(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式［１’］で示される化合物又はその塩。
0005626427.tif 000155
（式中、Ｒ１ａは、炭素数１〜５の無置換のアルキル基、又は下記一般式［２］で示される基を置換基として有する炭素数１〜５のアルキル基を表し、
Ｒ２ａは、下記一般式［２］で示される基、又は下記一般式［３］で示される基を置換基として有する炭素数１〜３のアルキル基を表し、
Ｒ３ａ及びＲ５ａは、炭素数１〜３の無置換のアルキル基、又は下記一般式［３］で示される基を置換基として有する炭素数１〜３のアルキル基を表し、
Ｒ４ａ及びＲ１１ａは、炭素数１の無置換のアルキル基を表し、
Ｒ６ａは、炭素数１〜３の無置換のアルキル基、又は下記一般式［２］で示される基
若しくは下記一般式［３］で示される基を置換基として有する炭素数１〜３のアルキル基を表し、
Ｒ８ａは、下記一般式［３］で示される基を表し、
ｎは１〜２の整数を表す。
また、Ｒ１ａとＲ６ａ又はＲ１ａとＲ２ａが、一般式［６０’］で示される２価の基を形成していても良い。
0005626427.tif 000156
[式中、T3は炭素数２〜５のアルキレン基を表し、R１４は−OR１２（式中、Ｒ１２は水素原子、アルカリ金属原子又はアニオンを表す）又は一般式[７３’]
0005626427.tif 000157
（式中、ｍ’は１〜５の整数を表し、Ｒ１２は前記に同じ）を表す。]
一般式［２］：
0005626427.tif 000158
（式中、Ｒ１２は前記に同じ）、
一般式［３］：
0005626427.tif 000159
（式中、Ｒ１３は水素原子、アルカリ金属原子又はアニオンを表す）をそれぞれ表す。
但し、Ｒ１ａ〜Ｒ６ａ及びＲ８ａに含まれる−COOR１２及び−SO３R13のいずれか１つはアニオン型である。）
【請求項２】
R１４が−OR１２（式中、Ｒ１２は前記に同じ）である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
請求項１〜２で示される化合物から選ばれる化合物と被標識物質を直接又は間接的に結合させた標識化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なピラゾール系シアニン色素に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、生化学検査や遺伝子検査の分野では、測定対象物の検出に対して高い検出感度が求められており、標識剤（標識物質）である蛍光色素の位置づけが非常に重要なファクターとなってきている。
【０００３】
蛍光色素としては、種々の目的に応じて、例えばシアニン色素誘導体、クマリン色素誘導体、フルオレセイン色素誘導体、ローダミン色素誘導体等が用いられるが、中でも600nm以上の近赤外領域に蛍光特性を有する色素として、シアニン色素誘導体が汎用されている。
【０００４】
シアニン色素誘導体としては、例えばＣｙ３、Ｃｙ５〔ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社（旧社名アマシャムバイオサイエンス社）製〕等が先導的な蛍光試薬として知られており、また、検出装置の測光仕様としてもＣｙ５の蛍光特性がスタンダードとして用いられている現状にある。
【０００５】
このような状況下、Ｃｙ３とＣｙ５の２波長を励起波長の基準として、シアニン色素誘導体の開発が行われている。Ｃｙ３及びＣｙ５は、２つのインドレニン骨格をポリメチン鎖で結合した構造（インドレニン系シアニン色素）を有しており、この構造を基本骨格として、例えば水溶性の改善、会合状態の回避等による高感度化を目的とした各種シアニン色素誘導体が開発されている（例えば特許文献１、特許文献２、特許文献３等参照）。
【０００６】
また、他のシアニン色素誘導体として、アザインドレニン骨格とピラゾール骨格がポリメチン鎖で結合された構造を有するものが開発されている（例えば特許文献４、特許文献５等参照）。
【０００７】
更には、例えばポリメチン鎖等で結合された２つのインドレニン骨格が更にスペーサー等で架橋された構造を有するものが開発されている（例えば特許文献６、特許文献７、特許文献８等）。
【０００８】
一方、光学系に使用されるレーザー光源は、光磁気ディスクの大容量化を実現するため、益々短波長化、高出力化されている。また、温度ドリフト幅の非常に小さい安定した半導体レーザー等の入手も可能となってきている。
【０００９】
このような状況下、従来の光学特性よりもエネルギー的に効率的な短波長領域に於いて、従来の色素よりも高感度な蛍光特性を示す新規なシアニン色素誘導体の開発が望まれている。
【００１０】
【特許文献１】米国特許第５，２６８，４８６号公報
【特許文献２】米国特許第５，４８６，６１６号公報
【特許文献３】米国特許第５，５６９，７６６号公報
【特許文献４】特開２００３−０３４６９６号公報
【特許文献５】特開２００３−０３４６９７号公報
【特許文献６】米国特許第５，５７１，３８８号公報
【特許文献７】米国特許第５，８００，９９５号公報
【特許文献８】国際公開ＷＯ０１／０２３７４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、上記した如き状況に鑑みなされたもので、従来の光学系よりも短波長領域で、高感度な性能を有し、且つ高い水溶性を示すピラゾール骨格とインドール骨格を有する新規なシアニン色素誘導体を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、下記（１）〜（３）の発明である。
（１）一般式［５０］で示される化合物又はその塩。
0005626427.tif 000002
【００１３】
〔式中、Ｒ１’〜Ｒ６’は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換のアルキル基を表し、Ｒ７’〜Ｒ１０’は夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、カルバモイル基、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式［２］
0005626427.tif 000003
【００１４】
（式中、Ｒ１２は水素原子、炭素数１〜１０のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アンモニウムイオン、アンモニウムイオン又はアニオンを表す。）で示される基、一般式［３］
0005626427.tif 000004
【００１５】
（式中、Ｒ１３は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモニウムイオン、アンモニウムイオン又はアニオンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族ヘテロ環チオ基、水素原子、水酸基、シアノ基、ホルミル基、チオール基若しくはニトロ基を表し、Ｒ１１’は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基若しくはアリール基を表し、ｎは０〜３の整数を表す。尚、Ｒ１’とＲ２’、Ｒ４’とＲ５’、Ｒ１’とＲ６’及びＲ２’とＲ４’の何れかが、−Ｏ−基、−Ｓ−基、−ＣＯＯ−基及び一般式［５２］〜［５４］
0005626427.tif 000005
【００１６】
（式中、Ｒ５０は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはアリール基を表す。）で示される基から選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで２価の基を形成していてもよく、当該２価の基を形成する場合は、Ｒ１’〜Ｒ１１’、並びにＲ１’とＲ２’、Ｒ４’とＲ５’、Ｒ１’とＲ６’及びＲ２’とＲ４’の何れかで形成される２価の基のうち少なくとも１つは一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有し、当該２価の基を形成しない場合は、Ｒ１’〜Ｒ１１’のうち少なくとも１つは一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。〕
（２）上記（１）の化合物と被標識物質を直接又は間接的に結合させた標識化合物。
（３）上記（１）の化合物を直接又は間接的に被標識物質と結合させることを特徴とする、被標識物質の標識方法。
【発明の効果】
【００１７】
本発明のピラゾール系シアニン色素は、ピラゾール骨格とインドール骨格がポリメチン鎖で結合された構造を有していることから、従来の光源よりも短波長領域で蛍光特性を有するため、エネルギー効率の高い短波長領域の光源が使用可能となる。またこれを標識剤（標識物質）として用いて測定対象物を検出する場合、従来のシアニン色素誘導体が有していた例えば水溶性が低い、色素同士の会合に起因した消光により検出感度が低下する等の問題点を有することなく測定対象物を高い検出感度で検出することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
一般式［５０］で示される化合物のうち、Ｒ１’とＲ２’、Ｒ４’とＲ５’、Ｒ１’とＲ６’及びＲ２’とＲ４’の何れかが、−Ｏ−基、−Ｓ−基、−ＣＯＯ−基及び一般式［５２］〜［５４］で示される基から選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで２価の基を形成していない化合物としては、例えば下記一般式［１］で示されるものが挙げられる。
0005626427.tif 000006
【００１９】
〔式中、Ｒ１〜Ｒ６は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換アルキル基を表し、Ｒ７〜Ｒ１０は夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、カルバモイル基、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式［２］
0005626427.tif 000007
【００２０】
（式中、Ｒ１２は水素原子、炭素数１〜１０のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アンモニウムイオン、アンモニウムイオン又はアニオンを表す。）で示される基、一般式［３］
0005626427.tif 000008
【００２１】
（式中、Ｒ１３は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモニウムイオン、アンモニウムイオン又はアニオンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族ヘテロ環チオ基、水素原子、水酸基、シアノ基、ホルミル基、チオール基若しくはニトロ基を表し、Ｒ１１は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基若しくはアリール基を表し、ｎは０〜３の整数を表す。但し、Ｒ１〜Ｒ１１のうち少なくとも１つは一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。〕
【００２２】
一般式［５０］で示される化合物のうち、Ｒ１’とＲ２’、Ｒ４’とＲ５’、Ｒ１’とＲ６’及びＲ２’とＲ４’の何れかが、−Ｏ−基、−Ｓ−基、−ＣＯＯ−基及び一般式［５２］〜［５４］で示される基から選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで２価の基を形成する化合物としては、例えば下記一般式［５１］で示されるものが挙げられる。
0005626427.tif 000009
【００２３】
〔式中、Ｒ１”〜Ｒ６”は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換のアルキル基を表し、Ｒ７”〜Ｒ１０”は夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、カルバモイル基、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式［２］
0005626427.tif 000010
【００２４】
（式中、Ｒ１２は水素原子、炭素数１〜１０のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アンモニウムイオン、アンモニウムイオン又はアニオンを表す。）で示される基、一般式［３］
0005626427.tif 000011
【００２５】
（式中、Ｒ１３は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモニウムイオン、アンモニウムイオン又はアニオンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族ヘテロ環チオ基、水素原子、水酸基、シアノ基、ホルミル基、チオール基若しくはニトロ基を表し、Ｒ１１”は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基若しくはアリール基を表し、ｎは０〜３の整数を表す。但し、Ｒ１”とＲ２”、Ｒ４”とＲ５”、Ｒ１”とＲ６”及びＲ２”とＲ４”の何れかが、−Ｏ−基、−Ｓ−基、−ＣＯＯ−基及び一般式［５２］〜［５４］
0005626427.tif 000012
【００２６】
（式中、Ｒ５０は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはアリール基を表す。）で示される基から選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで２価の基を形成する。また、Ｒ１”〜Ｒ１１”、並びにＲ１”とＲ２”、Ｒ４”とＲ５”、Ｒ１”とＲ６”及びＲ２”とＲ４”の何れかで形成される２価の基のうち少なくとも１つは一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。〕
【００２７】
一般式［５０］で示される化合物を、より具体的な化合物である一般式［１］及び［５１］で示される化合物の詳細を以下に説明する。
【００２８】
従って、一般式［５０］に於けるＲ１’〜Ｒ１１’の定義等は、以下に述べる一般式［１］に於けるＲ１〜Ｒ１１及び一般式［５１］で示される化合物中のＲ１”〜Ｒ１１”の定義等と実質同じである。
【００２９】
１．本発明の化合物［１］
１−１．本発明の化合物［１］
一般式［５０］で示される化合物のうち、Ｒ１’とＲ２’、Ｒ４’とＲ５’、Ｒ１’とＲ６’及びＲ２’とＲ４’の何れかが、−Ｏ−基、−Ｓ−基、−ＣＯＯ−基及び一般式［５２］〜［５４］で示される基から選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで２価の基を形成していない化合物としては、例えば下記一般式［１］で示されるものが挙げられる。
0005626427.tif 000013
【００３０】
〔式中、Ｒ１〜Ｒ６は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換アルキル基を表し、Ｒ７〜Ｒ１０は夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、カルバモイル基、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式［２］
0005626427.tif 000014
【００３１】
（式中、Ｒ１２は水素原子、炭素数１〜１０のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アンモニウムイオン、アンモニウムイオン又はアニオンを表す。）で示される基、一般式［３］
0005626427.tif 000015
【００３２】
（式中、Ｒ１３は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモニウムイオン、アンモニウムイオン又はアニオンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族ヘテロ環チオ基、水素原子、水酸基、シアノ基、ホルミル基、チオール基若しくはニトロ基を表し、Ｒ１１は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基若しくはアリール基を表し、ｎは０〜３の整数を表す。但し、Ｒ１〜Ｒ１１のうち少なくとも１つは一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。〕
【００３３】
一般式［１］に於いて、Ｒ１〜Ｒ６で示される、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換アルキル基としては、置換又は無置換アルキル基のアルキル鎖中にアミド結合を通常１〜１０個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１個含有しているものが挙げられる。
【００３４】
Ｒ１〜Ｒ６で示される、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換アルキル基のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-ヘキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、ネオヘプチル基、n-オクチル基、イソオクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ネオオクチル基、n-ノニル基、イソノニル基、sec-ノニル基、tert-ノニル基、ネオノニル基、n-デシル基、イソデシル基、sec-デシル基、tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられ、中でも、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、n-ペンチル基等の直鎖状のアルキル基が好ましい。
【００３５】
Ｒ１〜Ｒ６で示される、アミド結合を有していてもよい、置換アルキル基の置換基としては、当該アミド結合を有していてもよいアルキル基中の水素原子の一部が置換基で置換されているものが挙げられ、当該置換基としては、例えば一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基等が挙げられる。
【００３６】
一般式［２］及び［３］に於いて、Ｒ１２及びＲ１３で示されるアルカリ金属原子としては、例えばリチウム原子、ナトリウム原子、カリウム原子、ルビジウム原子等が挙げられ、中でもナトリウム原子又はカリウム原子が好ましく、就中ナトリウム原子がより好ましい。
【００３７】
Ｒ１２及びＲ１３で示される有機アンモニウムイオンとしては、例えばトリアルキルアンモニウムイオン等が挙げられる。当該トリアルキルアンモニウムイオンとしては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０のもの、好ましくは１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばトリメチルアンモニウムイオン、トリエチルアンモニウムイオン、トリn-プロピルアンモニウムイオン、トリイソプロピルアンモニウムイオン、トリブチルアンモニウムイオン、トリペンチルアンモニウムイオン、トリヘキシルアンモニウムイオン、トリヘプチルアンモニウムイオン、トリオクチルアンモニウムイオン、トリノニルアンモニウムイオン、トリデシルアンモニウムイオン、トリシクロプロピルアンモニウムイオン、トリシクロブチルアンモニウムイオン、トリシクロペンチルアンモニウムイオン、トリシクロヘキシルアンモニウムイオン、トリシクロヘプチルアンモニウムイオン、トリシクロオクチルアンモニウムイオン、トリシクロノニルアンモニウムイオン、トリシクロデシルアンモニウムイオン等が挙げられ、中でもトリメチルアンモニウムイオン又はトリエチルアンモニウムイオンが好ましく、就中、トリエチルアンモニウムイオンがより好ましい。
【００３８】
一般式［２］に於いて、Ｒ１２で示される炭素数１〜１０のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜６、より好ましくは１〜３のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-へキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、ネオヘプチル基、n-オクチル基、イソオクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ネオオクチル基、n-ノニル基、イソノニル基、sec-ノニル基、tert-ノニル基、イソノニル基、n-デシル基、イソデシル基、sec-デシル基、tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【００３９】
一般式［２］で示される基の好ましい具体例としては、例えばカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、そのアニオン〔カルボキシレート（−ＣＯＯ−）〕、そのアルカリ金属塩（例えばリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、ルビジウム塩等）、そのアンモニウム塩、その有機アンモニウム塩（例えばトリメチルアンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、トリプロピルアンモニウム塩等）等が挙げられる。
【００４０】
一般式［３］で示される基の好ましい具体例としては、例えばスルホ基（−ＳＯ３Ｈ）、そのアニオン〔スルホネート（−ＳＯ３−）〕、そのアルカリ金属塩（例えばリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、ルビジウム塩等）、そのアンモニウム塩、その有機アンモニウム塩（例えばトリメチルアンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、トリプロピルアンモニウム塩等）等が挙げられる。
【００４１】
Ｒ１〜Ｒ６で示される、アミド結合を有していてもよい、置換アルキル基の置換基（即ち、一般式［２］で示される基又は一般式［３］で示される基）は、当該アルキル基の末端の水素原子と置換されているものが好ましい。
【００４２】
Ｒ１及びＲ２の好ましい具体例としては、例えばカルボキシエチル基、カルボキシプロピル基、カルボキシブチル基、カルボキシペンチル基、これらのアニオン（カルボキシレート）、これらのアルカリ金属塩の基（例えばナトリウム塩、カリウム塩等）、これらの有機アンモニウム塩の基（例えばトリメチルアンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、アンモニウム塩等）等の一般式［２］で示される基を置換基として有する炭素数１〜５のアルキル基、例えばスルホエチル基、スルホプロピル基、スルホブチル基、スルホペンチル基、これらのアニオン（スルホネート）、これらのアルカリ金属塩の基（例えばナトリウム塩、カリウム塩等）、これらの有機アンモニウム塩の基（例えばトリメチルアンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、アンモニウム塩等）等の一般式［３］で示される基を置換基として有する炭素数１〜５のアルキル基等が挙げられる。
【００４３】
また、Ｒ３とＲ４の好ましい組み合わせ及びＲ５とＲ６の好ましい組み合わせとしては、何れか一方（即ち、Ｒ３とＲ４の何れか一方及びＲ５とＲ６の何れか一方）が炭素数１〜６のアルキル基（例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-ヘキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基等）であり、他方が、例えばカルボキシエチル基、カルボキシプロピル基、カルボキシブチル基、カルボキシペンチル基、これらのアニオン（カルボキシレート）、これらのアルカリ金属塩の基（例えばナトリウム塩、カリウム塩等）、これらのアンモニウム塩の基若しくは有機アンモニウム塩の基（例えばトリメチルアンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩等）等の一般式［２］で示される基を置換基として有する炭素数１〜５のアルキル基、例えばスルホエチル基、スルホプロピル基、スルホブチル基、スルホペンチル基、これらのアニオン（スルホネート）、これらのアルカリ金属塩の基（例えばナトリウム塩、カリウム塩等）、有機アンモニウム塩の基（例えばトリメチルアンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、アンモニウム塩等）等の一般式［３］で示される基を置換基として有する炭素数１〜５のアルキル基であるものが好ましい。
【００４４】
一般式［１］に於いて、Ｒ７〜Ｒ１０で示される置換又は無置換のアルキル基のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜６、好ましくは１〜３のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-ヘキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられる。
【００４５】
Ｒ７〜Ｒ１０で示される置換又は無置換のアルケニル基のアルケニル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数２〜６、好ましくは２〜４のものが挙げられ、具体的には、例えばビニル基、アリル基、1-プロペニル基、イソプロペニル基、3-ブテニル基、2-ブテニル基、1-ブテニル基、1,3-ブタジエニル基、4-ペンテニル基、3-ペンテニル基、2-ペンテニル基、1-ペンテニル基、1,3-ペンタジエニル基、2,4-ペンタジエニル基、1,1-ジメチル-2-プロペニル基、1-エチル-2-プロペニル基、1,2-ジメチル-1-プロペニル基、1-メチル-1-ブテニル基、5-ヘキセニル基、4-ヘキセニル基、3-ヘキセニル基、2-ヘキセニル基、1-ヘキセニル基、1-シクロプロペニル基、2-シクロペンテニル基、2,4-シクロペンタンジエニル基、1-シクロヘキセニル基、2-シクロヘキセニル基、3-シクロヘキセニル基等が挙げられる。
【００４６】
Ｒ７〜Ｒ１０で示される置換又は無置換のアルキニル基のアルキニル基としては、通常炭素数２〜６、好ましくは２〜４のものが挙げられ、具体的には、例えばエチニル基、2-プロピニル基、3-ブチニル基、1-メチル-2-プロピニル基、4-ペンチニル基、2-メチル-4-ペンチニル基、5-ヘキシニル基等が挙げられる。
【００４７】
Ｒ７〜Ｒ１０で示される置換又は無置換のアリール基のアリール基としては、通常炭素数６〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばフェニル基、ナフチル基等が挙げられる。
【００４８】
Ｒ７〜Ｒ１０で示される置換又は無置換のアルコキシ基のアルコキシ基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜６、好ましくは１〜３のものが挙げられ、具体的には、例えばメトキシ基、エトキシ基、n-プロポキシ基、イソプロポキシ基、n-ブトキシ基、イソブトキシ基、sec-ブトキシ基、tert-ブトキシ基、n-ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、sec-ペンチルオキシ基、tert-ペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、n-ヘキシルオキシ基、イソヘキシルオキシ基、sec-ヘキシルオキシ基、tert-ヘキシルオキシ基、ネオヘキシルオキシ基、シクロプロポキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基等が挙げられる。
【００４９】
Ｒ７〜Ｒ１０で示される置換又は無置換のアリールオキシ基のアリールオキシ基としては、通常炭素数６〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばフェニルオキシ基、ナフトキシ基等が挙げられる。
【００５０】
Ｒ７〜Ｒ１０で示される置換又は無置換のアルキルチオ基のアルキルチオ基としては、アルコキシ基の酸素原子が硫黄原子で置換されたものであり、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜６、好ましくは１〜３のものが挙げられ、具体的には、例えばメチルチオ基、エチルチオ基、n-プロピルチオ基、イソプロピルチオ基、n-ブチルチオ基、イソブチルチオ基、sec-ブチルチオ基、tert-ブチルチオ基、n-ペンチルチオ基、イソペンチルチオ基、sec-ペンチルチオ基、tert-ペンチルチオ基、ネオペンチルチオ基、n-ヘキシルチオ基、イソヘキシルチオ基、sec-ヘキシルチオ基、tert-ヘキシルチオ基、ネオヘキシルチオ基、シクロプロピルチオ基、シクロブチルチオ基、シクロペンチルチオ基、シクロヘキシルチオ基等が挙げられる。
【００５１】
Ｒ７〜Ｒ１０で示される置換又は無置換のアリールチオ基のアリールチオ基としては、アリールオキシ基の酸素原子が硫黄原子で置換されたものであり、通常炭素数６〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばフェニルチオ基、ナフチルチオ基等が挙げられる。
【００５２】
Ｒ７〜Ｒ１０で示される置換又は無置換のアルキルスルホニル基のアルキルスルホニル基としては、スルホ基（−ＳＯ２ＯＨ）の−ＯＨ基がアルキル基で置換されたものが挙げられ、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメチルスルホニル基、エチルスルホニル基、n-プロピルスルホニル基、イソプロピルスルホニル基、n-ブチルスルホニル基、イソブチルスルホニル基、sec-ブチルスルホニル基、tert-ブチルスルホニル基、n-ペンチルスルホニル基、イソペンチルスルホニル基、sec-ペンチルスルホニル基、tert-ペンチルスルホニル基、ネオペンチルスルホニル基、n-ヘキシルスルホニル基、イソヘキシルスルホニル基、sec-ヘキシルスルホニル基、tert-ヘキシルスルホニル基、ネオヘキシルスルホニル基、シクロプロピルスルホニル基、シクロブチルスルホニル基、シクロペンチルスルホニル基、シクロヘキシルスルホニル基等が挙げられる。
【００５３】
Ｒ７〜Ｒ１０で示される置換又は無置換のアリールスルホニル基のアリールスルホニル基としては、スルホ基（−ＳＯ２ＯＨ）の−ＯＨ基がアリール基で置換されたものが挙げられ、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数６〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばフェニルスルホニル基、ナフチルスルホニル基等が挙げられる。
【００５４】
Ｒ７〜Ｒ１０で示されるハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
【００５５】
Ｒ７〜Ｒ１０で示される芳香族ヘテロ環チオ基としては、チオール基（−ＳＨ）の水素原子が芳香族ヘテロ環基で置換されたものである。当該芳香族ヘテロ環基としては、例えば５員環又は６員環であり、異性原子として１〜３個の例えば窒素原子、酸素原子、硫黄原子等のヘテロ原子を含んでいるもの等が好ましく、具体的には、例えばフリル基、ピロリル基、インドリル基、プリニル基、キノリル基、ピリジル基、ピラジル基、ピリミジル基、オキサゾリル基、イミダゾリル基、チアゾリル基、ピラニル基等が挙げられる。
【００５６】
Ｒ７〜Ｒ１０で示される置換カルバモイル基としては、例えばカルバモイル（−ＣＯＮＨ２）基の水素原子１〜２個が炭素数１〜６のアルキル基又は炭素数６〜１０のアリール基で置換されたものが挙げられ、具体的には、例えばN-メチルカルバモイル基、N-エチルカルバモイル基、N-n-プロピルカルバモイル基、N-イソプロピルカルバモイル基、N-n-ブチルカルバモイル基、N-tert-ブチルカルバモイル基、N-n-ヘキシルカルバモイル基、N-シクロヘキシルカルバモイル基、N-メチルエチルカルバモイル基、N-ジシクロヘキシルカルバモイル基等のN-アルキルカルバモイル基、例えばN-フェニルカルバモイル基、N-ジフェニルカルバモイル基等のN-アリールカルバモイル基等が挙げられる。
【００５７】
Ｒ７〜Ｒ１０で示される置換スルファモイル基としては、例えばスルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）基の水素原子１〜２個が炭素数１〜６のアルキル基又は炭素数６〜１０のアリール基で置換されたものが挙げられ、具体的には、例えばN-メチルスルファモイル基、N-エチルスルファモイル基、N-n-プロピルスルファモイル基、N-イソプロピルスルファモイル基、N-n-ブチルスルファモイル基、N-tert-ブチルスルファモイル基、N-n-ヘキシルスルファモイル基、N-シクロヘキシルスルファモイル基、N-メチルエチルスルファモイル基、N-ジシクロヘキシルスルファモイル基等のN-アルキルスルファモイル基、例えばN-フェニルスルファモイル基、N-ジフェニルスルファモイル基等のN-アリールスルファモイル基等が挙げられる。
【００５８】
Ｒ７〜Ｒ１０で示される置換ウレイド基としては、ウレイド基（−ＮＨＣＯＮＨ２）の水素原子１〜３個が置換されたものが挙げられ、例えば下記式［４］〜［７］
0005626427.tif 000016
【００５９】
（式中、Ｒ１４〜Ｒ１６は夫々独立して、ハロゲン原子、アルキル基、スルホアミド基、カルボアミド基、スルホ基、カルボキシル基、ホスホ基、ヒドロキシル基又はアミノ基を表す。）で示される基が挙げられる。
【００６０】
一般式［４］〜［７］に於いて、Ｒ１４〜Ｒ１６で示されるハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
【００６１】
Ｒ１４〜Ｒ１６で示されるアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-へキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、ネオヘプチル基、n-オクチル基、イソオクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ネオオクチル基、n-ノニル基、イソノニル基、sec-ノニル基、tert-ノニル基、イソノニル基、n-デシル基、イソデシル基、sec-デシル基、tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【００６２】
Ｒ１４〜Ｒ１６で示されるスルホアミド基（−ＮＨＳＯ２Ｒ）としては、アミノ基の水素原子がアルキルスルホニル基で置換されたもの（アルキルスルホアミド基）又はアリールスルホニル基で置換されたもの（アリールスルホアミド基）が挙げられる。
【００６３】
当該アルキルスルホアミド基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０のもの、好ましくは１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメチルスルホアミド基、エチルスルホアミド基、n-プロピルスルホアミド基、イソプロピルスルホアミド基、n-ブチルスルホアミド基、イソブチルスルホアミド基、sec-ブチルスルホアミド基、tert-ブチルスルホアミド基、n-ペンチルスルホアミド基、イソペンチルスルホアミド基、sec-ペンチルスルホアミド基、tert-ペンチルスルホアミド基、ネオペンチルスルホアミド基、n-ヘキシルスルホアミド基、イソヘキシルスルホアミド基、sec-ヘキシルスルホアミド基、tert-ヘキシルスルホアミド基、ネオヘキシルスルホアミド基、シクロプロピルスルホアミド基、シクロブチルスルホアミド基、シクロペンチルスルホアミド基、シクロヘキシルスルホアミド基、n-ヘプチルスルホアミド基、イソヘプチルスルホアミド基、sec-ヘプチルスルホアミド基、tert-ヘプチルスルホアミド基、ネオヘプチルスルホアミド基、n-オクチルスルホアミド基、イソオクチルスルホアミド基、sec-オクチルスルホアミド基、tert-オクチルスルホアミド基、ネオオクチルスルホアミド基、n-ノニルスルホアミド基、イソノニルスルホアミド基、sec-ノニルスルホアミド基、tert-ノニルスルホアミド基、イソノニルスルホアミド基、n-デシルスルホアミド基、イソデシルスルホアミド基、sec-デシルスルホアミド基、tert-デシルスルホアミド基、ネオデシルスルホアミド基、シクロヘプチルスルホアミド基、シクロオクチルスルホアミド基、シクロノニルスルホアミド基、シクロデシルスルホアミド基等挙げられる。
【００６４】
当該アリールスルホアミド基としては、通常炭素数６〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばフェニルスルホアミド基、ナフチルスルホアミド基等が挙げられる。
【００６５】
Ｒ１４〜Ｒ１６で示されるカルボアミド基（−ＮＨＣＯＲ）としては、アミノ基の水素原子がアシル基で置換されたものが挙げられる。当該アシル基としては、例えば脂肪族カルボン酸由来のもの、芳香族カルボン酸由来のもの等が挙げられる。
【００６６】
脂肪族カルボン酸由来のカルボアミド基としては、直鎖状、分枝状或いは環状でもよく、また更に鎖中に二重結合を有していてもよく、通常炭素数２〜２０、好ましくは炭素数２〜１５、より好ましくは２〜１０、更に好ましくは２〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばアセチルアミド基、プロピオニルアミド基、ブチリルアミド基、イソブチリルアミド基、バレリルアミド基、イソバレリルアミド基、ピバロイルアミド基、ヘキサノイルアミド基、ヘプタノイルアミド基、オクタノイルアミド基、デカノイルアミド基、ラウロイルアミド基、ミリストイルアミド基、パルミトイルアミド基、ステアロイルアミド基、イコサノイルアミド基、アクリロイルアミド基、メタクリロイルアミド基、クロトノイルアミド基、オレオイルアミド基等が挙げられる。
【００６７】
芳香族カルボン酸由来のカルボアミド基としては、通常炭素数７〜１５、好ましくは７〜１１のものが挙げられ、具体的には、例えばベンゾイルアミド基、ナフトイルアミド基、アントイルアミド基等が挙げられる。
【００６８】
Ｒ７〜Ｒ１０で示される置換アミノ基としては、アミノ基の水素原子１〜２個が置換基で置換されたものが挙げられ、これら置換基としては、例えばアルキル基、アルコキシカルボニル基、アシル基、スルホ基等が挙げられる。
【００６９】
置換アミノ基の置換基として挙げられるアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-へキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、ネオヘプチル基、n-オクチル基、イソオクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ネオオクチル基、n-ノニル基、イソノニル基、sec-ノニル基、tert-ノニル基、イソノニル基、n-デシル基、イソデシル基、sec-デシル基、tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【００７０】
置換アミノ基の置換基として挙げられるアルコキシカルボニル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、n-プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、n-ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基、sec-ブトキシカルボニル基、tert-ブトキシカルボニル基、n-ペンチルオキシカルボニル基、イソペンチルオキシカルボニル基、sec-ペンチルオキシカルボニル基、tert-ペンチルオキシカルボニル基、ネオペンチルオキシカルボニル基、n-ヘキシルオキシカルボニル基、イソヘキシルカルボニル基、sec-ヘキシルオキシカルボニル基、tert-ヘキシルオキシカルボニル基、ネオヘキシルオキシカルボニル基、n-ヘプチルオキシカルボニル基、イソヘプチルオキシカルボニル基、sec-ヘプチルオキシカルボニル基、tert-ヘプチルオキシカルボニル基、ネオヘプチルオキシカルボニル基、n-オクチルオキシカルボニル基、イソオクチルオキシカルボニル基、sec-オクチルオキシカルボニル基、tert-オクチルオキシカルボニル基、ネオオクチルオキシカルボニル基、n-ノニルオキシカルボニル基、イソノニルオキシカルボニル基、sec-ノニルオキシカルボニル基、tert-ノニルオキシカルボニル基、ネオノニルオキシカルボニル基、n-デシルオキシカルボニル基、イソデシルオキシカルボニル基、sec-デシルオキシカルボニル基、tert-デシルオキシカルボニル基、ネオデシルオキシカルボニル基、シクロプロポキシカルボニル基、シクロブトキシカルボニル基、シクロペンチルオキシカルボニル基、シクロヘキシルオキシカルボニル基、シクロヘプチルオキシカルボニル基、シクロオクチルオキシカルボニル基、シクロノニルオキシカルボニル基、シクロデシルオキシカルボニル基等が挙げられる。
【００７１】
置換アミノ基の置換基として挙げられるアシル基としては、例えば脂肪族カルボン酸由来のもの、芳香族カルボン酸由来のもの等が挙げられる。
【００７２】
当該脂肪族カルボン酸由来のアシル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状でもよく、また更に鎖中に二重結合を有していてもよく、通常炭素数２〜２０、好ましくは炭素数２〜１５、より好ましくは２〜１０、更に好ましくは２〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基、ピバロイル基、ヘキサノイル基、ヘプタノイル基、オクタノイル基、デカノイル基、ラウロイル基、ミリストイル基、パルミトイル基、ステアロイル基、イコサノイル基、アクリロイル基、メタクリロイル基、クロトノイル基、オレオイル基等が挙げられる。
【００７３】
当該芳香族カルボン酸由来のアシル基としては、通常炭素数７〜１５、好ましくは７〜１１のものが挙げられ、具体的には、例えばベンゾイル基、ナフトイル基、アントイル基等が挙げられる。
【００７４】
一般式［１］に於いて、Ｒ７〜Ｒ１０で示される、置換アルキル基、置換アルケニル基、置換アルキニル基、置換アリール基、置換アルコキシ基、置換アリールオキシ基、置換アルキルチオ基、置換アリールチオ基、置換アルキルスルホニル基又は置換アリールスルホニル基の置換基としては、例えばハロゲン原子、スルホアミド基、カルボアミド基、スルホ基、カルボキシル基、ホスホ基（リン酸基）、ヒドロキシル基、アミノ基等が挙げられる。置換基として挙げられる、ハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の具体例としては、一般式［４］〜［７］に於けるＲ１４〜Ｒ１６で示されるハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の例示と同様のものが挙げられる。
【００７５】
Ｒ７〜Ｒ１０の好ましい例としては、Ｒ７〜Ｒ１０中の３つが水素原子であり、残りの一つが一般式［３］で示されるスルホン酸由来の基であるものが挙げられ、当該スルホン酸由来の基の中でも、例えばスルホ基、そのアニオン（スルホネート）、そのアルカリ金属塩、有機アンモニウム塩等が好ましく、就中、例えばスルホ基、スルホネート、そのアルカリ金属塩（例えばナトリウム塩等）等がより好ましく、特に、Ｒ８が一般式［３］で示される基であるものが好ましい。
【００７６】
一般式［１］に於いて、Ｒ１１で示される置換又は無置換のアルキル基のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-へキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、ネオヘプチル基、n-オクチル基、イソオクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ネオオクチル基、n-ノニル基、イソノニル基、sec-ノニル基、tert-ノニル基、イソノニル基、n-デシル基、イソデシル基、sec-デシル基、tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【００７７】
Ｒ１１で示される置換又は無置換のアルケニル基のアルケニル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数２〜６、好ましくは２〜４のものが挙げられ、具体的には、例えばビニル基、アリル基、1-プロペニル基、イソプロペニル基、3-ブテニル基、2-ブテニル基、1-ブテニル基、1,3-ブタジエニル基、4-ペンテニル基、3-ペンテニル基、2-ペンテニル基、1-ペンテニル基、1,3-ペンタジエニル基、2,4-ペンタジエニル基、1,1-ジメチル-2-プロペニル基、1-エチル-2-プロペニル基、1,2-ジメチル-1-プロペニル基、1-メチル-1-ブテニル基、5-ヘキセニル基、4-ヘキセニル基、3-ヘキセニル基、2-ヘキセニル基、1-ヘキセニル基、1-シクロプロペニル基、2-シクロペンテニル基、2,4-シクロペンタンジエニル基、1-シクロヘキセニル基、2-シクロヘキセニル基、3-シクロヘキセニル基等が挙げられる。
【００７８】
Ｒ１１で示される置換又は無置換のアルキニル基のアルキニル基としては、通常炭素数２〜６、好ましくは２〜４のものが挙げられ、具体的には、例えばエチニル基、2-プロピニル基、3-ブチニル基、1-メチル-2-プロピニル基、4-ペンチニル基、2-メチル-4-ペンチニル基、5-ヘキシニル基等が挙げられる。
【００７９】
Ｒ１１で示される置換又は無置換のアリール基のアリール基としては、通常炭素数６〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばフェニル基、ナフチル基等が挙げられる。
【００８０】
Ｒ１１で示される、置換アルキル基、置換アルケニル基、置換アルキニル基又は置換アリール基の置換基としては、例えばハロゲン原子、スルホアミド基、カルボアミド基、スルホ基、カルボキシル基、ホスホ基、ヒドロキシル基、アミノ基等が挙げられ、当該ハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の具体例は、一般式［４］〜［７］に於けるＲ１４〜Ｒ１６で示されるハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の例示と同様のものが挙げられる。
【００８１】
Ｒ１１の中でも、無置換アルキル基が好ましく、就中、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、n-ペンチル基、n-ヘキシル基等がより好ましい。
【００８２】
一般式［１］に於いて、ｎは、通常０〜３の整数、好ましくは１又は２である。
【００８３】
一般式［１］に於けるＲ１〜Ｒ１１中に少なくとも１つ含有される一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基の中でも、一般式［２］で示される基又は一般式［３］で示される基が好ましい。
【００８４】
本発明の化合物中に含有される一般式［３］で示される基（例えばスルホ基等）は、水溶性を高め、該色素分子間での会合による蛍光消光を抑制し、蛍光強度を高めるため多く導入されている方が好ましく、本発明の化合物中に通常１〜４個、好ましくは２〜４個含有される。
【００８５】
本発明の化合物中に含有される一般式［２］で示される基（例えばカルボキシル基等）は、被標識物質と結合し得る基（例えばスクシンイミド基、ノルボルネン基等の反応活性基）を容易に導入することができるため、本発明の化合物中に通常１〜３個、好ましくは１〜２個含有される。
【００８６】
Ｒ１〜Ｒ１１に少なくとも含有される一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基（以下、「本発明の反応性基」と略記する。）は、Ｒ１〜Ｒ１１として本発明の反応性基そのものが存在するもの（即ちピラゾール骨格若しくはインドール骨格に当該反応性基が直接結合するもの）又はＲ１〜Ｒ１１に置換基として含有されるもののどちらでもよいが、当該反応性基がＲ１１に含有される場合には、置換基として含有されるのが好ましい。
【００８７】
一般式［１］で示される化合物としては、例えば一般式［１−１］
0005626427.tif 000017
【００８８】
（式中、Ｒ１〜Ｒ１１は前記に同じ。）で示される化合物（一般式［１］に於けるｎ＝１のものに相当）、一般式［１−２］
0005626427.tif 000018
【００８９】
（式中、Ｒ１〜Ｒ１１は前記に同じ。）で示される化合物（一般式［１］に於けるｎ＝２のものに相当）、一般式［１−３］
0005626427.tif 000019
【００９０】
（式中、Ｒ１〜Ｒ１１は前記に同じ。）で示される化合物（一般式［１］に於けるｎ＝０のものに相当）、一般式［１−４］
0005626427.tif 000020
【００９１】
（式中、Ｒ１〜Ｒ１１は前記に同じ。）で示される化合物（一般式［１］に於けるｎ＝３のものに相当）等が挙げられ、中でも一般式［１−１］又は［１−２］で示されるものが好ましい。
【００９２】
また、本発明の化合物［１］の中でも、例えば下記一般式［１’］
0005626427.tif 000021
【００９３】
（式中、Ｒ１ａ〜Ｒ６ａは夫々独立して一般式［２］又は［３］で示される基を置換基として有していてもよいアルキル基を表し、Ｒ８ａは、一般式［３］で示される基を表し、Ｒ１１ａはアルキル基を表し、ｎは前記に同じ。）で示されるものが好ましい。
【００９４】
一般式［１’］に於いて、Ｒ１ａ〜Ｒ６ａで示される一般式［２］又は［３］で示される基を置換基として有していてもよいアルキル基のアルキル基としては、前記一般式［１］に於けるＲ１〜Ｒ６で示される、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換アルキル基のアルキル基の例示と同様のものが挙げられる。
【００９５】
Ｒ３ａ及びＲ４ａは夫々独立して一般式［２］又は［３］で示される基を置換基として有していてもよいアルキル基が挙げられるが、中でもその一方が一般式［２］又は［３］で示される基を置換基として有するアルキル基であり、他方がアルキル基であるものが好ましい。
【００９６】
Ｒ５ａ及びＲ６ａは夫々独立して一般式［２］又は［３］で示される基を置換基として有していてもよいアルキル基が挙げられるが、中でもその一方が一般式［２］又は［３］で示される基を置換基として有するアルキル基であり、他方がアルキル基であるものが好ましい。
【００９７】
Ｒ１１ａで示されるアルキル基としては、前記一般式［１］に於けるＲ１１で示されるアルキル基の例示と同様のものが挙げられる。
【００９８】
一般式［１−１］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表１で示されるもの等が挙げられる。
【００９９】
【表１】
0005626427.tif 000022
【０１００】
一般式［１−２］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表２で示されるもの等が挙げられる。
【０１０１】
【表２】
0005626427.tif 000023
【０１０２】
一般式［１−３］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表３で示されるもの等が挙げられる。
【０１０３】
【表３】
0005626427.tif 000024
【０１０４】
一般式［１−４］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表４で示されるもの等が挙げられる。
【０１０５】
【表４】
0005626427.tif 000025
【０１０６】
また、本発明の化合物中に含有される本発明の反応性基を、例えば被標識物質等と結合させる場合には、当該反応性基に、被標識物質に含有される官能基（例えばアミノ基、カルボキシル基、チオール基、ヒドロキシル基、ホルミル基等）（以下、「被標識物質の官能基」と略記する場合がある。）との結合性を高める（活性化させる）ような基（以下、「本発明の反応活性基」と略記する場合がある。）が更に導入されていてもよい。
【０１０７】
尚、このような本発明の反応活性基、即ち、本発明の反応性基に被標識物質の官能基との結合性を高めるような基を導入したものも、本発明の反応性基に含まれる。
【０１０８】
このような反応活性基としては、被標識物質の官能基と結合させることができるものであれば特に限定されないが、通常この分野で用いられるものが全て挙げられる。
【０１０９】
本発明の反応活性基としては、被標識物質の官能基と結合させることができるものであれば特に限定されないが、通常この分野で用いられるものが全て挙げられ、例えばアミノ基との反応性を活性化させるもの（以下、「アミノ基に対する反応活性基」）、チオール基との反応性を活性化させるもの（以下、「チオール基に対する反応活性基」）、水酸基との反応性を活性化させるもの（以下、「水酸基に対する反応活性基」）、ホルミル基との反応性を活性化させるもの（以下、「ホルミル基に対する反応活性基」）等が挙げられる。
【０１１０】
アミノ基に対する反応活性基の好ましい具体例としては、例えばスクシンイミド基、スルホスクシンイミド基、ノルボルネン基、4-ニトロフェノキシ基、カルボン酸無水物由来の基（例えばアセトキシカルボニルメチル基、プロピオニルオキシカルボニルエチル基、ベンゾイルオキシベンジル基等）、炭素数１〜３のハロスルホニルアルキル基（例えばフルオロスルホニルメチル基、フルオロスルホニルエチル基、フルオロスルホニルプロピル基、クロロスルホニルメチル基、クロロスルホニルエチル基、クロロスルホニルプロピル基、ブロモスルホニルメチル基、ブロモスルホニルエチル基、ブロモスルホニルプロピル基、ヨードスルホニルメチル基、ヨードスルホニルエチル基、ヨードスルホニルプロピル基等）、ハロスルホニルアリール基（例えばフルオロスルホニルフェニル基、クロロスルホニルフェニル基、ブロモスルホニルフェニル基、ヨードスルホニルフェニル基等）、炭素数１〜３のハロカルボニルアルキル基（例えばフルオロカルボニルメチル基、フルオロカルボニルエチル基、フルオロカルボニルプロピル基、クロロカルボニルメチル基、クロロカルボニルエチル基、クロロカルボニルプロピル基、ブロモカルボニルメチル基、ブロモカルボニルエチル基、ブロモカルボニルプロピル基、ヨードカルボニルメチル基、ヨードカルボニルエチル基、ヨードカルボニルプロピル基等）、ハロカルボニルアリール基（例えばフルオロカルボニルフェニル基、クロロカルボニルフェニル基、ブロモカルボニルフェニル基、ヨードカルボニルフェニル基等）、ホスファアミダイト基、イソチオシアネート基、イソシアネート基、モノハロゲン（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）置換トリアジノ基、ジハロゲン（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）置換トリアジノ基、モノハロゲン（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）置換ピリミジノ基、ジハロゲン（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）置換ピリミジノ基、モノハロゲン（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）置換ピリジノ基、ジハロゲン（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）置換ピリジノ基、ホスホリルハライド（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）等が挙げられる。
【０１１１】
チオール基に対する反応活性基の好ましい具体例としては、例えばカルボン酸無水物由来の基（例えばアセトキシカルボニルメチル基、プロピオニルオキシカルボニルエチル基、ベンゾイルオキシベンジル基等）、マレイミド基、スルホマレイミド基、スルホニルハライド基（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）、α-ハロゲノ（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）アセタミド基、炭素数１〜３のハロカルボニルアルキル基（例えばフルオロカルボニルメチル基、フルオロカルボニルエチル基、フルオロカルボニルプロピル基、クロロカルボニルメチル基、クロロカルボニルエチル基、クロロカルボニルプロピル基、ブロモカルボニルメチル基、ブロモカルボニルエチル基、ブロモカルボニルプロピル基、ヨードカルボニルメチル基、ヨードカルボニルエチル基、ヨードカルボニルプロピル基等）、ハロカルボニルアリール基（例えばフルオロカルボニルフェニル基、クロロカルボニルフェニル基、ブロモカルボニルフェニル基、ヨードカルボニルフェニル基等）、イソチオシアネート基、イソシアネート基、2-ピリジルジチオ基等が挙げられる。
【０１１２】
水酸基に対する反応活性基の好ましい具体例としては、例えばカルボン酸無水物由来の基（例えばアセトキシカルボニルメチル基、プロピオニルオキシカルボニルエチル基、ベンゾイルオキシベンジル基等）、炭素数１〜３のハロスルホニルアルキル基（例えばフルオロスルホニルメチル基、フルオロスルホニルエチル基、フルオロスルホニルプロピル基、クロロスルホニルメチル基、クロロスルホニルエチル基、クロロスルホニルプロピル基、ブロモスルホニルメチル基、ブロモスルホニルエチル基、ブロモスルホニルプロピル基、ヨードスルホニルメチル基、ヨードスルホニルエチル基、ヨードスルホニルプロピル基等）、ハロスルホニルアリール基（例えばフルオロスルホニルフェニル基、クロロスルホニルフェニル基、ブロモスルホニルフェニル基、ヨードスルホニルフェニル基等）、ホスファアミダイト基、炭素数１〜３のハロカルボニルアルキル基（例えばフルオロカルボニルメチル基、フルオロカルボニルエチル基、フルオロカルボニルプロピル基、クロロカルボニルメチル基、クロロカルボニルエチル基、クロロカルボニルプロピル基、ブロモカルボニルメチル基、ブロモカルボニルエチル基、ブロモカルボニルプロピル基、ヨードカルボニルメチル基、ヨードカルボニルエチル基、ヨードカルボニルプロピル基等）、ハロカルボニルアリール基（例えばフルオロカルボニルフェニル基、クロロカルボニルフェニル基、ブロモカルボニルフェニル基、ヨードカルボニルフェニル基等）、イソチオシアネート基、イソシアネート基、ホスホリルハライド（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）基等が挙げられる。
【０１１３】
ホルミル基に対する反応活性基の好ましい具体例としては、例えばヒドラジド基等が挙げられる。
【０１１４】
また、被標識物質の官能基に上記の如き反応活性基を導入した後に、本発明の反応性基と反応させることにより被標識物質を標識することも可能であり、この場合の被標識物質の官能基の反応活性基としても、上記の如き本発明の反応活性基と同様のものが挙げられる。
【０１１５】
本発明の反応活性基の中でも、例えばスクシンイミド（Ｓｕ）基、マレイミド（Ｍａ）基等が好ましい。
【０１１６】
本発明の反応性基に当該反応活性基が導入された基の好ましい具体例としては、例えば−ＣＯＯＳｕ基、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）４Ｍａ基等が挙げられる。このような本発明の反応活性基を含有する化合物も一般式［１］で示される本発明の化合物に含まれる。
【０１１７】
このような本発明の反応活性基を含有する本発明の化合物の具体例としては、本発明の化合物中の本発明の反応性基に上記の如き本発明の反応活性基が更に導入された化合物が全て挙げられるが、例えば一般式［１−１］〜［１−４］に於けるＲ１、Ｒ２及びＲ６に当該反応活性基を含有するものが挙げられる。
【０１１８】
このような本発明の反応活性基が導入された本発明の化合物の一例を以下に示す。
【０１１９】
本発明の反応活性基を含有する一般式［１−１］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表５で示されるもの等が挙げられる。
【０１２０】
【表５】
0005626427.tif 000026
【０１２１】
本発明の反応活性基を含有する一般式［１−２］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表６で示されるもの等が挙げられる。
【０１２２】
【表６】
0005626427.tif 000027
【０１２３】
本発明の反応活性基を含有する一般式［１−３］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表７で示されるもの等が挙げられる。
【０１２４】
【表７】
0005626427.tif 000028
【０１２５】
本発明の反応活性基を含有する一般式［１−４］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表８で示されるもの等が挙げられる。
【０１２６】
【表８】
0005626427.tif 000029
【０１２７】
このように本発明の反応性基に本発明の反応活性基を導入した化合物も、本発明の化合物に含まれる。
【０１２８】
１−２．本発明の化合物［１］の合成法
１−２−１．インドレニン化合物−ピラゾール化合物複合体（本発明の一般式［１］で示される化合物に相当）の合成
一般式［１］で示される化合物は、例えば下記方法によって合成し得る。
0005626427.tif 000030
【０１２９】
（式中、Ｒ１７はアルキル基又はアリール基を表し、Ｒ１〜Ｒ１１及びｎは前記に同じ。）
【０１３０】
一般式［１０］及び［１１］に於いて、Ｒ１７で示されるアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜３のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-ヘキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、ネオヘプチル基、n-オクチル基、イソオクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ネオオクチル基、n-ノニル基、イソノニル基、sec-ノニル基、tert-ノニル基、ネオノニル基、n-デシル基、イソデシル基、sec-デシル基、tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【０１３１】
Ｒ１７で示されるアリール基としては、通常炭素数６〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばフェニル基、ナフチル基等が挙げられる。
【０１３２】
即ち、先ず、一般式［８］で示されるインドレニン化合物（インドレニン骨格部分）、一般式［９］で示される化合物〔一般式［８］で示される化合物に対して１〜２倍モル〕及び一般式［１０］で示される酸無水物〔一般式［８］で示される化合物に対して１〜２０倍モル〕（例えば無水酢酸、無水プロピオン酸、無水酪酸、安息香酸無水物等）を、必要ならば溶媒（例えば、酢酸、プロピオン酸、酪酸等のカルボン酸類、例えばアセトニトリル、プロピオニトリル、ｎ-ブチロニトリル等のニトリル類等）に溶解し、０〜１５０℃（好ましくは４０〜１２０℃）で０．１〜２４時間（好ましくは０．５〜１２時間、より好ましくは１〜８時間）で反応させることにより一般式［１１］で示される化合物が得られた。
【０１３３】
次いで、一般式［１１］で示される化合物及び一般式［１２］で示される化合物（ピラゾール骨格部分）〔一般式［１１］で示される化合物に対して０．５〜１０倍モル、好ましくは１〜５倍モル〕を、塩基性触媒（例えばピリジン、トリエチルアミン、N,N-ジメチルアニリン、ピペリジン、ピリジン、4-ジメチルアミノピリジン、1,5-ジアザビシクロ[4.3.0]ノナ-5-エン、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン、トリ-n-ブチルアミン等の有機アミン類、例えば水素化ナトリウム等の金属水素化物類、例えばn-ブチルリチウム等の塩基性アルカリ金属化合物類等）の存在下、脱水縮合剤〔例えば濃硫酸、五酸化二リン、無水塩化亜鉛等の無機脱水剤類、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミド)塩酸塩等のカルボジイミド類、無水酢酸、ポリリン酸、カルボニルジイミダゾール、p-トルエンスルホニルクロライド等〕を用いて、必要ならば溶媒（例えばN,N-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、N,N-ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、アセトアミド、Ｎ-メチルピロリドン等のアミド類、例えばアセトニトリル、プロピオニトリル、ｎ-ブチロニトリル等のニトリル類、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、エチレングリコール、1,4-ブタンジオール等のアルコール類、例えばテトラヒドロフラン、ジオキサン、アニソール、エチレングリコールモノエチルエーテル等のエーテル類、例えばジメチルスルホキシド等のスルホキシド類）中で０〜１５０℃（好ましくは４０〜１２０℃）で０．１〜２４時間（好ましくは０．５〜１２、より好ましくは１〜８時間）で反応させ、目的物である一般式［１］で示される化合物が得られる。
【０１３４】
１−２−２．本発明の反応活性基（本発明の反応性基を活性化させた基）を含有する本発明の化合物の合成
本発明の反応性基に本発明の反応活性基を導入する方法を、一般式［１］で示される化合物のうち、一般式［２２］で示される化合物（即ち、一般式［１］に於けるＲ１が一般式［２］で示される基を置換基として有するアルキル基である化合物に相当）を用いた場合を例にとって以下に説明する。
0005626427.tif 000031
【０１３５】
（式中、Ｔ１２はアルキレン基を表し、Ａはテトラフルオロボレート又はヘキサフルオロホスフェートを表し、ｑは２〜１０の整数を表し、Ｒ３〜Ｒ１１、Ｒ１２Ａ及びｎは前記に同じ。）
【０１３６】
尚、一般式［２２］で示される化合物は、一般式［１］で示される化合物のうち、Ｒ１が一般式［２］で示される基を置換基として有するアルキル基（即ち、−Ｔ１２−ＣＯＯＲ１２基に相当）である場合の化合物に相当する。
【０１３７】
一般式［２２］〜［２４］に於いて、Ｔ１２で示されるアルキレン基としては、直鎖状又は分枝状でもよく、好ましくは直鎖状のものであり、通常炭素数１〜６、好ましくは１〜４のものであり、具体的には、例えばメチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、テトラメチレン基、ヘキサメチレン基等の直鎖状アルキレン基、例えばエチリデン基、プロピレン基、イソプロピリデン基、エチルエチレン基、1,2-ジメチルエチレン基、1,2-ジエチルエチレン基、1,2-ジ-n-プロピルエチレン基、1,2-ジ-n-ブチルエチレン基等の分枝状アルキレン基等が挙げられ、中でも直鎖状アルキレン基が好ましく、就中、エチレン基、ペンタメチレン基等がより好ましい。
【０１３８】
即ち、一般式［２２］で示される化合物（本発明の反応性基を有する化合物）を、例えば一般式［６２］で示される化合物等のスクシンイミド化試薬（一般式［２２］で示される化合物に対して１〜１０倍モル）と塩基性触媒（例えばN-エチルジイソプロピルアミン、ピリジン、トリエチルアミン、N,N-ジメチルアニリン、ピペリジン、4-ジメチルアミノピリジン、1,5-ジアザビシクロ[4.3.0]ノナ-5-エン、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン、トリ-n-ブチルアミン等の有機アミン類等）の存在下、適当な溶媒（例えばＤＭＦ、ＤＭＡ、アセトアミド、N-メチルピロリドン等のアミド類等）中、０〜４０℃で０．１〜１２時間反応させ、一般式［２３］で示される化合物（本発明の反応活性基であるスクシンイミド基を有する化合物）が得られる。
【０１３９】
一般式［２３］で示される化合物は、例えば一般式［６８］で示される化合物等のマレイミド化試薬（一般式［２３］で示される化合物に対して１〜１０倍モル）と塩基性触媒（例えばトリエチルアミン、N-エチルジイソプロピルアミン、ピリジン、N,N-ジメチルアニリン、ピペリジン、4-ジメチルアミノピリジン、1,5-ジアザビシクロ[4.3.0]ノナ-5-エン、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン、トリ-n-ブチルアミン等の有機アミン類等）の存在下、適当な溶媒（例えばＤＭＦ、ＤＭＡ、アセトアミド、N-メチルピロリドン等のアミド類等）中、０〜４０℃で０．１〜１２時間反応させ、一般式［２４］で示される化合物（本発明の反応活性基であるマレイミド基を有する化合物）が得られる。
【０１４０】
本発明に係るスクシンイミド化試薬としては、上記一般式［６２］で示される化合物に限らず、通常この分野で用いられるものが全て挙げられるが、具体的には、例えばジ（N-スクシンイミジル）カルボネート（ＤＳＣ）、2-スクシンイミド-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＳＴＵ）、2-（5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシミド）-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＮＴＵ）等が挙げられる。
【０１４１】
上記の如き反応活性基以外の本発明の反応活性基を導入する方法としては、対応する原料を用いて上記に準じて適宜合成することにより得られる。
【０１４２】
１−２−３．インドレニン化合物の合成
一般式［８］で示される化合物（インドレニン骨格部分）の合成法を以下に説明する。
0005626427.tif 000032
【０１４３】
（式中、Ｘはハロゲン原子を表し、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４及びＲ７〜Ｒ１０は前記に同じ。）
【０１４４】
一般式［１６］に於いて、Ｘで示されるハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
【０１４５】
即ち、一般式［１３］で示されるケトン化合物及び一般式［１４］で示される化合物を適当な溶媒中（例えば酢酸、プロピオン酸等のカルボン酸類、例えばエチレングリコール、1,4-ブタンジオール等のアルコール類等）で、４０〜２５０℃で０．１〜２４時間反応させることにより一般式［２１］で示される化合物が得られる（例えばJournal of Organic Chemistry, 42(14), 2474~80, 1977等）。
【０１４６】
次いで、一般式［１５］で示される化合物を一般式［１６］で示されるハロゲン化化合物）又は一般式［１７］で示されるトシレート化合物とを、適当な溶媒中（例えばクロロベンゼン、1,2-ジクロロベンゼン等のハロゲン化芳香族炭化水素類、例えば1,2-ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、例えばトルエン、キシレン、ベンゼン等の芳香族炭化水素類、例えばＤＭＡ、ＤＭＦ、アセトアミド、N-メチルピロリドン等のアミド類等）に溶解し、４０〜２００℃で１〜２４時間反応させることにより一般式［８］で示されるインドレニン化合物が得られる（例えばJ. Chem. Soc., Perkin Trans.1. 947~952. 1984等）。
【０１４７】
一般式［１３］で示されるケトン化合物は、市販品（例えば3-メチル-2-ブタノン、3-メチル-2-ペンタノン、3-メチル-2-ヘキサノン、１-シクロプロピルエタノン、1-シクロブチルエタノン等）を用いてもよいし、常法により適宜合成されたものを用いてもよく、具体的には、例えば2-メチルアセト酢酸エチルと脱離基（例えばハロゲン原子、トシレート基等）を有する化合物を塩基性触媒（例えば水素化ナトリウム、水素化カリウム等の金属水素化物類、例えば炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩、例えばナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムtert-ブトキシド等のアルカリ金属アルコキシド類等、例えばn-ブチルリチウム等の塩基性アルカリ金属化合物類、例えばリチウムジイソプロピルアミド等のアルカリ金属アミド類等）の存在下、適当な溶媒（例えばＤＭＦ、ＤＭＡ、アセトアミド、Ｎ-メチルピロリドン等のアミド類、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、エチレングリコール等のアルコール類、例えばテトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールモノエチルエーテル等のエーテル類、例えばジメチルスルホキシド等のスルホキシド類等）中、−８０〜１００℃で０．１〜２４時間反応させ、次いで、得られた溶液を酸触媒を用い脱炭酸を行う方法（例えばModern Synthetic Reactions, California, 2 nd ed.,p.492, 510, 756 (1972)等参照）等が挙げられる。
【０１４８】
一般式［１４］で示される化合物は、市販品を用いてもよいし、常法により適宜合成されたものを用いてもよい。
【０１４９】
１−２−４．ピラゾール化合物の合成
一般式［１２］で示される化合物（ピラゾール骨格部分）の合成法を以下に説明する。
0005626427.tif 000033
【０１５０】
（式中、Ｒ２、Ｒ５〜Ｒ６、Ｒ１１及びＸは前記に同じ。）
即ち、一般式［１８］で示されるジケトン化合物とヒドラジンを、適当な溶媒（例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、エチレングリコール等のアルコール類等）中、６０〜１００℃で１〜４時間脱水反応させ、一般式［２６］で示される４Ｈ−ピラゾール化合物が得られる（例えばAdv. Heterocycle. Chem. Vol.34. 53~78. 1983等）。
【０１５１】
次いで、一般式［１９］で示される４Ｈ−ピラゾール化合物を一般式［２０］で示されるハロゲン化化合物又は一般式［２１］で示されるトシレート化合物とを、適当な溶媒（例えばクロロベンゼン、1,2-ジクロロベンゼン等のハロゲン化芳香族炭化水素類、例えば1,2-ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、例えばトルエン、キシレン、ベンゼン等の芳香族炭化水素類、例えばＤＭＦ、ＤＭＡ、アセトアミド、N-メチルピロリドン等のアミド類等）中、８０〜１４０℃で１〜１２時間でN-アルキル化反応させ、一般式［１２］で示される化合物が得られる（例えばJ. Chem. Soc., Perkin Trans.1. 947~952. 1984等）。
【０１５２】
一般式［１８］で示されるジケトン化合物は、市販品（例えば3,3-ジメチル-2,4-ペンタンジオン等）を用いてもよいし、常法により適宜合成されたものを用いてもよく、具体的には、例えば3-メチル-2,4-ペンタンジオンや4-アセチル-5-オキソヘキサン酸エチルエステルを脱離基（例えばハロゲン原子、トシレート基等）を有する化合物を塩基性触媒（例えば水素化ナトリウム、水素化カリウム等の金属水素化物類、例えば炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩、例えばナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムtert-ブトキシド等のアルカリ金属アルコキシド類、例えばn-ブチルリチウム等の塩基性アルカリ金属化合物類、例えばリチウムジイソプロピルアミド等のアルカリ金属アミド類等）の存在下、適当な溶媒（例えばＤＭＦ、ＤＭＡ、アセトアミド、Ｎ-メチルピロリドン等のアミド類、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、エチレングリコール等のアルコール類、例えばテトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールモノエチルエーテル等のエーテル類、例えばジメチルスルホキシド等のスルホキシド類等）中、−８０〜１００℃で０．１〜２４時間反応させる方法（例えばModern Synthic Reactions, California, 2 nd ed.,p.492, 510, 756 (1972)等）等が挙げられる。
【０１５３】
１−３．本発明の化合物［１］の性質
このようにして得られた本発明の化合物［１］は、例えば核酸抽出法、イムノアッセイ法等の蛍光標識物質としての用途が期待されている。
【０１５４】
２．本発明の標識化合物及び標識方法
２−１．本発明の標識化合物（本発明の化合物［１］で標識された化合物）
本発明の標識化合物としては、本発明の化合物（標識物質）と被標識物質を直接又は間接的に結合されたものが挙げられ、具体的には、本発明の化合物中に含有される一般式［２］で示される基（例えばカルボキシル基等）、一般式［３］で示される基（例えばスルホ基等）、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基が被標識物質と直接又は間接的に結合されたものが挙げられる。
【０１５５】
被標識物質と結合される本発明の化合物中の一般式［２］で示される基（例えばカルボキシル基等）、一般式［３］で示される基（例えばスルホ基等）、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基（以下、「本発明の反応性基」と略記する場合がある。）は、通常一般式［１］に於けるＲ１〜Ｒ１１、好ましくはＲ１〜Ｒ６、より好ましくはＲ１又はＲ６に含有されるものが好ましい。
【０１５６】
本発明の化合物により標識される被標識物質としては、例えば通常この分野で被標識物質として用いられるものが全て挙げられるが、具体的には、例えばビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、抗体若しくはその分解産物（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２等）、アミノ酸、蛋白、ペプチド、酵素基質、ホルモン、リンフォカイン、代謝産物、レセプタ、リガンド、アゴニスト、アンタゴニスト、抗原、ハプテン、デンドリマー、レクチン、トキシン、炭水化物、例えば果糖類、多糖類等の糖類、ヌクレオシド（例えばリボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド等）、ヌクレオチド（例えばリボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド等）、核酸（オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド）〔例えばデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）等〕、核酸誘導体（例えばＤＮＡフラグメント、ＲＮＡフラグメント等）、天然薬物、ウイルス、ウイルス成分、イースト成分、血液細胞、血液細胞成分、生物細胞、非細胞血液成分、バクテリア、バクテリア成分、天然及び合成脂質嚢、合成及び天然薬物、毒薬、環境汚染物質、重合体、重合体粒子、ガラス粒子、ガラス表面材、プラスチック粒子、プラスチック表面材、重合体膜、導体及び半導体等が挙げられ、中でも、例えばヌクレオチド、抗体若しくはその分解産物等が好ましい。
【０１５７】
ヌクレオシドは、プリン塩基又はピリミジン塩基、糖部分であるペントースからなり、具体的には、例えば糖部分がD-リボースであるリボヌクレオシド、例えば糖部分がD-2-デオキシリボースであるデオキシリボヌクレオシド等が挙げられる。
【０１５８】
ヌクレオチドは、プリン塩基又はピリミジン塩基、糖部分であるペントース、及びリン酸からなり、具体的には、例えば糖部分がD-リボースであるリボヌクレオチド、例えば糖部分がD-2-デオキシリボースであるデオキシリボヌクレオチド等が挙げられる。
【０１５９】
また、当該ヌクレオシド及びヌクレオチドには、例えばヌクレオシド抗生物質のように、その基本となる塩基部分がプリン構造又はピリミジン構造でないもの、これらの構造が修飾されているもの、糖部分がD-リボース又はデオキシ-D-リボースでないもの、これらが修飾されているもの、リン酸部分（−ＯＰＯ３−）が他の元素〔例えば硫黄原子（−ＯＰＯ２Ｓ−）等〕で置換されたもの、リン酸部分が修飾されたもの等も含まれる。
【０１６０】
核酸は、当該ヌクレオチドを基本単位とし、このリン酸が各ヌクレオチド間で糖の３’と５’位炭素の間のジエステル結合により結合された鎖状のオリゴ又はポリヌクレオチドであり、具体的には、例えば糖部分がリボースであるリボ核酸（ＲＮＡ）、例えば糖部分がD-2-デオキシリボースであるデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）等が挙げられる。
【０１６１】
これらヌクレオチド、核酸及び誘導核酸は１本鎖でも、２本鎖乃至これ以上の複数の核酸鎖からなるものであってもよい。また、これらは本発明の目的を達成し得る範囲であれば、適当なもので適宜修飾等されていてもよい。
【０１６２】
本発明の化合物と被標識物質が直接的に結合されるとは、例えば本発明の化合物（要すれば本発明の反応性基）が被標識物質中の官能基（例えばアミノ基、カルボキシル基、チオール基、ヒドロキシル基、ホルミル基等）と、例えばイオン結合、共有結合等で結合されることを意味する。また、本発明の化合物と被標識物質が間接的に結合されるとは、例えば本発明の反応性基が被標識物質中の当該官能基とリンカー等を介して結合（例えばイオン結合、共有結合等）されることを意味する。間接的結合で使用されるリンカーとしては、通常この分野で用いられるものが全て挙げられる。
【０１６３】
２−２．本発明の標識方法
本発明の化合物［１］を用いて被標識物質を標識する方法としては、自体公知の方法に従い適宜選択して行えばよいが、例えば本発明の反応性基（即ち、一般式［１］に於けるＲ１〜Ｒ１１のうち少なくとも１つに含有される、一般式［２］で示される基（例えばカルボキシル基等）、一般式［３］で示される基（例えばスルホ基等）、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基）と、被標識物質中の官能基（例えばアミノ基、カルボキシル基、チオール基、ヒドロキシル基、ホルミル基等）（以下、「被標識物質の官能基」）とが例えばイオン結合、共有結合等で直接結合されるか、或いは被標識物質の一部に導入されたリンカーを介して結合されることにより容易に行うことができる。
【０１６４】
また、ヌクレオチド（被標識物質）を標識する方法としては、上記の化学反応を用いた標識方法の他に、酵素を用いた方法でも容易に標識することができ、ここで使用される酵素としては、通常この分野で用いられるものが全て挙げられる。
【０１６５】
本発明の反応性基は、被標識物質の官能基との反応性を高めるような基（以下、「反応活性基」と略記する場合がある。）が更に導入されていてもよい。
【０１６６】
尚、このような反応活性基も、本発明の反応性基に含まれ、当該反応活性基を含有する化合物も本発明の化合物に含有される。
【０１６７】
本発明の化合物を用いて被標識物質を標識する方法の具体例としては、例えば（１）本発明の反応性基に更に本発明の反応活性基を導入した後、これと被標識物質の官能基（以下、単に「官能基」の略記する場合がある。）と結合させることにより標識する方法、（２）被標識物質の官能基に本発明の反応活性基を導入した後、これと本発明の反応性基と結合させることにより標識する方法、（３）本発明の反応性基と被標識物質の官能基に、通常この分野で使用される多価反応性リンカー試薬を結合させることにより標識する方法、（４）本発明の反応性基及び被標識物質の官能基に同一又は異なる反応活性基を導入した後、これらと通常この分野で使用されるリンカーを結合させることにより標識する方法等が挙げられる。
【０１６８】
本発明の反応活性基としては、被標識物質の官能基と結合させることができるものであれば特に限定されないが、通常この分野で用いられるものが全て挙げられ、例えばアミノ基との反応性を活性化させるもの（以下、「アミノ基に対する反応活性基」）、チオール基との反応性を活性化させるもの（以下、「チオール基に対する反応活性基」）、水酸基との反応性を活性化させるもの（以下、「水酸基に対する反応活性基」）、ホルミル基との反応性を活性化させるもの（以下、「ホルミル基に対する反応活性基」）等が挙げられる。これら反応活性基の好ましい具体例は前述した通りである。
【０１６９】
また、被標識物質の官能基に上記の如き反応活性基を導入した後に、本発明の反応性基と反応させることにより被標識物質を標識することも可能であり、この場合の被標識物質の官能基の反応活性基としても、上記の如き本発明の反応活性基と同様のものが挙げられる。
【０１７０】
本発明の反応活性基の中でも、例えばスクシンイミド（Ｓｕ）基、マレイミド（Ｍａ）基等が好ましい。
【０１７１】
本発明の反応性基に当該反応活性基が導入された基の好ましい具体例としては、例えば−ＣＯＯＳｕ基、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）４Ｍａ基等が挙げられる。このような本発明の反応活性基を含有する化合物も一般式［１］で示される本発明の化合物に含まれる。
【０１７２】
本発明の反応性基が一般式［２］で示される基（以下、「本発明のカルボキシル基」と略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はこれに導入されたリンカーの官能基（以下、単に「被標識物質」と略記する場合がある。）であるアミノ基、チオール基又は水酸基と結合させるのが好ましく、その方法としては、（i）例えばN-ヒドロキシスクシンイミドとカルボジイミド等の縮合試薬を用いて反応させる方法、（ii）本発明のカルボキシル基に塩化チオニルを作用させカルボキシクロリドを形成させ、これと被標識物質のアミノ基とを反応させる方法、（iii）本発明のカルボキシル基に塩酸とメタノールを加えて反応させた後ヒドラジンを加え反応させ、ヒドラジドを形成させ、更に、これに亜硝酸ナトリウムと塩酸を加えアシルアジド化することで活性化させた後、これと被標識物質のアミノ基、チオール基、水酸基と反応させる方法、（iv）本発明のカルボキシル基から無水物を形成させ、これを被標識物質のアミノ基と反応（脱水縮合）させる方法等が挙げられる。
【０１７３】
また、本発明の反応性基が一般式［３］で示される基（以下、「本発明のスルホ基」と略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質のアミノ基、イミダゾール基、チオール基又はフェノール基と結合させるのが好ましく、その方法としては、例えば（i）本発明のスルホ基に塩化スルホン酸を反応させスルホクロライドを形成させ、これと被標識物質のアミノ基、イミダゾール基、チオール基又はフェノール基と反応させる方法等が挙げられる。
【０１７４】
本発明の反応性基がアミノ基（以下、「本発明のアミノ基」と略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカーの官能基であるカルボキシル基、アミノ基、フェノール基又はチオール基と結合させるのが好ましく、その方法としては、例えば(i)N-ヒドロキシスクシンイミド、カルボキシジイミド等の縮合試薬を用いて、本発明のアミノ基と被標識物質又はそのリンカーのアミノ基と結合させる方法、(ii)本発明のアミノ基にフォスゲンを作用させイソシアネート化した後、被標識物質又はそのリンカーのアミノ基と結合させる方法、(iii)本発明のアミノ基にグルタルアルデヒドを反応させ、これと被標識物質又はそのリンカーのアミノ基又はフェノール基と反応させる方法、(iv)被標識物質又はそのリンカーが糖、糖蛋白由来のものである場合は、予めこれを過ヨウ素酸と反応させた後、本発明のアミノ基と反応させ、更に水素化ホウ素ナトリウム等で還元させる方法、(v)本発明のアミノ基をマレイミド基を有する２官能性スペーサー（例えばm-マレイミドベンゾイル  N-ヒドロキシサクシンイミド  エステル）又はピリジルジチオスルフィド基を有する２官能性スペーサー（例えば4-サクシンイミジルオキシカルボニル-α-(2-ピリジルジチオ)トルエン等）でマレイミド化或いはピリジルジチオスルフィド化した後、これと被標識物質又はそのリンカーのチオール基とを反応させる方法等が挙げられる。
【０１７５】
本発明の反応性基が水酸基（以下、「本発明の水酸基」と略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカーの官能基であるアミノ基、チオール基又は水酸基と結合させるのが好ましく、その方法としては、例えば(i)本発明の水酸基に塩化シアヌル基を作用させトリアジニル誘導体を形成させ、被標識物質又はそのリンカーのアミノ基と反応させる方法、(ii)本発明の水酸基をアセチル化した後臭素化し、ヨウ化ナトリウムで臭素−ヨウ素置換した後、被標識物質又はそのリンカーのアミノ基、チオール基又は水酸基と反応させる方法、(iii)本発明の水酸基に臭化シアンを作用させ活性化させた後、被標識物質又はそのリンカーのアミノ基と反応させる方法等が挙げられる。
【０１７６】
本発明の反応性基がチオール基（以下、「本発明のチオール基」と略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカーの官能基であるアミノ基、チオール基又は水酸基と結合させるのが好ましく、その方法としては、例えば(i)被標識物質又はそのリンカーのアミノ基を、マレイミド基を有する２官能性スペーサー（例えばm-マレイミドベンゾイル  N-ヒドロキシサクシンイミド  エステル）又はピリジルジチオスルフィド基を有する２官能性スペーサー（例えば4-サクシンイミジルオキシカルボニル-α-(2-ピリジルジチオ)トルエン等）でマレイミド化或いはピリジルジチオスルフィド化した後、これと本発明のチオール基とを反応させる方法、(ii)ビスマレイミドヘキサン、1,4-ジ-[3’-2’-ピリジルジチオ（プロピオンアミド）]ブタン等の２官能性スペーサーを用いて、本発明のチオール基と被標識物質又はそのリンカーのチオール基を反応させる方法等が挙げられる。
【０１７７】
本発明の反応性基がホルミル基（以下、「本発明のホルミル基」と略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカーの官能基であるアミノ基等と結合させるのが好ましく、その方法としては、例えば(i)被標識物質又はそのリンカーのアミノ基と本発明のホルミル基を直接反応させた後、水素化ホウ素ナトリウム等で還元させる方法等が挙げられる。
【０１７８】
多価反応性リンカー試薬としては、通常この分野で用いられるものが全て挙げられるが、具体的には、例えば本発明の反応性基及び被標識物質の官能基の一方がアミノ基であり他方がチオール基である場合の二価性試薬（以下、「アミノ基とチオール基の二価性試薬」と略記する。）、当該反応性基と官能基の一方がアミノ基であり他方が一般式［２］で示される基（カルボキシル基等）である場合の二価性試薬（以下、「アミノ基とカルボキシル基の二価性試薬」と略記する。）、当該反応性基と官能基の一方がチオール基であり他方が水酸基である場合の二価性試薬（以下、「チオール基と水酸基の二価性試薬」と略記する。）、当該反応性基と官能基が共にアミノ基である場合の二価性試薬（以下、「アミノ基とアミノ基の二価性試薬」と略記する。）、当該反応性基と官能基が共にチオール基である場合の二価性試薬（以下、「チオール基とチオール基の二価性試薬」と略記する。）等が挙げられる。
【０１７９】
アミノ基とチオール基の二価性試薬の具体例としては、例えばN-(α-マレイミドアセトキシ)スクシンイミド、N-[γ-マレイミドブチリルオキシ]スクシンイミド、N-(6-マレイミドカプロイルオキシ)スクシンイミド、N-(8-マレイミドカプリルオキシ)スクシンイミド、N-(11-マレイミドウンデカノイルオキシ)スクシンイミド、m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミド、スクシンイミジル  4-[p-マレイミドフェニル]ブチレート、スクシンイミジル  4-[N-マレイミドメチル]シクロヘキサン-1-カルボキシレート、スクシンイミジル-6-[β-マレイミドプロピオンアミド]ヘキサノエート、N-スクシンイミジル  3-(2-ピリジルジチオ)プロピオネート等が挙げられる。
【０１８０】
アミノ基とカルボキシル基類の二価性試薬の具体例としては、例えば3-[(2-アミノエチル)ジチオ]プロピオン酸・塩酸塩、1-エチル-3-[3-ジメチルアミノプロピル]カルボジイミド  塩酸塩等が挙げられる。
【０１８１】
チオール基と水酸基の二価性試薬の具体例としては、例えばN-[p-マレイミドフェニル]イソシアネート等が挙げられる。
【０１８２】
アミノ基とアミノ基の二価性試薬の具体例としては、例えばメチル  N-スクシンイミジル  アジペート、ジスクシンイミジル  グルタレート、ジスクシンイミジル  スベレート、エチレン  グリコール  ビス[スクシンイミジルスクシネート]、ジチオビス[スクシンイミジルプロピオネート]、ジスクシンイミジル  タータレート、ビス[2-(スクシンイミドオキシカルボニルオキシ)エチル]スルホン、1,5-ジフルオロ-2,4-ジニトロベンゼン等が挙げられる。
【０１８３】
チオール基とチオール基の二価性試薬の具体例としては、例えばビス-マレイミドエタン、1,4-ビス-マレイミドブタン、ビス-マレイミドヘキサン、1,4  ビス-マレイミジル-2,3-ジヒドロキシブタン、ジチオ-ビス-マレイミドエタン、1,6-ヘキサン-ビス-ビニルスルホン、1,8-ビス-マレイミドジエチレングリコール、1,11-ビス-マレイミドトリエチレングリコール、1,4-ジ-[3’-(2’-ピリジルジチオ)-プロピオンアミド]ブタン等が挙げられる。
【０１８４】
２−３．本発明の化合物を用いた標識ヌクレオチドの調製
本発明の化合物［１］を用いて被標識物質を標識する方法の具体例として、ヌクレオチド（被標識物質）を標識する場合を例にとって以下に説明する。
【０１８５】
即ち、その塩基上にアミノ基を有するヌクレオチド（例えばシチジン，アデニン，グアニン等）を標識する場合は、本発明の化合物中の反応性基を直接結合させても本発明の反応性基を活性化させた基（反応活性基）を直接結合させてもよく、中でも活性エステル基又はカルボキシル基と結合させるのが好ましく、特に活性エステル基と結合させるのがより好ましい。
【０１８６】
また、本発明の化合物とヌクレオチドが間接的に結合される場合は、先ず、ヌクレオチドの塩基上又は水酸基に、例えばアミノ基、カルボキシル基、チオール基等の官能基を有するリンカーを導入した誘導体（以下、「ヌクレオチド誘導体」と略記する。）を合成し、次いで、例えばヌクレオチド誘導体中のアミノ基と結合させる場合は本発明の化合物中の活性エステル基又はカルボキシル基と結合させればよく、例えばヌクレオチド誘導体中のカルボキシル基と結合させる場合は本発明の化合物中のアミノ基と結合させればよく、例えばヌクレオチド誘導体中のチオール基と結合させる場合は本発明の化合物中のマレイミド基（反応活性基）と結合させればよい。使用されるリンカーとしては、通常この分野で用いられるものであれば何れでもよく、当該リンカー中にエステル結合、エーテル結合又は／及びアミド結合を含んでいてもよい。
【０１８７】
本発明の化合物［１］を用いた標識方法を、本発明の化合物のうち、Ｒ１に含有されるカルボキシアルキル基（即ち、Ｒ１が一般式［２］で示される基を置換基として有するアルキル基である場合に相当）がリンカー等を介してヌクレオチド残基に間接的に結合したものを一例として以下に説明する。
【０１８８】
上記において、リンカーとしては、通常この分野で用いられるものが全て使用できるが、具体的には、下記一般式（Ａ）で示される構造のリンカーが挙げられる。
0005626427.tif 000034
【０１８９】
（式中、Ｅは−ＣＨ＝ＣＨ−または−Ｃ≡Ｃ−を表し、Ｘ及びＹは夫々独立してアルキレン基を表し、Ｔ１０は−Ｏ−または−ＮＨ−ＣＯ−を表す。）
【０１９０】
上記一般式（Ａ）に於いて、Ｘで示されるアルキレン基としては、直鎖状、分枝状或いは環状でもよく、好ましくは直鎖状のものがよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜６、より好ましくは１〜３のものが挙げられ、具体的には、例えばメチレン基，エチレン基，トリメチレン基，テトラメチレン基，ペンタメチレン基，ヘキサメチレン基，ヘプタメチレン基，オクタメチレン基，ノナメチレン基，デカメチレン基等の直鎖状アルキレン基、例えばエチリデン基，プロピレン基，イソプロピリデン基，1-メチルトリメチレン基，2-メチルトリメチレン基，1,1-ジメチルエチレン基，1,2-ジメチルエチレン基，エチルエチレン基，1-メチルテトラメチレン基，1,1-ジメチルトリメチレン基，2,2-ジメチルトリメチレン基，2-エチルトリメチレン基，1-メチルペンタメチレン基，1-メチルヘキサメチレン基，1-メチルヘプタメチレン基，1,4-ジエチルテトラメチレン基，2,4-ジメチルヘプタメチレン基，1-メチルオクタメチレン基，1-メチルノナメチレン基等の分枝状アルキレン基、例えばシクロプロピレン基，1,3-シクロブチレン基，1,3-シクロペンチレン基，1,4-シクロへキシレン基，1,5-シクロヘプチレン基，1,5-シクロオクチレン基，1,5-シクロノニレン基，1,6-シクロデカレン基等の環状アルキレン基等が挙げられる。
【０１９１】
Ｙで示されるアルキレン基としては、直鎖状、分枝状或いは環状でもよく、好ましくは直鎖状のものがよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは２〜８、より好ましくは２〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメチレン基，エチレン基，トリメチレン基，テトラメチレン基，ペンタメチレン基，ヘキサメチレン基，ヘプタメチレン基，オクタメチレン基，ノナメチレン基，デカメチレン基等の直鎖状アルキレン基、例えばエチリデン基，プロピレン基，イソプロピリデン基，1-メチルトリメチレン基，2-メチルトリメチレン基，1,1-ジメチルエチレン基，1,2-ジメチルエチレン基，エチルエチレン基，1-メチルテトラメチレン基，1,1-ジメチルトリメチレン基，2,2-ジメチルトリメチレン基，2-エチルトリメチレン基，1-メチルペンタメチレン基，1-メチルヘキサメチレン基，1-メチルヘプタメチレン基，1,4-ジエチルテトラメチレン基，2,4-ジメチルヘプタメチレン基，1-メチルオクタメチレン基，1-メチルノナメチレン基等の分枝状アルキレン基、例えばシクロプロピレン基，1,3-シクロブチレン基，1,3-シクロペンチレン基，1,4-シクロへキシレン基，1,5-シクロヘプチレン基，1,5-シクロオクチレン基，1,5-シクロノニレン基，1,6-シクロデカレン基等の環状アルキレン基等が挙げられる。
【０１９２】
本発明に係る標識ヌクレオチドとしては、本発明の化合物［１］で直接またはリンカー等を介して間接的に標識されたヌクレオチド残基が挙げられ、具体的には、例えば下記一般式［２２］で示されるヌクレオチド残基を含むものが挙げられる。
0005626427.tif 000035
【０１９３】
〔式中、Ｑ１はヌクレオチド残基を表し、Ｖ１はリンカーを表し、Ｗ１は下記一般式［１’］を表す。
0005626427.tif 000036
【０１９４】
（式中、Ｚ１はＶ１と結合する結合手を表し、Ｒ２〜Ｒ１１、Ｔ１２及びｎは前記に同じ。）
【０１９５】
尚、一般式［１’］で示される化合物は、一般式［１］で示される化合物のうち、Ｒ１が一般式［２］で示される基を置換基として有するアルキル基（即ち、−Ｔ１２−ＣＯＯＲ１２基に相当）である場合の化合物誘導体に相当する。
【０１９６】
一般式［２２］においてＱ１で示されるヌクレオチド残基としては、例えばリボヌクレオチド残基、２’−デオキシリボヌクレオチド残基、３’−デオキシリボヌクレオチド残基、５’−デオキシリボヌクレオチド残基、２’、３’−ジデオキシリボヌクレオチド残基等が挙げられる。
【０１９７】
具体的には、このようなヌクレオチド残基としては、例えば一般式(i)、(ii)、(v)、（vi）、(vii)、(viii)、(xii)および(xiii)で示されるプリンヌクレオチド残基、または一般式(iii)、(iv)、(x)および(xi)で示されるピリミジンヌクレオチド残基が挙げられる。
0005626427.tif 000037
【０１９８】
0005626427.tif 000038
【０１９９】
上記一般式において、Ｚ３はＶ１と結合する結合手を、Ｒ２５及びＲ２６は夫々独立してＨ、ＯＨまたはＯ−を表し、Ｒ２７は−ＰＯ２Ｈ−、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｐ２Ｏ６Ｈ３、−Ｐ３Ｏ９Ｈ４又はその塩を表す。尚、塩の具体例としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のアルカリ金属塩、例えばバリウム塩等のアルカリ土類金属塩、例えばアンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジン塩等の有機アミン塩等が挙げられる。
【０２００】
一般式［２２］においてＶ１で示されるリンカーは、Ｑ１で示されるヌクレオチド残基と、Ｗ１〔一般式［１’］〕で示される本発明の化合物誘導体（蛍光標識）とを結合するためのリンカーである。
【０２０１】
即ち、当該リンカーの一方の末端が、前述したＱ１で示されるヌクレオチド残基のうち、ピリミジンヌクレオチド残基についてはそのピリミジン環の５位〔一般式(iii)、(iv)の場合〕またはそのリン酸残基のリン原子〔一般式(x)、(xi)の場合〕に結合し、また、プリンヌクレオチド残基についてはその７−デアザ（７−デアザ）プリン環の７位〔一般式(i)、(ii)、(v)、(vi)の場合〕またはそのプリン環（又は７−デアザプリン環）のリン酸残基のリン原子〔一般式(vii)、(viii)、(ix)、(xii)、(xiii)の場合〕に結合している。
【０２０２】
更に、当該リンカーの他方の末端が、Ｗ１〔一般式［１’］〕で示される本発明の化合物誘導体（標識物質）のカルボニル基〔一般式［１’］に於けるＴ１２に結合するカルボニル基〕に結合している。
【０２０３】
このようなリンカーとしては、Ｗ１〔一般式［１’］〕で示される本発明の化合物誘導体（標識物質）のカルボニル基〔一般式［１’］に於けるＴ１２に結合するカルボニル基〕とＱ１で示されるヌクレオチド残基とを結合し得るものであれば全て使用でき、具体的には、下記一般式（Ａ）で示される構造のリンカーが挙げられる。
0005626427.tif 000039
【０２０４】
（式中、Ｅ、Ｘ、Ｔ１０及びＹは前記と同じであり、これらの具体例、好ましい例等も前述の通りである。）
【０２０５】
従って、一般式［２２］で示されるヌクレオチド残基としては、それぞれ下記一般式［２２’］で示されるものが好ましく、下記一般式［２２”］で示されるものがより好ましい。
0005626427.tif 000040
【０２０６】
（式中、Ｅ１は−ＣＨ＝ＣＨ−または−Ｃ≡Ｃ−を表し、Ｘ１及びＹ１は夫々独立してアルキレン基を表し、Ｔ１１は−Ｏ−または−ＮＨ−ＣＯ−を表す。また、Ｑ１及びＷ１は前記と同じ。）
【０２０７】
尚、上記において、Ｘ１で示されるアルキレン基は前述のＸで示されるアルキレン基と同じであり、その具体例、好ましい例等も同様である。また、Ｙ１で示されるアルキレン基は前述のＹで示されるアルキレン基と同じであり、その具体例、好ましい例等も同様である。
0005626427.tif 000041
【０２０８】
（式中、ｒは１〜１０、好ましくは１〜６、より好ましくは１〜４の整数を、ｓは１〜１０、好ましくは２〜８、より好ましくは２〜４の整数を表す。また、Ｑ１、Ｗ１、Ｅ１およびＴ１１は前記と同じ。）
【０２０９】
また、Ｒ１〜Ｒ１１は前記と同じであり、その具体例、好ましい例等も前記した通りである。
【０２１０】
このようなＷ１〔一般式［１’］〕で示される本発明の化合物誘導体（標識物質）としては、前記した如き本発明の化合物［１］に由来するものであり、これらの好ましい具体例も前記した如き本発明の化合物［１］と同様である。
【０２１１】
上記した如きヌクレオチドを本発明に係る化合物［１］（標識物質）で標識する方法としては、自体公知の直接標識法や間接標識法〔例えばWO96/17628号パンフレット（特開2002-12782号公報）、米国特許第6974873号、特開2002-193991号公報、WO99/12544号パンフレット、特開平11-80189号公報等に記載された方法等〕が挙げられる。
【０２１２】
また、ヌクレオチドを本発明に係る化合物［１］（標識物質）で標識するに際しては、本発明に係る化合物［１］を用いる以外は、上記した如き標識法に基づく市販の標識キットを使用すればより簡便である。
【０２１３】
尚、本発明において、これらの方法を利用するには、本発明に係る化合物［１］（標識物質）が結合した標識モノヌクレオチドが必要であるが、これら標識ヌクレオチドは自体公知の方法（例えば上記の標識方法等）により調製することができる。
【０２１４】
具体的には、例えば特開2002-193991号公報（[0102]〜［0121］段落）に記載の方法に準じて調製することができ、また、例えば以下のように調製することができる。
【０２１５】
即ち、例えば下記一般式（ａ）で示されるヌクレオチド誘導体と下記一般式（ｂ）で示される本発明に係る化合物［１］（標識物質）〔スクシンイミジルエステル体〕とを反応させることにより容易に得られる。
0005626427.tif 000042
【０２１６】
（式中、ＱはＱ１を示す。Ｑ１、Ｅ、Ｘ、Ｔ１０およびＹは前記と同じ。）
0005626427.tif 000043
【０２１７】
（式中、ＷはＷ１を示し、Ｓｕはスクシンイミド基を示す。Ｗ１は前記と同じ。）
【０２１８】
また、前述した如き一般式（ａ）で示されるリンカー部分のＴ１０が−ＮＨ−ＣＯ−である場合には、例えば以下のように調製することもできる。
【０２１９】
即ち、例えば、先ず下記一般式（ｃ）で示されるリンカーの一部分（部分リンカーＡ）を導入し、更に残りのリンカー部分（部分リンカーＢ）のスクシンイミジルエステル体とを反応させて、リンカーが導入された下記一般式（ｄ）で示されるヌクレオチド誘導体を調製する。更に、この下記一般式（ｄ）で示されるヌクレオチド誘導体と下記一般式（ｂ）で示される本発明の化合物［１］（標識物質）〔スクシンイミジルエステル体〕とを反応させることにより容易に得られる。
0005626427.tif 000044
【０２２０】
（式中、ＥおよびＸは前記と同じ。）
0005626427.tif 000045
【０２２１】
（式中、Ｑ、Ｅ、ＸおよびＹは前記と同じ。）
0005626427.tif 000046
【０２２２】
（式中、ＷおよびＳｕは前記と同じ。）
【０２２３】
より具体的には、上記した如き本発明の化合物［１］（標識物質）が結合した標識モノヌクレオチドのうち、蛍光標識２'−デオキシシチジン−５'−トリホスフェート誘導体および蛍光標識２'−デオキシウリジン−５'−トリホスフェート誘導体は、例えば以下の如き合成経路に準じて合成することができる。
【０２２４】
尚、下記合成経路において使用される略称正式名は下記の通りである。
・ＭｅＯＴｆａ：トリフルオロ酢酸メチル
・−Ｔｆａ：トリフルオロアセチル基
・Ｂｕ3ＳｎＨ：水素化トリ（ｎ−ブチル）スズ
・ＡＩＢＮ：アゾイソブチロニトリル
・Ｅｔ3Ｎ：トリエチルアミン
・ＨＯ−Ｓｕ：Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド
・ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
・ＴＭＳ−Ａｃｅｔａｍｉｄｅ：Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド
・ＰｄＣｌ2(ＣＨ3ＣＮ)2：ビス（アセトニトリル）ジクロロパラジウム（II）
・tris(ＴＢＡＰＰ)：トリス（トリ−ｎ−ブチルアンモニウム）ピロホスフェート
・(ＥｔＯ)3ＰＯ：リン酸トリエチル
・ＴＦＰ：トリ−２−フリルホスフィン
・Ｐｄ2（ｄｂａ）3：トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）
【０２２５】
（１）部分リンカー（Ａ）の合成。
尚、この化合物は、上記一般式（Ａ）で示されるリンカー（−Ｅ−Ｘ−Ｔ１０−Ｙ−ＮＨ−）において、Ｔ１０が−ＮＨ−ＣＯ−である場合の、−Ｅ−Ｘ−ＮＨ−に相当する化合物であって、Ｅが−ＣＨ＝ＣＨ−およびＸがメチレン基である化合物である。
0005626427.tif 000047
【０２２６】
（２）部分リンカーＢの合成。
尚、この化合物は、上記一般式（Ａ）で示されるリンカー（−Ｅ−Ｘ−Ｔ１０−Ｙ−ＮＨ−）において、Ｔ１０が−ＮＨ−ＣＯ−である場合の、−ＣＯ−Ｙ−ＮＨ−に相当する化合物であって、Ｙがペンタメチレン基である化合物である。
0005626427.tif 000048
【０２２７】
（３）２'−デオキシシチジン−５'−トリホスフェート誘導体〔一般式（ｄ）の化合物〕の合成。
尚、この化合物は、一般式［２２’］（Ｑ１−Ｅ１−Ｘ１−Ｔ１１−Ｙ１−ＮＨ−Ｗ１）のＱ１−Ｅ１−Ｘ１−Ｔ１１−Ｙ１−ＮＨ−に相当する化合物であって、Ｑ１が2'−デオキシシチジン、Ｅ１が−ＣＨ＝ＣＨ−、Ｘ１がメチレン基、Ｔ１１が−ＮＨ−ＣＯ−、Ｙ１がペンタメチレン基である化合物である。
0005626427.tif 000049
【０２２８】
（４）蛍光標識２'−デオキシシチジン−５'−トリホスフェート誘導体〔本発明の化合物［１］（標識物質）で標識されたモノヌクレオチド〕の合成。
尚、当該化合物は、一般式［２２’］（Ｑ１−Ｅ１−Ｘ１−Ｔ１１−Ｙ１−ＮＨ−Ｗ１）におけるＱ１が2'−デオキシシチジン、Ｅ１が−ＣＨ＝ＣＨ−、Ｘ１がメチレン基、Ｔ１１が−ＮＨ−ＣＯ−、Ｙ１がペンタメチレン基であって、Ｗ１が下記化合物(14)又は(25)である化合物である。
0005626427.tif 000050
【０２２９】
0005626427.tif 000051
【０２３０】
尚、上記以外の標識ヌクレオチドについても同様に、対応する原料を用いて上記に準じて適宜合成することができる。
【０２３１】
本発明のピラゾール系シアニン色素は、ピラゾール骨格とインドール骨格がポリメチン鎖で結合された構造を有していることから、従来の光源よりも短波長領域で蛍光特性を有するため、エネルギー効率の高い短波長領域の光源が使用可能となる、またこれを標識剤（標識物質）として用いて測定対象物を検出する場合、従来のシアニン色素誘導体が有していた例えば水溶性が低い、色素同士の会合に起因する消光により検出感度が低下する等の問題点を有することなく測定対象物を高い検出感度で検出することが可能となる。
【０２３２】
３−１．本発明の化合物［５１］
一般式［５０］で示される化合物のうち、Ｒ１’とＲ２’、Ｒ４’とＲ５’、Ｒ１’とＲ６’及びＲ２’とＲ４’の何れかが、−Ｏ−基、−Ｓ−基、−ＣＯＯ−基及び一般式［５２］〜［５４］で示される基から選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで２価の基を形成する化合物としては、例えば下記一般式［５１］で示されるものが挙げられる。
0005626427.tif 000052
【０２３３】
〔式中、Ｒ１”〜Ｒ６”は夫々独立して、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換のアルキル基を表し、Ｒ７”〜Ｒ１０”は夫々独立して置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、カルバモイル基、スルファモイル基、ウレイド基若しくはアミノ基、一般式［２］
0005626427.tif 000053
【０２３４】
（式中、Ｒ１２は水素原子、炭素数１〜１０のアルキル基、アルカリ金属原子、有機アンモニウムイオン、アンモニウムイオン又はアニオンを表す。）で示される基、一般式［３］
0005626427.tif 000054
【０２３５】
（式中、Ｒ１３は水素原子、アルカリ金属原子、有機アンモニウムイオン、アンモニウムイオン又はアニオンを表す。）で示される基、ハロゲン原子、芳香族ヘテロ環チオ基、水素原子、水酸基、シアノ基、ホルミル基、チオール基若しくはニトロ基を表し、Ｒ１１”は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基若しくはアリール基を表し、ｎは０〜３の整数を表す。但し、Ｒ１”とＲ２”、Ｒ４”とＲ５”、Ｒ１”とＲ６”及びＲ２”とＲ４”の何れかが、−Ｏ−基、−Ｓ−基、−ＣＯＯ−基及び一般式［５２］〜［５４］
0005626427.tif 000055
【０２３６】
（式中、Ｒ５０は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはアリール基を表す。）で示される基から選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで２価の基を形成する。また、Ｒ１”〜Ｒ１１”、並びにＲ１”とＲ２”、Ｒ４”とＲ５”、Ｒ１”とＲ６”及びＲ２”とＲ４”の何れかで形成される２価の基のうち少なくとも１つは一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。〕
【０２３７】
一般式［５１］に於いて、Ｒ１”とＲ２”、Ｒ４”とＲ５”、Ｒ１”とＲ６”及びＲ２”とＲ４”の何れかは、−Ｏ−基、−Ｓ−基、−ＣＯＯ−基及び一般式［５２］〜［５４］
0005626427.tif 000056
【０２３８】
（式中、Ｒ５０は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはアリール基を表す。）で示される基から選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで２価の基を形成しており、このような一般式［５１］で示される化合物としては、例えば下記一般式［５５］〜［５８］で示される化合物等が挙げられる。
【０２３９】
0005626427.tif 000057
【０２４０】
（式中、Ｔは−Ｏ−基、−Ｓ−基、−ＣＯＯ−基及び一般式［４］〜［６］で示される基から選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで２価の基を形成し、Ｒ３”〜Ｒ１１”及びｎは前記に同じ。但し、Ｒ３”〜Ｒ１１”並びにＴで示される２価の基のうち少なくとも１つは一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。）
【０２４１】
0005626427.tif 000058
【０２４２】
（式中、Ｒ１”〜Ｒ３”、Ｒ６”〜Ｒ１１”、Ｔ及びｎは前記に同じ。但し、Ｒ１”〜Ｒ３”、Ｒ６”〜Ｒ１１”並びにＴで示される２価の基のうち少なくとも１つは一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。）
【０２４３】
0005626427.tif 000059
【０２４４】
（式中、Ｒ２”〜Ｒ５”、Ｒ７”〜Ｒ１１”、Ｔ及びｎは前記に同じ。但し、Ｒ２”〜Ｒ５”、Ｒ７”〜Ｒ１１”並びにＴで示される２価の基のうち少なくとも１つは一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。）
【０２４５】
0005626427.tif 000060
【０２４６】
（式中、Ｒ１”、Ｒ３”、Ｒ５”〜Ｒ１１”、Ｔ及びｎは前記に同じ。但し、Ｒ１”、Ｒ３”、Ｒ５”〜Ｒ１１”並びにＴで示される２価の基のうち少なくとも１つは一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を有する。）
【０２４７】
これらの化合物の中でも、例えば一般式［５５］で示される化合物、一般式［５７］で示される化合物等が好ましい。
【０２４８】
一般式［５１］及び［５５］〜［５８］に於いて、ｎは、通常０〜３の整数、好ましくは１又は２、より好ましくは２である。
【０２４９】
一般式［５１］及び［５５］〜［５８］に於いて、Ｒ１”〜Ｒ６”で示される、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換アルキル基のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜５のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-ヘキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、ネオヘプチル基、n-オクチル基、イソオクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ネオオクチル基、n-ノニル基、イソノニル基、sec-ノニル基、tert-ノニル基、ネオノニル基、n-デシル基、イソデシル基、sec-デシル基、tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられ、中でも、直鎖状のものが好ましく、就中、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、n-ブチル基、n-ペンチル基等がより好ましい。
【０２５０】
Ｒ１”〜Ｒ６”で示される、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換アルキル基としては、アミド結合を有さない、置換又は無置換アルキル基、或いは置換又は無置換アルキル基のアルキル鎖中にアミド結合を通常１〜１０個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１個含有しているものが挙げられる。
【０２５１】
アミド結合を有していてもよい無置換アルキル基の好ましい具体例としては、例えば下記一般式［５９］
0005626427.tif 000061
【０２５２】
（式中、Ｒ２１は水素原子又はアルキル基を表し、Ｔ１及びｍ個のＴ２はアルキレン基を表し、ｍは０〜１０の整数を表す。）で示される基が挙げられる。
【０２５３】
一般式［５９］に於いて、Ｒ２１で示されるアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、ネオブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-ヘキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、ネオヘプチル基、n-オクチル基、イソオクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ネオオクチル基、n-ノニル基、イソノニル基、sec-ノニル基、tert-ノニル基、ネオノニル基、n-デシル基、イソデシル基、sec-デシル基、tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【０２５４】
Ｔ１及びｍ個のＴ２で示されるアルキレン基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数２〜１０、好ましくは２〜８のものが挙げられ、具体的には、例えばメチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、ペンタメチレン基、ヘキサメチレン基、ヘプタメチレン基、オクタメチレン基、ノナメチレン基、デカメチレン基等の直鎖状アルキレン基、例えばエチリデン基、プロピレン基、イソプロピリデン基、1-メチルトリメチレン基、2-メチルトリメチレン基、1,1-ジメチルエチレン基、1,2-ジメチルエチレン基、エチルエチレン基、1-メチルテトラメチレン基、1,1-ジメチルトリメチレン基、2,2-ジメチルトリメチレン基、2-エチルトリメチレン基、1-メチルペンタメチレン基、2-メチルペンタメチレン、1,3-ジメチルテトラメチレン、3-エチルテトラメチレン、1-メチルヘキサメチレン基、1-メチルヘプタメチレン基、1,4-ジエチルテトラメチレン基、2,4-ジメチルヘプタメチレン基、1-メチルオクタメチレン基、1-メチルノナメチレン基等の分枝状アルキレン基、例えばシクロプロピレン基，1,3-シクロブチレン基、1,3-シクロペンチレン基、1,4-シクロへキシレン基、1,5-シクロヘプチレン基、1,5-シクロオクチレン基、1,5-シクロノニレン基、1,6-シクロデシレン基等の環状アルキレン基等が挙げられる。
【０２５５】
ｍは、通常０〜１０の整数、好ましくは０〜３の整数、より好ましくは０又は１である。
【０２５６】
一般式［５１］及び［５５］〜［５８］に於いて、Ｒ１”〜Ｒ６”で示される、アミド結合を有していてもよい、置換アルキル基の置換基としては、当該アミド結合を有していてもよいアルキル基中の水素原子の一部が置換基で置換されているものが挙げられ、当該置換基としては、例えば一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、水酸基、シアノ基、ホルミル基、チオール基等が挙げられ、中でも一般式［２］で示される基又は一般式［３］で示される基が好ましい。
【０２５７】
Ｒ１”〜Ｒ６”で示される、アミド結合を有する置換アルキル基としては、例えば上記一般式［５９］で示されるアミド結合を有する無置換アルキル基の水素原子の一部が上記一般式［２］で示される基又は一般式［３］で示される基で置換されたものが好ましく挙げられる。
【０２５８】
一般式［２］及び［３］に於いて、Ｒ１２及びＲ１３で示されるアルカリ金属原子としては、例えばリチウム原子、ナトリウム原子、カリウム原子、ルビジウム原子等が挙げられ、中でもナトリウム原子又はカリウム原子が好ましく、就中ナトリウム原子がより好ましい。
【０２５９】
Ｒ１２及びＲ１３で示される有機アンモニウムイオンとしては、例えばトリアルキルアンモニウムイオン等が挙げられる。当該トリアルキルアンモニウムイオンとしては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０のもの、好ましくは１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばトリメチルアンモニウムイオン、トリエチルアンモニウムイオン、トリn-プロピルアンモニウムイオン、トリイソプロピルアンモニウムイオン、トリブチルアンモニウムイオン、トリペンチルアンモニウムイオン、トリヘキシルアンモニウムイオン、トリヘプチルアンモニウムイオン、トリオクチルアンモニウムイオン、トリノニルアンモニウムイオン、トリデシルアンモニウムイオン、トリシクロプロピルアンモニウムイオン、トリシクロブチルアンモニウムイオン、トリシクロペンチルアンモニウムイオン、トリシクロヘキシルアンモニウムイオン、トリシクロヘプチルアンモニウムイオン、トリシクロオクチルアンモニウムイオン、トリシクロノニルアンモニウムイオン、トリシクロデシルアンモニウムイオン等が挙げられ、中でもトリメチルアンモニウムイオン又はトリエチルアンモニウムイオンが好ましく、就中、トリエチルアンモニウムイオンがより好ましい。
【０２６０】
一般式［２］に於いて、Ｒ１２で示される炭素数１〜１０のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜６、より好ましくは１〜３のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-へキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、ネオヘプチル基、n-オクチル基、イソオクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ネオオクチル基、n-ノニル基、イソノニル基、sec-ノニル基、tert-ノニル基、イソノニル基、n-デシル基、イソデシル基、sec-デシル基、tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【０２６１】
一般式［２］で示される基の好ましい具体例としては、例えばカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、そのアニオン〔カルボキシレート（−ＣＯＯ−）〕、そのアルカリ金属塩（例えばリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、ルビジウム塩等）、そのアンモニウム塩、その有機アンモニウム塩（例えばトリメチルアンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、トリプロピルアンモニウム塩等）等が挙げられ、中でも、例えばカルボキシル基、カルボキシレート基、これらのナトリウム塩等が好ましい。以下、これらを総称して「カルボキシル基等」と略記する場合がある。
【０２６２】
一般式［３］で示される基の好ましい具体例としては、例えばスルホ基（−ＳＯ３Ｈ）、そのアニオン〔スルホネート（−ＳＯ３−）〕、そのアルカリ金属塩（例えばリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、ルビジウム塩等）、そのアンモニウム塩、その有機アンモニウム塩（例えばトリメチルアンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、トリプロピルアンモニウム塩等）等が挙げられ、中でも、例えばスルホ基、スルホネート基、これらのナトリウム塩等が好ましい。以下、これらを総称して「スルホ基等」と略記する場合がある。
【０２６３】
尚、一般式［５１］及び［５５］〜［５８］に於けるＲ１”〜Ｒ６”で示される、アミド結合を有していてもよい、置換アルキル基の置換基（即ち、一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、水酸基、シアノ基、ホルミル基又はチオール基）は、当該アルキル基の末端の水素原子と置換されているものが好ましい。
【０２６４】
一般式［５１］及び［５６］〜［５８］に於けるＲ１”及びＲ２”の好ましい具体例としては、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、n-ブチル基、n-ペンチル基、n-ヘキシル基等の炭素数１〜６の直鎖状アルキル基の末端の水素原子が上記置換基（即ち、一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、水酸基、シアノ基、ホルミル基又はチオール基）で置換されたものが挙げられ、中でも一般式［２］で示される基又は一般式［３］で示される基で置換されたものが好ましい。
【０２６５】
また、一般式［５１］、［５５］、［５７］及び［５８］に於ける、Ｒ３”とＲ４”の好ましい組み合わせ又は／及びＲ５”とＲ６”の好ましい組み合わせとしては、何れか一方（即ち、Ｒ３”とＲ４”の何れか一方及びＲ５”とＲ６”の何れか一方）が炭素数１〜６のアルキル基（例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-ヘキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基等）であり、他方が、一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、水酸基、シアノ基、ホルミル基又はチオール基を置換基として有する炭素数１〜６のアルキル基（中でも、一般式［２］で示される基又は一般式［３］で示される基を置換基として有するものが好ましい。）であるものが挙げられる。
【０２６６】
更にまた、一般式［５１］及び［５６］〜［５８］に於けるＲ３”とＲ４”又はＲ５”とＲ６”の一方がＴで示される２価の基を形成する場合は、その他方（即ち、一般式［５６］に於けるＲ３”及びＲ６”、一般式［５７］に於けるＲ５、一般式［５８］に於けるＲ３”）が、炭素数１〜６のアルキル基（例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-ヘキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基等）であるのが好ましい。
【０２６７】
一般式［５１］及び［５５］〜［５８］に於いて、Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される置換又は無置換のアルキル基のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜６、好ましくは１〜３のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-ヘキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられる。
【０２６８】
Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される置換又は無置換のアルケニル基のアルケニル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数２〜６、好ましくは２〜４のものが挙げられ、具体的には、例えばビニル基、アリル基、1-プロペニル基、イソプロペニル基、3-ブテニル基、2-ブテニル基、1-ブテニル基、1,3-ブタジエニル基、4-ペンテニル基、3-ペンテニル基、2-ペンテニル基、1-ペンテニル基、1,3-ペンタジエニル基、2,4-ペンタジエニル基、1,1-ジメチル-2-プロペニル基、1-エチル-2-プロペニル基、1,2-ジメチル-1-プロペニル基、1-メチル-1-ブテニル基、5-ヘキセニル基、4-ヘキセニル基、3-ヘキセニル基、2-ヘキセニル基、1-ヘキセニル基、1-シクロプロペニル基、2-シクロペンテニル基、2,4-シクロペンタンジエニル基、1-シクロヘキセニル基、2-シクロヘキセニル基、3-シクロヘキセニル基等が挙げられる。
【０２６９】
Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される置換又は無置換のアルキニル基のアルキニル基としては、通常炭素数２〜６、好ましくは２〜４のものが挙げられ、具体的には、例えばエチニル基、2-プロピニル基、3-ブチニル基、1-メチル-2-プロピニル基、4-ペンチニル基、2-メチル-4-ペンチニル基、5-ヘキシニル基等が挙げられる。
【０２７０】
Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される置換又は無置換のアリール基のアリール基としては、通常炭素数６〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばフェニル基、ナフチル基等が挙げられる。
【０２７１】
Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される置換又は無置換のアルコキシ基のアルコキシ基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜６、好ましくは１〜３のものが挙げられ、具体的には、例えばメトキシ基、エトキシ基、n-プロポキシ基、イソプロポキシ基、n-ブトキシ基、イソブトキシ基、sec-ブトキシ基、tert-ブトキシ基、n-ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、sec-ペンチルオキシ基、tert-ペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、n-ヘキシルオキシ基、イソヘキシルオキシ基、sec-ヘキシルオキシ基、tert-ヘキシルオキシ基、ネオヘキシルオキシ基、シクロプロポキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基等が挙げられる。
【０２７２】
Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される置換又は無置換のアリールオキシ基のアリールオキシ基としては、通常炭素数６〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばフェニルオキシ基、ナフトキシ基等が挙げられる。
【０２７３】
Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される置換又は無置換のアルキルチオ基のアルキルチオ基としては、アルコキシ基の酸素原子が硫黄原子で置換されたものであり、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜６、好ましくは１〜３のものが挙げられ、具体的には、例えばメチルチオ基、エチルチオ基、n-プロピルチオ基、イソプロピルチオ基、n-ブチルチオ基、イソブチルチオ基、sec-ブチルチオ基、tert-ブチルチオ基、n-ペンチルチオ基、イソペンチルチオ基、sec-ペンチルチオ基、tert-ペンチルチオ基、ネオペンチルチオ基、n-ヘキシルチオ基、イソヘキシルチオ基、sec-ヘキシルチオ基、tert-ヘキシルチオ基、ネオヘキシルチオ基、シクロプロピルチオ基、シクロブチルチオ基、シクロペンチルチオ基、シクロヘキシルチオ基等が挙げられる。
【０２７４】
Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される置換又は無置換のアリールチオ基のアリールチオ基としては、アリールオキシ基の酸素原子が硫黄原子で置換されたものであり、通常炭素数６〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばフェニルチオ基、ナフチルチオ基等が挙げられる。
【０２７５】
Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される置換又は無置換のアルキルスルホニル基のアルキルスルホニル基としては、スルホ基（−ＳＯ２ＯＨ）の−ＯＨ基がアルキル基で置換されたものが挙げられ、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメチルスルホニル基、エチルスルホニル基、n-プロピルスルホニル基、イソプロピルスルホニル基、n-ブチルスルホニル基、イソブチルスルホニル基、sec-ブチルスルホニル基、tert-ブチルスルホニル基、n-ペンチルスルホニル基、イソペンチルスルホニル基、sec-ペンチルスルホニル基、tert-ペンチルスルホニル基、ネオペンチルスルホニル基、n-ヘキシルスルホニル基、イソヘキシルスルホニル基、sec-ヘキシルスルホニル基、tert-ヘキシルスルホニル基、ネオヘキシルスルホニル基、シクロプロピルスルホニル基、シクロブチルスルホニル基、シクロペンチルスルホニル基、シクロヘキシルスルホニル基等が挙げられる。
【０２７６】
Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される置換又は無置換のアリールスルホニル基のアリールスルホニル基としては、スルホ基（−ＳＯ２ＯＨ）の−ＯＨ基がアリール基で置換されたものが挙げられ、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数６〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばフェニルスルホニル基、ナフチルスルホニル基等が挙げられる。
【０２７７】
Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される置換カルバモイル基としては、例えばカルバモイル（−ＣＯＮＨ２）基の水素原子１〜２個が炭素数１〜６のアルキル基又は炭素数６〜１０のアリール基で置換されたものが挙げられ、具体的には、例えばN-メチルカルバモイル基、N-エチルカルバモイル基、N-n-プロピルカルバモイル基、N-イソプロピルカルバモイル基、N-n-ブチルカルバモイル基、N-tert-ブチルカルバモイル基、N-n-ヘキシルカルバモイル基、N-シクロヘキシルカルバモイル基、N-メチルエチルカルバモイル基、N-ジシクロヘキシルカルバモイル基等のN-アルキルカルバモイル基、例えばN-フェニルカルバモイル基、N-ジフェニルカルバモイル基等のN-アリールカルバモイル基等が挙げられる。
【０２７８】
Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される置換スルファモイル基としては、例えばスルファモイル（−ＳＯ２ＮＨ２）基の水素原子１〜２個が炭素数１〜６のアルキル基又は炭素数６〜１０のアリール基で置換されたものが挙げられ、具体的には、例えばN-メチルスルファモイル基、N-エチルスルファモイル基、N-n-プロピルスルファモイル基、N-イソプロピルスルファモイル基、N-n-ブチルスルファモイル基、N-tert-ブチルスルファモイル基、N-n-ヘキシルスルファモイル基、N-シクロヘキシルスルファモイル基、N-メチルエチルスルファモイル基、N-ジシクロヘキシルスルファモイル基等のN-アルキルスルファモイル基、例えばN-フェニルスルファモイル基、N-ジフェニルスルファモイル基等のN-アリールスルファモイル基等が挙げられる。
【０２７９】
Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される置換ウレイド基としては、ウレイド基（−ＮＨＣＯＮＨ２）の水素原子１〜３個が置換されたものが挙げられ、例えば一般式［４］〜［７］
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【０２８０】
（式中、Ｒ１４〜Ｒ１６は夫々独立して、ハロゲン原子、アルキル基、スルホアミド基、カルボアミド基、スルホ基、カルボキシル基、ホスホ基、ヒドロキシル基又はアミノ基を表す。）で示される基が挙げられる。
【０２８１】
一般式［４］〜［７］に於いて、Ｒ１４〜Ｒ１６で示されるハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
【０２８２】
Ｒ１４〜Ｒ１６で示されるアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-へキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、ネオヘプチル基、n-オクチル基、イソオクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ネオオクチル基、n-ノニル基、イソノニル基、sec-ノニル基、tert-ノニル基、イソノニル基、n-デシル基、イソデシル基、sec-デシル基、tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【０２８３】
Ｒ１４〜Ｒ１６で示されるスルホアミド基（−ＮＨＳＯ２Ｒ）としては、アミノ基の水素原子がアルキルスルホニル基で置換されたもの（アルキルスルホアミド基）又はアリールスルホニル基で置換されたもの（アリールスルホアミド基）が挙げられる。
【０２８４】
当該アルキルスルホアミド基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０のもの、好ましくは１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメチルスルホアミド基、エチルスルホアミド基、n-プロピルスルホアミド基、イソプロピルスルホアミド基、n-ブチルスルホアミド基、イソブチルスルホアミド基、sec-ブチルスルホアミド基、tert-ブチルスルホアミド基、n-ペンチルスルホアミド基、イソペンチルスルホアミド基、sec-ペンチルスルホアミド基、tert-ペンチルスルホアミド基、ネオペンチルスルホアミド基、n-ヘキシルスルホアミド基、イソヘキシルスルホアミド基、sec-ヘキシルスルホアミド基、tert-ヘキシルスルホアミド基、ネオヘキシルスルホアミド基、シクロプロピルスルホアミド基、シクロブチルスルホアミド基、シクロペンチルスルホアミド基、シクロヘキシルスルホアミド基、n-ヘプチルスルホアミド基、イソヘプチルスルホアミド基、sec-ヘプチルスルホアミド基、tert-ヘプチルスルホアミド基、ネオヘプチルスルホアミド基、n-オクチルスルホアミド基、イソオクチルスルホアミド基、sec-オクチルスルホアミド基、tert-オクチルスルホアミド基、ネオオクチルスルホアミド基、n-ノニルスルホアミド基、イソノニルスルホアミド基、sec-ノニルスルホアミド基、tert-ノニルスルホアミド基、イソノニルスルホアミド基、n-デシルスルホアミド基、イソデシルスルホアミド基、sec-デシルスルホアミド基、tert-デシルスルホアミド基、ネオデシルスルホアミド基、シクロヘプチルスルホアミド基、シクロオクチルスルホアミド基、シクロノニルスルホアミド基、シクロデシルスルホアミド基等挙げられる。
【０２８５】
当該アリールスルホアミド基としては、通常炭素数６〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばフェニルスルホアミド基、ナフチルスルホアミド基等が挙げられる。
【０２８６】
Ｒ１４〜Ｒ１６で示されるカルボアミド基（−ＮＨＣＯＲ）としては、アミノ基の水素原子がアシル基で置換されたものが挙げられる。当該アシル基としては、例えば脂肪族カルボン酸由来のもの、芳香族カルボン酸由来のもの等が挙げられる。
【０２８７】
脂肪族カルボン酸由来のカルボアミド基としては、直鎖状、分枝状或いは環状でもよく、また更に鎖中に二重結合を有していてもよく、通常炭素数２〜２０、好ましくは炭素数２〜１５、より好ましくは２〜１０、更に好ましくは２〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばアセチルアミド基、プロピオニルアミド基、ブチリルアミド基、イソブチリルアミド基、バレリルアミド基、イソバレリルアミド基、ピバロイルアミド基、ヘキサノイルアミド基、ヘプタノイルアミド基、オクタノイルアミド基、デカノイルアミド基、ラウロイルアミド基、ミリストイルアミド基、パルミトイルアミド基、ステアロイルアミド基、イコサノイルアミド基、アクリロイルアミド基、メタクリロイルアミド基、クロトノイルアミド基、オレオイルアミド基等が挙げられる。
【０２８８】
芳香族カルボン酸由来のカルボアミド基としては、通常炭素数７〜１５、好ましくは７〜１１のものが挙げられ、具体的には、例えばベンゾイルアミド基、ナフトイルアミド基、アントイルアミド基等が挙げられる。
【０２８９】
Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される置換アミノ基としては、アミノ基の水素原子１〜２個が置換基で置換されたものが挙げられ、これら置換基としては、例えばアルキル基、アルコキシカルボニル基、アシル基、スルホ基等が挙げられる。
【０２９０】
置換アミノ基の置換基として挙げられるアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-へキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、ネオヘプチル基、n-オクチル基、イソオクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ネオオクチル基、n-ノニル基、イソノニル基、sec-ノニル基、tert-ノニル基、イソノニル基、n-デシル基、イソデシル基、sec-デシル基、tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【０２９１】
置換アミノ基の置換基として挙げられるアルコキシカルボニル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、n-プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、n-ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基、sec-ブトキシカルボニル基、tert-ブトキシカルボニル基、n-ペンチルオキシカルボニル基、イソペンチルオキシカルボニル基、sec-ペンチルオキシカルボニル基、tert-ペンチルオキシカルボニル基、ネオペンチルオキシカルボニル基、n-ヘキシルオキシカルボニル基、イソヘキシルカルボニル基、sec-ヘキシルオキシカルボニル基、tert-ヘキシルオキシカルボニル基、ネオヘキシルオキシカルボニル基、n-ヘプチルオキシカルボニル基、イソヘプチルオキシカルボニル基、sec-ヘプチルオキシカルボニル基、tert-ヘプチルオキシカルボニル基、ネオヘプチルオキシカルボニル基、n-オクチルオキシカルボニル基、イソオクチルオキシカルボニル基、sec-オクチルオキシカルボニル基、tert-オクチルオキシカルボニル基、ネオオクチルオキシカルボニル基、n-ノニルオキシカルボニル基、イソノニルオキシカルボニル基、sec-ノニルオキシカルボニル基、tert-ノニルオキシカルボニル基、ネオノニルオキシカルボニル基、n-デシルオキシカルボニル基、イソデシルオキシカルボニル基、sec-デシルオキシカルボニル基、tert-デシルオキシカルボニル基、ネオデシルオキシカルボニル基、シクロプロポキシカルボニル基、シクロブトキシカルボニル基、シクロペンチルオキシカルボニル基、シクロヘキシルオキシカルボニル基、シクロヘプチルオキシカルボニル基、シクロオクチルオキシカルボニル基、シクロノニルオキシカルボニル基、シクロデシルオキシカルボニル基等が挙げられる。
【０２９２】
置換アミノ基の置換基として挙げられるアシル基としては、例えば脂肪族カルボン酸由来のもの、芳香族カルボン酸由来のもの等が挙げられる。
【０２９３】
当該脂肪族カルボン酸由来のアシル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状でもよく、また更に鎖中に二重結合を有していてもよく、通常炭素数２〜２０、好ましくは炭素数２〜１５、より好ましくは２〜１０、更に好ましくは２〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基、ピバロイル基、ヘキサノイル基、ヘプタノイル基、オクタノイル基、デカノイル基、ラウロイル基、ミリストイル基、パルミトイル基、ステアロイル基、イコサノイル基、アクリロイル基、メタクリロイル基、クロトノイル基、オレオイル基等が挙げられる。
【０２９４】
当該芳香族カルボン酸由来のアシル基としては、通常炭素数７〜１５、好ましくは７〜１１のものが挙げられ、具体的には、例えばベンゾイル基、ナフトイル基、アントイル基等が挙げられる。
【０２９５】
Ｒ７”〜Ｒ１０”で示されるハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
【０２９６】
Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される芳香族ヘテロ環チオ基としては、チオール基（−ＳＨ）の水素原子が芳香族ヘテロ環基で置換されたものである。当該芳香族ヘテロ環基としては、例えば５員環又は６員環であり、異性原子として１〜３個の例えば窒素原子、酸素原子、硫黄原子等のヘテロ原子を含んでいるもの等が好ましく、具体的には、例えばフリル基、ピロリル基、インドリル基、プリニル基、キノリル基、ピリジル基、ピラジル基、ピリミジル基、オキサゾリル基、イミダゾリル基、チアゾリル基、ピラニル基等が挙げられる。
【０２９７】
一般式［５１］及び［５５］〜［５８］に於いて、Ｒ７”〜Ｒ１０”で示される、置換アルキル基、置換アルケニル基、置換アルキニル基、置換アリール基、置換アルコキシ基、置換アリールオキシ基、置換アルキルチオ基、置換アリールチオ基、置換アルキルスルホニル基又は置換アリールスルホニル基の置換基としては、例えばハロゲン原子、スルホアミド基、カルボアミド基、ホスホ基（リン酸基）、上記一般式［２］で示される基、上記一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基、ホルミル基等が挙げられる。
【０２９８】
置換基として挙げられる、ハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の具体例としては、一般式［４］〜［７］に於けるＲ１４〜Ｒ１６で示されるハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の例示と同様のものが挙げられる。
【０２９９】
一般式［５１］及び［５５］〜［５８］に於けるＲ７”〜Ｒ１０”の好ましい例としては、Ｒ７”〜Ｒ１０”中の３つが水素原子であり、残りの１つが一般式［３］で示されるスルホン酸由来の基であるものが挙げられ、当該スルホン酸由来の基の中でも、例えばスルホ基、そのアニオン（スルホネート）、そのアルカリ金属塩、有機アンモニウム塩等が好ましく、就中、例えばスルホ基、スルホネート、そのアルカリ金属塩（例えばナトリウム塩等）等がより好ましく、特に、Ｒ８”が一般式［３］で示される基であるものが好ましい。
【０３００】
一般式［５１］及び［５５］〜［５８］に於いて、Ｒ１１”で示される置換又は無置換のアルキル基のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-へキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、ネオヘプチル基、n-オクチル基、イソオクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ネオオクチル基、n-ノニル基、イソノニル基、sec-ノニル基、tert-ノニル基、イソノニル基、n-デシル基、イソデシル基、sec-デシル基、tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【０３０１】
Ｒ１１”で示される置換又は無置換のアルケニル基のアルケニル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数２〜６、好ましくは２〜４のものが挙げられ、具体的には、例えばビニル基、アリル基、1-プロペニル基、イソプロペニル基、3-ブテニル基、2-ブテニル基、1-ブテニル基、1,3-ブタジエニル基、4-ペンテニル基、3-ペンテニル基、2-ペンテニル基、1-ペンテニル基、1,3-ペンタジエニル基、2,4-ペンタジエニル基、1,1-ジメチル-2-プロペニル基、1-エチル-2-プロペニル基、1,2-ジメチル-1-プロペニル基、1-メチル-1-ブテニル基、5-ヘキセニル基、4-ヘキセニル基、3-ヘキセニル基、2-ヘキセニル基、1-ヘキセニル基、1-シクロプロペニル基、2-シクロペンテニル基、2,4-シクロペンタンジエニル基、1-シクロヘキセニル基、2-シクロヘキセニル基、3-シクロヘキセニル基等が挙げられる。
【０３０２】
Ｒ１１”で示される置換又は無置換のアルキニル基のアルキニル基としては、通常炭素数２〜６、好ましくは２〜４のものが挙げられ、具体的には、例えばエチニル基、2-プロピニル基、3-ブチニル基、1-メチル-2-プロピニル基、4-ペンチニル基、2-メチル-4-ペンチニル基、5-ヘキシニル基等が挙げられる。
【０３０３】
Ｒ１１”で示される置換又は無置換のアリール基のアリール基としては、通常炭素数６〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばフェニル基、ナフチル基等が挙げられる。
【０３０４】
Ｒ１１”で示される、置換アルキル基、置換アルケニル基、置換アルキニル基又は置換アリール基の置換基としては、例えばハロゲン原子、スルホアミド基、カルボアミド基、スルホ基、カルボキシル基、ホスホ基、ヒドロキシル基、アミノ基等が挙げられ、当該ハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の具体例は、一般式［１４］〜［１７］に於けるＲ１４〜Ｒ１６で示されるハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の例示と同様のものが挙げられる。
【０３０５】
Ｒ１１”の中でも、無置換アルキル基が好ましく、就中、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、n-ペンチル基、n-ヘキシル基等がより好ましい。
【０３０６】
一般式［５１］に於いて、Ｒ１”とＲ２”、Ｒ４”とＲ５”、Ｒ１”とＲ６”及びＲ２”とＲ４”の何れかで形成される２価の基、即ち、−Ｏ−基、−Ｓ−基、−ＣＯＯ−基及び一般式［５２］〜［５４］
0005626427.tif 000063
【０３０７】
（式中、Ｒ５０は水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはアリール基を表す。）で示される基から選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで形成される２価の基、詳しくは、一般式［５５］〜［５８］に於けるＴで示される２価の基としては、例えば一般式［６０］
0005626427.tif 000064
【０３０８】
〔式中、Ｒ１８及びＲ１９は夫々独立して−Ｏ−基、−Ｓ−基、−ＣＯＯ−基又は一般式［５２］〜［５４］で示される基を表し、Ｒ２０は下記一般式［７０］〜［７２］
0005626427.tif 000065
【０３０９】
（式中、Ｒ５１は、水素原子、置換又は無置換の、アルキル基、アルケニル基若しくはアリール基を表し、Ｒ５０は前記に同じ。）で示される基、水素原子、一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基を表し、Ｔ３及びＴ５は夫々独立してアルキレン基を表し、ｐは１〜２０の整数を表す。〕で示される基が挙げられる。
【０３１０】
一般式［５２］〜［５４］及び［７０］〜［７２］に於いて、Ｒ５１で示される置換又は無置換のアルキル基のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソピロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-ヘキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、ネオヘプチル基、n-オクチル基、イソオクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ネオオクチル基、n-ノニル基、イソノニル基、sec-ノニル基、tert-ノニル基、ネオノニル基、n-デシル基、イソデシル基、sec-デシル基、tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【０３１１】
Ｒ５１で示される置換又は無置換のアルケニル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数２〜１０、好ましくは２〜６のものが挙げられる、具体的には、例えばビニル基、アリル基、1-プロペニル基、イソプロペニル基、3-ブテニル基、2-ブテニル基、1-ブテニル基、1,3-ブタジエニル基、4-ペンテニル基、3-ペンテニル基、2-ペンテニル基、1-ペンテニル基、1,3-ペンタジエニル基、2,4-ペンタジエニル基、1,1-ジメチル-2-プロペニル基、1-エチル-2-プロペニル基、1,2-ジメチル-1-プロペニル基、1-メチル-1-ブテニル基、5-ヘキセニル基、4-ヘキセニル基、3-ヘキセニル基、2-ヘキセニル基、1-ヘキセニル基、ヘプテニル基、オクテニル基、ノネニル基、デセニル基、1-シクロプロペニル基、2-シクロペンテニル基、2,4-シクロペンタンジエニル基、1-シクロヘキセニル基、2-シクロヘキセニル基、3-シクロヘキセニル基、シクロヘプテニル基、シクロオクテニル基、シクロノネニル基、シクロデセニル基等が挙げられる。
【０３１２】
Ｒ５１で示される置換又は無置換のアリール基としては、通常炭素数６〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばフェニル基、ナフチル基等が挙げられる。
【０３１３】
Ｒ５１で示される置換アルキル基、置換アルケニル基又は置換アリール基の置換基としては、例えば炭素数１〜１０のアルキル基、ハロゲン原子、スルホアミド基、カルボアミド基、ホスホ基（リン酸基）、上記一般式［２］で示される基、上記一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基、ホルミル基等が挙げられる。
【０３１４】
置換基として挙げられる炭素数１〜１０のアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜６であり、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ヘキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、ネオヘプチル基、n-オクチル基、イソオクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ネオオクチル基、n-ノニル基、イソノニル基、sec-ノニル基、tert-ノニル基、ネオノニル基、n-デシル基、イソデシル基、sec-デシル基、tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【０３１５】
置換基として挙げられる、ハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の具体例としては、一般式［４］〜［７］に於けるＲ１４〜Ｒ１６で示されるハロゲン原子、スルホアミド基及びカルボアミド基の例示と同様のものが挙げられる。
【０３１６】
一般式［６０］に於いて、Ｔ３及びＴ５で示されるアルキレン基としては、直鎖状又は分枝状でもよく、好ましくは直鎖状のものであり、通常炭素数１〜６のものであり、具体的には、例えばメチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、テトラメチレン基、ヘキサメチレン基等の直鎖状アルキレン基、例えばエチリデン基、プロピレン基、イソプロピリデン基、エチルエチレン基、1,2-ジメチルエチレン基、1,2-ジエチルエチレン基、1,2-ジ-n-プロピルエチレン基、1,2-ジ-n-ブチルエチレン基等の分枝状アルキレン基等が挙げられ、中でも直鎖状アルキレン基が好ましく、就中、エチレン基、ペンタメチレン基等がより好ましい。
【０３１７】
ｐは、通常１〜２０の整数、好ましくは１〜１０の整数、より好ましくは１〜６の整数である。
【０３１８】
ｐ個のＲ２０のうち少なくとも１つは、一般式［７０］〜［７２］、一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基であるものが好ましく、中でも一般式［２］で示される基、一般式［７１］で示される基であるものがより好ましい。
【０３１９】
一般式［７１］で示される基の中でも、特に下記一般式［７３］
0005626427.tif 000066
【０３２０】
（式中、Ｔ４はアルキレン基を表し、Ｒ１２は前記に同じ。）で示される基が好ましい。
【０３２１】
一般式［７３］に於いて、Ｔ４で示されるアルキレン基としては、一般式［６０］に於けるＴ３及びＴ５で示されるアルキレン基と同様のものが挙げられる。
【０３２２】
一般式［５１］及び［５５］〜［５８］に於けるＲ１”〜Ｒ１１”中に少なくとも１つ含有される一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基の中でも、一般式［２］で示される基又は一般式［３］で示される基が好ましい。
【０３２３】
本発明の化合物中に含有される一般式［３］で示される基（スルホ基等）は、水溶性を高め、該色素分子間での会合による蛍光消光を抑制し、蛍光強度を高めるため多く導入されている方が好ましく、本発明の化合物中に通常１〜４個、好ましくは２〜４個含有される。
【０３２４】
また、本発明の化合物中に含有される一般式［２］で示される基（カルボキシル基等）は、被標識物質と結合し得る基（例えばスクシンイミド基、ノルボルネン基等の反応活性基）を容易に導入することができるため、本発明の化合物中に通常１〜３個、好ましくは１〜２個含有される。
【０３２５】
Ｒ１”〜Ｒ１１”、或いはＲ１”とＲ２”、Ｒ４”とＲ５”、Ｒ１”とＲ６”及びＲ２”とＲ４”の何れかで形成される２価の基（即ち、一般式［５５］〜［５８］に於けるＴで示される２価の基）に少なくとも１つ含有される一般式［２］で示される基、一般式［３］で示される基、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基（以下、「本発明の反応性基」と略記する場合がある。）が、Ｒ１”〜Ｒ１１”に含有される場合は、これら本発明の反応性基がＲ１”〜Ｒ１１”として存在するもの（即ちピラゾール骨格若しくはインドール骨格に当該反応性基が直接結合するもの）又はＲ１”〜Ｒ１１”に置換基として含有されるもののどちらでもよいが、当該反応性基がＲ１１”に含有される場合には、置換基として含有されるのが好ましい。
【０３２６】
また、本発明の反応性基がＲ１”とＲ２”、Ｒ４”とＲ５”、Ｒ１”とＲ６”及びＲ２”とＲ４”の何れかで形成される２価の基（即ち、一般式［５５］〜［５８］に於けるＴで示される２価の基）に含有される場合は、例えば上記一般式［６０］に於けるＲ２０に含有されるのが好ましい。
【０３２７】
上記一般式［５５］〜［５８］で示される化合物の中でもｎが１又は２であるものが好ましく、就中、ｎが２であるものがより好ましい。
【０３２８】
また、本発明の化合物［５１］の中でも、例えば下記一般式［５１’］
0005626427.tif 000067
【０３２９】
〔式中、Ｒ１”ｂ〜Ｒ６”ｂは夫々独立して一般式［２］又は［３］で示される基を置換として有していてもよいアルキル基を表し、Ｒ８”ｂは一般式［３］で示される基を表し、Ｒ１１”ｂはアルキル基を表し、ｎは０〜３の整数を表す。但し、Ｒ１”ｂとＲ２”ｂ、Ｒ４”ｂとＲ５”ｂ、Ｒ１”ｂとＲ６”ｂ及びＲ２”ｂとＲ４”ｂの何れかが、−Ｏ−基、−Ｓ−基、−ＣＯＯ−基及び一般式［５２］〜［５４］で示される基から選ばれる基と置換又は無置換のアルキレン基とで２価の基を形成する。また、Ｒ１”ｂ〜Ｒ１１”ｂ、並びにＲ１”ｂとＲ２”ｂ、Ｒ４”ｂとＲ５”ｂ、Ｒ１”ｂとＲ６”ｂ及びＲ２”ｂとＲ４”ｂの何れかで形成される２価の基のうち少なくとも１つは一般式［２］で示される基又は一般式［３］で示される基を有する。〕で示されるものが好ましい。
【０３３０】
一般式［５１’］に於いて、Ｒ１”ｂ〜Ｒ６”ｂで示される一般式［２］又は［３］で示される基を置換基として有していてもよいアルキル基のアルキル基としては、前記一般式［５１］に於けるＲ１”〜Ｒ６”で示される、アミド結合を有していてもよい、置換又は無置換アルキル基のアルキル基の例示と同様のものが挙げられる。
【０３３１】
Ｒ３ａ及びＲ４ａは夫々独立して一般式［２］又は［３］で示される基を置換基として有していてもよいアルキル基が挙げられるが、中でもその一方が一般式［２］又は［３］で示される基を置換基として有するアルキル基であり、他方がアルキル基であるものが好ましい。
【０３３２】
Ｒ５ａ及びＲ６ａは夫々独立して一般式［２］又は［３］で示される基を置換基として有していてもよいアルキル基が挙げられるが、中でもその一方が一般式［２］又は［３］で示される基を置換基として有するアルキル基であり、他方がアルキル基であるものが好ましい。
【０３３３】
Ｒ１１”ｂで示されるアルキル基としては、前記一般式［５１］に於けるＲ１１で示されるアルキル基の例示と同様のものが挙げられる。
【０３３４】
一般式［５５］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表９〜１２で示されるもの等が挙げられる。尚、表９〜１２に於いて、一般式［５５］で示されるＲ３”、Ｒ５”及びＲ１１”は−ＣＨ３基であり、Ｒ７”、Ｒ９”及びＲ１０”は水素原子であり、Ｒ８”は−ＳＯ３Ｎａ基である。
【０３３５】
【表９】
0005626427.tif 000068
【０３３６】
【表１０】
0005626427.tif 000069
【０３３７】
【表１１】
0005626427.tif 000070
【０３３８】
【表１２】
0005626427.tif 000071
【０３３９】
一般式［５６］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表１３〜１６で示されるもの等が挙げられる。尚、表１３〜１６に於いて、一般式［５６］に於けるＲ３”、Ｒ６”及びＲ１１”は−ＣＨ３基であり、Ｒ７”、Ｒ９”及びＲ１０”は水素原子であり、Ｒ８”は−ＳＯ３Ｎａ基である。
【０３４０】
【表１３】
0005626427.tif 000072
【０３４１】
【表１４】
0005626427.tif 000073
【０３４２】
【表１５】
0005626427.tif 000074
【０３４３】
【表１６】
0005626427.tif 000075
【０３４４】
一般式［５７］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表１７〜２０で示されるもの等が挙げられる。尚、表１７〜２０に於いて、一般式［５７］に於けるＲ３”、Ｒ５”及びＲ１１”は−ＣＨ３基であり、Ｒ７”、Ｒ９”及びＲ１０”は水素原子であり、Ｒ８”は−ＳＯ３Ｎａ基である。
【０３４５】
【表１７】
0005626427.tif 000076
【０３４６】
【表１８】
0005626427.tif 000077
【０３４７】
【表１９】
0005626427.tif 000078
【０３４８】
【表２０】
0005626427.tif 000079
【０３４９】
一般式［５８］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表２１〜２４で示されるもの等が挙げられる。尚、表２１〜２４に於いて、一般式［５８］に於けるＲ３”、Ｒ５”及びＲ１１”は−ＣＨ３基であり、Ｒ７”、Ｒ９”及びＲ１０”は水素原子であり、Ｒ８”は−ＳＯ３Ｎａ基である。
【０３５０】
【表２１】
0005626427.tif 000080
【０３５１】
【表２２】
0005626427.tif 000081
【０３５２】
【表２３】
0005626427.tif 000082
【０３５３】
【表２４】
0005626427.tif 000083
【０３５４】
また、本発明の化合物中に含有される本発明の反応性基を、例えば被標識物質等と結合させる場合には、当該反応性基に、被標識物質に含有される官能基（例えばアミノ基、カルボキシル基、チオール基、ヒドロキシル基、ホルミル基等）（以下、「被標識物質の官能基」と略記する場合がある。）との結合性を高める（活性化させる）ような基（以下、「本発明の反応活性基」と略記する場合がある。）が更に導入されていてもよい。
【０３５５】
尚、このような本発明の反応活性基、即ち、本発明の反応性基に被標識物質の官能基との結合性を高めるような基を導入したものも、本発明の反応性基に含まれる。
【０３５６】
このような反応活性基としては、被標識物質の官能基と結合させることができるものであれば特に限定されないが、通常この分野で用いられるものが全て挙げられる。
【０３５７】
本発明の反応活性基としては、被標識物質の官能基と結合させることができるものであれば特に限定されないが、通常この分野で用いられるものが全て挙げられ、例えばアミノ基との反応性を活性化させるもの（以下、「アミノ基に対する反応活性基」）、チオール基との反応性を活性化させるもの（以下、「チオール基に対する反応活性基」）、水酸基との反応性を活性化させるもの（以下、「水酸基に対する反応活性基」）、ホルミル基との反応性を活性化させるもの（以下、「ホルミル基に対する反応活性基」）等が挙げられる。
【０３５８】
アミノ基に対する反応活性基の好ましい具体例としては、例えばスクシンイミド基、スルホスクシンイミド基、ノルボルネン基、4-ニトロフェノキシ基、カルボン酸無水物由来の基（例えばアセトキシカルボニルメチル基、プロピオニルオキシカルボニルエチル基、ベンゾイルオキシベンジル基等）、炭素数１〜３のハロスルホニルアルキル基（例えばフルオロスルホニルメチル基、フルオロスルホニルエチル基、フルオロスルホニルプロピル基、クロロスルホニルメチル基、クロロスルホニルエチル基、クロロスルホニルプロピル基、ブロモスルホニルメチル基、ブロモスルホニルエチル基、ブロモスルホニルプロピル基、ヨードスルホニルメチル基、ヨードスルホニルエチル基、ヨードスルホニルプロピル基等）、ハロスルホニルアリール基（例えばフルオロスルホニルフェニル基、クロロスルホニルフェニル基、ブロモスルホニルフェニル基、ヨードスルホニルフェニル基等）、炭素数１〜３のハロカルボニルアルキル基（例えばフルオロカルボニルメチル基、フルオロカルボニルエチル基、フルオロカルボニルプロピル基、クロロカルボニルメチル基、クロロカルボニルエチル基、クロロカルボニルプロピル基、ブロモカルボニルメチル基、ブロモカルボニルエチル基、ブロモカルボニルプロピル基、ヨードカルボニルメチル基、ヨードカルボニルエチル基、ヨードカルボニルプロピル基等）、ハロカルボニルアリール基（例えばフルオロカルボニルフェニル基、クロロカルボニルフェニル基、ブロモカルボニルフェニル基、ヨードカルボニルフェニル基等）、ホスファアミダイト基、イソチオシアネート基、イソシアネート基、モノハロゲン（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）置換トリアジノ基、ジハロゲン（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）置換トリアジノ基、モノハロゲン（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）置換ピリミジノ基、ジハロゲン（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）置換ピリミジノ基、モノハロゲン（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）置換ピリジノ基、ジハロゲン（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）置換ピリジノ基、ホスホリルハライド（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）等が挙げられる。
【０３５９】
チオール基に対する反応活性基の好ましい具体例としては、例えばカルボン酸無水物由来の基（例えばアセトキシカルボニルメチル基、プロピオニルオキシカルボニルエチル基、ベンゾイルオキシベンジル基等）、マレイミド基、スルホマレイミド基、スルホニルハライド基（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）、α-ハロゲノ（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）アセタミド基、炭素数１〜３のハロカルボニルアルキル基（例えばフルオロカルボニルメチル基、フルオロカルボニルエチル基、フルオロカルボニルプロピル基、クロロカルボニルメチル基、クロロカルボニルエチル基、クロロカルボニルプロピル基、ブロモカルボニルメチル基、ブロモカルボニルエチル基、ブロモカルボニルプロピル基、ヨードカルボニルメチル基、ヨードカルボニルエチル基、ヨードカルボニルプロピル基等）、ハロカルボニルアリール基（例えばフルオロカルボニルフェニル基、クロロカルボニルフェニル基、ブロモカルボニルフェニル基、ヨードカルボニルフェニル基等）、イソチオシアネート基、イソシアネート基、2-ピリジルジチオ基等が挙げられる。
【０３６０】
水酸基に対する反応活性基の好ましい具体例としては、例えばカルボン酸無水物由来の基（例えばアセトキシカルボニルメチル基、プロピオニルオキシカルボニルエチル基、ベンゾイルオキシベンジル基等）、炭素数１〜３のハロスルホニルアルキル基（例えばフルオロスルホニルメチル基、フルオロスルホニルエチル基、フルオロスルホニルプロピル基、クロロスルホニルメチル基、クロロスルホニルエチル基、クロロスルホニルプロピル基、ブロモスルホニルメチル基、ブロモスルホニルエチル基、ブロモスルホニルプロピル基、ヨードスルホニルメチル基、ヨードスルホニルエチル基、ヨードスルホニルプロピル基等）、ハロスルホニルアリール基（例えばフルオロスルホニルフェニル基、クロロスルホニルフェニル基、ブロモスルホニルフェニル基、ヨードスルホニルフェニル基等）、ホスファアミダイト基、炭素数１〜３のハロカルボニルアルキル基（例えばフルオロカルボニルメチル基、フルオロカルボニルエチル基、フルオロカルボニルプロピル基、クロロカルボニルメチル基、クロロカルボニルエチル基、クロロカルボニルプロピル基、ブロモカルボニルメチル基、ブロモカルボニルエチル基、ブロモカルボニルプロピル基、ヨードカルボニルメチル基、ヨードカルボニルエチル基、ヨードカルボニルプロピル基等）、ハロカルボニルアリール基（例えばフルオロカルボニルフェニル基、クロロカルボニルフェニル基、ブロモカルボニルフェニル基、ヨードカルボニルフェニル基等）、イソチオシアネート基、イソシアネート基、ホスホリルハライド（例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ等）基等が挙げられる。
【０３６１】
ホルミル基に対する反応活性基の好ましい具体例としては、例えばヒドラジド基等が挙げられる。
【０３６２】
また、被標識物質の官能基に上記の如き反応活性基を導入した後に、本発明の反応性基と反応させることにより被標識物質を標識することも可能であり、この場合の被標識物質の官能基の反応活性基としても、上記の如き本発明の反応活性基と同様のものが挙げられる。
【０３６３】
本発明の反応活性基の中でも、例えばスクシンイミド（Ｓｕ）基、マレイミド（Ｍａ）基等が好ましい。
【０３６４】
本発明の反応性基に当該反応活性基が導入された基の好ましい具体例としては、例えば−ＣＯＯＳｕ基、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）４Ｍａ基等が挙げられる。このような本発明の反応活性基を含有する化合物も一般式［５１］で示される本発明の化合物に含まれる。
【０３６５】
このような本発明の反応活性基を含有する本発明の化合物の具体例としては、本発明の化合物中の本発明の反応性基に上記の如き本発明の反応活性基が更に導入された化合物が全て挙げられるが、例えば一般式［５５］〜［５８］に於けるＴで示される２価の基に当該反応活性基を含有するものが挙げられ、中でも一般式［６０］に於けるＲ２０で示される本発明の反応性基に当該反応活性基が導入されたものが好ましい。
【０３６６】
このような本発明の反応活性基が導入された本発明の化合物の一例を以下に示す。
【０３６７】
本発明の反応活性基を含有する一般式［５５］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表２５で示されるもの等が挙げられる。尚、表２５に於いて、一般式［５５］で示されるＲ３”、Ｒ５”及びＲ１１”は−ＣＨ３基であり、Ｒ７”、Ｒ９”及びＲ１０”は水素原子であり、Ｒ８”は−ＳＯ３Ｎａ基である。
【０３６８】
【表２５】
0005626427.tif 000084
【０３６９】
本発明の反応活性基を含有する一般式［５６］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表２６で示されるもの等が挙げられる。尚、表２６に於いて、一般式［５６］に於けるＲ３”、Ｒ６”及びＲ１１”は−ＣＨ３基であり、Ｒ７”、Ｒ９”及びＲ１０”は水素原子であり、Ｒ８”は−ＳＯ３Ｎａ基である。
【０３７０】
【表２６】
0005626427.tif 000085
【０３７１】
本発明の反応活性基を含有する一般式［５７］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表２７で示されるもの等が挙げられる。尚、表２７に於いて、一般式［５７］に於けるＲ３”、Ｒ５”及びＲ１１”は−ＣＨ３基であり、Ｒ７”、Ｒ９”及びＲ１０”は水素原子であり、Ｒ８”は−ＳＯ３Ｎａ基である。
【０３７２】
【表２７】
0005626427.tif 000086
【０３７３】
本発明の反応活性基を含有する一般式［５８］で示される化合物の好ましい具体例としては、例えば下記表２８で示されるもの等が挙げられる。尚、表２８に於いて、一般式［５８］に於けるＲ３”、Ｒ５”及びＲ１１”は−ＣＨ３基であり、Ｒ７”、Ｒ９”及びＲ１０”は水素原子であり、Ｒ８”は−ＳＯ３Ｎａ基である。
【０３７４】
【表２８】
0005626427.tif 000087
【０３７５】
このように本発明の反応性基に本発明の反応活性基を導入した化合物も、本発明の化合物に含まれる。
【０３７６】
３−２．本発明の化合物［５１］の合成法
３−２−１．インドレニン化合物−ピラゾール化合物複合体（本発明の一般式［５１］で示される化合物に相当）の合成
一般式［５１］で示される化合物は、例えば下記方法によって合成し得る。
【０３７７】
一般式［５１］で示される化合物（詳しくは、一般式［５５］〜［５８］で示される化合物）の合成法を、一般式［５５］で示される化合物（即ち、一般式［５１］に於けるＲ１”とＲ２”とがＴで示される２価の基を形成するものに相当）を用いた場合を例にとって以下に説明する。
0005626427.tif 000088
【０３７８】
〔式中、Ａはテトラフルオロボレート又はヘキサフルオロホスフェートを表し、Ｒ３”〜Ｒ６”、Ｒ７”〜Ｒ１１”、Ｒ１２”、Ｒ２０”、Ｔ３、Ｔ５、ｎ及びｐは前記に同じ。〕
【０３７９】
尚、一般式［６１］で示される化合物は、一般式［５１］で示される化合物のうち、Ｒ１”が一般式［２］で示される基を置換基として有するアルキル基（即ち、−Ｔ３-ＣＯＯＲ１２基）、Ｒ２”が一般式［２］で示される基を置換基として有するアルキル基（即ち−Ｔ５-ＣＯＯＲ１２基）である場合の化合物に相当する。
【０３８０】
また、一般式［６５］で示される化合物は、一般式［５５］で示される化合物のうち、Ｔが一般式［６３］で示される基（式中、Ｒ１８及びＲ１９は−ＣＯＮＨ−基である。）である場合に相当する。
【０３８１】
即ち、一般式［６１］で示される化合物（本発明の反応性基を有する化合物）を、一般式［６２］で示される化合物又はジスクシイミジルカルボネート（ＤＳＣ）（一般式［６１］で示される化合物に対して２〜２０倍モル）と塩基性触媒（例えばN-エチルジイソプロピルアミン、ピリジン、トリエチルアミン、N,N-ジメチルアニリン、ピペリジン、4-ジメチルアミノピリジン、1,5-ジアザビシクロ[4.3.0]ノナ-5-エン、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン、トリ-n-ブチルアミン等の有機アミン類等）の存在下、適当な溶媒（例えばN,N-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、N,N-ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、アセトアミド、N-メチルピロリドン等のアミド類等）中、０〜４０℃で０．１〜１２時間反応させ、一般式［６３］で示される化合物が得られる。
【０３８２】
次いで、一般式［６３］で示される化合物と一般式［６４］で示される化合物を、塩基性触媒（例えば炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の炭酸水素アルカリ金属塩、例えばN-エチルジイソプロピルアミン、ピリジン、トリエチルアミン、N,N-ジメチルアニリン、ピペリジン、4-ジメチルアミノピリジン、1,5-ジアザビシクロ[4.3.0]ノナ-5-エン、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン、トリ-n-ブチルアミン等の有機アミン類等）の存在下、適当な溶媒（例えばＤＭＦ、ＤＭＡ、アセトアミド、N-メチルピロリドン等のアミド類、水等）中、０〜４０℃、０．１〜１２時間反応させ、目的物である一般式［６５］で示される化合物が得られる。
【０３８３】
その他の一般式［５１］で示される化合物も対応する原料を用いて上記に準じて適宜合成することにより得られる。
【０３８４】
３−２−２．本発明の反応活性基（本発明の反応性基を活性化させた基）を含有する本発明の化合物の合成
本発明の反応性基に本発明の反応活性基を導入する方法を、一般式［５１］で示される化合物のうち、一般式［５５］で示される化合物（即ち、一般式［５１］に於けるＲ１”とＲ２”とがＴで示される２価の基を形成するものに相当）、更には、上記一般式［６５］で示される化合物のうちｐが５であり５個のＲ２０のうちの１つが一般式［２］で示される基である化合物（下記一般式［６６］で示される化合物に相当）を用いた場合を例にとって以下に説明する。
0005626427.tif 000089
【０３８５】
（式中、ｑは２〜１０の整数を表し、Ｒ３”〜Ｒ１１”、Ｒ１２、Ｔ３、Ｔ５、Ａ及びｎは前記に同じ。）
【０３８６】
尚、一般式［６６］で示される化合物は、一般式［６５］で示される化合物のうち、ｐが５であり、５個のＲ２０のうちの１つが一般式［２］で示される基であり、それ以外のＲ２０が水素原子である場合の化合物に相当する。
【０３８７】
一般式［６８］及び［６９］に於いて、ｑは２〜１０の整数を表す。
【０３８８】
即ち、一般式［６６］で示される化合物（本発明の反応性基を有する化合物）を、例えば一般式［６２］で示される化合物等のスクシンイミド化試薬（一般式［６６］で示される化合物に対して１〜１０倍モル）と塩基性触媒（例えばN-エチルジイソプロピルアミン、ピリジン、トリエチルアミン、N,N-ジメチルアニリン、ピペリジン、4-ジメチルアミノピリジン、1,5-ジアザビシクロ[4.3.0]ノナ-5-エン、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン、トリ-n-ブチルアミン等の有機アミン類等）の存在下、適当な溶媒（例えばＤＭＦ、ＤＭＡ、アセトアミド、N-メチルピロリドン等のアミド類等）中、０〜４０℃で０．１〜１２時間反応させ、一般式［６７］で示される化合物（本発明の反応活性基であるスクシンイミド基を有する化合物）が得られる。
【０３８９】
一般式［６７］で示される化合物は、例えば一般式［６８］で示される化合物等のマレイミド化試薬（一般式［６７］で示される化合物に対して１〜１０倍モル）と塩基性触媒（例えばトリエチルアミン、N-エチルジイソプロピルアミン、ピリジン、N,N-ジメチルアニリン、ピペリジン、4-ジメチルアミノピリジン、1,5-ジアザビシクロ[4.3.0]ノナ-5-エン、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン、トリ-n-ブチルアミン等の有機アミン類等）の存在下、適当な溶媒（例えばＤＭＦ、ＤＭＡ、アセトアミド、N-メチルピロリドン等のアミド類等）中、０〜４０℃で０．１〜１２時間反応させ、一般式［６９］で示される化合物（本発明の反応活性基であるマレイミド基を有する化合物）が得られる。
【０３９０】
本発明に係るスクシンイミド化試薬としては、上記一般式［６２］で示される化合物に限らず、通常この分野で用いられるものが全て挙げられるが、具体的には、例えばジ（N-スクシンイミジル）カルボネート（ＤＳＣ）、2-スクシンイミド-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＳＴＵ）、2-（5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシミド）-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＮＴＵ）等が挙げられる。
【０３９１】
上記の如き反応活性基以外の本発明の反応活性基を導入する方法としては、対応する原料を用いて上記に準じて適宜合成することにより得られる。
【０３９２】
３−２−３．インドレニン化合物−ピラゾール化合物複合体（一般式［７５］で示される化合物）の合成
一般式［７５］で示される化合物（インドレニン化合物−ピラゾール化合物複合体）の合成法を以下に説明する。
0005626427.tif 000090
【０３９３】
（式中、Ｒ１７はアルキル基又はアリール基を表し、Ｒ１”〜Ｒ６”、Ｒ１１”、ｎ及びその他の定義は前記に同じ。但し、Ｒ１”、Ｒ３”及びＲ４”のうち少なくとは１つは一般式［２］で示される基を置換基として含有し、Ｒ２”、Ｒ５”及びＲ６”のうち少なくとも１つは一般式［２］で示される基を含有する。）
【０３９４】
一般式［７２］及び［７３］に於いて、Ｒ１７で示されるアルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜３のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、n-ペンチル基、イソペンチル基、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、ネオペンチル基、n-ヘキシル基、イソヘキシル基、sec-ヘキシル基、tert-ヘキシル基、ネオヘキシル基、n-ヘプチル基、イソヘプチル基、sec-ヘプチル基、tert-ヘプチル基、ネオヘプチル基、n-オクチル基、イソオクチル基、sec-オクチル基、tert-オクチル基、ネオオクチル基、n-ノニル基、イソノニル基、sec-ノニル基、tert-ノニル基、ネオノニル基、n-デシル基、イソデシル基、sec-デシル基、tert-デシル基、ネオデシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【０３９５】
Ｒ１７で示されるアリール基としては、通常炭素数６〜１０のものが挙げられ、具体的には、例えばフェニル基、ナフチル基等が挙げられる。
【０３９６】
即ち、先ず、一般式［７０］で示されるインドレニン化合物（インドレニン骨格部分）、一般式［７１］で示される化合物〔一般式［７０］で示される化合物に対して１〜２倍モル〕及び一般式［７２］で示される酸無水物〔一般式［７０］で示される化合物に対して１〜２０倍モル〕（例えば無水酢酸、無水プロピオン酸、無水酪酸、安息香酸無水物等）を、必要ならば溶媒（例えば、酢酸、プロピオン酸、酪酸等のカルボン酸類、例えばアセトニトリル、プロピオニトリル、ｎ-ブチロニトリル等のニトリル類等）に溶解し、０〜１５０℃（好ましくは４０〜１２０℃）で０．１〜２４時間（好ましくは０．５〜１２時間、より好ましくは１〜８時間）で反応させることにより一般式［７３］で示される化合物が得られた。
【０３９７】
次いで、一般式［７３］で示される化合物及び一般式［７４］で示される化合物（ピラゾール骨格部分）〔一般式［７３］で示される化合物に対して０．５〜１０倍モル、好ましくは１〜５倍モル〕を、塩基性触媒（例えばピリジン、トリエチルアミン、N,N-ジメチルアニリン、ピペリジン、ピリジン、4-ジメチルアミノピリジン、1,5-ジアザビシクロ[4.3.0]ノナ-5-エン、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン、トリ-n-ブチルアミン等の有機アミン類、例えば水素化ナトリウム等の金属水素化物類、例えばn-ブチルリチウム等の塩基性アルカリ金属化合物類等）の存在下、脱水縮合剤〔例えば濃硫酸、五酸化二リン、無水塩化亜鉛等の無機脱水剤類、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピルカルボジイミド)塩酸塩等のカルボジイミド類、無水酢酸、ポリリン酸、カルボニルジイミダゾール、p-トルエンスルホニルクロライド等〕を用いて、必要ならば溶媒（例えばN,N-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、N,N-ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、アセトアミド、Ｎ-メチルピロリドン等のアミド類、例えばアセトニトリル、プロピオニトリル、ｎ-ブチロニトリル等のニトリル類、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、エチレングリコール、1,4-ブタンジオール等のアルコール類、例えばテトラヒドロフラン、ジオキサン、アニソール、エチレングリコールモノエチルエーテル等のエーテル類、例えばジメチルスルホキシド等のスルホキシド類）中で０〜１５０℃（好ましくは４０〜１２０℃）で０．１〜２４時間（好ましくは０．５〜１２時間、より好ましくは１〜８時間）で反応させ、一般式［７５］で示される化合物が得られる。
【０３９８】
３−２−４．インドレニン骨格部分（一般式［７０］で示される化合物）の合成
一般式［７０］で示される化合物（インドレニン骨格部分）の合成法を以下に説明する。
0005626427.tif 000091
【０３９９】
（式中、Ｘはハロゲン原子を表し、Ｒ１”、Ｒ３”、Ｒ４”及びＲ７”〜Ｒ１０”は前記に同じ。）
【０４００】
一般式［７９］に於いて、Ｘで示されるハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
【０４０１】
即ち、一般式［７６］で示されるケトン化合物及び一般式［７７］で示される化合物を適当な溶媒中（例えば酢酸、プロピオン酸等のカルボン酸類、例えばエチレングリコール、1,4-ブタンジオール等のアルコール類等）で、４０〜２５０℃で０．１〜２４時間反応させることにより一般式［７８］で示される化合物が得られる（例えばJournal of Organic Chemistry, 42(14), 2474~80, 1977等）。
【０４０２】
次いで、一般式［７８］で示される化合物を一般式［７９］で示されるハロゲン化化合物）又は一般式［８０］で示されるトシレート化合物とを、適当な溶媒中（例えばクロロベンゼン、1,2-ジクロロベンゼン等のハロゲン化芳香族炭化水素類、例えば1,2-ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、例えばトルエン、キシレン、ベンゼン等の芳香族炭化水素類、例えばＤＭＡ、ＤＭＦ、アセトアミド、N-メチルピロリドン等のアミド類等）に溶解し、４０〜２００℃で１〜２４時間反応させることにより一般式［７０］で示されるインドレニン化合物が得られる（例えばJ. Chem. Soc., Perkin Trans.1. 947~952. 1984等）。
【０４０３】
一般式［７６］で示されるケトン化合物は、市販品（例えば3-メチル-2-ブタノン、3-メチル-2-ペンタノン、3-メチル-2-ヘキサノン、１-シクロプロピルエタノン、1-シクロブチルエタノン等）を用いてもよいし、常法により適宜合成されたものを用いてもよく、具体的には、例えば2-メチルアセト酢酸エチルと脱離基（例えばハロゲン原子、トシレート基等）を有する化合物を塩基性触媒（例えば水素化ナトリウム、水素化カリウム等の金属水素化物類、例えば炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩、例えばナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムtert-ブトキシド等のアルカリ金属アルコキシド類等、例えばn-ブチルリチウム等の塩基性アルカリ金属化合物類、例えばリチウムジイソプロピルアミド等のアルカリ金属アミド類等）の存在下、適当な溶媒（例えばＤＭＦ、ＤＭＡ、アセトアミド、Ｎ-メチルピロリドン等のアミド類、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、エチレングリコール等のアルコール類、例えばテトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールモノエチルエーテル等のエーテル類、例えばジメチルスルホキシド等のスルホキシド類等）中、−８０〜１００℃で０．１〜２４時間反応させ、次いで、得られた溶液を酸触媒を用い脱炭酸を行う方法（例えばModern Synthetic Reactions, California, 2 nd ed.,p.492, 510, 756 (1972)等参照）等が挙げられる。
【０４０４】
一般式［７７］で示される化合物は、市販品を用いてもよいし、常法により適宜合成されたものを用いてもよい。
【０４０５】
３−２−５．ピラゾール骨格部分（一般式［７４］で示される化合物）の合成
一般式［７４］で示される化合物（ピラゾール骨格部分）の合成法を以下に説明する。
0005626427.tif 000092
【０４０６】
（式中、Ｒ２”、Ｒ５”、Ｒ６”、Ｒ１１”及びＸは前記に同じ。）
【０４０７】
即ち、一般式［８１］で示されるジケトン化合物とヒドラジンを、適当な溶媒（例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、エチレングリコール等のアルコール類等）中、６０〜１００℃で１〜４時間脱水反応させ、一般式［８２］で示される４Ｈ−ピラゾール化合物が得られる（例えばAdv. Heterocycle. Chem. Vol.34. 53~78. 1983等）。
【０４０８】
次いで、一般式［８２］で示される４Ｈ−ピラゾール化合物を一般式［８３］で示されるハロゲン化化合物又は一般式［８４］で示されるトシレート化合物とを、適当な溶媒（例えばクロロベンゼン、1,2-ジクロロベンゼン等のハロゲン化芳香族炭化水素類、例えば1,2-ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、例えばトルエン、キシレン、ベンゼン等の芳香族炭化水素類、例えばＤＭＦ、ＤＭＡ、アセトアミド、N-メチルピロリドン等のアミド類等）中、８０〜１４０℃で１〜１２時間でN-アルキル化反応させ、一般式［７４］で示される化合物が得られる（例えばJ. Chem. Soc., Perkin Trans.1. 947~952. 1984等）。
【０４０９】
一般式［８１］で示されるジケトン化合物は、市販品（例えば3,3-ジメチル-2,4-ペンタンジオン等）を用いてもよいし、常法により適宜合成されたものを用いてもよく、具体的には、例えば3-メチル-2,4-ペンタンジオンや4-アセチル-5-オキソヘキサン酸エチルエステルを脱離基（例えばハロゲン原子、トシレート基等）を有する化合物を塩基性触媒（例えば水素化ナトリウム、水素化カリウム等の金属水素化物類、例えば炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩、例えばナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムtert-ブトキシド等のアルカリ金属アルコキシド類、例えばn-ブチルリチウム等の塩基性アルカリ金属化合物類、例えばリチウムジイソプロピルアミド等のアルカリ金属アミド類等）の存在下、適当な溶媒（例えばＤＭＦ、ＤＭＡ、アセトアミド、Ｎ-メチルピロリドン等のアミド類、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、エチレングリコール等のアルコール類、例えばテトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールモノエチルエーテル等のエーテル類、例えばジメチルスルホキシド等のスルホキシド類等）中、−８０〜１００℃で０．１〜２４時間反応させる方法（例えばModern Synthic Reactions, California, 2 nd ed.,p.492, 510, 756 (1972)等）等が挙げられる。
【０４１０】
３−３．本発明の化合物［５１］の性質
このようにして得られた本発明の化合物［５１］は、例えば核酸抽出法、イムノアッセイ法等の蛍光標識物質としての用途が期待されている。
【０４１１】
４．本発明の標識化合物及び標識方法
４−１．本発明の標識化合物（本発明の化合物［５１］で標識された化合物）
本発明の標識化合物としては、本発明の化合物（標識物質）と被標識物質を直接又は間接的に結合されたものが挙げられ、具体的には、本発明の化合物中に含有される一般式［２］で示される基（カルボキシル基等）、一般式［３］で示される基（スルホ基等）、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基が被標識物質と直接又は間接的に結合されたものが挙げられる。
【０４１２】
被標識物質と結合される本発明の化合物中の一般式［２］で示される基（カルボキシル基等）、一般式［３］で示される基（スルホ基等）、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基（以下、「本発明の反応性基」と略記する場合がある。）は、通常一般式［１］に於けるＲ１”〜Ｒ１１”、或いはＲ１”とＲ２”、Ｒ４”とＲ５”、Ｒ１”とＲ６”及びＲ２”とＲ４”の何れかで形成される２価の基（即ち、一般式［７］〜［１０］に於けるＴで示される２価の基）に、好ましくは一般式［７］〜［１０］に於けるＴで示される２価の基（例えば一般式［３６］で示される２価の基）に、より好ましくは一般式［３６］に於けるＲ２０に含有されるものが好ましい。
【０４１３】
本発明の化合物により標識される被標識物質としては、例えば通常この分野で被標識物質として用いられるものが全て挙げられるが、具体的には、例えばビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、アミノ酸、蛋白、ペプチド、酵素基質、ホルモン、リンフォカイン、代謝産物、レセプタ、リガンド、アゴニスト、アンタゴニスト、抗原、ハプテン、デンドリマー、レクチン、トキシン、炭水化物、例えば果糖類、多糖類等の糖類、ヌクレオシド（例えばリボヌクレオシド、デオキシリボヌクレオシド等）、ヌクレオチド（例えばリボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド等）、核酸（オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド）〔例えばデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）等〕、核酸誘導体（例えばＤＮＡフラグメント、ＲＮＡフラグメント等）、天然薬物、ウイルス、ウイルス成分、イースト成分、血液細胞、血液細胞成分、生物細胞、非細胞血液成分、バクテリア、バクテリア成分、天然及び合成脂質嚢、合成及び天然薬物、毒薬、環境汚染物質、重合体、重合体粒子、ガラス粒子、ガラス表面材、プラスチック粒子、プラスチック表面材、重合体膜、導体及び半導体、並びにこれらに対する抗体及びその分解産物（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２等）等が挙げられ、中でも、例えばヌクレオチド、抗体若しくはその分解産物等が好ましい。
【０４１４】
ヌクレオシドは、プリン塩基又はピリミジン塩基、糖部分であるペントースからなり、具体的には、例えば糖部分がD-リボースであるリボヌクレオシド、例えば糖部分がD-2-デオキシリボースであるデオキシリボヌクレオシド等が挙げられる。
【０４１５】
ヌクレオチドは、プリン塩基又はピリミジン塩基、糖部分であるペントース、及びリン酸からなり、具体的には、例えば糖部分がD-リボースであるリボヌクレオチド、例えば糖部分がD-2-デオキシリボースであるデオキシリボヌクレオチド等が挙げられる。
【０４１６】
また、当該ヌクレオシド及びヌクレオチドには、例えばヌクレオシド抗生物質のように、その基本となる塩基部分がプリン構造又はピリミジン構造でないもの、これらの構造が修飾されているもの、糖部分がD-リボース又はデオキシ-D-リボースでないもの、これらが修飾されているもの、リン酸部分（−ＯＰＯ３−）が他の元素〔例えば硫黄原子（−ＯＰＯ２Ｓ−）等〕で置換されたもの、リン酸部分が修飾されたもの等も含まれる。
【０４１７】
核酸は、当該ヌクレオチドを基本単位とし、このリン酸が各ヌクレオチド間で糖の３’と５’位炭素の間のジエステル結合により結合された鎖状のオリゴ又はポリヌクレオチドであり、具体的には、例えば糖部分がリボースであるリボ核酸（ＲＮＡ）、例えば糖部分がD-2-デオキシリボースであるデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）等が挙げられる。
【０４１８】
これらヌクレオチド、核酸及び誘導核酸は１本鎖でも、２本鎖乃至これ以上の複数の核酸鎖からなるものであってもよい。また、これらは本発明の目的を達成し得る範囲であれば、適当なもので適宜修飾等されていてもよい。
【０４１９】
本発明の化合物と被標識物質が直接的に結合されるとは、例えば本発明の化合物（要すれば本発明の反応性基）が被標識物質中の官能基（例えばアミノ基、カルボキシル基、チオール基、ヒドロキシル基、ホルミル基等）と、例えばイオン結合、共有結合等で結合されることを意味する。また、本発明の化合物と被標識物質が間接的に結合されるとは、例えば本発明の反応性基が被標識物質中の当該官能基とリンカー等を介して結合（例えばイオン結合、共有結合等）されることを意味する。間接的結合で使用されるリンカーとしては、通常この分野で用いられるものが全て挙げられる。
【０４２０】
４−２．本発明の標識方法
本発明の化合物［５１］を用いて被標識物質を標識する方法としては、自体公知の方法に従い適宜選択して行えばよいが、例えば本発明の反応性基（即ち、一般式［５１］に於けるＲ１”〜Ｒ１１”、或いはＲ１”とＲ２”、Ｒ４”とＲ５”、Ｒ１”とＲ６”及びＲ２”とＲ４”の何れかで形成される２価の基のうち少なくとも１つに含有される、一般式［２］で示される基（カルボキシル基等）、一般式［３］で示される基（スルホ基等）、アミノ基、水酸基、チオール基又はホルミル基）と、被標識物質中の官能基（例えばアミノ基、カルボキシル基、チオール基、ヒドロキシル基、ホルミル基等）（以下、「被標識物質の官能基」と略記する場合がある）とが例えばイオン結合、共有結合等で直接結合されるか、或いは被標識物質の一部に導入されたリンカーを介して結合されることにより容易に行うことができる。
【０４２１】
また、ヌクレオチド（被標識物質）を標識する方法としては、上記の化学反応を用いた標識方法の他に、酵素を用いた方法でも容易に標識することができ、ここで使用される酵素としては、通常この分野で用いられるものが全て挙げられる。
【０４２２】
本発明の反応性基は、被標識物質の官能基との反応性を高めるような基（本発明の反応活性基）が更に導入されていてもよい。
【０４２３】
尚、このような反応活性基も、本発明の反応性基に含まれ、当該反応活性基を含有する化合物も本発明の化合物に含有される。
【０４２４】
本発明の化合物を用いて被標識物質を標識する方法の具体例としては、例えば（１）本発明の反応性基に更に本発明の反応活性基を導入した後、これと被標識物質の官能基（以下、単に「官能基」の略記する場合がある。）と結合させることにより標識する方法、（２）被標識物質の官能基に本発明の反応活性基を導入した後、これと本発明の反応性基と結合させることにより標識する方法、（３）本発明の反応性基と被標識物質の官能基に、通常この分野で使用される多価反応性リンカー試薬を結合させることにより標識する方法、（４）本発明の反応性基及び被標識物質の官能基に同一又は異なる反応活性基を導入した後、これらと通常この分野で使用されるリンカーを結合させることにより標識する方法等が挙げられる。
【０４２５】
本発明の反応活性基としては、被標識物質の官能基と結合させることができるものであれば特に限定されないが、通常この分野で用いられるものが全て挙げられ、例えばアミノ基との反応性を活性化させるもの（以下、「アミノ基に対する反応活性基」）、チオール基との反応性を活性化させるもの（以下、「チオール基に対する反応活性基」）、水酸基との反応性を活性化させるもの（以下、「水酸基に対する反応活性基」）、ホルミル基との反応性を活性化させるもの（以下、「ホルミル基に対する反応活性基」）等が挙げられる。これら反応活性基の好ましい具体例は前述した通りである。
【０４２６】
また、被標識物質の官能基に上記の如き反応活性基を導入した後に、本発明の反応性基と反応させることにより被標識物質を標識することも可能であり、この場合の被標識物質の官能基の反応活性基としても、上記の如き本発明の反応活性基と同様のものが挙げられる。
【０４２７】
本発明の反応活性基の中でも、例えばスクシンイミド（Ｓｕ）基、マレイミド（Ｍａ）基等が好ましい。
【０４２８】
本発明の反応性基に当該反応活性基が導入された基の好ましい具体例としては、例えば−ＣＯＯＳｕ基、−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）４Ｍａ基等が挙げられる。このような本発明の反応活性基を含有する化合物も一般式［１］で示される本発明の化合物に含まれる。
【０４２９】
本発明の反応性基が一般式［２］で示される基（以下、「本発明のカルボキシル基」と略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はこれに導入されたリンカーの官能基（以下、単に「被標識物質」と略記する場合がある。）であるアミノ基、チオール基又は水酸基と結合させるのが好ましく、その方法としては、（i）例えばN-ヒドロキシスクシンイミドとカルボジイミド等の縮合試薬を用いて反応させる方法、（ii）本発明のカルボキシル基に塩化チオニルを作用させカルボキシクロリドを形成させ、これと被標識物質のアミノ基とを反応させる方法、（iii）本発明のカルボキシル基に塩酸とメタノールを加えて反応させた後ヒドラジンを加え反応させ、ヒドラジドを形成させ、更に、これに亜硝酸ナトリウムと塩酸を加えアシルアジド化することで活性化させた後、これと被標識物質のアミノ基、チオール基、水酸基と反応させる方法、（iv）本発明のカルボキシル基から無水物を形成させ、これを被標識物質のアミノ基と反応（脱水縮合）させる方法等が挙げられる。
【０４３０】
また、本発明の反応性基が一般式［３］で示される基（以下、「本発明のスルホ基」と略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質のアミノ基、イミダゾール基、チオール基又はフェノール基と結合させるのが好ましく、その方法としては、例えば（i）本発明のスルホ基に塩化スルホン酸を反応させスルホクロライドを形成させ、これと被標識物質のアミノ基、イミダゾール基、チオール基又はフェノール基と反応させる方法等が挙げられる。
【０４３１】
本発明の反応性基がアミノ基（以下、「本発明のアミノ基」と略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカーの官能基であるカルボキシル基、アミノ基、フェノール基又はチオール基と結合させるのが好ましく、その方法としては、例えば(i)N-ヒドロキシスクシンイミド、カルボキシジイミド等の縮合試薬を用いて、本発明のアミノ基と被標識物質又はそのリンカーのアミノ基と結合させる方法、(ii)本発明のアミノ基にフォスゲンを作用させイソシアネート化した後、被標識物質又はそのリンカーのアミノ基と結合させる方法、(iii)本発明のアミノ基にグルタルアルデヒドを反応させ、これと被標識物質又はそのリンカーのアミノ基又はフェノール基と反応させる方法、(iv)被標識物質又はそのリンカーが糖、糖蛋白由来のものである場合は、予めこれを過ヨウ素酸と反応させた後、本発明のアミノ基と反応させ、更に水素化ホウ素ナトリウム等で還元させる方法、(v)本発明のアミノ基をマレイミド基を有する２官能性スペーサー（例えばm-マレイミドベンゾイル  N-ヒドロキシサクシンイミド  エステル）又はピリジルジチオスルフィド基を有する２官能性スペーサー（例えば4-サクシンイミジルオキシカルボニル-α-(2-ピリジルジチオ)トルエン等）でマレイミド化或いはピリジルジチオスルフィド化した後、これと被標識物質又はそのリンカーのチオール基とを反応させる方法等が挙げられる。
【０４３２】
本発明の反応性基が水酸基（以下、「本発明の水酸基」と略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカーの官能基であるアミノ基、チオール基又は水酸基と結合させるのが好ましく、その方法としては、例えば(i)本発明の水酸基に塩化シアヌル基を作用させトリアジニル誘導体を形成させ、被標識物質又はそのリンカーのアミノ基と反応させる方法、(ii)本発明の水酸基をアセチル化した後臭素化し、ヨウ化ナトリウムで臭素−ヨウ素置換した後、被標識物質又はそのリンカーのアミノ基、チオール基又は水酸基と反応させる方法、(iii)本発明の水酸基に臭化シアンを作用させ活性化させた後、被標識物質又はそのリンカーのアミノ基と反応させる方法等が挙げられる。
【０４３３】
本発明の反応性基がチオール基（以下、「本発明のチオール基」と略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカーの官能基であるアミノ基、チオール基又は水酸基と結合させるのが好ましく、その方法としては、例えば(i)被標識物質又はそのリンカーのアミノ基を、マレイミド基を有する２官能性スペーサー（例えばm-マレイミドベンゾイル  N-ヒドロキシサクシンイミド  エステル）又はピリジルジチオスルフィド基を有する２官能性スペーサー（例えば4-サクシンイミジルオキシカルボニル-α-(2-ピリジルジチオ)トルエン等）でマレイミド化或いはピリジルジチオスルフィド化した後、これと本発明のチオール基とを反応させる方法、(ii)ビスマレイミドヘキサン、1,4-ジ-[3’-2’-ピリジルジチオ（プロピオンアミド）]ブタン等の２官能性スペーサーを用いて、本発明のチオール基と被標識物質又はそのリンカーのチオール基を反応させる方法等が挙げられる。
【０４３４】
本発明の反応性基がホルミル基（以下、「本発明のホルミル基」と略記する。）であり、これと被標識物質が結合する場合には、被標識物質又はそのリンカーの官能基であるアミノ基等と結合させるのが好ましく、その方法としては、例えば(i)被標識物質又はそのリンカーのアミノ基と本発明のホルミル基を直接反応させた後、水素化ホウ素ナトリウム等で還元させる方法等が挙げられる。
【０４３５】
多価反応性リンカー試薬としては、通常この分野で用いられるものが全て挙げられるが、具体的には、例えば本発明の反応性基及び被標識物質の官能基の一方がアミノ基であり他方がチオール基である場合の二価性試薬（以下、「アミノ基とチオール基の二価性試薬」と略記する。）、当該反応性基と官能基の一方がアミノ基であり他方が一般式［２］で示される基（カルボキシル基等）である場合の二価性試薬（以下、「アミノ基とカルボキシル基の二価性試薬」と略記する。）、当該反応性基と官能基の一方がチオール基であり他方が水酸基である場合の二価性試薬（以下、「チオール基と水酸基の二価性試薬」と略記する。）、当該反応性基と官能基が共にアミノ基である場合の二価性試薬（以下、「アミノ基とアミノ基の二価性試薬」と略記する。）、当該反応性基と官能基が共にチオール基である場合の二価性試薬（以下、「チオール基とチオール基の二価性試薬」と略記する。）等が挙げられる。
【０４３６】
アミノ基とチオール基の二価性試薬の具体例としては、例えばN-(α-マレイミドアセトキシ)スクシンイミド、N-[γ-マレイミドブチリルオキシ]スクシンイミド、N-(6-マレイミドカプロイルオキシ)スクシンイミド、N-(8-マレイミドカプリルオキシ)スクシンイミド、N-(11-マレイミドウンデカノイルオキシ)スクシンイミド、m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミド、スクシンイミジル  4-[p-マレイミドフェニル]ブチレート、スクシンイミジル  4-[N-マレイミドメチル]シクロヘキサン-1-カルボキシレート、スクシンイミジル-6-[β-マレイミドプロピオンアミド]ヘキサノエート、N-スクシンイミジル  3-(2-ピリジルジチオ)プロピオネート等が挙げられる。
【０４３７】
アミノ基とカルボキシル基類の二価性試薬の具体例としては、例えば3-[(2-アミノエチル)ジチオ]プロピオン酸・塩酸塩、1-エチル-3-[3-ジメチルアミノプロピル]カルボジイミド  塩酸塩等が挙げられる。
【０４３８】
チオール基と水酸基の二価性試薬の具体例としては、例えばN-[p-マレイミドフェニル]イソシアネート等が挙げられる。
【０４３９】
アミノ基とアミノ基の二価性試薬の具体例としては、例えばメチル  N-スクシンイミジル  アジペート、ジスクシンイミジル  グルタレート、ジスクシンイミジル  スベレート、エチレン  グリコール  ビス[スクシンイミジルスクシネート]、ジチオビス[スクシンイミジルプロピオネート]、ジスクシンイミジル  タータレート、ビス[2-(スクシンイミドオキシカルボニルオキシ)エチル]スルホン、1,5-ジフルオロ-2,4-ジニトロベンゼン等が挙げられる。
【０４４０】
チオール基とチオール基の二価性試薬の具体例としては、例えばビス-マレイミドエタン、1,4-ビス-マレイミドブタン、ビス-マレイミドヘキサン、1,4  ビス-マレイミジル-2,3-ジヒドロキシブタン、ジチオ-ビス-マレイミドエタン、1,6-ヘキサン-ビス-ビニルスルホン、1,8-ビス-マレイミドジエチレングリコール、1,11-ビス-マレイミドトリエチレングリコール、1,4-ジ-[3’-(2’-ピリジルジチオ)-プロピオンアミド]ブタン等が挙げられる。
【０４４１】
４−３．本発明の化合物を用いた標識ヌクレオチドの調製
本発明の化合物［５１］を用いて被標識物質を標識する方法の具体例として、ヌクレオチド（被標識物質）を標識する場合を例にとって以下に説明する。
【０４４２】
即ち、その塩基上にアミノ基を有するヌクレオチド（例えばシチジン，アデニン，グアニン等）を標識する場合は、本発明の化合物中の反応性基を直接結合させても本発明の反応性基を活性化させた基（反応活性基）を結合させてもよく、中でも一般式［２］で示される基又はこれに反応活性基を導入させた基（活性エステル基）と結合させるのが好ましく、特に活性エステル基と結合させるのがより好ましい。
【０４４３】
また、本発明の化合物とヌクレオチドが間接的に結合される場合は、先ず、ヌクレオチドの塩基上又は水酸基に、例えばアミノ基、カルボキシル基、チオール基等の官能基を有するリンカーを導入した誘導体（以下、「ヌクレオチド誘導体」と略記する。）を合成し、次いで、例えばヌクレオチド誘導体中のアミノ基と結合させる場合は本発明の化合物中の反応性基又は反応活性基（中でもカルボキシル基又は活性エステル基が好ましい）と結合させればよく、例えばヌクレオチド誘導体中のカルボキシル基と結合させる場合は本発明の化合物中の反応性基であるアミノ基と結合させればよく、例えばヌクレオチド誘導体中のチオール基と結合させる場合は本発明の化合物中のマレイミド基（反応活性基）と結合させればよい。使用されるリンカーとしては、通常この分野で用いられるものであれば何れでもよく、当該リンカー中にエステル結合、エーテル結合又は／及びアミド結合を含んでいてもよい。
【０４４４】
本発明の化合物［５１］を用いた標識方法を、本発明の化合物のうち、Ｒ１”に含有されるカルボキシアルキル基（即ち、Ｒ１”が一般式［２］で示される基を置換基として有するアルキル基である場合に相当）がリンカー等を介してヌクレオチド残基に間接的に結合したものを一例として以下に説明する。
【０４４５】
上記において、リンカーとしては、通常この分野で用いられるものが全て使用できるが、具体的には、下記一般式（Ａ）で示される構造のリンカーが挙げられる。
0005626427.tif 000093
【０４４６】
（式中、Ｅは−ＣＨ＝ＣＨ−または−Ｃ≡Ｃ−を表し、Ｘ及びＹは夫々独立してアルキレン基を表し、Ｔ１０は−Ｏ−または−ＮＨ−ＣＯ−を表す。）
【０４４７】
上記一般式（Ａ）に於いて、Ｘで示されるアルキレン基としては、直鎖状、分枝状或いは環状でもよく、好ましくは直鎖状のものがよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは１〜６、より好ましくは１〜３のものが挙げられ、具体的には、例えばメチレン基，エチレン基，トリメチレン基，テトラメチレン基，ペンタメチレン基，ヘキサメチレン基，ヘプタメチレン基，オクタメチレン基，ノナメチレン基，デカメチレン基等の直鎖状アルキレン基、例えばエチリデン基，プロピレン基，イソプロピリデン基，1-メチルトリメチレン基，2-メチルトリメチレン基，1,1-ジメチルエチレン基，1,2-ジメチルエチレン基，エチルエチレン基，1-メチルテトラメチレン基，1,1-ジメチルトリメチレン基，2,2-ジメチルトリメチレン基，2-エチルトリメチレン基，1-メチルペンタメチレン基，1-メチルヘキサメチレン基，1-メチルヘプタメチレン基，1,4-ジエチルテトラメチレン基，2,4-ジメチルヘプタメチレン基，1-メチルオクタメチレン基，1-メチルノナメチレン基等の分枝状アルキレン基、例えばシクロプロピレン基，1,3-シクロブチレン基，1,3-シクロペンチレン基，1,4-シクロへキシレン基，1,5-シクロヘプチレン基，1,5-シクロオクチレン基，1,5-シクロノニレン基，1,6-シクロデカレン基等の環状アルキレン基等が挙げられる。
【０４４８】
Ｙで示されるアルキレン基としては、直鎖状、分枝状或いは環状でもよく、好ましくは直鎖状のものがよく、通常炭素数１〜１０、好ましくは２〜８、より好ましくは２〜６のものが挙げられ、具体的には、例えばメチレン基，エチレン基，トリメチレン基，テトラメチレン基，ペンタメチレン基，ヘキサメチレン基，ヘプタメチレン基，オクタメチレン基，ノナメチレン基，デカメチレン基等の直鎖状アルキレン基、例えばエチリデン基，プロピレン基，イソプロピリデン基，1-メチルトリメチレン基，2-メチルトリメチレン基，1,1-ジメチルエチレン基，1,2-ジメチルエチレン基，エチルエチレン基，1-メチルテトラメチレン基，1,1-ジメチルトリメチレン基，2,2-ジメチルトリメチレン基，2-エチルトリメチレン基，1-メチルペンタメチレン基，1-メチルヘキサメチレン基，1-メチルヘプタメチレン基，1,4-ジエチルテトラメチレン基，2,4-ジメチルヘプタメチレン基，1-メチルオクタメチレン基，1-メチルノナメチレン基等の分枝状アルキレン基、例えばシクロプロピレン基，1,3-シクロブチレン基，1,3-シクロペンチレン基，1,4-シクロへキシレン基，1,5-シクロヘプチレン基，1,5-シクロオクチレン基，1,5-シクロノニレン基，1,6-シクロデカレン基等の環状アルキレン基等が挙げられる。
【０４４９】
本発明に係る標識ヌクレオチドとしては、本発明の化合物［５１］で直接またはリンカー等を介して間接的に標識されたヌクレオチド残基が挙げられ、具体的には、例えば下記一般式［７４］で示されるヌクレオチド残基を含むものが挙げられる。
0005626427.tif 000094
【０４５０】
〔式中、Ｑ１はヌクレオチド残基を表し、Ｖ１はリンカーを表し、Ｗ２は下記一般式［５１’］を表す。
0005626427.tif 000095
【０４５１】
（式中、Ｚ１はＶ１と結合する結合手を表し、ｐ’は１〜１９の整数を表し、Ｒ３”〜Ｒ１１”、Ｒ１８〜Ｒ１９、Ｔ３〜Ｔ５は前記に同じ。）
【０４５２】
尚、一般式［５１’］で示される化合物は、一般式［５１］で示される化合物のうち、Ｒ１”とＲ２”で形成される２価の基が一般式［６０］で示される基（式中、Ｒ２０が一般式［７３］で示される基である）である場合の化合物誘導体に相当する。
【０４５３】
一般式［７４］においてＱ１で示されるヌクレオチド残基としては、例えばリボヌクレオチド残基、２’−デオキシリボヌクレオチド残基、３’−デオキシリボヌクレオチド残基、５’−デオキシリボヌクレオチド残基、２’、３’−ジデオキシリボヌクレオチド残基等が挙げられる。
【０４５４】
具体的には、このようなヌクレオチド残基としては、例えば一般式(i)、(ii)、(v)、（vi）、(vii)、(viii)、(xii)および(xiii)で示されるプリンヌクレオチド残基、または一般式(iii)、(iv)、(x)および(xi)で示されるピリミジンヌクレオチド残基が挙げられる。
0005626427.tif 000096
【０４５５】
0005626427.tif 000097
【０４５６】
上記一般式において、Ｚ３はＶ１と結合する結合手を、Ｒ２５及びＲ２６は夫々独立してＨ、ＯＨまたはＯ−を表し、Ｒ２７は−ＰＯ２Ｈ−、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｐ２Ｏ６Ｈ３、−Ｐ３Ｏ９Ｈ４又はその塩を表す。尚、塩の具体例としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のアルカリ金属塩、例えばバリウム塩等のアルカリ土類金属塩、例えばアンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、ピリジン塩等の有機アミン塩等が挙げられる。
【０４５７】
一般式［７４］においてＶ１で示されるリンカーは、Ｑ１で示されるヌクレオチド残基と、Ｗ２〔一般式［５１’］〕で示される本発明の化合物誘導体（蛍光標識）とを結合するためのリンカーである。
【０４５８】
即ち、当該リンカーの一方の末端が、前述したＱ１で示されるヌクレオチド残基のうち、ピリミジンヌクレオチド残基についてはそのピリミジン環の５位〔一般式(iii)、(iv)の場合〕またはそのリン酸残基のリン原子〔一般式(x)、(xi)の場合〕に結合し、また、プリンヌクレオチド残基についてはその７−デアザ（７−デアザ）プリン環の７位〔一般式(i)、(ii)、(v)、(vi)の場合〕またはそのプリン環（又は７−デアザプリン環）のリン酸残基のリン原子〔一般式(vii)、(viii)、(ix)、(xii)、(xiii)の場合〕に結合している。
【０４５９】
更に、当該リンカーの他方の末端が、Ｗ２〔一般式［５１’］〕で示される本発明の化合物誘導体（標識物質）のカルボニル基〔一般式［５１’］に於けるＴ４に結合するカルボニル基〕に結合している。
【０４６０】
このようなリンカーとしては、Ｗ２〔一般式［５１’］〕で示される本発明の化合物誘導体（標識物質）のカルボニル基〔一般式［５１’］に於けるＴ４に結合するカルボニル基〕とＱ１で示されるヌクレオチド残基とを結合し得るものであれば全て使用でき、具体的には、下記一般式（Ａ）で示される構造のリンカーが挙げられる。
0005626427.tif 000098
【０４６１】
（式中、Ｅ、Ｘ、Ｔ１０及びＹは前記と同じであり、これらの具体例、好ましい例等も前述の通りである。）
【０４６２】
従って、一般式［７４］で示されるヌクレオチド残基としては、それぞれ下記一般式［７４’］で示されるものが好ましく、下記一般式［７４”］で示されるものがより好ましい。
0005626427.tif 000099
【０４６３】
（式中、Ｅ１は−ＣＨ＝ＣＨ−または−Ｃ≡Ｃ−を表し、Ｘ１及びＹ１は夫々独立してアルキレン基を表し、Ｔ１１は−Ｏ−または−ＮＨ−ＣＯ−を表す。また、Ｑ１及びＷ２は前記と同じ。）
【０４６４】
尚、上記において、Ｘ１で示されるアルキレン基は前述のＸで示されるアルキレン基と同じであり、その具体例、好ましい例等も同様である。また、Ｙ１で示されるアルキレン基は前述のＹで示されるアルキレン基と同じであり、その具体例、好ましい例等も同様である。
0005626427.tif 000100
【０４６５】
（式中、ｒは１〜１０、好ましくは１〜６、より好ましくは１〜４の整数を、ｓは１〜１０、好ましくは２〜８、より好ましくは２〜４の整数を表す。また、Ｑ１、Ｗ２、Ｅ１およびＴ１１は前記と同じ。）
【０４６６】
一般式［５１’］に於いて、Ｒ３”〜Ｒ１１”、Ｒ１８〜Ｒ１９、Ｔ３〜Ｔ５は前記と同じであり、その具体例、好ましい例等も前記した通りである。
【０４６７】
このようなＷ２〔一般式［５１’］〕で示される本発明の化合物誘導体（標識物質）としては、前記した如き本発明の化合物［５１］に由来するものであり、これらの好ましい具体例も前記した如き本発明の化合物［５１］と同様である。
【０４６８】
上記した如きヌクレオチドを本発明に係る化合物［５１］（標識物質）で標識する方法としては、自体公知の直接標識法や間接標識法〔例えばWO96/17628号パンフレット（特開2002-12782号公報）、米国特許第6974873号、特開2002-193991号公報、WO99/12544号パンフレット、特開平11-80189号公報等に記載された方法等〕が挙げられる。
【０４６９】
また、ヌクレオチドを本発明に係る化合物［５１］（標識物質）で標識するに際しては、本発明に係る化合物［５１］を用いる以外は、上記した如き標識法に基づく市販の標識キットを使用すればより簡便である。
【０４７０】
尚、本発明において、これらの方法を利用するには、本発明に係る化合物［５１］（標識物質）が結合した標識モノヌクレオチドが必要であるが、これら標識ヌクレオチドは自体公知の方法（例えば上記の標識方法等）により調製することができる。
【０４７１】
具体的には、例えば特開2002-193991号公報（[0102]〜［0121］段落）に記載の方法に準じて調製することができ、また、例えば以下のように調製することができる。
【０４７２】
即ち、例えば下記一般式（ａ）で示されるヌクレオチド誘導体と下記一般式（ｂ’）で示される本発明に係る化合物［５１］（標識物質）〔スクシンイミジルエステル体〕とを反応させることにより容易に得られる。
0005626427.tif 000101
【０４７３】
（式中、ＱはＱ１を示す。Ｑ１、Ｅ、Ｘ、Ｔ１０およびＹは前記と同じ。）
0005626427.tif 000102
【０４７４】
（式中、Ｗ’はＷ２を示し、Ｓｕはスクシンイミド基を示す。Ｗ２は前記と同じ。）
また、前述した如き一般式（ａ）で示されるリンカー部分のＴ１０が−ＮＨ−ＣＯ−である場合には、例えば以下のように調製することもできる。
【０４７５】
即ち、例えば、先ず下記一般式（ｃ）で示されるリンカーの一部分（部分リンカーＡ）を導入し、更に残りのリンカー部分（部分リンカーＢ）のスクシンイミジルエステル体とを反応させて、リンカーが導入された下記一般式（ｄ）で示されるヌクレオチド誘導体を調製する。更に、この下記一般式（ｄ）で示されるヌクレオチド誘導体と下記一般式（ｂ’）で示される本発明の化合物［５１］（標識物質）〔スクシンイミジルエステル体〕とを反応させることにより容易に得られる。
0005626427.tif 000103
【０４７６】
（式中、ＥおよびＸは前記と同じ。）
0005626427.tif 000104
【０４７７】
（式中、Ｑ、Ｅ、ＸおよびＹは前記と同じ。）
0005626427.tif 000105
【０４７８】
（式中、Ｗ’及びＳｕは前記と同じ。）
【０４７９】
より具体的には、上記した如き本発明の化合物［５１］（標識物質）が結合した標識モノヌクレオチドのうち、蛍光標識２'−デオキシシチジン−５'−トリホスフェート誘導体および蛍光標識２'−デオキシウリジン−５'−トリホスフェート誘導体は、例えば以下の如き合成経路に準じて合成することができる。
【０４８０】
尚、下記合成経路において使用される略称正式名は下記の通りである。
・ＭｅＯＴｆａ：トリフルオロ酢酸メチル
・−Ｔｆａ：トリフルオロアセチル基
・Ｂｕ3ＳｎＨ：水素化トリ（ｎ−ブチル）スズ
・ＡＩＢＮ：アゾイソブチロニトリル
・Ｅｔ3Ｎ：トリエチルアミン
・ＨＯ−Ｓｕ：Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド
・ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
・ＴＭＳ−Ａｃｅｔａｍｉｄｅ：Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド
・ＰｄＣｌ2(ＣＨ3ＣＮ)2：ビス（アセトニトリル）ジクロロパラジウム（II）
・tris(ＴＢＡＰＰ)：トリス（トリ−ｎ−ブチルアンモニウム）ピロホスフェート
・(ＥｔＯ)3ＰＯ：リン酸トリエチル
・ＴＦＰ：トリ−２−フリルホスフィン
・Ｐｄ2（ｄｂａ）3：トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）
【０４８１】
（１）部分リンカー（Ａ）の合成。
尚、この化合物は、上記一般式（Ａ）で示されるリンカー（−Ｅ−Ｘ−Ｔ１０−Ｙ−ＮＨ−）において、Ｔ１０が−ＮＨ−ＣＯ−である場合の、−Ｅ−Ｘ−ＮＨ−に相当する化合物であって、Ｅが−ＣＨ＝ＣＨ−およびＸがメチレン基である化合物である。
0005626427.tif 000106
【０４８２】
（２）部分リンカーＢの合成。
尚、この化合物は、上記一般式（Ａ）で示されるリンカー（−Ｅ−Ｘ−Ｔ１０−Ｙ−ＮＨ−）において、Ｔ１０が−ＮＨ−ＣＯ−である場合の、−ＣＯ−Ｙ−ＮＨ−に相当する化合物であって、Ｙがペンタメチレン基である化合物である。
0005626427.tif 000107
【０４８３】
（３）２'−デオキシシチジン−５'−トリホスフェート誘導体〔一般式（ｄ）の化合物〕の合成。
尚、この化合物は、一般式［７４’］（Ｑ１−Ｅ１−Ｘ１−Ｔ１１−Ｙ１−ＮＨ−Ｗ２）のＱ１−Ｅ１−Ｘ１−Ｔ１１−Ｙ１−ＮＨ−に相当する化合物であって、Ｑ１が2'−デオキシシチジン、Ｅ１が−ＣＨ＝ＣＨ−、Ｘ１がメチレン基、Ｔ１１が−ＮＨ−ＣＯ−、Ｙ１がペンタメチレン基である化合物である。
0005626427.tif 000108
【０４８４】
（４）蛍光標識２'−デオキシシチジン−５'−トリホスフェート誘導体〔本発明の化合物［５１］（標識物質）で標識されたモノヌクレオチド〕の合成。
尚、当該化合物は、一般式［７４’］（Ｑ１−Ｅ１−Ｘ１−Ｔ１１−Ｙ１−ＮＨ−Ｗ２）におけるＱ１が2'−デオキシシチジン、Ｅ１が−ＣＨ＝ＣＨ−、Ｘ１がメチレン基、Ｔ１１が−ＮＨ−ＣＯ−、Ｙ１がペンタメチレン基であって、Ｗ２が下記化合物(14)又は(25)である化合物である。
0005626427.tif 000109
【０４８５】
尚、上記以外の標識ヌクレオチドについても同様に、対応する原料を用いて上記に準じて適宜合成することができる。
【０４８６】
本発明の新規なピラゾール系シアニン色素（特に本発明の化合物［５１］）は、ピラゾール骨格とインドール骨格がポリメチン鎖で結合され、更に架橋された構造を有していることから、従来の光源よりも短波長領域で蛍光特性を有するため、エネルギー効率の高い短波長領域の光源が使用可能となる、またこれを標識剤（標識物質）として用いて測定対象物を検出する場合、従来のシアニン色素誘導体が有していた例えば水溶性が低い、色素同士の会合に起因する消光により検出感度が低下する等の問題点を有することなく測定対象物を高い検出感度で検出することが可能となる。
【０４８７】
以下に実施例及び比較例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらにより何等限定されるものではない。
【実施例】
【０４８８】
実施例１．本発明の化合物(13)〜(15)の合成
0005626427.tif 000110
【０４８９】
※Su＝スクシンイミド基、Ma＝マレイミド基
【０４９０】
（１）インドレニン化合物(8)の合成
0005626427.tif 000111
【０４９１】
〔化合物(2)の合成〕
N,N-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（80ml）中に、エチル-２-メチルアセトアセテート(1)（25.0g、0.173mol）、１，３−プロパンスルトン（23.3g、0.190mol）及び水素化ナトリウム（8.5g、0.208mol）を添加し、90℃で終夜攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、水（200ml）、ジエチルエーテル（200ml）を加え２回洗浄を行った。その後水層部分を減圧留去し、化合物(2)を得た（42.1g、収率９１％）。
【０４９２】
〔化合物(3)の合成〕
化合物(2)（40.5g、0.152mol）を濃塩酸（60ml）中、100℃で３時間攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：メタノール）を用いて精製し、化合物(3)を得た（16.6g、収率５６％）。
【０４９３】
〔化合物(5)の合成〕
化合物(3)（10.0g、0.051mol）及び化合物(4)（12.9g、0.066mol）を酢酸（50ml）中、120℃で４時間加熱還流を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶出液：水）を用いて精製し、化合物(5)を得た（11.5g、収率６５％）。
物性データ：IR(KBr) (cm-1)：3450, 1196
【０４９４】
〔化合物(6)の合成〕
化合物(5)（11.5g、0.033mol）を水（50ml）及びエタノール（50ml）中に溶解し、室温下で４時間攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶出液：水）を用いて精製し、化合物(6)を得た（10.3g、収率８０％）。
物性データ：Mass（nega=346）
IR(KBr) (cm-1)：3444, 1193
【０４９５】
〔化合物(7)の合成〕
化合物(6)（10.0g、0.026mol）及び６−ブロモヘキサン酸（9.97g、0.052mol）を１，２−ジクロロベンゼン（100ml）中に溶解し、１２０℃で終夜攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、酢酸エチルを用いて３回洗浄し、化合物(7)を得た（11.5g、収率８９％）。
物性データ：Mass（nega=460）
IR(KBr) (cm-1)：3446, 1723, 1194
【０４９６】
〔化合物(8)の合成〕
化合物(7)（1.5g、2.967mmol）及びマロン酸アルデヒドアニリド塩酸塩（0.77g、2.967mmol）を無水酢酸（20ml）中に溶解し、１２０℃で１時間攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶出液：１０％アセトニトリル水溶液）を用いて精製し、インドレニン化合物(8)を得た（0.18g、収率１０％）。
物性データ：Mass（nega:posi=631:633）
IR(KBr) (cm-1)：3443, 1716, 1574, 1465, 1189
【０４９７】
（２）ピラゾール化合物(12)の合成
0005626427.tif 000112
【０４９８】
〔化合物(10)の合成〕
ＤＭＦ（100ml）中、３−メチル−２,４−ペンタンジオン（化合物(9)）（15.0g、0.13mol）、１，３−プロパンスルトン（16.1g、0.13mol）及び水素化ナトリウム（5.0g、0.208mol）を用いて、５０℃で１６時間攪拌反応を行った。反応終了後、１Ｎ水酸化ナトリウムで中和し、溶媒を減圧留去し、水（200ml）及びジエチルエーテル（200ml）を加え２回洗浄を行った。その後水層部分を減圧留去し、ピラゾール化合物(10)を得た（32.2g、収率９６％）。
物性データ：IR(KBr) (cm-1)：3474, 1695, 1665, 1191
【０４９９】
〔化合物(11)の合成〕
化合物(10)（10.0g、0.042mol）及びヒドラジン一水和物（2.1g、0.042mol）をエタノール（EtOH）（150ml）中に溶解し、８０℃で３時間攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：メタノール/クロロホルム=１/１）を用いて精製し、化合物(11)を得た（9.0g、収率９２％）。
物性データ：IR(KBr) (cm-1)：3421, 1195
【０５００】
〔化合物(12)の合成〕
化合物(11)（4.8g、0.019mol）及び１，３−プロパンスルトン（2.5g、0.02mol）をジメチルアセトアミド（30ml）中に溶解し、１４０℃で４時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（200ml）を加え、析出した結晶を濾過し、ピラゾール化合物(12)を得た（5.3g、収率７６％）。
物性データ：Mass（nega=352）
IR(KBr) (cm-1)：3446, 1194
【０５０１】
（３）インドレニン化合物−ピラゾール化合物複合体（本発明の化合物）(13)〜(15)の合成
0005626427.tif 000113
【０５０２】
〔化合物(13)の合成〕（本発明のマレイミド体）
実施例１の（１）で得られたインドレニン化合物(8)（0.1g、0.158mmol）及び実施例１の（２）で得られたピラゾール化合物(12)（0.17g、0.474mmol）をＤＭＦ（2ml）中に溶解し、ピリジン（1ml）及び無水酢酸（0.5ml）を加え、８０℃で１時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶出液：１０％メタノール水溶液）及びSephadex  LH−２０〔ＧＥヘルスケアバイオサイエンス（株）（旧アマシャムバイオサイエンス（株））社製〕（溶出液：メタノール）を用いて精製し、化合物(13)を得た（15mg、収率１２％）。
物性データ：Mass（nega=850）
蛍光特性を以下に示す。
【０５０３】
0005626427.tif 000114
【０５０４】
〔化合物(14)の合成〕
化合物(13)（13mg、0.015mmol）をＤＭＦ（0.6ml）中に溶解し、２−スクシンイミド−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＳＴＵ）（46mg）及びN−エチルジイソプロピルアミン（(i-Pr)2NEt）（600μl）を加え、室温で１時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（15ml）を加えて晶析させた後、遠心分離により、化合物(14)を得た（13mg、収率９０％）。
物性データ：Mass（nega=947）
【０５０５】
〔化合物(15)の合成〕
マレイミド化試薬（Ｎ−（4-アミノブチル）マレイミド塩酸塩）（6mg）、トリエチルアミン（Et3N）（10μl）にDMF（1ml）を加え、１０分間攪拌を行った。その後に化合物(14)（7mg、0.007mmol）をDMF（1ml）に溶かしたものをゆっくり添加し、室温で１時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、分取逆相HPLCを用いて精製することで化合物(15)を得た（1.1mg、収率１５％）。
物性データ：Mass（nega=1000）
【０５０６】
実施例２．本発明の化合物(20)〜(22)の合成
0005626427.tif 000115
【０５０７】
（１）ピラゾール化合物(19)の合成
0005626427.tif 000116
【０５０８】
〔化合物(17)の合成〕
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（100ml）中に、４−アセチル−５−オキソへキサン酸エチルエステル（化合物(16)）（10.0g、49.94mmol）、ヨウ化エチル（10.6g、74.91mmol）及び炭酸カリウム（17.3g、0.125mol）を添加し、室温で終夜攪拌を行った。反応終了後、１Ｎ塩酸で中和し、水（100ml）及び酢酸エチル（100ml）を加え２回洗浄を行った。その後、酢酸エチル層を飽和重曹水（100ml）及び飽和食塩水（100ml）で２回ずつ洗浄し、得られた酢酸エチル層を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル/ヘキサン=１/３）を用いて精製し、化合物(17)を得た（10.0g、収率９３％）。
【０５０９】
〔化合物(18)の合成〕
化合物(17)（10.0g、46.7mmol）及びヒドラジン一水和物（2.6g、51.4mmol）をエタノール（150ml）中に溶解し、８０℃で２時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：メタノール/クロロホルム=１/１）を用いて精製し、化合物(18)を得た（9.3g、収率９５％）。
【０５１０】
〔ピラゾール化合物(19)の合成〕
化合物(18)（9.3g、44.2mmol）及び１，３−プロパンスルトン（5.9g、44.9mmol）をトルエン（150ml）中に溶解し、１２０℃で５時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（200ml）を加え、得られた晶析物を濾過し、ピラゾール化合物(19)を得た（10.6g、収率７２％）。
物性データ：Mass（nega=331）
IR(KBr) (cm-1)：3436, 1726, 1211
【０５１１】
（２）インドレニン化合物−ピラゾール化合物複合体（本発明の化合物）(20)〜(22)の合成
0005626427.tif 000117
【０５１２】
〔化合物(20)の合成〕
実施例１の（１）で得られたインドレニン化合物(8)（0.15g、0.237mmol）及び実施例２の（１）で得られたピラゾール化合物(19)（0.24g、0.711mmol）をＤＭＦ（2ml）中に溶解し、ピリジン（1ml）及び無水酢酸（0.5ml）を加え、８０℃で１時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶出液：１０％メタノール水溶液）及びSephadex  LH−２０〔ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製〕（溶出液：メタノール）を用いて精製し、化合物(20)を得た（52mg、収率２６％）。
物性データ：Mass（nega=828）
【０５１３】
〔化合物(21)の合成〕
化合物(20)（53mg、0.064mmol）をメタノール（MeOH）（3ml）中に溶解し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（1ml）を加え、４０℃で１時間攪拌を行った。反応終了後、Sephadex LH−２０（溶出液：メタノール）を用いて精製し、化合物(21)を得た（15mg、収率２９％）。
物性データ：Mass（nega=800）
蛍光特性を以下に示す。
【０５１４】
0005626427.tif 000118
【０５１５】
〔化合物(22)の合成〕
化合物(21)（15mg、0.019mmol）をＤＭＦ（1ml）中に溶解し、２−スクシンイミド−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＳＴＵ）（113mg、0.337mmol）及びN−エチルジイソプロピルアミン（120μl）を加え、室温で３時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（15ml）を加えて結晶化した後、遠心分離を行い、化合物(22)を得た（15mg、収率８１％）。
物性データ：（nega=995）
【０５１６】
実施例３．本発明の化合物(24)〜(25)の合成
0005626427.tif 000119
【０５１７】
（１）インドレニン化合物（23）の合成
0005626427.tif 000120
【０５１８】
〔化合物(23)の合成〕
実施例１の（１）で得られた化合物(7)（5.0g、9.89mmol）及びN，N’−ジフェニルホルムアミジン（2.1g、9.89mmol）を無水酢酸（50ml）中に溶解し、１２０℃で１時間攪拌を行った。反応終了後、反応液に酢酸エチル（200ml）を加え、析出した結晶を濾過し、インドレニン化合物(23)を得た（4.8g、収率７４％）。
【０５１９】
（２）インドレニン化合物−ピラゾール化合物複合体（本発明の化合物）(24)〜(25)の合成
0005626427.tif 000121
【０５２０】
〔化合物(24)の合成〕
実施例３の（１）で得られたインドレニン化合物(23)（60mg、0.092mmol）及び実施例１の（２）で得られたピラゾール化合物(12)（87mg、0.231mmol）をＤＭＦ（2ml）中に溶解し、ピリジン（0.5ml）及び無水酢酸（0.2ml）を加え、８０℃で１時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶出液：水）及びSephadex  LH−２０（溶出液：メタノール）を用いて精製し、化合物(24)を得た（8mg、収率１０％）。
物性データ：Mass（nega/posi=824/826）
【０５２１】
〔化合物(25)の合成〕
化合物(24)（6mg、0.007mmol）をＤＭＦ（300μl）中に溶解し、２−スクシンイミド−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＳＴＵ） （20mg、0.07mmol）及びN−エチルジイソプロピルアミン（30μl）を加え、室温で３時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（20ml）を加えて結晶化及び遠心分離を行うことで化合物(25)を得た（5mg、収率８１％）。
物性データ：Mass（nega=922）
【０５２２】
実施例４．本発明の化合物(32)及び(42)の合成
0005626427.tif 000122
【０５２３】
（１）インドレニン化合物（30）の合成
0005626427.tif 000123
【０５２４】
〔化合物(27)の合成〕
出発原料として4-ヒドラジノベンゼンスルホン酸0.5水和物〔化合物(26)〕（50.0g、0.253mol）及び3-メチル-2-ブタノン（65.5g、0.759mol）を用い、酢酸（200ml）中、１２０℃で３時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を冷却し、ジエチルエーテル（300ml）を加え２回洗浄することにより、化合物(27)を得た（52.0g、収率８６％）。
物性データ：Mass（nega=238）
【０５２５】
〔化合物(28)の合成〕
化合物(27)（10.0g、0.042mol）及び水酸化ナトリウム（1.67g、0.042mol）をエタノール（30ml）／2-プロパノール（10ml）混合溶媒中、室温下で4時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、2-プロパノール（100ml）を加え２回洗浄することで化合物(28)を得た（4.2g、収率３９％）。
物性データ：IR(cm-1)：3206, 1205
【０５２６】
〔化合物(29)の合成〕
化合物(28)（3.5g、0.013mol）、3-ブロモプロピオン酸（2.5g、0.016mol）をトルエン（50ml）中、１１０℃で終夜加熱還流を行った。反応終了後、酢酸エチル（100ml）を加え３回洗浄し、化合物(29)を得た（1.7g、収率４１％）。
物性データ：Mass（nega=310）
【０５２７】
〔化合物(30)の合成〕
化合物(29)（1.5g、4.50mmol）及びマロンアルデヒドジアニリド塩酸塩（1.16g、4.50mmol）を無水酢酸（20ml）に溶解し、120℃で1時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（50ml）を加え2回洗浄し、インドレニン化合物(30)を得た（1.59g、収率７０％）。
物性データ：Mass（nega=481）
【０５２８】
（２）ピラゾール化合物(31)の合成
0005626427.tif 000124
【０５２９】
〔化合物(31)の合成〕
実施例１の（２）で得られた化合物(10)（0.59g、2.32mmol）及び３−ブロモプロピオン酸（0.39g、2.55mmol）を無溶媒で攪拌しながら、終夜攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（30ml）を加え２回洗浄し、化合物(31)を得た（0.73g、収率９６％）。
物性データ：Mass（nega=303）
【０５３０】
（３）インドレニン−ピラゾール複合体(32)の合成
0005626427.tif 000125
【０５３１】
〔化合物(32)の合成〕
実施例４の（１）で得られたインドレニン化合物(30)（70mg、0.139mmol）及び実施例４の（２）で得られたピラゾール化合物(31)（45mg、0.139mmol）をＤＭＦ（5ml）中に溶解し、更にピリジン（1ml）及び無水酢酸（0.5ml）を加え、８０℃で１時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶出液：１０％メタノール水溶液）及びSephadex  LH−２０（溶出液：メタノール）を用いて精製し、化合物(32)を得た（11mg、収率１２％）。
物性データ：Mass（nega=649）
蛍光特性を以下に示す。
【０５３２】
0005626427.tif 000126
【０５３３】
〔化合物(42)の合成〕
化合物(32)（10mg、0.019mmol）をＤＭＦ（1ml）に溶解し、ジスクシイミジルカルボネート（ＤＳＣ）（113mg、0.37mmol）、ピリジン（120μl）を加え、４０℃で４時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（１５ｍｌ）を加えて結晶化及び洗浄を行うことで化合物(42)を得た（１０ｍｇ、収率７９％）。
物性データ：Mass（nega=846）
【０５３４】
実施例５．本発明の化合物（33）〜(34)の合成
0005626427.tif 000127
【０５３５】
（１）インドレニン化合物−ピラゾール化合物複合体（本発明の化合物）の合成
0005626427.tif 000128
【０５３６】
〔化合物(33)の合成〕
実施例２の（１）で得られたインドレニン化合物(19)（47mg、0.139mmol）及び実施例４の（１）で得られたピラゾール化合物(30)（72mg、0．143mmol）をDMF（5ml）中に溶解し、更にピリジン（1ml）及び無水酢酸（0.5ml）を加え、８０℃で１時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶出液：１０％メタノール水溶液）を用いて精製し、化合物(33)を得た（15mg、収率１５％）。
物性データ：Mass（nega=677）
【０５３７】
〔化合物(34)の合成〕
化合物(33)（10mg、0.014mmol）をメタノール 1ml中に溶解し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（0．5ml）を加え、４０℃で１時間攪拌を行った。反応終了後、Sephadex LH−２０（溶出液：メタノール）を用いて精製し、化合物(34)を得た（3.5mg、収率３７％）。
物性データ：Mass（nega=649）
蛍光特性を以下に示す。
【０５３８】
0005626427.tif 000129
【０５３９】
実施例６．本発明の化合物(37)〜(39)の合成
0005626427.tif 000130
【０５４０】
（１）インドレニン化合物(36)の合成
0005626427.tif 000131
【０５４１】
〔化合物(35)の合成〕
実施例４の（１）で得られた化合物(28)（4.9g、18.7mmol）をスルホラン（25mL）に溶解し、次いでエチルトルエンスルホン酸（11.3g、56.1mmol）を加え、140℃で１８時間反応を行った。反応終了後、反応溶液を酢酸エチル（100mL）に加え、析出物を濾取した。得られた晶析物を酢酸エチルで洗浄し、減圧乾燥することにより化合物(35)（4.04g、収率74.4％）を得た。
物性データ：Mass（nega=267）
【０５４２】
〔化合物(36)の合成〕
化合物(35)（3g、10mmol）及びマロンアルデヒドジアニリド塩酸塩（2.67g、10mmol）を無水酢酸（30ml）に溶解し、120℃で１時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（100ml）を加え、析出物を濾取した。得られた晶析物を酢酸エチル（100mL）で２回洗浄し、減圧乾燥することによりインドレニン化合物(36)を得た（2.4g、収率52.1％）。
物性データ：Mass（nega=436）
【０５４３】
（２）インドレニン化合物−ピラゾール化合物複合体（本発明の化合物）(37)〜(39)
0005626427.tif 000132
【０５４４】
〔化合物(37)の合成〕
実施例６の（１）で得られたインドレニン化合物(36)（1g、2.17mmol）及び実施例２の（１）で得られたピラゾール化合物(19)（1.8g、5.41mmol）をＤＭＦ（20ml）中に溶解し、更にピリジン（8ml）及び無水酢酸（4ml）を加え、８０℃で１時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶出液：20％CH3OHaq.）及びSephadex  LH−２０（溶出液：メタノール）を用いて精製し、化合物(37)を得た（130mg、収率9.5％）。
物性データ：Mass（nega=634）
【０５４５】
〔化合物(38)の合成〕
化合物(37)（130mg、0.21mmol）にメタノール（15mL）と５％水酸化リチウム水溶液（5mL）を加え、２０℃で１時間反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶出液：水）により精製を行うことで化合物(38)を得た（12mg、収率9.7％）。
物性データ：Mass（nega=606）
蛍光特性を以下に示す。
【０５４６】
0005626427.tif 000133
【０５４７】
〔化合物(39)の合成〕
化合物(38)（12mg、0.019mmol）のＤＭＦ（600μL）溶液中に溶解し、ＴＳＴＵ（57mg、0.19mmol）及びN-エチルジイソプロピルアミン（74μL）を加え、室温で３時間撹拌反応を行った。反応終了後、酢酸エチル（40mL）を加えて結晶化及び遠心分離を行い、化合物(39)を（10.7mg、収率80％）得た。
物性データ：Mass（nega=703）
【０５４８】
実施例７．本発明の標識化合物〔蛍光標識２'−デオキシシチジン−５'−トリホスフェート誘導体〕の合成。
本発明の化合物［１］で標識されたモノヌクレオチド（２'−デオキシシチジン−５'−トリホスフェート）を前記した合成経路に従って、以下のように合成した。
（１）部分リンカー（Ａ）の合成
【０５４９】
(i)トリフルオロアセチル（Ｔｆａ）化（第１工程）
21gのPropagylamine〔前記合成経路中の(51)の化合物〕（東京化成(株)製）に、氷冷下でトリフルオロ酢酸メチル（ＭｅＯＴｆａ）(54g)及びトリエチルアミン(Et3N)(25mL)を添加した後、室温で２日間攪拌した。反応終了後、減圧蒸留で精製を行い、56gの化合物(52)〔前記合成経路中の(52)の化合物〕を得た(収率；98.1%)。
【０５５０】
(ii)トリ（n-ブチル）スズ（Ｂｕ３Ｓｎ）化（第２工程）
15gの化合物(52)〔前記合成経路中の(52)の化合物〕をベンゼン(300mL)に溶解し、水素化トリ（n-ブチル）スズ（Bu3SnH）(35mL)及びアゾビスイソブチロニトリル（AIBN）(2.1g)を添加した後、還流下で1.5時間攪拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラム(溶離液；AcOEt:Hexane=1:20で精製し、11.4gの化合物(53)（部分リンカーＡ）〔前記合成経路中の(53)の化合物〕を得た(収率；25.8%)。
【０５５１】
（２）部分リンカーＢの合成
(i)Tfa化（第３工程）
10gの6-Aminohexanoic acid〔前記合成経路中の(54)の化合物〕（和光純薬工業（株）製）を懸濁し、トリフルオロ酢酸メチル(25g)，トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）(25mL)を添加した後、室温で２日間攪拌した。反応終了後、溶媒を留去し、水より結晶化を行うことで、8.4gの化合物(55)〔前記合成経路中の(55)の化合物〕を得た(収率；48.6%)。
【０５５２】
(ii)活性エステル化（第４工程）
2.3gの化合物(55)〔前述合成経路中の(55)の化合物〕をN,N-ジメチルホルムアミド（DMF）(50mL)に溶解し、N-ヒドロキシコハク酸（HO-Su）(1.4g)，WSC(2.3g)を添加した後、室温で終夜攪拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、酢酸エチルで分液洗浄した。有機層を減圧濃縮することで、3.6gの化合物(56)（部分リンカーＢ）〔前記合成経路中の(56)の化合物〕を得た(収率；定量的)。
【０５５３】
（３）部分リンカーの導入
(i)部分リンカーＡの導入（第５工程）
1.0gの５−ヨード−２’−デオキシシチジン〔上記合成経路中の(57)の化合物〕（和光純薬工業（株）製）をアセトニトリル(30mL)に懸濁し、Arガス置換下でO-ビス(トリメチルシリル)アセトアミド（TMS-Acetamide）(3mL)を添加した後、還流下で２時間攪拌した。反応液を室温に冷却した後、ビス（アセトニトリル）ジクロロパラジウム（II）[PdCl2(CH3CN)2](40mg)，及び２ｇの部分リンカーＡ〔前記合成経路中の(53)の化合物〕を添加し、更に50〜60℃で20時間攪拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラム(溶離液；CHCl3:MeOH=9:1)で精製を行い、ジエチルエーテルより結晶化することで、720mgの2’-デオキシシチジン誘導体〔前記合成経路中の(58)の化合物〕を得た(収率；67.3%)。
【０５５４】
(ii)脱トリフルオロアセチル（Tfa）化（第６工程）
500mgの2'-デオキシシチジン誘導体〔前記合成経路中の(58)の化合物〕をエタノール（EtOH）(10mL)に溶解し、25%-アンモニア水(25mL)を添加した後、室温で４時間攪拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮した。残渣をODSカラムクロマト(溶離液；5%-MeOH)で精製することで、190mgの2'-デオキシシチジン誘導体〔前記合成経路中の(59)の化合物〕を得た(収率；50.9%)。
【０５５５】
(iii)部分リンカーＢの導入（第７工程）
190mgの2'-デオキシシチジン誘導体〔前記合成経路中の(59)の化合物〕をN,N-ジメチルホルムアミド（DMF）(4mL)に溶解し、330mgの部分リンカーＢ〔前記合成経路中の(56)の化合物〕を添加した後、室温で終夜攪拌した。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラム(溶離液；CHCl3:MeOH:AcOH=80:20:5)で精製を行った。更に、ODSカラムクロマト(溶離液；20%-MeOH)で精製することで、169mgの2’-デオキシシチジン誘導体〔前記合成経路中の(60)の化合物〕を得た(収率；51.2%)。
【０５５６】
（４）モノヌクレオシドのトリリン酸化・脱Tfa化（第８工程）
(i)トリリン酸化試薬0.5M-tris(TBAPP)の調製
100cm3の再生済Dowex50W×8(H+Form)をφ2.5cmカラムに投入し、イオン交換水で洗浄した。ピロリン酸ナトリウム・10水和物水溶液(6.7g/100mL)をチャージし、溶出液(ピロリン酸溶液)を10.6mLのトリブチルアミンを含むEtOH(50mL)溶液に直接滴下した。溶出液のｐＨが中性になるまで滴下した後、10分間攪拌した。攪拌後、減圧濃縮し、残渣にEtOH(30mL×2回)，トルエン(30mL×3回)，DMF(20mL×2)を順次添加し、減圧濃縮を繰り返した。DMFで30mLにメスアップした後、MS4Aを添加し、終夜脱水することで、0.5M-tris(TBAPP)溶液を得た。
【０５５７】
(ii)トリリン酸化
147mg(0.3mmol)の2’-デオキシシチジン誘導体〔前記合成経路中の(60)の化合物〕をリン酸トリエチル[(EtO)3PO](1.4mL)に溶解し、オキシ塩化リン(27μL＋24μL)を添加した後、低温室で４時間攪拌することでモノリン酸化を行った。これに4mLの0.5M-tris(TBAPP)を投入し、低温室で２時間攪拌することで、トリリン酸化を行った(HPLC工程検査；生成率37.8%)。反応後、7%-トリエチルアミン水溶液(7mL)で反応液を中和し、更に終夜攪拌した。反応後、反応液をジエチルエーテルで洗浄し、水層をDEAE-TOYOPEARLカラム(溶離液；水→0.2M-TEABグラジェント)による精製を行った。溶出分画を減圧濃縮し、中間体を得た。次いで、中間体を25%-アンモニア水(30mL)に溶解し、低温室で終夜攪拌した。反応終了後、アンモニアを減圧留去し、残渣を凍結乾燥することで、130mgの2’-dCTP-アミノリンカー誘導体〔前記合成経路中の(61)の化合物〕を得た。
【０５５８】
本品の工程検査を行った結果、HPLC純度；95.8%，含量；77.3%であった。
【０５５９】
（５）モノヌクレオチドの標識（第９工程）
6.5mgの2’-dCTP-アミノリンカー誘導体〔前記合成経路中の(61)の化合物〕をイオン交換水(150μL)に溶解し、本発明の化合物（標識物質）〔前記合成経路中の(25)の化合物〕のDMF溶液(1mg/100μL)を７回添加した後、室温で終夜攪拌した(HPLC工程検査；生成率60.0%)。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、ワコーシル50C18カラム(溶離液；5%-MeOH)，次いでDEAE-TOYOPEARL 650Mカラムで精製を行った(Fr検査；HPLC)。残渣を凍結乾燥することで3.4mgの蛍光標識2’-dCTP誘導体〔前記合成経路中の(25a)の化合物：本発明の化合物（標識物質）で標識されたモノヌクレオチド〕を得た。
【０５６０】
実施例８．本発明の化合物の新規蛍光強度の測定
従来のシアニン色素であるＣｙ５の蛍光強度を基準に本発明の化合物の相対蛍光強度を概算した。
先ず、Ｃｙ５の蛍光強度から、Ｃｙ５の１μＭ当りの蛍光強度を測定し、この蛍光強度値を１００とした場合の、本発明の化合物の相対蛍光強度を概算した。その結果を表２９に示す。
【０５６１】
（１）Ｃｙ５の蛍光強度の測定
蛋白１ｍｇ標識用Ｃｙ５（GEヘルスケアバイオサイエンスバイオヘルス社製）を精製水１ｍLに溶解した。本溶液を５０ｍMりん酸緩衝液（ｐH７．５）で２００倍希釈し、ＯＤ値を測定した（０．１０２０）。
【０５６２】
このＯＤ値及びモル吸光係数（ε＝２５０，０００）〔GEヘルスケアバイオサイエンス総合製品カタログ2006「７−４」に記載〕からＣｙ５の溶液濃度を求めた（０．４０８μＭ）。次に、本溶液を用いて蛍光測定を実施した。
蛍光特性を以下に示す。
【０５６３】
0005626427.tif 000134
【０５６４】
（２）本発明の化合物の相対蛍光強度の概算
実施例８の（１）で得られたＣｙ５の１μＭ当りの蛍光強度を１００として、本発明の化合物(13)、(21)、(32)及び(38)の相対蛍光強度を概算した。その結果を表２９に示す。
【０５６５】
【表２９】
0005626427.tif 000135
【０５６６】
表２９の結果から明らかなように、本発明の化合物とＣｙ５（従来のシアニン色素）と比較した場合、本発明の化合物の方が、Ｃｙ５と同等以上の蛍光強度を示すことが分った。
【０５６７】
実施例９．新規蛍光色素の実用評価
（１）新規蛍光標識抗AFP-Fab’（本発明の標識化合物）の調製
抗α−フェトプロテイン（AFP）抗体（和光純薬工業（株）社製）をペプシン消化した後、２−アミノエタンチオールで還元し、ゲル濾過カラム（Superdex200、GEヘルスケアバイオサイエンス社製）で精製することにより抗AFP-Fab’を得た。
抗AFP-Fab’溶液（280nmのabsで算出した蛋白質量として2mg）を含有する50mMリン酸緩衝液（ＰＢＳ）ｐＨ6.0溶液（0.892mL）に上記実施例１で得られた化合物(15)〔本発明の化合物（マレイミド体）〕のDMF溶液（4mg/mL）0.1mLを添加し、低温室で終夜反応させた。得られた反応液を、イオン交換カラム（DEAE-5PW、東ソー(株)）及びゲル濾過カラムで精製し、本発明の標識化合物である新規蛍光標識抗AFP- Fab’の50mMのリン酸緩衝液pH6.0溶液（280nmのabsで算出した蛋白質量として0.2mg）を得た。
【０５６８】
（２）ＨＰＬＣ蛍光分析法による新規蛍光標識抗AFP-Fab’（本発明の標識化合物）の蛍光強度測定
上記実施例９の（１）で得られた150nMの蛍光標識抗AFP-Fab’を含有する50mMリン酸緩衝液（PBS）ｐＨ6.0溶液〔1mMエチレンジアミン四酢酸（EDTA）含有〕0.05mLに、各濃度のAFP（0、0.625、1.25、2.5、5、10及び20nM）を含有する50mMトリス塩酸ｐＨ8.0溶液0.05mLを添加し、２時間反応させた。得られた反応液をHPLC（LC-10A、島津製作所製）、ゲルろ過カラム（Diol-200、和光純薬工業（株）社製）で分析し、新規蛍光標識抗AFP-Fab’とAFPとの複合体（本発明の標識化合物）のピーク面積を蛍光強度として算出した（以下、「本発明の標識複合体」と略記する。）。その結果を下記表３０に示す。
【０５６９】
比較例２．Cｙ５蛍光標識抗AFP- Fab’の蛍光強度測定
標識物質として、実施例９の（１）で用いた本発明の化合物(15)の代わりにCy５マレイミド試薬（Cy5マレイミド、GEヘルスケアバイオサイエンス社製）を用いた以外は実施例９の（１）と同様の操作を行い、Cy5蛍光標識抗AFP-Fab’の50mMリン酸緩衝液ｐＨ6.0溶液を得た。
更に、実施例９の（２）と同様の操作を行い、得られたCy5蛍光標識抗AFP-Fab’とAFPとの複合体の蛍光強度を算出した（以下、「Cy5標識複合体」と略記する。）。その結果を下記表３０に併せて示す。
【０５７０】
【表３０】
0005626427.tif 000136
【０５７１】
表３０の結果から明らかなように、本発明の蛍光試薬及び従来の蛍光試薬を使用した場合を比較すると、本発明の標識複合体の方が約1.2〜2.0倍程度の蛍光強度を示すことが分る。
【０５７２】
実施例１０．新規蛍光色素の実用評価（標識ヌクレオチドの取り込み）
（１）ＰＣＲ法による蛍光標識ヌクレオチドの取込み
下記組成で反応液を調製した。
0005626427.tif 000137
【０５７３】
「WY-535」は、実施例３で得られた本発明の化合物(25)である。
「WY-535-dCTP」は、実施例３で得られた本発明の化合物(25)で標識されたモノヌクレオチド〔蛍光標識２'−デオキシシチジン−５'−トリホスフェート誘導体〕である。
Templateは、Escherichia coli JCM 1649Tからリゾチームで溶菌後、フェノールクロロホルム法によって精製を行なった。
Primerは、16Sリボソーム遺伝子の一部を増幅する配列を使用した。
「FowerdPrimer」：(AGAGTTTGATCMTGGCTCAG)
「ReversePrimer」：(CCCACTGCTGCCTCCCGTAG)
Taqは、TaKaRa社製ExTaq HSを使用した。
PCR反応の条件は、95℃  5min反応後、95℃  30sec、55℃  20sec、72℃  30secの反応を30回繰り返した後、72℃  5min反応を行った。
【０５７４】
（２）スピンカラムを用いた標識ゲノムDNA断片の精製
PCR Purification Kit (Qiagen社製)を用いて、上記（１）の反応液中に存在する未反応の標識ヌクレオチド（WY535-dCTP）及びプライマー、dNTPの除去を行った。反応停止後の各チューブにBinding Buffer（Qiagen社製のPCR Purification Kitに含まれているBuffer）を275μL加え、ピペッティングにより混合した。混合液全量をスピンカラム（Qiagen社製のPCR Purification Kitに含まれているカラム）にアプライし、6,000r.p.m.(3,500×g)で2分遠心分離処理した。フロースルーを捨て、スピンカラムWash Buffer（Qiagen社製のPCR Purification Kitに含まれているBuffer）750μLを添加し、6000r.p.m.(3,500×g)で2分遠心分離処理した。フロースルーを捨て12,000r.p.m.(14,000×g)で3分遠心分離処理した。新しい1.5mLのマイクロチューブをスピンカラムにセットし、カラムの中心にElution Buffer（Qiagen社製のPCR Purification Kitに含まれているBuffer）を50μL添加後、遮光下、5分室温に放置し、12,000r.p.m.(14,000×g)で3分遠心分離処理した。カラムの中心にElution Buffer（Qiagen社製のPCR Purification Kitに含まれているBuffer）を30μL添加後、遮光下、5分室温に放置し、12,000r.p.m.(14,000×g)で3分遠心分離処理し、精製したWY-535標識 DNA  80μlを得た。分光光度計により核酸の合成量および蛍光色素取り込み量を測定した。その結果を表３１に示す。
【０５７５】
【表３１】
0005626427.tif 000138
【０５７６】
表３１の結果から明らかなように、溶液２の実験からPCR Purification kitで未反応の標識物質のコンタミが１pmol程度であることがわかった。このことからPCR Purification kitで未反応の標識物質は、ほぼ完全に除去可能なことがわかった。
また、溶液３〜５の結果から、蛍光標識ヌクレオチドの濃度依存的に蛍光物質取込み量が増加していることが分かった。このことから本発明の標識ヌクレオチドを使用して、酵素的にDNA鎖に取り込む事が可能であることがわかった。
【０５７７】
以上の結果から明らかなように、本発明の化合物で標識されたヌクレオチドを用いても
公知の蛍光色素を用いた場合と同様に、測定対象物（例えば核酸等）を検出することが可能となる。
【０５７８】
実施例１１．本発明の化合物(40)の合成
0005626427.tif 000139
【０５７９】
（１）インドレニン化合物(8)の合成
0005626427.tif 000140
【０５８０】
〔化合物(2)の合成〕
N,N-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（80ml）中に、エチル-2-メチルアセトアセテート(1)（25.0g、0.173mol）、1,3-プロパンスルトン（23.3g、0.190mol）及び水素化ナトリウム（8.5g、0.208mol）を添加し、90℃で終夜攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、水（200ml）、ジエチルエーテル（200ml）を加え２回洗浄を行った。その後水層部分を減圧留去し、化合物(2)を得た（42.1g、収率９１％）。
【０５８１】
〔化合物(3)の合成〕
化合物(2)（40.5g、0.152mol）を濃塩酸（60ml）中、100℃で３時間攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：メタノール）を用いて精製し、化合物(3)を得た（16.6g、収率５６％）。
【０５８２】
〔化合物(5)の合成〕
化合物(3)（10.0g、0.051mol）及び化合物(4)（12.9g、0.066mol）を酢酸（50ml）中、120℃で４時間加熱還流を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶出液：水）を用いて精製し、化合物(5)を得た（11.5g、収率６５％）。
物性データ：IR(KBr) (cm-1)：3450, 1196
【０５８３】
〔化合物(6)の合成〕
化合物(5)（11.5g、0.033mol）を水（50ml）及びエタノール（50ml）中に溶解し、室温下で４時間攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶出液：水）を用いて精製し、化合物(6)を得た（10.3g、収率８０％）。
物性データ：Mass（nega=346）
IR(KBr) (cm-1)：3444, 1193
【０５８４】
〔化合物(7)の合成〕
化合物(6)（10.0g、0.026mol）及び6-ブロモヘキサン酸（9.97g、0.052mol）を1,2-ジクロロベンゼン（100ml）中に溶解し、１２０℃で終夜攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、酢酸エチルを用いて３回洗浄し、化合物(7)を得た（11.5g、収率８９％）。
物性データ：Mass（nega=460）
IR(KBr) (cm-1)：3446, 1723, 1194
【０５８５】
〔化合物(8)の合成〕
化合物(7)（1.5g、2.967mmol）及びマロンアルデヒドジアニリド塩酸塩（0.77g、2.967mmol）を無水酢酸（20ml）中に溶解し、１２０℃で１時間攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶出液：１０％アセトニトリル水溶液）を用いて精製し、インドレニン化合物(8)を得た（0.18g、収率１０％）。
物性データ：Mass（nega:posi=631:633）
IR(KBr) (cm-1)：3443, 1716, 1574, 1465, 1189
【０５８６】
（２）ピラゾール化合物(19)の合成
0005626427.tif 000141
【０５８７】
〔化合物(17)の合成〕
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（100ml）中に、4-アセチル-5-オキソへキサン酸エチルエステル(16)（10.0g、49.94mmol）、ヨウ化エチル（10.6g、74.91mmol）及び炭酸カリウム（17.3g、0.125mol）を添加し、室温で終夜攪拌を行った。反応終了後、１Ｎ塩酸で中和し、水（100ml）及び酢酸エチル（100ml）を加え２回洗浄を行った。その後、酢酸エチル層を飽和重曹水（100ml）及び飽和食塩水（100ml）で２回ずつ洗浄し、得られた酢酸エチル層を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル/ヘキサン=１/３）を用いて精製し、化合物(17)を得た（10.0g、収率９３％）。
【０５８８】
〔化合物(18)の合成〕
化合物(17)（10.0g、46.7mmol）及びヒドラジン一水和物（2.6g、51.4mmol）をエタノール（EtOH）（150ml）中に溶解し、８０℃で２時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：メタノール/クロロホルム=１/１）を用いて精製し、化合物(18)を得た（9.3g、収率９５％）。
【０５８９】
〔ピラゾール化合物(19)の合成〕
化合物(18)（9.3g、44.2mmol）及び1,3-プロパンスルトン（5.9g、44.9mmol）をトルエン（150ml）中に溶解し、１２０℃で５時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（200ml）を加え、得られた晶析物を濾過し、ピラゾール化合物(19)を得た（10.6g、収率７２％）。
物性データ：Mass（nega=331）
IR(KBr) (cm-1)：3436, 1726, 1211
【０５９０】
（３）インドレニン化合物−ピラゾール化合物複合体（本発明の化合物）(40)の合成
0005626427.tif 000142
【０５９１】
〔化合物(20)の合成〕
実施例１１の（１）で得られたインドレニン化合物(8)（0.15g、0.237mmol）及び実施例１１の（２）で得られたピラゾール化合物(19)（0.24g、0.711mmol）をＤＭＦ（2ml）中に溶解し、ピリジン（1ml）及び無水酢酸（0.5ml）を加え、８０℃で１時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（溶出液：１０％メタノール水溶液）及びSephadex  LH−２０〔ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製〕（溶出液：メタノール）を用いて精製し、化合物(20)を得た（52mg、収率２６％）。
物性データ：Mass（nega=828）
【０５９２】
〔化合物(21)の合成〕
化合物(20)（53mg、0.064mmol）をメタノール（3ml）中に溶解し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（1ml）を加え、４０℃で１時間攪拌を行った。反応終了後、Sephadex LH−２０（溶出液：メタノール）を用いて精製し、化合物(21)を得た（15mg、収率２９％）。
物性データ：Mass（nega=800）
【０５９３】
〔化合物(22)の合成〕
化合物(21)（15mg、0.019mmol）をＤＭＦ（1ml）中に溶解し、2-スクシンイミド-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＳＴＵ）（113mg、0.337mmol）及びN-エチルジイソプロピルアミン（(i-Pr)2NEt）（120μl）を加え、室温で３時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（15ml）を加えて結晶化した後、遠心分離を行い、化合物(22)を得た（15mg、収率８１％）。
物性データ：（nega=995）
【０５９４】
〔化合物(40)の合成〕
化合物(22)（6mg、0.006mmol）を水（12ml）に溶解し、１０分間攪拌を行った。次いで、得られた反応液に、リジン一塩酸塩（2.1mg、0.011mmol）と炭酸ナトリウム（0.6mg、0.006mmol）を水（6ml）に溶解した溶液をゆっくり添加し、室温で終夜攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、分取逆相ＨＰＬＣ〔溶出液；Ａ液(５％アセトニトリル−0.1％トリフルオロ酢酸  水溶液)：Ｂ液(95％アセトニトリル−0.1％トリフルオロ酢酸  水溶液)＝90:10〕（商品名「Wakosil-II 5C18 RS Prep (20.0mmX250mm)」、和光純薬工業(株)社製）を用いて精製し、化合物(40)を得た（1mg、収率１８％）。
物性データ：Mass（nega=955）
【０５９５】
蛍光特性を以下に示す。
0005626427.tif 000143
【０５９６】
実施例１２．本発明の化合物(43)の合成
0005626427.tif 000144
【０５９７】
（１）インドレニン化合物（30）の合成
0005626427.tif 000145
【０５９８】
〔化合物(27)の合成〕
出発原料として4-ヒドラジノベンゼンスルホン酸0.5水和物(26)（50.0g、0.253mol）及び3-メチル-2-ブタノン（65.5g、0.759mol）を用い、酢酸（200ml）中、１２０℃で３時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を冷却し、ジエチルエーテル（300ml）を加え２回洗浄することにより、化合物(27)を得た（52.0g、収率８６％）。
物性データ：Mass（nega=238）
【０５９９】
〔化合物(28)の合成〕
化合物(27)（10.0g、0.042mol）及び水酸化ナトリウム（1.67g、0.042mol）をエタノール（30ml）／2-プロパノール（10ml）混合溶媒中、室温下で4時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、2-プロパノール（100ml）を加え２回洗浄することで化合物(28)を得た（4.2g、収率３９％）。
物性データ：IR(cm-1)：3206, 1205
【０６００】
〔化合物(29)の合成〕
化合物(28)（3.5g、0.013mol）、3-ブロモプロピオン酸（2.5g、0.016mol）をトルエン（50ml）中、１１０℃で終夜加熱還流を行った。反応終了後、酢酸エチル（100ml）を加え３回洗浄し、化合物(29)を得た（1.7g、収率４１％）。
物性データ：Mass（nega=310）
【０６０１】
〔化合物(30)の合成〕
化合物(29)（1.5g、4.50mmol）及びマロンアルデヒドジアニリド塩酸塩（1.16g、4.50mmol）を無水酢酸（20ml）に溶解し、120℃で1時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（50ml）を加え2回洗浄し、インドレニン化合物(30)を得た（1.59g、収率７０％）。
物性データ：Mass（nega=481）
【０６０２】
（２）ピラゾール化合物(31)の合成
0005626427.tif 000146
【０６０３】
〔化合物(10)の合成〕
ＤＭＦ（100ml）中、3-メチル-2,4-ペンタンジオン(9)（15.0g、0.13mol）、1,3-プロパンスルトン（16.1g、0.13mol）及び水素化ナトリウム（5.0g、0.208mol）を用いて、５０℃で１６時間攪拌反応を行った。反応終了後、１Ｎ水酸化ナトリウムで中和し、溶媒を減圧留去し、水（200ml）及びジエチルエーテル（200ml）を加え２回洗浄を行った。その後水層部分を減圧留去し、ピラゾール化合物(10)を得た（32.2g、収率９６％）。
物性データ：IR(KBr) (cm-1)：3474, 1695, 1665, 1191
【０６０４】
〔化合物(11)の合成〕
化合物(10)（10.0g、0.042mol）及びヒドラジン一水和物（2.1g、0.042mol）をエタノール（150ml）中に溶解し、８０℃で３時間攪拌反応を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：メタノール/クロロホルム=１/１）を用いて精製し、化合物(11)を得た（9.0g、収率９２％）。
物性データ：IR(KBr) (cm-1)：3421, 1195
【０６０５】
〔化合物(12)の合成〕
化合物(11)（4.8g、0.019mol）及び1,3-プロパンスルトン（2.5g、0.02mol）をジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）（30ml）中に溶解し、１４０℃で４時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（200ml）を加え、析出した結晶を濾過し、ピラゾール化合物(12)を得た（5.3g、収率７６％）。
物性データ：Mass（nega=352）
IR(KBr) (cm-1)：3446, 1194
【０６０６】
〔化合物(31)の合成〕
化合物(12)（0.59g、2.32mmol）及び3-ブロモプロピオン酸（0.39g、2.55mmol）を無溶媒で攪拌しながら、終夜攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（30ml）を加え２回洗浄し、化合物(31)を得た（0.73g、収率９６％）。
物性データ：Mass（nega=303）
【０６０７】
（３）インドレニン化合物−ピラゾール化合物複合体（本発明の化合物）(43)の合成
0005626427.tif 000147
【０６０８】
〔化合物(41)の合成〕
実施例１２の（１）で得られたインドレニン化合物(30)（70mg、0.139mmol）、実施例１２の（２）で得られたピラゾール化合物(31)（91mg、0.278mmol）をＤＭＦ（1ml）に溶解し、ピリジン（0.1ml）、無水酢酸（0.1ml）を加え、８０℃で１時間攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、逆相カラムクロマトグラフィー（展開溶媒：１０％メタノール）及びSephadex  LH−２０（溶媒：メタノール）を用いて精製することで化合物(41)を得た（11mg、収率１２％）。
物性データ：Mass（nega=649）
【０６０９】
〔化合物(42)の合成〕
化合物(41)（10mg、0.019mmol）をＤＭＦ（1ml）に溶解し、ジスクシイミジルカルボネート（ＤＳＣ）（113mg、0.37mmol）、ピリジン（120μl）を加え、４０℃で４時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（１５ｍｌ）を加えて結晶化及び洗浄を行うことで化合物(42)を得た（１０ｍｇ、収率７９％）。
物性データ：Mass（nega=846）
【０６１０】
〔本発明の化合物(43)の合成〕
化合物(42)（10mg、0.011mmol）を水（12ml）に溶解し、１０分間攪拌を行った。次いで、得られた溶液に、リジン一塩酸塩（4mg、0.022mmol）と炭酸ナトリウム（1.1mg、0.011mmol）を水（6ml）に溶解した溶液をゆっくり添加し、室温で終夜攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、分取逆相ＨＰＬＣ〔溶出液；A液(5％アセトニトリル−0.1％トリフルオロ酢酸  水溶液): B液(95％アセトニトリル−0.1％トリフルオロ酢酸  水溶液)＝90:10〕（商品名「Wakosil-II 5C18 RS Prep (20.0mmX250mm)」、和光純薬工業(株)社製）を用いて精製することで本発明の化合物(43)を得た（1.5mg、収率１７％）。
物性データ：Mass（nega=761）
【０６１１】
蛍光特性を以下に示す。
0005626427.tif 000148
【０６１２】
実施例１３．本発明の化合物(47)〜(48)の合成
0005626427.tif 000149
【０６１３】
〔化合物(46)の合成〕
（１）リンカー化合物(46)の合成
0005626427.tif 000150
【０６１４】
※Ｂｏｃ＝tert-ブトキシカルボニル基
【０６１５】
〔化合物(45)の合成〕
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（100ml）中に、ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)（2.6g、12.6mmol）、(Z-Cl)-Lys-Boc（化合物(44)）（5.0g、12.1mmol）及びN-ヒドロキシスクシンイミド（1.4g、12.1mmol）を添加し、室温で終夜攪拌を行った。反応終了後、余分な尿素を濾過し、６-アミノへキサン酸（3.2g、12.1mmol）を加え、再び室温下で終夜撹拌を行った。反応終了後、１Ｎ塩酸で中和し、水（200ml）及び酢酸エチル（200ml）を加え、２回洗浄を行った。その後、酢酸エチル層を飽和食塩水（200ml）で２回洗浄し、得られた酢酸エチル層を減圧留去し、化合物(45)を得た（6.6g、収率52％）。
物性データ：Mass（nega:posi=526:528）
【０６１６】
〔化合物(46)の合成〕
化合物(45)（1.0g、1.9mmol）を25％臭化水素-酢酸（5ml）に溶解し、室温下で終夜撹拌を行った。反応終了後、反応液を濃縮し、酢酸エチルで３回洗浄を行うことで化合物(46)を得た（0.61g、収率94％）。
物性データ：Mass（posi=260）
【０６１７】
（２）インドレニン−ピラゾール複合体（本発明の化合物）(48)の合成
0005626427.tif 000151
【０６１８】
〔化合物(47)の合成〕
実施例１１で得られた化合物(22)（22mg、0.02mmol）を水（25ml）に溶解し、１０分間攪拌を行った。次いで、得られた反応液に、実施例１３の（１）で得られたリジン誘導体(化合物(46))（11mg、0.04mmol）と炭酸ナトリウム(Na2CO3)（2.2mg、0.02mmol）を水（10ml）に溶解した溶液をゆっくり添加し、室温で終夜攪拌を行った。反応終了後、溶媒を減圧留去し、分取逆相ＨＰＬＣ〔溶出液；Ａ液(5％アセトニトリル−0.1％トリフルオロ酢酸  水溶液)：Ｂ液(95％アセトニトリル−0.1％トリフルオロ酢酸  水溶液)＝90:10〕（商品名「Wakosil-II 5C18 RS Prep (20.0mmX250mm)」、和光純薬工業(株)社製）を用いて精製し、化合物(47)を得た（5mg、収率23％）。
物性データ：Mass（nega=1068,2Na+）
【０６１９】
〔化合物(48)の合成〕
化合物(47)（5mg、0.005mmol）をN,N-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（300μl）中に溶解し、2-スクシンイミド-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＳＴＵ）（14mg、0.046mmol）及びN-エチルジイソプロピルアミン（15μl）を加え、室温で3時間攪拌を行った。反応終了後、酢酸エチル（10ml）を加えて結晶化した後、遠心分離を行い、化合物(48)を得た（4mg、収率75％）。
【０６２０】
実施例１４．本発明の化合物の新規蛍光強度の測定
従来のシアニン色素であるＣｙ５の蛍光強度を基準に本発明の化合物の相対蛍光強度を概算した。
先ず、Ｃｙ５の蛍光強度から、Ｃｙ５の１μＭ当りの蛍光強度を測定し、この蛍光強度値を１００とした場合の、本発明の化合物の相対蛍光強度を概算した。
【０６２１】
（１）Ｃｙ５の蛍光強度の測定
蛋白１ｍｇ標識用Ｃｙ５（GEヘルスケアバイオサイエンスバイオヘルス社製）を精製水１ｍLに溶解した。本溶液を５０ｍMりん酸緩衝液（ｐＨ７．５）で２００倍希釈し、ＯＤ値を測定した（０．１０２０）。
このＯＤ値及びモル吸光係数（ε＝２５０，０００）〔ＧＥヘルスケアバイオサイエンス総合製品カタログ2006「７−４」に記載〕からＣｙ５の溶液濃度を求めた（０．４０８μＭ）。
【０６２２】
次に、本溶液を用いてＣｙ５の蛍光測定を実施した。
蛍光特性を以下に示す。
0005626427.tif 000152
【０６２３】
（２）本発明の化合物の相対蛍光強度の概算
実施例１４の（１）で得られたＣｙ５の１μＭ当りの蛍光強度を１００として、実施例１１により得られた本発明の化合物(40)及び実施例１２により得られた本発明の化合物(43)の相対蛍光強度を概算した。その結果を表３２に示す。
【０６２４】
【表３２】
0005626427.tif 000153
【０６２５】
表３２の結果から明らかなように、本発明の化合物とＣｙ５（従来のシアニン色素）と比較した場合、本発明の化合物の方が、Ｃｙ５より高い蛍光強度を示すことが分った。
【０６２６】
実施例１５．新規蛍光試薬の実用評価
（１）新規蛍光標識抗AFP- Fab’（本発明の標識化合物）の調製
抗α−フェトプロテイン（AFP）抗体（和光純薬工業（株）社製）をペプシン消化した後、２−アミノエタンチオールで還元し、ＳＨ基をN-エチルマレイミドでマスキング後、ゲル濾過カラム（Superdex200、GEヘルスケアバイオサイエンス社製）で精製することにより抗AFP-Fab’を得た。
抗AFP-Fab’ （280nmのabsで算出した蛋白質量として1.0mg）を含有するの0.1M炭酸ナトリウム緩衝液ｐＨ８．５溶液 0.43mLに上記実施例１１で得られた化合物(22)〔本発明の化合物（活性エステル体）〕のジメチルスルホキシド（DMSO）溶液（1.0mg/mL） １mlを添加し、低温室で終夜反応させた。得られた反応液を、ゲル濾過カラムで精製し、本発明の標識化合物である新規蛍光標識抗AFP- Fab’ の50mMリン酸緩衝液（PBS）ｐＨ６．０溶液（280nmのabsで算出した蛋白質量として0.23mg）を得た。
【０６２７】
（２）ＨＰＬＣ蛍光分析法による新規蛍光標識抗AFP- Fab’（本発明の標識化合物）の蛍光強度測定
上記実施例１５の（１）で得た150nMの蛍光標識抗AFP-Fab’を含有するの50mMリン酸緩衝液（PBS）ｐＨ６．０溶液〔1mMエチレンジアミン四酢酸（EDTA）含有〕 0.05mlに、各種濃度のAFP（0、0.625、1.25、2.5、5、10及び20μM）を含有する50mMトリス塩酸ｐＨ８．０溶液 0.05mlを添加し、２時間反応させた。得られた反応液をHPLC(島津製作所ＬＣ−１０Ａ，ゲルろ過カラムＤｉｏｌ−２００（和光純薬製）で分析し、新規蛍光標識抗AFP-Fab’とAFPとの複合体のピーク面積を蛍光強度として算出した。
得られた各種標識複合体の蛍光強度を下記表２に示す。
【０６２８】
比較例１．Cｙ５蛍光標識抗AFP- Fab’の合成
標識物質として、実施例１５で用いた本発明の化合物(22)の代わりにCy５活性エステル試薬（Cy5活性エステル；GEヘルスケアバイオサイエンス社製）を用いた以外は実施例１５と同様の操作を行い、Cy5蛍光標識抗AFP-Fab’ の50mMリン酸緩衝液（PBS）ｐＨ６．０溶液を得た。結果を併せて表３３に示す。
【０６２９】
【表３３】
0005626427.tif 000154
【０６３０】
表３３の結果から明らかなように、本発明の蛍光試薬及び従来の蛍光試薬を使用した場合を比較すると、本発明の標識複合体の方が1.1〜2.0倍程度の蛍光強度を示すことが分かった。
【産業上の利用可能性】
【０６３１】
本発明のピラゾール系シアニン色素は、ピラゾール骨格とインドール骨格がポリメチン鎖で結合された構造を有していることから、従来の光源よりも短波長領域で蛍光特性を有するため、エネルギー効率の高い短波長領域の光源が使用可能となり、またこれを標識剤（標識物質）として用いて測定対象物を検出する場合、従来のシアニン色素誘導体が有していた例えば水溶性が低い、色素同士の会合に起因する消光により検出感度が低下する等の問題点を有することなく測定対象物を高い検出感度で検出することが可能となる。