混合物１の混合比は、４．０対１．０対１７．０対６．０であった。
引き抜いたヒトの歯のう蝕病変内に、１〜３滴の実施例３を与えた（空洞の寸法に応じて）。１０秒後、沈殿した染料により形成された青紫色の点が可視となった。このように、増大した数の生きた細菌を有する部位を示す、明確に区別されるシグナルが観察できた。
【０１０６】
（実施例３ａ）
構成成分１：
２０ｍｇのＮａ２−ＮＡＤＨを１ｍｌの脱イオン水に溶解して、水溶液を調製した。
構成成分２：
２．００ｍｇのローダミンを、１．００ｍｌのＤＭＳＯに溶解した。
構成成分３
１３．２１４ｇのグリシルグリシンを、脱イオン水に溶解した。次に、溶液をＮａＯＨでｐＨ１１．４に調整した。脱イオン水を、全容積が５００ｍｌとなるまで加えた。
構成成分４
１．０ｇのＭＴＴ及び０．１５ｇのＫＣｌを脱イオン水に溶解して、溶液を調製した。次に、溶液をＨＣｌでｐＨ２．５に調整した。脱イオン水を、全容積が１００ｍｌとなるまで加えた。
混合物１：
１．００ｍｇの３−メチル−ナフトキノンを１ｍｌのポリ（エチレングリコール）２００に溶解して、溶液を調製した。
混合物１：
５ｍｌの構成成分３を、１ｍｌの構成成分４と混合した。
実施例３：構成成分１、２、３及び混合物１の混合比は、４．０対１．０対１７．０対６．０であった。
引き抜いたヒトの歯のう蝕病変内に、１〜３滴の実施例３を与えた（空洞の寸法に応じて）。１０秒後、沈殿した染料により形成された青紫色の点が可視となった。このように、増大した数の生きた細菌を有する部位を示す、明確に区別されるシグナルが観察できた。
【０１０７】
（実施例４）
構成成分１：
２０ｍｇのＮａ２−ＮＡＤＨを１ｍｌの脱イオン水に溶解して、水溶液を調製した。
構成成分２：
１０．００ｍｇの酸化型リポ酸を、１．００ｍｌのエタノールに溶解した。
構成成分３
１３．２１４ｇのグリシルグリシンを、脱イオン水に溶解した。次に、溶液をＮａＯＨでｐＨ１１．４に調整した。脱イオン水を、全容積が５００ｍｌとなるまで加えた。
構成成分４
１．０ｇのＭＴＴ及び０．１５ｇのＫＣｌを脱イオン水に溶解して、溶液を調製した。次に、溶液をＨＣｌでｐＨ２．５に調整した。脱イオン水を、全容積が１００ｍｌとなるまで加えた。
実施例４：構成成分１、２、３及び混合物１の混合比は、４．０対１．０対１７．０対６．０であった。
引き抜いたヒトの歯のう蝕病変内に、１〜３滴の実施例４を与えた（空洞の寸法に応じて）。１５秒後、沈殿した染料により形成された青紫色の点が可視となった。このように、増大した数の生きた細菌を有する部位を示す、明確に区別されるシグナルが観察できた。
【０１０８】
（実施例５）
構成成分１：
１．０ｇのＭＴＴ、０．０１２ｇのＰＭＳ及び０．１５ｇのＫＣｌを脱イオン水に溶解して、溶液を調製した。次に、溶液をＨＣｌでｐＨ２．５に調整した。脱イオン水を、全容積が１００ｍｌとなるまで加えた。
構成成分２：
１３．２１４ｇのグリシルグリシンを、脱イオン水に溶解した。次に、溶液をＮａＯＨでｐＨ１１．４に調整した。脱イオン水を、全容積が５００ｍｌとなるまで加えた。
実施例５：構成成分１及び構成成分２量の混合比は、１．０対４．０であった。
引き抜いたヒトの歯のう蝕病変内に、１〜３滴の実施例５を与えた（空洞の寸法に応じて）。１２０秒後、沈殿した染料により形成された青紫色の点が可視となった。このように、増大した数の生きた細菌を有する部位を示す、明確に区別されるシグナルが観察できた。
【０１０９】
（実施例６）
１．０ｇのＭＴＴ、０．０１２ｇのＰＭＳ及び０．１５ｇのＫＣｌを脱イオン水に溶解して、溶液を調製した。次に、溶液をＨＣｌでｐＨ２．５に調整した。脱イオン水を、全容積が１００ｍｌとなるまで加えた。
構成成分２：
１３．２１４ｇのグリシルグリシンを、脱イオン水に溶解した。次に、溶液をＮａＯＨでｐＨ１１．４に調整した。脱イオン水を、全容積が５００ｍｌとなるまで加えた。
構成成分３
２．００ｍｇのローダミンを、１．００ｍｌのＤＭＳＯに溶解した。
実施例６：構成成分１、構成成分２及び構成成分３量の混合比は、２５．０対１００．０対１．０であった。
引き抜いたヒトの歯のう蝕病変内に、１〜３滴の実施例６を与えた（空洞の寸法に応じて）。１２０秒後、沈殿した染料により形成された青紫色の点が可視となった。このように、増大した数の生きた細菌を有する部位を示す、明確に区別されるシグナルが観察できた。
【０１１０】
（実施例７）
構成成分１：
１．００ｇのＭＴＴ及び０．１５ｇのＫＣｌを脱イオン水に溶解して、溶液を調製した。次に、溶液をＨＣｌでｐＨ２．５に調整した。脱イオン水を、全容積が１００ｍｌとなるまで加えた。
構成成分２：
１．２２ｇのトリスを脱イオン水に溶解して、水溶液を調製した。次に、溶液をＮａＯＨでｐＨ１１．４に調整した。脱イオン水を、全容積が１００ｍｌとなるまで加えた。
実施例７：混合物１と構成成分２とを、１．０対３．６の比で混合した。
引き抜いたヒトの歯のう蝕病変内に、１〜３滴のう蝕指示薬溶液を与えた（空洞の寸法に応じて）。３００秒後、沈殿した染料により形成された青紫色の点が可視となった。このように、増大した数の生きた細菌を有する部位を示す、明確に区別されるシグナルが観察できた。
【０１１１】
（実施例８）
構成成分１：
１．００ｇのＭＴＴ及び０．１５ｇのＫＣｌを脱イオン水に溶解して、溶液を調製した。次に、溶液をＨＣｌでｐＨ２．５に調整した。脱イオン水を、全容積が１００ｍｌとなるまで加えた。
構成成分２：
３８０ｇのメラドラ・ブルー（Meldola’s blue）を１００ｍｌの脱イオン水に溶解して、溶液を調製した。
混合物１：
８６．８ｍｌの構成成分１を、１３．２ｍｌの構成成分２と混合した。
構成成分３
２．００ｍｇのローダミンを、１．００ｍｌのＤＭＳＯに溶解した。
構成成分４
１３．２１４ｇのグリシルグリシンを、脱イオン水に溶解した。次に、溶液をＮａＯＨでｐＨ１１．４に調整した。脱イオン水を、全容積が５００ｍｌとなるまで加えた。
実施例８：混合物１、構成成分３及び構成成分４を、２５．０対１．０対１００．０の比で混合した。
引き抜いたヒトの歯のう蝕病変内に、１〜３滴のう蝕指示薬溶液を与えた（空洞の寸法に応じて）。３００秒後、沈殿した染料により形成された青紫色の点が可視となった。このように、増大した数の生きた細菌を有する部位を示す、明確に区別されるシグナルが観察できた。
【０１１２】
実施例１〜４の全てにおいて、Ｎａ２−ＮＡＤＨの代わりに、国際公開第９８／３３９３６号によるＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの異なる類似体を使用してもよい。例えば、実施例１〜４のそれぞれにおいて、類似の３−アセチルピリジンアデニンジヌクレオチドの場合、１００ｍｌの脱イオン水及び０．１２ｍｇのトリス中、１．４５ｇの量のアセチル−ＮＡＤＨを有する水溶液を使用し得る。ＮＡＤＨ及びＮＡＤＰＨの他の類似体も使用し得る。
得られた結果を、表１に概略する：
【表Ｂ】
0005579612.tif 000003
【０１１３】
これらの実施例から明かであり得るように、色の変化と沈殿形成は、本発明の電子受容体及び電子供与体を含有する溶液で、より急速であると思われた。電子供与体が存在しない全溶液において、色の変化の時間は有意により長かった。ＰＭＳ又はメラドラ・ブルー（Meldola’s Blue）の様な構成成分が存在する場合、同様であった。