(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
グアバの葉および／またはグアバの果実をアルコールおよび水により高温で抽出して結果として生じた抽出物を得る工程と、
該結果として生じた抽出物を減圧に供して水性濃縮物を生成させる工程と、
該濃縮物を遠心分離に供して固形分を分離する工程と、
その清澄化した溶液をクロマトグラフィーカラムに供し、該カラムを水により、続いてアルコールにより溶出して溶出液を提供する工程と、
該溶出液を減圧に供して第２の水性濃縮物を生成させる工程と、該第２の水性濃縮物をポリアミド樹脂に通して不純物を取り除き、次いでアルコールにより活性成分を脱着させる工程と、
該活性成分を減圧下で濃縮して該単離した抽出物を得る工程とを含むプロセスから得られる、ペルタトシドおよびグアイジャベリンを含むケルセチン関連フラボノール配糖体類を、全体重量の少なくとも３０重量％含む単離したグアバ抽出物。
【請求項２】
イソケルセチンをさらに含んでいる、請求項１に記載の単離したグアバ抽出物。
【請求項３】
セスキテルペン類およびタンニン類が実質的に除去されている、請求項１または２に記載の単離したグアバ抽出物。
【請求項４】
前記抽出物の全体重量の約５重量％未満がセスキテルペン類およびタンニン類である、請求項３に記載の単離したグアバ抽出物。
【請求項５】
前記抽出物の全体重量の約１重量％未満がセスキテルペン類およびタンニン類である、請求項４に記載の単離したグアバ抽出物。
【請求項６】
ケルシチンヘキソース、メチルケルセチンヘキソース、イソケルシトリン、モリンペントース、またはケルシトリンペントースの少なくとも１つをさらに含む、請求項１または２に記載の単離したグアバ抽出物。
【請求項７】
セスキテルペン類およびタンニン類が実質的に除去されている、請求項６に記載の単離したグアバ抽出物。
【請求項８】
前記抽出物の全体重量の約５重量％未満がセスキテルペン類およびタンニン類である、請求項７に記載の単離したグアバ抽出物。
【請求項９】
前記抽出物の全体重量の約１重量％未満がセスキテルペン類およびタンニン類である請求項８に記載の単離したグアバ抽出物。
【請求項１０】
ＤＰ−ＩＶ活性またはＤＰ−ＩＶ様活性を阻害することができる、請求項１または２に記載の単離したグアバ抽出物。
【請求項１１】
単離したグアバ抽出物であって、
グアバの葉および／またはグアバの果実をアルコールおよび水により高温で抽出して結果として生じた抽出物を得る工程と、
該結果として生じた抽出物を減圧に供して水性濃縮物を生成させる工程と、該濃縮物を遠心分離に供して固形分を分離する工程と、
その清澄化した溶液をクロマトグラフィーカラムに供し、該カラムを水により、続いてアルコールにより溶出して溶出液を提供する工程と、
該溶出液を減圧に供して第２の水性濃縮物を生成させる工程と、
該第２の水性濃縮物をポリアミド樹脂に通して不純物を取り除き、次いでアルコールにより活性成分を脱着させる工程と、
該活性成分を減圧下で濃縮して該単離した抽出物を得る工程とを含むプロセスから得られる、単離したグアバ抽出物。
【請求項１２】
ジペプチジルぺプチダーゼＩＶ（ＤＰ−ＩＶ）阻害剤であって、
グアバの葉および／またはグアバの果実をアルコールおよび水により高温で抽出して結果として生じた抽出物を得る工程と、
該結果として生じた抽出物を減圧に供して水性濃縮物を生成させる工程と、
該濃縮物を遠心分離に供して固形分を分離する工程と、
その清澄化した溶液をクロマトグラフィーカラムに供し、該カラムを水により、続いてアルコールにより溶出して溶出液を提供する工程と、
該溶出液を減圧に供して第２の水性濃縮物を生成させる工程と、
該第２の水性濃縮物をポリアミド樹脂に通して不純物を取り除き、次いでアルコールにより活性成分を脱着させる工程と、
該活性成分を減圧下で濃縮して該ＤＰ−ＩＶ阻害剤を得る工程とを含むプロセスから得られる、ＤＰ−ＩＶ阻害剤。
【請求項１３】
ＤＰ−ＩＶ活性またはＤＰ−ＩＶ様活性を阻害することができる、請求項１２に記載のＤＰ−ＩＶ阻害剤。
【請求項１４】
グアバの葉および／またはグアバの果実のグアバ供給源をアルコールおよび水と高温で接触させて結果として生ずる抽出物を得る工程と、
該結果として生じた抽出物を減圧に供して水性濃縮物を生成させる工程と、
該水性濃縮物を遠心分離に供して固形分を分離して清澄化した溶液を生成させる工程と、
該清澄化した溶液をカラムクロマトグラフィーに供し、該カラムを水により、続いてアルコールにより溶出して溶出液を得る工程と、
該溶出液を減圧に供して第２の水性濃縮物を生成させる工程と、
該第２の水性濃縮物をポリアミド樹脂に通して不純物を取り除き、次いでアルコールにより活性成分を脱着させる工程と、
該活性成分を減圧下で濃縮して濃縮物を得る工程と、
を含む、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ活性を阻害することができるグアバ抽出物を製造する方法。
【請求項１５】
前記グアバ供給源が、Ｐｓｉｄｉｕｍ ｃａｔｔｌｅｉａｎｕｍ、Ｐｓｉｄｉｕｍ ｃａｔｔｌｅｉａｎｕｍ ｓｓｐ． Ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ、Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕｉｎｅｅｎｓｅ、Ｐｓｉｄｉｕｍ ｌｉｔｔｏｒａｌｅ、Ｐｓｉｄｉｕｍ ｍｏｌｌｅまたはＰｓｉｄｉｕｍ ｓｃｈｉｅｄｅａｎｕｍから選択される植物に由来するものである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
疎水性カラムが、架橋したポリスチレン／ジビニルベンゼンコポリマーから成る、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記濃縮物を膜濾過によってさらに処理する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
グルコース代謝障害又は真性糖尿病である疾患または状態を治療するための医薬組成物であって、請求項１−１１のいずれかに記載の組成物の治療有効量を含む医薬組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、イソケルセチン、ケルシチンヘキソース、メチルケルセチンヘキソース、モリンペントース、またはケルシトリンペントースの１つまたは複数をさらに含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
セスキテルペン類およびタンニン類を前記抽出物から実質的に除去する、請求項１８または１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記抽出物の全体重量の約５重量％未満がセスキテルペン類およびタンニン類である、請求項２０に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、大まかにはグアバ抽出物および関連する組成物を単離して精製する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリフェノール類は、植物および広範囲の種類の２次的な植物生産物中に分布している。５０００を超えるさまざまなポリフェノール類が確認されており、自然界の推定されるポリフェノール類の数は、この種の化合物の複雑さ故におそらくはそれよりはるかに高いレベルである。一般にポリフェノール類は、植物中に、遊離のポリフェノールモノマー類（例えば、フラバノール類、フラバノン類、フラボン類、アントシアニジン類）として、または、複合（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）タンニン類、例えば、加水分解性タンニン類、誘導型（ｄｅｒｉｖｅｄ）タンニン類もしくは縮合型タンニン類およびプロアントシアニジン類などとして見出される。
【０００３】
茶、果実類、および野菜類の多くの健康上の利点は、ポリフェノール類のおかげである。例えば、緑茶のポリフェノール類は、それらの実績のある抗酸化、抗突然変異、抗発癌および血中コレステロール低下効果ならびにそれらの循環器疾患を防止する潜在能力のために重視される。
【０００４】
茶のポリフェノール類は、文献に概してよく特性が示されている。２００ｍｌの緑茶は、最大１４０ｍｇの（−）−エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、６５ｍｇの（−）−エピガロカテキン、２８ｍｇの（−）−エピカテキンガレート（ＥＣＧ）および１７ｍｇの（−）−エピカテキンを含有することが報告されている。ガロイル構成単位のその高い含量は、前立腺癌および乳がん中に誘発されるアポトーシスならびに脂肪酸合成酵素の抑制と関連することが示された。
【０００５】
肥満のヒトおよび糖尿病に悩んでいる患者の研究によれば、高トリグリセリド血症は、新規の脂質生成を経る解糖の代謝産物の脂質への転換が原因の可能性が最も高い炭水化物摂取と強く関係していることを示している。
【０００６】
肥満は、エネルギー摂取と消費との間の不均衡の結果引き起こされる。過剰のエネルギーは肥大するかまたは数が増える脂肪細胞中に蓄えられる。その上、肥満は、さまざまな疾患、例えば、高血圧症、高脂血症、動脈硬化症、高血糖症および糖尿病などに対する強い危険因子である。それ故肥満を防ぐ有効な方法は、腸からの脂肪の吸収を阻止することである。
【０００７】
近年、高血糖と関連するいくつかの疾患、例えば、特にＩ型およびＩＩ型糖尿病がジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰ−ＩＶ）酵素の活性と関係することが見出された。
【０００８】
ＤＰ−ＩＶは、さまざまな組織に広く分布している７６６個のアミノ酸の膜結合性ペプチダーゼである。ＤＰ−ＩＶは、また、血漿中に可溶性の循環型として存在する。著しいＤＰ−ＩＶ活性が、ヒトおよびげっ歯類からの血漿中に検出することができる。膜結合性ＤＰ−ＩＶの第１の生物学的原理は、細胞内シグナル経路と関係する。ＤＰ−ＩＶの第２の生物学的原理は、血漿におけるその酵素機能である。ＤＰ−ＩＶは、２の位置にアミノ末端プロリンまたはアラニンを有するペピチダーゼ基質を好むが、２の位置に好ましくないアミノ酸類を有する基質を切断することもできる。多数の研究所からの知見により、ＤＰ−ＩＶに媒介される不活性化インクレチン類、例えば、ＧＬＰ−１生理活性の主な決定要因としてのグルカゴン様ペプチド−１アミド（「ＧＬＰ−１」）などの重要性が詳細に述べられている。
【０００９】
いくつかのＤＰ−ＩＶ阻害剤の特徴が明らかにされており、それらは、ＧＬＰ−１の延長および血漿中の胃抑制ポリペプチド（「ＧＩＰ」）作用によって糖尿病のげっ歯類中の血糖を低下させるようである。概してかかる阻害剤類は、自然発生源からは得られずいくつかの望ましくない（１つまたは複数の）副作用を有し得る。
【００１０】
それ故、１つまたは複数のこれらの広汎性の状態を緩和する助けとなり得る組成物および／または適切な組成物を特に自然発生源から提供する方法に対する必要性が存在し続けている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、意外にも、ジペプチジルぺプチダーゼＩＶ（ＤＰ−ＩＶ）阻害活性を有する単離したおよび／または精製したグアバ抽出物類を提供する。本明細書に記載のグアバ抽出物類は、ポリフェノール類、例えば、フラボノール類を含む。フラボノール類の化学種の１つであるグアイジャベリンがＤＰ−ＩＶ阻害剤として非常に有効であり、それ故、この化合物、ならびに本明細書に記載の抽出物がＤＰ−ＩＶ活性と関連する疾患の治療に対して適すると言えることが今や意外にも見出された。
【００１２】
本発明は、また、本明細書に記載のそのグアバ抽出物を調製する方法にも関する。
【００１３】
本発明は、また、治療有効量の本明細書に記載の該グアバ抽出物の投与によるさまざまな病気の治療の方法にも関する。
【００１４】
本発明は、また、本明細書に記載の該グアバ抽出物および薬学上許容されるキャリアを含む医薬品組成物にも関する。
【００１５】
それ故、本発明は、本明細書に記載のグアバ抽出物から誘導される治療レベルで体内に吸収されて利用され得るポリフェノール誘導体をさらに提供する。
【００１６】
多様な実施形態が開示されているが、本発明のさらなるその他の実施形態も以下の詳細な説明から当業者には明らかとなろう。当然ながら、本発明はさまざまな自明の態様において、すべて本発明の精神および範囲から逸脱することなく修正することが可能である。したがって、その詳細な説明は、本来例示的で限定的ではないと見なさなければならない。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】合成阻害剤Ｐ３２／９８についての用量／反応阻害曲線を示す図である。
【図２】本発明の単離グアバ抽出物についての用量／反応阻害曲線を示す図である。
【図３】グアイジャベリンがＤＰ−ＩＶの用量依存性阻害をもたらすことを示す図である。
【図４】グアイジャベリンがＤＰ−ＩＶの用量依存性阻害をもたらすことを示す図である。
【図５】単離グアバ抽出物中に見出される主要なケルセチン配糖体類を与える図である。
【図６】さまざまなグアバ抽出物構成要素によるＤＰ−ＩＶの阻害を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
グルコース誘発インスリンの分泌は、多数のホルモンおよび神経伝達物質によって調節される。特に興味深いのは２つの消化管ホルモン、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）および胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）であり、その両方ともがインスリン分泌性薬剤である。インスリン分泌性薬剤は、ホルモンインスリンの合成または発現を刺激することができ、またはその刺激を引き起こすことができる。
【００１９】
ＧＬＰ−１は、インスリンの分泌を増やし、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病で見られるレベルを含めたグルコースレベルを急激に低下する強力な消化管系インスリン分泌性薬剤である。ＧＬＰ−１は、腸のＬ細胞、膵臓内分泌部のα細胞、および脳内の神経細胞における代替的組織特異性切断によって形成される。ＧＩＰは、十二指腸および近位の空腸から食後に合成されて放出される。その放出は、食事の内容および前から存在する健康状態を含めたいくつかの因子に依存する。それは、最初はその胃酸分泌を抑制する性質のために発見され名付けられた。しかしながら、このホルモンの研究が進むに連れて、より今日的な意味を帯びた生理的役割が解明された。特に、ＧＩＰは、インスリン合成および放出に対して促進作用を有するインスリン分泌性薬剤である。
【００２０】
ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰ−ＩＶは、ＣＤ２６としても知られる）は、最後から２番目のＮ末端のプロリンおよびアラニン残基の後のペプチド類を選択的に切断するエクソペプチダーゼである酵素である。この酵素に対する内在性基質としては、ＧＩＰおよびＧＬＰ−１のようなグルコース依存性のインスリン分泌性ポリペプチド類などのインクレチン類が挙げられる。ＤＰ−ＩＶの存在下で、これらのホルモンは、酵素的に還元されて不活性な形になる。不活性な形のＧＩＰおよびＧＬＰは、インスリンの分泌を誘発することができず、したがって、血糖値は、特に高血糖性の状態において高められる。高められた血糖値は、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）および糖尿病を伴う続発症を含む多くのさまざまな病変と関連付けられている。
【００２１】
ＤＰ−ＩＶは、Ｔ細胞が介在する免疫反応における、例えば、移植における役割を演ずることも発見されている。ＤＰ−ＩＶの阻害は、移植心を延長することが実証されている。加えて、ＤＰ−ＩＶの阻害は、間接リウマチの抑圧に寄与してきた。ＤＰ−ＩＶは、また、ＨＩＶのＴ細胞（ヘルパーＴ細胞）中への侵入において役割を果たすと考えられてきた。
【００２２】
特徴的に血糖値上昇を示す疾患としては、真性糖尿病Ｉ型およびＩＩ型等の疾患が挙げられる。糖尿病は、膵臓β細胞によるホルモン産出量が不十分であることを一般に特徴とする。通常、これらの細胞はホルモンインスリンを合成して分泌する。Ｉ型糖尿病において、この機能不全は自己免疫過程によるβ細胞の破壊が原因である。ＩＩ型糖尿病は、β細胞の欠乏および末梢インスリン抵抗性が主たる原因である。糖尿病患者においては、β細胞の数は減少し、まさに、β細胞の生理的インスリンを合成して放出する能力に関する懸念があるばかりでなく、これらのインスリンを産生する膵臓細胞の臨界質量を取り巻く懸念も存在する。β細胞の損失は、糖尿病の存在を併発することが知られている。これらのインスリン産生細胞の損失状態では、膵臓の、例えば、インスリンを産生する内分泌機能に対する歪みが存在する。インスリン産生量の損失により、高血糖による病理過程が悪化し得る。
【００２３】
多くの場合単に水またはアルコールおよびグアバ材料のみから調製される通常のグアバ抽出物は、現に開示中の活性成分と関連するＤＰ−ＩＶ活性の阻害の邪魔になるセスキテルペン類、タンニン類、およびその他の成分を含む。意外にも、本発明の抽出工程による単離および精製、ならびに該成分の濃縮は、セスキテルペン類およびタンニン類等の無用の物質を実質的に排除して、相乗的な形でＤＰ−ＩＶ阻害効果を高める。
【００２４】
用語「実質的に排除する」または「実質的に除去される」とは、該抽出物が、至るところに詳述されている工程の１つによって精製されることを意味する。ＤＰ−ＩＶ活性を低下する汚染物質は、その工程の間に該濃縮物から有利に除去され、ＤＰ−ＩＶ活性を妨げるグアバ材料の成分の大部分を有する抽出物組成物を提供する。かかる成分としては、セスキテルペン類およびタンニン類が挙げられる。大まかに、該濃縮物は、該抽出物の全体重量に基づいて、約１０％未満のセスキテルペン類およびタンニン類の両方のいずれか、具体的には約５％未満のセスキテルペン類およびタンニン類の両方のいずれか、特に約１％未満のセスキテルペン類およびタンニン類の両方のいずれか、最も特定的には約０．５％未満のセスキテルペン類およびタンニン類の両方のいずれかを有する。
【００２５】
かくして、本発明は、明確な内容（標準化されている）の活性成分を有するその結果得られる濃縮物（抽出物）を提供する。すなわち、該抽出物は、該抽出物の１グラムの全体重量（乾燥固体物質）に対して、約５〜約２５ミリグラムの量で存在するペルタトシド、約３０〜約７５ミリグラムの量で存在するケルシチンヘキソース、約４０〜約７０ミリグラムの量で存在するメチルケルセチンヘキソース、約５〜約４０ミリグラムの量で存在するイソケルシチンの含量を有し、モリンペントースが約１５〜約４５ミリグラムの量で存在し、グアイジャベリンが約４５〜約８０ミリグラムの量で存在し、ケルセチンペントースが約６０〜約９５ミリグラムの量で存在する。
【００２６】
より具体的には、該抽出物は、該抽出物の１グラムの全体重量に対して、約１５〜約１７ミリグラムの量で存在するペルタトシド、約５０〜約５４ミリグラムの量で存在するケルシチンヘキソース、約５０〜約５６ミリグラムの量で存在するメチルケルセチンヘキソース、約１８〜約２１ミリグラムの量で存在するイソケルシトリンの標準化含量を有し、モリンペントースが約２６〜約２９ミリグラムの量で存在し、グアイジャベリンが約６３〜約６８ミリグラムの量で存在し、ケルセチンペントースが約７５〜約７９ミリグラムの量で存在する。
【００２７】
本明細書および特許請求の範囲において、用語「含める（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、無制限の用語であり、「を含めるが、〜に限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ，  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」を意味するものと解釈すべきである。これらの用語は、より限定的な用語「基本的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」および「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」を包含する。
【００２８】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるとき、単数形の冠詞「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、その文脈がはっきりとそうでないことを示していない限り、複数の言及を含めることに留意しなければならない。その上、用語「１つの（ａまたはａｎ）」、「１つまたは複数の」および「少なくとも１つの」は、本明細書では互換的に使用することができる。用語「含む」、「含める」、「〜を特徴とする（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ  ｂｙ）」および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」を互換的に使用することができることにも留意しなければならない。
【００２９】
別様に定義されていない限り、本明細書で使用されるすべての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の業者により普通に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に具体的に挙げられているすべての出版物および特許類は、本発明に関連して使用することができるであろう該出版物類に報告されている薬品類、器具類、統計分析および手順を、説明および開示することを含めたあらゆる目的のために、それら全体として参照により組み込む。本明細書に引用されているすべての参考資料は、当業者の水準を示すものと解釈することができる。本明細書におけるそれらの事柄はどれも本発明が先行発明のためにかかる開示に先行する資格がないことの承認と解釈すべきではない。
【００３０】
グアバ果実のさまざまな供給源を受け入れることができる。以下に限定はされないが、グアバ材料は、植物類、例えば、Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｃａｔｔｌｅｉａｎｕｍ、Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｃａｔｔｌｅｉａｎｕｍ  ｓｓｐ．  Ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ、Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕｉｎｅｅｎｓｅ、Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｌｉｔｔｏｒａｌｅ、Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｍｏｌｌｅまたはＰｓｉｄｉｕｍ  ｓｃｈｉｅｄｅａｎｕｍなどから理想的には得ることができる。
【００３１】
用語「抽出物」は、植物源、例えば、葉、小枝、皮、根、茎、種子、花、液果、果実など、から、例えば本明細書に記載の単離方法によって得られるグアバ抽出物組成を意味することを意図している。グアバ材料の抽出物は、グアバ供給源それ自体または冷凍乾燥した製品と比較してグアイジャベリンおよびケルセチン等のポリフェノール類の高い重量百分率を有する抽出物を提供することが意外なことに見出された。理想的には、グアバ果実の果肉および果汁を使用する。葉を使用する場合は、抽出前にその葉を細かく砕くのが多くの場合最良である。細かく砕く前にその葉を乾燥することは任意選択である。
【００３２】
グアイジャベリンは、ケルセチンのアラビノース配糖体であるケルセチン−３−Ｏ−α−Ｌ−アラビノピラノシドとして知られている。グアイジャベリンは、式：
【００３３】
【化１】
0005425758.tif 000002
を有し、式中、「Ａｒａ」は、アラビノース（Ｏ−α−Ｌ−アラビノピラノース）である。
【００３４】
より具体的には、グアイジャベリンは、（Ｉａ）
【００３５】
【化２】
0005425758.tif 000003
のような構造を有する。
【００３６】
ケルセチン（ＩＩ）は、フラボノイド、より具体的にはフラボノールである。
【００３７】
【化３】
0005425758.tif 000004
ケルセチンは、いくつかのその他のフラボノイド配糖体類、例えば、かんきつ類の果実に見出されるルチン、グアイジャベリンおよびケルシトリンなどのアグリコンの形態である。ケルセチンは、炎症のいくつかの初期過程を直接阻害するために顕著な抗炎症活性を明らかにしている。例えば、それは、ヒスタミンおよびその他のアレルギー／炎症メディエーターの生産および放出の両方を阻害する。加えれ、それは、強力な抗酸化活性およびビタミンＣ節約作用を発揮する。
【００３８】
ケルセチンは、ケルシトリン配糖体およびルチン配糖体をそれぞれラムノース（ケルセチン−３−Ｏ−ラムノシド、ＩＩａ）およびルチノースと共に形成する。
【００３９】
【化４】
0005425758.tif 000005
同様に、ケルセチンは、アラビノースと共にグアイジャベリン配糖体を形成する。他の態様において、式ＩＩのクロモンのカルボニルに隣接するエノールのヒドロキシルは、Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル、Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル、Ｏ−α−Ｌ−アラビノピラノシル（グアイジャベリン）またはＯ−α−Ｌ−ラムノピラノシルであり得る。
【００４０】
本発明は、ペルタトシド、ケルシチンヘキソース、メチルケルセチンヘキソース、イソケルシトリン、モリンペントース、グアイジャベリンおよびケルシトリンペントースを含めたケルセチン関連フラボノール配糖体類を含む単離したグアバ抽出物に関する。１態様において、該抽出物の全体重量に基づいて、単離したグアバ抽出物組成物の少なくとも約３０重量パーセントは、フラボノール配糖体類を含有する。
【００４１】
別の態様において、その単離したグアバ抽出物中に含まれる約３０重量パーセントのフラボノール配糖体類の該百分率重量の約９５パーセントは、ペルタトシド、ケルシチンヘキソース、メチルケルセチンヘキソース、イソケルシトリン、モリンペントース、グアイジャベリンおよびケルシトリンペントースに帰せられる。
【００４２】
かくして、式ＩＩＩ
【００４３】
【化５】
0005425758.tif 000006
を利用すると、Ｒは、次のように定義される：
ペルタトシドは、Ｒに対してアラビノグリコールを含み、
ケルシチンヘキソースは、Ｒに対してヘキソースを含み、
グアイジャベリンは、Ｒに対してアラビノースを含み、
ケルシトリンペントースは、Ｒに対してペントースを含み、
ただし、用語ヘキソースおよびペントースは、配糖体の特定の立体化学を意味しない。
【００４４】
例えば、ペルタトシドは、式（ＩＩＩａ）
【００４５】
【化６】
0005425758.tif 000007
を有することができる。
【００４６】
ケルセチンヘキソースは、式（ＩＩＩｂ）
【００４７】
【化７】
0005425758.tif 000008
を有することができる。
【００４８】
ケルシトリンペントースは、式（ＩＩＩｃ）
【００４９】
【化８】
0005425758.tif 000009
を有することができる。
【００５０】
メチルケルセチンヘキソースは、式ＩＶ
【００５１】
【化９】
0005425758.tif 000010
のように画くことができ、式中、Ｒ１は、不確定の立体化学のヘキソースで、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５またはＲ７のどれか１つがメチル基であり、その他は水素原子である。メチルケルセチンは、Ｒ２／Ｒ３／Ｒ５／Ｒ７のどのヒドロキシルがメチル化されているかを決定することは困難であるため異性体の混合物である可能性がある。
【００５２】
例えば、メチルケルセチンヘキソースは、Ｒ２がメチルであり、残りのＲ基がすべて水素である式（ＩＶａ）を有することができる。
【００５３】
【化１０】
0005425758.tif 000011
イソケルシトリンは、式Ｖ
【００５４】
【化１１】
0005425758.tif 000012
のように画くことができ、式中Ｒは、グルコースであり、したがって、ケルセチン−３−Ｏ−グルコシドである。
【００５５】
イソケルシトリンは、式（Ｖａ）
【００５６】
【化１２】
0005425758.tif 000013
を有することができる。
【００５７】
モリンペントースは、式ＶＩ
【００５８】
【化１３】
0005425758.tif 000014
のように画くことができ、式中Ｒは、不確定の立体化学のペントースである。
【００５９】
１態様において、モリンペントースは、（ＶＩａ）
【００６０】
【化１４】
0005425758.tif 000015
であり得る。
【００６１】
本発明の単離したグアバ抽出物の別の態様において、グアイジャベリンは、該抽出物のフラボノール配糖体類の全体量の約５重量パーセントを超え、ペルタトシドは約１０重量パーセントを超える。
【００６２】
本発明の単離したグアバ抽出物のさらに別の態様において、ペルタトシドは、該抽出物の全体重量の約１５〜約１７重量パーセントで存在し、ケルシチンヘキソースは、約５０〜約５４重量パーセントで存在し、メチルケルセチンヘキソースは、約５０〜約５６重量パーセントで存在し、イソケルシトリンは、約１８〜約２１重量パーセントで存在し、モリンペントースは、約２６〜約２９重量パーセントで存在し、グアイジャベリンは、約６３〜約６８重量パーセントで存在し、ケルセチンペントースは、約７５〜約７９重量パーセントで存在する。
【００６３】
別の実施形態において、ケルセチンペントースまたはモリンペントースの百分率範囲は逆にすることが可能である。
【００６４】
該グアバ抽出物は、脂肪族アルコール類、例えば、エタノール、メタノール、プロパノール、ブタノールなど、アセトン、ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル、石油エーテル、それらの混合物および／またはそれらの水との混合物から選択される溶媒により一般に得られる。特に、グアバ材料のエタノール抽出物は、エタノールによるかまたはエタノールと水との混合物により調製することができる。そのアルコール対水の割合は、重量で約９９パーセントから約１パーセントまで、その間のすべての可能な割合で変化させることができる。１態様において、そのエタノール対水の割合は、重量で約８０パーセント対約２０パーセントである。
【００６５】
１態様において、該活性成分の抽出は、昇温状態で、すなわち室温より上の温度で行われる。一般に該抽出混合物は、約３０℃〜約８０℃の間、特に約４０℃と約７０℃の間、より特定的には約４５℃と約６５℃の間、すなわち、約６０℃と約６２℃の間に加熱する。一般に、該抽出混合物は、必要な温度で約１時間と約５時間の間の時間、特に約２〜約４時間、とりわけ約２時間かけて加熱する。
【００６６】
本発明により、単離されたそのグアバ抽出物は、少なくとも１つのポリフェノール化合物、例えばグアイジャベリンおよびしばしばケルセチンなどを含有する。
【００６７】
１態様において、本発明の単離されたグアバ抽出物は、少なくとも約３０％、５０％、７５％以上、９０％以上およびさらに９５％以上のポリフェノール類を与える。本発明に従って使用される抽出物は、約０．５重量％以上、より詳しくは約１０〜約５０重量％の量のグアイジャベリンを含有することができる。一般的には、該抽出物は、約２重量％〜約４重量％の量のグアイジャベリンを含有する。
【００６８】
別の態様において、本発明の単離されたグアバ抽出物は、ケルセチンを含有することができる。
【００６９】
オリゴマーポリフェノール類およびポリマーポリフェノール類は、それらの安定性によって差別化される。熱水中で基本構造に加水分解されるポリフェノール類は、加水分解性タンニン類と呼ばれる。強酸の存在下でのみ加水分解されるポリフェノール類は、誘導型または縮合型タンニン類と呼ばれる。
【００７０】
ポリフェノール類は、「遊離」（モノマー）形および「複合」（オリゴマー／ポリマー）形で存在する。
【００７１】
本発明は、本発明のグアバ抽出物が、ＤＰ−ＩＶに対して、果汁／葉／茎などからのグアバ果汁またはグアバ濃縮物よりもより高い阻害効果を発揮することを提供する。上記の濃縮物は、水が除去された単なる濃縮物である。それ故、グアイジャベリンおよびケルセチン等のポリフェノール類の増加した量を含有するグアバ抽出物は、ＤＰ−ＩＶに対して非常に良好な阻害活性を有することが見出された。本明細書を通して示されているグアバ材料の独特の処理は、かかる特性を備えた独特のグアバ抽出物を提供する。
【００７２】
本発明の該単離されたグアバ抽出物は、グルコース代謝障害、例えば、肥満、高脂血症、高血圧症、関節硬化症および糖尿病、真性糖尿病などを含めた疾病の治療において利用することができる。これらの疾病はＤＰ−ＩＶの活性と関連していることが示されている。
【００７３】
その上、本発明に従って使用されるグアイジャベリンおよび／または該グアバ抽出物は、その他の治療目的、例えば、ＬＤＬコレステロールを低下するため、抗酸化物質として、鎮痛薬として、および例えば女性の月経と関係する状態を軽減するための止血剤としてなどのために使用することができる。
【００７４】
ＤＰ−ＩＶは、ジペプチジルプロテアーゼＩＶであり、多数の組織に広く分布している７６６個のアミノ酸の膜結合性ペプチダーゼである。ＤＰ−ＩＶは、また、当技術分野では周知のように血漿中に可溶性の循環型として存在する。
【００７５】
ＤＰ−ＩＶ様酵素類としては、インスリンに対して特異的であるものが挙げられる。
【００７６】
１つの典型的な方法において、本発明の該グアバ抽出物は、一般に、例えばＰｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａの葉を細かい粉末に粉砕する工程を含む工程によって単離することができる。その葉は、生または乾燥したものであり得る。いくつかの例において、乾燥した葉が、保存するのがそれらは容易であるので好ましい。
【００７７】
その粉砕したグアバ材料を次にエタノールと水により昇温状態で抽出する。その抽出溶媒の温度は、約５０℃と約８０℃の間に維持する。その溶媒は、約０パーセント（水）から約９５パーセントのエタノールまでのエタノール対水の割合を有するエタノール対水の混合物であり得る。大まかに、抽出時間は、昇温状態で約１時間と５時間の間であり、約５と約１０の間の溶媒対粉砕したグアバ材料の割合（重量対重量）を利用する。
【００７８】
一般的には該混合物は、濾過して固形分を除去する。その濾過工程は、重力濾過、微小孔濾過材または膜あるいは限外濾過の使用を含めた技術的に既知の方法により達成することができる。
【００７９】
その固形分の抽出は、数回繰り返すことができ、濾液を組み合わせることができる。
【００８０】
最終的に、その濾液（複数可）を減圧下でエタノールが除去されるまで濃縮して濃縮物を得ることができる。
【００８１】
その濃縮物を、次に、遠心分離に供して不溶性の不純物を除去し、透明な液体を得る。
【００８２】
その透明になった液体を、マクロ多孔性樹脂を充填したクロマトグラフィーカラムに送り込む。特定の態様においてそのマクロ多孔性樹脂は、疎水性である。不純物は、その樹脂を水で洗浄することによってさらに除去する。その活性成分は、次に、その樹脂をエタノールで処理することによって脱着させ、エタノール溶出液を収集する。
【００８３】
その溶出液を次に減圧下で濃縮してグアバ抽出物を生み出す。
【００８４】
場合によって、水およびエタノール洗浄による樹脂の処理後に収集したそのグアバ抽出物は、不純物をさらに除去するためにポリアミド樹脂および水によりさらに処理することができる。該樹脂に吸着した物質は、エタノール等のアルコールで洗浄することによって除去し、その液体を組み合わせることができる。減圧下での濃縮により、グアバ抽出物の濃縮物が得られる。
【００８５】
場合によって、そのグアバ抽出物は、該濃縮物を約０．２および約２ミクロンの間の孔を有する膜を通すことにより、または限外濾過によりさらに精製することができる。
【００８６】
当然のことながら、上記工程の１つまたは複数を取り除く、繰り返す、または順序を変えることができる。
【００８７】
一般的に、該単離されたグアバ抽出物は、ポリフェノール類等の活性成分が強化された溶液を提供するためのさまざまな方法によって濃縮する。例えば、限外濾過を、分子量分画によって不要な成分を除去するために使用することができる。濾過から得られる濃縮液は、貯蔵することができ、または、例えば、次いで、噴霧乾燥、凍結乾燥、気流乾燥、流動床乾燥、リング乾燥（ｒｉｎｇ  ｄｒｙｉｎｇ）、棚式乾燥、真空乾燥、高周波乾燥またはマイクロ波乾燥によってさらに濃縮して粉末にすることができる。最終的に該抽出物は、少なくとも１０重量％のポリフェノール内容物を含むはずである。該抽出物は、それ故、ポリフェノール誘導体類、および、場合によって、その他のＤＰ−ＩＶ活性を阻害する能力を提供する植物物質、例えば、他のフラボノイド類、糖類などを含有する。
【００８８】
該グアバ抽出物は、技術的に周知の１つまたは複数の方法、例えば、クロマトグラフィー、ゲルクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、晶出、親和性クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィーなどによりさらに精製することができる。特定の（１つまたは複数の）ポリフェノールの同定は、当業者には周知の方法によって達成することができ、それらには、１Ｈ  ＮＭＲ、化学分解、クロマトグラフィーおよび分光法、特に単離したポリフェノール化合物の特性決定のための同種核および異種核二次元ＮＭＲが挙げられる。
【００８９】
用語「精製した」または「単離した」は、上記のグアバ抽出物からの１つまたは複数のポリフェノール化合物の精製および／または単離に関連して使用される。さらに、技術的に周知の通常の方法を用いて該グアバ抽出物のさまざまな成分を精製された物質に分離することができる。本発明の１態様において、該抽出物のポリフェノール（複数可）は、技術的に周知の技術によって十分に精製および単離される。精製した化合物の純度は、重量で、大まかには少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも約９９％、さらにより好ましくは少なくとも約９９．９％（例えば約１００％）である。
【００９０】
それ故、本発明は、さまざまな苦痛を治療するために有用である本明細書に記載の体内に吸収されて利用され得る単離したグアバ抽出物組成物をさらに提供する。そのグアバ抽出物は、以下で述べられている多数の方法によって投与することができる。
【００９１】
本発明の組成物は、さまざまな食品類、飲料類、軽食類等に組み込むことができる。１態様において、該組成物は、消費前の食品の上に振りかけることができる。食品に振りかける場合、適当なキャリア、例えば、デンプン、ショ糖または乳糖などを使用して、グアバ抽出物の濃度の分布を助け、食品に適用することをより容易にすることができる。
【００９２】
本発明の該組成物は、また、さまざまな加工食品中のサプリメントとして提供することもできる。この用途の目的に対しては、加工食品は本発明の組成物が加えられている任意の天然の、加工された、ダイエットまたは非ダイエット食品を意味する。本発明の該組成物は、ダイエット飲料、ダイエットバーおよび加工冷凍食品を含むがこれらに限定されない多くの加工ダイエット食品中に直接組み込むことができる。その上、本発明の該組成物は、キャンデー、ポテトチップスなどの軽食製品、加工肉食品、ミルク、チーズ、ヨーグルト、スポーツバー、スポーツドリンク、マヨネーズ、サラダドレッシング、パンおよび任意のその他の脂肪または油含有食品を含むがそれらに限定されない多くの加工非ダイエット食品に組み込むことができる。本明細書で使用される用語「食品」は、ヒトまたは動物の消費に向く任意の材料を指す。
【００９３】
本発明の該組成物は、さまざまな飲料、例えば、果汁、ミルクシェイク、ミルクなどに添加することができる。
【００９４】
その上、本発明に従って使用されるグアイジャベリンおよび／または該グアバ抽出物は、例えば苦瓜、桑の葉、およびバナナの葉からの抽出物のような他の植物の抽出物と混合してもよい。
【００９５】
投与の好ましい方法は、経口である。本発明の該組成物は、適当なキャリア、例えば、デンプン、ショ糖または乳糖などと共に、錠剤、カプセル剤、液剤、シロップ剤および乳剤中に配合することができる。本発明の錠剤またはカプセル剤は、約６．０〜７．０のｐＨで溶解する腸溶コーティングで被覆することができる。小腸では溶解するが胃の中では溶解しない適当な腸溶コーティングは、酢酸フタル酸セルロースである。
【００９６】
本発明の該組成物の軟質ゲルカプセル中への配合は、技術的に周知の多くの方法によって達成することができる。しばしばその製剤は、容認できるキャリア、例えば、油、またはその他の懸濁剤もしくは乳化剤などを含む。
【００９７】
適当な任意のキャリアとしては、例えば、非限定で天然または合成の油、脂肪、ワックスまたはそれらの組み合わせを含む任意の供給源から誘導することができる脂肪酸類、それらのエステル類および塩類が挙げられるがこれらに限定されない。さらに、該脂肪酸類は、非限定で、非水素化油、部分水素化油、完全水素化油またはそれらの組み合わせから誘導することができる。脂肪酸類（それらのエステル類および塩類）の非限定の例示的供給源としては、種油、魚油、菜種油、植物油、サフラワー油、ヒマワリ油、キンレンカ種子油、からし種子油、オリーブ油、ゴマ油、ダイズ油、トウモロコシ油、ラッカセイ油、綿実油、コメヌカ油、ババスナッツ油、ヤシ油、低エルカ酸菜種油、パーム核油、ルーピン油、ココナツ油、アマニ油、マツヨイグサ油、ホホバ、コムギ胚種油、獣脂、牛脂、バター、鶏脂、ラード、乳脂肪、シアバターまたはそれらの組み合わせが挙げられる。
【００９８】
具体的な非限定の例示的魚油源としては、貝油、マグロ油、サバ油、サーモン油、メンハーデン、アンチョビ、ニシン、マス、イワシまたはそれらの組み合わせが挙げられる。特に脂肪酸類の供給源は魚油（ＤＨＡまたはＥＰＡ）、ダイズ油またはアマニ油である。代わりにまたは上で特定したキャリアと組み合わせて、ミツロウを適当なキャリア、並びにシリカ（二酸化ケイ素）等の懸濁化剤として使用することができる。
【００９９】
本発明の製剤は、栄養補助食品であるとも考えられる。用語「栄養補助食品」は、技術的に認められており、疾病を防ぎ、望ましくない状態を改善することができる食品中に見出される特定の化合物を表すことが意図されている。
【０１００】
本発明の製剤は、本発明の有益な組成物の成分の生物学的利用能を安定化する助け、または促進する助けとなり、あるいは個体のダイエットに対するさらなる栄養素として寄与するさまざまな成分をさらに含むことができる。適当な添加剤としては、ビタミン類および生物学的に容認できるミネラル類を挙げることができる。ビタミン類の非限定の例としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ類、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫおよび葉酸が挙げられる。ミネラル類の非限定の例としては、鉄、カルシウム、マグネシウム、カリウム、銅、クロム、亜鉛、モリブデン、ヨウ素、ホウ素、セレン、マンガン、それらの誘導体またはそれらの組み合わせが挙げられる。これらのビタミン類およびミネラル類は、制限なく任意の供給源または供給源の組み合わせに由来するものであり得る。非限定の例示的ビタミンＢ類としては、制限なく、チアミン、ナイアシンアミド、ピリドキシン、リボフラビン、シアノコバラミン、ビオチン、パントテン酸またはそれらの組み合わせが挙げられる。
【０１０１】
さまざまな添加剤を本組成物中に組み込むことができる。本組成物の任意的な添加剤としては、制限なく、ヒアルロン酸、リン脂質類、デンプン類、糖類、脂肪類、抗酸化物質類、アミノ酸類、タンパク質類、香味料類、着色剤類、加水分解デンプン（複数可）、およびそれらの誘導体またはそれらの組み合わせが挙げられる。
【０１０２】
本明細書で使用される用語「抗酸化物質」は、技術的に認められており、化合物の酸化変質を防止もしくは遅らせる合成もしくは天然の物質を指す。例示的な抗酸化物質類としては、トコフェロール類、フラボノイド類、カテキン類、スーパーオキシドジスムターゼ、レシチン、γオリザノール、ビタミン類、例えば、ビタミンＡ、Ｃ（アスコルビン酸）およびＥならびにβカロチンなど、天然要素類、例えばローズマリーおよびサンザシのエキス中に見出されるカモソール（ｃａｍｏｓｏｌ）、カモス酸（ｃａｍｏｓｉｃ  ａｃｉｄ）およびロスマノールなど、プロアントシアニジン類、例えばブドウ種子または松樹皮の抽出物、および緑茶抽出物中に見出されるものなど、が挙げられる。
【０１０３】
本発明のグアバ抽出物組成物を含む組成物は、通常の混合、溶解、整粒、糖衣錠製造研和、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥を経る方法によって製造することができる。該組成物は、該グアバ抽出物組成物を使用できる製剤に加工することを容易にする１つまたは複数の生理学的に容認できるキャリア類、希釈剤類、賦形剤類または助剤類を使用する通常のやり方で配合することができる。
【０１０４】
本発明の組成物は、例えば、経口、頬側、全身的、注射、経皮、直腸、膣など、または吸入もしくはガス注入に適した形を含めた実質的に任意の投与のやり方に適する形とすることができる。
【０１０５】
全身的製剤としては、注射、例えば皮下、静脈内、筋肉内、くも膜下腔内または腹腔内注射により投与するために設計されたもの、ならびに経皮、経粘膜的経口または肺投与のために設計されたものが挙げられる。
【０１０６】
有用な注射用製剤としては、水性または油性媒体中の該グアバ抽出物組成物の滅菌懸濁液、溶液または乳濁液が挙げられる。該組成物はまた、配合剤、例えば、懸濁、安定化および／または分散剤なども含むことができる。注射用の製剤は、単位剤形、例えばアンプル中、またはマルチ投与容器中に入れておくことができ、付加的な保存料を含むことができる。
【０１０７】
別法では、該注射製剤は、滅菌した発熱物質を含まない水、緩衝液、デキストロース溶液などが挙げられるがこれらに限定されない適切な媒体により使用前にもどすための粉末の形で提供することができる。この目的を達成するために、該グアバ抽出物組成物は、任意の技術的に既知の技術、例えば凍結乾燥などにより乾燥し、使用前にもどすことができる。
【０１０８】
経粘膜的投与については、該バリアを浸透させるために適切な浸透剤を該製剤中に使用する。かかる浸透剤は技術的に知られている。
【０１０９】
経口投与に対しては、本発明の該組成物は、例えば、通常の手段により薬学上許容される賦形剤、例えば、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、充填剤（例えば、乳糖、微結晶性セルロースまたはリン酸水素カルシウム）、滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）、錠剤分解物質（例えば、ジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）、または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などと共に調製されたトローチ剤、錠剤またはカプセルの形をとることができる。その錠剤は、技術的に周知の方法によって、例えば、糖類、膜または腸溶コーティングにより被覆することができる。
【０１１０】
経口投与のための液体製剤は、例えば、エリキシル剤、液剤、シロップまたは懸濁剤の形をとることができ、あるいはそれらは使用前に水またはその他の適当な媒体により構成するための乾燥製品としておくことができる。かかる液体製剤は、薬学上許容される添加剤類、例えば、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または食用硬化脂）、乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）、非水性媒体（例えば、アーモンドオイル、油性エステル類、エチルアルコール、または分画植物油）、および保存料（例えば、メチルまたはプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）などと共に通常の手段によって調製することができる。該製剤は、また、緩衝液塩類、保存料類、香味料、着色剤および甘味剤も適宜含むことができる。
【０１１１】
経口投与のための製剤は、周知のように適切に配合して該グアバ抽出物の制御された放出を与えることができる。
【０１１２】
口腔投与については、該組成物は通常のやり方で製剤化された錠剤またはトローチ剤の形をとることができる。
【０１１３】
直腸および膣経路の投与に対しては、該グアバ抽出物組成物は、ココアバターまたはその他のグリセリド類等の通常の座剤の基剤を含有する液剤（保持浣腸用）、座薬または軟膏として配合することができる。
【０１１４】
経鼻投与または吸入もしくはガス注入による投与に対しては、該グアバ抽出物組成物は、適当な高圧ガス、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、フッ化炭素類、二酸化炭素またはその他の適当なガスなど、を用いて加圧パックまたは噴霧器からのエアゾールスプレーの形で都合よく供給することができる。加圧エアロゾルの場合、その投与量単位量は、計量した量を供給するバルブを備えることによって決めることができる。吸入器またはガス注入器で使用するためのカプセルおよびカートリッジ（例えば、ゼラチンからなるカプセルおよびカートリッジ）は、該化合物の混合粉体および乳糖またはデンプン等の適当な粉体ベースを包含させて配合することができる。
【０１１５】
長期にわたる送達のためには、該グアバ抽出物組成物は、埋め込みまたは筋肉注射によって投与するための持効性製剤として処方することができる。該グアバ抽出物組成物は、適当なポリマーまたは疎水性材料（例えば、容認できる油中のエマルジョンとして）またはイオン交換樹脂と共に、つまり、やや溶けにくい誘導体類、例えばやや溶けにくい塩として処方することができる。別法では、該グアバ抽出物組成物を経皮吸収のためにゆっくり放出する粘着性ディスクまたはパッチとして製造した経皮的送達系を使用することができる。この目的を達成するために、透過促進剤を用いて該グアバ抽出物組成物の経皮浸透を促進することができる。適当な経皮パッチ類は、例えば、米国特許第５，４０７，７１３号、米国特許第５，３５２，４５６号、米国特許第５，３３２，２１３号、米国特許第５，３３６，１６８号、米国特許第５，２９０，５６１号、米国特許第５，２５４，３４６号、米国特許第５，１６４，１８９号、米国特許第５，１６３，８９９号、米国特許第５，０８８，９７７号、米国特許第５，０８７，２４０号、米国特許第５，００８，１１０号、および米国特許第４，９２１，４７５号に記載されている。
【０１１６】
別法では、その他の送達系を採用することができる。リポソーム類および乳濁液類は、グアバ抽出物組成物を送達するために使用することができる送達媒体の周知の例である。特定の有機溶媒類、例えばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）なども採用することができるが、通常はより大きな毒性が伴う。
【０１１７】
該組成物は、必要に応じて、該グアバ抽出物組成物を含有する１つまたは複数の単位剤形を含有することができるパックまたはディスペンサー装置に入れておくことができる。そのパックは、例えば、ブリスターパックのような金属またはプラスチックの箔を備えることができる。そのパックまたはディスペンサー装置は、投与のための取扱説明書を添付することができる。
【０１１８】
軟質ゲルまたは軟質ゼラチンカプセルは、例えば、無制限で、適切な媒体（例えば、コメヌカ油および／またはミツロウ）中に該製剤を分散させて高粘度の混合物を形成することによって調製することができる。この混合物は、次に、軟質ゲル産業の業者には既知の技術および機械装置を使ってゼラチン系の膜によりカプセル化する。そうして形成されたカプセルは、次に一定重量まで乾燥する。一般的に、そのカプセルの重量は、約１００〜約２５００ミリグラムの間であり、特に約１５００と約１９００ミリグラムの間の重さがあり、より具体的には、約１５００と約２０００ミリグラムの間の重さであり得る。
【０１１９】
例えば、軟質ゼラチンシェルを調製するとき、そのシェルは、約２０〜７０パーセントの間でゼラチン、通常は可塑剤および約５〜約６０重量％のソルビトールを含むことができる。その軟質ゼラチンカプセルの中身は、液体（主にコメヌカ油またはコムギ胚種油および／または必要に応じてミツロウ）であり、該グアバ抽出物組成物とは別に、親水性の充填材を含むことができる。その親水性の充填材は、存在する場合、約２００〜１０００の平均分子量を有するポリエチレングリコールである。さらなる含有物は、場合によって、増粘剤および／または乳化剤（複数可）である。１実施形態において、その親水性充填材としては、約２００〜１０００の平均分子量を有するポリエチレングリコール、５〜１５％のグリセロール、および５〜１５重量％の水が挙げられる。そのポリエチレングリコールは、プロピレングリコールおよび／またはプロピレンカーボネートと混合することもできる。
【０１２０】
別の実施形態において、その軟質ゲルカプセルは、ゼラチン、グリセリン、水およびさまざまな添加剤から調製される。一般的に、そのゼラチンの百分率（重量で）は、約３０と約５０重量パーセントの間、特に約３５と約    重量パーセントの間、より特定的には約４２重量パーセントである。該製剤は、約１５と約２５重量パーセントのグリセリン、より詳しくは約１７と約２３重量パーセントの間、より特定的には約２０重量パーセントのグリセリンを含む。
【０１２１】
そのカプセルの残余部分は一般的には水である。その量は、約２５重量パーセントと約４０重量パーセントの間、より詳しくは、約３０と約３５重量パーセントの間で変動し、より特定的には約３５重量パーセントである。そのカプセルの残りは、大まかに、着香料（複数可）、砂糖、着色剤（複数可）など、またはそれらの組み合わせからなる約２と約１０重量パーセントの間で変動することができる。そのカプセルが加工された後、その最終カプセルの含水量は、多くの場合、約５と約１０重量パーセントの間、より詳細には、７と約１２重量パーセント、より特定的には約９と約１０重量パーセントの間である。
【０１２２】
製造に関しては、標準的な軟質シェルゼラチンカプセル製造技術をその軟質シェル製品を調製するために使用することができるものと考えられる。有用な製造技術の例は、平板法、Ｒ．Ｐ．Ｓｃｈｅｒｅｒにより開発された回転金敷法、Ｎｏｒｔｏｎ  ｃａｐｓｕｌｅ  ｍａｃｈｉｎｅおよびＡｃｃｏｇｅｌ  ｍａｃｈｉｎｅを使用する方法、およびＬｅｄｅｒｌｅによって開発された方法である。これらの方法のそれぞれは、成熟技術であり、軟質ゼラチンカプセルを調製したい人には誰でもすべて幅広く利用できる。
【０１２３】
乳化剤は、軟質ゼラチンカプセル中の成分の可溶化を助けるために使用することができる。界面活性剤、乳化剤、または発泡剤の具体例としては、Ｄ−ソルビトール、エタノール、カラギーナン、カルボキシビニルポリマー、カルメロースナトリウム、グァーガム、グリセロール、グリセロール脂肪酸エステル、コレステロール、白ろう、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、スクロース脂肪酸エステル、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ポリオキシ４０ステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン、セタノール、ゼラチン、ソルビタン脂肪酸エステル、タルク、ソルビタントリオレエート、パラフィン、ジャガイモデンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、プロピレングリコール、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ペクチン、ポリオキシエチレン（１０５）ポリオキシプロピレン（５）グリコール、ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール、ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油、ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油４０、ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油６０、ポリオキシ３５ヒマシ油、ポリソルベート２０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、マクロゴール４００、オクチルドデシルミリステート、メチルセルロース、ソルビタンモノオレエート、グリセロールモノステアレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノラウレート、ラウリルジメチルアミンオキシド溶液、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウロマクロゴール、乾燥炭酸ナトリウム、酒石酸、水酸化ナトリウム、精製ダイズレシチン、ダイズレシチン、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、中鎖脂肪酸トリグリセリド、無水クエン酸、綿実油−ダイズ油混合物、および流動パラフィンが挙げられる。
【０１２４】
本発明は、また、該発明の組成物の包装された製剤および適切な状態（複数可）に対するその製品の使用についての取扱説明書も提供する。一般的に、その包装された製剤は、いかなる形であっても、それを必要とする個体に投与される。一般的に、その必要用量は、１日に約１〜約４回の用量である。
【０１２５】
本発明は、本発明の組成物のさまざまな状態の治療のための軟質ゼラチンカプセルにおける調製、使用、製造および包装について説明するが、それは軟質ゼラチンカプセルのみに限定されると考えるべきではない。本発明の摂取可能な組成物は、上記のような従来の錠剤、丸薬、トローチ剤、エリキシル剤、乳剤、硬カプセル剤、液剤、懸濁剤などで送達することができる。
【０１２６】
本発明のグアバ抽出物組成物、またはその複数の組成物は、意図した結果を達成するための有効量、例えば治療すべき特定の関連する健康状態を治療または防止するために有効な量を一般に使用する。該組成物は、治療のメリットを得るために治療的にまたは予防のメリットを得るために予防的に投与することができる。治療のメリットとは、治療すべき基礎疾患を根絶または改善すること、および／あるいは、患者が基礎疾患により依然として悩まされ得るにもかかわらず、その患者が感覚または状態の改善を伝えるようにその基礎疾患と関係する１つまたは複数の症状を根絶または改善することを意味する。例えば、本発明の組成物の疼痛に悩んでいる患者への投与は、その基礎疾患が根絶または改善される場合だけでなく該患者がその疼痛と関係する身体的な不快感の厳しさまたは持続の減少を伝える場合の治療的メリットも提供する。
【０１２７】
予防的投与については、該組成物は、前記の状態の１つに発展する危険のある患者に投与することができる。
【０１２８】
投与する組成物の量は、例えば、治療すべき特定の徴候、望ましいメリットが予防であるか治療であるかの投与の形態、治療すべき徴候の重症度ならびに患者の年齢および体重などを含めたさまざまな要因に依存する。有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲である。
【０１２９】
グアバ抽出物組成物の投与の全体量は、一般的には約０．０００１または０．００１または０．０１ｍｇ／ｋｇ／日から約１００ｍｇ／ｋｇ／日までの範囲であるが、他の要因の中でも、該成分の活性、その生物学的利用能、投与の形態によりおよび上で述べたさまざまな要因によって、より高くまたはより低くなり得る。投与量および投与間隔は、治療または予防効果を維持するのに十分であるその（１つまたは複数の）配合物の血漿濃度を提供するように個々に調節することができる。例えば、該配合物類は、とりわけ、投与の形態、治療すべき特定の徴候および処方医師の判断によって、週１回、週数回（例えば１日おき）、１日１回または１日複数回投与することができる。熟練した職人であれば必要以上に実験することなく有効な局所投薬量を最大限に利用することができよう。
【０１３０】
１から５６まで連続して列挙されている次の段落は、本発明のさまざまな態様を提供する。最初の段落（１）における１実施形態において、本発明は、単離したグアバ抽出物であって、前記抽出物の全体重量の少なくとも約３０重量の、ペルタトシド、ケルシチンヘキソース、メチルケルセチンヘキソース、イソケルシトリン、モリンペントース、グアイジャベリンおよびケルシトリンペントースを含むケルセチン関連フラボノール配糖体類を含む単離したグアバ抽出物を提供する。
【０１３１】
２．前記フラボノール配糖体類が前記抽出物の全体重量の９５重量パーセントを含む、段落１に記載の単離したグアバ抽出物。
【０１３２】
３．グアイジャベリンが、前記抽出物のフラボノール配糖体類の全体量の５重量パーセントより多く、ペルタトシドが、約１０重量パーセントより多い、段落１に記載の単離したグアバ抽出物。
【０１３３】
４．単離したグアバ抽出物であって、前記抽出物の１グラムの全体重量に対して、約１５〜約１７ミリグラムの量で存在するペルタトシド、約５０〜約５４ミリグラムの量で存在するケルシチンヘキソース、約５０〜約５６ミリグラムの量で存在するメチルケルセチンヘキソース、約１８〜約２１ミリグラムの量で存在するイソケルシトリンを含み、モリンペントースが約２６〜約２９ミリグラムの量で存在し、グアイジャベリンが約６３〜約６８ミリグラムの量で存在し、ケルセチンペントースが約７５〜約７９ミリグラムの量で存在する単離したグアバ抽出物。
【０１３４】
５．単離したグアバ抽出物であって、グアバの葉および／またはグアバの果実をアルコールおよび水により高温で抽出して結果として生じた抽出物を得る工程と、前記結果として生じた抽出物を減圧に供して水性濃縮物を生成させる工程と、前記濃縮物を遠心分離に供して固形分を分離する工程と、その清澄化した溶液をクロマトグラフィーカラムに供し、前記カラムを水により、続いてアルコールにより溶出して溶出液を提供する工程と、前記溶出液を減圧に供して第２の水性濃縮物を生成させる工程と、前記第２の水性濃縮物をポリアミド樹脂に通して不純物を取り除き、次いでアルコールにより活性成分を脱着させる工程と、前記活性成分を減圧下で濃縮して前記単離したグアバ抽出物を提供する工程とを含むプロセスから得た単離したグアバ抽出物。
【０１３５】
６．ＤＰ−ＩＶ活性またはＤＰ−ＩＶ様活性を阻害することができる、段落１から段落５のいずれかに記載の単離したグアバ抽出物。
【０１３６】
７．段落１から段落５のいずれかに記載の単離したグアバ抽出物を含む食品または飲料。
【０１３７】
８．段落１から段落５のいずれかに記載の単離したグアバ抽出物を食品または飲料に添加する工程を含むダイエット食品またはダイエット飲料を製造するための方法。
【０１３８】
９．段落８に記載の食品、飲料、またはその食品および飲料の両方を消費する工程を含むダイエット方法。
【０１３９】
１０．ジペプチジルぺプチダーゼＩＶ（ＤＰ−ＩＶ）阻害剤であって、グアバの葉および／またはグアバの果実をアルコールおよび水により高温で抽出して結果として生じた抽出物を得る工程と、前記結果として生じた抽出物を減圧に供して水性濃縮物を生成させる工程と、前記濃縮物を遠心分離に供して固形分を分離する工程と、その清澄化した溶液をクロマトグラフィーカラムに供し、前記カラムを水により、続いてアルコールにより溶出して溶出液を提供する工程と、前記溶出液を減圧に供して第２の水性濃縮物を生成させる工程と、前記第２の水性濃縮物をポリアミド樹脂に通して不純物を取り除き、次いでアルコールにより活性成分を脱着させる工程と、前記活性成分を減圧下で濃縮して前記ＤＰ−ＩＶ阻害剤を提供する工程とを含むプロセスから得たＤＰ−ＩＶ阻害剤。
【０１４０】
１１．ＤＰ−ＩＶ活性またはＤＰ−ＩＶ様活性を阻害することができる、段落１０に記載のＤＰ−ＩＶ阻害剤。
【０１４１】
１２．段落１０または１１のいずれかに記載のＤＰ−ＩＶ阻害剤を含む食品または飲料。
【０１４２】
１３．段落１０または１１のいずれかに記載のＤＰ−ＩＶ阻害剤を食品または飲料に添加する工程を含むダイエット食品またはダイエット飲料を製造するための方法。
【０１４３】
１４．段落１３に記載の食品、飲料、またはその食品および飲料の両方を消費する工程を含むダイエット方法。
【０１４４】
１５．グアバの葉および／またはグアバの果実のグアバ供給源をアルコールおよび水と高温で接触させて結果として生ずる抽出物を得る工程と、
前記結果として生じた抽出物を減圧に供して水性濃縮物を生成させる工程と、
前記水性濃縮物を遠心分離に供して固形分を分離して清澄化した溶液を生成させる工程と、
前記清澄化した溶液をカラムクロマトグラフィーに供し、前記カラムを水により、続いてアルコールにより溶出して溶出液を提供する工程と、
前記溶出液を減圧に供して第２の水性濃縮物を生成させる工程と、
前記第２の水性濃縮物をポリアミド樹脂に通して不純物を取り除き、次いでアルコールにより活性成分を脱着させる工程と、
前記活性成分を減圧下で濃縮して濃縮物を得る工程と、
を含む、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ活性を阻害することができるグアバ抽出物を製造する方法。
【０１４５】
１６．前記グアバ供給源がグアバの葉である、段落１５の方法。
【０１４６】
１７．前記アルコールがエタノールである、段落１５または１６のいずれかの方法。
【０１４７】
１８．アルコールの濃度が約８０容積％である、段落１５から１７のいずれかの方法。
【０１４８】
１９．アルコール容量の最終容量対グアバ供給源重量の比が約８対１である、段落１５から１８のいずれかの方法。
【０１４９】
２０．グアバ供給源が、Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｃａｔｔｌｅｉａｎｕｍ、Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｃａｔｔｌｅｉａｎｕｍ  ｓｓｐ．  Ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ、Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕｉｎｅｅｎｓｅ、Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｌｉｔｔｏｒａｌｅ、Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｍｏｌｌｅまたはＰｓｉｄｉｕｍ  ｓｃｈｉｅｄｅａｎｕｍから選択される植物に由来するものである、段落１５から１９のいずれかの方法。
【０１５０】
２１．前記高温が、約４０℃と約７０℃の間である、段落１５から２０のいずれかの方法。
【０１５１】
２２．前記疎水性カラムが、架橋したポリスチレン／ジビニルベンゼンコポリマーから構成されている、段落１５から２１のいずれかの方法。
【０１５２】
２３．前記アルコールがエタノールである、段落１５から２２のいずれかの方法。
【０１５３】
２４．前記濃縮物を膜濾過によってさらに処理する、段落１５から２３のいずれかの方法。
【０１５４】
２５．前記濃縮物を高温での水による抽出にさらにかけて水溶液を提供し、
その水溶液を遠心分離に供して清澄化した溶液を提供し、かつ
その清澄化した溶液を濾過する
段落１５から２４のいずれかの方法。
【０１５５】
２６．前記清澄化した溶液を減圧下で濃縮する、段落２５の方法。
【０１５６】
２７．段落１５から２６のいずれかの抽出物。
【０１５７】
２８．グルコース代謝障害、真性糖尿病、肥満、アテローム性動脈硬化症である疾患または状態を治療する、ＬＤＬコレステロールを低下する、または女性の月経と関係する状態を軽減するための方法であって、それを必要とする個体に段落１から２７のいずれかの組成物のいずれかの治療有効量を前記疾患または状態を治療するために投与する工程を含む方法。
【０１５８】
２９．段落１から２７の組成物のいずれかおよびそれらの薬学上許容される塩類またはエステル類、ならびに薬学上許容されるキャリアを含む医薬品。
【０１５９】
３０．グルコース代謝障害、真性糖尿病、肥満、アテローム性動脈硬化症である疾患または状態を治療する、ＬＤＬコレステロールを低下する、または女性の月経と関係する状態を軽減するのに適する包装した医薬品であって、
段落１から２７のいずれかの組成物、および
前記疾患または状態を治療するための取扱い説明書、
を含む包装した医薬品。
【０１６０】
３１．ペルタトシドおよびグアイジャベリンを含むケルセチン関連フラボノール配糖体を含む単離したグアバ抽出物。
【０１６１】
３２．イソケルセチンをさらに含む、段落３１の単離したグアバ抽出物。
【０１６２】
３３．セスキテルペン類およびタンニン類が実質的に除去されている、段落３１の単離したグアバ抽出物。
【０１６３】
３４．前記抽出物の全体重量の約５重量％未満がセスキテルペン類およびタンニン類である、段落３３の単離したグアバ抽出物。
【０１６４】
３５．前記抽出物の全体重量の約１重量％未満がセスキテルペン類およびタンニン類である、段落３４の単離したグアバ抽出物。
【０１６５】
３６．ケルセチン関連フラボノール配糖体類が、前記抽出物の全体重量の少なくとも３０重量パーセントを構成する段落３１の単離したグアバ抽出物。
【０１６６】
３７．セスキテルペン類およびタンニン類が実質的に除去されている、段落３２の単離したグアバ抽出物。
【０１６７】
３８．前記抽出物の全体重量の約５重量％未満がセスキテルペン類およびタンニン類である、段落３７の単離したグアバ抽出物。
【０１６８】
３９．前記抽出物の全体重量の約１重量％未満がセスキテルペン類およびタンニン類である、段落３８の単離したグアバ抽出物。
【０１６９】
４０．ケルセチン関連フラボノール配糖体類が、抽出物の全体重量の少なくとも３０重量パーセントを構成する、段落３２の単離したグアバ抽出物。
【０１７０】
４１．ケルシチンヘキソース、メチルケルセチンヘキソース、イソケルシトリン、モリンペントース、またはケルシトリンペントースの少なくとも１つをさらに含む段落３１の単離したグアバ抽出物。
【０１７１】
４２．セスキテルペン類およびタンニン類が実質的に除去されている、段落４１の単離したグアバ抽出物。
【０１７２】
１３．前記抽出物の全体重量の約５重量％未満がセスキテルペン類およびタンニン類である、段落４２の単離したグアバ抽出物。
【０１７３】
４４．前記抽出物の全体重量の約１重量％未満が、セスキテルペン類およびタンニン類である段落４３の単離したグアバ抽出物。
【０１７４】
４５．前記ケルセチン関連フラボノール配糖体類が、前記抽出物の全体重量の少なくとも３０重量パーセントを構成する、段落４１の単離したグアバ抽出物。
【０１７５】
４６．ケルシチンヘキソース、メチルケルセチンヘキソース、イソケルシトリン、モリンペントース、またはケルシトリンペントースの少なくとも１つをさらに含む、段落３２の単離したグアバ抽出物。
【０１７６】
４７．セスキテルペン類およびタンニン類が実質的に除去されている、段落４６の単離したグアバ抽出物。
【０１７７】
４８．前記抽出物の全体重量の約５重量％未満がセスキテルペン類およびタンニン類である、段落４７の単離したグアバ抽出物。
【０１７８】
４９．前記抽出物の全体重量の約１重量％未満が、セスキテルペン類およびタンニン類である、段落４８の単離したグアバ抽出物。
【０１７９】
５０．前記ケルセチン関連フラボノール配糖体類が、前記抽出物の全体重量の少なくとも３０重量パーセントを構成する、段落４６の単離したグアバ抽出物。
【０１８０】
５１．ＤＰ−ＩＶ活性またはＤＰ−ＩＶ様活性を阻害することができる、段落１から段落５０のいずれかによる単離したグアバ抽出物。
【０１８１】
５２．前記組成物が、イソケルセチン、ケルシチンヘキソース、メチルケルセチンへキソース、モリンペントース、またはケルシトリンペントースの１つまたは複数をさらに含む、段落２８の方法。
【０１８２】
５３．セスキテルペン類およびタンニン類が実質的に除去されている、段落５２の方法。
【０１８３】
５４．前記抽出物の全体重量の約５重量％未満がセスキテルペン類およびタンニン類である、段落５３の方法。
【０１８４】
５５．セスキテルペン類およびタンニン類を前記抽出物から実質的に除去する、段落５２の方法。
【０１８５】
５６．前記抽出物の全体重量の約５重量％未満がセスキテルペン類およびタンニン類である、段落５５の方法。
【０１８６】
以下の実施例は、限定を意味するのではなくさらなる情報を提供し本発明を裏付けるために提供するものである。
【実施例】
【０１８７】
（実施例１）
Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａからのエタノール抽出物の調製の概要
Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａの葉からの抽出物を調製する製造工程を以下の工程工程により説明する：
・Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａの葉を細かい粉末に粉砕する。
【０１８８】
・エタノールにより抽出する。
【０１８９】
・抽出液を減圧し、エタノールが蒸発するまで濃縮する。
【０１９０】
・不溶性不純物を遠心分離によって取り除き、透明な液体を得る。
【０１９１】
・その透明な液体をマクロ多孔性の樹脂を詰めたクロマトグラフィーカラムに入れ、水により不純物をさらに除去し、次いで活性成分をエタノールにより脱着し、そのエタノール溶出液を集める。
【０１９２】
・そのエタノール溶出液を乾燥してＰｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ抽出物を生じさせる。
【０１９３】
抽出の詳細：
１．抽出物：粉末にしたＰｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａの葉を８０％エタノールにより６０±２℃で２回抽出した。その抽出の持続時間は、各工程とも２時間であった。最後のエタノール容積対原料粉末重量の比率は８対１であった。
【０１９４】
２．濃縮：そのエタノール／水抽出物を減圧にかけ、６０±２°Ｃでエタノールが除去され、水性の液体が得られるまで濃縮した。その真空度は、−０．０８ＭＰａ未満であった。
【０１９５】
３．クロマトグラフィー：その水性液を遠心分離に供して固形分（複数可）を除去した。遠心分離により得られた透明な液体をマクロ多孔性の樹脂に詰め込んだ。その樹脂を水ですすいだ。その活性成分の溶出を、９５％エタノールによりその液体が透明になり、色がわずかに黄ばむまで行った。流速は、１５〜２０ｍｌ／分に制御した。そのエタノール画分を集めた。
【０１９６】
４．乾燥：その混ぜ合わせたエタノール画分を減圧にかけ、その溶出液を濃縮／乾燥した。その真空度は、−０．０８ＭＰａ未満であった。粉末が得られた。
【０１９７】
（実施例２）
Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ抽出物の製造
５００ｇの粉砕した原料（新鮮なＰｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａの果実）を計量し、３つ口フラスコの中の２０００ｍｌの８０％エタノール中に移した。その混合物を６０℃で２時間穏やかに混合した。その溶液を濾過した。その濾液を集め、その固体の抽出を同じ条件下で２０００ｍｌの８０％エタノールにより繰り返した。その溶液を再び濾過し、両方の濾液を混ぜ合わせた。
【０１９８】
その混ぜ合わせた濾液を、減圧下６０℃でエタノールが残らなくなるまで濃縮した。その真空度は、約−０．０９ＭＰａであった。その結果として生じたエタノールなしの液体を遠心分離機にかけて固体粒子を除去した。その液体をペレット状の固体から分離した。２００ｍｌの水をその遠心分離から得られたペレットに加え、その混合物を再び遠心分離した。両方の水性上澄み液を混ぜ合わせた。その透明な液体をマクロ多孔性樹脂（Ｔｙｐｅ  Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＸＡＤ４）に詰め込み、最初に水溶性成分を洗い流すために１７ｍｌ／分の流速の８００ｍｌの水によりすすいだ。その樹脂を次に該活性成分の脱着のために８．５ｍｌ／分の流速の１０００ｍｌの９５％エタノールにより処理し、その溶出液を２時間かけて集めた。その溶出液を減圧下６０℃で濃縮し、続いて５時間かけて乾燥させた。
【０１９９】
１．４ｇのＰｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ抽出物を得た。ＨＰＬＣにより重量基準でケルセチンの含量は０．１０％であると測定され、グアイジャベリンの含量は０．６５７％であると測定された。
【０２００】
（実施例３）
Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ抽出物の製造
２０ｋｇの粉砕したＰｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａの葉の粉末を計量し、２５０Ｌのボイラーに入れ、次いで１６０Ｌの８０％エタノールを加え、その混合物を６０℃で２時間混合した。その溶液を濾過して集めた。１６０Ｌの８０％エタノールをその残渣に加えた。その混合物を６０℃で２時間かけて抽出し、濾過し、濾液を混ぜ合わせた。得られた混合物を減圧下６０℃で残っているエタノールが痕跡量となるまで濃縮した。濃縮中のその真空度は、約−０．０９ＭＰａであった。
【０２０１】
その水性混合物を遠心分離した。得られた上澄み液を遠心分離中に形成された固体ペレットから分離した。そのペレットをバラバラにし、４０Ｌの水をその材料に加え、その水性混合物を遠心分離した。最初の抽出および２回目の抽出からの上澄み液を混ぜ合わせた。その混ぜ合わせた水性の液体をマクロ架橋したマクロ多孔性の樹脂（Ｔｙｐｅ  Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＸＡＤ４）に通した。最初、吸収後の樹脂を洗浄し、それによって不純物の一部を取り除くために１６０Ｌの水を使用した。次に、３５０Ｌの８０％エタノールをその樹脂に通し、その樹脂から活性成分を溶出させた。黄褐色の液体が集められた。その液体を減圧下６０℃で濃縮した。その後それを真空乾燥機中で５時間かけて乾燥した。
【０２０２】
１．８ｋｇのＰｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ抽出物を得た。ＨＰＬＣ分析（クロマトグラフィーカラム：Ｃ１８  ＯＤＳ（オクタデシルシリル化）；移動相：メタノール−１％氷酢酸（３２：６８容積比）３６０ｎｍの波長で）により測定して、グアイジャベリンの含量は１２．４４％であり、１．０２％のケルセチンを伴った。
【０２０３】
工程Ｂ  上の生産物をさらに濃縮した。該生産物を２００Ｌの水に溶解した。その溶液をポリアミド樹脂（Ｍｅｓｓｒｓ．  Ｓｏｒｂｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ．によるポリアミド６樹脂）により分離した。最初に、４０Ｌの水を使用してその樹脂を洗浄して不純物を除去した。次に、６０Ｌの８０％エタノールを用いて所望の活性成分を脱着させた。黄褐色の液体が溶出液として集められた。その溶出液を減圧下６０℃で濃縮し、次いで真空乾燥機中で５時間かけて乾燥した。
【０２０４】
０．４５ｋｇのＰｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ抽出物を得た。ＨＰＬＣ分析（上と同じ）により測定して、グアイジャベリンの含量は４２．０９％であり、０．９６％のケルセチンを伴った。
【０２０５】
（実施例４）
Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ抽出物のＤＰ−ＩＶ阻害効果の調査
方法：
ＤＰ−ＩＶ活性は、比色分析によって測定した。
【０２０６】
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−４−ＮＡ（Ｇ０５１３、Ｓｉｇｍａ、セントルイス、米国ミズーリ州）、ＤＰ−ＩＶの（合成）発色基質を、ＤＰ−ＩＶによって加水分解してジペプチドグリシンプロリンおよび４−ニトロアニリンにし、その出現の割合を４０５ｎｍで定量的に追跡した。
【０２０７】
４００μＬのアッセイ緩衝液（９．５ｇのＨＥＰＥＳ／１ｌの蒸留水、ｐＨ７．０に調整、製品番号Ｈ４０３４、Ｓｉｇｍａ、セントルイス、米国ミズーリ州）、１５０μＬのヒト血漿および１００μＬの阻害剤溶液（または溶媒）を光度計キュベットに移し、穏やかに混合し、３７℃で３分間プレインキュベートした。分析を、次に、７０μＬの基質溶液（１０ｍｌのアッセイ緩衝液中の８．６ｍｇのＧｌｙ−Ｐｒｏ−４−ＮＡ）を添加することにより開始した。４０５ｎｍにおける吸収の変化を２０分間にわたって記録した。
【０２０８】
ＤＰ−ＩＶ活性は、２０分間にわたる光学密度の直線的変化（ΔＡｂｓ／ｍｉｎ）として表される。
【０２０９】
試料の準備：
実施例２によるＰｓｉｄｉｕｍ  ｇｕｊａｖａ抽出物を、攪拌状態下の蒸留水中に４５℃で２４時間溶解した。その後その抽出物を遠心分離（１５，０００ｒｐｍ、１５分）、濾過（シリンジフィルター、０．４５μＭ）によりきれいにし、適宜希釈し、試験分析にかけた。
【０２１０】
その抽出物の濃度は、５ｇの粉末／１００ｍｌの水であった。希釈物は、そのきれいにした抽出物から水の添加によって準備した。
【０２１１】
比較目的で、ＤＰ−ＩＶを、合成酵素阻害剤のＰ３２／９８（３Ｎ−［（２Ｓ，３Ｓ）−２−アミノ−３−メチル−ペンタノイル］−１，３−チアゾリジンヘミフマレート）により阻害した。
【０２１２】
１．６０ｍｇのＰ３２／９８／ｍｌのアッセイ緩衝液の原液を用意し、アッセイ緩衝液で希釈して０．５０ｍｇ／ｍｌと０．０５ｍｇ／ｍｌの間の濃度を生み出した。１００μｌのこれらの溶液を「阻害剤」溶液としてその分析試料に加えた。
【０２１３】
比較実験を「結果」の欄において下でさらに説明する同じ試験分析法で行った。
【０２１４】
データ評価：
結果を、阻害剤を加えてない試料において得られた試験結果対阻害剤またはＰｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ抽出物（実施例２）を加えた（両方ともさまざまな濃度で）試料において得られた結果の比較から導かれた阻害％として表す。
【０２１５】
試験試料における阻害なし（０％）は、阻害剤を添加してない試料と比較して同じ吸収の増加を示した。完全阻害（１００％）は、吸収の明白な増加がないことを示した。
【０２１６】
すべての試験結果は、２つの試料の平均である。これらの反復試験試料の相対標準偏差は、常に７％未満であった。
【０２１７】
結果：
分析は周知の常法を用いて調整した：
試験分析法のｐＨ最適条件は、ｐＨ＝６．０とｐＨ＝８．０の間の範囲であることが示された。３２と４２℃の間の分析温度の範囲は、酵素活性に顕著に影響を及ぼさない。１０ｍｌ当たり５と１０μｇの間の任意の基質濃度は、最大の酵素活性を生じた。選択された基質濃度において、吸収の増加は、最大４５分まで直線的であることが示された。選択された分析条件下で、１００と２００μｌの間の血漿量は、用量に依存する吸収の増加の平行移動を生じることを示した。
【０２１８】
最終試験分析条件下での反復試験は、７％未満の相対標準偏差を生じる。
【０２１９】
周知の非特定の酵素阻害剤およびさまざまな溶媒による酵素の阻害は、表１に示す結果を生じた。
【０２２０】
【表１】
0005425758.tif 000016
上記のように、酵素ＤＰ−ＩＶは、選択された非特定の酵素阻害剤によっては実質的に妨害されない。言及することができる阻害が、有機溶媒によって得られた。これらの結果によって、有機溶媒は酵素活性を妨害することが示され、したがってそのような溶媒の導入は説明できない結果をもたらしたであろう故に、手元の抽出物は水に溶解した。
【０２２１】
合成阻害剤Ｐ３２／９８およびＰｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ抽出物により行った試験の結果を、それぞれの阻害剤の濃度を横座標にプロットし、それぞれの観察されたＤＰ−ＩＶの阻害を縦座標にプロットした図１および２に示す。
【０２２２】
図１に示されているように、合成阻害剤Ｐ３２／９８は、順調な用量／反応阻害曲線を生じた。選択された試験分析方法においては、ほぼ０．１０μｇ／分析量の濃度が５０％前後のＤＰ−ＩＶ阻害を生じた。
【０２２３】
図２に示されているように、Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａの抽出物も順調な用量／反応阻害曲線を生じた。選択された試験分析方法においては、１００〜１，０００μｇ／分析量の濃度が５０％前後のＤＰ−ＩＶ阻害を生じた。
【０２２４】
したがって、Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ抽出物は、ＤＰ−ＩＶを実質的に阻害することを示した。Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａと合成阻害剤Ｐ３２／９８の間の有効性の違いはほぼ１，０００となる。
【０２２５】
（実施例５）
グアイジャベリンのＤＰ−ＩＶ阻害効果の調査
以下において別段の断りのない限り、適用される材料および方法は実施例４のものと同じである。
【０２２６】
試料の準備：
グアイジャベリンをＨＥＰＥＳ緩衝液に溶解し（２０分間の超音波に続く室温での２時間の振とう）、適度に希釈し、試験分析にかけた。希釈物は、ＨＥＰＥＳ緩衝液の添加によって用意した。試験した濃度は、試験分析試料１ｍｌ当たり７０〜２８０μｇの間である。
【０２２７】
データ評価：
結果を、陽性対照試料（阻害剤を加えてない）において得られた試験結果対さまざまな濃度でグアイジャベリンを加えた試料において得られた結果の比較から導かれた阻害％として表す。
【０２２８】
試験試料における１００％の活性とは、阻害剤を含まない試料におけるのと比較して同じ吸収の増加を示した。ゼロ活性（０％）とは、吸収の明白な増加がないことを示した。
【０２２９】
すべての試験結果は、２つの試料の平均を表す。これらの反復試験試料の相対標準偏差は、常に５％未満であった。
【０２３０】
結果：
図３および４に示されているように、グアイジャベリンは、明白な用量に依存したＤＰ−ＩＶの阻害を生じる。選択した試験分析方法において、試験分析試料１ｍｌ当たり１４０〜２１０μｇの間の濃度（１００〜１５０μｇ／分析試料量）が、５０％前後のＤＰ−ＩＶ阻害を生じた。
【０２３１】
グアバ抽出物の試験：
１．抽出物組成物に関する定量的データ
２ｇの抽出物／１００ｍｌのメタノール／水溶液（ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、５０：５０、容積比）（実施例２で調製したもの）を、ケルセチン配糖体類の組成について分析した。図５に示されているように、７つの主要なケルセチン配糖体類が該抽出物中には見出されている。これらのピークに対する構造は、ＭＳ調査に基づいて提案された。定量化のため、個々のフラボノール配糖体類のピーク面積％を酸加水分解後の同じ試料から得たケルセチンの量と相関させた（提案された対応する構造中のケルセチンの質量割合に補正）。
【０２３２】
定量分析のためのＨＰＬＣ条件は、以下の通りとした：
１．００ｍｌ／分に設定したターナリーグラディエントポンプ
移動相Ａ：水中の０．１％リン酸
移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％リン酸
グラディエント：００〜１５分：０〜８％Ｂ；１５〜７０分：８〜２４％Ｂ；７０〜８５分：２４〜３５％Ｂ
波長：３６０ｎｍ
温度：３０℃
注入量：２５μＬ
カラム：Ｓｐｈｅｒｉｓｏｒｂ  ＯＤＳ  ２５０×４．６ｍｍ
ＨＰＬＣ／ＭＳ調査から導かれたグアバ抽出物の組成：
【０２３３】
【表２】
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全体で、グアバ抽出物の各グラム数は、３１３．８ｍｇのフラボノール配糖体類を含んでいた［３１．４％（ｍ／ｍ）のケルセチンと同類の配糖体類に等しい］。鉛化合物のグアイジャベリンの含量は、６５．７ｍｇ／ｇ抽出物［６．５７％（ｍ／ｍ）に相当］であった。
【０２３４】
２．インキュベート状態の間の個々のフラボノール配糖体の安定性
選択されたフラボノール配糖体類のＣａＣＯ２細胞による吸収試験のための試験条件下の安定性を、２ｇ抽出物（実施例２に由来）／１００ｍｌインキュベーション媒体の濃度で調査した。
【０２３５】
【表３】
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上記のように、試験したすべてのフラボノール配糖体類は、回腸条件下で安定であった。
【０２３６】
３．ＣａＣＯ２細胞中のケルセチン配糖体類の吸収の調査
試料濃度：２ｇグアバ抽出物（実施例２に由来）／１００ｍｌのインキュベーション媒体
インキュベーション条件：３７℃で６０分（５回のインキュベーションの反復）
データ評価：インキュベーション媒体（調製直後およびインキュベーションの６０分後）および該細胞の中身のＨＰＬＣ分析から得られた個々のフラボノール配糖体のピーク面積の比。結果は、５回のインキュベーションの平均値である。
【０２３７】
【表４】
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上記のように、フラボノール配糖体類の取り込み絶対量は、２．３と５．３％の間と推定される。最大の吸収は、ケルセチンアラビノシドに見られ、接近してケルセチングルコシドおよびメチルケルセチンヘキソースが続いた。
【０２３８】
その定量的組成を考慮に入れると、吸収されたケラセチン配糖体類の量は、合計１２ｍｇ／ｇ抽出物となる。
【０２３９】
ＣａＣｏ−２細胞の培養
ＣａＣｏ−２細胞を、２０％のウシ胎仔血清、１．２％の非必須アミノ酸、０．８３ｍＭのＬ−グルタミン、１．２％のペニシリン−ストレプトマイシンおよび０．１％のメルカプトエタノールを含有するダルベッコ変法イーグル培地中、３７℃の５％ＣＯ２および９５％の空気の雰囲気中で培養した。
【０２４０】
細胞は、７５ｃｍ２の培養瓶（Ｔ７５）中で成長させ、１週間後に継代培養した（１日おきにＰＢＳ緩衝液で洗浄し、トリプシンにより除去し、新たな培養瓶に移した）。
【０２４１】
ＣａＣｏ−２試験
実験のため、細胞をウェル当たり３×１０５の細胞密度で６個のウェルプレートに播種し、５％ＣＯ２および９５％の空気の雰囲気中３７℃で７〜８日培養密度に到達するまで成長させた。その細胞をＰＢＳ緩衝液で洗浄し、フラボノールと共に６０分間インキュベートした。
【０２４２】
相当するインキュベーション時間の後、使用したインキュベーション媒体の９００μｌを各ウェルから採取し、１００μｌのギ酸と混合した。その細胞をＰＢＳ緩衝液で洗浄し、１ｍｌの１０％ギ酸を用いて除去した。細胞を３０秒間にわたって３回超音波処理し、１０分間遠心分離に供してペレットを廃棄した。その上澄み液をＨＰＬＣ用の試料として用いた。
【０２４３】
４．選択されたケルセチン配糖体類のＤＰＩ−Ｖ試験
グアバ抽出物（実施例２由来のもの）のＤＰ−ＩＶ阻害に対する活性を、グアイジャベリンおよび該グアバ抽出物中に存在するすべてのフラボノール配糖体類を含有する精製した画分と比較した。その精製した画分は、活性成分を含むすべての画分を混ぜ合わせ、減圧下で濃縮して精製した抽出物を提供するＨＰＬＣによって準備した。その精製した抽出物は次にインキュベーション媒体中に望ましい濃度となるように溶解した。
【０２４４】
すべての３つの試料を、ヒト血漿中ＤＰ−ＩＶを５０％阻害することが示されている濃度の、１８０μｇグアイジャベリン／ｍｌ試験分析試料を含有するように調節した。
【０２４５】
図６は、この実験の結果を示す。
【０２４６】
１８０μｇグアイジャベリン／ｍｌの試験は、５０％のＤＰ−ＩＶの阻害を生じた。該グアバ抽出物を１８０μｇグアイジャベリン／ｍｌ試験分析試料を含有するように調節し、７０％よりわずかに多いＤＰ−ＩＶを阻害することを見出した。全体のフラボノール配糖体画分を含有するグアバ抽出物の精製画分を、１８０μｇグアイジャベリン／ｍｌ試験分析試料を含有するように調節し、７０％よりわずかに多いＤＰ−ＩＶを阻害することを見出した。
【０２４７】
これらの結果は以下のことを実証した：
（ａ）グアイジャベリンは、ＤＰ−ＩＶ阻害活性の点から見て活性成分の１つである。
【０２４８】
（ｂ）グアバ抽出物中に存在するその他のフラボノール配糖体類も、ＤＰ−ＩＶ阻害活性を発揮し、グアイジャベリンの効果を高める。
【０２４９】
（ｃ）グアイジャベリン含量に基づいて、グアバ抽出物は、すべてのフラボノール配糖体類の相乗活性を裏付けて純粋なグアイジャベリンより５０％強く作用する。
【０２５０】
（ｄ）該ＤＰ−ＩＶ阻害活性は、フラボノール配糖体画分中に備わっているようである。
【０２５１】
別の実験においては、該グアバ抽出物（６５．７ｍｇのグアイジャベリンを含有する１ｇ）を、ＤＰ−ＩＶ試験のために、１８０μｇのグアイジャベリン／ｍｌ試験分析試料溶液を含有するように希釈した。このグアイジャベリン（標準化化合物）の濃度は、選択された分析の設定においてＤＰ−ＩＶを５０％阻害することを示した。
【０２５２】
この濃度（２．７ｍｇ／ｍｌ試験分析試料溶液）における該抽出物の試験は、該抽出物がグアイジャベリンに加えて相乗作用をする化合物類を含有することを示す７３．２％の阻害を生じた。
【０２５３】
これらの結果に基づいて、主要なケラセチンと同類の配糖体類を含有するクロマトグラフィー画分を分取スケールで分画した。その主要なケラセチンと同類の配糖体類を含有する収集した画分を、真空（ロータリーエバポレーター）を適用して濃縮し、元の抽出物とほぼ同じ量のケラセチンと同類の配糖体類を示すように調節した。ケラセチンと同類の配糖体類のそれらが該グアバ抽出物中に存在するのと同じ濃度の精製した画分を投与するとき、ＤＰ−ＩＶの結果として生じる阻害は７２．５％と計算された。
【０２５４】
フラボノール配糖体類を分取クロマトグラフィーによって単離した。個々のフラボノール配糖体を含有する画分を集めた後、各画分を蒸発乾燥させた。乾燥した残留物を集め、その純度をクロマトグラフィーによってチェックした。それぞれ個別のフラボノール配糖体を、１００〜５００μｇフラボノール配糖体／ｍｌの間の濃度でＤＰ−ＩＶ試験にかけた。
【０２５５】
その試験結果から、ＤＰＩＶの５０％阻害に対する以下の濃度が推定された。
【０２５６】
【表５】
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本発明を好ましい実施形態に関して説明してきたが、当業者であれば、本発明の精神および範囲から逸脱することなく形および詳細において変化が加えられ得ることを認めるであろう。前記背景の中のものを含めて、本明細書中に引用されているすべての参考文献は、本明細書にそれらをそっくりそのまま組み込む。
【０２５７】
当業者であれば、ほんのわずかな日常実験を用いるだけで、本明細書に具体的に記載した本発明の特定の実施形態の多くの同等物を認識し、または解明することができよう。かかる同等物は、以下の特許請求項の範囲に含まれることを意味する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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