(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
精製したペプチドであって、当該ペプチドが配列番号１、２、３及び４からなる群から選択したアミノ酸配列を含み、前記ペプチドがＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）タンパク質と結合し、前記Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）タンパク質がＦＰＲＬ１であることを特徴とするペプチド。
【請求項２】
請求項１に記載のペプチドにおいて、当該ペプチドが配列番号１を含むことを特徴とするペプチド。
【請求項３】
請求項１に記載のペプチドにおいて、当該ペプチドが配列番号２を含むことを特徴とするペプチド。
【請求項４】
請求項１に記載のペプチドにおいて、当該ペプチドが配列番号３を含むことを特徴とするペプチド。
【請求項５】
請求項１に記載のペプチドにおいて、当該ペプチドが配列番号４を含むことを特徴とするペプチド。
【請求項６】
請求項１乃至５のいずれか１項に記載のペプチドと、薬理学的に許容されるキャリアとを含む医薬組成物。
【請求項７】
請求項６に記載の医薬組成物において、前記薬理学的に許容されるキャリアが眼科製剤に適していることを特徴とする医薬組成物。
【請求項８】
炎症性障害の治療用の薬剤製造のための、請求項２乃至４のいずれかに記載のペプチド、請求項２乃至４のいずれかに記載のペプチドをコードする核酸分子、または請求項２乃至４のいずれか１項に記載のペプチドと、薬理学的に許容されるキャリアとを含む医薬組成物の使用であって、前記ペプチドが単独で、あるいは別の治療薬と組み合わせて投与されることを特徴とする使用。
【請求項９】
請求項８に記載の使用において、前記炎症性障害が胃炎、痛風、痛風性関節炎、関節炎、関節リウマチ、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、潰瘍、慢性気管支炎、喘息、アレルギー、急性肺障害、肺炎症、気管支過敏症、血管炎、敗血症性ショック、並びに乾癬、アトピー性皮膚炎、及び湿疹から成るリストから選択される炎症性皮膚障害から成る群より選択されることを特徴とする使用。
【請求項１０】
請求項９に記載の使用において、前記炎症性障害が細菌感染症若しくはウイルス感染症、又は別の種類の病原体に起因する感染症に関連し、ヒト免疫不全ウイルスＩ（ＨＩＶ‐１）又はＨＩＶ‐２、後天性免疫不全（ＡＩＤＳ）、西ナイル脳炎ウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、インフルエンザウイルス、テングウイルス、出血熱によって引き起こされるウイルス感染症；耳感染症；重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、敗血症、及び副鼻腔炎から成る群より選択されることを特徴とする使用。
【請求項１１】
請求項１乃至５のいずれかに記載のペプチドのエピトープに選択的に結合する抗体であって、前記エピトープが配列番号２を含むことを特徴とする抗体。
【請求項１２】
配列番号１で表されるアミノ酸配列からなる、単離したペプチド。
【請求項１３】
請求項１２に記載のペプチドと、薬理学的に許容されるキャリアとを含む医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の医薬組成物において、前記薬理学的に許容されるキャリアが眼科製剤に適していることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１５】
炎症性障害の治療用の薬剤製造のための、請求項１２に記載のペプチド、請求項１２に記載のペプチドをコードする核酸分子、または請求項１３又は１４に記載の医薬組成物の使用であって、前記ペプチドが単独で、あるいは別の治療薬と組み合わせて投与されることを特徴とする使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物活性ペプチドに関する。
【背景技術】
【０００２】
公知の、及び未解明のＧＰＣＲ（Ｇタンパク質共役受容体）は、現在、薬物作用及び開発における主たる対象を成しており、市販されている全治療薬の３０％超がこれに作用するものである（Ｊａｃｏｂｙ  ｅｔ  ａｌ  ２００６，ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ  １，７６０‐７８２）。ＧＰＣＲは、通常、７個の膜貫通ドメインを持つ。ＧＰＣＲの細胞外部分若しくは断片とリガンドとが結合することによって細胞内をシグナルが伝達し、生物学的若しくは生理学的な細胞の性質又は挙動が変化する結果となる。ＧＰＣＲは、Ｇタンパク質及びエフェクター（Ｇタンパク質によって変性した細胞内酵素及びチャネル）と共に、細胞内セカンドメッセンジャーの状態と細胞外からのインプットとを結びつけるモジュラーシグナル伝達系の構成成分である（Ｐｉｅｒｃｅ  ｅｔ  ａｌ  ２００２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３，６３９‐６５０）。ＧＰＣＲは、中枢神経系及び末梢生理プロセスの両方において、極めて重要であると思われる。
【０００３】
ＧＰＣＲのスーパーファミリーは多種多様であり、ヒトゲノムの配列決定により、これらをコードする８５０個を超える遺伝子が明らかとなった（Ｈｏｐｋｉｎｓ  ａｎｄ  Ｇｒｏｏｍ  ２００２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １，７２７‐７３０）。ＧＰＣＲ内での多様性は高く、このことは、それらを活性化するリガンドが極めて多岐にわたるということと一致している。公知の薬物は、ＧＰＣＲファミリーの約３０種類のメンバーを標的としているに過ぎず、それらは主に生体アミン受容体である。従って、医薬品業界において、既存のリガンドが現在までのところ明らかにされていない１００を超えるオーファン受容体を含め、残りのファミリーメンバーを活用する可能性は計り知れない（Ｇｉｌｃｈｒｉｓｔ  ２００４，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｔａｒｇｅｔｓ  ８，４９５‐４９８）。
【０００４】
新規のＧＰＣＲを同定し、公知のＧＰＣＲを脱オーファン化する（ｄｅｏｒｐｈａｎｉｚｅ）取り組みは継続して行われており、これらを用いて、予防及び治療特性を持つ可能性のある新規なアゴニスト及びアンタゴニストのスクリーニングを行うことができる（Ｇｉｌｃｈｒｉｓｔ  ２００４，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｔａｒｇｅｔｓ  ８，４９５‐４９８；Ｓｃｈｙｌｅｒ  ａｎｄ  Ｈｏｒｕｋ  ２００６，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ  １１，４８１‐４９３）。以下に示すのは本願に関連するＧＰＣＲの例であり、これらは、新規な治療薬の標的となり得る。
【０００５】
Ｍａｓ受容体は、ＭＡＳ１癌原遺伝子産物であり、これは、その腫瘍化活性に基づいて最初に単離され、後に、ロドプシン様クラスＡ  ＧＰＣＲサブファミリーのメンバーとして同定された。最近、Ａｎｇ（１‐７）がＭａｓのアゴニストであること、及びこのペプチドが、ＡＣＥ２（アンジオテンシン変換酵素２）のアンジオテンシンＩに対する作用によって形成されることが実証された（Ｓａｎｔｏｓ  ｅｔ  ａｌ．２００７，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ３，５７‐６４、にてレビュー）。ＡｎｇＩＩの慢性的な増加が、心臓に対する多くの有害な影響を誘発し得るのに対し、Ａｎｇ（１‐７）は、血管拡張及び抗増殖活性を含む心保護作用を有し、これらは多くの場合、ＡｎｇＩＩの活性と対抗するものである。Ａｎｇ（１‐７）の効果は、血圧の低下、心臓リモデリングの予防、及び高血圧と関連する腎臓異常の軽減を伴う（Ｒｅｕｄｅｌｈｕｂｅｒ  ２００６，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ４７，８１１‐８１５）。
【０００６】
Ｍａｓ、ＡＣＥ２、及びＡｎｇ（１‐７）は、循環器系の恒常性維持及び水中電解質バランス（ｈｙｄｒｏｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ  ｂａｌａｎｃｅ）の主たる制御因子であるレニン‐アンジオテンシン系（ＲＡＳ）の重要な構成成分と考えられる（Ｓｉｌｖａ  ｅｔ  ａｌ  ２００６，Ｍｉｎｉ‐ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６，６０３‐６０９；Ｓａｎｔｏｓ  ａｎｄ  Ｆｅｒｒｅｉｒａ  ２００７，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  １６，１２２‐１２８）。ＲＡＳ系の乱れが、高血圧症及び循環器系疾患の発病において中心的な役割を果たしている。ＲＡＳは、相対する作用を持つ２種類の主たる軸を含む系と見ることができ：すなわち、血管収縮／増殖性のＡＣＥ‐ＡｎｇＩＩ‐ＡＴ１／ＡＴ２という軸と、血管拡張／抗増殖性ＡＣＥ２‐Ａｎｇ（１‐７）‐Ｍａｓという軸である。
【０００７】
ＡＣＥ‐ＡｎｇＩＩ‐ＡＴ１／ＡＴ２軸の構成成分は、ＡＣＥ阻害薬（ＡＣＥｉ）及びＡＴ１受容体遮断薬（ＡＲＢ）という２種類の主要な薬物種の標的として作用し、これらは、動脈高血圧症、左心室収縮不全、慢性心不全、心筋梗塞、並びに糖尿病性及び非糖尿病性慢性腎臓疾患を含むいくつかの臨床状態に対する有効な治療方法である（Ｆｅｒｒａｒｉｏ  ２００６，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｒｅｎｉｎ‐Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ‐Ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ７，３‐１４）。ＡＣＥ２‐Ａｎｇ（１‐７）‐Ｍａｓ軸は、循環器系疾患及び腎臓疾患を治療する新規な薬物の開発にとって重要と推定される標的と見なされている（Ｓａｎｔｏｓ  ｅｔ  ａｌ．２００７，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ３，５７‐６４；Ｋｅｉｄａｒ  ｅｔ  ａｌ  ２００７，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７３，４６３‐４６９）。Ｍａｓ受容体の治療への応用の可能性は、確かに、そのペプチドアゴニスト、Ａｎｇ（１‐７）、及び経口活性非ペプチドアゴニスト、ＡＶＥ０９９１のいくつかの実験モデルにおける心保護及び有益な効果によって支持されている（Ｓａｎｔｏｓ  ａｎｄ  Ｆｅｒｒｅｉｒａ  ２００６，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２４，２３９‐２４６）。
【０００８】
ＦＰＲＬ１受容体は、ＦＰＲ及びＦＰＲＬ２も含まれるＧＰＣＲのＦＰＲ（ホルミル‐ペプチド受容体）関連ファミリーに属する（Ｌｅ  ｅｔ  ａｌ  ２００１，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ａｎｄ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １２，９１‐１０５）。リポキシンＡ４受容体、ＡＬＸＲとしても知られるこの受容体は、多面発現性リガンド（ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｉｃ  ｌｉｇａｎｄ）、すなわち脂質及びペプチドの両方と結合し、主に好中球、好酸球、及び単球によって発現される（Ｃｈｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ  ２００６，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ５８，４６３‐４８７）。２種類の重要な内在性ＦＰＲＬ１リガンドであるリポキシンＡ４（ＬＸＡ４）及びアスピリン誘発性リポキシン（ＡＴＬ）、並びにアネキシンＩタンパク質及びＮ末端誘導ペプチドは、種々の実験用動物モデルにおいて抗炎症特性を示した（Ｇａｖｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ  ２００５，Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ，Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｆａｔｔｙ  Ａｃｉｄｓ  ７３，２１１‐２１９）。
【０００９】
広範囲にわたる研究により、これらのリガンドによるＦＰＲＬ１活性によって得られる抗炎症活性の基となるメカニズムが、白血球の対抗制御を含む、活性で緊密に同期したプロセスである炎症の消散を促進することによって達成されることが明らかとなった（Ｓｃａｎｎｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍａｄｅｒｎａ  ２００６，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｗｏｒｌｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ６，１５５５‐１５７３）。ＦＰＲＬ１の活性化により、多形核好中球（ＰＭＮ）の阻害及び好酸球の遊走が誘発され、白血球の媒介による組織の損傷が防がれる。さらに、ＦＰＲＬ１の活性化によって単球の遊出が刺激され、非炎症的な手段による炎症部位からのアポトーシス細胞の排除が可能となる。さらに、ＮＫ細胞毒性が阻害され、このことは、さらに、炎症部位における炎症誘発性メディエータの下方制御に寄与する。
【００１０】
ＬＸＡ４（及び、その安定な類似体ＡＴＬａ）及びＡｃ２‐２６（アネキシンＩのＮ末端から誘導されたペプチド）はいずれも、皮膚の炎症、結腸炎、喘息、及び虚血／灌流障害などの急性及び慢性の炎症の種々の動物疾患モデルにおいて広く研究されてきており、有効であることが見出された（Ｐｅｒｒｅｔｔｉ  ａｎｄ  Ｇａｖｉｎｓ  ２００３，Ｎｅｗｓ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃｉ．１８，６０‐６４；Ｇｅｗｉｒｔｚ  ２００５，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ  ６，１１１２‐１１１５）。これらの知見は、ＦＰＲＬ１アゴニストが、炎症の消散の促進を通して、治療処置への新規な道筋及び手がかりを開くものであり、虚血／灌流障害、臓器移植、炎症性腸疾患、乾癬、喘息、及び関節炎などの種々の病理学的炎症状態における有益な治療上の価値を有する可能性があることを示唆している。安定なリポキシン類似体は、実際、炎症性腸疾患に対して臨床開発中である（Ｂｅｒｌｅｘ）。
【００１１】
ＳＮＳＲ４（感覚ニューロン特異的受容体４）（ｓｅｎｓｏｒｙ  ｎｅｕｒｏｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４）とも称されるＭｒｇＸ１（Ｍａｓ関連遺伝子Ｘ１）受容体は、後根神経節の侵害受容性感覚ニューロン（ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  ｓｅｎｓｏｒｙ  ｎｅｕｒｏｎ）でしか検出されていない（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ  ２００１，Ｃｅｌｌ  １０６，６１９‐６３２）。これは、プロエンケファリンＡ誘導ペプチド、ＢＡＭ２２などのオピオイド関連ペプチドによって優先的に活性化される（Ｌｅｍｂｏ  ｅｔ  ａｌ  ２００２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５，２０１‐２０９）。ＭｒｇＸ２は、ＧＰＣＲのＭｒｇファミリーの別のメンバーであり、これも、侵害受容性ニューロン内で高い発現を示すが、その他の種々の組織内でも同様である。ＭｒｇＸ２に対して種々の親和性の高いリガンド及び低いリガンドが同定されてきた（Ｒｏｂａｓ  ｅｔ  ａｌ  ２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８，４４４００‐４４４０４）。これらの受容体がインビボで担う生理学的な役割は明らかになっていない。
【００１２】
疼痛の侵害受容伝達を媒介するニューロンである侵害受容器内でのこれらの発現に基づき、Ｍｒｇ受容体は、神経の損傷若しくは炎症に伴う急性の疼痛並びに慢性の疼痛の感覚又は調節を担っていると考えられる。従って、Ｍｒｇファミリー、特にＭｒｇＸ１は、疼痛を処理するための有望な薬理学的標的と見られている（Ａｈｍａｄ  ａｎｄ  Ｄｒａｙ  ２００４；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ  ５，６７‐７０；Ｄｒａｙ  ２００３，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ａｎａｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ  １６，５２１‐５２５）。
【００１３】
ＭｒｇＸ２は、数種類の分泌促進物質によっても活性化され、それらの物質によるヒトのマスト細胞の活性化に関与していると思われる（Ｔａｔｅｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ  ２００６，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．３４９，１３２２‐１３２８）。従って、ＭｒｇＸ２は、マスト細胞の活性化が関与する疾患を制御するための新規な治療標的を提供する可能性がある。ＭｒｇＸ２の高親和性リガンド、ＣＳＴは、睡眠の調節及び自発運動活性に関与するニューロペプチドである（Ｒｏｂａｓ  ｅｔ  ａｌ  ２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８，４４４００‐４４４０４）。ＣＳＴは、潜在的な内在性免疫修飾因子であることも明らかにされ、最近、実験動物モデルにおいて、強力な抗炎症活性が示された（Ｇｏｎｚａｌｅｚ‐Ｒｅｙ  ａｎｄ  Ｄｅｌｇａｄｏ  ２００６，Ｄｒｕｇ  Ｎｅｗｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ  １９，３９３‐３９９）。ＭｒｇＸ２は、従って、睡眠の調節及び炎症にも関与している可能性がある。
【００１４】
ＭｒｇＸ２の別の高親和性リガンドは、ＰＡＭＰ‐１２であり（Ｋａｍｏｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ  ２００５，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．３３０，１１４６‐１１５２；Ｎｏｔｈａｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ  ２００５，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５１９，１９１‐１９３）、これはプロアドレノメデュリンから誘導され、他のＰＡＭＰペプチドと同様に、高血圧症、慢性の腎不全及びうっ血性心不全、並びに慢性糸球体腎炎などのいくつかの疾患と関連していると考えられる血管生理学的機能（ｖａｓｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ）を有する（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ  ２００３，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２６，Ｓ７１‐Ｓ７８）。このことに基づき、ＭｒｇＸ２は、潜在的な低血圧調節薬（ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｏｎ‐ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｄｒｕｇ）の標的でもあり得る。
【発明の概要】
【００１５】
本発明は、一つには、新規なペプチド：ペプチド３３型のペプチド、ペプチド５８型のペプチド、ペプチド６０型のペプチド、ペプチド６１型のペプチド、ペプチド６３型のペプチド、及びペプチド９４型のペプチド、の識別に基づいており、これらは、４種類の公知のＧＰＣＲ受容体に対するリガンドとして作用するが、既知のＧＰＣＲリガンドに対する有意な相同性は示さない。
【００１６】
ペプチド６１＿Ｓ及びペプチド３３＿Ｖで例示され、それぞれ、式Ｉ及びＩＩの化合物である２種類のペプチド、は、ＭＡＳ１遺伝子産物、すなわちＭａｓ受容体を活性化する。この受容体は、レニン‐アンジオテンシン系の重要な構成成分であり、この系は、循環器系の恒常性維持及び水中電解質バランスの主たる制御因子である。この受容体は、循環器系疾患及び腎臓疾患を治療する新規な薬物の開発にとって重要であると推定される標的と見なされている。以下に述べるように、ペプチド６１＿Ｓ及びペプチド３３＿Ｖに代表されるペプチドは、Ｍａｓ受容体のアゴニストとして作用し、Ｍａｓ発現細胞内でのカルシウム流を誘発する。さらに、これらのペプチドは、ラット大動脈輪の弛緩、及びイソプロテレノールによって引き起こされた心肥大の軽減を誘発する。従って、ペプチド６１＿Ｓ及びペプチド３３＿Ｖに代表されるペプチド、並びに式Ｉ及びＩＩの化合物は、高血圧症、心不全、及びその他の循環器系病理状態など、Ｍａｓ受容体の活性を高めることによって恩恵を受ける症状におけるアゴニストとして有用である。
【００１７】
ペプチド６０＿Ｓで例示されるペプチドは、式ＩＩＩの化合物の範囲に含まれるものであり、ＭＲＧＰＲＸ１遺伝子産物、すなわちＭｒｇＸ１受容体（ＳＮＳＲ４としても知られるＭａｓ関連Ｇタンパク質共役受容体メンバーＸ１）を活性化する。この受容体は、侵害受容性ニューロンの機能に関与し、疼痛の感覚又は調節を含む侵害受容器の機能及び／又は発生を制御すると考えられる。これは、ＢＡＭ２２（ウシ副腎髄質ペプチド２２）などのエンケファリン誘導ペプチドによって強く活性化される。ペプチド６０＿Ｓは、ＭｒｇＸ１発現細胞内でのカルシウム流の誘発という点でＢＡＭ２２よりも優れている。従って、以下で述べるように、ペプチド６０＿Ｓに代表されるペプチド、並びに式ＩＩＩの化合物は、ＭｒｇＸ１の活性を高めることによって恩恵を受ける症状に対するアゴニストとして有用である。
【００１８】
ペプチド６１＿Ｓ、ペプチド６０＿Ｓ、ペプチド９４、及びペプチド６３で例示されるペプチド、並びに、それぞれ、式Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、及びＶの化合物は、ＭＲＧＰＲＸ２遺伝子産物、ＭｒｇＸ２（Ｍａｓ関連Ｇタンパク質共役受容体メンバーＸ２）を活性化する。この受容体は、侵害受容性ニューロンの機能に関与し、疼痛の感覚又は調節を含む侵害受容器の機能及び／又は発生を制御すると考えられる。コルチスタチン‐１４（ＣＳＴ）は、この受容体の非常に強力なリガンドである。コルチスタチンは、睡眠制御、自発運動活性、及び皮質機能における役割を含む、いくつかの生物学的機能を有する。ペプチド６０＿Ｓ、ペプチド６１＿Ｓ、ペプチド６３、及びペプチド９４は、ＭｒｇＸ２発現細胞内でのカルシウム流の誘発という点でコルチスタチン‐１４よりも優れている。従って、以下に述べるように、ペプチド６１＿Ｓ、ペプチド６０＿Ｓ、ペプチド９４、及びペプチド６３に代表されるペプチド、並びに、それぞれ、式Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、及びＶの化合物は、ＭｒｇＸ２の活性を高めることによって恩恵を受ける症状に対するアゴニストとして有用である。
【００１９】
ペプチド３３＿Ｖ、ペプチド６０＿Ｓ、ペプチド９４、及びペプチド５８で例示されるペプチド、並びに、それぞれ、式ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの化合物は、ＦＰＲＬ１（ＦＰＲ関連受容体１）（リポキシンＡ４受容体、ＬＸＡ４Ｒ又はＡＬＸＲとしても知られる）を活性化する。リポキシン又はアネキシンＩ誘導ペプチドによるＦＰＲＬ１の活性化は、抗炎症効果をもたらす。ペプチド３３＿Ｖ、ペプチド６０＿Ｓ、ペプチド９４、及びペプチド５８は、ＦＰＲＬ１発現細胞内においてカルシウム流を誘発する。さらに、ペプチド５８及びそれから誘導されるペプチドは、マウスモデルの急性炎症において抗炎症活性を示す。従って、以下に述べるように、ペプチド３３＿Ｖ、ペプチド６０＿Ｓ、ペプチド９４、及びペプチド５８に代表されるペプチド、並びに、それぞれ、式ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの化合物は、急性及び慢性炎症など、ＦＰＲＬ１の活性を高めることによって恩恵を受ける症状に対するアゴニストとして有用である。
【００２０】
さらに、本発明は、以下に示すさらなる態様を含む。
【００２１】
一つの態様における本発明は、長さが１００アミノ酸未満のペプチドを含み、該ポリペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ、又は式ＶＩのアミノ酸配列を有し、
ここで、式Ｉは、Ａ１‐Ａ２‐Ａ３‐Ａ４‐Ａ５‐Ａ６‐Ａ７‐Ａ８‐Ａ９‐Ａ１０‐Ａ１１‐Ａ１２‐Ａ１３‐Ａ１４‐Ａ１５‐Ａ１６‐Ａ１７‐Ａ１８‐Ａ１９‐Ａ２０‐Ａ２１‐Ａ２２‐Ａ２３‐Ａ２４‐Ａ２５‐Ａ２６、又はその薬理学的に許容される塩であり；
ここで、
Ａ１は、存在しないか、又はＦ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ２は、存在しないか、又はＡ若しくは低分子量非天然アミノ酸であり；
Ａ３は、存在しないか、又はＦ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ４は、存在しないか、又はＬ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ５は、存在しないか、又はＧ若しくは低分子量非天然アミノ酸であり；
Ａ６は、存在しないか、又はＹ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ７は、存在しないか、又はＳ若しくＣであり；
Ａ８は、存在しないか、又はＩ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ９は、存在しないか、又はＹ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ１０は、存在しないか、又はＬ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ１１は、存在しないか、又はＮ若しくは極性非天然アミノ酸であり；
Ａ１２は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ａ１３は、存在しないか、又はＫ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ａ１４は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ａ１５は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ａ１６は、存在しないか、又はＧ若しくは低分子量非天然アミノ酸であり；
Ａ１７は、存在しないか、又はＤ若しくは極性非天然アミノ酸であり；
Ａ１８は、存在しないか、又はＰであり；
Ａ１９は、存在しないか、又はＡ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ２０は、存在しないか、又はＦ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ２１は、存在しないか、又はＫ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ａ２２は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ａ２３は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ａ２４は、存在しないか、又はＬ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ２５は、存在しないか、又はＲ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ２６は、存在しないか、又はＤ若しくは極性非天然アミノ酸であり；
ここで、式ＩＩは、Ｂ１‐Ｂ２‐Ｂ３‐Ｂ４‐Ｂ５‐Ｂ６‐Ｂ７‐Ｂ８‐Ｂ９‐Ｂ１０‐Ｂ１１‐Ｂ１２‐Ｂ１３‐Ｂ１４‐Ｂ１５‐Ｂ１６‐Ｂ１７‐Ｂ１８、又はその薬理学的に許容される塩であり；
ここで、
Ｂ１は、存在しないか、又はＳであり；
Ｂ２は、存在しないか、又はＭ、若しくはノルロイシン（Ｎｌｅ）、若しくは別の疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ３は、存在しないか、又はＣ若しくはＶであり；
Ｂ４は、存在しないか、又はＨ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｂ５は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｂ６は、存在しないか、又はＷ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ７は、存在しないか、又はＳであり；
Ｂ８は、存在しないか、又はＲ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ９は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｂ１０は、Ｖ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ１１は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ１２は、Ｆ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ１３は、Ｐであり；
Ｂ１４は、Ａ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ１５は、Ａ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ１６は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｂ１７は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｂ１８は、Ｐであり；
ここで、式ＩＩＩは、Ｃ１‐Ｃ２‐Ｃ３‐Ｃ４‐Ｃ５‐Ｃ６‐Ｃ７‐Ｃ８‐Ｃ９‐Ｃ１０‐Ｃ１１‐Ｃ１２‐Ｃ１３‐Ｃ１４‐Ｃ１５‐Ｃ１６‐Ｃ１７‐Ｃ１８‐Ｃ１９‐Ｃ２０‐Ｃ２１‐Ｃ２２‐Ｃ２３‐Ｃ２４‐Ｃ２５‐Ｃ２６‐Ｃ２７‐Ｃ２８、又はその薬理学的に許容される塩であり；
ここで、
Ｃ１は、存在しないか、又はＧ若しくは低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｃ２は、存在しないか、又はＩ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ３は、存在しないか、又はＧ若しくは低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｃ４は、Ｃ、又はＳ、又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｃ５は、Ｖ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ６は、Ｗ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ７は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ８は、Ｗ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ９は、Ｋ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１０は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１１は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１２は、Ｖ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１３は、Ａ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１４は、Ｔ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１５は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１６は、Ｆ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１７は、Ｔ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１８は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１９は、Ｐであり；
Ｃ２０は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２１は、Ｆ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２２は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２３は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２４は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２５は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２６は、存在しないか、又はＳ若しくは極性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２７は、存在しないか、又はＳ若しくは極性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２８は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
ここで、式ＩＶは、Ｄ１‐Ｄ２‐Ｄ３‐Ｄ４‐Ｄ５‐Ｄ６‐Ｄ７‐Ｄ８‐Ｄ９‐Ｄ１０‐Ｄ１１‐Ｄ１２‐Ｄ１３‐Ｄ１４‐Ｄ１５‐Ｄ１６‐Ｄ１７‐Ｄ１８‐Ｄ１９‐Ｄ２０‐Ｄ２１‐Ｄ２２‐Ｄ２３‐Ｄ２４‐Ｄ２５‐Ｄ２６‐Ｄ２７‐Ｄ２８‐Ｄ２９‐Ｄ３０‐Ｄ３１‐Ｄ３２‐Ｄ３３‐Ｄ３４‐Ｄ３５‐Ｄ３６‐Ｄ３７‐Ｄ３８‐Ｄ３９‐Ｄ４０‐Ｄ４１‐Ｄ４２‐Ｄ４３‐Ｄ４４‐Ｄ４５、又はその薬理学的に許容される塩であり；
ここで、
Ｄ１は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｄ２は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｄ３は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ４は、Ａ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ５は、Ｔ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ６は、Ｇ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｄ７は、Ｐであり；
Ｄ８は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ９は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ１０は、Ｄ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ１１は、Ｎ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ１２は、Ｅ又は非天然アミノ酸であり；
Ｄ１３は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ１４は、Ｐであり；
Ｄ１５は、Ｇ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｄ１６は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ１７は、Ｄ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ１８は、Ｅ又は非天然アミノ酸であり；
Ｄ１９は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ２０は、Ｐであり； 
Ｄ２１は、Ｐであり；
Ｄ２２は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ２３は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｄ２４は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ２５は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｄ２６は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ２７は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ２８は、Ｆ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ２９は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３０は、Ｋ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３１は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３２は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３３は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３４は、Ｗ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３５は、Ｐであり； 
Ｄ３６は、Ｓ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３７は、Ｐであり；
Ｄ３８は、Ｆ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３９は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ４０は、Ａ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ４１は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ４２は、Ｋ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ４３は、Ｐであり；
Ｄ４４は、Ｒ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ４５は、Ｐであり；
ここで、式Ｖは、Ｅ１‐Ｅ２‐Ｅ３‐Ｅ４‐Ｅ５‐Ｅ６‐Ｅ７‐Ｅ８‐Ｅ９‐Ｅ１０‐Ｅ１１‐Ｅ１２‐Ｅ１３‐Ｅ１４‐Ｅ１５‐Ｅ１６‐Ｅ１７‐Ｅ１８‐Ｅ１９‐Ｅ２０‐Ｅ２１‐Ｅ２２‐Ｅ２３、又はその薬理学的に許容される塩であり；
ここで、
Ｅ１は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｅ２は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｅ３は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｅ４は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｅ５は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｅ６は、Ｆ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｅ７は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｅ８は、Ｋ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｅ９は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｅ１０は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｅ１１は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｅ１２は、Ｗ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｅ１３は、Ｐであり；
Ｅ１４は、Ｓであり；
Ｅ１５は、Ｐであり；
Ｅ１６は、Ｆ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｅ１７は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｅ１８は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｅ１９は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｅ２０は、Ｋ又は塩基性非天然アミノ酸であり； 
Ｅ２１は、Ｐであり；
Ｅ２２は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｅ２３は、Ｐであり；
ここで、式ＶＩは、Ｆ１‐Ｆ２‐Ｆ３‐Ｆ４‐Ｆ５‐Ｆ６‐Ｆ７‐Ｆ８‐Ｆ９‐Ｆ１０‐Ｆ１１‐Ｆ１２‐Ｆ１３‐Ｆ１４‐Ｆ１５‐Ｆ１６‐Ｆ１７‐Ｆ１８‐Ｆ１９‐Ｆ２０‐Ｆ２１‐Ｆ２２‐Ｆ２３‐Ｆ２４、又はその薬理学的に許容される塩であり；
ここで、
Ｆ１は、存在しないか、又はＨ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｆ２は、存在しないか、又はＫ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｆ３は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｆ４は、Ｔ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｆ５は、Ｉ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｆ６は、Ｐであり；
Ｆ７は、Ｍ、又はノルロイシン（Ｎｌｅ）、又は別の疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｆ８は、Ｆ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｆ９は、Ｖ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｆ１０は、Ｐであり；
Ｆ１１は、Ｅ又は非天然アミノ酸であり；
Ｆ１２は、Ｓであり；
Ｆ１３は、Ｔ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｆ１４は、Ｓであり；
Ｆ１５は、Ｋ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｆ１６は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｆ１７は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｆ１８は、Ｋ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｆ１９は、Ｆ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｆ２０は、Ｔ又は極性非天然アミノ酸であり； 
Ｆ２１は、Ｓであり；
Ｆ２２は、Ｗ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｆ２３は、Ｆ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｆ２４は、Ｍ、又はノルロイシン（Ｎｌｅ）、又は別の疎水性非天然アミノ酸である。
【００２２】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、該ペプチドは、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）タンパク質と結合する。
【００２３】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、前記のＧＰＣＲタンパク質は、Ｍａｓ、ＭｒｇＸ１、ＭｒｇＸ２、及びその他のＭｒｇＸから成る群より選択されるタンパク質のＭａｓ関連ファミリーに属するか；又は、ここで、前記のＧＰＣＲタンパク質は、ＦＰＲ、ＦＰＲＬ１、及びＦＰＲＬ２から成る群より選択されるタンパク質のＦＰＲ関連ファミリーに属する。
【００２４】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、該ペプチドは、ＧＰＣＲタンパク質を活性化する。
【００２５】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、前記のＧＰＣＲタンパク質は、Ｍａｓタンパク質であり、この場合、該ペプチドは、式Ｉ又は式ＩＩである。
【００２６】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、前記のＧＰＣＲタンパク質は、ＭｒｇＸ１タンパク質（ＳＮＳＲ４としても知られるＭａｓ関連Ｇタンパク質共役受容体メンバーＸ１）であり、この場合、該ペプチドは、式ＩＩＩである。
【００２７】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、前記のＧＰＣＲタンパク質は、ＭｒｇＸ２タンパク質（Ｍａｓ関連Ｇタンパク質共役受容体メンバーＸ２）であり、この場合、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、又は式Ｖである。
【００２８】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、前記のＧＰＣＲタンパク質は、ＦＰＲＬ１タンパク質であり、この場合、該ペプチドは、式ＩＩＩ又は式ＩＶである。
【００２９】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、該ペプチドは、細胞から単離された天然タンパク質の分解産物である。
【００３０】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、該ペプチドは、原核細胞又は真核細胞より選択される細胞内にて遺伝子組換えによって産生されたタンパク質から単離される。
【００３１】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、該ペプチドは、インビトロで化学的に合成される。
【００３２】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、該ペプチドは、ビオチン部分と結合するか、又は、ここで、該ペプチドは、ジスルフィド結合を有するか、又は、ここで、該ペプチドは、環状ペプチドであるか、又は、ここで、該ペプチドは、環状ラクタムであるか、又は、ここで、該ペプチドは、分岐鎖状ペプチドであるか、又は、ここで、該ペプチドは、リン酸化されており、任意に、ここで、Ｓ、Ｔ、又はＹ残基にてリン酸化されている。
【００３３】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、該ペプチドは、そのアミノ末端にて修飾され、任意に、ここで、該アミノ末端修飾は、Ｎ‐糖化、Ｎ‐アルキル化、Ｎ‐アセチル化、又はＮ‐アシル化アミノ酸を含む。
【００３４】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、該ペプチドは、ペグ化又はシアリル化されている。
【００３５】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、該ペプチドは、Ｃ末端アミド化アミノ酸を含む。
【００３６】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、前記の非天然アミノ酸は、オメガ‐アミノ酸である。
【００３７】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、前記のオメガ‐酸は、ベータ‐アラニン（ベータ‐Ａｌａ）又は３‐アミノプロピオン酸（３‐ａＰ）である。
【００３８】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、前記の低分子量非天然アミノ酸は、サルコシン（Ｓａｒ）、β‐アラニン（β‐Ａｌａ）、２，３‐ジアミノプロピオン酸（２，３‐ｄｉａＰ）、又はアルファ‐アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）であり；オメガ‐酸は、ベータ‐アラニン（ベータ‐Ａｌａ）又は３‐アミノプロピオン酸（３‐ａＰ）である。
【００３９】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、前記の疎水性非天然アミノ酸は、ｔ‐ブチルアラニン（ｔ‐ＢｕＡ）、ｔ‐ブチルグリシン（ｔ‐ＢｕＧ）、Ｎ‐メチルイソロイシン（Ｎ‐ＭｅＩｌｅ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メチルバリン（Ｍｖｌ）、シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）、フェニルグリシン（Ｐｈｇ）、ＮａＩ、β２‐チエニルアラニン（Ｔｈｉ）、２‐ナフチルアラニン（２‐Ｎａｌ）、又は１，２，３，４‐テトラヒドロイソキノリン‐３‐カルボン酸（Ｔｉｃ）である。
【００４０】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、前記の塩基性非天然アミノ酸は、オルニチン（Ｏｒｎ）又はホモアルギニン（Ｈａｒ）である。
【００４１】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、中性／極性非天然アミノ酸は、シトルリン（Ｃｉｔ）、アセチルＬｙｓ、又はメチオニンスルホキシド（ＭＳＯ）である。
【００４２】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、該ペプチドは、７５、５０、３０、２０、又は１０個未満のアミノ酸である。
【００４３】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉのアミノ酸配列を含み、ここで、このペプチドは：
ＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤ（配列番号９）モノマー若しくはダイマー、
ＦＬＧＹＳＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤ（配列番号１０）、
ＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤ（配列番号１１）、
ＦＡＦＬＧＹＳＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦ（配列番号１２）、
ＦＡＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦ（配列番号１３）モノマー若しくはダイマー、
ＦＡＦＬＧＹＳＩＹＬＮ（配列番号１８）、
ＦＡＦＬＧＹＣＩＹＬＮ（配列番号１９）モノマー若しくはダイマー、
ＦＡＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤ（配列番号２０）モノマー若しくはダイマー、
ＦＬＧＹＣＩＹＬＮ（配列番号２１）モノマー若しくはダイマー、
ＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲ（配列番号２２）モノマー若しくはダイマー、
ＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦ（配列番号２３）モノマー若しくはダイマー、
ＲＧＤＰＡＦ（配列番号２４）、
ＲＲＧＤＰＡＦ（配列番号２５）、
ＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤ（配列番号２８）、
ＧＤＰＡＦ（配列番号２９）、
ＩＹＬＮ（配列番号３０）、
ＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦ（配列番号３１）、
から成る群より選択されるか；又は、
ここで、このペプチドは、式ＩＩのアミノ酸配列を含み、ここで、このペプチドは：
ＳＭＣＨＲＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号６）のモノマー若しくはダイマー、
ＳＭＶＨＲＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号７）、
ＲＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号１４）、
ＨＲＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号１５）、
ＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号１６）、
ＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号２７）、
から成る群より選択されるか；又は、
ここで、このペプチドは、式ＩＩＩのアミノ酸配列を含み、ここで、このペプチドは：
ＧＩＧＳＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱ（配列番号８）、
ＧＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱ（配列番号３９）モノマー若しくはダイマー、
ＧＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲ（配列番号４０）モノマー若しくはダイマー、
ＧＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳ（配列番号４１）モノマー若しくはダイマー、
ＧＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳＲ（配列番号４２）モノマー若しくはダイマー、
ＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱ（配列番号４３）モノマー若しくはダイマー、
ＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲ（配列番号４４）モノマー若しくはダイマー、
ＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳ（配列番号４５）モノマー若しくはダイマー、
ＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳＲ（配列番号４６）モノマー若しくはダイマー、
ＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱ（配列番号４７）モノマー若しくはダイマー、
ＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲ（配列番号４８）モノマー若しくはダイマー、
ＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳ（配列番号４９）モノマー若しくはダイマー、
ＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳＲ（配列番号５０）モノマー若しくはダイマー、
から成る群より選択されるか；又は、
ここで、このペプチドは、式ＩＶのアミノ酸配列を含み、ここで、このペプチドは：
ＡＡＱＡＴＧＰＬＱＤＮＥＬＰＧＬＤＥＲＰＰＲＡＨＡＱＨＦＨＫＨＱＬＷＰＳＰＦＲＡＬＫＰＲＰ（配列番号５）、
ＡＡＱＡＴＧＰＬＱＤＮＥＬＰＧＬＤＥＲＰＰ（配列番号３２）、
ＡＡＱＡＴＧＰＬＱＤＮＥＬＰＧＬＤＥＲＰＰＲＡＨＡＱＨＦＨ（配列番号３３）、
ＰＰＲＡＨＡＱＨＦＨＫＨＱＬＷＰＳＰＦＲＡＬＫＰＲＰ（配列番号３４）、
ＨＱＬＷＰＳＰＦＲＡＬＫＰＲＰ（配列番号３５）、
から成る群より選択されるか；又は、
ここで、ペプチドは、式Ｖのアミノ酸配列を含み、ここで、このペプチドは：
ＡＨＡＱＨＦＨＫＨＱＬＷＰＳＰＦＲＡＬＫＰＲＰ（配列番号１７）、
から成る群より選択されるか；又は、
ここで、ペプチドは、式ＶＩのアミノ酸配列を含み、ここで、このペプチドは：
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＫＬＱＫＦＴＳＷＦＭ（配列番号１）、
ＦＴＳＷＦＭ（配列番号２）、
ＬＱＫＦＴＳＷＦＭ（配列番号３）、
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＴＬＱＫＦＴＳＷＦＭ（配列番号４）、
ＨＫＲＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＫＬＱＫＦＴＳＷＦＭ（配列番号２６）、
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＫＬＱ（配列番号３６）、
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＴＬＱ（配列番号３７）、
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳ（配列番号３８）、
から成る群より選択される。
【００４４】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、該ペプチドは、第二のペプチド又はポリペプチドと結合又は融合し、任意に、ここで、該第二のペプチド若しくはポリペプチドは、多抗原性ペプチド（ＭＡＰ）であるか、又は、ここで、該第二のペプチド若しくはポリペプチドは、免疫グロブリンの一部を含むか、又は、ここで、該第二のペプチド若しくはポリペプチドは、アルブミン若しくはアルブミンの一部を含む。
【００４５】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、ここで、前記第二のペプチド又はポリペプチドは、シグナル配列を含む。
【００４６】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つを含み、シグナル配列は：
該ペプチドが式Ｉの場合、ＭＰＳＶＲＳＬＬＲＬＬＡＡＡＡＡＣＧＡＦＡ（配列番号５１）又はＭＰＳＶＲＳＬＬＲＬＬＡＡＡＡＡＣＧＡ（配列番号５２）を含み；
該ペプチドが式ＩＩの場合、ＭＨＷＫＭＬＬＬＬＬＬＹＹＮＡＥＡ（配列番号５３）を含み；
該ペプチドが式ＩＩＩの場合、ＭＳＫＳＣＧＮＮＬＡＡＩＳＶＧＩＳＬＬＬＬＬＶＶＣ（配列番号５４）を含み；
該ペプチドが式ＩＶの場合、ＭＡＨＶＰＡＲＴＳＰＧＰＧＰＱＬＬＬＬＬＬＰＬＦＬＬＬＬＲＤＶＡＧ（配列番号５５）を含み；
該ペプチドが式Ｖの場合、ＭＡＨＶＰＡＲＴＳＰＧＰＧＰＱＬＬＬＬＬＬＰＬＦＬＬＬＬＲＤＶＡＧ（配列番号５５）を含み；又は、
該ペプチドが式ＶＩの場合、ＭＡＴＡＳＰＳＶＦＬＬＭＶＮＧＱＶＥＳ（配列番号５６）を含む。
【００４７】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つ、及び薬理学的に許容されるキャリアを含有する医薬組成物を含む。
【００４８】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つの断片を有するペプチドを含み、ここで、該ペプチド断片は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）タンパク質と結合するか又はこれを活性化し、任意に、ここで、該ＧＰＣＲタンパク質は、Ｍａｓ、ＭｒｇＸ１、ＭｒｇＸ２、及びその他のＭｒｇＸから成る群より選択されるタンパク質のＭａｓ関連ファミリーに属するか；又は、ここで、該ＧＰＣＲタンパク質は、ＦＰＲ、ＦＰＲＬ１、及びＦＰＲＬ２から成る群より選択されるタンパク質のＦＰＲ関連ファミリーに属する。
【００４９】
別の態様における本発明は、前述のペプチド断片のいずれか一つを含み、ここで、前記のペプチドが式Ｉ又はＩＩの場合、前記のＧＰＣＲタンパク質は、Ｍａｓタンパク質である。
【００５０】
別の態様における本発明は、前述のペプチド断片のいずれか一つを含み、ここで、前記のペプチドが式ＩＩＩの場合、前記のＧＰＣＲタンパク質は、ＭｒｇＸ１タンパク質（ＳＮＳＲ４としても知られる）である。
【００５１】
別の態様における本発明は、前述のペプチド断片のいずれか一つを含み、ここで、前記のペプチドが式Ｉ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、又は式Ｖの場合、前記のＧＰＣＲタンパク質は、ＭｒｇＸ２タンパク質である。
【００５２】
別の態様における本発明は、前述のペプチド断片のいずれか一つを含み、ここで、前記のペプチドが式ＩＩ、式ＩＶ、又は式ＶＩの場合、前記のＧＰＣＲタンパク質は、ＦＰＲＬ１タンパク質である。
【００５３】
別の態様における本発明は、前述のペプチドのいずれか一つをコードする精製された核酸配列を含む。
【００５４】
別の態様における本発明は、高血圧症に付随する疾病を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、又は式Ｖである。
【００５５】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の高血圧症に付随する疾病は、高血圧性心疾患；降圧（ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）（血圧低下）；全身性及び肺性高血圧；脳血管疾患及び脳卒中；心不全及び脳卒中；左心室肥大（ＬＶＨ）；うっ血性心不全（ＣＨＦ）；高血圧症、高血圧；血管拡張；腎性高血圧症；利尿；腎炎；ナトリウム利尿；強皮症腎クリーゼ；狭心症（安定性及び不安定性）；心筋梗塞；心臓発作；冠動脈疾患；不整脈；心房細動；門脈圧亢進症；眼内圧上昇；血管再狭窄；慢性高血圧症；弁膜症；心筋虚血；急性肺水腫；急性冠症候群；高血圧性網膜症；高血圧性悪阻（ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ  ｐｒｅｇｎａｎｃｙ  ｓｉｃｋｎｅｓｓ）；子癇前症；レイノー現象；勃起不全、及び緑内障から成る群より選択される。これらのペプチドは、血管拡張薬としても、及び抗血栓療法にも使用される。
【００５６】
別の態様における本発明は、循環器系障害を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＶ、又は式ＶＩである。
【００５７】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の循環器系障害は、末梢血管疾患及び冠動脈疾患；心筋梗塞；心臓損傷；うっ血性心不全（ＣＨＦ）；心筋不全；心筋肥大；虚血性心筋症；収縮期心不全；拡張期心不全；脳卒中；脳血栓；同心性左心室肥大；心筋炎；心筋症；肥大型心筋症；心筋炎；非代償性心不全；虚血性心筋疾患；先天性心疾患；狭心症；心筋梗塞後の心臓リモデリング又は心室リモデリングの阻害；虚血性事象及び虚血後の事象（例：心筋梗塞）における虚血再灌流障害；脳血管発作；僧帽弁逆流；高血圧症；低血圧症；再狭窄；線維症；血栓症；並びに血小板凝集から成る群より選択される。
【００５８】
別の態様における本発明は、虚血再灌流障害に関連する障害を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＶ、又は式ＶＩである。
【００５９】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、虚血再灌流障害に関連する障害は、臓器及び組織での虚血性事象並びに虚血後の事象と関連しており、この障害は、脳血栓；心筋梗塞；狭心症；塞栓性血管閉塞；末梢血行不全；内臓動脈閉塞；血栓又は塞栓症による動脈閉塞、低腸間膜血流又は敗血症などに続く非閉塞性プロセスによる動脈閉塞；腸間膜動脈閉塞；腸間膜静脈閉塞；腸間膜微小循環に対する虚血再灌流障害；虚血性急性腎不全；大脳組織に対する虚血再灌流障害；腸重積症；血行動態ショック；組織機能障害；臓器不全；再狭窄；粥状動脈硬化；血栓症；血小板凝集から成る群より選択されるか；又は、心臓手術；臓器手術；臓器移植；血管造影；心肺及び脳蘇生などの処置から成るリストから選択される状態に続くものである。
【００６０】
別の態様における本発明は、対象の中枢神経系（ＣＮＳ）障害又は末梢神経系（ＰＮＳ）障害を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、又は式Ｖである。
【００６１】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、前記のＣＮＳ又はＰＮＳ障害は、中枢及び末梢神経変性障害；神経保護；認識障害；不安障害、疼痛管理、食物摂取、行動障害、学習障害、睡眠障害、記憶障害、麻酔に対する病理的反応、嗜癖、抑うつ、片頭痛、月経障害、筋痙攣、アヘン依存症、認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、皮質性機能、及び自発運動活性から成る群より選択される。
【００６２】
別の態様における本発明は、対象の炎症性障害を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ、又は式ＶＩである。
【００６３】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、前記の炎症性障害は、胃炎、痛風、痛風性関節炎、関節炎、関節リウマチ、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、潰瘍、慢性気管支炎、喘息、アレルギー、急性肺障害、肺炎症、気管支過敏症、血管炎、敗血症性ショック、並びに乾癬、アトピー性皮膚炎、及び湿疹から成るリストから選択される炎症性皮膚障害から成る群より選択される。
【００６４】
別の態様における本発明は、感染症に付随する炎症状態を治療する方法を含み、該感染症は、対象における細菌感染症、又はウイルス感染症、又は別の種類の病原体に起因する感染症であり、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＶ、又は式ＶＩである。
【００６５】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、前記の炎症性障害は、細菌感染症、又はウイルス感染症、又は別の種類の病原体に起因する感染症に付随し、ヒト免疫不全ウイルスＩ（ＨＩＶ‐１）又はＨＩＶ‐２、後天性免疫不全（ＡＩＤＳ）、西ナイル脳炎ウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、インフルエンザウイルス、テングウイルス、出血熱によって引き起こされるウイルス感染症；耳感染症；重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、敗血症、及び副鼻腔炎から成る群より選択される。
【００６６】
別の態様における本発明は、対象の代謝障害を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＶ、又は式ＶＩである。
【００６７】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、前記の代謝障害は、糖尿病、真性糖尿病、リポジストロフィー、甲状腺機能亢進症、緑内障、高脂血症、非インスリン依存性糖尿病、食欲制御、及び肥満から成る群より選択される。
【００６８】
別の態様における本発明は、炎症又は虚血再灌流障害後の組織のリモデリングが関与する対象の線維性状態を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ、又は式ＶＩである。
【００６９】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、前記の線維性状態は、心内膜心筋線維症；縦隔線維症；特発性肺線維症；肺線維症；後腹膜線維症；脾臓の線維症；膵臓の線維症；肝線維症（硬変）；線維腫症；肉芽腫性肺疾患；及び糸球体腎炎から成る群より選択される。
【００７０】
別の態様における本発明は、結果として内皮障害となる活性酸素種の還元が関与する対象の疾患を予防及び治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ又は式ＩＩである。
【００７１】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、前記の内皮障害は、循環器系疾患、高血圧、粥状動脈硬化、血栓症、心筋梗塞、心不全、腎疾患、多代謝症候群、勃起不全；血管炎；及び中枢神経系（ＣＮＳ）の疾患から成る群より選択される。
【００７２】
別の態様における本発明は、対象の呼吸器疾患を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＶ、又は式ＶＩである。
【００７３】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の呼吸器疾患は、喘息、気管支疾患、肺疾患、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）から成る群より選択される。
【００７４】
別の態様における本発明は、皮膚損傷若しくは組織修復を予防又は治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＶ、又は式ＶＩである。
【００７５】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の皮膚損傷は、皮膚修復、創傷治癒；火傷、紅斑、皮膚又は組織病変、及び皮膚腫瘍から成る群より選択される。
【００７６】
別の態様における本発明は、対象の骨疾患を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式ＩＩ、式ＩＶ、又は式ＶＩである。
【００７７】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の骨疾患は、骨粗鬆症である。
【００７８】
別の態様における本発明は、対象の泌尿生殖器障害又は生殖泌尿器（ｇｅｎｉｔｏｒ‐ｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ）障害を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩである。
【００７９】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の泌尿生殖器障害又は生殖泌尿器障害は、腎疾患；膀胱障害；生殖系の障害；婦人科的障害（ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）；尿路障害；失禁；雄性（精子形成、精子の運動性）、及び雌性生殖系の障害；性機能不全；勃起不全；胚形成；妊娠関連障害、並びに妊娠モニタリングから成る群より選択される。
【００８０】
別の態様における本発明は、対象の損傷部位への血液細胞の化学誘引を活性化又は誘発する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式ＩＩ、式ＩＶ、又は式ＶＩである。
【００８１】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の血液細胞は貪食細胞、血小板、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、及びリンパ球から成る群より選択される。
【００８２】
別の態様における本発明は、対象の血球減少症を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＶ、又は式ＶＩである。
【００８３】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の血球減少症は、多系列血球減少症（ｍｕｌｔｉｌｉｎｅａｇｅ  ｃｙｔｏｐｅｎｉａ）、血小板減少症、貧血、腎不全による貧血；リンパ球減少症、白血球減少症、好中球減少症、放射線／化学療法関連の好中球減少症；及び血小板異常から成る群より選択される。
【００８４】
別の態様における本発明は、対象の免疫関連障害を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＶ、又は式ＶＩである。
【００８５】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の免疫関連障害は、移植片対宿主病；移植拒絶反応、骨髄移植から成る群より選択される。
【００８６】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の免疫関連障害は、自己免疫疾患であり、多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、クローン病、移植拒絶反応、移植片拒絶反応に付随する免疫異常、良性リンパ球性血管炎、エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、原発性粘液水腫、グレーブス病、悪性貧血、自己免疫性萎縮性胃炎、アジソン病、インスリン依存性真性糖尿病、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、天疱瘡、交感性眼炎、自己免疫性ぶどう膜炎、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少症、原発性胆汁性肝硬変、慢性活動肝炎、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、リウマチ性疾患、多発性筋炎、強皮症、混合性結合組織病、炎症性リウマチ、変性リウマチ、関節外リウマチ、膠原病、慢性多発性関節炎、関節症性乾癬、強直性脊椎炎、若年性関節リウマチ、肩関節周囲炎、結節性汎動脈炎、進行性全身性強皮症、尿酸炎性関節炎、皮膚筋炎、筋肉リウマチ、筋肉炎、筋硬症、及び軟骨石灰化症から成る群より選択される。
【００８７】
別の態様における本発明は、患者の癌、又は癌に付随する炎症を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＶ、又は式ＶＩである。
【００８８】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の癌は、浸潤型及び転移型を含む、結腸癌、肺癌、乳癌、前立腺癌、脳癌、膵臓癌、卵巣癌、腎臓癌、メラノーマ、グリオーマ、カルシノーマ、肉腫、白血病、又はリンパ腫から成る群より選択される。
【００８９】
別の態様における本発明は、患者の疼痛を治療又は管理する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、又は式Ｖである。
【００９０】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の疼痛は、複合性局所疼痛、筋骨格疼痛（ｍｕｓｃｏｓｋｅｌｅｔａｌ  ｐａｉｎ）、神経因性疼痛、ヘルペス後疼痛、癌に付随する疼痛、又は術後疼痛から成る群より選択される。
【００９１】
別の態様における本発明は、患者の腎臓疾患を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、又は式Ｖである。
【００９２】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の腎臓疾患は、糖尿病性腎症；糸球体硬化症；腎症；腎機能障害；強皮症腎クリーゼ；及び慢性腎不全から成る群より選択される。
【００９３】
別の態様における本発明は、患者の血液疾患を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ又は式ＩＩである。
【００９４】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の血液疾患は、血管形成（腔内プロステーシス（ｅｎｄｏｌｕｍｉｎａｌ  ｐｒｏｓｔｈｅｓｉｓ）及び血管形成後再狭窄）；造血；赤血球増多；及び、放射線療法後などの血液構成（ｂｌｏｏｄ  ｃｒａｓｉｓ）の異常から成る群より選択される。
【００９５】
別の態様における本発明は、患者の血管新生関連疾患を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＶ、又は式ＶＩである。
【００９６】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の血管新生関連疾患は、ヒトの眼疾患における網膜血管新生であり、真性糖尿病、未熟児網膜症、及び加齢黄斑変性症から成る群より選択される。
【００９７】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の血管新生関連疾患は、原発性又は転移性癌であり、前立腺癌、脳癌、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、腎臓癌、子宮頚部癌、メラノーマ、軟部組織肉腫、リンパ腫、頭頚部癌、及びグリオブラストーマから成る群より選択される。
【００９８】
別の態様における本発明は、患者の遺伝子多型に起因する疾患を治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ又は式ＩＩである。
【００９９】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の遺伝子多型に起因する疾患は、アンジオテンシン変換酵素のＤＤ型；Ｉ型及びＩＩ型真性糖尿病、並びに合併症；真性糖尿病予防；糖尿病黄斑症；及び糖尿病腎症から成る群より選択される。
【０１００】
別の態様における本発明は、加齢によって生ずる患者の器質変化（ｏｒｇａｎｉｃ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ）を予防又は治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ又は式ＩＩである。
【０１０１】
別の態様における本発明は、化学療法（エトポシドなど）によって誘発された脱毛症を含む患者の脱毛症を予防又は治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＶ、又は式ＶＩである。
【０１０２】
別の態様における本発明は、患者の筋肉萎縮症における筋肉の分化、成熟化、及び再生の変化が関与する疾患を予防又は治療する方法を含み、該方法は、それを必要とする対象に治療有効量の前述のペプチドのいずれか一つを投与する工程を含み、ここで、該ペプチドは、式Ｉ又は式ＩＩである。
【０１０３】
別の態様における本発明は、前述の方法を含み、ここで、前記の筋肉の変化又は筋肉萎縮症は、カヘキシー；数多くの要因による長期間にわたるベッドでの拘束；慢性的なコルチコイドの使用；及び筋肉萎縮症を誘発する種々の神経症候群、トラウマ、及び変性疾患から成る群より選択される。
【０１０４】
別の態様における本発明は、本発明のペプチド配列をコードするｃＤＮＡを含み、これは、遺伝子治療に用いることができる。
【０１０５】
所望する場合、遺伝子治療を用いて、本発明にかかるペプチドを対象へ送達することができる。ペプチドをコードする核酸は、ベクターに挿入することができ、次にこれを、遺伝子治療ベクターとして用いる。遺伝子治療ベクターは、例えば、静脈内注射、局所投与、又は定位注射（ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔｉｃ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）によって対象へ送達することができる。遺伝子治療ベクターの医薬製剤は、許容される希釈剤中の遺伝子治療ベクターを含むことができ、又は、遺伝子送達運搬体が包埋された徐放性マトリックスを含むことができる。別の選択肢として、例えばレトロウイルスベクターなど、遺伝子組換え細胞から完全な遺伝子送達ベクターが無傷な状態で産生可能な場合、医薬製剤は、遺伝子送達システムを産生する１若しくは２個以上の細胞を含むことができる。
【０１０６】
別の態様における本発明は、１若しくは複数種類の別の治療薬と組み合わせて提供される、１若しくは２種類以上の本発明のペプチドを用いる併用療法を含む。本明細書で用いる「併用療法」という用語は、２種類以上の治療薬の併用を含む単一の状態又は疾患の治療を意味する。
【０１０７】
別の態様における本発明は、前述のいずれか一つのペプチドのエピトープと選択的に結合する抗体を含む。
【０１０８】
別の態様における本発明は、前述の抗体のいずれか一つを含み、ここで、前記のペプチドは、
ＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤ（配列番号９）のモノマー若しくはダイマー、
ＦＬＧＹＳＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤ（配列番号１０）、
ＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤ（配列番号１１）、
ＦＡＦＬＧＹＳＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦ（配列番号１２）、
ＦＡＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦ（配列番号１３）のモノマー若しくはダイマー、
ＦＡＦＬＧＹＳＩＹＬＮ（配列番号１８）、
ＦＡＦＬＧＹＣＩＹＬＮ（配列番号１９）のモノマー若しくはダイマー、
ＦＡＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤ（配列番号２０）のモノマー若しくはダイマー、
ＦＬＧＹＣＩＹＬＮ（配列番号２１）のモノマー若しくはダイマー、
ＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲ（配列番号２２）のモノマー若しくはダイマー、
ＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦ（配列番号２３）のモノマー若しくはダイマー、
ＲＧＤＰＡＦ（配列番号２４）、
ＲＲＧＤＰＡＦ（配列番号２５）、
ＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤ（配列番号２８）、
ＧＤＰＡＦ（配列番号２９）、
ＩＹＬＮ（配列番号３０）、
ＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦ（配列番号３１）、
ＳＭＣＨＲＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号６）のモノマー若しくはダイマー、
ＳＭＶＨＲＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号７）、
ＲＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号１４）、
ＨＲＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号１５）、
ＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号１６）、
ＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号２７）、
ＧＩＧＳＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱ（配列番号８）、
ＧＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱ（配列番号３９）のモノマー若しくはダイマー、
ＧＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲ（配列番号４０）のモノマー若しくはダイマー、
ＧＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳ（配列番号４１）のモノマー若しくはダイマー、
ＧＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳＲ（配列番号４２）のモノマー若しくはダイマー、
ＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱ（配列番号４３）のモノマー若しくはダイマー、
ＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲ（配列番号４４）のモノマー若しくはダイマー、
ＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳ（配列番号４５）のモノマー若しくはダイマー、
ＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳＲ（配列番号４６）のモノマー若しくはダイマー、
ＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱ（配列番号４７）のモノマー若しくはダイマー、
ＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲ（配列番号４８）のモノマー若しくはダイマー、
ＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳ（配列番号４９）のモノマー若しくはダイマー、
ＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳＲ（配列番号５０）のモノマー若しくはダイマー、
ＡＡＱＡＴＧＰＬＱＤＮＥＬＰＧＬＤＥＲＰＰＲＡＨＡＱＨＦＨＫＨＱＬＷＰＳＰＦＲＡＬＫＰＲＰ（配列番号５）、
ＡＡＱＡＴＧＰＬＱＤＮＥＬＰＧＬＤＥＲＰＰ（配列番号３２）、
ＡＡＱＡＴＧＰＬＱＤＮＥＬＰＧＬＤＥＲＰＰＲＡＨＡＱＨＦＨ（配列番号３３）、
ＰＰＲＡＨＡＱＨＦＨＫＨＱＬＷＰＳＰＦＲＡＬＫＰＲＰ（配列番号３４）、
ＨＱＬＷＰＳＰＦＲＡＬＫＰＲＰ（配列番号３５）、
ＡＨＡＱＨＦＨＫＨＱＬＷＰＳＰＦＲＡＬＫＰＲＰ（配列番号１７）、
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＫＬＱＫＦＴＳＷＦＭ（配列番号１）、
ＦＴＳＷＦＭ（配列番号２）、
ＬＱＫＦＴＳＷＦＭ（配列番号３）、
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＴＬＱＫＦＴＳＷＦＭ（配列番号４）、
ＨＫＲＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＫＬＱＫＦＴＳＷＦＭ（配列番号２６）、
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＫＬＱ（配列番号３６）、
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＴＬＱ（配列番号３７）、
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳ（配列番号３８）、
である。
【０１０９】
別の態様における本発明は、前述の抗体のいずれか一つを含み、ここで、該抗体は、モノクローナル抗体である。
【０１１０】
別の態様における本発明は、前述の抗体のいずれか一つを含み、ここで、該抗体は、検出可能標識、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、若しくは治療薬と接合又は結合する。
【０１１１】
特に断りのない限り、本明細書で用いるすべての技術的及び科学的用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるものと同意である。本発明の実施又は検証に、本明細書で述べるものと類似又は同等の方法及び物質を用いることができるが、適切な方法及び物質を以下で述べる。本明細書で述べるすべての刊行物、特許出願、特許、及びその他の参考文献は、その全文が参照することで本明細書に組み入れられる。矛盾が生じた場合は、定義を含む本明細書が優先する。さらに、物質、方法、及び例は、説明のためだけのものであり、限定することを意図するものではない。
【０１１２】
本発明のその他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び請求項から明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１１３】
【図１】本出願で述べるペプチドのリストである。
【図２】ＭｒｇＸ１でトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞中のカルシウム流に対するペプチド６０＿Ｓによる影響を示す線グラフである。
【図３】ＭｒｇＸ１でトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞のペプチド６０＿Ｓに対する用量反応関係を示す線グラフである。
【図４】ＭｒｇＸ２でトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞中のカルシウム流に対するペプチド６０＿Ｓによる影響を示す線グラフである。
【図５】ＭｒｇＸ２でトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞中のカルシウム流に対するペプチド９４による影響を示す線グラフである。
【図６】ＭｒｇＸ２でトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞中のカルシウム流に対するペプチド６１＿Ｓによる影響を示す線グラフである。
【図７】ＭｒｇＸ２でトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞中のカルシウム流に対するペプチド６３による影響を示す線グラフである。
【図８】ＭａｓでトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞中のカルシウム流に対するペプチド３３＿Ｖによる影響を示す線グラフである。
【図９】ＭａｓでトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞のペプチドＰ３３＿Ｖ、Ｐ３３＿モノ、Ｐ３３＿ダイマー、及びＰ３３＿５に対する用量反応関係を示す線グラフである。
【図１０】ＭａｓでトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞のペプチドＰ３３＿８、Ｐ３３＿９、Ｐ３３＿１０、及びＰ３３＿Ｖに対する用量反応関係を示す線グラフである。
【図１１】ＭａｓでトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞中のカルシウム流に対するペプチド６１＿Ｓによる影響を示す線グラフである。
【図１２】ＭａｓでトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞のＰ６１＿Ｓ、Ｐ６１＿モノ、及びＰ６１＿ダイマーに対する用量反応関係を示す線グラフである。
【図１３】ＭａｓでトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞のＰ６１＿４、Ｐ６１＿１１Ｓ、及びＰ６１＿Ｓに対する用量反応関係を示す線グラフである。
【図１４】ＦＰＲＬ１でトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞中のカルシウム流に対するペプチド６０＿Ｓによる影響を示す線グラフである。
【図１５】ＦＰＲＬ１でトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞中のカルシウム流に対するペプチド３３＿Ｖによる影響を示す線グラフである。
【図１６】ＦＰＲＬ１でトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞中のカルシウム流に対するペプチド３３及びその誘導体による影響を、Ｗペプチドと比較して示す線グラフである。
【図１７】ＦＰＲＬ１でトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞中のカルシウム流に対するペプチド９４による影響を示す線グラフである。
【図１８】ＦＰＲＬ１でトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞中のカルシウム流に対するペプチド５８による影響を示す線グラフである。
【図１９】ＦＰＲＬ１でトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞中のカルシウム流に対するペプチドＰ５８及びその誘導体のいくつかによる影響を、Ｗペプチドと比較して示す線グラフである。
【図２０】ＦＰＲＬ１でトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞中のカルシウム流に対するペプチドＰ５８及びその誘導体のいくつかによる影響を、Ｗペプチドと比較して示す線グラフである。
【図２１】ＦＰＲＬ１でトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞中のカルシウム流に対するペプチド５８及びその誘導体による影響を、Ａｃ２‐２６と比較して示す線グラフである。
【図２２】ＦＰＲＬ１に対するペプチド５８の競合的放射性リガンド結合アッセイの結果を示す反応曲線である。
【図２３】空気嚢腔（ａｉｒ  ｐｏｕｃｈ  ｃａｖｉｔｙ）へのザイモサン誘導白血球流に対する４時間の時点でのＰ５８及びＡｃ２‐２６による影響を示す表である。
【図２４】空気嚢腔へのザイモサン誘導好中球（ＧＲ‐１＋細胞）流に対する４時間の時点でのＰ５８及びＡｃ２‐２６による影響を示す表である。
【図２５】ＧＲ‐１染色に対する代表的なフローサイトメトリーヒストグラムである。ヒストグラムは、各実験グループからの１匹のマウスからの代表的な染色を示す。灰色線：フィコエリスリン標識ＩｇＧによる明確なバックグラウンド染色なし。黒色ヒストグラムは、ＧＲ‐１＋染色を示す。黒色ヒストグラム上の数値は、白血球集団でのＧＲ‐１＋事象のパーセントを示す。
【図２６】空気嚢腔へのザイモサン誘導白血球流に対する４時間の時点でのＰ５８及び類似体による影響を示す表である。
【図２７】空気嚢腔へのザイモサン誘導好中球（ＧＲ‐１＋）流に対する４時間の時点でのＰ５８及び類似体による影響を示す表である。
【図２８】０．１μＭのフェニレフリン（ＰＨＥ）であらかじめ収縮させた血管中におけるＰ６１＿Ｓ、Ｐ６１＿Ｄ、Ｐ３３＿Ｖ及びＰ３３＿Ｄによる累積濃度反応曲線を示す、実験フローの代表的なスキームである。
【図２９】機能内皮を持つ（Ｅ＋）又は持たない（Ｅ−）ウィスターラット由来大動脈輪におけるＰ６１＿Ｓの血管拡張効果を示すグラフである。各々の点は、少なくとも６回の別々の実験から得られた±ＳＥＭの平均を表す。＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図３０】ＮＯ合成酵素阻害薬、Ｌ‐ＮＡＭＥの非存在下（コントロール）又は存在下でのウィスターラット由来大動脈輪におけるＰ６１＿Ｓの血管拡張効果を示すグラフである。各々の点は、少なくとも５回の別々の実験から得られた±ＳＥＭの平均を表す。＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図３１】機能内皮を持つ（Ｅ＋）又は持たない（Ｅ−）ウィスターラット由来大動脈輪におけるＰ６１＿Ｄの血管拡張効果を示すグラフである。各々の点は、少なくとも８回の別々の実験から得られた±ＳＥＭの平均を表す。＊＊ｐ＜０．０１。
【図３２】Ｌ‐ＮＡＭＥの非存在下（コントロール）又は存在下でのウィスターラット由来大動脈輪におけるＰ６１＿Ｓの血管拡張効果を示すグラフである。各々の点は、少なくとも５回の別々の実験から得られた±ＳＥＭの平均を表す。＊ｐ＜０．０５；＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図３３】機能内皮を持つ（Ｅ＋）又は持たない（Ｅ−）ウィスターラット由来大動脈輪におけるＰ３３＿Ｖの血管拡張効果を示すグラフである。各々の点は、少なくとも６回の別々の実験から得られた±ＳＥＭの平均を表す。＊＊ｐ＜０．０１。
【図３４】Ｌ‐ＮＡＭＥの非存在下（コントロール）又は存在下でのウィスターラット由来大動脈輪におけるＰ３３＿Ｖの血管拡張効果を示すグラフである。各々の点は、少なくとも６回の別々の実験から得られた±ＳＥＭの平均を表す。＊＊ｐ＜０．０１。
【図３５】機能内皮を持つ（Ｅ＋）又は持たない（Ｅ−）ウィスターラット由来大動脈輪におけるＰ３３＿Ｄの血管拡張効果を示すグラフである。各々の点は、少なくとも６回の別々の実験から得られた±ＳＥＭの平均を表す。＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図３６】Ｌ‐ＮＡＭＥの非存在下（コントロール）又は存在下でのウィスターラット由来大動脈輪におけるＰ３３＿Ｄの血管拡張効果を示すグラフである。各々の点は、少なくとも５回の別々の実験から得られた±ＳＥＭの平均を表す。＊ｐ＜０．０５。
【図３７】機能内皮を持つ（Ｅ＋）又は持たない（Ｅ−）ウィスターラット由来大動脈輪におけるＡｎｇ‐（１‐７）の血管拡張効果を示すグラフである。各々の点は、少なくとも４回の別々の実験から得られた±ＳＥＭの平均を表す。＊ｐ＜０．０５。
【図３８】Ｌ‐ＮＡＭＥの非存在下（コントロール）又は存在下でのウィスターラット由来大動脈輪におけるＡｎｇ‐（１‐７）の血管拡張効果を示すグラフである。各々の点は、少なくとも５回の別々の実験から得られた±ＳＥＭの平均を表す。＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図３９】ＭａｓでトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞のＰ３３＿Ｖ及びＰ６１＿Ｓに対する用量反応関係を示す線グラフである。
【図４０】イソプロテレノール誘導ラットにおける、コントロール動物及びＰ６１＿Ｄ存在下でのフィブロネクチン沈着を示すヒストグラムである。
【図４１】イソプロテレノール誘導ラットにおける、Ｐ６１＿Ｓ存在下又は非存在下でのフィブロネクチン沈着を示す。
【図４２】イソプロテレノール誘導ラットにおける、Ｐ６１＿Ｄ存在下又は非存在下でのＩＩＩ型コラーゲン沈着を示す。
【図４３】イソプロテレノール誘導ラットにおける、Ｐ６１＿Ｓ存在下又は非存在下でのＩＩＩ型コラーゲン沈着を示す。
【図４４】イソプロテレノール誘導ラットにおける、Ｐ６１＿Ｓ存在下又は非存在下でのＩ型コラーゲン沈着を示す。
【図４５】イソプロテレノール誘導ラットにおける、Ｐ６１＿Ｄ存在下又は非存在下でのＩ型コラーゲン沈着を示す。
【図４６】ロサルタンの存在下又は非存在下における、コントロールラット及びイソプロテレノール処理ラットの体重に対する左心室質量の比を示す。
【図４７】Ｐ３３＿Ｖの存在下又は非存在下における、コントロールラット及びイソプロテレノール処理ラットの体重に対する左心室質量の比を示す。
【図４８】Ｐ６１＿Ｓの存在下又は非存在下における、コントロールラット及びイソプロテレノール処理ラットの体重に対する左心室質量の比を示す。
【図４９】Ｐ３３＿Ｄの存在下又は非存在下における、コントロールラット及びイソプロテレノール処理ラットの体重に対する左心室質量の比を示す。
【図５０】Ｐ６１＿Ｄの存在下又は非存在下における、コントロールラット及びイソプロテレノール処理ラットの体重に対する左心室質量の比を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１１４】
本発明は、生物活性ペプチドを提供する。これらのペプチドは、とりわけ、以下で詳細に議論する種々の適応症及び障害の治療に有用である。ある態様では、このペプチドはＧＰＣＲ受容体のリガンドである。
【０１１５】
式Ｉ（ペプチド６１型のペプチドとしても知られる）、式ＩＩ（ペプチド３３型のペプチド）、式ＩＩＩ（ペプチド６０型のペプチド）、式ＩＶ（ペプチド９４型のペプチドとしても知られる）、式Ｖ（ペプチド６３型のペプチド）、又は式ＶＩ（ペプチド５８型のペプチド）の範囲内に含まれる生物活性ペプチドを提供する。
【０１１６】
式Ｉは、以下の式の範囲内に含まれる化合物：
Ａ１‐Ａ２‐Ａ３‐Ａ４‐Ａ５‐Ａ６‐Ａ７‐Ａ８‐Ａ９‐Ａ１０‐Ａ１１‐Ａ１２‐Ａ１３‐Ａ１４‐Ａ１５‐Ａ１６‐Ａ１７‐Ａ１８‐Ａ１９‐Ａ２０‐Ａ２１‐Ａ２２‐Ａ２３‐Ａ２４‐Ａ２５‐Ａ２６、
又はその薬理学的に許容される塩を含み、ここで、
Ａ１は、存在しないか、又はＦ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ２は、存在しないか、又はＡ若しくは低分子量非天然アミノ酸であり；
Ａ３は、存在しないか、又はＦ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ４は、存在しないか、又はＬ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ５は、存在しないか、又はＧ若しくは低分子量非天然アミノ酸であり；
Ａ６は、存在しないか、又はＹ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ７は、存在しないか、又はＳ若しくはＣであり；
Ａ８は、存在しないか、又はＩ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ９は、存在しないか、又はＹ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ１０は、存在しないか、又はＬ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ１１は、存在しないか、又はＮ若しくは極性非天然アミノ酸であり；
Ａ１２は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ａ１３は、存在しないか、又はＫ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ａ１４は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ａ１５は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ａ１６は、存在しないか、又はＧ若しくは低分子量非天然アミノ酸であり；
Ａ１７は、存在しないか、又はＤ若しくは極性非天然アミノ酸であり；
Ａ１８は、存在しないか、又はＰであり；
Ａ１９は、存在しないか、又はＡ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ２０は、存在しないか、又はＦ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ２１は、存在しないか、又はＫ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ａ２２は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ａ２３は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ａ２４は、存在しないか、又はＬ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ２５は、存在しないか、又はＲ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ａ２６は、存在しないか、又はＤ若しくは極性非天然アミノ酸である。
【０１１７】
ある態様では、式Ｉのペプチドは、本明細書においてペプチド６１（Ｐ６１）とも称するＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤモノマー又はダイマー（配列番号９）のアミノ酸配列、又は本明細書においてペプチド６１＿Ｓ（Ｐ６１＿Ｓ）とも称するＦＬＧＹＳＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含む。
【０１１８】
式Ｉの範囲内に含まれるＰ６１型のペプチドを以下の表１に挙げる：
【０１１９】
【表１】
0005502480.tif 000002
【０１２０】
式ＩＩの化合物は、以下の：
Ｂ１‐Ｂ２‐Ｂ３‐Ｂ４‐Ｂ５‐Ｂ６‐Ｂ７‐Ｂ８‐Ｂ９‐Ｂ１０‐Ｂ１１‐Ｂ１２‐Ｂ１３‐Ｂ１４‐Ｂ１５‐Ｂ１６‐Ｂ１７‐Ｂ１８、又はその薬理学的に許容される塩を含み、ここで、
Ｂ１は、存在しないか、又はＳであり；
Ｂ２は、存在しないか、又はＭ、若しくはノルロイシン（Ｎｌｅ）、若しくは別の疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ３は、存在しないか、又はＣ若しくはＶであり；
Ｂ４は、存在しないか、又はＨ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｂ５は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｂ６は、存在しないか、又はＷ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ７は、存在しないか、又はＳであり；
Ｂ８は、存在しないか、又はＲ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ９は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｂ１０は、Ｖ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ１１は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ１２は、Ｆ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ１３は、Ｐであり；
Ｂ１４は、Ａ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ１５は、Ａ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｂ１６は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｂ１７は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｂ１８は、Ｐである。
【０１２１】
式ＩＩの範囲内のペプチドの例は、本明細書においてＰ３３とも称するＳＭＣＨＲＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰモノマー若しくはダイマー（配列番号６）；及び、本明細書においてＰ３３＿Ｖとも称するＳＭＶＨＲＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号７）を含む。式ＩＩの範囲内に含まれるＰ３３型のペプチドのその他の例を、以下の表２に挙げる：
【０１２２】
【表２】
0005502480.tif 000003
【０１２３】
式ＩＩＩは、以下の式の範囲内に含まれる化合物：
Ｃ１‐Ｃ２‐Ｃ３‐Ｃ４‐Ｃ５‐Ｃ６‐Ｃ７‐Ｃ８‐Ｃ９‐Ｃ１０‐Ｃ１１‐Ｃ１２‐Ｃ１３‐Ｃ１４‐Ｃ１５‐Ｃ１６‐Ｃ１７‐Ｃ１８‐Ｃ１９‐Ｃ２０‐Ｃ２１‐Ｃ２２‐Ｃ２３‐Ｃ２４‐Ｃ２５‐Ｃ２６‐Ｃ２７‐Ｃ２８、
又はその薬理学的に許容される塩を含み、ここで、
Ｃ１は、存在しないか、又はＧ若しくは低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｃ２は、存在しないか、又はＩ若しくは疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ３は、存在しないか、又はＧ若しくは低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｃ４は、Ｃ、又はＳ、又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｃ５は、Ｖ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ６は、Ｗ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ７は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ８は、Ｗ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ９は、Ｋ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１０は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１１は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１２は、Ｖ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１３は、Ａ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１４は、Ｔ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１５は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１６は、Ｆ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１７は、Ｔ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１８は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ１９は、Ｐであり；
Ｃ２０は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２１は、Ｆ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２２は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２３は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２４は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２５は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２６は、存在しないか、又はＳ若しくは極性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２７は、存在しないか、又はＳ若しくは極性非天然アミノ酸であり；
Ｃ２８は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸である。
【０１２４】
式ＩＩＩの範囲内の配列の一部又はすべてを含むペプチドの例を以下の表３に示す。
【０１２５】
ＧＩＧＳＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱ（配列番号８）のアミノ酸配列から成るペプチドは、本明細書においてペプチド６０＿Ｓとも称する。
【０１２６】
【表３】
0005502480.tif 000004
【０１２７】
式ＩＶは、以下の式の範囲内に含まれる化合物：
Ｄ１‐Ｄ２‐Ｄ３‐Ｄ４‐Ｄ５‐Ｄ６‐Ｄ７‐Ｄ８‐Ｄ９‐Ｄ１０‐Ｄ１１‐Ｄ１２‐Ｄ１３‐Ｄ１４‐Ｄ１５‐Ｄ１６‐Ｄ１７‐Ｄ１８‐Ｄ１９‐Ｄ２０‐Ｄ２１‐Ｄ２２‐Ｄ２３‐Ｄ２４‐Ｄ２５‐Ｄ２６‐Ｄ２７‐Ｄ２８‐Ｄ２９‐Ｄ３０‐Ｄ３１‐Ｄ３２‐Ｄ３３‐Ｄ３４‐Ｄ３５‐Ｄ３６‐Ｄ３７‐Ｄ３８‐Ｄ３９‐Ｄ４０‐Ｄ４１‐Ｄ４２‐Ｄ４３‐Ｄ４４‐Ｄ４５、
又はその薬理学的に許容される塩を含み、ここで、
Ｄ１は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｄ２は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｄ３は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ４は、Ａ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ５は、Ｔ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ６は、Ｇ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｄ７は、Ｐであり；
Ｄ８は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ９は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ１０は、Ｄ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ１１は、Ｎ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ１２は、Ｅ又は非天然アミノ酸であり；
Ｄ１３は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ１４は、Ｐであり；
Ｄ１５は、Ｇ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｄ１６は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ１７は、Ｄ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ１８は、Ｅ又は非天然アミノ酸であり；
Ｄ１９は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ２０は、Ｐであり； 
Ｄ２１は、Ｐであり；
Ｄ２２は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ２３は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｄ２４は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ２５は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｄ２６は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ２７は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ２８は、Ｆ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ２９は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３０は、Ｋ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３１は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３２は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３３は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３４は、Ｗ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３５は、Ｐであり； 
Ｄ３６は、Ｓ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３７は、Ｐであり；
Ｄ３８は、Ｆ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ３９は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ４０は、Ａ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ４１は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ４２は、Ｋ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｄ４３は、Ｐであり；
Ｄ４４は、Ｒ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｄ４５は、Ｐである。
【０１２８】
ある態様では、式ＩＶのペプチドは、以下の表４に挙げるアミノ酸配列を含む。
【０１２９】
ＡＡＱＡＴＧＰＬＱＤＮＥＬＰＧＬＤＥＲＰＰＲＡＨＡＱＨＦＨＫＨＱＬＷＰＳＰＦＲＡＬＫＰＲＰ（配列番号５）のアミノ酸配列から成るペプチドは、本明細書においてペプチド９４とも称する。
【０１３０】
【表４】
0005502480.tif 000005
【０１３１】
式Ｖの化合物は、以下の：
Ｅ１‐Ｅ２‐Ｅ３‐Ｅ４‐Ｅ５‐Ｅ６‐Ｅ７‐Ｅ８‐Ｅ９‐Ｅ１０‐Ｅ１１‐Ｅ１２‐Ｅ１３‐Ｅ１４‐Ｅ１５‐Ｅ１６‐Ｅ１７‐Ｅ１８‐Ｅ１９‐Ｅ２０‐Ｅ２１‐Ｅ２２‐Ｅ２３、又はその薬理学的に許容される塩を含み、ここで、
Ｅ１は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｅ２は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｅ３は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｅ４は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｅ５は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｅ６は、Ｆ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｅ７は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｅ８は、Ｋ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｅ９は、Ｈ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｅ１０は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｅ１１は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｅ１２は、Ｗ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｅ１３は、Ｐであり；
Ｅ１４は、Ｓであり；
Ｅ１５は、Ｐであり；
Ｅ１６は、Ｆ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｅ１７は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｅ１８は、Ａ又は低分子量非天然アミノ酸であり；
Ｅ１９は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｅ２０は、Ｋ又は塩基性非天然アミノ酸であり； 
Ｅ２１は、Ｐであり；
Ｅ２２は、Ｒ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｅ２３は、Ｐである。
【０１３２】
式Ｖの範囲内のＰ６３型のペプチドの例は、ＡＨＡＱＨＦＨＫＨＱＬＷＰＳＰＦＲＡＬＫＰＲＰ（配列番号１７、本明細書においてペプチド６３（Ｐ６３）とも称する）を含む。
【０１３３】
式ＶＩは、以下の式の範囲内に含まれる化合物：
Ｆ１‐Ｆ２‐Ｆ３‐Ｆ４‐Ｆ５‐Ｆ６‐Ｆ７‐Ｆ８‐Ｆ９‐Ｆ１０‐Ｆ１１‐Ｆ１２‐Ｆ１３‐Ｆ１４‐Ｆ１５‐Ｆ１６‐Ｆ１７‐Ｆ１８‐Ｆ１９‐Ｆ２０‐Ｆ２１‐Ｆ２２‐Ｆ２３‐Ｆ２４、
又はその薬理学的に許容される塩を含み、ここで、
Ｆ１は、存在しないか、又はＨ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｆ２は、存在しないか、又はＫ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｆ３は、存在しないか、又はＲ若しくは塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｆ４は、Ｔ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｆ５は、Ｉ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｆ６は、Ｐであり；
Ｆ７は、Ｍ、又はノルロイシン（Ｎｌｅ）、又は別の疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｆ８は、Ｆ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｆ９は、Ｖ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｆ１０は、Ｐであり；
Ｆ１１は、Ｅ又は非天然アミノ酸であり；
Ｆ１２は、Ｓであり；
Ｆ１３は、Ｔ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｆ１４は、Ｓであり；
Ｆ１５は、Ｋ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｆ１６は、Ｌ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｆ１７は、Ｑ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｆ１８は、Ｋ又は塩基性非天然アミノ酸であり；
Ｆ１９は、Ｆ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｆ２０は、Ｔ又は極性非天然アミノ酸であり； 
Ｆ２１は、Ｓであり；
Ｆ２２は、Ｗ又は疎水性非天然アミノ酸であり；
Ｆ２３は、Ｆ又は極性非天然アミノ酸であり；
Ｆ２４は、Ｍ、又はノルロイシン（Ｎｌｅ）、又は別の疎水性非天然アミノ酸である。
【０１３４】
式ＶＩの範囲内の配列の一部を含むペプチドの例を以下の表５に示す。
【０１３５】
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＫＬＱＫＦＴＳＷＦＭ（配列番号１）のアミノ酸配列から成るペプチドは、本明細書においてペプチド５８とも称する。
【０１３６】
【表５】
0005502480.tif 000006
【０１３７】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、又はＶＩの範囲内のペプチドは、示したアミノ酸配列を含む長鎖のペプチドの一部分として提供することができる。例えば、ペプチドは、２００、１５０、１２５、１００、７５、５０、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、又は１７個未満のアミノ酸のペプチド上に提供することができる。本発明は、さらに、アミノ酸配列が式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、又はＶＩに列挙したものよりも短いペプチド断片も提供する。好適な態様では、ペプチド断片は、例えば、ＧＰＣＲ受容体への結合及び／若しくはその活性化、又は本明細書で述べる状態に対する活性など、完全長ペプチドに付随する１若しくは２種類以上の活性を保持する。
【０１３８】
ある態様では、式Ｉ、ＩＩ、又はＩＩＩの範囲内のペプチドは、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）タンパク質と結合する。例えば、ペプチドは、式Ｉ若しくは式ＩＩのペプチドの場合、ＭＡＳ１遺伝子産物と結合することができ、又は、式ＩＩＩのペプチドの場合、Ｍａｓ関連Ｇタンパク質共役受容体メンバーＸ１（感覚ニューロン特異的Ｇタンパク質共役受容体４）と結合することができる。式Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、若しくはＶのペプチドの場合、ペプチドは、Ｍａｓ関連Ｇタンパク質共役受容体メンバーＸ２と結合することができ、又は、式ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、若しくはＶＩのペプチドの場合、ペプチドは、ＦＭＬＰ関連受容体Ｉと結合することができる。
【０１３９】
ある態様では、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、又はＶＩの範囲内のペプチドは、ＧＰＣＲタンパク質を活性化する。ＧＰＣＲタンパク質の活性化は、本技術分野で公知の方法を用いて測定することができる。
【０１４０】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、又はＶＩの範囲内のペプチドは、第二のペプチド又はポリペプチドと接合した形で提供することができる。第二のペプチド又はポリペプチドの例としては、多抗原性ペプチド（ＭＡＰ）及びシグナル配列である。適切なシグナル配列としては、例えば、ＭＰＳＶＲＳＬＬＲＬＬＡＡＡＡＡＣＧＡＦＡ（配列番号５１）、ＭＰＳＶＲＳＬＬＲＬＬＡＡＡＡＡＣＧＡ（配列番号５２）；ＭＨＷＫＭＬＬＬＬＬＬＹＹＮＡＥＡ（配列番号５３）；ＭＳＫＳＣＧＮＮＬＡＡＩＳＶＧＩＳＬＬＬＬＬＶＶＣ（配列番号５４）；ＭＡＨＶＰＡＲＴＳＰＧＰＧＰＱＬＬＬＬＬＬＰＬＦＬＬＬＬＲＤＶＡＧ（配列番号５５）；及び、ＭＡＴＡＳＰＳＶＦＬＬＭＶＮＧＱＶＥＳ（配列番号５６）が挙げられる。
【０１４１】
ある態様では、第二のペプチド又はポリペプチドは、免疫グロブリン配列である（例：ＩｇＧ配列）。本発明において標的化部分として用いるための免疫反応性リガンドとしては、抗原認識免疫グロブリン（「抗体」とも称する）、又はその抗原認識断片が挙げられ、例えば、腫瘍関連抗原を認識することができる免疫グロブリンなどである。本明細書で用いる「免疫グロブリン」とは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、又はＩｇＥなど、認知されている免疫グロブリンのいかなるクラス又はサブクラスをも意味する。
【０１４２】
免疫グロブリンのＩｇＧクラスの範囲内に含まれる免疫グロブリンが好ましい。この免疫グロブリンは、いかなる種からも誘導することができる。しかし、好ましくは、免疫グロブリンは、ヒト、マウス、又はラビット由来である。さらに、免疫グロブリンは、ポリクローナルであってもモノクローナルであってもよいが、モノクローナルが好ましい。
【０１４３】
本発明の接合体は、抗原認識免疫グロブリン断片を含むことができる。このような免疫グロブリン断片としては、例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、若しくはＦａｂ断片、又はその他の抗原認識免疫グロブリン断片を挙げることができる。このような免疫グロブリン断片は、例えば、ペプシン若しくはパパイン消化などを例とするタンパク質分解酵素による消化、還元アルキル化、又は遺伝子組換え技術などによって作製することができる。このような免疫グロブリン断片作製のための物質及び方法は、当業者に公知である。Ｐａｒｈａｍ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１３１，２８９５，１９８３；Ｌａｍｏｙｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，５６，２３５，１９８３、を参照のこと。
【０１４４】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」の用語は、本明細書において交換可能に用いられ、アミノ酸残基のポリマーを意味する。これらの用語は、１若しくは２個以上のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の類似体又は模倣体であるアミノ酸ポリマー、並びに天然アミノ酸ポリマーに適用される。これらの用語は、ペプチド結合又は修飾ペプチド結合によって互いに結合している２若しくは３個以上のアミノ酸を含むいかなるペプチド（環状ペプチドを含む）、又はタンパク質も包含する。「ポリペプチド」は、一般にペプチド、オリゴペプチド、又はオリゴマーと称される短鎖、及び一般にタンパク質と称される長鎖の両方を意味する。
【０１４５】
「ポリペプチド」は、自然のプロセス、又は本技術分野で公知の化学修飾技術のいずれかによって修飾されたアミノ酸配列を含む。修飾は、ペプチドバックボーン、アミノ酸側鎖、及びアミノ末端若しくはカルボキシ末端を含む、ポリペプチドのいずれの場所で発生してもよい。ポリペプチドは、例えば、炭水化物残基の付加による糖タンパク質の形成などによって修飾することができる。「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」の用語は、糖タンパク質、並びに非糖タンパク質を含む。
【０１４６】
本発明の範囲内のペプチドは、例えば、天然タンパク質又はペプチドからのペプチド配列の精製などにより、本技術分野で公知の方法を用いて作製することができる。精製を、開裂又は分解（酵素によるか若しくは酵素によらない）と共に本技術分野で公知の方法を用いて行い、所望のペプチドを作製することができる。
【０１４７】
別の選択肢として、生成物は、例えば、固相合成法、部分的固相合成法、断片の縮合、従来の溶液合成などを用いて、生化学的に合成することができる。これらの方法は、好ましくは、ペプチドが比較的短鎖（すなわち、１０ｋＤａ）である場合、及び／又は遺伝子組換え技術で作製することができない（すなわち、核酸配列によってコードされない）場合に用いられる。
【０１４８】
固相ポリペプチド合成の手順は、本技術分野で公知であり、さらに、Ｊｏｈｎ  Ｍｏｒｒｏｗ  Ｓｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｊａｎｉｓ  Ｄｉｌｌａｈａ  Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ  （２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９８４）、に述べられている。
【０１４９】
合成ポリペプチドは、分取用高速液体クロマトグラフィによって精製することができ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ  Ｔ．（１９８３）  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ．ＷＨ  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．Ｎ．Ｙ．）、その組成物は、アミノ酸の配列決定によって確認することができる。
【０１５０】
ポリペプチド又はペプチドは、別の選択肢として、Ｂｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６‐５４４，Ｓｔｕｄｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８５：６０‐８９，Ｂｒｉｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）  Ｎａｔｕｒｅ  ３１０：５１１‐５１４，Ｔａｋａｍａｔｓｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）  ＥＭＢＯ  Ｊ．６：３０７‐３１１，Ｃｏｒｕｚｚｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）  ＥＭＢＯ  Ｊ．３：１６７１‐１６８０、及びＢｒｏｇｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２４：８３８‐８４３，Ｇｕｒｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６：５５９‐５６５、及びＷｅｉｓｓｂａｃｈ  ＆  Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ，１９８８，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，Ｓｅｃｔｉｏｎ  ＶＩＩＩ，ｐｐ４２１‐４６３、などに記載の遺伝子組換え技術を用いて合成することができる。
【０１５１】
本発明の範囲内のペプチドは、１若しくは２箇所以上の修飾を含むことができる。例えば、リン酸化（通常は、セリン、スレオニン、若しくはチロシン残基上にて）、ペグ化、ビオチン部分と結合した形、などで提供することができ、又は、別のペプチド、ポリペプチド、若しくはアミノ酸とのジスルフィド結合を含むことができる。ペプチドは、例えば、環状ペプチド又はラクタムなど、環状の形態で提供することができる。別の選択肢として、又は追加して、ペプチドは、分岐鎖状ペプチドとして提供することができる。
【０１５２】
ペプチドは、（直鎖の場合）そのアミノ末端又はカルボキシ末端にて、さらに修飾することができる。アミノ末端修飾の例としては、例えば、Ｎ‐糖化、Ｎ‐アルキル化、Ｎ‐アセチル化、又はＮ‐アシル化アミノ酸が挙げられる。末端修飾は、ペグ化を含むことができる。カルボキシ末端修飾の例としては、ｃ‐末端アミド化アミノ酸である。
【０１５３】
本発明のペプチドは、遺伝子にコードされる２０種類のアミノ酸以外のアミノ酸を含むことができる。アミノ酸がＤ‐アミノ酸ともＬ‐アミノ酸とも指定されていない場合、特定の異性体を要する状況でない限りにおいて、アミノ酸は、Ｌ‐アミノ酸であるか、又はＤ‐若しくはＬ‐アミノ酸のいずれかであり得る。
【０１５４】
ポリペプチドアミノ酸残基に対して本明細書で用いる記号は、本技術分野で一般的に用いられる略号である。より一般的でない略号、Ａｂｕ、Ｃｐａ、Ｎｌｅ、Ｐａｌ、Ｔｌｅ、Ｄｉｐ、４‐Ｆｐａ、及びＮａｌは、それぞれ、２‐アミノ酪酸、ｐ‐クロロフェニルアラニン、ノルロイシン、３‐ピリジル‐２‐アラニン、ｔｅｒｔ‐ロイシン、２，２‐ジフェニルアラニン、４‐フルオロ‐フェニルアラニン、及び３‐（２‐ナフチル）‐アラニン又は３‐（１‐ナフチル）‐アラニンを表す。
【０１５５】
非天然アミノ酸の一つの例は、例えばベータ‐アラニン（ベータ‐Ａｌａ）又は３‐アミノプロピオン酸（３-ａＰ）などのオメガ‐アミノ酸である。その他の例としては、例えば、サルコシン（Ｓａｒ）、β‐アラニン（β‐Ａｌａ）、２，３‐ジアミノプロピオン酸（２，３‐ｄｉａＰ）、又はアルファ‐アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）などの非天然アミノ酸であり；オメガ‐アミノ酸は、ベータ‐アラニン（ベータ‐Ａｌａ）又は３‐アミノプロピオン酸（３-ａＰ）であり；ｔ‐ブチルアラニン（ｔ‐ＢｕＡ）、ｔ‐ブチルグリシン（ｔ‐ＢｕＧ）、Ｎ‐メチルイソロイシン（Ｎ‐ＭｅＩｌｅ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メチルバリン（Ｍｖｌ）、シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）、フェニルグリシン（Ｐｈｇ）、ＮａＩ、β２‐チエニルアラニン（Ｔｈｉ）、２‐ナフチルアラニン（２‐Ｎａｌ）、又は１，２，３，４‐テトラヒドロイソキノリン‐３‐カルボン酸（Ｔｉｃ）などの疎水性非天然アミノ酸であり；オルニチン（Ｏｒｎ）又はホモアルギニン（Ｈａｒ）などの塩基性アミノ酸であり；及び、中性／極性非天然アミノ酸は、シトルリン（Ｃｉｔ）、アセチルＬｙｓ、又はメチオニンスルホキシド（ＭＳＯ）である。
【０１５６】
その他の非従来型のアミノ酸を表６に挙げる。
【０１５７】
【表６−１】
0005502480.tif 000007
【表６−２】
0005502480.tif 000008
【表６−３】
0005502480.tif 000009
【０１５８】
修飾
融合タンパク質
融合タンパク質は、免疫グロブリンの定常領域を含む免疫グロブリンの一部分との融合により、本発明にかかるペプチドから作製することができる。より好ましくは、免疫グロブリンの一部分は、重鎖定常領域を含み、これは、任意に、そしてより好ましくは、ヒト重鎖定常領域である。重鎖定常領域は、最も好ましくは、ＩｇＧ重鎖定常領域であり、任意に、そして最も好ましくは、Ｆｃ鎖、最も好ましくはＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含むＩｇＧ  Ｆｃ断片である。ＩｇＧのいかなるサブタイプも任意に用いることができるが、ＩｇＧ１サブタイプが好ましい。Ｆｃ鎖は、任意に、公知の若しくは「野生型」のＦｃ鎖であってよく、又は、別の選択肢として、変異型でもよい。限定されない説明のための典型的な変異の種類は、２００６年２月１６日公開の米国特許出願第２００６００３４８５２号に記載されており、この文献は、本明細書にその全文が記載されているかのごとく、参照することで本明細書に組み入れられる。「Ｆｃ鎖」という用語はさらに、任意に、いかなる種類のＦｃ断片も含む。
【０１５９】
ＩｇＧサブクラスにおける抗体の定常領域を介する活性にとって重要であるいくつかの特定のアミノ酸残基が確認されている。従って、これらの特定のアミノ酸の挿入、置換、又は除去により、免疫グロブリンの定常領域を介する特定の活性の取り込み又は除去が可能となる。さらに、特定の変化により、例えば非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）、及び／又はその他の所望の変化をＦｃ鎖にもたらすことができる。以下でより詳細に述べるように、少なくともいくつかの変化を任意に行って、望ましくない免疫系効果など、望ましくないと見なされるＦｃの機能を遮断してもよい。
【０１６０】
融合タンパク質の活性を調節するために行うことができるＦｃに対する変異の限定されない説明のための例としては、以下に示す変化が挙げられる（Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ：Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ，１９９１、より、Ｋａｂａｔによって示されたＦｃ配列の命名法に従って示す）：２２０Ｃ‐＞Ｓ；２３３‐２３８ＥＬＬＧＧＰ‐＞ＥＡＥＧＡＰ；２６５Ｄ‐＞Ａ、好ましくは４３４Ｎ‐＞Ａとの組み合わせ；２９７Ｎ‐＞Ａ（例えば、Ｎ‐グリコシル化の阻害のために）；３１８‐３２２ＥＹＫＣＫ‐＞ＡＹＡＣＡ；３３０‐３３１ＡＰ‐＞ＳＳ；又はこれらの組み合わせ（これらの変異及びその効果の説明については、例えば、Ｍ．Ｃｌａｒｋ，“Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ”，ｐｐ１‐３１、を参照）。上記の変化を特徴とするＦｃ鎖のコンストラクトは、任意に、そして好ましくは、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインとヒンジ領域との組み合わせを含む。
【０１６１】
上記の変異は、任意に実施して、所望の性質を高めることができ、又は、別の選択肢として、所望されない性質を阻害することもできる。例えば、抗体の非グリコシル化により、任意に所望されない性質であり得るＴ細胞の減少を阻害、又はサイトカインの放出を誘発しながら、所望の結合官能性を維持することが示された（Ｍ．Ｃｌａｒｋ，“Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ”，ｐｐ１‐３１、参照）。３３１プロリンをセリンで置換することにより、任意に所望されない機能とみなされ得る補体を活性化する能力を阻害することができる（Ｍ．Ｃｌａｒｋ，“Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ”，ｐｐ１‐３１、参照）。この変化を３３０アラニンのセリンへの変化と組み合わせることによっても、補体を活性化する能力を阻害するという所望の効果を高めることができる。
【０１６２】
残基２３５及び２３７は、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与することが示されており、従って、ＡＤＣＣが所望されない機能とみなされる場合は、既述のように、残基２３３乃至２３８のブロックを変化させることによってこの活性を阻害することもできる。
【０１６３】
ＩｇＧ１由来のＦｃの場合、残基２２０は通常はシステインであり、これは、重鎖が軽鎖と共有結合を形成する部位である。任意に、この残基をセリンに変えて、いかなる種類の共有結合の形成をも回避することができる（Ｍ．Ｃｌａｒｋ，“Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ”，ｐｐ１‐３１、参照）。
【０１６４】
上記の残基２６５及び４３４への変化を任意に実施して、Ｆｃ受容体への結合を低下若しくは阻害することができ、これによって、任意に、Ｆｃのその免疫系機能と関連する所望されない官能性を阻害することができる（“Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  ｆｏｒ  Ｆｃ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ”，Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．ｖｏｌ  ２７６，ｐｐ６５９１‐６６０４，２００１、参照）。
【０１６５】
上記の変化は、任意の変化の説明を意図しているのみであり、いかなる形においても限定することを意図するものではない。さらに、上記の説明は、説明の目的のみのために提供するものであり、単一の仮説に束縛されるものではない。
【０１６６】
基の付加
本発明にかかるペプチドが直鎖分子の場合、直鎖分子上の様々な部位に、化学修飾を受けやすい、又は化学修飾に適する種々の官能基を配置することが可能である。官能基は、直鎖状ペプチドの末端に付加することができる。ある態様では、官能基により、例えば、これらに限定されないが、安定性の向上、透過性（細胞膜及び／又は組織関門を通る）、組織局在性、有効性、クリアランスの低下、毒性の低下、選択性の向上、及び細胞ポンプによる排出に対する耐性の向上などを含む、１若しくは２種類以上の特性に関してペプチドの活性が向上する。限定を意図するものではなく、簡便性のために、本発明の組成物に含まれる配列の一つの遊離のＮ末端を、この組成物のＮ末端と称し、その配列の遊離のＣ末端をこの組成物のＣ末端とみなす。配列のＣ末端若しくはＮ末端のいずれか、又はその両方は、それぞれ、カルボン酸官能基若しくはアミン官能基と結合することができる。
【０１６７】
適切な官能基の限定されない例は、Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ５  ａｎｄ  ７，１９９１、に記載されており、その教示内容は参照することで本明細書に組み入れられる。好ましい保護基は、それが結合する活性成分の細胞内への輸送を、例えばその活性成分の親水性の低下、及び親油性の上昇などによって促進するものであり、これらは、“細胞膜を通過しての輸送のための部分”の例である。
【０１６８】
これらの部分は、任意に、そして好ましくは、細胞の内部にて、加水分解又は酵素によってインビボで開裂することができる（Ｄｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．５７：７８３（１９６８）；Ｄｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．５７：８２８（１９６８）；Ｄｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．５８：５５７（１９６９）；Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６：２２９４（１９８７）；Ｌｉｎｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  １７：３１１（１９８９）；並びに、Ｔｕｎｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．３７：３８６７（１９８８）、Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２３９：５３８（１９８５）、及びＳｉｎｇｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１：２２０（１９８７））。ヒドロキシル保護基としては、エステル、カーボネート、及びカルバメート保護基が挙げられる。アミン保護基としては、上記でＮ末端保護基について述べたように、アルコキシ及びアリールオキシカルボニル基が挙げられる。カルボン酸保護基としては、上記でＣ末端保護基について述べたように、脂肪族、ベンジル、及びアリールエステルが挙げられる。一つの態様では、本発明の組成物中の１若しくは２個以上のグルタミン酸又はアスパラギン酸残基の側鎖のカルボン酸基は、好ましくは、メチル、エチル、ベンジル、又は置換ベンジルエステルで保護され、より好ましくは、ベンジルエステルとして保護される。
【０１６９】
Ｎ末端保護基の限定されない説明のための例としては、アシル基（‐ＣＯ‐Ｒ１）及びアルコキシカルボニル又はアリールオキシカルボニル基（‐ＣＯ‐Ｏ‐Ｒ１）が挙げられ、ここで、Ｒ１は、脂肪族、置換脂肪族、ベンジル、置換ベンジル、芳香族、又は置換芳香族基である。アシル基の具体例としては、これらに限定されないが、アセチル、（エチル）‐ＣＯ‐、ｎ‐プロピル‐ＣＯ‐、イソプロピル‐ＣＯ‐、ｎ‐ブチル‐ＣＯ‐、ｓｅｃ‐ブチル‐ＣＯ‐、ｔ‐ブチル‐ＣＯ‐、ヘキシル、ラウロイル、パルミトイル、ミリストイル、ステアリル、オレオイル、フェニル‐ＣＯ‐、置換フェニル‐ＣＯ‐、ベンジル‐ＣＯ‐、及び（置換ベンジル）‐ＣＯ‐である。アルコキシカルボニル及びアリールオキシカルボニル基の例としては、ＣＨ３‐Ｏ‐ＣＯ‐、（エチル）‐Ｏ‐ＣＯ‐、ｎ‐プロピル‐Ｏ‐ＣＯ‐、ｉｓｏ‐プロピル‐Ｏ‐ＣＯ‐、ｎ‐ブチル‐Ｏ‐ＣＯ‐、ｓｅｃ‐ブチル‐Ｏ‐ＣＯ‐、ｔ‐ブチル‐Ｏ‐ＣＯ‐、フェニル‐Ｏ‐ＣＯ‐、置換フェニル‐Ｏ‐ＣＯ‐及びベンジル‐Ｏ‐ＣＯ‐、（置換ベンジル）‐Ｏ‐ＣＯ‐、アダマンタン、ナフタレン（ｎａｐｈｔａｌｅｎ）、ミリストレイル（ｍｙｒｉｓｔｏｌｅｙｌ）、トルエン（ｔｏｌｕｅｎ）、ビフェニル、シナモイル、ニトロベンゾイル、トルオイル、フロイル（ｆｕｒｏｙｌ）、ベンゾイル、シクロヘキサン、ノルボルナン、又はＺ‐カプロン（Ｚ‐ｃａｐｒｏｉｃ）が挙げられる。Ｎアシル化を促進するために、分子のＮ末端に１乃至４個のグリシン残基が存在してもよい。
【０１７０】
化合物のＣ末端のカルボキシル基は、例えば、これらに限定されないが、アミド（すなわち、Ｃ末端のヒドロキシル基が、‐ＮＨ２、‐ＮＨＲ２、及び‐ＮＲ２Ｒ３で置換される）又はエステル（すなわち、Ｃ末端のヒドロキシル基が、‐ＯＲ２で置換される）で保護することができる。Ｒ２及びＲ３は、任意に独立して、脂肪族、置換脂肪族、ベンジル、置換ベンジル、アリール、又は置換アリール基である。さらに、窒素原子と共に、Ｒ２及びＲ３は、任意に、窒素、酸素、又は硫黄などの約０乃至２個のヘテロ原子を持つＣ４乃至Ｃ８へテロ環を形成することができる。適切なヘテロ環の限定されない例としては、ピペリジニル、ピロリジニル、モルホリノ、チオモルホリノ、又はピペラジニルが挙げられる。Ｃ末端保護基の例としては、これらに限定されないが、‐ＮＨ２、‐ＮＨＣＨ３、‐Ｎ（ＣＨ３）２、‐ＮＨ（エチル）、‐Ｎ（エチル）２、‐Ｎ（メチル）（エチル）、‐ＮＨ（ベンジル）、‐Ｎ（Ｃ１‐Ｃ４アルキル）（ベンジル）、‐ＮＨ（フェニル）、‐Ｎ（Ｃ１‐Ｃ４アルキル）（フェニル）、‐ＯＣＨ３、‐Ｏ‐（エチル）、‐Ｏ‐（ｎ‐プロピル）、‐Ｏ‐（ｎ‐ブチル）、‐Ｏ‐（ｉｓｏ‐プロピル）、‐Ｏ‐（ｓｅｃ‐ブチル）、‐Ｏ‐（ｔ‐ブチル）、‐Ｏ‐ベンジル、及び‐Ｏ‐フェニルが挙げられる。
【０１７１】
ペプチド模倣部分による置換
「ペプチド模倣有機部分」により、保存的及び非保存的置換の両方として、本発明の組成物のアミノ酸残基を任意に置換することができる。これらの部分は、「非天然アミノ酸」とも称され、任意に、アミノ酸残基、アミノ酸を置換するか、又は、欠失したアミノ酸の代わりにペプチド内でのスペーサー基として作用する。ペプチド模倣有機部分は、任意に、そして好ましくは、置換されたアミノ酸と類似の立体構造的、電子的、又は立体配置的性質を有し、そのようなペプチド模倣は、必須部位のアミノ酸の置換に用いられ、保存的置換と見なされる。しかし、そのような類似性は、必ずしも必要なものではない。本発明の好適な態様によると、本発明に従って、天然ペプチドタンパク質と比較して、組成物がその生理学的活性を少なくとも実質的に保持するように、１若しくは２種類以上のペプチド模倣が選択される。
【０１７２】
ペプチド模倣を任意に用いて、酵素又はその他の分解プロセスによるペプチドの分解を阻害することができる。ペプチド模倣は、任意に、そして好ましくは、有機合成技術によって作製することができる。適切なペプチド模倣の限定されない例としては、対応するＬアミノ酸のＤアミノ酸、テトラゾール（Ｚａｂｒｏｃｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１０：５８７５‐５８８０（１９８８））；アミド結合のアイソスター（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２９：３８５３‐３８５６（１９８８））；ＬＬ‐３‐アミノ‐２‐プロペニドン‐６‐カルボン酸（ＬＬ‐３‐ａｍｉｎｏ‐２‐ｐｒｏｐｅｎｉｄｏｎｅ‐６‐ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）（ＬＬ‐Ａｃｐ）（Ｋｅｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５０：５８３４‐５８３８（１９８５））が挙げられる。同様の類似体が、Ｋｅｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２９：５０８１‐５０８２（１９８８）、並びにＫｅｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２９：５０５７‐５０６０（１９８８）、Ｋｅｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２９：４９３５‐４９３８（１９８８）、及びＫｅｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５４：１０９‐１１５（１９８７）に示されている。その他の適切だが典型的なペプチド模倣が、Ｎａｇａｉ  ａｎｄ  Ｓａｔｏ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２６：６４７‐６５０（１９８５）；Ｄｉ  Ｍａｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．，１６８７（１９８５）；Ｋａｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３０：２３１７（１９８９）；Ｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１２：３２３‐３３３（１９９０）；Ｇａｒｖｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５６：４３６（１９９０）、に示されている。さらなる適切で典型的なペプチド模倣としては、ヒドロキシ‐１，２，３，４‐テトラヒドロイソキノリン‐３‐カルボキシレート（Ｍｉｙａｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｔａｋｅｄａ  Ｒｅｓ．Ｌａｂｓ  ４３：５３‐７６（１９８９））；１，２，３，４‐テトラヒドロ‐イソキノリン‐３‐カルボキシレート（Ｋａｚｍｉｅｒｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３３：２２７５‐２２８３（１９９１））；ヒスチジンイソキノロンカルボン酸（ＨＩＣ）（Ｚｅｃｈｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．４３（１９９１））；（２Ｓ，３Ｓ）‐メチル‐フェニルアラニン、（２Ｓ，３Ｒ）‐メチル‐フェニルアラニン、（２Ｒ，３Ｓ）‐メチル‐フェニルアラニン、及び（２Ｒ，３Ｒ）‐メチル‐フェニルアラニン（Ｋａｚｍｉｅｒｓｋｉ  ａｎｄ  Ｈｒｕｂｙ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．（１９９１））が挙げられる。
【０１７３】
典型的な、説明のための、しかし限定されない非天然アミノ酸としては、ベータ‐アミノ酸（ベータ３及びベータ２）、ホモ‐アミノ酸、環状アミノ酸、芳香族アミノ酸、Ｐｒｏ及びＰｙｒ誘導体、３‐置換アラニン誘導体、グリシン誘導体、環置換Ｐｈｅ及びＴｙｒ誘導体、直鎖コアアミノ酸（ｌｉｎｅａｒ  ｃｏｒｅ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）若しくはジアミノ酸が挙げられる。これらは、例えばＳｉｇｍａ‐Ａｌｄｒｉｃｈ（米国）など、様々な供給業者より入手可能である。
【０１７４】
化学修飾
本発明では、ペプチドのいずれの部位も任意に化学修飾、すなわち、官能基の付加によって変化させることができる。例えば、天然の配列に見られる側鎖アミノ酸残基を、任意に修飾してもよいが、以下に述べるように、側鎖アミノ酸酸基に加えて、又はその代わりに、タンパク質の他の部位を別の選択肢として修飾してもよい。化学合成プロセスに続いて、例えば、化学修飾されたアミノ酸の付加などを行う場合、修飾は、任意に、分子の合成の間に行ってもよい。しかし、アミノ酸がすでに分子内に存在する場合は、アミノ酸の化学修飾も可能である（「ｉｎ  ｓｉｔｕ」修飾）。
【０１７５】
分子のいずれの配列領域のアミノ酸も、任意に、以下の典型的な修飾の種類のいずれか一つに従って修飾することができる（ペプチドでは、概念上、「化学修飾」とみなす）。限定されない典型的な修飾の種類としては、カルボキシメチル化、アシル化、リン酸化、グリコシル化、又は脂肪酸アシル化が挙げられる。エーテル結合を任意に用いて、セリン又はスレオニンのヒドロキシルを糖のヒドロキシルへ結合させてもよい。アミド結合を任意に用いて、グルタメート又はアスパルテートのカルボキシル基を糖のアミノ基と結合させてもよい（Ｇａｒｇ  ａｎｄ  Ｊｅａｎｌｏｚ，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．４３，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５）；Ｋｕｎｚ，Ａｎｇ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌｉｓｈ  ２６：２９４‐３０８（１９８７））。アセタール及びケタール結合を、アミノ酸と炭水化物との間に任意に形成させてもよい。脂肪酸アシル誘導体を、例えば遊離アミノ基（例：リジン）のアシル化によって、任意に形成してもよい（Ｔｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｉｖｉｅｒ  ａｎｄ  Ｍａｒｓｈａｌ，ｅｄｓ．，ＥＳＣＯＭ  Ｐｕｂｌ．，Ｌｅｉｄｅｎ，１０７８‐１０７９（１９９０））。
【０１７６】
本明細書で用いる「化学修飾」という用語は、本発明にかかるタンパク質又はペプチドを意味する場合、そのアミノ酸残基の少なくとも１個が、プロセシング若しくはその他の翻訳後修飾などの自然のプロセス、又は本技術分野で公知の化学修飾技術のいずれかによって修飾されたタンパク質又はペプチドを意味する。数多くの公知の修飾の例としては、これらに限定されないが、一般に、アセチル化、アシル化、アミド化、ＡＤＰ‐リボシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、脂質若しくは脂質誘導体の共有結合による付加、メチル化、ミリスチル化、ペグ化、プレニル化、リン酸化、ユビキチン化、又はこれらと同様のいずれかのプロセスが挙げられる。
【０１７７】
その他の種類の修飾は、任意に、ＰＣＴ出願番号ＷＯ２００６／０５０２６２に記載の、タンパク質などの生物学的分子へのシクロアルカン部分の付加を含み、この文献は、本明細書にその全文が記載されているかのごとく、参照することで本明細書に組み入れられる。これらの部分は、生体分子と共に使用するように設計されているものであり、任意に、タンパク質へ種々の性質を付与するために用いることができる。
【０１７８】
さらに、任意に、タンパク質のいずれの部位も修飾することができる。例えば、ＰＣＴ出願番号ＷＯ２００６／０５０２４７に記載のように、タンパク質上のグリコシル化部位のペグ化を任意に実施することができ、この文献は、本明細書にその全文が記載されているかのごとく、参照することで本明細書に組み入れられる。１若しくは２個以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基を、任意に、Ｏ結合型（Ｏ‐ｌｉｎｋｅｄ）及び／又はＮ結合型（Ｎ‐ｌｉｎｋｅｄ）グリコシル化部位へ付加することができる。ＰＥＧ基は、任意に、分岐鎖状であっても直鎖状であってもよい。任意に、いかなる種類の水溶性ポリマーも、グリコシルリンカーを通して、タンパク質上のグリコシル化部位へ結合させることができる。
【０１７９】
本発明のペプチドの共有結合による修飾は、本発明の範囲内に含まれる。ペプチドの他の種類の共有結合による修飾は、標的であるアミノ酸残基を、選択された側鎖、又はＮ-若しくはＣ‐末端残基と反応することができる有機誘導体化剤と反応させることによって分子中へ誘導される。
【０１８０】
システイニル残基は、最も一般的には、クロロ酢酸又はクロロアセタミドなどのα‐ハロアセテート（及び対応するアミン）と反応して、カルボキシメチル又はカルボキシアミドメチル誘導体を形成する。システイニル残基は、ブロモトリフルオロアセトン、α‐ブロモ‐β‐（５‐イミダゾイル）プロピオン酸、クロロアセチルリン酸、Ｎ‐アルキルマレイミド、３‐ニトロ‐２‐ピリジルジスルフィド、メチル２‐ピリジルジスルフィド、ｐ‐クロロ水銀安息香酸、２‐クロロ水銀‐４‐ニトロフェノール、又はクロロ‐７‐ニトロベンゾ‐２‐オキサ‐１，３‐ジアゾールとの反応によっても誘導体化される。
【０１８１】
ヒスチジル残基は、ｐＨ５．５乃至７．０においてジエチルピロカーボネートと反応させることで誘導体化され、それは、この剤がヒスチジル側鎖に対して比較的特異的であるからである。パラ‐ブロモフェナシルブロミドも有用であり；反応は、好ましくは、０．１Ｍのカコジル酸ナトリウム中、ｐＨ６．０にて実施される。
【０１８２】
リジニル、及びアミノ末端残基は、無水コハク酸、又はその他のカルボン酸無水物と反応する。これらの剤による誘導体化は、リジニル残基の帯電を逆にする効果を有する。α‐アミノ含有残基の誘導体化に適するその他の試薬としては、メチルピコリンイミデートなどのイミドエステル、ピリドキサールリン酸、ピリドキサール、クロロボロヒドリド、トリニトロベンゼンスルホン酸、Ｏ‐メチルイソウレア、２，４‐ペンタンジオン、及びトランスアミナーゼを触媒とするグリオキシレートとの反応、が挙げられる。
【０１８３】
アルギニル残基は、１若しくは数種類の従来の試薬、中でも、フェニルグリオキサール、２，３‐ブタンジオン、１，２‐シクロヘキサンジオン、及びニンヒドリンとの反応によって修飾される。アルギニン残基の誘導体化では、グアニジン官能基のｐＫａが高いため、反応をアルカリ条件下で行う必要がある。さらに、これらの試薬は、アルギニンのイプシロン‐アミノ基だけでなく、リジンの基とも反応することができる。
【０１８４】
チロシル残基の特定の修飾は、分光標識（ｓｐｅｃｔｒａｌ  ｌａｂｅｌ）をチロシル残基へ導入することに特に興味がある場合、芳香族ジアゾニウム化合物又はテトラニトロメタンとの反応によって行うことができる。最も一般的には、Ｎ‐アセチルイミジゾール（Ｎ‐ａｃｅｔｙｌｉｍｉｄｉｚｏｌｅ）及びテトラニトロメタンを用いて、それぞれ、Ｏ‐アセチルチロシル種及び３‐ニトロ誘導体を形成する。チロシル残基を１２５Ｉ又は１３１Ｉを用いてヨウ素化することで、上述のクロラミンＴ法が適切である放射性免疫アッセイに用いるための標識タンパク質が作製される。
【０１８５】
カルボキシル側鎖（アスパルチル又はグルタミル）は、カルボジイミド（Ｒ‐Ｎ＝Ｃ＝Ｎ‐Ｒ’）との反応によって選択的に修飾され、ここで、Ｒ及びＲ’は異なるアルキル基であり、１‐シクロヘキシル‐３‐（２‐モルホリニル‐４‐エチル）カルボジイミド又は１‐エチル‐３‐（４‐アゾニア‐４，４‐ジメチルペンチル）カルボジイミドなどである。さらに、アスパルチル及びグルタミル残基は、アンモニウムイオンとの反応によって、アスパラギニル及びグルタミニル残基へ変換される。
【０１８６】
二官能剤による誘導体化は、抗ＣＨＦ抗体の精製法に用いるために、ＣＨＦを水不溶性支持マトリックス又は表面と架橋させるのに、また、その逆にも有用である。一般的に用いられる架橋剤としては、例えば、１，１‐ビス（ジアゾアセチル）‐２‐フェニルエタン、グルタルアルデヒド、例えば４‐アジドサリチル酸とのエステルなどのＮ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル、３，３’‐ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）などのジスクシンイミジルエステルを含むホモ二官能イミドエステル、及びビス‐Ｎ‐マレイミド‐１，８‐オクタンなどの二官能マレイミドが挙げられる。メチル‐３‐［（ｐ‐アジドフェニル）ジチオ］プロピオイミデートなどの誘導体化剤により、光の存在下で架橋を形成することができる光活性化可能な中間体が得られる。別の選択肢として、臭化シアン活性化炭水化物などの反応性水不溶性マトリックス、及び米国特許第３，９６９，２８７号；第３，６９１，０１６号；第４，１９５，１２８号；第４，２４７，６４２号；第４，２２９，５３７号；及び第４，３３０，４４０号に記載の反応性基体が、タンパク質の固定化に用いられる。
【０１８７】
グルタミニル及びアスパラギニル残基は、多くの場合、それぞれ対応するグルタミル及びアスパルチルへ脱アミド化される。これらの残基は、中性又は塩基性条件下にて脱アミノ化される。これらの残基の脱アミノ化された形は、本発明の範囲内に含まれる。
【０１８８】
その他の修飾としては、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリル又はスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のα‐アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ｐｐ．７９‐８６（１９８３））、Ｎ末端アミンのアセチル化、並びにＣ末端カルボキシル基のアミド化、が挙げられる。
【０１８９】
変形グリコシル化
本発明のペプチドは、変形されたグリコシル化のパターン（すなわち、元の又は自然のグリコシル化パターンからの変形）を有するように修飾することができる。本明細書で用いる「変形」とは、１若しくは２箇所以上の炭水化物部分が欠失していること、及び／又は、元のタンパク質に少なくとも１箇所のグリコシル化部位が付加されていること、を意味する。
【０１９０】
タンパク質のグリコシル化は、通常、Ｎ結合型、又はＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を意味する。トリペプチド配列、アスパラギン‐Ｘ‐セリン及びアスパラギン‐Ｘ‐スレオニンは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の酵素による結合の認識配列であり、ここで、Ｘは、プロリン以外のいずれかのアミノ酸である。従って、このいずれかのトリペプチド配列がポリペプチド内に存在することにより、潜在的なグリコシル化部位が作り出される。Ｏ結合型グリコシル化とは、糖であるＮ‐アセチルガラクトサミン、ガラクトース、又はキシロースの一つのヒドロキシアミノ酸への結合を意味し、最も一般的には、セリン又はスレオニンであるが、５‐ヒドロキシプロリン又は５‐ヒドロキシリジンを用いることもできる。
【０１９１】
本発明のペプチドへのグリコシル化部位の付加は、都合良く、タンパク質のアミノ酸配列を変更して、１若しくは２個以上の上述のトリペプチド配列を含有させることによって達成される（Ｎ結合型グリコシル化部位の場合）。この変更は、元のタンパク質の配列中において、１若しくは２個以上のセリン若しくはスレオニン残基の付加、又はそれによる置換によっても行うことができる（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）。タンパク質のアミノ酸配列は、ＤＮＡレベルでの変化を導入することによっても変更することができる。
【０１９２】
タンパク質上の炭水化物部分の数を増加させる別の方法は、タンパク質のアミノ酸残基へのグリコシドの化学的又は酵素的結合によるものである。用いる結合モードに応じて、糖は、（ａ）アルギニン及びヒスチジン、（ｂ）遊離のカルボキシル基、（ｃ）システインのものなどの遊離のスルフヒドリル基、（ｄ）セリン、スレオニン、若しくはヒドロキシプロリンのものなどの遊離のヒドロキシル基、（ｅ）フェニルアラニン、チロシン、若しくはトリプトファンのものなどの芳香族残基、又は（ｆ）グルタミンのアミド基、へ結合させることができる。これらの方法は、ＷＯ８７／０５３３０、及びＡｐｌｉｎ  ａｎｄ  Ｗｒｉｓｔｏｎ，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２２：２５９‐３０６（１９８１）、に記載されている。
【０１９３】
本発明のペプチド上に存在するいずれの炭水化物部分の除去も、化学的又は酵素的に達成することができる。化学的脱グリコシル化では、タンパク質をトリフルオロメタンスルホン酸、又は同等の化合物と接触させることが必要である。この処理により、アミノ酸配列は無傷で残した状態で、連結糖（ｌｉｎｋｉｎｇ  ｓｕｇａｒ）（Ｎ‐アセチルグルコサミン若しくはＮ‐アセチルガラクトサミン）以外のほとんど又はすべての糖が開裂する結果となる。
【０１９４】
化学的脱グリコシル化は、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２５９：５２（１９８７）；及びＥｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１８：１３１（１９８１）、に記載されている。タンパク質上の炭水化物部分の酵素開裂は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１３８：３５０（１９８７）に記載にように、種々のエンド‐及びエキソ‐グリコシダーゼを用いることによって達成することができる。
【０１９５】
「変異体」とは、基準となるポリペプチドとは異なるが重要な性質は保持しているポリペプチドを意味する。一般に、異なる部分は、基準となるポリペプチドと変異体との配列が全体として極めて類似し、多くの領域では同一であるように限定される。変異体と基準となるポリペプチドとは、アミノ酸配列における１若しくは２箇所以上の置換、付加、及び／又は欠失により、これらのいかなる組み合わせで異なっていてもよい。置換又は挿入されたアミノ酸残基は、遺伝コードによってコードされたものであってもそうでなくてもよい。ポリペプチドの変異体は、対立遺伝子変異体などの天然のものであってもよく、又は天然に存在することが知られていない変異体であってもよい。ポリペプチドの非天然変異体は、変異原性技術、又は直接合成によって作製することができる。
【０１９６】
一般に、変異体は、保存的アミノ酸置換によって基準となるポリペプチドと異なっており、それにより、残基は、類似の特性（例：酸性、塩基性、芳香族性、など）を持つ別の残基と置換される。典型的な置換は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及びＩｌｅの間であり；Ｓｅｒ及びＴｈｒの間であり；酸性残基Ａｓｐ及びＧｌｕの間であり；Ａｓｎ及びＧｌｎの間であり；並びに、塩基性残基Ｌｙｓ及びＡｒｇの間であり；又は芳香族残基Ｐｈｅ及びＴｙｒの間である。
【０１９７】
生物活性ペプチドに対する抗体
本発明は、本明細書で開示する生物活性ペプチド、又は生物活性ペプチドの断片に対する抗体も含む。ある態様では、生物活性ペプチドは、ＧＰＣＲリガンドである。
【０１９８】
「抗体」とは、１若しくは複数の免疫グロブリン遺伝子、又はその断片によって実質的にコードされるポリペプチドリガンドを意味し、これは、エピトープ（例：抗原）と特異的に結合し、これを認識する。抗体は、例えば、無傷の免疫グロブリンとして、又は、例えば種々のペプチダーゼによる消化によって産生される断片などの断片として提供することができる。これには、例えば、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ）’２Ｆｖ（二本鎖として発現された、軽鎖の可変領域及び重鎖の可変領域を含む遺伝子操作された断片として定義される）；並びに（５）遺伝子的に融合された一本鎖分子として適切なポリペプチドリンカーによって連結された、軽鎖の可変領域及び重鎖の可変領域を含む遺伝子操作された分子である一本鎖抗体（「ＳＣＡ」）、が含まれる。本明細書で用いる「抗体」という用語は、全抗体の修飾によって作製された抗体断片、又は最初から組換えＤＮＡによる方法を用いて合成された抗体断片も含む。これには、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、又は一本鎖抗体が含まれる。抗体の「Ｆｃ」部とは、１若しくは２個以上の重鎖定常領域ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含むが重鎖可変領域は含まない免疫グロブリン重鎖の一部分を意味する。
【０１９９】
抗体は、例えば、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、又はＶＩのペプチド内のエピトープに対して産生される。ある態様では、抗ＧＰＣＲペプチドリガンド抗体は、
ＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤモノマー若しくはダイマー（配列番号９）、
ＦＬＧＹＳＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤ（配列番号１０）、
ＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤ（配列番号１１）、
ＦＡＦＬＧＹＳＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦ（配列番号１２）、
ＦＡＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦモノマー若しくはダイマー（配列番号１３）、
ＦＡＦＬＧＹＳＩＹＬＮ（配列番号１８）、
ＦＡＦＬＧＹＣＩＹＬＮモノマー若しくはダイマー（配列番号１９）、
ＦＡＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤ（配列番号２０）、
ＦＬＧＹＣＩＹＬＮ（配列番号２１）、
ＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲ（配列番号２２）、
ＦＬＧＹＣＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦ（配列番号２３）、
ＲＧＤＰＡＦ（配列番号２４）、
ＲＲＧＤＰＡＦ（配列番号２５）、
ＧＤＰＡＦＫＲＲＬＲＤ（配列番号２８）、
ＧＤＰＡＦ（配列番号２９）、
ＩＹＬＮ（配列番号３０）、
ＩＹＬＮＲＫＲＲＧＤＰＡＦ（配列番号３１）、
ＳＭＣＨＲＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰモノマー若しくはダイマー（配列番号６）、
ＳＭＶＨＲＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号７）、
ＲＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号１４）、
ＨＲＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号１５）、
ＷＳＲＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号１６）、
ＡＶＬＦＰＡＡＨＲＰ（配列番号２７）、
ＧＩＧＳＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱ（配列番号８）、
ＧＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱ（配列番号３９）、
ＧＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲ（配列番号４０）、
ＧＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳ（配列番号４１）、
ＧＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳＲ（配列番号４２）、
ＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱ（配列番号４３）、
ＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲ（配列番号４４）、
ＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳ（配列番号４５）、
ＩＧＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳＲ（配列番号４６）、
ＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱ（配列番号４７）、
ＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲ（配列番号４８）、
ＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳ（配列番号４９）、
ＣＶＷＨＷＫＨＲＶＡＴＲＦＴＬＰＲＦＬＱＲＲＳＳＲ（配列番号５０）、
ＡＡＱＡＴＧＰＬＱＤＮＥＬＰＧＬＤＥＲＰＰＲＡＨＡＱＨＦＨＫＨＱＬＷＰＳＰＦＲＡＬＫＰＲＰ（配列番号５）、
ＡＡＱＡＴＧＰＬＱＤＮＥＬＰＧＬＤＥＲＰＰ（配列番号３２）、
ＡＡＱＡＴＧＰＬＱＤＮＥＬＰＧＬＤＥＲＰＰＲＡＨＡＱＨＦＨ（配列番号３３）、
ＰＰＲＡＨＡＱＨＦＨＫＨＱＬＷＰＳＰＦＲＡＬＫＰＲＰ（配列番号３４）、
ＨＱＬＷＰＳＰＦＲＡＬＫＰＲＰ（配列番号３５）、
ＡＨＡＱＨＦＨＫＨＱＬＷＰＳＰＦＲＡＬＫＰＲＰ（配列番号１７）、
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＫＬＱＫＦＴＳＷＦＭ（配列番号１）、
ＦＴＳＷＦＭ（配列番号２）、
ＬＱＫＦＴＳＷＦＭ（配列番号３）、
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＴＬＱＫＦＴＳＷＦＭ（配列番号４）、
ＨＫＲＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＫＬＱＫＦＴＳＷＦＭ（配列番号２６）、
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＫＬＱ（配列番号３６）、
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳＴＬＱ（配列番号３７）、
ＴＩＰＭＦＶＰＥＳＴＳ（配列番号３８）、
に対して産生される。
【０２００】
ポリクローナル及びモノクローナル抗体、並びにそれらの断片を作製する方法は、本技術分野で公知である（例えば、参照することで本明細書に組み入れられる、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８、を参照）。
【０２０１】
抗体断片は、抗体のタンパク質分解性加水分解、又は大腸菌若しくは哺乳類細胞内（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞培養物、又はその他のタンパク質発現系）での断片をコードするＤＮＡの発現によって作製することができる。抗体断片は、従来の方法による全抗体のペプシン又はパパインによる消化によって得ることができる。
【０２０２】
生物活性ペプチド抗体は、さらに、単一の相補性決定領域（ＣＤＲ）に対応するペプチドコードとして提供することができる。ＣＤＲペプチド（「最小認識ユニット」）は、対象である抗体のＣＤＲをコードする遺伝子を構築することによって得ることができる。そのような遺伝子は、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応を用いて、抗体産生細胞のＲＮＡから可変領域を合成することによって作製することができる。例えば、Ｌａｒｒｉｃｋ  ａｎｄ  Ｆｒｙ（Ｍｅｔｈｏｄｓ，２：１０６‐１０（１９９１））、を参照のこと。
【０２０３】
非ヒト（例：マウス）抗体のヒト化された形態は、非ヒト免疫グロブリンから誘導された最小配列を含む、免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）、若しくは抗体のその他の抗原結合配列など）のキメラ分子である。ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体（ｒｅｃｉｐｉｅｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ））を含み、ここで、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を持ったマウス、ラット、又はウサギなどの非ヒト種のＣＤＲ（ドナー抗体）からの残基によって置換されている。ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応する非ヒト残基によって置換されている場合もある。ヒト化抗体は、さらに、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲ若しくはフレームワーク配列にも見られない残基を含んでもよい。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１個、典型的には２個の可変ドメインの全てを含み、ここで、全て、又は実質的に全てのＣＤＲ領域が、非ヒト免疫グロブリンのそれに対応し、及び、全て、又は実質的に全てのＦＲ領域が、ヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列のそれである。ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのそれの少なくとも一部分も含む（Jｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２‐５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３‐３２９（１９８８）；及び、Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３‐５９６（１９９２））。
【０２０４】
非ヒト抗体をヒト化する方法は、本技術分野で公知である。一般的に、ヒト化抗体は、ヒトではない供給源より導入された１若しくは２個以上のアミノ酸残基を持つ。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、移入残基（ｉｍｐｏｒｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ）と称され、これは、通常は移入可変ドメインから得られる。ヒト化は、実質的に、Ｗｉｎｔｅｒとその共同研究者による方法に従い（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２‐５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３‐３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４‐１５３６（１９８８））、げっ歯類のＣＤＲ又はＣＤＲ配列を、ヒト抗体の対応する配列に対して置換することによって実施することができる。従って、そのようなヒト化抗体は、キメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）であり、ここで、無傷のヒト可変ドメインよりも実質的に少ない部分が、非ヒト種由来の対応する配列で置換されている。実際には、ヒト化抗体は、通常、いくつかのＣＤＲ残基、及び場合によってはいくつかのＦＲ残基が、げっ歯類抗体の類似部位からの残基によって置換されたヒト抗体である。
【０２０５】
ヒト抗体も、ファージ表示ライブラリ（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１））を含む、本技術分野で公知の種々の技術を用いて作製することができる。Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．の技術も、ヒトモノクローナル抗体の作製に利用することができる（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４７（１）：８６‐９５（１９９１））。同様に、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を、例えば、内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的に又は完全に不活性化されたマウスなどのトランスジェニック動物へ導入することによって作製することができる。接種を行うと、ヒト抗体の産生が観察され、これは、遺伝子再構成、構築（ａｓｓｅｍｂｌｙ）、及び抗体レパートリーを含むあらゆる点でヒトに見られるものと非常に類似している。この方法は、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号；第５，５４５，８０６号；第５，５６９，８２５号；第５，６２５，１２６号；第５，６３３，４２５号；第５，６６１，０１６号、並びに以下の科学刊行物：Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０，：７７９‐７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６‐８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８  ８１２‐１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４，８４５‐５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８２６（１９９６）；及び、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３，６５‐９３（１９９５）、に記載されている。
【０２０６】
抗体は、好ましくは、ＧＰＣＲペプチドリガンドと特異的に（又は、選択的に）結合する。抗体と「特異的に（又は、選択的に）結合する」、又は「特異的に（又は、選択的に）免疫反応性である」という表現は、タンパク質又はペプチドを指す場合、タンパク質及びその他の生物学的種の不均一集団において、そのタンパク質の存在が決定因子である結合反応を意味する。従って、指定の免疫アッセイ条件下において、特定の抗体は、特定のタンパク質との結合がバックグラウンドの少なくとも２倍であり、サンプル中に存在するその他のタンパク質と実質的に有意な量の結合を起こさない。そのような条件下での抗体への特異的な結合は、特定のタンパク質への特異性について選別された抗体が必要であろう。種々の免疫アッセイのフォーマットを用いて、特定のタンパク質と特異的な免疫反応性を有する抗体を選別することができる。例えば、固相ＥＬＩＳＡ免疫アッセイは、タンパク質と特異的な免疫反応性を有する抗体の選別によく用いられる（特定の免疫反応性の測定に用いることができる免疫アッセイのフォーマット及び条件に関する説明については、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８８）を参照）。典型的には、特異的又は選択的反応とは、バックグラウンドシグナル若しくはノイズの少なくとも２倍であり、より典型的には、バックグラウンドの１０乃至１００倍超である。
【０２０７】
所望する場合は、抗体は、検出可能標識、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、若しくは治療薬と接合又は結合した状態で提供することができる。
【０２０８】
治療方法
本発明のさらなる局面によれば、上述のように、対象の疾患、障害、又は状態を治療する方法を提供する。
【０２０９】
本発明にかかる対象とは、哺乳類、好ましくは、上述の疾患、障害、又は状態の一つの診断を受けたか、又は、別の選択肢として、上述の疾患、障害、又は状態の少なくとも１種類にかかりやすいヒトである。
【０２１０】
本明細書で用いる「治療」という用語は、上述の疾患、障害、又は状態の有害な影響を予防、治療、後退、減弱、軽減、最小化、抑制、又は停止させることを意味する。
【０２１１】
本発明によると、治療は、対象中の本発明の少なくとも１種類のポリペプチドの発現を特異的に上方制御することによって行うことができる。
【０２１２】
任意に、上方制御は、本明細書で述べるように、本発明の少なくとも１種類のポリペプチド（例：遺伝子組換え、若しくは合成による）、又はその活性部分を対象へ投与することによって行うことができる。以下でより詳細に述べるように、ポリペプチド又はペプチドは、任意に、医薬組成物の一部として投与することができる。
【０２１３】
本発明にかかる上述の疾患の治療が、本技術分野で公知のその他の治療方法と組み合わせることができることは理解されるであろう（すなわち、併用療法）。従って、本発明の薬剤を用いる悪性腫瘍の治療は、例えば、放射線療法、抗体療法、及び／又は化学療法と組み合わせることができる。
【０２１４】
別の選択肢として、又は追加的に、上方制御の方法は、任意に、本発明の少なくとも１種類のポリペプチド、又はその活性部分の対象内の量（任意に、発現）を特異的に上方制御することによって実施することができる。
【０２１５】
本発明の治療用ペプチドの発現の上方制御は、真核細胞（例：哺乳類細胞）内でのコード配列の発現用に設計された核酸発現コンストラクトに結び付けられた、本発明の外来性ポリヌクレオチド配列の少なくとも１種類の投与によって行うことができる。従って、外来性ポリヌクレオチド配列は、本発明のペプチド若しくはその活性部分をコードするＤＮＡ、又はＲＮＡ配列であってよい。
【０２１６】
核酸コンストラクトの個体への投与が、インビボ遺伝子療法（例：上述のように、ウイルスのトランスフォーメーションを用いる）を含む適切ないかなる投与モードを用いても行うことができることは理解されるであろう。別の選択肢として、核酸コンストラクトは、適切な遺伝子送達運搬体／方法（トランスフェクション、トランスダクション、相同組換え、など）、及び必要に応じて発現系によって適切な細胞中へ導入され、続いて、この変化させた細胞は培養液中で増殖され、個体へ戻される（すなわち、エクスビボ遺伝子療法）。
【０２１７】
そのような細胞（すなわち、本発明の核酸コンストラクトでトランスフェクトされた細胞）は、腎臓、骨髄、角化細胞、リンパ球、成人幹細胞、臍帯血細胞、胚幹細胞など、個体由来であり、上述のように、本発明のポリペプチドを発現するように設計されたポリヌクレオチドを含む発現ベクターによってエクスビボでトランスフェクトされた適切ないかなる細胞であってもよい。
【０２１８】
本発明のエクスビボでトランスフェクトされた細胞の投与は、静脈内、腹膜内、腎臓内、胃腸管内、皮下、経皮、筋肉内、皮内、くも膜下腔内、硬膜外、及び直腸内など、適切ないかなる経路を用いて行ってもよい。本発明の好適な態様によれば、本発明のエクスビボでトランスフェクトされた細胞は、静脈内、腎臓内、胃腸管内、及び／又は腹膜内投与を用いて個体へ導入される。
【０２１９】
本発明のエクスビボでトランスフェクトされた細胞は、自身の骨髄細胞など、自己由来であってもよく、又は、非自己由来の骨髄若しくはその他の細胞など、同種異系由来であってもよい。非自己由来細胞は、体内へ投与された場合、免疫反応を引き起こす傾向にあるため、非自己細胞を拒絶する傾向を低減させるための手段がいくつか開発されてきた。これらには、レシピエントの免疫系の抑制、又は、移植の前に非自己細胞又は組織を免疫隔離性の半透膜でカプセル化することが含まれる。
【０２２０】
カプセル化の技術は、一般に、小さな球状運搬体を用いるマイクロカプセル化、並びに、より大きなフラットシート膜及び中空糸膜を用いるマクロカプセル化に分類される（Ｕｌｕｄａｇ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌ  ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ．  Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．２０００；４２：２９‐６４）。
【０２２１】
マイクロカプセルの作製方法は、本技術分野において公知であり、例えば、Ｌｕ  ＭＺ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａｌｇｉｎａｔｅ  ａｎｄ  ａｌｐｈａ‐ｐｈｅｎｏｘｙｃｉｎｎａｍｙｌｉｄｅｎｅ‐ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ  ｐｏｌｙ（ａｌｌｙｌａｍｉｎｅ）．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．２０００，７０：４７９‐８３、Ｃｈａｎｇ  ＴＭ  ａｎｄ  Ｐｒａｋａｓｈ  Ｓ．  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｚｙｍｅｓ，ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ．  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００１，１７：２４９‐６０、及び、Ｌｕ  ＭＺ，ｅｔ  ａｌ．，Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｅｌｌ  ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄ  ｕｓｉｎｇ  ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｐｏｌｙ（ａｌｌｙｌａｍｉｎｅ  ａｌｐｈａ‐ｃｙａｎｏｃｉｎｎａｍｙｌｉｄｅｎｅａｃｅｔａｔｅ）．  Ｊ  Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌ．２０００，１７：２４５‐５１、に開示されているものが挙げられる。
【０２２２】
例えば、マイクロカプセルは、修飾コラーゲンを、２‐ヒドロキシエチル  メチルアクリレート（ＨＥＭＡ）、メタクリル酸（ＭＡＡ）、及びメチルメタクリレート（ＭＭＡ）のターポリマーシェルで複合体化することで作製され、厚さ２乃至５μｍのカプセルを得る。そのようなマイクロカプセルは、負に帯電した平滑な表面を付与し、血漿タンパク質の吸収を最小限に抑えるために、追加の２乃至５μｍのターポリマーシェルでさらにカプセル化してもよい（Ｃｈｉａ，Ｓ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．  Ｍｕｌｔｉ‐ｌａｙｅｒｅｄ  ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅｓ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ  ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．  ２００２  ２３：８４９‐５６）。
【０２２３】
その他のマイクロカプセルは、アルギン酸塩、海洋性多糖（Ｓａｍｂａｎｉｓ，Ａ．  Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ  ｉｓｌｅｔｓ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｔｈｅｃｈｎｏｌ．Ｔｈｅｒ．  ２００３，５：６６５‐８）、又はその誘導体に基づいている。例えば、マイクロカプセルは、塩化カルシウムの存在下にて、ポリアニオン、アルギン酸ナトリウム及び硫酸セルロースナトリウム塩と、ポリカチオン、ポリ（メチレン‐グアニジン）塩酸塩との高分子電解質複合体形成によって作製することができる。
【０２２４】
医薬組成物及びその送達
生物活性ペプチドリガンドは、通常、医薬組成物のヒト患者への投与に適した薬理学的に許容されるキャリア中で提供される。当業者であれば理解されるように、キャリアは、以下に述べる投与経路、標的組織の位置、送達される薬物、薬物送達の経時変化、などに基づいて選択することができる。
【０２２５】
「薬理学的に許容されるキャリア」という用語は、無毒性で不活性な固体、半固体、若しくは液状の充填剤、希釈剤、カプセル化剤、又はどのような種類であってもよい補助製剤を意味する。一つの典型的な薬理学的に許容されるキャリアは、生理食塩水である。その他の生理学的に許容されるキャリア及びその製剤は、当業者に公知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，（１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ），．Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，１９９０，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．、に記載されている。薬理学的に許容されるキャリアとして用いることのできる物質のいくつかの例としては、これらに限定されないが、ラクトース、グルコース、及びスクロースなどの糖；コーンスターチ及びポテトスターチなどのデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロースなどのセルロース並びにその誘導体；粉末状トラガカント；モルト；ゼラチン；タルク；ココアバター及び坐薬用ワックスなどの賦活剤；ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油；ゴマ油；オリーブ油；コーン油、及び大豆油などの油類；プロピレングリコールなどのグリコール；オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルなどのエステル；カンテン；ＴＷＥＥＮ（商標）８０などの界面活性剤；水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムなどのバッファー剤；アルギン酸；脱パイロジェン水；等張食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；及び、リン酸バッファー溶液が挙げられ、並びに、ラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウムなどのその他の無毒性の適合性滑沢剤、並びに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味料、香味料及び香料、保存剤、及び抗酸化剤も、製剤者の判断に従って、組成物中に存在してもよい
【０２２６】
「薬理学的に許容される塩」とは、医薬品業界で一般的に使用される無毒性の酸付加塩又は金属複合体を意味する。酸付加塩の例としては、酢酸、乳酸、パモ酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、パルミチン酸、スベリン酸、サリチル酸、酒石酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、又はトリフルオロ酢酸などの有機酸；タンニン酸、又はカルボキシメチルセルロースなどのポリマー酸；及び、塩酸、臭化水素酸、硫酸、又はリン酸などの無機酸が挙げられる。金属複合体としては、亜鉛及び鉄などが挙げられる。
【０２２７】
医薬組成物は、経口及び非経口経路を含む、本技術分野で公知のいかなる手段によっても患者へ投与することができる。本明細書で用いる「患者」という用語は、ヒト並びに非ヒトを意味し、例えば、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、及び魚類を含む。好ましくは、非ヒトは、哺乳類である（例：げっ歯類（マウス又はラットを含む）、ラビット、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、ブタ、ウマ）。非ヒト動物は、別の選択肢として、例えば、ニワトリ又はシチメンチョウなどのトリでもよい。
【０２２８】
特定の態様では、消化管に見られる消化酵素との接触を避けるため、非経口経路が好ましい。そのような態様によれば、治療薬を含む本発明の組成物は、注射投与（例：静脈内、皮下若しくは筋肉内、腹腔内注射）、直腸内投与、膣内投与、局所投与（粉末、クリーム、軟膏、若しくはドロップにより）、又は吸入投与（スプレーにより）、鼻腔内投与、肺投与、若しくは頬投与によって投与することができる。
【０２２９】
例えば、無菌注射用水性若しくは油性懸濁液などの注射用製剤は、適切な分散剤又は湿潤剤、及び懸濁剤を用いて、公知の技術に従って製剤することができる。この無菌注射用製剤は、例えば、１，３‐ブタンジオール溶液など、無毒性の非経口的に許容される希釈剤又は溶媒中の無菌注射用溶液、懸濁液、又はエマルジョンであってもよい。使用可能な許容される運搬体及び溶媒を挙げると、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ、及び等張塩化ナトリウム溶液である。さらに、無菌固定油が、溶媒又は懸濁媒体として従来より用いられている。この目的のために、合成モノ‐又はジグリセリドを含むいかなる無刺激固定油（ｂｌａｎｄ  ｆｉｘｅｄ  ｏｉｌ）も用いることができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸が、注射液の製剤に用いられる。特に好適な態様では、治療薬は、１％（ｗ／ｖ）カルボキシメチルセルロースナトリウム及び０．１％（ｖ／ｖ）ＴＷＥＥＮ８０（商標）を含むキャリア液中に懸濁される。注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルター（ｂａｃｔｅｒｉａ‐ｒｅｔａｉｎｉｎｇ）を通したろ過により、又は、無菌水若しくはその他の無菌注射用媒体に溶解若しくは分散可能な無菌固体組成物の形態の殺菌剤を使用前に混合することにより殺菌することができる。
【０２３０】
直腸内又は膣内投与用の組成物は、好ましくは、ココアバター、ポリエチレングリコール、又は坐薬用ワックスなど、室温では固体だが体温では液体となり、従って直腸腔内又は膣腔内で溶解して治療薬を放出する適切な無刺激賦活剤若しくはキャリアと治療薬とを混合することによって作製することができる坐薬である。
【０２３１】
治療薬を含有する医薬組成物の局所投与又は経皮投与のための剤形としては、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入薬、又は貼付薬が挙げられる。治療薬は、無菌条件下にて、薬理学的に許容されるキャリア、及び必要に応じて、必要な保存剤又はバッファーと混合される。眼用製剤、点耳液、及び点眼液も、本発明の範囲内であることを意図している。軟膏、ペースト、クリーム、及びゲルは、本発明の治療薬に加えて、動物油脂及び植物油脂、油類、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、及び酸化亜鉛、又はこれらの混合物などの賦形剤を含んでもよい。経皮用貼付薬は、体内への化合物の送達を制御できるという追加的な利点を有する。そのような剤形は、治療薬を適切な媒体中で溶解又は調合することによって作製することができる。吸収促進剤を用いて、皮膚を通しての化合物の流れを促進させることもできる。その速度は、速度制御膜（ｒａｔｅ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）を提供するか、又は治療薬をポリマーマトリックス又はゲル中へ分散させることによって制御することができる。
【０２３２】
粉末及びスプレーも、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、及びポリアミド粉末、又はこれらの薬品の混合物などの賦形剤を含んでよい。スプレーは、さらに、クロロフルオロ炭化水素などの従来の噴霧剤を含んでもよい。
【０２３３】
経口投与される場合、治療薬は、任意にカプセル化される。種々の適切なカプセル化系が本技術分野で公知である（“Ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅｓ  ａｎｄ  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，”Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｄｏｕｂｒｏｗ，Ｍ．，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，１９９２；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅｒ  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ  ５：１３，１９８７；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ６：２７５，１９８７；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉ．３５：７５５，１９８８；Ｌａｎｇｅｒ  Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．３３：９４，２０００；Ｌａｎｇｅｒ  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ  ６２：７，１９９９；Ｕｈｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９９：３１８１，１９９９；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ  ７５：２７，２００１；及び、Ｈａｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６：３８９，１９９５）。例えば、治療薬は、生分解性ポリマーマイクロスフェア又はリポソーム内にカプセル化することができる。生分解性ポリマーマイクロスフェアの作製に有用な天然及び合成ポリマーの例としては、アルギネート、セルロースなどの炭水化物、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリアミド、ポリホスファゼン、ポリプロピルフマレート、ポリエーテル、ポリアセタール、ポリシアノアクリレート、生分解性ポリウレタン、ポリカーボネート、ポリ無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリ（オルソエステル）、及びその他の生分解性ポリエステルが挙げられる。リポソームの作製に有用な脂質の例としては、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミンなどのホスファチジル化合物、スフィンゴ脂質、セレブロシド、及びガングリオシドが挙げられる。
【０２３４】
経口投与用の医薬組成物は、液体でも固体でもよい。本発明の組成物の経口投与に適する液体剤形としては、薬理学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、及びエリキシル剤が挙げられる。カプセル化された、又はカプセル化されていない治療薬に加えて、液体剤形は、本技術分野で一般的に用いられる不活性希釈剤を含んでもよく、例えば、水若しくはその他の溶媒、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３‐ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油類（特に、綿実油、落花生油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ひまし油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタンの脂肪酸エステルなどの可溶化剤及び乳化剤、並びにこれらの混合物などである。不活性希釈剤に加えて、経口用組成物は、アジュバント、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味料、香味料、及び香料も含んでもよい。本明細書で用いる「アジュバント」という用語は、免疫反応の非特異的修飾因子であるいずれの化合物も意味する。特定の好適な態様では、アジュバントは、免疫反応を刺激する。本発明では、いかなるアジュバントを用いてもよい。非常に多くのアジュバント化合物が本技術分野において公知である（Ａｌｌｉｓｏｎ，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．９２：３，１９９８；Ｕｎｋｅｌｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２５１，１９９８；及び、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｖａｃｃｉｎｅ  １０：１５１，１９９２）。
【０２３５】
経口投与用の固体剤形としては、カプセル、錠剤、ピル、粉末、及び顆粒が挙げられる。このような固体剤形において、カプセル化された、又はカプセル化されていない治療薬は、少なくとも１種類の不活性で薬理学的に許容される、クエン酸ナトリウム若しくはリン酸二カルシウムなどの賦形剤又はキャリア、並びに／又は、（ａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸などの充填剤若しくは増量剤、（ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及びアラビアゴムなどのバインダー、（ｃ）グリセロールなどの付湿剤、（ｄ）カンテン、炭酸カルシウム、ポテト若しくはタピオカスターチ、アルギン酸、特定のシリケート、及び炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、（ｅ）パラフィンなどの溶解遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒｅｔａｒｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、（ｆ）四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、（ｇ）例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤、（ｈ）カオリン及びベントナイトクレイなどの吸収剤、並びに（ｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、及びこれらの混合物などの滑沢剤、と混合される。カプセル、錠剤、及びピルの場合、剤形は、バッファー剤も含んでよい。
【０２３６】
同様の種類の固体組成物は、ラクトース又は乳糖、並びに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いた軟質及び硬質充填ゼラチンカプセルに充填して使用することもできる。錠剤、糖錠、カプセル、ピル、及び顆粒の固体剤形は、腸溶性コーティング及び医薬製剤の分野で公知のその他のコーティングなどのコーティング並びにシェルを用いて作製することができる。
【０２３７】
治療薬の正確な投与量は、治療を受ける患者を考慮し、個々の医師によって選択される。一般的に、投与量及び投与は、治療を受ける患者に有効量の治療薬が提供されるように調節される。本明細書で用いる、治療薬の「有効量」とは、所望の生物学的反応を誘発するのに必要な量を意味する。当業者であれば理解されるように、治療薬の有効量は、所望の生物学的終点、送達される薬物、標的組織、投与経路、などの因子に応じて様々となり得る。例えば、抗癌薬を含有する治療薬の有効量は、腫瘍の大きさが、所望の期間に所望の量減少する結果となる量であろう。考慮される可能性のあるさらなる因子としては、疾患状態の重症度；治療を受ける患者の年齢、体重、及び性別；食事；投与の時間と頻度；薬物の組み合わせ；反応感受性；並びに治療に対する耐性／反応、が挙げられる。作用時間の長い医薬組成物は、その組成物の半減期とクリアランス速度に応じて、３乃至４日ごと、１週間ごと、又は２週間に１回の割合で投与されるであろう。
【０２３８】
本発明の治療薬は、好ましくは、投与の簡便化と投与量の均一化のために、単位剤形として製剤される。本明細書で用いる「単位剤形」という表現は、治療を受ける患者に適した治療薬の物理的に独立した単位を意味する。しかし、本発明の組成物の１日の使用量の合計は、確実な医学的判断の範囲内で、主治医によって決定されることは理解されるであろう。いずれの治療薬に対しても、治療有効投与量は、最初は、細胞培養アッセイによって、又は、通常はマウス、ラビット、イヌ、若しくはブタである動物モデルによって推定することができる。動物モデルは、望ましい濃度範囲及び投与経路を決定するためにも用いられる。そのような情報を用いて、次に、ヒトに対する有用な投与量及び投与経路を決定することができる。治療薬の治療効果及び毒性は、標準的な薬学的手順により、細胞培養物又は実験動物で測定することができ、例えば、ＥＤ５０（この投与量は、集団の５０％に治療的効果を有する）及びＬＤ５０（この投与量は、集団の５０％を死滅させる）などである。治療効果に対する毒性の用量比が、治療係数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことができる。治療係数の大きい医薬組成物が好ましい。細胞培養アッセイ及び動物実験から得られたデータは、ヒト用の投与量の範囲を構築する際に用いられる。
【０２３９】
いくつかの異なる治療モダリティ（例：治療薬が異なる）が同時に実施される場合、これらは、単一の医薬組成物にまとめてもよい。別の選択肢として、これらを、別々の組成物として作製し、その後、混合するか、又は単に１種類ずつ投与してもよい。いくつかの異なる治療薬（例：治療薬が異なる）が異なる時間に投与される場合は、別々の組成物として作製することが好ましい。併用療法において、追加の薬物が含まれることになる場合は、それらは１若しくは２種類以上のこれらの治療薬に添加してよく、又は別々の組成物として作製してもよい。
【０２４０】
ペプチドは、体内分布、薬物動態、及び溶解性などのその性質を変化させるために、化学修飾を施してもよい。薬物の溶解性及び安定性を高めるために種々の方法が用いられてきたが、中でも、有機溶媒の使用、エマルジョン若しくはリポソームへの取り込み、ｐＨの調節、化学修飾、及びシクロデキストリンとの複合体化などが挙げられる。シクロデキストリンは、オリゴ糖の環状ファミリーであり、６、７、又は８個のグルコピラノースユニットを有する。立体相互作用により、シクロデキストリンは、内部に空孔を有する円錐形状の環状構造を形成する。これらは、修飾可能な化学的に安定な化合物である。シクロデキストリンは、ホストとして、その空孔内の種々の疎水性ゲストと共に複合体を形成する。シクロデキストリンは、薬物の可溶化及びカプセル化に用いられる。
【０２４１】
リポソームと放出制御：
薬物送達システムを設計するために、必要な量の薬物を標的部位へ必要な時間、効果的かつ正確に送達させる様々な種類の高性能キャリア物質の開発が行われている。
【０２４２】
シクロデキストリン、生分解性若しくは非生分解性ポリマー、リポソーム、エマルジョン。複合エマルジョンは、ゲスト分子の物理的、化学的、及び生物学的性質を変化させるその能力のために、そのような役割に対する考え得る候補である。
【０２４３】
これらに限定されないが、ポリマーマイクロカプセル、マイクロ粒子、ナノ粒子、リポソーム、及びエマルジョンを含む、多くの薬物送達システムが存在する。これらの多くは、ポリ無水物及びポリヒドロキシ酸などの合成生分解性ポリマーから作製される。これらのシステムにおいて、薬物はポリマーのマイクロスフェア内に取り込まれ、そこから、薬物の少量で制御された１日の投与量が、何日間、何ヶ月間、又は何年間までの期間で、生物内で放出される。
【０２４４】
いくつかのポリマーについて、放出制御システムでの試験がすでに実施された。例えば、ポリウレタンはその弾性について、ポリシロキサン又はシリコーンはその良好な遮蔽性（ｉｎｓｕｌａｔｉｎｇ）について、ポリメチルメタクリレートはその物理的形状について；ポリビニルアルコールはその疎水性と耐性について、ポリエチレンはその硬度及び不透過性について、などである（Ｇｉｌｄｉｎｇ，Ｄ．Ｋ．Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ｐｏｌｙｍｅｒｓ．Ｂｉｏｃｏｍｐａｔ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｐｌ．Ｍａｔｅｒ．２：２０９‐２３２，１９８１）。生分解性ポリマー及び生体適合性ポリマーは、その表面分解を受ける能力のために、放出制御システムの運搬体として広く研究されてきた。このような種類のポリマーとしては、Ｔａｍａｄａ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅｒ，Ｊ．Ｂｉｏｍａｔｅｒ．Ｓｃｉ．Ｐｏｌｙｍ．Ｅｄｎ，３（４）：３１５‐３５３に記載のように、ポリ（２‐ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリアクリルアミド、乳酸のポリマー（ＰＬＡ）、グリコール酸のポリマー（ＰＧＡ）、及びこれらのそれぞれのコポリマー（ＰＬＧＡ）、並びにポリ（無水物）から選択することができる。
【０２４５】
適切な放出制御運搬体としては、これらに限定されないが、生体適合性ポリマー、その他のポリマーマトリックス、カプセル、マイクロカプセル、ナノカプセル、マイクロ粒子、ナノ粒子、ボーラス製剤（ｂｏｌｕｓ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）、浸透圧ポンプ、拡散デバイス、リポソーム、リポスフェア、及び経皮送達システムが挙げられ、移植可能であってもそうでなくてもよい。
【０２４６】
満足のいく放出制御システムとしては、これらに限定されないが、シクロデキストリン、生体適合性ポリマー、生分解性ポリマー、その他のポリマーマトリックス、カプセル、マイクロカプセル、マイクロ粒子、ボーラス製剤、浸透圧ポンプ、拡散デバイス、リポソーム、リポスフェア、及び経皮投与のシステムが挙げられる。放出制御用のその他の組成物としては、温度変化を受けた場合にｉｎ  ｓｉｔｕで固体又はゲルを形成する液体が挙げられる。
【０２４７】
リポソームは、内部に水性のコンパートメントを有し、そこに、例えば薬物などの分子が、個体への投与後にその薬物の放出制御を達成する目的でカプセル化される、脂質小胞である。リポソームの作製には、多くの種類の技術が提案されている（米国特許第４，５５２，８０３号、Ｌｅｎｋ；米国特許第４，３１０，５０６号、Ｂａｌｄｅｓｃｈｗｉｅｌｅｒ；米国特許第４，２３５，８７１号、Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ；米国特許第４，２２４，１７９号、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ；米国特許第４，０７８，０５２号、Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ；米国特許第４，３９４，３７２号、Ｔａｉｌｏｒ；米国特許第４，３０８，１６６号、Ｍａｒｃｈｅｔｔｉ；米国特許第４，４８５，０５４号、Ｍｅｚｅｉ；及び、米国特許第４，５０８，７０３号、Ｒｅｄｚｉｎｉａｋ；Ｗｏｏｄｌｅ  ａｎｄ  Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１７１：１９３‐２１５（１９８９）。単層小胞は、単一膜を示し（Ｈｕａｎｇ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ８：３３４‐３５２（１９６９））、一方、多層小胞（ＭＬＶ）は、多くの同心膜を有する（Ｂａｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３：２３８‐２５２（１９６５））。Ｂａｎｇｈａｍの手順（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３：２３８‐２５２（１９６５））では、「通常のＭＬＶ」が作製され、これは、水性コンパートメント間で溶質の不均一な分布を示し、結果として、浸透圧の違いを生ずる。Ｌｅｎｋ  ｅｔ  ａｌ．（米国特許第４，５２２，８０３号；米国特許第５，０３０，４５３号、及び米国特許第５，１６９，６３７号）、Ｆｏｕｎｔａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（米国特許第４，５８８，５７８号）、Ｃｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（米国特許第４，９７５，２８２号）、及びＧｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（国際特許ＷＯ９９／６５４６５）は、コンパートメント間で実質的に均一な溶質の分布を示す。異なるコンパートメント間で溶質の分布が類似するということは、薬物のカプセル化効果の増大、並びにこれらのＭＬＶを通常のＭＬＶよりも安定なものとする浸透圧差の減少を意味する。単層小胞は、ＭＬＶの超音波処理（Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９６８））、又はポリカーボネート膜を通しての押し出しによって作製することができる（Ｃｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（米国特許第５，００８，０５０号）、及びＬｏｕｇｈｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（米国特許第５，０５９，４２１号））。
【０２４８】
満足のいく脂質としては、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、コレステロール、ホスファチジン酸、スフィンゴ脂質、糖脂質、脂肪酸、ステロール、ホスファチジルエタノールアミン、重合した、若しくは重合していない状態の重合性脂質、これらの脂質の混合物などが挙げられる。
【０２４９】
リポソームの組成物は、ある種の臓器又は細胞に特異的となるように処理してもよい。リポソームの標的化は、解剖学的因子に基づいて、又はその環境との相互作用のメカニズムに基づいて分類される。解剖学的な分類は、例えば、臓器特異的又は細胞特異的など、その選択性のレベルに基づいている。メカニズムの観点からは、標的化は、受動的又は能動的と考えることができる。
【０２５０】
受動的標的化は、従来のリポソームが、細網内皮系の細胞、すなわち、主に、肝臓、脾臓、及び骨髄内の固定マクロファージ、によって捕獲されやすい自然の傾向を利用するものである。
【０２５１】
立体的に安定化されたリポソーム（「ＰＥＧ‐リポソーム」としても公知である）は、血液循環からの排出速度が遅いという特徴を持つ（Ｌａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，Ｓｔｅａｌｔｈ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９９５））。
【０２５２】
ＰＥＧ‐リポソームは、あるリン脂質の頭部基（ｈｅａｄ  ｇｒｏｕｐ）と接合し、オプソニンなどの血漿タンパク質との相互作用、及び細胞による取り込み速度を低下させたポリエチレングリコールポリマーを表している。得られた立体障害により、これらのリポソームは、従来のリポソームに比べて循環内により長期間にわたって残留することができる（Ｌａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，Ｓｔｅａｌｔｈ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９９５）；Ｗｏｏｄｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １１０５：１９３‐２００（１９９２）；Ｌｉｔｚｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １１９０：９９‐１０７（１９９４）；Ｂｅｄｕ  Ａｄｄｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１３：７１８‐７２４（１９９６））。ＰＥＧ‐リポソーム内への薬物のカプセル化により、多くの化学治療薬（Ｌａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，Ｓｔｅａｌｔｈ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９９５））、及び生物活性ペプチド（Ａｌｌｅｎ  Ｔ．Ｍ．Ｉｎ：Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，Ｎｅｗ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｎｅｗ  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｔｈｅｉｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  （Ｆ．Ｐｕｉｓｉｅｕｘ，Ｐ．Ｃｏｕｖｒｅｕｒ，Ｊ．Ｄｅｌａｔｔｒｅ，Ｊ．‐Ｐ．Ｄｅｖｉｓｓａｇｕｅｔ  Ｅｄ．），Ｅｄｉｔｉｏｎｓ  ｄｅ  ｌａ  Ｓａｎｔｅ，Ｆｒａｎｃｅ，１９９５，ｐｐ．１２５）の効果が向上した。
【０２５３】
この分野での研究により、種々の因子がＰＥＧ‐リポソームの効果に影響を及ぼすことが示された。理想的には、小胞の直径は２００ｎｍ未満、ＰＥＧ内のユニット数はおよそ２０００、及びペグ化脂質の割合は３乃至５モル％とするべきである（Ｌａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，Ｓｔｅａｌｔｈ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９９５）；Ｗｏｏｄｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １１０５：１９３‐２００（１９９２）；Ｌｉｔｚｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １１９０：９９‐１０７（１９９４）；Ｂｅｄｕ  Ａｄｄｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１３：７１８‐７２４（１９９６））。
【０２５４】
能動的標的化は、モノクローナル抗体、糖、糖脂質、タンパク質、ポリマーなどのリガンドとの会合により、又は脂質組成若しくはリポソームの大きさの変化により、従来のリポソームを蓄積するものとは異なる臓器及び細胞を標的とするようにリポソームを変化させることを含む。
【０２５５】
経粘膜送達促進剤
「経粘膜送達促進剤」とは、水、塩及び／又は一般的なバッファー、並びに本発明の範囲内のペプチドを含む製剤（コントロール製剤）に添加された場合に、血中、血清中、若しくは脳髄液中の最大濃度（Ｃｍａｘ）として、又は時間に対する濃度のプロットにおける曲線下面積、ＡＵＣ、として測定される粘膜を通したペプチドの輸送を著しく増加させる製剤を提供する、化学物質及びその他の賦形剤として定義される。粘膜は、鼻腔、口腔、腸管、頬側、気管支肺、膣、及び直腸の粘膜表面を含み、実際には、全ての体内腔部、又は外部と連結する導管の内面を覆っている全ての粘膜分泌膜を含む。経粘膜送達促進剤は、キャリアと称する場合がある。
【０２５６】
徐放のための組成物と方法
本発明は、本発明の範囲内のペプチドを、１若しくは２種類以上の経粘膜送達促進剤及び任意の１若しくは複数種類の徐放促進剤と組み合わせて含む製剤の改善された経粘膜（例：鼻腔）送達を提供する。本発明の経粘膜送達促進剤により、例えば、最大血漿内濃度（Ｃｍａｘ）が上昇して経粘膜投与されたペプチドの治療活性が高まるなど、送達の効果的な向上が得られる。血漿及びＣＮＳ中のペプチドの治療活性に影響する第二の因子は、残留時間（ＲＴ）である。徐放促進剤は、鼻腔内送達促進剤と組み合わせることで、Ｃｍａｘを上昇させ、ペプチドの残留時間（ＲＴ）を伸ばす。例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など、徐放促進製剤を提供する本発明の送達運搬体ポリマー及びその他の剤、並びに方法が、本明細書で開示される。本発明の経粘膜送達製剤及び方法の範囲内では、ペプチドは、経粘膜送達のための適切なキャリア若しくは運搬体と組み合わされるか、又は協調的に投与されることが多い。本明細書で用いる「キャリア」という用語は、薬理学的に許容される固体若しくは液体充填剤、希釈剤、又はカプセル化剤を意味する。水含有液体キャリアは、酸性化剤、アルカリ化剤、抗菌性保存剤、抗酸化剤、バッファー剤、キレート化剤、錯化剤、可溶化剤、付湿剤、溶媒、懸濁剤及び／若しくは粘度上昇剤、等張化剤、湿潤剤、又はその他の生体適合性物質などの薬理学的に許容される添加剤を含んでもよい。上述の分類による成分リストの表は、Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，１８５７‐１８５９，（１９９０）、で見ることができる。本明細書で用いる「経粘膜送達製剤」には、ペプチド又はその他の生物学的活性化合物の、放出又は溶解性（例：製剤送達運搬体から）、拡散速度、透過能及びタイミング、摂取、残留時間、安定性、有効半減期、ピーク若しくは維持濃度レベル、クリアランス、並びにその他の所望の経粘膜送達特性（例：送達部位で、又は血流、若しくは中枢神経系などの活性の選択された標的部位で測定される）を改善する剤が含まれる。本発明の特定の局面の範囲内において、本発明のペプチドとの協調投与又は組み合わせ製剤に対する吸収促進剤は、親水性小分子から選択され、これらに限定されないが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド、エタノール、プロピレングリコール、及び２‐ピロリドンが挙げられる。別の選択肢として、例えば、デアシルメチルスルホキシド（ｄｅａｃｙｌｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）、エイゾン、ラウリル硫酸ナトリウム、オレイン酸、及び胆汁酸塩などの長鎖両親媒性分子を用いて、ペプチドの粘膜透過を促進することができる。さらなる局面では、界面活性剤（例：ポリソルベート）が、添加化合物、処理剤、又は製剤添加剤として用いられ、ペプチドの鼻腔内送達が促進される。ＤＭＳＯ、ポリエチレングリコール、及びエタノールなどの剤は、送達環境内で十分に高い濃度で存在する場合（例：前投与、若しくは治療製剤に混合することにより）、粘膜の水相へ入り込み、その可溶化特性を変化させ、それによって、運搬体から粘膜へのペプチドの分配を促進する。本発明の粘膜治療及び予防組成物は、ペプチドの粘膜関門を通しての吸収、拡散、又は透過を促進する適切ないかなる透過促進剤も追加で補ってもよい。透過促進剤は、薬理学的に許容されるいかなる促進剤であってもよい。
【０２５７】
帯電調整剤及びｐＨ制御剤、並びにその方法
生物学的活性剤（本発明の範囲内のペプチドを含む）の輸送特性を改善して疎水性粘膜関門を通しての送達を促進するするために、本発明は、本明細書で述べる選択された生物学的活性剤又は送達促進剤の帯電調整のための技術及び試薬も提供する。これに関連して、高分子の相対透過度は、一般的に、その分配係数と関連している。分子のｐＫａ及び粘膜表面のｐＨに依存する分子のイオン化度も、分子の透過度に影響を与える。本発明の範囲内のペプチドを含む生物学的活性剤の経粘膜送達における透過及び分配は、活性剤若しくは透過剤の帯電の変化又は帯電の広がり（ｃｈａｒｇｅ  ｓｐｒｅａｄｉｎｇ）によって促進することができ、これは、例えば、帯電官能基の変化、活性剤を送達する送達運搬体若しくは溶液のｐＨの調整、又は帯電若しくはｐＨを変化させる試薬と活性剤との協調投与によって達成される。これらの一般的な教示事項と一致して、本発明の範囲内のペプチドを含む帯電高分子種の経粘膜送達は、活性剤が、実質的にイオン化されていないか若しくは中性の帯電状態で粘膜表面に送達された場合、著しく改善される。
【０２５８】
本発明の範囲内で用いる経粘膜製剤の特定のペプチド及びタンパク質成分は、そのペプチド又はタンパク質の正電荷密度を増加するために帯電調整が施される。このような調整は、ペプチド及びタンパク質の接合体、キャリア、及び本明細書で開示するその他の送達形態のカチオン化までも拡張される。
【０２５９】
分解系酵素阻害剤、及び方法
経粘膜製剤に含んでもよい別の賦形剤は、分解系酵素阻害剤である。酵素の活性を阻害して生物学的活性剤を保護する阻害剤であればいずれも、本発明の組成物及び方法に有効に用いることができる。生物学的活性タンパク質及びペプチドの保護に有用な酵素阻害剤としては、例えば、大豆トリプシンインヒビター、膵臓トリプシンインヒビター、キモトリプシンインヒビター、及びジャガイモ（ｓｏｌａｎｕｍ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ  Ｌ．）の塊茎から単離されたトリプシン及びキモトリプシンインヒビターが挙げられる。阻害剤の組み合わせ又は混合物を用いてもよい。阻害剤は、生物学的活性剤と組み合わせて、若しくは別々に投与された（例：前投与）製剤として、例えば親水性ポリマーなどのキャリア内に取り込まれるか若しくはこれと結合するか、鼻腔内粘膜と接触する剤形の表面にコーティングされるか、又は、その表面の外面相に取り込まれてもよい。本発明の範囲内で用いられるさらなる酵素阻害剤は、その効力及び毒性の度合いが様々である広範囲にわたる非タンパク質阻害剤から選択される。以下にさらに詳細に述べるように、毒性の問題が生じた場合は、これらの添加剤のマトリクス若しくはその他の送達運搬体への固定、又は化学修飾類似体の開発を容易に実施して、毒性を低減又は除去することができる。本発明の範囲内で用いる酵素阻害剤候補の大きな集団の中でも、例えば、ジイソプロピルフルオロリン酸（ＤＦＰ）及びフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）などの有機リン系阻害剤が、セリンプロテアーゼ（例：トリプシン及びキモトリプシン）の強力で非可逆的な阻害剤である。本発明の方法及び組成物の範囲内で用いるさらなる別の種類の酵素阻害剤は、特定の治療化合物の酵素による分解を妨害するアミノ酸及び修飾アミノ酸である。
【０２６０】
本発明の治療薬を用いて、ＧＰＣＲ関連シグナル伝達経路の調節が有効である障害を治療することができる。例えば、式ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドを用いて、ＦＰＬＲ１の調節が有効である障害が治療される。そのようなペプチドの例は、配列番号１乃至７、１４乃至１６、２６乃至２７、３２乃至３８に示される。これらのペプチドを用いて、好中球（多形核白血球、ＰＭＮ）依存性の損傷若しくは好中球の調節が関与するいかなる疾患又は状態も治療される。本発明のペプチドを用いて、対象中のＴＮＦα‐誘発サイトカイン活性と関連する障害も治療される。
【０２６１】
式Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、及びＶの範囲内に含まれる本発明のペプチドを用いて、ＭｒｇＸ２の調節が有効である障害が治療される。そのようなペプチドの例は、配列番号５、８乃至１３、１７乃至２５、２８乃至３５、３９乃至５０に示される。式ＩＩＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドを用いて、ＭｒｇＸ１の調節が有効である障害が治療される。そのようなペプチドの例は、配列番号８、３９乃至５０に示される。式Ｉ及びＩＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドを用いて、Ｍａｓの調節が有効である障害が治療される。そのようなペプチドの例は、配列番号６乃至７、９乃至１６、１８乃至２５、２７乃至３１に示される。
【０２６２】
例えば、配列番号１乃至５０に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、及びＶＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、炎症性疾患の治療に有用であり、それには、これらに限定されないが、胃炎、痛風、痛風性関節炎、関節炎、関節リウマチ、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、潰瘍、慢性気管支炎、喘息、アレルギー、急性肺障害、肺炎症、気管支過敏症、血管炎、敗血症性ショック、並びに乾癬、アトピー性皮膚炎、及び湿疹を含むがこれらに限定されない炎症性皮膚障害が含まれる。
【０２６３】
例えば、配列番号１乃至５０に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、及びＶＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、炎症又は虚血再灌流障害後の組織のリモデリングが関与する線維性状態の治療にも有用であり、それには、これらに限定されないが、心内膜心筋線維症；縦隔線維症；特発性肺線維症；肺線維症；後腹膜線維症；脾臓の線維症；膵臓の線維症；肝線維症（硬変）；線維腫症；肉芽腫性肺疾患；及び糸球体腎炎が含まれる。
【０２６４】
例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、自己免疫疾患の治療にも有用であり、それには、これらに限定されないが、多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、クローン病、移植拒絶反応、移植片拒絶反応に付随する免疫異常、良性リンパ球性血管炎、エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、原発性粘液水腫、グレーブス病、悪性貧血、自己免疫性萎縮性胃炎、アジソン病、インスリン依存性真性糖尿病、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、天疱瘡、交感性眼炎、自己免疫性ぶどう膜炎、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少症、原発性胆汁性肝硬変、慢性活動肝炎、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、リウマチ性疾患、多発性筋炎、強皮症、混合性結合組織病、炎症性リウマチ、変性リウマチ、関節外リウマチ、膠原病、慢性多発性関節炎、関節症性乾癬、強直性脊椎炎、若年性関節リウマチ、肩関節周囲炎、結節性汎動脈炎、進行性全身性強皮症、尿酸炎性関節炎、皮膚筋炎、筋肉リウマチ、筋肉炎、筋硬症、及び軟骨石灰化症が含まれる。
【０２６５】
例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、循環器系疾患及びその合併症、末梢血管疾患、並びに冠動脈疾患の治療にも有用であり、それらには、これらに限定されないが、心筋梗塞；うっ血性心不全（ＣＨＦ）；心筋不全；心筋肥大；虚血性心筋症；収縮期心不全；拡張期心不全；脳卒中；脳血栓；同心性左心室肥大；心筋炎；心筋症；肥大型心筋症；心筋炎；非代償性心不全；虚血性心筋疾患；先天性心疾患；狭心症；心筋梗塞後の心臓リモデリング又は心室リモデリングの阻害；虚血性事象及び虚血後の事象（例：心筋梗塞）における虚血再灌流障害；脳血管発作；僧帽弁逆流；高血圧症；低血圧症；再狭窄；線維症；血栓症；並びに血小板凝集が含まれる。
【０２６６】
例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、臓器及び組織での虚血性事象並びに虚血後の事象と関連する虚血再灌流障害の治療に有用であり、それには、これらに限定されないが、脳血栓；心筋梗塞；狭心症；塞栓性血管閉塞；末梢血行不全；内臓動脈閉塞；血栓又は塞栓症による動脈閉塞、低腸間膜血流又は敗血症などに続く非閉塞性プロセスによる動脈閉塞；腸間膜動脈閉塞；腸間膜静脈閉塞；腸間膜微小循環に対する虚血再灌流障害；虚血性急性腎不全；大脳組織に対する虚血再灌流障害；腸重積症；血行動態ショック；組織機能障害；臓器不全；再狭窄；粥状動脈硬化；血栓症；血小板凝集が含まれる。
【０２６７】
例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、これらに限定されないが、心臓手術；臓器手術；臓器移植；血管造影；心肺及び脳蘇生、などの処置を含む状態に続く虚血再灌流障害の治療に有用である。
【０２６８】
例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、化学療法によって誘発された脱毛症を含む脱毛症の抑制；及び、骨粗しょう症などの骨疾患の治療に有用である。
【０２６９】
別の局面では、例えば、配列番号５乃至２５、２７乃至３５、３９乃至５０に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、及びＶの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、高血圧症及びその合併症の予防並びに治療に用いられ、それらには、これらに限定されないが、高血圧性心疾患；降圧（血圧低下）；全身性及び肺性高血圧；脳血管疾患及び脳卒中；心不全及び脳卒中；左心室肥大（ＬＶＨ）；うっ血性心不全（ＣＨＦ）；高血圧症、高血圧；血管拡張；腎性高血圧症；利尿；腎炎；ナトリウム利尿；強皮症腎クリーゼ；狭心症（安定性及び不安定性）；心筋梗塞；心臓発作；冠動脈疾患；冠動脈性心疾患；不整脈；心房細動；門脈圧亢進症；眼内圧上昇；血管再狭窄；慢性高血圧症；弁膜症；心筋虚血；急性肺水腫；急性冠症候群；高血圧性網膜症；高血圧性悪阻；子癇前症；レイノー現象；勃起不全、及び緑内障が含まれる。これらのペプチドは、血管拡張薬としても、及び抗血栓療法にも使用される。
【０２７０】
例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、例えば、細菌感染症又はウイルス感染症などの感染症に付随する炎症状態の治療に有用であり、それらには、これらに限定されないが、ヒト免疫不全ウイルスＩ（ＨＩＶ‐１）又はＨＩＶ‐２、後天性免疫不全（ＡＩＤＳ）、西ナイル脳炎ウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、インフルエンザウイルス、テングウイルス、出血熱によって引き起こされるウイルス感染症；耳感染症；重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、敗血症、及び副鼻腔炎が含まれる。
【０２７１】
例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、これらに限定されないが、結腸癌、肺癌、乳癌、前立腺癌、脳癌、膵臓癌、卵巣癌、若しくは腎臓癌を含む固形癌などの癌又は癌に付随する炎症の予防、又は治療にも有用である。別の選択肢として、癌は、メラノーマ、グリオーマ、肉腫、白血病、又はリンパ腫であってもよい。これらのペプチドは、浸潤癌及び転移癌の予防、又は治療にも有用である。
【０２７２】
例えば、配列番号６乃至７、９乃至１６、１８乃至２５、２７乃至３１に示されるペプチドなど、式Ｉ及びＩＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、これらに限定されないが、循環器系疾患、高血圧、粥状動脈硬化、血栓症、心筋梗塞、心不全、腎疾患、多代謝症候群、勃起不全；血管炎；及び中枢神経系（ＣＮＳ）の疾患を含む、結果として内皮障害となる活性酸素種の還元が関与する疾患の予防及び治療に用いられる。
【０２７３】
例えば、配列番号６乃至７、９乃至１６、１８乃至２５、２７乃至３１に示されるペプチドなど、式Ｉ及びＩＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、老化によって生じる臓器変化の予防及び／又は治療に、並びにエルゴジェニックエイド（ｅｒｇｏｇｅｎｉｃ  ａｉｄ）として用いられる。
【０２７４】
例えば、配列番号６乃至７、９乃至１６、１８乃至２５、２７乃至３１に示されるペプチドなど、式Ｉ及びＩＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、これらに限定されないが、カヘキシー；数多くの要因による長期間にわたるベッドでの拘束；慢性的なコルチコイドの使用；及び筋肉萎縮症を誘発する種々の神経症候群、トラウマ、及び変性疾患を含む、筋肉萎縮症における筋肉の分化、成熟化、及び再生の変化が関与する疾患の予防及び治療に用いられる。本発明のペプチドは、老化によって生じる臓器変化の予防又は治療に、並びにエルゴジェニックエイドとして用いられる。
【０２７５】
例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、これらに限定されないが、皮膚修復、創傷治癒；火傷、紅斑、病変、及び皮膚腫瘍を含む皮膚損傷の予防及び治療に用いられる。
【０２７６】
例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、これらに限定されないが、移植片対宿主病；移植拒絶反応、骨髄移植を含む、免疫関連状態の予防又は治療に用いられる。
【０２７７】
例えば、配列番号１乃至７、１４乃至１６、２６乃至２７、３２乃至３８に示されるペプチドなど、式ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、損傷部位への血液細胞の動員、活性化、又は化学誘引の誘発に用いられる。血液細胞としては、血小板、貪食細胞、単球、マクロファージ、好酸球、好中球、及び／又はリンパ球を挙げることができる。
【０２７８】
例えば、配列番号６乃至７、９乃至１６、１８乃至２５、２７乃至３１に示されるペプチドなど、式Ｉ及びＩＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、アンジオテンシン変換酵素のＤＤ型；Ｉ型及びＩＩ型真性糖尿病、並びに合併症；真性糖尿病予防；糖尿病黄斑症；及び糖尿病腎症などの遺伝子多型に起因する疾患の予防又は治療に用いられる。
【０２７９】
例えば、配列番号６乃至７、９乃至１６、１８乃至２５、２７乃至３１に示されるペプチドなど、式Ｉ及びＩＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、これらに限定されないが、腎疾患；膀胱障害；生殖系の障害；婦人科的障害；尿路障害；失禁；雄性（精子形成、精子の運動性）、及び雌性生殖系の障害；性機能不全；勃起不全；胚形成；並びに妊娠関連障害を含む泌尿生殖器障害若しくは生殖泌尿器障害の予防又は治療に用いられる。これらは、妊娠モニタリングにも用いられる。
【０２８０】
例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、これらに限定されないが、多系列血球減少症、血小板減少症、貧血、腎不全による貧血；リンパ球減少症、白血球減少症、好中球減少症、放射線／化学療法関連の好中球減少症；及び血小板異常を含む、血球減少症の予防又は治療に用いられる。
【０２８１】
本発明は、例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれるペプチドも提供し、これらは、喘息、気管支疾患、肺疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）を含むがこれらに限定されない呼吸器疾患の予防又は治療に用いられる。
【０２８２】
本発明は、例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれるペプチドも提供し、これらは、糖尿病、真性糖尿病、リポジストロフィー、甲状腺機能亢進症、緑内障、高脂血症、非インスリン依存性糖尿病、食欲制御、及び肥満を含むがこれらに限定されない代謝障害の予防又は治療に用いられる。
【０２８３】
例えば、配列番号５乃至２５、２７乃至３５、３９乃至５０に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、及びＶの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、これらに限定されないが、糖尿病性腎症；糸球体硬化症；腎症；腎機能障害；強皮症腎クリーゼ；及び慢性腎不全を含む腎臓疾患の予防及び治療にも用いられる。これらのペプチドは、抗利尿薬としても用いることができる。
【０２８４】
例えば、配列番号６乃至７、９乃至１６、１８乃至２５、２７乃至３１に示されるペプチドなど、式Ｉ及びＩＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、これらに限定されないが、血管形成（腔内プロステーシス及び血管形成後再狭窄）；造血；赤血球増多；放射線療法後などの血液構成の異常を含む血液疾患の予防及び治療にも用いられる。
【０２８５】
例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、真性糖尿病、未熟児網膜症、及び加齢黄斑変性症などの多くのヒト眼疾患における網膜血管新生、又は、これらに限定されないが、前立腺癌、脳癌、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、腎臓癌、子宮頚部癌、メラノーマ、軟部組織肉腫、リンパ腫、頭頚部癌、及びグリオブラストーマを含む原発性若しくは転移性癌の癌関連血管新生を含むがこれらに限定されない血管新生関連状態の予防及び治療にも用いられる。
【０２８６】
例えば、配列番号５乃至２５、２７乃至３５、３９乃至５０に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、及びＶの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、これらに限定されないが、中枢及び末梢神経変性障害；神経保護；認識障害；不安障害、疼痛管理、食物摂取、行動障害、学習障害、睡眠障害、記憶障害、麻酔に対する病理的反応、嗜癖、抑うつ、片頭痛、月経障害、筋痙攣、アヘン依存症、認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、皮質性機能、自発運動活性、及び末梢神経系障害を含む中枢神経系（ＣＮＳ）障害の治療にも用いられる。
【０２８７】
例えば、配列番号５、８乃至１３、１７乃至２５、２８乃至３５、３９乃至５０に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、及びＶの範囲内に含まれる本発明のペプチドは、これらに限定されないが、複合性局所疼痛、筋骨格疼痛、神経因性疼痛、ヘルペス後疼痛、癌に付随する疼痛、又は術後疼痛を含む疼痛の治療及び管理にも用いられる。
【０２８８】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、又はＶＩの化合物を用いて、治療有効量の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、又はＶＩの範囲内に含まれるペプチドをそれを必要とする対象に投与することにより、本明細書で述べる障害、疾患、及び／又は状態を治療することができる。
【０２８９】
本発明により、さらに、ＧＰＣＲ関連シグナル伝達経路の調節が有効である障害を治療する方法も提供される。例えば、本発明によって提供されるのは、例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することにより、対象中のＦＰＬＲ１の調節が有効である障害を治療する方法である。そのような疾患、障害、及び／又は状態としては、好中球（多形核白血球、ＰＭＮ）依存性の損傷若しくは好中球の調節、及び／又は対象中のＴＮＦα‐誘発サイトカイン活性と関連する障害が関与するものであり得る。
【０２９０】
本発明により、例えば、配列番号５、８乃至１３、１７乃至２５、２８乃至３５、３９乃至５０に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、及びＶの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中のＭｒｇＸ２の調節が有効である障害を治療する方法も提供される。
【０２９１】
本発明により、例えば、配列番号８、３９乃至５０に示されるペプチドなど、式ＩＩＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中のＭｒｇＸ１の調節が有効である障害を治療する方法も提供される。
【０２９２】
本発明により、例えば、配列番号６乃至７、９乃至１６、１８乃至２５、２７乃至３１に示されるペプチドなど、式Ｉ及びＩＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中のＭａｓの調節が有効である障害を治療する方法も提供される。
【０２９３】
本発明により、例えば、配列番号１乃至５０に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の炎症性障害を治療する方法も提供される。炎症性障害としては、胃炎、痛風、痛風性関節炎、関節炎、関節リウマチ、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、潰瘍、慢性気管支炎、喘息、アレルギー、急性肺障害、肺炎症、気管支過敏症、血管炎、敗血症性ショック、並びに乾癬、アトピー性皮膚炎、及び湿疹を含むがこれらに限定されない炎症性皮膚障害が考えられる。
【０２９４】
本発明により、例えば、配列番号１乃至５０に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の炎症又は虚血再灌流障害後の組織のリモデリングが関与する線維性状態を治療する方法も提供される。このような線維性状態としては、心内膜心筋線維症；縦隔線維症；特発性肺線維症；肺線維症；後腹膜線維症；脾臓の線維症；膵臓の線維症；肝線維症（硬変）；線維腫症；肉芽腫性肺疾患；及び糸球体腎炎が考えられる。
【０２９５】
本発明により、例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の自己免疫疾患または障害を治療する方法も提供される。自己免疫疾患としては、多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、クローン病、移植拒絶反応、移植片拒絶反応に付随する免疫異常、良性リンパ球性血管炎、エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、原発性粘液水腫、グレーブス病、悪性貧血、自己免疫性萎縮性胃炎、アジソン病、インスリン依存性真性糖尿病、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、天疱瘡、交感性眼炎、自己免疫性ぶどう膜炎、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少症、原発性胆汁性肝硬変、慢性活動肝炎、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、リウマチ性疾患、多発性筋炎、強皮症、混合性結合組織病、炎症性リウマチ、変性リウマチ、関節外リウマチ、膠原病、慢性多発性関節炎、関節症性乾癬、強直性脊椎炎、若年性関節リウマチ、肩関節周囲炎、結節性汎動脈炎、進行性全身性強皮症、尿酸炎性関節炎、皮膚筋炎、筋肉リウマチ、筋肉炎、筋硬症、及び軟骨石灰化症が考えられる。
【０２９６】
本発明により、例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の循環器系疾患及びその合併症を治療する方法も提供される。循環器系疾患としては、末梢血管疾患、並びに冠動脈疾患が考えられ、それらには、これらに限定されないが、心筋梗塞；冠動脈性心疾患；うっ血性心不全（ＣＨＦ）；心筋不全；心筋肥大；虚血性心筋症；収縮期心不全；拡張期心不全；脳卒中；脳血栓；同心性左心室肥大；心筋炎；心筋症；肥大型心筋症；心筋炎；非代償性心不全；虚血性心筋疾患；先天性心疾患；狭心症；心筋梗塞後の心臓リモデリング又は心室リモデリングの阻害；虚血性事象及び虚血後の事象（例：心筋梗塞）における虚血再灌流障害；脳血管発作；僧帽弁逆流；高血圧症；低血圧症；再狭窄；線維症；血栓症；並びに血小板凝集が含まれる。
【０２９７】
本発明により、例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の虚血再灌流障害を治療する方法も提供される。虚血再灌流障害は、臓器及び組織での虚血性事象並びに虚血後の事象と関連するものが考えられ、それには、これらに限定されないが、脳血栓；心筋梗塞；狭心症；塞栓性血管閉塞；末梢血行不全；内臓動脈閉塞；血栓又は塞栓症による動脈閉塞、低腸間膜血流又は敗血症などに続く非閉塞性プロセスによる動脈閉塞；腸間膜動脈閉塞；腸間膜静脈閉塞；腸間膜微小循環に対する虚血再灌流障害；虚血性急性腎不全；大脳組織に対する虚血再灌流障害；腸重積症；血行動態ショック；組織機能障害；臓器不全；再狭窄；粥状動脈硬化；血栓症；血小板凝集が含まれる。別の選択肢として、虚血再灌流障害は、心臓手術；臓器手術；臓器移植；血管造影；心肺及び脳蘇生、などの処置を含むがこれらに限定されない状態に続くものである場合が考えられる。
【０２９８】
本発明により、例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中のその他の種々の障害、疾患、及び／又は状態を治療する方法も提供される。そのような障害、疾患、及び／又は状態としては、化学療法によって誘発された脱毛症をなどの脱毛症の抑制；又は、骨粗しょう症などの骨疾患の治療が考えられる。
【０２９９】
本発明により、例えば、配列番号５乃至２５、２７乃至３５、３９乃至５０に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の高血圧症及びその合併症を治療する方法も提供される。高血圧症及びその合併症としては、高血圧性心疾患；降圧（血圧低下）；全身性及び肺性高血圧；脳血管疾患及び脳卒中；心不全及び脳卒中；左心室肥大（ＬＶＨ）；うっ血性心不全（ＣＨＦ）；高血圧症、高血圧；血管拡張；腎性高血圧症；利尿；腎炎；ナトリウム利尿；強皮症腎クリーゼ；狭心症（安定性及び不安定性）；心筋梗塞；心臓発作；冠動脈疾患；冠動脈性心疾患；不整脈；心房細動；門脈圧亢進症；眼内圧上昇；血管再狭窄；慢性高血圧症；弁膜症；心筋虚血；急性肺水腫；急性冠症候群；高血圧性網膜症；高血圧性悪阻；子癇前症；レイノー現象；勃起不全、及び緑内障が考えられる。これらのペプチドは、血管拡張薬としても、及び抗血栓療法にも使用される。
【０３００】
本発明により、例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の感染症に付随する炎症障害及び／又は状態を治療する方法も提供される。感染症に付随する炎症状態としては、細菌感染症又はウイルス感染症が考えられ、それらには、これらに限定されないが、ヒト免疫不全ウイルスＩ（ＨＩＶ‐１）又はＨＩＶ‐２、後天性免疫不全（ＡＩＤＳ）、西ナイル脳炎ウイルス、コロナウイルス、ライノウイルス、インフルエンザウイルス、テングウイルス、出血熱によって引き起こされるウイルス感染症；耳感染症；重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、敗血症、及び副鼻腔炎が含まれる。
【０３０１】
本発明により、例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の癌、又は癌に付随する炎症を治療する方法も提供される。癌、又は癌に付随する炎症としては、固形癌が考えられ、それには、これらに限定されないが、結腸癌、肺癌、乳癌、前立腺癌、脳癌、膵臓癌、卵巣癌、又は腎臓癌が含まれる。別の選択肢として、癌は、メラノーマ、グリオーマ、肉腫、白血病、又はリンパ腫が考えられる。これらのペプチドは、浸潤癌及び転移癌の予防、又は治療にも有用である。
【０３０２】
本発明により、例えば、配列番号６乃至７、９乃至１６、１８乃至２５、２７乃至３１に示されるペプチドなど、式Ｉ及びＩＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の結果として内皮障害となる活性酸素種の還元が関与する疾患を治療する方法も提供される。結果として内皮障害となる活性酸素種の還元が関与する疾患としては、循環器系疾患、高血圧、粥状動脈硬化、血栓症、心筋梗塞、心不全、腎疾患、多代謝症候群、勃起不全；血管炎；及び中枢神経系（ＣＮＳ）の疾患が考えられる。
【０３０３】
本発明により、例えば、配列番号６乃至７、９乃至１６、１８乃至２５、２７乃至３１に示されるペプチドなど、式Ｉ及びＩＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の老化によって生じる臓器変化を予防及び／又は治療する方法も提供される。
【０３０４】
本発明により、例えば、配列番号６乃至７、９乃至１６、１８乃至２５、２７乃至３１に示されるペプチドなど、式Ｉ及びＩＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象の筋肉萎縮症における筋肉の分化、成熟化、及び再生の変化が関与する疾患を予防及び治療する方法も提供される。筋肉萎縮症における筋肉の分化、成熟化、及び再生の変化が関与する疾患としては、これらに限定されないが、カヘキシー；数多くの要因による長期間にわたるベッドでの拘束；慢性的なコルチコイドの使用；及び筋肉萎縮症を誘発する種々の神経症候群、トラウマ、及び変性疾患が含まれる。本発明のペプチドは、老化によって生じる臓器変化の予防又は治療に、並びにエルゴジェニックエイドとして用いられる。
【０３０５】
本発明により、例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の皮膚損傷疾患、障害、及び／又は状態を治療する方法も提供される。皮膚損傷疾患、障害、及び／又は状態としては、皮膚修復、創傷治癒；火傷、紅斑、病変、及び皮膚腫瘍が考えられる。
【０３０６】
本発明により、例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の免疫関連状態を予防又は治療する方法も提供される。免疫関連状態としては、これらに限定されないが、移植片対宿主病；移植拒絶反応、骨髄移植が含まれる。
【０３０７】
本発明により、例えば、配列番号１乃至７、１４乃至１６、２６乃至２７、３２乃至３８に示されるペプチドなど、式ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の損傷部位への血液細胞の動員、活性化、又は化学誘引の誘発の方法も提供される。血液細胞としては、血小板、貪食細胞、単球、マクロファージ、好酸球、好中球、及び／又はリンパ球を挙げることができる。
【０３０８】
本発明により、例えば、配列番号６乃至７、９乃至１６、１８乃至２５、２７乃至３１に示されるペプチドなど、式Ｉ及びＩＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の遺伝子多型に起因する疾患を治療する方法も提供される。遺伝子多型に起因する疾患としては、アンジオテンシン変換酵素のＤＤ型；Ｉ型及びＩＩ型真性糖尿病、並びに合併症；真性糖尿病予防；糖尿病黄斑症；及び糖尿病腎症が考えられる。
【０３０９】
本発明により、例えば、配列番号６乃至７、９乃至１６、１８乃至２５、２７乃至３１に示されるペプチドなど、式Ｉ及びＩＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の泌尿生殖器障害若しくは生殖泌尿器障害を予防又は治療する方法も提供される。泌尿生殖器障害若しくは生殖泌尿器障害としては、腎疾患；膀胱障害；生殖系の障害；婦人科的障害；尿路障害；失禁；雄性（精子形成、精子の運動性）、及び雌性生殖系の障害；性機能不全；勃起不全；胚形成；並びに妊娠関連障害が考えられる。これらは、妊娠モニタリングにも用いられる。
【０３１０】
本発明により、例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の血球減少症を治療する方法も提供される。血球減少症としては、多系列血球減少症、血小板減少症、貧血、腎不全による貧血；リンパ球減少症、白血球減少症、好中球減少症、放射線／化学療法関連の好中球減少症；及び血小板異常が考えられる。
【０３１１】
本発明により、例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の呼吸器疾患を予防又は治療する方法も提供される。呼吸器疾患としては、喘息、気管支疾患、肺疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）が考えられる。
【０３１２】
本発明により、例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の代謝障害を予防又は治療する方法も提供される。代謝障害としては、糖尿病、真性糖尿病、リポジストロフィー、甲状腺機能亢進症、緑内障、高脂血症、非インスリン依存性糖尿病、食欲制御、及び肥満が考えられる。
【０３１３】
本発明により、例えば、配列番号５乃至２５、２７乃至３５、３９乃至５０に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、及びＶの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の腎臓疾患を予防又は治療する方法も提供される。腎臓疾患としては、糖尿病性腎症；糸球体硬化症；腎症；腎機能障害；強皮症腎クリーゼ；及び慢性腎不全が考えられる。
【０３１４】
本発明により、例えば、配列番号６乃至７、９乃至１６、１８乃至２５、２７乃至３１に示されるペプチドなど、式Ｉ及びＩＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の血液疾患を予防又は治療する方法も提供される。血液疾患としては、血管形成（腔内プロステーシス及び血管形成後再狭窄）；造血；赤血球増多；放射線療法後などの血液構成の異常が考えられる。
【０３１５】
本発明により、例えば、配列番号１乃至７、９乃至１６、１８乃至３８に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、及びＶＩの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の血管新生関連状態を予防及び治療する方法も提供される。血管新生関連状態としては、これらに限定されないが、真性糖尿病、未熟児網膜症、及び加齢黄斑変性症などの多くのヒト眼疾患における網膜血管新生、又は、これらに限定されないが、前立腺癌、脳癌、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、腎臓癌、子宮頚部癌、メラノーマ、軟部組織肉腫、リンパ腫、頭頚部癌、及びグリオブラストーマを含む原発性若しくは転移性癌の癌関連血管新生が挙げられる。
【０３１６】
本発明により、例えば、配列番号５乃至２５、２７乃至３５、３９乃至５０に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、及びＶの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の中枢神経系（ＣＮＳ）障害を治療する方法も提供される。中枢神経系（ＣＮＳ）障害としては、これらに限定されないが、中枢及び末梢神経変性障害；神経保護；認識障害；不安障害、疼痛管理、食物摂取、行動障害、学習障害、睡眠障害、記憶障害、麻酔に対する病理的反応、嗜癖、抑うつ、片頭痛、月経障害、筋痙攣、アヘン依存症、認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、皮質性機能、自発運動活性、及び末梢神経系障害が挙げられる。
【０３１７】
本発明により、例えば、配列番号５、８乃至１３、１７乃至２５、２８乃至３５、３９乃至５０に示されるペプチドなど、式Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、及びＶの範囲内に含まれる化合物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することによって、対象中の疼痛を治療及び管理する方法も提供される。疼痛としては、これらに限定されないが、複合性局所疼痛、筋骨格疼痛、神経因性疼痛、ヘルペス後疼痛、癌に付随する疼痛、又は術後疼痛が挙げられる。
【０３１８】
任意に、本発明のペプチド配列をコードするｃＤＮＡを遺伝子治療に用いて、上記で詳細に述べたそれぞれの疾患、障害、及び／又は状態が治療される。
【実施例】
【０３１９】
以下の例により、本発明をさらに説明する。
【０３２０】
カルシウム流に影響を与えるペプチドの能力の分析方法（以下の実施例１乃至４に該当）
【０３２１】
このアッセイは、選択されたＧＰＣＲで一過性トランスフェクトされたＣＨＯ細胞内で実施し、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ  ２００３（Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ  ８，３９‐４９）に記載のように、乱交雑Ｇα１６（ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ  Ｇα１６）を用いてシグナル伝達をＧｑ経路へ転換することによって、カルシウム流に対する試験を行うことによるＧＰＣＲ活性化の読み取りを可能とした。
【０３２２】
ペプチド（図１に挙げた）は、特に断りのない限り、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）法によって合成し、樹脂から開裂させ、ＲＰ‐ＨＰＬＣによって精製した。ペプチドの同定は、質量分析法によて確認した。ペプチドの最終純度は、ＲＰ‐ＨＰＬＣによる測定で９０％超であった。ペプチドはＢＳＡを０．１％含有するＰＢＳで希釈した。プレートはすべて、使用するまで−８０℃にて保存した。
【０３２３】
こうして得られたペプチドはすべて、選択されたＧＰＣＲを含む発現ベクターとＧα１６をコードするｃＤＮＡを含む発現ベクターとで一過性共トランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞（ＡＴＣＣ‐ＣＣＬ‐６１）中にて、そのカルシウム流を変化させる能力について試験を行った。ＭｒｇＸ１、ＭｒｇＸ２、Ｍａｓ、又はＦＰＲＬ１のためのｃＤＮＡクローンを含む発現コンストラクトは、以下の発現ベクター：ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＣＭＶ６、又はＭＯ２、の一つとして市販のものを入手した。
【０３２４】
一過性トランスフェクションは、ＣＨＯ‐Ｋ１細胞を宿主細胞として用いて実施した。細胞（１２００万個）を、トランスフェクションの実施日に、Ｔ７５フラスコ中へ播種した。製造者の推奨事項に従い、適切なＧＰＣＲ発現ベクター、及びＧα１６発現ベクターで、脂質主体の試薬、ＭＴＩ、を用いて細胞をトランスフェクトした。細胞は５時間トランスフェクトし、次に、９６‐ウェルディッシュへ再播種し（ウェルあたり６００００細胞）、一晩増殖させた。
【０３２５】
製造者の推奨事項に従い、実験の実施日に、細胞にＦｌｕｏ４‐ＮＷ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を添加した。プレートをプレートリーダー、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ（商標）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）にセットし、蛍光をモニタリングした。読み取り開始の１７秒後に、最終濃度１μＭの表記のアゴニスト／化合物で細胞を刺激した。各９６ウェルプレートは、一つのＧＰＣＲ発現ベクターでトランスフェクトされた細胞を含み、分析された各々のペプチドは三つ組サンプルで試験を行った。
【０３２６】
細胞内カルシウムの明確に認識される増加を誘発し、それが少なくとも２回の反復実験によるカルシウムのトレース（ｃａｌｃｉｕｍ  ｔｒａｃｅ）の分析において目に見えて明らかであって統計的に有意であるようなペプチドを、ヒット（ｈｉｔ）と定義した。統計的有意の基準は、ペプチド添加の前後でのカルシウムレベルを比較したｔ検定でのｐ値が０．００１未満とした。
【０３２７】
用量反応実験に基づいて、ＥＣ５０の最も良くフィットする値を、Ｐｒｉｓｍ  バージョン４（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，カリフォルニア州）を用いたシグモイド用量反応曲線の非線形回帰によって算出した。シグモイド用量反応曲線に対する式は、Ｙ＝最小値＋（最大値−最小値）／（１＋１０（ＬｏｇＥＣ５０−Ｘ）×傾き）と定めた。
【０３２８】
実施例１．ＭｒｇＸ１でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞内でのカルシウム流の誘発
カルシウム流を変化させるペプチドの能力を、上述のように、ＭｒｇＸ１とＧα１６とで共トランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞内で調べた。以下に示す結果が得られた：
【０３２９】
ペプチド６０＿Ｓ（配列番号８）
図２に示すように、３個のウェルすべてに存在するＰ６０＿Ｓ（配列番号８）は、２０秒から９０秒の時間の間、ＭｒｇＸ１でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞のカルシウム流をネガティブコントロールと比較して増加させた。さらに、Ｐ６０＿Ｓは、１、３、１０、３０、１００、３００、１０００、及び３０００ｎＭでの実験において、用量に依存したＭｒｇＸ１の活性化を誘発した（図３）。最大濃度でのＰ６０＿Ｓに対する反応は、ポジティブコントロールであるＢＡＭ２２の場合と類似していた（図３）。これらの結果から、ＢＡＭ２２に対するＥＣ５０が少なくとも５０ｎＭであるのに対して、ペプチド６０＿Ｓ（配列番号８）に対するＥＣ５０は少なくとも３００ｎＭであると算出された。
【０３３０】
実施例２．ＭｒｇＸ２でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞内でのカルシウム流の誘発
カルシウム流を変化させるペプチドの能力を、上述のように、ＭｒｇＸ２とＧα１６とで共トランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞内で調べた。以下に示すように、いくつかのペプチドが、本実験系においてカルシウム流を誘発することが分かった：
【０３３１】
ペプチド６０＿Ｓ（配列番号８）
図４に示すように、３個のウェルすべてに存在するＰ６０＿Ｓ（配列番号８）のサンプルは、２０秒から９０秒の時間の間、カルシウム流をネガティブコントロールと比較して増加させた。
【０３３２】
ペプチド９４（配列番号５）
図５に示すように、３個のウェルすべてに存在するＰ９４（配列番号５）のサンプルは、２０秒から９０秒の時間の間、カルシウム流をネガティブコントロールと比較して増加させた。
【０３３３】
ペプチド６１＿Ｓ（配列番号１０）
図６に示すように、３個のウェルすべてに存在するペプチド６１＿Ｓ（配列番号１０）のサンプルは、２０秒から９０秒の時間の間、カルシウム流をネガティブコントロールと比較して増加させた。
【０３３４】
ペプチド６３（配列番号１７）
図７に示すように、両方のウェルに存在するペプチド６３（配列番号１７）のサンプルは、２０秒から９０秒の時間の間、カルシウム流をネガティブコントロールと比較して増加させた。
【０３３５】
実施例３．ＭａｓでトランスフェクトされたＣＨＯ細胞内でのカルシウム流の誘発
カルシウム流を変化させるペプチドの能力を、ＭａｓとＧα１６とで共トランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞内で調べた。以下に示すペプチドが、本実験系においてカルシウム流を誘発することが分かった：
【０３３６】
Ａ．Ｐ３３ファミリーによるＭａｓの活性化
ａ．Ｐ３３
図１に詳細に示すように、ペプチド３３（配列番号６）は、第３の位置にシステインを持つ。ダイマー化、又はその他のシステインを通してのペプチドの相互作用を避けるために、このアミノ酸をＶａｌで置換してＰ３３＿Ｖ（配列番号７）を作製し、均一なモノマーペプチドの合成を可能とした。図８に示すように、ウェル２に存在するＰ３３＿Ｖ（配列番号７）のサンプルは、２０秒から９０秒の時間の間、トランスフェクトされた細胞中のカルシウム流をネガティブコントロールと比較して増加させた。ウェル１及び３に存在するＰ３３＿Ｖ（配列番号７）のサンプルは、６０秒から９０秒の時間の間、カルシウム流をネガティブコントロールと比較して増加させた。
【０３３７】
図３９は、Ｍａｓのペプチド３３＿Ｖ（配列番号７）に対する用量反応を示す。本実験で調べた用量は、１０、３０、１００、３００、１０００、及び３０００ｎＭであった。公知の内在性Ｍａｓリガンド、Ａｎｇ（１‐７）（データ記載せず）は、文献に報告されているように（Ｓａｎｔｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３），ＰＮＡＳ：１００，８２５８‐８２６３）、本アッセイにおいてＣａ反応を誘発しなかった。ペプチド３３＿Ｖに対する最大反応までには到達しなかった。この結果より、ペプチド３３＿Ｖに対するＥＣ５０は、少なくとも１０００ｎＭであることが示唆される。
【０３３８】
ｂ．Ｐ３３ペプチド誘導体
Ｐ３３の活性をさらに解明するために、元の形であるＣｙｓを持つＰ３３をモノマー及びダイマーの両方として合成した（それぞれ、Ｐ３３＿モノ、及びＰ３３＿Ｄとも称するＰ３３＿ダイマー；（配列番号６））。モノマー型及びダイマー型のＰ３３は、「ＦＭＯＣ」法を用いた固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）によって合成した。次に、ＴＦＡ溶液によって樹脂から開裂させることで粗ペプチドを得た。粗ペプチドの精製は、９５％のレベルまでＨＰＬＣによって行った。システインのダイマー化は、空気酸化によって行い、このダイマーを再度９５％まで精製した。システインを持つペプチド（Ｐ３３＿モノ）のダイマー化又はその他の相互作用を避けるために、システインのスルフヒドリル部分を、ペプチドの樹脂からの酸開裂下でも安定であるＡｃｍ基で保護した。Ｐ３３＿Ｖについては、さらに、酢酸アンモニウムと酢酸を用いてＴＦＡ塩を酢酸塩へ置換し、続いて、ＨＰＬＣで精製した。ペプチドの同定は、質量分析法によって確認した。
【０３３９】
さらに、Ｐ３３の短鎖の誘導体（Ｐ３３＿５、Ｐ３３＿８、Ｐ３３＿９、Ｐ３３＿１０；それぞれ、配列番号２７、１４、１５、１６、図１）を合成し、ＭａｓでトランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞内でカルシウム流誘発する能力を調べた。Ｐ３３の短鎖の誘導体は、上述のように、「ＦＭＯＣ」法を用いた固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）によって合成し、続いて、ＴＦＡ溶液によって樹脂から開裂し、ＨＰＬＣを用いて９５％のレベルまで精製した。
【０３４０】
Ｐ３３モノマー及びダイマー、並びにその他のＰ３３誘導体ペプチドを、０．１、１、１０、１００、１０００、及び１００００ｎＭにて、Ｍａｓでトランスフェクトされた細胞中のカルシウム流を誘発する能力について比較した。図９に示すように、モノマーの形態のＰ３３（Ｐ３３＿モノ及びＰ３３＿Ｖ）は、同等の強さであるが、Ｐ３３＿ダイマーは、モノマーペプチドよりも優れている。Ｐ３３＿５は、本アッセイで活性を示さず（図９）、一方、その他のＰ３３誘導体（Ｐ３３＿８、Ｐ３３＿９、及びＰ３３＿１０）は、Ｐ３３＿Ｖと比較して多少低めではあったが、カルシウム流を誘発した（図１０）。
【０３４１】
Ｂ．Ｐ６１ファミリーによるＭａｓの活性化
ａ．ペプチド６１
ペプチド６１（配列番号９）は、第５の位置にシステインを持つが、ダイマー化又はペプチドのその他の相互作用を避けるために、これをセリンで置換した。こうして得られたペプチドをＰ６１＿Ｓ（配列番号１０）と称する（図１）。図１１に示すように、Ｐ６１＿Ｓは、Ｍａｓでトランスフェクトされた細胞内でカルシウム流を誘発し：ウェル１及び２に存在するペプチド６１＿Ｓのサンプルは、４５秒から９０秒の時間の間、カルシウム流をネガティブコントロールと比較して増加させ、一方、ウェル３に存在するペプチド６１＿Ｓのサンプルは、５０秒から９０秒の時間の間、カルシウム流をネガティブコントロールと比較して増加させた。
【０３４２】
図３９は、ペプチド６１＿Ｓの用量反応を示す。本実験で調べた用量は、１０、３０、１００、３００、１０００、及び３０００ｎＭであった。ペプチド６１＿Ｓに対する最大反応までには到達しなかった。この結果より、ペプチド６１＿Ｓに対するＥＣ５０は、少なくとも５００ｎＭであることが示唆される。上述のように、公知の内在性Ｍａｓリガンド、Ａｎｇ（１‐７）は、Ｃａ反応を誘発しなかった。
【０３４３】
ｂ．Ｐ６１ペプチド誘導体
Ｐ３３と同様に（上記参照）、元の形であるシステインをを持つＰ６１をモノマー（Ｐ６１＿モノ）及びダイマー（Ｐ６１＿ダイマー）の両方として合成した（配列番号９）。Ｐ６１の短鎖の誘導体も合成した（図１）。これらのＰ６１関連ペプチドを、Ｍａｓでトランスフェクトされた細胞内でカルシウム流を誘発する能力について調べた。図１２に示すように、Ｐ６１＿ダイマー（配列番号９）は、モノマーＰ６１ペプチド：Ｐ６１＿Ｓ（配列番号１０）及びＰ６１＿モノ（配列番号９）よりも強力であった。図１３は、Ｐ６１＿１１Ｓ（配列番号１２）が、Ｐ６１＿Ｓと同程度強力であり、一方、Ｐ６１＿４（配列番号１１）が、若干弱い目であったことを示す。
【０３４４】
Ｍａｓの活性化は、必ずしもカルシウム流と関連している訳ではなく、例えば、Ｍａｓの内在性リガンドであるＡｎｇ１‐７は、カルシウム流を誘発しない。従って、Ｍａｓでトランスフェクトされた細胞中でカルシウム流を誘発しなかったペプチドが、他の経路によってＭａｓを活性化する可能性は依然として存在する。さらに、実験系の感度が十分でないか、又はこれらのペプチドが、「活性」であるペプチドと比べて異なる方法、若しくは異なる結合部位によって受容体と相互作用しているという可能性もある。従って、この相互作用をさらに解明すべきである。
【０３４５】
カルシウム流アッセイでスクリーニングした１６種類のペプチド（Ｐ３３及びＰ６１ファミリー中）の中から（Ｐ６１＿５Ｓは、その水溶性の低さから、本アッセイで試験せず）、４種類のペプチドを選択し（Ｐ６１＿Ｓ（配列番号１０）；Ｐ６１‐ダイマー（配列番号９）；Ｐ３３＿Ｖ（配列番号７）、及びＰ３３‐ダイマー（配列番号６））、以下の実施例９乃至１２で述べるように、エクスビボ及びインビボアッセイによってさらに調べた。
【０３４６】
実施例４．ＦＰＲＬ１でトランスフェクトされあＣＨＯ細胞中でのカルシウム流の誘発
カルシウム流を変化させるペプチドの能力を、ＦＰＲＬ１とＧα１６とで共トランスフェクトされたＣＨＯ‐Ｋ１細胞内で調べた。以下に示すように、いくつかのペプチドが、本実験系においてカルシウム流を誘発することが分かった：
【０３４７】
ペプチド６０＿Ｓ（配列番号８）：
図１４に示すように、３個のウェルすべてに存在するＰ６０＿Ｓのサンプルは、２０秒から９０秒の時間の間、カルシウム流をネガティブコントロールと比較して増加させた。
【０３４８】
ペプチド３３＿Ｖ（配列番号７）：
図１５に示すように、３個のウェルすべてに存在するペプチド３３＿Ｖのサンプルは、２０秒から９０秒の時間の間、カルシウム流をネガティブコントロールと比較して増加させた。
【０３４９】
Ｐ３３誘導ペプチド（図１参照）：Ｐ３３＿Ｖ（配列番号７）、Ｐ３３（配列番号６）‐モノ、Ｐ３３（配列番号６）‐ダイマー、Ｐ３３＿５（配列番号２７）、Ｐ３３＿８（配列番号１４）、Ｐ３３＿９（配列番号１５）、及びＰ３３＿１０（配列番号１６）が、ＦＰＲＬ１でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞中でＦＰＲＬ１を活性化する能力について、カルシウム流アッセイを用いた試験を行った。図１６に示すように、モノマー型であるペプチド３３、Ｐ３３＿Ｖ、及びＰ３３＿モノは、試験を行った濃度において（０．１、１、１０、１００、１０００、１００００ｎＭ）、カルシウム流を誘発する能力が同様に強力であったが、一方、Ｐ３３＿ダイマーは、不活性であった。Ｐ３３の短鎖の誘導体（Ｐ３３＿５、Ｐ３３＿８、Ｐ３３＿９、及びＰ３３＿１０）も、試験を行った濃度において、カルシウム流を誘発しなかった（図１６、データ記載せず）。これらのペプチドの活性の欠如には、効力の減少；実験系の不十分な感度、受容体の別の相互作用、又は他の経路での活性化といった理由が考えられ、これらはカルシウム流と関連性がない。従って、この相互作用をさらに解明するべきである。
【０３５０】
ペプチド９４（配列番号５）
図１７に示すように、３個のウェルすべてに存在するＰ９４（配列番号５）のサンプルは、２０秒から９０秒の時間の間、カルシウム流をネガティブコントロールと比較して増加させた。
【０３５１】
ペプチド９４から誘導した短鎖ペプチド（図１に記載）を合成し、前述のように精製した。これらのペプチドは、カルシウム流を誘導しなかった（データ記載せず）。これは、実験系の不十分な感度、受容体の別の相互作用、又は他の経路での活性化といった理由が考えられ、これらはカルシウム流と関連性がない。従って、この相互作用をさらに解明するべきである。
【０３５２】
ペプチド５８（配列番号１）
図１８に示すように、３個のウェルすべてに存在するＰ５８（配列番号１）のサンプルは、２０秒から９０秒の時間の間、カルシウム流をネガティブコントロールと比較して増加させた。
【０３５３】
Ｐ５８の特性をさらに明らかにするために、その配列から誘導した短鎖ペプチドを合成し、カルシウム流アッセイで調べた。図１９乃至２１に示すように、Ｐ５８及びその誘導体Ｐ５８＿４（配列番号２）、Ｐ５８＿５（配列番号３）、及びＰ５８＿１０（配列番号４）は、ＦＰＲＬ１でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞内にて、用量に依存する形でカルシウム流を誘発した。すべてのペプチドがＦＰＲＬ１によってカルシウム流を誘発したが、ポジティブコントロールとして用いたＷペプチドほど強力ではなかった（図１９乃至２０）。Ｗペプチドは、ＦＰＲＬ１に対する親和性が非常に高いことで知られている（参考文献？）。しかし、Ｗペプチドは、有益な治療活性を有さない人工のペプチドである。Ｐ５８ペプチドは、抗炎症活性を有する公知のＦＰＲＬ１アゴニストであるＡｃ２‐２６とも比較し、カルシウム流の誘発という点でより強力であることが分かった（図２１）。
【０３５４】
以下のＰ５８誘導体ペプチドは、ＦＰＲＬ１でトランスフェクトされた細胞内でカルシウム流を誘発しなかった：Ｐ５８＿６（配列番号３８）、Ｐ５８＿７（配列番号３６）、Ｐ５８＿１２（配列番号３７）（図１９乃至２０、データ記載せず）。しかし、ＦＰＲＬ１の活性化は、必ずしもカルシウム流と関連している訳ではなく；例えば、リポキシンＡ４及びその類似体は、ＦＰＲＬ１を通して抗炎症活性を引き起こすが、カルシウム流は誘発しない。従って、これらのペプチドが、その他の経路を通してＦＰＲＬ１を活性化している可能性が依然として存在する。さらに、実験系の感度が十分でないか、又はこれらのペプチドが、カルシウム誘発ペプチドと比べて、異なる方法、若しくは異なる結合部位によって受容体と相互作用しているという可能性もある。
【０３５５】
ＦＰＲＬ１活性化についてカルシウム流アッセイによってスクリーニングされた２０種類のペプチドの中から、３種類のペプチドを選択し、インビボアッセイによってさらに調べた：Ｐ５８（配列番号１）、Ｐ５８＿４（配列番号２）、及びＰ５８＿５（配列番号３）。
【０３５６】
実施例５．ペプチド５８のＦＰＲＬ１に対する競合放射性リガンド結合アッセイ
ペプチド５８（配列番号１）のＦＰＲＬ１に対する特異的な結合性を、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞内でのＦＰＲＬ１への結合に関して、公知のＦＰＲＬ１のアゴニストである［１２５Ｉ］ＷＫＹＭＶｍ（Ｗペプチド）の０．０２５ｎＭと競合する能力を試験することによって分析した。ＦＰＲＬ１の別の公知のリガンドであるＣＫβ８‐１（ａａ４６‐１３７）を、本アッセイのポジティブコントロールとして用いた（Ｃｈｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ  ２００６，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ５８，４６３‐４８７）。ペプチドは、細胞と共に、インキュベーションバッファー（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．５％  ＢＳＡ）の存在下、２５℃にて９０分間インキュベートし、放射性Ｗペプチドの量を測定した。図２２の結果は、Ｗペプチドの結合が阻害されたこと示しており、用量に依存する形で、ＷペプチドのＦＰＲＬ１への結合をＰ５８が阻害し、ＩＣ５０が０．１８９μＭ、Ｋｉが０．０５４１μＭであったことを示している。
【０３５７】
実施例６．ザイモサン誘導による多形核白血球の空気嚢への流入に対するペプチド５８のインビボでの影響
Ｐ５８がＦＰＲＬ１受容体を通してインビボでの効果を示す能力を分析するために、炎症の急性実験モデル、ザイモサン誘導マウス背部空気嚢モデル（Ｚｙｍｏｓａｎ‐ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｕｒｉｎｅ  ｄｏｒｓａｌ  ａｉｒ  ｐｏｕｃｈ  ｍｏｄｅｌ）を用いた。このモデルにおけるＰＭＮのザイモサン誘導浸潤が、ＦＰＲＬ１受容体のアゴニスト、リポキシン及びアネキシン１誘導ペプチドなどによって阻害されることは過去に報告されている（Ｐｅｒｒｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ  ２００２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ８，１２９６‐１３０２）。
【０３５８】
動物：
オスの非近交スイスアルビノマウスをＨａｒｌａｎ、英国（Ｔ．Ｏ．種）から購入し、標準的な固形飼料ペレットの餌と水道水を適宜与え、１２時間の明暗サイクルで飼育した。動物はすべて、実験まで７日間飼育し、実験日の体重が約３０ｇとなるようにした。
【０３５９】
薬物処理及び実験計画：
薬物は、−２０℃で保存し、実験日に解凍した。ペプチドＰ５８は凍結乾燥状態で提供され；使用前に室温まで戻し、殺菌ＰＢＳで溶解して１ｍｇ／ｍｌの初期溶液を作製した。ペプチドＡｃ２‐２６（ポジティブコントロール）も、使用前に殺菌ＰＢＳで溶解して１ｍｇ／ｍｌの初期溶液を作製した。運搬体は、殺菌脱パイロジェンＰＢＳから成るものを使用した（Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ  ｎｏ．１４１９０‐０９４）。溶解すると、Ｐ５８（配列番号１）及びＡｃ２‐２６は透明な溶液となった。薬物又は運搬体は、最終体積２００μｌで静脈内投与し、この体積は以下に述べる用量を含有していた。
【０３６０】
実験スケジュール：
第−６日：２．５ｍｌの殺菌空気を注入して空気嚢を形成。
第−３日：２．５ｍｌの殺菌空気を注入して空気嚢を維持。
第０日：
０時間‐ザイモサンＡ（Ｓｉｇｍａ）１ｍｇの空気嚢内注射の直前に、運搬体（グループＡ）、Ｐ５８（グループＢ及びＣ）、又はＡｃ２‐２６（グループＤ）の静脈内投与。別のグループのマウスにはＰ５８を（グループＥ）、コントロールグループには運搬体を（グループＦ）、ザイモサンＡの非存在下で空気嚢へ直接投与した。
＋４時間‐空気嚢を、３ｍＭのＥＤＴＡを含む氷冷ＰＢＳ２ｍｌで洗浄した。
【０３６１】
洗浄液を常に氷上に保持し、その後、アリコート（１００μｌ）を取ってチュルク液（３％酢酸中０．０１％のクリスタルバイオレット）で１：１０に希釈し、遊走した白血球数の測定に用いた。次に、サンプルをボルテックス攪拌し、染色された細胞溶液の１０μｌをノイバウアー（Ｎｅｕｂａｕｅｒ）血球計数器に掛けた。分画細胞計数（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔ）を、光学顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ｂ０６１）を用いて行った。その染色特性、並びに核及び細胞質の外形より、多形核白血球（ＰＭＮ：＞９５％好中球）を容易に識別することができた。
【０３６２】
実験グループ：
グループＡ、運搬体（２００μｌ、静注）＋ザイモサンＡ（ｎ＝８）
グループＢ、ペプチドＰ５８（５０μｇ、静注）＋ザイモサンＡ（ｎ＝８）
グループＣ、ペプチドＰ５８（２００μｇ、静注）＋ザイモサンＡ（ｎ＝８）
グループＤ、ペプチドＡｃ２‐２６（２００μｇ、静注）＋ザイモサンＡ（ｎ＝８）
グループＥ、ペプチドＰ５８（１００μｇ、ｉｎ  ｓｉｔｕ）（ｎ＝８）
グループＦ、運搬体（１００μｌ、ｉｎ  ｓｉｔｕ）（ｎ＝５）
【０３６３】
ＦＡＣＳ染色及び分析：
ＦＡＣＳ分析では、洗浄液のアリコートをＰＥ接合抗ＧＲ‐１モノクローナル抗体（１：１００希釈、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｃａｔ  ５５３１２８）で染色し、多形核白血球の標識を行った。染色は、４℃で実施した。
【０３６４】
プログラムＣｅｌｌ  Ｑｕｅｓｔ  ＩＩを走らせたアップルマッキントッシュＧ３と接続し、４８８ｎｍに調整した空冷式１００ｍＷアルゴンレーザーを装備したＦＡＣＳｃａｎアナライザー（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｃｏｗｌｅｙ，英国）を用いてフローサイトメトリーを行った。最初は、前方散乱及び側方散乱特性を用いて、３種類の個々の細胞集団間（リンパ球、単球、及び顆粒球）を区別した。ＧＲ‐１に対して陽性である細胞は、ＦＬ２チャネル（波長５４８ｎｍ）で検出した。データは、陽性細胞のパーセントで表す（特定のｍＡｂに対して）。陽性集団及び陰性集団の判定は、ＰＥで標識した無関係のＩｇＧアイソタイプ（ラットＩｇＧ２ｂ）によるコントロール染色に基づいて行った。判定後は、すべての分析において、４分割領域（ｑｕａｄｒａｎｔ）は厳密に維持された。
【０３６５】
統計：
データは単一のマウスのものを示し、グループあたり（ｎ）匹のマウスに対する平均値の標準誤差のデータも示す。統計的な差は、ＡＮＯＶＡ、及びスチューデントニューマンクールズの検定によって判定した。Ｐ値＜０．０５を有意と見なした。
【０３６６】
白血球遊走：
ザイモサンＡによる空気嚢内接種により、著しい白血球の空気嚢への蓄積が誘発された（分画細胞計数により測定）。図２３に、白血球蓄積に関する累積データを示す。この白血球の蓄積は、Ａｃ２‐６の処理によって大きく阻害された（図２３）。Ｐ５８（配列番号１）の投与により、ザイモサンＡ誘発の白血球蓄積が減少し、５０μｇ／マウス及び２００μｇ／マウスに対して、それぞれ３８％及び２６％の阻害であった（図２３）。恐らくは、各グループの動物数が少なかったため、これらの結果に統計的な有意差はなかった（運搬体で処理したザイモサンＡと比較して）。
【０３６７】
ＰＭＮ遊走：
Ｇｒ１マーカーによるＦＡＣＳ分析で明らかとなったように、空気嚢へのザイモサンＡの注入によって著しい好中球の遊走が発生した。上述のように、空気嚢から回収した白血球にＧＲ‐１に対する染色を施した。図２４は、好中球の蓄積に関する累積データを示す（ＧＲ‐１＋細胞）。ペプチドＰ５８（配列番号１）をマウスに対して５０μｇ／マウスで投与することにより、ザイモサンＡによって誘発される好中球の蓄積の４０％が阻害された（Ｐ＜０．０５；図２４）。この阻害の割合は、Ａｃ２‐２６で処理したグループ（２００μｇ／マウス）で見られた５２％の阻害と同等である。Ｐ５８の２００μｇ／マウスによる処理では、恐らくは、ペプチドの薬動力学的な理由により、阻害の割合は低下（３０％）し、統計的な有意差も見られなかった。代表的なＦＡＣＳヒストグラムを図２５に示す。
【０３６８】
Ｐ５８の炎症促進効果：
Ｐ５８（配列番号１）（１００μｇの局所投与）の考えられる炎症促進効果を、マウスの空気嚢へ直接注入することによって評価し、同体積（１００μｌ）の運搬体（殺菌脱パイロジェンＰＢＳ）の注入と比較した。ペプチドＰ５８は、白血球も好中球もマウス空気嚢への蓄積を誘発せず（図２３及び２４）、このことは、このペプチドが炎症促進性又は走化性のいずれも有していないことを示唆している。この結果は、このペプチド製剤がＬＰＳを含んでいなかったことも示唆している。
【０３６９】
結論：
本実験により、５０μｇ／マウスの用量で投与されたペプチドＰ５８（配列番号１）が、細胞動員の実験モデルにおいて、マウス空気嚢内へのザイモサンＡの局所投与に対する反応であるＰＭＮの蓄積を低減する効果を有することを示すものである。ペプチド５８は、２００μｇ／マウスでは阻害の度合いが低下したが、５０μｇ／マウスでは、ペプチドＡｃ２‐２６の誘発による阻害と同等の著しい阻害を示した。ペプチドＰ５８に対する用量反応プロフィールが、不利なＰＫを反映するものか、又はこの内在性受容体（Ｐ５８の標的）が持つ活性化の性質の範囲内のものなのかは断定できない。完全な用量反応曲線（例：１０‐２５‐５０‐１００μｇ／マウス）を構築すれば、Ｐ５８の効力のさらに詳しい評価が可能となり、並びに、場合によっては、ペプチドＡｃ２‐２６、及びその他の公知の抗炎症薬（例：インドメタシン、１０ｍｇ／ｋｇ）の効力とのさらに厳密な比較も可能となるであろう。
【０３７０】
実施例７．ペプチド５８、並びにその短鎖誘導体、ペプチド５８＿４及びペプチド５８＿５の、多形核白血球輸送へのインビボでの効果
Ｐ５８短鎖誘導体の抗炎症活性について、実施例６と同じ急性炎症モデルである、ザイモサン誘導マウス背部空気嚢モデルで試験を行った。
【０３７１】
動物：
オスの非近交スイスアルビノマウスをＨａｒｌａｎ、英国（Ｔ．Ｏ．種）から購入し、標準的な固形飼料ペレットの餌と水道水を適宜与え、１２時間の明暗サイクルで飼育した。動物はすべて、実験まで７日間飼育し、実験日の体重が約２５ｇとなるようにした。
【０３７２】
薬物処理及び実験計画：
薬物は、−２０℃で保存し、実験日に解凍した。ペプチドＰ５８（配列番号１）は凍結乾燥状態で提供され；使用前に室温まで戻し、殺菌ＰＢＳで溶解して１ｍｇ／ｍｌの初期溶液を作製した。ペプチドＰ５８‐４（配列番号２）は凍結乾燥状態で提供され；使用前に室温まで戻し、殺菌ＰＢＳで溶解して３２７μｇ／ｍｌの初期溶液を作製した。ペプチドＰ５８‐５（配列番号３）は凍結乾燥状態で提供され；使用前に室温まで戻し、殺菌ＰＢＳで溶解して４７６μｇ／ｍｌの初期溶液を作製した。運搬体は、殺菌脱パイロジェンＰＢＳから成るものを使用した（Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ．ｎｏ．１４１９０‐０９４）。溶解すると、ペプチドＰ５８（配列番号１）、Ｐ５８‐４（配列番号２）、及びＰ５８‐５（配列番号３）は透明な溶液となった。薬物又は運搬体は、以下に述べる用量の最終体積２００μｌで静脈内投与した。
【０３７３】
実験スケジュール：
第−６日：２．５ｍｌの殺菌空気を注入して空気嚢を形成。
第−３日：２．５ｍｌの殺菌空気を注入して空気嚢を維持。
第０日：
０時間‐ザイモサンＡ（Ｓｉｇｍａ）１ｍｇの空気嚢内注射の直前に、運搬体（グループＡ）、Ｐ５８（配列番号１）（グループＢ及びＣ）、Ｐ５８‐４（配列番号２）（グループＤ及びＥ）、Ｐ５８‐５（配列番号３）（グループＦ及びＧ）の静脈内投与。
＋４時間‐空気嚢を、３ｍＭのＥＤＴＡと２５Ｕ／ｍＬのヘパリンを含む氷冷ＰＢＳ２ｍｌで洗浄した。
【０３７４】
洗浄液を常に氷上に保持し、その後、アリコート（１００μｌ）を取ってチュルク液（３％酢酸中０．０１％のクリスタルバイオレット）で１：１０に希釈し、遊走した白血球数の測定に用いた。次に、サンプルをボルテックス攪拌し、染色された細胞溶液の１０μｌをノイバウアー血球計数器に掛けた。分画細胞計数を、光学顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ｂ０６１）を用いて行った。その染色特性、並びに核及び細胞質の外形より、多形核白血球（ＰＭＮ：＞９５％好中球）を容易に識別することができた。
【０３７５】
実験グループ：
グループＡ、運搬体（２００μｌ、静注）＋ザイモサン（ｎ＝７）
グループＢ、ペプチドＰ５８（２００μｇ；８０ｎｍｏｌｅ、静注）＋ザイモサン（ｎ＝７）
グループＣ、ペプチドＰ５８（５０μｇ；２０ｎｍｏｌｅ、静注）＋ザイモサン（ｎ＝７）
グループＤ、ペプチドＰ５８‐４（６５．４μｇ；８０ｎｍｏｌｅ、静注）＋ザイモサン（ｎ＝７）
グループＥ、ペプチドＰ５８‐４（１６．３５μｇ；２０ｎｍｏｌｅ、静注）＋ザイモサン（ｎ＝７）
グループＦ、ペプチドＰ５８‐５（９５．２μｇ；８０ｎｍｏｌｅ、静注）＋ザイモサン（ｎ＝７）
グループＧ、ペプチドＰ５８‐５（２４μｇ；２０ｎｍｏｌｅ、静注）＋ザイモサン（ｎ＝７）
【０３７６】
ＦＡＣＳ染色及び分析：
ＦＡＣＳ分析では、洗浄液のアリコートをＰＥ接合抗ＧＲ‐１モノクローナル抗体（１：１００希釈、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｃａｔ  １１‐５９３１）で染色し、多形核白血球の標識を行った。染色は、４℃で実施した。プログラムＣｅｌｌ  Ｑｕｅｓｔ  ＩＩを走らせたアップルマッキントッシュＧ３と接続し、４８８ｎｍに調整した空冷１００ｍＷアルゴンレーザーを装備したＦＡＣＳｃａｎアナライザー（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｃｏｗｌｅｙ，英国）を用いてフローサイトメトリーを行った。最初は、前方散乱及び側方散乱特性を用いて、３種類の個々の細胞集団間（リンパ球、単球、及び顆粒球）を区別した。ＧＲ‐１に対して陽性である細胞は、ＦＬ２チャネル（波長５４８ｎｍ）で検出した。データは、陽性細胞のパーセントで表す（特定のｍＡｂに対して）。陽性集団及び陰性集団の判定は、ＰＥで標識した無関係のＩｇＧアイソタイプ（ラットＩｇＧ２ｂ）によるコントロール染色に基づいて行った。判定後は、すべての分析において、４分割領域は厳密に維持された。
【０３７７】
統計：
データは単一のマウスのものを示し、グループあたり（ｎ）匹のマウスに対する平均値の標準誤差のデータも示す。統計的な差は、ＡＮＯＶＡ、及びスチューデントニューマンクールズの検定によって判定した。Ｐ値＜０．０５を有意と見なした。
【０３７８】
白血球遊走：
ザイモサンＡによる空気嚢内接種により、白血球の空気嚢への著しい蓄積が誘発された（分画細胞計数により測定）。Ｐ５８（配列番号１）の投与により、ザイモサンＡ誘発の白血球蓄積が減少し、２０ｎｍｏｌｅ／マウス及び８０ｎｍｏｌｅ／マウスに対して、それぞれ４７％及び３３％の阻害であった（図２６）。Ｐ５８‐４（配列番号２）の投与により、ザイモサンＡ誘発の白血球蓄積が減少し、２０ｎｍｏｌｅ／マウス及び８０ｎｍｏｌｅ／マウスに対して、それぞれ３５％及び４７％の阻害であり（図２６）、一方、Ｐ５８（配列番号１）より誘導した９アミノ酸のペプチドであるペプチドＰ５８‐５（配列番号３）の投与では、８０ｎｍｏｌｅ／マウスに対してはザイモサンに誘発された白血球蓄積が２９％減少したが、２０ｎｍｏｌｅ／マウスで投与した場合は白血球遊走が阻害されなかった（図２６）。
【０３７９】
ＰＭＮ遊走：
Ｇｒ１マーカーによるＦＡＣＳ分析で明らかとなったように、空気嚢へのザイモサンの注入によって好中球の著しい遊走が発生した。図２７は、好中球の蓄積に関する累積データを示す（ＧＲ‐１＋細胞）。ペプチドＰ５８（配列番号１）を２０ｎｍｏｌｅ／マウス又は８０ｎｍｏｌｅ／マウスで投与することにより、ザイモサンによって誘発された好中球の蓄積が、それぞれ５０％（Ｐ＜０．０５）又は２９％阻害された（図２７）。ペプチドＰ５８‐４（配列番号２）を２０ｎｍｏｌｅ／マウス又は８０ｎｍｏｌｅ／マウスで投与することにより、好中球の遊走が、それぞれ３５％又は４９％阻害された（図２７）。Ｐ５８‐５は、２０ｎｍｏｌｅ／マウスでの投与でのみ、弱い効果が見られた。
【０３８０】
結論：
本実験は、ペプチドＰ５８（配列番号１）及びＰ５８‐４（配列番号２）が、細胞動員の実験モデルにおいて、マウス空気嚢内へのザイモサンの局所投与に反応してＰＭＮの蓄積を低減する能力を、異なる効力と効能で有することを示すものである。Ｐ５８‐５（配列番号３）は、弱い効果を示すのみであった。ペプチドＰ５８（配列番号１）（２０ｎｍｏｌｅ／マウス）及び８０ｎｍｏｌ／マウスでのペプチドＰ５８‐４（配列番号２）は、空気嚢中での好中球の蓄積を約５０％阻害したが、これは、そのような生物系内で予想される最大の効果であり、このことは、これらのペプチドが急性炎症の動物モデルにおいて生物活性を有することを示すものである。
【０３８１】
実施例８．ペプチド５８（配列番号１）、及びその短鎖誘導体、ペプチド５８＿４（配列番号２）の、虚血再灌流後心筋梗塞へのインビボでの効果
本実施例は、本発明のＰ５８及びその短鎖誘導体が、マウスの虚血再灌流後の急性心筋梗塞を予防する能力を有するかどうかの試験に関する。ＦＲＰＲＬ１受容体の公知のアゴニストは、マウスモデルの心筋虚血再灌流を予防する効果を持つことが報告されている（Ｌａ  ｅｔ  ａｌ  ２００１，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１５，２２４７‐２２５６；Ｇａｖｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ  ２００５，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１９，１００‐１０２）。従って、このモデルを用いて、マウスの急性心筋梗塞を予防するＰ５８及びその短鎖誘導体の能力の試験を行う。
【０３８２】
オスのアルビノマウス（約３０ｇ；ｎ＝６／グループ）に、ＬＡＤＣＡ（左前下行枝）の２５分間の閉鎖（虚血）、及びそれに続くＬＡＤＣＡの６０分間の開放（再灌流）を施して虚血再灌流を発生させる。再灌流の開始時に、５乃至８０ｎｍｏｌｅ／マウスの範囲の種々の投与量でペプチドを静注する。心筋組織の損傷を、梗塞サイズ（ｐ‐ニトロ‐ブルーテトラゾリウムを使用）及び危険領域（エバンスブルー染料を使用）の測定によって評価する。結果は、このペプチドが、実験的心筋虚血再灌流を予防する能力を有することを示している。
【０３８３】
実施例９．ウィスターラット由来大動脈輪内でのＰ６１＿Ｓ、Ｐ６１‐ダイマー（Ｐ６１＿Ｄ）、Ｐ３３＿Ｖ、及びＰ３３‐ダイマー（Ｐ３３＿Ｄ）の効果、並びに本効果における一酸化窒素（ＮＯ）の関与
本実施例は、本発明のペプチド、Ｐ６１＿Ｓ、Ｐ６１‐ダイマー（Ｐ６１＿Ｄ）、Ｐ３３＿Ｖ、及びＰ３３‐ダイマー（Ｐ３３＿Ｄ）が、マウス大動脈輪に対してＮＯ依存性の血管拡張効果をもたらす能力の試験に関する。Ｍａｓ受容体の公知のアゴニスト、すなわち、Ａｎｇ（１‐７）及びＡＶＥ０９９１は、マウス大動脈輪に対するＮＯ依存性の血管拡張効果を有し、これは無処理の内皮にも依存することが過去に報告されている（Ｌｅｍｏｓ  ｅｔ  ａｌ  ２００５，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４６，２７４‐２７９；Ｓａｎｔｏｓ  ｅｔ  ａｌ  ２００３，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ４１，７３７‐７４３）。本発明のＭａｓアゴニストペプチドのそのような効果をもたらす能力について、このモデルを用いて試験を行った。
【０３８４】
本実験の目的は以下の通りである：
１．Ｐ６１＿Ｓ（配列番号１０）、Ｐ６１＿Ｄ（配列番号９）、Ｐ３３＿Ｖ（配列番号７）、及びＰ３３＿Ｄ（配列番号６）の、単離されたラット大動脈輪への効果の測定。
２．Ｐ６１＿Ｓ（配列番号１０）、Ｐ６１＿Ｄ（配列番号９）、Ｐ３３＿Ｖ（配列番号７）、及びＰ３３＿Ｄ（配列番号６）の、ラット大動脈輪への血管効果における内皮の役割の評価。
３．Ｐ６１＿Ｓ（配列番号１０）、Ｐ６１＿Ｄ（配列番号９）、Ｐ３３＿Ｖ（配列番号７）、及びＰ３３＿Ｄ（配列番号６）の、ラット大動脈輪への血管効果におけるＮＯ（一酸化窒素）の関与の評価。
【０３８５】
比較のために、アンジオテンシン１‐７（Ａｎｇ‐（１‐７））の効果についても測定を行った。
【０３８６】
実験系動物情報の説明
１３乃至１４週齢の雄ウィスターラット（体重：２５０乃至３００ｇ）を用いた。ラットをタイマー制御の１２時間の明暗サイクル（昼‐０６：００から１８：００まで；夜‐１８：００から０６：００まで）に曝露した。ラットは斬首及び失血によって屠殺し、ただちに組織を除去した。
【０３８７】
ラット大動脈輪の調製及びマウンティング
脂肪組織及び結合組織の無い下行胸部大動脈からの弁輪（３乃至４ｍｍ）を、気体（９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２）を注入したクレブス‐ヘンセレイト液（ｍｍｏｌ／Ｌ）：ＮａＣｌ  １１０．８、ＫＣｌ  ５．９、ＮａＨＣＯ３  ２５．０、ＭｇＳＯ４  １．０７、ＣａＣｌ２  ２．４９、ＮａＨ２ＰＯ４  ２．３３、及びグルコース  １１．５１、の中へ、３７℃にて、１．０ｇの張力下で１時間セットし、平衡状態とした。機能内皮の存在は、フェニレフリン（０．３μＭ）であらかじめ収縮させた血管の７０％超の弛緩を誘発するアセチルコリン（１μＭ）の能力によって評価した（Ｌｅｍｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。必要に応じて、内膜表面から木製の棒で内皮を擦り取った。力変換器（Ｐａｎｌａｂ、モデル番号ＴＲＩ２１０、スペイン）により等尺的に記録された力学的活性を、増幅記録計（ａｍｐｌｉｆｉｅｒ‐ｒｅｃｏｒｄｅｒ）（Ｐｏｗｅｒｌａｂ  ４／２０、ＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．）へ、及びアナログ‐デジタル変換ボード（ＡＤ１６ＪＲ；Ｗｏｒｌｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．）を搭載したパーソナルコンピュータへ、データ収集／記録プログラムＣＶＭＳ（Ｗｏｒｌｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．）を用いて入力した。
【０３８８】
実験プロトコル
機能内皮の存在下又は非存在下にて、Ｐ６１＿Ｓ（配列番号１０）、Ｐ６１（配列番号９）‐ダイマー（Ｐ６１＿Ｄ）、Ｐ３３＿Ｖ（配列番号７）、及びＰ３３（配列番号６）‐ダイマー（Ｐ３３＿Ｄ）のペプチドの、準最大濃度のフェニレフリン（０．０１μＭ）によって誘発した同レベルの張力（およそ１．５ｇの張力）であらかじめ収縮させた血管内（Ｎ＝５乃至８）での血管弛緩活性を測定した。比較のために、Ａｎｇ‐（１‐７）の効果についての試験も行った（Ｎ＝４）。
【０３８９】
フェニレフリンに対する反応が安定化したところで、Ｐ６１＿Ｓ（配列番号１０）、Ｐ６１（配列番号９）‐ダイマー（Ｐ６１＿Ｄ）、Ｐ３３＿Ｖ（配列番号７）、又はＰ３３（配列番号６）‐ダイマー（Ｐ３３＿Ｄ）を、累積濃度が上昇する形（０．０００１から１μＭ）で添加した（図２８）。ペプチドの弛緩効果への内皮由来産物の関与を確認するために、一酸化窒素合成酵素の非選択的阻害薬であるＮw‐ニトロ‐Ｌ‐アルギニンメチルエステル（Ｌ‐ＮＡＭＥ）１００μＭの存在下での実験を行った。Ｌ‐ＮＡＭＥの存在下での実験では、血管は、０．０３μＭのフェニレフリンであらかじめ収縮させ、他と同レベルの張力を得た。Ｌ‐ＮＡＭＥは、フェニレフリン添加の２０分前にバスへ添加した。
【０３９０】
統計分析
結果は平均値の標準誤差として表す。ボンフェローニ多重比較事後検定（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｐｏｓｔ‐ｔｅｓｔ）による二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて、大動脈輪で得られた濃度反応曲線の比較を行った。Ｐ６１＿Ｓ（配列番号１０）、Ｐ６１（配列番号９）‐ダイマー（Ｐ６１＿Ｄ）、Ｐ３３＿Ｖ（配列番号７）、Ｐ３３（配列番号６）‐ダイマー（Ｐ３３＿Ｄ）、及びＡｎｇ‐（１‐７）の血管拡張効果は、フェニレフリン誘発の最大収縮の減少パーセントで表した。統計分析はすべて、ｐ＜０．０５の場合に有意であると判断した。
【０３９１】
結果
フェニレフリンであらかじめ収縮された内皮含有大動脈輪では、Ｐ６１＿Ｓ（配列番号１０）が濃度依存性の血管拡張効果をもたらした（図２９）。内皮を剥皮された血管では、Ｐ６１＿Ｓ（配列番号１０）の誘発による血管弛緩が消失した（図２９）。Ｐ６１＿Ｓの弛緩効果の最大値（％）（Ｅｍａｘ）は、内皮を有する血管で３９．９９±５．０３４であった。
【０３９２】
Ｐ６１＿Ｓの誘発による弛緩効果におけるＮＯの関与を調べるために、ＮＯ合成酵素阻害薬、Ｌ‐ＮＡＭＥの存在下でさらなる実験を行った。図３０に示す結果は、ＮＯ合成酵素の阻害がＰ６１＿Ｓの血管拡張効果を消失させたことを示す。
【０３９３】
図３１は、Ｐ６１＿Ｄ（配列番号９）の誘発による、ラット大動脈輪での内皮依存性血管拡張効果を示す。この効果は、機能内皮の非存在下では消失した。Ｐ６１＿Ｄの弛緩効果の最大値（％）（Ｅｍａｘ）は、内皮を有する血管で２０．４５±５．１１であった。
【０３９４】
Ｐ６１＿Ｄの誘発による反応にＮＯが関与しているかどうかを評価するために、このペプチドの血管拡張効果を、Ｌ‐ＮＡＭＥの存在下で試験した。図３２に示すように、ＮＯ合成酵素の遮断後、Ｐ６１＿Ｄ（配列番号９）の誘発による内皮依存性弛緩効果は、著しく阻害されたが、Ｐ６１＿Ｄの濃度が高い場合では、残留血管弛緩が観察された。
【０３９５】
図３３は、Ｐ３３＿Ｖ（配列番号７）の誘発による、ラット大動脈輪での血管拡張効果を示す。この効果は、完全に機能内皮に依存していた。Ｐ３３＿Ｖの弛緩効果の最大値（％）（Ｅｍａｘ）は、内皮を有する血管で１５．６９±３．６６であった。
【０３９６】
Ｐ３３＿Ｖ（配列番号７）の誘発による血管弛緩効果へのＮＯの関与を調べるために、この効果を、Ｌ‐ＮＡＭＥの存在下で試験した。ＮＯ合成酵素の遮断後、Ｐ３３＿Ｖの誘発による内皮依存性弛緩効果は、完全に阻害された（図３４）。
【０３９７】
図３５は、Ｐ３３＿Ｄの誘発による、ラット大動脈輪での血管拡張効果を示す。この効果は、機能内皮の非存在下で完全に阻害された。Ｐ３３＿Ｄの弛緩効果の最大値（％）（Ｅｍａｘ）は、内皮を有する血管で１７．７８±３．４３であった。
【０３９８】
Ｐ３３＿Ｄ（配列番号６）の血管拡張効果へのＮＯの関与を確認するために、この効果を、Ｌ‐ＮＡＭＥの存在下で試験した。ＮＯ合成酵素の阻害後、Ｐ３３＿Ｄの効果は、完全に阻害された（図３６）。
【０３９９】
図３７は、Ａｎｇ‐（１‐７）の誘発による、ウィスターラット由来大動脈輪での効果を示す。この効果は、機能内皮の非存在下では消失した。Ａｎｇ‐（１‐７）の弛緩効果の最大値（％）（Ｅｍａｘ）は、内皮を有する血管及び有さない血管でそれぞれ、１５．６４±１．９１及び２．８２±３．１１であった。
【０４００】
Ａｎｇ‐（１‐７）の誘発による弛緩効果へのＮＯの関与を調べるために、ＮＯ合成酵素阻害薬（Ｌ‐ＮＡＭＥ）の存在下でさらなる実験を行った。ＮＯ合成酵素の遮断後、Ａｎｇ‐（１‐７）の誘発による内皮依存性弛緩効果は、完全に阻害された（図３８）。
【０４０１】
まとめると、Ｐ６１＿Ｓ、Ｐ６１＿Ｄ、Ｐ３３＿Ｖ、及びＰ３３＿Ｄは、ウィスターラット由来の大動脈輪内で、濃度依存性の血管拡張効果を誘発した。これらのペプチドに誘発されたこの反応は、内皮の存在に依存していた。Ｐ６１＿Ｓ、Ｐ３３＿Ｖ、及びＰ３３＿Ｄのペプチドの効果は、Ｌ‐ＮＡＭＥ存在下で遮断された。Ｐ６１＿Ｄの誘発による血管拡張効果は、Ｌ‐ＮＡＭＥ存在下で、部分的にしかし著しく低下した。この結果は、ウィスターラットの大動脈内でのＰ６１＿Ｓ、Ｐ６１＿Ｄ、Ｐ３３＿Ｖ、及びＰ３３＿Ｄの血管拡張効果は、内皮由来ＮＯに依存することを示している。
【０４０２】
比較のために、Ａｎｇ‐（１‐７）の効果についても試験を行った。Ａｎｇ‐（１‐７）は、ウィスターラットの大動脈内で血管拡張効果を誘発した。この反応は、内皮及びＮＯに依存していた。これらの結果は、Ａｎｇ‐（１‐７）の血管拡張効果が内皮由来ＮＯに依存することを示す文献からのいくつかの他の報告と一致している（Ｌｅ  ｔｒａｎ  ＆  Ｆｏｒｓｔｅｒ，１９９７；Ｓｉｌｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０４０３】
ペプチド、Ｐ６１＿Ｓ、Ｐ６１‐ダイマー（Ｐ６１＿Ｄ）、Ｐ３３＿Ｖ、及びＰ３３‐ダイマー（Ｐ３３＿Ｄ）は、単離されたウィスターラット由来の大動脈輪内で、ＮＯ及び内皮に依存する血管拡張効果を誘発した。
【０４０４】
実施例１０．Ｐ６１＿Ｓ、Ｐ６１＿Ｄ、Ｐ３３＿Ｖ、及びＰ３３＿Ｄのペプチドの弛緩効果における、Ｄ‐Ｐｒｏ７‐Ａｎｇ１‐７感受性メカニズムの関与
Ｐ６１＿Ｓ（配列番号１０）、Ｐ６１‐ダイマー（Ｐ６１＿Ｄ）（配列番号９）、Ｐ３３＿Ｖ（配列番号７）、Ｐ３３‐ダイマー（Ｐ３３＿Ｄ）（配列番号６）のペプチドの弛緩効果におけるＭａｓ特異的経路の関与を確認するために、上述の実験を、公知のＭａｓ特異的アンタゴニストであるＤ‐Ｐｒｏ７‐Ａｎｇ１‐７（Ｌｅｍｏｓ  ｅｔ  ａｌ  ２００５，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ４６，２７４‐２７９；Ｓａｎｔｏｓ  ｅｔ  ａｌ．２００３，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ４１，７３７‐７４３）の存在下で再度行う。
【０４０５】
ペプチドの血管弛緩活性を、機能内皮の存在下又は非存在下、準最大濃度のフェニレフリン（０．０３μＭ又は０．１μＭ）によって誘発した同レベルの張力（およそ１．５ｇの張力）であらかじめ収縮させた血管にて測定する。フェニレフリンに対する反応が安定化したところで、ペプチドを、累積濃度が上昇する形（０．０００１から１μＭ）で添加した。ペプチドの弛緩効果へのＤ‐Ｐｒｏ７‐Ａｎｇ１‐７感受性メカニズムの関与を確認するために、Ｄ‐Ｐｒｏ７‐Ａｎｇ１‐７（１０―６Ｍ）の存在下での実験を行う。本プロトコルのコントロールとして、各ラットからの別の血管セグメントを、ペプチドのみの効果について同時にモニタリングする。ポジティブコントロールとして、Ａｎｇ‐（１‐７）に対する累積濃度反応曲線を、Ｄ‐Ｐｒｏ７‐Ａｎｇ１‐７の存在下と非存在下で構築する。
【０４０６】
実施例１１．単離されたラット心臓の虚血再灌流後のＰ６１＿Ｓ、Ｐ６１‐ダイマー（Ｐ６１＿Ｄ）、Ｐ３３＿Ｖ、及びＰ３３‐ダイマー（Ｐ３３＿Ｄ）の効果
本実施例は、単離されたラット心臓の虚血再灌流後のＰ６１＿Ｓ、Ｐ６１‐ダイマー（Ｐ６１＿Ｄ）、Ｐ３３＿Ｖ、及びＰ３３‐ダイマー（Ｐ３３＿Ｄ）の効果の試験に関する。Ａｎｇ（１‐７）は、冠血流量、再灌流不整脈、及び機械的な心機能などのパラメータによって表される単離されたマウス心臓の虚血後の機能を改善することが過去に報告されている（Ｆｅｒｒｅｉｒａ  ｅｔ  ａｌ  ２００２，Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．Ａｎｄ  Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ．３５，１０８３‐１０９０；Ｆｅｒｒｅｉｒａ  ｅｔ  ａｌ  ２００１，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ３８，６６５‐６６８；Ｍｅｌｌｏ  ２００４，Ｊ．ｏｆ  Ｒｅｎｉｎ‐Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ‐Ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ５，２０３‐２０８）。
【０４０７】
Ｐ６１＿Ｓ（配列番号１０）、Ｐ６１‐ダイマー（Ｐ６１＿Ｄ）（配列番号９）、Ｐ３３＿Ｖ（配列番号７）、及びＰ３３‐ダイマー（Ｐ３３＿Ｄ）（配列番号６）のペプチドの、単離され灌流されたラット心臓の冠血流量、再灌流不整脈、及び機械的な機能に対する効果は、成体ウィスターラット（１２乃至１４週齢）のランゲンドルフ標本（各投与量に対してＮ＝６）を用いて評価する。
【０４０８】
動物の順化
ラットは、実験開始前の最大７日間、動物施設内で飼育する。動物は、１２時間の明暗サイクルとなる明るさのサイクル（昼‐０６：００から１８：００まで；夜‐１８：００から０６：００まで）に曝露し、室温は２３±２℃に維持する。
【０４０９】
単離心臓の処理法‐虚血／再灌流
単離し灌流させた心臓の処理法に関しては、ラットは、４００ＩＵヘパリンの腹腔内注射後、１０乃至１５分で斬首し、胸部を開いて心臓を注意深く切開し、ＮａＣｌ（１１８．４）、ＫＣｌ（４．７）、ＫＨ２ＰＯ４（１．２）、ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ（１．２）、ＣａＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（２．５）、グルコース（１１．７）、ＮａＨＣＯ３（２６．５）（単位：ｍｍｏｌ／Ｌ）を含有するクレブスリンゲル液（ＫＲＳ）を大動脈断端を通して灌流させる。３７±１℃、及び一定の酸素投与（５％ＣＯ２及び９５％Ｏ２）にて、灌流圧は一定（６５ｍｍＨｇ）に維持する。力変換器を、心臓クリップ（ｈｅａｒｔ  ｃｌｉｐ）によって心室の心尖部に接続し、データ収集システム（Ｂｉｏｐａｃ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｓａｎｔａ  Ｂａｒｂａｒａ，カリフォルニア州）を通して収縮力（張力、ｇ）をコンピュータに記録する。１ｇの拡張期張力を心臓に印加する。右心房及び左心室の表面に直接設置した２個の電極を使用し（双極誘導）、データ収集システムを用いて電気的活性を記録する。心拍数は、力の記録から算出する。冠血流量は、一定間隔にて、１分の間の灌流液を採取することで測定する。１５分の平衡化期間の後、心臓をペプチド溶液にてさらに２０分の間灌流した。このベースライン期間の後、左前下行枝（ＬＡＤ）を結紮する。１５分後にこの結紮を開放し、さらに３０分間の再灌流を行う。
【０４１０】
不整脈は、冠動脈結紮の開放後の心室頻拍及び／又は心室細動の存在として定義する。定量的な測定を行うために、不整脈をその継続時間によって重み付けし、３０分の継続時間を不可逆的な不整脈と見なす。従って、３分までの不整脈の発生に対して係数２を割り当て；３乃至６分に対しては係数４；６乃至１０分に対しては係数６；１０乃至１５分に対しては係数８；１５乃至２０分に対しては係数１０；２０乃至２５分に対しては係数１１；及び、２５乃至３０分に対しては係数１２を割り当てる。２乃至１２の値がこのように各実験で得られ、不整脈重症度指数（ＡＳＩ）として示される。
【０４１１】
実験グループ：
心臓は、ＫＲＳ（コントロールグループ、Ｎ＝６）、又はペプチドを含有するＫＲＳ（０．０４、１、及び５ｎｍｏｌ／Ｌ、各用量に対してＮ＝６）で灌流する。
【０４１２】
統計分析：
データはすべて平均値の標準誤差として表す。各動物の心機能の値は、ベースライン期間及び実験期間の間に５分間隔で取得した値の平均によって得られる。統計的有意差は、一元配置ＡＮＯＶＡ、及びそれに続くダネットポストホック検定を用いて推定する（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ４．０）。有意差のレベルは、Ｐ＜０．０５とする。
【０４１３】
実施例１２．イソプロテレノール誘発の心臓リモデリングに対するＰ６１＿Ｓ、Ｐ６１‐ダイマー（Ｐ６１＿Ｄ）、Ｐ３３＿Ｖ、及びＰ３３‐ダイマー（Ｐ３３＿Ｄ）の効果
Ｐ６１＿Ｓ（配列番号１０）、Ｐ６１‐ダイマー（Ｐ６１＿Ｄ）（配列番号９）、Ｐ３３＿Ｖ（配列番号７）、Ｐ３３‐ダイマー（Ｐ３３＿Ｄ）（配列番号６）のペプチドの心臓リモデリングに対する効果について、そのイソプロテレノール誘発の心肥大及び線維症（Ｉ型、ＩＩＩ型コラーゲン、及びフィブロネクチンの析出）への効果を測定することによる試験を行った。ロサルタン（公知のアンジオテンシンＩＩ受容体、ＡＴ１、のアンタゴニスト、Ｋｕｃｈａｒｅｗｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，（４０）：７７４‐７７９）をポジティブコントロールとして用いた。ネガティブコントロールのグループは、運搬体のみで処理した。さらなるコントロールグループとして、イソプロテレノール未処理ラットをペプチド、ロサルタン、又は運搬体で処理したグループを含めた。左心室質量測定及び、形態計測を含む分析を行った。さらに、フィブロネクチン、並びにＩ型及びＩＩＩ型コラーゲンの析出の免疫蛍光分析を共焦点顕微鏡により実施した。
【０４１４】
動物の順化
１３乃至１４週齢の雄ウィスターラット（２５０乃至３００ｇ）を、実験開始前の７日間、動物施設内で飼育した。動物は、１２時間の明暗サイクルとなる明るさのサイクル（昼‐０６：００から１８：００まで；夜‐１８：００から０６：００まで）に曝露し、室温は２３±２℃に維持した。
【０４１５】
実験計画及び手順
７日間の間、イソプロテレノール（２ｍｇ／ｋｇ／日、皮下）を毎日注射することで心不全を誘発した。ラットを以下のグループに分割した：すなわち、イソプロテレノールの代わりに０．９％ＮａＣｌで処理したグループ（すなわち、リモデリングの誘発なし）は、各々Ｎ＝４であり、コントロール（０．９％ＮａＣｌの皮下投与、及び水の強制投与）；コントロール‐ロサルタン（０．９％ＮａＣｌの皮下投与、及び１日１回のロサルタン１ｍｇ／ｋｇの強制投与）、コントロール‐ペプチド（０．９％ＮａＣｌの皮下投与、及びＰ６１＿Ｓ又はＰ６１＿Ｄ又はＰ３３＿Ｖ又はＰ３３＿Ｄ、各ペプチドについて、１μｇ／時間／ｋｇ、浸透圧ミニポンプによる投与）より構成した。イソプロテレノールで処理したグループは、各々Ｎ＝６であり、ＩＳＯ（イソプロテレノール及び水の強制投与）、ＩＳＯ＋ロサルタン（イソプロテレノール及びロサルタン、１日１回、１ｍｇ／ｋｇの強制投与）、ＩＳＯ＋ペプチド（イソプロテレノール及びペプチド、Ｐ６１＿Ｓ又はＰ６１＿Ｄ又はＰ３３＿Ｖ又はＰ３３＿Ｄ、各ペプチドについて、１μｇ／時間／ｋｇ、浸透圧ミニポンプによる投与）より構成した。強制投与及び皮下注射の最終体積は、それぞれ、およそ０．５ｍｌ及び０．１ｍｌであった。
【０４１６】
免疫染色及び共焦点顕微鏡法
免疫蛍光標識及び定量的共焦点顕微鏡法を用いて、左心室に存在するＩ型及びＩＩＩ型コラーゲン、並びにフィブロネクチンの分布と量を調べた。コントロール動物及びイソプロテレノール処理動物から心臓を採取し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄して過剰の血液を除去し、次に、８０％メタノール及び２０％ジメチルスルホキシドの溶液中、−８０℃にて凍結固定した。サンプルを−８０℃で５乃至７日間貯蔵し（すなわち、凍結置換）、１日の間−２０℃に移し、室温にて無水エタノールで３回、キシレンで２回洗浄し、次に、標準的な方法に従って、パラフィンに包埋した。厚さが５乃至８μｍの薄片をスライドガラスに載せ、キシレンで脱パラフィンを行い、段階的なエタノール対ＰＢＳ系で脱水し、次に、停止液（ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（ＰＢＳ中、１％ＢＳＡ及び０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）中にて、室温で１時間インキュベートした。
【０４１７】
以下の一次抗体：ラビット抗ヒトＩ型コラーゲン、ラビット抗ヒトＩＩＩ型コラーゲン、又はラビット抗ヒトフィブロネクチン、の中の一つと共に、薄片を４℃で一晩インキュベートした。抗体はすべて、１：１０に希釈した停止液で希釈した。ＰＢＳ中にて４、５回リンスした後、Ｃｙ３が接合したロバ抗ラビットＩｇＧ（ｃａｔ＃  ７１１‐１６５‐１５２，Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、暗所にて、室温で１時間かけて添加した。ＰＢＳによる洗浄後、薄片を９０％グリセロール／１０％ＴＲＩＳ  １Ｍ、ｐＨ９．０の溶液中でスライドガラスに載せ、共焦点レーザー走査型顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ  ５１０Ｍｅｔａ）で観察した。共焦点の光学設定（開口率、ゲイン、レーザー出力）は、各回のイメージングの最初に決定し、そして、全サンプルの分析を行う間、それを一定に維持した。核は、４’，６‐ジアミジノ‐２‐フェニルインドール二塩酸塩（ＤＡＰＩ）、ｃａｔ＃  Ｄ１３０６‐Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、によって標識した。Ｉ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲン、及びフィブロネクチンの定量分析のために、イメージ分析プログラムＩｍａｇｅＴｏｏｌ  ２．０を用いて（ｈｔｔｐ：／／ｄｄｓｄｘ．ｕｔｈｓｃｓａ．ｅｄｕ／ｄｉｇ／ｉｔｄｅｓｃ．ｈｔｍｌ）、ランダムに選択したイメージの蛍光強度を測定した。イメージの取り込みは１２ビットで行い、グレースケール範囲０乃至２５５にて分析した。蛍光強度は、領域の平均として測定し（すなわち、全ピクセルのグレー値の合計を領域内の総ピクセル数で割った）、値は任意単位（ＡＵ）として記録した。バックグラウンド蛍光を測定し、対象とする領域から差し引いた。心筋細胞径の測定は、組織学的解析によって行った。
【０４１８】
各心筋細胞径も、心肥大の尺度である。イソプロテレノールによるリモデリング時の心筋細胞径、及び本発明のペプチドのこのプロセスへの効果を測定するために、左心室を４％ブアン固定液中に室温で２４時間静置する。組織を、７０％エタノール、８０％エタノール、９０％エタノール、そして１００％エタノールにより順に洗浄して脱水し、パラフィン中に包埋する。左心室の心基部領域より、４０μｍ間隔で横断薄片（６μｍ）を切り出し、ヘマトキシリンエオシン染料によって染色する。筋細胞径は、光学顕微鏡（ＢＸ６０、Ｏｌｙｍｐｕｓ）に合わせたステージミクロメターにより倍率４００×にて較正した接眼ミクロメターを用いて、組織薄片内（各動物につき３乃至４個）で評価する。長さ方向に切り出され、核と細胞の境界とが視認可能な心筋細胞のみを分析に使用する（各薄片につき平均して３０個の心筋細胞）。各筋細胞径は、核に相当する領域を横切る形で測定する。動物一匹につき５０乃至１００個の心筋細胞を分析する（ｎ＝４‐６の異なる動物）。これらの結果はまだ得られていなかった。
【０４１９】
統計分析
データは平均値の標準誤差として表した。共焦点顕微鏡法に対する統計分析は、独立スチューデントｔ検定、及びそれに続くマンホイットニー検定によって実施した。独立スチューデントｔ検定は、心筋細胞の分析に用いる。０．０５若しくはそれ未満のｐ値を有意であると見なした。
【０４２０】
結果：
コントロール動物及びイソプロテレノール処理動物から心臓を採取し、左心室質量を測定した。体重に対する左心室質量の比（ＬＶ／ＢＷ）を表す結果を図４６乃至５０に示す。上記のグループのすべてにおいて、イソプロテレノール処理により体重に対する左心室質量比が増加した（図４６乃至５０）。いずれのペプチドも、イソプロテレノールの誘発による体重に対する左心室質量比の増加を低下させることはなかった。ポジティブコントロールであるロサルタンも効果がなかった。
【０４２１】
心臓リモデリングへの効果は、フィブロネクチン、並びにＩ型及びＩＩＩ型コラーゲンの析出によって測定される心肥大を調べることによって、より直接的に分析することができる。従って、左心室質量の分析よりも感度の高い本アッセイを実施した。本出願の提出時には、各グループの６匹の動物のうち３匹のデータしか分析されていなかった。図４０乃至４５に示すのは、Ｐ６１＿Ｄ及びＰ６１＿Ｓに対して得られた部分的なデータであり、これは、イソプロテレノール心臓リモデリング後のフィブロネクチン、Ｉ型コラーゲン、及びＩＩＩ型コラーゲンの析出によって測定される心肥大に対するこれら２種類のペプチドの効果を表している。この結果は、フィブロネクチン、Ｉ型コラーゲン、及びＩＩＩ型コラーゲンの析出によって示唆されるように、Ｐ６１＿Ｄ及びＰ６１＿Ｓが、イソプロテレノールの誘発による心肥大の軽減に効果的であることを示している（ただし、フィブロネクチンの析出によって測定されるＰ６１＿Ｄの効果は有意ではなかった、図４０）。
【０４２２】
Ｐ３３＿Ｖに対して得られた部分的なデータは一貫性のないものであり（掲載せず）、このグループのすべての動物のデータが得られてから、分析を完了する予定である。本出願の提出時点で、Ｐ３３＿Ｄに対するデータは得られていなかった。
【０４２３】
ここの示した説明は例示することを意図したものであり、本発明の範囲を限定するものではない。さらなる態様は請求項の範囲内である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【配列表】
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