(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
【数８−１】
0005625050.tif 000053
【数８−２】
0005625050.tif 000054
から選択される、化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
【請求項２】
【数９】
0005625050.tif 000055
から選択される、請求項１に記載の化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
【請求項３】
【数１０】
0005625050.tif 000056
から選択される、請求項１に記載の化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
【請求項４】
【数１１】
0005625050.tif 000057
から選択される、請求項１に記載の化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
【請求項５】
２−（１−（３−クロロ−３’−フルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールである化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
【請求項６】
２−（２−（２−（２−クロロ−３−フルオロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３’−フルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールである化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
【請求項７】
２−（２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３’−フルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールである化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
【請求項８】
２−（２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３，３’−ジフルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールである化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
【請求項９】
２−｛２−［１−（２，６−ジクロロフェニル）エチル］−１−［３，３’−ジフルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝プロパン−２−オールである化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれか１項に記載の化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩、および１つまたは複数の薬学的に許容されるキャリアを含む、医薬組成物。
【請求項１１】
疾患または障害を処置するための組成物であって、治療有効量の請求項１から９のいずれか１項に記載の化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩を含み、該疾患または障害は、アテローム性動脈硬化症、インスリン抵抗性、変形性関節症、脳卒中、高血糖症、脂質異常症、乾癬、加齢およびＵＶ曝露関連の皮膚のしわ、糖尿病、がん、アルツハイマー病、炎症、免疫学的障害、脂質障害、肥満、黄斑変性症、表皮のバリア機能の乱れを特徴とする状態、表皮もしくは粘膜の分化撹乱もしくは過剰増殖状態、または心血管障害である、組成物。
【請求項１２】
前記疾患または障害が、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、アルツハイマー病または脂質異常症である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記疾患または障害がアテローム性動脈硬化症である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記疾患または障害が糖尿病である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記疾患または障害がアルツハイマー病である、請求項１１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、肝臓Ｘ受容体（ＬＸＲ）の活性を調節する化合物に関する。本発明はまた、本発明の化合物を含む医薬組成物および肝臓Ｘ受容体の活性を調節するためにそれらの組成物を利用する方法を提供する。特に、ＬＸＲの活性を調節するためのイミダゾール異性体および誘導体を提供する。
【背景技術】
【０００２】
（核内受容体）
核内受容体は、構造的かつ機能的に関連し、例えば、ステロイド、レチノイド、ビタミンＤおよび甲状腺ホルモンの受容体である調節タンパク質のスーパーファミリーである（例えば、非特許文献１参照）。これらのタンパク質は、それらの標的遺伝子のプロモータのシス作用エレメントに結合し、受容体のリガンドへの応答における遺伝子発現を調節する。
【０００３】
核内受容体は、それらのＤＮＡ結合特性に基づいて分類することができる（例えば、上記の非特許文献１および非特許文献２参照）。例えば、あるクラスの核内受容体には、グルココルチコイド、エストロゲン、アンドロゲン、プロゲスチンおよびミネラルコルチコイド受容体が含まれ、これらは逆方向反復として配置されているホルモン応答エレメント（ＨＲＥ）にホモ二量体として結合する（例えば、上記の非特許文献２参照）。レチノイン酸、甲状腺ホルモン、ビタミンＤ３、脂肪酸／ペルオキシソーム増殖因子（すなわち、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体またはＰＰＡＲ）およびエクジソンによって活性化される受容体を含む第２のクラスの受容体は、共通のパートナーであるレチノイドＸ受容体（すなわちＲＸＲ、９−シスレチノイン酸受容体としても公知；例えば、非特許文献３および非特許文献４参照）と共にヘテロ二量体としてＨＲＥに結合する。
【０００４】
ＲＸＲは、ホモ二量体としてＤＮＡに結合し、いくつかのさらなる核内受容体がＤＮＡに結合するためのヘテロ二量体性パートナーとして必要とされるという点で、核内受容体の中でも独特である（例えば、非特許文献５参照）。ＩＩ型核内受容体サブファミリーと呼ばれる後者の受容体には、遺伝子発現の重要な調節因子として確立された受容体、またはそれに関与する多くの受容体が含まれる。
【０００５】
ＲＸＲα、βおよびγをコードする３つのＲＸＲ遺伝子があり（例えば、非特許文献６参照）、これらはすべてＩＩ型受容体のいずれともヘテロ二量体化することができるが、インビボではパートナー受容体により異なるＲＸＲサブタイプに対して優先度があると思われる（例えば、非特許文献７参照）。成人の肝臓では、３つのＲＸＲの中でＲＸＲαが最も豊富であり（例えば、非特許文献８参照）、このことは、ＲＸＲαがＩＩ型核内受容体による調節を伴う肝機能において際立った役割を有し得ることを示唆している。非特許文献９も参照。
【０００６】
（ＬＸＲαおよびＬＸＲβ）
ＬＸＲαは、主に肝臓に見出され、腎臓、腸、脾臓および副腎組織では低いレベルで見出される（例えば、非特許文献１０参照）。ＬＸＲβは、哺乳動物に遍在しており、調査されたほぼすべての組織において見出された。ＬＸＲは、天然に生じる特定のコレステロールの酸化誘導体によって活性化される（例えば、Ｌｅｈｍａｎｎら（１９９７年）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７２巻（６）：３１３７〜３１４０頁参照）。ＬＸＲαは、オキシコレステロールによって活性化され、コレステロールの代謝を促進する（Ｐｅｅｔら（１９９８年）Ｃｅｌｌ  ９３巻：６９３〜７０４頁）。したがってＬＸＲは、例えばコレステロールの代謝において役割を果たすと思われる（例えば、Ｊａｎｏｗｓｋｉら（１９９６年）Ｎａｔｕｒｅ  ３８３巻：７２８〜７３１頁参照）。
【０００７】
核内受容体ＬＸＲは、胆汁酸、コレステロールおよびトリグリセリドの代謝の協調制御において、脂質のホメオスタシスを維持するために非常に重要な役割を果たす。ＬＸＲおよび胆汁酸／オキシステロールによって調節される遺伝子は、血清コレステロールを低下し、心血管および肝疾患を処置する薬物療法の開発にとって潜在的な標的となっている。ＬＸＲにおいて活性を有する化合物は、脂質のホメオスタシスに対して絶大な効果を有することができ、ＬＸＲが関与する疾患または障害をより有効に制御することができる。これは、コレステロールのホメオスタシス（チトクロムｐ４５０ファミリーの酵素の一員であるＣｙｐ７ａ１を含む）および胆汁酸合成の律速段階に関与する複数の遺伝子の調節、ならびにＡＢＣ膜輸送体であるＡＢＣＡ１、ＡＢＣＧ１、ＡＢＣＧ５およびＡＢＣＧ８によって達成される。ＡＢＣＡ１は、ＡｐｏＡ−Ｉなどの脂質が少ないリポタンパク質へのコレステロールおよびリン脂質の流出において非常に重要であり、したがって血漿ＨＤＬレベルの増大に寄与する。さらに、ＡＢＣＧ５およびＡＢＣＧ８は、腸管からのコレステロール吸収の低減を媒介し、肝細胞から胆汁へのコレステロールの流出を容易にすると思われる。細胞培養および動物モデル系における研究によって、ＬＸＲアゴニストのアテローム生成抑制効果以外に、残念ながら、ＬＸＲアゴニストが血漿トリグリセリドレベルおよび肝臓の脂肪生成を増大し、ＶＬＤＬリポタンパク質粒子の生成増大を促進することが実証されている。Ｓｃｈｕｌｔｚら、Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １４巻：２８３１〜２８３８頁（２０００年）；Ｒｅｐａら、Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １４巻：２８１１９〜２８３０頁（２０００年）。望ましくない脂質効果を最小限に抑える戦略には、部分アゴニストでもあるＬＸＲβに選択的な化合物の同定が含まれる。部分アゴニストは、乳房組織におけるエストロゲンシグナル伝達のアンタゴニストおよび子宮におけるアゴニストとして機能する抗エストロゲン薬であるタモキシフェンについて実証された通り、核内受容体の組織特異的な活性化または抑圧を示すことができる。ＬＸＲアイソフォーム特異的ヌルマウスの特徴は、ＬＸＲαが、肝臓におけるＬＸＲ活性の主なメディエーターであることを示している。しかしマクロファージでは、標的遺伝子発現に対するＬＸＲリガンドの効果を媒介するのにＬＸＲβだけで十分である。したがって、ＬＸＲαの活性が制限された化合物は、望ましくない肝臓の効果を制限すると同時にアテローム生成抑制活性を有するはずである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｅｖａｎｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８年）２４０巻：８８９〜８９５頁
【非特許文献２】ＥｖａｎｓおよびＧｌａｓｓ、Ｅｎｄｏｃｒ．  Ｒｅｖ．（１９９４年）１５巻：３９１〜４０７頁
【非特許文献３】Ｌｅｖｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９２年）３５５巻：３５９〜３６１頁
【非特許文献４】Ｈｅｙｍａｎら、Ｃｅｌｌ（１９９２年）６８巻：３９７〜４０６頁
【非特許文献５】Ｍａｎｇｅｌｓｄｏｒｆら、Ｃｅｌｌ（１９９５年）８３巻：８４１〜８５０頁
【非特許文献６】Ｍａｎｇｅｌｓｄｏｒｆら、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．（１９９２年）６巻：３２９〜３４４頁
【非特許文献７】Ｃｈｉｂａら、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．（１９９７年）１７巻：３０１３〜３０２０頁
【非特許文献８】Ｍａｎｇｅｌｓｄｏｒｆら、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．（１９９２年）６巻：３２９〜３４４頁
【非特許文献９】Ｗａｎら、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．（２０００年）２０巻：４４３６〜４４４４頁
【非特許文献１０】Ｗｉｌｌｙら、Ｇｅｎｅ  Ｄｅｖ．（１９９５年）９巻（９）：１０３３〜１０４５頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
（発明の概要）
したがって本発明者らは、コレステロール代謝およびアテローム発生に対する望ましい効果を高い血漿トリグリセリドレベルおよび肝臓の脂肪生成の増大と切り離すような、ＬＸＲ核内受容体の活性を調節する化合物、組成物および方法が必要であると認識した。ＬＸＲの完全アゴニストは、望ましい効果と望ましくない効果の両方を引き起こすが、本発明は、これら２つを有益に分離し、したがってコレステロール逆輸送の増大と、血漿トリグリセリドおよびＬＤＬ−コレステロールに対する有害な効果との間の治療指数が向上した化合物を記載する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、例えば、以下を提供する：
（項目１）
【数８−１】
0005625050.tif 000002
【数８−２】
0005625050.tif 000003
から選択される、化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
（項目２）
【数９】
0005625050.tif 000004
から選択される、項目１に記載の化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
（項目３）
【数１０】
0005625050.tif 000005
から選択される、項目１に記載の化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
（項目４）
【数１１】
0005625050.tif 000006
から選択される、項目１に記載の化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
（項目５）
２−（１−（３−クロロ−３’−フルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールである化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
（項目６）
２−（２−（２−（２−クロロ−３−フルオロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３’−フルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールである化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
（項目７）
２−（２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３’−フルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールである化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
（項目８）
２−（２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３，３’−ジフルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールである化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
（項目９）
２−｛２−［１−（２，６−ジクロロフェニル）エチル］−１−［３，３’−ジフルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝プロパン−２−オールである化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩。
（項目１０）
項目１から９に記載の化合物および１つまたは複数の薬学的に許容されるキャリアを含む、組成物。
（項目１１）
疾患または障害を処置する方法であって、治療有効量の項目１から９に記載の化合物を、処置を必要としている被験体に投与するステップを含み、該疾患または障害は、アテローム性動脈硬化症、インスリン抵抗性、変形性関節症、脳卒中、高血糖症、脂質異常症、乾癬、加齢およびＵＶ曝露関連の皮膚のしわ、糖尿病、がん、アルツハイマー病、炎症、免疫学的障害、脂質障害、肥満、黄斑変性症、表皮のバリア機能の乱れを特徴とする状態、表皮もしくは粘膜の分化撹乱もしくは過剰増殖状態、または心血管障害である、方法。
（項目１２）
前記疾患または障害が、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、アルツハイマー病または脂質異常症である、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記疾患または障害がアテローム性動脈硬化症である、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
前記疾患または障害が糖尿病である、項目１１に記載の方法。
（項目１５）
前記疾患または障害がアルツハイマー病である、項目１１に記載の方法。
一態様では、本発明は、肝臓Ｘ受容体（ＬＸＲ）の活性の調節因子として有用な化合物または、個々の異性体もしくは異性体混合物、その同位体、または薬学的に許容されるその塩を含む。
【００１１】
核内受容体の活性を調節するための組成物および方法において使用する化合物を提供する。特に本発明の化合物は、肝臓Ｘ受容体であるＬＸＲαおよびＬＸＲβ、特にＬＸＲβを調節するのに有用である。
【００１２】
一態様では、本明細書で提供される化合物は、ＬＸＲのアゴニストである。別の態様では、本明細書で提供される化合物は、ＬＸＲのアンタゴニストである。特定の態様では、低い効率を示すアゴニストはアンタゴニストである。
【００１３】
本発明の別の態様は、治療有効量の本発明の化合物、または、個々の異性体もしくは異性体混合物または薬学的に許容されるその塩を、それを必要としている被験体に投与するステップを含む、ＬＸＲ活性によって調節されるかもしくはそうでなければ影響を受けるか、またはＬＸＲ活性が関与する疾患または障害の症状を処置、阻害または改善する方法を対象とする。
【００１４】
本発明の別の態様は、コレステロール代謝を調節するのに有効な量の本発明の化合物、または、個々の異性体もしくは異性体混合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む、それを必要としている被験体に対するコレステロール代謝を調節する方法を対象とする。
【００１５】
本発明の別の態様は、コレステロールレベルを低下するのに有効な量の本発明の化合物、または、個々の異性体もしくは異性体混合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む、それを必要としている被験体のアテローム性動脈硬化症を予防または処置する方法を対象とする。
【００１６】
本発明の別の態様は、核内受容体を、本発明の化合物、または、個々の異性体もしくは異性体混合物または薬学的に許容されるその塩と接触させるステップを含む、それを必要としている被験体に対するＬＸＲ活性を調節する方法を対象とする。
【００１７】
本発明の別の態様は、治療有効量の本発明の化合物、または、個々の異性体もしくは異性体混合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む、それを必要としている被験体の低コレステロール血症の１つまたは複数の症状を処置、阻害または改善する方法を対象とする。
【００１８】
本発明の別の態様は、コレステロールの流出を増大するのに有効な量の本発明の化合物、または、個々の異性体もしくは異性体混合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む、それを必要としている被験体の細胞からのコレステロールの流出を増大する方法を対象とする。
【００１９】
本発明の別の態様は、ＡＴＰ結合カセットＡ１（ＡＢＣＡ１）およびＡＴＰ結合カセットＧ１（ＡＢＣＧ１）の発現を増大するのに有効な量の本発明の化合物、または、個々の異性体もしくは異性体混合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む、それを必要としている被験体の細胞におけるＡＢＣＡ１およびＡＢＣＧ１の発現を増大する方法を対象とする。
【００２０】
本発明の別の態様は、治療有効量の本発明の化合物、または、個々の異性体もしくは異性体混合物または薬学的に許容されるその塩を、それを必要としている被験体に投与するステップを含む、コレステロールまたは胆汁酸レベルによって影響を受ける疾患または障害の１つまたは複数の症状を処置、阻害または改善する方法を対象とする。
【００２１】
本発明の別の態様は、本発明の化合物、または、個々の異性体もしくは異性体混合物または薬学的に許容されるその塩、および少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤を含む医薬組成物を対象とする。
【００２２】
本発明の別の態様は、コレステロール逆輸送および炎症シグナル伝達経路を調節するのに有効な量の本発明の化合物、または、個々の異性体もしくは異性体混合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む、それを必要としている被験体のアテローム性動脈硬化症ならびに心筋梗塞および虚血性脳卒中などの関連疾患を含むヒト疾患病理に関与するコレステロール逆輸送および炎症シグナル伝達経路の調節を対象とする。
【００２３】
本発明の別の態様は、治療有効量の本発明の化合物、または、個々の異性体もしくは異性体混合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む、それを必要としている被験体の、アテローム性動脈硬化症および糖尿病を含む代謝および免疫不全から生じる疾患ならびに自己免疫障害および疾患の処置を含む、肥満、高血圧、インスリン抵抗性および糖尿病を含む身体の代謝の一群の障害を含むメタボリック症候群の処置を対象とする。
【００２４】
本発明の別の態様は、治療有効量の本発明の化合物、または、個々の異性体もしくは異性体混合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む、それを必要としている被験体のアテローム性動脈硬化症、インスリン抵抗性、変形性関節症、脳卒中、高血糖症、脂質異常症、乾癬、加齢およびＵＶ曝露依存性の皮膚のしわ、糖尿病、がん、アルツハイマー病、炎症、免疫学的障害、脂質障害、肥満、黄斑変性症、表皮のバリア機能の乱れを特徴とする状態、表皮もしくは粘膜の分化撹乱もしくは過剰増殖状態、または心血管障害の処置を対象とする。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
（発明の詳細な説明）
一態様では、本発明は、式Ｉの化合物：
【００２６】
【化１】
0005625050.tif 000007
または薬学的に許容されるその塩を含む（式中、
Ｒ１は、クロロ、フルオロ、メチルまたはトリフルオロメチルであり、
Ｒ２は、Ｈまたはメチルであり、
Ｒ３は、Ｈまたはメチルであり、
Ｒ４は、Ｈ、クロロ、フルオロまたはメチルであり、
ｎは、１または２である）。
【００２７】
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、Ｒ２およびＲ３がメチルである化合物である。
【００２８】
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、Ｒ１がクロロまたはフルオロである化合物である。いくつかのかかる実施形態では、Ｒ２およびＲ３はメチルである。
【００２９】
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、Ｒ４がフルオロである化合物である。いくつかのかかる実施形態では、Ｒ１はクロロまたはフルオロであり、Ｒ２およびＲ３はメチルである。
【００３０】
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、Ｒ２およびＲ３がＨである化合物である。いくつかのかかる実施形態では、Ｒ１はクロロまたはフルオロである。
【００３１】
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、Ｒ２がメチルであり、Ｒ３がＨである化合物である。いくつかのかかる実施形態では、ｎは２であり、Ｒ１はクロロであり、Ｒ４はフルオロである。
【００３２】
別の態様では、本発明は、先の実施形態のいずれかによる構造式Ｉの化合物を、１つまたは複数の薬学的に許容されるキャリア、賦形剤または希釈剤と一緒に含む。
【００３３】
別の態様では、本発明は、治療有効量の（ａ）先の実施形態のいずれかによる構造式Ｉの化合物、または（ｂ）先の実施形態のいずれかによる構造式Ｉの化合物を、１つもしくは複数の薬学的に許容されるキャリア、賦形剤もしくは希釈剤と一緒に含む医薬組成物を、それを必要としている被験体に投与するステップを含む、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高リポタンパク血症、高トリグリセリド血症、リポジストロフィー、高血糖症、真性糖尿病、脂質異常症、アテローム性動脈硬化症、胆石疾患、尋常性ざ瘡、ざ瘡様の皮膚状態、糖尿病、パーキンソン病、がん、アルツハイマー病、炎症、免疫学的障害、脂質障害、肥満、表皮のバリア機能の乱れを特徴とする状態、表皮もしくは粘膜の分化撹乱もしくは過剰増殖状態、または心血管障害である疾患または障害を処置する方法を含む。
【００３４】
いくつかの実施形態では、処置のための疾患または障害は、高コレステロール血症、高リポタンパク血症、高トリグリセリド血症、リポジストロフィー、高血糖症、アテローム性動脈硬化症、真性糖尿病または脂質異常症である。
【００３５】
別の実施形態では、本発明は、
【００３６】
【数１−１】
0005625050.tif 000008
【００３７】
【数１−２】
0005625050.tif 000009
から選択される化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩を含む。
【００３８】
別の実施形態では、本発明は、
【００３９】
【数２】
0005625050.tif 000010
から選択される化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩を含む。
【００４０】
別の実施形態では、本発明は、
【００４１】
【数３】
0005625050.tif 000011
から選択される化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩を含む。
【００４２】
別の実施形態では、本発明は、
【００４３】
【数４】
0005625050.tif 000012
から選択される化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩を含む。
【００４４】
別の実施形態では、本発明は、２−（１−（３−クロロ−３’−フルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールである化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩を含む。
【００４５】
別の実施形態では、本発明は、２−（２−（２−（２−クロロ−３−フルオロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３’−フルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールである化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩を含む。
【００４６】
別の実施形態では、本発明は、２−（２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３’−フルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールである化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩を含む。
【００４７】
別の実施形態では、本発明は、２−（２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３，３’−ジフルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールである化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩を含む。
【００４８】
別の実施形態では、本発明は、２−｛２−［１−（２，６−ジクロロフェニル）エチル］−１−［３，３’−ジフルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝プロパン−２−オールである化合物、その同位体または薬学的に許容されるその塩を含む。
【００４９】
本明細書に記載の様々な化合物またはそれらの薬学的に許容される塩は、１つまたは複数の不斉中心を含有することができ、したがって鏡像異性体、ジアステレオマーおよび他の立体異性形態などの異性体を生じることができる。かかる形態は、絶対立体化学の観点から（Ｒ）−もしくは（Ｓ）−、またはアミノ酸については（Ｄ）−もしくは（Ｌ）−と定義され得る。本発明は、すべてのかかる可能な個々の立体異性体、ならびにそれらのラセミ体および光学的に純粋な鏡像異性形態またはジアステレオマー形態を含むその混合物を含むことを意味する。化合物は、普通はラセミ体として調製され、好都合に使用することができ、またはキラルシントンもしくはキラル試薬を使用して、光学的に活性な（＋）および（−）、（Ｒ）−および（Ｓ）−、もしくは（Ｄ）−および（Ｌ）−異性体、もしくは対応するジアステレオマーを調製することができ、またはキラルクロマトグラフィーもしくは逆相ＨＰＬＣなどの従来技術を使用して、ラセミ混合物からそれらを分離することができる。本明細書に記載の化合物が、オレフィン性二重結合または幾何学的不斉性の他の中心を含有する場合、別段特定されない限り、該化合物はＥおよびＺ幾何異性体の両方を含むことを企図する。
【００５０】
本発明はまた、同位体標識化した本発明の化合物を含み、この場合１つまたは複数の原子は、通常自然に見出される原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有するが同じ原子番号を有する原子によって置き換えられている。本発明の化合物に包含するのに適した同位体の例には、２ＨまたはＤおよび３ＨまたはＴなどの水素の同位体、１１Ｃ、１３Ｃおよび１４Ｃなどの炭素の同位体、３６Ｃｌなどの塩素の同位体、１８Ｆなどのフッ素の同位体、１２３Ｉおよび１２５Ｉなどのヨウ素の同位体、１３Ｎおよび１５Ｎなどの窒素の同位体、１５Ｏ、１７Ｏおよび１８Ｏなどの酸素の同位体、３２Ｐなどのリンの同位体、ならびに３５Ｓなどの硫黄の同位体が含まれる。特定の同位体標識化した本発明の化合物、例えば、放射性同位体を組み込んでいる化合物は、薬物および／または基質組織分布研究において有用である。放射性同位元素であるトリチウム、すなわち３Ｈおよび炭素−１４、すなわち１４Ｃは、組込みが容易であり、検出が迅速な手段であることを考えると、この目的に特に有用である。重水素、すなわち２ＨまたはＤなどのより重い同位体による置換は、より高い代謝安定性から生じる治療上の特定の利点、例えばインビボ半減期の増大または必要投与量の低減をもたらすことができ、したがってある環境においては好ましいことがある。１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏおよび１３Ｎなどの陽電子放出同位体による置換は、基質受容体占有率を調査するための陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）研究において有用となり得る。
【００５１】
同位体標識化した本発明の化合物は、一般に、当業者に公知の従来技術によって、またはそうでなければ使用される非標識化試薬の代わりに適切な同位体標識化試薬を使用する本明細書に記載の過程に類似の過程によって、調製することができる。
【００５２】
（定義）
本明細書で使用される以下の用語および表現は、示した意味を有する。
【００５３】
「核内受容体」は、一般に他の転写因子と共に、核内の１つまたは複数の遺伝子の転写を活性化または抑圧する受容体を指す（しかしセカンドメッセンジャーシグナル伝達作用を有することもできる）。核内受容体は、受容体の天然同族リガンドによって活性化される。核内受容体は、膜結合しておらず、普通は細胞質または核において見出される。核内受容体は、様々な内因性小分子、例えばステロイド、レチノイド、ビタミンＤおよび甲状腺ホルモンの受容体である調節タンパク質のスーパーファミリーの一員である。これらのタンパク質は、それらの標的遺伝子のプロモータのシス作用エレメントに結合し、リガンドに対して応答して遺伝子発現を調節する。核内受容体は、それらのＤＮＡ結合特性に基づいて分類することができる。例えば、グルココルチコイド、エストロゲン、アンドロゲン、プロゲスチンおよびミネラルコルチコイド受容体は、逆方向反復として配置されているホルモン応答エレメント（ＨＲＥ）にホモ二量体として結合する。別の例は、レチノイン酸、甲状腺ホルモン、ビタミンＤ３、脂肪酸／ペルオキシソーム増殖因子およびエクジソンによって活性化されるものを含む受容体であり、これらは共通のパートナーであるレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）と共にヘテロ二量体としてＨＲＥに結合する。後者の中では、受容体はＬＸＲである。
【００５４】
「肝臓Ｘ受容体」または「ＬＸＲ」は、コレステロール生合成に関与する核内受容体を指す。本明細書で使用される場合、用語ＬＸＲは、ＬＸＲαおよびＬＸＲβの両方を指し、これら２つの形態のタンパク質は哺乳動物において見出される。肝臓Ｘ受容体−αまたはＬＸＲαは、米国特許第５，５７１，６９６号、同第５，６９６，２３３号および同第５，７１０，００４号、ならびにＷｉｌｌｙら（１９９５年）Ｇｅｎｅ  Ｄｅｖ．  ９巻（９）：１０３３〜１０４５頁に記載の受容体を指す。肝臓Ｘ受容体−βまたはＬＸＲβは、Ｐｅｅｔら（１９９８年）Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｇｅｎｅｔ．  Ｄｅｖ．  ８巻（５）：５７１〜５７５頁；Ｓｏｎｇら（１９９５年）Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ７６１巻：３８〜４９頁；Ａｌｂｅｒｔｉら（２０００年）Ｇｅｎｅ  ２４３巻（１〜２）：９３〜１０３頁；ならびにそれらに引用されている参考文献；ならびに米国特許第５，５７１，６９６号、同第５，６９６，２３３号および同第５，７１０，００４号に記載の受容体を指す。
【００５５】
「薬学的に許容される」は、正しい医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応または他の問題もしくは合併症なしにヒトおよび動物の組織と接触させるのに適し、妥当な損益比に見合っており、またはそうでなければ米国食品医薬局によってヒトもしくは飼育動物における使用が許容されるものとして承認を受けている化合物、材料、組成物および／または投薬形態を指す。
【００５６】
「薬学的に許容される塩」は、酸付加塩および塩基付加塩の両方を指す。
【００５７】
「薬学的に許容される酸付加塩」は、遊離塩基の生物学的有効性および特性を保持する塩を指し、これらは生物学的にもそれ以外でも望ましくないことがなく、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、および酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などの有機酸を用いて形成される。
【００５８】
「塩基付加塩」は、生物学的にもそれ以外でも望ましくないことがなく、遊離酸の生物学的有効性および特性を保持する塩を指す。これらの塩は、遊離酸に無機塩基または有機塩基を付加することによって調製される。無機塩基由来の塩には、それに限定されるものではないが、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩等が含まれる。好ましい無機塩は、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウム塩である。有機塩基由来の塩には、それに限定されるものではないが、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ポリアミン樹脂などの、第１、第２および第３級アミン、天然に生じる置換アミンを含む置換アミン、環状アミンならびに塩基性イオン交換樹脂の塩が含まれる。特に好ましい有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、コリンおよびカフェインである。
【００５９】
「治療有効量」は、被験体に投与される場合、本明細書に記載の疾患または障害の処置を行うのに十分な化合物の量を指す。「治療有効量」を構成する化合物の量は、その化合物、障害およびその重症度、ならびに処置を受ける被験体の年齢に応じて変わるが、当業者によって日常的に決定され得る。
【００６０】
「調節」または「調節する」は、機能、状態または障害の処置、予防、抑制、亢進または誘導を指す。例えば、本発明の化合物は、ヒトのアテローム硬化病変からのコレステロールの除去を刺激することによって、アテローム性動脈硬化症を調節することができると思われる。
【００６１】
「処置する」または「処置」は、本明細書で使用される場合、被験体、好ましくはヒトにおける本明細書に記載の疾患または障害の処置を包含し、
ｉ．疾患もしくは障害を阻害すること、すなわちその発症発達を抑止すること、または
ｉｉ．疾患もしくは障害を軽減すること、すなわち障害の後退を引き起こすこと
を含む。
【００６２】
「被験体」は、本明細書に記載の１つまたは複数の疾患および障害に罹患している、またはそれに罹患する潜在性を有する哺乳動物、好ましくはヒトまたはヒトの子どもなどの温血動物を指す。
【００６３】
「アテローム性動脈硬化症」は、アテローム性動脈硬化プラークが動脈壁の内層に形成され、アテローム硬化性心血管疾患に至る過程を指す。アテローム硬化性心血管疾患は、関連する医薬分野に携わる医師によって認識され理解され得、この疾患には、それに限定されるものではないが、再狭窄、冠状動脈性心疾患（冠動脈疾患または虚血性心疾患としても公知）、脳血管疾患、例えば、虚血性脳卒中、多発脳梗塞性認知症、および、末梢血管疾患、例えば、間欠性跛行および勃起機能不全が含まれる。
【００６４】
「脂質異常症」は、低いおよび／または高いレベルのリポタンパク質の両方を含む、血漿中のリポタンパク質の異常なレベルを指す（例えば、高いレベルの低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）および低レベルの高密度リポタンパク質（ＨＤＬ））。
【００６５】
「ＥＣ５０」は、特定の試験化合物によって誘導、誘発または増強される特定の応答の最大発現の５０％における、用量依存性応答を引き出す、その特定の試験化合物の投与量、濃度または量を指す。
【００６６】
「コレステロール」は、細胞膜およびミエリン鞘の必須成分であるステロイドアルコールを指し、本明細書で使用される場合、その一般的な用法を組み込むものである。コレステロールはまた、ステロイドホルモンおよび胆汁酸の前駆体として働く。
【００６７】
「トリグリセリド（複数可）」または「ＴＧ」は、グリセロール１分子にエステル化された３つの脂肪酸分子を指し、エネルギー生成のために筋細胞によって使用されるか、または脂肪組織に取り込まれ保存される脂肪酸を保存するように働く。
【００６８】
「ＩＣ５０」は、最大応答を測定するアッセイにおいて、ＬＸＲαまたはＬＸＲβ活性を含む核内受容体の調節など、その最大応答の５０％阻害を達成する特定の試験化合物の量、濃度または投与量を指す。
【００６９】
「ＬＸＲ」または「ＬＸＲｓ」は、ＬＸＲαおよびＬＸＲβの両方を指す。
【００７０】
「ＬＸＲα」（ＬＸＲα）は、例えば、選択的スプライスアイソフォームおよび天然に生じるアイソフォームを含む、あらゆる哺乳動物型のかかる受容体を指す。代表的なＬＸＲα種には、それに限定されるものではないが、ラット（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０３１６２７）、マウス（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＢＣ０１２６４６）、およびヒト（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｕ２２６６２）型の受容体が含まれる。
【００７１】
「ＬＸＲβ」（ＬＸＲβ）は、例えば、選択的スプライスアイソフォームおよび天然に生じるアイソフォームを含む、あらゆる哺乳動物型のかかる受容体を指す。代表的なＬＸＲβ種には、それに限定されるものではないが、ラット（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０３１６２６）、マウス（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００９４７３）、およびヒト（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｕ０７１３２）型の受容体が含まれる。
【００７２】
「肥満の」および「肥満」は、男性では２７．８ｋｇ／ｍ２を超え、女性では２７．３ｋｇ／ｍ２を超えるボディマス指数（ＢＭＩ）を指す（ＢＭＩ＝体重（ｋｇ）／（身長）２（ｍ２）。
【００７３】
（有用性）
本発明の化合物は、価値の高い薬理学的特性を示し、ＬＸＲアゴニスト、アンタゴニスト、逆アゴニスト、部分アゴニストおよびアンタゴニストとして特に有用であり、またはＬＸＲαもしくはＬＸＲβに選択的である。本発明の化合物は、コレステロール輸送、コレステロール逆輸送、脂肪酸代謝、コレステロール吸収、コレステロール再吸収、コレステロール分泌、コレステロール排出またはコレステロール代謝の変化に関連するかまたはその合併症から生じる症状を有するものなどの本明細書に記載の疾患または障害の処置に有用である。
【００７４】
これらの疾患には、例えば、アテローム性動脈硬化症、アテローム硬化性心血管疾患（例えば、国際公開第ＷＯ００／５７９１５号およびＷＯ００／３７０７７号参照）、脂質異常症、高血糖症、インスリン抵抗性、糖尿病、肥満、シンドロームＸ（米国特許出願第２００３００７３６１４号、国際公開第ＷＯ０１／８２９１７号）、皮膚などの末梢組織における過剰の脂質沈着（黄色腫）（例えば、米国特許第６，１８４，２１５号および同第６，１８７，８１４号参照）、脳卒中、末梢性の閉塞性疾患、記憶喪失（Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９７年）、７５２巻、１８９〜１９６頁）、視神経および網膜の病理（すなわち、黄斑変性症、網膜色素変性症）、中枢神経または末梢神経系への外傷性損傷の修復（Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９４年）、１７巻、５２５〜５３０頁）、加齢による変形性過程の予防（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ（１９９７年）、１５１巻、１３７１〜１３７７頁）、またはアルツハイマー病（例えば、国際公開第ＷＯ００／１７３３４号；Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９４年）、１７巻、５２５〜５３０頁参照）、糖尿病性神経障害などの疾患において生じる変形性神経障害の予防（例えば、国際公開第ＷＯ０１／８２９１７号参照）、多発性硬化症（Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９９６年）、３３巻、Ｎｏ．２、１４８〜１５０頁）、および自己免疫疾患（Ｊ．  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．（１９９８年）、３９巻、１７４０〜１７４３頁）が含まれる。
【００７５】
また、特許請求する化合物および組成物を使用して、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣＡ１）の発現を増大し（例えば、国際公開第ＷＯ００／７８９７２号参照）、それによって哺乳動物細胞のコレステロール逆輸送を増大する方法を提供する。
【００７６】
したがって別の態様では、本発明はまた、治療有効量の本発明の化合物または組成物を被験体に投与するステップを含む、アテローム性動脈硬化症またはアテローム硬化性心血管疾患の臨床徴候によって明示されるかかる疾患を有する被験体におけるアテローム性動脈硬化プラークまたは黄色腫などの組織沈着からコレステロールを除去する方法を含む。さらに本発明は、虚血性心疾患、虚血性脳卒中、多発脳梗塞性認知症および間欠性跛行を含むアテローム硬化性心血管疾患の事象の危険性がある被験体に、予防上有効な量の本発明の化合物または組成物を投与するステップを含む、かかる事象の最初の発生またはその後の発生の危険性を予防または低減する方法も提供する。
【００７７】
本発明の化合物はまた、高血糖症およびインスリン抵抗性を低減する方法、すなわち糖尿病を処置する方法（国際公開第ＷＯ０１／８２９１７号）、ならびに「シンドロームＸ」を構成する群の病状、状態または障害を含む、糖尿病、高血糖症またはインスリン抵抗性に関連するかまたはそれらの合併症として生じる障害を処置、予防または改善する方法（米国特許出願第２００３００７３６１４号参照）において使用することができ、該方法は、かかる処置を必要としている被験体に、治療有効量の本発明の化合物または組成物を投与するステップを含む。さらに本発明は、被験体の高血糖症、インスリン抵抗性、糖尿病またはシンドロームＸを発症する危険性を予防または低減する方法も提供し、該方法は、かかる事象の危険性がある被験体に、予防上有効な量の本発明の化合物または組成物を投与するステップを含む。
【００７８】
真性糖尿病は、一般に糖尿病と呼ばれ、複数の原因因子に由来し、高血糖症と呼ばれる高いレベルの血漿グルコースを特徴とする疾患過程を指す。例えば、ＬｅＲｏｉｔｈ，  Ｄ．ら（編）、ＤＩＡＢＥＴＥＳ  ＭＥＬＬＩＴＵＳ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  １９９６年）参照。制御されない高血糖症は、腎症、神経障害、網膜症、高血圧、脳血管疾患および冠状動脈性心疾患を含む大血管性疾患の高い危険性に起因して、高い死亡率および早世率に関連する。したがって、グルコースのホメオスタシスの制御は、糖尿病の処置にとって決定的に重要な手法である。
【００７９】
糖尿病には、１型糖尿病（以前はインスリン依存性糖尿病またはＩＤＥＭと呼ばれていた）および２型糖尿病（以前はインスリン非依存性糖尿病またはＮＩＤＤＭと呼ばれていた）の２つの主な形態がある。２型糖尿病は、絶対的ではなく相対的なインスリン欠乏を伴うインスリン抵抗性を特徴とする疾患である。２型糖尿病は、相対的なインスリン欠乏が伴う主たるインスリン抵抗性から、いくらかのインスリン抵抗性を伴う主たるインスリン欠乏までの幅があり得る。インスリン抵抗性とは、インスリンの生物学的作用を発揮する能力が、幅広い濃度範囲にわたって低下していることである。インスリン抵抗性の個体では、身体はこの欠損を補うために異常に多量のインスリンを分泌する。インスリン抵抗性およびグルコースの適切な制御を補うために、不適切な量のインスリンが存在する場合、耐糖能不良の状態が発症する。著しい数の個体において、インスリン分泌がさらに低下し、血漿グルコースレベルが上昇し、糖尿病の臨床的な状態が生じる。２型糖尿病は、主なインスリン感受性組織である筋肉、肝臓および脂肪組織における、グルコースおよび脂質の代謝へのインスリン刺激性調節効果に対する非常に大きい抵抗性に起因し得る。インスリン応答性に対するこの抵抗性は、筋肉内のグルコースの取込み、酸化および保存のインスリンによる活性化の不十分さ、ならびに脂肪組織内の脂肪分解および肝臓内のグルコースの生成および分泌のインスリンによる抑圧の不適切さをもたらす。２型糖尿病では、肥満被験体および非肥満のいくらかの被験体において遊離脂肪酸レベルが高いことが多く、脂質酸化が増大する。
【００８０】
アテローム性動脈硬化症の早発ならびに高い率の心血管および末梢血管疾患は、糖尿病被験体の特徴的な特色である。高脂血症は、これらの疾患の重要な増悪因子である。高脂血症は、一般に、血流中の血清脂質、例えばコレステロールおよびトリグリセリドの異常な増加を特徴とする障害であり、アテローム性動脈硬化症および心疾患の発症における重要な危険因子である。脂質代謝の障害の総説については、例えば、Ｗｉｌｓｏｎ，  Ｊ．ら（ｅｄ．）、Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、Ｃｈａｐｔｅｒ  ２３、Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、９ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  （Ｗ．  Ｂ．  Ｓａｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  １９９８年）参照。高脂血症は、通常、原発性または二次性高脂血症として分類される。原発性高脂血症は、一般に遺伝的欠損によって引き起こされ、二次性高脂血症は、一般に様々な病状、薬物および食事因子などの他の因子によって引き起こされる。あるいは、高脂血症は、高脂血症の原発的および二次的原因の両方の組合せから生じることもある。高いコレステロールレベルは、冠動脈疾患、狭心症、頸動脈疾患、脳卒中、大脳性動脈硬化症および黄色腫を含むいくつかの病状に関連している。
【００８１】
脂質異常症または血漿中のリポタンパク質の異常なレベルは、糖尿病において高い頻度で発生し、糖尿病被験体において冠動脈事象および死亡の高い発生率に主に寄与する因子の１つであることが示されている（例えば、Ｊｏｓｌｉｎ，  Ｅ．  Ａｎｎ．  Ｃｈｉｍ．  Ｍｅｄ．（１９２７年）、５巻、１０６１〜１０７９頁参照）。それ以来、疫学的研究によってそれらの関連が確認され、糖尿病被験体における冠動脈性死亡は、非糖尿病被験体と比較すると数倍高いことが示されている（例えば、Ｇａｒｃｉａ，  Ｍ．  Ｊ．ら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ（１９７４年）、２３巻、１０５〜１１頁（１９７４年）；およびＬａａｋｓｏ，  Ｍ．およびＬｅｈｔｏ，  Ｓ．、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９７年）、５巻、Ｎｏ．４、２９４〜３１５頁参照）。糖尿病被験体におけるいくつかのリポタンパク質の異常が記載されている（Ｈｏｗａｒｄ  Ｂ．ら、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ（１９７８年）、３０巻、１５３〜１６２頁）。
【００８２】
さらに本発明は、肥満ならびに肥満の合併症を処置するために本発明の化合物を使用する方法を提供する。肥満は、糖尿病および高脂血症を含む様々な医学的障害に関連している。肥満は、２型糖尿病の発症の公知の危険因子でもある（例えば、Ｂａｒｒｅｔｔ−Ｃｏｎｎｅｒ，  Ｅ．、Ｅｐｉｄｅｍｏｌ．  Ｒｅｖ．（１９８９年）、１１巻、１７２〜１８１頁；およびＫｎｏｗｌｅｒら、Ａｍ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ．  Ｎｕｔｒ．（１９９１年）、５３巻、１５４３〜１５５１頁参照）。
【００８３】
（投与および処方物）
本発明の化合物は、許容される任意の投与経路によってそれを必要としている被験体に投与することができる。許容される投与経路には、それに限定されるものではないが、頬側、皮膚、子宮頸管内、洞内、気管内、経腸、硬膜外、間質性、腹部内、動脈内、気管支内、嚢内（ｉｎｔｒａｂｕｒｓａｌ）、脳内、槽内、冠内、皮内、導管内、十二指腸内、硬膜内、表皮内、食道内、胃内、歯肉内、回腸内、リンパ内、髄質内、髄膜内、筋肉内、卵巣内、腹腔内、前立腺内、肺内、洞内（ｉｎｔｒａｓｉｎａｌ）、脊髄内、滑膜内、精巣内、髄腔内、管内、腫瘍内、子宮内、血管内、静脈内、鼻、経鼻胃、経口、非経口、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、硬膜上、直腸、呼吸器（吸入）、皮下、舌下、粘膜下、局所、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、経粘膜、経気管、尿管、尿道および膣内が含まれる。
【００８４】
本発明の化合物は、任意の許容される固体、半固体、液体または気体の投薬形態で投与され得る。許容される投薬形態には、それに限定されるものではないが、エアロゾル剤、カプセル剤、クリーム剤、乳剤、ガス剤、ゲル剤、粒状物剤、リニメント剤、ローション剤、軟膏剤、ペースト剤、散剤、溶液、懸濁物、シロップ剤および錠剤が含まれる。許容される送達系には、それに限定されるものではないが、生分解性移植片（例えば、ポリ（ＤＬ−ラクチド）、ラクチド／グリコリドコポリマーおよびラクチド／カプロラクトンコポリマー）、カプセル剤、圧注器、注腸、吸入器、子宮内デバイス、ネブライザー、パッチ、ポンプおよび坐剤が含まれる。
【００８５】
本発明の投薬形態は、本発明の化合物のみから構成することができ、または本発明の化合物は、従来の賦形剤、医薬キャリア、アジュバントおよび／または他の薬品もしくは医薬品と一緒に処方することができる。許容される賦形剤には、それに限定されるものではないが、（ａ）クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン（ｃｒｏｓｐｒｏｖｉｄｏｎｅ）、デンプングリコール酸ナトリウム、微結晶性セルロース、デンプンおよびタルクなどの抗接着剤、（ｂ）セルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ラクトース、マルチトール、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ソルビトール、デンプン、糖、スクロースおよびキシリトールなどの結合剤、（ｃ）セルロース、シェラック、ゼインおよび腸溶剤などのコーティング剤、（ｄ）セルロース、架橋ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、微結晶性セルロース、デンプングリコール酸ナトリウムおよびデンプンなどの崩壊剤、（ｅ）炭酸カルシウム、セルロース、リン酸水素カルシウム、グルコース、ラクトース、マンニトール、ソルビトールおよびスクロースなどの充填剤、（ｆ）矯味矯臭剤、（ｇ）着色剤、（ｈ）ステアリン酸カルシウム、コロイド状二酸化ケイ素、ベヘン酸グリセリル、モノステアリン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセリル、水素化植物油、ステアリン酸マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、鉱油、ポリエチレングリコール、二酸化ケイ素、デンプン、ステアレート、ステアリン酸、タルク、フマル酸ステアリルナトリウム、安息香酸ナトリウムおよび亜鉛などの流動促進剤、（ｉ）ステアリン酸カルシウム、水素化植物油、ステアリン酸マグネシウム、鉱油、ポリエチレングリコール、フマル酸ステアリルナトリウム、ステアリン、ステアリン酸およびタルクなどの潤滑剤、ならびに（ｊ）クロロブタノール、クエン酸、システイン、メチオニン、メチルパラベン、フェノール、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、セレン、クエン酸ナトリウム、ソルビン酸、ビタミンＡ、ビタミンＣおよびビタミンＥなどの保存剤が含まれる。カプセル剤は、先に列挙した任意の賦形剤を含有することができ、ポリエチレングリコールまたは植物ベースの油などの半固体または液体キャリアをさらに含有することができる。医薬キャリアには、可溶性ポリマー、不溶性または生分解性の天然および合成ポリマーから作られた微粒子、マイクロカプセルまたはミクロスフェア、リポタンパク質、リポソーム、ならびにミセルが含まれる。
【００８６】
医薬組成物は、液体、例えばエリキシル剤、シロップ剤、溶液、乳剤、懸濁物の形態、もしくは他の類似の形態であってよく、または使用前に水もしくは他の適切なビヒクルを用いて再構成するための乾燥生成物として提示することもできる。液体調製物は、（ａ）水、生理食塩水、リンゲル溶液、合成モノもしくはジグリセリドなどの固定油、またはポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の溶媒などの液体希釈剤、（ｂ）ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、飽和ポリグリコール化グリセリド、モノグリセリド、脂肪酸エステル、エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドのブロックコポリマー、ステアリン酸ポリオキシル、エトキシ化ヒマシ油およびエトキシ化ヒドロキシステアリン酸などの界面活性剤、懸濁化剤または乳化剤、（ｃ）酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝剤、（ｄ）エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤、（ｅ）ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、（ｆ）アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤、（ｇ）等張剤、塩化ナトリウムまたはデキストロース、ならびに甘味剤および矯味矯臭剤、色素および保存剤などの従来の添加物を含有することができる。
【００８７】
本発明の医薬組成物は、個々の立体異性体もしくは立体異性体の混合物としての治療有効量の本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩を含有するが、該医薬組成物の残部は、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤から構成される。一般に経口投与では、個々の立体異性体もしくは立体異性体の混合物としての本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩は、薬学的に許容される組成物の１重量％〜９９重量％を構成し、該組成物の残部は、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤から構成される。一般に、個々の立体異性体もしくは立体異性体の混合物としての本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩は、薬学的に許容される組成物の５重量％〜７５重量％を構成し、該組成物の残部は、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤から構成される。非経口投与では、個々の立体異性体もしくは立体異性体の混合物としての本発明の化合物、または薬学的に許容されるその塩は、薬学的に許容される組成物の０．０１重量％〜１重量％を構成する。本発明の投薬形態を調製するための方法は、当業者に公知であり、または明らかとなる。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１８ｔｈ  Ｅｄ．（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、１９９０年）参照。
【００８８】
本発明の化合物の治療有効量は、化合物の活性、代謝安定性、排出速度および作用期間、被験体の年齢、体重、全体的な健康状態、性別、食事および種、化合物の投与様式および時期、アジュバントまたは組成物中のさらなる治療上活性な成分の存在、ならびに治療効果が求められる疾患の重症度を含む様々な因子に応じて変わる。
【００８９】
本発明の化合物は、１日約０．１〜約１０，０００ｍｇの範囲の投与レベルでヒト被験体に投与することができる。体重約７０キログラムの正常な成人には、体重１キログラム当たり１日約０．１５μｇ〜約１５０ｍｇの範囲の投与量で投与することができる。一般に、正常な成人であれば、体重１キログラム当たり１日約０．１ｍｇ〜約２５ｍｇ、または０．５ｍｇ〜約１０ｍｇが投与される。本発明の化合物は、１つまたは複数の単位用量形態で投与することができる。単位用量は、１日１〜４回または１日２回または１日１回投与することができる。有効用量を記載する別の方法では、経口単位用量は、被験体において約０．０５〜２０μｇ／ｍｌまたは約１〜２０μｇ／ｍｌの血清レベルを達成するのに必要な用量である。特定の被験体のための本発明の化合物の最適な用量は、当業者によって決定され得る。
【００９０】
本発明の化合物、または個々の異性体もしくは異性体混合物、または薬学的に許容されるその塩は、以下に記載の治療剤の１つまたは複数の投与と同時に、その前に、またはその後に投与することもできる。かかる組み合わせ療法は、本発明の化合物および１つまたは複数のさらなる活性剤を含有する単一の医薬投与処方物の投与、ならびにそれ自体の別個の医薬投与処方物における本発明の化合物および各活性剤の投与を含む。例えば、本発明の化合物およびＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素インヒビターは、錠剤もしくはカプセル剤などの単一の経口投与組成物で一緒に被験体に投与することができ、または各薬剤は、別個の経口投与処方物で投与することができる。別個の投与処方物が使用される場合、本発明の化合物および１つまたは複数のさらなる活性剤は、本質的に同じ時間、すなわち共に、または分離時差を設けて、すなわち逐次的に投与することができ、組み合わせ療法は、これらすべてのレジメンを含むと理解される。
【００９１】
一実施形態では、本発明の化合物は、アテローム性動脈硬化症の処置において以下の治療剤の１つまたは複数と組み合わせて使用される。抗高脂血症薬、血漿ＨＤＬ上昇薬、抗高コレステロール血症薬、コレステロール生合成インヒビター（ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチンおよびリバスタチンなどのＨＭＧＣｏＡ還元酵素インヒビターなど）、アシル補酵素Ａ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ａｃｙｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）（ＡＣＡＴ）インヒビター、プロブコール、ラロキシフェン、ニコチン酸、ナイアシンアミド、コレステロール吸収インヒビター、胆汁酸捕捉剤（ｓｅｑｕｅｓｔｒａｎｔ）（アニオン交換樹脂または第四級アミン（例えば、コレスチラミンまたはコレスチポール）など）、低密度リポタンパク質受容体誘導物質、クロフィブレート、フェノフィブレート、ベザフィブレート（ｂｅｎｚｏｆｉｂｒａｔｅ）、シプロフィブレート（ｃｉｐｏｆｉｂｒａｔｅ）、ゲムフィブロジル（ｇｅｍｆｉｂｒｉｚｏｌ）、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、抗酸化ビタミン、β遮断薬、抗糖尿病薬、アンギオテンシンＩＩアンタゴニスト、アンギオテンシン変換酵素インヒビター、血小板凝集インヒビター、フィブリノゲン受容体アンタゴニスト、アスピリンまたはフィブリン酸誘導体。
【００９２】
別の実施形態では、本発明の化合物は、コレステロール生合成インヒビター、特にＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素インヒビターを用いる処置において以下の治療剤の１つまたは複数と組み合わせて使用される。用語ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素インヒビターは、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害活性を有する化合物のあらゆる薬学的に許容される塩、エステル、遊離酸およびラクトン形態を含むことを企図し、したがって、かかる塩、エステル、遊離酸およびラクトン形態の使用は、本発明の範囲に含まれる。ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素の阻害活性を有する化合物は、当技術分野で周知のアッセイを使用して容易に同定され得る。例えば、適切なアッセイは、米国特許第４，２３１，９３８号およびＷＯ８４／０２１３１号に記載または開示されている。適切なＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素インヒビターの例には、それに限定されるものではないが、ロバスタチン（ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）、米国特許第４，２３１，９３８号参照）、シンバスタチン（ＺＯＣＯＲ（登録商標）、米国特許第４，４４４，７８４号参照）、プラバスタチンナトリウム（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（登録商標）、米国特許第４，３４６，２２７号参照）、フルバスタチンナトリウム（ＬＥＳＣＯＬ（登録商標）、米国特許第５，３５４，７７２号参照）、アトルバスタチンカルシウム（ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）、米国特許第５，２７３，９９５号参照）、およびリバスタチン（セリバスタチンとしても公知、米国特許第５，１７７，０８０号参照）が含まれる。本発明の化合物と組み合わせて使用できるこれらのおよびさらなるＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素インヒビターの構造式は、Ｍ．  Ｙａｌｐａｎｉ、「Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  Ｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ」、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、８５〜８９頁（１９９６年２月５日）の８７頁に記載されている。現在好ましい実施形態では、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素インヒビターは、ロバスタチンおよびシンバスタチンから選択される。
【００９３】
さらなる一実施形態では、本発明の化合物は、所望の標的療法に応じて、１つまたは複数のさらなる活性な糖尿病薬を用いる処置において、以下の治療剤の１つまたは複数と組み合わせて使用される（例えば、Ｔｕｒｎｅｒ，  Ｎ．ら、Ｐｒｏｇ．  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．（１９９８年）、５１巻、３３〜９４頁；Ｈａｆｆｎｅｒ，  Ｓ．、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ（１９９８年）、２１巻、１６０〜１７８頁；およびＤｅＦｒｏｎｚｏ，  Ｒ．ら（編）、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９７年）、５巻、Ｎｏ．４参照）。いくつかの研究は、経口薬剤を用いた組み合わせ療法の利益について調査している（例えば、Ｍａｈｌｅｒ，  Ｒ．、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  Ｍｅｔａｂ．（１９９９年）、８４巻、１１６５〜７１頁；Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ：ＵＫＰＤＳ  ２８、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ（１９９８年）、２１巻、８７〜９２頁；Ｂａｒｄｉｎ，  Ｃ．  Ｗ．（ｅｄ．）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  Ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍｏｓｂｙ−−Ｙｅａｒ  Ｂｏｏｋ，  Ｉｎｃ．、Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．  １９９７年）；Ｃｈｉａｓｓｏｎ，  Ｊ．ら、Ａｎｎ．  Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｍｅｄ．（１９９４年）、１２１巻、９２８〜９３５頁；Ｃｏｎｉｆｆ，  Ｒ．ら、Ｃｌｉｎ．  Ｔｈｅｒ．（１９９７年）、１９巻、１６〜２６頁；Ｃｏｎｉｆｆ，  Ｒ．ら、Ａｍ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．（１９９５年）、９８巻、４４３〜４５１頁；Ｉｗａｍｏｔｏ，  Ｙ．ら、Ｄｉａｂｅｔ．  Ｍｅｄ．（１９９６年）、１３巻、３６５〜３７０頁；Ｋｗｉｔｅｒｏｖｉｃｈ，  Ｐ．、Ａｍ．  Ｊ．  Ｃａｒｄｉｏｌ（１９９８年）、８２巻（１２Ａ）、３Ｕ〜１７Ｕ頁参照）。これらの研究は、糖尿病および高脂血症の調節が、第２の薬剤を治療レジメンに追加することによってさらに向上され得ることを示している。
【００９４】
さらなる一実施形態では、本発明の化合物は、糖尿病の処置において以下の治療剤の１つまたは複数と組み合わせて使用される。スルホニル尿素（クロルプロパミド、トルブタミド、アセトヘキサミド、トラザミド、グリブリド、グリクラジド、グリナーゼ、グリメピリドおよびグリピジドなど）、ビグアニド（メトホルミンなど）、チアゾリジンジオン（シグリタゾン、ピオグリタゾン、トログリタゾンおよびロシグリタゾンなど）、ならびにＰＰＡＲα、ＰＰＡＲβおよびＰＰＡＲγの選択的および非選択的アクチベーターなどの関連するインスリン増感剤；デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡまたはその結合体化硫酸エステルであるＤＨＥＡ−ＳＯ４とも呼ばれる）；抗グルココルチコイド；ＴＮＦαインヒビター；α−グルコシダーゼインヒビター（アカルボース、ミグリトールおよびボグリボースなど）、プラムリンチド（ヒトホルモンアミリンの合成類似体）、他のインスリン分泌促進物質（レパグリニド、グリキドンおよびナテグリニドなど）、インスリン、ならびにアテローム性動脈硬化症の処置のための前述の治療剤。
【００９５】
さらに別の実施形態では、本発明の化合物は、肥満または肥満関連障害の処置において以下の治療剤の１つまたは複数と組み合わせて使用される。かかる薬剤には、それに限定されるものではないが、フェニルプロパノールアミン、フェンテルミン、ジエチルプロピオン、マジンドール、フェンフルラミン、デクスフェンフルラミン、フェントラミン（ｐｈｅｎｔｉｒａｍｉｎｅ）、β３アドレナリン作用性受容体アゴニスト剤；シブトラミン、消化管リパーゼインヒビター（オルリスタットなど）およびレプチンが含まれる。肥満または肥満関連障害の処置に使用される他の薬剤には、神経ペプチドＹ、エンテロスタチン、コレシストキニン（ｃｈｏｌｅｃｙｔｏｋｉｎｉｎ）、ボンベシン、アミリン、ヒスタミンＨ３受容体、ドーパミンＤ２受容体調節因子、メラニン細胞刺激ホルモン、コルチコトロピン放出因子、ガラニンおよびγアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）が含まれる。
【００９６】
（合成）
本発明の化合物は、それに限定されるものではないが、以下に記載の方法を含む当業者に周知のいくつかの方法で、または有機合成の技術者に公知の標準技術を適用することによってこれらの方法を改変して調製することができる。化合物は、ＣｈｅｍＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ  ９．０または１０．０（ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ）を使用して命名した。試薬および出発材料は市販されており、または当業者により周知の技術によって容易に合成される。以下の説明では、図示した式の置換基および／または変数の組合せは、かかる寄与が安定な化合物をもたらす場合にのみ許容されると理解されたい。別段指定されない限り、ＮＭＲおよび／または質量スペクトルデータを伴うすべての化合物を調製し、そのＮＭＲおよび質量スペクトルを測定した。
【００９７】
【化２】
0005625050.tif 000013
（ａ）Ｍｅ３Ａｌ、トルエン、０℃〜８０℃；（ｂ）ｉ．ブロモピルビン酸エチル、ＮａＨＣＯ３、ＴＨＦ、７０〜８０℃；ｉｉ．ＡｃＯＨ、トルエンまたはＴＦＡ、ＥｔＯＨ、８０℃；（ｃ）Ｒ３ＭｇＢｒ、ＴＨＦまたはＴＨＦ／ＣＨ２Ｃｌ２、０℃〜室温；（ｄ）Ｋ２ＣＯ３、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）、ＤＭＥ／Ｈ２Ｏ、８０℃。
【００９８】
一般に、式（００３６）の化合物を、まず、トリメチルアルミニウムの存在下で式（００３２）のアニリンを２−（フェニル）−２−メチルプロパンニトリル（００３１）と反応させて、標準の単離手順後に式（００３３）の化合物を得ることによって調製する（スキーム１）。その後のステップで、アミジン（００３３）を、α−ブロモピルビン酸エチルなどのハロエステルに塩基条件下において高温で曝露し、その後エタノール中トリフルオロ酢酸などの脱水条件に曝すことによって、標準の単離手順後に式（００３４）の１Ｈ−イミダゾールを得る。次いで、式（００３４）の化合物を、エステルからカルビノールなどへの官能基変換に供する。次いで、パラジウム媒介性カップリング反応、例えば鈴木反応において、式（００３５）の化合物を（２−フルオロ−６−（スルホニル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）メタノール（００１７）（以下のスキーム２参照）と反応させて、標準の単離手順後に式（００３６）の化合物を得る。
【００９９】
【化３】
0005625050.tif 000014
ａ）ｉ．ＴＨＦ中１．０ＭのＬＨＭＤＳ；ｉｉ．Ｒ４ＳＮａ、還流；ｂ）ＢＨ３−ＴＨＦ、０℃−還流；ｃ）ｍＣＰＢＡ、ＣＨ２Ｃｌ２；ｄ）ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）、ビス（ピナコレート）ジボロン、ＫＯＡｃ、ＤＭＳＯ、８０℃。
【０１００】
（スキーム２：ステップ２ａ）
（４−ブロモ−２−フルオロ−６−（メチルチオ）安息香酸の調製）
【０１０１】
【化４】
0005625050.tif 000015
冷却器を取り付けた５００ｍＬの丸底フラスコに、４−ブロモ−２，６−ジフルオロ安息香酸（１６．０ｇ、６７．５ｍｍｏｌ）および無水ＴＨＦ（１１０ｍＬ）を添加した。反応フラスコを氷浴中で冷却した後、１．０Ｍのリチウムビス−（トリメチルシリル）アミド（７４ｍＬ、１．１当量）を滴下添加した。反応懸濁物を室温で２０分間撹拌した後、ナトリウムチオメトキシド（５．２１ｇ、７４．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を還流状態で３時間撹拌した。希ＨＣｌ水溶液で反応物の一定分量をクエンチ（ｑｕｅｎｃｈ）し、ＧＣＭＳを実施した後、反応が完了したと決定付けた。実測値ｍ／ｚ＝２６５、２６７親イオン。冷却した反応混合物をＨ２Ｏでクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈した。反応混合物を分離漏斗に移し、１．０ＮのＨＣｌ水溶液を添加してｐＨ＝２〜３の溶液を得た。酢酸エチル層を分離し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮して、中間体６−フルオロ−４−ブロモ−２−メチルスルファニル−安息香酸１４．６ｇ（収率８１％）をワックス状の白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ    ７．１８  （ｓ，  １Ｈ），  ７．１２  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．４９  （ｓ，  ３Ｈ）；ＧＣＭＳｍ／ｚ＝２６５、２６７［Ｍ］＋。
【０１０２】
あるいは、中間体６−フルオロ−４−ブロモ−２−メチルスルファニル−安息香酸を、以下の通り調製した。
【０１０３】
２０Ｌのフラスコに、ジメチルホルムアミド（１４．５Ｌ、１０．０体積）を入れ、その後水酸化ナトリウム（２９３．７ｇ、１．２当量）を入れ、反応塊を−１５〜−１０℃に冷却した。４−ブロモ−２，６−ジフルオロ安息香酸（１４５０ｇ、１．０当量）を、−１５〜−１０℃で１０〜１５分かけて添加し、さらに１０〜１５分間撹拌した。ナトリウムチオメトキシド（５１４．６ｇ、１．２当量）を、−１０〜−５℃で５〜１０分かけて添加した。添加が完了したら、反応物の温度を４５〜６０分かけて２５〜２８℃に上昇させ、その温度で１．５〜２時間維持した。次いで、反応物の温度を３０〜６０分かけて６０〜６５℃に上昇させ、反応が完了したと見なされるまで、６０〜６５℃で５時間維持した。次いで反応混合物を２０〜２５℃に冷却し、冷却した（５〜１０℃）２ＮのＨＣｌ溶液（水３０．３Ｌ中１２ＮのＨＣｌ５．０４５Ｌ）でクエンチした。クエンチした後、酢酸エチル（１４．５Ｌ、１０体積）を添加し、混合物を１０〜１５分間撹拌した。各相を分離し、水層を酢酸エチル（７．２５Ｌ、５体積）で抽出した。二相を分離し、混合有機層をブライン溶液（水３．６２５Ｌ中ＮａＣｌ７２５ｇ）で洗浄した。各相を分離し、有機層を水（５．０体積、７．２５Ｌ）で洗浄した。各相を分離し、有機層を硫酸ナトリウム（１４５０ｇ）で乾燥させた。有機層を濾過して硫酸ナトリウムを除去し、次いで酢酸エチル（２．９Ｌ、２体積）で洗浄した。有機層を、減圧下において４５〜５０℃／３０〜４０ｍｍＨｇで約１〜１．２体積に濃縮し、石油エーテル（７．２５Ｌ、５体積）を４０〜４５℃で１５〜２０分かけて添加した。溶液を２０〜２５分かけて２０〜２５℃に冷却した。固体を濾過し、石油エーテル（２．９Ｌ、２．０体積）で洗浄し、生成物を真空下において２５〜２８℃、０．４〜０．７ｍｂａｒで乾燥させて、中間体６−フルオロ−４−ブロモ−２−メチルスルファニル−安息香酸１４１０ｇ（８７％、９９．４０面積％）を得た。
【０１０４】
（ステップ２ｂ）
（（４−ブロモ−２−フルオロ−６−（メチルチオ）フェニル）メタノールの調製）
【０１０５】
【化５】
0005625050.tif 000016
冷却器を取り付け、Ｎ２でパージした５００ｍＬの丸底フラスコに、６−フルオロ−４−ブロモ−２−メチルスルファニル−安息香酸（１４．６ｇ、５５．０ｍｍｏｌ）および無水ＴＨＦ（７０ｍＬ）を添加した。反応溶液を０℃に冷却した後、ＴＨＦ中１．０ＭのＢＨ３−ＴＨＦ（８３ｍＬ、１．５当量）溶液を滴下添加した。反応溶液を室温で撹拌し、次いで還流状態でさらに２時間撹拌した。反応溶液を冷却した後、１：１のＨ２Ｏ／ＴＨＦ溶液でクエンチした。反応溶液を、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）と共に分離漏斗に移し、Ｋ２ＣＯ３水溶液を添加した。酢酸エチル相を分離し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。粗生成物を、１１０ｇのＳｉＯ２カラムを介して溶媒勾配１００％Ｈｘ〜５５％ＥｔＯＡｃを使用してクロマトグラフにかけた。精製した標題生成物を、固体白色ワックスとして得た（１３．７ｇ、収率９９％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ    ７．１３  （ｓ，  １Ｈ），  ７．０６  （ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ８  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ２  Ｈｚ，  １Ｈ），    ４．７７  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．５１  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．２０−２．０５  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）；ＧＣＭＳｍ／ｚ＝２５１、２５３［Ｍ］＋。
【０１０６】
あるいは、中間体（４−ブロモ−２−フルオロ−６−（メチルチオ）フェニル）メタノールを、以下の通り調製した。
【０１０７】
２０Ｌのフラスコに、４−ブロモ−２−フルオロ−６−（メチルチオ）安息香酸（１４００ｇ、１．０当量）を入れ、その後窒素下でＴＨＦ（１４Ｌ、１０体積）を入れた。この溶液に、２５〜２８℃で３０〜４５分かけてボラン−ジメチルスルフィド錯体（８０２．４１ｇ、１０００ｍＬ）を添加した。反応温度を、３０〜４５分かけて６０〜６５℃に上昇させ、ＨＰＬＣによって＜１％の４−ブロモ−２−フルオロ−６−（メチルチオ）安息香酸が示されるまで（約３〜４時間）、その温度を維持した。反応が完了したら、混合物を３０〜４０分かけて１０〜１５℃に冷却した。次いで反応物を、１０〜１５℃で１〜１．５時間かけてメタノール（２．１Ｌ、１．５体積）でクエンチした。次いで反応塊を、真空下において４０〜５０℃／０．４〜０．７ｍｂａｒで１〜１．５体積に濃縮した。得られた混合物を、ＤＣＭ（８．４Ｌ、６体積）に溶解した。有機層を塩化アンモニウム溶液（水２．８Ｌ中ＮＨ４Ｃｌ５６０ｇ、２体積）で洗浄した。各相を分離し、有機層を、１０％ＮａＨＣＯ３溶液（２．８Ｌ、２体積）、飽和ブライン溶液（２．１Ｌ、１．５体積）および水（４．２Ｌ、３体積）で洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウム（７００ｇ）で乾燥させた。硫酸ナトリウムを濾過によって除去し、ＤＣＭ（２．８Ｌ、２体積）で洗浄した。有機層を、真空下において４０〜４５℃／０．４〜０．７ｍｂａｒで１〜１．２体積に濃縮して生成物を得、それを真空下において４５〜５０℃／０．４〜０．７ｍｂａｒで乾燥させた。標題生成物を、収率９０％（１２００ｇ）、９０．０７面積％で得た。
【０１０８】
（ステップ２ｃ）
（（４−ブロモ−２−フルオロ−６−（メタンスルホニル）フェニル）−メタノールの調製）
【０１０９】
【化６】
0005625050.tif 000017
５００ｍＬのフラスコに、（４−ブロモ−２−フルオロ−６−（メチルチオ）フェニル）メタノール（１３．７ｇ、５４．６ｍｍｏｌ）および無水ジクロロメタン（１２５ｍＬ）を添加した。溶液を氷浴中で０〜３℃に冷却し、その後３−クロロ過安息香酸（最大７７％、Ａｌｄｒｉｃｈ）（１８．８ｇ、２当量）を少しずつ（ｐｏｒｔｉｏｎｗｉｓｅ）添加した。次いで、反応溶液を室温に温め、それを１８時間維持した。次いで、反応物を真空中で濃縮してジクロロメタンを除去し、残渣を分離漏斗に入れて酢酸エチルおよび１ＭのＮａＯＨ水溶液で洗浄した。酢酸エチル層を分離し、１ＭのＮａＯＨ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ、６５×２００ｍｍのＳｉＯ２カラム、勾配溶出１００％ヘキサン〜９０％酢酸エチル）によって精製した。適切な画分を混合し、真空中で濃縮して、標題化合物を無色半結晶固体として収量８．１ｇ（５２％）で得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ    ７．９８  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．９１  （ｓ，  １Ｈ），  ５．４５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ  ，  １Ｈ），  ４．８８  （ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ８  Ｈｚ  ，  Ｊ２  ＝  ２  Ｈｚ，    ２Ｈ），  ３．４２  （ｓ，  ３Ｈ）；  １９Ｆ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  −１１１．８  ｐｐｍ；ＧＣＭＳｍ／ｚ＝２８３、２８５［Ｍ］＋。
【０１１０】
（ステップ２ｄ）
（（２−フルオロ−６−（メチルスルホニル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）メタノールの調製）
【０１１１】
【化７】
0005625050.tif 000018
乾燥Ｎ２でパージした１００ｍＬの丸底フラスコに、（４−ブロモ−２−フルオロ−６−（メタンスルホニル）フェニル）−メタノール（１．９８ｇ、６．９９ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコレート）ジボロン（２．１３ｇ、１．２当量）、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加物（５６０ｍｇ、１０ｍｏｌ％）、炭酸カリウム（２．０６ｇ、３当量）およびＤＭＳＯ（２５ｍＬ）を秤量して入れた。得られた懸濁物を、９０℃で３時間撹拌した。反応溶液の一定分量は、ＬＣＭＳ分析によって測定すると、出発臭化物をそれ以上含有していないことが見出された。冷却した反応懸濁物を、酢酸エチル（５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で希釈し、セライトパッド付きブフナー漏斗を介して濾過した。得られた濾液を分離漏斗に移し、有機相を分離した。水相を酢酸エチルで抽出し、混合酢酸エチル相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  ＳＰ−１、４０ｇのＳｉＯ２カラム、勾配溶出１００％ヘキサン〜６０％酢酸エチル）によって精製して、透明な粘性油を得た。生成物を、ジクロロメタンに溶解することによって非晶質白色粉末として単離し、ヘキサンを添加すると再沈殿が生じた。標題化合物を固体白色粉末として、収量１．９ｇ（収率８２％）で単離した。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ    ８．２８  （ｓ，  １Ｈ），  ７．７９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．０３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ３．２３  （ｓ，  ３Ｈ）  ３．０５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ，  １Ｈ），  １．３５  （ｓ，  ６Ｈ）；  １９Ｆ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  −１１６．３  ｐｐｍ。
【０１１２】
あるいは、中間体（２−フルオロ−６−（メチルスルホニル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）メタノールを、以下の通り調製した。
【０１１３】
撹拌棒、温度プローブ、還流冷却器および窒素注入口を備えた５００ｍＬのジャケット付き反応器に、メチルテトラヒドロフラン（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｒａｎ）（ＭｅＴＨＦ）（７５ｍＬ、５体積）を入れ、その後酢酸カリウム（５．２ｇ、５２．９８ｍｍｏｌ、１当量）および（オキシジ−２，１−フェニレン）ビス（ジフェニルホスフィン）（３２２ｍｇ；５９７．３μｍｏｌ、０．０１１２５当量）およびビス（ピナコレート）ジボロン（１７．５１ｇ、６８．９５ｍｍｏｌ、１．３当量）を入れた。反応フラスコを排気して１５０Ｔｏｒｒ未満にし、次いで窒素を再充填した。この脱気手順を３回反復した。Ｐｄ（ＯＡｃ）２（９４．２ｍｇ；４１９．６μｍｏｌ、０．００７５当量）を反応器に入れ、反応フラスコを１５０Ｔｏｒｒ未満に排気し、次いで窒素を再充填し、その順序を３回反復した。得られたスラリーを２０〜２５℃で１５分間熟成させた。１５分間の熟成が完了したら、スラリーを内部温度８０℃まで加熱した。反応器中の混合物をその温度に加熱しながら、別個のフラスコに（４−ブロモ−２−フルオロ−６−（メタンスルホニル）フェニル）−メタノール（１５．０３ｇ、５３．０９ｍｍｏｌ、１当量）を入れ、その後ＭｅＴＨＦ（７５ｍｌ、５体積）を入れた。得られた溶液を、窒素を表面下で起泡させることによって使用前に少なくとも１５分間脱気した。触媒混合物が還流状態に達したら、ＭｅＴＨＦ中（４−ブロモ−２−フルオロ−６−（メタンスルホニル）フェニル）−メタノールの脱気溶液を、反応物に一度に添加し、反応させた。反応は一般に、基質の添加後、完了するまで約２０時間かかる。完了したら（一般に＜０．７５ＲＡＰの出発材料）、反応物を２０〜２５℃に冷却した。ＲＴにしたら、反応物をＭｅＴＨＦ（７５ｍｌ、５体積）で希釈し、５ｗｔ％のＮａＣｌ溶液（７．５体積、１１０ｍｌ）で少なくとも１５分間洗浄した。各相を分離し、生成物を豊富に含む上層のＭｅＴＨＦ流を、セライトを介して濾過して、不溶性パラジウム残渣を除去した。セライトケーキをＭｅＴＨＦ（７５ｍｌ、５体積）で洗浄した。反応物を官能化シリカ（３０当量）で処理して、パラジウムおよび色を除去した。スラリーを少なくとも６０分間撹拌し、次いで濾過してシリカを除去した。使用したシリカをＭｅＴＨＦ（５体積、７５ｍｌ）で洗浄した。混合有機相を水（５体積、７５ｍｌ）で洗浄した。有機相を真空下（６０〜７０Ｔｏｒｒ、浴温度３０℃）で蒸留して５体積（７５ｍＬ）にした。７５ｍｌの目印に達したら、蒸留を停止し、ヘプタン（７５ｍｌ、５体積）を反応溶液に滴下添加した。ヘプタン約３５ｍｌを添加した後、生成物が溶液から結晶化し始めた。添加が完了したら、生成物を濾過によって単離し、湿潤ケーキをＭｅＴＨＦ−ヘプタン（１：９）溶液（２×７５ｍｌ）で洗浄し、５０℃で乾燥させた。標題生成物を、白色固体１３．６４ｇ（収率７８％）、９９．５８面積％で得た。
【実施例】
【０１１４】
（実施例１）
（２−（１−（３−クロロ−３’−フルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−２−（２−（２−フルオロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オール）
【０１１５】
【化８】
0005625050.tif 000019
（実施例１ａ）
（２−（２−フルオロフェニル）−２−メチルプロパンニトリルの調製）
【０１１６】
【化９】
0005625050.tif 000020
乾燥Ｎ２でパージし、添加漏斗を取り付けた５００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、２−フルオロフェニルアセトニトリル（１１．０ｇ、８１．４ｍｍｏｌ）および無水ＴＨＦ（７０ｍＬ）を添加した。反応溶液を−１０℃に冷却した後、ＴＨＦ中１．０Ｍのカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド溶液（１９５ｍＬ、２．４モル当量）を滴下添加した。反応溶液を−１０℃で２０分間撹拌した後、ヨードメタン（１５．２ｍＬ、２４４ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を、室温に温めながら４時間撹拌した。反応溶液を、ＮＨ４Ｃｌ水溶液を添加することによってクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈した。有機相を分離し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮し、２４０ｇのＳｉＯ２カラムによりＢｉｏｔａｇｅ  ＳＰ−１で溶媒勾配１００％Ｈｘ〜５０％ＥｔＯＡｃを使用してクロマトグラフにかけて、標題生成物１０．１ｇ（収率７６％）を得た。ＧＣＭＳｍ／ｚ＝１６３［Ｍ］＋。
【０１１７】
（実施例１ｂ）
（Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−（２−フルオロフェニル）−２−メチルプロパンイミドアミドの調製）
【０１１８】
【化１０】
0005625050.tif 000021
オーブンで乾燥させＮ２でパージし、添加漏斗を取り付けた２５０ｍＬの丸底フラスコに、４−ブロモアニリン（７．３１ｇ、４２．５ｍｍｏｌ）および無水トルエン（４０ｍＬ）を添加した。反応溶液に、０℃で２．０ＭのＭｅ３Ａｌ（３２ｍＬ、１．５ｍｏｌ当量）溶液を添加した。反応溶液を０℃で３０分間撹拌し、次いで２−（２−フルオロフェニル）−２−メチルプロパンニトリル（７．６２ｇ、４６．７ｍｍｏｌ）のトルエン（２５ｍＬ）溶液を、反応フラスコに添加した。反応溶液を９０℃で５時間撹拌した。冷却した反応溶液を、酒石酸ナトリウムカリウム水溶液でクエンチした。２０分静置した後、有機相を分離し、酒石酸ナトリウムカリウム溶液で洗浄した。有機溶液を１ＮのＨＣｌ水溶液（１００ｍＬ×３）で抽出した。混合ＨＣｌ水溶液を、１ＮのＮａＯＨ水溶液を添加することによって中和し、ジクロロメタン（２００ｍＬ×２）で抽出した。ジクロロメタン生成物溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、標題化合物（５．５ｇ、収率３９％）を得た。ＧＣＭＳｍ／ｚ＝３３４、３３６［Ｍ］＋。
【０１１９】
（実施例１ｃ）
（１−（４−ブロモフェニル）−２−（２−（２−フルオロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルの調製）
【０１２０】
【化１１】
0005625050.tif 000022
冷却器を取り付けた２５０ｍＬの丸底フラスコに、Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−（２−フルオロフェニル）−２−メチルプロパンイミドアミド（５．０ｇ、１５ｍｍｏｌ）、無水ＴＨＦ（８０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３（２．５２ｇ、３０ｍｍｏｌ）および９０％ブロモピルビン酸エチル（１．９０ｍＬ、１５．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を７０℃で２時間撹拌した後、ＬＣＭＳによって分析した。冷却した反応混合物をデカントし、真空中で濃縮した。残渣をトルエン（６５ｍＬ）および酢酸（１．８ｍＬ）に溶解した。溶液を還流状態で１時間撹拌した。冷却した溶液をＨ２Ｏ（１５０ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮し、ＳｉＯ２カラムで１００％Ｈｘ〜７０％ＥｔＯＡｃの勾配を使用してクロマトグラフにかけて、精製された標題化合物（４．３ｇ、収率６７％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝４３１．３、４３３．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２１】
（実施例１ｄ）
（２−（１−（４−ブロモフェニル）−２−（２−（２−フルオロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールの調製）
【０１２２】
【化１２】
0005625050.tif 000023
乾燥Ｎ２でパージし、添加漏斗を取り付けた２５０ｍＬの丸底フラスコに、Ｅｔ２Ｏ中３．０ＭのＭｅＭｇＢｒ（１２ｍＬ、３．７当量）溶液を添加した。フラスコを０℃に冷却した後、１−（４−ブロモフェニル）−２−（２−（２−フルオロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチル（４．２２ｇ、９．７８ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（８０ｍＬ）溶液を滴下添加した。反応溶液を室温に温めながら１時間かけて撹拌した。反応溶液を、ＮＨ４Ｃｌ水溶液を添加することによってクエンチした。混合物を分離漏斗に注ぎ、ジクロロメタン層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、４０ｇのＳｉＯ２カラムで勾配１００％Ｈｘ〜７０％ＥｔＯＡｃを使用してクロマトグラフにかけて、標題化合物（３．１９ｇ、収率７８％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝４１７．３、４１９．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２３】
（実施例１）
（２−（１−（３’−フルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−２−（２−（２−フルオロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールの調製）
【０１２４】
【化１３】
0005625050.tif 000024
５０ｍＬの丸底フラスコに、２−（１−（４−ブロモフェニル）−２−（２−（２−フルオロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オール（３８０ｍｇ、９１１μｍｏｌ）、ＤＭＥ（２５ｍＬ）およびＨ２Ｏ（６ｍＬ）を添加した。溶液を、Ｎ２で１０分間スパージした後、（２−フルオロ−６−（メチルスルホニル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）メタノール（３６０ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（３８０ｍｇ、２．７３ｍｍｏｌ）およびジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加物（７４ｍｇ、９１μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を８０℃で２時間撹拌した。冷却した反応溶液をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈し、セライトパッド付きブフナー漏斗で濾過した。濾液をＮＨ４Ｃｌ水溶液（１５０ｍＬ×２）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ  ＳＰ−１、２５ｇのＳｉＯ２カラム、勾配溶出５％ＥｔＯＡｃ〜１００％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、標題化合物（１００ｍｇ、収率２０％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．０２  （ｄ，    Ｊ  ＝  ２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．５１  （ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ２  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  １０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．２９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ９  ２Ｈ），  ７．０８−７．１６  （ｍｕｌｔ，  １Ｈ），  ６．８５−６．９２  （ｍｕｌｔ，  ３Ｈ），  ６．７７−６．８４  （ｍｕｌｔ，  ２Ｈ），  ６．６５  （ｓ，  １Ｈ），  ５．０９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ３．３５  （ｓ，  １Ｈ），  ３．３０  （２，  ３Ｈ），  ３．０２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６  Ｈｚ，  １Ｈ），  １．７２  （ｓ，  ６Ｈ），  １．６２  （ｓ，  ６Ｈ）；  １９Ｆ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  −１１２．１，    −１１３．５  ｐｐｍ；ＬＣＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ＝５４１．３［Ｍ＋Ｈ］＋、５６３．２［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０１２５】
（実施例２〜８）
以下の化合物のすべてを、適切なアニリンおよび２−（フェニル）−２−メチルプロパンニトリルを使用して、実施例１に記載のものと同様にして生成した。市販されていない場合には、当業者に容易に明らかな標準技術を使用してニトリルを生成した。
【０１２６】
【数５−１】
0005625050.tif 000025
【０１２７】
【数５−２】
0005625050.tif 000026
化合物２は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．０２  （ｓ，  １Ｈ），  ７．５６  −  ７．４９  （ｍ，  １Ｈ），  ７．３５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．０，  １Ｈ），  ７．１２  −  ６．９６  （ｍ，  ３Ｈ），  ６．６８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．２，  １Ｈ），  ６．６６  −  ６．６０  （ｍ，  １Ｈ），  ６．５６  （ｓ，  １Ｈ），  ５．０８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ５．４，  ２Ｈ），  ３．３６  （ｓ，  １Ｈ），  ３．２９  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．９２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０，  １Ｈ），  ２．０７  （ｓ，  ３Ｈ），  １．９７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．４，  ３Ｈ），  １．７２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．４，  ３Ｈ），  １．５９  （ｓ，  ６Ｈ）。
【０１２８】
化合物３は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．００  （ｍ，  １Ｈ），  ７．５７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．１，  １Ｈ），  ７．５５  −  ７．４９  （ｍ，  １Ｈ），  ７．１３  （ｓ，  １Ｈ），  ７．１１  （ｓ，  １Ｈ），  ７．０７  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．３，  ２．１，  １Ｈ），  ７．０１  −  ６．９５  （ｍ，  １Ｈ），  ６．８１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．３，  １Ｈ），  ６．５９  （ｓ，  １Ｈ），  ５．０９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ５．４，  ２Ｈ），  ３．３０  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．２６    （ｍ，  １Ｈ），  ２．８９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０，  １Ｈ），  ２．０６  （ｓ，  ３Ｈ），  １．９２  （ｓ，  ３Ｈ），  １．６１  （ｓ，  ３Ｈ），  １．５９  （ｓ，  ３Ｈ）。
【０１２９】
化合物４は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．９７  （ｓ，  １Ｈ），  ７．４７  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １０．０，  １．８，  １Ｈ），  ７．３１  −  ７．２０  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．００  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．３，  ２Ｈ），  ６．９２  −  ６．７１  （ｍ，  ３Ｈ），  ６．６５  （ｓ，  １Ｈ），  ５．０８  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．０，  １．６，  ２Ｈ），  ３．２９  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．２７  （ｓ，  １Ｈ），  ２．９０  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０，  １Ｈ），  １．８２  （ｓ，  ６Ｈ），  １．６０  （ｓ，  ６Ｈ）。
【０１３０】
化合物５は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ−ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７．８９−７．９０  （ｍｕｌｔ，  １Ｈ），  ７．８２−７．８５  （ｍｕｌｔ，  １Ｈ），  ７．５２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．６  Ｈｚ，２Ｈ），  ７．１６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．６  Ｈｚ  ２Ｈ），  ７．０７−７．０９  （ｍｕｌｔ，  ２Ｈ），  ６．９４−６．９８  （ｍｕｌｔ，  １Ｈ），  ６．８０  （ｓ，  １Ｈ），  ５．５５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．９３−４．９５  （ｍｕｌｔ，  ２Ｈ），  ４．６５  （ｓ，  １Ｈ），  ３．４５  （ｓ，  ３Ｈ），  １．９６  （ｓ，  ６Ｈ），  １．４５  （ｓ，  ６Ｈ）。
【０１３１】
化合物６は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．９７  （ｓ，  １Ｈ），  ７．４６  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ９．９，  １．８，  １Ｈ），  ７．２３  −  ７．１８  （ｍ，  １Ｈ），  ７．１２  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １０．３，  １．９，  １Ｈ），  ６．９７  （ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  ２３．４，  ９．０，  ４．０，  ２Ｈ），  ６．８８  −  ６．７９  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．６１  （ｓ，  １Ｈ），  ５．０８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ５．４，  ２Ｈ），  ３．３０  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．２７  −  ３．２３  （ｍ，  １Ｈ），  ２．９２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．９，  １Ｈ），  １．６１  （ｓ，  １２Ｈ）。
【０１３２】
化合物７は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，  ４００  ＭＨｚ）  δ  ７．９５−７．９０  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．６２  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１，  １．５  Ｈｚ），  ７．３３  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ９．５，  １．５  Ｈｚ），  ７．１３−７．０８  （ｍ，  ３Ｈ），  ６．８５  （ｓ，  １Ｈ），  ６．８０−６．７０  （ｍ，  １Ｈ），  ５．５７  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ），  ４．９５  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．３  Ｈｚ），  ４．７１  （ｓ，  １Ｈ），  ３．４７  （ｓ，  ３Ｈ），  １．８５  （ｓ，  ６Ｈ），  １．４６  （ｓ，  ６Ｈ）。
【０１３３】
化合物８は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，  ４００  ＭＨｚ）  δ  ７．９６−７．９０  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．４９  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１，  １．５  Ｈｚ），  ７．３４  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ９．５，  １．５  Ｈｚ），  ７．２０−７．１０  （ｍ，  １Ｈ），  ７．０５−６．９４  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．９０−６．７５  （ｍ，  ３Ｈ），  ５．５７  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ），  ４．９４  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．３  Ｈｚ），  ４．７０  （ｓ，  １Ｈ），  ３．４７  （ｓ，  ３Ｈ），  １．６８  （ｓ，  ６Ｈ），  １．４７  （ｓ，  ６Ｈ）。
【０１３４】
（実施例９）
（２−（２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３，３’−ジフルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オール）
【０１３５】
【化１４】
0005625050.tif 000027
（実施例９ａ）
（２−（２，６−ジクロロフェニル）−２−メチルプロパンニトリルの調製）
【０１３６】
【化１５】
0005625050.tif 000028
カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの１Ｍ溶液（４０３ｍＬ、４０３ｍｍｏｌ）に、−６６℃（アセトン／ドライアイス）で、無水ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中２−（２，６−ジクロロフェニル）アセトニトリル（２５．０ｇ、１３４ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した。混合物を−６６℃で２０分間撹拌した。次いで、ヨードメタン（３３．６ｍＬ、５３８ｍｍｏｌ）を−６６℃で２５分かけて滴下添加した。この段階で、溶液は発熱性となり、多量の淡黄色沈殿物が観察された。懸濁物を−６０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を氷水２００ｍＬでクエンチし、エーテル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を混合し、ブライン１５０ｍＬで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ロータリーエバポレーターで濃縮した。粗生成物（３０ｇ、黄色油）を、カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、３３０ｇのシリカ、ヘキサン中２０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、２−（２，６−ジクロロフェニル）−２−メチルプロパンニトリル（２８．２ｇ、１３２ｍｍｏｌ、収率９８％）を淡黄色がかった油として得た。１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）  δ  ７．３５  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０３  Ｈｚ  ），  ７．１６  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  ２．０９  （ｓ，  ６Ｈ）；  １３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １２６  ＭＨｚ）  δ  １３４．６，  １３３．８，  １３１．４，  １２９．０，  １２４．１，  ３８．６，  ２９．２；ＭＳｍ／ｅ２１４．１０（Ｍ＋Ｈ＋）；ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ  ５μ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、溶媒Ａ：０．２％Ｈ３ＰＯ４と１０％ＭｅＯＨ／水、溶媒Ｂ：０．２％Ｈ３ＰＯ４と９０％ＭｅＯＨ／水、４分にわたり０〜１００％Ｂの勾配）：３．１６分。
【０１３７】
（実施例９ｂ）
（Ｎ−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２，６−ジクロロフェニル）−２−メチルプロパンイミドアミドの調製）
【０１３８】
【化１６】
0005625050.tif 000029
２−（２，６−ジクロロフェニル）−２−メチルプロパンニトリル（２０ｇ、９３ｍｍｏｌ）および４−ブロモ−２−フルオロアニリン（２８．４ｇ、１４９ｍｍｏｌ）を、無水ｏ−キシレン（２００ｍＬ）に溶解し、Ｎ２下で１００℃に加熱した。トルエン（１４０ｍＬ、２８０ｍｍｏｌ）中トリメチルアルミニウム（２Ｍ）を、２．５時間かけて滴下添加すると同時に（１分当たり約０．９ｍＬ）、反応混合物を１００℃で撹拌した。添加後、反応混合物を１００℃で３０分間撹拌し、次いで−５℃に冷却した。反応混合物を、酒石酸カリウムナトリウム（水１００ｍＬ中２０ｇ）で非常に注意深くクエンチした（注意：ガスおよび熱形成）。反応混合物を、セライト５４５を介して濾過した。濾液を、１ＮのＨＣｌ（４×７０ｍＬ）で洗浄した。水層を２ＮのＮａＯＨで中和し、ＥｔＯＡｃ（４×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を混合し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ロータリーエバポレーターで濃縮して、粗生成物２４ｇを得た。粗生成物を、ＭＴＢＥ７２ｍＬおよびヘキサン２４０ｍＬを用いて再結晶化させて、Ｎ−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２，６−ジクロロフェニル）−２−メチルプロパンイミドアミド（１７．５ｇ、４３．３ｍｍｏｌ、収率４６．４％）を白色固体として得た（純度：９９％）。１Ｈ−ＮＭＲ  （ＭｅＯＤ，  ４００  ＭＨｚ）  δ  ７．４２  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  ７．３０  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．１６  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  ６．９３  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  ２．１１  （ｓ，  ６Ｈ）；  １３Ｃ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，  １００  ＭＨｚ）  δ  １６６．５，  １５６．１，  １５３．７，  １４０．６，  １３８．５，  １３５．９，  １３１．４，  １２８．６，  １２８．０，  １２５．７，  １１９．５，  １１２．９，  ５０．０，  ２９．２；ＭＳｍ／ｅ４０３．０９（Ｍ＋Ｈ＋）；ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ  ５μ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、溶媒Ａ：０．２％Ｈ３ＰＯ４と１０％ＭｅＯＨ／水、溶媒Ｂ：０．２％Ｈ３ＰＯ４と９０％ＭｅＯＨ／水、４分にわたり０〜１００％Ｂの勾配）：２．３２分。
【０１３９】
（実施例９ｃ）
（１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−４−ヒドロキシ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルの調製）
【０１４０】
【化１７】
0005625050.tif 000030
トルエン（１８０ｍＬ）およびＴＨＦ（１８０ｍＬ）中Ｎ−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２，６−ジクロロフェニル）−２−メチルプロパンイミドアミド（４８．０ｇ、１１９ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（４１．０ｇ、２９７ｍｍｏｌ）の混合物に、ＴＨＦ２４ｍＬ中３−ブロモ−２−オキソプロパン酸エチル（２３．３ｍＬ、１６６ｍｍｏｌ）の溶液を５５℃で５０分かけてゆっくり添加した。反応混合物を５５℃で１．５時間維持した。白色スラリーが観察された。反応混合物を５℃に冷却した。ＨＣｌ（０．５Ｎ、４５０ｍＬ）を滴下添加した（エンドポイントｐＨ＝９〜１０）。添加後、懸濁物を０℃に冷却した。固体を濾過によって集め、水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、次いで６０℃の真空オーブンで終夜乾燥させた。１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−４−ヒドロキシ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチル（５９ｇ、１１４ｍｍｏｌ、収率９６％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）  δ  ７．１１  （ｍ，  ３Ｈ），  ６．９６  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．７２  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．２８  Ｈｚ），  ４．３５  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．２５  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １０．５  Ｈｚ），  ３．８０  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １０．８  Ｈｚ），  １．９８  （ｓ，  ３Ｈ），  １．９３  （ｓ，  ３Ｈ），  １．３８  （ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ７．０３  Ｈｚ）；  １３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １２６  ＭＨｚ）  δ    １７３．０，  １７１．５，  １５９．８，  １５７．８，  １３７．３，  １３５．７，  １３２．１，  １３１．１，  １２８．１，  １２７．４，  １２５．６，  １２２．２，  １２０．１，  ９３．５，  ６２．５，  ４５．５，  ３０．２，  １４．０；ＭＳｍ／ｅ５１７．０５（Ｍ＋Ｈ＋）；ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ  ５μ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、溶媒Ａ：０．２％Ｈ３ＰＯ４と１０％ＭｅＯＨ／水、溶媒Ｂ：０．２％Ｈ３ＰＯ４と９０％ＭｅＯＨ／水、４分にわたり０〜１００％Ｂの勾配）：２．７４分。
【０１４１】
（実施例９ｄ）
（１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルの調製）
【０１４２】
【化１８】
0005625050.tif 000031
ＥｔＯＨ（２００ｍＬ）中１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−４−ヒドロキシ−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチル（３８ｇ、７３ｍｍｏｌ）の混合物に、ＴＦＡ（２５．０ｇ、２２０ｍｍｏｌ）を添加した。その後、混合物を９５℃に加熱した。２．５時間後、ＨＰＬＣ分析によって、＜１％のアルコール中間体が残っているのが示された。混合物をＣＨ２Ｃｌ２３００ｍＬで希釈し、氷浴で約５℃に冷却した。混合物を１ＮのＮａＯＨ（１２０ｍＬ）で中和し、有機層を分離した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で抽出した。混合有機層をロータリーエバポレーターで濃縮して、粗材料を得た。ＥｔＯＨ（５ｍＬ／１ｇ）中で再結晶化させて、１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチル３２ｇをオフホワイト色の固体として得た（収率８６％）。１Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，  ４００  ＭＨｚ）  δ  ７．９２  （ｓ，  １Ｈ），  ７．１６  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  ７．２２  （ｍ，  ３Ｈ），  ７．１１（ｍ，  １Ｈ），  ７．０４  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １２．０  Ｈｚ），  ４．２５  （ｑ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  １．９４  （ｓ，  ６Ｈ），  １．２７  （ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ）；ＭＳｍ／ｅ５０２．６８（Ｍ＋Ｈ＋）；ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ  ５μ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、溶媒Ａ：０．２％Ｈ３ＰＯ４と１０％ＭｅＯＨ／水、溶媒Ｂ：０．２％Ｈ３ＰＯ４と９０％ＭｅＯＨ／水、４分にわたり０〜１００％Ｂの勾配）：３．８７分。
【０１４３】
（実施例９ｅ）
（２−（１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールの調製）
【０１４４】
【化１９】
0005625050.tif 000032
氷／塩浴（−１５〜−１７℃）で冷却したＴＨＦ１２０ｍＬ中臭化メチルマグネシウム（６０．０ｍＬ、１８０ｍｍｏｌ、エーテル中３Ｍ）の混合物に、ＣＨ２Ｃｌ２６５ｍＬおよびＴＨＦ８７ｍＬ中１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチル（３０ｇ、６０ｍｍｏｌ）の溶液を、４５分かけてゆっくり添加した。内部温度を注意深く０℃未満に維持した。さらに２×２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２を使用して、残りの材料をその後洗浄した。反応混合物の温度を、１時間撹拌しながら０℃未満に維持した。次いで、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２１００ｍＬで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌをゆっくり添加した。得られた混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２×８０ｍＬ）で抽出した。有機層を混合し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ロータリーエバポレーターで濃縮して、２−（１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オール（２８．５ｇ、５８．６ｍｍｏｌ、収率９８％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）  δ  ７．１３  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ９．０３，  ２．０１  Ｈｚ），  ７．０９  （ｓ，  １Ｈ），  ７．０７  （ｓ，  １Ｈ），  ６．９３  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．７５  （ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ８．１６  Ｈｚ  ），  ６．５５  （ｓ，  １Ｈ），  ３．１８  （ｓ，  １Ｈ），  ２．００  （ｓ，  ６Ｈ），  １．５８  （ｓ，  ６Ｈ）；  １３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １２６  ＭＨｚ）  δ  １５８．１，  １５６．１，  １５４．５，  １４７．８，  １３９．３，  １３５．７，  １３１．３，  １３０．３，  １２７．８，  １２６．９，  １２２．７，  １１９．８，  １１５．１，  ６８．７，  ４４．８，  ３１．１，  ２９．９；ＭＳｍ／ｅ４８５．０５（Ｍ＋Ｈ＋）；ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ  ５μ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、溶媒Ａ：０．２％Ｈ３ＰＯ４と１０％ＭｅＯＨ／水、溶媒Ｂ：０．２％Ｈ３ＰＯ４と９０％ＭｅＯＨ／水、４分にわたり０〜１００％Ｂの勾配）：２．７８分。
【０１４５】
（実施例９）
（２−（２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３，３’−ジフルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オールの調製）
【０１４６】
【化２０】
0005625050.tif 000033
１Ｌの３つ口丸底フラスコに、窒素下で２−（１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オール（１２．０ｇ、２４．７ｍｍｏｌ）、［２−フルオロ−６−メタンスルホニル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−メタノール（９．７８ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１０．２ｇ、７４ｍｍｏｌ）、ＤＭＥ（１２０ｍＬ）および水（１２ｍＬ）を添加した。混合物を６０℃に加熱し、次いで１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）塩化物複合体（４．０６ｇ、４．９４ｍｍｏｌ）を窒素下で添加した。反応混合物を８０℃へ３０分間加熱した。得られた暗色混合物を氷浴で冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２２００ｍＬと水２００ｍＬにおいて分離した。有機層を混合し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濃縮した後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、３３０ｇのシリカ、ヘキサン中０％〜１００％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、粗生成物（収率８５％）１２．７９ｇを淡黄色固体として得た。
【０１４７】
粗生成物９．５ｇをアセトン（８０ｍＬ）に６５℃で溶解することによって、最結晶化を実施した。得られた溶液を５時間かけてゆっくり２５℃に冷却し、次いで０℃へさらに３０分間冷却した。結晶は４５℃で形成し始めた。固体を濾過によって集め、冷却したアセトンですすいだ。４５℃のオーブンにおいて真空下で１４時間乾燥させた後、純粋な生成物４．９ｇを得た。さらなる結晶生成物を収集するために、母液を約１０ｍＬに濃縮し、シリカパッドを通過させた。ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）を使用して、化合物を溶出した。濾液を真空下で濃縮して、粗固体を得た。粗固体を、先の手順に従ってアセトン中で再結晶化させて、生成物２．５ｇをさらに得た。最結晶化後の２種類の収集物の混合収集物は、収率７８％であった。１Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，  ４００  ＭＨｚ）  δ  ７．９４  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．６３  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．２９，  １．５１  Ｈｚ），  ７．３４  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ９．５４  Ｈｚ），  ７．１４  （ｍ，  ３Ｈ），  ７．０５  （ｍ，  １Ｈ），  ６．８３  （ｓ，  １Ｈ），  ５．５８  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．２７  Ｈｚ），  ４．９６  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．２７  Ｈｚ），  ４．７０（ｓ，  １Ｈ），  ３．４６  （ｓ，  ３Ｈ），  １．９６  （ｓ，  ６Ｈ），  １．４５  （ｓ，  ６Ｈ）；ＭＳｍ／ｅ６０９．１６（Ｍ＋Ｈ＋）；ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ  ５μ  Ｃ１８  ４．６×５０ｍｍ、４ｍＬ／分、溶媒Ａ：０．２％Ｈ３ＰＯ４と１０％ＭｅＯＨ／水、溶媒Ｂ：０．２％Ｈ３ＰＯ４と９０％ＭｅＯＨ／水、４分にわたり０〜１００％Ｂの勾配）：２．５６分。
【０１４８】
あるいは、実施例９を以下の通り調製した。
【０１４９】
１Ｌの３つ口丸底フラスコに、窒素下でメチルテトラヒドロフラン（「ＭｅＴＨＦ」、６．９ｋｇ）、２−（１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オール（１．９９４ｋｇ、４．１モル）および（２−フルオロ−６−（メチルスルホニル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）メタノール（１．３８ｋｇ、４．１９モル）を添加した。すべての固体が溶解するまで、混合物を２３℃で１５分間撹拌した。１５分経過したら、（オキシジ−２，１−フェニレン）ビス（ジフェニルホスフィン）（０．０２２ｋｇ、０．０４１モル）およびＰｄ（ＯＡｃ）２（０．０１ｋｇ、０．０４５モル）を、表面下のラインを介してスラリーとして添加した。添加が完了したら、混合物をさらなるＭｅＴＨＦ（１．６５ｋｇ）ですすいだ。得られた混合物を８０Ｔｏｒｒ未満まで排気し、窒素を再充填した。この過程をさらに２回反復した。脱気順序が完了した後、反応混合物を少なくとも１５分間撹拌し、透明黄金色物質を観察した。別個の反応容器に、水酸化カリウム（０．３５２ｋｇ）の水（１０．００ｋｇ）溶液を調製し、使用前に少なくとも１５分間、その溶液を窒素ガスでスパージすることによって脱気した。ＫＯＨ溶液（１０．３５ｋｇ）を、真空によって反応器に移した。反応温度は、２０℃〜２９℃の公知の発熱を示した。添加が完了したら、得られた二相性混合物を、一連の圧力スイングによって脱気した。混合物を４５〜５０℃の間に温め、少なくとも２時間撹拌した。２時間経過した後、反応混合物をＨＰＬＣによって分析すると、反応が完了したことが示された。反応混合物を２３℃に冷却し、撹拌を停止した。混合物を３０分間かけて分離させ、下層の使用済みＫＯＨ流を除去した。生成物を豊富に含む有機層を、１分当たり約０．１ｋｇでチオ尿素官能化シリカゲル（０．７８２ｋｇ）（Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ）のカラムを通過させて、パラジウムを除去した。生成物を豊富に含む有機相を、５％ＮａＨＣＯ３溶液（５体積）で洗浄し、各相を分離した。有機相を水（５体積）で洗浄し、有機相と水相を分離した。
【０１５０】
生成物を豊富に含む有機相を、精製濾過（ｐｏｌｉｓｈ  ｆｉｌｔｅｒｅｄ）して透明な反応容器に入れ、次いで真空下（８０Ｔｏｒｒ、Ｔジャケット＝６０℃）で約８体積（約１６Ｌ）に濃縮した。規定の体積になったら、反応混合物を２５℃に冷却した。規定の温度になったら、反応混合物に２−（２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３，３’−ジフルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン−２−オール（０．５％、０．００８ｋｇ）をシードとして入れた（ｓｅｅｄｉｎｇ）。得られたスラリーを２５℃で約１８時間撹拌した。１８時間が経過したら、反応混合物を真空下（１５０Ｔｏｒｒ、Ｔジャケット＝６０℃）で約８Ｌに濃縮した。規定の体積になったら、反応混合物を５０℃に加熱し、酢酸イソプロピル（ＩＰＡｃ、１３．９０ｋｇ）を９０分の間に反応器に添加した。添加が完了したら、反応混合物を２５℃へ３時間冷却した。規定の温度になったら、反応混合物を室温で約１６時間撹拌した。１６時間経過したら、反応混合物を濾過し、脱液し、さらなるＩＰＡｃ（１０．４ｋｇ）で洗浄した。フィルターケーキを、乾燥窒素流の下、フィルター上で吸引によって乾燥させて、白色固体を得た。白色固体を乾燥機に移し、完全真空下において５０℃で乾燥させて、生成物２．０３ｋｇを得た（収率８１％、９９．４０ＡＰ、９８ｗｔ％）。
【０１５１】
（実施例１０）
（２−（２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３，３’−ジフルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）［（１３ＣＤ３）２］プロパン−２−オール）
【０１５２】
【化２１】
0005625050.tif 000034
（２−（１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル［（１３ＣＤ３）２］プロパン−２−オールの調製）
【０１５３】
【化２２】
0005625050.tif 000035
オーブンで乾燥させたマグネシウム（８６ｍｇ、３．５２ｍｍｏｌ）および無水ジエチルエーテル（３．２０ｍＬ）を、アルゴン下でオーブン乾燥させた２５ｍＬの１４／２０丸底フラスコに移した。［１３ＣＤ３］−ヨードメタン（４６７ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を室温で添加し、３３℃で１時間撹拌した。視覚的徴候によってグリニャール試薬が形成されることが示された（透明懸濁物が、起泡および発熱を伴う濁った混合物に変化した）。溶液を室温に冷却し、無水ジクロロメタン（２．６０ｍＬ）中１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチル（４００ｍｇ、０．８００ｍｍｏｌ）の冷却した溶液（氷／水浴）に、カニューレを介してアルゴン下で移した。グリニャール試薬を調製したフラスコを、無水エーテル（２×４００μＬ）ですすぎ、エチルエステルを含有するフラスコに、カニューレを介して移した。反応混合物をゆっくり室温に温め、１時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析によって、＜０．３％の出発材料の存在が示された。反応物を０℃に冷却し、無水ジクロロメタン（８００μＬ）で希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液（８ｍＬ）をゆっくり注意深く添加することによってクエンチした。二層を分離し、水層をジクロロメタン（３×４ｍＬ）で抽出した。混合有機抽出物を真空中で濃縮して、粗生成物４４３．５ｍｇを白色固体として得た。前述の粗生成物を、類似の反応から得た２４４．３ｍｇ（白色固体）と混合した。混合生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（Ｉｓｃｏ  ＲｅｄｉＳｅｐカートリッジ、１２ｇ）によって精製し、ヘキサン中１０〜２０％ＥｔＯＡｃで溶出した。３０ｍＬ画分を集めた。画分を、ＴＬＣ（シリカ、５０％ＥｔＯＡｃ、５０％ヘキサン、Ｒｆ＝０．４１）およびＨＰＬＣによって調べた。純粋な生成物を含有する画分を混合し、真空中で濃縮して、生成物５３１．２ｍｇを白色固体として得た（収率９０％）。１Ｈ−ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  ｐｐｍ：  ６．４７−７．５８（ｍ，  ７Ｈ），  ２．０１（ｂｒ  ｓ，  ６Ｈ）．ＨＰＬＣ：（ＹＭＣ  ＯＤＳ−ＡＱ、３μｍ、１５０×４．６ｍｍ、移動相Ａ＝Ｈ２Ｏ中０．０５％ＴＦＡ、移動相Ｂ＝ＡＣＮ中０．０５％ＴＦＡ、０分で５０％Ｂ、９分で９５％Ｂ、１５分で９５％Ｂ、１５．５分で５０％Ｂ。流速＝１ｍｌ／分）Ｔｒ＝９．２３分（２２０ｎｍにおいて、化学的純度＝９８．８％）、ＬＣＭＳ（＋イオン）ｍ／ｚ＝４８７（０％）、４９３（５９％）、４９５（１００％）、４９７（４７％）、４９８（８％）。
【０１５４】
（２−（２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３，３’−ジフルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）［（１３ＣＤ３）２］プロパン−２−オールの調製）
【０１５５】
【化２３】
0005625050.tif 000036
アルゴン下の２５ｍＬの１４／２０丸底フラスコに、２−（１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）［（１３ＣＤ３）２］プロパン−２−オール（０．２８３ｇ、０．５７２ｍｍｏｌ）、（２−フルオロ−６−（メチルスルホニル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）メタノール（０．２２７ｇ、０．６８６ｍｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン−パラジウム（ＩＩ）二塩化物ジクロロメタン複合体（０．０９４ｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．２３７ｇ、１．７１６ｍｍｏｌ）、ＤＭＥ（４．３０ｍＬ）および水（０．２１５ｍＬ）（予めアルゴンでスパージ）を添加した。混合物を、８０℃へ１時間加熱した。ＨＰＬＣおよびＬＣＭＳ分析によって、出発材料が消費されたことが示された。反応混合物を氷水浴で冷却し、ジクロロメタン（１０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）に分離した。水層をジクロロメタン（３×１０ｍＬ）で抽出した。混合有機抽出物を真空中で濃縮して、６４３．６ｍｇを暗色半固体として得た。
【０１５６】
予め２−（２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３，３’−ジフルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）［（１３ＣＤ３）２］プロパン−２−オールの調製のための類似の反応を行って、暗色固体４６２．３ｍｇを得た。両方の実験からの粗生成物を混合し、ジクロロメタンに溶解し、シリカゲル上に予め吸収させた後、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（Ｉｓｃｏ  ＲｅｄｉＳｅｐカートリッジ、８０ｇ）によって精製した。フラッシュカラムを、ヘキサン中２５〜５０％ＥｔＯＡｃで溶出した。３０ｍＬ画分を集めた。画分を、ＴＬＣ（シリカ、５０％ＥｔＯＡｃ、５０％ヘキサン、Ｒｆ＝０．０９）およびＨＰＬＣによって調べた後、純粋な生成物を含有する画分を混合し、真空中で濃縮して、２−（２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３，３’−ジフルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）［（１３ＣＤ３）２］プロパン−２−オール４６８．３ｍｇを黄色固体として得た。
【０１５７】
この材料を、６５℃のアセトン（４ｍＬ）において再結晶化することによってさらに精製し、５時間かけて２５℃にゆっくり冷却し（４０℃で結晶が生じ始めた）、次いで０℃へさらに３０分間冷却した。固体を濾過によって集め、冷却したアセトンですすぎ、真空中で乾燥させて、標題化合物６６．２ｍｇをオフホワイト色の固体として得た。
【０１５８】
この第１の再結晶化からの母液を濃縮し、先に概説の手順と同じ手順を使用して、最少量のアセトン（１ｍＬ）から残渣を再結晶化させて、第２の収集物である結晶生成物２７６．４ｍｇをオフホワイト色の固体として得た。
【０１５９】
第２の再結晶化からの母液を濃縮し、分取ＨＰＬＣ、Ｔｒ＝１５．０分（分取ＨＰＬＣ条件：Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｈｙｄｒｏ−ＲＰカラム、４μ、８０Å、２１．２×２５０ｍｍ、移動相Ａ＝Ｈ２Ｏ、移動相Ｂ＝ＡＣＮ、０分で３０％Ｂ、２５分で１００％Ｂ。流速＝１６．０ｍｌ／分。ＵＶ２２０ｎｍにおける）によって精製した。
【０１６０】
３つの精製した単離物を混合して、２−（２−（２−（２，６−ジクロロフェニル）プロパン−２−イル）−１−（３，３’−ジフルオロ−４’−（ヒドロキシメチル）−５’−（メチルスルホニル）ビフェニル−４−イル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）［（１３ＣＤ３）２］プロパン−２−オール４０１．１ｍｇを薄黄色固体として得た（収率６４％）。１Ｈ−ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６））  δ  ｐｐｍ：  ７．８６−７．９６（ｍ，  ２Ｈ），  ７．６２  （ｄｄ，  Ｊ＝１１．３３  Ｈｚ，  ２．０１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３３（ｄｄ，  Ｊ＝８．３１  Ｈｚ，  １．７６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．０９−７．１９（ｍ，  ３Ｈ），  ６．９９−７．０９（ｍ，  １Ｈ），  ６．８１（ｓ，  １Ｈ），  ５．５３−５．６２（ｍ，  １Ｈ），  ４．８９−４．９９（ｍ，  ２Ｈ），  ４．６７（ｔ，  Ｊ＝３．１５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．４５  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．０８  （残存アセトン、８  ｍｏｌ％），  １．９５（ｓ，  ６Ｈ）．  １３Ｃ−ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  Ｄ６−ＤＭＳＯ）  ２９．６１（ｔ，  Ｊ＝１０９．８８  Ｈｚ）。
【０１６１】
ＨＰＬＣ：（ＹＭＣ  ＯＤＳ−ＡＱ、３μｍ、１５０×４．６ｍｍ、移動相Ａ＝Ｈ２Ｏ中０．０５％ＴＦＡ、移動相Ｂ＝ＡＣＮ中０．０５％ＴＦＡ、０分で５０％Ｂ、９分で９５％Ｂ、１５分で９５％Ｂ、１５．５分で５０％Ｂ。流速＝１ｍｌ／分）、Ｔｒ＝９．６６分（２２０ｎｍにおいて、化学的純度＝９９．８％）。ＬＣＭＳ（＋イオン）ｍ／ｚ＝６０９（０％）、６１７（１００％）、６１８（３１％）、６１９（７４％）、６２０（２２％）、６２１（１６％）、６２２（４．３％）、６２３（１．３％）。
【０１６２】
（実施例１１〜２０）
以下の化合物を、２−（フェニル）−２−メチルプロパンニトリルの代わりに様々なフェニルアセトニトリル試薬を出発材料として代用して、実施例１に記載のものと同様にして生成した。
【０１６３】
【数６−１】
0005625050.tif 000037
【０１６４】
【数６−２】
0005625050.tif 000038
【０１６５】
【数６−３】
0005625050.tif 000039
（実施例２１）
（化合物２１の実施例）
【０１６６】
【化２４】
0005625050.tif 000040
１Ｌのフラスコに、２，６−ジクロロフェニルアセトニトリル２５．０ｇ（１３４ｍｍｏｌ）および無水ＴＨＦ２５０ｍＬを秤量して入れた。得られた溶液を−７０℃に冷却し、ＴＨＦ中１．０Ｍのカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１．０Ｍ）１３４ｍＬを添加した後、ヨードメタン（１．０当量）８．４ｍＬを添加した。反応物を−７０℃で１時間撹拌し、次いで室温へ３時間温めた。反応物を真空中で濃縮してＴＨＦを除去し、次いで分離漏斗に入れて酢酸エチルおよび１ＭのＨＣｌで洗浄した。酢酸エチルを分離し、亜硫酸水素塩、ブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空中で濃縮した。残渣を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ、３００ｇのＳｉＯ２、１時間にわたり勾配溶出１００％ヘキサン〜１０％酢酸エチル）によって精製した。適切な画分を混合し、真空中で濃縮して、ＧＣにより約９９％の純度で、所望の生成物を無色油として得た。収量１２．２ｇ（４５％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）  δ  ７．３６（ｄ，  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．２２（ｔ，  Ｊ  ＝  ８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．８４（ｑ，  Ｊ  ＝  ７  Ｈｚ，  １Ｈ），  １．０７（ｄ，  Ｊ  ＝  ７  Ｈｚ，  ３Ｈ）。
【０１６７】
化合物２１を、適切なアニリンおよび２−（フェニル）プロパンニトリルを出発材料として使用して、実施例１に記載のものと同様にして生成した。
【０１６８】
【数７】
0005625050.tif 000041
化合物１１は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．１０  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．２，  １Ｈ），  ７．５９  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ９．９，  １．８，  １Ｈ），  ７．４７  −  ７．３７  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．２４  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．３，  ３．２，  ２Ｈ），  ７．１３  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．３，  ２．１，  １Ｈ），  ７．０５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４，  １Ｈ），  ６．８９  （ｓ，  １Ｈ），  ５．１０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ４．４，  ２Ｈ），  ４．０９  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．３０  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．２５  （ｄ，  Ｊ  ＝  １７．４，  １Ｈ），  ２．８６  （ｓ，  １Ｈ），  １．６３  （ｓ，  ６Ｈ）。
【０１６９】
化合物１２は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ）  δ  ８．０６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．７，  ２Ｈ），  ７．９９  −  ７．８６  （ｍ，  １Ｈ），  ７．７０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．３，  １Ｈ），  ７．５８  （ｍ，    ３Ｈ），  ７．４０  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．６，  １Ｈ），  ７．２１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．７，  １Ｈ），  ７．１３  （ｓ，  １Ｈ），  ５．５７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．３，  １Ｈ），  ４．９５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ４．７，  ２Ｈ），  ４．８１  （ｓ，  １Ｈ），  ４．１３  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．４５  （ｓ，  ３Ｈ），  １．４６  （ｓ，  ６Ｈ）。
【０１７０】
化合物１３は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．１０  （ｓ，  １Ｈ），  ７．７１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．０，  １Ｈ），  ７．６０  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ９．９，  １．８，  １Ｈ），  ７．４９  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．２，  ２．１，  １Ｈ），  ７．２２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．２，  １Ｈ），  ７．１２  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．６，  ６．１，  １Ｈ），  ６．９６  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．５，  ２．６，  １Ｈ），  ６．８９  −  ６．７８  （ｍ，  ２Ｈ），  ５．１０  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．０５  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．３１  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．００  （ｓ，  １Ｈ），  ２．７７  （ｓ，  １Ｈ），  １．６３  （２，  Ｊ  ＝  ５．５，  ６Ｈ）。
【０１７１】
化合物１４は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ）  δ  ７．８５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ４．５，  ２Ｈ），  ７．７０  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １１．４，  １．８，  １Ｈ），  ７．５０  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．３，  １．７，  １Ｈ），  ７．３５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．２，  １Ｈ），  ７．０９  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．８，  ２．６，  １Ｈ），  ７．０３  −  ６．８０  （ｍ，  ３Ｈ），  ５．３５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．３，  １Ｈ），  ４．７３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ４．１，  ２Ｈ），  ４．５６  （ｓ，  １Ｈ），  ３．８０  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．３８  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．４，  １Ｈ），  ３．２３  （ｓ，  ３Ｈ），  １．２１  （ｓ，  ６Ｈ）。
【０１７２】
化合物１５は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．１１  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．２，  １Ｈ），  ７．７２  −  ７．５３  （ｍ，  ３Ｈ），  ７．２８  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １８．０，  ４．９，  ５Ｈ），  ７．１５  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８．３，  ２．１，  １Ｈ），  ７．０５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４，  １Ｈ），  ６．９６  （ｓ，  １Ｈ），  ５．０９  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．１２  （ｓ，  ２Ｈ），    ３．３０（ｓ，  ３Ｈ），  ３．２８  （ｓ，  １Ｈ），  ２．９３  （ｓ，  １Ｈ），  １．６４  （ｓ，  ６Ｈ）。
【０１７３】
化合物１６は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．０９  （ｓ，  １Ｈ），  ７．６０  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ９．９，  １．８，  １Ｈ），  ７．３９  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．２３  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８，  １Ｈ），  ７．１８  −  ７．０６  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．００  （ｍ，  １Ｈ），  ６．８９  −  ６．８１  （ｍ，  ２Ｈ），  ５．１０  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．０，  １．６，  ２Ｈ），  ４．０６  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．３０  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．９２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０，  １Ｈ），  ２．７０  （ｓ，  １Ｈ），  １．６４  （ｓ，  ６Ｈ）。
【０１７４】
化合物１７は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．１０  （ｓ，  １Ｈ），  ７．６４  −  ７．５５  （ｍ，  ３Ｈ），  ７．２５  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．１６  −  ７．００  （ｍ，  ３Ｈ），  ６．９２  （ｓ，  １Ｈ），  ６．８１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．５，  １Ｈ），  ５．０８  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．１，  １．７，  ２Ｈ），  ４．０２  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．２８  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．９０  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．１，  １Ｈ），  ２．７６  （ｓ，  １Ｈ），  ２．１６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．６，  ３Ｈ），  １．６４  （ｓ，  ６Ｈ）。
【０１７５】
化合物１８は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．１２  （ｓ，  １Ｈ），  ７．７０  −  ７．５９  （ｍ，  ３Ｈ），  ７．４５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４，  ２Ｈ），  ７．２４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．０，  ２Ｈ），  ７．１６  −  ７．０７  （ｍ，  １Ｈ），  ６．８５  （ｓ，  １Ｈ），  ５．１０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ５．６，  ２Ｈ），  ４．３１  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．３０  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．０７  （ｓ，  １Ｈ），  ２．９４  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．０，  １Ｈ），  １．５５  （ｓ，  ６Ｈ）。
【０１７６】
化合物１９は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．１１  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．１，  １Ｈ），  ７．６２  （ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  １２．０，  ８．４，  １．８，  ３Ｈ），  ７．２８−７．２６  （ｍ，    ３Ｈ），  ６．９７  （ｓ，  １Ｈ），  ６．９３  −  ６．７６  （ｍ，  ２Ｈ），  ５．０９  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．１４  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．２９  （ｂｒ  ｓ，  ４Ｈ），  ２．９１  （ｓ，  １Ｈ），  １．６５  （ｓ，  ６Ｈ）。
【０１７７】
化合物２０は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ８．０８  （ｄ，  Ｊ  ＝  １．１，  １Ｈ），  ７．５７  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ９．９，  １．８，  １Ｈ），  ７．３８  （ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  １０．３，  ９．２，  ２．０，  ２Ｈ），  ７．２３  −  ７．１７  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．１８  −  ７．０１  （ｍ，  ３Ｈ），  ６．８９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ０．７，  １Ｈ），  ５．０９  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．１４  （ｓ，  ２Ｈ），  ３．３７  （ｓ，  １Ｈ），  ３．３０  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．９２  （ｓ，  １Ｈ），  １．６４  （ｓ，  ６Ｈ）。
【０１７８】
化合物２１は、以下のＮＭＲの特徴を有する。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．９７  （ｓ，  １Ｈ），  ７．４７  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ９．８，  １．６，  １Ｈ），  ７．１８  （ｄ，  Ｊ  ＝  １０．６，  １Ｈ），  ７．１２  −  ７．０４  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．９６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．９，  ２Ｈ），  ６．９０  −  ６．８１  （ｍ，  １Ｈ），  ６．７９  （ｓ，  １Ｈ），  ５．１３  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．９４  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．０，  １Ｈ），  ３．８２  （ｓ，  １Ｈ），  ３．３９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２４．５，  １Ｈ），  ３．３６  （ｓ，  ３Ｈ），  １．８１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．１，  ３Ｈ），  １．６３  （ｓ，  ６Ｈ）。
【０１７９】
ＬＸＲ（ＬＸＲαおよびＬＸＲβ）の活性を調節する生物学的活性を有する化合物を同定するために化合物を試験する上で、標準の生理的、薬理学的および生化学的手順を利用することができる。かかるアッセイには、例えば、結合アッセイ、蛍光偏光アッセイ、ＦＲＥＴベースのコアクチベーターリクルートメントアッセイなどの生化学アッセイ（一般に、Ｇｌｉｃｋｍａｎら、Ｊ．  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ（２００２年）、７巻、Ｎｏ．１、３〜１０頁参照）、ならびに共トランスフェクションアッセイ、ＬＢＤ−Ｇａｌ４キメラの使用およびタンパク質−タンパク質相互反応アッセイを含む細胞ベースのアッセイ（Ｌｅｈｍａｎｎ．ら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．（１９９７年）、２７２巻、Ｎｏ．６、３１３７〜３１４０頁参照）が含まれる。
【０１８０】
本発明の化合物は、ＰＣＴ公開ＷＯ２００７／００２５６３号に開示のものなどの、当技術分野で過去に開示されている化合物を上回る予想外の利点を示す。本化合物は、以下に記載のものなどのアッセイ（複数可）において、ヒト全血における高い効力および低いＬＸＲα効率を伴う望ましい部分ＬＸＲアゴニストの特徴を有することが示されている。さらに、本発明の化合物はまた、ヒト肝臓ミクロソームアッセイにおいて代謝安定性を示す。かかる化合物は、本明細書に論じられている１つまたは複数の疾患または障害の処置、阻害または改善においてより有用となるはずである。
【０１８１】
（実施例Ａ）
（シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ））
ＳＰＡアッセイによって、ＬＸＲα−ＲＸＲαまたはＬＸＲβ−ＲＸＲαヘテロ二量体への３Ｈ−２４，２５−エポキシコレステロールの結合によって生じた放射性シグナルを測定する。このアッセイの基礎は、シンチラントを含有するＳＰＡビーズを使用することによって、受容体との結合により標識化リガンドがビーズに近接すると、標識からのエネルギーがシンチラントを刺激して発光するというものである。この光は、標準マイクロプレートシンチレーションリーダーを使用して測定される。リガンドが受容体に結合する能力は、化合物が、その受容体について公知の親和性を有する放射標識化リガンドと競合し得る度合いを評価することによって測定することができる。
（必要な材料）
１．標識：３Ｈ−２４，２５−エポキシ−コレステロール（ＮＥＮ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ／Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｅｍｅｒ））
２．ＬＸＲα溶解物：粗溶解物として生成された、共に６−ＨＩＳタグを伴うバキュロウイルスで発現したＬＸＲα／ＲＸＲヘテロ二量体
３．ＬＸＲβ溶解物：粗溶解物として生成された、共に６−ＨＩＳタグを伴うバキュロウイルスで発現したＬＸＲβ／ＲＸＲヘテロ二量体
４．  ＳＰＡビーズ：Ｙｓｉ銅Ｈｉｓ−タグＳＰＡビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）
５．プレート：非結合表面３８４−ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）
６．タンパク質溶解物希釈緩衝液：（２０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．９、５００ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのイミダゾール）
７．２×ＳＰＡ緩衝液：（４０ｍＭのＫ２ＨＰＯ４／ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．３、１００ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、２０％グリセロール、４ｍＭのＥＤＴＡ）
８．２×ＳＰＡ緩衝液ｗ／ｏＥＤＴＡ：（４０ｍＭのＫ２ＨＰＯ４／ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．３、１００ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、２０％グリセロール）。
【０１８２】
（ストック溶液）
０．５ＭのＫ２ＨＰＯ４／ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．３
０．５ＭのＥＤＴＡ、ｐＨ８．０
５ＭのＮａＣｌ
１０％Ｔｗｅｅｎ−２０
グリセロール。
【０１８３】
（タンパク質溶解物の調製）
ヒトＲＸＲα（アクセッション番号ＮＭ＿００２９５７）、ＬＸＲα（アクセッション番号Ｕ２２６６２）およびＬＸＲβ（アクセッション番号Ｕ０７１３２）についてのバキュロウイルス発現プラスミドを、標準の手順に従って適切な全長ｃＤＮＡをｐＢａｃＰａｋｈｉｓ２ベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、ＣＡ）にクローニングすることによって生成した。ｐＢＡｃＰａｋｈｉｓ２ベクターポリリンカー内への該ｃＤＮＡの挿入によって、ｐＢａｃＰａｋｈｉｓ１に存在するＮ末端ポリＨｉｓタグに対するｃＤＮＡのインフレーム融合物を作成した。正確なクローニングを、制限酵素マッピングおよび／または配列決定によって確認した。
【０１８４】
１Ｌサイズのスピナーフラスコ１個当たり総体積５００ｍＬ中で、健康なＳｆ９昆虫細胞を２７℃において約１．２５×１０６／ｍｌの密度で感染させ、標準条件下で培養することによって細胞溶解物を調製した。ＬＸＲα溶解物を調製するために、昆虫細胞に、ＬＸＲα発現カセットをＭ．Ｏ．Ｉ．２．０で、ＲＸＲ発現カセットをＭ．Ｏ．Ｉ．約１．０で共トランスフェクトした。ＬＸＲβ溶解物を調製するために、昆虫細胞に、ＬＸＲβ発現カセットをＭ．Ｏ．Ｉ．約２．０で、ＲＸＲ発現カセットをＭ．Ｏ．Ｉ．約１．０で共トランスフェクトした。どちらの場合も、細胞を絶えず振とうしながら２７℃で４８時間インキュベートし、その後収集した。
【０１８５】
インキュベーション後、細胞を遠心分離によって収集し、ペレット化した。細胞ペレットを、新たに調製した２体積の氷冷抽出緩衝液（２０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、１０ｍＭのイミダゾール、４００ｍＭのＮａＣｌ、抽出緩衝液１０ｍｌ当たりＥＤＴＡフリープロテアーゼインヒビター錠剤（Ｒｏｃｈｅカタログ番号１８３６１７０）１個を含有）に再懸濁した。
【０１８６】
細胞を、Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザーを使用して氷上でゆっくりホモジナイズして、８０〜９０％の細胞溶解を達成した。そのホモジネートを、予冷したローター（Ｔｉ５０もしくはＴｉ７０、または同等物）中、４５，０００ｒｐｍにおいて４℃で３０分間、遠心分離にかけた。上清の一定分量をドライアイス上で凍結させ、定量化および品質管理まで−８０℃で凍結保存した。溶解物の一定分量をＳＰＡアッセイで試験して、ロット間の一貫性を確実にし、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して精製した後、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を介して、タンパク質の濃度および発現レベルについて調整し、その後スクリーニングアッセイにおいて使用した。
【０１８７】
（スクリーニング試薬の調製）
［３Ｈ］２４，２５−エポキシコレステロール（ＥＣ）溶液：単一の３８４ウェルプレート（または４００ウェル）について、［３Ｈ］ＥＣ（比活性７６．５Ｃｉ／ｍｍｏｌ、濃度３．２ｍＣｉ／ｍＬ）２１μＬを、２×ＳＰＡ緩衝液４．４ｍＬに添加して、最終濃度２００ｎＭにした。さらなる３８４ウェルプレートごとに、さらなる［３Ｈ］ＥＣ１９．１μＬを、さらなる２×ＳＰＡ緩衝液４．０ｍＬに添加した。ウェル中の［３Ｈ］ＥＣの最終濃度は５０ｎＭであった。
【０１８８】
ＬＸＲα溶解物（先の通り調製した）を、タンパク質溶解物希釈緩衝液で希釈した。３８４ウェルプレート（または２００ウェル）１個当たり、希釈したＬＸＲα溶解物１４００μＬを調製し、希釈したＬＸＲα溶解物１１２０μＬを、さらなる３８４ウェルプレートごとに調製した。
【０１８９】
ＬＸＲβ溶解物（先の通り調製した）を、タンパク質溶解物希釈緩衝液で希釈した。３８４ウェルプレート（または２００ウェル）１個当たり、希釈したＬＸＲβ溶解物１４００μＬを調製し、希釈したＬＸＲβ溶解物１１２０μＬを、さらなる３８４ウェルプレートごとに調製した。
【０１９０】
ＳＰＡビーズ溶液：３８４ウェルプレート（または４００ウェル）について、２×ＳＰＡ緩衝液ｗ／ｏＥＤＴＡ３．７５ｍＬ、Ｈ２Ｏ２．２５ｍＬおよびＹｓｉ  ＨｉｓタグＳＰＡビーズ１．５ｍＬ（使用前に十分にボルテックスした）を、一緒に混合した。さらなる３８４ウェルプレートごとに、さらなる２×ＳＰＡ緩衝液ｗ／ｏＥＤＴＡ３．５ｍＬ、Ｈ２Ｏ２．１ｍＬおよびＹｓｉ  ＨｉｓタグＳＰＡビーズ１．４ｍＬを、一緒に混合した。
【０１９１】
（手順）
各化合物の適切な希釈物を９６ウェルプレート内で調製し、３８４ウェルプレートの適切なウェル中にウェル１個当たり３．５μｌをピペットで入れた。
【０１９２】
［３Ｈ］ＥＣ９．１μＬを、該マルチウェルプレートの行２〜２３の各ウェルに添加した。
【０１９３】
希釈したＬＸＲα溶解物５μｌを、該マルチウェルプレートの行２〜２３の奇数列の各ウェルに添加した。
【０１９４】
希釈したＬＸＲβ溶解物５μＬを、該マルチウェルプレートの行２〜２３の偶数列の各ウェルに添加した。
【０１９５】
ＳＰＡビーズ溶液１７．５μＬを、該マルチウェルプレートの行２〜２３の各ウェルに添加した。
【０１９６】
該プレートを透明なシーラーでカバーし、インキュベーター内に環境温度で約３０分間置いた。
【０１９７】
インキュベーション後、プレートを、プログラムｎＡＢＡＳＥ３Ｈ＿３８４ＤＰＭを使用する発光プレートリーダー（ＭｉｃｒｏＢｅｔａ、Ｗａｌｌａｃ）を使用して分析した。ｎＡＢＡＳＥ３Ｈ＿３８４ＤＰＭについての設定は、以下の通りであった。
【０１９８】
計数モード：ＤＰＭ
試料の種類：ＳＰＡ
ＰａｒａＬｕｘモード：低バックグラウンド
計数時間：３０秒
ＬＸＲαおよびＬＸＲβについてのアッセイを同じ様式で実施した。決定したＫｉは、少なくとも２つの独立な用量応答実験の平均を表す。化合物ごとの結合親和性を、一部位競合（ｏｎｅ  ｓｉｔｅ  ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ）式を使用する非線形回帰分析によって決定して、ＩＣ５０を決定することができる。
Ｙ＝下限値（ｂｏｔｔｏｍ）＋（上限値（ｔｏｐ）−下限値）／（１＋１０Ｘ−ｌｏｇＩＣ５０）
次いでＫｉを、以下のチェンおよびプルソフ式を使用して算出する。
Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［リガンド濃度］／リガンドのＫｄ）
このアッセイでは、一般に、リガンド濃度＝５０ｎＭであり、受容体に対するＥＣのＫｄは、飽和結合により決定すると２００ｎＭになる。
【０１９９】
本発明の化合物は、このアッセイで試験した場合、ＬＸＲαおよび／またはＬＸＲβとの結合能を示した。
【０２００】
（実施例Ｂ）
（共トランスフェクションアッセイ）
細胞ベースのアッセイにおいて、化合物がＬＸＲの転写活性を活性化または阻害する能力を測定するために、共トランスフェクションアッセイを使用した。ＬＸＲは、ＲＸＲとのヘテロ二量体として機能することが示されている。共トランスフェクションアッセイのために、ＬＸＲαおよびＬＸＲβの発現プラスミドを、ＬＸＲ−ＲＸＲヘテロ二量体により結合される１コピーのＤＮＡ配列を含有するルシフェラーゼレポータープラスミド（ＬＸＲＥ；Ｗｉｌｌｙ，  Ｐ．ら、１９９５年）と共に、一過性トランスフェクションによって哺乳動物細胞中に別個に導入する。ＬＸＲは、内因性ＲＸＲと共にヘテロ二量体化する。トランスフェクトした細胞をＬＸＲアゴニストで処理すると、ＬＸＲの転写活性が増加し、これはルシフェラーゼ活性の増加によって測定される。同様に、ＬＸＲアンタゴニストの活性は、化合物がＬＸＲアゴニストの活性を競合的に阻害する能力を決定することによって測定することができる。
【０２０１】
（必要な材料）
ＣＶ−１アフリカミドリザル腎臓細胞
全長ＬＸＲα（ｐＣＭＸ−ｈＬＸＲαまたはＬＸＲβ（ｐＣＭＸ−ｈＬＸＲβ）を含む共トランスフェクション発現プラスミド、レポータープラスミド（ＬＸＲＥｘ１−Ｔｋ−ルシフェラーゼ）、および対照（ｐＣＭＸ−ガラクトシダーゼ発現ベクター）（Ｗｉｌｌｅｙら、Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ９巻：１０３３〜１０４５頁（１９９５年））
ＦｕＧＥＮＥ６（Ｒｏｃｈｅ）などのトランスフェクション試薬
１×細胞溶解緩衝液：
２２．４ｍＭのトリシン、ｐＨ８．０
０．５６ｍＭのＥＧＴＡ、ｐＨ８．０
５．６ｍＭのＭｇＳＯ４
０．６％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００
５．６％グリセロール。
【０２０２】
１０×ルシフェラーゼ基質溶液：
１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ６．５
２．７５ｍＭのＤ−ルシフェリン
０．７５ｍＭの補酵素Ａ
３．７ｍＭのＡＴＰ
９６ｍＭのＤＴＴ。
【０２０３】
（スクリーニング試薬の調製）
ＣＶ−１細胞を、トランスフェクション当日に７０％〜８０％の集密度を達成するために、Ｔ−１７５フラスコまたは５００ｃｍ２ディッシュ内に入れることによって、実験の２４時間前に調製した。トランスフェクトする細胞の数を、スクリーニングするプレートの数によって決定した。３８４ウェルプレートの各ウェルには、約８，０００個の細胞が必要である。ＤＮＡトランスフェクション試薬を、該試薬に提供された指示に従って、必要なプラスミドＤＮＡをカチオン性脂質トランスフェクション試薬ＦｕＧＥＮＥ６（Ｒｏｃｈｅ）と混合することによって調製した。最適なＤＮＡ量を、トランスフェクトする細胞株および容器のサイズによって経験的に決定した。Ｔ１７５ｃｍ２のフラスコごとに、合計２０μｇのＤＮＡ、６０μｌのＦｕｇｅｎｅ  ６および１ｍｌのＯｐｔｉｍｅｍを混合し添加した。次いで、細胞を３７℃で少なくとも５時間インキュベートして、スクリーニング細胞を調製した。
【０２０４】
ルシフェラーゼアッセイ試薬を、使用前に、
１０×ルシフェラーゼ基質溶液１部、
１×細胞溶解緩衝液９部
を混合することによって調製した。
【０２０５】
（手順）
アッセイプレートを、３８４ウェルプレートのウェル１個当たり化合物５μＬを分注して、１０μＭの最終化合物濃度および０．５％以下のＤＭＳＯを達成することによって調製した。培地をスクリーニング細胞から除去し、その細胞をトリプシン処理し、遠心分離により収集した細胞を計数し、体積約４５μＬで、先の通り調製した３８４ウェルアッセイプレート内のウェル１個当たり細胞約８０００個の密度でプレートに入れた。化合物およびスクリーニング細胞の両方（総体積５０μＬ）を含有するアッセイプレートを、３７℃で２０時間インキュベートした。
【０２０６】
化合物と共にインキュベーションした後、培地を細胞から除去し、ルシフェラーゼアッセイ試薬（３０μＬ／ウェル）を添加した。環境温度で約２分経過した後、アッセイプレートを、ルミノメーター（インジェクター搭載型ＰＥ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｎｏｒｔｈｓｔａｒリーダー、または同等物）で読み取った。
【０２０７】
ＬＸＲ／ＬＸＲＥ共トランスフェクションアッセイを使用して、効力についてはＥＣ５０／ＩＣ５０値を確立し、効率については活性百分率または阻害百分率を確立することができる。効率は、高対照（（Ｎ−（３−（（４−フルオロフェニル）−（ナフタレン−２−スルホニル）アミノ）プロピル）−２，２−ジメチルプロピオンアミド））または低対照（ＤＭＳＯ／ビヒクル）に対する化合物の活性を定義するものである。用量応答曲線は、濃度が１／２ＬＯＧ単位で異なる１０点曲線から作成する。各点は、３８４ウェルプレートからのデータの４つのウェルの平均を表す。
【０２０８】
このアッセイからのデータを次式にフィットさせ、それからＥＣ５０値を明らかにすることができる。
Ｙ＝下限値＋（上限値−下限値）／（１＋１０（（ｌｏｇＥＣ５０−Ｘ）＊傾き））
したがってＥＣ５０／ＩＣ５０は、アゴニストまたはアンタゴニストが、上限値（最大）と下限値（ベースライン）との中間である応答を誘発する濃度と定義される。表されるＥＣ５０／ＩＣ５０値は、少なくとも２つ、普通は３つの独立な実験の平均である。アゴニストについての相対的効率または対照％の決定は、各用量応答実験において個別に測定される（（（Ｎ−（３−（（４−フルオロフェニル）−（ナフタレン−２−スルホニル）−アミノ）プロピル）−２，２−ジメチルプロピオンアミド）によって達成される最大応答との比較によって行われる。
【０２０９】
アンタゴニストアッセイのために、ＬＸＲアゴニストを、３８４ウェルプレートの各ウェルに添加して、応答を誘発することができる。したがって、アンタゴニストごとの阻害％は、アゴニスト活性の阻害の測定値である。この実施例では、阻害が１００％であれば、特定濃度のＬＸＲアゴニストの活性が、ＤＭＳＯのみの存在下におけるアッセイの活性と定義されるベースラインレベルまで低減されたことを示す。
【０２１０】
本発明の化合物を、直前に記載のＬＸＲαアッセイで試験し、対照化合物の２５％以下の効率を有することが示された。
【０２１１】
本発明の化合物を、直前に記載のＬＸＲβアッセイで試験し、対照化合物の３０％以上の効率を有することが示された。
【０２１２】
（実施例Ｃ）
（ヒト全血アッセイ）
ヒト全血を、ＥＤＴＡを含有する試験管に採取し、一定分量０．５ｍＬを、９６ウェルブロック内で、０．５％ＤＭＳＯ中適切な連続希釈の試験化合物とすぐに混合した。化合物を、一定の揺動により３７℃において４時間、血液と共にインキュベートした。インキュベーション後、細胞をＡＢＩ核酸精製溶解溶液（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号４３０５８９５）で溶解し、−８０℃で凍結させた。細胞溶解後、すべてのＲＮＡを、ＡＢＩ６１００ＲＮＡプレップステーションを使用して、製造者によって提供されたプロトコルに従って精製した。ｃＤＮＡを合成し、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７９００ＨＴ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ＳｙｓｔｅｍでＳＹＢＲ−Ｇｒｅｅｎ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ＰＣＲ（Ｑ−ＰＣＲ）を使用し、Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｃの試薬（Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅカタログ番号９５０４７および９５０５５）を使用して、ｍＲＮＡを定量化した。
【０２１３】
【表２−１】
0005625050.tif 000042
各ｍＲＮＡの量を、ΔΔＣＴ法（Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｗ．  Ｐｆａｆｆｌ．  Ａ  ｎｅｗ  ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＲＴ−ＰＣＲ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００１年、２９巻、Ｎｏ．９ｅ４５）によって決定し、２つの対照ｍＲＮＡ、すなわちリボソームタンパク質Ｌ−３０（Ｌ−３０）およびβ−２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の量に対して正規化した。試験化合物によるＡＢＣＡ１およびＡＢＣＧ１の誘導を、参照化合物である２−（４−（５−（５−シアノ−１−（２，４−ジフルオロベンジル）−６−オキソ−４−（トリフルオロメチル）−１，６−ジヒドロピリジン−２−イル）チオフェン−２−イル）−３−メチルフェニル）酢酸の百分率としてグラフ化し、効力（ＥＣ５０）および活性（％ＭＡＸ）を、ＸＬＦｉｔソフトウェアを使用して等式ｙ＝Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ）））に従って、対数変換した化合物濃度の関数としてシグモイド型応答曲線にフィットすることによって算出した。完全ＬＸＲαおよびＬＸＲβパンアゴニストである２−（４−（５−（５−シアノ−１−（２，４−ジフルオロベンジル）−６−オキソ−４−（トリフルオロメチル）−１，６−ジヒドロピリジン−２−イル）チオフェン−２−イル）−３−メチルフェニル）酢酸（ＥＣ５０１〜２μＭ）を参照化合物として使用し、その最大活性を１００％と定義した。
【０２１４】
本発明の化合物を、直前に記載のアッセイで試験し、一般に１，０００ｎＭ未満、好ましくは１００ｎＭ未満、より好ましくは２０ｎＭ未満の効力を有することが示された。
【０２１５】
（実施例Ｄ）
（ヒトミクロソームにおけるハイスループット（ＨＴ）代謝安定性）
代謝安定性アッセイは、ヒト肝臓ミクロソームを使用して１０分間インキュベーションした後、インビトロでのＣＹＰ媒介性代謝安定性を評価する。
【０２１６】
試験化合物を、１００パーセントＤＭＳＯ中３．５ｍＭのストック溶液として受け取る。化合物を希釈して、１．４％ＤＭＳＯを含有する５０μＭアセトニトリル（ＡＣＮ）溶液を作成し、次いでそれを、ヒト肝臓ミクロソームを用いるインキュベーションのために、１００×ストック溶液として使用する。各化合物を二連で試験する。化合物、ＮＡＤＰＨおよび肝臓ミクロソームの溶液を、インキュベーションのために以下の３つのステップで混合する。
１）肝臓ミクロソーム懸濁物１５２μｌ、１００ｍＭのＮａＰｉ、ｐＨ７．４、５ｍＭのＭｇＣｌ２緩衝液中タンパク質濃度１．１ｍｇ／ｍｌを、３７℃で予め温める。
２）５０μＭの化合物（９８．６％ＡＣＮ、１．４％ＤＭＳＯ）１．７μｌを、同じ試験管に添加し、３７℃で５分間、予めインキュベートする。
３）１００ｍＭのＮａＰｉ、ｐＨ７．４中、予め温めた１０ｍＭのＮＡＤＰＨ溶液１７μｌを添加することによって、反応を開始する。
【０２１７】
反応成分を十分に混合し、７５μｌをクエンチ／停止溶液１５０μｌにすぐに移す（０時点、Ｔ０）。反応物を３７℃で１０分間インキュベートし、次いでさらなる一定分量７５μｌをクエンチ溶液１５０μｌに移す。１００μＭのＤＭＮを含有するアセトニトリル（注入品質管理のためのＵＶ標準）をクエンチ溶液として使用して、代謝反応を停止させる。
【０２１８】
クエンチした混合物を、Ａｌｌｅｇｒａ  Ｘ−１２遠心分離機、ＳＸ４７５０ローター（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｉｎｃ．、カリフォルニア州フラートン）により、１５００ｒｐｍ（約５００×ｇ）で１５分間遠心分離にかけて、変性ミクロソームをペレット化する。次いで、親化合物およびその代謝産物の混合物を含有する体積９０μｌの上清抽出物を、ＵＶ−ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ分析のために別個の９６ウェルプレートに移して、混合物中に残っている親化合物の百分率を決定する。
【０２１９】
（ＵＶ−ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ試料分析−構造的完全性の事前分析）
代謝安定性、構造的完全性の事前分析を使用して、アッセイする化合物の純度を評価する。化合物を、３．５ｍＭのＤＭＳＯ溶液５７μｌとして９６ウェルプレートに入れる。３．５ｍＭの化合物のＤＭＳＯストック溶液を、等体積のアセトニトリル、イソプロパノールおよびＭｉｌｌｉＱ−Ｈ２Ｏを含有する溶液で１８倍希釈する。得られた溶液（２００μＭ）を、Ｔｈｅｒｍｏ  ＬＣＱ  Ｄｅｃａ  ＸＰ  Ｐｌｕｓイオントラップ質量分析計のＬＣ−ＵＶ／ＭＳによって、Ｗａｔｅｒｓ  Ｓｅｎｔｒｙ  ２．１ｍｍのガードカラムを備えたＷａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８、５μｍ、２×５０ｍｍカラムおよび以下の表に記載のＬＣ条件を使用して、注入５μｌおよび流速１ｍｌ／分により構造的完全性について分析する。得られたデータは、２２０ｎｍのＵＶ吸収による純度を反映している。純度が５０％を超える化合物についての結果だけを報告する。
【０２２０】
【表３】
0005625050.tif 000043
＊構造的完全性の事前分析のための移動相：（Ａ）９８％水、２％アセトニトリルと１０ｍＭの酢酸アンモニウム；（Ｂ）１０％水、９０％アセトニトリルと１０ｍＭの酢酸アンモニウム。
【０２２１】
（試料分析−インキュベートした試料）
ＭＳ／ＭＳ条件の最適化を、加熱エレクトロスプレー（Ｈ−ＥＳＩ）源を備えたＴｈｅｒｍｏ  ＴＳＱ  Ｑｕａｎｔｕｍ三連四重極質量分析計で自動注入によって実施して、ＳＲＭ遷移およびそれらの対応する衝突エネルギー値を得る。１：１のメタノール：水中２０μＭの濃度の化合物溶液を、流速９０μＬ／分で注入し、次いで流速５０μＬ／分で移動相と混合した後、上記供給源に導入する。すべての化合物を、まず移動相ＡおよびＢ（５０％Ａおよび５０％Ｂ）を使用して最適化し、必要に応じて移動相ＣおよびＤ（やはり５０：５０組成物を用いる）を使用する。極性、ＳＲＭ遷移および衝突エネルギーを含む最適化したパラメーターを、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ａｃｃｅｓｓデータベースに保存する。
【０２２２】
自動注入から得られる質量分析条件を使用して、代謝安定性アッセイからのインキュベーション試料を分析する。注入体積は５μｌであり、流速は０．８ｍｌ／分である。使用する勾配を、以下の表に示す。すべての試料を、まず移動相ＡおよびＢを使用する勾配により注入する。必要に応じて（例えば、クロマトグラフィーによる理由のため）、試料を、移動相ＣおよびＤを使用する同じ勾配により再注入する。すべてのＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析パラメーターを、生データファイルに電子的に取り込む。
【０２２３】
【表４】
0005625050.tif 000044
＊反応試料分析のための移動相：（Ａ）９８％水、２％アセトニトリルと０．１％ギ酸；（Ｂ）２％水、９８％アセトニトリルと０．１％ギ酸；（Ｃ）水中０．１％水酸化アンモニウム；（Ｄ）アセトニトリル中０．１％水酸化アンモニウム。
【０２２４】
Ｘｃａｌｉｂｕｒ（商標）ソフトウェアを用いてピーク積分を実施する。残りの百分率の算出は、化合物ごとにＴ１０分の試料のＬＣ−ＭＳ／ＭＳピーク面積をＴ０分の試料のＬＣ−ＭＳ／ＭＳピーク面積と比較することによって実施する。
【０２２５】
本発明の化合物を、直前に記載のアッセイで試験し、１０分において８０％を超える残りの親化合物を有することが示された。
【０２２６】
以下の表１は、ＬＸＲαのＥＣ５０および効率を測定するＬＸＲ／ＬＸＲＥ共トランスフェクションアッセイ、参照化合物に対する、ＬＸＲに結合しＡＢＣＡ１遺伝子発現を誘導する化合物の能力を測定するヒト全血アッセイ（ｈＷＢＡ）、ならびにミクロソーム代謝安定性アッセイの結果を示す。ＥＣ５０値は、Ａが≦１００ｎＭであり、Ｂが１０１ｎＭ〜＜１，０００ｎＭであり、Ｃが＞１，０００ｎＭである範囲において得られる。
【０２２７】
【表１−１】
0005625050.tif 000045
【０２２８】
【表１−２】
0005625050.tif 000046
【０２２９】
【表１−３】
0005625050.tif 000047
先の代表的なデータは、本発明の化合物の予想外の望ましい部分ＬＸＲアゴニストの特徴、ヒト全血における高い効力、低いＬＸＲα効率およびヒト肝臓ミクロソームアッセイにおける代謝安定性を、ＰＣＴ公開ＷＯ２００７／００２５６３号に開示の化合物などの当技術分野で過去に開示されている化合物と比較して示すものである。
【０２３０】
（実施例Ｅ）
（カニクイザルにおけるインビボ効力およびＡＢＣＧ１の最大誘導）
本発明の化合物をカニクイザルに経口投与して、血液細胞中のＬＸＲ標的遺伝子であるＡＢＣＧ１のｍＲＮＡを誘導するそれらの化合物の能力について試験した。
【０２３１】
試験化合物を、０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ、Ｓｉｇｍａ）および２％Ｔｗｅｅｎ  ８０（Ｓｉｇｍａ）中、研和によって処方した。各処理群は、試験開始時にそれぞれ３．０〜６．０ｋｇの体重の３匹の雄性サルを含んでいた。試験化合物を、ビヒクル中、毎朝新しく処方し、前夜絶食させた動物に、強制経口投与（ｐｏ  ｇａｖａｇｅ）によって７ＡＭ〜７：３０ＡＭの間に投与した。ベースラインの血液細胞ｍＲＮＡの決定のために、ＥＤＴＡ乾燥コーティング試験管に静脈血１ｍｌを採取し、カルシウムまたはマグネシウムを含まないダルベッコリン酸緩衝食塩水１体積と、核酸精製溶解溶液（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）２体積を添加した。試料を、ＲＮＡの単離および分析の前に−８０℃で凍結させた。試験化合物を、ベースラインの試料採取後に投与した。投与の５時間後、静脈血を採取し、ＲＮＡを決定するために先の通り処理した。追加の血液０．５ｍｌをさらに採取し、化合物の血漿濃度について分析した。
【０２３２】
ＲＮＡ単離。凍結した試料を室温で解凍し、次いで氷上に置いた。全ＲＮＡを、製造者の指示（ＡＢＩマニュアル番号４３３２８０９Ｒｅｖ．Ｂ）に従って、組込み済みのプロトコルを使用して、ＡＢＩ６１００により単離した。
【０２３３】
ｃＤＮＡの合成およびＱ−ＰＣＲ反応。Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．製のｑＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キットを使用して、それぞれの全ＲＮＡ試料から第１鎖ｃＤＮＡを作成した。２０μｌでの反応を、９６ウェルのＥｐｐｅｎｄｏｒｆ  ＡＧ  ｔｗｉｎ−ｔｅｃ  ＰＣＲプレート中、ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．モデルＰＴＣ−２００ＤＮＡ  Ｅｎｇｉｎｅで実施した。反応ごとに全ＲＮＡ約５００ｎｇを使用した。反応物は、以下の通り構成されていた。５×ｑ−Ｓｃｒｉｐｔ反応ミックス４μｌとヌクレアーゼフリー水３〜５μｌとｑ−Ｓｃｒｉｐｔ逆転写酵素１μｌとインプットＲＮＡ１０〜１２μｌ。それらを混合した後、反応物を室温で２分間、３７５０ｒｐｍで遠心分離にかけ、ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈサーモサイクラー中、「ｑ−Ｓｃｒｉｐｔ」プロトコル（２５℃で５分間、その後４２℃で３０分間、次いで８５℃で５分間）を実施した。各反応物を、ヌクレアーゼフリー水３０μｌで希釈し、ＳＹＢＲ−ｇｒｅｅｎ  Ｑ−ＰＣＲですぐに使用するか、または−２０℃で保存した。ＳＹＢＲ−Ｇｒｅｅｎ  Ｑ−ＰＣＲ反応を、以下の通り実施した。ＬＸＲ標的遺伝子、ＡＢＣＧ１および内部標準正規化遺伝子であるリボソームタンパク質Ｌ３０の反応混合物を、検証済み順方向／逆方向プライマーのセット［ＡＢＣＧ１（Ｘ−Ｍｍｕｌ−ＡＢＣＧ１−Ｆ１およびＸ−Ｍｍｕｌ−ＡＢＣＧ１−Ｒ１）；リボソームタンパク質Ｌ３０（ＳＹＢＲ−ｈＬ３０−Ｆ１およびＳＹＢＲ−ｈＬ３０−Ｒ１）］を使用して調製した。これらのプライマーのセットの配列に関する情報は、Ｌ３０（プライマーバンク番号４５０６６３１ａ１）については「プライマーバンク」のウェブサイト（ｈｔｔｐ：／／ｐｇａ．ｍｇｈ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ｐｒｉｍｅｒｂａｎｋ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）から、ＡＢＣＧ１（Ｍｍｕｌ＿ＡＢＣＧ１．ＴａｑＭａｎ  Ｆ１／Ｒ１）についてはＥｘｅｌｉｘｉｓ，Ｉｎｃ．（ＵＳＡ、カリフォルニア州サウスサンフランシスコ）から得た。
【０２３４】
【化２５】
0005625050.tif 000048
ＳＹＢＲ−Ｇｒｅｅｎ反応物を以下の通りアセンブルした。反応１回当たり、２×ＰｏｗｅｒＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号４３６７６５９）１０μｌと、１０μＭの遺伝子特異的順方向／逆方向プライマーミックス（プライマーの最終濃度は、それぞれ５００ｎＭである）２μｌと、水４μｌを、希釈したＲＴ反応物４μｌと一緒に混合した。反応ミックスを、室温で２分間、３７５０ｒｐｍで遠心分離にかけ、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓモデル７９００ＨＴ  ＳＤＳ−Ｔａｑｍａｎ  Ｓｙｓｔｅｍにかけた。
【０２３５】
相対的なｍＲＮＡ量の算出、ならびにインビボ化合物効力および最大活性。ＡＢＣＧ１のｍＲＮＡの相対的な量を、二次導関数比較Ｃｔ法（２−ΔΔＣｔ）を使用して算出した。リボソームタンパク質Ｌ３０のｍＲＮＡに対して正規化した後、定量化を得た。各試料を二連で試験し、算出には平均Ｃｔを使用した。
【０２３６】
カニクイザルにおける化合物のインビボ効力の算出。投与の５時間後におけるそれぞれ個々の動物の、血漿中の試験化合物の濃度を、すべての投与群について投与の５時間後における動物ごとの、血液細胞中のＡＢＣＧ１のｍＲＮＡの誘導倍率対ベースラインに対してプロットした。すべての投与群からのデータは、各化合物について、同じプロット上に含まれていた。各化合物についてのインビボ効力（ＥＣ５０）およびＡＢＣＧ１のｍＲＮＡの最大誘導を、シグモイド用量応答式（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ４．０３ソフトウェア）を使用して非線形曲線フィッティングによって決定した。
【０２３７】
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる血漿化合物濃度の定量化。以下は、カニクイザルの血漿中の試験化合物を定量化するために使用したタンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）ベース生体分析法による液体クロマトグラフィーの詳細である。
【０２３８】
試験化合物のＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析を、１〜５０００ｎＭの範囲の標準曲線に対して実施した。平方の逆数（１／ｘ２）によって重み付けした線形回帰で標準曲線をフィットした。標準物を単一複製物で分析した。品質管理用試料を、生物学的ブランクマトリックス中、標準曲線範囲内の３つの濃度で調製し、分析用の各セット内の複製物として分析した。ＱＣが７５％を超えると決定された濃度は、それらの名目値の２０％以内であった。
【０２３９】
試料の調製を、Ｊａｎｕｓ  ８チップおよびＪａｎｕｓ  Ｍｉｎｉ  ９６チップの自動リキッドハンドラーで実施した。インビボ研究からの一定分量（５０μＬ）の生物学的マトリックス（血漿）および標準／ＱＣ試料を、２００ｎＭの２つの内部標準（ＩＳ）を含有する未調整のｐＨ９．２の水中１Ｍ炭酸アンモニウム（５０μＬ）で処理し、その後メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）３００μＬで処理し、４０充填−排出チップ反復（ｆｉｌｌ−ｅｘｐｅｌ  ｔｉｐ  ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎ）を用いて約３分間液体−液体抽出（ＬＬＥ）することによって分離した。次いで、水層および有機層を、３９００ｒｐｍで２分間、遠心分離にかけた。最上有機層である抽出溶媒ＭＴＢＥ（２５０μＬ）を取り出して、別の清浄な９６ウェルプレートに入れ、窒素蒸発器内に４０℃で１５分間置いて乾燥させた。一定分量（１００μＬ）を使用して、１：１のアセトニトリル／水からなる移動相で乾燥抽出物を再構成した。一定分量１０μＬを、まずＴｕｒｂｏｆｌｏｗ高速液体クロマトグラフィー（ＨＴＬＣ）抽出カラム上に注入し、次いでＬＣ／ＭＳ／ＭＳベース分析のために第２の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）カラム上に溶出した。
【０２４０】
すべての分析で使用したＬＣシステムは、分析中に試料を１０℃に維持する冷却スタックを備えた、８つのＳｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ１０ＡＤポンプと２つのＳＣＬ−１０ＡＶＰシステム制御装置（ＵＳＡ、メリーランド州コロンビア）および双腕ＣＴＣ  Ａｎａｌｙｔｉｃｓ  ＨＴＳ  ＰＡＬオートサンプラー（スイス）からなるＡｒｉａ  ＴＸ−２（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、マサチューセッツ州ウォルサム）ＨＰＬＣシステムであった。ＨＰＬＣオンライン抽出カラムは、Ｃｙｃｌｏｎｅ−Ｐ混合ポリマー（０．５×５０ｍｍ、５０μＭの粒子、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、マサチューセッツ州ウォルサム）とし、これを室温で維持した。使用したＨＰＬＣ  Ｃ１８分析カラムは、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８（２．１ｍｍ×５０ｍｍ、５μＭの粒子、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＵＳＡ、マサチューセッツ州ミルフォード）とし、これを室温で維持した。水中０．１％ギ酸（Ａ）およびアセトニトリル中０．１％ギ酸（Ｂ）からなる移動相を、流速１．５ｍＬ／分でＨＴＬＣオンライン抽出カラムに通液し、０．５ｍＬ／分でＨＰＬＣ  Ｃ１８分析カラムに通液した。これらの流速は、０．５〜１．０分の移送ステップ中で変化する。試験化合物および内部標準の保持時間を記録した。全分析時間は５．０分であった。勾配を以下の表にまとめる。
【０２４１】
【表５】
0005625050.tif 000049
【０２４２】
【表６】
0005625050.tif 000050
【０２４３】
【表７】
0005625050.tif 000051
すべての分析で使用した質量分析計は、正イオンおよび負イオン化モードの両方で操作される、加熱エレクトロスプレーインターフェースを備えたＦｉｎｎｉｇａｎ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｕｌｔｒａタンデム質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、マサチューセッツ州ウォルサム）であった。超高純度（ＵＨＰ）窒素を、シースガスおよび補助ガスとして、シースガスについては流速５５ｐｓｉで、補助ガスについては２５単位で使用した。脱溶媒和温度は３５０℃であり、供給源温度は３５０℃であった。各分析物の検出を、選択反応モニタリング（ＳＲＭ）によって達成した。正イオン化モードを使用して、試験化合物および内部標準を定量化した。四重極２の衝突セル中、圧力１．５×１０−３ｔｏｒｒのＵＨＰアルゴンを維持した。本発明の化合物およびその内部標準についてモニタした遷移を記録した。
【０２４４】
カニクイザルにおける試験化合物のインビボ効力、および投与の５時間後の血漿化合物濃度対投与の５時間後のｍＲＮＡ誘導倍率のプロットから得られたＡＢＣＧ１の最大誘導を、以下の表２に示す。
【０２４５】
【表２−２】
0005625050.tif 000052
本発明の実施例４および９は、カニクイザルにおける投与後、当技術分野で公知の化合物よりも約４〜６０倍強力である。同様に、実施例４および９は、当技術分野で公知の化合物では約１２倍であるのと比較して、最大約６倍および９倍まで血中のＡＢＣＧ１のｍＲＮＡを誘導し、したがってカニクイザルの血液において部分ＬＸＲ活性を示す。
【０２４６】
本明細書に記載の実施例および実施形態は、単に例示目的であり、様々な改変または変更がそれらに照らして当業者には提案され、本願の精神および範囲ならびに添付の特許請求の範囲に組み込まれることを理解されたい。本明細書に引用したすべての刊行物、特許文書および特許出願文書は、あらゆる目的で参照によって本明細書に組み込まれる。