(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
酸耐性、胆汁耐性を有する乳酸菌であるラクトバチルス・プランタラムNY3668株（NITE P-01603）。
【請求項２】
請求項１に記載のラクトバチルス・プランタラムNY3668株（NITE P-01603）を含有する飲食品。
【請求項３】
前記飲食品がはっ酵乳又は乳酸菌飲料である請求項２に記載の食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酸耐性、胆汁耐性を有する乳酸菌に関するものである。特に、ラクトバチルス・プランタラムに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
乳酸菌は、ヨーグルトなどの発酵乳製品、各種漬物類、鮒寿司など、多くの加工飲食品において、味や風味の付与、栄養の強化、食品の保存性改善など様々な目的で用いられてきた。また、乳酸菌は、生きた状態で摂取することで、腸内フローラが改善されると同時に、乳酸菌やその産生物質により人体に有用な効能をもたらすことが知られている。
【０００３】
しかしながら、摂取する乳酸菌の量が多くても、生菌状態で腸内において維持できなければ、前記効能を十分に発揮することができない。通常、飲食品より摂取された乳酸菌は胃酸や胆汁酸により生菌数の減少や増殖率の低下といった影響を受ける。このため、酸耐性及び胆汁耐性を有する乳酸菌が望まれている。このような観点から以下の特許文献が公開されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特表2009-545311号公報
【０００５】
特許文献１に記載された乳酸菌は、優れた活性を有する乳酸菌であると考えられる。しかし、体重増加抑制等の薬理的な活性に重点が置かれているため、食品に利用した場合の有用性について明らかでない。
【０００６】
すなわち、飲食品等として用いる場合、低温で保存することも想定されるが、例えば、はっ酵乳や乳酸菌飲料等で用いる場合、10℃程度の低温の状態においても菌数の減少が見られないことが望ましい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、高い酸耐性及び胆汁耐性を有し、飲食品に好適に利用できる乳酸菌を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決すべく、種々の食品等を分離源として、乳酸菌について検討を行った結果、植物由来の一種の乳酸菌に高い酸耐性及び胆汁耐性を有する株があることを見出し、本発明を完成するに至ったのである。
【０００９】
すなわち、本願第一の発明は、
酸耐性、胆汁耐性を有する乳酸菌であるラクトバチルス・プランタラムNY3668株（NITE P-01603）、
である。
さらに、本願出願人は、当該乳酸菌を含む飲食品も意図している。
すなわち、本願第二の発明は、
請求項１に記載のラクトバチルス・プランタラムNY3668株（NITE P-01603）を含有する飲食品、
である。
上記の飲食品のうち、特にはっ酵乳又は乳酸菌飲料であることが好ましい。
すなわち、本願第三の発明は、
前記飲食品がはっ酵乳又は乳酸菌飲料である請求項２に記載の食品、
である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の乳酸菌は、高い酸耐性と胆汁耐性を有する。摂取した場合に高い割合で生菌のまま腸内まで到達することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】試験例１で実施した各乳酸菌の酸耐性の結果を示した図である。
【図２】試験例２で実施した各乳酸菌の胆汁耐性の結果を示した図である。
【図３】試験例３で実施した本発明の乳酸菌における１０℃保存時の生菌数経時変化の結果を示した図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、本発明を詳細に説明する。
１．ラクトバチルス・プランタラムNY3668株（NITE P-01603）
本発明の乳酸菌は、ラクトバチルス・プランタラム（Lactobacillus plantarum）である。特にラクトバチルス・プランタラムに属する乳酸菌のうち、ラクトバチルス・プランタラムNY3668株である。本発明にいうNY3668の記号は日清ヨーク株式会社で独自に菌株に付与した番号である。本ラクトバチルス・プランタラムNY3668株は食用植物であるプチトマトより本発明者の一人によって初めて分離されたものである。
【００１３】
本発明のラクトバチルス・プランタラムNY3668株は、平成25年5月8日に、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターにNITE P-01603（寄託番号）として寄託されている。
本発明のラクトバチルス・プランタラムNY3668株の菌学的性質は以下の表１及び２に示す通りである。本菌学的性質は、Bergey’s manual of systematic bacteriology Vol.2(1986)に記載の方法による。
【００１４】
【表１】
0005425337.tif 000002
【００１５】
【表２】
0005425337.tif 000003
【００１６】
２．酸耐性試験
本発明のラクトバチルス・プランタラムNY3668株は後述する実験例に示すように、高い酸耐性を有する。酸耐性の確認については以下の試験方法によって行った。
【００１７】
＜前培養＞
MRS培地に復元培養した菌液を１％接種し、37℃・18時間嫌気培養し、前培養液とした。
【００１８】
＜酸耐性試験＞
MRS培地に6N塩酸を加えてpH2.5に調整し、121℃・15分間高圧蒸気滅菌後、無菌的に0.4％ペプシン液を10％添加し、酸性MRS培地を調製した。これに各菌株の前培養液を１％接種し、37℃・3時間静置したときの、接種直後、及び3時間静置後の生菌数を測定し、生菌残存率を算出した。
【００１９】
３．胆汁耐性試験
本発明のラクトバチルス・プランタラムNY3668株は後述する試験例に示すように、高い胆汁耐性を有する。胆汁耐性試験については以下の試験方法によって行った。
【００２０】
＜前培養＞
MRS培地に復元培養した菌液を１％接種し、37℃・18時間嫌気培養し、前培養とした。
【００２１】
＜胆汁耐性試験＞
MRS培地で牛胆汁Oxgall（Difco）無添加液及び0.2％添加液を調整し、121℃・15分間高圧蒸気滅菌した。これに各菌株の前培養液を１％接種し、37℃・18時間嫌気培養した後、分光光度計により濁度（OD660)を測定し、Oxgall無添加液に対する0.2％添加液の比として胆汁耐性率を算出した。
【００２２】
４．飲食品
本発明の乳酸菌は飲食品に含有せしめて使用することができる。本発明の乳酸菌は特に飲料に好適に用いることができるが、例えば、発酵乳及び乳酸菌飲料が考えられる。現行の乳及び乳製品の成分規格等に関する省令では、成分規格として発酵乳（無脂乳固形分8.0％以上のもの）や乳製品乳酸菌飲料（無脂乳固形分3.0％以上のもの）であれば1.0×10７／ｍｌ以上、乳酸菌飲料（無脂乳固形分3.0％未満のもの）であれば1.0×10６／ｍｌ以上必要とされるが、乳などのはっ酵液中で増殖させたり、最終製品の形態で増殖させるによって上記の菌数を実現することができる。
また、発酵乳及び乳酸菌飲料以外にも、バター等の乳製品、マヨネーズ等の卵加工品、バターケーキ等の菓子パン類等にも利用することができる。また、即席麺やクッキー等の加工食品にも好適に利用することができる。上記の他、本発明の食品は、前記乳酸菌と共に、必要に応じて適当な担体及び添加剤を添加して製剤化された形態（例えば、粉末、顆粒、カプセル、錠剤等）であってもよい。
【００２３】
本発明の食品は、一般の飲料や食品以外にも特定保健用食品、栄養補助食品等としても有用である。
【産業上の利用可能性】
【００２４】
本発明の乳酸菌（ラクトバチルス・プランタラムNY3668株）は高い酸耐性、胆汁耐性を有する。摂取した場合に高い割合で生菌のまま腸内まで到達することが可能となる。
【実施例】
【００２５】
以下、本発明の実施例を示すが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２６】
＜試験例１＞  酸耐性試験
本発明のラクトバチルス・プランタラムNY3668株について、プランタラム種内での比較のために4種のプランタラムを、はっ酵乳、乳酸菌飲料によく使用される菌との比較のためにカゼイ、ガッセリ、サーモフィルス、ブレビスを選択した。
【００２７】
【表３】
0005425337.tif 000004
【００２８】
酸耐性試験は次の手順により行った。MRS培地（OXOID社製）に本発明の乳酸菌及び上記表３に記載する各乳酸菌のそれぞれを復元培養した菌液を１％接種し、37℃・18時間培養し、前培養液とした。
【００２９】
別途、MRS培地に6N塩酸を加えてpH2.5に調整し、121℃・15分間高圧蒸気滅菌後、無菌的に0.4％ペプシン液を10％添加し、酸性MRS培地を調製した。これに各菌株の前培養液を１％接種し、37℃・3時間静置した。接種直後、及び3時間静置後の生菌数を測定し、生菌残存率を算出した。
【００３０】
結果を表４及び図１に示す。
【００３１】
【表４】
0005425337.tif 000005
【００３２】
本発明の乳酸菌（ラクトバチルス・プランタラムNY3668株）は他の乳酸菌と比べて、高い酸耐性を示した。
【００３３】
＜試験例２＞  胆汁耐性試験
本発明のラクトバチルス・プランタラムNY3668株について、他の乳酸菌と比較して胆汁耐性について検討した。比較対象として用いた乳酸菌は、以下の表３に記載したものである。
【００３４】
胆汁耐性試験は次の手順により行った。MRS培地（OXOID社製）に本発明の乳酸菌及び上記表３に記載する各乳酸菌のそれぞれを復元培養した菌液を１％接種し、37℃・18時間培養し、前培養液とした。
【００３５】
別途、MRS培地で牛胆汁Oxgall（Difco）無添加及び0.2％添加液を調整し、121℃・15分間高圧蒸気滅菌した。これに各菌株の前培養液を１％接種し、37℃・18時間嫌気培養した後、分光光度計により濁度（OD660)を測定し、Oxgall無添加に対する0.2％添加液の比として胆汁耐性率を算出した。
【００３６】
結果を表５及び図２に示す。
【００３７】
【表５】
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【００３８】
本発明の乳酸菌（ラクトバチルス・プランタラムNY3668株）は他の乳酸菌と比べて、比較的高い胆汁耐性を示した。
【００３９】
＜試験例３＞  本発明の乳酸菌を用いた乳酸菌飲料の調製
本発明の乳酸菌（ラクトバチルス・プランタラムNY3668株）を用いて実際に乳酸菌飲料を調整し、乳酸菌数の増殖を確認した。本発明の乳酸菌を脱脂粉乳10％液に接種して、30℃で48時間培養を行い培養液を得た。別途、ぶどう糖果糖液糖、安定剤、クエン酸を水溶し、殺菌したシロップ液（糖度10.5％、ｐH4.2）に前記培養液を５％添加し、乳酸菌飲料の仕様とした。当該乳酸菌飲料を10℃下で保存し、菌数の経時的推移を確認した。
【００４０】
結果、製造直後1.5×10６／ｍｌであった菌数は10℃保存下で減少することなく、21日保存後の菌数は1.9×10６／ｍｌとなった。当該菌数の変化について図３に示す。また、0、7、14、21日目のいずれにおいても当該乳酸菌飲料の風味は良好であった。
【００４１】
低ｐＨ条件下においては、10℃保存でも大半の乳酸菌に菌数の減少が認められ、これが商品の賞味期限決定要因のひとつとなっていることから、本発明の乳酸菌のもつ高い酸耐性は非常に有用である。
【要約】【課題】    本発明は、高い酸耐性及び胆汁耐性を有し、飲食品に好適に利用できる乳酸菌及び当該乳酸菌を含有する飲食品を提供することを目的とする。
【解決手段】
酸耐性、胆汁耐性を有する乳酸菌ラクトバチルス・プランタラムNY3668株（NITE P-01603）を提供する。また、当該乳酸菌を含有する飲食品を提供する。さらに、当該飲食品がはっ酵乳又は乳酸菌飲料であると好適である。
【選択図】図１【図１】
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【図２】
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【図３】
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