(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
0005412448.tif 000210
[式中、
Ｒ１は、
【化２】
0005412448.tif 000211
から選択され；
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し；
Ｒ２ａは、アミノ、メチル、ＣＨ２Ｆ、ＣＦ３、Ｃ２Ｈ５およびＨから選択され；
Ｒ２ｂは、Ｈおよびメチルから選択され；
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＣＨ３、Ｆ、およびＣｌから選択され；
Ｒ４ａは、アミノ、メチル、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣ２Ｈ５、Ｆ、ＣＦ３、Ｈおよびエチルから選択され；
Ｒ４ｂは、メチル、ＨおよびＦから選択され；
Ｒ２１は、ＨまたはＦを表し；
Ｒ２２は、Ｈ、ＣｌまたはＦを表し；
Ｒ２３は、Ｆ、ＯＣ２Ｈ５、ＯＣＨ３、Ｃｌ、Ｈ、メチル、ＯＨ、またはＯＣＨ(ＣＨ３)２を表し；
Ｒ２４は、ＨまたはＯＨを表す。]
の化合物またはその立体異性体、互変異性体もしくは薬学的に許容される塩。
【請求項２】
式II：
【化３】
0005412448.tif 000212
[式中、
Ｒ１は、−ＮＨ−ＣＯ−アルキル、置換または非置換シクロアルキル、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、置換または非置換アリール、および置換または非置換ヘテロアリールから選択され；
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し；
Ｒ２ａは、−Ｈ、−ＯＨ、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、アミノアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロ、アミノおよびベンゾエートから選択され；
Ｒ２ｂは、−Ｈおよびアルキルから選択され；
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、アルキル、アルコキシおよびハロから選択され；
Ｒ４ａは、−ＯＨ、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、アミノアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロおよびアミノから選択され；
Ｒ４ｂは、Ｈ、アルキルおよびハロから選択される。]
の化合物またはその立体異性体、互変異性体もしくは薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ１は、置換または非置換フェニル、置換または非置換シクロヘキシル、および置換または非置換ピペリジニルから選択される、請求項２に記載された化合物。
【請求項４】
Ｒ１が、
【化４】
0005412448.tif 000213
{式中、
Ｒ２１は、Ｈまたはハロであり；
Ｒ２２は、Ｈまたはハロであり；
Ｒ２３は、Ｈ、ハロ、アルキルおよびアルコキシから選択され；
Ｒ２４は、ＨまたはＯＨである。}
から選択される、請求項３に記載された化合物。
【請求項５】
Ｒ２１およびＲ２２が、ＨおよびＦから独立して選択される、請求項４に記載された化合物。
【請求項６】
Ｒ２３が、Ｈ、Ｃｌ、Ｆ、−ＯＣ２Ｈ５、−ＯＣＨ３、および−ＯＣＨ(ＣＨ３)２から選択される、請求項４に記載された化合物。
【請求項７】
Ｒ２が、Ｈ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、フルオロメチル、トリフルオロメチル、アミノメチルおよびヒドロキシメチルから選択される、請求項２に記載された化合物。
【請求項８】
Ｒ３が、Ｈ、−ＯＨ、メチル、メトキシ、ＦおよびＣｌから選択される、請求項２に記載された化合物。
【請求項９】
Ｒ４ａが、−ＯＨ、メチル、エチル、トリフルオロメチル、メトキシ、エトキシ、アミノ、ＦおよびＣｌから選択される、請求項２に記載された化合物。
【請求項１０】
Ｒ４ｂがメチルおよびＦから選択される、請求項２に記載された化合物。
【請求項１１】
以下の群から選択される請求項１または２に記載された化合物：
(Ｓ)−５−アミノ−Ｎ−(４−(３−アミノピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｓ,５Ｒ)−３−アミノ−５−メチルピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−３−アミノ−４−ヒドロキシ−５−メチルピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
５−アミノ−Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ)−３−アミノシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｓ,５Ｒ)−３−アミノ−５−(トリフルオロメチル)ピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｓ,５Ｒ)−３−アミノ−５−エチルピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロ−４−ヒドロキシフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
５−アミノ−Ｎ−(４−(３−アミノ−４−ヒドロキシシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−(３−アミノ−５−(フルオロメチル)ピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
５−アミノ−２−(２,６−ジフルオロフェニル)−Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−(３−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(３−エトキシ−２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
またはそれらの立体異性体、互変異性体もしくは薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
以下の群から選択される請求項１または２に記載された化合物：
(Ｓ)−５−アミノ−Ｎ−(４−(３−アミノピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｓ,５Ｒ)−３−アミノ−５−メチルピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−３−アミノ−４−ヒドロキシ−５−メチルピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
５−アミノ−Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ)−３−アミノシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｓ,５Ｒ)−３−アミノ−５−(トリフルオロメチル)ピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｓ,５Ｒ)−３−アミノ−５−エチルピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロ−４−ヒドロキシフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
５−アミノ−Ｎ−(４−(３−アミノ−４−ヒドロキシシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−(３−アミノ−５−(フルオロメチル)ピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
５−アミノ−２−(２,６−ジフルオロフェニル)−Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
または、それらの立体異性体、互変異性体もしくは薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
薬学的に許容される担体と共に、治療有効量の請求項１から１２の何れか１項に記載された化合物またはそれらの立体異性体、互変異性体または薬学的に許容される塩を含む組成物。
【請求項１４】
プロウイルス組み込みモロニーキナーゼ(ＰＩＭキナーゼ)活性を調節することによって状態を処置するための、請求項１３に記載された組成物。
【請求項１５】
細胞においてＰＩＭキナーゼ活性を阻害する方法であって、該細胞を有効量の請求項１から１２の何れか１項に記載された化合物とin vitroで接触させることを含む方法。
【請求項１６】
患者においてＰＩＭキナーゼ活性を阻害するための、請求項１３に記載された組成物。
【請求項１７】
患者において癌障害を処置するための、請求項１３に記載された組成物。
【請求項１８】
治療薬として使用するための、請求項１から１２の何れか１項に記載された化合物。
【請求項１９】
癌を処置する医薬の製造における、請求項１から１２の何れか１項に記載された化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の分野
本発明は、新規化合物、その互変異性体、立体異性体および多形、およびその薬学的に許容される塩、エステル、代謝物またはプロドラッグ、薬学的に許容される担体を伴う該新規化合物の組成物、ならびに、癌の予防または処置における単独または少なくとも１種のさらなる治療薬と組み合わせた該新規化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
モロニーレトロウイルスの感染および宿主細胞ゲノムへのゲノム組み込みは、マウスにおいてリンパ腫の発症をもたらす。モロニーのプロウイルス組み込みキナーゼ(ＰＩＭキナーゼ)は、レトロウイルス組み込みイベントによって転写活性化され得る高頻度の癌原遺伝子の一つとして同定され(Cuypers HT et al., “Murine leukemia virus-induced T-cell lymphomagenesis: integration of proviruses in a distinct chromosomal region”, Cell 37(1):141-50 (1984); Selten G, et al., “Proviral activation of the putative oncogene Pim-1 in MuLV induced T-cell lymphomas”, EMBO J 4(7):1793-8 (1985))、従って、このキナーゼの過剰発現とその発癌能の間の相関関係が確立された。配列相同性分析により、３つの相同性の高いＰｉｍ−キナーゼ(Ｐｉｍ１、２および３)があることが証明され、Ｐｉｍ１がレトロウイルス組み込みによって最初に識別された癌原遺伝子である。さらに、Ｐｉｍ１またはＰｉｍ２を過剰発現した遺伝子組み換えマウスは、Ｔ細胞リンパ腫の発病率の増大を示し(Breuer M et al., “Very high frequency of lymphoma induction by a chemical carcinogen in pim-1 transgenic mice”, Nature 340(6228):61-3 (1989))、一方、ｃ−ｍｙｃと組み合わせた過剰発現は、Ｂ細胞リンパ腫の発病率に関連している(Verbeek S et al., “Mice bearing the E mu-myc and E mu-pim-1 transgenes develop pre-B-cell leukemia prenatally” Mol Cell Biol 11(2):1176-9 (1991))。従って、これらの動物モデルは、造血器悪性腫瘍において、Ｐｉｍ過剰発現と発癌の間の強い相関関係を確立している。これらの動物モデルに加えて、Ｐｉｍ過剰発現は、他の多くのヒトの悪性腫瘍において報告されている。Ｐｉｍ１、２および３の過剰発現は、しばしば、多くの造血器悪性腫瘍において(Amson R et al., “The human protooncogene product p33pim is expressed during fetal hematopoiesis and in diverse leukemias”, PNAS USA 86(22):8857-61 (1989); Cohen AM et al., “Increased expression of the hPim-2 gene in human chronic lymphocytic leukemia and non-Hodgkin lymphoma”, Leuk Lymph 45(5):951-5 (2004); Huttmann A et al., “Gene expression signatures separate B-cell chronic lymphocytic leukaemia prognostic subgroups defined by ZAP-70 and CD38 expression status”, Leukemia 20:1774-1782 (2006))、そして、前立腺癌において(Dhanasekaran SM, et al., “Delineation of prognostic biomarkers in prostate cancer”, Nature 412(6849):822-6 (2001); Cibull TL, et al., “Overexpression of Pim-1 during progression of prostatic adenocarcinoma”, J Clin Pathol 59(3):285-8 (2006))、観察され、一方、Ｐｉｍ３の過剰発現は、しばしば、肝細胞癌において(Fujii C, et al., “Aberrant expression of serine/threonine kinase Pim-3 in hepatocellular carcinoma development and its role in the proliferation of human hepatoma cell lines”, Int J Cancer 114:209-218 (2005))、そして、膵臓癌において(Li YY et al., “Pim-3, a proto-oncogene with serine/threonine kinase activity, is aberrantly expressed in human pancreatic cancer and phosphorylates bad to block bad-mediated apoptosis in human pancreatic cancer cell lines”, Cancer Res 66(13):6741-7 (2006))、観察される。
【０００３】
Ｐｉｍ１、２および３は、増殖因子およびサイトカインに応答して、造血細胞の生存および増殖において通常機能するセリン／トレオニン・キナーゼである。Ｊａｋ／Ｓｔａｔ経路を介するサイトカインシグナル伝達は、Ｐｉｍ遺伝子の転写および蛋白質合成の活性化をもたらす。キナーゼＰｉｍ活性化のために、さらなる翻訳後修飾は必要とされない。従って、シグナル伝達経路の下流は、主に、転写／翻訳レベルおよび蛋白質ターンオーバーレベルで制御される。Ｐｉｍキナーゼのための基質は、アポトーシスの制御因子、例えばＢｃｌ−２ファミリーメンバーＢＡＤ(Aho T et al., “Pim-1 kinase promotes inactivation of the pro-apoptotic Bad protein by phosphorylating it on the Ser112 gatekeeper site”, FEBS Letters 571: 43-49 (2004))、細胞周期制御因子、例えばｐ２１ＷＦＡ１／ＣＩＰ１(Wang Z, et al., “Phosphorylation of the cell cycle inhibitor p21Cip1/WAF1 by Pim-1 kinase”, Biochim Biophys Acta 1593:45- 55 (2002))、ＣＤＣ２５Ａ(1999)、Ｃ−ＴＡＫ(Bachmann M et al., “The Oncogenic Serine/Threonine Kinase Pim-1 Phosphorylates and Inhibits the Activity of Cdc25C-associated Kinase 1 (C-TAK1).  A novel role for Pim-1 at the G2/M cell cycle checkpoint”, J Biol Chem 179:48319-48328 (2004))、および、ＮｕＭＡ(Bhattacharya N, et al., “Pim-1 associates with protein complexes necessary for mitosis”, Chromosoma 111(2):80-95 (2002))、および、蛋白質合成制御因子４ＥＢＰ１(Hammerman PS et al., “Pim and Akt oncogenes are independent regulators of hematopoietic cell growth and survival”, Blood 105(11):4477-83 (2005))を含む。これらの制御因子におけるＰｉｍの効果は、アポトーシスからの保護および細胞増殖と成長の促進における役割と一致する。従って、癌におけるＰｉｍの過剰発現は、癌細胞の生存および増殖の促進に役割を果たし、従って、その阻害は、それが過剰発現している癌を処置するのに有効な方法であると考えられている。事実、幾つかの報告により、ｓｉＲＮＡでＰｉｍの発現をノックダウンすると、増殖の阻害および細胞死を引き起こすことが示されている(Dai JM, et al., “Antisense oligodeoxynucleotides targeting the serine/threonine kinase Pim-2 inhibited proliferation of DU-145 cells”, Acta Pharmacol Sin 26(3):364-8 (2005); Fujii et al. 2005; Li et al. 2006)。さらに、造血器悪性腫瘍における幾つかの周知の発癌遺伝子の変異による活性化は、少なくとも一部Ｐｉｍを介して、その効果を発揮すると考えられている。例えば、ｐｉｍ発現の標的下方制御は、Ｆｌｔ３およびＢＣＲ／ＡＢＬによって形質転換された造血細胞の生存を損う(Adam et al. 2006)。従って、Ｐｉｍ１、２および３に対する阻害剤は、これらの悪性腫瘍の処置に有用である。癌および骨髄増殖性疾患の処置における可能性のある役割に加えて、当該阻害剤は、他の病理学的状態、例えば自己免疫疾患、アレルギー反応、および臓器移植拒絶反応症候群における免疫細胞の増殖を制御するのに有用であり得る。この考えは、ＩＬ−１２およびＩＦＮ−αによるＴｈ１ヘルパーＴ細胞の分化が、Ｐｉｍ１および２の双方の発現を誘発するという発見によって支持される(Aho T et al., “Expression of human Pim family genes is selectively up-regulated by cytokines promoting T helper type 1, but not T helper type 2, cell differentiation”, Immunology 116: 82-88 (2005))。さらに、Ｐｉｍ発現は、免疫抑制ＴＧＦ−βによって両方の細胞型で阻害される(Aho et al. 2005)。これらの結果は、Ｐｉｍキナーゼが、自己免疫疾患、ア���ルギー反応および組織移植拒絶反応において免疫応答を調整するヘルパーＴ細胞の初期の分化プロセスに関係していることを示唆している。
【０００４】
毛細血管の増殖を阻害する、腫瘍の増殖を阻害する、癌を処置する、細胞周期抑止を調節する、および／またはＰｉｍ１、Ｐｉｍ２およびＰｉｍ３などの分子を阻害する化合物、ならびに、該化合物を含む医薬製剤および医薬に対する必要性が引き続き存在する。また、投与が必要な患者または対象に、該化合物、医薬製剤および医薬を投与する方法に対する必要性もまた存在する。
【発明の概要】
【０００５】
本発明の概要
本発明は、式Ｉ： 
【化１】
0005412448.tif 000002
[式中、
Ｒ１は、
【化２】
0005412448.tif 000003
から選択され；
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し；
Ｒ２ａは、アミノ、メチル、ＣＨ２Ｆ、ＣＦ３、Ｃ２Ｈ５およびＨから選択され；
Ｒ２ｂは、Ｈおよびメチルから選択され；
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＣＨ３、ＦおよびＣｌから選択され；
Ｒ４ａは、アミノ、メチル、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣ２Ｈ５、Ｆ、ＣＦ３、Ｈおよびエチルから選択され；
Ｒ４ｂは、メチル、ＨおよびＦから選択され；
Ｒ２１は、ＨまたはＦを表し；
Ｒ２２は、Ｈ、ＣｌまたはＦを表し；
Ｒ２３は、Ｆ、ＯＣ２Ｈ５、ＯＣＨ３、Ｃｌ、Ｈ、メチル、ＯＨまたはＯＣＨ(ＣＨ３)２を表し；
Ｒ２４は、ＨまたはＯＨを表す。]
の化合物またはその立体異性体、互変異性体または薬学的に許容される塩を提供する。
【０００６】
他の局面において、本発明は、式II：
【化３】
0005412448.tif 000004
[式中、
Ｒ１は、−ＮＨ−ＣＯ−アルキル、置換または非置換シクロアルキル、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、置換または非置換アリール、および置換または非置換ヘテロアリールから選択され；
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し；
Ｒ２ａは、−Ｈ、−ＯＨ、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、アミノアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロ、アミノおよびベンゾエートから選択され；
Ｒ２ｂは、−Ｈおよびアルキルから選択され；
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、アルキル、アルコキシおよびハロから選択され；
Ｒ４ａは、−ＯＨ、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、アミノアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロおよびアミノから選択され；
Ｒ４ｂは、Ｈ、アルキルおよびハロから選択される。]
の化合物、またはその立体異性体、互変異性体または薬学的に許容される塩を提供する。
【０００７】
本発明の他の局面は、薬学的に許容される担体と共に、治療有効量の式Ｉまたは式IIの化合物、またはそれらの立体異性体、互変異性体または薬学的に許容される塩を含む組成物を提供する。
【０００８】
本発明の他の局面において、細胞においてＰＩＭキナーゼ活性を阻害する方法であって、該細胞を有効量の式Ｉまたは式IIの化合物と接触させることを含む方法が提供される。また、本発明の他の局面は、プロウイルス組み込みモロニーキナーゼ(ＰＩＭキナーゼ)活性を調節することによって状態を処置する方法であって、当該処置を必要とする患者に、有効量の式Ｉまたは式IIの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の詳細な説明
一つの局面において、本発明は、式Ｉ：
【化４】
0005412448.tif 000005
[式中、
Ｒ１は、
【化５】
0005412448.tif 000006
から選択され；
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し；
Ｒ２ａは、アミノ、メチル、ＣＨ２Ｆ、ＣＦ３、Ｃ２Ｈ５およびＨから選択され；
Ｒ２ｂは、Ｈおよびメチルから選択され；
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＣＨ３、ＦおよびＣｌから選択され；
Ｒ４ａは、アミノ、メチル、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣ２Ｈ５、Ｆ、ＣＦ３、Ｈおよびエチルから選択され；
Ｒ４ｂは、メチル、ＨおよびＦから選択され；
Ｒ２１は、ＨまたはＦを表し；
Ｒ２２は、Ｈ、ＣｌまたはＦを表し；
Ｒ２３は、Ｆ、ＯＣ２Ｈ５、ＯＣＨ３、Ｃｌ、Ｈ、メチル、ＯＨまたはＯＣＨ(ＣＨ３)２を表し；
Ｒ２４は、ＨまたはＯＨを表す。]
の化合物、またはその立体異性体、互変異性体または薬学的に許容される塩を提供する。
【００１０】
他の局面において、本発明は、式II：
【化６】
0005412448.tif 000007
[式中、
Ｒ１は、−ＮＨ−ＣＯ−アルキル、置換または非置換シクロアルキル、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、置換または非置換アリール、および置換または非置換ヘテロアリールから選択され；
Ｘは、ＣＨまたはＮを表し；
Ｒ２ａは、−Ｈ、−ＯＨ、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、アミノアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロ、アミノおよびベンゾエートから選択され；
Ｒ２ｂは、−Ｈおよびアルキルから選択され；
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨ、アルキル、アルコキシおよびハロから選択され；
Ｒ４ａは、−ＯＨ、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、アミノアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロおよびアミノから選択され；
Ｒ４ｂは、Ｈ、アルキルおよびハロから選択される。]
の化合物、またはその立体異性体、互変異性体または薬学的に許容される塩を提供する。
【００１１】
幾つかの局面において、本発明は、Ｒ１が、置換または非置換フェニル、置換または非置換シクロヘキシル、および、置換または非置換ピペリジニルから選択される、式IIの化合物を提供する。他の局面において、本発明は、Ｒ１が、
【化７】
0005412448.tif 000008
{式中、
Ｒ２１は、Ｈまたはハロであり；
Ｒ２２は、Ｈまたはハロであり；
Ｒ２３は、Ｈ、ハロ、アルキルおよびアルコキシから選択され；
Ｒ２４は、ＨまたはＯＨである。}
から選択される、式IIの化合物を提供する。
【００１２】
本発明の幾つかの態様において、Ｒ２１およびＲ２２は、ＨおよびＦから独立して選択される。他の態様において、Ｒ２３は、Ｈ、Ｃｌ、Ｆ、−ＯＣ２Ｈ５、−ＯＣＨ３および−ＯＣＨ(ＣＨ３)２から選択される。
【００１３】
他の態様において、本発明は、Ｒ２が、Ｈ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、フルオロメチル、トリフルオロメチル、アミノメチルおよびヒドロキシメチルから選択される、式IIの化合物を提供する。
【００１４】
また、他の態様は、Ｒ３が、Ｈ、−ＯＨ、メチル、メトキシ、ＦおよびＣｌから選択される、式IIの化合物を提供する。
【００１５】
幾つかの態様において、本発明は、Ｒ４ａが、−ＯＨ、メチル、エチル、トリフルオロメチル、メトキシ、エトキシ、アミノ、ＦおよびＣｌから選択される、式IIの化合物を提供する。他の態様は、Ｒ４ｂが、メチルおよびＦから選択される、式IIの化合物を提供する。
【００１６】
現在、幾つかの好ましい態様において、本発明は、
(Ｓ)−５−アミノ−Ｎ−(４−(３−アミノピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｓ,５Ｒ)−３−アミノ−５−メチルピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−３−アミノ−４−ヒドロキシ−５−メチルピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
５−アミノ−Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ)−３−アミノシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｓ,５Ｒ)−３−アミノ−５−(トリフルオロメチル)ピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｓ,５Ｒ)−３−アミノ−５−エチルピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロ−４−ヒドロキシフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
５−アミノ−Ｎ−(４−(３−アミノ−４−ヒドロキシシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−(３−アミノ−５−(フルオロメチル)ピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
５−アミノ−２−(２,６−ジフルオロフェニル)−Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−(３−アミノ−４−メチルピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(３−エトキシ−２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
からなる群から選択される式Ｉまたは式IIの化合物、またはそれらの立体異性体、互変異性体または薬学的に許容される塩を提供する。
【００１７】
現在、他の好ましい態様において、本発明は、
(Ｓ)−５−アミノ−Ｎ−(４−(３−アミノピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｓ,５Ｒ)−３−アミノ−５−メチルピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−３−アミノ−４−ヒドロキシ−５−メチルピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
５−アミノ−Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ)−３−アミノシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｓ,５Ｒ)−３−アミノ−５−(トリフルオロメチル)ピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((３Ｓ,５Ｒ)−３−アミノ−５−エチルピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロ−４−ヒドロキシフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
５−アミノ−Ｎ−(４−(３−アミノ−４−ヒドロキシシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−(３−アミノ−５−(フルオロメチル)ピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
５−アミノ−２−(２,６−ジフルオロフェニル)−Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)チアゾール−４−カルボキサミド、
Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド、
からなる群から選択される式Ｉまたは式IIの化合物、またはそれらの立体異性体、互変異性体または薬学的に許容される塩を提供する。
【００１８】
本発明の他の局面は、薬学的に許容される担体と共に、治療有効量の式Ｉまたは式IIの化合物またはそれらの立体異性体、互変異性体または薬学的に許容される塩を含む組成物を提供する。
【００１９】
本発明の他の局面において、細胞においてＰＩＭキナーゼ活性を阻害する方法であって、該細胞を有効量の式Ｉまたは式IIの化合物と接触させることを含む方法が提供される。また、本発明の別の局面は、プロウイルス組み込みモロニーキナーゼ(ＰＩＭキナーゼ)活性を調節することによって状態を処置する方法であって、該処置を必要とする患者に、有効量の式Ｉまたは式IIの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００２０】
本発明の好ましい態様は、患者において癌障害を処置する方法であって、該患者に、上に記載された化合物を、患者においてＰＩＭキナーゼ活性を阻害するのに有効な量で含む組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００２１】
本発明の他の局面は、治療薬として使用するための式Ｉまたは式IIの化合物を提供する。また、本発明の他の局面は、癌を処置する医薬の製造における、式Ｉまたは式IIの化合物の何れか１つの使用を提供する。
【００２２】
定義
“ＰＩＭ阻害剤”は、本明細書において、ＰＩＭキナーゼ活性に関して、本明細書で以下に記載されたＰＩＭのＡＴＰ消費アッセイで測定して、約１００μＭ以下、より典型的には約５０μＭ以下のＩＣ５０を示す化合物を言うために用いられる。
【００２３】
フレーズ“アルキル”は、ヘテロ原子を含まないアルキル基を言う。従って、該フレーズは、直鎖アルキル基を含み、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシルなどである。
【００２４】
本明細書で用いられるとき、用語“ハロゲン”または“ハロ”は、クロロ、ブロモ、フルオロおよびヨード基を言う。“ハロアルキル”は、１個以上のハロゲン原子で置換されているアルキル基を言う。用語“ハロ低級アルキル”は、１個以上のハロゲン原子で置換されている低級アルキル基を言う。用語“ハロアルコキシ”は、１個以上のハロゲン原子で置換されているアルコキシ基を言う。用語“ハロ低級アルコキシ”は、１個以上のハロゲン原子で置換されている低級アルコキシ基を言う。
【００２５】
“アミノ”は、本明細書で、基−ＮＨ２を言い、該基は、置換されて−ＮＲＲ'を形成してもよい。用語“アルキルアミノ”は、本明細書で、基−ＮＲＲ' (ここで、ＲおよびＲ'はそれぞれ、水素または低級アルキルから独立して選択される。)を言う。用語“アリールアミノ”は、本明細書で、基−ＮＲＲ' (ここで、Ｒはアリールであり、Ｒ'は水素、低級アルキル、またはアリールである。)を言う。用語“アラルキルアミノ”は、本明細書で、基−ＮＲＲ' (ここで、Ｒは低級アラルキルであり、Ｒ'は水素、低級アルキル、アリール、または低級アラルキルである。)を言う。
【００２６】
用語“アルコキシ”は、ＲＯ− (ここで、Ｒは置換または非置換アルキルである。)を言う。低級アルコキシ基の代表例は、メトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシ、トリフルオロメトキシなどを含む。
【００２７】
“シクロアルキル”は、単環式または多環式の、ヘテロ環式または炭素環式アルキル置換基を言う。典型的なシクロアルキル置換基は、３から８個の骨格原子(すなわち環原子)を有し、各骨格原子は、炭素原子またはヘテロ原子の何れかである。用語“ヘテロシクロアルキル”または“ヘテロシクリル”は、本明細書で、環構造中に、１から５個の、より典型的には１から４個のヘテロ原子を有するシクロアルキル置換基を言う。本発明の化合物において用いられる適当なヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄である。ヘテロシクロアルキル部分の代表例は、例えば、モルホリノ、ピペラジニル、ピペリジニルなどを含む。カルボシクロアルキル基は、全ての環原子が炭素であるシクロアルキル基である。シクロアルキル置換基と関連して用いられるとき、用語“多環式”は、本明細書で、縮合および非縮合の複数のアルキル環構造を言う。
【００２８】
“アリール”は、３から１４個の骨格炭素原子またはヘテロ原子を有する、所望により置換されている単環式および多環式の芳香族性基を言い、炭素環式アリールおよびヘテロ環式アリール基の双方を含む。炭素環式アリール基は、芳香環中の全ての環原子が炭素であるアリール基である。用語“ヘテロアリール”は、本明細書で、芳香環中の環原子として１から４個のヘテロ原子を有し、残りの環原子が炭素原子であるアリール基を言う。アリール置換基と関連して用いられるとき、用語“多環式アリール”は、本明細書で、少なくとも１個の環構造が芳香族性である、縮合および非縮合の複数の環構造を言い、例えば、ベンゾジオキソゾロ (フェニル基に縮合したヘテロ環構造を有する)、すなわち、
【化８】
0005412448.tif 000009
、ナフチルなどである。本発明の化合物において置換基として用いられるアリール部分の例は、フェニル、ピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、インドリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、トリアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、プリニル、ナフチル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピリジル、およびベンゾイミダゾリルなどを含む。
【００２９】
“所望により置換されている”または“置換されている”は、１個以上の水素原子を１価または２価の基で置き換えることを言う。適当な置換基は、例えば、ヒドロキシ、ニトロ、アミノ、イミノ、シアノ、ハロ、チオ、スルホニル、チオアミド、アミジノ、イミジノ、オキソ、オキサミジノ(oxamidino)、メトキサミジノ(methoxamidino)、イミジノ、グアニジノ、スルホンアミド、カルボキシル、ホルミル、低級アルキル、ハロ低級アルキル、低級アルキルアミノ、ハロ低級アルキルアミノ、低級アルコキシ、ハロ低級アルコキシ、低級アルコキシアルキル、アルキルカルボニル、アミノカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアラルキルカルボニル、アルキルチオ、アミノアルキル、シアノアルキル、アリールなどを含む。
【００３０】
置換基は、それ自身置換されていてもよい。当該置換基を置換している基は、カルボキシル、ハロ；ニトロ、アミノ、シアノ、ヒドロキシ、低級アルキル、低級アルコキシ、アミノカルボニル、−ＳＲ、チオアミド、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２Ｒまたはシクロアルキル (ここで、Ｒは、典型的に水素、ヒドロキシルまたは低級アルキルである。)であってよい。
【００３１】
上記の定義は、許容されない置換パターン(例えば、５個のフルオロ基で置換されたメチル、または、他のハロゲン原子で置換されたハロゲン原子)を含むことを意図しない。このような許容されない置換パターンは、当業者に周知である。
【００３２】
式(Ｉ)または(II)の化合物またはその立体異性体、ならびにその何れかの薬学的に許容される塩、エステル、代謝物およびプロドラッグを含む本発明の化合物は、互変異性を示して得て、従って、分子の１個の原子のプロトンが他の原子にシフトし、その結果、分子の原子間の結合が再配列されている種々の互変異性体の形態であり得ることが、当業者に明らかである。例えば、March, Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structures, Fourth Edition, John Wiley & Sons, pages 69-74 (1992)を参照のこと。本明細書で用いられるとき、用語“互変異性体”は、プロトンのシフトによって生じる化合物を言い、全ての互変異性体の形態は、それらが存在し得る限り、本発明の範囲内に含まれると理解されるべきである。
【００３３】
式(Ｉ)または(II)の化合物またはその互変異性体、ならびにその何れかの薬学的に許容される塩、エステル、代謝物およびプロドラッグを含む本発明の化合物は、不斉に置換された炭素原子を含んでもよい。このような不斉に置換された炭素原子は、エナンチオマー、ジアステレオマー、および絶対立体化学の用語で定義され得る他の立体異性体、例えば(Ｒ)型または(Ｓ)型が存在する本発明の化合物を生じ得る。結果として、全てのこのような可能な異性体、光学的に純粋な形態の個々の立体異性体、それらの混合物、ラセミ混合物(またはラセミ化合物)、ジアステレオマー混合物、および本発明の化合物の単一のジアステレオマーは、本発明に含まれる。本明細書で用いられる用語“Ｓ”および“Ｒ”配置は、IUPAC 1974 RECOMMENDATIONS FOR SECTION E, FUNDAMENTAL STEREOCHEMISTRY, Pure Appl. Chem. 45:13 30 (1976)によって定義された通りである。用語αおよびβは、環状化合物の環の位置について用いられる。参照平面のα側とは、好ましい置換基がより低い数の位置にある側である。該参照平面の反対側にある置換基はβという記載で示す。環状の立体骨格では、これの使用法は異なっていることに注意するべきであり、そこで“α”は“平面の下”を意味し、絶対配置を示す。用語αおよびβ配置は、本明細書で用いられるとき、CHEMICAL ABSTRACTS INDEX GUIDE-APPENDIX IV (1987) paragraph 203によって定義された通りである。
【００３４】
本明細書で用いられるとき、用語“薬学的に許容される塩”は、式(Ｉ)または(II)の化合物の非毒性の酸またはアルカリ土類金属の塩を言う。これらの塩は、式(Ｉ)または(II)の化合物の最終的な単離および精製の際に、in situで製造され得るか、または、別個に、塩基または酸官能基を、それぞれ、適切な有機または無機の酸または塩基と反応させることによって、製造され得る。代表的な塩は、次に示すものを含み、これらの限定されない：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロパン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロパン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロパン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびウンデカン酸塩。また、塩基性窒素含有基は、ハロゲン化低級アルキル、例えば塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピル、およびブチル；硫酸ジアルキル、例えば硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミル、ハロゲン化長鎖、例えば塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリル；ハロゲン化アラルキル、例えば臭化ベンジルおよびフェネチルなどの反応剤で四級化され得る。それによって、水または油に可溶なまたは懸濁可能な生成物が得られる。
【００３５】
薬学的に許容される酸付加塩を形成するために用いられ得る酸の例は、塩酸、硫酸およびリン酸といった無機酸、ならびに、シュウ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、コハク酸およびクエン酸といった有機酸を含む。塩基付加塩は、式(Ｉ)の化合物の最終的な単離および精製の際に、in situで製造され得るか、または、別個に、カルボン酸部分を、適切な塩基、例えば薬学的に許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩、またはアンモニア、または有機の第１級、第２級または第３級アミンと反応させることによって製造され得る。薬学的に許容される塩は、次に示すものを含み、これらに限定されない：アルカリ金属およびアルカリ土類金属をベースとするカチオン(例えばナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウムなど)の塩、ならびに非毒性のアンモニウム塩、第４級アンモニウム塩、およびアミンカチオンの塩(アンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩、テトラエチルアンモニウム塩、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンの塩などを含み、これらに限定されない)。塩基付加塩の形成に有用な他の代表的な有機アミン類は、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどを含む。
【００３６】
本明細書で用いられるとき、用語“薬学的に許容されるエステル”は、in vivoで加水分解するエステル類を言い、ヒトの体内で容易に切断され親化合物またはその塩が得られるものを含む。適当なエステル基は、例えば、薬学的に許容される脂肪族カルボン酸、特にアルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸およびアルカンジオン酸から誘導される基を含み、ここで、それぞれのアルキルまたはアルケニル部分は、有利には、最大６個の炭素原子を有する。特定のエステル類の例は、ホルメート類、アセテート類、プロピオネート類、ブチレート類、アクリレート類、およびエチルスクシネート類を含む。
【００３７】
用語“薬学的に許容されるプロドラッグ”は、本明細書で用いられるとき、正常な医学的判断の範囲内でヒトおよび下等動物の組織と接触させる使用に適当であり、不適当な毒性、刺激性、アレルギー応答などがなく、合理的な利益／危険比を有し、かつその意図された使用に有効である、ならびに可能であれば本発明の化合物の双性イオンの形態である、本発明の化合物のプロドラッグを言う。用語“プロドラッグ”は、例えば血中で加水分解することによって、in vivoで素早く変換され、上記の式の親化合物を得る化合物を言う。徹底的な議論は、T. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series、および、Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987において提供され、両者は言及することによって本明細書に組み込まれる。
【００３８】
式(Ｉ)または(II)の化合物、またはその互変異性体、プロドラッグおよび立体異性体、ならびにその何れかの薬学的に許容される塩、エステルおよびプロドラッグを含む本発明の化合物は、in vivoで、ヒトまたは動物の体内または細胞内で、代謝によって処理され、代謝物を生じ得ることが、当業者に明らかである。用語“代謝物”は、本明細書で用いられるとき、親化合物の投与後、対象内で生じる式の何れかの誘導体を言う。該誘導体は、対象内の種々の生化学的変換によって、例えば酸化、還元、加水分解、または結合によって、親化合物から生じ、例えばオキシドおよび脱メチル誘導体を含む。本発明の化合物の代謝物は、当技術分野で既知の慣例の方法を用いて同定され得る。例えば、Bertolini, G. et al., J. Med. Chem. 40:2011-2016 (1997); Shan, D. et al., J. Pharm. Sci. 86(7):765-767; Bagshawe K., Drug Dev. Res. 34:220-230 (1995); Bodor, N., Advances in Drug Res. 13:224-331 (1984); Bundgaard, H., Design of Prodrugs (Elsevier Press 1985); および Larsen, I. K., Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen et al., eds., Harwood Academic Publishers, 1991)を参照のこと。式(Ｉ)または(II)の化合物、またはその互変異性体、プロドラッグおよび立体異性体、ならびにそれらの何れかの薬学的に許容される塩、エステルおよびプロドラッグの代謝物である個々の化学化合物は、本発明の範囲に含まれると理解されるべきである。
【００３９】
用語“癌”は、例えば、固形癌、例えば癌腫(例えば肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、卵巣癌、膀胱癌、乳癌、前立腺癌または大腸癌)、黒色腫、骨髄性障害(例えば骨髄性白血病、多発性骨髄腫および赤白血病)、腺癌(例えば繊毛結腸腺腫)および肉腫(例えば骨肉腫)を含む、Ｐｉｍキナーゼの阻害によって有益に処置され得る癌疾患を言う。
【００４０】
合成方法
本発明の化合物は、当業者に既知の手順によって得られる。例えば、スキーム１に示された通り、４−クロロ−３−ニトロピリジンを求核剤と反応させ、ニトロ還元後、４位置換３−アミノピリジン(Ｉ)を得る。置換アミノピリジン(Ｉ)は、カップリング剤の助けによりチアゾールカルボン酸で、あるいは、ハロゲン化酸または酸無水物でアシル化して、３,４位二置換ピリジン(II)を得る。チアゾールの２位のＲ基がブロモ、トリフレートまたはヨードであるならば、この位置に多様な置換基を組み込むためのさらなる修飾が、金属介在炭素−炭素結合形成反応によって実現可能である。
【００４１】
スキーム１
【化９】
0005412448.tif 000010
【００４２】
スキーム１に記載された４−クロロ−３−ニトロピリジンと求核剤との反応は、窒素をベースとする求核剤に限定されない；炭素−炭素結合が、同様に炭素求核剤の最終的な付加により形成され得る。スキーム２に示された通り、シクロヘキサンジオン類は、モノトリフレート類を介して対応するシクロへキセノンボロン酸エステル類に変換され得る。これは、４−クロロ,３−ニトロピリジンで、パラジウム介在炭素−炭素結合形成を行って、ニトロピリジン置換シクロへキセノン類(III)を得る。エノン官能基を還元して、シクロヘキセノール(IV)を得て、これをアルコール保護した後、ニトロおよびアルケンを還元し、アミドカップリングおよび脱保護をして、シクロヘキサノールアミド類(Ｖ)を得ることができる。シクロヘキセノール(IV)はまた、フタルイミドとMitsunobo反応を行い、保護されたアミノシクロヘキセン類(Ｖ)を得ることもできる。ニトロおよびアルケン還元後、フタルイミド保護アミノシクロヘキシル ピリジル アニリン(VIIa)は、アミドカップリングと脱保護を行い、アミノシクロヘキサン アミド類(VIII)を得ることができる。対応するＢｏｃ保護アミノシクロヘキサン ピリジル アニリン(VIIb)はまた、下記の方法で、シクロヘキセノール(IV)から製造され得る：アルコール保護、アルケンおよびニトロ還元、ピリジルアミンＣｂｚ保護、シリル エーテル脱保護、シクロヘキサノンへのデスマーチン酸化、ベンジルアミンとの還元的アミノ化、Ｃｂｚおよびベンジル脱保護および第１級脂肪族アミンＢｏｃ保護。アミド生成物(Ｖ)および(VIII)において、Ｒ２がハロまたはトリフレートならば、アミド類(IV)および(VIII)は標準的な修飾によってさらに修飾され、Ｒ２で置換アリール、アルキルおよびヘテロアリールを導入することができる。例えば、Ｒ２がＢｒならば、ボロン酸または有機金属反応剤と反応させることによって、あるいは、対応するボロン酸エステルに変換し、アリール／ヘテロアリールのハロゲン化物またはトリフレートと反応させることによって、多様なＲ２修飾が可能である。
【００４３】
スキーム２
【化１０】
0005412448.tif 000011
【００４４】
シクロヘキシル基で置換されたチアゾールアミド類は、ニトロピリジル シクロヘキセノール(IV)を修飾することによって得ることができる。スキーム３に示された通り、シクロヘキセノール(IV)を脱水してシクロヘキサジエンを得て、それをエポキシ化し(ブロモヒドリン形成およびＨＢｒ除去により、あるいはｍＣＰＢＡから直接)、そしてアジド エポキシド開環した後、シクロヘキセニルアジドアルコール(IX)を得ることができる。シクロヘキセニルアジドアルコール(IX)を、アジド還元、アルコール保護およびアルケンおよびニトロ還元によって、ｔｒａｎｓ保護アミノヒドロキシアニリン(Xa)に変換することができる。あるいは、シクロヘキセニルアジドアルコール(IX)を、アジド還元およびＢｏｃ保護、アルコールメシル化および分子内環化して、ｃｉｓ環状カルバメートとし、続いてＢｏｃ保護およびアルケンおよびニトロ還元することによって、ｃｉｓアミノヒドロキシアニリン(Xb)に変換することができる。得られたシクロヘキシルピリジルアニリン類(Xa)および(Xb)を、アミドカップリング、アセテートまたは環状カルバメート切断、およびＢｏｃ脱保護によって、対応するチアゾールアミド(XIa)および(XIb)に変換することができる。Ｒ２がハロまたはトリフレートならば、アミド(XIa)および(XIb)および(XII)は標準的な修飾によってさらに修飾され、アミド結合形成後、全て脱保護する前に、Ｒ２で置換アリール、アルキルおよびヘテロアリールを導入することができる。例えば、Ｒ２がＢｒならば、ボロン酸または有機金属反応剤と反応させることによって、あるいは、対応するボロン酸エステルに変換し、アリール／ヘテロアリールのハロゲン化物またはトリフレートと反応させることによって、多様なＲ２修飾が可能である。
【００４５】
スキーム３
【化１１】
0005412448.tif 000012
【００４６】
スキーム４に記載された通りに、置換３−アミノピペリジン類を製造し、修飾して置換３−アミノピペリジニルチアゾールアミド類(XII)を得る。クロチルボロン酸エステルのＳｅｒＯＢｎ−アルデヒドとの反応、続いて環状カルバメート形成、アルケン酸化切断および還元を行い、ヒドロキシル化合物(XIII)を得る。ベンジル脱保護、続いてビストシル化、ｐ−メトキシベンジルアミンとの反応およびアミン脱保護を行い、ピペリジン(XIV)を得る。キラルなボロン酸エステルおよび異なるＬおよびＤ−セリン誘導アルデヒドの使用によって、得られた三置換５−アルキル、４−ヒドロキシ、３−アミノピペリジンの全ての可能なジアステレオマーを得ることができる。置換ピペリジン(XIV)の４−クロロ−３−ニトロピリジンとの反応、続いてカルバメート保護、ニトロ還元、アミドカップリング、環状カルバメート開環および脱保護を行い、三置換５−メチル、４−ヒドロキシ、３−アミノピペリジニルチアゾールアミド類(XII)を得る。Ｒ２がハロまたはトリフレートならば、アミド(XII)は、アミド結合形成後、全て脱保護する前に、標準的な修飾によってさらに修飾され、Ｒ２で置換アリール、アルキルおよびヘテロアリールを導入することができる。例えば、Ｒ２がＢｒならば、ボロン酸または有機金属反応剤と反応させることによって、あるいは、対応するボロン酸エステルに変換し、アリール／ヘテロアリールのハロゲン化物またはトリフレートと反応させることによって、多様なＲ２修飾が可能である。
【００４７】
スキーム４
【化１２】
0005412448.tif 000013
【００４８】
本発明の化合物は、in vitroまたはin vivoにおいて、癌細胞の増殖を阻害するのに有用である。本化合物は、単独でまたは薬学的に許容される担体と共に用いられ得る。適切な薬学的に許容される担体または賦形剤は、例えば、加工剤(processing agent)および薬物送達修飾剤および増強剤を含み、例えば、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、単糖類、二糖類、澱粉、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース ナトリウム、ブドウ糖、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ポリビニルピロリジノン、低融点ろう、イオン交換樹脂など、ならびにその何れかの２種以上の組み合わせである。他の適切な薬学的に許容される賦形剤は、“Remington's Pharmaceutical Sciences”, Mack Pub. Co., New Jersey (1991)(言及することによって本明細書に組み込まれる)に記載されている。
【００４９】
有効量の本発明の化合物は、一般的に、本明細書で記載された何れかのアッセイによって、当業者に既知の他のＰｉｍキナーゼ活性アッセイによって、または、癌の症状の阻害または緩和を検出することによって、検出可能な程度にＰｉｍ活性を阻害するのに十分な量を含む。
【００５０】
担体物質と組み合わせて１回投与量が得られる活性成分の量は、処置される宿主および特定の投与方法に依存して変化する。しかしながら、何れかの特定の患者の特定の投与量は、用いられる具体的な化合物の活性、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与時間、投与経路、排泄速度、薬物の組み合わせおよび治療を行う具体的な疾患の重症度を含む種々の因子に依存することは理解されるであろう。示された状況についての治療有効量は、慣用の試験によって容易に決定され、通常の臨床医の技術および判断の範囲内である。
【００５１】
本発明の目的において、治療有効量は、一般的に、１回または分割投与で宿主に投与される総１日投与量であり、例えば、１日当たり０.００１から１０００mg/kg体重、より好ましくは１日当たり１.０から３０mg/kg体重である。単位投与組成物は、１日投与量を構成するために、その約数の量を含み得る。
【００５２】
本発明の化合物は、経口で、非経腸で、舌下で、エアゾールまたは吸入スプレーによって、直腸で、または局所で、記載された慣用の非毒性の薬学的に許容される担体、アジュバントおよびビークルを含む単位投与製剤で、投与され得る。局所投与はまた、経皮投与、例えば経皮パッチまたは電気泳動デバイスの使用を含む。用語非経腸は、本明細書で用いられるとき、皮下注射、静脈内、筋肉内、関節内注射または点滴を含む。
【００５３】
注射可能な製剤、例えば滅菌処理された注射可能な水性または油性の懸濁液は、当技術分野で知られている通りに、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて製剤化され得る。滅菌処理された注射可能な製剤はまた、非毒性の非経腸で許容される希釈剤または溶媒中の滅菌処理された注射可能な溶液または懸濁液、例えば１,３−プロパンジオールの溶液であり得る。用いられ得る許容されるビークルおよび溶媒は、水、リンゲル溶液、および等張性塩化ナトリウム溶液である。さらに、滅菌処理された固定化油は、溶媒または懸濁媒体として、慣習的に用いられる。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドを含む何れかの混合固定化油が用いられ得る。さらに、脂肪酸、例えばオレイン酸が、注射可能な製剤に用いられる。
【００５４】
薬物の直腸投与のための坐剤は、薬物を、普通の温度で固体であるが直腸温度で液体であり、そのため直腸内で融解して薬物を放出する非刺激性賦形剤、例えばココアバターおよびポリエチレングリコールと混合することによって製造され得る。
【００５５】
経口投与のための固体投与形は、カプセル剤、錠剤、丸薬、粉剤および顆粒剤を含み得る。このような固体投与形において、活性な化合物は、少なくとも１種の不活性な希釈剤、例えばショ糖、乳糖または澱粉と混合され得る。このような投与形はまた、常法として、不活性な希釈剤以外のさらなる物質、例えば滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウムを含んでもよい。カプセル剤、錠剤および丸薬の場合において、投与形はまた、緩衝剤を含んでもよい。錠剤および丸薬は、さらに腸溶性コーティングと共に製造され得る。
【００５６】
経口投与のための液体投与形は、当技術分野で一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば水を含む、薬学的に許容されるエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシルを含み得る。このような組成物はまた、アジュバント、例えば湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、シクロデキストリン、および甘味料、風味剤および香料を含んでもよい。
【００５７】
本発明の化合物はまた、リポソームの形態で投与され得る。当技術分野で知られている通り、リポソームは、一般的に、リン脂質または他の脂質から誘導される。リポソームは、水性媒体に分散された１層または多層の水和した液晶によって形成される。リポソームを形成し得る何れの非毒性の生理学的に許容され且つ代謝可能な脂質も、使用され得る。リポソーム中の本組成物は、本発明の化合物に加えて、安定剤、保存料、賦形剤などを含み得る。好ましい脂質は、天然および合成のリン脂質およびホスファチジルコリン(レシチン)である。リポソームを形成する方法は、当技術分野で既知である。例えば、Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.W., p. 33 et seq. (1976)を参照のこと。
【００５８】
本発明の化合物は、唯一の活性な薬物として投与され得るが、それらはまた、１種以上の他の癌の処置に用いられる薬物と組み合わせて用いられ得る。本発明の化合物はまた、既知の治療薬および抗癌剤との組み合わせに有用であり、また、本明細書で開示されている化合物と、他の抗癌剤または化学療法剤との組み合わせは、本発明の範囲内である。このような薬物の例は、Cancer Principles and Practice of Oncology, V. T. Devita and S. Hellman (editors), 6th edition (Feb. 15, 2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishersで見出され得る。当業者は、薬物の具体的な特性および関係する癌に基づいて、薬物のどの組み合わせが有用であるか認識し得る。このような抗癌剤は、次に示すものを含み、これらに限定されない：エストロゲン受容体モジュレーター、アンドロゲン受容体モジュレーター、レチノイド受容体モジュレーター、細胞毒／細胞増殖阻害剤、抗増殖剤、プレニル蛋白質トランスフェラーゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤および他の血管新生阻害剤、細胞増殖および生存シグナル伝達阻害剤、アポトーシス誘発剤、および細胞周期チェックポイントを妨害する薬剤。本発明の化合物はまた、放射能治療と共投与される際に有用である。
【００５９】
従って、本発明の一つの態様において、本発明の化合物はまた、例えばエストロゲン受容体モジュレーター、アンドロゲン受容体モジュレーター、レチノイド受容体モジュレーター、細胞毒、抗増殖剤、プレニル蛋白質トランスフェラーゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素阻害剤および他の血管新生阻害剤を含む、既知の抗癌剤と組み合わせて用いられる。
【００６０】
本発明の特定の現在好ましい態様において、本発明の化合物との組み合わせに有用な代表的な癌処置薬は、例えば、イリノテカン、トポテカン、ゲムシタビン、５−フルオロウラシル、ロイコボリン、カルボプラチン、シスプラチン、タキサン類、テザシタビン(tezacitabine)、シクロホスファミド、ビンカアルカロイド類、イマチニブ(Gleevec)、アントラサイクリン類、リツキシマブ、トラスツズマブ、および他の癌化学療法薬を含む。
【００６１】
本発明の化合物と組み合わせて用いられる上記化合物は、Physicians' Desk Reference (PDR) 47th Edition (1993)(言及することによって本明細書に組み込まれる)に示された治療量または当業者に既知の治療有効量で用いられる
【００６２】
本発明の化合物および他の抗癌剤は、推奨される最大臨床投与量またはそれより少ない投与量で投与され得る。本発明の組成物中の活性化合物の投与量は、投与経路、疾患の重症度および患者の応答に依存して、望ましい治療応答を得るよう変更し得る。組み合わせは、別個の組成物として、または両方の薬物を含む１個の投与形として投与され得る。組み合わせとして投与されるとき、治療薬は、同時にまたは異なる時間で摂取される別個の組成物として製剤化され得るか、または、治療薬は、１個の組成物として摂取される。
【００６３】
本発明は、下記の実施例の記載によって、より容易に理解されるであろう。該実施例は、説明の目的で提供され、本発明を限定することを意図しない。
【００６４】
下記の実施例の化合物に使用する代表的な側鎖は、一般的に、下記の手順に従って製造され得る。
【００６５】
実施例
下記の実施例に関して、好ましい態様の化合物を、本明細書に記載された方法または当技術分野で既知の他の方法を用いて合成した。
【００６６】
本化合物および／または中間体を、2695 Separation Moduleを備えたWaters Millenium chromatography system (Milford, MA)を用いる高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)によって特性決定した。分析カラムは、逆相 Phenomenex Luna C18, 5μ, 4.6×50mm, (Alltech (Deerfield, IL))であった。濃度勾配溶出を用い(流速２.５ml/分)、典型的には、５％  アセトニトリル／９５％  水から出発し、１０分かけて１００％  アセトニトリルへと増大させる。全ての溶媒は、０.１％  トリフルオロ酢酸 (ＴＦＡ)を含む。化合物は、２２０または２５４nmでの紫外線(ＵＶ)吸収によって検出された。ＨＰＬＣ溶媒は、Burdick and Jackson (Muskegan, MI)またはFisher Scientific (Pittsburgh, PA)から得た。
【００６７】
幾つかの例において、純度を、ガラスまたはプラスチック支持シリカゲルプレート、例えばBaker Flex Silica Gel 1B2 F flexible sheetを用いる薄層クロマトグラフィー(ＴＬＣ)によって測定した。ＴＬＣの結果は、紫外線下で可視化するか、または周知のヨウ素蒸気および他の種々の染色法を用いることによって、容易に検出された。
【００６８】
質量分析は、以下の３種のＬＣＭＳ装置のうちの１つで行った：
Waters System (Alliance HT HPLC および Micromass ZQ mass spectrometer；カラム＝Eclipse XDB C18, 2.1×50mm；濃度勾配＝０.０５％ＴＦＡを含む水中５〜９５％(または３５〜９５％、または６５〜９５％、または９５〜９５％)  アセトニトリル, ４分；流速＝０.８ml/分；分子量範囲＝２００〜１５００；コーン電圧＝２０Ｖ；カラム温度＝４０℃)
別の Waters System (ACQUITY UPLC system および ZQ 2000 system；カラム＝ACQUITY UPLC HSS-C18, 1.8μm, 2.1×50mm；濃度勾配＝０.０５％ＴＦＡを含む水中５〜９５％(または３５〜９５％、または６５〜９５％、または９５〜９５％)  アセトニトリル, １.３分；流速＝１.２ml/分；分子量範囲＝１５０〜８５０；コーン電圧＝２０Ｖ；カラム温度＝５０℃)
または、Hewlett Packard System (Series 1100 HPLC；カラム＝Eclipse XDB C18, 2.1×50mm；濃度勾配＝０.０５％ＴＦＡを含む水中５〜９５％  アセトニトリル, ４分；流速＝０.８ml/分；分子量範囲＝１５０〜８５０；コーン電圧＝５０Ｖ；カラム温度＝３０℃)。全ての質量を、プロトン化された親イオンの質量として報告した。
【００６９】
ＧＣＭＳ分析は、Hewlett Packard装置(Mass Selective Detector 5973を備えたHP6890 シリーズ ガスクロマトグラフ；注入体積＝１μｌ；初期カラム温度＝５０℃；最終カラム温度＝２５０℃；傾斜時間(ramp time)＝２０分；ガス流速＝１ml/分；カラム＝５％ フェニルメチルシロキサン, Model No. HP 190915 443, 容積＝30.0 m×25 m×0.25 m)で行った。
【００７０】
核磁気共鳴(ＮＭＲ)分析は、Varian 300または400MHz NMR (Palo Alto, CA)で行う。参照スペクトルは、ＴＭＳまたは溶媒の既知の化学シフトの何れかである。
【００７１】
幾つかの化合物の純度は、元素分析(Desert Analytics, Tucson, AZ)によって評価される。
【００７２】
融点は、Laboratory Devices Mel Temp apparatus (Holliston, MA)で測定される。
【００７３】
分取分離は、Flash 40 クロマトグラフィー・システムおよび KP Sil, 60A (Biotage, Charlottesville, VA)を用いて、または、シリカゲル(230〜400メッシュ)充填剤を用いたフラッシュ・カラム・クロマトグラフィーによって、または、Waters 2767 Sample Manager、C 18 逆相カラム, 30×50mm、流速７５ml/分を用いたＨＰＬＣによって行われる。Flash 40 Biotage systemおよびフラッシュ・カラム・クロマトグラフィーに用いられる典型的な溶媒は、ジクロロメタン、メタノール、酢酸エチル、ヘキサン、アセトン、水性アンモニア(または水酸化アンモニウム)、およびトリエチル アミンである。逆相ＨＰＬＣに用いられる典型的な溶媒は、０.１％トリフルオロ酢酸を含む、アセトニトリルと水の濃度変化である。
【００７４】
好ましい態様による有機化合物は、互変異性の現象を示し得ると理解されるべきである。本明細書内の化学構造は、可能性のある１個の互変異性体の形態のみを示しており、好ましい態様は、描かれた構造の全ての互変異性体の形態を含むと理解されるべきである。
【００７５】
本発明は、説明のために本明細書で示された態様に限定されず、上記の開示の範囲内の全ての形態を含むと理解される。
【００７６】
下記の実施例および本明細書全体において、下記の略語は、下記の意味を有する。定義していなければ、用語は、その一般的に受け入れられている意味を有する。
【表１】
0005412448.tif 000014
【実施例】
【００７７】
方法１
３−ニトロ−４−(ピペリジン−１−イル)ピリジンの合成
【化１３】
0005412448.tif 000015
エタノール中の濃度０.５Ｍの４−クロロ−３−ニトロピリジン(１.０当量)およびピペリジン(２.０当量)の溶液を４８時間撹拌し、その時点でエタノールを真空で除去した。残渣をＥｔＯＡｃ(３００ml)およびＮａ２ＣＯ３(飽和)(７５ml)の層間に分配し、さらにＨ２Ｏ(５０ml)で、そしてＮａＣｌ(飽和)(５０ml)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、揮発成分を真空で除去し、３−ニトロ−４−(ピペリジン−１−イル)ピリジンを得た(９５％)。
LCMS (m/z): 207.7 (MH+); LC Rt = 1.60分。
1H NMR (CDCl3): δ 8.80 (s, 1H), 8.31 (d, J=5.7, 1H), 6.84 (d, J=6.3, 1H), 3.18-3.21 (m, 4H), 1.64-1.78 (m, 6H).
【００７８】
(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化１４】
0005412448.tif 000016
それぞれ１当量の４−クロロ−３−ニトロピリジン、(Ｓ)−３−Ｎ−Ｂｏｃ−アミノピペリジンおよびジイソプロピルエチルアミンを用いて方法１を行い、(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た(９９％)。
LCMS (m/z): 323.1 (MH+); LC Rt = 2.13分。
【００７９】
ｔｒａｎｓ−(＋／−)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化１５】
0005412448.tif 000017
ｔｒａｎｓ−(＋／−)−ベンジル ４−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−３−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化１６】
0005412448.tif 000018
【００８０】
飽和水酸化アンモニウム水溶液およびエタノール(１：１, ０.０５Ｍ溶液)中の、(＋／−)−ベンジル ７−オキサ−３−アザビシクロ[４.１.０]ヘプタン−３−カルボキシレート(１.０当量)の溶液を、密封した鋼鉄製容器中で、７０℃で５時間加熱した。全ての揮発性物質をＮ２ガス流によって除去した後、酢酸エチルおよび水を後処理のために加えた。粗製の位置異性体混合物、すなわち３−アミノ−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ベンジルおよび４−アミノ−３−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ベンジルを、ジクロロメタン中のＢｏｃ２Ｏ(１.０当量)およびトリエチルアミン(１.０当量)(０.１Ｍ溶液)と反応させた。室温で２時間撹拌した後、反応混合物をジクロロメタンで抽出した。極性の(＋／−)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートおよび非極性の(＋／−)−ベンジル ４−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−３−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートを、フラッシュ・カラム・クロマトグラフィーによって得た(ヘキサン中２０％から４０％  ＥｔＯＡｃ, それぞれ２８％, ５１％)。
LCMS (m/z): 351.1 (MH+), Rt = 0.81分。
LCMS (m/z): 351.1 (MH+), Rt = 0.83分。
【００８１】
エナンチオマーとして純粋な(３Ｓ,４Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートおよび(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートをキラルＨＰＬＣによって分離した(分析においてそれぞれＲｔ＝６.８分および９.１分；ｎ−ヘプタン：エタノール＝７０：３０(v:v), Chiralpak AD-H prep 250×4.6mm, １mL/分。分取分離においてｎ−ヘプタン：エタノール＝８０：２０(v:v), Chiralpak AS 50×500mm, ９０mL/分)。
【００８２】
方法２
４−(ピペリジン−１−イル)ピリジン−３−アミンの合成
【化１７】
0005412448.tif 000019
エタノール中の濃度０.１Ｍの３−ニトロ−４−(ピペリジン−１−イル)ピリジン(１.０当量)の溶液に、１０％パラジウム／炭素(０.１当量)を加えた。得られた不均一な溶液を水素雰囲気下に置いて１５時間撹拌した。この時点で混合物をセライトのパッドで濾過し、メタノールで溶出した。揮発成分を真空で除去し、４−(ピペリジン−１−イル)ピリジン−３−アミンを油状物として得た(９３％)。
LCMS (m/z): 178.0 (MH+); LC Rt = 1.68分。
1H NMR (CDCl3): δ 8.01 (s, 1H), 7.96 (d, J=5.4, 1H), 6.78 (d, J=5.1, 1H), 3.64-3.74 (m, 2H), 2.86-2.94 (m, 4H), 1.66-1.78 (m, 4H), 1.58-1.64 (m, 2H).
【００８３】
(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化１８】
0005412448.tif 000020
方法２に従って、(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートを還元して、(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た(７８％)。
LCMS (m/z): 293.1 (MH+); LC Rt = 2.08分。
【００８４】
(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化１９】
0005412448.tif 000021
ジクロロメタン中の(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレート(１.０当量)の溶液(０.１Ｍ溶液)に、イミダゾール(１.１当量)、ＤＭＡＰ(０.１当量)およびＴＢＤＭＳＣｌ(１.１当量)を連続して加えた。反応混合物を室温で２０時間撹拌した。ジクロロメタンで後処理した後、粗製の物質をシリカのカラムクロマトグラフィーによって精製し(ヘキサン中１０％から２０％ＥｔＯＡｃ)、(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレートを得た(７６％)。
LCMS (m/z): 365.2 [(M-Boc)H+]; LC Rt = 6.05分。
【００８５】
(３Ｓ,４Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化２０】
0005412448.tif 000022
ジクロロメタン中の(３Ｓ,４Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレート(１.０当量)の溶液(０.１Ｍ溶液)に、イミダゾール(１.１当量)、ＤＭＡＰ(０.１当量)およびＴＢＤＭＳＣｌ(１.１当量)を連続して加えた。反応混合物を室温で２０時間撹拌した。ジクロロメタンで後処理した後、粗製の物質をシリカのカラムクロマトグラフィーによって精製し(ヘキサン中１０％から２０％ＥｔＯＡｃ)、(３Ｓ,４Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレートを得た。
LCMS (m/z): 365.2 [(M-Boc)H+]; LC Rt = 6.05分。
【００８６】
(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートおよび(３Ｓ,４Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化２１】
0005412448.tif 000023
ジクロロメタン中の(＋／−)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレート(１.０当量)の溶液(０.３Ｍ溶液)に、ＤＡＳＴを−７８℃で加えた。反応混合物をゆっくりと室温まで１５時間温めた。飽和重炭酸ナトリウム水溶液でクエンチした後、酢酸エチルおよび水を後処理のために加えた。(＋／−)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートを、シリカのカラムクロマトグラフィー(ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ, ４０％)によって得た。
LCMS (m/z): 253.1[(M-Boc)H+]; LC Rt = 4.08分。
【００８７】
エナンチオマーとして純粋な(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートおよび(３Ｓ,４Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートを、キラルＨＰＬＣによって分離した(分析においてそれぞれＲｔ＝９.４分および１２.６分；ｎ−ヘプタン：イソプロパノール＝９０：１０(v:v), Chiralpak AS 250×4.6mm, １ml/分。分取分離においてｎ−ヘプタン：イソプロパノール＝９０：１０(v:v), Chiralpak AS 50×500mm, ９０ml/分)。
【００８８】
(３Ｒ,４Ｒ)−４−フルオロピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化２２】
0005412448.tif 000024
(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−フルオロピペリジン−１−カルボキシレート(１.０当量)を用いて方法２を行い、粗製の(３Ｒ,４Ｒ)−４−フルオロピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(９３％)。
LCMS (m/z): 219.2 (MH+), LC Rt = 0.45分。
【００８９】
(３Ｓ,４Ｓ)−４−フルオロピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化２３】
0005412448.tif 000025
(３Ｓ,４Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−フルオロピペリジン−１−カルボキシレート(１.０当量)を用いて方法２を行い、粗製の(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ４−フルオロピペリジン−３−イルカルバメートを得た(９３％)。
LCMS (m/z): 219.2 (MH+), LC Rt = 0.45分。
【００９０】
(３Ｒ,４Ｒ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化２４】
0005412448.tif 000026
(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレート(１.０当量)を用いて方法２を行い、粗製の(３Ｒ,４Ｒ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(＞９９％)。
LCMS (m/z): 331.3 (MH+). 
【００９１】
(３Ｒ,４Ｒ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化２５】
0005412448.tif 000027
(３Ｓ,４Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレート(１.０当量)を用いて方法２を行い、粗製の(３Ｓ,４Ｓ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(＞９９％)。
LCMS (m/z): 331.3 (MH+). 
【００９２】
(３Ｒ,４Ｒ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化２６】
0005412448.tif 000028
それぞれ１当量の４−クロロ−３−ニトロピリジン、(３Ｒ,４Ｒ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよびトリエチルアミンを用いてＤＭＦ中で方法１を行い、(３Ｒ,４Ｒ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(９８％)。
LCMS (m/z): 453.3 (MH+); LC Rt = 4.01分。
【００９３】
(３Ｓ,４Ｓ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化２７】
0005412448.tif 000029
それぞれ１当量の４−クロロ−３−ニトロピリジン、(３Ｓ,４Ｓ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよびトリエチルアミンを用いてＤＭＦ中で方法１を行い、(３Ｓ,４Ｓ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(９８％)。
LCMS (m/z): 453.3 (MH+); LC Rt = 4.01分。
【００９４】
(３Ｒ,４Ｒ)−４−フルオロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化２８】
0005412448.tif 000030
それぞれ１当量の４−クロロ−３−ニトロピリジン、(３Ｒ,４Ｒ)−４−フルオロピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよびトリエチルアミンを用いてエタノール中で実施例１の方法１を行い、(３Ｒ,４Ｒ)−４−フルオロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(９１％)。
LCMS (m/z): 341.0 (MH+); LC Rt = 2.37分。
【００９５】
(３Ｓ,４Ｓ)−４−フルオロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化２９】
0005412448.tif 000031
それぞれ１当量の４−クロロ−３−ニトロピリジン、(３Ｓ,４Ｓ)−４−フルオロピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルおよびトリエチルアミンを用いてエタノール中で実施例１の方法１を行い、(３Ｓ,４Ｓ)−４−フルオロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(９１％)。
LCMS (m/z): 341.0 (MH+); LC Rt = 2.37分。
【００９６】
(３Ｒ,４Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化３０】
0005412448.tif 000032
方法２に従って、(３Ｒ,４Ｒ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルをエタノールおよび酢酸エチル(１：１, ０.１Ｍ溶液)中で還元して、(３Ｒ,４Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(＞９９％)。
LCMS (m/z): 423.2 (MH+); LC Rt = 3.78分。
【００９７】
(３Ｓ,４Ｓ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化３１】
0005412448.tif 000033
方法２に従って、(３Ｒ,４Ｒ)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルをエタノールおよび酢酸エチル(１：１, ０.１Ｍ溶液)中で還元して、(３Ｒ,４Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(＞９９％)。
LCMS (m/z): 423.2 (MH+); LC Rt = 3.78分。
【００９８】
(３Ｒ,４Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−４−フルオロピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化３２】
0005412448.tif 000034
方法２に従って、(３Ｒ,４Ｒ)−４−フルオロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルをエタノールおよび酢酸エチル(１：１, ０.１Ｍ溶液)中で還元して、(３Ｒ,４Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−４−フルオロピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(＞９９％)。
LCMS (m/z): 311.2 (MH+); LC Rt = 2.14分。
【００９９】
(３Ｓ,４Ｓ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−４−フルオロピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化３３】
0005412448.tif 000035
方法２に従って、(３Ｓ,４Ｓ)−４−フルオロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルをエタノールおよび酢酸エチル(１：１, ０.１Ｍ溶液)中で還元して、(３Ｒ,４Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−４−フルオロピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(＞９９％)。
LCMS (m/z): 311.2 (MH+); LC Rt = 2.14分。
【０１００】
(３Ｓ,５Ｒ)−５−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化３４】
0005412448.tif 000036
(３Ｓ,５Ｒ)−５−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを、Y, Zhouによって記載された特許(WO 2005 028467)の手順に従って製造した。
【０１０１】
(３Ｓ,５Ｒ)−５−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化３５】
0005412448.tif 000037
(３Ｓ,５Ｒ)−５−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを用いて方法１を行い、(３Ｓ,５Ｒ)−５−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た。
LC/MS (m/z): 453.2 (MH+).
【０１０２】
(３Ｓ,５Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化３６】
0005412448.tif 000038
(３Ｓ,５Ｒ)−５−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを用いて方法２を行い、(３Ｓ,５Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た。
LC/MS (m/z): 423.2 (MH+).
【０１０３】
ｔｒａｎｓ−(＋／−)−ベンジル ３−(ビス(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)アミノ)−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化３７】
0005412448.tif 000039
ＤＣＭおよびＣＨ３ＣＮ(１：１, ０.１４Ｍ)中の、ｔｒａｎｓ−(＋／−)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレート(１.０当量)の溶液に、ＢＯＣ２Ｏ(１.０当量)、トリエチルアミン(１.５当量)およびＤＭＡＰ(触媒量)を加えた。反応物を室温で１５時間撹拌し、その後、溶液を濃縮し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＥｔＯＡｃおよびヘキサン(１：６)で溶出して、望ましい生成物を白色の泡状物質として得た。
LCMS (m/z): 451.1 (MH+).
【０１０４】
ｔｒａｎｓ−(＋／−)−ベンジル ３−(ビス(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)アミノ)−４−メトキシピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化３８】
0005412448.tif 000040
ＴＨＦ中のＮａＨ(１.３当量)の溶液(０.１Ｍ)に、３−(ビス(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)アミノ)−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ベンジル(１.０当量)を加え、反応物を５０℃で１０分間加熱した。室温まで冷却した後、ＭｅＩ(１.５当量)を加え、溶液を１６時間撹拌した。反応物を水でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃで抽出し、有機物を塩水で洗浄してＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗製の物質をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＥｔＯＡｃおよびヘキサン(１：３)で溶出して、透明な油状物を収率７１％で得た。
LCMS (m/z): 365.0 (MH+).
【０１０５】
ｔｒａｎｓ−(＋／−)−３−(ビス(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)アミノ)−４−メトキシピペリジンの合成
【化３９】
0005412448.tif 000041
ｔｒａｎｓ−(＋／−)−ベンジル ３−(ビス(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)アミノ)−４−メトキシピペリジン−１−カルボキシレート(１.０当量)を用いて方法２を行い、粗製のｔｒａｎｓ−(＋／−)−３−(ビス(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)アミノ)−４−メトキシピペリジンをさらに精製することなく次の工程に用いた。
LCMS (m/z):331.2 (MH+)
【０１０６】
ｔｒａｎｓ−(＋／−)−Ｎ,Ｎ−ジ−ＢＯＣ−４−メトキシ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−アミンの合成
【化４０】
0005412448.tif 000042
ｔｒａｎｓ−(＋／−)−３−(ビス(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)アミノ)−４−メトキシピペリジン(１.０当量)、４−クロロ−３−ニトロピリジン(１.２当量)およびＤＩＥＡ(４.０当量)を用いて方法１を行い、カラムクロマトグラフィー後(ＥｔＯＡｃおよびヘキサン, ５０％)、２工程について収率５９％でｔｒａｎｓ−(＋／−)−Ｎ,Ｎ−ジ−ＢＯＣ−４−メトキシ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)−ピペリジン−３−アミンを得た。
LCMS (m/z): 453.2 (MH+), LC Rt = 3.24分。
【０１０７】
ｔｒａｎｓ−(＋／−)−Ｎ,Ｎ−ジ−ＢＯＣ−４−メトキシ−１−(３−アミノピリジン−４−イル)ピペリジン−３−アミンの合成
【化４１】
0005412448.tif 000043
ｔｒａｎｓ−(＋／−)−Ｎ,Ｎ−ジ−ＢＯＣ−４−メトキシ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)−ピペリジン−３−アミンを用いて方法２を行い、ｔｒａｎｓ−(＋／−)−Ｎ,Ｎ−ジ−ＢＯＣ−４−メトキシ−１−(３−アミノピリジン−４−イル)ピペリジン−３−アミンを透明な油状物として収率＞９５％で得た。
LCMS (m/z): 423.0 (MH+), LC Rt = 3.10分。
【０１０８】
(３Ｒ,５Ｒ)−５−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−オールの合成
【化４２】
0005412448.tif 000044
(３Ｒ,５Ｒ)−５−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−オールを、Zhou, Yによって記載された特許(WO 2005 028467)の手順に従って製造した。
【０１０９】
(３Ｒ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化４３】
0005412448.tif 000045
２０mlの１,４−ジオキサンおよび８mlの水中の、(３Ｒ,５Ｒ)−５−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−オール(１当量)の溶液に、クロロ蟻酸ベンジル(１.５当量)を加えた。混合物を室温で４時間撹拌した。粗製の混合物を１００mlのＥｔＯＡｃで希釈し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：３)、(３Ｒ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレート(７４％)を得た。
LC/MS (m/z): 366.2 (MH+).
【０１１０】
(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ベンゾイルオキシ)−５−(ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化４４】
0005412448.tif 000046
２３mlのＴＨＦ中のトリフェニルホスフィン(１.２当量)の０℃の溶液に、撹拌しながら、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル アゾジカルボキシレート(１.２当量)を加えた。混合物を０℃で１０分間撹拌した。次いで１１mlのＴＨＦ中の(３Ｒ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレート(１.０当量)の溶液を加えて、０℃で２０分間撹拌した。次いで安息香酸(１.２当量)を加えて、反応混合物を室温までゆっくりと温めた。１６時間後、反応混合物を真空で濃縮し、次いでＥｔＯＡｃで希釈し、水で、次いで塩水で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：８)、(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ベンゾイルオキシ)−５−(ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレートを得た(７７％)。
LC/MS (m/z): 470.2 (MH+),
HPLC Rt = 6.05分。
【０１１１】
(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ベンゾイルオキシ)−５−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化４５】
0005412448.tif 000047
３０mlのメタノール中の(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ベンゾイルオキシ)−５−(ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリルオキシ)−ピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、イソプロパノール中３.８Ｍ  ＨＣｌ(４当量)を加えた。反応混合物を室温で３時間放置し、その時点で、それを減圧下で濃縮した。得られた残渣を１２０mlのＥｔＯＡｃで希釈し、飽和水性重炭酸ナトリウムで、そして塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１)、(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ベンゾイルオキシ)−５−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートを得た(９５％)。
LC/MS (m/z): 355.9 (MH+).
HPLC: Rt: 3.62分。
【０１１２】
(３Ｓ,５Ｓ)−ベンジル ３−アジド−５−(ベンゾイルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化４６】
0005412448.tif 000048
２０mlのジクロロメタン中の、(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ベンゾイルオキシ)−５−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、トリエチルアミン(３当量)および塩化メタンスルホニル(１.５当量)を０℃で加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。粗製の混合物を１２０mlのＥｔＯＡｃで希釈し、飽和水性重炭酸ナトリウムで、そして塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣を２５mlのＮＭＰに溶解した。アジ化ナトリウム(２.２当量)を加え、得られた懸濁液を８０℃で一夜撹拌した。反応混合物を２００mlのＥｔＯＡｃおよび１００mlのヘキサンで希釈し、水で、そして塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：２)、(３Ｓ,５Ｓ)−ベンジル ３−アジド−５−(ベンゾイルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレートを得た(８８％)。
LC/MS (m/z): 381.0 (MH+).
HPLC: Rt: 4.41分。
【０１１３】
(３Ｓ,５Ｓ)−ベンジル ３−(ベンゾイルオキシ)−５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−ピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化４７】
0005412448.tif 000049
１４mlのピリジンおよび２mlの水酸化アンモニウムの混合物中の、(３Ｓ,５Ｓ)−ベンジル ３−アジド−５−(ベンゾイルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、１Ｍ  トリメチルホスフィン(３当量)を室温で加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、その時点で溶媒を減圧下で除去し、黄色の油状物を得た。油状物を再度１００mlのエタノールに溶解し、濃縮し、水酸化アンモニウムを完全に除去した。残渣を２４mlの１,４−ジオキサンに溶解し、２４mlの飽和水性ＮａＨＣＯ３を加えた。１２mlのＴＨＦ中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル ジカーボネート(４当量)を０℃で滴下した。混合物を室温で２時間撹拌した。粗製の混合物を２００mlのＥｔＯＡｃで希釈し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：２)、(３Ｓ,５Ｓ)−ベンジル ３−(ベンゾイルオキシ)−５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−ピペリジン−１−カルボキシレートを得た(９２％)。
LC/MS (m/z): 455.1 (MH+).
HPLC: Rt: 4.38分。
【０１１４】
(３Ｓ,５Ｓ)−５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)−ピペリジン−３−イル ベンゾエートの合成
【化４８】
0005412448.tif 000050
１５mlのメタノールおよび１５mlのＥｔＯＡｃ中の、(３Ｓ,５Ｓ)−ベンジル ３−(ベンゾイルオキシ)−５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−ピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、１０％  Ｐｄ／Ｃ(０.１当量)を加えた。得られた懸濁液をＨ２雰囲気で４時間撹拌した。粗製の固体を濾紙をひいたブフナー漏斗上のセライトのパッドで濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで真空で濃縮した。残渣を２０mlのイソプロパノールに溶解し、ＤＩＰＥＡ(１.８当量)および４−クロロ−３−ニトロピリジン(１.２当量)を加えた。反応混合物を７５℃で２時間撹拌し、その時点で反応混合物を室温まで冷却し、減圧下で濃縮した。残渣を１５０mlのＥｔＯＡｃで希釈し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１)、(３Ｓ,５Ｓ)−５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)−ピペリジン−３−イル ベンゾエートを得た(９０％)。
LC/MS (m/z): 443.2 (MH+).
HPLC: Rt: 2.89分。
【０１１５】
(３Ｓ,５Ｓ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)ピペリジン−３−イル ベンゾエートの合成
【化４９】
0005412448.tif 000051
方法２に従って、(３Ｓ,５Ｓ)−５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)−ピペリジン−３−イル ベンゾエートを還元して、(３Ｓ,５Ｓ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)ピペリジン−３−イル ベンゾエートを得た。
LC/MS (m/z): 413.1 (MH+).
HPLC: Rt: 2.75分。
【０１１６】
(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化５０】
0005412448.tif 000052
(３Ｓ,５Ｓ)−ベンジル ３−(ベンゾイルオキシ)−５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−ピペリジン−１−カルボキシレートの合成方法を、(３Ｒ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートから出発して行った。
LC/MS (m/z): 365.2 (MH+-Boc), Rt: 1.37。
【０１１７】
(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化５１】
0005412448.tif 000053
３０mlのＴＨＦ中の(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、５.２mlのＴＢＡＦ(１.２当量)を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１中５％  メタノール)、(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートを得た(１００％)。
LC/MS (m/z): 251.2 (MH+), Rt: 0.89。
HPLC: Rt: 3.26分。
【０１１８】
(３Ｓ,５Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化５２】
0005412448.tif 000054
５mlのジクロロメタン中の(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、ＤＡＳＴ(１.３５当量)を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を１２０mlの酢酸エチルで希釈し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：３)、(３Ｓ,５Ｓ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−フルオロピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(３０％)。
LC/MS (m/z): 253.1 (MH+-100), Rt = 0.96分。
HPLC: Rt: 3.79分。
【０１１９】
(３Ｓ,５Ｓ)−５−フルオロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化５３】
0005412448.tif 000055
５mlのメタノールおよび５mlのＥｔＯＡｃ中の(３Ｓ,５Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−フルオロピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、１０％  Ｐｄ／Ｃ(０.１当量)を加えた。得られた懸濁液をＨ２雰囲気で４時間撹拌した。粗製の固体を濾紙をひいたブフナー漏斗上のセライトのパッドで濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで真空で濃縮した。残渣を５mlのイソプロパノールに溶解し、ＤＩＰＥＡ(１.８当量)および４−クロロ−３−ニトロピリジン(１.５当量)を加えた。反応混合物を６５℃で３時間撹拌し、その時点で反応混合物を室温まで冷却し、減圧下で濃縮した。残渣を１２０mlのＥｔＯＡｃで希釈し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１)、(３Ｓ,５Ｓ)−５−フルオロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(７８％)。
LC/MS (m/z): 341.1 (MH+), Rt = 0.57分。
HPLC: Rt: 2.01分。
【０１２０】
(３Ｓ,５Ｓ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−フルオロピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化５４】
0005412448.tif 000056
方法２に従って、(３Ｓ,５Ｓ)−５−フルオロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを還元して、(３Ｓ,５Ｓ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−フルオロピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た。
LC/MS (m/z): 311.1 (MH+), Rt = 0.54分。
HPLC: Rt: 1.76分。
【０１２１】
(Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−オキソピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化５５】
0005412448.tif 000057
１０mlのジクロロメタン中の(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、デスマーチン・ペルヨージナン(１.２当量)を室温で加えた。反応混合物をその温度で一夜撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：２)、(Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−オキソピペリジン−１−カルボキシレートを得た(８１％)。
LC/MS (m/z): 249.1 (MH+-100), Rt: 0.83分。
HPLC: Rt: 3.26分。
【０１２２】
５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−３,３−ジフルオロピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化５６】
0005412448.tif 000058
２５mlのジクロロメタン中の(Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−オキソピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、ＤＡＳＴ(２０当量)を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応物を水性重炭酸ナトリウムによってクエンチした。得られた混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：２)、５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−３,３−ジフルオロピペリジン−１−カルボキシレートを得た(５２％)。
LC/MS (m/z): 271.1 (-Boc), Rt: 0.99分。
【０１２３】
(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル ５,５−ジフルオロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化５７】
0005412448.tif 000059
５mlのメタノールおよび５mlのＥｔＯＡｃ中の５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−３,３−ジフルオロピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、１０％  Ｐｄ／Ｃ(０.１当量)を加えた。得られた懸濁液をＨ２雰囲気で一夜撹拌した。粗製の固体を、濾紙をひいたブフナー漏斗上のセライトのパッドで濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで真空で濃縮した。残渣を５mlのイソプロパノールに溶解し、ＤＩＰＥＡ(２.０当量)および４−クロロ−３−ニトロピリジン(１.５当量)を加えた。反応混合物を７０℃で３時間撹拌し、その時点で反応混合物を室温まで冷却し、減圧下で濃縮した。残渣を１２０mlのＥｔＯＡｃで希釈し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１中５％  メタノール)、(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル ５,５−ジフルオロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た(１９％)。
LC/MS (m/z): 359.0 (MH+), Rt: 0.65分。
【０１２４】
(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)−５,５−ジフルオロピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化５８】
0005412448.tif 000060
方法２に従って、(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル ５,５−ジフルオロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートを還元し、(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)−５,５−ジフルオロピペリジン−３−イルカルバメートを得た。
LC/MS (m/z): 329.0 (MH+), Rt: 0.62分。
【０１２５】
(Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−エチリデンピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化５９】
0005412448.tif 000061
１４mlのＴＨＦ中のエチルトリフェニルホスホニウム ブロミド(１１当量)の懸濁液に、カリウム ｔｅｒｔ−ブトキシド(１０当量)を室温で加えた。反応混合物をその温度で２０分間撹拌した。次いで反応物を０℃に冷却し、７mlのＴＨＦ中の(Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−オキソピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)を反応混合物に加えた。反応物を室温まで温めた。４０分間撹拌した後、反応混合物を水性重炭酸ナトリウムに注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝２：１)、(Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−エチリデンピペリジン−１−カルボキシレートを得た。
LC/MS (m/z): 261.2 (MH+-100), Rt: 1.12分。
HPLC: Rt: 4.31分。
【０１２６】
(３Ｓ,５Ｒ)−５−エチル−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化６０】
0005412448.tif 000062
５.５mlのエタノールおよび５.５mlのＥｔＯＡｃ中の(Ｓ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−エチリデンピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、１０％  Ｐｄ／Ｃ(０.１当量)を加えた。得られた懸濁液をＨ２雰囲気で４５分間撹拌した。粗製の固体を、濾紙をひいたブフナー漏斗上のセライトのパッドで濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで真空で濃縮した。残渣を１.４mlのイソプロパノールに溶解し、ＤＩＰＥＡ(２.５当量)および４−クロロ−３−ニトロピリジン(１.５当量)を加えた。反応混合物を８０℃で一夜撹拌し、その時点で反応混合物を室温まで冷却し、減圧下で濃縮した。残渣を１２０mlのＥｔＯＡｃで希釈し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１)、(３Ｓ,５Ｒ)−５−エチル−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(９１％)。
LC/MS (m/z): 351.2 (MH+), Rt: 0.75分。
【０１２７】
(３Ｓ,５Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−エチルピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化６１】
0005412448.tif 000063
方法２に従って、(３Ｓ,５Ｒ)−５−エチル−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを還元し、(３Ｓ,５Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−エチルピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た。
LC/MS (m/z): 321.2 (MH+), Rt: 0.73分。
HPLC: Rt: 2.65分。
【０１２８】
(３Ｒ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−メトキシピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化６２】
0005412448.tif 000064
３０mlのＴＨＦ中の(３Ｒ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、水素化ナトリウム(１.５当量)を、続いてヨウ化メチル(５当量)を０℃で加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。粗製の混合物を１２０mlのＥｔＯＡｃで希釈し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：５)、(３Ｒ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−メトキシピペリジン−１−カルボキシレートを得た(９３％)。
LC/MS (m/z): 380.2 (MH+).
【０１２９】
(３Ｒ,５Ｒ)−ベンジル ３−ヒドロキシ−５−メトキシピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化６３】
0005412448.tif 000065
３０mlのメタノール中の(３Ｒ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−メトキシピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、イソプロパノール中３.８Ｍ  ＨＣｌ(４当量)を加えた。反応混合物を室温で３時間放置し、その時点で、それを減圧下で濃縮した。得られた残渣を１００mlのＥｔＯＡｃで希釈し、飽和水性重炭酸ナトリウムで、そして塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝２：１)、(３Ｒ,５Ｒ)−ベンジル ３−ヒドロキシ−５−メトキシピペリジン−１−カルボキシレートを得た(９２％)。
LC/MS (m/z): 266.2 (MH+).
【０１３０】
(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−アジド−５−メトキシピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化６４】
0005412448.tif 000066
４０mlのジクロロメタン中の(３Ｒ,５Ｒ)−ベンジル ３−ヒドロキシ−５−メトキシピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、トリエチルアミン(３当量)および塩化メタンスルホニル(１.５当量)を０℃で加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。粗製の混合物を１５０mlのＥｔＯＡｃで希釈し、飽和水性重炭酸ナトリウムで、そして塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１)、中間体を得た。これを１５mlのＤＭＦに溶解した。アジ化ナトリウム(３.３当量)を加え、得られた懸濁液を８０℃で一夜撹拌した。反応混合物を１５０mlのＥｔＯＡｃで希釈し、水で、そして塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：２)、(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−アジド−５−メトキシピペリジン−１−カルボキシレートを得た(９５％)。
LC/MS (m/z): 263.2 (MH+-28).
【０１３１】
(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−メトキシピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化６５】
0005412448.tif 000067
１４mlのピリジンおよび２mlの水酸化アンモニウムの混合物中の(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−アジド−５−メトキシピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、１Ｍ  トリメチルホスフィン(３当量)を室温で加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌し、その時点で溶媒を減圧下で除去し、黄色の油状物を得た。再度油状物を１００mlのエタノールに溶解し、濃縮して水酸化アンモニウムを完全に除去した。残渣を１６mlの１,４−ジオキサンに溶解し、１６mlの飽和水性ＮａＨＣＯ３を加えた。８mlのＴＨＦ中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル ジカーボネート(４当量)を０℃で滴下した。混合物を室温で２時間撹拌した。粗製の混合物を３００mlのＥｔＯＡｃで希釈し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１)、(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−メトキシピペリジン−１−カルボキシレートを得た(８６％)。
LC/MS (m/z): 365.0 (MH+).
【０１３２】
(３Ｓ,５Ｒ)−５−メトキシ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化６６】
0005412448.tif 000068
２５mlのメタノール中の(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−メトキシピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、１０％  Ｐｄ／Ｃ(０.１当量)を加えた。得られた懸濁液をＨ２雰囲気で２時間撹拌した。粗製の固体を濾紙をひいたブフナー漏斗上のセライトのパッドで濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで真空で濃縮した。残渣を２５mlのイソプロパノールに溶解し、ＤＩＥＡ(１.８当量)および４−クロロ−３−ニトロピリジン(１.２当量)を加えた。反応混合物を８０℃で４時間撹拌し、その時点で反応混合物を室温まで冷却し、減圧下で濃縮した。残渣を１５０mlのＥｔＯＡｃで希釈し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１中５％  メタノール)、(３Ｓ,５Ｒ)−５−メトキシ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た(８８％)。
LC/MS (m/z): 353.0 (MH+).
HPLC: Rt: 2.15分。
【０１３３】
(３Ｓ,５Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−メトキシピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化６７】
0005412448.tif 000069
方法２に従って、(３Ｓ,５Ｒ)−５−メトキシ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを還元し、(３Ｓ,５Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−メトキシピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た。
LC/MS (m/z): 323.1 (MH+).
【０１３４】
(３Ｓ,５Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−エトキシピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化６８】
0005412448.tif 000070
この化合物を製造する方法は、メトキシ化合物と同一である。
LC/MS (m/z): 337.1 (MH+), Rt: 0.63分。
HPLC: Rt: 2.47分。
【０１３５】
(３Ｒ,５Ｒ)−３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−フルオロ−１−(４−メトキシベンジル)ピペリジンの合成
【化６９】
0005412448.tif 000071
(３Ｒ,５Ｒ)−３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−フルオロ−１−(４−メトキシベンジル)ピペリジンを、Cossy, J. Synlett, 2007, 263に記載された文献の手順に従って製造した。
【０１３６】
(３Ｒ,５Ｒ)−３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−フルオロピペリジンの合成
【化７０】
0005412448.tif 000072
５mlのメタノール中の(３Ｒ,５Ｒ)−３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−フルオロ−１−(４−メトキシベンジル)ピペリジン(１当量)の溶液に、１０％  Ｐｄ／Ｃ(０.２当量)を加えた。得られた懸濁液をＨ２雰囲気で一夜撹拌した。粗製の固体を濾紙をひいたブフナー漏斗上のセライトのパッドで濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで真空で濃縮し、(３Ｒ,５Ｒ)−３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−フルオロピペリジンを得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
LC/MS (m/z): 234.1 (MH+).
【０１３７】
(３Ｒ,５Ｒ)−ベンジル ３−フルオロ−５−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化７１】
0005412448.tif 000073
３０mlのメタノール中の(３Ｒ,５Ｒ)−３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−フルオロピペリジン(１当量)の溶液に、イソプロパノール中３.８Ｍ  ＨＣｌ(４当量)を加えた。反応混合物を室温で３時間放置し、その時点で、それを減圧下で濃縮した。得られた残渣を１２０mlのＥｔＯＡｃで希釈し、飽和水性重炭酸ナトリウムで、そして塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝２：１)、(３Ｒ,５Ｒ)−ベンジル ３−フルオロ−５−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートを得た(９４％)。
LC/MS (m/z): 254.2 (MH+).
【０１３８】
(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−アジド−５−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化７２】
0005412448.tif 000074
１４mlのジクロロメタン中の(３Ｒ,５Ｒ)−ベンジル ３−フルオロ−５−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、トリエチルアミン(３当量)および塩化メタンスルホニル(１.５当量)を０℃で加えた。反応混合物を室温で１.５時間撹拌した。粗製の混合物を１２０mlのジエチルエーテルで希釈し、飽和水性重炭酸ナトリウムで、そして塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣を１６mlのＮＭＰに溶解した。アジ化ナトリウム(３.０当量)を加え、得られた懸濁液を８０℃で一夜撹拌した。反応混合物を２００mlのＥｔＯＡｃおよび１００mlのヘキサンで希釈し、水で、そして塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：３)、(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−アジド−５−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートを得た(９０％)。
LC/MS (m/z): 251.1 (MH+-28).
【０１３９】
(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化７３】
0005412448.tif 000075
１１mlのピリジンおよび１.５mlの水酸化アンモニウムの混合物中の、(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−アジド−５−フルオロピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、１Ｍ  トリメチルホスフィン(３当量)を室温で加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、その時点で溶媒を減圧下で除去し、黄色の油状物を得た。再度油状物を１００mlのエタノールに溶解し、濃縮し、水酸化アンモニウムを完全に除去した。残渣を１２mlの１,４−ジオキサンに溶解し、１２mlの飽和水性ＮａＨＣＯ３を加えた。６mlのＴＨＦ中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル ジカーボネート(４当量)を０℃で滴下した。混合物を室温で１時間撹拌した。粗製の混合物を１５０mlのＥｔＯＡｃで希釈し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１)、(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−フルオロピペリジン−１−カルボキシレートを得た(９５％)。
LC/MS (m/z): 253.1 (MH+-100).
【０１４０】
(３Ｓ,５Ｒ)−５−フルオロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化７４】
0005412448.tif 000076
２８mlのメタノール中の(３Ｓ,５Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−フルオロピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)の溶液に、１０％  Ｐｄ／Ｃ(０.１当量)を加えた。得られた懸濁液をＨ２雰囲気で１時間撹拌した。粗製の固体を濾紙をひいたブフナー漏斗上のセライトのパッドで濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで真空で濃縮した。残渣を３３mlのイソプロパノールに溶解し、ＤＩＰＥＡ(２.５当量)および４−クロロ−３−ニトロピリジン(１.５当量)を加えた。反応混合物を８０℃で２時間撹拌し、その時点で反応混合物を室温まで冷却し、減圧下で濃縮した。残渣を１５０mlのＥｔＯＡｃで希釈し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ中５％メタノール：ヘキサン＝１：１)、(３Ｓ,５Ｒ)−５−フルオロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(９０％)。
LC/MS (m/z): 341.1 (MH+).
HPLC: Rt: 2.12分。
【０１４１】
(３Ｓ,５Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−フルオロピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化７５】
0005412448.tif 000077
方法２に従って、(３Ｓ,５Ｒ)−５−フルオロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを還元し、(３Ｓ,５Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−フルオロピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た。
LC/MS (m/z): 311.1 (MH+).
【０１４２】
５−メチルピリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化７６】
0005412448.tif 000078
ＴＨＦ(８０ml)中の５−メチルピリジン−３−アミン(５ｇ, ４６mmol)の溶液に、室温で、ＴＨＦ中１Ｍ  ナトリウム ビス(トリメチルシリルアミド)(１０１ml, １０１mmol)を加え、１５分間撹拌し、続いてＴＨＦ(２０ml)中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル ジカーボネート(１１ｇ, ４９mmol)を加えた。反応物を室温で一夜撹拌し、濃縮した。濃縮物を０.２Ｍ  ＨＣｌ(６０ml)およびＥｔＯＡｃで処理し、有機層を抽出し、ＮａＨＣＯ３(飽和)で、そして塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。濃縮物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを用いて精製し(４０％  ＥｔＯＡｃ：ヘキサン)、生成物として黄色の固体である５−メチルピリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(８.５ｇ, 収率８８％)。
LCMS (m/z): 209.1 (MH+); LC Rt = 1.94分。
1H NMR(CDCl3) δ 8.20(d, 1H), 8.12(s, 1H), 7.86(s, 1H), 6.53(s, 1H), 2.33(s, 3H), 1.53(s, 9H).  
【０１４３】
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−メチルピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化７７】
0005412448.tif 000079
氷酢酸(５０ml)中の５−メチルピリジン−３−イルカルバメート(３ｇ, １４mmol)の溶液に５％ロジウム／活性炭(０.５ｇ)および酸化白金(IV)(０.５ｇ)を水素化用鋼鉄製容器中で加えた。混合物を密封し、２００psiで、７０℃で４８時間水素化した。混合物をセライトのパッドで濾過し、濃縮し、ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−メチルピペリジン−３−イルカルバメートを得た。
LCMS (m/z): 215.1 (MH+).
【０１４４】
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−メチル−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化７８】
0005412448.tif 000080
粗製のｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−メチルピペリジン−３−イルカルバメートを用いて方法１を行い、ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−メチル−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た(収率６６％)。
LCMS (m/z): 337.1 (MH+); LC Rt = 2.50分。
1H NMR(CDCl3) δ 8.84(s, 1H), 8.36(d, 1H), 7.04(m, 1H), 4.44(m, 1H), 3.90(m, 1H), 3.71(m, 1H), 3.09(d, 1H), 2.66(q, 2H), 2.10(d, 1H), 1.84(m, 1H), 1.56(s, 9H), 0.93(d, 3H).
【０１４５】
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−メチルピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化７９】
0005412448.tif 000081
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−メチル−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートを用いて方法２を行い、ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−メチル−１−(３−アミノピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た(収率９８％)。
LCMS (m/z): 307.1 (MH+); LC Rt = 2.44分。
1H NMR(CDCl3) δ 8.01(s, 1H), 7.95(d, 1H), 6.76(d, 1H), 4.40(m, 1H), 3.70(m, 3H), 3.58(dq, 1H), 3.21(dq, 1H), 2.15(m, 3H), 1.90(m, 1H), 1.58(s, 9H), 0.97(d, 3H).
【０１４６】
５−(トリフルオロメチル)ピリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化８０】
0005412448.tif 000082
ＴＨＦ(８０ml)中の５−トリフルオロメチルピリジン−３−アミン(１当量)の溶液に、室温で、ＴＨＦ中１Ｍ  ナトリウム ビス(トリメチルシリルアミド)(２当量)を加えて、１５分間撹拌し、続いてＴＨＦ中のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート(１当量)を加えた。反応物を室温で一夜撹拌し、濃縮した。濃縮物を０.２Ｍ  水性ＨＣｌおよびＥｔＯＡｃで処理して、有機層を抽出し、ＮａＨＣＯ３(飽和)で、そして塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。濃縮物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを用いて精製し(４０％  ＥｔＯＡｃ：ヘキサン)、生成物として黄色の固体である５−(トリフルオロメチル)ピリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(収率３１％)。
LCMS (m/z): 263.0 (MH+); LC Rt = 3.84分。
1H NMR(CDCl3) δ 8.56(m, 2H), 8.34(s, 1H), 6.71 (s, 1H), 1.55 (s, 9H).
【０１４７】
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(トリフルオロメチル)ピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化８１】
0005412448.tif 000083
氷酢酸(５０ml)中の５−(トリフルオロメチル)ピリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル(３ｇ, １４mmol)の溶液に、５％ロジウム／活性炭(０.５ｇ)および酸化白金(IV)(０.５ｇ)を、水素化用鋼鉄製容器中で加えた。混合物を密封し、２００psiで、そして７０℃で４８時間水素化した。混合物をセライトで濾過し、濃縮し、ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(トリフルオロメチル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た。
LCMS (m/z): 269.1 (MH+).
【０１４８】
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−ニトロピリジン−４−イル)−５−(トリフルオロメチル)ピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化８２】
0005412448.tif 000084
粗製のｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(トリフルオロメチル)ピペリジン−３−イルカルバメートを用いて方法１を行い、ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−ニトロピリジン−４−イル)−５−(トリフルオロメチル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た(２工程における収率４２％)。
LCMS (m/z): 391.1 (MH+); LC Rt = 2.92分。
1H NMR(CDCl3) δ  8.93(s, 1H), 8.47(d, 1H), 7.01(d, 1H), 4.50(m, 1H), 3.80(m, 2H), 3.45(m, 1H), 3.00(t, 1H), 2.66(m, 1H), 2.63(m,1H), 2.38(d, 1H), 1.56(s, 9H).
【０１４９】
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−(トリフルオロメチル)ピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化８３】
0005412448.tif 000085
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−ニトロピリジン−４−イル)−５−(トリフルオロメチル)ピペリジン−３−イルカルバメートを用いて方法２を行い、ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−(トリフルオロメチル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た。
LCMS (m/z): 361.0 (MH+); LC Rt = 2.72分。
1H NMR(CDCl3) δ  8.05(s, 1H), 7.98(d, 1H), 6.79 (d, 1H), 4.46(m, 1H), 3.83(m, 1H), 3.72(s, 2H), 3.62(m, 1H), 3.49(m, 1H),  2.59(m, 2H), 2.36(m, 1H), 2.23(t,1H), 1.58(s, 9H).
【０１５０】
ｃｉｓ−(＋／−)−１−ベンジル ３−メチル ５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)ピペリジン−１,３−ジカルボキシレートの合成
【化８４】
0005412448.tif 000086
ジクロロメタン中、濃度０.２５Ｍのｃｉｓ−(＋／−)−１−(ベンジルオキシカルボニル)−５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)ピペリジン−３−カルボン酸(１.０当量)、メタノール(２０当量)およびＥＤＣ(１.３当量)の溶液に、０℃で、ジメチルアミノピリジン(０.１当量)を加えた。４８時間撹拌した後、反応物を室温まで温め、揮発成分を真空で除去した。酢酸エチルを加えた後、Ｈ２Ｏ(３×)で、１Ｎ  ＨＣｌで、ＮａＨＣＯ３(飽和)で、そして塩水で洗浄し、溶液をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィーによって精製し(２５％  酢酸エチル／ヘキサン)、ｃｉｓ−(＋／−)−１−ベンジル ３−メチル ５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)ピペリジン−１,３−ジカルボキシレートを得た。
LCMS (m/z): 293.1 (MH-Boc+); LC Rt = 4.09分。
【０１５１】
ｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−(ヒドロキシメチル)ピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化８５】
0005412448.tif 000087
ＴＨＦ中、濃度０.０８Ｍのｃｉｓ−(＋／−)−１−ベンジル ３−メチル ５−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)ピペリジン−１,３−ジカルボキシレート(１.０当量)の溶液を、０℃で冷却し、次いでＬｉＣｌ(２.３当量)および水素化ホウ素ナトリウム(２.３当量)を加えた。反応物を室温まで温めながら２０時間撹拌した後、ｐＨを１Ｍ  クエン酸でｐＨ  ４〜５に調節した。真空で揮発成分を除去した後、生成物をジクロロメタンに抽出し、Ｈ２Ｏで、そして塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。濾過して揮発成分を真空で除去した後、ｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−(ヒドロキシメチル)ピペリジン−１−カルボキシレートを白色の泡状固体として得た。
LCMS (m/z): 265.0 (MH-Boc+ ); LC Rt = 3.37分。
【０１５２】
ｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−((ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)ピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化８６】
0005412448.tif 000088
ジクロロメタン中、濃度０.１Ｍのｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−(ヒドロキシメチル)ピペリジン−１−カルボキシレート(１.０当量)、イミダゾール(１.１当量)、塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル(１.１当量)およびジメチルアミノピリジン(０.１当量)の溶液を、１８時間撹拌し、その時点で揮発成分を真空で除去した。粗製の物質をカラムクロマトグラフィーによって直接精製し(２０％  酢酸エチル／ヘキサン)、ｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−((ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)ピペリジン−１−カルボキシレートを得た。
LCMS (m/z): 379.0 (MH-Boc+ ); LC Rt = 5.95分。
【０１５３】
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−((ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)ピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化８７】
0005412448.tif 000089
方法２を行い、ｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−((ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)ピペリジン−１−カルボキシレートを脱保護して、ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−((ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た。
LCMS (m/z): 344.1 (MH+).
【０１５４】
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−((ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化８８】
0005412448.tif 000090
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−((ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)ピペリジン−３−イルカルバメートおよび４−クロロ−３−ニトロピリジンを用いて方法１を行い、ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−((ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た。
LCMS (m/z): 467.0 (MH+); LC Rt = 4.02分。
【０１５５】
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−((ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)ピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化８９】
0005412448.tif 000091
方法２に従って、ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−((ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートを還元して、ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−((ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た。
LCMS (m/z): 437.2  (MH+); LC Rt = 3.86分。
【０１５６】
ｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−(フルオロメチル)ピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化９０】
0005412448.tif 000092
テトラヒドロフラン中、濃度０.１６Ｍのｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−(ヒドロキシメチル)ピペリジン−１−カルボキシレート(１当量)、フッ化 ペルフルオロブタンスルホニル(２当量)、トリエチルアミン−ＨＦ(４当量)およびトリエチルアミン(６当量)の溶液を、３６時間撹拌した。酢酸エチルで希釈(５０×)した後、該溶液を１Ｎ  ＨＣｌで、ＮａＨＣＯ３(飽和)で、そして塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィーによって精製し(２５〜４０％  酢酸エチル／ヘキサン)、ｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−(フルオロメチル)ピペリジン−１−カルボキシレートを得た(収率４５％)。
LCMS (m/z): 267.1  (MH+); LC Rt = 4.23分。
【０１５７】
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(フルオロメチル)ピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化９１】
0005412448.tif 000093
方法２を行い、ｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−５−(フルオロメチル)ピペリジン−１−カルボキシレートを脱保護して、ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(フルオロメチル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た。
LCMS (m/z): 233.1 (MH+).
【０１５８】
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(フルオロメチル)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化９２】
0005412448.tif 000094
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(フルオロメチル)ピペリジン−３−イルカルバメートおよび４−クロロ−３−ニトロピリジンを用いて実施例１の方法１を行い、ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(フルオロメチル)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た。
LCMS (m/z): 355.1 (MH+); LC Rt = 2.41分。
【０１５９】
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−(フルオロメチル)ピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化９３】
0005412448.tif 000095
方法２に従って、ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(フルオロメチル)−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートを還元して、ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−(フルオロメチル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た。
LCMS (m/z): 325.1  (MH+); LC Rt = 2.27分。
【０１６０】
(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−(メチルスルホニルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレートの合成
【化９４】
0005412448.tif 000096
ジクロロメタン中の(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボキシレートの溶液(０.１３Ｍ)に、トリエチルアミン(１.５当量)を加え、続いて塩化メタンスルホニル(１.３当量)を加えた。反応物を室温で１５時間撹拌した。次いで溶液を飽和ＮａＨＣＯ３でクエンチし、ジクロロメタンで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、粗製の(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−(メチルスルホニルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレートを収率＞９５％で得た。
LCMS (m/z): 428.9/328.9 (MH+), Rt = 3.81分。
【０１６１】
(３ａＲ,７ａＳ)−ベンジル ２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−５(６Ｈ)−カルボキシレートの合成
【化９５】
0005412448.tif 000097
ピリジン中の(３Ｒ,４Ｒ)−ベンジル ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−(メチルスルホニルオキシ)ピペリジン−１−カルボキシレートの溶液(０.１６Ｍ)を、マイクロ波で１２０℃で１０分間加熱した。次いで溶液をほとんど乾固するまで濃縮し、形成された固体を濾過して望ましい生成物を得た。さらに濾液をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチル(１００％)で溶出して、(３ａＲ,７ａＳ)−ベンジル ２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−５(６Ｈ)−カルボキシレートを、合わせた収率７５％で得た。
LCMS (m/z): 277.1 (MH+), Rt = 2.327分。
【０１６２】
(３ａＲ,７ａＳ)−５−ベンジル ３−ｔｅｒｔ−ブチル ２−オキソテトラヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３,５(２Ｈ,６Ｈ)−ジカルボキシレートの合成
【化９６】
0005412448.tif 000098
ジクロロメタン中の(３ａＲ,７ａＳ)−ベンジル ２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−５(６Ｈ)−カルボキシレート(１.０当量)の溶液(０.０９Ｍ)に、ＢＯＣ２Ｏ(１.１当量)、トリエチルアミン(１.１当量)および触媒量のＤＭＡＰを加えた。反応物を室温で１時間撹拌し、その時点で、それを真空下で濃縮し、シリカゲルのプラグで濾過して、酢酸エチルで溶出した。生成物を真空下で乾燥し、(３ａＲ,７ａＳ)−５−ベンジル ３−ｔｅｒｔ−ブチル ２−オキソテトラヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３,５(２Ｈ,６Ｈ)−ジカルボキシレートを白色の固体として収率７５％で得た。
LCMS (m/z): 277.2 (MH+), Rt = 3.43分。
【０１６３】
(３ａＲ,７ａＳ)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレートの合成
【化９７】
0005412448.tif 000099
ＥｔＯＨおよびＥｔＯＡｃの混合物(１：１, ０.０７Ｍ)中の、(３ａＲ,７ａＳ)−５−ベンジル ３−ｔｅｒｔ−ブチル ２−オキソテトラヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３,５(２Ｈ,６Ｈ)−ジカルボキシレートの溶液に、Ｐｄ／Ｃ(１０重量％)を加え、反応物を水素バルーン下で１５時間撹拌した。次いで溶液をセライトのパッドで濾過し、濾液を乾固するまで濃縮し、透明な油状物を得た。ｉ−ＰｒＯＨ中の(３ａＲ,７ａＳ)−ｔｅｒｔ−ブチル ２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレートの溶液(０.１２Ｍ)に、４−クロロ−３−ニトロピリジン(１.２当量)およびＤＩＥＡ(４.０当量)を加えた。反応物を７５℃で２時間加熱して、次いで室温まで冷却して、真空下で濃縮した。粗製の混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水を加え、有機層を抽出し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗製の物質をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＥｔＯＡｃ(１００％)で溶出して、(３ａＲ,７ａＳ)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレートを黄色の泡状物質として収率８９％で得た。
LCMS (m/z): 365.1 (MH+), Rt = 1.79分。
【０１６４】
(３ａＲ,７ａＳ)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(３−アミノピリジン−４−イル)−２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレートの合成
【化９８】
0005412448.tif 000100
ＥｔＯＨおよびＥｔＯＡｃ(１：１, ０.１５Ｍ)中の、(３ａＲ,７ａＳ)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレートの溶液に、Ｐｄ／Ｃ(１０重量％)を加え、反応物を水素バルーン下で１５時間撹拌した。溶液をセライトのパッドで濾過し、濾液を濃縮して、(３ａＲ,７ａＳ)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(３−アミノピリジン−４−イル)−２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレートを透明な油状物として収率＞９５％で得た。
LCMS (m/z): 335.0 (MH+), Rt = 1.68分。
【０１６５】
３−アジド−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ベンジルおよび４−アジド−３−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ベンジルの合成
【化９９】
0005412448.tif 000101
ＭｅＯＨおよび水中の７−オキサ−３−アザビシクロ[４.１.０]ヘプタン−３−カルボン酸ベンジル(１.０当量)の溶液(０.１７Ｍ)に、アジ化ナトリウム(２.０当量)および塩化アンモニウム(１.０当量)を加えた。反応物を油浴中で６５℃で７時間撹拌し、次いで濃縮してメタノールを除去した。酢酸エチルを加え、有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空下で濃縮し、３−アジド−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ベンジルおよび４−アジド−３−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ベンジルを透明な油状物として収率＞９５％で得た。
LCMS (m/z): 276.9 (MH+), Rt =  2.98分。
【０１６６】
３,７−ジアザビシクロ[４.１.０]ヘプタン−３−カルボン酸ベンジルの合成
【化１００】
0005412448.tif 000102
ジオキサン中の３−アジド−４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ベンジルおよび４−アジド−３−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ベンジル(１.０当量)の溶液(０.１４Ｍ)に、ＰＰｈ３(２.０当量)を加えて、反応物を１時間還流した。次いで溶液を真空下で濃縮し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＤＣＭ、１０％ＭｅＯＨおよび１％  Ｅｔ３Ｎで溶出し、３,７−ジアザビシクロ[４.１.０]ヘプタン−３−カルボン酸ベンジルを透明な油状物として収率２５％で得た。
LCMS (m/z): 233.0 (MH+), Rt = 1.94分。
【０１６７】
７−(ジエトキシホスホリル)−３,７−ジアザビシクロ[４.１.０]ヘプタン−３−カルボン酸ベンジルの合成
【化１０１】
0005412448.tif 000103
ＤＣＭ中の３,７−ジアザビシクロ[４.１.０]ヘプタン−３−カルボン酸ベンジル(１.０当量)の溶液(０.２６Ｍ)に、クロロ燐酸ジエチル(１.３当量)およびトリエチルアミン(１.５当量)を加えた。反応物を２４時間撹拌し、次いで濃縮乾固した。水および酢酸エチルを加えて、有機物を抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗製の物質をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチルおよびヘキサンで溶出し(５０％から１００％  酢酸エチル)、７−(ジエトキシホスホリル)−３,７−ジアザビシクロ[４.１.０]ヘプタン−３−カルボン酸ベンジルを透明な油状物として収率２１％で得た。
LCMS (m/z): 369.0 (MH+).
【０１６８】
３−(ジエトキシホスホリルアミノ)−４−メチルピペリジン−１−カルボン酸ベンジルの合成
【化１０２】
0005412448.tif 000104
無水ＴＨＦ中のＣｕＩ(０.３当量)の懸濁液(０.１Ｍ)に、臭化メチルマグネシウム(Ｅｔ２Ｏ中３Ｍ溶液, １０当量)を−４０℃で加えた。反応物を３０分間撹拌し、続いてＴＨＦ中の７−(ジエトキシホスホリル)−３,７−ジアザビシクロ[４.１.０]ヘプタン−３−カルボン酸ベンジル(１.０当量)(０.１Ｍ)を、−４０℃で加えた。反応物を１０℃まで５時間かけて温め、次いで水でクエンチして、酢酸エチルで抽出した。有機相を真空下で濃縮し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチルおよびヘキサンで溶出し(５０％から１００％  酢酸エチル)、３−(ジエトキシホスホリルアミノ)−４−メチルピペリジン−１−カルボン酸ベンジルを収率３５％で得た。
LCMS (m/z): 385.0 (MH+), Rt =  3.38分。
【０１６９】
ジエチル ４−メチルピペリジン−３−イルホスホロアミダートの合成
【化１０３】
0005412448.tif 000105
脱気したＭｅＯＨ中の３−(ジエトキシホスホリルアミノ)−４−メチルピペリジン−１−カルボン酸ベンジル(１.０当量)の溶液に、Ｐｄ／Ｃ(１０重量％)を加え、反応物を水素雰囲気下で１時間撹拌した。溶液を濾過し、次いで濃縮して、ジエチル ４−メチルピペリジン−３−イルホスホロアミダートを収率８３％で得た。
LCMS (m/z): 251.1 (MH+).
【０１７０】
ジエチル ４−メチル−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルホスホロアミダートの合成
【化１０４】
0005412448.tif 000106
イソプロピルアルコール中のジエチル ４−メチルピペリジン−３−イルホスホロアミダート(１.０当量)の溶液に、４−クロロ−３−ニトロピリジン(２.０当量)およびＤＩＥＡ(１.１当量)を加えた。反応物を７０℃で１８時間加熱し、次いで水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機物を乾燥し、真空下で濃縮した。粗製の物質をＩＳＣＯによって精製し(酢酸エチルおよびヘキサン)、ジエチル ４−メチル−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルホスホロアミダートを収率５２％で得た。
LCMS (m/z): 373.0 (MH+), Rt =  1.93分。
【０１７１】
ジエチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)−４−メチルピペリジン−３−イルホスホロアミダートの合成
【化１０５】
0005412448.tif 000107
脱気したＥｔＯＡｃ中のジエチル ４−メチル−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルホスホロアミダート(１.０当量)の溶液(０.１Ｍ)に、Ｐｄ／Ｃ(１０重量％)を加え、反応物を水素雰囲気下で１８時間撹拌した。濾過して濾液を濃縮して、ジエチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)−４−メチルピペリジン−３−イルホスホロアミダートを収率８６％で得た。
LCMS (m/z): 343.0 (MH+), Rt =  1.85分。
【０１７２】
４−クロロ−３−(ジエトキシホスホリルアミノ)ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルの合成
【化１０６】
0005412448.tif 000108
ＤＣＭ中の７−(ジエトキシホスホリル)−３,７−ジアザビシクロ[４.１.０]ヘプタン−３−カルボン酸ベンジル(１.０当量)およびトリエチルアミン塩酸塩(４当量)の溶液(０.１Ｍ)に、ＢＦ３・ＯＥｔ２(２.０当量)を加え、反応物を、窒素雰囲気下、室温で２時間撹拌した。次いで溶液を水でクエンチし、ＤＣＭで抽出した。粗生成物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し(ＩＳＣＯ, ＥｔＯＡｃおよびヘキサンで、５０％から１００％  ＥｔＯＡｃで溶出)、４−クロロ−３−(ジエトキシホスホリルアミノ)ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルを収率８９％で得た。
LCMS (m/z): 405.1 (MH+), Rt =  2.73分。
【０１７３】
ジエチル ４−クロロピペリジン−３−イルホスホロアミダートの合成
【化１０７】
0005412448.tif 000109
脱気したＭｅＯＨ中の４−クロロ−３−(ジエトキシホスホリルアミノ)ピペリジン−１−カルボン酸ベンジル(１.０当量)の溶液に、Ｐｄ／Ｃ(１０重量％)を加え、反応物を水素雰囲気下で１時間撹拌した。溶液を濾過して、次いで濃縮して、ジエチル ４−クロロピペリジン−３−イルホスホロアミダートを収率９２％で得た。
LCMS (m/z): 271.0 (MH+).
【０１７４】
ジエチル ４−クロロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルホスホロアミダートの合成
【化１０８】
0005412448.tif 000110
イソプロピルアルコール中のジエチル ４−クロロピペリジン−３−イルホスホロアミダート(１.０当量)の溶液(０.１Ｍ)に、４−クロロ−３−ニトロピリジン(２.０当量)およびＤＩＥＡ(１.１当量)を加えた。反応物を７０℃で１８時間加熱して、次いで水でクエンチして、酢酸エチルで抽出した。有機物を乾燥し、真空下で濃縮した。粗製の物質をＩＳＣＯによって精製し(酢酸エチルおよびヘキサン、次いでＤＣＭ中１０％  メタノール)、ジエチル ４−クロロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルホスホロアミダートを収率６９％で得た。
LCMS (m/z): 393.1 (MH+), Rt =  2.01分。
【０１７５】
ジエチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)−４−クロロピペリジン−３−イルホスホロアミダートの合成
【化１０９】
0005412448.tif 000111
脱気したＥｔＯＡｃ中のジエチル ４−クロロ−１−(３−ニトロピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルホスホロアミダート(１.０当量)の溶液(０.１Ｍ)に、Ｐｄ／Ｃ(１０重量％)を加えて、反応物を水素雰囲気下で１８時間撹拌した。濾過して、濾液を濃縮して、ジエチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)−４−クロロピペリジン−３−イルホスホロアミダートを収率８３％で得た。
LCMS (m/z): 363.1 (MH+), Rt = 1.89分。
【０１７６】
３−オキソシクロヘキサ−１−エニル トリフルオロメタンスルホネートの合成
【化１１０】
0005412448.tif 000112
ＤＣＭ中のシクロヘキサン−１,３−ジオン(１当量)の溶液(０.４Ｍ)に、Ｎａ２ＣＯ３(１.０当量)を加え、０℃に冷却する。ＤＣＭ中のＴｆ２Ｏ(１.０当量)(５Ｍ)を、室温で窒素雰囲気下で１時間かけて滴下した。添加後、反応物を２時間撹拌した(暗赤色溶液)。溶液を濾過して、濾液に飽和ＮａＨＣＯ３を加え(注意深く)、次いで有機物を抽出し、塩水で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗製の物質を、ＳｉＯ２のカラムクロマトグラフィーによって精製してＤＣＭおよびヘキサン(１：１)で溶出するか、あるいは、中性アルミナプラグによって精製してＤＣＭで溶出して、３−オキソシクロヘキサ−１−エニル トリフルオロメタンスルホネートを、それぞれ収率３０％または６７％で得た。トリフレートは貯蔵すると分解するため、次の反応にすぐに用いられるべきである。
LC/MS = 244.9/286.0 (M+H および M+CH3CN); Rt = 0.88分。
【０１７７】
３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)シクロヘキサ−２−エノンの合成
【化１１１】
0005412448.tif 000113
脱気したジオキサン中の３−オキソシクロヘキサ−１−エニル トリフルオロメタンスルホネート(１.０当量)の溶液(０.３Ｍ)に、ビス(ピナコレート)ジボラン(２.０当量)、ＫＯＡｃ(３.０当量)およびＰｄ(ｄｐｐｆ)Ｃｌ２−ＤＣＭ(０.０５当量)を加えた。反応物を８０℃で２時間加熱し、次いで濾過した。ジオキサン溶液をさらに精製することなく次の工程に用いた。
LC/MS = 140.9 (ボロン酸のM+H).
【０１７８】
３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノンの合成
【化１１２】
0005412448.tif 000114
脱気したジオキサンおよび２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３中の３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)シクロヘキサ−２−エノン(１.０当量)の溶液に、４−クロロ−３−ニトロピリジン(１.２当量)およびＰｄ(ＰＰｈ３)４(０.０５当量)を加えた。反応物を油浴中で１２０℃で３０分間加熱した(反応はまたマイクロ波で１２０℃で１０分間行ってもよい)。室温まで冷却し、次いでＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏを加えて、暗色の溶液と大量のエマルジョンを得た。濾過して固体を除き、次いで有機相を抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗製の物質をシリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し、３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノンを得た(６４％, ２工程)。
LC/MS = 219 (M+H), LC = 2.29分。
【０１７９】
３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノールの合成
【化１１３】
0005412448.tif 000115
ＥｔＯＨ中の３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノン(１.０当量)の溶液(１.１Ｍ)に、ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ(１.３当量)を加えた。反応物を０℃に冷却し、次いでＮａＢＨ４(１.３当量)を少しずつ加えた。０℃で２時間撹拌し、次いで水を添加することによってクエンチし、濃縮してＥｔＯＨを除去し、ＥｔＯＡｃを加え、有機物を抽出し、塩水で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮し、３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノールを得た(９９％)。
LC/MS = 221.1 (M+H), LC = 2.24分。
【０１８０】
２−(３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニル)イソインドリン−１,３−ジオンの合成
【化１１４】
0005412448.tif 000116
ＴＨＦ中の３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノール(１.０当量)、トリフェニルホスフィン(１.５当量)およびフタルイミド(１.５当量)の均一な溶液(０.２Ｍ)を、０℃に冷却し、その溶液にＴＨＦ中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル アゾジカルボキシレート(１.５当量)を加えた。混合物を０℃で２時間撹拌した。反応物を真空で濃縮した。残渣をカラムによって精製して(１：１  酢酸エチルおよびヘキサン中５％  メタノール)、固体を得た。それをさらにＤＣＭおよびヘキサンで磨砕して、純粋な生成物と濾液を得た。濾液をさらに精製して、さらなる純粋な生成物を得た。２−(３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニル)イソインドリン−１,３−ジオンの全収率は５８％である。
LC/MS (m/z): MH+=350.2, Rt=0.96. HPLC Rt=3.73。
【０１８１】
２−(３−(３−アミノピリジン−４−イル)シクロヘキシル)イソインドリン−１,３−ジオンの合成
【化１１５】
0005412448.tif 000117
酢酸中の２−(３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニル)イソインドリン−１,３−ジオン(１当量)の溶液(０.１Ｍ)を、窒素で１０分間パージした。次いで１０％  Ｐｄ／Ｃ(０.１５当量)を加えた。反応混合物を水素雰囲気下で室温で４日間撹拌した。セライトで濾過することによって固体を除き、次いでＥｔＯＡｃとＭｅＯＨで濯いだ。濾液を濃縮し、ＥｔＯＡｃで希釈し、２Ｍ  飽和水性Ｎａ２ＣＯ３で２回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。ＥｔＯＡｃ／ヘキサンから磨砕して、２−(３−(３−アミノピリジン−４−イル)シクロヘキシル)イソインドリン−１,３−ジオンを収率７７％で得た。
LC/MS (m/z): MH+=322.2, Rt=0.64。
HPLC Rt=2.43分。
【０１８２】
５,５−ジメチル−３−オキソシクロヘキサ−１−エニル トリフルオロメタンスルホネートの合成
【化１１６】
0005412448.tif 000118
３つ首丸底フラスコ中で、５,５−ジメチルシクロヘキサン−１,３−ジオン(１.０当量)をＤＣＭに溶解した(０.２Ｍ)。炭酸ナトリウム(１.１当量)を加え、マグネチックスターラーで撹拌しながら、混合物を、氷／塩／水浴上で、Ｎ２下で約−５℃に冷却した。ＤＣＭで希釈した無水トリフルオロ酢酸(１.０５当量)を滴下漏斗で９０分かけて滴下した。添加完了後、反応物を約０℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳおよび１Ｈ−ＮＭＲによると、出発物質が未だ残っていた。さらなる炭酸ナトリウム(０.５１当量)および無水トリフルオロ酢酸(０.５０当量)を加えた。２時間後、混合物を目の粗い焼結ガラス漏斗で濾過し(ケーキをＤＣＭで洗浄)、エルレンマイヤーフラスコに移して、ｐＨ＝７になるまで、勢いよく撹拌しながら飽和水性重炭酸ナトリウムを注意深く添加することによってクエンチし、分液漏斗に移して層を分離した。有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して、５,５−ジメチル−３−オキソシクロヘキサ−１−エニル トリフルオロメタンスルホネートを得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
LC/MS (m/z): MH+=273.1, Rt=1.03分。
【０１８３】
５,５−ジメチル−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)シクロヘキサ−２−エノンの合成
【化１１７】
0005412448.tif 000119
全ての反応剤、すなわち５,５−ジメチル−３−オキソシクロヘキサ−１−エニル トリフルオロメタンスルホネート(１.０当量)、酢酸カリウム(３.０当量)およびビス(ピナコレート)ジボラン(２.０当量)を、丸底フラスコ中の１,４−ジオキサン(０.２Ｍ)に加え、Ｎ２を混合物に１０分間通気することによって脱気した。ＰｄＣｌ２(ｄｐｐｆ)−ＤＣＭ付加物(０.０３当量)を加えて、還流コンデンサーを付けて、反応物を、Ｎ２下、油浴上で８０℃で一夜還流した。混合物を室温まで冷却し、目の粗い焼結ガラス漏斗で濾過し、ケーキを１,４−ジオキサンで濯ぎ、１,４−ジオキサン中の５,５−ジメチル−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)シクロヘキサ−２−エノンを得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
LC/MS (m/z): MH+(ボロン酸) =169.1, Rt=0.50分。
【０１８４】
５,５−ジメチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノンの合成
【化１１８】
0005412448.tif 000120
ボロン酸エステルである５,５−ジメチル−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)シクロヘキサ−２−エノン(１.０当量)を丸底フラスコ中で１,４−ジオキサンに溶解し、Ｎ２を溶液に３０分間通気することによって脱気した。４−クロロ−３−ニトロ−ピリジン(１.３当量)および２Ｍ(水性)の炭酸ナトリウム(２.０当量)を加え、Ｎ２を１０分間通気し、次いでＰｄＣｌ２(ｄｐｐｆ)−ＤＣＭ(０.０５当量)を加えた。反応混合物を１１０℃で２時間撹拌した。混合物にＥｔＯＡｃおよび水を加えた。得られた混合物をセライトで濾過し、ケーキをＥｔＯＡｃで洗浄した。有機層を分離した。水相をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をシリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１０から２：１で溶出)、５,５−ジメチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノンを得た(３工程について４６.７％)。
LC/MS (m/z): MH+=247.2, Rt=0.79分。
【０１８５】
５,５−ジメチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノールの合成
【化１１９】
0005412448.tif 000121
ＭｅＯＨ中の５,５−ジメチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノン(１.０当量)およびＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ(１.２当量)の溶液(０.２Ｍ)に、ＮａＢＨ４(１.０当量)を０℃で加えた。溶液を１時間撹拌し、次いで５mlの水によってクエンチした。揮発成分を真空で除去し、残渣をＥｔＯＡｃとＨ２Ｏの層間に分配した。有機層を分離し、塩水で洗浄した。合わせた水相をＥｔＯＡｃで逆抽出し、有機物を塩水で洗浄した。合わせた有機物をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をカラムによって精製し(１：１  酢酸エチルおよびヘキサン中５％  メタノール)、５,５−ジメチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノールを得た(７４％)。
LC/MS (m/z): MH+=249.2, Rt=0.76分。
【０１８６】
２−(５,５−ジメチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニル)イソインドリン−１,３−ジオンの合成
【化１２０】
0005412448.tif 000122
ＴＨＦ中の５,５−ジメチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノール(１.０当量)、トリフェニルホスフィン(１.５当量)およびフタルイミド(１.５当量)の均一な溶液(０.２Ｍ)を０℃に冷却し、ＴＨＦ中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル アゾジカルボキシレート(１.５当量)を溶液に加えた。混合物を０℃で２時間撹拌した。反応物を真空で濃縮した。残渣をカラムによって精製し(１：１  酢酸エチルおよびヘキサン中５％  メタノール)、２−(５,５−ジメチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニル)イソインドリン−１,３−ジオンを得た(９９％)。
LC/MS (m/z): MH+=378.2, Rt=1.10分。
【０１８７】
２−(３−(３−アミノピリジン−４−イル)−５,５−ジメチルシクロヘキサ−２−エニル)イソインドリン−１,３−ジオンの合成
【化１２１】
0005412448.tif 000123
酢酸中の２−(５,５−ジメチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニル)イソインドリン−１,３−ジオン(１当量)の溶液(０.１Ｍ)を、窒素で１０分間パージした。次いで１０％  Ｐｄ／Ｃ(０.１０当量)を加えた。反応混合物を室温で水素雰囲気で一夜撹拌した。セライトで濾過することによって固体を除去し、次いでＥｔＯＡｃで、そしてＭｅＯＨで濯いだ。濾液を濃縮し、ＥｔＯＡｃで希釈し、２Ｍ  飽和水性Ｎａ２ＣＯ３で２回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をカラムによって精製し(１：１  酢酸エチルおよびヘキサン中５％  メタノール)、２−(３−(３−アミノピリジン−４−イル)−５,５−ジメチルシクロヘキサ−２−エニル)イソインドリン−１,３−ジオンを得た(８９％)。
LC/MS (m/z): MH+=348.3, Rt=0.79分。
【０１８８】
２−(５−(３−アミノピリジン−４−イル)−３,３−ジメチルシクロヘキシル)イソインドリン−１,３−ジオンの合成
【化１２２】
0005412448.tif 000124
酢酸中の２−(３−(３−アミノピリジン−４−イル)−５,５−ジメチルシクロヘキサ−２−エニル)イソインドリン−１,３−ジオン(１.０当量)の溶液(０.１Ｍ)を、窒素で１０分間パージした。次いで１０％  Ｐｄ／Ｃ(０.１当量)を加えた。反応混合物を、鋼鉄製容器中、４５℃で３００psiの水素雰囲気で一夜撹拌し、そして、６５℃で３００psiで５時間撹拌した。セライトで濾過することによって固体を除去し、次いでＥｔＯＡｃで、そしてＭｅＯＨで濯いだ。濾液を濃縮し、ＥｔＯＡｃで希釈し、２Ｍ  飽和水性Ｎａ２ＣＯ３で２回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をカラムによって精製し(１：１  酢酸エチルおよびヘキサン中５％  メタノール)、２−(５−(３−アミノピリジン−４−イル)−３,３−ジメチルシクロヘキシル)イソインドリン−１,３−ジオンを得た(５３％)。
LC/MS (m/z): MH+=350.3, Rt=0.78分。
【０１８９】
エナンチオマーとして純粋な２−((１Ｒ,５Ｒ)−５−(３−アミノピリジン−４−イル)−３,３−ジメチルシクロヘキシル)イソインドリン−１,３−ジオン、および、２−((１Ｓ,５Ｓ)−５−(３−アミノピリジン−４−イル)−３,３−ジメチルシクロヘキシル)イソインドリン−１,３−ジオンを、キラルＨＰＬＣによって分離した(分析において、それぞれＲｔ＝７.５３分および１３.１１分；ヘキサン：エタノール＝８０：２０(v:v), Chiralcel OJ-H 100×4.6mm, １ml/分。分取分離においてヘキサン：エタノール＝８０：２０(v:v), Chiralcel OJ-H 250×20mm, ２０ml/分)。
1H NMR (CDCl3): δ 8.04 (s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.82 (m, 2H), 7.71 (m, 2H), 7.06 (d, 1H), 4.54 (m, 1H), 3.71 (m, 2H), 2.89 (m, 1H), 2.23-2.44 ( m, 2H), 1.90 (m, 1H), 1.20-1.60 (m, 3H), 1.18 (s, 3H), 1.07 (s, 3H).
【０１９０】
５−メチル−３−オキソシクロヘキサ−１−エニルトリフルオロメタンスルホネートの合成
【化１２３】
0005412448.tif 000125
ＤＣＭ中の５−メチルシクロヘキサン−１,３−ジオン(１当量)の溶液(０.４Ｍ)に、Ｎａ２ＣＯ３(１.０当量)を加え、０℃に冷却した。ＤＣＭ中のＴｆ２Ｏ(１.０当量)(５Ｍ)を、窒素雰囲気下、０℃で１時間かけて滴下した。添加後、反応物を室温で２時間撹拌した(暗赤色の溶液)。溶液を濾過し、濾液に飽和ＮａＨＣＯ３を加え(注意深く)、次いで有機物を抽出し、塩水で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗製の物質をＳｉＯ２のカラムクロマトグラフィーによって精製してＤＣＭおよびヘキサン(１：１)で溶出するか、あるいは、中性アルミナプラグによって精製してＤＣＭで溶出して、５−メチル−３−オキソシクロヘキサ−１−エニル トリフルオロメタンスルホネートをそれぞれ収率３０％または６７％で得た。このトリフレートは、貯蔵すると分解するため、次の反応にすぐに用いられるべきである。
LC/MS=259.1/300.1 (M+H and M+CH3CN); Rt = 0.94分, LC = 3.84分。
【０１９１】
５−メチル−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)シクロヘキサ−２−エノンの合成
【化１２４】
0005412448.tif 000126
脱気したジオキサン中の５−メチル−３−オキソシクロヘキサ−１−エニル トリフルオロメタンスルホネート(１.０当量)の溶液(０.３Ｍ)に、ビス(ピナコレート)ジボラン(２.０当量)、ＫＯＡｃ(３.０当量)およびＰｄ(ｄｐｐｆ)Ｃｌ２−ＤＣＭ(０.０５当量)を加えた。反応物を８０℃で１０時間加熱し、次いで濾過した。このジオキサン溶液をさらに精製することなく次の工程に用いた。
LC/MS = 155.1 (M+H of ボロン酸); Rt = 0.41分, LC = 1.37分。
【０１９２】
５−メチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノンの合成
【化１２５】
0005412448.tif 000127
脱気したジオキサンおよび２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３中の、５−メチル−３−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)シクロヘキサ−２−エノン(１.０当量)の溶液に、４−クロロ−３−ニトロピリジン(１.２当量)およびＰｄ(ＰＰｈ３)４(０.０５当量)を加えた。反応物を油浴中で１２０℃で２時間加熱した(反応はまたマイクロ波で１２０℃で１０分間行うこともできる)。室温まで冷却し、次いでＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏを加えて、暗色の溶液と大量のエマルジョンを得た。濾過して固体を除き、次いで有機相を抽出して、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗製の物質をシリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し、５−メチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノンを得た。
LC/MS = 233.2 (M+H); Rt = 0.69分, LC = 2.70分。
【０１９３】
ｃｉｓ−(＋／−)−５−メチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノールの合成
【化１２６】
0005412448.tif 000128
ＥｔＯＨ中の５−メチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノン(１.０当量)の溶液(１.１Ｍ)に、ＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏ(１.３当量)を加えた。反応物を０℃に冷却し、次いでＮａＢＨ４(１.３当量)を少しずつ加えた。０℃で２時間撹拌し、次いで水を添加することによってクエンチし、濃縮してＥｔＯＨを除去し、ＥｔＯＡｃを加え、有機物を抽出し、塩水で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮して、５−メチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノールを得た(９１％)。
LC/MS = 235.2 (M+H), LC = 2.62分。
【０１９４】
ｃｉｓ−(＋／−)−４−(３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−メチルシクロヘキサ−１−エニル)−３−ニトロピリジンの合成
【化１２７】
0005412448.tif 000129
ＤＭＦ中の５−メチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノール(１.０当量)の溶液(０.５Ｍ)に、イミダゾール(４.０当量)およびＴＢＤＳＭＣｌ(２.５当量)を加えた。１８時間撹拌した後、溶液をＥｔＯＡｃとＨ２Ｏの層間に分配して分離した。さらにＨ２Ｏ(３×)で、そしてＮａＣｌ(飽和)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、溶媒を除去して、４−(３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−メチルシクロヘキサ−１−エニル)−３−ニトロピリジンを得た(８５％)。
LC/MS = 349.2 (M+H), LC = 5.99分。
【０１９５】
ｃｉｓ−(＋／−)−４−(３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−アミンの合成
【化１２８】
0005412448.tif 000130
メタノール中、濃度０.１Ｍのｃｉｓ−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−メチルシクロヘキサ−１−エニル)−３−ニトロピリジン(１.０当量)の溶液に、１０％  パラジウム／炭素(０.１当量)を加えた。得られた不均一な溶液を水素雰囲気下に置き、１５時間撹拌した。この時点で混合物をセライトのパッドで濾過し、メタノールで溶出した。揮発成分を真空で除去し、全てのｃｉｓ−４−(３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−アミンを得た(９０％)。
LCMS (m/z): 321.3 (MH+); LC Rt = 3.85分。
【０１９６】
ｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ４−(３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イルカルバミン酸の合成
【化１２９】
0005412448.tif 000131
ジクロロメタン中、濃度０.５Ｍのｃｉｓ−(＋／−)−４−(３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−アミンの溶液に、ベンジル ２,５−ジオキソピロリジン−１−イル カーボネート(１.１当量)およびＤＭＡＰ(０.０５当量)を加えた。室温で１６時間撹拌した後、さらなるベンジル ２,５−ジオキソピロリジン−１−イル カーボネート(０.５５当量)およびＤＭＡＰ(０.０３当量)を加えた。室温でさらに２４時間撹拌した後、さらなるベンジル ２,５−ジオキソピロリジン−１−イル カーボネート(０.１当量)およびＤＭＡＰ(０.０３当量)を加えた。さらに１８時間撹拌した後、溶液をＥｔＯＡｃとＮａ２ＣＯ３(飽和)の層間で分配し、分離した。さらにＮａ２ＣＯ３(飽和)(２×)で、そしてＮａＣｌ(飽和)で洗浄した後、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、溶媒を除去し、ｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ４−(３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イルカルバメートを得た。粗製の物質をそのまま用いた。
LC/MS = 455.3 (M+H), LC = 4.39分。
【０１９７】
ｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ４−(３−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イルカルバメートの合成
【化１３０】
0005412448.tif 000132
１：２：１の６Ｎ  ＨＣｌ／ＴＨＦ／ＭｅＯＨ中の、濃度０.１Ｍのｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ４−(３−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イルカルバメートの溶液を室温で６時間撹拌した。６Ｎ  ＮａＯＨを添加することによってｐＨをｐＨ＝７に調節し、揮発成分を真空で除去した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、有機物をＮａＣｌ(飽和)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、揮発成分を真空で除去した後、ｃｉｓ−(＋／−)ベンジル ４−(３−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イルカルバメートを得た。粗製の物質をそのまま用いた。
LC/MS = 341.2 (M+H), LC = 2.38分。
【０１９８】
ｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ４−(３−メチル−５−オキソシクロヘキシル)ピリジン−３−イルカルバメートの合成
【化１３１】
0005412448.tif 000133
含水ＣＨ２Ｃｌ２中の濃度０.１６Ｍのｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ４−(３−ヒドロキシ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イルカルバメートの０℃の溶液に、デスマーチン・ペルヨージナン(１.５当量)を加え、室温まで温めながら溶液を１８時間撹拌した。ＥｔＯＡｃと、１：１  １０％  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３／ＮａＨＣＯ３(飽和)の層間に溶液を分配し、分離した。さらに１：１  １０％  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３／ＮａＨＣＯ３(飽和)(２×)で、そしてＮａＣｌ(飽和)で洗浄した後、ＭｇＳＯ４で洗浄し、濾過し、溶媒を除去し、シリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(７５〜１００％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン)、ｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ４−(３−メチル−５−オキソシクロヘキシル)ピリジン−３−イルカルバメートを白色の固体として得た(５３％, ５工程)。
LC/MS = 339.2 (M+H).
【０１９９】
ｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ４−(３−(ベンジルアミノ)−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イルカルバメートの合成
【化１３２】
0005412448.tif 000134
ＭｅＯＨ中の濃度０.２５Ｍのｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ４−(３−メチル−５−オキソシクロヘキシル)ピリジン−３−イルカルバメート(１.０当量)およびベンジルアミン(３.０当量)の溶液を、室温で２時間撹拌した。−７８℃の浴で冷却後、ＬｉＢＨ４(１.１当量, ＴＨＦ中２.０Ｍ)を加え、溶液を撹拌しながら１６時間かけて室温まで温めた。溶液をＥｔＯＡｃとＮａＨＣＯ３(飽和)の層間に分配し、分離し、さらにＮａＨＣＯ３(飽和)で、そしてＮａＣｌ(飽和)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で揮発成分を除去した後、ｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ４−(３−(ベンジルアミノ)−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イルカルバメートを４：１  異性体混合物として、全てｃｉｓのものが優勢で得た。
LC/MS = 430.3 (M+H), LC = 0.62分。
【０２００】
ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル (３−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−メチルシクロヘキシルカルバメートの合成
【化１３３】
0005412448.tif 000135
メタノール中の濃度０.０７Ｍのｃｉｓ−(＋／−)−ベンジル ４−(３−(ベンジルアミノ)−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イルカルバメート(１.０当量)の溶液に、２０％  水酸化パラジウム／炭素(０.２当量)を加えた。得られた不均一な溶液を水素雰囲気下に置き、１４時間撹拌した。この時点で反応物をＡｒでパージして、Ｂｏｃ２Ｏ(１.０当量)を加え、溶液を８時間撹拌した。さらなるＢｏｃ２Ｏ(１.０当量)を加え、溶液をさらに１６時間撹拌した。この時点で混合物をセライトのパッドで濾過し、メタノールで溶出した。真空で揮発成分を除去した後、シリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(２.５〜２.５  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２, ０.１％のＤＩＥＡ含有)、１０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサンから再結晶して、ｃｉｓ−(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル (３−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−メチルシクロヘキシルカルバメートを得た(４９％)。
LCMS (m/z): 306.3 (MH+), LC Rt = 2.59分。
純粋なエナンチオマーはキラルクロマトグラフィーによって得られた。
【０２０１】
４−(シクロヘキサ−１,３−ジエニル)−３−ニトロピリジンの合成
【化１３４】
0005412448.tif 000136
ジオキサン中の３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノール(１.０当量)の溶液(０.１８Ｍ)に、ｐ−ＴＳＡ(１.１当量)を加えた。溶液を１００℃で４時間加熱した。室温まで冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３および酢酸エチルで後処理して、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗製の物質をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、１００％  ＤＣＭで溶出して、４−(シクロヘキサ−１,３−ジエニル)−３−ニトロピリジンを黄色の油状物として得た(収率２７％)。
LCMS (m/z): 203.1 (MH+), LC Rt = 3.53分。
H-NMR (CDCl3): 9.02 (s, 1H), 8.70 (d, J=5.3, 1H), 7.30 (d, J=5.3, 1H), 6.15-6.17 (m, 1H), 6.02-6.11 (m, 2H), 2.35-2.38 (m, 4H).
【０２０２】
６−ヒドロキシ−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化１３５】
0005412448.tif 000137
ピリジンおよびＮＨ４ＯＨ(８：１, ０.２３Ｍ)中の２−アジド−４−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−３−エノール(１.０当量)の溶液に、トリメチルホスフィン(３.０当量)を室温で加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を除去した。残渣にエタノールを加えた。次いでエタノールを真空で除去し、確実に全てのアンモニアを除去した。残渣を１,４−ジオキサンおよび飽和水性重炭酸ナトリウムに溶解し、次いでＴＨＦ中のＢｏｃ２Ｏ(１.０当量)を混合物に加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＣｌで洗浄した。有機物をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をカラムによって精製し(１：１  酢酸エチルおよびヘキサン中５％  メタノール)、６−ヒドロキシ−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル(８２％)を得た。
LC/MS (m/z): MH+=336.0, Rt=0.71
【０２０３】
(＋／−)−４−(３−アジド−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)シクロヘキサ−１−エニル)−３−ニトロピリジンの合成
【化１３６】
0005412448.tif 000138
ＤＣＭ(０.１５Ｍ)中の(＋／−)−２−アジド−４−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−３−エノール(１.０当量)の溶液に、ＴＢＳＣｌ(２.０当量)、イミダゾール(２.０当量)およびＤＭＡＰ(０.１当量)を室温で加えた。１８時間後、水を加え、有機物を塩水で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗製の物質をシリカゲルに負荷し、ＩＳＣＯによって精製し、酢酸エチルおよびヘキサン(２０％)で溶出した。(＋／−)−４−(３−アジド−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)シクロヘキサ−１−エニル)−３−ニトロピリジンを黄色の油状物として収率６０％で得た。
LCMS (m/z): 376.3 (MH+), LC Rt =5.848分。
【０２０４】
(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ６−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニルカルバメートの合成
【化１３７】
0005412448.tif 000139
丸底フラスコに、(＋／−)−４−(３−アジド−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)シクロヘキサ−１−エニル)−３−ニトロピリジン(１.０当量)およびピリジン(０.１Ｍ)を加え、黄色の溶液を得た。水酸化アンモニウム(１０：１  ピリジン：水酸化アンモニウム)を加え、続いてＰＭｅ３(３.０当量)を加えた。１０分後に反応物は暗褐色となった。室温で１.５時間撹拌した。ＥｔＯＨを加えることによってクエンチし、濃縮した。これを２回以上繰り返した。粗製の物質に、飽和ＮａＨＣＯ３およびジオキサン(１：１, ０.１Ｍ)を加えた。Ｂｏｃ２Ｏ(１.０当量)を加えた。室温で１時間撹拌した。Ｈ２ＯおよびＥｔＯＡｃで洗浄し、有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をＩＳＣＯによって精製した(５：１  Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ)。純粋なフラクションを集めて濃縮し、(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ６−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニルカルバメートを泡状物質として得た。
LCMS  (m/z): 450.3 (MH+), LC Rt = 5.83分。
【０２０５】
(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ３−(３−アミノピリジン−４−イル)−６−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)シクロヘキサ−２−エニルカルバメートの合成
【化１３８】
0005412448.tif 000140
ＡｃＯＨ中の(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ６−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニルカルバメート(１.０当量)の溶液(０.１８Ｍ)に、Ｆｅ(６.０当量)を加え、反応物を２０時間撹拌した。メタノールで反応物を希釈することによって後処理し、濾過し、濾液を濃縮した。粗製の物質に酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３を加え、有機物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して、(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−(３−アミノピリジン−４−イル)−６−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)シクロヘキサ−２−エニルカルバメートを黄色の油状物として収率９４％で得た。
LCMS (m/z): 420.3 (MH+), LC Rt = 3.88分。
【０２０６】
(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(３−アミノピリジン−４−イル)−２−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)シクロヘキシルカルバメートの合成
【化１３９】
0005412448.tif 000141
ＭｅＯＨ中の(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ３−(３−アミノピリジン−４−イル)−６−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)シクロヘキサ−２−エニルカルバメート(１.０当量)の溶液(０.１Ｍ)に、Ｐｄ／Ｃ(２０重量％)を加え、反応物を水素バルーン下で１８時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳにより反応物がジアステレオマー混合物であることが示され、反応物を濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、濾液を濃縮した。粗製の物質を分取ＨＰＬＣによって精製し(ＤＭＳＯ中)、純粋なフラクションを合わせて、固体ＮａＨＣＯ３で中和して、酢酸エチルで抽出し、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４下で乾燥し、濃縮し、生成物Ａ(収率８％)および生成物Ｂ(収率５１％)を得た。
生成物Ａ： LCMS (m/z): 422.4 (MH+), LC Rt = 3.75分。
生成物Ｂ： LCMS (m/z): 422.4 (MH+), LC Rt = 3.94分。
【０２０７】
２−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−３−エニル メタンスルホネートの合成
【化１４０】
0005412448.tif 000142
ＣＨ２Ｃｌ２中の６−ヒドロキシ−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル(１.０当量)およびトリエチルアミン(１.５当量)の溶液(０.２Ｍ)に、塩化メタンスルホニル(１.２当量)を０℃で加えた。混合物をその温度で２時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＣｌで洗浄した。有機物をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮し、２−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−３−エニル メタンスルホネートを得た(８５％)。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
LC/MS (m/z): MH+=414.0, Rt=0.82
【０２０８】
(＋／−)−５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−３,３ａ,７,７ａ−テトラヒドロベンゾ[ｄ]オキサゾール−２(６Ｈ)−オンの合成
【化１４１】
0005412448.tif 000143
ピリジン中の２−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−３−エニル メタンスルホネート(１.０当量)の混合物(０.２１Ｍ)を、マイクロ波で１１０℃で１０分間撹拌した。ピリジンを減圧下で除去した。残渣を酢酸エチルに溶解し、飽和ＮａＣｌで洗浄した。有機物をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮し、５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−３,３ａ,７,７ａ−テトラヒドロベンゾ[ｄ]オキサゾール−２(６Ｈ)−オンを得た(８５％)。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
LC/MS (m/z): MH+=262.1, Rt=0.49
【０２０９】
(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル  ５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−２−オキソ−３ａ,６,７,７ａ−テトラヒドロベンゾ[ｄ]オキサゾール−３(２Ｈ)−カルボキシレートの合成
【化１４２】
0005412448.tif 000144
ＣＨ２Ｃｌ２中の５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−３,３ａ,７,７ａ−テトラヒドロベンゾ[ｄ]オキサゾール−２(６Ｈ)−オン(１.０当量)、ＴＥＡ(１.８当量)および触媒量のＤＭＡＰの溶液(０.１９Ｍ)に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ジカーボネート(１.２当量)を室温で加えた。反応混合物を１時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル(１００ml)で希釈し、飽和ＮａＣｌ(３０ml)で洗浄した。有機物をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をカラムによって精製し(１：１  酢酸エチルおよびヘキサン中５％  メタノール)、５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−２−オキソ−３ａ,６,７,７ａ−テトラヒドロベンゾ[ｄ]オキサゾール−３(２Ｈ)−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(９８％)。
LC/MS (m/z): MH+=306.0, Rt=0.75
【０２１０】
(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(３−アミノピリジン−４−イル)−２−オキソヘキサヒドロベンゾ[ｄ]オキサゾール−３(２Ｈ)−カルボキシレートの合成
【化１４３】
0005412448.tif 000145
メタノールおよび酢酸エチル(１：１, ０.１Ｍ)中の５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−２−オキソ−３ａ,６,７,７ａ−テトラヒドロベンゾ[ｄ]オキサゾール−３(２Ｈ)−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル(１.０当量)の溶液に、Ｐｄ／Ｃ(１０％)を加えた。得られた混合物をＨ２雰囲気下で６時間撹拌した。固体を濾過によって除去した。濾液を減圧下で濃縮し、５−(３−アミノピリジン−４−イル)−２−オキソヘキサヒドロベンゾ[ｄ]オキサゾール−３(２Ｈ)−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た(８７％)。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
LC/MS (m/z): MH+=334.1, Rt=0.51。
【０２１１】
(＋／−)−４−(５−メチルシクロヘキサ−１,３−ジエニル)−３−ニトロピリジンの合成
【化１４４】
0005412448.tif 000146
ジオキサン中の５−メチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノール(１.０当量)の溶液(０.１Ｍ)に、ｐ−ＴＳＡ(１.０当量)を加え、反応物を１００℃で３時間撹拌した。溶液を室温まで冷却し、次いで中性アルミナのパッドを通し、ＥｔＯＡｃで溶出し、(＋／−)−４−(５−メチルシクロヘキサ−１,３−ジエニル)−３−ニトロピリジンを黄色の油状物として収率６８％で得た。
LC/MS = 217.1 (M+H), LC = 3.908分。
【０２１２】
(＋／−)−６−ブロモ−５−メチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノールの合成
【化１４５】
0005412448.tif 000147
ＴＨＦおよび水(１：１, ０.１３Ｍ)中の４−(５−メチルシクロヘキサ−１,３−ジエニル)−３−ニトロピリジン(１.０当量)の溶液に、ＮＢＳ(１.５当量)を加え、反応物を室温で３０分間撹拌した。完了後、酢酸エチルおよび水を反応物に加え、有機相を塩水で洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。粗製の物質をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチルおよびヘキサン(１：１)で溶出し、(＋／−)−６−ブロモ−５−メチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノールを黄色の油状物として収率８０％で得た。
LC/MS = 315.0/313.0 (M+H), LC = 2.966分。
【０２１３】
(＋／−)−２−アジド−６−メチル−４−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−３−エノールの合成
【化１４６】
0005412448.tif 000148
ＴＨＦ中の(＋／−)−６−ブロモ−５−メチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エノール(１.０当量)の溶液(０.１Ｍ)に、カリウム ｔｅｒｔ−ブトキシド(１.５当量)を加えた。反応物は、ほとんどすぐに橙色から黒色に変化した。ＴＬＣによると、生成物の形成は３０分以内に完了した。飽和塩化アンモニウムおよび酢酸エチルを添加することによってクエンチした。有機相を塩水で洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。粗生成物をエタノールおよび水(３：１, ０.１Ｍ)に溶解し、塩化アンモニウム(２.０当量)およびアジ化ナトリウム(２.０当量)を加えた。暗橙色の反応物を室温で一夜撹拌した。生成物への変換は、ＬＣ／ＭＳにより示される通り、完了した。反応物を濃縮してエタノールを除去し、酢酸エチルおよび水を加えて、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。粗製の物質をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチルおよびヘキサン(１：１)で溶出し、(＋／−)−２−アジド−６−メチル−４−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−３−エノールを収率５５％で得た。
LC/MS = 276.0 (M+H), LC = 2.803分。
【０２１４】
(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ６−ヒドロキシ−５−メチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニルカルバメートの合成
【化１４７】
0005412448.tif 000149
ピリジンおよび水酸化アンモニウム(８：１, ０.０８Ｍ)中の、(＋／−)−２−アジド−６−メチル−４−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−３−エノール(１.０当量)の溶液に、トリメチルホスフィン(３.０当量)を加え、褐色の溶液を室温で２時間撹拌した。完了後、ＥｔＯＨを加え、溶液を真空で濃縮した。さらにエタノールを加え、反応物を再度濃縮した。ジオキサンおよび飽和ＮａＨＣＯ３(１：１, ０.０８Ｍ)を粗生成物に加え、続いてＢｏｃ２Ｏ(１.０当量)を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで水および酢酸エチルを加えた。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチルおよびヘキサン(１：１)で溶出し、(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ６−ヒドロキシ−５−メチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニルカルバメートを得た(５９％)。
LC/MS = 350.1 (M+H), Rt: 0.76分。
【０２１５】
(＋／−)−２−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−６−メチル−４−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−３−エニル アセテートの合成
【化１４８】
0005412448.tif 000150
ピリジン中の(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ６−ヒドロキシ−５−メチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニルカルバメート(１.０当量)の溶液(０.１Ｍ)に、Ａｃ２Ｏ(２.０当量)を加えて、反応物を室温で一夜撹拌した。完了後、反応物を濃縮乾固し、次いで酢酸エチルおよび水で後処理し、有機相を塩水で洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、(＋／−)−２−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−６−メチル−４−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−３−エニル アセテートを収率９４％で得た。
LC/MS = 392.2 (M+H), Rt = 0.94分。
【０２１６】
(＋／−)−４−(３−アミノピリジン−４−イル)−２−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−６−メチルシクロヘキシル アセテートの合成
【化１４９】
0005412448.tif 000151
ＭｅＯＨおよびＥｔＯＡｃ(１：１, ０.１Ｍ)中の(＋／−)−２−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−６−メチル−４−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−３−エニル アセテート(１.０当量)の脱気した溶液に、Ｐｄ／Ｃ(０.１当量)を加え、反応物を、水素バルーン下、室温で３日間撹拌した。完了後、溶液をセライトのパッドで濾過し、パッドを酢酸エチルで洗浄し、濾液を濃縮した。粗製の物質は約１０％の望ましくない異性体を含んでいた。粗製の物質を酢酸エチル(〜２０％)およびヘキサンに溶解し、全て溶解するまで加熱した。溶液を室温で２日間放置した。次いで沈殿物を集めて、(＋／−)−４−(３−アミノピリジン−４−イル)−２−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−６−メチルシクロヘキシル アセテートを純粋な生成物として収率５９％で得た。
LC/MS = 364.3 (M+H), Rt = 0.63分。
【０２１７】
２−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−６−メチル−４−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−３−エニル メタンスルホネートの合成
【化１５０】
0005412448.tif 000152
ＤＣＭ中の６−ヒドロキシ−５−メチル−３−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−２−エニルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル(１.０当量)の溶液(０.０９Ｍ)に、トリエチルアミン(１.５当量)を加え、反応物を０℃に冷却した。ＭｓＣｌ(１.２当量)を反応物に加え、３時間撹拌した。さらに１.０当量のＭｓＣｌを反応物に加え、さらに２時間撹拌した。水を添加することによって反応物を後処理し、有機相を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチルおよびヘキサン(１：１)で溶出し、２−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−６−メチル−４−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−３−エニル メタンスルホネートを白色の泡状物質として収率６５％で得た。
LC/MS = 428.2 (M+H), LC: 3.542分。
【０２１８】
(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ７−メチル−５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−２−オキソ−３ａ,６,７,７ａ−テトラヒドロベンゾ[ｄ]オキサゾール−３(２Ｈ)−カルボキシレートの合成
【化１５１】
0005412448.tif 000153
ピリジン中の(＋／−)−２−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−６−メチル−４−(３−ニトロピリジン−４−イル)シクロヘキサ−３−エニル メタンスルホネート(１.０当量)の溶液(０.２Ｍ)をマイクロ波で１１０℃で１０分間加熱した。次いで橙色の反応物を真空下で濃縮し、粗製の物質を酢酸エチルおよび水に溶解し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮した。粗製の物質をＤＣＭ(０.２Ｍ)に溶解し、トリエチルアミン(１.８当量)を加え、続いてＢｏｃ２Ｏ(１.２当量)を加えた。反応物を４０分間撹拌し、次いで濃縮乾固した。粗製の物質をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサンおよび酢酸エチル(１：１)で溶出し、(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ７−メチル−５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−２−オキソ−３ａ,６,７,７ａ−テトラヒドロベンゾ[ｄ]オキサゾール−３(２Ｈ)−カルボキシレートを白色の泡状物質として収率６６％で得た。
LC/MS = 376.0 (M+H), LC: 3.424分。
【０２１９】
(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(３−アミノピリジン−４−イル)−７−メチル−２−オキソヘキサヒドロベンゾ[ｄ]オキサゾール−３(２Ｈ)−カルボキシレートの合成
【化１５２】
0005412448.tif 000154
ＭｅＯＨおよびＥｔＯＡｃ(１：１, ０.１Ｍ)中の(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ７−メチル−５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−２−オキソ−３ａ,６,７,７ａ−テトラヒドロベンゾ[ｄ]オキサゾール−３(２Ｈ)−カルボキシレート(１.０当量)の脱気した溶液に、Ｐｄ／Ｃ(０.１当量)を加えた。反応物を水素バルーン下で一夜撹拌した。完了後、溶液をセライトのパッドで濾過し、パッドを酢酸エチルで洗浄した。濾液を真空下で濃縮し、望ましい生成物として(＋／−)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(３−アミノピリジン−４−イル)−７−メチル−２−オキソヘキサヒドロベンゾ[ｄ]オキサゾール−３(２Ｈ)−カルボキシレートを黄色の泡状物質として収率９３％で得た。
LC/MS = 348.1 (M+H), Rt = 055分。
【０２２０】
(２Ｒ)−１−(ベンジルオキシ)−３−ヒドロキシ−４−メチルヘキサ−５−エン−２−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化１５３】
0005412448.tif 000155
ＤＣＭ中のＮ−Ｂｏｃ,Ｏ−ベンジル−Ｄ−セリン アルデヒド(１.０当量)の溶液(０.１Ｍ)に、−７８℃で、アルゴン雰囲気下で、(Ｚ)−２−(ブタ−２−エニル)−４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン(１.１当量)を加え、室温まで温めながら透明な溶液を１６時間撹拌した。溶液をＥｔＯＡｃに加え、Ｈ２Ｏ(３×)で、そしてＮａＣｌ(飽和)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で洗浄し、シリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(１５％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン)、(２Ｒ)−１−(ベンジルオキシ)−３−ヒドロキシ−４−メチルヘキサ−５−エン−２−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル(５４％)を３：１  異性体混合物(１Ｈ  ＮＭＲによって判断)として得た。
LCMS (m/z): 236.3  (MH+-Boc); LC Rt = 4.37 および 4.51分。
【０２２１】
(４Ｒ)−４−(ベンジルオキシメチル)−５−(ブタ−３−エン−２−イル)オキサゾリジン−２−オンの合成
【化１５４】
0005412448.tif 000156
ＴＨＦ中の(２Ｒ)−１−(ベンジルオキシ)−３−ヒドロキシ−４−メチルヘキサ−５−エン−２−イルカルバメートの溶液(０.１Ｍ)に、鉱物油中６０％  水素化ナトリウム(１.５当量)を加えた。３日間撹拌した後、ＮＨ４Ｃｌ(飽和)を添加することによって反応物をクエンチし、溶液をＥｔＯＡｃで希釈し、ＮＨ４Ｃｌ(飽和)およびＮａＣｌ(飽和)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、シリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(５０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン)、(４Ｒ)−４−(ベンジルオキシメチル)−５−(ブタ−３−エン−２−イル)オキサゾリジン−２−オン(８９％)を３：１  混合物として得た。
LCMS (m/z): 262.2  (MH+); LC Rt = 3.47分。
【０２２２】
(４Ｒ)−４−(ベンジルオキシメチル)−５−(１−ヒドロキシプロパン−２−イル)オキサゾリジン−２−オンの合成
【化１５５】
0005412448.tif 000157
２：１  ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ中の(４Ｒ)−４−(ベンジルオキシメチル)−５−(ブタ−３−エン−２−イル)オキサゾリジン−２−オン(１.０当量)の溶液(０.０４Ｍ)に、Ｈ２Ｏ中４％の四酸化オスミウム(０.０７当量)および過ヨウ素酸ナトリウム(３.０当量)を加えた。３時間撹拌した後、白色の沈殿物を濾過し、ＥｔＯＡｃで濯いだ。合わせた濾液を真空で濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、ＮａＣｌ(飽和)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗製のアルデヒドをＥｔＯＨに溶解し(０.０８Ｍ)、０℃に冷却した後、水素化ホウ素ナトリウム(２.０当量)を加えた。１５時間撹拌した後、室温にして、Ｈ２Ｏを添加することによって反応物をクエンチした。２０分間撹拌した後、ＥｔＯＨを真空で除去し、ＥｔＯＡｃを加え、溶液を１Ｎ  ＨＣｌで、ＮａＨＣＯ３(飽和)で、そしてＮａＣｌ(飽和)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して、シリカゲルのクロマトグラフィーによって精製した後、(４Ｒ)−４−(ベンジルオキシメチル)−５−(１−ヒドロキシプロパン−２−イル)オキサゾリジン−２−オンを３：１  異性体混合物として得た(６０％)。
LCMS (m/z): 266.1  (MH+); LC Rt = 2.28分。
【０２２３】
(４Ｒ)−４−(ヒドロキシメチル)−５−(１−ヒドロキシプロパン−２−イル)オキサゾリジン−２−オンの合成
【化１５６】
0005412448.tif 000158
メタノール中の濃度０.１Ｍの(４Ｒ)−４−(ベンジルオキシメチル)−５−(１−ヒドロキシプロパン−２−イル)オキサゾリジン−２−オン(１.０当量)の溶液に、１０％  パラジウム／炭素(０.１当量)を加えた。得られた不均一な溶液を水素雰囲気下に置き、１５時間撹拌した。この時点で混合物をセライトのパッドで濾過し、メタノールで溶出した。揮発成分を真空で除去し、(４Ｒ)−４−(ヒドロキシメチル)−５−(１−ヒドロキシプロパン−２−イル)オキサゾリジン−２−オンを得た(９９％)。
LCMS (m/z): 176.1 (MH+).
【０２２４】
２−((４Ｒ)−２−オキソ−４−(トシルオキシメチル)オキサゾリジン−５−イル)プロピル ４−メチルベンゼンスルホネートの合成
【化１５７】
0005412448.tif 000159
ピリジン中の(４Ｒ)−４−(ヒドロキシメチル)−５−(１−ヒドロキシプロパン−２−イル)オキサゾリジン−２−オン(１.０当量)の溶液(０.１５Ｍ)に、０℃で、塩化 ｐ−トルエンスルホニル(２.１当量)を加えた。１４時間撹拌しながら溶液を室温まで温め、その時点でＥｔＯＡｃを加え、溶液をＨ２Ｏ(３×)、ＣｕＳＯ４(飽和)(２×)、Ｈ２Ｏ、Ｎａ２ＣＯ３(飽和)、そしてＮａＣｌ(飽和)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(溶出液として７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン)、２−((４Ｒ)−２−オキソ−４−(トシルオキシメチル)オキサゾリジン−５−イル)プロピル ４−メチルベンゼンスルホネートを得た(６８％)。
LCMS (m/z): 484.1  (MH+); LC Rt = 4.06分。
【０２２５】
(３ａＲ,７Ｒ,７ａＳ)−５−(４−メトキシベンジル)−７−メチルヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−２(３Ｈ)−オンおよび(３ａＲ,７Ｓ,７ａＲ)−５−(４−メトキシベンジル)−７−メチルヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−２(３Ｈ)−オンの合成
【化１５８】
0005412448.tif 000160
ＮＭＰ中の２−((４Ｒ)−２−オキソ−４−(トシルオキシメチル)オキサゾリジン−５−イル)プロピル ４−メチルベンゼンスルホネート(１.０当量)、ジイソプロピルエチルアミン(３.０当量)およびパラ−メトキシベンジルアミン(１.５当量)の溶液(０.０５Ｍ)を、１００℃で１４時間加熱した。溶液をＲＰ−ＨＰＬＣによって直接精製した。生成物のフラクションをＥｔＯＡｃおよびＮａ２ＣＯ３(飽和)に添加することによって脱塩し、さらにＮａＣｌ(飽和)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮し、２つの別個の異性体、すなわち(３ａＲ,７Ｒ,７ａＳ)−５−(４−メトキシベンジル)−７−メチルヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−２(３Ｈ)−オンおよび(３ａＲ,７Ｓ,７ａＲ)−５−(４−メトキシベンジル)−７−メチルヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−２(３Ｈ)−オンを得た(２７％および８％)。
LCMS (m/z): 277.2  (MH+).
【０２２６】
(３ａＲ,７Ｒ,７ａＳ)−７−メチルヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−２(３Ｈ)−オンの合成
【化１５９】
0005412448.tif 000161
メタノール中の濃度０.１Ｍの(３ａＲ,７Ｒ,７ａＳ)−５−(４−メトキシベンジル)−７−メチルヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−２(３Ｈ)−オン(１.０当量)の溶液に、２０％  水酸化パラジウム／炭素(０.３当量)を加えた。得られた不均一な溶液を水素雰囲気下に置き、２時間撹拌した。この時点で混合物をセライトのパッドで濾過し、メタノールで溶出した。揮発成分を真空で除去し、(３ａＲ,７Ｒ,７ａＳ)−７−メチルヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−２(３Ｈ)−オンを得た(９９％)。
LCMS (m/z): 157.1 (MH+).
【０２２７】
(３ａＲ,７Ｒ,７ａＳ)−ｔｅｒｔ−ブチル ７−メチル−５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレートの合成
【化１６０】
0005412448.tif 000162
ＣＨ２Ｃｌ２中の濃度０.１Ｍの４−クロロ−３−ニトロピリジン(１.３当量)および(３ａＲ,７Ｒ,７ａＳ)−７−メチルヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−２(３Ｈ)−オン(１.５当量)の溶液を室温で４８時間撹拌し、その時点で過剰の４−クロロ−３−ニトロピリジンを消費するためにピペリジン(０.４当量)を加えた。さらに２時間撹拌した後、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ジカーボネート(２.０当量)およびジメチルアミノピリジン(０.１当量)を加えた。４時間撹拌した後、溶液をＥｔＯＡｃとＮａＨＣＯ３(飽和)の層間に分配し、さらにＮａＨＣＯ３(飽和)で、そしてＮａＣｌ(飽和)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、シリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し、(３ａＲ,７Ｒ,７ａＳ)−ｔｅｒｔ−ブチル ７−メチル−５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレートを得た(６２％)。
LCMS (m/z): 379.0 (MH+).
【０２２８】
(３ａＲ,７Ｒ,７ａＳ)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(３−アミノピリジン−４−イル)−７−メチル−２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレートの合成
【化１６１】
0005412448.tif 000163
メタノール中の濃度０.１Ｍの(３ａＲ,７Ｒ,７ａＳ)−ｔｅｒｔ−ブチル ７−メチル−５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレート(１.０当量)の溶液に、１０％  パラジウム／炭素(０.１当量)を加えた。得られた不均一な溶液を水素雰囲気下に置き、１４時間撹拌した。この時点で混合物をセライトのパッドで濾過し、メタノールで溶出した。揮発成分を真空で除去し、(３ａＲ,７Ｒ,７ａＳ)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(３−アミノピリジン−４−イル)−７−メチル−２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレートを得た。
LCMS (m/z): 349.1 (MH+); LC Rt = 2.06分。
【０２２９】
(３ａＲ,７Ｓ,７ａＲ)−７−メチルヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−２(３Ｈ)−オンの合成
【化１６２】
0005412448.tif 000164
メタノール中の、濃度０.１Ｍの(３ａＲ,７Ｓ,７ａＲ)−５−(４−メトキシベンジル)−７−メチルヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−２(３Ｈ)−オン(１.０当量)の溶液に、２０％  水酸化パラジウム／炭素(０.３当量)を加えた。得られた不均一な溶液を水素雰囲気下に置き、２時間撹拌した。この時点で混合物をセライトのパッドで濾過し、メタノールで溶出した。揮発成分を真空で除去し、(３ａＲ,７Ｓ,７ａＲ)−７−メチルヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−２(３Ｈ)−オンを得た(９９％)。
LCMS (m/z): 157.1 (MH+).
【０２３０】
(３ａＲ,７Ｓ,７ａＲ)−ｔｅｒｔ−ブチル ７−メチル−５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレートの合成
【化１６３】
0005412448.tif 000165
ＣＨ２Ｃｌ２中の濃度０.１Ｍの４−クロロ−３−ニトロピリジン(１.３当量)および(３ａＲ,７Ｓ,７ａＲ)−７−メチルヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−２(３Ｈ)−オン(１.５当量)の溶液を４８時間撹拌し、その時点で過剰の４−クロロ−３−ニトロピリジンを消費するためにピペリジン(０.４当量)を加えた。さらに２時間撹拌した後、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ジカーボネート(２.０当量)およびジメチルアミノピリジン(０.１当量)を加えた。４時間撹拌した後、溶液をＥｔＯＡｃとＮａＨＣＯ３(飽和)の層間に分配し、さらにＮａＨＣＯ３(飽和)で、そしてＮａＣｌ(飽和)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、シリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(溶出液として７５％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン)、(３ａＲ,７Ｓ,７ａＲ)−ｔｅｒｔ−ブチル ７−メチル−５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレートを得た(３５％)。
LCMS (m/z): 379.0 (MH+).  LC Rt = 2.42分。
【０２３１】
(３ａＲ,７Ｒ,７ａＳ)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(３−アミノピリジン−４−イル)−７−メチル−２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレートの合成
【化１６４】
0005412448.tif 000166
メタノール中、濃度０.１Ｍの(３ａＲ,７Ｓ,７ａＲ)−ｔｅｒｔ−ブチル ７−メチル−５−(３−ニトロピリジン−４−イル)−２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレート(１.０当量)の溶液に、１０％  パラジウム／炭素(０.１当量)を加えた。得られた不均一な溶液を水素雰囲気下に置き、１４時間撹拌した。この時点で混合物をセライトのパッドで濾過し、メタノールで溶出した。揮発成分を真空で除去し、(３ａＲ,７Ｓ,７ａＲ)−ｔｅｒｔ−ブチル ５−(３−アミノピリジン−４−イル)−７−メチル−２−オキソヘキサヒドロオキサゾロ[４,５−ｃ]ピリジン−３(２Ｈ)−カルボキシレートを得た。
LCMS (m/z): 349.1 (MH+); LC Rt = 2.18分。
【０２３２】
方法３
２,６−ジフルオロベンゾチオアミドの合成
【化１６５】
0005412448.tif 000167
トルエン中の２,６−ジフルオロベンズアミド(１当量)およびローソン反応剤(０.５当量)の溶液(０.２Ｍ)を、９０℃で１４時間加熱した。冷却後、揮発成分を真空で除去し、ＳｉＯ２のクロマトグラフィーによって精製し(２５％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン)、２,６−ジフルオロベンゾチオアミドを明黄色の固体として得た(９９％)。
LCMS (m/z): 174.1 (MH+); LC Rt = 2.19分。
【０２３３】
シクロヘキサンカルボチオアミドの合成
【化１６６】
0005412448.tif 000168
方法３に従って、シクロヘキサンカルボキサミドおよびローソン反応剤を反応させて、シクロヘキサンカルボチオアミドを得た。
LCMS (m/z): 144.1 (MH+); LC Rt = 5.10分。
【０２３４】
方法４
２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボン酸エチルの合成
【化１６７】
0005412448.tif 000169
エタノール中の２,６−ジフルオロベンゾチオアミド(１.０当量)およびブロモピルビン酸エチル(１.０当量)の溶液(１.０Ｍ)を、マイクロ波で、１３０℃で３０分間加熱した。揮発成分を真空で除去した後、酢酸エチルを加えて、溶液をＮａ２ＣＯ３(飽和)で、そしてＮａＣｌ(飽和)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して、２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボン酸エチルを得た(８４％)。
LCMS (m/z): 270.1 (MH+); LC Rt = 3.79分。
【０２３５】
２−シクロヘキシルチアゾール−４−カルボン酸エチルの合成
【化１６８】
0005412448.tif 000170
方法４に従って、シクロヘキサンカルボチオアミドを用いて、２−シクロヘキシルチアゾール−４−カルボン酸エチルを得た。
LCMS (m/z):  240.1 (MH+); LC Rt = 3.90分。
【０２３６】
方法５
２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボン酸の合成
【化１６９】
0005412448.tif 000171
２：１  ＴＨＦ／ＭｅＯＨ中の２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボン酸エチル(１.０当量)の溶液(０.１７Ｍ)に、１.０Ｍ  ＬｉＯＨ(２.０当量)を加えた。１６時間放置した後、１.０Ｍ  ＨＣｌ(２.０当量)を加え、ＴＨＦ／ＭｅＯＨを真空で除去した。得られた固体を濾過し、Ｈ２Ｏで濯いで、乾燥し、２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボン酸を堅くなった(crusty)固体として得た(８８％)。
LCMS (m/z): 251.1 (MH+); LC Rt = 2.68分。
【０２３７】
２−シクロヘキシルチアゾール−４−カルボン酸の合成
【化１７０】
0005412448.tif 000172
方法５に従って、２−シクロヘキシルチアゾール−４−カルボン酸エチルを加水分解して、２−シクロヘキシルチアゾール−４−カルボン酸を得た。
LCMS (m/z): 212.1 (MH+); LC Rt = 2.90分。
【０２３８】
２−アミノ−２−シアノ酢酸エチルの合成
【化１７１】
0005412448.tif 000173
７０mlの水および５６mlの飽和水性重炭酸ナトリウム中の、２−シアノ−２−(ヒドロキシイミノ)酢酸エチル(１当量)の溶液に、Ｎａ２Ｓ２Ｏ４(２.８当量)を１０分かけて少しずつ加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。溶液を塩化ナトリウムで飽和させ、塩化メチレンで抽出し(３００ml×３)、次いで合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮し、表題化合物を得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた(５５％)。
LC/MS (m/z): 129.0 (MH+), Rt: 0.25分。
【０２３９】
２−シアノ−２−(２,６−ジフルオロベンズアミド)酢酸エチルの合成
【化１７２】
0005412448.tif 000174
６mlのジクロロメタン中の２−アミノ−２−シアノ酢酸エチル(１当量)の溶液に、ピリジン(１.５当量)および塩化 ２,６−ジフルオロベンゾイル(１当量)を０℃で加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１)、表題化合物を得た(８４％)。
LC/MS (m/z): 269.1 (MH+), Rt: 0.69分。
【０２４０】
５−アミノ−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボン酸の合成
【化１７３】
0005412448.tif 000175
１０mlのトルエン中の２−シアノ−２−(２,６−ジフルオロベンズアミド)酢酸エチル(１当量)の溶液に、ローソン反応剤を加えた。混合物を９５℃で２日間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。粗製の残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し(ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１)、５−アミノ−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボン酸エチルを得た。これを５mlのメタノールおよび５mlのＴＨＦに溶解した。次いで混合物を１Ｍ  水酸化ナトリウム(２当量)を加えた。反応混合物を室温で一夜撹拌した。反応物を濃縮して大部分の溶媒を除去した。残渣を酢酸エチルで抽出した。水層を１Ｎ  ＨＣｌによってｐＨ＝４〜５まで酸性にした。得られた混合物を酢酸エチルによって抽出した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮し、純粋な表題化合物を得た(３４％)。
LC/MS (m/z): 257.1 (MH+), Rt: 0.61分。
【０２４１】
方法６
(Ｓ)−Ｎ−(４−(３−アミノピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミドの合成
【化１７４】
0005412448.tif 000176
ＮＭＰ中のそれぞれ１当量の(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメート、２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボン酸、ＨＯＡＴおよびＥＤＣの濃度０.３８Ｍの均一な溶液を、４８時間放置し、その時点で混合物をＨＰＬＣによって直接精製した。凍結乾燥後、(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−(２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド)ピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートのＴＦＡ塩を得た。あるいは、ＨＰＬＣフラクションをＥｔＯＡｃおよび固体のＮａ２ＣＯ３に加えて、分離し、ＮａＣｌ(飽和)で洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥した後、濾過し、揮発成分を真空で除去し、(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−(２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド)ピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た。
【０２４２】
Ｂｏｃ基を、２５％  ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２で２時間、または過剰のジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌで１２時間処理することによって除去した。揮発成分を真空で除去した後、その物質をＲＰ−ＨＰＬＣによって精製し、凍結乾燥後、(Ｓ)−Ｎ−(４−(３−アミノピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミドをＴＦＡ塩として得た。あるいは、ＨＰＬＣフラクションをＥｔＯＡｃおよび固体Ｎａ２ＣＯ３に加え、分離し、ＮａＣｌ(飽和)で洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥した後、濾過し、揮発成分を真空で除去し、遊離塩基を得た。ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏに溶解した後、１当量の１Ｎ  ＨＣｌを加えて凍結乾燥し、(Ｓ)−Ｎ−(４−(３−アミノピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミドの塩酸塩を得た(４３％)。
LCMS (m/z): 416.1 (MH+); LC Rt = 1.95分。
【０２４３】
ベンゾイル保護されたヒドロキシルが存在するならば、それらは、Ｂｏｃ除去前に、ＭｅＯＨ中０.２Ｍ  水酸化ナトリウム(３当量)で室温で３時間処理されることによって脱保護され、その後、溶液を酢酸エチルで希釈し、塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮し、Ｂｏｃ保護されたアルコールを得る。
【０２４４】
Ｎ−Ｂｏｃ−１,２−アミノアルコール環状カルバメートが存在するならば、Ｂｏｃ脱保護前に、環状カルバメートは、メタノール中、濃度０.１ＭのＣｓ２ＣＯ２(０.５当量)で３時間処理することによって切断され得る。揮発成分を真空で除去した後、Ｂｏｃアミノ基は上記の通り脱保護された。
【０２４５】
ＴＢＤＭＳ−エーテルが存在するならば、それらは、Ｂｏｃ除去前に、６Ｎ  ＨＣｌとＴＨＦとメタノール(１：２：１)で、室温で２時間処理することによって脱保護された。揮発成分を真空で除去した後、Ｂｏｃアミノ基は上記の通り脱保護した。
【０２４６】
ジエトキシホスホリルアミノ基が存在するならば、アミンは、ジオキサン／２Ｎ  ＨＣｌ(水性)の１：１溶液を７０℃で一夜加熱することによって脱保護された。揮発成分を真空で除去した後、その物質をＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。
【０２４７】
下記の化合物を方法６を用いて製造した。
【表２】
0005412448.tif 000177
【０２４８】
【表３】
0005412448.tif 000178
【０２４９】
【表４】
0005412448.tif 000179
【０２５０】
【表５】
0005412448.tif 000180
【０２５１】
【表６】
0005412448.tif 000181
【０２５２】
【表７】
0005412448.tif 000182
【０２５３】
【表８】
0005412448.tif 000183
【０２５４】
【表９】
0005412448.tif 000184
【０２５５】
(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−(２−ブロモチアゾール−４−カルボキサミド)ピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートの合成
【化１７５】
0005412448.tif 000185
ＤＭＦ中、それぞれ１当量の(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−アミノピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメート、２−ブロモチアゾール−４−カルボン酸、ＨＯＡＴおよびＥＤＣを含む濃度０.５Ｍの溶液を６０時間撹拌した。溶液をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏ(４×)で、そしてＮａＣｌ(飽和)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、揮発成分を真空で除去し、(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−(２−ブロモチアゾール−４−カルボキサミド)ピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメートを得た。
LCMS (m/z): 416.1 (MH+); LC Rt = 1.95分。
【０２５６】
方法７
(Ｓ)−Ｎ−(４−(３−アミノピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２−フルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミドの合成
【化１７６】
0005412448.tif 000186
３：１  ＤＭＥ／２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３中、(Ｓ)−ｔｅｒｔ−ブチル １−(３−(２−ブロモチアゾール−４−カルボキサミド)ピリジン−４−イル)ピペリジン−３−イルカルバメート(１.０当量)、２−フルオロフェニルボロン酸(３.０当量)、Ｐｄ(ｄｐｐｆ)Ｃｌ２−ＣＨ２Ｃｌ２(０.１５当量)の溶液(濃度＝０.１Ｍ)を、１２０℃で、１２００秒間のマイクロ波照射で加熱した。冷却後、有機層を分離し、濃縮し、Ｎ−Ｂｏｃスズキ生成物を逆相ＨＰＬＣによって直接精製した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、得られた固体を２５％  ＴＦＡ／ＤＣＭ(得られた濃度０.０５Ｍ)で処理した。２時間置いた後、揮発成分を真空で除去し、残渣を逆相ＨＰＬＣによって精製した。凍結乾燥後、(Ｓ)−Ｎ−(４−(３−アミノピペリジン−１−イル)ピリジン−３−イル)−２−(２−フルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミドをＴＦＡ塩として得た(３５％)。
LCMS (m/z): 398.1 (MH+); LC Rt = 2.06分。
【０２５７】
下記の化合物を方法７を用いて製造した。
【表１０】
0005412448.tif 000187
【０２５８】
(３Ｒ,４Ｒ)−１−(３−(２−ブロモチアゾール−４−カルボキサミド)ピリジン−４−イル)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化１７７】
0005412448.tif 000188
ＤＭＦ中、それぞれ１当量の(３Ｒ,４Ｒ)−１−(３−アミノピリジン−４−イル)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル、２−ブロモチアゾール−４−カルボン酸、ＨＯＡＴおよびＥＤＣを含む濃度０.５Ｍの溶液を６０時間撹拌した。溶液をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏ(４×)で、そしてＮａＣｌ(飽和)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、揮発成分を真空で除去し、(３Ｒ,４Ｒ)−１−(３−(２−ブロモチアゾール−４−カルボキサミド)ピリジン−４−イル)−４−(ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ)ピペリジン−３−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た。
LCMS (m/z): 612.2/614.2 (MH+); LC Rt = 4.26分。
【０２５９】
(１Ｓ,３Ｒ,５Ｓ)−３−(３−(２−ブロモチアゾール−４−カルボキサミド)ピリジン−４−イル)−５−メチルシクロヘキシルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成
【化１７８】
0005412448.tif 000189
ＤＭＦ中、それぞれ１当量の(１Ｓ,３Ｒ,５Ｓ)−３−(３−アミノピリジン−４−イル)−５−メチルシクロヘキシルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル、２−ブロモチアゾール−４−カルボン酸、ＨＯＡＴおよびＥＤＣを含む濃度０.３Ｍの溶液を１７時間撹拌した。溶液をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏ(４×)で、そしてＮａＣｌ(飽和)で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過して、揮発成分を真空で除去し、(１Ｓ,３Ｒ,５Ｓ)−３−(３−(２−ブロモチアゾール−４−カルボキサミド)ピリジン−４−イル)−５−メチルシクロヘキシルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た。
LCMS (m/z): 495.1/497.1 (MH+); LC Rt = 3.17分。
【０２６０】
方法８
Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル)チアゾール−４−カルボキサミドの合成
【化１７９】
0005412448.tif 000190
１：１  トルエン／エタノール中濃度０.０３Ｍの(１Ｓ,３Ｒ,５Ｓ)−３−(３−(２−ブロモチアゾール−４−カルボキサミド)ピリジン−４−イル)−５−メチルシクロヘキシルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル(１.０当量)、２,６−ジフルオロ−３−メトキシフェニルボロン酸(４.０当量)、ＤＩＥＡ(４.０当量)およびＰｄ(ＰＰｈ３)４(０.２当量)の溶液を、マイクロ波で、１２０℃で２０分間加熱した。溶液を、マイクロ波で、１３０℃で２×３０分間再度加熱にかけた。溶媒を真空で除去し、残渣をＨＰＬＣによって精製した。生成物のフラクションを直接凍結乾燥して、保護されたアミド生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｂｏｃ基を２５％  ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２で２時間処理することによって脱保護した。揮発成分を真空で除去した後、生成物をＨＰＬＣによって精製し、Ｎ−(４−((１Ｒ,３Ｓ,５Ｓ)−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル)チアゾール−４−カルボキサミドを得た。
LCMS (m/z): 459.2 (MH+); LC Rt = 2.32分。
【０２６１】
上記の方法をスズキ反応に適用する際には、マイクロ波での再加熱を行い、さらに、再加熱時にさらなるボロン酸(４.０当量)、ＤＩＥＡ(４.０当量)およびＰｄ(ＰＰｈ３)４(０.２当量)をそれぞれ追加する必要があることがある。
【０２６２】
あるいは、２,６−ジフルオロ置換ボロン酸類および２−ブロモ−４−カルボキサミドチアゾール類でのスズキ反応を、１０：１  ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ中濃度０.０３Ｍの臭化物(１.０当量)、ボロン酸(５当量)、ＫＦ(５.５当量)、トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン(０.４当量)およびＰｄ２(ｄｂａ)３(０.２当量)をマイクロ波で１００℃で３０分間加熱することによって行ってもよい。この方法では、マイクロ波で１００℃の再加熱を行い、さらに、再加熱時にさらなるボロン酸(５.０当量)、ＫＦ(５.５当量)、トリ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン(０.４当量)およびＰｄ２(ｄｂａ)３(０.２当量)をそれぞれ添加する必要があることがある。
【０２６３】
下記の化合物を方法８を用いて製造した。
【表１１】
0005412448.tif 000191
【０２６４】
実施例５８
Ｎ−(４−((＋／−)−３−アミノ−４−フルオロ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミドの合成
【化１８０】
0005412448.tif 000192
ＭｅＯＨ中の(＋／−)−２−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)−４−(３−(２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド)ピリジン−４−イル)−６−メチルシクロヘキシル アセテートの溶液(０.０３Ｍ)に、炭酸カリウム(３.０当量)を加え、反応物を室温で３時間撹拌した。完了後、反応物を水と酢酸エチルの層間に分配した。さらに水相を酢酸エチルで３回以上抽出した。有機物を合わせて、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。単離された(＋／−)−５−(３−(２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド)ピリジン−４−イル)−２−ヒドロキシ−３−メチルシクロヘキシルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを、灰白色の固体として収率８７％で得た。
LC/MS = 545.2 (M+H), Rt = 0.75分。
【０２６５】
ＤＣＭ中の(＋／−)−５−(３−(２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド)ピリジン−４−イル)−２−ヒドロキシ−３−メチルシクロヘキシルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル(１.０当量)の溶液(０.０７Ｍ)に、０℃で、窒素雰囲気下で、ＤＡＳＴ(１.０当量)を加えた。反応物を１時間撹拌し、その後、２当量以上のＤＡＳＴを加えた。３０分後、出発物質の消費が完了した。水を添加することによって反応物をクエンチし、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。粗製の物質をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチルおよびヘキサン(１：１)で溶出して、(＋／−)−５−(３−(２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミド)ピリジン−４−イル)−２−フルオロ−３−メチルシクロヘキシルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを透明な油状物として収率６０％で得た。
LC/MS = 547.3 (M+H), Rt = 0.92分。
【０２６６】
ジクロロメタン中２５％  ＴＦＡで２時間処理することによってＢｏｃ基を除去した。真空下で濃縮した後、粗製の物質をセミ分取ＨＰＬＣによって精製した。純粋なフラクションを凍結乾燥して、望ましい生成物としてＮ−(４−((＋／−)−３−アミノ−４−フルオロ−５−メチルシクロヘキシル)ピリジン−３−イル)−２−(２,６−ジフルオロフェニル)チアゾール−４−カルボキサミドをＴＦＡ塩として収率７４％で得た。
LC/MS = 447.0 (M+H), Rt = 0.56分。
【０２６７】
下記の化合物を本明細書に記載された技術および手順を用いて製造する。
【表１２】
0005412448.tif 000193
【０２６８】
【表１３】
0005412448.tif 000194
【０２６９】
【表１４】
0005412448.tif 000195
【０２７０】
【表１５】
0005412448.tif 000196
【０２７１】
【表１６】
0005412448.tif 000197
【０２７２】
【表１７】
0005412448.tif 000198
【０２７３】
【表１８】
0005412448.tif 000199
【０２７４】
Ｐｉｍ１のＡＴＰ消費(depletion)アッセイ
ルシフェラーゼ−ルシフェリンをベースとするＡＴＰ検出試薬を用いて、ペプチド基質へのキナーゼ触媒ホスホリル移動に由来するＡＴＰ消費を定量して、ＰＩＭ１の活性を測定する。試験化合物を１００％  ＤＭＳＯに溶解し、直接白色３８４ウェル・プレートに０.５μｌ／ウェルで入れる。反応を開始させるために、１０μｌのアッセイ緩衝液(５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ(pH 7.5)、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、０.０５％  ＢＳＡ)中５ｎＭ  Ｐｉｍ１キナーゼおよび８０μＭ  ＢＡＤペプチド(RSRHSSYPAGT-OH)を、それぞれのウェルに加える。１５分後、１０μｌのアッセイ緩衝液中４０μＭ  ＡＴＰを加える。最終アッセイ濃度は、２.５ｎＭ  ＰＩＭ１、２０μＭ  ＡＴＰ、４０μＭ  ＢＡＤペプチドおよび２.５％  ＤＭＳＯである。約５０％のＡＴＰが消費されるまで反応を行い、次いで、２０μｌのKinaseGlo Plus (Promega Corporation)溶液を添加することによって停止させる。停止させた反応物を１０分間インキュベートし、残ったＡＴＰをVictor2 (Perkin Elmer)の発光によって検出する。前述の実施例の化合物をＰｉｍ１のＡＴＰ消費アッセイによって試験し、下記の表で示したＩＣ５０値を示すことが分かった。ＩＣ５０、すなわち最大の半分を阻害する濃度は、in vitroでその標的の５０％阻害に必要な試験化合物の濃度を表す。
【０２７５】
Ｐｉｍ２のＡＴＰ消費アッセイ
ルシフェラーゼ−ルシフェリンをベースとするＡＴＰ検出試薬を用いて、ペプチド基質へのキナーゼ触媒ホスホリル移動に由来するＡＴＰ消費を定量して、ＰＩＭ２の活性を測定する。試験化合物を１００％  ＤＭＳＯに溶解し、直接白色３８４ウェル・プレートに０.５μｌ／ウェルで入れる。反応を開始させるために、１０μｌのアッセイ緩衝液(５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ(pH 7.5)、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、０.０５％  ＢＳＡ)中１０ｎＭ  Ｐｉｍ２キナーゼおよび２０μＭ  ＢＡＤペプチド(RSRHSSYPAGT-OH)を、それぞれのウェルに加える。１５分後、１０μｌのアッセイ緩衝液中８μＭ  ＡＴＰを加える。最終アッセイ濃度は、５ｎＭ  ＰＩＭ２、４μＭ  ＡＴＰ、１０μＭ  ＢＡＤペプチドおよび２.５％  ＤＭＳＯである。約５０％のＡＴＰが消費されるまで反応を行い、次いで、２０μｌのKinaseGlo Plus (Promega Corporation)溶液を添加することによって停止させる。停止させた反応物を１０分間インキュベートし、残ったＡＴＰをVictor2 (Perkin Elmer)の発光によって検出する。前述の実施例の化合物をＰｉｍ２のＡＴＰ消費アッセイによって試験し、下記の表で示したＩＣ５０値を示すことが分かった。
【０２７６】
Ｐｉｍ３のＡＴＰ消費アッセイ
ルシフェラーゼ−ルシフェリンをベースとするＡＴＰ検出試薬を用いて、ペプチド基質へのキナーゼ触媒ホスホリル移動に由来するＡＴＰ消費を定量して、ＰＩＭ３の活性を測定する。試験化合物を１００％  ＤＭＳＯに溶解し、直接白色３８４ウェル・プレートに０.５μｌ／ウェルで入れる。反応を開始させるために、１０μｌのアッセイ緩衝液(５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ(pH 7.5)、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、０.０５％  ＢＳＡ)中１０ｎＭ  Ｐｉｍ３キナーゼおよび２００μＭ  ＢＡＤペプチド(RSRHSSYPAGT-OH)を、それぞれのウェルに加える。１５分後、１０μｌのアッセイ緩衝液中８０μＭ  ＡＴＰを加える。最終アッセイ濃度は、５ｎＭ  ＰＩＭ３、４０μＭ  ＡＴＰ、１００μＭ  ＢＡＤペプチドおよび２.５％  ＤＭＳＯである。約５０％のＡＴＰが消費されるまで反応を行い、次いで、２０μｌのKinaseGlo Plus (Promega Corporation)溶液を添加することによって停止させる。停止させた反応物を１０分間インキュベートし、残ったＡＴＰをVictor2 (Perkin Elmer)の発光によって検出する。前述の実施例の化合物をＰｉｍ３のＡＴＰ消費アッセイによって試験し、下記の表で示したＩＣ５０値を示すことが分かった。
【０２７７】
細胞増殖アッセイ
ＫＭＳ１１(ヒト骨髄腫細胞株)を、１０％  ＦＢＳ、ピルビン酸ナトリウムおよび抗生物質を加えたＩＭＤＭ中で培養した。同じ培地中で、２０００細胞／ウェルの密度で、アッセイの日に、９６ウェル組織培養プレートに、細胞を、外側のウェルは空けて、播種した。ＭＭ１.ｓ(ヒト骨髄腫細胞株)を、１０％  ＦＢＳ、ピルビン酸ナトリウムおよび抗生物質を加えたＲＰＭＩ１６４０中で培養した。同じ培地中で、５０００細胞／ウェルの密度で、アッセイの日に、９６ウェル組織培養プレートに、細胞を、外側のウェルは空けて、播種した。
【０２７８】
ＤＭＳＯ中に加えられた試験化合物を、ＤＭＳＯで望ましい最終濃度の５００倍に希釈した後、培養培地で最終濃度の２倍に希釈した。等体積の２×化合物を９６ウェルプレート中の細胞に加え、３７℃で３日間インキュベートした。
【０２７９】
３日後、プレートを室温に平衡化し、等体積のCellTiter-Glow試薬(Promega)を培養ウェルに加えた。該プレートを短時間激しく撹拌し、発光シグナルをルミノメーターで測定した。ＤＭＳＯのみで処理した細胞で見られるシグナル対コントロール化合物で処理した細胞で見られるシグナルの％阻害を計算し、下記の表で示した試験化合物についてのＥＣ５０値(すなわち細胞における最大効果の５０％を得るのに必要な試験化合物の濃度)を決定するために用いた。
【０２８０】
本発明の化合物のＩＣ５０およびＥＣ５０活性
上記のＰｉｍ１のＡＴＰ消費アッセイ(ＰＩＭ−１)、Ｐｉｍ２のＡＴＰ消費アッセイ(ＰＩＭ−２)およびＰｉｍ３のＡＴＰ消費アッセイ(ＰＩＭ−３)の手順を用いて、前記の実施例の化合物のＩＣ５０濃度を以下の表に示した通りに決定した。
【０２８１】
【表１９】
0005412448.tif 000200
【０２８２】
【表２０】
0005412448.tif 000201
【０２８３】
【表２１】
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【０２８４】
【表２２】
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【０２８５】
【表２３】
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【０２８６】
【表２４】
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【０２８７】
【表２５】
0005412448.tif 000206
【０２８８】
上記の細胞増殖アッセイの手順を用いて、前記の実施例の化合物のＥＣ５０濃度をＫＭＳ１１細胞において下記の表に示した通りに決定した。
【０２８９】
【表２６】
0005412448.tif 000207
【０２９０】
【表２７】
0005412448.tif 000208
【０２９１】
【表２８】
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