(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
鼻腔内投与のための薬学的に受容可能な担体と一緒の（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、またはその薬学的に受容可能な塩の組成物であって、同一の用量での経口組成物と比較してより高い脳吸収濃度（ｎｇ／ｇ）を与えることを特徴とする前記組成物。
【請求項２】
化合物が、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−［３−（５−イソプロポキシピリジン）イル］−４−ペンテン−２−アミンのヒドロキシ安息香酸塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
吸収促進剤をさらに含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
１つまたはそれ以上の添加剤、賦形剤、結合剤、滑沢剤、流動促進剤、崩壊剤、除痛剤、乳化剤、粘膜付着剤、可溶化剤、懸濁化剤、粘度調整剤、イオン等張化剤、緩衝剤、担体、界面活性剤、矯味矯臭剤、またはそれらの混合物をさらに含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
組成物が、液体、液体スプレー、マイクロスフェア、半固体、ゲル、または粉末である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
様々なメタニコチンアナログは、主に経口投与で様々な障害の治療に使用することが提案されてきた。例えば、特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４および特許文献５（これらの内容は、このようなアナログに関して参照により本明細書に加入される）を参照のこと。しかし、これらの化合物のいくつかは、インビボで比較的早い分解を受け、これが腸壁および肝臓での初回通過代謝に関与する経路を介して作用部位にこれらを投与することを困難にしている。迅速な初回通過代謝を有さないメタニコチンアナログでさえ、特に、それらが治療レベルまたは活性開始の改善を提供する場合、経口経路以外の投与経路は、有利な利点をもたらし得る。
【０００２】
経口に代わる投与経路は、以下のそれぞれで議論されている：非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；特許文献６；非特許文献６；および非特許文献７（これらの各々は背景に関して本明細書中に加入される）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．５，６１６，７１６
【特許文献２】Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．５，８６１，４２３
【特許文献３】Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．６，２３２，３１６
【特許文献４】Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．６，９５８，３９９
【特許文献５】Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．７，０４５，５３８
【特許文献６】Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ＵＳ  ２００６  ００８４６５６  Ａ１
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｇｒａｆｆ  ａｎｄ  Ｐｏｌｌａｃｋ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｖｏｌｕｍｅ  ９４（２００５），＃６，ｐａｇｅ  １１８７
【非特許文献２】Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｄｒｕｇｓ，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，ｖｏｌｕｍｅ  １００，＃１（Ｊｕｌｙ，１９９７），ｐａｇｅ  １４３
【非特許文献３】Ｓｈｏｊａｅｉ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｖｏｌｕｍｅ  １，＃１，ｐａｇｅ  １５（１９９８）
【非特許文献４】Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｑｕａｙ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ｖｏｌｕｍｅ  ２，＃２，ｐａｇｅ  ２８１（２００５）
【非特許文献５】Ｓｈｅｃｋｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌｕｍｅ  ６，＃  ５，ｐａｇｅ  ５６（２００６）
【非特許文献６】Ｌｅｏｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｖｏｌｕｍｅ  ９４，＃８，ｐａｇｅ  １７３６（２００５）
【非特許文献７】Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｖｏｌｕｍｅ  ３１，ｐａｇｅ  ６３７（２００６）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、特定のメタニコチンアナログを投与するための新規な組成物および方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、鼻腔内、バッカル、または舌下投与のための、薬学的に受容可能な担体と一緒のＥ−メタニコチン、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、またはその薬学的に受容可能な塩の組成物を含む。
【０００７】
１つの実施形態において、組成物は、Ｅ−メタニコチンまたはその薬学的に受容可能な塩を含む。別の実施形態において、組成物は、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンまたはその薬学的に受容可能な塩を含む。別の実施形態において、組成物は、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンまたはその薬学的に受容可能な塩を含む。
【０００８】
１つの実施形態において、本発明の組成物は、吸収促進剤をさらに含む。１つの実施形態において、本発明の組成物は、１つまたはそれ以上の添加剤、賦形剤、結合剤、滑沢剤、流動促進剤、崩壊剤、除痛剤（ｄｅｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、乳化剤、粘膜付着剤（ｍｕｃｏｓａｌ  ａｄｈｅｓｉｖｅ）、可溶化剤、懸濁化剤、粘度調整剤、イオン等張化剤（ｉｏｎｉｃ  ｔｏｎｉｃｉｔｙ  ａｇｅｎｔ）、緩衝剤、担体、界面活性剤、矯味矯臭剤、またはそれらの混合物をさらに含む。
【０００９】
１つの実施形態において、本発明の組成物は、液体、液体スプレー、マイクロスフェア、半固体、ゲル、または粉末である。
【００１０】
１つの実施形態において、本発明の組成物は、体温により口腔内で崩壊し、場合により口腔の体組織に付着し得る、バッカルまたは舌下投与のための固体投与形態である。さらなる実施形態において、本発明の組成物は、１つまたはそれ以上の添加剤、賦形剤、結合剤、滑沢剤、流動促進剤、崩壊剤、除痛剤、乳化剤、粘膜付着剤、可溶化剤、懸濁化剤、粘度調整剤、イオン等張化剤、緩衝剤、担体、界面活性剤、矯味矯臭剤、またはそれらの混合物をさらに含む。さらなる実施形態において、組成物は、錠剤、丸剤、生体接着パッチ剤、スポンジ剤、フィルム剤、トローチ剤、ハードキャンディー剤、ウエハー剤、スフェア剤、ロリポップ剤（ｌｏｌｌｉｐｏｐｓ）、ディスク形構造剤、またはスプレー剤として製剤化される。
【００１１】
ニューロンのニコチン性アセチルコリン特異的受容体部位に結合する本発明のもののような化合物は、コリン作動性機能を調節するのに有用である。従って、本発明の化合物は、種々の状態または障害を治療するのに有用であり、種々の状態または障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎、壊疽性膿皮症、およびクローン病を含む）、過敏性腸症候群、痙攣性ジストニア、疼痛（急性疼痛、慢性疼痛、神経性疼痛、神経因性疼痛、女性特有の疼痛、術後疼痛、炎症性疼痛、またはがん性疼痛を含む）、セリアックスプルー、回腸嚢炎、血管収縮、不安（全般性不安障害、パニック障害を含む）、うつ病、双極性障害、自閉症、ピック病、クロイツフェルトヤコブ病、多発性硬化症、躁病、睡眠障害、ジェットラグ、筋萎縮性側索硬化症（「ＡＬＳ」）、認知機能障害、高血圧、過食症、食欲不振、肥満、心不整脈、胃酸分泌過多、潰瘍、褐色細胞腫、進行性核上性麻痺、薬物依存症および嗜癖（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｉｅｓ  ａｎｄ  ａｄｄｉｃｔｉｏｎｓ）（ニコチンもしくは他のタバコ製品、アルコール、ベンゾジアゼピン、バルビツール酸系催眠薬、オピオイド、またはコカインに対する依存症または嗜癖を含む）、頭痛、片頭痛、卒中、外傷性脳損傷、強迫性障害（「ＯＣＤ」）、精神病、ハンチントン舞踏病、遅発性ジスキネジー、運動過剰（ｈｙｐｅｒｋｉｎｅｓｉａｓ）、失読症、統合失調症、統合失調症様障害、統合失調性感情障害、または統合失調症における認知障害、多発脳梗塞性認知症、加齢関連認知低下、発作、てんかん（小発作欠神てんかんを含む）、加齢関連性記憶障害、軽度認識障害、初老期認知症、早期発症型アルツハイマー病、老年性認知症、アルツハイマー型認知症、レヴィー小体認知症、ＨＩＶ−認知症、血管性認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、エイズ認知症複合、注意力欠如障害、注意欠陥多動障害、怒りの暴発（ｒａｇｅ  ｏｕｔｂｕｒｓｔｓ）、およびトゥーレット症候群。
【００１２】
疼痛に関して、本発明は、有効量の本発明の組成物をその必要がある対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与することを通して疼痛を緩和する方法を含む。１つの実施形態において、疼痛の型は、急性疼痛、慢性疼痛、神経性疼痛、神経因性疼痛、女性特有の疼痛、術後疼痛、炎症性疼痛、またはがん性疼痛である。
【００１３】
中枢神経系（「ＣＮＳ」）障害に関して、本発明は、有効量の本発明の組成物をその必要がある対象に投与することを通して中枢神経系障害を治療する方法を含む。１つの実施形態において、中枢神経系障害は、正常な神経伝達物質放出の変化に関連する。１つの実施形態において、中枢神経系障害は、失読症、パーキンソニズム、パーキンソン病、ピック病、ハンチントン舞踏病、遅発性ジスキネジー、運動過剰症、進行性核上性麻痺、クロイツフェルトヤコブ病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、てんかん、躁病、不安、うつ病、パニック障害、双極性障害、全般性不安障害、強迫性障害、怒りの暴発、トゥーレット症候群、自閉症、加齢関連性記憶障害、軽度認識障害、初老期認知症、早期発症型アルツハイマー病、老年性認知症、アルツハイマー型認知症、レヴィー小体認知症、ＨＩＶ−認知症、血管性認知症、アルツハイマー病、エイズ認知症複合、注意力欠如障害、注意欠陥多動障害、統合失調症、統合失調症様障害、統合失調性感情障害、または統合失調症の認知障害である。
【００１４】
１つの実施形態において、本発明は、１つまたはそれ以上のアルツハイマー型の軽度〜中等度の認知症、注意力欠如障害、注意欠陥多動障害、軽度認識障害、加齢関連性記憶障害、統合失調症、および統合失調症の認知障害の治療または予防に使用するための、鼻腔内、バッカル、または舌下投与のための薬学的に受容可能な担体と共に（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンまたはその塩（塩としてはヒドロキシ安息香酸塩が挙げられるがこれに限定されない）を含む。１つの実施形態において、本発明は、１つまたはそれ以上のアルツハイマー型の軽度〜中等度の認知症、注意力欠如障害、注意欠陥多動障害、軽度認識障害、加齢関連性記憶障害、統合失調症、および統合失調症の認知障害の治療または予防に使用する薬剤の製造における、鼻腔内、バッカル、または舌下投与のための薬学的に受容可能な担体と一緒の（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンまたはその塩（塩としてはヒドロキシ安息香酸塩が挙げられるがこれに限定されない）の使用を含む。
【００１５】
１つの実施形態において、本発明は、１つまたはそれ以上のアルツハイマー型の軽度〜中等度の認知症、注意力欠如障害、注意欠陥多動障害、軽度認識障害、加齢関連性記憶障害、統合失調症、および統合失調症の認知障害の治療または予防に使用するための、鼻腔内、バッカル、または舌下投与のための薬学的に受容可能な担体と共に（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンまたはその塩を含む。１つの実施形態において、本発明は、１つまたはそれ以上のアルツハイマー型の軽度〜中等度の認知症、注意力欠如障害、注意欠陥多動障害、軽度認識障害、加齢関連性記憶障害、統合失調症、および統合失調症の認知障害の治療または予防に使用する薬剤の製造における、鼻腔内、バッカル、または舌下投与のための、薬学的に受容可能な担体と共に（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンまたはその塩の使用を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】培養ヒト気道上皮を越える化合物Ｂの透過性の結果を示す（平均±ＳＴＤ、Ｎ＝３）。化合物Ｂ単独での透過と比較して、ＭＡＯ阻害剤パルギリン（Ｐａｒｇｙｌｉｎｅ）の存在下での化合物Ｂの透過性は有意に増大し、表わされた*は、両側ｔ−検定（ｔｗｏ−ｔａｉｌｅｄ  ｔ−ｔｅｓｔ）でｐ＜０．０５を示す。
【図２】培養ヒト気道上皮を越えるＭＡＯ基質フェニルエチルアミン（ＰＥＡ）の透過性の結果を示す（平均±ＳＴＤ、Ｎ＝３）。ＰＥＡ単独での透過と比較して、ＭＡＯ阻害剤パルギリンの存在下でのＰＥＡの透過性は有意に増大し、表わされた*は、両側ｔ−検定でｐ＜０．０５を示す。
【図３】培養ヒト気道上皮を越える化合物Ａの透過性の結果を示す（平均±ＳＴＤ、Ｎ＝３）。図で示されるように、ＣＹＰ２Ｄ６阻害剤キニジンの非存在または存在下で適用される場合、化合物Ａの透過性の間に有意な差は存在しない。
【図４】培養ヒト気道上皮を越えるＣＹＰ２Ｄ６基質ブフラロールの透過性の結果を示す（平均±ＳＴＤ、Ｎ＝３）。図で示されるように、ＣＹＰ２Ｄ６阻害剤キニジンの非存在または存在下で適用される場合、ブフラロールの透過性の間に有意な差は存在しない。
【図５】化合物Ｂの脳透過性を示す（平均±ＳＴＤ、Ｎ＝３）。図で示されるように、化合物Ｂ単独での脳濃度と比較して、ＭＡＯ阻害剤パルギリンの存在下での化合物Ｂの脳透過性は、有意に増加し、*は、両側ｔ−検定でｐ＜０．０５を示す。
【図６】化合物Ａの脳透過性を示す（平均±ＳＴＤ、Ｎ＝３）。図で示されるように、ＣＹＰ２Ｄ６阻害剤キニジンの非存在または存在下でかん流した場合、化合物Ａの脳透過性の間に有意な差は存在しない。
【図７】化合物Ｃの平均脳濃度（ｎｇ／ｇ）を示す。図で示されるように、投与の１０分後、５ｍｇ／ｋｇの用量での脳レベルは、経口投与よりも鼻腔内投与の方が高かった。
【図８】化合物Ｃの平均血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。図で示されるように、投与の１０分後、５ｍｇ／ｋｇの用量での血漿レベルは、経口投与よりも鼻腔内投与の方が高かった。
【図９】化合物Ｃの平均脳／血漿比［（ｎｇ／ｇ）／（ｎｇ／ｍＬ）］を示す。本明細書でさらに詳細に説明するように、図示された低い値は、血液脳関門の完全性（ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ）がこの研究の関連部分全体にわたって維持されていたことを実証する。
【００１７】
Ｅ−メタニコチンおよびその塩は、肝臓での初回通過の間に代謝されるために、経口投与した場合、相対的に乏しいバイオアベイラビリティーしか有さない。（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンおよび（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンならびにそれらのそれぞれの塩は、経口投与した場合、受容可能なバイオアベイラビリティーを有するが、鼻腔内、バッカル、または舌下投与は、経口投与をより優れた他の利点を与える。
【００１８】
以下の本明細書で詳細に説明するように、本発明のいくつかの方法には、コリン作動性機能の調節を通して影響を受ける疾患または障害を治療または予防することが含まれる。例として、中枢神経系障害としては、ニコチン様コリン作動性神経伝達の機能障害により特徴付けられる障害（ドーパミン放出のような神経伝達物質放出の神経変調が関与する障害を含む）が挙げられる。中枢神経系（ＣＮＳ）障害は、正常な神経伝達物質放出の変化により特徴付けられ得る。本発明の他の方法には、一定の他の状態を治療すること（疼痛の緩和および炎症の治療または予防が挙げられるが、これらに限定されない）が含まれる。本発明の各々の方法には、障害を治療または予防する（疼痛または炎症の緩和または排除が挙げられるが、これらに限定されない）ために、鼻腔内、バッカルまたは舌下経路を経て、有効量の本発明の組成物を対象に投与することが含まれる。
【００１９】
鼻腔内、バッカル、または舌下投与のための組成物は、有効量の１つまたはそれ以上のメタニコチンアナログまたはその薬学的に受容可能な塩を、１つまたはそれ以上の薬学的に受容可能な担体または添加剤と共に含有する。組成物は、活性化合物の粉末、分散液または溶液の形態であり得る。組成物は、場合により、透過促進剤、生体接着ポリマー、および活性成分の瞬間放出または調節放出（例えば、徐放）を与えるための手段のような成分を含有し得る。組成物はまた、１種またはそれ以上の薬学的に受容可能な矯味矯臭剤または他の味マスキング剤を含有し得る。
【００２０】
薬剤組成物は、対象の関連あるニコチン性受容体部位と相互作用するために有効量の化合物Ｅ−メタニコチン、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、または（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、またはその組み合わせを含む。本発明の薬剤組成物に含まれる化合物が有効量で用いられる場合に以下の可能性を有するので、このような障害に罹患し、このような障害の臨床症状を示す個体に対して、本発明の薬剤組成物は治療上の利点をもたらす：（ｉ）ニコチン性の薬理を示し、そして関連するニコチン性受容体部位に影響を与える（ニコチン性受容体を活性化する薬理学的なアゴニストとして作用することが挙げられるが、これに限定されない）；および（ｉｉ）神経伝達物質の分泌を引き出し、従って疾患に関連する症状を予防および抑制する。さらに、本化合物は、以下の可能性を有することが期待される：（ｉ）患者の脳のニコチン様コリン作動性受容体の数を増加させること；および（ｉｉ）好ましいプロファイルを示しながら、すなわち血圧および心拍数の有意な増加、胃腸管に対する有意な負の作用、または骨格筋に対する有意な作用を引き起こさずに、神経保護効果を示すこと。
【００２１】
用語「鼻腔内送達（ｉｎｔｒａｎａｓａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」または「鼻腔内送達（ｎａｓａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」とは、本明細書中で使用される場合、鼻を通して、および鼻内で薬物吸収するための方法を意味する。用語「バッカル送達」とは、本明細書中で使用される場合、頬側（ｂｕｃｃａｌ）（頬の内部、組織を含む）を通して吸収させるために薬物を存在させる方法を意味する。用語「舌下送達」とは、舌下への活性剤の送達を意味する。まとめて、これらは経粘膜送達法である。
【００２２】
薬物は、鼻腔内および口腔内の粘膜面のような粘膜面を介して吸収され得る。皮膚を越える吸収の主な障壁である表皮の角質層を欠いているので、粘膜面を介する薬物送達は効率的であり得る。粘膜面はまた、典型的に血液供給が豊富であり、これは初回通過肝代謝による著しい分解を回避し、さらに全身的に薬物を迅速に輸送し得る。
【００２３】
嗅粘膜上に噴霧された薬物を吸収するための３つの経路が存在し、これらとしては、嗅覚ニューロンによる、支持細胞および周辺毛細血管床（ｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇ  ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｂｅｄ）による、ならびに脳脊髄液内へのものが挙げられる。鼻粘膜を介する薬物の吸収は、迅速になりがちである。
【００２４】
鼻腔内投与のように、口腔経粘膜吸収は、粘膜への豊富な血液供給および表皮の角質層を欠くために、一般に迅速である。このような薬物輸送は、典型的に、血液濃度の迅速な上昇をもたらし、そして同様に、腸肝循環、ならびに胃酸によるまたは腸壁および肝の代謝の部分的な初回通過効果によるおよび即時分解を回避する。
【００２５】
薬物は、典型的に、有意な薬物吸収が生じるように口腔粘膜面に長期にわたって暴露される必要がある。薬物送達に影響する因子としては、味（これは、接触時間に影響し得る）および薬物のイオン化が挙げられる。薬物吸収は、一般に、舌および歯肉よりも頬側（ｂｕｃｃａｌ）粘膜または口腔粘膜からの方が大きい。バッカル薬物送達に関連する１つの制約は低フラックスであり、これはしばしば、低い薬物バイオアベイラビリティーをもたらす。低フラックスは、当該分野で知られているように頬側浸透促進剤を使用することによりいくらか補われて、粘膜を通しての薬物のフラックスを増大させ得る。
【００２６】
鼻腔内またはバッカル経路のいずれかにおいて、薬物吸収が、遅延または持続する場合があり、または取り込みが静脈内ボーラス投与される場合とほとんど同様に迅速になる場合がある。豊富な血液供給の高い透過性のために、舌下経路は作用の迅速な発現をもたらし得る。
【００２７】
Ｅ−メタニコチン（これは関連する受容体に対する適切な親和性および選択性を示し、そしてその受容体で活性を示す）の送達において、鼻腔内、バッカル、および舌下経路は、有効であり得るが、これは、インビボでの他の方法では、例えば経口で送達される場合、肝臓の初回通過代謝により、あまりに迅速に代謝される。これらの経路はまた、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンおよび（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン（これらの化合物は、すぐに代謝されない）を送達するためにも有効である。
【００２８】
鼻腔内、バッカル、および舌下経路はまた、比較的早い吸収および治療効果の発現をもたらし得る点から、経口経路よりもより有効であり得る。さらに、鼻腔内、バッカル、および舌下経路は、錠剤、カプセル剤、または他の経口固形剤の嚥下困難な患者、または腸吸収に障害がある疾患を有する患者の治療に使用するのが好ましい可能性がある。従って、Ｅ−メタニコチン、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、またはその薬学的に受容可能な塩（本明細書中まとめて「活性成分」と呼ばれる）の鼻腔内、バッカル、または舌下投与には多くの利点がある。
【００２９】
語句「活性成分」とは、化合物Ｅ−メタニコチン、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、または（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンを意味する。本明細書中で使用される場合、「活性成分」には、化合物のプロドラッグが含まれる。本明細書中で使用される場合、「活性成分」には、化合物またはプロドラッグの薬学的に受容可能な塩、水和物、または溶媒和物が含まれる。
【００３０】
用語「薬学的に受容可能な塩」の範囲内に包含される塩は、本発明の化合物の非毒性塩をいう。本発明の化合物の塩としては、酸付加塩が挙げられ得るが、これに限定されるべきではない。典型的な塩としては、酢酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、エデトカルシウム酸塩（ｃａｌｃｉｕｍ  ｅｄｅｔａｔｅ）、カンシル酸塩、炭酸塩、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エジシル酸塩、エストール酸塩、エシル酸塩（ｅｓｙｌａｔｅ）、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩（ｇｌｙｃｏｌｌｙｌａｒｓａｎｉｌａｔｅ）、ヘキシルレゾルシン酸塩（ｈｅｘｙｌｒｅｓｏｒｃｉｎａｔｅ）、ヒドラバミン塩（ｈｙｄｒａｂａｍｉｎｅ）、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩（ｈｙｄｒｏｘｙｎａｐｈｔｈｏａｔｅ）、ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、塩酸リジン塩（ｌｙｓｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、マレイン酸一カリウム塩、粘膜酸塩（ｍｕｃａｔｅ）（ガラクタル酸塩（ｇａｌａｃｔａｒｔｒａｔｅ））／ヘミムチン酸塩（ｈｅｍｉｍｕｃａｔｅ）（ヘミガラクタル酸塩（ｈｅｍｉｇａｌａｃｔａｒｔｒａｔｅ））、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミン酸、オロト酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（エンボナン酸塩（ｅｍｂｏｎａｔｅ））、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩（ｐｏｌｙｇａｌａｃｔｕｒｏｎａｔｅ）、カリウム塩、サリチル酸塩、ナトリウム塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオジド（ｔｒｉｅｔｈｉｏｄｉｄｅ）、トリメチルアンモニウム塩、および吉草酸塩が挙げられる。本発明の１つの実施形態には、酒石酸、ヒドロキシ安息香酸、リン酸、エジシル酸（ｅｄｉｓｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）、クエン酸、オロト酸、マンデル酸、硫酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、アスパラギン酸、およびリジン一塩酸との酸付加により形成される薬学的に受容可能な塩を含む。薬学的に受容可能でない他の塩は、本発明の化合物の製造に有用であり得、そしてそれらは本発明のさらなる側面を形成するとされるべきである。非限定的な例として、本発明の活性成分には、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンのヒドロキシ安息香酸塩が含まれる。
【００３１】
本明細書中で使用される場合、用語「溶媒和物」とは、溶質により形成された可変化学量論の複合体、すなわち本発明においては本明細書に記載される式の化合物またはその塩もしくはそのプロドラッグと、溶媒との複合体をいう。本発明の目的のためのこのような溶媒は、溶質の生物活性を阻害すべきでない。適切な溶媒の非限定的な例としては、水、メタノール、エタノール、および酢酸が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、使用される溶媒は薬学的に受容可能な溶媒である。適切な薬学的に受容可能な溶媒の非限定的な例としては、水、エタノール、および酢酸が挙げられる。最も好ましくは、使用される溶媒は水である。
【００３２】
本明細書中で使用される場合、プロドラッグとしては、本明細書中に記載される化合物の生加水分解性（ｂｉｏｈｙｄｒｏｌｙｚａｂｌｅ）エステルまたは生加水分解性アミドが挙げられる。
【００３３】
語句「他の成分」とは、１つまたはそれ以上の活性成分と共に製剤化される任意の添加剤、賦形剤、結合剤、滑沢剤、流動促進剤、崩壊剤、除痛剤（ｄｅｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）、乳化剤、粘膜付着剤、可溶化剤、懸濁化剤、粘度調整剤、イオン等張化剤、緩衝剤、担体、界面活性剤、矯味矯臭剤、およびそれらの混合物を意味する。
【００３４】
語句「適切な期間（ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ  ｐｅｒｉｏｄ  ｏｆ  ｔｉｍｅ）」または「適する期間（ｓｕｉｔａｂｌｅ  ｐｅｒｉｏｄ  ｏｆ  ｔｉｍｅ）」とは、所望の効果または結果を達成するのに必要な期間を意味する。例えば、混合物は、ブレンドされる混合物の所定の適用または使用のための受容可能な範囲内の、用量効力分布（ｐｏｔｅｎｃｙ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）に達するまで、ブレンドし得る。
【００３５】
語句「単位用量」、「単位投与量」、または「単位投与形態」とは、所望の治療効果を生じさせるために計算された、所定量の活性成分を含有する物理的に別々の単位を意味する。投与形態は、バッカル、舌下、または鼻腔内投与のための任意の適する形態であり得、この形態は当業者に周知である。
【００３６】
本明細書で使用される場合、語句「有効量」とは、中枢神経系障害を治療または予防するか、または個体における中毒、炎症、または疼痛を治療または予防するための当該技術分野で公知である考慮により決定される量を意味する。この語句には、例えば改善（より迅速な回復、症状の改善、症状の除去、合併症の減少、または適切で、医術の当業者に公知である他の測定結果を含むがこれらに限定されない）を示すことを通じてなど、治療される個体における測定可能な軽減を与えることが含まれる。
【００３７】
本明細書中に記載される任意の実施形態において、投与形態の活性ブレンドには、一般に、１つまたはそれ以上の他の成分が含まれ、そしてこれは活性成分が適用されている目的に依存する。一般に、鼻腔内、バッカルおよび舌下製剤は、添加剤、賦形剤、結合剤、滑沢剤、流動促進剤、崩壊剤、除痛剤、乳化剤、粘膜付着剤、可溶化剤、懸濁化剤、粘度調整剤、イオン等張化剤、緩衝剤、担体、矯味矯臭剤およびそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない他の成分で作られている。
【００３８】
Ｉ．メタニコチン化合物
本発明の主題である化合物としては、以下が挙げられる：（Ｅ）−メタニコチン、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、および（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、またはその薬学的に受容可能な塩。これらの化合物の遊離塩基の式は、以下に示される：
【化１】
0005502494.tif 000002
【００３９】
ＩＩ．化合物の製造
（Ｅ）−メタニコチンの合成は、Ｒｕｅｃｒｏｆｔ  ａｎｄ  Ｗｏｏｄｓによる米国特許第５，６６３，３５６号（このような合成に関して参照により本明細書に加入される）に記載されている。米国特許第６，７４３，８１２号およびＰＣＴ  ＷＯ２００６／０５３０３９（各々、このような合成に関して参照により本明細書に加入される）に例示されているように、（Ｅ）−メタニコチンの塩の合成は、適切な溶媒中、（Ｅ）−メタニコチンを種々の無機酸および有機酸と混合することにより達成し得る。
【００４０】
（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンおよび（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンの合成は、例えば米国特許第７，０４５，５３８号および同第６，９５８，３９９号（各々、このような合成に関して参照により本明細書に加入される）に記載されている手順を使用して行なうことができる。米国特許第６，４３２，９５４号、同第７，０４５，５３８号およびＰＣＴ  ＷＯ／０５３０３９（各々、このような合成に関して参照により本明細書に加入される）に例示されているように、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンおよび（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンの塩の合成は、適切な溶媒中、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンまたは（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンを種々の無機酸および有機酸と混合することにより達成し得る。（Ｅ）−メタニコチン、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、および（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンのヘミガラクタル酸塩は、米国特許第７，０４５，５３８号および同第６，９５８，３９９号（各々、このような合成に関して参照により本明細書に加入される）に示されている技術を使用して製造し得る。
【００４１】
ＩＩＩ．鼻腔内組成物
錠剤またはカプセル剤のような経口投与形態と比較して、鼻腔内送達は、迅速な吸収、治療効果の早期発現および腸壁または肝臓の初回通過代謝の回避を提供する。錠剤、カプセル剤または他の固形剤の嚥下困難な患者または腸疾患を有する患者にとって、鼻腔内送達経路は好ましい可能性がある。
【００４２】
鼻腔内投与のための組成物には、（Ｅ）−メタニコチン、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、または（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、またはその薬学的に受容可能な塩が含まれ、また場合により、他の成分が含まれていてもよく、他の成分としては、担体および添加剤、例えば鼻腔内投与後、活性成分の鼻腔内吸収を促進する吸収促進剤が挙げられるが、これらに限定されない。他の任意の添加剤としては、賦形剤、結合剤、滑沢剤、流動促進剤、崩壊剤、除痛剤、乳化剤、粘膜付着剤、可溶化剤、懸濁化剤、粘度調整剤、イオン等張化剤、緩衝剤、担体、矯味矯臭剤およびそれらの混合物が挙げられる。
【００４３】
１つの実施形態において、活性成分の粒子サイズは、約６０ミクロン以下であり、これは該粒子と他の成分との任意のブレンドの均一性の確保、または液体ビヒクル中の十分な分散の提供を補助し得る。
【００４４】
吸収される薬物の量は、多くの因子に依存する。これらの因子としては、薬物濃度、薬物送達ビヒクル、粘膜接触時間、粘膜組織の静脈ドレナージ、薬物が吸収部位のｐＨでイオン化される程度、薬物分子の大きさ、およびその相対的な脂溶性が挙げられる。当業者は、これらの因子を考慮して、活性剤の適切な量を送達する適切な鼻腔内組成物を容易に調製し得る。
【００４５】
ＩＶ．吸収促進剤
鼻、頬側または舌下の粘膜のような正常な粘膜面を越える活性成分の輸送は、米国特許第５，６２９，０１１号、同第５，０２３，２５２号、同第６，２００，５９１号、同第６，３６９，０５８号、同第６，３８０，１７５、および国際公開番号ＷＯ  ０１／６０３２５（これらの全ては、吸収促進剤に関して参照により本明細書に加入される）に開示されているように、場合により吸収促進剤と混合することにより増強され得る。これらの吸収促進剤の例としては、カチオン性ポリマー、界面活性剤、キレート化剤、粘液溶解剤、シクロデキストリン、高分子ヒドロゲル、それらの組み合わせ、および当業者に公知の任意の他の類似する吸収促進剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４６】
典型的な吸収促進添加剤としては、ホスファチジルグリセロールまたはホスファチジルコリンのようなリン脂質、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルグリセロール、リゾホスファチジルセリン、またはリゾホスファチジン酸のようなリゾホスファチジル誘導体、グリセリンまたはプロピレングリコールのような多価アルコール、グリセリドのようなそれらの脂肪酸エステル、アミノ酸、およびそれらのエステル、ならびにシクロデキストリン類が挙げられる。ゲル化添加剤または粘性増強添加剤（ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ−ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）もまた使用できる。
【００４７】
Ｖ．粘膜付着／生体接着ポリマー
正常な粘膜面を越える活性成分の輸送はまた、製剤が粘膜面に付着する時間を増加させることにより増強し得る。例えば、ヒドロゲルを形成する粘膜付着／生体接着ポリマーは、粘膜付着および制御された薬物放出特性を示し、そして本明細書に記載される鼻腔内、バッカルおよび舌下組成物に含め得る。このような製剤の例は、米国特許第６，０６８，８５２号および同第５，８１４，３２９号；および国際公開番号ＷＯ９９／５８１１０（これらの全ては、このような製剤に関して参照により本明細書に加入される）に記載されている。
【００４８】
鼻粘膜に結合し得る典型的な生体接着またはヒドロゲル形成ポリマーは当業者によく知られており、そしてこれらとしては、ポリカルボフィル、ポリリジン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ペクチン、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９３４Ｐ、ポリエチレンオキシド６００Ｋ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１２７、ポリイソブチレン（ＰＩＢ）、ポリイソプレン（ＰＩＰ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、キサンタンガム（ｘａｎｔｈｕｍ  ｇｕｍ）、グァーガム、およびローカストビーンガムが挙げられる。
【００４９】
他の鼻腔内送達組成物は、キトサンベースであり、そして粘膜面上の活性成分の滞留時間を延長させるのに適切であり、これによりそのバイオアベイラビリティーの増大をもたらす。これらの鼻腔内送達組成物の例は、米国特許第６，４６５，６２６号、同第６，４３２，４４０号、同第６，３９１，３１８号、および同第５，８４０，３４１号；欧州特許第ＥＰ０９９３４８３号および同第ＥＰ１０５１１９０号；ならびに国際公開番号ＷＯ  ９６／０５８１０、ＷＯ  ９６／０３１４２、およびＷＯ  ９３／１５７３７（これらの全ては、鼻腔内送達組成物に関して参照により本明細書に加入される）に記載されている。
【００５０】
さらに、本発明は、欧州特許第ＥＰ１０２５８５９号および同第ＥＰ１１０８４２３号（これらはこのような組成物に関して参照により本明細書に加入される）に記載されているような粉末マイクロスフェアおよび粘膜付着組成物で製剤化され得る。最後に、粘膜のシステインリッチサブドメインと共有結合を形成するチオール化ポリマー添加剤はまた、粘膜付着を与えることができ、これにより活性成分と膜との接触時間を延長させる。このような添加剤は、国際公開番号ＷＯ  ０３／０２０７７１（これは、このような添加剤に関して参照により本明細書に加入される）に記載されている。
【００５１】
Ｖｌ．保存剤
鼻腔内組成物にはまた、１つまたはそれ以上の保存剤が含まれ得る。
典型的な保存剤としては、塩化ラウラルコニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゾドデシニウム、塩化セチルピリジニウム、セトリミド、臭化ドミフェンのような第四級アンモニウム塩；ベンジルアルコール、クロロブタノール、ｏ−クレゾール、フェニルエチルアルコールのようなアルコール；安息香酸、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸カリウム、パラベンのような有機酸もしくはその塩；またはＥＤＴＡのような錯体形成剤が挙げられる。
【００５２】
ＶＩＩ．他の添加剤
担体および添加剤としては、カルボン酸残基、カルボキシメチル基、スルホプロピル基およびメチルスルホネート基のような適切なアニオン基を有するイオン交換マイクロスフェアが挙げられる。また、陽イオン交換体のようなイオン交換樹脂を使用し得る。部分的に脱アセチル化されたキチンであるキトサン、またはポリ−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサアミン、または塩酸塩、乳酸塩、グルタミン酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、リンゴ酸塩、マロン酸塩、アジピン酸塩もしくはコハク酸塩のようなそれらの薬学的に受容可能な塩もまた使用し得る。
【００５３】
非イオン交換性マイクロスフェアとしての使用に適切な他の成分としては、デンプン、ゼラチン、コラーゲンおよびアルブミンが挙げられる。
【００５４】
組成物にはまた、塩酸、乳酸、グルタミン酸、マレイン酸、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、リンゴ酸、マロン酸、アジピン酸、およびコハク酸からなる群から選択される適切な酸が含まれ得る。賦形剤のような他の成分としては、セルロース、微結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどが挙げられる。
【００５５】
塩化ナトリウム、グルコース、Ｄ−グルコース、マンニトール、ソルビトール、ラクトースなどのような、組成物の張度を調整するための添加剤を添加してもよい。
【００５６】
また、ｐＨを制御するために鼻腔内組成物に酸性または塩基性緩衝剤を添加し得る。
【００５７】
ＶＩＩＩ．組成物中への活性剤の組込み
粘膜を通る活性剤の輸送を向上させる吸収促進剤、および粘膜に対する活性剤の接触時間を延長する生体接着材料の使用に加えて、製剤に依存して速放性または徐放性、またはその両方を提供し得る制御放出製剤を使用することにより、活性剤の投与を制御し得る。
【００５８】
活性成分を含み、そして制御様式でそれらを送達し得る、当業者に公知の多数の微粒子薬物送達ビヒクルが存在する。微粒子ポリマー薬物送達ビヒクルを含む例としては、例えば生分解性ポリマーおよび非ポリマー成分から形成される粒子が挙げられる。これらの微粒子薬物送達ビヒクルは、粉末、微粒子、ナノ粒子、マイクロカプセル、リポソームなどの形態であり得る。典型的に、活性剤が、成分が添加されていない微粒子形態にある場合、その放出速度は、活性剤自体の放出に依存する。典型的に、吸収速度は、粒子が直径２０ミクロン以下である微粒化形態で薬物を存在させることにより促進され得る。対照的に、活性剤が活性剤とポリマーのブレンドとしての微粒子形態である場合、活性剤の放出は、典型的にはポリマーマトリクスからの溶解、生分解、または拡散による、ポリマーの除去によって少なくとも部分的に制御される。
【００５９】
組成物は、活性成分の初期迅速放出、続く活性成分の徐放を提供し得る。米国特許題５，６２９，０１１号では、この種の製剤の例が提供されており、これはこのような製剤に関して参照により本明細書に加入される。鼻腔内送達を利用する多数の組成物およびそれらに関連する方法が存在する。さらに、種々の薬剤組成物の鼻腔内送達を提供する多数の方法および関連する送達ビヒクルが存在する。例えば、現在市販されているニコチン置換療法［Ｎ．Ｊ．Ｂｅｎｏｗｉｔｚ，Ｄｒｕｇｓ，４５：１５７−１７０（１９９３）（これは、その全体が参照により本明細書に加入される）を参照のこと］を用いる鼻腔内組成物はまた、本明細書に記載されるメタニコチンを投与するのに適切である。
ＩＸ．鼻腔内インサフレーター（ｉｎｓｕｆｆｌａｔｏｒ）デバイス
鼻腔内組成物は、それらの形態に従って任意の適切な方法により投与され得る。マイクロスフェアまたは粉末を含む組成物は、鼻腔内インサフレーターデバイスを使用して投与され得る。これらのデバイスの例は当業者によく知られており、これにはＦｉｓｏｎｓ  Ｌｏｍｕｄａｌ  Ｓｙｓｔｅｍのような市販の粉末系が含まれる。インサフレーターは、ドライパウダーまたはマイクロスフェアの微細化雲粒（ｆｉｎｅｌｙ  ｄｉｖｉｄｅｄ  ｃｌｏｕｄ）を発生させる。インサフレーターは、好ましくは実質的に一定量の組成物の投与を確保するための機構を備えている。散剤またはマイクロスフェア剤を、インサフレ
ーターで直接使用でき、インサフレーターは散剤またはマイクロスフェア剤用のボトルまたは容器を備えている。あるいは、散剤またはマイクロスフェア剤をゼラチンカプセルのようなカプセル内に、または鼻腔内投与に適合された単回投与デバイス内に充填できる。インサフレーターは、好ましくは、カプセルまたは他のデバイスをこじ開ける機構を有する。
【００６０】
さらに、組成物は、例えば２つ以上の型のマイクロスフェアまたは粉末を備えることにより、活性成分の初期迅速放出、続く活性成分の徐放性を備え得る。
【００６１】
Ｘ．定量スプレーの使用
鼻腔内送達はまた、スプレーとして投与できる水性媒体中の溶液また分散液に活性成分を含ませることによって達成できる。
【００６２】
スプレーのような投与に適切なデバイスとしては、場合により気体または液体の噴射剤を使用する、定量エアゾールバルブおよび定量ポンプが挙げられる。
【００６３】
この種の典型的なデバイスは、以下の特許、特許出願および刊行物に記載されている［ＷＯ  ０３／０２６５５９、ＷＯ  ０２／０１１８００、ＷＯ  ００／５１６７２、ＷＯ  ０２／０６８０２９、ＷＯ  ０２／０６８０３０、ＷＯ  ０２／０６８０３１、ＷＯ  ０２／０６８０３２、ＷＯ  ０３／０００３１０、ＷＯ  ０３／０２０３５０、ＷＯ  ０３／０８２３９３，ＷＯ  ０３／０８４５９１、ＷＯ  ０３／０９０８１２、ＷＯ  ００／４１７５５、および薬学文献（Ｂｅｌｌ，Ａ．Ｉｎｔｒａｎａｓａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｔｙｌｅ  Ｐ．（ｅｄ），Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８を参照のこと）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，１９７５（これらの全ては、参照により本明細書に加入される）］。
【００６４】
ＸＩ．他の様式の鼻腔内送達
前述に加えて、本化合物および本化合物を含む鼻腔内組成物はまた、当該分野で公知の点鼻薬、鼻スプレー、鼻洗浄剤（ｉｒｒｉｇａｔｉｏｎｓ）、および鼻潅注液（ｄｏｕｃｈｅｓ）の形態で投与され得る。
【００６５】
点鼻薬は、典型的に、患者をベッドに仰向けに横たわらせ、特に頭をベッドの側面上に置いて、液滴を入れることにより投与される。このアプローチは、液滴がさらに奥に入ることを助ける。
【００６６】
鼻洗浄剤は、本明細書に記載される１種またはそれ以上の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩を含む温めた塩水を鼻腔に一定の間隔で注ぎ込むことを包含する。
【００６７】
鼻潅注液（ｄｏｕｃｈｅｓ）は、典型的に、本明細書に記載される１種またはそれ以上の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩を含む塩水で鼻潅注器（ｄｏｕｃｈｅ）に満たし、一方の鼻孔に潅注器（ｄｏｕｃｈｅ）のノズルを挿入し、口を開けて息をし、そして一方の鼻孔に溶液を流し込み、中隔および鼻甲介の周辺をリンスし、そして他方の鼻孔から排出させることにより使用される。
【００６８】
ＸＩＩ．バッカルおよび舌下組成物
錠剤またはカプセル剤のような経口投与形態と比較して、バッカルまたは舌下送達はまた、迅速な吸収、治療効果の早期発現および肝臓または腸壁の初回通過代謝の回避を提供し得る。錠剤、カプセル剤または他の固形剤の嚥下困難な患者または腸疾患を有する患者にとって、バッカルまたは舌下送達経路が好ましい。
【００６９】
バッカル投与のための組成物は、メタニコチンアナログまたはその薬学的に受容可能な塩および少なくとも１つの添加剤を含み、メタニコチンアナログまたはその薬学的に受容可能な塩を含む固形投与形態を形成する。固形投与形態は、最小液体曝露（ｌｉｑｕｉｄ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ）および体温で口腔内で崩壊し、口腔体組織への直接付着、またはガムおよびインナーチーク（ｉｎｎｅｒ  ｃｈｅｅｋ）間における投与形態の捕捉を介して、組織に理想的に付着する。
【００７０】
舌下投与のための組成物は、メタニコチンアナログまたはその薬学的に受容可能な塩および少なくとも１つの添加剤を含み、固形投与形態を形成する。固形投与形態は、舌下で、体温により口腔内で崩壊する。
【００７１】
固形投与形態は、即時放出または制御放出、またはそれらの組み合わせを備えることができ、投与形態は、流体、唾液、物理的浸食、またはそれらの組み合わせの助けを用いてまたは用いずに、体温により口腔内で崩壊または溶融する。
【００７２】
あるいは、投与形態を、液スプレーまたはドライパウダーの形態で口腔中にスプレーし得る。
【００７３】
一般に、組成物は患者の口腔内膜体組織に付着し得る。投与形態としては、錠剤、生体接着パッチ剤またはフィルム剤、スポンジ剤、トローチ剤、ハードキャンディー剤、ウエハー剤、ロリポップ剤（ｌｏｌｌｉｐｏｐｓ）、スプレー剤、ガム剤、丸剤、ペレット剤、スフェア剤、それらの組み合わせ、および当業者に公知の他の形態を挙げ得るが、これらに限定されない。
【００７４】
活性成分のバッカルまたは舌下送達に適切な多数の組成物および送達ビヒクルが存在する。このような組成物または送達ビヒクルの例は、以下に記載されている：米国特許第６，６７６，９５９号、同第６，６７６，９３１号、同第６，５９３，３１７号、同第６，５５２，０２４号、同第６，３０６，９１４号、同第６，２８４，２６４号、同第６，２４８，３５８号、同第６，２１０，６９９号、同第６，１７７，０９６号、同第６，１９７，３３１号、同第６，１５３，２２２号、同第６，１２６，９５９号、同第６，２８６，６９８号、同第６，２６４，９８１号、同第６，１８７，３２３号、同第６，１７３，８５１号、同第６，１１０，４８６号、同第５，９５５，０９８号、同第５，８６９，０８２号、同第５，９８５，３１１号、同第５，９４８，４３０号、同第５，７５３，２５６号、同第５，４８７，９０２号、同第５，４７０，５６６号、同第５，３６２，４８９号、同第５，２８８，４９８号、同第５，２８８，４９７号、同第５，２６９，３２１号、同第６，４８８，９５３号、同第６，１２６，９５９号、同第６，６４１，８３８号、同第６，５７６，２５０号、同第６，５０９，０３６号、同第６，３９１，３３５号、同第６，３６５，１８２号、同第６，２８０，７７０号、同第６，２２１，３９２号、同第６，２００，６０４号、同第６，５３１，１１２号および同第６，４８５，７０６（これらの全ては参照により本明細書に加入される）。
【００７５】
ＸＩＩＩ．バッカルおよび舌下組成物のための添加剤
１種またはそれ以上の活性成分に加えて、バッカルおよび舌下投与形態の他の成分としては、デンプン、マンニトール、カオリン、硫酸カルシウム、塩化ナトリウムのような無機塩、粉末セルロース誘導体、リン酸二カルシウムおよびリン酸三カルシウム、硫酸カルシウム、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、ポリエチレンオキシドのようなポロキサマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アニオン性添加剤、カチオン性添加剤、双性イオン添加剤［米国特許第６，４３６，９５０号（これは、このような添加剤に関して参照により本明細書に加入される）を参照のこと］、高分子ヒドロゲル、粉末マイクロスフェア粘膜付着組成物、チオール化高分子添加剤、ポリカチオン性物質、キトサン、架橋デンプン、脂質、糖質、多価アルコール、緩衝剤、リン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、メトセル、塩化ナトリウム、水、乳酸、塩化ベンザルコニウム、脱塩水、セルロース、微結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、硬化植物油、矯味矯臭剤、リン脂質、キシリトール、カカオ、それらの組み合わせ、および当業者に公知の他の類似の添加剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７６】
ＸＩＶ．透過促進剤
透過促進剤がまた存在してもよい。典型的な透過促進剤としては、２３−ラウリルエーテル、アプロチニン（ａｐｒｏｎｔｉｎｉｎ）、アゾン、塩化ベンザルコニウム、塩化セチルピリジニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、シクロデキストリン、硫酸デキストラン、ラウリン酸、リゾホスファチジルコリン、メントール、メトキシサリチル酸ナトリウム、オレイン酸メチル、オレイン酸、ホスファチジルコリン、ポリオキシエチレン、ポリソルベート（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｃ）、ＥＤＴＡナトリウム、グリココール酸ナトリウム、グリコデオキシコール酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム、スルホキシド、短鎖および中鎖のモノ−、ジ−およびトリグリセリドおよび他のポリオールエステル、ならびに種々のアルキルグリコシドが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
ＸＶ．結合剤
結合剤がまた存在してもよい。適切な結合剤としては、セルロース類のような物質が挙げられ、これらとしては、セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースおよびヒドロキシメチルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ポリエチレングリコール、デンプン、天然ガム（例えば、アカシア、アルギン酸塩、グアー、およびアラビアゴム）および合成ガムならびにワックスが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７８】
ＸＶＩ．滑沢剤
滑沢剤は、典型的に、錠剤製剤に使用され、ダイス中の錠剤とパンチのスティッキングを防止する。適切な滑沢剤としては、ステアリン酸カルシウム、モノステアリン酸グリセリン、ベヘン酸グリセリン、パルミトステアリン酸グリセリン（ｇｌｙｃｅｒｙｌ  ｐａｌｍｉｔｏｓｔｅａｒａｔｅ）、硬化植物油、軽油、ステアリン酸マグネシウム、鉱油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、フマル酸ステアリルナトリウム、ステアリン酸、タルクおよびステアリン酸亜鉛が挙げられる。好ましい滑沢剤はステアリン酸マグネシウムである。ステアリン酸マグネシウムは、一般に、約０．２５  ｗｔ％〜約４．０  ｗｔ％の量で存在する。
【００７９】
ＸＶＩＩ．崩壊剤および流動促進剤
崩壊剤および流動促進剤のような他の成分を組成物に添加し、投与形態を崩壊させ、そして化合物を放出させ得る。適切な崩壊剤としては、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、クロスポビドン、メチルセルロース、微結晶セルロース、粉末セルロース、低アルキル置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ポラクリリンカリウム、デンプン、アルファ化デンプンおよびアルギン酸ナトリウムが挙げられる。これらのうちのクロスカルメロースナトリウムおよびデンプングリコール酸ナトリウムが好ましく、クロスカルメロースナトリウムが最も好ましい。クロスカルメロースナトリウムは、一般に、約０．５ｗｔ％〜約６．０ｗｔ％の量で存在する。投与形態に含まれる崩壊剤の量は、いくつかの因子（分散液の性質、ポロシゲン（ｐｏｒｏｓｉｇｅｎ）の性質、および選択される崩壊剤の性質が挙げられる）に依存する。一般に、崩壊剤は、投与形態の１  ｗｔ％〜１５  ｗｔ％、好ましくは１  ｗｔ％〜１０  ｗｔ％を構成する。
【００８０】
適切な流動促進剤としては、二酸化ケイ素、タルク、コーンスターチ、それらの組み合わせ、および当業者に公知の任意の他の類似の流動促進剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８１】
ＸＶＩＩＩ．治療法
鼻腔内、バッカル、または舌下製剤を使用して、状態または障害に罹患しやすい対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）におけるこのような状態または障害を治療または予防し得る。本方法は、有効量の（Ｅ）−メタニコチン、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、または（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、またはその薬学的に受容可能な塩のいずれかを投与することを含む。
【００８２】
本化合物は、ＣＮＳの特徴のα4β2ＮＮＲサブタイプのモジュレータであり、そしてＣＮＳの状態または障害を含む種々の状態または障害を有するか、またはこのような状態または障害に罹患しやすい対象において、α4β2ＮＮＲの調節によりこのような状態または障害を予防または治療するのに使用できる。本化合物は、α4β2ＮＮＲに選択的に結合する能力を有し、そしてニコチン薬理（パーシャルアゴニスト、アゴニスト、アンタゴニスト、またはインバースアゴニストとして作用する能力を含む）を示す。例えば、本発明の化合物は、それらを必要な患者に有効量で投与する場合、ＣＮＳ障害の進行のある程度の予防をもたらし、すなわち保護効果、ＣＮＳ障害の症状の改善、またはＣＮＳ障害の再発の改善をもたらす。
【００８３】
本化合物を使用して、他の種類のニコチン性化合物が治療薬として提案されている、これらの種類の状態および障害を治療または予防し得る。例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｎｅｗｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃ．７（４）：２０５（１９９４），Ａｒｎｅｒｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，ＣＮＳ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｖ．１（１）：１−２６（１９９５），Ａｒｎｅｒｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ  ５（１）：７９−１００（１９９６），Ｂｅｎｃｈｅｒｉｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２７９：１４１３（１９９６），Ｌｉｐｐｉｅｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２７９：１４２２（１９９６），Ｄａｍａｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２９１：３９０（１９９９）；Ｃｈｉａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ  ９１：１４４７（１９９９）、Ｌａｖａｎｄ’ｈｏｍｍｅ  ａｎｄ  Ｅｉｓｅｎｂａｃｈ，Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ  ９１：１４５５（１９９９）、Ｈｏｌｌａｄａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４０（２８）：４１６９−９４（１９９７）、Ｂａｎｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７９：７７（１９９８）、Ｂｅｎｃｈｅｒｉｆ  ｅｔ  ａｌ．に対するＰＣＴ  ＷＯ  ９４／０８９９２、ＰＣＴ  ＷＯ  ９６／３１４７５、ＰＣＴ  ＷＯ  ９６／４０６８２および米国特許第５，５８３，１４０号、Ｄｕｌｌ  ｅｔ  ａｌに対する米国特許第５，５９７，９１９号、Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．に対する米国特許第５，６０４，２３１号およびＣｏｓｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．対する米国特許第５，８５２，０４１号（これらの記載は、治療薬理学に関して参照により本明細書に加入される）を参照のこと。
【００８４】
本化合物およびその薬剤組成物は、種々のＣＮＳ障害（神経変性疾患、精神神経疾患、神経障害、および中毒を含む）を治療または予防するのに有用である。本化合物およびその薬剤組成物を、注意障害を治療または予防するため；神経防護作用を提供するため；痙攣および多発性脳梗塞を治療するため；認識障害、気分障害、衝動強迫および嗜癖行動を治療するため；鎮痛を提供するため；サイトカインおよび核因子カッパＢにより媒介されるような炎症を制御するため、および炎症性疾患を治療するため；鎮痛緩和（急性疼痛、慢性疼痛、神経性疼痛、神経因性疼痛、女性特有の疼痛、術後疼痛、またはがん性疼痛からの緩和を含む）を提供するため；および細菌、真菌、およびウイルス感染を治療するための抗感染症薬のように感染症を治療するために使用し得る。
【００８５】
本化合物および本発明の医薬組成物を使用して、治療または予防し得る例示的な障害、疾患、および状態としては、以下が挙げられる：加齢関連性記憶障害、軽度認知障害、初老期認知症、別名早期発症型アルツハイマー病、老年性認知症、別名アルツハイマー型認知症、レヴィー小体認知症、ＨＩＶ−認知症、血管性認知症、アルツハイマー病、卒中（ｓｔｒｏｋｅ）、エイズ認知症複合、注意力欠如障害、注意欠陥多動障害、失読症、統合失調症、統合失調症様障害、統合失調性感情障害、統合失調症の認知障害、パーキンソニズム（パーキンソン病を含む）、ピック病、ハンチントン舞踏病、遅発性ジスキネジー、運動過剰症、進行性核上性麻痺、クロイツフェルトヤコブ病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、てんかん、躁病、不安、うつ病、パニック障害、双極性障害、全般性不安障害、強迫性障害、怒りの暴発、トゥーレット症候群、自閉症、薬物およびアルコール中毒、タバコ中毒、肥満、悪液質、乾癬、狼瘡、急性胆管炎、アフタ性口内炎、ぜんそく、ウイルス性肺炎、関節炎（関節リウマチおよび変形性関節症を含む）、内毒素血症、敗血症、アテローム性動脈硬化症、特発性肺線維症、および新生物（ｎｅｏｐｌａｓｉａｓ）。
【００８６】
本発明は、感知できるほどの有害な副作用（これには血圧および心拍数の有意な上昇、胃腸管に対する有意な悪影響、および骨格筋に対する有意な作用が含まれ得る）を伴うことなく、疾患、障害、および状態を治療または予防するのに有用である。本発明の化合物は、有効量で使用される場合、副腎のクロム親和性組織、または骨格筋において、ニコチン機能を引き起こすそれらの能力が欠落していることにより実証されるように、筋肉型ニコチン受容体を発現する細胞調製において、ニコチン機能を引き起こすそれらの能力が欠落していることにより実証されるように、ヒトガングリオンを特徴付けるニコチンサブタイプと感知できるほどの相互作用なしに、α４β２ＮＮＲの活性化を調節し得る。従って、本化合物は、神経節（ｇａｎｇｌｉｏｎｉｃ）または神経筋（ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ）部位での活性に関連する有意な副作用を引き起こすことなく、疾患、障害、および状態を治療または予防し得る。従って、本化合物の投与は、特定の疾患、障害、および状態の治療または予防を提供し、そして特定の副作用を回避する治療域を提供する。すなわち、化合物の有効用量とは、疾患、障害、または状態に対する所望の効果を提供するのに十分であるが、望ましくない副作用を与えるには不十分な、すなわち十分高いレベルでない量である。
【００８７】
以下の実施例は、本発明を説明するために提供されており、本発明を限定するものとして解すべきではない。これらの実施例において、他に言及されない限り、全ての部および割合は質量である。
【実施例】
【００８８】
実施例１：薬物吸収の測定
当該技術分野で公知の「バッカル吸収試験」を使用して、薬物吸収の動態を測定し得る。方法論は、ヒトボランティアにより最長１５分間の試験溶液のサンプル（２．５ｍＬ）の旋回（ｓｗｉｒｌｉｎｇ）、続く溶液の排出を包含する。次いで、排出された体積中に残っている薬物の量を測定し、吸収された薬物の量を評価する。本方法の認められた欠点としては、薬物の唾液による希釈、サンプル溶液の一部分の偶発的な嚥下、および口腔の特定部位（頬側、舌下、または歯肉）内に薬物溶液を局在化させられないことが挙げられる。唾液による希釈および偶発的な嚥下を補正することで、バッカル吸収試験の種々の改変が行われているが、これらの改変もまた部位局在化ができないことに難儀する。吸収部位局在化を達成するための実行可能なアプローチは、生体接着系を使用して頬側粘膜に薬物を保持させることである。次いで、バイオアベイラビリティーのような薬物動態のパラメータを血漿濃度対時間プロファイルから計算し得る。
【００８９】
別のインビボ方法では、麻酔イヌの上唇に付着させた小さなかん流チャンバーを使用して行うことが含まれる。かん流チャンバーをシアノアクリレートセメントにより組織に付着させる。薬物溶液を所定の時間の間、デバイスを通して循環させ、次いでサンプル画分をかん流チャンバーから回収し、チャンバーに残っている薬物の量を測定し、そして０および３０分後に血液サンプルを取り、粘膜を越えて吸収された薬物の量を測定する。
【００９０】
これらの方法の各々は参考文献に記載されており、データを伴っていないが本明細書中に記載されるメタニコチンアナログは、このような方法において吸収を示すと考えられる。
【００９１】
実施例２：インビトロでの培養ヒト呼吸組織を透過する試験化合物ＡおよびＢの能力
この研究の目的は、酵素阻害剤の非存在および存在下での、インビトロでのヒト呼吸組織培養物を越える２つの試験化合物（（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン（「化合物Ａ」）、およびＮ−メチル−（４−ピリジン−３−イル−ブタ−３−エニル）−アミン（（Ｅ）−メタニコチン）（「化合物Ｂ」））の粘膜側（ａｐｉｃａｌ）から基底膜側への透過性を測定することであった。
【００９２】
研究計画および方法論
材料
化合物ＡおよびＢを、それらのヘミガラクタル酸塩としてＴａｒｇａｃｅｐｔ，Ｉｎｃ．（Ｗｉｎｓｔｏｎ  Ｓａｌｅｍ，ＮＣ）より入手した。アテノロール、アンチピリン、パルギリン（ＭＡＯ阻害剤）、キニジン（ＣＹＰ２Ｄ６阻害剤）、フェニルエチルアミン（ＰＥＡ）、およびブフラロールをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から得た。鼻腔組織培養物（ＥｐｉＡｉｒ（R））およびダルベッコリン酸緩衝化生理食塩水（ＤＰＢＳ）をＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ａｓｈｌａｎｄ，ＭＡ）から得た。
【００９３】
インビトロでの気道上皮を越える透過
ＭａｔＴｅｋ  ＥｐｉＡｉｒ（R）組織のインビトロモデルを、試験物質および対照化合物の透過性評価に使用した。ＥｐｉＡｉｒ（R）培養物は、ヒト気道の上皮組織に非常に酷似する、高度に分化した偽重層（ｐｓｅｕｄｏ−ｓｔｒａｔｉｆｉｅｄ）モデルを形成するために培養されている細胞からなる。培養された組織の組織学的横断面は偽重層粘液線毛表現型を示す。
【００９４】
手順
１２ウェルのプレートに塗布したＥｐｉＡｉｒ（R）組織を、加湿したインキュベータ中３７℃、５％  ＣＯ2で２４時間培養することにより、アッセイのために予め平衡化させた。アッセイの日に、培養物をｐＨ  ７．４のダルベッコリン酸緩衝化生理食塩水（ＤＰＢＳ緩衝液）で２回洗浄し、次いでそれぞれ培養物の粘膜側表面および基底膜側表面に適用したドナーおよびレシーバー緩衝液と共に投与した。レシーバー緩衝液はｐＨ７．４
のＤＰＢＳからなった。ドナー溶液は、表１に明記される適切な化合物を含有するＤＰＢＳ緩衝液からなった。全ての処理を三重で行った。レシーバー緩衝液は、１５、３０、６０、および１２０分でサンプリングし、そしてドナー緩衝液は１２０分でサンプリングした。
【００９５】
【表１】
0005502494.tif 000003
【００９６】
サンプルおよびデータ分析
レシーバーサンプルのルシファーイエロー濃度を、ＦｌｕｏＳｔａｒ蛍光プレートリーダー（ＢＭＧ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）を使用して測定した。励起および発光波長は、それぞれ、４８５および５３８ｎｍであった。試験物質、アテノ
ロール、カフェイン、ＰＥＡ、およびブフラロールをＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析した。
【００９７】
見かけの透過係数Ｐａｐｐを以下のように計算した：
Ｐapp＝（ｄＣr／ｄｔ）×Ｖr／（Ａ×Ｃo）
式中：
ｄＣr／ｄｔは、レシーバーコンパートメント対時間における累積濃度の傾きである；
Ｖrは、レシーバーコンパートメントの体積である；
Ａは、透過に利用可能な上皮の表面積である；そして
Ｃoは、投与溶液の濃度である。
【００９８】
結果
各処理についての個々の結果が表２である。図１および２は、化合物ＢおよびＭＡＯ基質フェニルアチルアミンのそれぞれについての透過結果の要約である。図３および４は、化合物ＡおよびＣＹＰ２Ｄ６基質ブフラロールのそれぞれについての透過結果の要約である。
【００９９】
【表２】
0005502494.tif 000004
【０１００】
【表３】
0005502494.tif 000005
【０１０１】
鼻腔内投与後、ＥｐｉＡｉｒ（R）モデル全般のＰapp値とインビボＡＵＣ値との間に良好な相関関係があるように見受けられる（Ｌｅｏｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，（このような研究に関して参照により本明細書に加入される）を参照のこと）。本研究の結果は、全ての組織培養物の複製において、中程度吸収される化合物であるアテノロールのＰapp値が、高度に吸収される化合物であるカフェインの約半分であったことを示す。さらに、全ての処理にわたって、平均アテノロールおよびカフェインのＰapp値は類似しており、モデルの機能性および透過率結果の良好な再現性を証明する培養物完全性マーカー（ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  ｍａｒｋｅｒ）のルシファーイエローのＰapp値も同様に類似していた。
【０１０２】
ＭＡＯ  Ｂ阻害剤、パルギリンの非存在または存在下での化合物Ｂの透過は、カフェインの透過よりも低かったが、アテノロールの透過よりも高かった（表２を参照こと）。従って、酵素阻害にかかわらず、化合物Ｂは鼻腔組織を越える中程度〜高度な吸収を有すると予期され得る。試験物質の化合物Ｂは、ＭＡＯ  Ｂ阻害剤パルギリンの存在下よりも非存在下で有意に低いＰａｐｐ値を有した（表２、図１を参照のこと）。さらに、この組織におけるＭＡＯ  Ｂ−媒介代謝の有無を確認するＭＡＯ  Ｂ基質、フェニルアチルアミン（「ＰＥＡ」）について、同様の結果が得られた（表２および図２を参照のこと）。化合物ＢのＭＡＯ  Ｂ−媒介代謝が、ヒト呼吸粘膜を越える化合物Ｂの透過を制限し、従ってインビボでの化合物Ｂの送達に影響を与え得ることが、これらの結果から示唆される。
【０１０３】
ＣＹＰ２Ｄ６阻害剤の非存在または存在下での組織培養物を越える化合物Ａの透過は、カフェインの透過よりも低かったが、アテノロールの透過よりも高かった（表２を参照のこと）。従って、化合物Ａは、インビボで鼻腔組織を越える中程度〜高度な吸収を有し得る。ＣＹＰ２Ｄ６阻害剤、キニジンの投与は、化合物Ａの透過またはＣＹＰ２Ｄ６マーカー基質、ブフラロールの透過に影響を与えなかった（表２、図３および４を参照のこと）。従って、ＣＹＰ２Ｄ６−媒介代謝は、ヒト呼吸組織培養物を越える薬物透過に対する制限因子であると見受けられない。これらの結果は、ヒト呼吸粘膜におけるＣＹＰ２Ｄ６ｍＲＮＡ発現の公表された欠損に一致する［Ｍａｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８（このような研究に関して参照により本明細書に加入される）を参照のこと］。
【０１０４】
鼻腔内送達は、オピオイドのような中枢神経系（ＣＮＳ）薬物［Ｒｕｄｙ  ｅｔ  ａｌ，２００４（このような教示に関して参照により本明細書に加入される）を参照のこと］およびムスカリン性受容体拮抗薬［Ａｈｍｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０００（このような教示に関して参照により本明細書に加入される）を参照のこと］の投与に有用である。従って、実質的に鼻粘膜、さらに血液脳関門（「ＢＢＢ」）を越える可能性のある薬物は、良好なＣＮＳ送達プロファイルを有し得る。化合物Ｂは、気道上皮を越える中程度〜高度な可能性を示し、これはＭＡＯ活性により制限され、そしてＭＡＯ阻害剤の存在下、改善されたＣＮＳ送達を有し得る。化合物Ａは、気道上皮を越える中程度〜高度な透過を示し、これはＣＹＰ２Ｄ６代謝とは独立していた。従って、鼻腔内投与後の化合物ＡのＣＮＳ透過は、ＣＹＰ２Ｄ６阻害剤の同時投与により増強され得ない。
【０１０５】
Ａｈｍｅｄ，Ｓ．，Ｓｉｌｅｎｏ，Ａ．Ｐ．，ｄｅＭｅｉｒｅｌｅｓ，Ｊ．Ｃ．，Ｄｕａ，Ｒ．，Ｐｉｍｐｌａｓｋａｒ，Ｈ．Ｋ．，Ｘｉａ，Ｗ．Ｊ．，Ｍａｒｉｎａｒｏ，Ｊ．，Ｌａｎｇｒｂａｃｋ，Ｅ．，Ｍａｔｏｓ，Ｆ．Ｊ．，Ｐｕｔｃｈａ  Ｌ．，Ｒｏｍｅｏ，Ｖ．Ｄ．，ａｎｄ  Ｂｅｈｌ，ＣＲ．（２０００）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１７：９７４−９７７；Ｌｅｏｎａｒｄ，Ａ．Ｋ．，Ｓｉｌｅｎｏ，Ａ．Ｐ．，Ｍａｃｅｖｉｌｌｙ，Ｃ，Ｆｏｅｒｄｅｒ，Ｃ．Ａ．，Ｑｕａｙ，Ｓ．Ｃ．，ａｎｄ  Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏ，Ｈ．Ｒ．（２００５）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９４：１７３６−１７４６；Ｍａｃｅ，Ｋ．，Ｂｏｗｍａｎ，Ｅ．Ｄ．，Ｖａｕｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｐ．Ｇ．，Ｈａｒｒｉｓ，ＣＣ，ａｎｄ  Ｐｆｅｉｆｅｒ，Ａ．Ｍ．（１９９８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ３４：９１４−９２０；およびＲｕｄｙ，Ａ．Ｃ．，Ｃｏｄａ，Ｂ．Ａ．，Ａｒｃｈｅｒ，Ｓ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｗｅｒｍｅｌｉｎｇ  Ｄ．Ｐ．（２００４）Ａｎｅｓｔｈ．Ａｎａｌｇ．９９：１３７９−１３８６（これらの各々は、このような教示に関して参照により本明細書に加入される）には、さらに言及がなされている。
【０１０６】
実施例３：化合物ＡおよびＢの脳透過
研究目的
この研究の目的は、酵素阻害剤の非存在および存在下での、インサイチュ脳かん流を使用する化合物ＡおよびＢの脳透過可能性を測定することであった。
【０１０７】
研究計画および方法論
材料
化合物ＡおよびＢをＴａｒｇａｃｅｐｔ，Ｉｎｃ．（Ｗｉｎｓｔｏｎ  Ｓａｌｅｍ，ＮＣ）より入手した。アテノロール、アンチピリン、パルギリン（ＭＡＯ  阻害剤）、キニジン（ＣＹＰ２Ｄ６阻害剤）、およびクレブスリンガー重炭酸塩緩衝液（ＫＲＢ）をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から得た。
【０１０８】
動物
この研究に使用される動物は、Ｈｉｌｌｔｏｐ  Ｌａｂ  Ａｎｉｍａｌｓ，Ｓｃｏｔｔｄａｌｅ，ＰＡから入手したＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（体重約２５０〜３００グラム）であった。到着次第、ラットを無作為に処理群に分け、そして少なくとも２４時間順応させた。動物を１ケージ当たり２匹収容し、そしてケージのラベルにより識別した。シングルルームをこの研究に使用した。動物に水および市販の齧歯動物用の餌を随意に与えた。実験の日に、各ラットにケタミンＨＣｌ／キシラジンＨＣｌ溶液を腹腔内に麻酔し、その後左頸動脈内にカニューレを移植した。動脈枝（ｂｒａｎｃｈ  ａｒｔｅｒｙ）を結び、そして心臓供給（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｕｐｐｌｙ）を中断した後脳かん流した。
【０１０９】
脳かん流
単一時点法（ｓｉｎｇｌｅ  ｔｉｍｅ−ｐｏｉｎｔ  ｍｅｔｈｏｄ）を使用して、かん流を行った。適切な阻害剤の非存在または存在下で、２つの対照化合物、アテノロールおよびアンチピリン、ならびに１つの試験物質を含むＫＲＢ緩衝液で構成されるかん流液を、注入ポンプにより、左外頸動脈を介して３０秒間で動物に注入した。かん流の３０秒後、ポンプを止め、そしてすぐに脳を頭蓋骨から取り出した。脳を縦方向に半分に切った。各々の左大脳半球を冷却したチューブ内に入れ、ドライアイス上で凍結させ、そして分析まで−６０℃〜−８０℃で冷凍して保存した。対照、アテノロールが実験の失敗を明らかに示した場合に、１匹のラットからのデータを除外することを可能にするために４匹のラットにかん流した。従って、連続したラットの番号に従って、始めに成功した３つの実験からのデータを記録する。アテノロールは５０μＭの濃度でかん流し、そしてアンチピリンは５μＭの濃度でかん流した。試験物質は５０μＭの濃度でかん流した。実験的処理、ならびにかん流における試験物質および対照化合物の、標的および測定濃度の概略を表３に示す。
【０１１０】
【表４】
0005502494.tif 000006
【０１１１】
サンプルおよびデータの分析
各ラットからの左脳半球を解凍し、そして重さを量った。メタノール（２０％水溶液）を各左脳半球に脳組織１ｇ当たり約４ｍＬで添加し、そして混合物をＶｉｒＳｏｎｉｃ  Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｒｕｐｔｏｒ  １００（ＶｉｒＴｉｓ）を用いる超音波処理を使用してホモジナイズした。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを使用することにより、得られたホモジネートで試験物質および２つの基準化合物を分析した。
【０１１２】
単一点かん流アッセイの以下の式を使用して、試験物質および高透過性基準物質、アンチピリンについての一方向脳関門移動定数Ｋin（ｍＬ／ｇ／分）を決定した：
Ｋin＝［Ｃbr／Ｃpf  ］／ｔ
式中：
Ｃbr／Ｃpfは、見かけの脳分布体積（脳組織１ｇ当たりの量（ｍＬ））である；
Ｃbrは、脳組織中の薬物濃度（脳組織１ｇ当たりの薬物量（ｐｍｏｌ）である）；
Ｃpfは、かん流液中の薬物濃度（かん流液１ｍＬ当たりの量（ｐｍｏｌ））である；そして
ｔは、正味のかん流時間（分）である。
【０１１３】
毛細血管中に含まれる薬物を脳濃度値から除外するために、各動物の薬物値からアテノロールの見かけの脳分布体積を引き算した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、データのグラフィック表示および統計分析を行った。
【０１１４】
結果
脳濃度が示す各処理の個々の結果を、血管含有量、さらにＫin値について補正した。これらは表４および５にある。図５および６は、それぞれ、化合物Ｂおよび化合物Ａについてのかん流結果を要約する。図５に示されるように、ＭＡＯ阻害剤、パルギリンの非存在下の化合物Ｂの脳濃度と比較して、パルギリンの存在下の化合物Ｂの脳濃度は有意に増加した（*ｐ＜０．０５、両側ｔ検定）。図６に示されるように、ＣＹＰ２Ｄ６阻害剤、キニジンの非存在または存在下でかん流した場合、化合物Ａの脳濃度に有意な差は存在しなかった。
【０１１５】
【表５】
0005502494.tif 000007
【０１１６】
【表６】
0005502494.tif 000008
【０１１７】
分析的方法論
ブランク脳ホモジネート
ブランク脳ホモジネートを標準曲線およびＱＣ調製のための希釈剤として使用するために調製した。２つのラット全脳を５０ｍＬの遠心管に入れた。これに、２０：８０（ｖ／ｖ）メタノール／水（１６ｍＬ）を添加した。次いで、ＶｉｒＳｏｎｉｃ  １００  Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｒｕｐｔｏｒを使用して、脳をホモジナイズした。十分な量のホモジネートが生産されるまで、この手順を繰り返した。各ホモジナイズ生産物を５０ｍＬ遠心管に合わせ、そして分析に必要とされるまで−８０℃で凍結した。
【０１１８】
ラット左脳研究サンプルのホモジナイズ
左脳サンプルを解凍し、そしてそれらの重さを記録した。各サンプルに２０：８０（ｖ／ｖ）メタノール／水（４ｍＬ）を添加した。次いで、ＶｉｒＳｏｎｉｃ  １００  Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｒｕｐｔｏｒを使用して、各サンプルをホモジナイズした。ホモジナイズした後、各サンプルの体積を記録し、そしてサンプルを分析に必要とされるまで−８０℃で凍結した。
【０１１９】
化合物ＡおよびＢのプレ研究バリデーション
ラット脳ホモジネートからの化合物ＡおよびＢの抽出物についての正確さ（ａｃｃｕｒａｃｙ）および精度（ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ）を決定するために、分析方法を、試験１日前のバリデーション（ｏｎｅ−ｄａｙ  ｐｒｅ−ｓｔｕｄｙ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ）にかけた。以下に概略が説明される方法論を使用して、単一標準曲線および３つの品質管理レベル各々の６回の複製（合計１８）を抽出し、分析した後サンプル分析を研究した。
【０１２０】
標準サンプルおよび品質管理サンプルの調製
脳ホモジネートサンプル中の化合物Ａ、化合物Ｂ、アテノロール、およびアンチピリンの濃度を測定するために、標準をブランクラット脳ホモジネートで調製した。プラスチックチューブを全工程に使用した。標準を連続希釈法により濃度１．０、０．５、０．２５、０．１０、０．０５０、０．０２５、０．０１０、または０．００５μＭで調製した。品質管理サンプルをまた０．５０、０．１０、および０．０１０μＭで調製した。化合物Ｂは個別に分析したが、化合物Ａ、アテノロール、およびアンチピリンは同時分析するために一緒にプールした。脳標準サンプルおよび品質管理サンプルを脳サンプルと同一に処理した。
【０１２１】
脳ホモジネートサンプルのサンプル調製
化合物Ｂ
脳標準、品質管理サンプル、および化合物Ｂについての研究サンプルの抽出を、９６ウェルプレート形式でＴｏｍｔｅｃ  Ｑｕａｄｒａ  ９６−Ｍｏｄｅｌ  ３２０液体ハンドリングシステムで行った。脳サンプル（２００μＬ）を９６ウェルプレートにロードし、次いでＳｉｒｏｃｃｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  Ｐｌａｔｅ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）中の純粋なアセトニトリル（４００μＬ）に移した。得られた懸濁液を混合し、次いで真空を用いて清潔な９６ウェル回収プレート内に濾過した。次いで、得られた濾液のアリコート（２００μＬ）を分析のためにプラスチックＨＰＬＣバイアルに移した。
【０１２２】
化合物Ａ、アテノロール、およびアンチピリン
脳標準、品質管理サンプル、ならびに化合物Ａ、アテノロール、およびアンチピリンについての研究サンプルの抽出を、９６ウェルプレート形式でＴｏｍｔｅｃ  Ｑｕａｄｒａ  ９６−Ｍｏｄｅｌ  ３２０液体ハンドリングシステムで行った。脳サンプル（２００μＬ）を９６ウェルプレートにロードし、次いでＳｉｒｏｃｃｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  Ｐｌａｔｅ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）中の内部標準（１００ｎｇ／ｍＬ  Ｐｉｎｄｏｌｏｌ）を含むアセトニトリル（４００μＬ）に移した。得られた懸濁液を混合し、次いで真空を用いて清潔な９６ウェル回収プレート内に濾過した。次いで、得られた濾液を窒素下、３７℃で乾燥状態までエバポレートした。得られた残留物を水（２００μＬ）で再構成した。次いで、サンプルを混合し、遠心分離し、そして分析のためにプラスチックＨＰＬＣバイアルに移した（１００μＬ）。
【０１２３】
全ての動物において、アテノロール（脳を透過しない化合物）でマークした血管空間は、脳組織（２０μＬ／ｇ）を上回らなかった。これらの結果は、かん流の間、血液脳関門特性を維持していたことを示す。さらに、アンチピリン（ａｎｙｐｙｒｉｎｅ）（高脳透過可能性を有する薬物）の平均Ｋin値は、全ての実験群において、１分当たり脳組織１ｇ当たり０．３０〜０．３９ｍＬの範囲で一貫していた。アンチピリンのこれらのＫin値は、脳かん流技術を使用して記録され、典型的に得られているものに類似する［Ｙｏｕｄｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｌａｖａｎｏｉｄ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ａｃｒｏｓｓ  ａｎ  ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ，Ｆｒｅｅ  ｒａｄｉｃ  Ｂｉｏｌ  ｍｅｄ，３６：５９２−６０４，２００４（このような教示に関して参照により本明細書に加入される）を参照のこと］。
【０１２４】
両方の試験化合物は、酵素阻害剤の非存在および存在下の両方において、共かん流した（ｃｏ−ｐｅｒｆｕｓｅ）アンチピリンよりも低いＫin値を有した。図５および６を参照のこと。化合物ＡおよびＢのＫin値は、ＣＮＳを実質的に透過しない薬物について記録されているものよりも１００倍より高い［Ｍｕｒａｋａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ａｂｄ  ｒａｔｓ  ｕｓｉｎｇ  ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｂｒａｉｎ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２７９：Ｈ  １０２２−１０２８，２０００（このような教示に関して参照により本明細書に加入される）を参照のこと］。従って、化合物ＡおよびＢは、脳を透過する良好な可能性を有するが、アンチピリンの可能性よりも低い。さらに、キニジンの非存在下での化合物Ａの平均Ｋin値は、パルギリンの非存在下での化合物Ｂのものよりも高かった。従って、化合物Ａは、おそらく化合物ＢよりもＣＮＳを透過するより高い本質的可能性を有する。
【０１２５】
ＭＡＯ阻害剤パルギリンの存在下、化合物Ｂの平均脳濃度およびＫin値は、阻害剤の非存在下での値と比較して有意に増加した（図５）。従って、化合物Ｂの脳透過は、ＭＡＯ媒介分解により制限されるようである。化合物Ｂの結果と対照的に、化合物ＡとＣＹＰ２Ｄ６阻害剤キニジンとの共かん流は、化合物Ａの脳透過またはＫin値に影響を与えなかった（図６）。従って、化合物Ａの脳透過は、おそらくＣＹＰ２Ｄ６媒介分解によっては制限されない。
【０１２６】
実施例４：化合物ＡおよびＢの脳対血漿比
研究目的
この研究の目的は、雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに強制経口投与、または鼻腔内投与した後の化合物Ａおよび化合物Ｂの脳対血漿比を決定することであった。化合物Ｂの脳対血漿比に対するＭＡＯ阻害剤、パルギリンの影響をまた評価した。
【０１２７】
研究計画および方法論
材料
化合物ＡおよびＢをＴａｒｇａｃｅｐｔ，Ｉｎｃ．（Ｗｉｎｓｔｏｎ  Ｓａｌｅｍ，ＮＣ）より入手した。アテノロールおよびパルギリン（ＭＡＯ阻害剤）をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から得た。
【０１２８】
動物および投与溶液
この研究に使用された動物は、Ｈｉｌｌｔｏｐ  Ｌａｂ  Ａｎｉｍａｌｓ，Ｓｃｏｔｔｄａｌｅ，ＰＡから入手したＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（体重約２００〜４００グラム）であった。８つの処理群に各々９匹のラットを使用した（研究計画、表６を参照のこと、）。到着次第、ラットを無作為に処理群に分け、そして少なくとも２４時間順応させた。動物を１ケージ当たり最大３匹収容し、そしてケージのラベルにより識別した。シングルルームをこの研究に使用した。動物に水および市販の齧歯動物用の餌を随意に与えた。研究の最低１２時間前および研究の間、動物に食べ物を与えず、そして投与４時間後に戻した。研究の間、水は随意に与えた。
【０１２９】
全ての投与溶液を、ｐＨ  ７．４の等張ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）緩衝液で調製した。投与溶液の濃度は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより測定した。これらは表７に示される。実験の日に、試験化合物の投与３０分前に、各ラットに１０ｍｇ／ｋｇの用量でアテノロールを強制経口投与した。試験化合物（化合物Ａまたは化合物Ｂ；パルギリンと共に、またはパルギリンなしで）を各々強制経口投与または鼻腔内投与した。鼻腔内投与のために、動物を投与前にＣＯ２で麻酔し、そして溶液をピペットから液滴で投与した。
【０１３０】
【表７】
0005502494.tif 000009
【０１３１】
【表８】
0005502494.tif 000010
【０１３２】
サンプル回収
各処理群について、脳および血漿のサンプルを、投与の１０、３０および６０分後に回収した。血液サンプルをヘパリン化チューブに入れ、そして１３，０００ｒｐｍで５分間回転させた。血漿をポリエチレンチューブに入れ、そして凍結させた（−６０〜−８０℃）。脳サンプルもまた冷凍チューブに入れ、そして凍結させた（−６０〜−８０℃）。サンプルは後続処理の間、冷凍したままにした。
【０１３３】
分析方法論
ブランク脳ホモジネート
ブランク脳ホモジネートを標準曲線およびＱＣ調製のための希釈剤として使用するために調製した。２つのラット全脳を５０ｍＬの遠心管に入れた。これに、２０：８０（ｖ／ｖ）メタノール／水（１６ｍＬ）を添加した。次いで、ＶｉｒＳｏｎｉｃ  １００  Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｒｕｐｔｏｒを使用して、脳をホモジナイズした。十分な量のホモジネートが生産されるまで、この手順を繰り返した。ホモジナイズした各々の生産物を５０ｍＬ遠心管に合わせ、そして分析に必要とされるまで−８０℃で凍結した。
【０１３４】
ラット脳研究サンプルのホモジナイズ
脳サンプルを解凍し、そして重さを量った。十分な量のメタノール（２０％水溶液）を各サンプルに添加して脳組織１ｇ当たり４ｍＬにし、そしてＶｉｒＳｏｎｉｃ  Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｒｕｐｔｏｒ  １００（ＶｉｒＴｉｓ）を用いる超音波処理を使用して混合物をホモジナイズした。ホモジナイズした後、各サンプルの体積を記録し、そしてサンプルを分析まで−８０℃で凍結した。
【０１３５】
標準サンプルおよび品質管理サンプルの調製
脳ホモジネートサンプル中の化合物Ａ、化合物Ｂ、およびアテノロールの濃度を測定するために、ブランクラット脳ホモジネートまたは抗凝血剤（ａｎｔｉｃｏａｇｙｌａｎｔ）としてヘパリンナトリウムを含むプールラット血漿でそれぞれ標準を調製した。プラスチックチューブを全工程に使用した。標準を連続希釈法により濃度１０００、５００、２５０、１００、５０、１０、５および１ｎｇ／ｍＬで調製した。品質管理サンプルをまた５００、１００、および５ｎｇ／ｍＬで調製した。化合物Ｂは個別に分析したが、化合物Ａおよびアテノロールは同時分析するために一緒にプールした。脳標準サンプルおよび品質管理サンプルを試験化合物サンプルと同一に処理した。
【０１３６】
サンプル抽出
化合物Ｂ
脳標準、品質管理サンプル、および化合物Ｂについての研究サンプルの抽出を、９６ウェルプレート形式でＴｏｍｔｅｃ  Ｑｕａｄｒａ  ９６−Ｍｏｄｅｌ  ３２０液体ハンドリングシステムで行った。脳サンプル（２００μＬ）を９６ウェルプレートにロードし、次いでＳｉｒｏｃｃｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  Ｐｌａｔｅ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）中の純粋なアセトニトリル（内部標準として１０ｎｇ／ｍＬのニコチンを含む）（４００μＬ）に移した。得られた懸濁液を混合し、次いで真空を使用して清潔な９６ウェル回収プレート内に濾過した。次いで、得られた濾液のアリコート（２００μＬ）を分析のためにプラスチックＨＰＬＣバイアルに移した。
【０１３７】
血漿標準、品質管理サンプル、および化合物Ｂについての研究サンプルの抽出を、９６ウェルプレート形式でＴｏｍｔｅｃ  Ｑｕａｄｒａ  ９６−Ｍｏｄｅｌ  ３２０液体ハンドリングシステムで行った。血漿サンプル（５０μＬ）を９６ウェルプレートにロードし、次いでＳｉｒｏｃｃｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  Ｐｌａｔｅ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）中の純粋なアセトニトリル（内部標準として１０ｎｇ／ｍＬのニコチンを含む）（１５０μＬ）に移した。得られた懸濁液を混合し、次いで真空を用いて清潔な９６ウェル回収プレート内に濾過した。次いで、得られた濾液のアリコート（８０μＬ）を分析のためにプラスチックＨＰＬＣバイアルに移した。
【０１３８】
化合物Ａおよびアテノロール
脳標準、品質管理サンプル、および化合物Ａおよびアテノロールについての研究サンプルの抽出を、９６ウェルプレート形式でＴｏｍｔｅｃ  Ｑｕａｄｒａ  ９６−Ｍｏｄｅｌ  ３２０液体ハンドリングシステムで行った。脳サンプル（２００μＬ）を９６ウェルプレートにロードし、次いでＳｉｒｏｃｃｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  Ｐｌａｔｅ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）中の内部標準（１００ｎｇ／ｍＬ  Ｐｉｎｄｏｌｏｌ）を含むアセトニトリル（４００μＬ）に移した。得られた懸濁液を混合し、次いで真空を用いて清潔な９６ウェル回収プレート内に濾過した。次いで、得られた濾液を窒素下、３７℃で乾燥状態までエバポレートした。得られた残留物を水（２００μＬ）で再構成した。次いで、サンプルを混合し、遠心分離し、そして分析のためにプラスチックＨＰＬＣバイアルに移した（１００μＬ）。
【０１３９】
血漿標準、品質管理サンプル、および化合物Ａおよびアテノロールについての研究サンプルの抽出を、９６ウェルプレート形式でＴｏｍｔｅｃ  Ｑｕａｄｒａ  ９６−Ｍｏｄｅｌ  ３２０液体ハンドリングシステムで行った。血漿サンプル（５０μＬ）を９６ウェルプレートにロードし、次いでＳｉｒｏｃｃｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  Ｐｌａｔｅ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）中の内部標準（１００ｎｇ／ｍＬ  Ｐｉｎｄｏｌｏｌ）を含むアセトニトリル（１５０μＬ）に移した。得られた懸濁液を混合し、次いで真空を用いて清潔な９６ウェル回収プレート内に濾過した。次いで、得られた濾液を窒素下、３７℃で乾燥状態までエバポレートした。得られた残留物を水（１００μＬ）で再構成した。次いで、サンプルを混合し、遠心分離し、そして分析のためにプラスチックＨＰＬＣバイアルに移した（１００μＬ）。
【０１４０】
方法バリデーションおよび脳における較正範囲の拡大
脳ホモジネート中の化合物ＡおよびＢの測定方法を、約２００ｎｇ／ｍＬ〜１ｎｇ／ｍＬの範囲にわたり、前の研究において上記したように予めバリデーションを行った。この研究のために、この較正範囲を１０００ｎｇ／ｍＬまで拡大し、そしてこのより高い較正レベルでの精度を、各試験化合物について６つの高品質管理レベルの複製の分析により実証した。
【０１４１】
ラット血漿における化合物ＡおよびＢの部分的バリデーションは、プロトコルにおいて概説される全ての合否基準をパスした。
【０１４２】
結果
多くの脳サンプルが１ｎｇ／ｍＬの定量下限以下であったため、化合物Ｂについての大多数の脳対血漿比が測定できなかった。強制経口投与後、２つの脳対血漿比のみが、両方とも３０分の時点で測定できた（平均値＝０．２２）。パルギリンと共にまたは単独で、０．１ｍｇ／ｋｇでの鼻腔内投与後、全ての脳サンプルは、定量下限以下であった。パーギキリンを用いない、１ｍｇ／ｋｇでの鼻腔内投与後、２つの脳対血漿比のみが、両方とも１０分の時点で測定できた（平均値＝１．０９）。パルギリンと一緒の、１ｍｇ／ｋｇでの鼻腔内投与後、２つの脳対血漿比のみが、１０分の時点（平均値＝０．８９）および３０分の時点（０．２１）で測定できた。脳対血漿値が不十分であるために、添加したパルギリンの効果は決定できなかった。
【０１４３】
対照化合物、アテノロールについての脳対血漿比は低く、そして０．１４４〜０．０２５の範囲であった。これらの低い値は、血液脳関門の完全性（ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ）が研究の生存中部分（ｉｎ−ｌｉｆｅ  ｐｏｒｔｉｏｎ）の全経過で維持されていたことを示す。
【０１４４】
化合物Ａの結果を表８に示す。５ｍｇ／ｋｇでの化合物Ａの強制経口投与後、薬物レベルは、全ての時点で脳および血漿において検出可能であった。平均脳対血漿比は時間とともに増加し、１０、３０および６０分でそれぞれ１．７５、２．３７および３．３８の値であった。
【０１４５】
０．１ｍｇ／ｋｇでの化合物Ａの鼻腔内投与後、脳対血漿比は３匹の動物でのみ、２匹は１０分の時点（平均値＝２．２１）で、および１匹は３０分の時点（５．５２）で測定できた。
【０１４６】
１ｍｇ／ｋｇでの化合物Ａの鼻腔内投与後、薬物レベルは、全ての時点で脳および血漿において検出可能であった。平均脳対血漿比は時間とともに増加し、１０、３０および６０分でそれぞれ１．５８、４．２８および６．４０  の値であった。
【０１４７】
これらの実験は、化合物Ａおよび化合物Ｂの鼻腔内投与が実際に可能であることを示した。血漿および脳の両方において、鼻腔内および経口投与の両方による暴露は、化合物Ｂよりも化合物Ａの方がはるかに大きかった。化合物Ａの脳対血漿比は、強制経口投与と対照的に、特により後の時点で鼻腔内投与の方が一般に大きかった。試験動物における鼻腔内投与は、スプレーの代わりに液滴によるものであった。アクセスした表面積の点から見て、鼻腔内投与が典型的な鼻腔内スプレーにより類似していることからより大きい血漿および脳暴露が期待される。
【０１４８】
【表９】
0005502494.tif 000011
【０１４９】
【表１０】
0005502494.tif 000012
【０１５０】
【表１１】
0005502494.tif 000013
【０１５１】
実施例２〜４の要約
以上の実施例は、化合物Ａ［（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン］およびＢ［（Ｅ）−メタニコチン］の以下の能力を確立している：（ｉ）気道上皮の通過；（ｉｉ）血液脳関門の通過；および（ｉｉｉ）鼻腔内投与経路による有利な暴露および脳対血漿比の確立。
【０１５２】
実験動物において、（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミンは、特に鼻腔内経路を経て、ＣＹＰ２Ｄ６（通常の薬の代謝酵素）の活性化により損なわれない様式で非常に有利な脳対血漿比をもたらす。一方、鼻腔内投与による有用な（Ｅ）−メタニコチン暴露の達成は、ＭＡＯ阻害剤の共投与の助けを得てなされる。
【０１５３】
これらの鼻腔内実験は、他の粘膜投与法（バッカルおよび舌下経路を含む）に十分に置き換えることができると期待できる。（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−メトキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、またはその塩、ならびに本明細書中に記載される種々の薬学的に受容可能な担体および添加剤を含む組成物は、鼻腔内、バッカル、または舌下手段により投与した場合、有効な薬剤となることが期待される。
【０１５４】
実施例５：化合物Ｃについての脳対血漿比
研究目的
この研究の目的は、雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける強制経口投与または鼻腔内投与後の化合物Ｃ、［（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン］の脳対血漿比を測定することである。
【０１５５】
研究計画および方法論
材料
化合物Ｃ、［（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン］をＴａｒｇａｃｅｐｔ，Ｉｎｃ．（Ｗｉｎｓｔｏｎ  Ｓａｌｅｍ，ＮＣ）より入手した。アテノロールをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から得た。
【０１５６】
動物および投与溶液
この研究に使用された動物は、Ｈｉｌｌｔｏｐ  Ｌａｂ  Ａｎｉｍａｌｓ，Ｓｃｏｔｔｄａｌｅ，ＰＡから入手したＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（体重約２００〜４００グラム）であった。３つの処理群に各々９匹のラットを使用した（研究計画、表９を参照のこと）。到着次第、ラットを無作為に処理群に分け、そして少なくとも２４時間順応させた。動物を１ケージ当たり最大３匹収容し、そしてケージのラベルにより識別した。シングルルームをこの研究に使用した。動物に水および市販の齧歯動物用の餌を随意に与えた。研究の最低１２時間前および研究の間、動物に食べ物を与えず、そして投与４時間後に戻した。研究の間、水は随意に与えた。
【０１５７】
全ての投与溶液を、ｐＨ  ７．４の等張ＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）緩衝液で調製した。投与溶液の濃度は、ＬＣ／ＭＳ／Ｍにより測定した。実験の日に、試験化合物の投与３０分前に、各ラットに１０ｍｇ／ｋｇの用量でアテノロールを強制経口投与した。試験化合物（化合物Ｃ）を各々強制経口投与または鼻腔内投与した。鼻腔内投与のために、動物を投与前にＣＯ2で麻酔し、そして溶液をピペットから２５μＬの液滴で投与した。
【０１５８】
【表１２】
0005502494.tif 000014
【０１５９】
試験化合物の投与３０分前に、アテノロールを各動物に投与体積１ｍＬ／ｋｇで強制経口投与した。
【０１６０】
各処理群について、脳および血漿のサンプルを、投与の１０、３０および６０分後に回収した。血液サンプルをヘパリン化チューブに入れ、そして１３，０００ｒｐｍで５分間回転させた。血漿をポリエチレンチューブに入れ、そして凍結させた（−６０〜−８０℃）。脳サンプルもまた冷凍チューブに入れ、そして凍結させた（−６０〜−８０℃）。サンプルを後続処理の間、冷凍したままにした。
【０１６１】
分析方法論
ブランク脳ホモジネート
ブランク脳ホモジネートを標準曲線およびＱＣ調製のための希釈剤として使用するために調製した。２つのラット全脳を５０ｍＬの遠心管に入れた。これに、２０：８０（ｖ／ｖ）メタノール／水（１６ｍＬ）を添加した。次いで、ＶｉｒＳｏｎｉｃ  １００  Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｒｕｐｔｏｒを使用して、脳をホモジナイズした。十分な量のホモジネートが生産されるまで、この手順を繰り返した。ホモジナイズした各々の生産物を５０ｍＬ遠心管に合わせ、そして分析に必要とされるまで−８０℃で凍結した。
【０１６２】
ラット脳研究サンプルのホモジナイズ
脳サンプルを解凍し、そして重さを量った。十分な量のメタノール（２０％水溶液）を各サンプルに添加して脳組織１ｇ当たり４ｍＬにし、そしてＶｉｒＳｏｎｉｃ  Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｒｕｐｔｏｒ  １００（ＶｉｒＴｉｓ）を用いる超音波処理を使用して混合物をホモジナイズした。ホモジナイズした後、各サンプルの体積を記録し、そしてサンプルを分析まで−８０℃で凍結した。
【０１６３】
標準サンプルおよび品質管理サンプルの調製
脳ホモジネートおよび血漿サンプル中の化合物Ｃおよびアテノロールの濃度を測定するために、ブランクラット脳ホモジネートまたは抗凝血剤としてヘパリンナトリウムを含むプールラット血漿でそれぞれ標準を調製した。プラスチックチューブを全工程に使用した。標準を連続希釈法により濃度１０００、５００、２５０、１００、５０、１０、５、および１ｎｇ／ｍＬで調製した。品質管理サンプルをまた５００、１００、および５ｎｇ／ｍＬで調製した。化合物Ｃおよびアテノロールは同時分析するために一緒にプールをした。脳標準および品質管理サンプルを試験化合物サンプルと同一に処理した。
【０１６４】
サンプル抽出
化合物Ｃおよびアテノロール
脳標準、品質管理サンプル、および化合物Ｃおよびアテノロールについての研究サンプルの抽出を、９６ウェルプレート形式でＴｏｍｔｅｃ  Ｑｕａｄｒａ  ９６−Ｍｏｄｅｌ  ３２０液体ハンドリングシステムで行った。脳サンプル（２００μＬ）を９６ウェルプレートにロードし、次いでＳｉｒｏｃｃｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  Ｐｌａｔｅ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）中の内部標準（１００ｎｇ／ｍＬ  Ｐｉｎｄｏｌｏｌ）を含むアセトニトリル（４００μＬ）に移した。得られた懸濁液を混合し、次いで真空（ｖａｃｃｕｍａｎｄ）を用いて清潔な９６ウェル回収プレート内に濾過し、分析のためにプラスチックＨＰＬＣバイアルに移した（１００μＬ）。
【０１６５】
血漿標準、品質管理サンプル、および化合物Ｃおよびアテノロールついての研究サンプルの抽出を、９６ウェルプレート形式でＴｏｍｔｅｃ  Ｑｕａｄｒａ  ９６−Ｍｏｄｅｌ
３２０液体ハンドリングシステムで行った。血漿サンプル（５０μＬ）を９６ウェルプレートにロードし、次いでＳｉｒｏｃｃｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  Ｐｌａｔｅ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）中の内部標準（１００ｎｇ／ｍＬ  Ｐｉｎｄｏｌｏｌ）を含むアセトニトリル（１５０μＬ）に移した。得られた懸濁液を混合し、次いで真空を用いて清潔な９６ウェル回収プレート内に濾過し、そして分析のためにプラスチックＨＰＬＣバイアルに移した（１００μＬ）。
【０１６６】
方法バリデーションおよび脳における較正範囲の拡大
脳ホモジネート中の化合物Ｃの測定方法を、約１０００ｎｇ／ｍＬ〜１ｎｇ／ｍＬの範囲にわたる間の部分的なバリデーションを行なった。
【０１６７】
ラット血漿における化合物Ｃの部分的バリデーションは、プロトコルにおいて概説される全ての合否基準をパスした。
【０１６８】
化合物Ｃの結果
全てのサンプルは、定量化可能な範囲内で残留物を含んでいた。分析の結果を表１０に示す。
【０１６９】
５ｍｇ／ｋｇの強制経口投与後、平均血漿レベルは、それぞれ、１０、３０および６０分で３１２、５７８および１５５ｎｇ／ｍＬであった。平均脳レベルは、それぞれ、１０、３０および６０分で、２２５、１１６７および５７１ｎｇ／ｇ、脳／血漿比０．８０、２．２および３．５であった。５ｍｇ／ｋｇの鼻腔内投与後、平均血漿レベルは、それぞれ、１０、３０および６０分で１４６３、４２１および１５５ｎｇ／ｍＬであった。平均脳レベルは、それぞれ、１０、３０および６０分で、１７５３、１１６３および３８２ｎｇ／ｇ、脳／血漿比１．２、２．８および２．４であった。１ｍｇ／ｋｇの鼻腔内投与後、平均血漿レベルは、それぞれ、１０、３０および６０分で、２５０、２０８および１０３ｎｇ／ｍＬであった。平均脳レベルは、それぞれ、１０、３０および６０分で、１３６、９５および５０ｎｇ／ｇ、脳／血漿比２．０、２．８および２．４であった。
【０１７０】
図７に示されるように、投与の１０分後、５ｍｇ／ｋｇの用量についての脳レベルは経口投与よりも鼻腔内投与の方が７．８倍高かった。似たような傾向が、投与の１０分後での血漿についての図８に見られ、鼻腔内は経口よりも４．７倍高かった。３０および６０分の時点で、５ｍｇ／ｋｇの２つの投与経路についての脳および血漿レベルは類似していた。５ｍｇ／ｋｇの２つの投与経路（鼻腔内／経口）についての脳対血漿比は、それぞれ、１０、３０および６０分で１．５、１．３および０．７であった（図９）。
【０１７１】
対照化合物、アテノロールの脳対血漿比は低く、そして０．１３６〜０．０３５の範囲であった。これらの低い値は、血液脳関門の完全性が研究の生存中部分の全経過で維持されていたことを示す。
【０１７２】
【表１３】
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【０１７３】
【表１４】
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【０１７４】
化合物Ｃの結論
脳および血流中への鼻腔内吸収は、経口投与よりも非常に速かった。より高い脳対血漿比が、１０および３０分で経口よりも鼻腔内投与を通じて達成された。
【０１７５】
これらの鼻腔内実施例は、他の粘膜投与法（バッカルおよび舌下経路を含む）に十分に置き換えられることが期待できる。（２Ｓ）−（４Ｅ）−Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジン）イル）−４−ペンテン−２−アミン、またはその塩、ならびに本明細書中に記載される種々の薬学的に受容可能な担体および添加剤を含む組成物は、鼻腔内、バッカル、または舌下手段で投与される場合、有効な薬剤となると期待される。
【０１７６】
本発明の特定の実施形態が開示され、詳細に説明されているが、本発明はそれらに限定されない。上の記述は本発明の例証として提供され、そして本発明の何らかの限定を構成するものとして解釈すべきでない。むしろ、改変は当業者には自明であり、そして本発明の趣旨から逸脱することがない全ての改変は添付した特許請求の範囲内に包含されるものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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