(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
女性におけるエストロゲン不足による泌尿生殖器萎縮の予防および／または治療のための、エストリオールを含む、経膣投与に用いる医薬組成物であって、該組成物が、該患者がエストリオールの０．１ｍｇ／日以下の用量を受けるように投与されるものであり、かつ毎日または２日に１回、３日に１回、もしくは週に１回で少なくとも３週間投与されるように用いられる、医薬組成物。
【請求項２】
前記患者がエストリオールの０．００２〜０．０５ｍｇ／日の用量を受ける、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記患者がエストリオールの０．０２〜０．０５ｍｇ／日の用量を受ける、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記投与が少なくとも３週間、毎日投与されるものである、先行する請求項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記投与が少なくとも３０日間、毎日投与されるものである、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記投与が少なくとも６０日間、毎日投与されるものである、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記投与が少なくとも９０日間、毎日投与されるものである、請求項４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
発明の分野
本発明は、女性におけるエストロゲン不足による泌尿生殖器萎縮の予防および／または治療における経膣経路による低用量のエストリオールの使用に関する。
【０００２】
発明の背景
更年期は、生殖期と非生殖期との間にある、女性の人生の過渡期であると考えられている。更年期の間には、卵巣によるエストロゲン類産生の漸減が生じ、通常、一連の徴候、症状、および病変を伴う。
【０００３】
この過渡期の主な徴候は、月経の消失（閉経）や多数のホルモンおよび精神症状の発現であり、血管運動障害（一過性熱感および発汗）および泌尿生殖器萎縮が最も多くみられる。
【０００４】
閉経期および閉経後には、エストロゲン類の漸減とともに、膣粘膜、尿道粘膜、および膀胱粘膜の段階的な減少が生じる。この萎縮がより著しくなると、生殖器症状（膣の灼熱感および痒み、萎縮性膣炎、性交疼痛、ならびに外傷性出血）や泌尿器症状（反復性感染症、排尿困難、および尿失禁）が増加し得る。さらに、ホルモン不足により支持組織が減少し、それによって脱出や腹圧性尿失禁が起こり得る。
【０００５】
泌尿生殖器萎縮は、更年期および閉経の自然の成り行きであるが、その関連障害は女性の生活の質に影響を及ぼすことが多い。そのため、医師がその存在を迅速に見つけ、治療を指示することが重要である。
【０００６】
エストロゲン不足は更年期に起こるだけでなく、他の状況（例えば、産後期）にも起こり、泌尿生殖器萎縮も同様に起こるがこれは治療し得る。
【０００７】
ホルモン欠乏の影響を補正または軽減しようと、エストロゲン類を用いるホルモン補充療法が行われており、このホルモン補充療法は血管運動症状および泌尿生殖器症状に有益な効果をもたらし、骨量減少および心血管系リスクを軽減する。しかし、ある特定種の癌、特に乳癌または子宮内膜癌、および他の病変、例えば血栓塞栓症および高血圧症に罹患するリスクも高める。
【０００８】
これらの関連リスクから通常のプロトコールは不安を与え、医師および患者は毒性の低いホルモン補充の提案を絶えず求めている。
【０００９】
泌尿生殖器萎縮の場合、経口経路によるホルモン補充療法を用いた症状の系統的治療は必ずしも必要ではない。代替法は経膣経路によるエストロゲン類の投与である。しかしながら、局所投与されたエストロゲンホルモンは望ましくない子宮内膜増殖に有利に働く可能性があるため、この経路はリスクが無いわけではなく、この増殖症が、著しい場合には、悪化してホルモン依存性癌になる可能性がある。
【００１０】
泌尿生殖器萎縮の治療において、特に経膣経路により用いられるエストロゲン類の一つがエストリオールである。
【００１１】
現在市販されているエストリオール処方物は、治療の最初の２〜３週間は０．５ｍｇ／日（５００μｇ／日）の用量、その後０．５ｍｇ  ２回または３回／週の用量の経膣投与用に設計されている。この用量は、局所投与がその効果を有するように必要と考えられる用量である。しかしながら、長期的に投与する場合にはこれらの水準は子宮内膜増殖症のリスクを伴うため、投与は続けて行われない。一般的には、治療を２〜３ヶ月以上延長しないことが推奨されている。
【発明の概要】
【００１２】
上述のように、泌尿生殖器萎縮の予防および／または治療のためにエストリオールの経膣投与計画を用意する必要性が生じ、この計画は、安全性と効力の両方を提供し、その結果、医師および患者により受け入れられ、その結果として治療に一層順守させ、そして患者の生活の質をより良好にするものである。
【００１３】
本発明者らは、驚くべきことに、１日当たり５００マイクログラム（５００μｇ＝０．５ｍｇ）未満のエストリオールの投与によりこれらの目的を達成することができ、子宮内膜増殖症を引き起こすことなく女性の泌尿生殖器萎縮を逆転させることを見出した。
【００１４】
これらのような低用量のエストリオールは、用いる処方物の種類にかかわらず、効果的かつ安全であり、患者へのリスクなしに治療を延長することができる。実際には、製品の３週間を超えての連日投与が可能になるであろう。
【００１５】
よって、本発明は、女性におけるエストロゲン不足による泌尿生殖器萎縮の予防および／または治療のための経膣投与に用いる医薬組成物の製造のためのエストリオールの使用に関し、該組成物は、該患者がエストリオールの０．５ｍｇ／日未満の用量を受けるように投与され、該治療はリスクなしに延長することができる。
【発明の具体的説明】
【００１６】
本発明者らは、有効成分として、エストリオールを含む局所処方物はとりわけ低用量で投与することができ、そうであっても女性の泌尿生殖器萎縮の治療において効果的であることを見出した。
【００１７】
非常に驚くべきことに、通常用量の１０〜２５０分の１の用量でも膣の萎縮状態を逆転させ、追加療法さえ必要としないことを見出した。さらに、これらの低用量は、エストロゲン類を用いる治療によるリスクを著しく軽減する。
【００１８】
一つの態様においては、本発明は、女性におけるエストロゲン不足による泌尿生殖器萎縮の予防および／または治療のための経膣投与に用いる医薬組成物の製造のためのエストリオールの使用に関し、該組成物は、該患者がエストリオールの０．５ｍｇ／日未満の用量を受けるように投与されるものである。
【００１９】
本発明において用いる医薬組成物は、エストリオールの０．５ｍｇ／日未満の用量の投与が可能な、当業者に公知のもののいずれであってもよい。前記組成物は、例えば、固体形態（カプセル、錠剤など）、半固体形態（ゲル、クリームなど）、液体形態、または泡沫形態であってもよい。また、前記組成物は、当業者に公知の賦形剤のいずれを含んでもよい。
【００２０】
本発明の重要な態様は、本発明において定義する処方物に用いることができ、エストロゲン不足による泌尿生殖器萎縮の治療に効果的である、とりわけ低用量のエストリオールである。
【００２１】
本発明の特定の実施形態においては、エストリオールは、エストロゲン不足による泌尿生殖器萎縮の予防および／または治療のために０．３ｍｇ／日以下の用量で投与される。
【００２２】
別のさらに好ましい実施形態は、０．１ｍｇ／日以下の用量でのエストリオールの使用に関する。
【００２３】
別の特に好ましい実施形態は、０．００２〜０．０５ｍｇ／日（２〜５０μｇ／日）の用量でのエストリオールの使用に関する。
【００２４】
別の特に好ましい実施形態は、０．０２〜０．０５ｍｇ／日（２０〜５０μｇ／日）の用量でのエストリオールの使用に関する。
【００２５】
驚くべきことに、エストリオールをこのような低用量で用いる場合には、この製品は連日長期間にわたって投与することができ、有害作用がない。本発明のエストリオール投与計画の安全性が高いことから、泌尿生殖器萎縮の予防または治療は、長期間、例えば数ヶ月または数年間中断することなく継続し得る。
【００２６】
本発明の特定の実施形態においては、前記処方物は、連日投与計画により少なくとも３週間投与される。他の実施形態においては、前記処方物は、少なくとも３０日間、少なくとも６０日間、少なくとも９０日間、少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１年間連日投与することができる。これらの場合には、治療を中断する必要がないことが好ましい。
【００２７】
他の実施形態においては、前記処方物は、２日に１回、３日に１回、または週に１回の投与計画により少なくとも３週間、少なくとも３０日間、少なくとも６０日間、少なくとも９０日間、少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１年間投与してもよい。
【００２８】
本発明のいくつかの例示を以下に記載するが、それらを特許請求の範囲の解釈に対する限定と考えてはならない。
【実施例】
【００２９】
泌尿生殖器萎縮の治療における低用量のエストリオールの使用についての効力を次のインビボアッセイを通じて示す。
【００３０】
アッセイＩ
処方物
この研究では処方物を試験し、これらの処方物はそれぞれ、０．００５％（ｗ／ｗ）のエストリオールを含むものであった。
【００３１】
有効成分を溶解するために、グリセリン中のエストリオール原液を調製した。そのために、２５ｍｇの微粉化エストリオールを５０ｇの植物性グリセリンに加え、それを１時間攪拌し、エストリオールが完全に溶解したことを確認した。
【００３２】
クリーム処方物（処方物１）を調製するために、一方で、外部水相中のＮｅｏ  ＰＣＬ  ｏ／ｗ自己乳化基剤２０ｇを磁気攪拌下、７５℃で加熱し、もう一方で、４０ｍｇのブロノポール(Bronopol)を７０ｍｌの精製水に７５℃で溶かした。このブロノポール溶液（水性、ｗ）を自己乳化基剤（油性、ｏ）に徐々に加え、連続攪拌下で、３０℃に達するまで、その温度を下げた。攪拌を停止させずに、１０グラムの予め調製したグリセリン中エストリオール溶液を加え、次の組成を有する０．００５％エストリオール処方物を得た。
【表１】
0005623273.tif 000002
【００３３】
ゲル処方物（処方物２）を調製するために、４０ｍｇのブロノポールを８８ｍｌの精製水に溶かし、連続攪拌下で２ｇのNatrosolをゆっくり加えた。最後に、攪拌を停止せずに、１０グラムのグリセリン中エストリオール溶液を加え、次の組成を有する０．００５％エストリオール処方物を得た。
【表２】
0005623273.tif 000003
【００３４】
膣萎縮に対する効果の評価
この研究においては、合計８体の雌卵巣切除Wistar Hanラットを用い、そしてそれらを無作為に２群に分け、各群に動物４体とした。群Ａを処方物１で処置し、一方、群Ｂを処方物２で処置した。
【００３５】
卵巣切除動物の受け入れから１８日経過した後、総てのラットにおいて閉経期の状態（特に膣萎縮）が確認されるまで、各ラットにおいて膣スミアを定期的に数回行い、膣上皮の成熟度指数を決定した。
【００３６】
処置開始後、処方物１（０．００５％エストリオールのクリーム）および処方物２（０．００５％エストリオールのゲル）を実験群ＡおよびＢそれぞれに、１日１回５日間投与した。この投与は、経膣経路により、１動物当たり処方物５．８ｍｇ（１動物当たりエストリオール０．２９μｇに相当する）の量で、専用のチップ取り付けた容積式マルチピペットを用いて行った。
【００３７】
各動物に投与する用量の計算では、女性の場合には６０ｋｇ、ラットの場合には３５０ｇという平均重量を考慮し、それによって、各ラットには０．２９μｇのエストリオールを投与して、女性の場合に０．０５ｍｇのエストリオールの投与にあると思われる効果を評価した。
【００３８】
投与前日に各ラットにおいて膣スミアを１回行い、第５日の投与後８時間が経過した場合にスミアをもう１回行った。これらのスミアは膣洗浄法によって行い、固定し、パパニコロー法で染色した。
【００３９】
各処方物での処置の効果は、角化細胞の出現、膣上皮成熟度指数の決定、および全体的トロフィズム(overall trophism)の評価を利用して評価した。
【００４０】
得た結果を次の表に示す。
【００４１】
【表３】
0005623273.tif 000004
【００４２】
【表４】
0005623273.tif 000005
【００４３】
【表５】
0005623273.tif 000006
【００４４】
これらの結果は、現在、通常用いられている用量よりも１０倍低いエストリオール用量の投与により、両群のラットにおいて膣萎縮状態を逆転させ、処置後に角化細胞および中間細胞の存在ならびに栄養良好の子宮内膜に相当する成熟度指数が得られることを示す。
【００４５】
従って、本発明において提示した投与計画は、安全性がより高く、現在用いられている投与計画と同様の治療効力を得ることを可能にすると結論付けることができる。
【００４６】
アッセイＩＩ
この研究では二つのゲル処方物を試験し、一方の処方物は０．００２％のエストリオールを含み、もう一方の処方物は０．０００２％（ｗ／ｗ）のエストリオールを含み、次の組成を有するものであった。
エストリオール            ０．００２％または０．０００２％
Carbopol 971P              ０．５％
ポリカルボフィルＡＡ−１  １．５％
グリセリン                １０％
メチルパラベン            ０．１５％
プロピルパラベン          ０．０５％
３７％ＨＣｌ              適量でｐＨ２．５〜３．５とする
１０％ＫＯＨ              定量でｐＨ４．５とする
水                        適量で１００％とする
【００４７】
膣萎縮に対する効果の評価
このアッセイでは、おがくずの床などを備えた２５５ｘ４０５ｘｌ９７ｍｍのポリカーボネート製Ｅタイプケージに収容された成体雌卵巣切除Wistarラットを用いる。
【００４８】
それらのラットを、無作為に選択し、各ケージ中に動物５体の群に分け、それらを温度（２２±２℃）、光周期（１２／１２時間  明／暗）、空気圧、更新回数、および相対湿度（４０〜６０％）について制御された条件において動物飼育ユニットに収容する。
【００４９】
それらのラットにラット標準食を与え（ペレットで給餌、Harlan Iberica S.L.による供給品）、ラットには飲料水（公共消費向け飲用水）を自由に入手できるようにする。
【００５０】
この研究においては、各群動物５体の５実験群を用いる。アッセイする物質はエストリオールに基づく三種の医薬処方物とプラセボである：
群Ａ：対照（シミュレーション）
群Ｂ：プラセボゲルで処置
群Ｃ：０．０００２％ゲルで処置
群Ｄ：０．００２％ゲルで処置
群Ｅ：参照物質（０．１％Ovestinon）で処置
【００５１】
各動物に投与するアッセイ物質の量の計算では、ヒトにおける用量  １日当たりゲル１ｇを考慮した。
【００５２】
女性の場合には６０Ｋｇ、ラットの場合には３５０ｇを平均重量とする。
６０Ｋｇ＝ゲル１ｇ
３５０ｇのラット＝ゲル５．８ｍｇ
【００５３】
参照物質（０．１％Ovestinon）の場合、ヒトにおける用量は１日当たり０．５ｇである。
【００５４】
女性の場合には６０Ｋｇ、ラットの場合には３５０ｇを平均重量とする。
６０Ｋｇ＝クリーム０．５ｇ
３５０ｇのラット＝クリーム２．９ｍｇ
【００５５】
よって、群Ｂ、Ｃ、およびＤの各動物には５．８ｍｇの対応するアッセイ物質が投与され、一方、群Ｅの動物は２．９ｍｇの参照物質を受ける。
【００５６】
０．０００２％／０．００２％ゲル＝１００ｇのゲル中、０．０００２ｇ／０．００２ｇ                                  のエストリオール
１ｇのゲル中、０．００２ｍｇ／０．０２ｍｇ
のエストリオール
０．１％Ovestinon＝１００ｇのクリーム中０．１ｇのエストリオール
０．５ｇのクリーム中０．０００５ｇのエストリオール
【００５７】
従って、各群に投与した有効成分の相当物は：
群Ａ：対照              ＝０μｇエストリオール
群Ｂ：プラセボ          ＝０μｇエストリオール
群Ｃ：０．０００２％ゲル＝０．０１μｇエストリオール：用量１
群Ｄ：０．００２％ゲル  ＝０．１μｇエストリオール：用量２
群Ｅ：０．１％Ovestinon ＝２．９μｇエストリオール：用量３
である。
【００５８】
対照群を含め、この対照群では観察される栄養応答に与え得る「機械的」効果の貢献を決定することができるように経膣投与をシミュレートする。
【００５９】
この研究は４段階から成る：
・第１段階は１５日間継続し、動物の毎日の処置を必要とする。
・第２段階は１５日間継続し、動物の週２回の処置を必要とする（総ての群）。
・第３段階は７日間継続し、動物の週１回の処置を必要とする（総ての群）。
・第３段階は１５日間継続し、処置を伴わない。
【００６０】
アッセイ物質および参照物質の初回投与（２４時間）の前に、各ラットにおいて膣スミアを行って、その閉経期の状態（膣萎縮）を確認し、膣上皮の成熟度指数を決定する。
【００６１】
そのために、膣スミアを洗浄法により行い、細胞診のために水溶性固定スプレーで固定し、成熟度指数の評価のためにパパニコロー法に従って染色する。
【００６２】
次いで、各処置群に対応処方物の初回用量を投与する。この投与は１日１回（２４時間おきに）連続１５日間繰り返す。
【００６３】
この期間が経過した後、群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥ（対照、プラセボ、０．０００２％ゲル、０．００２％ゲル、および０．１％Ovestinon）の総てにおいて投薬を週２回の投与に２週間変更する。
【００６４】
この２週間が終わった場合に、総ての群において投薬をもう一度、週１回の投与に１週間変更する。
【００６５】
初回反復投与（連続１５日間）の期間中、その日の投与の前に、総ての動物において膣スミアを第８日まで（第８日を含めた）毎日行う。さらに、第１６日に、最終投与の２４時間後に総ての動物においてもう１回膣スミアを行う。
【００６６】
この時点以降、この研究が終わるまで総ての動物において膣スミアを３日おきに行う。
【００６７】
総ての塗抹標本を、細胞診のために水溶性固定スプレーで固定し、成熟度指数の評価のためにパパニコロー法に従って染色する。
【００６８】
適用した異なる処置の栄養効果についての定性的評価を次のスキームに従って行った：
Ａ−萎縮細胞診(Atrophic cytology)
Ｈ−発育不全細胞診(Hypotrophic cytology)
Ｍ−中間トロフィズム細胞診(intermediate trophism cytology)
Ｂ−良好なトロフィズムに関する細胞診
【００６９】
初期統計分析を行うために、これらの診断それぞれに数値を与えた：
０−Ａ−萎縮細胞診
１−Ｈ−発育不全細胞診
２−Ｍ−中間トロフィズム細胞診
３−Ｂ−良好なトロフィズムに関する細胞診
これらの前提に従って次の結果を得る：
【００７０】
【表６】
0005623273.tif 000007
【００７１】
【表７】
0005623273.tif 000008
【００７２】
【表８】
0005623273.tif 000009
【００７３】
その結果、以下であることを観察することができる：
・対照群（シミュレーション）およびプラセボ群では、中間の栄養効果が第２日〜第８日の間に観察され、良好なトロフィズムが第４日〜第７日の間に（数日だけ）観察される。過去の研究において観察されたように、この増加には、実際の細胞診サンプル採取の機械的な効果が寄与している可能性があり、同時にその後の減少は前記機械的な効果に対する「慣れ」すなわち脱感作による因子であり得る（表８および表９参照）。
・エストリオールを含む物質を投与した群（用量１（０．０１μｇエストリオール）、用量２（０．１μｇエストリオール）、用量３（２．９μｇエストリオール）では、良好なトロフィズムが第２日〜第３７日の間に観察される。この時期からそれが発育不全になり、異なるアッセイ物質および参照物質の投与の停止と一致する（第３６日が投与最終日であった）。
【００７４】
よって、長期間の投与を可能にし、発育不全または泌尿生殖器萎縮の期間を抑え、かつ患者に高い安全性を提供する極低用量エストリオールの処方物を有することが非常に有利である。
【００７５】
定量的解析は、細胞成熟度指数（ＭＩ）を用いることによって行い、細胞総数の比率を、基底／傍基底細胞、中間細胞、および表面細胞（Ｂ／Ｉ／Ｓ）の量に割り当てる。
【００７６】
初期統計分析を行うために、各サンプルに数値を割り当てる目的で、次の式を用いた：
値＝（−１＊Ｂ）＋（０＊Ｉ）＋（１＊Ｓ）
【００７７】
この式を用いて、−１００（基底／傍基底細胞の１００％）〜１００（表面細胞の１００％）の値の範囲を得、−９０より小さい値は完全萎縮、−８９〜−３０間の値は発育不全、−２９〜＋２０間の値は中間のトロフィズム、＋２０より大きい値は良好なトロフィズムと考えた。
【００７８】
これらの前提に従って次の結果を得る：
【表９】
0005623273.tif 000010
【表１０】
0005623273.tif 000011
【表１１】
0005623273.tif 000012
【００７９】
その結果、以下であることを観察することができる：
・これらの結果、評価および解析は、定性的評価で得られたものと極めてよく似ている。
・対照群（シミュレーション）およびプラセボ群では、中間の栄養効果は第２日〜第８日の間に観察され、良好なトロフィズムは第４日〜第７日の間に観察され、これは中間細胞およびある場合には表面細胞の出現により示される。この効果は研究を通して漸進的に減少する。
・用量１群（０．０１μｇエストリオール）では、中間細胞および表面細胞に関する良好なトロフィズムは治療第２日〜第１６日の間に観察され、第１５日に至るまで連日投与と一致する。その後、良好なトロフィズム〜中間のトロフィズム間の変動が観察され、研究の第３７日から中間のトロフィズム状態となり（第３６日が投与最終日であった）、第４０日から発育不全状態に到達する。
・エストリオールを含む残りの群（用量２（０．１μｇエストリオール）および用量３（２．９μｇエストリオール））は類似挙動を示す。良好なトロフィズムが第２日〜第３６日の間に観察される。第３７日において用量３では良好なトロフィズムがあり、一方、用量２では中間のトロフィズムがある。用量２では発育不全状態が用量３の場合よりも１日早く得られる。