(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
インビボ又はエキソビボでの線維芽細胞増殖の促進及び／又は加速を目的とした組成物又は構成物の製造のための、２−メチル−２−［（１−オキソ−２−プロペニル）アミノ］−１−プロパンスルホン酸塩とプロペン酸２−ヒドロキシエチルエステルとの共重合体の使用。
【請求項２】
癒合の促進を目的とした組成物又は構成物の製造のための、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記共重合体は１つ以上の活性物質と併用されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
前記共重合体は、硫酸化糖と併用されることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記硫酸化糖はショ糖オクタ硫酸エステルカリウムであることを特徴とする、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記２−メチル−２−［（１−オキソ−２−プロペニル）アミノ］−１−プロパンスルホン酸塩はナトリウム塩であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
２−メチル−２−［（１−オキソ−２−プロペニル）アミノ］−１−プロパンスルホン酸塩とプロペン酸２−ヒドロキシエチルエステルとの共重合体を含む創傷治療用創傷被覆材であって、
前記共重合体は、創傷被覆材の構成要素であるエラストマー体中に存在し、当該共重合体を含むエラストマー体の重量に対して０．１重量％〜２０重量％の量で存在することを特徴とする、創傷治療用創傷被覆材。
【請求項８】
前記共重合体は１つ以上の活性物質と併用される、請求項７に記載の創傷被覆材。
【請求項９】
前記活性物質は、硫酸化糖である、請求項８に記載の創傷被覆材。
【請求項１０】
前記硫酸化糖はショ糖オクタ硫酸エステルカリウムであることを特徴とする、請求項９に記載の創傷被覆材。
【請求項１１】
前記共重合体は、当該共重合体を含む前記エラストマー体の重量に対して１重量％〜５重量％の量で存在する、請求項７〜１０のいずれか一項に記載の創傷被覆材。
【請求項１２】
前記２−メチル−２−［（１−オキソ−２−プロペニル）アミノ］−１−プロパンスルホン酸塩はナトリウム塩であることを特徴とする、請求項７〜１１のいずれか一項に記載の創傷被覆材。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の目的の１つは、本質的に、２−メチル−２−［（１−オキソ−２−プロペニル）アミノ］−１−プロパンスルホン酸塩とプロペン酸２−ヒドロキシエチルエステルとの共重合体である化合物の新規の使用である。
【０００２】
より具体的には、本発明は、当該化合物を線維芽細胞の増殖及び／又は分化を促進及び／又は加速する物質として、特に、癒合の促進を目的とした組成物又は構成物の製造のために、又は、エキソビボで使用して植皮用細胞を産生させることを目的とした組成物又は構成物の製造のために使用することに関する。
【０００３】
また、本発明は、当該化合物を単独で含む、又は、他の活性物質と併含する創傷治療用創傷被覆材（ドレッシング）にも関する。
【背景技術】
【０００４】
創傷の大部分は、熱傷、潰瘍、神経障害性潰瘍、静脈性又は動脈性潰瘍、糖尿病性潰瘍、褥瘡、水疱、滲出性創傷、真皮・表皮の病変（慢性と急性の場合がある）などの開放創であることが知られている。
【０００５】
創傷治療の主たる目的の一つは、当該創傷がどのような性質又は由来のものであれ、その創傷をふさぐことである。
【０００６】
さらに、創傷治癒は生物学的な自然現象であり、ヒトや動物の組織は、各局所病変を、その組織特有の修復及び再生過程によって修復する能力を有することが知られている。
【０００７】
概して、創傷治癒の過程は３期に分けられる。即ち、洗浄期、肉芽形成期、及び上皮形成期である。これらの各期は、それぞれ特有の細胞活性を有し、それにより修復過程が正確な時間順序で進行するという特徴を有する。
【０００８】
洗浄期の特徴は、早期に炎症現象が現れることである。外傷が生じるとすぐに、血管やリンパ管から分泌が始まる。放出されたトロンボキナーゼが活性化され、相関的にフィブリンが形成されることにより凝固が誘導される。約１０分後、滲出が始まり、これによって創傷の感染が阻止され、創傷が洗浄される。約４日後、当該創は増殖期に入る。生体は物質の損失分を新組織で補填し始める。このため、線維芽細胞がまずムコ多糖を産生し、このムコ多糖が、結合組織のコラーゲン線維の発現において基質となる。平均して６日目〜１０日目に、分化期に入る。コラーゲン線維が成熟し始める。創傷は、特定の細胞、即ち筋線維芽細胞の影響を受けて収縮する。次第に、肉芽組織から水分が消耗されていき、脈管がだんだんと少なくなり、結果、当該組織が硬化する。その後、当該組織は瘢痕組織へと変わり、これにより次々と瘢痕の収縮が促進される。
【０００９】
肉芽形成期として知られている第二治癒期の間、線維芽細胞は重要な役割を果たす。肉芽形成期は約３週間続き、通常の治癒過程では上皮形成もまた進行する。創傷中で線維芽細胞は、ケラチノサイト前駆細胞と共に、創縁、毛嚢、及び汗腺から増殖する。３日後、線維芽細胞はコラーゲンを産生し、当該コラーゲンの線維がそれぞれ、受ける力に合わせて配向されていく。それらの増殖は、特定数の因子により制御される。通例、肉芽組織が物質の損失分を補填し終えた場合や、線維芽細胞増殖が高まって創縁の位置にまで達した場合に、この増殖は中断される。
【００１０】
線維芽細胞は治癒過程における主要因子の一つである。実際、約６日目で、創傷中に存在する線維芽細胞の半数超が筋線維芽細胞へと変化する。当該細胞は、その細胞質中に収縮性の筋原線維が存在するという特徴を有し、当該筋原線維により創傷が収縮し、結果として創傷の表面積が減少し、創傷の閉鎖が早まることとなる。
【００１１】
従って、上記細胞は、創傷腔が自発的にふさがる上で主要な現象である創傷収縮において不可欠な役割を有する。筋線維芽細胞（収縮性タンパク質、α平滑筋アクチンを含む）の４０％超が肉芽組織中に存在する。創傷が治癒するとこれらの細胞は死ぬが、この消失の引き金となるシグナルは完全には解明されていない。
【００１２】
また、線維芽細胞は増殖期の鍵となる細胞である。線維芽細胞はＩＩＩ型コラーゲンを分泌した後、続いてＩ型コラーゲン及びヘパラン硫酸（これらは、真皮細胞外マトリックスの基本構成成分である）、さらには、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、フィブロネクチン、及びコラゲナーゼまでも分泌し、これにより、創傷がふさがれることとなる。
【００１３】
治癒過程は、小さな創傷や傷穴であったとしても、置かれる環境によっては数時間、数日間、又は数週間、又はさらに長期にわたって続くこともある。例えば潰瘍形成の場合、創傷は長期間、即ち、数カ月間又は数年間残存し続ける場合がある。
【００１４】
治癒期が短期間であっても長期間であっても、当該治癒期の間、創傷は新組織の再生により傷穴が完全にふさがれるまであらゆる種類（病原体又は異物）の侵入を受ける可能性がある。
【００１５】
あらゆる感染を防ぐために、通常、傷口の部分に病原物質をもたらし得るあらゆる汚染物質（ちり、破片など）を除去するように創傷を治療する。続いて、この部分の組織の創傷清拭や消毒を行う。場合によっては、創傷の閉鎖を促進するために数針縫合することもある。一旦これらの工程が行われてしまえば、創傷は治癒に適した環境に保たれることとなる。これを行うために、様々な種類の創傷被覆材が用いられ、病原体の侵入及び／又は増殖を防いでいる。
【００１６】
従って、創傷を治療する際、創傷閉鎖現象を促進して、例えば創傷への細菌や異物の侵入などを防ぎ、結果として創傷の感染を防ぐことが重要である。よって、創傷治癒過程を誘導又は促進する手段が必要である。
【００１７】
創傷治癒の誘導又は促進を目的として、幾つかの活性剤を投与することができる。これらの活性剤は、種々の濃度で、各種治癒期において作用し得る。当該活性剤は治療対象の創傷の段階や種類によって異なる。当該活性剤としては、例えば線維芽細胞及び／又はケラチノサイト増殖因子類（塩基性線維芽細胞増殖因子など）又は擬似増殖因子類（ｐｓｅｕｄｏ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒｓ）（マンノース−６−ホスフェート等）、グリコサミノグリカン類（ヒアルロン酸、コラーゲン等）、ホルモン類（エストラジオール、ＤＨＥＡ等）、多糖類（デキストラン等）などが挙げられる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１８】
非常に驚くべきかつ予想外なことに、２−メチル−２−［（１−オキソ−２−プロペニル）アミノ］−１−プロパンスルホン酸塩とプロペン酸２−ヒドロキシエチルエステルとの共重合体である化合物によって線維芽細胞の増殖及び／又は分化を促進し、かつ／又は加速し、結果として癒合を促進することもまた可能であることを見出した。
【００１９】
上記２−メチル−２−［（１−オキソ−２−プロペニル）アミノ］−１−プロパンスルホン酸塩はナトリウム塩であることが好ましい。
【００２０】
当該共重合体は、その乳化安定化能や良好な増粘能のために特に化粧品分野などで知られている物質である。
【００２１】
このような物質としては、例えば、Ｓｅｐｉｎｏｖ  ＥＭＴ  １０＜Ｒ＞の商品名でＳＥＰＰＩＣ社から販売されているものがある。
【００２２】
このように、第一の態様において、本発明の目的の一つは、インビボ又はエキソビボでの線維芽細胞増殖の促進及び／又は加速を目的とした組成物又は構成物の製造のための、特に癒合の促進を目的とした組成物又は構成物の製造のための、２−メチル−２−［（１−オキソ−２−プロペニル）アミノ］−１−プロパンスルホン酸塩とプロペン酸２−ヒドロキシエチルエステルとの共重合体の使用である。
【００２３】
上記共重合体はインビボで使用しても、エキソビボで使用してもよい。
【００２４】
エキソビボでの適用例としては、線維芽細胞増殖を促進するための培地の調製のための当該化合物の使用が挙げられる。当該使用は真皮シート又は真皮・表皮シートの自家移植に有用であると考えられる。これは、この種の移植では、患者自身から採取した少量のサンプルをもとに十分な表面積の皮膚を得るために、細胞培養技術が用いられることによる。本発明に係る共重合体の使用により線維芽細胞の増殖を加速できるため、当該使用はこの種の治療において有用であると考えられる。
【００２５】
インビボでの適用においては、上記共重合体は、創傷部やその周辺部、又は粘膜に、有利には局所的に、直接適用することが可能な組成物又は構成物の製造のために使用してもよい。当該共重合体は創傷被覆材に組み込まれるのが好ましい。
【００２６】
通常、上記共重合体は、単独で使用してもよいし、癒合を誘導若しくは促進し得る他の活性物質、又は、創傷治療に良好に作用し得る他の活性物質、例えば抗菌剤や鎮痛剤などと併用してもよい。
【００２７】
そのような活性剤の併用により創傷の併用治療が可能となる。本発明において使用できる活性物質の中では、例えば殺菌剤や静菌剤（クロラミン、クロルヘキシジン、銀塩、亜鉛塩、メトロニダゾール、ネオマイシン等）、癒合促進剤（ホルモン類、ペプチド類等）、創傷洗浄を促進する酵素（ペプシン、トリプシン等）、プロテアーゼ若しくはメタロプロテアーゼ阻害剤、鎮痛剤や局部麻酔薬（リドカイン、シンコカイン）、又は、非ステロイド系抗炎症薬（イブプロフェン、ケトプロフェン、フェノプロフェン、ジクロフェナク）が挙げられる。
【００２８】
上記共重合体は、硫酸化糖又は硫酸化糖の塩若しくは錯体と併用するのが好ましい。当該硫酸化糖は、例えば、錯体の形態、又は、Ｎａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｂａ、Ａｌ、Ｚｎ、Ｃｕ、Ｚｒ、Ｔｉ、Ｍｎ若しくはＯｓなどの金属との塩の形態、又は、アミノ酸などの有機塩基との塩の形態のショ糖オクタ硫酸エステルであってもよい。癒合過程で作用することが知られている活性成分であるショ糖オクタ硫酸エステルカリウムと、上記共重合体を併用した場合に特に有利な結果が得られている。
【００２９】
予想されなかったことだが、インビトロ増殖試験によって、２−メチル−２−［（１−オキソ−２−プロペニル）アミノ］−１−プロパンスルホン酸塩とプロペン酸２−ヒドロキシエチルエステルとの共重合体が非常に低い投与量で線維芽細胞増殖に活性を示すことが分かった。具体的には、そのような活性は、上記共重合体が培地中に０．０００６４ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する場合に確認されている。
【００３０】
また、特に有利なことに、上記共重合体は数日間にわたって活性を示すことも分かった。インビボで行った試験では、上記共重合体を培地に加えてから７２時間たっても線維芽細胞増殖に対する活性が認められた。これは、上記共重合体を創傷被覆材に含ませた場合に特に有利である。具体的には、活性を維持させつつ、交換の必要なしに、同じ創傷被覆材を数日間使用することができる。
【００３１】
通常、本発明において使用される共重合体は、あらゆる種類の組成物／構成物、特に溶液、クリーム、ジェル、塊状体（ｍａｓｓ）、具体的にはエラストマー体（ｅｌａｓｔｏｍｅｒｉｃ  ｍａｓｓ）、又は、創傷被覆材などに組み込むことができる。上記共重合体は、圧定布に組み込むこともできる。「圧定布（ｃｏｍｐｒｅｓｓ）」という用語は、創傷被覆材に通常使用されるあらゆる種類の吸収材、例えば、吸収性不織布（例えばビスコース系）、場合によっては非吸収性不織布（ポリエステル繊維など）と組み合わせた吸収性不織布、であってもよい繊維材料などを意味するものである。当該用語はさらに高吸湿性繊維（東洋紡績株式会社販売のランシール（登録商標）繊維など）やポリウレタン発泡体も含む。
【００３２】
特に、上記共重合体は、創傷に接触させて当該創傷を治療することを目的とした、創傷被覆材を構成する塊状体中、又は、創傷被覆材から分離した層上、又は、創傷被覆材の表面を被覆するコーティング中に存在してもよい。
【００３３】
本明細書において「創傷被覆材（ｄｒｅｓｓｉｎｇ）」という用語は、あらゆる種類の公知の創傷被覆材、好ましくはインターフェイス創傷被覆材（ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  ｄｒｅｓｓｉｎｇｓ）を包含するものである。このような創傷被覆材は、例えばＴｕｌｌｅ  Ｇｒａｓ＜Ｒ＞（Ｓｏｌｖａｙ  Ｐｈａｒｍａ製）、Ｐｈｙｓｉｏｔｕｌｌｅ＜Ｒ＞（Ｃｏｌｏｐｌａｓｔ製）、又は、Ｕｒｇｏｔｕｌ＜Ｒ＞（Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅｓ  Ｕｒｇｏ製）の商品名で販売されており、欧州特許第１，１４３，８９５号明細書に記載されている。
【００３４】
これらのインターフェイス創傷被覆材は、一般的に、塊状体、通常はエラストマー体で被覆されたメッシュ又はネット状の形態である。適用される創傷の種類に応じて、当該創傷被覆材は、メッシュやネット状物を用いない、貫通孔があってもなくてもよいシート状の塊状体で構成されていてもよい（塊状体の吸収力がほんのわずかしかないか、あるいは塊状体が吸収力を有しない場合、貫通孔のあるシートを滲出性創傷に使用するのが好ましく、そうすることで貫通孔から創傷滲出液が排出される）。
【００３５】
本発明はさらに、上記共重合体を含ませたヒドロゲル又は親水コロイドを主体とする創傷被覆材の製造のための用途も提供する。親水コロイドを主体とする公知の創傷被覆材は、例えば、Ａｌｇｏｐｌａｑｕｅ＜Ｒ＞（Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅｓ  Ｕｒｇｏ製）、Ｄｕｏｄｅｒｍ＜Ｒ＞（Ｃｏｎｖａｔｅｃ製）、及び、Ｃｏｍｆｅｅｌ＜Ｒ＞（Ｃｏｌｏｐｌａｓｔ製）の商品名で販売されている。このような創傷被覆材は、以下の特許出願：仏国特許出願公開第２，３９２，０７６号明細書、仏国特許出願公開第２，４９５，４７３号明細書、及び国際公開第９８／１０８０１号パンフレット、及び欧州特許出願公開第２６４，２９９号明細書に記載されている。
【００３６】
特許出願：国際公開第２００６／００７８４４号パンフレットに記載されているように、本発明において使用される共重合体を圧定布や発泡体などの吸収部材中に、例えばその吸収部材の創傷への接触面上に当該共重合体を配置させるなどして、含ませてもよい。
【００３７】
本発明はさらに、発泡体や圧定布などの吸収層と複合させたインターフェイス創傷被覆材の製造、又は、吸収性発泡体と複合させた親水コロイドの製造のための用途も提供する。このような創傷被覆材は、公知であり、例えばＵｒｇｏｔｕｌＤｕｏ＜Ｒ＞及びＣｅｌｌｏｓｏｒｂ＜Ｒ＞（Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅｓ  Ｕｒｇｏ製）の商品名で販売されている。当該創傷被覆材において、上記共重合体は塊状体及び／又は吸収層に含ませてもよい。
【００３８】
本発明において好ましく使用されるインターフェイス創傷被覆材は、エラストマー体で構成されている。即ち、ポリ（スチレン−オレフィン−スチレン）ブロック共重合体類から選択される１つ以上のエラストマー；並びに、可塑剤、粘着性付与樹脂、及び、必要に応じて添加される酸化防止剤から選択される１つ以上の化合物で構成されている。
【００３９】
そのようなエラストマー体は、当業者に周知であり、例えば、「Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ａｄｈｅｓｉｖｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」，Ｄｏｎａｔａｓ  Ｓａｔａｓ編集，１９９５年４月，第７章「Ｗｏｕｎｄ  ｄｒｅｓｓｉｎｇｓ」，１５８〜１７１頁に記載されている。
【００４０】
インターフェイス創傷被覆材などの創傷被覆材に上記共重合体を組み込む場合、上記共重合体は、エラストマー体の重量に対して１重量％〜５重量％の濃度で使用してもよい。このような濃度であれば、線維芽細胞増殖を活性化させ、結果として癒合を促進するのに十分であることが分かった。
【００４１】
通常、上記共重合体の創傷被覆材中における存在量は、その重合体を含む塊状体の重量に対して０．１重量％〜２０重量％であってもよく、好ましくは１重量％〜５重量％である。
【００４２】
第二の態様において、本発明は、２−メチル−２−［（１−オキソ−２−プロペニル）アミノ］−１−プロパンスルホン酸塩とプロペン酸２−ヒドロキシエチルエステルとの共重合体を含む上記創傷被覆材を包含することを意図している。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
線維芽細胞に対する上記共重合体の活性を実証するために、以下の２種類の実験によりインビトロでの検討を行った。
【００４４】
１．上記共重合体を、単独で、又は、活性物質（本実験では、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム）と併用して、様々な濃度で線維芽細胞培養培地に直接添加した。
【００４５】
本実験では、上記共重合体を、単独で、又は、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウムと併用して、上記共重合体の様々な希釈物を調製し、培地に添加した。
【００４６】
Ｓｅｐｉｎｏｖ  ＥＭＴ  １０共重合体を０．０１１ｍｇ／ｍＬに、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウムを０．０００６４ｍｇ／ｍＬに希釈し、これらの希釈物を線維芽細胞を含む培地で試験した。
【００４７】
２．上記共重合体を、単独で、又は、活性物質（本実験では、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム）と併用して、インターフェイス創傷被覆材のマトリックス中に含ませ、当該創傷被覆材を線維芽細胞を含む培養ウェルに貼付した。
【００４８】
本実験では、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウムと組み合わせて又は組み合わせないで、上記共重合体を様々な濃度で含む各種インターフェイス創傷被覆材を下記方法により製造した。上記２つの活性剤をどちらも含まないインターフェイス創傷被覆材も製造し、比較試験を行った。
【００４９】
試験用創傷被覆材の製造方法
ａ．エラストマー体の製造
以下の構成成分を表１に記載の重量比で使用して様々なエラストマー体（実施例１〜５）を製造した。
・エラストマー：ポリ（スチレン−エチレン−ブチレン−スチレン）のブロック共重合体（ＳＥＢＳと略す）；Ｋｒａｔｏｎ社販売のＫｒａｔｏｎ  Ｇ  １６５４及びＧ  １６５１
・可塑剤：鉱油：Ｓｈｅｌｌ社販売のＯｎｄｉｎａ  ９１７
・酸化防止剤：Ｃｉｂａ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ販売のＩｒｇａｎｏｘ  １０１０
・脂肪性物質：ワセリン：Ａｉｇｌｏｎ販売のＣｏｄｅｘ  Ａワセリン
・親水コロイド：カルボキシメチルセルロースナトリウム：Ｈｅｒｃｕｌｅｓ社販売のＣＭＣ  Ｂｌａｎｏｓｅ  ７Ｈ４ＸＦ
・追加の活性物質：ショ糖オクタ硫酸エステルカリウム：Ｅｕｔｉｃａｌｓ社販売
・共重合体：２−メチル−２−［（１−オキソ−２−プロペニル）アミノ］−１−プロパンスルホン酸塩とプロペン酸２−ヒドロキシエチルエステルとの共重合体：ＳＥＰＰＩＣ社販売のＳｅｐｉｎｏｖ  ＥＭＴ  １０
【００５０】
設定温度１５５℃でＺブレード・ミキサー中で混合してエラストマーを主成分とする塊状体を調製した。
（１）スチレン−エチレンブチレン−スチレントリブロックエラストマーを鉱油の半量及び酸化防止剤と混合する。
（２）３０分に、混合物にワセリンを添加する。
（３）４０分に、残りの鉱油を添加する。
（４）５５分に、混合物に、カルボキシメチルセルロースナトリウムと、該当する場合は活性剤とを添加する。
７０分にミキサーの中身を取り出す。
【００５１】
ｂ．創傷被覆材の製造
上記エラストマー体を使用して、エラストマー体で被覆されたメッシュで構成されるインターフェイス創傷被覆材を製造した。
【００５２】
より具体的には、本製造例においては、縦糸方向及び横糸方向共に３３デシテックスのポリエステル（ポリエチレンテレフタラート）ヤーンからなる熱硬化性マーキゼットでできた、目開きが約０．８〜１ｍｍ２の正方形メッシュセルを有するメッシュ（ＭＤＢ  Ｔｅｘｉｎｏｖ社販売のメッシュ５５５）を使用した。
【００５３】
このメッシュを、１３５〜１４５℃で溶融させたエラストマー体の層で被覆した後、２００μｍのすき間を有する２つの固定ローラーの間に通して余剰分を取り除いた。このようにして得たストリップを裁断し、各両端において、厚さ２３μｍのポリエステル製保護フィルムと組み合わせて複合体とした。このようにして、個々に不浸透性の袋に包装し、２５ｋＧｙのβ線で滅菌した一個単位の創傷被覆材を作製した。
【００５４】
【表１】
0005460580.tif 000002
【００５５】
線維芽細胞増殖に対する２−メチル−２−［（１−オキソ−２−プロペニル）アミノ］−１−プロパンスルホン酸塩とプロペン酸２−ヒドロキシエチルエステルとの共重合体の効果を以下のプロトコルによって測定した。
【００５６】
線維芽細胞増殖に対する上記共重合体の活性の実証：
【００５７】
使用細胞：
種類：正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）Ｒ９ＰＦ２のプール
培養：３７℃、５％ＣＯ２
培地：
ＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ２１９６９０３５）
２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ２５０３００２４）
５０  ＩＵ／ｍＬ  ペニシリン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １５０７００６３）
１０％ウシ胎仔血清（ｖ／ｖ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １０２７００９８）
【００５８】
被験品：
実施例１〜５のエラストマー体を使用して上述のように製造した、ウェルの大きさに合わせた各創傷被覆材と、Ｓｅｐｉｎｏｖ  ＥＭＴ  １０共重合体を０．０１１ｍｇ／ｍＬに、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウムを０．０００６４ｍｇ／ｍＬに希釈して得た各希釈物とを試験した。
【００５９】
増殖に対する効果：
１２ウェルプレートに線維芽細胞を低密度（６０％コンフルエンス）で播種した後、細胞を上記各希釈物で処理するか、又は、各創傷被覆材を上記プレートに貼付し、プラグにより定位置に保った（「試験群」という）。創傷被覆材及び希釈物は使用しないがプラグは使用する対照試験を行った（「対照群」という）。
【００６０】
その後、細胞を２４時間、４８時間、及び７２時間インキュベートした。各インキュベート時間において、インキュベートの最終の２４時間はトリチウム化チミジン（［メチル−３Ｈ］−チミジン、Ａｍｅｒｓｈａｍ  ＴＲＫ  ６８６  最終濃度２．５μＣｉ／ｍＬ）を添加し、その後、細胞層の細胞のＤＮＡを抽出し、精製し、ＤＮＡ中に取り込まれた放射能をシンチレーションカウンターで計数した。
【００６１】
得られた結果は、１分当たりの計数（ｃｐｍ）として表し、さらに、下記式に準じて対照群に対するパーセンテージとして表す。
％（対照群）＝（ｃｐｍ（試験群）／ｃｐｍ（対照群））×１００
式中：
ｃｐｍ（試験群）：試験群で得た１分当たりの計数の値
ｃｐｍ（対照群）：対照群で得た１分当たりの計数の値
【００６２】
全ての実験は３連で行った。
得られた結果を以下の表２〜４に示す。
【００６３】
【表２】
0005460580.tif 000003
【００６４】
【表３】
0005460580.tif 000004
【００６５】
【表４】
0005460580.tif 000005
【００６６】
これらのインビトロ実験によって、線維芽細胞増殖におけるＳｅｐｉｎｏｖ  ＥＭＴ  １０共重合体の作用、さらには、同細胞に対する当該共重合体とショ糖オクタ硫酸エステルカリウムとの複合的な活性が実証された。
【００６７】
得られた結果によれば、Ｓｅｐｉｎｏｖ  ＥＭＴ  １０共重合体をエラストマー体に当該エラストマー体総質量の５％の濃度で組み込んだ場合、特に有利であり、これは、細胞培養培地に接触させてから４８時間後及び７２時間後の結果に示されている。
【００６８】
上記共重合体を単独で使用し、細胞培養培地中で非常に低濃度（０．０００６４ｍｇ／ｍＬ）に希釈した場合でも、線維芽細胞増殖は著しく促進された。
【００６９】
驚くべきことに、Ｓｅｐｉｎｏｖ  ＥＭＴ  １０共重合体をショ糖オクタ硫酸エステルカリウムと併用した場合、線維芽細胞増殖に対して相乗効果が発揮されることを確認することもできた。この相乗効果は、特に、ショ糖オクタ硫酸エステルカリウムを０．０１１ｍｇ／ｍＬの濃度で、Ｓｅｐｉｎｏｖ  ＥＭＴ  １０共重合体を０．０００６４ｍｇ／ｍＬの濃度で培地に添加した場合に確認された。
【００７０】
従って、本発明において使用される共重合体は、特に創傷被覆材に含ませた場合、創傷の治療に、特に癒合の促進にとりわけ有利である。