(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
極薄の扁平な円板の中央に円形の孔（１）を貫通して環状体（２）を形成し、環状体（２）の周縁に周縁と同方向に長孔（３）を複数貫通し、長孔（３）と長孔（３）の間の隙間の一ヶ所を平板状の中央帯（４）として設け、中央帯（４）の下側に内縁から外縁へ横切る凹状の溝（５）を設け、孔（１）を挟んで溝（５）と反対位置に細軸（６）を設けたことを特徴とする電子顕微鏡観察試料の超薄切片の積載具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  この発明は電子顕微鏡観察用試料を超薄切片法で作製してナイフボートの水面に浮いている超薄切片を電子顕微鏡観察試料台のグリッドに載せる積載具に関するものである。
【背景技術】
【０００２】  従来、医・生物を電子顕微鏡で観察するためには超薄切片法で作製した超薄切片を用いる。超薄切片法は生物組織を１ｍｍ３に切り出し、厚さは約０．１μｍ以下に超薄切りした切片を電子染色して観察する。超薄切片法の一連の手順を簡単に記載すれば、固定（グルタール、オスミウム酸）⇒水洗（緩衝）⇒脱水（アルコール）⇒樹脂浸透（エポキシ樹脂、その他の樹脂）⇒樹脂包埋（エポキシ樹脂、その他の樹脂）⇒超薄切片（超ミクロトーム使用してナイフボートの水面に超薄切）⇒回収（超薄切片は支持膜を張ったグリッドに載せる、または、支持膜を張らないグリッドに載せる）⇒電子染色（重金属を浸透）⇒電子顕微鏡観察（透過電子顕微鏡使用）⇒影像記録（フィルム・テレビ）する。グリッドに載せた超薄切片の透過電子顕微鏡で観察できるのはグリッドの孔を覆った部分のみで、グリッドの孔から落ちる小さい超薄切片や破れやすい超薄切片の場合には支持膜を張ったグリッドに載せる。支持膜が無くても破れないでグリッドの孔からも落ちない広さの超薄切片は直接グリッドに載せることができる。支持膜の無い方が解像度の良い像が観察できる。グリッドの孔の形状や孔の大小のものが市販されている。グリッドに超薄切片を積載する方法は以下の方法がある。【０００３】  押し付け法、超薄切時に試料の超薄切面に水が付かないようにナイフボートの水面は凹状にして刃先より低くして超薄切する。押し付け法で積載するにはナイフボートに水を足して水面を少し盛り上げて凸面にする。予めグリッドには粘着処理や支持膜を張って親水処理をして用いる。グリッドの縁をピンセットで掴み、さらに、グリッドが水平になるように掴んだ処を曲げる。実体顕微鏡下で浮いている超薄切片にグリッドを水平に押し付ける（非特許文献１参照）。【０００４】  引き上げ法、予めグリッドに粘着処理、または支持膜を張って親水処理をしたグリッドの縁をピンセットで掴み、グリッドは縦にして実体顕微鏡下で浮いている超薄切片の近くに載せる位置まで沈める。そして、超薄切片をグリッド面に睫毛等の用具を用いて引き寄せ付着させて引き上げる（非特許文献１参照）。【０００５】  ループ法１の方法について図１〜図３によって説明する。
積載具（Ａ）は厚さを２０〜５０μｍの極薄でグリッド（１０）と同じ外径で３ｍｍの扁平状金属材円板の中央に円形で電子顕微鏡観察できる範囲の内径２ｍｍの孔（１）を貫通して環状体（２ａ）を形成し、環状体（２ａ）の一側に細軸（６）を設け、細軸（６）に握り柄（７）を付けた積載具（Ａ）を使用する。実施例として環状体（２ａ）の周面において適宜形状の孔を設ければ水滴吸収後の乾燥を早めることができる。環状体（２ａ）と細軸との角度が３０度に折り曲げると、各自の好みの角度の調整がらくである。この積載具を使用するには通常行われている超薄切片法によって超薄切してナイフボートの水面に浮いた超薄切片を実体顕微鏡下で積載具の握り柄を手に持って環状体を超薄切片の上方から超薄切片が孔の中に収まるように静かに下げ、環状体の下面が着水したら、次にそのままの状態で積載具を静かに持ち上げると、超薄切片は孔内の水面に浮き、環状体の下面全面に水滴がつく。次いで、環状体の下面の水滴をあらかじめ用意したグリッドの上面に接触させると環状体（２ａ）の水滴にグリッドが同心円状に付着する。次に、環状体の任意の側方から吸収紙を環状体の側面に押付けて環状体とグリッドとの隙間から水滴を吸収する。環状体の内径の水面に浮いた超薄切片は水滴が無くなるとグリッドに積載される。グリッドは環状体との接合面が乾燥すると落下するので所定の位置にうつす（特許文献１参照）。【０００６】  ループ法２の方法について図４図５によって説明する。
ループ法２の積載具（Ｂ）は厚さを５０μｍの極薄でグリッド（１０）と同じ外径で３ｍｍの扁平状金属材円板の中央に円形で電子顕微鏡観察できる範囲の内径２ｍｍの孔（１）を貫通して環状体（２ｂ）を形成し、環状体（２ｂ）の内縁から外縁に向けて低くごく緩やかな傾斜を形成した環状体（２ｂ）の一側に細軸（６）を設け、細軸（６）に柄を付けた積載具を使用する。環状体（２ｂ）と細軸との角度が３０度に折り曲げてあるので、各自の好みの角度に調整して使用する。この積載具を使用するには通常行われている超薄切片法によって超薄切してナイフボートの水面に浮いた超薄切片を実体顕微鏡下で積載具の握り柄を手に持って環状体を超薄切片の上方から超薄切片が孔の中に収まるように静かに下げ環状体の下面が着水したら、次にそのままの状態で積載具を静かに持ち上げると、超薄切片は孔内の水面に浮き、環状体の下面全面に水滴がつく、次いで環状体の下面の水滴をあらかじめ粘着処理や支持膜を張って親水処理をしたグリッドの上面に接触させると、環状体の水滴にグリッドが同心円状に付着する。次に、環状体の任意の側方から図５のように吸収紙を環状体の側面に押付けて環状体とグリッドとの隙間から水滴を吸収する。環状体の内径の水面に浮いた超薄切片は水滴が無くなるとグリッドに積載される。グリッドは環状体との接合面が乾燥すると落下するので所定の位置にうつす。ループ法２は支持膜が破損しない環状体で製作された積載具である（特許文献２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】実用新案登録第１９７３２７７号
【特許文献２】特許第３４３３２９２号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】「電顕入門ガイドブック」４７〜４８ページ２００４年８月１０日初版編者（社）日本顕微鏡学会
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】  ループ法１の積載具Ａに関して特許文献１の実用新案登録第１９７３２７７号とループ法２の積載具Ｂに関して特許文献２の特許第３４３３２９２号にはつぎのような欠点があった。【００１０】  グリッドと環状体の隙間から水滴を吸収紙に吸収する過程で経過にともない環状体とグリッドの隙間は狭くなってゆき吸収効率を悪くし、吸収時間が長くなる弊害がある。また、吸収紙に水滴を吸収途中で押付け位置がずれた場合や離れた場合は、グリッドと環状体との隙間が閉じ乾燥して再度押し付けても吸収しない。再度吸収させるには吸収紙に呼び水を滴下した箇所に押付けて吸収させている。【００１１】  従来の積載具はナイフボートの水面に浮いている超薄切片を環状体の内径に収め環状体を水平に着水させるが、環状体は正確な水平で着水できず。つまり、環状体はやや傾斜した状態で着水するので、環状体周辺のどこかの箇所が先に着水することになる。先に着水した側の環状体で水面を反対側の環状体方向に押出して、浮いている超薄切片を図６の矢印のように移動させる。しかし、移動方向が不確定であることを顧慮して超薄切片枚数を少なくして、環状体の内径に余裕を持たせた積載をするためにグリッド面は余白が広くなって有効に使われていない。本発明は、以上のような欠点をなくすためになされたものである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】  図７〜図１１によって説明すれば、
本発明の積載具Ｂは極薄の扁平からなる円板の中央に円形の孔（１）を貫通して環状体（２）を形成し、環状体（２）の周縁に周縁と同方向に長孔（３）を複数貫通し、長孔（３）と長孔（３）の間の隙間の一ヶ所を他の隙間より幅広くして平板状からなる中央帯（４）として設ける。該中央帯（４）の下側に内縁から外縁へ横切る凹状の溝（５）を設け、溝（５）と反対側に細軸（６）を設け、細軸（６）に延長して握り柄（７）を設ける。
本発明は、以上の構成よりなる電子顕微鏡観察試料の超薄切片の積載具である。
【発明の効果】
【００１３】  環状体の部分の下側に内縁から外縁へ横切る凹状の溝を設けたことに因り、水滴は環状体とグリッドの間が閉ざされても凹状の溝が水路となり、環状体に留保された水滴の水路が確保されていて滞りなく流れて吸収紙に短時間で吸収される。吸収の途中で吸収紙を環状体から離しても再度押し付けると滞りなく吸収紙に吸収される。溝は水面とグリッドとの間の位置にあり、水滴が吸収完了するまで環状体の水面は溝に開放した状態にならないので、超薄切片は環状体に停留する。環状体に囲まれた水面で超薄切片が溝側に移動は大変緩慢である。その要因は環状体に囲まれた水面の状態が超薄切時に発生した可視できない疎水性物質と超薄切片とが混在して水面を覆っているからで、もし、環状体の水面が溝に開放した形状の場合では水滴を吸水紙に吸収すると水面に流れが起きて疎水性物質は溝に流れて超薄切片を溝側に移動させる。【００１４】  本発明の積載具は環状体の周縁に周縁と同方向に長孔を貫通し複数設け、環状体の面積を少なくしたことに因って、その結果、面積の少ない環状体は着水時の水面の押出がわずかとなり、超薄切片の移動は極めて少ないので、積載具の環状体の内径に超薄切片を多く収めて安心して環状体を着水させることができる。また、環状体の面積が少ないので乾燥も迅速である。さらに、グリッドの支持膜は破損しない。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】  従来技術の平面図
【図２】  従来技術の側面図
【図３】  従来技術の要部拡大平面斜視図
【図４】  従来技術の要部拡大平面斜視図
【図５】  従来技術の積載具の使用状態を示す拡大斜視図
【図６】  従来技術の積載具の使用状態を示す拡大断面図であって水滴に浮く超薄切片の移動状況を示す
【図７】  本発明の平面図
【図８】  本発明の側面図
【図９】  本発明の要部拡大平面図
【図１０】  本発明の要部拡大平面斜視図
【図１１】  本発明の要部拡大裏面斜視図
【図１２】  本発明の使用状態を示す拡大斜視図
【図１３】  本発明の使用状態を示す拡大斜視図
【図１４】  本発明の使用状態を示す拡大側面図
【図１５】  本発明の使用状態を示す拡大側面図
【図１６】  本発明の上下を反転してグリッドと環状体の間の水滴を吸収紙に吸収する拡大側面図
【図１７】  本発明の上下を反転してグリッドと環状体の間の水滴を吸収紙に吸収する拡大断面図
【図１８】  本発明のグリッドと環状体の間の水滴を吸収紙に吸収を終了した断面図
【図１９】  本発明のグリッドに超薄切片が積載された平面図
【発明を実施するための形態】
【００１６】  以下、本発明を実施するための形態について図７〜図１１によって説明する。
厚さ５０μｍ〜１００μｍの扁平状金属材円板の中央に円形孔（１）を貫通させた環状体（２）を設け、環状体（２）の外径はグリッド（１０）と同径とし、内径は電子顕微鏡で観察可動範囲の円形孔（１）とする。
【００１７】  本発明の積載具（Ｃ）は従来の積載具（Ａ）と従来の積載具（Ｂ）異なり、環状体（２ｃ）の周縁に周縁と同方向に長孔（３）を複数貫通させて設け、長孔（３）と長孔（３）の間の隙間の一ヶ所を幅広くして平板状の中央帯（４）とする。
【００１８】  中央帯（４）の下側に環状体（２ｃ）の内縁から外縁へ横切る凹状の溝（５）を設ける。凹状の溝（５）は幅０．４ｍｍ〜０．９ｍｍで深さを環状体（２ｃ）の厚みの半分程度とする。
【００１９】  環状体（２ｃ）の中央帯（４）と対向する位置に細軸（６）を設け、細軸（６）の延長方向に握り柄（７）を設ける。本発明は、以上のような構造である。
【００２０】  この積載具の使用について図１２〜図１９説明する。
これを使用するには通常行われている超薄切片法によって超薄切してナイフボートの水面に浮いた超薄切片を実体顕微鏡下で、本発明の積載具（Ｃ）の溝（５）を下に向けてナイフボートの水面（８）に浮いている超薄切片（９）の上方に環状体（２ｃ）を水平にかざす。そして、環状体（２ｃ）内径に超薄切片（９）を収めて着水する。積載具（Ｃ）を垂直に引き上げると環状体（２ｃ）下部に水滴（１１）は付着する。超薄切片（９）は環状体（２ｃ）の内径の水面（８）に浮いている。次に、環状体（２ｃ）の下部の水滴（１１）を予め粘着処理や支持膜（１２）を張って親水処理をしたグリッド（１０）に静かに接触させる。グリッド（１０）は水滴（１１）を介して環状体（２ｃ）と同心円状に付着する。そして、乾燥した時にグリッド（１０）を落下させないために上下を反転して環状体（２ｃ）の側面に在る溝（５）の口部分に吸収紙（１３）を押し付ける。環状体（２ｃ）とグリッド（１０）との間の水滴（１１）は溝（５）を通って吸収紙（１３）に吸収されるが、環状体（２ｃ）内径に囲まれて浮いている超薄切片（９）は移動しない。水滴（１１）が吸収紙（１３）に吸収完了すると超薄切片（９）はグリッド（１０）に積載される。
【符号の説明】
【００２１】  １  孔
２  環状体
３  長孔
４  中央帯
５  溝
６  細軸
７  握り柄
８  水面
９  超薄切片
１０  グリッド
１１  水滴
１２  支持膜
１３  吸収紙
Ａ  従来の積載具
Ｂ  従来の積載具
Ｃ  本発明の積載具
【要約】
【課題】環状体に溝を設け、グリッドと環状体の隙間から吸収紙に水滴を吸収して環状体とグリッドの隙間が狭くなっても水滴は溝を滞りなく流れ吸収紙に吸収される。さらに、環状体に長孔を貫通して環状体の面積を少なくしてグリッドと環状体の乾燥を迅速にし、そして、支持膜が破れない。さらに、環状体の着水で起きる水面を押出による超薄切片の移動は極めて少なくした電子顕微鏡観察試料の超薄切片の積載具を提供する。
【解決手段】極薄の扁平で円板の中央に円形の孔（１）を貫通して環状体（２ｃ）を形成し、環状体（２ｃ）の周縁に周縁と同方向に長孔（３）を複数貫通し、長孔（３）と長孔（３）の間の隙間の一ヶ所を中央滞（４）として設け、中央帯（４）の下側に内縁から外縁へ横切る凹状の溝（５）を設け、溝（５）と反対側に細軸（６）を設け、細軸（６）に握り柄（７）を設けたことを特徴とする。
【選択図】図１１【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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