(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の第１工程、第２工程及び第３工程を含む工程を経ることを特徴とする蛋白質分解物の製造方法。
第１工程：ゴマ種子由来の蛋白質１質量部に対して水を１０〜５０質量部の割合で混合し、その混合物を耐圧容器内に密閉して、耐圧容器内の雰囲気ガスをＮ２ガスで置換し、与圧した後、耐圧容器内の混合物を１０〜９０分間で１６０〜２８０℃の到達温度となるよう且つ到達温度時の耐圧容器内の圧力が４．０〜８．０ＭＰａとなるように加熱する工程。
第２工程：１６０〜２８０℃の同温度で０〜２０分間保持する工程。
第３工程：耐圧容器内の生成した加水分解物を冷却し、耐圧容器から取り出して、液体部を分離し、分離した液体部を乾燥する工程。
【請求項２】
ゴマ種子が、生ゴマ種子、煎りゴマ種子及び脱脂ゴマ種子から選ばれる一つ又は二つ以上である請求項１記載の蛋白質分解物の製造方法。
【請求項３】
第１工程が、耐圧容器内の混合物を２０〜６０分間で２００〜２４０℃の到達温度となるように加温する工程であり、また第２工程が、２００〜２４０℃の同温度を０〜２０分間維持する工程である請求項１又は２記載の蛋白質分解物の製造方法。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一つの項記載のＡＣＥ阻害活性を有する蛋白質分解物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ゴマ種子由来の蛋白質から得られる蛋白質分解物の製造方法に関し、更に詳しくはゴマ種子由来の蛋白質を亜臨界状態の水により加水分解することによって得られるアンジオテンシン変換酵素阻害活性を有する蛋白質分解物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、高血圧症は代表的な生活習慣病であり、脳出血、クモ膜下出血、脳梗塞、心筋梗塞、狭心症、腎硬化症等、様々な合併症を引き起こすことが知られている。高血圧症の原因にはアンジオテンシン変換酵素（以下、ＡＣＥという）が関与することが知られており、ＡＣＥの阻害活性を有するものが高血圧症を防止するものとして注目されている。かかるＡＣＥの阻害活性を有するものの一つとして食品素材タンパク質の酵素分解物であるペプチドが提案されており、かかるペプチドの製造方法として、ゼラチンに酵素コラゲナーゼを作用させてＡＣＥの阻害活性を有するペプチドを得る方法（例えば、特許文献１参照）、ゴマ種子由来の蛋白質を酵素分解する方法（例えば、特許文献２参照）、乳質原料物質等からκカゼイングリコマクロペプチドを製造し、このκカゼイングリコマクロペプチドを蛋白質分解酵素で加水分解する方法（例えば、特許文献３参照）、蛋白質を３００〜４００℃の温度で２２１〜１０００気圧の高温・高圧下の超臨界状態又は亜臨界状態の水で加水分解する方法（例えば、特許文献４参照）等が提案されている。
【０００３】
しかし、酵素を用いた製造方法はその方法自体が複雑であって製造効率が悪く、また高温・高圧下の超臨界状態又は亜臨界状態の水で加水分解する方法は相応の設備と熟練を要し、それでもなお作業の危険性が高いという問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開昭５２−１４８６３１号公報
【特許文献２】特開平７−６９９２２号公報
【特許文献３】特開平８−２６９０８８号公報
【特許文献４】特開平９−２６８１６６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明が解決しようとする課題は、ＡＣＥ阻害活性を有する蛋白質分解物を安全に量産できる製造方法を提供する処にある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、前記の課題を解決するべく研究した結果、ゴマ種子由来の蛋白質を特定条件下の亜臨界状態の水で加水分解する方法が正しく好適であることを見出した。
【０００７】
すなわち本発明は、蛋白質分解物の製造方法（以下、本発明の製造方法という）に係り、下記の第１工程、第２工程及び第３工程を含む工程を経ることを特徴とする。
第１工程：ゴマ種子由来の蛋白質１質量部に対して水を１０〜５０質量部の割合で混合し、その混合物を耐圧容器内に密閉して、耐圧容器内の雰囲気ガスをＮ２ガスで置換し、与圧した後、耐圧容器内の混合物を１０〜９０分間で１６０〜２８０℃の到達温度となるよう且つ到達温度時の耐圧容器内の圧力が４．０〜８．０ＭＰａとなるように加熱する工程。
第２工程：１６０〜２８０℃の同温度で０〜２０分間保持する工程。
第３工程：耐圧容器内の生成した加水分解物を冷却し、耐圧容器から取り出して、液体部を分離し、分離した液体部を乾燥する工程。
【０００８】
本発明の製造方法では、ゴマ種子由来の蛋白質を亜臨界状態の水により特定の条件下で加水分解する。かかるゴマ種子としては、生ゴマ種子、煎りゴマ種子、練りゴマ種子、切りゴマ種子、脱脂ゴマ種子等の各種のゴマ種子が挙げられるが、なかでも生ゴマ種子、煎りゴマ種子及び脱脂ゴマ種子が好ましい。本発明の製造方法では、蛋白質分解物を効率的に得るために、かかるゴマ種子から抽出したゴマ種子由来の蛋白質を使用する。
【０００９】
ゴマ種子由来の蛋白質は、それ自体は公知の方法により得ることができ、例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．４７ｐ．４５７−４６０（１９８２）に記載の方法により得ることができる。かかる方法によれば、原料のゴマ種子をヘキサンにより脱脂し、脱脂したゴマ種子処理物から蛋白質をアルカリ溶液により抽出し、更に等電点沈殿法等の処理により沈殿物として得ることができる。
【００１０】
第１工程では、先ずゴマ種子由来の蛋白質（以下、蛋白質という）と水とを混合して混合物とする。水の量は蛋白質を加水分解するのに必要な科学量論的量以上であれば十分であるが、蛋白質１質量部に対し水を１０〜５０質量部の割合で混合する。またこの段階での混合物の温度は１０〜８０℃とするのが好ましい。この混合物を耐圧容器内に密閉して、耐圧容器内の混合物の到達温度が１６０〜２８０℃、好ましくは２００〜２４０℃となるように加熱する。到達温度に達するまでの加熱時間は、１０〜９０分間とするが、２０〜６０分間とするのが好ましく、この際の昇温速度は３〜２０℃／分とするのが好ましい。耐圧容器内の雰囲気ガスは、予めＮ２ガスで置換し、与圧しておく。
【００１１】
第２工程は、第１工程終了後、耐圧容器内の温度を保持して加水分解を更に進める工程である。第２工程では、第１工程で到達した同温度を０〜２０分間保持する。
【００１２】
第３工程は、耐圧容器内の生成した加水分解物を冷却し、耐圧容器から取り出して液体部を分離し、分離した液体部を乾燥する工程である。
【００１３】
耐圧容器内には反応処理物に相当する加水分解物が生成し、この加水分解物は通常液体部と固体部とが混合した状態となっているので、デカンテーション、濾過、遠心分離等により液体部を分離し、分離した液体部をスプレードライ、ドラムドライ、フリーズドライ等の方法により乾燥して、蛋白質分解物を得ることができる。
【００１４】
亜臨界状態の水としては、上水、蒸留水、イオン交換水及び超純水等を用いることができる。また反応に用いる耐圧容器としては、使用温度と使用圧力に耐えられるものはいずれでも使用可能であるが、なかでもステンレス製の耐圧容器が好ましい。反応方式は連続式でもバッチ式でもいずれも可能である。
【００１５】
本発明の製造方法によって得られる蛋白質分解物は、詳しくは後述するように、優れたＡＣＥ阻害活性を示し、血圧降下剤として有用である。
【発明の効果】
【００１６】
以上説明した本発明には、ゴマ種子由来の蛋白質からＡＣＥ阻害活性を有する蛋白質分解物を安全に量産できるという効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の製造方法によって得られる蛋白質分解物を経口投与したときの収縮期血圧の変化を例示するグラフ。
【図２】本発明の製造方法によって得られる蛋白質分解物を経口投与したときの拡張期血圧の変化を例示するグラフ。
【図３】本発明の製造方法によって得られる蛋白質分解物を経口投与したときの平均血圧の変化を例示するグラフ。
【図４】本発明の製造方法によって得られる蛋白質分解物を経口投与したときの心拍数の変化を例示するグラフ。
【００１８】
以下、本発明の構成及び効果をより具体的にするため、実施例及び比較例を挙げるが、本発明がこれらの実施例に限定されるというものではない。尚、以下の実施例及び比較例において、部は質量部を、また％は質量％を意味する。
【実施例】
【００１９】
試験区分１（蛋白質分解物の製造−その１）
実施例１
生ゴマ種子をヘキサンで脱脂した後、０．０５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液中に浸漬し、加熱して、液温を５５℃に保ちながら４５分間撹拌し、蛋白質を抽出した。抽出物から遠心分離（８０００×ｇ、１５分間）により残渣を除去し、残渣を除去した液体部を２Ｎ塩酸によりｐＨを４．５に調整し、等電点沈殿法により蛋白質を含む含水物を得た。
【００２０】
前記で得た蛋白質を含む含水物３０ｇをステンレス製の耐熱容器に入れ、蒸留水２００ｇを加えて混合物（蛋白質８．３ｇ／水２２１．７ｇ）とした。混合物の温度は２５℃であった。蓋を閉じて耐圧容器内の気体をＮ２ガスで置換した後、排気バルブを閉じて耐圧容器内の圧力が３．０ＭＰａになるまでＮ２ガスを圧入し、密封した。密封した耐圧容器内の混合物の温度が１８０℃に到達するまで７℃／分の昇温速度で加熱した。混合物の温度が１８０℃に到達したときの耐圧容器内の圧力は４．０ＭＰａであった。混合物の温度が１８０℃に到達後、直ちに５０℃まで冷却し、排気バルブを開いて復圧した後、蓋を開いて加水分解物を取り出した。取り出した加水分解物から遠心分離により水相を分離し、この水相を凍結乾燥して蛋白質分解物を得た。
【００２１】
実施例２〜５及び比較例１〜２
実施例１と同様にして、但し表１に示した条件下で、実施例２〜５及び比較例１〜２の蛋白質分解物を得た。
【００２２】
試験区分２（ＡＣＥ阻害活性の測定−その１）
６．０ｍＵ（１Ｕは１分間に１μｍｏｌのヒプリル酸を生成する酵素力価）のウサギの肺アンジオテンシン変換酵素（シグマ社製）、５ｍｍｏｌのヒプリルーＬ―ヒスチジルーＬ−ロイシン（シグマ社製）、４００ｍｍｏｌの塩化ナトリウム及び試験区分１で得た蛋白質分解物を濃度が１ｍｇ／ｍｌとなるよう純水に溶解した水溶液１００μｇを、３５０μｌのホウ酸緩衝液（ｐＨ８．３）中で撹拌して、液温を３７℃に保ちながら３０分間反応させた。１Ｎ塩酸を２５０μｌ添加して反応を停止させた後、１ｍｌの酢酸エチルを加えて１５秒間激しく撹拌した。遠心分離機（３０００ｒｐｍ×１０分間）により、処理して内容物を分離し、酢酸エチル層を０．５ｍｌ採取した。採取したものを１２０℃の温度下で乾燥して溶媒を除去し、蒸留水１ｍｌで再溶解して測定用試料とした。この測定用試料について、ヒプリル酸の吸収波長である波長２２８ｎｍの吸光度（Ｂ）を測定した。蛋白質分解物を含有させずに同様に試験して吸光度（Ａ）を測定し、以下の数１からＡＣＥ阻害活性（％）を求めた。
【００２３】
【数１】
0005561850.tif 000002
【００２４】
【表１】
0005561850.tif 000003
【００２５】
試験区分３（蛋白質分解物の製造−その２）
実施例６
試験区分１の実施例１と同様にして得た蛋白質３０ｇをステンレス製の耐圧容器に入れ、蒸留水２００ｍｌを加えて混合物（蛋白質４．９ｇ／水２２５．１ｇ）とした。混合物の温度は２５℃であった。蓋を閉じて耐圧容器内の気体をＮ２ガスで置換した後、排気バルブを閉じて耐圧容器内の圧力が３．０ＭＰａになるまでＮ２ガスを圧入し、密封した。密封した耐圧容器内の混合物の温度が２００℃に到達するまで７℃／分の昇温速度で加熱した。混合物の温度が２００℃に到達したときの耐圧容器内の圧力は４．５ＭＰａであった。混合物の温度が２００℃に到達後、直ちに５０℃まで冷却し、排気バルブを開いて復圧した後、蓋を開いて加水分解物を取り出した。取り出した加水分解物から遠心分離により水相を分離し、この水相を凍結乾燥して蛋白質分解物を得た。
【００２６】
実施例７
試験区分１の実施例１と同様にして得た蛋白質３０ｇをステンレス製の耐圧容器に入れ、蒸留水２００ｍｌを加えて混合物（蛋白質４．９ｇ／水２２５．１ｇ）とした。混合物の温度は２５℃であった。蓋を閉じて耐圧容器内の気体をＮ２ガスで置換した後、排気バルブを閉じて耐圧容器内の圧力が３．０ＭＰａになるまでＮ２ガスを圧入し、密封した。密封した耐圧容器内の混合物の温度が２００℃に到達するまで７℃／分の昇温速度で加熱した。混合物の温度が２００℃に到達後、更に同温度を１０分間保持した。保持中の耐圧容器内の圧力は４．５ＭＰａであった。その後、直ちに５０℃まで冷却し、排気バルブを開いて復圧した後、蓋を開いて加水分解物を取り出した。取り出した加水分解物から遠心分離により水相を分離し、この水相を凍結乾燥して蛋白質分解物を得た。
【００２７】
実施例又は参考例８〜１６
実施例６又は７と同様にして、但し表２に示した条件下で、実施例又は参考例８〜１６の蛋白質分解物を得た。
【００２８】
試験区分４（ＡＣＥ阻害活性の測定−その２）
試験区分２の測定と同様にして、但し蛋白質分解物の濃度を変えた数サンプルの水溶液を用意し、これらについてＡＣＥ阻害活性（％)を求め、各ＡＣＥ阻害活性を結ぶ線からＡＣＥ阻害活性が５０％のときの蛋白質分解物の濃度を算出し、阻害蛋白質分解物濃度（ＩＣ５０）を求めた。結果を表２にまとめて示した。
【００２９】
【表２】
0005561850.tif 000004
【００３０】
試験区分５（血圧降下剤としての評価）
１１週齢の高血圧自然発症ラット（日本チャールズリバー社）を温度２２±３℃、湿度６０±１５％、換気回数１２〜１５回／時間及び照明１２時間/日（７：００〜１９：００）に設定した飼育室にて、水及び飼料（オリエンタル酵母社製）を自由摂取させて馴化飼育した。体重が２７０〜３００ｇ且つ収縮期血圧が１６０ｍｍＨｇ以上のラットを１群５匹にわけ、試験区分３の実施例８の蛋白質分解物を水に分散したものを体重１ｋｇ当たり１０００ｍｇの割合で経口投与した。投与後、非観血的血圧測定装置（ＢＰ−９８Ａ、ソフトロン社製）を用い、Ｔａｉｌ−ｃｕｆｆ法で、経時的に収縮期血圧、拡張期血圧、平均血圧、心拍数、体重を測定した。対照として、蛋白質分解物を投与しない群についても同様に測定した。測定値の平均値を図１〜４に示した。
【００３１】
図１〜４からも明らかなように、本発明のＡＣＥ阻害活性を有する蛋白質分解物は、経口投与後に血圧降下作用を示した。また経口投与後、心拍数の上昇や体重の増加等の傾向は見られなかった。
【符号の説明】
【００３２】
１１〜１４  本発明の蛋白質分解物による場合の折れ線
２１〜２４  対照の折れ線
【図１】
0005561850.tif 000005
【図２】
0005561850.tif 000006
【図３】
0005561850.tif 000007
【図４】
0005561850.tif 000008