(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療が必要な患者のアルツハイマー病を治療するための薬剤の製造におけるエポチロンＤの使用であって、
患者に投与されるエポチロンＤの毎月の累積用量が、０．０１〜５ｍｇ／ｍ２である使用。
【請求項２】
エポチロンＤが経口投与される、請求項１の使用。
【請求項３】
エポチロンＤが静脈内投与される、請求項１の使用。
【請求項４】
エポチロンＤが、投与の２０分〜１時間後において０．５以上の脳透過性を示し、かつ、以下（１）２４時間以上の脳内半減期、および／または（２）投与の２４時間以上後において２以上の脳−肝臓間選択的保持率を示す、請求項１の使用。
【請求項５】
エポチロンＤ治療の使用の中止を必要とする薬剤性の副作用を引き起こすことなく、該患者におけるアルツハイマー病を治療するのに有効である、請求項１の使用。
【請求項６】
エポチロンＤがヒト患者に静脈内投与される、請求項１の使用。
【請求項７】
治療が必要な患者のアルツハイマー病を治療するための薬剤の製造におけるエポチロンＤの使用であって、
患者に投与されるエポチロンＤの毎月の累積用量が、０．０１〜５ｍｇ／ｍ２であって、
エポチロンＤ治療の使用の中止を必要とする薬剤性の副作用を引き起こすことなく、該患者におけるアルツハイマー病を治療するのに有効である、
エポチロンＤの使用。
【請求項８】
エポチロンＤがヒト患者に静脈内投与される、請求項７の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に、エポチロンＤを用いるタウ関連疾患の治療に関し、より具体的には、エポチロンＤを用いるアルツハイマー病の治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）とは、認知症の最も一般的な形態であり、２００６年において、世界中で推定２７００万人の人々が罹患している。ＡＤでは、年齢が知られている最大の危険因子であり、８５歳以上の人々における発症率は２５〜５０％である。人口の平均年齢が上昇するにつれて、ＡＤ患者の数は指数関数的に増大すると予測される。ＡＤは、６５歳以上の人々の死因で５番目に多く、大半の患者は最終的に、自宅での介護者による介護を必要とする。結果として、ＡＤは、甚大な経済的影響を有し、例えば、２００５年の直接的および間接的な推定費用は、米国だけでも１４８０億ドルであった。経済的費用のほかに、ＡＤは、患者およびその家族たちに対して計り知れない影響を及ぼし、重大な精神的苦痛および不安を引き起こす。
【０００３】
記憶および他の認知機能の進行性低下を伴う認知症の存在に基づき、また、認知症の他の原因を除外することにより、患者がＡＤを有する可能性が高いと診断する。臨床診断は、脳の神経病理学に基づき、具体的に述べると、診断には、脳の細胞外における斑の存在および濃縮、細胞内のもつれ、ならびに脳の神経変性を含めた、脳組織の評価を必要とするので、ＡＤの診断が裏付けられるのは死後に限られる。通常はより低度ではあるが、斑およびもつれは認知の正常な成人においても観察されるので、認知症もまた、診断に必須の部分である。
【０００４】
２つの薬剤クラスである、コリンエステラーゼ阻害剤およびＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）アンタゴニストが、現在のところ、ＡＤについて承認されている。これらの２つの治療剤クラスは、ある程度の臨床的利益を示すが、多くの患者には効果がなく、これらの薬物は、疾患の進行をほとんどまたはまったく修飾することなく、ＡＤの症状（例えば、認知機能）を改善するだけである。これらの理由で、この壊滅的な疾患に対する疾患修飾療法の同定が、医薬業界の主要な焦点である。
【０００５】
ＡＤを含めたタウオパチーを治療するための療法として、微小管安定化剤が示唆されている。例えば、Lee et al.（参考文献リスト、前出）を参照されたい。１９９４年５月に出願され、１９９６年１２月３日に付与された米国特許第５，５８０，８９８号において、Ｔｒｏｊａｎｏｗｓｋｉらは、微小管を安定化させることによりＡＤ患者を治療するためのパクリタキセル［ＴＡＸＯＬ（登録商標）］の使用を示唆している。パクリタキセルは、癌患者の治療における微小管安定化剤として極めて有効であることが分かっている；しかし、ＡＤに用いることを考えた場合、それは、脳透過性および末梢における神経障害の問題（以下でさらに説明する）を示し、ＡＤを治療するための実行可能な療法としては浮上していない。
【０００６】
１９９５年に、エポチロンＢが、パクリタキセルに類似の微小管安定化効果を及ぼすことが報告された（Bollag et al. 1995年）。エポチロンＡおよびエポチロンＢは、細菌であるソランギウム・セルロースムの発酵生成物からＨｏｆｌｅらにより単離された天然化合物である（例えば、ＷＯ９３／１０１２１）。Ｈｏｆｌｅらはまた、エポチロンＣ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、ならびに他の異性体および変異体を含め、エス・セルロースムおよび改変株により生成された、３７の天然のエポチロン変異体および関連の化合物も発見している（米国特許第６，６２４，３１０号）。
【０００７】
天然エポチロンに固有の特徴は、潜在的な抗癌薬としてのそれらの探索に対する多大な関心を引き起こした。今日、天然エポチロンＡおよびＢの最初の発見以来２０年近くが経過している。数百ものエポチロン類似体が発見され、様々な特許出願において記載され、「エポチロン」の表題の下に多数の文献が刊行されている（例えば、Altmann et al.、参考文献リスト、前出、396〜423頁を参照されたい）。
【０００８】
本出願の譲受人は、癌治療のために、エポチロンＢの半合成類似体であるイキサベピロンを開発している。イキサベピロンの構造式は：
【化１】
0005548675.tif 000002
である。
【０００９】
イキサベピロンの化学名は、（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２，１６−ペンタメチル−３−［（１Ｅ）−１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−１７−オキサ−４−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオンである。本譲受人である、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ（ＢＭＳ）社へと譲渡された米国特許第６，６０５，５９９号もまた参照されたい。イキサベピロンは、転移性乳癌の治療についてＦＤＡにより承認されている微小管安定化剤であり、ＩＸＥＭＰＲＡ（登録商標）の商標名で、ＢＭＳにより市販されている。イキサベピロンは、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，６０５，５９９号または同第７，１７２，８８４号に記載の通りに調製することができる。
【００１０】
Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａ  ＡＧ社による卵巣癌治療のための第ＩＩＩ相試験中にあるエポチロンＢ（パツピロンまたはＥＰＯ−９０６としても知られる）、Ｂａｙｅｒ  Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ社による、卵巣癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、および黒色腫を含めた各種の癌の治療のための第ＩＩ相試験中にある、エポチロンＢのベンゾチアゾリル−７−プロぺニル合成類似体であるサゴピロン（またはＺＫ−ＥＰＯ）を含めた、他の天然エポチロンおよび類似体が、癌治療のためのより進んだ臨床試験中にある。２００７年に、乳癌からの脳転移を治療するためのサゴピロンによる第ＩＩ相試験が、米国において開始された。加えて、エポチロンＤ類似体であるＫＯＳ−１５８４も、Ｋｏｓａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社（現在はＢＭＳ社により完全所有される子会社）による、非小細胞肺癌および充実性腫瘍を治療するための第ＩＩ相臨床試験へと進んでおり、エポチロンＤも、Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ社と提携するＫｏｓａｎ社による、癌治療のための第ＩＩ相臨床試験へと進んでいた；しかし、エポチロンＤにより癌を治療するための臨床試験は２００７年に打ち切られた。エポチロンＤの構造は、以下の式：
【化２】
0005548675.tif 000003
により表わすことができる。
【００１１】
エポチロンＤは、Ｈｏｆｌｅらに帰属の米国特許出願第０９／３１３，５２４号において組成物として特許請求され、その出願および特許がＵＳＰＴＯの特許審判抵触部に提訴の特許抵触第１０５，２９８号の対象であった、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙらに帰属の米国特許第６，２４２，４６９号および同第６，２８４，７８１号において説明されている。
【００１２】
本出願の譲受人はまた、癌治療について、ＢＭＳ−３１０７０５（本明細書における化合物ＩＩ）も臨床評価している。ＢＭＳ−３１０７０５は、卵巣癌を治療するための第Ｉ相臨床試験を経過した；それは、アミノ−エポチロンＦ類似体であり、化学構造：
【化３】
0005548675.tif 000004
を有する。
【００１３】
化合物ＩＩ（ＢＭＳ−３１０７０５）は、本明細書に組み込まれる米国特許第６，２６２，０９４号に記載の通りに調製することができる。
【００１４】
エポチロン化合物および類似体のうちのいくつかが癌の治療について臨床評価される一方で、癌治療薬がＡＤを含めた神経変性疾患を治療するのに有効に用いうるかどうかは極めて予測外のことである。この予測不可能性には、様々な因子が影響している。１つの因子は、血液脳関門（ＢＢＢ）に起因する、良好な脳透過性を達成することの実質的な困難である。化合物が神経変性脳疾患を治療するのに有用であるには、該化合物がＢＢＢを超えることが必要である；しかし、ＢＢＢの機能は外部の物質および毒素から脳を保護することであるため、良好なＢＢＢ透過性を有する有用な薬物の発見は困難である。加えて、ＢＢＢ透過性は、癌治療薬（脳腫瘍治療薬以外の）には望ましくない特徴である。癌治療薬の場合は通常、ＢＢＢ透過性の回避が求められるが、ＡＤまたは他の神経変性脳疾患を治療するようにデザインされる薬物の場合、該化合物が有効であるためには、良好なＢＢＢ透過性が必要である。したがって、例えば、パクリタキセルは極めて有効な癌治療薬であるが、ＢＢＢを介する脳透過性が低率であるため、ＡＤなどの脳疾患を治療するのに有用な療法としては浮上していない。
【００１５】
ＡＤおよび他の脳疾患の治療における、癌治療薬、特に、微小管安定化薬の有用性を評価することの予測不可能性に影響するさらなる因子は、薬物が脳を透過し、長時間にわたり脳内に保持され、末梢組織と比べて脳内において選択的に蓄積される能力に関与する。これらのパラメータは、脳対血漿比、脳内における半減期、また、末梢組織（中でも特に、肝臓）と比較した、脳内に保持される薬物量の比を用いて測定することができる。加えて、微小管安定化剤は、血漿から急速に消失することが典型的であるが、微小管を含有する組織からの消失はより緩徐であり、血漿レベルと組織レベルとの比較に適切な時間窓を設定することが重要となるため、これらの化合物について、脳透過性、脳内における保持、および脳内における選択的な蓄積を測定することは複雑である。特定の用量での微小管安定化剤が末梢組織に対して極めて細胞傷害性であることを踏まえると、脳対末梢組織比が特に重要な測定値である：パクリタキセルなどの微小管安定化剤を化学療法の用量で投与する場合、末梢における神経障害および他の副作用が生じることが多い（Postma et al. 1999年）。これらの副作用は、癌患者の治療では忍容されうるが、ＡＤおよび他の脳疾患に罹患する患者の治療には、異なる治療域および許容可能な副作用プロファイルが存在する。
【００１６】
神経変性疾患への潜在的な適用について癌治療薬を検討することに関与するまたさらなる困難は、投与方式ならびにこれと関連するバイオアベイラビリティーおよび細胞傷害性に関与する。
【００１７】
ＩＮＳＥＲＭ社のＡｎｄｒｉｅｕｘらに帰属し、２００４年１月３０日に公開された、ＷＯ２００５／０７５０２３ Ａ１では、エポチロンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、およびＦ、ならびにベンゾチアゾリルおよびピリジルによるエポチロンＢおよびＤの類似体を含めた特定のエポチロンおよび類似体が、統合失調症または自閉症など、ニューロンの結合性欠損に関与する疾患の治療に有用でありうることが示唆されている。しかし、Ａｎｄｒｉｅｕｘらは、ニューロンの結合性欠損に関連する疾患（すなわち、件の出願において特許請求された疾患）は、「神経変性を伴うアルツハイマー病などの進行性認知障害とは異なる」と述べて、ＡＤの治療のためのこれらの化合物の使用に対しては特許請求せず、したがって、この使用には反対の教示を行った。
【００１８】
Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ社のＬｉｃｈｔｎｅｒらに帰属するＷＯ０３／０７４０５３（’０５３）（２００３年９月１２日公開）では、原発性脳腫瘍、続発性脳腫瘍、多発性硬化症、およびＡＤを含めた、脳腫瘍および他の脳疾患を治療するための、広範な種類のエポチロン化合物およびエポチロン合成類似体の使用に対して、広範な特許請求が行われている。Ｌｉｃｈｔｎｅｒらは、４つの化合物、すなわち、該明細書において、化合物１：４，８−ジヒドロキシ−１６−（１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）−エテニル）−１−オキサ−７−（１−プロピル）−５，５，９，１３−テトラメチル−シクロヘキサデク−１３−エン−２，６−ジオン；化合物２：ジヒドロキシ−３−（１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）−エテニル）−１０−プロピル−８，８，１２，１６−テトラメチル−４，１７−ジオキサビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオン；および化合物３：７，１１−ジヒドロキシ−３−（２−メチルベンゾチオアゾール−５−イル）−１０−（プロプ−２−エン−１−イル）−８，８，１２，１６−テトラメチル−４，１７−ジオキサビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオンと命名された化合物と比較されたパクリタキセルについての特定のデータを報告している（特許公開第ＷＯ’０５３号の２１頁を参照されたい）。
【００１９】
とりわけ、Ｌｉｃｈｔｎｅｒらは、上記の３つのエポチロン類似体について、脳内および血漿中における濃度データについて報告しているが、最長４０分間にわたるデータに限られている。そのパクリタキセルの脳内レベルが検出レベル未満であり、化合物のいずれについても、脳対肝臓比、半減期、または脳内保持（例えば、長時間にわたる脳組織内における薬物濃度）に関するデータを報告していないため、Ｌｉｃｈｔｎｅｒらは、脳内レベル対血漿中レベルについて、パクリタキセルに対する比較データを報告することができていない。
【００２０】
上述の視点から、当技術分野では、タウオパチー、特にアルツハイマー病を治療する方法が依然として必要である。
【発明の概要】
【００２１】
本発明者らは、行動学的研究および神経病理学的研究を含めた複数のインビボ研究に基づき、エポチロンＤが、ＡＤを含めたタウ関連疾患の治療において、著明に有利なプロファイルを達成することを発見した。本発明者らは、エポチロンＤが、該化合物をこのような疾患の治療に特によく適するものとする、有利な特性の顕著な組合せを示すことを発見した。これらの特性には、ＢＢＢを超える高レベルの脳透過性だけでなく、長時間にわたり、末梢組織、中でもとりわけ、肝臓内において見出される薬物レベルと比較して著明に長い脳内半減期、および脳内における著明に高い選択的保持率が含まれる。加えて、本発明者らは、タウ関連疾患、特に、ＡＤの治療における著明な治療的利点を、低用量のエポチロンＤ、例えば、化学療法効果を達成するのに投与される用量の約１００分の１である用量により達成しうることをさらに発見した。結果として、本発明者らは、エポチロンＤの使用の中止を必要とする薬剤性の副作用および／または薬物の血漿中濃度レベルを引き起こすことなく、エポチロンＤによるタウ関連疾患の治療、特に、ＡＤの治療における療法を可能とする方法を発見した。化学療法治療と比較した低用量を踏まえれば、癌を治療するためのエポチロンおよび類似体の投与時において誘導される副作用と比較して、いずれの副作用も大幅に軽減される。
【００２２】
本発明は、著明に有利な治療プロファイルを示すエポチロンＤを用いてタウオパチーを含めたタウ関連疾患を治療する方法、また特に、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含む方法を提供する。
【００２３】
本発明は、患者におけるタウ関連疾患を治療するための、エポチロンＤを含む医薬組成物であって、本明細書で定義される良好な脳透過性、脳内における長い半減期、および脳内における選択的な保持（例えば、高度な脳対肝臓比）を含む治療プロファイルを示す組成物をさらに提供する。好ましい実施形態は、治療有効量のエポチロンＤおよび薬学的に許容される担体を含む、タウオパチー、特にＡＤを治療するための医薬組成物を含む。本発明のさらなる実施形態および態様を以下に示す。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は、エポチロンＤ（化合物Ｉ）を用いるＴｇ４５１０マウスについての実験の基本的なデザインを示す。
【００２５】
【図２】図２は、エポチロンＤ（化合物Ｉ）の投与以前である２．５カ月後におけるＴｇ４５１０マウスに対するモリス水迷路（ＭＷＭ）検査の結果を示す。
【００２６】
【図３】図３は、エポチロンＤ（化合物Ｉ）投与の２カ月後である４．５カ月後におけるＴｇ４５１０マウスに対するＭＷＭ検査の結果を示す。
【００２７】
【図４】図４は、エポチロンＤ（化合物Ｉ）を２カ月間にわたり投与された４．５カ月齢のＴｇ４５１０マウスにおける５日間の訓練の１８時間後の探索データを示す。「ＴＱ」とは標的四分円を表わし、「ＡＲ」とは隣接する右側の四分円を表わし、「ＡＬ」とは隣接する左側の四分円を表わし、「ＯＰ」とは、向かい側の四分円を表わす。行動の２つの測定値、すなわち各四分円内における％による経路長（Ａ）およびプラットフォーム通過回数（Ｂ）が記載される。
【００２８】
【図５】図５は、ビヒクル、１ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）、および１０ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）による治療の５．５カ月後のＴｇ４５１０マウスにおける海馬のＣＡ１領域およびＣＡ３領域内のニューロンカウントを示す。
【００２９】
【図６】図６は、ビヒクル、１ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）、および１０ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）で治療したＴｇ４５１０マウスに対する海馬のリン酸化タウ染色を示す。群当たり３匹ずつのマウスに由来する代表的な切片を示す。ＡＴ８陽性染色は、暗灰色および暗黒色である。
【００３０】
【図７】図７Ａ〜７Ｂは、ビヒクル、１ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）、および１０ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）で治療したＴｇ４５１０マウスにおける神経原線維変化についてのガリヤス銀染色を示す。図７Ａは、皮質染色の代表的な顕微鏡写真を示し、ここでは黒い銀染色が陽性である。非トランスジェニックマウスでは、より明るい背景染色および一部の血管染色が観察された。図７Ｂは、皮質および海馬の両方における銀染色の定量化を示す。
【００３１】
【図８】図８Ａ〜８Ｄは、最長２４時間の様々な間隔での静脈内投与後におけるマウスの血漿、脳、および肝臓における化合物ＩＩ（図８Ａ）、イキサベピロン（図８Ｂ）、パクリタキセル（図８Ｃ）、およびエポチロンＤ（化合物Ｉ）（図８Ｄ）の濃度を示す。
【００３２】
【図９】図９は、投与の５〜２４時間後までの経口投与（３５ｍｐｋ）後の脳内におけるエポチロンＤ（化合物Ｉ）および化合物ＩＩＩ（本明細書の実施例７に記載の）の濃度を示す。
【００３３】
【図１０】図１０は、投与後最長１週間の時間間隔後のマウスの血漿、脳、および肝臓におけるエポチロンＤ濃度を示す。
【００３４】
（略号）
以下は、本明細書において用いられる様々な用語の略号である。
３Ｒ＝３回の反復
４Ｒ＝４回の反復
ＡＤ＝アルツハイマー病
ＡＰＰ＝βアミロイド前駆体タンパク質
ＢＢＢ＝脳血液関門
ＢＭＳ＝Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社
ＣＨＣｌ３＝クロロホルム
ＣＨ２Ｃｌ２＝塩化メチレン
ＤＭＡＰ＝４−ジメチルアミノピリジン
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィー
ＦＤＡ＝米国食品医薬品局
ＦＴＤＰ−１７＝第１７染色体と関連するパーキンソン病を伴う前頭側頭部認知症
Ｈ、ｈ、ｈｒ＝時間
ＩＰ＝腹腔内
ＩＶ＝静脈内
ＬＤＡ＝リチウムジイソプロピルアミド
ＬＬＱ＝定量下限
＜ＬＬＱ＝ＬＬＱ未満、検出不能
ＭＡＰ＝微小管関連タンパク質
ＭｅＯＨ＝メタノール
ｍｉｎ＝分
ＭＴ＝微小管
ｍｐｋ＝キログラム当たりのミリグラム
ＭＷＭ＝モリス水迷路
ｎＭ＝ナノモルの
ＮＱ＝＜ＬＬＱである１つまたは複数のデータ点に起因して定量不能
ＰＥＧ＝ポリエチレングリコール
ＰＧＰ＝Ｐ糖タンパク質
ＰＯ＝経口（経口投与）
ＰＶＰ＝ポリビニルピロリドン
ＲＴ＝室温
ＳｉＯ２＝シリカゲル
ＴＢＡＦ＝テトラブチルアンモニウムフルオリド
ＴＢＳ＝トリス緩衝生理食塩液
ＴＥＡ＝トリエチルアミン
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＰＧＳ＝ｄ−α−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート
【００３５】
（定義）
本明細書で用いられる「約」とは、問題とされる測定値および測定を行うために用いられる測定器を考慮して当業者が決定する、特定の値に対する標準偏差の許容範囲内（すなわち、測定系の限界）を意味する。例えば、「約」とは、１つまたは複数の標準偏差内を意味しうる。製剤および用量に適用される「約」は、報告される数の１０％以内、より好ましくは５％以内、さらにより好ましくは２％以内にある偏差を意味しうる。
【００３６】
本明細書において、ｘが数値を示す場合の「少なくともｘ」および「ｘ以上」という用語は、それらが同じ意味を有することを意図するものとして、本明細書では互換的に用いられる。
【００３７】
「脳透過性」とは、化合物がＢＢＢを超える能力を指す。大半の微小管安定化剤に対する末梢クリアランスが急速であるために、投与の比較的短時間後、例えば、投与の約２０分〜１時間後における脳対血漿比を測定して、脳透過性自体を評価することが重要である。本明細書で定義される良好な脳透過性を有する化合物とは、投与の約２０分〜１時間後において、０．５以上の脳対血漿比、より好ましくは０．８以上、最も好ましくは１以上の比（ここでも、投与の約２０分〜１時間後において）を示す化合物を意味する。化合物または薬物が、高度な脳／血漿比のこの基準（例えば、本明細書の特許請求の範囲において列挙される）を満たすかどうかを評価する場合、薬物濃度を評価するのにヒトの脳組織を解析することはできないので、インビボにおける非ヒト研究に依拠しなければならない。
【００３８】
「認知的利益」とは、治療を必要とする少なくとも１人の患者について、認知試験、全体的機能の測定値、ならびに日常生活の活動および行動を特徴とする認知機能の改善またはその低下の軽減が観察または報告されることを意味する。認知的利益は、患者または患者群における認知低下を測定する目的でデザインされる認知検査により測定される。このような検査の例には、ＡＤＡＳ−ｃｏｇ（アルツハイマー病評価スケール、認知サブスケール）およびＭＭＳＥ（ミニメンタルステート検査）などの認知検査；ＮＰＩ（神経精神症状検査票）などの行動検査；ＡＤＣＳ−ＡＤＬ（アルツハイマー病共同研究−日常生活動作検査）などの日常生活動作検査；ならびにＣＩＢＩＣ−ｐｌｕｓ（医師の面接に基づく変化の印象）、およびＣＤＲ（臨床的認知症評価）の下位尺度累計などの全体的な機能検査が含まれる。
【００３９】
本明細書で用いられる「長時間」とは、２４時間以上、典型的には２４〜７６時間を意味する。
【００４０】
本明細書で用いられる「高度な選択的保持率」または「高度な選択的保持」とは、投与の長時間後において測定した場合、薬物または化合物が、１つの組織または内臓、特に、脳において、他の組織および内臓、特に、肝臓において見出されるよりはるかに高いレベルで保持されることを意味する。本明細書で定義される通りにより具体的に述べると、高度の選択的保持率とは、脳内における薬物濃度が、投与の２４時間以上後に肝臓で見出される濃度の４倍以上、より好ましくは、少なくとも６倍以上、最も好ましくは、投与の２４時間以上後に少なくとも８倍以上であることを意味する。化合物または薬物が、高度な選択的保持のこの基準（例えば、本明細書の特許請求の範囲において列挙される）を満たすかどうかを評価する場合、薬物濃度を評価するのにヒトの脳組織を解析することはできないので、当然非ヒト研究に依拠しなければならない。
【００４１】
「基礎疾患に対する影響」とは、ＣＳＦ中または血漿中における生化学的マーカー、脳容量の変化、機能的画像化により測定される脳機能の変化、および剖検後において観察されうる組織病理学または生化学における変化を含めた、該疾患過程と関連するバイオマーカーおよび他のパラメータの測定値の改善を意味する。ＡＤの臨床試験に用いうる典型的なバイオマーカーには、タウ、ホスホタウ、ベータ−アミロイド、およびイソプロスタンなど、ＣＳＦ中において測定される解析物のほか、フルオロデオキシグルコースＰＥＴおよび容量測定ＭＲＩなどの脳画像化モダリティーが含まれる。潜在的に有用でありうるさらなるバイオマーカー、特に、シナプス活性、ＭＴの完全性／機能、および酸化的ストレスを検討するバイオマーカーには、ＧＡＢＡ、神経ペプチドＹ、アルファ−シヌクレイン、ニューログラニンおよび血管作動性腸ペプチド、チューブリン、タウフラグメント、ユビキチン化タンパク質、アミロイド前駆体タンパク質の可溶性形態、クロモグラニンＢ、４−ヒドロキシノネナール、ニトロチロシン、および８−ヒドロキシドキシグアニジンが含まれるが、これらに限定されない。
【００４２】
投与スケジュールとの関係で用いられる場合の「断続的」とは、該投与スケジュールが不規則に中断することを意味する。例えば、毎日、毎週、隔週、または毎月の投与スケジュールは、投与間の休止が各場合において定期的であり、薬物を投与する投与周期により定義されるので、この定義の下では断続的とは考えられない。しかし、５日間施薬した後で２日間休薬する；または３０日周期の第１、８、および１５日において投与される投与など、１回または複数回の不規則な中断を伴う、より精緻な投与スケジュールならば、断続的であると考えられるであろう。
【００４３】
本明細書で用いられる「長い半減期」または「長い脳内半減期」とは、薬剤の半減期が投与後２０時間以上（これは、用量非依存性であると考えられる）であり、より好ましくは、投与後３０時間以上にわたり、最も好ましくは、投与後４０時間以上にわたることを意味する。選択的保持率についてと同様、化合物の脳内半減期が長いかどうかを評価する場合には、インビボにおける非ヒト試験に依拠しなければならない。
【００４４】
本明細書で用いられる「低用量」とは、化学療法効果を達成するのに投与される用量（例えば、所与の特定の投与方式、臨床試験、および／または実験）を著明に下回る用量のエポチロンＤ化合物、好ましくは、化学療法用量の１０分の１以下の用量、より好ましくは、５０分の１以下の用量、またさらにより好ましくは化学療法用量、すなわち、所与の実験、研究、または試験について、同じ投与方法を用いて化学療法的に有効であると既に評価された用量の１００分の１以下の用量を意味する。例えば、エポチロンＤの第ＩＩ相臨床試験において投与された用量は、４週間ごとに、３週間にわたり、毎週１回、９０分間の注入として投与された１００ｍｇ／ｍ２であり（３週間施薬し、１時間休薬）、４週間ごとに投与された３００ｍｇ／ｍ２の累積総量に相当した。本明細書で定義される、この臨床試験用量と比べた低用量ならば、３０ｍｇ／ｍ２以下の静脈内投与後１カ月間の累積用量、より好ましくは、６ｍｇ／ｍ２以下の用量、またさらにより好ましくは、３ｍｇ／ｍ２以下の用量を意味するであろう。したがって、代替的な例として、４週間ごとに１回投与される場合の、上記の臨床試験用量と比較した低用量ならば、３０ｍｇ／ｍ２の用量、より好ましくは、６ｍｇ／ｍ２の用量、またさらにより好ましくは、３ｍｇ／ｍ２の用量を意味するであろう。バイオアベイラビリティーは、投与方式に依存して変化しうる（例えば、経口投与対静脈内投与では、経口投与時に達成されるバイオアベイラビリティーの方が低い）ので、相対用量（すなわち、所与の用量が本明細書で定義される「低用量」であるかどうかの評価）は、同じであるかまたは類似の投与方式を伴う比較に基づくべきである。
【００４５】
本明細書で用いられる「治療を必要とする患者」とは、１）軽度の認知障害から進行した認知症を有する患者を含め、任意の臨床病期におけるタウ関連疾患（タウオパチー、特に、ＡＤを含めた）を有すると既に診断された患者；および／または２）タウ関連疾患（タウオパチー、特に、ＡＤを含めた）の早期症状および早期徴候または前駆症状および前駆徴候を有する患者；および／または３）年齢、遺伝、または他の因子によりタウ関連疾患（タウオパチー、特に、ＡＤを含めた）に対して感受性であると診断されており、疾患の症状または徴候の発生または進行または悪化もしくは増悪を遅延させるためにある治療コースが医学的に推奨される患者に対するエポチロンＤの使用を包含することを意図する。
【００４６】
「統計学的に有意な認知的利益」とは、評価された少なくとも１０％以上の患者、より好ましくは、少なくとも２５％以上の患者、またさらにより好ましくは、５０％以上の患者群について、治療の６カ月〜１年後において、認知的利益（認知機能の改善またはその低下の軽減）が見られることを意味する。好ましくは、対照群と比較した比率での改善が評価され、これにより少なくとも１０％の改善（例えば、プラセボと対照との比較検査スコアに基づき評価され、「改善」とは、患者状態の低下の軽減を包含することを意図する）が反映され、より好ましくは、２５％以上の比率で改善が観察され、最も好ましくは、３５％以上の比率で改善が観察される。
【００４７】
本明細書で定義される「タウ関連疾患」とは、「タウオパチー」である疾患のほか、タウにおける異常と関連する疾患も意味する。タウ関連疾患には、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ−１７）の亜型、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、嗜銀顆粒性疾患を含めた前頭側頭認知症、並びに、パーキンソン病、ダウン症候群、脳炎後パーキンソン病、筋強直性ジストロフィー、ニーマン−ピック病Ｃ型、ボクサー認知症、ブリント病、プリオン病、筋萎縮性側索硬化症、グアム島パーキンソン認知症複合、多発性硬化症、緑内障、糖尿病性網膜症、および外傷性脳傷害；ならびにハンチントン病、レビー小体型認知症、シャルコー−マリー−トゥース病、遺伝性痙性対麻痺、および多発性全身性萎縮症が含まれるがこれらに限定されない。
【００４８】
本明細書で定義される「タウオパチー」とは、脳内におけるタウタンパク質の線維形態（もつれ）と関連する神経変性疾患を意味する。これらの疾患にはＡＤが含まれる；しかし、他のタウオパチーには、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ−１７）の亜型、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、および嗜銀顆粒性疾患を含めた前頭側頭認知症も含まれるが、これらに限定されない。
【００４９】
「治療有効量のエポチロンＤ」とは、
（１）認知症、記憶喪失、理解力の低下、日常生活動作を行う際の障害、ならびに／または運動障害および視覚など、中枢神経を介する影響などの認知機能を含めた、タウ関連疾患（好ましくは、タウオパチー、より好ましくは、ＡＤ）の少なくとも１つの症状を軽減または緩和し；かつ／あるいは
（２）タウ関連疾患（好ましくは、タウオパチー、より好ましくは、ＡＤ）と関連する認知機能の喪失の発生または悪化を可逆化、軽減、予防、阻害するか、もしくは遅延させ、かつ／または運動障害および視覚を含めた、中枢神経を介する前記疾患の１つもしくは複数の影響の発生もしくは悪化を、可逆化、軽減、予防、阻害するか、もしくは遅延させるのに十分な量のエポチロンＤを意味する。本発明の好ましい実施形態において、エポチロンＤの医薬化合物は、タウ関連疾患（好ましくは、タウオパチー、より好ましくは、ＡＤ）の症状を軽減または緩和する際に治療的に有効であるだけでなく、基礎疾患（すなわち、上記で定義した）に対して影響を及ぼす際にも有効である。
【００５０】
（本発明の代替的な実施形態）
本発明者らは、タウ関連疾患の治療に投与されるエポチロンＤが、特に、他の微小管安定化剤と比較して、著明なレベルの脳透過性、長い脳内半減期、および選択的保持を達成することを見出した。本発明者らは、注目すべきことに、タウ関連疾患（特定すれば、タウオパチー、より特定すれば、ＡＤ）の治療における治療効果の増大が、低用量のエポチロンＤにより達成されることをさらに発見した。タウ関連疾患、好ましくはＡＤの有効な治療に、それ自体としては比較的低用量のエポチロンＤを投与することができる。こうして、本発明者らは、アルツハイマー病を有する患者に対するエポチロンＤの投与を用いてＡＤを治療する方法を開発した。該方法は、ヒト患者におけるＡＤを治療する際に治療的に有効であることが期待される一方で、また、これによりもたらされる副作用は、微小管安定化剤を化学療法でヒト患者に投与する場合に生じることが典型的な副作用と比較して、重篤さの程度が著明に低いか、またはより少数である。軽減されるかまたは消失する副作用には、１つまたは複数の胃腸障害（悪心、下痢、口内炎／粘膜炎、嘔吐、食欲不振、便秘、および／または腹痛を含むが、これらに限定されない）、肝臓毒性、好中球減少症、白血球減少症、骨髄抑制、脱毛症、筋肉痛／関節痛、疲労、筋骨格痛、爪障害、発熱、頭痛、皮膚落屑、および／または様々なグレードレベルにおける神経感覚効果が含まれうる。
【００５１】
本発明の代替的な実施形態によれば、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含み、該エポチロンＤ化合物が、本明細書で定義される、良好な脳透過性、長い脳内半減期、および高度な選択的保持率から選択される２つ以上の特性を有し、より好ましくは、該エポチロンＤが、本明細書でこれらの用語が定義される、良好な脳透過性、長い脳内半減期、および選択的保持率の３つの特性すべてを示す方法が提供される。
【００５２】
本発明の別の実施形態によれば、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含み、投与時における該エポチロンＤ化合物が、
・投与の２０分〜１時間後において測定された０．５以上、より好ましくは０．８以上、最も好ましくは１以上の脳透過性；および／または
・少なくとも２４時間、より好ましくは、少なくとも３０時間、最も好ましくは最長４０時間以上の脳内半減期；および／または
・投与の２４時間以上後において少なくとも４の脳−肝臓間選択的保持率、より好ましくは、２４時間以上後において６以上の比率、最も好ましくは、投与の２４時間以上後において８以上の倍率
のうちの２つ以上から選択される特性を有する方法が提供される。
【００５３】
本発明の別の実施形態によれば、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含み、投与時における該エポチロンＤ化合物が、
・投与の２０分〜１時間後において測定された０．５以上、より好ましくは０．８以上、最も好ましくは１以上の脳透過性；および／または
・少なくとも２４時間、より好ましくは、少なくとも３０時間、最も好ましくは最長４０時間以上の脳内半減期；および／または
・投与の２４時間以上後において少なくとも４の脳−肝臓間選択的保持率、より好ましくは、２４時間以上後において６以上の比率、最も好ましくは、投与の２４時間以上後において８以上の倍率
の３つすべてから選択される特性を有する方法が提供される。
【００５４】
本発明の別の実施形態によれば、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含み、その使用の中止を必要とする薬剤性の副作用および／または薬物の血漿中濃度レベルを引き起こすことなく、該患者におけるＡＤを治療する際に治療的に有効な方法が提供される。
【００５５】
本発明の別の実施形態によれば、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含み、その使用の中止を必要とする薬剤性の副作用および／または薬物の血漿中濃度レベルを引き起こすことなく、ＡＤの治療において認知的利益、より好ましくは、統計学的に有意な認知的利益をもたらす方法が提供される。
【００５６】
本発明の別の実施形態によれば、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含み、その使用の中止を必要とする薬剤性の副作用および／または薬物の血漿中濃度レベルを引き起こすことなく、基礎疾患に対する影響、より好ましくは、基礎疾患に対する統計学的に有意な影響を及ぼす方法が提供される。
【００５７】
本発明の別の実施形態によれば、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含み、その使用の中止を必要とする、消化器における副作用、白血球減少症、および／または神経毒性などの副作用を引き起こすことなく、基礎疾患に対して影響を及ぼし、認知的利益をもたらし、かつ／または他の形で治療的に有効な方法が提供される。
【００５８】
本発明の別の実施形態によれば、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含み、エポチロンＤの用量が、本明細書に定義される低用量である方法が提供される。
【００５９】
本発明の別の実施形態によれば、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含み、エポチロンＤの用量が、毎日、毎週、または断続的な投与周期で投与される、０．００１〜１０ｍｇ／ｍ２、または代替的に、０．００００３〜０．３ｍｐｋの用量である方法が提供される。
【００６０】
本発明の別の実施形態によれば、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含み、エポチロンＤが静脈内投与され、毎月の投与周期にわたるエポチロンＤの累積用量（すなわち、スケジュール、例えば、毎週、隔週、３週間施薬で１週間休薬などにかかわらず、１カ月の周期にわたって投与される化合物の総用量）が、０．００１〜５ｍｇ／ｍ２、より好ましくは、０．０１〜５ｍｇ／ｍ２、さらにより好ましくは、０．０１〜３ｍｇ／ｍ２、さらにより好ましくは、０．１〜３ｍｇ／ｍ２、最も好ましくは、０．１〜１ｍｇ／ｍ２の範囲にある方法が提供される。
【００６１】
本発明の別の実施形態によれば、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含み、エポチロンＤが経口投与され、毎日のベースで計算されたエポチロンＤの用量が、０．００１〜２ｍｇ／ｍ２、より好ましくは、０．０１〜２ｍｇ／ｍ２、さらにより好ましくは、０．１〜２ｍｇ／ｍ２、さらにより好ましくは、０．２〜２ｍｇ／ｍ２の範囲にある方法が提供される。
【００６２】
本発明の別の実施形態によれば、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含み、エポチロンＤが経口投与され、毎月の累積ベースのエポチロンＤ用量（すなわち、スケジュール、例えば、毎日、毎週、隔週などにかかわらず、１カ月の周期にわたり投与される化合物の総用量）が０．０３〜６０ｍｇ／ｍ２、より好ましくは、０．３０〜６０ｍｇ／ｍ２、さらにより好ましくは、３〜６０ｍｇ／ｍ２、さらにより好ましくは、６〜６０ｍｇ／ｍ２の範囲にある方法が提供される。
【００６３】
本発明の別の実施形態によれば、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含み、エポチロンＤが毎日１回、毎週１回、隔週１回、または毎月１回から選択される投与スケジュールで経口投与される方法が提供される。
【００６４】
本発明の別の実施形態によれば、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含み、エポチロンＤが毎日１回から選択される投与スケジュールで経口投与され、エポチロンＤの毎日の用量が０．２〜２ｍｇ／ｍ２である方法が提供される。
【００６５】
本発明の別の態様によれば、上記で列挙された本発明の実施形態のいずれか１つによる、ＡＤ以外の他のタウオパチーを治療する方法が提供される。例えば、このような他のタウオパチーには、本明細書の「タウオパチーに関連する疾患」の定義において言及される１つまたは複数の疾患が含まれうる。例えば、本発明の一実施形態は、ＡＤだけでなく、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ−１７）の亜型、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、嗜銀顆粒性疾患を含めた前頭側頭認知症、並びに、パーキンソン病、ダウン症候群、脳炎後パーキンソン病、筋強直性ジストロフィー、ニーマン−ピック病Ｃ型、ボクサー認知症、ブリント病、プリオン病、筋萎縮性側索硬化症、グアム島パーキンソン認知症複合、多発性硬化症、緑内障、糖尿病性網膜症、および／または外傷性脳傷害から選択される疾患もまた治療するための、上記実施形態のいずれかによるエポチロンＤの使用を含む。好ましい実施形態は、ＡＤ；１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ−１７）の亜型、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、および嗜銀顆粒性疾患を含めた前頭側頭認知症から選択される疾患が含まれるがこれらに限定されないタウオパチーを治療するための、本明細書に記載の実施形態のいずれかによるエポチロンＤの使用を含む。
【００６６】
本発明の別の実施形態によれば、タウ関連疾患、より好ましくは、タウオパチー、最も好ましくは、ＡＤの治療において用いられるエポチロンＤが提供される。
【００６７】
上記の本発明の方法の各々はまた、１つまたは複数の、本発明の他の方法とも組み合わせうることが意図され、本明細書では、上記の本発明の方法によるこのように多様な組合せのすべてが意図される。例えば、上記の本発明の方法による１つの組合せは、アルツハイマー病を治療する方法であって、治療有効量のエポチロンＤを患者に投与する工程を含み、その使用の中止を必要とする薬剤性の副作用および／または薬物の血漿中濃度レベルを引き起こすことなく、該患者におけるＡＤを治療する際に治療的に有効であり；エポチロンＤの用量が、静脈内投与される毎月の累積用量０．００１〜５ｍｇ／ｍ２であり；かつ／またはエポチロンＤの用量が、毎日経口投与される０．００１〜２ｍｇ／ｍ２であり；かつ／またはエポチロンＤの用量が、経口投与もしくは静脈内投与について上記で表わされた好ましい範囲のうちのいずれか１つのうちにある用量から選択される方法を含みうる。
【００６８】
また、列挙された治療方法のいずれかを、ヒト患者におけるタウオパチー、好ましくは、ＡＤの治療において用いられるエポチロンＤを伴う実施形態と組み合わせうることも意図される。したがって、例えば、上記の代替的な実施形態の組合せを含む、本発明の一実施形態ならば、ＡＤを治療するためのエポチロンＤを含み、該使用はＡＤを治療する際に治療的に有効であり、該エポチロンＤは、毎日、毎週、または断続的な投与周期で投与される、０．００１〜１０ｍｇ／ｍ２、または代替的に、０．００００３〜０．３ｍｐｋの用量で該患者に投与されるであろう。さらに別の実施形態ならば、タウオパチー、特に、ＡＤを治療するためのエポチロンＤを含み、該エポチロンＤが低用量でヒト患者に投与され、基礎疾患に対して影響を及ぼし、かつ／または認知的利益をもたらす際に治療的に有効であろう。
【００６９】
本発明の別の実施形態によれば、タウ関連疾患、好ましくは、タウオパチー、より好ましくは、ＡＤの治療を必要とするヒト患者に投与するのに適するエポチロンＤを含む医薬製剤であって、該製剤の投与が、その使用の中止を必要とする薬剤性の副作用および／または薬物の血漿中濃度レベルを引き起こすことなく、該患者における疾患を治療する際に治療的に有効な医薬製剤が提供される。
【００７０】
本発明のさらに別の実施形態によれば、タウ関連疾患、好ましくは、タウオパチー、より好ましくは、ＡＤの治療を必要とするヒト患者に投与するのに適するエポチロンＤを含む医薬製剤であって、該製剤の投与が、その使用の中止を必要とする薬剤性の副作用および／または薬物の血漿中濃度レベルを引き起こすことなく、該疾患の治療において統計学的に有意な認知的利益をもたらす医薬製剤が提供される。
【００７１】
本発明のさらに別の実施形態によれば、タウ関連疾患、好ましくは、タウオパチー、より好ましくは、ＡＤの治療を必要とするヒト患者に投与するのに適するエポチロンＤを含む医薬製剤であって、その使用の中止を必要とする薬剤性の副作用および／または薬物の血漿中濃度レベルを引き起こすことなく、基礎疾患に対する影響を及ぼす際に有効な医薬製剤が提供される。
【００７２】
本発明のさらに別の実施形態によれば、タウ関連疾患、好ましくは、タウオパチー、より好ましくは、ＡＤの治療を必要とするヒト患者に投与するのに適する医薬製剤であって、０．０００１〜１０ｍｇ／ｍ２、より好ましくは、０．００１〜５ｍｇ／ｍ２、さらにより好ましくは、０．００１〜３ｍｇ／ｍ２、さらにより好ましくは、０．００１〜１ｍｇ／ｍ２、最も好ましくは、０．００１〜０．５ｍｇ／ｍ２の用量単位のエポチロンＤを含む医薬製剤が提供される。
【００７３】
本発明のさらに別の実施形態によれば、ヒト患者に静脈内投与するための医薬製剤であって、０．００１〜５ｍｇ／ｍ２、より好ましくは、０．０１〜５ｍｇ／ｍ２、さらにより好ましくは、０．０１〜３ｍｇ／ｍ２、さらにより好ましくは、０．１〜３ｍｇ／ｍ２、最も好ましくは、０．１〜１ｍｇ／ｍ２の範囲にある毎月の累積用量のエポチロンＤのデリバリーに適する医薬製剤が提供される。
【００７４】
本発明のさらに別の実施形態によれば、ヒト患者に経口投与するための医薬製剤であって、０．０３〜６０ｍｇ／ｍ２、より好ましくは、０．３０〜６０ｍｇ／ｍ２、さらにより好ましくは、３〜６０ｍｇ／ｍ２、さらにより好ましくは、６〜６０ｍｇ／ｍ２の範囲にある毎月の累積経口用量のエポチロンＤのデリバリーに適する医薬製剤が提供される。
【００７５】
本発明のさらに別の実施形態によれば、ヒト患者に投与するための医薬製剤であって、約０〜５０％のプロピレングリコール、約１〜１０％のＴＰＧＳ、約０．５〜１０％エタノール、約０〜９０％の水、および／または約５〜８５％のＰＥＧ−４００などのＰＥＧを含む、薬学的に許容される溶媒系中においてエポチロンＤを含む医薬製剤が提供される。
【００７６】
本明細書では、上記の本発明の医薬製剤の各々による組合せもまた意図される。
【００７７】
（有用性）
（タウオパチー）
タウオパチーは、脳組織内におけるタウタンパク質の異常な形態と関連する神経変性疾患である。アルツハイマー病（ＡＤ）が、タウの機能不全を伴う最初の神経変性疾患として同定された。特に、その存在がＡＤにおける特徴的病態の１つである神経原線維変化が、タウタンパク質の線維形態、リン酸化過剰形態、立体構造が変化した形態を含有することが判明した。その後、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ−１７）、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、および嗜銀顆粒性疾患を含めた他のタウオパチーが同定された。さらに、タウ異常性との連鎖（過剰リン酸化タウ、タウ凝集物、および／またはＨ１／Ｈ１タウハプロタイプとの関連を含む）は、パーキンソン病、ダウン症候群、脳炎後パーキンソン病、筋強直性ジストロフィー、ニーマン−ピック病Ｃ型、ボクサー認知症、ブリント病、プリオン病、筋萎縮性側索硬化症、グアム島パーキンソン認知症複合、多発性硬化症、緑内障、糖尿病性網膜症、および外傷性脳傷害と関連づけられている。（Avila et al. 2004年；Bartosik-Psujek et al. 2006年；Dickey et al. 2006年；Wostyn et al. 2008年）。
【００７８】
タウとは、微小管（ＭＴ）に結合してこれを安定化させる、５０〜７５ｋＤａの微小管関連タンパク質（ＭＡＰ）である。タウには６つの一次配列変異体が存在し、これらの変異体は、選択的スプライシングにより形成される（Lace et al. 2007年）。スプライス変異体は、微小管結合ドメインの３つの反復（３Ｒ）または４つの反復（４Ｒ）と組み合わせた、０、１つ、または２つのＮ末端挿入（０Ｎ、１Ｎ、または２Ｎ）を含有する。反復ドメインが微小管の安定化に必要であるのに対し、該反復ドメインの両側にあるプロリンに富む領域は、微小管に対する結合に必要である（Preuss et al. 1997年）。反復ドメインおよびプロリンに富む領域は複数のキナーゼによりリン酸化され、これにより、タウが微小管から解離する。タウのＮ末端は、微小管表面から外側に伸び、そこで、微小管間の間隔を決定し、運動タンパク質であるダイナクチンが微小管に結合することを補助する（Magnani et al. 2007年）。正常な細胞では、３Ｒタウおよび４Ｒタウがほぼ同等レベルで存在する。４Ｒタウは、３Ｒタウより強固に微小管に結合する。
【００７９】
タウは、ニューロンにおいて最も豊富であり、そこでは、主に軸索に局在化している。タウは、ニューロンの軸索における主要な微小管関連タンパク質であり、そのＭＡＰ１ファミリーはニューロンにおいて広く分布するが、そのＭＡＰ２ファミリーは主に細胞体樹状突起にある。タウは、軸索の微小管を安定化させ、これにより、分解の標的とされるタンパク質、細胞小器官、脂質、細胞成分の輸送、および細胞体とシナプス末端との間における二方向的な細胞シグナル伝達分子の輸送を促進する。タウの機能不全が生じると、軸索による輸送が妨げられ、これにより、ニューロンの機能および生存に影響が及ぼされうる。マウスにおいてタウ遺伝子をノックアウトしても結果として生じる帰結は軽度であるが、タウ遺伝子およびＭＡＰ  １Ｂ遺伝子の両方を除去すると、該二重ノックアウトマウスは胚の段階で死滅する。発生を含めた多くの場合において、一部のＭＡＰ発現における変化は、互いに代替し合うと考えられる（Avila et al. 2004年）。
【００８０】
一部の症例、特に、ＦＴＤＰ−１７および他の前頭側頭認知症では、タウをコードする遺伝子（場合によって、ＭＡＰＴとも呼ばれる）における突然変異により、タウオパチーが引き起こされる。ＦＴＤＰ−１７における多くの突然変異では、インビトロにおいて微小管に対する結合が低下し、かつ／またはそれらが線維を形成する傾向が増大する（Lace et al. 2007）。タウオパチーに関連する他の突然変異では、主に３Ｒまたは４Ｒのタウを生成するタウのスプライスパターンが変化する。Ｎ末端における、さらに別のクラスのタウ突然変異は、ダイナクチンに対する結合能力を変化させる（Magnani et al. 2007年）。これらの突然変異のすべては、タウの正常な機能を妨げる可能性を有する。ＡＤの場合、βアミロイド（Ａβ）により、タウにおける異常がもたらされると考えられる。
【００８１】
もつれおよび他のタウ凝集物がタウオパチーの病理学的特徴であるが、複数の筋からの証拠により、一部の他の可溶性で未同定の異常なタウ形態が神経毒性であることが示唆されている。凝集して神経原線維変化をもたらすタウが直接には病原性でないことを示唆するデータには、ヒト脳およびマウスモデルに対する観察が含まれる。例えば、異なる領域および異なる病期のアルツハイマー病脳に対する検討により、神経原線維変化が生じても、数十年間にわたりニューロンは生存し機能しうるという結論が得られている（Morsch et al. 1999年）。同様に、ヒトタウ（ｈタウ）によるトランスジェニックマウスは、もつれおよび重篤な神経変性を示すが、もつれを伴うニューロンは、選択的な損傷の徴候を示さず、このモデルにおいて観察されるニューロンの劇的な喪失を説明するにはあまりに少数である（Andorfer et al. 2005年）。誘導性のタウトランスジェニック株であるＴｇ４５１０は、タウ−Ｐ３０１Ｌを誘導すると、劇的で急速なもつれの形成、神経変性、および行動学的障害を示す（Santacruz et al., 2005年）。タウ−Ｐ３０１Ｌの発現を抑制すると、神経変性および認知障害は大幅に軽減されるが、もつれの形成は持続する。これらのマウスを用いるさらなる研究は、可溶性のタウ多量体が、認知障害と相関することを示す。類似のタウ多量体はまた、ＦＴＤＰ−１７およびＡＤの脳組織においても観察されている（Berger et al. 2007年）。ようやく、βアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の突然変異形態を過剰発現するトランスジェニックマウスを用いて、非線維性タウがＡＤにおける行動学的障害に関与していることの証拠が得られた（Roberson et al., 2007年）。これらのＡＰＰマウスをタウノックアウトマウスと交配させると、アミロイド斑は形成されるが、行動学的障害およびシナプスの異常は防止された。このＡＰＰ株ならば、シナプス欠損および行動学的障害が存在しても、タウの異常は検出できないであろう。まとめると、これらの研究は、可溶性で未同定の異常なタウ形態が神経毒性種である可能性が高いことを示す。
【００８２】
（タウオパチーを治療するための微小管安定化剤）
神経変性疾患におけるタウの役割については、２つの主要な仮説が存在する。１つの仮説が、タウの異常な形態により細胞機能が破壊されることを仮定するのに対し、他の仮説は、機能的タウの喪失により微小管が不安定化することを仮定する（Avila et al. 2004年；Lace et al. 2007年）。微小管安定化剤が、タウオパチーを治療するための療法として示唆されているのは、第２の仮説に基づく（Lee et al. 1994年；米国特許第５，５８０，８９８号）。軸索輸送の不適切な破壊が、タウの異常が同定されている疾患に加えた多くの疾患に関与している。これらには、ハンチントン病、レビー小体型認知症、シャルコー−マリー−トゥース病、遺伝性痙性対麻痺、および多発性全身性萎縮症が含まれる（Roy et al. 2005年）。
【００８３】
微小管安定化剤が、タウを過剰発現するマウスに有益でありうるかどうかを調べるため、ＰｒＰ  Ｔ４４タウトランスジェニックマウスをパクリタキセルにより治療した（Zhang et al., 2005年）。ＰｒＰ  Ｔ４４マウスは、脊髄ニューロンにおいて、正常なヒト０Ｎ３Ｒタウを過剰発現し、その結果として、タウの過剰発現に起因する運動障害を発生する。３カ月間にわたるパクリタキセル治療により運動機能不全が軽減され、微小管数、および脊髄前根における軸索輸送が増大した。パクリタキセルは、ＣＮＳ透過性は低いが、血液脳関門の外側にある、脊髄前角におけるニューロンからの遠心性軸索に影響を及ぼすことが可能であった。興味深いことに、このモデルにおけるタウ病態（球状物）には影響が及ばなかった。このモデルはニューロンの喪失を示さないので、ニューロンの生存に対する微小管安定化剤の効果は評価することができなかった。加えて、脊髄のタウオパチーにおいて観察される運動利益が、皮質−海馬間のタウオパチーにおける認知的利益へと変換されるかどうかも不明である。例えば、２つの異なるタウオパチートランスジェニックマウス株を、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（Ｇｓｋ３）を過剰発現するトランスジェニックマウスに交配させたところ、反対の結果が観察された。脊髄のタウオパチーモデルのタウ−Ｇｓｋ３バイジェニック動物では病態が軽減されたのに対し、前脳のタウオパチーモデルのタウ−Ｇｓｋ３バイジェニック動物は病態の増悪を示した（Spittaels et al. 2000年；Terwel et al. 2008年）。
【００８４】
複数の動物モデルにおける、配列ＮＡＰＶＳＩＰＱのペプチドであるＮＡＰの効果についての説明として、微小管の安定化が提起されている。特に、胎児アルコール症候群マウスおよびアポリポタンパク質Ｅ欠損マウスにおける中脳動脈閉塞（脳卒中モデル）、頭部外傷、コリン毒性病変、老化、および発達障害を含めた、多くの細胞モデルおよびインビボモデルにおいて、ＮＡＰは、神経栄養活性、抗炎症活性、抗アポトーシス活性、および神経保護活性を有する（Gozes et al. 2006年；Gozes 2007年）。タウオパチーの場合、３または６カ月にわたるＮＡＰの投与は、３ｘＴｇマウスにおける可溶性のタウを増加させる一方で、Ａβレベルを低下させ、リン酸化過剰タウおよびサルコシルに不溶性のタウを低減することが報告されている（Matsuoka et al. 2007年；Matsuoka et al. 2008年）。３ｘＴｇマウスは、ＡＰＰおよびタウ−Ｐ３０１Ｌを過剰発現する（Oddo et al. 2003年）。ＮＡＰ活性の機構は完全には明確にされていないが、ＮＡＰによるアフィニティーカラムに対するチューブリンの結合、ならびに培養ニューロンにおける微小管の形成および／または安定化に対する効果に基づき、ＮＡＰが微小管に結合するという証拠が存在する（Divinski et al. 2006年）。ＮＡＰはまた、Ａβの凝集を阻害することも知られており、このため、３ｘＴｇモデルではタウの上流において作用する可能性がある。ＮＡＰは、ラットにおけるパクリタキセル誘導型末梢性神経障害に対して保護的でありうるので、典型的な微小管安定化剤として作用する可能性は高くない（米国特許出願公開第２００６／０２４７１６８Ａ１号）。パクリタキセルなどの微小管安定化剤が化学療法の高用量で投与されると末梢性神経障害が生じることが多く（Postma et al. 1999年）、これは、末梢神経における微小管の過剰安定化およびバンドリングから生じると考えられる。ＮＡＰによりラットにおけるパクリタキセル誘導型末梢性神経障害が予防されるので、パクリタキセルとＮＡＰとは、同一の機構を介して作用する可能性が低い。
【００８５】
微小管安定化剤は、タウの明白な機能不全とは無関係の神経保護効果を及ぼしうるという示唆もなされている。微小管安定化化合物は、Ａβ４２、可溶性のＡβ４０に由来する酸化的ストレス、リソソームの破壊、カルシウム誘導型毒性、およびグルタミン酸誘導型毒性を含めた多数の毒性損傷から培養ニューロンを保護する（Burke et al. 1994年；Furukawa 1995年；Sponne et al. 2003年；Michaelis et al. 2005年；Butler et al. 2007年）。微小管が、輸送機構だけでなく、細胞シグナル伝達の調節、特に、おそらくは原形質膜の近傍における高分子シグナル伝達複合体の固定を介する、カルシウムによるシグナル伝達の調節においても重要な役割を果たすことが仮定されている（Michaelis et al. 2005年）。微小管安定化剤はまた、反応性酸素分子種の生成を低下させ、ＡＴＰの生成に関与する酸化的リン酸化遺伝子の発現を増大させることにより、ミトコンドリアの機能を増強することも示されている（Wagner et al. 2008年）。微小管安定化剤はまた、癌細胞における有糸分裂紡錘体を破壊する際の細胞シグナル伝達にも広範な影響を及ぼすことが知られている（Bergstralh et al. 2006年）。
【００８６】
（脳透過性微小管安定化剤）
タウオパチーおよび他の神経変性疾患に対する微小管安定化剤の治療標的は、脳内の微小管である。しかし、微小管安定化剤は、特に、消化管および造血細胞における細胞増殖の阻害、ならびに末梢性神経障害など、末梢組織に対する毒性を引き起こしうる。したがって、タウオパチーおよび他の神経変性疾患に対する治療指標を最大化するためには、末梢組織と比較して優れた脳透過性および脳内における選択的保持を示す微小管安定化剤を同定することが極めて望ましい。化合物が、末梢組織の場合と比べて長い半減期で脳組織に結合する能力は、極めて望ましい特性である。
【００８７】
タキサン系の微小管安定化剤は、Ｐ−糖タンパク質（ＰＧＰ）、ＡＴＰ結合カセット、多剤耐性タンパク質、および乳癌耐性タンパク質など、多数の多剤耐性輸送体に対する基質である。これらの多剤耐性輸送体は、化合物が腫瘍組織および脳組織内に蓄積されることを妨げる。多数の研究者が、多剤耐性輸送体、特に、ＰＧＰの基質とならないタキサンの合成に努めているが、成果は限られている（Minderman et al. 2004年；Rice et al. 2005年；Ballatore et al. 2007年）。パクリタキセルと共にＰＧＰ阻害剤を共投与することもまた試みられている（Fellner et al. 2002年）。これらの試みは、タキサンがある程度脳内に侵入する結果を示し、例えば、ＰＧＰ阻害剤により腎内パクリタキセルレベルの約３０分の１の脳内パクリタキセルレベル、またはＫＵ−２３７によりμＭの範囲の脳内パクリタキセルレベルが達成されたが、投与後４時間にわたるに過ぎなかった（Michaelis 2006年）。これより、ＰＧＰ阻害剤の使用は、タキサンの脳透過性を上昇させるための魅力的な方法ではない。
【００８８】
（調製方法および製剤）
エポチロンＤは、新規に化学合成され、また、ソランギウム・セルロースムの発酵における副産物として、エス・セルロースム菌株の発酵からも単離された、既知の化合物である。エポチロンＤの全体的な合成は、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙらに帰属する米国特許第６，２４２，４６９号において報告されており、エポチロンＤおよび他のエポチロン化合物を調製するためのさらなる方法は、それらの各々が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，２０４，３８８号、同第６，２８８，２３７号、同第６，３０３，３４２号；ＷＯ０３／０７２７３０、米国特許第６，４１０，３０１号；米国特許出願公開第２００２／０１３７１５２号 Ａ１；米国特許第６，８６７，３３３号、米国特許出願公開第２００６／００４０６５号において見出すことができる。エポチロンＤを製造するための合成方法は、フルスケールの医薬開発には実用的でないと特徴づけられている。１つの代替的な調製方法は、例えば、米国特許第７，１７２，８８４号 Ｂ２に記載の通り、比較的高収量のエポチロンＢをもたらすようにデザインされた改良株を用いてエポチロンＢの大規模発酵を行うことであり、該エポチロンＢを脱エポキシド化して、エポチロンＤを生成させることができる。脱エポキシド化の方法はよく知られているが、特に、エポチロンＤに適用された、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙらに帰属する米国特許第６，９６５，０３４号（ＷＯ９９／４３６５３）においてもまた見出すことができる。
【００８９】
エポチロンＤのさらなる作製方法は、米国特許第６，９９８，２５６Ｂ２号および同第７，０６７，２８６号、「Methods of Obtaining Epothilone D using Crystallization and/or By the Culture of Cells in the Presence of Methyl Oleate」に記載されており、そこでは、ミキソコックス・キサントゥスの菌株であるＫ１１１−４０−１およびＫ１１１−７２．４．４、ならびに／またはＫｏｓａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｎｅｃｅｓ社（現ＢＭＳ社）によりエポチロンＤの生成を改善する目的で開発された他の組換え菌株を用いる、生合成によるエポチロンＤの生成が説明されている。エポチロンＤを作製するための発酵条件および精製条件もまた、それらの各々がＫｏｓａｎ社（本譲受人である現ＢＭＳ社）に譲渡され、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，９９８，２５６Ｂ２号および同第７，０６７，２８６号のほか、米国特許第６，５８３，２９０号、同第６，８５８，４１１号、同第６，９２１，６５０号、および同第７，１２９，０７１号に記載されている。また、Lau et al., Kosan Biosciences、「Optimizing the Heterologous Production of Epothilone D in Myxococcus xanthus」、Biotechnology & Bioengineering、78巻、3号、280〜288頁（2002年5月5日）も参照されたい。
【００９０】
エポチロンＤを作製するのに用いうるまたさらなる方法は、米国特許出願第１２／１１８，４３２号において説明されている。この出願は、エポチロンＤなどのエポチロンを調製するための化学工程および生合成工程の組合せを開示している。例えば、組換え細胞の発酵を介して、エポチロン合成に用いうる１つまたは複数の中間体を得、次いで、該出願で開示された、該組換え細胞を用いて生合成された中間体を、化学合成を介して最終的なエポチロン化合物へと転換する方法が提供されている。
【００９１】
本発明の方法において用いられるエポチロンＤは、当技術分野で知られる各種の方法により、典型的には、静脈内（ＩＶ）投与、皮下投与、経口投与などにより、患者に投与することができる。例えば、エポチロンＤは、薬学的に許容されるビヒクルまたは希釈剤により製剤化することができる。エポチロンＤを含む医薬組成物は、所望の投与方式に適切な固形物または液状物のビヒクル、希釈剤、および添加剤を用いる古典的な方法により製剤化することができる。
【００９２】
非経口投与のための例示的な組成物には、例えば、マンニトール、１，３−ブタンジオール、水、リンゲル液、等張性の塩化ナトリウム溶液（０．９％の塩化ナトリウム注射液［生理食塩液］または５％のデキストロース注射液）など、適切な非毒性の非経口的に許容される希釈剤もしくは溶媒、または合成のモノグリセリドもしくはジグリセリドおよび脂肪酸を含めた他の適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を含有しうる、注射溶液または懸濁液が含まれる。本発明の薬学的に許容される組成物および／または本発明の化合物を投与する方法は、エタノール、Ｎ，Ｎジメチルアセトアミド、プロピレングリコール、グリセロール、およびポリエチレングリコール、例えば、ポリエチレングリコール３００および／またはポリエチレングリコール４００が含まれるがこれらに限定されない共溶媒の使用も包含しうる。ｄ−α−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート（ＴＰＧＳ）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ、Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ  １５、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロキサマー、Ｎ−アルキルピロリドン（例えば、Ｎ−メチルピロリドン）および／またはポリビニルピロリドンなどのピロリドンが含まれるがこれらに限定されない界面活性物質（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ）（薬学的に許容される界面活性物質（ｓｕｒｆａｃｅ  ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ））を用いて、その表面張力を低下させることにより化合物の拡散特性または湿潤特性を増大させることができる；しかし、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒの使用は不利であり、好ましくない。製剤はまた、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−アラニン、グリシン、炭酸ナトリウム、トロメタミン（トリス［ヒドロキシメチル］アミノメタンまたはトリスとしても知られる）および／またはこれらの混合物が含まれるがこれらに限定されない、１つまたは複数の「バッファー」（例えば、酸または塩基の増分添加時において、培地が実質的な酸性またはアルカリ性の変化に抵抗する能力を付与する成分）の使用も含みうる。
【００９３】
Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒなどの非イオン性界面活性物質の使用を回避する製剤を含めた、エポチロン化合物を投与するための製剤は、当技術分野で説明されている。例えば、プロピレングリコールおよびエタノールの混合物を含む、静脈内投与で用いられる製剤は、米国特許第６，６８３，１００号で説明されている。さらなる製剤は、ポリエチレングリコール／無水アルコール、またはプロピレングリコールまたはグリセロール／無水アルコールの組合せを含みうる。例えば、ＢＭＳ社に帰属するＷＯ２００６／１０５３９９（ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０１１９２０）は、容量で約３０〜７０パーセントのＰＥＧ  ３００および／またはＰＥＧ  ４００の各々に対して、容量で約３０〜７０パーセントの無水アルコールの混合物を包含する製剤を開示するが、これは、生理食塩液またはデキストロースによる静脈内投与用注入液により希釈することができ、静脈内投与を介してエポチロンＤを患者に投与する際の使用に適用することができる。このような製剤では、エタノール量を最小化させて、エタノール投与と関連する副作用を回避することが好ましい。溶媒の最適比率は、当業者が容易に得ることができる。
【００９４】
エポチロンＤおよび類似体を投与するために特にデザインされた、さらに好ましい製剤は、Ｋｏｓａｎ社（現ＢＭＳ社）に帰属する米国特許第７，０９１，１９３号（また、米国特許出願公開第２００５／０１４８５４３号としても公開されている）で開示されている。この特許は、エポチロンＤおよびヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリンをアルコール水溶液中で混合し、次いでこれを凍結乾燥する製剤について説明している。実施形態は、６０％のｔｅｒｔ−ブタノール水溶液中で混合し、次いでこれを凍結乾燥させる（本発明による個別の低用量単位の調製にふさわしく成分を減量することができる）、約１０ｍｇのエポチロンＤおよび約０．４ｇのヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリンの使用を伴う。次いで、凍結乾燥された有効成分の「ケーキ」を、水、エタノール、ならびに／またはプロピレングリコール、ポリエチレングリコール４００、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ  ８０の商標名で市販されている）、および関連の酸素化された炭化水素が含まれうるグリコールの使用により、静脈内投与用に再構成することができる。多様な鎖長および分子量のグリコール（例えば、ポリエチレングリコール１０００、他のＴＷＥＥＮ化合物）も用いうることが理解される。
【００９５】
より具体的な例として述べると、本発明による、エポチロンＤの患者へのデリバリーに用いうる製剤は、約０〜５０％のプロピレングリコール、約１〜１０％のＴＰＧＳ、約０．５〜１０％のエタノール、約０〜９０％の水、および／または約５〜８５％のＰＥＧ−４００などのＰＥＧを含みうる。より具体的に述べると、製剤は、
５０％のプロピレングリコール、１０％のＴＰＧＳ、１０％のエタノール、３０％の水；または
１０％のプロピレングリコール、４０％のＰＥＧ−４００、５％のＴＰＧＳ、５％のエタノール、４０％の水；または
８５％のＰＥＧ−４００、１０％のＴＰＧＳ、５％のエタノール；または
８．５％のＰＥＧ−４００、１％のＴＰＧＳ、０．５％のエタノール、９０％の水
を含みうる。
【００９６】
本発明による、エポチロンＤを投与するのに好ましい１つの方法は、経口投与を伴う。米国特許第６，５７６，６５１号は、薬学的に許容される１つまたは複数の酸中和化バッファーを用いて、エポチロンを経口投与するための方法を開示する。しかし、好ましい投与方法であれば、固形物の錠剤もしくはカプセル、または流体もしくはゼラチンを充填したカプセルを含めた、錠剤またはカプセルの使用を伴うであろう。エポチロンＤの固形物の錠剤またはカプセルは、１つまたは複数の腸溶性コーティングにより調製することができる。腸溶性コーティングは、経口摂取可能な剤形からの薬剤の放出を停止させる目的で、多年にわたり用いられている。成分および／または厚さに応じて、腸溶性コーティングは、必要な時間にわたり胃酸に対して抵抗性であった後に、胃の下部または小腸の上部において崩壊し始め、薬剤の徐放を可能とする。一部の腸溶性コーティングは、それらの各々が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，２２４，９１０号、同第５，２２５，２０２号、同第２，８０９，９１８号、同第３，８３５，２２１号、同第４，７２８，５１２号、および同第４，７９４，００１号で開示されている。
【００９７】
エポチロンＤの使用を目的とする腸溶性コーティングされた錠剤は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願第１１／２８１，８３４号で説明されており、これを用いてエポチロンの錠剤またはカプセルを製剤化し、本発明を実施することができる。この製剤は、そこに有効成分（すなわち、エポチロンＤ）が適用される糖ビーズなど、不活性の基剤粒子の使用を伴い、次いで、これを腸溶性コーティング用ポリマー、および／または１つもしくは複数のサブコーティング層により封入する。次いで、該ビーズをカプセル内に組み入れる。エポチロンＤの錠剤またはカプセルを製剤化するのに用いられる腸溶性コーティングには、例えば、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ酢酸フタル酸ビニル、酢酸フタル酸セルロース、アクリル酸コポリマー、およびメタクリル酸コポリマーなどの腸溶性コーティング用ポリマーが含まれうる。腸溶性コーティングを形成するのに用いうるメタクリル酸コポリマーの一例は、ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ−３０−Ｄ  ５５水性コポリマー懸濁液であり、これは、エチルエステル基に対する遊離カルボキシル基の比が約１：１であり、平均分子量が約２５０，０００である、メタクリル酸およびアクリル酸エチルに由来の陰イオン性コポリマーを含み、重量で３０％の固形物を含有する水性分散液として供給される。ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）Ｌ−３０−Ｄ  ５５水性コポリマー懸濁液は、ドイツ、Ｒｏｈｍ−Ｐｈａｒｍａ社により市販されている。
【００９８】
エポチロンＤのカプセルを形成するための腸溶性コーティングされたビーズを調製する場合、エポチロンＤのコアと、腸溶性コーティングとの間に位置して、これらの層の間の接触を最小化する１つまたは複数のサブコーティング層を包含することが望ましいことがある。例えば、サブコーティング層を形成するのに適する物質には、デンプン；ゼラチン；スクロース、グルコース、デキストロース、糖蜜、およびラクトースなどの糖；アカシアゴムなど、天然および合成のゴム、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ならびにＰＶＡ−ＰＶＡコポリマーなど、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）のポリマーおよびコポリマー；エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、およびヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのセルロース；ポリエチレングリコール；ならびに蝋が含まれる。サブコーティング層は、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、クエン酸トリエチル、トリアシチン、フタル酸ジエチル、セバシン酸トリブチル、またはこれらの組合せなど、１つまたは複数の可塑剤をさらに含みうる。
【００９９】
エポチロンＤの錠剤またはカプセルは、必要または所望でありうる香味剤、防腐剤、または着色剤など他の材料を所望により含みうる。
【０１００】
エポチロンＤの適切な用量は、患者の体重、患者の身体状態などの典型的な因子と共に、本明細書に記載の知見を考慮に入れ、当業者が決定することができる。該用量は、ＡＤなどのタウオパチーを含めたタウ関連疾患を治療するのに有効な量でエポチロンＤを含有するものとする。一般に、タウ関連疾患（ＡＤなどのタウオパチーを含めた）を治療するのに投与されるエポチロンＤの用量範囲は、０．０００１〜１０ｍｇ／ｍ２、より好ましくは０．００１〜５ｍｇ／ｍ２であると考えられる。経口投与および静脈内投与により好ましい他の用量範囲は、上記の代替的実施形態の節において記載されている。エポチロンおよびこれらの類似体により既に投与された化学療法用量との比較を目的として、本明細書では単位ｍｇ／ｍ２を用いる。しかし、該薬物を施される（または施された）動物種ならびに患者の体重および／または身長を考慮すると、単位ｍｇ／ｍ２は、ｍｐｋへと容易に変換することができる。例えば、体重が約７０ｋｇのヒト患者の場合、０．０００１〜１０ｍｇ／ｍ２の用量範囲は、約０．００００３〜０．３ｍｐｋへと変換される。用量の変換に関するさらなる情報は、www.rphworld.com/viewlink-25045.htmlおよびFreireich et al.、Cancer Chemother. Reports、50巻、4号、219頁（1966年）において見出すことができる。
【０１０１】
薬物は、毎日、毎週、または断続的に投与することができる。例えば、薬物は、３週間にわたり施薬した後で１週間休薬するか、または２週間施薬した後で１週間休薬するか、または当業者により決定されうる他の投与スケジュールの下で投与することができる。選択される特定の用量は、選択される投与方式および投与レジメに依存する。１つの好ましいスケジュールは、毎日１回の経口投与スケジュールである。各適用間においてより長い時間が規定される場合（静脈内投与の場合が典型的である）、各単位用量は毎日の用量が施される場合よりも高量でありうる。
【０１０２】
とりわけ、ある第ＩＩ相臨床試験において癌治療のために患者に投与されたエポチロンＤ用量は、投与ごとに９〜１５０ｍｇ／ｍ２の用量漸増を伴う第Ｉ相試験の後で、４週間のうちの３週間にわたり毎週（すなわち、４週間ごとに第１、８、および１５日において）９０分間の注入としての１００ｍｇ／ｍ２であった。投与スケジュールおよび投与方式も用量に影響を及ぼすが、ＡＤ治療に意図される薬物の用量は、第ＩＩ相臨床試験において癌患者を治療するために投与されたエポチロンＤの治療用量の約１０分の１であり、また、約１００分の１であることがより可能性が高く、また意図される別の実施形態では１０００分の１をさらに下回る。
【０１０３】
本発明は、添付の図面に言及する、以下の非限定的な実施例によりさらに詳細に説明される。方法の説明に後続する実施例において説明される実験では、以下の方法が用いられた。
【０１０４】
（実験の方法、実施例１〜５）
侵襲性のタウトランスジェニックマウス株であるＴｇ４５１０の作製については、近年説明がなされている（Santacruz et al.、2005年；Berger et al.、2007年）。カルモジュリンキナーゼＩＩプロモーターを用いて、ＦＴＤＰ−１７において見出されたタウ突然変異体であるタウ−Ｐ３０１Ｌを、Ｔｇ４５１０株に発現させた。Ｔｇ４５１０株は、いくつかの点：
１．タウ発現レベルが高いこと（マウスタウと比べて１３倍）；
２．タウ発現が前頭側頭葉に制約されること（これにより、脊髄においてタウを発現した過去のタウ株を特徴づけていた運動障害を回避する）；
３．測定可能な認知障害に続き、４．５カ月後に、急速で広範な神経変性が見られること（５．５カ月後までに６０％のＣＡ１ニューロンが失われた）
において固有であった。
【０１０５】
（Ｔｇ４５１０研究のための薬物の調製）
０（ビヒクル）、１ｍｐｋ、および１０ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）を、１０％のエタノール、９０％の水中で１０ｍｌ／ｋｇとして、２６ゲージの注射針により腹腔内投与した。１００％のエタノール中で１０倍濃度の原液を作製し、投与直前に希釈した。マウスへの投与は３つのコホートで行い、データを統合して、ビヒクル群、１ｍｐｋ群、および１０ｍｐｋ群のそれぞれに対する最終マウス数を、それぞれ、１２匹、９匹、および１５匹とした。マウスへの投与は、ドラフト内で行った。
【０１０６】
（Ｔｇ４５１０研究のための注射および行動学的検査のスケジュール）
この研究では、Ｔｇ４５１０マウスを用いた。これらのマウスは、前脳においてヒトＰ３０１Ｌ突然変異タウを過剰発現する、十分に特徴づけられた、侵襲性のタウオパチーモデルである（Santacruz et al.、2005年；Berger et al.、2007年）。マウスは、ＡＤ脳において観察されるものと同様のもつれを含めたタウの異常形態の蓄積、行動学的障害、また最終的にはニューロンの喪失を特徴とする。９週齢（±１５日）のとき、ドラフト内で実施されるリン酸緩衝生理食塩液の単回模擬注射により、マウスを取扱いに馴らした。次いで、４８時間にわたり、ドラフト内のケージでマウスを飼育した。４８時間後、マウスを清浄なケージへと移し、一連の行動学的検査を行った。
【０１０７】
次いで、６日間にわたり、モリス水迷路（ＭＷＭ）でマウスを検査した。２回目の探索試行における環状通過指数のランクスコアを用いる行動学的解析の結果に基づき、マウスを治療群に分けた。投与開始時においてマウスは１１週齢（±１５日）であり、これらに毎週１回投与した。第１週の投与後、身体位置検査、振戦検査、体毛外見検査、歩行検査、接触回避検査、身体拘束検査、四肢把持検査、および立ち直り反射検査の解析を含めた神経身体傾向検査のパネル（ＳＨＩＲＰＡ変法）を実施した。加えて、毎週の各投与の４８時間後において、体毛外見、四肢把持、立ち直り反射について、また、任意の明白な定型的行動についてマウスを検査した。研究の経過において、明白な毒性、体重減少、または運動障害の徴候は観察されなかった。
【０１０８】
８回目の投与後（１９週齢±１５日）にも再度、ＭＷＭにより６日間にわたりマウスを検査した。行動学的検査後、動物が採取時である５．５カ月齢となるまで、投与を再開した。動物の飼育および取扱いは、研究機関における動物管理使用委員会および米国国立衛生研究所による基準に従った。
【０１０９】
（モリス水迷路のプロトコール）
１回は投与前、またもう１回は投与開始の２カ月後の２回にわたり、マウスをモリス水迷路（ＭＷＭ）により検査した。水迷路検査の第２ラウンドは、別の検査室で実施した。検査前の２〜３日間にわたり、マウスを実験室に馴らした。水面下０．５〜１．０ｃｍに置かれた直径１６ｃｍのプラットフォームを伴う、直径１．５ｍの水迷路内にマウスを入れた。非毒性の白色塗料で水を不透明にし、水温を２２〜２５℃に調節した。
【０１１０】
各試行後にプラットフォーム上において１０秒間の休息時間を伴う、各々が最長９０秒間の試行を１日当たり４回ずつマウスに施した。マウスが９０秒間以内にプラットフォームを見出さなかった場合は、マウスをプラットフォームへと静かに誘導し、１０秒間にわたりそこに滞留させた。検査室は各々、マウスがプラットフォームの位置を学習するのに応じてマウスの方向付けが可能となるように、外部に大型の目印を有した。各試行後における低体温症を予防するため、マウスを保温電球下においた。試行間の間隔は２５〜４５分間の範囲であった。ＨＶＳ  Ｉｍａｇｅ社（英国、バッキンガム）製のＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｔｒａｃｋｅｒ  ＶＰ２００型ソフトウェアを用いてマウスを追跡し、プラットフォームに到着するまでに通過したのべの距離を決定した。
【０１１１】
５回の試行による習得経路長についての統計学的解析は、反復測定分散分析を伴った。該統計学的モデルは、動物間項としての「治療」（０、１ｍｐｋ、または１０ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ））と、各動物に対する反復測定としての５回の試行とを包含した。該解析が有意な治療効果、または治療−試行間の交互作用を示した場合、ダネット検定を用いて、１ｍｐｋ群と１０ｍｐｋ群との差違をビヒクル群と比較した。ダネット検定を用いて、各四分円内における探索経路長、および各四分円内におけるプラットフォーム通過回数を解析した。すべての場合において、１ｍｐｋ群および１０ｍｐｋ群をビヒクル群と比較した。すべての計算は、Ｗｉｎｄｏｗｓ  ＸＰ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ基本システム下にあるＳＡＳ、ｖｅｒｓｉｏｎ  ９．１により行った。
【０１１２】
習得訓練は５日間にわたり連続で実施した。探索試行は、第６日における最後の習得訓練の１８時間後に実施した。これらの６０秒間にわたる試行では、プラットフォームを取り除き、マウスが標的四分円内において通過した距離と、該プラットフォームがかつて位置した領域の通過回数とを測定した。すべての動物について泳動速度をモニタリングした；薬物治療が泳動速度の変化を引き起こさなかったことは、該薬物が運動行動に影響を及ぼさないことと符合する。浮遊時間（泳動速度＜５ｃｍ／秒）もまた、治療群間で変動しなかった。
【０１１３】
（組織採取）
５．５カ月後に頸椎脱臼によりマウスを安楽死させた後、断頭した。脳を速やかに摘出し、正中線に沿って２つの半球に分割した。右半球を２０ｍＬの４％パラホルムアルデヒド（屠殺日に新たに調製した）中に入れ、４℃で一晩にわたり保管した。翌日、２０ｍＬのＴＢＳ（ｐＨ７．４、２０ｍＭ  ＴＲＩＳ、１００ｍＭ  ＮａＣｌ）を含有する試験管に脳を移し、次いで、加工するまで４℃で保存した。右半球をパラフィン包埋し、５ミクロンで切片化し、正に帯電したスライドガラス上に載せた。６０℃のオーブン内で一晩にわたり該スライドガラスを乾燥させ、染色するまで室温で保管した。左半球は、ドライアイス上で凍結させた（２分以内）。
【０１１４】
（ガリヤス法）
ガリヤス染色法を用いて、銀陽性の神経原線維変化および異栄養性神経突起を検出した。パラフィン包埋してスライドガラス上に載せた薄片（５ミクロン）を脱パラフィン化し、キシレン（１０分ずつ２回）、１００％エタノール（１０分ずつ２回）、９５％  ＭｅＯＨ／５％  Ｈ２Ｏ２（３０分間）、９５％エタノール（５分ずつ２回）、８０％エタノール（５分ずつ２回）、５０％エタノール（５分ずつ２回）、および水（５分ずつ２回）中における一連のインキュベーションにより再水和化した。次いで、５％過ヨウ素酸中で５分間にわたり切片を静置し、ｄＨ２Ｏ中で５分ずつ２回にわたり洗浄し、ヨウ化銀のアルカリ溶液（１％硝酸銀を含有する）中で１分間にわたり静置した。
【０１１５】
０．５％酢酸中で１０分間にわたり切片を洗浄し、新たに調製した現像液中で１５分間にわたり静置し、０．５％酢酸中で５分間にわたり再度洗浄した。脱イオン化水中ですすいだ後、０．１％金コロイド中で５分間にわたり切片を静置し、脱イオン化水中で再度すすいだ。１％チオ硫酸ナトリウム（ハイポ）中で５分間にわたり切片をインキュベートし、次いで、水道水中ですすいだ。０．１％ニュークリアファストレッド中で２分間にわたり対比染色を実施した。次いで、切片を水道水中ですすぎ、アルコールの勾配系列（９５％、１００％、１００％）中で２分間にわたり脱水し、１０回ずつ浸漬する３回交換のキシレン中で清浄化した。最後に、Ｃｙｔｏｓｅａｌ  ６０封入剤（ミシガン州、カラマズー、Ｒｉｃｈａｒｄ−Ａｌｌａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）およびカバースリップをスライドに添加した。ノンパラメトリックのクルスカル−ワリス検定を用いた後で、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ４を用いるダンの多重比較検定により統計学的解析を実施した。パラメトリックＡＮＯＶＡに続くダネットの事後検定によっても同じ結果が得られた。
【０１１６】
（免疫組織化学）
パラフィン包埋した薄片（５ミクロン）を脱パラフィン化し、３回交換のキシレン、２回交換の１００％エタノール、および１回交換の９５％エタノール中で再水和化した後、水中ですすいだ。１０ｍＭクエン酸ナトリウムバッファー、ｐＨ６．０中のスライドを、Ｂｌａｃｋ  ａｎｄ  Ｄｅｃｋｅｒスチーマー（型番：ＨＳ９００）内で３０分間にわたり蒸気曝露し、次いで、３０分間にわたり冷却することにより、抗原賦活を実施した。９０％ＭｅＯＨ中に０．６％の過酸化水素中で１５分間にわたるインキュベーションにより、内因性ペルオキシダーゼ活性を除去する。ＴＢＳ中での洗浄後、ＴＢＳ中１０％の正常ヤギ血清中で１時間にわたりスライドをブロッキングした。この後、ブロッキング液中で希釈したＡＴ８ホスホタウ抗体（イリノイ州、ロックフォード、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、Goedert et al.、1995年）により、４℃で一晩にわたりインキュベートした。ＴＢＳ中で３回の洗浄後、抗マウスＩｇＧ抗体と共に室温で１時間にわたりスライドをインキュベートした。ＴＢＳ中での洗浄後、Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣ  Ｅｌｉｔｅキット（カリフォルニア州、バーリンガム、Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ社製）を用いて１時間にわたりシグナルを検出した後で、Ｖｅｃｔｏｒ  ｌａｂｓ社製のジアミノベンザジン試薬を用いて検出した。ヘマトキシリンにより核を青色に対比染色した後、２回にわたりスコットの水道水代替液（イリノイ州、リッチモンド、Ｓｕｒｇｉｐａｔｈ社製、型番：０２９００）中にスライドを浸漬し、次いで、水道水中ですすいだ。次いで、アルコールの勾配系列（９５％、１００％、１００％）中で切片を脱水し、次いで、３回交換のキシレン中で清浄化した。次いで、カバースリップおよびＣｙｔｏｓｅａｌ  ６０封入剤を添加した。
【０１１７】
（立体解析）
Ａｐｅｒｉｏ  ＳｃａｎＳｃｏｐｅ（カリフォルニア州、ビスタ、Ａｐｅｒｉｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用いて、ニッスル染色されたスライドを走査してデジタル画像化した。高解像度で脳切片全体の画像を収集し、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ（Ａｐｅｒｉｏ社製のソフトウェア）内のファイルとして保存した。画像を加工するため、抜粋ツールを用いて、海馬全体を包含する４，０００×４，０００ピクセルの領域を取り込み、ＪＰＥＧファイルとして保存してＭｅｔａｍｏｒｐｈ（カリフォルニア州、サニーベール、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社製）へとインポートし、海馬のＣＡ１領域およびＣＡ３領域内における細胞喪失の定量化を行った。パラフィン包埋された組織薄片に適するため、単一切片の解像法の改変形（Moller et al. 1990年）を用いて細胞喪失を定量化した。細胞の相対数を得るため、パラフィン包埋した脳を、ブレグマ間の矢状面に沿って側面方向に約０．７５ｍｍずつスライスしながら、切片を５枚目ごとに回収した。Ｍｅｔａｍｏｒｐｈソフトウェアを用いて、３つの領域を線描し、切片当たりのカウントを記録した。各画像では同じ領域を用い、スライド５枚おきに、動物１匹当たり５枚の切片のカウントを記録した。ＡＮＯＶＡの後でダネットの事後検定を用いて、統計学的解析を実施した。
【発明を実施するための形態】
【０１１８】
（実施例１）
上記で説明した、エポチロンＤ（化合物Ｉ）によるＴｇ４５１０実験のデザインを図１に示す。この実験では、各群の治療前における行動が同様であると判定されるように、２．５カ月後にＭＷＭでマウスを検査し、３つの群（Ｎ＝１２、１３、１６）のうちの１つに割りつけた。２．５カ月後から、ビヒクルだけ、または１ｍｐｋもしくは１０ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）を伴うビヒクルの腹腔内（ＩＰ）注射を、毎週マウスに投与した。４．５カ月後に再度ＭＷＭでマウスを検査し、認知行動に対する治療効果を判定した。５．５カ月後にマウスを安楽死させ、脳を回収し、後続の解析にかけた。
【０１１９】
腫瘍異種移植実験において、典型的には、実験者は３０ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）を５日間にわたり隔日で腹腔内投与し、１５０ｍｐｋの累積用量をもたらす（Chou et al.、1998年）。このため、本明細書に記載の、１２週間にわたる１ｍｐｋエポチロンＤ（化合物Ｉ）による治療は、腫瘍学用量の約１００分の１であると考えられ、１０ｍｐｋでの治療は、この種の実験において投与される典型的な腫瘍学用量の約１０分の１である。１ｍｐｋおよび１０ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）を、２または６カ月間にわたり毎週１回マウスに腹腔内投与したところ、肝臓、腎臓、心臓、睾丸、副腎、骨髄、末梢神経、胃、ならびに小腸および大腸を含めた多数の組織において、組織病理学的異常は観察されなかった。
【０１２０】
図２は、エポチロンＤ（化合物Ｉ）またはビヒクルの投与以前である２．５カ月後におけるＴｇ４５１０マウスに対するＭＷＭ検査の結果を示す。投与以前の群間では、習得または探索試行において統計学的な有意差が見られず、これが、動物を群分けするための根拠であった。言い換えれば、図２は、各群の治療前における行動が同様であったことを示す点で、対照として機能する。
【０１２１】
次いで、Ｔｇ４５１０マウスに、１ｍｐｋ、１０ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）、およびビヒクルを毎週１回腹腔内投与し、１２週間にわたるこの毎週の投与に続く４．５カ月後に、ＭＷＭ検査を実施した。図３で報告される結果は、１ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）で治療されたマウスが、ビヒクルで治療されたマウスより迅速（すなわち、統計学的に有意な形で（ｐ＜０．０１））に、ＭＷＭで隠されたプラットフォームの位置を特定しうることを示した。１０ｍｐｋ治療群は、ビヒクル群と比較して改善への傾向を示した。これらの知見は、エポチロンＤ（化合物Ｉ）によるＴｇ４５１０マウスの治療が、ビヒクル治療と比べて統計学的に有意な認知機能の改善をもたらし、加えて、より低用量である１ｍｐｋが、より高用量（１０ｍｐｋ）と比較して結果を改善したことも示す。とりわけ、この実施例において本発明者らは、このパラダイムを用いる曝露が、マウスにおける１ｍｐｋ用量および１０ｍｐｋ用量を比較する個別の実験に基づき、用量依存的であることをさらに確認した。１ｍｐｋ群と比べた１０ｍｐｋ群における行動学的改善の低下が、１０ｍｐｋ治療動物における薬物レベルの予測外の低下に起因しなかったのは、このためである。
【０１２２】
（実施例２）
図４は、１ｍｐｋ、１０ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）、およびビヒクルを２カ月間にわたり投与された４．５カ月齢のＴｇ４５１０マウスにおける５日間の訓練の１８時間後における探索データを示す。図４において、「ＴＱ」とは標的四分円を表わし、「ＡＲ」とは隣接する右側の四分円を表わし、「ＡＬ」とは隣接する左側の四分円を表わし、「ＯＰ」とは、向かい側の四分円を表わす。行動の２つの測定値、すなわち各四分円内における％による経路長（Ａ）およびプラットフォーム通過回数（Ｂ）を図４に示す。標的四分円の優先は、研究の習得期においてプラットフォームが位置していた場所をマウスが記憶していたことを示す。データから見られる通り、ビヒクル治療マウスは、経路長（Ａ）およびプラットフォーム通過回数（Ｂ）のいずれの測定値についても、ＴＱ、ＡＲ、ＡＬ、およびＯＰの各々に対して同様の結果を伴う偶然性で行動し、四分円における優先を示さなかった。しかし、１ｍｐｋ（化合物Ｉ）で治療したマウスは、例えば、プラットフォームがＴＱに配置されていたことを想起する記憶において、いずれの測定値においても、ビヒクル群と比較して統計学的な有意差を示した。加えて、１０ｍｐｋ群は、％による経路長（Ａ）において、ビヒクル群と比較してこれを有意に上回る行動を示したが、プラットフォーム通過回数の測定値（Ｂ）を用いた場合はそうでなかった。
【０１２３】
（実施例３）
脳病態に対するエポチロンＤ（化合物Ｉ）の効果を判定するため、前出の実験によるＴｇ４５１０マウスの部分集団（Ｎ＝５）に由来する脳組織を検討した。先行研究は、Ｔｇ４５１０マウスが、５．５カ月後に、海馬のＣＡ１領域内にあるニューロンの約６０％を喪失することを示していた（Santacruz et al. 2005年）。したがって、本発明者らは、海馬のＣＡ１領域におけるニューロン数をまず検討し、この後、ＣＡ３領域を検討した。図５は、ビヒクル、１ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）、および１０ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）による治療の５．５カ月後のマウスにおける、海馬のＣＡ１領域およびＣＡ３領域内のニューロンカウントを示す。
【０１２４】
驚くべきことに、図５で見られる通り、１ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）で治療したＴｇ４５１０マウスは、ビヒクル治療動物より実質的に多くのＣＡ１ニューロンを有した。実際、ビヒクルで治療したマウスと、１ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）で治療したマウスとの差は、１ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）が、ビヒクルとの統計学的な有意差（ｐ＜０．０１）を伴ってニューロン喪失を防止したことを示す。１０ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）で治療したマウスは、ＣＡ１ニューロンレベルが、ビヒクル治療マウスと１ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）で治療したマウスとの中間であった。これらの結果は、実施例１および２の行動学的研究による知見、すなわち、１００分の１の低用量（すなわち、腫瘍異種移植実験において投与された化学療法用量の）が、タウオパチーの治療において結果の著明な改善を一貫してもたらしたことを示す知見と符合し、これを補強する。
【０１２５】
また、海馬のＣＡ３領域の総細胞カウントについても同様の傾向が観察され、ビヒクル治療マウスと比較して、１ｍｐｋマウスと非トランスジェニックマウスとの間に著明な差違がみられた。治療群におけるＣＡ３領域の細胞カウントの上昇は、この月齢での神経変性がより高度なＣＡ１領域におけるほど顕著ではない；しかし、これらの結果は、脳の複数の領域における基礎疾患に対する影響を示す。
【０１２６】
（実施例４）
ＣＡ１領域におけるリン酸化タウ染色に対する治療効果もまた検討した。ＡＴ８抗体は、残基２０２および２０５の両方においてリン酸化したタウを認識する。ＡＤ患者および他のタウオパチー患者の脳では、過剰リン酸化タウのこの形態が極めて豊富である。
【０１２７】
図６は、上記のビヒクル、１ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）、および１０ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）で治療したＴｇ４５１０マウスに対するＡＴ８ホスホタウ染色を示す。ホスホタウ染色は、暗黒色で示される。驚くべきことに、１ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）で治療したマウスは、特に、ビヒクル治療マウスと比べて、はるかに低度のホスホタウ染色を示した。１０ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）で治療したマウスは、中間レベルのホスホタウ染色を示した。
【０１２８】
（実施例５）
ガリヤス銀染色により、皮質における神経原線維変化の形成に対するエポチロンＤ（化合物Ｉ）による治療効果を検討した。図７は、上記のビヒクル、１ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）、および１０ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）で治療したＴｇ４５１０マウスの前頭皮質における神経原線維変化についてのガリヤス銀染色を示す。図７Ａにおいて、銀染色は黒色（陽性）であり、「ＮＴ」は非トランスジェニックを表わし、これにより、血管と関連する一部の非特異的染色が示される。図７Ａで見られる通り、１ｍｐｋのエポチロンＤ（化合物Ｉ）で治療したマウスは、ビヒクル治療マウスよりはるかに低レベルの神経原線維変化を示した；図７Ｂでは、この研究のすべての動物についてこれを定量化している。１ｍｐｋ投与では、皮質および海馬の両方において、基礎疾患に対する著明な影響が観察され、１０ｍｐｋ投与でもまた、改善への傾向が示された。
【０１２９】
前出の実施例に記載の通り、エポチロンＤ（化合物Ｉ）によるＴｇ４５１０マウスの治療は、時間と共に、非治療のＴｇ４５１０マウスと比較して認知低下を防止し、認知機能を改善した。さらに、基礎疾患に対する影響の尺度としての神経病理学的検査（すなわち、細胞カウント検査、ホスホタウ染色検査、および銀染色検査）は、エポチロンＤによる治療が、非治療のＴｇ４５１０マウスと比較して統計学的に有意なレベルでニューロン喪失を防止し、異常なタウの蓄積を低下させ、神経原線維変化の形成を防止することを示す。したがって、本発明者らは、本明細書において、微小管安定化化合物、すなわち、エポチロンＤにより治療すると、認知喪失、タウ病態、および神経変性が防止されることを最初に発見し、裏付けたと考える。
【０１３０】
加えて、本発明者らは、本明細書において、エポチロンＤによる治療で達成可能な治療効果は、非直線的に用量依存的である可能性が高いことも発見した。具体的に述べると、報告された行動学的研究および神経病理学的研究の各々において、一貫した用量依存的な結果が繰り返し得られたが、そこでは、低用量（１ｍｐｋ）（腫瘍異種移植実験における化学療法用量の約１００分の１）時に、ビヒクルと比較して、すべての測定値で著明に増強された有益な効果が得られる一方、高用量（１０ｍｐｋ）では、大半の測定値について効果への傾向が示され、ＭＷＭ探索検査の１つの測定値ではビヒクルを上回る統計学的な有意差が示された。
【０１３１】
（実施例６：静脈内ボーラス実験における、他の微小管安定化剤と比較したエポチロンＤの効能）
一群の実験において、ヌードマウス３匹／群の尾静脈に、１〜１２ｍｐｋの用量で静脈内ボーラス投与を行った後で、イキサベピロン（アザ−エポチロンＢ類似体）、化合物ＩＩ（ＢＭＳ  ３１０７０５、２１アミノ酸のエポチロンＦ）、およびエポチロンＤ（化合物Ｉ）を評価し、パクリタキセルと比較した。５％のデキストロースを含有する１０％のＣｒｅｍｏｐｈｏｒ、１０％のエタノール、および８０％の水を用いて、４つの化合物の各々を５ｍｌ／ｋｇで投与した。図８Ａ〜８Ｄおよび表１で報告する通り、各化合物の相対的な脳透過性を決定するため、有機相の抽出後における、タンデム質量分析を伴う液体クロマトグラフィー（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）を用いて、単回投与後の様々な時点において、該化合物の血漿レベル、脳レベル、および肝臓レベルを測定した。パクリタキセル治療マウスでは、肝臓レベルを測定しなかった。
【０１３２】
図８Ａは、様々な時点における１ｍｐｋでの静脈内投与後のマウスの血漿、脳、および肝臓における化合物ＩＩの濃度を示す。
【０１３３】
図８Ｂは、様々な時点における１２ｍｐｋでの静脈内投与後のマウスの血漿、脳、および肝臓におけるイキサベピロンの濃度を示す。
【０１３４】
図８Ｃは、様々な時点における４ｍｐｋでの静脈内投与後のマウスの血漿および脳におけるパクリタキセルの濃度を示す。
【０１３５】
図８Ｄは、様々な時点における５ｍｐｋでの静脈内投与後のマウスの血漿、脳、および肝臓におけるエポチロンＤ（化合物Ｉ）の濃度を示す。
【０１３６】
データは、特に、血漿中薬物の初期の分布およびクリアランスの後のより後期の時点において、脳対肝臓の化合物レベルの比率により測定される、化合物ＩＩおよびイキサベピロンの末梢組織と比べた脳レベルが適度であることを示した。予測される通り、パクリタキセルの脳レベルは低かった。特に、パクリタキセルの脳レベルは、投与後少なくとも２４時間にわたり血漿中の薬物レベルを超えなかった。投与の６および２４時間後における、肝臓レベルを超えた高い脳レベルにより裏付けられる通り、エポチロンＤ（化合物Ｉ）が、この実験において調べた化合物より、顕著に良好な脳透過性および選択的保持の特性を兼ね備えたことは、予測外であった。これは、血漿および組織、中でもとりわけ、潜在的な毒性部位である肝臓を含めた末梢と比べて、標的臓器（脳）における予測外のエポチロンＤ（化合物Ｉ）保持を裏付ける。
【０１３７】
より具体的に述べると、表１は、ヌードマウスを用いる静脈内ボーラス投与（表中で報告される通り、ｍｐｋを変化させた）後において、４つの微小管安定化剤であるパクリタキセル、化合物ＩＩ（ＢＭＳ  ３１０７０５）、イキサベピロン、およびエポチロンＤについて脳透過性を比較するデータを報告し、このデータは図８Ａ〜８Ｄにも反映されている。脳対血漿比は一般に、血漿からの急速な喪失、および微小管に対する結合を介する脳内における薬物の保持に起因して、投与後の各化合物について、時間と共に上昇する。次いで、脳対血漿比は、６〜２４時間後において低下を示す化合物ＩＩで観察される場合など、脳内における保持が低度である化合物では低下しうる。時間と共に変化するにもかかわらず、この脳対血漿比は、投与後短時間（例えば、投与の２０〜６０分後）のデータを比較する場合、化合物に固有の脳透過性の尺度を提供する。本明細書の表において、脳対血漿比および脳対肝臓比は、まず、個別の動物について該比を計算し、次いで、該比の平均を決定することにより計算した；本明細書の表は、このようにして得られた平均値を報告する。
【表１】
0005548675.tif 000005
【０１３８】
表１を見ると、投与の１時間後における０．１の脳対血漿比により裏付けられる通り、パクリタキセルは脳透過性が低い；イキサベピロンは、投与の１時間後における脳対血漿比が０．７３であり、パクリタキセルより脳透過性が高い（表１）。投与の６〜２４時間後の時点において、脳対血漿比は、固有の脳透過性および脳内保持（半減期）の両方を反映する。エポチロンＤ投与の６および２４時間後におけるデータは、この群において脳対血漿比がこれに次いで高い化合物であるイキサベピロンを、少なくとも６０倍上回る脳対血漿比を示す。
【０１３９】
脳対肝臓比は、末梢組織と比較した脳内保持および脳内半減期についてのより特異的な尺度を提供するだけでなく、末梢組織と比較した選択的保持も提供する。主に、それが十分に灌流され、他の多くの末梢組織より高レベルを示す傾向にあるために選択される肝臓は、非細胞性の血漿と異なり、化合物が保持されうる微小管を含有するので、この比は有用である。最適の測定時点が２０〜６０分後である脳対血漿比と対照的に、血漿レベルが著明に低下し、これにより、脳細胞および肝臓細胞内に特異的に保持される薬物のより正確な測定を可能とする、投与後のより後期の時点（例えば、２４時間後以降）で脳対肝臓比を比較することが好ましい。脳対肝臓比の比較は、エポチロンＤが、肝臓と比べて脳内に高度で選択的に保持されることを示す。例えば、２４時間後におけるエポチロンＤの脳対肝臓比は１２０４であり、これは、同じ１組の実験におけるイキサベピロン（１．２）および化合物ＩＩ（０．０２）の低い比率と比較してはるかに高い比率であることが注目に値する。
【０１４０】
別個の実験では、異なる研究者の手により、上記と同様のプロトコールを用いるが、中程度に老齢の三重トランスジェニックマウスを伴う、静脈内ボーラス投与後において、より長時間、すなわち最長１６８時間にわたり、エポチロンＤの血漿中濃度および脳内濃度が評価された（Oddo et al. 2003年）。この実験結果を、以下の表２および図１０において報告する。
【表２】
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【０１４１】
これらのデータは、脳組織内におけるエポチロンＤの保持が、単回投与の少なくとも１６８時間（７日間）後まで延長されたことを示す。エポチロンＤの脳内レベルの絶対値および比率は、表１および２で異なる；表１および２に記載の実験は、異なるマウス株と共に異なる研究者により異なる時点において個別に実施されたことに注意することが重要である。本発明者らは、静脈内注射回数の小さな差が、正確な曝露プロファイル、特に、脳内濃度に影響を及ぼす最大血漿中濃度を変化させうること、またさらに、静脈内注射回数が研究者間で異なる場合があることを観察した。結果を単一の実験内で比較することが最良であるのはこのためである。この問題点にもかかわらず、互いに比較された微小管安定化剤の全体的な傾向および相対的な特徴は一貫しており、これらの結果は、エポチロンＤが、高度に脳透過性であり、化合物ＩＩ、イキサベピロン、およびパクリタキセルと比較して、脳透過性および脳内保持が実質的に改善されていることを示す。例えば、２つの個別の実験から得られたデータの比較を行う場合であっても、投与の６時間後におけるエポチロンＤの脳対血漿比は、表における２０４６および表２における８９であり、表１におけるパクリタキセル（０．３７）および化合物ＩＩ（２．１）についての同じ時点における比率をやはり顕著に上回る。表２に記載の研究における肝臓レベルは、２４時間後において定量下限（この研究では４９ｎＭのＬＬＱ）未満まで低下したため、この時点における脳対肝臓比は定量不能（ＮＱ）であった。
【０１４２】
ＷＯ０３／０７４０５３Ａ１は、脳疾患を治療するための特定のエポチロンの使用について広く開示している。この特許公開によれば、３つのエポチロン（エポチロンＤは含めない）の血漿中レベルおよび脳内レベルは、５ｍｐｋの静脈内ボーラス投与後の最初の４０分間において測定された。ＷＯ０３／０７４０５３Ａ１において化合物Ｉとして同定される物質：４，８−ジヒドロキシ−１６−（１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）−エテニル）−１−オキサ−７−（１−プロピル）−５，５，９，１３−テトラメチル−シクロヘキサデク−１３−エン−２，６−ジオン、およびパクリタキセルについて、該特許公開で報告された脳内濃度および血漿中濃度のデータを、下記の表１において再現する。ＷＯ０３／０７４０５３において、データは、μｇ／ｍｌおよび分の単位により報告された；比較を目的として、このデータをｎＭに変換し、ｎＭおよび時間の単位により表３で報告する。このデータ（表３による）は、本明細書において本発明者らにより独立して裏付けられたものではなく、該特許公開で示された値（時間およびｎＭへと変換された）に基づき再現される。加えて、ＷＯ０３／０７４０５３内において、化合物Ｉの立体異性および／または調製方法は報告されておらず、１３  Ｅ／Ｚ混合物が言及されている（１３頁、１５行目）ことが注意される。
【表３】
0005548675.tif 000007
【０１４３】
データが報告されたのは４０分後までに限られたので、脳対血漿比を検討することによりこの研究から評価しうるのは脳透過性だけである。検出レベルは開示されなかったが、脳内レベルがＬＬＱ未満であるため、パクリタキセルは脳透過性が低いと推測される（表１のデータと符合する）。ＷＯ０３／０７４０５３Ａ１において、投与の少なくとも２４時間後において測定する必要がある脳内保持の測定値、および末梢組織との比較による選択的な脳透過性は論じられなかった。
【０１４４】
（実施例７：経口投与によるエポチロンＤの能力）
タウオパチー治療における、エポチロンＤの能力をさらに分析するために、化合物を２つの実験で評価し、それぞれ１０ｍｐｋおよび３５ｍｐｋで、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに強制経口投与した。また、これらの実験では、４，８−ジヒドロキシ−１６−（１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）−エテニル）−１−オキサ−７−（１−プロピル）−５，５，９，１３−テトラメチル−シクロヘキサデカ−１３−エン−２，６−ジオンの異性体（本明細書における、化合物ＩＩＩ）も評価され、エポチロンＤと化合物ＩＩＩとの対照比較も行われた。以下では、まず、化合物ＩＩＩの製造および単離の実験を詳細に記載し、次いで生物学的、インビボデータを記載する。
【０１４５】
（一般的な実験情報）
以下の手順では、温度は全てセルシウス度を用いた。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ５００、４００、または３００ＭＨｚ装置を用い、また化学シフトはテトラメチルシラン（δ＝０.０）に関してｐｐｍ（δ）で記録した。全ての蒸発は、減圧下で行なった。特に断りがなければ、ＬＣ／ＭＳ分析はＷａｔｅｒｓ装置で行ない、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ ３.０×５０ｍｍ Ｓ１０逆相カラムを用いて、流速４ｍＬ／分で、０.１％ＴＦＡのＭｅＯＨ／水溶液グラジエント［３分で０〜１００％、４分でランタイム］を使用し、ＵＶ検出器を２２０ｎｍにセットするか、あるいはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−Ｌｕｎａ ３.０×５０ｍｍ １０μ逆相カラムを用いて流速５ｍＬ／分で、１０ｍＭ酢酸アンモニウムのアセトニトリル／水溶液グラジエント［３分で５〜９５％、４分でランタイム］を使用し、ＵＶ検出器を２２０ｎｍにセットした。特に断りがなければ、精製は、４０〜６３メッシュのシリカゲルカラムによって、またはＢＩＯＴＡＧＥ（登録商標）Ｈｏｒｉｚｏｎシステムを用いて、または特定のＨＰＬＣ装置および条件を用いて行なった。
【０１４６】
工程１：
【化４】
0005548675.tif 000008
【化５】
0005548675.tif 000009
ホスホニウム塩Ａ［Nicolaou et al., J. Am. Chem. Soc., 119:7974-7991 (1997) に従って製造；４０.５ｇ、５７.９ｍｍｏｌ］のＴＨＦ溶液（３００ｍＬ）に、０°でナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（６３.７ｍＬ、６３.７ｍｍｏｌ）を加え、溶液を５分間、攪拌した。（６Ｓ）−６−メチル−７−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）ヘプタン−２−オン（ＵＳ７，３２６，７９８に従って製造；１４.５４ｇ、６３.７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（５０ｍＬ）を急速に加え、混合液を１６時間かけて室温に加温した。反応混合液を飽和ＮＨ４Ｃｌに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧中で蒸発させた。粗生成物をシリカゲルカラムで精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、０〜１０％）、合成中間体−１を得た（１６ｇ、３０.７ｍｍｏｌ、５３％）。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 6.90 (s, 1H), 6.43 (s, 1H). 5.20-5.05 (m, 1H), 4.6-4.5 (m, 1H), 4.15-4.00 (m, 1H), 3.9-3.8 (m, 1H), 3.6-3.3 (m, 2H), 3.25-3.05 (m, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.35-2.15 (m, 2H), 2.05 -1.90 (m, 5H), 1.90-1.75 (m, 1H), 1.75 -1.65 (m, 3H), 1.65 -1.45 (m, 6H), 1.45 -1.25 (m, 3H), 1.15 -1.00 (m, 1H), 1.00-0.80 (m, 12H), 0.05 - -0.05 (dd, 6H). MS (LCMS) [M+H] = 522.44, [M+Na] = 544.42.
【０１４７】
工程２：
【化６】
0005548675.tif 000010
合成中間体−１（１６ｇ、３０.７ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（３００ｍＬ）に室温で、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（５.８３ｇ、３０.７ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を７時間、攪拌し、飽和ＮａＨＣＯ３に注ぎ、塩化メチレン（３００ｍＬ）で２回抽出した。有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過して、溶媒を除去した後、粗物質をＢＩＯＴＡＧＥ（登録商標）システムで精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１０〜４５％）、合成中間体−２を得た（９.８ｇ、２２.４ｍｍｏｌ、７３％）。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 6.92-6.90 (m, 1H), 6.45-6.40 (m, 1H), 5.15-5.00 (m, 1H), 4.10-4.00 (m, 1H), 3.50-3.30 (m, 2H), 2.69 (s, 3H), 2.35-2.15 (m, 2H), 2.1-1.9 (m, 5H), 1.75 -1.50 (m, 5H), 1.50-1.25 (m, 3H), 1.10-0.75 (m, 13H), 0.05 - -0.05 (dd, 6H). MS (LCMS) [M+H] = 438.29, [M+Na] = 460.24.
【０１４８】
工程３：
【化７】
0005548675.tif 000011
シュウ酸クロリド（２.９４ｍＬ、３３.６ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（１００ｍＬ）に、ＤＭＳＯ（４.８８ｍＬ、６８.８ｍｍｏｌ）を−７８°でゆっくり加えた。１０分、攪拌した後、合成中間体−２（７ｇ、１５.９９ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（１００ｍＬ）を加え、３０分間、攪拌を継続した。ＴＥＡ（１１.１４ｍＬ、８０ｍｍｏｌ）を加え、混合液を−１０°に加温した。飽和ＮａＨＣＯ３を加えた後、反応混合液を塩化メチレン（１００ｍＬ）で２回抽出した。有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、蒸発させて、粗生成物を黄色の油状物として得た。ショートＳｉＯ２カラムで濾過し、１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶媒で溶離し、減圧濃縮して、合成中間体−３を無色の油状物として得た（７ｇ、１６ｍｍｏｌ、１００％）。 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 9.6-9.5 (d, 1H), 6.9 (m, 1H).6.4 (m, 1H), 5.2-5.1(m, 1H), 4.1-4.0 (m, 1H), 2.7 (s, 3H), 2.3-2.2 (m, 3H), 2.2-1.8 (m, 5H), 1.7-1.5 (m, 4H), 1.4 -1.2 (m, 3H), 1.1-1.0(m, 3H), 0.87 (s, 9H), 0.03 (s, 3H), 0.01 (s, 3H).
【０１４９】
工程４：
【化８】
0005548675.tif 000012
Klar et al.［Angew. Chem. Int. Ed., 45:7942-7948 (2006)］の方法に従った。ＴＨＦ（２００ｍＬ）に、−７８°で新しく調製したＬＤＡ（７０ｍＬ、０.５Ｍ、３５ｍｍｏｌ）を加え、続いて（Ｓ）−２−（２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４−イル）−２−メチルヘプタン−３−オン（８.４８ｇ、３５ｍｍｏｌ）を加えた［Klar et al., Synthesis, 2:301-305 (2005)］。攪拌を３０分間、−３０°で続けた。−７８°で冷却後、ＺｎＣｌ２溶液（１.０Ｍ、３５.０ｍＬ、３５ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を２０分間、攪拌した。合成中間体−３（７ｇ、１６.０６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（５０ｍＬ）を２０分かけて加えた。混合液を、さらに８時間、−７８°で攪拌した。混合液を飽和ＮＨ４Ｃｌに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で２回抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧中で濃縮した。残渣をＳｉＯ２カラムで精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、０〜１０％）、合成中間体−４を最初の溶離物および主要なアルドール異性体として得た（７.５ｇ、１１ｍｍｏｌ、６９％）。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm  6.90 (m, 1H), 6.43 (m, 1H), 5.15 -5.05 (m, 1H), 4.15 - 4.00 (m, 2H), 4.00-3.80 (m, 2H), 3.50-3.40 (m, 1H), 3.30-3.20 (m, 1H), 2.85 -2.75 (m 1H), 2.69 (s, 3H), 2.35 -2.15 (m, 2H), 2.10-1.90 (m, 5H), 1.75 - 0.75 (m, 41H ), 0.05 - -0.05 (d, 6H).  MS (LCMS) [M+H] = 678.47, [M+Na] = 700.44.
【０１５０】
工程５：
【化９】
0005548675.tif 000013
合成中間体−４（８ｇ、１１.８ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（２００ｍＬ）に０°で２，６−ルチジン（６.８７ｍＬ、５９ｍｍｏｌ）を加え、続いてｔｅｒｔ−ブチル ジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（８.１３ｍＬ、３５.４ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を１６時間かけて室温に加温し、飽和ＮａＨＣＯ３に注ぎ、塩化メチレンで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧中で除去した。残渣をＳｉＯ２カラムで精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、５〜１０％）、合成中間体−５を得た（７.８ｇ、９.８４ｍｍｏｌ、８３％）。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 6.90 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.15 -5.05 (m, 1H), 4.25 -4.20 (m, 1H), 4.10 -4.00 (m, 1H), 4.00-3.90 (m, 1H), 3.90 - 3.75 (m, 1H), 3.75 - 3.70 (m, 1H), 3.10 -3.00 (, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.35 -2.15 (m, 2H), 2.00-1.85 (m, 5H), 1.70 - 0.75 (m, 50H), 0.10 - -0.05 (m, 12H).MS (LCMS) [M+H] = 792.48, [M+Na] = 814.44.
【０１５１】
工程６：
【化１０】
0005548675.tif 000014
合成中間体−５（６.８ｇ、８.５８ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（１００ｍＬ）に室温で、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１.８ｇ、９.４４ｍｍｏｌ）を加えた。６時間、攪拌した後、飽和ＮａＨＣＯ３を加え、混合液をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧中で濃縮した。反応を、合成中間体−５（１ｇ）を用いて繰り返した。粗生成物を合わせて、ＢＩＯＴＡＧＥ（登録商標）システムで精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１０〜４０％）、合成中間体−６を得た（５ｇ、６.６５ｍｍｏｌ、６８％）。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 6.9 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.15 -5.05 (m, 1H), 4.15-4.00 (m, 1H), 4.00-3.90 (m, 1H), 3.90-3.80 (m, 1H), 3.75-3.65 (m, 1H), 3.65-3.55 (m, 1H), 3.10-2.90 (m, 2H), 2.69 (s, 3H), 2.25-2.15(m, 2H), 2.00-0.75 (m, 50H), 0.10- -0.05 (m, 12H). MS (LCMS) [M+H] = 752.42.
【０１５２】
工程７：
【化１１】
0005548675.tif 000015
合成中間体−６（５ｇ、６.６５ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（２００ｍＬ）に０°で２，６−ルチジン（７.７ｍＬ、６６.５ｍｍｏｌ）を加え、続いてｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル トリフルオロメタンスルホネート（９.１６ｍＬ、３９.９ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を１６時間かけて室温に加温し、次いで飽和ＮａＨＣＯ３に注ぎ、塩化メチレンで抽出した有機溶媒を蒸発させ、粗混合液をＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１０〜２０％）でＳｉＯ２層に通じて濾過し、合成中間体−７を油状物として得た（６.９ｇ、１００％）。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 6.9 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.20-5.05 (m, 1H), 4.10 - 4.00 (m, 1H), 3.95 - 3.85 (m, 1H), 3.80 - 3.75 (m, 1H), 3.70 -3.60 (m, 1H), 3.60 - 3.50 (m, 1H), 3.10 -3.00 (m, 1H), 2.69 (s, 3H), 2.25 - 2.15 (m, 2H), 2.00 - 0.75 (m, 67H), 0.10 - -0.05 (m, 24H).
【０１５３】
工程８：
【化１２】
0005548675.tif 000016
合成中間体−７（５ｇ、５.１ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（８０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（４０ｍＬ）溶液に、０°で（＋／−）−カンファー−１０−スルホン酸（１.１８ｇ、５.１ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を０°で６時間攪拌し、飽和ＮａＨＣＯ３に注ぎ、塩化メチレンで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、合成中間体−８を油状物として得た（３.６ｇ、４.１５ｍｍｏｌ、８１％）。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 6.90 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.2-5.1 (m, 1H), 4.1-4.0 (m, 2H), 3.85-3.75 (m, 1H), 3.7-3.6 (m, 2H), 3.1-3.0 (m, 1H), 2.7 (s, 3H), 2.3 -2.2 (m, 2H), 2.0-1.9 (m, 6H), 1.7-1.5 (m, 5H), 1.5 -1.3 (m, 3H), 1.3-1.1 (m, 6H), 1.1-1.0 (m, 4H), 1.0-0.8 (m, 35H), 0.1- -0.1 (m, 18H). MS (LCMS) [M+H] = 866.49.
【０１５４】
工程９：
【化１３】
0005548675.tif 000017
シュウ酸クロリド（０.８ｍＬ、９.１４ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（４０ｍＬ）に−７８°で、ＤＭＳＯ（１.２４ｍＬ、１７.５ｍｍｏｌ）を加えた。１０分間、攪拌した後、合成中間体−８（３.６ｇ、４.１５ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（４０ｍＬ）を加えた。３０分後、ＴＥＡ（３.７６ｍＬ、２７.０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合液を２時間かけて０°に加温した。飽和ＮａＨＣＯ３を加え、混合液を塩化メチレンで抽出した有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧中で濃縮し、合成中間体−９を油状物として得た（３.６ｇ、４.１６ｍｍｏｌ、１００％）。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 9.77 (m, 1H), 6.9 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.3 (s, 1H), 5.2-5.1 (m, 1H), 4.5-4.4 (m, 1H), 4.1-4.0 (m, 1H), 3.8-3.7 (m, 1H), 3.1-3.0 (m, 1H), 2.7 (s, 3H), 2.6-2.1 (m, 4H), 2.0-1.9 (m, 4H), 1.7-1.5 (m, 4H), 1.5 -1.3 (m, 5H), 1.3-1.1 (m, 5H), 1.1-1.0 (m, 3H), 1.0-0.8 (m, 35H), 0.1- -0.1 (m, 18H).
【０１５５】
工程１０：
【化１４】
0005548675.tif 000018
合成中間体−９（３.６ｇ、４.１６ｍｍｏｌ）のｔ−ＢｕＯＨ（８５ｍＬ）およびＴＨＦ（１２０ｍＬ）溶液に０°で、水（３０ｍＬ）、２−メチルブタ−１−エン（１８.５ｇ、２６４ｍｍｏｌ）、リン酸二水素ナトリウム（１.６ｇ、１３.２ｍｍｏｌ）、および亜塩素酸ナトリウム（２.９８ｇ、２６.４ｍｍｏｌ）を加えた。０°で２時間、攪拌した後、混合液を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（１００ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で３回、抽出した。有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧中で濃縮した。残渣をＢＩＯＴＡＧＥ（登録商標）システムで精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン，１０〜５０％）、合成中間体−１０を無色の油状物として得た（２.８ｇ、３.１８ｍｍｏｌ、７２％）。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 6.93 (s, 1H), 6.66 (s, 0.5H), 6.46 (s, 0.5H), 5.25-5.0 (m, 1H), 4.4 -4.3 (m, 1H), 4.2-4.0 (m, 1H), 3.9-3.7 (m, 1H), 3.2-3.0 (m, 1H), 2.7 (d, 3H), 2.6 -2.4 (m, 1H), 2.4-2.0 (m, 3H), 2.0-1.0 (m, 23H), 1.0-0.8 (m, 35H), 0.1- -0.1 (m, 18H). MS (LCMS) [M+H] = 881.53.
【０１５６】
工程１１：
【化１５】
0005548675.tif 000019
合成中間体−１０（２.８ｇ、３，１８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（５ｍＬ）に室温で、ＴＢＡＦ（４２ｍＬ、１.０Ｍ）を加えた。混合液を６時間、攪拌し、次いで飽和ＮＨ４Ｃｌに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で２回、抽出した。有機層を合わせて、ＨＣｌ（１.０Ｎ、２００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３、および食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、合成中間体−１１を粘稠性油状物として得た（２.６ｇ、３.３ｍｍｏｌ、１００％）。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 6.9 (s, 1H), 6.6-6.5 (m, 1H), 5.2-5.1 (m,1H), 4.4-4.3 (m, 1H), 4.15-4.05 (m, 1H), 3.8-3.7 (m, 1H), 3.4-3.2 (m, 1H), 3.1-3.0 (m, 1H), 2.8-2.7 (m, 2H), 2.66 (d, 3H), 2.5-2.4 (m, 1H), 2.4-2.3 (m, 2H), 2.3-2.2 (m, 1H), 2.0-0.8 (m, 46H), 0.1-0.0 (m, 12H). MS (LCMS) [M+H) = 766.3, [M-H20] = 748.3.
【０１５７】
工程１２：
【化１６】
0005548675.tif 000020
合成中間体−１１（２.６ｇ、３.３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（２７ｍＬ）に室温で、ＴＥＡ（２.３６ｍＬ、１７ｍｍｏｌ）を加え、続いて２，４，６−トリクロロ塩化ベンゾイル（３.３１ｇ、１３.５７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液を２０分間、攪拌し、次いでトルエン（２６０ｍＬ）で希釈した。トルエン溶液を４時間かけて、ＤＭＡＰ（３.８６ｇ、３１.６ｍｍｏｌ）のトルエン攪拌混合液（１４００ｍＬ）にゆっくり加えて、その後、ＴＬＣは完了を示した。ＨＣｌ（４.０Ｎ、１２.５ｍＬ）を加え、溶媒を減圧下で除去した。残渣を部分的にＢＩＯＴＡＧＥ（登録商標）システムで精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、０〜１０％）、モノ−シリル生成物および化合物ＩＩＩを含有する上記の混合物（１３Ｅ／Ｚ異性体）を含む混合物を得た（１.１ｇ）。MS (LCMS) (520.2, 634.2).  この物質は、さらなる精製をすることなく、脱保護を行なった。
【０１５８】
工程１３：化合物ＩＩＩ
上記反応混合物（１０２ｍｇ）の溶液に、−２０°で、ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ、２０％ｖ／ｖ）を加えた。反応混合液を氷浴に移して、１時間、攪拌した。溶媒を減圧中で除去し、少量のトルエンを加え、次いで再び蒸発させて、白色の固形物を得た。同じ反応を部分的に精製した混合物（１２５ｍｇ）で繰り返した。２つの反応残渣を合わせて、ＳｉＯ２カラムで精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、２０〜３５％）、白色の固形物を得た（１８０ｍｇ）。白色の固形物をＭｅＯＨ（５ｍＬ）中に取り込み、ＨＰＬＣで精製した（Ｖａｒｉａｎ、Ｄｙｎａｍａｘ ＰＤＡ−２ 検出器；Ｗａｔｅｒs Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ；Ａ：０.０５％ＴＦＡの水溶液；Ｂ：０.０５％ＴＦＡのアセトニトリル溶液、均一濃度）。２つの主要なピークを得た（ピーク１、７３.４ｍｇ、３８％；およびピーク２、４１.８ｍｇ、２２％）。
【０１５９】
ピーク１が、１３−Ｚ［１−オキサナンバリング（oxa numbering）］異性体であることを、Ｃ−１４オレフィンプロトンおよびＣ−１３メチルの間のＮＯＥの観察によって決定した。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 7.14 (s, 1H), 6.75 (s, 1H), 5.15-5.05 (m, 1H), 5.05-5.00 (m, 1H), 4.45-4.35 (m, 1H), 3.65 -3.55 (m, 1H), 3.35-3.25 (m,1H), 2.92 (s, 3H), 2.55-2.45 (m, 2H), 2.35-2.25 (m, 2H), 2.25-2.15 (m, 1H), 2.00 (s, 3H), 1.90-1.80 (m, 1H), 1.80-1.65 (m, 5H), 1.60-1.45 (m, 2H), 1.45-1.30 (m, 5H), 1.25-1.15 (m, 3H), 1.05-0.95 (m, 6H), 0.90-0.85 (t, 3H).  MS (LCMS) [M+H] = 520.3.
【０１６０】
ピーク２が、１３−Ｅ異性体（実施例７の化合物ＩＩＩ、以下）であることを、Ｃ−１４オレフィンプロトンおよびＣ−１３メチルの間のＮＯＥが存在しないことこら決定した。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 7.03 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 5.3-5.2 (m, 1H), 5.05-5.00 (m, 1H), 4.45-4.40 (m, 1H), 3.65 -3.60 (m, 1H), 3.4-3.3 (m,1H), 2.77 (s, 3H), 2.6-2.3 (m, 4H), 2.15-2.05 (m, 1H), 1.99 (s, 3H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.8-1.7 (m, 2H), 1.57 (s, 3H), 1.50-1.35 (m, 4H), 1.29 (s, 3H), 1.25-1.10(m, 3H), 1.0-0.9 (m, 6H), 0.9-0.8 (t, 3H).  MS (LCMS) [M+H] = 520.3.
【０１６１】
（エポチロンＤおよび化合物ＩＩＩによる経口インビボ研究）
各化合物（すぐ上記の実験に従い調製され説明された、エポチロンＤおよび化合物ＩＩＩ）について、群（１０ｍｐｋ群および３５ｍｐｋ群）当たり３匹ずつのマウスに、８５％のＰＥＧ−４００、１０％のＴＰＧＳ、および５．０％のエタノールを用いて１０ｍｌ／ｋｇで投与した。投与後の様々な間隔で、組織ホモジナイゼーション、アセトニトリルによる抽出、およびタンデム質量分析を伴う液体クロマトグラフィー（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）に従い、血漿、脳、および肝臓における化合物レベルを測定した。研究からの結果を表４および５にまとめ、また、３５ｍｐｋ研究の結果を図９で報告する。具体的に述べると、表４では、投与の２４時間後まで（化合物ＩＩＩについて、所与のＬＬＱに対して依然として検出可能な範囲まで）の経口投与（１０ｍｐｋ）後の脳内におけるエポチロンＤ（化合物Ｉ）および化合物ＩＩＩの濃度を報告し、投与の５〜２４時間後まで（ここでもまた、化合物ＩＩＩについて、検出可能な範囲まで）の経口投与（３５ｍｐｋ）後の脳内におけるエポチロンＤ（化合物Ｉ）および化合物ＩＩＩの濃度を表５では報告し、図９ではプロットする（化合物ＩＩＩについての検出可能な脳内濃度の値が１つだけであったため、表４のデータについてはプロットを作製しなかった）。以下の表４および５では、値が＜ＬＬＱであった場合、ＬＬＱ値をカッコ内に記録する。
【表４】
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【表５】
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【０１６２】
化合物ＩＩＩについて見られる通り、より後期の時点（すなわち、１時間後以降）に由来する組織レベルは、脳組織内において、化合物ＩＩＩレベルが急激に低下することを示す。こうして、いずれの実験でも測定可能な脳レベルを欠くことに観察される通り、化合物ＩＩＩは脳内保持が低度である。エポチロンＤの経口投与が１時間後において０．７および１．１の脳対血漿比を示したことは、良好な脳透過性を示す。化合物ＩＩＩと異なり、エポチロンＤの脳内レベルは、２４時間を超えて維持された（表２、４、および５、図９〜１０）。エポチロンＤの経口投与についての脳対肝臓比は、エポチロンＤが、脳内に選択的に保持されることを示し、静脈内投与後の表１および２におけるデータと符合する。特に、エポチロンＤの脳対肝臓比は、１０ｍｐｋおよび３５ｍｐｋで投与した２４時間後において、それぞれ、８および１９であった（表４および５）。これらの値は、エポチロンＤの顕著に高度な選択的脳対肝臓保持率を反映する。
【０１６３】
（実施例８：静脈内投与、経口投与、および腹腔内投与後におけるエポチロンＤの半減期データ）
タウオパチーの治療について、エポチロンＤの特性をさらに評価するため、複数の研究からエポチロンＤの脳内半減期を計算し、その結果を表６で報告する。長半減期化合物の正確な脳内半減期を計算するため、単回投与後における複数時点の半減期を測定する必要があった。脳内濃度が単回投与後の７日間全体にわたり測定された、表２に記載の研究から、静脈内投与後におけるエポチロンＤ（化合物Ｉ）の脳内半減期は６１時間である（表６）。複数の経路および用量による投与後におけるマウスの脳内半減期は、平均４６．０±７時間であった（表６）。同様に、ラットにおける静脈内投与後における脳内半減期は３１時間であった（表６）。これに対し、化合物ＩＩＩの脳内半減期は、図９に反映される通り、エポチロンＤより著明に短いことが明らかであった。エポチロンＤの脳内半減期についてのさらなる例示として、ある研究結果（上記の表２において報告したデータ）をプロットする図１０を示すが、これにより、５ｍｐｋの静脈内ボーラス投与の最長１７５時間後における脳内濃度レベルが示される。
【表６】
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【０１６４】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９】
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【図１０】
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