(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における動脈コンプライアンスを増加させるための薬学的処方物であって、該薬学的処方物は、全体的な動脈コンプライアンスが減少した被験体に投与されることを特徴とし、ここで該被験体において測定された全体的な動脈コンプライアンスは、健常被験体における全体的な動脈コンプライアンスと比較して該被験体において減少しており、そして該薬学的処方物は、該被験体における動脈コンプライアンスを増加させるために有効な量のヒトＨ２レラキシンを含有する、薬学的処方物。
【請求項２】
前記全体的な動脈コンプライアンスが面積法を用いて大動脈圧波形の拡張期の減衰から測定される、請求項１に記載の薬学的処方物。
【請求項３】
前記全体的な動脈コンプライアンスが一回拍出量の脈圧に対する比として計算され、そして該一回拍出量が心拍出量の心拍数に対する比として定義される、請求項１に記載の薬学的処方物。
【請求項４】
前記被験体における前記全体的な動脈コンプライアンスが、該被験体への前記薬学的処方物の投与後少なくとも１０％増加する、請求項１〜３のいずれかに記載の薬学的処方物。
【請求項５】
前記被験体における前記全体的な動脈コンプライアンスが、該被験体への前記薬学的処方物の投与後１５〜２０％増加する、請求項１〜３のいずれかに記載の薬学的処方物。
【請求項６】
前記薬学的処方物が、レラキシンの血清中濃度を０．５〜８０ｎｇ／ｍｌに維持するように所定の速度で前記被験体に投与される、請求項１〜３のいずれかに記載の薬学的処方物。
【請求項７】
前記レラキシンが組換えヒトレラキシンである、請求項１〜３のいずれかに記載の薬学的処方物。
【請求項８】
前記薬学的処方物が毎日投与される、請求項１〜３のいずれかに記載の薬学的処方物。
【請求項９】
前記薬学的処方物が注射可能な処方物である、請求項１〜３のいずれかに記載の薬学的処方物。
【請求項１０】
前記薬学的処方物が徐放性処方物である、請求項１〜３のいずれかに記載の薬学的処方物。
【請求項１１】
前記薬学的処方物が連続注入により送達される、請求項１〜３のいずれかに記載の薬学的処方物。
【請求項１２】
前記被験体が、アテローム性動脈硬化症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、冠状動脈疾患、硬皮症、脳卒中、拡張期機能不全、家族性高コレステロール血症、孤立性収縮期高血圧、原発性高血圧、二次性高血圧、左室肥大、長期間喫煙に関連する動脈壁の硬化、肥満に関連する動脈壁の硬化、年齢に関連する動脈壁の硬化、全身性エリテマトーデス、子癇前症および高コレステロール血症からなる群より選択される１つ以上の病気と診断されている、請求項１〜３のいずれかに記載の薬学的処方物。
【請求項１３】
前記被験体が閉経周辺期の女性、閉経期の女性または閉経後の女性である、請求項１〜３のいずれかに記載の薬学的処方物。
【請求項１４】
被験体における動脈コンプライアンスを増加させるための薬学的処方物であって、該薬学的処方物は、局所的な動脈コンプライアンスが減少した被験体に投与されることを特徴とし、ここで該被験体において測定された局所的な動脈コンプライアンスが、健常被験体における全体的な動脈コンプライアンスと比較して該被験体において減少しており、そして該薬学的処方物は、該被験体における動脈コンプライアンスを増加させるために有効な量のヒトＨ２レラキシンを含有する、薬学的処方物。
【請求項１５】
前記被験体における前記局所的な動脈コンプライアンスが前記薬学的処方物の投与後少なくとも１０％増加する、請求項１４に記載の薬学的処方物。
【請求項１６】
前記被験体における前記動脈コンプライアンスが前記薬学的処方物の投与後１５〜２０％増加する、請求項１４に記載の薬学的処方物。
【請求項１７】
前記薬学的処方物が、レラキシンの血清濃度を約０．５〜８０ｎｇ／ｍｌに維持するように所定の速度で前記被験体に投与される、請求項１４に記載の薬学的処方物。
【請求項１８】
前記薬学的処方物が毎日投与される、請求項１４に記載の薬学的処方物。
【請求項１９】
前記薬学的処方物が注射可能な処方物である、請求項１４に記載の薬学的処方物。
【請求項２０】
前記薬学的処方物が徐放性処方物である、請求項１４に記載の薬学的処方物。
【請求項２１】
前記薬学的処方物が連続注入により送達される、請求項１４に記載の薬学的処方物。
【請求項２２】
前記被験体が、アテローム性動脈硬化症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、冠状動脈疾患、硬皮症、脳卒中、拡張期機能不全、家族性高コレステロール血症、孤立性収縮期高血圧、原発性高血圧、二次性高血圧、左室肥大、長期間喫煙に関連する動脈壁の硬化、肥満に関連する動脈壁の硬化、年齢に関連する動脈壁の硬化、全身性エリテマトーデス、子癇前症および高コレステロール血症からなる群より選択される１つ以上の病気と診断されている、請求項１４に記載の薬学的処方物。
【請求項２３】
前記被験体が閉経周辺期の女性、閉経期の女性または閉経後の女性である、請求項１４に記載の薬学的処方物。
【請求項２４】
被験体における動脈コンプライアンスを増加させるための薬学的処方物であって、該薬学的処方物は、限局的な動脈コンプライアンスが減少した被験体に投与されることを特徴とし、ここで該被験体において測定された限局的な動脈コンプライアンスが健常被験体における全体的な動脈コンプライアンスと比較して該被験体において減少しており、該薬学的処方物は、該被験体における動脈コンプライアンスを増加させるために有効な量のヒトＨ２レラキシンを含有する、薬学的処方物。
【請求項２５】
前記限局的な動脈コンプライアンスが脈波速度を用いて測定される、請求項２４に記載の薬学的処方物。
【請求項２６】
前記被験体における前記限局的な動脈コンプライアンスが、該被験体への前記処方物の投与後少なくとも１０％増加する、請求項２４に記載の薬学的処方物。
【請求項２７】
前記被験体における前記限局的な動脈コンプライアンスが、該被験体への前記薬学的処方物の投与後１５〜２０％増加する、請求項２４に記載の薬学的処方物。
【請求項２８】
前記薬学的処方物が、レラキシンの血清濃度を約０．５〜８０ｎｇ／ｍｌに維持するように所定の速度で前記被験体に投与される、請求項２４に記載の薬学的処方物。
【請求項２９】
前記薬学的処方物が毎日投与される、請求項２４に記載の薬学的処方物。
【請求項３０】
前記薬学的処方物が注射可能な処方物である、請求項２４に記載の薬学的処方物。
【請求項３１】
前記薬学的処方物が徐放性処方物である、請求項２４に記載の薬学的処方物。
【請求項３２】
前記薬学的処方物が連続注入により送達される、請求項２４に記載の薬学的処方物。
【請求項３３】
前記被験体が、アテローム性動脈硬化症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、冠状動脈疾患、硬皮症、脳卒中、拡張期機能不全、家族性高コレステロール血症、孤立性収縮期高血圧、原発性高血圧、二次性高血圧、左室肥大、長期間喫煙に関連する動脈壁の硬化、肥満に関連する動脈壁の硬化、年齢に関連する動脈壁の硬化、全身性エリテマトーデス、子癇前症および高コレステロール血症からなる群より選択される１つ以上の病気と診断されている、請求項２４に記載の薬学的処方物。
【請求項３４】
前記被験体が閉経周辺期の女性、閉経期の女性または閉経後の女性である、請求項２４に記載の薬学的処方物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願に対する相互参照）
本出願は、２００４年３月１９日に出願された米国特許出願第６０／５５４，７１６号に対する優先権を主張し、その教示は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（連邦政府の後援研究に関する記述）
米国政府は、米国国立衛生研究所により資金援助された助成金番号ＲＯ１ＨＬ６７９３７に従って、本発明における一部の権利を有し得る。
【０００３】
（発明の分野）
本発明は、動脈コンプライアンス、特に動脈コンプライアンスを増加させるためのレラキシンの使用の分野に属する。
【背景技術】
【０００４】
（発明の背景）
動脈コンプライアンスは明白な心臓血管疾患を有さない健常個体においても年齢とともに低下する。加齢に伴って大型および小型の動脈が圧力増加に応答して拡張する能力の低下が観察される。動脈コンプライアンスの年齢と結びついた低下は心臓血管疾患の発生の独立した危険因子であり、多くの他の病理学的状態に関連している。例えば、低下した動脈コンプライアンスはまたＩ型糖尿病およびＩＩ型糖尿病の両方に関連している。糖尿病の動脈は、非糖尿病個体の動脈と比較して加速された速度で老化するようであることが報告されている。例えば、非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；特許文献１；特許文献２を参照のこと。
【特許文献１】米国特許第６，２５１，８６３号明細書
【特許文献２】米国特許第６，２１１，１４７号明細書
【非特許文献１】Ａｒｎｅｔｔら、「Ａｍ  Ｊ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．」、１９９４年、第１４０巻、ｐ．６６９−６８２
【非特許文献２】Ｒｏｗｅ、「Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ．」、１９８７年、第６０巻、ｐ．６８Ｇ−７１Ｇ
【非特許文献３】Ｃａｍｅｒｏｎら、「Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒ．」、２００３年、第２６巻、第７号、ｐ．２１３３−８
【非特許文献４】Ｋａｓｓら、「Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ」、２００１年、第１０４巻、ｐ．１４６４−１４７０
【非特許文献５】Ａｖｏｌｉｏら、「Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ」、１９８３年、第６８巻、ｐ．５０−５８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
動脈コンプライアンスを増加させる方法、および、低下した動脈コンプライアンスに伴うかそれにより生じる障害の処置に対する必要性がこの分野に存在する。本発明はこれらの必要性に取り組む。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本発明は、レラキシンレセプターアゴニストを含有する有効量の処方物で減少した動脈コンプライアンスを有する個体を処置する方法を提供する。好ましい実施形態において、レラキシンレセプターアゴニストは組換えヒトレラキシン、例えばヒトＨ２レラキシンである。
【０００７】
本発明の１つの実施形態において、本発明は、被験体における動脈コンプライアンスを増加させる方法を提供し、この方法は以下：この被験体における全体的な動脈コンプライアンスを測定する工程；この全体的な動脈コンプライアンスが健常被験体における全体的な動脈コンプライアンスと比較してこの被験体において減少していることを決定する工程；および、この被験体における動脈コンプライアンスを増加させるためにレラキシンを含有する薬学的処方物をこの被験体に投与する工程を包含する。１つの実施形態において、全体的な動脈コンプライアンスは、面積法を用いて大動脈圧波形の拡張期の減衰から測定され得る。別の実施形態において、全体的な動脈コンプライアンスは、一回拍出量の脈圧に対する比として計算され、そしてこの一回拍出量は心拍出量の心拍数に対する比として定義される。
【０００８】
関連する実施形態において、被験体の局所的動脈コンプライアンスまたは限局的な動脈コンプライアンスは、全体的な動脈コンプライアンス測定に加えて、またはその代替として測定され得、そして、局所的または限局的な動脈コンプライアンスが同様の状況下の健常個体で期待される局所的または限局的な動脈コンプライアンスと比較して減少している場合に、レラキシンが投与されてその個体における動脈コンプライアンスを増加させ得る。
【０００９】
さらに別の実施形態において、レラキシンが投与される被験体は以下の障害：アテローム性動脈硬化症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、冠状動脈疾患、硬皮症、脳卒中、拡張期機能不全、家族性高コレステロール血症、孤立性収縮期高血圧、原発性高血圧、二次性高血圧、左室肥大、長期間喫煙に関連する動脈壁の硬化、肥満に関連する動脈壁の硬化、年齢に関連する動脈壁の硬化、全身性エリテマトーデス、子癇前症および高コレステロール血症の１つ以上に罹患している。関連する実施形態において、本発明は閉経周辺期、閉経期または閉経後の女性における、そして上記の障害の１つの危険性を有する個体における、動脈コンプライアンスを増加させる方法を提供する。
【００１０】
本発明のさらなる実施形態において、レラキシンの投与は、投与前に測定された動脈コンプライアンスと比較して少なくとも１０％、１５％、２０％またはそれより多く動脈コンプライアンスを増加させる。なおさらなる実施形態において、本発明は、減少した動脈コンプライアンスを有する個体への、０．５〜８０ｎｇ／ｍｌの血清レラキシン濃度を維持するような所定の速度でのレラキシンの投与を提供する。１つの実施形態において、レラキシンは組換えヒトレラキシンである。なお別の実施形態において、レラキシンは組換えＨ２レラキシンである。関連する実施形態において、レラキシンは毎日、注射可能な処方物中で、徐放性処方物として、または、連続注入として投与され得る。
【００１１】
（定義）
本明細書中で交換可能に使用される用語「被験体」、「宿主」、「個体」および「患者」は、診断または治療が望まれる任意の被験体、特に哺乳動物被験体、特にヒトを指す。他の被験体としては、ウシ、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマなどが挙げられ得る。多くの実施形態において被験体は、低下した動脈コンプライアンスに関連するか、その結果生じる疾患または状態に対する処置が必要なヒトである。
【００１２】
「処置」、「処置する」、「治療」などの用語は、本明細書中で、一般的に所望の治療上の効果、薬理学的効果または生理学的な効果が得られることを指す。効果は疾患またはその症状を完全または部分的に予防する点で予防的なものであってもよく、そして／または、疾患および／または疾患に起因する有害な効果に対する部分的または完全な治癒の点で、治療的であってもよい。本明細書において使用される場合、「処置」とは、哺乳動物、例えばヒトにおける疾患の任意の処置を包含し、そして、（ａ）疾患に罹患しやすいがまだ疾患を有すると診断されていない被験体において疾患が生じることを防止すること；（ｂ）疾患を抑制、すなわちその発生を停止させること；および（ｃ）疾患を軽減、すなわち疾患の後退を引き起こすことを包含する。
【００１３】
本明細書中で使用される場合、用語「単離された」および「実質的に精製された」は、本明細書中で交換可能に使用され、「単離されたレラキシン」の文脈で使用される場合、レラキシンポリペプチドが天然に存在する環境とは異なる環境に存在するレラキシンポリペプチドを指す。本明細書中で使用される場合、用語「実質的に精製された」は、その天然の環境から取り出されており、天然には伴っている他の成分が少なくとも６０％非含有、好ましくは７５％非含有、最も好ましくは９０％非含有のレラキシンポリペプチドを指す。
【００１４】
本発明をさらに説明する前に、本発明は記載した特定の実施形態に限定されないと理解されるべきである。本発明の範囲は、添付する特許請求の範囲によってのみ限定される。
【００１５】
在る範囲の数値を提供する場合、それぞれの間の値、文脈が明確に他のものを指示しない限り、下限の単位の１０分の１まで、その範囲またはいずれかの他に述べたもの上限と下限との間、または述べた範囲の間の値が本発明に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限および下限は独立してより小さい範囲に包含され、そしてやはり本発明に包含され、記載した範囲の任意の特に除外された限度に従う。記載した範囲が限界の一方または両方を包含する場合は、これらに包含される限度のいずれかまたは両方を排除する範囲もまた本発明に包含される。
【００１６】
他に定義しない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語および科学的用語は、本発明の属する分野で当業者に一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載したものと同様または同等である任意の方法および材料もまた本発明の実施または試験において使用され得るが、好ましい方法および材料を記載する。本明細書において言及した全ての出版物は、出版物が引用されている部分と関連する方法および／または材料を開示および説明するために、本明細書中に参考として援用される。
【００１７】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、文脈が他に明確に指示しない限り、単数形「ａ」、「および」、「ｔｈｅ」は、複数の参照物を包含することが注意されるべきである。従って、例えば、「レラキシン処方物」との言及は、そのような処方物の複数を包含し、そして「活性な因子」との言及は、当業者に公知の活性な因子およびその等価物の１つ以上に対する言及を包含する。
【００１８】
本明細書において考察される出版物は、本出願の出願日の前のその開示に関してのみ提供する。本明細書に記載するもののいずれも、以前の発明によりこのような出版物に先行するものとは本発明が見なされないことを受け入れるものとして解釈されるべきではない。さらに、提供された出版物の日付は、実際に公開された日付とは異なる場合があり、それは、個々に確認される必要がある場合もある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
（発明の詳細な説明）
本発明は、動脈の硬化に伴う疾患を処置する方法；動脈コンプライアンスを増加させる方法；個体における動脈の硬化を減少する方法；および個体が低下した動脈コンプライアンスに関わる合併症または障害の１つ以上を発症する危険性を低下させる方法を提供する。本方法は、一般的に有効量のレラキシンレセプターアゴニストを、それを必要とする個体に投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、個体は年齢に関連する動脈壁の硬化を有するか、発症する危険性を有している。他の実施形態において、個体はＩ型糖尿病またはＩＩ型糖尿病を有し、従って、動脈の硬化を発症しているか、発症する危険性を有する。他の実施形態において、個体は閉経周辺期の女性、閉経期の女性または閉経後の女性であり、従って動脈の硬化を発症しているか、発症する危険性を有する。さらに他の実施形態において、個体は子癇前症を発症しているか、発症する危険性を有する女性である。
【００２０】
ヒトの妊娠における主要な心臓血管の調節の１つは、ちょうど全身血管抵抗（ＳＶＲ）が最低に達する最初の３ヶ月の終了時までに最高値に達するレラキシンレベルの増加を伴う全体的な動脈コンプライアンスの増加である。少なくとも理論的には、全体的な動脈コンプライアンスの上昇はいくつかの理由：（１）広範囲のＡＣの上昇は、さもなければＳＶＲの顕著な低下により不安定に低いレベルまで低下する拡張期血圧の過剰な低下を防止すること；（２）上昇はさもなければ妊娠期間中に心臓が必要とし、心臓により消費される全仕事の上昇とは不均衡に上昇する心臓により消耗される拍動性または振動性の仕事を最小限にすること；および（３）全体的なＡＣの上昇は、妊娠期間の過剰動的循環に関わらず血液−内皮の界面において安定した剪断型の応力を保つ（または振動性の剪断型の応力を防止する）ことにより、内皮によるスーパーオキシドおよび他の損傷性反応性酸素物質種ではなく酸化窒素の産生に望ましい状態を作ることにより、妊娠期間の心臓血管のホメオスタシスの維持にとって重要である。全体的なＡＣの増加はＳＶＲの減少と共に循環性の過少充填を生じ得、そしてこれにより早期妊娠期間中の腎臓のナトリウムおよび水の保持および血漿容量拡大に寄与する。
【００２１】
（処置方法）
本発明は、有効量のレラキシンレセプターアゴニストを、これを必要とする個体に投与する工程を利用した動脈コンプライアンスを増加させるための方法を提供する。いくつかの実施形態において、個体は、アテローム性動脈硬化症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、冠状動脈疾患、硬皮症、脳卒中、拡張期機能不全、家族性高コレステロール血症、孤立性収縮期高血圧、原発性高血圧、二次性高血圧、左室肥大、長期間喫煙に関連する動脈壁の硬化、肥満に関連する動脈壁の硬化、年齢に関連する動脈壁の硬化、全身性エリテマトーデス、子癇前症および高コレステロール血症を有するか、加齢関連の動脈の硬化を発症する危険性を有する。他の実施形態において、個体は閉経周辺期の女性、閉経期の女性または閉経後の女性であるか、または非加齢関連の理由により（例えば過剰な運動により、または、手術（例えば子宮摘出、卵巣摘出）の結果として）、月経を終止しており、そして動脈の硬化を発症しているか、その発症の危険性を有する女性である。
【００２２】
本発明の方法は、一般的にレラキシンの有効量を個体に投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、レラキシンの有効量は、レラキシンを用いた処置の非存在下の動脈コンプライアンスと比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、または少なくとも約５０％以上、動脈コンプライアンスを増加させるのに有効である量である。
【００２３】
いくつかの実施形態において、レラキシンの有効量は、レラキシンを用いた処置の非存在下の個体の動脈の硬化と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、または少なくとも約５０％以上、動脈の硬化を減少するのに有効である量である。
【００２４】
いくつかの実施形態において、レラキシンの有効量は、レラキシンを用いた処置の非存在下の個体の動脈の弾性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、または少なくとも約５０％以上、動脈の弾性を増加させるのに有効である量である。
【００２５】
動脈の硬化または低下した動脈コンプライアンスに起因するか関連する障害としては、アテローム性動脈硬化症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、冠状動脈疾患、硬皮症、脳卒中、拡張期機能不全、家族性高コレステロール血症、孤立性収縮期高血圧、原発性高血圧、二次性高血圧、左室肥大、長期間喫煙に関連する動脈壁の硬化、肥満に関連する動脈壁の硬化、年齢に関連する動脈壁の硬化、全身性エリテマトーデス、子癇前症および高コレステロール血症が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において特に興味深いものは、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、通常の加齢、脳卒中、拡張期機能不全、閉経、肥満、高コレステロール血症、家族性高コレステロール血症、孤立性収縮期高血圧、長期間喫煙および左室肥大、に関連する動脈の硬化である。
【００２６】
動脈コンプライアンスの増加、または動脈の硬化の減少は、減少した動脈コンプライアンスに起因する病理学的状態を個体が発症する危険性を減少する。
【００２７】
いくつかの実施形態において、レラキシンの有効量は、低下した動脈コンプライアンスに関連するか起因する病理学的状態を個体が発症する危険性を、レラキシンを用いた処置の非存在下のその状態を発症する危険性と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、または少なくとも約５０％以上減少させるのに有効である量である。
【００２８】
一般的には、上で議論した通り、レラキシンの有効量は動脈コンプライアンスを増加させるのに有効な量である。「増加させる」という用語は本明細書において、「刺激する」および「促進する」と交換可能に使用される。実施例は、ラットにおいて使用される有効量の一般的手引きを提供する。当業者は実施例の手引きに基づいてヒト被験体において使用するための有効量を容易に決定し得る。一般的に、レラキシンの用量は一日当たり約０．１〜５００μｇ／ｋｇ体重、一日当たり約６．０〜２００μｇ／ｋｇ体重、または一日当たり約１．０〜１００μｇ／ｋｇ体重である。体重７０ｋｇの人間への投与のためには、投薬量の範囲は、一日当たり約７．０μｇ〜３．５ｍｇ、一日当たり約４２．０μｇ〜２．１ｍｇ、または一日当たり約８４．０〜７００μｇである。いくつかの実施形態において、ヒトへの投与のためには、有効量は約５μｇ／ｋｇ体重／日〜約５０μｇ／ｋｇ体重／日、または約１０μｇ／ｋｇ体重／日〜約２５μｇ／ｋｇ体重／日である。投与されるレラキシンの量は、当然のことながら、被験体の体格、性別および体重、ならびに、疾患または状態の重症度、投与の様式および計画、疾患再発の可能性、ならびに、担当医の判断に依存する。各々の場合において、一日の用量は、所望の作用および個体の状況の相違に依存して、単回のボーラスよりもむしろ、一定時間に渡って投与され得る。
【００２９】
いくつかの実施形態において、レラキシンは、レラキシンの血清濃度を約０．０１ｎｇ／ｍｌ〜約８０ｎｇ／ｍｌ、例えば約０．０１ｎｇ／ｍｌ〜約０．０５ｎｇ／ｍｌ、約０．０５ｎｇ／ｍｌ〜約０．１ｎｇ／ｍｌ、約０．１ｎｇ／ｍｌ〜約０．２５ｎｇ／ｍｌ、約０．２５ｎｇ／ｍｌ〜約０．５ｎｇ／ｍｌ、約０．５ｎｇ／ｍｌ〜約１．０ｎｇ／ｍｌ、約１．０ｎｇ／ｍｌ〜約５ｎｇ／ｍｌ、約５ｎｇ／ｍｌ〜約１０ｎｇ／ｍｌ、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１５ｎｇ／ｍｌ、約１５ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌ、約２０ｎｇ／ｍｌ〜約２５ｎｇ／ｍｌ、約２５ｎｇ／ｍｌ〜約３０ｎｇ／ｍｌ、約３０ｎｇ／ｍｌ〜約３５ｎｇ／ｍｌ、約３５ｎｇ／ｍｌ〜約４０ｎｇ／ｍｌ、約４０ｎｇ／ｍｌ〜約４５ｎｇ／ｍｌ、約４５ｎｇ／ｍｌ〜約５０ｎｇ／ｍｌ、約５０ｎｇ／ｍｌ〜約６０ｎｇ／ｍｌ、約６０ｎｇ／ｍｌ〜約７０ｎｇ／ｍｌまたは約７０ｎｇ／ｍｌ〜約８０ｎｇ／ｍｌに維持するような所定の速度で個体に投与される。
【００３０】
（有効性の決定）
所定のレラキシン処方物またはレラキシンの所定の投薬量が動脈コンプライアンスを増加させること、動脈の硬化を減少すること、または、動脈の弾性を増加させることにおいて有効であるか否かは、任意の公知の方法を用いて決定され得る。動脈の硬化は実施例に議論する方法を含む当業者に公知のいくつかの方法により測定され得る。
【００３１】
全体的な動脈コンプライアンスの１つの尺度はＡＣａｒｅａ値であり、これは後述する実施例において記載するとおり、面積法（Ｌｉｕら、（１９８６）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５１：Ｈ５８８−Ｈ６００）を用いて大動脈圧波形［Ｐ（ｔ）］の拡張期の減衰から計算される。全体的な動脈コンプライアンスの別の尺度は後述する実施例において記載するとおり、一回拍出量の脈圧に対する比（Ｃｈｅｍｌａら、（１９９８）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７４：Ｈ５００−Ｈ５０５）として計算される。
【００３２】
局所的動脈コンプライアンスは、侵襲的または非侵襲的な手段を用いて特定の点における動脈壁の弾性を測定することにより決定され得る。例えば米国特許第６，２６７，７２８号を参照のこと。限局的コンプライアンスは、動脈セグメントにおけるコンプライアンスを記載するものであるが、これは、動脈容量および伸展性から計算され得、そして主に、脈波速度を用いて測定される。例えばＯｇａｗａら、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｙ（２００３）２：１０；Ｓａｆａｒら、Ａｒｃｈ  Ｍａｌ  Ｃｏｅｒ（２００２）９５：１２１５−１８を参照のこと。動脈コンプライアンスを測定する他の適切な方法は文献に記載されており、任意の公知の方法が使用され得る。例えば、Ｃｏｈｎ，Ｊ．Ｎ．、「Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｒｔｅｒｉａｌ  Ｃｏｍｐｌｉａｎｃｅ」、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｉｚｚｏ，Ｊ．Ｌ．およびＢｌａｃｋ，Ｈ．Ｒ．（編）、Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｏｎ  Ｈｉｇｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、ｐｐ．２５２−２５３、（１９９３）；Ｆｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎ，Ｓ．Ｍ．ら、「Ｆｉｒｓｔ  ａｎｄ  Ｔｈｉｒｄ−Ｏｒｄｅｒ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｆｏｒ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  Ａｒｔｅｒｉａｌ  Ｃｏｍｐｌｉａｎｃｅ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、１０（補遺６）Ｓ１１−Ｓ１４、（１９９２）；Ｈａｉｄｅｔ，Ｇ．Ｃ．，ら、「Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ  ｏｎ  Ａｒｔｅｒｉａｌ  Ｃｏｍｐｌｉａｎｃｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｂｅａｇｌｅ」、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、４０、２６６Ａ、（１９９２）；ＭｃＶｅｉｇｈ，Ｇ．Ｅ．ら、「Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｒｔｅｒｉａｌ  Ｃｏｍｐｌｉａｎｃｅ  ｉｎ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ」、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、２、８２−８６、（１９９３）を参照のこと。
【００３３】
（レラキシンレセプターアゴニスト）
本発明の方法は、薬学的に活性なレラキシンレセプターアゴニストを含有する処方物の投与を包含する。本明細書中で使用する場合、「レラキシンレセプターアゴニスト」および「レラキシン」という用語は、組換えまたはネイティブの（例えば天然に存在する）供給源に由来する生物学的に活性な（本明細書中では、「薬学的に活性な」ともいわれる）レラキシンポリペプチド；レラキシンポリペプチド改変体（例えばアミノ酸配列改変体）；合成のレラキシンポリペプチド；および非ペプチドレラキシンレセプターアゴニスト（例えばレラキシン模倣物）を指すために交換可能に使用される。
【００３４】
天然に存在する生物学的に活性なレラキシンは、ヒト、ネズミ（例えばラットまたはマウス）、ブタまたは他の哺乳動物の供給源に由来し得る。「レラキシン」という用語はヒトＨ１プレプロレラキシン、プロレラキシンおよびレラキシン；Ｈ２プレプロレラキシン、プロレラキシンおよびレラキシン；組換えヒトレラキシン（ｒｈＲＬＸ）；およびＨ３プレプロレラキシン、プロレラキシンおよびレラキシンを包含する。Ｈ３レラキシンは当該分野で記載されている。例えばＳｕｄｏら、（２００３）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．７；２７８（１０）：７８５５−６２を参照のこと。ヒトレラキシンのアミノ酸配列は当該分野で記載されている。例えばヒトレラキシンアミノ酸配列は、以下のＧｅｎＢａｎｋ登録番号：Ｑ３ＷＸＦ３、ヒトＨ３プロレラキシン；Ｐ０４８０８、ヒトＨ１プロレラキシン；ＮＰ＿６０４３９０およびＮＰ＿００５０５０、ヒトＨ２プロレラキシン；ＡＡＨ０５９５６、ヒトレラキシン１プレプロタンパク質；ＮＰ＿００８８４２、ヒトＨ１プレプロレラキシンなどの下に見出される。「レラキシンレセプターアゴニスト」という用語は上記した配列のいずれか１つに由来するヒトレラキシンを包含する。
【００３５】
「レラキシンレセプターアゴニスト」という用語はまた、Ｎ末端および／またはＣ末端切断を有するＡ鎖およびＢ鎖を含むレラキシンポリペプチドを包含する。例えば、Ｈ２レラキシンにおいては、Ａ鎖はＡ（１−２４）からＡ（１０−２４）に、そしてＢ鎖はＢ（１−３３）からＢ（１０−２２）に変化させることができ；そしてＨ１レラキシンにおいては、Ａ鎖はＡ（１−２４）からＡ（１０−２４）に、そしてＢ鎖はＢ（１−３２）からＢ（１０−２２）に変化させることができる。
【００３６】
「レラキシンレセプターアゴニスト」という用語の範囲にさらに包含されるものは、１つ以上のアミノ酸残基の挿入、置換または欠失を含むレラキシンポリペプチド、グリコシル化改変体、非グリコシル化レラキシン、有機および無機の塩、レラキシンの共有結合的に修飾された誘導体、プレプロレラキシンおよびプロレラキシンである。野生型（例えば天然に存在する）配列とは異なるアミノ酸配列を有するレラキシンアナログも用語に包含され、これらとしては、米国特許第５，８１１，３９５号および米国特許第６，２００，９５３号に開示されているレラキシンアナログが挙げられるが、これらに限定されない。他の適切なレラキシンおよびレラキシン処方物は、米国特許第５，９４５，４０２号に記載されている。インビボでの半減期が増加するように修飾されたレラキシンポリペプチド（例えばＰＥＧ化レラキシン（すなわちポリエチレングリコールに結合体化されたレラキシン）などもまた包含される。
【００３７】
レラキシンポリペプチドアミノ酸残基に対する可能な修飾としては、Ｎ末端を含む遊離アミノ基のアセチル化、ホルミル化または同様の保護、Ｃ末端基のアミド化、またはヒドロキシル基またはカルボキシル基のエステルの形成（例えばホルミル基の付加によるＢ２におけるトリプトファン（Ｔｒｐ）残基の修飾）が挙げられる。ホルミル基は容易に除去できる保護基の代表的な例である。他の可能な修飾としては、Ｂ鎖および／またはＡ鎖内の天然のアミノ酸の１つ以上を異なるアミノ酸（天然アミノ酸のＤ型を含む）で置換すること（、Ｂ２４におけるＭｅｔ部分をノルロイシン（Ｎｌｅ）、バリン（Ｖａｌ）、アラニン（Ａｌａ）、グリシン（Ｇｌｙ）、セリン（Ｓｅｒ）またはホモセリン（ＨｏｍｏＳｅｒ）で置換することが挙げられるが、これらに限定されない）が挙げられる。他の可能な修飾としては、鎖からの天然のアミノ酸の欠失、または、鎖への１つ以上の余分なアミノ酸の付加が挙げられる。さらなる修飾としては、プロレラキシンのＢ／ＣおよびＣ／Ａ接合部におけるアミノ酸の置換（この修飾はプロレラキシンからのＣ鎖の切断を促進する）；および天然に存在しないＣペプチドを含む改変体レラキシン（例えば米国特許第５，７５９，８０７号に記載のもの）が挙げられる。
【００３８】
レラキシンポリペプチドおよび異種ポリペプチドを含む融合ポリペプチドは、「レラキシンレセプターアゴニスト」という用語にまた包含される。異種ポリペプチド（例えば非レラキシンポリペプチド）融合相手は、融合タンパク質のレラキシン部分に対してＣ末端またはＮ末端であってもよい。異種ポリペプチドとしては、免疫学的に検出可能なポリペプチド（例えば「エピトープタグ」）；検出可能なシグナルを発生し得るポリペプチド（例えば緑色蛍光タンパク質、酵素（例えばアルカリホスファターゼ）および他の当該分野で公知のもの）；治療用ポリペプチド（サイトカイン、ケモカインおよび成長因子が挙げられるがこれらに限定されない）が挙げられる。
【００３９】
改変体を生じるレラキシン分子の構造におけるこのような改変または変異の全てはレラキシンの機能的（生物学的）活性が維持される限り、本発明の範囲内に包含される。一般的に、レラキシンアミノ酸配列または構造のいずれかの修飾は、レラキシン改変体を用いて処置した個体においてその免疫原性を増加させないものである。記載した機能的活性を有するレラキシンの改変体は本明細書中に考察した方法を用いて容易に同定され得る。
【００４０】
（レラキシン処方物）
本発明の方法において使用するのに適したレラキシン処方物は、薬学的に活性のレラキシンの治療有効量および薬学的に受容可能な賦形剤を含有する薬学的処方物である。処方物はいくつかの実施形態において、注射可能であり、そして、いくつかの実施形態において静脈内注射可能に設計される。
【００４１】
レラキシンが薬学的に活性である限り、任意の公知のレラキシン処方物も本発明の方法に使用され得る。「薬学的に活性な」レラキシンとは、個体への投与時に増加した動脈コンプライアンスを生じるレラキシンの形態である。
【００４２】
レラキシンはポリペプチドとして、または、レラキシンをコードする配列を含むポリヌクレオチドとして投与され得る。本発明の方法において使用するのに適したレラキシンは、天然供給源から単離され得るか、化学的または酵素的に合成され得るか、または、当該分野で公知の標準的組換え技術を用いて製造され得る。組換えレラキシンを製造する方法の例は、種々の出版物（例えば米国特許第４，８３５，２５１号；同第５，３２６，６９４号；同第５，３２０，９５３号；同第５，４６４，７５６号および同第５，７５９，８０７号が挙げられる）に見出される。
【００４３】
使用に適したレラキシンとしては、ヒトレラキシン、組換えヒトレラキシン、非ヒト動物に由来するレラキシン、例えばブタレラキシン、および当該分野で公知のレラキシンの種々の改変体が挙げられるが、これらに限定されない。レラキシン、薬学的に活性なレラキシン改変体、およびレラキシンを含有する薬学的処方物は当該分野で周知である。例えば米国特許第５，４５１，５７２号；同第５，８１１，３９５号；同第５，９４５，４０２号；同第５，１６６，１９１号；および同第５，７５９，８０７号を参照のこと。その内容はレラキシン処方物に関する教示、および、レラキシン製造に関する教示について、その全体が参考として援用される。本明細書に記載する実施例において、組換えヒトレラキシン（ｒｈＲＬＸ）は、２４アミノ酸のＡ鎖および２９アミノ酸のＢ鎖からなるヒトＨ２遺伝子の天然に存在する産物とアミノ酸配列において同一である。
【００４４】
レラキシンはレラキシンをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドの形態で個体に投与され得る。レラキシンをコードするヌクレオチド配列は当該分野で公知であり、そのいずれも本明細書に記載した方法において使用され得る。例えばＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ１３５８２４；ＡＦ０７６９７１；ＮＭ＿００６９１１；およびＮＭ＿００５０５９を参照のこと。本発明のレラキシンポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、遺伝子送達ビヒクルにより細胞に導入され得る。遺伝子送達ビヒクルは、ウイルス起源または非ウイルス起源であってもよい（例えば一般的にＪｏｌｌｙ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９４）１：５１−６４；Ｋｉｍｕｒａ（１９９４）Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ５：８４５−８５２；Ｃｏｎｎｅｌｌｙ（１９９５）Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １：１８５−１９３；およびＫａｐｌｉｔｔ（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ６：１４８−１５３を参照のこと）。本発明のポリヌクレオチドのコーディング配列を含む構築物の送達のための遺伝子療法ビヒクルは、局所または全身のいずれかで投与され得る。これらの構築物は、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクターのアプローチを利用し得る。このようなコーディング配列の発現は、内因性の哺乳動物または異種のプロモーターを用いて誘導され得る。コーディング配列の発現は構成的であるか、または調節的のいずれかであり得る。
【００４５】
本発明は、目的の選択された核酸分子を保持または発現するように構築された組換えレトロウイルスを使用し得る。使用され得るレトロウイルスベクターとしては、ＥＰ４１５７３１；ＷＯ９０／０７９３６；ＷＯ９４／０３６２２；ＷＯ９３／２５６９８；ＷＯ９３／２５２３４；米国特許第５，２１９，７４０号；ＷＯ９３／１１２３０；ＷＯ９３／１０２１８；ＶｉｌｅおよびＨａｒｔ（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：３８６０−３８６４；ＶｉｌｅおよびＨａｒｔ（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：９６２−９６７；Ｒａｍら、（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：８３−８８；Ｔａｋａｍｉｙａら、（１９９２）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．３３：４９３−５０３；Ｂａｂａら、（１９９３）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７９：７２９−７３５；米国特許第４，７７７，１２７号；およびＥＰ３４５，２４２に記載されているものが挙げられる。
【００４６】
上記のレトロウイルスベクター構築物と共に使用するのに適したパッケージング細胞株は容易に調製され得（ＰＣＴ公開ＷＯ９５／３０７６３およびＷＯ９２／０５２６６を参照のこと）、そして、組換えベクター粒子の製造のためのプロデューサー細胞株（ベクター細胞株とも称される）を作製するために使用され得る。パッケージング細胞株はヒト細胞株（例えばＨＴ１０８０細胞）またはミンクの親細胞株から作製され、これにより、ヒト血清中における不活性化を残存させ得る組換えレトロウイルスの製造が可能となる。
【００４７】
遺伝子送達ビヒクルはまた、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクターのようなパルボウイルスを使用し得る。代表例としては、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ、ＷＯ９３／０９２３９、Ｓａｍｕｌｓｋｉら、（１９８９）Ｊ．Ｖｉｒ．６３：３８２２−３８２８；Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎら、（１９８８）Ｖｉｒｏｌ．１６６：１５４−１６５；およびＦｌｏｔｔｅら、（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：１０６１３−１０６１７により開示されるＡＡＶベクターが挙げられる。
【００４８】
目的のアデノウイルスベクターはまた、例えば、Ｂｅｒｋｎｅｒ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（１９８８）６：６１６−６２７；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ  ら、（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５２：４３１−４３４；ＷＯ９３／１９１９１；Ｋｏｌｌｓら、（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：２１５−２１９；Ｋａｓｓ−Ｅｉｓｌｅｒら、（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：１１４９８−１１５０２；ＷＯ９４／１２６４９；ＷＯ９３／０３７６９；ＷＯ９３／１９１９１；ＷＯ９４／２８９３８；ＷＯ９５／１１９８４およびＷＯ０５／００６５５に記載のものである。
【００４９】
他の遺伝子送達ビヒクルおよび方法も使用され得、死滅したアデノウイルス単独に連結された、または連結されないポリカチオン性縮合ＤＮＡ、例えばＣｕｒｉｅｌ（１９９２）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．３：１４７−１５４；リガンド連結ＤＮＡ（例えばＷｕ（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４；１６９８５−１６９８７を参照のこと）；真核生物細胞送達ビヒクル細胞；光重合ヒドロゲル物質の付着；手持ち式の遺伝子移入パーティクルガン（米国特許第５，１４９，６５５号に記載される）；イオン化放射線照射（米国特許第５，２０６，１５２号およびＷＯ９２／１１０３３に記載される）；核電荷中和または細胞膜との融合が挙げられる。さらなるアプローチは、Ｐｈｉｌｉｐ（１９９４）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：２４１１−２４１８およびＷｏｆｆｅｎｄｉｎ（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：１５８１−１５８５に記載されている。
【００５０】
ネイキッド（ｎａｋｅｄ）ＤＮＡもまた使用され得る。例示的なネイキッドＤＮＡ導入方法は、ＷＯ９０／１１０９２および米国特許第５，５８０，８５９号に記載されている。取り込みの効率は生体分解性のラテックスビーズを用いて改善され得る。ＤＮＡコーティングラッテクスビーズは、ビーズによるエンドサイトーシスの開始の後に細胞に効率的に輸送される。その方法は、疎水性を増加させてそれによってエンドソームの破壊および原形質へのＤＮＡの放出を促進するようにビーズを処理することによりさらに改善され得る。遺伝子送達ビヒクルとして作用し得るリポソームは、米国特許第５，４２２，１２０号；ＰＣＴＷＯ９５／１３７９６、ＷＯ９４／２３６９７およびＷＯ９１／１４４４５；およびＥＰ５２４９６８に記載されている。
【００５１】
使用に適したさらなる非ウイルス送達としては、Ｗｏｆｆｅｎｄｉｎら、（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：１１５８１−１１５８５に記載されているアプローチのような機械的送達系が挙げられる。さらに、コーディング配列およびその発現産物は、光重合ヒドロゲル物質の沈着を介して送達され得る。コーディング配列の送達のために使用され得る遺伝子送達のための他の簡便な方法としては、例えば、手持ち式の遺伝子移入パーティクルガンの使用（米国特許第５，１４９，６５５号に記載される）；移された遺伝子の活性化のためのイオン化放射線照射の使用（米国特許第５，２０６，１５２号およびＷＯ９２／１１０３３に記載される）が挙げられる。
【００５２】
動脈コンプライアンスを増加させるためのレラキシンの使用において、任意の薬学的に受容可能な様式の投与が使用され得る。レラキシンは単独または他の薬学的に受容可能な賦形剤と組み合わせて、例えば固体、半固体、液体またはエアロゾルの剤型、例えば錠剤、カプセル、粉末、液体、ゲル、懸濁液、坐剤、エアロゾルなどのいずれかで投与され得る。レラキシンはまた、好ましくは正確な投薬量の単回投与に適した単位投薬形態における、所定の速度での延長された投与のための、徐放性または制御放出投薬形態（例えば緩徐放出の生体分解性の送達系を使用する）（例えば蓄積注射、浸透圧ポンプ（例えばＡｌｚａ製造のＡｌｚｅｔインプラント）、丸薬、皮膚用または経皮用（電子輸送が挙げられる）パッチなどが挙げられる）により投与され得る。
【００５３】
いくつかの実施形態において、レラキシンは移植可能な薬物送達系（例えばレラキシンの投与を提供するようにプログラム可能な系）を用いて送達される。例示的なプログラム可能な移植可能な系としては、移植可能な注入ポンプが挙げられる。例示的な移植可能な注入ポンプまたはそのようなポンプと組み合わせて使用されるデバイスは、例えば米国特許第４，３５０，１５５号；同第５，４４３，４５０号；同第５，８１４，０１９号；同第５，９７６，１０９号；同第６，０１７，３２８号；同第６，１７１，２７６号；同第６，２４１，７０４号；同第６，４６４，６８７号；同第６，４７５，１８０号；および同第６，５１２，９５４号に記載されている。本発明における使用に適合され得るさらなる例示的なデバイスは、同調させた注入ポンプ（Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ）である。
【００５４】
組成物は代表的には、従来の薬学的なキャリアまたは賦形剤およびレラキシンを含有する。さらに、これらの組成物は、他の活性剤、キャリア、アジュバントなどを含有し得る。一般的に、意図される投与様式に依存して、薬学的に受容可能な組成物は、約０．１重量％〜９０重量％；約０．５重量％〜５０重量％、または約１重量％〜約２５重量％のレラキシンを含有し、残余は適切な薬学的賦形剤、キャリアなどである。このような投薬形態を製造するための実際の方法は当業者に公知であるか、明らかであり；例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．、第１５版、１９９５または最新版を参照のこと。米国特許第５，４５１，５７２号に記載されているヒトレラキシンの処方物は本発明の方法で使用され得る適切な処方物の非限定的な例である。
【００５５】
非経口投与は一般的に皮下、皮内、筋肉内または静脈内または皮下のいずれかの注射を特徴とする。注射可能物質は、液体の溶液または懸濁液、注射直前に溶液または懸濁液とするのに適する固体形態、またはエマルジョンのいずれかの従来の形態に調製され得る。適切な賦形剤は例えば水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどである。さらに所望の場合、投与すべき薬学的組成物は少量の非毒性の補助的物質（例えば湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、溶解度増強剤など、例えば酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、オレイン酸トリエタノールアミン、シクロデキストリンなど）を含有し得る。
【００５６】
そのような非経口組成物に含有されるレラキシンの比率は、その特定の性質、ならびに被験体の必要性に大きく依存する。しかし、溶液中の０．０１％〜１０％の活性成分の比率が使用され得、そして組成物が後に上記比率まで希釈される固体である場合はより高くなる。一般的に、組成物は溶液中にレラキシン０．２〜２％を含有する。
【００５７】
非経口投与は、持続放出または徐放性の系の移植を用いてもよく、これにより定常レベルの投薬量が維持される。徐放性を制御するため、および、レラキシンのような活性な因子の放出の速度を継続的に減少させるための種々のマトリックス（例えばポリマー、親水性ゲルなど）は当該分野で公知である。例えば米国特許第３，８４５，７７０号（基本的浸透圧ポンプを記載）；米国特許第３，９９５，６５１号、同第４，０３４，７５６号および同第４，１１１，２０２号（小型浸透圧ポンプを記載）；米国特許第４，３２０，７５９号および同第４，４４９，９８３号（プッシュ−プルおよびプッシュ−メルト浸透圧ポンプと称されるマルチチャンバーの浸透圧系を記載）；および米国特許第５，０２３，０８８号（種々の投薬単位の逐次的時間指定供給のためのパターン化浸透圧ポンプを記載）を参照のこと。
【００５８】
本発明の方法に従ってレラキシンを投与するために使用するのに適した薬物放出デバイスは、種々の作動様式のいずれかに基づき得る。例えば薬物放出デバイスは、拡散系、対流系または侵食系（例えば侵食に基づく系）に基づくことができる。例えば薬物放出デバイスは、浸透圧ポンプ、電気浸透圧ポンプ、蒸気圧ポンプ、浸透圧バーストマトリックス（例えば薬物がポリマーに取り込まれ、そのポリマーが薬物含浸ポリマー物質（例えば生体分解性の薬物含浸ポリマー物質）の分解と同時に薬物処方物の放出を提供するもの）であり得る。他の実施形態において、この薬物放出デバイスは、電気拡散系、電解ポンプ、発泡性ポンプ、圧電ポンプ、加水分解系などに基づく。
【００５９】
機械的または電気機械的な注入ポンプに基づく薬物放出デバイスもまた本発明と共に使用するのに適している。このようなデバイスの例としては、例えば米国特許第４，６９２，１４７号；同第４，３６０，０１９号；同第４，４８７，６０３号；同第４，３６０，０１９号；同第４，７２５，８５２号などに記載されるものが挙げられる。一般的に、本発明の処置方法は、種々の再充填可能な非交換型のポンプ系のいずれかを用いて達成され得る。浸透圧ポンプは文献に十分に記載されている。例えば、ＷＯ９７／２７８４０；および米国特許第５，９８５，３０５号および同第５，７２８，３９６号を参照のこと。
【００６０】
レラキシンは種々の因子、例えば動脈の硬化の程度などに依存して、数時間、数日間、数週間、数ヶ月間または数年間の期間に渡って投与され得る。例えばレラキシンは、約２時間〜約８時間、約８時間〜約１２時間、約１２時間〜約２４時間、約２４時間〜約３６時間、約３６時間〜約７２時間、約３日間〜約１週間、約１週間〜約２週間、約２週間〜約１ヶ月間、約１ヶ月間〜約３ヶ月間、約３ヶ月間〜約６ヶ月間、約６ヶ月間〜約１２ヶ月間、または約１年間〜数年間の期間、投与される。投与は一定、例えば数時間、数日間、数週間、数ヶ月間、数年間などに渡って一定の注入であってもよい。あるいは、投与は間欠的であってもよく、例えばレラキシンを数日間の期間に渡り１日１回、数時間の期間に渡り１時間に１回、または、いずれかの他の適当と思われる計画で投与され得る。
【００６１】
レラキシンの処方物はまた、ネブライザーのための鼻吸入用または肺吸入用のエアロゾルまたは溶液として、または、吸入のための微小粉末として、単独、または、不活性のキャリア（例えばラクトース）と、または、他の薬学的に受容可能な賦形剤と組み合わせて呼吸管に投与され得る。そのような場合、処方物の粒子は好都合には５０μｍ未満、好ましくは１０μｍ未満の直径を有する。
【００６２】
（複合療法）
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、少なくとも１つのさらなる治療因子の投与を含むように改変される。適切なさらなる治療因子としては、エストロゲンレセプター調節因子、抗高血圧因子（例えばカルシウムチャンネルブロッカー）、エンドセリンレセプターアンタゴニスト、アンジオテンシンＩ変換酵素（ＡＣＥ）インヒビター、α−アドレナリン遮断薬、血管拡張薬、利尿薬、β−アドレナリン遮断薬、レニンインヒビターおよびアンジオテンシンレセプターアンタゴニスト；ナトリウム排泄増加ペプチド（例えば心房性ナトリウム排泄増加ペプチド、脳ナトリウム排泄増加ペプチド、およびＣ型ナトリウム排泄増加ペプチド）；コレステロール産生を遮断する物質（例えばスタチン）および糖尿病を処置するための因子が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６３】
（エストロゲンレセプター調節因子）
適切なエストロゲンレセプター調節因子は、種々のエストロゲン化合物、ならびに選択的エストロゲンレセプター調節因子（「ＳＥＲＭ」）のいずれかを包含する。ＳＥＲＭとしては、タモキシフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、イドキシフェン、ラソフォキシフェン、ＣＰ−３３６，１５６、ＧＷ５６３８、ＬＹ３５３５８１、ＴＳＥ−４２４、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン、フルベストラント、４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル−２，２−ジメチルプロパノエート、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニル−ヒドラゾンおよびＳＨ６４６が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６４】
適切なエストロゲン化合物としては、メストラノール、エストラジオールのエステル、ポリエストリオールホスフェート、エストロンサルフェート、天然エストロゲン、合成エストロゲン、結合体化エストロゲン、エストラジオール、エストラジオールサルファメート、エストラジオールバレレート、エストラジオールベンゾエート、エチニルエストラジオール、エストロン、エストリオール、エストリオールサクシネートおよび結合体化エストロゲン、非結合体化ウマエストロゲン、エストロンサルフェート、１７β−エストラジオールサルフェート、１７α−エストラジオールサルフェート、エクイリンサルフェート、１７β−ジヒドロエクイリンサルフェート、１７α−ジヒドロエクイリンサルフェート、エクイレニンサルフェート、１７β−ジヒドロエクイレニンサルフェートおよび１７α−ジヒドロエクイレニンサルフェートが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６５】
微粉化された形態のエストロゲン、例えば微粉化エストラジオール、微粉化エストラジオールスルファメート、微粉化エストラジオールバレレート、微粉化エストラジオールベンゾエート、微粉化エストロンまたは微粉化エストロンサルフェートまたはこれらの混合物、特に微粉化エストラジオール、微粉化エストラジオールバレレート、微粉化エストラジオールベンゾエートまたは微粉化エストラジオールサルファメートもまた使用に適している。
【００６６】
エストロゲンの有効投薬量は従来どおりであり、当該分野で周知である。経口投与用の代表的なおよその投薬量は、例えばエチニルエストラジオール（０．００１〜０．０３０ｍｇ／日）、メストラノール（５〜２５ｍｇ／日）、エストラジオール（１７．β．エストラジオールを含む）（０．５〜６ｍｇ／日）、ポリエストリオールホスフェート（２〜８ｍｇ）および結合体化エストロゲン（０．３〜１．２ｍｇ／日）である。送達の他の手段のための投薬量は、当業者に明らかである。例えば経皮投薬量は、使用するビヒクルの吸収効率に従って変動する。
【００６７】
エストロゲン化合物は、種々の従来の様式のいずれか（例えば経口（例えば溶液、懸濁液、錠剤、糖剤、カプセルまたは丸薬）、非経口（皮下注射または静脈内、筋肉内または胸骨内の注射もしくは注入の技術が挙げられる）、吸入スプレー、経皮投与、直腸投与または膣内（例えば膣内環またはクリームによる）投与により投与され得る。
【００６８】
（抗高血圧因子）
適切なＡＣＥインヒビターとしては、ベナゼプリル（Ｌｏｔｅｎｓｉｎ（登録商標））、カプトプリル（Ｃａｐｏｔｅｎ（登録商標））、エナラプリル、エナラプリラット、フォシノプリル（Ｍｏｎｏｐｒｉｌ（登録商標））、リシノプリル（Ｚｅｓｔｒｉｌ（登録商標）；Ｐｒｉｎｉｖｉｌ（登録商標））、ペントプリル、キナプリル（Ａｃｃｕｐｒｉｌ（登録商標））、キナプリラット、ラミプリル（Ａｌｔａｃｅ（登録商標））、トランドラプリル（Ｍａｖｉｋ（登録商標））、ゾフェノプリル、モエキシプリル（Ｕｎｉｖａｓｃ（登録商標））、ペリンドプリル（Ｃｏｖｅｒｓｙｌ（登録商標）；Ａｃｅｏｎ（登録商標））、Ｖａｓｏｔｅｃ（登録商標）、シラザプリル（Ｉｎｈｉｂａｃｅ（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６９】
適切な利尿薬としては、アセタゾラミド；アミロリド；ベンドロフルメチアジド；ベンズチアジド；ブメタニド；クロロチアジド；クロルタリドン；シクロチアジド；エタクリン酸；フロセミド；ヒドロクロロチアジド；ヒドロフルメチアジド；インダクリノン（ラセミ混合物、または（＋）もしくは（−）のエナンチオマーのいずれか単独、または操作された比、例えばそれぞれ９：１のそのエナンチオマー）；メトラゾン；メチクロチアジド；ムゾリミン；ポリチアジド；キネタゾン；ナトリウムエタクリネート；ナトリウムニトロプルシド；チクリナフェン；トリアムテレン；およびトリクロルメチアジドが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７０】
適切なα−アドレナリン遮断薬としては、例えば、ジベナミン；フェントラミン；フェノキシベンザミン；プラゾシン；プラゾシン／ポリチアジド（Ｍｉｎｉｚｉｄｅ（登録商標））；トリアゾリン；ドキサゾシン（Ｃａｒｄｕｒａ）；テラゾシン（Ｈｙｔｒｉｎ（登録商標））；タムスロシン（Ｆｌｏｍａｘ（登録商標））；およびアルフゾシン（Ｕｒｏｘａｔｒａｌ（登録商標））が挙げられる。
【００７１】
適切なβ−アドレナリン遮断薬としては、Ｂｅｔａｐａｃｅ（ソタロール）、Ｂｌｏｃａｄｒｅｎ（チモロール）、Ｂｒｅｖｉｂｌｏｃ（エスモロール）、Ｃａｒｔｒｏｌ（カルテオロール）、Ｃｏｒｅｇ（カルベジロール）、Ｃｏｒｇａｒｄ（ナドロール）、Ｉｎｄｅｒａｌ（プロプラノロール）、Ｉｎｄｅｒａｌ−ＬＡ（プロプラノロール）、Ｋｅｒｌｏｎｅ（βキソロール）、Ｌｅｖａｔｏｌ（ペンブトロール）、Ｌｏｐｒｅｓｓｏｒ（メトプロロール）、Ｎｏｒｍｏｄｙｎｅ（ラベタロール）、Ｓｅｃｔｒａｌ（アセブトロール）、Ｔｅｎｏｒｍｉｎ（アテノロール）、Ｔｏｐｒｏｌ−ＸＬ（メトプロロール）、Ｔｒａｎｄａｔｅ（ラベタロール）、Ｖｉｓｋｅｎ（ピンドロール）およびＺｅｂｅｔａ（ビソプロロール）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７２】
適切な血管拡張剤としては、例えばジアゾキシド、ヒドララジン（Ａｐｒｅｓｏｌｉｎｅ（登録商標））、ミノキシジル、ニトロプルシド（Ｎｉｐｒｉｄｅ（登録商標））、ナトリウムニトロプルシド、ジアゾキシド（ＨｙｐｅｒｓｔａｔＩＶ）、ベラパミルおよびネフィジピンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７３】
適切なカルシウムチャンネルブロッカーとしては、アムロジピン（Ｎｏｒｖａｓｃ（登録商標））、フェロジピン（Ｐｌｅｎｄｉｌ（登録商標））、ニモジピン、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン（Ｐｒｏｃａｒｄｉａ（登録商標））、ベプリジル（Ｖａｓｃｏｒ（登録商標））、ジルチアゼム（Ｃａｒｄｉａｚｅｍ（登録商標））およびベラパミル（Ｉｓｏｐｔｉｎ（登録商標）；Ｃａｌａｎ（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７４】
適切なアンジオテンシンＩＩレセプターブロッカーまたはインヒビターとしては、サララシン、ロサルタン（Ｃｏｚａａｒ）、シクロシドミン、エプロサルタン、フロセミド、イルベサルタンおよびバルサルタンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７５】
適切なレニンインヒビターとしては、例えば、ペプスタチンおよびジペプチドレニンインヒビターまたはトリペプチドレニンインヒビター；エナルクレイン、ＲＯ４２−５８９２（Ｈｏｆｆｍａｎ  ＬａＲｏｃｈｅ）、Ａ６５３１７（Ａｂｂｏｔｔ）、ＣＰ８０７９４、ＥＳ１００５、ＥＳ８８９１、ＳＱ３４０１７；米国特許第６，６７３，９３１号に開示されている化合物などが挙げられる。
【００７６】
本発明において有用な適切なエンドセリンアンタゴニストとしては、アトラセンタン（ＡＢＴ−６２７；Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＶｅｌｅｔｒｉＴＭ（テゾセンタン；Ａｃｔｅｌｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｌｔｄ．）、シタキシセンタン（ＩＣＯＳ−Ｔｅｘａｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、エンラセンタン（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ダルセンタン（ＬＵ１３５２５２；Ｍｙｏｇｅｎ）、ＢＭＳ−２０７９４０（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＢＭＳ−１９３８８４（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＢＭＳ−１８２８７４（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、Ｊ−１０４１３２（Ｂａｎｙｕ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）、ＶＭＬ５８８／Ｒｏ６１−１７９０（Ｖａｎｇｕａｒｄ  Ｍｅｄｉｃａ）、Ｔ−０１１５（Ｔａｎａｂｅ  Ｓｅｉｙａｋｕ）、ＴＡＫ−０４４（Ｔａｋｅｄａ）、ＢＱ−７８８（Ｂａｎｙｕ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）、ＢＱ１２３、ＹＭ−５９８（Ｙａｍａｎｏｕｃｈｉ  Ｐｈａｒｍａ）、ＰＤ１４５０６５（Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ）、Ａ−１２７７２２（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、Ａ−１９２６２１（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、Ａ−１８２０８６（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＴＢＣ３７１１（ＩＣＯＳ−Ｔｅｘａｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ＢＳＦ２０８０７５（Ｍｙｏｇｅｎ）、Ｓ−０１３９（Ｓｈｉｏｎｏｇｉ）、ＴＢＣ２５７６（Ｔｅｘａｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ＴＢＣ３２１４（Ｔｅｘａｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ＰＤ１５６７０７（Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ）、ＰＤ１８０９８８（Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ）、ＡＢＴ−５４６（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＡＢＴ−６２７（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＳＢ２４７０８３（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＳＢ２０９６７０（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；および当該分野で考察されているエンドセリンレセプターアンタゴニスト（例えばＤａｖｅｎｐｏｒｔおよびＢａｔｔｉｓｔｉｎｉ（２００２）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １０３：１５−３５、Ｗｕ−Ｗｏｎｇら、（２００２）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １０３：１０７５−１１１５ならびにＬｕｅｓｃｈｅｒおよびＢａｒｔｏｎ（２０００）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０２：２４３４−２４４０に記載のもの）が挙げられるが、これらに限定されない。適切なエンドセリンレセプターアンタゴニストは、ＴＲＡＣＬＥＥＲＴＭ（ボセンタン；Ａｃｔｅｌｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｌｔｄ．製造）である。ＴＲＡＣＬＥＥＲＴＭは経口活性の二重エンドセリンレセプターアンタゴニストであり、そのレセプターであるエンドセリンレセプターＡおよびエンドセリンレセプターＢの両方に対するエンドセリンの結合を遮断する。ＴＲＡＣＬＥＥＲＴＭは一般的に４週間にわたって６２．５ｍｇの用量を１日２回経口投与し、その後、維持用量として１２５ｍｇを１日２回経口投与する。
【００７７】
他の適切な抗高血圧因子としては、例えばアミノフィリン；クリプタナミンアセテートおよびクリプタナミンタンネート；デセルピジン；メレメトキシリンプロカイン；パルギリン；クロニジン（Ｃａｔａｐｒｅｓ）；メチルドパ（Ａｌｄｏｍｅｔ）；レセルピン（Ｓｅｒｐａｓｉｌ）；グアネチジン（Ｉｓｍｅｌｉｎ）；およびトリメタファンカムシレートが挙げられる。
【００７８】
（スタチン）
適切なスタチンとしては、Ｃｒｅｓｔｏｒ、Ｌｉｐｉｔｏｒ、Ｌｅｓｃｏｌ、Ｍｅｖａｃｏｒ、Ｐｒａｖｏｃｈｏｌ、Ｚｏｃｏｒのような製品および関連の化合物、例えばＲｅｖ．Ｐｏｒｔ．Ｃａｒｄｉｏ．（２００４）２３（１１）；１４６１−８２；Ｃｕｒｒ  Ｖａｓｃ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２００３）３：３２９−３３に記載されているもの挙げられるが、これらに限定されない。
【００７９】
（Ｉ型糖尿病またはＩＩ型糖尿病を処置するための治療因子）
レラキシンとの複合療法において使用するための他の適切な因子としては、Ｉ型糖尿病を処置するための治療因子およびＩＩ型糖尿病を処置するための治療因子（例えばインスリン感受性を増加させる因子）が挙げられる。
【００８０】
Ｉ型糖尿病を処置するための治療因子としては、インスリンが生物学的に活性な限り、すなわち、インスリンがインスリンに応答する個体において血中グルコース濃度を減少させるのに有効である限り、任意の形態のインスリンが挙げられる。いくつかの実施形態において、組換えヒトインスリン（「レギュラー」インスリン）または組換えヒトインスリンアナログを使用する。特定の実施形態において、インスリンアナログはインスリンのモノマー形態、例えばヒトリスプロである。いくつかの例において、他の形態のインスリンを単独または組換えヒトインスリンと組み合わせて、または相互に使用する。本明細書中で使用するのに適したインスリンとしては、レギュラーインスリン（Ｈｕｍｕｌｉｎ  Ｒ、Ｎｏｖｌｉｎ  Ｒなど）、セミレンテ、ＮＰＨ（イソファンインスリン懸濁液；Ｈｕｍｕｌｉｎ  Ｎ、Ｎｏｖｏｌｉｎ  Ｎ、Ｎｏｖｏｌｉｎ  Ｎ  ＰｅｎＦｉｌｌ、ＮＰＨ  Ｉｌｅｎｔｉｎ  ＩＩ、ＮＰＨ−Ｎ）、レンテ（インスリン亜鉛懸濁液；Ｈｕｍｕｌｉｎ−Ｌ、Ｌｅｎｔｅ  Ｉｌｅｎｔｉｎ  ＩＩ、Ｌｅｎｔ  Ｌ、Ｎｏｖｏｌｉｎ  Ｌ）、プロタミン亜鉛インスリン（ＰＺＩ）、ウルトラレンテ（インスリン亜鉛懸濁液、膨張；Ｈｕｍｕｌｉｎ  Ｕ  Ｕｌｔｒａｌｅｎｔｅ）、インスリングラルジン（Ｌａｎｔｕｓ）、インスリンアスパート（Ｎｏｖｏｌｏｇ）、アシル化インスリン、モノマーインスリン、スーパーアクティブインスリン、肝選択性インスリン、リスプロ（ＨｕｍａｌｏｇＴＭ）および任意の他のインスリンアナログまたは誘導体、および上記のいずれかの混合物が挙げられる。一般的に使用される混合物としては、以下のパーセント：７０％／３０％、５０％／５０％、９０％／１０％、８０％／２０％、６０％／４０％などのＮＰＨおよびレギュラーインスリンを含有するＮＰＨとレギュラーインスリンとの混合物が挙げられる。本明細書中で使用するのに適したインスリンとしては、米国特許第４，９９２，４１７号；同第４，９９２，４１８号；同第５，４７４，９７８号；同第５，５１４，６４６号；同第５，５０４，１８８号；同第５，５４７，９２９号；同第５，６５０，４８６号；同第５，６９３，６０９号；同第５，７００，６６２号；同第５，７４７，６４２号；同第５，９２２；６７５号；同第５，９５２，２９７号；および同第６，０３４，０５４号；ならびにＰＣＴ公開出願ＷＯ００／１２１１９７；ＷＯ９０／１０６４５；およびＷＯ９０／１２８１４に開示されているインスリンの形態が挙げられるが、これらに限定されない。インスリンアナログとしては、スーパーアクティブインスリンアナログ、モノマーインスリンおよび肝特異的インスリンアナログが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８１】
スーパーアクティブインスリンアナログは、天然のヒトインスリンを超えた高い活性を有している。従って、そのようなインスリンは血清グルコースレベルを低下することに関して実質的に同じ効果を得ながら、実質的により少量で投与され得る。スーパーアクティブインスリンアナログとしては、例えば１０−アスパラギン酸−Ｂヒトインスリン；デスペンタペプチド（Ｂ２６−Ｂ３０）→ＡｓｐＢ１０、ＴｙｒＢ２５−α−カルボキサミドヒトインスリン；（Ｂ２６−Ｂ３０）→ｇｌｕＢ１０、ＴｙｒＢ２５−α−カルボキサミドヒトインスリン；デストリペプチドＢ２８−３０インスリン；Ａ１３Ｌｅｕ−Ａ１４Ｔｙｒで置換されたγ−アミノ酪酸を有するインスリン；および式デス（Ｂ２６−Ｂ３０）→ＸＢ１０、ＴｙｒＢ２５−α−カルボキサミドヒトインスリン（ここで、ＸはＢ鎖の１０位で置換している残基）のさらなるインスリンアナログが挙げられる。これらのインスリンアナログは、天然のヒトインスリンの１１〜２０倍程度の力価を有する。上記のインスリンアナログの全ては天然のヒトインスリンのＡ鎖またはＢ鎖に沿ったアミノ酸置換を含んでおり、これが化合物の力価を増加させるか、または、化合物の他の特性を変化させている。モノマーインスリンとしては、リスプロが挙げられるが、これに限定されない。
【００８２】
インスリン誘導体としては、例えばアシル化インスリン、グリコシル化インスリンなどが挙げられるが、これらに限定されない。アシル化インスリンの例としては、米国特許第５，９２２，６７５号に開示されるもの、例えばグリシン、フェニルアラニンまたはリジンのα−アミノ酸またはε−アミノ酸においてＣ６−Ｃ２１脂肪酸（例えばミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、ヘプタデシル酸またはステアリン酸）で誘導体化したインスリンが挙げられる。
【００８３】
（インスリン感受性を増加させる因子）
いくつかの実施形態において、ＩＩ型糖尿病を有する個体を処置するための本発明の処置レジメンはさらに、インスリン抵抗性を減少させる（例えばインスリン感受性を増加させる）さらなる因子を投与する工程を包含する。インスリン抵抗性を処置する適切な因子としては、ビグアニド（例えばＭｅｔｆｏｒｍｉｎ（例えば一日当たり３回５００ｍｇまたは８５０ｍｇの量で投与））、Ｐｈｅｎｆｏｒｍｉｎまたはその塩；チアゾリジンジオン化合物（例えばトログリタゾン（例えば米国特許第４，５７２，９１２号を参照のこと））、ロシグリタゾン（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅＢｅｅｃｈａｍ）、ピオグリタゾン（Ｔａｋｅｄａ）、Ｇｌａｘｏ−ＷｅｌｃｏｍｅのＧＬ−２６２５７０、エングリタゾン（ＣＰ−６８７２２、Ｐｆｉｚｅｒ）またはダルグリタゾン（ＣＰ−８６３２５、Ｐｆｉｚｅｒ、イサグリタゾン（ＭＣＣ−５５５；Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ；例えば米国特許第５，５９４，０１６号を参照のこと）、レグリタザール（ＪＴＴ−５０１）、Ｌ−８９５６４５（Ｍｅｒｃｋ）、Ｒ−１１９７０２（Ｓａｎｋｙｏ／ＷＬ）、ＮＮ−２３４４、ＹＭ−４４０（Ｙａｍａｎｏｕｃｈｉ）、Ｒａｇａｇｌｉｔａｚａｒ（ＮＮＣ６１−００２９またはＤＲＦ２７２５；ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ）、ファルグリタザール（ＧＩ２６２５７０）、テサグリタザール（ＡＺ２４２）、ＫＲＰ−２９７など；および複合物（例えばＡｖａｎｄａｍｅｔＴＭ（ロシグリダゾンマレエートとメトホルミン−ＨＣｌ））が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８４】
（処置に適した被験体）
本発明の方法による処置に適した個体としては、いずれかの理由により動脈の硬化（または低下した動脈コンプライアンス）を有する任意の個体が挙げられる。このような個体としては、減少した動脈コンプライアンスに関連または起因する障害（アテローム性動脈硬化症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、冠状動脈疾患、硬皮症、脳卒中、拡張期機能不全、家族性高コレステロール血症、孤立性収縮期高血圧、原発性高血圧、二次性高血圧、左室肥大、長期間喫煙に関連する動脈壁の硬化、肥満に関連する動脈壁の硬化、年齢に関連する動脈壁の硬化、全身性エリテマトーデス、子癇前症および高コレステロール血症が挙げられるが、これらに限定されない）を有する個体が挙げられる。
【００８５】
処置に特に適しているのは、同様な状況下にある健常個体と比較して測定された全体的な動脈コンプライアンスが低下している個体である。また処置に特に適しているのは、同様な状況下にある健常個体において予測される局所的動脈コンプライアンスと比較して測定された局所的動脈コンプライアンスが減少している個体である。同様な健常個体において予測される限局的な動脈コンプライアンスと比較してその測定値が減少している個体も処置に特に適している。いくつかの例において、異なる時点において、ある個体の広範囲の、局所的なまたは限局的な動脈コンプライアンスが測定され得、その個体における動脈コンプライアンスが減少し、介入が適切であることを示すレベルに近づいているか否かを決定するために比較され得る。
【００８６】
本発明の方法による処置に適した個体としては、年齢に関連する動脈の硬化を発症しているか、発症の危険性を有する個体が挙げられる。そのような個体としては、５０歳を超えたヒト、例えば約５０歳〜約６０歳、約６０歳〜約６５歳、約６５歳〜約７０歳、約７０歳〜約７５歳、約７５歳〜約８０歳、またはそれより高齢のヒトが挙げられる。
【００８７】
また本発明の方法による処置に適した個体は、閉経周辺期の女性、閉経期の女性または閉経後の女性、および、非加齢関連の理由により、例えば手術（例えば子宮摘出、卵巣摘出）の結果として、月経を終止しており、そしてこれにより動脈の硬化を発症しているか、その発症の危険性を有する女性である。このような女性は、レラキシンおよびエストロゲンを使用した複合療法により処置され得る。このような女性はまた、レラキシン、エストロゲンおよび抗高血圧因子を使用した複合療法により処置され得る。
【００８８】
また本発明の方法による処置に適した個体は、Ｉ型糖尿病と診断された個体である。また本発明の方法による処置に適した個体は、ＩＩ型糖尿病と診断された個体である。インスリン抵抗性である個体は、以下の基準：１）２．５より高いＨＯＭＡ−ＩＲ値（空腹時インスリン（ｍＵ／ｍｌ）×空腹時グルコース（ｍｍｏｌ／ｌ）／２２．５の計算に基づく）；２）約２０μＵ／ｍＬより高い、または、約２５μＵ／ｍＬより高い空腹時血清インスリンレベル；３）約３．５ｎｇ／ｍＬより高い、または約４．５ｎｇ／ｍＬより高い空腹時血清Ｃペプチド濃レベル、の１つ以上によって同定される。
【実施例】
【００８９】
以下の実施例は、当業者に対して本発明の製造および使用の方法の完全な開示および説明を提供するために記載するものであり、本発明者らがその発明とみなしている範囲を限定する意図はなく、また、以下の実験が行なわれた全てまたは唯一の実験であることを示す意図もない。使用した数値（例えば量、温度など）に関しては正確を期したが、実験上の誤差および偏差は許容されなければならない。他に示さない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、そして圧力は大気圧近傍である。標準的な略記方法を使用しており、例えばｂｐは塩基対；ｋｂはキロベース；ｐｌはピコリットル；ｓまたはｓｅｃは秒；ｍｉｎは分；ｈまたはｈｒは時間；ａａはアミノ酸；ｋｂはキロベース；ｂｐは塩基対；ｎｔはヌクレオチド；ｉ．ｍ．は筋肉内；ｉ．ｐ．は腹腔内；ｓ．ｃ．は皮下などである。
【００９０】
（実施例１：全身動脈抵抗およびコンプライアンスに対するレラキシンの効果）
（方法）
（動物）
１２〜１４週齢のＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓ雌性ラットを、Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，Ｍａｒｙｌａｎｄ  ＵＳＡ）から購入した。これらには０．４８％ナトリウムを含有するＰＲＯＬＡＢ  ＲＭＨ２０００飼料（ＰＭＥ  Ｆｅｅｄｓ  Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ  ＵＳＡ）および水を自由摂取させた。ラットは１２時間の明期／暗期サイクルで維持した。Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｍａｇｅｅ−Ｗｏｍｅｎｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅは全ての動物手順を認可している。
【００９１】
（外科的調製）
手短には、ラットをＮａｌｇｅｎｅ代謝ケージ（ＶＷＲ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）に１週間馴化させ、その後、代謝ケージ内において、ハーネス／７．５ｃｍスプリングアセンブリに対してさらに１週間馴化させた（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ  ＵＳＡ）。動物をイソフラン麻酔下にハーネスにフィットさせた。この馴化期間の後、ラットを、６０ｍｇ／ｋｇケタミンを筋肉内および２１ｍｇ／ｋｇペントバルビタール腹腔内で麻酔し、そして加熱パッド上に腹臥位に置いた。７０％エタノールおよびベタジンを全ての露出した皮膚領域に適用した後、アンピシリンを皮下投与（１２５ｍｇ／ｍｌ溶液を０．２ｍｌ）し、アトロピンも皮下投与した（０．４ｍｇ／ｍｌ溶液を０．０７５ｍｌ）。次にリンゲル液を含有するシリンジに連結した滅菌ｔｙｇｏｎカテーテル（１８インチ長、０．０１５インチ内径、０．０３０外径）ならびに滅菌熱希釈マイクロプローブ（２２ｃｍ長、Ｆ＃１．５；Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ、ＯＨ  ＵＳＡ）をスプリングの内側に通した。その後、ｔｙｇｏｎカテーテルをハーネス内の孔に通し、次に１８ゲージのトロカールを用いて耳後部の小切開部に出るように肩甲骨中間地点から皮下を貫通させた。
【００９２】
熱希釈カテーテルはまたハーネスアセンブリに通し、次に左肋下縁の皮膚切開部に出るように肩甲骨中間地点から皮下を貫通させた。次にスプリングをハーネスに再度取り付けた。ラットを再度仰臥位とした。１．０ｃｍの皮膚切開部を左鼡径部に作製した。外部腸骨動脈を単離し、カテーテル挿入用に調製した。次に熱電対を皮下に貫通させ、鼡径部の切開部から出した。次に熱電対を外部腸骨動脈内に吻側方向に挿入し、これにより内部の腸骨動脈を容易に通過してその後大動脈にいたるようにした。４．０ｃｍにおいて、熱電対は左腎動脈の約１．０ｃｍ下となった。次に水平方向の２．０ｃｍ切開部を輪状切痕の１．０ｃｍ上の気管上に作製した。
【００９３】
この切開部を通して、大型の皮下ポケットを首部の左肩上部に切開した。次に右頚静脈および頚動脈を単離し、カテーテル挿入用に調製し、後者はガーゼの小ロールを頚部下に入れてこの深構造を上昇させることにより容易に行えるようにした。１８ゲージトロカールを用いて、ｔｙｇｏｎカテーテルを右耳後部の小切開部から皮下に貫通させ頚部切開部から出した。ｔｙｇｏｎカテーテルを右頸静脈３．０ｃｍに移植し、これによりカテーテルの先端が前大静脈と右心耳の交会部に配置するようにした。滅菌マウス圧力カテーテルのバッテリー／トランスミッター（ＴＡ１１ＰＡ−Ｃ２０；ｃａ．Ｆ＃１．２；Ｄａｔａ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ  ＵＳＡ）を皮下ポケットに挿入した。次にマウス圧力カテーテルを右頚動脈２．８ｃｍに移植し、これによりカテーテルの先端が右頚動脈と大動脈弓の交会部に位置するようにした。全ての創傷部を４−０シルクまたはオートクリップで閉鎖した。頸静脈カテーテルにヘパリン溶液０．０５ｍｌを滴加し、ストレートピンでプラグした後、ラットを代謝ケージに入れ、２日間飲料水によりアンピシリンを与えた（デキストロース小さじ２杯で１００ｍｇ／５０ｍｌ）。ケージ上部から出ているスプリングおよびカテーテルは固定した。
【００９４】
ラットが麻酔から十分回復した後すぐに、テルブトロールを術後鎮痛剤として皮下投与した。１０日間組換えヒトレラキシンの低用量投与（４．０μｇ／ｈ  ｒｈＲＬＸ）のために、２個のＡｌｚｅｔモデル２００２浸透圧ミニポンプ（Ｄｕｒｅｃｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃｕｒｐｅｒｔｉｎｏ、ＣＡ  ＵＳＡ）をイソフラン麻酔下に動物の背部に皮下挿入した。１０日間の高用量投与（２５μｇ／ｈ）のために、１個のＡｌｚｅｔモデル２ＭＬ２浸透圧ミニポンプを移植した。最終時点の測定終了後、ラットを６０ｍｇ／ｋｇペントバルビタールの静脈内により麻酔した。ｒｈＲＬＸレベル、浸透圧およびヘマトクリット用に腹部大動脈から採血した。右心房に相対的な頸静脈カテーテルの位置、大動脈弓に相対的な圧力カテーテルの配置、および、左腎動脈に相対的な熱電対の位置を記録した。
【００９５】
（インビボ研究：血液力学的特性および全身動脈機械的特性）
時間コントロール研究を、まず５匹のラットにおいて行うことにより手術後１７日間に渡る全身の血液力学の安定性を実証した。測定は、術後４〜５日、７〜８日、９〜１０日、１３〜１４日および１６〜１７日に記録した。低用量および高用量のｒｈＲＬＸプロトコルは、それぞれラット６匹および７匹を要した。さらにｒｈＲＬＸ用のビヒクル（２０ｍＭ  酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０）を別のラット６匹に投与した。術後第５日および７日の全身血液力学の２ベースライン測定の後、低用量または高用量のいずれかのｒｈＲＬＸまたはビヒクルを浸透圧ミニポンプにより投与した。全身血液力学は再度、ｒｈＲＬＸまたはビヒクル注入開始後３日、６日、８日および１０日に評価した。
【００９６】
各測定はラットが睡眠または安静時に得た心拍出量および血圧波形の４〜６個の記録からなるものとした。記録の間は最低１０分間設けた。これらの測定値は午前９時〜午後３時の間に得た。
【００９７】
心拍出量。心拍出量を測定するために、本発明者らは熱希釈技術を用いた。Ｏｓｂｏｒｎら、（１９８６）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５１：Ｈ１３６５−Ｈ１３７２。既知の容量および温度のリンゲル液を、Ｍｉｃｒｏ  Ｉｎｊｅｃｔｏｒ４００（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて前大静脈内に注射した。心拍出量は血液温度の変化から計算した（Ｃａｒｄｉｏｔｈｅｒｍ４００Ｒ、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）。Ｃａｒｄｉｏｔｈｅｒｍ４００Ｒにより測定された心拍出量は以下の通り計算した：
【００９８】
【数１】
0005502274.tif 000002
ここで、ＢＴは血液温度（腹部大動脈に移植した熱電対により記録）、ＩＴは注射物の温度（室温）、ＶＩは注射物の容量（１５０μＬ）、そして、ＢＴ（ｔ）は時間の関数としての血液温度である。
【００９９】
血圧。瞬間的大動脈圧を、血圧テレメトリーシステム（Ｄａｔａ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ  ＵＳＡ）を用いて記録した。Ｍｉｌｌｓら、（２０００）Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．８８：１５３７−１５４４。大動脈圧は、右頚動脈を介して大動脈弓内に移植した圧力カテーテルにより記録し、外部レシーバーに伝達した。定常状態の大動脈圧は１６ビットの解像度および２０００Ｈｚのサンプリング速度でＰＣ系のデータ取得システムを用いてオンラインでデジタル化し、テキストファイルとして保存してオフライン分析用とした。各測定は３０秒間のサンプリング持続時間からなるものとした。
【０１００】
大動脈圧の分析。取得したデータの分析および全体的なＡＣの計算を、ＭＡＴＬＡＢソフトウエア（ＭａｔｈＷｏｒｋｓ  Ｉｎｃ．，Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ  ＵＳＡ）を用いて開発された専用のコンピュータープログラムにより実施した。手短には、心拍出量の測定直前の大動脈圧の記録の１０秒から個々の拍動を選択した（３〜１５サイクル）。全体をＢｕｒａｔｔｉｎｉら、（（１９８５）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．１８：３０３−３１２）に記載の通りに平均して各試行に関する単一の代表的拍動を求めた。平均動脈圧（ＭＡＰ）、最高収縮期血圧（Ｐｓ）および拡張末期血圧（Ｐｄ）を、この平均拍動から計算した。脈圧（ＰＰ）を、Ｐｓ−Ｐｄとして計算した。全身血管抵抗性（ＳＶＲ）は、ＣＯでＭＡＰを割ることにより計算した。
【０１０１】
全体的な動脈コンプライアンス。全体的な動脈コンプライアンスの２測定値を計算した。第１（ＡＣａｒｅａ）を、面積法（２）：ＡＣａｒｅａ＝Ａｄ／［ＳＶＲ（Ｐ１−Ｐ２）］を用いて大動脈圧波形［Ｐ（ｔ）］の拡張期の減衰から計算し、ここで、Ｐ１およびＰ２はそれぞれ拡張期の減衰曲線の開始時および終了時の圧力であり、そしてＡｄはこの領域にわたるＰ（ｔ）波形下の面積である。全体的な動脈コンプライアンスの第２の測定を、一回拍出量の脈圧に対する比として計算した（Ｃｈｅｍｌａら、（１９９８）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７４：Ｈ５００−Ｈ５０５）。一回拍出量を、ＣＯ／ＨＲとして定義した。
【０１０２】
（インビトロ研究：動脈の受動的機構）
非妊娠雌性ラットにｒｈＲＬＸ（４μｇ／ｈ）またはビヒクルを、浸透圧ミニポンプを用いて５日間投与した。腎臓を摘出し、氷冷ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水（ＰＳＳ、改変Ｋｒｅｂ’ｓ緩衝液）中に入れた。ＨＥＰＥＳ−生理食塩水溶液の組成（ｍｍｏｌ／Ｌ）は、塩化ナトリウム１４２、塩化カリウム４．７、硫酸マグネシウム１．１７、塩化カルシウム２．５、リン酸カリウム１．１８、ＨＥＰＥＳ１０、グルコース５．５からなり、３７°ＣでｐＨ７．４であった。Ｇａｎｄｌｅｙら、（（２００１）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８０：Ｒ１−Ｒ７）の記載に従ってステレオ切開顕微鏡、微小鉗子および虹彩切除ハサミを用いて葉間動脈を単離した（未加圧内径１００〜２００μｍ）。次に動脈切片を等圧動脈造影デバイス（Ｌｉｖｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＶＴ  ＵＳＡ）に移し、チャンバー内に懸垂した２つのガラスマイクロカニューレ上にマウントした。残余の血液を動脈管腔から洗浄した後、遠位のカニューレを閉塞して流動を防止した。近位のカニューレを圧力変換器、圧力サーボコントローラーおよび蠕動ポンプに連結した。サーボコントローラーは段階的様式で変化する選択された管腔内圧力を維持した。電子寸法分析システムにより動脈直径測定値を得た。
【０１０３】
血管をカルシウム非含有ＨＥＰＥＳ  ＰＰＳ中１０−４Ｍ  パパベリンおよび１０−２Ｍ  ＥＧＴＡを含む浴中でインキュベートした。３０分の平衡期間の後、経壁圧を０ｍｍＨｇで開始し、１５０ｍｍＨｇまで１４段階に増加させた。各圧力段階の後、血管が定常状態に達した時点で内径および外径ならびに壁圧を測定した。壁中央の半径（Ｒｍ）および周囲壁応力（σ）を前に記載の通りにこれらのデータから計算した（Ｃｈｏｌｌｅｙら、（２００１）Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．９０：２４２７−２４３８）。血管壁の弾性は、漸増量の弾性率（Ｅｉｎｃ）として定量し、これはσ−Ｒｍの関係から計算した（Ｐａｇａｎｉら、（１９７９）Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．４４：４２０−４２９）。
【０１０４】
（血清の測定）
血清の浸透圧を、凝固点低下機器浸透圧計を用いて測定した（Ｍｏｄｅｌ  ３  ＭＯ；Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｅｅｄｈａｍ  Ｈｅｉｇｈｔｓ、ＭＡ  ＵＳＡ）。血清中のｒｈＲＬＸのレベルを、以前に記載されている通り定量的サンドイッチイムノアッセイにより測定した（Ｊｅｙａｂａｌａｎら、（２００３）Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．９３（１２）：１２４９−５７）。
【０１０５】
（ｒｈＲＬＸの調製）
２個のモデル２００２の浸透圧ミニポンプ（Ｄｕｒｅｃｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ、ＣＡ  ＵＳＡ）を用いて１０日間４μｇ／ｈの用量でｒｈＲＬＸを送達し、これにより、ラットの早期〜中期の妊娠期間に測定される循環レラキシン濃度、すなわちこの種において妊娠に誘導される腎血管拡張が最大となる時期の１０〜２０ｎｇ／ｍｌと類似する循環レラキシン濃度を生じた。１個のモデル２ＭＬ２浸透圧ミニポンプを用いて、この種においてＣＯがさらに増加しＳＶＲが低下する中期〜後期の妊娠期間に記録される数値に匹敵する循環ホルモン濃度が生じることが予測される２５μｇ／ｈの用量で１０日間ｒｈＲＬＸを送達した。２０ｍＭ  酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０中の５．０ｍｇ／ｍｌ溶液として提供されたｒｈＲＬＸ（Ｃｏｎｎｅｔｉｃｓ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡ）を、同じ緩衝液中に希釈した。
【０１０６】
（統計学的分析）
データを平均＋ＳＥＭとして表示する。反復測定一元配置ＡＮＯＶＡまたは反復測定二元配置ＡＮＯＶＡ（Ｚａｒ（１９８４）Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ、Ｅｎｇｌｅｗｏｏｄ  Ｃｌｉｆｆｓ、ＮＪ：Ｐｒｅｎｔｉｃｅ  Ｈａｌｌ）を用いて種々の群間の平均値を比較した。有意な主効果または相互作用が観察された場合は、群間の比較をＦｉｓｈｅｒの最小有意差法またはＤｕｎｎｅｔｔ検定を用いて行った。対応のあるスチューデントｔ検定を用いてｒｈＲＬＸの注入の間の複合平均値（すなわちｒｈＲＬＸ注入の間の全時点に渡って平均された値）をベースラインと比較した。最小二乗法による回帰分析をσ−ＲｍおよびＥｉｎｃ−Ｒｍの関係について行った。過分散（または自乗の過総和）の分析を用いてビヒクルとレラキシン処置群との間のこれらの関係を比較した。ｐ＜０．０５を有意と見なした。
【０１０７】
（結果）
（インビボ研究）
時間コントロール。コントロールラットにおける術後１７日間にわたる全身動脈血液力学的および負荷の安定性（表１）。心拍数は前に報告されている通り訓練効果により有意に低下した（ＣｏｎｒａｄおよびＲｕｓｓ（１９９２）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．３１．Ｒ４７２−４７７）。一回拍出量はＣＯが未変化となるように相互に増加した。全ての他の変数は、術後１７日間の期間にわたって有意に変化せず、従って、この覚醒ラットモデルは次に記載する実験条件下で意味のあるデータを得るために使用され得る（表１）。
【０１０８】
【表１】
0005502274.tif 000003
平均±ＳＥＭ。Ｎ＝５匹のラット。ΔＴは右心臓内へのリンゲル液の注入後の血液の温度の変化；ＣＯは心拍出量；ＨＲは心拍数；ＳＶは一回拍出量；ＡＣａｒｅａは面積法を用いて計算した全体的な動脈コンプライアンス；ＳＶＲは全身血管抵抗；ＭＡＰは平均動脈圧である。＊反復測定一元配置ＡＮＯＶＡによりＰ＜０．０５。
【０１０９】
ビヒクル投与ラット（ｒｈＲＬＸ用）。これらの結果は、１μｌ／ｈの注入速度でｒｈＲＬＸ用のビヒクルを投与したラット３匹から、そして、５μｌ／ｈの注入速度でｒｈＲＬＸ用のビヒクルを投与した別のラット３匹から得られた。（これらはそれぞれｒｈＲＬＸの低用量および高用量の投与の流量に相当する。）結果は比較可能であり、従って組み合わせた。図１および図２は、全身血液力学および他の変数に関するベースラインからのパーセント変化を示す。時間コントロール研究と同様、心拍数には有意な低下が観察され、これはＣＯが未変化に維持されるように有意でない一回拍出量増加により相殺された。他の全ての変数は比較的一定に維持された。ビヒクルの投与の間の時点の全てを合わせると、ＣＯ、広範囲のＡＣおよびＳＶＲの全体的変化は、それぞれベースラインの−１．４＋１．３％、２．２＋４．６％および０．４＋３．４％であった（全てのＰは、ＮＳ  対  ベースライン）。予測された通り、血清中には測定可能なｒｈＲＬＸは観察されず、浸透圧は３０９＋６ｍＯｓｍ／ｋｇ水であった。
【０１１０】
低用量ｒｈＲＬＸ（４μｇ／ｈ）投与ラット。全身血液力学および他のパラメーターに関する絶対値は表２に示す通りであり、そして図１および図２はベースラインからのパーセント変化の一時的パターンを示す。
【０１１１】
【表２】
0005502274.tif 000004
平均±ＳＥＭ。Ｎ＝６匹のラット。２回のベースライン測定を術後第５日および第７日に実施した。これらの結果を各ラットにつき平均した。略記については表１を参照のこと。
【０１１２】
低用量ｒｈＲＬＸは、ベースラインおよびビヒクル注入と比較してＣＯを有意に増加させた（図１Ａ）。ｒｈＲＬＸの注入は、ＨＲにおいて通常観察される低下を防止し（ビヒクルと比較、図１Ｂ）、そしてホルモンは有意にＳＶを増加させた（図１Ｃ）。従って、ＳＶおよびＨＲの両方の増加は複合されて、ビヒクル注入ラットと比較してＣＯを上昇させた。全身血管抵抗は、ベースラインおよびビヒクル注入と比較して有意に低下（図２Ａ）したが、ＭＡＰは未変化のままであった（図２Ｂ）。
【０１１３】
広範囲のＡＣはベースラインおよびビヒクル注入と比較して有意に増加した（図２Ｃ）。脈圧には有意な変化はなかったが、一回拍出量の脈圧に対する比、動脈コンプライアンスの別の指標は、ベースラインおよびビヒクル注入と比較して低用量ｒｈＲＬＸの注入の間に、有意に増加した（図２Ｄ）。低用量ｒｈＲＬＸ投与により有意な変化（すなわちレラキシンおよび／または相互作用に関する有意なＦ値）を示した変数の経時変化をさらに試験した。種々の時点におけるデータの事後対比較によれば（Ｆｉｓｈｅｒの最小有意差法）ＣＯおよびＳＶは共に第３日にはベースラインより有意に高かった。ＳＶは第８日まで増加し続けた（ｐ＜０．０５、第８日  対  第３日）（図１Ｃ）が、第３日以降はＣＯには有意な経時変化は観察されなかった（図１Ａ）。これは第３日から第８日へのＨＲの小規模であるが非有意の低下の結果であった（図１Ｂ）。
【０１１４】
ＳＶＲおよび広範囲のＡＣの両測定値は第３日に有意に変化し、その後はそれ以上の有意な変化は観察されなかった（図２）。一般的に低用量ｒｈＲＬＸ投与後の動脈の血液力学および機械的特性の最大の変化は、試験の最も早い時点（第３日）において観察され、その後の一時的変化は観察されない。低用量ｒｈＲＬＸの投与の間の全時点を組み合わせれば、ＣＯおよび広範囲のＡＣの全体的増加は、それぞれ、１９．２＋４．８％および２１．４＋３．６％ベースラインより高く、ＳＶＲの全体的低下は１５．５＋２．４％ベースラインより低かった（全てＰ＜０．０１は、ベースラインに対してである）。血清のｒｈＲＬＸおよび浸透圧はそれぞれ１４＋２ｎｇ／ｍｌおよび２８４＋２ｍＯｓｍ／ｋｇ水であった。後者はビヒクル注入と比較して有意に低下していた。
【０１１５】
高用量ｒｈＲＬＸ（２５μｇ／ｈ）投与ラット。全身血液力学および他の変数に関する絶対値は表３に示す通りであり、そして図１および図２はベースラインからのパーセント変化の一時的パターンを示す。高用量注入の結果は、方向性は低用量投与に匹敵するものであったが、程度が多少小さかった。
【０１１６】
【表３】
0005502274.tif 000005
平均±ＳＥＭ。Ｎ＝７匹のラット。２回のベースライン測定を術後第５日および第７日に実施した。これらの結果を各ラットにつき平均した。略記については表１を参照のこと。
【０１１７】
高用量ｒｈＲＬＸによる個々の変数の変化の一時的分析は、低用量ｒｈＲＬＸの場合と同様の様式で実施した。もう一度述べると、ＣＯ（図１Ａ）、ＳＶ（図１Ｃ）、ＳＶＲ（図２Ａ）および広範囲のＡＣ（ＳＶ／ＰＰ法）（図２Ｄ）は、試験の最も早い時点（第３日）までに最大に変化し、その後の有意な変化は観察されなかった。面積法により計算した広範囲のＡＣの一時的応答（図２Ｃ）は、この一般的パターンからは若干偏位しており、第６日のＡＣａｒｅａはベースラインのものと差がなかった。これは異常計測の可能性があり、その理由は第２の測定の全時点における広範囲のＡＣ（図２Ｄ）および第３日、第８日および第１０日におけるＡＣａｒｅａ（図２Ｃ）がベースラインより有意に高かったためである。高用量ｒｈＲＬＸの投与の間の全時点を組み合わせれば、ＣＯおよび広範囲のＡＣの全体的増加は、それぞれ、１４．１＋３．２および１５．６＋４．７％ベースラインより高く、ＳＶＲの全体的低下は９．７＋２．４％ベースラインより低かった（全てＰ＜０．０２）。血清中のレラキシンおよび浸透圧はそれぞれ３６＋３ｎｇ／ｍｌおよび２８７＋１ｍＯｓｍ／ｋｇ水であった。後者はビヒクル注入と比較して有意に低下していた。
【０１１８】
動脈圧波形。ベースラインおよびｒｈＲＬＸ投与後の１匹のラットから得た代表的な動脈波形を図３Ａに示す。これらはマウスの圧力カテーテル（ＴＡ１１ＰＡ−Ｃ２０）が広範囲のＡＣの測定に必要な高い忠実度の記録を与えることを示している。Ｂｕｒａｔｔｉｎｉら、（前出）の提案した方法を用いて誘導した全体的平均の動脈圧波形を、注入の第１０日におけるラット３群について図３Ｂに示す。上で考察した通り、ｒｈＲＬＸ投与後のＳＶは有意に増加し、ＳＶＲは有意に減少した（表２および３）。これらが唯一の変化である場合、圧力波形形態の明確な変化：増加した脈圧および加速された動脈圧拡張期の減衰の観察を期待できる。しかし、図３Ｂに示す通り、ｒｈＲＬＸの投与は圧力波形形態に有意に影響せず、これは未変化の脈圧および拡張期の減衰が示す通りである。増加ＳＶおよび減少ＳＶＲの存在下のこの不変の圧力波形形態は広範囲のＡＣにおける同時増加と一致している。
【０１１９】
（インビトロ研究）
動脈の受動的機序。これらのインビトロの実験を、血管壁の受動的（すなわち活性な平滑筋の緊張の非存在下）機械的特性に対するｒｈＲＬＸ投与の効果を調べるために実施した。上述した通り（方法の節）、主要な測定は、管腔内圧力の種々のレベルにおける血管の内径および外径からなるものとした。周囲壁応力（σ）および壁中央の半径（Ｒｍ）をこれらの主要測定値から計算し、σ−Ｒｍの関係を用いて血管壁弾性挙動（例えば漸増弾性率、Ｅｉｎｃ）を定量した。小腎動脈に関わるσ−Ｒｍ（図４Ａ）およびＥｉｎｃ−Ｒｍ（図４Ｂ）の関係は２群間で有意に異なり（過分散の分析によりｐ＜０．００１）、これによりσおよびＥｉｎｃはレラキシン処置群の所定のＲｍについてはより小さかった。対照的に、非応力のＲｍ、Ｒｍｏ（すなわちσ＝０におけるＲｍ）は２群間で差がなかった（レラキシン処置：１０５±５μｍ；ビヒクル処置：９８±６μｍ）。従って、Ｒｍ軸は周囲壁応力と考えることができる。これらのデータは、レラキシン処置が適合したＲｍ（緊張）値において血管壁の硬化（Ｅｉｎｃ）を有意に低下させることを示している。この減少した受動的壁硬化は、レラキシン処置した覚醒動物において観察される上昇した全体的ＡＣに寄与している（上出）。
【０１２０】
（実施例２：覚醒ラットにおける全身動脈血液力学的特性および機械的特性に対するレラキシンの効果：性別依存性および用量応答）
（方法）
（動物）
１２〜１４週齢のＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓ雄性および雌性ラットをＨａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、Ｍａｒｙｌａｎｄ  ＵＳＡ）から購入した。これらには０．４８％ナトリウムを含有するＰＲＯＬＡＢ  ＲＭＨ２０００飼料（ＰＭＥ  Ｆｅｅｄｓ  Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ  ＵＳＡ）および水を自由摂取させた。ラットは１２時間：１２時間の明期−暗期サイクルで維持した。この研究は、米国国立衛生研究所により公開されている実験動物の管理と使用に関する指針（ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．８５−２３，１９９６年改定）に合致している。
【０１２１】
（組換えヒトレラキシン（ｒｈＲＬＸ）の投与）
ｒｈＲＬＸ（ＢＡＳ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡ）は緩衝液（２０ｍＭ  酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０）中の５．０ｍｇ／ｍｌ溶液として提供された。これを必要に応じて同じ緩衝液中に希釈した。低用量注入プロトコルについては、２個のモデル２００２の浸透圧ミニポンプ（Ｄｕｒｅｃｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ、ＣＡ  ＵＳＡ）を用いて１０日間４μｇ／ｈの用量でｒｈＲＬＸを送達した。この用量は、ラットの早期〜中期の妊娠期間に測定される循環レラキシン濃度、すなわち１０〜２０ｎｇ／ｍｌと類似する循環レラキシン濃度を生じるように設計した（Ｓｈｅｒｗｏｏｄ  ＯＤ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｒｅｖ  ２５（２）：２０５−２３４、２００４）。高用量注入プロトコルについては１個のモデル２ＭＬ２浸透圧ミニポンプを用いて、この種においてＣＯがさらに増加しＳＶＲが減少する時期（Ｇｉｌｓｏｎら、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ３２：Ｈ１９１１−Ｈ１９１８、１９９２；Ｓｌａｎｇｅｎら、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２７０：Ｈ１７７９−１７８４、１９９６）の後期の妊娠期間に記録される数値に匹敵する血清濃度がもたらされることが予測される５０μｇ／ｈの用量で６日間ｒｈＲＬＸを送達した（Ｓｈｅｒｗｏｏｄ  ＯＤ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｒｅｖ  ２５（２）：２０５−２３４，２００４）。最後に第３のプロトコルにおいて、ｒｈＲＬＸを３分間にわたって静脈内ボーラスにより投与し（１３．４μｇ／ｍｌ）、その後４時間静脈内連続注入した。
【０１２２】
（外科的調製）
実施例１のように、ラットを、６０ｍｇ／ｋｇケタミンを筋肉内および２１ｍｇ／ｋｇペントバルビタールを腹腔内で麻酔した。次いでこれらを、滅菌技術を用いて、以下の通りに機器処置に付した：（ｉ）ｔｙｇｏｎカテーテルを前大静脈および右心房の接合部に先端が位置するように右頸静脈内に移植し、（ｉｉ）熱希釈マイクロプローブ（３６ｃｍ長、Ｆ＃１．５；Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ、ＯＨ  ＵＳＡ）を左腎動脈の１．０ｃｍ下に先端が位置するように左大腿動脈を介して腹部大動脈内に移植し、そして（ｉｉｉ）マウス圧カテーテル（ＴＡ１１ＰＡ−Ｃ２０；Ｆ＃１．２；Ｄａｔａ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｓｔ．Ｐａｕｌ、ＭＮ  ＵＳＡ）を右頚動脈および大動脈弓の接合部に先端が位置するように右頚動脈内に移植した。ｒｈＲＬＸの急性投与のためには、別のｔｙｇｏｎカテーテルを右腎動脈の１．０ｃｍ下に先端が位置するように左大腿動脈を介して下大静脈内に移植した。
【０１２３】
頸静脈カテーテルにヘパリン溶液０．０５ｍｌを滴加し、ストレートピンでプラグした後、ラットに２日間飲料水によりアンピシリンを与えた（デキストロース小さじ２杯で１００ｍｇ／５０ｍｌ）。テルブトロールを術後鎮痛剤として皮下投与した。
【０１２４】
雄性ラットにおける１０日間の低用量組換えヒトレラキシンの慢性投与（４．０μｇ／ｈ  ｒｈＲＬＸ）のために、２個のＡｌｚｅｔモデル２００２浸透圧ミニポンプ（Ｄｕｒｅｃｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｃｕｒｐｅｒｔｉｎｏ、ＣＡ  ＵＳＡ）をイソフラン麻酔下に動物の背部に皮下挿入した。６日間の雌性ラットにおける慢性高用量投与（８０μｇ／ｈ）のために、１個のＡｌｚｅｔモデル２ＭＬ２浸透圧ミニポンプを移植した。高用量ｒｈＲＬＸをまた別の群の雌性ラットに対し、急性には３分間にわたる静脈内ボーラス投与（１３．４μｇ／ｍｌ）、ついで４時間の連続注入により投与した。
【０１２５】
最終時点の測定終了後、ラットを６０ｍｇ／ｋｇペントバルビタールの静脈内により麻酔した。血漿のｒｈＲＬＸレベル測定用に腹部大動脈から採血した。右心房に相対的な頸静脈カテーテルの位置、大動脈弓に相対的な圧力カテーテルの配置、および、左腎動脈に相対的な熱電対の位置を記録した。
【０１２６】
（血液力学的特性および全身動脈機械的特性）
低用量および高用量のｒｈＲＬＸプロトコルはそれぞれ雄性ラット７匹および雌性ラット９匹を要した。術後第５日および第７日の全身血液力学の２ベースライン測定の後、低用量または高用量のいずれかのｒｈＲＬＸを浸透圧ミニポンプにより投与した。全身血液力学は再度、レラキシン注入開始後、低用量雄性ラットでは第３日、６日、８日および１０日に、そして高用量雌性ラットでは３日および６日に測定した。各測定はラットが睡眠または安静時に得た心拍出量および血圧波形の４〜８個の記録からなるものとした。記録の間は７〜１０分間設けた。これらの測定値は午前９時〜午後３時の間に得た。
【０１２７】
高用量ｒｈＲＬＸの急性投与については、雌性ラット５匹を使用した。４時間の高用量ｒｈＲＬＸの静脈内注入の後に全身血液力学のベースライン測定を行った。全身血液力学的特徴は４時間の注入中継続して評価した。
【０１２８】
本発明者等は心拍出量を測定するために、熱希釈技術を用いた（Ｏｓｂｏｒｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５１：Ｈ１３６５−Ｈ１３７２、１９８６）。瞬間的大動脈圧波形を、血圧テレメトリーシステム（Ｄａｔａ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｓｔ．Ｐａｕｌ、ＭＮ  ＵＳＡ）を用いて記録した（Ｍｉｌｌｓら、Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ８８：１５３７−１５４４、２０００）。大動脈圧は大動脈弓内に移植した圧力カテーテルにより記録し、外部レシーバーに伝達した。定常状態の大動脈圧は１６ビットの解像度および２０００Ｈｚのサンプリング速度でＰＣ系のデータ取得システムを用いてオンラインでデジタル化し、テキストファイルとして保存してオフライン分析用とした。各測定は３０秒のサンプリング持続時間からなるものとした。
【０１２９】
取得したデータの分析および全体的なＡＣの計算を、Ｍａｔｌａｂソフトウエア（ＭａｔｈＷｏｒｋｓ  Ｉｎｃ．、Ｎａｔｉｃｋ、ＭＡ  ＵＳＡ）を用いて開発された専用のコンピュータープログラムにより実施した。手短には、心拍出量の測定直前の大動脈圧の記録の１０秒から個々の拍動を選択した（３〜１５サイクル）。全体をＢｕｒａｔｔｉｎｉら、（２）に記載の通りに平均して各試行に関する単一の代表的拍動を求めた。平均動脈圧（ＭＡＰ）、最高収縮期血圧（Ｐｓ）および拡張末期血圧（Ｐｄ）を、この平均拍動から計算した。脈圧（ＰＰ）を、Ｐｓ−Ｐｄとして計算した。全身血管抵抗性（ＳＶＲ）は、ＣＯでＭＡＰを割ることにより計算した。
【０１３０】
全体的な動脈コンプライアンスの２測定値を計算した。第１（ＡＣａｒｅａ）を、面積法（１８）：
ＡＣａｒｅａ＝Ａｄ／［ＳＶＲ（Ｐ１−Ｐ２）］
を用いて大動脈圧波形［Ｐ（ｔ）］の拡張期の減衰から計算し、ここで、Ｐ１およびＰ２はそれぞれ拡張期の減衰曲線の開始時および終了時の圧力であり、そしてＡｄはこの領域に渡るＰ（ｔ）波形下の面積である。全体的な動脈コンプライアンスの第２の測定を、一回拍出量の脈圧に対する比、ＳＶ／ＰＰとして計算した（Ｃｈｅｍｌａら、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２７４：Ｈ５００−Ｈ５０５、１９８８）。一回拍出量を、ＣＯ／ＨＲとして定義した。
【０１３１】
（血清の測定）
血清の浸透圧を、凝固点低下機器浸透圧計を用いて測定した（Ｍｏｄｅｌ  ３  ＭＯ；Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｅｅｄｈａｍ  Ｈｅｉｇｈｔｓ、ＭＡ  ＵＳＡ）。血清中のｒｈＲＬＸのレベルを、以前に記載されている通り定量的サンドイッチイムノアッセイにより測定した（Ｊｅｙａｂａｌａｎら、Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ  ９３：１２４９−１２５７、２００３）。
【０１３２】
（統計学的分析）
データを平均±ＳＥＭとして表示する。低用量および中程度の用量のｒｈＲＬＸを雌性ラットに投与した以前の試験（Ｃｏｎｒａｄら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １４５（７）：３２８９−３２９６、２００４；実施例１）のデータを比較のために含める。反復測定二元配置ＡＮＯＶＡ（Ｚａｒ  ＪＨ、Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｅｎｇｌｅｗｏｏｄ  Ｃｌｉｆｆｓ：Ｐｒｅｎｔｉｃｅ  Ｈａｌｌ、１９８４）を用いて種々の時点における低用量の雄性ラットと雌性ラットとの間の平均値を比較した。同じ分析を、種々の時点での雌性ラットにおけるｒｈＲＬＸの低用量、中程度の用量および高用量間の平均値を比較するために実施した。反復測定一元配置ＡＮＯＶＡ（Ｃｏｎｒａｄら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １４５（７）：３２８９−３２９６、２００４）を用いて高用量ｒｈＲＬＸ急性注入開始後の種々の時点における平均値をベースライン値と比較した。有意な主効果または相互作用が観察された場合は、群間の対比較をＦｉｓｈｅｒの最小有意差法試験を用いて行った。対応のあるスチューデントｔ検定を用いてｒｈＲＬＸの慢性注入の間の複合平均値（後に定義）をベースラインと比較した。ｐ＜０．０５を有意と見なした。最後に直線回帰を用いてレラキシン注入に応答した個々のラットの各動脈特性の変化の程度とその特性のベースライン値との関係を分析した。直線回帰パラメーターにおける群の差を、ダミー変数を用いた多重直線回帰として行われるＡＮＣＯＶＡを用いて検査した（Ｇｕｊａｒａｔｉ  Ｄ、Ａｍ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｉａｎ  ２４：１８−２２、１９７０）。
【０１３３】
（結果）
低用量ｒｈＲＬＸを投与した雄性ラット（４μｇ／ｈ）。ベースラインの数値のパーセントとして表示したいくつかの全身血液力学の変数の一時的パターンは図５に示す通りであり、これらの変数の絶対値を表４に示す。比較のために雌性ラットにおける４μｇ／ｈでのｒｈＲＬＸ注入の効果を試験した本発明者等の以前の試験（Ｃｏｎｒａｄら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １４５（７）：３２８９−３２９６、２００４）のデータも図５に示す。低用量ｒｈＲＬＸは、雄性ラットにおいてベースラインと比較してＣＯを有意に増加させた。わずか（約６％）であるが統計学的に有意なＨＲの上昇がレラキシン処置雄性ラットにおいて観察された（図５Ａ）。しかし、より大きなＳＶの上昇（図５Ｂ）が観察され、これは、ＣＯの上昇は大部分がＳＶ増加に起因しており、そしてＨＲの上昇に起因する程度は低かったこと示唆している。平均動脈圧はｒｈＲＬＸ注入の間有意に変化しなかった（図５Ｄ）。最終時点（すなわちｒｈＲＬＸ注入開始後１０日）において、雄性ラットおよび雌性ラットの全身血液力学に対するｒｈＲＬＸ投与の効果には統計学的有意差はなかった。
【０１３４】
ベースライン値のパーセントとして表示した雄性ラットにおける全身動脈特性に対するｒｈＲＬＸ注入の一時的作用を図６に示す。これらの変数の絶対値はやはり表４に示す通りであり、雌性ラットから得たデータも比較のために図６に示す。全身血管抵抗はベースラインと比較して有意に低下（図６Ａ）していたが、動脈コンプライアンスの両方の尺度（ＡＣａｒｅａおよびＳＶ／ＰＰ）は有意に増加していた（図２Ｂおよび２Ｃ）。最終時点（すなわちｒｈＲＬＸ注入開始後１０日）において、動脈特性の変化は、雄性ラットと雌性ラットとの間で統計学的有意差はなかった。
【０１３５】
【表４】
0005502274.tif 000006
平均±ＳＥＭ。Ｎ＝７匹のラット。ΔＴは右心臓内へのリンゲル液の注入後の血液の温度の変化；ＣＯは心拍出量；ＨＲは心拍数；ＳＶは一回拍出量；ＡＣａｒｅａは面積法を用いて計算した全体的な動脈コンプライアンス；ＳＶＲは全身血管抵抗；ＭＡＰは平均動脈圧である。＊反復測定一元配置ＡＮＯＶＡによりＰ＜０．０５。
【０１３６】
本発明者らは、ベースラインからの有意な変化により特徴付けられ、相互には有意差がないｒｈＲＬＸ注入の間の全ての連続時点における値（即ち定常状態）を平均することにより各変数に対するベースラインからの複合的平均変化を計算した。これによりＣＯおよびＡＣの全体的増加は、それぞれ、ベースラインから２０．５±４．２％および１９．４±６．９％となり、そしてＳＶＲの全体的減少はベースラインから１２．７±３．９％となった（ベースラインに対して全てＰ＜０．０５）。雄性ラットのこれらの結果と報告された雌性ラットの結果との間には統計学的差はなかった（実施例１）。血清中ｒｈＲＬＸは１７．７±１．１ｎｇ／ｍｌであり、これは同じｒｈＲＬＸレジメンで投与した雌性ラットで以前に観察された数値、１４．０±２．０ｎｇ／ｍｌと類似していた。
【０１３７】
高用量ｒｈＲＬＸ（５０μｇ／ｈ）を投与した雌性ラット。全身血液力学および動脈特性の絶対値は表５に列挙し、ｒｈＲＬＸ注入開始後のその一時的パターンを、図３および４に示す。比較のために、雌性ラットにおいて低用量（血清濃度＝１４±２ｎｇ／ｍｌ）および中程度の用量（血清濃度＝３６±３ｎｇ／ｍｌ）のｒｈＲＬＸ注入の効果を試験する実施例１のデータも図３および４に示す。低用量および中程度の用量のｒｈＲＬＸ注入は、主にＳＶを増加させることにより、ＣＯを有意に増加させた。両方の用量とも有意にＳＶＲを低下させ、そしてＡＣを増加させた（Ｃｏｎｒａｄら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １４５（７）：３２８９−３２９６、２００４）。これらの変化は全て試験した最も早期の時点、すなわちｒｈＲＬＸ投与開始後３日に観察された。この研究における高用量注入に関する血清ｒｈＲＬＸ濃度は７１．５±１．６ｎｇ／ｍｌであった。しかし、全身血液力学および動脈特性のいずれにおいてもベースラインからの変化はなかった（図３および図４）。従って、全身血液力学的特性および動脈特性に対するｒｈＲＬＸの効果は、見かけ上は二相性であった。
【０１３８】
【表５】
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平均±ＳＥＭ。Ｎ＝８匹のラット。ΔＴは右心臓内へのリンゲル液の注入後の血液の温度の変化；ＣＯは心拍出量；ＨＲは心拍数；ＳＶは一回拍出量；ＡＣａｒｅａは面積法を用いて計算した全体的な動脈コンプライアンス；ＳＶＲは全身血管抵抗；ＭＡＰは平均動脈圧である。＊反復測定一元配置ＡＮＯＶＡによりＰ＜０．０５。
【０１３９】
ｒｈＲＬＸ投与開始後３日よりも早期の時点において高用量ｒｈＲＬＸ処置に応答した全身血液力学的特性および動脈特性における有意な変化があるか否かを決定するために、さらに５匹の雌性覚醒ラットに４時間にわたってｒｈＲＬＸを急性静脈内注入で処置した。血清中ｒｈＲＬＸ濃度は６４．１±１．０ｎｇ／ｍｌであった。ベースライン値のパーセントで表示した雌性ラットにおける全身血液力学的特性および動脈特性に対する短期高用量ｒｈＲＬＸ注入の一時的効果を図５および図６に示す。心拍数は、２時間および４時間の両方の時点において有意に増加した（約１３％）（図９Ａ）。このＨＲの増加は、ＳＶの低下（統計学的に有意ではない）により相殺され（図９Ｂ）、ＣＯの有意な変化は生じなかった（図９Ｃ）。わずか（約８％）であるが統計学的に有意なＭＡＰの増加が観察された（図９Ｄ）。全身動脈特性のいずれにもベースラインからの統計学的に有意な変化は観察されなかった（図９）。
【０１４０】
上記のデータは、低用量ｒｈＲＬＸの注入に応答した個々のラット（雌性または雄性）の動脈特性の変化の程度がその特定の特性のベースライン値に依存していたことを示唆している。この傾向を確認するために、ＳＶＲ、ＡＣａｒｅａおよびＳＶ／ＰＰのベースライン値とそれぞれのｒｈＲＬＸ注入の間のベースラインからの複合パーセント変化との間の関係を分析した。直線回帰分析により、ＳＶＲ（図９Ａ）およびＡＣに対するｒｈＲＬＸ注入の効果（すなわちベースラインからのパーセント変化）は、ＡＣａｒｅａ（図９Ｂ）およびＳＶ／ＰＰ（図９Ｃ）により測定した場合、全てそのベースライン値に高度に依存していることが明らかになった。特に、ベースラインにおいて低ＡＣであったラットはレラキシン処置に応答したＡＣのより大きい増加を特徴としていた。同様に、ベースラインにおいて高いＳＶＲを有していたラットはＳＶＲのより大きな低下を伴うレラキシンへ応答していた。さらなる解析（ＡＮＣＯＶＡ）は、これらの直線的関係は雌雄のラット間で差がなかったことを示した。
【０１４１】
上記の結果は、レラキシンが伝統的には雌性ホルモンであると考えられており、雄性ラットにおいては循環しないと考えられていた（Ｓｈｅｒｗｏｏｄ  ＯＤ，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｒｅｖ  ２５（２）：２０５−２３４、２００４）にも関わらず、雄性および雌性のラットの両方において全身血液力学的特性および動脈特性に対して同様の効果を誘発することを示す。
【０１４２】
本発明はその特定の実施形態を参照して記載されたが、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく、種々の変更が可能であり、等価物による代替が可能であることが当業者により理解されるべきである。さらに、本発明の目的、精神および範囲に対し、特定の状況、材料、物質の組成物、プロセス、プロセスの工程または工程を適合させるべく多くの改変がなされ得る。このような改変は全て本明細書に添付した特許請求の範囲の範囲内に包含されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１４３】
【図１】図１Ａ〜Ｃは、低用量の組換えヒトレラキシン（ｒｈＲＬＸ；４μｇ／ｈ）、高用量のｒｈＲＬＸ（２５μｇ／ｈ）またはビヒクルを投与した雌性ラットにおける心拍出量（図１Ａ）、心拍数（図１Ｂ）および一回拍出量（図１Ｃ）に関するベースラインからのパーセント変化を示す。
【図２】図２Ａ〜Ｄは、低用量ｒｈＲＬＸ、高用量ｒｈＲＬＸまたはビヒクルを投与した雌性ラットにおける全身血管抵抗（図２Ａ）、平均動脈圧（図２Ｂ）、全体的な動脈コンプライアンス（図２Ｃ）および一回拍出量の脈圧に対する比に関するベースラインからのパーセント変化を示す。
【図３】図３Ａおよび図３Ｂは、１匹のラットから得た代表的な動脈圧の追跡結果（図３Ａ）；および、浸透圧ミニポンプの移植後１０日における３群（ビヒクル、低用量ｒｈＲＬＸおよび高用量ｒｈＲＬＸ）に関する全体的平均動脈圧波形（図３Ｂ）を示す。
【図４】図４Ａおよび４Ｂは、５日間ｒｈＲＬＸまたはビヒクルを処置したラットから単離した小腎動脈に関する周囲ストレス（σ）−壁中央の半径（Ｒｍ）（図４Ａ）；および漸増弾性率（Ｅｉｎｃ）−Ｒｍ（図４Ｂ）の関係を示す。
【図５】図５は、雄性および雌性のラットにおける低用量（４μｇ／ｈ）組換えヒトレラキシン投与に応答した全身血液力学の一時的変化を示す。心拍数（Ａ）、一回拍出量（Ｂ）、心拍出量（Ｃ）および平均動脈圧（Ｄ）のデータをベースラインのパーセントとして表示する。＊Ｐ＜０．０５は、ベースラインに対してである（事後Ｆｉｓｈｅｒの最小有意差法）。ＳＶにおける有意な漸増は第６日、第８日および第１０日にのみ観察された。
【図６】図６は雄性および雌性のラットにおける低用量（４μｇ／ｈ）の組換えヒトレラキシン投与に応答した全身動脈特性の一時的変化を示す。全身血管抵抗（Ａ）および全体的な動脈コンプライアンスの２測定値、ＡＣａｒｅａ（Ｂ）およびＳＶ／ＰＰ（Ｃ）、のデータをベースラインのパーセントとして表示する。＊Ｐ＜０．０５は、ベースラインに対してである（事後Ｆｉｓｈｅｒの最小有意差法）。ＡＣａｒｅａおよびＳＶ／ＰＰにおける有意な漸増は第８日および第１０日にのみ観察された。
【図７】図７は、雌性ラットにおける組換えヒトレラキシン投与の３つの用量：低用量（４μｇ／ｈ）、中程度の用量（２５μｇ／ｈ）および高用量（５０μｇ／ｈ）に応答した全身血液力学の一時的変化を示す。心拍数（Ａ）、一回拍出量（Ｂ）、心拍出量（Ｃ）および平均動脈圧（Ｄ）のデータをベースラインのパーセントとして表示する。＊Ｐ＜０．０５は、ベースラインに対してである（事後Ｆｉｓｈｅｒの最小有意差法）。
【図８】図８は、雌性ラットにおける組換えヒトレラキシン投与の３用量：低用量（４μｇ／ｈ）、中程度の用量（２５μｇ／ｈ）および高用量（５０μｇ／ｈ）に応答した全身血液力学の一時的変化を示す。全身血管抵抗（Ａ）および全体的な動脈コンプライアンスの２測定値、ＡＣａｒｅａ（Ｂ）およびＳＶ／ＰＰ（Ｃ）、のデータをベースラインのパーセントとして表示する。＊Ｐ＜０．０５は、ベースラインに対してである（事後Ｆｉｓｈｅｒの最小有意差法）。
【図９】図９は、雌性ラットにおける短期間高用量の組換えヒトレラキシン投与に応答した全身血液力学の一時的変化を示す。心拍数（Ａ）、一回拍出量（Ｂ）、心拍出量（Ｃ）および平均動脈圧（Ｄ）のデータをベースラインのパーセントとして表示する。＊Ｐ＜０．０５は、ベースラインに対してである（事後Ｆｉｓｈｅｒの最小有意差法）。
【図１０】図１０は、雌性ラットにおける短期間高用量組換えヒトレラキシン投与に応答した全身動脈特性の一時的変化を示す。全身血管抵抗（Ａ）および全体的な動脈コンプライアンスの２測定値、ＡＣａｒｅａ（Ｂ）およびＳＶ／ＰＰ（Ｃ）、のデータをベースラインのパーセントとして表示する。
【図１１】図１１は、低用量組換えヒトレラキシン（４μｇ／ｈ）を投与した雄性ラットおよび雌性ラットにおける全身血管抵抗（Ａ）および全体的な動脈コンプライアンスの２測定値、ＡＣａｒｅａ（Ｂ）およびＳＶ／ＰＰ（Ｃ）の複合的なベースラインからのパーセント変化とベースライン値との間の関係を示す。これらの関係は性別非依存性であった。各パネルの実線は直線回帰により得られた関係のプロットに相当する（雄性および雌性ラットを組み合わせた）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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