(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
0005606737.tif 000055
（上式中、
Ｒは、Ｃ６〜Ｃ１２置換もしくは非置換アリール、Ｃ６〜Ｃ１２置換もしくは非置換ヘテロアリール、Ｃ１〜Ｃ６置換もしくは非置換アルキルまたは−ＮＲ’Ｒ’であり、
Ｑは、Ｃ（Ｏ）、Ｏ、ＮＲ’、Ｓ、またはＳ（Ｏ）２であり、
Ｙは、Ｃ（Ｏ）、Ｏ、ＮＲ’、Ｓ、またはＳ（Ｏ）２であり、
Ｚは、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
ｍは、０、１、２、３、４または５であり、
ｎは、０であり、
Ｒ’は、独立に、Ｈ、Ｃ６〜Ｃ１２置換もしくは非置換アリール、Ｃ６〜Ｃ１２置換もしくは非置換ヘテロアリールまたはＣ１〜Ｃ６置換もしくは非置換アルキルであり、
置換されている場合のアリール、ヘテロアリールおよびアルキルは、ハロゲン、Ｃ５〜Ｃ１２ヘテロアリール、−ＮＲ’Ｒ’またはＣＯＯＺで置換されており、
さらに、
（ｉ）ＲもしくはＲ’の少なくとも１つは、ハロゲンで置換されたＣ６〜Ｃ１２アリールもしくはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールであり、または
（ｉｉ）ＲもしくはＲ’の少なくとも１つは、Ｃ６〜Ｃ１２ヘテロアリールである。）
または式（Ｉ）の前記化合物の医薬的に許容される塩。
【請求項２】
前記ハロゲンは、放射性ハロゲン、Ｉ−１２３、Ｉ−１２５、Ｉ−１３１、Ｉ−１２４、Ｂｒ−７５、Ｂｒ−７７、またはＦ−１８である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ｎは、０であり、
ｍは、０、１、２、３または４であり、
Ｑは、ＮＲ’であり、
Ｙは、Ｃ（Ｏ）であり、
Ｒは、Ｃ６〜Ｃ１２置換または非置換アリールである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒが、ハロゲンで置換されたフェニル部分である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
以下の化合物
【化２Ａ】
0005606737.tif 000056
【化２Ｂ】
0005606737.tif 000057
【化２Ｃ】
0005606737.tif 000058
または前記化合物の医薬的に許容される塩であり、
上記化合物のいずれの前記カルボキシ基も、Ｃ１〜Ｃ４アルキルで置換されていてもよく、
Ｘは、ハロゲン、放射性ハロゲン、Ｉ−１２３、Ｉ−１２５、Ｉ−１３１、Ｉ−１２４、Ｂｒ−７５、Ｂｒ−７７、およびＦ−１８からなる群より選択される化合物または前記化合物の医薬的に許容される塩。
【請求項６】
以下の化合物
【化３Ａ】
0005606737.tif 000059
【化３Ｂ】
0005606737.tif 000060
または前記化合物の医薬的に許容される塩。
【請求項７】
ｎは、０であり、
ｍは、０、１、２、３、または４であり、
Ｑは、ＮＲ’であり、
Ｙは、Ｃ（Ｏ）である、
請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
前記化合物は、式（ＩＩ）：
【化７】
0005606737.tif 000061
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
請求項１に記載の化合物または塩を含んで構成される、放射性核種を含むキレート錯体。
【請求項１０】
前記放射性核種は、イメージング用放射性核種である、請求項９に記載の放射性核種を含むキレート錯体。
【請求項１１】
前記放射性核種は、治療用放射性核種である、請求項９に記載の放射性核種を含むキレート錯体。
【請求項１２】
前記キレート錯体は、（テクネチウム−９９ｍ）Ｔｃ（ＣＯ）３キレート錯体または（レニウム−１８６／１８８）Ｒｅ（ＣＯ）３キレート錯体である、請求項９に記載の放射性核種を含むキレート錯体。
【請求項１３】
放射性核種を含むキレート錯体であって、前記キレート錯体は、
【化８Ａ】
0005606737.tif 000062
【化８Ｂ】
0005606737.tif 000063
であり、
上記化合物のいずれの前記カルボキシ基も、Ｃ１〜Ｃ４アルキルで置換されていてもよい、
放射性核種を含むキレート錯体。
【請求項１４】
ＰＳＭＡのＩＣ５０阻害が２０ｎＭ未満であり、請求項１の式（Ｉ）を有する、グルタメート−尿素−リジンＰＳＭＡ結合部分を含む化合物または医薬的に許容されるその塩であって、
前記グルタメート−尿素−リジンＰＳＭＡ結合部分が、α−ＮＨ２またはβ−ＮＨ２基を介して結合したグルタメート−尿素−αまたはβ−アミノ酸ヘテロダイマーである、
化合物または医薬的に許容されるその塩。
【請求項１５】
（ｉ）金属キレート化部分と、前記金属キレート化部分に結合した請求項１４に記載の化合物または塩を含んで構成される化合物と、
（ｉｉ）放射性核種と、
を含んで構成される、キット。
【請求項１６】
前記放射性核種は、テクネチウム−９９ｍ、レニウム−１８６、レニウム−１８８、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
有痛性および感覚性糖尿病性ニューロパシー、神経損傷、および前立腺癌、統合失調症、結腸直腸癌、炎症、筋萎縮性側索硬化症、または糖尿病性ニューロパシーに罹患した患者の治療方法に用いるための請求項１４に記載の化合物または塩であって、
請求項１４に記載の化合物または塩の治療有効量を前記患者に投与することを含み、
前記グルタメート−尿素−リジンＰＳＭＡ結合部分は、α−ＮＨ２またはβ−ＮＨ２基を介して結合したグルタメート−尿素−αまたはβ−アミノ酸ヘテロダイマーである、
化合物または塩。
【請求項１８】
鎮痛が必要な患者の治療方法に用いるための請求項１４に記載の化合物または塩であって、
前記方法は請求項１４に記載の化合物または塩の治療有効量を前記患者に投与することを含み、
前記グルタメート−尿素−リジンＰＳＭＡ結合部分は、α−ＮＨ２またはβ−ＮＨ２基を介して結合したグルタメート−尿素−αまたはβ−アミノ酸ヘテロダイマーである、
化合物または塩。
【請求項１９】
前記化合物は、式Ｉｉｂ：
【化１３】
0005606737.tif 000064
の化合物であり、
上式中、
−Ｙ−Ｒは、
【化１４】
0005606737.tif 000065
からなる群より選択され、
Ｘは、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、およびＦからなる群より選択される、
請求項１に記載の化合物。
【請求項２０】
前記キレート錯体は、（テクネチウム−９９ｍ）Ｔｃ（ＣＯ）３キレート錯体または（レニウム−１８６／１８８）Ｒｅ（ＣＯ）３キレート錯体である、請求項１３に記載の放射性核種を含むキレート錯体。
【請求項２１】
前記放射性核種は、イメージング用放射性核種である、請求項１３に記載の放射性核種を含むキレート錯体。
【請求項２２】
前記放射性核種は、治療用放射性核種である、請求項１３に記載の放射性核種を含むキレート錯体。
【請求項２３】
【化１８】
0005606737.tif 000066
（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［１−カルボキシ−５−（２−クロロ−ベンジルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸、
【化１９】
0005606737.tif 000067
（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［１−カルボキシ−５−（３−クロロ−ベンジルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸、
【化２０】
0005606737.tif 000068
（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［１−カルボキシ−５−（４−クロロ−ベンジルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸、
【化２３】
0005606737.tif 000069
２−（３−｛１−カルボキシ−５−［３−（４−ブロモ−フェニル）−ウレイド］−ペンチル｝−ウレイド）−ペンタン二酸、
【化２４】
0005606737.tif 000070
２−（３−｛１−カルボキシ−５−［３−（４−クロロ−フェニル）−ウレイド］−ペンチル｝−ウレイド）−ペンタン二酸、および
【化２６】
0005606737.tif 000071
２−（３−｛１−カルボキシ−５−［３−（３−ヨード−ベンジル）−ウレイド］−ペンチル｝−ウレイド）−ペンタン二酸
からなる群より選択される、化合物。
【請求項２４】
前記放射性核種は、イメージング用放射性核種である、請求項１３に記載の放射性核種を含むキレート錯体。
【請求項２５】
前記放射性核種は、治療用放射性核種である、請求項１３に記載の放射性核種を含むキレート錯体。
【請求項２６】
前記キレート錯体は、（テクネチウム−９９ｍ）Ｔｃ（ＣＯ）３キレート錯体または（レニウム−１８６／１８８）Ｒｅ（ＣＯ）３キレート錯体である、請求項１３に記載の放射性核種を含むキレート錯体。
【請求項２７】
式ＩＩＩの化合物
【化２９】
0005606737.tif 000072
（上式中、
Ｌは、結合、場合により置換されたＣ１〜Ｃ１５のアルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、または−［（ＣＨ２）ｑＯ］ｓ−であり、ｑおよびｓは独立に１〜１０の整数であり；
Ｅは、−ＮＲ’Ｒ’であり、
Ｑは、Ｃ（Ｏ）、Ｏ、ＮＲ’、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、または（ＣＨ２）ｐであり、
Ｙは、Ｃ（Ｏ）、Ｏ、ＮＲ’、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、または（ＣＨ２）ｐであり、
Ｚは、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
ｍは、０、１、２、３、４または５であり、
ｎは、０であり、
ｎ’は、０であり、
ｐは、０、１、２、３、４、５または６であり、
Ｒ’は、独立に、Ｈ、Ｃ６〜Ｃ１２置換もしくは非置換アリール、Ｃ６〜Ｃ１２置換もしくは非置換ヘテロアリール、またはＣ１〜Ｃ１４置換もしくは非置換アルキルであり、置換されている場合のアリール、ヘテロアリール、およびアルキルは、ハロゲン、Ｃ５〜Ｃ１２ヘテロアリール、−ＮＲ’Ｒ’またはＣＯＯＺで置換されている。）
またはそれらの医薬的に許容される塩。
【請求項２８】
請求項２７に記載の化合物または塩を含んで構成される、放射性核種を含むキレート錯体。
【請求項２９】
前記放射性核種は、イメージング用放射性核種である、請求項２８に記載の放射性核種を含むキレート錯体。
【請求項３０】
前記放射性核種は、治療用放射性核種である、請求項２８に記載の放射性核種を含むキレート錯体。
【請求項３１】
前記放射性核種は、放射性銅である、請求項９、１３、または２８のいずれか１項に記載の放射性核種を含むキレート錯体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００６年１１月８日に出願された米国仮出願第６０／８５７，４９０号明細書および２００７年１月５日に出願された米国仮出願第６０／８７８，６７８号明細書の優先権を主張し、これらの開示全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
少なくとも百万人の男性が前立腺癌に罹患し、６０〜８０歳の間の米国男性の６人に１人がこの病気にかかると推定される。前立腺癌と診断される新しい症例は毎年３００，０００を超える。前立腺癌は、米国男性の６人に１人が罹患し、この疾病による死亡率は肺癌に次いで第２位である。現在世界中で外科的治療、放射線治療、薬物療法、および最小侵襲的治療に対して２０億ドルが費やされ、その中の１０億ドルが米国内によるものだと推定されている。再発性転移性アンドロゲン非依存性前立腺癌の効果的な治療法は現在存在しない。現在の放射線治療が可能となるような迅速な前立腺癌の可視化および特異的ターゲッティングを可能にする、新規な物質が必要とされている。
【０００３】
Ｎ−アセチル化α−結合酸性ジペプチダーゼ（ＮＡＡＬＡＤａｓｅ）は、グルタメートカルボキシペプチダーゼＩＩ（ＧＣＰＩＩ）とも呼ばれており、神経系内でＮ−アセチルアスパルチル−グルタメート（ＮＡＡＧ）をＮ−アセチルアスパルテートおよびグルタメートに開裂するニューロペプチダーゼの一種であり、後述のようにＮＡＡＬＤａｓｅによって四面体型中間体を介してＮＡＡＧが加水開裂される。この酵素は、活性部位に２つの亜鉛原子を含有するメタロペプチダーゼの共触媒の種類のＩＩ型タンパク質である。
【０００４】
【化１】
0005606737.tif 000002
【０００５】
神経系内でのその特性とは独立に、ＮＡＡＬＡＤａｓｅの一形態が、ヒト前立腺腺癌において多量に発現されることが知られており、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）と呼ばれている。ＮＡＡＬＡＤａｓｅ／ＰＳＭＡ遺伝子は、複数のｍＲＮＡスプライシング型を産生することが知られており、従来の免疫組織化学的証拠に基づいて、ヒトの脳および前立腺が異なるアイソフォームの酵素を発現していると推定されていた。
【０００６】
ヒト前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）は、葉酸ヒドロラーゼＩ（ＦＯＬＨ１）とも呼ばれており、膜貫通型７５０アミノ酸ＩＩ型糖タンパク質の一種であり、正常なヒト前立腺上皮で主として発現されるが、転移性疾患を含む前立腺癌において発現増加する。ＰＳＭＡは、ポリ−γ−グルタミン酸化葉酸に対して反応性を有する独特のエキソペプチダーゼであり、ポリ−γ−グルタミル末端を連続的に除去することができる。ＰＳＭＡは実質的にあらゆる前立腺癌で発現され、その発現は低分化転移性およびホルモン抵抗性癌においてさらに増加するため、前立腺のイメージングおよび治療のための非常に魅力的なターゲットとなる。ＰＳＭＡと相互作用し適切な放射性核種を運ぶリガンドを開発することによって、前立腺癌の検出、治療、および管理のための有望で新規なターゲッティングの選択肢を提供することができる。
【０００７】
抗ＰＳＭＡモノクローナル抗体（ｍＡｂ）７Ｅ１１の放射性免疫複合形態は、ＰＲＯＳＴＡＳＣＩＮＴスキャンとも呼ばれており、現在では前立腺癌の転移および再発の診断に使用されている。種々の第Ｉ相および第ＩＩ相試験で得られた初期の有望な結果から、ＰＳＭＡが治療ターゲットとして使用されてきた。ＰＲＯＳＴＡＳＣＩＮＴは、ＰＳＭＡの細胞内ドメインを標的としており、前立腺腫瘍のほとんどの壊死部分に結合すると考えられている。１４より最近では、ＰＳＭＡの細胞外ドメインに結合するモノクローナル抗体が開発され、放射標識することで、動物のＰＳＭＡ陽性前立腺腫瘍モデルに蓄積することが示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
モノクローナル抗体は腫瘍の検出および治療に有望であり続けているが、固形腫瘍に対する浸透性が低いために、リンパ腫の外部に臨床的成果が限定されている。固形腫瘍に対して高い浸透性を有する低分子量模倣薬は、１ｇ当たりで高いパーセント値および特異的結合の高いパーセント値が得られるという明確な利点を有する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の一態様は、式（Ｉ）の化合物
【００１０】
【化２】
0005606737.tif 000003
【００１１】
（上式中、Ｒは、Ｃ６〜Ｃ１２置換もしくは非置換アリール、Ｃ６〜Ｃ１２置換もしくは非置換ヘテロアリール、Ｃ１〜Ｃ６置換もしくは非置換アルキル、または−ＮＲ’Ｒ’であり、
Ｑは、Ｃ（Ｏ）、Ｏ、ＮＲ’、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｃ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｐであり、
Ｙは、Ｃ（Ｏ）、Ｏ、ＮＲ’、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｃ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｐであり、
Ｚは、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
ｍは、０、１、２、３、４または５であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５または６であり、
ｐは、０、１、２、３、４、５または６であり、
Ｒ’は、Ｈ、Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、Ｃ（Ｏ）２、Ｃ６〜Ｃ１２置換もしくは非置換アリール、Ｃ６〜Ｃ１２置換もしくは非置換ヘテロアリールまたはＣ１〜Ｃ６置換もしくは非置換アルキルであり、
置換されている場合のアリール、ヘテロアリールおよびアルキルは、ハロゲン、Ｃ６〜Ｃ１２ヘテロアリール、−ＮＲ’Ｒ’またはＣＯＯＺで置換されており、
さらに、
（ｉ）ＲもしくはＲ’の少なくとも１つが、ハロゲンで置換されたＣ６〜Ｃ１２アリールもしくはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリールであり、または、
（ｉｉ）ＲもしくはＲ’の少なくとも１つが、Ｃ６〜Ｃ１２ヘテロアリールである。）
または式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される塩に関する。
【００１２】
本発明の別の一態様は、式（Ｉａ）の化合物
【００１３】
【化３】
0005606737.tif 000004
【００１４】
（上式中、Ｒは、Ｃ６〜Ｃ１２置換もしくは非置換アリール、Ｃ６〜Ｃ１２置換もしくは非置換ヘテロアリール、Ｃ１〜Ｃ６置換もしくは非置換アルキル、または−ＮＲ’Ｒ’であり、
Ｑは、Ｃ（Ｏ）、Ｏ、ＮＲ’、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｃ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｐであり、
Ｙは、Ｃ（Ｏ）、Ｏ、ＮＲ’、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、Ｃ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｐであり、
Ｚは、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
ｍは、０、１、２、３、４、または５であり、
ｎは、０、１、２、３、４、５、または６であり、
ｎ’は、０、１、２、３、４、５、または６であり、
ｐは、０、１、２、３、４、５、または６であり、
Ｒ’は、Ｈ、Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、Ｃ（Ｏ）２、Ｃ６〜Ｃ１２置換もしくは非置換アリール、Ｃ６〜Ｃ１２置換もしくは非置換ヘテロアリール、またはＣ１〜Ｃ６置換もしくは非置換アルキルであり、
置換されている場合のアリール、ヘテロアリール、およびアルキルは、ハロゲン、Ｃ６〜Ｃ１２ヘテロアリール、−ＮＲ’Ｒ’、またはＣＯＯＺで置換されており、
さらに、
（ｉ）ＲもしくはＲ’の少なくとも１つが、少なくとも１つのハロゲンで置換されたＣ６〜Ｃ１２アリールもしくはＣ６〜Ｃ１２ヘテロアリール、または
（ｉｉ）ＲもしくはＲ’の少なくとも１つが、置換もしくは非置換Ｃ６〜Ｃ１２ヘテロアリールである。）
または式（Ｉａ）の化合物の医薬的に許容される塩に関する。
【００１５】
式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、または（ＩＩａ）の化合物の好ましい一実施形態においては、ｎは０または１であり、ｎ’は０または１である。
【００１６】
本発明は、グルタメート−尿素−リジンＰＳＭＡ結合部分、ならびにそれらの診断および治療的処置における使用にも関する。一実施形態においては、本明細書に記載の尿素系類似体は、α−ＮＨ２またはβ−ＮＨ２基を介して結合したグルタメート−尿素−αまたはβ−アミノ酸ヘテロダイマーである。炭素またはヘテロ原子結合を介してＸアミノ酸側鎖に結合した種々の補欠分子族を介して、構造中に放射線標識を組み込むことができる。本発明の化合物は、前立腺癌およびＮＡＡＬＡＤａｓｅ阻害に関連する他の疾患の治療および管理のための標的薬剤、ならびに診断薬および治療薬として用途を見いだすことができる。
【００１７】
適切な化学的部分、化学的部分の定義、賦形剤、ならびに投与方法および方式は、米国特許出願公開第２００４／００５４１９０号明細書および米国特許出願公開第２００４／０００２４７８号明細書、ならびに国際公開第０２／２２６２７号パンフレットおよび国際公開第０３／０６０５２３号パンフレットに見ることができ、これらの記載内容全体が参照として本明細書に援用される。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】（ａ）はＴＣ−９９ｍ−ｇｌｕ−尿素−ＤｐＫ（Ｔｃ−９９ｍ−ＭＩＰ  １００８）の、（ｂ）はレニウム類似体の、（ｃ）はレニウムジエステル錯体の、同時注入のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図２】（ａ）はＰＢＳｐＨ７．２中、（ｂ）はＰＢＳ中０．１Ｍのシステイン中、（ｃ）はＰＢＳ中０．１ＭのＤＴＰＡ中、（ｄ）はＰＢＳ中５％マウス血清中、３７℃で６時間におけるＧｌｕ−尿素−ＤｐＫ（Ｔｃ−９９ｍ−ＭＩＰ  １００８）のＴｃ−９９ｍ錯体の安定性を示している。
【図３】（ａ）は、Ｎ−［Ｎ−［（Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］カルバモイル］−Ｓ−３−ヨード−Ｌ−チロシン（Ｉ−１３１  ＤＣＩＴ）の粗反応物のＨＰＬＣクロマトグラムである（上段）。（ｂ）は、２時間において精製したＮ−［Ｎ−［（Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］カルバモイル］−Ｓ−３−ヨード−Ｌ−チロシン（Ｉ−１３１  ＤＣＩＴ）のＨＰＬＣクロマトグラムである（中段）。（ｃ）は、２日において精製したＮ−［Ｎ−［（Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］カルバモイル］−Ｓ−３−ヨード−Ｌ−チロシン（Ｉ−１３１  ＤＣＩＴ）のＨＰＬＣクロマトグラムである（下段）。
【図４】（ａ）はＤＭＳＯ中、（ｂ）は３％ゲンスチセート（ｇｅｎｓｔｉｓａｔｅ）−６％アスコルベート／アスコルビン酸中、（ｃ）はＰＢＳ（ｐＨ＝７．２）中、（ｄ）は食塩水中１０％エタノール中、３７℃で３日で精製したＩ−１３１  ＭＩＰ  １０７２のラジオ−ＨＰＬＣクロマトグラムである。示されているように、Ｉ−１３１−１０７２（ピーク１２分）は実験全体で依然として安定していた。
【図５】Ｉ−１２３  ＤＣＩＴがＬｎＣａｐ細胞には特異的に結合しＰＣ３細胞には特異的に結合しないこと（左の組）を示しており、このことが、ＬｎＣａｐ細胞中の非放射線標識化合物（中央の組）またはＰＭＰＡ（右の組）により置換可能な計数より明らかとなっている。このヒストグラムは、平均±ＳＥＭを示しており、各実験は２回繰り返して行った。
【図６】非放射性２−｛３−［１−カルボキシ−２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸（ＤＣＴ）を使用したＰＳＭＡ細胞結合アッセイにおけるスキャッチャード（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ）解析である。
【図７】ＰＳＭＡ陽性ＬＮＣａＰ細胞中の選択された化合物の生物学的評価を示している。
【図８】ＰＳＭＡ陽性ＬＮＣａＰ細胞中のリード化合物の生物学的評価を示している。
【図９】ＭＩＰ１０７２を使用したＰＳＭＡ細胞結合アッセイにおけるスキャッチャード解析を示している。
【図１０】Ｉ−１３１−ＭＩＰ１０７２の内部移行を示している。
【図１１】（ａ）は、ラットミクロソーム中６０分におけるＩ−１３１  ＭＩＰ−１０７２バーシス（ｖｅｒｓｅｓ）フェナセチンの安定性を示している。（ｂ）は、ラットミクロソーム中６０分におけるＩ−１３１  ＭＩＰ−１０７２バーシス（ｖｅｒｓｅｓ）ＤＣＴおよびフェナセチンの安定性を示している。
【図１２】異種移植片腫瘍マウス中のＩ−１３１  ＭＩＰ１０７２の組織生体内分布を示している。
【図１３】ＬＮＣａＰ細胞溶解物からのＮＡＡＬＡＤａｓｅ活性の阻害を示している。
【図１４】ＬＮＣａＰ細胞溶解物からのＮＡＡＬＡＤａｓｅ活性の阻害を示している。
【図１５】ＬＮＣａＰ細胞溶解物からのＮＡＡＬＡＤａｓｅ活性の阻害を示している。
【図１６】ＬＮＣａＰ細胞上のＰＳＭＡへの公知のＮＡＡＬＡＤａｓｅ阻害剤１３１Ｉ−ＤＣＩＴの結合を阻害する、試験化合物の能力を試験したものを示している。細胞は、種々の濃度の試験化合物および１３１Ｉ−ＤＣＩＴとともに１時間インキュベートした後、洗浄し、計数してＩＣ５０値を求めた。
【図１７】ＭＩＰ−１０７２の直接結合分析である。１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２（３ｎＭ、＞１，０００ｍＣｉ／μｍｏｌ）を、ＰＳＭＡ陽性ＬＮＣａＰ細胞またはＰＳＭＡ陰性ＰＣ３細胞（３００，０００細胞／ウェル）とともに、非放射性の１０μＭのＭＩＰ−１０７２または１０μＭの特異的ＰＳＭＡ阻害剤（ＰＭＰＡ）いずれかの存在下および非存在下の両方でインキュベートした。
【図１８】ＬＮＣａＰ細胞中の１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２の飽和結合分析を示している。
【図１９】１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２の内部移行を示している。
【図２０】ＬＮＣａＰ異種移植片を有するマウスにおける１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２の取り込みを示している。１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２（２μＣｉ／マウス、＞１，０００ｍＣｉ／μｍｏｌ）の組織生体内分布を、ＬＮＣａＰ（ＰＳＭＡ陽性）腫瘍を有するヌードマウスからの選択された組織において評価した。結果は、選択した組織１ｇ当たりの注入量の％（％ＩＤ／ｇ）として表している。
【図２１】ＬＮＣａＰおよびＰＣ３異種移植片を有するマウスにおける１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２の取り込みを示す。５０ｍｇ／ｋｇＰＭＰＡによる予備処置を行った（遮断）または行わなかった（正常）、ＬＮＣａＰ（ＰＳＭＡ陽性）およびＰＣ３（ＰＳＭＡ陰性）腫瘍を有するヌードマウスからの選択された組織において、１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２（２μＣｉ／マウス、＞１，０００ｍＣｉ／μｍｏｌ）の組織生体内分布を評価した。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
定義
「医薬的に許容される塩」は、遊離塩基の生物学的な有効性および性質を維持し、無機酸、たとえば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などとの反応によって得られる塩を意味する。
【００２０】
「アルキル」は、直鎖、分岐、または環状の飽和脂肪族炭化水素を意味する。典型的なアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、第３級ブチル、ペンチル、ヘキシルなどが挙げられる。アルキル基は、ヒドロキシル、シアノ、またはアルコキシからなる群より選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよい。アルキル基がＲ’置換基である場合、これは１〜６個の炭素、より好ましくは１〜４個の炭素の低級アルキル基である。
【００２１】
「アリール」は、共役π電子系を有する少なくとも１つの環を有する芳香族基を意味し、このようなものとしては炭素環式アリール基、複素環式アリール基、およびビアリール基が挙げられる。アリール基は、ハロゲン、トリハロメチル、ヒドロキシル、ＳＨ、ＯＨ、ＮＯ２、アミン、チオエーテル、シアノ、アルコキシ、アルキル、およびアミノからなる群より選択される１つ以上の置換基で場合により置換されていてもよい。アリール基の例としては、フェニル基、ナプチル（ｎａｐｔｈｙｌ）基、およびアントラシル基が挙げられる。フェニル基および置換フェニル基が好ましい。「ヘテロアリール」は、１〜３個のヘテロ原子を環原子として有し、残りの環原子が炭素であるアリール基を意味する。ヘテロ原子としては、酸素、硫黄、および窒素が挙げられる。たとえば、複素環式アリール基としては、フラニル、チエニル、ピリジル、ピロリル、Ｎ−低級アルキルピロロ、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリルなどが挙げられる。
【００２２】
合成
特に明記しない限り、すべての反応はアルゴン雰囲気下の乾燥ガラス器具中で行った。反応物は、ＢｉｏｔａｇｅＳＰ４を使用した中圧下のカラムクロマトグラフィーによって、または分取高圧液体クロマトグラフィーによって精製した。
【００２３】
１Ｈ  ＮＭＲをＢｒｕｋｅｒ４００ＭＨｚ測定器上で記録した。スペクトルは、ｐｐｍδとして報告し、ＣＤＣｌ３、ＤＭＳＯ−ｄ６、またはメタノール−ｄ４中の溶媒共鳴を基準としている。すべての溶媒は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈより購入した。試薬は、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｃｈｅｍ、Ａｋａａｌ、Ｆｉｓｈｅｒ、Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ、Ａｃｒｏｓ、およびＡｎａｓｐｅｃより購入した。以下の略語を使用している。塩化メチレン（ＤＣＭ）、酢酸エチル（ＥＡ）、ヘキサン（Ｈｅｘ）、ジクロロエタン（ＤＣＥ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、トリフルオロメタンスルホン酸メチル（ＭｅＯＴｆ）、（Ｓ）−２−アミノ−６−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−ヘキサン酸（ｄｐＫ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）。
【００２４】
中間体の合成
以下の化合物のすべては、スキーム１に示す経路に従って、２０〜４０％の範囲の全収率で調製した。第１のステップは、０℃不活性条件下で行い、グルタミン酸のジ−ｔ−ブチルエステルをＣＤＩと共に塩基の存在下で使用して中間体のＧｌｕ−尿素−イミダゾール誘導体２を形成した。この中間体は、塩基性条件下でＭｅＯＴｆを使用して活性化させると、メチル化イミダゾール３が得られ、これは不活性条件下で容易にアミンと反応した。ＤＣＭ中２０％ＴＦＡを室温で１〜４時間使用して第３級ブチルエステル保護基を除去した。脱保護の終了後、反応物をロータリーエバポレーター上で濃縮するか、または窒素を吹き付けて乾燥させ、シリカカラム上での精製または再結晶を行った。最終生成物についてインビトロおよびインビボで試験を行った。
【００２５】
【化４】
0005606737.tif 000005
【００２６】
Ｌ−（Ｓ）−２−［（イミダゾール−１−カルボニル）−アミノ］−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２）
０℃に冷却したグルタメートジ−ｔ−ブチル塩酸塩（１５．０ｇ、５１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５０ｍＬ）中の懸濁液に、ＴＥＡ（１８ｍＬ）およびＤＭＡＰ（２５０ｍｇ）を加えた。５分間撹拌した後、ＣＤＩ（９．０ｇ、５６ｍｍｏｌ）を加え、その反応物を室温に温めながら終夜撹拌した。反応物をＤＣＭ（１５０ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム（６０ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）、およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。その有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮すると、粗生成物が半固体として得られ、これを静置するとゆっくりと固化した。ヘキサン／酢酸エチルを使用してこの粗材料を粉砕すると白色固体が得られ、これを濾過し、ヘキサン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて所望の生成物（１５．９ｇ、４５ｍｍｏｌ、８８％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．６３（ｓ，１Ｈ）、７．００（ｂｒ，２Ｈ）、６．３１（ｄ，１Ｈ）、４．０２（ｍ，１Ｈ）、２．１９（ｍ，２Ｈ）、１．８６（ｍ，１Ｈ）、１．６７（ｍ，１Ｈ）、１．３９（ｓ，９Ｈ）、１．３８（ｓ，９Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：３５４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００２７】
【化５】
0005606737.tif 000006
【００２８】
あるいは、トリホスゲンを使用してその場で生成したイソシアネートを介して類似体を調製することができる。この方法は、以下のスキーム２に示すような、グルタメート残基の活性化およびリジン残基との結合によって（経路Ａ）、またはリジン残基の活性化およびそれとグルタメートとの結合によって（経路Ｂ）のいずれかで行うことができる。
【００２９】
【化６】
0005606737.tif 000007
【００３０】
Ｌ−（Ｓ，Ｓ）−２−［３−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ペンチル−ウレイド）−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３）
経路Ａ．丸底フラスコ中で、１．８ｍＬのＴＥＡ（１３．２ｍｍｏｌ）を、２０ｍＬのＤＣＭ中の１．８ｇ（６ｍｍｏｌ）のＬ−グルタミン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル塩酸塩と混合した。この溶液を、１０ｍＬのＤＣＭとトリホスゲン（０．７ｇ、２．２ｍｍｏｌ）との０℃の溶液に４５分かけて滴下する。さらに３０分間撹拌した後、１５ｍＬのＤＣＭ中にＴＥＡ（１．８ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）を含有するＨ−ｌｙｓ−（Ｚ）−Ｏ−ｔ−ブチルエステルＨＣｌ（２．２ｇ、６ｍｍｏｌ）の溶液を一度に加えた。この溶液を１時間撹拌した。反応物を濃縮し、５０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、２ＮのＮａＨＳＯ４（２×５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、黄色油を得た。
カラムクロマトグラフィーによって精製すると所望の生成物が透明油として得られ、これを静置すると固化して白色固体（１．９ｇ、５４％）となる。
【００３１】
経路Ｂ．丸底フラスコ中で、トリホスゲン（２．９ｇ、１０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）中に懸濁させ、０℃で撹拌する。Ｈ−リジン（Ｚ）遊離塩基（９．１ｇ、２７ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１０．４ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）ＤＣＭ（５０ｍＬ）の溶液を上記トリホスゲン溶液に２．５時間かけて滴下した。２．５時間後、ＤＩＥＡ（１０．４ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）ＤＣＭ（５０ｍＬ）を含有するＬ−グルタミン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル塩酸塩（８ｇ、２７ｍｍｏｌ）の溶液を一度に加え、４５分間撹拌した。この反応物を濃縮乾固させ、１５０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、２ＮのＮａＨＳＯ４（２×２００ｍＬ）、ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、黄色油を得た。この油をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２）によって精製すると、所望の生成物が透明油として得られ、これを静置すると固化して白色固体（１２．０ｇ、７２％）となった。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．３４（ｍ，５Ｈ）、５．３３〜５．２８（ｍ，３Ｈ）、５．０８（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、４．３８〜４．２９（ｍ，２Ｈ）、３．１５（ｍ，２Ｈ）、２．３２〜２．０１（ｍ，２Ｈ）、１．９０〜１．５０（ｍ，８Ｈ）、１．４３〜１．４０（ｍ，２７Ｈ，ｔ−Ｂｕ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：６２２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３２】
【化７】
0005606737.tif 000008
【００３３】
２−［３−（５−アミノ−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４）
２−［３−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（６３０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のエタノール（２０ｍＬ）中の溶液にギ酸アンモニウム（６３０ｍｇ、１０当量）を加え、続いて１０％Ｐｄ−Ｃを加え、得られた懸濁液を、完了するまでときどき撹拌しながら終夜静置した。反応物をセライトで濾過し、濃縮して、所望の生成物（４７９ｍｇ、９８％）を蝋状固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．１５〜６．０（ｂｍ，４Ｈ，ＮＨ）、４．２９（ｍ，２Ｈ）、３．０２（ｍ，２Ｈ）、２．３３（ｍ，２Ｈ）、２．０６〜１．４７（ｍ，８Ｈ）、１．４５〜１．４０（ｍ，２７Ｈ，ｔ−Ｂｕ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：４８８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３４】
【化８】
0005606737.tif 000009
【００３５】
Ｇｌｕ−尿素−Ｇｌｕテザーコアモデル化合物の合成
このシリーズでは、共役して尿素ダイマーを形成する前に、グルタミン酸またはリジンの側鎖上にテザーを組み込む。以下の例では、グルタミン酸の１つの側鎖カルボン酸が、放射性核種であるか、または放射性核種を含有するキレーター、原子、または官能基を取り付けるためのテザーに変更される（スキーム４）。
【００３６】
【化９】
0005606737.tif 000010
【００３７】
２−｛３−［３−（４−アミノ−ブチルカルバモイル）−１−メトキシカルボニル−プロピル］−ウレイド｝−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２８）
０℃に冷却したＮ−ＢＯＣグルタミン酸α−メチルエステルＢＯＣ−Ｇｌｕ（ＯＨ）−Ｏｍｅ（９６０ｍｇ、３．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６ｍＬ）中の溶液に、ＥＤＣ（８４５ｍｇ、１．３当量）およびＴＥＡ（１．３ｍＬ）を加えた。１０分間撹拌した後、モノ保護化ジアミンＮ−ＣＢＺ−１，４−ジアミノブタン塩酸塩（１ｇ、３．８ｍｍｏｌ）を加え、その反応物を室温まで温めながら終夜撹拌する。得られた粗反応物をＥＡ（１００ｍＬ）で希釈し、水（３０ｍＬ）、５％クエン酸水溶液（３０ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム（３０ｍＬ）、水（３０ｍＬ）、およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。その有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮して、粗生成物を濃厚シロップ（２．１ｇ）として得た。得られたシロップにジオキサン（１０ｍＬ）中４ＮのＨＣｌを加え、反応物を室温で３時間撹拌した。濃縮して塩酸塩としての蝋状固体（１．８ｇ）を得た。この塩を、先行する実験の項で説明した活性化Ｌ−（Ｓ）−２−［（イミダゾール−１−カルボニル）−アミノ］−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２）と結合させて、所望の完全に保護されたダイマーｘ（１．９ｇ）を得た。この材料を無水ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中に懸濁させ、過剰ギ酸アンモニウム（５ｇ）を加え、続いて炭素上に担持された２０％Ｐｄ（ＯＨ）２（１００ｍｇ）を加え、得られた懸濁液を非常に穏やかに終夜撹拌して、ＣＢＺ保護基を開裂させた。セライトで濾過し、濃縮して、所望の遊離アミン（１．４ｇ、２．７ｍｍｏｌ、７３％、４段階）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．４１（ｂｒ，２Ｈ）、７．３６  ９ｂｒ，１Ｈ）、６．４４（ｂｓ，１Ｈ）、６．３７（ｂｓ，１Ｈ）、４．３７〜４．２９（ｍ，２Ｈ）、３．７１（ｓ，３Ｈ）、３．２０〜１．５０（ｍ，１６Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）、１．４３（ｓ，９Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：５１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３８】
【化１０】
0005606737.tif 000011
【００３９】
Ｒｅ（ＣＯ）３−２−（３−｛３−［４−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−ブチルカルバモイル］−１−カルボキシ−プロピル｝−ウレイド）−ペンタン二酸［Ｂｒ］（２９）（ＭＩＰ−１１００）
ピリジン−２−カルボキシアルデヒドを使用して前述のように還元的アミノ化を行うことによって保護された中間体を調製した。ＭｅＯＨ中の２ＭのＬｉＯＨで処理することで、メチルエステルを加水分解した。メタノールを除去し、過剰のＤＣＭ：ＴＦＡ（１：１）を加え、その反応物を室温において終夜撹拌した。得られた粗材料を、前述の手順に従って所望のレニウム結合体に変換した。分取ＨＰＬＣによって所望の分子（９．５ｍｇ、１６％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．７８（ｍ，２Ｈ）、８．３１（ｂｒ，１Ｈ）、７．９５（ｍ，２Ｈ）、７．５９（ｍ，２Ｈ）、７．３９（ｍ，２Ｈ）、６．６０〜６．３３（ｍ，２Ｈ）、４．８９（ｍ，４Ｈ）、４．００（ｍ，１Ｈ）、３．７６（ｍ，１Ｈ）、３．２０〜１．２（ｍ，１６Ｈ）（３ＣＯ２Ｈは見られず）。ＥＳＭＳ  ８４２（Ｍ−Ｈ）＋。
【００４０】
【化１１】
0005606737.tif 000012
【００４１】
Ｇｌｕ−尿素−Ｘ−ベンジル−リジンコアモデル化合物の合成
以下の化合物はすべて、スキーム３に示す経路を使用して２０〜４０％の範囲の全収率で調製した。Ｚ−脱保護化Ｇｌｕ−尿素−リジンを適切なアルデヒド（０．９当量）と室温で１時間混合して、チフ塩基（ｃｈｉｆｆ  ｂａｓｅ）中間体を形成した。このチフ塩基を、１当量のトリアセトキシホウ水素化ナトリウムを使用して還元した。ＤＣＭ中５０％のＴＦＡを室温で１時間使用して、この化合物を脱保護した。完了後、反応物をロータリーエバポレーター上で濃縮するか、または窒素を吹き付けて乾燥させ、塩化メチレンおよび水を使用して抽出した。その水層を蒸発乾固させて、脱保護された生成物を４０〜８０％の収率で得た。
【００４２】
【化１２】
0005606737.tif 000013
【００４３】
４−トリメチルスタンナニル−ベンズアルデヒド（５）
４−ヨードベンズアルデヒド（１．９２ｇ、８．２７ｍｍｏｌ）の乾燥ジオキサン（６０ｍＬ）中の溶液に、ヘキサメチルジスズ（４．１ｍＬ、１９．８ｍｍｏｌ）を加え、続いてＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）Ｃｌ２（１５０ｍｇ）を加え、得られた反応混合物を、反応が完了したと判断されるまで３時間加熱還流した。得られた反応物をセライトで濾過し、ヘキサン／酢酸エチル（９／１）を溶離剤として使用してカラムクロマトグラフィーによって精製して（２．２４ｇ、９８％）を透明油として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．９７（ｓ，１Ｈ）、７．８１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．７２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ）、０．２９（ｓ，９Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：２６８（Ｓｎ−クラスター）。
【００４４】
【化１３】
0005606737.tif 000014
【００４５】
２−｛３−［１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−（４−トリメチルスタンナニル−ベンジルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（６）
２−［３−（５−アミノ−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１５０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）のＤＣＥ（１０ｍＬ）中の溶液に、４−トリメチルスタンナニル−ベンズアルデヒド（８２ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を加え、続いてトリアセトキシホウ水素化ナトリウム（９８ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を加え、その反応物を４０℃で終夜撹拌した。反応物を濃縮し、ヘキサン／酢酸エチルを溶離剤として使用してカラムクロマトグラフィーによって精製すると、所望の生成物（８８ｍｇ、３８％）が濃厚シロップとして得られ、これは静置すると固化し始める。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．４８（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、７．３０（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、６．２７（ｍ，２Ｈ，ＮＨ）、３．９６（ｍ，４Ｈ）、２．７４（ｂｍ，２Ｈ）、２．２１（ｍ，２Ｈ）、１．８７（ｍ，２Ｈ）、１．６５〜１．１９（ｍ，７Ｈ）、１．３５（ｍ，２７Ｈ，ｔ−Ｂｕ）、０．２３（ｓ，９Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：７４２（Ｓｎ−クラスター）。
【００４６】
【化１４】
0005606737.tif 000015
【００４７】
（Ｓ，Ｓ）−２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸（７）（ＭＩＰ  １０３３）
スキーム１に示すものと同じ実験手順によって、８％の２−［３−（５−ベンジルオキシカルボニルアミノ−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護し、ＨＰＬＣによって精製して所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｚ−保護アミンのトリ−ｔ−ブチルエステル）（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１２．２（ｓ，３Ｈ）、６．４（ｓ，２Ｈ）、４．１５（ｍ，２Ｈ）、３．４５（ｍ，１Ｈ）、２．７５（ｂｓ，１Ｈ）、２．２（ｍ，４Ｈ）、１．９０（ｍ，２Ｈ）、１．６５（ｍ，２Ｈ）、１．５０（ｓ，２Ｈ）、１．３５（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：６２２（Ｍ−Ｈ）＋。
【００４８】
【化１５】
0005606737.tif 000016
【００４９】
（Ｓ）−２−（３，３−ビス−ピリジン−２−イルメチル−ウレイド）−ペンタン二酸（８）（ＭＩＰ  １０２５）
一般的合成と同じ実験手順によって、０．６５ｇ、４８％の２−（３，３−ビス−ピリジン−２−イルメチル−ウレイド）−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護し、ＨＰＬＣによって精製して所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ、１２．０（ｂｓ，２Ｈ）、８．６８（ｄ，２Ｈ）、８．００（ｍ，２Ｈ）、７．４１（ｄ，４Ｈ）、７．１４（ｄ，１Ｈ）、４．７３（ｄ，４Ｈ）、３．９６（ｓ，１Ｈ）、２．１８（ｍ，２Ｈ），１．８０（ｍ，２Ｈ）。
【００５０】
【化１６】
0005606737.tif 000017
【００５１】
（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［３−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−１−カルボキシ−プロピル］−ウレイド｝−ペンタン二酸（９）（ＭＩＰ  １０２８）
スキーム１中の一般的合成と同じ実験手順によって、０．１６ｇ、３５％の２−｛３−［３−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−１−カルボキシ−プロピル］−ウレイド｝−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護し、ＨＰＬＣによって精製して所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．４（ｂｒ，２Ｈ）、９．３７（ｓ，１Ｈ）、８．５２（ｄ，２Ｈ）、７．８０（ｔ，２Ｈ）、７．１４（ｄｄ，４Ｈ）、６．４５（ｍ，２Ｈ）、４．４９（ｂｒ，４Ｈ）、４．１２（ｓ，１Ｈ）、４．０５（ｓ，１Ｈ）、３．２１（ｍ，２Ｈ）、２．２４（ｍ，２Ｈ）、１．８０（ｍ，２Ｈ）、１．４０（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：（ジエチルエステル）４２９（Ｍ）＋、４５１（Ｍ＋Ｎａ）。
【００５２】
【化１７】
0005606737.tif 000018
【００５３】
（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［５−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−１−カルボキシ−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸（１０）（ＭＩＰ  １００８）
一般的合成と同じ実験手順によって、０．０９ｇ、１２％の２−｛３−［５−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−１−カルボキシ−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護し、ＨＰＬＣによって精製して所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．７（ｓ，２Ｈ）、８．９７（ｓ，１Ｈ）、８．６５（ｄｄ，２Ｈ）、７．９１（ｄｄ，２Ｈ）、７．４５（ｍ，４Ｈ）、６．４４（ｄ，１Ｈ）、６．２８（ｄ，１Ｈ）、４．４５（ｂｒ，４Ｈ）、４．１０（ｍ，２Ｈ）、３．１５（ｂｒ，２Ｈ）、２．６０（ｍ，２Ｈ）、２．２５（ｍ，２Ｈ）、１．９０（ｍ，２Ｈ）、１．７８（ｍ，２Ｈ）、１．４５（ｍ，２Ｈ）。
【００５４】
【化１８】
0005606737.tif 000019
【００５５】
（Ｓ）−２−｛３−［１−カルボキシ−２−（４−ヨード−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸（１１）（ＭＩＰ−１０３４）
一般的合成と同じ実験手順によって、０．０３８ｇ、５％の２−｛３−［１−カルボキシ−２−（４−ヨード−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．４０（ｓ，３Ｈ）、７．６５（ｄｄ，２Ｈ）、７．０５（ｄｄ，２Ｈ）、６．３０（ｍ，２Ｈ）、４．２５（ｓ，１Ｈ）、４．０５（ｓ，１Ｈ）、２．９０（ｍ，２Ｈ）、２．２（ｍ，２Ｈ）、１．８０（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：４２９（Ｍ）＋、４５１（Ｍ＋Ｎａ）。
【００５６】
【化１９】
0005606737.tif 000020
【００５７】
（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［１−カルボキシ−５−（２−ヨード−ベンジルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸（１２）（ＭＩＰ  １０３５）
同じ一般手順、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護した（５．５ｍｇ、６６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．４（ｓ，３Ｈ）、８．８（ｓ，１Ｈ）、７．９４（ｍ，１Ｈ）、７．５（ｍ，１Ｈ）、７．１６（ｔ，１Ｈ）、６．３８（ｍ，２Ｈ）、４．１５（ｍ，５Ｈ）、３．０６（ｓ，２Ｈ）、２．８５（ｓ，１Ｈ）、２．２（ｍ，２Ｈ）、１．９０（ｍ，１Ｈ）、１．７０（ｍ，２Ｈ）、１．５０（ｓ，２Ｈ）、１．３５（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：５３６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５８】
【化２０】
0005606737.tif 000021
【００５９】
（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［１−カルボキシ−５−（３−ヨード−ベンジルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタンジオイック（１３）（ＭＩＰ  １０８９）
同じ一般手順、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジ−ｔ−ブチルエステルを使用。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護した（４．１ｍｇ、５３％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．４（ｓ，３Ｈ）、８．７（ｓ，２Ｈ）、７．９（ｓ，１Ｈ）、７．８（ｄ，１Ｈ）、７．４４（ｄ，１Ｈ）、７．２２（ｔ，１Ｈ）、６．２５（ｓ，２Ｈ）、４．０９（ｍ，５Ｈ）、２．８９（ｓ，１Ｈ）、２．７５（ｓ，１Ｈ）、２．２（ｄ，２Ｈ）、１．９０（ｍ，２Ｈ）、１．６５（ｍ，２Ｈ）、１．４０（ｍ，２Ｈ）。
【００６０】
【化２１】
0005606737.tif 000022
【００６１】
（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［１−カルボキシ−５−（４−ヨード−ベンジルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタンジオイック（１４）（ＭＩＰ  １０７２）
同じ一般手順、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護した（１２ｍｇ、６６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．４（ｂｓ，３Ｈ）、８．８（ｂｒ，１Ｈ）、７．８（ｄ，２Ｈ）、７．２７（ｄ，２Ｈ）、６．３５（ｂｒ，２Ｈ）、４．１（ｍ，４Ｈ）、２．８９（ｍ，２Ｈ）、２．２（ｄ，２Ｈ）、１．９０（ｍ，２Ｈ）、１．６５（ｍ，４Ｈ）、１．３５（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：５３６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６２】
【化２２】
0005606737.tif 000023
【００６３】
（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［１−カルボキシ−５−（４−フルオロ−ベンジルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタンジオイック（１５）（ＭＩＰ  １０９０）
同じ一般手順、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．４（ｂｒ，３Ｈ）、８．７（ｂｒ，１Ｈ）、７．５（ｍ，２Ｈ）、７．３（ｍ，２Ｈ）、６．３５（ｍ，２Ｈ）、４．１（ｍ，４Ｈ）、２．９（ｍ，２Ｈ）、２．２（ｄ，２Ｈ）、１．９０（ｍ，２Ｈ）、１．６０（ｍ，４Ｈ）、１．３５（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：４２８（Ｍ＋Ｈ）＋、４５０（Ｍ＋Ｎａ）。
【００６４】
【化２３】
0005606737.tif 000024
【００６５】
（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［１−カルボキシ−５−（４−ブロモ−ベンジルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタンジオイック（１６）（ＭＩＰ  １０９４）
同じ一般手順、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用。１Ｈ  ＮＭＲ（トリｔ−ブチルエステル）（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．５２（ｄ，２Ｈ）、７．３２（ｄ，２Ｈ）、６．２８（ｍ，２Ｈ）、３．９８（ｍ，２Ｈ）、２．５５（ｔ，２Ｈ）、２．４８（ｔ，２Ｈ）、２．２２（ｍ，２Ｈ）、１．８５（ｍ，２Ｈ）、１．６２（ｍ，２Ｈ）、１．４５（ｍ，２Ｈ）、１．３７（ｓ，２７Ｈ）、１．２８（ｍ，２Ｈ）ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：６４２（Ｍ＋Ｈ）＋。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護した。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：４７４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６６】
【化２４】
0005606737.tif 000025
【００６７】
（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［１−カルボキシ−５−（４−ヨード−ベンゾイルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸（１７）（ＭＩＰ  １０４４）
同じ一般手順、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．４（ｓ，３Ｈ）、８．４５（ｓ，１Ｈ）、７．８（ｄｄ，２Ｈ）、７．６（ｄｄ，２Ｈ）、６．３（ｓ，２Ｈ）、５．７５（ｓ，１Ｈ）、４．１（ｍ，４Ｈ）、３．２（ｓ，２Ｈ）、２．２５（ｄ，２Ｈ）、１．９０（ｍ，１Ｈ）、１．６５（ｍ，２Ｈ）、１．４（ｍ，２Ｈ）。
【００６８】
【化２５】
0005606737.tif 000026
【００６９】
２−｛３−［１−カルボキシ−５−（４−ヨード−ベンゼンスルホニルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸（１８）（ＭＩＰ  １０９７）
丸底フラスコ中で、２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステル（３００ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を水（１０ｍＬ）および１，４ジオキサン（１０ｍＬ）中に懸濁させ、ＴＥＡ（１．７５ｍＬ、１．２５ｍｍｏｌ）を加え、次に４−ヨード−ベンゼンスルホニルクロライドを加え、その混合物を５０℃で終夜撹拌した。その反応混合物を蒸発乾固させて、ＤＣＭ中に溶解させ、シリカゲル上でクロマトグラフィーを行うことで、所望の生成物（３７５ｍｇ、８０％）を透明油として得た。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護し、続いてＨＰＬＣ精製を行って、所望の生成物ＭＩＰ−１０９７をより白い固体として得た（２７０ｇ、収率９０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．９７（ｄ，２Ｈ）、７．６８（ｔ，１Ｈ）、７．５３（ｄ，２Ｈ）、６．３５（ｄｄ，２Ｈ）、４．１０（ｍ，１Ｈ）、４．００（ｍ，１Ｈ）、２．６５（ｍ，２Ｈ）、２．２２（ｍ，２Ｈ）、１．９（ｍ，１Ｈ）、１．７（ｍ，１Ｈ）、１．５５（ｍ，１Ｈ）、１．４５（ｍ，１Ｈ）、１．３５（ｍ，２Ｈ）、１．２５（ｍ，２Ｈ）、（３ＣＯ２Ｈは見られず）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：５６５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７０】
【化２６】
0005606737.tif 000027
【００７１】
２−（３−｛１−カルボキシ−５−［３−（４−ヨード−フェニル）−ウレイド］−ペンチル｝−ウレイド）−ペンタン二酸（１９）（ＭＩＰ  １０９５）
丸底フラスコ中で、４−ヨード−イソシアン酸フェニル（１００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を、ＴＥＡ（０．０５７ｍＬ、０．４ｍｍｏｌ）を含有するＤＣＭ（１０ｍＬ）中に溶解させる。２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステル（２００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を加え、３時間撹拌した。反応混合物を蒸発乾固させ、得られた粗混合物をメタノール（５ｍＬ）中に溶解させた。水（２０ｍＬ）へ滴下すると、白色沈殿物が得られ、これを回収し、水（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させると、所望のトリ−ｔｅｒｔブチルエステルが白色固体として得られ、これを前述の方法で直接脱保護して、所望の生成物（１５８ｍｇ、５３％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．５１（ｓ，１Ｈ）、７．５（ｄ，２Ｈ）、７．２２（ｄ，２Ｈ）、６．３（ｔ，２Ｈ）、６．１６（ｔ，１Ｈ）、４．０５（ｍ，２Ｈ）、３．０５（ｍ，２Ｈ）、２．２４（ｍ，２Ｈ）、１．９（ｍ，１Ｈ）、１．６８（ｍ，２Ｈ）、１．５２（ｍ，１Ｈ）、１．３８（ｍ，２Ｈ）、１．２８（ｍ，２Ｈ）、（３ＣＯ２Ｈは見られず）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：５６５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７２】
【化２７】
0005606737.tif 000028
【００７３】
Ｇｌｕ−尿素−β−フェニルグリシンの合成
（±）３−アミノ−３−（３−ヨード−フェニル）−プロピオン酸（２０）
マロン酸（２．２ｇ、２１．５ｍｍｏｌ）および３−ヨードベンズアルデヒド（５ｇ、２１．５ｍｍｏｌ）をエタノール（５０ｍＬ）中に懸濁させ、酢酸アンモニウム（１．６６ｇ、２１．５ｍｍｏｌ）を加え、その反応物を終夜加熱還流させた。反応物を室温まで冷却し、濾過し、エタノールで洗浄し、続いてエーテルで洗浄し、乾燥させて生成物（３．４ｇ、１１．６ｍｍｏｌ、５４％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８０（ｓ，１Ｈ）、７．６４（ｄｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．４２（ｄｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．１６（ｄｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．１４（ｄｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．２１（ｍ，１Ｈ）、２．３６（ｍ，２Ｈ）。
【００７４】
【化２８】
0005606737.tif 000029
【００７５】
（±）−３−アミノ−３−（３−ヨード−フェニル）−プロピオン酸メチルエステル（２１）
（±）３−アミノ−３−（３−ヨード−フェニル）−プロピオン酸（３．１ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）のメタノール中の懸濁液に塩化チオニル（０．９５ｍＬ、１２，７ｍｍｏｌ）を加え、その反応物を室温において終夜撹拌した。濃縮し、エーテルを加えて粉砕すると白色固体が得られる。この固体を濾過し、エーテルで洗浄し、乾燥させると所望の生成物（３．５ｇ、１０ｍｍｏｌ、９５％）が白色固体として得られる。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．７９（ｂｒ，２Ｈ）、８．０１（ｓ，１Ｈ）、７．７４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．５７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２１（ｄｄ，Ｊ＝８．１、７．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．５６（ｂｒ，１Ｈ）、３．５４（ｓ，３Ｈ）、３．２３〜３．１７（ｍ，１Ｈ）、３．０４〜２．９８（ｍ，１Ｈ）。
【００７６】
【化２９】
0005606737.tif 000030
【００７７】
（Ｓ，Ｒ）および（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［１−（３−ヨード−フェニル）−２−メトキシカルボニル−エチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２２）
２−［（イミダゾール−１−カルボニル）−アミノ］−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３７０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）をＤＣＥ（１０ｍＬ）中に溶解させ、０℃に冷却した。ＭｅｏＴｆ（１４２μＬ、１．２５ｍｍｏｌ）を加え、２０分間反応を進行させた。（±）３−アミノ−３−（３−ヨード−フェニル）−プロピオン酸メチルエステル（３５６ｍｇ、１．０４５ｍｍｏｌ）を加え、その反応物を室温まで温め、次に５５℃まで温めて終夜撹拌した。反応物をＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、水（３０ｍＬ）、５％クエン酸水溶液（３０ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム（３０ｍＬ）、水（３０ｍＬ）、およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。その有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮して粗生成物を得た。その生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物（３０３ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ、４９％）を白色発泡体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．６６（ｓ，１Ｈ）、７．５７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．２９（ｓ，１Ｈ）、７．０７〜７．０２（ｍ，１Ｈ）、５．７４（ｂｒ，１Ｈ）、５．１７（ｂｒ，２Ｈ）、４．３０（ｍ，１Ｈ）、３．６３（ｓ，１．５Ｈ）、３．６２（ｓ  １．５Ｈ）、２．８８〜２．７６（ｍ，２Ｈ）、２．３８〜２．２４（ｍ，２Ｈ）、２．１０〜２．００（ｍ，１Ｈ）、１．９０〜１．８０（ｍ，１Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）。
【００７８】
【化３０】
0005606737.tif 000031
【００７９】
（Ｓ，Ｒ）および（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［２−カルボキシ−１−（３−ヨード−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸（２３）
（±）２−｛３−［１−（３−ヨード−フェニル）−２−メトキシカルボニル−エチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２８９ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）をメタノール（３ｍＬ）中に溶解させた溶液に、２ＭのＬｉＯＨ（０．５ｍＬ）を加え、その反応物を室温において終夜撹拌した。その反応物を水（２０ｍＬ）で希釈し、その有機層を酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出し、続いて１ＮのＨＣｌを使用してｐＨ約２まで酸性化した。その水層を酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮して、粗生成物（２０６ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、７３％）を白色固体として得た。この粗材料にＤＣＭ（２ｍＬ）を加え、続いてＴＦＡ（２ｍＬ）を加え、その反応物を室温において終夜撹拌した。
【００８０】
濃縮し、続いて酢酸エチルから再結晶させて、所望の生成物（２２ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ、１０％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．３９（ｂｒ，３Ｈ）、７．６４（ｂｒ，１Ｈ）、７．５６（ｍ，１Ｈ）、７．３０（ｂｍ，１Ｈ）、７．１０（ｂｍ，１Ｈ）、６．７２（ｂｍ，１Ｈ）、６．３４（ｂｍ，１Ｈ）、４．９４（ｂｒ，１Ｈ）、４．０３（ｂｍ，１Ｈ）、２．６４（ｂｒ，２Ｈ）、２．２０（ｂｒ，２Ｈ）、１．８６（ｂｒ，１Ｈ）、１．７１（ｂｒ，１Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：４６３（Ｍ−Ｈ）＋。
【００８１】
【化３１】
0005606737.tif 000032
【００８２】
（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［１−カルボキシ−５−（２−クロロ−ベンジルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタンジオイック（７）（ＭＩＰ−１１３７）
スキーム１に示すものと同じ一般手順、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジ−ｔ−ブチルエステルを使用。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護して所望の生成物（１００ｍｇ、４５％）をオフホワイト固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．０（ｂｒ、３Ｈ）、７．６３（ｄ，１Ｈ）、７．２（ｍ，２Ｈ）、７．１５（ｄ，１Ｈ）、６．３０（ｄ，２Ｈ）、４．１（ｍ，４Ｈ）、２．９（ｂｒ，２Ｈ）、２．２（ｍ，２Ｈ）、１．９０（ｍ，２Ｈ）、１．６０（ｍ，４Ｈ）、１．３５（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：４４４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８３】
【化３２】
0005606737.tif 000033
【００８４】
（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［１−カルボキシ−５−（３−クロロ−ベンジルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタンジオイック（８）（ＭＩＰ  １１３１）
スキーム１に示すものと同じ一般手順、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護して所望の生成物（２００ｍｇ、９０％）をオフホワイト固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９（ｂｒ，３Ｈ）、７．６（ｓ，Ｈ）、７．４３（ｍ，３Ｈ）、６．３９（ｂｒ，２Ｈ）、４．１（ｍ，４Ｈ）、２．９（ｂｒ，２Ｈ）、２．２（ｍ，２Ｈ）、１．９０（ｍ，２Ｈ）、１．６０（ｍ，４Ｈ）、１．３５（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：４４４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８５】
【化３３】
0005606737.tif 000034
【００８６】
（Ｓ，Ｓ）−２−｛３−［１−カルボキシ−５−（４−クロロ−ベンジルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタンジオイック（９）（ＭＩＰ  １１３５）
スキーム１に示すものと同じ一般手順、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護して所望の生成物を（１０ｍｇ、６６％）でオフホワイト固体として得た。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：４４４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８７】
【化３４】
0005606737.tif 000035
【００８８】
（Ｓ）−２−（３−（（Ｒ）−５−（ベンジルアミノ）−１−カルボキシペンチル）ウレイド）ペンタン二酸（１０）（ＭＩＰ−１１０６）
スキーム１に示すものと同じ一般手順、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護して所望の生成物（５ｍｇ、４７％）をオフホワイト固体として得た。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：４１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８９】
【化３５】
0005606737.tif 000036
【００９０】
２−（３−｛１−カルボキシ−５−［３−（フェニル）−ウレイド］−ペンチル｝−ウレイド）−ペンタン二酸（１１）（ＭＩＰ  １１１１）
丸底フラスコ中で、イソシアン酸フェニル（１００ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）中に溶解させ２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステル（４０９ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を加え、３時間撹拌した。その反応混合物を蒸発乾固させ、その粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィー２：１ヘキサン／酢酸エチルによって精製すると、ｔｅｒｔ−ブチルエステルが白色固体として得られ、ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用してこれを脱保護して、所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．５（ｓ，３Ｈ）、８．５４（ｓ，１Ｈ）、７．４０（ｄｄ，２Ｈ）、７．２６（ｄｄ，２Ｈ）、６．３０（ｔ，２Ｈ）、６．１７（ｔ，１Ｈ）、４．０５（ｍ，２Ｈ）、３．０５（ｍ，２Ｈ）、２．４４（ｍ，２Ｈ）、１．９０（ｍ，１Ｈ）、１．６８（ｍ，２Ｈ）１．５２（ｍ，１Ｈ）。１．４０（ｍ，２Ｈ）。１．２９（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：４３９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９１】
【化３６】
0005606737.tif 000037
【００９２】
２−（３−｛１−カルボキシ−５−［３−（４−ブロモ−フェニル）−ウレイド］−ペンチル｝−ウレイド）−ペンタン二酸（１２）（ＭＩＰ  １１２９）
丸底フラスコ中で、４−ブロモ−イソシアン酸フェニル（１００ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）中に溶解させた。２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステル（２４６ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を加え、３時間撹拌した。その反応混合物を蒸発乾固させ、その粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィー２：１ヘキサン／酢酸エチルによって精製すると、ｔｅｒｔ−ブチルエステルが白色固体として得られ、ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用してこれを脱保護して、所望の生成物を得た。
【００９３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．５（ｓ，３Ｈ）、８．５５（ｓ，１Ｈ）、７．３５（ｄ，４Ｈ）、６．３０（ｔ，２Ｈ）、６．１８（ｔ，１Ｈ）、４．０８（ｍ，２Ｈ）、３．０５（ｍ，２Ｈ）、２．２２（ｍ，２Ｈ）、１．９０（ｍ，１Ｈ）、１．６８（ｍ，２Ｈ）、１．５２（ｍ，１Ｈ）、１．４０（ｍ，２Ｈ）、１．３０（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：５１８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９４】
【化３７】
0005606737.tif 000038
【００９５】
２−（３−｛１−カルボキシ−５−［３−（４−クロロ−フェニル）−ウレイド］−ペンチル｝−ウレイド）−ペンタン二酸（１３）（ＭＩＰ  １１１０）
丸底フラスコ中で４−クロロ−イソシアン酸フェニル（１００ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）中に溶解させ２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジ−ｔ−ブチルエステル（３１８ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を加え、３時間撹拌した。その反応混合物を蒸発乾固させ、その粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィー２：１ヘキサン／酢酸エチルによって精製すると、ｔｅｒｔ−ブチルエステルが白色固体（４７０ｍｇ、９６％）として得られ、ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２を使用してこれを脱保護して、所望の生成物を得た。
【００９６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．５（ｓ，３Ｈ）、８．３５（ｓ，１Ｈ）、７．４０（ｄｄ，２Ｈ）、７．１９（ｄｄ，２Ｈ）、６．３０（ｔ，２Ｈ）、６．１０（ｔ，１Ｈ）、４．０８（ｍ，２Ｈ）、３．０５（ｍ，２Ｈ）、２．３２（ｍ，２Ｈ）、１．９０（ｍ，１Ｈ）、１．６８（ｍ，２Ｈ）、１．５２（ｍ，１Ｈ）、１．４０（ｍ，２Ｈ）、１．３０（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：４７４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９７】
【化３８】
0005606737.tif 000039
【００９８】
（Ｓ）−２−（３−（（Ｒ）−１−カルボキシ−５−（イリジン  ｎｅ−１−イルメチルアミノ）ペンチル）ウレイド）ペンタン二酸（１４）（ＭＩＰ−１１０８）
スキームＡに示すものと同じ一般手順、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護して、所望の生成物（５１ｍｇ、７０％）をオフホワイト固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．９（ｂｒ，３Ｈ）、７．９５（ｍ，５Ｈ）、７．６（ｍ，２Ｈ）、６．３５（ｂｒ，２Ｈ）、４．１（ｍ，４Ｈ）、２．９（ｂｒ，２Ｈ）、２．５５（ｍ，２Ｈ）、２．２５（ｍ，２Ｈ）、１．７０（ｍ，４Ｈ）、１．３（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：４６０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９９】
【化３９】
0005606737.tif 000040
【０１００】
２−（３−｛１−カルボキシ−５−［３−（３−ヨード−ベンジル）−ウレイド］−ペンチル｝−ウレイド）−ペンタン二酸（１５）（ＭＩＰ−１１０１）
スキーム２に示すものと同じ一般手順、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護して所望の生成物を得た。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：５７９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０１】
【化４０】
0005606737.tif 000041
【０１０２】
（１９Ｓ，２３Ｓ）−２−（４−ヨードベンジル）−１−（４−ヨードフェニル）−１３，２１−ジオキソ−２，１４，２０，２２−テトラアザペンタコサン−１９，２３，２５−トリカルボン酸（１６）（ＭＩＰ−１１３０）
スキームＡに示すものと同じ一般手順、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護して所望の生成物（８．３ｍｇ、１０％）をオフホワイト固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８（ｄ）、７．３（ｄ）、６．３（ｄｄ）、４．２５（ｂｒ）、４．０５（ｍ）、２．９７（ｍ）、２．８５（ｂｒ）、２．２２（ｍ）、２．０５（ｍ）、．９０（ｍ）、１．６４（ｍ）、１．４８（ｍ）、１．３５（ｍ）、１．２（ｍ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：９３６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０３】
【化４１】
0005606737.tif 000042
【０１０４】
レニウムの一般的実験：
ＳＡＡＣ−阻害剤のレニウム錯体は、容易に入手可能な前駆体［Ｎｅｔ４］２［Ｒｅ（ＣＯ）３Ｂｒ３］とＳＡＡＣ−阻害剤との反応から好都合に単離される。ＳＡＡＣによって提供される供与体の組は、｛Ｍ（ＣＯ）３｝＋１コアに対して有効なキレーターとして十分に立証されており、金属部位に対して必要なｆａｃ配置が取り入れられるように設計されているので、これらの錯体の調製はごく普通であった。
【０１０５】
｛Ｒｅ（Ｉ）（ＣＯ）３｝＋系について、Ｔｃ−９９ｍトリカルボニルコアと類似の反応化学に従った。［Ｎｅｔ４］２［ＲｅＢｒ３（ＣＯ）３］を出発物質として使用することで、ｆａｃ−｛Ｒｅ（ＣＯ）３（Ｌ）３｝コアの形成が容易になった。［Ｎｅｔ４］２［ＲｅＢｒ３（ＣＯ）３］は［ＲｅＢｒ（ＣＯ）５］から容易に誘導された。Ｒｅ（Ｉ）錯体の合成は、［Ｎｅｔ４］２［ＲｅＢｒ３（ＣＯ）３］を適切なＴＥＣリガンドと１：１．２の比率で１０ｍｌのメタノール中で反応させることによって行った。この反応物を８０℃で４時間加熱した。以下のすべての反応生成物は冷却後に、小型シリカカラムを使用してすべて精製し、１０〜３０％の範囲の収率となった。
【０１０６】
【化４２】
0005606737.tif 000043
【０１０７】
Ｇｌｕ−尿素−Ｌｙｓ−ＰＥＧ２−ＲｅＤＰ：
［Ｒｅ（ＣＯ）３｛（１７Ｒ，２１Ｓ）−１１，１９−ジオキソ−１−（イリジン−２−イル）−２−（イリジン−２−イルメチル）−５，８−ジオキサ−２，１２，１８，２０−テトラアザトリコサン−１７，２１，２３−トリカルボン酸｝］［Ｂｒ］（１７）（ＭＩＰ−１１３３）
スキーム１に示すものと同じ一般手順を使用し、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用して、ＰＥＧ２ジピリジル化合物の（１７Ｒ，２１Ｓ）−１１，１９−ジオキソ−１−（イリジン−２−イル）−２−（イリジン−２−イルメチル）−５，８−ジオキサ−２，１２，１８，２０−テトラアザトリコサン−１７，２１，２３−トリカルボン酸を調製した。一般的レニウム実験において記載した手順と同じ手順を使用してレニウムエステル錯体を調製した。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護して所望の生成物（２ｍｇ、２０％）をオフホワイト固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．８（ｄ）、８．００（ｄｄ）、７．５５（ｄ）、７．４２（ｄｄ）、６．４５（ｓ）、３．９５（ｍ）、３．４〜３．６（ｍ）、２．４５（ｍ）、１．２５（ｍ）、１．１（ｍ）、０．８（ｍ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：９３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０８】
Ｇｌｕ−尿素−Ｌｙｓ−ＰＥＧ４−ＲｅＤＰ：
［Ｒｅ（ＣＯ）３｛（２３Ｒ，２７Ｓ）−１７，２５−ジオキソ−１−（ピリジン−２−イル）−２−（ピリジン−２−イルメチル）−５，８，１１，１４−テトラオキサ−２，１８，２４，２６−テトラアザノナコサン−２３，２７，２９−トリカルボン酸｝］［Ｂｒ］（１８）（ＫＭ１１−２００）
スキームＡに示すものと同じ一般手順を使用し、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用して、ＰＥＧ４ジピリジル化合物の（２３Ｒ，２７Ｓ）−１７，２５−ジオキソ−１−（ピリジン−２−イル）−２−（ピリジン−２−イルメチル）−５，８，１１，１４−テトラオキサ−２，１８，２４，２６−テトラアザノナコサン−２３，２７，２９−トリカルボン酸を調製した。一般的レニウム実験において記載した手順と同じ手順を使用してレニウムエステル錯体を調製した。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護して所望の生成物（５．１ｍｇ、２９．６％）を白色固体として得た。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：１０１９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０９】
Ｇｌｕ−尿素−Ｌｙｓ−ＰＥＧ８−ＲｅＤＰ：
［Ｒｅ（ＣＯ）３｛（３５Ｒ，３９Ｓ）−２９，３７−ジオキソ−１−（イリジン−２−イル）−２−（イリジン−２−イルメチル）−５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６−オクタオキサ−２，３０，３６，３８−テトラアザヘンテトラコンタン−３５，３９，４１−トリカルボン酸｝］［Ｂｒ］（１９）（ＭＩＰ−１１３２）
スキームＡに示すものと同じ一般手順を使用し、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用して、ＰＥＧ８ジピリジル化合物の（３５Ｒ，３９Ｓ）−２９，３７−ジオキソ−１−（ピリジン−２−イル）−２−（ピリジン−２−イルメチル）−５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６−オクタオキサ−２，３０，３６，３８−テトラアザヘンテトラコンタン−３５，３９，４１−トリカルボン酸を調製した。一般的レニウム実験において記載した手順と同じ手順を使用してレニウムエステル錯体を調製した。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護して所望の生成物（８．０ｍｇ、３０．４％）を白色固体として得た。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：１１９５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１０】
Ｇｌｕ−尿素−Ｌｙｓ−Ｃ１１ＰＡＭＡ−Ｒｅ：
［Ｒｅ（ＣＯ）３｛（１９Ｒ，２３Ｓ）−１３，２１−ジオキソ−２−（イリジン−２−イルメチル）−２，１４，２０，２２−テトラアザペンタコサン−１，１９，２３，２５−テトラカルボン酸｝］（２０）（ＭＩＰ−１１０９）
スキームＡに示すものと同じ一般手順を使用し、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用して、Ｃ１１−ＰＡＭＡ化合物の（１９Ｒ，２３Ｓ）−１３，２１−ジオキソ−２−（イリジン−２−イルメチル）−２，１４，２０，２２−テトラアザペンタコサン−１，１９，２３，２５−テトラカルボン酸を調製した。一般的レニウム実験において記載した手順と同じ手順を使用してレニウムエステル錯体を調製した。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護して所望の生成物（３．０ｍｇ、７５％）をオフホワイト固体として得た。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：９２２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１１１】
【化４３】
0005606737.tif 000044
【０１１２】
以下の表１は、合成したＰＳＭＡ阻害剤の研究のまとめである。
【０１１３】
【表１】
0005606737.tif 000045
【０１１４】
β−アミノ酸類似体
ＭＩＰ−１０７２、ＭＩＰ−１０９５、ＭＩＰ−１０２７のβ−アミノ酸類似体が特に望ましいが、テクネチウム結合体およびその他のハロゲン類似体などの他の類似体への拡張も非常に望ましい。本発明者らは、現時点ではこの主張を支持する新しい例を得られていない。
【０１１５】
【化４４】
0005606737.tif 000046
【０１１６】
【化４５】
0005606737.tif 000047
【０１１７】
｛Ｒｅ（ＣＯ）３｝＋１コアモデル錯体の合成
ＶＩＩ族金属のテクネチウムおよびレニウムの性質は、それらの周期的関係のために非常に類似している。これらの金属は類似の反応化学を示すと予想され、このことは、これら２種類の金属のトリカルボニル、窒素、およびチアゾールの化学反応の場合によく起こる。同様に、Ｍ（Ｉ）のスピン対のｄ６電子配置を安定化させるそれらの類似した大きさのため、過レニウム酸と過テクネチウム酸は非常に類似した反応挙動を有する。レニウム−ＴＥＣを合成することによって、本発明者らは生成物を構造的に特徴付ける簡単な方法が得られた。ＴｃとＲｅとの間に周期的な関係があるということは、類似のレニウム錯体をモデル化することによってＴｃ−９９ｍ放射性医薬品を設計できることを示している。
【０１１８】
一部の新規化合物は、質量分析、１Ｈおよび１３Ｃ  ＮＭＲ分光法などを含む従来方法による特性決定のために、巨視的な量のレニウムを使用して合成した。精製後、合成したレニウム錯体をＨＰＬＣカラムに通して精製し、滞留時間を測定し、Ｔｃ反応生成物と比較した。レニウム−ＴＥＣ錯体も結晶化した。
【０１１９】
ＳＡＡＣ−阻害剤のレニウム錯体は、容易に入手可能な前駆体｛Ｒｅ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３｝＋１および［Ｎｅｔ４］２［Ｒｅ（ＣＯ）３Ｂｒ３］とＳＡＡＣ−阻害剤との反応から好都合に単離される。ＳＡＡＣによって提供される供与体の組は、｛Ｍ（ＣＯ）３｝＋１コアに対して有効なキレーターとして十分に立証されており、金属部位に対して必要なｆａｃ配置が取り入れられるように設計されているので、これらの錯体の調製はごく普通であった。
【０１２０】
一般的実験
｛Ｒｅ（Ｉ）（ＣＯ）３｝＋系について、Ｔｃ−９９ｍトリカルボニルコアと類似の反応化学に従った。［Ｎｅｔ４］２［ＲｅＢｒ３（ＣＯ）３］を出発物質として使用することで、ｆａｃ−｛Ｒｅ（ＣＯ）３（Ｌ）３｝コアの形成が容易になった。［Ｎｅｔ４］２［ＲｅＢｒ３（ＣＯ）３］は［ＲｅＢｒ（ＣＯ）５］から容易に誘導された。Ｒｅ（Ｉ）錯体の合成は、［Ｎｅｔ４］２［ＲｅＢｒ３（ＣＯ）３］を適切なＴＥＣリガンドと１：１．２の比率で１０ｍｌのメタノール中で反応させることによって行った。この反応物を８０℃で４時間加熱した。以下のすべての反応生成物は冷却後に、小型シリカカラムを使用してすべて精製し、１０〜３０％の範囲の収率となった。
【０１２１】
［Ｒｅ（ＣＯ）３（２−｛３−［３−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−１−カルボキシ−プロピル］−ウレイド｝−ペンタンジエチルエステル）］［Ｂｒ］（２４）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．６５（ｄｄ，２Ｈ）、７．８５（ｄｄ，２Ｈ）、７．７（ｄｄ，４Ｈ）、７．２５（ｄｄ，２Ｈ）、６．４２（ｄｄ，１Ｈ）、６．０（ｄｄ，１Ｈ）、４．５（ｍ，２Ｈ）、４．１６（ｍ，２Ｈ）、３．８０（ｍ，４Ｈ）、２．４５（ｍ，２Ｈ）、２．０（ｄｄ，２Ｈ）、１．５（ｍ，４Ｈ）、１．２５（ｍ，６Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：８１２〜８１５。
【０１２２】
【化４６】
0005606737.tif 000048
【０１２３】
［Ｒｅ（ＣＯ）３（２−｛３−［５−（ビス−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−１−カルボキシ−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸）］［Ｂｒ］（２５）（ＭＩＰ  １０２９）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．６（ｓ，２Ｈ）、８．９１（ｓ，１Ｈ）、８．６３（ｄｄ，２Ｈ）、７．８５（ｄｄ，２Ｈ）、７．７５（ｄｄ，４Ｈ）、７．３（ｄｄ，２Ｈ）、６．４４（ｄ，Ｈ）、６．２８（ｄ，１Ｈ）、４．４５（ｓ，２Ｈ）、４．１０（ｍ，２Ｈ）、３．１５（ｓ，１Ｈ）、２．６０（ｍ，２Ｈ）、２．２５（ｍ，２Ｈ）、１．９０（ｍ，１Ｈ）、１．７８（ｍ，２Ｈ）、１．４５（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：７７０〜７７４。
【０１２４】
【化４７】
0005606737.tif 000049
【０１２５】
２−｛３−［１−カルボキシ−５−（カルボキシメチル−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸（２６）
同じ一般手順、前述のように調製し保護した２−［３−（５−アミノ−１−カルボキシ−ペンチル）−ウレイド］−ペンタン二酸ジｔ−ブチルエステルを使用。前述の方法を使用してこの化合物を脱保護した（２．２ｍｇ、６５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．６５（ｄ，１Ｈ）、７．９１（ｄｄ，１Ｈ）、７．５６（ｄ，１Ｈ）、７．４５（ｄｄ，１Ｈ）、６．３１（ｍ，２Ｈ）、４．３４（ｓ，２Ｈ）、４．０８（ｍ，４Ｈ）、３．１０（ｍ，２Ｈ）、２．２４（ｍ，２Ｈ）、１．９５（ｍ，１Ｈ）、１．６８（ｍ，４Ｈ）、１．５（ｍ，１Ｈ）、１．２２（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ：４６９（Ｍ＋Ｈ）＋。Ｍ＋１  ４６９。
【０１２６】
［Ｒｅ（ＣＯ）３（２−｛３−［１−カルボキシ−５−（カルボキシメチル−ピリジン−２−イルメチル−アミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸）］（２７）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．７５（ｄ，１Ｈ）、８．１３（ｄｄ，１Ｈ）、７．６９（ｄ，１Ｈ）、７．５７（ｄｄ，１Ｈ）、６．４５（ｍ，２Ｈ）、４．７５（ｍ，１Ｈ）、４．５０（ｍ，１Ｈ）、４．２０（ｍ，２Ｈ）、３．６１（ｍ，４Ｈ）、３．１５（ｍ，２Ｈ）、２．３８（ｍ，１Ｈ）、２．０（ｍ，２Ｈ）、１．７５（ｍ，４Ｈ）、１．６２（ｍ，１Ｈ）、１．２５（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ  ７７９〜７８２（Ｍ＋２Ｎａ）＋。
【０１２７】
【化４８】
0005606737.tif 000050
【０１２８】
Ｇｌｕ−尿素−Ｌｙｓ（Ｎ−ベンジル−Ｘ）類似体（３）の合成
スキームＡに示す一般経路を使用して、一般構造３の化合物を２０〜４０％の範囲の全収率で調製した。重要な合成中間体（１）を適切なアルデヒドと室温で１時間反応させてイリジ（ｙｒｉｄｉ）塩基中間体を形成した。このイリジ塩基は単離せずに、その場でトリアセトキシホウ水素化ナトリウムを使用して還元した。ＤＣＭ中５０％ＴＦＡを室温で１時間使用して、ｔ−ブチルエステル保護基を除去した。脱保護完了後、反応物をロータリーエバポレーター上で濃縮し、ＨＰＬＣまたはフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物（３）を４０〜８０％の収率で得た。
【０１２９】
【化４９】
0005606737.tif 000051
【０１３０】
Ｇｌｕ−尿素−ウレイド（フェニル−Ｘ）類似体の合成
スキームＢに示す経路によって、以下の一般構造８の化合物を２０〜６０％の範囲の全収率で調製した。重要な合成中間体（４）を適切なフェニルイソシアネートと室温で反応させて、良好な収率で所望の保護中間体（５）を得た。室温で１時間ＤＣＭ中５０％ＴＦＡの存在下でｔ−ブチルエステル保護基を除去した。完了後、反応物をロータリーエバポレーター上で濃縮し、ＨＰＬＣまたは再結晶によって精製して、所望の生成物（６）を４０〜９０％の収率で得た。
【０１３１】
【化５０】
0005606737.tif 000052
【０１３２】
放射標識された錯体の調製および特性決定
テクネチウム−９９ｍ標識
９９ｍＴｃ標識錯体の調製は、［９９ｍＴｃ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３］＋を含有する溶液１００μＬを阻害剤−ＳＡＡＣの１０−４Ｍ溶液５００μＬに加えることによって行った。その混合物を７０℃で３０分間加熱した。得られた生成物の放射化学的純度を、逆相ＨＰＬＣによって分析した。
【０１３３】
放射標識化合物の溶液中および血清中の安定性を、時間および溶液条件の関数として求めた。具体的には、放射線標識および単離の後、生成物を室温で６時間保管し、その後ＨＰＬＣ分析を行って、標識保持の程度、および生成物の分解の可能性を調べた。ＴｃＯ４−の再形成および還元された材料ＴｃＯ２の存在を分析した。
【０１３４】
インビボ安定性を予測しやすくするために、リガンドによる攻撃（ｌｉｇａｎｄ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）を行った。具体的には、ＨＰＬＣで精製した錯体を５％マウス血清中室温および３７℃でインキュベートすることによって、９９ｍＴｃ錯体の安定性を調べた。システインおよびＤＴＰＡなどの競合するリガンドが、Ｔｃ−９９ｍを錯体から抽出する能力を、０．１Ｍの最終濃度で競合するリガンドを含有する溶液（ＰＢＳ  ｐＨ７．２）を使用して精製した錯体をインキュベートすることによって調べた。
【０１３５】
標識競合試験の結果から、血清中または競合リガンド試験において６時間まではＴｃ−９９ｍ−錯体の分解が起こらないことが示された。３７℃でのインキュベーションの６時間の結果を図２に示す。
【０１３６】
ＤＣＴのヨウ素化
１００ｕｌの、０．１ＮのＮａＯＨ中の［Ｉ−１３１］ＮａＩを、Ｉｏｄｏｇｅｎ  ｔｕｂｅ（商標）（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｐｉｅｒｃｅ）中のＤＣＴ（１ｍｇ／ｍＬ）を含有するＰＢＳ（ｐＨ７．２）溶液に加えることによって、ヨウ素−１３１で標識された化合物Ｎ−［Ｎ−［（Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］カルバモイル］−Ｓ−３−ヨード−Ｌ−チロシン（Ｉ−１３１−ＤＣＩＴ）の調製を行った。この混合物を３分間ボルテックスし、室温で２０分間保管した。
【０１３７】
溶液中の放射標識化合物の安定性を時間の関数として求めた。具体的には、放射線標識および単離の後、生成物を室温で４８時間保管し、その後ＨＰＬＣ分析を行って、標識保持の程度、および生成物の分解の可能性を調べた。ＮａＩの再形成および還元されたヨウ素酸塩の存在を分析した。標識安定性試験の結果から、Ｉ−１３１  ＤＣＩＴは室温で２日間まで有意な分解が起こらないことが示された。この試験結果を図３に示す。
【０１３８】
１００ｕｌの、０．１ＮのＮａＯＨ中の［Ｉ−１３１］ＮａＩと、０．５％の酢酸を有する３０μｌのメタノールとを、ＩＯＤＯＧＥＮ  ＴＵＢＥ（商標）（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中のＭＩＰ  １０７２（１ｍｇ／ｍＬ）を含有するＰＢＳ（ｐＨ７．２）溶液に加えることによって、ヨウ素−１３１で標識された化合物２−｛３−［１−カルボキシ−５−（４−ヨード−ベンゾイルアミノ）−ペンチル］−ウレイド｝−ペンタン二酸（Ｉ−１３１−ＭＩＰ  １０７２）の調製を行った。この混合物を３分間ボルテックスし、室温で２０分間保管した。
【０１３９】
溶液中の放射標識化合物の安定性を時間の関数として求めた。具体的には、放射線標識および単離の後、生成物を３７℃で３日間保管し、その後ＨＰＬＣ分析を行って、標識保持の程度、および生成物の分解の可能性を調べた。ＮａＩの再形成および還元されたヨウ素酸塩の存在を分析した。標識安定性試験の結果から、ＤＭＳＯ、１０％エタノール／食塩水、ＰＢＳ  ｐＨ７．２、および６％アスコルベート／３％ゲンチシン酸溶液中で、Ｉ−１３１  １０７２は室温で３日間まで有意な分解が起こらないことが示された。この試験結果を図４に示す。
【０１４０】
ＳＡＡＣ−尿素−グルタメート結合体の生物学的特性決定
ＰＳＭＡ陽性ＬｎＣａｐ細胞、およびＰＳＭＡ陰性ＰＣ３細胞を使用して、新しく調製したＳＡＡＣ−尿素−Ｇｌｕ結合体のヒト前立腺癌細胞結合アッセイにおけるスクリーニングを行った。ＰＳＭＡ陽性細胞への特異的な取り込みまたは結合を示す化合物の腫瘍局在についてインビボで試験を行った。
【０１４１】
インビトロコールドスクリーニングアッセイ（ｃｏｌｄ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ａｓｓａｙ）バーシス（ｖｅｒｓｅｓ）Ｉ−１３１  ＤＣＩＴ
ＬＮＣａＰおよびＰＣ３ヒト前立腺癌細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）より入手した。ＬＮＣａＰ細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を追加したＲＰＭＩ−１６４０培地中に維持した。ＰＣ３細胞は、１０％ＦＢＳを追加したＦ１２Ｋ培地中で増殖させた。ＬＮＣａＰ細胞およびＰＣ−３細胞に対する放射標識化合物の結合、および非放射性誘導体との競合を、Ｔａｎｇらの方法（Ｔａｎｇ，Ｈ．；Ｂｒｏｗｎ，Ｍ．；Ｙｅ，Ｙ．；Ｈｕａｎｇ，Ｇ．；Ｚｈａｎｇ，Ｙ．；Ｗａｎｇ，Ｙ．；Ｚｈａｉ，Ｈ．；Ｃｈｅｎ，Ｘ．；Ｓｈｅｎ，Ｔ．Ｙ．；Ｔｅｎｎｉｓｗｏｏｄ，Ｍ．，Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｌｉｇａｎｄｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｎ−ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ  ａｌｐｈａ−ｌｉｎｋｅｄ  ａｃｉｄｉｃ  ｄｉｐｅｐｔｉｄａｓｅ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２００３，３０７，８−１４））に適切な修正を加えたものに従って行った。細胞は１２ウェルプレート中に約４×１０５細胞／ウェルで入れ、加湿インキュベーター中３７℃／５％二酸化炭素において４８時間インキュベートした後、化合物を加えた。それぞれ独自のＳＡＡＣ−尿素−Ｇｌｕ結合体を調製し、０．５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）とともに３ｎＭのＩ−１３１  ＤＣＩＴ（公知の阻害剤）を含有する無血清細胞培養液で希釈した。試験化合物を使用せずにＩ−１３１  ＤＣＩＴをインキュベートすることによって全結合量を求めた。プレートは室温で１時間インキュベートした。穏やかにピペット操作することによってプレートから細胞を取り出してエッペンドルフ管に移した。サンプルを１５秒間１０Ｋ×ｇで微量遠心分離した。培養液を吸引し、得られたペレットは、新しいアッセイ媒体中に分散させた後に微量遠心分離することによって２回洗浄した。自動ガンマ計数器中で細胞ペレットを計数することによって、Ｉ−１３１  ＤＣＩＴの細胞結合量を求めた。非特異的結合は、２ｕＭの非放射標識化合物または２−ホスホノメチル−ペンタン二酸（ＰＭＰＡ）を使用してインキュベートした後の細胞に関する計数として求めた。対照化合物を以下に示す。
【０１４２】
【化５１】
0005606737.tif 000053
【０１４３】
結合アッセイの２つの重要な化合物を上に示しており、Ｉ−ＤＣＩＴ（Ｋｏｚｉｋｏｗｓｋｉら）、およびＩＣ５０＝６ｎＭの強力な阻害剤である２−ホスホノメチル−ペンタン二酸（ＰＭＰＡ−右側）である。
【０１４４】
（ｉｉ）インビトロ投与量スクリーニング
Ｉ−１３１  ＤＣＩＴは、ＬｎＣａｐ細胞に特異的に結合し、ＰＣ３細胞には特異的に結合しないことが、ＬｎＣａｐ細胞中でのみ非放射標識化合物またはＰＭＰＡによって置換可能な計数から明らかである（図５）。一定量のＩ−１３１  ＤＣＩＴの存在下で、種々の量の非放射標識ＤＣＩＴを加えてＬｎＣａｐ細胞をインキュベートすることによって結合定数を求め、各溶液の比放射能で除することによって、結合化合物のフェムトモル数を求めた（図６）。Ｋｄを求めると２６４ｎＭとなりＢｍａｘは２５４フェムトモルであった。ＬｎＣａｐ細胞に対する結合がＩ−１３１  ＤＣＩＴと２ｕＭで競合する化合物ＭＩＰ−１００８およびＭＩＰ−１０３３を種々の投与量で再試験してＩＣ−５０値を求めた（図７および図８）。ＭＩＰ−１０７２、ＭＩＰ−１０９５、およびＭＩＰ−１０９７はＩＣ５０値が＜５０ｎｍとなったが、化合物ＭＩＰ−１００８およびＭＩＰ−１０３３はＩＣ−５０がそれぞれ９８ｎＭおよび４９７ｎＭであった。化合物ＭＩＰ−１０２５、ＭＩＰ−１０２８、およびＭＩＰ−１０２９は結合を競合しなかった（表１）。
【０１４５】
ＭＩＰ−１０７２がＬＮＣａＰ細胞に内部移行したことを示す図７のスキャッチャード解析の結果を立証するために、ＭＩＰ−１０７２のＬＮＣａＰ細胞中の取り込み速度をモニタした。各ウェルに、４℃および３７℃において１００ｎＭのＭＩＰ−１０７２（２ｕＣｉ／ウェル）を投与した。１５分後にＰＳＭＡへの結合が平衡に達し、このことは４℃における曲線の平坦部によって示された。３７℃でインキュベートした細胞は、平衡到達後もＭＩＰ−１０７２の内部移行が続いた。この結果（図１０）はスキャッチャードと一致しており、ＭＩＰ−１０７２が実際に内部移行していることを示している。
【０１４６】
（ｉｉｉ）ミクロソームアッセイ実験
試験化合物のカタストロフィ的な分解をモニタするために、プールした雄ラット肝臓ミクロソーム（１ｍｇ／ｍＬ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＮＡＤＰＨ再生システム（１．３ｍＭのＮＡＤＰ、３．３ｍＭのグルコース６−ホスフェート、および０．４Ｕ／ｍＬのグルコース６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、および試験化合物（５０μＭのＭＩＰ−１０７２、５０μＭのＤＣＴ、および１００μＭのフェナセチン）を０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ  ７．４）に加えた。この混合物を３７℃において指定の時間（０、１５、６０分）インキュベートし、等体積の氷冷メタノール（５００μＬ）を加えることで反応を停止させた。得られたスラリーを次に２１，０００×Ｇで１０分間遠心分離し、その上澄みを回収し、９５：５の水：アセトニトリル（０．１％のギ酸含有）から４０：６０の水：アセトニトリル（０．１％のギ酸含有）のグラジエントを使用してＡｇｉｌｅｎｔ  ＬＣＭＳ  ｍｏｄｅｌ  ＭＳＤ  ＳＬ上に注入し、単一イオンモードで親イオンのみをモニタした。図１１（ａ）および（ｂ）に示す結果は、０分の時点に対する親イオンの分解として表されている。
【０１４７】
ラット肝臓ミクロソームを使用してＭＩＰ−１０７２の安定性を評価した。ＭＩＰ−１０７２（５０μＭ）およびフェナセチン（１００μＭ）をラット肝臓ミクロソームとともに３７℃において指定の時間インキュベートした。代謝されることが知られているフェナセチンを対照物質として使用した。インキュベーション時間中にＭＩＰ−１０７２はラット肝臓ミクロソームによって分解されなかった。しかし、フェナセチンは６０分のインキュベーション後に２２％分解した。
【０１４８】
ＬＮＣａＰ（ＰＳＭＡ陽性）腫瘍およびＰＣ３（ＰＳＭＡ陰性）腫瘍の両方を移植したマウスで組織分布を調べるために、リード化合物のＭＩＰ  １０７２をＩ−１３１で標識した。この化合物は以下に示す経路で放射標識した。
【０１４９】
【化５２】
0005606737.tif 000054
【０１５０】
組織の体内分布結果は、インビトロデータと一致し、ＬＮＣａＰ（ＰＳＭＡ陽性）腫瘍中への顕著な取り込みが示された。これらの結果は、ＰＣ３（ＰＳＭＡ陰性）腫瘍中値の活性が非常にわずかであり高い特異性も示した。マウスの分布を示すグラフを以下に示す（図１２）。
【０１５１】
Ｎ−［Ｎ−［（Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］カルバモイル］−Ｓ−３−ヨード−Ｌ−チロシン（Ｉ−１３１−ＤＣＩＴ）バーシス（ｖｅｒｓｅｓ）「非放射性」（ｃｏｌｄ）錯体を使用した生物学的評価は迅速な第１のスクリーンとなることが分かり、続いて線量曲線によって正確なＩＣ５０値を求めた。リードシリーズの化合物はＩＣ５０値＜５０ｎＭを示した。リードシリーズのインビボデータでは、ＬＮＣａＰ腫瘍中で３％ＩＤ／ｇが蓄積して高い親和性が示され、ＬＮＣａＰ：ＰＣ３の比が１５：１を超える高い特異性を示した。
【０１５２】
ＬＮＣａＰ細胞溶解プロトコル
２つのコンフルエントＴ７５フラスコ
ピペットで培養液を上下させることでプレートから細胞を洗い落とす。
０．３２Ｍのスクロースで洗浄、再遠心分離する。
１ｍＬの５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．４、０．５％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００中に細胞ペレットを再懸濁させる。
１４０００ｒｐｍで１分間遠心分離して核を沈殿させる。
上澄みを取り出し５０ｕＬのアリコートに分割する。
−８０Ｃで保管する。
【０１５３】
タンパク質アッセイ：
Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  ＩＩ−１．４４ｍｇ／ｍｌ
溶解ステップで界面活性剤を使用しているので、２０ｕＬの試薬Ｓを、試験に必要なそれぞれ１ｍＬの試薬Ａに加えることによって作業用試薬Ａ’を調製する。（沈殿物が形成される場合は、加温およびボルテックスを行う）。
５つのタンパク質希釈物−０、０．２、０．４、０．８、１．６ｍｇ／ｍＬを調製する。
２５μＬの標準／未知物質、１００μＬのＡ’、８００μＬの試薬Ｂの未知の混合物の１／１０、１／１００、および１／１０００希釈物も２つずつ調製する。混合
約１５分後、７５０ｎＭにおいて吸光度を測定する。
【０１５４】
ＮＡＡＬＡＤａｓｅアッセイ：
Ｒｘｎ緩衝液：５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、２０ｍＭのＣｏＣｌ２、３２ｍＭのＮａＣｌ
冷ＮＡＡＧ（１００ｍＭストック）をＲｘｎ緩衝液中で１／１００に希釈して１ｍＭにする。
６００ｕＬの緩衝液とＬＮＣａＰ細胞溶解物（２００μｇ）とを混合し、３７Ｃで３分間プレインキュベートする。
Ｒｘｎ緩衝液およびＬＮＣａＰ細胞溶解物を３７Ｃで３分間プレインキュベートする。
１，０００，０００ＣＰＭの３Ｈ−ＮＡＡＧを加えた６μＬの１ｍＭのＮＡＡＧ（最終濃度１μＭの場合）を加える（１００μＬの１ｍＭのＮＡＡＧ＋１０μＬの３Ｈ−ＮＡＡＧ（１０μＣｉ））。競合させるためＰＭＰＡを加える。
３０分間インキュベートする。
指定の時間において、１００ｕＬの反応混合物を取り出し、等体積の氷冷した０．２５ＭのＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ４．３を加えてｒｘｎを停止させることによって、反応を停止させる。
１／２の混合物を２５０ｍｇのＡＧ  ５０Ｗ−Ｘ４陽イオン交換カラム（２００〜４００メッシュ、Ｈ＋型、使用前にＤＩ  Ｈ２Ｏで膨潤させた樹脂）に加える。残りの１／２は計数のため保存する。
カラムを５００μＬの１：１のＲｘｎ緩衝液／０．２５ＭのＫＨ２ＰＯ４で洗浄する。
３ＭのＫＣｌ（１．５ｍＬ）で溶出させる。
クエンチングを最小限にするため、１００ｕＬの投入液、溶出液、および反応液（１：６で希釈）を計数する。
注記：
時間＝０の対照値を実験時点から減算する。
結果は、形成されたｐｍｏｌ３Ｈ−グルタメート／分／ｍｇタンパク質で表される。
Ｇｒａｎｔは１０分間のみ線形性が保たれると述べているが、Ｌｕｔｈｉ−Ｃａｒｔｅｒら（Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒａｐ  １９９８  ２８６（２））は、２時間後もなお線形性に影響はなく、消費された物質は２０％未満であると述べている。
【０１５５】
治療的処置
本化合物は、治療的処置のためにＮＡＡＬＡＤａｓｅを阻害するために使用することができる。ＮＡＡＬＡＤａｓｅ処置を受け入れることができる疾病としては、有痛性および感覚性糖尿病性ニューロパシー、神経損傷、および前立腺癌、統合失調症、結腸直腸癌、炎症、筋萎縮性側索硬化症、または糖尿病性ニューロパシーが挙げられる。本化合物は鎮痛剤として使用することもできる。このような治療的処置のモデル化のガイダンスは、Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，１０  ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１），Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｒｏｍ Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｄｒｕｇ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍ，（ＣＲＣ，２００１）、およびＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，（ＡｐｈＡ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，５  ｅｄｉｔｉｏｎ，２００５）に見ることができる。
【０１５６】
類似体の競合的結合（図１６）
ＰＳＭＡへの結合を１３１Ｉ−ＤＣＩＴと競合する非放射性類似体の能力について、ＰＳＭＡ陽性ヒト前立腺癌細胞系のＬＮＣａＰ細胞において試験した。ＬＮＣａＰ細胞（３００，０００細胞／ウェル）を３ｎＭの［１３１Ｉ］−ＤＣＩＴとともに、１〜１０，０００ｎＭ  ＭＩＰ−１０７２の存在下、０．５％ウシ血清アルブミンを追加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で１時間インキュベートした後、洗浄し、ガンマ計数器中で計数した。特許出願を含めて本明細書に引用されるすべての文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１５７】
ＭＩＰ−１０７２の直接結合および内部移行
１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２の前立腺癌細胞への直接結合について試験した（図１７）。ＬＮＣａＰ細胞、またはＰＳＭＡ陰性細胞系のＰＣ３細胞を、０．５％ウシ血清アルブミンを追加したＲＰＭＩ−１６４０培地中、３ｎＭの１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２単独、または１０μＭの非標識ＭＩＰ−１０７２の存在下、または構造的に無関係のＮＡＡＬＡＤａｓｅ阻害剤である１０μＭの２−（ホスホノメチル）−ペンタン二酸（ＰＭＰＡ）とともに１時間インキュベートした。細胞を洗浄し、ガンマ計数器中で計数した。
【０１５８】
ＭＩＰ−１０７２の親和定数（Ｋｄ）を飽和結合分析によって求めた（図１８）。ＬＮＣａＰ細胞は、ＨＢＳ（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ，ｐＨ７．５、０．９％の塩化ナトリウム）中３０〜１００，０００ｐＭの１３１Ｉ−ＭＩＰ−１０７２とともに、４℃または３７℃において、１０μＭの非標識ＭＩＰ−１０７２（非特異的結合を求めるため）の非存在下または存在下で１時間インキュベートした。次に細胞を洗浄し、放射能量をガンマ計数器上で測定した。特異的結合を全結合量と非特異的結合との間の差として計算した。過剰の非放射標識ＭＩＰ−１０７２（１０μＭ）の存在下および非存在下で１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２（３ｐＭ〜１，０００ｎＭ）を滴定することによって行った飽和結合分析によって、ＭＩＰ−１０７２とＬＮＣａＰ細胞上のＰＳＭＡとの相互作用の親和定数（Ｋｄ）を測定した。グラフ・パッド・プリズム（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ）ソフトウェアを使用した非線形回帰分析によって、４℃において４．８ｎＭのＫｄ、および１，４９０フェムトモル／１０６細胞のＢｍａｘが求められた（図１８）。このＫｄは３７℃における８．１ｎＭと顕著な差がなかった。しかし、Ｂｍａｘは３７℃において４℃よりも大きく、それぞれ１，４９０対４，４００フェムトモル／１０６細胞であり、ＭＩＰ−１０７２の内部移行を示している。以下の結果は２つの独立した分析の代表例である。
【０１５９】
ＬＮＣａＰ細胞中に内部移行するＭＩＰ−１０７２の能力を酸洗浄アッセイによって確認した（図１９）。ＬＮＣａＰ細胞を、ＨＢＳ中１００ｎＭの１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２とともに０〜２時間４℃および３７℃においてインキュベートした。指定の時間で、培地を除去し、細胞を弱酸性緩衝液（５０ｍＭのグリシン、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ３．０）中４℃で５分間インキュベートした。この短時間のインキュベーションの後、細胞を２０，０００×ｇで５分間遠心分離した。得られた上澄みおよび細胞ペレットについてガンマ計数器中で計数した。ＭＩＰ−１０７２のＬＮＣａＰ細胞中への内部移行を示す飽和結合分析の結果を確認するために、本発明者らはＭＩＰ−１０７２のＬＮＣａＰ細胞中への取り込み速度をモニタした。各ウェルに、４℃および３７℃において１００ｎＭのＭＩＰ−１０７２（２ｕＣｉ／ウェル）を投与した。１５分後にＰＳＭＡへの結合が平衡に達し、このことは４℃における曲線の平坦部によって示された。３７℃でインキュベートした細胞は、平衡到達後もＭＩＰ−１０７２の内部移行が続いた。結果は、３７℃においてはペレットと関連する放射能は時間に依存し酸に鈍感な増加を示したが４℃では示さず、このことは１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２は、３７℃において内部移行するが４℃ではしないことを示している（図１９）。
【０１６０】
１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２の腫瘍取り込みおよび組織分布
尾静脈を介してボーラス注入として（約２μＣｉ／マウス）一定体積０．０５ｍｌで投与したＰＳＭＡ陽性ＬＮＣａＰ異種移植片（約１００〜２００ｍｍ３）を有する雄ＮＣｒヌード（ＮＣｒ  Ｎｕｄｅ）−／−マウスの独立した複数の群において、１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２の組織分布の定量分析を行った。注入から０．２５、１、２、４、８、および２４時間後に、二酸化炭素で窒息させることによって動物（ｎ＝５／各時点）を安楽死させた。組織（血液、心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、副腎、胃、大腸および小腸（内容物を有する）、睾丸、骨格筋、骨、脳、脂肪、および腫瘍）を解剖し、摘出し、湿潤時に秤量し、プラスチック管に移し、自動γ計数器（ＬＫＢ  Ｍｏｄｅｌ  １２８２（Ｗａｌｌａｃ  Ｏｙ，Ｆｉｎｌａｎｄ））中で計数した。１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２のＬＮＣａＰ腫瘍中とＰＣ３腫瘍中との取り込みを比較し、この化合物が２−（ホスホノメチル）−ペンタン二酸（ＰＭＰＡ）との競合を介した機序で機能することを示すため、ＬＮＣａＰまたはＰＣ３のいずれかの異種移植片を有する一部のマウスについて、１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２の注入の５分前に、５０ｍｇ／ｋｇ  ＰＭＰＡであらかじめ処置し、選択した組織を注入から１時間後に回収した。ＭＩＰ−１０７２の取り込みおよび曝露は、ＰＳＭＡの発現が多い腎臓およびＬＮＣａＰ異種移植片において最大であった。腎臓における取り込みのピークは２時間における１５８±４６％ＩＤ／ｇであり、ＬＮＣａＰ異種移植片では１時間における１７±６％ＩＤ／ｇであった（図２０）。これらのターゲット組織における取り込みは迅速であり、一方ＬＮＣａＰ異種移植片における流出はより遅かった。１２３Ｉ−ＭＩＰ−１０７２は、ＰＳＭＡを発現するＬＮＣａＰ腫瘍への局所化によって示されるようにインビボの機序で機能するが、ＰＳＭＡを発現しないＰＣ３腫瘍では機能しないことが実証された（図２１）。さらに、この腫瘍および腎臓の両方は、マウスをＰＳＭＡの強力な阻害剤であるＰＭＰＡで予備処置することによって遮断された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
0005606737.tif 000089
【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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