(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖尿病を除く疾患に使用し、血中アディポネクチン濃度が４μｇ／mL未満のヒトの血中アディポネクチン濃度を上昇させるための、水及び／又は親水性有機溶媒で抽出したグァバ葉の抽出物を有効成分とする血中アディポネクチン濃度上昇剤。
【請求項２】
グァバ葉の抽出物が、水及び／又は低級アルコールで抽出したものである請求項１記載の血中アディポネクチン濃度上昇剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グァバ葉の抽出物を有効成分とするアディポネクチン濃度上昇剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
グァバ葉の抽出物は、古くより糖尿病、高血圧、便秘、肥満、下痢等に効果があることが知られており、そのまま、もしくは適宜加工して健康維持飲料として利用されている。グァバ（Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ  Ｌｉｎｎ．）は、熱帯、亜熱帯地方に自生しているフトモモ科バンジロウ属の常緑樹で、その葉は上記のように健康維持飲料等として、また、その果実は生食のほか、ジュース等に利用されている。【０００３】
グァバ葉の抽出物は、近年、その薬理作用が注目され、α−アミラーゼ阻害作用を有するダイエット食品（特許文献１）、ウイルス感染予防・治療剤（特許文献２）、過酸化脂質生成抑制剤（特許文献３）、腎臓疾患の予防治療剤（特許文献４）、グリケーション阻害剤（特許文献５）、リパーゼ阻害剤（特許文献６）といった様々な作用や用途が提案されている。【０００４】
一方、近年の分子生物学の進展により、ヒトの疾患に関わる種々の因子が解明されつつある。中でも、脂肪組織特異的ホルモン因子であるアディポネクチンは、インスリン感受性増強作用、抗動脈硬化作用等を有し、「低アディポネクチン血症」は、糖尿病、動脈硬化症等の発症において、それらの上流に位置する根幹病態であることが明らかとなっている（非特許文献１）。さらに、アディポネクチンは、各種がん、心肥大、腸ポリープ、感染症、繊維症及び炎症性疾患の治療・予防作用（特許文献７）、急性創傷の治療作用（特許文献８）、高血圧症の予防・改善作用（特許文献９）、肝硬変や慢性肝炎の予防・治療作用（特許文献１０）を有することが報告されており、糖や脂質の代謝異常を是正するのみならず、様々な疾病に関わっていることが明らかになっている。【０００５】
従って、血中のアディポネクチン濃度を上昇或いはその低下を抑制させることは、これら様々な疾病の治療や改善、或いはその予防といった観点から非常に重要であり、血中のアディポネクチン濃度を上昇させる作用を有し、かつ、長期に渡って摂取可能な安全性の高い物質が要望されている。【０００６】
しかしながら、血中のアディポネクチン濃度を上昇させる作用を有する組成物は、発酵茶抽出物が報告されているのみで（特許文献１１）、選択肢が非常に狭いのが現状である。また、これまで、グァバ葉の抽出物が、血中のアディポネクチン濃度を上昇させるとの報告はなかった。
【特許文献１】特許第２６７０７４２号公報
【特許文献２】特開２０００−２７３０４８号公報
【特許文献３】特開平１１−７５７７０号公報
【特許文献４】特許第３６２５９００号公報
【特許文献５】特開２００４−２５０４４５号公報
【特許文献６】特開２０００−１０３７４１号公報
【特許文献７】特開２００４−３４５９６８号公報
【特許文献８】特開２００４−３３１５９０号公報
【特許文献９】特開２００４−２７５０４１号公報
【特許文献１０】特開２００２−３６３０９４号公報
【特許文献１１】特開２００４−３１５３７９号公報
【非特許文献１】Molecular Medicine、Vol.39、No.4、416-423 (2002)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って本発明は、血中のアディポネクチン濃度を上昇させる作用を有し、かつ、長期に渡って摂取可能な安全性の高い医薬、飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは上記課題を解決するため鋭意検討した結果、グァバ葉の抽出物に血中のアディポネクチン濃度を上昇させる作用があり、かつ、このものは日常的に摂取しても副作用の問題が起きないことを見出し、本発明を完成した。【０００９】
すなわち、本発明は、グァバ葉の抽出物を有効成分とするアディポネクチン濃度上昇剤を提供するものである。【００１０】
また、本発明は、グァバ葉の抽出物を有効量投与することを特徴とするアディポネクチンの濃度上昇方法を提供するものである。【００１１】
さらに、本発明は、アディポネクチン濃度上昇剤を製造するためのグァバ葉の抽出物の使用を提供するものである。
【発明の効果】
【００１２】
グァバ葉の抽出物は優れたアディポネクチン上昇作用を示し、また、この抽出物は古くより健康維持飲料等として利用されており、食経験も豊富なことから安全性が高いものである。したがって、本発明のアディポネクチン濃度上昇剤は、アディポネクチンが関与する糖尿病、動脈硬化症、各種がん、心肥大、腸ポリープ、感染症、繊維症、炎症性疾患、急性創傷、高血圧症、肝硬変及び慢性肝炎等の様々な疾病の治療や改善、或いはその予防等の目的に広く利用でき、かつ副作用が少なく安全である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明に用いられるグァバ葉は、グァバ（Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ  Ｌｉｎｎ．）（別名：バンジロウ）の葉である。本発明で用いられるグァバ葉の抽出物は、グァバ葉を、水及び／又は親水性の有機溶媒で抽出することにより得ることができる。グァバ葉の抽出物は、葉そのものよりもアディポネクチン上昇作用が強く、嗜好的にも優れているため好ましい。【００１４】
抽出に用いられるグァバ葉は、生の状態のものでも乾燥したものでもよく、これらを適当なサイズ、例えば３ｍｍ〜５ｍｍに切断したものを用いても良い。また、乾燥後焙煎したものを用いてもよく、この場合風味が改善される点で好ましい。【００１５】
抽出に用いられる溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等の低級アルコール；酢酸エチル等のエステル；エチレングリコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレンアルコール、グリセリン等のグリコール類；ジエチルエーテル、石油エーテル等のエーテル類；アセトン、酢酸等の親水性溶媒；ベンゼン、ヘキサン、キシレン等の炭化水素などを挙げることができ、水及び／又は親水性溶媒が好ましい。これらの溶媒は、単独で用いてもよく、二種以上を組み合わせて用いてもよい。【００１６】
抽出の際の植物と溶媒との比率は植物乾燥重量に対して溶媒が１〜１００重量倍、特に２〜４０重量倍であるのが好ましい。【００１７】
抽出方法としては、一般的な方法を使用することができ、例えば、溶媒にグァバ葉を浸漬する方法、加温下（常温〜溶媒の沸点の範囲）攪拌する方法等を挙げることができ、圧力式抽出釜等を用いて行うこともできる。【００１８】
抽出条件は原料の状態、使用する溶媒の種類等により異なるが、例えば、常圧ないし加圧条件、すなわち、１気圧〜２気圧の範囲で、室温或いは加温・加熱することが挙げられ、熱水抽出の場合、５０〜１３０℃の加熱条件下、１分から２時間に渡って抽出を行う例が挙げられる。上記抽出方法によれば、原料のグァバ葉に存在する可能性のある雑菌、例えば耐熱芽胞菌等に対する滅菌処理も行うことができ、雑菌汚染の心配がなく衛生的観点からも極めて安全性の高い点で好ましい。【００１９】
また、抽出は、抽出溶媒に重曹等のアルカリを加えてｐＨを上げて行ってもよく、希鉱酸（例えば、希塩酸）又は有機酸（例えば、コハク酸、クエン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸）を加え、弱酸性にして行ってもよい。【００２０】
本発明においてグァバ葉の抽出物は、この様にして得られる抽出物を、そのまま用いることもできるが、抽出後常法により抽出液を分離し、必要により不純物を除去した後のものを用いてもよい。また、一旦真空濃縮機等にかけて濃縮し、抽出溶液を除去したものを用いてもよく、フリーズ・ドライ法等を用いて粉末化したものを用いてもよい。【００２１】
また、上の様にして得られる抽出物を、更に適当なクロマトグラフィー処理等の精製処理等を加えて精製したものを用いてもよく、当該抽出物の精製レベル、利用形態等については特に制限はない。【００２２】
これらのグァバ葉の抽出物は、抽出方法等が異なる２種以上を混合して用いても良い。【００２３】
かくして得られるグァバ葉の抽出物は、グァバ葉に含まれる天然物由来の有効成分を高濃度に含有しており、その作用機序は不明であるが、生体内に投与すると血中、臓器、組織、又は細胞などにおけるアディポネクチン濃度を上昇させる作用を有することから、アディポネクチン濃度上昇剤、特に血中アディポネクチン濃度上昇剤として利用できる。そして、上記抽出物を有効成分とするアディポネクチン濃度上昇剤は、アディポネクチンが関与する糖尿病、動脈硬化症、各種がん、心肥大、腸ポリープ、感染症、繊維症、炎症性疾患、急性創傷、高血圧症、肝硬変及び慢性肝炎等の様々な疾病の治療や改善、或いはその予防等の目的に利用できる。また、本発明のアディポネクチン濃度上昇剤は、糖尿病、高血圧症、高脂血症等を重複して有し心筋梗塞や脳梗塞等を起こすリスクが高い状態であるメタボリックシンドローム（代謝異常症候群、マルチプルリスクファクター症候群、内臓脂肪蓄積症候群）の予防、改善等の目的に利用することもできる。【００２４】
本発明のアディポネクチン濃度上昇剤の投与方法は、経口投与又は非経口投与のいずれも使用できるが、経口投与が好ましい。投与に際しては、有効成分を経口投与、直腸内投与、注射等の投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬品製剤の形態で投与することができる。【００２５】
このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散在、カプセル剤等の固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、凍結乾燥剤等が挙げられる。これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水等が挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤、賦形剤等の慣用の添加剤を適宜添加することもできる。【００２６】
また、本発明のアディポネクチン濃度上昇剤は、上記のような医薬品製剤として用いるだけでなく、飲食品等として用いることもできる。この場合には、前記のグァバ葉の抽出物をそのまま、又は種々の栄養成分を加えて、あるいは飲食品中に含有せしめて、アディポネクチン濃度を上昇させる目的、或いはアディポネクチンが関与する糖尿病、動脈硬化症、各種がん、心肥大、腸ポリープ、感染症、繊維症、炎症性疾患、急性創傷、高血圧症、肝硬変及び慢性肝炎等の疾病の予防や改善等に有用な保健用食品又は食品素材として利用できる。例えば、前記のグァバ葉の抽出物に、飲食品として使用可能な添加剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して食用に供してもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食品；かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品；パン、菓子、バター、粉乳、発酵乳製品に添加して使用したり、水、果汁、牛乳、清涼飲料などの飲料に添加して使用してもよい。【００２７】
さらに飲食品としては、グァバ葉の抽出物をそのまま用いたグァバ葉茶飲料が好適に用いられる。かかるグァバ葉茶飲料を製造する場合は、例えば、グァバ葉を乾燥し、約１２０℃で１０〜２０分間焙煎した後、３〜５ｍｍに細断し、５０〜１００℃の水で１〜６０分、好ましくは３〜２５分間抽出し、得られたグァバ葉の抽出物を適当な濃度、好ましくはタンニンの含有率が０．０５〜０．１％程度となるように濃縮又は希釈して調製したグァバ葉の抽出物を用いるのが好ましい。【００２８】
本発明のアディポネクチン濃度上昇剤の有効成分であるグァバ葉の抽出物は、従来、食品として利用され、その安全性も確認されているものであることから、これをアディポネクチン濃度上昇剤として使用する場合の投与量に厳格な制限はないが、その好適な投与量は乾燥固形分として１日当たり１５０ｍｇ〜２ｇであり、特に４００ｍｇ〜１．６ｇが好ましい。
【実施例】
【００２９】
以下、製造例、試験例、実施例によって本発明の内容をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらにより何ら制約されるものではない。【００３０】
製造例１  グァバ葉茶飲料の製造
グァバ葉（中国産）を乾燥し、１２１℃で１５分間焙煎した後、５ｍｍ程度に細断した。この茶葉７５ｋｇを９５℃の熱水１５００ｋｇに入れ、５分間抽出を行った。抽出液を３０℃以下に冷却し、遠心分離を行って清澄化した後、タンニン量が０．０６〜０．０７重量％になるように水を入れて希釈し、グァバ葉の抽出物を得た。この抽出物に０．０５重量％のアスコルビン酸ナトリウムを添加し、グァバ葉茶飲料を製造した。【００３１】
製造例２  グァバ葉の抽出物の製造１
乾燥グァバ葉１００ｇに水２Ｌを加え、８０℃で３０分間加熱抽出し、４重ガーゼでろ過し、得られたグァバ葉の抽出物を凍結乾燥処理し、粉末とした。収量は約１４％であった。【００３２】
製造例３  グァバ葉の抽出物の製造２
乾燥グァバ葉２５ｇを５００ｍＬの５０％含水エタノール中にて、常圧下、室温で１週間抽出した。得られたグァバ葉の抽出物をガーゼでろ過した後、ろ液を減圧乾固して粉末とした。収量は約３０％であった。【００３３】
試験例１  グァバ葉の抽出物のアディポネクチン上昇作用の検討
製造例１のグァバ葉茶飲料を用い、血中のアディポネクチン濃度に及ぼす影響を検討した。試験前の総コレステロール値が１８０ｍｇ／ｄＬ以上の境界域を含む軽症高脂血症者２３名（女性１５名、男性８名）に、製造例１のグァバ葉茶飲料２００ｍＬを、１日３回、８週間飲用させた。飲用開始前と飲用４、８週目に、血液生化学検査、尿検査、診察等を行い、また、飲用開始後の１週間、４〜５週目と飲用終了前の１週間には食事内容のアンケートを行った。
なお、対象者のうち、７名は抗高脂血症薬であるローコール、メバロチン（ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤）、リバロ（高コレステロール血症治療薬）、コレバイン（コレステロール吸収抑制剤）、エパデール（トリグリセライド低下薬）が処方されていたが、グァバ葉茶飲料の飲用期間中は薬の種類や量の変更は行わなかった。【００３４】
対象者の飲用開始前及び飲用８週目の血中アディポネクチン濃度を、４μｇ／ｍＬ未満、４μｇ／ｍＬ以上かつ７μｇ／ｍＬ未満、７μｇ／ｍＬ以上の３群に層別して表１に示す。【００３５】
【表１】
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【００３６】
表１に示すとおり、飲用８週目では、より高い血中アディポネクチン濃度群にシフトし、全体的に血中アディポネクチン濃度の増加が認められ、特に女性では１５名中９名に増加が認められた。また、対象者全体での血中のアディポネクチン濃度の平均値は、飲用前８．６μｇ／ｍＬから、飲用８週目で８．９μｇ／ｍＬへと増加した。【００３７】
次に、飲用開始前の体脂肪率が肥満領域（女性：３０％以上、男性：２５％以上）の者の飲用開始前、飲用４週目及び飲用８週目の血中アディポネクチン濃度を、表２に示す。飲用開始前のＨｂＡ１ｃ（糖化ヘモグロビン）が糖尿病領域（６．５％以上）の者の結果も表２に示す。【００３８】
【表２】
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【００３９】
表２に示すとおり、飲用開始前の体脂肪率が肥満領域の対象者のアディポネクチン濃度は、飲用８週目では増加した。また、飲用開始前のＨｂＡ１ｃ（糖化ヘモグロビン）が糖尿病領域の対象者のアディポネクチン濃度も飲用８週目では増加した。【００４０】
その他、以下のような結果が得られた。
１．血中コレステロール値を調べた結果、女性において、飲用８週目で血中の総コレステロール値が低下傾向（ｐ＝０．０７）を示し、ＬＤＬ−コレステロール値が低下傾向（ｐ＝０．０５）を示した。一方、ＨＤＬ−コレステロール値は変化しなかった。
２．飲用開始前の総コレステロール値が２２０ｍｇ／ｄＬ以上の高値者において、飲用４週目で総コレステロール値の低下傾向（ｐ＝０．０６）が認められ、８週目で有意な低下（ｐ＜０．０５）が認められた。また、ＬＤＬ−コレステロール値も低下傾向（ｐ＝０．０６）を示し、この結果は女性で顕著に現れた。
３．飲用８週目でＨｂＡ１ｃ値は有意に低下（ｐ＜０．０５）した。
４．その他の血液検査値や尿検査値に異常値や大きな変動は認められなかった。また、下痢や便秘、食欲不振、不快感等の有害事象はなく、飲用期間中の食事内容に大きな変動は認められなかった。【００４１】
以上の結果より、グァバ葉の抽出物をヒトに飲用させることで、血中のアディポネクチン濃度が上昇することが分かった。飲用中の食事内容に大きな変動がなく、また、元々処方されていた薬の種類や量を変更しなかったことから、血中のアディポネクチン濃度上昇作用は、グァバ葉の抽出物の飲用に起因するものと考えられる。さらに、飲用期間中に有害事象は発生せず、血液検査値や尿検査値で異常値は認められなかったことから、その安全性が確認された。特に、アディポネクチンについて、ヒト血中の濃度が４μg／ｍＬ以下では冠動脈疾患の危険率が上がることが指摘されている（Bio Clinica, 19 ,18-30, 2004）。今回の試験で、飲用８週目で４μg／ｍＬ未満のヒトが減り、対象者全体での血中のアディポネクチン濃度の平均値が増加したことから、グァバ葉の抽出物の飲用は生体にとって有意義であることが明らかになった。さらに、飲用開始前の体脂肪率が肥満領域の対象者や、ＨｂＡ１ｃが糖尿病領域の対象者で、血中アディポネクチン濃度が増加したことから、特にメタボリックシンドロームの予防・改善に有効であることが示された。【００４２】
処方例１  錠剤の製造
下記の処方で各種成分を混合して造粒・乾燥・整粒した後に、打錠して錠剤を製造した。【００４３】
（処方）                      （ｍｇ）
製造例３の抽出物                ４０
微結晶セルロース              １００
乳糖                                 ８０
ステアリン酸マグネシウム      ０．５
メチルセルロース                  １２【００４４】
処方例２  清涼飲料の製造
下記処方により、常法に従って各成分を配合し、均質化して清涼飲料を得た。得られた清涼飲料は褐色瓶に充填後、アルミキャップにて封印し、加熱処理を施した。【００４５】
（処方）                      （ｇ）
製造例２の抽出物              ０．８
香料                               ０．８
水                                  １００
還元澱粉糖化物                  ２４
果糖                                 １８【００４６】
処方例３  発酵乳の製造
１５％脱脂乳に３％グルコースを添加し、１２０℃で３秒間殺菌した後、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）ＹＩＴ９０２９株の種菌を１％接種し、３７℃でｐＨ３．６まで培養してヨーグルトベース２１０ｇを得た。一方、砂糖９７ｇ、クエン酸鉄０．２ｇ及び製造例２の抽出物５ｇを水に溶解し、水を加え全量を７９０ｇとし、この溶液を１１０℃で３秒間殺菌し、シロップを得た。上記のようにして得られたヨーグルトベースとシロップを混合し、香料を１ｇ添加した後、１５Ｍｐａで均質化して容器に充填して発酵乳製品を得た。