(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
0005495206.tif 000011
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して水素、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル｛この（Ｃ１−Ｃ６）アルキルは、場合によってヒドロキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシによって置換される｝、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ及び（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルコキシを表す］、若しくはその立体異性体、又はそれらの混合物の、
糖尿病性血管疾患及び多発性硬化症から選択される、変性性組織障害を特徴とする疾患を予防及び／又は治療するための薬剤を調製するための使用。
【請求項２】
変性性組織障害を特徴とする前記疾患が、糖尿病性血管疾患である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項３】
糖尿病性血管疾患が、糖尿病性網膜症である、請求項１又は２に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項４】
変性性組織障害を特徴とする前記疾患が、多発性硬化症である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の、化合物若しくはその立体異性体又はそれらの混合物の使用であって、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、それぞれ独立して水素、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル｛この（Ｃ１−Ｃ４）アルキルは、場合によってヒドロキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシによって置換される｝、（Ｃ１−Ｃ４）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ及び（Ｃ１−Ｃ４）ハロアルコキシを表すものである、前記使用。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の、化合物若しくはその立体異性体又はそれらの混合物の使用であって、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、それぞれ独立して水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル｛この（Ｃ１−Ｃ４）アルキルは、場合によってヒドロキシ又は（Ｃ１−Ｃ２）アルコキシによって置換される｝、ＣＦ３、ＣＣｌ３、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、ＯＣＦ３、ＯＣＨＦ２及びＯＣＨ２Ｆを表すものである、前記使用。
【請求項７】
式（Ｉ）の化合物が、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（３−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（２−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（２−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−ブロモフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−メチルフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（５−クロロ−２−メトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン及び１−（３−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオンから成る群から選択される、
請求項１〜６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項８】
式（Ｉ）の化合物が、１−（３−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオンである、請求項７に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項９】
請求項８に記載の前記化合物の、糖尿病性網膜症を予防及び／又は治療するための薬剤を調製するための使用。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項において定義されている化合物を有効成分として含む、糖尿病性血管疾患及び多発性硬化症から選択される、変性性組織障害を特徴とする疾患を予防及び／又は治療するための医薬組成物。
【請求項１１】
糖尿病性血管疾患が、糖尿病性網膜症である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、変性性組織障害を特徴とする、ミトコンドリア膜透過性遷移孔（Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｐｏｒｅ：ＰＴＰ）の開口により引き起こされる疾患を予防及び／又は治療するための薬剤を調製するための、細胞におけるＭＰＴＰの開口を阻害する化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
生物学的背景
ミトコンドリア膜透過性遷移（ＭＰＴ）は、約１５００Ｄａ未満の分子質量の溶質に対するミトコンドリア内膜の透過性の急激な上昇と、その結果生じるミトコンドリアの膨張及びシトクロムＣの放出である。ＭＰＴを惹起する鍵となるミトコンドリアのメカニズムは、依然として全分子成分が完全に同定されていない高コンダクタンスの内膜チャネルである透過性遷移孔（ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｐｏｒｅ：ＰＴＰ）の開口である（Forte, M.; Bernardi, P. Genetic dissection of the permeability transition pore. J. Bioenerg. Biomembr., 2005, 37, 121-8）。
【０００３】
ＰＴＰの開口状態は、プロトンの電気化学的勾配を消失させてＣａ２＋の放出及びＡＴＰ加水分解を引き起こす及び浸透圧による膨張の潜在的原因である。これは、次に内膜のアンフォールディング（ｕｎｆｏｌｄｉｎｇ）及び外膜の破裂、それに続くプロアポトーシス膜間タンパク質の細胞質ゾル内への放出を引き起こし得る。ＰＴＰの開閉状態は、様々な部位にて作用する複数のエフェクタによって調節され、これらの部位の多くは、細胞死の各種モデルにおいて含意された条件及びメディエータの影響を受ける（Bernardi, P. Mitochondrial transport of cations: Channels, exchangers and permeability transition. Physiol. Rev., 1999, 79, 1127-1155）。そのため、ＰＴＰ開口は、細胞死を促進する１つのミトコンドリア介在性メカニズムである。
【０００４】
プラグラム細胞死（アポトーシス）は、多細胞生物に不可欠な過程であり、アポトーシスの生理学的速度が、正常な発達及び組織の再生を制御する。しかしながら、アポトーシスの速度上昇が、過剰な細胞損失及び組織変性を特徴とする多くの病態に見られる。多数の細胞ストレスが、ミトコンドリアに機能的及び構造的変化を引き起こし、これらの変化が、細胞死を通して、組織のホメオスタシス及び機能性に影響を及ぼす（Green, D.R.; Kroemer, G. The pathophysiology of mitochondrial cell death, Science, 2004, 305, 626-629）。幹細胞区画におけるアポトーシス速度の上昇は、組織の再生に影響し、加齢を加速させる一方で、機能性細胞質量の減少は、組織の性能を直接的に損なう（Pelicci, P.G. Do tumor-suppressive mechanisms contribute to organism aging by inducing stem cell senescence? J. Clin. Invest., 2004, 113, 4-7）。
【０００５】
ミトコンドリアは、アポトーシスの誘発において中心的な役割を果たす。アポトーシスの最中において最も重要なミトコンドリアの事象は、この細胞小器官の構造的及び機能的な再構築と、それに続くミトコンドリアの膜間腔から細胞質ゾル内へのアポトーシスを誘導するタンパク質（ａｐｏｐｔｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ）の放出である。これらのタンパク質は、シトクロムＣ、Ｓｍａｃ／ＤＩＡＢＬＯ、ＡＩＦ、Ｏｍｉ／ＨｔｒＡ２を含む。更に、ＰＴＰの開口が、アポトーシスへの関与における初期の事象であり得ることを示唆する有力な証拠が存在する。
【０００６】
多くの疾患の病因論において、ミトコンドリアがアポトーシスにおいて果たす役割は十分に確立されており、心筋梗塞、腎虚血、１型及び２型糖尿病又は神経変性障害の最中に観察される病理的ストレス状態に典型的なアポトーシス率の上昇は、ミトコンドリア膜透過性遷移及びミトコンドリアの完全性の喪失と常に相関関係にある。これらの疾患状態の多くは、ＭＰＴ及びアポトーシスの誘発因子として知られる活性酸素種（ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ：ＲＯＳ）の著しい増加によって特徴付けられる。
【０００７】
ＭＰＴＰの開口によって起こる最も重要な疾患の幾つかが、以下に挙げられる。
【０００８】
心筋梗塞
虚血性心疾患において、連続的な虚血・再潅流事象が起こると、壊死及び／又はアポトーシスによる心筋の細胞死がもたらされる及び心筋梗塞においてＰＴＰ及びミトコンドリアの膨張が果たす役割は、既に実証されている（Solaini, G.; Harris, D.A. Biochemical dysfunction in heart mitochondria exposed to ischemia and reperfusion. Biochem. J., 2005, 390, 377-394）。Ｃａ２＋調節の崩れ及び低酸素・高酸素間での遷移の結果としてのＲＯＳの産生による心筋細胞におけるミトコンドリア完全性の崩壊が、心筋梗塞の最中のアポトーシスの主な原因である(Di Lisa, F.; Bernardi, P. Mitochondria and ischemia-reperfusion injury of the heart: Fixing a hole. Cardiovasc. Res., 2006, 70, 2, 191-199）。更に、ＰＴＰの既知の阻害物質であるシクロスポリンＡ（ＣｓＡ）は、実験的低酸素状態及び再潅流の後のヒト心房組織において基礎心筋収縮機能の回復を改善すると判明している。
【０００９】
神経疾患及び脳卒中
ＰＴＰ及びミトコンドリアの膨張は、変性疾患に続く神経細胞死、脳損傷が起き易い条件（高血糖症、低血糖症、脳卒中、虚血、外傷）の多く及び実験的癲癇にも関連している（Pordan, J.; Cena, V.; Prehn, J.H. Mitochondrial control of neuron death and its role in neurodegenerative disorders. J. Physiol. Biochem., 2003, 59, 129-141; Li, P.A.; Uchino, H.; Elmer, E.; Siesjo, B.K. Amelioration by cyclosporin A of brain damage following 5 or 10 min of ischemia in rats subjected to preischemic hyperglycaemia, Brain Res., 1997, 753, 133-140; Folbergrova, J.; Li, P.A.; Uchino, H.; Smith, M.L.; Siesjo, B.K. Changes in the bioenergetic state of rat hippocampus during 2.5 min of ischemia, and prevention of cell damage by cyclosporin A in hyperglycaemic subjects. Exp. Brain Res., 1997, 114, 44-50; Friberg, H.; Ferrand-Drake, M.; Bengtsson, F.; Halestrap, A.P.; Wieloch, T. Cyclosporin A, but not FK 506, protects mitochondria and neurons against hypoglycaemic damage and implicates the mitochondrial peameability transition in cell death. J. Neurosci., 1998, 18, 5151-5159; Sims, N.R. and Anderson M.F. Mitochondrial contributions to tissue damage in stroke. Neurochem Int., 2002, 40, 511-26; Stavrovskaya I.G.; Narayanan M.V.; Zhang W.; Krasnikov B.F.; Heemskerk J.; Young S.S.; Blass J.P.; Brown A.M.; Beal M.F.; Friedlander R.M.; Kristal B.S. Clinically approved heterocyclics act on a mitochondrial target and reduce stroke-induced pathology. J Exp Med., 2004, 200, 211-22;  Matsumoto, S.; Friberg, H.; Ferrand-Drake, M.; Wieloch, T. Blockade of the mitochondrial permeability transition pore diminishes infarct size in the rat after transient middle cerebral artery occlusion. J. Cereb. Blood Flow Metab., 1999, 19, 736-741 Scheff, S.W.; Sullivan P. G. Cyclosporin A significantly ameliorates cortical damage following experimental traumatic brain injury in rodents. J. Neurotrauma, 1999, 16, 783-792; Kudin, A. P.; Debska-Vielhaber, G.; Vielhaber, S.; Elger, CE.; Kunz, W. S. The mechanism of neuroprotection by topiramate in an animal model of epilepsy. Epilepsia, 2004, 45, 1478-1487）。アルツハイマー病に関与するβ−アミロイドタンパク質は、神経細胞死に繋がる酸化ストレス及びミトコンドリアの損傷を誘発し、このことは、ミトコンドリアの機能不全が疾患の進行に関連していることを示している（Abramov, A. Y.; Canevari, L.; Duchen, M. R. Beta-amyloid peptides induce mitochondrial dysfunction and oxidative stress in astrocytes and death of neurons through activation of NADPH oxidase. J. Neurosci., 2004, 24, 565-575）。加えて、パーキンソン病においてドーパミン作動性細胞で起こる大規模なアポトーシスは、ＭＴＰと因果関係がある（Fiskum, G.; Starkov A.; Polster, B. M.; Chinopoulos, C. Mitochondrial mechanisms of neural cell death and neuroprotective interventions in Parkinson's disease. Ann. N. Y. Acad. Sci. 2003, 991, 111-119）。更に、ＭＰＴに繋がるミトコンドリアの機能不全は、ハンチントン病及び筋萎縮性側索硬化症における特徴である（Tang, T. S.; Slow, E.; Lupu, V.; Stavrovskaya, I. G.; Sugimori, M.; Llinas, R.; Kristal, B.S.; Hayden, M.R.; Bezprozvanny, I. Disturbed Ca2+ signaling and apoptosis of medium spiny neurons in Huntington's disease. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2005, 102, 2602-2607; Kirkinezos, I. G.; Hernandez, D.; Bradley, W. G.; Moraes, CT. An ALS mouse model with a permeable blood-brain barrier benefits from systemic cyclosporine A treatment. J. Neurochem., 2004, 88, 821-826）。
【００１０】
糖尿病
１型及び２型糖尿病を含む糖尿病は、幾つかのメカニズムによって損傷及び細胞死を誘発する。何よりも、高血糖それ自体が、多様な組織並びに腎臓、内皮及び網膜細胞培養物内において、細胞を直接的に殺すことができる（Allen, D.A.; Yaqoob, M.M.; Harwood, S.M. Mechanisms of high glucose-induced apoptosis and its relationship to diabetic complications. J. Nutri. Biochem., 2005, 16, 705-713）。糖尿病性網膜症（Ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ：ＤＲ）は、糖尿病性血管障害の罹患率を大きく引き上げる末梢微小血管合併症の１つである。網膜血管新生に繋がるこの進行性の病気は、若年の患者の失明で最も一般的な原因であり、先進国において臨床的に極めて重要である。
【００１１】
ＤＲは、毛細血管周皮細胞の損失、進行性の毛細管の閉鎖、毛細管瘤及び網膜浮腫を特徴とする初期の前増殖期（非増殖性網膜症（ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ  ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ））から始まる。これに続く、血管の閉塞による網膜虚血（又は低酸素症）が、異常な網膜血管の増殖の引き金となる。新生血管は網膜の内表面に沿って及び／又は硝子体腔内へと伸び、網膜剥離及び網膜出血につながり得る。この段階は、増殖性糖尿病性網膜症（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ：ＰＤＲ）として知られている。高血糖性ストレスは、ＰＤＲにおける重要な因子と見なされているが、これは高血糖性ストレスが、血管新生に繋がる網膜細胞による血管内皮増殖因子（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ  ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ：ＶＥＧＦ）の産生の上昇を誘発し、ミトコンドリアに影響を与える細胞の酸化障害を引き起こす。このことから、酸化ストレス等のメカニズムが、発病の連鎖における主な役割を果たしていると思われる。糖尿病で多量に生成されるＲＯＳは、ＰＤＲに関係する、病理学的な細胞内経路の殆どを始動でき得る及びＲＯＳは、糖尿病誘発性虚血に続く再潅流において網膜にて産生されることが実証されている。加えて、ＲＯＳは、微小血管周皮細胞の損失、つまり非増殖性糖尿病性網膜症の初期変化の１つに関与している。最近の報告は、過酸化水素又は紫外線（ＵＶ）（共にＲＯＳの供給源である）に曝露されると、網膜周皮細胞がアポトーシスにより死ぬことを実証した。最後に、酸化ストレスも、未熟児網膜症（ＲＯＰ）の発生及び進行と相関関係があった。未熟な網膜は、比較的低レベルの抗酸化物質（ヘム・オキシゲナーゼ１及びカタラーゼ等）を含有している。高濃度の酸素が送り込まれると、ＲＯＳが生成され、とりわけ、虚血、ひいてはＲＯＰの発症と同時に生物活性イソプロスタンの産生を促進する。
【００１２】
先天性ジストロフィ
組織の機能不全及び不安定さに関連した遺伝性障害は、しばしばアポトーシスの速度の上昇を特徴とする。実際に、ＭＰＴが、幾つかの遺伝性ミオパチーにおける筋細胞の喪失に原因として関与していることが判明している。特に、ＣｓＡ治療でＰＴＰを阻害することにより、筋線維の変性が軽減され、マウスにおけるコラーゲンＶＩ型ミオパチーが治癒することが示されている（Irwin, W.A.; Bergamin, N.; Sabatelli, P.; Reggiani, C; Megighian, A.; Merlini, L.; Braghetta, P.; Columbaro, M.; Volpin, D.; Bressan, G.M.; Bernardi, P.; Bonaldo, P. Mitochondrial dysfunction and apoptosis in myopathic mice with collagen VI deficiency. Nat. Genet., 2003, 35, 367-371）。
【００１３】
肝炎
肝臓は、化学的な毒物、起炎因子又はウィルス等の異なる作因によって損傷され得る。いかなる場合でも、肝細胞は、ＭＰＴによって引き起こされる大規模なアポトーシスを経る（Haouzi, D.; Cohen, I.; Vieira, H. L.; Poncet, D.; Boya, P.; Castedo, M.; Vadrot, N.; Belzacq, A.S.; Fau, D.; Brenner, C; Feldmann, G.; Kroemer, G. Mitochondrial permeability transition as a novel principle of hepatorenal toxicity in vivo. Apoptosis., 2002, 7, 395-405; Shirakata, Y.; Koike, K. Hepatitis B virus X protein induces cell death by causing loss of mitochondrial membrane potential. J. Biol. Chem., 2003, 278, 22071-22078）。更に、マウスをＣｓＡで治療してＰＴＰの開口を阻害することにより、ＴＮＦ−α−依存性急性肝炎のラットモデルにおいて肝臓の損傷が大きく軽減されることが報告されている（Soriano, M.E.; Nicolosi, L.; Bernardi P. Desensitization of the permeability transition pore by cyclosporine A prevents activation of the mitochondrial apoptotic pathway and liver damage by tumour necrosis factor-alpha. J. Biol. Chem., 2004, 279, 36803-36808）。更に、ＰＴＰの阻害物質としてのチアゾール誘導体は、肝硬変を予防又は治療するための薬剤として有用であることが報告されている（Auget, M. et al., WO03009843）。
【００１４】
つまり、ミトコンドリア膜透過性遷移は、変性性組織障害を特徴とする、多種多様な疾患状態におけるアポトーシスのメカニズムに関わっていることが判明している。従って、ＭＰＴを薬理学的に阻害することが、心筋梗塞、（例えば、外傷及び自己免疫反応による）神経疾患及び脳卒中、糖尿病性網膜症等の糖尿病及び糖尿病性合併症、先天性ジストロフィ並びに肝炎を含む広い範囲の疾患の予防及び治療にとって重要なアプローチとなる（Kroemer, G. The mitochondrial permeability transition pore complex as a pharmacological target. Curr. Med. Chem., 2003, 10, 1469-1472; Mattson, M.P.; Kroemer, G. Mitochondria in cell death: novel targets for neuroprotection and cardioprotection. Trends Mol. Med., 2003, 9, 196-205）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】国際公開第３００９８４３号パンフレット
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Forte, M.; Bernardi, P. Genetic dissection of the permeability transition pore. J. Bioenerg. Biomembr., 2005, 37, 121-8
【非特許文献２】Bernardi, P. Mitochondrial transport of cations: Channels, exchangers and permeability transition. Physiol. Rev., 1999, 79, 1127-1155
【非特許文献３】Green, D.R.; Kroemer, G. The pathophysiology of mitochondrial cell death, Science, 2004, 305, 626-629
【非特許文献４】Pelicci, P.G. Do tumor-suppressive mechanisms contribute to organism aging by inducing stem cell senescence? J. Clin. Invest., 2004, 113, 4-7
【非特許文献５】Solaini, G.; Harris, D.A. Biochemical dysfunction in heart mitochondria exposed to ischemia and reperfusion. Biochem. J., 2005, 390, 377-394
【非特許文献６】Di Lisa, F.; Bernardi, P. Mitochondria and ischemia-reperfusion injury of the heart: Fixing a hole. Cardiovasc. Res., 2006, 70, 2, 191-199
【非特許文献７】Pordan, J.; Cena, V.; Prehn, J.H. Mitochondrial control of neuron death and its role in neurodegenerative disorders. J. Physiol. Biochem., 2003, 59, 129-141
【非特許文献８】Li, P.A.; Uchino, H.; Elmer, E.; Siesjo, B.K. Amelioration by cyclosporin A of brain damage following 5 or 10 min of ischemia in rats subjected to preischemic hyperglycaemia, Brain Res., 1997, 753, 133-140
【非特許文献９】Folbergrova, J.; Li, P.A.; Uchino, H.; Smith, M.L.; Siesjo, B.K. Changes in the bioenergetic state of rat hippocampus during 2.5 min of ischemia, and prevention of cell damage by cyclosporin A in hyperglycaemic subjects. Exp. Brain Res., 1997, 114, 44-50
【非特許文献１０】Friberg, H.; Ferrand-Drake, M.; Bengtsson, F.; Halestrap, A.P.; Wieloch, T. Cyclosporin A, but not FK 506, protects mitochondria and neurons against hypoglycaemic damage and implicates the mitochondrial peameability transition in cell death. J. Neurosci., 1998, 18, 5151-5159
【非特許文献１１】Sims, N.R. and Anderson M.F. Mitochondrial contributions to tissue damage in stroke. Neurochem Int., 2002, 40, 511-26
【非特許文献１２】Stavrovskaya I.G.; Narayanan M.V.; Zhang W.; Krasnikov B.F.; Heemskerk J.; Young S.S.; Blass J.P.; Brown A.M.; Beal M.F.; Friedlander R.M.; Kristal B.S. Clinically approved heterocyclics act on a mitochondrial target and reduce stroke-induced pathology. J Exp Med., 2004, 200, 211-22
【非特許文献１３】Matsumoto, S.; Friberg, H.; Ferrand-Drake, M.; Wieloch, T. Blockade of the mitochondrial permeability transition pore diminishes infarct size in the rat after transient middle cerebral artery occlusion. J. Cereb. Blood Flow Metab., 1999, 19, 736-741
【非特許文献１４】Scheff, S.W.; Sullivan P. G. Cyclosporin A significantly ameliorates cortical damage following experimental traumatic brain injury in rodents. J. Neurotrauma, 1999, 16, 783-792
【非特許文献１５】Kudin, A. P.; Debska-Vielhaber, G.; Vielhaber, S.; Elger, CE.; Kunz, W. S. The mechanism of neuroprotection by topiramate in an animal model of epilepsy. Epilepsia, 2004, 45, 1478-1487
【非特許文献１６】Abramov, A. Y.; Canevari, L.; Duchen, M. R. Beta-amyloid peptides induce mitochondrial dysfunction and oxidative stress in astrocytes and death of neurons through activation of NADPH oxidase. J. Neurosci., 2004, 24, 565-575
【非特許文献１７】Fiskum, G.; Starkov A.; Polster, B. M.; Chinopoulos, C. Mitochondrial mechanisms of neural cell death and neuroprotective interventions in Parkinson's disease. Ann. N. Y. Acad. Sci. 2003, 991, 111-119
【非特許文献１８】Tang, T. S.; Slow, E.; Lupu, V.; Stavrovskaya, I. G.; Sugimori, M.; Llinas, R.; Kristal, B.S.; Hayden, M.R.; Bezprozvanny, I. Disturbed Ca2+ signaling and apoptosis of medium spiny neurons in Huntington's disease. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2005, 102, 2602-2607
【非特許文献１９】Kirkinezos, I. G.; Hernandez, D.; Bradley, W. G.; Moraes, CT. An ALS mouse model with a permeable blood-brain barrier benefits from systemic cyclosporine A treatment. J. Neurochem., 2004, 88, 821-826
【非特許文献２０】Allen, D.A.; Yaqoob, M.M.; Harwood, S.M. Mechanisms of high glucose-induced apoptosis and its relationship to diabetic complications. J. Nutri. Biochem., 2005, 16, 705-713
【非特許文献２１】Irwin, W.A.; Bergamin, N.; Sabatelli, P.; Reggiani, C; Megighian, A.; Merlini, L.; Braghetta, P.; Columbaro, M.; Volpin, D.; Bressan, G.M.; Bernardi, P.; Bonaldo, P. Mitochondrial dysfunction and apoptosis in myopathic mice with collagen VI deficiency. Nat. Genet., 2003, 35, 367-371
【非特許文献２２】Haouzi, D.; Cohen, I.; Vieira, H. L.; Poncet, D.; Boya, P.; Castedo, M.; Vadrot, N.; Belzacq, A.S.; Fau, D.; Brenner, C; Feldmann, G.; Kroemer, G. Mitochondrial permeability transition as a novel principle of hepatorenal toxicity in vivo. Apoptosis., 2002, 7, 395-405
【非特許文献２３】Shirakata, Y.; Koike, K. Hepatitis B virus X protein induces cell death by causing loss of mitochondrial membrane potential. J. Biol. Chem., 2003, 278, 22071-22078
【非特許文献２４】Soriano, M.E.; Nicolosi, L.; Bernardi P. Desensitization of the permeability transition pore by cyclosporine A prevents activation of the mitochondrial apoptotic pathway and liver damage by tumour necrosis factor-alpha. J. Biol. Chem., 2004, 279, 36803-36808
【非特許文献２５】Kroemer, G. The mitochondrial permeability transition pore complex as a pharmacological target. Curr. Med. Chem., 2003, 10, 1469-1472
【非特許文献２６】Mattson, M.P.; Kroemer, G. Mitochondria in cell death: novel targets for neuroprotection and cardioprotection. Trends Mol. Med., 2003, 9, 196-205
【発明の概要】
【００１７】
発明の要旨のまとめ
本発明の主な目的は、式（I）
【００１８】
【化１】
0005495206.tif 000002
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して水素、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル（この（Ｃ１−Ｃ６）アルキルは、場合によってヒドロキシ若しくは（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシによって置換される。）、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ又は（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルコキシを示す。）の化合物を、変性性組織障害を特徴とする、ＭＰＴＰの開口から起こる疾患を予防及び／又は治療するための薬剤の調製に使用することに関する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１は、化合物１−（３−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオンについてのＲＯＰアッセイの結果を示す。
【図２】図２は、化合物１−（３−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオンについてのＥＡＥアッセイの結果を示す。
【００２０】
化学的背景
上記の式（Ｉ）の範囲に含まれる幾つかの化合物は、科学及び／又は特許文献に記載されている。これまでに開示された化合物の限定的な一覧が、以下に報告される。
【００２１】
Ｍ．Ａｕｇｕｓｔｉｎら（Zeitschrift fur Chemie, 1975, 15(3), 102）は、アリール無水マレイン酸と一置換アニリンとの反応について記載している。具体的には、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−クロロフェニル）−３−（４−ブロモフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（２−メトキシフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、３−（４−ブロモフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−メトキシフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１，３−ビス−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−メチルフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン及び１−（４−メチルフェニル）−３−（４−ブロモフェニル）−ピロール−２，５−ジオンが記載されている。
【００２２】
Ａ．Ｐ．Ｍｏｌｃｈａｎｏｖら（Russian Journal of Organic Chemistry（Zhurnal Organicheskoi Khimiiの翻訳文）, 2002, 36(8), 1139）は、ジアゾ酢酸エステルとマレイミドとの反応について記載している。具体的には、以下の化合物：１−（４−メチルフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン及び１−（４−メトキシフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオンが挙げられれる。
【００２３】
Ｇ．Ｋ．Ａｌｍｓｔｒｏｍ（Journal of the Chemical Society, Abstracts, 1916, 110(I), 568）は、１，３−ジフェニル−ピロール−２，５−ジオン及び１−（４−ブロモフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオンの合成について記載している。
【００２４】
Ｏ．Ｋｗｏｎら（J. Am. Chem. Soc., 2002, 124, 13402）は、２９４００種から成るライブラリの合成における１−（３−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオンの使用について記載している。
【００２５】
Ｋ．Ｆ．Ｈｅｂｅｎｂｒｏｃｋ（Liebigs Ann. Chem, 1978, 2, 320）は、１−アリール−３−ヒドロキシ−３−メチル−ピロリジン−２，５−ジオン誘導体の調製及び反応性の研究のための試薬としての１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオンを開示している。
【００２６】
Ａ．Ｐ．Ｍｏｌｃｈａｎｏｖら（Russian Journal of Organic Chemistry（Zhurnal Organicheskoi Khimiiの翻訳文）, 2002, 38(2), 259）は、ジフェニルジアゾメタンと、マレイン酸及びイタコン酸の置換イミドとの反応について記載している。具体的には、１−（２−クロロフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオンが挙げられている。
【００２７】
Ｓ．Ｕｍｉｏら（JP43029950）は、殺菌剤として有用なフェニルマレイミドの合成を開示している。具体的には、１−フェニル−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン及び１−フェニル−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオンの合成が記載されている。
【００２８】
Ｍ．Ａｒｔｉｃｏら（Farmaco, 1971, 26, 411）は、抗菌性を有するマレイミドの合成について記載している。具体的には、１−（４−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオンの合成が記載されている。
【００２９】
Ｈ．Ｙｕｋｉら（Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 1967, 15(8), 1101）は、抗ウィルス特性を有する化合物の合成について記載している。具体的には、１−（４−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１，３−ビス−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−エトキシフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−エトキシフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−エトキシフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−フェニル−３−（３，４−ジクロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−フェニル−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−メチルフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−クロロフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１，３−ビス−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン及び１−（４−クロロフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオンの合成が開示されている。
【００３０】
Ａ．Ｆｕｊｉｎａｍｉら（US3743654）は、殺菌剤としてのマレイミド誘導体の合成について記載している。具体的には、１−（３，５−ジクロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３，５−ジクロロフェニル）−３−（２−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン及び１−（３，５−ジブロモ−フェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオンの合成が記載されている。
【００３１】
更に別の化合物が、ケミカル・アブストラクト・データベースにおいて開示されている。このような誘導体は、例えば、１−（２−クロロフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−２−メチルフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−ブロモフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−ブロモフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−ヨードフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（２−メチルフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（２，３−ジメチル−フェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−メチルフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン及び１−（３−メトキシフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオンである。
【００３２】
更に別の化合物が市販されている。このような誘導体は、例えば、１−（４−トリフルオロメトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（５−クロロ−２−メトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン及び１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオンである。
【００３３】
上記にて引用された従来技術により既知の、式（Ｉ）の化合物の幾つかは、薬理活性を有していると報告されている。
【００３４】
例えば、以下の活性が報告されている：抗菌薬としての１−（４−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、抗ウィルス剤としての１−（４−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン及び１，３−ビス−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、殺菌剤としての１−（３，５−ジクロロフェニル）−３−（２−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３，５−ジブロモフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン及び１−（３，５−ジクロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン。
【００３５】
発明者の知識の及ぶ限り、上記にて引用された従来技術において開示された、式（Ｉ）の化合物の幾つかについて、第三者によって薬理活性は触れられていない。
【００３６】
前述の化合物の例は、以下の：１−（５−クロロ−２−メトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−トリフルオロメトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−メチルフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１，３−ジフェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン及び１−（３−クロロフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオンである。
【００３７】
上記の式（Ｉ）の化合物の更に別の群は、新規であると見なされる。
【００３８】
これらの化合物の例は、以下の：１−（３−メトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−ヨードフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−ブロモフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（２−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−ヒドロキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−フルオロ−３−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（２，３−ジメチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−メトキシ−２−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（３−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（３−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−ブロモフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（３−ブロモフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（２−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（２−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（２−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１，３−ビス−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−フルオロフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（２−メトキシフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（２−フルオロフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３，４−ジフルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３，４−ジフルオロフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−フルオロ−２−メトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−フルオロ−２−メトキシフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−ヒドロキシ−フェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３，４−ジフルオロフェニル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（２−メトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン及び１−（３−クロロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオンである。
【００３９】
発明の要旨
上記を踏まえ、本発明の第１の目的は、式（Ｉ）
【００４０】
【化２】
0005495206.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して水素、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル（この（Ｃ１−Ｃ６）アルキルは、場合によってヒドロキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシによって置換される。）、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ及び（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルコキシを示す。）の化合物を、特に糖尿病、糖尿病性合併症、神経疾患、脳卒中、心筋梗塞、先天性ジストロフィ及び肝炎から選択される、変性性組織障害を特徴とする、ＭＰＴＰの開口から起こる疾患を予防及び／又は治療するための薬剤の調製に使用することに関する。
【００４１】
より詳細には、上記のＭＰＴＰ疾患は、好ましくは１型及び２型糖尿病、糖尿病性合併症、神経疾患及び脳卒中を含み、より好ましくは、前述のＭＰＴＰ疾患は、糖尿病性網膜症等の糖尿病性血管疾患及び多発性硬化症等の神経変性障害を含む。
【００４２】
本発明の更なる目的は、糖尿病、糖尿病性合併症、神経疾患、脳卒中、心筋梗塞、先天性ジストロフィ及び肝炎から選択される、変性性組織障害を特徴とする、ＭＰＴＰの開口から起こる疾患を、このような疾患を患っている哺乳動物に、上記で定義されたような式（Ｉ）の化合物を有効量にて投与することにより予防及び／又は治療するための方法を提供することである。
【００４３】
本発明のある態様により、上記にて定義されたような変性性組織障害を特徴とする、ＭＰＴＰの開口から起こる疾患を予防及び／又は治療するための薬剤を調製するための好ましい式（Ｉ）の化合物の群は、式（Ｉ）（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して水素、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル（この（Ｃ１−Ｃ４）アルキルは、場合によってヒドロキシ又は（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシによって置換される。）、（Ｃ１−Ｃ４）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ及び（Ｃ１−Ｃ４）ハロアルコキシを示す。）の化合物によって代表される。
【００４４】
本発明の別の態様により、上記にて定義されたような変性性組織障害を特徴とする、ＭＰＴＰの開口から起こる疾患を予防及び／又は治療するための薬剤を製造するためのより一層好ましい式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル（この（Ｃ１−Ｃ４）アルキルは、場合によってヒドロキシ又は（Ｃ１−Ｃ２）アルコキシによって置換される。）、ＣＦ３、ＣＣｌ３、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、ＯＣＦ３、ＯＣＨＦ２及びＯＣＨ２Ｆを示す。）の化合物によって代表される。
【００４５】
本願において、用語「ハロ」又は「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを含むことが意図されている。
【００４６】
本願において、用語「（Ｃ１−Ｃ６）アルキル」、「（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル」、「（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ」、「（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルコキシ」、「（Ｃ１−Ｃ４）アルキル」、「（Ｃ１−Ｃ４）ハロアルキル」、「（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ」及び「（Ｃ１−Ｃ４）ハロアルコキシ」は、分岐鎖及び直鎖の両方のアルキル鎖を含むことが意図されている。
【００４７】
上記ラジカルの分岐アルキル部分は、１つ以上の不斉炭素原子を含有し得、エナンチオマー及び／又はジアステレオ異性体が生じ得る。「立体異性体」という用語は、本願において、空間における炭素原子の構成だけが異なる、個々の分子の異性体全てを意図している。この用語は、エナンチオマー及びジアステレオ異性体を含む。
【００４８】
本発明は、式（Ｉ）の化合物の考えられ得る全ての立体異性体（単一の異性体及びラセミ体を含むこれらの混合物の両方として）を含む。これらの化合物の結晶形の幾つかは、多形体として存在し得、これらも本発明に含まれる。これらの化合物の幾つかは、水によって溶媒和されているため、これらも又、本発明の範囲内に含まれることが意図されている。
【００４９】
上述したように、発明者の知識が及ぶ限り、一般式（Ｉ）の範囲内に含まれる既知の化合物の幾つかについては薬理活性も医療利用も過去に開示されていないため、本発明の詳細な目的は、薬剤として使用するための、１−（５−クロロ−２−メトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−トリフルオロメトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−メチルフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１，３−ジフェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン及び１−（３−クロロフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオンから成る群から選択される化合物に関する。
【００５０】
本発明の更に詳細な目的は、１−（３−メトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−ヨードフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−ブロモフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（２−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−ヒドロキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−フルオロ−３−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（２，３−ジメチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−メトキシ−２−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（３−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（３−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（４−ブロモフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（３−ブロモフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（２−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（２−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（２−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１，３−ビス−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−フルオロフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（２−メトキシフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（２−フルオロフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３，４−ジフルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３，４−ジフルオロフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−フルオロ−２−メトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（４−フルオロ−２−メトキシフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（２−メトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３，４−ジフルオロフェニル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（３，４−ジメトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、１−（３−クロロフェニル）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン及び１−（３−クロロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオンから成る群から選択される新規な化合物に関する。
【００５１】
上記の式（Ｉ）の化合物のＭＰＴＰの阻害物質としての生物活性並びに変性性組織障害を特徴とする、ＭＰＴＰの開口から起こる疾患を予防及び／又は治療する薬剤を製造するためのその使用は、一連の試験管内及び生体内アッセイを通して実証されており、このアッセイは、ミトコンドリアの試験管内アッセイ及び２種の生体内マウスモデル（糖尿病性網膜症の未熟児網膜症（ＲＯＰ）モデル及び多発性硬化症のモデルとしての実験的自己免疫性脳脊髄炎（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ：ＥＡＥ））を含む。
【００５２】
本発明の式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）
【００５３】
【化３】
0005495206.tif 000004
（式中、Ｒ１及びＲ２は、上記の定義を有する。）のアニリンと、式（ＩＩＩ）
【００５４】
【化４】
0005495206.tif 000005
（式中、Ｒ３及びＲ４は、上記の定義を有する。）の化合物との反応によって得ることができ得る。
【００５５】
上記の式（ＩＩ）の化合物は、市販されている又は当業者に既知の方法によって簡単に合成でき得る。
【００５６】
上記の式（ＩＩＩ）の化合物は、市販されている及び／又は式（ＩＶ）
【００５７】
【化５】
0005495206.tif 000006
（式中、Ｒ３及びＲ４は、上記の定義を有する。）の化合物から合成でき得る。
【００５８】
このような反応は、例えば、還流する硫酸の存在下で、酢酸中にて行うことができ得る。
【００５９】
式（ＩＶ）の化合物は、式（Ｖ）
【００６０】
【化６】
0005495206.tif 000007
（式中、Ｒ３及びＲ４は、上記の定義を有する。）の出発物質とグリオキシル酸との反応によって得られる。
【００６１】
このような反応は、通常、室温にてメタノール中で、炭酸カリウムの存在下で２時間以内で行われる。
【００６２】
上記の式（Ｖ）の化合物は、市販されている又は式（ＶＩ）
【００６３】
【化７】
0005495206.tif 000008
（式中、Ｒ３及びＲ４は、上記の定義を有する。）のブロモベンジル誘導体とＫＣＮとの反応によって簡単に合成することができ得る。
【００６４】
本発明による薬剤の製造に使用される式（Ｉ）の化合物は、通常、意図された目的を達成するのに適した医薬組成物中に組み入れられる。
【００６５】
従って、この化合物は、上記の医薬組成物に、疾患を予防又は治療するのに有効な量にて含有させられる。通常、この化合物は、哺乳類（例えば、ヒト）に１日に体重１キロ当たり０．１〜１００ｍｇの投与量にて投与され得るが、各個体にとっての最適な範囲は、当該分野における技術範囲内で求められる。
【００６６】
本発明による式（Ｉ）の化合物を投与するのに有用な医薬組成物は、経口、直腸、皮下、静脈、筋肉、腹腔、経皮、経粘膜（頬側、舌下、経尿道及び直腸を含む）、局所、吸入及び眼球経路（眼球インプラント、薬剤貯留型インプラント（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ  ｉｍｐｌａｎｔ）及び硝子体内投与等の注射治療を含む）又は他の投与経路を用いた形態である。
【００６７】
経口により投与でき得る調合物は、通常、錠剤、糖衣錠及びカプセル等の固形物並びにシロップ、エマルション及び懸濁液等の液状物の両方の形態である。
【００６８】
この固形物は、活性化合物と共に、適切な賦形剤及び助剤を含有しており、賦形及び助剤はたとえば、入党、ブドウ糖、ショ糖、セルロース調合物及びリン酸カルシウム等の充填剤、トウモロコシでんぷん、ジャガイモでんぷん、米でんぷん、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース等のセルロース誘導体、アラビアゴム及びポリビニルピロリドン等のバインダ、シリカ、タルク、ステアリン酸及び／又はそのマグネシウム及びカルシウム塩並びにポリエチレングリコール等の滑剤、でんぷん、寒天、アルギン酸又はその塩、デンプングリコール酸ナトリウム及び架橋ポリビニルピロリドン等の崩壊剤である。染料、沸騰剤、湿潤剤を前述の固形調合物に添加してもよく、これらの固形調合物は、それ自体が既知であるやり方、例えば、活性化合物を固形賦形剤と混合し、得られる混合物を粉砕し、必要なら適切な助剤を添加した後にこの細粒を錠剤、糖衣錠又はカプセルに加工することにより製造され得る。糖衣又はフィルムコーティング工程も、前述の固形物の製造に応用され得る。
【００６９】
固形経口製剤は、慣用のやり方、例えば腸溶コーティングを錠剤及び顆粒に塗布することにより調製でき得る徐放性製剤の形態でもあり得る。
【００７０】
シロップは、ショ糖、グリセリン、マンニトール及び／又はソルビトール等の担体を含有し得る。
【００７１】
懸濁液及びエマルションは、天然ゴム、寒天、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース及びポリビニルアルコール等の担体を含有し得る。
【００７２】
直腸内投与に適した医薬調合物、例えば坐薬は、活性化合物を、天然又は合成トリグリセリド、ココアバター、ポリエチレングリコール、パラフィン炭化水素、ポリオキシエチレン、ソルビタン脂肪酸エステル界面活性剤及びレシチン等の坐薬基剤と共に含有している。
【００７３】
皮下及び筋肉内投与に適した非経口製剤は、水溶液及び適当な油系担体中の活性化合物である懸濁液を含む。適した油系担体は、脂肪油（例えば、ゴマ油、オリーブオイル）、合成脂肪酸エステル、グリコール（例えば、プロピレングリコール）、トリグリセリド及びポリエチレングリコール等の親油性のビヒクルを含む。
【００７４】
水性懸濁注射液は、増粘物質、例えばソルビトール、デキストラン及びカルボキシメチルセルロースナトリウムも含有し得る。
【００７５】
静脈内注射又は注入のための調合物は、通常、担体として滅菌水を、好ましくは無菌等張生理食塩水の形態で含有している。
【００７６】
本発明の化合物は、経皮放出を介して投与されてもよい。通常の経皮製剤は、クリーム、オイル、ローション若しくはペースト等の慣用の水性及び非水性媒体を含む又は膜若しくは薬用プラスター剤として提供でき得る。ある実施形態において、本発明の化合物は、皮膚に付着する感圧プラスター剤中に分散させられる。この製剤は、化合物を皮膚を介してプラスター剤から患者に拡散させることができる。皮膚を介して薬物を徐放させるために、天然ゴム及びシリコーンが、感圧接着剤として使用でき得る。
【００７７】
本発明の化合物は、局所的にも投与でき得る。局所製剤は、例えば、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、溶液、ペースト等を含み得る並びに／又はリポソーム、ミセル及び／又は微粒子を含有するように調製され得る。医薬製剤の分野において周知であるように、軟膏は、通常、ワセリン又は他の石油誘導体を基剤とした半固形の調合物である。軟膏の例は、油性の軟膏基剤、例えば、植物油、動物から得た脂肪及び石油から得られた半固形炭化水素、乳化可能な軟膏基剤、例えば、ヒドロキステアリンスルフェート、無水ラノリン及び親水性ワセリン、乳剤性軟膏基剤、例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセリン、ラノリン及びステアリン酸並びに様々な分子量のポリエチレングリコールから調製された水溶性軟膏基剤を含む（例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Twentieth Ed., Lippincott Williams & Willcins: Philadelphia, 2000を参照のこと）。同じく当業者に周知であるクリームは、粘性のある液体又は半固形のエマルションであり、油相、乳化剤及び水相を含有する。油相は、一般に、ワセリン及びセチル又はステアリルアルコール等の脂肪アルコールから構成される。水相は、通常、湿潤剤を含有する。クリーム製剤中の乳化剤は、非イオン性、アニオン性、カチオン性又は両性の界面活性剤から選択される。単相ゲルは有機高分子を含有し、有機高分子は、通常は水性であるが好ましくはアルコールを含有し、場合によって油分も含有する液状担体全体に実質的に均一に分散させられている。好ましいゲル化剤は、架橋アクリル酸重合体（「カルボマー」重合体、例えばＣａｒｂｏｐｏｌの商標で商業的に入手され得るカルボキシポリアルキレン等）である。ポリエチレンオキシド、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体及びポリビニルアルコール等の親水性重合体、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート及びメチルセルロース等のセルロース重合体、トラガカントゴム及びキサンタンゴム等のゴム、アルギン酸ナトリウム並びにゼラチンも好ましい。均一なゲルを調製するために、アルコール若しくはグリセリン等の分散剤が添加でき得る又はゲル化剤を、研和（ｔｒｉｔｕｒａｔｉｏｎ）、機械的混合及び／若しくは攪拌により分散させることができ得る。
【実施例】
【００７８】
一般法
市販の試薬及び溶媒（ＨＰＬＣグレード）は、更に精製されることなく使用された。
【００７９】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ４００ＭＨｚ  ＡＶ分光計、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ  ２５０ＭＨｚ分光計又はＢｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ  ３６０ＭＨｚ分光計上で重水素化溶媒中で記録された。ここにおいて報告される化学シフト（δ）は、１００万分の１で示される。薄層クロマトグラフィ（ｔｈｉｎ−ｌａｙｅｒ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：ＴＬＣ）分析は、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ）プレートを用いて行われ、ＵＶ光を用いて可視化された。
【００８０】
分析ＨＰＬＣ−ＭＳは、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰ１１００、Ｗａｔｅｒｓ  ６００又はＷａｔｅｒｓ  １５２５ＬＣシステム上にて、逆相Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  ＢＤＳ  Ｃ１８カラム（５μｍ、２．１ｘ５０ｍｍ）を用いて、勾配０〜９５％  Ｂ（Ａ＝水／０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、Ｂ＝アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ）にて２．１０分に亘って、流量＝１．０ｍｌ／分で行われた。ＵＶスペクトルは、２１５ｎｍにて、Ｇｉｌｓｏｎ  Ｇ１３１５Ａダイオード・アレイ検出装置、Ｇ１２１４Ａ単一波長ＵＶ検出装置、Ｗａｔｅｒｓ  ２４８７二波長ＵＶ検出装置、Ｗａｔｅｒｓ  ２４８８二波長ＵＶ検出装置又はＷａｔｅｒｓ  ２９９６ダイオード・アレイＵＶ検出装置を用いて記録された。質量スペクトルは、範囲ｍ／ｚ１５０〜８５０に亘って、１秒あたり２走査又は１．２秒あたり１走査のサンプリングレートにて、Ｚ型スプレーインターフェースを備えたＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ＬＣＴ又はＺ型スプレー若しくはＭＵＸインターフェースを備えたＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ＬＣＴを用いて得られた。データは、ＯｐｅｎＬｙｎｘ及びＯｐｅｎｌｙｎｘ  Ｂｒｏｗｓｅｒソフトウェアを用いて統合及び報告された。実施例３２及び４７の化合物については、ＨＰＬＣ−ＭＳは、Ａｇｉｒｅｎｔ  ＨＰ１１００システム上にて、逆相Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ８カラム（３．５μｍ、２．１ｘ５０ｍｍ）を用いて、勾配０〜９５％  Ｂ（Ａ＝水／０．１％ギ酸、Ｂ＝アセトニトリル／０．１％ギ酸）にて７．０分に亘って、流量＝０．６ｍｌ／分で行われた。ＵＶスペクトルは、２１５ｎｍにて、Ｗａｔｅｒｓ  ２９９６ダイオード・アレイＵＶ検出装置を用いて記録された。質量スペクトルは、範囲ｍ／ｚ１５０〜１０００に亘って、１秒あたり２走査のサンプリングレートにて、Ｗａｔｅｒｓ  ＺＱ質量分析計を用いて得られた。データは、ＯｐｅｎＬｙｎｘ及びＯｐｅｎｌｙｎｘ  Ｂｒｏｗｓｅｒソフトウェアを用いて統合及び報告された。
【００８１】
実施例１：１−（３−クロロフェニル）−３−（３−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
【００８２】
【化８】
0005495206.tif 000009
【００８３】
段階Ａ：３−シアノ−３−（３−メチルフェニル）アクリル酸カリウム
メタノール（５００ｍｌ）中の（３−メチルフェニル）−アセトニトリル（２１．６ｍｌ、１６５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、グリオキシル酸水和物（２２．７ｇ、２４７ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（５７．０ｇ、４１２ｍｍｏｌ）が添加された。この反応混合物は、室温にて２時間に亘って攪拌され、続いて３時間に亘って還流させられた。沈殿物は濾別され、メタノール（３００ｍｌ）及びジクロロメタン（ＤＣＭ、３００ｍｌ）で洗浄され、次に空気の吸引により乾燥させられた。所望の生成物は、白色の固形物として得られ、この固形物は、更に精製されることなく次の段階において使用された。
収率：４３ｇ
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））１８８［Ｍ（遊離酸）＋Ｈ］＋、保持時間１．８２分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．４５−７．３２（２Ｈ、ｍ）、７．３０（１Ｈ、ｔ）、７．１５（１Ｈ、ｄ）、７．０５（１Ｈ、ｓ）、２．２９（３Ｈ、ｓ）
【００８４】
段階Ｂ：（３−メチルフェニル）−フラン−２，５−ジオン
濃硫酸（２ｍｌ）を含有する８８％ギ酸（１４ｍｌ）中の３−シアノ−３−（３−メチルフェニル）アクリル酸カリウム（０．６９ｇ、３ｍｍｏｌ）の懸濁液は、出発物質が消費されるまで還流下で攪拌され、ＬＣ−ＭＳによって監視された。反応混合物は室温にまで冷却され、氷／水中に注がれた。得られた沈殿物は濾過により回収され、水（１５ｍｌ）、ヘプタン（１５ｍｌ）により洗浄され、空気乾燥させられた。
収率：２７０ｍｇ（４８％）
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．９４−７．８５（２Ｈ、ｍ）、７．７２（１Ｈ、ｓ）、７．５１−７．３９（２Ｈ、ｍ）、２．４０（３Ｈ、ｓ）
【００８５】
段階Ｃ：１−（３−クロロフェニル）−（３−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
酢酸（５ｍｌ）中の（３−メチルフェニル）−フラン−２，５−ジオン（２６５ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）の室温の攪拌溶液に、３−クロロアニリン（１４９μｌ、１．４１ｍｍｏｌ）が添加された。反応混合物は還流するまで加熱され、３時間に亘って攪拌された。反応混合物は、室温にまで冷却された。生成された沈殿物は濾過され、水（１５ｍｌ）中に再懸濁させられ、濾過により回収された。沈殿物は、水（１０ｍｌ）、ヘプタン（１０ｍｌ）で洗浄され、空気の吸引とそれに続く高真空によって乾燥させられた。
収率：１６０ｍｇ（３８％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２９８［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．５２分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．７０−７．６１（２Ｈ、ｍ）、７．３５−７．１０（６Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）、２．１５（３Ｈ、ｓ）
【００８６】
実施例２〜４２は、特に指定がない限り、要求された出発物質（段階Ａ）及び適当なアニリン（段階Ｃ）を用いてスキーム１に記載の手順に従って調製された。収率は、特に指定がない限り、スキーム１における段階Ｃについて報告された。
【００８７】
実施例２：１−（３−クロロフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
段階Ａ：３−シアノ−３−（４−フルオロフェニル）アクリル酸カリウム
反応は、室温で３時間に亘って行われた。
収率：２．２ｇ（３８％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））１９２［Ｍ（遊離酸）＋Ｈ］＋、保持時間１．７２分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．６９−７．６０（２Ｈ、ｍ）、７．３２−７．２２（２Ｈ、ｍ）、７．０３（１Ｈ、ｓ）
【００８８】
段階Ｂ：３−（４−フルオロフェニル）−フラン−２，５−ジオン
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．３８−８．２１（２Ｈ、ｍ）、７．９０（１Ｈ、ｓ）、７．６８−７．５２（２Ｈ、ｍ）
【００８９】
段階Ｃ：１−（３−クロロフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
収率：２００ｍｇ（８５％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３０２［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．４４分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１３−８．００（２Ｈ、ｍ）、７．５０−７．３９（３Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）、７．３８−７．２８（３Ｈ、ｍ）
【００９０】
実施例３：1−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
収率：２３０ｍｇ（９２％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３２０［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．５２分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．２２−８．１２（２Ｈ、ｍ）、７．７５（１Ｈ、ｄ）、７．６５（１Ｈ、ｔ）、７．５３（１Ｈ、ｓ）、７．５０−４０（３Ｈ、ｍ）
【００９１】
実施例４：１，３−ビス−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。濾過により回収された固形物は、メタノール（５ｍｌ）で更に研和された。
収率：２０７ｍｇ（９３％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２８６［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．３５分、９８％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．２３−８．１０（２Ｈ、ｍ）、７．５１−７．３０（６Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）
【００９２】
実施例５：１−（３−フルオロフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。  
収率：１８１ｍｇ（８１％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２８６［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．３７分、９８％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、２５０ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．２１−８．０５（２Ｈ、ｍ）、７．６１−７．２０（６Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）
【００９３】
実施例６：１−（２−メトキシフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。濾過により回収された固形物は、ＤＣＭ／ヘプタンの１：１混合物（５ｍｌ）から更に再結晶化させられた。
収率：１３２ｍｇ（５７％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２９８［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．３０分、９７％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．２４−８．１７（２Ｈ、ｍ）、７．５６−７．４２（３Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）、７．３７（１Ｈ、ｄｄ）、７．２５（１Ｈ、ｄｄ）、７．１３（１Ｈ、ｄｔ）、３．８１（３Ｈ、ｓ）
【００９４】
実施例７：１−（２−フルオロフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。
収率：１９５ｍｇ（８８％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２８６［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．３４分、９９％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１１−８．０４（２Ｈ、ｍ）、７．５３−７．２５（６Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）
【００９５】
実施例８：１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−（４−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。
【００９６】
濾過により回収された固形物は、ＤＣＭ／ヘプタンの１：１混合物（５ｍｌ）から更に再結晶化させられた。
収率：１８６ｍｇ（７１％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３７７［Ｍ＋Ｈ＋ＭｅＣＮ］＋、保持時間２．４９分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．２２−８．１２（２Ｈ、ｍ）、７．８５（１Ｈ、ｓ）、７．８０−７．７１（３Ｈ、ｍ）、７．５２（１Ｈ、ｓ）、７．４８−７．３９（２Ｈ、ｍ）
【００９７】
実施例９：１−（３−クロロフェニル）−３−（３−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
段階Ａ：３−シアノ−３−（３−フルオロフェニル）−アクリル酸カリウム
反応は、室温で行われた。
収率：５．７ｇ
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））１９２［Ｍ（遊離酸）＋Ｈ］＋、保持時間１．７２分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．５５−７．３８（３Ｈ、ｍ）、７．２７−７．２０（１Ｈ、ｍ）、７．１５（１Ｈ、ｓ）
【００９８】
段階Ｂ：３−（３−フルオロフェニル）−フラン−２，５−ジオン
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．９２−７．７９（２Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）、７．６９−７．５８（１Ｈ、ｍ）、７．５１−７．３９（１Ｈ、ｍ）
【００９９】
段階Ｃ：１−（３−クロロフェニル）−３−（３−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
収率：２１０ｍｇ（８９％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３０２［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．４５分、９５％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１４−８．０３（２Ｈ、ｍ）、７．８０−７．６４（４Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）、７．６１−７．５１（２Ｈ、ｍ）
【０１００】
実施例１０：１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。
収率：１８２ｍｇ（７３％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３２０［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．５４分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．０９−７．９９（２Ｈ、ｍ）、７．８０（１Ｈ、ｍ）、７．７５−７．６５（２Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）、７．６０−７．５５（２Ｈ、ｍ）
【０１０１】
実施例１１：１−（３−クロロフェニル）−３−（４−ブロモフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
段階Ａ：３−（４−ブロモフェニル）−３−シアノ−アクリル酸カリウム
反応は、室温で行われた。
収率：１１．０ｇ（精製されず）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２５２、２５４  ［Ｍ（遊離酸）＋Ｈ］＋、保持時間２．０１分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．４９−７．４０（２Ｈ、ｍ）、７．３９−７．３０（２Ｈ、ｍ）、６．９７（１Ｈ、ｓ）
【０１０２】
段階Ｂ：３−（４−ブロモフェニル）−フラン−２，５−ジオン
収率：５．４ｇ（２段階後８４％）
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．０２−７．９６（２Ｈ、ｍ）、７．８５−７．７５（２Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）
【０１０３】
段階Ｃ：１−（３−クロロフェニル）−３−（４−ブロモフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
残留物を熱いメタノールにより研和すると、掲題の化合物が得られた。
収率：４９ｍｇ（３７％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））、イオン化なし、保持時間２．５７分、９７％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１０−８．００（２Ｈ、ｍ）、７．８８−７．７０（２Ｈ、ｍ）、７．６０−７．４５（３Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）、７．４０−７．３５（１Ｈ、ｍ）
【０１０４】
実施例１２：１−（３−クロロフェニル）−３−（３−ブロモフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
段階Ａ：３−（３−ブロモフェニル）−３−シアノ−アクリル酸カリウム
反応は、室温で行われた。
収率：１２．５ｇ
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２５２、２５４［Ｍ（遊離酸）＋Ｈ］＋、保持時間１．９８分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．５８（１Ｈ、ｔ）、７．４７−７．３８（２Ｈ、ｍ）、７．２３（１Ｈ、ｔ）、７．０４（１Ｈ、ｓ）
【０１０５】
段階Ｂ：３−（３−ブロモフェニル）−フラン−２，５−ジオン
収率：４．７ｇ（２段階後７３％）
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．２３（１Ｈ、ｓ）、８．００（１Ｈ、ｄ）、７．８４（１Ｈ、ｓ）、７．７９（１Ｈ、ｄ）、７．５５（１Ｈ、ｔ）
【０１０６】
段階Ｃ：１−（３−クロロフェニル）−３−（３−ブロモフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。残留物を熱いメタノールで研和すると、掲題の化合物が得られた。
収率：４５ｍｇ（３１％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））、イオン化なし、保持時間２．５６分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、２５０ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．３０（１Ｈ、ｓ）、８．１５−８．０２（１Ｈ、ｍ）、７．８０−７．７０（１Ｈ、ｍ）、７．６０（１Ｈ、ｓ）、７．５８−７．４６（５Ｈ、ｍ）、７．４５−７．３０（１Ｈ、ｍ）
【０１０７】
実施例１３：１−（３−クロロフェニル）−３−（２−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
段階Ａ：３−シアノ−３−（２−フルオロフェニル）−アクリル酸カリウム
反応は、室温で行われた。
収率：９ｇ
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））１９２［Ｍ（遊離酸）＋Ｈ］＋、保持時間１．８１分、９７％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．２８−７．１５（２Ｈ、ｍ）、７．１０−７．０１（２Ｈ、ｍ）、６．６８（１Ｈ、ｓ）
【０１０８】
段階Ｂ：３−（２−フルオロフェニル）−フラン−２，５−ジオン
収率：２．１ｇ（２段階後３０％）
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１１−８．００（１Ｈ、ｍ）、７．７０−７．６０（１Ｈ、ｍ）、７．５２（１Ｈ、ｓ）、７．５０−７．３５（２Ｈ、ｍ）
【０１０９】
段階Ｃ：１−（３−クロロフェニル）−３−（２−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
収率：７２５ｍｇ（９２％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３０２［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．４５分、９９％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１２−８．０５（１Ｈ、ｍ）、７．６８−７．３７（７Ｈ、ｍ）、７．３０（１Ｈ、ｓ）
【０１１０】
実施例１４：１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（２−フルオロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
収率：７２５ｍｇ（８７％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３２０［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．４６分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１１−８．００（１Ｈ、ｍ）、７．７９−７．７０（１Ｈ、ｍ）、７．６９−７．５５（２Ｈ、ｍ）、７．５２−７．３８（３Ｈ、ｍ）、７．３０（１Ｈ、ｓ）
【０１１１】
実施例１５：１−（３−メトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
固形物は、ＤＣＭ／ヘプタンの１：１混合物（５ｍｌ）から更に再結晶化させられた。
収率：３１０ｍｇ（３９％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２８０［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．１３分、９６％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、２５０ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１３−８．０２（２Ｈ、ｍ）、７．６０−７．５１（３Ｈ、ｍ）、７．４７（１Ｈ、ｓ）、７．４４−７．３８（１Ｈ、ｍ）、７．０３−６．９３（３Ｈ、ｍ）、３．７９（３Ｈ、ｓ）
【０１１２】
実施例１６：１−（３−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。固形物は、ＤＣＭ／ヘプタンの１：１混合物（５ｍｌ）から更に再結晶化させられた。  
収率：４９７ｍｇ（６５％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２６８［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．１６分、９４％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１０−８．０３（２Ｈ、ｍ）、７．６１−７．５１（４Ｈ、ｍ）、７．５０（１Ｈ、ｓ）、７．３６−７．２４（３Ｈ、ｍ）
【０１１３】
実施例１７：１−（４−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。固形物は、ＤＣＭ／ヘプタンの１：１混合物（７ｍｌ）から更に再結晶化させられた。
収率：１０６ｍｇ（１４％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２６８［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．３３分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．９６−７．８９（２Ｈ、ｍ）、７．４５−７．３７（３Ｈ、ｍ）、７．３６−７．２８（１Ｈ、ｓ及び２Ｈ、ｍ）、７．２７−７．１７（２Ｈ、ｍ）
【０１１４】
実施例１８：１−（３，４−ジフルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。固形物は、ＤＣＭ／ヘプタンの１：１混合物（７ｍｌ）から更に再結晶化させられた。
収率：４７４ｍｇ（５８％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２８６［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．３８分、９８％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１３−８．０３（２Ｈ、ｍ）、７．６８−７．４８（５Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）、７．３９−７．２７（１Ｈ、ｍ）
【０１１５】
実施例１９：１−（３−ヨードフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
収率：８３０ｍｇ（７７％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３７６［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．２８分、９４％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．０４−８．０２（２Ｈ、ｍ）、７．８２（１Ｈ、ｓ）、７．７９（１Ｈ、ｄ）、７．５８−７．５１（３Ｈ、ｍ）、７．５０−７．４３（２Ｈ、ｍ）、７．３２（１Ｈ、ｔ）
【０１１６】
実施例２０：１−（３−ブロモフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
固形物は、ＤＣＭ／ヘプタンの１：１混合物（５ｍｌ）から更に再結晶化させられた。
収率：４２０ｍｇ（４５％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３２８、３３０［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．２５分、９３％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．０５−８．０３（２Ｈ、ｍ）、７．６９（１Ｈ、ｓ）、７．６４（１Ｈ、ｄ）、７．５８−７．４３（６Ｈ、ｍ）
【０１１７】
実施例２１：１−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
固形物は、ＤＣＭ／ヘプタンの１：１混合物（５ｍｌ）から更に再結晶化させられた。
収率：５００ｍｇ（５２％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３３４［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．２８分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１０−８．０３（２Ｈ、ｍ）、７．６９−７．６４（１Ｈ、ｔ）、７．５８−７．５３（３Ｈ、ｍ）、７．５２−７．４９（３Ｈ、ｍ）、７．４３（１Ｈ、ｄ）
【０１１８】
実施例２２：１−（３−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
固形物は、ヘプタン（５ｍｌ）から更に再結晶化させられた。
収率：３１０ｍｇ（４１％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２６４［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．４６分、９７％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．０２−７．９７（２Ｈ、ｍ）、７．４９−７．４４（３Ｈ、ｍ）、７．４０（１Ｈ、ｓ）、７．３３（１Ｈ、ｍ）、７．２０−７．０９（１Ｈ、ｍ）、２．２９（３Ｈ、ｓ）
【０１１９】
実施例２３：１−（２−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
収率：７１６ｍｇ（８８％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２８３［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．３８分、９２％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１１−８．０３（２Ｈ、ｍ）、７．７１（１Ｈ、ｄ）、７．６２−７．５１（７Ｈ、ｍ）
【０１２０】
実施例２４：１−（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
収率：８０５ｍｇ（８１％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３４６、３４８［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．５４分、９７％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１０−８．０３（２Ｈ、ｍ）、７．８８（１Ｈ、ｔ）、７．５８−７．５２（４Ｈ、ｍ）、７．５０（１Ｈ、ｓ）、７．２９（１Ｈ、ｄ）
【０１２１】
実施例２５：１−（３−クロロ−４−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
収率：７８０ｍｇ（９１％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２９８、３００［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．５５分、８８％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１０−８．０２（２Ｈ、ｍ）、７．５７−７．４６（６Ｈ、ｍ）、７．３１（１Ｈ、ｄ）、２．３８（３Ｈ、ｓ）
【０１２２】
実施例２６：１−（３−クロロ−４−ヒドロキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
収率：８５０ｍｇ（９９％）
質量スペクトル(ＥＳ−ＭＳ (＋ｖｅ) )３００、３０２［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．２１分、９０％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１０．４０（１Ｈ、ｓ）、８．０９−８．０１（２Ｈ、ｍ）、７．４５−７．４９（３Ｈ、ｍ）、７．３３（１Ｈ、ｓ）、７．３１−７．２９（１Ｈ、ｍ）、７．０９−７．０２（１Ｈ、ｍ）、６．９８−６．９２（１Ｈ、ｍ）
【０１２３】
実施例２７：１−（４−フルオロ−３−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。
収率：３９７ｍｇ（８２％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２８２［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．４６分、９１％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１３−８．０４（２Ｈ、ｍ）、７．６１−７．５７（３Ｈ、ｍ）、７．５１（１Ｈ、ｓ）、７．３８（１Ｈ、ｄ）、７．３４−７．２９（２Ｈ、ｍ）、２．３２（３Ｈ、ｓ）
【０１２４】
実施例２８：１−（２−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。
収率：４０８ｍｇ（８９％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２６８［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．３２分、９０％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．０９−８．０２（２Ｈ、ｍ）、７．５８−７．４８（５Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）、７．４７−７．４０（１Ｈ、ｍ）、７．３９−７．３２（１Ｈ、ｍ）
【０１２５】
実施例２９：１−（２，３−ジメチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。
収率：３５５ｍｇ（７４％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２７８［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．４６分、８８％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．２１−８．１５（２Ｈ、ｍ）、７．６９−７．６３（３Ｈ、ｍ）、７．６１（１Ｈ、ｓ）、７．４０（１Ｈ、ｄ）、７．３３（１Ｈ、ｔ）、７．２５（１Ｈ、ｄ）、２．４４（３Ｈ、ｓ）、２．１２（３Ｈ、ｓ）
【０１２６】
実施例３０：１−（４−メトキシ−２−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。
収率：４０９ｍｇ（８１％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２９４［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．３９分、８６％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．９６−７．８９（２Ｈ、ｍ）、７．４３−７．３８（３Ｈ、ｍ）、７．３３（１Ｈ、ｓ）、７．０６（１Ｈ、ｄ）、６．８２−６．８０（１Ｈ、ｍ）、６．７５−６．７１（１Ｈ、ｍ）、３．６４（３Ｈ、ｓ）、１．９５（３Ｈ、ｓ）
【０１２７】
実施例３１：１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。
収率：４３９ｍｇ（８０％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３１８［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．４６分、９８％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．０７−８．０１（２Ｈ、ｍ）、７．８２（１Ｈ、ｓ）、７．７９−７．７０（３Ｈ、ｍ）、７．５２−７．４９（３Ｈ、ｍ）、７．４８（１Ｈ、ｓ）
【０１２８】
実施例３２：１−（３−クロロフェニル）−３−（３，４−ジメトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
収率：５４ｍｇ（４６％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３４４［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間４．８４分、８７％ＵＶ（７分ＬＣ−ＭＳ法）
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、３６０ＭＨｚ）：７．８７（１Ｈ、ｄｄ）、７．７１（１Ｈ、ｄ）、７．６５−７．５３（３Ｈ、ｍ）、７．５０−７．４５（１Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）、７．１９（１Ｈ、ｄ）、３．９１（３Ｈ、ｓ）、３．９０（３Ｈ、ｓ）
【０１２９】
実施例３３：１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。
収率：１３９ｍｇ（８２％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３４８［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．５０分、９０％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、２５０ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１０（２Ｈ、ｄ）、７．９０−７．７０（４Ｈ、ｍ）、７．３９（１Ｈ、ｓ）、７．１０（２Ｈ、ｄ）、３．８５（３Ｈ、ｓ）
【０１３０】
実施例３４：１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。
収率：９５ｍｇ（６５％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２９８［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．３５分、９２％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、２５０ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１０（２Ｈ、ｄ）、７．５１−７．２８（４Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）、７．１１（２Ｈ、ｄ）、３．８６（３Ｈ、ｓ）
【０１３１】
実施例３５：１−（３，４−ジフルオロフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。
収率：２８０ｍｇ（９１％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３１６［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．４０分、９７％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１４（２Ｈ、ｄ）、７．７１−７．５８（２Ｈ、ｍ）、７．４０（１Ｈ、ｓ）、７．３８−７．３２（１Ｈ、ｍ）、７．１６（２Ｈ、ｄ）、３．８９（３Ｈ、ｓ）
【０１３２】
実施例３６：１−（３−クロロフェニル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。
収率：９２ｍｇ（６７％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ）３００［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．２２分、９４％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１０．３０（１Ｈ、ｓ）、８．００（２Ｈ、ｄ）、７．５６−７．４５（３Ｈ、ｍ）、７．４０（１Ｈ、ｄ）、７．２４（１Ｈ、ｓ）、６．９１（２Ｈ、ｄ）
【０１３３】
実施例３７：１−（３−クロロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
段階Ａ：３−シアノ−３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−アクリル酸カリウム
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。
収率：１５．５ｇ
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２２２［Ｍ（遊離酸）＋Ｈ］＋、保持時間１．７４分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：７．２８−７．１０（４Ｈ、ｍ）、３．９６（３Ｈ、ｓ、Ｍｅ）
【０１３４】
段階Ｂ：１−（３−クロロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−フラン−２，５−ジオン
収率：１．７ｇ（２段階後３２％）
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、２５０ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．００−７．９０（２Ｈ、ｍ）、７．６５（１Ｈ、ｓ、アルケンＣＨ）、７．３８（１Ｈ、ｔ）、３．９４（３Ｈ、ｓ、Ｍｅ）
【０１３５】
段階Ｃ：１−（３−クロロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。
収率：１３２ｍｇ（５９％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））、イオン化なし、保持時間４．８７分、９７％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．０２−７．９４（２Ｈ、ｍ）、７．５８−７．４６（３Ｈ、ｍ）、７．４４−７．３２（１Ｈ、ｓ及び２Ｈ、ｍ）、３．９３（３Ｈ、ｓ、Ｍｅ）
【０１３６】
実施例３８：１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。固形物は、メタノール（５ｍｌ）から更に再結晶化された。
収率：１３１ｍｇ（５５％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））、イオン化なし、保持時間２．４６分、８９％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．０２−７．９４（２Ｈ、ｍ）、７．７０（１Ｈ、ｄｄ）、７．５９（１Ｈ、ｔ）７．４８−７．４２（１Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）、７．３５（１Ｈ、ｔ）、３．９３（３Ｈ、ｓ）
【０１３７】
実施例３９：１−（２−メトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。固形物は、ＤＣＭ／ヘプタンの１：１混合物（５ｍｌ）から更に再結晶化させられた。
収率：１２０ｍｇ（１５％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２８０［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間４．４７分、９８％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．０９−８．０１（２Ｈ、ｍ）、７．５７−７．５１（３Ｈ、ｍ）、７．５０−７．４３（１Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）、７．３１（１Ｈ、ｄｄ）、７．１９（１Ｈ、ｄｄ）、７．０６（１Ｈ、ｄｔ）、３．７５（３Ｈ、ｓ）
【０１３８】
実施例４０：１−（４−フルオロ−２−メトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。固形物は、メタノール（５ｍｌ）で更に研和された。
収率：７４ｍｇ（４３％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））２９８［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間２．３２分、８８％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．０９−８．０１（２Ｈ、ｍ）、７．５８−７．５０（３Ｈ、ｍ）、７．４７（１Ｈ、ｓ、アルケンＣＨ）、７．３９（１Ｈ、ｄｄ）、７．１３（１Ｈ、ｄｄ）、６．９２（１Ｈ、ｄｔ）、３．７７（３Ｈ、ｓ、Ｍｅ）
【０１３９】
実施例４１：１−（４−フルオロ−２−メトキシフェニル）−３−（４−フルロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。固形物は、メタノール（５ｍｌ）により更に研和された。
収率：１２３ｍｇ（６８％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３１６［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間４．５８分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．１８−８．１０（２Ｈ、ｍ）、７．４７（１Ｈ、ｓ）、７．４５−７．３５（３Ｈ、ｍ）、７．１３（１Ｈ、ｄｄ）、６．９２（１Ｈ、ｄｔ）、３．７７（３Ｈ、ｓ、Ｍｅ）
【０１４０】
実施例４２：１−（３−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
掲題の化合物は、実施例２に記載の手順に従って調製された。
収率：１２３ｍｇ（５８％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３１６［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間４．６８分、１００％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、２５０ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：８．０５−７．９５（２Ｈ、ｍ）、７．６４−７．５０（１Ｈ、ｍ）、７．４５（１Ｈ、ｓ）、７．４２−７．２３（４Ｈ、ｍ）、３．９４（３Ｈ、ｓ）
【０１４１】
実施例４３：１−（３−クロロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
三臭化ホウ素（５２．５ｍｌ、０．５５ｍｍｏｌ）は、室温のジクロロメタン（５ｍｌ）中の１−（３−クロロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン（実施例３９、１７５ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）の溶液に窒素下にて滴下添加された。溶液は、６時間に亘って室温にて攪拌された。次に、反応物は、氷水（５ｍｌ）中に注がれ、更に３０分に亘って攪拌された。生成物は濾別され、水（１０ｍｌ）で洗浄され、吸引により乾燥させられた。
収率：１２３ｍｇ（７３％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３１８［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間４．４２分、９９％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１０．８４（１Ｈ、ｓ）、７．９４（１Ｈ、ｄｄ）、７．８５（１Ｈ、ｄｄ）、７．５８−７．４６（３Ｈ、ｍ）、７．４２−７．３６（１Ｈ、ｍ）、７．３３（１Ｈ、ｓ）、７．０９（１Ｈ、ｔ）
【０１４２】
実施例４４〜４７は、要求されたメトキシ誘導体から開始して、１−（３−クロロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオンについての実施例４３に記載の手順に従って調製された。
【０１４３】
実施例４４：１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
固形物は、メタノール（２ｍｌ）から更に再結晶化させられた。
収率：２２ｍｇ（４６％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））、イオン化なし、保持時間４．４６分、８９％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１０．８４（１Ｈ、ｓ）、７．９４（１Ｈ、ｄｄ）、７．８５（１Ｈ、ｄｄ）、７．６９（１Ｈ、ｄｄ）、７．５８（１Ｈ、ｔ）、７．４９−７．４１（１Ｈ、ｍ）、７．３４（１Ｈ、ｓ）、７．０９（１Ｈ、ｔ）
【０１４４】
実施例４５：１−（３−フルオロフェニル）−３−（３−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
収率：２１ｍｇ（４９％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））、イオン化なし、保持時間４．２２分、９０％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１０．８３（１Ｈ、ｓ）、７．９５（１Ｈ、ｄｄ）、７．８５（１Ｈ、ｄｄ）、７．６０−７．５１（１Ｈ、ｍ）、７．３７−７．２２（３Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）、７．０９（１Ｈ、ｔ）
【０１４５】
実施例４６：１−（３，４−ジフルオロフェニル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
収率：１１６ｍｇ（５６％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））、イオン化なし、保持時間４．２４分、９８％ＵＶ
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、２５０ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１０．３０（１Ｈ、ｓ）、８．００（２Ｈ、ｄ）、７．７０−７．５０（２Ｈ、ｍ）、７．３５−７．２２（１Ｈ、ｍ及び１Ｈ、ｓ）、６．９２（２Ｈ、ｄ）
【０１４６】
実施例４７：１−（３−クロロフェニル）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン
収率：２３ｍｇ（５７％）
質量スペクトル（ＥＳ−ＭＳ（＋ｖｅ））３１６［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間４．２３分、９６％ＵＶ（７分ＬＣ−ＭＳ法）
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）：９．９５（２Ｈ、ｂｒｏａｄ  ｓ）、７．７０−７．４８（５Ｈ、ｍ）、７．４４−７．３９（１Ｈ、ｍ）、７．１７（１Ｈ、ｓ）、６．８９（１Ｈ、ｄ）
【０１４７】
以下の化合物は、市販されている又は文献に記載されている。
【０１４８】
実施例４８：１−（３−クロロフェニル）−３−（４−メトキシフェニル）−ピロール−２，５−ジオン（Augustin, M.; Koehler, M. Synthesis of 2-aryl maleimides. Zeitschrift fur Chemie, 1975, 15(3), 102) 。
【０１４９】
実施例４９：１，３−ジフェニルピロール−２，５−ジオン（Almstrom, G.K. Some derivatives of pyrrole. III. Journal of the Chemical Society, Abstracts (1916), 110(1), 568）。
【０１５０】
実施例５０：１−（４−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン（Yuki, H.; Yamamoto, T.; Tohira, Y.; Aoki, B.; Aoki, B.; Kano, T.; Yamazaki, T. Antiviral agents. II. Synthesis and biological activity of maleimide derivatives. Chemical &  Pharmaceutical Bulletin (1967), 15(8), 1101-1106）。
【０１５１】
実施例５１：１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン（Hebenbrock, K.F. Preparation and reaction of l-aryl-3-hydroxy-3-methyl-2, 5-pyrrolidinediones. Justus Liebigs Annalen der Chemie 1978, (2), 320-336）。
【０１５２】
実施例５２：１−（４−メチルフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン（Artico, M.; Filacchioni, G.; Nacci, V.; Chimenti, F. Synthesis of pyrrolnitrin analogs. III. Preparation and antibacterial properties of 1, 3-diaryl-substituted maleimides. Farmaco, Edizione Scientifica 1971, 26(5), 411-423）。
【０１５３】
実施例５３：１−（３−メチルフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｌｏｃｋ：Ａ０８４６／００３９６１８、モスクワ、ロシア
【０１５４】
実施例５４：１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｌｏｃｋ：Ａ１４９５／００６５５８０
【０１５５】
実施例５５：１−（３−クロロフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ：５６３０４２９、サンディエゴ、米国
【０１５６】
実施例５６：１，３−ビス−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ：５６３３４０６
【０１５７】
実施例５７：１−（３−クロロフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン（Augustin, M.; Koehler, M. Synthesis of 2-aryl maleimides. Zeitschrift fur Chemie, 1975, 15(3), 102）。
【０１５８】
実施例５８：１−（５−クロロ−２−メトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ：Ｓ１２６２３、ティンタジェル（Ｔｉｎｔａｇｅｌ）、英国
【０１５９】
実施例５９：１−（４−トリフルオロメトキシフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ：Ｓ１３１２０、ティンタジェル、英国
【０１６０】
実施例６０：１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−（４−メチルフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ：５６３２６８９、サンディエゴ、米国
【０１６１】
実施例６１：１−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ：Ｓ０９２０９、ティンタジェル、英国
【０１６２】
実施例６２：１−（４−フルオロフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−ピロール−２，５−ジオン、Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ：５６２８９９０、サンディエゴ、米国
【０１６３】
実施例６３：１−（３−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン、Ｍａｙｂｒｉｄｇｅ：Ｓ０９５７９、ティンタジェル、英国
【０１６４】
ミトコンドリア試験管内アッセイ：方法及び結果  
ミトコンドリア試験管内アッセイは、ミトコンドリア細胞小器官の特性に基づいており、この特性により、還元的試験管内細胞系においてミトコンドリアの機能を調べることができる。ミトコンドリア内での工程の多くを、様々な組織から得られる単離されたミトコンドリアの懸濁液内で調査することができる。
【０１６５】
単離されたミトコンドリアがカルシウムを外部から取り込む能力は、ミトコンドリアの完全性及び機能の直接的な尺度である。実際に、ＭＰＴは、細胞小器官の構造がで無傷であることを必要とする特殊なチャネルを介してカルシウムを汲み上げるミトコンドリアの能力を損なう。このアッセイは、この現象を利用することにより、本発明の化合物が単離されたミトコンドリアにおいてＭＰＴを干渉する能力を評価する。
【０１６６】
マウスの肝臓からのミトコンドリアの調達
ミトコンドリアは、体重２０〜２５ｇの雄の１２９系又はＣ５７／Ｂ６系マウスの肝臓から調達された。マウスは、頚椎脱臼により屠殺された。肝臓が取り出され、氷冷された０．２５Ｍショ糖、１０ｍＭトリスＨＣｌ、０．１ｍＭエチレン−ビス（オキシエチレンニトリロ）四酢酸中（ＥＧＴＡ）（ｐＨ７．４）中に置かれた。肝臓は、氷冷された溶媒で３〜４回すすがれ、ハサミで細分化され、氷水浴内に維持された手動式ポッター（Ｐｏｔｔｅｒ）型ホモジナイザに通された。ホモジネートは、肝臓１つあたり５０ｍｌに希釈され、破壊されていない細胞及び核は、４℃に維持されたＢｅｃｋｍａｎ  ＡｖａｎｔｉＴＭ  Ｊ−２５冷却遠心機内で９００ｘｇにての１０分に亘る遠心分離により沈殿させられた。上清は慎重にデカントされ、同じ遠心分離機内で７０００ｘｇにて１０分間に亘って遠心分離された。上清は廃棄され、ミトコンドリアペレットは、氷冷された分離培地に慎重に再懸濁させられ、上記のように遠心分離された。得られたミトコンドリアペレットは、少量の氷冷された分離培地に再懸濁させられ、氷上で保存された。ミトコンドリアのタンパク質含有量は、ビウレット反応により求められた。
【０１６７】
カルシウム保持能（Ｃａｌｃｉｕｍ  Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  Ｃａｐａｃｉｔｙ：ＣＲＣ）
ミトコンドリアのＣａ２＋保持能（ＣＲＣ）は、Ｃａ２＋を取り込んだ後にミトコンドリアがＰＴＰを開口する傾向についての精度の高い尺度である。ミトコンドリアは、その内膜に存在するＣａ２＋単輸送体によりＣａ２＋を双方向に透過させることができるため、ミトコンドリアの膜電位（ΔΨｍ）は、ミトコンドリアのマトリクス内におけるＣａ２＋の蓄積と、その結果としてのＣａ２＋勾配に関与している。ΔΨｍの低下（ＰＴＰ開口中のＨ＋の流入によって引き起こされる脱分極等）は、ミトコンドリア内空間とミトコンドリア外空間との間でのＣａ２＋の再分布に至ると予想され、その際、Ｃａ２＋は、ミトコンドリア膜を通る使用可能な経路の全てを利用する。
【０１６８】
ミトコンドリア調製物のＣＲＣは、蛍光Ｃａ２＋指示薬であるカルシウムグリーン５Ｎ（励起−発光：５０５−５３５ｎｍ）の存在下で、マグネチック・スターラー及び２５℃に設定された温度制御装置を備えたＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＬＳ５５分光蛍光計を用いて蛍光分析により評価された（Ichas, F.; Jouaville, L.S.; Mazat, J.P. Mitochondria are excitable organelles capable of generating and conveying electrical and calcium signal. Cell., 1997, 89, 1145-1153）。カルシウムグリーン５Ｎは、膜を透過しない蛍光プローブであり、ミトコンドリア懸濁液に添加することにより、ミトコンドリア外部の培地中のＣａ２＋の存在を検出することができる。ミトコンドリアには、１分間隔で１０μＭのＣａ２＋パルスが負荷された。これらの条件下で、ミトコンドリアは、ＰＴＰの開口により急激なＣａ２＋放出が起こるまでの間、活発にＣａ２＋を取り込み及び保持した。ＰＴＰの開口に必要なカルシウムパルスの数（カルシウムの最終濃度）が、ミトコンドリアのＣＲＣである。従って、このＣａ２＋負荷試験計画は、ＰＴＰの開口を測定するための簡便で感度の高いアッセイであり、本発明の化合物がＰＴＰの開口を阻害する能力を評価するために用いられる。本発明の化合物は、カルシウムパルスの供給が開始される１分前にミトコンドリア溶液に直接添加され、ＰＴＰを開口させるのに必要とされたカルシウムパルスの数が求められた。本発明の化合物の存在下でミトコンドリアの膨張を惹起するのに必要なカルシウムの量（カルシウムパルスの数から計算される）と本発明の化合物の不在下でミトコンドリアの膨張を惹起するのに必要なカルシウムの量との比が、本発明の化合物の予防効果の尺度である。この値はＣＲＣ有効性と称され、本発明の幾つかの化合物から得られた結果が、表１に報告されている。
【０１６９】
【表１】
0005495206.tif 000010
【０１７０】
ＲＯＰアッセイ：方法及び結果
網膜血管新生が、虚血誘発性網膜血管新生のマウス未熟児網膜症（ＲＯＰ）モデルにおいて評価された。げっ歯類において、網膜の血管形成は、一般に、生後１４日目（Ｐ１４）までに完了する。生後２週目の間に酸素治療を行うと、視神経乳頭付近の未熟な網膜血管の閉塞が部分的に引き起こされ、続く深網膜層における血管の発達が阻害される。酸素治療を停止すると、網膜の虚血は異常な血管増殖、すなわち網膜血管新生を引き起こす。
【０１７１】
生後７日目（Ｐ７）で、マウスの新生児は、酸素供給保温器（ｏｘｙｇｅｎ  ｉｎｃｕｂａｔｏｒ）内で５日間に亘って７５％のＯ２に曝露された。二酸化炭素のラットの網膜への影響を回避するために（Holmes, J.M.; Zhang, S.; Leske, D.A.; Lanier, W.L. Carbon dioxide-induced retinopathy in the neonatal rat. Curr. Eye Res., 1998, 17, 608-616）、ＣＯ２吸収剤が、保温器内に置かれた（Ｓｏｄａｓｏｒｂ、ＧＲＡＣＥ、エペルノン、フランス）。酸素濃度は、酸素モニタ（Ｍｉｎｉｏｘ  ＩＩＩ、Ｃａｔａｌｙｓｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、メリーランド）によって監視された。大気中（２１％Ｏ２）で飼育されたマウスの子供が、対照群であった。
【０１７２】
１２日目（Ｐ１２）に、マウスは酸素曝露室から出され、ハミルトン（Ｈａｍｉｌｔｏｎ）シリンジを用いて本発明の化合物又はビヒクル溶液が、硝子体内に注射された。ＲＯＰ及び対照群の両方から数匹のマウスが無作為に選ばれ、麻酔をかけられ、次に左心室を介してＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、セントルイス、ミズーリ）中のフルオレセインイソチオシアネート・デキストラン（２ｘ１０６分子量）（５０ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌが潅流させられた。各群の残りのマウスは、大気中にて更に５日間に亘って（Ｐ１７）飼育され、次に上述されたようにフルオロセインを潅流させられた。潅流後、眼球が摘出され、次に４％パラホルムアルデヒド中で２４時間に亘って４℃にて固定された。角膜、水晶体及び硝子体を外科的に除去し、網膜を丁寧に切開し、周辺網膜を切除し、グリセロール−ゼラチンを用いてプレパラート上に平らに載せた。プレパラート上に平らに載せられた網膜は、蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｐｌａｎ  ２、ソーンウッド、ニューヨーク）によって画像撮影され、コンピュータ画像処理（ＫＳ３００、Ｋｏｎｔｒｏｎ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｋ  ＧｍｂＨ、ドイツ）により、網膜の画像が捉えられた。
【０１７３】
ＲＯＰに罹り易くさせた２つのマウス新生児群は、生後１２日目に、ＤＭＳＯに溶解させられた実施例６３の化合物１−（３−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオン又はＤＭＳＯ（ビヒクル）だけを、硝子体中における化合物の最終濃度が約１又は２又は４ｍＭとなるように注射された。
【０１７４】
生後１７日目での蛍光血管造影（Ｆｌｕｏｒａｎｇｉｏｇｒａｐｈｉｃ）分析は、本発明の化合物による処理によって血管新生が大幅に軽減されたことを示した。
【０１７５】
生後１７日目に同じ群から得た眼球を固定し、切片を作成し、ヘマトキシリン及びエオシンで染色して、発達した内皮細胞の量を測定した。下のグラフは、各自４匹の異なるマウスを含む４つの実験代表群の１つから得られた、１切片あたりの内皮細胞の平均数を報告している（図１）。
【０１７６】
上記の化合物による処理は、ＲＯＰ誘発試験後における眼球に存在する内皮細胞の数を大幅に低下させており、血管造影によって確認されたことを裏付けている。
【０１７７】
ＥＡＥアッセイ：方法及び結果
実験的自己免疫性脳脊髄炎（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ：ＥＡＥ）は、恐らく、中枢神経系（ＣＮＳ）の脱髄疾患（多発性硬化症（ＭＳ）等）を研究するのに最適の動物モデルである。初期の古典的な研究時から、ＥＡＥは、ＣＮＳ内での自己抗原に対しての免疫応答のメカニズムを分析したり、自己免疫疾患を治療するための新しい治療法を試験するのに有益なツールであった。げっ歯類は、ＥＡＥに罹患しやすい。種、抗原及び感作のモードに応じ、ＥＡＥは、単相性の急性の経過又は慢性の再発型となり得、ヒト多発性硬化症に似た、主として進行型の経過を辿る場合さえある。ＥＡＥの急性モデルではより迅速な実験及び観察が可能だが、慢性モデルでは、予防的治療対治療としての治療等の広範に亘った観察が可能である。
【０１７８】
生後７週間のＣ５７ブラック／６Ｎ系の雌のマウスは、リン酸緩衝液及びフロイントアジュバント中に溶解させられた結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）とミエリン・オリゴデンドロサイト・グリコプロテイン（ＭＯＧ）のシーケンス３５ａａ〜５５ａａのペプチドとのエマルションにより免疫を付与された。マウスは、全部で０．３ｍｌのエマルションを３つの異なる部位から皮下注入された。免疫付与後すぐに、マウスは、０．１ｍｌの百日咳毒素（５５０ｎｇ／μｌ）を静注された。免疫付与から４８時間後、マウスは、百日咳毒素の２回目の負荷試験を受けた。このモデルは過去に記載されており（Furlan，R．；Brambilla，E．；Sanvito，F．；Roccatagliata，L．；Olivieri，S．；Bergami，A．；Pluchino，S．；Uccelli，A．；Comi，G．；Martino，G．Vaccination  with  amyloid−beta  peptide  induces  autoimmune  encephalomyelitis  in  C57/BL6  mice．Brain，2003，126，285−291）、１０日〜１２日目での発症、３〜４日中の急激な進行及び臨床スコアが安定したままの安定期とを特徴とする。
【０１７９】
免疫付与から４日後、マウス群は、５ｍｇ／ｋｇの実施例６３の化合物１−（３−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオンを毎日腹腔内注入された。
【０１８０】
免疫付与から１０日目から、体重の減少及び運動機能異常について毎日マウスを評価した。
【０１８１】
ノンパラメトリックなスケールを用いて、ＥＡＥの臨床症状を評価した。スコアは、以下のパラメータに従って割り振られた。０＝健康、１＝弱々しい又は弛緩した尾、２＝不安定な歩行（運動失調）、後肢の不全麻痺又は緩慢な正向反射、３＝不全対麻痺、完全な後肢麻痺、４＝前肢を含む不全対麻痺、５＝瀕死又は死亡。
【０１８２】
２つのマウス群の観察から得られたノンパラメトリック試験の平均スコアが、以下に報告される。実施例６３の１−（３−クロロフェニル）−３−フェニル−ピロール−２，５−ジオンを用いた治療は、疾患の発現を大いに予防した。ＥＡＥに罹り易くさせたマウスの約３０％もが２０日後にアート（ａｒｔ）不全麻痺を発現した一方で、本発明の化合物で治療したマウスは１匹たりともこの疾患の同様の徴候を示さなかった（図２）。
【図１】
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【図２】
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