(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記工程（１）〜（３）を含む、アムルビシン凍結乾燥製剤の製造方法：
（１）（ａ）アムルビシンまたはその薬学上許容される塩、および、（ｂ）Ｌ−システインまたはその塩を含有し、アムルビシンまたはその薬学上許容される塩の濃度が７．５ｍｇ（力価）／ｍＬ〜３０ｍｇ（力価）／ｍＬである水溶液を調製し、
（２）（１）の水溶液を無菌濾過し、
（３）（２）で得られた水溶液を凍結乾燥する。
【請求項２】
Ｌ−システインの塩が塩酸塩である、請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
アムルビシンの塩が塩酸塩である、請求項１または２のいずれか記載の製造方法。
【請求項４】
工程（１）の水溶液のアムルビシンまたはその薬学上許容される塩の濃度が７．５ｍｇ（力価）／ｍＬ〜２５ｍｇ（力価）／ｍＬである、請求項１〜３のいずれか一項記載の製造方法。
【請求項５】
さらに賦形剤を含む、請求項１〜４のいずれか一項記載の製造方法。
【請求項６】
賦形剤として乳糖を含む、請求項５記載の製造方法。
【請求項７】
アムルビシンの塩が粉末Ｘ線回折図において回折角（２θ）：６．３±０．３、１０．１±０．３、２０．３±０．３、２６．５±０．３および２６．９±０．３度に主ピークを示す結晶性塩酸アムルビシンである、請求項１〜６のいずれか一項記載の製造方法。
【請求項８】
アムルビシンまたはその薬学上許容される塩を含有する製剤であって、アムルビシンまたはその塩を７．５ｍｇ（力価）／ｍＬ〜３０ｍｇ（力価）／ｍＬ含有する水溶液を凍結乾燥することによって製造される凍結乾燥製剤であって、
Ｌ−システインまたはその塩を含有する、凍結乾燥製剤。
【請求項９】
Ｌ−システインまたはその塩の含有量がアムルビシンまたはその塩１００ｍｇ（力価）に対し０．５〜２５０ｍｇである、請求項８記載の凍結乾燥製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌化学療法剤として有用であるアムルビシンまたはその薬学上許容される塩を含有する安定化された製剤、特に凍結乾燥製剤に関する。本発明はまた、それらアムルビシンまたはその薬学上許容される塩を含有する製剤、特に凍結乾燥製剤の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
下記式（１）：
【化１】
0005389910.tif 000002
で示される（７Ｓ，９Ｓ）−９−アセチル−９−アミノ−７−［（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロ−ペントピラノシル）オキシ］−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，１１−ジヒドロキシ−５，１２−ナフタセンジオン（以下、アムルビシンと称す。）およびその塩は、癌化学療法剤として有用であることが知られている（特許文献１参照）。かかるアムルビシンの塩酸塩には、数種の結晶形があるが、そのうちの特定の結晶が熱安定性に優れていることも知られている（特許文献２参照）。【０００３】
アムルビシンなどのアンスラサイクリン系化合物は溶液中で不安定であるが、このような化合物を注射剤として製剤化する場合には粉末充填または凍結乾燥を施して用時溶解型の注射剤とする方法が一般に行われている。【０００４】
また、アムルビシンの安定化された製剤として、Ｌ−システインまたはその塩を含有する製剤が知られている（特許文献３および特許文献４参照）。【０００５】
【特許文献１】特公平３−５３９７号公報（対応米国特許第４，６７３，６６８号明細書）
【特許文献２】特許第２９７５０１８号公報（対応米国特許第６，３７６，４６９号明細書）
【特許文献３】特許第２６０３４８０号公報（対応米国特許第４，９５２，５６６号明細書）
【特許文献４】国際公開第２００４／０５００９８号パンフレット（対応米国特許出願公開第２００６／０００３９４９号明細書）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
アムルビシンの代表的な分解物として、下記式（２）：
【化２】
0005389910.tif 000003
で示される脱糖体（以下、脱糖体（２）と称す。）および下記式（３）：
【化３】
0005389910.tif 000004
で示される脱アミノ体（以下、脱アミノ体（３）と称す。）が知られており、これら分解物は、アムルビシン製剤の製造工程や保存の過程で増加する傾向が認められている。従って、医薬品の品質保証という観点から、長期にわたりこれら分解物の増加をできるだけ抑制することは極めて重要であり、アムルビシン製剤をさらに安定化する方法の開発が望まれていた。【０００７】
一方で、アムルビシン製剤の安定化方法として、前述の通り、製剤中にＬ−システインまたはその塩を添加する方法が知られている（特許文献３）。しかしながら、この方法により、脱アミノ体（３）の生成は抑制できるものの、条件によっては脱糖体（２）の生成が増加する場合があった。従って、本願発明の目的は、当該Ｌ−システイン含有製剤の脱糖体（２）の生成を抑制し、さらなる安定化を達成することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者が鋭意研究した結果、アムルビシン凍結乾燥製剤を調製するにあたって、凍結乾燥前の水溶液中のアムルビシンまたはその薬学上許容される塩の濃度を一定範囲内にコントロールし、およびＬ−システインまたはその塩を組み合わせて使用することで、脱糖体（２）の生成が抑制され、長期保存時にも安定な凍結乾燥製剤が得られることを見出した。すなわち、本発明は以下の通りである。【０００９】
［１］  下記工程（１）〜（３）を含む、アムルビシン凍結乾燥製剤の製造方法：
（１）（ａ）アムルビシンまたはその薬学上許容される塩、および、（ｂ）Ｌ−システインまたはその塩を含有し、アムルビシンまたはその薬学上許容される塩の濃度が約７．５ｍｇ（力価）／ｍＬ〜約３０ｍｇ（力価）／ｍＬである水溶液を調製し、
（２）（１）の水溶液を無菌濾過し、
（３）（２）で得られた水溶液を凍結乾燥する。【００１０】
［２］  Ｌ−システインの塩が塩酸塩である、［１］記載の製造方法。【００１１】
［３］  アムルビシンの塩が塩酸塩である、［１］または［２］のいずれか記載の製造方法。【００１２】
［４］  工程（１）の水溶液のアムルビシンまたはその薬学上許容される塩の濃度が約７．５ｍｇ（力価）／ｍＬ〜約２５ｍｇ（力価）／ｍＬである、［１］〜［３］のいずれか一項記載の製造方法。【００１３】
［５］  さらに賦形剤を含む、［１］〜［４］のいずれか一項記載の製造方法。【００１４】
［６］  賦形剤として乳糖を含む、［５］記載の製造方法。【００１５】
［７］  アムルビシンの塩が粉末Ｘ線回折図において回折角（２θ）：６．３±０．３、１０．１±０．３、２０．３±０．３、２６．５±０．３および２６．９±０．３度に主ピークを示す結晶性塩酸アムルビシンである、［１］〜［６］のいずれか一項記載の製造方法。【００１６】
［８］  アムルビシンまたはその薬学上許容される塩を含有する製剤であって、アムルビシンまたはその塩を約７．５ｍｇ（力価）／ｍＬ〜約３０ｍｇ（力価）／ｍＬ含有する水溶液を凍結乾燥することによって製造される凍結乾燥製剤。【００１７】
［９］  Ｌ−システインまたはその塩を含有する、［８］記載の凍結乾燥製剤。【００１８】
［１０］  Ｌ−システインまたはその塩の含有量がアムルビシンまたはその塩１００ｍｇ（力価）に対し約０．５〜約２５０ｍｇである、［９］記載の凍結乾燥製剤。【００１９】
［１１］  Ｌ−システインまたはその塩の含有量がアムルビシンまたはその塩１００ｍｇ（力価）に対し約３〜約４５ｍｇである、［９］記載の凍結乾燥製剤。【００２０】
［１２］  アムルビシンの塩が塩酸塩である、［８］〜［１１］のいずれか一項記載の凍結乾燥製剤。【００２１】
［１３］  Ｌ−システインの塩が塩酸塩である、［９］〜［１２］のいずれか一項記載の凍結乾燥製剤。【００２２】
［１４］  製剤中の水分が凍結乾燥粉末重量に対して０〜約４重量％である、［８］〜［１３］のいずれか一項記載の凍結乾燥製剤。【００２３】
［１５］  製剤中の水分が凍結乾燥粉末重量に対して約０．５〜約３．５重量％である、［８］〜［１３］のいずれか一項記載の凍結乾燥製剤。【００２４】
［１６］  製剤中の水分が凍結乾燥粉末重量に対して約０．５〜約２．０重量％である、［８］〜［１３］のいずれか一項記載の凍結乾燥製剤。【００２５】
［１７］  ［１］から［７］のいずれか一項記載の製造方法によって製造される、凍結乾燥製剤。
【発明の効果】
【００２６】
本発明は、凍結乾燥前のアムルビシンまたはその薬学上許容される塩の水溶液濃度を一定の範囲内にコントロールし、およびＬ−システインまたはその塩を組み合わせて使用することにより、アムルビシンの分解産物である脱糖体の生成を抑制することができ、長期保存時にも一層安定な凍結乾燥製剤を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】様々な塩酸アムルビシン濃度の水溶液を調製し、小型凍結乾燥機で製造した凍結乾燥製剤を４０℃−３ヶ月の安定性試験（実験例１）に供した際の、分解物の一つである脱糖体（２）の生成量を表すグラフである。
【００２８】
【図２】様々な塩酸アムルビシン濃度の水溶液を調製し、大型凍結乾燥機で製造した凍結乾燥製剤を４０℃−６ヶ月の安定性試験（実験例２）に供した際の、分解物の一つである脱糖体（２）の生成量を表すグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
以下に、本発明をさらに詳細に説明する。
本明細書において、特に記載した場合を除き、脱糖体（２）および脱アミノ体（３）の含量は、アムルビシンの配合量に対する重量％を表す。脱糖体（２）および脱アミノ体（３）の含量は、ＨＰＬＣ法（アムルビシン標準品を標準とした絶対検量線法）により測定することができる。【００３０】
本明細書において、特に記載した場合を除き、製剤中の「水分」とは凍結乾燥粉末重量に対しての重量％を表す。製剤中の水分は、公知の測定方法、例えばカールフィッシャー法により測定することができる。【００３１】
アムルビシンの薬学上許容される塩としては、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、酢酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、トリフルオロ酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩等の有機酸塩が挙げられる。塩基付加塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩等の無機塩基塩、トリエチルアンモニウム塩、トリエタノールアンモニウム塩、ピリジニウム塩、ジイソプロピルアンモニウム塩等の有機塩基塩等が挙げられる。好ましい薬学上許容される塩として塩酸塩等を挙げることができる。【００３２】
塩酸アムルビシンの場合には、より安定な結晶形である、β型結晶性塩酸アムルビシン（粉末Ｘ線回折図において回折角（２θ）：６．３±０．３、１０．１±０．３、２０．３±０．３、２６．５±０．３および２６．９±０．３度に主ピークを示す結晶性塩酸アムルビシン；特許第２９７５０１８号公報）を用いることがより好ましい。粉末Ｘ線回折パターンは、リガク電機（株）のＸ線回折装置ＲＩＮＴ２５００ＶによりＣｕ・Ｋαの１．５４１Åを用いて測定することができる。【００３３】
本発明の凍結乾燥製剤を安定化するために添加されるアミノ酸としては、Ｌ−システインまたはその塩が挙げられる。Ｌ−システインの塩としては通常は塩酸塩が用いられ、その他の塩としては硫酸塩などが挙げられる。Ｌ−システインまたはその塩は、その水和物等の溶媒和物であってもよい。例えば好ましいものとして、Ｌ−システイン塩酸塩一水和物が挙げられる。【００３４】
Ｌ−システインまたはその塩の添加量および添加方法としては特に限定されないが、アムルビシンの安定化度あるいは添加物の薬理活性などの関係から、例えばアムルビシンまたはその薬学上許容される塩１００ｍｇ（力価）に対して約０．５〜約２５０ｍｇ、好ましくは約３〜約８０ｍｇ、さらに好ましくは約３〜約４５ｍｇが適当である。特に好ましくは、アムルビシンまたはその塩１００ｍｇ（力価）に対して、Ｌ−システインを約５〜約２０ｍｇの範囲で、またはそれに相当する量のＬ−システイン塩を添加することが適当である。ここで、「それに相当する量のＬ−システイン塩」とは、含まれるＬ−システインの量が等モルであることを表す。例えば、Ｌ−システイン１２１．２ｍｇに「相当する量の」Ｌ−システイン塩酸塩は１５７．６ｍｇであり、同様に、「相当する量の」Ｌ−システイン塩酸塩一水和物は１７５．６ｍｇである。Ｌ−システイン塩としてＬ−システイン塩酸塩一水和物を用いる場合、「約５〜約２０ｍｇの範囲のＬ−システイン」に相当する量とは、Ｌ−システイン塩酸塩一水和物約７．２〜約２９ｍｇである。【００３５】
本発明の凍結乾燥製剤において、必要ならば通常の製剤成分として添加されうる賦形剤等の添加物を加えてもよい。賦形剤としては、例えば、乳糖、ショ糖、パラチノース、ブドウ糖、マルトース、果糖、マンニトール、エリスリトール、キシリトール、マルチトール、イノシトール、デキストラン、ソルビトール、アルブミンおよびこれらの２種以上の混合物などが挙げられる。好ましい賦形剤としては、乳糖、ショ糖、ブドウ糖、マルトース、果糖、マンニトール、キシリトール、イノシトール、デキストランおよびこれらの２種以上の混合物などが挙げられる。さらに好ましくは、乳糖、マンニトールおよびこれらの混合物が挙げられる。本発明で用いる賦形剤の添加量は、本発明の効果を奏すれば特に制限されないが、使用感や抗癌効果などを考慮して適宜選択して用いることができる。【００３６】
凍結乾燥製剤中の水分は０〜約４重量％、好ましくは０〜約３．５重量％、より好ましくは約０．５〜約３．５重量％、さらに好ましくは約０．５〜約２．０重量％が安定化のために効果的である。【００３７】
凍結乾燥製剤の製法は、例えば（ａ）アムルビシンまたはその薬学上許容される塩、（ｂ）Ｌ−システインまたはその塩および必要に応じ賦形剤等を注射用蒸留水に溶解し、無菌濾過した液をバイアル瓶に充填して凍結乾燥を施し粉末状態で製剤とするもので、注射剤はこの状態で保存がおこなわれ、用時水に溶解されて投与に使用される。【００３８】
本発明の特徴は、上記凍結乾燥製剤の製造方法において、凍結乾燥前の水溶液濃度をアムルビシンまたはその薬学上許容される塩の濃度が約７．５ｍｇ（力価）／ｍＬ以上であるように調製することにある。後述の実施例に示すとおり、本発明者らは、凍結乾燥前の水溶液濃度が約７．５ｍｇ（力価）／ｍＬ以上であることにより、それ未満の濃度で製造した凍結乾燥製剤よりもさらに優れた安定性を示すことを見出した。凍結乾燥前の水溶液濃度として、より好ましくは約８．０ｍｇ（力価）／ｍＬ以上であり、さらに好ましくは約９．０ｍｇ（力価）／ｍＬ以上である。【００３９】
凍結乾燥前の水溶液濃度の上限は、含有される成分が溶解する限り特に制限されないが、アムルビシンまたはその薬学上許容される塩の濃度として、好ましくは約９０ｍｇ（力価）／ｍＬ以下である。溶解の容易さ、充填液量の制御等、製造上の理由により、アムルビシンまたはその塩の濃度として、さらに好ましくは約３０ｍｇ（力価）／ｍＬ以下であり、一層好ましくは約２５ｍｇ（力価）／ｍＬ以下であり、より一層好ましくは約２０ｍｇ（力価）／ｍＬ以下である。【００４０】
また、（ａ）アムルビシンまたはその薬学上許容される塩、（ｂ）Ｌ−システインまたはその塩および必要に応じ賦形剤等を注射用蒸留水に溶解した水溶液は、無菌濾過する前に微量の塩基および／または酸でpH調整することが好ましい。pHはアムルビシンの特性から考えてpH約1.9〜約5.0の間に調整されていることが望ましく、より好ましくはpH約1.9〜約3.0の範囲が挙げられる。pH調節剤として用いることのできる塩基としては、例えばアルカリ金属（例えばナトリウム、カリウムなど）の水酸化物、アルカリ土類金属（例えばマグネシウム、カルシウムなど）の水酸化物、弱酸のアルカリ金属塩などが挙げられる。pH調節剤として用いることのできる塩基の好ましい具体例としては、例えば水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムが挙げられる。pH調節剤として用いることのできる酸としては、例えば塩酸、硫酸などが挙げられる。【００４１】
本発明のアムルビシンまたはその薬学上許容される塩を含有する安定化された凍結乾燥製剤は、癌化学療法剤として、種々の癌疾患の治療に用いることができる。治療対象となる癌は、特に制限されないが、血液癌および固型癌等を含む癌疾患が挙げられる。ヒトの治療に用いる場合の投与量としては、静脈内投与の場合、例えばヒトの体表面積ｍ２あたり１日量５〜３００ｍｇ、好ましくは２０〜２５０ｍｇ、更に好ましくは３５〜１６０ｍｇの範囲で連続点滴投与して処置することができる。投与スケジュールとしては、例えば単回投与、１日１回３日間連日投与等を挙げることができる。
【実施例】
【００４２】
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。なお、以下の実施例、実験例においては、特許第２９７５０１８号公報記載の方法により製造された、β型結晶性塩酸アムルビシンを使用した。【００４３】
実施例１：小型凍結乾燥機により製造した凍結乾燥製剤の保存安定性
塩酸アムルビシン２０ｍｇ（力価）に対してＬ−システイン塩酸塩一水和物３．２ｍｇ、賦形剤としてラクトース（乳糖）５０ｍｇ、ｐＨ調節剤として水酸化ナトリウム０．１３ｍｇを加えて塩酸アムルビシンの濃度が２．５ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、７．５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、または３０ｍｇ／ｍＬになるよう、それぞれ注射用蒸留水８ｍＬ、４ｍＬ、２．６７ｍＬ、２ｍＬ、１．３３ｍＬ、１ｍＬ、または０．６７ｍＬに溶解し無菌濾過をおこない、ガラス製バイアルに充填した。これを小型凍結乾燥機（乾燥庫容量約０．５ｍ３）（ＵＬＶＡＣ製、型式ＤＭＦ−１３Ａ−特）に入れ、充分凍結した後、温度と真空度を制御しながら凍結乾燥ケーキが融解しないように水分を乾燥した後、ゴム栓及びキャップシールすることにより凍結乾燥製剤を得た。得られた凍結乾燥製剤について、水分を測定していずれも十分に乾燥していることを確認した後、４０℃−１箇月、４０℃−３箇月の保存安定性試験を行った。分解物である脱糖体（２）または脱アミノ体（３）の測定結果（ＨＰＬＣ法により測定）を表１に示す。さらに、当該脱糖体（２）の４０℃−３ヶ月の試験時の測定結果のグラフを図１に示す。【００４４】
【表１】
0005389910.tif 000005
【００４５】
上記安定性データに見られるように、長期保存時の脱糖体（２）の生成量は、凍結乾燥前の水溶液中の塩酸アムルビシン濃度に依存し、塩酸アムルビシン濃度を７．５〜３０ｍｇ／ｍＬの範囲内にコントロールして調製した場合の凍結乾燥製剤は、比較例として２．５および５．０ｍｇ／ｍＬの濃度にコントロールして調製した場合の凍結乾燥製剤と比べて安定性の向上、特に脱糖体（２）生成の抑制が認められ、長期保存時にも十分安定な凍結乾燥製剤であることが確認された。また、脱アミノ体（３）の生成量は塩酸アムルビシン濃度による差は認められず、いずれの場合も低かった。【００４６】
実施例２：大型凍結乾燥機により製造した凍結乾燥製剤の保存安定性
塩酸アムルビシン５０ｍｇ（力価）に対してＬ−システイン塩酸塩一水和物８ｍｇ、賦形剤としてラクトース（乳糖）１２５ｍｇ、ｐＨ調節剤として水酸化ナトリウム０．３１ｍｇを加えて塩酸アムルビシンの濃度が５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１２．５ｍｇ／ｍＬ、または２５ｍｇ／ｍＬになるよう、それぞれ注射用蒸留水１０ｍＬ、５ｍＬ、４ｍＬ、または２ｍＬに溶解し無菌濾過をおこない、ガラス製バイアルに充填した。これを大型凍結乾燥機（乾燥庫容量約１２．４ｍ３）（ＵＬＶＡＣ製、型式ＤＦＢ５１５０−５ＢＳ−ＳＴ／ＣＩＰ／ＣＣＶ）に入れ、充分凍結した後、温度と真空度を制御しながら凍結乾燥ケーキが融解しないように水分を乾燥した後、ゴム栓及びキャップシールすることにより凍結乾燥製剤を得た。得られた凍結乾燥製剤について、水分を測定していずれも十分に乾燥していることを確認した後、４０℃−１ヶ月、４０℃−３ヶ月、４０℃−６ヶ月の保存安定性試験を行った。分解物である脱糖体（２）の測定結果（ＨＰＬＣ法により測定）を表２に示す。さらに、当該脱糖体（２）の４０℃−６ヶ月の試験時の測定結果のグラフを図２に示す。【００４７】
【表２】
0005389910.tif 000006
【００４８】
上記安定性データに見られるように、長期保存時の脱糖体（２）の生成量は、凍結乾燥前の水溶液中の塩酸アムルビシン濃度に依存し、塩酸アムルビシン濃度を１０ｍｇ／ｍＬ、１２．５ｍｇ／ｍＬ、または２５ｍｇ／ｍＬにコントロールして調製した場合の凍結乾燥製剤は、比較例としての５ｍｇ／ｍＬの濃度にコントロールして調製した場合の凍結乾燥製剤と比べて脱糖体（２）生成の抑制が認められ、長期保存時にも十分安定な凍結乾燥製剤であることが確認された。【００４９】
以上述べた、本願発明によるアムルビシン凍結乾燥製剤の更なる安定化により、安定に保存できる期間の延長が期待できる。
【産業上の利用可能性】
【００５０】
本発明により、癌化学療法剤として有用であるアムルビシンの、長期保存時にも十分安定な凍結乾燥製剤を得ることができるため、工業的利用価値が高い。
【図１】
0005389910.tif 000007
【図２】
0005389910.tif 000008