(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
３×１０−８Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）を有する、ブドウ球菌エンテロトキシンＢと特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
重鎖ＣＤＲ１は配列ＩＤ番号１４４のアミノ酸配列を有するものであり、重鎖ＣＤＲ２は配列ＩＤ番号１４６のアミノ酸配列を有するものであり、重鎖ＣＤＲ３は配列ＩＤ番号１４８のアミノ酸配列を有するものであり、軽鎖ＣＤＲ１は配列ＩＤ番号１３６のアミノ酸配列を有するものであり、軽鎖ＣＤＲ２は配列ＩＤ番号１３８のアミノ酸配列を有するものであり、軽鎖ＣＤＲ３は配列ＩＤ番号１４０のアミノ酸配列を有するものである、ヒト抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
重鎖可変ドメインは、配列ＩＤ番号２３０のアミノ酸配列を有するものであり、軽鎖可変ドメインは、配列ＩＤ番号２２８のアミノ酸配列を有するものである、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
重鎖は、配列ＩＤ番号２１６のアミノ酸配列を有するものであり、軽鎖は、配列ＩＤ番号２１４のアミノ酸配列を有するものである、請求項１又は２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４】
解離定数（ＫＤ）は、３×１０−９Ｍ未満である、請求項１から３のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
請求項１から４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチド。
【請求項６】
請求項１から４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメントおよび薬学的に許容可能な担体を有する組成物。
【請求項７】
請求項５に記載のポリヌクレオチド配列を有するベクター。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを発現する細胞。
【請求項９】
前記細胞はハイブリドーマである、請求項８に記載の細胞。
【請求項１０】
請求項１〜４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを作製する方法であって、
前記抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するのに適した条件下で請求項８又は９に記載の宿主細胞を培養する工程と、
この細胞培養物から前記抗体または抗原結合フラグメントを回収する工程と、を有する、方法。
【請求項１１】
被験体におけるブドウ球菌エンテロトキシンＢ媒介性疾患の処置または予防、又は被験体におけるブドウ球菌エンテロトキシンＢの中和において使用するための、請求項１〜４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、ブドウ球菌エンテロトキシンＢを中和するものである、請求項１１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１３】
前記被験体は哺乳動物である、請求項１１又は請求項１２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１４】
前記哺乳動物はヒトである、請求項１３に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００７年１月３日出願の米国仮出願番号６０／８８３，２７１および２００７年２月６日出願の米国仮出願番号６０／８８８，４０５の利益を主張し、この両方は、本明細書中で参考として組み込まれる。
【０００２】
本明細書中の開示の一部は、米国国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）のＣｏｎｔｒａｃｔ  Ｎｏ．Ｕ０１ＡＩ０７５３９９の契約によって部分的に支援されたものでありうる。米国政府は、本願においてある特定の権利を有しうる。
【０００３】
本発明は、概して、免疫療法の分野に関する。より詳細には、本発明は、細菌のトキシンを中和することができるモノクローナル抗体、およびそのような抗体を使用してそのようなトキシンに曝露された被験体を処置するための方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
バイオテロに用いられる致死性物質の多くが容易に使用することができ、また、大部分は無防備な大衆に到達させることができるので、現在、バイオテロの脅威に大きな注目が集められている。郵便公社の混乱および１８人の死者を招いた２００１年のＷａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．およびＮｅｗ  Ｙｏｒｋでの炭疽菌入り封筒を用いた攻撃に見られるようなバイオテロ攻撃の結果として、重大な経済的および政治的悪影響が起きうる。そのような物質からの脅威に起因して、疾病対策センター（Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ）は、「兵器化」することができ、大規模な罹患および死亡を引き起こす可能性を有する生物学的物質のリストを確立した。これらの選ばれた物質は、一般市民に広く散布される可能性に基づいて３つの群（Ａ、ＢおよびＣ）に分類された。カテゴリーＢの物質は、適度に散布しやすく、一般市民に対して散布された場合、中程度の罹患および死亡をもたらしうると考えられる。そのカテゴリーＢの物質のリストの中に入るのが、微生物Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓによって産生されるブドウ球菌性エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）である（Ｍａｎｔｉｓ，ＮＪ（２００５）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．５７：１４２４−３９）。ＳＥＢは、特に粘膜表面による投与経路のとき、比較的低用量でヒトにおいて疾患を引き起こす可能性を有する。ＳＥＢの典型的な投与経路は、エアロゾルとしての吸入、またはＳＥＢ入りの食品もしくは水の経口摂取によるものである。
【０００５】
Ｓ．ａｕｒｅｕｓの株によって分泌される抗原性の異なるエンテロトキシンが少なくとも７つ存在する（Ｋｏｔｂ（１９９８）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  １：５６−６５；Ｂｅｒｇｄｏｌｌ（１９８３）Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎｓ：Ｃ．Ｓ．Ｆ．Ｅａｓｍｏｎ，Ｃ．Ａｄｌａｍ（Ｅｄｓ．），Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｎｄ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．５５９−５９８）。ＳＥＢは、分子量が約２８，０００Ｄａの単一のポリペプチドであり、２つの堅く詰め込まれたドメイン：大ドメインおよび小ドメインから構成されている（Ｓｗａｍｉｎａｔｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｎａｔｕｒｅ  ３５９：８０１−６）。ＳＥＢがコンパクトな三次構造であるため、ＳＥＢは、トリプシン、キモトリプシンおよびパパインをはじめとしたプロテアーゼによる分解に対して非常に抵抗性である。プロテアーゼに対する抵抗性は、腸管の内腔におけるＳＥＢの安定性に寄与する可能性がある（Ｍａｎｔｉｓ（２００５））。
【０００６】
ブドウ球菌などの病原菌による宿主生物の感染は、外毒素の産生によって促進される。Ｓ．ａｕｒｅｕｓによって産生されるＳＥＢは、スーパー抗原（ＳＡｇ）として分類されるタンパク質である。スーパー抗原は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＭＨＣＩＩと、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の特定のサブセット上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）との間に架橋を形成することによってＴ細胞を活性化することができるトキシンと定義される。ＳＥＢは、ヒトＶβ＋Ｔ細胞受容体の７つのクラス：Ｖβ３、１２、１３．２、１４、１５、１７、２０のうちの１つを認識する（Ｊａｒｄｅｔｚｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：７１１−８；Ｌｅｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：８２３−３３；Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ９：８０７−１６）。ＳＥＢが結合した結果、Ｔ細胞は、ＩＬ−２、ＴＮＦ−βおよびインターフェロン−γをはじめとした大量のサイトカインを放出し、最終的にその枯渇をもたらす過剰増殖を起こす（Ｋａｐｐｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：８１１−３）。ＭＨＣＩＩ＋ＡＰＣは、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１を産生することによって応答する（Ｋｒａｋａｕｅｒ（２００３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１４：１３７−４９）。Ｌ４５近傍の疎水性ポケット、ならびに残基Ｙ８９、Ｙ１１５およびＥ６７を含む極性ポケットをはじめとしたＳＥＢの２領域が、ＭＨＣＩＩとの相互作用に関与する（Ｍａｎｔｉｓ（２００５）；Ｊａｒｄｅｔｚｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）；Ｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１０：２７７−８９；およびＳｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６９：３２４−７）。ＳＥＢとＴＣＲ−ＭＨＣＩＩとの分子相互作用についてさらに理解することが、弱毒化ＳＥＢワクチンの候補の開発につながると予測される；この予測は、ある程度理解されてきている（Ｕｌｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｖａｃｃｉｎｅ  １６：１８５７−６４）。
【０００７】
ＳＥＢは、かなり安定したタンパク質であるが、長時間煮沸することによって変性することがある。ＳＥＢは、エアロゾルとして安定であるので、バイオテロリストが用いる物質として有望な候補になると考えられる。ＳＥＢは、不能化（ｉｎｃａｐａｃｉｔａｔｉｎｇ）トキシンであり、吸入によるＬＤ５０（集団の５０％に対して致死性の用量）は、２７μｇ／ｋｇであり、ＩＤ５０（集団の５０％に対して感染性の用量）は、たった０．０００４μｇ／ｋｇである。ＳＥＢは、経口摂取または吸入のいずれかによって体内に入ることが最も多く、それにより、ＳＥＢ食中毒およびＳＥＢ呼吸器症候群という２つの異なる臨床像がもたらされる。ＳＥＢは、戦場では経口摂取される可能性は低いが、テロリストによる攻撃においては両方の経路がありうる。テロリストの大量破壊兵器としてのＳＥＢは、エアロゾルとして散布される可能性が最も高いだろう（Ｍａｄｓｅｎ（２００１）Ｃｌｉｎｉｃｓ  ｉｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２１：５９３−６０５）。
【０００８】
ＳＥＢ食中毒は、重症の腹部痙攣、通常は非血性下痢を特徴とし、時折、頭痛および発熱を伴う。通常、経口摂取後の２〜８時間以内に急激に症状が現れ、通常は１２時間以内に軽減する。エアロゾル化されて予め形成されたトキシンを吸入することによって、発熱、頭痛、悪寒、筋痛（ｍｙａｌａｇｉａｓ）、乾性咳、呼吸困難および胸骨後胸痛を特徴とするＳＥＢ呼吸器症候群がもたらされる。このトキシンを不注意に嚥下してしまうと、悪心および嘔吐がもたらされ、眼への接触によって、結膜充血が誘導されうる。３９℃〜４１℃の発熱は、最長５日続くことがあり、咳は、最長４週間続くことがある。致死的な吸入の場合における死亡のメカニズムは、肺浮腫である（Ｍａｄｓｅｎ  ２００１）。
【０００９】
ＳＥＢ感染個体を処置するためにいくつかの有望なストラテジーが開発中であるが、現在、有効な処置法は存在しない。静脈内免疫グロブリンを使用することが、限定的に成功したアプローチである（Ｄａｒｒｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．３８：８３６−４２）。マウスＳＥＢモデルシステムにおいて開発中の別のアプローチが、現在、報告されている（Ｋｒａｋａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．５０：３９１−５）。マウスのＳＥＢモデルシステムでは、マウスをＳＥＢに曝露し、抗炎症性薬のデキサメタゾンで処置した。ＳＥＢのＬＰＳ増強型モデルにおいて、その薬物がＳＥＢ処置の直後にそのマウスに投与される場合、中毒性ショックは停止しうる（短処置期間）。しかしながら、実際の問題として、そのような短い処置期間内でＳＥＢへの曝露を正確に診断し、ＳＥＢ媒介性疾患を鎮めるのに十分なデキサメタゾンを投与することは困難であろう。
【００１０】
ＳＥＢワクチンの研究は、主に米陸軍感染症研究所（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ａｒｍｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ）（ＵＳＡＭＲＩＩＤ）によって行われている。そのワクチンの開発は、ホルマリンによって不活性化されたトキシンを使用することに焦点が当てられていた（Ｔｓｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６３：２８８０−５）。このトキソイドワクチンは、典型的には、ｐＨ７．５のホルマリン中で長時間インキュベートすることによって作製される。ＳＥＢトキソイドワクチンは、免疫原性であり、患者はＳＥＢに対して免疫反応を起こさなかったが、このワクチンは、最近、ＵＳＡＭＲＩＩＤによって広く断念され、組換え部位特異的弱毒化変異体に取って代わられた（Ｓｔｉｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６９：２０３１−６）。残念なことに、これらの変異体は、霊長類の研究において催吐活性を保持しているので、ヒトにおいて使用するのに適していない可能性がある（Ｈａｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６１：３１７５−８３）。
【００１１】
上で概説したＳＥＢの研究から、テロリストがＳＥＢを使用することに立ち向かうための有効な方法が現在のところ無いと示唆される。ゆえに、インビボにおいてＳＥＢの活性を中和することができる薬物を開発するアプローチは、ＳＥＢ媒介性疾患を処置および予防するための価値あるヒトの治療法になるだろう。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、ブドウ球菌エンテロトキシンＢに特異的に結合し、好ましくは、それを中和する、単離されたヒト抗体および抗原結合フラグメントを特徴とする。本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号３９、４０、７０、９４、１１８、１３２または１４８を有する重鎖ＣＤＲ３を含みうる。本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号６８、６９および７０；配列ＩＤ番号１３０、１３１および１３２；配列ＩＤ番号９２、９３および９４；または配列ＩＤ番号１４４、１４６および１４８の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１６０、１７６、２０４または２３０の重鎖可変ドメインを含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号３０、３４、１２６、１４２、２１６、２３２または２５１を有する重鎖を含みうる。
【００１３】
いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号５６、５７および５８；配列ＩＤ番号１０４、１０５および１０６；配列ＩＤ番号８０、８１および８２；または配列ＩＤ番号１３６、１３８および１４０の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１５８、１７４、２００または２２８の軽鎖可変ドメインを含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号２８、３２、３６、１３４、１８６、２１４または２４９を有する軽鎖を含みうる。
【００１４】
いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号６８、９２、１３０または１４４のＣＤＲ１；配列ＩＤ番号６９、９３、１３１または１４６のＣＤＲ２；および配列ＩＤ番号７０、９４、１３２または１４８のＣＤＲ３を有する重鎖；ならびに配列ＩＤ番号５６、８０、１０４または１３６のＣＤＲ１；配列ＩＤ番号５７、８１、１０５または１３８のＣＤＲ２；および配列ＩＤ番号５８、８２、１０６または１４０のＣＤＲ３を有する軽鎖を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１６０、１７６、２０４または２３０を有する重鎖可変ドメインおよび配列ＩＤ番号１５８、１７４、２００または２２８を有する軽鎖可変ドメインを含みうる。
【００１５】
好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号６８のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号６９のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号７０のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号５６のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号５７のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号５８のＣＤＲ３を有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１７６の可変ドメインを有する重鎖および配列ＩＤ番号１７４の可変ドメインを有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号３０を有する重鎖および配列ＩＤ番号２８を有する軽鎖を含む。
【００１６】
好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１３０のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１３１のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１３２のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号１０４のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１０５のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１０６のＣＤＲ３を有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号２０４の可変ドメインを有する重鎖および配列ＩＤ番号２００の可変ドメインを有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号２３２を有する重鎖および配列ＩＤ番号１８６を有する軽鎖を含む。
【００１７】
好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号９２のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号９３のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号９４のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号８０のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号８１のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号８２のＣＤＲ３を有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１６０の可変ドメインを有する重鎖および配列ＩＤ番号１５８の可変ドメインを有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号２５１を有する重鎖および配列ＩＤ番号２４９を有する軽鎖を含む。
【００１８】
好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１４４のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１４６のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１４８のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号１３６のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１３８のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１４０のＣＤＲ３を有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号２３０の可変ドメインを有する重鎖および配列ＩＤ番号２２８の可変ドメインを有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号２１６を有する重鎖および配列ＩＤ番号２１４を有する軽鎖を含む。
【００１９】
本発明はまた、先に記載されたアミノ酸配列と実質的に同じであるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合フラグメントも企図する。例えば、そのような抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列ＩＤ番号６８、６９および７０；９２、９３および９４；１３０、１３１および１３２；または１４４、１４６および１４８のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるものを含みうる。先に記載されたアミノ酸配列と実質的に同じであるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列ＩＤ番号５６、５７および５８；８０、８１および８２；１０４、１０５および１０６；または１３６、１３８および１４０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるものを含みうる。いくつかの実施形態において、先に記載されたアミノ酸配列と実質的に同じであるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列ＩＤ番号６８、６９および７０；９２、９３および９４；１３０、１３１および１３２；または１４４、１４６および１４８のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であり、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、それぞれ配列ＩＤ番号５６、５７および５８；８０、８１および８２；１０４、１０５および１０６；または１３６、１３８および１４０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるものを含みうる。先に記載されたアミノ酸配列と実質的に同じであるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖ＣＤＲ３が、配列ＩＤ番号３９、４０、７０、９４、１３２または１４８のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるものを含みうる。そのような抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖ＣＤＲ３が、配列ＩＤ番号４１、４２、５８、８２、１０６または１４０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるものを含みうる。
【００２０】
先に記載されたアミノ酸配列と実質的に同じであるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、配列ＩＤ番号６８のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号６９のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号７０のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号５６のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号５７のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号５８のＣＤＲ３を有する軽鎖を有する抗体またはその抗原結合フラグメントと少なくとも９０％同一であるものを含みうる。
【００２１】
先に記載されたアミノ酸配列と実質的に同じであるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、配列ＩＤ番号１３０のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１３１のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１３２のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号１０４のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１０５のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１０６のＣＤＲ３を有する軽鎖を有する抗体または抗原結合フラグメントと少なくとも９０％同一であるものを含みうる。
【００２２】
先に記載されたアミノ酸配列と実質的に同じであるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、配列ＩＤ番号９２のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号９３のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号９４のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号８０のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号８１のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号８２のＣＤＲ３を有する軽鎖を有する抗体またはその抗原結合フラグメントと少なくとも９０％同一であるものを含みうる。
【００２３】
先に記載されたアミノ酸配列と実質的に同じであるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、配列ＩＤ番号１４４のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１４６のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１４８のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号１３６のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１３８のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１４０のＣＤＲ３を有する軽鎖を有する抗体またはその抗原結合フラグメントと少なくとも９０％同一であるものを含みうる。
【００２４】
さらなる例において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１７６、１６０、２０４または２３０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である可変ドメインを有する重鎖、および配列ＩＤ番号１７４、１５８、２００または２２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である可変ドメインを有する軽鎖を含む。
【００２５】
先に記載されたアミノ酸配列と実質的に同じであるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１７６および配列ＩＤ番号１７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、可変ドメインを有する重鎖および可変ドメインを有する軽鎖を有するものを含みうる。
【００２６】
先に記載されたアミノ酸配列と実質的に同じであるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１６０および配列ＩＤ番号１５８のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、可変ドメインを有する重鎖および可変ドメインを有する軽鎖を有するものを含みうる。
【００２７】
先に記載されたアミノ酸配列と実質的に同じであるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号２０４および配列ＩＤ番号２００のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、可変ドメインを有する重鎖および可変ドメインを有する軽鎖を有するものを含みうる。
【００２８】
先に記載されたアミノ酸配列と実質的に同じであるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号２３０および配列ＩＤ番号２２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、可変ドメインを有する重鎖および可変ドメインを有する軽鎖を有するものを含みうる。
【００２９】
本抗体および抗原結合フラグメントは、高親和性の抗体および抗原結合フラグメントであり、約１×１０−８Ｍ未満、好ましくは、約２×１０−８Ｍ未満、より好ましくは、約３×１０−８Ｍ未満の親和性を有しうる。好ましくは、本抗体は、モノクローナル抗体であり、より好ましくは、ヒトモノクローナル抗体である。そのような抗体および抗原結合フラグメントを発現する細胞（例えば、ハイブリドーマ細胞および発現細胞）もまた提供される。
【００３０】
本発明は、ＳＥＢに対する結合について、抗体７９Ｇ９、１５４Ｇ１２、Ｆ１０、１００Ｃ９、Ｆ６、Ｅ１２またはＣ５と競合する抗体またはその抗原結合フラグメントをさらに企図する。
【００３１】
本発明はまた、抗体７９Ｇ９、１５４Ｇ１２、Ｆ１０、１００Ｃ９、Ｆ６、Ｅ１２またはＣ５と同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントも企図する。
【００３２】
本発明はまた、ブドウ球菌エンテロトキシンＢに特異的に結合する抗体および抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを特徴とする。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号６８、６９および７０の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号６２、６３および６４を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号１３０、１３１および１３２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１２３または１９４、１２４または１９６、および１２５または１９８を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号９２、９３および９４の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号８６または１６６、８７または１６８および８８または１７０を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号１４４、１４６および１４８の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２５３または２２２、２５５または２２４および２５７または２２６を含みうる。
【００３３】
いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号５６、５７および５８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号５０、５１および５２を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号１０４、１０５および１０６の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号９８または１８０、９９または１８２および１００または１８４を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号８０、８１および８２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号７４または１５２、７５または１５４および７６または１５６を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号１３６、１３８および１４０の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２５９または２０８、２６１または２１０および２６３または２１２を含みうる。
【００３４】
いくつかの好ましい実施形態において、本抗体または抗原結合フラグメントの重鎖可変ドメインは、配列ＩＤ番号１５９、１６４、１７２、１７５、１９２、２０３または２２９を含むポリヌクレオチドによってコードされる。いくつかの好ましい実施形態において、重鎖配列は、配列ＩＤ番号２９、３３、１１９、１４１、１６２、１６３、１９０、１９１、２１５、２１８、２１９、２３１または２５０を含むポリヌクレオチドによってコードされる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１６０の重鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１５９または１６４を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７６の重鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７５を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２０４の重鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７２または２０３を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２３０の重鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１９２または２２９を含みうる。
【００３５】
いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、それぞれ、配列ＩＤ番号５０、５１および５２；配列ＩＤ番号９８、９９および１００；配列ＩＤ番号７４、７５および７６；配列ＩＤ番号２５９、２６１および２６３；配列ＩＤ番号１８０、１８２および１８４；配列ＩＤ番号１５２、１５４および１５６；または配列ＩＤ番号２０８、２１０および２１２を含むポリヌクレオチドによってコードされる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントの軽鎖可変ドメインは、配列ＩＤ番号１５０、１５７、１７１、１７３、１７８、１９９または２２７を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【００３６】
いくつかの好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１５８の軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１５０または１５７を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７４の軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７３を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２００の軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７１または１９９を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２２８の軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７８または２２７を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントの軽鎖配列は、配列ＩＤ番号２７、３１、３５、１３３、１４９、１６１、１７７、１８５、１８９、２０５、２１３、２１７または２４８を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【００３７】
いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号６８、６９および７０；および５６、５７および５８の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号６２、６３および６４；ならびに５０、５１および５２を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号１３０、１３１および１３２；ならびに１０４、１０５および１０６の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１２３または１９４、１２４または１９６および１２５または１９８；ならびに９８または１８０、９９または１８２および１００または１８４を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号９２、９３および９４；ならびに８０、８１および８２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号８６または１６６、８７または１６８および８８または１７０；ならびに７４または１５２、７５または１５４および７６または１５６を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号１４４、１４６および１４８；ならびに１３６、１３８および１４０の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２５３または２２２、２５５または２２４および２５７または２２６；ならびに２５９または２０８、２６１または２１０および２６３または２１２を含みうる。
【００３８】
いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７６および１７４の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７５および１７３を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２０４および２００の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２０３または１７２および１９９または１７１を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１６０および１５８の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１５９または１６４および１５７または１５０を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２３０および２２８の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２２９または１９２および２２７または１７８を含みうる。
【００３９】
いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号６２、８６、１２３、１６６、１９４、２２２または２５３のＣＤＲ１；配列ＩＤ番号６３、８７、１２４、１６８、１９６、２２４または２５５のＣＤＲ２；および配列ＩＤ番号６４、８８、１２５、１７０、１９８、２１２または２５７のＣＤＲ３を有する重鎖；ならびに配列ＩＤ番号５０、７４、９８、１５２、１８０、２０８または２５９のＣＤＲ１；配列ＩＤ番号５１、７５、９９、１５４、１８２、２１０または２６１のＣＤＲ２；および配列ＩＤ番号５２、７６、１００、１５６、１８４、２１２または２６３のＣＤＲ３を有する軽鎖を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１５９、１６４、１７２、１７５、１９２、２０３または２２９を有する重鎖可変ドメインおよび配列ＩＤ番号１５０、１５７、１７１、１７３、１７８、１９９または２２７を有する軽鎖可変ドメインを含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２９、３３、１１９、１４１、１６２、１６３、１９０、１９１、２１５、２１８、２１９、２３１または２５０の重鎖配列および配列ＩＤ番号２７、３１、３５、１３３、１４９、１６１、１７７、１８５、１８９、２０５、２１３、２１７または２４８の軽鎖配列を含みうる。そのようなポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。
【００４０】
本発明はまた、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ媒介性疾患の処置の必要な被験体において、そのような疾患を処置または予防するための方法も特徴とする。本方法は、薬学的に許容可能な担体、およびブドウ球菌エンテロトキシンＢに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を含む組成物を、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ媒介性疾患を処置または予防するのに有効な量でその被験体に投与する工程を包含する。本発明はまた、ブドウ球菌エンテロトキシンＢの中和の必要な被験体においてそのような中和を行うための方法も特徴とする。本方法は、ブドウ球菌エンテロトキシンＢに特異的に結合して、それを中和する少なくとも１つの本発明の抗体を、ブドウ球菌エンテロトキシンＢを中和するのに有効な量でその被験体に投与する工程を包含する。
【００４１】
ブドウ球菌エンテロトキシンＢに特異的に結合する抗体および抗原結合フラグメントを作製するための方法もまた特徴とする。いくつかの実施形態において、本方法は、動物から単離された骨髄細胞または末梢血細胞を、ブドウ球菌エンテロトキシンＢまたはその抗原性フラグメントとともに培養する工程、ブドウ球菌エンテロトキシンＢに特異的に結合する抗体を発現するＢ細胞を単離する工程、および前記Ｂ細胞によって産生される抗体を単離する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記動物は、骨髄細胞または末梢血細胞の単離の前に、ブドウ球菌エンテロトキシンＢまたはその抗原性フラグメントで免疫される。その動物は哺乳動物であることが好ましいが必須ではなく、その動物がヒトであることがより好ましい。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＡＴＣＣ１４４５８由来のブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）のアミノ酸配列（太字のタイプ）（配列ＩＤ番号４６）を示している。ＳＥＢとＳＥＢムテインワクチン（ＳＴＥＢ）のアミノ酸配列間で異なっている箇所（暗いハイライト）を示している、類似ＳＥＢアミノ酸配列（斜体）（配列ＩＤ番号４５）（Ｂｏｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０８：５１−９）が提供されていて、これには、ＩＶＩＧ結合エピトープ（一重下線）（Ｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：２４７−５４）、Ｔ細胞受容体に結合するＨ結合（二重下線）（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ９：８０７−１６）およびＴ細胞受容体に結合するファンデルワールス接触（薄いハイライト）もまた示されている。
【図２】抗原特異的ヒトｍＡｂのＥ１２、Ｆ６、Ｆ１０およびＣ５の選択用の抗原パネルＥＬＩＳＡを示している。ムチン、ヤギＩｇＧ、ＢＳＡ、ＴＴ、ＨＥＬ、ＣＡＢ、ＢＧＧ、ＳＥＢ、メゾテリンおよびＧＭ−ＣＳＦに対する結合について抗体をスクリーニングした。様々な抗原に対して反応性であることが知られている抗体を、ポジティブコントロールとして使用した。マウス抗体Ｓ５を、ＳＥＢとの反応性を示すポジティブコントロールとして使用した。Ｅ１２、Ｆ６、Ｆ１０およびＣ５抗体は、ＳＥＢに特異的であり、そのパネル中の他の抗原のいずれにも交差反応しなかった。本図の凡例から、試験された抗原が特定され、列挙された抗原に対応するグラフ上のバーが与えられる。
【図３】ＳＥＢ特異的抗体Ｅ１２、Ｆ１０、Ｆ６およびＣ５のアイソタイプの判定を示している。各抗体は、ＩｇＭであることが示された。Ｅ１２、Ｆ６およびＣ５は、ラムダ軽鎖を有することが示され、Ｆ１０は、カッパー軽鎖を有することが示された。
【図４】完全ヒトｍＡｂのＦ６、Ｅ１２およびＣ５を用いたＰＢＭＣのＳＥＢ依存的増殖を示している。抗ＳＥＢＭＡｂと命名されたポジティブコントロールは、マウスＳ５である。各抗体は、ＳＥＢを中和したときにＰＢＭＣ増殖を誘導した。同時に、アッセイ培地のみでは増殖しないことが証明されると示される。
【図５】ＳＥＢ特異的抗体７９Ｇ９および１００Ｃ９のアイソタイプの判定を示している。両方の抗体が、ＩｇＧであると示された。７９Ｇ９は、カッパー軽鎖を有し、１００Ｃ９は、ラムダ軽鎖を有する。
【図６】抗原特異的ヒトＭＡｂ７９Ｇ９および１００Ｃ９の選択用の抗原パネルＥＬＩＳＡを示している。ムチン、ヤギＩｇＧ、ＢＳＡ、ＴＴ、ＨＥＬ、ＣＡＢ、ＢＧＧ、ＳＥＢ、メゾテリンおよびＧＭ−ＣＳＦに対する結合について抗体をスクリーニングした。様々な抗原に対して反応性であることが知られている抗体を、ポジティブコントロールとして使用した。マウス抗体Ｓ５を、ＳＥＢとの反応性を示すポジティブコントロールとして使用した。７９Ｇ９および１００Ｃ９は、ＳＥＢおよびＳＥＢワクチンＳＴＥＢと反応した。そのパネル中の他の抗原との交差反応性は観察されなかった。本図の凡例から、試験された抗原が特定され、列挙された抗原に対応するグラフ上のバーが与えられる。
【図７】クローン７９Ｇ９による、ＳＥＢ媒介性のＰＢＭＣ有糸分裂誘発の阻害を示している。抗体の濃度が上がるにつれて、有糸分裂誘発の阻害が大きくなった。
【図８】ヒトモノクローナル抗体７９Ｇ９による、ＳＥＢ媒介性のＰＢＭＣ有糸分裂誘発の用量依存的阻害を示している。
【図９】抗体７９Ｇ９および１００Ｃ９によるＳＥＢ誘導性のＩＦＮ−γ産生の阻害を示している。これらの抗体が、一緒に使用されるとき、ＳＥＢ誘導性のＩＦＮ−γ産生の阻害の相乗効果または相加効果が観察された。マウス抗体Ｓ５をポジティブコントロールとして使用した。
【図１０】抗体７９Ｇ９および１００Ｃ９によるＳＥＢ誘導性のＴＮＦ−α産生の阻害を示している。これらの抗体が一緒に使用されるとき、ＳＥＢ誘導性のＴＮＦ−α産生の阻害の相乗効果または相加効果が観察された。マウス抗体Ｓ５をポジティブコントロールとして使用した。
【図１１】ヒト抗体７９Ｇ９および１００Ｃ９が、ＳＥＢには結合するが、全細胞可溶化物中に存在する他のヒトタンパク質には結合しないことを証明している免疫ブロットを示している。
【図１２】ヒト抗体７９Ｇ９および１００Ｃ９が、ヒトＴ細胞によるＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの産生を阻害すること示している。これらの抗体が相前後して使用されるとき、相乗効果または相加効果が観察される。
【図１３Ａ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｂ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｃ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｄ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｅ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｆ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｇ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｈ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｉ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｊ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｋ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｌ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｍ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｎ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｏ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｐ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｑ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１３Ｒ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号２７〜３０、１７３〜１７６）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号３１〜３４、１５７〜１６０、２４８〜２５１）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号３７〜３８、１８７〜１８８、２０１〜２０２）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号３５〜３６、１１９、１２６、１８５〜１８６、１９９〜２００、２０３〜２０４、２３１〜２３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３３〜１３４、１４１〜１４２、２１３〜２１６、２２７〜２３０）のＨ鎖およびＬ鎖の核酸配列およびアミノ酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１４Ａ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｂ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｃ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｄ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｅ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｆ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｇ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｈ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｉ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｊ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｋ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｌ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｍ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｎ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｏ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｐ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｑ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１４Ｒ】抗体Ｆ１０（配列ＩＤ番号４７〜７０）、１００Ｃ９（配列ＩＤ番号７１〜９４）、７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１０７〜１１８）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号９５〜１０６、１２０〜１２５、１２７〜１３２）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１３５〜１４０、１４３〜１４８、２５２〜２６３）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域を示している。
【図１５Ａ】抗体１００Ｃ９（配列ＩＤ番号１４９〜１５０、１６１〜１６４）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号１７１〜１７２、１７７、１８９〜１９１）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１７８、１９２、２０５、２１７〜２１９）のＨ鎖および／またはＬ鎖のコドン最適化核酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１５Ｂ】抗体１００Ｃ９（配列ＩＤ番号１４９〜１５０、１６１〜１６４）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号１７１〜１７２、１７７、１８９〜１９１）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１７８、１９２、２０５、２１７〜２１９）のＨ鎖および／またはＬ鎖のコドン最適化核酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１５Ｃ】抗体１００Ｃ９（配列ＩＤ番号１４９〜１５０、１６１〜１６４）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号１７１〜１７２、１７７、１８９〜１９１）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１７８、１９２、２０５、２１７〜２１９）のＨ鎖および／またはＬ鎖のコドン最適化核酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１５Ｄ】抗体１００Ｃ９（配列ＩＤ番号１４９〜１５０、１６１〜１６４）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号１７１〜１７２、１７７、１８９〜１９１）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１７８、１９２、２０５、２１７〜２１９）のＨ鎖および／またはＬ鎖のコドン最適化核酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１５Ｅ】抗体１００Ｃ９（配列ＩＤ番号１４９〜１５０、１６１〜１６４）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号１７１〜１７２、１７７、１８９〜１９１）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１７８、１９２、２０５、２１７〜２１９）のＨ鎖および／またはＬ鎖のコドン最適化核酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１５Ｆ】抗体１００Ｃ９（配列ＩＤ番号１４９〜１５０、１６１〜１６４）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号１７１〜１７２、１７７、１８９〜１９１）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号１７８、１９２、２０５、２１７〜２１９）のＨ鎖および／またはＬ鎖のコドン最適化核酸配列を示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線の部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。
【図１６Ａ】抗体１００Ｃ９（配列ＩＤ番号１５１〜１５６、１６５〜１７０）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号１７９〜１８４、１９３〜１９８）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号２０７〜２１２、２２１〜２２６）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域に対するコドン最適化核酸配列を示している。
【図１６Ｂ】抗体１００Ｃ９（配列ＩＤ番号１５１〜１５６、１６５〜１７０）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号１７９〜１８４、１９３〜１９８）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号２０７〜２１２、２２１〜２２６）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域に対するコドン最適化核酸配列を示している。
【図１６Ｃ】抗体１００Ｃ９（配列ＩＤ番号１５１〜１５６、１６５〜１７０）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号１７９〜１８４、１９３〜１９８）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号２０７〜２１２、２２１〜２２６）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域に対するコドン最適化核酸配列を示している。
【図１６Ｄ】抗体１００Ｃ９（配列ＩＤ番号１５１〜１５６、１６５〜１７０）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号１７９〜１８４、１９３〜１９８）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号２０７〜２１２、２２１〜２２６）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域に対するコドン最適化核酸配列を示している。
【図１６Ｅ】抗体１００Ｃ９（配列ＩＤ番号１５１〜１５６、１６５〜１７０）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号１７９〜１８４、１９３〜１９８）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号２０７〜２１２、２２１〜２２６）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域に対するコドン最適化核酸配列を示している。
【図１６Ｆ】抗体１００Ｃ９（配列ＩＤ番号１５１〜１５６、１６５〜１７０）、７９Ｇ９（配列ＩＤ番号１７９〜１８４、１９３〜１９８）および１５４Ｇ１２（配列ＩＤ番号２０７〜２１２、２２１〜２２６）のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域に対するコドン最適化核酸配列を示している。
【図１７Ａ】７９Ｇ９と７９Ｇ９＋との配列の相違を明示している。図１７Ａは、７９Ｇ９のヌクレオチド配列（配列ＩＤ番号１１９）と７９Ｇ９＋のヌクレオチド配列（配列ＩＤ番号３７）とにおける相違を示している。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは、７９Ｇ９のアミノ酸配列（配列ＩＤ番号１２６）と７９Ｇ９＋のアミノ酸配列（配列ＩＤ番号３８）とにおける相違を示している。７９Ｇ９重鎖核酸配列および７９Ｇ９軽鎖核酸配列を含む抗体を産生する細胞を、２００７年１月３日にＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託した。
【図１８】抗体７９Ｇ９、１００Ｃ９および１５４Ｇ１２と、ブドウ球菌エンテロトキシンのＳＥＡ、ＳＥＤ、ＳＥＣ１、ＳＥＣ２およびＴＳＳＴ−１；ブドウ球菌性の発熱性外毒素ＳＰＥ−Ａ、ＳＰＥ−Ｂ；および破傷風トキソイドとの結合を示している。斜め線の入ったバーは、ＴＳＳＴ−１または破傷風トキソイドのいずれかに特異的なコントロール抗体の結合を示している。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
便宜のため、表１に各配列ＩＤ番号および対応する配列の名称を列挙する。
【００４４】
【表１】
0005412293.tif 000002
0005412293.tif 000003
0005412293.tif 000004
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0005412293.tif 000009
0005412293.tif 000010
【００４５】
明細書および請求項の全体にわたって、本発明の方法および他の態様に関する様々な用語が使用される。別段示されない限り、そのような用語には、当該分野における通常の意味が与えられるべきである。他の明確に定義される用語は、本明細書中に提供される定義と一致する形式で解釈されるべきである。
【００４６】
明細書全体にわたって、以下の省略形を使用する。ＳＥＢ，ブドウ球菌エンテロトキシンＢ；ＰＢＭＣ，末梢血単核球；ＢＳＡ，ウシ血清アルブミン；ＴＴ，破傷風トキソイド；ＨＥＬ，雌鳥卵（ｈｅｎ  ｅｇｇ）リゾチーム；ＣＡＢ，ニワトリアルブミン；ＢＧＧ，ウシガンマグロブリン；ＴＣＲ，Ｔ細胞受容体；ＣＤＲ，相補性決定領域；ＦＷＲ，フレームワーク領域。
【００４７】
本明細書および添付の請求項において使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、含量が別途明らかに規定されていない限り、複数の指示対象を含む。従って、例えば、「細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」という言及は、２つ以上の細胞の組み合わせなどを含む。
【００４８】
量、継続時間などの測定可能な値について言及するときの「約」なる用語は、本明細書中で使用されるとき、以下のような変分が、開示される方法を行うのに適切であるとき、特定の値からの±２０％または±１０％、より好ましくは±５％、なおもより好ましくは±１％、およびさらにより好ましくは±０．１％の変分を包含すると意味される。
【００４９】
「単離された」とは、天然の状態から「人間の手で」改変されたことを意味する。分子または組成物が天然に存在する場合、それが変更されているか、もしくはその元の環境から取り出されているか、またはその両方である場合、それは「単離されている」。例えば、生存している植物または動物の中に天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、「単離されて」いないが、その天然の状態に共存する物質から分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、この用語が本明細書中で使用されるとき、「単離されて」いる。
【００５０】
「核酸分子」と同義に呼ばれる「ポリヌクレオチド」とは、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドのことを指し、それは、修飾されていないＲＮＡまたはＤＮＡであってもよいし、修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであってもよい。「ポリヌクレオチド」としては、一本鎖ＤＮＡおよび二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領域との混合物であるＤＮＡ、一本鎖ＲＮＡおよび二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖領域と二本鎖領域との混合物であるＲＮＡ、一本鎖であってもよいし、より典型的には二本鎖であってもよいし、一本鎖領域と二本鎖領域との混合物であってもよい、ＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子が挙げられるがこれらに限定されない。さらに、「ポリヌクレオチド」とは、ＲＮＡもしくはＤＮＡ、またはＲＮＡとＤＮＡの両方を含む三重鎖領域のことを指す。ポリヌクレオチドなる用語は、１つ以上の修飾塩基を含むＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチル化された（ｔｒｉｔｙｌａｔｅｄ）塩基、およびイノシンなどの通常のものではない塩基が挙げられる。種々の修飾は、ＤＮＡおよびＲＮＡに対して行うことができる；従って、「ポリヌクレオチド」は、典型的には天然に見られるような化学的、酵素的または代謝的に修飾された型のポリヌクレオチド、ならびにウイルスおよび細胞に特有の化学型のＤＮＡおよびＲＮＡを包含する。「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴヌクレオチドと呼ばれる比較的短い核酸鎖も包含する。
【００５１】
核酸配列またはアミノ酸配列に関して「実質的に同じ」とは、２つ以上の配列が少なくとも約６５％同一であることを意味する。好ましくは、この用語は、２つ以上の配列が少なくとも約７０％同一、より好ましくは、少なくとも約７５％同一、より好ましくは、少なくとも約８０％同一、より好ましくは、少なくとも約８５％同一、より好ましくは、少なくとも約９０％同一、より好ましくは、少なくとも約９１％同一、より好ましくは、少なくとも約９２％同一、より好ましくは、少なくとも約９３％同一、より好ましくは、少なくとも約９４％同一、より好ましくは、少なくとも約９５％同一、より好ましくは、少なくとも約９６％同一、より好ましくは、少なくとも約９７％同一、より好ましくは、少なくとも約９８％同一、より好ましくは、少なくとも約９９％またはそれ以上同一であることを指す。
【００５２】
「ベクター」は、別の核酸セグメントを、そのセグメントの複製または発現を生じさせるために作動可能に挿入することができるレプリコン（例えば、プラスミド、ファージ、コスミドまたはウイルス）である。
【００５３】
「作動可能に連結される」または「作動可能に挿入される」なる用語は、コード配列が発現できるために、コード配列の発現に必要な制御配列が、そのコード配列に対して適切な位置の核酸分子内に置かれることを意味する。例としては、あるプロモーターが、コード配列の転写または発現を制御することができるとき、そのプロモーターは、そのコード配列と作動可能に連結されている。コード配列は、センス方向またはアンチセンス方向に、プロモーターまたは制御配列に作動可能に連結することができる。「作動可能に連結される」なる用語は、時折、発現ベクター内の他の転写調節因子（例えば、エンハンサー）の配置に対して適用される。
【００５４】
外来性または異種性の核酸（例えばＤＮＡ）が細胞内に導入されるとき、その細胞は、そのようなＤＮＡによって「形質転換」または「トランスフェクト」される。形質転換ＤＮＡは、その細胞のゲノム内に統合（共有結合的に連結）されてもよいし、統合されなくてもよい。例えば、原核生物、酵母および哺乳動物の細胞では、形質転換ＤＮＡは、プラスミドなどのエピソームエレメント上に維持されうる。真核細胞に関して、安定的に形質転換された細胞、すなわち「安定細胞」は、形質転換ＤＮＡが、染色体複製を介して娘細胞によって遺伝されるように、染色体に統合されるようになった細胞である。この安定性は、その真核細胞が、形質転換ＤＮＡを含む娘細胞の集団から構成される細胞株またはクローンを樹立することができることによって証明される。「クローン」は、単一細胞または共通の祖先から有糸分裂によって得られる細胞の集団である。「細胞株」は、インビトロにおいて多くの世代にわたって安定した増殖が可能な初代細胞のクローンである。
【００５５】
「ポリペプチド」とは、ペプチド結合または修飾されたペプチド結合、すなわちペプチド同配体によって互いに結合された２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまたはタンパク質のことを指す。「ポリペプチド」とは、ペプチド、オリゴペプチドまたはオリゴマーと通常呼ばれている短鎖と、一般にタンパク質と呼ばれている長鎖の両方のことを指す。ポリペプチドは、遺伝子にコードされる２０個のアミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。「ポリペプチド」は、翻訳後のプロセシングなどの天然のプロセス、または当該分野で周知の化学修飾手法のいずれかによって修飾されるアミノ酸配列を含む。そのような修飾は、基本的な教科書、より詳細なモノグラフならびに大量の研究文献に十分に記載されている。ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノ末端またはカルボキシル末端をはじめとしたポリペプチドのいずれの部分においても修飾することができる。同じタイプの修飾が、所与のポリペプチド内のいくつかの部位に、同じかまたは異なる程度で存在しうると認識されるだろう。また、所与のポリペプチドは、多くのタイプの修飾を含んでもよい。ポリペプチドは、ユビキチン化の結果として分枝であってもよく、分枝を有するか、または有しない環状であってもよい。環状、分枝状および分枝環状のポリペプチドは、天然の翻訳後プロセスから生じうるか、または合成方法によって作製されうる。修飾としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）の共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合性の架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク分解性のプロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、タンパク質に対するアミノ酸の転移ＲＮＡ媒介性付加（例えば、アルギニン化）およびユビキチン化が挙げられる。例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ−Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３およびＷｏｌｄ，Ｆ．，Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ：Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ，Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｖａｌｅｎｔ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓの１−１２頁，Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８３；Ｓｅｉｆｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｎｏｎｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｆａｃｔｏｒｓ，Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９９０）１８２：６２６−６４６およびＲａｔｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｙｎ��ｈｅｓｉｓ：Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ａｇｉｎｇ，Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ（１９９２）６６３：４８−６２を参照のこと。
【００５６】
「生体分子」には、タンパク質、ポリペプチド、核酸、脂質、単糖類、多糖類、ならびにそれらのすべてのフラグメント、類似体、相同体、結合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）および誘導体が含まれる。
【００５７】
「発現する」および「産生する」なる用語は、本明細書中で同義に使用され、遺伝子産物の生合成のことを指す。これらの用語は、遺伝子からＲＮＡへの転写を包含する。これらの用語は、ＲＮＡから１つ以上のポリペプチドへの翻訳も包含し、天然に存在するすべての転写後修飾および翻訳後修飾をさらに包含する。抗体の発現／産生は、細胞の細胞質内、および／または細胞培養の増殖培地などの細胞外の環境に対して、行われうる。
【００５８】
「処置する」または「処置」なる用語は、損傷、病状もしくは状態の減弱もしくは改善の任意の成功もしくは成功の徴候（任意の客観的または主観的なパラメータ（例えば、緩和、緩解、症状の減少、またはその損傷、病状もしくは状態を患者にとってより許容できるようにすること）を含む）、退化もしくは減退の速度を遅くすること、退化の最終点を消耗性がより低いものにすること、被験体の身体的健康もしくは精神的健康を改善すること、または生存時間を延長することを指す。症状の処置または改善は、客観的または主観的なパラメータ（理学的検査、神経学的検査および／または精神医学的評価の結果を含む）に基づきうる。
【００５９】
「有効な量」および「治療有効量」は、本明細書中で交換可能に使用され、本明細書中に記載されるとき、特定の生物学的結果（例えば、本明細書中に開示、記載または例示される生物学的結果が挙げられるがこれらに限定されない）を達成するのに有効な抗体または組成物の量のことを指す。そのような結果としては、当該分野において適切な任意の手段によって測定されるような、ブドウ球菌エンテロトキシンＢへの曝露によって媒介される疾患の処置が挙げられ得るが、これらに限定されない。
【００６０】
「薬学的に許容可能な」とは、薬理学的／毒物学的な観点から患者に、ならびに組成、製剤化、安定性、患者の許容性およびバイオアベイラビリティに関する物理的／化学的な観点から製薬化学者に、受け入れられる特性および／または物質のことを指す。「薬学的に許容可能な担体」とは、活性成分の生物学的活性の有効性を妨害せず、投与される宿主に対して毒性でない媒質のことを指す。
【００６１】
本明細書中で使用されるとき、用語「インビトロにおける有糸分裂誘発の阻害」とは、培養物中の細胞の数が、約５％、好ましくは、約１０％、より好ましくは、約２０％、より好ましくは、約３０％、より好ましくは、約４０％、より好ましくは、約５０％、より好ましくは、約６０％、より好ましくは、約７０％、より好ましくは、約８０％、より好ましくは、約９０％、および最も好ましくは、約１００％減少することを意味する。有糸分裂促進的な細胞増殖のインビトロ阻害は、当該分野で公知のアッセイによって測定することができる。
【００６２】
本発明は、特定の方法、試薬、化合物、組成物または生体系に限定されないことが理解されるべきであり、当然のことながら変化しうる。本明細書中で使用される用語は、特定の実施形態を説明するだけの目的であって、限定する意図ではないことも理解されるべきである。
【００６３】
ブドウ球菌トキシンは、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ細菌による感染に対する主要な病原性因子である。汚染された食品もしくは水の経口摂取によるか、または例えば、テロリストの攻撃による吸入によるかに関係なく、そのようなトキシンに曝露されると、急激に発症する消耗性の疾病が生じうる。現在までに、ブドウ球菌トキシンへの曝露に対する有効な処置は、開発されるのに時間がかかっている。本発明によれば、ブドウ球菌エンテロトキシンＢなどのトキシンは、抗体を用いて中和することができると発見されている。
【００６４】
従って、一態様において、本発明は、ブドウ球菌エンテロトキシン、より詳細には、ブドウ球菌エンテロトキシンＢに特異的に結合する、単離された抗体およびその抗原結合フラグメントを特徴とする。この抗体は、ポリクローナルもしくはモノクローナルでありうるか、またはブドウ球菌性エンテロトキシンに対する特異性を保持する抗体の誘導体もしくはフラグメントでありうる。抗体分子の一般構造は、抗原結合ドメイン（重鎖および軽鎖を含む）およびＦｃドメイン（補体結合をはじめとした種々の機能を果たす）を含む。
【００６５】
免疫グロブリンには５つのクラスがあり、免疫グロブリンクラスは、Ｆｃ領域における重鎖の１次構造によって判定される。具体的には、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミュー鎖が、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭアイソタイプに対応する。本発明の抗体は、すべてのアイソタイプおよび４鎖免疫グロブリン構造の合成多量体を含む。本発明の抗体はまた、雌鳥またはシチメンチョウの血清中および雌鳥またはシチメンチョウの卵黄中に通常見られるＩｇＹアイソタイプも含む。抗体は、非共有結合的かつ特異的かつ可逆的に抗原に結合する。
【００６６】
抗原結合フラグメントは、親抗体分子の抗原結合特異性を保持しているインタクトな抗体の一部を含む。例えば、抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの可変領域（重鎖または軽鎖の可変領域のいずれか）を含みうる。適当な抗原結合フラグメントの例としては、多エピトープ特異性を有する抗体、二重特異性抗体、ダイアボディおよび一本鎖分子、ならびにＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ＦａｂｃおよびＦｖ分子、一本鎖（Ｓｃ）抗体、個別の抗体軽鎖、個別の抗体重鎖、抗体鎖と他の分子とのキメラ融合物、重鎖モノマーまたはダイマー、軽鎖モノマーまたはダイマー、１本の重鎖および１本の軽鎖からなるダイマーなどが挙げられるがこれらに限定されない。抗原結合フラグメントを作製するために、すべての抗体アイソタイプを使用することができる。抗原結合フラグメントは、組換え的に作製することができる。
【００６７】
本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、いずれの種に由来してもよい。例えば、本抗体および抗原結合フラグメントは、マウス、ラット、ヤギ、ウマ、ブタ、ウシ、ニワトリ、ウサギ、ロバ、ヒトなどでありうる。ヒトを処置する際に使用するために、非ヒト由来の抗体および抗原結合フラグメントは、ヒト患者に投与したときにより抗原性が低くなるように構造的に改変することができる。
【００６８】
本発明のいくつかの実施形態において、本抗体は、キメラ抗体である。キメラ抗体およびそれを作製する方法は、当該分野において周知であり、確立されている。本明細書中で使用されるとき、「キメラ抗体」なる用語は、非ヒト哺乳動物、げっ歯類または爬虫類の抗体アミノ酸配列に由来する少なくとも１つの可変ドメインの少なくとも一部を有する抗体またはその抗原結合フラグメントのことを意味するが、その抗体またはその抗原結合フラグメントの残りの部分は、ヒトに由来する。例えば、キメラ抗体は、マウス抗原結合ドメインを、ヒトＦｃまたは他のそのような構造ドメインとともに含みうる。
【００６９】
いくつかの実施形態において、本抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含むキメラの免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそれらのフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合部分配列）でありうる。ほとんどの部分について、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ）決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラットまたはウサギ）のＣＤＲの残基（ドナー抗体）で置換された、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＷＲ）残基は、対応する非ヒト残基で置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移植されるＣＤＲ配列またはフレームワーク配列にも見られない残基を含むことがある。これらの修飾は、抗体の性能をさらに洗練させ、最適化するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ここで、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリンのそれに対応し、ＦＷＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリン配列のそれである。ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのそれを含む。詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−９；およびＰｒｅｓｔａ（１９９２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−６を参照のこと。
【００７０】
本発明の好ましい態様において、本抗体は、完全にヒトのものである。本明細書中で使用されるとき、「ヒト抗体」なる用語は、その抗体が、全くヒト起源由来であるか、または可変ドメイン配列および定常ドメイン配列がヒト配列である任意の抗体であることを意味する。この用語は、ヒト遺伝子由来の（すなわち、それを利用する）配列を有するが、その抗体は、例えば、可能性のある免疫原性を低減させる、親和性を高める、望ましくない折りたたみを引き起こしうるシステインを除去する、などのために変更された、抗体を含む。この用語は、非ヒト細胞内で組換え的に作製されたそのような抗体を含み、それにより、ヒト細胞において典型的ではないグリコシル化が付与されることがある。
【００７１】
本発明の抗体は、例えば、治療的または診断的に適用するために、様々な化学部分または生体分子部分で標識されてもよいし、別途それらと結合体化されてもよい。その部分は、細胞傷害性でありえ、例えば、細菌のトキシン、ウイルスのトキシン、放射性同位体などでありうる。その部分は、検出可能な標識、例えば、蛍光標識、放射標識、ビオチンなどでありうる。
【００７２】
抗体特異性が６つのＣＤＲ領域、特に、Ｈ鎖のＣＤＲ３によって主に決定されることを当業者は認識するだろう（Ｋａｌａ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３２：５３５−４１；Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７５：２６９−９４；およびＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−１７）。しかしながら、抗体フレームワーク領域は、抗原抗体相互作用（Ｐａｎｋａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：３０８０−４）、特に、ＣＤＲループのコンフォメーション（Ｆｏｏｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−９９）に関与しうる。従って、本発明の抗体は、ＳＥＢに対する抗体特異性を付与する、Ｈ鎖またはＬ鎖のＣＤＲ領域またはＦＷＲ領域の任意の組み合わせを含むことができる。当該分野において日常的に行われるドメインシャフリング実験（Ｊｉｒｈｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｇｅｎｅ  ２１５：４７１−６；Ｓｏｄｅｒｌｉｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １８：８５２−６）を用いて、本明細書中に説明および例示される詳述に従って、ＳＥＢに特異的に結合する抗体を作製することができる。そのようなドメインシャフリング実験によって作製される抗体は、本発明の範囲内である。
【００７３】
従って、いくつかの実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号６８、９２、１１６、１３０または１４４と実質的に同じかまたは同一の重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号６９、９３、１１７、１３１または１４６と実質的に同じかまたは同一の重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列を含む。いくつかの特に好ましい実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号３９、４０、７０、９４、１１８、１３２または１４８と実質的に同じかまたは同一の重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号５６、８０、１０４または１３６と実質的に同じかまたは同一の軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号５７、８１、１０５または１３８と実質的に同じかまたは同一の軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号５８、８２、１０６または１４０と実質的に同じかまたは同一の軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号６５、８９、１１３、１２７または１４３と実質的に同じかまたは同一の重鎖ＦＷＲ１アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号６６、９０、１１４、１２８または１４５と実質的に同じかまたは同一の重鎖ＦＷＲ２アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号６７、９１、１１５、１２９または１４７と実質的に同じかまたは同一の重鎖ＦＷＲ３アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号５３、７７、１０１または１３５と実質的に同じかまたは同一の軽鎖ＦＷＲ１アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号５４、７８、１０２または１３７と実質的に同じかまたは同一の軽鎖ＦＷＲ２アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号５５、７９、１０３または１３９と実質的に同じかまたは同一の軽鎖ＦＷＲ３アミノ酸配列を含む。図１４および１６は、本パラグラフに記載される重鎖および軽鎖ＣＤＲ１〜３およびＦＷＲ１〜３をコードすることができる核酸配列の例を示している。
【００７４】
本発明の抗体は、配列ＩＤ番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖を含みうる。この重鎖は、配列ＩＤ番号２９を含む核酸配列によってコードされうる。本発明の抗体は、配列ＩＤ番号２５１のアミノ酸配列を含む重鎖を含みうる。この重鎖は、配列ＩＤ番号２５０または１６２を含む核酸配列によってコードされうる。本発明の抗体は、配列ＩＤ番号１８８のアミノ酸配列を含む重鎖を含みうる。この重鎖は、配列ＩＤ番号３７を含む核酸配列によってコードされうる。本発明の抗体は、配列ＩＤ番号２３２のアミノ酸配列を含む重鎖を含みうる。この重鎖は、配列ＩＤ番号２３１または１９０を含む核酸配列によってコードされうる。本発明の抗体は、配列ＩＤ番号２１６のアミノ酸配列を含む重鎖を含みうる。この重鎖は、配列ＩＤ番号２１５または２１８を含む核酸配列によってコードされうる。
【００７５】
本発明は、ブドウ球菌エンテロトキシンＢに特異的に結合し、好ましくはそれを中和する、単離されたヒト抗体および抗原結合フラグメントを特徴とする。本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号３９、４０、７０、９４、１１８、１３２または１４８を有する重鎖ＣＤＲ３を含みうる。本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号６８、６９および７０；配列ＩＤ番号１１６、１１７および１１８；配列ＩＤ番号１３０、１３１および１３２；配列ＩＤ番号９２、９３および９４；または配列ＩＤ番号１４４、１４６および１４８の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１６０、１７６、２０２、２０４または２３０の重鎖可変ドメインを含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号３０、３４、３８、１２６、１４２、２１６、２３２または２５１を有する重鎖を含みうる。
【００７６】
いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号５６、５７および５８；配列ＩＤ番号１０４、１０５および１０６；配列ＩＤ番号８０、８１および８２；または配列ＩＤ番号１３６、１３８および１４０の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１５８、１７４、２００または２２８の軽鎖可変ドメインを含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号２８、３２、３６、１３４、１８６、２１４または２４９を有する軽鎖を含みうる。
【００７７】
いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号６８、９２、１１６、１３０または１４４のＣＤＲ１；配列ＩＤ番号６９、９３、１１７、１３１または１４６のＣＤＲ２；および配列ＩＤ番号７０、９４、１１８、１３２または１４８のＣＤＲ３を有する重鎖；ならびに配列ＩＤ番号５６、８０、１０４または１３６のＣＤＲ１；配列ＩＤ番号５７、８１、１０５または１３８のＣＤＲ２；および配列ＩＤ番号５８、８２、１０６または１４０のＣＤＲ３を有する軽鎖を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１６０、１７６、２０２、２０４または２３０を有する重鎖可変ドメイン、および配列ＩＤ番号１５８、１７４、２００、２２８を有する軽鎖可変ドメインを含みうる。
【００７８】
好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号６８のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号６９のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号７０のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号５６のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号５７のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号５８のＣＤＲ３を有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１７６の可変ドメインを有する重鎖および配列ＩＤ番号１７４の可変ドメインを有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号３０を有する重鎖および配列ＩＤ番号２８を有する軽鎖を含む。
【００７９】
好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１１６のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１１７のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１１８のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号１０４のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１０５のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１０６のＣＤＲ３を有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号２０２の可変ドメインを有する重鎖および配列ＩＤ番号２００の可変ドメインを有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１８８を有する重鎖および配列ＩＤ番号１８６を有する軽鎖を含む。
【００８０】
好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１３０のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１３１のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１３２のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号１０４のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１０５のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１０６のＣＤＲ３を有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号２０４の可変ドメインを有する重鎖および配列ＩＤ番号２００の可変ドメインを有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号２３２を有する重鎖および配列ＩＤ番号１８６を有する軽鎖を含む。
【００８１】
好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号９２のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号９３のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号９４のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号８０のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号８１のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号８２のＣＤＲ３を有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１６０の可変ドメインを有する重鎖および配列ＩＤ番号１５８の可変ドメインを有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号２５１を有する重鎖および配列ＩＤ番号２４９を有する軽鎖を含む。
【００８２】
好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１４４のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１４６のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１４８のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号１３６のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１３８のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１４０のＣＤＲ３を有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号２３０の可変ドメインを有する重鎖および配列ＩＤ番号２２８の可変ドメインを有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号２１６を有する重鎖および配列ＩＤ番号２１４を有する軽鎖を含む。
【００８３】
本抗体および抗原結合フラグメントは、高親和性の抗体および抗原結合フラグメントであり、約１×１０−８Ｍ未満、好ましくは、約２×１０−８Ｍ未満、より好ましくは、約３×１０−８Ｍ未満の親和性を有しうる。好ましくは、本抗体は、モノクローナル抗体であり、より好ましくは、ヒトモノクローナル抗体である。そのような抗体および抗原結合フラグメントを発現する細胞（例えば、ハイブリドーマ細胞および発現細胞）もまた提供される。
【００８４】
本発明の抗体は、配列ＩＤ番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含みうる。この軽鎖は、配列ＩＤ番号２７を含む核酸配列によってコードされうる。本発明の抗体は、配列ＩＤ番号２４９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含みうる。この軽鎖は、配列ＩＤ番号３１、２４８、１６１または１４９を含む核酸配列によってコードされうる。本発明の抗体は、配列ＩＤ番号１８６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含みうる。この軽鎖は、配列ＩＤ番号１８５または１８９を含む核酸配列によってコードされうる。本発明の抗体は、配列ＩＤ番号２１４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含みうる。この軽鎖は、配列ＩＤ番号２１３または２１７を含む核酸配列によってコードされうる。
【００８５】
重鎖および軽鎖ならびにそれらをコードする遺伝子の中に、天然の配列バリエーションが存在する可能性があるので、本発明の抗体の特有の結合特性（例えば、特異性および親和性）を維持しつつも、アミノ酸配列またはそれらをコードする遺伝子の中にいくらかのレベルのバリエーションが見つけ出されると当業者は予想しうる、と理解されるべきである。そのような予想は、部分的には、遺伝暗号の縮重、ならびにコードされるタンパク質の性質をあまり変化させない保存的なアミノ酸配列のバリエーションの既知の進化的成功に起因する。従って、そのような変異体および相同体は、互いに実質的に同じであると考えられ、本発明の範囲内に含まれる。
【００８６】
従って、本発明の抗体は、本発明の抗体の生物学的特性（例えば、結合親和性または免疫エフェクター活性）を保持する単一または複数のアミノ酸置換、欠失、付加または置換を有する変異体を含む。当業者は、単一または複数のアミノ酸置換、欠失、付加または置換を有する変異体を作製することができる。これらの変異体としては、とりわけ：（ａ）１つ以上のアミノ酸残基が保存アミノ酸または非保存アミノ酸で置換されている変異体、（ｂ）１つ以上のアミノ酸が、そのポリペプチドに付加されているか、またはそのポリペプチドから欠失している変異体、（ｃ）１つ以上のアミノ酸が置換基を含む変異体、および（ｄ）そのポリペプチドが、そのポリペプチドに有用な特性を付与しうる別のペプチドまたはポリペプチド（例えば、融合パートナー、タンパク質タグまたは他の化学部分）（例えば、抗体のエピトープ、ポリヒスチジン配列、ビオチン部分など）と融合している変異体が挙げられうる。本発明の抗体は、１つの種からのアミノ酸残基が、保存された位置または保存されていない位置において別の種における対応残基で置換されている変異体を含みうる。他の実施形態において、保存されていない位置におけるアミノ酸残基は、保存残基または非保存残基で置換される。遺伝学的（抑制、欠失、変異など）、化学的および酵素的な手法をはじめとした、これらの変異体を得るための手法は、当業者に公知である。
【００８７】
いくつかの好ましい実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖および配列ＩＤ番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号２５１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列ＩＤ番号２４９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号１８８のアミノ酸配列を含む重鎖および配列ＩＤ番号１８６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号２３２のアミノ酸配列を含む重鎖および配列ＩＤ番号１８６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体は、配列ＩＤ番号２１６のアミノ酸配列を含む重鎖および配列ＩＤ番号２１４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含みうる。しかしながら、いくつかの場合において、所与の重鎖と様々な軽鎖との対形成、または所与の軽鎖と様々な重鎖との対形成によって、その組み合わせ本来の特異性および／または親和性と同じかまたはそれよりも良好な特異性および／または親和性を有する抗体が生じうることを当業者は認識するだろう。従って、本発明は、Ｈ鎖とＬ鎖の対の好ましい組み合わせに限定されない。よって、本発明の抗体は、Ｈ鎖とＬ鎖の対の様々な組み合わせを包含する。その組み合わせとしては、本明細書中に記載されるＨ鎖およびＬ鎖、または当業者に公知でありうるかもしくはＳＥＢに対して特異的で高い親和性の結合を得るために本明細書中に記載されるＨ鎖およびＬ鎖と適合可能であると別途実験的に判定される他のＨ鎖もしくはＬ鎖、が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８８】
本発明の抗体は、１×１０−２未満の解離定数（ＫＤ）を含む、標的抗原に対する結合親和性（単位Ｍ）を有する。いくつかの実施形態において、ＫＤは、１×１０−３未満である。他の実施形態において、ＫＤは、１×１０−４未満である。いくつかの実施形態において、ＫＤは、１×１０−５未満である。さらに他の実施形態において、ＫＤは、１×１０−６未満である。他の実施形態において、ＫＤは、１×１０−７未満である。他の実施形態において、ＫＤは、１×１０−８未満、２×１０−８未満または３×１０−８未満である。他の実施形態において、ＫＤは、１×１０−９未満である。他の実施形態において、ＫＤは、１×１０−１０未満、２×１０−１０未満または３×１０−１０未満である。さらに他の実施形態において、ＫＤは、１×１０−１１未満である。いくつかの実施形態において、ＫＤは、１×１０−１２未満である。他の実施形態において、ＫＤは、１×１０−１３未満である。他の実施形態において、ＫＤは、１×１０−１４未満である。さらに他の実施形態において、ＫＤは、１×１０−１５未満である。
【００８９】
例えば、共有結合が本抗体とそのエピトープとの結合を妨げないような任意のタイプの分子が本抗体に共有結合することによって、本発明の抗体を修飾することができる。適当な修飾の例としては、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化などが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の抗体自体を、公知の保護基／ブロッキング基、タンパク分解性切断、細胞性リガンドまたは他のタンパク質への結合などによって誘導体化してもよい。本発明の抗体は、抗体活性または安定性を改善する翻訳後部分を有してもよい。これらの部分としては、硫黄、メチル、炭水化物、リンならびに免疫グロブリン分子上に通常見られる他の化学基が挙げられる。さらに、本発明の抗体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含んでもよい。
【００９０】
本発明の抗体をコードするヌクレオチド配列が提供される。本発明の核酸としては、ゲノムＤＮＡ、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、二本鎖核酸および一本鎖核酸ならびにそれらの相補的配列が挙げられるがこれらに限定されない。
【００９１】
本発明の好ましいポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号３０、３４、３８、１２６、１４２、２１６、２３２または２５１の重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。配列ＩＤ番号２８、３２、３６、１３４、１８６、２１４または２４９の軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列。本発明の他の好ましいポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１６０、１７６、２０２、２０４または２３０の重鎖可変ドメインアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。配列ＩＤ番号１５８、１７４、２００または２２８の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列をコードする核酸配列。他の好ましいポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号３９、４０、４１、４２、５８、７０、８２、９４、１０６、１１８、１３２、１４０または１４８の抗体ＣＤＲ３ドメイン；配列ＩＤ番号５７、６９、８１、９３、１０５、１１７、１３１、１３８または１４６のＣＤＲ２ドメイン、ならびに配列ＩＤ番号５６、６８、８０、９２、１０４、１１６、１３０、１３６および１４４のＣＤＲ１ドメインをコードする核酸配列を含む。
【００９２】
本発明のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドのいくつかの好ましい例は、配列ＩＤ番号２９、３３、３７、１１９、１４１、１６２、１６３、１９０、１９１、２１５、２１８、２１９、２３１および２５０の重鎖ポリヌクレオチド；ならびに配列ＩＤ番号２７、３１、３５、１３３、１４９、１６１、１７７、１８５、１８９、２０５、２１３、２１７および２４８の軽鎖ポリヌクレオチドを含む。本発明のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドの他の好ましい例は、配列ＩＤ番号１５９、１６４、１７２、１７５、１９２、２０１、２０３および２２９の重鎖可変ドメイン；ならびに配列ＩＤ番号１５０、１５７、１７１、１７３、１７８、１９９および２２７の軽鎖可変ドメインを含む。本発明のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドの他の好ましい例は、配列ＩＤ番号６２、８６、１１０、１２３、１６６、１９４、２２２および２５３の重鎖ＣＤＲ１ドメイン；配列ＩＤ番号６３、８７、１１１、１２４、１６８、１９６、２２４および２５５のＣＤＲ２ドメイン；ならびに配列ＩＤ番号６４、８８、１１２、１２５、１７０、１９８、２１２および２５７のＣＤＲ３ドメイン；ならびに配列ＩＤ番号５０、７４、９８、１５２、１８０、２０８および２５９の軽鎖ＣＤＲ１ドメイン；配列ＩＤ番号５１、７５、９９、１５４、１８２、２１０および２６１のＣＤＲ２ドメイン；ならびに配列ＩＤ番号５２、７６、１００、１５６、１８４、２１２および２６３のＣＤＲ３ドメインを含む。本明細書中のこの箇所および別の箇所に記載されるポリヌクレオチド配列は、本発明の好ましい実施形態の例を提供するが、遺伝暗号の縮重の性質から、本発明の抗体および抗体フラグメントをコードする多数のポリヌクレオチドが提供されることを当業者は認識するだろう。本発明はまた、ブドウ球菌エンテロトキシンＢに特異的に結合する抗体および抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを特徴とする。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号６８、６９および７０の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号６２、６３および６４を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１１６、１１７および１１８の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１１０、１１１および１１２を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１３０、１３１および１３２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１２３または１９４、１２４または１９６および１２５または１９８を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号９２、９３および９４の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号８６または１６６、８７または１６８および８８または１７０を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１４４、１４６および１４８の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２５３または２２２、２５５または２２４および２５７または２２６を含みうる。
【００９３】
いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号５６、５７および５８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびのＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号５０、５１および５２を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１０４、１０５および１０６の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号９８または１８０、９９または１８２および１００または１８４を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号８０、８１および８２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号７４または１５２、７５または１５４および７６または１５６を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１３６、１３８および１４０の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２５９または２０８、２６１または２１０および２６３または２１２を含みうる。
【００９４】
いくつかの好ましい実施形態において、本抗体または抗原結合フラグメントの重鎖可変ドメインは、配列ＩＤ番号１５９、１６４、１７２、１７５、１９２、２０１、２０３または２２９を含むポリヌクレオチドによってコードされる。いくつかの好ましい実施形態において、その重鎖配列は、配列ＩＤ番号２９、３３、３７、１１９、１４１、１６２、１６３、１９０、１９１、２１５、２１８、２１９、２３１または２５０を含むポリヌクレオチドによってコードされる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１６０の重鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１５９または１６４を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７６の重鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７５を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２０２の重鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２０１を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２０４の重鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７２または２０３を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２３０の重鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１９２または２２９を含みうる。
【００９５】
いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、配列ＩＤ番号５０、５１および５２；配列ＩＤ番号９８、９９および１００；配列ＩＤ番号７４、７５および７６；配列ＩＤ番号２５９、２６１および２６３；配列ＩＤ番号１８０、１８２および１８４；配列ＩＤ番号１５２、１５４および１５６；または配列ＩＤ番号２０８、２１０および２１２を含むポリヌクレオチドによってコードされる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントの軽鎖可変ドメインは、配列ＩＤ番号１５０、１５７、１７１、１７３、１７８、１９９または２２７を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【００９６】
いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１５８の軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１５０または１５７を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７４の軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７３を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２００の軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７１または１９９を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２２８の軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７８または２２７を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントの軽鎖配列は、配列ＩＤ番号２７、３１、３５、１３３、１４９、１６１、１７７、１８５、１８９、２０５、２１３、２１７または２４８を含むポリヌクレオチドによってコードされる。
【００９７】
いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号６８、６９および７０；ならびに５６、５７および５８の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号６２、６３および６４；ならびに５０、５１および５２を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号１１６、１１７および１１８；ならびに１０４、１０５および１０６の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号１１０、１１１および１１２；ならびに９８または１８０、９９または１８２および１００または１８４を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号１３０、１３１および１３２；ならびに１０４、１０５および１０６の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号１２３または１９４、１２４または１９６および１２５または１９８；ならびに９８または１８０、９９または１８２および１００または１８４を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号９２、９３および９４；ならびに８０、８１および８２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号８６または１６６、８７または１６８および８８または１７０；ならびに７４または１５２、７５または１５４および７６または１５６を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号１４４、１４６および１４８；ならびに１３６、１３８および１４０の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、それぞれ配列ＩＤ番号２５３または２２２、２５５または２２４および２５７または２２６；ならびに２５９または２０８、２６１または２１０および２６３または２１２を含みうる。
【００９８】
いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７６および１７４の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１７５および１７３を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２０２および２００の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２０１および１９９または１７１を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２０４および２００の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２０３または１７２および１９９または１７１を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１６０および１５８の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１５９または１６４および１５７または１５０を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２３０および２２８の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントをコードする。例えば、本ポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２２９または１９２および２２７または１７８を含みうる。
【００９９】
いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号６２、８６、１１０、１２３、１６６、１９４、２２２または２５３のＣＤＲ１；配列ＩＤ番号６３、８７、１１１、１２４、１６８、１９６、２２４または２５５のＣＤＲ２；および配列ＩＤ番号６４、８８、１１２、１２５、１７０、１９８、２１２または２５７のＣＤＲ３を有する重鎖；ならびに配列ＩＤ番号５０、７４、９８、１５２、１８０、２０８または２５９のＣＤＲ１；配列ＩＤ番号５１、７５、９９、１５４、１８２、２１０または２６１のＣＤＲ２；および配列ＩＤ番号５２、７６、１００、１５６、１８４、２１２または２６３のＣＤＲ３を有する軽鎖を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号１５９、１６４、１７２、１７５、１９２、２０１、２０３または２２９を有する重鎖可変ドメインおよび配列ＩＤ番号１５０、１５７、１７１、１７３、１７８、１９９または２２７を有する軽鎖可変ドメインを含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、本抗体および抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドは、配列ＩＤ番号２９、３３、３７、１１９、１４１、１６２、１６３、１９０、１９１、２１５、２１８、２１９、２３１または２５０の重鎖配列および配列ＩＤ番号２７、３１、３５、１３３、１４９、１６１、１７７、１８５、１８９、２０５、２１３、２１７または２４８の軽鎖配列を含みうる。そのようなポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。
【０１００】
いくつかの実施形態において、本発明のポリヌクレオチド（およびそれがコードするペプチド）は、リーダー配列を含む。当該分野で公知の任意のリーダー配列を使用することができる。リーダー配列としては、制限酵素認識部位および／または翻訳開始部位が挙げられうるが、これらに限定されない。いくつかの好ましい実施形態において、リーダー配列は、核酸配列ＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＣＴＴＣＴＴＧＧＴＡＧＣＡＡＣＡＧＣＴＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＡＧＣ（配列ＩＤ番号４３）、
ＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＣＣＴＧＣＡＴＣＡＴＣＣＴＧＴＴＴＣＴＧＧＴＧＧＣＣＡＣＣＧＣＣＡＣＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＴＣＣ（配列ＩＤ番号２０６）、
ＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＣＴＴＣＴＴＧＧＴＡＧＣＡＡＣＡＧＣＴＡＣＡＧＧＴＧＴＣＣＡＣＴＣＣ（配列ＩＤ番号２２０）またはＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＣＴＴＣＴＴＧＧＴＡＧＣＡＡＣＡＧＣＴＡＣＡＧＧＴＧＴＧＣＡＣＴＣＣ（配列ＩＤ番号２１）を有する。いくつかの好ましい実施形態において、リーダー配列は、アミノ酸配列ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳ（配列ＩＤ番号４４）をコードする。
【０１０１】
本発明のポリヌクレオチドを含むベクターも、本発明に包含される。そのベクターは、発現ベクターでありうる。従って、目的のポリペプチドをコードする配列を含む組換え発現ベクターが、提供される。その発現ベクターは、１つ以上の付加配列（例えば、制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー）、選択マーカーおよびポリアデニル化シグナルが挙げられるがこれらに限定されない）を含んでもよい。多岐にわたる宿主細胞を形質転換するためのベクターは、当業者に周知である。それらとしては、プラスミド、ファージミド、コスミド、バキュロウイルス、バクミド、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）ならびに他の細菌、酵母およびウイルスのベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０２】
本発明の組換え発現ベクターは、適当な調節エレメントに作動可能に連結されうる少なくとも１つの組換えタンパク質をコードする、合成核酸フラグメント、ゲノムまたはｃＤＮＡに由来する核酸フラグメントを含む。そのような調節エレメントは、転写プロモーター、適当なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、ならびに転写および翻訳の終結を制御するものを含みうる。発現ベクター、特に哺乳動物発現ベクターは、１つ以上の非転写エレメント（例えば、発現される遺伝子に連結される、複製起点、適当なプロモーターおよびエンハンサー、他の５’または３’隣接非転写配列、５’または３’非転写配列（例えば、必要なリボソーム結合部位）、ポリアデニル化部位、スプライスドナー部位およびアクセプター部位または転写終結配列）も含んでもよい。宿主において複製する能力を付与する複製起点も組み込んでもよい。
【０１０３】
脊椎動物細胞の形質転換に使用される発現ベクター内の転写調節配列および翻訳調節配列は、ウイルスの起源によって提供されてもよい。例示的なベクターは、ＯｋａｙａｍａおよびＢｅｒｇ（１９８３）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２８０に記載されているように構築することができる。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、本抗体のコード配列は、強力な構成的プロモーター（例えば、以下の遺伝子：ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、ベータ−アクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチンおよびその他の遺伝子に対するプロモーター）の支配下に置かれる。さらに、多くのウイルスプロモーターは、真核細胞において構成的に機能し、本発明において使用するのに適している。そのようなウイルスプロモーターとしては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター、ＳＶ４０の初期および後期プロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、モロニー白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）および他のレトロウイルスの末端反復配列（ＬＴＲ）、ならびに単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。他のプロモーターが、当業者に公知である。１つの実施形態において、本抗体のコード配列は、誘導性プロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター、テトラサイクリン誘導性プロモーター、ドキシサイクリン誘導性プロモーター、１つ以上のインターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）（例えば、タンパク質キナーゼＲ２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素、Ｍｘ遺伝子、ＡＤＡＲ１など）を含むプロモーター）の支配下に置かれる。他の適当な誘導性プロモーターが、当業者に公知であろう。
【０１０５】
本発明のベクターは、１つ以上の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含みうる。融合ベクターにＩＲＥＳ配列を含めることは、いくつかのタンパク質の発現を増大させるために有益であることがある。いくつかの実施形態において、そのベクターシステムは、１つ以上のポリアデニル化部位（例えば、ＳＶ４０）を含み、それらの部位は、上述の核酸配列のいずれかの上流に存在してもよいし、下流に存在してもよい。ベクターの構成要素は、遺伝子産物を発現するために最適な間隔をもたらす形式で、隣接して連結または配置されてもよいし（すなわち、ＯＲＦ間に「スペーサー」ヌクレオチドを導入することによって）、別の方法で位置してもよい。ＩＲＥＳモチーフなどの調節エレメントも、発現に最適な間隔をもたらすように配置することができる。
【０１０６】
本ベクターは、当該分野で周知の選択マーカーを含んでもよい。選択マーカーとしては、正および負の選択マーカー、例えば、抗生物質耐性遺伝子（例えば、ネオマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、カナマイシン耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、ペニシリン耐性遺伝子）、ガンシクロビル選択用のＨＳＶ−ＴＫ、ＨＳＶ−ＴＫ誘導体または６−メチルプリン選択用の細菌プリンヌクレオシドホスホリラーゼ遺伝子（Ｇａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．７：１７３８−１７４３）が挙げられる。選択マーカーをコードする核酸配列または上記クローニング部位は、目的のポリペプチドをコードする核酸配列またはクローニング部位の上流に存在してもよいし、下流に存在してもよい。
【０１０７】
本発明のベクターは、本発明の様々な抗体をコードする遺伝子で様々な細胞を形質転換するために使用することができる。例えば、本ベクターは、抗体産生細胞を作製するために使用することができる。従って、本発明の別の態様は、本明細書中に記載および例示される抗体などの、ＳＥＢに特異的に結合する抗体をコードする核酸配列を含むベクターで形質転換された宿主細胞を特徴とする。
【０１０８】
外来遺伝子を細胞に導入するための数多くの手法が当該分野で公知であり、それらの手法を用いて、本発明の様々な実施形態に従って本発明の方法を実施する目的で組換え細胞を構築することができる。用いられる手法は、異種遺伝子配列が、遺伝可能で、子孫細胞によって発現可能であり、レシピエント細胞の必要な発生機能および生理学的機能が妨害されないように、その異種遺伝子配列を宿主細胞に安定的に移入する手法であるべきである。用いられうる手法としては、染色体導入（例えば、細胞融合、染色体媒介性の遺伝子導入、微小細胞媒介性の遺伝子導入）、物理的方法（例えば、トランスフェクション、スフェロプラスト融合、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、リポソームキャリア）、ウイルスベクター導入（例えば、組換えＤＮＡウイルス、組換えＲＮＡウイルス）など（Ｃｌｉｎｅ（１９８５）Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．２９：６９−９２に記載）が挙げられるがこれらに限定されない。リン酸カルシウム沈殿、および細菌のプロトプラストと哺乳動物細胞とのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）誘導性の融合もまた、細胞を形質転換するために使用することができる。
【０１０９】
本発明の発現ベクターでトランスフェクトされた細胞を、正の選択条件下で選択することができ、そして／または本抗体の組換え発現についてスクリーニングすることができる。組換え陽性細胞を増殖させ、そして、例えば、タンパク質修飾および／または翻訳後修飾の変更に起因して所望の表現型（例えば、高レベルの発現、高い増殖特性および／または所望の生化学的特徴を有するタンパク質をもたらす能力）を示すサブクローンについてスクリーニングする。これらの表現型は、所与のサブクローンの固有の特性または突然変異誘発に起因するものであってもよい。突然変異誘発は、化学薬品の使用、ＵＶ波長光、放射線照射、ウイルス、挿入性の突然変異原、不完全なＤＮＡ修復、またはそれらの方法の組み合わせによってもたらすことができる。
【０１１０】
抗体を発現させるために本発明において使用するのに適した細胞は、好ましくは、真核細胞であり、より好ましくは、植物、げっ歯類またはヒト起源の細胞であり、例えば、とりわけ、ＮＳＯ、ＣＨＯ、ｐｅｒＣ．６、Ｔｋ−ｔｓ１３、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ−７、Ｔ９８Ｇ、ＣＶ−１／ＥＢＮＡ、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＮＳ１、Ｓｐ２／０ミエローマ細胞およびＢＨＫ細胞株が挙げられるがこれらに限定されない。抗体の発現にとって大いに好ましい細胞は、ハイブリドーマ細胞である。ハイブリドーマを作製するための方法は、当該分野において十分に確立されている。
【０１１１】
いったん、所望のタンパク質を発現する細胞が同定されると、それを増殖させて、選択することができる。トランスフェクトされた細胞は、多くの方法で選択することができる。例えば、目的のポリペプチドの発現について細胞を選択することができる。ベクターが抗生物質耐性遺伝子も含む細胞に対しては、抗生物質耐性についてその細胞を選択することができ、それによって、そのベクターを含む細胞が正に選択される。他の実施形態において、その細胞は、選択的条件下で成長することができる。
【０１１２】
本発明は、少なくとも１つの本発明の抗体および薬学的に許容可能な担体を含む組成物も特徴とする。そのような組成物は、例えば、本明細書中に記載および例示される疾患などのＳＥＢ媒介性疾患を処置または予防するための患者への投与に有用である。本組成物は、本明細書中に記載および例示されるものをはじめとした、当該分野において公知であり、適当である様々な調製法のいずれかのとおりに製剤化することができる。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、本組成物は、水性の製剤である。水溶液は、水または適当な生理緩衝液に本抗体を混合し、所望であれば、必要に応じて、適当な着色料、香味料、保存料、安定化剤および増粘剤などを加えることによって、調製することができる。水性懸濁液もまた、粘稠性の材料（例えば、天然または合成のゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウムおよび他の周知の懸濁剤）を含んだ水または生理緩衝液に本抗体を分散することによって作製することができる。
【０１１４】
液体の製剤、および使用する直前に液体の形態の調製物に変換されることを意図された固体の形態の調製物も含まれる。そのような液体の形態としては、溶液、懸濁液、シロップ剤、スラリーおよびエマルジョンが挙げられる。液体の調製物は、薬学的に許容可能な添加物（例えば、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ剤、セルロース誘導体または食用の水素化脂肪または硬化油）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアラビアゴム）；非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油性エステルまたは分画（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ）植物油）；および保存料（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピルまたはソルビン酸））を用いて従来の手段によって調製されうる。これらの調製物は、活性な薬剤に加えて、着色料、香味料、安定剤、緩衝液、人工甘味料および天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含んでもよい。本組成物は、使用前に適当なビヒクル（例えば、滅菌水、生理学的緩衝液、食塩水またはアルコール）を用いて構成するための、粉末または凍結乾燥の形態であってもよい。
【０１１５】
本組成物は、被験体への注射を意図して製剤化することができる。注射のために、本発明の組成物は、水もしくはアルコールなどの水溶液、または生理的に適合可能な緩衝液（例えば、ハンクス溶液、リンゲル溶液または生理食塩水緩衝液）において製剤化することができる。その溶液は、処方剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔｓ）（例えば、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤）を含んでもよい。注射製剤はまた、例えば、使用する前に適当なビヒクル（例えば、滅菌水、食塩水溶液またはアルコール）を用いて構成することによって、使用の直前に、注射に適した液体の形態の調製物に変換されることを意図された固体の形態の調製物として調製されてもよい。
【０１１６】
本組成物は、徐放ビヒクルまたはデポー調製物中に製剤化することができる。そのような長時間作用型の製剤は、埋め込みによって（例えば、皮下または筋肉内に）、または筋肉内注射によって投与することができる。従って、例えば、本組成物は、適当な重合体材料もしくは疎水性材料（例えば、許容可能な油中のエマルジョンとして）またはイオン交換樹脂とともに、または難溶性誘導体、例えば、難溶性塩として製剤化してもよい。リポソームおよびエマルジョンは、疎水性薬物に対する担体として使用するのに適した送達ビヒクルの周知の例である。
【０１１７】
本発明はまた、ＳＥＢによって媒介される疾患の処置または予防を必要とする被験体においてそのような処置または予防を行うための方法も特徴とする。いくつかの態様において、本方法は、ＳＥＢ媒介性疾患の処置または予防を必要とする被験体を同定する工程を包含しうる。１つの実施形態において、本方法は、本明細書中に記載および例示される組成物などの組成物を被験体に投与する工程を包含し、その組成物は、薬学的に許容可能な担体、およびブドウ球菌エンテロトキシンＢに特異的に結合し、好ましくは、それを中和する少なくとも１つの抗体を、ＳＥＢによって媒介される疾患を処置または予防するのに有効な量で含む。１つの実施形態において、本方法は、ブドウ球菌エンテロトキシンＢに特異的に結合し、好ましくは、それを中和する少なくとも１つの抗体（例えば、本明細書中に記載および例示される抗体）を、ＳＥＢによって媒介される疾患を処置または予防するのに有効な量で被験体に投与する工程を包含する。
【０１１８】
当業者が理解するように、ＳＥＢは、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．が感染した個体において産生されうるＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ細菌の病原性因子である。従って、ＳＥＢ中和抗体を用いた処置を必要とする被験体は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ細菌に感染している可能性がある。その感染は、被験体の身体内または身体上のどこにでも存在しうるものであり、医療機器が埋め込まれた患者において観察されるような感染の任意のステージ（例えば、初期、進行期または慢性の感染）におけるものでありうる。さらに、本明細書中に記載されるように、ＳＥＢ自体が、患者において様々な疾患を引き起こすことができる。ＳＥＢは、それを産生する細菌とは別に存在する場合があり、例えば、汚染された食品または飲料の中に存在しうるか、またはバイオテロリストの攻撃の形態で散布される場合に存在しうる。従って、ＳＥＢ中和抗体での処置を必要とする被験体は、ＳＥＢに曝露されている可能性があるが、必ずしもそのトキシンを発現する細菌または他の細胞を有しているわけではない。
【０１１９】
ＳＥＢは、上記トキシンに曝露された被験体において種々の疾患状態を媒介する。本発明の方法および本発明のＳＥＢ中和抗体を用いて効果的に処置することができる、ＳＥＢによって媒介される疾患の非限定的な例としては、発熱、筋痛、呼吸窮迫、呼吸困難、胸膜炎、頭痛、悪心、嘔吐、食欲不振、肝腫大および白血球増加が挙げられる（例えば、Ｕｌｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｗａｒｆａｒｅ，Ｓｉｄｅｌｌ，Ｔａｋａｆｕｊ，ａｎｄ  Ｆｒａｎｚ，Ｅｄｓ．，Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｉｌｉｔａｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｒｉｇａｄｉｅｒ  Ｇｅｎ．Ｒｕｓｓ  Ｚａｊｔｃｈｕｋ，Ｅｄｓ．，Ｏｆｆｉｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｕｒｇｅｏｎ  Ｇｅｎｅｒａｌ  ａｔ  ＴＭＭ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ出版，Ｂｏｒｄｅｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｗａｌｔｅｒ  Ｒｅｅｄ  Ａｒｍｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣを参照）。当業者は、本発明の方法に従って処置することができるであろう、ＳＥＢによって媒介される他の疾患および合併症を知っているだろう。
【０１２０】
被験体は、いずれの動物であってもよく、好ましくは、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、サル、ロバ、ウシ、ウマ、ブタなど）である。最も好ましくは、哺乳動物は、ヒトである。
【０１２１】
本発明の方法において、少なくとも１つの抗体は、好ましくは、本発明の抗体である。例えば、その少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号６８、９２、１１６、１３０または１４４のＣＤＲ１；配列ＩＤ番号６９、９３、１１７、１３１または１４６のＣＤＲ２；および配列ＩＤ番号７０、９４、１１８、１３２または１４８のＣＤＲ３を有する重鎖；ならびに配列ＩＤ番号５６、８０、１０４または１３６のＣＤＲ１；配列ＩＤ番号５７、８１、１０５または１３８のＣＤＲ２；および配列ＩＤ番号５８、８２、１０６または１４０のＣＤＲ３を有する軽鎖を含みうる。いくつかの好ましい実施形態において、上記少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号１６０、１７６、２０２、２０４または２３０を有する重鎖可変ドメインおよび配列ＩＤ番号１５８、１７４、２００、２２８を有する軽鎖可変ドメインを含みうる。
【０１２２】
好ましい実施形態において、上記少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号６８のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号６９のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号７０のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号５６のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号５７のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号５８のＣＤＲ３を有する軽鎖を含みうる。好ましい実施形態において、その少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号１７６の可変ドメインを有する重鎖および配列ＩＤ番号１７４の可変ドメインを有する軽鎖を含みうる。好ましい実施形態において、その少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号３０を有する重鎖および配列ＩＤ番号２８を有する軽鎖を含みうる。
【０１２３】
好ましい実施形態において、本発明の抗体および抗原結合フラグメントは、配列ＩＤ番号１１６のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１１７のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１１８のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号１０４のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１０５のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１０６のＣＤＲ３を有する軽鎖を含む。好ましい実施形態において、少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号２０２の可変ドメインを有する重鎖および配列ＩＤ番号２００の可変ドメインを有する軽鎖を含みうる。好ましい実施形態において、少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号１８８を有する重鎖および配列ＩＤ番号１８６を有する軽鎖を含みうる。
【０１２４】
好ましい実施形態において、少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号１３０のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１３１のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１３２のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号１０４のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１０５のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１０６のＣＤＲ３を有する軽鎖を含みうる。好ましい実施形態において、少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号２０４の可変ドメインを有する重鎖および配列ＩＤ番号２００の可変ドメインを有する軽鎖を含みうる。好ましい実施形態において、少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号２３２を有する重鎖および配列ＩＤ番号１８６を有する軽鎖を含みうる。
【０１２５】
好ましい実施形態において、少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号９２のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号９３のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号９４のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号８０のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号８１のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号８２のＣＤＲ３を有する軽鎖を含みうる。好ましい実施形態において、少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号１６０の可変ドメインを有する重鎖および配列ＩＤ番号１５８の可変ドメインを有する軽鎖を含みうる。好ましい実施形態において、少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号２５１を有する重鎖および配列ＩＤ番号２４９を有する軽鎖を含みうる。
【０１２６】
好ましい実施形態において、少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号１４４のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１４６のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１４８のＣＤＲ３を有する重鎖、ならびに配列ＩＤ番号１３６のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号１３８のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号１４０のＣＤＲ３を有する軽鎖を含みうる。好ましい実施形態において、少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号２３０の可変ドメインを有する重鎖および配列ＩＤ番号２２８の可変ドメインを有する軽鎖を含みうる。好ましい実施形態において、少なくとも１つの抗体は、配列ＩＤ番号２１６を有する重鎖および配列ＩＤ番号２１４を有する軽鎖を含みうる。
【０１２７】
非常に好ましい実施形態において、少なくとも１つの抗体は、ＳＥＢを中和する。本方法のいくつかの態様において、少なくとも１つの抗体は、好ましくは、約１×１０−８Ｍ未満、好ましくは約３×１０−８Ｍ未満のブドウ球菌エンテロトキシンＢに対する親和性を有し、より好ましくは、約１×１０−９Ｍ未満のブドウ球菌エンテロトキシンＢに対する親和性を有し、より好ましくは、約１×１０−１０Ｍ未満、および好ましくは、約３×１０−１０Ｍ未満のブドウ球菌エンテロトキシンＢに対する親和性を有する。
【０１２８】
本組成物の投与は、注入または注射によるものでありうる（静脈内、筋肉内、皮内、皮下、髄腔内、十二指腸内、腹腔内など）。本組成物はまた、鼻腔内、膣、直腸、経口的または経皮的に投与することもできる。好ましくは、本組成物は、経口的に投与される。投与は、医師の指導において行うことができる。
【０１２９】
様々な代替の薬学的送達系を使用することができる。そのような系の非限定的な例としては、リポソームおよびエマルジョンが挙げられる。ジメチルスルホキシドなどのある特定の有機溶媒も使用することができる。さらに、治療抗体を含む固体ポリマーの半透性マトリックスなどの徐放系を用いて、本組成物を送達してもよい。様々な利用可能な徐放材料が、当業者に周知である。徐放カプセルは、その化学的性質に応じて、数日から数週間から数ヶ月にわたって抗体を放出しうる。
【０１３０】
ＳＥＢ媒介性疾患に罹患している被験体を処置するために、治療有効量の本組成物をその被験体に投与する。治療有効量は、ＳＥＢによって媒介される少なくとも１つの疾患において臨床的に有意な緩和をもたらし、その疾患は、本明細書中に記載および例示される疾患でありうるが、それらに限定されない。
【０１３１】
本組成物の有効な量は、任意の数の変動するもの（例えば、被験体の種、人種、サイズ、身長、体重、年齢、全般的な健康状態、製剤のタイプ、形式もしくは様式もしくは投与、またはＳＥＢによって引き起こされる被験体における疾患の重症度が挙げられるがこれらに限定されない）に依存しうる。適切な有効量は、通例の最適化の手法、ならびに開業医の熟達および訓練された判断および当業者にとって明らかな他の因子を用いて、当業者が日常的に決定することができる。好ましくは、本明細書中に記載される化合物の治療的に有効な用量は、被験体に対して実質的な毒性を引き起こさずに治療的な利益をもたらすものである。
【０１３２】
薬剤または化合物の毒性および治療的な有効性は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死性の用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定するために、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって測定することができる。毒性効果と治療効果との用量比が治療指数であり、それはＬＤ５０／ＥＤ５０比として表すことができる。幅広い治療指数を示す薬剤または組成物が好ましい。被験体において使用するためにある範囲の投薬量を製剤化する際に、細胞培養アッセイおよび動物試験から得られるデータを使用することができる。そのような薬剤または組成物の投薬量は、好ましくは、毒性がほとんどないかまたは全くないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内である。その投薬量は、使用される剤形および用いられる投与経路に応じて、この範囲内で変動しうる。
【０１３３】
本発明の方法において使用される任意の組成物について、治療的に有効な用量は、はじめに、細胞培養アッセイなどのインビトロアッセイから推定することができる。例えば、細胞培養において決定されたＩＣ５０（すなわち、破骨細胞の形成または活性化の最大半分の阻害を達成する組成物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するように、ある用量を動物モデルにおいて処方することができる。そのような情報を用いることにより、ヒトなどの特定の被験体における有用な用量をより正確に決定することができる。処置する医師は、毒性または臓器の機能不全を理由に、投与を終結させるか、中断するか、または調節することができ、また、臨床応答を改善するために、その応答が適切でない場合には必要に応じて、処置を調節することができる。目的の障害を管理する際に投与される用量は、処置される状態の重症度および投与経路によって変動しうる。状態の重症度は、例えば、標準的な予後評価方法によって部分的に評価することができる。
【０１３４】
本発明の方法の一態様において、本組成物は、本組成物の乾物重の約０．０１％〜約９０％の範囲の濃度の少なくとも１つの抗ＳＥＢ抗体を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの抗ＳＥＢ抗体は、本組成物の乾物重の最大約５０％を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの抗ＳＥＢ抗体は、本組成物の乾物重の最大約４０％を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの抗ＳＥＢ抗体は、本組成物の乾物重の最大約３０％を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの抗ＳＥＢ抗体は、本組成物の乾物重の最大約２５％を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの抗ＳＥＢ抗体は、本組成物の乾物重の最大約２０％を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの抗ＳＥＢ抗体は、本組成物の乾物重の最大約１５％を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの抗ＳＥＢ抗体は、本組成物の乾物重の最大約１０％を含む。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、被験体の体重１ｋｇあたり約０．０１μｇ〜約５００ｍｇという抗体の１日量の範囲で、少なくとも１つの抗ＳＥＢ抗体を被験体に投与することができる。被験体に投与される用量は、１日あたりに投与される少なくとも１つの抗ＳＥＢ抗体の総量に関して判断してもよい。いくつかの実施形態において、被験体は、１日あたり約５〜約５０００ｍｇの少なくとも１つの抗ＳＥＢを投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、１日あたり最大約１０ｍｇの少なくとも１つの抗ＳＥＢを投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、１日あたり最大約１００ｍｇの少なくとも１つの抗ＳＥＢを投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、１日あたり最大約２５０ｍｇの少なくとも１つの抗ＳＥＢを投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、１日あたり最大約５００ｍｇの少なくとも１つの抗ＳＥＢを投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、１日あたり最大約７５０ｍｇの少なくとも１つの抗ＳＥＢを投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、１日あたり最大約１０００ｍｇの少なくとも１つの抗ＳＥＢを投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、１日あたり最大約１５００ｍｇの少なくとも１つの抗ＳＥＢを投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、１日あたり最大約２０００ｍｇの少なくとも１つの抗ＳＥＢを投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、１日あたり最大約２５００ｍｇの少なくとも１つの抗ＳＥＢを投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、１日あたり最大約３０００ｍｇの少なくとも１つの抗ＳＥＢを投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、１日あたり最大約３５００ｍｇの少なくとも１つの抗ＳＥＢを投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、１日あたり最大約４０００ｍｇの少なくとも１つの抗ＳＥＢを投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、１日あたり最大約４５００ｍｇの少なくとも１つの抗ＳＥＢを投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、１日あたり最大約５０００ｍｇの少なくとも１つの抗ＳＥＢを投与される。
【０１３６】
処置は、少なくとも１つの抗ＳＥＢの最適な用量未満である、より少ない投薬量で開始した後、その状況における最適な効果に達するまで、その処置の経過を通して投薬量を増加させていくことができる。必要であれば、１日の総投薬量を分割して、その１日の間に分けて投与してもよい。
【０１３７】
ＳＥＢ媒介性疾患を有効に処置するために、当業者は、処置される被験体にとって適切な投薬スケジュールおよび投薬量を推奨することがある。必要とされる期間にわたって、１日１〜４回またはそれ以上、投薬を行うことが好ましい場合がある。本組成物が持続性の送達ビヒクル中に製剤化されている場合は、より低い頻度で投薬を行ってもよい。投薬スケジュールは、活性な薬物濃度に応じて変化しうるものであり、それは、被験体の必要性に依存しうる。
【０１３８】
ＳＥＢ媒介性疾患を処置するための本発明の組成物は、処置される状態に対する特定の有用性について選択された他の周知の治療薬と同時投与されうる。例えば、そのような治療薬は、鎮痛剤、解熱剤（ｆｅｖｅｒ  ｒｅｄｕｃｅｒｓ）、胃制酸剤、本組成物の有害作用を和らげる化合物またはＳＥＢ媒介性疾患を処置する他の公知の薬剤でありうる。
【０１３９】
これらの付加的な化合物の投与は、少なくとも１つの抗ＳＥＢ抗体の投与と同時であってもよいし、必要に応じて、少なくとも１つの抗ＳＥＢ抗体の投与の前後のいずれかに連続して投与してもよい。併用処置に含められる様々な化合物が、互いに数分間、数時間、数日間または数週間以内に投与される任意の適当なプロトコルが考え出されうる。周期的なプロトコルにおける反復投与もまた、本発明の範囲内であると企図される。
【０１４０】
本発明はまた、ブドウ球菌エンテロトキシンＢに特異的に結合する抗体を作製するための方法を特徴とする。いくつかの実施形態において、この方法は、骨髄細胞または末梢血細胞を動物から単離する工程、そのような細胞をブドウ球菌エンテロトキシンＢまたはその抗原性フラグメントとともに培養する工程、その培地からブドウ球菌エンテロトキシンＢに特異的に結合する抗体を発現するＢ細胞を単離する工程、およびそのＢ細胞によって産生される抗体を単離する工程を包含する。必要に応じて、当該分野で公知の任意の方法に従って、そのＢ細胞をドナー細胞と融合することによって、ハイブリドーマを形成してもよい。骨髄細胞または末梢血細胞の単離の前に、その骨髄細胞または末梢血細胞が単離される動物を、ブドウ球菌エンテロトキシンＢまたはその抗原性フラグメントで免疫することができる。任意の動物をこの方法において用いることができる。好ましくは、その動物は、哺乳動物であり、より好ましくは、ヒトである。いくつかの実施形態において、動物を免疫するために用いられ、そして／または単離された骨髄細胞もしくは末梢血細胞とともに培養する際に用いられる、ブドウ球菌エンテロトキシンＢは、ＳＴＥＢである。ＳＴＥＢは、以下のアミノ酸配列を有し、ここで、ＳＥＢと異なる残基に下線を引いた：ＥＳＱＰＤＰＫＰＤＥＬＨＫＳＳＫＦＴＧＬＭＥＮＭＫＶＬＹＤＤＮＨＶＳＡＩＮＶＫＳＩＤＱＦＲＹＦＤＬＩＹＳＩＫＤＴＫＬＧＮＹＤＮＶＲＶＥＦＫＮＫＤＬＡＤＫＹＫＤＫＹＶＤＶＦＧＡＮＡＹＹＱＣＡＦＳＫＫＴＮＤＩＮＳＨＱＴＤＫＲＫＴＣＭＹＧＧＶＴＥＨＮＧＮＱＬＤＫＹＲＳＩＴＶＲＶＦＥＤＧＫＮＬＬＳＦＤＶＱＴＮＫＫＫＶＴＡＱＥＬＤＹＬＴＲＨＹＬＶＫＮＫＫＬＹＥＦＮＮＳＰＹＥＴＧＹＩＫＦＩＥＮＥＮＳＦＷＹＤＭＭＰＡＰＧＤＫＦＤＱＳＫＹＬＭＭＹＮＤＮＫＭＶＤＳＫＤＶＫＩＥＶＹＬＴＴＫＫＫ（配列ＩＤ番号４５）。比較として、ＳＥＢは、以下のアミノ酸配列：ＥＳＱＰＤＰＫＰＤＥＬＨＫＳＳＫＦＴＧＬＭＥＮＭＫＶＬＹＤＤＮＨＶＳＡＩＮＶＫＳＩＤＱＦＬＹＦＤＬＩＹＳＩＫＤＴＫＬＧＮＹＤＮＶＲＶＥＦＫＮＫＤＬＡＤＫＹＫＤＫＹＶＤＶＦＧＡＮＹＹＹＱＣＹＦＳＫＫＴＮＤＩＮＳＨＱＴＤＫＲＫＴＣＭＹＧＧＶＴＥＨＮＧＮＱＬＤＫＹＲＳＩＴＶＲＶＦＥＤＧＫＮＬＬＳＦＤＶＱＴＮＫＫＫＶＴＡＱＥＬＤＹＬＴＲＨＹＬＶＫＮＫＫＬＹＥＦＮＮＳＰＹＥＴＧＹＩＫＦＩＥＮＥＮＳＦＷＹＤＭＭＰＡＰＧＤＫＦＤＱＳＫＹＬＭＭＹＮＤＮＫＭＶＤＳＫＤＶＫＩＥＶＹＬＴＴＫＫＫ（配列ＩＤ番号４６）を有する。
【０１４１】
いくつかの実施形態において、ブドウ球菌エンテロトキシンＢに特異的に結合する抗体を作製するための方法は、その抗体を産生するのに適した条件下で宿主細胞を培養する工程、およびその細胞培養物から抗体を回収する工程を包含する。いくつかの実施形態において、その宿主細胞は、本発明の抗体およびその抗原結合フラグメントをコードする本発明のポリヌクレオチドを含むベクターで形質転換されたいずれの細胞であってもよい。
【０１４２】
本発明をさらに詳細に説明するために以下の実施例を提供する。これらは、本発明を例証することを意図しており、限定することを意図していない。
【実施例１】
【０１４３】
抗原特異的完全ヒトハイブリドーマ細胞株の作製
健常ヒトドナーを、ＳＥＢに対する血清力価について事前にスクリーニングした。ＴＰＰ  Ｉｍｍｕｎｏｍｉｎｉ  ＥＬＩＳＡプレートを、炭酸水素塩コーティング緩衝液（ｐＨ９．６）（Ｓｉｇｍａ）に溶解した１μｇ／ｍＬのＳＴＥＢ（ＳＥＢ  ワクチン）で４℃において一晩コーティングすることによって、ＳＥＢ特異的ＥＬＩＳＡを行った。次いで、そのプレートを、洗浄緩衝液（０．５％ｔｗｅｅｎ−２０含有）で３回洗浄し、次いで、室温で２時間、１×アッセイ緩衝液でブロッキングした。そのブロッキングしたプレートを、様々なドナー由来の正常なヒト血漿を段階希釈したもの（１：１００、１：３００、１：９００、１；２，７００、１：８，１００および１：２４，３００）ならびにポジティブコントロール（マウス抗ＳＥＢｍＡｂ  １５Ｄ２−１−１およびウサギ抗ＳＥＢ  ＰＡｂ  ＦＴ１００９）とともに室温で１時間、インキュベートした。血清とともにインキュベートした後、そのプレートを洗浄し、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（１：１０，０００希釈したもの）、ＨＲＰ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（１：１０，０００希釈したもの）およびＨＲＰ標識ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（１：１０，０００希釈したもの）とともに、室温で１時間、振盪しながらインキュベートした。次いで、そのプレートを洗浄し、１ウェルあたり１００μＬのＴＭＢ基質で発色させ、５０μＬの停止溶液（１Ｍ  Ｈ２ＳＯ４）を加えることによって、その反応を停止した。発色させたプレートを、マイクロタイタープレートリーダーにおいて４５０ｎｍで読み出した。
【０１４４】
ＳＥＢ反応性Ｂ細胞を得るために、ＳＥＢ陽性ドナーから白血球パック（ｌｅｕｋｏｐａｃｋｓ）を得た。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）密度勾配遠心分離によってＰＢＭＣを精製した。ＥａｓｙＳｅｐ（登録商標）Ｈｕｍａｎ  Ｂ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  Ｋｉｔ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ）を用いるネガティブ選択によってＰＢＭＣからＣＤ２０陽性Ｂ細胞を単離した。濃縮されたＢ細胞を、ＣＤ４０培養システムを用いて刺激し、増殖させた。
【０１４５】
１０％熱失活ヒトＡＢ血清（Ｎａｂｉ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ＦＬ，ＵＳＡ）、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０μｇ／ｍＬのゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、５０μｇ／ｍＬのトランスフェリン（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，ＳＴ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）および５μｇ／ｍＬのインスリン（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）が補充されたＩＭＤＭ（Ｇｉｂｃｏ）中に、０．２×１０６細胞／ｍＬという最終濃度になるようにＢ細胞を再懸濁した。ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）をトランスフェクトされたＣＨＯフィーダー細胞を用いて、濃縮されたＢ細胞を、ＣＤ４０を介して活性化した。共培養にむけて、ＣＤ４０Ｌ−ＣＨＯ細胞にγ線を照射し（９６Ｇｙ）、６ウェルプレートに０．４×１０５細胞をプレーティングした。そのフィーダー細胞を３７℃で一晩接着させた。合計４ｍＬ（０．８×１０６）の単離されたＢ細胞を、γ線照射されたＣＤ４０Ｌ−ＣＨＯとともに、１００Ｕ／ｍＬの組換えヒトＩＬ−４（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）および０．５５μＭのＣｓＡ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）の存在下において３７℃で７〜１４日間共培養した。
【０１４６】
１：１のＢ細胞：ミエローマ細胞の比において、ＣｙｔｏＰｕｌｓｅ  ＣＥＥＦ−５０を用いる電気融合を介して、増殖させたＢ細胞をミエローマ融合パートナーと融合した。クローンＥ１２、Ｆ１０、Ｆ６、Ｃ５、７９Ｇ９および１００Ｃ９を、Ｋ６Ｈ６／Ｂ５ミエローマ細胞（ＡＴＣＣ）と融合し、１０％熱失活ＦＢＳ（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＫＳ，ＵＳＡ）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、０．１ｍＭ可欠アミノ酸、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、５５μＭ  ２−メルカプトエタノールおよび１×ＨＡＴ（１００μＭヒポキサンチン、０．４μＭアミノプテリンおよび１６μＭチミジンが補充されたＲＰＭＩ  １６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）が入った平底９６ウェルプレートに播種した。クローン１５４Ｇ１２を、ＣＢＦ７ミエローマ細胞（Ｇｒｕｎｏｗ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．７１，３−７；Ｎｉｅｄｂｌａ  ａｎｄ  Ｓｔｏｔｔ（１９９８）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １７（３），２９９−３０４）と融合し、１０％熱失活ヒトＡＢ血清（Ｎａｂｉ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ＦＬ，ＵＳＡ）、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０μｇ／ｍＬのゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、５０μｇ／ｍＬのトランスフェリン（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，ＳＴ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）および５μｇ／ｍＬのインスリン（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）が補充されたＩＭＤＭ（Ｇｉｂｃｏ）が入った平底９６ウェルプレートに播種した。
【０１４７】
細胞融合の後、培養液を毎週交換し、抗原反応性スクリーニングプロセスの間、ＨＡＴ選択を続けた。播種されたウェルの約９０％が、生存可能なハイブリドーマ細胞増殖を示した。弱毒化型の組換えＳＥＢ（ＳＴＥＢ）を用いるＥＬＩＳＡによって、ハイブリドーマをスクリーニングした。ＳＥＢ反応性を有するハイブリドーマクローンを、再度、ＥＬＩＳＡによって試験して、ＳＥＢには結合するが破傷風トキソイド（ＴＴ）には結合しないことを証明することによって、反応性および特異性を確かめた。クローンＥ１２、Ｆ１０、Ｆ６、Ｃ５、７９Ｇ９、１００Ｃ９および１５４Ｇ１２は、ＳＥＢと高度に反応性であったが、ＴＴとは反応性でなかった。次いで、各クローンをサブクローン化した後、ＥＬＩＳＡスクリーニングを行って、ＳＥＢ特異性が保持されていることを確かめた。
【実施例２】
【０１４８】
抗体の特異性の特徴づけ
抗ＳＥＢ抗体をさらに特徴付けるために、抗原のパネル：ＳＥＢ、ＳＴＥＢ、ＢＧＧ、ＣＡＢ、ＨＥＬ、ＴＴ、ＢＳＡ、ヒトメゾテリン、ヒトＧＭ−ＣＳＦ、ヒトムチン、ヤギＩｇＧおよびマウスＩｇＧを用いて、抗原特異性ＥＬＩＳＡを行った。
【０１４９】
ＴＰＰ  Ｉｍｍｕｎｏｍｉｎｉ  ＥＬＩＳＡプレートを、炭酸水素塩コーティング緩衝液（ｐＨ９．６）（Ｓｉｇｍａ）に溶解した、１μｇ／ｍＬのＳＴＥＢ（ＳＥＢワクチン）、０．５μｇ／ｍＬのＳＥＢ、２μｇ／ｍＬのＢＧＧ、２μｇ／ｍＬのＣＡＢ、２μｇ／ｍＬのＨＥＬ、１：５００希釈のＴＴ、１％ＢＳＡ、０．２μｇ／ｍＬのヒトメゾテリン、２μｇ／ｍＬのヒトムチン、１μｇ／ｍＬのヒトＧＭ−ＣＳＦ、２μｇ／ｍＬのヤギＩｇＧ、２μｇ／ｍＬのマウスＩｇＧで４℃において一晩コーティングすることによって、抗原特異的ＥＬＩＳＡを行った。次いで、そのプレートを洗浄緩衝液（０．５％Ｔｗｅｅｎ−２０含有）で３回洗浄し、次いで、室温で２時間、１×アッセイ緩衝液でブロッキングした。そのブロッキングしたプレートを、ハイブリドーマ上清ならびにポジティブコントロールとともに室温で１時間インキュベートした。インキュベートした後、そのプレートを洗浄し、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（１：１０，０００希釈したもの）、ＨＲＰ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（１：１０，０００希釈したもの）またはＨＲＰ標識ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（１：１０，０００希釈したもの）とともに、室温で１時間、振盪しながらインキュベートした。次いで、そのプレートを洗浄し、１ウェルあたり１００μＬのＴＭＢ基質で発色させ、５０μＬの停止溶液（１Ｍ  Ｈ２ＳＯ４）を加えることによって、その反応を停止した。発色させたプレートを、マイクロタイタープレートリーダーにおいて４５０ｎｍで読み出した。図２および図６にこれらの実験の結果を示す。
【０１５０】
図２は、抗体Ｅ１２、Ｆ１０、Ｆ６およびＣ５が、ＳＥＢを特異的に認識することを示しており、これらのパネル中の他の抗原との交差反応性がないことを示している。様々な抗体の各々に対するポジティブコントロール抗体を同時にスクリーニングした。そのポジティブコントロール抗体は、以下のとおりである：マウスＩｇＧ：ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｍｅｄｉａ，ＰＡ）；ヤギＩｇＧ：ロバ抗ヤギＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，）；ＢＳＡ，ドナー血清（研究室内で調製したもの）；ＴＴ，ドナー血清（研究室内で調製したもの）；ＨＥＬ，ウサギ抗ＨＥＬ（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）；ＣＡＢ，マウス抗ニワトリ卵アルブミン（Ｓｉｇｍａ）；ＢＧＧ，ウサギ抗ウシＩｇＧ（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ）；メゾテリン（抗メゾテリン、研究室内で調製したもの）；ＧＭ−ＣＳＦ（抗ＧＭ−ＣＳＦ、研究室内で調製したもの）。
【０１５１】
図６は、抗体１００Ｃ９および７９Ｇ９が、ＳＥＢおよびＳＥＢのワクチン変異体であるＳＴＥＢを認識することを示している。これらの抗体は、このパネル中の他の抗原との交差反応性がないと証明された。
【実施例３】
【０１５２】
抗体のアイソタイプの特徴づけ
抗ヒトＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＭ、ＬｋおよびＬｌを用いる標準的なＥＬＩＳＡによって、各抗体サブクローンのアイソタイプを判定した。ＴＰＰ  Ｉｍｍｕｎｏｍｉｎｉ  ＥＬＩＳＡプレートを、炭酸水素塩コーティング緩衝液（ｐＨ  ９．６）（Ｓｉｇｍａ）に溶解した２．５μｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトＩｇＧ＋Ｍ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ製）で４℃において一晩コーティングすることによって、アイソタイプＥＬＩＳＡを行った。次いで、そのプレートを、洗浄緩衝液（０．５％Ｔｗｅｅｎ−２０含有）で３回洗浄し、次いで、室温で２時間、１×アッセイ緩衝液でブロッキングした。そのブロッキングしたプレートをハイブリドーマ上清とともに室温で１時間、インキュベートした。インキュベートした後、そのプレートを洗浄し、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃγ（１：１０，０００希釈したもの、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ製）、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＭ  ５μ（１：１０，０００希釈したもの、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ製）、ＨＲＰ標識マウス抗ヒト軽鎖κ（１：１０，０００希釈したもの、ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ製）またはＨＲＰ標識マウス抗ヒト軽鎖λ（１：１０，０００希釈したもの、ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ製）とともに室温で１時間、振盪しながらインキュベートした。次いで、そのプレートを洗浄し、１ウェルあたり１００μＬのＴＭＢ基質で発色させ、５０μＬの停止溶液（１Ｍ  Ｈ２ＳＯ４）を加えることによって、その反応を停止した。発色させたプレートを、マイクロタイタープレートリーダーにおいて４５０ｎｍで読み出した。その結果を図３および図５に示す。
【０１５３】
図３は、抗体Ｅ１２、Ｆ１０、Ｆ６およびＣ５が、ＩｇＭ抗体であることを示している。抗体Ｆ１０は、カッパー軽鎖を有し、抗体Ｅ１２、Ｆ６およびＣ５は、ラムダ軽鎖を有する。図５は、抗体７９Ｇ９および１００Ｃ９が、ＩｇＧであることを示している。抗体７９Ｇ９は、カッパー軽鎖を有し、抗体１００Ｃ９は、ラムダ軽鎖を有する。
【実施例４】
【０１５４】
ＳＥＢ媒介性ＰＢＭＣ増殖の抗体による阻害
健常ドナー由来のヒトＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離によって白血球パックから得た。細胞を完全ＲＰＭＩ中で３回洗浄した。ＰＢＭＣを、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ  Ｌ−グルタミンおよび１％ペニシリン−ストレプトマイシンが補充されたＲＰＭＩ１６４０（すべてＧｉｂｃｏから購入）中に１０６／ｍＬとなるように再懸濁した。ＳＥＢ（Ｔｏｘｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｓａｒａｓｏｔａ，ＦＬ）が入った９６ウェル平底プレートのウェルに、１００マイクロリットル（１０５細胞）を加えた。
【０１５５】
ＳＥＢに対する用量反応曲線を確立することにより、中和研究にとって適切なトキシン濃度を決定した。中和活性を評価するために、１００μＬのＳＥＢ（５０ｐｇ／ｍＬ）をＳＥＢ反応性ヒトＢ細胞ハイブリドーマからの培養上清とともに３７℃で１時間インキュベートした後、ＰＢＭＣを加えた。マウス抗ＳＥＢモノクローナル抗体クローンＳ５（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．，Ｃｏｎｃｏｒｄ，ＭＡ）を、ＳＥＢ媒介性刺激の阻害についてのポジティブコントロールとして使用した。その培養物を３７℃で３日間インキュベートした後、さらに２４時間、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の存在下で培養した。ＥＬＩＳＡ（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）でＢｒｄＵ取り込みを測定することによって、細胞増殖を評価した。式１００−［抗ＳＥＢ  Ｉｇを含むＯ．Ｄ．／ＳＥＢのみを含むＯ．Ｄ．］×１００に従って、阻害パーセントを計算した。
【０１５６】
図４は、完全ヒトｍＡｂのＦ６、Ｅ１２およびＣ５を用いたＳＥＢ媒介性のＰＢＭＣ増殖の阻害を証明している。マウス抗ＳＥＢ抗体Ｓ５をポジティブコントロールとして同時にスクリーニングした。上記３抗体は、コントロール抗体に匹敵するレベルでＳＥＢ誘導性のＰＢＭＣ増殖を有意に阻害することができた。
【０１５７】
図７は、抗体７９Ｇ９が、ＳＥＢ媒介性のＰＢＭＣ有糸分裂誘発を阻害したことを証明している。７９Ｇ９の濃度が上がるにつれて、有糸分裂誘発の阻害パーセントが上昇した。図８は、抗体７９Ｇ９を用いたＳＥＢ媒介性のＰＢＭＣ増殖の阻害を証明している。この抗体の濃度が上がるにつれて、増殖の阻害レベルが上昇した。
【実施例５】
【０１５８】
サイトカインバイオアッセイ
上記ヒト抗体がＳＥＢ誘導性の炎症促進性サイトカインの産生を阻害する能力を、以下のとおりヒトＰＢＭＣを用いて研究した。まず、ＳＥＢ（Ｔｏｘｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）に対する用量反応曲線を決定した。新鮮ヒトＰＢＭＣを健常成人ドナーから得て、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ）で精製した。１０％熱失活ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）が補充された２００μＬのｃＩＭＤＭ培地中の約１×１０５細胞を９６ウェル平底組織培養プレート（Ｆａｌｃｏｎ  Ｌａｂｗａｒｅ）において培養し、様々な濃度のＳＥＢとともに３７℃、５％ＣＯ２において１８〜２２時間インキュベートした。培養上清をＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αでコーティングされたプレート（７５μＬ／ウェル）に移し、ＥＬＩＳＡキット（Ｒ&Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍ）を製造者のプロトコルに従って使用してアッセイした。グラフパッケージＰｒｉｓｍ４（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いてＳＥＢのＥＣ５０値を計算した。中和について研究するために、様々な濃度の抗体をＳＥＢ（４×または１×ＥＣ５０のいずれか）とともに３７℃で１時間予めインキュベートした後、細胞を加えた。ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αアッセイの感度限界は、１６ｐｇ／ｍＬであった。
【０１５９】
表２は、抗体７９Ｇ９によるＩＦＮ−γ阻害の生データを示している。２．５μｇ／ｍＬの７９Ｇ９は、検出限界未満に（ｔｏ  ｂｅｌｏｗ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）ＳＥＢ誘導性のＩＦＮ−γ産生を阻害する。図９は、変換されたデータを示しており、ここで、阻害のパーセンテージが、グラフパッケージＰｒｉｓｍ４（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて図示されている。このデータは、７９Ｇ９または１００Ｃ９が単独で、ポジティブコントロールの抗ＳＥＢマウス抗体Ｓ５と同程度か、またはそれよりも有効にＳＥＢ誘導性のＩＦＮ−γの異常な分泌を阻止することができたことを示している（０．１２５μｇ／ｍＬおよび０．０７６６５μｇ／ｍＬ  対  ０．２５１７μｇ／ｍＬというＥＣ５０）。さらに、２つの抗体７９Ｇ９および１００Ｃ９が併用されると、ＳＥＢ中和の相乗効果または相加効果が観察され、これらの抗体は、０．０１８８μｇ／ｍＬという併合ＥＣ５０を示した。図１０は、ＴＮＦ−α阻害についてのアッセイにおいて同様の結果が得られることを示している。ＩＦＮ−γについて観察されたように、７９Ｇ９および１００Ｃ９は、Ｓ５によって阻害されるレベル以上でＴＮＦ−α産生を阻害することが見出された。同様に、７９Ｇ９および１００Ｃ９に対する相乗効果または相加効果もまた、ＴＮＦ−α阻害について観察された。図１２は、ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γ阻害に対して計算されたＥＣ５０値のグラフを示している。７９Ｇ９および１００Ｃ９の相乗効果または相加効果が、このグラフに示されている。
【０１６０】
【表２】
0005412293.tif 000011
【実施例６】
【０１６１】
抗ＳＥＢ抗体の結合カイネティクスおよび抗体競合の解析
ＳＥＢを、酢酸ナトリウム緩衝液，ｐＨ５．０中、５μｇ／ｍＬという濃度に希釈し、そして１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いる標準的なアミン化学を用いて１０．８ＲＵのレベルになるように、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）３０００  Ｃｏｎｔｒｏｌソフトウェア，バージョン３．２を作動させるＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）３０００装置上に取り付けられたＣＭ５チップに結合させた。残りの活性部位を１Ｍエタノールアミンでクエンチした。対照フローセルを、ＥＤＣおよびＮＨＳを用いて活性化し、続いてＳＥＢリガンドを投与せずにエタノールアミンでクエンチすることによって、コントロールとして調製した。再生溶液として５００ｎＭの１００Ｃ９抗体および１０ｍＭのＨＣｌを用いて表面性能（ｓｕｒｆａｃｅ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ）解析をそのチップ上で行うことにより、安定な反応およびベースラインを確認した。選択された抗ＳＥＢ抗体の会合および解離を１０μＬ／分、４５μＬ／分および７０μＬ／分という流速において解析することによって、物質移動（Ｍａｓｓ  ｔｒａｎｓｆｅｒ）効果を評価した。試験された流速の範囲にわたって、速度は１０％未満しか変動しなかったことから、物質移動の限界がほとんどまたは全くないと示唆される。
【０１６２】
抗体の結合カイネティクスを解析するために、精製された抗ＳＥＢモノクローナル抗体を、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））中、１０００ｎＭ、３３３．３ｎＭ、１１１．１ｎＭ、３７．０ｎＭ、１２．３ｎＭ、４．１ｎＭ、１．４ｎＭ、０．４６ｎＭおよび０ｎＭに希釈した。はじめに対照セル、その後ＳＥＢ結合セルの上に、サンプルを３０μＬ／分の流速でランダムに注入した（注入した総体積は２５０μＬであった）。解離を３０分間観察した。各サイクル後のチップの再生は、１００μＬ／分という流速で５０μＬの１０ｍＭ  ＨＣｌを２回注入することによって行った。その後のすべてのデータ解析をＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア，バージョン４．１において行った。バルク効果および装置のノイズを除去するために、まず、ブランク注入からのデータを差し引くことによって、センサグラム（Ｓｅｎｓｏｇｒａｍ）を正規化した。解析される各抗体についてのデータを二価アナライト結合（ｂｉｖａｌｅｎｔ  ａｎａｌｙｔｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ）モデルに全体的に適合することによって、結合反応Ａ＋Ｂ＝ＡＢ（ここで、Ａは、抗ＳＥＢアナライトであり、Ｂは、ＳＥＢリガンドである）についての会合（ｋａ１）および解離（ｋｄ１）の速度定数を同時に決定した。上記相互作用についての定常状態の結合定数（ＫＤ１）を、ＫＤ１＝ｋｄ１／ｋａ１という関係によって決定した（表３）。
【０１６３】
【表３】
0005412293.tif 000012
【０１６４】
結合の競合が生じているか否かを判定するために、１μＭという濃度の抗ＳＥＢモノクローナル抗体を、リガンドが結合したチップ上に、上に記載したように注入した。この濃度がＫＤ１よりも１０倍から１００倍高かったので、すべての抗体についてこの濃度を選んだ。これらの条件下では、すべてまたはほぼすべての利用可能な結合部位が占有されるはずである。これに続いて、同じ抗体の２回目の注入を行い、平衡状態に達したことを確認した。次いで、３回目に同じではない抗体を１μＭの濃度で注入した。続いて、５０μＬの１０ｍＭ  ＨＣｌを２回注入することによってそのチップを再生した。２つ目の抗体の結合の程度（Ｒｅｑ’）を、非占有チップで達成された結合のレベル（Ｒｅｑ）と比較した。次いで、Ｒｅｑ’／Ｒｅｑの比を計算した；１に近いかまたは１に等しい比は、それらの抗体が、競合していないこと、および独立してＳＥＢに結合することを示唆し、１よりもかなり小さい比は、結合部位が著しく重複していることを示唆する（表４）。
【０１６５】
【表４】
0005412293.tif 000013
【０１６６】
表４に示される結果から、７９Ｇ９および１５４Ｇ１２は、競合せず、互いに独立して結合することができ、重複したエピトープを有していないことが示唆される。ところが、これらのデータは、１５４Ｇ１２および１００Ｃ９が、互いに高度に競合し、ゆえに重複エピトープを有することも示唆している。７９Ｇ９は、その後の１００Ｃ９の結合をわずかに阻害し、ゆえにこれらの２つの抗体は、隣接したエピトープを有している可能性がある。１００Ｃ９の解離速度が速かったこと、そしてその後の抗体の結合に対する影響を評価することが困難であったことから、１００Ｃ９を１つ目の抗体として試験しなかった。
【実施例７】
【０１６７】
ヒト抗ＳＥＢ抗体はインビトロおよびインビボにおいてＳＥＢ活性を中和する
ヒト抗ＳＥＢモノクローナル抗体７９Ｇ９および１００Ｃ９は、以下のとおり得られた、ＳＥＢに対して高度に特異的な２つの独立したヒトＩｇＧ４である。健常ドナー由来のヒトＢ細胞をＳＥＢ由来ペプチドでエキソビボにおいて免疫し、細胞パートナーに融合することにより、>２，０００個のハイブリドーマを得た。ＳＥＢ特異的ｍＡｂを分泌するクローンを、ＳＥＢでコーティングされたプレートを使用するＥＬＩＳＡ法を用いてロボット制御で同定した。ｍＡｂを分泌するリードハイブリドーマ（その特異的な結合はその後の解析によって確かめられた）をさらに増殖させ、特徴付けた。図６は、７９Ｇ９および１００Ｃ９が、精製ＳＥＢおよびＳＴＥＢ（ＵＳＡＭＲＩＩＤのワクチン候補）に特異的に結合したこと、および試験された他の無関係な精製タンパク質とは交差反応しなかったことを示している。免疫ブロット法に使用したとき、抗体は、ＳＥＢとだけ反応し、ヒト細胞可溶化物中に存在する何千ものタンパク質に対して交差反応性を示さなかった（図１１）。１００Ｃ９は、ＥＬＩＳＡで測定されたように、７９Ｇ９よりも強く結合する（データ示さず）。
【０１６８】
インビボにおいて７９Ｇ９および１００Ｃ９の生物学的活性を測定するために、Ｂａｌｂ／ＣマウスにＳＥＢを負荷し、そして７９Ｇ９単独または１００Ｃ９との併用で処置した。このモデルにおいて、マウスは、このトキシンに対して全く感受性でないので、この動物のＳＥＢに対する応答を増大させるためにリポ多糖類（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅ）（ＬＰＳ）を注射する必要がある。このＳＥＢ負荷は、約１０（研究１）または２５（研究２）という５０％致死量（ＬＤ５０）に相当する、すなわち２〜５μｇのＳＥＢ／マウスを腹腔内に送達した。インビトロのデータに基づいて、約１００：１という抗体：ＳＥＢのモル比が、十分であると推定され（抗体およびＳＥＢの分子量は、それぞれ約１５０ｋＤおよび３０ｋＤである）、ゆえに、抗体の用量は、１ｍｇ／マウスを超えなかった（１，０００μｇ抗体：２μｇ  ＳＥＢ：５［重量の差］＝１００）。研究１（表５）において、未処置群では生存マウスがいなかった（４匹中０匹）のに対し、１００：１という７９Ｇ９：ＳＥＢのモル比によって、１００％のマウス（５匹中５匹）が保護された。ＳＥＢのみまたはＬＰＳのみでは、死に至らなかった。
【０１６９】
【表５】
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【０１７０】
研究２では、ＳＥＢ曝露を２５ＬＤ５０に増加させた（表６）。処置なしまたはコントロールヒトＩｇＧは、ＳＥＢ毒性からマウスを救済できなかった。対照的に、マウスを４０：１という７９Ｇ９：ＳＥＢ比の７９Ｇ９のみ（１ｍｇ）で処置したか、またはちょうど８：１という併用抗体：ＳＥＢ比の７９Ｇ９と１００Ｃ９との併用（各０．１ｍｇ）で処置したとき、５匹中３匹のマウスが、ＳＥＢ曝露に対して生存した。この併用では、４０：１（各抗体０．５ｍｇ）という抗体：ＳＥＢ比を使用したとき、１００％の生存（５匹中５匹のマウス）がもたらされた。
【０１７１】
【表６】
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【実施例８】
【０１７２】
完全ヒト抗ＳＥＢ抗体Ｆ１０、７９Ｇ９および１００Ｃ９をコードするヌクレオチド配列およびアミノ酸配列
完全ヒト抗ＳＥＢ抗体に対するヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を標準的な分子生物学的方法によって得た。簡潔には、Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を製造者の指示に従って使用してハイブリドーマＦ１０、７９Ｇ９および１００Ｃ９から全ＲＮＡを単離した。そのメッセージを、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造者の指示に従って使用してｃＤＮＡに合成した。
【０１７３】
軽鎖および重鎖の可変領域を増幅するために、Ｈｅｒｃｕｌａｓｅ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を用いてＰＣＲ反応を行った。各抗体に対する重鎖および軽鎖の増幅に用いられるプライマーを下記の表７に示す。
【０１７４】
【表７】
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0005412293.tif 000017
上表では、Ｒ＝ＡまたはＧ；Ｂ＝ＣまたはＧまたはＴ；Ｗ＝ＡまたはＴ；Ｓ＝ＣまたはＧ；Ｄ＝ＡまたはＧまたはＴ；Ｈ＝ＡまたはＣまたはＴ；Ｙ＝ＣまたはＴである。
【０１７５】
ＰＣＲ産物をｐＣＲ４−ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｍａｃｈ１細胞に形質転換し、そして、形質転換体をＬＢ−カナマイシンプレート上で選択した。ＰＣＲ増幅に使用したものと同じプライマー対を用いて、挿入配列についてコロニーをスクリーニングし、各々４つの陽性コロニーを用い、ＴｅｍｐｌｉＰｈｉ試薬（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してＤＮＡ配列決定用の鋳型ＤＮＡを作製した。
【０１７６】
配列ＩＤ番号１および２のプライマーを使用し、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＤＴＣＳシークエンシング試薬を用いて、ＤＮＡ挿入配列を配列決定した後、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＣＥＱ２０００においてデータを取得し、解析した。その軽鎖にリーダーペプチド配列を付加するために、陽性クローンを、配列ＩＤ番号１７および１８（１００Ｃ９に対して）、ならびに配列ＩＤ番号２２および２４（７９Ｇ９に対して）のプライマーを使用し、Ｈｅｒｃｕｌａｓｅ  ＤＮＡポリメラーゼを用いて再度増幅した。リーダーペプチド配列を含む完全長重鎖を作製するために、配列ＩＤ番号１９および２０（１００Ｃ９に対して）、ならびに配列ＩＤ番号２５および２６（７９Ｇ９に対して）のプライマーを使用し、鋳型として元のｃＤＮＡを用いてＰＣＲを行った。得られたＰＣＲ産物をＴＡクローニングし、Ｍａｃｈ１細胞に形質転換し、上に記載したように陽性クローンを同定した。
【０１７７】
配列ＩＤ番号１、２、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１９および２０（１００Ｃ９に対して）、ならびに配列ＩＤ番号１、２、１１、１２、１３、１４および１５（７９Ｇ９に対して）のプライマーを使用し、ＴｅｍｐｌｉＰｈｉ試薬を用いて作製された鋳型ＤＮＡを用いて、完全長重鎖ｃＤＮＡを配列決定した。完全長重鎖可変領域について得られたＤＮＡ配列は、以下のとおりである：Ｆ１０（配列ＩＤ番号２９）；１００Ｃ９（配列ＩＤ番号２５０）；７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号２０１）；７９Ｇ９（配列ＩＤ番号２３１）。７９Ｇ９に対する重鎖核酸配列は、７９Ｇ９＋に対する、訂正された核酸配列であると指摘されるべきである（図１７）。完全長軽鎖可変領域について得られたＤＮＡ配列は、以下のとおりである：Ｆ１０（配列ＩＤ番号１７３）；１００Ｃ９（配列ＩＤ番号２４８）；７９Ｇ９（配列ＩＤ番号１８５）。重鎖核酸配列から得られる予測アミノ酸配列は、以下のとおりである：Ｆ１０（配列ＩＤ番号３０）；１００Ｃ９（配列ＩＤ番号２５１）；７９Ｇ９＋（配列ＩＤ番号１８８）；７９Ｇ９（配列ＩＤ番号２３２）。軽鎖核酸配列から得られる予測アミノ酸配列は、以下のとおりである：Ｆ１０（配列ＩＤ番号２８）；１００Ｃ９（配列ＩＤ番号２４９）；７９Ｇ９（配列ＩＤ番号１８６）。
【０１７８】
これらの抗体の各々に対する核酸配列およびアミノ酸配列は、図１３Ａ〜図１３Ｎに示されている。配列の下線部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表している。配列の太字領域は、ＣＤＲを強調している。影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。図１４Ａ〜図１４Ｎは、抗体Ｆ１０、１００Ｃ９および７９Ｇ９のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域に対する配列を提供している。
【０１７９】
ＶＨおよびＶＬのＣＤＲ３領域配列は、ハイブリドーマＣ５およびＦ６について追加として得られた。Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造者の指示に従って使用してハイブリドーマＣ５およびＦ６から全ＲＮＡを単離した。ｃＤＮＡを、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造者の指示に従って使用して合成した。軽鎖および重鎖の可変領域を増幅するために、Ｈｅｒｃｕｌａｓｅ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用い、軽鎖に対してはＭｏｒｐｈｏｔｅｋプライマー＃８８５（配列ＩＤ番号８）および＃９００（配列ＩＤ番号１０）、ならびに重鎖に対しては＃９７４（配列ＩＤ番号４）および＃８８３（配列ＩＤ番号３）を使用してＰＣＲ反応を行った。ＰＣＲ産物をｐＣＲ４−ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｍａｃｈ１細胞に形質転換し、そして形質転換体をＬＢカナマイシンプレート上で選択した。上と同じプライマー対を用いて、挿入配列についてコロニーをスクリーニングし、各々４つの陽性コロニーを用い、ＴｅｍｐｌｉＰｈｉ試薬（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してＤＮＡ配列決定用の鋳型ＤＮＡを作製した。Ｍｏｒｐｈｏｔｅｋプライマー＃３９０（配列ＩＤ番号１）および＃３９１（配列ＩＤ番号２）を使用し、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＤＴＣＳシークエンシング試薬を用いて、ＤＮＡ挿入配列を配列決定した後、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＣＥＱ２０００においてデータを取得し、解析した。予測されるＣＤＲ３翻訳アミノ酸配列を下記の表８に示す。
【０１８０】
【表８】
0005412293.tif 000018
【実施例９】
【０１８１】
ヒトＩｇＧ抗ＳＥＢ抗体１５４Ｇ１２のクローニングおよび配列決定
ヒトＩｇＧ抗ＳＥＢ抗体１５４Ｇ１２に対するヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を標準的な分子生物学的方法によって得た。Ｔｒｉｚｏｌ（登録商標）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造者の指示に従って使用してハイブリドーマ１５４Ｇ１２から全ＲＮＡを単離した。Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造者の指示に従って用いて、単離された全ＲＮＡから１５４Ｇ１２  ｃＤＮＡを合成した。
【０１８２】
軽鎖および重鎖の核酸配列を増幅するために、Ｈｅｒｃｕｌａｓｅ（登録商標）ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用い、軽鎖に対してはプライマー＃１５７８（配列ＩＤ番号２３８）および＃１５８２（配列ＩＤ番号２３９）、ならびに重鎖に対しては＃１５８４（配列ＩＤ番号２６５）および＃１５７７（配列ＩＤ番号２６４）（表７）を使用してＰＣＲを行った。両方の鎖の増幅のための５’プライマーには、真核生物の発現用のリーダーペプチドが含まれている。
【０１８３】
得られたＰＣＲ産物をｐＣＲ４−ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｍａｃｈ１細胞に形質転換し、ＬＢカナマイシン寒天プレート上にプレーティングし、そしてカナマイシン耐性について選択した。軽鎖に対してはプライマー＃１５７８（配列ＩＤ番号２３８）および＃１５８２（配列ＩＤ番号２３９）、ならびに重鎖に対しては＃１５８４（配列ＩＤ番号２６５）および＃１５７７（配列ＩＤ番号２６４）（表７）を用いて、挿入配列についてコロニーをスクリーニングした。各々４つの陽性コロニーを用い、ＴｅｍｐｌｉＰｈｉ試薬（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してＤＮＡ配列決定用の鋳型ＤＮＡを作製した。
【０１８４】
プライマー＃１３２１（配列ＩＤ番号２３５）、１４６１（配列ＩＤ番号２３６）、１５００（配列ＩＤ番号１６）、１５５１（配列ＩＤ番号１８）および１５５２（配列ＩＤ番号１９）（表７）を使用し、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＤＴＣＳシークエンシング試薬を用いて、軽鎖ＤＮＡ挿入配列を配列決定した後、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＣＥＱ２０００においてデータを取得し、解析した。プライマー＃９９６（配列ＩＤ番号２６）、１０１５（配列ＩＤ番号２３３）、１０１７（配列ＩＤ番号１１）、１０１８（配列ＩＤ番号１２）、１０１９（配列ＩＤ番号１３）、１０２０（配列ＩＤ番号２３４）、１０４０（配列ＩＤ番号１５）および１５３０（配列ＩＤ番号２３７）（表７）を用い、ＴｅｍｐｌｉＰｈｉ試薬を用いて作製された鋳型ＤＮＡを使用して、完全長１５４Ｇ１２重鎖ｃＤＮＡを配列決定した。
【０１８５】
上記抗体に対する核酸配列およびアミノ酸配列を図１３Ｏ〜図１３Ｒに提供し、ここで、これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、可変ドメインを示している。これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調している。図１４Ｏ〜図１４Ｒは、この抗体のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域に対する核酸配列およびアミノ酸配列を提供している。
【実施例１０】
【０１８６】
コドン最適化完全ヒトＩｇＧ抗ＳＥＢ抗体７９Ｇ９、１００Ｃ９および１５４Ｇ１２の開発
完全ヒトＩｇＧ抗ＳＥＢ抗体７９Ｇ９、１００Ｃ９および１５４Ｇ１２の重鎖および／または軽鎖に対する完全なオープンリーディングフレームを、コドン使用頻度最適化のためにＧｅｎｅＡｒｔ  ＡＧ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に付託した。最適化された型の３つすべての抗体（重鎖および軽鎖）を配列決定した。表７に列挙された以下のクローン特異的シークエンシングプライマーを用いて、軽鎖および重鎖ＤＮＡ挿入配列を配列決定した：７９Ｇ９軽鎖−＃１７３４（配列ＩＤ番号２４４）および＃１７３５（配列ＩＤ番号２４５）；１００Ｃ９および１５４Ｇ１２軽鎖−＃１７３６（配列ＩＤ番号２４６）および＃１７３７（配列ＩＤ番号２４７）；７９Ｇ９、１００Ｃ９および１５４Ｇ１２重鎖−＃１７３０（配列ＩＤ番号２４０）、＃１７３１（配列ＩＤ番号２４１）、＃１７３２（配列ＩＤ番号２４２）および＃１７３３（配列ＩＤ番号２４３）。Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＤＴＣＳシークエンシング試薬を用いて配列決定を行った後、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＣＥＱ２０００においてデータを取得し、解析した。
【０１８７】
これらの抗体に対する核酸配列を図１５に提供し、ここで、これらの配列の太字領域は、ＣＤＲを強調しており、下線部分は、ＰＣＲによって付加されたリーダー配列を表しており、影がつけられた領域は、抗体可変ドメインを示している。図１６は、これらの抗体のＣＤＲ領域およびＦＷＲ領域に対する核酸配列を提供している。
【実施例１１】
【０１８８】
ＳＥＢ誘導性のＴ細胞サイトカイン産生の抗ＳＥＢ抗体媒介性の阻害の評価
ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を用いて、上記抗ＳＥＢ抗体がＳＥＢ誘導性のＴ細胞サイトカイン産生を阻害する能力を測定し、それらのインビトロにおけるＥＣ５０値を測定した。約１×１０５個のＰＢＭＣを、９６ウェル平底組織培養プレート中、３７℃、５％ＣＯ２において培養した。４×濃度の抗ＳＥＢ抗体７９Ｇ９、１５４Ｇ１２またはそれらの混合物をＳＥＢ（４×そのインビトロＥＤ５０）とともに１時間インキュベートした。次いで、その混合物を上記ＰＢＭＣ（抗ＳＥＢ抗体とＳＥＢの両方に対する１×最終濃度）に加え、１８〜２２時間インキュベートした。サイトカインの産生が生じているか否かを判定するために、上清を、抗ＩＦＮ−γおよび抗ＴＮＦ−αを吸収させたＥＬＩＳＡプレートに移し、ＥＬＩＳＡキット（Ｒ&Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍ）を製造者が推奨する手順に従って使用してアッセイした。Ｐｒｉｓｍ４（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて抗ＳＥＢ抗体のＥＣ５０の計算を行った。ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αのＥＬＩＳＡの感度限界は、１６ｐｇ／ｍＬである。結果を表９に示す。
【０１８９】
【表９】
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【実施例１２】
【０１９０】
ＳＥＢ関連トキシンに対するＳＥＢ特異的抗体７９Ｇ９、１００Ｃ９および１５４Ｇ１２の反応性
抗体７９Ｇ９、１００Ｃ９および１５４Ｇ１２のＳＥＢ特異性を測定するために、これらの抗体を、ＳＥＢ関連ブドウ球菌エンテロトキシンのＳＥＡ、ＳＥＤ、ＳＥＣ１、ＳＥＣ２およびＴＳＳＴ−１；連鎖球菌性の発熱性外毒素ＳＰＥ−Ａ、ＳＰＥ−Ｂ（各々、Ｔｏｘｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入）；および破傷風トキソイド（ＴＴ，Ｃｙｌｅｘ  Ｉｎｃ．から購入）に対する交差反応性について調べた。上記トキシンの各々を、コーティング緩衝液（５０ｍＭ炭酸塩−炭酸水素塩，ｐＨ９．４（Ｓｉｇｍａ））中、０．５μｇ／ｍＬに希釈し、４℃で一晩、ＥＬＩＳＡプレート上に吸収させた。そのＥＬＩＳＡプレートを、室温において２時間、アッセイ緩衝液（１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）および０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）含有のＰＢＳ（ＣｅｌｌＧｒｏ））でブロッキングした。そのＥＬＩＳＡプレートを洗浄緩衝液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０含有のＰＢＳ）で１回洗浄した。精製抗体７９Ｇ９、１００Ｃ９および１５４Ｇ１２；コントロールマウス抗ＴＳＳＴ−１（Ｈｙｃｕｌｔ）；ならびにコントロールマウス抗ＴＴ（Ａｂｃａｍ）（各々２．５μｇ／ｍＬの濃度）を１ウェルあたり１００μＬでそのＥＬＩＳＡプレートに移し、室温で１時間インキュベートした。続いて、プレートを４回洗浄した。抗体７９Ｇ９、１００Ｃ９および１５４Ｇ１２については、結合緩衝液中、１：１０，０００希釈された、１ウェルあたり１００μＬの西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体化ヤギ抗ヒトＩｇＧ＋Ｍ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を加えることによって抗体結合を測定し、一方、コントロール抗体を検出するためには、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体化ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）を用いた。そのＥＬＩＳＡプレートに加えたら、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体化抗体を室温で１時間インキュベートした。プレートを４回洗浄し、そしてＳｕｒｅＢｌｕｅ基質（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ  &  Ｐｅｒｒｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を１０分間加えた（１００μＬ／ウェル）。１Ｎ硫酸（５０μＬ／ウェル）を加えることによって反応を停止させ、吸光度を４５０ｎｍで測定した。結果を図１８に示す。
【０１９１】
抗体産生細胞の生物学的寄託：本明細書中に提供される詳細な説明および記載された例と一致して、本発明の抗体産生細胞の例をＡｍｅｒ．Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔ．Ｃｏｌｌ．（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ２０１１０−２２０９）に寄託した。抗体１００Ｃ９および７９Ｇ９を産生するハイブリドーマ細胞株を２００７年１月３日に寄託し、それぞれＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−８１１５およびＰＴＡ−８１１６が割り当てられた。さらに、抗体Ｆ１０、Ｆ６、Ｅ１２、Ｃ５および１５４Ｇ１２を産生する細胞を、２００７年１２月１９日に寄託し、それぞれＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−８８４９、ＰＴＡ−８８４８、ＰＴＡ−８８４７、ＰＴＡ−８８４６、およびＰＴＡ−８８５０が割り当てられている。
【０１９２】
本発明は、上に記載および例示された実施形態に限定されないが、添付の請求項の範囲内の変更および改変を行うことができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１３Ｆ】
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【図１３Ｇ】
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【図１３Ｈ】
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【図１３Ｉ】
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【図１３Ｊ】
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【図１３Ｋ】
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【図１３Ｌ】
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【図１３Ｍ】
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【図１３Ｎ】
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【図１３Ｏ】
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【図１３Ｐ】
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【図１３Ｑ】
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【図１３Ｒ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１４Ｅ】
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【図１４Ｆ】
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【図１４Ｇ】
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【図１４Ｈ】
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【図１４Ｉ】
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【図１４Ｊ】
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【図１４Ｋ】
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【図１４Ｌ】
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【図１４Ｍ】
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【図１４Ｎ】
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【図１４Ｏ】
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【図１４Ｐ】
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【図１４Ｑ】
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【図１４Ｒ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１５Ｅ】
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【図１５Ｆ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１６Ｄ】
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【図１６Ｅ】
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【図１６Ｆ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８】
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【配列表】
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