(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの硫酸塩またはその水和物の結晶。
【請求項２】
前記結晶は硫酸塩の結晶である、請求項１に記載の結晶。
【請求項３】
前記結晶は、６．５８±０．２０、７．５２±０．２０、９．３５±０．２０、１４．６９±０．２０、１６．０１±０．２０、１７．４５±０．２０、１７．９９±０．２０、１８．６２±０．２０、１９．７６±０．２０、２１．１１±０．２０、２２．０７±０．２０、２３．１８±０．２０、２３．７４±０．２０、２４．５６±０．２０、２５．６３±０．２０、２６．４５±０．２０、２７．８６±０．２０、２８．３１±０．２０、２９．５４±０．２０、３０．５９±０．２０、３１．５８±０．２０、３３．８９±０．２０、および３６．０２±０．２０から選択される２θ値に２つ以上の回折ピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする、請求項２に記載の結晶。
【請求項４】
前記Ｘ線粉末回折パターンは、１４．６９±０．２０、１６．０１±０．２０、２１．１１±０．２０、２２．０７±０．２０、および２３．１８±０．２０から選択される２θ値に２つ以上の回折ピークを含む、請求項３に記載の結晶。
【請求項５】
前記結晶は、前記ピーク位置が以下の図：
【化９】
0005512289.tif 000011
に示すパターンのピーク位置と実質的に一致するＸ線粉末回折パターンを特徴とする、請求項２に記載の結晶。
【請求項６】
前記結晶は、１０℃／分の加熱速度で記録された示差走査熱量測定トレースが１９０℃〜２０５℃の温度で吸熱流の最大値を示すことを特徴とする、請求項２に記載の結晶。
【請求項７】
前記結晶は、示差走査熱量測定トレースが以下の図：
【化１０】
0005512289.tif 000012
に示すものと実質的に一致することを特徴とする、請求項２に記載の結晶。
【請求項８】
前記結晶は硫酸塩の水和物である、請求項１に記載の結晶。
【請求項９】
前記結晶は、９．４１±０．２０、９．９８±０．２０、１５．１７±０．２０、１６．７０±０．２０、１８．５９±０．２０、１９．４６±０．２０、１９．９１±０．２０、２０．６３±０．２０、２１．３５±０．２０、２１．８９±０．２０、２３．００±０．２０、２４．２０±０．２０、２５．４０±０．２０、２６．０３±０．２０、２７．４４±０．２０、２８．４６±０．２０、２９．４５±０．２０、３１．２２±０．２０、３１．８２±０．２０、３３．１７±０．２０、３３．５６±０．２０、および３６．８９±０．２０から選択される２θ値に２つ以上の回折ピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする、請求項８に記載の結晶。
【請求項１０】
前記Ｘ線粉末回折パターンは、１６．７０±０．２０、１８．５９±０．２０、１９．４６±０．２０、１９．９１±０．２０、２３．００±０．２０、および２４．２０±０．２０から選択される２θ値に２つ以上の回折ピークを含む、請求項９に記載の結晶。
【請求項１１】
前記結晶は、前記ピーク位置が以下の図
【化１１】
0005512289.tif 000013
に示すパターンのピーク位置と実質的に一致するＸ線粉末回折パターンを特徴とする、請求項８に記載の結晶。
【請求項１２】
前記結晶は、示差走査熱量測定トレースが以下の図
【化１２】
0005512289.tif 000014
に示すものと実質的に一致することを特徴とする、請求項８に記載の結晶。
【請求項１３】
薬学上許容可能な担体および請求項１〜１２のいずれか１つに記載の結晶を含む医薬組成物。
【請求項１４】
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの硫酸塩の結晶を調製するための方法であって、
（ａ）ヒドロキシ基が保護された３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの保護前駆体を硫酸に接触させて第１の反応混合物を形成する工程と、
（ｂ）３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの固体硫酸塩中間体を該第１の反応混合物から単離する工程と、
（ｃ）該固体硫酸塩中間体を、メタノールを含む希釈剤中に分散させて第２の反応混合物を形成する工程と、
（ｄ）該結晶を該第２の反応混合物から単離する工程と、
を包含する、方法。
【請求項１５】
前記保護前駆体は（Ｓ）−２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−カルボン酸｛２−［３−（３−カルバモイル−フェニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−８−イル］エチル｝シクロヘキシルメチル−アミドである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記メタノールを含む希釈剤は最大で２５％の水をさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記メタノールを含む希釈剤は５％〜１５％の水を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの硫酸塩の結晶を調製するための方法であって、
（ａ）３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドを硫酸に接触させて反応混合物を形成する工程と、
（ｂ）該硫酸塩の結晶を該反応混合物から単離する工程と、
を包含する、方法。
【請求項１９】
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの硫酸塩の結晶を調製するための方法であって、
（ａ）３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの硫酸塩の水和物の結晶を、メタノールを含む希釈剤中に分散させて反応混合物を形成する工程と、
（ｂ）該硫酸塩の結晶を該反応混合物から単離する工程と、
を包含する、方法。
【請求項２０】
前記メタノールを含む希釈剤は最大で２５％の水をさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
Ｎ−シクロヘキシルメチル−（２−オキソエチル）−カルバミン酸ベンジルエステルの重亜硫酸付加物。
【請求項２２】
μオピオイド受容体アンタゴニストを用いた治療により改善される哺乳類の疾患または医学的状態の治療における使用のための、請求項１〜１２のいずれか１つに記載の結晶を含む組成物であって、該疾患または医学的状態が、オピオイド誘発性腸管機能不全または術後腸閉塞である、組成物。
【請求項２３】
μオピオイド受容体アンタゴニストを用いた治療により改善される医学的状態を有する哺乳類を治療するための組成物であって、薬学的に許容される担体および請求項１〜１２のいずれか１つに記載の結晶を含み、該医学的状態が、オピオイド誘発性腸管機能不全または術後腸閉塞である、組成物。
【請求項２４】
哺乳類の消化管の運動性を増大するための組成物であって、薬学的に許容される担体および請求項１〜１２のいずれか１つに記載の結晶を含む、組成物。
【請求項２５】
哺乳類においてμオピオイド受容体に拮抗するための組成物であって、薬学的に許容される担体および請求項１〜１２のいずれか１つに記載の結晶を含む、組成物。
【請求項２６】
オピオイド鎮痛薬の使用に関連する副作用を軽減または予防するための組成物であって、薬学的に許容される担体および請求項１〜１２のいずれか１つに記載の結晶を含み、該オピオイド鎮痛薬の使用に関連する副作用が、便秘、胃排出能低下、腹痛、膨満感、吐き気、および胃食道逆流から選択される、組成物。
【請求項２７】
オピオイド鎮痛薬をさらに含む、請求項２６に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、μオピオイド受容体アンタゴニストとして有用な８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン化合物の結晶塩形態に関する。本発明はまた、当該結晶化合物を含む医薬組成物、μオピオイド受容体活性が媒介する医学的状態の治療または改善のための当該化合物の使用法、および当該化合物の調製に有用なプロセスにも関する。
【背景技術】
【０００２】
同一出願人により２００６年３月１日に出願された米国特許仮出願番号第６０／７７７，９６２号および２００６年８月３０日に出願された米国特許仮出願番号第６０／８４１，０２８号、ならびに米国特許出願番号第１１／７１１，９６１号は、μオピオイド受容体活性によって媒介される医学的状態の治療または改善に有用であることが期待されるμオピオイド受容体アンタゴニストである８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン化合物を開示している。特に、これらの出願では、化合物３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩がμオピオイド受容体アンタゴニスト活性を示すことが具体的に開示されている。
【０００３】
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド（以下、化合物１）の化学構造を以下に示す：
【０００４】
【化１】
0005512289.tif 000002
この化合物を治療薬として効果的に使用するためには、容易に製造可能であるとともに許容可能な化学的および物理的安定性を有するな固体塩形態を有するようにすることが望ましい。例えば、約１７５℃または約１８０℃を超える温度に対して熱安定性を有する塩形態を有し、吸湿性または潮解性のいずれでもないようにすることにより、原料の加工および保存を容易にすることは非常に望ましい。一般に、製品の純度および安定性を高めるためには、非晶形よりも結晶性固体が好ましい。
【０００５】
化合物１の非結晶塩形態は以前より報告されている。従って、吸湿性または融解性のいずれでもなく、良好な熱安定性を示す化合物１の安定した結晶塩形態に対する要望が存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの結晶硫酸塩またはその溶媒和物を提供する。１つの局面では、本発明の結晶塩形態は化合物１の結晶硫酸塩である。他の局面では、本発明の結晶塩形態は化合物１の硫酸塩の結晶水和物である。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの硫酸塩またはその溶媒和物である結晶塩形態。
（項目２）
前記結晶塩形態は結晶硫酸塩である、項目１に記載の結晶塩形態。
（項目３）
前記結晶塩形態は、６．５８±０．２０、７．５２±０．２０、９．３５±０．２０、１４．６９±０．２０、１６．０１±０．２０、１７．４５±０．２０、１７．９９±０．２０、１８．６２±０．２０、１９．７６±０．２０、２１．１１±０．２０、２２．０７±０．２０、２３．１８±０．２０、２３．７４±０．２０、２４．５６±０．２０、２５．６３±０．２０、２６．４５±０．２０、２７．８６±０．２０、２８．３１±０．２０、２９．５４±０．２０、３０．５９±０．２０、３１．５８±０．２０、３３．８９±０．２０、および３６．０２±０．２０から選択される２θ値に２つ以上の回折ピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする、項目２に記載の結晶塩形態。
（項目４）
前記Ｘ線粉末回折パターンは、１４．６９±０．２０、１６．０１±０．２０、２１．１１±０．２０、２２．０７±０．２０、および２３．１８±０．２０から選択される２θ値に２つ以上の回折ピークを含む、項目３に記載の結晶塩形態。
（項目５）
前記結晶塩形態は、前記ピーク位置が図１に示すパターンのピーク位置と実質的に一致するＸ線粉末回折パターンを特徴とする、項目２に記載の結晶塩形態。
（項目６）
前記結晶塩形態は、１０℃／分の加熱速度で記録された示差走査熱量測定トレースが約１９０℃〜約２０５℃の温度で吸熱流の最大値を示すことを特徴とする、項目２に記載の結晶塩形態。
（項目７）
前記結晶塩形態は、示差走査熱量測定トレースが図２に示すものと実質的に一致することを特徴とする、項目２に記載の結晶塩形態。
（項目８）
前記結晶塩形態は硫酸塩の水和物である、項目１に記載の結晶塩形態。
（項目９）
前記結晶塩形態は、９．４１±０．２０、９．９８±０．２０、１５．１７±０．２０、１６．７０±０．２０、１８．５９±０．２０、１９．４６±０．２０、１９．９１±０．２０、２０．６３±０．２０、２１．３５±０．２０、２１．８９±０．２０、２３．００±０．２０、２４．２０±０．２０、２５．４０±０．２０、２６．０３±０．２０、２７．４４±０．２０、２８．４６±０．２０、２９．４５±０．２０、３１．２２±０．２０、３１．８２±０．２０、３３．１７±０．２０、３３．５６±０．２０、および３６．８９±０．２０から選択される２θ値に２つ以上の回折ピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする、項目８に記載の結晶塩形態。
（項目１０）
前記Ｘ線粉末回折パターンは、１６．７０±０．２０、１８．５９±０．２０、１９．４６±０．２０、１９．９１±０．２０、２３．００±０．２０、および２４．２０±０．２０から選択される２θ値に２つ以上の回折ピークを含む、項目９に記載の結晶塩形態。
（項目１１）
前記結晶塩形態は、前記ピーク位置が図４に示すパターンのピーク位置と実質的に一致するＸ線粉末回折パターンを特徴とする、項目８に記載の結晶塩形態。
（項目１２）
前記結晶塩形態は、示差走査熱量測定トレースが図５に示すものと実質的に一致することを特徴とする、項目８に記載の結晶塩形態。
（項目１３）
薬学上許容可能な担体および項目１〜１２のいずれか１つに記載の結晶塩形態を含む医薬組成物。
（項目１４）
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの結晶硫酸塩を調製するためのプロセスであって、
（ａ）ヒドロキシ基が保護された３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの保護前駆体を硫酸に接触させて第１の反応混合物を形成する工程と、
（ｂ）３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの中間グレードの固体硫酸塩を該第１の反応混合物から単離する工程と、
（ｃ）該中間グレードの固体硫酸塩を、メタノールを含む希釈剤中に分散させて第２の反応混合物を形成する工程と、
（ｄ）該結晶硫酸塩を該第２の反応混合物から単離する工程と、
を包含する、プロセス。
（項目１５）
前記保護前駆体は（Ｓ）−２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−カルボン酸｛２−［３−（３−カルバモイル−フェニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−８−イル］エチル｝シクロヘキシルメチル−アミドである、項目１４に記載のプロセス。
（項目１６）
前記メタノールを含む希釈剤は最大で約２５％の水をさらに含む、項目１５に記載のプロセス。
（項目１７）
前記メタノールを含む希釈剤は約５％〜約１５％の水を含む、項目１５に記載のプロセス。
（項目１８）
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの結晶硫酸塩を調製するためのプロセスであって、
（ａ）３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドを硫酸に接触させて反応混合物を形成する工程と、
（ｂ）該結晶硫酸塩を該反応混合物から単離する工程と、
を包含する、プロセス。
（項目１９）
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの結晶硫酸塩を調製するためのプロセスであって、
（ａ）３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの硫酸塩の結晶水和物を、メタノールを含む希釈剤中に分散させて反応混合物を形成する工程と、
（ｂ）該結晶硫酸塩を該反応混合物から単離する工程と、
を包含する、プロセス。
（項目２０）
前記メタノールを含む希釈剤は最大で２５％の水をさらに含む、項目１９に記載のプロセス。
（項目２１）
Ｎ−シクロヘキシルメチル−（２−オキソエチル）−カルバミン酸ベンジルエステルの重亜硫酸付加物。
（項目２２）
治療に用いられる項目１〜１２のいずれか１つに記載の結晶塩形態。
（項目２３）
μオピオイド受容体アンタゴニストを用いた治療により改善される哺乳類の疾患または医学的状態の治療のための薬剤の製造における項目１〜１２のいずれか１つに記載の結晶塩形態の使用。
（項目２４）
前記疾患または状態はオピオイド誘発性腸管機能不全または術後腸閉塞である、項目２３に記載の使用。
（項目２５）
μオピオイド受容体アンタゴニストを用いた治療により改善される医学的状態を有する哺乳類を治療する方法であって、薬学的に許容される担体および項目１〜１２のいずれか１つに記載の結晶塩形態を含む医薬組成物を該哺乳類に投与する工程を包含する、方法。
（項目２６）
前記医学的状態はオピオイド誘発性腸管機能不全または術後腸閉塞である、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
哺乳類の消化管の運動性を増大する方法であって、薬学的に許容される担体および項目１〜１２のいずれか１つに記載の結晶塩形態を含む医薬組成物を該哺乳類に投与する工程を包含する、方法。
（項目２８）
哺乳類においてμオピオイド受容体に拮抗する方法であって、薬学的に許容される担体および項目１〜１２のいずれか１つに記載の結晶塩形態を含む医薬組成物を該哺乳類に投与する工程を包含する、方法。
【０００７】
意外なことに、本発明の結晶硫酸塩は、約１９０〜約２０５℃の範囲の融解温度未満では有意な熱的事象を示さず、室温において約２％〜約９０％の範囲の相対湿度に曝露すると約０．３％未満の質量変化を示すことが分かっている。さらに、室温において最大で約９０％の相対湿度に曝露すると、本発明の結晶硫酸塩またはその水和物のいずれもが融解性を有さなくなる。
【０００８】
いくつかの用途の中でも特に、本発明の結晶塩形態はμオピオイド受容体活性により媒介される医学的状態の治療または改善のための医薬組成物の調製に有用であることが期待される。従って、その組成物の他の局面では、本発明は、薬学的に許容される担体および３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの結晶硫酸塩またはその溶媒和物を含む医薬組成物を提供する。
【０００９】
本発明はまた、μオピオイド受容体アンタゴニストを用いた治療によって改善する疾患または状態（例えば、消化管の運動性が低下する障害）を治療または改善する方法であって、３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの結晶硫酸塩またはその溶媒和物の治療有効量を哺乳類に投与する工程を含む、方法を提供する。
【００１０】
本発明は、オピオイド誘発性腸管機能不全または術後腸閉塞を治療する方法であって、３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの結晶硫酸塩またはその溶媒和物の治療有効量を哺乳類に投与する工程を含む、方法をさらに提供する。
【００１１】
他の方法局面では、本発明は、本発明の結晶硫酸塩を調製するプロセスであって、３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドと硫酸を接触させて反応混合物を形成する工程と、結晶硫酸塩を反応混合物から単離する工程とを含む、プロセスを提供する。
【００１２】
本発明は、本発明の結晶硫酸塩を調製するためのさらなるプロセスであって、３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの硫酸塩の結晶水和物を、メタノールを含む希釈剤中に分散させて反応混合物を形成する工程と、結晶硫酸塩を反応混合物から単離する工程とを含む、プロセスを提供する。
【００１３】
さらに他の方法局面では、本発明は、化合物１の結晶硫酸塩を調製するプロセスであって、（ａ）ヒドロキシ基が保護された化合物１の保護前駆体を硫酸に接触させて第１の反応混合物を形成する工程と、（ｂ）化合物１の中間グレード（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ
ｇｒａｄｅ）の固体硫酸塩を第１の反応混合物から単離する工程と、（ｃ）中間グレードの固体硫酸塩を、メタノールを含む希釈剤中に分散させて第２の反応混合物を形成する工程と、（ｄ）結晶硫酸塩を第２の反応混合物から単離する工程とを含む、プロセスを提供する。
【００１４】
関連する組成物局面では、本発明は、上記化合物１の保護前駆体の調製に有用なＮ−シクロヘキシルメチル−（２−オキソエチル）−カルバミン酸ベンジルエステル重亜硫酸付加物（ｂｉｓｕｌｆｉｔｅ  ａｄｄｕｃｔ）を提供する。
【００１５】
本発明はまた、本発明の結晶硫酸塩を本明細書に記載するように療法に使用するかまたは薬剤として使用するとともに、薬剤の製造、特に、哺乳類のμオピオイド受容体活性に関連する障害を治療するための薬剤の製造における本発明の結晶硫酸塩の使用も提供する。
【００１６】
添付の図面を参照して本発明の各種局面を説明する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの結晶硫酸塩のＸ線粉末回折（ＸＰＲＤ）パターンを示す。
【図２】本発明の３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの結晶硫酸塩の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレース（右側縦軸）および熱重量分析（ＴＧＡ）トレース（ｔｒａｃｅ）（左側縦軸）を示す。
【図３】本発明の３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの結晶硫酸塩の動的水分吸着（ＤＭＳ）トレースを示す。
【図４】本発明の３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの硫酸塩の結晶水和物のＸ線粉末回折（ＸＰＲＤ）パターンを示す。
【図５】本発明の３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの硫酸塩の結晶水和物の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレース（右側縦軸）および熱重量分析（ＴＧＡ）トレース（左側縦軸）を示す。
【図６】本発明の３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの硫酸塩の結晶水和物の動的水分吸着（ＤＭＳ）トレースを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明は、３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの結晶硫酸塩またはその溶媒和物を提供する。
【００１９】
定義
本発明の化合物、組成物、および方法の説明では、特に明記しない限り、下記の用語は以下の意味を有する。
【００２０】
「治療有効量」という用語は、治療を必要とする患者に投与した場合に治療を行うに十分な量を意味する。
【００２１】
本明細書で用いる「治療」という用語は、哺乳類（特に、ヒト）等の患者の疾患、障害、または医学的状態の治療であって、下記のものを含む治療を意味する：
（ａ）疾患、障害、または医学的状態の発生の予防、すなわち、患者の予防的治療、
（ｂ）疾患、障害、または医学的状態の改善、すなわち、患者の疾患、障害、または医学的状態の解消または軽減（他の治療薬の影響を抑えることを含む）、
（ｃ）疾患、障害、または医学的状態の抑制、すなわち、患者の疾患、障害、または医学的状態の進行の遅延または阻止、または
（ｄ）患者の疾患、障害、または医学的状態の症状の緩和。
【００２２】
「溶媒和物」という用語は、１つ以上の溶質分子、すなわち、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩、および１つ以上の溶媒分子によって形成された複合体または集合体を意味する。そのような溶媒和物は、典型的には、溶質および溶媒のモル比が実質的に固定された結晶性固体である。代表的な溶媒の例としては、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、酢酸等が挙げられる。上記溶媒が水である場合、上記形成された溶媒和物を、具体的には、水和物と呼ぶ。
【００２３】
本明細書で用いる「結晶硫酸塩」、代替的には、「結晶硫酸塩（無水形態）」または「無水硫酸塩」という用語は、結晶格子中にモル分率が実質的に固定された溶媒分子を含まない結晶性固体、すなわち、溶媒和物または水和物のいずれでもない結晶性固体を意味する。本発明の溶媒和物（または具体的には水和物）については明示的に特定する。
【００２４】
本明細書および添付の請求の範囲において用いる「１つ」、「１つの」、「１個」、および「その」といった単数形は、文脈によって特に明示しない限り、複数のものについての言及も含む場合があることに留意されたい。
【００２５】
活性剤
本塩形態、すなわち、化合物１中の活性剤は、３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドと示す。代替的には、ＡｕｔｏＮｏｍソフトウェア（（ＭＤＬ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＧｍｂＨ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ））で実行するＩＵＰＡＣ命名法を用いて、上記化合物を、３−（（１Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドと示す。それゆえ、本明細書で用いる名称はＩＵＰＡＣ表記法に対応しており、８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン基に対する置換フェニル基のｅｎｄｏ配向が明示されている。さらに他の一般的な命名法では、上記分子の「（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ」部分は、（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−１−オキソプロピル）アミノ、または（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロパンアミド）として様々な名称で示される。
【００２６】
本発明の塩形態
１つの局面では、本発明は、結晶性３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩を提供する。
【００２７】
１つの局面では、本発明の結晶硫酸塩は、６．５８±０．２０、７．５２±０．２０、９．３５±０．２０、１４．６９±０．２０、１６．０１±０．２０、１７．４５±０．２０、１７．９９±０．２０、１８．６２±０．２０、１９．７６±０．２０、２１．１１±０．２０、２２．０７±０．２０、２３．１８±０．２０、２３．７４±０．２０、２４．５６±０．２０、２５．６３±０．２０、２６．４５±０．２０、２７．８６±０．２０、２８．３１±０．２０、２９．５４±０．２０、３０．５９±０．２０、３１．５８±０．２０、３３．８９±０．２０、および３６．０２±０．２０から選択される２θ値に２つ以上の回折ピーク（３つ以上および４つ以上の回折ピークを含む）を有するＸ線粉末回折（ＸＰＲＤ）パターンを特徴とする。特に、この局面では、上記結晶形態は、１４．６９±０．２０、１６．０１±０．２０、２１．１１±０．２０、２２．０７±０．２０、および２３．１８±０．２０から選択される２θ値に２つ以上の回折ピーク（３つ以上および４つ以上の回折ピークを含む）を有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００２８】
粉末Ｘ線回折の分野では周知のとおり、ＸＰＲＤスペクトルのピーク位置は、相対ピーク高さよりも、サンプル調製および機器形状の詳細等の実験の詳細による影響を相対的に受け難い。それゆえ、１つの局面では、化合物１の結晶硫酸塩は、ピーク位置が図１に示すものと実質的に一致するＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００２９】
上記結晶硫酸塩構造は、以下の格子パラメータを示す単結晶Ｘ線回折分析をさらに特徴とする：サイズがａ＝６．８２３９Å、ｂ＝１６．２２７５Å、ｃ＝２４．２０２１Å、α＝β＝γ＝９０°である斜方晶系の単位セル；セル体積（Ｖ）２６８０．０Å３；算出密度１．３８ｇ／ｃｍ３；空間群Ｐ２１２１２１（＃１９）。この結果得られた分子構造により、化学的組成物が硫酸塩対イオンと化合物１のモル比が１：１の化合物１の硫酸塩のものであり、非対称単位セルが水または他の溶媒分子のいずれも含まないことが確認される。導出された原子配置から予測されるＸ線粉末回折ピークは、観察されたＸＰＲＤパターンと極めてよく一致している。
【００３０】
他の局面では、本発明の結晶硫酸塩は、高温に曝露された際の作用を特徴とする。図２に示すように、高結晶サンプルの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレースは、約１９０℃〜約２０５℃の範囲において融解転移として特定される吸熱流のピークを示す。熱重量分析（ＴＧＡ）トレースは、融点未満の温度では有意な質量損失を示さない。熱分解は概ね融解時に生じる。
【００３１】
さらに他の局面では、結晶硫酸塩は、約４３０、５９０、６３９、７０５、８６７、１０３６、１０５３、１１０５、１１７１、１２３１、１２７７、１３７５、１３９１、１４５２、１４７６、１５５３、１５９６、１６３９、１６６４、２８５２、２９０７、２９２８、２９６７、３１６８、および３３５７ｃｍ−１に有意な吸収帯を示す赤外吸収スペクトルを特徴とする。
【００３２】
化合物１の結晶硫酸塩は、図３に示すように、吸湿性が非常に低い（すなわち、室温における湿度範囲が２％〜９０％の相対湿度において質量増加が約０．３％未満）可逆的吸着／脱着プロフィールを有することが証明されている。
【００３３】
さらに、化合物１の結晶硫酸塩は、高温および高湿度に対する曝露時に安定していることが分かっている。４０℃、７５％の相対湿度で４週間保存した後のＨＰＬＣ分析では化学劣化が示されず、ＤＳＣ、ＴＧＡ、またはＸＰＲＤの結果に検出可能な変化はなかった。
【００３４】
他の局面では、本発明は、化合物１の硫酸塩の結晶水和物を提供する。
【００３５】
１つの局面では、本発明の硫酸塩の結晶水和物は、９．４１±０．２０、９．９８±０．２０、１５．１７±０．２０、１６．７０±０．２０、１８．５９±０．２０、１９．４６±０．２０、１９．９１±０．２０、２０．６３±０．２０、２１．３５±０．２０、２１．８９±０．２０、２３．００±０．２０、２４．２０±０．２０、２５．４０±０．２０、２６．０３±０．２０、２７．４４±０．２０、２８．４６±０．２０、２９．４５±０．２０、３１．２２±０．２０、３１．８２±０．２０、３３．１７±０．２０、３３．５６±０．２０および３６．８９±０．２０から選択される２θ値に２つ以上の回折ピーク（３つ以上および４つ以上の回折ピークを含む）を有するＸ線粉末回折（ＸＰＲＤ）パターンを特徴とする。特に、この局面では、結晶形態は、１６．７０±０．２０、１８．５９±０．２０、１９．４６±０．２０、１９．９１±０．２０、２３．００±０．２０、および２４．２０±０．２０から選択される２θ値に２つ以上の回折ピーク（３つ以上および４つ以上の回折ピークを含む）を有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００３６】
他の局面では、化合物１の硫酸塩の結晶水和物は、ピーク位置が図４に示すものと実質的に一致するＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００３７】
本発明の硫酸塩の結晶水和物はまた、図５に示すように、１０℃／分の加熱速度で分析した場合に、２つの吸熱事象（約１２５〜約１３３℃の範囲の吸熱流における第１のピークおよび約１７８〜約１８３℃の範囲の第２のピーク）を示す示差走査熱量測定（ＤＳＣ）トレースを特徴とする。熱重量分析（ＴＧＡ）トレースは、約６０〜約１４０℃の間に第１の熱的事象を示し、約１４０〜約１９０℃の間に第２の熱的事象を示す。第１の熱的事象において蒸発した原料のＩＲと組み合わせたＴＧＡ分析は、１モルの化合物１硫酸塩につき約１モルの水を有する水和物組成物と一致している。
【００３８】
意外なことに、化合物１の硫酸塩の結晶水和物は低吸湿性を示した。図６に示すように、この結晶水和物は、室温では、約２％〜約９０％の相対湿度の全範囲に渡って可逆的吸着／脱着プロフィールを示し、当該相対湿度の全範囲における質量増加は約０．３％未満である。
【００３９】
本発明の塩形態のこれらの特性は下記の実施例においてさらに説明する。
【００４０】
合成手順
活性剤（３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド）は、下記の実施例に記載の手順を用いるか、または本願の背景技術に示す同一出願人による米国出願に記載の手順を用いて、容易に入手可能な出発原料から調製することできる。
【００４１】
１つの調製法では、本発明の結晶硫酸塩は、３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドを約０．５〜約１．５モル当量（約１モル当量を含む）の硫酸に接触させることにより調製される。一般に、この反応は、約０℃〜約６５℃（約６０〜約６５℃を含む）の範囲の温度において、不活性希釈剤中で行われる。適切な不活性希釈剤としては、例えば、メタノール、トルエン、ジクロロメタン、トルエンとアセトニトリル、ジクロロメタンとアセトニトリル、およびトルエンとアセトニトリルと水等の組み合わせ、ならびに約１０％水を含むメタノールと水の組み合わせが挙げられる。これらの希釈剤を用いて、約５〜約４００ｍｇ／ｍＬ（約５０〜約１００ｍｇ／ｍＬを含む）の濃度の反応混合物を調製し、必要に応じて撹拌しながら約２〜約２４時間放置する。この混合物は、放置期間中に約５〜約２０℃まで冷却してもよい。
【００４２】
反応の終了時に、本発明の結晶塩を、ろ過、濃縮、遠心分離等のいずれかの常法によって反応混合物から単離する。
【００４３】
代替的には、本発明の結晶硫酸塩は、上記水和物形態の再結晶化によって調製される。この結晶水和物を約５〜約４００ｍｇ／ｍｌの濃度で上記のような不活性希釈剤に分散させる。メタノール、または約３：１〜約９：１の割合のメタノールと水の組み合わせは、この反応に特に有用な希釈剤である。上記反応混合物を、典型的には、約１〜約２４時間（約１〜約６時間を含む）撹拌しながら、約０〜約６５℃の温度に維持する。典型的には、上記反応混合物を放置期間中に約６５℃から約５〜約２０℃まで冷却する。収率を上げるために、上記反応混合物を約１〜約２４時間（約１〜約６時間を含む）、約５〜約２０℃の温度で放置する前に、溶液の容積を約５０％低減させてもよい。この結果得られた結晶を従来の方法で回収する。
【００４４】
化合物１の硫酸塩の結晶硫酸塩および結晶水和物はともに、化合物１の保護前駆体から有利に調製される。下記の実施例で説明するように、上記活性剤を調製するために、保護アルデヒド２（その重亜硫酸付加物３から再生したＮ−シクロヘキシルメチル−（２−オキソエチル）−カルバミン酸ベンジルエステル）と３−ｅｎｄｏ−（８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）−ベンズアミド塩酸塩４とを結合し、保護中間体５を得て、これを脱保護して、３−ｅｎｄｏ−｛８−［２−（シクロヘキシルメチルアミノ）エチル］−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝ベンズアミド６を得る。
【００４５】
【化２】
0005512289.tif 000003
中間体６とリチウム（４Ｓ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボン酸塩７とを反応させることにより、保護中間体（Ｓ）−２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−カルボン酸｛２−［３−（３−カルバモイル−フェニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−８−イル］エチル｝シクロヘキシルメチル−アミド８を得る。
【００４６】
【化３】
0005512289.tif 000004
保護中間体８を、約２０〜約３０℃の温度の酢酸エチルまたは酢酸イソプロピル等の不活性希釈剤中において、約０．８〜約１．３当量、典型的には、約１〜約１．２当量の硫酸水と接触させる。典型的には、上記反応混合物との混和性を有し、上記生成物が溶けにくい第２の希釈剤が上記反応混合物に含まれる。アセトニトリルは第２の希釈剤として有用である。典型的には、上記反応混合物を約２〜約７２時間撹拌することで、化合物８を脱保護し、典型的には大部分が化合物１の硫酸塩の結晶水和物である化合物１の中間グレードの固体硫酸塩を形成する。この中間グレード生成物は、従来の方法、例えば、ろ過によって単離することができる。
【００４７】
上記水和物形態は、下記実施例２に記載するように、上記中間グレード硫酸塩生成物の再結晶化、例えば、上記中間グレード生成物をアセトニトリル中に懸濁して加熱し、水を加えることにより溶解を促進し、周囲温度まで冷却し、再結晶化した水和物形態を単離することにより得てもよい。
【００４８】
化合物１の結晶硫酸塩は、上記の脱保護工程の中間グレード固体生成物から得てもよい。当該中間グレード生成物を、約５〜約４００ｍｇ／ｍＬ（約５０〜約２００ｍｇ／ｍＬを含む）の濃度でメタノールを含む不活性希釈剤中に分散させる。意外なことに、最大で２５％の水（約０〜約１５％の水、および約５〜約１５％の水を含む）を含むメタノールと水の組み合わせは、無水結晶塩の調製に有用な希釈剤であることが分かっている。特に、約１０％の水を含むメタノールと水の組み合わせは、中間グレード生成物を本発明の無水硫酸塩に再結晶化する際に有用である。
【００４９】
典型的な再結晶化プロセスでは、上記反応混合物を完全に溶解するまで加熱する（例えば、反応混合物を約６５℃に加熱した後、約２〜約２４時間かけて約５〜約２２℃まで冷却する）。随意に、上記反応混合物が溶解温度未満のときには、上記無水硫酸塩の種晶を加えることができる。この結果得られた結晶を従来の方法、例えば、ろ過により回収する。
【００５０】
さらに他のプロセスによると、上記水和物形態を上記結晶硫酸塩（無水）形態から調製してもよい。典型的には、まず、例えば、上記結晶硫酸塩から調製した溶液を凍結乾燥または急速蒸発させることにより、上記結晶硫酸塩をより可溶性が高い非晶形に変換する。次いで、この無定形固体硫酸塩原料を水性溶媒系（例えば、２５％水および７５％アセトニトリル）中に分散させ、随意に、約０〜約６５℃の範囲の温度で約１２時間を超えるかまたは約２４時間を超える期間撹拌する。典型的には、まず、温度を約６５℃に上げた後、約５〜約２０℃に下げる。この結果得られた結晶水和物形態を従来の方法で回収する。
【００５１】
従って、１つの方法局面では、本発明は、いくつかのプロセスの中でも特に、化合物１の結晶硫酸塩を調製するプロセスであって、（ａ）ヒドロキシ基が保護された化合物１の保護前駆体と硫酸とを接触させて第１の反応混合物を形成する工程と、（ｂ）第１の反応混合物から化合物１の中間グレードの固体硫酸塩を単離する工程と、（ｃ）中間グレードの固体硫酸塩を、メタノールを含む希釈剤中に分散させて第２の反応混合物を形成する工程と、（ｄ）結晶硫酸塩を第２の反応混合物から単離する工程とを含む、プロセスを提供する。
【００５２】
さらに、１つの組成物局面では、本発明は、化合物１の調製に有用なＮ−シクロヘキシルメチル−（２−オキソエチル）−カルバミン酸ベンジルエステル重亜硫酸付加物３を提供する。調製１に記載するように、重亜硫酸付加物３は、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリドを用いてシクロへキサンカルボキシアルデヒドを２，２−ジエトキシエチルアミンで還元的アミノ化した後、アミノ保護基を加え、アルデヒド官能基の脱保護を行い、亜硫酸水素ナトリウムとの反応により重亜硫酸付加物への変換を行うことにより調製することができる。代替的には、初期の還元的アミノ化は、接触水素化により行うことができる。適切な水素化触媒は、パラジウム、白金、およびラネーニッケル触媒を含むがこれらに限定されない。
【００５３】
医薬組成物
本発明の結晶硫酸塩形態は、典型的には、医薬組成物または製剤の形態で患者に投与される。そのような医薬組成物は、経口、直腸、膣内、鼻腔内、吸入、局所（経皮を含む）、および非経口投与方式を含むがこれらに限定されないあらゆる許容可能な投与経路で患者に投与してもよい。
【００５４】
従って、その組成物局面の１つでは、本発明は、薬学的に許容される担体または賦形剤、および化合物１の結晶硫酸塩またはその溶媒和物の治療有効量を含む医薬組成物に関する。随意に、そのような医薬組成物は、必要に応じて、他の治療および／または配合薬を含有するようにしてもよい。組成物の説明では、「本発明の塩」という用語は、化合物１の結晶硫酸塩および溶媒和物、特に、その水和物を含むことは言うまでもない。
【００５５】
本発明の医薬組成物は、典型的には、本発明の塩の形態で存在する上記活性剤の治療有効量を含有する。典型的には、そのような医薬組成物は、上記活性剤の約０．１〜約９５重量％、好ましくは、約５〜約７０重量％、より好ましくは、上記活性剤の約１０〜約６０重量％を含有する。
【００５６】
従来の担体または賦形剤を本発明の医薬組成物中に用いてもよい。特定の担体もしくは賦形剤の選択、または担体もしくは賦形剤の組み合わせは、特定の患者を治療するために用いる投与方式または医学的状態もしくは病状の種類に依存する。この点において、特定の投与方式に適した医薬組成物の調製は、十分に、医薬分野における当業者の知識の範囲内である。さらに、本発明の医薬組成物中に用いられる担体または賦形剤は市販されている。さらなる例示としては、従来の製剤化技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（２０００）；およびＨ．Ｃ．  Ａｎｓｅｌら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９９９）に記載されている。
【００５７】
薬学上許容可能な担体として作用可能な原料の代表例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：糖類（例えば、ラクトース、グルコース、およびスクロース）；でんぷん（例えば、トウモロコシでんぷん、およびジャガイモでんぷん）；セルロース（例えば、微結晶性セルロース、およびその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロース））；トラガント末；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤（例えば、ココアバター、および座剤蝋；油類（例えば、ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、および大豆油）；グリコール類（例えば、プロピレングリコール）；ポリオール類（例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコール）；エステル類（例えば、オレイン酸エチル、およびラウリン酸エチル）；寒天；緩衝剤（例えば、水酸化マグネシウム、および水酸化アルミニウム）；アルギン酸；発熱物質除去水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；および医薬組成物で用いる他の非毒性適合性物質。
【００５８】
医薬組成物は、典型的には、上記活性剤を薬学的に許容される担体および１つ以上の任意成分と完全かつ十分に混合またはブレンドすることによって調製する。次いで、この結果得られた均一にブレンドされた混合物を、従来の手順および装置を用いて錠剤、カプセル、丸薬等に成形または充填することができる。
【００５９】
本発明の医薬組成物は、好ましくは、単位用量形態で包装される。「単位用量形態」という用語は、患者への投薬に適した物理的に個別の単位を指すものであり、すなわち、各単位は、所望の治療効果を単独でまたは１つ以上のさらなる単位と組み合わせて得られるように計算された所定量の活性剤を含有する。例えば、そのような単位用量形態は、カプセル、錠剤、丸薬等、または非経口投与に適した単位包装であってもよい。
【００６０】
１つの実施形態では、本発明の医薬組成物は経口投与に適している。経口投与に適した医薬組成物は、カプセル、錠剤、丸薬、トローチ剤、カシェ剤、糖衣錠、粉末、顆粒；または水性もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液として；または水中油もしくは油中水乳濁液；またはエリキシル剤もしくはシロップ等の形態であってもよく、それぞれ、本発明の所定量の化合物を活性成分として含有するようにしてもよい。
【００６１】
固形製剤形態で（すなわち、カプセル、錠剤、丸薬等として）経口投与する場合、本発明の医薬組成物は、典型的には、上記活性剤および１つ以上の薬学的に許容される担体（例えば、クエン酸ナトリウム、または第二リン酸カルシウム）を含む。随意に、または代替的には、そのような固形製剤形態はまた、充填剤または増量剤（例えば、でんぷん、微結晶性セルロース、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および／またはケイ酸）；結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、および／またはアラビアゴム）；保湿剤（例えば、グリセロール）；崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカでんぷん、アルギン酸、一部のケイ酸塩、および／または炭酸ナトリウム）；溶液遅延剤（例えば、パラフィン）；吸収促進剤（例えば、４級アンモニウム化合物）；潤沢剤（例えば、セチルアルコール、および／またはモノステアリン酸グリセロール）；吸収剤（例えば、カオリン、および／またはベントナイト粘土）；潤滑剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、および／またはそれらの混合物）；着色剤；および緩衝剤を含んでもよい。
【００６２】
離型剤、湿潤剤、コーティング剤、甘味、香味および芳香剤、保存料、ならびに抗酸化剤も本発明の医薬組成物中に存在させることができる。薬学的に許容される抗酸化剤の例としては、水溶性抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等）；油溶性抗酸化剤（例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロール等）；および金属キレート剤（例えば、クエン酸、エチレンジアミン４酢酸、ソルビトール、酒石酸、リン酸等）が挙げられる。錠剤、カプセル、丸薬等のためのコーティング剤は、腸溶コーティング（酢酸フタル酸セルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタクリル酸−メタクリル酸エステル共重合体、酢酸セルローストリメリテート、カルボキシメチルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル酢酸セルロースコハク酸塩等）に用いられるものを含む。
【００６３】
本発明の医薬組成物はまた、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを各種割合で用いるか、または他のポリマーマトリックス、リボソーム、および／またはミクロスフェアを用いて、活性剤を徐々にまたは制御して放出するように製剤化されてもよい。また、本発明の医薬組成物は、随意に、乳白剤を含有してもよく、活性成分のみを、または好ましくは、消化管の一部において、随意に、遅延させて放出するように製剤化してもよい。使用可能な埋込組成物の例としては、高分子物質およびワックスが挙げられる。上記活性剤はまた、マイクロカプセル形態とすることができ、適切であれば、上記賦形剤の１つ以上を有するようにすることができる。
【００６４】
経口投与に適した液体投与形態は、例えば、薬学的に許容される乳濁液、微細乳濁液、溶液、懸濁液、シロップ、およびエリキシル剤を含む。液体投与形態は、典型的には、上記活性剤および不活性希釈剤（例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤（例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油類（特に、綿実、ラッカセイ、トウモロコシ、胚芽、オリーブ、ヒマシ、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、およびそれらの混合物を含む。上記活性成分に加えて、懸濁液は、懸濁化剤（例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、およびソルビタンエステル）、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｕｍ  ｍｅｔａｈｙｄｒｏｘｉｄｅ）、ベントナイト、寒天、およびトラガカント、ならびにそれらの混合物を含有してもよい。
【００６５】
本発明の塩はまた、非経口（例えば、静脈内、皮下、筋内、または腹腔内注射）で投与することができる。非経口投与に関しては、上記活性剤は、典型的には、例えば、滅菌水性溶液、生理食塩水、低分子量アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、植物油類、ゼラチン、脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチル）等を含む、非経口投与に適したビヒクルと混ぜる。非経口製剤はまた、抗酸化物質、可溶化剤、安定剤、保存料、湿潤剤、乳化剤、または分散剤のうちの１つ以上を含有してもよい。これらの製剤は、滅菌注射媒体、滅菌剤、ろ過、放射線、または熱を用いて滅菌してもよい。
【００６６】
代替的には、本発明の医薬組成物は吸入投与用に製剤化される。吸入投与に適した医薬組成物は、典型的には、エアロゾルまたは粉末の形態である。そのような組成物は、一般に、周知の送達装置（例えば、定量吸入器、乾燥粉末吸入器、噴霧器、または同様の送達装置）を用いて投与される。
【００６７】
高圧容器を用いて吸入投与する場合、本発明の医薬組成物は、典型的には、上記活性成分、および適切な高圧ガス（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適切なガス）を含む。さらに、上記医薬組成物は、本発明の化合物および粉末吸入器での使用に適した粉末を含むカプセルまたはカートリッジ（例えば、ゼラチン製）の形態であってもよい。適切な粉末原料は、例えば、ラクトースまたはでんぷんを含む。
【００６８】
本発明の塩はまた、公知の経皮送達システムおよび賦形剤を用いて経皮投与することができる。例えば、上記活性剤は、透過促進剤（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールモノラウレート、アザシクロアルカン−２−オン等）と混ぜ、パッチまたは同様の送達系に組み込むことができる。必要に応じて、そのような経皮組成物中にゲル化剤、乳化剤、および緩衝剤を含むさらなる賦形剤を用いてもよい。
【００６９】
必要に応じて、本発明の塩は、１つ以上の他の治療薬と組み合わせて投与してもよい。この実施形態では、本発明の塩は、当該他の治療薬と物理的に組み合わされて両方の薬剤を含有する組成物を形成するか、または各薬剤は、同時にまたは連続して患者に投与される別々の異なる組成物中に存在する。
【００７０】
例えば、本発明の塩は、従来の手順および装置を用いて第２の治療薬と組み合わせて、化合物１および第２の治療薬を含む組成物を形成することができる。さらに、当該治療薬は、薬学上許容可能な担体と組み合わせて、本発明の塩、第２の治療薬、および薬学上許容可能な担体を含む医薬組成物を形成するようにしてもよい。この実施形態では、当該組成物の成分は、典型的には、混合またはブレンドされて物理的混合物を生成する。次いで、この物理的混合物の治療有効量を、本明細書に記載の経路のいずれかを用いて投与する。代替的には、上記治療薬は、患者に投与する前は、個別に分離していてもよい。この実施形態では、上記薬剤は、投与前には物理的に混合しないが、同時に投与されるか、または別々の時点で別々の組成物として投与される。このような組成物は別個に包装可能か、またはキットとして一緒に包装してもよい。キット中のこれら２つの治療薬は、同一の投与経路または異なる投与経路で投与してもよい。
【００７１】
本活性剤と適合する治療薬を上記第２の治療薬として用いてもよい。特に、μオピオイド受容体拮抗以外のメカニズムを介して作用する運動促進剤は、本化合物と組み合わせて用いてもよい。例えば、５−ＨＴ４受容体作用薬（例えば、テガセロド、レンザプリド、モサプリド、プルカロプリド、１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミド、１−イソプロピル−２−オキソ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（メタンスルホニル−メチル−アミノ）プロピル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミド、または４−（４−｛［（２−イソプロピル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボニル）アミノ］メチル｝−ピペリジン−１−イルメチル）ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル）を上記第２の治療薬として用いてもよい。
【００７２】
さらなる有用な運動促進剤としては、５−ＨＴ３受容体作用薬（例えば、プモセトラグ）、５−ＨＴ１Ａ受容体アンタゴニスト（例えば、ＡＧＩ００１）、アルファ−２−デルタリガンド（例えば、ＰＤ−２１７０１４）、塩素チャンネル開口薬（例えば、ルビプロストン（ｌｕｂｉｐｒｏｓｔｏｎｅ））、ドーパミンアンタゴニスト（例えば、イトプリド（ｉｔｏｐｒｉｄｅ）、メタクロプラミド（ｍｅｔａｃｌｏｐｒａｍｉｄｅ）、ドンペリドン（ｄｏｍｐｅｒｉｄｏｎｅ））、ＧＡＢＡ−Ｂ作用薬（例えば、バクロフェン（ｂａｃｌｏｆｅｎ）、ＡＧＩ００６）、κオピオイド作用薬（例えば、アシマドリン（ａｓｉｍａｄｏｌｉｎｅ））、ムスカリンＭ１およびＭ２アンタゴニスト（例えば、アコチアミド（ａｃｏｔｉａｍｉｄｅ））、モチリン作用薬（例えば、ミテムシナル（ｍｉｔｅｍｃｉｎａｌ））、グアニル酸シクラーゼ活性剤（例えば、ＭＤ−１１００）、およびグレリン作用薬（例えば、Ｔｚｐ１０１、ＲＣ１１３９）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００７３】
さらに、本発明の塩は、オピオイド治療薬と組み合わせることができる。そのようなオピオイド剤としては、モルヒネ、ペチジン、コデイン、ジヒドロコデイン、オキシコンチン、オキシコドン、ヒドロコドン、スフェンタニル、フェンタニル、レミフェンタニル、ブプレノルフィン、メタドン、およびヘロインが挙げられるがこれらに限定されない。
【００７４】
そのような治療薬のさらなる例の多くが当該分野では公知であり、そのような公知の治療薬のいずれかと本発明の化合物とを組み合わせて用いてもよい。二次的薬剤を含む場合、それらは治療有効量、すなわち、本発明の化合物と併用投与した場合に治療に有益な効果を及ぼす量で存在する。本発明の化合物と組み合わせて投与される他の治療薬の適切な用量は、典型的には、１日あたり約０．０５μｇ〜約１００ｍｇの範囲である。
【００７５】
従って、本発明の医薬組成物は、随意に、上記のような第２の治療薬を含む。
【００７６】
以下の例では、本発明の代表的な医薬組成物を説明する。
【００７７】
調合例Ａ：経口投与用硬ゼラチンカプセル
【００７８】
本発明の塩（５０ｇ）、噴霧乾燥ラクトース（２００ｇ）、およびステアリン酸マグネシウム（１０ｇ）を完全にブレンドする。この結果得られた組成物を硬ゼラチンカプセルに充填する（カプセル１個あたり組成物２６０ｍｇ）。
【００７９】
調合例Ｂ：経口投与用硬ゼラチンカプセル
本発明の塩（２０ｍｇ）、でんぷん（８９ｍｇ）、微結晶性セルロース（８９ｍｇ）、およびステアリン酸マグネシウム（２ｍｇ）を完全にブレンドした後、米国規格４５メッシュの篩にかける。この結果得られた組成物を硬ゼラチンカプセルに充填する（カプセル１個あたり組成物２００ｍｇ）。
【００８０】
調合例Ｃ：経口投与用ゼラチンカプセル
本発明の塩（１０ｍｇ）、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（５０ｍｇ）、およびでんぷん粉末（２５０ｍｇ）を完全にブレンドした後、ゼラチンカプセルに充填する（カプセル１個あたり組成物３１０ｍｇ）。
【００８１】
調合例Ｄ：経口投与用錠剤
本発明の塩（５ｍｇ）、でんぷん（５０ｍｇ）、および微小性結晶セルロース（３５ｍｇ）を米国規格４５メッシュの篩にかけ、完全に混合する。ポリビニルピロリドン溶液（水中１０ｗｔ％、４ｍｇ）をこの結果得られた粉末と混合した後、この混合物を米国規格１４メッシュの篩にかける。そのようにして作成した顆粒を５０〜６０℃で乾燥させ、米国規格１８メッシュの篩にかける。次いで、予め米国規格６０メッシュの篩にかけたカルボキシメチルナトリウムでんぷん（４．５ｍｇ）、ステアリン酸マグネシウム（０．５ｍｇ）、およびタルク（１ｍｇ）をこの顆粒に加える。混合した後、その混合物を錠剤機で圧縮して、１００ｍｇの重さの錠剤を得る。
【００８２】
調合例Ｅ：経口投与用錠剤
本発明の塩（２５ｍｇ）、微結晶性セルロース（４００ｍｇ）、ヒュームド二酸化ケイ素（１０ｍｇ）、およびステアリン酸（５ｍｇ）を完全にブレンドした後、圧縮して錠剤を形成する（錠剤１個あたり組成物４４０ｍｇ）。
【００８３】
調合例Ｆ：経口投与用１割線錠剤
本発明の塩（１５ｍｇ）、トウモロコシでんぷん（５０ｍｇ）、クロスカルメロースナトリウム（２５ｍｇ）、ラクトース（１２０ｍｇ）、およびステアリン酸マグネシウム（５ｍｇ）を完全にブレンドした後、圧縮して１割線錠剤を形成するする（錠剤１個あたり組成物２１５ｍｇ）。
【００８４】
調合例Ｇ：経口投与用懸濁液
以下の成分を完全に混合して、懸濁液１０ｍＬあたり活性成分１００ｍｇを含有する経口投与用懸濁液を形成する：
【００８５】
【化４】
0005512289.tif 000005
調合例Ｈ：乾燥粉末組成物
本発明の微粉末塩（１ｍｇ）をラクトース（２５ｍｇ）とブレンドした後、ゼラチン吸入カートリッジ内に充填する。カートリッジの内容物を、粉末吸入器を用いて投与する。
【００８６】
調合例Ｊ：注射製剤
本発明の塩（０．１ｇ）を０．１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝剤溶液（１５ｍＬ）とブレンドする。この結果得られた溶液のｐＨを、１Ｎ含水塩酸または１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ６に調節する。次いで、クエン酸塩緩衝剤中の滅菌生理食塩水を加えて全容積を２０ｍＬにする。
【００８７】
特定の投与方式に適した本発明のあらゆる形態の塩（すなわち、結晶塩または溶媒和物）を上記の医薬組成物中に用いることができることは言うまでもない。
【００８８】
効用
本活性剤（３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩）は、μオピオイド受容体のアンタゴニストであるため、本発明の塩は、μオピオイド受容体によって媒介されるか、またはμオピオイド受容体活性に関連する医学的状態、すなわち、μオピオイド受容体アンタゴニストを用いた治療により改善される医学的状態の治療に有用であることが期待される。特に、本発明の塩は、オピオイド鎮痛薬の使用に関連する副作用、すなわち、オピオイド誘発性腸管機能不全と総称される便秘、胃排出能低下、腹痛、膨満感、吐き気、および胃食道逆流等の症状の治療に有用であることが期待される。本塩形態はまた、術後腸閉塞、腹部または他の手術後に発生する消化管の運動性低下障害の治療に有用であることが期待される。さらに、オピオイド誘発性吐き気および嘔吐に対して化合物１等のμオピオイド受容体アンタゴニスト化合物が使用可能であることが示唆されている。
【００８９】
化合物１は、動物モデルにおいて胃腸（ＧＩ）管の運動性を増大することが示されているため、本発明の塩は、ヒトを含む哺乳類における運動性の低下によって生じるＧＩ管の障害の治療に有用であることが期待される。そのようなＧＩ運動性障害の例としては、慢性便秘、便秘型過敏性大腸症候群（Ｃ−ＩＢＳ）、糖尿病性および突発性胃不全麻痺、ならびに機能性消化不良が挙げられる。
【００９０】
１つの局面では、それゆえ、本発明は、哺乳類の消化管の運動性を増大する方法であって、薬学的に許容される担体および本発明の塩を含む医薬組成物の治療有効量を哺乳類に投与する工程を含む方法を提供する。
【００９１】
μオピオイド受容体によって媒介されるＧＩ管の運動性低下障害または他の病状の治療に用いる場合、本発明の塩は、典型的には、１日に１回または１日に複数回経口投与されるが、他の投与形態を用いてもよい。例えば、特に、術後腸閉塞の治療に用いる場合、本発明の化合物を非経口投与してもよい。１回に投与される活性剤の量または１日の総投与量は、典型的には、治療する疾患、選択した投与経路、実際に投与する化合物およびその相対活性、個々の患者の年齢、体重、および反応、患者の症状の重篤性等を含む関連する状況を考慮して、医師により決定される。
【００９２】
μオピオイド受容体によって媒介されるＧＩ管の運動性低下障害または他の障害の治療に適した用量は、１日あたり活性剤約０．０００７〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲（１日あたり約０．０００７〜約１．４ｍｇ／ｋｇを含む）である。平均的な７０ｋｇのヒトについては、これは、１日あたり活性剤約０．０５〜約１００ｍｇとなる。
【００９３】
本発明の１つの局面では、本発明の化合物を用いてオピオイド誘発性腸管機能不全を治療する。オピオイド誘発性腸管機能不全の治療に用いる場合、本発明の化合物は、典型的には、１日に１回または１日に複数回経口投与される。好ましくは、オピオイド誘発性腸管機能不全を治療するための用量は、１日あたり約０．０５〜約１００ｍｇの範囲である。
【００９４】
本発明の他の局面では、本発明の化合物を用いて術後腸閉塞を治療する。術後腸閉塞の治療に使用する場合、本発明の化合物は、典型的には、１日に１回または１日に複数回経口または静脈内投与される。好ましくは、術後腸閉塞を治療するための用量は、１日あたり約０．０５〜約１００ｍｇの範囲である。
【００９５】
本発明はまた、μオピオイド受容体活性に関連する疾患または状態を有する哺乳類を治療する方法であって、本発明の化合物、または本発明の化合物を含む医薬組成物の治療有効量を哺乳類に投与する工程を含む、方法を提供する。
【００９６】
本活性剤は、随意に、他の治療薬または薬剤と組み合わせて、特に、非μオピオイド機構を介して作用する運動促進剤と組み合わせて投与される。従って、他の局面では、本発明の方法および組成物は、他の運動促進剤の治療有効量をさらに含む。
【００９７】
上記のとおり、本発明の塩はμオピオイド受容体アンタゴニストである。本発明は、それゆえ、哺乳類においてμオピオイド受容体に拮抗する方法であって、本発明の塩を哺乳類に投与する工程を含む、方法をさらに提供する。
【００９８】
いくつかの特徴の中でも特に、本活性剤は、自由塩基および硫酸塩形態において、μオピオイド受容体に対して強力に結合し、μ受容体機能アッセイにおいて、受容体活性化作用をほとんどまたは全く示さないことが分かっている。それゆえ、本発明の塩は、強力なμオピオイド受容体アンタゴニストである。さらに、活性剤は、動物モデルにおける中枢神経系活動と比較して、大部分が末梢活性であることを示している。それゆえ、本発明の塩は、有益な中枢鎮痛効果に干渉することなく、オピオイド誘発性ＧＩ運動性低下を改善することを期待することができる。これらの特性は、本発明の化合物の効用とともに、当業者に周知の各種インビトロおよびインビボアッセイを用いて実証することができる。代表的なアッセイを以下の実施例においてさらに詳細に説明する。
【実施例】
【００９９】
以下の合成および生物学的実施例は本発明を例示するものであり、いずれにおいても本発明の範囲を限定するためのものであると解釈されるものではない。下記実施例では、下記の略語は特に明示しない限り以下の意味を有する。下記において定義していない略語の意味は一般に認識されるものである。
【０１００】
ＤＩＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＥｔＯＨ＝エタノール
ＭｅＴＨＦ＝２−メチルテトラヒドロフラン
ＭＴＢＥ＝ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル
ＮａＨＭＤＳ＝ビス（トリメチルシリル）アミドナトリウム
ＰｙＢｏｐ＝ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノ−六フッ化リン酸ホスホニウム
ｐｓｉ＝ポンド／平方インチ
Ｒｔ＝保持時間
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン  。
【０１０１】
試薬および溶媒を民間供給業者（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｋａ、Ｓｉｇｍａ等）から購入し、さらに精製することなく使用した。特に明示しない限り、反応は窒素雰囲気下で行った。反応混合の進捗状況は、薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）、分析高速液体クロマトグラフィ（分析ＨＰＬＣ）、および質量分析により監視した。下記のプロトコルを用いて生成物のｅｎｄｏ／ｅｘｏ比をＨＰＬＣ分析により判定した。反応混合物は、各反応について具体的に説明するとおりに作成したが、一般に、抽出、ならびに温度および溶媒依存結晶化、および沈殿等の他の精製方法により精製した。反応生成物の特性解析を質量および１Ｈ−ＮＭＲ分析を用いて通法で実施した。ＮＭＲ測定については、サンプルを重水素化溶媒（ＣＤ３ＯＤ、ＣＤＣｌ３、またはＤＭＳＯ−ｄ６）に溶解し、標準的な観測条件においてＶａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ２０００測定器（３００ＭＨｚ）で１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを得た。Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）モデルＡＰＩ  １５０  ＥＸ測定器またはＡｇｉｌｅｎｔ（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）モデル１１００ＬＣ／ＭＳＤ測定器を用いて化合物の質量分析同定をエレクトロスプレーイオン化方法（ＥＳＭＳ）で行った。
【０１０２】
一般的なＨＰＬＣ条件
カラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ａｑ、５μｍ．４．６×２５０ｍｍ
カラム温度：４０℃
流量：１．０ｍＬ／分
移動相：Ａ＝水／ＡＣＮ（９８：２）＋０．１％ＴＦＡ
Ｂ＝水／ＡＣＮ（１０：９０）＋０．１％ＴＦＡ，
注入量：１０μＬ
検出器波長：２１４ｎｍ
ＨＰＬＣ法１
粗化合物を水／ＡＣＮ（５０：５０）に約１ｍｇ／ｍＬで溶解し、以下の勾配を用いて２０分かけて分析した（時間（分）／％Ｂ）：０／１０、２．５／２０、９／７５、１５／９０、１７／９０、１８／１０、２０／１０。
【０１０３】
ＨＰＬＣ法２
化合物を水／ＡＣＮ（９０：１０）に約１ｍｇ／ｍＬで溶解し、以下の勾配を用いて３０分かけて分析した（時間（分）／％Ｂ）：０／１０、１３／１０、２３／６５、２８／９０、２９／９０、３０／１０。
【０１０４】
ＨＰＬＣ法３
化合物を水／ＡＣＮ（９０：１０）に約１ｍｇ／ｍＬで溶解し、以下の勾配を用いて５５分かけて分析した（時間（分）／％Ｂ）：０／１０、１０／２０、４６／７５、４７／９０、５０／１０、５５／１０。
【０１０５】
調製１：Ｎ−シクロヘキシルメチル−（２−オキソエチル）−カルバミン酸ベンジルエステル重亜硫酸付加物の合成
ａ．Ｎ−シクロヘキシルメチル−（２，２−ジエトキシエチル）アミンの調製
２，２−ジエトキシエチルアミン（２０９ｍＬ、１．４３ｍｏｌ）とＭｅＴＨＦ（１０５０Ｌ）の混合物にシクロへキサンカルバルデヒド（１０７ｍＬ、０．８９ｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を３０分間室温で撹拌し、０℃まで冷却した。ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（３７８ｇ、１．７９ｍｏｌ）を４０分かけて加え、その反応混合物を２時間撹拌し、０℃まで冷却した。１ＭのＮａＯＨ（１Ｌ）を加えた。その有機層を塩水（１：１、２×１Ｌ）で洗浄し、その容積を約２０％まで減少させた。ＭｅＴＨＦ（１Ｌ）を加え、その容積を約２０％まで減少させた。粗表題中間体の溶液をそのまま次の工程で用いた。
【０１０６】
ｂ．Ｎ−シクロヘキシルメチル−（２，２−ジエトキシエチル）カルバミン酸ベンジルエステルの調製
前工程の生成物（約２１３ｇ、約０．９ｍｏｌ）にＭｅＴＨＦ（２Ｌ）およびＤＩＰＥＡ（２３３ｍＬ、１．３４ｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を０℃まで冷却し、クロロギ酸ベンジル（１４０ｍＬ、０．９８ｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、０℃から室温になるまで２時間撹拌し、次いで、室温で１時間撹拌した。水（１．６Ｌ）を加え、その反応混合物を１０分間撹拌した。それらの相を分離し、その有機層を重炭酸ナトリウム（１．６Ｌ）および水（１．６Ｌ）で洗浄した。これらの層を分離し、その有機層を約２０％に減少させた。ＭｅＴＨＦ（１Ｌ）を加え、その容積を約２０％に減少させた。粗表題中間体の溶液をそのまま次の工程で用いた。
【０１０７】
ｃ．Ｎ−シクロヘキシルメチル−（２−オキソエチル）−カルバミン酸ベンジルエステル重亜硫酸付加物の合成
前工程の生成物（約３０２ｇ、約０．６２ｍｏｌ）およびアセトニトリル（２Ｌ）に１ＭのＨＣｌ（２Ｌ）を加え、その反応混合物を３０℃で７時間撹拌した。酢酸エチル（２Ｌ）を加え、その反応混合物を１０分間撹拌した。それらの相を分離し、その有機層を１ＭのＨＣｌ（１．５Ｌ）で洗浄し、それらの相を再度分離し、その有機層を０．５ＭのＨＣｌ（１Ｌ）で洗浄した。亜硫酸水素ナトリウム（７１．４ｇ、０．６９ｍｏｌ）を加え、その反応混合物を一晩撹拌した後、ろ過した。その反応炉およびろ過ケーキを酢酸エチル（１Ｌ）で洗浄した。この結果得られた溶液を２時間かけて風乾し、一晩真空下に置き、表題化合物を白色固体（１９９ｇ、ＨＰＬＣ面積純度＞９９％）として得た。そのろ液を同一の手順で処理し、表題化合物の第２ロット（３０ｇ）を得た。
【０１０８】
調製２：３−ｅｎｄｏ−（８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）−ベンズアミドの合成
ａ．８−ベンジル−３−エキソ−（３−メトキシフェニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−オールの調製
３Ｌフラスコに塩化セリウム粉末（１９４ｇ、０．７９ｍｏｌ）を加えた。このフラスコを窒素で洗い流し、ＴＨＦ（８００ｍＬ）を加えた。この反応混合物を２５℃で１時間撹拌した。この混合物に約１Ｍの３−メトキシフェニル臭化マグネシウムＴＨＦ溶液（８００ｍＬ、０．８７ｍｏｌ）を滴下した。この結果得られたスラリーを３℃で１．５時間撹拌した。次いで、内部温度を−５℃に維持しながら、８−ベンジル−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−３−オン（１２０．４ｇ、０．５６ｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（２００ｍＬ）を滴下した。この結果得られた溶液を１５分間撹拌した。６ＮのＨＣｌ（８００ｍＬ）を入れ、温度を１０℃に維持したフラスコにこの反応混合物を加えた。回転蒸発により溶媒を除去した後、その反応混合物を室温で一晩撹拌した。それらの固体をろ過により単離し、６ＮのＨＣＬ（７０ｍＬ）およびアセトニトリル（３×７０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて表題中間体のＨＣｌ塩をオフホワイトの固体（１６１ｇ）として得た。
【０１０９】
ｂ．８−ベンジル−３−（３−メトキシフェニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−２−エンの調製
３Ｌフラスコに８−ベンジル−３−エキソ−（３−メトキシフェニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−オール塩酸塩（３８３．９ｇ、１．０６ｍｏｌ）、６ＭのＨＣｌ（８００ｍＬ）、およびＭｅＴＨＦ（２００ｍＬ）を加えた。この結果得られたスラリーを７０℃で２．５時間、窒素雰囲気下で加熱した。この反応混合物を１２Ｌ反応炉に移し、１０℃まで冷却した。その反応フラスコを、ＭｅＴＨＦ（１Ｌ）で洗浄し、１２Ｌ反応炉に加えた。ＮａＯＨ（水中で５０ｗｔ％、２００ｍＬ）を加え、ｐＨが約１３に達するまで、さらなるＮａＯＨ（５０ｗｔ％、１５０ｍＬ）数部を加えた。これらの相を分離し、その水層をＭｅＴＨＦ（１Ｌ）で抽出し、合わせたＭｅＴＨＦ層を塩水（１Ｌ）で洗浄した。溶媒を３０〜４０℃で回転蒸発により減少させ、表題中間体（３６０ｇ）を濃油として生じた。ＥｔＯＨ（１．５Ｌ）を加え、その容積を約５００ｍＬまで減少させた後、１．８Ｌに調節した。
【０１１０】
ｃ．３−ｅｎｄｏ−（３−メトキシフェニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタンの調製
前工程で調製した８−ベンジル−３−（３−メトキシフェニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−２−エン（ＥｔＯＨ中、９５％、４００ｍＬ、０．２０ｍｏｌ）に、６ＭのＨＣｌ（４５ｍＬ）を加えた後、ＭｅＴＨＦ（５０ｍＬ）を加えた。この反応混合物を窒素でパージし、４０℃まで加熱し、パラジウム炭素（１０重量％、８ｇ）を加えた。この反応炉を水素で加圧し（３×２０ｐｓｉ）、その後、２０ｐｓｉ、４０℃で１８時間かけて水素化した。この反応混合物をセライトでろ過し、濃縮し、ＭｅＴＨＦ（２×１００ｍＬ）で洗浄し、粗ガラスフィルタでろ過し、ＭｅＴＨＦ（１０ｍＬ）で洗浄し、フィルタ上で乾燥させて、表題中間体のＨＣｌ塩を白色固体として得た（３１ｇ、単一異性体、（エキソ異性体はＨＰＬＣで検出不可））。さらなる５．２ｇの生成物を母液から回収した。
【０１１１】
ｄ．３−ｅｎｄｏ−（８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）−フェノールの調製
５００ｍＬフラスコに３−ｅｎｄｏ−（３−メトキシフェニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン塩酸塩（１１５ｇ、０．４５ｍｏｌ）および臭化水素酸（水中で４８重量％、１００ｍＬ、０．８８ｍｏｌ）を加えた。この混合物を１２０℃まで加熱し、その温度のまま２４時間撹拌した。さらなる臭化水素酸溶液（２５ｍＬ）を加え、その反応混合物を撹拌しながら６時間加熱した後、７０℃まで冷却した。アセトニトリル（２００ｍＬ）を加え、この結果得られたスラリーを１０℃まで冷却した後、ろ過し、そのろ過ケーキをアセトニトリル（５０ｍＬ）で洗浄し、表題中間体のＨＢｒ塩を白色粒状固体として生じた（９９ｇ、純度＞９９％）。
【０１１２】
ｅ．２，２，２−トリフルオロ−１−［３−ｅｎｄｏ−（３−ヒドロキシフェニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−８−イル］エタノンの調製
３−ｅｎｄｏ−（８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）−フェノール臭化水素酸塩（５４．４ｇ、０．１９ｍｏｌ）、トルエン（２１０ｍＬ）、およびトリエチルアミン（４０ｍＬ、０．２９ｍｏｌ）の溶液にトリフルオロ酢酸無水物（５４ｍＬ、０．３８ｍｏｌ）を２０分かけて加えた。この反応混合物を４０℃で２時間撹拌した。酢酸エチル（３７０ｍＬ）および塩水（１：１、２６５ｍＬ）を加えた。この反応混合物を１５分間撹拌し、それらの相を分離した。この有機層に飽和重炭酸ナトリウム（３００ｍＬ）を加え、その混合物を一晩激しく撹拌した。それらの相を分離し、その有機層を、塩水（１：１、２６５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、その溶媒の大部分を回転蒸発により除去した。トルエン（１００ｍＬ）を加え、その溶媒を回転蒸発により除去して粗表題中間体を得た。
【０１１３】
ｆ．トリフルオロメタンスルホン酸（３−ｅｎｄｏ−［８−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル］フェニルエステル）の調製
５００ｍＬフラスコに前工程の中間体（３２．８ｇ、０．１１ｍｏｌ）とトリエチルアミン（２３ｍＬ．０．１７ｍｏｌ）の酢酸エチル溶液（２２０ｍＬ）を加えた。この溶液を５℃まで冷却し、トリフルオロメタンスルホニルクロリド（１４ｍＬ、０．１３ｍｏｌ）を滴下した。この混合物を２５℃まで暖めて、その温度のまま１時間撹拌した。飽和重炭酸ナトリウム（２００ｍＬ）を加え、それらの層を分離し、その有機層に塩水（１５０ｍＬ）を加え、それらの層を再度分離し、溶媒を有機層から除去して粗表題中間体を得た。
【０１１４】
ｇ．３−ｅｎｄｏ−［８−（２，２，２−トリフルオロアセチル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル］−ベンゾニトリルの調製
１００ｍＬフラスコにトリフルオロメタンスルホン酸３−ｅｎｄｏ−［８−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル］フェニルエステル（２５．３ｇ、５８．７ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．８１ｇ、０．９ｍｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（１．０１ｇ、１．８ｍｍｏｌ）、およびシアン化亜鉛（４．２ｇ、３５．８ｍｍｏｌ）を加えた。フラスコを５分かけて窒素でパージした後、家庭用吸引機で５分かけて真空を引くことを３回行なった。このフラスコにＤＭＦ（１５０ｍＬ）および蒸留水（２．５ｍＬ）を加えた。この溶液を撹拌しながら１０分かけて窒素でパージし、１２０℃に加熱し、１２０℃の窒素雰囲気下で４時間かけて撹拌した。この反応が終了すると、前回のロットから同一の手順で調整した２０ｇの生成物を加え、２０分間撹拌した。
【０１１５】
その溶媒の大部分を蒸留により除去し、その溶液を２２℃まで冷却した。この溶液に酢酸エチル（４４５ｍＬ）を加え、この結果得られた溶液をセライトを介してろ過した。重炭酸ナトリウム（４５０ｍＬ）を加え、その溶液を１５分間撹拌した。これらの層を分離し、その有機層を希釈塩水（２×９５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムを介してろ過した。この容積を酢酸エチルを除去して約５０ｍＬ減少させた。イソプロピルアルコール（１５０ｍＬ）を加え、その溶液を２２℃で１時間かき混ぜた。固体をろ過により単離し、イソプロピルアルコール（２×２５ｍＬ）で洗浄して表題中間体（３３．５ｇ、ＨＰＬＣ純度１００％）をオフホワイト／淡褐色固体として得た。第２群生成物（６．３ｇ、ＨＰＬＣ純度＞９８％）をろ液から単離した。
【０１１６】
ｈ．３−ｅｎｄｏ−（８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）−ベンズアミドの合成
３−ｅｎｄｏ−［８−（２，２，２−トリフルオロアセチル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル］−ベンゾニトリル（１０ｇ、３２ｍｍｏｌ）の硫酸（９６％、１２ｍＬ）溶液を撹拌しながら５０℃まで加熱し、その温度のまま２時間撹拌した。この反応混合物を２２℃まで冷却し、５ＮのＮａＯＨ（９０ｍＬ）およびメタノール（１００ｍＬ）を入れ、１０℃に冷却した５００ｍＬフラスコにゆっくりと加えた。塩沈殿物をろ過し、そのろ液を２２℃で１時間撹拌した。その反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物にＭｅＴＨＦ（１５０ｍＬ）を加え、その反応混合物を２２℃で５分間撹拌した。それらの層を分離し、ＭｅＴＨＦ（１００ｍＬ）をその水層に加えた。これらの層を分離し、塩水（１５０ｍＬ）をその合わせた有機層に加えた。これらの層を分離し、その有機層を炭酸カリウム上で乾燥させ、ろ過し、その溶媒を除去した。ＥｔＯＨ（２５ｍＬ）と濃縮ＨＣｌ（２．６ｍＬ）の混合物を撹拌しながら残留物に加えた後、ＭＴＢＥ（２５ｍＬ）を加え、その溶液を２２℃で撹拌した。沈殿固体をろ過し、風乾して表題化合物のＨＣｌ塩を白色固体として得た（８ｇ、ＨＰＬＣ純度９７％）。
【０１１７】
調製３：３−ｅｎｄｏ−（８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの合成
ａ．トリフルオロ−メタンスルホン酸８−ベンジル−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−２−エン−３−イルエステルの調製
５００ｍＬフラスコに８−ベンジル−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−オン塩酸塩（５０．４ｇ、２００ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＡｃ（１６０ｍＬ）、および４ＮのＮａＯＨ（５０ｍＬ）を加えた。この反応混合物を３０℃まで加熱し、その温度で１時間撹拌した。これらの層を分離し、その水層を廃棄した。その有機層の容積を回転蒸発により約４０ｍＬまで減少させ、ＴＨＦ（２７０ｍＬ）を加えた。
【０１１８】
この結果得られた溶液を１Ｌフラスコに加え、−２０℃まで冷却した。ＮａＨＭＤＳ溶液（ＴＨＦ中１Ｍ、２３０ｍＬ、２３０ｍｍｏｌ）をそのフラスコに１５分かけて加えた。その反応混合物を−２０±５℃で１時間撹拌した。Ｎ−フェニル−ビス（トリフルオロメタンスルホンイミド（８２．２ｇ、２３０ｍｍｏｌ）をその反応混合物数部に５分かけて加え、その混合物を−２０℃〜−１０℃で１時間撹拌した。この反応混合物に１ＮのＮａＯＨ（２００ｍＬ）を加え、その混合物を撹拌しながら２２℃まで暖めた。溶媒を回転蒸発により３０℃で４５０ｍＬの容積まで部分的に除去した。残留反応混合物にＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）およびヘプタン（１５０ｍＬ）を加えた。この混合物を２２℃で５分間撹拌した。これらの層を分離し、その水層を廃棄した。この有機層を１ＮのＮａＯＨ（３×４５０ｍＬ）で洗浄した。これらの水層を廃棄した。この有機層を回転蒸発により濃縮して表題中間体（７７ｇ、ＨＰＬＣ法１で純度＞９６％）を得た。
【０１１９】
【化５】
0005512289.tif 000006
ｂ．３−（８−ベンジル−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−２−エン−３−イル）ベンズアミドの調製
前記工程の粗生成物にＴＨＦ（４２０ｍＬ）を加え、その溶液を５分かけて窒素でパージした。２Ｌフラスコに３−カルバモイルフェニルボロン酸（９８％、３３．０ｇ、２００ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（９８％．０．４６ｇ、２ｍｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（９７％、１．１ｇ、２ｍｍｏｌ）、およびフッ化カリウム（３４．９ｇ、６００ｍｍｏｌ）を加えた後、トリフルオロ−メタンスルホン酸８−ベンジル−８−アザ−＼ビシクロ［３．２．１］オクト−２−エン−３−イルエステルのＴＨＦ溶液を加えた。この結果得られた混合物を５分かけて窒素でパージし、窒素雰囲気下で加熱還流（６７℃）し、２時間撹拌した。この反応混合物を３０℃まで冷却した後、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）および１ＮのＮａＯＨ（５００ｍＬ）を加え、その混合物を２２℃で１０分間撹拌した。これらの層を分離し、その水層を廃棄した。その有機層を塩水（２５０ｍＬ）と水（２５０ｍＬ）の混合物で洗浄し、５分間撹拌した。それらの層を分離し、その水層を廃棄した。この有機層をＮａ２ＳＯ４上で短時間乾燥させ、ろ過し、溶媒を部分的に除去した。溶媒除去時に生成物が淡黄色固体として沈殿した。この結果得られたスラリー（約２００ｍＬ）をろ過し、その固体を冷ＥｔＯＡｃ（０℃、１００ｍＬ）で洗浄し、２５℃の高真空下で乾燥させて表題中間体（４２．５ｇ）を淡黄色固体として得た。
【０１２０】
この母液および上記洗浄液を合わせて濃縮し、この結果得られたスラリー（約１００ｍＬ）を５℃で３０分間撹拌し、ろ過した。このろ過した固体を冷ＥｔＯＡｃ（０℃、３０ｍＬ）で洗浄し、高真空下で乾燥させて表題中間体の第２群を得た（７ｇ、総収率７８％、ＨＰＬＣ法１による純度＞９８．５％）。
【０１２１】
【化６−１】
0005512289.tif 000007
ｃ．３−ｅｎｄｏ−（８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミドの合成
１Ｌ水素添加器に３−（８−ベンジル−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−２−エン−３−イル）ベンズアミド（４０ｇ、１２５ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（８００ｍＬ）、６ＭのＨＣｌ（４２ｍＬ）、および水（８０ｍＬ）を加え、完全な溶解が観察されるまで、その混合物を２２℃で撹拌した。その反応混合物を５分かけて窒素でパージしながら、５分かけて３０℃まで加熱した。この混合物に１０ｗｔ％のＰｄ／Ｃ（水中で５０％、４ｇ）を加えた。この混合物を５〜１０分かけて大気圧下において水素でパージしながら加熱した。この混合物を＜５ｐｓｉ（＜０．３４気圧）の水素流中で５０℃で５時間かけて撹拌し、ＨＰＬＣ分析で＞９９％転化率の反応物を生じた。この溶液を３０℃まで冷却し、セライトを介してろ過して、表題化合物の粗ＨＣｌ塩の溶液を得た（ＨＰＬＣ法２でｅｎｄｏ：ｅｘｏ比が約９３：７、ｅｎｄｏ  Ｒｔ＝１０．９７、ｅｘｏ  Ｒｔ＝１２．６７。
【０１２２】
【化６−２】
0005512289.tif 000008
ＥｔＯＨ（約８０ｍＬ）における３０℃の共沸蒸留により粗生成物から水を除去してスラリーを得て、完全に溶解するまで６０℃まで加熱した。この溶液を３５℃まで冷却し、この生成物の種晶（０．０５ｇ）を加えた。（それらの種晶は調製２に記載のプロセスに従って調製した。）この結果得られたスラリーを２２℃で３０分間撹拌し、ＭＴＢＥ（１２０ｍＬ）をゆっくりと加え、そのスラリーを２２℃で４時間撹拌した後、０℃で１時間撹拌した。この結果得られた固体をろ過し、冷ＥｔＯＨで洗浄し、高真空下で乾燥させて表題化合物のＨＣｌ塩（２４．５ｇ）を白色粉末として得た（７５％収率、ＨＰＬＣ法３で純度＞９８．５％、エキソ異性体＜０．４％、ｅｎｄｏ  Ｒｔ＝８．６７、ｅｘｏ  Ｒｔ＝９．４３）。
【０１２３】
【化７】
0005512289.tif 000009
実施例１Ａ
結晶３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩の合成
ａ．Ｎ−シクロヘキシルメチル−（２−オキソエチル）−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
１００ｍＬフラスコにＮ−シクロヘキシルメチル−（２−オキソエチル）−カルバミン酸ベンジルエステル重亜硫酸付加物（３．９４ｇ、１ｍｍｏｌ）およびＭｅＴＨＦ（３５ｍＬ）を加えた後、水（２５ｍＬ）を加えた。この結果得られたスラリーを室温で５分間撹拌し、１ＭのＮａＯＨ（８ｍＬ）を加えた。この反応混合物を室温で４５分間撹拌した。これらの層を分離し、その有機層の容積を約８ｍＬまで減少させて粗表題中間体を得た。
【０１２４】
ｂ．２−［３−ｅｎｄｏ−（３−カルバモイルフェニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−８−イル］−エチル｝シクロヘキシルメチル−カルバミン酸ベンジルエステルの調製
前工程の生成物にＤＭＦ（１５ｍＬ）を加えた後、３−ｅｎｄｏ−（８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）−ベンズアミド塩酸塩（２．６７ｇ、１ｍｍｏｌ）を加えて、さらにＤＭＦ（１０ｍＬ）を加えた。この混合物を室温で３０分間撹拌し、１０℃まで冷却した後、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（４．２５ｇ、２ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で９０分間撹拌した後、１０℃まで冷却した。酢酸イソプロピル（１００ｍＬ）を加えた後、１ＭのＮａＯＨ（５０ｍＬ）を加えた。この混合物を１５分間撹拌し、それらの相を分離した。この有機層を塩水（１：１、２×５０ｍＬ）で洗浄し、その有機層の容積を約１０ｍＬまで減少させて粗表題中間体を得た。
【０１２５】
ｃ．３−ｅｎｄｏ−｛８−［２−（シクロヘキシルメチルアミノ）エチル］−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝ベンズアミドの調製
前工程の生成物にＥｔＯＨ（３０ｍＬ）および濃ＨＣｌ（１．５ｍＬ）を加えた。この溶液を窒素でパージし、１０％パラジウム炭素（４７０ｍｇ）を加え、その混合物を５分かけて窒素でパージした後、３０ｐｓｉで一晩かけて水素化した。２分かけて窒素でパージした後、その溶液をセライトを介してろ過し、溶媒を除去して約１０ｍＬにした。酢酸イソプロピル（４０ｍＬ）および１ＭのＮａＯＨ（２０ｍＬ）を加えた。これらの層を分離し、その有機層を塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、それらの相を分離し、有機溶媒を除去して５〜１０ｍＬにした。酢酸イソプロピル（２０ｍＬ）を加え、その容積を約８ｍＬまで減少させ、酢酸イソプロピル（２０ｍＬ）を加えた。この結果得られたスラリーを室温で２時間撹拌した。その生成物をろ過により単離し、その反応フラスコおよびろ過ケーキを酢酸イソプロピル（１０ｍＬ）で洗浄し、表題中間体（２．４ｇ、純度９８％）をオフホワイトの固体として生じた。
【０１２６】
ｄ．３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩（水和物形態）の調製
５００ｍＬフラスコに３−ｅｎｄｏ−｛８−［２−（シクロヘキシルメチルアミノ）エチル］−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝ベンズアミド（３１ｇ、８３．９ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１５０ｍＬ）を加えた。その混合物を１０分間撹拌した後、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）−ホスホニウムヘキサフルオロ−ホスフェート（５６．８ｇ、１０９ｍｍｏｌ）およびリチウム（４Ｓ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボキシレート（１５．６ｇ、９２．３ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を室温で２時間撹拌した。酢酸エチル（６００ｍＬ）および０．５ＭのＮａＯＨ（３００ｍＬ）を加え、それらの相を分離した。その有機層は、単離されなかった粗（Ｓ）−２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−カルボン酸｛２−［３−（３−カルバモイル−フェニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−８−イル］エチル｝シクロヘキシルメチル−アミド（約８４ｍｍｏｌ）を含有していた。
【０１２７】
この有機層を塩水（１：１、２×３００ｍＬ）で洗浄し、それらの相を分離した。この有機層に２ＭのＨ２ＳＯ４（４２ｍＬ）を加え、その反応混合物を室温で一晩撹拌した。アセトニトリル（３００ｍＬ）を加え、この結果得られたスラリーを２時間撹拌した。その生成物をろ過により単離し、そのろ過ケーキをアセトニトリル（２００ｍＬ）で洗浄し、２時間風乾した後、室温で２０時間、真空下において表題化合物（４０ｇ、ＨＰＬＣ純度９７％）を白色粉末として得た。
【０１２８】
ｅ．結晶３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩の合成
１００ｍＬフラスコに３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩水和物形態（２ｇ）およびＭｅＯＨ（４０ｍＬ）を加えた。この結果得られたスラリーを窒素雰囲気下で２０分かけて６５℃まで加熱し、完全に溶解した。この溶液を撹拌しながら室温まで冷却した。約２０ｍＬの溶媒をわずかに減圧しながら除去し、この結果得られたスラリーを室温で一晩撹拌した。この生成物をろ過により単離し、そのフラスコおよびろ過ケーキをアセトニトリル（２×５ｍＬ）で洗浄した。そのろ過ケーキを２時間風乾した後、室温で一晩真空下において表題化合物（１．７１ｇ、ＨＰＬＣ純度＞９９％、収率約８５％）を白色粉末として得た。
【０１２９】
上記手順に従って調製したサンプルは
【０１３０】
【化８】
0005512289.tif 000010
を特徴とする。
【０１３１】
実施例１Ｂ
結晶３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩の合成
ａ．３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩の調製
３−ｅｎｄｏ−｛８−［２−（シクロヘキシルメチルアミノ）エチル］−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝ベンズアミド（１００ｇ、２７０．６ｍｍｏｌ）とＤＭＦ（４８０ｍＬ）の混合物を１０分間撹拌した後、０℃まで冷却した。ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）六フッ化リン酸ホスホニウム（１８３ｇ、３５２ｍｍｏｌ）およびリチウム（４Ｓ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボキシレート（４９．３ｇ、３２４ｍｍｏｌ）を０℃で一度に加えた。この反応混合物を室温で６時間撹拌した。酢酸イソプロピル（２．０Ｌ）および１ＭのＮａＯＨ（１．０Ｌ）を加え、その反応混合物を１５分間撹拌し、それらの相を分離した。この有機層を塩水（１：１、２×１．０Ｌ）で洗浄し、それらの相を分離した。この有機層を容積の４分の１（約５００ｍＬ）まで減少させ、アセトニトリル（５００ｍＬ）を加え、その反応混合物を均質になるまで撹拌して、酢酸イソプロピルおよびアセトニトリル中の中間体（Ｓ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボン酸２−［３−ｅｎｄｏ−（３−カルバモイル−フェニル）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−８−イル］−エチル−シクロヘキシルメチル−アミド溶液を得た。
【０１３２】
上記酢酸イソプロピル／アセトニトリル（２２．５ｍＬ）中の中間体（３．０３ｇ、６．０９ｍｍｏｌ）の溶液のアリコートを２．０Ｍの硫酸水（３．６８ｍＬ）と合わせ、２０時間２５℃に保った後、５時間撹拌しながら１０℃に保った。この反応溶液をろ過し、そのろ過ケーキをアセトニトリル（２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて表題化合物の中間グレード硫酸塩（２．９１ｇ、ＨＰＬＣ純度９９．４％）を大部分が結晶水和物形態である白色固体として生じた。
【０１３３】
ｂ．結晶３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩の合成
前工程と同様に調製した３−ｅｎｄｏ−（８−２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）−アミノ］−エチル−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）−ベンズアミド硫酸塩中間グレード（１５４．０ｇ、２７７．１ｍｍｏｌ）とメタノール／１０％水（６１６ｍＬ）の混合物を６５℃で４５分間撹拌しながら加熱した。この反応混合物を５５℃まで冷却し、表題生成物の種晶（１２０ｍｇ）を加え、その反応混合物を５５℃で１時間撹拌し、その温度を１０℃／時間の割合で２０℃まで下げた後、そのまま８時間保持した。その反応混合物を５℃まで冷却し、そのまま３０時間保ち、ろ過した。そのろ過ケーキをメタノール（２×２５ｍＬ）で洗浄し、高真空下で一晩乾燥させて表題化合物を生じた（１２６．３ｇ、純度９９．９％）。
【０１３４】
実施例２
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩（水和物形態）の再結晶化
化合物１の硫酸塩（水和物形態）（９２０ｍｇ）をアセトニトリル（５ｍＬ）中に懸濁し、６５℃まで加熱した。次いで、完全に溶解するまで水（２．４ｍＬ）を滴下した。この結果得られた溶液を２０分かけて周囲温度まで冷却した。およそ３５℃で核生成が観察された。これらの固体を真空ろ過により単離し、アセトニトリル（５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて表題化合物を得た。
【０１３５】
実施例３
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩の結晶化
化合物１の硫酸塩（水和物形態）（５０ｍｇ）を水（１０％）とメタノール（９０％）溶媒の混合液（０．８３ｍＬ）中に分散させ、撹拌しながら６０℃まで加熱した。この結果得られた溶液を２時間かけて周囲温度まで冷却した。この結果得られた固体を真空ろ過により単離して表題化合物（８ｍｇ）を得た。
【０１３６】
実施例４
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩の結晶化
化合物１の硫酸塩（水和物形態）（４２ｍｇ）を水（２５％）とメタノール（７５％）溶媒の混合液（０．４２ｍＬ）中に分散させ、撹拌しながら６０℃まで加熱した。この結果得られた溶液を周囲温度まで冷却した。この容積を回転蒸発により５０％減少させ、その溶液を周囲温度で一晩放置した。この結果得られた固体を真空ろ過により単離して表題化合物（８ｍｇ）を得た。
【０１３７】
実施例５
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩の結晶化
化合物１（１１ｍｇ）をトルエン（２２％）とアセトニトリル（７８％）溶媒の混合液（０．２ｍＬ）中に溶解した。アセトニトリル（０．１５ｍＬ）を加えた後、０．０４Ｍの硫酸アセトニトリル溶液（０．５９ｍＬ）を加えた。酸の添加時に固体沈殿物が形成された。この反応混合物を周囲温度で１２時間放置した。この結果得られた固体をろ過により単離して表題化合物を得た。
【０１３８】
実施例６
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩の結晶化
化合物１（３８ｍｇ）をジクロロメタン（０．５ｍＬ）中に溶解した。この溶液に０．０４Ｍの硫酸アセトニトリル溶液（１．９１ｍＬ）を加えた。酸の添加時に固体沈殿物が形成された。この反応混合物を周囲温度で１２時間放置した。この結果得られた固体をろ過により単離して表題化合物を得た。
【０１３９】
実施例７
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩の結晶化
化合物１（２２ｍｇ）をトルエン（２３％）とアセトニトリル（７７％）溶媒の混合液（０．４１ｍＬ）中に溶解した。この溶液に０．０４Ｍの硫酸アセトニトリル溶液（１．２０ｍＬ）を加えた。酸の添加時に固体沈殿物が形成された。水（０．１６ｍＬ）をこの反応混合物に加えて沈殿物を溶解した。２時間後に核生成が観察された。この結果得られた固体を真空ろ過により単離して表題化合物を得た。
【０１４０】
実施例８
３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド硫酸塩（水和物形態）の結晶化
結晶化合物１の硫酸塩（７．１ｇ）を水（４２ｍＬ）とアセトニトリル（２５ｍＬ）の溶媒混合液に溶解した。この溶液を凍結乾燥して無定形硫酸塩を産生した。この無定形塩（６．６ｇ）をアセトニトリル（７５％）と水（２５％）の溶媒混合液（３４．６ｍＬ）中に分散させ、撹拌しながら１０分かけて６５℃まで加熱し、周囲温度に達するまで撹拌しながら冷却した。１２時間後、この結果得られた固体を真空ろ過により単離して表題化合物を得た（５．４ｇ）。
【０１４１】
実施例９〜１７
本発明の塩形態の特性
実施例１Ａと同様に調製した３−ｅｎｄｏ−（８−｛２−［シクロヘキシルメチル−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−プロピオニル）アミノ］エチル｝−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）ベンズアミド（化合物１）の結晶硫酸塩のサンプルおよび実施例２と同様に調製した化合物１の硫酸塩の結晶水和物のサンプルをＸ線粉末回折（ＸＰＲＤ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）赤外線分光法（ＩＲ）、およびイオンクロマトグラフィにより分析した。
【０１４２】
実施例１０
Ｘ線粉末回折
Ｒｉｇａｋｕ回折装置によりＣｕ−Ｋα（３０．０ｋＶ、１５．０ｍＡ）線を用いて図１および図４のＸ線粉末回折パターンを得た。この分析は、ゴニオメータを３°／分の連続走査モードで動作させ、２〜４０°の範囲でステップ幅を０．０３°にして行った。石英製試料ホルダー上でサンプルを粉末原料の薄層として調製した。シリコン標準を用いて器具を較正した。
【０１４３】
実施例１１
熱分析
ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｍｏｄｅｌ  Ｑ−１００モジュールを用いて示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を行った。ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ  ｆｏｒ  Ｑ  Ｓｅｒｉｅｓ（登録商標）ソフトウェアを用いてデータを収集、分析した。約１〜１０ｍｇのサンプルを正確に計量してアルミパンに入れ蓋をした。このサンプルを５℃から、典型的には、２６５℃までの１０℃／分の直線加熱傾斜（ｌｉｎｅａｒ  ｈｅａｔｉｎｇ  ｒａｍｐ）を用いて評価した。ＤＳＣセルを使用時に乾燥窒素でパージした。化合物１の結晶硫酸塩および硫酸塩の結晶水和物のサンプルの代表的なＤＳＣトレースをそれぞれ図２および図５に示す。
【０１４４】
ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｍｏｄｅｌ  Ｑ−５００モジュールを用いて熱重量分析（ＴＧＡ）を行った。ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ  ｆｏｒ  Ｑ  Ｓｅｒｉｅｓ（登録商標）ソフトウェアを用いてデータを収集、分析した。約１〜５ｍｇの重さのサンプルを白金のクレードル上のアルミパンに入れ、１０℃／分の直線加熱速度で周囲温度３００℃で走査した。天秤および炉室を使用時に窒素でパージした。化合物１の硫酸塩および結晶硫酸塩の結晶水和物のサンプルの代表的なＴＧＡトレースもそれぞれ図２および図５に示す。
【０１４５】
実施例１２
動的水分吸着アセスメント
ＶＴＩ大気微量天秤ＳＧＡ−１００システム（ＶＴＩ  Ｃｏｒｐ．，Ｈｉａｌｅａｈ，ＦＬ３３０１６）を用いて２５℃で動的水分吸着（ＤＭＳ）アセスメントを行った。約５〜１０ｍｇのサンプルサイズを用い、湿度を分析開始時の周囲値に設定した。典型的なＤＭＳ分析は３つの走査から構成されていた：５％ＲＨ／ステップの走査速度で、周囲〜２％相対湿度（ＲＨ）、２％ＲＨ〜９０％ＲＨ、９０％ＲＨ〜５％ＲＨ。２分毎に質量を測定し、サンプルの質量が連続する５つの点について０．０２％以内に安定するとＲＨを次の値（±５％ＲＨ）に変更した。化合物１の結晶硫酸塩および硫酸塩の結晶水和物サンプルの代表的なＤＭＳトレースをそれぞれ図３および図６に示す。
【０１４６】
実施例１３
赤外分析
拡散反射赤外フーリエ変換分光（ＤＲＩＦＴＳ）モジュールを備えたＡｖａｔａｒ  ３６０  ＦＴ−ＩＲ分光計を用いて周波数範囲４０００〜４００ｃｍ−１の赤外（ＩＲ）吸収スペクトルを決定した。本発明の結晶硫酸塩のサンプルの代表的なＩＲ吸収スペクトルは、４３０±１、５９０±１、６３９±１、７０５±１、８６７±１、１０３６±１、１０５３±１、１１０５±１、１１７１±１、１２３１±１、１２７７±１、１３７５±１、１３９１±１、１４５２±１、１４７６±１、１５５３±１、１５９６±１、１６３９±１、１６６４±１、２８５２±１、２９０７±１、２９２８±１、２９６７±１、３１６８±１、および３３５７±１ｃｍ−１に有意な吸収帯を有していた。
【０１４７】
実施例１４
Ｘ線回折結晶構造分析
０．４３×０．０５×０．０３１ｍｍのサイズを有する化合物１の硫酸塩の結晶塊をグラスファイバー上に載せた。窓径が１３．５ｃｍ、Ｃｕ−Ｋα線を用いてＳＭＡＲＴバージョン５．６３０ソフトウェア（Ｂｒｕｋｅｒ、２００３）で制御されるＢｒｕｋｅｒ  ＳＭＡＲＴ  ６Ｋ  ＣＣＤ  Ｘ線面検出器を用いてＸ線回折結晶構造データを得た。サンプルと検出器間の距離は５．０３９ｃｍであった。−１５３±１℃の温度でデータを収集し、ＳＨＥＬＸＳバージョン６．１４（Ｂｒｕｋｅｒ、２００３）ソフトウェアを用いて分析した。以下の格子パラメータを導出した：サイズがａ＝６．８２３９Å、ｂ＝１６．２２７５Å、ｃ＝２４．２０２１Å、α＝β＝γ＝９０°の斜方晶系の単位セル；セル体積（Ｖ）２６８０．０Å３；算出密度１．３８ｇ／ｃｍ３；空間群Ｐ２１２１２１（＃１９）。Ｍｅｒｃｕｒｙ  １．４ソフトウェアに従って導出された原子配置から予測される粉末Ｘ線回折ピークは、目視検査によって図１の実験結果と極めてよく一致していると判定された。
【０１４８】
実施例１５
固体安定性アセスメント
本発明の硫酸塩のサンプルを複数の開栓したガラスバイアルに２０℃、６０％相対湿度（ＲＨ）と、４０℃、７５％ＲＨで保存した。一定の間隔で、代表的バイアルの内容物を除去し、その化学的純度についてＤＳＣ、ＴＧＡ、ＰＸＲＤ、およびＨＰＬＣで分析した。４週間保存した後、ＤＳＣまたはＴＧＡサーモグラムにも、いずれの条件で保存したサンプルのＸＰＲＤパターンにも検出可能な変化をなかった。保存したサンプルのＨＰＬＣによる化学的純度は９９．７％で変化はなかった。
【０１４９】
実施例１６
対イオン含有量の判定
陰イオン自己再生抑制器、電導度検出器、ＩｏｎＰａｃ  ＡＳ１１−ＨＣ分析陰イオン交換カラム、およびＩｏｎＰａｃ  ＡＧ１１−ＨＣガードカラムを備えたＤｉｏｎｅｘ  ＩＣＳ−２０００イオンクロマトグラフィシステムを用いた硫酸塩イオンクロマトグラフィにより本発明の硫酸塩のサンプルを分析した。サンプルの硫酸塩含有量は１７．１％と判定されたが、これは、親化合物の１モルあたりの１分子当量の硫酸イオンの理論硫酸塩含有量１７．６％に匹敵し得る。
【０１５０】
実施例１７
水和物の含水量の判定
初期重量損失中に蒸発した原料のＩＲ分析とＴＧＡを併用して本発明の水和物のサンプルを分析した。ＴＧＡトレースは、１００℃未満で３．２％の質量損失を示すが、これは、化合物１硫酸塩の一水和物の３．１％の理論質量損失と匹敵し得る。上記蒸発した原料のＩＲスペクトルは水の基準ＩＲスペクトルと一致していた。
【０１５１】
アッセイ１：ヒトμ、ヒトδ、およびモルモットκオピオイド受容体に関する放射性リガンド結合アッセイ
ａ．膜調製
ヒトμオピオイドまたはモルモットκ受容体ｃＤＮＡを安定に導入されたＣＨＯ−Ｋ１（チャイニーズハムスター卵巣）細胞を、３７℃の５％ＣＯ２加湿インキュベータ内に１０％ＦＢＳ、１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリン−１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、および８００μｇ／ｍＬのＧｅｎｅｔｉｃｉｎを補充したハムＦ１２培地からなる培地で培養した。膜放射性リガンド結合アッセイにおいて［３Ｈ］−ジプレノルフィン（比活性度〜５０−５５Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を用いて受容体発現レベル（それぞれ、Ｂｍａｘ〜２．０、および〜０．４１４ｐｍｏｌ／ｍｇ蛋白）を判定した。
【０１５２】
細胞を８０〜９５％密集度に培養した（＜２５代の継代培養）。細胞株の継代のために、細胞単層を室温で５分間かけてインキュベートし、５ｍＭのＥＤＴＡを補充した１０ｍＬのＰＢＳ中での機械的撹拌により採取した。再懸濁の後、細胞を４０ｍＬ新鮮成長培地に移し、５分間、１０００ｒｐｍで遠心分離を行い、新鮮成長培地中において適切な分割比で再懸濁した。
【０１５３】
膜調製のために、ＰＢＳ中において５ｍＭのＥＤＴＡを用いて軽く機械的撹拌を行った後、遠心分離（２５００ｇ、５分間）により細胞を採取した。アッセイ緩衝剤（５０ｍＭの４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ））、ｐＨ７．４中でペレットを再懸濁し、ポリトロン破壊機（ｐｏｌｙｔｒｏｎ  ｄｉｓｒｕｐｔｅｒ）を用いて氷上で均質化した。この結果得られたホモジネートを遠心分離機にかけ（１２００ｇ、５分間）、ペレットを廃棄し、浮遊物を遠心分離機にかけた（４０，０００ｇ、２０分間）。それらのペレットをアッセイ緩衝剤中に再懸濁して一度洗浄した後、さらに遠心分離機にかけた（４０，０００ｇ、２０分間）。最終的なペレットをアッセイ緩衝剤（同等の１Ｔ−２２５フラスコ／１ｍＬアッセイ緩衝剤）中で再懸濁した。Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｂｒａｄｆｏｒｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙキットを用いてタンパク濃度を判定し、必要になるまで膜を−８０℃の凍結アリコートで保存した。
【０１５４】
ヒトδオピオイド受容体（ｈＤＯＰ）膜をＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒから購入した。［３Ｈ］−ナトリンドール放射性リガンド結合アッセイ（［３Ｈ］  Ｎａｔｒｉｎｄｏｌｅｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｓｓａｙｓ）において飽和分析によって判定され、これらの膜について報告されたＫｄおよびＢｍａｘは、それぞれ、０．１４ｎＭ（ｐＫｄ＝９．８５）、および２．２ｐｍｏｌ／ｍｇ蛋白であった。Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｂｒａｄｆｏｒｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙキットを用いてタンパク濃度を判定した。必要になるまで膜を−８０℃凍結アリコートで保存した。
【０１５５】
ｂ．放射性リガンド結合アッセイ
Ａｘｙｇｅｎ社の１．１ｍＬディープウェル９６ウェルポリプロピレンアッセイプレートにおいて、アッセイ緩衝剤中に適量の膜タンパク質（μ、δ、およびκについて、それぞれ、約３、約２、および約２０μｇ）を入れ、０．０２５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を補充し、総アッセイ容積２００μＬで放射性リガンド結合アッセイを行った。０．００１ｎＭ〜５ｎＭの範囲で８〜１２の異なる濃度で［３Ｈ］−ジプレノルフィンを用いて放射性リガンドのＫｄ値の判定のための飽和結合試験を行った。μ、δ、およびκに対して、それぞれ、０．５、１．２、および０．７ｎＭの［３Ｈ］−ジプレノルフィン、および１０ｐＭ〜１００μＭの範囲の１１の化合物濃度を用いて、化合物のｐＫｉ値の判定のための置換アッセイを行った。
【０１５６】
１部位競合について３パラメータモデルを用いたＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅパッケージ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）での非線形回帰分析により結合データを分析した。１０μＭナロキソンの存在下で判定されるような非特異的結合の値に最小曲線を固定した。Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式（Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋（［Ｌ］／Ｋｄ））（ここで、［Ｌ］＝［３Ｈ］−ジプレノルフィンの濃度である）を用いて、Ｐｒｉｓｍで最適なＩＣ５０値から試験化合物のＫｉ値、、および放射性リガンドのＫｄ値を算出した。結果はＫｉ値（ｐＫｉ）の１０を底とする負の対数で表している。
【０１５７】
これらのアッセイにおいて高いｐＫｉ値を有する試験化合物は、μ、δ、またはκオピオイド受容体に対して高い結合親和性を有する。化合物１の硫酸塩は、ヒトμオピオイド受容体で９．９のｐＫｉ値を示した。
【０１５８】
アッセイ２：ヒトμオピオイド受容体を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞から調製された膜におけるμオピオイド受容体の作用薬媒介活性化
このアッセイでは、ヒトμオピオイド受容体を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞から調製された膜における受容体活性化後に存在する結合ＧＴＰ−Ｅｕの量を測定して試験化合物の有効性および固有活性値を判定した。
【０１５９】
ａ．μオピオイド受容体膜調製：
ヒトμオピオイド受容体（ｈＭＯＰ）膜を上記のとおりに調製するか、またはＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒから購入した。［３Ｈ］−ジプレノルフィン放射性リガンド結合アッセイにおける飽和分析により判定した、購入した膜の報告ｐＫｄおよびＢｍａｘは、それぞれ、１０．０６および２．４ｐｍｏｌ／ｍｇ蛋白であった。Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｂｒａｄｆｏｒｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙキットを用いてタンパク濃度を判定した。必要になるまで膜を−８０℃の凍結アリコートで保存した。凍結乾燥ＧＴＰ−ＥｕおよびＧＤＰを再蒸留Ｈ２Ｏで、それぞれ、１０μＭおよび２ｍＭに希釈した後、混合し、−２０℃で保存するために個々のアリコートサンプルに移すまで室温で３０分間静置した。
【０１６０】
ｂ．ヒトμＧＴＰ−Ｅｕヌクレオチド交換アッセイ
ＡｃｒｏＷｅｌｌ９６ウェルフィルタプレートにおいて製造者の仕様書に従ってＤＥＬＰＨＩＡ  ＧＴＰ結合キット（Ｐｅｒｋｉｎ／Ｅｌｍｅｒ）を用いてＧＴＰ−Ｅｕヌクレオチド交換アッセイを行った。膜を上記のとおり調製し、アッセイを開始する前に、アッセイ緩衝剤（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、２５℃でｐＨ７．４）中で２００μｇ／ｍＬの濃度にアリコートを希釈した後、Ｐｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザーを用いて１０秒かけて均質化した。ＤＭＳＯ中の１０ｍＭのストック溶液を試験化合物として用いて、４００μＭに希釈して、０．１％ＢＳＡを含有するアッセイ緩衝剤中に入れた後、連続して希釈を行って（１：５）４０ｐＭ〜８０μＭの範囲の１０の濃度の化合物を生成し、ＧＤＰおよびＧＴＰ−Ｅｕをアッセイ緩衝剤中で、それぞれ、４μＭおよび４０ｎＭに希釈した。このアッセイは、全５μｇの膜タンパク質を含有する容積１００μＬで行い、試験化合物は１０ｐＭ〜２０μＭ）の範囲であり、１μＭのＧＤＰ、および１０ｎＭのＧＴＰ−Ｅｕを１０ｍＭのＭｇＣｌ２、５０ｍＭのＮａＣｌ、および０．０１２５％ＢＳＡ、（最終アッセイ濃度）に希釈した。ＤＡＭＧＯ（Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−（メチル）Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−オール）濃度反応曲線（１２．８ｐＭ〜１μＭの範囲）をすべてのプレートに含めた。
【０１６１】
２５μＬのアッセイ緩衝剤、２５μＬの試験化合物、および２５μＬのＧＤＰおよびＧＴＰ−Ｅｕの添加後、アッセイの直前にアッセイプレートを調製した。このアッセイは、２５μＬの膜タンパク質を加えて開始し、３０分間インキュベートを行った。次いで、このアッセイプレートを、１０〜１２ｉｎ．Ｈｇに調節した家庭用真空機に接続したＷａｔｅｒｓ真空マニホールドでろ過し、室温のＧＴＰ  Ｗａｓｈ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（２×３００ｍＬ）で洗浄した。プレートの底を拭いて余分な液体を除去した。次いで、これらのプレートをすぐに読み取って、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｌａｔｅ  ＲｅａｄｅｒＶｅｈｉｃｌｅで時間分解蛍光（ＴＲＦ）を測定して結合ＧＴＰ−Ｅｕの量を判定した：ＤＭＳＯは１％の最終アッセイ濃度を超えない。
【０１６２】
結合ＧＴＰ−Ｅｕの量は、試験化合物によるμオピオイド受容体の活性化の度合いに比例する。パーセンテージで表される固有活性（ＩＡ）は、試験化合物による活性化が観察された結合ＧＴＰ−Ｅｕの量と完全作用薬（ＩＡ＝１００）と考えられるＤＡＭＧＯによる活性化が観察された量の比として判定した。このアッセイでは、化合物１の硫酸塩は−５の固有活性を示した。このようにして、本硫酸塩はアンタゴニストであることが示された。
【０１６３】
アッセイ３：インビボでの有効性のラットモデル
このアッセイでは、末梢活性の評価を行う胃腸通過のモデルにおける試験化合物の有効性を評価した。この試験は、Ｔｈｅｒａｖａｎｃｅ，Ｉｎｃ．のＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより認可され、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓにより出版されたＧｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ（（ｃ）１９９６）に従っている。
【０１６４】
ａ．ラット胃排出能アッセイ
ラット胃排出能アッセイにおいて試験化合物を評価してそれらのロペラミド誘導胃排出遅延を好転させる能力を判定した。試験化合物またはビヒクルの静脈内、皮下、筋内、または経口投与経路による０．００１〜約３０ミリグラム／キログラム（ｍｇ／ｋｇ）の範囲の用量での投与前に、ラットを一晩絶食させた。試験化合物の投与の後、ロペラミドを１ｍｇ／ｋｇの用量で、またはビヒクルを皮下投与した。ロペラミドまたはビヒクルの投与から５分後、栄養のない非吸収性チャコールミールを強制経口投与し、動物には６０分の実験時間の間自由に水を与えた。次いで、動物を二酸化炭素により窒息させて安楽死させた後、開胸して胃を丁寧に切除した。胃を下部食道括約筋および幽門括約筋で結紮して、組織除去時のさらなる排出を防いだ。次いで、結紮糸を除去した後、胃重量を判定した。
【０１６５】
ｂ．データ分析および結果
ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅパッケージ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いてデータを分析した。シグモイド用量反応（可変勾配）モデルを用いて非線形回帰分析により好転率曲線（ｐｅｒｃｅｎｔ  ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｃｕｒｖｅｓ）を作成し、最適なＩＤ５０値を算出した。曲線最小値および最大値を、それぞれ、ロペラミド対照値（０％の好転を示す）およびビヒクル対照（１００％の好転を示す）に固定した。結果は、ロペラミドの影響を５０％好転させるために必要な用量（１キログラムあたりのミリグラム）であるＩＤ５０で示している。経口投与した化合物１の硫酸塩は、胃排出モデルにおいて０．２６ｍｇ／ｋｇのＩＤ５０値を示した。
【０１６６】
本発明を具体的な実施形態に関して説明したが、当業者は、各種変更が可能であり、本発明の真の趣旨および範囲から逸脱することなく均等物と置換可能であることを理解する。さらに、特定の状況、原料、組成物、プロセス、１つまたは複数のプロセス工程が本発明の目的、趣旨、および範囲に適合するように多くの改変を行うことが可能である。そのような改変は全て添付の請求の範囲内に該当するものである。さらに、上記において引用した全ての出版物、特許、および特許文献に関しては、参考として個々に援用したものとして、その内容全てを参考として援用する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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