(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
５０μｍから２５００μｍの範囲の平均直径を有するペレットを含有する経口多粒子剤形であって、ペレットが、主として
ａ）天然産生のヌクレオチドおよび／または非天然産生の合成改質ヌクレオチドが存在してよい、一本鎖または二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡあるいはＤＮＡ−ＲＮＡキメラである核酸作用物質を含有し、キトサン、２０質量％から４０質量％のメタクリル酸メチルおよび６０質量％から８０質量％のメタクリル酸からなる（メタ）アクリレートコポリマー、セルロース、架橋および／または未架橋ポリアクリル酸、レクチン、Ｎａアルギネート、ならびに／あるいはペクチンである粘膜接着作用を有するポリマーのマトリックスに埋包されたナノ粒子を含有し、該マトリックスが、他の薬剤的に一般的な助剤を随意選択で含有してよい、内部マトリックス層と、
ｂ）薬剤的に一般的な助剤と共に随意選択で調合してよいアニオン性ポリマーまたはコポリマーから本質的になる外部被膜コーティングとから構成される経口多粒子剤形において、
包含されるペレットが、胃のｐＨ範囲において放出され、外部被膜コーティングが、腸において１５分から６０分以内に４．０から８．０のｐＨ範囲において溶解し、それにより、内部マトリックス層が暴露され、腸粘膜に結合してそこで核酸作用物質を放出することができるように、アニオン性ポリマーまたはコポリマーを選択することにより、ならびに助剤とのその調合およびその層の厚さを選択することにより調節され、この場合、粘膜接着作用を有するポリマーが、外部被膜コーティングが溶け始めるｐＨ値に対して＋／−０．５ｐＨ単位の範囲において、少なくともηｂ＝１５０から１０００ｍＰａ・ｓの粘膜接着作用と、１５分で１０％から７５０％の吸水性とを示すように選択され、かつ、内部マトリックス層のナノ粒子の核酸作用物質含有量が、粘膜接着作用を有するポリマーの含有量の最大４０質量％を有するように多粒子剤形が調合されており、かつ、ナノ粒子に含まれる核酸作用物質が、カチオン性およびアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーとの複合体の形態で存在する、ことを特徴とする、経口多粒子剤形。
【請求項２】
ナノ粒子が、２０ｎｍから１０００ｎｍの範囲のサイズを有することを特徴とする、
請求項１記載の剤形。
【請求項３】
カチオン性（メタ）アクリレートコポリマーが、第３級アミノ基または第４級アミノ基を有する（メタ）アクリレートコポリマーであることを特徴とする、請求項１又は２記載の剤形。
【請求項４】
カチオン性（メタ）アクリレートコポリマーが、２０質量％から３０質量％のメタクリル酸メチル、２０質量％から３０質量％のメタクリル酸ブチル、および６０質量％から４０質量％のメタクリル酸ジメチルアミノエチルの遊離基重合単位からなることを特徴とする、請求項１から３までのいずれか１項記載の剤形。
【請求項５】
アニオン性（メタ）アクリレートコポリマーが、５質量％から６０質量％のアニオン性基を有するモノマーの含有量を有することを特徴とする、請求項１から４までのいずれか１項記載の剤形。
【請求項６】
アニオン性（メタ）アクリレートコポリマーが存在し、これが、
２０質量％から３３質量％のメタクリル酸および／またはアクリル酸、
５質量％から３０質量％のアクリル酸メチル、
２０質量％から４０質量％のアクリル酸エチル、
１０質量％を上回り３０質量％までのメタクリル酸ブチル、
および適切であれば、
０質量％から１０質量％の、ビニル共重合可能な他のモノマーとからなり、それらのモノマーの割合は合計で１００質量％までとするが、但し、ＩＳＯ  １１３５７‐２  ポイント３．３．３によるコポリマーのガラス転移温度（中点温度Ｔｍｇ）が、５５℃から７０℃であることを特徴とする、請求項１から５までのいずれか１項記載の剤形。
【請求項７】
ナノ粒子が、５００００以下の平均分子量Ｍｗを有するカチオン性またはアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーを含有することを特徴とする、請求項１から６までのいずれか１項記載の剤形。
【請求項８】
ナノ粒子が、５００００以下の平均分子量Ｍｗを有するアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーによるナノカプセル化のためのシェルを有することを特徴とする、請求項１から７までのいずれか１項記載の剤形。
【請求項９】
核酸作用物質が、核酸と特異的に結合する抗体、およびカチオン性物質との複合体の形態で存在することを特徴とする、請求項１から８までのいずれか１項記載の剤形。
【請求項１０】
外部被膜コーティングが、グリコール酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、酢酸コハク酸セルロース、酢酸トリメリット酸セルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、酢酸ビニル−ビニルピロリドンコポリマー、酢酸ビニル：クロトン酸９：１コポリマー、および／またはシェラックであることを特徴とする、請求項１から９までのいずれか１項記載の剤形。
【請求項１１】
外部被膜コーティングが、５質量％から６０質量％のアニオン性基を有するモノマーの含有量を有する（メタ）アクリレートコポリマーからなることを特徴とする、請求項１から１０までのいずれか１項記載の剤形。
【請求項１２】
外部コーティングの層の厚さが、２０μｍから２００μｍの範囲にあることを特徴とする、請求項１から１１までのいずれか１項記載の剤形。
【請求項１３】
内部マトリックスが、塩を含むＣ１０からＣ２０の脂肪酸および／またはＣ１０からＣ２０のアルコールおよび／または脂質および／またはリン脂質および／または脂質可溶性ビタミンおよび／または浸透促進剤を含有することを特徴とする、請求項１から１２までのいずれか１項記載の剤形。
【請求項１４】
内部マトリックスが、粘膜接着作用を有するポリマーとしてキトサンを含有し、キトサンが、酸または緩衝系と共に使用され、これらは、マトリックス中に存在するか、またはマトリックスが施与されるコア中、もしくはコア上に存在することを特徴とする、請求項１から１３までのいずれか１項記載の剤形。
【請求項１５】
内部マトリックス層が、キトサンを含有し、酸または緩衝系でｐＨ５．０から５．５に調節され、ｐＨ６．０から８．０の領域において溶け始める外部被膜コーティングと組み合わされることを特徴とする、請求項１から１４までのいずれか１項記載の剤形。
【請求項１６】
作用物質を含有するマトリックス層と外部被膜コーティング層との間に分離層が施与されることを特徴とする、請求項１から１５までのいずれか１項記載の剤形。
【請求項１７】
請求項１から１６までのいずれか１項記載の多粒子剤形の製造方法において、
ａ）核酸作用物質と助剤とを自体公知のように調合して、ナノ粒子にする工程と、
ｂ）ナノ粒子の形態の核酸作用物質および粘膜接着作用を有するポリマー、ならびに適切であれば、他の薬剤的に一般的な助剤を含有する内部マトリックス層を、コアの上に噴霧で施与することによって、またはコアを有さずに球状集塊、沈殿、もしくは噴霧法によって調合して、前ペレットを形成する工程と、その後、
ｃ）薬剤的に一般的な助剤と共に随意選択で調合してよいアニオン性ポリマーから主としてなる外部被膜コーティングを、前ペレット上に噴霧によって施与し、それにより、作用物質を含有するペレットを得る工程と、
ｄ）得られるペレットを薬剤的に一般的な助剤によって、および自体公知のように加工して多粒子剤形を得る工程によって、包含されるペレットが胃のｐＨ範囲において放出されるように調合する多粒子剤形の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、粘膜接着性に調合された核酸作用物質を含有する多粒子剤形、および剤形を生成する方法に関する。
【０００２】
背景技術
ＷＯ  ０２／６４１４８は、ムコ多糖体を含有する調合物、およびムコ多糖体を生成する方法を記述する。この場合、ヘパリンなどのムコ多糖体は、キトサンなどの吸着促進剤と共に調合され、その後、小腸の中央部分または下方部分において作用物質を放出することができるように、腸液において可溶なコーティングを提供する。腸液において可溶で適切なコーティングの例は、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ、Ｓ、Ｌ１００−５５のタイプのアニオン性アクリルポリマーである。調合は、カプセル、タブレット、および顆粒を含むことが可能である。
【０００３】
テロメラーゼは、細胞分裂において、特に染色体端部の領域のＤＮＡ２重化に寄与する酵素である。したがって、酵素は、無損傷の染色体構造を維持するのに重要である。テロメラーゼの活性は、ほとんどの成人の体細胞において抑制され、テロメラーゼの活性の上昇は、生殖細胞においてだけでなく、多くの腫瘍細胞のタイプにおいても観測される。テロメラーゼは、遺伝子により事前にプログラムされた細胞死まで、細胞の通常の生活環の分子制御において重要な役割を果たすと想定される。通常の細胞とは異なり腫瘍細胞においてテロメラーゼの活性が高いことは、通常の細胞分裂制御が失われている徴候であると解釈される。テロメラーゼおよびそれに関連する遺伝子構造は、腫瘍細胞の遺伝子治療の開始点と見なされる。
【０００４】
ＷＯ  ９９／３８９６４は、特にテロメラーゼ遺伝子促進剤を含有する遺伝子治療のための核酸を記載している。このＤＮＡは、たとえば細胞毒素符号化遺伝子など、外来遺伝子に結合することができる。核酸構成体は、腫瘍細胞に向上したテロメラーゼ活性をトランスフェクションするための作用物質として使用することができる。これは、腫瘍細胞の分裂を抑制し、さらに特にこれらの細胞を殺傷することが予測される。ＷＯ９９／３８９６４に記載されている作用物質のタイプ、およびそれから誘導された剤形を経口投与する可能性が述べられている。
【０００５】
Ｒｏｙら（１９９９年）は、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｖｏｌ．５、Ｎｏ．４、３８７から３９１ページ、「Ｏｒａｌ  ｇｅｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｗｉｔｈ  ｃｈｉｔｏｓａｎ−ＤＮＡ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｇｅｎｅｒａｔｅｓ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｐｅａｎｕｔ  ａｌｌｅｒｇｙ」において、マウスにおけるＤＮＡ作用物質の経口投与について記載している。プラスミドＤＮＡに関して存在する主要なピーナツ・アレルゲン遺伝子（ｐＣＭＶＡｒａｈ２）が、複合体に集合化することによって、約３９００００のＭｗを有するキトサンと共に、１００ｎｍから２００ｎｍの範囲のサイズを有するナノ粒子に調合された。これらのナノ粒子は、ＡＫＲ／Ｊマウスに経口で投与され、その際、腸上皮細胞において形質導入された遺伝子の発現を検出することが可能であった。このように処置されたマウスは、アレルゲン特有の分泌ＩｇＡ抗体および血清ＩｇＧ２ａ抗体を生成し、制御群と比較してアレルゲン誘発アナフィラキシの低下を示した。
【０００６】
Ｌｅｏｎｇら（１９９８年）は、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ５３、１８３から１９３ページ、「ＤＮＡ−ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎ  ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ  ａｓ  ｎｏｎ−ｖｉｒａｌ  ｇｅｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｖｅｈｉｃｌｅｓ」において、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいてインビボで外来遺伝子の発現を生じる遺伝子導入助剤を記載している。ナノスフェアが、２００から７００ｎｍの範囲のサイズを有するゼラチンまたはキトサンと共にＤＮＡ複合体として生成された。
【０００７】
ＷＯ  ０２／０９４９８３は、核酸、ＤＮＡについて特異性を有する抗体、およびそれに関連付けられたカチオン性高分子複合体の調合を記載している。調合は、ナノ粒子の形態において行われ、トランスフェクション率の増大が、インビトロおよびインビボの両方で検出される。作用物質を遅延放出する経口投与の調合が述べられている。
【０００８】
ＷＯ  ０３／００７９１３は、いわゆる複数のパッチの形態において作用物質を含有する経口多粒子剤形を記載している。パッチは、５００μｍから５ｍｍの直径および１００μｍから１０００μｍの高さを有する生体適合性材料で生成されたディスク状の物質である。パッチは、２つの層または側面からなり、その１側面は、水またはエチルセルロースなどで生成さたれ体液についてごく低い浸透性を有し、その第２側面は、タンパク質、多糖類、または小分子などの作用物質を含有し、これらは、キトサン、ＣＭＣ、ポリアクリル酸、またはペクチンなど、粘膜接着性ポリマーを有する混合物において存在することが可能である。パッチは、タブレットを形成するために圧縮することができ、または、腸液において可溶なコーティングをさらに含有するカプセルに実装することができる。作用物質の調製はまた、脂肪酸、脂肪アルコール、エステル、表面活性物質、およびプロテアーゼ抑制剤など、いわゆる促進剤とさらに組み合わせることも可能である。腸の特定の部分においてなど、活性部位において、カプセルは溶解し、パッチを放出する。放出されたパッチは、粘膜接着側で超粘膜に接着し、そこから遅延方式で腸粘膜に向かって作用物質を送達することができる。パッチの第２のごくわずかに浸透性の側は、腸管腔に面する側から化学的または酵素的不活性化に対してある保護を有する作用物質を提供することを意図する。
【０００９】
ＷＯ  ０３／０９２７３２は、１０００から５００００の比較的低分子量Ｍｗを有するアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーに基づくｐＨ感受性ポリマーを記載している。ｐＨ感受性ポリマーはまた、とりわけ、核酸を複合体にするのにも適している。ｐＨ感受性ポリマーは、ｐＨ７．０もしくはわずかにそれより上の領域では、高濃度においてのみ細胞毒性作用を有し、または全く有さないが、ｐＨ６．５より下では低濃度でもインビボで細胞毒性または溶血性あるいは膜溶解性の作用を有する。
【００１０】
問題および解決法
ＷＯ  ９９／３８９６４は、ヒトテロメラーゼ遺伝子およびこの遺伝子の促進剤に関する核酸およびベクターを記載している。そこで記載された核酸は、腫瘍細胞の遺伝子治療の有望な作用物質と見なすことが可能である。ＷＯ  ９９／３８９６４に記載された作用物質タイプの経口投与は、非常に一般的にのみ示唆されている。特にヌクレアーゼによる時期尚早の不活性化が起きず、かつ十分な割合の作用物質が対象細胞をトランスフェクションするのに成功するような方式で、熟練者がこのタイプの作用物質を活性部位に送達することを可能にする調合を提案することが必要である。冒頭に述べられ、ナノ粒子における抗体ＤＮＡ結合複合体を記載するＷＯ  ０２／０９４９８３は、経口剤形の調合についてもかなり一般的な示唆を与えるだけである。
【００１１】
ＷＯ  ０３／００７９１３は、腸管腔において放出され、かつ腸管腔において作用することを意図する経口剤形の調製に対する可能な解決法を記載する。この解決法の１つの欠点は、とりわけ、２層パッチ構造の構築および生成が精巧であると見なされる可能性があることである。医薬品の形態が、胃液に対して抵抗性であり、かつ腸液において可溶性であるコーティングを有するカプセルとして提供されることが、特に不利益である。２．５ｍｍを明らかに超えるサイズでは、治療の再現性が不十分であることが懸念される。カプセルが胃を通過する時間は、大きく変化する可能性がある。あらゆる場合において、作用の開始が遅延されることが予測される。さらに、カプセル自体は、コーティングが一部溶解した後、迅速または緩慢に溶解する可能性がある。コーティングおよびカプセルの２つの成分は、この場合不良に重複し、それにより、パッチの放出は、全体的に制御されないことが予測されるはずである。カプセルは、腸液に少なくとも部分的に到達可能である状況において、現在の腸の内容物または腸の蠕動に応じて、完全なままである、または機械的大きく破損している可能性がある。当初コーティングされたカプセルの構造に関する崩壊または機械的応力に応じて、一方では大量のパッチが突然放出される可能性があり、他方では放出が望ましくなく遅延される可能性がある。したがって、より良好に全体的に制御することができる作用物質の送達が望ましい。
【００１２】
本発明は、特に遺伝子治療の目的で、核酸作用物質について経口投与することができる剤形に関する。これに関連する一般的な課題は、作用部位において生細胞をトランスフェクションするのに有益である形態で作用物質を調合し、同時に、作用物質または少なくとも十分な量が、トランスフェクションすることができる形態で作用部位に到達することを保証することである。本発明の課題の１つは、核酸作用物質を対象化して効率的に放出するのに適切な剤形を提供することであると見なされた。剤形は、高投与量信頼性を提供し、胃を迅速に通過した後に腸管腔において十分に分布することを意図する。含まれている核酸作用物質は、さらに、物理的、化学的、または核酸分解的な不活性化から十分に保護され、かつ作用物質の大きな割合を身体によって吸収することができるような方式で、確定作用部位において放出されることを意図する。放出部位は、治療の目的に応じて、変動的および確実に調節可能であることを意図する。剤形は、ＤＮＡ作用物質の他に、薬理学的に許容可能な無毒の成分のみを含有することを意図し、それにより、剤形の摂取が頻繁である、または規則的である場合でさえ、当初から望ましくない副作用が予期されない。
【００１３】
前記課題は、
ａ）核酸作用物質を含有し、粘膜接着作用を有するポリマーのマトリックスに埋包されたナノ粒子を含有し、マトリックスが、薬剤的に有用な助剤を随意選択でさらに含有することが可能である、内部マトリックス層と、
ｂ）薬剤的に一般的な助剤、特に可塑剤を有して随意選択で調合することが可能であるアニオン性ポリマーまたはコポリマーから本質的になる外部被膜コーティングとからなり、
包含されるペレットが、胃のｐＨ範囲において放出され、コーティングが、腸において１５分から６０分以内に４．０から８．０のｐＨにおいて溶解し、それにより、作用物質包含粘膜接着マトリックス層が腸粘膜に暴露され、腸粘膜に結合して腸粘膜において作用物質を放出することができるように、外部コーティングが、アニオン性ポリマーまたはコポリマー、ならびに助剤を有するその調合およびその層の厚さを選択することにより調節され、この場合、粘膜接着作用を有するポリマーが、外部コーティングが溶け始めるｐＨに対して＋／−０．５ｐＨ単位の範囲において、少なくともηｂ＝１５０から１０００ｍＰａ・ｓの粘膜接着作用と、１５分で１０％から７５０％の吸水性とを示すように選択され、マトリックス層のナノ粒子の作用物質含有量が、粘膜接着作用を有するポリマーの含有量の４０質量％の最大値を有するように、多粒子剤形が調合されることを特徴とする、５０μｍから２５００μｍの範囲の平均直径を有するペレットを含有する経口多粒子剤形によって解決される。
【００１４】
本発明の実施形態
本発明は、
ａ）核酸作用物質を含有し、粘膜接着作用を有するポリマーのマトリックスに埋包されたナノ粒子を含有する内部マトリックス層であって、マトリックスが、薬剤的に一般的な助剤を随意選択でさらに含有することが可能である、内部マトリックス層と、
ｂ）薬剤的に有用な助剤、特に可塑剤を有して随意選択で調合することが可能であるアニオン性ポリマーまたはコポリマーから本質的になる外部被膜コーティングとからなる、特にタブレット、ミニタブレット、カプセルに実装されたペレット、サシェット、または乾燥粉末の形態にあり、５０μｍから２５００μｍ、好ましくは１００μｍから１０００μｍの範囲の平均サイズまたは平均直径を有するペレットを含有する、多粒子剤形に関する。
【００１５】
多粒子剤形は、包含されるペレットが、胃のｐＨ範囲において放出されるように調合される。
【００１６】
本発明の文脈におけるペレットという用語は、本発明において記述される構造およびサイズを有する限り、微小粒子、ビーズ、またはミニタブレットと呼ぶことも可能である円形から球状の凝集物を含む。
【００１７】
外部コーティングは、コーティングが、１５分から６０分、好ましくは２０分から４０分以内に胃において４．０から８．０、好ましくは、５．５から７．８、特に好ましくは５．８から７．５のｐＨ範囲で溶解し、それにより、作用物質包含粘膜接着マトリックス層が、腸粘膜に暴露され、腸粘膜に結合して腸粘膜において作用物質を放出することができるように、アニオン性ポリマーまたはコポリマー、ならびに助剤を有するその調合およびその層の厚さを選択することによって調節される。
【００１８】
粘膜接着作用を有するポリマーまたはコポリマーは、外部コーティングが溶け始めるｐＨに対して＋／−０．５、好ましくは＋／−０．３のｐＨ単位の範囲において、ηｂ＝１５０から１０００、好ましくは１５０から６００ｍＰａ・ｓの粘膜接着作用と、１５分で１０％から７５０％、好ましくは１０％から２５０％、特に好ましくは１０％から１６０％の吸水性とを示し、マトリックス層の作用物質含有量が、粘膜接着作用を有するポリマーの含有量の４０質量％を超えない、好ましくは０．００１質量％から１５質量％、または０．０５質量％から５質量％であるように選択される。
【００１９】
内部マトリックス層
内部マトリックス層は、作用物質の担体として作用する。内部マトリックス層は、作用物質が腸粘膜から体内に入ることができるように、包含される粘膜接着ポリマーによって、作用物質を腸粘膜に結合する機能をさらに有する。内部マトリックス層は、作用物質を物理的、化学的、または酵素的な不活性化から保護する機能をさらに有する。
【００２０】
内部マトリックスは、薬剤的助剤、特にＧタンパク質結合受容体および配位子（たとえば、ＷＯ  ０２／１０２４０７、７４から７６ページを参照されたい）、特に８‐ＯＨ‐ＤＰＡＴ、アミノケタンセリン、アントロピン、ブタクラモール、クロルプロマジン、クロロプロジクセン、キナンセリン、シアノピンドロール、シプロヘプタジン、ドンペリドン、エピ−デプリド、エピ−ネフリン、フェノルドパン、フルペンチキソール、フルフェナジン、ハロペリドール、ヘキソシクリウム、ヒンバシン、イオドメラトニン、ケタンセリン、リセルグ酸誘導体、メソリダジン、メスレリギン、メトクトラミン、メチルセルギド、メトクロプラミン、ミアンセリン、モリンドネン、ムスカリニック、ナロキソン、Ｎ−メチルスピペロン、ノルエピネフリン、ペルゴリド、フェントラミン、ピレンゼピン、ＰＰＨＴ−コウマリン、ＰＰＨＴ−ロダミン、ＰＰＨＴ−テキサスレッド、プラゾシン、プロマジン、ラクロプリド、セロトニン、スペペロン、スプリロキサトリン、スルピリド、スマトリプタン、テニラピン、およびトリフルプリマジンをさらに含有することが可能である。
【００２１】
内部マトリックスは、浸透促進剤、たとえば、クエン酸トリエチル、クエン酸アセチルトリエチル、セバシン酸ジエチル、セバシン酸ジブチルなどの可塑剤、カルボマー、キトサン、キトサン−システイン、ナトリウムカルボキシルメチルセルロース、Ｎ−トリメチル化キトサン、ポリカルボフィルシステイン、長鎖脂肪酸、そのエステル（たとえば、モノおよびジグリセリド）などのポリマーおよびラウリン酸、ラウリンスルホン酸、パルミチン酸、カプリル酸、カプリン酸、オレイン酸などの塩、アシルカルニチン、ＥＤＴＡなどのキレート剤、サリチル酸塩、シクロデキストリン、ポリアクリル酸、コール酸、コリルタウリン、コリルサルコシン、ケノデオキシコール酸などの胆汁酸およびＮａコール、Ｎａグリココール、Ｎａタクロコール、Ｎａタウロジヒドロフシジン、Ｎａグリコジヒドロフシジンなどのその塩、表面活性剤および乳化剤、特にポリエチレン−６６０、１２−ヒドロキシステアレート（Ｓｏｌｕｔｏｌ（登録商標）ＨＳ１５）、（Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５）、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、ポリオキシエチル化カストール油（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレングリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８）、毒閉鎖帯毒性（ＺＯＴ）、およびビタミンＥ（トコフェロール）またはビタミンＢ１２などのビタミンをさらに含有することが可能である。
【００２２】
薬剤助剤、浸透促進剤、ならびに／あるいはＧタンパク質結合受容体および配位子は、内部マトリックス層に存在しないこと、または０．０１質量％から１０質量％、好ましくは０．０５質量％から２質量％、特に好ましくは０．１質量％から１質量％など、少量のみ存在することが好ましい。
【００２３】
核酸作用物質
マトリックス層は、核酸作用物質を有するナノ粒子を含有する。核酸作用物質は、哺乳動物細胞、特にヒト細部のＤＮＡとの相互作用を対象部位においてインビボで誘発するタスクを有し、これにより細胞のＤＮＡ構造が変化し、または非常に一般的には細胞の特性が変化する。これに関して、遺伝子的に関連する疾患の欠陥遺伝子構造を修復することを目的とするいわゆる遺伝子治療が、主に述べられるべきである。これは、たとえば、腫瘍細胞におけるテロメラーゼ活性などの望ましくない遺伝子活性を不活性化する、または切り替える形態をとることが可能である。これはまた、ｐ５３遺伝子活性、長く既知であり、かつ集中的に研究された腫瘍抑制遺伝子など、健康な細胞に通常存在する遺伝子活性を回復する形態をとることも可能である。したがって、本発明は、特に遺伝子治療のために、核酸作用物質について経口投与することができる剤形に関する。
【００２４】
核酸作用物質は、一本鎖または二本鎖のＤＮＡ（デオキシリボ核酸）またはＲＮＡ（リボ核酸）、あるいはＤＮＡ‐ＲＮＡキメラとすることが可能であり、天然産生のヌクレオチドおよび／または非天然産生の合成改質ヌクレオチドが存在することが可能である。核酸作用物質は、線形または円形の形態にあることが可能である。核酸作用物質は、たとえば１０から２００塩基または塩基対の長さを有する、オリゴヌクレオチド単位の形態を取ることが可能である。核酸作用物質はまた、たとえば、２００から１０００００、５００から１００００、または１０００から５０００塩基または塩基対のより長い単位の形態を取ることも可能である。実際の作用物質として作用する配列、たとえば、対象細胞に存在する、または補充される核酸配列の他に、核酸作用物質はまた、適切であれば、対象細胞に通常は存在せず、対象細胞と相互作用することを意図しないベクター配列を有することも可能である。
【００２５】
既知のベクター系の例は、二本鎖ＤＮＡに基づき、かつウィルス系に基づいてプラスミドまたはベクターから導出されるものである。既知の例は、組換えアデノ随伴ウィルス・ベクター（ｒＡＡＶ）である。他の二本鎖ベクターは、促進剤またはサイトメガロウィルス（ＣＭＶ）またはＳＶ４０ウィルスからの調節配列を有することが可能である。付着ＲＮＡ要素の補助で、分解から保護することができる一本鎖ＤＮＡから他のベクターを導出することが可能である。また、短いＤＮＡ部分、たとえば３０から６０の塩基が、１から４の塩基の短いＲＮＡ部分と共に端部において提供されるいわゆるＲＤＯ  ＩおよびＲＤＯ  ＩＩ構成物も知られている。半減期またはヌクレアーゼ抵抗は、非天然産生のヌクレオチドをＲＮＡまたはＤＮＡに導入することによって、さらに向上させることができる。これに関連して、たとえば、単一の酸素原子が硫黄原子によって置換され、それによりリン−硫黄ブリッジが得られる（ＭＳＯ）ことが可能である。遺伝子修復ベクターまたは遺伝子置換ベクターとして適切であり、かつ本発明の文脈において作用物質として使用することができる多様な核酸形態が、たとえば、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｖｏｌ．４、２００３、６７９から６８９ページ、Ｌｉ  Ｌｉｕらに記載されている。本質的に、作用物質として作用する核酸配列のみを有し、ごく小さい割合のベクターＤＮＡを有する、またはベクターＤＮＡを有しない核酸断片が好ましい。
【００２６】
核酸作用物質は、抗体などのカチオン性ポリマーまたはタンパク質を有する、たとえば複合体または結合体において存在することが可能である。複合体化または結合体構成は、化学ブリッジ結合により共役結合で、またはファン・デア・ワールス力（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｗａａｌ‘ｓ  ｆｏｒｃｅｓ）、イオン連鎖、疎水性連鎖を介する非共有結合で、可逆的または不可逆的に行うことが可能である。複合体または結合体自体において核酸作用物質の他に示される分子は、治療効果を示さないが、それにより、調合の補助剤と見なされ、作用物質または作用物質の一部とは見なされない。
【００２７】
核酸作用物質は、適切であれば、タンパク質またはペプチドの補助で調合することが可能である。しかし、タンパク質またはペプチド自体は、治療効果を示さず、したがって、調合補助剤と見なされ、作用物質または作用物質の一部とは見なされない。
【００２８】
核酸は、たとえばＷＯ  ０２／０９４９８３において開示されているように、特定的に核酸に結合する抗体、およびカチオン性物質との複合体の形態にあることが可能である。この尺度は、インビトロおよびインビボの両方においてトランスフェクション率の増大に寄与することができることを示すことが可能であった。これに関して、完全に作用する単クローンＩｇＧ抗体またはＩｇＭ抗体、あるいは断片として、Ｆｃ抗体断片、Ｆａｂ’抗体断片、Ｆ（ａ，ｂ）’２抗体断片、または半抗体断片が可能であり、かつ好ましいが、これらの断片は、各場合において、少なくとも１つの抗ＤＮＡ結合部位を有さなければならない。核酸対抗ＤＮＡ抗体の分子比は、たとえば、１：２０から１：５とすることが可能である。
【００２９】
核酸作用物質は、たとえば、血友病の治療を目的とし、凝固因子遺伝子、たとえば、ヒト凝固因子ＫＸのｃＤＮＡ遺伝子を有することが可能である（たとえば、ＷＯ  ０３／０２８６５７、またはＰａｌｍｅｒら、Ｂｌｏｏｄ，１９８９年、７３（２）、４３８から４４５ページ、あるいはＹａｏら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ、ＵＳＡ、１９９２年、８９（８）：３３５７から３３６１ページを参照されたい）。核酸作用物質は、治療有効遺伝子部分の他に、たとえばＦａｓ配位子など、免疫寛容誘発遺伝子を有することも可能である。共発現したＦａｓ配位子またはＦａｓ遺伝子のセクションは、遺伝子を対象細胞に移入した後に特定的に活性化させることができるＴ細胞において細胞消滅を誘発することができる。白血病細胞における細胞消滅誘発に関連するベクターも、Ｗａｌｅｎｓｋｙら、２００４年、「Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  Ｖｉｖｏ  ｂｙ  ａ  Ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ−Ｓｔａｐｌｅｄ  ＢＨ３  Ｈｅｌｉｘ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ、３０５、１４６６から１４７０ページから推測することができる。
【００３０】
核酸作用物質は、たとえば、ヒトテロメラーゼ遺伝子の遺伝性セクション、特に促進剤領域を有することが可能である。適切な例は、ＷＯ  ９９／３８９６４に記載されている遺伝子治療ベクターｐＧＴ６２−ｃｏｄＡｕｐｐ、またはＷＯ  ９９／３８９６４から当業者によって推測することができる他のベクターである。核酸作用物質は、腫瘍抑制遺伝子セクション、たとえばｐ５３腫瘍抑制遺伝子またはその断片を有することが可能である。ＵＳ６４５１５９３Ｂ１が、本発明の文脈において核酸作用物質を生成するのに適切な遺伝子治療のための発現ベクターを構築する原理を記載している。
【００３１】
ナノ粒子
剤形は、２０ｎｍから１０００ｎｍ、好ましくは５０ｎｍから２５０ｎｍ、特に好ましくは８０ｎｍから２２０ｎｍ、とりわけ１００ｎｍから２００ｎｍの範囲のサイズを有することが好ましい可能性があるナノ粒子を含有する。
【００３２】
ナノ粒子に存在する核酸は、カチオン性物質との複合体の形態で存在することが好ましい可能性がある。
【００３３】
カチオン性物質は、カチオン性脂質、カチオン性ポリペプチド、および／またはカチオン性ポリマーとすることが可能である。ポリエチレンイミンまたはその誘導体も、適切である可能性がある。
【００３４】
カチオン性脂質は、たとえば、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイロキシ）プロピル］−Ｎ−Ｎ−Ｎ−トリメチル塩化アンモニウム（ＤＯＴＭＡ）とジオレイルフォスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）の商用混合物とすることが可能である。適切な例はまた、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイロキシ）プロピル］−Ｎ−Ｎ−Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルスルフェート（ＤＯＴＡＰ）、ジオレイルフォスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）である。
【００３５】
カチオン性ポリペプチドは、カチオン性側基を有するアミノ酸の合成により調製されたホモポリマーであることが好ましい。ポリリシン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、およびポリヒスチジンが述べられるべきである。鎖の長さは、３から２０、１０から５０、５０から１００、または最高で５００、あるいは最高で１０００のアミノ酸など、数単位から長単位まで変化することが可能である。たとえばヒストンタンパク質など、主にカチオン特性を有する天然産生のタンパク質を使用することも可能である。
【００３６】
比較的わずかな薬理学的経験を有する他の物質に関して、（メタ）アクリレートコポリマーが好ましいが、その理由は、経口投与される医薬品において、数１０年にわたり安全に使用されてきたからである。したがって、カチオン性ポリマーは、（メタ）アクリレートコポリマー、特に第３級アミノ基または第４級アミノ基を有する（メタ）アクリレートコポリマーが好ましい可能性がある。カチオン性（メタ）アクリレートコポリマーのガラス転移温度（ＩＳＯ  １１３５７−２、サブセクション３．３．３）は、４０℃から６０℃の範囲にあることが好ましく、分子量Ｍｗ（質量平均）は、１０００００から２０００００である（分子量Ｍｗは、たとえば、ゲル浸透クロマトグラフィによって、または散乱光法によって決定することができる（たとえば、Ｈ．Ｆ．Ｍａｒｋら、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、第２版、Ｖｏｌ．１０、１ページ以降、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ、１９８９年を参照されたい）。腎臓または胆管を介する排出を改善するために、たとえば５００００以下、または５０００から４００００、１００００から３００００、あるいは１５０００から２５０００のＭｗを有する、低分子量Ｍｗを有するカチオン性（メタ）アクリレートコポリマーが好ましい。
【００３７】
分子量Ｍｗ（質量平均）は、たとえば、粘度計またはゲル排除クロマトグラフィ（ＧＰＣ）によって決定することができる。粘度計の値（限界粘度数）は、２３℃のクロロホルムまたはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）において決定することができ、１０から２０、好ましくは１１から１５ｎｓｐｅｃ／ｃ（ｃｍ３／ｇ）の範囲にあるべきであることが好ましい。粘度数は、たとえば、ＩＳＯ  １６２８−６において規定されているように測定することができる。
【００３８】
２０質量％から３０質量％のメタクリル酸メチル、２０質量％から３０質量％のメタクリル酸ブチル、および６０質量％から４０質量％のメタクリル酸ジメチルアミノエチルの遊離基重合単位からなる（メタ）アクリレートコポリマーが好ましい。（メタ）アクリレートは、特に、１０μｍから３０μｍの平均粒子サイズを有するミクロ形態において使用することができる。第３級アミノ基を有する特に適切な商用の（メタ）アクリレートコポリマーは、たとえば、２５質量％のメタクリル酸メチル、２５質量％のメタクリル酸ブチル、および５０質量％のメタクリル酸ジメチルアミノエチルからなる（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｅ１００）。１０μｍから２０μｍの平均粒子サイズを有するミクロ形態（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｅ  ＰＯ、粉末）が、特に好ましい。この形態は、核酸包含ナノ粒子に特によく処理することができる。この場合の結果は、トランスフェクション率の増大に寄与することが可能である、核酸分子との明らかに特に有益な複合体形成である。
【００３９】
核酸作用物質ならびにカチオン性およびアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーを含有するナノ粒子
対象細胞のタイプについてのそれぞれの核酸のトランスフェクション率は、核酸作用物質およびカチオン性（メタ）アクリレートコポリマーを含有するナノ粒子の調製において、核酸作用物質およびカチオン性（メタ）アクリレートコポリマーに基づいて、０．１質量％から４０質量％、特に１質量％から３０質量％、特に好ましくは２質量％から２５質量％の割合のアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーをさらに追加することによって、さらに最適化することができる。その場合、ナノ粒子は、利用可能であれば対象細胞タイプの細胞培養基で、または少なくとも同様であるもしくは同様に反応する細胞タイプで、インビトロ検定においてトランスフェクション率について検査されなければならない。このようにして、複合体における核酸の結合力と、複合体から生細胞への放出との間において適切な均衡を調節することが可能である。カチオン性（メタ）アクリレートコポリマーのみによる結合作用が当初過度に強く、それにより核酸のトランスフェクション率が不十分に低い場合、結合作用は、使用される核酸および対象細胞のタイプに特有である最適値にトランスフェクション率が到達するまで、（メタ）アクリレートコポリマーを添加することによって弱めることができる。この調合モードは、カチオン性およびアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーの両方が薬理学的に許容可能であり、それにより副作用がほとんどまたは全く予期されないという利点を有する。
【００４０】
適切で好ましいアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーは、外部コーティングについて使用することもできる同じタイプであり、すなわち５質量％から６０質量％のアニオン性基を有するモノマー含有量を有する（メタ）アクリレートコポリマー（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）タイプＬ、Ｓ、Ｌ１００−５５、ＦＳ）である。多くの場合、トランスフェクション率の驚くべき増大は、
２０質量％から３３質量％のメチルアクリル酸および／またはアクリル酸、
５質量％から３０質量％のアクリル酸メチル、
２０質量％から４０質量％のアクリル酸エチル、
１０質量％を上回り３０質量％までのメタクリル酸ブチル、
および適切であれば、
ビニルコポリマー化することができる０質量％から１０質量％の他のモノマーであって、
モノマーの割合が合計で１００質量％まで他のモノマーからなるアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーを使用することによって達成することができ、
ＩＳＯ  １１３５７‐２、サブセクション３．３．３によるコポリマーのガラス転移温度（中点温度Ｔｍｇ）が、５５℃から７０℃であることを条件とする。
【００４１】
上述されたコポリマーは、特に、
２０質量％から３３質量％、好ましくは２５質量％から３２質量％、特に好ましくは２８質量％から３１質量％のメタクリル酸またはアクリル酸であり、好ましくはメタクリル酸と、
５質量％から３０質量％、好ましくは１０質量％から２８質量％、特に好ましくは１５質量％から２５質量％のアクリル酸メチルと、
２０質量％から４０質量％、好ましくは２５質量％から３５質量％、特に好ましくは１８質量％から２２質量％のアクリル酸エチルと、
１０質量％を上回り３０質量％まで、好ましくは１５質量％から２５質量％、特に好ましくは１８質量％から２２質量％のアクリル酸ブチルとの遊離基重合からなり、
モノマーの組成は、コポリマーのガラス転移温度が、５５℃から７０℃、好ましくは５９℃から６６℃、特に好ましくは６０℃から６５℃であるように選択される。
【００４２】
腎臓または胆管を介した排出を改善するために、低分子量を有するアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーが好ましく、たとえば、５００００以下、５０００から４００００、１００００から３００００、または１５０００から２５０００のＭｗを有することが好ましい。
【００４３】
分子量Ｍｗ（質量平均）は、たとえば、粘度計またはゲル排除クロマトグラフィ（ＧＰＣ）によって決定することができる。粘度計の値（限界粘度数）は、２３℃のクロロホルムまたはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）において決定することができ、１０から２０、好ましくは１１から１５ｎｓｐｅｃ／ｃ（ｃｍ３／ｇ）の範囲にあるべきであることが好ましい。粘度数は、たとえば、ＩＳＯ  １６２８−６において規定されているように測定することができる。
【００４４】
低分子量を有するアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーは、ｐＨ７．０もしくはわずかにそれより上の領域では、高濃度においてのみ細胞毒性作用を有し、または全く有さないが、ｐＨ６．５．より下では低濃度でもインビボで溶血性および膜溶解性の作用を有するｐＨ感受性ポリマーである。ポリマーは、ナノ粒子において核酸作用物質とカチオン性（メタ）アクリレートコポリマーの間の結合力変調剤として作用することができ、同時に、トランスフェクション率に対して有益な影響を有する。ナノ粒子において低分子量を有するアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーの特性は、その後の不安定化または溶解によりエンドソーム内に摂取した後、特に核酸作用物質の細胞内放出に寄与することができる。
【００４５】
ナノカプセル化のための低分子量を有するアニオン性（メタ）アクリレートコポリマー
好ましい実施形態では、５００００以下、５０００から４００００、１００００から３００００、または１５０００から２５０００のＭｗなど、低分子量を有するアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーが、ナノカプセル化によってシェルとして、核酸作用物質およびカチオン性ポリマー、好ましくはカチオン性（メタ）アクリレートコポリマーを含有するナノ粒子に加えられる。ナノ粒子の表面上において低分子量を有するアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーは、特に、その後の不安定化または溶解によりエンドソーム内に摂取した後、特に核酸作用物質の細胞内放出に寄与することができる。さらに、核酸作用物質は、内部において核酸の分解からより良好に保護され、それにより、より多くの作用物質が、対象部位に到達することができる。
【００４６】
作用物質の割合
マトリックス層におけるナノ粒子の割合は、粘膜接着作用を有するポリマーの含有量の４０質量％を超えない、特に０．００１質量％から１５質量％、または０．０５質量％から５質量％であることが好ましい。ナノ粒子における核酸作用物質の割合は、たとえば、１質量％から５０質量％、好ましくは２質量％から２５質量％とすることができる。
【００４７】
ナノ粒子の調製
ナノ粒子の調製は既知である。既知の方法は、コアセルベーション、複合体形成、エマルジョン沈殿、油中水エマルジョンからの有機溶媒含有物の蒸発であり、水溶性相においてナノ粒子を得る。Ｌｅｏｎｇら（１９９８年）が、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ５３、１８３〜１９３ページ、「ＤＮＡ  ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎ  ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ  ａｓ  ｎｏｎ−ｖｉｒａｌ  ｇｅｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｖｅｈｉｃｌｅｓ」において、ナノ粒子の準備を記載している。Ｌｅｏｎｇら（１９９８年）が、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ５３、１８３から１９３ページ、「ＤＮＡ  ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎ  ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ  ａｓ  ｎｏｎ−ｖｉｒａｌ  ｇｅｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｖｅｈｉｃｌｅｓ」において、ナノ粒子の調製を記載している。Ｒｏｙら（１９９９年）が、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｖｏｌ．５、Ｎｏ．４、３８７から３９１ページ、「Ｏｒａｌ  ｇｅｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｗｉｔｈ  ｃｈｉｔｏｓａｎ−ＤＮＡ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｇｅｎｅｒａｔｅｓ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｐｒｏｂｌｅｍｓ  ｉｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｐｅａｎｕｔ  ａｌｌｅｒｇｙ」おいて、ナノ粒子の調製を記載している。
【００４８】
ナノカプセル化は、境界層重合法である（たとえば、Ｃｈｏｕｉｎａｒｄ  Ｆ．ら、Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．、１９９４年、Ｊｕｎｅ  １１（６）：８６９から８７４ページを参照されたい）。ナノカプセルは、水溶性媒体においてナノ粒子を不溶性複合体として分散させ、有機溶媒において分散を乳化することによって生成することができる。有機溶媒の分散は、たとえば、（メタ）アクリレートコポリマーを含有する。有機溶媒が蒸発する際、（メタ）アクリレートコポリマーは沈殿し、ナノ粒子の周りにシェルを形成する。ナノ粒子のカプセル化は有利であるが、その理由は、複合体化した核酸の追加の保護が、結腸腸細胞および肝臓による吸収プロセス中に保証されるからである。
【００４９】
粘膜接着作用を有するポリマー
マトリックス層は、粘膜接着作用を有するポリマーをさらに含有する。粘膜接着作用を有する適切なポリマーは、特にキトサン（キトサンおよび誘導体、キトサン）、２０質量％から４５質量％のメチルメタクリレートおよび５５質量％から８０質量％のメタクリル酸からなる（メタ）アクリレートコポリマー、セルロース、特にＮａカルボキシメチルセルロース（たとえば、Ｂｌａｎｏｓｅ（登録商標）またはＭｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標））などのメチルセルロースである。比較的わずかな薬理学的経験を有する他の物質に関して、（メタ）アクリレートコポリマーが好ましいが、その理由は、経口投与された医薬品において数１０年にわたり安全に使用されてきたからである。
【００５０】
粘膜接着作用を有するポリマーは、外部コーティングが溶け始めるｐＨに関して、＋／−０．５、好ましくは＋／−０．３のｐＨ単位の範囲において、１５分で１０％から７５０％、好ましくは１０％から２５０％、特に好ましくは１０％から１６０％の吸水性を示すように選択される。
【００５１】
粘膜接着特性の測定
粘膜接着特性を特徴付ける適切な測定方法が、ＨａｓｓａｎおよびＧａｌｌｏ（１９９０年）に含まれている（Ｈａｓｓａｎ  Ｅ．Ｅ．およびＧａｌｌｏ  Ｊ．Ｍ．「Ａ  Ｓｉｍｐｌｅ  Ｒｈｅｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍｕｃｉｎ−Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｂｉｏａｄｈｅｓｉｖｅ  Ｂｏｎｄ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ」、Ｐｈａｒｍａ  Ｒｅｓ．７（５）、４９１（１９９０年）を参照されたい）。この方法は、ポリマーを有するムチンの混合物の粘性（η、動的粘性または粘性係数）が、個々の構成要素の粘性の全体とは異なるという想定に基づく。適用される関係は、ηポリマーとムチンとの混合物＝ηムチン＋ηポリマー＋ηｂであり、ηｂは差を表す。より高いηｂは、より優れた粘膜接着特性を意味する。個々の構成要素は、回転粘度計を使用して粘性について当初測定された。粘膜接着ポリマーの０．５％強度（Ｗ／Ｗ）水溶液および豚の胃粘素の１５％強度溶液が使用される。粘膜接着特性ηｂを決定するために、ムチンおよびポリマーは単独で測定され、述べられた濃度で混合される。
【００５２】
粘膜接着作用を有するポリマーは、外部コーティングが溶け始めるｐＨに関して、＋／‐０．５、好ましくは＋／−０．３ｐＨ単位の範囲において、１５０から１０００、好ましくは１５０から６００ｍＰａ・ｓの粘性ηｂとして測定された粘膜接着作用を示すように選択される。
【００５３】
水和および吸水
ポリマーの水和は、水を吸収するポリマーの親和力に基づく。ポリマーは、この水の摂取により膨潤する。これは、ポリマーの水と周囲媒質の水の化学的電位の間の不均衡に関連する。水は、内相と外相の間で平衡に到達するまで、ポリマーの浸透圧のために吸収される。したがって、ポリマーは、１００％水和される。その場合、低平均分子量を有するポリマーは、溶液の形態にある。より高い分子量を有するポリマーまたは架橋ポリマーで、ゲルが生成される。均衡が設定されるまでの水の吸収は、たとえば、ポリマー質量の１０００％に対応して、最高で固有質量の１０倍に達する可能性がある。
【００５４】
吸水性の割合の測定
吸水性の割合の測定は、当業者には周知である。適切な方法が、たとえば、Ｌｅｈｒｂｕｃｈ  ｄｅｒ  ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ／Ｒｕｄｏｌｆ  Ｖｏｉｇｔ、Ｂａｓｅｌ：Ｖｅｒｌａｇ  Ｃｈｅｍｉｅ、第５完全改定版、１９８４年、１５１ページ、７．７．６ｕｎｄｅｒ「Ａｕｆｓａｕｇｖｅｒｍｏｇｅｎ」に記載されている。この方法は、いわゆるインシュリン装置を使用し、ガラス吸引フィルタ漏斗が、管によって目盛り付きピペットに接続される。ピペットは、ガラス・フリットと同じレベルにあるように、正確に水平に取り付けられる。１００％の吸水性は、この場合は、１５分における粘膜接着作用を有するポリマーの１ｇあたりの１ｍｌの水の吸水性として確定される。
【００５５】
比較的迅速な水の摂取または水和、ならびに高程度の水和は、外部コーティングが溶け始めるのと同時に、作用物質を迅速に保護すること、および腸粘膜に直接結合することを保証する。粘膜接着マトリックスにおける作用物質の結合は、作用物質が腸粘膜から体内に直接通過することができるように、ごく小さくあるべきである。
【００５６】
マトリックスｐＨの制御
粘膜接着作用は、多くの粘膜接着ポリマーについてｐＨ依存性である。マトリックスのｐＨは、酸、塩基、または緩衝系を追加することにより特定的に制御することができる。内部マトリックスは、粘膜接着作用を有するポリマーとして、酢酸塩緩衝系と共に使用されるキトサンを含有することが可能である。たとえばｐＨ５．０から５．５に調節された酢酸塩／Ｎａ酢酸塩緩衝剤が、マトリックスにおいて添加剤として存在する、またはマトリックスが上に加えられているコアに加えることができる。このようにして、ｐＨ６．０から８．０．など、より高いｐＨ値において溶け始める膜コーティングと組み合わせて、キトサンを使用することも可能である。高い周囲ｐＨにもかかわらず、低いｐＨが、マトリックスのミクロ環境において維持される。したがって、そうでない場合には粘膜接着特性を有さない、またはこの程度には有さないｐＨ範囲において、ポリマーの粘膜接着作用を利用することが可能である。これは、ｐＨ最適値がより高いｐＨ範囲にあるヌクレアーゼに対してある保護を達成することができるという利点を有する。同じ原理は、塩基を追加し、より低いｐＨ値で溶ける膜コーティングと組み合わせることによって、マトリックスのｐＨ値を上げることによっても、反対の方式で同じ原理を適用することができる。
【００５７】
適切な粘膜接着ポリマーの選択の実施例
適切な粘膜接着ポリマーの選択の実施例は、粘膜接着特性および吸水性能力に基づく。ポリマーは、それぞれのｐＨ範囲において１５分で、少なくともηｂ＝１５０から１０００ｍＰａ・ｓの粘膜接着作用および１０％から７５０％の吸水性を有するべきである。以下の表は、実施例の方法としてリストを与える。
【００５８】
キトサンは、マトリックスｐＨ領域が、たとえば緩衝系の補助で、約ｐＨ５．５の領域に調節されている限り、たとえば、ｐＨ５．５（十二指腸）の周囲ｐＨ領域または他の周囲ｐＨ領域（回腸または結腸）において使用するのに適している。
【００５９】
表に列挙された（メタ）アクリレートコポリマーは、約ｐＨ５．５．のｐＨ領域について、よりｐＨ７．２のｐＨ領域について適している。
【００６０】
アルギン酸は、ｐＨ７．２についてではなく、約ｐＨ５．５のｐＨ領域に適している。
【００６１】
Ｎａカルボキシメチルセルロースおよび架橋ポリアクリル酸は、５．５から７．２の広いｐＨ範囲にわたって適している。
【００６２】
【表１】
0005578764.tif 000002
【００６３】
*＝３０質量％のメタクリル酸メチルおよび７０質量％のメタアクリル酸からなる（メタ）アクリレートコポリマー
アニオン性（メタ）アクリレートコポリマーの外部コーティング
アニオン性（メタ）ポリマーまたはコポリマーの外部コーティングは、内部マトリックス層を胃液から保護するために、胃液に対して耐性コーティングとして作用する。外部コーティングは、コーティングが溶け始める腸のセクション（十二指腸、空腸、回腸、または結腸）にコーティングが到達する時間まで、作用物質を核酸分解酵素から保護するようにさらに作用する。外部コーティングは、この場合、いわゆる「胃腸対象化」、すなわち優勢であるｐＨによって決定される腸のセクションにおける内部マトリックス層の対象放出について作用する。内部マトリックス層への送達に障害がないように、外部コーティングの（メタ）アクリレートコポリマーは、内部マトリックス層の作用物質または粘膜接着ポリマーと最小限またはごくわずかな相互作用を提示するべきである。
【００６４】
適切なアニオン性ポリマーおよびコポリマーは、グリコール酸セルロース（Ｄｕｏｄｃｅｌｌ（登録商標）、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ、酢酸セルロース、ＰｈＥｕｒ、酢酸フタル酸セルロース、ＮＦ、Ａｑｕａｔｅｒｉｃ（登録商標）、酢酸コハク酸セルロース（ＣＡＳ）、酢酸トリメトリット酸セルロース（ＣＡＴ）、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＰ、ＨＰ５０、ＨＰ５５）、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＡＳ−ＬＦ、−ＭＦ、−ＨＦ）、酢酸フタル酸ポリビニル（ＰＶＡＰ、Ｓｕｒｅｔｅｒｉｃ（登録商標）、酢酸ビニル−ビニルピロリドンコポリマー（ＰＶＡｃ、Ｋｏｌｌｉｄｏｎ（登録商標）ＶＡ６４）、酢酸ビニル：クロトン酸９：１コポリマー（ＶＡＣ：ＣＲＡ、Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ（登録商標）ＶＡＣ）、および／またはシェラックである。述べられたポリマーおよびコポリマーは、多くの場合、ｐＨ特有の溶解を達成することが可能であるように、完全に申し分のない方式で調合することができる。
【００６５】
外部被膜コーティングは、薬剤的に一般的な助剤、特に可塑剤を有して随意選択で調合することが可能である５質量％から６０質量％のアニオン性基を有するモノマーの含有量を有する（メタ）アクリレートコポリマーから本質的になることが特に好ましい。最初に述べられたポリマーと比較して、述べられたアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーにより、本発明の範囲内において、多くの場合、溶解ｐＨのｐＨ特有の調節がさらにより正確かつ再現的に調節されることが可能になる。取扱いおよび適用も、一般的には、より精緻ではないと見なされる。
【００６６】
外部コーティングの（メタ）アクリレートコポリマーは、アクリル酸またはメタクリル酸の遊離基重合Ｃ１−からＣ４−アルキルエステルの４０質量％から９５質量％、好ましくは４５質量％から９０質量％、特に３０質量％からなることが好ましく、アニオン性基を有する（メタ）アクリレートモノマーの5質量％から６０質量％、好ましくは８質量％から４０質量％、特に２０質量％から３５質量％を含有することが可能である。
【００６７】
述べられた割合は、通常、１００質量％まで増大する。しかし、これにより本質的な特性を阻害または変更せずに、メタクリル酸ヒドロキシエチルまたはアクリル酸ヒドロキシエチルなど、ビニル共重合することができる他のモニマーの０質量％から１０質量％、たとえば１質量％から５質量％の領域において少量が存在することが可能である。
【００６８】
アクリル酸またはメタクリル酸のＣ１−からＣ４−アルキルエステルは、特に、メタクリル酸メチル、メタクリル酸エチル、メタクリル酸ブチル、アクリル酸メチル、アクリル酸エチル、およびアクリル酸ブチルである。
【００６９】
アニオン性基を有する（メタ）アクリレートモノマーは、たとえば、アクリル酸とすることが可能であるが、メタクリル酸であることが好ましい。
【００７０】
また、４０質量％から６０質量％のメタクリル酸、および６０質量％から４０質量％のメタクリル酸メチルまたは６０質量％から４０質量％のアクリル酸エチルからなるアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーも適切である（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＬまたはＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００−５５のタイプ）。このタイプのガラス転移温度（ＩＳＯ  １１３５７−２、ポイント３．３．３）は、１０５℃から１６０℃の範囲にあり、分子量Ｍｗは、１０００００から３０００００である（分子量Ｍｗは、たとえば、ゲル浸透クロマトグラフィによって、または散乱光方法によって決定することができる（たとえば、Ｈ．Ｆ．Ｍａｒｋら、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、第２版、Ｖｏｌ．１０、１ページ以降、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ、１９８９年を参照されたい））。
【００７１】
Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌは、５０質量％のメタクリル酸メチルおよび５０質量％のメタクリル酸のコポリマーである。この（メタ）アクリレートコポリマーは、約ｐＨ６．０から６．５のｐＨ領域（空腸）における溶解に特に適している。
【００７２】
Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００−５５は、５０質量％のアクリル酸エチルおよび５０質量％のメタクリル酸のコポリマーである。Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ  ３０Ｄ−５５は、３０質量％のＥｕｄｒａｇｉｔｅ（登録商標）Ｌ  １００−５５を含有する分散液である。この（メタ）アクリレートコポリマーは、約ｐＨ５．５から６．０のｐＨ領域（十二指腸）における溶解に特に適している。
【００７３】
同様に、２０質量％から４０質量％のメタクリル酸および８０質量％から６０質量％のメタクリル酸メチルのアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーも適している（Ｅｕｄｒａｇｉｔｅ（登録商標）Ｓタイプ）。この（メタ）アクリレートコポリマーは、約ｐＨ６．５から７．０のｐＨ領域（空腸または回腸）における溶解に特に適している。このタイプのガラス転移温度は、１４０℃から１８０℃の範囲にあり、分子量Ｍｗは、１０００００から１５００００である。
【００７４】
特に適切な（メタ）アクリレートコポリマーは、１０質量％から３０質量％のメタクリル酸メチル、５０質量％から７０質量％のアクリル酸メチル、および５質量％から１５質量％のメタクリル酸からなるものである。
【００７５】
Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＦＳタイプは、２５質量％のメタクリル酸メチル、６５質量％のアクリル酸メチル、および１０質量％のメタクリル酸のコポリマーである。Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＦＳ  ３０Ｄは、３０質量％のＦＳタイプのコポリマーを含有する分散液である。この（メタ）アクリレートコポリマーは、約ｐＨ７．０から７．８のｐＨ領域（回腸または結腸）における溶解に特に適している。
【００７６】
２０質量％から３４質量％のメタクリル酸および／またはアクリル酸、
２０質量％から６９質量％のアクリル酸メチル、
０質量％から４０質量％のアクリル酸エチル、および／または適切であれば、
ビニル共重合することができる０質量％から１０質量％の他のモノマーからなるコポリマーがさらに適切であり、
ＩＳＯ  １１３５７−２、サブセクション３．３．３によるコポリマーのガラス転移温度が６０℃を超えないことを条件とする。この（メタ）アクリレートコポリマーは、ペレットをタブレットに圧縮するための破壊特性における良好な延びのために、特に適している。
【００７７】
２０質量％から３３質量％のメタクリル酸および／またはアクリル酸、
５質量％から３０質量％のアクリル酸メチル、
２０質量％から４０質量％のアクリル酸エチル、
１０質量％を上回り３０質量％までのメタクリル酸ブチル、および適切であれば、
ビニル共重合することができる０質量％から１０質量％の他のモノマーからなり、
モノマーの割合が１００質量％まで増大する、コポリマーがさらに適切であり、
ＩＳＯ  １１３５７−２、ポイント３．３．３によるコポリマーのガラス転移温度が５５℃から７０℃であることを条件とする。このタイプのコポリマーは、ペレットをタブレットに圧縮するための良好な機械的特性のために、特に適している。
【００７８】
上述されたコポリマーは、特に、
２０質量％から３３質量％、好ましくは２５質量％から３２質量％、特に好ましくは２８質量％から３１質量％のメタクリル酸またはアクリル酸、好ましくはメタクリル酸と、
５質量％から３０質量％、好ましくは１０質量％から２８質量％、特に好ましくは１５質量％から２５質量％のアクリル酸メチルと、
２０質量％から４０質量％、好ましくは２５質量％から３５質量％、特に好ましくは１８質量％から２２質量％のアクリル酸エチルと、
１０質量％を上回り３０質量％まで、好ましくは１５質量％から２５質量％、特に好ましくは１８質量％から２２質量％のメタクリル酸ブチルとの遊離基重合単位からなり、
モノマー組成物は、コポリマーのガラス転移温度が、５５℃から７０℃、好ましくは５９℃から６６℃、特に好ましくは６０℃から６５℃であるように選択される。
【００７９】
また、特定の放出プロファイルまたは放出部位を調節するために、述べられたコポリマーの混合物を使用することも可能である。
【００８０】
ガラス転移温度は、これに関して、ＩＳＯ  １１３５７−２、ポイント３．３．３による特に中点温度Ｔｍｇを意味する。測定は、可塑剤を追加せずに、１００ｐｐｍ未満の残留モノマー含有量（ＲＥＭＯ）、１０℃／ｍｉｎの加熱率、窒素大気下において行われる。
【００８１】
コポリマーは、上述された量の範囲において、モノマーの９０質量％、９５質量％、または９９質量％から１００質量％のメタクリル酸、アクリル酸メチル、アクリル酸エチル、およびメタクリル酸ブチルから本質的から排他的になることが好ましい。
【００８２】
しかし、これにより本質的な特性を必ずしも損なわずに、たとえばメタクリル酸メチル、アクリル酸ブチル、メタクリル酸ヒドロキシエチル、ビニルピロリドン、マロイン酸ビニル、スチレン、ビニルアルコール、酢酸ビニルおよび／またはその誘導体など、ビニル重合することができる他のモノマーの０質量％から１０質量％、たとえば１質量％から５質量％の範囲において少量がさらに存在することが可能である。
【００８３】
コポリマーは、遊離基バルク、溶液、ビーズ、またはエマルジョン重合によって、本質的に既知の方式で得られる。コポリマーは、処理の前に、適切な研摩、乾燥、または噴霧の方法によって、本発明の粒子サイズ範囲にされなければならない。これは、押し出されて冷却されたペレットを単に粉砕する、または高温切断することによって行うことができる。
【００８４】
粉末の使用は、他の粉末または液体との混合物について特に有利である可能性がある。粉末を生成するのに適切な装置は、当業者には周知であり、空気ジェットミル、ピン止めディスクミル、区画ミルなどがある。適切であれば、適切なふるい工程を含むことが可能である。産業用の大量に適切なミルは、たとえば、約６バールのゲージ圧力で動作する対向ジェット・ミル（Ｍｕｌｔｉ  Ｎｏ．４２００）である。
【００８５】
コポリマーの調製
述べられたすべての（メタ）アクリレートコポリマーは、ブロック、ビーズ、またはエマルジョン重合およびポリマーの放出によって、重合開始剤および分子量調節剤が存在する状態で、モノマーの遊離基重合によって得ることができる（たとえば、ＥＰ  ０７０４２０７Ａ２、ＥＰ  ０７０４２０８Ａ２、またはＷＯ  ０３／０９２７３２を参照されたい）。（メタ）アクリレートコポリマーは、たとえばＤＥ‐Ｃ  ２１３５０７３に記載されている方法によって、好ましくはアニオン性乳化剤が存在する状態で、水溶性相におけるエマルジョン重合によって本質的に既知の方式で調製することができる。原理的にやはり適切である他の調製方法は、基移入重合（ＧＴＰ）または原子移入遊離基重合（ＡＴＲＰ）である（たとえばＭａｔｙｊａｓｚｅｗｓｋｉ，Ｋ．ら、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２００１年、１０１、２９２１から２９９０ページを参照されたい）。結果として得られるポリマー構造は、ランダムコポリマーまたはブロックコポリマーである。
【００８６】
２質量％から１５質量％の分子量調整剤、０．１質量％から２質量％の範囲の乳化剤含有量、重合開始剤、０．０２質量％から０．４質量％の範囲の重合開始剤の量が存在し、および６５℃から９０℃の温度におけるエマルジョン重合が好ましい。たとえば０．１質量％から０．５質量％のラウリル硫酸ナトリウム、およびたとえば０．４質量％から１．５質量％のポリオキシエチレン−２０ソルビタンモノオレエートからなる乳化剤混合物が好ましい。特に適切な開始剤は、ペルオキソ二硫酸ナトリウム、またはペルオキソ二硫酸アンモニウムである。このようにして、たとえば、２０質量％から４０質量％の固体含有量を有する分散を調製し、噴霧乾燥によって、または押出し器において水を凝固させて排除することによって、コポリマーを隔離することが可能である。ポリマーは、その後好ましくは有機溶媒において溶解し、水に対して多重透析することによって精製され、好ましくは凍結乾燥される。
【００８７】
重合開始剤について述べることが可能である例は、２，２’−アゾビス（イソブチロニトリル）または２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）などのアゾ化合物、たとえば第３級アミンと過酸化物または好ましくは過酸化物の組合わせなどの酸化還元系である（これに関連して、たとえば、Ｈ．Ｒａｕｃｈ−Ｐｕｎｔｉｇａｍ、Ｔｈ．Ｖｏｌｋｅｒ、「Ａｃｒｙｌ−  ｕｎｄ  Ｍｅｔｈａｃｒｙｌｖｅｒｂｉｎｄｕｎｇｅｎ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、１９６７年、またはＫｉｒｋ−Ｏｔｈｍｅｒ、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１、３８６ページ以降、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ、ニューヨーク、１９７８年を参照されたい）。適切な酸化物重合開始剤の例は、過酸化ジラウロイル、ｔ−ブチルペルオクトエート、ｔ−ブチルペリソノナノエート、ジシクロヘキシルペロキシジカーボネート、過酸化ジベンゾイル、または２，２−ビス（ｔ−ブチルペロキシ）ブタンである。
【００８８】
重合はまた、重合中に異なる重合温度において遊離基の流れを一定に維持するために、過酸化ジラウロイルおよび２，２−ビス（ｔ−ブチルペロキシ）ブタンなど、半減期が異なる重合開始剤で実施することができることも好ましい。使用される重合開始剤の量は、モノマー混合物に基づいて、一般的に０．０１質量％から最大で１質量％である。
【００８９】
分子量Ｍｗは、分子量調整剤が存在する状態で、モノマー混合物を重合することによって調節することができる。適切な分子量調整剤は、特に、たとえば、ｎ−ブチルメルカプタン、ｎ−ドデシルメルカプタン、２−メルカプトエタノール、または２−エチルヘキシルチオグリコレートなどのメルカプタンであり、一般的に使用される分子量調整剤は、モノマー混合物に基づいて、０．０５質量％から１５質量％の量、好ましくはモノマー混合物に基づいて０．１質量％から１０質量％の量、特に好ましくは２質量％から１２質量％の量である（たとえば、Ｈ．Ｒａｕｃｈ−Ｐｕｎｔｉｇａｍ、Ｔｈ．Ｖｏｌｋｅｒ、「Ａｃｒｙｌ−  ｕｎｄ  Ｍｅｔｈａｃｒｙｌｖｅｒｂｉｎｄｕｎｇｅｎ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、１９６７年；Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ、Ｍｅｔｈｏｄｅｎ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ、Ｖｏｌ．ＸＩＶ／１、６６ページ、Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、１９６１年、またはＫｉｒｋ−Ｏｔｈｍｅｒ、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１、２９６ページ以降、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ、ニューヨーク、１９７８年を参照されたい）。使用される分子量調整剤は、ｎ−ドデシルメルカプタンまたは２−エチルヘキシルチオグリコレートである。エチルヘキシルチオグリコレートは、（メタ）アクリレートコポリマーの疎水性に影響を与えることができるという利点を有するが、その理由は、調整剤が末端において分子に組み込まれているからである。使用される好ましい量は、５質量％から１５質量％のドデシルメルカプタン、または２質量％から１０質量％の２−エチルヘキシルチオグリコレートである。
【００９０】
有機溶液
述べられた（メタ）アクリレートコポリマーは、たとえば１０質量％から３０質量％の濃度において、有機溶液の形態で提供することができる。使用することが可能である溶媒は、たとえば、アセトン、イソプロパノール、またはエタノール、あるいはその混合物であり、これらは、適切であれば、約１０質量％までの割合で水を含有することが可能である。しかし、水溶性分散が好ましい。
【００９１】
分散
述べられた（メタ）アクリレートコポリマーは、好ましくは１０質量％から５０質量％、特に２０質量％から４０質量％の強度の水溶性分散の形態で、エマルジョンポリマーとして生成および使用することができる。３０質量％の固体含有量が、商用形態として好ましい。処理のためにメタクリル酸単位の部分中和を分散させることができる。しかし、たとえば、コーティング組成分散を安定させる、または厚くすることが望ましい場合、最高で５ｍｏｌ％または１０ｍｏｌ％の程度まで可能である。ラテックス粒子の質量平均サイズは、通常、４０ｎｍから１００ｎｍ、好ましくは５０ｎｍから７０ｎｍであり、それにより、処理に有益な１０００ｍＰａ・ｓより小さい粘性を保証する。
【００９２】
１０ｍｏｌ％から５０ｍｏｌ％などのより高い中和度、または完全な中和では、コポリマーを溶解状態に変換することが可能である。
【００９３】
アニオン性コポリマーの溶液を調製するために、酸基を部分的にまたは完全に中和することが通常必要である。アニオン性コポリマーは、たとえば、１質量％から４０質量％の最終濃度において、水の中に徐々に撹拌し、同時に、たとえばＮａＯＨ、ＫＯＨ、水酸化アンモニウムなどの塩基物質、またはたとえばトリエタノールアミンなどの有機塩基を追加することによって、部分的にまたは完全に中和することが可能である。また、ＮａＯＨなどの塩基が（部分）中和のために調製中に追加されているコポリマーの粉末を使用することも可能であり、それにより、粉末は、すでに（部分的に）中和されているポリマーである。溶液のｐＨは、４から約７など、通常４より大きい。
【００９４】
分散は、たとえば、本質的に既知の方式で噴霧乾燥または凍結乾燥し、再分散可能な粉末の形態で提供することもできる（たとえば、ＥＰ−Ａ  ０２６２３２６を参照されたい）。代替方法は、凍結乾燥または凝固して、押出し器の水から圧搾し、その後顆粒化する（たとえば、ＥＰ−Ａ  ０６８３０２８を参照されたい）。
【００９５】
驚くべきことに、噴霧または凍結乾燥され、再分散された粉末からのコポリマー分散は、剪断安定性の向上を示すことが判明した。これは、噴霧応用分野の場合に特に有利である。この利点は、分散に存在するコポリマーが、２ｍｏｌ％から１０ｍｏｌ％の程度まで部分的に中和されているとき、特に明らかである。（コポリマーに存在する酸基に基づく）。ＮａＯＨを追加することによる部分中和が、この目的には好ましい。アニオン性乳化剤が、０．１質量％から２質量％の量で存在することが好ましい。ラウリル硫酸ナトリウムが、乳化剤として特に好ましい。
【００９６】
層の厚さ
外部コーティングの層の厚さは、２μｍから２００μｍ、好ましくは５０μｍから１２０μｍの範囲にあることが好ましい。
【００９７】
多粒子剤形の生成
本発明は、
ａ）既知の方式で助剤を有する核酸作用物質をナノ粒子に調合することと、
ｂ）ナノ粒子の形態の核酸作用物質、および粘膜接着作用を有するポリマーを含有する内部マトリックス層、ならびに適切であれば他の薬剤的に一般的な助剤の噴霧を適用することによってコアの上に、またはコア有さずに球状集塊（ｒｏｔａｇｇｌｏｍｅｒａｔｉｏｎ）、沈殿、または噴霧の方法によって生成することと、その後、
ｃ）薬剤的に一般的な助剤、特に可塑剤を有して随意選択で調合することが可能であるアニオン性ポリマーから本質的になる外部被膜コーティングの噴霧の適用によって加え、それにより、作用物質を含有する包皮ペレットが得られることと、
ｄ）結果として得られるペレットを薬剤的に一般的な助剤によって、および本質的に既知の方式で、多粒子剤形に処理する、特に、包含されるペレットが胃のｐＨ範囲において放出されるように調合されるペレット包含タブレット、ミニタブレット、カプセル、サシェット、または乾燥粉末の形態に処理することとによって、多粒子剤形を生成する方法にさらに関する。
【００９８】
前ペレットおよびペレットの生成
ペレット化は、作用物質フリービーズ（ノンパレイユ（ｎｏｎｐａｒｅｉｌｌｅｓ））上で行うことができ、またはコアフリーペレットを生成することができる。
【００９９】
第１に、作用物質包含ナノ粒子が生成される。
【０１００】
その後、内部マトリックス層が、コアを有してまたはコアを有さずに生成される。これはまだコーティングされていないので、丸い層は、前ペレット（ペレットのコア）と呼ぶことができる。
【０１０１】
流動床方法によって、溶媒または懸濁剤が蒸発することで、核酸作用物質を有するナノ粒子を含有する粘膜接着ポリマーの溶液または懸濁液をプラセボ・ペレットまたは他の適切な担体材料に加えることが可能である。生成方法に、乾燥工程が続くことができる。
【０１０２】
核酸作用物質は、粘膜接着作用を有するポリマーを有するナノ粒子の形態で、有機溶媒または水に導入されて混合される。混合物の十分な噴霧性を保証するために、低粘性の混合物を調合することが一般に必要である。この目的では、１質量％から最大で１０質量％、好ましくは２質量％から５質量％など、比較的低濃度の粘膜接着作用を有するポリマーを使用することが有益である可能性がある。０．１質量％から２０質量％，好ましくは０．５質量％から１０質量％の濃度で、Ｔｗｅｅｎなどの界面活性剤を追加することが、表面張力を低減するためにさらに有利である可能性がある。
【０１０３】
作用物質の他に、他の薬剤助剤が存在することが可能である：セルロースおよびその誘導体などの結合剤、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ），湿潤、崩壊促進剤、潤滑崩壊剤、（メタ）アクリレート、スターチおよびその誘導体、糖、可溶化剤、またはその他。
【０１０４】
適切な加える方法が、たとえば、Ｂａｕｅｒ、Ｌｅｈｍａｎｎ、Ｏｓｔｅｒｗａｌｄ、Ｒｏｔｈｇａｎｇ、「Ｕｂｅｒｚｏｇｅｎｅ  Ａｒｚｎｅｉｆｏｒｍｅｎ」Ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｌｉｃｈｅ  Ｖｅｒｌａｇｓ−ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ  ｍｂＨ  Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、第７章、１６５から１９６ページにおいて開示されている。
【０１０５】
詳細が、テキストブックから当業者にさらに開示されている。たとえば、
Ｖｏｉｇｔ，Ｒ．（１９８４年）：Ｌｅｈｒｂｕｃｈ  ｄｅｒ  ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ；Ｖｅｒｌａｇ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｗｅｉｎｈｅｉｍ−Ｂｅｅｒｆｉｅｌｄ  Ｂｅａｃｈ／Ｆｌｏｒｉｄａ−Ｂａｓｅｌ、
Ｓｕｃｋｅｒ，Ｈ．、Ｆｕｃｈｓ，Ｐ．、Ｓｐｅｉｓｅｒ，Ｐ．：Ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ、Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｖｅｒｌａｇ  Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ（１９９１年）、特に第１５章および第１６章、６２６から６４２ページ、
Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．，Ｒ．（Ｅｄｉｔｏｒ）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ（１９８５年）、第８８章、１５６７から１５７３ページ、
Ｌｉｓｔ，Ｐ．Ｈ．（１９８２年）：Ａｒｚｎｅｉｆｏｒｍｅｎｌｅｈｒｅ、Ｗｉｓｓｅｎ−ｓｃｈａｆｔｌｉｃｈｅ  Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ  ｍｂＨ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ．
を参照されたい。
【０１０６】
内部マトリックは、不活性コアの補助を有さずに生成することもできる（ノンパレイユ）。内部マトリックスの成分は、この場合、球状集塊、沈殿、または噴霧方法などの方法、特に超音波流動化噴霧方法によって、５０μｍから１０００μｍなどの確定サイズの未コーティング・ペレット（前ペレット）に丸くすることが可能である。これは、コア全体の容積が作用物質を装填するのに利用可能であるという利点を有する。したがって、作用物質の装填は、不活性コアを有する実施形態と比較して、さらに増大させることができる。
【０１０７】
内部マトリックス・コアの（または前ペレットの）生成後、これらは、好ましくは噴霧方法において、外部コーティング提供され、完成ペレットとなる。ペレットは、有機溶媒から、または好ましくは水溶性懸濁液から噴霧を適用することによって生成される。この場合、一様なポアフリーコーティングが生成されることが、実施について決定的である。
【０１０８】
トップコート
ペレットは、顔料コーティングをさらに設けることができるが、顔料コーティングは、溶解ｐＨに影響を与えてはならない。適切な例は、顔料ヒドロキシプロピルメチルセルロース、または水において可溶であるもしくは水において迅速に崩壊する他のポリマーである。
【０１０９】
薬剤的に一般的な助剤
生成中に、一般的な助剤または添加剤を本発明の調合に追加することができる。当然、使用されるすべての物質が、患者にとって危険ではなく、毒性学的に許容可能であり、特に医薬品において使用可能であることが常に必要である。
【０１１０】
医薬品コーティングまたは層における一般的な添加剤の使用される量および使用法は、当業者には周知である。一般的な添加剤の可能な例は、可塑剤、放出剤、顔料、安定剤、酸化防止剤、ポア形成剤、浸透促進剤、光沢剤、芳香族化剤、界面活性剤、潤滑剤、または着香剤である。これらは、処理補助剤として作用し、確実で再現性の生成方法および良好な長期貯蔵安定性を保証することを意図し、または、剤形について追加の有利な特性を達成する。これらは、処理の前にポリマー調製に追加され、コーティングの浸透性に影響を与えることが可能であり、適切であれば、追加の制御パラメータとして使用することが可能である。
【０１１１】
放出剤
放出剤は、通常、親油性を有し、通常、噴霧懸濁液に追加される。放出剤は、膜コーティング中にコアが凝集するのを防止する。タルク、ステアリン酸Ｍｇまたはステアリン酸Ｃａ、研摩シリカ、カオリン、あるいは３と８の間のＨＬＢを有する非イオン乳化剤が使用されることが好ましい。本発明のコーティング剤および結合剤の放出剤に使用される通常の量は、コポリマー基づいて０．５質量％から１００質量％である。
【０１１２】
顔料
コーティング剤を有する不適合の顔料は、特に、（メタ）アクリレートコポリマーの乾燥質量に基づいて、たとえば２０質量％から４００質量％の通常使用量において、撹拌などによって（メタ）アクリレートコポリマー分散に直接追加される場合、不均一性または同様の望ましくない効果の徴候まで分散を不安定にし、凝集させる顔料である。使用される顔料は、さらに無毒であり、薬剤の目的に適している。これに関して、たとえば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇｓｇｅｍｅｉｎｓｃｈａｆｔ、Ｆａｒｂｓｔｏｆｆｅ  ｆｕｒ  Ｌｅｂｅｎｓｍｉｔｔｅｌ、Ｈａｒａｌｄ  Ｂｏｌｄｔ  Ｖｅｒｌａｇ  ＫＧ、Ｂｏｐｐａｒｄ（１９７８年）；Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｌｅｂｅｎｓｍｉｔｔｅｌｒｕｎｄｓｃｈａｕ  ７４、第４、１５６ページ（１９７８年）；Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆａｒｂｓｔｏｆｆｖｅｒｏｒｄｎｕｎｇ  ＡｍＦａｒｂＶ、２５．０８．１９８０年も参照されたい。
【０１１３】
コーティング剤を有する不適合の顔料は、たとえば、アルミナ顔料である可能性がある。不適合顔料の例は、オレンジ・イエロー、コチニール・レッド・レーキ、アルミナまたはアゾ染料に基づく着色顔料、スルホン酸染料、オレンジ・イエローＳ（Ｅ１１０、Ｃ．Ｉ．１５９８５、ＦＤ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ６）、インドゴ・カルミン（Ｅ１３２、Ｃ．Ｉ．７３０１５、ＦＤ＆Ｃ  Ｂｌｕｅ２）、タルトラジン（Ｅ１０２、Ｃ．Ｉ．１９１４０、ＦＤ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ５），ポンソー４Ｒ（Ｅ１２５、Ｃ．Ｉ．１６２５５、ＦＤ＆Ｃ  Ｃｏｃｈｉｎｅａｌ  Ｒｅｄ  Ａ）、キノリン・イエロー（Ｅ１０４、Ｃ．Ｉ．４７００５、ＦＤ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ１０）、エリスロシン（Ｅ１２７、Ｃ．Ｉ．４５４３０、ＦＤ＆Ｃ  Ｒｅｄ３）、アゾルビン（Ｅ１２２、Ｃ．Ｉ．１４７２０、ＦＤ＆Ｃ  Ｃａｒｍｏｉｓｉｎｅ）、アマランス（Ｅ１２３、Ｃ．Ｉ．１６１８５、ＦＤ＆Ｃ  Ｒｅｄ  ２）、酸ブリリアント・グリーン（Ｅ１４２、Ｃ．Ｉ．４４０９０、ＦＤ＆ＣＧｒｅｅｎＳ）である。
【０１１４】
顔料について示されるＥ数は、ＥＵ番号に関係する。これに関して、「Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇｓｇｅｍｅｉｎｓｃｈａｆｔ、Ｆａｒｂｓｔｏｆｆｅ、ｆｕｒ  Ｌｅｂｅｎｓｍｉｔｔｅｌ、Ｈａｒａｌｄ  Ｂｏｌｄｔ  Ｖｅｒｌａｇ  ＫＧ、Ｂｏｐｐａｒｄ（１９７８年）；Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｌｅｂｅｎｓｍｉｔｔｅｌｒｕｎｄｓｃｈａｕ  ７４、第４、１５６ページ（１９７８年）；Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆａｒｂｓｔｏｆｆｖｅｒｏｒｄｎｕｎｇ  ＡｍＦａｒｂＶ、２５．０８．１９８０年も参照されたい。ＦＤ＆Ｃ数は、米国食品医薬品局、食品安全および応用栄養センター、化粧品および色局、連邦規制コード−タイトル２１色添加規制パート８２、承認された暫定的に列挙されたおよび仕様（ＣＦＲ２１パート８２）（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ、Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｆｏｏｄ  Ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、Ｏｆｆｉｃｅ  ｏｆ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｃｏｌｏｒｓ：Ｃｏｄｅ  ｏｆ   Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ  −Ｔｉｔｌｅ  ２１  Ｃｏｌｏｒ  Ａｄｄｉｔｉｖｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ  Ｐａｒｔ ８２、Ｌｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ  Ｐｒｏｖｉｓｉｏｎａｌｌｙ  Ｌｉｓｔｅｄ  Ｃｏｌｏｒｓ  ａｎｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ（ＣＦＲ  ２１  Ｐａｒｔ  ８２）に記載されている、米国食品医薬品（ＦＤＡ）による食品、医薬品、および化粧品の承認に関係する。
【０１１５】
可塑剤
他の添加剤は、可塑剤とすることも可能である。一般的な量は、０質量％と５０質量％の間、好ましくは２質量％から２０質量％、特に好ましくは５質量％から１０質量％である。
【０１１６】
可塑剤は、タイプ（親油性または親水性）および追加される量に応じて、ポリマー層の機能に影響を与える可能性がある。可塑剤は、ポリマーと物理的に相互作用することにより、追加される量に応じて、ガラス転移温度の低下を達成し、膜の形成を促進する。適切な物質は、通常、１００と２００００の間の分子量を有し、水酸基、エステル基、またはアミノ基など、１つまたは複数の親水基を分子において有する。
【０１１７】
適切な可塑剤の例は、クエン酸アルキル、グリセロールエステル、フタル酸アルキル、セバシン酸アルキル、ショ糖エステル、ソルビタンエステル、セバシン酸ジエチル、セバシン酸ジブチル、およびポリエチレングリコール２００から１２０００である。好ましい可塑剤は、クエン酸トリエチル（ＴＥＣ）およびクエン酸アセチルトリエチル（ＡＴＥＣ）である。さらに、クエン酸塩、フラル酸塩、セバシン酸塩、またはカストール油など、室温で通常液体であるエステルが述べられるべきである。クエン酸およびサバシン酸のエステルが使用されることが好ましい。
【０１１８】
可塑剤を調合に追加することは、直接、水溶性溶液において、または混合物を熱処理した後、既知の方式で行うことができる。また、可塑剤の混合物を使用することも可能である。
【０１１９】
多粒子剤形の生成
作用物質包含コーティング・ペレットは、薬剤的に一般的な助剤によって、本質的に既知の方式で、多粒子剤形、特にペレット包含タブレット、ミニタブレット、カプセル、サシェット、または乾燥粉末に処理することができ、これらは、包含されているペレットが胃のｐＨ範囲において放出されるように調合される。調製は、多粒子剤形が高投与量信頼性を提示するので、ペレットが腸管腔において良好に分布するという利点を提供する。本発明の多粒子剤形はまた、異なる作用物質および／または異なるペレット構造を有する異なるペレット・タイプをもさらに有することが可能である。
【０１２０】
圧縮タブレット
作用物質包含粒子と共に薬剤的に一般的な結合剤を圧縮することによる多粒子剤形の生成は、たとえば、Ｂｅｃｋｅｒｔら（１９９６年）、「Ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｔｅｒｉｃ−ｃｏａｔｅｄ  ｐｅｌｌｅｔｓ  ｔｏ  ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ  ｔａｂｌｅｔｓ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  １４３、１３から２３ページ、およびＷＯ  ９６／０１６２４に記載されている。
【０１２１】
作用物質包含ペレットの膜コーティングは、通常、流動床装置において加えられる。膜形成剤が、通常、適切な方法によって、可塑剤および放出剤と混合される。この場合、膜形成剤が溶液または懸濁液の形態にあることが可能である。膜形成の助剤は、同様に、溶解または懸濁することが可能である。有機または水溶性の溶媒または分散剤を使用することができる。分散を安定させるために、安定剤をさらに使用することができる（例：Ｔｗｅｅｎ８０または適切な乳化剤もしくは安定剤）。
【０１２２】
放出剤の例は、モノステアリン酸グリセロールまたは他の適切な脂肪酸誘導体、シリカ誘導体、タルクなどである。可塑剤の例は、プロピレングリコール、フタル酸塩、ポリエチレングリコール、セバシン酸、またはクエン酸、および文献において述べられた他の物質である。
【０１２３】
作用物質包含層と可溶性コポリマー層の間に分離層を加えることができ、分離層は、相互作用を防ぐ目的で、作用物質とコーティング材料を分離するように作用する。この層は、不活性膜形成剤（たとえばＨＰＭＣ、ＨＰＣ、もしくは（メタ）アクリル酸コポリマー）、またはたとえばタルクもしくは他の適切な薬剤物質からなることが可能である。同様に、膜形成剤とタルクまたは同様の物質の組合わせを使用することが可能である。また、部分的または完全に中和された（メタ）アクリレートコポリマー分散からなる分離層を加えることも可能である。
【０１２４】
分離層はまた、下にあるマトリックス層においてのように、同じまたは異なる粘膜接着ポリマーからなることも可能である。作用物質または粘膜接着ポリマーと膜形成（メタ）アクリレートコポリマー層との可能な相互作用または不適合は、このようにして相殺することができる。
【０１２５】
コーティング粒子からなるタブレットを生成するための混合物は、タブレット化に適切な結合剤とペレットを混合し、必要であれば崩壊促進物質を追加し、および必要であれば潤滑剤を追加することによって調製される。混合は、適切な機械において行うことができる。不適切なミキサは、すき刃ミキサなど、コーティング粒子を損傷することになるミキサである。適切な短い崩壊時間を達成するために、助剤を特定の配列でコーティング粒子に追加することが必要である可能性がある。コーティング粒子を潤滑剤または離型剤のステアリン酸マグネシウムと事前に混合することによって、表面を疎水性にし、それにより接着を回避することが可能である。
【０１２６】
タブレット化に適切な混合物は、通常、Ｋｏｌｌｉｄｏｎ  ＣＬなど、３質量％から１５質量％の崩壊補助剤、ならびにステアリン酸マグネシウムなどの０．１質量％から１質量％の潤滑剤および離型剤を含有する。結合剤の割合は、コーティング粒子の必要な割合によって決定される。
【０１２７】
通常の結合剤の例は、Ｃｅｌｌａｃｔｏｓｅ（登録商標）、微結晶性セルロース、リン酸カルシウム、Ｌｕｄｉｐｒｅｓｓ（登録商標）、ラクトース、または他の適切な糖、硫酸カルシウム、もしくはスターチ誘導体である。低バルク密度の物質が好ましい。
【０１２８】
通常の崩壊補助剤（崩壊剤）は、架橋スターチ誘導体またはセルロース誘導体、および架橋ポリビニルピロリドンである。セルロース誘導体も同様に適切である。適切な結合剤を選択することにより、崩壊補助剤を不要にすることが可能である。
【０１２９】
通常の潤滑剤および離型剤は、ステアリン酸マグネシウムまたは脂肪酸の他の適切な塩、あるいはこの目的のために文献において詳述されている物質である（たとえば、ラウリン酸、ステアリン酸カルシウム、タルクなど）。適切な機械（たとえば、外部潤滑を有するタブレット・プレス）または適切な調合の使用の際に、混合物における潤滑剤および離型剤の使用を不要にすることが可能である。
【０１３０】
適切であれば、流れを改善するために、補助剤を混合物に追加することが可能である（たとえば、コロイドシリカ誘導体、タルクなど）。
【０１３１】
タブレット化は、通常のタブレット・プレス、偏心プレス、または回転タブレット・プレス上で行うことができ、圧縮力は５ｋＮから４０ｋＮ、好ましくは１０ｋＮから２０ｋＮである。タブレット・プレスは、外部潤滑用系を装備することができる。インペラ・パドルによるダイの充填を回避するダイ充填用の特別な系が、適切であれば使用される。
【０１３２】
他の多粒子剤形
圧縮タブレットまたはミニタブレットの代替として、作用物質包含コーティング・ペレットは、あらゆる他の経口投与多粒子剤形に処理されることも可能である。コーティングされたペレットは、たとえば、ゼラチン・カプセルなどのカプセルに実装することができ、またはサシェットもしくは乾燥粉末に調合することができる。
【０１３３】
本発明の有利な効果
本発明の剤形は、核酸作用物質の対象化した効率的な放出に適している。剤形は、高投与量信頼性を示し、胃および腸管腔において十分に分布する。包含されている核酸作用物質は、さらに、物理的または核酸分解的な不活性化から実質的に保護され、高い割合の作用物質を身体によって摂取することができるように、確定作用部位において放出することができる。したがって、剤形は、失われる作用物質がごくわずかなので、少ない作用物質で間に合う。副作用の危険性は、対象化送達によって全体的に低減される。作用部位は、治療目的に応じて変動的に調節することができる。したがって、作用物質摂取のタイミングは、よりよく制御することができる。剤形は経口使用についてなので、他の投与形と比較して、患者によって全体的により良好に受け取られる（患者服薬遵守）。したがって、大量の核酸作用物質を経口使用に利用可能とすることができる。投与の危険性は、特に非経口投与よりしばしば低い。投与のコストも、低く維持することができるが、その理由は、投与のための熟練スタッフを必要としないからである。
【０１３４】
親油性マトリックス
本発明の特別な態様は、作用物質が、約３７℃、好ましくは約４５℃、特に好ましくは約５５℃の融点を有する親油性マトリックスにナノ粒子の形態で組み込まれるとき、出現し、作用物質包含親油性マトリックスは、粘膜接着作用を有するポリマーからなるマトリックスに組み込まれる。親油性マトリックスの調合の目的は、作用物質、好ましくは控えめにまたはわずかに可溶性の作用物質の可溶性および生体適合性（ＤＡＢ１０、２００３年において確定されている）を改善させることである。
【０１３５】
親油性マトリックスは、本発明の文脈では、作用物質を溶解する、懸濁する、または乳化することができる物質または物質の混合物を意味する。親油性マトリックスの１つまたは複数の物質は、粘膜接着作用を有する通常の薬剤助剤およびポリマーとは異なる。親油性マトリックスの１つまたは複数の物質は、疎水性または両親媒性の特徴を有することが好ましい。親油性マトリックスはまた、両親媒性マトリックスまたは類脂質性マトリックスと呼ぶことも可能である。
【０１３６】
親油性マトリックスは、脂質など、単一の物質からなる、または脂質の混合物など、物質の混合物からなることが可能である。混合物の場合、ＤＡＢ１０による水可溶性について以下で記述される特性、分配係数、および／またはＨＬＢ値が、部分の質量による算術平均および混合物の物質の値から各場合において計算される。使用される物質は、毒性であってはならない。
【０１３７】
粘膜接着作用を有する親油性マトリックス／ポリマー
好ましい実施形態では、親油性マトリックスと、粘膜接着作用を有するポリマーとの可能な相互作用が考慮される。制御不可能な相互作用を回避するために、親油性マトリックスを形成する１つまたは複数の物質、および粘膜接着作用を有するポリマーは、同じイオン特性を有するべきである。すなわち、両方とも、調和して少なくとも主にカチオン、または調和してアニオン性の特性を有するべきである。反対のイオン特性を有する物質が選択される場合、粘膜接着作用を有するポリマーは、少なくとも５０％、特に好ましくは１００％の中和形態で存在するべきである。中和は、既知の方式で酸または塩基を追加することによって行うことができる。
【０１３８】
親油性マトリックスをアセンブルするための１つまたは複数の物質
親油性マトリックスは、０から１５、好ましくは２から１０の（平均）ＨＬＢを有する物質または物質の混合物の８０質量％から１００質量％、好ましくは９０質量％から１００質量％、特に好ましくは１００質量％からなることが好ましい。親油性マトリックスは、薬剤的に一般的な助剤、特に安定剤、増粘剤、または吸着剤の０質量％から２０質量％、好ましくは０質量％から１０質量％からなることが可能である。薬剤的に一般的な助剤が存在することが特に好ましい。
【０１３９】
親油性マトリックスを形成することが可能である１つまたは複数の物質は、たとえば、油、脂肪、モノ−、ジ−、またはトリグリセリド、脂肪酸、脂肪アルコール、特に、塩、エーテル、エステルを含むＣ６からＣ２０の脂肪酸および／またはＣ６からＣ２０のアルコール、あるいはアミド誘導体、リン脂質、レクチン、乳化剤、類脂質、脂溶性ビタミン、または表面活性剤の群に属することが可能である。
親油性マトリックスは、たとえば、以下の脂質製剤の１つを含有することが可能である：（Ｉｍｗｉｔｏｒ３０８）８０％以下のモノエステル含有量を有するグリセリルモノカプリレート、（Ｉｍｗｉｔｏｒ３１２）９０％以下のモノエステル含有量を有するグリセリルモノラウレート、（Ｉｍｗｉｔｏｒ４９１）９０％以下のモノエステル含有量を有するグリセロールモノステアレート（Ｃ１６＋Ｃ１８）、（Ｉｍｗｉｔｏｒ９００Ｐ）４０％から５５％のモノエステル含有量および４０％から６０％のＣ１８含有量を有するモノステアリン酸グリセロール、（Ｉｍｗｉｔｏｒ９００Ｋ）４０％から５５％のモノエステル含有量および６０％から８０％のＣ１８含有量を有するモノステリン酸グリセロール、（Ｉｍｗｉｔｏｒ７４２）４５％から５５％のモノエステル含有量を有する中鎖長Ｃ８およびＣ１０グリセリド、（Ｉｍｗｉｔｏｒ９２８）Ｃ１２の主含有量を有し、かつ３４％から３６％のＣ８およびＣ１０グリセリド、Ｎａカプリレート、またはＮａカプリエートのモノエステル含有量を有する飽和植物性脂肪酸。
【０１４０】
親油性マトリックスは、たとえば、以下の脂質製剤の１つを含有することが可能である：飽和脂肪酸および不飽和脂肪酸ならびにその混合物のモノ−、ジ−、トリグリセリド。特に、グリセロールステアリン酸エステル、グリセロールパルミチン酸エステル、グリセロールミリスチン酸エステル、グリセロールパルミチン酸ステアリン酸エステル、グリセロールラウリン酸エステル、グリセロールカプリリル酸エステル、グリセロールオレイン酸エステル、これらのエステルの例は、Ｉｍｗｉｔｏｒ（登録商標）−３０８、−３１２、−４９１、−７４２、−９００、−９２８、−９８８、およびＧｅｌｕｃｉｒｅ（登録商標）４４／１４、−５０／１３、Ｇｅｌｅｏｌ、Ｃｏｍｐｒｉｔｏｌ  Ｅ  ＡＴＯ、Ｄｙｎａｓａｎ  １１４、Ｓｏｆｔｉｓａｎ、Ｗｉｔｅｐｓｏｌ、Ｄｙｎａｃｅｔ２１２、ココナツ脂肪、たとえばカストール油、ゴマ油、ひまわり油、綿実油、コーン油、アーモンド油、ピーナツ油、オリーブ油、ココナツ油、キャロット油、麦芽油、クルミ油などの油、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、イソプロピルステアレート中鎖長トリグリセリド、（Ｍｉｇｌｙｏｌｅ（登録商標））である。
【０１４１】
たとえばフタル酸ジブチル、セバシン酸ジエチル、セバシン酸ジブチル、クエン酸トリブチル、クエン酸アセチルトリブチル、グリセロールトリアセテートなどの単鎖脂肪族および芳香族カルボン酸エステル、
たとえばカナウバ・ワックス、蜜蝋、ウールワックスなどのワックス、
グリセロールベヘン酸エステル、
たとえばステアルアミド、パルミトアミド、ラウルアミドなどの脂肪酸アミド、
たとえばステアリン酸、パルミチン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、カプリル酸、リノレン酸、リノレン酸、リノレン酸などの脂肪酸長鎖カルボン酸、ならびにそのＮａ塩、Ａｌ塩、およびＭｇ塩、
たとえばステアリルアルコール、ラウリルアルコール、セチルアルコール、ミリスチンアルコール、グリセロール形式、などの脂肪族アルコール、
たとえばコレステロール、モノステアリン酸グリセロール、モノステアリン酸エチレングリコール、ソルビタンモノオレエート（Ｓｐａｎ（登録商標）８０）、ソルビタンモノパルミテート（Ｓｐａｎ（登録商標）４０）、ソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ（登録商標）２０）、モノステアリン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ（登録商標）６０）、ソルビタントリオレエート（Ｓｐａｎ（登録商標）８５）、ソルビタントリステアレート（Ｓｐａｎ（登録商標）６５）、ソルビタンセスキノレエート（Ａｒｌａｃｅｌ（登録商標）８３）、Ｃａ、Ａｌ、Ｍｇステアレート、ポリオキシエチレン、ソルビタントリステアレート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６５）、ポロキシエチレンソルビタントリオレエート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８５）などのＷ／Ｏ乳化剤、
たとえばマクロゴールステアレート４００（Ｃｈｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）Ａ）、マクロゴールラウリルエーテル、ポリエチレングリコール２０ソルビタンモノラウレート、モノステアリン酸ソルビタン、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノオレエート、マクロゴール１５００グリセロールトリリシノレート、マクロゴールグリセロールヒドロキシステアレート（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＲＨ）、マクロゴール１０００グリセロールモノラウレート、モノステアリン酸、モノオレエート、モノステアリン酸スクロース。ポリソルベート６０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０）、モノステアリン酸ポリオキシエチレン（Ｍｙｒｊ４９）、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）、ポリソルベート４０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）４０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）、ポロキサマ４０７（Ｌｕｔｒｏｌ（登録商標）Ｆ１２７）、ポロキサマ１８８（Ｌｕｔｒｏｌ（登録商標）Ｆ６８）、ポリオキシエチレンリシノレート（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ）、ポリオキシエチレン５ステアリルステアレートなどの非イオンＯ／Ｗ乳化剤、
たとえばセチルステアリルスルフェート（Ｌａｎｅｔｔｅ（登録商標）Ｅ）、Ｎａラウリルスルフェート（Ｔｅｘａｐｏｎ（登録商標）Ｚ）、Ｎａグリココレート、ヘデラゲニンなどのイオンＯ／Ｗ乳化剤、
たとえば卵ホスファチジルコリン（卵レシチン）、大豆ホスファチジルコリン（大豆レシチン）、ベタイン、スルフォベタイン、セラミド（スフィンゴミエリン）などの両親媒性乳化剤、
たとえばレチノール（ビタミンＡ）、コレカルシフェロール（ビタミンＤ）、アルファトコフェロールおよび酢酸アルファトコフェロール（ビタミンＥ）、フィロキノン（ビタミンＫ）などのビタミン、
他の助剤は、たとえば、モノガラクトシルジアシルグリセロール、ジガラクトシルジアシルグリセロール、トリガラクトシルジアシルグリセロールなどのガラクトリピド、およびたとえばアニス油、シトロネラ油、ユーカリ油、ウイキョウ油、カモミール油、ショウズク油、マツ葉油、キャラウエイ油、ドワーフ・パイン油、ラベンダー油、ミント油、マスカット油、クローブ油、ペパーミント油、ローズマリー油、サルビア油などの芳香族油、ならびにたとえばメントール、リナロール、１，４−シネオール、ピレトリン、ボルネオール、ユーデスモール、フィトール、マヌール、アザジラクチン、ニムビンなどのテルペンである。
【０１４２】
内部マトリックス層ａ）の作用物質包含脂質マトリックスの含有量は、１質量％から５０質量％、好ましくは１０質量％から２０質量％とすることができる。
【０１４３】
親油性マトリックスは、少なくとも５０質量％のグリセロールモノカプリレート、最高で１０質量％のＮａコラート、最高で１０質量％のコハク酸トコフェロール、１質量％から５質量％の排出ポンプ抑制剤を含有することが可能であり、この場合、作用物質は、Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５などのＰｇＰ排出ポンプの基質、トリグリセリド、特にトリステアレートであり、構成要素は１００％まで増加する。この親油性マトリックスは、粘膜接着ポリマーに直接組み込む、または水において乳化させ、粘膜接着ポリマーに組み込むことができる。後者の場合、水溶性相は、たとえばクエン酸などの弱酸を含有することが可能である。
【０１４４】
方法
本発明はまた、
ａ）親油性マトリックスを形成する物質、および適切であれば他の薬剤的に一般的な助剤と共に、核酸作用物質を含有するナノ粒子を勢いよく混合する、または融解することによって、作用物質包含親油性マトリックスを生成する工程と、
ｂ）作用物質包含親油性マトリックスと混合された粘膜接着性ポリマーをコアの上に噴霧で加えることによって、またはコアを有さずに球状集塊、沈殿、もしくは噴霧の方法によって前ペレット（ペレット・コア）を生成する工程と、
ｃ）薬剤的に一般的な助剤、特に可塑剤および放出剤の混合物を随意選択で含有することが可能であるアニオン性ポリマーまたはコポリマーのコーティングを、分散または有機溶液から工程ｂ）の前ペレットの上に噴霧で加えることによってペレットを生成する工程と、
ｄ）本質的に既知の方式で、適切であれば薬剤的に一般的な助剤を使用して、特にペレット包含タブレット、ミニタブレット、カプセル、サシェット、または乾燥粉末に処理することによって、工程ｃ）のペレットを充填するまたは組み込むことによって多粒子剤形を生成する工程とで、多粒子剤形を生成する方法にも関する。
【０１４５】
好ましい方法
方法工程ａ）およびｂ）は、以下のように実施されることが好ましい：
ａ）親油性マトリックス用の物質、および適切であれば他の薬剤的に一般的な助剤と共に核酸作用物質を含有するナノ粒子のエマルジョンまたは懸濁液を、水において成分を勢いよく混合し、６０μｍを超えない、好ましくは２０μｍを超えない平均粒子サイズを有する水中油製剤を生成することによって調製することによる内部マトリックス層の生成、
ｂ）工程ａ）の水中油製剤を、他の薬剤的に一般的な助剤の混合物を随意選択で含有することが可能である粘膜接着ポリマーの上に噴霧で加えることによる前ペレットの生成、この場合、成分は、たとえば球状集塊、押出し、または顆粒化によって、１０μｍから１００μｍの平均粒子サイズを有するミクロ粉末の形態にある。
【０１４６】
実施例
実施例は、本発明に一般的な手続きを示す。
【０１４７】
実施例１
カチオン性（メタ）アクリレートコポリマーを含有するナノ粒子の調製
たとえば３０００から１００００の塩基対を有し、ヒトの細胞において発現し、かつ治療効果を有することを意図する遺伝子を有する二本鎖プラスミドＤＮＡからなる遺伝子治療ベクターなど、２ｍｇのＤＮＡ（核酸作用物質）を、ｐＨ７．４の４ｍｌのリン酸緩衝剤に溶解し、２ｍｌのマウス単クローン抗ヒトＤＮＡ  ＩｇＭ溶液（１ｍｇ／ｍｌ）と混合し、３７℃で１時間培養する。次いで、１ｍｌのＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標）または好ましくは３ｍｌ（１ｍｇ／ｍｌ）の改質Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｅ（２５質量％のメタクリル酸メチル、２５質量％のメタクリル酸ブチル、および５０質量％のメタクリル酸ジメルアミノエチルの（メタ）アクリレートコポリマー、低分子量、腎臓排泄Ｍｗ＝２１０００）を混合し、３７℃に維持して、約３０分ゆっくり撹拌する。この時間の後、ｐＨを測定し、０．００１ＮのＨＣｌで７．４に調節する。この時間の後、ｐＨを測定し、０．００１ＮのＨＣｌでｐＨを７．４に調節する。たとえばヴォルテックス上で勢いよく混合して、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）の使用で約２５０ｎｍの平均径およびＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）の使用の際に約１５０ｎｍの平均径を有するナノ粒子を得る。ナノ粒子の懸濁液を透析によって精製する。懸濁液は、さらに直接処理することができ、または凍結乾燥によってナノ粒子を分離することができる。
【０１４８】
実施例２
カチオン性およびアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーを含有するナノ粒子
適切なヒト細胞培養基での予備試験において、たとえば１０％の割合のアニオン性（メタ）アクリレートコポリマーＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ（改質）がカチオン性Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｅ（改質）に追加されるとき、核酸作用物質の最適なトランスフェクション率を達成することができることが判明している。
【０１４９】
たとえば３０００から１００００の塩基対を有し、ヒトの細胞において発現し、かつ治療効果を有することを意図する遺伝子を有する二本鎖プラスミドＤＮＡからなる遺伝子治療ベクターなど、２ｍｇのＤＮＡ（核酸作用物質）を、ｐＨ７．４の４ｍｌのリン酸緩衝剤に溶解し、２ｍｌのマウス単クローン抗ヒトＤＮＡ  ＩｇＭ溶液（１ｍｇ／ｍｌ）と混合し、３７℃で１時間培養する。次いで、１．１ｍｌ、４ｍｌ（１ｍｇ／ｍｌ）の改質Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｅ（２５質量％のメタクリル酸メチル、２５質量％のメタクリル酸ブチル、および５０質量％のメタクリル酸ジメチルアミノエチルの（メタ）アクリレートコポリマー、低分子量、腎臓排泄Ｍｗ＝２１０００）、ならびに０．４ｍｌ（１ｍｇ／ｍｌ）の改質Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ（５０質量％のメタクリル酸メチル、および５０質量％のメタクリル酸、低分子量、腎臓排泄Ｍｗ＝２１０００）を混合し、３７℃に維持して、約３０分ゆっくり撹拌する。たとえばヴォルテックス上で勢いよく混合して、約２５０ｎｍの平均直径を有するナノ粒子を得る。ナノ粒子の懸濁液を透析によって精製する。懸濁液は、さらに直接処理することができ、または凍結乾燥によってナノ粒子を分離することができる。
【０１５０】
実施例３
表面改質ナノ粒子（アニオン性（メタ）アクリレートコポリマーのシェルを有するカチオン性（メタ）アクリレートコポリマーを含有するナノ粒子）
たとえば３０００から１００００の塩基対を有し、ヒトの細胞において発現し、かつ治療効果を有することを意図する遺伝子を有する二本鎖プラスミドＤＮＡからなる遺伝子治療ベクターなど、２ｍｇのＤＮＡ（核酸作用物質）を、ｐＨ７．４の４ｍｌのＤｕｌｂｅｃｃｏリン酸緩衝剤に溶解し、２ｍｌのマウス単クローン抗ヒトＤＮＡ  ＩｇＭ溶液（１ｍｇ／ｍｌ）と混合し、３７℃で１時間培養する。次いで、４ｍｌ（１ｍｇ／ｍｌ）の改質Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｅ（２５質量％のメタクリル酸メチル、２５質量％のメタクリル酸ブチル、および５０質量％のメタクリル酸ジメチルアミノエチルの（メタ）アクリレートコポリマー、低分子量、腎臓排泄Ｍｗ＝２１０００）を混合し、３７℃に維持して、約３０分ゆっくり撹拌する。この時間の後、ｐＨを測定し、０．００１ＮのＨＣｌで７．４に調節する。
【０１５１】
リン酸緩衝剤（ｐＨ７．４、０．５ｍｇ／ｍｌ）における１ｍｌの改質Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌの溶液（１ｍｇ／ｍｌ）（５０質量％のメタクリル酸メチル、および５０質量％のメタクリル酸の（メタ）アクリレートコポリマー、低分子量、腎臓排泄Ｍｗ＝２１０００）を混合し、結果として得られるラテックス状緩衝分散に、０．００１Ｍのクエン酸をｐＨ５．０になるまで追加する。ナノ粒子の懸濁液を透析によって精製する。懸濁液は、さらに直接処理することができ、または被覆されたナノ粒子を凍結乾燥によって分離することができる。
【０１５２】
実施例４
実施例１、２、または３からのナノ粒子を、キトサンを含有し、かつ酸でｐＨ５．０から５．５に調節される内部マトリックス層に組み込むことによる未コーティング・ペレット（前ペレット）としての粘膜接着の生成
粘膜接着溶液の調製
４ｇの酢酸キトサンを２０ｇの水に溶解する。次いで、迅速に撹拌しながら、２ｇのクエン酸一水和物を追加する。ｐＨを５．２に設定する。次いで、０．４ｇのＮａドデカネートを、得られた澄んだ黄色状の粘性溶液に追加する。実施例１、２、または３からの懸濁液をゆっくり撹拌してこの溶液に混合する。
【０１５３】
前ペレットの調製
５から８ｇ／分／ｋｇの撹拌率で流動床装置（ＨｕｔｔｌｉｎｇからのＭｉｃｒｏ−Ｌａｂ）を使用して、混合された懸濁液を、３０℃の吸気温度で約４００μｍから６００μｍの直径を有する４０ｇの中和ペレットの上に噴霧する。この場合、吸気は、３５から４５ｍ３／ｈに設定される。この場合の歩留まりは８５％から９０％である。
【０１５４】
実施例５
（コーティング）ペレットの生成
実施例４において生成した前ペレットを流動床方法において、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１２．５（５０質量％のメタクリル酸メチルおよび５０質量％のメタクリル酸の（メタ）アクリレートコポリマー、Ｍｗ＝約２０００００、イソプロパノール／アセトン３：２において１２．５％強度の有機溶液）でコーティングする。加えるポリマーの量は、コアの質量に基づいて４０質量％になる。コーティング用の懸濁液は、
Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１２．５    ５３．５％
クエン酸トリエチル                        １．３３％
イソプロパノール                          ３８．３％
タルク                                    ２．０％
水                                        ５．０％
からなる。
胃液に対して耐性であり、外皮が十二指腸または空腸において約ｐＨ６．０で迅速に溶解し、粘膜接着前ペレットを放出する一様に被覆されたペレットを得る。
【０１５５】
実施例６
カプセル形態の多粒子剤形の生成
実施例５において生成したペレットを、カプセル充填装置によって、サイズが０のカプセルである固いゼラチン・カプセルに直接実装し、５５０ｍｇの充填質量を有する単位を与える。経口投与後、カプセルは、胃のｐＨ範囲において迅速に溶解し、胃においてさえ一様に分布するペレットを放出する。
【０１５６】
実施例７
タブレット形態の多粒子剤形の生成
実施例５において生成したペレットをタブレット化補助剤、結合剤、崩壊促進剤、および潤滑剤と共に調合する。５５０ｇのペレットを３９０ｇの微結晶性セルロース、１５０ｇのＮａカルボキシメチル−スターチ、および１０ｇのＭｇステアレートと混合する。混合物をタブレット・プレスにおいて１１００ｍｇの全質量を有するコンパクトに圧縮する。経口投与後、タブレットは、胃のｐＨ範囲において崩壊し、胃においてさえ一様に分布するペレットを放出する。