(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式、
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000117
のペプチド誘導体。
【請求項２】
請求項１に記載の誘導体又はその薬学的に許容可能な塩、アミド、アルキル、又はエステルと、薬学的に許容可能な賦形剤を含有する薬学的組成物。
【請求項３】
医薬としての使用のための、請求項１に記載の誘導体、又は請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、肥満症、高血圧症、Ｘ症候群、脂質代謝異常、認知障害、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、冠動脈心疾患及び他の心血管障害、脳卒中、炎症性腸症候群、胃腸障害、及び胃潰瘍の治療又は予防に使用される、請求項１に記載の誘導体、又は請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、肥満症、高血圧症、Ｘ症候群、脂質代謝異常、認知障害、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、冠動脈心疾患及び他の心血管障害、脳卒中、炎症性腸症候群、胃腸障害、及び胃潰瘍の治療又は予防に使用される医薬の製造における、請求項１に記載の誘導体、又は請求項２に記載の薬学的組成物の使用。
【請求項６】
薬学的に活性な量の、請求項１に記載の誘導体、又は請求項２に記載の薬学的組成物を含んでなる、高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、肥満症、高血圧症、Ｘ症候群、脂質代謝異常、認知障害、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、冠動脈心疾患及び他の心血管障害、脳卒中、炎症性腸症候群、胃腸障害、及び胃潰瘍を治療又は予防するための医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、治療用ペプチドの分野、すなわち、Ａ-Ｂ-Ｃ-Ｄで誘導体化された新規な遅延性(protracted)ペプチド、及びその治療用途に関する。本発明に特に関連する治療用ペプチドの例は、グルカゴン様ペプチド-１(ＧＬＰ-１)、エキセンディン-４、並びにそれらのアナログである。
【背景技術】
【０００２】
インビボにおける作用の持続時間を長くするために、治療用ペプチド、例えばＧＬＰ-１及びエキセンディン-４の構造を修飾する様々な種類の異なるアプローチが使用されている。例えば、国際公開第２００６／０９７５３８号、国際公開第２００６／０９７５３６号、国際公開第２００６／０３７８１０号、国際公開第２００６００５６６７号、国際公開第２００５／０２７９７８号、国際公開第９８／０８８７１号、及び米国特許第２００１／００１１０７１号には、種々のＧＬＰ-１アナログ及びその誘導体が記載されている。
【０００３】
特に２型糖尿病区分に入る多くの糖尿病患者は、いわゆる「針恐怖症」、すなわち自分自身で注射することへかなりの恐怖心を抱きやすい。２型糖尿病区分では、ほとんどの患者は、経口の血糖降下剤を用いて処置されており、ＧＬＰ-１化合物は、これらの患者に投与されるであろう注射可能な薬学的生成物であると期待されるため、注射に対する恐怖心が、臨床的に非常に有望な化合物の幅広い使用にとって、重大な障害になるおそれがある。よって、許容可能な臨床的プロファイル、又は場合によっては非侵襲的投与、例えば肺、鼻、舌下、頬、又は経口投与を介して保持されつつ、１日に１回未満、例えば２〜３日毎に１回、好ましくは１週間１回の投与が可能な、新規の化合物を開発する必要がある。
【０００４】
本発明の目的の一つは、長時間作用する、すなわち、上述した投与投与を計画を有するペプチド誘導体、例えばＧＬＰ-１、エキセンディン-４の誘導体、又はそのアナログを提供することである。
この発明の他の目的は、例えば１週間に１回、皮下投与、又は代替として非侵襲的送達に使用される、治療的用量を低減するために、高い作用強度(レセプター親和性)を有するペプチド誘導体、例えばＧＬＰ-１、エキセンディン-４の誘導体、又はそのアナログを提供することである。
【０００５】
さらなる目的は、高濃度のヒトアルブミンの存在下での親和性に対して、非常に低濃度のヒトアルブミンの存在下での親和性を比較した場合、ＧＬＰ-１レセプターに対する親和性が部分的に低減しているＧＬＰ-１の誘導体又はそのアナログを提供することにある。結合親和性におけるシフトは、好ましくは低い。
この発明の他の目的は、タンパク質分解からペプチドを保護し、ペプチドの腎クリアランスを低下させる、高いアルブミン結合親和性を有するペプチド誘導体、例えばＧＬＰ-１誘導体又はそのアナログを提供することである。
作用強度、特に低及び高濃度のアルブミンの存在下におけるＧＬＰ-１レセプターに対する結合親和性の比率、半減期、アルブミンに対する結合親和性は、長時間作用し、安定しており、もちろん治療的に活性であり、１週間１回の投与が可能なペプチド誘導体、例えばＧＬＰ-１誘導体を得るという全目的に対して潜在的に関連する特性である。
本発明のペプチド誘導体は、好ましくは化学的、物理的及び酵素的に安定している。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、少なくとも一のアミノ酸残基がＡ-Ｂ-Ｃ-Ｄ-で誘導体化されているペプチドを含有するペプチド誘導体に関し、ここで
Ａ-は、
0005606314.tif 000002
[上式中、Ｒは低級の直鎖状又は分枝状アルキル、例えばイソブチルであり、ｐは１０、１１、１２、１３及び１４からなる群から選択され、ｄは０、１、２、３、４及び５からなる群から選択される]であり、
-Ｂ-は、
0005606314.tif 000003
[上式中、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、ｙは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２からなる群から選択される]からなる群から選択され、
又はＡは、
0005606314.tif 000004
[上式中、ｎは１４、１５、１６、１７、１８及び１９からなる群から選択される]であり、
Ｂは、
0005606314.tif 000005
[上式中、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択される]
からなる群から選択され、
-Ｃ-は、
0005606314.tif 000006
[上式中、ｂ及びｅはそれぞれ独立して、０、１及び２からなる群から選択され、ｃ及びｆはそれぞれ独立して、０、１及び２からなる群から選択され、但し、ｃが０の場合、ｂは１又は２であり、又はｃが１又は２である場合、ｂは０であり、ｆが０である場合、ｅは１又は２であり、ｆが１又は２である場合、ｅは０である]
からなる群から選択され、
-Ｄ-は前記アミノ酸残基に結合しており、リンカーであり、結合を表すか、又は存在しない。
また本発明は、これらのペプチド誘導体の組成物及び使用に関する。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
発明の説明
定義及び特定の実施態様
本明細書において、以下の用語は、以下に示した意味を有する：
ここで使用される場合、「ポリペプチド」及び「ペプチド」なる用語は、ペプチド結合により結合した、少なくとも５つの構成アミノ酸からなる化合物を意味する。構成アミノ酸は遺伝暗号によりコードされるアミノ酸からなる群からのものであってよく、また遺伝暗号によりコードされない天然アミノ酸、並びに合成アミノ酸であってもよい。遺伝暗号によりコードされない天然アミノ酸は、例えばγ-カルボキシグルタマート、オルニチン、ホスホセリン、Ｄ-アラニン及びＤ-グルタミンである。合成アミノ酸は、化学合成により製造されたアミノ酸、すなわち遺伝暗号によりコードされるアミノ酸のＤ-異性体、例えばＤ-アラニン及びＤ-ロイシン、Ａｉｂ(α-アミノイソ酪酸)、Ａｂｕ(α-アミノ酪酸)、Ｔｌｅ(tert-ブチルグリシン)、β-アラニン、３-アミノメチル安息香酸、アントラニル酸を含む。
【０００８】
２２のタンパク新生アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、シスチン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、ヒドロキシプロリン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンである。
【０００９】
よって、非タンパク新生アミノ酸(非天然アミノ酸とも称される)は、ペプチド結合を介してペプチドに導入可能な部分であるが、タンパク新生アミノ酸ではない。具体例は、γ-カルボキシグルタマート、オルニチン、ホスホセリン、Ｄ-アミノ酸、例えばＤ-アラニン及びＤ-グルタミン、化学合成により製造されたアミノ酸を含む非タンパク新生合成アミノ酸、すなわち遺伝暗号によりコードされるアミノ酸のＤ-異性体、例えばＤ-アラニン及びＤ-ロイシン、Ａｉｂ(α-アミノイソ酪酸)、Ａｂｕ(α-アミノ酪酸)、Ｔｌｅ(tert-ブチルグリシン)、３-アミノメチル安息香酸、アントラニル酸、デス-アミノ(des-amino)-ヒスチジン(デスアミノＨｉｓと省略、又はイミダゾプロピオン酸と命名、Ｉｍｐｒと省略)、アミノ酸のベータアナログ、例えばβ-アラニン等、Ｄ-ヒスチジン、２-アミノ-ヒスチジン、β-ヒドロキシ-ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα-アセチル-ヒスチジン、α-フルオロメチル-ヒスチジン、α-メチル-ヒスチジン、α,α-ジメチル-グルタミン酸、ｍ-ＣＦ３-フェニルアラニン(ｍ-ＣＦ３-Ｐｈｅと省略)、アルファ,アルファ-ジアミノプロピオン酸(Ｄａｐと省略)、２-ナフチル-スレオニン(２-ナフチル-Ｔｈｒ又は-Ｔと省略)、３-ピリジルアラニン、２-ピリジルアラニン又は４-ピリジルアラニン、(１-アミノシクロプロピル)カルボン酸、(１-アミノシクロブチル)カルボン酸、(１-アミノシクロペンチル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(１-アミノシクロへプチル)カルボン酸、又は(１-アミノシクロオクチル)カルボン酸である。
【００１０】
イプシロン-アミノ-Ｌｙｓ(又はイプシロン-Ｌｙｓ)なる用語は、リジン残基が、(通常のケースの場合)そのアルファアミノ基ではなく、そのイプシロンアミノ基を介して、ペプチド、例えばＧＬＰ-１(７-３７)ペプチド又はそのアナログに結合していることを示すことを意図している(例えば、実施例５３の化合物を参照)。
【００１１】
ポリペプチドを称し、ここで使用される場合「アナログ」なる用語は、修飾されたペプチドを意味し、ペプチドの一又は複数のアミノ酸残基は、他のアミノ酸残基で置換されており、及び／又は一又は複数のアミノ酸残基は、ペプチドから欠失しており、又は一又は複数のアミノ酸残基は、ペプチドに付加されている。アミノ酸残基のこのような付加又は欠失は、ペプチドのＮ末端及び／又はペプチドのＣ末端で生じる可能性がある。
【００１２】
多くの場合、アナログを記載するための簡単なシステムが使用される：例えば[Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１(７-３７)Ｌｙｓは、ＧＬＰ-１(７-３７)アナログと命名され、ここで３４位で自然に生じたリジンはアルギニンで置換されており、リジンは末端アミノ酸残基、すなわちＧｌｙ３７に付加されている。
光学異性体が記載されない全てのアミノ酸は、Ｌ-異性体を意味すると理解される。
【００１３】
本発明のペプチド誘導体の特定の実施態様では、リンカーＤは存在せず、ペプチドがＡ-Ｂ-Ｃ-のみで誘導体化されていることを意味する。
他の特定の実施態様では、リンカーＤは、少なくとも５、８、１０、１９、２０、２９、４１、又は少なくとも６０の非水素原子を含む及び含有する。
さらなる他の実施態様では、リンカーの非水素原子の３０−５０％(例えば、３４、３８、４０、４１又は４２％)が、Ｎ又はＯ原子で構成されている。
【００１４】
機能的特性
本発明の多くのペプチド誘導体は合成であり、実験部分に記載されているようにして試験される。
本発明のペプチド誘導体は、実施例を参照することで、以下に説明されるように、いくつかの有利で有益な特性を有する。
第１の態様では、本発明のペプチド誘導体は、作用の遅延化特性を有しており、潜在的に、１日に１回未満の投与頻度、１週間に１回の可能性、又はそれ未満の投与頻度に適している。作用プロフィールは、実験動物、例えばマウス又はブタを用いて、薬物動態実験にて評価される。適切な実験は、本出願の実施例７３(ミニブタ)及び実施例７７(マウス)において見出される。
【００１５】
実施例７３のミニブタに記載されているように、(ｉ)ペプチド誘導体は、皮下又は静脈内、好ましくは皮下に投与されてよく；(ｉｉ)ブタは、好ましくは約５ヶ月で体重８−１０ｋｇのゲティンゲン(Gottingen)ミニブタであり；(ｉｉｉ)動物は、投与前、好ましくは記載されているように絶食させ；(ｉｖ)好ましくは示したように注射をし；(ｖ)試験される動物の数は、好ましくは示したようなものであり；(ｖｉ)用量は、好ましくは示したようなものであり；及び／又は(ｖｉｉ)血液サンプルは、好ましくはこの実施例に示したように取り出され、収集され、アッセイされる。
実施例７３の一つと同様、薬物動態実験は、時間に対する当該問題の化合物の血漿濃度プロフィールとされ、半減期Ｔ１／２に基づき測定され得る。
【００１６】
第１の特定の実施態様では、本発明のペプチド、例えばＧＬＰ-１誘導体の半減期は、ミニブタに皮下投与した後、１８時間以上、好ましくは２４時間以上、より好ましくは２８時間以上、さらに好ましくは３０時間以上、最も好ましくは３２時間以上である。
第２の特定の実施態様では、本発明のペプチド誘導体の半減期は、ミニブタに皮下投与した後、３２時間以上、好ましくは３４時間以上、より好ましくは３６時間以上、さらに好ましくは３８時間以上、最も好ましくは４０時間以上である。
【００１７】
第３の特定の実施態様では、本発明のペプチド誘導体の半減期は、ミニブタに皮下投与した後、４５時間以上、好ましくは５０時間以上、より好ましくは５５時間以上、さらに好ましくは６０時間以上、最も好ましくは６５時間以上である。
第４の特定の実施態様では、本発明のペプチド誘導体の半減期は、ミニブタに皮下投与した後、４５時間以上、好ましくは５０時間以上、より好ましくは５５時間以上、さらに好ましくは６０時間以上、最も好ましくは６５時間以上である。
【００１８】
第５の特定の実施態様では、本発明のペプチド誘導体の半減期は、ミニブタに皮下投与した後、７０時間以上、好ましくは７５時間以上、より好ましくは８０時間以上、さらに好ましくは８５時間以上、最も好ましくは９０時間以上である。
第６の特定の実施態様では、本発明のペプチド誘導体の半減期は、ミニブタに皮下投与した後、９２時間以上、好ましくは９４時間以上、より好ましくは９６時間以上、さらに好ましくは９８時間以上、最も好ましくは１００時間以上である。
従って、本発明のペプチド誘導体の例示的半減期間隔(hour、ｈで示す時間)は：ミニブタへの皮下投与で測定して、２０-１００、３０-１００、４０-１００、５０-１００、６０-１００、７０-１００、８０-１００、又は９０-１００(時間)である。
【００１９】
本発明のペプチド誘導体、例えばＧＬＰ-１誘導体の半減期は、例えば実施例７７に記載されているように、ｄｂ／ｄｂマウスにおける、用量応答研究において決定されてもよい。この実施例に記載されているように、(ｉ)マウスは、好ましくはタコニック(Taconic)からのものであり；(ｉｉ)１０-１２週齢であり；(ｉｉｉ)アルトロミン(Altromin)１３２４及び水道水等の標準的な餌に、自由に近づくことができるようにしてあり；(ｉｖ)２４ｄｇＣで保持されており；(ｖ)１週間、環境に慣れさせ；(ｖｉ)マッチング平均血糖値に基づき、７つのグループ(好ましくはｎ＝６)に配分され；(ｖｉｉ)実施例に記載されているようにして処理を受け；(ｖｉｉｉ)記載されているようにして投与され；(ｉｘ)記載されているようなスキーム、好ましくは記載されているようなアッセイに従い、血糖を算定し；及び／又は(ｘ)好ましくは実施例に記載されているようにして、時間決定に対する血糖に基づき、半減期が決定される。
【００２０】
第１の特定の実施態様では、本発明のペプチド誘導体、例えばＧＬＰ-１誘導体の半減期は、ｄｂ／ｄｂマウスに皮下投与した後、１０時間以上、好ましくは１１時間以上、より好ましくは１２時間以上、さらに好ましくは１３時間以上、最も好ましくは１４時間以上である。
第２の特定の実施態様では、本発明のペプチド誘導体の半減期は、ｄｂ／ｄｂマウスに皮下投与した後、１５時間以上、好ましくは１６時間以上、より好ましくは１７時間以上、さらに好ましくは１８時間以上、最も好ましくは１９時間以上である。
第３の特定の実施態様では、本発明のペプチド誘導体の半減期は、ｄｂ／ｄｂマウスに皮下投与した後、２０時間以上、好ましくは２１時間以上、より好ましくは２２時間以上、さらに好ましくは２３時間以上、最も好ましくは２４時間以上である。
【００２１】
第４の特定の実施態様では、本発明のペプチド誘導体の半減期は、ｄｂ／ｄｂマウスに皮下投与した後、２５時間以上、好ましくは２６時間以上、より好ましくは２７時間以上、さらに好ましくは２８時間以上、最も好ましくは２９時間以上である。
第５の特定の実施態様では、本発明のペプチド誘導体の半減期は、ｄｂ／ｄｂマウスに皮下投与した後、３０時間以上、好ましくは３１時間以上、より好ましくは３２時間以上、さらに好ましくは３３時間以上、最も好ましくは３４時間以上である。
従って、本発明のペプチド誘導体の例示的半減期間隔(hour、ｈで示す時間)は、ｄｂ／ｄｂマウスへの皮下投与でアッセイして：５-３５、１０-３５、１５-３５、２０-３５、又は２５-３５(時間)である。
【００２２】
第２の態様では、本発明のペプチド誘導体は、(レセプターで)許容可能な、好ましくは高い作用強度を有している。インスリン分泌性剤、例えば本発明のＧＬＰ-１誘導体の作用強度は、実施態様７４に記載されているように、用量応答曲線から、ＥＣ５０値を算出することにより決定されてよい。
ここで使用される場合「インスリン分泌性剤」なる用語は、ヒトＧＬＰ-１レセプターのアゴニストである誘導体、すなわち、ヒトＧＬＰ-１レセプターを含有する適切な媒体(このような媒体の一つは以下に開示される)において、ｃＡＭＰの形成を刺激する誘導体を意味する。
【００２３】
特定の実施態様では、(ｉ)クローンされたヒトＧＬＰ-１レセプターを発現するベビーハムスター腎臓(ＢＨＫ)細胞、好ましくはＢＨＫ-４６７-１２Ａ、より好ましくはＢＨＫ-４６７-１２Ａ(ｔｋ-ｔｓ１３)を使用し；(ｉｉ)好ましくは５％のＣＯ２ において、１００ＩＵ／ｍＬのペニシリン、１００μＬ／ｍＬのストレプトマイシン(１％のＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ)、５％のウシ胎仔血清(ＦＣＳ)及び０．５ｍｇ／ｍＬのジェネテシンＧ-４１８(Life Technologies)が添加されたＤＭＥＭ培地で、細胞を増殖させ；(ｉｉｉ)好ましくは約８０％のコンフルエンスの細胞を、リン酸緩衝食塩水(ＰＢＳ)で２回洗浄し；(ｖｉ)例えばヴェルセン等、エチレンジアミン四酢酸の四ナトリウム塩の水溶液を用いて細胞を収集し；(ｖ)好ましくはバッファー１においてホモジナイズすることにより、細胞から細胞膜を調製し；(ｖｉ)ホモジネートを、４℃で１５分、例えば４８０００ｘｇで遠心分離にかけ；及び／又は(ｖｉｉ)バッファー２においてホモジナイズすることにより、ペレットを懸濁させ；工程(ｖｉ)と(ｖｉｉｉ)を、例えば１又は２回以上、好ましくは繰り返す。
【００２４】
機能的レセプターアッセイを、インスリン分泌性剤による刺激に対する反応として、環状ＡＭＰ(ｃＡＭＰ)を測定することにより、実施態様７４に記載されるようにして実施してよい。好ましくは、形成したｃＡＭＰを、アルファスクリーン(AlphaScreen)ＴＭｃＡＭＰキット(Perkin Elmer Life Sciences)により定量する。次の添加物：１ｍＭのＡＴＰ、１μＭのＧＴＰ、０．５ｍＭの３-イソブチル-１-メチルキサンチン(ＩＢＭＸ)、０．０１％のトゥイーン(Tween)-２０、０．１％のＢＳＡ、６μｇの膜調製物、１５μｇ／ｍＬのアセプタービーズ、２０μｇ／ｍＬのドナービーズで、６ｎＭのビオチニル-ｃＡＭＰでプレインキュベートされたものと共に、全用量５０μＬのバッファー３(５０ｍＭのトリス-ＨＣＩ、５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４)内の、半領域の９６-ウェルマイクロタイタープレートにおいてインキュベートを実施してよい。アゴニスト活性について試験される誘導体を、好ましくはバッファー３に溶解、及びこれで希釈する。各実験について、ＧＴＰを新たに調製する。室温で３時間、ゆっくりと攪拌しつつ、暗所でプレートをインキュベートし、続いてフュージョン(Fusion)機器(Perkin Elmer Life Sciences)において計測する。個々の誘導体について、濃度-反応曲線をプロットし、プリズム(Prism)の、好ましくはバージョン４．０又は５．０(GraphPad, Carlsbad, CA)を用いた、４つのパラメーターのロジスティックモデルを使用し、ＥＣ５０値を算出する。
【００２５】
第１の特定の実施態様では、本発明のＧＬＰ-１誘導体は、ｃＡＭＰアッセイを使用して測定した場合に、４．００以下、好ましくは３．５０以下、より好ましくは３．００以下、さらに好ましくは２．５０以下、最も好ましくは２．００(ｎＭ)以下の作用強度(ｎＭでのＥＣ５０)を有する。
第２の特定の実施態様では、本発明のＧＬＰ-１誘導体は、ｃＡＭＰアッセイを使用して測定した場合に、１．８０以下、好ましくは１．６０以下、より好ましくは１．４０以下、さらに好ましくは１．２０以下、最も好ましくは１．００(ｎＭ)以下の作用強度(ｎＭでのＥＣ５０)を有する。
第３の特定の実施態様では、本発明のＧＬＰ-１誘導体は、ｃＡＭＰアッセイを使用して測定した場合に、０．８０以下、好ましくは０．６０以下、より好ましくは０．４０以下、さらに好ましくは０．２０以下、最も好ましくは０．１０(ｎＭ)以下の作用強度(ｎＭでのＥＣ５０)を有する。
【００２６】
第４の特定の実施態様では、本発明のＧＬＰ-１誘導体は、ｃＡＭＰアッセイを使用して測定した場合に、０．０９０以下、好ましくは０．０８０以下、より好ましくは０．０７０以下、さらに好ましくは０．０６０以下、最も好ましくは０．０５０(ｎＭ)以下の作用強度(ｎＭでのＥＣ５０)を有する。
第５の特定の実施態様では、本発明のＧＬＰ-１誘導体は、ｃＡＭＰアッセイを使用して測定した場合に、０．０４０以下、好ましくは０．０３０以下、より好ましくは０．０２０以下、最も好ましくは０．０１０(ｎＭ)以下の作用強度(ｎＭでのＥＣ５０)を有する。
従って、本発明のＧＬＰ-１誘導体の作用強度(ｃＡＭＰアッセイを使用して測定した場合、ｎＭでのＥＣ５０)の例示的範囲は、０．０１０-２．００、０．０１０-１．８０、０．０１０-１．６０、０．０１０-１．４０、０．０１０-１．２０、０．０１０-１．００、０．０１０-０．８０、０．０１０-０．６０、０．０１０-０．４０、０．０１０-０．３０、０．０１０-０．２０、０．０１０-０．１０、及び０．０１０-０．９０(ｎＭ)、好ましくは０．０１０-０．４０、０．０１０-０．３０、０．０１０-０．２０、０．０１０-０．１０、及び０．０１０-０．９０(ｎＭ)である。
【００２７】
第６の特定の実施態様では、本発明のＧＬＰ-１誘導体は、アルブミン及びＧＬＰ-１レセプターに、同時に結合可能である。例えば、本発明のＧＬＰ-１誘導体は、２％のアルブミンの存在下、１００ｎＭ以下、好ましくは３０ｎＭ以下の親和性で、ＧＬＰ-１レセプターに結合し得る。
【００２８】
第３の態様では、本発明のＧＬＰ-１誘導体は、ＧＬＰ-１レセプターに対する親和性を有しており、ここで、２％(高／低)のヒトアルブミンの存在下における親和性に対し、非常に低濃度(例えば０．００５％〜０．２％)のヒトアルブミンの存在下における親和性を比較した場合、幾分減少しただけである。これらの条件下での、結合親和性におけるシフトは、好ましくは１００倍以下、より好ましくは５０倍以下、さらに好ましくは３０倍以下、最も好ましくは１０倍以下である。高濃度及び低濃度のアルブミンにおける、レセプターの結合親和性は、実施例７５に記載されているようにして測定されてよい。
【００２９】
第１の特定の実施態様では、本発明のＧＬＰ-１誘導体は、５００以下、好ましくは４００以下、より好ましくは３００以下、さらに好ましくは２００以下、最も好ましくは１００以下の[(ＩＣ５０／ｎＭ)高ＨＳＡ]／[(ＩＣ５０／ｎＭ)超低ＨＳＡ]比率を有する。
第２の特定の実施態様では、本発明のＧＬＰ-１誘導体は、９０以下、好ましくは８０以下、より好ましくは７０以下、さらに好ましくは６９以下、最も好ましくは５０以下の[(ＩＣ５０／ｎＭ)高ＨＳＡ]／[(ＩＣ５０／ｎＭ)超低ＨＳＡ]比率を有する。
【００３０】
第３の特定の実施態様では、本発明のＧＬＰ-１誘導体は、４０以下、好ましくは３５以下、より好ましくは３０以下、さらに好ましくは２５以下、最も好ましくは２０以下の[(ＩＣ５０／ｎＭ)高ＨＳＡ]／[(ＩＣ５０／ｎＭ)超低ＨＳＡ]比率を有する。
第４の特定の実施態様では、本発明のＧＬＰ-１誘導体は、１５以下、好ましくは１０以下、より好ましくは８以下、さらに好ましくは５以下、最も好ましくは４以下の[(ＩＣ５０／ｎＭ)高ＨＳＡ]／[(ＩＣ５０／ｎＭ)超低ＨＳＡ]比率を有する。
従って、[(ＩＣ５０／ｎＭ)高ＨＳＡ]／[(ＩＣ５０／ｎＭ)超低ＨＳＡ]比率の例示的範囲は、２-５００、２-３００、２-１００、２-５０、２-３０、２-２０、及び２-１０である。
【００３１】
第４の態様では、本発明のペプチド誘導体は、高いアルブミン結合親和性を有している。アルブミンとは、ヒト血清アルブミン(ＨＳＡ)を称し、親和性は、実施例７６に記載されたようにして測定されてよい。
【００３２】
ヒト血清アルブミン(ＨＳＡ)に対するＧＬＰ-１誘導体の親和性は、競合シンチレーション近接アッセイ(ＳＰＡ)により、好ましくは(ｉ)例えば５時間、ビオチニル化ＨＳＡと共に、ストレプトアビジン-ＳＰＡビーズ(例えば、GE Healthcare RPNQ0009)をインキュベートし；(ｉｉ)バッファーを用いてビーズを洗浄し；(ｉｉｉ)１２５Ｉ-標識されたアシル化ＧＬＰ-１アナログ、例えばＮ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-(１７-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，１２５Ｉ-Ｔｙｒ１９，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１(７-３７)又はＮ-イプシロン３７-[２-(２-[２-((Ｓ)-４-((Ｓ)-４-(１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ)-４-カルボキシブチリルアミノ)-４-カルボキシブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，１２５Ｉ-Ｔｙｒ１９，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１(７-３７)-ＮＨ２とビーズを、好ましくは１００ｍＭのＨｅｐｅｓ、１００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＭｇＳＯ４、０．０２５％のトゥイーン-２０、ｐＨ７．４において混合し；(ｉｖ)好ましくは同じバッファーにおいて、測定されるＧＬＰ-１誘導体の適切な希釈シリーズを適切な容量、例えば１００μｌを使用し、シンチレーションカウンター、例えばパーキン・エルマー・オプチプレート(Perkin Elmer Optiplate)-９６ ６００５２９０のウェルに混合物を移し(ウェル当たり１００μｌ)；(ｖ)好ましくはゆっくりと揺らしつつ、さらに好ましくは室温での適切なインキュベート時間、例えば２０時間後、プレートを遠心分離し；(ｖｉ)例えば、トップカウンター(TopCounter)においてプレートを計測し；及び／又は(ｖｉｉ)ＧＬＰ-１誘導体の濃度の関数として、結合ｃｐｍをプロットすることにより、測定されてよい。競合曲線のＥＣ５０値は、好ましくはＨＳＡに対する誘導体の親和性の測定として使用される。また、ＨＳＡ結合親和性は、見かけＫｄ(解離平衡定数についてのＫｄ)として表されてもよい。
【００３３】
第１の特定の実施態様では、アルブミン結合親和性(すなわち、実施例７６のアッセイを使用して測定した場合の、競合曲線のＥＣ５０値(ｎＭ))は、３０００以下、好ましくは２５００以下、より好ましくは２０００以下、さらに好ましくは８００以下、最も好ましくは６００(ｎＭ)以下である。
第２の特定の実施態様では、アルブミン結合親和性(すなわち、実施例７６のアッセイを使用して測定した場合の、競合曲線のＥＣ５０値(ｎＭ))は、５００以下、好ましくは４００以下、より好ましくは３００以下、さらに好ましくは２００以下、最も好ましくは１００(ｎＭ)以下である。
従って、本発明のＧＬＰ-１誘導体のアルブミン結合親和性(ｎＭでのＥＣ５０)の例示的範囲は：１-３０００、１-２５００、１-２０００、１００-２０００、２００-２０００、４００-１５００、６００-１５００、及び８００-１５００(ｎＭ)である。
【００３４】
付加的な定義及び特定の実施態様
本発明の誘導体であり得る他のペプチドの具体例は、１００ｋＤａ未満、５０ｋＤａ未満、又は１０ｋＤａ未満の分子量を有する治療用ペプチドである。
本発明で誘導体化可能な他のペプチドの具体例は、エキセンディン-４、ヒト成長ホルモン、ヒトインスリン、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩＩＩ因子を含む凝固因子、副甲状腺ホルモン、ヒト卵胞刺激ホルモン、血小板由来増殖因子(ＰＤＧＦ)、トランスフォーミング増殖因子α(ＴＧＦ-α)、トランスフォーミング増殖因子β(ＴＧＦ-β)、上皮成長因子(ＥＧＦ)、血管内皮増殖因子(ＶＥＧＦ)、ソマトメジン、例えばインスリン成長因子Ｉ(ＩＧＦ-Ｉ)、インスリン成長因子ＩＩ(ＩＦＧ-ＩＩ)、エリスロポエチン(ＥＰＯ)、トロンボポエチン(ＴＰＯ)又はアンジオポエチン、インターフェロン、プロ-ウロキナーゼ、ウロキナーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター(ｔ-ＰＡ)、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター１、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター２、フォン・ヴィルブランド因子、サイトカイン、例えばインターロイキン、例えばインターロイキン(ＩＬ)１、ＩＬ-１Ｒａ、ＩＬ-２、ＩＬ-４、ＩＬ-５、ＩＬ-６、ＩＬ-９、ＩＬ-１１、ＩＬ-１２、ＩＬ-１３、ＩＬ-１５、ＩＬ-１６、ＩＬ-１７、ＩＬ-１８、ＩＬ-２０又はＩＬ−２１、コロニー刺激因子(ＣＦＳ)、例えばＧＭ-ＣＳＦ、幹細胞因子、腫瘍壊死因子、例えばＴＮＦ-α、リンホトキシン-α、リンホトキシン-β、ＣＤ４０Ｌ、又はＣＤ３０Ｌ、プロテアーゼインヒビター、例えばアプロチニン、酵素、例えばスーパーオキシドジスターゼ、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ、リボヌクレアーゼ、カタラーゼ、ウリカーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、トリプシン、パパイン、アルカリホスファターゼ、β-グルコロニダーゼ(glucoronidase)、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ又はバトロキソビン、オピオイド、例えばエンドルフィン類、エンケファリン類又は非天然オピオイド類、ホルモン又はニューロペプチド、例えばカルシトニン、グルカゴン、ガストリン類、副腎皮質刺激ホルモン(ＡＣＴＨ)、コレシストキニン類、黄体形成ホルモン、生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン、絨毛性ゴナドトロピン、コルチコトロピン放出因子、バソプレシン、オキシトシン、抗利尿ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、レラキシン、プロラクチン、ペプチドＹＹ、Ｙ２レセプターアゴニスト、Ｙ４レセプターアゴニスト、混合Ｙ２／Ｙ４レセプターアゴニスト、ニューロペプチドＹ、膵臓ポリペプチド、レプチン、ＣＡＲＴ(コカイン及びアンフェタミン調節転写物)、ＣＡＲＴ関連ペプチド、ペリリピン、ナトリウム利尿ペプチド、アドレノメデュリン、エンドセリン、セクレチン、アミリン、血管作用性小腸ペプチド(ＶＩＰ)、脳下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド(ＰＡＣＡＰ)、ボンベシン、ボンベシン様ペプチド、チモシン、ヘパリン結合タンパク質、可溶性ＣＤ４、視床下部放出ホルモン、メラノトニン類(melanotonins)、及びそのアナログ、ヘマタイド(hematide)及びそのアナログである。
【００３５】
ここで使用される「下流の各アミノ酸残基」なる用語は、特定のアミノ酸に対してＣ末端に向けて位置する各アミノ酸を意味する。例として、Ｌｙｓ３４、Ｇｌｙ３５及びＡｒｇ３６及びＧｌｙ３７は、ＧＬＰ-１(７-３７)においてＶａｌ３３の下流にあるアミノ酸残基である。
【００３６】
本発明の一態様では、本発明の誘導体のＣ末端は、酸又はアミドで終結してよい。好ましい態様では、本発明の誘導体のＣ末端はアミドである。他の好ましい態様では、本発明の誘導体のＣ末端は酸である。
【００３７】
本発明の実施態様では、最大１７のアミノ酸が修飾されている。本発明の実施態様では、最大１５のアミノ酸が修飾されている。本発明の実施態様では、最大１０のアミノ酸が修飾されている。本発明の実施態様では、最大８のアミノ酸が修飾されている。本発明の実施態様では、最大７のアミノ酸が修飾されている。本発明の実施態様では、最大６のアミノ酸が修飾されている。本発明の実施態様では、最大５のアミノ酸が修飾されている。本発明の実施態様では、最大４のアミノ酸が修飾されている。本発明の実施態様では、最大３のアミノ酸が修飾されている。本発明の実施態様では、最大２のアミノ酸が修飾されている。本発明の実施態様では、１のアミノ酸が修飾されている。
【００３８】
ペプチドに関してここで使用される「誘導体」なる用語は、その化学的に修飾されたペプチド又はアナログを意味し、ここで少なくとも一の置換基はその未修飾のペプチド又はアナログ、すなわち共有結合的に修飾されたペプチドに存在しない。典型的な修飾は、アミド、炭水化物、アルキル基、アシル基、エステル等である。本発明のＧＬＰ-１誘導体(ＧＬＰ-１(７-３７)のアナログの誘導体の例は、Ｎ-イプシロン３７{２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１(７-３７)アミドで、ここで３７位に自然に生じたＧｌｙは、{２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルでＮ-イプシロン３７で誘導体化されたリジンで置換されている(構造１)
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であり、７位の天然に生じるヒスチジンがデスアミノＨｉｓで置換され、２２位の天然に生じるグリシンがグルタメートで、２６及び３４位のリジンがアルギニンで置換されている。
ここで使用される「ＧＬＰ-１ペプチド」なる用語は、ＧＬＰ-１(７-３７)(配列番号：１)又はＧＬＰ-１(７-３７)アナログを意味する。
【００３９】
本発明の一態様では、ＧＬＰ-１ペプチドは：
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１(７-３７)アミド、
[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)，[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド、
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２  Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｐｈｅ(ｍ-ＣＦ３)２８]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド、
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)-Ｌｙｓ、
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)-Ｌｙｓ、
[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４,]ＧＬＰ-１-(７-３７)-Ｌｙｓ
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド、
[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド、
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)、
[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)、
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)、
[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｔｈｒ(Ｏ-ベンジル)３３,]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド、
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３０]ＧＬＰ-１-(７-３７)，[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３１]ＧＬＰ-１-(７-３７)、
[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ａｒｇ２６, ２-ナフチルアラニン２８，Ｇｌｕ３０,]ＧＬＰ-１(７-３７)アミド、
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４,]ＧＬＰ-１-(７-３７)-Ｌｙｓ、
[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ａｒｇ２６，２-ナフチルアラニン１２，Ｇｌｕ３０,]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド、
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３１，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)、
[Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)、
[Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)-アミド、
[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ１８，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１(７-３７)、
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド、
[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２６]ＧＬＰ-１(７-３７)アミド、
[Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３４)、
[Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３５)、
[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ３３，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３４)、
[Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３６)アミド、
[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３６)アミド、
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ、
[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｐｒｏ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド、
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド、
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド、
[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド、
Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｐｒｏ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ、
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｐｒｏ３７]ＧＬＰ-１-((７-３７)Ｌｙｓ、及び
[Ａｉｂ８，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)、
からなる群から選択される。
【００４０】
本発明の一態様では、ＧＬＰ-１ペプチドは、Ａｒｇ１８，Ｌｅｕ２０，Ｇｌｎ３４，Ｌｙｓ３３(Ｎε-(γ-アミノブチロイル(Ｎα-ヘキサデカノイル)))エキセンディン-４-(７-４５)-アミド、又はＡｒｇ３３，Ｌｅｕ２０，Ｇｌｎ３４，Ｌｙｓ１８(Ｎε-(γ-アミノブチロイル(Ｎα-ヘキサデカノイル)))エキセンディン-４-(７-４５)-アミドである。
【００４１】
ペプチドに関してここで使用される場合、「誘導体」なる用語は、その化学的に修飾されたペプチド又はアナログを意味し、ここで少なくとも一の置換基はその未修飾のペプチド又はアナログ、すなわち共有結合的に修飾されたペプチドに存在しない。典型的な修飾は、アミド、炭水化物、アルキル基、アシル基、エステル等である。
【００４２】
ペプチド、例えばＧＬＰ-１ペプチドの任意のアミノ酸位置が誘導体化されていてもよい。本発明の一態様では、誘導体化されたアミノ酸残基はアミノ基を有する。一態様では、誘導体化されたアミノ酸残基はアミノ基を有する。さらなる態様では、誘導体化されたアミノ酸残基は、側鎖に第１級アミノ基を有する。さらなる態様では、誘導体化されたアミノ酸残基はリジンである。本発明の一態様では、誘導体化されたアミノ酸残基はシステインである。本発明の一態様では、一つのアミノ酸残基が誘導体化されている。本発明のさらなる態様では、本発明の誘導体は、一つの位置のみで誘導体化されている、すなわち唯一のアミノ酸残基が誘導体化されている。
【００４３】
アミノ基を有するアミノ酸残基の例は、リジン、オルニチン、イプシロン-Ｎ-アルキル化リジン、例えばイプシロン-Ｎ-メチルリジン、Ｏ-アミノエチルセリン、Ｏ-アミノプロピルセリン、又は長鎖のＯアルキル化セリンで、側鎖に第１級又は第２級アミノ基を有するものである。本発明のさらなる態様では、誘導体化されたアミノ酸残基は、側鎖に第１級アミノ基を有する。第１級アミノ基を有するアミノ酸残基の例は、リジン、オルニチン、Ｏ-アミノエチルセリン、Ｏ-アミノプロピルセリン、又は長鎖のＯアルキル化セリンで、側鎖に第１級アミノ基を有するものである。
【００４４】
一実施態様では、本発明のＧＬＰ-１ペプチドの誘導体は、インスリン分泌性剤である。
ここで使用される場合「インスリン分泌性剤」なる用語は、ヒトＧＬＰ-１レセプターのアゴニストである誘導体、すなわち、ヒトＧＬＰ-１レセプターを含有する適切な媒体(このような媒体の一つは以下に開示される)において、ｃＡＭＰの形成を刺激する誘導体を意味する。インスリン分泌性剤の作用強度は、以下に記載されるように、用量応答曲線から、ＥＣ５０値を算出することにより決定される。
クローンされたヒトＧＬＰ-１レセプターを発現するベビーハムスター腎臓(ＢＨＫ)細胞(ＢＨＫ-４６７-１２Ａ)を、１００ＩＵ／ｍＬのペニシリン、１００μＬ／ｍＬのストレプトマイシン、５％のウシ胎仔血清(ＦＣＳ)及び０．５ｍｇ／ｍＬのジェネテシンＧ-４１８(Life Technologies)が添加されたＤＭＥＭ培地で増殖させる。細胞を、リン酸緩衝食塩水で２回洗浄し、ヴェルセンを用いて収集する。バッファー１(２０ｍＭのＨＥＰＥＳ-Ｎａ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４)において、ウルトラトゥラックス(Ultraturrax)を用いてホモジナイズすることにより、細胞から細胞膜を調製する。ホモジネートを、４℃で１５分、４８０００ｘｇの遠心分離にかける。バッファー２(２０ｍＭのＨＥＰＥＳ-Ｎａ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４)においてホモジナイズすることにより、ペレットを懸濁させ、ついで、４℃で１５分、４８０００ｘｇの遠心分離にかける。洗浄手順を１回以上繰り返す。最終ペレットをバッファー２に懸濁させ、直ちにアッセイに使用するか、又は−８０℃で保存する。
【００４５】
機能的レセプターアッセイを、インスリン分泌性剤による刺激に対する反応として、環状ＡＭＰ(ｃＡＭＰ)を測定することにより実施してよい。形成したｃＡＭＰを、アルファスクリーン(AlphaScreen)ＴＭｃＡＭＰキット(Perkin Elmer Life Sciences)により定量する。次の添加物：１ｍＭのＡＴＰ、１μＭのＧＴＰ、０．５ｍＭの３-イソブチル-１-メチルキサンチン(ＩＢＭＸ)、０．０１％のトゥイーン(Tween)-２０、０．１％のＢＳＡ、６μｇの膜調製物、１５μｇ／ｍＬのアセプタービーズ、２０μｇ／ｍＬのドナービーズで、６ｎＭのビオチニル-ｃＡＭＰでプレインキュベートされたものと共に、全用量５０μＬのバッファー３(５０ｍＭのトリス-ＨＣＩ、５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４)内の、半領域の９６-ウェルマイクロタイタープレートにおいてインキュベートを実施する。アゴニスト活性について試験される誘導体を、バッファー３に溶解し、これで希釈する。各実験について、ＧＴＰを新たに調製する。室温で３時間、ゆっくりと攪拌しつつ、暗所でプレートをインキュベートし、続いてフュージョン(Fusion)ＴＭ機器(Perkin Elmer Life Sciences)において計測する。個々の誘導体について、濃度-反応曲線をプロットし、プリズム(Prism)バージョン４．０(GraphPad, Carlsbad, CA)を用いた、４つのパラメーターのロジスティックモデルを使用し、ＥＣ５０値を算出する。
【００４６】
ポリペプチドを称し、ここで使用される場合「ＤＰＰ-ＩＶ保護された」なる用語は、血漿ペプチダーゼジペプチジルアミノペプチダーゼ−４(ＤＰＰ-ＩＶ)に対して耐性のある前記誘導体を付与するために、化学的に修飾されたポリペプチドを意味する。血漿におけるＤＰＰ-ＩＶ酵素は、ＧＬＰ-１、ＧＬＰ-２、エキセンディン-４等、いくつかのペプチドホルモンの分解に関与していることが知られている。よって、ＤＰＰ-ＩＶによる分解速度を低減するために、ＤＰＰ-ＩＶ媒介性の加水分解に対して敏感なポリペプチドの誘導体及びアナログを開発するための多くの努力がなされている。
【００４７】
本発明の一態様では、ＧＬＰ-１ペプチドは、ＤＰＰＩＶ保護されたＧＬＰ-１ペプチドである。
本発明の一態様では、前記ＧＬＰ-１ペプチドは、リラグルチドの安定性よりもＤＰＰ-ＩＶに対して安定している。
一実施態様では、本発明の誘導体は、リラグルチドよりもＤＰＰ-ＩＶに対して耐性のある、ＤＰＰ-ＩＶ保護された誘導体である。
【００４８】
ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶによる分解に対するペプチドの耐性は、以下の分解アッセイにより測定される：
ペプチドのアリコート(５ｎｍｏｌ)を、５ｍＵの酵素活性に相当する１μＬの精製されたジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶと共に、１０-１８０分、１００μＬの０．１Ｍトリエチルアミン-ＨＣｌバッファー、ｐＨ７．４において、３７℃でインキュベートする。１０％のトリフルオロ酢酸を５μＬ添加することにより、酵素反応を終了させ、ペプチド分解生成物を分離し、ＨＰＬＣ分析を使用して定量する。この分析を実施するための一方法は次の通りである：混合物をＶｙｄａｃ Ｃ１８ワイドポア(widepore)(３０ｎｍの孔、５μｍの粒子)２５０ｘ４．６ｍｍのカラムに適用し、Siegelら,  Regul. Pept. 1999；79；93-102及びMentleinら, Eur. J. Biochem. 1993；214：829-35に従い、０．１％のトリフルオロ酢酸に直線段階的勾配をつけてアセトニトリルが入ったもの(３分間は０％のアセトニトリル、１７分間は０-２４％のアセトニトリル、１分間は２４-４８％のアセトニトリル)を、１ｍｌ／分の流速で溶出させる。ペプチドとその分解生成物は、２２０ｎｍ(ペプチド結合)又は２８０ｎｍ(芳香族アミノ酸)の吸光度をモニターし、標準体に対するそれらのピーク領域を積分することにより定量してよい。ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶによるペプチドの加水分解速度は、１０％未満のペプチドが加水分解されるインキュベート時間で概算される。
【００４９】
また、ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶよる分解に対するペプチドの耐性は、以下の分解アッセイにより測定される：
ペプチドのアリコート(４ｎｍｏｌ)を、１．６％のヒト血清アルブミンの存在下又は不在下、４０μＬの０．０８５Ｍトリス-ＨＣｌバッファー、ｐＨ８．０において２２時間、１０．９ｍＵの精製されたジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶと共に、３７℃でインキュベートする。０、４及び２２時間後、１０μｌのサンプルを取り出し、１％のトリフルオロ酢酸を１００μＬ混合することにより、酵素反応を終了させる。ペプチド分解生成物を分離し、ＨＰＬＣ分析を使用して定量する。この分析を実施するための一方法は次の通りである：混合物をアリゲント・ゾーバックス(Agilent Zorbax)３００ＳＢ-Ｃ１８(５μｍの粒子)１５０ｘ２．１ｍｍのカラムに適用し、０．０７％のＴＦＡと共に、０．１％のトリフルオロ酢酸から１００％のアセトニトリルまでの直線段階的勾配で、０．５ｍｌ／分の流速で３０分溶出させる。ペプチドとその分解生成物は、２１４ｎｍの吸光度をモニターし、それらのピーク領域を積分することにより定量される。ジペプチジルアミノペプチダーゼＩＶに対するペプチドの安定性は、無傷ペプチドと、切断後に２つのアミノ末端アミノ酸を欠く分解生成物のピーク領域の合計に対する、無傷ペプチドのピーク領域として決定される。
【００５０】
ここで使用される場合「薬学的に許容可能な」なる用語は、通常の医薬用途に適していること、すなわち患者等に重大な有害事象を引き起こさないことを意味している。
ここで使用される場合「賦形剤」なる用語は、薬学的組成物に通常添加される化学化合物、例えばバッファー、等張剤、保存料等を意味する。
ここで使用される場合「有効量」なる用語は、処置しない場合と比較して、患者を処置するのに十分有効な投与量を意味する。
【００５１】
ここで使用される場合「薬学的組成物」なる用語は、薬学的賦形剤、例えばバッファー、保存料、場合によっては浸透圧調節剤及び／又は安定剤と共に、本発明の活性誘導体を含有する生成物を意味する。よって、薬学的組成物は、薬学的製剤としても、当該技術で公知である。
ここで使用される場合「病気の処置」なる用語は、病気、病状又は疾患を発症した患者の管理及びケアを意味する。処置の目的は、病気、病状又は疾患に抗することである。処置には、病気、病状又は疾患の除去又は制御、並びに病気、病状又は疾患に関連する症候群又は合併症を緩和するために、本発明の活性誘導体を投与することを含む。
【００５２】
他の態様では、本発明は、アルブミン及びＧＬＰ-１レセプターに、同時に結合可能なＧＬＰ-１ペプチドの誘導体に関する。
他の態様では、本発明は、２％のアルブミンの存在下、１００ｎＭ以下、好ましくは３０ｎＭ以下の親和性で、ＧＬＰ-１レセプターに結合するＧＬＰ-１ペプチドの誘導体に関する。
他の態様では、本発明は、ＧＬＰ-１レセプターに対する親和性が、２％のヒトアルブミンの存在下における親和性に対し、非常に低濃度(例えば０．００５％〜０．２％)のヒトアルブミンの存在下における親和性を比較した場合に幾分減少している、ＧＬＰ-１ペプチドの誘導体に関する。これらの条件下での、結合親和性におけるシフトは、５０倍以下、好ましくは３０倍以下、さらに好ましくは１０倍以下である。
【００５３】
他の態様では、本発明は、エキセンディン-４で通常見られる化学的分解−特に酸化及び脱アミド化に対して安定、ＧＬＰ-１ペプチドの誘導体に関する。
【００５４】
他の態様では、本発明は、レセプターに対して強い作用強度を有するＧＬＰ-１ペプチドの誘導体に関する。１００ｎＭ以下のアルブミン結合親和性を有する、非常に強いアルブミン結合アナログについて、ｃＡＭＰアッセイでのＧＬＰ-１の作用強度は３マイクロモルより良好、好ましくは、作用強度は１マイクロモルより良好である。
５００ｎＭ以下のアルブミン結合親和性を有する、強いアルブミン結合誘導体について、ｃＡＭＰアッセイでのＧＬＰ-１作用強度は１マイクロモルより良好、好ましくは、作用強度は０．２マイクロモルより良好である。
他の態様では、本発明は、高いアルブミン結合親和性を有する、ＧＬＰ-１ペプチドの誘導体に関する。この発明の誘導体は、１マイクロモル以下のアルブミン結合親和性を有する。より好ましくは、この発明の誘導体は５００ｎＭ以下、さらに好ましくは２００ｎＭ以下、又は１００ｎＭ以下のアルブミン結合親和性を有する。
【００５５】
以下のアッセイを使用し、アルブミン結合アッセイを測定可能である：
アルブミン結合アッセイ：
ヒト血清アルブミン(ＨＳＡ)に対するＧＬＰ-１誘導体の親和性を、競合シンチレーション近接アッセイ(ＳＰＡ)により測定する。ストレプトアビジン-ＳＰＡビーズ(GE Healthcare RPNQ0009)を５時間、ビオチニル化ＨＳＡと共にインキュベートする。バッファーを用いてビーズを洗浄し、未結合のＨＳＡを除去する。ビーズを、１２５Ｉ-標識されたアシル化ＧＬＰ-１アナログ、例えばＮ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-(１７-カルボキシ-ヘプタデカノイルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，１２５Ｉ-Ｔｙｒ１９，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１(７-３７)、又はＮ-イプシロン３７-[２-(２-[２-((Ｓ)-４-((Ｓ)-４-(１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ)-４-カルボキシブチリルアミノ)-４-カルボキシブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，１２５Ｉ-Ｔｙｒ１９，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１(７-３７)-ＮＨ２と、１００ｍＭのＨｅｐｅｓ、１００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＭｇＳＯ４、０．０２５％のトゥイーン-２０を含有するバッファー、ｐＨ７．４において混合する。パーキン・エルマー・オプチプレート-９６ ６００５２９０のウェルに、混合物をピペットで移し(ウェル当たり１００μｌ)、測定されるＧＬＰ-１誘導体の希釈シリーズを１００μｌ、同様のバッファーに添加する。室温でゆっくりと揺らして２０時間後、プレートを遠心分離し、トップカウンターにおいて計測する。ＧＬＰ-１誘導体の濃度の関数として、結合ｃｐｍをプロットし、競合曲線のＥＣ５０値を、ＨＳＡに対する誘導体の親和性の測定値として使用する。
【００５６】
他の態様では、本発明は、ＧＬＰ-１レセプターの単離されたＮ末端細胞外ドメイン(ｎＧＬＰ-１Ｒ)に対して、高い結合親和性を有する、ＧＬＰ-１ペプチド誘導体に関する。親和性は、ｎＧＬＰ-１Ｒへの結合から、１２５Ｉ-エキセンディン-４(９-３９)を置き換える能力により測定される。このアッセイにおいて、エキセンディン-４は５ｎＭのＩＣ５０値でｎＧＬＰ-１Ｒに結合しており、ＧＬＰ-１(７-３７)は１１２０ｎＭのＩＣ５０値でｎＧＬＰ-１Ｒに結合しており、リラグルチドは１０００ｎＭのＩＣ５０値でｎＧＬＰ-１Ｒに結合している。一態様では、この発明の誘導体は、リラグルチドより低いＩＣ５０値でｎＧＬＰ-１Ｒに結合している。より好ましくは、この発明の誘導体は、１００ｎＭ以下、より好ましくは１０ｎＭ、又は５ｎＭのＩＣ５０値で、ｎＧＬＰ-１Ｒに結合している。
【００５７】
ｎＧＬＰ-１Ｒへの結合は次のアッセイにおいて測定される。タンパク質ｎＧＬＰ-１Ｒは、以前に記載(Rungeら,2007)されているようにして調製され、ビオチニル化され、ストレプトアビジンでコーティングされたＳＰＡビーズに固定化される。０．１ＭのＮａＨＣＯ３中のｎＧＬＰ１Ｒは、１ｍｇのタンパク質に対して７５μｇのＢＮＨＳ(Sigma H1759)を使用してビオチニル化される。ビオチニル化されたｎＧＬＰ１Ｒは、続いて、ＰＢＳに対して透析される。全ての試薬と誘導体は、ＰＢＳ、特に０．０５％ｖ／ｖのトゥイーン２０が入ったものを用いて希釈される。結合アッセイは、最終容量２００μｌの９６ウェルオプチプレート(PerkinElmer 6005290)において実施される。各ウェルには、２ｍｇのストレプトアビジンでコーティングされたＳＰＡビーズ(例えば、PerkinElmer RPNQ007)、０．１ｐｍｏｌのビオチニル化ｎＧＬＰ１Ｒ、５０ｐＣｉの１２５Ｉ-エキセンディン(９-３９)、及び１０００ｎＭ〜０．０６４ｎＭの範囲の最終濃度の試験用ペプチドが含有せしめられている。プレートは、好ましくはＲＴで、３時間、シェーカーにおいてインキュベートされる。またＳＰＡ粒子は、１０分、１５００ｒｐｍの遠心分離により沈降され、プレートはトップカウント-ＮＸＴ(PerkinElmer)において計測される。
【００５８】
他の態様では、本発明は、リラグルチドに対し、齧歯動物及び非齧歯動物モデルにおいて、実質的に改善された末端半減期を有する、ＧＬＰ-１ペプチドの誘導体に関する。
この発明の一態様では、齧歯動物及び非齧歯動物モデルにおける末端半減期は、リラグルチドの少なくとも３倍改善されている。
この発明の他の態様では、非齧歯動物モデルにおける末端半減期は、リラグルチドの少なくとも６倍改善されている。
【００５９】
他の態様では、本発明は、ラットへの静脈内投与の後、少なくとも１０時間のインビボ半減期を有する、ＧＬＰ-１ペプチドの誘導体に関する。
他の態様では、本発明は、ミニブタへの皮下投与の後、少なくとも５０時間のインビボ半減期を有する、好ましくは、ミニブタへの皮下投与の後、少なくとも８０時間のインビボ半減期を有する、ＧＬＰ-１ペプチドの誘導体に関する。
【００６０】
他の態様では、本発明は、肺投与に適した粒子に処方可能な、ＧＬＰ-１ペプチドの誘導体に関する。
他の態様では、本発明は、中性ｐＨ、最も好ましくは６-８の範囲で、化学的かつ物理的に安定している、ＧＬＰ-１ペプチドの誘導体に関する。
他の態様では、本発明は、ほとんど又は全く、凝集傾向を有していない、ＧＬＰ-１ペプチドの誘導体に関する。一態様では、凝集傾向は、チオフラビンアッセイで試験される場合、リラグルチドの凝集傾向に対してかなり改善されている。
【００６１】
他の態様では、本発明は、肺送達に適したＧＬＰ-１ペプチドの誘導体に関する。このことは、肺用製剤に有用な、物理的又は化学的態様に関してであってよい。また、誘導体は、気道及び肺における、酵素による分解に対して安定している。
本発明の一実施態様では、上述した特徴の組合せが達成される。
【００６２】
ここで使用される場合「アルブミン結合部分」なる用語は、ヒト血清アルブミンに非共有結合する残基を意味する。治療用ポリペプチドに結合するアルブミン結合残基は、典型的には１マイクロモル以下、好ましくは５００ｎＭ以下、さらに好ましくは２００ｎＭ以下、又は１００ｎＭ以下のアルブミン結合親和性を有する。
アルブミン結合残基の範囲は、遠位酸性基を有する４-４０の炭素原子を含む、直鎖状及び分枝状の脂質親和性部分が公知である。
【００６３】
ここで使用される場合「親水性リンカー」なる用語は、少なくとも５の非水素原子を有し、これらの３０−５０％がＮ又はＯである化学部分を有する、アルブミン結合残基とペプチドとを離間させるスペーサーを意味する。
以下の式において、結合基からの末端結合は、記載がない限りは、付着結合(attachment bonds)とみなされ、メチレン基で終結しない。
【００６４】
組成物及び医薬用途
本発明の他の目的は、０．１ｍｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、本発明の誘導体を含有する薬学的製剤を提供することであり、ここで該製剤は、３．０〜９．０のｐＨを有する。製剤は、バッファー系、保存料(類)、等張剤(類)、キレート剤(類)、安定剤、及び界面活性剤をさらに含有する。
【００６５】
本発明の一実施態様では、薬学的製剤は、水性製剤、すなわち水分を含有する製剤である。このような製剤は、典型的には溶液又は懸濁液である。
本発明のさらなる実施態様では、薬学的製剤は水溶液である。
「水性製剤」なる用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水分を含有する製剤と定義される。同様に「水溶液」なる用語も、少なくとも５０％ｗ／ｗの水分を含有する溶液と定義され、「水性懸濁液」なる用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水分を含有する懸濁液と定義される。
【００６６】
他の実施態様では、薬学的製剤は凍結乾燥された製剤であり、医師又は患者は、使用前に溶媒及び／又は希釈液を添加する。
他の実施態様では、薬学的製剤は、何ら事前に溶解することなく使用準備が整った乾燥した製剤(例えば凍結乾燥又は噴霧乾燥)である。
【００６７】
さらなる態様では、本発明は、本発明の誘導体の水溶液とバッファーを含有する薬学的製剤で、該誘導体が０．１ｍｇ／ｍｌ又はそれ以上の濃度で存在し、該製剤が約３．０〜約９．０のｐＨを有する製剤に関する。
本発明の他の実施態様では、製剤のｐＨは約７．０〜約９．５である。本発明の他の実施態様では、製剤のｐＨは約３．０〜約７．０である。本発明の他の実施態様では、製剤のｐＨは約５．０〜約７．５である。本発明の他の実施態様では、製剤のｐＨは約７．５〜約９．０である。本発明の他の実施態様では、製剤のｐＨは約７．５〜約８．５である。本発明の他の実施態様では、製剤のｐＨは約６．０〜約７．５である。本発明の他の実施態様では、製剤のｐＨは約６．０〜約７．０である。他の実施態様では、薬学的製剤は８．０〜８．５である。
【００６８】
本発明の一実施態様では、各投与量は、０．０１ｍｇ-１０ｍｇの活性誘導体を含有する。一実施態様では、投与量は、０．０５ｍｇ以上の活性誘導体を含有する。一実施態様では、投与量は、０．１ｍｇ以上の活性誘導体を含有する。一実施態様では、投与量は、１０ｍｇまでの活性誘導体を含有する。一実施態様では、投与量は、９ｍｇまでの活性誘導体を含有する。一実施態様では、投与量は、８ｍｇまでの活性誘導体を含有する。一実施態様では、投与量は、７ｍｇまでの活性誘導体を含有する。一実施態様では、投与量は、６ｍｇまでの活性誘導体を含有する。一実施態様では、投与量は、５ｍｇまでの活性誘導体を含有する。一実施態様では、投与量は、０．２ｍｇ〜５ｍｇの活性誘導体を含有する。
【００６９】
本発明のさらなる実施態様では、バッファーは、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、シタラート、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、及びトリス(ヒドロキシメチル)-アミノメタン、ビシン、トリシン、リンゴ酸、スクシナート、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸又はそれらの混合物からなる群から選択される。これらの特定のバッファーの各一が、本発明の別の実施態様を構成する。
【００７０】
本発明のさらなる実施態様では、製剤は、薬学的に許容可能な保存料をさらに含有する。本発明のさらなる実施態様では、保存料は、フェノール、ｏ-クレゾール、ｍ-クレゾール、ｐ-クレゾール、ｐ-ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ-ヒドロキシ安息香酸プロピル、２-フェノキシエタノール、ｐ-ヒドロキシ安息香酸ブチル、２-フェニルエタノール、ベンジルアルコール、クロロブタノール、及びチオメロサル(thiomerosal)、ブロノポール、安息香酸、イミド尿素、クロロヘキシジン、デヒドロ酢酸ナトリウム、クロロクレゾール、ｐ-ヒドロキシ安息香酸エチル、塩化ベンゼトニウム、クロルフェネシン(chlorphenesine)(３ｐ-クロルフェノキシプロパン-１,２-ジオール)又はそれらの混合物からなる群から選択される。一実施態様では、保存料はフェノール又はｍ-クレゾールである。本発明のさらなる実施態様では、保存料は、０．１ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。本発明のさらなる実施態様では、保存料は、０．１ｍｇ／ｍｌ〜５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。本発明のさらなる実施態様では、保存料は、５ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。本発明のさらなる実施態様では、保存料は、１０ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在している。これらの特定の保存料の各一が、本発明の別の実施態様を構成する。薬学的組成物に保存料を使用することは、当業者によく知られている。簡便には、Remington：The Science and Practice of Pharmacy, 第19版, 1995が参照される。
【００７１】
本発明のさらなる実施態様では、製剤は、等張剤をさらに含有する。本発明のさらなる実施態様では、等張剤は、塩(例えば塩化ナトリウム)、糖又は糖アルコール、アミノ酸(例えば、Ｌ-グリシン、Ｌ-ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、スレオニン)、アルジトール(例えばグリセロール(グリセリン)、１,２-プロパンジオール(プロピレングリコール)、１,３-プロパンジオール、１,３-ブタンジオール)ポリエチレングリコール(例えばＰＥＧ４００)、又はそれらの混合物からなる群から選択される。一実施態様では、等張剤はプロピレングリコールである。任意の糖、例えば単糖類、二糖類又は多糖類、又は水溶性グルカン類、例えばフルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、アルファ及びベータＨＰＣＤ、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、及びカルボキシメチルセルロース-Ｎａを使用してもよい。一実施態様では、糖添加剤はスクロースである。糖アルコールは、少なくとも一の-ＯＨ基を有するＣ４-Ｃ８炭化水素と定義され、例えばマンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラシチトール、ズルシトール、キシリトール、及びアラビトールを含む。一実施態様では、糖アルコール添加剤はマンニトールである。上述した糖又は糖アルコールは、個々に又は組合せて使用されてよい。使用される量は、糖又は糖アルコールが液状調製物に溶解し、本発明の方法を使用して得られた安定化効果に悪影響を与えない限りは、限定されて固定されるものではない。一実施態様では、糖又は糖アルコールの濃度は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌである。本発明のさらなる実施態様では、等張剤は１ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明のさらなる実施態様では、等張剤は１ｍｇ／ｍｌ〜７ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の一実施態様では、等張剤は５ｍｇ／ｍｌ〜７ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明のさらなる実施態様では、等張剤は８ｍｇ／ｍｌ〜２４ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明のさらなる実施態様では、等張剤は２５ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。これらの特定の等張剤の各一が、本発明の別の実施態様を構成する。薬学的組成物に等張剤を使用することは、当業者によく知られている。簡便には、Remington：The Science and Practice of Pharmacy, 第19版, 1995が参照される。
【００７２】
本発明のさらなる実施態様では、製剤は、キレート剤をさらに含有する。本発明のさらなる実施態様では、キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸(ＥＤＴＡ)、クエン酸、及びアスパラギン酸の塩、及びそれらの混合物から選択される。本発明のさらなる実施態様では、キレート剤は０．１ｍｇ／ｍｌ〜５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明のさらなる実施態様では、キレート剤は０．１ｍｇ／ｍｌ〜２ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明のさらなる実施態様では、キレート剤は２ｍｇ／ｍｌ〜５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。これらの特定のキレート剤の各一が、本発明の別の実施態様を構成する。薬学的組成物にキレート剤を使用することは、当業者によく知られている。簡便には、Remington：The Science and Practice of Pharmacy, 第19版, 1995が参照される。
本発明のさらなる実施態様では、製剤は安定剤をさらに含有する。薬学的組成物に安定剤を使用することは、当業者によく知られている。簡便には、Remington：The Science and Practice of Pharmacy, 第19版, 1995が参照される。
【００７３】
特に、本発明の組成物は安定化した液状薬学的組成物であり、その治療的活性成分は、液状薬学的組成物の保存中に、凝集体形成を示す可能性のあるポリペプチドを含む。
「凝集体形成」とは、オリゴマーを形成するポリペプチド分子間の物理的相互作用を意図しており、それは溶解したままか、溶液に沈殿し、大きくて可視できる程に会合する可能性がある。「保存中」とは、調製されて直ぐの液状薬学的組成物又は製剤が、被験者に直ぐ投与されるものではないことを意図している。むしろ次の準備のために、液状の形態、凍結状態、液体の形態に後ほど再構成される乾燥した形態、又は被験者への投与に適した他の形態で保存用に包装されている。「乾燥した形態」とは、液状薬学的組成物又は製剤が、凍結乾燥(すなわち氷結乾燥；例えばWilliams及びPolli(1984)J. Parenteral Sci. Technol. 38：48-59を参照)、噴霧乾燥(Masters(1991) Spray-Drying Handbook(第5版；Longman Scientific and Technical, Essez, U.K.), pp.491-676；Broadheadら, (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18：1169-1206；及びMumenthalerら, (1994) Pharm. Res. 11：12-20)、又は空気乾燥(Carpenter及びCrowe (1988) Cryobiology 25：459-470；及びRoser (1991) Biopharm. 4：47-53)により乾燥されることを意図している。液状薬学的組成物の保存中のポリペプチドによる凝集体形成は、ポリペプチドの生物活性に悪影響を及ぼし、薬学的組成物の治療効果が損なわれるおそれがある。さらに凝集体形成は、他の問題、例えば管組織、膜組織、又はポリペプチド含有薬学的組成物が注入システムを使用して投与される場合はポンプを閉塞させる原因となりかねない。
【００７４】
本発明の薬学的組成物は、組成物の保存中、ポリペプチドによる凝集体形成を低減させるのに十分な量のアミノ酸ベースをさらに含有してよい。「アミノ酸ベース」とは、アミノ酸又はアミノ酸の組合せで、任意の付与されたアミノ酸が、遊離塩基の形態又は塩の形態で存在しているものを意図している。アミノ酸の組合せを使用する場合、全てのアミノ酸は遊離塩基の形態で存在していてよく、全ては塩の形態で存在していてよく、又はあるものは遊離塩基の形態で存在していてよく、他は塩の形態で存在していてよい。一実施態様では、本発明の組成物の調製に使用されるアミノ酸は、帯電側鎖を担持しているもの、例えばアルギニン、リジン、アスパラギン酸、及びグルタミン酸である。特定のアミノ酸(例えば、メチオニン、ヒスチジン、イミダゾール、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、スレオニン及びそれらの混合物)の任意の立体異性体(すなわち、Ｌ、Ｄ、又はその混合物)、又はこれらの立体異性体の組合せは、特定のアミノ酸が遊離塩基の形態又は塩の形態で存在している限り、本発明の薬学的組成物に存在していてよい。一実施態様においては、Ｌ-立体異性体が使用される。また本発明の組成物は、これらのアミノ酸のアナログと共に処方されてもよい。「アミノ酸アナログ」とは、本発明の液状薬学的組成物の保存中、ポリペプチドによる凝集体形成を低減させるといった、所望する効果を引き起こす、天然に生じるアミノ酸の誘導体を意図している。適切なアルギニンアナログは、例えばアミノグアニジン、オルニチン及びＮ-モノエチル-Ｌ-アルギニンを含み、適切なメチオニンアナログはエチオニン及びブチオニンを含み、適切なシステインアナログはＳ-メチル-Ｌ-システインを含む。他のアミノ酸と同様、アミノ酸アナログは、遊離塩基の形態又は塩の形態で組成物に導入される。本発明のさらなる実施態様では、アミノ酸又はアミノ酸アナログは、タンパク質の凝集を防止又は遅延化させるのに十分な濃度で使用される。
【００７５】
本発明のさらなる実施態様では、メチオニン(又は他の含硫アミノ酸又はアミノ酸アナログ)は、治療剤として作用するポリペプチドが、このような酸化に敏感な少なくとも一のメチオニン残基を有するポリペプチドである場合、メチオニン残基の酸化を阻害するために、メチオニンスルホキシドに添加されてもよい。「阻害」とは、経時的なメチオニン酸化種の蓄積を最小にすることを意図している。メチオニンの酸化を阻害すると、適切な分子形態でポリペプチドがさらに保持される結果となる。メチオニン(Ｌ又はＤ)の任意の立体異性体又はそれらの組合せを使用することができる。添加される量は、メチオニンスルホキシドの量が調節剤に対して許容可能であるように、メチオニン残基の酸化を阻害するのに十分な量とするべきである。典型的には、これは、組成物が約１０％以下から約３０％以下のメチオニンスルホキシドしか含まないことを意味する。一般的に、メチオニン残基に対して添加されるメチオニンの比率が、約１：１〜約１０００：１、例えば１０：１〜約１００：１の範囲になるようにメチオニンを添加することで達成することができる。
【００７６】
本発明のさらなる実施態様では、製剤は高分子量のポリマー又は低分子量の化合物の群から選択される安定剤をさらに含有する。
本発明のさらなる実施態様では、安定剤は、ポリエチレングリコール(例えばＰＥＧ３３５０)、ポリビニルアルコール(ＰＶＡ)、ポリビニルピロリドン、カルボキシ-/ヒドロキシセルロース又はそれらの誘導体(例えばＨＰＣ、ＨＰＣ-ＳＬ、ＨＰＣ-Ｌ及びＨＰＭＣ)、シクロデキストリン類、硫黄含有物質、例えばモノチオグリセロール、チオグリコール酸及び２-メチルチオエタノール、及び種々の塩(例えば塩化ナトリウム)から選択される。これらの特定の安定剤の各一が、本発明の別の実施態様を構成する。
【００７７】
また薬学的組成物は、治療的に活性なポリペプチドの安定性をさらに高める、付加的な安定剤をさらに含有してよい。
本発明で特に関心を持たれた安定剤は、限定されるものではないが、メチオニンの酸化に対してポリペプチドを保護するＥＤＴＡ及びメチオニン、及び凍結-解凍又は機械的剪断に関連する凝集からポリペプチドを保護する非イオン性界面活性剤を含む。
【００７８】
本発明のさらなる実施態様では、製剤はさらに界面活性剤を含有する。本発明の他の実施態様では、薬学的組成物は２つの異なる界面活性剤を含有する。ここで使用される場合「界面活性剤」なる用語は、水溶性(親水性)部分、頭部、脂溶性(親油性)セグメントからなる任意の分子又はイオンを意味する。界面活性剤は、好ましくは界面に蓄積され、親水性部分は水(親水性相)に向いており、親油性部分は油又は疎水性相(すなわち、ガラス、空気、油等)に向いている。界面活性剤がミセルを形成し始める濃度は、臨界ミセル濃度、すなわちＣＭＣとして公知である。さらに、界面活性剤は液体の表面張力を低下させる。界面活性剤は両親媒性化合物として公知である。「洗浄剤」なる用語は、一般的に界面活性剤と同義語として使用される。
【００７９】
アニオン性界面活性剤は、ケノデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸ナトリウム塩、コール酸、デヒドロコール酸、デオキシコール酸、デオキシコール酸メチルエステル、ジギトニン、ジギトキシゲニン、Ｎ,Ｎ-ジメチルドデシルアミン-Ｎ-オキシド、ドキュセートナトリウム、グリコケノデオキシコール酸ナトリウム、グリココール酸水和物、グリコデオキシコール酸一水和物、グリコデオキシコール酸ナトリウム塩、グリコデオキシコール酸ナトリウム塩、グリコリトコール酸-３-硫酸二ナトリウム塩、グリコリトコール酸エチルエステル、Ｎ-ラウロイルサルコシンナトリウム塩、Ｎ-ラウロイルサルコシンナトリウム塩、Ｎ-ラウロイルサルコシン、Ｎ-ラウロイルサルコシン、ドデシル硫酸リチウム、ルゴール、１-オクタンスルホン酸ナトリウム塩、１-オクタンスルホン酸ナトリウム塩、１-ブタンスルホン酸ナトリウム、１-デカンスルホン酸ナトリウム、１-ドデカンスルホン酸ナトリウム、１-ヘプタンスルホン酸ナトリウム、１-ヘプタンスルホン酸ナトリウム、１-ノナンスルホン酸ナトリウム、１-プロパンスルホン酸一水和物、２-ブロモエタンスルホン酸ナトリウム、コール酸ナトリウム水和物、雄牛又はヒツジの胆汁、コール酸ナトリウム水和物、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、ヘキサンスルホン酸ナトリウム、オクチル硫酸ナトリウム、ペンタンスルホン酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、タウロケノデオキシコール酸ナトリウム塩、タウロデオキシコール酸ナトリウム塩一水和物、タウロリトコール酸-３-硫酸二ナトリウム塩、タウロウルソデオキシコール酸ナトリウム塩、トリズマ(Trizma)(登録商標)ドデシルスルファート、ＤＳＳ(ドキュセートナトリウム、ＣＡＳ登録番号[５７７-１１-７])、ドキュセートカルシウム、ＣＡＳ登録番号[１２８-４９-４])、ドキュセートカリウム、ＣＡＳ登録番号[７４９１-０９-０])、ＳＤＳ(ドデシル硫酸ナトリウム又はラウリル硫酸ナトリウム)、ドデシルホスホコリン(ＦＯＳ-コリン-１２)、デシルホスホコリン(ＦＯＳ-コリン-１０)、ノニルホスホコリン(ＦＯＳ-コリン-９)、ホスファチジル酸ジパルミトイル、カプリル酸ナトリウム、及び／又はウルソデオキシコール酸からなる群から選択されてよい。
【００８０】
カチオン性界面活性剤は、アルキルトリメチルアンモニウムブロミド、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンザルコニウム、ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウムクロリド、ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウムクロリド、ベンジルトリメチルアンモニウムテトラクロロヨージド、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド、ドデシルエチルジメチルアンモニウムブロミド、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド、エチルヘキサデシルジメチルアンモニウムブロミド、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド、ポリオキシエチレン(１０)-Ｎ-獣脂-１,３-ジアミノプロパン、臭化トンゾニウム(thonzonium)、及び／又はトリメチル(テトラデシル)アンモニウムブロミドからなる群から選択されてよい。
【００８１】
非イオン性界面活性剤は、ＢｉｇＣＨＡＰ、ビス(ポリエチレングリコールビス[イミダゾリルカルボニル])、ポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドブロックコポリマー等のブロックコポリマー、例えばポロキサマー類、ポロキサマー１８８及びポロキサマー４０７、ビリジ(Brij)(登録商標)３５、ビリジ(登録商標)５６、ビリジ(登録商標)７２、ビリジ(登録商標)７６、ビリジ(登録商標)９２Ｖ、ビリジ(登録商標)９７、ビリジ(登録商標)５８Ｐ、クレモポア(Cremophor)(登録商標)ＥＬ、デカエチレングリコールモノドデシルエーテル、Ｎ-デカノイル-Ｎ-メチルグルカミン、Ｎ-ドデカノイル-Ｎ-メチルグルカミド、アルキル-ポリグルコシド、エトキシル化ヒマシ油、ヘプタエチレングリコールモノデシルエーテル、ヘプタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ヘプタエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノドデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、イゲパル(Igepal)ＣＡ-６３０、イゲパルＣＡ-６３０、メチル-６-Ｏ-(Ｎ-ヘプチルカルバモイル)-ベータ-Ｄ-グルコピラノシド、ノナエチレングリコールモノドデシルエーテル、Ｎ-ノナノイル-Ｎ-メチルグルカミン、Ｎ-ノナノイル-Ｎ-メチルグルカミン、オクタエチレングリコールモノデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノドデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、オクチル-β-Ｄ-グルコピラノシド、ペンタエチレングリコールモノデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノヘキシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノオクチルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールエーテルＷ-１、ポリオキシエチレン１０トリデシルエーテル、ポリオキシエチレン１００ステアラート、ポリオキシエチレン２０イソヘキサデシルエーテル、ポリオキシエチレン２０オレイルエーテル、ポリオキシエチレン４０ステアラート、ポリオキシエチレン５０ステアラート、ポリオキシエチレン８ステアラート、ポリオキシエチレンビス(イミダゾリルカルボニル)、ポリオキシエチレン２５プロピレングリコールステアラート、Quillaja barkからのサポニン、スパン(Span)(登録商標)２０、スパン(登録商標)４０、スパン(登録商標)６０、スパン(登録商標)６５、スパン(登録商標)８０、スパン(登録商標)８５、テルギトール(Tergitol),タイプ１５-Ｓ-１２、テルギトール,タイプ１５-Ｓ-３０、テルギトール,タイプ１５-Ｓ-５、テルギトール,タイプ１５-Ｓ-７、テルギトール,タイプ１５-Ｓ-９、テルギトール,タイプＮＰ-１０、テルギトール,タイプＮＰ-４、テルギトール,タイプＮＰ-４０、テルギトール,タイプＮＰ-７、テルギトール,タイプＮＰ-９、テトラデシル-β-Ｄ-マルトシド、テトラエチレングリコールモノデシルエーテル、テトラエチレングリコールモノド��シルエーテル、テトラエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、トリエチレングリコールモノデシルエーテル、トリエチレングリコールモノドデシルエーテル、トリエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、トリエチレングリコールモノオクチルエーテル、トリエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、トリトン(Triton)ＣＦ-２１、トリトンＣＦ-３２、トリトンＤＦ-１２、トリトンＤＦ-１６、トリトンＧＲ-５Ｍ、トリトンＱＳ-１５、トリトンＱＳ-４４、トリトンＸ-１００、トリトンＸ-１０２、トリトンＸ-１５、トリトンＸ-１５１、トリトンＸ-２００、トリトンＸ-２０７、トリトン(登録商標)Ｘ-１００、トリトン(登録商標)Ｘ-１１４、トリトン(登録商標)Ｘ-１６５溶液、トリトン(登録商標)Ｘ-３０５溶液、トリトン(登録商標)Ｘ-４０５、トリトン(登録商標)Ｘ-４５、トリトン(登録商標)Ｘ-７０５-７０、トゥイーン(登録商標)２０、トゥイーン(登録商標)４０、トゥイーン(登録商標)６０、トゥイーン(登録商標)６、トゥイーン(登録商標)６５、トゥイーン(登録商標)８０、トゥイーン(登録商標)８１、トゥイーン(登録商標)８５、チロキサポール、スフィンゴリン脂質(スフィンゴミエリン)、及びスフィンゴ糖脂質(セラミド、ガングリオシド)、リン脂質、及び／又はＮ-ウンデシル-β-Ｄ-グルコピラノシドからなる群から選択されてよい。
【００８２】
双性イオン性界面活性剤は、ＣＨＡＰＳ、ＣＨＡＰＳＯ、３-(デシルジメチルアンモニオ)プロパンスルホン酸内塩、３-(ドデシルジメチルアンモニオ)プロパンスルホン酸内塩、３-(ドデシルジメチルアンモニオ)プロパンスルホン酸内塩、３-(Ｎ,Ｎ-ジメチルミリストイルアンモニオ)プロパンスルホナート、３-(Ｎ,Ｎ-ジメチルオクタデシルアンモニオ)プロパンスルホナート、３-(Ｎ,Ｎ-ジメチルオクチルアンモニオ)プロパンスルホン酸内塩、３-(Ｎ,Ｎ-ジメチルパルミチルアンモニオ)プロパンスルホナート、Ｎ-アルキル-Ｎ,Ｎ-ジメチルアンモニオ-１-プロパンスルホナート、３-コールアミド-１-プロピルジメチルアンモニオ-１-プロパンスルホナート、ドデシルホスホコリン、ミリストイルリゾホスファチジルコリン、両性洗浄剤３-１２(Ｎ-ドデシル-Ｎ,Ｎ-ジメチル-３-アンモニオ-１-プロパンスルホナート)、両性洗浄剤３-１０(３-(デシルジメチルアンモニオ)プロパンスルホン酸内塩)、両性洗浄剤３-０８(３-(オクチルジメチルアンモニオ)プロ-パンスルホナート)、グリセロリン脂質(レシチン、ケファリン、ホスファチジルセリン)、グリセロ糖脂質(ガラクトピラノシド)、リゾホスファチジル及びホスファチジルコリンのアルキル、アルコキシル(アルキルエステル)、アルコキシ(アルキルエーテル)-誘導体、例えばリゾホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリンのラウロイル及びミリストイル誘導体、コリン、エタノールアミン、ホスファチジン酸、セリン、スレオニン、グリセロール、イノシトール、リゾホスファチジルセリン、及びリゾホスファチジルスレオニン、アシルカルニチン及び誘導体で、極性頭部基が修飾されたもの、リジン、アルギニン又はヒスチジンのＮベータ-アシル化誘導体、又はリジン又はアルギニンの側鎖アシル化誘導体、リジン、アルギニン又はヒスチジン、及び中性又は酸性アミノ酸の任意の組合せを含むジペプチドのＮベータ-アシル化誘導体、中性アミノ酸と２つの帯電アミノ酸の任意の組合せを含むトリペプチドのＮベータ-アシル化誘導体からなる群から選択されてよく、又は界面活性剤は、イミダゾリン誘導体、長鎖の脂肪酸及びそのＣ６-Ｃ１２塩(例えば、オレイン酸及びカプリル酸)、Ｎ-ヘキサデシル-Ｎ,Ｎ-ジメチル-３-アンモニオ-１-プロパンスルホナート、アニオン性(アルキル-アリール-スルホナート)の一価の界面活性剤、パルミトイルリゾホスファチジル-Ｌ-セリン、リゾリン脂質(例えば、エタノールアミン、コリン、セリン又はスレオニンの１-アシル-ｓｎ-グリセロ-３-ホスファートエステル)、又はそれらの混合物からなる群から選択されてもよい。
【００８３】
ここで使用される「アルキル-ポリグルコシド」なる用語は、一又は複数のグルコシド部分、例えばマルトシド、サッカリドで置換された、直鎖状又は分枝状のＣ５−２０-アルキル、-アルケニル又は-アルキニル鎖に関する。これらのアルキル-ポリグルコシドの実施態様には、Ｃ６-１８-アルキル-ポリグルコシド類が含まれる。これらのアルキル-ポリグルコシド類の特定の実施態様には、偶数炭素鎖のもの、例えばＣ６、Ｃ８、Ｃ１０、Ｃ１２、Ｃ１４、Ｃ１６、Ｃ１８及びＣ２０アルキル鎖が含まれる。グルコシド部分の特定の実施態様には、ピラノシド、グルコピラノシド、マルトシド、マルトトリオシド、及びスクロースが含まれる。本発明の実施態様では、６未満のグルコシド部分がアルキル基に結合している。本発明の実施態様では、５未満のグルコシド部分がアルキル基に結合している。本発明の実施態様では、４未満のグルコシド部分がアルキル基に結合している。本発明の実施態様では、３未満のグルコシド部分がアルキル基に結合している。本発明の実施態様では、２未満のグルコシド部分がアルキル基に結合している。アルキル-ポリグルコシドの特定の実施態様は、アルキルグルコシド、例えばｎ-デシル-β-Ｄ-グルコピラノシド、デシル-β-Ｄ-マルトピラノシド、ドデシル-β-Ｄ-グルコピラノシド、ｎ-ドデシル-β-Ｄ-マルトシド、ｎ-ドデシル-β-Ｄ-マルトシド、ｎ-ドデシル-β-Ｄ-マルトシド、テトラデシル-β-Ｄ-グルコピラノシド、デシル-β-Ｄ-マルトシド、ヘキサデシル-β-Ｄ-マルトシド、デシル-β-Ｄ-マルトトリオシド、ドデシル-β-Ｄ-マルトトリオシド、テトラデシル-β-Ｄ-マルトトリオシド、ヘキサデシル-β-Ｄ-マルトトリオシド、ｎ-ドデシル-スクロース、ｎ-デシル-スクロース、スクロースモノカプラート、スクロースモノラウラート、スクロースモノミリスタート、及びスクロースモノパルミタートである。
薬学的組成物における界面活性剤の使用は、当業者によく知られている。簡便には、Remington：The Science and Practice of Pharmacy, 第19版, 1995が参照される。
【００８４】
本発明のさらなる実施態様では、製剤は、プロテアーゼインヒビター、例えばＥＤＴＡ(エチレンジアミン四酢酸)及びベンズアミジンＨＣｌをさらに含有してよいが、他の商業的に入手可能なプロテアーゼインヒビターを使用してもよい。プロテアーゼインヒビターを使用することは、自己触媒を阻害するため、プロテアーゼのチモーゲンを含有する薬学的組成物に特に有用である。
【００８５】
他の成分が本発明のペプチド薬学的製剤に存在することも可能である。このような付加的な成分には、湿潤剤、乳化剤、酸化防止剤、増量剤、張力修正剤、キレート剤、金属イオン、油性ビヒクル、タンパク質(例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチン又はタンパク質)及び双性イオン(例えばアミノ酸、特にベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジン及びヒスチジン)を含んでよい。もちろん、このような付加的な成分は、本発明の薬学的製剤の全体的な安定性に悪影響が及ばないようにすべきである。
【００８６】
本発明の誘導体を含有する薬学的組成物は、いくつかの部位、例えば局所的部位、特に皮膚及び粘膜部位、動脈、静脈、心臓への投与等、バイパス吸収がなされる部位、例えば皮膚、皮下、筋肉又は腹部への投与等、吸収に関する部位において、このような処置が必要とされる患者に投与してよい。
【００８７】
本発明の薬学的組成物は、いくつかの投与経路、例えば舌、舌下、頬、口、経口、胃、及び腸、鼻、肺を介して、例えば細気管支及び肺胞及び／又はそれらを組合せたもの、表皮、真皮、経皮、膣、直腸、眼球を介して、例えば結膜、尿管、及び非経口を介して、このような処置を必要としている患者に投与されてよい。
【００８８】
本発明の組成物は、いくつかの投与形態、例えば溶液、懸濁液、エマルション、マイクロエマルション、多相エマルション、フォーム、膏薬、ペースト、プラスター、軟膏、錠剤、被覆錠剤、チューイングガム、リンス、カプセル、例えば硬質ゼラチンカプセル及び軟質ゼラチンカプセル、坐薬、直腸用カプセル、ドロップ、ゲル、スプレー、パウダー、エアゾール、吸入剤、点眼剤、眼球用軟膏、眼球用リンス、膣用ペッサリー、膣用リング、膣用軟膏、注入溶液、インサイツ形質転換溶液、インサイツゲル化、インサイツ硬化、インサイツ沈殿、インサイツ結晶化のもの、輸液、及び移植片として投与されうる。
本発明の組成物は、本発明の誘導体の安定性を高め、生物学的利用能を増加させ、溶解度を高め、悪影響を低減させ、当業者によく知られている時間治療を達成し、患者のコンプライアンスを高める、又はそれらの任意の組合せのために、例えば共有的、疎水的及び静電気的相互作用を介して、薬剤担体、薬剤送達系、及び先端の薬剤送達系を、さらに組合せ又はこれらに附随させてもよい。担体、薬剤送達系及び先端の薬剤送達系の例は、限定されるものではないが、ポリマー、例えばセルロース及び誘導体、多糖類、例えばデキストラン及び誘導体、デンプン及び誘導体、ポリ(ビニルアルコール)、アクリラート及びメタクリラートポリマー、ポリ乳酸及びポリグリコール酸、及びそれらのブロックコ-ポリマー、ポリエチレングリコール、担体タンパク質、例えばアルブミン、ゲル、例えば熱ゲル化系、例えば当業者によく知られているブロックコ-ポリマー系、ミセル、リポソーム、ミクロスフィア、ナノ粒子、液晶、及びそれらの分散液、Ｌ２相、及び脂質-水系における相挙動が当業者によく知られているそこでの分散液、ポリマー性ミセル、多相エマルション、自己乳化剤、自己-マイクロ乳化剤、シクロデキストリン及びそれらの誘導体、及びデンドリマーを含む。
【００８９】
本発明の組成物は、全て、当業者によく知られた装置である、定量吸入器、乾燥パウダー吸入器、及び噴霧器等を使用し、本発明の誘導体を肺に投与するための、固体状、半固体状、パウダー状及び液状の製剤に有用である。
【００９０】
本発明の組成物は、制御、徐放性、持続性、遅延性及び低速放出性の薬剤送達系の製剤に特に有用である。特に限定されるものではないが、組成物は、当業者によく知られている非経口用の制御放出性及び徐放性系(双方の系では、投与の数が数倍低下する)製剤に有用である。さらに好ましいのは、皮下投与される制御放出性及び徐放性系のものである。本発明の範囲を制限することなく、有用な制御放出性及び組成物の例は、ヒドロゲル、油性ゲル、液晶、ポリマー性ミセル、ミクロスフィア、ナノ粒子である。
【００９１】
本発明の組成物に有用な制御放出性系の作製方法は、限定されるものではないが、結晶化、縮合、共結晶化、沈殿、共沈殿、乳化、分散、高圧ホモジナイズ、カプセル化、噴霧乾燥、マイクロカプセル化、コアセルベーション、相分離、ミクロスフィアを製造するための溶媒蒸発、押出及び超臨界流体プロセスを含む。一般的には、Handbook of Pharmaceutical Controlled Release(Wise, D.L.編. Marcel Dekker, New York, 2000)及びDrug and the Pharmaceutical Sciences vol.99：Protein Formulation and Delivery(MacNally, E.J.編. Marcel Dekker, New York, 2000)を参照。
【００９２】
非経口投与は、シリンジ、場合によってはペン様シリンジにより、皮下、筋肉内、腹膜内又は静脈内注射で実施されてよい。また非経口投与は、注入ポンプにより実施することもできる。さらなる選択肢は、鼻用又は肺用の液状又はパウダー状スプレーの形態で、本発明の誘導体を投与するための溶液又は懸濁液又はパウダーであってよい組成物にある。さらなる選択肢としては、本発明の誘導体を含有する薬学的組成物を、例えば針のない注射、又はイオン導入パッチであってよいパッチによる経皮投与用、又は頬等の経粘膜投与用に適合させることもできる。
【００９３】
本発明の誘導体は、肺薬剤送達系に適した任意の公知の種類の装置を使用し、ビヒクル、例えば溶液、懸濁液又は乾燥パウダーとして、肺経路を介して投与することができる。これらの例には、限定されるものではないが、肺薬剤送達用に作製された一般的には３種類のエアゾールが含まれ、ジェット又は超音波噴霧器、定量吸入器、又は乾燥パウダー吸入器も含まれ得る(Yu J, Chien YW. Pulmonary drug delivery：Physiologic and mechanistic aspects. Crit Rev Ther Drug Carr Sys 14(4)(1997)395-453を参照)。
【００９４】
標準化された試験方法に基づき、粒子の空気動力学的直径(ｄａ)を、単位密度(１ｇ／ｃｍ３)の参照基準球形粒子の幾何学的相当直径として定義する。球形粒子における最も単純なケースにおいて、ｄａは、記載されるような密度比の平方根の関数として、参照直径(ｄ)に相関している。
【００９５】
この関係は非球形粒子で修正される(Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer R. Recent advances in pulmonary drug delivery using large, porous inhaled particles. J Appl Physiol 84(2)(1998)379-385を参照)。「ＭＭＡＤ」及び「ＭＭＥＡＤ」なる用語は、詳しく記載されており、当該技術で公知である(Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer R、及び空気動力学的粒子径分布の中央値の測定を表す。Recent advances in pulmonary drug delivery using large, porous inhaled particles. J Appl Physiol 84(2) (1998) 379-385を参照)。空気動力学的中央粒子径(ＭＭＡＤ)及び有効空気動力学的中央粒子径(ＭＭＥＡＤ)(mass median effective aerodynamic diameter)は、交換可能に使用され、統計パラメータであり、実際の形状、サイズ又は密度に無関係に、肺に沈着するそれらの可能性に関連して、エアゾール粒子のサイズが経験的に記載されている(Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer R. Recent advances in pulmonary drug delivery using large, porous inhaled particles. J Appl Physiol 84(2)(1998)379-385を参照)。通常、ＭＭＡＤは、空気中における粒子の慣性運動を測定する装置、衝突体を用いて作製される測定値から算出される。
【００９６】
さらなる実施態様では、製剤は、１０μｍ未満、好ましくは１-５μｍ、最も好ましくは１-３μｍのエアゾール粒子のＭＭＡＤを達成するために、任意の公知のエアゾール化技術、例えば噴霧化によりエアゾール化することができる。好ましい粒子径は、肺の奥深くに薬剤を送達せしめるのに最も効果的なサイズに基づき、タンパク質が最適に吸収されるようになされる(例えば、Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer A, Recent advances in pulmonary drug delivery using large, porous inhaled particles. J Appl Physiol 84(2)(1998)379-385を参照)。
本発明の誘導体を含有する肺用製剤を肺の奥深くに蓄積させることは、吸入技術、例えば限定されるものではないが：低吸入速度(例えば３０Ｌ／分)、呼吸停止、及び作動のタイミングを修正して最適化されてよい。
【００９７】
「安定化された製剤」なる用語は、物理的安定性が増した、化学的安定性が増した、又は物理的及び化学的安定性が増した製剤を意味する。
ここで使用される場合、タンパク質製剤の「物理的安定性」なる用語は、タンパク質が熱-機械的ストレスに暴露される、及び／又は不安定な表面及び界面、例えば疎水性の表面及び界面と相互作用する結果として、タンパク質が生物学的に不活性になり及び／又は不溶性の凝集体が形成されるといったタンパク質の傾向を意味する。水性タンパク質製剤の物理的安定性は、適切な容器(例えばカートリッジ又はバイアル)に充填された製剤を、種々の時間、異なる温度で機械的／物理的ストレス(例えば攪拌)に暴露した後に、視覚検査及び／又は濁度測定することで評価される。製剤の視覚検査は、暗色背景で、鋭く集光されたライトにおいて実施される。製剤の濁度は、例えば０〜３のスケールで、濁りの程度をランク付けする視覚スコア(濁りのない製剤は視覚スコア０に相当し、日光下で視覚的に濁りのある製剤は視覚スコア３に相当する)により特徴付けられる。製剤は、日光下で視覚的濁りを示す場合に、タンパク質凝集に関して物理的に不安定であると分類される。また製剤の濁度は、当業者によく知られている簡単な濁度測定法により評価することもできる。また水性タンパク質製剤の物理的安定性は、タンパク質の立体構造状態のプローブ又は分光剤を使用して評価することもできる。プローブは、好ましくはタンパク質の非天然配座異性体に結合する小分子である。タンパク質構造の小分子分光プローブの一例はチオフラビンＴである。チオフラビンＴは、アミロイド原繊維の検出に広範囲に使用されている蛍光染料である。原繊維に、おそらく他のタンパク質立体配置が存在すると、チオフラビンＴが約４５０ｎｍで新たな励起極大を引き起こし、原繊維タンパク質形態に結合した時に、約４８２ｎｍで増強発光する。未結合のチオフラビンＴは本質的には、その波長で非蛍光性である。
【００９８】
天然から非天然状態まで、タンパク質構造における変化のプローブとして、他の小分子を使用することができる。例えば、タンパク質の暴露された疎水性パッチに好ましくは結合する「疎水性パッチ」プローブ。疎水性パッチは、天然状態にあるタンパク質の３次構造内に、一般的に埋められているが、タンパク質の展開及び変性が始まると、暴露されるようになる。これらの小分子の例、分光プローブは、芳香族の疎水性染料、例えばアントラセン(antrhacene)、アクリジン、フェナントロリン等である。他の分光プローブは金属-アミノ酸錯体、例えば疎水性アミノ酸、例えばフェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、及びバリン等のコバルト金属錯体である。
【００９９】
ここで使用される場合、タンパク質製剤の「化学的安定性」なる用語は、天然のタンパク質構造と比較して、免疫原性の潜在的増加及び／又は生物学的作用強度の潜在的低下を伴う、化学的に分解された生成物の形成に至る、タンパク質構造における化学的共有変化を意味する。種々の化学的に分解された生成物は、天然タンパク質の性質及び種類、及びタンパク質が暴露される環境に応じて形成させることができる。化学的分解の排除は、多くの場合、完全に回避することはできず、当業者によく知られているように、タンパク質製剤の保存及び使用中に、化学的に分解された生成物の量の増加が見られる。ほとんどのタンパク質は、グルタミニル又はアスパラギニル残基の側鎖アミド基が加水分解され、遊離のカルボン酸を形成するプロセスである、脱アミド化する傾向にある。他の分解経路は高分子量の形質転換生成物の形成に関与しており、２又はそれ以上のタンパク質分子は、アミド転移及び／又はジスルフィド相互作用を介して互いに共有結合し、共有結合したダイマー、オリゴマー及びポリマーの分解生成物の形成に至る(Stability of Protein Phramaceuticals, Ahern. T. J. & Manning M.C., Plenum Press, New York 1992)。(例えばメチオニン残基の)酸化も、化学的分解の他の変形例として挙げることができる。タンパク質製剤の化学的安定性は、異なる環境条件に暴露させた後、種々の時点での化学的に分解された生成物の量を測定することにより評価することができる(分解された生成物の形成は、多くの場合、例えば温度上昇により促進される)。分解された個々の生成物の量は、多くの場合、種々のクロマトグラフィー技術(例えばＳＥＣ-ＨＰＬＣ及び／又はＲＰ-ＨＰＬＣ)を使用し、分子サイズ及び／又は帯電性に応じて、分解された生成物を分離することにより測定される。
【０１００】
よって、概要を述べると、「安定化された製剤」とは、物理的安定性が増加、化学的安定性が増加、又は物理的及び化学的安定性が増加した製剤を意味する。一般的に、製剤は、有効期限になるまで、使用及び保存中に(推奨される使用及び保存条件で)安定していなければならない。
【０１０１】
本発明の一実施態様では、本発明の誘導体を含有する薬学的製剤は、使用で６週間以上、保存で３年以上安定している。
本発明の他の実施態様では、本発明の誘導体を含有する薬学的製剤は、使用で４週間以上、保存で３年以上安定している。
本発明のさらなる実施態様では、本発明の誘導体を含有する薬学的製剤は、使用で４週間以上、保存で２年以上安定している。
本発明のさらなる実施態様では、本発明の誘導体を含有する製剤組成物は、使用で２週間以上、保存で２年以上安定している。
【０１０２】
他の態様では、本発明は、薬剤を調製するための、本発明の誘導体の使用に関する。
一実施態様では、本発明の誘導体は、高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、肥満症、高血圧症、Ｘ症候群、脂質代謝異常、認知障害、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、脳卒中、冠動脈心疾患、及び他の心血管障害、炎症性腸症候群、胃腸障害、及び胃潰瘍を治療又は予防する薬剤を調製するために使用される。
他の実施態様では、本発明の誘導体は、２型糖尿病の病気の進行を遅延化又は防止する薬剤を調製するために使用される。
他の実施態様では、本発明の誘導体は、食物の取込を低減させ、β-細胞アポトーシスを低減させ、β-細胞機能及びβ-細胞質量を増大させ、及び／又はβ-細胞に対するグルコース感度を回復させる薬剤を調製するために使用される。
【０１０３】
本発明の一態様では、ペプチド、例えばＧＬＰ-１ペプチドの患者における作用時間を長くする方法であって、該ペプチド、例えばＧＬＰ-１(７-３７)が、上述したＡ-Ｂ-Ｃ-Ｄ-で誘導体化されていることを特徴とする方法が提供される。
本発明の一態様では、ペプチド、例えばＧＬＰ-１ペプチドの患者における作用時間を約４０時間以上に長くする方法であって、該ペプチド、例えばＧＬＰ-１(７-３７)が、上述したＡ-Ｂ-Ｃ-Ｄ-で誘導体化されていることを特徴とする方法が提供される。
【０１０４】
本発明の一態様では、本発明の誘導体、及び薬学的に許容可能な賦形剤を含有する薬学的組成物が提供される。
本発明の一態様では、本発明の薬学的組成物は、非経口投与に適している。
【０１０５】
本発明のさらなる態様では、薬剤を調製するための、本発明の誘導体の使用が提供される。
本発明のさらなる態様では、高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、肥満症、高血圧症、Ｘ症候群、脂質代謝異常、認知障害、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、冠動脈心疾患、及び他の心血管障害、脳卒中、炎症性腸症候群、胃腸障害、及び胃潰瘍を治療又は予防する薬剤を調製するための、本発明の誘導体の使用が提供される。
本発明のさらなる態様では、２型糖尿病の病気の進行を遅延化又は防止する薬剤を調製するための、本発明の誘導体の使用が提供される。
【０１０６】
本発明の誘導体を用いた処置は、例えば抗糖尿病剤、抗肥満剤、食欲調節剤、血圧降下剤、糖尿病に起因する又は関連する合併症を処置及び／又は予防する薬剤、及び肥満に起因する又は関連する合併症及び疾患を処置及び／又は予防する薬剤から選択される、第２の又はそれ以上の薬理学的活性物質と併用してもよい。これら薬理学的活性物質の例は：インスリン、スルホニル尿素、ビグアニド類、メグリチニド類(meglitinides)、グルコシダーゼインヒビター、グルカゴンアンタゴニスト、ＤＰＰ-ＩＶ(ジペプチジルペプチダーゼ-ＩＶ)インヒビター、グルコース新生及び／又はグリコーゲン分解の刺激に係る肝酵素のインヒビター、グルコース取込調節剤、脂質代謝を調節する化合物、例えば抗高脂血剤(antihyperlipidemic agents)、例えばＨＭＧ ＣｏＡインヒビター(スタチン類)、胃抑制ポリペプチド(ＧＩＰアナログ)、食糧摂取量を低下させる化合物、ＲＸＲアゴニスト、及びβ-細胞のＡＴＰ-依存性カリウムチャンネルに作用する薬剤；コレスチラミン、コレスチポール、クロフィブラート、ゲンフィブロジル(gemfibrozil)、ロバスタチン、プラバスタチン、シムバスタチン、プロブコール、デキストロサイロキシン、ネテグリニド(neteglinide)、レパグリニド類；β-ブロッカー、例えばアルプレノロール、アテノロール、チモロール、ピンドロール、プロプラノロール及びメトプロロール、ＡＣＥ(アンジオテンシン変換酵素)インヒビター、例えばベナゼプリル(benazepril)、カプトプリル、エナラプリル、フォシノプリル(fosinopril)、リシノプリル、アラトリオプリル(alatriopril)、キナプリル及びラミプリル、カルシウムチャンネルブロッカー、例えばニフェジピン、フェロジピン、ニカルジピン、イスラジピン、ニモジピン、ジルチアゼム及びベパラミル、及びα-ブロッカー、例えばドキサゾシン、ウラピジル、プラゾシン及びテラゾシン；ＣＡＲＴ(コカインアンフェタミン調節転写)アゴニスト、ＮＰＹ(神経ペプチドＹ)アンタゴニスト、ＰＹＹアゴニスト、Ｙ２レセプターアゴニスト、Ｙ４レセプターアゴニスト、混合Ｙ２／Ｙ４レセプターアゴニスト、ＭＣ４(メラノコルチン４)アゴニスト、オレキシン(orexin)アンタゴニスト、ＴＮＦ(腫瘍壊死因子)アゴニスト、ＣＲＦ(コルチコトロピン放出因子)アゴニスト、ＣＲＦ ＢＰ(コルチコトロピン放出因子結合タンパク質)アンタゴニスト、ウロコルチンアゴニスト、β３アゴニスト、オキシントモジュリン及びアナログ、ＭＳＨ(メラノサイト刺激ホルモン)アゴニスト、ＭＣＨ(メラノサイト集中ホルモン)アンタゴニスト、ＣＣＫ(コレシストキニン)アゴニスト、セロトニン再摂取インヒビター、セロトニン及びノルアドレナリン再摂取インヒビター、混合セロトニン及びノルアドレナリン性化合物、５ＨＴ(セロトニン)アゴニスト、ボンベシンアゴニスト、ガラニンアンタゴニスト、成長ホルモン、成長ホルモン放出化合物、ＴＲＨ(チレオトロピン(thyreotropin)放出ホルモン)アゴニスト、ＵＣＰ２又は３(脱共役タンパク質２又は３)モジュレーター、レプチンアゴニスト、ＤＡアゴニスト(ブロモクリプチン、ドプレキシン(doprexin))、リパーゼ／アミラーゼインヒビター、ＲＸＲ(レチノイドＸレセプター)モジュレーター、ＴＲβアゴニスト；ヒスタミンＨ３アンタゴニスト、胃抑制ポリペプチドアゴニス��又はアンタゴニスト(ＧＩＰアナログ)、ガストリン及びガストリンアナログである。
【０１０７】
この発明の誘導体を用いた処置は、手術−胃緊縛術又は胃バイパス術等の、グルコースレベル及び／又は脂質ホメオスタシスに影響を及ぼす手術と併用されてよい。
本発明の誘導体と、一又は複数の上述した化合物、及び場合によっては一又は複数のさらなる薬理学的活性物質との任意の適切な組合せは、本発明の範囲に入ると考えられると、理解すべきである。
【０１０８】
ペプチド及びそのアナログの製造方法
配列に応じて、この本発明のアナログは、ポリペプチドをコードし、ポリペプチドを発現可能なＤＮＡ配列を含む宿主細胞を、ペプチドの発現が可能な条件下、適切な栄養培地において培養し、その後、得られたペプチドを培地から回収することを含む方法によっても作製できる。
細胞培養に使用される培地は、宿主細胞の増殖に適した任意の従来からの培地、例えば適切なサプリメントを含有する最小又は複合培地であってよい。適切な培地は商業的供給者から入手可能であり、又は公開されているレシピ(例えば、American Type Culture Collectionのカタログ)に従い調製されてもよい。ついで、細胞により生成されるペプチドは、硫酸アンモニウム等の塩により、上清又は濾液のタンパク質様成分を遠心分離又は濾過、沈殿にて培地から宿主細胞を分離させ、当該分野のペプチドの種類に応じて、例えばイオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等の多様なクロマトグラフィー手順により精製することを含む従来からの手順により、培養培地から回収されてよい。
【０１０９】
治療用ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、ゲノム又はｃＤＮＡ由来のものが適しており、例えばゲノム又はｃＤＮＡライブラリを調製し、標準的な技術(例えば、Sambrook, J, Fritsch, EF及びManiatis, T,  Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York、1989)に従い、合成オリゴヌクレオチドプローブを使用するハイブリッド形成により、ポリペプチドの全体又は一部をコードするＤＮＡ配列をスクリーニングすることで得られる。またポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、確立された標準的な方法、例えばBeaucage及びCaruthers, Tetrahedron Letters 22 (1981), 1859-1869に記載されたホスホアミジト(phosphoamidite)法、又はMatthesら, EMBO Journal 3 (1984), 801-805により記載された方法により合成的に調製することもできる。さらに、ＤＮＡ配列は、例えば米国特許第4,683,202号、又はSaikiら, Science 239 (1988), 487-491に記載されたようにして、特定のプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応により調製されてもよい。
【０１１０】
ＤＮＡ配列は、便宜的に組換えＤＮＡ手順にかけられうる任意のベクターに挿入されてよく、多くの場合、ベクターの選択は、それが導入される宿主細胞に依存する。例えば、ベクターは自己複製可能なベクターであってよく、すなわちベクターは染色体外実体として存在しており、その複製は染色体複製、例えばプラスミドとは独立している。また、ベクターは、宿主細胞に導入される場合、宿主細胞ゲノムに組み込まれ、それが組み込まれる染色体(群)と共に複製される。
【０１１１】
ベクターは好ましくは発現ベクターであり、そこでペプチドをコードするＤＮＡ配列は、プロモーター等、ＤＮＡの転写に必要な付加的なセグメントに作用可能に結合する。プロモーターは宿主細胞の選択において転写活性を示す任意のＤＮＡ配列であってよく、宿主細胞と相同又は異種であるタンパク質をコードする遺伝子から誘導されてよい。様々な宿主細胞において本発明のペプチドをコードするＤＮＡの転写を指向する適切なプロモーターの具体例は、当該技術でよく知られており、例えばSambrookら, 上掲が参照される。
【０１１２】
ペプチドをコードするＤＮＡ配列は、もし必要ならば、適切なターミネーター、ポリアデニル化シグナル、転写エンハンサー配列、及び翻訳エンハンサー配列に作用可能に結合していてもよい。さらに本発明の組換えベクターは、当該問題においては、ベクターが宿主細胞内で複製可能なＤＮＡ配列をさらに含んでよい。
【０１１３】
またベクターは、選択可能なマーカー、例えば遺伝子、宿主細胞における欠失を補完する生成物、又は例えばアンピシリン、カナマイシン、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、ネオマイシン、ハイグロマイシン、又はメトトレキサート等の薬剤に対する耐性を付与するものをさらに含んでもよい。
【０１１４】
宿主細胞の分泌経路において、本発明の親ペプチドを方向付けるために、分泌シグナル配列(リーダー配列、プレプロ配列、又はプレ配列としても公知)は、組換えベクター内に提供されてもよい。分泌シグナル配列は正確なリーディングフレームにおいて、ペプチドをコードするＤＮＡ配列に結合している。分泌シグナル配列は、通常、ペプチドをコードするＤＮＡ配列に対し、５'に位置している。分泌シグナル配列は通常ペプチドに関連していてもよく、又は他の分泌タンパク質をコードする遺伝子からのものであってもよい。
親ペプチドをコードするＤＮＡ配列、プロモーター及び場合によってはターミネーター及び／又は分泌シグナル配列をそれぞれライゲーションし、複製に必要な情報を含む適切なベクターにそれらを挿入するのに使用される手順は、当業者によく知られている(例えば、Sambrookら, 上掲)。
【０１１５】
ＤＮＡ配列又は組換えベクターが導入されている宿主細胞は、本ペプチドを生成可能な任意の細胞であってよく、細菌、酵母、真菌及び高等真核細胞を含む。よく知られており、当該技術で使用されている適切な宿主細胞の例は、限定されるものではないが、大腸菌、出芽酵母、又は哺乳類ＢＨＫ又はＣＨＯ細胞系である。
【０１１６】
本発明の実施態様
１．少なくとも一のアミノ酸残基がＡ-Ｂ-Ｃ-Ｄ-で誘導体化されているペプチドを含有するペプチド誘導体であって、
Ａ-が：
0005606314.tif 000008
[上式中、ｐは１０、１１、１２、１３及び１４からなる群から選択され、ｄは０、１、２、３、４及び５からなる群から選択される]
であり、
-Ｂ-が：
0005606314.tif 000009
[上式中、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、ｙは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２からなる群から選択される]
からなる群から選択され、
又はＡが：
0005606314.tif 000010
[上式中、ｎは１４、１５、１６、１７、１８及び１９からなる群から選択される]
であり、
Ｂが：
0005606314.tif 000011
[上式中、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択される]
からなる群から選択され、
-Ｃ-が：
0005606314.tif 000012
[上式中、ｂ及びｅはそれぞれ独立して、０、１及び２からなる群から選択され、ｃ及びｆはそれぞれ独立して、０、１及び２からなる群から選択され、但し、ｃが０の場合、ｂは１又は２であり、又はｃが１又は２である場合、ｂは０であり、ｆが０である場合、ｅは１又は２であり、又はｆが１又は２である場合、ｅは０である]
からなる群から選択され、
-Ｄ-が前記アミノ酸残基に結合しており、リンカーである誘導体。
【０１１７】
２．前記ペプチドが、ＧＬＰ-１(７-３７)及びＧＬＰ-１(７-３７)のアナログから選択されるＧＬＰ-１ペプチドであり、該ペプチドの少なくとも一のアミノ酸残基がＡ-Ｂ-Ｃ-Ｄ-で誘導体化されている、実施態様１の誘導体。
３．誘導体化されたアミノ酸残基がアミノ基を有する、実施態様１-２のいずれか一つの誘導体。
４．誘導体化されたアミノ酸残基がリジンである、実施態様１-４のいずれか一つの誘導体。
【０１１８】
５．Ｄが：
0005606314.tif 000013
(これらの構造の１、３、４、５及び６のものが好ましくは、すなわち２は除く)
[上式中、ｋは０、１、２、３、４、５、１１及び２７からなる群から選択され、ｍは、０、１、２、３、４、５及び６からなる群から選択され、Ｄは＊で表された末端でアミノ酸残基に結合している]
からなる群から選択される、実施態様１-４のいずれかの誘導体。
【０１１９】
６．前記ＧＬＰ-１アナログが、次の式(Ｉ)：
Ｘａａ７-Ｘａａ８-Ｇｌｕ-Ｇｌｙ-Ｔｈｒ-Ｐｈｅ-Ｔｈｒ-Ｓｅｒ-Ａｓｐ-Ｘａａ１６-Ｓｅｒ-Ｘａａ１８-Ｘａａ１９-Ｘａａ２０-Ｇｌｕ-Ｘａａ２２-Ｘａａ２３-Ａｌａ-Ｘａａ２５-Ｘａａ２６-Ｘａａ２７-Ｐｈｅ-Ｉｌｅ-Ｘａａ３０-Ｔｒｐ-Ｌｅｕ-Ｘａａ３３-Ｘａａ３４-Ｘａａ３５-Ｘａａ３６-Ｘａａ３７-Ｘａａ３８-Ｘａａ３９-Ｘａａ４０-Ｘａａ４１-Ｘａａ４２-Ｘａａ４３-Ｘａａ４４-Ｘａａ４５-Ｘａａ４６      式(Ｉ)(配列番号：２)
[上式中、
Ｘａａ７は、Ｌ-ヒスチジン、Ｄ-ヒスチジン、デスアミノ-ヒスチジン、２-アミノ-ヒスチジン、β-ヒドロキシ-ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα-アセチル-ヒスチジン、α-フルオロメチル-ヒスチジン、α-メチル-ヒスチジン、３-ピリジルアラニン、２-ピリジルアラニン、又は４-ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、(１-アミノシクロプロピル)カルボン酸、(１-アミノシクロブチル)カルボン酸、(１-アミノシクロペンチル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘプチル)カルボン酸、又は(１-アミノシクロオクチル)カルボン酸であり；
Ｘａａ１６は、Ｖａｌ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ１９は、Ｔｙｒ又はＧｌｎであり；
Ｘａａ２０は、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、又はＬｙｓ、好ましくはＬｅｕ又はＭｅｔであり；
Ｘａａ２２は、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ２３は、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２５は、Ａｌａ又はＶａｌであり；
Ｘａａ２６は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２７は、Ｇｌｕ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、又はＡｒｇ、好ましくはＡｌａ、Ｇｌｕ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３３は、Ｖａｌ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ、Ｇｌｙ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３８は、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３９は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４０は、Ｇｌｙ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４１は、Ａｌａ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４２は、Ｐｒｏ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４３は、Ｐｒｏ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４４は、Ｐｒｏ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４５は、Ｓｅｒ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４６は、アミドであるか、又は存在せず；
但し、Ｘａａ３８、Ｘａａ３９、Ｘａａ４０、Ｘａａ４１、Ｘａａ４２、Ｘａａ４３、Ｘａａ４４、Ｘａａ４５又はＸａａ４６が存在しないならば、各アミノ酸残基の下流も存在しない]
のアミノ酸配列を有する、実施態様１-５のいずれか一つの誘導体。
【０１２０】
７．前記ＧＬＰ-１アナログが、次の式(ＩＩ)：
Ｘａａ７-Ｘａａ８-Ｇｌｕ-Ｇｌｙ-Ｔｈｒ-Ｐｈｅ-Ｔｈｒ-Ｓｅｒ-Ａｓｐ-Ｖａｌ-Ｓｅｒ-Ｘａａ１８-Ｔｙｒ-Ｌｅｕ-Ｇｌｕ-Ｘａａ２２-Ｘａａ２３-Ａｌａ-Ａｌａ-Ｘａａ２６-Ｇｌｕ-Ｐｈｅ-Ｉｌｅ-Ｘａａ３０-Ｔｒｐ-Ｌｅｕ-Ｖａｌ-Ｘａａ３４-Ｘａａ３５-Ｘａａ３６-Ｘａａ３７-Ｘａａ３８            式(ＩＩ)(配列番号：３)
[上式中、
Ｘａａ７は、Ｌ-ヒスチジン、Ｄ-ヒスチジン、デスアミノ-ヒスチジン、２-アミノ-ヒスチジン、β-ヒドロキシ-ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα-アセチル-ヒスチジン、α-フルオロメチル-ヒスチジン、α-メチル-ヒスチジン、３-ピリジルアラニン、２-ピリジルアラニン、又は４-ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、(１-アミノシクロプロピル)カルボン酸、(１-アミノシクロブチル)カルボン酸、(１-アミノシクロペンチル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘプチル)カルボン酸、又は(１-アミノシクロオクチル)カルボン酸であり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２２は、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ２３は、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２６は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、又はＡｒｇ、好ましくはＡｌａ、Ｇｌｕ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｕ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３８は、Ｌｙｓ、アミドであるか、又は存在しない]
のアミノ酸配列を有する、実施態様１-５のいずれか一つの誘導体。
【０１２１】
８．前記ＧＬＰ-１アナログが、次の式(ＩＩＩ)：
Ｘａａ７-Ｘａａ８-Ｘａａ９-Ｇｌｙ-Ｔｈｒ-Ｐｈｅ-Ｔｈｒ-Ｓｅｒ-Ａｓｐ-Ｘａａ１６-Ｓｅｒ-Ｘａａ１８-Ｔｙｒ-Ｌｅｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｘａａ２３-Ａｌａ-Ｘａａ２５-Ａｒｇ-Ｘａａ２７-Ｐｈｅ-Ｉｌｅ-Ｘａａ３０-Ｔｒｐ-Ｌｅｕ-Ｘａａ３３-Ｘａａ３４-Ｘａａ３５-Ｘａａ３６-Ｘａａ３７-Ｘａａ３８-Ｘａａ３９      式(ＩＩＩ)(配列番号：６)
[上式中、
Ｘａａ７-Ｘａａ８は、Ｌ-ヒスチジン-Ａｉｂ、デスアミノ-ヒスチジン-アラニン又はデスアミノ-ヒスチジン-Ａｉｂであり；
Ｘａａ９は、Ｇｌｕ又はＧｌｕ誘導体、例えばアルファ，アルファ ジメチル-Ｇｌｕであり；
Ｘａａ１６は、Ｖａｌ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ１９は、Ｔｙｒ又はＧｌｎであり；
Ｘａａ２３は、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２５は、Ａｌａ又はＶａｌであり；
Ｘａａ２７は、Ｇｌｕ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ａｒｇであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３３は、Ｖａｌ、又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｉｂであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３８は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３９は、アミドであるか、又は存在せず；
但し、Ｘａａ３７が存在しない場合は、Ｘａａ３８も存在しない]
のアミノ酸配列を有し、１８、２３、３４、３６、３７又は３８位で誘導体化されている、実施態様１-５のいずれか一つの誘導体。
【０１２２】
９．ＧＬＰ-１アナログが、次の式(ＩＶ)：
Ｘａａ７-Ｘａａ８-Ｇｌｕ-Ｇｌｙ-Ｔｈｒ-Ｐｈｅ-Ｔｈｒ-Ｓｅｒ-Ａｓｐ-Ｖａｌ-Ｓｅｒ-Ｘａａ１８-Ｔｙｒ-Ｌｅｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｎ-Ａｌａ-Ａｌａ-Ａｒｇ-Ｇｌｕ-Ｐｈｅ-Ｉｌｅ-Ｘａａ３０-Ｔｒｐ-Ｌｅｕ-Ｘａａ３３-Ｘａａ３４-Ｘａａ３５-Ｘａａ３６-Ｘａａ３７-Ｘａａ３８-Ｘａａ３９      式(ＩＶ)(配列番号：７)
[上式中、
Ｘａａ７は、Ｌ-ヒスチジン、Ｄ-ヒスチジン、デスアミノ-ヒスチジン、２-アミノ-ヒスチジン、β-ヒドロキシ-ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα-アセチル-ヒスチジン、α-フルオロメチル-ヒスチジン、α-メチル-ヒスチジン、３-ピリジルアラニン、２-ピリジルアラニン又は４-ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、(１-アミノシクロプロピル)カルボン酸、(１-アミノシクロブチル)カルボン酸、(１-アミノシクロペンチル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘプチル)カルボン酸、又は(１-アミノシクロオクチル)カルボン酸であり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇであるか、又は存在せず、好ましくはＡｌａ、Ｇｌｕ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３３は、Ｖａｌ、又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｉｂであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３８は、Ｌｙｓであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３９は、アミドであるか、又は存在しない]
のアミノ酸配列を有し、１８、２３、３４、３６、３７又は３８にて、アルブミン結合残基で誘導体化されている、実施態様１-５のいずれか一つの誘導体。
【０１２３】
１０．Ｘａａ３８が存在しない、実施態様１-９のいずれか一つの誘導体。
１１．Ｘａａ３７及びＸａａ３８ が双方とも存在しない、実施態様１-１０のいずれか一つの誘導体。
１２．Ｘａａ７がデスアミノ-ヒスチジンである、実施態様１-１１のいずれか一つの誘導体。
１３．Ｘａａ８がＡｉｂである、実施態様１-１２のいずれか一つの誘導体。
【０１２４】
１４．実施態様１-１３のいずれか一つの誘導体、及び薬学的に許容可能な賦形剤を含有する薬学的組成物。
１５．高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、肥満症、高血圧症、Ｘ症候群、脂質代謝異常、認知障害、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、冠動脈心疾患及び他の心血管障害、脳卒中、炎症性腸症候群、胃腸障害、及び胃潰瘍の治療又は予防に使用される、実施態様１-１３のいずれか一つの誘導体。
【０１２５】
配列番号：１、及び配列番号：２-３及び６-７」は、本発明の誘導体に使用されるＧＬＰ-１(７-３７)アナログの具体例であるため、ヒトＧＬＰ-１(７-３７)のアミノ酸配列は、配列リストに含まれる。配列リストにおいて、ＧＬＰ-１(７-３７)及びそのアナログの番号付けはアミノ酸残基１番から出発する。従って、例えば配列番号：１の１位は、ＧＬＰ-１(７-３７)(Ｈｉｓ)の７位と同等であり、配列番号：１の１６位は、ＧＬＰ-１(７-３７)(Ｇｌｙ)の２２位と同等であり、配列番号：１の２０位は、ＧＬＰ-１(７-３７)(Ｌｙｓ)の２６位と同等であり−他の位置及び他の配列について、逆も同様である。
【０１２６】
従って、本発明は、例えば上述した実施態様６において、ＧＬＰ-１(７-３７)アナログが、式(Ｉ)(配列番号：２)のアミノ酸配列を有するペプチド誘導体を提供するものであり、ここで：
Ｘａａ７(配列番号：２の１位)は、Ｌ-ヒスチジン、Ｄ-ヒスチジン、デスアミノ-ヒスチジン、２-アミノ-ヒスチジン、β-ヒドロキシ-ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα-アセチル-ヒスチジン、α-フルオロメチル-ヒスチジン、α-メチル-ヒスチジン、３-ピリジルアラニン、２-ピリジルアラニン又は４-ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８(配列番号：２の２位)は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、(１-アミノシクロプロピル)カルボン酸、(１-アミノシクロブチル)カルボン酸、(１-アミノシクロペンチル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘプチル)カルボン酸、又は(１-アミノシクロオクチル)カルボン酸であり；
Ｘａａ１６(配列番号：２の１０位)は、Ｖａｌ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ１８(配列番号：２の１２位)は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ１９(配列番号：２の１３位)は、Ｔｙｒ又はＧｌｎであり；
Ｘａａ２０(配列番号：２の１４位)は、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ２２(配列番号：２の１６位)は、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ２３(配列番号：２の１７位)は、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２５(配列番号：２の１９位)は、Ａｌａ又はＶａｌであり；
Ｘａａ２６(配列番号：２の２０位)は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２７(配列番号：２の２１位)は、Ｇｌｕ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ３０(配列番号：２の２４位)は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３３(配列番号：２の２７位)は、Ｖａｌ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３４(配列番号：２の２８位)は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５(配列番号：２の２９位)は、Ｇｌｙ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ３６(配列番号：２の３０位)は、Ａｒｇ、Ｇｌｙ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３７(配列番号：２の３１位)は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３８(配列番号：２の３２位)は、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３９(配列番号：２の３３位)は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４０(配列番号：２の３４位)は、Ｇｌｙ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４１(配列番号：２の３５位)は、Ａｌａ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４２(配列番号：２の３６位)は、Ｐｒｏ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４３(配列番号：２の３７位)は、Ｐｒｏ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４４(配列番号：２の３８位)は、Ｐｒｏ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４５(配列番号：２の３９位)は、Ｓｅｒ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４６(配列番号：２の４０位)は、アミドであるか、又は存在せず；
但し、Ｘａａ３８、Ｘａａ３９、Ｘａａ４０、Ｘａａ４１、Ｘａａ４２、Ｘａａ４３、Ｘａａ４４、Ｘａａ４５又はＸａａ４６(それぞれ、配列番号：２の３２ないし４０位)が存在しないならば、各アミノ酸残基の下流も存在しない。
【０１２７】
本発明は、本発明の請求項及び特定の実施態様のいずれかに相当する内容を有する、付加的な誘導体、方法及びその使用、薬学的組成物を提供するものであり、ここで対応する位置の番号付けの修正は、上述にて説明したように、また実施態様６の誘導体について上述にて示したようになされる。例えば優先出願の請求項７-１３(上述した実施態様の７-１３)は、ＧＬＰ-１アナログが式(ＩＩ、ＩＩＩ及びＩＶ)のアミノ酸配列を有する、本発明の特定の誘導体に関し、位置の番号付けは、式の代わりに、それぞれの配列番号を意味する、上述にて説明したように修正されてもよい。
【０１２８】
本発明のさらなる実施態様：
８ａ．次の式(Ｉ)：
Ｘａａ７-Ｘａａ８-Ｇｌｕ-Ｇｌｙ-Ｔｈｒ-Ｐｈｅ-Ｔｈｒ-Ｓｅｒ-Ａｓｐ-Ｘａａ１６-Ｓｅｒ-Ｘａａ１８-Ｘａａ１９-Ｘａａ２０-Ｇｌｕ-Ｘａａ２２-Ｘａａ２３-Ａｌａ-Ｘａａ２５-Ｘａａ２６-Ｘａａ２７-Ｐｈｅ-Ｉｌｅ-Ｘａａ３０-Ｔｒｐ-Ｌｅｕ-Ｘａａ３３-Ｘａａ３４-Ｘａａ３５-Ｘａａ３６-Ｘａａ３７-Ｘａａ３８-Ｘａａ３９-Ｘａａ４０-Ｘａａ４１-Ｘａａ４２-Ｘａａ４３-Ｘａａ４４-Ｘａａ４５-Ｘａａ４６      式(Ｉ)(配列番号：２)
[上式中、
Ｘａａ７は、Ｌ-ヒスチジン、Ｄ-ヒスチジン、デスアミノ-ヒスチジン、２-アミノ-ヒスチジン、β-ヒドロキシ-ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα-アセチル-ヒスチジン、α-フルオロメチル-ヒスチジン、α-メチル-ヒスチジン、２(３Ｈ-イミダゾール-４-イル)アセチル、３-ピリジルアラニン、２-ピリジルアラニン、又は４-ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、(１-アミノシクロプロピル)カルボン酸、(１-アミノシクロブチル)カルボン酸、(１-アミノシクロペンチル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘプチル)カルボン酸、又は(１-アミノシクロオクチル)カルボン酸であり；
Ｘａａ１６は、Ｖａｌ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ１９は、Ｔｙｒ又はＧｌｎであり；
Ｘａａ２０は、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、又はＬｙｓであり；
Ｘａａ２２は、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ２３は、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２５は、Ａｌａ又はＶａｌであり；
Ｘａａ２６は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２７は、Ｇｌｕ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３３は、Ｖａｌ、Ｔｈｒ(Ｏ-ベンジル)、又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ、Ａｉｂであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ、Ｇｌｙ又はＬｙｓあるか、又は存在せず；
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、イプシロン-アミノ-Ｌｙｓ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３８は、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３９は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４０は、Ｇｌｙ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４１は、Ａｌａ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４２は、Ｐｒｏ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４３は、Ｐｒｏ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４４は、Ｐｒｏ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４５は、Ｓｅｒ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４６は、アミドであるか、又は存在せず；
但し、Ｘａａ３８、Ｘａａ３９、Ｘａａ４０、Ｘａａ４１、Ｘａａ４２、Ｘａａ４３、Ｘａａ４４、Ｘａａ４５又はＸａａ４６が存在しないならば、各アミノ酸残基の下流も存在しない]
のアミノ酸配列を有するＧＬＰ-１誘導体。
【０１２９】
９ａ．次の式(ＩＩ)：
Ｘａａ７-Ｘａａ８-Ｇｌｕ-Ｇｌｙ-Ｔｈｒ-Ｐｈｅ-Ｔｈｒ-Ｓｅｒ-Ａｓｐ-Ｖａｌ-Ｓｅｒ-Ｘａａ１８-Ｔｙｒ-Ｌｅｕ-Ｇｌｕ-Ｘａａ２２-Ｘａａ２３-Ａｌａ-Ａｌａ-Ｘａａ２６-Ｇｌｕ-Ｐｈｅ-Ｉｌｅ-Ｘａａ３０-Ｔｒｐ-Ｌｅｕ-Ｖａｌ-Ｘａａ３４-Ｘａａ３５-Ｘａａ３６-Ｘａａ３７-Ｘａａ３８            式(ＩＩ)(配列番号：３)
[上式中、
Ｘａａ７は、Ｌ-ヒスチジン、Ｄ-ヒスチジン、デスアミノ-ヒスチジン、２-アミノ-ヒスチジン、β-ヒドロキシ-ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα-アセチル-ヒスチジン、α-フルオロメチル-ヒスチジン、α-メチル-ヒスチジン、２(３Ｈ-イミダゾール-４-イル)アセチル、３-ピリジルアラニン、２-ピリジルアラニン、又は４-ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、(１-アミノシクロプロピル)カルボン酸、(１-アミノシクロブチル)カルボン酸、(１-アミノシクロペンチル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘプチル)カルボン酸、又は(１-アミノシクロオクチル)カルボン酸であり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２２は、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ２３は、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２６は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ、Ａｉｂであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ、Ｌｙｓであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、又はイプシロン-アミノ-Ｌｙｓであり；
Ｘａａ３８は、Ｌｙｓ、アミドであるか、又は存在しない]
のアミノ酸配列を有するＧＬＰ-１誘導体。
【０１３０】
１０ａ．前記ＧＬＰ-１アナログが、次の式(ＩＩＩ)：
Ｘａａ７-Ｘａａ８-Ｘａａ９-Ｇｌｙ-Ｔｈｒ-Ｐｈｅ-Ｔｈｒ-Ｓｅｒ-Ａｓｐ-Ｘａａ１６-Ｓｅｒ-Ｘａａ１８-Ｔｙｒ-Ｌｅｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｘａａ２３-Ａｌａ-Ｘａａ２５-Ａｒｇ-Ｘａａ２７-Ｐｈｅ-Ｉｌｅ-Ｘａａ３０-Ｔｒｐ-Ｌｅｕ-Ｘａａ３３-Ｘａａ３４-Ｘａａ３５-Ｘａａ３６-Ｘａａ３７-Ｘａａ３８-Ｘａａ３９      式(ＩＩＩ)(配列番号：６)
[上式中、
Ｘａａ７-Ｘａａ８は、２(３Ｈ-イミダゾール-４-イル)アセチル-アラニン、Ｌ-ヒスチジン-Ａｉｂ、デスアミノ-ヒスチジン-アラニン、又はデスアミノ-ヒスチジン-Ａｉｂであり；
Ｘａａ９は、Ｇｌｕ又はＧｌｕ誘導体、例えばアルファ，アルファ ジメチル-Ｇｌｕであり；
Ｘａａ１６は、Ｖａｌ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ１９は、Ｔｙｒ又はＧｌｎであり；
Ｘａａ２３は、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２５は、Ａｌａ又はＶａｌであり；
Ｘａａ２７は、Ｇｌｕ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３３は、Ｖａｌ、Ｔｈｒ(Ｏ-ベンジル)、又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ、Ａｉｂであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ、Ｌｙｓであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ｐｒｏ、イプシロン-アミノ-Ｌｙｓであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３８は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３９は、アミドであるか、又は存在せず；
但し、Ｘａａ３７が存在しない場合は、Ｘａａ３８も存在しない]
のアミノ酸配列を有し、１８、２３、２６、３０、３１、３４、３６、３７又は３８位で誘導体化されている、好ましくは実施態様８ａ-９ａのいずれか一つのＧＬＰ-１誘導体。
【０１３１】
１１ａ．次の式(ＩＶ)：
Ｘａａ７-Ｘａａ８-Ｇｌｕ-Ｇｌｙ-Ｔｈｒ-Ｐｈｅ-Ｔｈｒ-Ｓｅｒ-Ａｓｐ-Ｖａｌ-Ｓｅｒ-Ｘａａ１８-Ｔｙｒ-Ｌｅｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｎ-Ａｌａ-Ａｌａ-Ａｒｇ-Ｇｌｕ-Ｐｈｅ-Ｉｌｅ-Ｘａａ３０-Ｔｒｐ-Ｌｅｕ-Ｘａａ３３-Ｘａａ３４-Ｘａａ３５-Ｘａａ３６-Ｘａａ３７-Ｘａａ３８-Ｘａａ３９      式(ＩＶ)(配列番号：７)
[上式中、
Ｘａａ７は、Ｌ-ヒスチジン、Ｄ-ヒスチジン、デスアミノ-ヒスチジン、２-アミノ-ヒスチジン、β-ヒドロキシ-ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα-アセチル-ヒスチジン、α-フルオロメチル-ヒスチジン、α-メチル-ヒスチジン、２(３Ｈ-イミダゾール-４-イル)アセチル、３-ピリジルアラニン、２-ピリジルアラニン又は４-ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、(１-アミノシクロプロピル)カルボン酸、(１-アミノシクロブチル)カルボン酸、(１-アミノシクロペンチル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘプチル)カルボン酸、又は(１-アミノシクロオクチル)カルボン酸であり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３３は、Ｖａｌ、又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ、Ａｉｂであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ、Ｌｙｓであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｉｂ、Ｐｒｏ、イプシロン-アミノ-Ｌｙｓであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３８は、Ｌｙｓであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３９は、アミドであるか、又は存在しない]
のアミノ酸配列を有し、１８、２３、２６、３０、３１、３４、３６、３７又は３８位にて、アルブミン結合残基で誘導体化されているＧＬＰ-１誘導体。
【０１３２】
１２ａ．Ｘａａ３８が存在しない、実施態様８ａ-１１ａのいずれか一つの誘導体。
１３ａ．Ｘａａ３７及びＸａａ３８ が双方とも存在しない、実施態様８ａ-１２ａのいずれか一つの誘導体。
１４ａ．Ｘａａ７がデスアミノ-ヒスチジンである、実施態様８ａ-１３ａのいずれか一つの誘導体。
１５ａ．Ｘａａ８がＡｉｂである、実施態様８ａ-１４ａのいずれか一つの誘導体。
【０１３３】
１６ａ．Ｎ-ε３７{２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１(７-３７)アミド；
Ｎ-ε２０−{２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[Ａｉｂ２，Ｌｅｕ１４，Ｌｙｓ２０，Ｇｌｎ２８，Ｓｅｒ(Ｏ-ベンジル)３９]エキセンディン-４(１-３９)アミド：
Ｎ-ε２６{２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン３７{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン２３-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[１-(１７-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ピペリジン-４-イルカルボニルアミノ]-３-(カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[１-(１７-カルボキシヘプタデカノイル)ピペリジン-４-イルカルボニルアミノ]３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７,Ｇｌｕ２２  Ａｒｇ２６,  Ａｒｇ３４，Ｐｈｅ(ｍ-ＣＦ３)２８]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)-Ｌｙｓ(２-{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}ブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)；
Ｎ-ε２０({２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１７-カルボキシヘプタデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｔｈｒ(Ｏ-ベンジル)３３，]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３０{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３０]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン３１{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３１]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-ε２０({２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１７-カルボキシヘプタデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ａｒｇ２６，２-ナフチルアラニン２８、Ｇｌｕ３０，]ＧＬＰ-１(７-３７)アミド；
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-４-[１-[１９-カルボキシノナデカノイル]ピペリジン-４-カルボニルアミノ]-４-カルボキシブチリルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル]アミド；
Ｎ-ε２０({２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１７-カルボキシヘプタデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ａｒｇ２６，２-ナフチルアラニン１２、Ｇｌｕ３０，]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-４-[１-[１９-カルボキシノナデカノイル]ピペリジン-４-カルボニルアミノ]-４-カルボキシブチリルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル]アミド；
Ｎ-イプシロン３１-(２-{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシ-ノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３１，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-{４-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]ブチリル}[Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)-アミド；
Ｎ-イプシロン１８-{２-(２-(２-(２-[２-(２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブタノイルアミノ]エトキシ)エトキシ]アセチル)エトキシ)エトキシ)アセチル}[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ１８，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１(７-３７)；
Ｎ-ε２０-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-４-[トランス-４-([１９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]-４-カルボキシブタノイルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ１，Ｌｙｓ２０，Ｓｅｒ(Ｏ-ベンジル)３３，Ｓｅｒ(Ｏ-ベンジル)３９]エキセンディン(１-３９)；
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-３-[４-([１９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]-３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル]アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({４-[(トランス-１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-{２-[２-(２-{２-[４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]−アミド；
[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[トランス-４-((９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル]アミド；
Ｎ-イプシロン２６[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２６]ＧＬＰ-１(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン２６[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-２-[トランス-４-((９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]-４-カルボキシブタノイルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２６]ＧＬＰ-１(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{４-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)-ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]-ブチリルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{６-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ヘキサノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{４-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ブチリルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３４)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]-ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３４)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{６-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ヘキサノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３４)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３５)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{６-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ヘキサノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３５)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{６-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ヘキサノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３６)アミド；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{６-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ヘキサノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３５)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｌｙｓ３３，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３４)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３６)アミド；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３６)アミド；
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}-ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]アミド；
Ｎ-イプシロン２０-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｐｒｏ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｐｒｏ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-{２-[４-カルボキシ-４-(４-カルボキシ-４-{４-[４-(１６-１Ｈ-テトラゾール-５-イル-ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ブチリルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]；
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｐｒｏ３７]ＧＬＰ-１-((７-３７)Ｌｙｓ(２-(２-(３-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-[４-(Ｓ)-カルボキシ-４-(４-(Ｓ)-カルボキシ-４-(４-{４-[１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル]ブタノイルアミノ}ブタノイルアミノ)ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]；
エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)プロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ)ペプチド；
Ｎ-アルファ３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，イプシロン-Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-アルファ８-[２-(４-イミダゾリル)アセチル]Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(８-３７)；
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，３４]-ＧＬＰ-１(７-３７)-Ｌｙｓ-(２-{２-[２-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}ブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)ペプチド；
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，３４]-ＧＬＰ-１(７-３７)-Ｌｙｓ-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[４-カルボキシ-４-({４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]ペプチド；
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，３４]-ＧＬＰ-１(７-３７)-Ｌｙｓ((Ｓ)-４-カルボキシ-４-(２-{２-[２-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}ブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)ブチリル)ペプチド；
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，３４]-ＧＬＰ-１(７-３７)-Ｌｙｓ-(２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-(２-{２-[２-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}ブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル)ペプチド；
[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，３４]-ＧＬＰ-１(７-３７)-Ｌｙｓ(２-{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}ブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)ペプチド；
Ｎ-イプシロン３７-(２-{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}ブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン３７-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシ-ノナデカノイル)-ピペリジン-４-カルボニル]-アミノ}-ブチリル)[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，３４]-ＧＬＰ-１(７-３７)-Ｌｙｓ-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシ-ノナデカノイル)-ピペリジン-４-カルボニル]-アミノ}-ブチリル)ペプチド；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｒ)-４-カルボキシ-４-((Ｒ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-１Ｈ-テトラゾール-５-イル-ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]-[Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１(７-３７)；
Ｎ-イプシロン３７-{２-[２-(２-{(Ｓ)-４-[(Ｓ)-４-(１２-{４-[１６-(２-tert-ブチル-２Ｈ-テトラゾール-５-イル)-ヘキサデカノイルスルファモイル]ブチリルアミノ}ドデカノイルアミノ)-４-カルボキシブチリルアミノ]-４-カルボキシブチリルアミノ}エトキシ)エトキシ]アセチル}[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１(７-３７)；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
[ＩｍＰｒ７，Ａｒｇ２６，３４，Ｇｌｕ２２]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-[２-((Ｓ)-４-((Ｓ)-４-(１２-[４-(１６-１Ｈ-テトラゾール-５-イルヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ)-４-カルボキシブチリルアミノ)-４-カルボキシブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル]-アミド；
Ｎ-イプシロン３６-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[トランス-４-((９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２，Ｇｌｎ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[トランス-４-((９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２，Ｇｌｎ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン１８-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[トランス-４-((９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，２２，３５、Ｌｙｓ１８，Ａｒｇ２６，３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；及び
Ｎ-イプシロン１８-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[トランス-４-((９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｌｙｓ１８，Ｇｌｕ２２，Ｇｌｎ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
から選択されるＧＬＰ-１誘導体。
【０１３４】
本発明のさらなる実施態様
１．少なくとも一のアミノ酸残基がＡ-Ｂ-Ｃ-Ｄ-で誘導体化されているペプチドを含有するペプチド誘導体であって、
Ａ-が：
0005606314.tif 000014
[上式中、ｐは１０、１１、１２、１３及び１４からなる群から選択され、ｄは０、１、２、３、４及び５からなる群から選択される]
であり、
-Ｂ-が：
0005606314.tif 000015
[上式中、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択され、ｙは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２からなる群から選択される]
からなる群から選択され、
又はＡが：
0005606314.tif 000016
[上式中、ｎは１４、１５、１６、１７、１８及び１９からなる群から選択される]
であり、
Ｂが：
0005606314.tif 000017
[上式中、ｘは０、１、２、３及び４からなる群から選択される]
からなる群から選択され、
-Ｃ-が：
0005606314.tif 000018
[上式中、ｂ及びｅはそれぞれ独立して、０、１及び２からなる群から選択され、ｃ及びｆはそれぞれ独立して、０、１及び２からなる群から選択され、但し、ｃが０の場合、ｂは１又は２であり、又はｃが１又は２である場合、ｂは０であり、ｆが０である場合、ｅは１又は２であり、又はｆが１又は２である場合、ｅは０である]
からなる群から選択され、
-Ｄ-が前記アミノ酸残基に結合しており、リンカーである誘導体。
【０１３５】
２．前記ペプチドが、ＧＬＰ-１(７-３７)及びＧＬＰ-１(７-３７)のアナログから選択されるＧＬＰ-１ペプチドであり、該ペプチドの少なくとも一のアミノ酸残基がＡ-Ｂ-Ｃ-Ｄ-で誘導体化されている、実施態様１の誘導体。
３．誘導体化されたアミノ酸残基がアミノ基を有する、実施態様１-２のいずれか一つの誘導体。
４．誘導体化されたアミノ酸残基が、側鎖に第１級アミノ基を有している、実施態様１-３のいずれか一つの誘導体。
５．誘導体化されたアミノ酸残基がリジンである、実施態様１-４のいずれか一つの誘導体。
６．唯一のアミノ酸残基が誘導体化されている、実施態様１-５のいずれか一つの誘導体。
【０１３６】
７．Ａ-が
0005606314.tif 000019
である、実施態様１-６のいずれか一つの誘導体。
８．ｎが１５及び１７からなる群から選択され、好ましくは１７である、実施態様１-７のいずれかの誘導体。
【０１３７】
９．Ａ-が
0005606314.tif 000020
である、実施態様１-６のいずれか一つの誘導体。
１０．ｐが１２、１３及び１４からなる群から選択され、好ましくは１３である、実施態様１-６及び９のいずれかの誘導体。
【０１３８】
１１．ｄが０、１、２、３及び４、好ましくは０、１及び２からなる群から選択され、最も好ましくは１である、実施態様１-６及び９-１０のいずれかの誘導体。
１２．ｄが０、１及び２からなる群から選択され、ｐが１２、１３又は１４からなる群から選択され、好ましくはｄが１及び２からなる群から選択され、ｐが１３及び１４からなる群から選択され、最も好ましくはｄが１であり、ｐが１３である、実施態様１-６及び９-１１のいずれかのＧＬＰ-１誘導体。
【０１３９】
１３．-Ｂ-が
0005606314.tif 000021
である、実施態様１-１２のいずれかの誘導体。
１４．-Ｂ-が
0005606314.tif 000022
である、実施態様１-１２のいずれかの誘導体。
１５．-Ｂ-が
0005606314.tif 000023
である、実施態様１-１２のいずれかの誘導体。
１６．-Ｂ-が
0005606314.tif 000024
である、実施態様１-１２のいずれかの誘導体。
【０１４０】
１７．ｘが０、１及び２からなる群から選択され、好ましくはｘが０及び１からなる群から選択され、最も好ましくはｘが０又は１、好ましくは０である、実施態様１-１２及び１６のいずれかの誘導体。
１８．-Ｂ-が
0005606314.tif 000025
である、実施態様１-６及び９-１２のいずれかの誘導体。
１９．ｙが２、３、４、５、６、７、８、９及び１０からなる群から選択され、好ましくはｙが２、３、４、５、６、７及び８からなる群から選択される、実施態様１-６及び９-１３のいずれかの誘導体。
【０１４１】
２０．-Ｃ-が
0005606314.tif 000026
である、実施態様１-１９のいずれかの誘導体。
２１．ｃが０及び１からなる群から選択され、ｂが１及び２からなる群から選択され、好ましくはｂが１であり；ｃが０である、実施態様２０の誘導体。
【０１４２】
２２．-Ｃ-が
0005606314.tif 000027
である、実施態様１-１９のいずれかの誘導体。
２３．ｆが０及び１からなる群から選択され、ｅが１及び２からなる群から選択され、好ましくはｅが１であり、ｆが０である、実施態様２２の誘導体。
２４．-Ｃ-が
0005606314.tif 000028
である、実施態様１-１９のいずれかの誘導体。
【０１４３】
２５．Ｄが
0005606314.tif 000029
[上式中、ｋは０、１、２、３、４、５、１１及び２７からなる群から選択され、ｍは０、１、２、３、４、５及び６からなる群から選択される]
からなる群から選択され、Ｄが＊で表された末端でアミノ酸残基に結合している、実施態様１-２４のいずれかの誘導体。
２６．-Ｄ-が
0005606314.tif 000030
である、実施態様１-２５のいずれかの誘導体。
２７．ｋが１、２、３、１１及び２７からなる群から選択され、好ましくはｋが１である、実施態様２５-２６のいずれかの誘導体。
２８．ｍが０、１、２、３及び４からなる群から選択され、好ましくはｍが０、１及び２からなる群から選択される、実施態様２５-２７のいずれかの誘導体。
２９．ｍが０、１、２、３及び４からなる群から選択され、好ましくはｍが０、１及び２からなる群から選択される、実施態様２９の誘導体。
【０１４４】
３０．-Ｄ-が
0005606314.tif 000031
である、実施態様１-２５のいずれかの誘導体。
３１．ｍが０、１、２、３及び４からなる群から選択され、好ましくはｍが０、１及び２からなる群から選択される、実施態様３１の誘導体。
３２．-Ｄ-が
0005606314.tif 000032
である、実施態様１-２５のいずれかの誘導体。
３３．ｍが０、１、２、３及び４からなる群から選択され、好ましくはｍが０、１及び２からなる群から選択される、実施態様３３の誘導体。
【０１４５】
３４．-Ｄ-が
0005606314.tif 000033
である、実施態様１-２５のいずれかの誘導体。
３５．ｍが０、１、２、３及び４からなる群から選択され、好ましくはｍが０、１及び２からなる群から選択される、実施態様３５の誘導体。
３６．-Ｄ-が
0005606314.tif 000034
である、実施態様１-２５のいずれかの誘導体。
３７．ｍが０、１、２、３及び４からなる群から選択され、好ましくはｍが０、１及び２からなる群から選択される、実施態様３７の誘導体。
【０１４６】
３８．Ａ-Ｂ-Ｃ-Ｄ-が
0005606314.tif 000035
0005606314.tif 000036
0005606314.tif 000037
から選択され、組合せられる、実施態様１-３８のいずれかの誘導体。
【０１４７】
３９．Ａ-Ｂ-Ｃ-Ｄ-が
0005606314.tif 000038
0005606314.tif 000039
0005606314.tif 000040
から選択され、組合せられる、実施態様１-３８のいずれかの誘導体。
【０１４８】
４０．Ａ-Ｂ-Ｃ-Ｄ-が
0005606314.tif 000041
0005606314.tif 000042
からなる群から選択される、実施態様１-４０のいずれかの誘導体。
【０１４９】
４１．前記ＧＬＰ-１アナログが、次の式(Ｉ)：
Ｘａａ７-Ｘａａ８-Ｇｌｕ-Ｇｌｙ-Ｔｈｒ-Ｐｈｅ-Ｔｈｒ-Ｓｅｒ-Ａｓｐ-Ｘａａ１６-Ｓｅｒ-Ｘａａ１８-Ｘａａ１９-Ｘａａ２０-Ｇｌｕ-Ｘａａ２２-Ｘａａ２３-Ａｌａ-Ｘａａ２５-Ｘａａ２６-Ｘａａ２７-Ｐｈｅ-Ｉｌｅ-Ｘａａ３０-Ｔｒｐ-Ｌｅｕ-Ｘａａ３３-Ｘａａ３４-Ｘａａ３５-Ｘａａ３６-Ｘａａ３７-Ｘａａ３８-Ｘａａ３９-Ｘａａ４０-Ｘａａ４１-Ｘａａ４２-Ｘａａ４３-Ｘａａ４４-Ｘａａ４５-Ｘａａ４６      式(Ｉ)(配列番号：２)
[上式中、
Ｘａａ７は、Ｌ-ヒスチジン、Ｄ-ヒスチジン、デスアミノ-ヒスチジン、２-アミノ-ヒスチジン、β-ヒドロキシ-ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα-アセチル-ヒスチジン、α-フルオロメチル-ヒスチジン、α-メチル-ヒスチジン、３-ピリジルアラニン、２-ピリジルアラニン、又は４-ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、(１-アミノシクロプロピル)カルボン酸、(１-アミノシクロブチル)カルボン酸、(１-アミノシクロペンチル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘプチル)カルボン酸、又は(１-アミノシクロオクチル)カルボン酸であり；
Ｘａａ１６は、Ｖａｌ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ１９は、Ｔｙｒ又はＧｌｎであり；
Ｘａａ２０は、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、又はＬｙｓであり；
Ｘａａ２２は、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ２３は、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２５は、Ａｌａ又はＶａｌであり；
Ｘａａ２６は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２７は、Ｇｌｕ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３３は、Ｖａｌ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ、Ｇｌｙ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３８は、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３９は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４０は、Ｇｌｙ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４１は、Ａｌａ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４２は、Ｐｒｏ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４３は、Ｐｒｏ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４４は、Ｐｒｏ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４５は、Ｓｅｒ、アミドであるか、又は存在せず；
Ｘａａ４６は、アミドであるか、又は存在せず；
但し、Ｘａａ３８、Ｘａａ３９、Ｘａａ４０、Ｘａａ４１、Ｘａａ４２、Ｘａａ４３、Ｘａａ４４、Ｘａａ４５又はＸａａ４６が存在しないならば、各アミノ酸残基の下流も存在しない]
のアミノ酸配列を有する、上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
【０１５０】
４２．前記ＧＬＰ-１アナログが、次の式(ＩＩ)：
Ｘａａ７-Ｘａａ８-Ｇｌｕ-Ｇｌｙ-Ｔｈｒ-Ｐｈｅ-Ｔｈｒ-Ｓｅｒ-Ａｓｐ-Ｖａｌ-Ｓｅｒ-Ｘａａ１８-Ｔｙｒ-Ｌｅｕ-Ｇｌｕ-Ｘａａ２２-Ｘａａ２３-Ａｌａ-Ａｌａ-Ｘａａ２６-Ｇｌｕ-Ｐｈｅ-Ｉｌｅ-Ｘａａ３０-Ｔｒｐ-Ｌｅｕ-Ｖａｌ-Ｘａａ３４-Ｘａａ３５-Ｘａａ３６-Ｘａａ３７-Ｘａａ３８            式(ＩＩ)(配列番号：３)
[上式中、
Ｘａａ７は、Ｌ-ヒスチジン、Ｄ-ヒスチジン、デスアミノ-ヒスチジン、２-アミノ-ヒスチジン、β-ヒドロキシ-ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα-アセチル-ヒスチジン、α-フルオロメチル-ヒスチジン、α-メチル-ヒスチジン、３-ピリジルアラニン、２-ピリジルアラニン、又は４-ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、(１-アミノシクロプロピル)カルボン酸、(１-アミノシクロブチル)カルボン酸、(１-アミノシクロペンチル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘプチル)カルボン酸、又は(１-アミノシクロオクチル)カルボン酸であり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２２は、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ２３は、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２６は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｕ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３８は、Ｌｙｓ、アミドであるか、又は存在しない]
のアミノ酸配列を有する、上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
【０１５１】
４３．前記ＧＬＰ-１ペプチドがＧＬＰ-１(Ａ-Ｂ)であり、Ａが１〜７の整数であり、Ｂが３８から４５の整数であり、場合によっては一又は複数の置換を有するものであり、またＧＬＰ-１ペプチドが、Ｃ末端アミノ酸残基に、親水性のスペーサーを介して誘導体しており、場合によっては他のアミノ酸残基の一つで誘導体化されている、上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
４４．ＧＬＰ-１ペプチドが、ＧＬＰ-１(７-３５)、ＧＬＰ-１(７-３６)、ＧＬＰ-１(７-３６)-アミド、ＧＬＰ-１(７-３７)、ＧＬＰ-１(７-３８)、ＧＬＰ-１(７-３９)、ＧＬＰ-１(７-４０)、及びＧＬＰ-１(７-４１)から選択され、場合によっては一又は複数の置換を有している、上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
【０１５２】
４５．ＧＬＰ-１(７-３７)(配列番号：１)の誘導体である、実施態様１-４５のいずれかの誘導体。
４６．ＧＬＰ-１(７-３７)(配列番号：１)のアナログの誘導体である、実施態様１-４５のいずれかの誘導体。
４７．前記ＧＬＰ-１アナログが、ＧＬＰ-１(７-３７)(配列番号：１)に対して、置換、付加又は欠失しているアミノ酸残基を、１５を越えて有していない、実施態様４７の誘導体。
４８．前記ＧＬＰ-１アナログが、ＧＬＰ-１(７-３７)(配列番号：１)に対して、置換、付加又は欠失しているアミノ酸残基を、１０を越えて有していない、実施態様４７の誘導体。
４９．前記ＧＬＰ-１アナログが、ＧＬＰ-１(７-３７)(配列番号：１)に対して、置換、付加又は欠失しているアミノ酸残基を、６を越えて有していない、実施態様４７の誘導体。
【０１５３】
５０．前記ＧＬＰ-１アナログが、ＧＬＰ-１(７-３７)(配列番号：１)に対して、置換、付加又は欠失しているアミノ酸残基を、４を越えて有していない、実施態様４７の誘導体。
５１．前記ＧＬＰ-１アナログが、遺伝暗号によりコードされないアミノ酸残基を、４を越えて有していない、実施態様５１の誘導体。
５２．前記ＧＬＰ-１アナログが、ＧＬＰ-１(７-３７)(配列番号：１)に対して、置換、付加又は欠失しているアミノ酸残基を、３を越えて有していない、実施態様４７の誘導体。
５３．前記ＧＬＰ-１アナログが、遺伝暗号によりコードされないアミノ酸残基を、３を越えて有していない、実施態様５３の誘導体。
【０１５４】
５４．前記ＧＬＰ-１ペプチドが、誘導体化されている唯一のリジン残基を有する、上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
５５．前記ＧＬＰ-１ペプチドが、ＤＰＰＩＶ保護されたＧＬＰ-１ペプチドである、上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
５６．前記ＧＬＰ-１ペプチドがＤＰＰＩＶ安定化されている、上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
【０１５５】
５７．前記ｇ１でＲＧα、８位にＡｉｂ残基を有する、上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
５８．前記ＧＬＰ-１ペプチドの７位にあるアミノ酸残基が、Ｄ-ヒスチジン、デスアミノ-ヒスチジン、２-アミノ-ヒスチジン、β-ヒドロキシ-ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα-アセチル-ヒスチジン、α-フルオロメチル-ヒスチジン、α-メチル-ヒスチジン、３-ピリジルアラニン、２-ピリジルアラニン、及び４-ピリジルアラニンからなる群から選択される、上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
５９．前記ＧＬＰ-１ペプチドが、
Ａｒｇ３４ＧＬＰ-１(７-３７)、Ｌｙｓ３８Ａｒｇ２６，３４ＧＬＰ-１(７-３８)、Ｌｙｓ３８Ａｒｇ２６，３４ＧＬＰ-１(７-３８)-ＯＨ、Ｌｙｓ３６Ａｒｇ２６，３４ＧＬＰ-１(７-３６)、Ａｉｂ８，２２，３５  ＧＬＰ-１(７-３７)、Ａｉｂ８，３５  ＧＬＰ-１(７-３７)、Ａｉｂ８，２２  ＧＬＰ-１(７-３７)、Ａｉｂ８，２２，３５  Ａｒｇ２６，３４Ｌｙｓ３８ＧＬＰ-１(７-３８)、Ａｉｂ８，３５  Ａｒｇ２６，３４Ｌｙｓ３８ＧＬＰ-１(７-３８)、Ａｉｂ８，２２  Ａｒｇ２６，３４Ｌｙｓ３８ＧＬＰ-１(７-３８)、Ａｉｂ８，２２，３５  Ａｒｇ２６，３４Ｌｙｓ３８ＧＬＰ-１(７-３８)、Ａｉｂ８，３５  Ａｒｇ２６，３４Ｌｙｓ３８ＧＬＰ-１(７-３８)、Ａｉｂ８，２２，３５  Ａｒｇ２６Ｌｙｓ３８ＧＬＰ-１(７-３８)、Ａｉｂ８，３５  Ａｒｇ２６Ｌｙｓ３８ＧＬＰ-１(７-３８)、Ａｉｂ８，２２  Ａｒｇ２６Ｌｙｓ３８ＧＬＰ-１(７-３８)、Ａｉｂ８，２２，３５  Ａｒｇ３４Ｌｙｓ３８ＧＬＰ-１(７-３８)、Ａｉｂ８，３５Ａｒｇ３４Ｌｙｓ３８ＧＬＰ-１(７-３８)、Ａｉｂ８，２２Ａｒｇ３４Ｌｙｓ３８ＧＬＰ-１(７-３８)、Ａｉｂ８，２２，３５Ａｌａ３７Ｌｙｓ３８ＧＬＰ-１(７-３８)、Ａｉｂ８，３５Ａｌａ３７Ｌｙｓ３８ＧＬＰ-１(７-３８)、Ａｉｂ８，２２Ａｌａ３７Ｌｙｓ３８ＧＬＰ-１(７-３８)、Ａｉｂ８，２２，３５  Ｌｙｓ３７ＧＬＰ-１(７-３７)、Ａｉｂ８，３５Ｌｙｓ３７ＧＬＰ-１(７-３７)、及びＡｉｂ８，２２Ｌｙｓ３７ＧＬＰ-１(７-３８)
からなる群から選択される、上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
【０１５６】
６０．前記ＧＬＰ-１ペプチドがエキセンディン-４(配列番号：４)である、上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
６１．前記ＧＬＰ-１ペプチドがＺＰ-１０、すなわちＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＳＫＫＫＫＫＫ-アミド(配列番号：５)である、上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
６２．前記ＧＬＰ-１ペプチドが、ＸがＰ又はＹであるＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＸ、又はそのフラグメントもしくはアナログである、上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
６３．４前記ＧＬＰ-１誘導体が、Ａｒｇ１８，Ｌｅｕ２０，Ｇｌｎ３４，Ｌｙｓ３３(Ｎε-(γ-アミノブチロイル(Ｎα-ヘキサデカノイル)))エキセンディン-４-(７-４５)-アミド又はＡｒｇ３３，Ｌｅｕ２０，Ｇｌｎ３４，Ｌｙｓ１８(Ｎε-(γ-アミノブチロイル(Ｎα-ヘキサデカノイル)))エキセンディン-４-(７-４５)-アミドである、上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
【０１５７】
６４．前記ＧＬＰ-１アナログが、次の式(ＩＩＩ)：
Ｘａａ７-Ｘａａ８-Ｘａａ９-Ｇｌｙ-Ｔｈｒ-Ｐｈｅ-Ｔｈｒ-Ｓｅｒ-Ａｓｐ-Ｘａａ１６-Ｓｅｒ-Ｘａａ１８-Ｔｙｒ-Ｌｅｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｘａａ２３-Ａｌａ-Ｘａａ２５-Ａｒｇ-Ｘａａ２７-Ｐｈｅ-Ｉｌｅ-Ｘａａ３０-Ｔｒｐ-Ｌｅｕ-Ｘａａ３３-Ｘａａ３４-Ｘａａ３５-Ｘａａ３６-Ｘａａ３７-Ｘａａ３８-Ｘａａ３９      式(ＩＩＩ)(配列番号：６)
[上式中、
Ｘａａ７-Ｘａａ８は、Ｌ-ヒスチジン-Ａｉｂ、デスアミノ-ヒスチジン-アラニン又はデスアミノ-ヒスチジン-Ａｉｂであり；
Ｘａａ９は、Ｇｌｕ又はＧｌｕ誘導体、例えばアルファ，アルファ ジメチル-Ｇｌｕであり；
Ｘａａ１６は、Ｖａｌ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ１９は、Ｔｙｒ又はＧｌｎであり；
Ｘａａ２３は、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ２５は、Ａｌａ又はＶａｌであり；
Ｘａａ２７は、Ｇｌｕ又はＬｅｕであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３３は、Ｖａｌ、又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｉｂであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３８は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３９は、アミドであるか、又は存在せず；
但し、Ｘａａ３７が存在しない場合は、Ｘａａ３８も存在しない]
のアミノ酸配列を有し、１８、２３、３４、３６、３７又は３８位で誘導体化されている、
上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
【０１５８】
６５．ＧＬＰ-１アナログが、次の式(ＩＶ)：
Ｘａａ７-Ｘａａ８-Ｇｌｕ-Ｇｌｙ-Ｔｈｒ-Ｐｈｅ-Ｔｈｒ-Ｓｅｒ-Ａｓｐ-Ｖａｌ-Ｓｅｒ-Ｘａａ１８-Ｔｙｒ-Ｌｅｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｎ-Ａｌａ-Ａｌａ-Ａｒｇ-Ｇｌｕ-Ｐｈｅ-Ｉｌｅ-Ｘａａ３０-Ｔｒｐ-Ｌｅｕ-Ｘａａ３３-Ｘａａ３４-Ｘａａ３５-Ｘａａ３６-Ｘａａ３７-Ｘａａ３８-Ｘａａ３９      式(ＩＶ)(配列番号：７)
[上式中、
Ｘａａ７は、Ｌ-ヒスチジン、Ｄ-ヒスチジン、デスアミノ-ヒスチジン、２-アミノ-ヒスチジン、β-ヒドロキシ-ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα-アセチル-ヒスチジン、α-フルオロメチル-ヒスチジン、α-メチル-ヒスチジン、３-ピリジルアラニン、２-ピリジルアラニン又は４-ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、(１-アミノシクロプロピル)カルボン酸、(１-アミノシクロブチル)カルボン酸、(１-アミノシクロペンチル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(１-アミノシクロヘプチル)カルボン酸、又は(１-アミノシクロオクチル)カルボン酸であり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇであり；
Ｘａａ３３は、Ｖａｌ、又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、又はＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、Ｇｌｙ又はＡｉｂであり；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり；
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｉｂであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３８は、Ｌｙｓであるか、又は存在せず；
Ｘａａ３９は、アミドであるか、又は存在しない]
のアミノ酸配列を有し、１８、２３、３４、３６、３７又は３８にて、アルブミン結合残基で誘導体化されている、上述した実施態様のいずれか一つの誘導体。
６６．Ｘａａ３８が存在しない、上述した実施態様６５-６６のいずれか一つの誘導体。
６７．Ｘａａ３７及びＸａａ３８ が双方とも存在しない、上述した実施態様６５-６７のいずれか一つの誘導体。
【０１５９】
６８．ＧＬＰ-１(７-３７)に対して２つのアミノ酸が置換されている、上述した実施態様６５-６８のいずれか一つの誘導体。
６９．ＧＬＰ-１(７-３７)に対して３つのアミノ酸が置換されている、上述した実施態様６５-６８のいずれか一つの誘導体。
７０．ＧＬＰ-１(７-３７)に対して４つのアミノ酸が置換されている、上述した実施態様６５-６８のいずれか一つの誘導体。
７１．ＧＬＰ-１(７-３７)に対して５つのアミノ酸が置換されている、上述した実施態様６５-６８のいずれか一つの誘導体。
７２．ＧＬＰ-１(７-３７)に対して６つのアミノ酸が置換されている、上述した実施態様６５-６８のいずれか一つの誘導体。
【０１６０】
７３．Ｘａａ７がデスアミノ-ヒスチジンである、上述した実施態様６５-７３のいずれか一つの誘導体。
７４．Ｘａａ８がＡｉｂである、上述した実施態様６５-７４のいずれか一つの誘導体。
【０１６１】
７５．Ｎ-イプシロン３７{２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン２０-{２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[Ａｉｂ２，Ｌｅｕ１４，Ｌｙｓ２０，Ｇｌｎ２８，Ｓｅｒ(Ｏ-ベンジル)３９]エキセンディン-４(１-３９)アミド：
Ｎ-イプシロン２６{２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン３７{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン２３-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[１-(１７-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ピペリジン-４-イルカルボニルアミノ]-３-(カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[１-(１７-カルボキシヘプタデカノイル)ピペリジン-４-イルカルボニルアミノ]３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７,Ｇｌｕ２２  Ａｒｇ２６,  Ａｒｇ３４，Ｐｈｅ(ｍ-ＣＦ３)２８]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)-Ｌｙｓ(２-{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}ブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)；
Ｎ-イプシロン２０({２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１７-カルボキシヘプタデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｔｈｒ(Ｏ-ベンジル)３３，]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３０{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３０]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン３１{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３１]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２０({２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１７-カルボキシヘプタデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ａｒｇ２６，２-ナフチルアラニン２８、Ｇｌｕ３０，]ＧＬＰ-１(７-３７)アミド；
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-４-[１-[１９-カルボキシノナデカノイル]ピペリジン-４-カルボニルアミノ]-４-カルボキシブチリルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル]アミド；
Ｎ-イプシロン２０({２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１７-カルボキシヘプタデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ａｒｇ２６，２-ナフチルアラニン１２，Ｇｌｕ３０，]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-４-[１-[１９-カルボキシノナデカノイル]ピペリジン-４-カルボニルアミノ]-４-カルボキシブチリルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル]アミド；
Ｎ-イプシロン３１-(２-{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシ-ノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３１，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-{４-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]ブチリル}[Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)-アミド；
Ｎ-イプシロン１８-{２-(２-(２-(２-[２-(２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブタノイルアミノ]エトキシ)エトキシ]アセチル)エトキシ)エトキシ)アセチル}[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ１８，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２０-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-４-[トランス-４-([１９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]-４-カルボキシブタノイルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ１，Ｌｙｓ２０，Ｓｅｒ(Ｏ-ベンジル)３３，Ｓｅｒ(Ｏ-ベンジル)３９]エキセンディン(１-３９)；
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-３-[４-([１９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]-３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル]アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({４-[(トランス-１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-{２-[２-(２-{２-[４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]-アミド；
[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[トランス-４-((９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル]アミド；
Ｎ-イプシロン２６[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２６]ＧＬＰ-１(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン２６[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-２-[トランス-４-((９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]-４-カルボキシブタノイルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２６]ＧＬＰ-１(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{４-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)-ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]-ブチリルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{６-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ヘキサノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{４-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ブチリルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３４)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]-ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３４)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{６-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ヘキサノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３４)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３５)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{６-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ヘキサノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３５)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{６-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ヘキサノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３６)アミド；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{６-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ヘキサノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３５)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｌｙｓ３３，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３４)；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３６)アミド；
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３６)アミド；
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}-ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]アミド；
Ｎ-イプシロン２０-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｐｒｏ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
Ｎ-イプシロン３７-[[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド；
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｐｒｏ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-{２-[４-カルボキシ-４-(４-カルボキシ-４-{４-[４-(１６-１Ｈ-テトラゾール-５-イル-ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ブチリルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]；及び
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｐｒｏ３７]ＧＬＰ-１-((７-３７)Ｌｙｓ(２-(２-(３-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-[４-(Ｓ)-カルボキシ-４-(４-(Ｓ)-カルボキシ-４-(４-{４-[１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル]ブタノイルアミノ}ブタノイルアミノ)ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]
エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)プロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ)ペプチド
からなる群から選択される、上述した実施態様のいずれかの誘導体。
【０１６２】
７６．ＧＬＰ-１ペプチドの患者における作用時間を長くする方法であって、ＧＬＰ-１(７-３７)ペプチド又はそのアナログが、上述した実施態様のいずれかに開示のＡ-Ｂ-Ｃ-Ｄ-で誘導体化されていることを特徴とする方法。
７７．ＧＬＰ-１ペプチドの患者における作用時間を約４０時間以上に長くする方法であって、ＧＬＰ-１(７-３７)ペプチド又はそのアナログが、上述した実施態様のいずれかに開示のＡ-Ｂ-Ｃ-Ｄ-で誘導体化されていることを特徴とする方法。
【０１６３】
７８．実施態様１-７６のいずれか一つの誘導体と、薬学的に許容可能な賦形剤を含有する薬学的組成物。
７９．非経口投与に適している、実施態様１-７６の薬学的組成物。
【０１６４】
８０．薬剤を調製するための、実施態様１-７６のいずれか一つの誘導体の使用。
８１．高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、肥満症、高血圧症、Ｘ症候群、脂質代謝異常、認知障害、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、冠動脈心疾患及び他の心血管障害、脳卒中、炎症性腸症候群、胃腸障害、及び胃潰瘍を治療又は予防する薬剤を調製するための、実施態様１-７６のいずれか一つの誘導体の使用。
８２．２型糖尿病の病気の進行を遅延化又は防止する薬剤を調製するための、実施態様１-７６のいずれか一つの誘導体の使用。
８３．食物の取込を低減させ、β-細胞アポトーシスを低減させ、β-細胞機能及びβ-細胞質量を増大させ、及び／又はβ-細胞に対するグルコース感度を回復させる薬剤を調製するための、実施態様１-７６のいずれか一つの誘導体の使用。
【０１６５】
８４．高血糖症、２型糖尿病、耐糖能障害、１型糖尿病、肥満症、高血圧症、Ｘ症候群、脂質代謝異常、認知障害、アテローム性動脈硬化、心筋梗塞、冠動脈心疾患及び他の心血管障害、脳卒中、炎症性腸症候群、胃腸障害、及び胃潰瘍の治療又は予防に使用される、実施態様１-７６のいずれか一つの誘導体。
【０１６６】
ここに引用された刊行物、特許出願及び特許を含む全ての文献は、各文献が、出典明示により個々にかつ特に援用され、その全内容がここに記載されているかの如く、出典明示によりここに援用される。
全ての表題及び副題は、ここでは便宜的にのみ使用されており、いかなる方法であっても、本発明を限定するものとは解釈すべきでない。
その全ての可能性のある変形例における、上述した要素の任意の組合せは、他に示されず、又は文脈においてはっきりと矛盾していない限りは、本発明に含まれる。
【０１６７】
本発明で記載されて使用されている「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び類似指示対象なる用語は、ここで他に示されず、又は文脈においてはっきりと矛盾していない限りは、単数形及び複数形の双方をカバーすると解釈される。
ここで他に示されない限りは、ここでの値の範囲の記述は、単に、範囲内に入るそれぞれ別個の値を個々に称する省略方法として提供することを意図しているものであって、ここで個々に列挙されているかのように、それぞれの別個の値が明細書に導入される。特に示さない限り、ここで提供される全ての正確な値は、対応する近似値の代表例である(例えば、特定の要因又は測定値に関して提供される全ての正確な例示的値は、適切な場合は、「約」により修飾される、対応する近似測定値を提供するとみなすことができる)。
ここに記載されている全ての方法は、ここで他に示されず、又は文脈においてはっきりと矛盾していない限りは、任意の適切な順番で実施することができる。
ここに提供される任意かつ全ての実施例、又は例示的言語（例えば、「等」）の使用は、単に本発明をより例証することを意図しており、他に示されない限り、本発明の範囲に限定をもたらすものではない。明確に記載していない限りは、明細書中の如何なる語句も、任意の要素が本発明の実施に必須であることを示しているものと解すべきではない。
【０１６８】
ここでの特許文献の引用及び援用は単に便宜上なされているもので、そのような特許文献の作用強度、特許性、及び／又は権利行使性についての見解を反映させるものではない。
特に明記せず、文脈においてはっきりと矛盾していない限りは、成分又は成分類に関して、「含有する」、「有する」、「含む」又は「含める」等の用語を使用する、本発明の任意の側面又は実施態様のここでの記載は、特定の成分又は成分類「からなる」、「本質的になる」、又は「実質的に含有する」といった本発明の類似した側面又は実施態様を支持することを意図したものである(例えば、特定の成分を含有するここに記載の製剤は、特に明記しない又は文脈においてはっきりと矛盾していない限りは、その成分からなる製剤を記載すると理解されるべきである)。
この発明は、適用される法律に容認される最大範囲まで、ここに提供される態様又は請求項に列挙された主題事項の全ての修正点及び等価物を含む。
【０１６９】
本発明を以下の代表的方法及び実施例によりさらに例証するが、何らの方法によっても、本発明の範囲を限定することを意図したものではない。
上述の記載及び以下の実施例に開示されている特徴は、双方とも別個に、またその任意の組合せにおいて、様々な形態で本発明を実践するための構成要素でありうる。
【実施例】
【０１７０】
使用した略語：
ｒ.ｔ：     室温
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
Ｈ２Ｏ：     水
ＣＨ３ＣＮ： アセトニトリル
ＤＭＦ：    ＮＮジメチルホルムアミド
ＨＢＴＵ：  ２-(１Ｈ-ベンゾトリアゾール-１-イル-)-１,１,３,３-テトラメチルウロ              ニウムヘキサフルオロホスファート
Ｆｍｏｃ：  ９Ｈ-フルオレン-９-イルメトキシカルボニル
Ｂｏｃ：    tert-ブチルオキシカルボニル
ＯｔＢｕ：  tert-ブチルエステル
ｔＢｕ：    tert-ブチル
Ｔｒｔ：    トリフェニルメチル
Ｐｍｃ：    ２,２,５,７,８-ペンタメチル-クロマン-６-スルホニル
Ｄｄｅ：    １-(４,４-ジメチル-２,６-ジオキソシクロヘキシリデン)エチル
ｉｖＤｄｅ：１-(４,４-ジメチル-２,６-ジオキソシクロヘキシリデン)-３-メチルブチル
Ｍｔｔ：    ４-メチルトリトル
Ｍｍｔ：    ４-メトキシトリチル
ＤＣＭ：    ジクロロメタン
ＴＩＳ：    トリイソプロピルシラン)
ＴＦＡ：    トリフルオロ酢酸
Ｅｔ２Ｏ：   ジエチルエーテル
ＮＭＰ：    １-メチル-ピロリジン-２-オン
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＨＯＡｔ：  １-ヒドロキシ-７-アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ：  １-ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＤＩＣ：    ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＢＵ：    １,８-ジアザビシクリ[５,４,０]ウンデセン-７
ＭＷ：     分子量
【０１７１】
Ａ：樹脂結合ペプチドの合成
ＳＰＰＳ法Ａ
保護されたペプチジル樹脂を、Ｆｍｏｃ保護基を検出するＵＶモニタリング、及びＮＭＰ(Ｎ-メチルピロリドン)におけるカップリングを媒介するＨＡＴＵ(Ｏ-(７-アザベンゾトリアゾール-１-イル)-１,１,３,３-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート)、又はＨＢＴＵ(２-(１Ｈ-ベンゾトリアゾール-１-イル-)-１,１,３,３-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート)を使用する、製造者から供給されるファストモック(FastMoc)ＵＶプロトコルを用い、０．２５ｍｍｏｌ又は１．０ｍｍｏｌスケールにて、アプリド・バイオシステムズ(Applied Biosystems)４３３Ａペプチド合成器でＦｍｏｃ法により合成した。ペプチドアミド合成に使用した出発樹脂はリンク(Rink)-アミド樹脂であり、ワン(Wang)又はクロロトリチル樹脂は、カルボキシＣ末端を有するペプチド用に使用した。使用される保護されたアミノ酸誘導体は、ＡＢＩ４３３Ａ合成器に適切な、事前計量されたカートリッジに供給され、Ｆｍｏｃ-Ａｉｂ-ＯＨ(Ｆｍｏｃ-アミノイソ酪酸)等、非天然アミノ酸を除く、標準Ｆｍｏｃ-アミノ酸(例えばAnaspec、又はNovabiochemから供給)であった。Ｎ末端アミノ酸は、アルファアミノ基で保護されたＢｏｃであった(例えば、Ｂｏｃ-Ｈｉｓ(Ｂｏｃ)ＯＨは、Ｎ末端にＨｉｓを有するペプチド用に使用した)。２６位にあるリジンのイプシロンアミノ基を、アルブミン結合部分及びスペーサーの結合経路に応じて、Ｍｔｔ、Ｍｍｔ、Ｄｄｅ、ｉｖＤｄｅ、又はＢｏｃで保護した。いくつかのケースにおいては、２-Ｆｍｏｃ-オキシ-４-メトキシベンジル又は２,４,６-トリメトキシベンジルに限定されないが、酸性条件下で切断可能な基で、ジペプチドアミド結合で保護されたジペプチドを使用することにより、ペプチド合成が改善される。セリン又はスレオニンがペプチドに存在するケースにおいては、疑似プロリンジペプチドが使用されてもよい(例えば、Novobiochem 2002/2003又は新刊のカタログ、又はW.R. Sampson(1999), J. Pep. Sci. 5, 403を参照)。
【０１７２】
ＳＰＰＳ法Ｂ
ペプチド合成の代替法(方法Ｂ)は、マイクロ波ベースのリバティ(Liberty)ペプチド合成器(CEM Corp., North Carolina)におけるＦｍｏｃ化学によるものであった。樹脂は、０．２４ｍｍｏｌ／ｇ充填されたテンタゲル(Tentagel)Ｓ ＲＡＭであった。カップリング化学は、ＮＭＰ、及び８-１０倍過度のモルにて０．３Ｍのアミノ酸溶液を使用する、ＮＭＰにおけるＤＩＣ／ＨＯＡｔであった。カップリング条件を７０℃までで５分とした。７０℃までで、ＮＭＰにおいて５％のピペリジンを使用し、検出を実施した。リジン側鎖の化学的修飾が所望されている場合、リジンをＬｙｓ(Ｍｔｔ)として導入した。２０分、ストレートのヘキサフルオロイソプロパノールに樹脂を懸濁させ、続いてＤＣＭ及びＮＭＰで洗浄することにより、Ｍｔｔ基を除去した。手動合成、又はリバティにおける一又は複数の自動工程、続く手動カップリングにより、リジンの化学的修飾を実施した。ＨＢＴＵカップリングを用いる、ＡＢＩ４３３におけるＦｍｏｃ化学により、ペプチド合成の他の方法がなされた。合成後、樹脂をＤＣＭで洗浄し、乾燥させ、ＴＦＡ／ＴＩＳ／水(９２．５／５／２．５)で２時間処理し、ジエチルエーテルで沈殿させることにより、ペプチドを樹脂から切断した。ペプチドを３０％の酢酸、又は類似の溶媒に再溶解させ、アセトニトリル／ＴＦＡを使用するＣ１８カラムにおける標準的ＲＰ-ＨＰＬＣにより精製した。ペプチドの同一性をＭＡＬＤＩ-ＭＳにより確認した。
【０１７３】
ＳＰＰＳ法Ｃ
保護されたペプチジル樹脂を、ＮＭＰ(Ｎ-メチルピロリドン)におけるカップリングを媒介するＨＯＢｔ(１-ヒドロキシベンゾゾトリアゾール)及びＤＩＣ(ジシクロヘキシルカルボジイミド)を使用する、製造者から供給されるプロトコルを用い、０．２５ｍｍｏｌスケールにて、アドバンスド・ケムテック(Advanced ChemTech)合成器(APEX 348)でＦｍｏｃ法により合成した。ペプチドアミド合成に使用した出発樹脂はリンク-アミド樹脂であり、ワン又はクロロトリチル樹脂を、カルボキシＣ末端を有するペプチド用に使用した。使用される保護されたアミノ酸誘導体を、標準Ｆｍｏｃ-アミノ酸(例えばAnaspec、又はNovabiochemから供給)とした。Ｎ末端アミノ酸は、アルファアミノ基で保護されたＢｏｃであった(例えば、Ｂｏｃ-Ｈｉｓ(Ｂｏｃ)ＯＨは、Ｎ末端にＨｉｓを有するペプチド用に使用した)。２６位にあるリジンのイプシロンアミノ基を、アルブミン結合部分及びスペーサーの結合経路に応じて、Ｍｔｔ、Ｍｍｔ、Ｄｄｅ、ｉｖＤｄｅ、又はＢｏｃで保護した。いくつかのケースにおいては、ペプチド、例えばNovabiochemからの疑似プロリン、Ｆｍｏｃ-Ｓｅｒ(ｔｂｕ)-ΨＳｅｒ(Ｍｅ，Ｍｅ)-ＯＨを使用することにより、ペプチド合成が改善される。例えば、Novobiochem 2002/2003又は新刊のカタログ、又はW.R. Sampson(1999), J. Pep. Sci. 5, 403を参照。
【０１７４】
ｉｖＤｄｅ又はＤｄｅ-保護を除去する手順
樹脂(０．２５ｍｍｏｌ)を手動の振揺／濾過装置に配し、Ｎ-メチルピロリドンに２％のヒドラジンが入ったものを用いて処理し(２０ｍｌ、２ｘ１２分)で処理し、Ｄｄｅ又はｉｖＤｄｅ基を除去し、Ｎ-メチルピロリドン(４ｘ２０ｍｌ)で洗浄した。
【０１７５】
Ｍｔｔ又Ｍｍｔ-保護を除去する手順
樹脂(０．２５ｍｍｏｌ)を手動の振揺／濾過装置に配し、ＤＣＭに２％のＴＦＡ及び２-３％のＴＩＳが入ったもので処理し(２０ｍｌ、６-１２回繰り替えしで５-１０分)、Ｍｔｔ又はＭｍｔ基を除去し、ＤＣＭ(２ｘ２０ｍｌ)、ＤＣＭに１０％のＭｅＯＨ及び５％のＤＩＰＥＡが入ったもの(２ｘ２０ｍｌ)、及びＮ-メチルピロリドン(４ｘ２０ｍｌ)で洗浄した。
【０１７６】
Ｍｔｔ-保護を除去する他の手段：
樹脂をシリンジに配し、２ｘ１０分、ヘキサフルロ(fluro)イソプロパノールで処理し、Ｍｔｔ基を除去した。ついで上述したようにして、樹脂をＤＣＭ及びＮＭＰで洗浄した。
【０１７７】
リジン残基に側鎖を付与する手順
アルブミン結合残基(式(Ｉ)のＢ-Ｕ-側鎖)は、ＤＩＣ、ＨＯＢｔ／ＤＩＣ、ＨＯＡｔ／ＤＩＣ、又はＨＢＴＵに限定されるものではないが、標準的なアシル化試薬を使用し、保護されていないペプチドを溶液中でアシル化する、又は樹脂に結合したペプチドをアシル化することにより、ペプチドに結合させることができる。
【０１７８】
樹脂に結合したペプチドへの結合：
経路Ｉ
活性化した(活性エステル又は対称無水物)アルブミン結合残基(Ａ-Ｂ)-式(Ｉ)の側鎖、例えばオクタデカン二酸モノ-(２,５-ジオキソ-ピロリジン-１-イル)エステル(Ebashiら,欧州特許第511600号、樹脂に結合したペプチドに対して４モル当量)をＮＭＰ(２５ｍｌ)に溶解させ、樹脂に添加し、室温で一晩振揺した。反応混合物を濾過し、ＮＭＰ、ジクロロメタン、２-プロパノール、メタノール及びジエチルエーテルを用い、樹脂を広範囲に洗浄した。
【０１７９】
経路ＩＩ
アルブミン結合残基(Ａ-(Ｂ)-式(Ｉ)の側鎖)を、Ｎ-メチルピロリドン／塩化メチレン(１：１、１０ｍｌ)に溶解させた。活性化試薬、例えばヒドロキシベンゾゾトリアゾール(ＨＯＢｔ)(樹脂に対して４モル当量)、及びジイソプロピルカルボジイミド(樹脂に対して４モル当量)を添加し、溶液を１５分攪拌した。溶液を樹脂に添加し、ジイソプロピ(propy)エチルアミン(樹脂に対して４モル当量)を添加した。樹脂を、室温で２〜２４時間振揺した。樹脂をＮ-メチルピロリドン(２ｘ２０ｍｌ)、Ｎ-メチルピロリドン／塩化メチレン(１：１)(２ｘ２０ｍｌ)、及び塩化メチレン(２ｘ２０ｍｌ)で洗浄した。
【０１８０】
経路ＩＩＩ
活性化した(活性エステル又は対称無水物)アルブミン結合残基(Ａ-Ｂ-式(Ｉ)の側鎖、例えばオクタデカン二酸モノ-(２,５-ジオキソ-ピロリジン-１-イル)エステル(Ebashiら,欧州特許第511600号、ペプチドに対して１-１．５モル当量)を、有機溶媒、例えばアセトニトリル、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、又は水／有機溶媒(１-２ｍｌ)の混合物に溶解させ、１０モル当量のＤＩＰＥＡと共に、水(１０-２０ｍｌ)にペプチドが入った溶液に添加した。アルブミン結合残基、例えばtert-ブチルにおいて基が保護されているケースでは、反応混合物を凍結乾燥Ｏ／Ｎさせ、後に、単離された粗ペプチドを脱保護し−tert-ブチル基のケースでは、ペプチドを、トリフルオロ酢酸、水及びトリイソプロピルシラン(９０：５：５)の混合物に溶解させた。３０分後、混合物を真空下で蒸発させ、最終ペプチドを調製用ＨＰＬＣにより精製した。
【０１８１】
Ｆｍｏｃ-保護を除去する手順：
樹脂(０．２５ｍｍｏｌ)を手動の振揺装置の濾過フラスコに配し、Ｎ-メチルピロリドン／塩化メチレン(１：１)(２ｘ２０ｍｌ)、及びＮ-メチルピロリドン(１ｘ２０ｍｌ)、Ｎ-メチルピロリドンに２０％のピペリジンが入った溶液(３ｘ２０ｍｌ、各１０分)で処理した。樹脂を、Ｎ-メチルピロリドン(２ｘ２０ｍｌ)、Ｎ-メチルピロリドン／塩化メチレン(１：１)(２ｘ２０ｍｌ)及び塩化メチレン(２ｘ２０ｍｌ)で洗浄した。
【０１８２】
樹脂からペプチドを切断する手段
室温で１８０分、トリフルオロ酢酸、水及びトリイソプロピルシラン(９５：２．５：２．５〜９２：４：４)の混合物と共に攪拌することにより、樹脂からペプチドを切断した。切断混合物を濾過し、窒素流により、濾液が油になるまで濃縮した。４５ｍｌのジエチルエーテルを用い、この油からペプチドを沈殿させ、４５ｍｌのジエチルエーテルで、１〜３回洗浄した。
【０１８３】
精製：
粗ペプチドを、５μ又は７μのＣ-１８シリカが包装された、２０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍのカラムにおける、半調製用ＨＰＬＣにより精製した。ペプチドに応じて、１又は２の精製システムを使用した。
ＴＦＡ：
乾燥後、粗ペプチドを５ｍｌの５０％酢酸Ｈ２Ｏに溶解させ、Ｈ２Ｏを用いて２０ｍｌに希釈し、カラムに注入し、０．１％のＴＦＡにおける４０-６０％のＣＨ３ＣＮ勾配を用いて、４０℃で５０分、１０ｍｌ／分で溶出させた。ペプチドを含有するフラクションを収集した。溶出液を水で希釈した後、精製されたペプチドを凍結乾燥させた。
【０１８４】
硫酸アンモニウム：
濃Ｈ２ＳＯ４でｐＨ２．５に調節された、０．０５Ｍの(ＮＨ４)２ＳＯ４に４０％のＣＨ３ＣＮが入ったものを用いて、カラムを平衡にした。乾燥後、粗ペプチドを５ｍｌの５０％酢酸Ｈ２Ｏに溶解させ、Ｈ２Ｏを用いて２０ｍｌに希釈し、カラムに注入し、ついで、０．０５Ｍの(ＮＨ４)２ＳＯ４における４０-６０％のＣＨ３ＣＮ勾配、ｐＨ２．５を用いて、４０℃で５０分、１０ｍｌ／分で溶出させた。ペプチドを含有するフラクションを収集し、３容量のＨ２Ｏで希釈し、０．１％のＴＦＡで平衡にされたセップ-パック(Sep-Pak)(登録商標)Ｃ１８カートリッジ(ウォーターズ(Waters)パーツ、＃：５１９１０)を通した。ついで、０．１％のＴＦＡを含有する７０％のＣＨ３ＣＮで溶出させ、溶出液を水で希釈した後、凍結乾燥により、精製されたペプチドを単離した。
得られた最終生成物を分析用ＲＰ-ＨＰＬＣ(保持時間)及びＬＣＭＳにより特徴付けした。
ＲＰ-ＨＰＬＣ分析を、２１４ｎｍでのＵＶ検出、及び例えばバイダック(Vydac)２１８ＴＰ５４、４．６ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ、５μのＣ-１８シリカカラム(The Separations Group, Hesperia, USA)を使用して実施し、例えば４２℃で１ｍｌ／分で溶出させた。多くの場合、次の特定の条件が使用される：
【０１８５】
方法０３＿Ａ１＿１
ＨＰＬＣ(方法０３＿Ａ１＿１)：ＲＰ-分析を、ウォーターズ９９６ダイオードアレイ検出器が取り付けられたウォーターズ２６９０システムを使用して実施した。４２℃で１ｍｌ／分溶出させる、２１８ＴＰ５４、４．６ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ、５μのＣ-１８シリカカラム(The Separations Group, Hesperia)において、２１４、２５４、２７６、及び３０１ｎｍでのＵＶ検出を収集した。４Ｍの硫酸でｐＨ２．５に調節された、１０％の０．５Ｍ硫酸アンモニウムを用いて、カラムを平衡にした。注入後、５０分、同様の水性バッファーにおける０％〜６０％のアセトニトリル勾配により、サンプルを溶出させた。
【０１８６】
方法０３＿Ｂ１＿２
ＨＰＬＣ(方法０３＿Ｂ１＿２)：ＲＰ-分析を、ウォーターズ９９６ダイオードアレイ検出器が取り付けられたウォーターズ２６９０システムを使用して実施した。４２℃で０．５ｍｌ／分溶出させる、ゾーバックス３００ＳＢ-Ｃ１８(４．５ｘ１５０ｍｍ、５μ)において、２１４、２５４、２７６、及び３０１ｎｍでのＵＶ検出を収集した。水にＴＦＡ(０．１％)が入った水溶液を用いて、カラムを平衡にした。注入後、５０分、水にＴＦＡ(０．１％)が入った水溶液における０％〜６０％のアセトニトリル勾配(＋０．１％のＴＦＡ)により、サンプルを溶出させた。
【０１８７】
方法０２＿Ｂ１＿１
ＨＰＬＣ(方法０２＿Ｂ１＿１)：ＲＰ-分析を、ウォーターズ２４８７二重バンド(dualband)検出器が取り付けられたアリアンス(Alliance)・ウォーターズ２６９５システムを使用して実施した。４２℃で、バイダック２１８ＴＰ５３、Ｃ１８、３００Å、５μｍ、３．２ｍｍ ｘ ２５０ｍｍカラムを使用し、２１４ｎｍと２５４ｎｍでのＵＶ検出を収集した。０．５ｍｌ／分の流速で、５０分以上かけ、０-６０％のアセトニトリル、９５-３５％の水、及び５％のトリフルオロ酢酸(１．０％)の直線状勾配を用いて溶出させた。
【０１８８】
方法０１＿Ｂ４＿２
ＨＰＬＣ(方法０１＿Ｂ４＿２)：ＲＰ-分析を、ウォーターズ９９６ダイオードアレイ検出器が取り付けられたウォーターズ６００Ｓシステムを使用して実施した。４２℃で、シンメトリー(Symmetry)３００ Ｃ１８、５μｍ、３．９ｍｍ ｘ １５０ｍｍカラムを使用し、２１４ｎｍと２５４ｎｍでのＵＶ検出を収集した。１．０ｍｌ／分の流速で、１５分以上かけ、５-９５％のアセトニトリル、９０-０％の水、及び５％のトリフルオロ酢酸(１．０％)の直線状勾配を用いて溶出させた。
【０１８９】
方法０２＿Ｂ４＿４
ＨＰＬＣ(方法０２＿Ｂ４＿４)：ＲＰ-分析を、ウォーターズ２４８７二重バンド検出器が取り付けられたアリアンス・ウォーターズ２６９５システムを使用して実施した。４２℃で、シンメトリー３００ Ｃ１８、５μｍ、３．９ｍｍ ｘ １５０ｍｍカラムを使用し、２１４ｎｍと２５４ｎｍでのＵＶ検出を収集した。１．０ｍｌ／分の流速で、１５分以上かけ、５-９５％のアセトニトリル、９０-０％の水、及び５％のトリフルオロ酢酸(１．０％)の直線状勾配を用いて溶出させた。
【０１９０】
方法０２＿Ｂ６＿１
ＨＰＬＣ(方法０２＿Ｂ６＿１)：ＲＰ-分析を、ウォーターズ２４８７二重バンド検出器が取り付けられたアリアンス・ウォーターズ２６９５システムを使用して実施した。４２℃で、バイダック２１８ＴＰ５３、Ｃ１８、３００Å、５μｍ、３．２ｍｍ ｘ ２５０ｍｍカラムを使用し、２１４ｎｍと２５４ｎｍでのＵＶ検出を収集した。０．５０ｍｌ／分の流速で、５０分以上かけ、０-９０％のアセトニトリル、９５-５％の水、及び５％のトリフルオロ酢酸(１．０％)の直線状勾配を用いて溶出させた。
【０１９１】
方法０３＿Ｂ６＿１
ＨＰＬＣ(方法０３＿Ｂ１＿１)：ＲＰ-分析を、ウォーターズ９９６ダイオードアレイ検出器が取り付けられたウォーターズ２６９０システムを使用して実施した。４２℃で１ｍｌ／分溶出させる、２１８ＴＰ５４、４．６ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ、５μのＣ-１８シリカカラム(The Separations Group, Hesperia)において、２１４、２５４、２７６、及び３０１ｎｍでのＵＶ検出を収集した。水にＴＦＡ(０．１％)が入った水溶液に５％のアセトニトリル(＋０．１％のＴＦＡ)が入ったものを用いて、カラムを平衡にした。注入後、５０分、水にＴＦＡ(０．１％)が入った水溶液における０％〜９０％のアセトニトリル勾配(＋０．１％のＴＦＡ)により、サンプルを溶出させた。
また、調製用勾配溶出は上述したように実施することができ、化合物が溶出されるアセトニトリルのパーセンテージが示される。同一性はＭＡＬＤＩにより確認される。
【０１９２】
以下の器具を使用した：
ＬＣＭＳを、サイエックス(Sciex)ＡＰＩ １００シングル四極子(quadropole)質量分析計、パーキン・エルマー・シリーズ２００クアード(Quard)ポンプ、パーキン・エルマー・シリーズ２００オートサンプラー、アプリド・バイオシステムズ７８５Ａ ＵＶ検出器、セデックス(Sedex)７５蒸発性光散乱検出器からなるセットアップにおいて実施した。
機器のコントロールとデータ収集は、ウインドウズ２０００コンピューターで起動するサイエックス・サンプルコントロールソフトウェアにより実施した。
【０１９３】
Ａ：水に０．０５％のトリフルオロ酢酸が入ったもの
Ｂ：アセトニトリルに０．０５％のトリフルオロ酢酸が入ったもの
を収容する２つの溶出用容器に、ＨＰＬＣポンプを連結した。
アセトニトリル勾配で溶出させるカラムに、適切な容量(好ましくは２０μｌ)のサンプルを注入することにより、室温で分析を実施する。
使用するＨＰＬＣ条件、検出器の設定及び質量分析計の設定を、以下に付与する。
カラム：ウォーターズ・エクステラ(Xterra)ＭＳ Ｃ-１８ Ｘ ３ｍｍ 内径５μｍ
勾配：  １．５ｍｌ／分で、７．５分間直線状の５％-９０％アセトニトリル
検出：  ２１０ｎｍ(ＤＡＤからのアナログ出力)
ＥＬＳ(ＥＬＳからのアナログ出力)、４０℃
ＭＳイオン化モード ＡＰＩ-ＥＳ
【０１９４】
代替ＬＣＭＳを、ヒューレット・パッカード(Hewlett Packard)シリーズ１１００ Ｇ１３１２Ａ Ｂｉｎポンプ、ヒューレット・パッカードシリーズ１１００カラムコンパートメント、ヒューレット・パッカードシリーズ１１００ Ｇ１３１５Ａ ＤＡＤダイオードアレイ検出器、ヒューレット・パッカードシリーズ１１００ＭＳＤ、及びＨＰケムステイション(Chemstation)ソフトウェアで検出器制御されている、セデレ(Sedere)７５蒸発性光散乱検出器からなるセットアップにおいて実施した。
Ａ：水に１０ｍＭのＮＨ４ＯＨが入ったもの
Ｂ：９０％のアセトニトリルに１０ｍＭのＮＨ４ＯＨが入ったもの
を収容する２つの溶出用容器に、ＨＰＬＣポンプを連結した。
Ａ及びＢの勾配で溶出させるカラムに、適切な容量(好ましくは２０μｌ)のサンプルを注入することにより、２３℃で分析を実施した。使用するＨＰＬＣ条件、検出器の設定及び質量分析計の設定を、以下に付与する。
カラム：ウォーターズ・エクステラＭＳ Ｃ-１８ Ｘ ３ｍｍ 内径５μｍ
勾配：  １．５ｍｌ／分で、６．５分間直線状の５％-１００％アセトニトリル
検出：  ２１０ｎｍ(ＤＡＤからのアナログ出力)
ＥＬＳ(ＥＬＳからのアナログ出力)
ＭＳイオン化モード ＡＰＩ-ＥＳ  スキャン１００-１０００ａｍｕステップ０．１ａｍｕ
【０１９５】
ＭＡＬＤＩ-ＭＳ：
ペプチドの分子量を、マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分(ＭＡＬＤＩ-ＭＳ)を使用して測定し、マイクロフレックス(Microflex)(Bruker)に記録した。α-シアノ-４-ヒドロキシケイ皮酸のマトリックスを使用した。
【０１９６】
分析用ＨＰＬＣ条件(方法Ｉ)
０．１％のＴＦＡ／Ｈ２Ｏでカラム(エクステラＴＭ ＭＳ Ｃ１８、５μｍ、４．６ ｘ １５０ｍｍのカラム、Ｐ７Ｎ １８６ ０００４９０)を平衡にし、２５分間は０％のＣＨ３ＣＮ／０．１％のＴＦＡ／Ｈ２Ｏ〜６０％のＣＨ３ＣＮ／０．１％のＴＦＡ／Ｈ２Ｏの勾配、続いて５分以上、６０％〜１００％の勾配により溶出させる。
【０１９７】
この発明の実施例において、命名法及び構造的図解は、以下のことを意味する：
天然アミノ酸については１文字記号を使用し、例えばＨはＬ-ヒスチジンであり、ＡはＬ-アラニンである。アミノ酸については３文字略語を使用してもよく、例えば、ＨｉｓはＬ-ヒスチジンであり、ＡｌａはＬ-アラニンである。非天然アミノ酸については、３文字略語が使用され、例えばＡｉｂはアミノイソ酪酸である。アミノ酸の位置は、アミノ酸記号、例えばＬｙｓ３７の後の上付文字、又はＬｙｓ３７の数字で示されてよい。Ｎ末端アミノ基はＮＨ２又はＨとして記号化されていてもよい。Ｃ末端カルボン酸は、-ＯＨ又は-ＣＯＯＨとして記号化されていてもよい。Ｃ末端アミド基は-ＮＨ２として記号化されている。
【０１９８】
サブ構造
0005606314.tif 000043
双方とも、Ｈｉｓ-Ａｉｂ-Ｇｌｕ-Ｇｌｙ-Ｔｈｒ-Ｐｈｅを意味する。
リジンのイプシロンアミノ基は、ギリシャ記号、又は「イプシロン」とスペルで記載されていてよい。
【０１９９】
以下の実施例における構造は、いくつかのケースでは、天然のアミノ酸についての１文字記号と、アミノイソ酪酸ついての３文字略語とが組合せられている。いくつかのケースでは、拡大されて全構造が示されているアミノ酸もある。よって、誘導体化されているリジンは、実施例１の拡大された全構造として示されていてよく、ここでは３８位のリジンが拡大されている。３７位のアルギニンと３８位の拡大リジンとの間の窒素(Ｈで示す)は、実施例１の２つのアミノ酸を連結するペプチド結合の窒素である。
上述した手順に従い、以下の誘導体を、本発明の非限定的実施例として調製した：
【０２００】
実施例１
Ｎ-ε３７{２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１(７-３７)アミド
0005606314.tif 000044
調製法：Ａ
ＨＰＬＣ法  Ｂ６
ＲＴ＝３５．４９分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１０９６．２(Ｍ＋３Ｈ)３＋
算出されたＭＷ＝４３８０．０
【０２０１】
実施例２
Ｎ-ε２０-{２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[Ａｉｂ２，Ｌｅｕ１４，Ｌｙｓ２０，Ｇｌｎ２８，Ｓｅｒ(Ｏ-ベンジル)３９]エキセンディン-４(１-３９)アミド
0005606314.tif 000045
調製法：Ａ
ＨＰＬＣ法  Ｂ６：
ＲＴ＝３７．６３分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１７０５．９(Ｍ＋３Ｈ)３＋
算出されたＭＷ＝５１１３．９
【０２０２】
実施例３
Ｎ-ε２６{２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000046
調製法：Ａ
ＨＰＬＣ法  Ｂ６：
ＲＴ＝３６．４５分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１４０４．３(Ｍ＋３Ｈ)３＋
算出されたＭＷ＝４２０９．８
【０２０３】
実施例４
Ｎ-イプシロン３７{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２,Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４,Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド
0005606314.tif 000047
調製法：Ｂ
ペプチドを６６％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４４０９．１
【０２０４】
実施例５
Ｎ-イプシロン２３-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[１-(１７-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ピペリジン-４-イルカルボニルアミノ]-３-(カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000048
調製法：Ａ
ＨＰＬＣ法  ０２＿Ｂ６＿４：
ＲＴ＝９．３２分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝(Ｍ＋３Ｈ)３＋  １４１３．８
算出されたＭＷ＝４２３８．８
【０２０５】
実施例６
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[１-(１７-カルボキシヘプタデカノイル)ピペリジン-４-イルカルボニルアミノ]３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７,Ｇｌｕ２２, Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４,Ｐｈｅ(ｍ-ＣＦ３)２８]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド
0005606314.tif 000049
調製法：Ａ
ＨＰＬＣ法  ０１＿Ｂ６＿２：
ＲＴ＝１１．９２分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１４７４．８(Ｍ＋３Ｈ)３＋
算出されたＭＷ＝４４２０．０
【０２０６】
実施例７
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)-Ｌｙｓ(２-{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}ブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)
0005606314.tif 000050
調製法：Ｂ
ｆｍｏｃ-Ｌｙｓ(ｍｔｔ)-ワン樹脂から出発し、ＣＥＭリバティペプチド合成器を使用するが、方法Ａと同様にして、ペプチドを合成した。Ｎ末端アミンをＢｏｃ基で保護した。ヘキサフルオロ−２-プロパノールを使用して、Ｍｔｔをリジンから除去し、ＣＥＭリバティペプチド合成器においてｆｍｏｃ-化学を使用し、側鎖を調製した。
ＨＰＬＣ法  ０３＿Ｂ６＿１：
ＲＴ＝３５．５０分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１１１４．０(Ｍ＋４Ｈ)４＋
算出された(Ｍ)＝４４５２．１
【０２０７】
実施例８
Ｎ-ε２０({２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１７-カルボキシヘプタデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｔｈｒ(Ｏ-ベンジル)３３，]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド
0005606314.tif 000051
調製法：Ａ
ＨＰＬＣ法  Ｂ６：
ＲＴ＝３２．４９分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１４５９．０(Ｍ＋３Ｈ)３＋
算出されたＭＷ＝４３７５．０
【０２０８】
実施例９
Ｎ-イプシロン３０{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２, Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３０]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000052
調製法：アドバンスド・ケムテックからのアペックス(Apex)３９６において、ペプチドを調製し、最終生成物を、分析用ＨＰＬＣ及びＭＡＬＤＩ-ＭＳで特徴付けした。
ＨＰＬＣ法(方法Ｉ)：上述の記載を参照
ＲＴ＝２７．６分
ＭＡＬＤＩ-ＭＳ：４３６７．９
【０２０９】
実施例１０
Ｎ-イプシロン３１{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２, Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３１]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000053
調製法：アドバンスド・ケムテックからのアペックス３９６において、ペプチドを調製し、最終生成物を、分析用ＨＰＬＣ及びＭＡＬＤＩ-ＭＳで特徴付けした。
ＨＰＬＣ法(方法Ａ)：上述の記載を参照
ＲＴ＝２８．４分
ＭＡＬＤＩ-ＭＳ：４２５２．５
【０２１０】
実施例１１
Ｎ-ε２０({２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１７-カルボキシヘプタデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ａｒｇ２６，２-ナフチルアラニン２８、Ｇｌｕ３０，]ＧＬＰ-１(７-３７)アミド
0005606314.tif 000054
調製法：Ａ
ＨＰＬＣ法  Ｂ６：
ＲＴ＝３２．３１分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１４４５．０(Ｍ＋３Ｈ)３＋
算出されたＭＷ＝４３３２．９
【０２１１】
実施例１２
[Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２、Ａｒｇ２６、Ａｒｇ３４，]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-４-[１-[１９-カルボキシノナデカノイル]ピペリジン-４-カルボニルアミノ]-４-カルボキシブチリルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル]アミド
0005606314.tif 000055
調製法：Ａ
ＨＰＬＣ法  ０２＿Ｂ４＿４：
ＲＴ＝９．７３分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝(Ｍ／３)＋１＝１４９４．９、及び(Ｍ／４)＋１＝１１２０．９；(サイエックス１００ ＡＰＩ)
算出されたＭＷ＝４４８０．１
【０２１２】
実施例１３
Ｎ-ε２０({２-[２-(２-{２-[２-((Ｒ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１７-カルボキシヘプタデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ａｒｇ２６，２-ナフチルアラニン１２、Ｇｌｕ３０，]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド
0005606314.tif 000056
調製法：Ａ
ＨＰＬＣ法  Ｂ６：
ＲＴ＝３０．７０分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１０８４．０(Ｍ＋４Ｈ)４＋
算出されたＭＷ＝４３３２．９
【０２１３】
実施例１４
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-４-[１-[１９-カルボキシノナデカノイル]ピペリジン-４-カルボニルアミノ]-４-カルボキシブチリルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル]アミド
0005606314.tif 000057
調製法：Ａ、及び実施例７２
ＨＰＬＣ法  ０２＿Ｂ６＿４：
ＲＴ＝９．９５分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１４８４．(Ｍ＋３Ｈ)３＋
算出されたＭＷ＝４４５１．１
【０２１４】
実施例１５
Ｎ-イプシロン３１-(２-{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシ-ノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２,Ａｒｇ２６，Ｌｙｓ３１, Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000058
調製法：Ｂ、及び実施例７２
ペプチドを６６％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４２８０．９
【０２１５】
実施例１６
Ｎ-イプシロン２６-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000059
調製法：Ｂ、及び実施例７２
ペプチドを６９％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝３９９０．６
【０２１６】
実施例１７
Ｎ-イプシロン２６-{４-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]ブチリル}[Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000060
調製法：Ｂ
ペプチドを７０％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４０７５．７
【０２１７】
実施例１８
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000061
調製法：Ｂ、及び実施例７２
ペプチドを６８％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４１３５．８
【０２１８】
実施例１９
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)-アミド
0005606314.tif 000062
調製法：Ｂ、及び実施例７２
ペプチドを７０％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４２７９．９
【０２１９】
実施例２０
Ｎ-イプシロン１８-{２-(２-(２-(２-[２-(２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブタノイルアミノ]エトキシ)エトキシ]アセチル)エトキシ)エトキシ)アセチル}[Ａｉｂ８，Ｌｙｓ１８，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１(７-３７)
0005606314.tif 000063
調製法：アドバンスド・ケムテックからのアペックス３９６において、ペプチドを調製し、最終生成物を、分析用ＨＰＬＣ及びＭＡＬＤＩ-ＭＳで特徴付けした。
ＨＰＬＣ(方法  Ｂ６)：
ＲＴ＝３４．１分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝ＸＸ(Ｍ＋４Ｈ)４＋：１０８８
算出されたＭＷ＝４３５０．０
【０２２０】
実施例２１
Ｎ-ε２０-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-４-[トランス-４-([１９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]-４-カルボキシブタノイルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ１、Ｌｙｓ２０，Ｓｅｒ(Ｏ-ベンジル)３３，Ｓｅｒ(Ｏ-ベンジル)３９]エキセンディン(１-３９)
0005606314.tif 000064
調製法：Ａ
ＨＰＬＣ法  Ｂ６：
ＲＴ＝３９．２２分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１７３６．９(Ｍ＋３Ｈ)３＋
算出されたＭＷ＝５２０７．０
【０２２１】
実施例２２
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-３-[４-([１９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]-３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル]アミド
0005606314.tif 000065
調製法：Ｂ
ペプチドを６８％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４４９４．２
【０２２２】
実施例２３
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２,Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４,Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド
0005606314.tif 000066
調製法：Ｂ
ペプチドを６７％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４４５１．１
【０２２３】
実施例２４
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７,Ｇｌｕ２２,Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４,Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド
0005606314.tif 000067
調製法：Ｂ
ペプチドを６８％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４４２２．１
【０２２４】
実施例２５
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({４-[(トランス-１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド
0005606314.tif 000068
調製法：Ｂ
ペプチドを６８％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４３５０．０
【０２２５】
実施例２６
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７,Ｇｌｕ２２,Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４,Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000069
調製法：Ｂ
ペプチドを６９％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４４２３．１
【０２２６】
実施例２７
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-{２-[２-(２-{２-[４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]-アミド
0005606314.tif 000070
調製法：Ｂ
ペプチドを６８％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４４７９．１
【０２２７】
実施例２８
[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[トランス-４-((９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル]アミド
0005606314.tif 000071
調製法：Ａ
ＨＰＬＣ法  Ｂ６：
ＲＴ＝３５．２５分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１４６９．０(Ｍ＋３Ｈ)３＋
算出されたＭＷ＝４４０７．１
【０２２８】
実施例２９
Ｎ-イプシロン２６[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル[Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２６]ＧＬＰ-１(７-３７)アミド
0005606314.tif 000072
調製法：方法Ｃ
ＨＰＬＣ法  ０１＿Ｂ４＿２：
ＲＴ＝１１．２６分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝ＸＸ(Ｍ＋４Ｈ)４＋  １０７１
算出されたＭＷ＝４２７９．９
【０２２９】
実施例３０
Ｎ-イプシロン２６[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-２-[トランス-４-((９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]-４-カルボキシブタノイルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８、Ｌｙｓ２６]ＧＬＰ-１(７-３７)アミド
0005606314.tif 000073
調製法：方法Ｃ
ＨＰＬＣ法  ０１＿Ｂ４＿２：
ＲＴ＝１１．１１分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝ＸＸ(Ｍ＋４Ｈ)４＋  １１０３
算出されたＭＷ＝４４０９．１
【０２３０】
実施例３１
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000074
調製法：Ｂ
ペプチドを７１％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４３５１．０
【０２３１】
実施例３２
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７,Ｇｌｕ２２,Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ａｒｇ３４,Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000075
調製法：Ｂ
ペプチドを６８％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４４８１．１
【０２３２】
実施例３３
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{４-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)-ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ブチリルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000076
調製法：Ｂ
ペプチドを６２％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４３４１．９
【０２３３】
実施例３４
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000077
調製法：Ｂ
ペプチドを６５％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４４５４．１
【０２３４】
実施例３５
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{６-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ヘキサノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000078
調製法：Ｂ
ペプチドを６２％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４３７０．０
【０２３５】
実施例３６
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{４-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ブチリルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３４)
0005606314.tif 000079
調製法：Ｂ
ペプチドを６６％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４０７１．６
【０２３６】
実施例３７
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]-ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３４)
0005606314.tif 000080
調製法：Ｂ
ペプチドを６８％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４１８３．８
【０２３７】
実施例３８
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{６-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ヘキサノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３４)
0005606314.tif 000081
調製法：Ｂ
ペプチドを６７％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４０９９．７
【０２３８】
実施例３９
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３５)
0005606314.tif 000082
調製法：Ｂ
ペプチドを７０％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４２４０．９
【０２３９】
実施例４０
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{６-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ヘキサノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３５)
0005606314.tif 000083
調製法：Ｂ
ペプチドを６６％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４１５６．７
【０２４０】
実施例４１
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{６-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ヘキサノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３６)アミド
0005606314.tif 000084
調製法：Ｂ
ペプチドを６６％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４３１１．９
【０２４１】
実施例４２
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{６-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ヘキサノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３５)
0005606314.tif 000085
調製法：Ｂ
ペプチドを６６％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４１２８．７
【０２４２】
実施例４３
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｌｙｓ３３，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３４)
0005606314.tif 000086
調製法：Ｂ
ペプチドを６８％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４１１３．７
【０２４３】
実施例４４
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３６)アミド
0005606314.tif 000087
調製法：Ｂ
ペプチドを６６％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４３９６．１
【０２４４】
実施例４５
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３６)アミド
0005606314.tif 000088
調製法：Ｂ
ペプチドを６５％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝５１２１．９
【０２４５】
実施例４６
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}-ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]アミド
0005606314.tif 000089
調製法：Ｂ
ペプチドを６５％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４６８１．４
【０２４６】
実施例４７
Ｎ-イプシロン２０-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２０，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｐｒｏ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド
0005606314.tif 000090
調製法：Ｂ
ペプチドを６２％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４６３８．３
【０２４７】
実施例４８
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド
0005606314.tif 000091
調製法：Ｂ
ペプチドを６９％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４６２４．３
【０２４８】
実施例４９
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド
0005606314.tif 000092
調製法：Ｂ
ペプチドを６５％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４５９５．３
【０２４９】
実施例５０
Ｎ-イプシロン３７-[[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)アミド
0005606314.tif 000093
調製法：Ｂ
ペプチドを６６％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４５２３．２
【０２５０】
実施例５１
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｐｒｏ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-{２-[４-カルボキシ-４-(４-カルボキシ-４-{４-[４-(１６-１Ｈ-テトラゾール-５-イル-ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ブチリルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]
0005606314.tif 000094
調製法：８-１０倍過度のモルのアミノ酸、ＤＩＣ及びＨＯＡｔ／ＨＯＢｔ(１：１)を使用するアドバンスド・ケムテックからのアペックス３９６において、ペプチドを調製し、Ｍｔｔ基をヘキサフルオロイソプロパノールで脱保護することを除けば、方法Ａ。チオアミドリンカーの結合を２つの工程で成し遂げた；まず、ＤＩＣ及びＨＯＡｔ／ＨＯＢｔ(１：１)を使用して、４-スルファモイル酪酸(３倍過度)を樹脂にカップリングさせた。ついで、ＮＭＰにおいて、カルボニルジイミダゾールと混合された１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカン酸(３倍過度)を樹脂に添加し、続いてＤＢＵを添加した。
ＨＰＬＣ法  Ｂ６：
ＲＴ＝２９．８分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１１６１．２(Ｍ＋４Ｈ)４＋
算出されたＭＷ＝４６４０．２
【０２５１】
実施例５２
[Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ｇｌｕ３０，Ｐｒｏ３７]ＧＬＰ-１-((７-３７)Ｌｙｓ(２-(２-(３-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-(２-[４-(Ｓ)-カルボキシ-４-(４-(Ｓ)-カルボキシ-４-(４-{４-[１６-(テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル]ブタノイルアミノ}ブタノイルアミノ)ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)プロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ)ペプチド
0005606314.tif 000095
調製法：アドバンスド・ケムテックからのアペックス３９６において、ペプチドを調製し、チオアミドリンカーの結合を２つの工程で成し遂げた；まず、ＤＩＣ及びＨＯＡｔ／ＨＯＢｔ(１：１)を使用して、４-スルファモイル酪酸を樹脂にカップリングさせた。ついで、ＮＭＰにおいて、カルボニルジイミダゾールと混合された１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカン酸を樹脂に添加し、続いてＤＢＵを添加した。その他は、実施例の最初に記載されたものと同様のプロトコルである。
ＨＰＬＣ(方法  Ｂ６)：
ＲＴ＝３０分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝ＸＸ(Ｍ＋４Ｈ)４＋：  １２７４
算出された(Ｍ＋Ｈ)＋＝５０９６
【０２５２】
実施例５３
Ｎ-アルファ３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，イプシロン-Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000096
調製法：Ｂ、実施例７に記載のものと同様の方式
ＨＰＬＣ法  ０２＿Ｂ６＿１：
ＲＴ＝３７．０５分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１１０６．３(Ｍ＋４Ｈ)４＋
算出された(Ｍ)＝４４２３．１
【０２５３】
実施例５４
Ｎ-アルファ８-[２-(４-イミダゾリル)アセチル]Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(８-３７)
0005606314.tif 000097
調製法：Ｂ
ペプチドを６８％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４４０９．１
【０２５４】
実施例５５
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，３４]-ＧＬＰ-１(７-３７)-Ｌｙｓ-(２-{２-[２-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}ブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)ペプチド
0005606314.tif 000098
調製法：Ｂ、実施例７に記載のものと同様の方式
ＨＰＬＣ法  ０３＿Ｂ６＿１：
ＲＴ＝３５．５８分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１０７７．８(Ｍ＋４Ｈ)４＋
算出された(Ｍ)＝４３０６．９
【０２５５】
実施例５６
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，３４]-ＧＬＰ-１(７-３７)-Ｌｙｓ-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[４-カルボキシ-４-({４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]ペプチド
0005606314.tif 000099
調製法：Ｂ、実施例７に記載のものと同様の方式
ＨＰＬＣ法  ０２＿Ｂ６＿１：
ＲＴ＝３４．４０分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１１２０．８(Ｍ＋４Ｈ)４＋
算出された(Ｍ)＝４４８０．１
【０２５６】
実施例５７
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，３４]-ＧＬＰ-１(７-３７)-Ｌｙｓ((Ｓ)-４-カルボキシ-４-(２-{２-[２-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}ブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)ブチリル)ペプチド
0005606314.tif 000100
調製法：Ｂ、実施例７に記載のものと同様の方式
ＨＰＬＣ法  ０３＿Ｂ６＿１：
ＲＴ＝３５．１４分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝(Ｍ＋４Ｈ)４＋
算出された(Ｍ)＝４４３６．１
【０２５７】
実施例５８
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，３４]-ＧＬＰ-１(７-３７)-Ｌｙｓ-(２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-(２-{２-[２-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}ブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル)ペプチド
0005606314.tif 000101
調製法：Ｂ、実施例７に記載のものと同様の方式
ＨＰＬＣ法  ０３＿Ｂ６＿１：
ＲＴ＝３４．９２分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１１４６．３(Ｍ＋４Ｈ)４＋
算出された(Ｍ)＝４５８１．２
【０２５８】
実施例５９
[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，３４]-ＧＬＰ-１(７-３７)-Ｌｙｓ(２-{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}ブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)ペプチド
0005606314.tif 000102
調製法：Ｂ、実施例７に記載のものと同様の方式
ＨＰＬＣ法  ０３＿Ｂ６＿１：
ＲＴ＝３５．３９分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１０９５．８(Ｍ＋４Ｈ)４＋
算出された(Ｍ)＝４３８０．０
【０２５９】
実施例６０
Ｎ-イプシロン３７-(２-{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}ブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000103
調製法：Ｂ、実施例７に記載のものと同様の方式
ＨＰＬＣ法  ０３＿Ａ１＿１：
ＲＴ＝３５．７３分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１０８１．３(Ｍ＋４Ｈ)４＋
算出された(Ｍ)＝４３２３．０
【０２６０】
実施例６１
Ｎ-イプシロン３７-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシ-ノナデカノイル)-ピペリジン-４-カルボニル]-アミノ}-ブチリル)[デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000104
調製法：Ｂ、実施例７に記載のものと同様の方式
ＨＰＬＣ法  ０３＿Ｂ６＿１：
ＲＴ＝３６．２８分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１００９．５(Ｍ＋４Ｈ)４＋
算出された(Ｍ)＝４０３２．６
【０２６１】
実施例６２
[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，３４]-ＧＬＰ-１(７-３７)-Ｌｙｓ-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{[１-(１９-カルボキシ-ノナデカノイル)-ピペリジン-４-カルボニル]-アミノ}-ブチリル)ペプチド
0005606314.tif 000105
調製法：Ｂ、実施例７に記載のものと同様の方式
ＨＰＬＣ法  ０３＿Ｂ６＿１：
ＲＴ＝３６．０６分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１０４１．０(Ｍ＋４Ｈ)４＋
算出された(Ｍ)＝４１６１．８
【０２６２】
実施例６３
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[(Ｒ)-４-カルボキシ-４-((Ｒ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-１Ｈ-テトラゾール-５-イル-ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]-[Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４]ＧＬＰ-１(７-３７)
0005606314.tif 000106
調製法  Ｂ
ペプチドを７０％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４４５４．１
【０２６３】
実施例６４
Ｎ-イプシロン３７-{２-[２-(２-{(Ｓ)-４-[(Ｓ)-４-(１２-{４-[１６-(２-tert-ブチル-２Ｈ-テトラゾール-５-イル)-ヘキサデカノイルスルファモイル]ブチリルアミノ}ドデカノイルアミノ)-４-カルボキシブチリルアミノ]-４-カルボキシブチリルアミノ}エトキシ)エトキシ]アセチル}[デスアミノＨｉｓ７，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１(７-３７)
0005606314.tif 000107
調製法  Ｂ
ペプチドを７４％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４６５２．４
【０２６４】
実施例６５
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-((Ｓ)-４-カルボキシ-４-{１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ}ブチリルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノＨｉｓ７，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000108
調製法  Ｂ
ペプチドを６５％のアセトニトリルで溶出させた。
ＭＡＬＤＩ-ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ＝４５２４．２
【０２６５】
実施例６６
Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000109
ＳＰＰＳ方法Ｂに類似した調製法
ＨＰＬＣ法  ０２＿Ｂ６＿１：
ＲＴ＝３３．５８分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１１１４(Ｍ＋４Ｈ)４＋
Ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ(Ｍ)＝４４５１．１
【０２６６】
実施例６７
[ＩｍＰｒ７，Ａｒｇ２６，３４，Ｇｌｕ２２]ＧＬＰ-１-(７-３７)Ｌｙｓ[２-(２-[２-((Ｓ)-４-((Ｓ)-４-(１２-[４-(１６-１Ｈ-テトラゾール-５-イルヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ)-４-カルボキシブチリルアミノ)-４-カルボキシブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル]-アミド
0005606314.tif 000110
調製法  Ａ
ペプチドを６１％のアセトニトリルで溶出させた。
ＬＣ--ＭＳにより構造を確認
算出されたＭＷ：(Ｍ／３)＋１＝１５５０．８、及び(Ｍ／４)＋１＝１１６３．１；(サイエックス１００ ＡＰＩ)
実測されたＭｗ：(Ｍ／３)＋１＝１５５１．９、及び(Ｍ／４)＋１＝１１６４．３；(サイエックス１００ ＡＰＩ)
【０２６７】
実施例６８
Ｎ-イプシロン３６-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[トランス-４-((９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２，Ｇｌｎ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000111
調製法：Ａ
ＨＰＬＣ(方法  Ｂ６)：
ＲＴ＝３６．８分
ＭＳ-ＴＯＦ：ｍ／ｚ＝４４６８
算出された(Ｍ＋Ｈ)＋＝４４６９
【０２６８】
実施例６９
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[トランス-４-((９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８、Ｇｌｕ２２，Ｇｌｎ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000112
調製法：Ａ
ＨＰＬＣ(方法  Ｂ４)：
ＲＴ＝１１．４分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１４３３(Ｍ＋３Ｈ)３＋
算出された(Ｍ＋Ｈ)＋＝４２９６．９
【０２６９】
実施例７０
Ｎ-イプシロン１８-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[トランス-４-((９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，２２，３５，Ｌｙｓ１８，Ａｒｇ２６，３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000113
調製法：Ａ
ＨＰＬＣ(方法  Ｂ４)：
ＲＴ＝１１．０分
ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１４５９(Ｍ＋３Ｈ)３＋
算出された(Ｍ＋Ｈ)＋＝４３７８．１
【０２７０】
実施例７１
Ｎ-イプシロン１８-[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｒ)-３-[トランス-４-((９-カルボキシノナデカノイルアミノ]メチル)シクロヘキシルカルボニルアミノ]３-カルボキシプロピオニルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，Ｌｙｓ１８，Ｇｌｕ２２，Ｇｌｎ３４]ＧＬＰ-１-(７-３７)
0005606314.tif 000114
調製法：Ａ
ＨＰＬＣ(方法  Ｂ４)：
ＲＴ＝１１．４分
ＭＳ-ＴＯＦ：ｍ／ｚ＝４３３８
算出された(Ｍ＋Ｈ)＋＝４３３８
マイクロ波ベースのリバティペプチド合成器(CEC Corp., North Carolina、Ａ-Ｂ-Ｃ-Ｄ-誘導体化Ｌｙｓ ＧＬＰ-１アナログを０．１２５ｍｍｏｌ合成
【０２７１】
実施例７２：ペプチドアミドの合成
一般的通知
ペプチドアミドの合成に使用した出発樹脂はリンク-アミド樹脂であり、ワン又はクロロトリチル樹脂は、カルボキシＣ末端を有するペプチド用に使用した。
【０２７２】
実施例１９のＮ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]誘導体の合成
工程１
ペプチド配列を全てそろえた後、ｍｔｔ保護を、Ｌｙｓのイプシロンアミノ基から除去し、ＮＭＰ(２．５ｍｌ)にＦＭＯＣ ８-アミノ-３,６-ジオキサオクタン酸／ＨＯＡＴが入った０．３Ｍ溶液を樹脂に添加し、続いて、ＮＭＰ(１ｍｌ)にＤＩＣが入った０．７５Ｍ溶液を添加した。反応体を７０-７５℃で５分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄した。
【０２７３】
工程２
工程１で得られた樹脂を、ＮＭＰ(７ｍｌ)に５％のピペリジンが入ったものを使用して、ＦＭＯＣ脱保護し、３０秒加熱し、排水し、ＮＭＰ(７ｍｌ)、続いてＮＭＰ(７ｍｌ)にさらに５％のピペリジンが入ったものを用いて洗浄し、７０-７５℃で３分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄した。
ＮＭＰ(２．５ｍｌ)にＦＭＯＣ ８-アミノ-３,６-ジオキサオクタン酸／ＨＯＡＴが入った０．３Ｍ溶液を樹脂に添加し、続いて、ＮＭＰ(１ｍｌ)にＤＩＣが入った０．７５Ｍ溶液を添加した。反応体を７０-７５℃で５分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄した。
【０２７４】
工程３
工程２で得られた樹脂を、ＮＭＰ(７ｍｌ)に５％のピペリジンが入ったものを使用して、ＦＭＯＣ脱保護し、３０秒加熱し、排水し、ＮＭＰ(７ｍｌ)、続いてＮＭＰ(７ｍｌ)にさらに５％のピペリジンが入ったものを用いて洗浄し、７０-７５℃で３分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄した。
ＮＭＰ(２．５ｍｌ)にＦＭＯＣ Ｇｌｕ-ＯＴＢＵ／ＨＯＡＴが入った０．３Ｍ溶液を樹脂に添加し、続いて、ＮＭＰ(１ｍｌ)にＤＩＣが入った０．７５Ｍ溶液を添加した。反応体を７０-７５℃で５分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄した。
【０２７５】
工程４
工程３で得られた樹脂を、ＮＭＰ(７ｍｌ)に５％のピペリジンが入ったものを使用して、ＦＭＯＣ脱保護し、３０秒加熱し、排水し、ＮＭＰ(７ｍｌ)、続いてＮＭＰ(７ｍｌ)にさらに５％のピペリジンが入ったものを用いて洗浄し、７０-７５℃で３分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄した。
ＮＭＰ(２．５ｍｌ)にＦＭＯＣ-トラネキサム酸／ＨＯＡＴが入った０．３Ｍ溶液を樹脂に添加し、続いて、ＮＭＰ(１ｍｌ)にＤＩＣが入った０．７５Ｍ溶液を添加した。反応体を７０-７５℃で５分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄した。
【０２７６】
工程５
工程４で得られた樹脂を、ＮＭＰ(７ｍｌ)に５％のピペリジンが入ったものを使用して、ＦＭＯＣ脱保護し、３０秒加熱し、排水し、ＮＭＰ(７ｍｌ)、続いてＮＭＰ(７ｍｌ)にさらに５％のピペリジンが入ったものを用いて洗浄し、７０-７５℃で３分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄した。
ＮＭＰ(２．５ｍｌ)にエイコサンジオン酸(eicosanedioic acid)モノ-tert-ブチルエステル及びＨＯＡＴが入った０．３Ｍ溶液を樹脂に添加し、続いて、ＮＭＰ(１ｍｌ)にＤＩＣが入った０．７５Ｍ溶液を添加した。反応体を７０-７５℃で５分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄した。
【０２７７】
工程６
tert-ブチルエステル保護の除去及び樹脂からの切断
工程５で得られた樹脂をＤＣＭ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄し、乾燥させた。乾燥樹脂をリバティから取り出し、ＴＦＡ／ＴＩＳ／水(９２．５／５／２．５)で２時間処理して、樹脂からペプチドを切断し、tert-ブチルエステル保護基を除去した。樹脂を濾過し、ジエチルエーテルを用いてペプチドを沈殿させ、遠心分離により単離した。ペプチドを３０％の酢酸又は代替溶媒混合物に再溶解させ、記載した方法の一つを使用して精製した。
【０２７８】
実施例１４の[２-(２-[２-(２-[２-(２-((Ｓ)-４-[１-[１９-カルボキシノナデカノイル]ピペリジン-４-カルボニルアミノ]-４-カルボキシブチリルアミノ)エトキシ)エトキシ]アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル]誘導体の合成
工程７
ペプチド配列を全てそろえた後、ｍｔｔ保護を、Ｌｙｓのイプシロンアミノ基から除去し、樹脂を工程１-３に記載したようにして修飾した。樹脂を、ＮＭＰ(７ｍｌ)に５％のピペリジンが入ったものを使用して、ＦＭＯＣ脱保護し、３０秒加熱し、排水し、ＮＭＰ(７ｍｌ)、続いてＮＭＰ(７ｍｌ)にさらに５％のピペリジンが入ったものを用いて洗浄し、７０-７５℃で３分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄した。
ＮＭＰ(２．５ｍｌ)にＦＭＯＣ-イソニペコチン酸(isonipecotic acid)／ＨＯＡＴが入った０．３Ｍ溶液を樹脂に添加し、続いて、ＮＭＰ(１ｍｌ)にＤＩＣが入った０．７５Ｍ溶液を添加した。反応体を７０-７５℃で５分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄した。
【０２７９】
工程８
工程７で得られた樹脂を、ＮＭＰ(７ｍｌ)に５％のピペリジンが入ったものを使用して、ＦＭＯＣ脱保護し、３０秒加熱し、排水し、ＮＭＰ(７ｍｌ)、続いてＮＭＰ(７ｍｌ)にさらに５％のピペリジンが入ったものを用いて洗浄し、７０-７５℃で３分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄した。
ＮＭＰ(２．５ｍｌ)にエイコサンジオン酸モノ-tert-ブチルエステル／ＨＯＡＴが入った０．３Ｍ溶液を樹脂に添加し、続いて、ＮＭＰ(１ｍｌ)にＤＩＣが入った０．７５Ｍ溶液を添加した。反応体を７０-７５℃で５分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄し、工程６に記載した切断手順を実施した。
【０２８０】
実施例１５のＮ-イプシロン３１-(２-{２-[２-(２-{２-[２-((Ｓ)-３-カルボキシ-３-{[１-(１９-カルボキシ-ノナデカノイル)ピペリジン-４-カルボニル]アミノ}プロピオニルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチルアミノ)エトキシ]エトキシ}アセチル)誘導体の合成
工程９
工程２で得られた樹脂を、ＮＭＰ(７ｍｌ)に５％のピペリジンが入ったものを使用して、ＦＭＯＣ脱保護し、３０秒加熱し、排水し、ＮＭＰ(７ｍｌ)、続いてＮＭＰ(７ｍｌ)にさらに５％のピペリジンが入ったものを用いて洗浄し、７０-７５℃で３分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄した。
ＮＭＰ(２．５ｍｌ)にＦＭＯＣ-Ａｓｐ-ＯＴＢＵ／ＨＯＡＴが入った０．３Ｍ溶液を樹脂に添加し、続いて、ＮＭＰ(１ｍｌ)にＤＩＣが入った０．７５Ｍ溶液を添加した。反応体を７０-７５℃で５分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄した。
【０２８１】
工程１０
工程９で得られた樹脂に、ＦＭＯＣ-イソニペコチン酸を付着させる工程７、ついで、エイコサンジオン酸モノ-tert-ブチルエステルを付着させる工程８を施し、工程６に記載された脱保護により、合成を終了させた。
【０２８２】
実施例１８のＮ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]誘導体の合成
工程１１
Ｎ-イプシロン２６-[２-(２-{２-[２-(２-{２-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシ-ノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]誘導体を、工程１-３-４-５及び６に従い得た。
【０２８３】
実施例１６のＮ-イプシロン２６-[(Ｓ)-４-カルボキシ-４-({トランス-４-[(１９-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリル]誘導体の合成
工程１２
Ｍｔｔを脱保護した後、ＮＭＰ(２．５ｍｌ)にＦＭＯＣ-Ｇｌｕ-ＯＴＢＵ／ＨＯＡＴが入った０．３Ｍ溶液を樹脂に添加し、ＮＭＰ(１ｍｌ)にＤＩＣが入った０．７５Ｍ溶液を添加した。反応体を７０-７５℃で５分加熱し、ついで、ＮＭＰ(４ｘ７ｍｌ)で洗浄し、続いて工程４-５及び６を施した。
【０２８４】
工程１３
アルブミンバインダーの記載されたＡ部を付着させるために、工程８の手順を使用可能で、酸として適切なＡで、エイコサンジオン酸モノ-tert-ブチルエステルを置き換えた。
工程１４
アルブミンバインダーの記載されたＢ部を付着させるために、工程７の手順を使用可能で、酸として適切なＢで、ＦＭＯＣ-イソニペコチン酸を置き換えた。
工程１５
アルブミンバインダーの記載されたＣ部を付着させるために、工程９の手順を使用可能で、酸として適切なＣで、ＦＭＯＣ-Ａｓｐ-ＯＴＢＵを置き換えた。
工程１６
アルブミンバインダーの記載されたＤ部を付着させるために、工程１の手順を使用可能で、酸として適切なＤで、ＦＭＯＣ-８-アミノ-３,６-ジオキサオクタン酸を置き換えた。
【０２８５】
生物学的発見
静脈内又は皮下投与後のＧＬＰ-１の遅延性
本発明の多くのＧＬＰ-１誘導体の遅延性を、以下の方法を使用し、健康なブタに皮下投与した後、血漿におけるその濃度をモニターすることにより測定してよい。続いて、皮下投与後のＧＬＰ-１(７-３７)の血漿中の濃度と比較してよい。本発明の他のＧＬＰ-１誘導体の遅延性は、同様の方式で測定することができる。
【０２８６】
実施例７３：ミニブタにおける薬物動態試験
本発明の多くのＧＬＰ-１誘導体(実施例１、２、５、７、９、１０、１４、１６、１７、１８、１９、２０、２３、２４、２５、２６、２７、２８、３１、３３、３４、３５、４９、５０、５２、５９及び６３の化合物)に、ミニブタにおける薬物動態試験を施した。リラグルチドを、比較目的のための試験に含めた。
一般的に、試験物質は、皮下又は静脈内投与に適したビヒクルに溶解されている。本研究において、試験物質は皮下に投与された。各動物は２ｎｍｏｌ／ｋｇ体重を受容し、濃度は、次のビヒクル：０．０５％ｗ／ｖのトゥイーン８０を有する５０ｍＭのリン酸バッファー(ｐＨは約８)を使用して、投与量が約１ｍｌになるように調節される。
【０２８７】
本研究を、エレガード・ゲッティンゲン(Ellegaard Gottingen)ミニブタＡｐＳからの、オスのゲッティンゲンミニブタにおいて実施した。研究に入る前、６-１０日間の順応期間に動物を配した。順応期間の開始時、ミニブタは約５ヶ月で、７-１０ｋｇの範囲の重量であった。
本研究を、相対湿度≧５０％、室温が２１-２３℃に設定された、適切な動物用の部屋において実施した。１２時間は明るく、１２時間は暗いというサイクルで、部屋に光をあてた。６．００〜１８．００時までを明るいとした。動物を、寝具としてわら作りの囲いにおいて、各囲い毎に６匹を飼った。研究中、動物は、家庭用の質の飲用水に自由に近づくことができるが、投与の前日の午後４時から、投与の約１２時間後まで、絶食させた。動物を、到着時、及び投与した日に計量した。
【０２８８】
動物に皮下注射を１回施した。耳から約５-７ｃｍ、頸部の中央から約７-９ｃｍの頸部右側に、皮下注射をした。注射は、０．５ｃｍの針が挿入されるよう、針にストッパーが具備されたものを用いてなされた。
各試験物質を、典型的は３匹の動物に与えたが、いくつかのケースでは、１又は２匹の動物に与えた。１２-１６のサンプリング点を使用し、全血漿濃度-時間のプロフィールを各動物から得た。以下のスケジュールに従い、血液サンプルを収集した。
【０２８９】
静脈内投与後(本研究には適用せず)
プレ投与(０)、注入後０．１７(１０分)、０．５、１、２、４、６、８、１２、２４、４８、７２、９６及び１２０時間。いくつかのケースでは、投与後１６８時間及び２４０時間。
皮下投与後：
プレ投与(０)、注入後０．５、１、２、４、６、８、１２、２４、４８、７２、９６及び１２０時間。
【０２９０】
各サンプリング時間に、１-２ｍｌの血液を各動物から取り出した。血液サンプルを頸静脈から取り出した。いくつかのケースでは、注射後１６８時間及び２４０時間。
ＧＬＰ-１誘導体の酵素的分解を防止するために、安定化用のバッファーを含有する試験用チューブに、血液サンプルを収集した。適切なバッファーの例は：ＥＤＴＡ(ジ-ナトリウム)０．１８Ｍ；アプロチニン １５０００ＫＩＥ／ｍｌ、Ｖａｌ-Ｐｙｒ ０．３０ｍＭ、ｐＨは７．４に調節)である．又はＥＤＴＡ試験用チューブ(すなわち、Sarstedt Micro tube 1.3 mL K3E)に直接収集される。血液サンプルを、遠心分離の前に、最大で２０分、好ましくは氷上で保持する。
遠心分離(例えば、４ｄｇＣ、１０分、１５００Ｇ)を使用して、血漿を分離し、直ちにマイクロニック(Micronic)-チューブに移した。約２００μｌの血漿を、各マイクロニック-チューブに移した。アッセイまで、血漿を−２０℃で保存した。適切なアッセイ、例えばイムノアッセイ、特にＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＲＲＡ、又はＬＣＭＳアッセイを使用し、ＧＬＰ-１誘導体の含有量について、血漿サンプルをアッセイした。
【０２９１】
ＬＣＭＳアッセイについて、血漿サンプルを、アセラ(Accela)ＨＰＬＣポンプとオートサンプラー(双方ともThermoFisher)が連結された、ＬＴＱ-オービトラップ(Orbitrap)質量分析計(ThermoFisher Scientiifc, Bremen)において、ＬＣ-ＭＳによりアッセイした。質量分析計は電気スプレーインターフェィスに具備されており、正のイオン化モードで作動する。３００００の解像度、５Ｄａのウインドウを有する、選択されたイオンモニタリングモードで、分析を実施した。定量目的のために、５つの最も強力なアイソトープピークを、正確に５ｐｐｍ抽出した。ジュピター・プロテオ(Jupiter Proteo)カラム(４μ)９０Ａ(５０ ｘ ２．０ｍＭ  ＩＤ)において、勾配溶出を実施した。移動相は、Ａ．０．１％のギ酸、及びＢ．アセトニトリルに０．１％のギ酸が入ったものからなり、流速は０．３ｍｌ／分であった。有機溶媒を用いて、血漿サンプルを沈殿させた。血漿標準体の構築について、化合物を血漿にスパイクさせ、血漿標準体をサンプルとして処理した。定性用対称体を、２０％で基準として承認されている標準体として調製した。
【０２９２】
血漿濃度−時間プロフィールを、例えば薬物動態解析により分析した。適切な分析用ツールの例は、ウィン・ノンリン(WinNonlin)プロフェッショナル５．０(Pharsight Inc., Mountain View, CA, USA)を使用する(ＮＣＡ)である。ＮＣＡは、各動物について、個々の血漿濃度−時間プロフィールを使用して実施され、半減期(Ｔ1/2)が算出された。
【０２９３】
２つの化合物を除き、本発明の全ての試験されたＧＬＰ-１誘導体は、ミニブタへの皮下投与後、１９-１０１時間の範囲の半減期を有していた。３つの化合物を除き、本発明の全ての試験されたＧＬＰ-１誘導体は、ミニブタへの皮下投与後、２９-１０１時間の範囲の半減期を有していた。比較化合物リラグルチドの半減期は１８時間であった。
本発明の選択された誘導体を、デンマーク・ランドレースブタで試験する。
【０２９４】
ブタにおけるＧＬＰ-１誘導体の薬物動態試験
ブタ(５０％デュロック、２５％ヨークシャー、２５％デンマーク・ランドレース、約４０ｋｇ)を、実験の開始から絶食させる。５０μＭの等張液(５ｍＭのホスファート、ｐＨ７．４、０．０２％のトゥイーン(登録商標)-２０(Merck)、４５ｍｇ／ｍｌのマンニトール(ピロゲンフリー、Novo Nordisk)にて、ｋｇ体重当たり０．５ｎｍｏｌの試験用誘導体を、各ブタに投与する。頸静脈のカテーテルから、血液サンプルを取り出す。５ｍｌの血液サンプルを、１７５μｌの次の溶液：０．１８ＭのＥＤＴＡ、１５０００ＫＩＥ／ｍｌのアプロチニン(Novo Nordisk)、及び０．３０ｍＭのバリン-ピロリジド(Novo Nordisk)、ｐＨ７．４を収容したチルド冷却されたグラスに注ぐ。３０分以内に、サンプルを１０分、５-６０００*ｇの遠心分離にかける。温度を４℃で保持する。異なるグラスに上清をピペット取りし、使用するまで、−２０℃で保持する。
血漿のペプチド濃度を、種々のモノ-又はポリクローナル抗体を使用する、サンドイッチＥＬＩＳＡ又はＲＩＡにおいて測定する。抗体の選択はＧＬＰ-１誘導体に依存する。血漿におけるピーク濃度に達した時間は、選択された特定のＧＬＰ-１誘導体に応じて、広範囲で変化する。
【０２９５】
９６-ウェルマイクロタイタープレートにおける、サンドウィッチＥＬＩＳＡの一般的なアッセイプロトコル
コーティング用バッファー(ＰＢＳ)：リン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．２
洗浄用バッファー(ＰＢＳ-洗浄)：リン酸緩衝食塩水、０．０５％ｖ／ｖのトゥイーン２                               ０、ｐＨ７．２
アッセイ用バッファー(ＢＳＡ−バッファー)：リン酸緩衝食塩水、１０ｇ／ｌのウシ血清
アルブミン  
(Fluka 05477)
０．０５％ｖ／ｖのトゥイーン２０、
ｐＨ７．２
ストレプトアビジン-バッファー：リン酸緩衝食塩水、０．５ＭのＮａＣｌ、０．０５％                               ｖ／ｖのトゥイーン２０、ｐＨ７．２
標準体：血漿マトリックスにおける個々の誘導体
Ａ-ＴＮＰ：ナンセンス抗体
ＡＭＤＥＸ：ストレプトアビン(Streptavin)-西洋ワサビ-ペルオキシダーゼ(Amersham RP            N4401V)
ＴＭＢ-基質：３,３',５,５'テトラメチルベンジジン(＜０．０２％)、過酸化水素
【０２９６】
アッセイを以下のようにして実施した(容量／ウェル)：
１）ＰＢＳ-バッファーに５μｇ／ｍｌで捕捉抗体(catching antibody)が入ったもの１００μｌでのコーティング
・４℃でインキュベートｏ／ｎ
・ＰＢＳ-洗浄５回
・最小で３０分、最後の洗浄でブロック
・ついでプレートを空にする
２）１０μｇ／ｍｌのＡ-ＴＮＰと共に、ＢＳＡ-バッファーに１μｇ／ｍｌでビオチニル化検出抗体が入ったもの１００μｌ＋サンプル２０μｌ
・振揺器において、室温で２時間インキュベート。ＰＢＳ-洗浄５回。ついでプレートを空にする。
３）ストレプトアビジン-バッファーにおいて、ＡＭＤＥＸ１００μｌを１：８０００
・振揺器において、室温で４５-６０分インキュベート
・ＰＢＳ-洗浄５回、ついでプレートを空にする
４）ＴＭＢ-基質１００μｌ
・振揺器において、室温でｘ分インキュベート
・４ＭのＨ３ＰＯ４１００μｌで反応を停止させる
参照として、４５０ｎｍと６２０ｎｍでの吸光度を読み取る。
サンプル中の濃度を、標準曲線から算出した。
【０２９７】
ＲＩＡについての一般的なアッセイプロトコル
ＤＢ-バッファー：８０ｍＭのリン酸バッファー、０．１％のヒト血清アルブミン、１０                 ｍＭのＥＤＴＡ、０．６ｍＭのチオマーサル、ｐＨ７．５
ＦＡＭ-バッファー：４０ｍＭのリン酸バッファー、０．１％のヒト血清アルブミン、０．                   ６ｍＭのチオマーサル、ｐＨ７．５
木炭：４０ｍＭのリン酸バッファー、０．６ｍＭのチオマーサル、１６．７％のウシ血漿、      １５ｇ／ｌの活性炭、ｐＨ７．５(４℃での使用前、最小１時間、懸濁液を混合)
標準体：血漿マトリックスにおける個々の誘導体
【０２９８】
アッセイを、以下のようにして、ミニソープ(minisorp)チューブ、１２ｘ７５ｍｍ(容量／チューブ)において実施した：
0005606314.tif 000115
混合−４℃で３０分、インキュベート−３０００ｒｐｍで３０分、遠心分離−直後に新たなチューブに上清を移動−ストッパーで閉じ−１分間、ガンマ計測器で計測。
サンプル中の濃度を、個々の標準曲線から算出した。
【０２９９】
ＧＬＰ-１のラジオレセプターアッセイ(ＲＲＡ)：
本方法は、リードシーカー(LEADseeker)画像粒子を使用する、放射測定-リガンド結合アッセイである。アッセイは、ＧＬＰ-１レセプター、未標識のＧＬＰ-１アナログ、１２５Ｉで標識されたヒトＧＬＰ-１、及び小麦胚芽凝集素(ＷＧＡ)でコーティングされたＰＳ リードシーカー粒子を含有する膜フラグメントからなる。冷却され、１２５Ｉ-標識されたＧＬＰ-１は、レセプターに対する結合について、競合するであろう。リードシーカー粒子が付加される場合、それらは、ＷＧＡ-残基を介して、膜フラグメントの炭水化物残基に結合するであろう。１２５Ｉ-分子とリードシーカー粒子との間が近接していることで、粒子から光の放射が引き起こされる。リードシーカーは発光した光をイメージし、サンプルに存在するＧＬＰ-１アナログの量と可逆的に相関するであろう。
【０３００】
試薬及び材料：
動物血漿の予備処理：動物血漿を５６℃で４時間加熱処理し、１００００ｒｐｍで１０分遠心分離した。その後、Ｖａｌ-Ｐｙｒ(１０μＭ)及びアプロテニン(５００ＫＩＥ／ｍＬ)を添加し、使用するまで＜−１８℃で保存した。
ＧＬＰ-１アナログ標準物質：ＧＬＰ-１アナログを、加熱処理された血漿に混ぜ、約１μＭ〜１ｐＭの範囲の希釈線を作製した。
ＧＬＰ-１ ＲＲＡアッセイ用バッファー：２５ｍＭのＮａ-ＨＥＰＥＳ(ｐＨ＝７．５)、２．５ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＣｌ２、５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１％の卵白アルブミン、０．００３％のトゥイーン２０、０．００５％のバシトラシン、０．０５％のＮａＮ３。
ＧＬＰ-１レセプター懸濁液：ＧＬＰ-１レセプター膜フラグメントを、ヒト膵臓ＧＬＰ-１レセプターを安定して発現するベビーハムスター腎臓(ＢＨＫ)細胞から精製した。使用まで＜−８０℃で保存。
ＷＧＡがカップリングしたポリスチレンリードシーカー画像粒子(RPNQ0260, Amersham)：ビーズを、ＧＬＰ-１ ＲＲＡアッセイ用バッファーを用いて、１３．３ｍｇ／ｍＬの濃度に再構成させた。ついで、ＧＬＰ-１レセプター膜懸濁液を添加し、使用前に少なくとも１時間、回転させつつ、冷状態(２-８℃)でインキュベートした。
[１２５Ｉ]-ＧＬＰ-１(７-３６)アミド(Novo Nordisk A/S)。使用まで＜-１８℃で保存。
エタノール９９．９％容量(De Dansk Spritfabrikker A/S)：使用まで＜-１８℃で保存。
マルチスクリーン(MultiScreen)(登録商標)ソルビナート(Solvinert)０．４５μｍの疎水性ＰＴＦＥプレート(MSRPN0450, Millipore Corp.)
ポリプロピレンプレート(カタログ番号650201, Greiner BiO-One)
ホワイト・ポリスチレン３８４-ウェルプレート(カタログ番号781075, Greiner BiO-One)
【０３０１】
装置：
水平プレートミキサー
標準的なスイングバケット式マイクロタイタープレート回転アセンブリを具備する遠心分離器
ウルトラバップ(UltraVap)−ドライダウン・サンプル濃縮器(Porvair)
リードシーカーＴＭ多様式画像システム(Amersham)
【０３０２】
アッセイ手順：
サンプル調製：
濾液を収集するために、化学-比較用受皿(すなわち、ポリプロピレンプレート)に、マルチスクリーン(MultiScreen)(登録商標)ソルビナートフィルタープレートを搭載。
マルチスクリーン(MultiScreen)(登録商標)ソルビナートフィルタープレートの空のウェルに１５０μＬの氷冷されたエタノール９９．９％、ついで５０μＬの標準物質又は血漿サンプルを添加。フィルタープレート上に保存用蓋を配置。
水平プレートミキサーにおいて、１８-２２℃で１５分、インキュベート。
標準的なスイングバケット式マイクロタイタープレート回転アセンブリに、蓋を有する受皿とフィルターのアセンブリを配置。ついで、１５００ｒｐｍで２分、受皿の空のウェルに濾液を収集。
１５分の持続時間、加熱された(４０℃)Ｎ２を用いるウルトラバップを使用し、濾液をドライダウン。各ウェルに１００μＬのＧＬＰ-１ ＲＲＡアッセイ用バッファーを添加することにより、乾燥物質を再構成。水平ミキサーで５分、インキュベート。
【０３０３】
ＧＬＰ-１のラジオレセプターアッセイ：
次のピペット用スキーム及びホワイト・ポリスチレン３８４-ウェルプレートを使用
・３５μＬのＧＬＰ-１ ＲＲＡアッセイ用バッファー
・５μＬの再構成された濾液
・１０μＬの[１２５Ｉ]-ＧＬＰ-１(７-３６)アミド。保存溶液をＧＬＰ-１ ＲＲＡアッセイ用バッファーで、使用前に２００００ｃｐｍ／ウェルに希釈した。
・１５μＬのＧＬＰ-１レセプター膜フラグメント(〜０．５μｇ／ウェル)で、ＷＧＡ-ポリスチレンリードシーカー画像ビーズ(０．２ｍｇ／ウェル)をプレコーティング。
プレートを密封し、１８-２２℃で一晩インキュベート。
各ウェルからの発光を、１０分の持続時間、リードシーカーＴＭ多様式画像システムを使用して検出する。
【０３０４】
実施例７４：クローンされたヒトＧＬＰ-１レセプターを発現する細胞系における、ｃＡＭＰ形成の刺激
本発明の多数のＧＬＰ-１誘導体(実施例１-２８、３１-３７、及び３９-７１の化合物)の作用強度を、以下に記載するようにして、すなわちヒトＧＬＰ-１レセプターを含有する媒体における、環状ＡＭＰ(ｃＡＭＰ)形成の刺激性について測定した。比較のために、リラグルチドの作用強度も測定した。
ヒトＧＬＰ-１レセプターを発現する、安定した形質移入細胞系、ＢＨＫ４６７-１２Ａ(ｔｋ-ｔｓ１３)からの精製された細胞膜を、当該問題のＧＬＰ-１誘導体で刺激させ、ｃＡＭＰ生成の作用強度を、パーキン・エルマー・ライフ・サイエンスからのアルファスクリーンＴＭｃＡＭＰアッセイキットを使用して測定した。
安定した形質移入細胞系を、NN A/S、デンマークで調製し、高発現クローンをスクリーニング用に選択した。ＤＭＥＭ、５％のＦＣＳ、１％のＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ(ペニシリン／ストレプトマイシン)、及び０．５ｍｇ／ｍｌの選択マーカーＧ４１８において、５％のＣＯ２にて、細胞を増殖させた。
【０３０５】
約８０％のコンフルエンスの細胞を、ＰＢＳ(リン酸緩衝食塩水)で２回洗浄し；ヴェルセン(エチレンジアミン四酢酸の四ナトリウム塩の水溶液)を用いて収集し、１０００ｒｐｍで５分遠心分離し、上清を除去した。付加的な工程を、全て氷上で実施した。細胞ペレットをウルトラトゥラックス(Ultrathurax)により、１０ｍｌのバッファー１(２０ｍＭのＮａ-ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ＝７．４)において、２０-３０秒、ホモジナイズし、２００００ｒｐｍで１５分遠心分離し、ペレットを１０ｍＬのバッファー２(２０ｍＭのＮａ-ＨＥＰＥＳ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ＝７．４)に再懸濁させた。懸濁液を２０-３０秒ホモジナイズし、２００００ｒｐｍで１５分遠心分離した。バッファー２における懸濁、ホモジナイズ、及び遠心分離を、一度繰り返し、膜をバッファー２に再懸濁させ、さらなる分析用に準備するか、−８０℃で保存した。
【０３０６】
機能的レセプターアッセイを、アルファスクリーン技術により、ペプチド誘発性ｃＡＭＰ生成を測定することにより実施した。アルファスクリーン技術の基本原理は、内因性ｃＡＭＰと、外因的に付加されたビオチン-ｃＡＭＰとの競合である。ｃＡＭＰの捕捉は、アセプタービーズにコンジュゲートした特定の抗体を使用することで達成される。形成したｃＡＭＰを計測し、アルファフュージョン(AlphaFusion)マイクロプレート分析器で測定した。グラフ-パッド・プリスム(Graph-Pad Prisme)ソフトウェア(第５版)を使用し、ＥＣ５０値を算出した。
６つの化合物を除き、本発明の全ての試験されたＧＬＰ-１誘導体は、４．００以下の作用強度(ＥＣ５０)を有していることが見出された。
【０３０７】
実施例７５．高対低アルブミンにおけるＧＬＰ-１レセプターに対する親和性
ヒトＧＬＰ-１レセプターに対する、ＧＬＰ-１ペプチドの結合親和性を、レセプターから１２５Ｉ-ＧＬＰ-１を置き換える方法により測定した。
アルブミンに対するペプチドの結合性を試験するために、低濃度のアルブミン(０．００５％−トレーサーにおけるその残存量に相当)、並びに高濃度のアルブミン(２．０％添加)で、アッセイを実施した。
結合親和性におけるシフト、ＩＣ５０は、当該問題のペプチドがアルブミンに結合することの指標であり、よって動物モデルにおける、当該問題のペプチドの潜在的遅延性の薬物動態プロフィールの予測である。
【０３０８】
条件
種(インビトロ)：ハムスター
生物学的終点：レセプターの結合
アッセイ方法：ＳＰＡ
レセプター：ＧＬＰ-１レセプター
細胞系：ＢＨＫ ｔｋ-ｔｓ１３
【０３０９】
膜精製：
細胞(約８０％のコンフルエンス)をＰＢＳで２回洗浄し、(ＰＢＳ＋ＥＤＴＡ又はヴェルセンス(Versene))を収集し、ついで、それらを１０００ｒｐｍ、５分の遠心分離により分離させた。細胞／細胞ペレットは、次の工程に及ぶ可能性まで、氷上で保持しなければならない。細胞ペレットを、適量のバッファー１(細胞量によるが、例えば１０ｍｌ)において、２０-３０秒、ウルトラトゥラックスでホモジナイズした。ホモジナートを２０００ｒｐｍで１５分、遠心分離した。ペレットを１０ｍｌのバッファー２に再懸濁(ホモジナイズ)し、再度、遠心分離を行った。この工程を１度繰り返した。得られたペレットをバッファー２に再懸濁させ、タンパク質濃度を測定した。膜を−８０℃で保存した。
バッファー１：２０ｍＭのＮａ-ＨＥＰＥＳ＋１０ｍＭのＥＤＴＡ
バッファー２：２０ｍＭのＮａ-ＨＥＰＥＳ＋０．１ｍＭのＥＤＴＡ
【０３１０】
結合アッセイ：
ＳＰＡ：
試験用混合物／ペプチド、膜、ＳＰＡ-粒子及び[１２５Ｉ]を、アッセイ用バッファーに希釈した。２５μｌ(マイクロリットル)の試験用化合物／ペプチドを、オプチプレートに添加する。ＨＳＡ(「高アルブミン」実験)、又はバッファー(「低アルブミン」実験)を添加する(５０μｌ)。０．１-０．２ｍｇのタンパク質／ｍｌ(好ましくは、各膜調製物に対して最適にされる)に相当する、５-１０μｇのタンパク質／サンプル(５０μｌ)を添加。ＳＰＡ-粒子(小麦胚芽凝集素ＳＰＡビーズ)ＲＰＮＱ  ０００１)０．５ｍｇ／ウェル(５０μｌ)を添加。[Ｉ１２５]-ＧＬＰ-１(最終濃度０．０５ｎＭは４９．８８０ＤＰＭ、２５μｌに相当)と共にインキュベート開始。プレートシーラーでプレートを密封する。振揺しつつ、３０℃で１２０分インキュベート。プレートを遠心分離(１５００ｒｐｍ、１０分)し、トップカウンターで計測。
アッセイ用バッファー：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ
５ｍＭのＥＧＴＡ
５ｍＭのＭｇＣｌ２
０．００５％のトゥイーン２０
ｐＨ７．４
ＨＳＡはシグマ(SIGMA)Ａ１６５３であった。
【０３１１】
ＩＣ５０値を、レセプターから１２５Ｉ-ＧＬＰ-１の５０％が置き換えられる濃度として、曲線から読み取り、[(ＩＣ５０／ｎＭ)高ＨＳＡ]／[(ＩＣ５０／ｎＭ)超低ＨＳＡ]の比率として決定した。試験されたＧＬＰ-１誘導体の２１は１０以下、１２は１０-３０の範囲、１２は３０-５０の範囲、１４は５０-１００の範囲の比率を有していた。
【０３１２】
実施例７６：アルブミン結合親和性  
ヒト血清アルブミン(ＨＳＡ)に対する本発明の多数のＧＬＰ-１誘導体(実施例１-２、４-１６、２２-２８、３１、及び３３-７１)の親和性を、以下に記載するようにして、競合シンチレーション近接アッセイ(ＳＰＡ)により測定した。
ストレプトアビジン-ＳＰＡビーズ(GE Healthcare RPNQ0009)を５時間、ビオチニル化ＨＳＡと共にインキュベートした。バッファーを用いてビーズを洗浄し、未結合のＨＳＡを除去した。ビーズを、１２５Ｉ-標識されたアシル化ＧＬＰ-１アナログ(Ｎ-イプシロン３７-[２-(２-[２-((Ｓ)-４-((Ｓ)-４-(１２-[４-(１６-(１Ｈ-テトラゾール-５-イル)ヘキサデカノイルスルファモイル)ブチリルアミノ]ドデカノイルアミノ)-４-カルボキシブチリルアミノ)-４-カルボキシブチリルアミノ)エトキシ]エトキシ)アセチル][Ａｉｂ８，１２５Ｉ-Ｔｙｒ１９，Ｇｌｕ２２，Ａｒｇ２６，Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ３７]ＧＬＰ-１(７-３７)-ＮＨ２)と、１００ｍＭのＨｅｐｅｓ、１００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＭｇＳＯ４、０．０２５％のトゥイーン-２０、ｐＨ７．４を含有するバッファーにおいて混合した。パーキン・エルマー・オプチプレート-９６ ６００５２９０のウェルに、混合物をピペットで移し(ウェル当たり１００μｌ)、測定されるＧＬＰ-１誘導体の希釈シリーズを１００μｌ、同様のバッファーに添加した。室温でゆっくりと揺らして２０時間後、プレートを遠心分離し、トップカウンターにおいて計測した。ＧＬＰ-１誘導体の濃度の関数として、結合ｃｐｍをプロットし、競合曲線のＥＣ５０値を、ＨＳＡに対する誘導体の親和性の測定値として使用した。
【０３１３】
本発明の種々のＧＬＰ-１誘導体のアルブミン結合親和性(ＥＣ５０、ｎＭ)を、表１に示す。
表１：アルブミン結合親和性
0005606314.tif 000116
表１から明らかなように、本発明のいくつかのＧＬＰ-１誘導体は、２０００Ｍ以下のＥＣ５０に相応する、高いアルブミン結合親和性を有する(ＥＣ５０が低ければ低い程、アルブミン結合親和性は高くなる)。
【０３１４】
実施例７７：ｄｂ／ｄｂマウスにおける用量応答研究
本発明の多数のＧＬＰ-１誘導体(実施例１、７、１４、１６、２２、２３、２４、２６、２７、２８、３１、３３、４６、４７、４８、４９、５０、５３、及び５９の化合物)を、以下に記載するようにして、肥満症、糖尿病のマウスモデル(ｄｂ／ｄｂマウス)における用量応答研究を試験した。
１０-１２の週齢の５０匹のｄｂ／ｄｂマウス(Taconic, Denmark)を、Novo Nordiskの標準的な動物保護規則に従って飼い、標準的な食べ物(例えば、Altromin 1324, Brogaarden, Gentofte, Denmark)、及び水道水に自由に近づくことができ、２４℃で保持した。順応して１週間後、基礎血糖を２回算定した。
平均血糖値に基づき、４２匹のマウスをさらなる実験用に選択し、血糖値に合わせて７つのグループ(ｎ＝６)に配分した。マウスを、３-６日の期間で４回までの実験に使用し、その後安楽死させた。
【０３１５】
処理を受けた７つのグループは以下の通りである：
１：ビヒクル、皮下
２：ＧＬＰ-１誘導体、０．３ｎｍｏｌ／ｋｇ、皮下
３：ＧＬＰ-１誘導体、１ｎｍｏｌ／ｋｇ、皮下
４：ＧＬＰ-１誘導体、３ｎｍｏｌ／ｋｇ、皮下
５：ＧＬＰ-１誘導体、１０ｎｍｏｌ／ｋｇ、皮下
６：ＧＬＰ-１誘導体、３０ｎｍｏｌ／ｋｇ、皮下
７：ＧＬＰ-１誘導体、１００ｎｍｏｌ／ｋｇ、皮下
ビヒクル：５０ｍＭのホスファート、０．０５％のトゥイーン８０、ｐＨ８。ＧＬＰ-１誘導体をビヒクルに、例えば０．０５、０．１７、０．５、１．７、５及び１７ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度で溶解させ、３００マイクロリットルを、マウス５０ｇ毎に、皮下投与した(６ｍｌ／ｋｇ)。
【０３１６】
投与日、当該問題の化合物を、約午前９時(時間０)に投与した。時間−１／２ｈ(午前８時３０分)、血糖を算定し、ついで、マウスを計量した。投与日、いくつかの時点、通常は時間１、３及び６ｈ(午前１０時、午後１２時及び午後３時)に血糖を算定した。
次の日、血糖を、投与の２４、４８，７２及び９６時間後(すなわち２、３、４、５日目の午前９時)に算定し、続いて計量した。いくつかの研究においては、血糖と体重を、投与後１２０時間(６日目)にさらに算定した。
マウスは個々にデジタル計量で計量した。
【０３１７】
血糖の測定用サンプルは、意識のあるマウスの尾端キャピラリーから得た。１０μｌの血液を、ヘパリン化キャピラリーに収集し、５００μｌのグルコースバッファー(EBIOバッファー溶液、Eppendorf, Germany)に移した。グルコース酸化法(gluse analyser Biosen 5040, EKF Diagnostic, GmbH, Barleben, Germany)を使用し、グルコース濃度を測定した。分析までの１時間、サンプルを室温で保持した。分析を延期しなければならない場合、最大２４時間、サンプルを４℃で保持した。
【０３１８】
半減期(Ｔ1/2)を以下の数学的モデルに従って算出した：
仮定
(１)血漿からの化合物の消失は単一指数である；
(２)血糖における影響(デルタＢＧ)は、標準的なＳ字型用量応答曲線で記載可能である；
(３)吸収及び分配の最初の６時間は無視し、底部から基線(最小０)へのグルコースの回復のみが適合される；
ついで、グルコース反応(Ｙ)(例えばデルタＢＧ)は次の等式
Ｙ＝底部＋(頂部-底部)／(１＋用量*ｅｘｐ(−Ｉｎ２*ｔ／Ｔ1/2)／ＥＤ５０)
により記載可能であり、ここで変数ＥＤ５０及びＴ1/2は、以下の通りに定義される：
ＥＤは、ＢＧにおいて最大効果の半分まで上昇させる用量(ｎｍｏｌ／ｋｇ)である。
Ｔ1/2は、半減期(時間)であり；以下は包括的定数である：
頂部(基線グルコースへの回復後の反応)、底部(最大グルコース低下での反応)；また次は、各データ設定への定数(各用量)での定数である：
用量(投与量(ｎｍｏｌ／ｋｇ))。
全てのデータ設定を同時に適合させる。
試験される全ての化合物は、１２-３５時間の範囲の半減期(Ｔ1/2)を有する。
【配列表】
0005606314000001.app