(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
糞土除去処理をしたミミズを原料にしてミミズ乾燥粉末を製造するミミズ乾燥粉末製造方法であって、
糞土除去処理をしたミミズの生体又はその破砕物に対し１０〜５００ ＭＰａの圧力条件且つ０〜７０℃の温度条件での加圧処理を行い、この加圧処理後のミミズ又はその破砕物を前記ミミズ乾燥粉末の原料にするミミズ乾燥粉末製造方法。
【請求項２】
前記糞土除去処理として、ミミズに対しヒーターによる熱線の照射を行うことでミミズの体内から糞土除去を行い、この糞土除去処理後のミミズの生体又はその破砕物に対し前記加圧処理を行う請求項１記載のミミズ乾燥粉末製造方法。
【請求項３】
ミミズに対する前記ヒーターによる熱線の照射と、その熱線照射によりミミズの排泄した糞土の除去、又は、ミミズを育成する育成床の表層床材の除去とを交互に行う請求項２記載のミミズ乾燥粉末製造方法。
【請求項４】
前記糞土除去処理として、ミミズを気化させた揮発性有機溶媒に暴露することでミミズの体内から糞土及び体腔液を除去し、この糞土及び体腔液除去処理後のミミズの生体又はその破砕物に対し前記加圧処理を行う請求項１〜３のいずれか１項に記載のミミズ乾燥粉末製造方法。
【請求項５】
前記糞土除去処理として、ミミズをアルカリ性溶液に浸漬することでミミズの体内から糞土及び体腔液を除去し、この糞土及び体腔液除去処理後のミミズの生体又はその破砕物に対し前記加圧処理を行う請求項１〜３のいずれか１項に記載のミミズ乾燥粉末製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
糞土除去処理をしたミミズを原料にしてミミズ乾燥粉末を製造するミミズ乾燥粉末製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
健康食品や薬剤として用いられるミミズ乾燥粉末の原料となるミミズの養殖は、土からなる養殖床において土とは別途に牛糞や食品廃棄物等を餌として与えて行われるが、一般に土には大腸菌や一般細菌が繁殖し、さらに、砒素や重金属等の有害物質も少なからず含まれているものであり、また、ミミズに与える餌にも砒素や重金属等の有害物質が少なからず含まれているものであるから、ミミズはその育成中に土や餌を食べることで体内に菌や有害物質を蓄積していくこととなり、このため、人体への悪影響がないようにミミズ乾燥粉末の製造において、ミミズから菌や有害物質を除去する必要がある。
【０００３】
従来、菌や有害物質を除去したミミズ乾燥粉末を製造する方法として、ミミズ体内の糞土、及び、有害物質を含有する体腔液をミミズ体内から除去することで菌や有害物質をミミズから除去し、このミミズをミミズ乾燥粉末の原料とする方法が知られており、例えば、ミミズの生体を明所に長時間放置する工程と、クエン酸などの酸の粉末をミミズに振りかける又はその酸の水溶液にミミズを浸す工程により、糞土、体腔液をミミズ体内から除去し、その後ミミズを破砕し、その破砕物を凍結乾燥することで菌や有害物質を除去したミミズ乾燥粉末を製造する方法が知られている（特許文献１参照）。
【０００４】
また、製造したミミズ乾燥粉末に対し加熱殺菌を行うことにより菌をさらに除去する方法も知られている（特許文献２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特許第４８０８８２２号公報
【特許文献２】特許第４８８６０１７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
健康食品や薬剤としてのミミズ乾燥粉末の薬理作用はミミズの酵素の働きによるものであり、ミミズ乾燥粉末の酵素活性が高いほどその薬理作用は高いため、製造されるミミズ乾燥粉末の酵素活性は高いことが求められる。
【０００７】
しかし、従来のように加熱殺菌を行うと、一般に酵素は熱に弱いため、酵素活性が低下することは避けられないものであった。
【０００８】
この実情に鑑み、本発明の主たる課題は、合理的な殺菌処理方法を採用することで、ミミズの酵素活性の低下の虞がないばかりか、得られるミミズ乾燥粉末の酵素活性を増大させるミミズ乾燥粉末の製造方法を提供する点にある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の第１特徴構成は、ミミズ乾燥粉末製造方法に係り、その特徴は、
糞土除去処理をしたミミズを原料にしてミミズ乾燥粉末を製造するミミズ乾燥粉末製造方法であって、
糞土除去処理をしたミミズの生体又はその破砕物に対し１０〜５００ ＭＰａの圧力条件且つ０〜７０℃の温度条件での加圧処理を行い、この加圧処理後のミミズ又はその破砕物を前記ミミズ乾燥粉末の原料にする点にある。
【００１０】
つまり、本構成によれば、糞土除去処理をしたミミズ又はその破砕物を加圧処理により確実に殺菌することができるから、酵素活性が低下する虞のある加熱殺菌と異なり、酵素活性が低下する虞がなく、そればかりか、加圧処理を通してミミズ又はその破砕物の酵素活性を増大させることができる。
【００１１】
また、加圧処理によるミミズの酵素活性の増大によりミミズの自己消化が促進されることでミミズの表皮が加圧処理の間に自己消化により溶かされるため、従来ミミズ乾燥粉末への加工前に必要であった濾過などによるミミズの表皮の除去工程を省くことができ、これに伴い、濾過などの表皮除去工程に起因する有効成分の損失やミミズ乾燥粉末を採取する上清液の収率低下といった問題も回避することができる。
【００１２】
またさらに、加圧処理により、ミミズの破砕等の工程から乾燥粉末への加工にかけて発生するミミズのニオイを効果的に低減することもでき、作業環境も良化できる。
しかも、前記加圧処理を上記の温度条件で行うことにより、加熱により酵素活性が低下しない温度条件で、ミミズの殺菌を一層効果的に行うことができる。
【００１３】
なお、加圧処理の圧力条件は、より好ましくは１００〜２００ ＭＰａである。
【００１６】
本発明の第２特徴構成は、第１特徴構成の実施に好適な実施形態を特定するものであり、その特徴は、
前記糞土除去処理として、ミミズに対しヒーターによる熱線の照射を行うことでミミズの体内から糞土除去を行い、この糞土除去後のミミズの生体又はその破砕物に対し前記加圧処理を行う点にある。
【００１７】
つまり、ミミズは表皮が乾燥すると乾燥から身を守るために糞土などを体内から排泄する習性があるが、上記構成によれば、ヒーターによる熱線の照射によりミミズの表皮が乾燥しミミズの糞土排出を促進することができ、さらに、ヒーター照射に伴いミミズの体温が上がり、これにより動きが活発化され一層糞土排出効率を上げることができるから、極めて短時間で効率的にミミズの体内から糞土除去を行うことができる。
【００１８】
即ち、本構成によれば、このように、短時間で糞土除去を行うことができるため、糞土除去においてミミズにかかるダメージを小さくでき、これによりミミズへのダメージに伴う酵素活性の低下を効果的に抑止することができる。
【００１９】
本発明の第３特徴構成は、第２特徴構成の実施に好適な実施形態を特定するものであり、その特徴は、
ミミズに対する前記ヒーターによる熱線の照射と、その熱線照射によりミミズの排泄した糞土の除去、又は、ミミズを育成する育成床の表層床材の除去とを交互に行う点にある。
【００２０】
つまり、ヒーターによる熱線の照射によりミミズは自らの排泄した糞土を身にまとう、又は、ミミズを育成する育成床の床材に潜りこみ、これによりヒーターによる熱線の照射が糞土又は表層床材により妨げられるが、上記構成によれば、ヒーターによる熱線の照射と、ミミズのまとった糞土の除去、又は、潜りこんだミミズの上方の表層床材の除去とをミミズに対し交互に行うから、糞土又は表層床材によりヒーターによる熱線の照射が妨げられることなく、一層効率的にミミズの体内から糞土除去を行うことができる。
【００２１】
即ち、本構成によれば、このように、一層効率的に糞土除去を行うことができるため、糞土除去においてミミズにかかるダメージを小さくでき、これによりミミズへのダメージに伴う酵素活性の低下を一層効果的に抑止することができる。
【００２２】
本発明の第４特徴構成は、第１〜第３特徴構成の実施に好適な実施形態を特定するものであり、その特徴は、
前記糞土除去処理として、ミミズを気化させた揮発性有機溶媒に暴露することでミミズの体内から糞土及び体腔液を除去し、この糞土及び体腔液除去後のミミズの生体又はその破砕物に対し前記加圧処理を行う点にある。
【００２３】
つまり、上記構成によれば、揮発性有機溶媒を用いて糞土・体腔液の除去処理をしたミミズをミミズ乾燥粉末の原料とすることで、同処理を行わないミミズを原料としたものと比べて酵素活性（即ち、薬理作用）の高いミミズ乾燥粉末を得ることができる。
【００２４】
また、上記構成によれば、クエン酸などの酸に比べミミズに害の少ない揮発性有機溶媒によりミミズに刺激を与えることで、安全にミミズの体内から糞土及び体腔液を除去することもできる。
【００２５】
さらに、揮発性有機溶媒を気化してミミズに暴露させるため、液体の揮発性有機溶媒に浸漬させる場合に比べ、ミミズの体温を大きく下げることがなく、このためミミズの体温が低下することによるミミズの糞土・体腔液の排出効率の低下を招くことなく、効率的にミミズの体内から糞土及び体腔液を除去することもできる。
【００２６】
なお、揮発性有機溶媒のうち殺菌作用があるものを選択すれば、本構成による糞土・体腔液の除去処理と同時にミミズの殺菌も同時に行うことも可能である。
【００２７】
本発明の第５特徴構成は、第１〜第３特徴構成の実施に好適な実施形態を特定するものであり、その特徴は、
前記糞土除去処理として、ミミズをアルカリ性溶液に浸漬することでミミズの体内から糞土及び体腔液を除去し、この糞土及び体腔液除去後のミミズの生体又はその破砕物に対し前記加圧処理を行う点にある。
【００２８】
つまり、上記構成によれば、アルカリ性溶液を用いて糞土・体腔液の除去処理をしたミミズをミミズ乾燥粉末の原料とすることで同処理を行わないミミズを原料としたものと比べて酵素活性（即ち、薬理作用）の高いミミズ乾燥粉末を得ることができる。
【００２９】
また、クエン酸などの酸に比べミミズに害の少ないアルカリ性溶液によりミミズに刺激を与えることで、安全にミミズの体内から糞土及び体腔液を除去することもできる。
【００３０】
なお、アルカリ性溶液のうち殺菌作用があるものを選択すれば、本構成による糞土・体腔液の除去処理と同時にミミズの殺菌も同時に行うことも可能である。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】育成専用床にて育成したミミズの一般細菌数及び大腸菌数を示す表
【図２】気化した揮発性有機溶媒の暴露により糞土・体腔液除去処理をしたミミズの酵素活性の変化を示す表
【図３】アルカリ性溶液への浸漬により糞土・体腔液除去処理をしたミミズの酵素活性の変化を示す表
【図４】加圧処理によるミミズの一般細菌数及び大腸菌数の変化を示す表
【図５】加圧処理によるミミズの酵素活性の変化を示す表
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明のミミズ乾燥粉末の製造方法はミミズの養殖工程、ミミズの糞土除去処理工程、ミミズ乾燥粉末の製造工程に分けられ、以下それぞれについて説明する。なお、本例ではミミズとしてＬｕｍｂｒｉｃｉｄａｅ科に属するシマミミズを用いた。
【００３３】
〈ミミズの養殖工程〉
本発明では、産卵させる繁殖用ミミズとミミズ乾燥粉末の原料とする育成用ミミズとにミミズを分別して育成することとし、繁殖用ミミズを繁殖専用床にて飼育しタマゴを産卵させ、育成用ミミズを育成専用床にて飼育することでミミズの養殖を行う。
【００３４】
繁殖専用床は、床材を容器内に敷き詰めて作成するが、特にその床材は限定されず、従来のミミズの養殖と同様に土からなるものでよい。
【００３５】
また、育成専用床は、植物性繊維質材を床材にして、これを容器内に敷き詰めて作成する。なお、植物性繊維質材としては、ヤシ、パイナップル、ココナッツ、水コケ、ピーナッツ殻、廃パルプなどの種々のものを採用できる。
【００３６】
この植物性繊維質材を床材とする育成専用床の製造においては、まず、植物性繊維質材を破砕し、その後、ビタミンやカルシウム等のミネラル分を含有させミミズの生育環境に適する中性付近のｐＨ値に調整した処理液に破砕物を浸漬しミネラル分を含有させると同時に破砕物のｐＨ調整を行い、そして、この破砕物を乾燥させて含水量を調整し、最終的に得られた乾燥物により育成専用床を製造する。
【００３７】
育成専用床の原料とする植物性繊維質材は土に比べて菌が少なく、そして、植物性繊維質材の破砕物を上記処理液に浸漬する工程により、破砕物中の砒素や重金属が処理液に溶出するため、破砕物たる植物性繊維質材は砒素や重金属などの有害物質が分離除去されたものとなっている。そして、この菌が少なく、有害物質が除去された植物性繊維質材を原料とするため、育成専用床は菌、有害物質が少なく、したがって、この育成専用床により育成用ミミズをクリーンな環境で飼育することができる。
【００３８】
本発明におけるミミズの養殖工程では、繁殖用ミミズを繁殖専用床にて別途餌を与えながら飼育しタマゴを産卵させ、繁殖用ミミズの産卵したタマゴを育成専用床に移して育成専用床にて孵化させる、若しくは、繁殖専用床にて孵化したミミズを育成専用床に移す。そして、育成専用床におけるミミズを育成用ミミズとして別途に餌を与えないようにして飼育する。
【００３９】
産卵にはカルシウム、タンパク質や有機分解物などの養分が必要であり、このため、繁殖専用床における繁殖用ミミズの飼育は、このような養分を与えて効率的に産卵させるために餌を与えながら行う。なお、餌としては焼酎の絞りかす、砕いたコーヒー豆、キノコの廃菌床等、種々のものを採用できる。
【００４０】
また、育成専用床における育成用ミミズの飼育では、育成専用床は菌が少なく有害物質が分離除去された植物性繊維質材を原料とするため、育成用ミミズの体内に菌や有害物質が蓄積されることを効果的に抑止できる。
【００４１】
即ち、一般に菌が繁殖し、砒素や重金属等の有害物質も少なからず含まれている土でミミズを育成する場合には、ミミズはその育成中に土を食べて体内に菌や有害物質を蓄積していくこととなるが、育成専用床で育成用ミミズを育成する場合には、育成用ミミズは育成専用床の床材である植物性繊維質材を餌として食べ、この植物性繊維質材は菌が少なく有害物質が分離除去されたものであるため、育成用ミミズの体内に菌や有害物質が蓄積されることを効果的に抑止することができる。
【００４２】
また、育成用ミミズは産卵を目的としていないため産卵に必要な養分を与えなくてよく、そして、植物性繊維質材を食べることで十分育つため、育成専用床における育成用ミミズの育成では、繁殖用ミミズと違い別途に餌を与えないようにしてあり、これにより、餌に少なからず含まれる砒素や重金属等の有害物質が餌を介してミミズに蓄積されること、及び、餌により植物性繊維質材の菌の繁殖が促進されることを回避し、育成用ミミズの体内に菌や有害物質が蓄積されることを一層効果的に抑止することができる。
【００４３】
なお、育成用ミミズが食べる植物性繊維質材には上記の処理液浸漬工程により栄養分としてミネラル分が含有されているため、栄養不足により育成用ミミズが育たないといった問題を回避できる。
【００４４】
図１は、本工程による育成専用床にて２０−２５℃で３か月飼育したミミズの一般細菌数及び大腸菌数を示す。本例における育成専用床は、ヤシ繊維を原料とし、具体的には、ヤシ繊維を市販の破砕機で破砕し、滅菌用ろ過フィルターを通した水道水で十分に洗浄し付着していた汚れを除去して、次に、ビタミンやカルシウム等のミネラル分を含有させて中性付近のｐＨ値に調整した処理液にヤシ繊維の破砕物を約２０時間浸漬しミネラル分を含有させると同時に破砕物のｐＨ調整を行い、その破砕物を２０−４０℃で長時間低温乾燥させたものを容器に敷き詰めることで育成専用床を作成した。なお、図１では、土からなる養殖床で別途餌を与えながら飼育した従来法のミミズの一般細菌数及び大腸菌数と比較してある。本工程によるミミズと従来法のミミズとはそれぞれ５匹ずつで１匹ごとにホモジナイザーで破砕し、殺菌工程を加えることなく菌数検査を行った。
【００４５】
菌数検査は、一般細菌数検査については、ミミズ破砕溶液の原液と、滅菌水で希釈したミミズ破砕溶液１ｍＬを３ＭペトリフィルムＡＣプレート（住友スリーエム（株）、３Ｍ及びペトリフィルムは登録商標）に塗布し、プレートを３０℃にセットしたインキュベーターで４８時間培養後、コロニー数を計測することにより行い、大腸菌数検査については、ミミズ破砕溶液の原液と、滅菌水で希釈したミミズ破砕溶液１ｍＬを３ＭペトリフィルムＲＣＣプレート（住友スリーエム（株））に塗布し、プレートを３５℃にセットしたインキュベーターで２４時間培養後、コロニー数を計測することにより行った。
【００４６】
図１に示すように、従来法のミミズは一般細菌及び大腸菌ともに測定不能となっていた。これは１０億以上の細菌数については計測が不能であるためであり、即ち、従来法のミミズには多くの菌が蓄積していることを示す。これに対し、育成専用床で飼育した本工程によるミミズは一般細菌及び大腸菌ともに測定可能な範囲で収まっており、即ち、本工程により、従来法のミミズと比べて、体内への菌の蓄積を効果的に抑止することができた。特に大腸菌に関しては従来法のミミズが少なくとも１０億以上の値であることを考えると６桁以上もその数が減少していることがわかる。このように、育成専用床で飼育した本工程によるミミズは従来法のミミズに比べて体内への菌の蓄積は効果的に抑止できる。
【００４７】
〈ミミズの糞土除去処理工程〉
このミミズの糞土除去処理工程は、（１）ヒーター照射による糞土除去工程、その後の（２−１）気化揮発性有機溶媒の暴露による残留糞土・体腔液除去工程、又は（２−２）アルカリ性溶液への浸漬による残留糞土・体腔液除去工程に分けられる。
【００４８】
（１）ヒーター照射による糞土除去工程
本工程では、ミミズは表皮が乾燥すると乾燥から身を守るために糞土などを排泄し糞土を身にまとうというミミズの習性を利用し、ヒーターによる熱線の照射によりミミズの表皮を乾燥させてミミズの糞土排出を促すようにする。そして、ヒーター照射に伴いミミズの体温は上昇し、これにより動きが活発化されるため一層糞土排出効率が上がることとなり、効率的に育成用ミミズの糞土除去を行うことができる。
【００４９】
具体的工程としては、まず、一定期間、育成用ミミズを飼育した育成専用床を処理室へと移動し、その後、明所環境にて育成専用床にさらされている育成用ミミズに対し上方から赤外線ヒーター等のヒーターによる熱線の照射を行う。
【００５０】
そうすると、育成用ミミズはヒーターによる熱線照射を嫌い、糞土を排泄しながら床材に潜りこむため、一旦ヒーターの照射を停止し、育成用ミミズが育成専用床の表面にさらされるまで床材を育成専用床から剥ぎ取り、その後再度育成専用床の表面にさらされている育成用ミミズに対し上方からヒーターの照射を行う。
【００５１】
このヒーターの照射と床材の剥ぎ取りを交互に繰り返し行うことで育成用ミミズに直接ヒーター照射を行うことができ、これにより、効率的に糞土を排泄させることができ、同時に、育成専用床下方に育成用ミミズを潜らせていくことができる。そしてこの操作は、床材がほぼ育成専用床からなくなり、育成専用床の底部に育成用ミミズが集まる状態まで繰り返す。
【００５２】
そして、この育成専用床の底部に育成用ミミズが集まった状態においてもヒーターの照射を行い、そうすると潜りこむ床材がないため、育成用ミミズは排泄した糞土を身にまといヒーターの照射を防ぐから、一旦ヒーターの照射を停止し、育成用ミミズから糞土を剥ぎ取り、再度育成用ミミズに対し上方からヒーターの照射を行う。
【００５３】
このヒーターの照射と糞土の剥ぎ取りを２〜３回交互に繰り返し行うことで、育成用ミミズの体内から糞土が効果的に除去される。
【００５４】
このように、本工程では、育成用ミミズが潜りこんだ分だけ床材を剥ぎ取り、又は、育成用ミミズのまとった糞土を剥ぎ取り、その後にヒーターによる熱線の照射を育成用ミミズに対し行うことで、床材又は糞土によりヒーターによる熱線の照射が妨げられることなく効率的に育成用ミミズの体内から糞土除去を行える。
【００５５】
また、本工程では、育成用ミミズを育成専用床から取出し、育成用ミミズと床材を分別する手間なしに、ヒーター照射により育成用ミミズから糞土除去を行いながら、同時に、育成用ミミズと床材の分別を行うことができるため、手間がかからず処理として効率的である。
【００５６】
なお、ミミズはある程度体温が上昇すると死亡するので、本工程では育成用ミミズの体温が上昇しすぎることを防ぐために、ヒーターにより照射する熱の量をミミズが死亡しない程度のものとしてあり、また、ヒーターを長時間連続して使用せず断続的に使用するようにしてある。
【００５７】
（２−１）気化揮発性有機溶媒の暴露による残留糞土・体腔液除去工程
本工程としては、ヒーター照射による糞土除去工程後の表皮を洗浄した育成用ミミズを気化した揮発性有機溶媒に暴露させる又はアルカリ性溶液へ浸漬させることで育成用ミミズに刺激を与え、これにより育成用ミミズから残留糞土及び体腔液の除去を行う。
【００５８】
体腔液には、ミミズ体内の砒素や重金属などの有害物質が含まれているため、体腔液を除去することで育成用ミミズ体内から有害物質を除去することができる。
【００５９】
気化した揮発性有機溶媒の暴露は、例えば、揮発性有機溶媒を含ませた脱脂綿を瓶に入れ、瓶内で揮発性有機溶媒を気化させて瓶に取り付けたノズルなどの噴射手段により育成用ミミズに気化した揮発性有機溶媒を吹きかけることで行う。
【００６０】
このように揮発性有機溶媒を気化してミミズに暴露させることで、液体の揮発性有機溶媒に浸漬させる場合に比べ、ミミズの体温を大きく下げることがなく、このためミミズの体温が低下することによるミミズの糞土・体腔液の排出効率の低下を招くことがない。
【００６１】
また、揮発性有機溶媒を用いて糞土・体腔液の除去処理をしたミミズをミミズ乾燥粉末の原料とすることで、同処理を行わないミミズを原料としたものと比べて酵素活性（即ち、薬理作用）の高いミミズ乾燥粉末を得ることができる。
【００６２】
本工程に用いる揮発性有機溶媒は、特に限定されず、アルコール、メタノール、ヘキサン、トリエチルアミン、酢酸メチル、クロロホルムなど何でもよいが、毒性や安全性の面から特にアルコールが好ましい。
【００６３】
また、揮発性有機溶媒としてアルコールを用いると、残留糞土・体腔液除去と同時にミミズ表面の殺菌も行うことができる。
【００６４】
図２は、本工程により糞土・体腔液除去を行った育成用ミミズの酵素活性の変化を示す。具体的には、まず、育成専用床にて飼育した育成用ミミズに、（１）の工程と同様にしてヒーター照射による糞土除去を行い、（２−１）の残留糞土・体腔液除去工程では、揮発性有機溶媒としてエタノールを使用し、５０℃で気化させたエタノールを育成用ミミズに暴露して残留糞土・体腔液除去を行った。そしてその後、育成用ミミズをホモジナイザーで破砕し、その破砕物を純水で懸濁し、その懸濁液から遠心分離機により抽出した上清液の活性を測定した。なお、比活性を求めるためタンパク質量の測定も行った。また、比較対象として、気化エタノールの暴露処理を行わなかったミミズから抽出した上清液の活性も測定してある。
【００６５】
酵素活性測定において、線溶活性基質としてプラスミン基質（Ｓ−２２５１）、ｔ−ＰＡ基質（Ｓ−２２８８）を用いてプラスミン活性、ｔ−ＰＡ活性を測定した。１分間に１μｍｏｌのｐＮＡ（ｐ−ニトロアニリン）が遊離する量を１ｕｎｉｔとし、ＣＯＲＯＮＡ  ＧＲＡＴＩＮＧ  ＭＩＣＲＯＰＬＡＴＥ  ＲＥＡＤＥＲ  ＳＨ−９０００（コロナ電気（株））を用いて３７℃で４０５ｎｍの吸収波長を測定した。反応溶液組成は、０．２５ ｍＭ基質、５０ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酵素液適量とした。
【００６６】
タンパク質量は、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法によって測定した。具体的には、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社のＢｉｏ−Ｒａｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓａｙ試薬を用い、ＣＯＲＯＮＡ ＧＲＡＴＩＮＧ ＭＩＣＲＯＰＬＡＴＥ ＲＥＡＤＥＲ  ＳＨ−９０００（コロナ電気（株））を使用し、波長５９５ｎｍで定量した。検量線の作成には、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を用いた。
【００６７】
図２に示すように、気化エタノールの暴露処理を行わなかったミミズに比べ、気化エタノールに暴露したミミズは、プラスミン活性、ｔ−ＰＡ活性の総活性は２倍弱に、比活性はいずれも２倍以上に高めることができた。このように、本発明における気化揮発性有機溶媒の暴露による残留糞土・体腔液除去工程を行うことで、残留糞土・体腔液除去を行うことができるだけでなく、育成用ミミズの酵素活性を高めることができる。
【００６８】
（２−２）アルカリ性溶液への浸漬による残留糞土・体腔液除去工程
本工程としては、ヒーター照射による糞土除去工程後の表皮を洗浄した育成用ミミズをアルカリ性溶液へ浸漬させることで育成用ミミズに刺激を与え、これにより育成用ミミズから残留糞土及び体腔液の除去を行う。
【００６９】
また、アルカリ性溶液を用いて糞土・体腔液の除去処理をしたミミズをミミズ乾燥粉末の原料とすることで、同処理を行わないミミズを原料としたものと比べて酵素活性（即ち、薬理作用）の高いミミズ乾燥粉末を得ることができる。
【００７０】
本工程に用いるアルカリ性溶液の溶質は、特に限定されず、次亜塩素酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、リン酸水素二ナトリウム、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム 、塩化カルシウムなど何でもよいが、特に次亜塩素酸ナトリウムが好ましい。次亜塩素酸ナトリウムは食品添加物として認可されており安全性が高く、その溶液は体腔液除去効果が高く、強い殺菌作用を持つためである。
【００７１】
図３は、本工程により糞土・体腔液除去を行った育成用ミミズの酵素活性の変化を示す。具体的には、まず、育成専用床にて飼育した育成用ミミズに、（１）の工程と同様にしてヒーター照射による糞土除去を行い、（２−１）の残留糞土・体腔液除去工程では、アルカリ性溶液の溶質として次亜塩素酸ナトリウム（ＮａＣｌＯ）、及び塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を使用し、０．０５％ 、０．１％、０．２５％、若しくは、０．５％に調整した次亜塩素酸ナトリウム溶液、又は、１０％に調整した塩化ナトリウム溶液に育成用ミミズを１０分間浸漬し、残留糞土・体腔液除去を行った。そしてその育成用ミミズを純水で洗浄した後、各溶液に浸漬した育成用ミミズをホモジナイザーで破砕し、その破砕物を純水で懸濁し、その懸濁液から遠心分離機により抽出した上清液の活性を測定した。なお、比活性を求めるためタンパク質量の測定も行った。また、比較対象として、溶液浸漬処理を行わなかったミミズから抽出した上清液の活性も測定してある。
【００７２】
酵素活性測定、及び、タンパク質量測定は、図２における測定と同様にして行った。
【００７３】
図３に示すように、溶液浸漬処理を行わなかったミミズに比べ、各溶液に浸漬したミミズは、プラスミン活性、ｔ−ＰＡ活性の総活性、比活性のいずれも高めることができた。そして、次亜塩素酸ナトリウム溶液は塩化ナトリウム溶液に比べ、極めて低い濃度でも酵素活性を高めることができ、０．１％の濃度の次亜塩素酸ナトリウム溶液でも１０％の塩化ナトリウム溶液と同程度の酵素活性の向上効果があった。このように、本発明におけるアルカリ性溶液への浸漬による残留糞土・体腔液除去工程を行うことで、残留糞土・体腔液除去を行うことができるだけでなく、育成用ミミズの酵素活性を高めることができる。
【００７４】
〈ミミズ乾燥粉末の製造工程〉
本工程では、まず、ミミズの糞土除去処理工程により糞土・体腔液を除去した育成用ミミズをホモジナイザー等公知の手段で破砕し、その破砕物を純水で懸濁する。その後、その懸濁液をフィルム等の容器に封入し、適当な加圧装置による加圧処理を行い、懸濁液を殺菌する。そして、加圧処理後の懸濁液から遠心分離機により上清液を抽出し、その上清液に凍結乾燥処理を施してミミズ乾燥粉末を製造する。
【００７５】
ミミズ乾燥粉末の製造において、ミミズの糞土・体腔液除去だけでなく、ミミズに殺菌処理を行うことで、一層人体に害のないミミズ乾燥粉末を得ることができ、このため、本工程では、加圧処理により育成用ミミズに殺菌処理を施す。
【００７６】
殺菌処理としては加熱処理が知られているが、加熱処理はその加熱により酵素活性が低下する虞があり、これに対し、この加圧処理による殺菌では、酵素活性が低下するような加熱を行う必要がなく確実に殺菌でき、さらには、加圧処理を通して酵素活性を増大させることができる。
【００７７】
また、加圧処理による酵素活性の増大によりミミズの自己消化が促進されることとなり、これによりミミズの表皮が加圧処理の間に自己消化で溶かされる。このため、加圧処理を行うことで本来必要であった濾過などによるミミズの表皮の除去工程を省くことができる。従来は、表皮除去に伴い有効成分の損失や乾燥させてミミズ乾燥粉末にする上清液の収率低下が起こる虞があったが、加圧処理を採用することによりこの問題を回避することができる。
【００７８】
またさらに、加圧処理により、ミミズの破砕から乾燥粉末への加工にかけて発生するミミズのニオイを低減することもできるという利点もある。
【００７９】
本工程における加圧処理において、その圧力条件は好ましくは１０〜５００ＭＰａ、より好ましくは１００〜２００ ＭＰａであり、また、加圧する時間については好ましくは０．５〜４８時間、より好ましくは１〜２時間である。
【００８０】
また、温度条件は特に限定されないが、好ましくは０〜７０℃、より好ましくは４０〜５０℃であり、この温度条件で加圧処理を行うことで、一層効果的に殺菌を行うことができる。なお、この温度であれば酵素活性が低減する事もない。
【００８１】
また、本工程では、育成用ミミズの破砕物の懸濁液に代えて、育成用ミミズの生体を純水とともにフィルムに封入し加圧処理を行ってもよい。この場合でも、育成用ミミズの破砕物の懸濁液に加圧処理を行ったのと同様の効果が得られる。そして、加圧処理後に、表皮の溶けた育成用ミミズを破砕し、育成用ミミズとともにフィルムに封入した純水を用いて破砕物の懸濁液を得るなどすればよい。
【００８２】
図４、５は、本工程における加圧処理を行った場合の育成用ミミズの菌数の変化、及び、酵素活性の変化を示す。測定を行ったミミズは、糞土・体腔液除去を行った育成用ミミズであり、糞土・体腔液を除去した後純水で洗浄し、次にホモジナイザーを用いて破砕し純水に破砕物を懸濁した。そして、その後、３５ｍｌの懸濁液をプラフィルムの容器に封入し、１００ＭＰａ、５０℃で１〜２時間処理し、この加圧処理後の懸濁液から遠心分離機により抽出した上清液の活性、及び菌数を測定した。また、比較対象として、加圧処理を行わなかったミミズから抽出した上清液の活性及び菌数も測定してある。
【００８３】
菌数検査は、一般細菌数検査については、滅菌水で希釈したミミズ破砕溶液１ｍＬを３ＭペトリフィルムＡＣプレート（住友スリーエム（株））に塗布し、プレートを３０℃にセットしたインキュベーターで４８時間培養後、コロニー数を計測することにより行い、大腸菌数検査については、滅菌水で希釈したミミズ破砕溶液１ｍＬを３ＭペトリフィルムＲＣＣプレート（住友スリーエム（株））に塗布し、プレートを３５℃にセットしたインキュベーターで２４時間培養後、コロニー数を計測することにより行った。
【００８４】
酵素活性測定、及び、タンパク質量測定は、図２における測定と同様にして行った。
【００８５】
図４に示すように、加圧処理を行わない場合は一般細菌及び大腸菌は多数検出されたが、１時間加圧処理を行った場合、一般細菌数は極めて少なくなっており、大腸菌数に関しては陰性となった。さらに、２時間加圧処理を行った場合は、一般細菌数及び大腸菌数ともに陰性となった。このように、加圧処理を行うことで効果的に殺菌を行うことができる。
【００８６】
図５に示すように、加圧処理を行うとタンパク質が沈殿するためタンパク質濃度は減少しているものの、プラスミン活性、ｔ−ＰＡ活性の総活性は高まっており、比活性も高まっていた。このように加圧処理を行うことで、殺菌だけでなく、酵素活性も高めることができる。
【００８７】
〔別実施形態〕
前述の実施形態では、ミミズ乾燥粉末の製造においてミミズとしてシマミミズを用いたが、本発明はこれに限定されず、例えば、アカミミズなどの健康食品用・薬剤用で用いられる種々のミミズを用いてもよい。
【００８８】
前述の実施形態におけるミミズの養殖行程では、育成用ミミズの飼育に用いる育成専用床の製造において、床材とする植物性繊維質材の破砕物のｐＨ値を中性付近に調整したが、本発明はこれに限定されず、破砕物のｐＨ値は目的に応じて種々の値に調整してもよい。
【００８９】
前述の実施形態におけるミミズの養殖行程では、育成用ミミズの飼育に用いる育成専用床の製造において、床材とする植物性繊維質材の破砕物に対しミネラル分の含有とｐＨ調整を行うものを示したが、本発明はこれに限定されず、植物性繊維質材の破砕物に対しミネラル分の含有とｐＨ調整を行わなくともよい。また、床材は破砕しなくとも、減菌水で洗浄しなくてもよい。
【００９０】
前述の実施形態におけるヒーター照射による糞土除去工程では、育成専用床から育成用ミミズを取り出すことなく育成専用床の上方から育成用ミミズに対しヒーター照射を行うものを示したが、本発明はこれに限定されず、育成専用床から育成用ミミズを取り出して、その育成用ミミズに対しヒーター照射を行ってもよい。
【００９１】
前述の実施形態における気化揮発性有機溶媒の暴露による残留糞土・体腔液除去工程では、気化手段として、揮発性有機溶媒を含ませた脱脂綿を瓶に入れ、瓶内で揮発性有機溶媒を気化させるものを示したが、本発明はこれに限定されず、別の気化手段を用いてもよい。
【００９２】
前述の実施形態では、残留糞土・体腔液除去工程として育成用ミミズをアルカリ性溶液へ浸漬させるものを示したが、気化させたアルカリ性溶液を育成用ミミズに暴露して残留糞土・体腔液を除去してもよい。
【００９３】
本発明の実施において、育成用ミミズに対する加圧処理の温度条件、時間条件、圧力条件、その他の条件は、種々の条件を援用することができる。
【００９４】
前述の実施形態では、ミミズの養殖行程において育成専用床で飼育した育成用ミミズに対し、ヒーター照射による糞土除去、気化揮発性有機溶媒の暴露、又はアルカリ性溶液への浸漬による残留糞土・体腔液除去、及び、加圧処理による殺菌処理を行い、ミミズ乾燥粉末を製造したが、本発明はこれに限定されず、前述の実施形態とは別の方法によりミミズの養殖や糞土・体腔液除去処理を行い、そのミミズに対して加圧処理による殺菌処理を行いミミズ乾燥粉末を製造してもよい。
【産業上の利用可能性】
【００９５】
本発明のミミズ乾燥粉末製造方法は、各種分野において種々の用途に用いるミミズ乾燥粉末の製造に利用できる。
【要約】
【課題】ミミズの酵素活性の低下の虞がないばかりか、得られるミミズ乾燥粉末の酵素活性を増大させるミミズ乾燥粉末の製造方法を提供する。
【解決手段】糞土除去処理をしたミミズを原料にしてミミズ乾燥粉末を製造するミミズ乾燥粉末製造方法において、糞土除去処理をしたミミズの生体又はその破砕物に対し加圧処理を行い、この加圧処理後のミミズ又はその破砕物をミミズ乾燥粉末の原料にする。
【選択図】なし【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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