(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
モリンダ・シトリフォリアの種子からオイル成分を除去した後の残渣を、エタノール、イソプロピルアルコールまたはプロピレングリコールで加熱抽出して得られるエキスを含むことを特徴とするエラスターゼ阻害剤。
【請求項２】
モリンダ・シトリフォリアの種子からオイル成分を除去した後の残渣を、エタノール、イソプロピルアルコールまたはプロピレングリコールで加熱抽出して得られるエキスを含むことを特徴とする抗酸化作用を併せ持つエラスターゼ阻害剤。
【請求項３】
モリンダ・シトリフォリアの種子を粉砕することなくエタノール、イソプロピルアルコールまたはプロピレングリコールで加熱抽出して得られるエキスを含むことを特徴とするエラスターゼ阻害剤。
【請求項４】
モリンダ・シトリフォリアの種子を粉砕することなくエタノール、イソプロピルアルコールまたはプロピレングリコールで加熱抽出して得られるエキスを含むことを特徴とする抗酸化作用を併せ持つエラスターゼ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、モリンダ・シトリフォリアの種子を含むエラスターゼ阻害剤に関するものであり、さらに種子の大部分を占めるオイル成分を除いた成分を得る抽出条件により見出せたエラスターゼ阻害剤・抗酸化作用を併せ持つエラスターゼ阻害剤、及びモリンダ・シトリフォリアの種子を粉砕することなく加熱抽出して得られるエキスを含むエラスターゼ阻害剤・抗酸化作用を併せ持つエラスターゼ阻害剤に関するものであり、新規にして、かつ、安全な化粧品、医薬品、医薬部外品、飲食品素材に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ノニ〔（学名：モリンダ・シトリフォリア（Ｍｏｒｉｎｄａ  ｃｉｔｒｉｆｏｌｉａ）、和名：ヤエヤマアオキ）〕は、インドネシアのモルッカ諸島原産、アカネ科の熱帯性植物である。主に南太平洋のポリネシアの島々を中心に群生し、東南アジア、オーストラリア、インド、アフリカ、沖縄、小笠原諸島などの熱帯・亜熱帯地域に広く分布している。モリンダ・シトリフォリアは古くから熱帯・亜熱帯地域において食用、あるいは伝承医薬品として用いられ、根や茎、樹皮、葉、花、果実などの各部位が、高血圧、糖尿病、心臓病、疼痛、関節炎、喘息、マラリア熱、捻挫、火傷、虫歯、下痢、伝染病などの各種疾病の治療に利用されてきた。近年、それらの伝統的薬効を科学的に証明する研究が世界各国で進められている。
【０００３】
長時間の紫外線暴露は、しわの形成などの光老化をもたらすことがよく知られている。エラスチンは皮膚の弾力を保つ主要な真皮マトリックス成分のひとつであり、特に繰り返しの伸縮に関与する繊維性のタンパク質であるが、紫外線の影響でエラスターゼ酵素の活性が亢進すると、エラスチンの過剰な分解がおこり、しわが形成される。従って、安全で、かつ有効なエラスターゼ阻害剤は、美容上の問題を解決する手段として非常に有用であるといえる。
【０００４】
また、過度の紫外線は活性酸素を過剰に増加させ、しみやそばかすなどの色素沈着の原因となるメラニンの産生を促進する。また、過度の活性酸素は炎症反応を増悪させ、その治癒を遅らせるほか、肌荒れや過敏肌などさまざまな肌トラブルの原因となる。従って、安全で、かつ有効な抗酸化剤は美容上の問題を解決する手段として非常に有用であるといえる。
【０００５】
モリンダ・シトリフォリアに関しては、特開２０００−９５６６３号の請求項及び［００１２］にモリンダ・シトリフォリアのみならずアルトカルパス  ラクーチャ等の植物の抽出物が美白剤、活性酵素消却剤、抗菌剤として有効であることが記載され、又、有効成分として用いられる植物抽出物は葉／枝・幹／樹皮／花／果実／根またはそれらの乾燥物から、適当な抽出溶媒を用いて、抽出することにより、調製される、ことが記載され、種子のことは記載されていないし、エラスターゼ阻害効果についての記載もない。
【０００６】
又、特開２００７−５５９６３号の［００１７］には、ヤエヤマアオキ（モリンダ・シトリフォリア）の果実は、果肉及び種子のうちいずれか一方又はその両方を含むものであるが、より抗酸化活性を高めることができるため、種子を除いた果肉部分のみを用いることが好ましい、ことが記載されている。果実には当然種子を含むので、種子を含んでも良いが、種子を除いた果肉の部分のみを用いることが好ましい、と解釈することが出来、種子についての効果を認めておらず、エラスターゼ阻害効果についての記載もない。
【０００７】
又、特開２００５−１４５９４５号の請求項１には、ヤエヤマアオキ（モリンダ・シトリフォリア）熟成果実発酵液からなる皮膚機能賦活化粧料組成物のことが記載されているが種子のことについては全く記載されていない。
【０００８】
又、特表２００３−５０８５５４号の［０００６］には、ヤエヤマアオキ（モリンダ・シトリフォリア）種子から抽出されたエッセンシャルオイル、及びオイルを抽出する方法に関することが記載され、その抽出方法は［０００８］に記載のように種子を砕き、破砕し、薄片にし、切断し、することが記載されているが、種子がエラスターゼ阻害効果を有することは記載されていない。
【０００９】
又、特開２００４−３５２７０１号は［０００２］、［０００４］等に、モリンダ・シトリフォリアの果実の種子及び種皮が抗炎症作用、殺菌効果、保湿効果を有する入浴剤として利用出来ることが記載されているが、種子がエラスターゼ阻害効果を有することは記載されていない。
【００１０】
このように、従来においてはモリンダ・シトリフォリアの種子がエラスターゼ阻害効果を有すること、又、その種子からオイル成分を除去した後の残渣を加熱抽出して得られたエキスがエラスターゼ阻害効果、抗酸化作用を併せ持つエラスターゼ阻害効果を有すること、又、その種子を粉砕することなく加熱抽出して、得られたエキスがエラスターゼ阻害効果、抗酸化作用を併せ持つエラスターゼ阻害効果を有することは全く知られておらず、本発明者らの鋭意研究の結果初めて発見されたものである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、モリンダ・シトリフォリア種子のエラスターゼ阻害活性を発現させる製法で、かつ、抗酸化作用を最大限に引き出すことのできる製法によって調製したエキスを有効成分として含有することで、しわの形成をはじめとする光老化の抑制、皮膚の美白、炎症の治療促進、肌荒れの予防・改善等に有用でかつ安全な、皮膚外用剤および内服剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、モリンダ・シトリフォリアの種子がエラスターゼ阻害活性のあることを見出した。
【００１３】
また、モリンダ・シトリフォリアの種子からオイル成分を除去した後の残渣を加熱抽出して得られたエキスに、オイル成分には期待できないエラスターゼ阻害活性、及び抗酸化作用を併せ持つエラスターゼ阻害活性を見出した。
【００１４】
さらに、その方法で調製したエキスには、オイル成分には期待できないエラスターゼ阻害活性、及び抗酸化作用を併せ持つエラスターゼ阻害活性が発現することを見出した。
【００１５】
また、モリンダ・シトリフォリアの種子をあえて粉砕することなく含水アルコールで加熱抽出して得られたエキスに、粉砕後の種子を含水アルコールで静置抽出するという一般的に知られている抽出方法で調製したエキスには発現しないエラスターゼ阻害活性を見出した。なお、この際のアルコールとしては一価および多価アルコールが用いられ、前者としてはメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールが例示され、後者としてはエチレングリコール、プロピレングリコールが例示される。
【００１６】
さらに、その方法で調製したエキスは、一般的に知られている抽出方法で得られたエキスよりも極めて強い抗酸化活性が発現することを見出し、かつ抗酸化作用を併せ持つエラスターゼ阻害活性を見出した。
【００１７】
モリンダ・シトリフォリアの種子は前記のように粉砕しない場合にエラスターゼ阻害活性を見出すことが出来るのであるが、オイル成分を除去する場合はその種子を粉砕することが望ましい。粉砕することで効率よくオイル成分を除去できるからである。
【００１８】
また、本発明における製法によって得られた抽出液あるいはエキスから、カラムクロマトグラフィーなどを用いて精製した単一成分を用いることもできる。
【実施例】
【００１９】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００２０】
実験材料にはタヒチ産のモリンダ・シトリフォリア果実、および種子を使用した。
【００２１】
参考例
検体１；乾燥種子を粉砕後、１０倍量のヘキサンで１時間１回還流抽出し、ろ液を減圧下濃縮して溶媒を留去したものをヘキサン抽出エキスとした（収率；１０．７％）。
検体２；検体１の調製においてヘキサン抽出した後、即ちヘキサン抽出によりオイル成分を除去した後の残渣を再度エタノールで１時間１回還流抽出し、ろ液を減圧下濃縮して溶媒を留去したものをエタノール抽出エキスとした（収率；３．６％）。
検体３；乾燥種子を粉砕後、１０倍量の５０％エタノールで一晩静置抽出し、ろ液を減圧下濃縮してエタノールを除き、凍結乾燥したものを５０％エタノール静置抽出エキスとした（収率；３．５％）。
検体４；粉砕していない乾燥種子を１０倍量の５０％エタノールで２時間２回還流抽出し、ろ液を減圧下濃縮してエタノールを除き、凍結乾燥したものを５０%エタノール加熱抽出エキスとした（収率；５．０％）。
検体５；種子を除き、粉砕した乾燥果実を１０倍量の５０％エタノールで２時間２回還流抽出し、ろ液を減圧下濃縮してエタノールを除き、凍結乾燥したものを５０%エタノール加熱抽出エキスとした（収率；３３．０％）。
【００２２】
試験例１
エラスターゼ阻害活性試験；Ｃａｉｎｅｌｌｉらの方法に準じて行った。すなわち、８ｍＭの基質（Ｎ-メトキシスクシニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−バリン−ｐ−ニトロアニリド）（シグマ社製）／ジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）溶液を調製し、これを基質溶液とした。２５０ｍＵ／ｍＬの酵素エラスターゼ溶液を０．１Ｍ  ヘペス（Ｈｅｐｅｓ）緩衝液（０．５  Ｍ  ＮａＣｌ、１０％  ＤＭＳＯ、ｐＨ  ７．８）を用いて調製した。被検体液５μＬと酵素エラスターゼ（シグマ社製）溶液９０μＬを混合し、４℃、１５分間プレインキュベーションした後、基質溶液５μＬを加え反応を開始した。３７℃、２０分間インキュベーションした後、吸光波長４０５ｎｍで吸光度を測定した。被検体、および陽性対照薬のフェニルメタンスルフォニルフルオリド（ＰＭＳＦ）（シグマ社製）はＤＭＳＯに溶解した。
【００２３】
表１  検体４及び５のエラスターゼ阻害作用
0005425413.tif 000002
対照；被検体無添加群。（有意差検定  ＊；ｐ＜０．０１（対照（ａ）との比較）、
＃；ｐ＜０．０１（対照（ｂ）との比較））
【００２４】
表１に示したように、果実および種子の５０％エタノール抽出エキスのエラスターゼ阻害活性を検討した結果、種子エキス（検体４）にエラスターゼ阻害活性が認められたが、種子を除いた果実エキス（検体５）にはエラスターゼ阻害作用はまったく認められなかった。
【００２５】
0005425413.tif 000003
【００２６】
表２に示したように、オイル成分であるヘキサン抽出エキス（検体１）にはエラスターゼ阻害活性はまったく認められなかった。一方、オイル成分をヘキサン抽出によって除去した残渣のエタノール抽出エキス（検体２）にはエラスターゼ阻害活性が認められた。
また、粉砕した種子を５０％エタノールで静置抽出して得られた５０％エタノール静置抽出エキス（検体３）はエラスターゼ阻害活性をまったく示さなかった。一方、種子をあえて粉砕せずに加熱抽出して得られた５０％エタノール加熱抽出エキス（検体４）にはエラスターゼ阻害活性が認められた。陽性対照薬として用いたＰＭＳＦにもエラスターゼ阻害活性が認められた。
【００２７】
試験例２
１、１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）ラジカル捕捉活性試験；ＤＰＰＨラジカル捕捉能試験はＭａｒｓｄｅｎらの方法に従った。すなわち、０．５Ｍに調整した酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）０．４ｍＬ、エタノール１．６ｍＬ、および被検体液２ｍＬを加えて混合した。その混合した液に０．５ｍＭ  ＤＰＰＨ（和光純薬社製）／エタノール溶液１ｍＬを加え、暗所で３０分間室温放置後、吸光波長５２０ｎｍで吸光度を測定した。
【００２８】
0005425413.tif 000004
【００２９】
表３に示したように、オイル成分であるヘキサン抽出エキス（検体１）はラジカル捕捉活性をまったく示さなかった。一方、オイル成分をヘキサン抽出によって除去した残渣のエタノール抽出エキス（検体２）には濃度依存的にラジカルを捕捉する活性が認められた。
また、種子をあえて粉砕せずに加熱抽出して得られた５０％エタノール加熱抽出エキス（検体４）は５、１０、２０μｇ／ｍＬの濃度で、粉砕した種子を５０％エタノールで静置抽出して得られた５０％エタノール静置抽出エキス（検体３）のそれよりも約４倍もの強いラジカル捕捉活性を示した。
【００３０】
試験例３
試験例１において、エタノールをイソプロピルアルコールおよびプロピレングリコールに置きかえて実験を行ったところ、いずれにおいても同様の結果を得た。
【００３１】
以下に皮膚外用剤（化粧水）及び内服剤（カプセル剤）の配合例及び製造例を示す。なお、％とあるのは重量％を示す。
【００３２】
検体４を用い、下記成分を所定量混合して24時間静置し、ろ過して化粧水とした。
検体４                  １０％
幼若ハッサクエキス      １０％
メチルパラベン            １％
エタノール                ４％
精製水                  ７５％
【００３３】
検体４を用い、下記各成分を所定量加水混合して造粒し、６０℃で６時間乾燥したのち整粒し、常法に従いカプセル充填し、２５０  ｍｇのハードカプセル剤とした。
検体４                  ２０％
幼若ウンシュウミカン末  ３５％
還元麦芽糖              ２５％
アスコルビン酸            ５％
結晶セルロース末        １５％