(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ピロリドンカルボン酸亜鉛塩とユビキノンからなる、コラーゲン合成促進剤。
【請求項２】
ユビキノンとピロリドンカルボン酸亜鉛塩の重量比が、５０：１〜０．１：１である、請求項１に記載のコラーゲン合成促進剤。
【請求項３】
ピロリドンカルボン酸亜鉛塩とユビキノンを有効成分として配合することを特徴とする、コラーゲン合成促進用組成物。
【請求項４】
ピロリドンカルボン酸亜鉛塩を、組成物中に１μＭ〜１００ｍＭの濃度で存在するように配合することを特徴とする、請求項３に記載のコラーゲン合成促進用組成物。
【請求項５】
ユビキノン０．０００１重量％〜１０重量％および、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩０．００００３５重量％〜３．５重量％を含有することを特徴とするコラーゲン合成促進用組成物。
【請求項６】
さらに、Ｎ−アシル酸性アミノ酸エステル、またはアミノ酸誘導体が配合される、請求項３から５のいずれか１項に記載のコラーゲン合成促進用組成物。
【請求項７】
軟膏、化粧水、ローション、クリーム、乳液、美容液、パック、ファンデーション、液体ハンドソープ、シャンプー、または毛髪用化粧水である請求項３から６のいずれか１項に記載のコラーゲン合成促進用組成物。
【請求項８】
コラーゲン合成が、ヒト繊維芽細胞のアスコルビン酸トランスポーターの発現増強を介してされるものである、請求項３から７のいずれか１項に記載のコラーゲン合成促進用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はしわを防止するのに有用な、亜鉛を有効成分として含有するコラーゲン合成促進剤、およびこれを含有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚のしわを予防あるいは改善する物質は多く見出されているが、完全に予防や改善が実感できる安全な物質はなく、未だ多くの研究がなされている。しわの形成が起きる原因は種々報告されているが、その一つに肌の乾燥があげられる。皮膚角層中の水分量が減少することで、皮膚の小じわは現れることは良く知られた事実である。このことから、皮膚角層中の水分量を高く維持するため保湿成分が利用されている。我々自身の皮膚角層が持っている保湿成分としてＮＭＦ（Ｎａｔｕｒａｌ  Ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ  Ｆａｃｔｏｒ）が有名であるが、その構成要素であるアミノ酸自身にも角層中の水分を高く保持するものも見出されている。また、プラセンタエキスやビタミン類などの細胞賦活成分により皮膚角化細胞のターンオーバーを促進し、しわの予防・改善を行おうとする提案もなされている。
【０００３】
乾燥とは異なる原因として、皮膚の老化に伴うしわやたるみの大きな原因として、真皮中のコラーゲン量の減少が関係していると考えられる。皮膚中のコラーゲンは真皮の細胞外マトリックスの成分であり結合組織として重要な役割を果たしている。コラーゲン量は皮膚の柔らかさや張りを構成する重要な要因である。
【０００４】
皮膚組織におけるコラーゲン量を増加させるためには、ＵＶ照射により誘導されるコラーゲナーゼ活性を阻害し、コラーゲンの分解を抑制すること、および、コラーゲン合成を促進することが重要である。コラーゲン合成はビタミンやホルモン、サイトカインなどが作用することで促進することが知られている。
【０００５】
コラーゲン合成を促す製品としてコラーゲンタンパクやコラーゲン組成アミノ酸組成物などが市販されているが、そのコラーゲン合成促進効果は明確でない。
【０００６】
また、レチノイド、レチノール、レチノイン酸がコラーゲンの合成を促進させることが知られているが、催奇性、副作用も報告されており、より安全で、効果の高いコラーゲン合成促進剤が求められている。
【０００７】
ユビキノンは１９５７年にウシの心臓の細胞内ミトコンドリアから単離・発見された化合物で、コエンザイムＱ１０、補酵素Ｑ１０、あるいは単にＣｏＱ１０とも呼ばれる。ユビキノンは体内で作り出され、多くの臓器に存在する。その働きの１つに細胞内ミトコンドリアでのエネルギーの産生がある。ミトコンドリア内において、糖や脂質などを利用し電子伝達系、ＴＣＡサイクルを介して、ＡＴＰという高エネルギー分子を産生する。すなわち、ユビキノンは電子伝達系で働き、ＡＴＰ産生に寄与する。心臓でのユビキノンは４０歳を過ぎると２０歳時の約半分までその生成量が減少すると言われている。皮膚においては、いまだユビキノンに関する詳しいデータは少ないが、他の臓器と同様に加齢と共にユビキノン濃度は減少すると考えられる。
【０００８】
また、ユビキノンのもう１つの働きは抗酸化効果である。皮膚は紫外線などに暴露される機会が多いため、皮膚内での酸化反応が常に引き起こされている。この酸化反応を防ぐため、多くのユビキノンが生成され利用されていると考えられる。２００４年には、化粧品としてユビキノンが利用可能となり、多くの化粧品に使われるようになってきたが、エネルギー産生促進による肌のターンオーバーの促進や、抗酸化効果以外では、ユビキノンの皮膚に対する具体的な効果については未だ不明な点も多い。
【０００９】
一方、亜鉛については、無機亜鉛塩の一種である酸化亜鉛が、おむつかぶれを抑制すると報告されている（例えば、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，３８４巻，９２〜９６ページ、１９９６年）。しかしながら、この化合物は水にも油性成分にも難溶で、化粧品や皮膚外用剤の成分として用いることが難しい。
【００１０】
有機亜鉛塩の一種であるグリシン亜鉛塩について、メタロチオネインの誘導促進作用を有することが知られている（特開２００５−２４７７２９号公報）。これは抗酸化効果やラジカル補足能などの経路により、メラニン合成阻害や細胞毒性阻害などのＵＶによる皮膚損傷の抑制作用である。しかしながらグリシン亜鉛塩のコラーゲン合成に対する影響は知られていない。
【００１１】
同じく有機亜鉛塩の一種であるピロリドンカルボン酸亜鉛塩やアシルアミノ酸亜鉛塩について、ＵＶにより惹起されるＡＰ−１やＮＦ−κＢなどの炎症因子を抑制することが知られている（特開２００６−０２２０９０号公報、国際公開ＷＯ２００５／１２３０６２号パンフレット）。しかしながらピロリドンカルボン酸亜鉛塩やアシルアミノ酸亜鉛塩のコラーゲン合成に関する作用は知られていない。
【００１２】
その他、有機亜鉛塩や無機亜鉛塩について、収れん作用、消炎作用、白色顔料、紫外線防御剤、消臭・殺菌剤の用途で化粧料組成物に配合することが知られているが、効果を期待できる濃度領域近傍での利用は皮膚に対する刺激性から、化粧品としての利用が難しかった。また低濃度での利用では、皮膚への上記有効性を見出せず、亜鉛塩の化粧料への配合は進んでいないのが現状である。
【発明の開示】
【００１３】
本発明者らは、保湿や、肌のターンオーバーの促進によるしわの改善ではなく、コラーゲン合成によるしわの改善を目的として鋭意検討を重ねた結果、亜鉛をヒト真皮繊維芽細胞に導入することにより、アスコルビン酸トランスポーターの発現促進効果を有することを見出し、これに伴いコラーゲン合成促進効果が得られることを見出した。
【００１４】
アスコルビン酸トランスポーターは、細胞へのアスコルビン酸の取り込みを促進する膜タンパク質であり（Ｈｉｒｏｙａｓｕ  Ｔｓｕｋａｇｕｃｈｉ  ｅｔｃ  （１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  ３９９，７０−７５を参照せよ）、アスコルビン酸トランスポーターの発現増強により、真皮繊維芽細胞においてコラーゲン合成に必須なアスコルビン酸の細胞内への取り込みが増加し、コラーゲン合成が促進される。
【００１５】
さらに、驚くべきことに、従来コラーゲン合成促進効果が知られていなかったユビキノンに、亜鉛塩の一つであるピロリドンカルボン酸亜鉛塩を添加することにより、極めて顕著にコラーゲン合成が相乗的に促進されることを見出した。
【００１６】
本発明の目的は、上記の知見に基づき、優れたコラーゲン合成作用を有するコラーゲン合成促進剤、およびこれを含有する化粧料組成物を得ることにある。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
すなわち、本発明は、亜鉛を有効成分として含有することを特徴とするコラーゲン合成促進用組成物、およびユビキノンとピロリドンカルボン酸亜鉛塩を有効成分として含有することを特徴とするコラーゲン合成促進用組成物に関する。
【００１８】
皮膚刺激性、細胞内への導入効率などの観点から、現実的に実施可能な亜鉛の導入方法としては、亜鉛を亜鉛塩にして、一定濃度、皮膚に塗布することが必要であり、具体的には以下の発明を含む。
【００１９】
（１）亜鉛を有効成分として含有するコラーゲン合成促進剤。
（２）亜鉛が、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩、グルコン酸亜鉛塩、フェノールスルホン酸亜鉛、乳酸亜鉛塩、各種アミノ酸亜鉛塩、アシルアミノ酸亜鉛塩、硫酸亜鉛、塩化亜鉛および酸化亜鉛からなる群より選択される化合物である、（１）記載のコラーゲン合成促進剤。
（３）亜鉛が、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩である（１）記載のコラーゲン合成促進剤。
（４）ピロリドンカルボン酸亜鉛塩とユビキノンを有効成分として含有するコラーゲン合成促進剤。
（５）コラーゲン合成が、ヒト繊維芽細胞のアスコルビン酸トランスポーターの発現増強を介してされるものである、上記（１）から（４）に記載のコラーゲン合成促進剤。
（６）亜鉛を、有効成分として配合することを特徴とする、コラーゲン合成促進用組成物。
（７）亜鉛が、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩、グルコン酸亜鉛塩、フェノールスルホン酸亜鉛、乳酸亜鉛塩、各種アミノ酸亜鉛塩、アシルアミノ酸亜鉛塩、硫酸亜鉛、塩化亜鉛および酸化亜鉛からなる群より選択される化合物である、（６）記載のコラーゲン合成促進用組成物。
（８）亜鉛が、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩である（６）記載のコラーゲン合成促進用組成物。
（９）ピロリドンカルボン酸亜鉛塩とユビキノンを有効成分として配合することを特徴とする、コラーゲン合成促進用組成物。
（１０）亜鉛を、組成物中に１μＭ〜１００ｍＭの濃度で存在するように配合することを特徴とする、上記（６）〜（９）に記載のコラーゲン合成促進用組成物。
（１１）さらに、Ｎ−アシル酸性アミノ酸エステル、またはアミノ酸誘導体が配合される、上記（６）〜（１０）に記載のコラーゲン合成促進用組成物。
（１２）軟膏、化粧水、ローション、クリーム、乳液、美容液、パック、ファンデーション、液体ハンドソープ、シャンプー、または毛髪用化粧水である上記（６）〜（１１）に記載のコラーゲン合成促進用組成物。
（１３）亜鉛を、有効成分として配合することを特徴とする、しわの予防剤または治療剤。
（１４）亜鉛が、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩、グルコン酸亜鉛塩、フェノールスルホン酸亜鉛、乳酸亜鉛塩、各種アミノ酸亜鉛塩、アシルアミノ酸亜鉛塩、硫酸亜鉛、塩化亜鉛および酸化亜鉛からなる群より選択される化合物である、（１３）記載のしわの予防剤または治療剤。
（１５）亜鉛が、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩である（１３）記載のしわの予防剤または治療剤。
（１６）ピロリドンカルボン酸亜鉛塩とユビキノンを有効成分として配合することを特徴とする、しわの予防剤または治療剤。
（１７）コラーゲン合成促進のための亜鉛の使用。
（１８）コラーゲン合成促進のための、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩、グルコン酸亜鉛塩、フェノールスルホン酸亜鉛、乳酸亜鉛塩、各種アミノ酸亜鉛塩、アシルアミノ酸亜鉛塩、硫酸亜鉛、塩化亜鉛および酸化亜鉛からなる群より選択される亜鉛塩の使用。
（１９）コラーゲン合成促進のためのピロリドンカルボン酸亜鉛塩の使用。
（２０）コラーゲン合成促進のためのピロリドンカルボン酸亜鉛塩とユビキノンの併用。
（２１）上記（６）〜（１２）に記載の組成物を皮膚に塗布することを特徴とするコラーゲン合成を促進する方法。
（２２）ユビキノンとピロリドンカルボン酸亜鉛塩が、５０：１〜０．１：１の重量比率で含有される、上記（４）に記載のコラーゲン合成促進剤。
（２３）０．０００１重量％〜１０重量％のユビキノンおよび０．００００３５重量％〜３．５重量％のピロリドンカルボン酸亜鉛塩を含有することを特徴とするコラーゲン合成促進用組成物。
（２４）０．０００１重量％〜１０重量％のユビキノンおよび０．００００３５重量％〜３．５重量％のピロリドンカルボン酸亜鉛塩を含有することを特徴とするしわの予防剤または治療剤。
（２５）０．０００１重量％〜１０重量％のユビキノンおよび０．００００３５重量％〜３．５重量％のピロリドンカルボン酸亜鉛塩を含有する組成物を皮膚に塗布することを特徴とするコラーゲン合成を促進する方法。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
図１は、ヒト真皮繊維芽細胞を用いた亜鉛塩のコラーゲン合成促進効果を確認した図である。
図２は、ヒト真皮繊維芽細胞を用いたピロリドンカルボン酸亜鉛塩によるコラーゲン合成促進効果を確認した図である。
図３は、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩によるアスコルビン酸トランスポーターｍＲＮＡ発現増強効果を確認した図である。
図４は、ヒト真皮繊維芽細胞を用いたピロリドンカルボン酸亜鉛塩およびユビキノンによるコラーゲン合成促進効果を確認した図である。
図５は、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩配合処方による三次元培養ヒト皮膚におけるコラーゲン合成促進効果を確認した図である。
【発明の詳細な説明】
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、本発明の詳細を説明する。
【００２２】
本発明に用いられる亜鉛は、皮膚刺激性、細胞への導入効率などの観点から、現実的に亜鉛を亜鉛塩にして、一定濃度、皮膚に塗布することが必要である。この場合有機亜鉛塩および無機亜鉛塩のいずれも使用することができる。有機亜鉛塩としては、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩、グルコン酸亜鉛塩、フェノールスルホン酸亜鉛、乳酸亜鉛塩、各種アミノ酸亜鉛塩、アシルアミノ酸亜鉛塩、などが含まれる。無機亜鉛塩としては、硫酸亜鉛、塩化亜鉛、酸化亜鉛などが含まれる。
【００２３】
アミノ酸亜鉛塩としては、グリシン亜鉛塩、アラニン亜鉛塩、バリン亜鉛塩、ロイシン亜鉛塩、イソロイシン亜鉛塩、フェニルアラニン亜鉛塩、メチオニン亜鉛塩、トリプトファン亜鉛塩、アスパラギン亜鉛塩、グルタミン亜鉛塩、セリン亜鉛塩、スレオニン亜鉛塩、システイン亜鉛塩、チロシン亜鉛塩、アスパラギン酸亜鉛塩、グルタミン酸亜鉛塩、リジン亜鉛塩、アルギニン亜鉛塩、若しくはヒスチジン亜鉛塩などの各種アミノ酸亜鉛塩が挙げられる。
【００２４】
アシルアミノ酸亜鉛塩とは、アミノ酸のアミノ基にアシル基が結合した化合物の亜鉛塩であるが、例えば、アシルアミノ酸としては以下の構造式を有する化合物が挙げられる。
【００２５】
【化１】
0005423002.tif 000002
【００２６】
（上記（Ｉ）中、Ｒ１は炭素原子数２〜２２のアシル基、Ｒ２は水素原子または、炭素数１〜６の直鎖または分岐鎖アルキル基を、Ｒ３はアミノ酸であるバリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アラニンの側鎖または、水素原子を表し、ｎは０または１の整数を表す。）
【００２７】
コラーゲン合成促進効果を高めるという観点において、血流促進効果を持つピロリドンカルボン酸の亜鉛塩は、血管内のアスコルビン酸などの有用物質を塗布部位に集めることが期待されるため、アスコルビン酸トランスポーターの発現促進効果がより顕著にコラーゲン合成促進効果に反映される亜鉛塩である。
【００２８】
ピロリドンカルボン酸亜鉛塩（以下、ＰＣＡ亜鉛塩、ＰＣＡＺｎ塩ともいう）とは、２−ピロリドン−５−カルボン酸の亜鉛塩であって、各種水和物であってもよい。実施例において使用したピロリドンカルボン酸亜鉛塩は２水和物であり、以下の構造を有する。
【００２９】
【化２】
0005423002.tif 000003
【００３０】
ピロリドンカルボン酸亜鉛塩は、Ｄ体、Ｌ体もしくはＤＬ体（Ｄ体とＬ体の混合物）のいずれを用いてもよい。例えば、Ｌ−ＰＣＡ亜鉛塩やＤＬ−ＰＣＡ亜鉛塩を用いることができる。これらを単独あるいは混合して用いることが可能であり、ＤＬ体を用いる場合、Ｄ体とＬ体の比率は特に限定されない。
【００３１】
本発明のコラーゲン合成促進剤は、化粧料や皮膚外用剤などの組成物に配合して使用される。この際、その配合量を１μＭ〜１００ｍＭ（ＰＣＡ亜鉛塩として０．００００３５重量％〜３．５重量％）、好ましくは、１μＭ〜１０ｍＭ（ＰＣＡ亜鉛塩として０．００００３５重量％〜０．３５重量％）、更に好ましくは、１μＭ〜１ｍＭ（ＰＣＡ亜鉛塩として０．００００３５重量％〜０．０３５重量％）程度のごく少量配合することが重要である。３．５重量％以上の配合では皮膚に対して刺激感が生じる、あるいは、きしみ感などが発生する問題があり、また、培養皮膚細胞を用いた検討によれば、高濃度ではコラーゲン合成促進効果は起こらなくなり、好ましくない。
【００３２】
本発明のコラーゲン合成促進剤を化粧料や皮膚外用剤などの組成物に配合するとき、これらの成分以外に、一般に化粧料あるいは皮膚外用剤として使用される成分を本発明の効果を阻害しない範囲で添加することができる。
【００３３】
本発明の第二の態様として、ユビキノンとピロリドンカルボン酸亜鉛塩を有効成分として含有するコラーゲン合成促進剤に関する。今まで説明したように、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩を単独でコラーゲン合成促進剤として使用することができるが、ユビキノンと併用して用いると、驚くべき相乗効果を有するコラーゲン合成促進剤として使用することができる。これにより、肌のターンオーバーの促進や、抗酸化効果による、しわの改善ではなく、コラーゲン合成によるしわの改善が期待できる。
【００３４】
本発明においてユビキノンとは、２，３−ジメトキシ−５−メチル−６−ポリプレニル−１，４−ベンゾキノンの側鎖のイソプレン単位が１０のユビキノン類であり、本発明の効果を適切に発現させるためには、ユビキノンの配合量は０．０００１重量％以上にすることが好ましく、０．０１重量％以上にすることがより好ましく、０．０３重量％以上にすることがさらに好ましい。また、ユビキノンの配合量を必要以上に多くすると、結晶化したり、製品の色が黄変するおそれがあるので、１０重量％以下にすることが好ましく、１重量％以下にすることがより好ましく、０．１重量％以下にすることがさらに好ましい。ピロリドンカルボン酸亜鉛塩は、その効果を適切に発現させるためには、ユビキノンとピロリドンカルボン酸亜鉛塩の配合比率が、５０：１〜０．１：１の比率で含有されることが好ましい。
【００３５】
また、本発明の更なる態様として、本発明のコラーゲン合成促進剤と、Ｎ−アシル酸性アミノ酸エステル、アミノ酸およびアミノ酸誘導体からなる群より選択される１種また２種以上が同時に配合されてなる組成物に関する。
【００３６】
本発明の組成物に配合することができるＮ−アシル酸性アミノ酸エステルは、次の構造で表されるものであって、
【００３７】
【化３】
0005423002.tif 000004
【００３８】
（式中のＸおよびＹは双方が同じでも異なっていてもよいが、ＸおよびＹはステロールのエステル生成残基、炭素数８〜３０の直鎖もしくは分岐の液状高級アルキルアルコールもしくはアルケニルアルコール、または炭素数１２〜３８の固形状直鎖もしくは分岐の高級アルコールのエステル生成残基から選ばれる少なくとも１種である。そして、窒素原子に結合するＣＯＲは炭素数８〜２２の直鎖アシル基である。ｎは１または２である。ａ、ｂは０〜１０であり、ｂは０〜１０である。）
【００３９】
特にＮ−アシル酸性ジエステルが好ましく、その好適な具体例としては、例えば、Ｎ−ラウロイルグルタミン酸ジ（コレステリルベヘニルオクチルドデシル）、Ｎ−ラウロイルグルタミン酸ジ（コレステリルオクチルドデシル）、Ｎ−ラウロイルグルタミン酸ジ（フィトステリル２−オクチルドデシル）、Ｎ−ラウロイルグルタミン酸ジ（オクチルドデシルフィトステリルベヘニル）などが挙げられ、それらは、味の素株式会社から、それぞれ、「エルデュウＣＬ−３０１」、「エルデュウＣＬ−２０２」、「エルデュウＰＳ−２０３」、「エルデュウＰＳ−３０４」の商品名で市販されている。
【００４０】
そして、本発明において、このＮ−アシル酸性アミノ酸エステルは、保湿力や整肌性の向上に寄与し、また、安定性の向上にも寄与するが、その効果を適切に発現させるためには、その配合量は、０．０１重量％以上にすることが好ましく、０．１重量％以上にすることがより好ましく、０．５重量％以上にすることがさらに好ましく、また、Ｎ−アシル酸性アミノ酸エステルの配合量を必要以上に多くすると、べたつくおそれがあるので、２０重量％以下にすることが好ましく、１０重量％以下にすることがより好ましく、５重量％以下にすることがさらに好ましい。
【００４１】
アミノ酸またはアミノ酸誘導体は、保湿効果の向上に寄与させるために組成物中に配合されるが、そのアミノ酸としては、例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、シトルリン、システイン、シスチン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、オキシプロリン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンなどが挙げられ、それらのＬ体、Ｄ体またはＤＬ体のいずれであってもよいし、また、それらの塩であってもよい。そのような塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、トリエタノールアミン塩などが挙げられる。
【００４２】
また、アミノ酸誘導体としては、前述のアミノ酸を環化、アシル化またはエステル化したものであって、例えば、アセチルグルタミン酸、アセチルメチオニン、アセチルシステイン、Ｎ，Ｎ−ジアセチル−Ｌ−シスチンジメチルエステル、アシルグルタミン酸塩、アシルグリシン塩、アシルアラニン塩、アシルアルギニンエチルエステル塩などが挙げられる。ただし、Ｎ−アシル酸性アミノ酸エステルは含まない。
【００４３】
一般に化粧料あるいは皮膚外用剤に使用されている成分としては、抗酸化剤、抗炎症剤、紫外線吸収剤、美白剤、細胞賦活剤、保湿剤、金属キレート剤、油性原料、界面活性剤、溶剤、高分子物質、粉体物質、色素類、香料、経皮吸収促進剤及びステロイドホルモン等を挙げることができる。
【００４４】
上記亜鉛塩を含有する組成物の形態には特に制限はなく、溶液状、ペースト状、ゲル状、固体状、粉末状等任意の形態をとることができる。また、本発明の組成物は、オイル、ローション、クリーム、乳液、ゲル、シャンプー、ヘアリンス、ヘアコンディショナー、エナメル、ファンデーション、リップスティック、おしろい、パック、軟膏、錠剤、注射液、顆粒、カプセル、香水、パウダー、オーデコロン、歯磨、石鹸、エアゾル、クレンジングフォーム等の他、皮膚老化防止改善剤、皮膚炎症防止改善剤、浴用剤、養毛剤、皮膚美容液、日焼け防止剤、色素性乾皮症・日光蕁麻疹等の光線過敏症の防止改善剤、光アレルギーの防止改善剤、光免疫抑制の防止改善剤あるいは、外傷・あかぎれ・ひびわれ等による肌荒れの防止改善剤、消毒剤、抗菌剤、殺虫剤、害虫駆除剤、角質溶解剤、表皮剥離剤、ニキビの防止改善剤、角化症・乾皮症・魚鱗癬・乾癬等の各種皮膚疾患の防止改善剤等に用いることができる。
【００４５】
更にその他の常用成分を、組成物に本発明の効果を阻害しない範囲で添加することができる。本発明の組成物におけるその他の常用成分としては、防腐剤、褪色防止剤、緩衝剤、にきび用薬剤、ふけ・かゆみ防止剤、制汗防臭剤、熱傷用薬剤、抗ダニ・シラミ剤、角質軟化剤、乾皮症用薬剤、抗ウイルス剤、ホルモン類、ビタミン類、アミノ酸・ペプチド類、タンパク質類、収れん剤、清涼・刺激剤、動植物由来成分、抗生物質、抗真菌剤、育毛剤等を挙げることができる。
【実施例】
【００４６】
以下、本発明を実施例（合成例、試験例および配合例）により更に具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。尚、これらの実施例において、配合量は重量％で表した。
【００４７】
試験例１．亜鉛塩のコラーゲン合成促進効果
亜鉛塩のコラーゲン合成促進効果を確認するため、２種類の亜鉛塩と、同じくナトリウム塩を調製し、正常ヒト真皮繊維芽細胞からのコラーゲン合成促進効果を評価した。コンフルエント状態になった正常ヒト真皮繊維芽細胞を剥がし、Ｄ−ＭＥＭ（１０％ＦＢＳ含有）中、９６ウェルプレートに播種し、２４時間、飽和水蒸気下、３７℃、５％ＣＯ２にて無菌的に培養した。２４時間後、培地を取り除き、各サンプルを所定の濃度（５０μＭ。２５０μＭアスコルビン酸Ｎａ塩及び２％ＦＢＳ含有）に調製したＤ−ＭＥＭを添加した。４８時間、飽和水蒸気下、３７℃、５％ＣＯ２にて無菌的に培養した。４８時間後、その培養上澄みを採取し、その液中のヒト真皮繊維芽細胞から放出されたＩ型プロコラーゲン量をＥＬＩＳＡにて定量評価した。
結果を図１に示す。グラフから分かるように、２種類の亜鉛塩はともに、コントロールに比べ４８時間での培地中へのコラーゲン合成量が増加した。しかし、対応するナトリウム塩では、培地中のコラーゲン合成量の増加は認められなかった。
【００４８】
試験例２．ＰＣＡＺｎ塩の血流促進効果
ＰＣＡＺｎ塩とその他のＺｎ塩との違いを血流促進効果（血液量増加）から確認した。各サンプルのＺｎ塩及び、Ｎａ塩を調製し、ヒト前腕に塗布し血流促進効果を目視にて評価した。サンプルは、（１）ＰＣＡＺｎ塩、（２）ＰＣＡＮａ塩、（３）グルコン酸Ｚｎ塩、（４）グルコン酸Ｎａ塩、（５）硫酸Ｚｎ塩、（６）硫酸Ｎａ２塩を用いた。濃度は５ｗｔ％とし、ｐＨは５．５〜６．５の間に調製した。上記サンプルを８０μｌ、前腕に半閉塞パッチし、３０分後パッチを除去し、目視評価を行った。さらに、３０分後、５０分後に目視観察を行い、表１に従い評点を付した。結果を表２に示す。結果は得られた評点の平均である。
【００４９】
【表１】
0005423002.tif 000005
【００５０】
【表２】
0005423002.tif 000006
【００５１】
サンプル（１）及び（２）では一過性の血流促進効果が確認された。しかし、その他のサンプルにおいては、どの評価時間帯においても血流促進効果は認められなかった。この結果から、ＰＣＡＺｎ塩はその他のＺｎ塩に比べ、皮膚に塗布することで一時的な血流促進効果を誘導することが判明した。
これにより、血管内のアスコルビン酸などの有用物質を塗布部位に集めることで、ＰＣＡＺｎ塩はその他のＺｎ塩に比べ、よりコラーゲン産生促進効果を高めることが期待される。
【００５２】
試験例３．ピロリドンカルボン酸亜鉛塩のヒト真皮繊維芽細胞コラーゲン合成促進効果
正常ヒト真皮繊維芽細胞を６ウェルプレートにＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地、ＦＢＳ１０％含有）にて播種した。５％ＣＯ２、飽和水蒸気下、３７℃のインキュベータで２４時間培養した。２４時間後、サンプル（ＰＣＡ亜鉛塩など）を１０μＭの濃度で添加したＤＭＥＭ（ＦＢＳ１０％含有、アスコルビン酸５００μＭ含有）に、６ウェルプレートの培地を交換した。サンプルの交換は毎日行い、計５回サンプル交換（８日間）を行った。最後のサンプルを交換した後、２４時間後、培地を吸引除去しＰＢＳにてウェルをリンスした。得られたコラーゲンシートを酵素的に分解し可溶化させ、ＥＬＩＳＡにてＩ型コラーゲン量を定量評価した。
図２に示したように、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩を１０μＭ添加したＩ型コラーゲン量はコントロール（ピロリドンカルボン酸亜鉛塩無添加）に比べ、１８０％の増加を示した。
【００５３】
試験例４．ピロリドンカルボン酸亜鉛塩のアスコルビン酸トランスポーターｍＲＮＡ発現増強効果
正常ヒト真皮繊維芽細胞をシャーレにＤ−ＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地、ＦＢＳ１０％含有）にて播種した。５％ＣＯ２、飽和水蒸気下、３７℃のインキュベータで１日、培養した。シャーレにサンプル（ＰＣＡ亜鉛塩など）を１μＭ、５０μＭの濃度で添加し、インキュベータにて２４時間培養した。培養後、培地を吸引除去し、ＰＢＳでリンスした。細胞はＲＮ  ｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｕｉａｇｅｎ製）のプロトコールに従って、細胞内中のＲＮＡの抽出を行った。得られたＲＮＡから、定法に従いｃ−ＤＮＡを合成し、文献既知の方法にて（Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｐ．Ｃｏｒｐｅ  ｅｔｃ（２００５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０、５２１１−５２２０）、アスコルビン酸トランスポーター；ＳＶＣＴのＲＴ−ＰＣＲを行った（プライマー：センスプライマー；５’−ＣＴＧＡＧＣＴＣＡＴＧＧＣＧＡＴＣＴＡＣ−３’（配列番号１）、アンチセンス；５’−ＣＡＴＧＴＣＡＧＧＴＡＧＴＧＣＴＧＴＡＧＣＣＣＣＡ−３’（配列番号２））。得られたＤＮＡを電気泳動し、サンプルの有無によるＳＶＣＴのＲＮＡの発現量を評価した。電気泳動のバンドの評価は、ルミノ・イメージアナライザー（ＬＡＳ−３０００／富士フィルム製）を用い、Ｇ３ＰＤＨにて規格化した数値にて行った。
図３に示すように、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩を１μＭ、５０μＭ添加することで、無添加のコントロールに比べ１μＭで１５０％、５０μＭ添加で２００％のアスコルビン酸トランスポーターのＲＮＡ発現量の増加が確認された。これにより、ＮＨＤＦでのアスコルビン酸トランスポーターが増加し細胞内のアスコルビン酸濃度の増加、これに伴いＮＨＤＦのコラーゲン合成量が増加したと考えられる。
【００５４】
試験例５．ピロリドンカルボン酸亜鉛塩とユビキノンのヒト真皮繊維芽細胞コラーゲン合成促進効果
正常ヒト真皮繊維芽細胞を６ウェルプレートにＤ−ＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地、ＦＢＳ１０％含有）にて播種した。５％ＣＯ２、飽和水蒸気下、３７℃のインキュベータで２４時間培養した。２４時間後、サンプル（１）ＰＣＡ亜鉛塩（３０μＭ）＋ユビキノン（３０μＭ）、サンプル（２）ＰＣＡ亜鉛塩（３０μＭ）、サンプル（３）ユビキノン（３０μＭ）を添加したＤＭＥＭ（ＦＢＳ１０％含有、アスコルビン酸５００μＭ含有）に、６ウェルプレートの培地を交換した。サンプルの交換は毎日行い、計５回サンプル交換（８日間）を行った。最後のサンプルを交換した後、２４時間後、培地を吸引除去しＰＢＳにてウェルをリンスした。得られたコラーゲンシートを酵素的に分解し可溶化させ、ＥＬＩＳＡにてＩ型コラーゲン量を定量評価した。
図４に示したように、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩単独ではコントロール（サンプル無添加）に比べ約３００％のコラーゲンマトリックス生成促進効果を示し、ユビキノン単独では２５０％の促進効果を示した。さらに、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩とユビキノンを併用投与した場合、コラーゲン合成促進は約４００％まで上昇し、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩単独の場合よりも強いコラーゲン合成促進効果が確認された。
これにより従来知られていなかったユビキノンおよびピロリドンカルボン酸亜鉛塩の組み合わせにコラーゲン合成促進効果があることが示され、さらに、ユビキノンのエネルギー産生促進効果をピロリドンカルボン酸亜鉛塩がコラーゲン合成促進につなげ、両者を併用することで、コラーゲン合成促進を相乗的に増加させることに成功した。
【００５５】
試験例６．ピロリドンカルボン酸亜鉛塩配合処方による三次元培養ヒト皮膚におけるコラーゲン合成促進効果
角層、表皮層、真皮層を持ちコラーゲンマトリックスを形成している三次元培養ヒト皮膚モデルを用い、ＰＣＡ亜鉛塩（０．００１ｗｔ％）、ユビキノン、Ｎ，Ｎ’−ジアセチルシスチンジメチルエステル（ＤＡＣＤＭ）、アミノ酸数種類を配合したクリームＡ（表７および表８を参照）を角層表面に１００μｌ塗布した。さらに、比較対象としてクリームＡから上記４種類（ＰＣＡ亜鉛塩、ユビキノン、ＤＡＣＤＭ、アミノ酸群）を除いたクリームＢを、コントロールとしてはリン酸バッファー（ＰＢＳ）を同様に、それぞれ１００μｌ角層表面に塗布した。皮膚モデルの真皮層側には皮膚モデル用培地を張り、培地は毎日交換した。サンプルを塗布後、皮膚モデルは、５％ＣＯ２、飽和水蒸気下、３７℃のインキュベータにて培養した。サンプル塗布後３日目に、上層のサンプル、下層の培地を取り除き、水でリンス後、皮膚を凍結乾燥した。凍結乾燥後、真皮層のみを水に１日浸潤させた。１日後、浸潤した真皮層を上記試験例２．で行った方法を用い、コラーゲンマトリックスを酵素的に分解可溶化し、ＥＬＩＳＡにてＩ型コラーゲン量を定量評価した。
図５に示すように、ピロリドンカルボン酸亜鉛塩を含んだクリームＡを塗布した三次元培養ヒト皮膚モデルは、コントロール、及びクリームＢに比較し、真皮層のコラーゲンマトリックス中のＩ型コラーゲン量が１７０％程度増加した。
【００５６】
合成例１．ピロリドンカルボン酸亜鉛塩の合成
ＤＬ−ＰＣＡ亜鉛塩は特開平３−１６８２４０号公報記載の方法に準じ、ＤＬ−ＰＣＡと酸化亜鉛を水中１００℃で２時間反応させた後、室温下５時間攪拌を続け、析出した結晶をろ別することにより合成した。Ｌ−ＰＣＡ亜鉛塩は以下の方法で合成した。オートクレーブ中にて、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム１水和物（６１．１ｇ）の水溶液を１８０℃で２時間加熱し、５０ｗｔ％のピロリドンカルボン酸ナトリウム塩溶液を得た。５０ｗｔ％のピロリドンカルボン酸ナトリウム塩溶液１００．０ｇ（０．３３ｍｏｌ、ｐＨ７．７、光学純度８４％、Ｌ／Ｄ比率＝９２／８）に、硝酸（純度  ６０ｗｔ％）２．７ｇを添加し、ｐＨ５．２に調整した。硫酸亜鉛７水和物４７．６ｇ（０．１７ｍｏｌ）を水３４．２ｇに溶解した水溶液を、ピロリドンカルボン酸ナトリウム塩溶液（ｐＨ４．１）に添加した。この溶液を３０分間室温（ｐＨ３．７）で結晶を得るまで混和し、ろ過した。得られた結晶は水（２１．９ｇ）で洗浄し、３２．０ｇ（０．０９ｍｏｌ、収率５５％）のピロリドンカルボン酸亜鉛二水和物を得た。光学純度は９９．８％（Ｌ／Ｄ比率９９．９／０．１）であった。
【００５７】
配合例１〜４０
以下に、種々の製剤の配合例を次に示す。これらの製剤は常法に従い調製した。尚、配合量は重量％で表した。
【００５８】
以下に、軟膏の配合例を示す。
【００５９】
【表３】
0005423002.tif 000007
【００６０】
以下に、化粧水の配合例を示す。
【００６１】
【表４】
0005423002.tif 000008
【００６２】
【表５】
0005423002.tif 000009
【００６３】
以下に、ローションの配合例を示す。
【００６４】
【表６】
0005423002.tif 000010
【００６５】
以下に、クリームの配合例を示す。
【００６６】
【表７】
0005423002.tif 000011
【００６７】
【表８】
0005423002.tif 000012
【００６８】
以下に、乳液の配合例を示す。
【００６９】
【表９】
0005423002.tif 000013
【００７０】
以下に、美容液の配合例を示す。
【００７１】
【表１０】
0005423002.tif 000014
【００７２】
以下に、パックの配合例を示す。
【００７３】
【表１１】
0005423002.tif 000015
【００７４】
以下に、ファンデーションの配合例を示す。
【００７５】
【表１２】
0005423002.tif 000016
【００７６】
以下に、液体ハンドソープの配合例を示す。
【００７７】
【表１３】
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【００７８】
以下に、シャンプーの配合例を示す。
【００７９】
【表１４】
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【００８０】
以下に、毛髪用化粧水の配合例を示す。
【００８１】
【表１５】
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【産業上の利用可能性】
【００８２】
本発明は、化粧品の分野において効果の高いコラーゲン合成促進剤として利用可能である。従来知られていた、レチノイド、レチノール、レチノイン酸と同等以上のコラーゲン合成促進効果があり、催奇性、副作用もなく、より安全なコラーゲン合成促進剤である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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