(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物における加齢性難聴を予防、治療および／または遅延するための、３，３’−ジインドリルメタン（ＤＩＭ）を含む医薬組成物。
【請求項２】
哺乳動物における加齢性難聴を予防、治療および／または遅延するための医薬組成物の製造における、３，３’−ジインドリルメタン（ＤＩＭ）の使用。
【請求項３】
前記３，３’−ジインドリルメタンが合成起源のものである、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記３，３’−ジインドリルメタンが植物エキスから単離される、請求項２に記載の使用。
【請求項５】
前記組成物中に存在するＤＩＭの量が、１製剤単位または数製剤単位で、あるいは一食分または数食分で、成人１日当たり１０〜１０００ｍｇの用量を提供するのに適切である、請求項２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は３、３’−ジインドリルメタン（ＣＡＳ１９６８−０５−４）および／またはその誘導体の新規使用に関し、特に本発明は、老人性難聴とも言われる、加齢性難聴を予防したり治療したりするための医薬組成物および／または栄養成分の形での、３、３’ジインドリルメタンおよび／またはその誘導体の使用に関する。
【０００２】
３，３’−ジインドリルメタン（ＤＩＭ）は、キャベツ、ブロッコリ、芽キャベツおよびカリフラワーを含むアブラナ科の野菜に存在する既知の植物インドール誘導体である。ＤＩＭは、その前駆体、インドール−３−カルビノール（Ｉ３Ｃ）２分子の縮合反応により生じる。
【０００３】
ＤＩＭは、幾つかの有益な特性、たとえば心臓および脳の保護作用、癌の予防、および月経前症候群（ＰＭＳ）、子宮内膜症、および子宮頚部異形成の状態にある閉経前後の女性にとっての効用等を有することが証明されている。エストロゲン補充（ホルモン補充療法：ＨＲＴ）中の女性も、前立腺肥大を含むエストロゲン関連の病気に罹患している男性もまた、ＤＩＭ補給が有効である。Ｉ３ＣおよびＤＩＭはまた、イン・ビボモデルおよびイン・ビトロモデルの両方で、複数の制癌作用を有することも証明されている。
【０００４】
国立聴覚・伝達障害研究所（ＮＩＤＣＤ）により示されている通り、年齢６５〜７５歳の米国人の約３分の１が難聴を患っており、７５歳より上の人々の５０％がある程度の難聴に罹っている。
【０００５】
耳は３つの部分：外耳（耳介）、中耳（鼓膜を含む）、および内耳（蝸牛）から構成されている。音は外耳に入り、鼓膜にぶつかって鼓膜を振動させる。鼓膜の振動は、音波の振動を蝸牛に伝える３つの微小な相互接続した骨、槌骨、きぬた骨、およびあぶみ骨に沿った中耳のチャンバを通って増幅される。
【０００６】
多くの種を冒す、加齢性難聴、すなわち老人性難聴は、聴覚機能の加齢性進行性低下を特徴とし、不可逆過程である。
【０００７】
個体が、その種に正常に聞こえる音を感じ得ないとき、難聴（聴覚障害とも言う）が存在する。
【０００８】
難聴が起こる原因は未だ十分に分かっておらず、また多くの因子がリスクファクターであると証明されてきた。難聴は主として、蝸牛内の有毛細胞またはらせん神経節（ＳＧ）細胞の変性に起因する。蝸牛内側の微小な毛が損傷を受けたり死んだりするとき、これは人々が年を取るにつれて起こることが多いのであるが、難聴が発生する。感覚細胞、聴覚神経細胞および血管条の細胞等の、内耳の構造的変化もまた難聴の一因となる。人では、蝸牛変性は、音響外傷および聴覚毒性薬物への暴露を含む数々の傷害の累積作用に起因すると考えられる。しかし、難聴は、騒音暴露および毒素暴露に関係なく、哺乳動物でよくみられる現象である。加えて、遺伝的因子、心疾患による血液供給障害、高血圧、糖尿病、または他の循環障害は全て、難聴につながるリスクファクターである。
【０００９】
活性酸素種（ＲＯＳ）は、生物全体の加齢性細胞変性の原因の一つである。細胞呼吸生成物である、フリーラジカルすなわちＲＯＳは、スーパーオキシドアニオン（Ｏ・２−）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）およびヒドロキシルラジカル（ＯＨ）という３つの形で通常存在する。これらの種は非常に不安定で、蛋白質、脂質およびＤＮＡと反応し、その結果、蛋白質、脂質およびＤＮＡを損傷する。内因性の、細胞酵素、たとえばカタラーゼ、銅／亜鉛スーパーオキシドジスムターゼおよびマンガンスーパーオキシドジスムターゼ（それぞれ、ＳＯＤ１およびＳＯＤ２）ならびにペルオキシダーゼ等は、ＲＯＳを中性の非反応性分子に変換する。したがって、これらの物質は、細胞の安定性および生存への重要な寄与因子である。これらの内因性抗酸化物質の、蝸牛細胞生存における重要性は、早期難聴ならびに聴覚神経細胞変性および有毛細胞変性が確認されたＳＯＤ１トランスジェニックマウスで証明されている（ＭｃＦａｄｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９ａ、ＭｃＦａｄｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９ｂ、ＭｃＦａｄｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１およびＫｅｉｔｈｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。血管条ははるかに少ししか冒されていないため、各酸化組織は異なる抗酸化機構を使用してＲＯＳを除去できるようである。ＳＯＤ１の欠如は多大の変性を来たすが、聴力および蝸牛の形態構造を維持するためには半分のＳＯＤ１で十分であった（Ｋｅｉｔｈｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。ミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）は、ミトコンドリアの内膜中の酸化的リン酸化部位付近に位置し、特に脆弱である（Ｍｉｑｕｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０、Ｂａｒｊａ，２００４およびＳａｓｔｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。
【００１０】
したがって、加齢性難聴を予防するためのサプリメントとして抗酸化物質を使用することが提唱された。
【００１１】
それにもかかわらず、多くの聴力障害者は、ある種の補助器具、たとえば入ってくる音を増幅する補聴器を、日常生活で使用する。補聴器は、聴力障害に起因する問題の一部を軽減することは可能であるが、多くの場合不十分である。補聴器のほかに、より複雑で有効な蝸牛インプラントが存在する。これらは、軽度ないし重度の聴力障害の治療に有益である。
【００１２】
現在、難聴の治療または予防に対する有効性が証明されている食事療法介入または医学的介入は何も存在しない。
【００１３】
騒音性難聴から耳を守るために、マグネシウムが使用された。マグネシウムがいかにして聴力を守るかは不明で、動物での研究から、マグネシム欠乏は、聴力と関係のある細胞に対するストレスを増加し、それによって強烈な騒音に起因する傷害を受けやすくする可能性があることが示唆される。しかし、人のマグネシウム欠乏は稀であり、したがって補足的マグネシウムは何らかの全く異なる方法で作用する可能性がある。
【００１４】
突発性難聴、すなわちいわゆる片側性特発性突発性難聴を治療するために、イチョウの葉エキスが使用された。循環を改善することが証明されている、イチョウの葉エキスが、突発性難聴の治療方法として試験された。二重盲検試験で、イチョウを、ドイツで突発性難聴の治療に使用されている循環増強薬であるペントキシフィリンと比較したが、イチョウはペントキシフィリンと少なくとも同等に有効であったことを、その結果は示している。
【００１５】
抗酸化物質補充は、難聴予防の有望な手段として提案され、よく使用される抗酸化物質は、シトラスバイオフラボノイド類、コエンザイムＱ１０、リポ酸、ルテイン、リコピン、オリゴメリック・プロアントシアニジン類（ＯＰＣｓ）、ビタミンＣおよびビタミンＥである。しかし、難聴予防における抗酸化物質の効果に関する科学的証拠は欠如している。
【００１６】
したがって、以下の発明の目的は、加齢性難聴を予防または遅延するための組成物を提供することであった。
【００１７】
意外なことに、本発明の目的は、組成物が３，３’−ジインドリルメタンを含むことを特徴とする、哺乳動物における加齢性難聴の予防、治療および／または遅延のための組成物により実現されることが分かった。
【００１８】
本明細書で使用されるとき、用語「３，３’−ジインドリルメタン」および「ＤＩＭ」はまた、下記の化学構造：
【化１】
0005407079.tif 000002
［ここで、残基Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は以下の群：
・  Ｒ１：Ｈ、ＯＣＨ３、ＣＨ３、ただし、５つの残基Ｒ１のうち少なくとも３つはＨであり；
・  Ｒ２：ＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ３、ここでｎ＝０〜１６であり；
・  Ｒ３：Ｈ、ＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ４、ここでｎ＝０〜１６であり、かつＲ４＝ＨまたはＣＯＯＨである；
から独立に選択される］
による３，３’−ジインドリルメタンの誘導体も含む。
【００１９】
本発明によれば、３，３’−ジインドリルメタンは、合成起源のものであってもよく、植物エキス、たとえばアブラナ科の野菜（それらの種子および／または芽を含む）のエキス等から単離してもよい。３，３’−ジインドリルメタンを含有するエキス、たとえばアブラナ科の野菜から得られるエキスを使用することもまた好都合であろう。特定の抽出法に基づいて、当業者は植物エキス中のフェノール化合物の量を容易に調整することができる。本発明によれば、植物エキス中の３，３’−ジインドリルメタンの量は、各々エキスの総重量を基準にして、２０〜８０重量％であれば好ましく、より好ましくは３０〜５０重量％である。
【００２０】
本発明による組成物は、好ましくは栄養補助食品、食品添加物または飼料添加物、機能性食品または機能性飼料、食品プレミックスまたは飼料プレミックス、および／または飲料である。
【００２１】
本発明では、哺乳動物は好ましくは人であるが、本発明は人に限定されず、たとえば、ヒトコブラクダ、ラクダ、ゾウ、およびウマ等の、他の哺乳動物、ならびに犬、猫および／または小動物等のペット類も包含する。
【００２２】
本発明では、３，３’−ジインドリルメタン（ＤＩＭ）は、たとえば、成人（体重約７０ｋｇ）に、１製剤単位または数製剤単位あるいは一食分または数食分で、最高約１０〜１０００ｍｇ／日までの量で、投与することが可能である。本発明の特定の実施態様では、成人（体重約７０ｋｇ）の投与量は、最高約５００ｍｇ／日まで、特に３０〜３００ｍｇ／日である。食品または飲料で投与される場合、その中に含まれるＤＩＭの量は一食分当たり約１００ｍｇ以上が好適である。ＤＩＭが医薬製剤として投与される場合、このような製剤は、固体の製剤単位当たり、たとえば１カプセル当たり、最高約５００ｍｇまで含有してもよい。
【００２３】
本明細書で使用されるとき、用語「一食分（ｓｅｒｖｉｎｇ）」は、一度に食事とともに成人により通常摂取される食品および／または飲料の量を意味し、たとえば約１００ｇ〜約５００ｇの食品および／または飲料の範囲であってもよい。
【００２４】
本発明による組成物は、好ましくは栄養補給組成物であってもよい。本明細書で使用されるとき、用語「栄養補給の」は、栄養および医薬の両応用分野における有用性を意味する。したがって、本発明による「栄養補給組成物」は、食品、飼料および飲料のサプリメント、栄養補助食品として、また固体−たとえばカプセル剤等−または液体−たとえば液剤または懸濁剤−であってもよい医薬製剤として、機能することができる。用語「栄養補給組成物」はまたＤＩＭを含有する食品、飼料および飲料も包含することは、前述から明白である。
【００２５】
マルチビタミンサプリメントおよびミネラルサプリメントを本発明による組成物に加えて、たとえば、バランスのとれた栄養を維持したり、ある食事に欠けている適量の必須栄養素を得たりすることが可能である。このマルチビタミンサプリメントおよびミネラルサプリメントはまた、疾病予防ならびに生活パターンおよびよくある不適切な食習慣に起因する栄養損失および栄養欠乏に対する防護にも有益であろう。
【００２６】
本発明による組成物は、好ましくは食品組成物または飲料組成物であってもよい。飲料は、たとえばスポーツドリンク類、栄養ドリンク類または他のソフトドリンク類であってもよく、あるいは他の適当な飲料調製品、たとえばヨーグルト飲料類、熱い飲み物、またはスープ類等であってもよい。
【００２７】
本発明の好ましい実施態様では、上記飲料は「インスタント飲料」、すなわち、普通は消費者自身が、粉末を液体の中に、通常はミルクまたは水の中に、かき混ぜながら入れることによって作られる飲料である。
【００２８】
「スポーツドリンク」は、主として水分補給のためならびに電解質、糖および他の栄養分の（再）貯蔵のために、肉体運動の前、間、および／または後に消費される飲料を意味する。スポーツドリンク類は通常、人体内に存在するのと同じ割合の栄養分を含むことを意味する、等張である。
【００２９】
栄養ドリンク類は、ユーザーに爆発的なエネルギーを与えるために（合法）刺激薬、ビタミン類（特にビタミンＢ類）および／またはミネラル類を含有する飲料である。一般的な成分としては、カフェイン、ガラナ（ガラナ植物由来のカフェイン）および／またはタウリン、様々な形の朝鮮人参、マルトデキストリン、イノシトール、カルニチン、クレアチン、グルクロノラクトン、コエンザイムＱ１０および／またはイチョウ等が挙げられる。高濃度の糖、すなわちグルコースを含有するものもあるが、糖アルコールおよび／またはサイクラミン酸カルシウムやアスパルテームのような人工甘味料で完全にまたは部分的に甘くしたものもある。多くのそのような飲料は、風味付けおよび／または着色されている。
【００３０】
ソフトドリンクは、アルコールを含有しない飲み物である。概して、本用語は冷たい飲料のみに使用される。ホットチョコレート、茶、およびコーヒーは、ソフトドリンクと考えられない。本用語は、炭酸飲料および非炭酸飲料、たとえばミネラルウォーターやいわゆる「水に近い飲料」、すなわち付加的な利点、たとえば特別な風味および／またはさらなる（機能的）成分を有する、水が主成分の飲料を包含する。「水に近い飲料」の簡単な一例は、水と非常に少量のジュースとの混合物である。
【００３１】
本組成物が下記の食料品のうちの一形態で調製される場合、本発明によれば、組成物中のＤＩＭの量が、下表に示した範囲から選択さると好都合である。
【００３２】
【表１】
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【００３３】
本組成物がカプセルの形で調製される場合、本発明によれば、ＤＩＭの量が下表に示した範囲から選択されると好都合である。
【００３４】
【表２】
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【００３５】
本発明を図１でさらに説明する。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、聴覚機能の著明低下を示す、促進老化マウスモデルであるＤ２５７Ａマウスにおいて、試験した化合物が加齢性難聴（老人性難聴）に及ぼす作用を示す図である。
【００３７】
デシベル（ｄＢ）で表した聴覚誘発性脳幹反応閾値（聴覚閾値）８ｋＨｚがｙ軸上に示されている。黒丸はオスＤ２５７Ａマウスを表し、灰色の丸はメスＤ２５７Ａマウスを表す。∞は、反応が何も得られなかったことを意味する。
値は、
Ｉ：プラシーボコントロール；
ＩＩ：ＤＩＭ；
ＩＩＩ：ＥＧＣＧ；
を表す。
【００３８】
本発明を、以下の実施例でさらに説明する。
【００３９】
［実施例］
下記の試験から分かる通り、ＤＩＭの効果が立証された。試験系は、ミトコンドリアＤＮＡポリメラーゼγ（ＰＯＬＧ）のプルーフリーディング欠損バージョンを発現するＤ２５７Ａ−／−（Ｄ２５７Ａ）マウスであった。これらのマウスは、加齢性難聴（老人性難聴）を含む促進老化の特徴を示す。難聴は、聴力誘発性脳幹反応の亢進によりモニターすることができる（Ｋｕｊｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０９，４８１−４８４，２００５）。
【００４０】
［実施例１］
［化合物給餌］
ヘテロ接合体Ｄ２５７Ａ（−／＋）マウスを飼育して、今後はＤ２５７Ａと表示されるホモ接合体Ｄ２５７Ａ（−／−）マウスを作りだした。動物は、固有の番号付けおよび耳の刈り込みで同定した。Ｄ２５７Ａマウスは、ＰＣＲに基づく遺伝子型同定および３週令での離乳に続いて、様々な食事療法下に置いた。マウスは、全く補給しない（コントロール群）か、あるいはＤＩＭ（４０ｍｇ／ｋｇ、ＢｉｏＲｅｓｐｏｎｓｅ  ＬＬＣ  Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）、（−）−没食子酸エピガロカテキン、すなわち（ＥＧＣＣ）（３００ｍｇ／ｋｇ、ＤＳＭ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を加えた、ＡＩＮ−９３Ｍ維持用精製飼料（ＴｅｓｔＤｉｅｔ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＵＳＡ）を主成分とする飼料を摂取した。
【００４１】
[聴覚機能の評価]
聴覚機能は、様々な化合物を摂取している９カ月令のＤ２５７Ａマウスで試験した。聴覚脳幹反応（ＡＢＲｓ）は、ＡＢＲ記録システム（Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ  Ｈｅａｒｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｍｉａｍｉ  ＦＬ）を使用して、トーンバースト刺激（８ｋＨｚ，１６ｋＨｚおよび３２ｋＨｚ）で測定した。動物は、塩酸キシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ、筋肉内）と塩酸ケタミン（４０ｍｇ／ｋｇ、筋肉内）との混合物で麻酔し、針電極を頭頂の皮下（作用電極）、測定する耳の耳介の下方（基準電極）、および反対側の耳の下方（グランド）に取り付けた。刺激持続時間、提示速度、および立ち上がり時間／立ち下がり時間は、それぞれ３ミリ秒、１９．３／秒、および１ミリ秒であった。１０２４スイープの反応を、各強度レベル（５ｄＢ段階）で平均して、聴力閾値を評価した。聴力閾値は、明瞭な再現可能な波形がトレースで見えた最低の強度レベルと定義された。ＡＢＲ閾値の平均値を、８ｋＨｚ、１６ｋＨｚ、および３２ｋＨｚで比較した。
【００４２】
[結果]
９か月令のＤ２５７Ａマウスにおける聴覚機能の加齢性喪失および蝸牛変性が記述されている（Ｋｕｊｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００５  Ｊｕｌ  １５；３０９（５７３３）：４８１−４）。これらのデータに基づいて、本出願人は、ＤＩＭまたは（−）没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）が、老人性難聴の予防に役立てるかどうかを試験した。
【００４３】
８ｋＨｚの振動数で、ＤＩＭを投与したマウス８匹の中に聴覚障害マウスは存在しなかった。コントロール群では、マウス８匹のうち３匹は聴覚障害であった。ＤＩＭ投与群では、聴力閾値は約１０ｄＢであった。コントロール群では、聴力閾値は約４０ｄＢであった。聴力障害マウスの量は、ＥＧＣＧ投与マウスでさらに多かった（図１参照）。３２ｋＨｚで、聴覚障害マウスのパーセンテージは、コントロール群および残りの試験化合物と比較して、やはりＤＩＭ群で著しく低かった。
【００４４】
若年令から続けているＤＩＭ補給は、加齢性難聴に対する保護作用を示した。他の抗酸化物質はどれも同様の作用を示さなかったため、ＤＩＭは抗酸化よりも追加的保護を提供するので、加齢性難聴の治療または予防するための栄養補給組成物または医薬組成物で使用することが可能であるという視点で、ＤＩＭは独特であると本出願人は主張する。
【００４５】
医薬組成物は、従来の製剤手順で調製することが可能である。
【００４６】
[例１]
ソフトゼラチンカプセル
有効成分として１カプセル当たり１００〜２００ｍｇのＤＩＭを含有するソフトゼラチンカプセルは、従来の手順で調製される。
【００４７】
[例２]
ハードゼラチンカプセル
有効成分として１カプセル当たり１００〜２００ｍｇのＤＩＭを含有するハードゼラチンカプセルは、従来の手順で調製される。
【００４８】
[例３]
有効成分として一食分当たり３０〜３００ｍｇの量でＤＩＭを含有する食料品は、従来の手順で調製することが可能である。このような食料品の例は、ソフトドリンク類、パン、クッキー類、ヨーグルト、アイスクリーム、およびスイーツである。
【図１】
0005407079.tif 000005