(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容できるその塩
【化１】
0005435592.tif 000133
［式中、
Ｒ１は、シアノおよびメトキシから独立に選択される１から２個の置換基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、テトラヒドロフラニル、ベンジル、ピリジルまたはフェニルであり、
Ｒ２は、水素、メチルまたはエチルであり、
Ｒ３は、
【化２−１】
0005435592.tif 000134
【化２−２】
0005435592.tif 000135
からなる群から選択される化学的部分であり、
ここで、Ｘは、Ｏ、ＳまたはＮ−Ｒ３ｃであり、
Ｙは、ＣＨ２またはＯであり、
Ｒ３ａは、水素またはメチルであり、
Ｒ３ｂは、水素、メチル、エチル、ハロ、メトキシまたはエトキシであり、
Ｒ３ｃは、水素、メチル、エチルまたは３員から６員のシクロアルキルであり、
Ｒ３ｄは、水素、メチルまたはヒドロキシルであり、
Ｒ３ｅは、水素、メチル、エチル、ハロまたはアミノであり、
Ｒ３ｆは、水素、メチルまたはメトキシであり、
Ｒ３ｇは、水素またはメトキシであり、
Ｒ３ｈは、水素、メチル、メトキシまたはハロであり、
Ｒ３ｉは、水素、メチルまたはメトキシであり、または
Ｒ３ｊは、水素またはメトキシである］。
【請求項２】
Ｒ１が（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、テトラヒドロフラニルであり、Ｒ２が水素またはメチルである、請求項１に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項３】
Ｒ１がエチル、イソプロピルまたはｔ−ブチルであり、Ｒ３が、式（１ａ）、（１ｃ）、（１ｄ）、（１ｆ）、（１ｉ）、（１ｊ）、（１ｋ）、（１ｌ）、（１ｍ）、（１ｎ）、（１ｏ）、（１ｐ）または（１ｑ）の化学的部分であり、ＸがＯまたはＮ−Ｒ３ｃであり、ＹがＣＨ２であり、Ｒ３ａが水素であり、Ｒ３ｂが水素、メチル、メトキシ、クロロまたはフルオロであり、Ｒ３ｃおよびＲ３ｅがそれぞれ独立に、水素またはメチルであり、Ｒ３ｆ、Ｒ３ｇ、Ｒ３ｈ、Ｒ３ｉおよびＲ３ｊが水素である、請求項１または２に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項４】
Ｒ１がｔ−ブチルであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３が式（１ａ）、（１ｃ）、（１ｄ）、（１ｆ）、（１ｊ）または（１ｋ）の化学的部分であり、ここで、Ｘは、Ｎ−Ｒ３ｃであり、Ｒ３ｄは、水素である、請求項３に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項５】
（ｉ）治療有効量の請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩、および（ｉｉ）薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤または担体を含む医薬組成物。
【請求項６】
抗肥満薬および抗糖尿病薬からなる群から選択される少なくとも１種の別の薬剤をさらに含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記抗肥満薬が、ジルロタピド、ミトラタピド、インプリタピド、Ｒ５６９１８（ＣＡＳ番号４０３９８７）、ＣＡＳ番号９１３５４１−４７−６、ロルカセリン、セチリスタット、ＰＹＹ３−３６、ナルトレキソン、オレオイル−エストロン、オビネピチド、プラムリンチド、テソフェンシン、レプチン、リラグルチド、ブロモクリプチン、オルリスタット、エクセナチド、ＡＯＤ−９６０４（ＣＡＳ番号２２１２３１−１０−３）およびシブトラミンからなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記抗糖尿病薬が、メトホルミン、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ジアビネース、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド、グリキドン、グリソラミド、トラザミド、トルブタミド、テンダミスタット、トレスタチン、アカルボース、アジポシン、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラジミシン−Ｑ、サルボスタチン、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、トログリタゾン、エキセンディン−３、エキセンディン−４、トロズスクエミン、レセルバトロール、ヒルチオサール抽出物、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチンおよびサクサグリプチンからなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
肥満および肥満関連障害を治療するための、請求項５から８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
２型糖尿病および糖尿病関連障害の進行または発症を治療するまたは遅延させるための、請求項５から８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）または肝臓インスリン抵抗性を治療するための、請求項５から８のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼの阻害剤として作用する置換ピラゾロスピロケトン化合物およびアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によって調節される疾患、状態または障害の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）は、ほとんどの種に見られる酵素のファミリーであり、アセチルＣｏＡからのマロニルＣｏＡの生成を触媒することによって脂肪酸の合成および代謝に関連している。哺乳動物では、ＡＣＣ酵素の２つのアイソフォームが確認されている。脂肪および肝臓などの脂質合成組織において高レベルで発現されるＡＣＣ１は、長鎖脂肪酸の生合成の最初の始動反応を制御する。アセチルＣｏＡがマロニルＣｏＡを形成するためにカルボキシル化していなかったら、クレブス回路によって代謝される。肝臓ＡＣＣの微量成分であるが、心臓および骨格筋内で主要なアイソフォームであるＡＣＣ２は、ミトコンドリアのシストリック（ｃｙｓｔｏｌｉｃ）表面でマロニルＣｏＡの生成を触媒し、カルニチンパルミトイル転移酵素を阻害することによってβ酸化においてどれくらい脂肪酸が利用されているか調節する。したがって、脂肪酸利用を増大させ、かつ新規脂肪酸合成の増大を防止することによって、ＡＣＣ阻害剤の慢性投与は、高脂肪食または低脂肪食を摂取している肥満対象における肝臓および脂肪組織ＴＧ貯蔵を激減させることもでき、体脂肪の選択的な減量をもたらす。
【０００３】
Ａｂｕ−Ｅｔｈｅｉｇａらによって実施された研究は、ＡＣＣ２が脂肪酸酸化を制御する上で極めて重要な役割を果たすことを示唆している。したがって、ＡＣＣ２の阻害が、肥満および肥満関連疾患、例えば２型糖尿病に対する治療の標的となると考えられる。Ａｂｕ−Ｅｔｈｅｉｇａ，Ｌ．ら、「Ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｍｕｔａｎｔ  ｍｉｃｅ  ａｒｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ａｎｄ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｈｉｇｈ−ｆａｔ／ｈｉｇｈ−ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｄｉｅｔｓ」ＰＮＡＳ、１００（１８）１０２０７〜１０２１２（２００３）を参照のこと。Ｃｈｏｉ，Ｃ．Ｓ．ら、「Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｆａｔ  ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｏｔａｌ  ｅｎｅｒｇｙ  ｅｘｐｅｎｄｉｔｕｒｅ，ｒｅｄｕｃｅｓ  ｆａｔ  ｍａｓｓ，ａｎｄ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ」ＰＮＡＳ、１０４（４２）１６４８０〜１６４８５（２００７）も参照のこと。肝臓脂質蓄積が肝臓インスリン抵抗性の原因であり、２型糖尿病の病因となることがますます明らかになっている。ＡＣＣ１とＡＣＣ２は両方とも肝細胞における脂肪酸化の調節に関与しているが、ラット肝臓において主要なアイソフォームであるＡＣＣ１は脂肪酸合成の唯一の調節物質であることを、Ｓａｌｖａｇｅらは実証した。さらに、彼らのモデルでは、両アイソフォームの組み合わさった減少（ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）には、肝臓マロニルＣｏＡレベルの著しい低減、摂食状態における脂肪酸化の増大、脂質蓄積の低下、およびｉｎ  ｖｉｖｏにおけるインスリン作用の改善が必要とされる。したがって、肝臓ＡＣＣ１およびＡＣＣ２阻害剤が非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および肝臓インスリン抵抗性の治療に有用である可能性があることを示している。Ｓａｖａｇｅ，Ｄ．Ｂ．ら、「Ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ｄｉｅｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅａｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｂｙ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅｓ  １  ａｎｄ  ２」Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ｄｏｉ：１０．１１７２／ＪＣＩ２７３００を参照のこと。Ｏｈ，Ｗら、「Ｇｌｕｃｏｓｅ  ａｎｄ  ｆａｔ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２  ｋｎｏｗｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ」ＰＮＡＳ、１０２（５）１３８４〜１３８９（２００５）も参照のこと。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
その結果、脂肪酸合成を阻害し、脂肪酸酸化を増大させることによって肥満および肥満関連疾患（ＮＡＦＬＤおよび２型糖尿病など）を治療するためにＡＣＣ１およびＡＣＣ２阻害剤を含有する医薬が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、式（１）の構造を有する化合物または薬学的に許容できるその塩に関する
【０００６】
【化１】
0005435592.tif 000002
［式中、
Ｒ１は、シアノおよびメトキシから独立に選択される１から２個の置換基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、テトラヒドロフラニル、ベンジル、ピリジルまたはフェニルであり（好ましくは、Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキルまたはテトラヒドロフラニル、より好ましくは、エチル、イソプロピルまたはｔ−ブチル、最も好ましくは、ｔ−ブチルであり）、
Ｒ２は、水素、メチルまたはエチルであり（好ましくは、Ｒ２は、水素またはメチル、より好ましくは、水素であり）、
Ｒ３は、
【０００７】
【化２−１】
0005435592.tif 000003
【０００８】
【化２−２】
0005435592.tif 000004
からなる群から選択される化学的部分であり（好ましくは、Ｒ３は、式（１ａ）、（１ｃ）、（１ｄ）、（１ｆ）、（１ｉ）、（１ｊ）、（１ｋ）、（１ｌ）、（１ｍ）、（１ｎ）、（１ｏ）、（１ｐ）または（１ｑ）、より好ましくは、式（１ａ）、（１ｃ）、（１ｄ）、（１ｆ）、（１ｊ）または（１ｋ）の化学的部分であり）、
ここで、Ｘは、Ｏ、ＳまたはＮ−Ｒ３ｃであり（好ましくは、Ｘは、ＯまたはＮ−Ｒ３ｃ、より好ましくは、Ｎ−Ｒ３ｃであり）、
ＹはＣＨ２またはＯであり（好ましくは、ＹはＣＨ２であり）、
Ｒ３ａは、水素またはメチルであり（Ｒ３ａは、好ましくは、水素であり）、
Ｒ３ｂは、水素、メチル、エチル、ハロ、メトキシまたはエトキシであり（Ｒ３ｂは、好ましくは、水素、メチル  メトキシ、クロロまたはフルオロであり、より好ましくは、Ｒ３が式（１ａ）、（１ｃ）、（１ｄ）または（１ｆ）の化学的部分である場合、Ｒ３ｂは、水素、メチルまたはクロロであり、Ｒ３が式（１ｂ）、（１ｅ）、（１ｇ）、（１ｈ）、（１ｉ）、（１ｊ）、（１ｋ）、（１ｍ）、（１ｎ）または（１ｏ）の化学的部分である場合、Ｒ３ｂは、水素であり）、
Ｒ３ｃは、水素、メチル、エチルまたは３員から６員のシクロアルキルであり（好ましくは、Ｒ３ｃは、水素またはメチルであり）、
Ｒ３ｄは、水素、メチルまたはヒドロキシルであり（好ましくは、Ｒ３ｄは、水素であり）、
Ｒ３ｅは、水素、メチル、エチル、ハロまたはアミノであり（好ましくは、Ｒ３ｅは、水素またはメチル、より好ましくは、水素であり）、
Ｒ３ｆは、水素、メチルまたはメトキシであり（好ましくは、Ｒ３ｆは、水素であり）、
Ｒ３ｇは、水素またはメトキシであり（好ましくは、Ｒ３ｇは、水素であり）、
Ｒ３ｈは、水素、メチル、メトキシまたはハロであり（好ましくは、Ｒ３ｈは、水素であり）、
Ｒ３ｉは、水素、メチルまたはメトキシであり（好ましくは、Ｒ３ｉは、水素であり）、または
Ｒ３ｊは、水素またはメトキシである（好ましくは、Ｒ３ｉは、水素である）］。
【０００９】
本発明の別の態様は、（１）本発明の化合物、および（２）薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤または担体を含む医薬組成物である。この組成物は、治療有効量の本発明の化合物を含むことが好ましい。この組成物は、少なくとも１種の別の薬剤（本明細書に記載されている）も含有することができる。好ましい薬剤には、抗肥満薬および／または抗糖尿病薬（以下に記載されている）が含まれる。
【００１０】
本発明のさらに別の態様には、哺乳動物におけるアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によって媒介される疾患、状態または障害を治療するための方法であって、かかる治療を必要とする哺乳動物、好ましくはヒトに、治療有効量の本発明の化合物、またはその医薬組成物を投与するステップを含む方法がある。
【００１１】
アセチルＣｏＡカルボキシラーゼの阻害剤によって媒介される疾患、障害または状態には、ＩＩ型糖尿病および糖尿病関連疾患、例えば非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝臓インスリン抵抗性、高血糖、代謝症候群、耐糖能障害、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、肥満、異脂肪血症、高血圧、高インスリン血症およびインスリン抵抗性症候群が含まれる。好ましい疾患、障害または状態には、ＩＩ型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝臓インスリン抵抗性、高血糖、耐糖能障害、肥満、およびインスリン抵抗性症候群が含まれる。ＩＩ型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、肝臓インスリン抵抗性、高血糖および肥満がより好ましい。ＩＩ型糖尿病が最も好ましい。
【００１２】
好ましい実施形態は、動物における２型糖尿病および糖尿病関連障害の進行または発症を治療するまたは遅延させるための方法であって、かかる治療を必要とする動物に治療有効量の本発明の化合物またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００１３】
別の好ましい実施形態は、動物における肥満および肥満関連障害を治療するための方法であって、かかる治療を必要とする動物に治療有効量の本発明の化合物またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００１４】
さらに別の好ましい実施形態は、動物における非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）または肝臓インスリン抵抗性を治療するための方法であって、かかる治療を必要とする動物に治療有効量の本発明の化合物またはその組成物を投与するステップを含む方法である。
【００１５】
本発明の化合物は、他の薬剤（特に、本明細書の以下に記載の抗肥満および抗糖尿病薬）と併せて投与することができる。併用療法は、（ａ）本発明の化合物、本明細書に記載されている少なくとも１種の別の薬剤および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤もしくは担体を含む単一医薬組成物、または（ｂ）（ｉ）本発明の化合物および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤もしくは担体を含む第１の組成物と、（ｉｉ）本明細書に記載されている少なくとも１種の別の薬剤および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤もしくは担体を含む第２の組成物とを含む２種の別々の医薬組成物として投与することができる。医薬組成物は、同時にまたは順次および任意の順序で投与することができる。
【００１６】
定義
「治療有効量」という表現は、（ｉ）特定の疾患、状態もしくは障害を治療もしくは予防する、（ｉｉ）特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症候を減弱、回復、もしくは排除する、または（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症候の発症を予防もしくは遅延する、本発明の化合物の量を表す。
【００１７】
「動物」という用語は、ヒト（男性または女性）、コンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコおよびウマ）、食物源の動物、動物園の動物、海生動物、鳥類および他の類似の動物種を意味する。「食用動物」は、ウシ、ブタ、ヒツジおよび家禽などの食物源の動物を意味する。
【００１８】
「薬学的に許容できる」という表現は、物質または組成物が、製剤を構成する他の成分と、および／またはそれを用いて治療される哺乳動物と化学的および／または毒物学的に適合しなければならないことを示す。
【００１９】
「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、予防的な治療、すなわち、予防療法と待期療法の両方を包含する。
【００２０】
「調節した（ｍｏｄｕｌａｔｅｄ）」または「調節すること（ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ）」、または「調節する（ｍｏｄｕｌａｔｅ（ｓ））」という用語は、本明細書では、特に指示がない限り、本発明の化合物によるアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）酵素（複数可）の阻害を意味する。
【００２１】
「媒介した（ｍｅｄｉａｔｅｄ）」または「媒介すること（ｍｅｄｉａｔｉｎｇ）」または「媒介する（ｍｅｄｉａｔｅ（ｓ））」という用語は、本明細書では、特に指示がない限り、特定の疾患、状態または障害の治療もしくは予防、（ｉｉ）特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症候の減弱、回復もしくは排除、または（ｉｉｉ）アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）酵素（複数可）を阻害することによる本明細書に記載の特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症候の発症の予防もしくは遅延を意味する。
【００２２】
「本発明の化合物」という用語は（別段に特に同定されていない限り）、式（Ｉ）の化合物および任意の薬学的に許容できるその化合物の塩、さらに、全ての立体異性体（ジアステレオ異性体および鏡像異性体を包含）、互変異性体、配座異性体および同位体標識化合物を指す。本発明の化合物の水和物および溶媒和物は、本発明の組成物と見なされ、その化合物は、それぞれ水または溶媒に関連している。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明の化合物は、特に本明細書に包含されている説明に照らして、化学分野でよく知られているものに類似したプロセスを含む合成経路によって合成することができる。出発物質は、一般にＡｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（米国ウィスコンシン州Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ）などの商業供給源から入手可能であり、または当業者によく知られている方法（例えば、Ｌｏｕｉｓ  Ｆ．ＦｉｅｓｅｒおよびＭａｒｙ  Ｆｉｅｓｅｒ、Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１〜１９巻、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９６７〜１９９９編）、もしくは補遺を含めたＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ  Ｈａｎｄｂｕｃｈ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ、４、Ａｕｆｌ．編  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースによっても入手可能である）に一般に記載されている方法によって調製される）を用いて容易に調製される。
【００２４】
例示のために、以下に示した反応スキームは、本発明の化合物ならびに重要な中間体を合成するための潜在的な経路を提供する。個々の反応ステップのより詳細な説明については、以下の実施例の項を参照のこと。他の合成経路を使用して本発明の化合物を合成することができることが当業者には理解されよう。特定の出発物質および試薬をスキームに示し、以下で論じているが、他の出発物質および試薬と容易に置き換えて、種々の誘導体および／または反応条件を得ることができる。さらに、後述の方法によって調製した多くの化合物は、当業者によく知られている従来の化学的手法を用いて本開示に照らしてさらに修飾することができる。
【００２５】
本発明の化合物の調製では、中間体の離れた官能基（ｒｅｍｏｔｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ）（例えば、第一級または第二級アミン）の保護が必要なこともある。このような保護の必要性は、離れた官能基の性質および調製方法の条件に応じて変わるものである。適当なアミノ保護基（ＮＨ−Ｐｇ）には、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）および９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）がある。同様に、「ヒドロキシ保護基」は、ヒドロキシ官能基を遮断または保護するヒドロキシ基の置換基を意味する。適当なヒドロキシル保護基（Ｏ−Ｐｇ）には、例えば、アリル、アセチル、シリル、ベンジル、パラメトキシベンジル、トリチル、などがある。このような保護の必要性は、当業者により容易に決定される。保護基およびそれらの使用の一般的な説明については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１を参照のこと。
【００２６】
スキームＩは、式（Ｉ）を有する本発明の化合物を得るために使用できる一般的な手順の概要である。
【００２７】
【化３】
0005435592.tif 000005
【００２８】
中間体ヒドラゾン（１ａ）は、酢酸などの酸性環境において室温でメチルグリオキサール（ＳＭ−１）を所望のヒドラジン（ＳＭ−２）で処理することによって形成することができる。還流させた水性酢酸中でヒドラゾン（１ａ）を所望のα−ケトアルデヒド（ＳＭ−３）で処理することによって、１−（４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン中間体（１ｂ）が得られる。あるいは、１Ｈ−ピラゾール中間体（１ｂ）は、還流させた水性酢酸中で所望のα−ケトアルデヒド（ＳＭ−３）を所望のヒドラジンオキサレートで処理することによって直接形成することもできる。アミノ保護ピラゾロスピロケトン中間体（１ｃ）は、アミン（好ましくは、ピロリジン）の存在下において室温でアミノ保護４−ピペリドン（好ましくは、ＢＯＣ保護基）を１−（４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン中間体（１ｂ）に加えることによって形成することができる。次いで保護基を除去して、ピラゾロスピロケトン中間体（１ｄ）を得ることができる。アミノ保護基を除去するために使用した条件は、どの保護基を使用したかによって決まることになる。例えば、ＢＯＣ保護基は、強酸（例えば、ＨＣｌ）を用いた処理によって除去することができる。次いで最終化合物（Ｉ）は、所望のカルボン酸（Ｒ３ＣＯ２Ｈ）を用いた標準的なペプチドカップリング反応を使用することによって形成することができる。例えば、ピラゾロスピロケトン中間体（１ｄ）およびカルボン酸（Ｒ３ＣＯ２Ｈ）は、例えばＴＨＦおよび／またはＤＭＦなどの適当な溶媒中に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）などの活性化剤の存在下または不在下、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）またはＮ−メチルモルフォリン（ＮＭＭ）などの適当な塩基の存在下で、カルボン酸（Ｒ３ＣＯ２Ｈ）とＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロフォスフェート（ＨＡＴＵ）などのペプチドカップリング試薬とを接触させることによって、活性カルボン酸エステルを形成し、次いで活性カルボン酸エステルとピラゾロスピロケトン中間体（１ｄ）とを接触させることによって結合させて、式（１）の化合物を形成することができる。あるいは、式（１）の化合物は、まず例えば塩化チオニルと反応させることによってカルボン酸（Ｒ３ＣＯ２Ｈ）を酸塩化物に転換し、次いで酸塩化物をピラゾロスピロケトン中間体（１ｄ）と反応させて式（１）の化合物を形成することによって形成することができる。さらに別の代替法は、ＴＨＦおよび／またはＤＭＦなどの適当な溶媒中にＮ−メチルモルフォリンなどの適当な塩基の存在下で、カルボン酸（Ｒ３ＣＯ２Ｈ）を２−クロロ−４，６−ジメトキシトリアジンで処理することを伴う。活性エステルには、ＴＨＦおよび／またはＤＭＦなどの適当な溶媒に溶かしたピラゾロスピロケトン中間体（１ｄ）とＮ−メチルモルフォリンなどの塩基の溶液を加える。
【００２９】
本発明の化合物は、そのままで、または薬学的に許容できるその塩の形態で単離し、使用することができる。本発明では、複数の塩基性窒素原子を有する化合物は、様々な当量数（「ｅｑ．」）の酸と塩を形成し得る。当業者であれば、このような塩の全てが、本発明の範囲内であることは理解するであろう。
【００３０】
本発明の化合物に関連して本明細書で使用される場合、薬学的に許容できる塩には、前記化合物の薬学的に許容できる無機塩および有機塩が包含される。これらの塩は、化合物の最終単離および精製の間にその場で、またはその化合物を適切な有機酸または無機酸と別に反応させ、こうして形成された塩を単離することにより調製することができる。代表的な塩には、これらに限られないが、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、シュウ酸塩、ベシル酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、マロン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トシル酸塩、ギ酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩、メシル酸塩、グルコヘプト酸塩、ラクトビオン酸塩およびラウリルスルホン酸塩などが包含される。これらにはまた、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ金属およびアルカリ土類金属をベースとするカチオン、さらに、これらに限られないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、トリエチルアンモニウム、エチルアンモニウムなどを包含する非毒性アンモニウム、第４級アンモニウムおよびアミンカチオンが包含され得る。追加の例については、例えば、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、６６、１〜１９（１９７７）を参照されたい。
【００３１】
ある種の本発明の化合物は、１つより多い結晶形で存在することがある。式（Ｉ）の化合物の多形およびその塩（溶媒和物および水和物を包含）は、本発明の一部を構成し、本発明の化合物を様々な条件下で結晶化させることにより調製することができる。例えば、再結晶化のために様々な溶媒または様々な溶媒混合物を使用すること、様々な温度で結晶化させること、結晶化の間の非常に急速な冷却から非常に緩徐な冷却までに及ぶ様々な冷却方法。多形をまた、本発明の化合物を加熱または溶融し、続いて、徐々に、または迅速に冷却することにより得ることができる。多形の存在は、固体プローブ核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、赤外（ＩＲ）分光法、示差走査熱分析、粉末Ｘ線回折または他のこのような技術により決定することができる。
【００３２】
本発明には、１個または複数個の原子を通常自然界に見られる原子量または質量数と異なる原子量または質量数を有する原子と置き換えていることを除けば、式（１）によって記述されたものと等しい、同位体的標識化合物も含まれる。本発明の化合物に取り込める同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、硫黄およびフッ素の同位体、例えばそれぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、１２５Ｉ、１２９Ｉ、および１８Ｆがある。いくつかの本発明の同位体的標識化合物、例えば３Ｈおよび１４Ｃなどの放射性同位体を取り込んでいるものは、薬物および／または基質組織分布アッセイに有用である。トリチウム化（すなわち、３Ｈ）、および炭素−１４（すなわち、１４Ｃ）、同位体は、それらの調製の容易さおよび検出感度に関して特に好ましい。さらに、より重い同位体、例えば重水素（すなわち、２Ｈ）との置換は、より大きい代謝安定性の結果として生じるいくつかの治療的利点、例えばｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の増大または必要投与量の低減をもたらす可能性があり、したがって、状況によっては好ましいこともある。本発明の同位体的標識化合物は、同位体的標識されていない試薬の代わりに容易に入手可能な同位体的標識された試薬を使用することにより、以下のスキームおよび／または実施例に開示されている手順を実施することによって、一般に調製することができる。
【００３３】
本発明の化合物は、不斉中心を含有することがある。これらの化合物は、鏡像異性体の混合物として、または純粋な鏡像異性体として存在し得る。化合物が不斉中心を含有する場合、当業者に知られている方法により、例えば、例えば結晶化により分離することができるジアステレオ異性体塩を形成することによるか、例えば結晶化、気液または液体クロマトグラフィーにより分離することができる立体異性体誘導体または錯体を形成することによるか、一方の鏡像異性体を鏡像異性体特異的試薬と選択的に反応させる、例えば、酵素によりエステル化させることによるか、またはキラル環境中で、例えば、キラル支持体、例えば、結合キラルリガンドを伴うシリカ上で、またはキラル溶媒の存在下での気液もしくは液体クロマトグラフィーにより、化合物を純粋な鏡像異性体に分割することができる。上記のいずれかの分離手順により所望の立体異性体を他の化学的実体に変換する場合、所望の鏡像異性体形態を遊離するためには、さらなるステップが必要であることは理解されるであろう。別法では、光学的に活性な出発物質を使用することによるか、光学的に活性な試薬、基質、触媒もしくは溶媒を使用する不斉合成によるか、または不斉変換により一方の立体異性体を他方に変換することにより、特定の立体異性体を合成することができる。
【００３４】
本発明のある種の化合物は、分離可能であり得る様々な安定な配座形態で存在し得る。不斉単結合の周囲で回転が限られることに起因する、例えば、立体障害または環歪みが原因のねじれ不斉により、様々な配座異性体を分離することが可能であり得る。本発明の化合物はさらに、式（１）の化合物の各配座異性体およびその混合物を包含する。
【００３５】
本発明の化合物は、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）（特に、ＡＣＣ１およびＡＣＣ２）の阻害によって調節される疾患、状態および／または障害を治療するのに有用である。したがって、本発明の別の実施形態は、治療有効量の本発明の化合物および薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤または担体を含む医薬組成物である。本発明の化合物（そこに使用した組成物およびプロセスを含む）は、本明細書に記載の治療用途のための医薬の製造に使用することもできる。
【００３６】
代表的な製剤は、本発明の化合物および担体、希釈剤または賦形剤を混合することによって調製する。適当な担体、希釈剤および賦形剤は、当業者によく知られており、炭水化物、蝋、水溶性および／または水膨潤性ポリマー、親水性または疎水性物質、ゼラチン、油、溶媒、水などの物質が含まれる。使用する特定の担体、希釈剤または賦形剤は、本発明の化合物を適用する手段および目的によって決まることになる。溶媒は、一般に哺乳動物に投与するのが安全と当業者によって認められた（ＧＲＡＳ）溶媒に基づいて選択される。一般に、安全な溶媒は、水などの非毒性水性溶媒および水に可溶性または混和性の他の非毒性溶媒である。適当な水性溶媒には、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００）など、およびその混合物がある。製剤は、１種または複数のバッファー、安定剤、界面活性剤、湿潤剤、平滑剤、乳化剤、懸濁化剤、保存剤、酸化防止剤、不透明化剤、流動促進剤、加工助剤、着色剤、甘味料、芳香剤、矯味矯臭剤および薬物（すなわち、本発明の化合物またはその医薬組成物）の洗練された体裁を与える、または医薬品（すなわち、医薬）の製造に役立つ他の既知の添加剤も含んでいてよい。
【００３７】
製剤は、従来の溶解および混合手順を用いて調製することができる。例えば、原薬（すなわち、本発明の化合物または化合物の安定化形態（例えば、シクロデキストリン誘導体または他の既知の複合体形成剤との複合体））を、上記の１種または複数の賦形剤の存在下で適当な溶媒に溶解させる。低水溶性化合物の溶解速度は、参照により本明細書に組み込む、Ｔａｋｅｕｃｈｉ，Ｈ．らによって「Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒａｔｅ  ｏｆ  ａ  ｐｏｏｒｌｙ  ｗａｔｅｒ−ｓｏｌｕｂｌｅ  ｄｒｕｇ（ｔｏｌｂｕｔａｍｉｄｅ）  ｂｙ  ａ  ｓｐｒａｙ−ｄｒｙｉｎｇ  ｓｏｌｖｅｎｔ  ｄｅｐｏｓｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄ  ａｎｄ  ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｎｔｓ」Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３９、７６９〜７７３（１９８７）、および欧州特許第０９０１７８６Ｂ１号（米国特許出願公開第２００２／００９４９４号）に記載されているものなど、噴霧乾燥した分散体の使用によって高めることができる。本発明の化合物は、通常、容易に制御可能な薬物投与量を提供し、患者に洗練されかつ取り扱いやすい製品を与えるために、医薬剤形に製剤する。
【００３８】
医薬組成物には、本発明の化合物の溶媒和物および水和物も含まれる。「溶媒和物」という用語は、式（Ｉ）で表される化合物（その薬学的に許容できる塩を含む）と１種または複数の溶媒分子との分子複合体を意味する。かかる溶媒分子は、レシピエントに対して無害であることが知られている、製薬技術分野で一般に使用されているもの、例えば、水、エタノール、エチレングリコールなどである。「水和物」という用語は、溶媒分子が水である複合体を意味する。溶媒和物および／または水和物は、結晶形で存在することが好ましい。メタノール、メチルｔ−ブチルエーテル、酢酸エチル、酢酸メチル、（Ｓ）−プロピレングリコール、（Ｒ）−プロピレングリコール、１，４−ブチン−ジオールなど、他の溶媒は、より望ましい溶媒和物の調製における中間溶媒和物として使用することができる。
【００３９】
使用するための医薬組成物（または製剤）は、薬物を投与するために使用する方法に応じて種々の形に包装することができる。一般に、販売用の商品には、適切な形態の医薬製剤が入れられている容器が含まれる。適当な容器は、当業者によく知られており、ボトル（プラスチックおよびガラス）、サッシェ、アンプル、ビニール袋、金属シリンダーなどの材料が含まれる。容器は、包装の中身に不用心に近づくのを防ぐためにいたずら防止セットも含んでいてよい。その上、容器には、容器の中身を説明するラベルを付けている。ラベルは、適切な警告も含んでいてよい。
【００４０】
本発明は、かかる治療を必要とする動物に、治療有効量の本発明の化合物または有効量の本発明の化合物と薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤、もしくは担体とを含む医薬組成物を投与することを含む、動物におけるアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害によって調節される疾患、状態および／または障害を治療する方法をさらに提供する。この方法は、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ酵素（複数可）の阻害から恩恵を受ける疾患、状態および／または障害を治療するのに特に有用である。
【００４１】
本発明の一態様は、肥満、および肥満関連障害（例えば、過体重、体重増加、または体重維持）の治療である。
【００４２】
肥満および過体重は一般に肥満度指数（ＢＭＩ）によって定義され、これは全体脂肪と相関関係があり、疾患の相対危険度を推定する。ＢＭＩは、キログラム表示の体重を、メートル表示の身長の二乗で割って算出される（ｋｇ／ｍ２）。過体重は通常、ＢＭＩが２５〜２９．９ｋｇ／ｍ２と定義され、肥満は通常、ＢＭＩが３０ｋｇ／ｍ２と定義される。例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ，ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｏｖｅｒｗｅｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔｓ、Ｔｈｅ  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  Ｒｅｐｏｒｔ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ：Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９８−４０８３（１９９８）を参照のこと。
【００４３】
本発明の別の態様は、糖尿病または１型（インスリン依存真性糖尿病、「ＩＤＤＭ」とも呼ばれる）および２型（非インスリン依存真性糖尿病、「ＮＩＤＤＭ」とも呼ばれる）糖尿病、耐糖能障害、インスリン抵抗性、高血糖、ならびに糖尿病性合併症（アテローム性動脈硬化症、冠状動脈性心臓病、発作、末梢血管疾患、腎症、高血圧、神経障害、および網膜症など）を含めた糖尿病関連障害の進行または発症を治療または遅延するためである。
【００４４】
本発明のさらに別の態様では、代謝症候群などの肥満同時罹患状態（ｏｂｅｓｉｔｙ  ｃｏｍｏｒｂｉｄｉｔｉｅｓ）の治療である。代謝症候群には、異脂肪血症、高血圧、インスリン抵抗性、糖尿病（例えば、２型糖尿病）、冠状動脈疾患および心不全などの疾患、状態または障害が含まれる。代謝症候群に関するより詳細な情報については、例えば、Ｚｉｍｍｅｔ，Ｐ．Ｚ．ら、「Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ：  Ｐｅｒｈａｐｓ  ａｎ  Ｅｔｉｏｌｏｇｉｃ  Ｍｙｓｔｅｒｙ  ｂｕｔ  Ｆａｒ  Ｆｒｏｍ  ａ  Ｍｙｔｈ  −  Ｗｈｅｒｅ  Ｄｏｅｓ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ  Ｓｔａｎｄ？」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ＆  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、７（２）、（２００５）、およびＡｌｂｅｒｔｉ，Ｋ．Ｇ．ら、「Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  −  Ａ  Ｎｅｗ  Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ」、Ｌａｎｃｅｔ、３６６、１０５９〜６２（２００５）を参照のこと。本発明の化合物の投与は、薬物を含有しないビヒクル対照と比較して、血漿レプチン、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）および／またはコレステロールの低下など少なくとも１種の心臓血管疾患危険因子で統計的に有意な（ｐ＜０．０５）低減をもたらすことが好ましい。本発明の化合物の投与は、グルコース血清レベルでも統計的に有意な（ｐ＜０．０５）低減をもたし得る。
【００４５】
本発明のさらに別の態様では、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および肝臓インスリン抵抗性の治療である。
【００４６】
体重が約１００ｋｇの正常な成人ヒトの場合、体重１キログラム当たり約０．００１ｍｇ〜約１０ｍｇの範囲の投与量が通常十分であり、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５．０ｍｇ／ｋｇが好ましく、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇがより好ましい。しかしながら、治療対象の年齢および体重、意図される投与経路、投与される特定の化合物などよって、一般的な投与量範囲にいくらかの変動性が求められてもよい。特定の患者についての投与量範囲および最適投与量の決定は、本開示の利点を有する当業者の能力の十分に範囲内である。本発明の化合物は、徐放、制御放出、および遅延放出製剤に使用でき、その形態も当業者によく知られているという点にも留意されたい。
【００４７】
本発明の化合物は、本明細書に記載の疾患、状態および／または障害の治療のための他の薬剤と併用してもよい。したがって、本発明の化合物を他の薬剤と併せて投与することを含む治療の方法も提供している。本発明の化合物と併せて使用できる適当な薬剤には、抗肥満薬（食欲抑制薬を含む）、抗糖尿病薬、抗高血糖症薬、脂質低下剤、および抗高血圧剤がある。
【００４８】
適当な抗肥満薬には、１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ−１（１１β−ＨＳＤ１型）阻害剤、ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ−１（ＳＣＤ−１）阻害剤、ＭＣＲ−４アゴニスト、コレシストキニン−Ａ（ＣＣＫ−Ａ）アゴニスト、モノアミン再取り込み阻害剤（シブトラミンなど）、交感神経様作用薬、β３アドレナリンアゴニスト、ドーパミンアゴニスト（ブロモクリプチンなど）、メラノサイト刺激ホルモン類似体、５ＨＴ２ｃアゴニスト、メラニン凝集ホルモンアンタゴニスト、レプチン（ＯＢタンパク質）、レプチン類似体、レプチンアゴニスト、ガラニンアンタゴニスト、リパーゼ阻害剤（テトラヒドロリプスタチン、すなわちオルリスタットなど）、食欲抑制薬（ボンベシンアゴニストなど）、ニューロペプチドＹアンタゴニスト（例えば、ＮＰＹ  Ｙ５アンタゴニスト）、ＰＹＹ３−３６（その類似体を含む）、甲状腺模倣剤、デヒドロエピアンドロステロンまたはその類似体、グルココルチコイドアゴニストまたはアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニスト、グルカゴン様ペプチド−１アゴニスト、毛様体神経栄養因子（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ．、米国ニューヨーク州ＴａｒｒｙｔｏｗｎおよびＰｒｏｃｔｅｒ＆Ｇａｍｂｌｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ、米国オハイオ州Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉから入手可能なＡｘｏｋｉｎｅ（商標）など）、ヒトアグーチ関連タンパク質（ＡＧＲＰ）阻害剤、グレリンアンタゴニスト、ヒスタミン３アンタゴニストまたはインバースアゴニスト、ニューロメジンＵアゴニスト、ＭＴＰ／ＡｐｏＢ阻害剤（例えば、ジルロタピドなどの消化管選択的ＭＴＰ阻害剤）、オピオイドアンタゴニスト、オレキシンアンタゴニストなどがある。
【００４９】
本発明の組み合わせた態様で使用するのに好ましい抗肥満薬には、消化管選択的ＭＴＰ阻害剤（例えば、ジルロタピド、ミトラタピドおよびインプリタピド、Ｒ５６９１８（ＣＡＳ番号４０３９８７）およびＣＡＳ番号９１３５４１−４７−６）、ＣＣＫａアゴニスト（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００５／１１６０３４または米国特許出願公開第２００５−０２６７１００Ａ１号に記載されているＮ−ベンジル−２−［４−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−５−オキソ−１−フェニル−４，５−ジヒドロ−２，３，６，１０ｂ−テトラアザ−ベンゾ［ｅ］アズレン−６−イル］−Ｎ−イソプロピル−アセトアミド）、５ＨＴ２ｃアゴニスト（例えば、ロルカセリン）、ＭＣＲ４アゴニスト（例えば、米国特許第６，８１８，６５８号に記載されている化合物）、リパーゼ阻害剤（例えば、セチリスタット）、ＰＹＹ３−３６（本明細書では「ＰＹＹ３−３６」にはペグ化ＰＹＹ３−３６、例えば、米国特許出願公開第２００６／０１７８５０１号に記載されているものなどの類似体が含まれる）、オピオイドアンタゴニスト（例えば、ナルトレキソン）、オレオイル−エストロン（ＣＡＳ番号１８０００３−１７−２）、オビネピチド（ｏｂｉｎｅｐｉｔｉｄｅ）（ＴＭ３０３３８）、プラムリンチド（Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標））、テソフェンシン（ＮＳ２３３０）、レプチン、リラグルチド、ブロモクリプチン、オルリスタット、エクセナチド（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））、ＡＯＤ−９６０４（ＣＡＳ番号２２１２３１−１０−３）およびシブトラミンがある。本発明の化合物および併用療法は、運動および堅実な食事と併せて投与することが好ましい。
【００５０】
適当な抗糖尿病薬には、ナトリウム−グルコース共輸送体（ＳＧＬＴ）阻害剤、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）−１０阻害剤、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）１または２阻害剤、スルホニル尿素（例えば、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、ジアビネース、グリベンクラミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド、グリクラジド、グリペンチド、グリキドン、グリソラミド、トラザミド、およびトルブタミド）、メグリチニド、α−アミラーゼ阻害剤（例えば、テンダミスタット、トレスタチンおよびＡＬ−３６８８）、α−グルコシドヒドロラーゼ阻害剤（例えば、アカルボース）、α−グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アジポシン、カミグリボース、エミグリテート、ミグリトール、ボグリボース、プラジミシン−Ｑ、およびサルボスタチン）、ＰＰＡＲγアゴニスト（例えば、バラグリタゾン、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、イサグリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾンおよびトログリタゾン）、ＰＰＡＲα／γアゴニスト（例えば、ＣＬＸ−０９４０、ＧＷ−１５３６、ＧＷ−１９２９、ＧＷ−２４３３、ＫＲＰ−２９７、Ｌ−７９６４４９、ＬＲ−９０、ＭＫ−０７６７およびＳＢ−２１９９９４）、ビグアナイド（例えば、メトホルミン）、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）アゴニスト（例えば、Ｂｙｅｔｔａ（商標）、エキセンディン−３およびエキセンディン−４）、タンパク質チロシンホスファターゼ−１Ｂ（ＰＴＰ−１Ｂ）阻害剤（例えば、トロズスクエミン、ヒルチオサール抽出物、およびＺｈａｎｇ，Ｓ．ら、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ、１２（９／１０）、３７３〜３８１（２００７）によって開示されている化合物）、ＳＩＲＴ−１阻害剤（例えば、レセルバトロール（ｒｅｓｅｒｖａｔｒｏｌ））、ジペプチジルペプチデアーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）阻害剤（例えば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチンおよびサクサグリプチン）、インスリン分泌促進物質、脂肪酸酸化阻害剤、Ａ２アンタゴニスト、ｃ−ｊｕｎアミノ末端キナーゼ（ＪＮＫ）阻害剤、インスリン、インスリン様作用薬、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、ＶＰＡＣ２受容体アゴニストおよびグルコキナーゼ活性化剤がある。好ましい抗糖尿病薬は、メトホルミン、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）アゴニスト（例えば、Ｂｙｅｔｔａ（商標））およびＤＰＰ−ＩＶ阻害剤（例えば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチンおよびサクサグリプチン）である。
【００５１】
上記の全ての米国特許および公開は、参照により本明細書に組み込まれている。
【００５２】
本明細書の以下に記載されている実施例は、例示的な目的のために過ぎない。本明細書において反映されている組成物、方法、および種々のパラメーターは、本発明の種々の態様および実施形態を例示するものに過ぎず、決して特許請求した発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００５３】
後述の化合物および中間体は、有機化学の命名法およびＣＡＳ索引規則に対するＩＵＰＡＣ（国際純正および応用化学連合）勧告に基づいて一般に命名した。特に指摘がない限り、全ての反応物は、商業的に得た。本明細書の以下に引用した全ての参考文献は、参照により組み込まれている。
【００５４】
フラッシュクロマトグラフィーは、Ｓｔｉｌｌら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９７８、４３、２９２３によって記載されている方法に基づいて行った。
【００５５】
本明細書で論じている全てのＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）精製は、ＫＰ−ＳＩＬシリカ（４０〜６３μＭ、６０オングストローム）を含有する４０Ｍまたは４０Ｓ  Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）カラム（Ｂｉｏａｔｇｅ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）を用いて行った。
【００５６】
本明細書で論じている全てのＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ（登録商標）精製は、充填ＲｅｄｉＳｅｐ（登録商標）シリカカラムを利用したＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ、米国ネブラスカ州Ｌｉｎｃｏｌｎ）を用いて行った。
【００５７】
質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．、米国マサチューセッツ州Ｍｉｌｆｏｒｄ）Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＩＩ分光計で記録した。特に指定のない限り、質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ（米国マサチューセッツ州Ｍｉｌｆｏｒｄ）Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＩＩ分光計で記録した。
【００５８】
プロトンＮＭＲ化学シフトは、テトラメチルシランから低磁場に百万分率で示され、Ｖａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ  ４００または５００ＭＨｚ（メガヘルツ）分光計（Ｖａｒｉａｎ  Ｉｎｃ．、米国カリフォルニア州Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ）で記録した。ＮＭＲ化学シフトは、テトラメチルシラン（プロトンの場合）またはフルオロトリクロロメタン（フッ素の場合）から低磁場に百万分率で示される。
【００５９】
下記の調製を、次の実施例に例示されている化合物を合成する際に使用した。
【００６０】
鍵となる中間体および出発物質
ピラゾロスピロケトン出発物質
例示された化合物を調製するために使用されたピラゾロスピロケトンは、次のピラゾロスピロケトン調製１〜２１のいずれかの方法を使用して調製した。
【００６１】
ピラゾロスピロケトン調製１
２’−フェニル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【００６２】
【化４】
0005435592.tif 000006
フェニルヒドラジン（１０．０ｇ、９２．５ｍｍｏｌ）の水（３０ｍＬ）溶液に、酢酸（８．８ｍＬ）を加え、続いて、水（４００ｍＬ）中のピルブアルデヒド（１６．７ｇ、９２．５ｍｍｏｌ）を１５分間にわたって滴下した。溶液を室温で一晩撹拌した。反応物を濾過し、生じた固体を水（２×３０ｍＬ）で洗浄すると、２−オキソプロパナールフェニルヒドラゾンが黄色の固体（１５．２ｇ、１０１％）として得られた。
【００６３】
酢酸（６０ｍＬ）中の２−オキソプロパナールフェニルヒドラゾン（５．００ｇ、３０．８ｍｍｏｌ）に、４０％グリオキサール水溶液（５．９ｇ、４．６ｍＬ、３０．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を４５分間加熱還流した。酢酸を減圧下で除去した。生じた混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。固体を濾過により除去し、濾液をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（１８０ｇカラム、０〜２０  ＥｔＯＡｃ／ヘプタン勾配）により精製すると、１−（４−ヒドロキシ−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノンが黄色の固体（２．７０ｇ、４３％）として得られた。
【００６４】
１−（４−ヒドロキシ−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（２．７０ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）のメタノール（２５ｍＬ）溶液に、Ｂｏｃ−４−ピペリドン（２．６６ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）およびピロリジン（０．９５ｇ、１．１ｍＬ、１３．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で６日間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、粗製物質をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（８０ｇカラム、ＣＨ２Ｃｌ２−ヘプタン（１：１）／メタノール勾配）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル７’−オキソ−２’−フェニル−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレートが茶色の固体（１．３３ｇ、２６％）として得られた。
【００６５】
ｔｅｒｔ−ブチル７’−オキソ−２’−フェニル−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（１．３３ｇ、３．４７ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（５ｍＬ）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去すると、表題化合物が茶色のオイル（０．９８ｇ、７１％）として得られた。
【００６６】
ピラゾロスピロケトン調製２
２’−イソプロピル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【００６７】
【化５】
0005435592.tif 000007
塩酸イソプロピルヒドラジン（２．０ｇ、１８ｍｍｏｌ）の水（１００ｍＬ）溶液に、酢酸（１．７ｍＬ）を加え、続いて、水中のピルブアルデヒド（２．６ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）を滴下添加した。溶液を室温で一晩撹拌した。水性層をＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出し、合わせた有機抽出物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄した。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、２−オキソプロパナールイソプロピルヒドラゾン（１．３ｇ、５６％）が得られた。
【００６８】
４０％ギオキサール（ｇｙｏｘａｌ）水溶液（１．４７ｇ、１．１６ｍＬ、１０．１ｍｏｌ）を、２−オキソプロパナールイソプロピルヒドラゾン（１．３ｇ、１０ｍｍｏｌ）の水（９０ｍＬ）溶液に加えた。混合物を２時間加熱還流し、室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、１−（４−ヒドロキシ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノンが黄色のオイル（１．４０ｇ、８２％）として得られた。
【００６９】
１−（４−ヒドロキシ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（１．４０ｇ、８．３ｍｍｏｌ）のメタノール（１３ｍＬ）溶液に、ピロリジン（０．５９ｇ、０．６９ｍＬ、８．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、その後、Ｂｏｃ−４−ピペリドン（１．６６ｇ、８．３２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、粗製物質をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（４０ｇカラム、３０〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル２’−イソプロピル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレートがコハク色の泡（１．０８ｇ、３７％）として得られた。
【００７０】
ｔｅｒｔ−ブチル２’−イソプロピル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（１．０８ｇ、３．０９ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）溶液に、ジオキサン中４ＭのＨＣｌ（７．７ｍＬ）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、２−メチルテトラヒドロフランと共に摩砕した。固体を濾過し、２−メチルテトラヒドロフランで洗浄し、固体を空気乾燥させた。固体は吸湿性であり、この物質をＣＨ２Ｃｌ２に入れ、濃縮した。生じた固体を減圧下で乾燥させると、表題化合物が茶色の泡（０．５３ｇ、６８％）として得られた。
【００７１】
ピラゾロスピロケトン調製３
２’−エチル−３’−メチル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【００７２】
【化６】
0005435592.tif 000008
メチルグリオキサール（ピルブアルデヒド）（４０％、６．５ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）の水溶液をシュウ酸エチルヒドラジン（１ｇ、６．７ｍｍｏｌ）および酢酸（０．５７ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）の水（１１ｍＬ）溶液に加え、生じた混合物を３時間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により、ヘプタンからヘプタン：酢酸エチル（８０：２０）への勾配で溶離して精製すると、１−（１−エチル−４−ヒドロキシ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン６２２ｍｇ（５６％）が白色の固体として得られた。
【００７３】
１−（１−エチル−４−ヒドロキシ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（１．９３ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍＬ）溶液に、ピロリジン（０．８２ｇ、０．９５ｍＬ、１１．５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２．５時間撹拌し、その後、Ｂｏｃ−４−ピペリドン（２．２９ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、粗製物質をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（１２０ｇカラム、０〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル２’−エチル−３’−メチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレートが黄色の泡（２．３８ｇ、５９％）として得られた。
【００７４】
ｔｅｒｔ−ブチル２’−エチル−３’−メチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（２．３８ｇ、６．８１ｍｍｏｌ）のジオキサン（１７ｍＬ）溶液に、ジオキサン中４ＭのＨＣｌ（１７ｍＬ）を加え、混合物を室温で２０分間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、２−メチルテトラヒドロフランおよび少量のエタノールと共に摩砕した。固体を濾過により単離し、２−メチルテトラヒドロフランで洗浄し、空気乾燥させると、表題化合物が黄色の固体（１．７８ｇ、９２％）として得られた。
【００７５】
ピラゾロスピロケトン調製４
２’−エチル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【００７６】
【化７】
0005435592.tif 000009
シュウ酸エチルヒドラジン（５．０ｇ、３３ｍｍｏｌ）の水（５０ｍＬ）溶液に、ピルブアルデヒド（４．８０ｇ、４．３３ｍＬ、２６．６ｍｍｏｌ）の水（５５０ｍＬ）溶液を滴下添加した。溶液を室温で一晩撹拌した。水性層をＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出した。合わせた有機抽出物を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（４０ｇカラム、０〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製すると、２−オキソプロパナールエチルヒドラゾンが黄色のオイル（１．８３ｇ、４８％）として得られた。
【００７７】
４０％グリオキサール水溶液（２．３ｇ、１．８ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）を２−オキソプロパナールエチルヒドラゾン（１．８３ｇ、１６ｍｍｏｌ）の水（９０ｍＬ）溶液に加えた。混合物を１時間加熱還流した。反応物を室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、１−（１−エチル−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノンが黄色のオイル（２．１６ｇ、８７％）として得られた。
【００７８】
１−（１−エチル−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（２．１６ｇ、１４ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍＬ）溶液に、ピロリジン（１．０ｇ、１．２ｍＬ、１４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、その後、Ｂｏｃ−４−ピペリドン（２．７９ｇ、１４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、粗製物質をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（８０ｇカラム、３０〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル２’−エチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレートが黄色の泡（２．３９ｇ、５１％）として得られた。
【００７９】
ｔｅｒｔ−ブチル２’−エチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（２．３９ｇ、７．１３ｍｍｏｌ）のジオキサン（１８ｍＬ）溶液に、ジオキサン中４ＭのＨＣｌ（１８ｍＬ）を加え、混合物を室温で４５分間撹拌した。固体が溶液から沈殿し、これを、真空濾過により単離した。固体を真空濾過により単離し、続いて、２−メチルテトラヒドロフランおよび少量のエタノールに入れた。固体を濾過により単離し、２−メチルテトラヒドロフランで洗浄し、空気乾燥させると、表題化合物が黄色の固体（１．６７ｇ、７６％）として得られた。
【００８０】
ピラゾロスピロケトン調製５
２’−（３−メトキシフェニル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【００８１】
【化８】
0005435592.tif 000010
酢酸（１．７ｍＬ）を３−メトキシフェニルヒドラジン（３．０ｇ、１７ｍｍｏｌ）の水（３５ｍＬ）溶液に加えた。次いで、この混合物をピルブアルデヒド（３．１ｇ、２．８ｍＬ、１７ｍｍｏｌ）の水（４５ｍｌ）溶液に１５分にわたって滴下した。混合物を２日間撹拌し、固体を濾過により除去し、水で洗浄すると、２−オキソプロパナール（３−メトキシフェニル）ヒドラゾンが黒色の固体（１．１ｇ、３３％）として得られた。
【００８２】
２−オキソプロパナール（３−メトキシフェニル）ヒドラゾン（２．８８ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）、酢酸（２０ｍＬ）およびグリオキサール（６．３ｇ、５．０ｍＬ、４３ｍｍｏｌ）の混合物を一晩加熱還流した。反応物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。黒色のスラッジをデカンテーションにより除去し、濾液をさらなる飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（８０ｇカラム、０〜５０％ヘプタン／ＥｔＯＡｃ勾配）により精製すると、１−［４−ヒドロキシ−１−（３−メトキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］エタノン（３３０ｍｇ、１０％）が得られた。
【００８３】
１−［４−ヒドロキシ−１−（３−メトキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］エタノン（９０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）のメタノール（２ｍＬ）溶液にピロリジン（３２μＬ、０．３９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２０分間撹拌し、その後、Ｎ−Ｂｏｃ−４−ピペリドン（７７ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を加えた。生じた混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（８０ｇカラム、０〜５％ＣＨ２Ｃｌ２／メタノール勾配）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル２’−（３−メトキシフェニル）−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（６６ｍｇ、４１％）が得られた。
【００８４】
ｔｅｒｔ−ブチル２’−（３−メトキシフェニル）−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（６６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のメタノール（１．５ｍＬ）溶液に、ジエチルエーテル中２ＭのＨＣｌ（１．２ｍＬ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去すると、表題化合物が塩酸塩（６０ｍｇ、１０７％）として得られた。
【００８５】
ピラゾロスピロケトン調製６
２’，３’−ジメチル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【００８６】
【化９】
0005435592.tif 000011
酢酸（４．１ｍＬ）をメチルヒドラジン（２．０ｇ、２．３ｍＬ、４３ｍｍｏｌ）の水（１００ｍＬ）溶液に徐々に加えた。次いで、この混合物をピルブアルデヒド（６．２６ｇ、５．６５ｍＬ、３４．７ｍｍｏｌ）の水（１７５ｍＬ）溶液に滴下添加した。生じた混合物を室温で２日間撹拌した。水相をＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出し、合わせた有機抽出物を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、２−オキソプロパナールメチルヒドラゾン（３．４ｇ、７８％）が得られた。
【００８７】
４０％ピルブアルデヒド水溶液（５．５ｍＬ、３４ｍｍｏｌ）に、２−オキソプロパナールメチルヒドラゾン（３．４ｇ、３４ｍｍｏｌ）の水（１００ｍＬ）溶液を加えた。混合物を２時間加熱還流し、その後、室温に冷却した。混合物をＥｔＯＡｃ（４×）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮し、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（４０ｇカラム、０〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製すると、１−（４−ヒドロキシ−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（２．０２ｇ、３９％）が得られた。
【００８８】
ピロリジン（０．９３ｇ、１．１ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）を、１−（４−ヒドロキシ−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（２．０２ｇ、１３ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍＬ）溶液に加えた。混合物を室温で２．５時間撹拌し、その後、Ｎ−Ｂｏｃ−ピペリドン（２．６１ｇ、１３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、その後、乾燥するまで濃縮した。粗製物質をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（１２０ｇカラム、０〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル２’，３’−ジメチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（２．３８ｇ、５４％）が得られた。
【００８９】
ｔｅｒｔ−ブチル２’，３’−ジメチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（２．３８ｇ、７．１０ｍｍｏｌ）のジオキサン（１７ｍＬ）溶液に、ジオキサン中４ＭのＨＣｌ（１７ｍＬ）を加えた。混合物を室温で２０分間撹拌し、その後、乾燥するまで濃縮した。残渣を２−メチルテトラヒドロフランおよび少量のエタノールと共に摩砕した。固体を濾過により単離し、２−メチルテトラヒドロフランで洗浄し、空気乾燥させると、表題化合物が黄色の固体（１．７０ｇ、８８％）として得られた。
【００９０】
ピラゾロスピロケトン調製７
２’−メチル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【００９１】
【化１０】
0005435592.tif 000012
４０％グリオキサール水溶液（７．１ｍＬ、６２ｍｍｏｌ）に、２−オキソプロパナールメチルヒドラゾン（６．１７ｇ、６１．６ｍｍｏｌ）の水（３００ｍＬ）溶液を加えた。混合物を１時間加熱還流し、その後、室温に冷却した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮し、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（１２０ｇカラム、３０〜４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製すると、１−（４−ヒドロキシ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（５．９３ｇ、６９％）が得られた。
【００９２】
ピロリジン（３．０ｇ、３．５ｍＬ、４２ｍｍｏｌ）を、１−（４−ヒドロキシ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（５．９３ｇ、４２．３ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）溶液に加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、その後、Ｎ−Ｂｏｃ−ピペリドン（８．４３ｇ、４２．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、その後、乾燥するまで濃縮した。粗製物質をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（１２０ｇカラム、３０〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製すると、未反応の出発物質を含有する所望の生成物が得られた。この物質を３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンと共に摩砕し、固体を濾過し、空気乾燥させると、ｔｅｒｔ−ブチル２’−メチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（６．８ｇ、５０％）が得られた。
【００９３】
ｔｅｒｔ−ブチル２’−メチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（６．８３ｇ、２１．３ｍｍｏｌ）の１：１のトリフルオロ酢酸／ＣＨ２Ｃｌ２（全体積３８ｍＬ）溶液を室温で１５分間撹拌した。これに、１ＮのＨＣｌを加え、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。水相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で中和し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。固体がＣＨ２Ｃｌ２抽出物中に生じ、真空濾過により単離すると、表題化合物が白色の固体（２．６６ｇ、４３％）として得られた。水相をＣＨＣｌ３（３×）で逆抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、表題化合物の第２のバッチ（１．３６ｇ、２９％）が得られた。１ＮのＮａＯＨを用いて、水相をｐＨ１２まで塩基性にし、ＣＨＣｌ３（６×）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、表題化合物の第３のバッチ（１．５６ｇ、３３％）が得られた。
【００９４】
ピラゾロスピロケトン調製８
２’−プロピル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【００９５】
【化１１】
0005435592.tif 000013
酢酸（２．９ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）をシュウ酸ｎ−プロピルヒドラジン（５．０ｇ、３０ｍｍｏｌ）の水（１００ｍＬ）溶液に加えた。この混合物を、ピルブアルデヒド（４．３９ｇ、３．９６ｍＬ、２４．４ｍｍｏｌ）の水（５００ｍＬ）溶液に加えた。溶液を室温で一晩撹拌した。水相をＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出し、合わせた有機抽出物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、２−オキソプロパナールプロピルヒドラゾン（３．７４ｇ、９６％）が得られた。
【００９６】
４０％グリオキサール水溶液（４．２３ｇ、３．３５ｍＬ、２９．２ｍｍｏｌ）を２−オキソプロパナールプロピルヒドラゾン（３．７４ｇ、２９．２ｍｍｏｌ）の水（１８５ｍＬ）溶液に加えた。混合物を１時間加熱還流した。反応物を室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、純度５０％の１−［４−（ヒドロキシメチル）−１−プロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］エタノン（３．６０ｇ、７３％）が得られた。
【００９７】
ピロリジン（１．５２ｇ、１．７７ｍＬ、２１．４ｍｍｏｌ）を１−［４−（ヒドロキシメチル）−１−プロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］エタノン（３．６ｇ、２１ｍｍｏｌ）のメタノール（３３ｍＬ）溶液に加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、その後、Ｎ−Ｂｏｃ−ピペリドン（４．２６ｇ、２１．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、その後、乾燥するまで濃縮した。粗製物質をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（８０ｇカラム、３０〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル７’−オキソ−２’−プロピル−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（１．９３ｇ、２６％）が得られた。
【００９８】
ｔｅｒｔ−ブチル７’−オキソ−２’−プロピル−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（１．３９ｇ、３．９８ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）溶液に加え、２０分間撹拌した。混合物を濃縮し、２−メチルテトラヒドロフランおよび少量のエタノールと共に摩砕した。濾過により、固体を単離し、２−メチルテトラヒドロフランで洗浄し、一晩乾燥させると、表題化合物（８５３ｍｇ、８６％）が得られた。
【００９９】
ピラゾロスピロケトン調製９
３’−メチル−２’−（２，２，２−トリフルオロエチル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【０１００】
【化１２】
0005435592.tif 000014
４０％メチルグリオキサール水溶液（３３．２ｇ、１８４ｍｍｏｌ）を水（１００ｍＬ）中の７０％トリフルオロエチルヒドラジン水溶液（１０ｇ、６１ｍｍｏｌ）に加えた。生じた混合物を２．５時間加熱還流した。反応物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃで抽出し、水、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（８０ｇカラム、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製すると、１−［４−ヒドロキシ−５−メチル−１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］エタノン（３．５１ｇ、２５％）が得られた。
【０１０１】
１−［４−ヒドロキシ−５−メチル−１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］エタノン（３．５１ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）のメタノール（２５ｍＬ）溶液に、Ｎ−Ｂｏｃ−４−ピペリドン（３．１５ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）を、続いて、ピロリジン（１．１２ｇ、１．３２ｍＬ、１５．８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で６日間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（１２０ｇカラム、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル３’−メチル−７’−オキソ−２’−（２，２，２−トリフルオロエチル）−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（１．２２ｇ、１６％）が得られた。
【０１０２】
ｔｅｒｔ−ブチル３’−メチル−７’−オキソ−２’−（２，２，２−トリフルオロエチル）−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（１．２２ｇ、３．０２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（８ｍＬ）を加えた。混合物を室温で４時間撹拌し、その後、濃縮すると、表題化合物の塩酸塩が得られた。
【０１０３】
ピラゾロスピロケトン調製１０
２’−ベンジル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【０１０４】
【化１３】
0005435592.tif 000015
塩酸ベンジルヒドラジン（１１．１ｇ、５７．１ｍｍｏｌ）の水（１００ｍＬ）溶液に、ピルブアルデヒド（１０．３ｇ、９．３ｍＬ、５７．１ｍｍｏｌ）の水（５００ｍＬ）溶液を滴下添加した。混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（４×１５０ｍＬ）で希釈した。合わせた有機抽出物を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、２−オキソプロパナールベンジルヒドラゾン（１０．１ｇ、１００％）が得られた。
【０１０５】
４０％グリオキサール水溶液（８．２８ｇ、６．５５ｍＬ、５７．１ｍｍｏｌ）に、２−オキソプロパナールベンジルヒドラゾン（１０．１ｇ、５７．１ｍｍｏｌ）の水（２５０ｍＬ）およびメタノール（２５ｍＬ）中のスラリーを加えた。生じた混合物を３時間加熱還流し、その後、室温に冷却した。混合物をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を水、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（１２０ｇカラム、０〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン勾配）により精製すると、１−（１−ベンジル−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（４．０７ｇ、３３％）が得られた。
【０１０６】
１−（１−ベンジル−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（４．０７ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）溶液に、Ｎ−Ｂｏｃ−４−ピペリドン（３．７５ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）を、続いて、ピロリジン（１．３４ｇ、１．５７ｍＬ、１８．８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で６日間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（１２０ｇカラム、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル２’−ベンジル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（３．０２ｇ、４０％）が得られた。
【０１０７】
ｔｅｒｔ−ブチル２’−ベンジル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（１．２２ｇ、３．０２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、その後、濃縮すると、表題化合物のトリフルオロ酢酸塩（３１１ｍｇ、１００％）が得られた。
【０１０８】
ピラゾロスピロケトン調製１１
２−メトキシ−４−（３’−メチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−２’−イル）ベンゾニトリル
【０１０９】
【化１４】
0005435592.tif 000016
４−フルオロ−２−メトキシベンゾニトリル（１００ｇ、０．６６２ｍｏｌ）のエタノール（０．６６Ｌ）溶液に、ヒドラジン一水和物（３３１ｇ、０．３２１Ｌ、６．６２ｍｏｌ）を加えた。混合物を一晩加熱還流した。反応物を室温に冷却し、水（７５０ｍＬ）で希釈し、１．５時間撹拌し、生じた固体を濾過により集めた。固体を水（２×２５０ｍＬ）ですすぎ、３時間空気乾燥させた。次いで、固体を真空炉中、４５℃で乾燥させた。物質をジオキサン（２Ｌ）に溶かし、ＨＣｌガスを３０分間気泡導入した。生じた固体を濾過し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２×１Ｌ）で洗浄した。固体を１時間空気乾燥させ、生じた固体を真空炉中、４５℃で乾燥させると、−ヒドラジノ−２−メトキシベンゾニトリルヒドロクロリド（１１５．６ｇ、８７．５％）が得られた。
【０１１０】
塩酸２−メトキシベンゾニトリル（１．００ｇ、５．００ｍｍｏｌ）の酢酸（２０ｍＬ）およびメチルグリオキサール（１．８０ｇ、１．６３ｍＬ、２５．０ｍｍｏｌ）混合物を一晩加熱還流した。混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃおよび飽和ＮａＣｌ水溶液で希釈した。固体を濾過により除去し、有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。有機抽出物をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（４０ｇカラム、０〜１０  ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ勾配）により精製すると、４−（３−アセチル−４−ヒドロキシ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メトキシベンゾニトリル（４７ｍｇ、４％）が得られた。
【０１１１】
４−（３−アセチル−４−ヒドロキシ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メトキシベンゾニトリル（４７ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のメタノール（２ｍＬ）溶液に、Ｎ−Ｂｏｃ−４−ピペリドン（３４ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を、続いて、ピロリジン（１２ｍｇ、１４μＬ、０．１７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈにより精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル２’−（４−シアノ−３−メトキシフェニル）−３’−メチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（７４ｍｇ、９５％）が得られた。
【０１１２】
ｔｅｒｔ−ブチル２’−（４−シアノ−３−メトキシフェニル）−３’−メチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（７４ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のメタノール（１ｍＬ）および濃ＨＣｌ（０．８２ｍＬ）溶液を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去すると、表題化合物の塩酸塩（７０ｍｇ、１１０％）が得られた。
【０１１３】
ピラゾロスピロケトン調製１２
３’−エチル−２’−メチル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【０１１４】
【化１５】
0005435592.tif 000017
２−オキソプロパナールメチルヒドラゾン（３．０ｇ、３０ｍｍｏｌ）の水１５０ｍＬ）溶液に、２−オキソブチルアルデヒド（４．０ｇ、４６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２時間加熱還流し、その後、室温に冷却した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出し、合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質は、１−（５−エチル−４−ヒドロキシ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（２．９３ｇ、３７％）を未反応の２−オキソプロパナールメチルヒドラゾンと共に含有し、この物質を、さらに精製することなくそのまま使用した。
【０１１５】
１−（５−エチル−４−ヒドロキシ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（２．９３ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）のメタノール（２７ｍＬ）溶液に、ピロリジン（１．２４ｇ、１．４４ｍＬ、１７．４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２時間撹拌した。この混合物に、Ｎ−Ｂｏｃ−４−ピペリドン（３．４７ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（８０ｇカラム、３０〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル３’−エチル−２’−メチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（３７６ｍｇ、６．２％）が得られた。
【０１１６】
ｔｅｒｔ−ブチル３’−エチル−２’−メチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（３７６ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）のジオキサン（４ｍＬ）溶液に、ジオキサン中４ＭのＨＣｌ（２．７ｍＬ）を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、その後、濃縮した。粗製物質を２−メチルテトラヒドロフランおよび少量のエタノールと共に摩砕した。固体を濾過により集め、２−メチルテトラヒドロフランで洗浄し、空気乾燥させると、表題化合物の塩酸塩（２４２ｍｇ、９０％）が得られた。
【０１１７】
ピラゾロスピロケトン調製１３
２’−ピリジン−２−イル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【０１１８】
【化１６】
0005435592.tif 000018
２−ピリジルヒドラジン（１０．０ｇ、９１．６ｍｍｏｌ）の水（３０ｍＬ）溶液に、酢酸（８．７ｍＬ）を加えた。次いで、この混合物を、ピルブアルデヒド（１６．５ｇ、１４．９ｍＬ、９１．６ｍｍｏｌ）の水（４００ｍＬ）溶液に加えた。混合物を室温で３日間撹拌した。混合物をＮａＨＣＯ３（固体）で中和すると、黄色の沈殿物が形成する。濾過により、固体を単離し、次いで、水（３０ｍＬ）で洗浄した。固体を高真空下で乾燥させると、２−オキソプロパナールピリジン−２−イルヒドラゾンが黄色の固体（６．１２ｇ、４１％）として得られた。
【０１１９】
２−オキソプロパナールピリジン−２−イルヒドラゾン（６．１２ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）およびグリオキサール（１６．３ｇ、１２．９ｍＬ、１１３ｍｍｏｌ）の水（５０ｍＬ）およびメタノール（１０ｍＬ）溶液を一晩加熱還流した。混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で順次洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をシリカゲルプラグに、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（１：２、３００ｍＬ）で溶離して通過させると、１−（４−ヒドロキシ−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（１９９ｍｇ、２．６％）が得られた。
【０１２０】
１−（４−ヒドロキシ−１−ピリジン−２−イル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（１９９ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）溶液に、Ｎ−Ｂｏｃ−４−ピペリドン（１９５ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）およびピロリジン（７０μＬ、０．９８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、ＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＨＣＯ３（１×）、飽和ＮａＣｌ水溶液（３×）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、エナミンｔｅｒｔ−ブチル２’−ピリジン−２−イル−７’−ピロリジン−１−イル−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（１９８ｍｇ、５６％）が得られた。
【０１２１】
ｔｅｒｔ−ブチル２’−ピリジン−２−イル−７’−ピロリジン−１−イル−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（１９８ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（４ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去すると、表題化合物のトリフルオロ酢酸塩が得られた。
【０１２２】
ピラゾロスピロケトン調製１４
２’−（テトラヒドロフラン−３−イル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【０１２３】
【化１７】
0005435592.tif 000019
酢酸（１．７ｍＬ）を塩酸テトラヒドロフラン−３−イルヒドラジン（２．５０ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）（Ｂａｃｏｎ，Ｅ．Ｒ．；Ｓｉｎｇｈ，Ｂ．；およびＬｅｓｈｅｒ，Ｇ．Ｙ．により米国特許第５，２９４，６１２号に記載されている通りに調製）の水（３０ｍＬ）溶液に徐々に添加した。次いで、この混合物を、ピルブアルデヒド（２．５９ｇ、２．３４ｍＬ、１４．４ｍｍｏｌ）の水（２４０ｍＬ）溶液に滴下添加した。混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を分離漏斗に注ぎ、ＮａＣｌを加え、水相に溶かし、次いで、ＣＨ２Ｃｌ２（６回）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、粗製物質が得られ、これを、オイルをＳｉＯ２に予備吸着させ、続いて、クロマトグラフィー（Ｉｓｃｏ、８０ｇ  ＲｅｄｉＳｅｐカラム）により０〜８０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン勾配で８０分にわたって溶離して精製した。フラクションを分析すると、２−オキソプロパナールテトラヒドロフラン−３−イルヒドラゾン（１．１９ｇ、５３％）の単離が生じた。
【０１２４】
４０％グリオキサール水溶液（０．８３ｇ、０．６５ｍＬ、５．７ｍｍｏｌ）を水（５０ｍＬ）中の２−オキソプロパナールテトラヒドロフラン−３−イルヒドラゾン（０．８９ｇ、５．７ｍｍｏｌ）に加えた。混合物を１時間加熱還流し、室温に冷却し、一晩撹拌した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２（４回）で抽出し、合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮し、高真空下で乾燥させると、粗製物質が得られた。粗製オイルをＳｉＯ２に予備吸着させ、続いて、クロマトグラフィー（Ｉｓｃｏ  ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ  １００、４０ｇ  ＲｅｄｉＳｅｐカラム）により２５〜５５％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン勾配で４０分にわたり、５５％で１０分保持して溶離することにより、精製を達成すると、１−［４−ヒドロキシ−１−（テトラヒドロフラン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］エタノン（１．１２ｇ、１９％）および１−［４−ヒドロキシ−５−メチル−１−（テトラヒドロフラン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］エタノン（１．２０ｇ、８．４％）が得られた。
【０１２５】
１−［４−ヒドロキシ−１−（テトラヒドロフラン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］エタノン（２１０ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）のメタノール（３ｍＬ）溶液に、ピロリジン（７６ｍｇ、８８μＬ、１．０７ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で２時間撹拌し、その後、Ｎ−Ｂｏｃ−４−ピペリドン（２１３ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、その後、濃縮した。粗製物質をＳｉＯ２に予備吸着させ、１０〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン勾配で５０分にわたって溶離してクロマトグラフィー処理すると（Ｉｓｃｏ  ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ  １００、１２ｇ  ＲｅｄｉＳｅｐカラム）、ｔｅｒｔ−ブチル７’−オキソ−２’−（テトラヒドロフラン−３−イル）−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（４０４ｍｇ、３６％）が得られた。
【０１２６】
ｔｅｒｔ−ブチル７’−オキソ−２’−（テトラヒドロフラン−３−イル）−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（１４４ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（２ｍＬ）溶液に、ジオキサン中４ＭのＨＣｌ（０．９６ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、その後、乾燥するまで濃縮した。ジエチルエーテルおよび少量のエタノールと共に摩砕した。固体を真空濾過により集め、ジエチルエーテルで洗浄し、高真空下で乾燥させると、２’−（テトラヒドロフラン−３−イル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン（４９ｍｇ、４１％）が得られた。
【０１２７】
ピラゾロスピロケトン調製１５
３’−メチル−２’−（テトラヒドロフラン−３−イル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【０１２８】
【化１８】
0005435592.tif 000020
１−［４−ヒドロキシ−５−メチル−１−（テトラヒドロフラン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル］エタノン（ピラゾロスピロケトン調製１４に記載されている通りに調製）（３０４ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）のメタノール（４．５ｍＬ）溶液に、ピロリジン（１０３ｍｇ、１２０μＬ、１．４５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で２時間撹拌し、その後、Ｎ−Ｂｏｃ−４−ピペリドン（２８８ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、その後、濃縮した。粗製物質をＳｉＯ２に予備吸着させ、１０〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン勾配で５０分にわたって溶離して、クロマトグラフィー処理すると（Ｉｓｃｏ  ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ  １００、１２ｇ  ＲｅｄｉＳｅｐカラム）、ｔｅｒｔ−ブチル３’−メチル−７’−オキソ−２’−（テトラヒドロフラン−３−イル）−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（２９９ｍｇ、５３％）が得られた。
【０１２９】
ｔｅｒｔ−ブチル３’−メチル−７’−オキソ−２’−（テトラヒドロフラン−３−イル）−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（２９５ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（４ｍＬ）溶液に、ジオキサン中４ＭのＨＣｌ（１．９ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、その後、乾燥するまで濃縮した。ジエチルエーテルおよび少量のエタノールと共に摩砕した。固体を真空濾過により集め、ジエチルエーテルで洗浄し、高真空下で乾燥させると、３’−メチル−２’−（テトラヒドロフラン−３−イル）−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン（１０６ｍｇ、４３％）が得られた。
【０１３０】
ピラゾロスピロケトン調製１６
２’−ｔｅｒｔ−ブチル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【０１３１】
【化１９】
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２００Ｌ反応器に：水（７２Ｌ）および一塩酸（１，１−ジメチルエチル）ヒドラジン（１３．４ｋｇ、１０８モル）を投入した。溶液を２３℃で１５分間撹拌し（全ての固体が溶けるまで）、次いで、２−オキソ−プロパナール（１４．８ｋｇ、８２．１モル）を加え、少なくとも４時間保持した。反応溶液をＭＴＢＥ（５４Ｌ）で２回抽出した。合わせた有機層を１ＮのＮａＯＨ（３２Ｌ）で２回、水（３２Ｌ）で１回洗浄し、最小撹拌体積まで濃縮（２２０ｍｍＨｇ、３０℃）した。この濃縮物に、水（７２Ｌ）、エタンジアール（グリオキサルデヒド）（２７．３ｋｇ、１８８モル）を加え、反応物を９５℃に加熱し、残渣ＭＴＢＥを留去させて、所望の温度を達成した。１．５時間後に、混合物を周囲温度に冷却し（１時間にわたって）、ＭＴＢＥ（５４Ｌ）で２回抽出した。合わせた有機層を１ＮのＮａＯＨ（３４Ｌ）で２回洗浄した。合わせた水性層を５℃に冷却し、水中３３〜４０ｗｔ／ｗｔ％のＨＣｌ（６Ｌ）を用いてｐＨ３に酸性化し、次いで、ＭＴＢＥ（５４Ｌ）で２回抽出した。合わせた有機層を水（３６Ｌ）で洗浄し、最小撹拌体積まで濃縮した（２００ｍｍＨｇ、３０℃）。濃縮物に、メタノール（１０９Ｌ）、Ｎ−ＢＯＣ−４−ピペリドン（１６．７ｋｇ、８４モル）およびピロリジン（１．４Ｌ、１６モル）を加えた。反応物を６８℃に２４時間加熱し、５０℃に冷却し、真空にして、最小撹拌体積まで蒸留した。真空を外し、酢酸エチル（４５Ｌ）を加え、蒸留して（大気圧）僅かな撹拌体積にし、次いで、ＭＴＢＥ（７２Ｌ）を加えた。溶液を穏やかな還流まで戻し、次いで、周囲温度に３時間にわたって冷却している間に、ｎ−ヘプタン（８２Ｌ）を３０分にわたって加えた。Ｎｕｔｓｃｈｅ  Ｆｉｌｔｅｒで固体を濾過し、１：１．１のＭＴＢＥ／ｎ−ヘプタン（５０Ｌ）で洗浄し、真空下、５０℃で１２時間乾燥させた。ｔｅｒｔ−ブチル２’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート１０．０ｋｇ（２７．５モル、全体で３３％）が白色の結晶質固体として単離された。
【０１３２】
２００Ｌ反応器に、ｔｅｒｔ−ブチル２’−ｔｅｒｔ−ブチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（８．３ｋｇ、２２．８モル）、酢酸エチル（８９Ｌ）およびメタノール（２４Ｌ）を投入した。溶液を０℃に冷却し、塩化アセチル（１１．０Ｌ、１５５モル）を３０分にわたって加えた。添加の後に、反応物を周囲温度に加温し、４時間反応させた。溶液を加熱して、４１Ｌの反応体積まで蒸留し、内部温度が７２℃に達するまで、酢酸エチル（約２２Ｌ）を徐々に再充填した。３時間にわたって周囲温度まで冷却し、Ｎｕｔｓｃｈｅ  Ｆｉｌｔｅｒで固体を濾過し、酢酸エチル（５．３Ｌ）で洗浄し、真空下、５０℃で１２時間乾燥させた。２’−ｔｅｒｔ−ブチル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン６．６ｋｇ（２２．０モル、９６％）が白色の結晶質固体として単離された。
【０１３３】
ピラゾロスピロケトン調製１７
２’−シクロヘキシル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【０１３４】
【化２０】
0005435592.tif 000022
酢酸（３．１５ｍＬ、５４．８ｍｍｏｌ）をシクロヘキシルヒドラジン  ＨＣｌのＨ２Ｏ（６０ｍＬ）溶液に徐々に加えた。次いで、生じた溶液をピルブアルデヒド（４．７８ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（５４０ｍＬ）溶液に滴下添加した。この溶液を室温で一晩撹拌した。水性層をＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。次いで、粗製生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）を介して、１００％ヘキサンからヘキサン：酢酸エチルの７０：３０混合物への勾配で溶離して精製すると、２−オキソプロパナールシクロヘキシル−ヒドラゾン２．５４ｇ（４５％）がコハク色のオイルとしてもたらされた。
【０１３５】
４０％グリオキサール水溶液（１．７３ｍＬ、１５．１ｍｍｏｌ）をＨ２Ｏ（１２５ｍＬ）中の２−オキソプロパナールシクロヘキシル−ヒドラゾン（２．５４ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）に加えた。次いで、混合物を加熱還流した。１時間後に、混合物を室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮すると、１−（４−ヒドロキシ−１−シクロヘキシル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン３．２２ｇが黄色のオイルとして得られた。次いで、粗製生成物をさらに精製することなく、次のステップで使用した。
【０１３６】
ピロリジン（１．１０ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を１−（４−ヒドロキシ−１−シクロヘキシル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（３．２２ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２５ｍＬ）溶液に加えた。暗赤色の溶液を室温で２時間撹拌した。次いで、１−（Ｎ−Ｂｏｃ）−４−ピペリドン（３．０８ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を溶液に加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮した。次いで、粗製生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）を介して酢酸エチル：ヘキサン（３０：７０から５０：５０へ）の勾配で溶離して精製すると、黄色物が得られた。次いで、この黄色のオイルをヘキサンで１時間摩砕すると、白色の固体が得られた。固体を濾過し、ヘキサンで洗浄し、一晩空気乾燥させた。ｔｅｒｔ−ブチル２’−シクロヘキシル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート３７２ｍｇ（６％）が白色の固体として得られた。
【０１３７】
ｔｅｒｔ−ブチル２’−シクロヘキシル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（３７２ｍｇ、０．９５５ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（４ｍＬ）溶液に室温で、ＨＣｌ溶液（１，４−ジオキサン中４Ｍ、２．３９ｍＬ、９．５５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を乾燥するまで濃縮し、２−メチルテトラヒドロフランおよび少量のＥｔＯＨ中で約１時間摩砕した。固体を真空濾過により集めると、表題化合物２２３ｍｇ（８０％）がオフホワイト色の固体として得られた。
【０１３８】
ピラゾロスピロケトン調製１８
２’−シクロペンチル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【０１３９】
【化２１】
0005435592.tif 000023
酢酸（１．３９ｍＬ、２４．２ｍｍｏｌ）をシクロペンチルヒドラジンＨＣｌ（２．０ｇ、１５ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（２４ｍＬ）溶液に徐々に加えた。次いで、生じた溶液をピルブアルデヒド（４０％、１．９０ｍＬ、１１．７ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（２００ｍＬ）溶液に滴下添加した。この溶液を室温で一晩撹拌した。水性層をＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。次いで、粗製生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）を介して１００％ヘキサンからヘキサン：酢酸エチルの７０：３０混合物への勾配で溶離して精製すると、２−オキソプロパナールシクロペンチルヒドラゾン１．５３ｇ（６８％）がコハク色のオイルとしてもたらされた。
【０１４０】
４０％グリオキサール水溶液（１．８８ｍＬ、１６．４ｍｍｏｌ）をＨ２Ｏ（１２５ｍＬ）中の２−オキソプロパナールシクロペンチルヒドラゾン（２．５３ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）に加えた。次いで、混合物を加熱還流した。１時間後に、混合物を室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮すると、１−（４−ヒドロキシ−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン１．６８ｇ（５３％）が黄色のオイルとして得られた。次いで、粗製生成物を、さらに精製することなく次のステップで使用した。
【０１４１】
ピロリジン（０．６１５ｇ、８．６５ｍｍｏｌ）を１−（４−ヒドロキシ−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（１．６８ｇ、８．６５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１５ｍＬ）溶液に加えた。暗赤色の溶液を室温で２時間撹拌した。次いで、１−（Ｎ−Ｂｏｃ）−４−ピペリドン（１．７２ｇ、８．６５ｍｍｏｌ）を溶液に加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮した。次いで、粗製生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）を介して酢酸エチル：ヘキサン（３０：７０から５０：５０へ）の勾配で溶離して精製すると、黄色物が得られた。次いで、この黄色のオイルをヘキサンで１時間摩砕すると、白色の固体が得られた。固体を濾過し、ヘキサンで洗浄し、一晩空気乾燥させた。ｔｅｒｔ−ブチル２’−シクロペンチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート８１１ｍｇ（２５％）が黄色の固体として得られた。
【０１４２】
ｔｅｒｔ−ブチル２’−シクロペンチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（８１１ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（９ｍＬ）溶液に室温で、ＨＣｌ溶液（１，４−ジオキサン中４Ｍ、５．４０ｍＬ、２１．６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を乾燥するまで濃縮し、２−メチルテトラヒドロフランおよび少量のＥｔＯＨ中で約１時間摩砕した。固体を真空濾過により集めると、表題化合物３７８ｍｇ（６４％）がオフホワイト色の固体として得られた。
【０１４３】
ピラゾロスピロケトン調製１９
２’−シクロブチル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【０１４４】
【化２２】
0005435592.tif 000024
酢酸（２．３２ｍＬ、４０．４ｍｍｏｌ）をシクロブチルヒドラジンＨＣｌ（３．０ｇ、２４ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（３５ｍＬ）溶液に徐々に加えた。次いで、生じた溶液をピルブアルデヒド（４０％、３．１８ｍＬ、１９．６ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（３００ｍＬ）溶液に滴下添加した。この溶液を室温で一晩撹拌した。水性層をＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。次いで、粗製生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）を介して１００％ヘキサンからヘキサン：酢酸エチルの７０：３０混合物への勾配で溶離して精製すると、２−オキソプロパナールシクロブチルヒドラゾン１．３８ｇ（４０％）がコハク色のオイルとしてもたらされた。
【０１４５】
４０％グリオキサール水溶液（１．１３ｍＬ、９．８４ｍｍｏｌ）を２−オキソプロパナールシクロブチルヒドラゾン（１．３８ｇ、９．８４ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（７０ｍＬ）に加えた。次いで、混合物を加熱還流した。１時間後に、混合物を室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮すると、１−（４−ヒドロキシ−１−シクロブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン１．５３ｇ（８６％）が黄色のオイルとして得られた。次いで、粗製生成物をさらに精製することなく次のステップで使用した。
【０１４６】
ピロリジン（０．６０４ｇ、８．４９ｍｍｏｌ）を１−（４−ヒドロキシ−１−シクロブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（１．５３ｇ、８．４９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１５ｍＬ）溶液に加えた。暗赤色の溶液を室温で２時間撹拌した。次いで、１−（Ｎ−Ｂｏｃ）−４−ピペリドン（１．６９ｇ、８．４９ｍｍｏｌ）を溶液に加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮した。次いで、粗製生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）を介して酢酸エチル：ヘキサン（３０：７０から５０：５０へ）の勾配で溶離して精製すると、黄色のオイルがもたらされた。次いで、この黄色のオイルをヘキサンで１時間摩砕すると、白色の固体が得られた。固体を濾過し、ヘキサンで洗浄し、一晩空気乾燥させた。ｔｅｒｔ−ブチル２’−シクロブチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート８１２ｍｇ（２７％）が黄色の固体として得られた。
【０１４７】
ｔｅｒｔ−ブチル２’−シクロブチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（８１２ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（９ｍＬ）溶液に室温で、ＨＣｌ溶液（１，４−ジオキサン中４Ｍ、５．６２ｍＬ、２２．５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を乾燥するまで濃縮し、２−メチルテトラヒドロフランおよび少量のＥｔＯＨ中で約１時間摩砕した。固体を真空濾過により集めると、表題化合物３３２ｍｇ（５７％）がオフホワイト色の固体として得られた。
【０１４８】
ピラゾロスピロケトン調製２０
２’−シクロプロピル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【０１４９】
【化２３】
0005435592.tif 000025
酢酸（１．７１ｍＬ、２９．９ｍｍｏｌ）をシクロプロピル−ヒドラジン・ＨＣｌ（２．５ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（３０ｍＬ）溶液に徐々に加え、次いで、ピルブアルデヒド（４０％、２．３６ｍＬ、１４．５ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（２４０ｍＬ）溶液に迅速に滴下添加した。この溶液を室温で一晩撹拌した。水性層を塩処理し、ＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮すると、粗製生成物１．０４ｇが赤色がかったオイルとして得られた。粗製生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）を介して酢酸エチル／ヘキサン（２５：７５から５０：５０へ）の勾配で溶離して精製すると、２−オキソプロパナールシクロプロピルヒドラゾン６３７ｍｇ（３５％）が黄色の固体として得られた。
【０１５０】
４０％グリオキサール水溶液（０．４４ｍＬ、３．８４ｍｍｏｌ）をＨ２Ｏ（３０ｍＬ）中の２−オキソプロパナールシクロプロピルヒドラゾン（４８５ｍｇ、３．８４ｍｍｏｌ）に加えた。次いで、混合物を加熱還流した。１時間後に、混合物を室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（４×）で抽出した。層を分離し、有機層を除去した。ブラインを水性層に加え、これをＣＨ２Ｃｌ２（２×）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮した。次いで、粗製生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）を介して酢酸エチル／ヘプタン（１０：９０から５０：５０へ）の勾配で溶離して精製すると、１−（４−ヒドロキシ−１−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン３７０ｍｇ（５８％）が黄色のオイルとしてもたらされた。
【０１５１】
ピロリジン（０．１５４ｇ、２．１６ｍｍｏｌ）を１−（４−ヒドロキシ−１−シクロプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（３６０ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）溶液に加えた。暗赤色の溶液を室温で２時間撹拌した。次いで、１−（Ｎ−Ｂｏｃ）−４−ピペリドン（４３１ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）をこの溶液に加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。追加量の１−（Ｎ−Ｂｏｃ）−４−ピペリドン（５０ｍｇ）を加えた。反応混合物をさらに４時間撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮し、生じた粗製生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）を介して酢酸エチル：ヘプタン（１０：９０から５０：５０へ）の勾配で溶離して精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル２’−シクロプロピル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート４８８ｍｇ（６５％）が得られた。
【０１５２】
ｔｅｒｔ−ブチル２’−シクロプロピル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（４７５ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（５ｍＬ）溶液に室温で、ＨＣｌの溶液（１，４−ジオキサン中４Ｍ、３．４２ｍＬ、１３．７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を乾燥するまで濃縮し、ジエチルエーテルおよび少量のＥｔＯＨ中で一晩摩砕した。固体を真空濾過により集め、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、高真空下で乾燥させると、表題化合物３６０ｍｇ（９３％）が緑色の固体として得られた。
【０１５３】
ピラゾロスピロケトン調製２１
２’−イソプロピル−３’−メチル−２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−７’（６’Ｈ）−オン
【０１５４】
【化２４】
0005435592.tif 000026
ピルブアルデヒド（４０％、７．３ｇ、４１ｍｍｏｌ）をシュウ酸エチルヒドラジン（１ｇ、１０ｍｍｏｌ）および重炭酸ナトリウム（２．２７ｇ、２７．０ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）溶液に加え、生じた混合物を２日間加熱還流した。反応物を室温に冷却し、酢酸エチル（３×）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、減圧下で濃縮した。粗製生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）を介してヘキサン：酢酸エチル（８０：２０）で溶離して精製すると、１−（１−ｉ−プロピル−４−ヒドロキシ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン８００ｍｇ（３０％）が明茶色のオイルとして得られた。
【０１５５】
ピロリジン（３１２ｍｇ、４．４０ｍｍｏｌ）を１−（１−ｉ−プロピル−４−ヒドロキシ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）エタノン（８００ｍｇ、４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液に加えた。暗赤色の溶液を室温で２時間撹拌した。次いで、１−（Ｎ−Ｂｏｃ）−４−ピペリドン（８７５ｍｇ、４．４０ｍｍｏｌ）を溶液に加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮した。次いで、粗製生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）を介して酢酸エチル：ヘキサン（３０：７０から５０：５０へ）の勾配で溶離して精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル２’−イソプロピル−３’−メチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート５４２ｍｇ（３０％）が黄色のオイルとしてもたらされた。
【０１５６】
ｔｅｒｔ−ブチル２’−イソプロピル−３’−メチル−７’−オキソ−６’，７’−ジヒドロ−１Ｈ，２’Ｈ−スピロ［ピペリジン−４，５’−ピラノ［３，２−ｃ］ピラゾール］−１−カルボキシレート（５４２ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（５ｍＬ）溶液に室温で、ＨＣｌ溶液（１，４−ジオキサン中４Ｍ、３．７３ｍＬ、１４．９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を乾燥するまで濃縮し、２−メチルテトラヒドロフランおよび少量のＥｔＯＨ中で摩砕した。固体を真空濾過により集めると、表題化合物３０３ｍｇ（７７％）が黄褐色の固体として得られた。
【０１５７】
カルボン酸出発物質
次の市販のカルボン酸を使用して、本発明の例示化合物を調製した：４−メトキシ−７−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ａｍｂｉｎｔｅｒ、Ｐａｒｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ）、２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−カルボン（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｍｔ．Ｐｌｅａｓａｎｔ、ＳＣ）、１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（Ｔｙｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、Ｅｗｉｎｇ、ＮＪ）、４−エトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｍｔ．Ｐｌｅａｓａｎｔ、ＳＣ）、４−クロロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｍｔ．Ｐｌｅａｓａｎｔ、ＳＣ）、４，６−ジメトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｔｙｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｅｗｉｎｇ、ＮＪ）、７−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＳＣ）、４，６−ジクロロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｏａｋｗｏｏｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ、Ｗｅｓｔ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＳＣ）、７−クロロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ａｕｒｏｒａ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ａｕｓｔｒｉａ）、７−クロロ−４−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ａｍｂｉｎｔｅｒ、Ｐａｒｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ）、６，７−ジメトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（ＭｉｃｒｏＣｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｔｄ、Ｒｕｓｓｉａ）、６−クロロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＳＣ）、５−プロポキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  ＢｉｏＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｍｏｎｍｏｕｔｈ  Ｊｕｎｃｔｉｏｎ、ＮＪ）、６−クロロ−４−フルオロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ａｍｂｉｎｔｅｒ、Ｆｒａｎｃｅ）、６−エチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、Ｍｔ．Ｐｌｅａｓａｎｔ、ＳＣ）、６−フルオロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、Ｍｔ．Ｐｌｅａｓａｎｔ、ＳＣ）、３−エチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（ＣｈｅｍＢｒｉｄｇｅ  Ｃｏｒｐ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（ＡＳＤＩ  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ）、３−フルオロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、Ｍｔ．Ｐｌｅａｓａｎｔ、ＳＣ）、７−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＳＣ）、５−フルオロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、Ｍｔ．Ｐｌｅａｓａｎｔ、ＳＣ）、５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ、Ｗａｒｄ  Ｈｉｌｌ、ＭＡ）、４，６−ジフルオロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、Ｍｔ．Ｐｌｅａｓａｎｔ、ＳＣ）、インドール−２−カルボン酸（ＡＳＤＩ  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ）、６−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＳＣ）、１−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（ＡＳＤＩ  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ）、６−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、Ｍｔ．Ｐｌｅａｓａｎｔ、ＳＣ）、６−イソプロピル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、Ｍｔ．Ｐｌｅａｓａｎｔ、ＳＣ）、５−エチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｗａｋｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＵＳＡ，Ｉｎｃ．、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＶＡ）、３−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）安息香酸（Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ．  Ｃｏｒｎｗａｌｌ、ＵＫ）、７−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−カルボン酸（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｓｃｉｔｅｃｈ  ＵＳＡ，Ｉｎｃ．、Ｃｏｎｓｈｏｈｏｃｋｅｎ、ＰＡ）、２−ナフトエ酸（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ、Ｗａｒｄ  Ｈｉｌｌ、ＭＡ）、５−メトキシ−４，７−ジメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（ＡＳＤＩ  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ）、３，６−ジメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（ＡＳＤＩ  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ）、７−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−カルボン酸（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｓｃｉｔｅｃｈ  ＵＳＡ，Ｉｎｃ．、Ｃｏｎｓｈｏｈｏｃｋｅｎ、ＰＡ）、１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−カルボン酸（Ａｆｆｉｎｉｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａ  ＬＬＣ、Ｎｅｗ  Ｈａｖｅｎ、ＣＴ）、３−（１Ｈ−ピラゾール−３−イル）安息香酸（３Ｂ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏｒｐ、Ｌｉｂｅｒｔｙｖｉｌｌｅ、ＩＬ）、２−ナプトエ酸（ｎａｐｔｈｏｉｃ  ａｃｉｄ）（Ｓｉｇｍａ−  Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）、ベンズイミダゾール−５−カルボン酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）、１，３−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸（Ｂｏｓｃｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＬＬＣ、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）、７−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−５−カルボン酸（Ｃｈｅｍｓｔｅｐ、Ｃａｒｂｏｎ  Ｂｌａｎｃ、Ｆｒａｎｃｅ）、４−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−カルボン酸（Ｃｈｅｍｓｔｅｐ、Ｃａｒｂｏｎ  Ｂｌａｎｃ、Ｆｒａｎｃｅ）、５，６−ジメトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３Ｂ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｌｉｂｅｒｔｙｖｉｌｌｅ、ＩＬ）  ６−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３Ｂ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｌｉｂｅｒｔｙｖｉｌｌｅ、ＩＬ）、７−フルオロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＳＣ）、４−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｂｏｓｃｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＬＬＣ、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）、１−オキソ−２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ｂｅｔａ−カルボリン−６−カルボン酸（Ｊ  ＆  Ｗ  ＰｈａｒｍａＬａｂ，ＬＬＣ、Ｌｅｖｉｔｔｏｗｎ、ＰＡ）、３−アミノ−１，２−ベンズイソチアゾール−５−カルボン酸（Ｃｈｅｍｓｔｅｐ、Ｃａｒｂｏｎ  Ｂｌａｎｃ、Ｆｒａｎｃｅ）、ベンゾ［ｄ］チアゾール−６−カルボン酸（ＡＳＤＩ  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ）、６−メトキシ−２−ナフトエ酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）、ベンゾフラン−５−カルボン酸（Ａｐｏｌｌｏ、Ｃｈｅｓｈｉｒｅ、ＵＫ）、キノリン−５−カルボン酸（Ｓｙｎｔｈｏｎｉｘ、Ｗａｋｅ  Ｆｏｒｅｓｔ、ＮＣ）、２−ナフトエ酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）、２−メチルベンゾ［ｄ］チアゾール−５−カルボン酸（ＡＳＤＩ  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ）、７−メトキシ−２−ナフトエ酸（３Ｍ、Ｓｔ．Ｐａｕｌ、ＭＮ）、２−オキソ−２，３−ジヒドロベンゾ［ｄ］オキサゾール−６−カルボン酸（ＡＳＤＩ  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ）、２−ヒドロキシ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−カルボン酸（ＡＳＤＩ  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ）、１−メチル−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸（Ｒｙａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、Ｍｔ．Ｐｌｅａｓａｎｔ、ＳＣ）、キノリン−６−カルボン酸（ＴＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａ、Ｐｏｒｔｌａｎｄ、ＯＲ）、７−キノリンカルボン酸（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  ＢｉｏＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｍｏｎｍｏｕｔｈ  Ｊｕｎｃｔｉｏｎ、ＮＪ）および６−クロロ−３−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（ＡＳＤＩ  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ）。
【０１５８】
次のカルボン酸（下記の実施例に記載されている化合物を調製するために使用された）を、既に出版された方法により調製した：６−フルオロ−５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（米国特許第５４８９５９３号、実施例９２）；３，７−ジメチル−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸（Ｋｎｅｐｐｅｒ，Ｋ．；Ｂｒａｅｓｅ，Ｓ．  Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２００３、５、２８２９〜２８３２）；３−メチル−１Ｈ−インダゾール−６−カルボン酸（米国特許第６３０３６００号、実施例４５）；５−メトキシ−４−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（米国特許第４０６０６２６号）；６−メトキシ−３−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（Ｇａｎ，Ｔ．ら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９７、６２、９２９８〜９３０４）；２−ビニル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（米国特許出願公開第２００５／００２６９８７号、化合物１５１）；８−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−６−カルボン酸（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２００３、４６（１４）、３０３３〜３０４４と同様）；２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−７−カルボン酸（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９８６、３４（２）、６８２〜９３）；３−アミノベンゾ［ｄ］イソチアゾール−５−カルボン酸（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００８、５１（５）、１２３１〜１２４１）；２−メチルキノリン−６−カルボン酸（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００２、４５（２１）、４６４７〜４６５４）；３−オキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン−７−カルボン酸（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００５、４８（９）、３１１０〜３１１３）；５−メトキシ−２−ナフトエ酸（Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２００８、１０（１５）、３３５９〜３３６２に見られるエステルの加水分解により調製）；３−オキソ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン−６−カルボン酸（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００５、４８（９）、３１１０〜３１１３）；および５−フルオロ−６−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（ＰＣＴ公開ＷＯ９１０９８４９）。３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸は、５−ブロモ−１Ｈ−インダゾール−３−アミン（Ａｐｏｌｌｏ、Ｃｈｅｓｈｉｒｅ、ＵＫ）をカルボニル化することにより調製することができる。１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−６−カルボン酸は、６−ブロモイソキノリン−１（２Ｈ）−オン（ＰｈａｒｍＬａｂ、Ｌｅｖｉｔｔｏｗｎ、Ｐａ）をカルボニル化することにより調製することができる。１−オキソ−１，２−ジヒドロイソキノリン−７−カルボン酸は、６−ブロモイソキノリン−１（２Ｈ）−オン（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ、Ｗａｒｄ  Ｈｉｌｌ、ＭＡ）をカルボニル化することにより調製することができる。
【０１５９】
下記のカルボン酸出発物質（下記の実施例に記載されている化合物を調製するために使用された）を、下記の通りに調製した。
【０１６０】
酸調製１
３−メチル−７−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０１６１】
【化２５】
0005435592.tif 000027
セミカルバジドＨＣｌ（２０ｇ、１７５ｍｍｏｌ）、アセトン（１１．１ｇ、１９２ｍｍｏｌ）の水（４００ｍＬ）溶液に、酢酸ナトリウム（２１．５ｇ、２６２ｍｍｏｌ）を室温で加え、１８時間維持した。反応混合物を濾過し、得られた固体をエーテル（２×２５ｍＬ）で洗浄し、７０℃で２０時間乾燥させると、アセトンセミカルバゾール（１５ｇ、７５％）が白色の固体として得られた。1H NMR (CDCl3) δ 7.95 (br, 1H), 5.9-5.1 (br, 2H), 1.95 (s,
3H), 1.85 (s, 3H).
【０１６２】
０℃の冷たいＤＭＦ（６５ｍＬ）に、ＰＯＣｌ３（３９ｍＬ）を３０分間滴下添加し、０℃で１時間維持した。混合物にアセトンセミカルバゾール（１３ｇ、１１４ｍｍｏｌ）を０℃で滴下添加し、７０℃で４時間維持した。混合物を粉砕氷（５００ｇ）に注ぎ、１０％ＮａＯＨ溶液を使用して中和し、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）を使用して抽出した。合わせた有機層を水（２×１００ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮すると、粗製生成物が得られ、これを、カラムクロマトグラフィー（６０〜１２０メッシュシリカゲル）によりクロロホルム中２〜４％のメタノールを溶離剤として使用して精製すると、３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド（４ｇ、３２％）が固体として得られた。1H NMR (CDCl3) δ
9.96 (s, 1H), 8.0 (s, 1H), 2.6 (s, 3H)。
【０１６３】
３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド（９ｇ、８２ｍｍｏｌ）およびコハク酸ジエチル（５７ｇ、３２７ｍｍｏｌ）のｔ−ブタノール（５０ｍＬ）溶液に、ｔ−ＢｕＯＫ（３７．３ｇ、２４５ｍｍｏｌ）のｔ−ブタノール（４０ｍＬ）溶液を加え、混合物を８０℃に４時間加熱した。混合物を濃縮し、得られた残渣を水（５０ｍＬ）に溶かし、６ＮのＨＣｌを使用して酸性化し（ｐＨ約２）、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた水性層を酸性化（ｐＨ約２）し、酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた酢酸エチル層を飽和ＮａＣｌ水溶液（２５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮すると、３−（エトキシカルボニル）−４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ブト−３−エン酸（２０ｇ、１００％）がゴムとして得られた。1H NMR (CDCl3) δ 7.85 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 4.3 (t, 2H), 3.65
(s, 2H), 4.4 (s, 3H), 1.3 (t, 3H).
【０１６４】
３−（エトキシカルボニル）−４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ブト−３−エン酸（２０ｇ、８４ｍｍｏｌ）の無水酢酸（８０ｍＬ）溶液に、酢酸ナトリウム（１３．８ｇ、１６８ｍｍｏｌ）を室温で加え、混合物を４時間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、ＮａＨＣＯ３水溶液を使用して塩基性にし（ｐＨ約９）、酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（５０ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮すると、粗製生成物が得られ、これを、カラムクロマトグラフィー（１００−２００メッシュシリカゲル）により石油エーテル中６〜８％の酢酸エチルを溶離剤として使用して精製すると、エチル３−メチル−７−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（１０ｇ、４０％）がオレンジ色の固体として得られた。1H NMR (CDCl3) δ 8.25 (s, 1H), 7.9 (s, 1H), 4.4 (q, 2H),
2.75 (s, 3H), 2.6 (s, 3H), 2.4 (s, 3H), 1.4 (t, 3H). 
【０１６５】
０℃のエチル３−メチル−７−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（０．８４ｇ、３．８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２５ｍＬ）溶液に、ＮａＨの６０％オイル分散液（１５２ｍｇ、３．８１ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で１時間撹拌した後に、ヨードエタン（５９５ｍｇ、０．３１ｍＬ、３．８１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液を加えた。混合物を０℃で数時間維持した後に、混合物を、一晩撹拌しながら室温に加温した。ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（８０ｇカラム、０〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製すると、エチル７−メトキシ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（５１６ｍｇ、５５％）が得られた。
【０１６６】
エチル７−メトキシ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（５１６ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１７ｍＬ）溶液に、１ＭのＬｉＯＨ（４．２ｍＬ、４．２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を一晩加熱還流した。分析により、少量の未反応の出発物質の存在が示されたので、少量のエタノールを加えて、物質の可溶化を促進した。さらに２時間、加熱を継続し、その後、乾燥するまで濃縮した。残渣を１ＮのＨＣｌで摩砕し、固体を濾過により単離し、水で洗浄し、一晩空気乾燥させると、表題化合物がオフホワイト色の固体（４１７ｍｇ、９１％）として得られた。
【０１６７】
酸調製２
３−エチル−７−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０１６８】
【化２６】
0005435592.tif 000028
セミカルバジドＨＣｌ（６１．２ｇ、５３４ｍｍｏｌ）、エチル−メチルケトン（３５ｇ、０．４９ｍｏｌ）の水（５２５ｍＬ）溶液に、酢酸ナトリウム（７９．７ｇ、９７２ｍｍｏｌ）を室温で加え、１８時間維持した。反応混合物を濾過し、得られた固体をエーテル（２×２５ｍＬ）で洗浄し、７０℃で２０時間乾燥させると、ブタン−２−オンセミカルバゾン（４５ｇ、７２％）が白色の固体として得られた。1H NMR (CDCl3) δ 7.9 (br, 1H), 5.0-6.0 (br, 2H), 2.3 (q,
2H), 1.82 (s, 3H), 1.1 (t, 3H).
【０１６９】
０℃の冷たいＤＭＦ（５０ｍＬ）に、ＰＯＣｌ３（３０ｍＬ）を３０分にわたって滴下添加し、０℃で１時間維持した。混合物に、ブタン−２−オンセミカルバゾン（１０ｇ、７８ｍｍｏｌ）を少量ずつ０℃で加え、７０℃で４時間維持した。混合物を粉砕氷（７００ｇ）に注ぎ、１０％ＮａＯＨ溶液を使用して中和し、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）を使用して抽出した。合わせた有機層を水（２×８０ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮すると、粗製生成物が得られ、これを、カラムクロマトグラフィー（６０〜１２０メッシュシリカゲル）によりクロロホルム中３〜５％のメタノールを溶離剤として使用して精製すると、３−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド（１．５ｇ、１６％）が固体として得られた。1H NMR (CDCl3) δ
9.95 (s, 1H), 8.0 (s, 1H), 3.0 (q, 2H), 1.35 (t, 3H).
【０１７０】
３−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド（２．２ｇ、１８ｍｍｏｌ）およびコハク酸ジエチル（１２．３ｇ、７１．０ｍｍｏｌ）のｔ−ブタノール（１５ｍＬ）溶液に、ｔ−ＢｕＯＫ（８．０８ｇ、５３．２ｍｍｏｌ）のｔ−ブタノール（１０ｍＬ）溶液を加えた。混合物を８０℃に３時間加熱し、その後、混合物を濃縮した。得られた残渣を水（３０ｍＬ）に溶かし、６ＮのＨＣｌを使用して酸性化し（ｐＨ約２）、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた水性層を酸性化（ｐＨ約２）し、酢酸エチル（２×７５ｍＬ）で抽出した。合わせた酢酸エチル層を飽和ＮａＣｌ水溶液（２５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮すると、エチル２−［（３−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチレン］−４−オキソペンタノエート（４ｇ、１００％）がゴムとして得られ、これを、そのまま、次のステップに入れた。
【０１７１】
粗製のエチル２−［（３−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチレン］−４−オキソペンタノエート（４ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）の無水酢酸（１０ｍＬ）溶液に、酢酸ナトリウム（２．６ｇ、３２ｍｍｏｌ）を室温で加え、混合物を４時間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、ＮａＨＣＯ３水溶液を使用して塩基性（ｐＨ約９）にし、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（２５ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ水溶液（２５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮すると、粗製生成物が得られ、これを、カラムクロマトグラフィー（６０−１２０メッシュシリカゲル）により石油エーテル中２〜３％の酢酸エチルを溶離剤として使用して精製すると、エチル１−アセチル−７−（アセチルオキシ）−３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（１．７ｇ、３４％）が茶色の固体として得られた。1H NMR (CDCl3) δ 8.44 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 4.58 (q,
2H),3.2 (s, 3H), 2.9 (s, 3H), 2.58 (s, 3H), 1.6 (t, 3H).
【０１７２】
１−アセチル−７−（アセチルオキシ）−３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（４．０ｇ、１３ｍｍｏｌ）のエタノール（４５０ｍＬ）溶液に、６０％ＮａＨ（０．５０ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）を徐々に加えた。混合物を１時間撹拌し、その後、濃縮し、大部分のエタノールを除去した。残渣をＥｔＯＡｃに入れ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄した。水相をＥｔＯＡｃ（２×）で逆抽出した。合わせた有機抽出物を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。固体をＣＨ２Ｃｌ２で摩砕すると、エチル３−エチル−７−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレートがオフホワイト色の固体（２９ｇ、８７％）として得られた。
【０１７３】
エチル３−エチル−７−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（２．４７ｇ、１０．５ｍｍｏ）のＤＭＦ（４０ｍＬ）溶液を０℃に冷却した。この混合物に、６０％ＮａＨ（０．４２ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。これに、０℃のヨードメタン（１．５０ｇ、０．６６ｍＬ、１０．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液を加えた。混合物を０℃で数時間維持し、その後、室温で一晩撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液および飽和ＮａＣｌ水溶液の混合物で、続いて、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（８０ｇカラム、０〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製すると、エチル３−エチル−７−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（２．６２ｇ、４０％）が得られた。
【０１７４】
３−エチル−７−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（１．０５ｇ、４．２３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３５ｍＬ）溶液に、１ＭのＬｉＯＨ（８．４６ｍＬ、８．４６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を一晩加熱還流した。混合物を濃縮し、残渣を１ＮのＨＣｌと共に摩砕した。沈殿物を水で洗浄し、空気乾燥させた。次いで、固体を温メタノールに入れ、濾過し、濃縮し、高真空下で一晩乾燥させると、表題化合物がオフホワイト色の固体（８４９ｍｇ、９１％）として得られた。
【０１７５】
酸調製３
７−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０１７６】
【化２７】
0005435592.tif 000029
３−ブロモピラゾール（５０ｇ、０．３４ｍｏｌ）をＴＨＦ（３１０ｍＬ）に溶かし、テトラヒドロピラン（３１０ｍｌ、３．４ｍｏｌ）およびＤＤＱ（７．７ｇ、０．０３４ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１時間加熱還流し、蒸発させた。残渣をクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：６）により精製すると、４−ブロモ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（６１ｇ、７８％）が得られた。
【０１７７】
４−ブロモ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（６１ｇ、０．２６４ｍｏｌ）をＴНＦ（４００ｍＬ）に溶かした。次いで、１．６Ｍのｎ−ＢｕＬｉ（１８１ｍＬ）を、−９５℃の溶液に加えた。反応混合物を同じ温度で４５分間にわたって撹拌した。次いで、ＤＭＦ（２２．４ｍＬ、０．２９ｍｏｌ）を加えた（同じ温度を維持した）。混合物を室温まで加熱し、その後、水（１００ｍＬ）を加えた。有機層を分離し、水相をエーテル（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残渣をクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：４）により精製すると、１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド（２９ｇ、５７％）が得られた。
【０１７８】
ｔ−ＢｕＯＫ（４９ｇ、０．５１ｍｏｌ）のｔ−ＢｕＯＨ（３００ｍＬ）溶液を１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボアルデヒド（２９ｇ、０．１６ｍｏｌ）およびコハク酸ジエチル（１２１ｍＬ、０．７２ｍｏｌ）の混合物に加えた。得られた溶液を５時間にわたって加熱還流し、水（３００ｍＬ）に注いだ。生じた混合物をＥｔＯＡｃで洗浄した。水性層をｐＨ２に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。溶媒を蒸発させた。得られた（３Ｅ）−３−（エトキシカルボニル）−４−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ブト−３−エン酸（４５ｇ）のオイルを、さらに精製することなく、次のステップで使用した。
【０１７９】
粗製（３Ｅ）−３−（エトキシカルボニル）−４−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ブト−３−エン酸（４５ｇ）を無水酢酸（５００ｍＬ）およびＮａＯＡｃ（１２ｇ、０．１４６ｍｏｌ）と混合した。反応混合物を５時間にわたって加熱還流し、蒸発させた。残渣をＮａ２ＣＯ３水溶液でｐＨ８〜９にアルカリ化した。生成物をＥｔＯＡｃ（５×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ、蒸発させた。残渣をクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：４）により精製すると、エチル７−（アセチルオキシ）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（１３ｇ、２５％）が得られた。
【０１８０】
エチル７−（アセチルオキシ）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（６ｇ、０．０１８ｍｏｌ）をＥｔＯＨ（１００ｍＬ）に溶かし、Ｋ２ＣＯ３（７ｇ、０．０５ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を６時間にわたって加熱還流し、蒸発させた。残渣を水（１５０ｍＬ）で処理し、生成物をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を蒸発させ、残渣をクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：４）により精製すると、エチル７−ヒドロキシ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（４ｇ、８５％）が得られた。
【０１８１】
Ｋ２ＣＯ３（７６０ｍｇ、５．５０ｍｍｏｌ）を含有するエチル７−ヒドロキシ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（１．４５ｇ、５．０ｍｍｏｌ）のアセトン（２０ｍＬ）溶液に、ヨードメタン（７８１ｍｇ、０．３４ｍＬ、５．５ｍｍｏ）を加えた。混合物をＮ２下で一晩加熱還流した。混合物を室温に冷却し、濾過し、蒸発させ、ＥｔＯＡｃと水に分配した。水相を追加のＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、粗製生成物が得られた。粗製物質をクロマトグラフィー（Ｉｓｃｏ、０〜４０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）により精製すると、物質が得られ、これを、高真空下で一晩乾燥させると、エチル７−メトキシ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（１．４０ｇ、９２％）が得られた。
【０１８２】
エチル７−メトキシ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（９８０ｍｇ、４．４５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）、水（１０ｍＬ）およびＬｉＯＨ（５６０ｍｇ、１３．４ｍｍｏｌ）混合物を４０℃で３時間加熱し、次いで、室温で一晩撹拌した。反応が完了しなかったので、混合物を４５℃に加熱し、一晩加熱した。次いで、混合物を乾燥するまで濃縮し、濃ＨＣｌを用いてｐＨ６に酸性化し、ＥｔＯＡｃと水に分配した。生じた固体を真空濾過により集め、ＥｔＯＡｃですすぎ、高真空下で乾燥させると、白色の固体が得られた。有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、オフホワイト色の固体が得られた。白色の固体の両方のバッチを合わせると、表題化合物（６４２ｍｇ、７５％）が得られた。
【０１８３】
酸調製４
７−フルオロ−４−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸
【０１８４】
【化２８】
0005435592.tif 000030
２−メトキシ−５−フルオロベンズアルデヒド（１．００ｇ、６．４９ｍｍｏｌ）およびアジド酢酸エチル（１４．０ｇ、３２．４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２０ｍＬ）溶液に−２０℃（アセトニトリル／ドライアイス）で、酢酸ナトリウムのＥｔＯＨ溶液を２０分にわたって加えた。添加が完了したら、反応物を０℃に徐々に加温し、そこで、これを２時間維持した。次いで、懸濁液を氷および固体ＮＨ４Ｃｌの混合物に注ぎ、全ての氷が溶けるまで撹拌し、生成物を集めた。粗製生成物をＣＨ２Ｃｌ２に溶かし、ＭｇＳＯ４を加えた。懸濁液をシリカゲルの小さなプラグで濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。濃縮すると、エチル２−アジド−３−（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）アクリレートが黄色の固体として得られ、これを、さらに精製することなく使用した（１．６８ｇ、９８％）。
【０１８５】
加熱還流されたキシレン（１５０ｍＬ）に、エチル２−アジド−３−（５−フルオロ−２−メトキシフェニル）アクリレート（１．５０ｇ、５．６６ｍｍｏｌ）のキシレン（５０ｍＬ）溶液を加えた。混合物を４時間加熱還流し、室温に冷却し、元の体積の約１／５まで濃縮した。溶液を−２０℃に２時間冷却し、固体を真空濾過により集めた。固体を冷たいキシレンで洗浄し、真空下で乾燥させると、エチル７−フルオロ−４−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボキシレートが得られた。母液を濃縮すると、追加の生成物が得られた。固体を合わせると、最終生成物（０．７５ｇ、５６％）が得られた。
【０１８６】
エチル７−フルオロ−４−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボキシレート（１．００ｇ、４．２２ｍｍｏｌ）のエタノール溶液に、ＫＯＨ（４７３ｍｇ、８．４３ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１２時間撹拌し、０℃に冷却し、１ＮのＨＣｌで酸性化した。混合物をＥｔＯＡｃおよびＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、表題化合物（５５０ｍｇ、６２％）が得られた。
【０１８７】
酸調製５
３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０１８８】
【化２９】
0005435592.tif 000031
０℃に冷却された３−ブロモベンズアルデヒド（４２．５ｇ、２０９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３００ｍＬ）溶液に、ＭｅＭｇＣｌ（１７．２ｇ、２３０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（１００ｍＬ）でクエンチし、ジエチルエーテル（２×２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（２×１００ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮すると、１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−エタノール（１７ｇ、３７％）がオイルとして得られた。1H NMR (CDCl3): δ 7.6-7.7 (d, 1H), 7.3-7.4 (m, 1H), 6.8-6.9
(t, 1H), 5.1-5.2 (m, 1H), 1.8-1.9 (br, 1H), 1.46-1.55 (d, 3H).
【０１８９】
１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−エタノール（３７ｇ、１６８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍＬ）溶液および重クロム酸ピリジニウム（１２７ｇ、３３７ｍｍｏｌ）に、分子ふるい（１０ｇ）を加えた。混合物を室温で２０時間撹拌した。混合物を珪藻土で濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１００ｍＬ）で洗浄し、濃縮した。粗製生成物を、カラムクロマトグラフィー（６０−１２０メッシュシリカゲル）により石油エーテル中１０％の酢酸エチルを使用して精製すると、１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−エタノン（２３ｇ、６３％）が淡茶色オイルとして得られた。1H NMR (CDCl3): δ 7.9-8.1 (d, 1H), 7.5-7.7 (m, 1H), 6.95-7.1
(t, 1H), 2.6-2.7 (d, 3H).
【０１９０】
１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−エタノン（１０ｇ、４６ｍｍｏｌ）のヒドラジン水和物（８０ｍＬ）溶液を２０時間加熱還流した（１３０℃）。反応混合物を室温に冷却し、過剰のヒドラジン水和物を除去し、粗製残渣を、カラムクロマトグラフィー（６０−１２０メッシュシリカゲル）により石油エーテル中１０％の酢酸エチルを溶離剤として使用して精製すると、５−ブロモ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール（７．０９ｇ、７３％）が固体として得られた。1H NMR (CDCl3): δ 10.2-10.6 ( br, 1H), 7.8-7.9 (s, 1H),
7.4-7.5 (d, 1H), 7.2-7.4 (d, 1H),2.5-2.7 (s, 3H).
【０１９１】
５−ブロモ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール（１０ｇ、４７．６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１６０ｍＬ）溶液に、ＰｄＣｌ２・ｄｐｐｆ（５．５７ｇ、７．６２ｍｍｏｌ）、ＮａＯＡｃ（１１．７ｇ、１４２．８５ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（５ｍＬ）を加え、脱ガスした（Ｎ２ガスを３回使用して）。混合物を密閉し、ＣＯガス（６０ｐｓｉ）を充填し、８０℃で２０時間加熱した。反応混合物を濃縮すると、残渣が得られ、これを、水（１００ｍＬ）で希釈し、１０％クエン酸水溶液で酸性化し、酢酸エチル（３×２００ｍＬ）を使用して抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸メチルエステル（７．２３ｇ、８０％）が固体として得られた。1H NMR (CDCl3): δ 9.6-10.2 ( br, 1H), 8.4-8.6 (s, 1H),
8.0-8.2 (d, 1H), 7.4-7.5 (d, 1H), 3.9-4.05 (s, 3H), 2.55-2.7 (s, 3H).
【０１９２】
１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸メチルエステル（８ｇ、４２．１ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ（５．０５ｇ、２１１ｍｍｏｌ）のメタノール（１００ｍＬ）および水（３５ｍＬ）溶液を室温で２０時間撹拌した。この時間の終了時に、反応混合物を濃縮し、水性残渣を、１０％クエン酸水溶液（１５０ｍＬ）を使用して酸性化し（ｐＨ約６）、固体を濾過すると、粗製生成物が得られ、これを、水（３×３０ｍｌ）で洗浄し、よく乾燥させると、表題化合物（７ｇ、９５％）が淡茶色の固体として得られた。1H NMR (CDCl3): δ 8.5(s, 1H), 8.0-8.1 (d, 1H), 7.45-7.55 (d,
1H), 2.5-2.66 (s, 3H),
【０１９３】
酸調製６
３−プロピル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０１９４】
【化３０】
0005435592.tif 000032
Ｍｇ（０．２３６ｇ、９．８３ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（１０ｍＬ）懸濁液に、Ｉ２（１スパチュラ）、臭化ｎ−プロピル（０．７２ｇ、０．５３ｍＬ、５．９ｍｍｏｌ）を室温で加えた。ヨウ素の色が消失したら、エーテル中の残りの臭化ｎ−プロピルを反応混合物に加え、室温で１０分間撹拌した。このグリニャール試薬に、エーテル中の５−ブロモ−２−フルオロベンズアルデヒド（１．００ｇ、４．９２ｍｍｏｌ）を冷却条件下で加え、室温で１時間撹拌した。反応混合物をＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、エーテルで抽出した。エーテル層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−ブタン−１−オール（１．１４ｇ、９２．６％）が得られた。1H NMR (CDCl3): δ 7.6 (m, 1H), 7.3-7.4 (m, 1H), 6.9 (t, 1H),
5.0 (brs, 1H), 2.0 (brs, 1H), 1.6-1.7 (m, 2H), 1.3-1.5 (m, 2H), 1.0 (t, 3H).
【０１９５】
１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−ブタン−１−オール（６．２ｇ、２５ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）溶液に、重クロム酸ピリジニウム（１９．０ｇ、５０．３ｍｍｏｌ）および分子ふるい粉末（１．２４ｇ）を室温で加え、一晩撹拌した。反応混合物を珪藻土で濾過し、ジエチルエーテル（２００ｍＬ）で洗浄した。合わせたＣＨ２Ｃｌ２およびエーテル層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、粗製生成物が得られ、これを、カラムクロマトグラフィーにより５％酢酸エチル／石油エーテルを溶離剤として使用して精製すると、１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）ブタン−１−オン（４．６ｇ、７５％）がシロップとして得られた。1H NMR (CDCl3): δ 8.0 (m, 1H), 7.5-7.6 (m, 1H), 7.0 (t, 1H),
2.9-3.0 (m, 2H), 1.7 (q, 2H), 1.0 (t, 3H).
【０１９６】
ＴＨＦ中の１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）ブタン−１−オン（２．０ｇ、８．１ｍｍｏｌ）に、ＴＨＦ中の無水ヒドラジン（１１ｍＬ）を加え、５〜６時間加熱還流した（６０〜７０℃）。キシレンを反応混合物に加え、２０〜２４時間加熱還流した。反応混合物を濃縮すると、粗製生成物が得られ、これを、カラムクロマトグラフィーにより１５％酢酸エチル／石油エーテルを溶離剤として使用して精製すると、５−ブロモ−３−プロピル−１Ｈ−インダゾール（１．０２ｇ、５２．３％）が固体として得られた。1H NMR (CDCl3): δ 7.9
(s, 1H), 7.4 (d, 1H), 7.3 (d, 1H), 2.9 (t, 2H), 1.8 (q, 2H), 1.0 (t, 3H).
【０１９７】
ジエチルエーテル（６０ｍＬ）中の５−ブロモ−３−プロピル−１Ｈ−インダゾール（１．００ｇ、４．１８ｍｍｏｌ）に、ペンタン中１．３Ｍのｔ−ＢｕＬｉ（１０．９ｍＬ、１４．２ｍｍｏｌ）を−７８℃、Ｎ２雰囲気下で徐々に加えた。１時間後に、ＣＯ２ガスを反応混合物に−７８℃で１時間通過させ、室温に徐々に加温する。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、エーテル層を分離した。水性層を２ＮのＨＣｌで酸性化し、酢酸エチルで抽出すると、表題化合物（３５０ｍｇ、４０．８％）がオフホワイト色の固体として得られた。1H NMR (DMSO-d6): δ 11.8-13.0 (br, 1H), 8.4 (s, 1H), 7.9 (d,
1H), 7.5 (d, 1H), 3.0 (q, 2H), 1.8 (q, 2H), 0.9 (t, 3H). mp: 296-299℃.
【０１９８】
酸調製７
３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０１９９】
【化３１】
0005435592.tif 000033
５−ブロモ−２−フルオロベンズアルデヒド（１０ｇ、４９ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（２０ｍＬ）溶液に１５℃で、ＥｔＭｇＢｒ（７．２２ｇ、５４．２ｍｍｏｌ）を１５℃で滴下添加した。混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を冷水およびＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチした。これをジエチルエーテルで抽出し、エーテル層を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮すると、１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）プロパン−１−オール（１２．１ｇ、９８％）がシロップとして得られた。1H NMR (CDCl3): δ 7.6-7.7 (m, 1H), 7.2-7.3 (m, 1H), 6.9 (t,
1H), 4.9 (brs, 1H), 1.8 (m, 2H), 1.0 (t, 3H).
【０２００】
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）プロパン−１−オール（１２．１ｇ、６４．８ｍｍｏｌ）に、重クロム酸ピリジニウム（７３．２ｇ、１９４ｍｍｏｌ）および粉末化分子ふるいを加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を珪藻土パッドで濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した。合わせたエーテルおよびＣＨ２Ｃｌ２層を集め、真空下で濃縮すると、１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）プロパン−１−オン（１２．６ｇ、９８％）がシロップとして得られた。1H NMR (CDCl3): δ
7.9-8.0 (m, 1H), 7.5-7.6 (m, 1H), 7.0 (t, 1H), 3.0-3.1 (m, 2H), 1.2 (t, 3H).
【０２０１】
１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）プロパン−１−オン（１０ｇ、４３ｍｍｏｌ）に、無水ヒドラジン（５３ｍＬ）を加え、２日間加熱還流した（７０〜７５℃）。過剰のヒドラジンを真空下で、反応混合物から留去した。これに、キシレン（６０ｍＬ）を加え、混合物を３日間１４５〜１５０℃に加熱した。キシレンを真空下で完全に濃縮すると、粗製生成物が得られ、これを、カラムクロマトグラフィーにより８％酢酸エチル／石油エーテルを溶離剤として使用して精製すると、５−ブロモ−３−エチル−１Ｈ−インダゾール（４ｇ、４０％）が固体として得られた。1H NMR (CDCl3): δ 9.6-10.0 (br, 1H), 7.9 (s, 1H), 7.5 (d,
1H), 7.3 (d, 1H), 3.0 (q, 2H), 1.4 (t, 3H).
【０２０２】
−７８℃の５−ブロモ−３−エチル−１Ｈ−インダゾール（５ｇ、２２ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（１５０ｍＬ）溶液に、ｔ−ＢｕＬｉ（４．８４ｇ、７５．６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を−７８℃で１時間撹拌した。無水ＣＯ２ガスを反応混合物に−７８℃で１時間通過させ、温度を室温まで徐々に２時間上昇させた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチした。エーテル層を分離し、濃縮して、未反応の出発物質を回収した。水性層のｐＨを、２ＮのＨＣｌを用いて酸性にし、これを濾過すると、表題化合物（２ｇ、４７％）が淡茶色の固体として得られた。1H NMR (DMSO-d6): δ 12.6-13.0 (br, 2H), 8.4 (s, 1H), 7.9 (d,
1H), 7.5 (d, 1H), 3.0 (q, 2H), 1.4 (t, 3H).
【０２０３】
酸調製８
７−クロロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２０４】
【化３２】
0005435592.tif 000034
１−（２−アミノ−５−ブロモフェニル）エタノン（２００ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液に、Ｎ−クロロスクシンイミド（１２５ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。分析により、反応が完了していないことが示されたので、追加のＮ−クロロスクシンイミド（１２５ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（４０ｇカラム、０〜１０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）により精製すると、１−（２−アミノ−５−ブロモ−３−クロロフェニル）エタノン（２０６ｍｇ、８９％）が得られた。
【０２０５】
０℃の１−（２−アミノ−５−ブロモ−３−クロロフェニル）エタノン（２０６ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）の５０％濃Ｈ２ＳＯ４水溶液中の溶液に、ＮａＮＯ２（７３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を徐々に加えた。冷却浴を外し、続いて、ＮａＮＯ２を加え、室温で１時間撹拌し、次いで、０℃に再冷却し、その後、ＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏ（５７３ｍｇ、２．４９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で１時間撹拌し、その後、水で希釈した。固体を真空濾過により集めると、５−ブロモ−７−クロロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール（１３０ｍｇ、６４％）が得られた。
【０２０６】
マイクロ波管に５−ブロモ−７−クロロ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール（６１０ｍｇ、２．４８ｍｍｏｌ）、ジオキサン（５ｍＬ）、Ｈｅｒｍａｎｎ触媒（１１９ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（７９０ｍｇ、７．４６ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）溶液を投入した。混合物を２０秒間撹拌し、マイクロ波反応器中、非常に高い吸収設定で、１６５℃で３０分間加熱した。反応物を、取り扱い前にガス抜きした。混合物を珪藻土で濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を濃縮し、残渣を水に溶かし、濃ＨＣｌでｐＨ約３に酸性化した。固体を濾過により集め、乾燥させると、表題化合物（４２０ｍｇ、８２％）が得られた。
【０２０７】
酸調製９
３−エチル−７−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２０８】
【化３３】
0005435592.tif 000035
０℃のエチル３−エチル−７−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（酸調製２に記載されている通りに調製）（５０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、６０％ＮａＨオイル分散液（８．５ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を３０分間撹拌し、その後、ヨードメタン（０．０１１ｍＬ、０．１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を０℃で２時間維持し、その後、一晩撹拌しながら室温に徐々に加温した。反応物をＥｔＯＡｃおよび飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で希釈した。有機相を単離し、水相をＥｔＯＡｃ（２×）で逆抽出した。合わせた有機抽出物を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製生成物をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（１２ｇカラム、０〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製すると、３−エチル−７−メトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（２２ｍｇ、４１％）およびエチル３−エチル−７−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（４６ｍｇ、６０％）が得られた。
【０２０９】
エチル３−エチル−７−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（５２ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．５ｍＬ）溶液に、１ＭのＬｉＯＨ（０．３６ｍＬ、０．３６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を一晩加熱還流した。反応物を室温に冷却し、濃縮し、１ＮのＨＣｌで摩砕し、次いで、濾過された固体を水で洗浄し、空気乾燥させると、表題化合物（４６ｍｇ、９４％）が得られた。
【０２１０】
酸調製１０
７−エトキシ−３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２１１】
【化３４】
0005435592.tif 000036
０℃のエチル３−エチル−７−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（酸調製２に記載されている通りに調製）（９３２ｍｇ、３．９８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２８ｍＬ）溶液に、６０％ＮａＨオイル分散液（１５９ｍｇ、３．９８ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を０℃で１時間撹拌し、その後、ヨードエタン（０．３２ｍＬ、３．９８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液を滴下添加した。混合物を０℃で数時間維持し、その後、冷却浴を外し、一晩撹拌しながら反応物を室温に加温した。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、次いで、有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（８０ｇカラム、０〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製すると、エチル７−エトキシ−３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（３８９ｍｇ、３７％）およびエチル７−エトキシ−１，３−ジエチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（２０２ｍｇ）が得られた。
【０２１２】
エチル７−エトキシ−３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（３８９ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１３ｍＬ）溶液に、１ＭのＬｉＯＨ（３．０ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を一晩加熱還流した。反応物に、痕跡量のエタノールを加えて、物質の溶解を促進した。加熱還流をさらに２時間継続した。反応物を室温に冷却し、濃縮し、１ＮのＨＣｌで摩砕し、次いで、濾過された固体を水で洗浄し、空気乾燥させると、表題化合物（３４７ｍｇ、９７％）が得られた。
【０２１３】
酸調製１１
１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２１４】
【化３５】
0005435592.tif 000037
撹拌されている６０％ＮａＨオイル分散液（８７ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）懸濁液に、メチル１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（２６４ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、その後、ヨードメタン（０．１１ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）を滴下添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、濃縮し、残渣をＢｉｏｔａｇｅクロマトグラフィー（４０Ｓカラム、１５％アセトン／ヘプタン）により精製すると、メチル１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（１０７ｍｇ、３８％）が得られた。
【０２１５】
メチル１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（１０７ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）のメタノール／水（Ｖ：Ｖ、１：１、４ｍＬ）溶液に、ＬｉＯＨ（４８ｍｇ）を加えた。溶液を４０℃で３時間加熱し、その後、室温に冷却した。混合物を水で希釈し、ＫＨＳＯ４でｐＨ３．５〜４に酸性化した。固体が沈殿し、濾過により単離し、真空下で乾燥させると、表題化合物が黄色の固体（７０ｍｇ、７１％）として得られた。
【０２１６】
酸調製１２
２，７−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２１７】
【化３６】
0005435592.tif 000038
７−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（３５６ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．８５ｇ、６．２ｍｍｏｌ）およびヨードメタン（０．４５ｍＬ、７．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４時間撹拌し、次いで、５０℃で一晩加熱した。反応物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。有機抽出物を濃縮し、Ｂｉｏｔａｇｅクロマトグラフィー（４０Ｓ  カラム、２５〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）により精製すると、メチル１，７−ジメチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（９１ｍｇ、２２％）およびメチル２，７−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（１４１ｍｇ、３５％）が得られた。
【０２１８】
メチル２，７−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（１４０ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）のメタノール／水（Ｖ：Ｖ  １：１、２ｍＬ）溶液に、ＬｉＯＨ（３８ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を５０℃で１時間加熱し、室温に冷却し、濃縮し、ＫＨＳＯ４でｐＨ２に酸性化した。固体物質を濾過により単離すると、表題化合物が白色の固体（１４０ｍｇ、１０７％）として得られた。
【０２１９】
酸調製１３
２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２２０】
【化３７】
0005435592.tif 000039
メチル１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（２．５ｇ、１４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４５ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（４．９０ｇ、３５．５ｍｍｏｌ）を、続いて、ヨードメタン（１．７７ｍＬ、２８．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌し、次いで、５０℃で一晩加熱した。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに溶かし、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（８０ｇカラム、２５〜４５％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）により精製すると、メチル１−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（１．０７ｇ、４０％）およびメチル２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（２２７ｍｇ、８．４％）が得られた。
【０２２１】
メチル２−メチル−２Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（２１０ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）溶液に、１．０ＭのＬｉＯＨ（１．２ｍＬ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を４０℃で一晩撹拌した。室温に冷却した後に、１ＮのＨＣｌ（１．１７ｍＬ、１．１当量）を加えた。溶液を冷却し、固体を濾過により単離した。固体を真空炉中、５０℃で乾燥させると、表題化合物（１４７ｍｇ、７６％）が得られた。
【０２２２】
酸調製１４
３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２２３】
【化３８】
0005435592.tif 000040
２−フルオロ−４−メトキシアクトフェノン（ｍｅｔｈｏｘｙａｃｔｏｐｈｅｎｏｎｅ）（２．０ｇ、１２ｍｍｏｌ）のヒドラジン水和物（３０ｍＬ）溶液を２日間加熱還流した。混合物を室温に冷却し、水に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。有機抽出物を濃縮し、最小量のＣＨ２Ｃｌ２に溶かし、濾過すると、６−メトキシ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール（３７０ｍｇ、１９％）が得られた。濾液を再濾過すると、追加の生成物（２５０ｍｇ、１３％）が得られた。
【０２２４】
氷冷された６−メトキシ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール（６２０ｍｇ、３．８２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）溶液に、ＢＢｒ３のＣＨ２Ｃｌ２（１Ｍ、１７ｍＬ）溶液を加えた。氷浴を外し、反応物を室温に加温し、一晩撹拌した。氷冷された飽和ＮａＨＣＯ３水溶液に徐々に注ぐことにより、溶液を慎重にクエンチした。相を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせた有機抽出物を濃縮し、粗製物質をＢｉｏｔａｇｅ（４０Ｓカラム、４５〜６０％アセトン／ヘプタン）により精製すると、３−メチル−１Ｈ−インダゾール−６−オール（４５８ｍｇ、８１％）が得られた。
【０２２５】
３−メチル−１Ｈ−インダゾール−６−オール（４５８ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液を、６０％ＮａＨオイル分散液（０．５０ｇ、１３ｍｍｏｌ）で処理した。当初の泡立ちの後に、溶液を５０℃で１時間加熱し、その後、室温に冷却した。これに、Ｎ−フェニルトリフルオロメタンスルホンイミド（２．５０ｇ、７．００ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌し、その後、水に注いだ。水相をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出し、合わせた有機抽出物を濃縮した。粗製生成物をＢｉｏｔａｇｅ（４０Ｍカラム、１２％アセトン／ヘプタン）により精製し、続いて、Ｂｉｏｔａｇｅ（４０Ｓカラム、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）により再精製すると、３−メチル−１−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−１Ｈ−インダゾール−６−イルトリフルオロメタンスルホネート（１．１３ｇ、８９％）が得られた。
【０２２６】
３−メチル−１−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−１Ｈ−インダゾール−６−イルトリフルオロメタンスルホネート（０．６１ｇ、１．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６ｍＬ）溶液を、ＣＯで５分間フラッシュした。溶液を酢酸パラジウム（６８ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（１６７ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．３３ｇ、０．４５ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）およびメタノール（４ｍＬ）で処理した。混合物を室温でＣＯ（１ａｔｍ）下で撹拌した。溶液を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせた有機抽出物を濃縮し、Ｂｉｏｔａｇｅ（４０Ｓカラム、８％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）により精製すると、メチル３−メチル−１−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート（３３０ｍｇ、６９％）が得られた。
【０２２７】
メチル３−メチル−１−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−１Ｈ−インダゾール−６−カルボキシレート（５９０ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）のメタノール／水（３：１、７２ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１．０１ｇ、７．３１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２時間加熱還流した。反応物を室温に冷却し、メタノールを減圧下で除去した。水溶液をＫＨＳＯ４でｐＨ３〜３．５に酸性化した。固体を濾過により単離し、ＥｔＯＡｃに溶かし、水で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、表題化合物（２５９ｍｇ、８０％）が得られた。
【０２２８】
酸調製１５
３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸
【０２２９】
【化３９】
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２−ブロモマロンアルデヒド（４．０ｇ、３０ｍｍｏｌ）およびメチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（２．５７ｇ、２６．５ｍｍｏｌ）の酢酸（４０ｍＬ）溶液を１１６℃に２．５時間加熱した。次いで、反応物を室温で２日間撹拌した。溶液を濃縮し、残渣をメタノールに入れ、珪藻土で濾過し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（２〜５％ＣＨ２Ｃｌ２／メタノール）により精製すると、５−ブロモ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（５１５ｍｇ、９％）が得られた。
【０２３０】
マイクロ波管に、５−ブロモ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（５１５ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ）、ジオキサン（２ｍＬ）、Ｈｅｒｍａｎｎ触媒（７２．１ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（７７２ｍｇ、７．２９ｍｍｏｌ）の水（５ｍＬ）溶液を投入した。混合物を２０秒間撹拌し、マイクロ波反応器中、非常に高い吸収設定で、１６５℃で１５分間加熱した。反応物を、取り扱い前にガス抜きした。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、５分間撹拌し、その後、珪藻土で濾過すると、表題化合物（１２４ｍｇ、２９％）が得られた。
【０２３１】
酸調製１６
３，７−ジメチル−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸
【０２３２】
【化４０】
0005435592.tif 000042
４−ブロモ−２−メチルアニリン（２．００ｇ、１０．８ｍｍｏｌ）を濃ＨＣｌ（１０ｍＬ）に溶かし、８０℃に３０分間加熱した。次いで、反応物を５℃に冷却し、ＮａＮＯ２（７８１ｍｇ、１０．８ｍｍｏｌ）の水（４ｍＬ）溶液を１０分にわたって加えた。生じた混合物を５℃で３０分間撹拌し、その後、濃ＨＣｌ（８ｍＬ）中のＳｎＣｌ２（１５．３ｇ、８０．６ｍｍｏｌ）を１０分にわたって加えた。混合物を室温で４５分間撹拌し、その後、５０％ＮａＯＨ水溶液を加えた。生じた沈殿物を濾過により単離し、濾液をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、（４−ブロモ−２−メチルフェニル）ヒドラジン（１．０８ｇ、５０％）が得られた。
【０２３３】
（４−ブロモ−２−メチルフェニル）ヒドラジン（１．４４ｇ、７．１６ｍｍｏｌ）のエタノール（１０ｍＬ）懸濁液に、プロピオンアルデヒド（０．６８ｍＬ、９．３ｍｍｏｌ）を加えた。溶液は透明になり、その混合物を室温で４５分間撹拌した。溶媒を除去し、無水ＺｎＣｌ２（１．０７ｇ、７．８８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１７０℃で３０分間加熱した。混合物を室温に冷却し、１０％ＨＣｌで希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、有機抽出物をＭｇＳＯ４上で乾燥させた。濾過および濃縮の後に、残渣をＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（０〜１０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）により精製すると、５−ブロモ−３，７−ジメチル−１Ｈ−インドール（３１７ｍｇ、２０％）が得られた。
【０２３４】
マイクロ波管に、５−ブロモ−３，７−ジメチル−１Ｈ−インドール（３１７ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）、ジオキサン（３ｍＬ）、Ｈｅｒｍａｎｎ触媒（４２．１ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（４５０ｍｇ、４．２４ｍｍｏｌ）の水（６ｍＬ）溶液を投入した。混合物を２０秒間撹拌し、マイクロ波反応器中、非常に高い吸収設定で、１６５℃で１５分間加熱した。反応物を、取り扱い前にガス抜きした。混合物を珪藻土で濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を濃縮し、残渣を水に溶かした。溶液をｐＨ３に酸性化し、固体を集めると、表題化合物（２５０ｍｇ、９３％）が得られた。
【０２３５】
酸調製１７
７−クロロ−３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２３６】
【化４１】
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三つ口丸底フラスコにＮ２下で、ＡｌＣｌ３（７７５ｍｇ、５．８１ｍｍｏｌ）を投入し、次いで、トルエン５．００ｍＬを加えた。スラリーを−１０℃に冷却し、４−ブロモアニリン（１．０ｇ、５．８１ｍｍｏｌ）を１回で加えた。これに、ＢＣｌ３（キシレン中１．０Ｍの溶液６．４ｍＬ）を混合物に−１０℃で徐々に加え、煙がもう生じなくなるまで、混合物をＮ２でパージした。プロピオイトリル（Ｐｒｏｐｉｏｉｔｒｉｌ）（１．８８ｍＬ、２５．６ｍｍｏｌ）を加え、温度を４５℃以下まで上昇させた。反応物を６３℃で１０分間加熱し、６３℃で５分間維持すると、均一な溶液が得られた。さらなるトルエン４．０ｍＬを別の三つ口フラスコに加え、Ｎ２下で加熱還流した。先のフラスコからの溶液をトルエンに還流で１０分にわたって加えた。混合物をさらに４時間加熱還流し、その間、反応物をＮ２でパージし続けた。このプロセスの間に、トルエンが失われ、必要な場合にはさらなるトルエンを混合物に加えた。反応物を室温に冷却し、水１０ｍＬを十分な撹拌下に約３０分間加えた。混合物を５５℃に加熱し、１５分間撹拌し、その後、２層に分離した。有機相を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、粗製の固体が得られた。残渣をカラムクロマトグラフィー（０〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン勾配）により精製すると、１−（２−アミノ−５−ブロモ−フェニル）−プロパン−１−オンが黄色の固体（１４４．０ｍｇ、１０．９％）として得られた。
【０２３７】
１−（２−アミノ−５−ブロモ−フェニル）−プロパン−１−オン（１４４．０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１０．０ｍＬ）に溶かし、Ｎ−クロロスクシンイミド（１６８．０ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）をこの溶液に加えた。生じた混合物を４５℃で一晩撹拌した。反応物を室温に冷却し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、１−（２−アミノ−５−ブロモ−３−クロロ−フェニル）−プロパン−１−オンが固体（１３０．０ｍｇ、７６．１％）として得られた。
【０２３８】
５０％Ｈ２ＳＯ４水溶液（２．５ｍＬ）およびＮａＮＯ２（４３．１ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）に溶かした１−（２−アミノ−５−ブロモ−３−クロロ−フェニル）−プロパン−１−オン（１３０．０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）をこの混合物に０℃で徐々に加えた。次いで、混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、ＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏ（３４２．０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃で１時間撹拌し、次いで、水で希釈した。白色の固体が生じ、濾過により集め、乾燥させると、５−ブロモ−７−クロロ−３−エチル−１Ｈ−インダゾールが固体（１２７．０ｍｇ、９８．８％）として得られた。
【０２３９】
マイクロ波管に、ジオキサン（１．０ｍＬ）に溶かした５−ブロモ−７−クロロ−３−エチル−１Ｈ−インダゾール（１２７．０ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を加えた。Ｈｅｒｍａｎｎ触媒（（トランス−ビス（アセタト）ビス［ｏ−（ジ−ｏ−トリルホスフィノ）ベンジル］ジパラジウム（ＩＩ）））（２３．０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）およびモリブデンヘキサカルボニル（６４．４ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）を、続いて、炭酸ナトリウム（１５６ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）の水（２．０ｍＬ）溶液を加えた。容器内で分離が生じる。混合物を２０秒間撹拌し、次いで、混合物を、マイクロ波照射下、非常に高い吸収設定で、１６５℃に１５分間加熱した。反応を止め、取り扱い前に、容器をガス抜きした。混合物を濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を濃縮し、残渣を水に再溶解させた。次いで、溶液をｐＨ約３に酸性化させた。固体を集め、乾燥させると、７−クロロ−３−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸が固体（９５．０ｍｇ、８６．４％）として得られた。
【０２４０】
酸調製１８
２，４−ジメチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−カルボン酸
【０２４１】
【化４２】
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５−ブロモ−３−メチルベンゼン−１，２−ジアミン（２０１ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１５ｍＬ）溶液に、５ＮのＨＣｌ（４ｍＬ）を加えた。混合物を加熱還流し、その後、２，４−ペンタンジオン（２００ｍｇ、０．２１ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）を加えた。加熱を４５分間継続し、その後、分析により、反応が完了したことが示された。反応物を室温に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で中和し、ＣＨＣｌ３で抽出した。有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮し、乾燥させると、６−ブロモ−２，４−ジメチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール（２１７ｍｇ、９６％）が得られた。
【０２４２】
６−ブロモ−２，４−ジメチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール（２００ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）の脱ガスジオキサン（２ｍＬ）溶液に、（（トランス−ビス（アセタト）ビス［ｏ−（ジ−ｏ−トリルホスフィノ）ベンジル］ジパラジウム（ＩＩ）））（３０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、モリブデンヘキサカルボニル（１２０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）およびＮａ２ＣＯ３（２８３ｍｇ、２．６７ｍｍｏｌ）の脱ガス水（２．４ｍｌ）溶液を加えた。混合物を２０秒間撹拌し、次いで、マイクロ波反応器中、１６５℃で１５分間加熱し、２０分間の非常に高い吸収設定を伴った。反応容器をガス抜きし、珪藻土で濾過した。溶液をＥｔＯＡｃで抽出し、水相をさらなるＥｔＯＡｃ（２×）で逆抽出した。合わせた有機抽出物を除去した。水（５ｍＬ）を水性抽出物に加え、次いで、０．５ＭのＨＣｌでｐＨ３に酸性化した。生じた固体を空気乾燥させると、表題化合物（９７ｍｇ、５７％）が得られた。
【０２４３】
酸調製１９
４−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−カルボン酸
【０２４４】
【化４３】
0005435592.tif 000045
５−ブロモ−３−メチルベンゼン−１，２−ジアミン（２．０２ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液に、水（１０ｍＬ）を、続いて、ギ酸（１．１６ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１００℃で６時間撹拌し、その後、室温に冷却した。固体が溶液から沈殿し、室温で２日間放置した。次いで、この混合物に、１ＮのＫＯＨ（３５ｍＬ）を加え、固体を真空濾過により単離した。固体を空気乾燥させ、ＣＨＣｌ３（７０ｍＬ）から再結晶化させると、６−ブロモ−４−メチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール（０．８２ｍｇ、３９％）が得られた。生成物のさらなるバッチが、ＣＨＣｌ３母液から得られた（１．０１ｇ、４８％）。
【０２４５】
６−ブロモ−４−ジメチル−１Ｈ−ベンズイミダゾール（１００ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）の脱ガスジオキサン（２ｍＬ）溶液に、（（トランス−ビス（アセタト）ビス［ｏ−（ジ−ｏ−トリルホスフィノ）ベンジル］ジパラジウム（ＩＩ）））（１６ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、モリブデンヘキサカルボニル（６４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）およびＮａ２ＣＯ３（１５０ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）の脱ガス水（２．４ｍｌ）溶液を加えた。混合物を２０秒間撹拌し、次いで、マイクロ波反応器中、１６５℃で１５分間加熱し、２０分間の非常に高い吸収設定を伴った。反応容器をガス抜きし、ＳＰＥカートリッジで濾過した。水溶液をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。有機抽出物を合わせ、濃縮した。残渣を水に溶かし、ｐＨ３に酸性化し、冷蔵庫で一晩貯蔵した。水性物質に、水（３ｍＬ）を加え、ｐＨ３。固体が溶液から沈殿し、濾過により単離した。固体を水で洗浄し、空気乾燥させると、生成物（４４ｍｇ、５３％）が得られた。放置すると、固体が母液から沈殿して、追加の生成物（３４ｍｇ、４１％）が得られた。
【０２４６】
酸調製２０
７−エチル−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２４７】
【化４４】
0005435592.tif 000046
７−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（５００ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１５ｍＬ）溶液に、濃Ｈ２ＳＯ４（０．２５ｍＬ）を加えた。混合物を一晩加熱還流した。溶媒を減圧下で除去すると、黄褐色の固体が得られ、これを、フラッシュクロマトグラフィー（４０ｇカラム）により１５〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンを使用して精製すると、メチル７−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（２５２ｍｇ、４７％）が得られた。
【０２４８】
メチル７−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（２５２ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（５５０ｍｇ、３．９８ｍｍｏｌ）およびＩ２（３７０ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、これに５％ＮａＨＳＯ３（１０ｍＬ）を、続いて、１：１のＥｔＯＡｃ／ＴＨＦ（５０ｍＬ）を加えた。有機層を単離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。固体をＣＨ２Ｃｌ２に懸濁させ、濾過により集め、乾燥させると、メチル７−エチル−３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（２９８ｍｇ、７３％）が得られた。
【０２４９】
メチル７−エチル−３−ヨード−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（１００ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（２．５ｍＬ）中の脱ガス溶液に、脱ガスされたボロキシン溶液（５０％、０．２８ｍＬ）を、続いて、パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン（３．５ｍｇ、０．００３ｍｍｏｌ）および２ＭのＮａ２ＣＯ３（０．５７ｍＬ）を加えた。混合物をマイクロ波反応器（非常に高い吸収設定）中、１２５℃で１０分間次いで、１６５℃で１０分間加熱した。反応物をＥｔＯＡｃで抽出し、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。有機抽出物を減らし、粗製物質を、シリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇカラム）により０〜４０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンを使用して精製すると、メチル７−エチル−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（１８ｍｇ、２７％）が得られた。
【０２５０】
メチル７−エチル−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（２４０ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１３ｍＬ）溶液に、１ＭのＬｉＯＨ（２．２ｍＬ）を加えた。混合物を一晩加熱還流し、室温に冷却した。溶媒を減圧下で除去し、生じた物質を１ＮのＨＣｌに懸濁させた。固体を真空濾過により単離し、水で洗浄し、４５℃、真空下で乾燥させると、デスメチル物質約１０％を含有する表題化合物（１５４ｍｇ、６９％）が得られた。
【０２５１】
酸調製２１
３−クロロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２５２】
【化４５】
0005435592.tif 000047
１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（１５５ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（８ｍＬ）懸濁液に、Ｎ−クロロスクシンイミド（１４２ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を一晩加熱還流し、その後、濃縮した。固体を水およびチオ硫酸ナトリウム水溶液に懸濁させ、１ＮのＨＣｌで酸性化し、固体を濾過により単離した。次いで、固体を水で洗浄し、真空下、５０℃で乾燥させると、表題化合物がオフホワイト色の固体（１５７ｍｇ、８４％）として得られた。
【０２５３】
酸調製２２
３−クロロ−７−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２５４】
【化４６】
0005435592.tif 000048
７−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（１８０ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（１０ｍＬ）懸濁液に、Ｎ−クロロスクシンイミド（１５０ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を一晩加熱還流し、その後、濃縮した。固体を水およびチオ硫酸ナトリウム水溶液に懸濁させ、１ＮのＨＣｌで酸性化し、固体を濾過により単離した。次いで、固体を水で洗浄し、乾燥させると、表題化合物が黄褐色の固体（２０８ｍｇ、９８％）として得られた。
【０２５５】
酸調製２３
７−エトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２５６】
【化４７】
0005435592.tif 000049
濃Ｈ２ＳＯ４（０．３４ｍＬ）を含有する７−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸（１．０８ｇ、６．０６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）溶液を一晩加熱還流した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄した。水相をＥｔＯＡｃ（３×）で逆抽出した。合わせた有機抽出物を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、エチル７−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（９１８ｍｇ、７３％）が得られた。
【０２５７】
エチル７−ヒドロキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（９１８ｍｇ、４．４５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３５ｍＬ）溶液に０℃で、ＮａＨの６０％オイル分散液（１７８ｍｇ、４．４５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で１時間エージングさせ、その後、ヨードエタン（６９４ｍｇ、０．３６ｍＬ、４．４５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）溶液を滴下添加した。混合物を０℃で数時間エージングさせ、その後、氷浴を外した。反応物を室温に加温し、一晩エージングさせた。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇカラム）により０〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配で溶離して精製すると、エチル７−エトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（４００ｍｇ、３８％）が得られた。
【０２５８】
エチル７−エトキシ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（４００ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）の溶液に、１ＭのＬｉＯＨ（３．４ｍＬ）を加えた。混合物を一晩加熱還流した。反応物を乾燥するまで濃縮し、固体を１ＮのＨＣｌと共に摩砕した。固体を水で洗浄し、空気乾燥させると、表題化合物がオフホワイト色の固体（３５０ｍｇ、９９％）として得られた。
【０２５９】
酸調製２４
７−メトキシ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２６０】
【化４８】
0005435592.tif 000050
エチル７−ヒドロキシ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １９９７、１２、５５５）のＤＭＦ（２５ｍＬ）溶液に０℃で、ＮａＨの６０％オイル分散液（１５２ｍｇ、３．８１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１時間撹拌し、その後、ヨードメタン（０．５４ｇ、０．２４ｍＬ、３．８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液を滴下添加した。混合物を０℃で数時間維持し、その後、混合物を室温に加温し、一晩撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水および飽和ＮａＣｌ水溶液で希釈した。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。物質を、シリカゲルクロマトグラフィー（８０ｇカラム）により０〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配で溶離して精製すると、エチル７−メトキシ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（２９４ｍｇ、３３％）が得られた。
【０２６１】
エチル７−メトキシ−３−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボキシレート（２９４ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１１ｍＬ）溶液に、１ＭのＬｉＯＨ（２．５ｍＬ）を加えた。混合物を４時間加熱還流し、室温に冷却し、濃縮した。粗製物質を１ＮのＨＣｌで摩砕し、固体を濾過により単離し、水で洗浄した。固体を一晩空気乾燥させると、表題化合物（２３５ｍｇ、９１％）が得られた。
【０２６２】
酸調製２５
７−メチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２６３】
【化４９】
0005435592.tif 000051
５−ブロモ−７−メチルインダゾール（ＰｈａｒｍａＬａｂ、Ｍｏｒｒｉｓｖｉｌｌｅ、ＰＡから購入）（２．００ｇ、９．４７ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液に、ＮａＨ（５７０ｍｇ、１４．２５ｍｍｏｌ；鉱油中６０％懸濁液）を室温で加えた。２０分後に、混合物を−７８℃に冷却し、ｓｅｃ−ブチルリチウム（シクロヘキサン中１．４Ｍ、１７ｍＬ；２３．８ｍｍｏｌ）を滴下添加し、生じた混合物を４時間撹拌した。次いで、無水ＣＯ２を反応混合物に１時間気泡導入し、その間、室温に加温した。次いでこれを、室温で一晩撹拌した。１ＮのＨＣｌを加え、溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、次いで、濾過し、濃縮した。残渣をＭｅＯＨに再溶解し、濾過し、次いで、濃縮すると、生成物が茶色の固体（１．４４５ｇ、８６．６％）として得られた。1H NMR (DMSO-d6) δ 8.23 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 2.46 (s, 3H). LC/MS ES+ 177 (MH+).
【０２６４】
酸調製２６
７−エチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２６５】
【化５０】
0005435592.tif 000052
２−エチル−６−メチルアニリン（２．０３ｇ、１５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）溶液に０℃で、Ｎ−ブロモスクシンイミド（２．６６ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１０分間撹拌し、その後、飽和ＮａＣｌ水溶液を加えた。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、有機相を飽和ＮａＣｌ（２×）水溶液で洗浄し、濃縮し、粗製物質を、Ｂｉｏｔａｇｅクロマトグラフィー（４０Ｍ、１５％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）により精製すると、４−ブロモ−２−エチル−６−メチルベンゼンアミンが赤茶色の液体（３．２１ｇ、１００％）として得られた。
【０２６６】
４−ブロモ−２−エチル−６−メチルベンゼンアミン（３．２１ｇ、１５ｍｍｏｌ）の酢酸（５０ｍＬ）溶液を３時間撹拌し、その後、２Ｍの亜硝酸ナトリウム溶液（１１ｍＬ、２２．５ｍｍｏｌ）を加えた。生じた混合物を室温で一晩撹拌した。溶液を濃縮し、固体をＥｔＯＡｃに溶かし、飽和ＮａＣｌ水溶液（３×）で洗浄した。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＢｉｏｔａｇｅクロマトグラフィー（４０Ｍ、１５〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）により精製すると、５−ブロモ−７−エチル−１Ｈ−インダゾール（１．１１ｇ、３３％）および５−ブロモ−３，７−ジメチル−１Ｈ−インダゾール（０．８４ｇ、２５％）が得られた。
【０２６７】
５−ブロモ−７−エチル−１Ｈ−インダゾール（２２５ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）のジオキサン（１．５ｍＬ）溶液に、ヘキサカルボニルモリブデン（１３２ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、Ｈｅｒｒｍａｎｎ触媒（トランス−ビス（アセタト）ビス［ｏ−（ジ−ｏ−トリルホスフィノ）ベンジル］ジパラジウム）（４６．９ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（３１８ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）の水（２ｍＬ）溶液を加えた。懸濁液を密閉し、マイクロ波中１６５℃で１５分間照射した（高吸収設定）。バイアルをガス抜きし、珪藻土で濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、濃縮すると、表題化合物（１４０ｍｇ、７４％）が得られた。
【０２６８】
酸調製２７
７−クロロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２６９】
【化５１】
0005435592.tif 000053
４−アミノ−３−クロロ−５−メチルベンゾニトリル（３．００ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）のＣＨＣｌ３（５０ｍＬ）溶液に、無水酢酸（３．９ｍＬ、４１．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、次いで、５時間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、酢酸カリウム（５３０ｍｇ、５．４０ｍｍｏｌ）および亜硝酸イソアミル（５．２８ｍＬ、３９．６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を３日間加熱還流した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。これに、メタノールを、続いて、水（２５ｍＬ）および３８％ＨＣｌ（２５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を濃縮し、ｐＨを約７に調節した。固体を濾過により単離し、次いで、水（２×３０ｍＬ）およびヘプタン（２×３０ｍＬ）で洗浄した。Ｂｉｏｔａｇｅクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２−ヘプタン（１：１）／ＭｅＯＨ勾配により精製すると、７−クロロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニトリルが得られ、これを、白色の固体（５８５ｍｇ、１８％）として単離した。
【０２７０】
７−クロロ−１Ｈ−インダゾール−５−カルボニトリル（２５０ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）のエタノール／水（３：１の比、１５ｍＬ）溶液に、水酸化カリウム（３９５ｍｇ、７．０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を加熱還流した。３時間後に、大部分のエタノールを留去し、追加の水酸化カリウム（６１４ｍｇ）を加え、加熱を一晩続けた。反応混合物を室温に冷却し、Ｅｔ２Ｏ（３×２０ｍＬ）で洗浄し、有機抽出物を１ＮのＨＣｌで酸性化した。生じた沈殿物を真空濾過により単離し、水（約１５ｍＬ）およびヘプタン（約１５ｍＬ）で洗浄し、室温／０．５ｍｍＨｇで乾燥させると、表題化合物（２２１ｍｇ、７９．７％）が得られた。
【０２７１】
酸調製２８
３，７−ジメチル−１Ｈ−インダゾール−５−カルボン酸
【０２７２】
【化５２】
0005435592.tif 000054
再精製された５−ブロモ−３，７−ジメチル−１Ｈ−インダゾール（酸調製２６で記載された通りに調製、２８５ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）のジオキサン（１．３ｍＬ）溶液を含有する反応容器に、ヘキサカルボニルモリブデン（２６４ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、Ｈｅｒｒｍａｎｎ触媒（９３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびＮａ２ＣＯ３の水溶液（水２ｍＬ中６３６ｍｇ）を加えた。懸濁液をマイクロ波中、１６５℃で１５分間加熱した（高吸収）。バイアルをガス抜きし、１ＮのＨＣｌ（ｐＨ２まで）酸性化した。反応混合物を珪藻土で濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液（３×）で洗浄した。有機抽出物を濃縮すると、表題化合物がピンク色の固体（６５ｍｇ、１７％）として得られた。
【０２７３】
酸調製２９
２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−カルボン酸
【０２７４】
【化５３】
0005435592.tif 000055
（Ｊ  ｏｆ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、４６（１４）、３０３３〜３０４４；２００３と同様に）
ステップ１：６−（２−クロロアセチル）−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン
機械式撹拌機を備えた１０Ｌの４つ口フラスコにＮ２下で、ＡｌＣｌ３（４０８ｇ、３．０６ｍｏｌ）および無水ＣＨ２Ｃｌ２（２．７Ｌ、１８体積）を加えた。次いで、塩化クロロアセチル（８９ｍＬ、１．２２ｍｏｌ）を付加漏斗から、１５分にわたって徐々に室温で加えた。生じた大部分透明な溶液をこの温度で３０分間維持すると、泥状の混合物になった。３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン（１５０ｇ、１．０２ｍｏｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（０．３Ｌ、２体積）の溶液を、内部温度が３０℃未満に維持されるような速度で１．５時間にわたって加えた。生じた茶色の混合物をこの温度で２時間撹拌し、次いで、４０℃でさらに２時間加熱し、次いで、室温で一晩撹拌し続けた。反応混合物を氷浴中で冷却し、ＨＣｌガストラップに接続した。次いで、氷冷Ｈ２Ｏ（全部で３Ｌ）を、内部温度が３０℃未満に維持されるような速度で１．５時間にわたって加えた。生じた混合物を室温で１時間撹拌し、次いで、４０〜５０℃で加熱して、ＣＨ２Ｃｌ２を除去した。この混合物に、ＴＨＦ（１Ｌ）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。固体を濾過により集めた。黄色のケーキをＨ２Ｏ（５００ｍＬ）、ＴＨＦ（２００ｍＬ）およびヘキサン（１Ｌ×２）で洗浄し、これを、真空炉中で乾燥させると（５０℃で１日）、６−（２−クロロアセチル）−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン（２２１ｇ、９７％）が得られた。1H NMR (270 MHz, d-DMSO) δ 10.48 (s, 1 H), 7.86-7.77 (m, 2 H), 6.96
(d, J = 8.2 Hz, 1 H), 5.08 (s, 2 H), 2.96 (t, J = 7.6 Hz, 2 H), 2.51 (t, J =
7.6 Hz, 2 H)
【０２７５】
ステップ２：２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−カルボン酸
６−（２−クロロアセチル）−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン（５０．０ｇ、０．２２ｍｏｌ）をピリジン１９０ｍｌに加えた。混合物を９０℃で２．５時間加熱し、次いで、室温に冷却した。ピリジニウム塩を濾過により集め、フィルターケーキをエタノールで洗浄した。固体を真空炉中で一晩乾燥させた。無水塩を０．５Ｍの水酸化ナトリウム水溶液６３０ｍＬに加え、８０℃で１時間加熱した。反応物を室温に冷却し、１２ＮのＨＣｌ（３０ｍＬ）で酸性化し、固体を濾過により集めた。集めた固体を２：１の水／ＤＭＦと共に撹拌し、濾過して生成物を淡黄色の固体として集めた。集めた固体を真空炉中で一晩乾燥させると、２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−カルボン酸３８．７７ｇ（９２％）が淡黄色の固体として得られた。1H NMR (300 MHz, d-DMSO) δ 12.63 (br, 1 H), 10.40 (s, 1 H), 7.75-7.72
(m, 2 H), 6.92 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 2.96-2.91 (m, 2 H), 2.51-2.46 (m, 2 H).
【０２７６】
酸調製３０
３，７−ジメチルインドール−５−カルボン酸
【０２７７】
【化５４】
0005435592.tif 000056
４−ブロモ−２−メチルアニリン（２．０ｇ）を濃ＨＣｌ（１０ｍＬ）に溶かし、８０℃に３０分間加熱した。反応物を５℃に冷却し、亜硝酸ナトリウム溶液（水４．０ｍＬ中の７８１．０ｍｇ）を１０分にわたって加えた。次いで、生じた混合物を５℃で３０分間撹拌した。塩化スズ（ＩＩ）の溶液（濃ＨＣｌ８ｍＬ中の１５．３ｇ）を１０分にわたって加え、生じた溶液を室温で４５分間撹拌した。反応物を５０％ＮａＯＨ溶液で塩基性にすると、白色の沈殿物が形成した。固体を濾過し、濾液をジクロロメタンで抽出した。有機抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、１−（４−ブロモ−２−メチルフェニル）ヒドラジン１．０８ｇ（５０％）が白色の固体として得られた。LC-MS @ 201.1 (M+1)
【０２７８】
１−（４−ブロモ−２−メチルフェニル）ヒドラジン２００ｍｇをＥｔＯＨ１０．０ｍＬに懸濁させ、プロピオンアルデヒド（６７８μＬ）を加えた。プロピオンアルデヒドを添加した後に、反応物は透明になった。次いで、生じた溶液を室温で４５分間撹拌した。反応物を濃縮し、塩化亜鉛（ＩＩ）（１０７０．０ｍｇ）を加え、混合物を１７０℃で３０分間加熱した。次いで、溶融した混合物を室温に冷却し、１０％ＨＣｌ溶液で希釈した。次いで、溶液をジクロロメタンで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー処理すると（０〜１０％ＥｔＯＡｃ／ハプタン（Ｈａｐｔａｎｅ）勾配）、５−ブロモ−３，７−ジメチル−１Ｈ−インドール３１７．０ｍｇが得られた。LC-MS @ 222.1 (M-1)
【０２７９】
２５ｍＬマイクロ波反応管に、ジオキサン３Ｌに溶かした５−ブロモ−３，７−ジメチル−１Ｈ−インドール３１７ｍｇを投入した。トランス−ビス（アセタト）ビス［ｏ−（ジ−ｏ−トリルホスフィノ）ベンジル］ジパラジウム（ＩＩ）４２ｍｇおよびモリブデンヘキサカルボニル１８７ｍｇを、続いて、水６ｍＬに溶かした炭酸ナトリウム４５０ｍｇを加えた。バイアルを密閉し、マイクロ波反応器中、１６５℃で２０分間加熱した。反応物を冷却し、次いで、セライトで濾過し、フィルターケーキをＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を濃縮し、生じたオイルを水に再溶解した。溶液をｐＨ３に酸性化し、沈殿物を濾過により集めると、３，７−ジメチルインドール−５−カルボン酸２５０．０ｍｇ（９３％）が得られた。LC-MS @ 188.1 (M-1)
【０２８０】
酸調製３１
ベンゾ［ｄ］イソチアゾール−５−カルボン酸
【０２８１】
【化５５】
0005435592.tif 000057
５−ブロモ−２−フルオロベンズアルデヒド（４．０６ｇ）の２−プロパノール（２０．０ｍＬ）溶液に、２−メチル−２−プロパンチオール（２．２６ｍＬ）およびＫ２ＣＯ３（３．０４ｇ）を加え、一晩加熱した。反応混合物を室温に冷却し、水５０．０ｍＬに注ぎ、ジクロロメタンで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー処理すると（３％ＥｔＯＡｃ／ハプタン）、５−ブロモ−２−（ｔｅｒｔ−ブチルチオ）ベンズアルデヒド１．９７ｇ（３６％）が透明なオイルとして得られた。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 1.30 (s, 9 H) 7.51 (d, J=8.05 Hz, 1 H)
7.70 (dd, J=8.29, 2.20 Hz, 1 H) 8.12 (d, J=2.20 Hz, 1 H) 10.70 (s, 1 H).
【０２８２】
塩酸ヒドロイルアミン（１．５ｇ）を水２５ｍＬに溶かし、２Ｎの水酸化ナトリウム水溶液１０．８ｍＬで処理した。この溶液を５−ブロモ−２−（ｔｅｒｔ−ブチルチオ）ベンズアルデヒド（１．９７ｇ）のエタノール２５ｍＬ溶液に室温で２０分にわたって滴下添加した。混合物を２時間加熱還流し、次いで、室温に冷却した。反応混合物を水（１５０．０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。有機相を濾過し、濃縮した。残渣をポリリン酸（１０５．０ｇ）で処理し、１００℃に２時間加熱した。次いで、反応混合物を氷水（４００．０ｍＬ）に注ぎ、５ＮのＮａＯＨ水溶液で氷冷下に中和し、次いで、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー処理すると（３％ＥｔＯＡｃ／ハプタン）、５−ブロモベンゾ［ｄ］イソチアゾール１．５１ｇ（９８％）が白色の固体として得られた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δδ ppm 7.61 (dd, J=8.58, 1.76 Hz, 1 H) 7.83
(d, J=8.58 Hz, 1 H) 8.20 (d, J=1.37 Hz, 1 H) 8.84 (s, 1 H), LC-MS @ 214.0,
216.0 (M+2).
【０２８３】
小さなＰａｒｒボトル中の５−ブロモベンゾ［ｄ］イソチアゾール１．５１ｇおよび１，１’−シス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）８２５．０ｍｇのメタノール３５ｍＬ溶液に、酢酸ナトリウム（１．７４ｇ）およびＤＭＦ（５４３μＬ）を加えた。混合物を窒素で複数回脱ガスし、次いで、ＣＯ雰囲気（４０ｐｓｉ）下、５０度で１８時間振盪した。溶液を濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー処理すると（０〜２０％ＥｔＯＡｃ／ハプタン勾配）、メチルベンゾ［ｄ］イソチアゾール−５−カルボキシレート６１．０ｍｇ（５％）が白色の固体として得られた。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 3.96 (s, 3 H) 8.17 (d, J=0.98 Hz, 2 H)
8.84 (s, 1 H) 9.08 (s, 1 H); LC-MS @ 194.1 (M+1).
【０２８４】
メチルベンゾ［ｄ］イソチアゾール−５−カルボキシレート６１ｍｇをメタノール１．２６ｍＬに溶かし、１０％水酸化ナトリウム水溶液１．２６ｍＬで処理した。混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、次いで、水で希釈した。ｐＨ約３に酸性化し、濾過により沈殿物を集めた。フィルターケーキを水で洗浄した。次いで、固体を高真空下で乾燥させると、ベンゾ［ｄ］イソチアゾール−５−カルボン酸４８ｍｇが白色の固体として得られた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δδ ppm 8.08 (dd, J=8.49, 1.46 Hz, 1 H) 8.31
(d, J=8.58 Hz, 1 H) 8.79 (s, 1 H) 9.24 (d, J=0.78 Hz, 1 H).
【０２８５】
酸調製３２
７−メチルベンゾ［ｄ］イソチアゾール−５−カルボン酸
【０２８６】
【化５６】
0005435592.tif 000058
撹拌されている５−ブロモ−２−フルオロ−１，３−ジメチルベンゼン（５．０ｇ、２５ｍｍｏｌ）の四塩化炭素（１００．０ｍＬ）溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（４．１１ｇ、２３．１ｍｍｏｌ）および過酸化ベンゾイル（１００．０ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を７時間加熱還流した。反応物を濾過し、濾液を２ＮのＨＣｌ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー処理すると（５％ＥｔｏＡｃ／ハプタン）、５−ブロモ−１−（ブロモメチル）−２−フルオロ−３−メチルベンゼン６．５６ｇがオイル生成物として得られた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.22 - 2.36 (s, 3 H) 4.42 (d, J=0.98
Hz, 2 H) 7.21 - 7.37 (m, 2 H)
【０２８７】
撹拌されている５−ブロモ−１−（ブロモメチル）−２−フルオロ−３−メチルベンゼン（６．５６ｇ、２３．３ｍｍｏｌ）のアセトン（１５０．０ｍＬ）溶液に、重炭酸ナトリウム（２．４４ｇ、２９．１ｍｍｏｌ）および水（２５０．０ｍＬ）を加えた。反応物を一晩還流させた。反応物を室温に冷却し、酢酸エチルで３回抽出した。有機抽出物を合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。生じたオイルをフラッシュクロマトグラフィー処理すると（８０ｇシリカ、５〜１０％酢酸エチル／ヘキサン勾配）、（５−ブロモ−２−フルオロ−３−メチルフェニル）メタノール２．５ｇが白色の固体として得られた。
【０２８８】
撹拌されているクロロクロム酸ピリジニウム（３．７７ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）およびシリカゲルのジクロロメタン２５ｍｌ中の懸濁液に、（５−ブロモ−２−フルオロ−３−メチルフェニル）メタノールのジクロロメタン２５ｍＬ溶液を加えた。反応物を室温で３０分間撹拌した。追加のシリカゲルを加え、濃縮して、反応生成物をシリカゲルに吸着させた。フラッシュクロマトグラフィー処理すると（８０ｇシリカ、５〜１０％酢酸エチル／ヘキサン勾配）、５−ブロモ−２−フルオロ−３−メチルベンズアルデヒド２．１ｇが白色の固体として得られた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm
2.31 (d, J=2.15 Hz, 3 H) 7.42 - 7.63 (m, 1 H) 7.77 (dd, J=5.46, 2.34 Hz, 1 H)
10.27 (s, 1 H).
【０２８９】
７−メチルベンゾ［ｄ］イソチアゾール−５−カルボン酸の合成を、酸調製３１に記載されたカルボニル化方法と同様に完了した。
【０２９０】
酸調製３３
６−ブロモ−４−フルオロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール
【０２９１】
【化５７】
0005435592.tif 000059
５−ブロモ−３−フルオロベンゼン−１，２−ジアミン（０．２ｇ、０．９７５ｍｍｏｌ）を水１ｍｌと、続いて、ギ酸（０．１ｍＬ、３ｍｍｏｌ）と混合した。暗茶色の混合物を１００℃で６時間撹拌した。反応物を室温に冷却し、１ＮのＫＯＨ（冷）３ｍＬで処理し、沈殿した固体を濾過により集め、一晩空気乾燥させると、６−ブロモ−４−フルオロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール１６２ｍｇが明ピンク色の固体として得られた。LC/MS @ 215 (M+H).
【０２９２】
６−ブロモ−４−フルオロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾールの合成を、酸調製３１に記載されたカルボニル化方法と同様に完了した。
【０２９３】
酸調製３４
７−メトキシ−２−メチルベンゾ［ｄ］オキサゾール−５−カルボン酸
【０２９４】
【化５８】
0005435592.tif 000060
激しく撹拌されている４−ヒドロキシ−３−メトキシ−５−ニトロベンズアルデヒド（４７．０ｇ、２３８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（４５０ｍＬ）懸濁液に、室温で、無水塩化アルミニウム（３８．１ｇ、２８６ｍｍｏｌ）を１回で加えた。次いで、ピリジン（７７ｍＬ、９５４ｍｍｏｌ）を４５〜５０℃で３０分間滴下添加した。反応混合物を２時間還流させ、６０℃に冷却した。反応混合物を氷／濃ＨＣｌ混合物（２６５ｍＬ）に慎重に注いだ。５０℃で１時間撹拌した後に、反応混合物を０℃に冷却した。形成した沈殿物を濾過により分離し、水で洗浄し、真空乾燥させると、３，４−ジヒドロキシ−５−ニトロベンズアルデヒド（２９．４ｇ、１６１ｍｍｏｌ、収率６７．３％）が得られた。
【０２９５】
亜塩素酸ナトリウム（４７．６ｇ、５２６ｍｍｏｌ）の水（３５０ｍＬ）溶液を、３，４−ジヒドロキシ−５−ニトロベンズアルデヒド（６８．８ｇ、３７６ｍｍｏｌ）およびリン酸二水素ナトリウム（４５．１ｇ、３７６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ／Ｈ２Ｏ混合（３７５ｍＬ／１５０ｍＬ）溶液に室温で１．５時間滴下添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、５％ＮａＨＣＯ３溶液（５００ｍＬ）を含有する分離漏斗に注いだ。生成物をジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で抽出した。水層を濃ＨＣｌでｐＨ約１まで酸性化し、エーテル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し（２００ｍＬ）、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させると、３，４−ジヒドロキシ−５−ニトロ安息香酸（７０．３ｇ、３５３ｍｍｏｌ、収率９４％）が得られた。
【０２９６】
塩化チオニル（６．０７ｍＬ、８３ｍｍｏｌ）を、撹拌されている３，４−ジヒドロキシ−５−ニトロ安息香酸（１４．４ｇ、７２．３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（７０ｍＬ）溶液に室温で１時間滴下添加した。反応混合物を３時間還流させ、回転蒸発器を使用して濃縮した。残渣を水から再結晶化させ、真空乾燥させると、３，４−ジヒドロキシ−５−ニトロ安息香酸メチルエステル（１１．０ｇ、５１．６ｍｍｏｌ、収率７１．４％）が得られた。
【０２９７】
撹拌されている３，４−ジヒドロキシ−５−ニトロ安息香酸メチル（１１．９ｇ、５５．８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２００ｍＬ）溶液に、ジオキサン中４ＭのＨＣｌ（１３．９６ｍＬ、５５．８ｍｍｏｌ）および炭素上１０％のパラジウム（４．０ｇ、３．７６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を大気圧のＨ２で３時間水素化した（ＴＬＣ監視）。生じた混合物を濾過し、回転蒸発器を使用して濃縮した。残渣をエーテル（１００ｍＬ）と共に摩砕した。沈殿物を濾別し、真空乾燥させると、メチル３−アミノ−４，５−ジヒドロキシベンゾエートヒドロクロリド（１２．０ｇ、５４．６ｍｍｏｌ、収率９８％）が得られた。
【０２９８】
撹拌されているオルト酢酸トリエチル（３５．０ｍＬ、１９０ｍｍｏｌ）に、３−アミノ−４，５−ジヒドロキシベンゾエートヒドロクロリド（６．００ｇ、２７．３ｍｍｏｌ）を加えた。撹拌されている懸濁液を２０分間還流させ、室温に冷却した。反応混合物をヘキサン（２００ｍＬ）に注いだ。形成した沈殿物を濾過により分離し、真空乾燥させると、ベンゾオキサゾールメチル７−ヒドロキシ−２−メチル−１，３−ベンゾオキサゾール−５−カルボキシレート（４．９８ｇ、２４．０４ｍｍｏｌ、収率８８％）が得られた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ
10.74 (br. s, 1H), 7.66 (d, J=1.4 Hz, 1H), 7.43 (d, J=1.4 Hz, 1H), 3.85 (s,
3H), 2.62 (s, 3H).
【０２９９】
メチル７−メトキシ−２−メチル−１，３−ベンゾオキサゾール−５−カルボキシレート（３６５ｍｇ）をエタノール１６ｍＬに溶かし、１Ｍの水酸化リチウム３．３ｍＬを加えた。反応物を６０℃で一晩加熱した。揮発性物質を真空下で除去し、残渣を水に溶かし、１ＭのＨＣｌでｐＨ３に酸性化した。黄褐色の固体を濾過により集め、水で洗浄した。空気乾燥させると、７−ヒドロキシ−２−メチル−１，３−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸２２１ｍｇ（６５％）が得られた。LC/MS = 208 (M+H).
【０３００】
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のメチル７−ヒドロキシ−２−メチル−１，３−ベンゾオキサゾール−５−カルボキシレート（４００ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）に、摩砕炭酸カリウム（５７０ｍｇ、４．１４ｍｍｏｌ）およびヨウ化メチル（０．１４２ｍＬ、２．２８ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、メチル７−メトキシ−２−メチル−１，３−ベンゾオキサゾール−５−カルボキシレート３６８ｍｇ（７３％）がオフホワイト色の固体として得られた。LC/MS = 222 (M+H).
【０３０１】
酸調製３５
７−メトキシ−２−メチルベンゾ［ｄ］オキサゾール−５−カルボン酸
７−メトキシ−２−メチルベンゾ［ｄ］オキサゾール−５−カルボン酸の合成を、酸調製３１に記載されている加水分解法を使用して完了することができる。
【０３０２】
（実施例）
下記の表１〜２５に例示されている式（１）の化合物を、下記の方法のいずれかにより、適切なカルボン酸およびスピロ環式ケトンを使用して調製した：
【０３０３】
方法Ａ：フラスコに、適切なアミンまたは塩酸アミン（１当量）、ＤＭＦ、ＤＭＳＯまたはＣＨ２Ｃｌ２（約０．１Ｍ）、カルボン酸、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（４〜６当量）またはトリエチルアミン（ＴＥＡ）（４〜６当量）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（１〜１．３当量）または１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ）（１当量）を、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（１当量）と共に、またはそれを伴わずに加えた。ＬＣ／ＭＳにより決定して反応が完了するまで、混合物を室温で撹拌した。混合物を酢酸エチルまたはＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×）またはＮａＯＨ水溶液（０．５Ｍ溶液）で、次いで、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。有機抽出物をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質を液体クロマトグラフィーにより精製すると、生成物が得られた。
【０３０４】
方法Ｂ：カルボン酸（１当量）、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（１当量）およびＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）（１当量）のＤＭＦおよび／またはＴＨＦ混合物を室温で１時間撹拌し、その後、アミン（１当量）を、さらに追加のＮＭＭ（１当量）を加えた。生じた混合物を室温で一晩撹拌した。溶液をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で洗浄した。層を分離し、水性層をＥｔＯＡｃで洗浄した。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗製物質をクロマトグラフィーにより精製した。
【０３０５】
方法Ｃ：ＣＨ２Ｃｌ２（０．１Ｍ）中のカルボン酸（１．５当量）に、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド（１．５当量）およびヒドロキシベンゾトリアゾール（１．５当量）を加えた。約５分間撹拌した後に、アミン（１当量）のＣＨ２Ｃｌ２（０．１Ｍ）溶液およびトリエチルアミン（１．５当量）を加えた。ＬＣ／ＭＳにより決定して反応が完了するまで、混合物を室温で撹拌した。反応物を水、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質を液体クロマトグラフィーにより精製すると、生成物が得られた。
【０３０６】
方法Ｄ：カルボン酸（１２５μｍｏｌ）を含有する反応バイアルに、ＴＨＦ（０．５ｍＬ）中のＤＭＦ（０．５ｍＬ）および２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（１２５μｍｏｌ）を、続いて、ＮＭＭ（２当量）を加えた。バイアルを音波処理し、ボルテックス処理して、物質の可溶化を保証した。バイアルを室温で１．７５時間振盪し、その時間の後、３：１のＤＭＦ／ＴＨＦ中のアミン塩（１当量）懸濁液を、続いて、ＮＭＭを加えた。混合物を室温で一晩振盪させた。溶媒を減圧下で除去した。残渣に、ＥｔＯＡｃ（２．５ｍＬ）および飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１ｍＬ）を加えた。バイアルをボルテックス処理し、遠心分離した。有機相を予め秤量したバイアルに移し、次いで、溶媒を減圧下で除去した。試料を、ＨＰＬＣによりＳｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ８  ４．６×５０ｍｍ  ３．５μｍ粒径カラムを備えたＷａｔｅｒｓシステムを使用して精製した。
【０３０７】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析条件：
方法ＬＣ−１：カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＡＣＱＵＩＴＹ  Ｕｌｔｒａ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＬＣ（登録商標）ＢＥＨ  Ｃ１８カラム、２．１×３０ｍｍ、１．７μｍ、０．０５％ＴＦＡ  ９５／５から５／９５  水／アセトニトリルへ、流速：１．３ｍＬ／分、ラン時間：１．１分。
【０３０８】
方法ＬＣ−２：カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａ（登録商標）Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、３．５μｍカラム。溶媒ＡおよびＢは、それぞれ、０．１％ＴＦＡを伴う水および０．１％ＴＦＡを伴うアセトニトリルである。９分の全体方法時間で、５．８３分にわたって５％Ｂから９５％Ｂへ。質量スペクトルデータを、１８０〜８５０ａｍｕから、エレクトロスプレーポジティブモードで得た。流速２．０ｍＬ／分。
【０３０９】
方法ＬＣ−３：カラム：ＨＡＬＯ（登録商標）Ｃ１８  ３．０×３０ｍｍ、２．７μｍ  ＨＰＬＣカラム。溶媒ＡおよびＢは、それぞれ０．０５％ＴＦＡを伴う水および０．０５％ＴＦＡを伴うアセトニトリルである。２．５分の全体方法時間で、２．３０分にわたって５％Ｂから９５％Ｂへ、次いで、９５％Ｂで０．２分間保持。質量スペクトルデータを、１６０〜６５０ａｍｕから、エレクトロスプレーポジティブモードで得た。流速１．５ｍＬ／分。
【０３１０】
【表１−１】
0005435592.tif 000061
【０３１１】
【表１−２】
0005435592.tif 000062
【０３１２】
【表１−３】
0005435592.tif 000063
【０３１３】
【表１−４】
0005435592.tif 000064
【０３１４】
【表１−５】
0005435592.tif 000065
【０３１５】
【表１−６】
0005435592.tif 000066
【０３１６】
【表１−７】
0005435592.tif 000067
【０３１７】
【表１−８】
0005435592.tif 000068
【０３１８】
【表１−９】
0005435592.tif 000069
【０３１９】
【表１−１０】
0005435592.tif 000070
【０３２０】
【表１−１１】
0005435592.tif 000071
【０３２１】
【表１−１２】
0005435592.tif 000072
【０３２２】
【表１−１３】
0005435592.tif 000073
【０３２３】
【表１−１４】
0005435592.tif 000074
【０３２４】
【表１−１５】
0005435592.tif 000075
【０３２５】
【表１−１６】
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【０３２６】
【表２−１】
0005435592.tif 000077
【０３２７】
【表２−２】
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【０３２８】
【表２−３】
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【０３２９】
【表３−１】
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【０３３０】
【表３−２】
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【０３３１】
【表３−３】
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【０３３２】
【表４】
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【０３３３】
【表５】
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【０３３４】
【表６】
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【０３３５】
【表７−１】
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【０３３６】
【表７−２】
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【０３３７】
【表８】
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【０３３８】
【表９】
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【０３３９】
【表１０】
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【０３４０】
【表１１】
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【０３４１】
【表１２】
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【０３４２】
【表１３】
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【０３４３】
【表１４】
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【０３４４】
【表１５】
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【０３４５】
【表１６】
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【０３４６】
【表１７】
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【０３４７】
【表１８】
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【０３４８】
【表１９】
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【０３４９】
【表２０】
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【０３５０】
【表２１】
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【０３５１】
【表２２】
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【０３５２】
【表２３】
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【０３５３】
【表２４】
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【０３５４】
【表２５】
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【０３５５】
薬理学的データ
生物学的プロトコル
動物、特に哺乳動物（例えば、ヒト）における疾患（例えば本明細書において詳述しているもの）の治療における本発明の化合物の有用性は、後述のｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏアッセイを含めた当業者に既知の従来のアッセイにおけるその活性によって実証することができる。かかるアッセイは、それによって本発明の化合物の活性が他の既知の化合物の活性と比較できる手段も提供する。
【０３５６】
ＡＣＣ１およびＡＣＣ２の活性の直接阻害
本発明の化合物のＡＣＣ阻害活性を標準手順に基づく方法によって実証した。例えば式（１）の化合物に関するＡＣＣ活性の直接阻害を、ラット肝臓ＡＣＣおよび組換えヒトＡＣＣ２の調製物を用いて決定した。
【０３５７】
［１］ラット肝臓ＡＣＣの調製。標準手順、例えばＴｈａｍｐｙおよびＷａｋｉｌ（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：６３１８〜６３２３；１９８５）によって記載されているものに基づいて以下の方法を用いてラット肝臓からラット肝臓ＡＣＣを得た。
【０３５８】
重さが１５０〜２００ｇの雄ＣＤラットを１８〜２４時間絶食させ、その後高スクロース食餌（ＡＩＮ−７６Ａげっ歯類食餌、Ｃａｔ＃Ｄ１０００１、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ  Ｉｎｃ．、米国ニュージャージー州Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ）を３日間与え、その時点でそれらをＣＯ２窒息によって殺した。肝臓を取り出し、氷冷リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）中ですすぎ、Ｗａｒｉｎｇ（登録商標）ブレンダー中の５倍の体積量の均質化バッファー（５０ｍＭリン酸カリウム、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、１０ｍＭ  ２−メルカプトエタノール、２ｍＭベンズアミジン、０．２ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）、各５ｍｇ／Ｌのロイペプチン、アプロチニン、および抗トリプシン）中で、１分間４℃でホモジナイズした。後続の全ての操作を４℃で実施した。５０％ＰＥＧ溶液を加えることによってポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に対してホモジネートを３％とし、２０，０００ｘｇで１５分間遠心分離した。５０％ＰＥＧ溶液を加えて得られた上清を５％ＰＥＧに調節し、５分間撹拌した。２０，０００×ｇで２０分間の遠心分離によってペレット（ＡＣＣ活性を含有する）を捕集し、氷冷二重蒸留水ですすいで過剰ＰＥＧを除去し、均質化バッファーを用いて元のホモジネート体積の４分の１に再懸濁させた。硫酸アンモニウム（２００ｇ／リットル）を撹拌しながらゆっくり加えた。４５分後、２０，０００×ｇで３０分間の遠心分離によって酵素を捕集し、１０ｍＬの５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．１ｍＭ  ＤＴＴ、１．０ｍＭ  ＥＤＴＡ、および１０％グリセリン中に再懸濁させ、同じバッファーで平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ（商標）Ｇ−２５カラム（２．５ｃｍ×５０ｃｍ）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、米国ニュージャージー州Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ現ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上で脱塩する。脱塩した酵素調製物をアリコート中に−７０℃で保管した。即時使用の前に冷凍ラット肝臓ＡＣＣアリコートを解凍し、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭクエン酸三カリウム、２．０ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）、および０．７５ｍｇ／ｍＬの脂肪酸を含まないウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するバッファー中に５００μｇ／ｍＬまで希釈し、３７℃で３０分間プレインキュベートした。
【０３５９】
［２］ラット肝臓ＡＣＣ阻害の測定。ＡＣＣ活性の測定およびＡＣＣ阻害の評価のために、試験化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解し、アリコート１μＬをクリアボトム、９６穴プレート（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＰＮ＃１４５０−５１４）に加えた。対照穴は、ＤＭＳＯ単独１μＬまたは高阻害化合物１μＬを含有する。上記のようにラット肝臓から得た酵素を、酵素バッファー中３７℃で３０分間活性化させてから化合物プレートに加えた。全穴に、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、７．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、７．５ｍＭクエン酸三カリウム、２ｍＭ  ＤＴＴ、５０ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡを含有するバッファーに溶かした活性酵素（１．３３Ｘ）７５μＬを与える。活性酵素を化合物と一緒に１０分間プレインキュベートしてから、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、７．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、７．５ｍＭクエン酸三カリウム、２ｍＭ  ＤＴＴ、５０ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、１２０μＭアセチルＣｏＡ、８．０ｍＭ  ＡＴＰ、３８．４ｍＭ  ＫＨＣＯ３、および１．６ｍＭ  ＮａＨ［１４Ｃ］Ｏ３（１００μＣｉ／μＬ）を含有する基質溶液２５μＬを加えることによって反応を開始した。反応中の最終基質濃度は、３０μＭアセチルＣｏＡ、９．６ｍＭ  ＫＨＣＯ３、０．４ｍＭ  ＮａＨ［１４Ｃ］Ｏ３、および２ｍＭ  ＡＴＰであった。３Ｎ  ＨＣｌ  ２５μＬを加えることによって１０分後に反応を停止させ、プレートを５０℃で最低２０時間乾燥させた。水３０μＬを乾燥させたプレートに加え、５分間混合した。Ｏｐｔｉｐｈａｓｅ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ液体シンチレーション流体（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、米国マサチューセッツ州Ｗａｌｔｈａｍ）９５μＬを加え、プレートを２０分間混合する。Ｗａｌｌａｃ  Ｔｒｉｌｕｘ  １４５０  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  ＬＳＣルミネセンスカウンターを用いてＭＣｏＡ中への１４Ｃの取り込みを測定した。
【０３６０】
［３］ヒトＡＣＣ２阻害の測定。精製した組換えヒトＡＣＣ２（ｈｒＡＣＣ２）を用いてヒトＡＣＣ２阻害を測定した。簡単に言えば、ＡＣＣ２の完全長ＣｙｔｏｍａｘクローンをＣａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄから購入し、配列決定し、ＰＣＤＮＡ５  ＦＲＴ  ＴＯ−ＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州Ｃａｒｌｓｂａｄ）中にサブクローニングした。テトラサイクリン誘導によってＡＣＣ２をＣＨＯ細胞中で発現させ、１μｇ／ｍＬテトラサイクリン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州Ｃａｒｌｓｂａｄ）を含む、グルタミン、ビオチン、ハイグロマイシンおよびブラストサイジンを含んだＤＭＥＭ／Ｆ１２  ５リットル中に回収した。次いでＡＣＣ２を含有するならし培地をＳｏｆｔｌｉｎｋ  Ｓｏｆｔ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ａｖｉｄｉｎカラム（Ｐｒｏｍｅｇａ、米国ウィスコンシン州Ｍａｄｉｓｏｎ）に加え、５ｍＭビオチンで溶離した。ＡＣＣ２  ４ｍｇを濃度０．０５ｍｇ／ｍＬ（Ａ２８０によって決定した）、推定純度９５％（Ａ２８０によって決定した）で溶離した。精製したＡＣＣ２を５０ｍＭトリス、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＤＴＴ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、および５％グリセリン中で透析した。プールしたタンパク質を凍結し、融解時に活性の損失なしに−８０℃で保管した。ＡＣＣ２活性の測定およびＡＣＣ２阻害の評価のために、試験化合物をＤＭＳＯ中に溶解し、最終ＤＭＳＯ濃度１％の５倍ストックとしてｒｈＡＣＣ２酵素に加えた。５０μＭ  ＡＴＰ反応のための製造条件を用いたＴｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ  ＡＤＰ検出ＦＰアッセイキット（Ｂｅｌｌｂｒｏｏｋ  Ｌａｂｓ、米国ウィスコンシン州Ｍａｄｉｓｏｎ）を使用して、ｒｈＡＣＣ２をＣｏｓｔａｒ＃３７６７（Ｃｏｓｔａｒ、米国マサチューセッツ州Ｃａｎｂｒｉｄｇｅ）３８４穴プレート中で検定した。アッセイの最終条件は、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭクエン酸三カリウム、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、３０μＭアセチルＣｏＡ、５０μＭ  ＡＴＰ、および８ｍＭ  ＫＨＣＯ３であった。通常、１０μＬ反応を室温で１時間実施し、１０μｌのＴｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒ停止および検出バッファーを加え、さらに１時間インキュベートした。６２０励起Ｃｙ５  ＦＰジェネラルデュアルミラー、６２０励起Ｃｙ５  ＦＰフィルター、６８８発光（Ｓ）および６８８（Ｐ）発光フィルターを用いたＥｎｖｉｓｉｏｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅリーダー（Ｐｅｒｋｉｎｅｌｍｅｒ）上でデータを取得した。
【０３６１】
上記ラット肝臓ＡＣＣ放射酵素アッセイおよび組換えｈＡＣＣ２  ｔｒａｎｓｃｒｅｅｎｅｒアッセイを用いた結果を、上記実施例で例示した式（Ｉ）の化合物に関して以下の表にまとめて示す。
【０３６２】
【表２６−１】
0005435592.tif 000106
【０３６３】
【表２６−２】
0005435592.tif 000107
【０３６４】
【表２６−３】
0005435592.tif 000108
【０３６５】
【表２６−４】
0005435592.tif 000109
【０３６６】
【表２６−５】
0005435592.tif 000110
【０３６７】
【表２６−６】
0005435592.tif 000111
【０３６８】
【表２６−７】
0005435592.tif 000112
【０３６９】
【表２６−８】
0005435592.tif 000113
【０３７０】
【表２６−９】
0005435592.tif 000114
【０３７１】
【表２６−１０】
0005435592.tif 000115
【０３７２】
【表２６−１１】
0005435592.tif 000116
【０３７３】
【表２６−１２】
0005435592.tif 000117
【０３７４】
【表２６−１３】
0005435592.tif 000118
【０３７５】
【表２６−１４】
0005435592.tif 000119
【０３７６】
【表２６−１５】
0005435592.tif 000120
【０３７７】
【表２６−１６】
0005435592.tif 000121
【０３７８】
【表２６−１７】
0005435592.tif 000122
【０３７９】
【表２６−１８】
0005435592.tif 000123
【０３８０】
【表２６−１９】
0005435592.tif 000124
【０３８１】
【表２６−２０】
0005435592.tif 000125
【０３８２】
【表２６−２１】
0005435592.tif 000126
【０３８３】
【表２６−２２】
0005435592.tif 000127
【０３８４】
【表２６−２３】
0005435592.tif 000128
【０３８５】
【表２６−２４】
0005435592.tif 000129
【０３８６】
【表２６−２５】
0005435592.tif 000130
【０３８７】
【表２６−２６】
0005435592.tif 000131
【０３８８】
実験動物におけるＡＣＣ阻害の急性ｉｎ  ｖｉｖｏ評価
本発明の化合物のＡＣＣ阻害活性は、治療した動物からの肝臓および筋肉組織のマロニルＣｏＡレベルを低減させるそれらの能力の評価によってｉｎ  ｖｉｖｏで確認することができる。
【０３８９】
実験動物におけるマロニルＣｏＡ生成阻害の測定。この方法では、適宜の標準固形飼料および水で維持した雄スプレーグ・ドーリーネズミ（２２５〜２７５ｇ）を、研究する前に無作為化した。動物は、実験を開始する１８時間前に餌を与えるか、または絶食させた。明期に入って２時間後に、動物に５ｍＬ／ｋｇの体積（０．５％メチルセルロース、ビヒクル）または適切な化合物（ビヒクル中で調製）を経口投与した。ビヒクルを与えた対照は、ベースライン組織マロニルＣｏＡレベルを決定するために含め、一方絶食した動物は、マロニルＣｏＡレベルに対して絶食が与えた影響を決定するために含めた。化合物投与の１時間後、動物をＣＯ２で窒息させ、組織を取り出した。特に、血液を心臓穿刺によって捕集し、ＥＤＴＡを含有するＢＤ  Ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒチューブ中に入れ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国ニュージャージー州）、混合し、氷上に置いた。血漿を用いて薬物曝露を決定した。肝臓および四頭筋を取り出し、直ちに凍結クランプし、金属箔で包み、液体窒素中で保管した。
【０３９０】
組織を液体Ｎ２下で微粉砕して、サンプリングにおける均一性を確保した。ＦａｓｔＰｒｅｐ  ＦＰ１２０（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、速度＝５．５、４５秒間）中のＬｙｓｉｎｇ  Ｍａｔｒｉｘ  Ａ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、ＰＮ  ６９１０）に溶かした５倍体積量の１０％トリカルボン酸を用いて組織（１５０〜２００ｍｇ）からマロニルＣｏＡを抽出した。１５０００×ｇで３０分間遠心分離（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ  ５４０２）した後にマロニルＣｏＡを含有する上清を細胞片から取り出した。分析が完了するまで試料を−８０℃で安定して凍結させた。
【０３９１】
肝臓および筋肉組織中のマロニルＣｏＡレベルの分析は、以下の方法論を用いて評価することができる。
【０３９２】
この方法は、以下の物質を利用する：Ｉｓｏｔｅｃ（米国オハイオ州Ｍｉａｍｉｓｂｕｒｇ）から購入したマロニルＣｏＡテトラリチウム塩およびマロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡトリリチウム塩、過塩素酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ、ｃａｔ  ｎｏ．４１０２４１）、トリクロロ酢酸（ＡＣＲＯＳ、ｃａｔ  ｎｏ．４２１４５）、リン酸（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、ｃａｔ  ｎｏ．０２６０−０１）、ギ酸アンモニウム（Ｆｌｕｋａ、ｃａｔ  ｎｏ．１７８４３）、メタノール（ＨＰＬＣグレード、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、ｃａｔ  ｎｏ．９０９３−３３）、および水（ＨＰＬＣグレード、Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、４２１８−０３）を使用して必要とする移動相を作成した。Ｓｔｒａｔａ−Ｘオンライン固相抽出カラム、２５μｍ、２０ｍｍ×２．０ｍｍ  Ｉ．Ｄ（ｃａｔ  ｎｏ．００Ｍ−Ｓ０３３−Ｂ０−ＣＢ）をＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（米国カリフォルニア州Ｔｏｒｒａｎｃｅ）から得た。ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８逆相カラム、３．５μｍ、１００ｍｍ×３．０ｍｍ  Ｉ．Ｄ．（ｃａｔ  ｎｏ．１８６００２５４３）をＷａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（米国マサチューセッツ州Ｍｉｌｆｏｒｄ）から購入した。
【０３９３】
この方法は、以下の装備を利用して行うことができる。Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００バイナリーポンプ、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００クォータナリーポンプおよび２個のＶａｌｃｏ  Ｃｈｅｍｉｎｅｒｔ  ６ポート２位置弁を用いた二次元クロマトグラフィー。１０℃で保持したＰｅｌｔｉｅｒ冷却スタックおよび２０μＬサンプリングループを備えたＬＥＡＰ  ＨＴＣ  ＰＡＬオートサンプラーによって試料を導入した。オートサンプラーのためのニードル洗浄溶液は、Ｗａｓｈ  １が１０％トリクロロ酢酸水溶液（ｗ／ｖ）であり、Ｗａｓｈ  ２が９０：１０  メタノール：水である。ＭｉｃｒｏＴｅｃｈ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｍｉｃｒｏ−ＬＣ  Ｃｏｌｕｍｎ  Ｏｖｅｎを用いて分析用カラム（Ｓｕｎｆｉｒｅ）を３５℃で保持した。Ｔｕｒｂｏ  Ｉｏｎ  Ｓｐｒａｙを備えたＡＢＩ  Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ３０００三連四重極質量分析計で溶離液を分析した。
【０３９４】
オンライン固相抽出および逆相クロマトグラフィーに関して異なる勾配溶離条件を用いて同時に二次元クロマトグラフィーを行った。この方法の一般的な計画は、第１次元をサンプル洗浄および目的の分析物の捕捉のために利用し、続いて第１次元から第２次元上への溶離のために両方の次元を短時間カップリングするようなものであった。両次元を続いて脱共役させて、定量化のために第２次元から分析物を勾配溶離させ、同時に配列中の次の試料のために第１次元を調製した。両次元を簡単に連結した場合、第１次元中の移動相の流れを第２次元上への分析物溶離のために逆流させて、最適ピーク幅、ピーク形状、および溶離時間を可能にする。
【０３９５】
ＨＰＬＣ系の第１次元は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｓｔｒａｔａ−Ｘオンライン固相抽出カラムと溶媒Ａが１００ｍＭ過塩素酸ナトリウム／０．１％（ｖ／ｖ）リン酸および溶媒Ｂがメタノールからなる移動相とを利用した。
【０３９６】
ＨＰＬＣ系の第２次元は、Ｗａｔｅｒｓ  ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８逆相カラムと溶媒Ａが１００ｍＭギ酸アンモニウムおよび溶媒Ｂがメタノールからなる移動相とを利用した。勾配の初期条件を２分間保持し、この間に分析物を分析用カラムに移した。分析用で維持している間、オンラインＳＰＥカラムから分析物を溶離するのに初期条件は十分な強度であったことが重要であった。その後、洗浄および再平衡ステップの前に４．５分で７４．５％Ａまで勾配が直線的に上がった。
【０３９７】
質量分析は、ＨＰＬＣと連結すると、複雑な基質中の分析物を定量的に測定する場合に高選択的および高感度な方法になり得るが、依然として干渉および抑制を受ける。二次元ＨＰＬＣを質量分析計と連結することによって、これらの干渉は著しく減少する。さらに、三連四重極質量分析計の多重反応モニタリング（ＭＲＭ）特色を利用することによって、信号対雑音比が著しく改善した。
【０３９８】
このアッセイでは、質量分析計を、ＴｕｒｂｏｌｏｎＳｐｒａｙ電圧２２５０Ｖで陽イオンモードにおいて操作した。噴霧ガスを４５０℃まで加熱した。デクラスタリング電位（ＤＰ）、集束電位（ＦＰ）、および衝突エネルギー（ＣＥ）を、それぞれ６０、３４０、および４２Ｖに設定した。四重極１（Ｑ１）分解能をユニット分解能に設定し、四重極３（Ｑ３）を低に設定した。ＣＡＤガスを８に設定した。モニターしたＭＲＭ転移は、停止時間２００ｍｓでのマロニルＣｏＡ：８５４．１→３４７．０ｍ／ｚ（Ｌ．Ｇａｏら（２００７）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  ８５３、３０３〜３１３）、およびマロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ：８５７．１→３５０．０ｍ／ｚに関してであった。溶離液を、予想した分析物の溶離時間付近で質量分析計に分流し、他の場合には、供給源の保持および器械使用の頑健性の向上を助けるために廃棄した。得られたクロマトグラムを、Ａｎａｌｙｓｔソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて組み込んだ。マロニルＣｏＡの組織濃度を、１０％トリクロロ酢酸水溶液で調製した標準曲線から計算した。
【０３９９】
組織抽出物中のマロニルＣｏＡの定量化のための標準曲線を含む試料を１０％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）で調製し、０．０１〜１ｐｍｏｌ／μＬの範囲であった。マロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ（最終濃度０．４ｐｍｏｌ／μＬ）を各標準曲線成分および試料に内部標準として加えた。
【０４００】
アッセイ内品質対照を６個調製した。絶食させた動物から調製したプールした抽出物から３個、および餌を与えた動物から作製したプールから３個。これらは、０、０．１または０．３ｐｍｏｌ／μＬの１２Ｃ−マロニルＣｏＡならびにマロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ（０．４ｐｍｏｌ／μＬ）を加えた別々の試料として実行した。各アッセイ内品質対照は、水性組織抽出物を８５％含有し、残りの部分が内部標準（０．４ｐｍｏｌ／μＬ）および１２Ｃ−マロニルＣｏＡによって占められていた。アッセイ間対照を各実験に含めた。それらは１個の絶食させたおよび１個の餌を与えたプールした四頭筋の試料および／または１個の絶食させたおよび１個の餌を与えたプールした肝臓の試料で構成される。かかる全ての対照に、マロニル−１３Ｃ３−ＣｏＡ（０．４ｐｍｏｌ／μＬ）を加えている。
【０４０１】
下記に示されているある種の式（Ｉ）の化合物を、上記のｉｎ  ｖｉｖｏ試験で使用して、肝臓および筋肉組織におけるマロニルＣｏＡレベルに対するその作用を決定した。結果を以下の表に示す。
【０４０２】
【表２７】
0005435592.tif 000132