(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハス植物（Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ）の少なくとも一部分の少なくとも１種の抽出物を、肌の局所的な適用に適合した、化粧品として許容可能なビヒクル中に含有する化粧品組成物であって、ハスの根の水性抽出物に加えて、
−活発化するか又は新しい活力を与える活性を有し、ジグアノシンポリリン酸又はジグアノシンポリリン酸を含有する抽出物を含む活性物質と、
−βエンドルフィンの分泌を刺激し、Ｎ−アセチル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−ヘキサデシルエステルジペプチドを含む活性物質と、
−ハスの花の抽出物を含む抗ラジカル剤と、
−ホスホリパーゼＡ２抑制作用を有し、アスコルビルトコフェリルリン酸塩を含む抗炎症剤と、
を含有する化粧品組成物。
【請求項２】
ハスの根の水性抽出物が、水蒸気蒸留の方法により得られる抽出物である、請求項１に記載の化粧品組成物。
【請求項３】
前記水蒸気蒸留の方法が、真空マイクロ水蒸気蒸留法（ＶＭＨＤ）の方法である、請求項２に記載の化粧品組成物。
【請求項４】
グリセロールを含む肌用保湿剤をさらに含有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
【請求項５】
前記アスコルビルトコフェリルリン酸塩がアスコルビルトコフェリルリン酸カリウムである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
【請求項６】
前記ハスの花の抽出物が、水、Ｃ１〜Ｃ４アルコール、Ｃ２〜Ｃ６グリコール、及びこれらの混合物からなる群から選択される極性溶媒又は極性溶媒の混合物を用いる抽出によって得られる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
【請求項７】
０．１〜５０重量％のＮｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａの根の水性抽出物と、０．１％〜１０重量％のＮｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａの花の抽出物と、０．５〜５重量％のジグアノシンポリリン酸又はジグアノシンポリリン酸を含有する抽出物と、０．１％〜５重量％のＮ−アセチル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−ヘキサデシルエステルジペプチドと、０．０１％〜２重量％のアスコルビルトコフェリルリン酸塩と、１〜１５重量％のグリセロールとを含有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
【請求項８】
前記ジグアノシンポリリン酸を含有する抽出物は、アルテミア・サリーナからの抽出物を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
【請求項９】
前記ハスの花の抽出物が、水、エタノール、グリセロール、ブチレングリコール及びプロピレングリコール、並びにこれらの混合物からなる群から選択される極性溶媒又は極性溶媒の混合物を用いる抽出によって得られる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
【請求項１０】
ストレスの影響に晒される肌に、沈静効果、リラックス効果及び癒し効果を提供し、リラックスした顔つき、よりスムースで引き締まった肌、落ち着いて触れるとより柔らかい肌、明るく、輝いた肌の色を徐々に得るための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
【請求項１１】
敏感性又は反応性の肌のケアのための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化粧品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ハスからの抽出物を含有する化粧品組成物及び前記組成物を用いる美容ケアの方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ハス（ネルンボヌキフェラゲルトナー（Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ  Ｇａｅｒｔｎ．））は、ハス科（Ｎｅｌｕｍｂｏｎａｃｅａｅ）の水生植物であり、特に東南アジアに発生する。
【０００３】
それは多年生植物であり、茎が海綿状で、厚く枝分かれした根茎の形態をしており、池の底に固定されている小塊茎を有し、白っぽいピンクの色の花は、１５〜３０ｃｍの直径及び約２０枚の花弁を有する。
【０００４】
ハスの抽出物の美容目的での使用は、多数のものがすでに記載されてきた。
【発明の概要】
【０００５】
しかし本発明は、ハスからの抽出物の新規な美容目的での使用、特にストレスを受けた肌のケアに関する。
【０００６】
この新規な使用は、敏感肌のケアにとりわけ適切である。
【０００７】
実際、敏感肌は普通の肌と比較して、同じ刺激、特に環境の刺激に晒された場合、過敏になる傾向があるという特徴がある。
【０００８】
この過敏性は、時々赤みを伴っての刺痛、赤み、熱、蟻走感又はかゆみによって明らかになる。
【０００９】
このような反応を開始又は誘発させる環境の刺激とは、物理的（紫外線、温度など）、化学的（汚染など）、ホルモン（月経周期）又は感情的な性質（ストレス）（Ｍｏｒｉｚｏｔら、Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｔｏｉｌｅｔｒｉｅｓ、２０００、１１５（１１）、ｐ．８３−８９）なものであってよい。
【００１０】
ある著者は、カルシトニン遺伝子に結合しているペプチドである、ＣＧＲＰ（カルシトニン遺伝子関連ペプチド）が神経媒介物質であり、肌の感覚神経の細胞レベルで、例えば紫外（ＵＶ）線が肌に照射されることにより誘発させられる炎症反応に関与していることを示した（Ｓｃｈｏｌｚｅｎら、Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｙｍｐ．Ｐｒｏｃ．、１９９９、４（１）：５５〜６０）。
【００１１】
肌の神経細胞により放出されたニューロペプチドＣＧＲＰが、真皮の内皮細胞を刺激することによって、インターロイキン８（ＩＬ−８）を放出するが、これが肌の炎症に重要なメディエータであることが示された（Ａｎｓｅｌら、Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｙｍｐ．Ｐｒｏｃ．、１９９７、２（１）：２３〜２６）。
【００１２】
ストレスに関連する影響は、敏感肌又は反応性の肌を持つ人々においてより強く皮膚レベルに表われることが多い。
【００１３】
本明細書において、ストレスとは、普通でない又は普通でないと認知された状況に直面した場合の身体の適応によって生じる緊張として定義される。
【００１４】
したがってストレスとは、それが予想可能であるかないかに関わらず、ストレス性要素の性質及び特徴の両方によって、並びに個人がそれをどのような形で認知及び経験するかによって決まる主観的な現実である。
【００１５】
研究者達は、中枢神経系レベルでのストレスの認知は、ニューロトロフィン及びニューロペプチドにより肌などの末梢性器官へ伝達されることを示した。
【００１６】
ＣＧＲＰは、敏感肌の人々においてより著しく生じる不快感のような感覚（強い疼痛又は刺痛）を悪化させることにより、皮膚レベルでの刺激状態の生成に関与しているニューロペプチドの１つである。
【００１７】
特に、ストレス、この場合音によって引き起こされたストレスに晒されたラットは、肌の感受性線維により放出されたＣＧＲＰの量が、有意に増加したことが実証された（Ｊｏａｃｈｉｍら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．、２００７  Ｊｕｌ  １７）。
【００１８】
さらに、コルチゾルは、「ストレスホルモン」として通常指定されるホルモンである。
【００１９】
コルチゾルは、副腎皮質によりコレステロールから、下垂体ＡＣＴＨの影響下で分泌されるコルチコステロイドホルモンである。
【００２０】
ある著者らは、口腔内の唾液のコルチゾルの濃度は、ストレス発症の間に変化し、ストレスを発生させる良くない事象が起こっている間にこのホルモンがさらに著しく放出されることを示した（Ｓｍｙｔｈら、Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １９９８、２３：３５３〜３７０）。
【００２１】
したがって、唾液のコルチゾルは、ストレスの影響を明らかにするための興味深いマーカーとなる。
【００２２】
別のマーカーは、αアミラーゼである。
【００２３】
αアミラーゼは、最近の研究で別のストレスのマーカーであることが示された唾液の酵素である。
【００２４】
したがって、ストレスに反応してのαアミラーゼの唾液分泌は、交感神経系の活性化に一致することが示唆された（Ｒｏｈｌｅｄｅｒら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、２００４、１０３２、２５８〜２６３）。
【００２５】
ストレス発症の前、次いで直後における唾液のαアミラーゼ活性の測定と、試験を受けている被検体の精神的状態との相関関係を示した研究がある（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ２５ｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＩＥＥＥ、２００３、４、３０７５〜３０７８）。
【００２６】
心理的ストレスの発症の経過におけるこれら２種の唾液マーカー、コルチゾル及びαアミラーゼの変化を比較する目的のための研究において、唾液のαアミラーゼが唾液のコルチゾルよりもより有意に、より急速に、心理的ストレスに反応して増加し、この酵素が、ストレス並びに弛緩及び緩和に対するより優れた指標であることを示唆していることが結論づけられた（Ｔａｋａｉ、Ａｒｃｈ．Ｏｒａｌ  Ｂｉｏｌ．、２００４、４９（１２）、９６３〜９６８）。
【００２７】
本出願人は、感覚神経及びケラチノサイトを共培養したモデルを用いて、感覚神経によるＣＧＲＰ、つまり肌の反応性に関与する神経媒介物質の分泌を抑制する好ましい効果をハスの根の水性抽出物が示すことを最初に実証した。
【００２８】
出願人は、ハスの根の水性抽出物を様々な活性成分と、任意選択で同じ植物からの他の抽出物と組み合わせることによって、ストレスの影響を著しく減少させる結果となる組成物を調製することが可能であることを次いで実証した。この効果は、上述の唾液マーカーを測定することによって実証された。
【００２９】
このような組成物は、新規な製品を構成し、注目すべき特性を示し、ストレスなど、環境因子に関連した肌への良くない影響を制限することと、特にストレスなど、前記環境因子が敏感肌上で悪化して発現される場合の肌への沈静効果及び癒し効果を発揮することとの両方を可能にする。
【００３０】
さらにこれらの組成物は、他の作用物質（複数可）、とりわけ同じ植物からの追加の抽出物が存在しているおかげで、ＣＧＲＰの生成を制限するハスの根の水性抽出物の存在に主に関連している肌への癒し効果及び沈静効果に加え、この効果との相乗効果が働き、様々な毎日の緊張又は攻撃的な因子から肌を保護し、感覚の受容性を改善することを可能にする組成物をもたらす様々な他の特性を示す。
【００３１】
実際のところ、本発明の組成物のおかげで、肌は真の弛緩状態に入る。
【００３２】
さらに、組成物に含有された少なくとも１種の特定の活性物質の存在により、筋肉弛緩効果及び／又はフリーラジカルに対するより良い保護及び／又は肌の感覚受容性の改善及び／又は細胞代謝刺激作用によりさらにリラックスした肌を得ることを可能にする少なくとも１つの追加的効果を提供することによって得られるさらなる効果改善を可能にする。
【００３３】
本発明の組成物における他の活性成分の存在により、これらの効果の少なくとも１つを得ること、したがって組成物の主要活性成分（ハスの根の水性抽出物）との相乗作用を働かせることが可能となることにより、敏感肌のケアに特に適切である組成物を得て、ストレスの様々な影響に晒された場合、肌にリラックス効果、沈静効果、及び癒し効果を提供し、並びに／又はリラックスした顔つき、よりスムースで引き締まった肌、落ち着いて触れるとより柔らかい肌、及び明るく、輝いた肌の色が徐々に得られる。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
したがって、第１の態様によると、本発明は、ハス植物（Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ）の少なくとも一部分の少なくとも１種の抽出物を、肌に局所的に適用することに適合した、化粧品として許容可能なビヒクル中に含有する新規な化粧品組成物に関し、前記組成物がハスの根の水性抽出物を含有し、
−活発化するか又は新しい活力を与える活性を有する活性物質、
−βエンドルフィンの分泌を刺激する活性物質、
−抗ラジカル活性物質及び
−抗炎症剤
からなる群から選択される少なくとも１種の活性物質をさらに含有する。
【００３５】
この第１態様の好ましい変法によると、
−活発化するか又は新しい活力を与える活性物質は、ジグアノシンポリリン酸塩又はこれを含有する抽出物、具体的にはアルテミア・サリーナ（Ａｒｔｅｍｉａ  ｓａｌｉｎａ）からの抽出物であり、
−βエンドルフィンの分泌を刺激する活性物質は、Ｎ−アセチル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−ヘキサデシルエステルジペプチドであり、
−抗ラジカル物質は、ハスの花からの抽出物であり、
−抗炎症剤は、ホスホリパーゼＡ２に作用するものから選択される。好ましくは、これはアスコルビルトコフェリルリン酸の塩、好ましくはアスコルビルトコフェリルリン酸カリウムである。
【００３６】
第２の態様によると、本発明は、第１の態様の対象物である組成物を用いる美容ケアの方法に関する。
【００３７】
この美容ケアの方法は、ストレスの影響に晒される肌に、リラックス効果、沈静効果及び癒し効果を提供し、並びに／又はリラックスした顔つき、よりスムースで引き締まった肌、落ち着いて触れるとより柔らかい肌、明るく、輝いた肌の色を徐々に得ることを意図し、問題になっている顔又は身体の肌の部分に、第１の態様の対象物である組成物の、上述の効果を得るのに有効な量を適用することを含む。
【００３８】
本発明の他の利点及び特徴は、後続の詳細な記述からより明らかになるであろう。
【００３９】
したがって、本発明の組成物は、ハスの根の水性抽出物を主要活性物質として含有し、少なくとも１種の相補的活性物質をさらに含有する。
【００４０】
出願人が得た結果により、すでに述べたように、インビトロ試験において（ケラチノサイト及び感覚神経を共培養）、主要抽出物（ハスの根の水性抽出物）の存在による癒し効果及び神経保護効果を実証することが可能となった。
【００４１】
さらに出願人は、この主要抽出物を上に定義した相補的活性物質の少なくとも１種と組み合わせた際に、唾液のコルチゾル濃度の減少に対し、インビボで広範囲な効果を得ることができ、これによって弛緩、快適さ及び全般的なリラクゼーション効果を得ることが可能なことを確証することができた。
【００４２】
これらの様々な利点は、後続の記述からより明らかになるであろう。
【００４３】
組成物に含有される主要抽出物は、ハスの根の水性抽出物である。
【００４４】
本発明の特に興味深いに変法によると、この抽出物は、溶媒として水を用いて蒸気同伴の方法で調製される。
【００４５】
この蒸気同伴の方法（本出願の中では、水蒸気蒸留とも呼ばれる）により、植物中に存在し水に可溶性である揮発性化合物、特に揮発性の芳香族化合物、例えば精油を特に抽出することが可能となる。
【００４６】
本方法の用途には、使用する植物材料は新鮮なもの、すなわち新しく収穫され乾燥していないものが好ましい。
【００４７】
この好ましい方法によると、水蒸気蒸留の方法により外部から発生する水蒸気を用いて抽出物を得るが、水蒸気は植物に含有される可溶性の揮発性化合物を飛沫同伴する。
【００４８】
本方法の代替の用途によると、抽出物は、外部からのいかなる水蒸気の供給も含まない水蒸気蒸留の方法によって得ることができる。
【００４９】
最後に述べた、本方法のこの変法によると、植物を構成する水は、物理的手段（波、圧力、温度）により直接気化させる。
【００５０】
前記抽出物は、真空マイクロ水蒸気蒸留法（ＶＭＨＤ）の方法により特に得ることができ、これによって植物を構成する水は、減圧下で一般に８０℃未満の温度で気化する。
【００５１】
水蒸気は、植物自体からのみ生じ、植物の可溶性の揮発性化合物を飛沫同伴する。
【００５２】
可溶性の揮発性化合物内に収集、濃縮した水蒸気は、次いで凝縮する。
【００５３】
縮合段階からの生成物は、次いで濾過し、次いで保存がし易いように滅菌するのが有利である。
【００５４】
したがって、本発明の組成物に使用する水性抽出物は、ハスの根（Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ）の水性抽出物、特に上述した真空マイクロ水蒸気蒸留法（ＶＭＨＤ）により得た抽出物であることが好ましい。
【００５５】
好ましい抽出物は、新鮮で、乾燥していないハス（Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ）の根から得る。
【００５６】
この抽出物は精油を含有するのが好ましい。
【００５７】
そのような抽出物の例は、ＧＡＴＴＥＦＯＳＳＥという会社からハスのＥｘｔｒａｉｔ  Ｏｒｉｇｉｎｅｌ（登録商標）という名称で市販されているハスの根の抽出物である。
【００５８】
以前に指示したように、本発明の化粧品組成物は、主要な活性物質、すなわち水蒸気蒸留で有利に得たハスの根の水性抽出物に加え、少なくとも１種の相補的活性物質を含有するが、この相補的活性物質をハスの根の水性抽出物と組み合わせた場合、唾液のコルチゾル濃度の減少に対しインビボで広い範囲の効果を得ることになり、本発明の組成物に要求される、弛緩、快適さ及び全般的なリラグゼーション効果を得ることになる。
【００５９】
以前に指示したように、本発明の組成物は、上述の反応性成分のうちの少なくとも１種を主要活性物質と組合せて含有する。一方でもちろんこれは、上述の活性成分の種類から有利に選択されるいくつかの相補的活性物質が本発明の組成物中に存在することを排除するものではない。
【００６０】
以下の点に注目されたい。
１）ヒドロキシルラジカル及び超酸化物ラジカルの形成を最適に制限するために、抗ラジカル物質として、広域性の抗ラジカル活性を有する物質を選ぶのが有利である。
【００６１】
このような状態において、本発明の組成物中にハスの花からの抽出物を抗ラジカル物質として使用するのが特に有利であることが証明された。実際、フラボノイド及びアントシアニンが特に豊富なハスの花からの抽出物を特に選択することによって、非常に広域性の抗ラジカル活性を得ることが可能であろう。
【００６２】
この理由で本発明の化粧品組成物は、ハスの根からの抽出物及びハスの花からの抽出物を含有するのが有利である。
【００６３】
ハスの花からの抽出物は、水、Ｃ１〜Ｃ４アルコール、特にエタノール、Ｃ２〜Ｃ６グリコール、特にグリセロール、ブチレングリコール及びプロピレングリコール、並びにこれらの混合物からなる群から選択される極性溶媒又は極性溶媒の混合物を用いて抽出することによって得るのが有利である。
【００６４】
したがって、本発明の組成物は、ハスの花（Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ）からの抽出物、好ましくはブチレングリコール／水の混合物中の、好ましくはフラボノイド及びアントシアニンが豊富な抽出物を含有するのが有利である。
【００６５】
そのような抽出物は、例えばＣ．Ｅ．Ｐ  ＳＯＬＡＢＩＡという会社から、ハス（花）のＧｌｙｃｏｌｉｓａｔ  ＢＧという名称で市販されている。
【００６６】
２）活発化するか又は新しい活力を与える活性を有する活性物質として、ジグアノシンホスフェート又はより好ましくはこれを含有する抽出物、特にアルテミア・サリーナからの抽出物を選ぶのが好ましい。そのような抽出物には、ＡＴＰの合成を刺激することによって細胞に新しい活力を与え、活発化する効果があるが、ＡＴＰは、細胞代謝に欠くことのできない主要なエネルギー源である。
【００６７】
３）抗炎症剤として、ホスホリパーゼＡ２抑制活性を示す物質、とりわけアスコルビルトコフェリルリン酸塩、特にアスコルビルトコフェリルリン酸カリウムを選択するのが好ましい。このようなビタミンＥ及びビタミンＣの二リン酸は、癒し効果をもたらす活性により作用し、炎症プロセスに関連した酵素であるホスホリパーゼＡ２を阻害する。
【００６８】
４）βエンドルフィンの分泌を刺激する活性物質として、筋線維の収縮回数を減らし、ケラチノサイトによるβエンドルフィンの生成を刺激する、弛緩特性を有するリポペプチドを選択するのが好ましい。このリポペプチドは、Ｎ−アセチル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−ヘキサデシルエステルジペプチドであるのが有利である。
【００６９】
前に指摘した通り、上述した相補的活性成分の少なくとも１種、好ましくは上記各種類のうちの少なくとも１種の活性成分を含有する組成物を、唾液のコルチゾルのアッセイを用いて、モデルにインビボでテストし、これにより本発明の組成物により提供される真のリラクゼーションの証拠が得られた。
【００７０】
さらに、本発明の化粧品組成物は、保湿剤、特にグリセロールを含有するのが有利である。
【００７１】
以前に述べた理由で、本発明の化粧品組成物は、ハスの花からの抽出物、特に極性溶媒を用いる抽出によって得た抽出物を含有するのが有利である。
【００７２】
ハスの花からの抽出物並びに根の水性抽出物を任意選択で含む本発明の化粧品組成物は、ハスの乾燥抽出物の全含有量が乾燥抽出物の０．０００１〜５重量％の間、好ましくは０．００１〜２重量％の間、より好ましくは０．０１〜１重量％の間であるのが有利である。
【００７３】
この組成物は、ハスの乾燥抽出物の全含有量が乾燥抽出物の０．０００１〜５重量％の間、好ましくは０．００１〜２重量％の間、より好ましくは０．０１〜１重量％の間であるのが有利である。
【００７４】
したがって本発明による組成物は、好ましくは０．１重量％〜９９重量％、好ましくは０．１重量％〜５０重量％のハスからの抽出物又はハスからの抽出物の混合物を含有する。
【００７５】
化粧品組成物は、ハスの根からの抽出物及びハスの花からの抽出物を含有するのが有利である。有利な実施形態によると、上述した４種類のうちの少なくとも１種から選択される相補的な活性物質を少なくとも１種さらに含有する。
【００７６】
ハスの花からの抽出物は、水、Ｃ１〜Ｃ４アルコール、特にエタノール、Ｃ２〜Ｃ６グリコール、特にグリセロール、ブチレングリコール及びプロピレングリコール、及びこれらの混合物を含む群から選択される極性溶媒又は極性溶媒の混合物を用いる抽出により得るのが有利である。
【００７７】
本発明の化粧品組成物の様々な成分の割合に関しては、組成物は１０〜５０重量％のハスの根からの水性抽出物及び０．１〜１０重量のハスの花からの抽出物を含有するのが有利であるということに注目されたい。
【００７８】
もう一方の相補的活性物質は、これらがその溶液中に存在する場合には、以下の割合で、
−０．５〜５重量％のジグアノシンポリリン酸塩又はこれを含有する抽出物、特にアルテミア・サリーナからの抽出物と
−０．１〜５重量％のＮ−アセチル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−ヘキサデシルエステルジペプチドとを含有し、さらに組成物は、１〜１５重量％のグリセロールも含有することが有利である。
【００７９】
したがって、本発明の組成物は、ハスの根からの水性抽出物とハスの花からの抽出物とを含有するのが有利である。
【００８０】
本発明の好ましい用途によると、組成物は、０．１〜５０重量％のハス（Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ）の根からの水性抽出物と、０．１％〜１０重量％のハス（Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ）の花からの抽出物とを含有し、０．５〜５重量％のジグアノシンポリリン酸塩又はこれを含有する抽出物、特にアルテミア・サリーナからの抽出物と、０．１％〜５重量％のＮ−アセチル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−ヘキサデシルエステルジペプチド、すなわちＣａｌｍｏｓｅｎｓｉｎｅ（登録商標）という名称で市販されているものと、０．０１％〜２重量％のアスコルビルトコフェリルリン酸の塩と、１〜１５重量％のグリセロールとを有利に含み得る。
【００８１】
化粧品組成物は、顔料、真珠貝、染料、ポリマー、界面活性剤、粘度改善剤、香料、電解液、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、保存剤、及びこれらの混合物から選択できる少なくとも１種の、化粧品として許容可能な賦形剤を含む。
【００８２】
本発明による化粧品組成物は、例えば美容液、ローション、乳濁液、クリーム、これらは着色していてもいなくてもかまわない、又は代わりにハイドロゲル、好ましくはマスク、又はそれはスティック若しくはパッチの形態であってよい。
【００８３】
本発明による化粧品組成物は、前記抽出物又は前記組成物を顔又は身体の肌に適用した場合、特に望ましい沈静効果及び癒し効果を示し、リラックスした顔つき、よりスムースで引き締まった肌、落ち着いていて、触れるとより柔らかい肌、及び明るく輝いた肌の色を得ることを特に可能にする。
【００８４】
本発明は、以前に記述された組成物を有効量で用いることにより、前記抽出物又は前記組成物を顔又は身体の肌に適用した場合、ストレスの影響に晒される肌に、リラックス効果、沈静効果及び癒し効果を提供し、リラックスした顔つき、よりスムースで引き締まった肌、落ち着いていて触れるとより柔らかい肌、明るく輝いた肌の色を徐々に得るための美容ケアの方法にも関する。
【００８５】
本発明による組成物は、身体又は顔の肌のすべて又は一部、特に感度が悪化した肌ゾーン、特に顔への適用を対象とする。
【００８６】
美容ケアの方法は、敏感性又は反応性の肌のケアを特に対象とする。
【実施例】
【００８７】
実施例１：感覚神経及びケラチノサイトを共培養したモデルにおけるＣＧＲＰ（カルシトニン遺伝子関連ペプチド）の放出についてのハス（Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ）の根からの抽出物の活性
選択されたモデルは、ラットの感覚神経及びヒトのケラチノサイトの共培養である。このモデルに、市販のハスからの抽出物、より正確には、Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅという会社から市販されているハスの根（Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ）のＥｘｔｒａｉｔ  Ｏｒｉｇｉｎｅｌ（登録商標）を適用した。
【００８８】
ラット胎仔の脊髄神経節から得た感覚神経の培養を選択したのは、これらの神経細胞の生理機能がヒトの感覚神経に非常に類似しているという理由からである。水性抽出物の効果を、感覚神経によるＣＧＲＰの放出を測定することにより評価する。
【００８９】
ＣＧＲＰ（カルシトニン遺伝子関連ペプチド）は、強い疼痛又は刺痛などの不快感の感覚を悪化させることにより肌の反応性に関与している神経媒介物質である。
【００９０】
加えて、神経細胞の細胞体の数を染色及び標識により評価した。
【００９１】
機器及び方法
１．使用した細胞
感覚神経
−種類：Ｈａｌｌらによる（Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９９７、１７（８）：２７７５〜８４）に記載された技法に従い調製した感覚神経の初代培養
−培地：ＮａＨＣＯ３で緩衝した、超純水（Ｍｅｒｃｋ）で再構成した粉末形態のＤＭＥＭ（Ｉｎｖｌｔｒｏｇｅｎ  ２１３３１）
Ｌ−グルタミン２ｍＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ２５０３０）
ペニシリン５０ＩＵ／ｍｌ−ストレプトマイシン５０μｇ／ｍｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １５０７０）サプリメントＮ２（１７５０２）
５ｎｇ／ｍｌ神経成長因子（ＮＧＦ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １３２９０）
２．５ｎｇ／ｍｌニューロトロフィン３（ＮＴ−３、Ｔｅｂｕ４５０−０３−ｂ）
【００９２】
ヒトのケラチノサイト
−種類：第３経路（Ｒ３  Ｋ０１５）で使用される、回復手術から単離した健常なヒトのケラチノサイト。
−培地：Ｋ  ＳＦＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １７００５）、サプリメントなし
【００９３】
２．感覚神経の培養及び処置
脊髄神経節を１５日目のラット胎仔から取る。
【００９４】
神経節を酵素により及び機械的に解離した後、懸濁液中の細胞を、１穴につき１５０００細胞の密度で培地の９６穴のプレート内に播種した。
【００９５】
細胞は、３７℃及び５％ＣＯ２で、水分飽和した温室内に置いた。
【００９６】
３日間培養した後、培養物の上清を取り除き、
・１００％の超純水を添加して粉末形態の培地から再構成された培地と、
・テストする市販の抽出物２５％及び超純水７５％を添加して粉末形態の培地から再構成された培地と、
・同じ抽出物５０％及び超純水５０％を添加して粉末形態の培地から再構成された培地とで交換した。
【００９７】
これらすべての培地は、５ｎｇ／ｍＬのＮＧＦ及び２．５ｎｇ／ｍｌのＮＴ３を含有する。培養液量の半分を一日おきに取り替えた。
【００９８】
３．感覚神経及びケラチノサイトの共培養
４日間のインキュベーション（７日間の神経細胞培養）の後、１つの培養穴につき１００００のケラチノサイトを加え、細胞を４日間、３７℃及び５％ＣＯ２でインキュベーションした。
【００９９】
４．ＣＧＲＰでの処置及びアッセイ
４日間の共培養（１１日間の神経細胞培養）の後、培養物の上清を取り除き、テストする市販の抽出物の存在下で、カプサイシン有り無しに関わらず、１０−６Ｍで２５分間の間、３７℃及び５％ＣＯ２で、水分飽和した温室内で、細胞をインキュベーションする。
【０１００】
実験条件の各セットは、４通り行った。
【０１０１】
これらのインキュベーションの最後に、上清を採取し、培養物の上清中のＣＧＲＰ含有量を、製造業者の推薦するプロトコルに従い、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒａｔ  ＣＧＲＰ酵素免疫アッセイキットＡ０５４８２）で測定した。
【０１０２】
５．細胞体の数の分析
最後に述べるインキュベーション（１２日間の神経細胞培養）の最後に、細胞をアルコール酢酸溶液中に固定する。
【０１０３】
神経細胞の細胞体は、神経細胞の細胞体と反応する抗体であるタンパク質「微小管結合タンパク質（ＭＡＰ２）」を対象とする抗体で標識する。
【０１０４】
２時間のインキュベーションの後で、細胞はＰＢＳで洗浄し、標識は蛍光の抱合体（ＧＡＲ  Ａｌｅｘａ  ５６８）で示される。
【０１０５】
平行して、核はＨｏｅｃｈｓｔ製の溶液で標識した。
【０１０６】
高分解能画像システム、ＩｎＣｅｌｌ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（商標）１０００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、画像処理（培養穴１つにつき３つの画像又は１つの実験条件につき倍率２０倍で１２枚の写真）及び細胞体の数の分析を行った。
【０１０７】
・結果
神経細胞から放出されたＣＧＲＰの量を、テストした各条件における神経細胞の数（ＣＧＲＰの量／１つの条件ごとの神経細胞の平均数）と呼ぶ。
【０１０８】
結果を以下の表に示す。
【０１０９】
【表１】
0005582630.tif 000002
【０１１０】
７日間のインキュベーション後で、２５％及び５０％でのハス（Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ）の根の抽出物の存在下で、ベースライン条件において、１つの神経細胞ごとのＣＧＲＰ放出量は、対照としての役目を果たす培地と比較して有意に抑制されている。
【０１１１】
４．結論
市販のハス（Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ）の根の抽出物を含有する培地に置かれた感覚神経によるＣＧＲＰの放出は、対照培養の神経細胞よりも有意に低い。
【０１１２】
テストした抽出物は、神経細胞の数、感覚神経の数、及び両セットの条件（２５％及び５０％）において、ベースラインの活性を抑制している。
【０１１３】
しかし抽出物は、神経細胞の機能には影響を与えず、神経細胞はカプサイシン（顔料抽出物であり、肌に存在する知覚線維を励起させる）による刺激作用という生理的能力をまだ持っている。
【０１１４】
これらの結果は、ハスの根の前記抽出物を、沈静剤及び癒し剤として化粧品組成物に用いる利点を実証している。
【０１１５】
実施例２：顔のケア用の美容クリーム
以下に示す配合（重量によるパーセンテージ）を有するクリームは水中油型の乳濁液である。
【０１１６】
％
精製水                                                                ３２．８
ハス（Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ）の根の水性抽出物
（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅという会社から市販の
Ｅｘｔｒａｉｔ  Ｏｒｉｇｉｎｅｌ（登録商標））                        ２５．０
Ｃａｌｍｏｓｅｎｓｉｎｅ（登録商標）                                    ３．０
植物源のグリセロール                                                    ２．０
アルテミア・サリーナの抽出物                                            １．０
ハス（Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ）の花の抽出物
（ＳＯＬＡＢＩＡという会社からＧｌｙｃｏｌｉｓａｔ  ＢＧ（登録商標）
という名称で市販されている）                                            ０．１
アスコルビルトコフェリルリン酸カリウム
（Ｓｅｐｉｖｉｔａｌ（登録商標））                                      ０．０５
乳化賦形剤、香料及び保存剤                                      十分量  １００％
【０１１７】
水中油型乳濁液は、当業者に周知の従来の方法で調製する。
【０１１８】
このようにして調製したクリームは、顔に塗ることを意図している。
【０１１９】
実施例３：唾液のコルチゾル分泌に対する実施例２の組成物のインビボでの活性
実施例２の組成物を顔に塗布した場合のインビボでの美容効果を測定する。
【０１２０】
研究の目的は、特別な収集装置を用いて唾液のコルチゾル濃度及びα−アミラーゼ濃度を測定し、分光光度法により測定することである。
【０１２１】
・研究プロトコル
被検者らは、唾液試験の前の日にカフェイン、アルコール又はニコチンを摂取してはならず、試験当日にはビタミンＣの摂取を避けなければならない。
【０１２２】
唾液収集から一時間前の間には、被検者らは、歯磨きをしたり、何か食べたりしてはならない。さらに、ホルモンを摂取している被検者らは、試料を取る１２時間前の時間帯には必ずそれを中断しなければならない。
【０１２３】
第１に、参加者達は、唾液収集から少なくとも１０分前から、湿度（５０％±１０％）及び温度（２２℃±２℃）で調節されている部屋の中で、座っている体位で静止している。
【０１２４】
実施例２による組成物を顔に塗る前に、１つの唾液試料を採取する。
【０１２５】
唾液試料収集のため被検者は、歯用の無菌の綿（ｓａｌｉｖｅｔｔｅ（登録商標）、Ｓａｒｓｔｅｄｔ）１巻を２〜３分の間噛む。
【０１２６】
収集後、この唾液試料は適切なチューブに置き、次いで分析まで−２０℃で保管する。
【０１２７】
実施例２による組成物を顔全体に塗ってから１０分後、唾液試料を再び採取する。
【０１２８】
・唾液中のコルチゾル及びα−アミラーゼの測定
唾液中のコルチゾルの免疫酵素分析用キット（Ｓａｌｉｍｅｔｒｉｃｓ、参照１〜３０１２）
この方法は、コルチゾルのモノクローナル抗体を使用する。アッセイは、唾液試料並びにコルチゾル標準物質について実施される。
【０１２９】
コルチゾルは、ペルオキシダーゼに結合したコルチゾルと競合させる。
【０１３０】
抗体に結合したコルチゾル−ペルオキシダーゼの部分は、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質との比色反応により測定する。
【０１３１】
光学密度は４５０ｎｍで測定する。
【０１３２】
コルチゾル−ペルオキシダーゼの量は、存在するコルチゾルの量に反比例する。
【０１３３】
唾液中のα−アミラーゼのアッセイ用キット（Ｓａｌｉｍｅｔｒｉｃｓ、参照１〜１９０２）
この方法は、マルトトリオースに結合した色素生産性基質である２−クロロ−ｐ−ニトロフェノールを用いる。
【０１３４】
α−アミラーゼの酵素活性によって２−クロロ−ｐ−ニトロフェノールが放出され、これを分光光度法で４０５ｎｍで測定する。
【０１３５】
試料内に存在するα−アミラーゼ活性は、４０５ｎｍで測定する光吸収の増加に正比例する。
【０１３６】
・結果のまとめ
コルチゾル
【表２】
0005582630.tif 000003
【０１３７】
２１名の被検者において、コルチゾルは減少する傾向にある（ｐ＝０．１１）。
【０１３８】
被検者の７５％、すなわち１８／２４がコルチゾルの著しい減少を示している。
【０１３９】
α−アミラーゼ
【表３】
0005582630.tif 000004
【０１４０】
２１名の被検者において、実施例２による化粧品組成物を塗布した後の唾液のα−アミラーゼ濃度が有意に減少している。
【０１４１】
結論
ハス（Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ）の根と花の混合物を含有する化粧品組成物を塗布した後で、唾液のコルチゾル及びα−アミラーゼ濃度が減少している。
【０１４２】
この減少は、ストレス状態に関連した症状の改善が全体的に肌の状態に反映され、和らいで、リラックスしている状態を示すものである。この効果によって、敏感肌のケア並びに顔肌への沈静効果及び癒し効果を得るために本発明の組成物を使用することが特に可能となる。
【０１４３】
実施例４：実施例２の組成物の美容効果
１．２４時間後の保湿効果の評価
実施例２による組成物を顔全体に塗ってから２４時間、コルネオメトリー（ｎ＝１０被検者）により保湿効果を求める。
保湿作用
２時間後＋５１％
４時間後＋５１％
６時間後＋４９％
２４時間後＋３７％
【０１４４】
組成物は、塗布してから２４時間の間まで著しい保湿効果を示している。
【０１４５】
２．即効性のしわのばし効果の評価
眼の周辺のしわのばし効果を、実施例２による組成物の塗布より１時間前及び１時間後の測定により決定する（ｎ＝１５被検者）。
【０１４６】
写真を撮り、キャストシャドーによる画像分析も行う。
【０１４７】
得た結果は、以下の通りである。
−しわの数：−１２％
−矯正された深さの平均：−１３％
−全長：−２０％
【０１４８】
眼の周辺での組成物のしわのばし効果は著しい。
【０１４９】
３．抗ラジカル効果の評価
組成物は、各塗布ごとに２時間の間隔をあけて４回塗布する。
【０１５０】
抗ラジカル活性は、蛍光光度分析によりペルオキシド濃度を求めることにより、エックスビボ方法（Ｄ−ｓｑｕａｍｅの剥離の測定）で評価する。
【０１５１】
測定は、試験組成物の最初の塗布から２４時間後に行い、その結果を未処置の対照ゾーンで得た結果と比較する。
【０１５２】
肌の表面に存在する酸素化した反応性の種の、２８％もの著しい減少が観察されている。