(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象が外科的介入後に急性腎傷害（ＡＫＩ）に関連する有害事象を経験するリスクを予測するための方法であって、
ａ）外科的介入前に得た対象の試料中の、肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアントの量を測定し；そして
ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較する
段階を含み；これにより、対象が外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を経験するリスクを予測する方法。
【請求項２】
さらに試料中のアディポネクチンまたはそのバリアントの量を測定し、そのマーカー量と各基準量の比較に基づいてリスクを予測する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
試料中のアルブミンまたはそのバリアントおよび好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）またはそのバリアントから選択される少なくとも１種類の追加マーカーの量を測定し、そのマーカー量と各基準量の比較に基づいてリスクを予測する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
外科的介入を実施する前に測定した際、Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントについて≦３．６μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量はその個体がＡＫＩに罹患するリスクが低いことの指標であり、Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントについて≧１０．８μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量はその個体がＡＫＩに罹患するリスクが高いことの指標である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
外科的介入を実施する前に測定した際、Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントについて≦４．２μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量はその個体が透析の必要性を生じるリスクが低いことの指標であり、Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントについて≧３５．４μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量はその個体が透析の必要性を生じるリスクが高いことの指標である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
外科的介入を実施する前に測定した際、アディポネクチンまたはそのバリアントについて≦３．６μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量はその個体がＡＫＩに罹患するリスクが低いことの指標であり、アディポネクチンまたはそのバリアントについて≧１５．６μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量はその個体がＡＫＩに罹患するリスクが高いことの指標である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
外科的介入を実施する前に測定した際、アディポネクチンまたはそのバリアントについて≦８．８μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量はその個体が透析の必要性を生じるリスクが低いことの指標であり、アディポネクチンまたはそのバリアントについて≧３０．４μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量はその個体が透析の必要性を生じるリスクが高いことの指標である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を経験するリスクをもつ対象に適切な療法を推奨する方法であって、
ａ）外科的介入の前に対象の尿試料中の肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアントの量を測定し；
ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較する
段階を含み；これにより、対象が外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を経験するリスクを予測し、この予測に基づいて適切な療法の開始または差控えを推奨する方法。
【請求項９】
対象が外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を経験するリスクを予測するための、外科的介入前における抗Ｌ−ＦＡＢＰ抗体の使用。
【請求項１０】
外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を経験するリスクをもつ対象に適切な療法を推奨または決定するための、外科的介入前における抗Ｌ−ＦＡＢＰ抗体の使用。
【請求項１１】
対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクを予測するためのデバイスであって、
ａ）対象の試料中の、肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）もしくはそのバリアント、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントおよび／またはアルブミンもしくはそのバリアントの量を測定するための手段；
ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較するための手段；ならびに
ｃ）段階ｂ）で実施した比較に基づいてリスクを予測するための手段
を含み、これにより腎損傷の診断に適応させたデバイス。
【請求項１２】
対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクを予測するためのキットであって、
ａ）対象の試料中の、肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）もしくはそのバリアント、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントおよび／またはアルブミンもしくはそのバリアントの量を測定するための手段；
ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較するための手段；ならびに
ｃ）段階ｂ）で実施した比較に基づいてリスクを予測するための手段
を含み、これにより腎損傷の診断に適応させたキット。
【請求項１３】
ａ）における試料が尿試料である、請求項１〜７のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
ａ）における試料が尿試料である、請求項１１記載のデバイス。
【請求項１５】
ａ）における試料が尿試料である、請求項１２記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、診断の方法および手段に関する。詳細には、本発明は、外科的介入、好ましくは心臓介入、特に冠動脈バイパス外科処置を受ける予定の個体において、急性腎傷害（ＡＫＩ）のリスクを予測するための方法に関する。本発明はまた、外科的介入、好ましくは心臓介入、特に冠動脈バイパス外科処置を受けた個体において急性腎傷害のリスクを予測するための方法、および外科的介入、好ましくは心臓介入、特に冠動脈バイパス外科処置を受けた個体において急性腎傷害を診断する方法に関する。さらに本発明は、その方法を実施するためのデバイス、キット、および外科的介入後にＡＫＩに罹患している患者に適切な療法を決定する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
急性腎傷害が臨床医療における著しい問題であることは当業者に知られている。入院患者の５％および集中治療室の３０％に及ぶ患者が急性腎傷害を発症するであろう。ＡＫＩでは血清クレアチニンレベルが徐々に上昇し、一般に少なくとも０．３ｍｇ／ｄｌのクレアチニン上昇またはベースラインから５０％を超える上昇を指標とする急性腎傷害が顕性になるまで２〜３日かかる場合がある(Devarajan, Expert Opinion Med Diagn 2008, 2: 387 - 398)。この報文の著者らは、急性腎傷害の初期指標が緊急に必要であることを指摘している。
【０００３】
幾つかの刊行物が、ＡＫＩと関係する種々のペプチドマーカーを報告している；たとえばLiangos et al (Biomarkers 2009 14: 423 - 431)は、ペプチドＫＩＭ−１およびＮＧＡＬのレベルが心肺外科処置後２時間で既に上昇し、これがＡＫＩの指標であることを示した。この著者らは、ＫＩＭ−１がＡＫＩグループで優先的に上昇すると報告したが、ＮＧＡＬはＡＫＩ患者とＡＫＩを伴わない患者を識別できなかった。同様な結果が同じバイオマーカー類についてHan et al, (Clin J. Am Soc Nephrol 2009, 4 873 - 882)により得られた。Portillaらは、小児集団で心臓外科処置の４時間後に、ＡＫＩを発症する患者ではＬ−ＦＡＢＰの上昇を観察できたが、ＡＫＩを発症しない患者では観察できなかった；Kidney International (2008) 73, 465 - 472を参照。
【０００４】
術後ＡＫＩの病因は多因子性であると思われ、それと罹患率および長期死亡率の上昇との関連性は十分に確立している(Brown et al Ann Thorac Surg 2008, 86: 4 - 11)。
冠動脈バイパス外科処置は、冠動脈アテローム硬化の局在性または程度のため経皮冠動脈介入が不可能である患者に優先的に実施される。この介入は著しいＡＫＩのリスクを伴い、このリスクは１０〜２０％の範囲に及び、これらの個体のうち１〜５％は透析を必要とすると記載されている(Mehta, Circulation 2006: 114 2208 - 16)。
【０００５】
本発明出願人の前公開されていない特許出願“適切な療法を必要とする個体における心不全関連腎損傷を診断するための手段および方法”、2009年4月30日出願、出願番号EP 09 159 234.5において、心不全を伴う患者はその尿中のＬ−ＦＡＢＰおよびＫＩＭ  １のレベルが上昇していること、およびこれらの尿細管損傷／修復マーカーの濃度は明らかにＮＴ−ｐｒｏ  ＢＮＰ（心不全と明らかに関連するナトリウム利尿ペプチド）のレベルと関連することが示された。
【０００６】
Kamijo et al. (Urinary liver-type fatty acid binding protein as a useful biomarker in chronic kidney disease. Mol. Cell Biochem. 2006; 284)は、Ｌ−ＦＡＢＰの尿中排出は尿細管間質損傷を引き起こすさまざまな種類のストレスを反映している可能性があり、慢性腎疾患の進行の有用な臨床マーカーになる可能性があると報告した。
【０００７】
ＡＫＩは、高いリスクをもつことが分かっている患者では、外科処置に際して慎重に体液バランスを維持すること、ならびに他のＡＫＩ促進因子を避けること、たとえばＡＣＥ阻害薬、ＮＳＡＩＤ、および腎傷害を引き起こすことが知られている他の薬物を外科処置前に中断すること、ならびに利尿薬、特にループ利尿薬を慎重に使用することにより阻止できる。詳細は、Brit J. of Hospital Medicine, 2008, 69, 450 - 454 (詳細については表2および3を参照)にまとめられている。
【０００８】
特に、早期に退院させることが多い低リスク集団では、急性腎傷害の初期証拠を認識することが重要である。早期に診断して処置すれば多くの症例が可逆性であるが、多くのＡＫＩ患者が著しい基礎障害、たとえば敗血症、呼吸不全を伴うので、全生存率は約５０％に留まっている。死亡の原因は腎不全自体ではなくこれらの障害によるものであることが多い。約１０％の症例で、即時処置としてまたは腎機能が徐々に劣化するのに伴って、透析または移植が必要になる。ＡＫＩは、適切かつ適時に処置すれば十分に可逆的な可能性がある。前記のように、腎機能が劣化して慢性腎不全になる場合もある。処置には、肺浮腫および高カリウム血症の即時処置；透析；投薬計画の調整、水、ＮａおよびＫ摂取の制限、リン酸結合剤、ならびにポリスチレンスルホン酸Ｎａを含めることができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】EP 09 159 234.5
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Devarajan, Expert Opinion Med Diagn 2008, 2: 387 - 398
【非特許文献２】Liangos et al (Biomarkers 2009 14: 423 - 431)
【非特許文献３】Han et al, (Clin J. Am Soc Nephrol 2009, 4 873 - 882)
【非特許文献４】Portilla et al, Kidney International (2008) 73, 465 - 472
【非特許文献５】Brown et al Ann Thorac Surg 2008, 86: 4 - 11
【非特許文献６】Mehta, Circulation 2006: 114 2208 - 16
【非特許文献７】Kamijo et al. (Urinary liver-type fatty acid binding protein as a useful biomarker in chronic kidney disease. Mol. Cell Biochem. 2006; 284)
【非特許文献８】Brit J. of Hospital Medicine, 2008, 69, 450 - 454
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
したがって、個体が外科的介入、好ましくは心臓介入、より好ましくは心血管介入、特に冠動脈バイパス外科処置の後にＡＫＩに罹患するリスクを予測するための方法および手段が緊急に求められている。外科的介入を実施する前に得た試料の分析に基づいて、個体が外科的介入後にＡＫＩに罹患するリスクを予測するための手段も求められている。
【００１２】
本発明の基礎となる技術的課題は、前記要望のうち少なくとも１つに応じる手段および方法の提供であるとみることができる。本発明は、特許請求の範囲および以下に示す態様によりこの技術的課題を解決する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
したがって本発明は、対象が対象の外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を経験するリスクを予測するための方法であって、対象の試料において測定した肝臓型脂肪酸結合タンパク質(liver-type fatty acid binding protein)（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアント、好ましくは対象の尿試料において測定した尿中肝臓型脂肪酸結合タンパク質とも呼ばれるものの量と、少なくとも１つの基準量との比較に基づく方法に関する。
【００１４】
本発明の方法は、下記の段階のうち少なくとも１つを含み、および／または含むことができる：ａ）対象の試料、好ましくは尿試料中の、肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアント、好ましくは尿中肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）の量を測定し；ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較し；ｃ）段階ｂ）で実施した比較に基づいてリスクを予測する。
【００１５】
したがって、１態様において本発明は、対象が対象の外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を経験するリスクを予測するための方法であって、下記の段階を含む方法を提供する：
ａ）対象の試料、好ましくは尿試料中の、肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアント、好ましくは尿中肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアントの量を測定し；
ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較し；そして
ｃ）段階ｂ）で実施した比較に基づいてリスクを予測する。
【００１６】
本発明の他の態様において、本発明は、対象が対象の外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を経験するリスクを予測するための方法であって、
ａ）対象の試料、好ましくは尿試料中の、肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアント、好ましくは尿中肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアントの量を測定し；そして
ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較する
段階を含み；これにより、対象が外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を経験するリスクを予測する方法を提供する。
【００１７】
本発明の好ましい態様において、Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントの量のほかに、試料、好ましくは尿試料中の、アディポネクチンまたはそのバリアントまたはそのバリアントの量を測定し、そしてこれらのマーカー量と基準量の比較に基づいてリスクを予測する。
【００１８】
本発明の他の好ましい態様において、尿試料中のアルブミンまたはそのバリアントおよび好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン(neutrophil gelatinase associated lipocalin)（ＮＧＡＬ）またはそのバリアントから選択される少なくとも１種類の追加マーカーの量を測定し、これらのマーカー量と基準量の比較に基づいてリスクを予測する。この態様において、Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントおよび好ましくはアディポネクチンまたはそのバリアントのほかに上記の群からの１つの追加マーカーだけの量、あるいはＬ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントおよび好ましくはアディポネクチンまたはそのバリアントのほかに両方の追加マーカーの量を測定する。
【００１９】
好ましくは、外科的介入の前にリスクを予測する。本発明には、外科的介入後にリスクを予測する場合も含まれる。
さらに本発明は、予め定めた対象患者に適切な療法を決定する方法、療法をモニタリングする方法、ならびに本発明の方法を実施するためのデバイスおよびキットに関する。
【００２０】
本発明の方法は、好ましくはインビトロ法である。さらに本発明の方法は、適切な場合には前記に明白に述べたもの以外の段階を含むことができる。たとえば、追加段階は試料の前処理またはその方法により得られた結果の評価に関するものであってもよい。
【００２１】
本発明に関して測定するマーカー（すなわち、Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアント、および任意選択的にアディポネクチンまたはそのバリアント、および任意選択的にアルブミンまたはそのバリアント、および任意選択的にＮＧＡＬまたはそのバリアント）の量を、好ましくは各対象の尿試料において測定する。場合により、前記マーカー（単数または複数）を各対象の血液、血漿または血清試料において測定してもよい。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、実施例１に記載する患者から外科処置前に得た試料の尿中Ｌ  ＦＡＢＰについてのＲＯＣ分析を示す。分析は臨床エンドポイント急性腎傷害に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図２】図２は、実施例１に記載する患者から外科処置前に得た試料の尿中Ｌ  ＦＡＢＰについてのＲＯＣ分析を示す。分析は透析の必要性に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図３】図３は、実施例１に記載する患者から外科処置前に得た試料のアディポネクチンについてのＲＯＣ分析を示す。分析は臨床エンドポイント急性腎傷害に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図４】図４は、実施例１に記載する患者から外科処置前に得た試料のアディポネクチンについてのＲＯＣ分析を示す。分析は透析の必要性に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図５】図５は、実施例１に記載する患者から外科処置前に得た試料のアルブミンについてのＲＯＣ分析を示す。分析は臨床エンドポイント急性腎傷害に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図６】図６は、実施例１に記載する患者から外科処置前に得た試料のアルブミンについてのＲＯＣ分析を示す。分析は透析の必要性に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図７】図７は、実施例１に記載する患者から外科処置前に得た試料のＮＧＡＬについてのＲＯＣ分析を示す。分析は臨床エンドポイント急性腎傷害に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図８】図８は、実施例１に記載する患者から外科処置前に得た試料のＮＧＡＬについてのＲＯＣ分析を示す。分析は透析の必要性に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図９】図９は、実施例１に記載する患者から外科処置終了の約６時間後に得た試料のアルブミンについてのＲＯＣ分析を示す。分析は臨床エンドポイント急性腎傷害に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図１０】図１０は、実施例１に記載する患者から外科処置終了の約１２時間後に得た試料のアルブミンについてのＲＯＣ分析を示す。分析は臨床エンドポイント急性腎傷害に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図１１】図１１は、実施例１に記載する患者から外科処置終了の約６時間後に得た試料のアルブミンについてのＲＯＣ分析を示す。分析は透析の必要性に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図１２】図１２は、実施例１に記載する患者から外科処置終了の約１２時間後に得た試料のアルブミンについてのＲＯＣ分析を示す。分析は透析の必要性に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図１３】図１３は、実施例１に記載する患者から外科処置終了の約６時間後に得た試料のアディポネクチンについてのＲＯＣ分析を示す。分析は透析の必要性に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図１４】図１４は、実施例１に記載する患者から外科処置終了の約１２時間後に得た試料のアディポネクチンについてのＲＯＣ分析を示す。分析は透析の必要性に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図１５】図１５は、実施例１に記載する患者から外科処置終了の約６時間後に得た試料のＬ−ＦＡＢＰについてのＲＯＣ分析を示す。分析は透析の必要性に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図１６】図１６は、実施例１に記載する患者から外科処置終了の約１２時間後に得た試料のＬ−ＦＡＢＰについてのＲＯＣ分析を示す。分析は透析の必要性に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図１７】図１７は、実施例１に記載する患者から外科処置終了の約６時間後に得た試料のＮＧＡＬについてのＲＯＣ分析を示す。分析は透析の必要性に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【図１８】図１８は、実施例１に記載する患者から外科処置終了の約１２時間後に得た試料のＮＧＡＬについてのＲＯＣ分析を示す。分析は透析の必要性に関して行なわれた（有りまたは無し）。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
用語“急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象”は、用語“急性腎傷害ＡＫＩ関連有害事象”と互換性をもって使用でき、ＡＫＩに罹患している個体に起きることが当業者に知られている事象／合併症を表わす。この用語は、好ましくはＡＫＩ自体、透析の必要性および死亡を含む。外科処置を受けている患者に関して、急性腎傷害は３日以内に少なくとも０．３ｍｇ／ｄｌのクレアチニン増加と定義される。クレアチニンの増加は遅延するので、この最終診断は遅れることが多い。腎機能障害の初期徴候は、尿量の減少である。血管内血液量減少症は急性腎傷害に似ている場合があり、この症例では液体を適用すると利尿が迅速に回復する。場合によっては乏尿症が無尿症（排尿が全くまたはほとんど無い）にまで進行し、無尿症の程度によっては血管内容量過負荷が起き、これは特に既存の心機能障害を伴う個体では心不全の臨床徴候と関連する可能性がある。場合によっては利尿薬および液体制限が効果をもたず、透析が必要になる。透析の開始について明確な推奨条件はないが、１００ｍｇ／ｄｌを超える血中尿素濃度、高カリウム血症またはアシドーシスが透析開始の決定に用いられる。意思決定は、必要ならば胸部Ｘ線、心エコー検査、超音波、およびおそらくＣＴスキャンにより支援することができる。
【００２４】
本明細書中で用いる用語“予測する”および“リスクを予測する”は、対象が将来、ＡＫＩ関連有害事象、好ましくはＡＫＩ、透析の必要性および／または死亡を生じる確率を評価することを表わす。好ましくは、この予測は外科的介入が実施される前の患者試料の分析に基づく。当業者に理解されるように、そのような評価は通常は診断される対象の１００％について正確であることを意図するものではない。しかし、この用語は、統計的に有意部分の対象（たとえば、コホート研究におけるコホート）をその疾患に罹患していると診断できることを要求する。ある部分が統計的に有意であるかどうかは、当業者が種々の周知の統計学的評価ツール、たとえば信頼区間の決定、ｐ−値の決定、スチューデントのｔ−検定、マン−ホイットニー検定などを用いて容易に判定できる。詳細は、Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983中にある。好ましい信頼区間は、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である。ｐ−値は、好ましくは０．１、０．０５、０．０１、０．００５、または０．０００１である。
【００２５】
一般に、本明細書の他の箇所に記載した有害事象は、クレアチニンまたはＧＦＲにより測定して３日以内、たとえば１日、２日、または３日、好ましくは３日で起きる。
本明細書中で用いる用語“モニタリング”は、各個体の病態生理学的状態をＡＫＩ関連事象、特にＡＫＩ自体、または透析の必要性、疾患の発症および／または進行、あるいは特定の処置が疾患の進行に及ぼす影響について追跡し続けることに関する。本明細書中で用いる診断は、関連疾患の分析およびモニタリングを表わす。特に、診断は臓器の特定部分（たとえば、腎臓の糸球体、尿細管およびヘンレ係蹄）の病理学的状態を分析して損傷および修復（たとえば、尿細管の場合）の程度を推定することを意味する。
【００２６】
本明細書中で用いる用語“対象”は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを表わす。ただし本発明によれば、特に腎機能に関して対象が好ましくは見掛け上は健康であるはずであると想定する（糸球体濾過速度（ＧＦＲ）および／または血清クレアチニンに基づいて）。≧約６０ｍｌ／分／１．７３ｍ２のＧＦＲ（すなわち、体表面積１．７３ｍ２当たりの濾過速度）は、本発明の状況内で見掛け上は健康な対象の指標であるとみなされる。≦１．３、好ましくは≦１．２ｍｇ／ｄｌの血清クレアチニン価は、本発明の状況内で見掛け上は健康な対象の指標であるとみなされる。上記に引用した血清クレアチニン価の限界は、一般に検査法の正常上限に相当する。
【００２７】
本発明に関して、用語“見掛け上は健康な”は、当業者に既知であり、基礎疾患の明らかな徴候を示していない対象を表わす。本発明における疾患は、たとえばクレアチニンクリアランス、特に前記に詳述したそれの上限に基づいた、特にＧＦＲに関する腎機能障害に関係する。したがって、対象は後記に定める腎機能障害に罹患している可能性があるが、好ましくは、医師による詳細な診断検査なしに腎機能障害と診断または評価できるほど明らかな徴候を示していない。特に、その疾患の明らかな徴候を示していない、見掛け上は健康な対象の腎機能障害を診断するには、専門家（たとえば腎臓専門医）による診断が必要であろう。用語“腎機能障害”は、本発明に関して“腎障害”とも呼ぶことができる。腎障害の一例は“腎不全”である。
【００２８】
本明細書中で用いる用語“腎機能(kidney function)”は、当業者に周知である。それは“腎機能(renal function)”と互換性をもって使用でき、腎臓が尿産生、体水分および体液の管理および排泄、ならびに電解質および廃棄物の恒常性および濾過、ならびにしばしば、エリスロポエチン合成を行なう能力に関係する。
【００２９】
本明細書中で用いる腎機能障害（腎不全）の最初の手掛かりのひとつは、尿中のタンパク質の存在である（ミクロ−またはマクロアルブミン尿症）。
腎不全では、腎機能が適切でなく、結果的に尿産生の減少、体液蓄積および体液障害、ならびに健康な腎臓では濾過される電解質および廃棄物の蓄積が生じる。さらに、エリスロポエチン合成減少の結果として貧血が頻繁にみられる。
【００３０】
腎機能は、血液および尿の検査結果に基づく式から計算された数値、一般にＧＦＲ（１分間当たり腎臓により濾過される血液の容量）および／またはクレアチニンクリアランスを用いて評価される。
【００３１】
ＧＦＲは、ｍＬ／分で表わされる腎機能の最良の全般的尺度である。若い健康な成人の普通のＧＦＲは約１２０〜１３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２であり、年齢と共に低下して７０歳では約７５ｍＬ／分／１．７３ｍ２になる。慢性腎疾患は３ヶ月間を超えるＧＦＲ＜６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２により定義される。ＧＦＲ測定に代わる至適基準はインスリンクリアランスである。インスリンは尿細管により吸収または排出されないので、それは腎機能の評価のための理想的なマーカーである。しかし、その測定は煩雑であるので、それは大部分は研究の場で用いられる。
【００３２】
クレアチニンは筋代謝によって一定速度で産生され、糸球体によって妨げられずに濾過され、尿細管によって排出もされる。クレアチニンは排出されるので、クレアチニンクリアランス（ＣｒＣｌ）は正常な腎機能をもつ者では約１０〜２０％、進行腎不全を伴う者では最高５０％、ＧＦＲを過剰評価する。
【００３３】
血清クレアチニン自体は腎機能の評価には不適切であるので、血清クレアチニンおよび他の因子を用いてＣｒＣｌを推定するために幾つかの式が考案された。コッククロフトとゴールトの式(Cockcroft and Gault formula)を用いてＣｒＣｌを推定することができる。それは、年齢、除脂肪体重、および血清クレアチニンレベルを用いる。それは、日常のクレアチニン産生が２８ｍｇ／ｋｇ／日であり、０．２ｍｇ／歳で低下するという前提に基づく。
【００３４】
急性腎傷害（ＡＫＩ）および慢性腎疾患（ＣＫＤ）は当業者に既知であり、一般にＧＦＲまたはクレアチニンクリアランスにより判定される腎不全を表わすと認識されている。
ＣＫＤは数カ月または数年にすらわたって悪化する可能性のある腎機能喪失として知られている。悪化しつつある腎機能の症状は不特定である。ＣＫＤでは糸球体濾過速度が著しく低下し、腎臓が水および溶質の濾過により廃棄物を排出する能力が結果的に低下する。クレアチニンレベルはＣＫＤの初期には正常な場合がある。ＣＫＤは可逆性ではない。ＣＫＤの重症度は５期に分類され、１期は最も軽度であり、通常はほとんど症状を引き起こさない。５期は、短い余命を含めた重篤な疾病を構成し、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）、慢性腎不全(chronic kidney failure（ＣＫＦ）またはchronic renal failure（ＣＲＦ）)とも呼ばれる。
【００３５】
急性腎傷害（ＡＫＩ）は以前は急性腎不全（ＡＲＦ）とも呼ばれており、急速な腎機能喪失であり、それはショック、低血液量、腎毒性化合物の被曝、および尿道閉塞に伴う尿うっ滞を含めたさまざまな理由から生じる可能性がある。ＣＫＤと異なり、ＡＫＩは可逆性の場合がある。ＡＫＩは、クレアチニンレベル、尿指数、たとえば血中尿素窒素（ＢＵＮ）、尿沈渣の発生に基づいて診断されるが、病歴によっても診断される。日毎に増加する血清クレアチニンはＡＫＩと診断できるとみなされる。
【００３６】
ＡＫＩは数時間ないし数日での急激な糸球体濾過速度低下、特に少なくとも３日以内で０．３ｍｇ／ｄｌの低下を特徴とする。
ＡＫＩはそれの基礎原因に関して不均一であり、腎低潅流の状況で起きる原因（腎前性）、腎臓の主要部分で起きる原因（内因性または腎性）、および尿路閉塞に関係する原因（腎後性）が含まれる。
【００３７】
ＡＫＩの腎前性原因は、腎臓への効果的血流を減少させるものである。これらには、全身性原因、たとえば血液量減少、低血圧、および心不全、ならびに腎臓に供給する血管に対する局所変化が含まれる。後者には、腎動脈狭窄（腎動脈の縮小）および腎静脈血栓形成（腎静脈内の凝血塊形成）が含まれる。より詳細には、腎前性原因には血液量減少症、たとえば著しい出血、胃腸液喪失（たとえば、下痢により起きる）、腎液喪失（たとえば、利尿薬により起きる）、血管外壊死巣分離(extravascular sequestration)（たとえば、火傷または重篤な低アルブミン血症により起きる）、または摂取量減少（たとえば脱水症）が含まれる。血流動態の変化も腎前性急性腎不全の原因となる可能性があり、これには心拍出量減少、全身血管拡張、腎血管収縮、腎自己調節応答障害または肝腎症候群が含まれる。
【００３８】
ＡＫＩの内因性または腎性原因は腎臓自体に起きるものであり、これには糸球体、尿細管、または間質に対する損傷が含まれ、これらはそれぞれ糸球体腎炎、急性尿細管壊死（ＡＴＮ）、および急性間質性腎炎（ＡＩＮ）により引き起こされる。より詳細には、内因性または腎性原因には腎動脈閉塞、糸球体または脈管構造の疾患、急性尿細管壊死（これには感染症が含まれるが、薬物、たとえば放射性造影剤、抗生物質および化学療法剤も含まれる）、間質性腎炎および尿細管内閉塞が含まれる。
【００３９】
ＡＫＩの腎後性原因には、尿路閉塞（腎盂、尿道および／または膀胱頚部の）が含まれる。これは良性前立腺肥大、腎結石、または尿道カテーテル閉塞に関係する可能性がある。
【００４０】
ＡＫＩの初期臨床徴候は、細胞外体液過負荷と関連して排尿量が４００ｍｌ／日未満に減少する尿量減少症である。電解質および酸／塩基の異常もみられ、これは最終的に尿素およびクレアチニンの増加を伴う。急性腎不全の腎後性原因はイメージング、具体的には超音波により診断できるが、急性腎不全の前腎性および内因性原因はイメージング法では診断できない。
【００４１】
本発明に関して用いられるマーカーは、腎臓またはその部分の特異的種類の損傷または傷害の指標になると推測される。Ｌ−ＦＡＢＰおよびＮＧＡＬは尿細管損傷のマーカーであると推定される。アルブミンおよびアディポネクチンは糸球体損傷のマーカーであると推定される。
【００４２】
本発明に関して、用語“尿細管損傷”は、尿細管細胞の上皮傷害を表わす。好ましくは、尿細管損傷は、冠動脈疾患および心不全を含めた既存の心機能障害および／または心血管疾患の結果またはそれに伴うものである。本発明は、好ましくは慢性尿細管損傷に関する。尿細管損傷では尿細管細胞が心不全に伴って虚血性になると考えられるが、腎臓全体または少なくとも最大部分もしくは大部分において尿細管はそれらの機能を維持しているとも考えられる。これは腎機能が損傷を受けていないか、あるいは軽度に損傷を受けているにすぎず、したがってＣＫＤまたはＡＫＩとは診断されないであろうということを意味する。尿細管損傷では、尿細管細胞が一般に壊死によって機能障害になり、死滅する可能性がある。しかし、虚血後に、または壊死後ですら、尿細管上皮の再生は可能であり、これは本発明に関して“尿細管修復”と呼ばれる。本発明は好ましくは慢性尿細管傷害に関するものであるので、持続的な尿細管修復、すなわち慢性尿細管損傷からの尿細管修復に関するものでもある。
【００４３】
本発明に関して、用語“糸球体損傷”は、糸球体細胞の上皮傷害を表わす。好ましくは、糸球体損傷は、冠動脈疾患および心不全を含めた既存の心機能障害および／または心血管疾患の結果またはそれに伴うものである。本発明は、好ましくは慢性糸球体損傷に関する。糸球体損傷では糸球体細胞が心不全に伴って虚血性になると考えられるが、腎臓全体または少なくとも最大部分もしくは大部分において糸球体はそれらの機能を維持しているとも考えられる。これは腎機能が損傷を受けていないか、あるいは軽度に損傷を受けているにすぎず、したがってＣＫＤまたはＡＫＩとは診断されないであろうということを意味する。糸球体損傷では、糸球体細胞が一般に壊死によって機能障害になり、死滅する可能性がある。しかし、虚血後に、または壊死後ですら、糸球体上皮の再生は可能であり、これは本発明に関して“糸球体修復”と呼ばれる。本発明は好ましくは慢性糸球体傷害に関するものであるので、持続的な糸球体修復、すなわち慢性糸球体損傷からの糸球体修復に関するものでもある。
【００４４】
腎不全はＣＤＫの進行に伴って起きる（慢性腎不全）。腎不全はＡＫＩの結果としても起きる（急性腎不全）。重症期の腎不全は透析を必要とし、場合によっては腎移植により治療されることもある。急性腎不全は可逆性である可能性がある。ＡＫＩは進行して死に至る可能性もある。
【００４５】
これに関して、用語“腎障害”は、好ましくは、腎臓の、または腎臓に影響を及ぼす、より具体的には腎臓の廃棄物除去および／または限外濾過の能力に影響を及ぼす、いずれかの疾患、傷害、または機能障害に関係すると考えられる。腎障害の例には先天性障害および後天性障害が含まれる。
【００４６】
用語“肝臓型脂肪酸結合タンパク質”（Ｌ−ＦＡＢＰ、本明細書中でしばしばＦＡＢＰ１とも呼ばれ、肝脂肪酸結合タンパク質とも呼ばれる）は、肝臓型脂肪酸結合タンパク質およびそのバリアントであるポリペプチドを表わす。肝臓型脂肪酸結合タンパク質は、ヒト腎臓の近位尿細管に発現する、遊離脂肪酸の細胞内輸送タンパク質である。ヒトＬ−ＦＡＢＰの配列については、たとえばChan et al.: Human liver fatty acid binding protein cDNA and amino acid sequence, Functional and evolutionary implications, J. Biol. Chem. 260 (5), 2629-2632 (1985)、またはGenBank Acc. Number Ml 0617.1を参照。
【００４７】
Ｌ−ＦＡＢＰは好ましくは各対象の尿試料において測定されるので、本発明に関して“尿中肝臓型脂肪酸結合タンパク質”または“尿中”Ｌ−ＦＡＢＰとも呼ばれる。
用語“Ｌ−ＦＡＢＰ”には、Ｌ−ＦＡＢＰ、好ましくはヒトＬ−ＦＡＢＰの、バリアントも含まれる。そのようなバリアントは少なくともＬ−ＦＡＢＰと同じ本質的な生物学的および免疫学的特性をもち、すなわちそれらは遊離の脂肪酸および／またはコレステロールおよび／またはレチノイド類を結合し、ならびに／あるいは細胞内脂質輸送に関与する。特に、本明細書中に述べるものと同じ特異的アッセイ法、たとえばＬ−ＦＡＢＰを特異的に認識するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を用いるＥＬＩＳＡアッセイ法でそれらを検出できれば、それらは同じ本質的な生物学的および免疫学的特性を共有する。さらに、本発明に従って述べるバリアントは少なくとも１つのアミノ酸の置換、欠失および／または付加のため異なるアミノ酸配列をもつはずであることを理解すべきである；その際、バリアントのアミノ酸配列はなお、ヒトＬ−ＦＡＢＰのアミノ酸配列と好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一である。同一度を判定する方法は、本明細書の他の箇所に詳述されている。バリアントは対立遺伝子バリアント、または他のいずれかの種特異的なホモログ、パラログもしくはオルソログであってもよい。さらに、本明細書中で述べるバリアントには、Ｌ−ＦＡＢＰまたは前記タイプのバリアントのフラグメントが含まれる；ただし、これらのフラグメントが前記に述べた本質的な免疫学的および生物学的特性をもつ限りにおいてである。そのようなフラグメントは、たとえばＬ−ＦＡＢＰの分解生成物であってもよい。さらに、翻訳後修飾、たとえばリン酸化またはミリスチル化のため異なるバリアントが含まれる。用語“Ｌ−ＦＡＢＰ”は、好ましくは心臓ＦＡＢＰ、脳ＦＡＢＰおよび腸ＦＡＢＰを含まない。
【００４８】
アディポネクチンは、脂肪細胞が分泌するポリペプチド（幾つかの既知アディポネクチンのうちの１つ）である。当技術分野で、アディポネクチンはしばしばＡｃｒｐ３０およびａｐＭ１とも呼ばれる。アディポネクチンは抗炎症、抗アテローム形成、メタボリックシンドローム予防、およびインスリン増感活性など多様な活性をもつことが最近示された。アディポネクチンは単一遺伝子によりコードされ、２４４個のアミノ酸をもち、それの分子量は約３０キロダルトンである。成熟型のヒト−アディポネクチンタンパク質は、全長アディポネクチンのアミノ酸１９−２４４を含む。球状ドメインは全長アディポネクチンのアミノ酸１０７−２４４を含むと考えられている。アディポネクチンポリペプチドの配列は当技術分野で周知であり、たとえばWO/2008/084003に開示されている。
【００４９】
アディポネクチンは脂肪細胞が分泌する最も多量に存在するアディポカインである。脂肪細胞は内分泌細胞であり、遊離脂肪酸を放出し、アディポネクチンのほかに幾つかのサイトカイン、たとえば腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）アルファ、レプチン、およびインターロイキン類を産生する。
【００５０】
一般にアディポネクチンは身体をインスリンに対して増感すると推測されている。糖尿病およびメタボリックシンドロームを伴う患者ではアディポネクチンの血中レベル低下がみられ、インスリン抵抗性において鍵となる役割を果たすと考えられている(たとえば、Han et al. Journal of the American College of Cardiology, Vol. 49(5) 531-8を参照)。
【００５１】
アディポネクチンはそれ自体が会合してより大きな構造体になる。３つのアディポネクチンポリペプチドが互いに結合してホモ３量体を形成する。これらの３量体が互いに結合して６量体または１２量体を形成する。アディポネクチンは血漿中に広範な多量体複合体で存在し、それのコラーゲンドメインを介して結合して３種類の主要なオリゴマー形態を形成することが知られている：低分子量（ＬＭＷ）３量体、中分子量（ＭＭＷ）６量体、および高分子量（ＨＭＷ）１２〜１８量体アディポネクチン(Kadowaki et al. (2006) Adiponectin and adiponectin receptors in insulin resistance, diabetes, and the metabolic syndrome. J Clin Invest. 1 16(7): 1784-1792; Rexford S. Ahima, Obesity 2006; 14: 242S-249S)。アディポネクチンは、アテローム硬化症の予防活性、インスリン感受性の改善、および肝線維症の阻止など、幾つかの生理作用をもつと報告されている。
【００５２】
本明細書中で用いるアディポネクチンは、好ましくは低分子量アディポネクチン、中分子量アディポネクチンおよび高分子量アディポネクチンを含めた、総アディポネクチンに関する。高分子量アディポネクチン、低および中分子量アディポネクチン、ならびに総アディポネクチンという用語は、当業者に理解されている。好ましくは、アディポネクチンはヒト−アディポネクチンである。アディポネクチンの測定方法は、たとえばUS 2007/0042424 AlおよびWO/2008/084003に開示されている。アディポネクチンの量は尿試料において測定される。
【００５３】
本発明に従って述べるアディポネクチンにはさらに、上記で考察したヒト−アディポネクチンに特異的な配列の対立遺伝子バリアントその他のバリアントが含まれる。具体的には、アミノ酸レベルでヒト−アディポネクチンと好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一であるバリアントポリペプチドが考慮される。２つのアミノ酸配列間の同一度は、当技術分野で周知のアルゴリズムにより判定できる。好ましくは、同一度は比較ウインドウにわたって最適にアラインさせた２つの配列を比較することにより判定すべきであり、その際、比較ウインドウ内のアミノ酸配列フラグメントは、最適アラインメントのために基準配列（付加または欠失を含まないもの）と比較して付加または欠失（たとえば、ギャップまたはオーバーハング）を含むことができる。パーセントは、両配列中に同一アミノ酸残基が現われる位置の数を判定して一致した位置の数を求め、この一致した位置の数を比較ウインドウ内の位置の総数で割り、その商に１００を掛けて配列同一パーセントを得ることにより計算される。比較のための最適な配列アラインメントは、下記により実施できる：Smith and Waterman Add. APL. Math. 2:482 (1981)の局所相同性アルゴリズムによる、Needleman and Wunsch J. Mol. Biol. 48:443 (1970)の相同性アラインメントアルゴリズムによる、Pearson and Lipman Proc. Natl. Acad Sci. (USA) 85: 2444 (1988)の類似性検索法による、これらのアルゴリズムのコンピューター実行による（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ、ＰＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ；Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ中，Genetics Computer Group(GCG), 575 Science Dr., Madison, WI)、または視覚検査による。比較のための２つの配列が同定されていれば、好ましくはＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴを用いてそれらの最適アラインメント、したがって同一度を判定する。好ましくは、ギャップ重みについて５．００、およびギャップ重み長さについて０．３０のデフォルト値を用いる。前記に述べたバリアントは対立遺伝子バリアント、または他のいずれかの種特異的なホモログ、パラログもしくはオルソログであってもよい。実質的に類似し、同様に考慮されるのは、タンパク質分解生成物であって各全長ペプチドに対する診断手段またはリガンドによりなお認識されるものである。同様に包含されるのは、ヒト−アディポネクチンのアミノ酸配列と比較してアミノ酸の欠失、置換、および／または付加をもつバリアントポリペプチドである；ただし、それらのポリペプチドがアディポネクチン特性、特にインスリン増感特性をもつ限りにおいてである。
【００５４】
用語“アルブミン”は、主に血中にみられる球状タンパク質を表わす。それらは３．５ｇ／ｄｌ〜４．５ｇ／ｄｌの濃度に達し、血漿タンパク質の約６０％に相当する。アルブミンは、好ましくはヒト−アルブミンである。成熟型のヒト−アルブミンは５８５個のアミノ酸を含み、約６６，４７０Ｄａの分子量をもつ。プレプロタンパク質は、好ましくはＮＣＢＩ基準配列ＮＰ＿０００４６８．１により規定されるアミノ酸配列をもつ。アルブミンは血液のコロイド浸透圧の維持に重要な役割を果たし、遊離脂肪酸、甲状腺ホルモン、コンジュゲートしていないビリルビン、および多くの薬物を輸送する。さらに、それは血液のｐＨを緩衝化する。
【００５５】
用語“アルブミン”には、アルブミン、好ましくはヒト−アルブミンの、バリアントも含まれる。そのようなバリアントは少なくともアルブミンと同じ本質的な生物学的および免疫学的特性をもち、すなわちそれらは血液のコロイド浸透圧を維持し、および／または遊離脂肪酸を輸送し、および／または甲状腺ホルモンを輸送し、および／またはコンジュゲートしていないビリルビンを輸送し、および／または血液のｐＨを緩衝化する。特に、本明細書中に述べるものと同じ特異的アッセイ法、たとえばアルブミンを特異的に認識するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を用いるＥＬＩＳＡアッセイ法でそれらを検出できれば、それらは同じ本質的な生物学的および免疫学的特性を共有する。さらに、本発明に従って述べるバリアントは少なくとも１つのアミノ酸の置換、欠失および／または付加のため異なるアミノ酸配列をもつはずであることを理解すべきである；その際、バリアントのアミノ酸配列はなお、ヒト−アルブミンのアミノ酸配列と好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一である。同一度を判定する方法は、本明細書の他の箇所に詳述されている。バリアントは対立遺伝子バリアント、または他のいずれかの種特異的なホモログ、パラログもしくはオルソログであってもよい。さらに、本明細書中で述べるバリアントには、アルブミンまたは前記タイプのバリアントのフラグメントが含まれる；ただし、これらのフラグメントが前記に述べた本質的な免疫学的および生物学的特性をもつ限りにおいてである。そのようなフラグメントは、たとえばアルブミンの分解生成物であってもよい。さらに、翻訳後修飾、たとえばリン酸化またはミリスチル化のため異なるバリアントが含まれる。
【００５６】
用語“好中球ゼラチナーゼ関連タンパク質”（ＮＧＡＬ）は、それのグリコシル化形で２５ｋＤａ、それの脱グリコシル化形で約２１ｋＤａの分子質量をもつタンパク質を表わす。それは１７８個のアミノ酸を含み、Kjeldsen et al. 1993 (Journal of Biological Chemistry, 268: 10425-10432)に記載されたアミノ酸配列をもつ。それは時にはヒト好中球ゼラチナーゼ（マトリックスメタロプロテイナーゼ９）とのヘテロ２量体として見出される。ある証拠が、ＮＧＡＬの結合はマトリックスメタロプロテイナーゼ９の分解を阻止することを指摘している(Yan et al., 2001 , Journal of Biological Chemistry, 276: 37258-37265)。ＮＧＡＬの発現は、特に腎虚血性傷害後の急性腎機能障害を伴う患者においてアップレギュレートされることが知られている(Wagener et al., 2006, Anesthesiology, 105: 485-491。
【００５７】
用語“ＮＧＡＬ”には、ＮＧＡＬ、好ましくはヒトＮＧＡＬの、バリアントも含まれる。そのようなバリアントは少なくともＮＧＡＬと同じ本質的な生物学的および免疫学的特性をもち、すなわちそれらはマトリックスメタロプロテイナーゼ９の分解を阻止する。特に、本明細書中に述べるものと同じ特異的アッセイ法、たとえばＮＧＡＬを特異的に認識するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を用いるＥＬＩＳＡアッセイ法でそれらを検出できれば、それらは同じ本質的な生物学的および免疫学的特性を共有する。さらに、本発明に従って述べるバリアントは少なくとも１つのアミノ酸の置換、欠失および／または付加のため異なるアミノ酸配列をもつはずであることを理解すべきである；その際、バリアントのアミノ酸配列はなお、ヒトＮＧＡＬのアミノ酸配列と好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一である。同一度を判定する方法は、本明細書の他の箇所に詳述されている。バリアントは対立遺伝子バリアント、または他のいずれかの種特異的なホモログ、パラログもしくはオルソログであってもよい。さらに、本明細書中で述べるバリアントには、ＮＧＡＬまたは前記タイプのバリアントのフラグメントが含まれる；ただし、これらのフラグメントが前記に述べた本質的な免疫学的および生物学的特性をもつ限りにおいてである。そのようなフラグメントは、たとえばＮＧＡＬの分解生成物であってもよい。さらに、翻訳後修飾、たとえばリン酸化またはミリスチル化のため異なるバリアントが含まれる。
【００５８】
本明細書中で述べるアディポネクチンもしくはそのバリアント、Ｌ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアント、アルブミンもしくはそのバリアント、ＮＧＡＬもしくはそのバリアント、または他のいずれかのペプチドもしくはポリペプチドの量の測定は、量または濃度を、好ましくは半定量的または定量的に計量することに関する。測定は、直接または間接的に行なうことができる。直接測定は、ペプチドまたはポリペプチド自体から得られる信号であってその強度がその試料中に存在するペプチドの分子数と直接相関する信号に基づいて、ペプチドもしくはポリペプチドの量または濃度を測定することに関する。そのような信号−時には本明細書中で強度信号と呼ばれる−は、たとえばペプチドまたはポリペプチドの特異的な物理的または化学的特性の強度値を測定することにより得ることができる。間接測定には、二次成分（すなわち、そのペプチドまたはポリペプチド自体ではない成分）または生物学的読出し系、たとえば測定可能な細胞応答、リガンド、標識もしくは酵素反応生成物から得られる信号を測定することが含まれる。
【００５９】
本発明によれば、ペプチドまたはポリペプチドの量の測定は、試料中のペプチドの量を測定するためのあらゆる既知手段により達成できる。それらの手段には、標識分子を種々のサンドイッチ、競合または他のアッセイ方式で使用できる免疫アッセイの器具および方法が含まれる。それらのアッセイは、ペプチドまたはポリペプチドの存在または不存在の指標となる信号を発生するであろう。さらに、その信号強度を、好ましくは試料中に存在するポリペプチドの量に直接または間接的に（たとえば反比例）相関させることができる。さらに他の適切な方法は、そのペプチドまたはポリペプチドに特異的な物理的または化学的特性、たとえばそれの厳密な分子質量またはＮＭＲスペクトルの測定を含む。それらの方法は、好ましくはバイオセンサー、免疫アッセイに連携させた光学機器、バイオチップ、分析機器、たとえば質量分析計、ＮＭＲ分析計、またはクロマトグラフィー機器を含む。さらに、方法にはマイクロプレートＥＬＩＳＡに基づく方法、完全自動化またはロボット式の免疫アッセイ（たとえば、Ｅｌｅｃｓｙｓ（商標）分析計で得られる）、ＣＢＡ(enzymatic Cobalt Binding Assay（酵素コバルト結合アッセイ）、たとえばＲｏｃｈｅ−Ｈｉｔａｃｈｉ（商標）分析計で得られる）、およびラテックス凝集アッセイ（たとえば、Ｒｏｃｈｅ−Ｈｉｔａｃｈｉ（商標）分析計で得られる）が含まれる。
【００６０】
好ましくは、ペプチドまたはポリペプチドの量の測定は、下記の段階を含む：（ａ）その強度がペプチドまたはポリペプチドの量の指標となる細胞応答を誘発することができる細胞を、適切な期間、ペプチドまたはポリペプチドと接触させ、（β）その細胞応答を測定する。細胞応答を測定するために、試料または処理した試料を、好ましくは細胞培養物に添加し、細胞の内部応答または外部応答を測定する。細胞応答には、測定可能なレポーター遺伝子発現、または物質、たとえばペプチド、ポリペプチドもしくは小分子の分泌を含めることができる。この発現または物質は、ペプチドまたはポリペプチドの量に相関する強度信号を発生すべきである。
【００６１】
同様に好ましくは、ペプチドまたはポリペプチドの量の測定は、試料中のペプチドまたはポリペプチドから得られる特異的な強度信号を測定する段階を含む。前記のように、そのような信号は、ペプチドもしくはポリペプチドに特異的なｍ／ｚ変数で観察される質量スペクトルにみられる信号強度、またはペプチドもしくはポリペプチドに特異的なＮＭＲスペクトルにみられるものであってもよい。
【００６２】
ペプチドまたはポリペプチドの量の測定は、好ましくは下記の段階を含むことができる：（α）ペプチドを特異的リガンドと接触させ、（任意選択的に）結合していないリガンドを除去し、（β）結合したリガンドの量を測定する。結合したリガンドは強度信号を発生するであろう。本発明による結合には、共有結合および非共有結合の両方が含まれる。本発明によるリガンドは、本明細書に記載するペプチドまたはポリペプチドに結合するいずれかの化合物、たとえばペプチド、ポリペプチド、核酸または小分子であってもよい。好ましいリガンドには、抗体、核酸、ペプチドまたはポリペプチド、たとえば前記のペプチドまたはポリペプチドに対する受容体または結合パートナー、およびそのフラグメントであって前記ペプチドに対する結合ドメインを含むもの、ならびにアプタマー、たとえば核酸アプタマーまたはペプチドアプタマーが含まれる。そのようなリガンドを作製する方法は当技術分野で周知である。たとえば、適切な抗体またはアプタマーの同定および作製は業者も提供している。そのようなリガンドの誘導体であってより高い親和性または特異性をもつものを開発する方法は、当業者に周知である。たとえば、核酸、ペプチドまたはポリペプチドにランダム変異を導入することができる。次いでこれらの誘導体を、当技術分野で既知のスクリーニング法、たとえばファージディスプレー法に従って、結合について試験することができる。本明細書中に述べる抗体には、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方、ならびにそのフラグメントであって抗原またはハプテンを結合できるもの、たとえばＦｖ、ＦａｂおよびＦ（ａｂ）２フラグメントが含まれる。本発明には、一本鎖抗体、および目的とする抗原特異性を示すヒト以外のドナー抗体のアミノ酸配列をヒトのアクセプター抗体と結合させたヒト化ハイブリッド抗体も含まれる。ドナー配列は通常は少なくともドナーの抗原結合アミノ酸残基を含むであろうが、ドナー抗体の構造および／または機能に関連する他のアミノ酸残基をも含むことができる。そのようなハイブリッドは、当技術分野で周知の幾つかの方法で作製できる。好ましくは、リガンドまたは作用剤は前記のペプチドまたはポリペプチドに特異的に結合する。本発明による特異的結合とは、リガンドまたは作用剤が被分析試料中に存在する他のペプチド、ポリペプチドまたは物質に実質的に結合（と“交差反応”）すべきでないことを意味する。好ましくは、特異的に結合するペプチドまたはポリペプチドは、他のいずれかの関連ペプチドまたはポリペプチドより少なくとも３倍高い、より好ましくは少なくとも１０倍高い、よりさらに好ましく少なくとも５０倍高い親和性で結合すべきである。非特異的結合は、たとえばウェスタンブロットにおけるそれのサイズによって、または試料中におけるそれの相対的に高い存在度によって、それをなお確実に識別および測定できれば、許容できる。リガンドの結合は、当技術分野で既知のいずれかの方法により測定できる。好ましくは、その方法は半定量的または定量的である。適切な方法を以下に記載する。
【００６３】
好ましくは、用語“抗体”は、Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアント、アディポネクチンまたはそのバリアント、アルブミンまたはそのバリアント、およびＮＧＡＬまたはそのバリアントからなる群から選択されるペプチドに結合する抗体を表わす。
【００６４】
第１に、リガンドの結合は直接的に、たとえばＮＭＲまたは表面プラズモン共鳴により測定できる。
第２に、リガンドが目的ペプチドまたはポリペプチドの酵素活性の基質としても作用するならば、酵素反応生成物を測定してもよい（たとえばプロテアーゼの量は、開裂した基質の量をたとえばウェスタンブロット法で測定することにより測定できる）。あるいは、リガンドが酵素特性そのものを示してもよく、“リガンド／ペプチドもしくはポリペプチド”複合体、またはペプチドもしくはポリペプチドが結合したリガンドを、それぞれ適切な基質と接触させて、強度信号の発生により検出することができる。酵素反応生成物を測定するためには、好ましくは基質の量を飽和させる。反応前に基質を検出可能な標識で標識化してもよい。好ましくは、適切な期間、試料を基質と接触させる。適切な期間とは、検出可能な、好ましくは測定可能な量の生成物を生成させるのに必要な時間を表わす。生成物の量を測定する代わりに、一定の（たとえば、検出可能な）量の生成物が出現するのに必要な時間を測定してもよい。
【００６５】
第３に、リガンドの検出および測定を可能にする標識にリガンドを共有結合または非共有結合させてもよい。標識化は直接法または間接法により行なうことができる。直接標識化は、標識をリガンドに直接的に（共有結合または非共有結合により）カップリングさせることを伴う。間接標識化は、二次リガンドを一次リガンドに（共有結合または非共有結合により）結合させることを伴う。二次リガンドは一次リガンドに特異的に結合すべきである。その二次リガンドは、適切な標識とカップリングさせてもよく、および／または二次リガンドに結合する三次リガンドのターゲット（受容体）であってもよい。信号を増強するために、二次、三次、またはよりさらに高次のリガンドの使用がしばしば採用される。適切な二次またはより高次のリガンドには、抗体、二次抗体、および周知のストレプトアビジン−ビオチン系（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を含めることができる。リガンドまたは基質に、当技術分野で既知である１以上のタグを“タグ付け”することもできる。その際、そのようなタグはより高次のリガンドに対するターゲットであってもよい。適切なタグには、ビオチン、ジゴキシゲニン、Ｈｉｓ−タグ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、ＦＬＡＧ、ＧＦＰ、ｍｙｃ−タグ、インフルエンザＡウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）、マルトース結合タンパク質などが含まれる。ペプチドまたはポリペプチドの場合、タグは好ましくはＮ−末端および／またはＣ−末端にある。適切な標識は、適宜な検出法で検出できるいずれかの標識である。一般的な標識には、金粒子、ラテックスビーズ、アクリダンエステル(acridan ester)、ルミノール、ルテニウム、酵素活性標識、放射性標識、磁性標識（たとえば、常磁性および超常磁性標識を含む“磁性ビーズ”）、および蛍光標識が含まれる。酵素活性標識には、たとえば西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、およびその誘導体が含まれる。検出に適した基質には、ジ−アミノ−ベンジジン（ＤＡＢ）、３，３’−５，５’−テトラメチルベンジジン、ＮＢＴ−ＢＣＩＰ（４−ニトロブルーテトラゾリウムクロリドおよび５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−ホスフェート；既製原液としてＲｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓから入手できる）、ＣＤＰ−Ｓｔａｒ（商標）（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＥＣＦ（商標）（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が含まれる。適切な酵素−基質の組合わせは有色反応生成物、蛍光または化学発光を生じることができ、それらを当技術分野で既知の方法（たとえば、感光フィルムまたは適切なカメラシステムの使用）に従って測定することができる。酵素反応の測定に関して、前記に挙げた基準を同様に適用する。一般的な蛍光標識には、蛍光タンパク質（たとえば、ＧＦＰおよびそれの誘導体）、Ｃｙ３、Ｃｙ５、テキサス・レッド、フルオレセイン、およびＡｌｅｘａ色素（たとえば、Ａｌｅｘａ  ５６８）が含まれる。さらに他の蛍光標識を、たとえばＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（オレゴン州）から入手できる。蛍光標識として量子ドットの使用も考慮される。一般的な放射性標識には、３５Ｓ、１２５Ｉ、３２Ｐ、３３Ｐなどが含まれる。放射性標識はいずれか既知の適切な方法、たとえば感光フィルムまたはホスホイメージャー(phosphr imager)により検出できる。本発明による適切な測定方法には、下記のものも含まれる：沈降法（特に免疫沈降法）、電気化学発光（電気的に発生する化学発光）、ＲＩＡ（ラジオイムノアッセイ）、ＥＬＩＳＡ（酵素結合イムノソルベントアッセイ）、サンドイッチ酵素免疫検定、電気化学発光サンドイッチイムノアッセイ(electro chemiluminescence sandwich immunoassays、ＥＣＬＩＡ）、解離増強ランタニドフルオロイムノアッセイ(dissociation-enhanced lanthanide fluoro immuno assay 、ＤＥＬＦＩＡ）、シンチレーション近接アッセイ(scintillation proximity assay、ＳＰＡ）、タービジメトリー、ネフェロメトリー、ラテックス増強型のタービジメトリーもしくはネフェロメトリー、または固相免疫検定。当技術分野で既知のさらに他の方法（たとえば、ゲル電気泳動、２Ｄゲル電気泳動、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）、ウェスタンブロット法、および質量分析）を単独で、または前記の標識法その他の検出法と組み合わせて使用できる。
【００６６】
ペプチドまたはポリペプチドの量は、好ましくは下記に従って測定することもできる：（α）前記に詳述したペプチドまたはポリペプチドに対するリガンドを含む固体支持体を、ペプチドまたはポリペプチドを含む試料と接触させ、そして（β）支持体に結合したペプチドまたはポリペプチドの量を測定する。好ましくは核酸、ペプチド、ポリペプチド、抗体およびアプタマーからなる群から選択されるリガンドは、好ましくは固体支持体上に固定化された形態で存在する。固体支持体を作成するための材料は当技術分野で周知であり、特に市販のカラム材料、ポリスチレンビーズ、ラテックスビーズ、磁性ビーズ、コロイド金属粒子、ガラスおよび／またはシリコンのチップおよび表面、ニトロセルロースのストリップ、メンブレン、シート、デュラサイト(duracyte)類、反応トレーのウェルおよび壁、プラスチックチューブなどが含まれる。リガンドまたは作用剤を多様なキャリヤーに結合させることができる。周知のキャリヤーの例には、ガラス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカーボネート、デキストラン、ナイロン、アミロース類、天然および改質セルロース類、ポリアクリルアミド類、アガロース類、および磁鉄鉱が含まれる。本発明の目的に対して、キャリヤーの性質は可溶性または不溶性のいずれであってもよい。前記リガンドを固定／固定化するのに適した方法は周知であり、イオン性、疎水性、共有結合性相互作用などが含まれるが、これらに限定されない。“懸濁アレイ”を本発明によるアレイとして用いることも考慮される(Nolan 2002, Trends Biotechnol. 20(1): 9-12)。そのような懸濁アレイにおいて、キャリヤー、たとえばマイクロビーズまたはマイクロスフェアは懸濁状態で存在する。このアレイは、種々のリガンドを保有する標識されていてもよい種々のマイクロビーズまたはマイクロスフェアからなる。そのようなアレイを調製する方法、たとえば固相化学および光不安定保護基に基づくものが一般に知られている(US 5,744,305)。
【００６７】
本明細書中で用いる用語“量”は、ポリペプチドまたはペプチドの絶対量、ポリペプチドまたはペプチドの相対量または濃度、およびそれらと相関するかまたはそれらから誘導できるいずれかの数値またはパラメーターを包含する。そのような数値またはパラメーターは、それらのペプチドから直接測定により得られるあらゆる特異的な物理的または化学的特性に由来する強度信号値、たとえば質量スペクトルまたはＮＭＲスペクトルにおける強度値を含む。さらに、本明細書の他の箇所に詳述した間接測定により得られるすべての数値またはパラメーター、たとえば生物学的読出し系からペプチドに応答して測定された応答レベル、または特異的に結合したリガンドから得られる強度信号が包含される。上記の量またはパラメーターと相関する数値はあらゆる標準的数学操作によっても得られることを理解すべきである。
【００６８】
本明細書中で用いる用語“比較する”は、被分析試料が含むペプチドまたはポリペプチドの量を本明細書の他の箇所に詳述した適切な基準源の量と比較することを包含する。本明細書中で用いる比較は、対応するパラメーターまたは数値の比較を表わすと理解すべきであり、たとえば絶対量を絶対基準量と比較し、一方で濃度を基準濃度と比較し、または被験試料から得られる強度信号を基準試料の同タイプの強度信号と比較し、または量比を基準量比と比較する。本発明方法の段階（ｃ）に述べる比較は、手動で、またはコンピューター支援で実施できる。コンピューター支援比較については、測定量の数値を、データベースに記憶させた適切な基準に対応する数値と、コンピュータープログラムにより比較することができる。コンピュータープログラムは比較の結果をさらに評価することができ、すなわち目的とする評価を適切な出力フォーマットで自動的に提供する。
【００６９】
段階ａ）で測定した量と適切な基準量（単数または複数）の比較に基づいて、個体がＡＫＩに関連する有害事象に罹患するリスクを予測することができる。本発明方法の段階（ａ）で測定したＬ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアント、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントおよび／またはアルブミンもしくはそのバリアントの量を、段階（ｂ）で、本明細書の他の箇所に詳述したＬ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアント、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントおよび／またはアルブミンもしくはそのバリアントに関する基準量と比較すると理解すべきである。
【００７０】
本明細書中で本発明のこの態様において用いる用語“基準量”は、個体が外科処置後にＡＫＩ関連有害事象に罹患する高いリスクをもたない（一般に、この対象は生理的に健康な対象である）か、あるいは対象が健康ではなく外科処置後にＡＫＩ関連有害事象に罹患する高いリスクをもつかどうかを診断できるポリペプチドの量を表わす。
【００７１】
したがって、基準量は一般に、生理的に健康な対象であることが分かっている対象、または腎障害に罹患していることが分かっている対象（見掛け上は健康な場合がある）、またはＣＡＢＧを受ける予定であるかもしくは受けた対象、または腎障害に罹患していることが分かっていてＣＡＢＧを受ける予定であるかもしくは受けた対象に由来するであろう。
【００７２】
したがって、本明細書中で用いる用語“基準量”は、対象においてＡＫＩに関連する有害事象、特にＡＫＩ自体、透析の必要性および／または死亡を生じるリスクを予測できる量を表わし、その際、各マーカー（単数または複数）の量は、対象が受ける予定の外科的介入、好ましくは冠動脈疾患関連の介入、特にＣＡＢＧ介入の前に測定することができる。基準量との比較により、対象におけるＡＫＩに関連する有害事象、特にＡＫＩ自体、透析の必要性および／または死亡を対象／個体が生じるリスクを予測または推定できる。個体の外科的介入の必要性は、好ましくは本発明のマーカーを測定する前に確立している。
【００７３】
Ｌ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアント、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントおよび／またはアルブミンもしくはそのバリアントに関する基準量は、本発明において前記に定めたように外科的介入、特にＣＡＢＧを受ける予定であるかもしくは受けた対象であって、その対象の予後、すなわちＡＫＩの発症、透析の必要性および／または死亡が決定している対象に由来するものであってもよい。基準量を確立するために用いる各ペプチドの量は、外科的介入の前に測定することができる。本発明の他の態様において、マーカー（単数または複数）は外科的介入後の１時点または種々の時点で、たとえば介入終了の直後、または１、２、３、４、５、６、８、１０、１２、１６、１８もしくは２４時間後に測定される。
【００７４】
本発明のすべての態様において、本発明に用いる各マーカー（Ｌ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアント、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントおよび／またはアルブミンもしくはそのバリアント）の量（単数または複数）は、当業者に既知の方法により測定される。
【００７５】
一般に、本発明の各態様に従って目的とする診断を確立できるそれぞれの量（単数／複数）または量比（“閾値”、“基準量”）を決定するために、適切な患者グループにおいて各ペプチドまたはペプチド類の量（単数／複数）または量比を測定する。確立すべき診断に応じて、患者グループはたとえば健康な個体だけから構成されてもよく、あるいは健康な個体および判定すべき病態生理学的状態に罹患している個体から構成されてもよく、あるいは判定すべき病態生理学的状態に罹患している個体だけから構成されてもよく、あるいは立証された分析法を用いて各マーカー（単数または複数）により識別すべき種々の病態生理学的状態に罹患している個体から構成されてもよい。得られた結果を集めて、当業者に既知の統計学的方法により分析する。得られた閾値を次いでその疾患に罹患する目的確率に従って確立し、特定の閾値と関連づける。たとえば、閾値（単数または複数）、基準値（単数または複数）または量比を確立するために、健康な患者および／または健康でない患者の集合体の中央値、第６０、第７０、第８０、第９０、第９５、またはさらに第９９百分位数を選択するのが有用な場合がある。
【００７６】
診断マーカーの基準値を確立し、患者試料中のマーカーの量を基準値と簡単に比較することができる。診断および／または予後検査法の感度および特異性は、その検査法の分析の“質”に依存するだけでなく、それらは異常な結果を構成するものの定義にも依存する。実際に、受動者操作特性(Receiver Operating Characteristic)曲線、または“ＲＯＣ”曲線は、一般に変数の値を、“正常”および“疾患”集団におけるそれの相対頻度に対してプロットすることにより計算される。本発明のいずれか特定のマーカーについて、疾患を伴う対象または伴わない対象に関するマーカー量の分布はオーバーラップする可能性がある。そのような条件下では、検査法は正常を疾患から１００％の精度で絶対的に識別することはできず、このオーバーラップ面積はその検査法が正常を疾患から識別できない場合の指標となる。それより上では（または、その疾患に伴ってマーカーがどのように変化するかに応じて、それより下では）検査値が異常とみなされ、それより下では検査値が正常とみなされる閾値を選択する。ＲＯＣ曲線下面積は、検知した測定値がある状態を正確に同定できる確率の尺度である。ＲＯＣ曲線は、検査結果によって必ずしも厳密な数字が得られない場合ですら採用できる。結果をランク付けできる限り、ＲＯＣ曲線を作成できる。たとえば、“疾患”試料についての検査結果を程度に応じてランク付けしてもよい（たとえば、１＝低、２＝正常、および３＝高）。このランク付けを“正常”集団における結果と相関させ、ＲＯＣ曲線を作成することができる。これらの方法は当技術分野で周知である。たとえば、Hanley et al, Radiology 143: 29-36 (1982)を参照。
【００７７】
特定の態様において、少なくとも約７０％の感度、より好ましくは少なくとも約８０％の感度、よりさらに好ましくは少なくとも約８５％の感度、さらにより好ましくは少なくとも約９０％の感度、最も好ましくは少なくとも約９５％の感度を、少なくとも約７０％の特異性、より好ましくは少なくとも約８０％の特異性、よりさらに好ましくは少なくとも約８５％の特異性、さらにより好ましくは少なくとも約９０％の特異性、最も好ましくは少なくとも約９５％の特異性と合わせて示すように、マーカーおよび／またはマーカーパネルを選択する。特に好ましい態様において、感度と特異性の両方が少なくとも約７５％、より好ましくは少なくとも約８０％、よりさらに好ましくは少なくとも約８５％，、さらにより好ましくは少なくとも約９０％、最も好ましくは約９５％である。これに関して用語“約”は、示した測定値の＋／−５％を表わす。
【００７８】
他の態様において、ある検査法がリスクを予測し、または疾患を診断する能力の尺度として、正の尤度比、負の尤度比、オッズ比、または危険率(hazard ratio)を用いる。正の尤度比の場合、１の数値は正の結果が“罹病”グループと“対照”グループの両方の対象間で同等の可能性をもつことの指標となる；１より大きい数値は正の結果が罹病グループにおいてより可能性が大きいことの指標となる；１より小さい数値は正の結果が対照グループにおいてより可能性が大きいことの指標となる。負の尤度比の場合、１の数値は負の結果が“罹病”グループと“対照”グループの両方の対象間で同等の可能性をもつことの指標となる；１より大きい数値は負の結果が被験グループにおいてより可能性が大きいことの指標となる；１より小さい数値は負の結果が対照グループにおいてより可能性が大きいことの指標となる。特定の好ましい態様において、少なくとも約１．５以上または約０．６７以下、より好ましくは少なくとも約２以上または約０．５以下、さらにより好ましくは少なくとも約５以上または約０．２以下、さらにより好ましくは少なくとも約１０以上または約０．１以下、最も好ましくは少なくとも約２０以上または約０．０５以下の正または負の尤度比を示すように、マーカーおよび／またはマーカーパネルを選択することが好ましい。これに関して用語“約”は、示した測定値の＋／−５％を表わす。
【００７９】
オッズ比の場合、１の数値は正の結果が“罹病”グループと“対照”グループの両方の対象間で同等の可能性をもつことの指標となる；１より大きい数値は正の結果が罹病グループにおいてより可能性が大きいことの指標となる；１より小さい数値は正の結果が対照グループにおいてより可能性が大きいことの指標となる。特定の好ましい態様において、少なくとも約２以上または約０．５以下、より好ましくは少なくとも約３以上または約０．３３以下、よりさらに好ましくは少なくとも約４以上または約０．２５以下、さらにより好ましくは少なくとも約５以上または約０．２以下、最も好ましくは少なくとも約１０以上または約０．１以下のオッズ比を示すように、マーカーおよび／またはマーカーパネルを選択することが好ましい。これに関して用語“約”は、示した測定値の＋／−５％を表わす。
【００８０】
危険率の場合、１の数値はあるエンドポイント（たとえば死亡）の相対リスクが“罹病”グループと“対照”グループの両方で同等であることの指標となる；１より大きい数値はそのリスクが罹病グループにおいてより大きいことの指標となる；１より小さい数値はそのリスクが対照グループにおいてより大きいことの指標となる。特定の好ましい態様において、少なくとも約１．１以上または約０．９１以下、より好ましくは少なくとも約１．２５以上または約０．８以下、さらにより好ましくは少なくとも約１．５以上または約０．６７以下、さらにより好ましくは少なくとも約２以上または約０．５以下、最も好ましくは少なくとも約２．５以上または約０．４以下の危険率を示すように、マーカーおよび／またはマーカーパネルを選択することが好ましい。これに関して用語“約”は、示した測定値の＋／−５％を表わす。
【００８１】
例示パネルを本明細書に記載するが、これらの例示パネルの１以上のマーカーを交換、追加または排除しても、なお臨床的に有用な結果を得ることができる。パネルは特異的な疾患マーカー（たとえば、細菌感染症において増加または減少するが他の疾病状態ではそうではないマーカー）および／または非特異的なマーカー（たとえば、原因にかかわらず炎症のため増加または減少するマーカー；原因にかかわらず恒常性の変化のため増加または減少するマーカーなど）の両方を含むことができる。ある種のマーカーが本明細書に記載する方法において個々には決定的でない場合があるが、変化の特定の“フィンガープリント”パターンが実際に疾病状態の特異的指標として役立つ場合がある。前記のように、その変化パターンは単一試料から得ることができ、あるいは場合によりそのパネルの１以上のメンバーにおける時間変化（またはパネル応答値の時間変化）を考慮することができる。
【００８２】
選択した基準値が、目的とする疾患に罹患している患者の十分に安全な診断を提供するかどうかを検査するために、たとえばある基準値について次式を用いて本発明方法の有効性（Ｅ）を判定することができる：
Ｅ＝（ＴＰ／ＴＯ）×１００；
式中、ＴＰ＝真陽性、ＴＯ＝検査の総数＝ＴＰ＋ＦＰ＋ＦＮ＋ＴＮ、ここでＦＰ＝偽陽性、ＦＮ＝偽陰性、およびＴＮ＝真陰性。Ｅは下記の範囲の数値をもつ：０＜Ｅ＜１００）。好ましくは、Ｅの数値が少なくとも約５０、より好ましくは少なくとも約６０、より好ましくは少なくとも約７０、より好ましくは少なくとも約８０、より好ましくは少なくとも約９０、より好ましくは少なくとも約９５、より好ましくは少なくとも約９８であれば、検査した基準値は十分に安全な診断を提供する。
【００８３】
個体が健康であるかあるいは特定の病態生理学的状態に罹患しているかの診断は、当業者に既知である確立した方法により行なわれる。それらの方法は個々の病態生理学的状態に関して異なる。
【００８４】
目的とする診断を確立するためのアルゴリズムを、本発明において参照する各態様に関する節に示す。
したがって本発明は、生理学的状態および／または病理学的状態および／または特定の病理学的状態の指標となる閾値量を決定する方法であって、適切な患者グループにおいて適切なマーカー（単数または複数）の量を測定し、データを集め、そしてデータを統計学的方法で分析して閾値を確立する段階を含む方法をも含む。
【００８５】
本明細書中で用いる用語“約”は、示した測定値または数値の＋／−２０％、好ましくは＋／−１０％、好ましくは＋／−５％を表わす。
本発明者らは意外にも、先行技術において公開された結果、すなわちＡＫＩを発症する患者はＡＫＩを発症しなかった患者におけるレベルより低いＬ−ＦＡＢＰまたはそのバリアント、アディポネクチンまたはそのバリアント、およびＮＧＡＬまたはそのバリアントのレベルをもつことを見出した前掲のPortilla et al, Kidney International 2008と、本明細書に示すそれらの結果との相違を見出した。この意外な所見は、介入直後に測定した場合のアルブミンまたはそのバリアント、アディポネクチンおよびＮＧＡＬについて、これらのマーカーは透析の必要性ではなくＡＫＩ（３日以内に０．３ｍｇ／ｄｌを超えるクレアチニン増加か指標となる）を予測する際に有用ではないらしいということを示した。事実、検査した大部分の患者は尿中の腎損傷マーカーの増加の証拠を伴っていたが、この増加は意外にも腎機能の低下とは関係がなかった。Portilla et alのデータ（心肺バイパス形成術を受ける小児において確立されたもの）は、外科処置前に測定したＬ−ＦＡＢＰ濃度自体からＡＫＩは予測されず、外科処置後のＬ−ＦＡＢＰ濃度の上昇がＡＫＩと関連することを示すように思われたが、これと対照的に本発明者らは、成人、好ましくは心血管疾患を伴う患者において、外科処置前に測定したＬ−ＦＡＢＰ濃度が将来のＡＫＩを予測することを見出した。
【００８６】
成人におけるこの所見−小児における所見と対照的−は、介入およびＡＫＩ発症の前に適切な決定を行なうことができるので、臨床的に重要である。これに関して、ＡＫＩの発症後では、ＡＫＩに罹患するリスクが認識されていてそれの発症を予防処置できる場合より療法選択肢（治療のための選択肢）が明らかに限定されることを考慮に入れるべきである。そのような決定には、損益評価の改善に関連して外科処置の適用を再考すること、ＡＫＩを促進することが分かっている薬物（ＡＣＥ阻害薬、アンギオテンシン受容体遮断薬およびＮＳＩＡＤ、およびおそらく抗生物質、ならびにＡＫＩを促進することが分かっている他の薬物を含む）を停止することが含まれる。さらに、外科処置に際して、体液および血圧の適切かつ集中的な調整が必要である。したがって本発明の方法はＡＫＩの予防を目標とし、したがって改善された臨床意志決定を提供する。
【００８７】
したがって本発明の方法は特に成人に適用される。好ましい態様において、リスクを予測する方法、適切な療法を推奨または決定する方法、および療法をモニタリングする方法を成人に適用する；他の好ましい方法において、これらの列記した方法は小児には適用されない。
【００８８】
意外にも、介入を実施する前に測定した場合にＬ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントの量がＡＫＩに関連する将来の事象の良好な予測子であることが見出された。介入前に測定した場合にアディポネクチンの量がＬ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントにより提供される情報に相補的情報を追加できることも見出された。さらに他の情報は、介入前にアルブミンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントの量を測定することにより追加できる。
【００８９】
重大な外科的介入、特に重大な心血管外科的介入は、著しい死亡率および罹病率を伴ない、これには急性腎傷害（ＡＫＩ）の発症が含まれる。ＡＫＩは透析なしで寛解する場合があり、あるいは持続すれば透析を必要とする場合があり、あるいは将来の慢性腎障害に関連する場合すらある。現在は、正常な腎機能をもつ患者（検査の正常範囲内のクレアチニンレベルまたは６０ｍｌ／分を超えるＧＦＲにより評価して）においてはＡＫＩ発症のリスク、または透析の必要性すら予測できない。しかし本発明によれば、Ｌ−ＦＡＢＰを用いてリスクをもつ患者を外科処置前ですら同定できる。外科処置前に、好ましくは損益分析に際してリスク評価するだけで、外科処置の適用を再考し、ＡＫＩを促進する薬物（それらは基礎疾患（単数または複数）のため適用されている可能性があるが）を停止し、外科処置中に適切な措置（血圧の維持、一過性血液量減少の回避、および当業者に既知である他の措置）をとることができる。
【００９０】
Ｌ−ＦＡＢＰは、虚血後腎臓の近位尿細管に発現する尿バイオマーカーである。アディポネクチンは“糸球体健康状態”の指標であると思われるので、これらのマーカーを合わせて測定することにより、発病性腎プロセスの関連情報が明らかになる。
【００９１】
本発明の他の態様において、アルブミンおよび／またはＮＧＡＬをＬ−ＦＡＢＰおよびアディポネクチンのほかに測定する。ＮＧＡＬは尿細管損傷のマーカーであり、アルブミンは糸球体損傷のマーカーであるので、相補的情報を集めることができる。
【００９２】
有利なことに、バイオマーカーとしてのＬ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントの量、特に対象の試料、好ましくは尿試料中に存在するＬ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントの量は、実施例において証明する本発明方法の高い特異性および感度に反映されるように、個体が外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を生じるリスクを信頼性をもって効果的に予測することが見出された。
【００９３】
バイオマーカーとしてのアディポネクチンまたはそのバリアントの量、特に対象の尿試料中に存在するアディポネクチンまたはそのバリアントの量は、個体が外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を生じるリスクを信頼性をもって効果的に予測することも見出された。Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントおよびアディポネクチンまたはそのバリアントは、個体が外科的介入後に急性腎傷害に関連する有害事象を生じるリスクに関して相補的情報を提供する。
【００９４】
ＡＫＩは透析の必要性およびさらには死亡（本発明に関して、これらは両方とも急性腎傷害に関連する有害事象とみなされる）にまで進行する可能性がある。本発明の好ましい態様において、Ｌ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアントおよび／またはアディポネクチンもしくはそのバリアント、好ましくはこれら２つの組合わせは、個体が外科的介入の結果として、またはそれに伴って、透析の必要性を生じるリスクを予測するために使用できる。
【００９５】
“透析の必要性”は、腎不全、本発明に関しては急性腎不全（ＡＫＩ）に罹患している個体において、腎不全の範囲および程度（ＧＦＲおよび／またはクレアチニンクリアランスにより判定）によって尿産生ならびに電解質および廃棄物（健康な腎体では濾過により除去される）の除去が身体の要求を満たさないほど腎機能が損なわれ、個体の健康に著しく影響し、特に不可逆的な健康障害を引き起こす可能性がある場合に生じる。一例は貧血症であり、これはエリスロポエチン合成低下の結果として頻繁にみられる。
【００９６】
本発明に関して、用語“外科的介入”は、動物、好ましくは哺乳動物、特にヒトの身体に対するいずれかの種類の侵襲介入、好ましくは外科的方法によるものを表わし、好ましくは重大な外科処置を含む。外科的介入は、血管疾患、外傷、出血障害、腫瘍、たとえば良性もしくは悪性の腫瘍、感染症、または他の理由で適用される可能性がある。外科処置は短期間または長期間の可能性があり、既存の、または外科処置自体に際しての、体液または血液の喪失を伴う可能性がある。外科処置は、局所もしくは全身麻酔を用いて、または用いずに実施される可能性がある。外科処置後に起きるものとして本明細書に列記した合併症が侵襲性の少ない外科処置後にみられる頻度はより低いけれども、この用語には侵襲性の少ない外科処置も含まれる。
【００９７】
本発明に関して用いる用語“重大な外科処置（大手術）”は、麻酔および／または呼吸補助を必要とするいずれかの外科処置を表わす。
用語“外科的介入”には、たとえば四肢（足、手）および頭部に対する介入も含まれる。
【００９８】
この用語には、好ましくは内臓（たとえば、肝臓、腎臓、腸、胃、肺；全摘出を行なわないもの）に対する介入が含まれる。さらにより好ましくは、この用語には心血管外科処置とも呼ばれる心臓（たとえば、弁、または心筋のいずれかの部分）に対する介入が含まれる。
【００９９】
心血管外科処置を受ける患者は、心血管疾患および最も重要なものとして既存の腎疾患の結果として、またはそれに伴って、しばしば心不全を生じる。
特に、この用語は心血管に対する介入（心血管外科処置とも呼ばれる）、特にバイパス移植術を表わす。
【０１００】
冠動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）では、ステント導入による血管形成術の実施に適さない重度の狭窄または閉塞を伴う元の冠動脈に、一般に動脈を茎状移植片として用いて左下行冠動脈にバイパスを形成する。この用語およびそれの意味は当業者に既知である。
【０１０１】
原則としていかなる外科的介入もＡＫＩ関連の有害事象を引き起こす可能性があることは当業者に知られている。この現象は、好ましくは、認識されていない腎障害が各個体に存在し（個体は見掛け上は健康であることを意味する）、これがＡＫＩ関連の有害事象に罹患する、より高い確率を誘発することによると考えられる。好ましくは、この認識されていない腎障害は外科的介入前に存在する。しばしば、腎障害は、一般に血液供給が損なわれて腎臓の代謝要求量を満たさなくなった後の虚血性および／または壊死性プロセスの結果である。この虚血性および壊死性プロセスは、心血管疾患、好ましくは冠動脈疾患（ＣＡＤ）によってしばしば引き起こされる。
【０１０２】
その結果、ＧＦＲおよび／またはクレアチニン値を指標とする腎障害の明らかな徴候および症状を示さず、本発明の意味で見掛け上は健康である個体が、特にＣＡＤおよび／または心不全に関する心血管外科処置を受けてＡＫＩ関連有害事象を発症する確率が増す。
【０１０３】
本発明に関して用いる用語“心血管疾患”は、当業者に既知であり、冠血管および心臓自体にみられるいずれかの機能障害に関連し、特に冠動脈疾患ＣＡＤを含む。
用語“心血管外科処置”は、心血管疾患に関して実施される外科処置を表わす。好ましい態様において、この用語はＣＡＤに関して実施される外科処置に関するものであり、“ＣＡＤ外科処置”と呼ぶこともできる。
【０１０４】
本発明に関して用いる用語“冠動脈疾患”（ＣＡＤ）は、当業者に既知であり、多くの場合は動脈硬化プロセス、一般にアテロームにより引き起こされる冠動脈血流障害を伴い、これは虚血、狭心症、急性冠動脈症候群（不安定狭心症、心筋梗塞ＭＩ）および突然心臓死を引き起こす可能性がある。処置には、虚血を軽減し、冠動脈血流を回復または改善する薬物および措置が含まれる。通常、ＣＡＤは、大径および中径冠動脈におけるアテロームの沈着（アテローム硬化症）が原因となる。より頻度は低いが、ＣＡＤは冠動脈攣縮が原因となる。稀な原因には、冠動脈の塞栓症、剥離、動脈瘤および血管炎が含まれる。本発明に関して、ＣＡＤには心不全も含まれる。
【０１０５】
本発明の方法によれば、基準量と比較して、対象の試料、好ましくは尿試料において測定したＬ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントの量の増加は、腎臓の尿細管損傷の指標となる。基準量と比較して、対象の試料において測定したＮＧＡＬまたはそのバリアントの量の増加は、腎臓の尿細管損傷の指標となる。基準量と比較したアディポネクチンまたはそのバリアントの量の増加は、腎臓の糸球体損傷の指標となる。基準量と比較したアルブミンまたはそのバリアントの量の増加は、腎臓の糸球体損傷の指標となる。基準量と比較したＬ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアントの量の増加および／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントの量の増加は、アディポネクチンもしくはそのバリアントの量の増加および／またはアルブミンもしくはそのバリアントの量の増加と合わせて、腎臓の尿細管および糸球体の進行性損傷の指標となる。
【０１０６】
本発明に関して、１態様は外科的介入を実施する前に、すなわち介入の少なくともまたは最大で約４週間前、好ましくは少なくともまたは最大で約２週間前に、あるいは外科的介入の少なくともまたは最大で約７日前、あるいは少なくともまたは最大で約３日前、あるいは少なくともまたは最大で約１日前、あるいは少なくともまたは最大で約２０時間前、あるいは少なくともまたは最大で約１２時間前、あるいは少なくともまたは最大で約６時間前に、マーカー量を測定する場合に関する。マーカー量の測定後に急性事象が起きる場合、好ましくはそれらの量を再び測定すべきである。
【０１０７】
本発明の好ましい態様において、マーカーについて下記の基準量を用い、その際、マーカー量は好ましくは外科的介入の前に採取した試料において測定される。各個体の尿量の変動から生じる不正確さを排除するために、各マーカーの量をクレアチニンに対して標準化する（“creatinine for.....（について、・・・・（クレアチニン））”）。
【０１０８】
急性腎傷害、およびＡＫＩにおける透析の必要性は、重大な外科処置、特に心臓外科処置の既知合併症であって外科処置後７２時間（すなわち３日）以内に起きることが知られている。これらの合併症の平均リスクの計算法は当業者に既知である(Mcllroy D.R. et al, Clin J. Am Soc Nephrol 5: 211 - 219, 2010)。平均リスクは特に、平均リスク計算の基礎となる基礎疾患、共存疾患(comorbidities)、および介入のタイプに依存する。本発明に関して用いる用語“高いリスク”、“より高いリスク”、“きわめて高いリスク”は、平均リスクに対比してリスクが増大している症例に関する。本発明に関して用いる用語“低いリスク”、“より低いリスク”、“きわめて低いリスク”は、平均リスクに対比してリスクが低下している症例に関する。
【０１０９】
Ｌ−ＦＡＢＰ：
Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントについて、≦約３．６μｇ／ｇ、好ましくは≦約３．２μｇ／ｇ、より好ましくは≦約２．９μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体がＡＫＩに罹患するリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外(rule out)）。
【０１１０】
Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントについて、≧約１０．８μｇ／ｇ、好ましくは≦約２９．５μｇ／ｇ、より好ましくは≧約３２．３μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体がＡＫＩに罹患するリスクが高い、好ましくはリスクがより高い、より好ましくはリスクがきわめて高いことの指標となる（包含(rule in)）。
【０１１１】
Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントについて、≦約４．２μｇ／ｇ、好ましくは≦約３．２μｇ／ｇ、より好ましくは≦約２．８μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外）。
【０１１２】
Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントについて、≧約３５．４μｇ／ｇ、好ましくは≦約３６．２μｇ／ｇ、より好ましくは≧約３７．２μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが高い、好ましくはリスクがより高い、より好ましくはリスクがきわめて高いことの指標となる（包含）。
【０１１３】
アディポネクチン：
さらにアディポネクチンまたはそのバリアントの量を測定する場合、ＡＫＩ／透析の必要性を生じるリスクが低いことおよびＡＫＩ／透析の必要性を生じるリスクが高いことの指標となる基準値は、下記のとおりである：
アディポネクチンまたはそのバリアントについて、≦約３．６μｇ／ｇ、好ましくは≦約３．２μｇ／ｇ、より好ましくは≦約２．８μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体がＡＫＩに罹患するリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外）。
【０１１４】
アディポネクチンまたはそのバリアントについて、≧約１５．６μｇ／ｇ、好ましくは≦約１７．６μｇ／ｇ、より好ましくは≧約３０．０μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体がＡＫＩに罹患するリスクが高い、好ましくはリスクがより高い、より好ましくはリスクがきわめて高いことの指標となる（包含）。
【０１１５】
アディポネクチンまたはそのバリアントについて、≦約８．８μｇ／ｇ、好ましくは≦約３．２μｇ／ｇ、より好ましくは≦約１．２μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外）。
【０１１６】
アディポネクチンまたはそのバリアントについて、≧約３０．４μｇ／ｇ、好ましくは≦約１３５．２μｇ／ｇ、より好ましくは≧約１７１．６μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが高い、好ましくはリスクがより高い、より好ましくはリスクがきわめて高いことの指標となる（包含）。
【０１１７】
アディポネクチンはＬ−ＦＡＢＰから独立して情報を提供する。
アルブミン：
さらにアルブミンまたはそのバリアントの量を測定する場合、ＡＫＩ／透析の必要性を生じるリスクが低いことおよびＡＫＩ／透析の必要性を生じるリスクが高いことの指標となる基準値は、下記のとおりである：
アルブミンまたはそのバリアントについて、≦約６μｇ／ｇ、好ましくは≦約４μｇ／ｇ、より好ましくは≦約２μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体がＡＫＩに罹患するリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外）。
【０１１８】
アルブミンまたはそのバリアントについて、≧約１２８μｇ／ｇ、好ましくは≦約１４２μｇ／ｇ、より好ましくは≧約１６０μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体がＡＫＩに罹患するリスクが高い、好ましくはリスクがより高い、より好ましくはリスクがきわめて高いことの指標となる（包含）。
【０１１９】
アルブミンまたはそのバリアントについて、≦約８μｇ／ｇ、好ましくは≦約４μｇ／ｇ、より好ましくは≦約２μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外）。
【０１２０】
アルブミンまたはそのバリアントについて、≧約５４μｇ／ｇ、好ましくは≦約１２８μｇ／ｇ、より好ましくは≧約１４２μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが高い、好ましくはリスクがより高い、より好ましくはリスクがきわめて高いことの指標となる（包含）。
【０１２１】
アルブミンはＬ−ＦＡＢＰから独立して情報を提供する。
ＮＧＡＬ：
さらにＮＧＡＬまたはそのバリアントの量を測定する場合、ＡＫＩ／透析の必要性を生じるリスクが低いことおよびＡＫＩ／透析の必要性を生じるリスクが高いことの指標となる基準値は、下記のとおりである：
ＮＧＡＬまたはそのバリアントについて、≦約７．０μｇ／ｇ、好ましくは≦約５．５μｇ／ｇ、より好ましくは≦約３．５μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体がＡＫＩに罹患するリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外）。
【０１２２】
ＮＧＡＬまたはそのバリアントについて、≧約１２μｇ／ｇ、好ましくは≦約１３μｇ／ｇ、より好ましくは≧約１４μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体がＡＫＩに罹患するリスクが高い、好ましくはリスクがより高い、より好ましくはリスクがきわめて高いことの指標となる（包含）。
【０１２３】
ＮＧＡＬまたはそのバリアントについて、≦約９．０μｇ／ｇ、好ましくは≦約７．５μｇ／ｇ、より好ましくは≦約１．５μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外）。
【０１２４】
ＮＧＡＬまたはそのバリアントについて、≧約１５．０μｇ／ｇ、好ましくは≦約２０．５μｇ／ｇ、より好ましくは≧約２６．５μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが高い、好ましくはリスクがより高い、より好ましくはリスクがきわめて高いことの指標となる（包含）。
【０１２５】
ＮＧＡＬはＬ−ＦＡＢＰから独立して情報を提供する。
本発明の１態様において、Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアント、アディポネクチンまたはそのバリアント、アルブミンまたはそのバリアント、およびＮＧＡＬまたはそのバリアントのうち１種類以上を、外科処置終了時または外科処置終了後に測定する。これにより、ＡＫＩおよび／または透析の必要性を生じるリスクを判定できる。これらの１種類以上のマーカーを、外科処置の終了時（すなわち、外科処置の終了後、数分ないし約１時間以内）に測定し、および／またはその後、間隔をおいて、たとえば外科処置終了の約２時間、４時間、５時間、６時間、１０時間、１２時間、１６時間、２４時間後に測定することができる。
【０１２６】
外科処置の終了時または終了後に測定するアルブミンまたはそのバリアントの量は、外科処置直後に測定した場合、急性腎傷害を将来発症するリスクをもつ個体とリスクをもたない個体を識別することができる。同様に、アルブミンまたはそのバリアントの量は、外科処置後に測定した場合、将来の透析の必要性のリスクをもつ個体とリスクをもたない個体を識別することができる。アルブミンまたはそのバリアントの量は外科処置終了後に急速に減少するが、外科処置後、約６〜２４時間以内、好ましくは約６〜１２時間以内のアルブミンまたはそのバリアントの量の測定は、なおＡＫＩおよび透析の両方について、リスクをもつ患者とリスクをもたない患者を識別できる。
【０１２７】
外科処置後、好ましくは外科処置終了の約６時間後に測定した場合、アルブミンまたはそのバリアントについて、≦約８μｇ／ｇ、好ましくは≦約５μｇ／ｇ、より好ましくは≦約４μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体がＡＫＩに罹患するリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外）。
【０１２８】
外科処置後、好ましくは外科処置終了の約１２時間後に測定した場合、アルブミンまたはそのバリアントについて、≦約８μｇ／ｇ、好ましくは≦約４μｇ／ｇ、より好ましくは≦約２μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体がＡＫＩに罹患するリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外）。
【０１２９】
外科処置後、好ましくは外科処置終了の約６時間後に測定した場合、アルブミンまたはそのバリアントについて、≦約８μｇ／ｇ、好ましくは≦約６μｇ／ｇ、より好ましくは≦約４μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外）。
【０１３０】
外科処置後、好ましくは外科処置終了の約１２時間後に測定した場合、アルブミンまたはそのバリアントについて、≦約１０μｇ／ｇ、好ましくは≦約４μｇ／ｇ、より好ましくは≦約２μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外）。
【０１３１】
外科処置の終了時または終了後に測定するアディポネクチンまたはそのバリアントの量は、外科処置後に測定した場合、将来の透析の必要性のリスクをもつ個体とリスクをもたない個体を識別することができる。アディポネクチンまたはそのバリアントの量は外科処置終了後に急速に増加するが、外科処置後、約６〜２４時間以内、好ましくは約６〜１２時間以内のアディポネクチン量の測定は、なお透析のリスクをもつ患者とリスクをもたない患者を識別できる。
【０１３２】
外科処置後、好ましくは外科処置終了の約６時間後に測定した場合、アディポネクチンまたはそのバリアントについて、≦約６５μｇ／ｇ、好ましくは≦約４８μｇ／ｇ、より好ましくは≦約２４μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低い、よりさらに好ましくはリスクがよりさらに低いことの指標となる（除外）。
【０１３３】
外科処置後、好ましくは外科処置終了の約１２時間後に測定した場合、アディポネクチンまたはそのバリアントについて、≦約７２μｇ／ｇ、好ましくは≦約６２μｇ／ｇ、より好ましくは≦約４７μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低い、よりさらに好ましくはリスクがよりさらに低いことの指標となる（除外）。
【０１３４】
外科処置の終了時または終了後に測定したＬ  ＦＡＢＰまたはそのバリアントの量は、ＡＫＩを発症する患者においては発症しなかった患者より低く、これはおそらく既存の腎疾患のためであろう。外科処置終了直後ではないが、外科処置終了の約６〜２４時間後、好ましくは約６〜１２時間後のアディポネクチンまたはそのバリアントの量の測定は、透析の必要性のリスクをもつ患者とリスクをもたない患者を識別できる。
【０１３５】
外科処置後、好ましくは外科処置終了の約６時間後に測定した場合、Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントについて、≦約１０μｇ／ｇ、好ましくは≦約５μｇ／ｇ、より好ましくは≦約０μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外）。
【０１３６】
外科処置後、好ましくは外科処置終了の約１２時間後に測定した場合、Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントについて、≦約１０μｇ／ｇ、好ましくは≦約５μｇ／ｇ、より好ましくは≦約２μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外）。
【０１３７】
外科処置の終了時または終了後に測定したＮＧＡＬまたはそのバリアントの量は、将来の透析の必要性のリスクをもつ個体とリスクをもたない個体を識別することができる。外科処置終了の約６〜２４時間後、好ましくは約６〜１２時間後のＮＧＡＬ量またはそのバリアント量の測定は、透析の必要性のリスクをもつ患者とリスクをもたない患者を識別できる。
【０１３８】
外科処置後、好ましくは外科処置終了の約６時間後に測定した場合、ＮＧＡＬまたはそのバリアントについて、≦約２０μｇ／ｇ、好ましくは≦約１５μｇ／ｇ、より好ましくは≦約１０μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外）。
【０１３９】
外科処置後、好ましくは外科処置終了の約１２時間後に測定した場合、ＮＧＡＬまたはそのバリアントについて、≦約３０μｇ／ｇ、好ましくは≦約２０μｇ／ｇ、より好ましくは≦約１０μｇ／ｇ（クレアチニン）の基準量は、その個体が透析の必要性を生じるリスクが低い、好ましくはリスクがより低い、より好ましくはリスクがきわめて低いことの指標となる（除外）。
【０１４０】
本発明はまた、対象の外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を経験するリスクをもつ対象において、対象の試料中において測定した肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアントの量を少なくとも１つの基準量と比較することによりＡＫＩに関連する有害事象のリスクを予測することに基づいて、適切な療法を推奨または決定する方法に関する。
【０１４１】
この本発明方法は、下記の段階のうち少なくとも１つを含み、および／または下記の段階を含むことができる：ａ）対象の試料、好ましくは尿試料中の、肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアント、好ましくは尿中肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアントの量を測定し；ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較し；ｃ）段階ｂ）で実施した比較に基づいてそのリスクを予測し；ｄ）段階ｃ）で得た情報に基づいて、適切な療法の開始または適切な療法の差控えを推奨または決定する。
【０１４２】
本発明はまた、対象の外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を経験するリスクをもつ対象に適切な療法を推奨または決定する方法であって、下記の段階を含む方法を提供する：
ａ）対象の試料、好ましくは尿試料中の、肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアント、好ましくは尿中肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアントを測定し；
ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較し；
ｃ）段階ｂ）で実施した比較に基づいてそのリスクを予測し；
ｄ）段階ｃ）で得た情報に基づいて、適切な療法の開始または適切な療法の差控えを推奨または決定する。
【０１４３】
本発明の他の態様において、本発明は、対象の外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を経験するリスクをもつ対象に適切な療法を推奨または決定する方法であって、
ａ）対象の試料、好ましくは尿試料中の、肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアント、好ましくは尿中肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアントの量を測定し；
ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較する
段階を含み；これにより、対象が外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を経験するリスクを予測し、この予測に基づいて適切な療法の開始または差控えを推奨する方法を提供する。
【０１４４】
本発明の好ましい態様において、Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントの量のほかに尿試料中のアディポネクチンまたはそのバリアントの量を測定し、これらのマーカー量と基準量の比較に基づいて推奨を確立する。
【０１４５】
本発明の他の好ましい態様において、尿試料中のアルブミンまたはそのバリアントおよび好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）またはそのバリアントから選択される少なくとも１種類の追加マーカーの量を測定し、これらのマーカー量と基準量の比較に基づいて推奨を確立する。この態様において、Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアント、および好ましくはアディポネクチンまたはそのバリアンの量のほかに、上記の群のうち１つの追加マーカーだけの量を測定し、あるいはＬ−ＦＡＢＰまたはそのバリアント、および好ましくはアディポネクチンまたはそのバリアンの量のほかに、両方の追加マーカーの量を測定する。
【０１４６】
前記に開示した適切な療法を推奨または決定する方法において、各マーカーは好ましくは外科処置前に測定される。本発明の他の態様において、マーカー（単数または複数）は外科的介入が終了した後に、たとえば介入が終了した直後、または１、２、３、４、５、６、８、１０、１２、１６、１８もしくは２４時間後に測定される。
【０１４７】
本発明の他の態様において、適切な療法は、腎疾患のそれ以上の進行を阻止するのに有効な医薬の投与および／または生活様式の推奨である。
有利には、本発明方法によって、高いＡＫＩリスクをもつ患者を外科的介入前および／または外科的介入後に同定できる。患者のＡＫＩリスクが高いという判定から、外科処置後にＡＫＩに罹患するリスクが高い患者において、ＡＫＩを促進することが分かっているリスク因子を制御することができる。これらのリスク因子の制御には、外科処置の途中および後の慎重な体液バランスが含まれる。外科処置に際して心肺バイパスを用いる場合、低い潅流温度を避けるべきである。腎毒性薬物（たとえば、非ステロイド系抗炎症薬およびスルホンアミド類）も避けるべきである。さらに、エリスロポエチンの投与を適用することができる(Song et al., 2009, American Journal of Nephrology, 253-260)。患者における外科的介入後の急性腎傷害のリスクをその介入の前および／またはその介入の後に予測できることは、その患者がその外科処置に適格であるかどうかの決定について意義をもつことが明らかである。
【０１４８】
本明細書中で用いる用語“感受性の”は、対象に適用する療法が糖尿病またはそれに随伴する症状の進行を阻害または改善することを意味する。療法に対する感受性の評価が被験対象のすべて（１００％）について正確というわけではないことを理解すべきである。しかし、少なくとも統計的に有意の部分についてその療法の適用が成功すると判定できることが考慮される。ある部分が統計的に有意であるかどうかは、本明細書の他の箇所に明記した手法により判定できる。
【０１４９】
さらに本発明は、対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクをもつ対象において、種々の時点（少なくとも２つの異なる時点）で得た対象の試料中で測定した肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアント、好ましくは尿中Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントの量を少なくとも１つの基準量と比較することによりＡＫＩに関連する有害事象のリスクを予測することに基づいて、療法をモニタリングする方法に関する。
【０１５０】
この本発明方法は、下記の段階のうち少なくとも１つを含み、および／または下記の段階を含むことができる：ａ）種々の時点（少なくとも２つの異なる時点）で得た対象の試料、好ましくは尿試料中の、肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアントの量を測定し；ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較し；ｃ）段階ｂ）で実施した比較に基づいてそのリスクを予測し；ｄ）段階ｃ）で得た情報に基づいて、療法をモニタリングする。
【０１５１】
本発明は、対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクをもつ対象において、療法をモニタリングする方法であって、下記の段階を含む方法も提供する：
ａ）種々の時点（少なくとも２つの異なる時点）で得た対象の尿試料中の、肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアントの量を測定し；そして
ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較し；
ｃ）段階ｂ）で実施した比較に基づいてそのリスクを予測し；
ｄ）段階ｃ）で得た情報に基づいて、適切な療法の開始または適切な療法の差控えを推奨または決定する。
【０１５２】
本発明の他の態様において、本発明は、対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクをもつ対象において、療法をモニタリングする方法であって、
ａ）種々の時点（少なくとも２つの異なる時点）で得た対象の尿試料中の、肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアントの量を測定し；そして
ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較する
段階を含み；これにより、対象が外科的介入後に急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象を経験するリスクを予測し、この予測に基づいて適切な療法の開始または差控えを推奨する方法を提供する。
【０１５３】
本発明の好ましい態様において、Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアントの量のほかに尿試料中のアディポネクチンまたはそのバリアントの量を測定し、これらのマーカー量と基準量の比較に基づいてモニタリングを実施する。
【０１５４】
本発明の他の好ましい態様において、尿試料中のアルブミンまたはそのバリアントおよび好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）またはそのバリアントから選択される少なくとも１種類の追加マーカーの量を測定し、これらのマーカー量と基準量の比較に基づいてモニタリングを実施する。この態様において、Ｌ−ＦＡＢＰまたはそのバリアント、および好ましくはアディポネクチンまたはそのバリアンの量のほかに、上記の群のうち１つの追加マーカーだけの量を測定し、あるいはＬ−ＦＡＢＰまたはそのバリアント、および好ましくはアディポネクチンまたはそのバリアンの量のほかに、両方の追加マーカーの量を測定する。
【０１５５】
本明細書中で用いる用語“モニタリング”は、各個体の病態生理学的状態をＡＫＩ関連事象、特にＡＫＩ自体、または透析の必要性、疾患の発症および／または進行、あるいは特定の処置が疾患の進行に及ぼす影響について追跡し続けることに関する。モニタリングは、好ましくは約１日後、約２日後、約３日後、約５日後、約７日後、約１０日後、約１２日後、約１４日後の管理を意味する。
【０１５６】
１態様において、本発明は、対象の急性腎傷害ＡＫＩを診断する方法であって、下記の段階を含む方法を提供する：
ａ）好ましくは対象の尿試料中の肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアントの量を測定し；
ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較し；そして
ｃ）段階ｂ）で実施した段階に基づいてＡＫＩを診断する。
【０１５７】
本発明はまた、対象の急性腎傷害ＡＫＩを診断する方法であって、
ａ）好ましくは対象の尿試料中の肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）またはそのバリアントの量を測定し；そして
ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較する
段階を含み；その際、段階ｂ）で実施した段階に基づいてＡＫＩを診断する方法を提供する。
【０１５８】
さらに本発明はまた、本発明の方法を実施するために適応させたキットおよびデバイスを考慮する。
さらに本発明は、対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクを予測するためのデバイスであって、
ａ）対象の試料、好ましくは尿試料中の、肝臓型脂肪酸結合タンパク質、好ましくは尿中肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）もしくはそのバリアント、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントおよび／またはアルブミンもしくはそのバリアントの量を測定するための手段；
ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較するための手段；ならびに
ｃ）段階ｂ）で実施した比較に基づいてリスクを予測すること
を含み、これにより腎損傷の診断に適応させたデバイスに関する。
【０１５９】
さらに本発明は、対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクを予測するためのキットであって、
ａ）対象の試料、好ましくは尿試料中の、肝臓型脂肪酸結合タンパク質、好ましくは尿中肝臓型脂肪酸結合タンパク質（Ｌ−ＦＡＢＰ）もしくはそのバリアント、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントおよび／またはアルブミンもしくはそのバリアントの量を測定するための手段；
ｂ）段階ａ）で測定した量を基準量と比較するための手段；ならびに
ｃ）段階ｂ）で実施した比較に基づいてリスクを予測すること
を含み、これにより腎損傷の診断に適応させたキットに関する。
【０１６０】
本明細書中で用いる用語“デバイス”は、対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクを予測し、および／または対象におけるＡＫＩに関連する有害事象のリスクの予測に基づいて、対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクをもつ対象に適切な療法を推奨または決定し、および／または対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクをもつ対象において療法をモニタリングできるように、作動可能な状態で相互に接続した少なくとも前記の手段を含む手段のシステムに関する。（Ｌ−ＦＡＢＰ）、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントおよび／またはアルブミンもしくはそのバリアントの量を測定するための好ましい手段、ならびに比較を実施するための手段は、本発明の方法に関して前記に開示されている。それらの手段を作動可能な様式で接続する方法は、デバイスに含まれる手段のタイプに依存するであろう。たとえば、ペプチドの量を自動的に測定するための手段を使用する場合、目的とする結果を得るために、その自動的に作動する手段により得られたデータをたとえばコンピュータープログラムにより処理することができる。好ましくは、そのような場合、それらの手段は単一デバイスにより構成される。したがって、そのようなデバイスは、適用した試料中のペプチドまたはポリペプチドの量を測定するための分析ユニット、および得られたデータを評価のために処理するためのコンピューターユニットを含むことができる。あるいは、ペプチドまたはポリペプチドの量を測定するために検査ストリップなどの手段を用いる場合、比較のための手段は、測定量を基準量に割り当てる対照ストリップまたは対照表を含むことができる。検査ストリップは、好ましくは、本明細書中に述べるペプチドまたはポリペプチドに特異的に結合するリガンドにカップリングしている。ストリップまたはデバイスは、好ましくはそのリガンドへの前記ペプチドまたはポリペプチドの結合を検出するための手段を含む。検出のための好ましい手段は、前記の本発明方法に関する態様に関連して開示されている。そのような場合、それらの手段は、そのシステムのユーザーがマニュアルに示された指示および解説によって量の測定結果とその診断値または予後値を一緒にするという点で、作動可能な状態で接続する。そのような態様において、それらの手段は別個のデバイスとして得られてもよく、好ましくは一緒にキットとしてパッケージされる。当業者にはそれらの手段を接続する方法が容易に理解されるであろう。好ましいデバイスは、専門臨床医の特別な知識なしに使用できるもの、たとえば試料を装填するだけでよい検査ストリップまたはエレクトロニクスデバイスである。結果は医師が解釈する必要がある生データの出力として得られる場合がある。しかし、好ましくはデバイスの出力は、生データが処理され、すなわち評価されたものであり、その解釈に臨床医を必要としない。他の好ましいデバイスは、本発明の方法に関して前記に述べた、分析ユニット／デバイス（たとえば、バイオセンサー、アレイ、固体支持体（Ｌ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアント、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントおよび／またはアルブミンもしくはそのバリアントを特異的に認識するリガンドにカップリングしたもの）、表面プラズモン共鳴デバイス、ＮＭＲ分光計、質量分析計など）または評価ユニット／デバイスを含む。
【０１６１】
本明細書中で用いる用語“キット”は、前記手段の集合体であって、好ましくは個別に、または単一容器内において提供されるものを表わす。場合により、キットはさらに、本発明に定めるように、いずれかの測定（単数または複数）の結果を対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクを予測することに関して解釈し、および／または対象におけるＡＫＩに関連する有害事象のリスクの予測に基づいて、対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクをもつ対象に適切な療法を推奨または決定し、および／または対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクをもつ対象において療法をモニタリングするための、ユーザーマニュアルを含むことができる。特にそのようなマニュアルは、どの測定量がどの種類の診断に対応するかについての情報を含むことができる。これは本明細書中の他の箇所に詳細に説明されている。さらに、そのようなユーザーマニュアルは、各バイオマーカーの量を測定するためにキットの構成要素を適正に使用することについての指示を提供することができる。
【０１６２】
本発明はまた、対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクを予測し、および／または対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクをもつ対象に適切な療法を推奨または決定し、および／または対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクをもつ対象において療法をモニタリングするための、下記の使用に関する：対象の試料中のＬ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアント、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントおよび／またはアルブミンもしくはそのバリアントの量を測定するキットまたはデバイスの使用；Ｌ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアント、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントおよび／またはアルブミンもしくはそのバリアントの量を測定する手段の使用；ならびに／あるいはＬ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアント、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントおよび／またはアルブミンもしくはそのバリアントの量を少なくとも１つの基準量と比較する手段の使用に関する；その際、すべての使用は対象におけるＡＫＩに関連する有害事象のリスクの予測に基づく。
【０１６３】
好ましくは、外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクの予測は、外科的介入の前に採取した試料に基づく。
本発明はまた、対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクを予測し、および／または対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクをもつ対象に適切な療法を推奨または決定し、および／または対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクをもつ対象において療法をモニタリングするのに用いる診断用組成物の調製のための、下記のものの使用に関する：Ｌ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアントに対する抗体、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントに対する抗体、および／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントに対する抗体、および／またはアルブミンもしくはそのバリアントに対する抗体；ならびに／あるいはＬ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアントの量を測定する手段、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントの量を測定する手段、および／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントの量を測定する手段、および／またはアルブミンもしくはそのバリアントの量を測定する手段；ならびに／あるいはＬ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアント、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントおよび／またはアルブミンもしくはそのバリアントの量を少なくとも１つの基準量と比較する手段；その際、すべての使用は対象におけるＡＫＩに関連する有害事象のリスクの予測に基づく。
【０１６４】
好ましくは、外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクの予測は、外科的介入の前に採取した試料に基づく。
本発明はまた、対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクを予測し、および／または対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクをもつ対象に適切な療法を推奨または決定し、および／または対象の外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクをもつ対象において療法をモニタリングするための、下記のものの使用に関する：Ｌ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアントに対する抗体、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントに対する抗体、および／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントに対する抗体、および／またはアルブミンもしくはそのバリアントに対する抗体；ならびに／あるいはＬ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアントの量を測定する手段、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントの量を測定する手段、および／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントの量を測定する手段、および／またはアルブミンもしくはそのバリアントの量を測定する手段；ならびに／あるいはＬ−ＦＡＢＰもしくはそのバリアント、ならびに場合によりアディポネクチンもしくはそのバリアントおよび／またはＮＧＡＬもしくはそのバリアントおよび／またはアルブミンもしくはそのバリアントの量を少なくとも１つの基準量と比較する手段；その際、すべての使用は対象におけるＡＫＩに関連する有害事象のリスクの予測に基づく。
【０１６５】
好ましくは、外科的介入の結果としての急性腎傷害ＡＫＩに関連する有害事象のリスクの予測は、外科的介入の前に採取した試料に基づく。
本明細書に引用したすべての参考文献を、それらの開示内容全体および本明細書に詳述した開示内容に関して本明細書に援用する。
【０１６６】
以下の実施例は本発明を説明するためのものにすぎない。それらが本発明の範囲を限定するものとは決して解釈すべきでない。
【実施例】
【０１６７】
以下の実施例では、各ペプチドの量を測定するために下記の検査法を用いた：
Ｌ−ＦＡＢＰは、Ｌ−ＦＡＢＰ  ＥＬＩＳＡ−Ｋｉｔ（ＣＭＩＣ  Ｃｏ．，Ｌｔｄから，日本）を用いて測定された。この検査はＥＬＩＳＡ  ２段階アッセイに基づいていた。Ｌ−ＦＡＢＰ標準品または尿試料をまず、この検査法と共に提供される前処理溶液で処理し、アッセイ用緩衝液を入れたＬ−ＦＡＢＰ抗体コートしたマイクロプレートへ移し、インキュベートした。このインキュベーションに際して、反応液中のＬ−ＦＡＢＰは固定化抗体に結合した。洗浄後、二次抗体−ＰＯＤコンジュゲートを二次抗体として添加してインキュベートし、これにより固定化抗体とコンジュゲート抗体の間のＬ−ＦＡＢＰ抗原のサンドイッチを形成した。インキュベーション後、プレートを洗浄し、酵素反応の基質を添加すると、Ｌ−ＦＡＢＰ抗原量に従って発色した。光学濃度に基づいてＬ−ＦＡＢＰ濃度を測定した。このアッセイ法は３ｎｇ／ｍｌから４００ｎｇ／ｍｌまでの測定範囲をもっていた。
【０１６８】
アディポネクチン（多量体）は、“サンドイッチ”方式ＥＬＩＳＡの原理で作動する検査法ＥＩＡ（ＡＬＰＣＯ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（登録商標）（米国）から）を用いて測定された。このキットに用いられている特異的抗体は、２つの独立したエピトープに対する抗ヒト−アディポネクチンモノクローナル抗体（ＭｏＡｂ）類であった。検体を下記に従って前処理し、総アディポネクチンおよび個々のアディポネクチン多量体を選択的、直接的または間接的に測定した。アディポネクチンの多量体は、このキットで４画分に分類された：
１）総アディポネクチン画分：“総−Ａｄ”−  プレート上で直接アッセイされた；
２）高分子量アディポネクチン画分（１２量体〜１８量体に相当）：“ＨＭＷ−Ａｄ”−  プレート上で直接アッセイされた；
３）中分子量アディポネクチン画分（６量体に相当）：“ＭＭＷ−Ａｄ”−  ＨＭＷ−Ａｄの濃度をＭＭＷ−Ａｄ  ＋  ＨＭＷ−Ａｄの合計濃度から差し引くことにより得られた推測値；
４）低分子量アディポネクチン画分（３量体に相当、アルブミン結合アディポネクチンを含む）：“ＬＭＷ  Ａｄ”−  ＭＭＷ−Ａｄ  ＋  ＨＭＷ−Ａｄの合計濃度を総Ａｄ濃度から差し引くことにより得られた推測値。
マイクロタイタープレートのウェルを抗ヒト−アディポネクチンモノクローナル抗体でコートした。標準品および前処理検体中のアディポネクチンは、１回目のインキュベーションに際してこの抗体により捕獲された。その後、洗浄段階ですべての非結合物質を除去した。次いで、ビオチン標識した抗ヒト−アディポネクチン抗体を添加し、ウェル内に固定化されたアディポネクチンに結合させた。次いで、ビオチン標識した抗ヒト−アディポネクチン抗体を添加し、ウェル内に固定化されたアディポネクチンに結合させた。２回目のインキュベーションおよびそれに続く洗浄段階の後、ＨＲＰ標識ストレプトアビジンを添加した。３回目のインキュベーションおよびそれに続く洗浄段階の後、基質溶液を添加した。最後に、発色させた後に停止試薬を添加した。発色強度をマイクロプレートリーダーで読みとった。プレートリーダーが示した吸光度値は試料中のアディポネクチンの濃度に比例していた。この検査キットは、０．０７５ｎｇ／ｍｌから４．８ｎｇ／ｍｌまでの範囲で有効であった。
【０１６９】
ＮＧＡＬは、ＮＧＡＬ  Ｒａｐｉｄ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｂｉｏｐｏｒｔｏ（登録商標）Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓから，デンマーク）により測定された。このアッセイ法は、ヒトＮＧＡＬに対するモノクローナル抗体でコートしたマイクロウェル内で実施されるＥＬＩＳＡであった。結合したＮＧＡＬを西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートしたモノクローナル抗体で検出し、発色基質と共にインキュベートすることによりアッセイを発色させた。用いたアッセイ法は迅速２段階法であった：
段階１．部分量の検量体、希釈した試料、およびいずれかの対照を、ＨＲＰコンジュゲートした検出抗体と共に、コートしたマイクロウェル内でインキュベートした。ＮＧＡＬだけがコートと検出抗体の両方に結合し、一方、結合しなかった物質は洗浄により除去された。
【０１７０】
段階２．テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を含有する色原体ペルオキシダーゼ基質を各検査ウェルに添加した。結合した検出抗体に連結したＨＲＰは基質と反応して有色生成物を生成した。この酵素反応を化学的に停止し、色の強度を４５０ｎｍでＥＬＩＳＡリーダーにより読みとった。色の強度（吸光度）は、各ウェルに最初に添加したＮＧＡＬの濃度の関数であった。検量体についての結果を用いて検量曲線を作成し、これから被験検体中のＮＧＡＬの濃度を読みとった。
【０１７１】
アルブミンは、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｔｉｎａ−ｑｕａｎｔ  Ａｌｂｕｍｉｎ  ｔｅｓｔ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いてイムノタービジメトリーにより測定された。この検査法の原理は、アルブミンと複合体を形成する特異的アルブミン抗体によるアルブミンの認識であり、これを凝集後に測定した。このアッセイ法は、尿中で３ｎｇ／ｍｌ〜４００ｎｇ／ｍｌの測定範囲をもっていた。
【０１７２】
上記の検査法は、好ましくは各ペプチドを測定するための本発明の一般状況にも用いられた。
合併症が起きる尤度または起きない尤度を予測する基準値を最適化するために、受動者操作曲線（ＲＯＣ曲線）を作成した。本発明に関する合併症は、前記に定めた腎傷害または透析の必要性である。合併症が起きる尤度または起きない尤度を測定する時点は、好ましくは外科処置前であった。この時点は、本発明において説明したように、外科処置を実施しない可能性を含めて、そのような合併症を避けるためのあらゆる適切な措置をとるのを可能にする。そのような合併症を回避または改善するための外科処置後またはさらに遅れた措置はこれよりはるかに制限されるが、透析のリスクに関してはそのような情報はそのような合併症に対して準備するのに適切な時間を提供するであろう；たとえば、透析装置の入手、適切なユニットへの移動、より集中した監視など。
【０１７３】
実施例１：
クレアチニンが正常範囲であり、選択的冠動脈バイパス外科処置を受ける合計１２６人の患者（中央年齢６３歳）を、介入の前、後、ならびに６、１２および２４時間後に、腎傷害マーカーの存在について評価した。
【０１７４】
８９人の患者はＡＫＩを発症せず、３７人の患者に少なくとも０，３ｍｇ／ｄｌのクレアチニン増加により示されるようにＡＫＩが認められ、１２人の患者は透析の必要性を生じ、９人は外科処置後３０日以内に死亡した。
【０１７５】
以下の尿中腎マーカーを測定した：アルブミン、アディポネクチン、Ｌ−ＦＡＢＰおよびＮＧＡＬ。
結果をＲＯＣ曲線１〜１８として示す（前記を参照）。
【０１７６】
外科処置前に採取した試料中のＬ−ＦＡＢＰの量は、外科処置後の透析の必要性を良好に予測する（図２を参照）。約８０％の選択性を維持した状態で、約６０％の感度を達成できた。したがって、最終的に透析を必要とする患者の半数以上において外科処置後の透析の必要性が正確に予測される。
【０１７７】
急性腎傷害、特に透析を伴う急性腎傷害は、介入前の疾患により、または介入自体の合併症により引き起こされる可能性があることを理解することが重要である。この検査では、尿中Ｌ−ＦＡＢＰにより、他の腎機能検査、たとえばクレアチニンの測定に基づく検査では認識されなかった急性腎傷害および透析のリスクが高いサブグループの患者が同定された。この同定は介入の前に可能であった。介入前のリスク評価によって、急性腎傷害をもたらす事象が起きた後に行なう場合には有効でないかまたは有効性が低い予防措置を行なうことができる。そのような措置には、具体的には特に慎重な体液バランス、腎毒性薬物の回避、および心肺バイパスを用いる場合の低い潅流温度の回避が含まれる。
【０１７８】
実施例２：
ある患者が心肺バイパス移植術を受ける計画である。この患者の外科処置前の尿中Ｌ−ＦＡＢＰ量は３６．０μｇ／ｇ（クレアチニン）である。したがって、患者の体液バランスを慎重にモニタリングし、低い潅流温度での心肺バイパス避ける。患者は腎傷害の徴候または症状なしに外科処置から回復する。
【０１７９】
実施例３：
ある患者が心肺バイパス移植術を受ける計画である。この患者の外科処置前の尿中Ｌ−ＦＡＢＰ量は３．１μｇ／ｇ（クレアチニン）である。特別な措置を行なわなくても、患者は腎傷害の徴候または症状なしに外科処置から回復する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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