(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＭＴＨＦＲのＣ６７７Ｔ多型性についてホモ接合性の被験者における血圧上昇の治療または予防に使用する医薬品であって、薬学的に有効な量の降圧剤および０．５〜５０ｍｇ／日のリボフラビンを含有する、医薬品。
【請求項２】
ＭＴＨＦＲのＣ６７７Ｔ多型性についてヘテロ接合性の被験者における血圧上昇の治療または予防に使用する医薬品であって、０．５〜５０ｍｇ／日のリボフラビンおよび薬学的に有効な量の降圧剤を含有する、医薬品。
【請求項３】
前記降圧剤は、ＡＣＥ阻害薬、β遮断薬、Ｃａ＋＋拮抗剤、α遮断薬、アンジオテンシンＩＩ拮抗剤、α／β遮断薬および利尿薬から選択される、請求項１または請求項２に記載の医薬品。
【請求項４】
前記ＡＣＥ阻害薬は、キナプリル、カプトプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、ペリンドプリル、マレイン酸エナラプリル、トランドラプリル、ラミプリルおよびシラザプリルから選択され、前記β遮断薬は、アテノロール、テルタトロール、酒石酸メトプロロール、フマル酸ビソプロロール、ネビボロール、セリプロロールおよびピンドロールから選択され、前記Ｃａ＋＋拮抗剤は、ニフェジピン、ジルチアゼム、アムロジピン、ベラパミルおよびフェロピジンから選択され、前記α遮断薬は、メチルドパ、ドキサゾシン、クロニジンおよびプラゾシンから選択され、前記アンジオテンシンＩＩ拮抗剤は、イルベサルタン、カンデサルタン・シレキセチル、オルメサルタン・メドキソミル、バルサルタン、ロサルタン、テルミサルタンおよびエプロサルタン・メシレートから選択され、前記α／β遮断薬は、カルベジロールおよびラベタロールから選択され、ならびに前記利尿薬は、ベンドロフルメチアジド、ピレタニド、クロルサリドンおよびヒドロクロロチアジド（ＨＣＴＺ）から選択される、請求項３に記載の医薬品。
【請求項５】
前記医薬品は、経口投与または非経口投与に適切な形態である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬品。
【請求項６】
栄養成分を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬品。
【請求項７】
個人用栄養成分を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は遺伝子型特異的集団における高血圧症治療でのリボフラビンの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に高血圧と呼ばれる高血圧症とは、血圧が上昇し、ほとんどの場合慢性的に上昇している健康状態である。高血圧症は、原因を問わず、心臓病や心発作などの心血管疾患（ＣＶＤ）の主な危険因子の１つである。
【０００３】
酵素５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素（ＭＴＨＦＲ）をコードする遺伝子に通常存在するＣ６７７Ｔの多型性についてホモ接合性の個体では、ＣＶＤのリスクの増大があることが見出されている。ＭＴＨＦＲは、５−メチルテトラヒドロ葉酸の形成に必要であり、同様にこの５−メチルテトラヒドロ葉酸がホモシステインをメチオニンに変換するのに必要である。ＭＴＨＦＲのＣ６７７Ｔ多型性（ＴＴ遺伝子型）にホモ接合性である個体は、心臓病および心発作に対して野性型遺伝子（ＣＣ遺伝子型）よりも有意に高いリスクを有するとみなされる。多型性（ＣＴ遺伝子型）にヘテロ接合性であるヒトはまた、心臓病および心発作のやや高いリスクを有する。種々の降圧薬（例えば、ＡＣＥ阻害薬、β遮断薬および利尿薬）は、高血圧を有すると臨床的にみなされる患者の降圧に役立つが、これらの薬物は、望ましくない副作用をもたらす場合があり、被験者によっては、１種類以上の降圧薬を服用しているにもかかわらず依然として高血圧が続く場合もある。
【０００４】
今や驚くべきことに、リボフラビン（ビタミンＢ２）には、特にＭＴＨＦＲのＣ６７７Ｔ多型性についてホモ接合性であるＣＶＤ患者に対して、有意な収縮期血圧・拡張期血圧低下効果があることが見出されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の第一の態様によれば、ＭＴＨＦＲのＣ６７７Ｔ多型性にホモ接合性またはヘテロ接合性の被験者に対する血圧上昇を治療または予防する医薬品の製造におけるリボフラビンの使用が得られる。
【０００６】
本発明の第二の態様によれば、ＭＴＨＦＲのＣ６７７Ｔ多型性にホモ接合性またはヘテロ接合性の被験者における血圧上昇を治療または予防する医薬品であって、同時投与、別の投与または連続的投与される、薬学的に有効な量の降圧剤およびリボフラビンを含む医薬品が得られる。
【０００７】
適切な降圧剤としては、ＡＣＥ阻害薬（例えば、キナプリル、カプトプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、ペリンドプリル、マレイン酸エナラプリル、トランドラプリル、ラミプリルおよびシラザプリル）、β遮断薬（例えば、アテノロール、テルタトロール、酒石酸メトプロロール、フマル酸ビソプロロール、ネビボロール、セリプロロール、およびピンドロール）、Ｃａ＋＋拮抗剤（例えば、ニフェジピン、ジルチアゼム、アムロジピン、ベラパミルおよびフェロピジン）、α遮断薬（例えば、メチルドパ、ドキサゾシン、クロニジンおよびプラゾシン）、アンジオテンシンＩＩ拮抗剤（例えば、イルベサルタン、カンデサルタン・シレキセチル、オルメサルタン・メドキソミル、バルサルタン、ロサルタン、テルミサルタンおよびエプロサルタン・メシレート）、α／β遮断薬（例えば、カルベジロールおよびラベタロール）ならびに利尿薬（例えば、ベンドロフルメチアジド、ピレタニド、クロルサリドンおよびヒドロクロロチアジド（ＨＣＴＺ））が挙げられる。
【０００８】
本発明の利点としては以下が挙げられる。
・リボフラビンを、任意の他の降圧剤の非存在下で血圧を低下させるために用いることができる。
・他の降圧剤をリボフラビンと同時、別々または連続して投与する場合、必要な効果を得るために要する他の降圧剤の量を有利に減量することができ、即ち、より少ない薬剤用量で被験者の血圧上昇の治療または予防を果たすことができるため、従来の降圧剤の任意の望ましくない副作用を最小化することができる。
【０００９】
本発明の第三の態様によれば、ＭＴＨＦＲのＣ６７７Ｔ多型性についてホモ接合性またはヘテロ接合性の被験者における血圧上昇を治療または予防する方法であって、被験者に対してリボフラビンを投与することを含む方法が提供される。
【００１０】
本発明の医薬品または生成物は好ましくは、経口投与または非経口投与に適切な形態に構成される。適切な経口剤形としては、錠剤、カプセル（徐放性カプセルを含む。）、丸剤、散剤、顆粒剤などが挙げられる。非経口投与としては、例えば、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、膀胱内投与（例えば、膀胱に対する投与。）、皮内投与、局所投与または皮下投与が挙げられる。適切な非経口剤形としては、無菌の注射用水溶液または分散液、および無菌の注射用溶液または分散液の調製用の無菌の粉末が挙げられる。投与の好ましい経路は経口である。
【００１１】
リボフラビンは、経口投与または非経口投与に適切な薬学的に適合するまたは受容可能なキャリアと一緒に投与され得、このキャリアは用いられる特定の投与タイプに従って選択される。経口投与の場合には、リボフラビンは適切な経口剤形の調製のための１つ以上の固形の不活性成分とともに投与され得る。例えば、リボフラビンは、少なくとも１つの補形剤、例えば、充填剤、結合剤、保湿剤、崩壊剤、溶液凝結遅延剤、吸収促進剤、保潤剤、吸収剤または潤滑剤とともに投与されてもよい。非経口投与の場合には、リボフラビンは適切なキャリアまたは希釈剤、例えば、水、エタノール、生理食塩水、デキストロース（グルコース）溶液および関連の糖溶液、グリセロール、またはグリコール、例えば、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコールとともに投与されてもよい。
【００１２】
いずれの場合も、リボフラビンの用量は、食事摂取基準値内であり、安全と考えられる最大値以下である。しかし、多くの他の栄養物とは異なり、リボフラビンについては公式の耐容上限値は確立されておらず、極めて高用量でさえ一般には安全とみなされており、５００ｍｇ／日までの値が有害な影響なしに耐容されるということを示している証拠がある。これは、１．１〜１．８ｍｇ／日の範囲である成体の推奨リボフラビン食事値と比肩する。この医薬品または生成物は、被験者に対するリボフラビンの投与について約１．６ｍｇ／日の量で処方されることが最も好ましい。しかし、この医薬品または生成物は、被験者に対するリボフラビンの投与のために１．６ｍｇ／日を超えるかまたはそれ未満の任意の他の適切な用量で処方されてもよい。例えば、適切な用量は、約０．５ｍｇ／日〜５０ｍｇ／日、好ましくは約０．７５ｍｇ／日〜２０ｍｇ／日、より好ましくは約１ｍｇ／日〜１０ｍｇ／日、より好ましくは約１．２ｍｇ／日〜５ｍｇ／日、さらにより好ましくは約１．４ｍｇ／日〜約５ｍｇ／日であってもよい。
【００１３】
本発明は、個人用のオーダーメイド栄養物の領域にも用いられ得る。遺伝子−栄養物の相互作用に対する関心は増大してきており、遺伝子プロファイルへのアクセシビリティが増すのに伴い、個人用栄養物が市場に近年出現してきている。このアプローチは、栄養所要量は、年齢および性別のような一般的な要因だけでなく、被験者に特異的である遺伝子要因も考慮すべきであるという観点に基づく。例えば、被験者のＭＴＨＦＲ遺伝子型をチェックし、次に、特にその被験者がＴＴまたはＣＴ遺伝子型を有することが見出される場合は、低用量リボフラビンを摂取する、というように進めることができる。
【００１４】
本発明はまた、薬の臨床試験、例えば、新規の降圧医薬品を試験する臨床試験のデザインにも用いられ得る。このような試験の首尾よい転帰および正確な解釈のために、低リボフラビン状態と組み合わせてＭＴＨＦＲのＣ６７７Ｔ多型性についてＴＴ遺伝子型を有するものが、層別化され、かつ種々の治療群に等しく無作為化されることが重要である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、研究デザインのフロー図を示す。
【図２】図２（ｉ）は、健常対照群の間のＭＴＨＦＲ遺伝子型群によるホモシステイン濃度（μｍｏｌ／Ｌ）を示す。図２（ｉｉ）は、健常対照群の間のＭＴＨＦＲ遺伝子型群による収縮期血圧（ｍｍＨｇ）を示す。図２（ｉｉｉ）は、健常対照群の間のＭＴＨＦＲ遺伝子型群による拡張期血圧（ｍｍＨｇ）を示す。図２（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）の値は、平均（標準誤差のバー）である。異なる文字は、ＭＴＨＦＲ遺伝子型群間の統計学的に有意な相違を示し、ＡＮＯＶＡはチューキーの事後検定で、Ｐ＜０．０５が有意である。図２（ｉ）〜（ｉｉｉ）では、「ａ」という文字は、他の「ａ」値と有意に異なることのない値を示し、文字「ｂ」は他の「ｂ」値と有意に異なることはないが、「ａ」の値とは異なる値を示す。
【図３】図３（ｉ）は、早発性ＣＶＤ患者の間のＭＴＨＦＲ遺伝子型群によるホモシステイン濃度（μｍｏｌ／Ｌ）を示す。図３（ｉｉ）は、早発性ＣＶＤ患者の間のＭＴＨＦＲ遺伝子型群による収縮期血圧（ｍｍＨｇ）を示す。そして図３（ｉｉｉ）は、早発性ＣＶＤ患者の間のＭＴＨＦＲ遺伝子型群による拡張期血圧（ｍｍＨｇ）を示す。図３（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）の値は、平均（標準誤差のバー）である。異なる文字は、ＭＴＨＦＲ遺伝子型群の間の統計学的に有意な相違を示し、ＡＮＯＶＡはチューキーの事後検定で、Ｐ＜０．０５が有意である。図３（ｉ）〜（ｉｉｉ）では、「ａ」という文字は、他の「ａ」値と有意に異なることのない値を示し、文字「ｂ」は他の「ｂ」値と有意に異なることはないが、「ａ」の値とは異なる値を示す。「ａｂ」という文字は、「ａ」または「ｂ」の値とは有意に異なることがない値を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
（実施例１：ＣＶＤ患者）
材料と方法
被験者の募集
Ｔｈｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｅｔｈｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｕｌｓｔｅｒと、Ａｌｔｎａｇｅｌｖｉｎ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｔｒｕｓｔ，  Ｌｏｎｄｏｎｄｅｒｒｙ，  Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｉｒｅｌａｎｄとの両方から倫理的承認を受けた。早発性のＣＶＤ患者、男性は５５歳以下、女性は６５歳以下（当時）を、Ａｌｔｎａｇｅｌｖｉｎ病院の心臓科から集めた。患者は以前の心筋梗塞（ＭＩ）またはＥＣＧ変化により診断された狭心症によって選ばれた。見込みのある参加者（ｎ＝４０４）を口腔内スワブの試料に基づいてＭＴＨＦＲ遺伝子型についてスクリーニングした。ＴＴ遺伝子型を有する患者を特定した（ｎ＝５４）。これらの患者は、年齢および性別を同様の数の患者で、ＣＣまたはＣＴの遺伝子型でマッチングさせ、総数１９７例の患者に、現行の介入研究に参加するように依頼した（図１を参照）。全ての被験者についての除外基準は、肝疾患または腎疾患の既往、ビタミンＢサプリメントの使用者、葉酸代謝を妨げることが公知の医薬を摂取している被験者、ＭＩの後から血液採取の前までが少なくとも３か月の被験者とした。全ての志願者が書面でインフォームドコンセントを提出し、健康および医学的／ライフスタイルのアンケート（ＣＶＤの家族歴および喫煙習慣に関する質問を含む。）に答えた。
【００１７】
研究のデザイン
この研究は、１６週のプラセボ対照介入試験とした。患者を、各々の遺伝子型群内の血漿ホモシステインの最初のスクリーニングに基づいて層別化して、引き続き、図１に示すように、リボフラビン（１．６ｍｇ／日）またはプラセボのいずれかを投与されるように各々の層内で無作為化した。コンプライアンスを最大化することを企図して、患者には７日用丸剤ボックスで４週ごとにリボフラビンを与え、未使用の丸剤は戻すよう依頼してそれを記録した。非空腹時の血液試料を、スクリーニング時および介入後に、Ａｌｔｎａｇｅｌｖｉｎ病院、患者の職場、または患者の自宅のいずれかで採取した。
【００１８】
血圧および身体測定値
血圧測定値は、Ｏｍｃｒｏｎ  ７０５ＣＰ電気血圧モニター（Ｍｅｄｉｓａｖｅ，Ｄｏｒｓｅｔ，ＵＫ）を用いて、１５分あけて測定した２回の測定値の平均として記録した。体重（ｋｇ）および身長（ｍ）を用いて、ＢＭＩ（体重（ｋｇ）／身長２（ｍ））を算出した。腹囲（ｃｍ）も測定した。全ての測定は、Ｓｅｃａの承認した装置（Ｂｒｏｓｃｈ  Ｄｉｒｅｃｔ，Ｌｔｄ，Ｐｅｔｅｒｂｏｒｏｕｇｈ，ＵＫ）を用いて行った。
【００１９】
試料の採取
３０ｍＬの血液試料を１つ各々の患者から採取した。血漿および洗浄赤血球については９ｍＬのＥＤＴＡ試験管を１つ、赤血球溶解物の調製ならびにヘモグロビン（ＨＢ）および血中血球容積（ＰＣＶ）の測定には４ｍＬのＥＤＴＡ試験管を１つ、血清抽出物用に８ｍＬの血清分離試験管を１つ、脂質プロフィール分析用に５ｍＬの血清分離試験管を１つ、および凝固スクリーニング用に４ｍＬのクエン酸ナトリウムの試験管を１つである。９ｍＬのＥＤＴＡを直ちにスズのホイルに包み、氷上に置いた。試料は、採取後２時間内に３０００ｒｐｍで１５分間、遠心分離した。血漿を取り出して、血漿ホモシステイン・ＰＬＰ分析のために−８０℃で保管した。そのバフィー層をＭＴＨＦＲ遺伝子型決定の確認のために取り出して、−２０℃で保管した。残りの赤血球を、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄し、その上清および残りのバフィー層は各洗浄後に廃棄した。この洗浄された赤血球を取り出して、ＥＧＲａｃ分析（リボフラビン状態の機能的指標）のために−８０℃で保管した。血清を取り出して血清葉酸分析のために−８０℃で保管した。
【００２０】
生化学的分析
血漿ホモシステインを、Ａｂｂｏｔｔ  Ｉｍｘアナライザー（Ｌｅｉｎｏ  Ａ．，１９９９，「Ｆｕｌｌｙ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｏｔａｌ  ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｉｎ  ｐｌａｓｍａ  ａｎｄ  ｓｅｒｕｍ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ａｂｂｏｔｔ  ＩＭｘ  ａｎａｌｙｚｅｒ」．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ，４５，５６９〜７１）を用いるイムノアッセイによって測定した。血清葉酸および赤血球葉酸濃度を、凍結保存、マイクロタイタープレート方法を用いて微生物学的アッセイによって測定した（Ｍｏｌｌｏｙら、１９９７，「Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｓｅｒｕｍ，ｐｌａｓｍａ，ａｎｄ  ｒｅｄ  ｃｅｌｌ  ｆｏｌａｔｅ  ｕｓｉｎｇ  ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ，ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ  ｐｌａｔｅ  ｍｅｔｈｏｄ」．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，２８１，４３〜５３）。血漿のＰＬＰは、蛍光検出付き逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定した（Ｂａｔｅｓら、１９９９，「Ｐｌａｓｍａ  ｐｙｒｉｄｏｘａｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ａｎｄ  ｐｙｒｉｄｏｘｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｔｏ  ｐｌａｓｍａ  ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｉｎ  ａ  ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ  ｓａｍｐｌｅ  ｏｆ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｍｅｎ  ａｎｄ  ｗｏｍｅｎ  ａｇｅｄ  ６５  ｙｅａｒｓ  ａｎｄ  ｏｖｅｒ」．  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１，１９１−２０１）。ＭＴＨＦＲのＣ６７７Ｔ遺伝子型の特定は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅、続いてＨｉｎＦｌ（Ｆｒｏｓｓｔら、１９９５，「Ａ  ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ：Ａ  ｃｏｍｍｏｎ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ」．Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔｃ，１０，１１１−１１３）を用いて行った。リボフラビンの状態は、ＥＧＲａｃ（機能的アッセイであって、これによってグルタチオン還元酵素の活性が追加のＦＡＤの有無の両方で測定される。）に基づいて測定した。次いでＥＧＲａｃを、ＦＡＤ刺激酵素活性対、非刺激酵素活性の比として算出し（Ｐｏｗｅｒｓら、１９８３，「Ｔｈｅ  ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ｏｆ  ｉｒｏｎ  ａｎｄ  ｉｒｏｎ  ｗｉｔｈ  ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ  ｉｎ  ｃｏｒｒｅｃｔｉｎｇ  ａ  ｍｉｃｒｏｃｙｔｉｃ  ａｎａｅｍｉａ  ｉｎ  ｍｅｎ  ａｎｄ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ｉｎ  ｒｕｒａｌ  Ｇａｍｂｉａ」．  Ｈｕｍ  Ｎｕｔｒ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ，３７，４１３−４２５）、１．３以上の値が最適以下のリボフラビン状態を反映すると一般にはみなす。凝固スクリーニングを、ＡＣＩ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって測定した。ＨＢおよびＰＣＶを、Ｓｙｓｍｅｘ  ＸＥ−２１００（Ｓｙｓｍｅｘ，ＵＫ  Ｌｔｄ．Ｍｉｌｔｏｎ  Ｋｅｙｎｅｓ  ＵＫ）アナライザーを用いて測定し、脂質プロフィールを、Ａｂｂｏｔｔ  Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ  ＣＩ  ８２００アナライザー（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＵＳＡ）を用いて測定した。全てのアッセイにおいて、試料を盲検で、二連で、���つ採取の１年内に分析した。精度管理（ＱＣ）は、貯留した洗浄済みの赤血球（ＥＧＲａｃについて）、ホモシステインおよびＰＬＰについては血漿、および葉酸については血清が保管されたバッチの反復分析によって得た（広範な値をカバーする）。
【００２１】
統計学的分析
全ての統計学的分析は、社会科学についてのＳＰＳＳ統計学的パッケージを用いて行った（バージョン１１．０，ＳＰＳＳ  ＵＫ  Ｌｔｄ．，Ｃｈｅｒｓｅｙ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）。正規化のために、変数は、統計学的分析の前に必要に応じて対数変換した。チューキーの事後検定による一元ＡＮＯＶＡを用いて、遺伝子型群間のベースラインの特徴における相違を検討した。カイ二乗分析を用いてカテゴリーデータを評価した。二変数のピアソン相関係数を用いて相関分析を行った。各々の遺伝子型群内のリボフラビン介入の効果は、対応のあるｔ検定を用いて検討した。０．０５未満のＰ値を有意とみなした。
【００２２】
結果
健常な個体におけるベースラインのデータ
図２を参照すると、血液のホモシステイン値に関して、ＭＴＨＦＲのＣ６７７Ｔ多型性（ＴＴ遺伝子型）についてホモ接合性の健常個体について観察された表現型は、ＣＴまたはＣＣのいずれかの遺伝子型を有するものと比較して、血液ホモシステイン濃度の上昇であった。対応する血圧値に関して、ＴＴ遺伝子型を有する健常個体では、図２に示されるとおり、ＣＴまたはＣＣ遺伝子型のいずれにおける値に比較しても収縮期血圧または拡張期血圧の上昇はなかったことが見出された。
【００２３】
早発性ＣＶＤ患者におけるベースラインのデータ
早発性のＣＶＤ患者は一般に、男性については５５歳前に、女性については６５歳前にＣＶＤを発症する被験者として規定される。図３を参照すると、早発性のＣＶＤを有し、ＴＴ遺伝子型を有する患者は、ＣＣおよびＣＴの両方の患者に比較して血液ホモシステイン濃度の上昇があった。ＴＴ患者はまた、図３に示すとおり、ＣＣ患者に比較して、収縮期血圧および拡張期血圧の有意な増大があることも見出された。ＣＴ個体は、ＣＣおよびＴＴの患者に比較して、中間値の拡張期血圧を有することが見出された（図３に示す。）。これらの結果は予想されないものである。なぜなら、健康なＴＴ被験者は、他の遺伝子型群と比較して血圧の上昇を示さなかったためである。全ての患者は、下の表１に示すとおり、試料採取の時点で１つ以上の降圧薬を摂取していたが、この医薬品はＴＴ遺伝子型群においては比較的効果が低いことが、図３から明らかである。
【００２４】
【表１】
0005577100.tif 000002
【００２５】
早発性ＣＶＤ患者のＭＴＨＦＲ遺伝子型（ＴＴ、ＣＴまたはＣＣ）に従って分類されたこの早発性ＣＶＤ患者のベースラインの特徴を、下表２に示す。表２を参照すると、ＴＴ患者は、ＣＣ患者に比較して、収縮期血圧および拡張期血圧の有意な増大があることが観察された。ＣＴ患者は、拡張期血圧について中間の値を有することが見出された。ＴＴ患者で見出された血圧の上昇値は、リボフラビン状態による影響を強く受けた。従って、ＴＴ遺伝子型と低リボフラビン状態の組み合わせを有する患者は、顕著に上昇した血圧を有することが予期せぬことに見出された。
【００２６】
【表２】
0005577100.tif 000003
【００２７】
早発性ＣＶＤ患者の介入データ
下表３を参照すると、１８１例の早発性ＣＶＤ患者を対象としたプラセボ・対照の介入研究では、ＴＴ遺伝子型を有する患者での収縮期血圧および拡張期血圧の両方の有意な低下が、低用量リボフラビン投与の１６週後に達成された。示される血圧応答は、統計的・臨床的に有意である。リボフラビンに対する応答で観察される血圧低下の規模（収縮期血圧では１１単位、および拡張期血圧では８単位の減少）により心疾患のリスクを２９％まで、心発作のリスクを４６％まで下げることが、メタ分析から見積もることができる。この結果、有意かつ臨床的に重要な血圧低下が、特にＴＴ遺伝子型患者で、リボフラビンに応答して達成された。再度図３を参照すると、ＣＣ患者ではリボフラビン投与後に血圧（収縮期または拡張期）の有意な低下は観察されなかった。
【００２８】
【表３】
0005577100.tif 000004
【００２９】
（実施例２：健常対照群）
ＭＴＨＦＲのＣ６７７Ｔ遺伝子型に基づき、健常な個体におけるリボフラビンと血圧との間の関連を検討した。上記の実施例１に記載の手順に従って測定を行い、記録した。得られた結果として、ＭＴＨＦＲ遺伝子型について年齢でマッチングさせたスクリーニング前の健常被験者のベースラインの特徴（ｎ＝１２４）を表４に示す。
【００３０】
【表４】
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【００３１】
実施例２（表４）で得られた結果から示すとおり、ＴＴ遺伝子型を有する個体は、ＣＣまたはＣＴ遺伝子型群と比較して、有意に高い収縮期血圧または拡張期血圧を示さなかった。また一方、このＴＴ遺伝子型の代表的な表現型として有意に上昇した血漿ホモシステインおよび葉酸低状態へ向かう傾向を示したが、表４に示すとおり、葉酸状態の相違は、統計的有意差には達しなかった（Ｐ値は０．０５未満ではなかったため。）。
【００３２】
健常個体での介入データ
８１例の健常個体でのプラセボ対照介入研究を行った。健常個体でのＭＴＨＦＲ遺伝子型別の、リボフラビン介入（１６週間にわたり１．６ｍｇ／日）に対する血圧応答を検討し、その結果を表５に示す。
【００３３】
Ｐ値を参照すると、表５の結果は、ＴＴ遺伝子型を有するこの健常なコホートではリボフラビンの有意な収縮期血圧低下効果も有意な拡張期血圧低下効果もなかったことを示す。従って、上の実施例１において考察したＴＴ遺伝子型を有するＣＶＤ患者でのリボフラビンによる収縮期血圧の低下および拡張期血圧の低下は予想されないものであって、統計的かつ臨床的に有意である。
【００３４】
表５に示されるＰ値を再度参照すると、この統計学的分析によって、拡張期血圧がＣＣ群ではリボフラビン治療で増大を示した1件を除いて、リボフラビンまたはプラセボに対する応答において遺伝子型を超えて血圧に有意な増大または低下がないことが示される。これは予想されなかったが、この結果は、偶然によるおよび比較的小さいサンプルサイズによると考えられる。ＣＣ群でのリボフラビンに対するこの応答を考慮しても、リボフラビンは、健康なＣＣ個体で拡張期血圧を増大することが見出されたことに注意されたい。この結果、上の実施例１で考察されたＴＴ遺伝子型を有するＣＶＤ患者におけるリボフラビンによる収縮期および拡張期血圧の低下は、特に予想されないものである。
【００３５】
【表５】
0005577100.tif 000006
【図１】
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【図２】
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【図３】
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