(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ia：
【化１】
0005390626.tif 000066
[式中、
Ｌは、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)２−３−、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)２ＮＲ５ｂ−、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)２Ｓ−、−ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)−および−ＮＲ５ａＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２−から選択され；ここで、Ｒ５ａおよびＲ５ｂは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；
Ｒ１は、チオフェニル、フラニル、１Ｈ−ベンゾイミダゾリル、イソキノリニル、１Ｈ−イミダゾピリジニル、ベンゾチオフェニル、ピリミジニル、ピリジニル、１Ｈ−イミダゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、１Ｈ−ピロリルおよびチアゾリルから選択され；ここで、Ｒ１のチオフェニル、フラニル、１Ｈ−ベンゾイミダゾリル、イソキノリニル、１Ｈ−イミダゾピリジニル、ベンゾチオフェニル、ピリミジニル、ピリジニル、１Ｈ−イミダゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、１Ｈ−ピロリルまたはチアゾリルは、所望によりシアノ、ヒドロキシ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ、ハロ置換Ｃ１−４アルキル、−Ｓ(Ｏ)０−２Ｒ８ａおよび−Ｃ(Ｏ)ＯＲ８ａから独立して選択される１〜３個の基によって置換されていてもよく；ここで、Ｒ８ａは、水素およびＣ１−４アルキルから選択され；
Ｒ２は、−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ６ａＲ６ｂ、−ＮＲ６ａＣ(Ｏ)ＮＲ６ｂＲ６ｃ、フェニル、１Ｈ−ピロロピリジン−３−イル、１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−５−イル、１Ｈ−インドリル、チオフェニル、ピリジニル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾリル、２−オキソイミダゾリジニル、１Ｈ−ピラゾリル、２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾリルおよび１Ｈ−インダゾリルから選択され；ここで、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂおよびＲ６ｃは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；ここで、Ｒ２のフェニル、１Ｈ−ピロロピリジン−３−イル、１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−５−イル、１Ｈ−インドリル、チオフェニル、ピリジニル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾリル、２−オキソイミダゾリジニル、１Ｈ−ピラゾリル、２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾリルまたは１Ｈ−インダゾリルは、所望によりヒドロキシ、ハロ、メチル、メトキシ、アミノ、−Ｏ(ＣＨ２)２ＮＲ７ａＲ７ｂ、−ＯＳ(Ｏ)２ＮＲ７ａＲ７ｂおよび−ＮＲ７ａＳ(Ｏ)２Ｒ７ｂから独立して選択される１〜３個の基で置換されており；ここで、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキルおよびビフェニルから選択され；
Ｒ４は、Ｃ１−１０アルキル、プロパ−１−エン−２−イル、シクロヘキシル、シクロプロピル、２−(２−オキソピロリジン−１−イル)エチル、オキセタン−３−イル、ベンズヒドリル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イルおよびベンジルから選択され；ここで、当該アルキル、シクロプロピル、シクロヘキシル、２−(２−オキソピロリジン−１−イル)エチル、オキセタン−３−イル、ベンズヒドリル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イルまたはベンジルは、所望によりヒドロキシ、Ｃ１−４アルキルおよびハロ置換Ｃ１−４アルキルから独立して選択される１〜３個の基で置換されていてもよい。]
の化合物またはその塩。
【請求項２】
Ｒ１が、チオフェン−２−イル、チオフェン−３−イル、フラン−３−イル、１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−１−イル、イソキノリン−４−イル、１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン−１−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ピリミジン−５−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−イミダゾール−１−イル、ピラジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリダジン−４−イル、１Ｈ−ピロール−２−イルおよびチアゾール−５−イルから選択され；ここで、Ｒ１のチオフェン−２−イル、チオフェン−３−イル、フラン−３−イル、１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−１−イル、イソキノリン−４−イル、１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン−１−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ピリミジン−５−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−イミダゾール−１−イル、ピラジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリダジン−４−イル、１Ｈ−ピロール−２−イルまたはチアゾール−５−イルは、所望によりシアノ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ、ハロ置換Ｃ１−４アルキル、−Ｓ(Ｏ)０−２Ｒ８ａおよび−Ｃ(Ｏ)ＯＲ８ａから独立して選択される１〜３個の基によって置換されていてもよく；ここで、Ｒ８ａは、水素およびＣ１−４アルキルから選択され；
Ｒ２が、−ＮＲ６ａＣ(Ｏ)ＮＲ６ｂＲ６ｃ、フェニル、１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−３−イル、１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−５−イル、１Ｈ−インドール−３−イル、チオフェン−３−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル、２−オキソイミダゾリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イルおよび１Ｈ−インダゾール−３−イルから選択され；ここで、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂおよびＲ６ｃは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；ここで、Ｒ２のフェニル、１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−３−イル、１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−５−イル、１Ｈ−インドール−３−イル、チオフェン−３−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル、２−オキソイミダゾリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イルまたは１Ｈ−インダゾール−３−イルは、所望によりヒドロキシ、ハロ、メチル、メトキシ、アミノ、−ＯＳ(Ｏ)２ＮＲ７ａＲ７ｂおよび−ＮＲ７ａＳ(Ｏ)２Ｒ７ｂから独立して選択される１〜３個の基で置換されており；ここで、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；
Ｒ４が、イソプロピル、メチル、エチル、プロパ−１−エン−２−イル、イソブチル、シクロヘキシル、ｓｅｃ−ブチル、(Ｓ)−ｓｅｃ−ブチル、(Ｒ)−ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシプロパン−２−イル、(Ｓ)−１−ヒドロキシプロパン−２−イル、(Ｒ)−１−ヒドロキシプロパン−２−イル、ノナン−２−イル、２−(２−オキソピロリジン−１−イル)エチル、オキセタン−３−イル、ベンズヒドリル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イルおよびベンジルから選択され；ここで、当該シクロヘキシル、２−(２−オキソピロリジン−１−イル)エチル、オキセタン−３−イル、ベンズヒドリル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イルまたはベンジルは、所望によりＣ１−４アルキルおよびハロ置換Ｃ１−４アルキルから独立して選択される１〜３個の基で置換されていてもよい、請求項１に記載された化合物。
【請求項３】
Ｌが、−ＮＨ(ＣＨ２)２−３−、−ＮＨ(ＣＨ２)２ＮＨ−、−ＮＨ(ＣＨ２)２Ｓ−、−ＮＨＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２−および−ＮＨＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)−から選択される、請求項１または２に記載された化合物。
【請求項４】
Ｌが、−ＮＨ(ＣＨ２)２−である、請求項１または２に記載された化合物。
【請求項５】
Ｒ２が、フェニル、１Ｈ−インドール−３−イル、チオフェン−３−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル、２−オキソイミダゾリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イルおよび２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イルから選択され；ここで、Ｒ２のフェニル、１Ｈ−インドール−３−イル、チオフェン−３−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル、２−オキソイミダゾリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イルまたは２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イルが、所望によりヒドロキシ、メトキシ、メチル、ハロおよびアミノで置換されている、請求項１ないし４の何れか１項に記載された化合物。
【請求項６】
Ｒ３が、水素、メチルおよびビフェニルから選択され；
Ｒ４が、イソプロピル、メチル、エチル、プロパ−１−エン−２−イル、イソブチル、シクロヘキシル、ｓｅｃ−ブチル、(Ｓ)−ｓｅｃ−ブチル、(Ｒ)−ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシプロパン−２−イル、(Ｓ)−１−ヒドロキシプロパン−２−イル、(Ｒ)−１−ヒドロキシプロパン−２−イルおよびノナン−２−イルから選択される、請求項１ないし５の何れか１項に記載された化合物。
【請求項７】
化合物が、式Ia
【化２】
0005390626.tif 000067
[式中、
Ｌは、−ＮＨ(ＣＨ２)２−であり；
Ｒ１は、チオフェン−２−イル、チオフェン−３−イル、フラン−３−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ピリミジン−５−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−イミダゾール−１−イル、ピラジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリダジン−４−イル、１Ｈ−ピロール−２−イルおよびチアゾール−５−イルから選択され；ここで、Ｒ１のチオフェン−２−イル、チオフェン−３−イル、フラン−３−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ピリミジン−５−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−イミダゾール−１−イル、ピラジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリダジン−４−イル、１Ｈ−ピロール−２−イルまたはチアゾール−５−イルは、所望によりシアノ、ヒドロキシ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ、ハロ置換Ｃ１−４アルキル、−Ｓ(Ｏ)０−２Ｒ８ａおよび−Ｃ(Ｏ)ＯＲ８ａから独立して選択される１〜３個の基によって置換されていてもよく；ここで、Ｒ８ａは、水素およびＣ１−４アルキルから選択され；
Ｒ２は、フェニル、１Ｈ−インドール−３−イル、チオフェン−３−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル、２−オキソイミダゾリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イルから選択され；ここで、Ｒ２のフェニル、１Ｈ−インドール−３−イル、チオフェン−３−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル、２−オキソイミダゾリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イルまたは２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イルは、所望によりヒドロキシ、ハロ、メトキシ、アミノ、−ＯＳ(Ｏ)２ＮＲ７ａＲ７ｂおよび−ＮＲ７ａＳ(Ｏ)２Ｒ７ｂから独立して選択される１〜３個の基で置換されており；ここで、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキルおよびビフェニルから選択され；
Ｒ４は、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシプロパン−２−イル、オキセタン−３−イル、ベンズヒドリル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イルおよびベンジルから選択され；ここで、当該オキセタン−３−イル、ベンズヒドリル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イルまたはベンジルは、所望によりＣ１−４アルキルおよびハロ置換Ｃ１−４アルキルから独立して選択される１〜３個の基で置換されていてもよい。]
の化合物である、請求項１に記載された化合物。
【請求項８】
次に示すものから選択される請求項１に記載された化合物：
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−ｓｅｃ−ブチル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−ベンズヒドリル−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(チオフェン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(４−(トリフルオロメチル)ベンジル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソブチル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−メチル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(４−メチルベンジル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(チオフェン−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−Ｎ−(４−フルオロフェネチル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(４−アミノフェネチル)−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリミジン−５−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(チオフェン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(フラン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−Ｎ−(４−フルオロフェネチル)−９−フェニル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(ノナン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−ｓｅｃ−ブチル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−４−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチン酸エチル；
４−(２−（(９−イソプロピル−２−(５−メトキシピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル)アミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(６−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(４−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチノニトリル；
４−(２−(２−(１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリダジン−４−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピラジン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(５−(メチルスルホニル)ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(４−クロロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−（(９−イソプロピル−２−(４−メチルチオフェン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル)アミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−２−メトキシフェノール；
Ｎ−[２−(６−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−[２−(５−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
１−(２−{[９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)イミダゾリジン−２−オン；
Ｎ−(２−{[９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)ピリジン−２−アミン；
９−(プロパン−２−イル)−Ｎ−[３−(１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロピル]−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−{２−[(３−メチル−１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル)スルファニル]エチル}−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
１−(２−{[２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)イミダゾリジン−２−オン；
Ｎ−[２−(５−アミノ−１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)エチル]−２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−{[２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)ピリジン−２−アミン；
２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−Ｎ−[３−(１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロピル]−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−Ｎ−[３−(３,５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロピル]−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
(２−{[２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)ウレア；
Ｎ−[２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェニル)メタン−スルホンアミド；
４−(２−(２−(ピリジン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)プロピル)フェノール；
４−(２−(９−(オキセタン−３−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
Ｎ−（２−(１Ｈ−インダゾール−３−イル)エチル）−９−イソプロピル−２−（ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−((９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル)(メチル)アミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−(１−ヒドロキシプロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェニル スルファメート；
４−(２−(２−(２−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(チアゾール−５−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−１−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(２,４−ジメチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
５−(９−ｓｅｃ−ブチル−６−(４−ヒドロキシ−３−メチルフェネチルアミノ)−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチノニトリル；
Ｎ−(２−(１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−５−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
９−イソプロピル−Ｎ−(２−(５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル)エチル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(オキセタン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(５−クロロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(５−(トリフルオロメチル)ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
５−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−９−ｓｅｃ−ブチル−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチノニトリル；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
(Ｒ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
(Ｓ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
(Ｒ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
(Ｓ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−(オキセタン−３−イル)−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチノニトリル；
(Ｒ)−４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−３−メチルフェノール；
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)ピコリノニトリル；
３−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)イソニコチノニトリル；
３−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)ピコリノニトリル；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(６−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(イソキノリン−４−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
２−クロロ−４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
３−フルオロ−４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
Ｎ−(２−(５−クロロ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(５−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−２−メチルフェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(オキセタン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
(Ｓ)−４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
(Ｒ)−４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オール；
(Ｒ)−２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オール；
(Ｓ)−２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オール；
(Ｒ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(２−(１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン−１−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(４,５−ジメチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(ピリジン−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)−１−ヒドロキシエチル)フェノール；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(６−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(５−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(プロパ−１−エン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
５−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)ピリジン−２−オール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(６−(２−(ジエチルアミノ)エトキシ)−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(２−(２−エチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(２−プロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
３−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−６−オール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(７−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(オキセタン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９−(オキセタン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(６−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(４−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(７−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(４−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−５−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(１−ヒドロキシプロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−２−メチルフェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−シクロヘキシル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(チオフェン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；および
１−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９Ｈ−プリン−９−イル)エチル)ピロリジン−２−オン；
またはそれらの塩。
【請求項９】
式
【化３】
0005390626.tif 000068
の化合物またはその塩。
【請求項１０】
式
【化４】
0005390626.tif 000069
の化合物またはその塩。
【請求項１１】
式
【化５】
0005390626.tif 000070
の化合物またはその塩。
【請求項１２】
式
【化６】
0005390626.tif 000071
の化合物またはその塩。
【請求項１３】
式
【化７】
0005390626.tif 000072
の化合物またはその塩。
【請求項１４】
式
【化８】
0005390626.tif 000073
の化合物またはその塩。
【請求項１５】
式
【化９】
0005390626.tif 000074
の化合物またはその塩。
【請求項１６】
幹細胞および前駆細胞の数をin vitroまたはex vivoで増大させる方法であって、該幹細胞をアリール炭化水素受容体および／またはアリール炭化水素受容体経路の下流エフェクターの活性および／または発現に拮抗することができる請求項１ないし１５の何れか１項に記載された化合物と接触させることを含む、方法。
【請求項１７】
幹細胞がヒトに由来するものである、請求項１６に記載された方法。
【請求項１８】
幹細胞が骨髄に由来するものである、請求項１６に記載された方法。
【請求項１９】
幹細胞が臍帯血に由来するものである、請求項１６に記載された方法。
【請求項２０】
幹細胞が造血幹細胞である、請求項１７ないし１９の何れか１項に記載された方法。
【請求項２１】
(ａ) 造血幹細胞を含む出発細胞集団を提供し、(ｂ) 造血幹細胞を増加させるのに適当な条件下で、アリール炭化水素受容体および／またはアリール炭化水素受容体経路の下流エフェクターの活性および／または発現を下方制御することができる請求項１ないし１５の何れか１項に記載された化合物の存在下、当該出発細胞集団をex vivoで培養することを含む、造血幹細胞を増加させる方法。
【請求項２２】
アリール炭化水素受容体経路の下流エフェクターが、Ｃｙｐ１Ｂ１、Ｃｙｐ１Ａ１、βカテニン、ＡＨＲＲ、ＳＴＡＴ５およびＳＴＡＴ１から選択される、請求項２１に記載された方法。
【請求項２３】
出発細胞集団が、ＣＤ３４＋細胞で富化したものである、請求項２１または２２に記載された方法。
【請求項２４】
出発細胞集団が、臍帯血細胞に由来するものである、請求項２１ないし２３の何れか１項に記載された方法。
【請求項２５】
出発細胞集団が、１単位または２単位の臍帯血単位に由来するものである、請求項２１ないし２４の何れか１項に記載された方法。
【請求項２６】
出発細胞集団が、動員された末梢血に由来するものである、請求項２１ないし２３の何れか１項に記載された方法。
【請求項２７】
出発細胞集団が、本質的に、１単位または２単位の臍帯血単位から精製されたＣＤ３４＋細胞からなる、請求項２１ないし２３の何れか１項に記載された方法。
【請求項２８】
出発細胞集団が、本質的に、ＣＤ３４抗原結合抗体フラグメントを含むアフィニティークロマトグラフィーカラムまたは磁性ビーズを用いて１単位または２単位の臍帯血単位から精製したＣＤ３４＋細胞からなる、請求項２１ないし２３の何れか１項に記載された方法。
【請求項２９】
動員された末梢血細胞が、１体の哺乳動物の対象から得られたものである、請求項２６に記載された方法。
【請求項３０】
造血幹細胞を増加させる条件が、十分量のＩＬ６、Ｆｌｔ３−Ｌ、ＴＰＯおよびＳＣＦ、ならびに請求項１ないし１５の何れか１項に記載された化合物の存在下で出発細胞集団を培養することを含む、請求項２１ないし２９の何れか１項に記載された方法。
【請求項３１】
請求項１ないし１５の何れか１項に記載された化合物を、１ｐＭ〜１００μＭの濃度で細胞培養培地中に添加する、請求項２１ないし２９の何れか１項に記載された方法。
【請求項３２】
請求項１ないし１５の何れか１項に記載された化合物を、１００ｐＭ〜１μＭの濃度で細胞培養培地中に添加する、請求項２１ないし２９の何れか１項に記載された方法。
【請求項３３】
出発細胞集団が、本質的に、１単位または２単位の臍帯血単位から精製されたＣＤ３４＋細胞からなり、かつ、出発細胞集団が、請求項１ないし１５の何れか１項に記載された化合物の存在下で、３日間から９０日間培養される、請求項２１ないし３２の何れか１項に記載された方法。
【請求項３４】
出発細胞集団が、本質的に、１単位または２単位の臍帯血単位から精製されたＣＤ３４＋細胞からなり、かつ、出発細胞集団が、請求項１ないし１５の何れか１項に記載された化合物の存在下で、７日間から３５日間培養される、請求項２１ないし３２の何れか１項に記載された方法。
【請求項３５】
請求項１ないし１５の何れか１項に記載された化合物の存在下で、ＣＤ３４＋細胞が１０〜５００００倍に増加するのに十分な時間出発細胞集団を培養する、請求項２１ないし３２の何れか１項に記載された方法。
【請求項３６】
請求項１ないし１５の何れか１項に記載された化合物、および請求項２１ないし３５の何れか１項に記載された方法に使用するための説明書、および、所望によりサイトカイン、増殖因子および細胞増殖培地の１つ以上を含む、造血幹細胞を増加させるためのキット。
【請求項３７】
１種以上のサイトカインまたは増殖因子が、ＩＬ６、Ｆｌｔ３−Ｌ、ＳＣＦおよびＴＰＯからなる群から選択される、請求項３６に記載されたキット。
【請求項３８】
請求項２１ないし３５の何れか１項に記載された方法によって得られた増加させた造血幹細胞を含む細胞集団。
【請求項３９】
哺乳動物の宿主への投与に適当な薬学的に許容される媒体に再懸濁された、請求項３８に記載された細胞集団を含む組成物。
【請求項４０】
増加させた造血幹細胞を有する細胞集団および請求項１ないし１５の何れか１項に記載された化合物を含む組成物。
【請求項４１】
増加させた造血幹細胞が１単位または２単位の臍帯血単位に由来する組成物であって、少なくとも１０５個の細胞総量を含み、細胞総量の２０〜１００％がＣＤ３４＋細胞である、請求項４０に記載された組成物。
【請求項４２】
ＣＤ３４およびＴｈｙ１マーカーを発現する細胞を総量の０.１％〜４０％；ＣＤ３４およびＣＤ４５ＲＡマーカーを発現する細胞を総量の２０〜８０％；ＣＤ３８＋である細胞を１０〜９５％；およびＣＤ１３３＋である細胞を５〜７０％含む、請求項４１に記載された組成物。
【請求項４３】
哺乳動物の対象において、造血幹細胞同種移植に使用するための、請求項３９ないし４２の何れか１項に記載された組成物。
【請求項４４】
造血機能が障害されている患者に使用するための、請求項３９ないし４３の何れか１項に記載された組成物。
【請求項４５】
遺伝性免疫不全疾患、自己免疫障害または造血障害に罹患している患者に使用するための、請求項４４に記載された組成物。
【請求項４６】
造血障害が、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性障害、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、再生不良性貧血、赤芽球癆、発作性夜間ヘモグロビン尿症、ファンコーニ貧血、重症型サラセミア、鎌状赤血球貧血、重症複合免疫不全症、ウィスコット・アルドリッチ症候群、血球貪食性リンパ組織球症および先天性代謝異常から選択される、請求項４５に記載された組成物。
【請求項４７】
静脈内注入に適切なものであって、患者に少なくとも１０４細胞/kgを注入するための量を含む、請求項３９ないし４２の何れか１項に記載された組成物。
【請求項４８】
静脈内注入に適切なものであって、患者に１０５細胞/kgないし１０９細胞/kgを注入するための量を含む、請求項３９ないし４２の何れか１項に記載された組成物。
【請求項４９】
遺伝性免疫不全疾患、自己免疫疾患および／または造血障害の処置剤であって、アリール炭化水素受容体(ＡＨＲ)および／またはＡＨＲ経路の下流エフェクターの活性および／または発現を下方制御することができる請求項１ないし１５の何れか１項に記載された化合物によって増加させた造血幹細胞を含む処置剤。
【請求項５０】
自家移植に使用されるものであり、造血障害が、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、急性骨髄性白血病、神経芽腫、胚細胞性腫瘍、自己免疫障害およびアミロイド症から選択される、請求項４９に記載された処置剤。
【請求項５１】
自己免疫障害が、全身性エリテマトーデスおよび全身性強皮症から選択される、請求項５０に記載された処置剤。
【請求項５２】
同種移植に使用されるものであり、造血障害が、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性障害、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、再生不良性貧血、赤芽球癆、発作性夜間ヘモグロビン尿症、ファンコーニ貧血、重症型サラセミア、鎌状赤血球貧血、重症複合免疫不全症、ウィスコット・アルドリッチ症候群、血球貪食性リンパ組織球症および先天性代謝異常から選択される、請求項４９に記載された処置剤。
【請求項５３】
先天性代謝異常が、ムコ多糖症、ゴーシェ病、異染性白質ジストロフィーおよび副腎白質ジストロフィーから選択される、請求項５２に記載された処置剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互引用
本出願は、米国仮特許出願第61/109,821号(2008年10月30日出願)および米国仮特許出願第61/242,765号(2009年9月15日)の優先権の利益を主張する。これらの出願の全ての開示は、言及することによって、全ての目的について、その全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明の背景
本発明の分野
本発明は、移植のために、ＣＤ３４＋細胞の数を増加させる化合物および組成物に関する。本発明は、さらに、増加させた造血幹細胞(ＨＳＣ)を含む細胞集団、および、造血細胞系および免疫系防御を再構成するために、遺伝性免疫不全疾患および自己免疫疾患および多様な造血障害を有する患者を処置するための自家移植または同種移植におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
造血幹細胞(ＨＳＣ)は、個体の生涯を通じて、その自己再生と子孫の分化のバランスを取りながら、全ての血液成分を再生することができる。造血幹細胞は、移植レシピエントにおいて、血液細胞および免疫細胞を再建する能力の結果としての治療可能性を有する。さらに、ＨＳＣは、脳、筋肉および肝臓などの、他の組織の細胞を生じる可能性を有する。ヒトの自家および同種骨髄移植法は、現在、白血病、リンパ腫および他の致死的疾患のための治療として用いられている。これらの方法において、生着に十分なＨＳＣが存在することを確実にするために、大量の幹細胞を単離しなければならない。処置に利用可能なＨＳＣの数が、臨床的制限である。
【０００４】
本発明は、造血幹細胞集団を増加させるための化合物および組成物、ならびにそれらの使用に関する。
【発明の概要】
【０００５】
本発明の概要
一つの局面において、本発明は、式Ｉ：
【化１】
0005390626.tif 000002
[式中、
Ｇ１は、ＮおよびＣＲ３から選択され；
Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は、ＣＨおよびＮから独立して選択され；ただし、Ｇ３およびＧ４の少なくとも１個がＮであり；ただし、Ｇ１およびＧ２の両方がＮとなることはない；
Ｌは、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)０−３−(ここで、０−３は、０、１、２または３を意味する。)、−ＮＲ５ａＣＨ(Ｃ(Ｏ)ＯＣＨ３)ＣＨ２−、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)２ＮＲ５ｂ−、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)２Ｓ−、−ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２−、−ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)−および−ＮＲ５ａＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２−から選択され；ここで、Ｒ５ａおよびＲ５ｂは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；
【０００６】
Ｒ１は、水素、フェニル、チオフェニル、フラニル、１Ｈ−ベンゾイミダゾリル、イソキノリニル、１Ｈ−イミダゾピリジニル、ベンゾチオフェニル、ピリミジニル、１Ｈ−ピラゾリル、ピリジニル、１Ｈ−イミダゾリル、ピロリジニル、ピラジニル、ピリダジニル、１Ｈ−ピロリルおよびチアゾリルから選択され；ここで、Ｒ１のフェニル、チオフェニル、フラニル、１Ｈ−ベンゾイミダゾリル、イソキノリニル、１Ｈ−イミダゾピリジニル、ベンゾチオフェニル、ピリミジニル、１Ｈ−ピラゾリル、ピリジニル、１Ｈ−イミダゾリル、ピロリジニル、ピラジニル、ピリダジニル、１Ｈ−ピロリルまたはチアゾリルは、所望によりシアノ、ヒドロキシ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ、ハロ置換Ｃ１−４アルキル、ハロ置換Ｃ１−４アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、−Ｃ(Ｏ)Ｒ８ａ、−Ｓ(Ｏ)０−２Ｒ８ａ、−Ｃ(Ｏ)ＯＲ８ａおよび−Ｃ(Ｏ)ＮＲ８ａＲ８ｂから独立して選択される１〜３個の基によって置換されていてもよく；ここで、Ｒ８ａおよびＲ８ｂは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；ただし、Ｒ１およびＲ３の両方が水素となることはない；
Ｒ２は、−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ６ａＲ６ｂ、−ＮＲ９ａＣ(Ｏ)Ｒ９ｂ、−ＮＲ６ａＣ(Ｏ)ＮＲ６ｂＲ６ｃ、フェニル、１Ｈ−ピロロピリジン−３−イル、１Ｈ−インドリル、チオフェニル、ピリジニル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾリル、２−オキソイミダゾリジニル、１Ｈ−ピラゾリル、２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾリルおよび１Ｈ−インダゾリルから選択され；ここで、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂおよびＲ６ｃは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；ここで、Ｒ２のフェニル、１Ｈ−ピロロピリジン−３−イル、１Ｈ−インドリル、チオフェニル、ピリジニル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾリル、２−オキソイミダゾリジニル、１Ｈ−ピラゾリル、２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾリルまたは１Ｈ−インダゾリルは、所望によりヒドロキシ、ハロ、メチル、メトキシ、アミノ、−Ｏ(ＣＨ２)ｎＮＲ７ａＲ７ｂ、−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ７ａＲ７ｂ、−ＯＳ(Ｏ)２ＮＲ７ａＲ７ｂおよび−ＮＲ７ａＳ(Ｏ)２Ｒ７ｂから独立して選択される１〜３個の基で置換されており；ここで、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；
【０００７】
Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキルおよびビフェニルから選択され；
Ｒ４は、Ｃ１−１０アルキル、プロパ−１−エン−２−イル、シクロヘキシル、シクロプロピル、２−(２−オキソピロリジン−１−イル)エチル、オキセタン−３−イル、ベンズヒドリル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イル、ベンジル、(４−ペンチルフェニル)(フェニル)メチルおよび１−(１−(２−オキソ−６,９,１２−トリオキサ−３−アザテトラデカン−１４−イル)−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル)エチルから選択され；ここで、当該アルキル、シクロプロピル、シクロヘキシル、２−(２−オキソピロリジン−１−イル)エチル、オキセタン−３−イル、オキセタン−２−イル、ベンズヒドリル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロフラン−２−イル、ベンジル、(４−ペンチルフェニル)(フェニル)メチルまたは１−(１−(２−オキソ−６,９,１２−トリオキサ−３−アザテトラデカン−１４−イル)−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル)エチルは、所望によりヒドロキシ、Ｃ１−４アルキルおよびハロ置換Ｃ１−４アルキルから独立して選択される１〜３個の基で置換されていてもよい。]
の化合物、または、当該化合物のＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、保護誘導体、個々の異性体およびそれらの異性体混合物；または塩(好ましくは薬学的に許容される塩)および溶媒和物(例えば水和物)を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノールの形態Ａの固体形態のＰＸＲＤパターンを開示している。
【図２−１２】図２〜１２は、それぞれ、４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノールの硝酸塩、メシル酸塩、トシル酸塩、塩酸塩、硫酸塩、ベシル酸塩、エシル酸塩、臭化水素酸塩、オロト酸塩、フマル酸塩およびナパジシル酸塩の固体形態のＰＸＲＤパターンを開示している。
【図１３】図１３は、４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノールの非晶質形態のＤＳＣパターンを開示している。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の詳細な説明
定義
基として、およびハロ置換アルキルおよびアルコキシなどの他の基の構成要素としての“アルキル”は、直鎖であっても分枝鎖であってもよい。例えば、アルキルは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチルなどを含む。Ｃ１−４−アルコキシは、メトキシ、エトキシなどを含む。ハロ置換アルキルは、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチルなどを含む。
【００１０】
“アリール”は、６〜１０個の環炭素原子を含む単環式または縮合二環式芳香環の集合を意味する。例えば、アリールは、フェニルであってもナフチルであってもよく、好ましくはフェニルである。“アリーレン”はアリール基から誘導される二価の基を意味する。
【００１１】
“ヘテロアリール”は、１個以上の環員が、−Ｏ−、−Ｎ＝、−ＮＲ−、−Ｃ(Ｏ)−、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−または−Ｓ(Ｏ)２−(ここで、Ｒは、水素、Ｃ１−４アルキルまたは窒素保護基である。)から選択されるヘテロ原子または部分である、アリールについて定義された通りの基である。例えば、ヘテロアリールは、ピリジル、インドリル、インダゾリル、キノキサリニル、キノリニル、ベンゾフラニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾ[１,３]ジオキソール、イミダゾリル、ベンゾ−イミダゾリル、ピリミジニル、フラニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、チエニルなどを含む。
【００１２】
“シクロアルキル”は、示された数の環原子を含む飽和または部分的に不飽和の、単環式、縮合二環式または架橋多環式環の集合を意味する。例えば、Ｃ３−１０シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどを含む。“ヘテロシクロアルキル”は、１個以上の環炭素が、−Ｏ−、−Ｎ＝、−ＮＲ−、−Ｃ(Ｏ)−、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−または−Ｓ(Ｏ)２−(ここで、Ｒは、水素、Ｃ１−４アルキルまたは窒素保護基である。)から選択される１個の部分によって置き換えられているという条件で、本明細書で定義されたシクロアルキルを意味する。例えば、Ｃ３−８ヘテロシクロアルキルは、本発明の化合物を記載するために本明細書で用いられるとき、モルホリノ、ピロリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリジニルオン(piperidinylone)、２−オキソ−ピロリジン−１−イル、１,４−ジオキサ−８−アザ−スピロ[４.５]デカ−８−イルなどを含む。
【００１３】
“ハロゲン”(またはハロ)は、好ましくはクロロまたはフルオロを表すが、ブロモまたはヨードであってもよい。
【００１４】
“造血幹細胞”(ＨＳＣ)は、本明細書で用いられるとき、自己再生し、顆粒球(例えば前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球)、赤血球(例えば網状赤血球、赤血球)、血小板(例えば、巨核芽球、血小板生成巨核球、血小板)、および単球(例えば単球、マクロファージ)を含むより成熟した血液細胞に分化する能力を有する未成熟な血液細胞を言う。ＨＳＣは、本明細書を通して、幹細胞と同義である。当技術分野で、当該細胞は、ＣＤ３４＋細胞を含むことも含まないこともあることが知られている。ＣＤ３４＋細胞は、ＣＤ３４細胞表面マーカーを発現する未成熟な細胞である。ＣＤ３４＋細胞は、上記幹細胞の性質を有する細胞の亜集団を含むと考えられる。ＨＳＣが、多能性幹細胞、多分化能幹細胞(例えばリンパ系幹細胞)および／または特定の造血系に関連づけられた幹細胞を含むことが当技術分野で周知である。特定の造血系に関連づけられた幹細胞は、Ｔ細胞系、Ｂ細胞系、樹状細胞系、ランゲルハンス細胞系および／またはリンパ組織特異的マクロファージ細胞系のものであり得る。さらに、ＨＳＣはまた、長期ＨＳＣ(ＬＴ−ＨＳＣ)および短期ＨＳＣ(ＳＴ−ＨＳＣ)を言う。ＳＴ−ＨＳＣは、ＬＴ−ＨＳＣより活性で、かつ増殖性である。しかし、ＬＴ−ＨＳＣは、制限のない自己再生を有し(すなわち、それらは成体期を通して生存する)、一方、ＳＴ−ＨＳＣは制限された自己再生を有する(すなわち、それらは限定された期間のみ生存する)。これらのＨＳＣの何れもが本明細書に記載された方法のいずれにも用いられ得る。所望により、増殖性が高く、従って速くＨＳＣおよび子孫の数が増加することから、ＳＴ−ＨＳＣが有用である。造血幹細胞は、所望により、血液製剤から得られる。血液製剤は、身体または造血器由来の細胞を含む身体の臓器から得られるものを含む。このような原料は、未分画骨髄、臍帯血、末梢血、肝臓、胸腺、リンパおよび脾臓を含む。前記の粗製または未分画血液製剤の全てが、当技術分野で既知の方法で、造血幹細胞の特徴を有する細胞について富化され得る。
【００１５】
“処置する”、“処置すること”および“処置”は、疾患および／またはその付随する症状を緩和するまたは阻止する方法を言う。
【００１６】
細胞の内容において“増加”は、当初の細胞集団から、それと同一であってもなくてもよい特有の細胞型(複数を含む)の数を増加させることを言う。増加に用いられる当初の細胞は、増加から生じた細胞と同一でなくてもよい。
【００１７】
“細胞集団”は、血液製剤または組織などの生物学的原料から単離し、１個以上の細胞に由来する真核生物の、哺乳類の、好ましくはヒトの細胞を言う。
【００１８】
“富化した”は、細胞集団の文脈において用いられるとき、１つ以上のマーカー、例えばＣＤ３４＋の存在に基づいて選択された細胞集団を言う。
【００１９】
用語“ＣＤ３４＋細胞”は、その表面でＣＤ３４マーカーを発現する細胞を言う。ＣＤ３４＋細胞は、フローサイトメトリーおよび蛍光標識抗ＣＤ３４抗体を用いて検出し、計数され得る。
【００２０】
“ＣＤ３４＋細胞で富化した”は、ＣＤ３４マーカーの存在に基づいて選択された細胞集団を意味する。従って、選択方法後の細胞集団におけるＣＤ３４＋細胞のパーセンテージは、ＣＤ３４マーカーに基づく選択工程前の当初の細胞集団におけるＣＤ３４＋細胞のパーセンテージより高い。例えば、ＣＤ３４＋細胞で富化した細胞集団において、ＣＤ３４＋細胞は、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％または少なくとも９０％の細胞を表し得る。
【００２１】
“臍帯血単位”は、単胎出産の臍帯から集められた血液を言う。
【００２２】
好ましい態様の説明
本発明は、アリール炭化水素受容体の活性および／または発現、および／または、アリール炭化水素受容体経路の下流エフェクターを下方制御することができる薬物を用いて、ＨＳＣ集団を増加させる方法および組成物に関する。
【００２３】
一つの態様において、アリール炭化水素受容体の活性および／または発現を下方制御することができる薬物は、式Ｉの化合物である。
【００２４】
一つの態様において、式Ｉの化合物についての記載は、式Ia、Ib、Ic、IdおよびIe：
【化２】
0005390626.tif 000003
[式中、
Ｌは、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)０−３−、−ＮＲ５ａＣＨ(Ｃ(Ｏ)ＯＣＨ３)ＣＨ２−、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)２ＮＲ５ｂ−、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)２Ｓ−、−ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２−、−ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)−および−ＮＲ５ａＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２−から選択され；ここで、Ｒ５ａおよびＲ５ｂは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；ここで、示されたＬ部分の右側がＲ２に結合しており、例えば：−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)０−３−Ｒ２、−ＮＲ５ａＣＨ(Ｃ(Ｏ)ＯＣＨ３)ＣＨ２−Ｒ２、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)２ＮＲ５ｂ−Ｒ２、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)２Ｓ−Ｒ２、−ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２−Ｒ２、−ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)−Ｒ２および−ＮＲ５ａＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２−Ｒ２であり；
【００２５】
Ｒ１は、水素、フェニル、チオフェン−２−イル、チオフェン−３−イル、フラン−３−イル、１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−１−イル、イソキノリン−４−イル、１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン−１−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ピリミジン−５−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−イミダゾール−１−イル、ピロリジン−１−イル、ピラジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリダジン−４−イル、１Ｈ−ピロール−２−イルおよびチアゾール−５−イルから選択され；
ここで、Ｒ１のフェニル、チオフェン−２−イル、チオフェン−３−イル、フラン−３−イル、１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−１−イル、イソキノリン−４−イル、１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン−１−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ピリミジン−５−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−イミダゾール−１−イル、ピロリジン−１−イル、ピラジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリダジン−４−イル、１Ｈ−ピロール−２−イルまたはチアゾール−５−イルは、所望によりシアノ、ヒドロキシ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ、ハロ置換Ｃ１−４アルキル、−Ｓ(Ｏ)０−２Ｒ８ａおよび−Ｃ(Ｏ)ＯＲ８ａから独立して選択される１〜３個の基によって置換されていてもよく；ここで、Ｒ８ａおよびＲ８ｂは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；ただし、Ｒ１およびＲ３の両方が水素となることはない；
【００２６】
Ｒ２は、−ＮＲ６ａＣ(Ｏ)ＮＲ６ｂＲ６ｃ、フェニル、１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−３−イル、１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−５−イル、１Ｈ−インドール−３−イル、チオフェン−３−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル、２−オキソイミダゾリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イルおよび１Ｈ−インダゾール−３−イルから選択され；ここで、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂおよびＲ６ｃは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；ここで、Ｒ２のフェニル、１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−３−イル、１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−５−イル、１Ｈ−インドール−３−イル、チオフェン−３−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル、２−オキソイミダゾリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イルまたは１Ｈ−インダゾール−３−イルは、所望によりヒドロキシ、ハロ、メトキシ、アミノ、−ＯＳ(Ｏ)２ＮＲ７ａＲ７ｂおよび−ＮＲ７ａＳ(Ｏ)２Ｒ７ｂから独立して選択される１〜３個の基で置換されており；ここで、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；
【００２７】
Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキルおよびビフェニルから選択され；
Ｒ４は、イソプロピル、メチル、エチル、プロパ−１−エン−２−イル、イソブチル、シクロヘキシル、ｓｅｃ−ブチル、(Ｓ)−ｓｅｃ−ブチル、(Ｒ)−ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシプロパン−２−イル、(Ｓ)−１−ヒドロキシプロパン−２−イル、(Ｒ)−１−ヒドロキシプロパン−２−イル、ノナン−２−イル、２−(２−オキソピロリジン−１−イル)エチル、オキセタン−３−イル、オキセタン−２−イル、ベンズヒドリル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イルおよびベンジルから選択され；ここで、当該シクロヘキシル、２−(２−オキソピロリジン−１−イル)エチル、オキセタン−３−イル、オキセタン−２−イル、ベンズヒドリル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イルまたはベンジルは、所望によりＣ１−４アルキルおよびハロ置換Ｃ１−４アルキルから独立して選択される１〜３個の基で置換されていてもよい。]
の化合物から選択される化合物である。
【００２８】
他の態様において、Ｌは、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)０−３−、−ＮＲ５ａＣＨ(Ｃ(Ｏ)ＯＣＨ３)ＣＨ２−、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)２ＮＲ５ｂ−、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)２Ｓ−、−ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２−、−ＮＲ５ａＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２−および−ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)−から選択され；ここで、Ｒ５ａおよびＲ５ｂは、水素およびメチルから独立して選択され；
Ｒ１は、水素、フェニル、チオフェン−２−イル、チオフェン−３−イル、フラン−３−イル、１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−１−イル、イソキノリン−４−イル、１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン−１−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ピリミジン−５−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−イミダゾール−１−イル、ピロリジン−１−イル、ピラジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリダジン−４−イル、１Ｈ−ピロール−２−イルおよびチアゾール−５−イルから選択され；ここで、Ｒ１のフェニル、チオフェン−２−イル、チオフェン−３−イル、フラン−３−イル、１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−１−イル、イソキノリン−４−イル、１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン−１−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ピリミジン−５−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−イミダゾール−１−イル、ピロリジン−１−イル、ピラジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリダジン−４−イル、１Ｈ−ピロール−２−イルまたはチアゾール−５−イルは、所望によりシアノ、ヒドロキシ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ、ハロ置換Ｃ１−４アルキル、−Ｓ(Ｏ)０−２Ｒ８ａおよび−Ｃ(Ｏ)ＯＲ８ａから独立して選択される１〜３個の基によって置換されていてもよく；ここで、Ｒ８ａおよびＲ８ｂは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；ただし、Ｒ１およびＲ３の両方が水素となることはない。
【００２９】
他の態様において、Ｌが−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)０−３であるとき、それは、好ましくは−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)１−３(ここで、１−３は、１、２または３である。)である。
【００３０】
他の態様において、Ｒ２は、ウレア、フェニル、１Ｈ−インドール−２−イル、１Ｈ−インドール−３−イル、チオフェン−３−イル、ピペリジン−１−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル、２−オキソイミダゾリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イル、１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イルおよび１Ｈ−イミダゾール−４−イルから選択され；ここで、Ｒ２のフェニル、１Ｈ−インドール−２−イル、１Ｈ−インドール−３−イル、チオフェン−３−イル、ピペリジン−１−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル、２−オキソイミダゾリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イルまたは１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イルは、所望によりヒドロキシ、メトキシ、メチル、ハロ、アミノおよびアミノ−スルホニルで置換されている。
【００３１】
他の態様において、Ｒ３は、水素、メチルおよびビフェニルから選択され；
Ｒ４は、イソプロピル、メチル、エチル、プロパ−１−エン−２−イル、イソブチル、シクロヘキシル、ｓｅｃ−ブチル、(Ｓ)−ｓｅｃ−ブチル、(Ｒ)−ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシプロパン−２−イル、(Ｓ)−１−ヒドロキシプロパン−２−イル、(Ｒ)−１−ヒドロキシプロパン−２−イル、ノナン−２−イル、２−(２−オキソピロリジン−１−イル)エチル、オキセタン−３−イル、オキセタン−２−イル、ベンズヒドリル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イルおよびベンジルから選択され；ここで、シクロヘキシル、２−(２−オキソピロリジン−１−イル)エチル、オキセタン−３−イル、オキセタン−２−イル、ベンズヒドリル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イルまたはベンジルは、所望によりメチルおよびトリフルオロメチルから独立して選択される１〜３個の基で置換されていてもよい。
【００３２】
他の態様は、次に示すものから選択される化合物である：
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−ｓｅｃ−ブチル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−ベンズヒドリル−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(チオフェン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(４−(トリフルオロメチル)ベンジル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソブチル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−メチル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(４−メチルベンジル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
【００３３】
２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(チオフェン−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−Ｎ−(４−フルオロフェネチル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(４−アミノフェネチル)−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリミジン−５−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−フェニル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(チオフェン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(フラン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−Ｎ−(４−フルオロフェネチル)−９−フェニル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
【００３４】
Ｎ−ベンジル−８−(ビフェニル−４−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(ノナン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−ｓｅｃ−ブチル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−５−イル ５−((３ａＳ,４Ｓ,６ａＲ)−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ[３,４−ｄ]イミダゾール−４−イル)ペンタノエート；
Ｎ−(２−(２−(２−(２−(４−(１−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９Ｈ−プリン−９−イル)エチル)−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エチル)アセトアミド；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−４−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチン酸エチル；
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチン酸エチル；
４−(２−(２−(６−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(４−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチノニトリル；
【００３５】
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピロリジン−１−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリダジン−４−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピラジン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(５−(メチルスルホニル)ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(４−クロロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
【００３６】
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−２−メトキシフェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−２−メトキシフェノール；
Ｎ−[２−(６−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−[２−(５−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
１−(２−{[９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)イミダゾリジン−２−オン；
Ｎ−(２−{[９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)ピリジン−２−アミン；
９−(プロパン−２−イル)−Ｎ−[３−(１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロピル]−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−{２−[(３−メチル−１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル)スルファニル]エチル}−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
１−(２−{[２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)イミダゾリジン−２−オン；
Ｎ−[２−(５−アミノ−１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)エチル]−２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
【００３７】
Ｎ−(２−{[２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)ピリジン−２−アミン；
２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−Ｎ−[３−(１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロピル]−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−Ｎ−[３−(３,５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロピル]−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
(２−{[２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)ウレア；
５−({[２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}メチル)−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−１,３−ベンゾジアゾール−２−オン；
Ｎ−[２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェニル)メタン−スルホンアミド；
４−(２−(２−(ピリジン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)プロピル)フェノール；
４−(２−(９−(オキセタン−３−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
【００３８】
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)−Ｎ−メチルニコチンアミド；
４−(２−(９−(１−ヒドロキシプロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェニル スルファメート；
４−(２−(２−(２−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(チアゾール−５−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−１−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(２,４−ジメチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
５−(９−ｓｅｃ−ブチル−６−(４−ヒドロキシ−３−メチルフェネチルアミノ)−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチノニトリル；
【００３９】
Ｎ−(２−(１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−５−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
９−イソプロピル−Ｎ−(２−(５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル)エチル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(オキセタン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(５−クロロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(５−(トリフルオロメチル)ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
５−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−９−ｓｅｃ−ブチル−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチノニトリル；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
(Ｒ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
(Ｓ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
【００４０】
(Ｒ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
(Ｓ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−(オキセタン−３−イル)−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチノニトリル；
４−(２−(６−(５−フルオロピリジン−３−イル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(６−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール；
(Ｒ)−４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−３−メチルフェノール；
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)ピコリノニトリル；
３−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)イソニコチノニトリル；
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−７−イソプロピル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール；
【００４１】
３−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)ピコリノニトリル；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(６−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(イソキノリン−４−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
２−クロロ−４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
３−フルオロ−４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
Ｎ−(２−(５−クロロ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(５−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−２−メチルフェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(オキセタン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
(Ｓ)−４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
【００４２】
(Ｒ)−４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オール；
(Ｒ)−２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オール；
(Ｓ)−２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オール；
(Ｒ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(２−(３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン−１−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(６−(５−フルオロピリジン−３−イル)−１−イソプロピル−１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]ピリジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(４,５−ジメチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(ピリジン−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
【００４３】
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)−１−ヒドロキシエチル)フェノール；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(６−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(５−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(プロパ−１−エン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
５−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)ピリジン−２−オール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(６−(２−(ジエチルアミノ)エトキシ)−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(５−(５−フルオロピリジン−３−イル)−３−イソプロピル−３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン−７−イルアミノ)エチル)フェノール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
【００４４】
４−(２−(２−(２−エチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(２−プロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
３−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−６−オール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(７−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(オキセタン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９−(オキセタン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(６−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
【００４５】
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(４−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(７−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(４−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−７−イソプロピル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール；
９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−Ｎ−(２−(ピリジン−４−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−５−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(１−ヒドロキシプロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−２−メチルフェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−シクロヘキシル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(チオフェン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；および
１−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９Ｈ−プリン−９−イル)エチル)ピロリジン−２−オン。
式Ｉの化合物を、下記の実施例および表Ｉに詳述する。
【００４６】
他の態様は、式Ia:
【化３】
0005390626.tif 000004
[式中、
Ｌは、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)０−３−、−ＮＲ５ａＣＨ(Ｃ(Ｏ)ＯＣＨ３)ＣＨ２−、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)２ＮＲ５ｂ−、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)２Ｓ−、−ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２−、−ＮＲ５ａＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２−、−(ＣＨ２)３−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＲ５ａＣＨ２−、−ＮＲ５ａＣ(Ｏ)ＣＨ２−および−ＮＲ５ａＹ−から選択され；ここで、Ｒ５ａおよびＲ５ｂは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；Ｙは、Ｏ、ＮおよびＳから選択される３個までのヘテロ原子を含む５員のヘテロアリール環であり；
【００４７】
Ｒ１は、水素、フェニル、チオフェン−２−イル、チオフェン−３−イル、フラン−２−イル、フラン−３−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−２−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ベンゾフラン−２−イル、ベンゾフラン−３−イル、ピリミジン−４−イル、ピリミジン−５−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、ピリジン−２−イル、ピリダジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−イミダゾール−１−イル、ピロリジン−１−イル、ピラジン−２−イル、ピリジン−３−イル、１Ｈ−ピラゾール−１−イル、ピリダジン−４−イル、１Ｈ−インドール−２−イル、チアゾール−４−イル、１Ｈ−インドール−３−イル、１Ｈ−ピロール−２−イルおよびチアゾール−５−イルから選択され；ここで、Ｒ１のフェニル、チオフェン−２−イル、チオフェン−３−イル、フラン−２−イル、フラン−３−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−２−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ベンゾフラン−２−イル、ベンゾフラン−３−イル、ピリミジン−４−イル、ピリミジン−５−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、ピリジン−２−イル、ピリダジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−イミダゾール−１−イル、ピロリジン−１−イル、ピラジン−２−イル、ピリジン−３−イル、１Ｈ−ピラゾール−１−イル、ピリダジン−４−イル、１Ｈ−インドール−２−イル、チアゾール−４−イル、１Ｈ−インドール−３−イル、１Ｈ−ピロール−２−イルまたはチアゾール−５−イルは、所望によりシアノ、ヒドロキシ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ、ハロ置換Ｃ１−４アルキル、ハロ置換Ｃ１−４アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、−Ｃ(Ｏ)Ｒ８ａ、−Ｓ(Ｏ)０−２Ｒ８ａ、−Ｃ(Ｏ)ＯＲ８ａおよび−Ｃ(Ｏ)ＮＲ８ａＲ８ｂから独立して選択される１〜３個の基によって置換されていてもよく；ここで、Ｒ８ａおよびＲ８ｂは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；ただし、Ｒ１およびＲ３の両方が水素となることはない；
【００４８】
Ｒ２は、−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ６ａＲ６ｂ、−ＮＲ９ａＣ(Ｏ)Ｒ９ｂ、−ＮＲ６ａＣ(Ｏ)ＮＲ６ｂＲ６ｃ、フェニル、１Ｈ−インドール−２−イル、１Ｈ−インドール−３−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−２−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ベンゾフラン−２−イル、ベンゾフラン−３−イル、チオフェン−２−イル、チオフェン−３−イル、フラン−２−イル、フラン−３−イル、ピペリジン−４−イル、ピペリジン−３−イル、ピペリジン−２−イル、ピペリジン−１−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル、２−オキソイミダゾリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、３−オキソピペラジン−１−イル、２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イル、１,２,３,４−テトラヒドロナフタレン−２−イル、インドリン−５−イル、２−オキソインドリン−５−イル、１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イル、１Ｈ−インダゾール−５−イルおよび１Ｈ−イミダゾール−４−イルから選択され；ここで、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂおよびＲ６ｃは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択され；ここで、Ｒ２のフェニル、１Ｈ−インドール−２−イル、１Ｈ−インドール−３−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−２−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ベンゾフラン−２−イル、ベンゾフラン−３−イル、チオフェン−２−イル、チオフェン−３−イルまたはフラン−２−イル、フラン−３−イル、ピペリジン−４−イル、ピペリジン−３−イル、ピペリジン−２−イル、ピペリジン−１−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル、２−オキソイミダゾリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、３−オキソピペラジン−１−イル、２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イル、１,２,３,４−テトラヒドロナフタレン−２−イル、インドリン−５−イル、２−オキソインドリン−５−イル、１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イル、１Ｈ−インダゾール−５−イルまたは１Ｈ−イミダゾール−４−イルは、所望によりヒドロキシ、ハロ、メチル、メトキシ、アミノ、−Ｓ(Ｏ)２ＮＲ７ａＲ７ｂ、−ＯＳ(Ｏ)２ＮＲ７ａＲ７ｂおよび−ＮＲ７ａＳ(Ｏ)２Ｒ７ｂから独立して選択される１〜３個の基で置換されており；ここで、Ｒ７ａおよびＲ７ｂは、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択されるか；あるいは５−((３ａＳ,４Ｓ,６ａＲ)−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ[３,４−ｄ]イミダゾール−４−イル)ペンタノイルオキシ、２−(２−(５−((３ａＳ,４Ｓ,６ａＲ)−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ[３,４−ｄ]イミダゾール−４−イル)ペンタンアミド)エトキシ)エトキシおよび２−(４−(４−ヘキサ−５−インアミドベンゾイル)フェニルアミノ)−２−オキソエトキシから選択される１個の基であり；
【００４９】
Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキルおよびビフェニルから選択され；
Ｒ４は、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシプロパン−２−イル、シクロプロピル、オキセタン−３−イル、オキセタン−２−イル、ベンズヒドリル、ピペリジン−４−イル、ピペリジン−３−イル、ピペリジン−２−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロフラン−２−イル、ベンジル、(４−ペンチルフェニル)(フェニル)メチルおよび１−(１−(２−オキソ−６,９,１２−トリオキサ−３−アザテトラデカン−１４−イル)−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル)エチルから選択され；ここで、当該シクロプロピル、オキセタン−３−イル、オキセタン−２−イル、ベンズヒドリル、ピペリジン−４−イル、ピペリジン−３−イル、ピペリジン−２−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロフラン−２−イル、ベンジル、(４−ペンチルフェニル)(フェニル)メチルまたは１−(１−(２−オキソ−６,９,１２−トリオキサ−３−アザテトラデカン−１４−イル)−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル)エチルは、所望によりＣ１−４アルキルおよびハロ置換Ｃ１−４アルキルから独立して選択される１〜３個の基で置換されていてもよい。]
の化合物または当該化合物のＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、保護誘導体、個々の異性体およびそれらの異性体混合物；または薬学的に許容される塩および溶媒和物(例えば水和物)である。
【００５０】
さらなる態様において、式Iaの化合物について、Ｌは、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)０−３−、−ＮＲ５ａＣＨ(Ｃ(Ｏ)ＯＣＨ３)ＣＨ２−、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)２ＮＲ５ｂ−、−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)２Ｓ−、−ＮＲ５ａＣＨ２ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２−、−ＮＲ５ａＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ２−、−(ＣＨ２)３−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＲ５ａＣＨ２−、−ＮＲ５ａＣ(Ｏ)ＣＨ２−および−ＮＲ５ａＹ−から選択され；ここで、Ｒ５ａおよびＲ５ｂは、水素およびメチルから独立して選択され；Ｙは、イソオキサゾールおよび１,３,４−オキサジアゾールから選択される。
【００５１】
他の態様において、Ｌが−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)０−３であるとき、それは、好ましくは−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)１−３(ここで、１−３は、１、２または３を意味する。)である。
【００５２】
他の態様において、Ｒ１は、水素、フェニル、チオフェン−３−イル、チオフェン−２−イル、フラン−３−イル、フラン−２−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ピリミジン−５−イル、ピリジン−４−イル、ピリジン−２−イル、ピロリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、ピラジン−２−イル、ピリダジン−３−イル、ピリダジン−４−イル、１Ｈ−ピラゾール−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、１Ｈ−イミダゾール−１−イル、チアゾール−４−イル、１Ｈ−ピロール−２−イル、チアゾール−５−イルおよびピリジン−３−イルから選択され；ここで、Ｒ１のフェニル、チオフェン−３−イル、チオフェン−２−イル、フラン−３−イル、フラン−２−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ピリミジン−５−イル、ピリジン−４−イル、ピリジン−２−イル、ピロリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、ピラジン−２−イル、ピリダジン−３−イル、ピリダジン−４−イル、１Ｈ−ピラゾール−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、１Ｈ−イミダゾール−１−イル、チアゾール−４−イル、１Ｈ−ピロール−２−イル、チアゾール−５−イルまたはピリジン−３−イルは、所望によりシアノ、メチル、メチル−スルホニル、メトキシ、ハロ、ヒドロキシ、カルボキシル、エトキシ−カルボニル、メチル−アミノ−カルボニルおよびアミノから独立して選択される１〜３個の基で置換されており；ただし、Ｒ１およびＲ３の両方が水素となることはない。
【００５３】
他の態様において、Ｒ２は、アミノ−スルホニル、メチル−カルボニル−アミノ、メチル−スルホニル−アミノ、アミノ−スルホニル−オキシ、ウレア、フェニル、１Ｈ−インドール−２−イル、１Ｈ−インドール−３−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−２−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ベンゾフラン−２−イル、ベンゾフラン−３−イル、チオフェン−２−イル、チオフェン−３−イル、フラン−２−イル、フラン−３−イル、ピペリジン−４−イル、ピペリジン−３−イル、ピペリジン−２−イル、ピペリジン−１−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル、２−オキソイミダゾリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、３−オキソピペラジン−１−イル、２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イル、１,２,３,４−テトラヒドロナフタレン−２−イル、インドリン−５−イル、２−オキソインドリン−５−イル、１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イル、１Ｈ−インダゾール−５−イルおよび１Ｈ−イミダゾール−４−イルから選択され；ここで、Ｒ２のフェニル、１Ｈ−インドール−２−イル、１Ｈ−インドール−３−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−２−イル、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル、ベンゾフラン−２−イル、ベンゾフラン−３−イル、チオフェン−２−イル、チオフェン−３−イル、フラン−２−イル、フラン−３−イル、ピペリジン−４−イル、ピペリジン−３−イル、ピペリジン−２−イル、ピペリジン−１−イル、ピリジン−２−イル、ピリジン−３−イル、ピリジン−４−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル、２−オキソイミダゾリジン−１−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イル、１Ｈ−ピラゾール−４−イル、３−オキソピペラジン−１−イル、２−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イル、１,２,３,４−テトラヒドロナフタレン−２−イル、インドリン−５−イル、２−オキソインドリン−５−イル、１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イル、１Ｈ−インダゾール−５−イルおよび１Ｈ−イミダゾール−４−イルは、所望によりヒドロキシ、メトキシ、メチル、ハロ、アミノ、アミノ−スルホニル、５−((３ａＳ,４Ｓ,６ａＲ)−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ[３,４−ｄ]イミダゾール−４−イル)ペンタノイルオキシ、２−(２−(５−((３ａＳ,４Ｓ,６ａＲ)−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ[３,４−ｄ]イミダゾール−４−イル)ペンタンアミド)エトキシ)エトキシおよび２−(４−(４−ヘキサ−５−インアミドベンゾイル)フェニルアミノ)−２−オキソエトキシで置換されている。
【００５４】
他の態様において、Ｒ３は、水素、メチルおよびビフェニルから選択され；
Ｒ４は、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシプロパン−２−イル、シクロプロピル、オキセタン−３−イル、オキセタン−２−イル、ベンズヒドリル、ピペリジン−４−イル、ピペリジン−３−イル、ピペリジン−２−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロフラン−２−イル、ベンジル、(４−ペンチルフェニル)(フェニル)メチルおよび１−(１−(２−オキソ−６,９,１２−トリオキサ−３−アザテトラデカン−１４−イル)−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル)エチルから選択され；ここで、当該シクロプロピル、オキセタン−３−イル、オキセタン−２−イル、ベンズヒドリル、ピペリジン−４−イル、ピペリジン−３−イル、ピペリジン−２−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル、フェニル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロフラン−２−イル、ベンジル、(４−ペンチルフェニル)(フェニル)メチルまたは１−(１−(２−オキソ−６,９,１２−トリオキサ−３−アザテトラデカン−１４−イル)−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−４−イル)エチルは、所望によりメチルおよびトリフルオロメチルから独立して選択される１〜３個の基で置換されていてもよい。
【００５５】
他の態様は、次に示すものから選択される化合物である：
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−ｓｅｃ−ブチル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−ベンズヒドリル−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(４−(トリフルオロメチル)ベンジル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソブチル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−メチル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(４−メチルベンジル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(チオフェン−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
【００５６】
３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−Ｎ−(４−フルオロフェネチル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(４−アミノフェネチル)−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリミジン−５−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−フェニル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(チオフェン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(フラン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−Ｎ−(４−フルオロフェネチル)−９−フェニル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−ベンジル−８−(ビフェニル−４−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
【００５７】
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(ノナン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−((４−ペンチルフェニル)(フェニル)メチル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−ｓｅｃ−ブチル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−ｓｅｃ−ブチル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−５−オール；
３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−５−イル ５−((３ａＳ,４Ｓ,６ａＲ)−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ[３,４−ｄ]イミダゾール−４−イル)ペンタノエート；
Ｎ−(２−(２−(３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ)エトキシ)エチル)−５−((３ａＳ,４Ｓ,６ａＲ)−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ[３,４−ｄ]イミダゾール−４−イル)ペンタンアミド；
Ｎ−(４−(４−(２−(３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ)アセトアミド)ベンゾイル)フェニル)ヘキサ−５−インアミド；
Ｎ−(２−(２−(２−(２−(４−(１−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９Ｈ−プリン−９−イル)エチル)−１Ｈ−１,２,３−トリアゾール−１−イル)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エチル)アセトアミド；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−４−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
【００５８】
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチン酸エチル；
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチン酸エチル；
４−(２−(２−(６−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(４−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(２−メトキシピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチノニトリル；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピロリジン−１−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(１Ｈ−ピラゾール−１−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリダジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
【００５９】
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリダジン−４−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピラジン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(５−(メチルスルホニル)ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(２−クロロピリジン−３−イル)−６−イソプロピル−２,６−ジヒドロイミダゾ[４,５−ｃ]ピラゾール−３−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(４−クロロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(４−メトキシピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(チアゾール−４−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
【００６０】
４−(２−(９−イソプロピル−２−(１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(１Ｈ−ピラゾール−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(１Ｈ−ピラゾール−４−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(チオフェン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)チオフェン−２−カルボン酸；
４−(２−(２−(フラン−２−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(４−メチルチオフェン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−２−メトキシフェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−２−メトキシフェノール；
Ｎ−[２−(６−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
【００６１】
Ｎ−[２−(５−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−[２−(ピペリジン−４−イル)エチル]−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
１−(２−{[９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)ピペリジン−４−オール；
(２Ｓ)−３−(４−ヒドロキシフェニル)−２−{[９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}プロパン酸メチル；
４−(２−{[９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)ベンゼン−１−スルホンアミド；
２−{[２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エタン−１−スルホンアミド；
４−(２−{[９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)ベンゼン−１,２−ジオール；
Ｎ−[２−(１Ｈ−イミダゾール−４−イル)エチル]−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
１−(２−{[９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)イミダゾリジン−２−オン；
Ｎ−[２−(５−アミノ−１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)エチル]−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
【００６２】
Ｎ−(２−{[９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)ピリジン−２−アミン；
９−(プロパン−２−イル)−Ｎ−[３−(１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロピル]−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−[２−({[９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}メチル)プロピル]アセトアミド；
４−(２−{[９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)ピペラジン−２−オン；
Ｎ−{２−[(３−メチル−１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル)スルファニル]エチル}−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−[３−(３,５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロピル]−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
(２−{[９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)ウレア；
５−({[９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}メチル)−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−１,３−ベンゾジアゾール−２−オン；
２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−Ｎ−[２−(１Ｈ−イミダゾール−４−イル)エチル]−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
１−(２−{[２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)イミダゾリジン−２−オン；
【００６３】
Ｎ−[２−(５−アミノ−１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)エチル]−２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−{[２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)ピリジン−２−アミン；
２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−Ｎ−[３−(１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロピル]−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−[２−({[２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}メチル)プロピル]アセトアミド；
４−(２−{[２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)ピペラジン−２−オン；
２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−Ｎ−{２−[(３−メチル−１Ｈ−１,２,４−トリアゾール−５−イル)スルファニル]エチル}−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−Ｎ−[３−(３,５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロピル]−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
(２−{[２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}エチル)ウレア；
５−({[２−(１−ベンゾチオフェン−３−イル)−９−(プロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル]アミノ}メチル)−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−１,３−ベンゾジアゾール−２−オン；
Ｎ−[２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル]−９−(プロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
【００６４】
Ｎ−(４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェニル)メタンスルホンアミド；
４−(２−(２−(ピリジン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)プロピル)フェノール；
４−(２−(９−(オキセタン−３−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)−Ｎ−メチルニコチンアミド；
６−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)−５,６,７,８−テトラヒドロナフタレン−２−オール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インダゾール−３−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−((９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル)(メチル)アミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−８−メチル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
１−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−２(３Ｈ)−オン；
【００６５】
４−(３−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル)プロピル)フェノール；
４−((((９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル)メチル)(メチル)アミノ)メチル)フェノール；
４−(((９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル)メチルアミノ)メチル)フェノール；
４−(((９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル)メトキシ)メチル)フェノール；
Ｎ−(２−(インドリン−５−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(９−(１−メチルピペリジン−４−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−(ピペリジン−４−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インダゾール−５−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−５−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
５−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)インドリン−２−オン；
【００６６】
４−(２−(９−シクロプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−(１−ヒドロキシプロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェニル スルファメート；
２−(４−ヒドロキシフェニル)−Ｎ−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イル)アセトアミド；
４−(５−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)イソオキサゾール−３−イル)フェノール；
４−(５−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)−１,３,４−オキサジアゾール−２−イル)フェノール；
４−(２−(２−(２−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；および
４−(２−(９−イソプロピル−２−(チアゾール−５−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール。
【００６７】
他の態様は、式1f：
【化４】
0005390626.tif 000005
[式中、Ｒ２は、１Ｈ−インドール−３−イルおよびフェニルから選択され、これらは所望によりヒドロキシで置換されており；Ｒ４は、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、ベンズヒドリル、ノナン−２−イル、オキセタン−３−イルおよびテトラヒドロフラン−３−イルから選択される。]
の化合物である。
【００６８】
さらなる態様は、次に示すものから選択される化合物である：
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−ｓｅｃ−ブチル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−ベンズヒドリル−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(ノナン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−ｓｅｃ−ブチル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(オキセタン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
(Ｓ)−４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；および
(Ｒ)−４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール。
【００６９】
他の態様は、式1g：
【化５】
0005390626.tif 000006
[式中、Ｒ２は、１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−３−イル；所望によりハロ、メチルおよびメトキシから独立して選択される１〜２個の基で置換されている１Ｈ−インドール−３−イル；ならびに所望によりメチル、ハロおよびヒドロキシから独立して選択される１〜２個の基で置換されているフェニルから選択され；Ｒ４は、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、１−ヒドロキシプロパン−２−イル、プロパ−１−エン−２−イル、ベンズヒドリル、ノナン−２−イル、オキセタン−３−イルおよびテトラヒドロフラン−３−イルから選択され；Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは、水素、シアノ、メチル、ハロ、−ＳＯ２ＣＨ３およびトリフルオロメチルから独立して選択される。]
の化合物である。
【００７０】
さらなる態様は、次に示す化合物から選択される化合物である：
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(６−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(４−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチノニトリル；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(５−(メチルスルホニル)ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(４−クロロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
９−イソプロピル−Ｎ−(２−(６−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
９−イソプロピル−Ｎ−(２−(５−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
【００７１】
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(９−(オキセタン−３−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−(１−ヒドロキシプロパン−２−イル)−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(２−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
５−(９−ｓｅｃ−ブチル−６−(４−ヒドロキシ−３−メチルフェネチルアミノ)−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチノニトリル；
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(オキセタン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(２−(５−クロロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(５−(トリフルオロメチル)ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
５−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−９−ｓｅｃ−ブチル−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチノニトリル；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
【００７２】
(Ｒ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
(Ｓ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
(Ｒ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
(Ｓ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−ｓｅｃ−ブチル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
５−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−(オキセタン−３−イル)−９Ｈ−プリン−２−イル)ニコチノニトリル；
４−(２−(６−(５−フルオロピリジン−３−イル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール；
３−(６−(４−ヒドロキシフェネチルアミノ)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−イル)イソニコチノニトリル；
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−７−イソプロピル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(６−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
【００７３】
２−クロロ−４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
３−フルオロ−４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール；
Ｎ−(２−(５−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(５−クロロ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−２−メチルフェノール；
２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オール；
(Ｒ)−２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オール；
(Ｓ)−２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オール；
(Ｒ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(６−(５−フルオロピリジン−３−イル)−１−イソプロピル−１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]ピリジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール；
【００７４】
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(６−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(５−メトキシ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(プロパ−１−エン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
４−(２−(５−(５−フルオロピリジン−３−イル)−３−イソプロピル−３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン−７−イルアミノ)エチル)フェノール；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−イソプロピル−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(７−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(オキセタン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−メチルピリジン−３−イル)−９−(オキセタン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
【００７５】
Ｎ−(２−(６−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(６−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(４−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；
２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−Ｎ−(２−(４−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９Ｈ−プリン−６−アミン；
Ｎ−(２−(７−フルオロ−１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン；および
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９−(１−ヒドロキシプロパン−２−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−２−メチルフェノール。
【００７６】
他の態様は、分裂の回数を増加させることによって、幹細胞の増加を刺激するために、式Ｉの化合物を使用する方法であり、当該方法は、幹細胞を式Ｉの化合物と接触させることを含む。
他の態様は、幹細胞の増加がin vivo、in vitroまたはex vivoで行われる方法である。
他の態様は、幹細胞がヒトの造血幹細胞である方法である。
他の態様は、本発明の方法によって得られたまたは得られる増加させた造血幹細胞を有する細胞集団である。
【００７７】
さらなる態様は、１単位または２単位の臍帯血単位、好ましくは１単位の臍帯血単位に由来する増加させたＨＳＣを有する細胞集団を含む組成物であって、当該組成物が、少なくとも１０５細胞、１０７細胞、１０８細胞または１０９細胞の細胞総数を含み、そして全細胞の２０〜１００％がＣＤ３４＋細胞であり、例えば全細胞の４０〜８０％がＣＤ３４＋細胞である組成物である。
【００７８】
他の態様は、幹細胞治療が疾患または障害の予防、処置または根絶をもたらす、疾患または障害を処置する方法である。
【００７９】
幹細胞の使用が進むにつれて、幹細胞移植によって処置され得る疾患が広がることが予測される。非限定的な実施例を下記に示す。
【００８０】
他の態様は、遺伝性免疫不全疾患、自己免疫疾患および／または造血障害を処置する組成物の製造における、本発明の概要で定義した式Ｉの化合物またはその塩の使用である。
【００８１】
さらなる態様において、投与は、自家移植であり、造血障害は、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、急性骨髄性白血病、神経芽腫、胚細胞性腫瘍、自己免疫障害およびアミロイド症から選択される。
【００８２】
さらなる態様において、自己免疫障害は、全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)および全身性強皮症から選択される。
【００８３】
さらなる態様において、投与は、同種移植であり、造血障害は、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性障害、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、再生不良性貧血、赤芽球癆、発作性夜間ヘモグロビン尿症、ファンコーニ貧血、重症型サラセミア、鎌状赤血球貧血、重症複合免疫不全症(ＳＣＩＤ)、ウィスコット・アルドリッチ症候群、血球貪食性リンパ組織球症(ＨＬＨ)および先天性代謝異常から選択される。
【００８４】
さらなる態様において、先天性代謝異常は、ムコ多糖症、ゴーシェ病、異染性白質ジストロフィーおよび副腎白質ジストロフィーから選択される。
【００８５】
他の態様は、遺伝性免疫不全疾患、自己免疫疾患および／または造血障害を処置する方法であって、該処置を必要とする患者に、本発明の概要で定義された化合物によって増加させた造血幹細胞を投与することを含む方法である。
【００８６】
さらなる態様において、投与は自家移植であり、造血障害は、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、急性骨髄性白血病、神経芽腫、胚細胞性腫瘍、自己免疫障害およびアミロイド症から選択される。
【００８７】
さらなる態様において、自己免疫障害は、全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)および全身性強皮症から選択される。
【００８８】
さらなる態様において、投与は同種移植であり、造血障害は、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性障害、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、再生不良性貧血、赤芽球癆、発作性夜間ヘモグロビン尿症、ファンコーニ貧血、重症型サラセミア、鎌状赤血球貧血、重症複合免疫不全症(ＳＣＩＤ)、ウィスコット・アルドリッチ症候群、血球貪食性リンパ組織球症(ＨＬＨ)および先天性代謝異常から選択される。
【００８９】
さらなる態様において、先天性代謝異常は、ムコ多糖症、ゴーシェ病、異染性白質ジストロフィーおよび副腎白質ジストロフィーから選択される。
【００９０】
有用性
ＨＳＣは、全ての血液細胞を再生することができる初期の細胞である。発達の間、造血は、胎児の肝臓から骨髄へ移動し、それはそのまま成体期の造血部位となる。造血が骨髄で確立したら、ＨＳＣは、骨空洞中で無作為に分布しない。代わりに、それらは、骨内膜表面に近接する位置で見出される。骨表面から遠くなるにつれて、成熟した幹細胞の数が多くなる。最終的に、骨の中心の縦軸に近づくにつれて、成熟細胞の末期の分化が起こっている。
【００９１】
成人、臍帯血、胎児または胚起源のいずれに由来するかに関わらず、幹細胞の数を増加させることは、移植にならびに血液学および腫瘍疾患および障害のための他の治療に大きな影響を与え、最も小さいものでも安全性増加およびコスト削減であろう。本発明の方法に記載した通り、ＨＳＣの数はex vivoで増加する。現在、幹細胞が十分にないために約２５％の自己ドナー移植が禁止されていることから、幹細胞の数を増加させる方法は重要である。さらに、同種移植が必要な患者の２５％未満しか組織適合性ドナーを見つけられない。臍帯血バンクが現在存在しており、一般集団の広範囲の人種構成をカバーしているが、成人レシピエントのためには検体中の幹細胞数が不適当なため、これらのバンクは、現在、子供での使用に限定されている。幹細胞の数を増加させる方法は、臍帯血を成人患者に有用とすることを可能とし、それによって、同種移植の使用を拡大させる。本発明の化合物はまた前駆細胞の数を増加させるために用いることができ、これは例えば生着を促進して好中球減少症の持続時間を減少させるために臨床的に有用である。
【００９２】
従って、ＨＳＣの数を増加させる方法を提供する。本明細書で用いられるとき、ＨＳＣの増加は、対象が、１０％、２０％、３０％またはそれ以上増加する少なくとも１種以上のＨＳＣを有することを意味する。ＨＳＣは、ＣＤ３４＋細胞のサブセットからなってよく、ＨＳＣの増加は、細胞集団中のＣＤ３４＋細胞の数を計数することによって、所望により下記の実験の章で記載されたコロニー形成単位(ＣＦＵ)を分析することによって、ＣＤ３４＋細胞の分化の性質を測定することによって間接的に測定できる：増加させていないコントロールと比較して、ＣＤ３４＋細胞培養物の数の少なくとも１０％、好ましくは２０％または３０％の増加は、ＨＳＣ増加を示す。増加したＨＳＣの集団を、例えば対象の骨髄サンプルまたは培養物から収穫する。ＨＳＣの収穫は、細胞の除去または分離として定義される。これは、幾つかの方法、例えば酵素的方法、非酵素的方法、遠心法、電気的方法またはサイズをベースとする方法、または好ましくは培養培地(例えば細胞をインキュベートした培地)または緩衝溶液を用いて細胞を流すことによって達成される。細胞は、所望により集めて、分離し、さらにＨＳＣおよび分化した子孫のより大きな集団さえ生じさせるよう増加させる。
【００９３】
ＨＳＣの集団を増加させる方法は、ＡＨＲおよび／またはＡＨＲの下流エフェクターの活性および／または発現を下方制御することができる薬物、例えば本発明の化合物を、ＨＳＣおよび所望によりＨＳＣ支持細胞の混合物を含む出発細胞集団(すなわち増加させていない細胞の集団)と接触させることを含む。投与工程は、ex vivo、in vivoおよび／またはin vitroで行う。本明細書に記載されるとき、増加させたＨＳＣの集団は、所望により対象に投与される。ex vivoで増加させるために、ＨＳＣを増加させる薬物、例えば本発明の化合物を、ＤＭＳＯまたは何らかの他の適当な担体中で製剤し、細胞から“洗浄”して、細胞を、例えば輸液緩衝液に移し得る。ＤＭＳＯ製剤は、例えば、６０％  ＤＭＳＯ／４０％  水中の０.３mg/mlの本発明の化合物の溶液を含み得る。従って、本明細書に記載された増加させたＨＳＣの集団または本明細書に記載された方法によって作られた増加させたＨＳＣの集団を対象に投与することを含む、増加させたＨＳＣの集団を対象に提供する方法を提供する。増加させたＨＳＣの集団は、所望により、血液細胞を作るために用いられる。血液細胞は、所望により、それを必要とする対象に投与される。所望により、対象は、増加させていないＨＳＣの集団またはＨＳＣとＨＳＣ支持細胞の混合物を得た対象と同じ対象である。
【００９４】
本明細書で用いられるとき、用語ＨＳＣ支持細胞は、ＨＳＣ支持細胞によって放出される因子が例えば拡散によってＨＳＣに到達するように、１種以上のＨＳＣ付近で天然に見出される細胞を言う。ＨＳＣ支持細胞は、リンパ細網間質細胞を含み、これらに限定されない。リンパ細網間質細胞は、本明細書で用いられるとき、リンパ球やリンパ球前駆体や前駆細胞ではないリンパ組織中に存在する全ての細胞型を含み、これらに限定されない。従って、リンパ細網間質細胞が、造骨細胞、上皮細胞、内皮細胞、中皮細胞、樹状細胞、脾細胞およびマクロファージを含む。リンパ細網間質細胞はまた、リンパ細網間質細胞として通常機能しない細胞、例えば、ＨＳＣの子孫を含むＨＳＣの維持、増殖または分化に必要な因子を細胞表面で分泌するまたは発現するよう遺伝的に変化した線維芽細胞を含む。リンパ細網間質細胞は、場合により、リンパ系組織の一片の脱凝集から誘導される。このような細胞は、in vitroまたはin vivoで、ＨＳＣの子孫を含むＨＳＣの維持、増殖または分化を支えることができる。リンパ系組織によって、骨髄、末梢血(動員された末梢血を含む)、臍帯血、胎盤の血液、胎児の肝臓、胚細胞(胚の幹細胞を含む)、大動脈−生殖腺−中腎由来細胞、およびリンパ系柔組織を含むことを意味する。リンパ系柔組織は、本明細書で用いられるとき、胸腺、脾臓、肝臓、リンパ節、皮膚、扁桃腺、咽頭扁桃腺およびパイエル板およびこれらの組み合わせを含み、これらに限定されない。
【００９５】
リンパ細網間質細胞は、インタクトなリンパ系組織中でＨＳＣの子孫を含むＨＳＣの維持、増殖または分化のための支持微小環境を提供する。微小環境は、リンパ細網間質細胞を含む多様な細胞型によって発現される可溶性細胞表面因子を含む。一般的にリンパ細網間質細胞が提供する支持は、接触依存性および非接触依存性の双方として特徴付けられる。
【００９６】
リンパ細網間質細胞は、例えば、ＨＳＣに関して、自家性(自己)または非自家性(非自己、例えば異種(heterologous)、同種、同系または異種(xenogeneic))である。自家性は、本明細書で用いられるとき、同じ対象からの細胞を言う。同種は、本明細書で用いられるとき、遺伝的に異なる同じ種の細胞を言う。同系は、本明細書で用いられるとき、比較する細胞と遺伝的に同一である異なる対象の細胞を言う。異種は、本明細書で用いられるとき、異なる種の細胞を言う。リンパ細網間質細胞は、例えば、臓器／組織が、ＨＳＣの維持、増殖または分化を支えることができる段階(すなわち成熟期)まで発達した後は何時でも、ヒトまたは非ヒトの対象のリンパ系組織から得られる。リンパ細網間質細胞が由来するリンパ系組織は、通常、ＨＳＣが行う、分化した子孫の分化系列特異性をもたらす分化系列決定を決定する。
【００９７】
ＨＳＣ(およびその子孫)とリンパ細網間質細胞の同時培養は、通常、当技術分野で既知の条件下で(例えば温度、ＣＯ２およびＯ２含量、栄養培地、持続時間など)、行う。細胞の数を増加させるのに十分な時間は、当業者によって容易に決定され得る時間であり、播種された細胞の元の数に依存して変化する。ＨＳＣおよびリンパ細網間質細胞の量は、実験の必要性に従って変化する。理想的な量は、必要性に応じて当業者によって容易に決定される。
【００９８】
本明細書で用いられるとき、“対象”は個体を意味する。従って、対象は、例えば飼育動物、例えばネコやイヌ、家畜(例えばウシ、ウマ、ブタ、ヒツジおよびヤギ)、実験動物(例えばマウス、ウサギおよびモルモット)、哺乳動物、非ヒト哺乳動物、霊長類、非ヒト霊長類、齧歯類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類およびその他の何れかの動物を含む。対象は、所望により哺乳物であり、例えば霊長類またはヒトである。
【００９９】
造血幹細胞を増加させる方法
従って、本発明は、(ａ)造血幹細胞を含む出発細胞集団を提供し、そして(ｂ) アリール炭化水素受容体および／またはアリール炭化水素受容体経路の下流エフェクターの活性および／または発現を下方制御することができる薬物の存在下、造血幹細胞を増加させるのに適当な条件下で、当該出発細胞集団をex vivoで培養することを含む、造血幹細胞を増加させる方法に関する。
【０１００】
アリール炭化水素(ジオキシン)受容体(ＡＨＲ)は、動物で、そして恐らくヒトにおいても、多くの毒性作用および発癌作用を媒介することが知られているサイトゾルリガンド活性化転写因子である (Safe S 2001 Toxicol Lett 120: 1-7)。そのリガンドによるＡＨＲ活性化の結果として、第１相異物代謝酵素、例えばチトクロムＰ４５０ ＣＹＰ１Ａ１、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ１Ｂ１およびＣＹＰ２Ｓ１、ならびに第２相酵素、すなわちＵＤＰグルクロン酸転移酵素ＵＧＴ１Ａ６、ＮＡＤ(Ｐ)Ｈ−依存性キノン酸化還元酵素(ＮＱＯ１)、アルデヒド脱水素酵素ＡＬＤＨ３Ａ１および幾つかのグルタチオンＳ−転移酵素をコードする遺伝子を含む多くの解毒作用遺伝子が転写的に誘発される。
【０１０１】
一つの態様において、アリール炭化水素受容体および／またはアリール炭化水素受容体経路の下流エフェクターの活性および／または発現を下方制御することができる薬物は、(i) 有機化合物；(ii) ＡＨＲの発現を下方制御することができる妨害ＲＮＡ小分子(ｓｉＲＮＡ)；および(iii) ＡＨＲの発現を下方制御することができるアンチセンスオリゴヌクレオチドからなる群から選択される。
【０１０２】
一つの具体的な態様において、造血幹細胞を増加させる方法は、(ａ) 造血幹細胞を含む出発細胞集団を提供し、(ｂ) アリール炭化水素受容体および／またはアリール炭化水素受容体経路の下流エフェクターの活性および／または発現を下方制御することができる薬物の存在下、造血幹細胞を増加させるのに適切な条件下で、当該出発細胞集団をex vivoで培養することを含み、当該アリール炭化水素受容体および／またはアリール炭化水素受容体経路の下流エフェクターの活性および／または発現を下方制御することができる薬物が、α−ナフトフラボンまたは３'−メトキシ−４'−ニトロフラボンではない。
【０１０３】
ＡＨＲ活性を阻害する有機化合物(本明細書でＡＨＲアンタゴニストとも言う)は、当技術分野で記載されたものであり、例えば２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸(２−メチル−４−ｏ−トリルアゾフェニル)アミド(CH223191)、α−ナフトフラボン、レスベラトロール(Nutr. Metab. Cardiovasc. Dis., 2003 Apr; 13(2):104-13)、３'−メトキシ−４'−ニトロフラボン(Biochem. Pharmacol., 2007 May 15; 73(10):1622-34, Epub 2007 Jan 30)、および、６−メチル−１,３,８−トリクロロジベンゾフラン(Cancer Res., 2004, Apr 15;64(8):2889-97)である。ＡＨＲ活性の阻害剤は、活性化条件下で観察されるＡＨＲ転写活性の少なくとも１０％、２０％、３０％、５０％、６０％、７０％、８０％または少なくとも９０％までＡＨＲ活性を減少させる化合物を言う。ＡＨＲ阻害活性を測定するためのアッセイは、例えば、実施例に記載されたジオキシン誘発ＡＨＲ依存性ルシフェラーゼ受容体遺伝子アッセイである。一つの態様において、ＡＨＲ活性の阻害剤は、ジオキシン誘発ＡＨＲ依存性ルシフェラーゼ受容体遺伝子アッセイで測定したとき、１０μＭ未満の、好ましくは５μＭ未満のＥＣ５０を有する化合物である。
【０１０４】
ＡＨＲは、ヒトにおける様々な遺伝子の転写を制御する転写因子である。一つの態様において、ＡＨＲ経路の下流エフェクターは、ＡＨＲによって転写レベルで直接制御される遺伝子である。このような遺伝子の例は、Ｃｙｐ１Ｂ１、Ｃｙｐ１Ａ１およびＡＨＲＲから選択される。ＡＨＲはまた、生体異物酵素誘発における十分に特徴付けされた役割以外の経路でも機能する。ＡＨＲの生体異物リガンドは、β−カテニン、ＳＴＡＴ５、ＳＴＡＴ１、ＨＥＳ−１、ｃ−Ｍｙｃ、Ｃ／ＥＢＰ、ＰＵ.１、β−カテニン、ｐ２１、Ｐ２７、ｐＲｂ、デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ、ＣＸＣＲ４およびケモカインリガンドＣＸＣＬ１２(ＳＤＦ−１)を制御することが示されている。
【０１０５】
一つの具体的態様において、アリール炭化水素受容体の活性および／または発現を下方制御することができる薬物は、本発明の概要で定義された化合物である。
【０１０６】
他の態様において、アリール炭化水素受容体の活性および／または発現を下方制御することができる薬物は、ＡＨＲタンパク質発現または１つ以上のＡＨＲの下流エフェクターのタンパク質発現を下方制御することができるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは妨害ＲＮＡ小分子(ｓｉＲＮＡ)である。
【０１０７】
ＡＨＲタンパク質発現を有効に阻害するのに使用され得るアンチセンスオリゴヌクレオチドの設計は、このようなオリゴヌクレオチドが転写を阻害するように細胞内で設計されたｍＲＮＡに特異的に結合する方法で行われなければならない。ＡＨＲ ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡおよび／またはそのプロモーターまたは他の制御配列に特異的に結合するアンチセンスオリゴヌクレオチドの設計および合成に使用するのに適当な配列は、ＡＨＲ、特にヒトＡＨＲの公表された配列において利用可能である。さらに、標的ｍＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドの双方における構造変化のエネルギーを説明する熱力学的サイクルに基づいて予測された標的ｍＲＮＡに対して高い結合親和性を有する配列を同定するアルゴリズムもまた利用可能である。
【０１０８】
本発明で使用するのに適当なＲＮＡｉ分子の合成は、次に示す通り行われ得る：最初に、ＡＨＲ ｍＲＮＡ配列(または１種以上のその下流エフェクター)を、ＡＡ−ジヌクレオチド配列のためのＡＵＧ開始コドンの下流でスキャンする。ＡＡおよび１９ ３'隣接のそれぞれの存在が、可能性のあるｓｉＲＮＡ標的部位として記録される。次いで、推定標的部位を、何らかの配列アラインメントソフトウェアを用いて、適切なゲノムのデータベース(例えばヒト、マウス、ラットなど)と比較する。他のコード配列と高い相同性を示す推定標的部位を取り出す。好ましい配列は、Ｇ／Ｃ含量の低いものであり、特にＧ／Ｃ含量が５５％未満の配列である。次いで、幾つかの標的部位を、標的遺伝子の長さによって選択する。ｓｉＲＮＡの推定標的部位を同定するための方法またはアルゴリズムは、例えば(Tilesi, et al., Curr. Opin. Mol. Ther. 11:156, 2009)に記載されている。ＡＨＲの発現を下方制御することができるｓｉＲＮＡ分子の例は、AHR 111S＝5' GCG GCA TAG AGA CCG ACT TAA TTT CAA GAG AAT TAA GTC GGT CTC TAT GCC GCT TTT TTG G 3'；AHR 111AS＝5' CGC GCC AAA AAA GCG GCA TAG AGA CCG ACT TAA TTC TCT TGA AAT TAA GTC GGT CTC TAT GCC GC 3'；AHR 242S＝5' GGC TTC TTT GAT GTT GCA TTA ATT CAA GAG ATT AAT GCA ACA TCA AAG AAG CCT TTT TTG G 3'；AHR 242AS＝5' CGC GCC AAA AAA GGC TTC TTT GAT GTT GCA TTA ATC TCT TGA ATT AAT GCA ACA TCA AAG AAG CC 3'である。
【０１０９】
造血幹細胞を含む出発細胞集団は、考えられる使用に応じて当業者によって選択される。造血幹細胞を含む細胞の様々な原料は、当技術分野で開示されているものであり、骨髄、末梢血、新生児臍帯血、胎盤、または、肝臓、特に胎児の肝臓などの他の原料を含む。
【０１１０】
細胞集団は、出発細胞集団を得るために、最初に、特異的細胞マーカーに基づく細胞の陰性および／または陽性の選択を含む富化または精製工程を行われ得る。特異的細胞マーカーに基づいて出発細胞集団を単離する方法は、フローサイトメトリーとも呼ばれる蛍光活性細胞分類法(ＦＡＣＳ)、または、特異的細胞表面マーカーと相互作用する抗体またはリガンドを結合させた固体もしくは不溶性支持体を用いてもよい。例えば、細胞は、抗体を含む固体支持体(例えばビーズのカラム、フラスコ、磁性粒子)と接触させ、結合しない細胞を全て除く。磁性ビーズまたは常時性ビーズを含む固体支持体を用いるとき、ビーズに結合させた細胞は、磁性分離器によって容易に単離され得る。
【０１１１】
一つの態様において、出発細胞集団は、望ましい細胞マーカー表現型(例えばＣＤ３４＋、ＣＤ１３３＋、ＣＤ９０＋)で富化されたものであるか、色素、例えばローダミン、ヘキストの流出またはアルデヒド脱水素酵素活性に基づく。一つの具体的態様において、出発細胞集団は、ＣＤ３４＋細胞で富化されている。血液細胞集団をＣＤ３４＋細胞で富化する方法は、Miltenyi Biotec (CD34+ direct isolation kit, Miltenyi Biotec, Bergisch, Gladbach, Germany)またはBaxter (Isolex 3000)により商品化されているキットを含む。
【０１１２】
単胎出産からの臍帯血の量は、しばしば、成人または年長児を処置するのに不適当な量である。本発明の化合物またはアリール炭化水素受容体および／またはアリール炭化水素受容体経路の下流エフェクターの活性および／または発現を下方制御することができる薬物を用いた増加方法の１つの利点は、１単位のみの臍帯血単位から十分量の造血幹細胞を生産することができることである。
【０１１３】
従って、一つの態様において、出発細胞集団は、ＣＤ３４＋細胞で富化された新生児臍帯血細胞に由来する。一つの関連した態様において、出発細胞集団は、１単位または２単位の臍帯血単位に由来する。
【０１１４】
他の態様において、出発細胞集団は、ＣＤ３４＋細胞で富化されたヒトの動員された末梢血細胞に由来する。一つの関連した態様において、出発細胞集団は、１人のみの患者から単離したヒトの動員された末梢血細胞に由来する。
【０１１５】
出発細胞集団は、好ましくは、少なくとも５０％のＣＤ３４＋細胞を含んでもよく、幾つかの態様において９０％より多くのＣＤ３４＋細胞を含み、１０５個〜１０９個の有核細胞を含んでもよい。
【０１１６】
出発細胞集団を直接増加させるのに用いてもよく、後日使用するために凍結して保存してもよい。
【０１１７】
造血幹細胞増加のために出発細胞集団を培養する条件は、とりわけ出発細胞集団、望ましい最終細胞数およびＨＳＣの望ましい最終割合に応じて変化する。
【０１１８】
一つの具体的態様、特にＣＤ３４＋細胞に富化した臍帯血細胞からの出発細胞集団を用いる態様において、培養条件は、当技術分野で一般的に知られている造血幹細胞増加のための他のサイトカインおよび増殖因子の使用を含む。このようなサイトカインおよび増殖因子は、ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＦｌＴ３−Ｌ、トロンボポエチン(ＴＰＯ)、エリスロポエチンおよびそれらのアナログを含み、これらに限定されない。本明細書で用いられるとき、“アナログ”は、天然由来の形態と比較して増加したまたは減少した生物活性を有する変異体、またはサイトカイン受容体アゴニスト、例えばＴＰＯ受容体に対するアゴニスト抗体(例えば特許明細書WO 2007/145227に詳述されたＶＢ２２Ｂ ｓｃ(Ｆｖ)２など)を含み、これらに限定されない、天然由来の形態の生物活性を有するサイトカインおよび増殖因子の何れかの構造変異体を含む。サイトカインおよび増殖因子の組み合わせは、高分化した細胞の産生を制限しながらＨＳＣおよび前駆細胞を増加させるために選択される。一つの具体的態様において、１種以上のサイトカインおよび増殖因子は、ＳＣＦ、Ｆｌｔ３−ＬおよびＴＰＯからなる群から選択される。一つの具体的態様において、少なくともＴＰＯは、ＨＳＣ増加に適当な条件下で、血清を含まない培地中で用いられる。一つの関連した態様において、ＩＬ６、ＳＣＦ、Ｆｌｔ３−ＬおよびＴＰＯの混合物は、ＨＳＣを増加させる方法において、本発明の化合物を、または、アリール炭化水素受容体および／またはアリール炭化水素受容体経路の下流エフェクターの活性および／または発現を下方制御することができる薬物と組み合わせて使用される。
【０１１９】
Ｂ細胞刺激因子２としても知られているヒトＩＬ６またはインターロイキン−６が、記載され(Kishimoto, Ann. review of Imm. 23:1 2005)、市販されている。ｃ−ｋｉｔリガンド、肥満細胞増殖因子または造血幹細胞因子としても知られるヒトＳＣＦまたは幹細胞因子が記載され(Smith, MA et al., ACTA Haematologica, 105, 3:143, 2001)、市販されている。ＦＬとも呼ばれるＦｌｔ３−ＬまたはＦＬＴ−３リガンドは、ｆｌｔ３−受容体に結合する因子である。これは、記載され(Hannum C, Nature 368 (6472): 643-8)、市販されている。巨核球増強因子(ＭＧＤＦ)またはｃ−Ｍｐｌリガンドとしても知られるＴＰＯまたはトロンボポエチンが記載され(Kaushansky K (2006). N. Engl. J. Med. 354 (19): 2034-45)、市販されている。
【０１２０】
ＨＳＣの増加は、上記のサイトカインおよび増殖因子を加えた基本培地中で行い得る。基本培地は、典型的に、アミノ酸、炭素源、ビタミン類、血清タンパク質(例えばアルブミン)、無機塩、二価のカチオン、緩衝液およびＨＳＣ増加に使用するのに適当な他の何れかの要素を含む。ＨＳＣを増加する方法に適切な当該基本培地の例は、StemSpan(登録商標) SFEM - Serum-Free Expansion Medium (StemCell Technologies, Vancouver, Canada)、StemSpan(登録商標) H3000 - Defined Medium (StemCell Technologies, Vancouver, Canada)、CellGro(登録商標) SCGM (CellGenix, Freiburg, Germany)、StemPro(登録商標)-34 SFM (Invitrogen)を含み、これらに限定されない。
【０１２１】
一つの態様において、本発明の化合物、または、アリール炭化水素受容体および／またはアリール炭化水素受容体経路の下流エフェクターの活性および／または発現を下方制御することができる薬物は、当該出発細胞集団の増加方法の間、ＨＳＣ発現に適切な濃度で投与される。一つの具体的態様において、当該化合物またはＡｈＲ調節剤は、１ｐＭ〜１００μＭ、例えば１０ｐＭ〜１０μＭ、または１００ｐＭ〜１μＭの濃度で投与される。
【０１２２】
出発細胞集団が１単位または２単位の臍帯血単位から本質的にＣＤ３４＋細胞で富化した細胞からなる一つの具体的な態様において、細胞は、ＨＳＣ増加のための条件下で、３日から約９０日間、例えば７日間〜２日間で、および／または示された倍数まで増加して特徴的な細胞集団が得られるまで増殖させる。一つの具体的態様において、細胞は、ＨＳＣ増加のための条件下、２１日間以下、１４日間以下または７日間以下増殖させる。
【０１２３】
一つの態様において、出発細胞集団は、ＣＤ３４＋細胞の絶対数が少なくとも１０５個、１０６個、１０７個、１０８個または１０９個の細胞に至るのに十分な時間培養される。他の態様において、当該出発細胞集団は、ＣＤ３４＋細胞数が１０〜５００００倍、例えば１００倍〜１００００倍まで増加するのに十分な時間培養される。
【０１２４】
増加方法後に得られた細胞集団は、さらに精製することなく用いても、さらなる精製工程または選択工程を行ってもよい。
【０１２５】
細胞集団は、次いで、本発明の化合物、または、アリール炭化水素受容体および／またはアリール炭化水素受容体経路の下流エフェクターの活性および／または発現を下方制御することができる他の何れかの薬物および／または細胞培養物の他の何れかの成分を除去するために洗浄してもよく、そして、短期使用に適切な細胞懸濁媒体、または、長期保存用媒体、例えば冷凍保存に適当な媒体に再懸濁されてもよい。
【０１２６】
増加方法によって得られた増加させたＨＳＣを有する細胞集団および治療組成物
本発明は、さらに、上記の増加方法によって得ることができるかまたは得られた増加させたＨＳＣを有する細胞集団を提供する。一つの具体的な態様において、当該細胞集団は、哺乳動物の宿主に投与するのに適当な薬学的に許容される媒体に再懸濁し、それによって治療用組成物を提供する。
【０１２７】
本発明の概要で定義した化合物、あるいは、アリール炭化水素受容体および／またはアリール炭化水素受容体経路の下流エフェクターの活性および／発現を下方制御することができる薬物は、ＨＳＣの増加を可能とし、例えば１単位または２単位の臍帯血から、必要とするヒトの患者において有効な短期間および長期間の生着に、量的および質的に適切な細胞集団を提供する。特に、本発明は、１単位または２単位までの臍帯血単位に由来する増加させたＨＳＣを有する細胞集団を含む組成物に関し、治療組成物は、少なくとも１０５個、１０６個、１０７個、１０８個または１０９個の細胞総量を含み、ＣＤ３４＋細胞である細胞を総量の２０〜１００％、例えば４０〜８０％含む。一つの関連する態様において、組成物は、ＣＤ３４＋ Ｔｈｙ１＋である細胞を総量の０.１〜４０％、例えば０.１〜１０％と、ＣＤ３４＋ ＣＤ４５ＲＡ＋である細胞を２０〜８０％含む。幾つかの具体的な態様において、組成物は、ＣＤ３８＋である細胞を１０〜９５％と、ＣＤ１３３＋である細胞を５〜７０％含む。
【０１２８】
治療組成物の使用
本発明は、さらに、増加させたＨＳＣを有する細胞集団、または、哺乳動物の対象において同種または自家幹細胞移植に使用するためのその組成物を提供する。
【０１２９】
本明細書で言う対象は、例えば、骨髄ドナーであるか、または、血液細胞レベルが枯渇しているかまたは制限されているまたはそのリスクがある個体を言う。所望により、対象は、骨髄を採取する前の骨髄ドナーであるか、または骨髄採取後の骨髄ドナーである。対象は、所望により骨髄移植レシピエントである。本明細書に記載された方法は、特に、骨髄の保存量が限定されている対象、例えば高齢の対象、あるいは、例えば白血病またはリンパ腫を処置するために、免疫枯渇処置または骨髄破壊処置、例えば化学療法に予め曝露した対象に有用である。対象は、所望により、減少させた血液細胞レベルを有するか、コントロールの血液細胞レベルと比較して減少した血液細胞レベルとなるリスクがある。本明細書で用いられるとき、用語コントロールの血液細胞レベルは、対象において血液細胞レベルを変化させる事象がある前または当該事象が実質的にない対象での平均血液細胞レベルを言う。対象において血液細胞レベルを変化させる事象は、例えば、貧血、外傷、化学療法、骨髄移植および放射線治療を含む。例えば、対象は、貧血を有するか、あるいは、例えば外傷のために血液が減少している。
【０１３０】
増加させたＨＳＣの集団、または、増加させたＨＳＣを有する細胞集団を含む組成物は、対象、例えば化学療法、放射線治療または骨髄移植の前に、それと同時に、またはその後に投与される。対象は、所望により、骨髄減少または骨髄枯渇によって特徴付けられる先天性、遺伝性または後天性の症候群に関係して、骨髄が枯渇している。従って、対象は、所望により造血に必要性がある対象である。所望により、対象は、骨髄ドナーであるか、あるいは、骨髄が枯渇しているまたはそのリスクがある対象である。
【０１３１】
造血幹細胞操作は、化学療法または放射線治療への追加処置として有用である。例えば、化学療法を受ける対象から、ＨＳＣを末梢血に局在化させ単離し、化学療法後、細胞を戻す。従って、対象は、免疫細胞枯渇処置、例えば化学療法、放射線治療を受けているまたは受けると予想される対象であるか、または骨髄移植のためのドナーとなる対象である。骨髄は、身体において最も増殖性の組織の１つであり、従って、しばしば化学療法剤や放射線によって最初に損傷を受ける器官である。その結果、血液細胞産生が化学療法または放射線処置の間に急速に破壊され、患者が化学療法で再度処置される前に、造血系が血液細胞供給を補充することを可能とするために、化学療法または放射線を終える必要がある。従って、本明細書に記載されるとき、本明細書に記載された方法によって作られたＨＳＣまたは血液細胞は、所望により、さらなる血液細胞を必要とする対象に投与される。
【０１３２】
本発明の化合物、または、アリール炭化水素受容体および／またはアリール炭化水素受容体経路の下流エフェクターの活性および／または発現を下方制御することができる薬物によって増加させたＨＳＣ、あるいは、in vivo、in vitroまたはex vivoでＨＳＣ増殖を増強することができる治療剤(例えば小分子、抗体など)および所望により少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤または担体と組み合わせた、上で記載された増加させたＨＳＣを有する組成物が提供される。ＨＳＣ増殖を増強することができる治療剤は、ＴＰＯ受容体に対するアゴニスト抗体(例えばＶＢ２２Ｂ ｓｃ(Ｆｖ)２など、特許明細書WO 2007/145227に詳述)；サイトカイン、例えばＳＣＦ、ＩＬ−６、Ｆｌｔ−３リガンド、ＴＰＯまたはＴＰＯミメティック(例えばWO/2007/022269；WO/2007/009120；WO/2004/054515；WO/2003/103686；WO/2002/085343；WO/2002/049413；WO/2001/089457；WO/2001/039773；WO/2001/034585；WO/2001/021180；WO/2001/021180；WO/2001/017349；WO/2000/066112；WO/2000/035446；WO/2000/028987；WO/2008/028645などに記載されたもの)；顆粒球コロニー刺激因子(Ｇ−ＣＳＦ)；顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(ＧＭ−ＣＳＦ)；プロスタグランジンまたはプロスタグランジン受容体アゴニスト(例えばプロスタグランジンＥ２受容体−１(ＥＰ−Ｉ)アゴニスト、プロスタグランジンＥ２受容体−２(ＥＰ−２)アゴニスト、プロスタグランジンＥ２受容体−３(ＥＰ−３)アゴニストおよびプロスタグランジンＥ２受容体−４(ＥＰ−４)アゴニスト(特許明細書WO/2008/073748に詳述))；テトラエチレンペンタアミン(ＴＥＰＡ)；ノッチ・リガンド(Delta-1)；および／またはＷＮＴアゴニストを意味する。さらに、間葉系幹細胞(ＭＳＣ)と共に幹細胞を培養することが、移植片対宿主病(ＧＶＨＤ)を防ぎ、幹細胞増殖を助け得る。ＭＳＣおよび幹細胞は、全培養として移植され得る。
【０１３３】
薬学的に許容される、によって、生物学的にまたはその他の点で、望ましくないことがない物質、すなわち望ましくない生物学的作用を起こすことなく、または有害な方法で医薬組成物に含まれる他の成分と相互作用することなく対象または細胞に投与され得る物質を意味する。担体または賦形剤は、有効成分の分解を最少にし、かつ対象または細胞における有害な副作用を最少にするよう選択される。
【０１３４】
組成物は、本明細書で記載された方法に使用するための何れかの慣用の方法で製剤化される。投与は、当業者によって有効と知られている何れかの経路による。例えば、本組成物は、経口で、非経腸で(例えば静脈内で)、筋肉内注射によって、腹腔内注射によって、経皮で、体外で、鼻腔内でまたは局所で投与される。
【０１３５】
好ましい投与方法は、静脈内注入である。注入される細胞の数は、性別、年齢、体重、疾患または障害のタイプ、障害の段階、細胞集団中の望ましい細胞のパーセンテージ、および治療上の利益を得るのに必要な細胞の量などの因子を考慮に入れる。一つの特定の態様において、本組成物は、静脈内注入によって投与され、少なくとも１０４細胞/kg、１０５〜５×１０７細胞/kg、必要であればそれ以上を含む。一つの具体的な態様において、注入される細胞は、単胎出産から集められた臍帯血細胞を増加させて得られた全ての細胞である。
【０１３６】
細胞を含む組成物を患者に注入するための薬学的に許容される担体は、典型的に、５％ＨＳＡを加えた緩衝食塩水または未添加の基本培地または当技術分野で既知の媒体を含む。
【０１３７】
経口投与のために、組成物は、例えば、結合剤(例えば予めゼラチン化したトウモロコシ澱粉、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピル メチルセルロース)；充填剤(例えば乳糖、微晶性セルロースまたはリン酸水素カルシウム)；滑沢剤(例えばステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ)；崩壊剤(例えばじゃがいも澱粉または澱粉グリコール酸ナトリウム)；または湿潤剤(wetting agent)(例えばラウリル硫酸ナトリウム)などの薬学的に許容される賦形剤と共に慣用の方法によって製造される錠剤またはカプセル剤の形態をとる。錠剤は、当技術分野で周知の方法によって被覆される。経口投与のための液体製剤は、例えば、溶液、シロップ剤または懸濁液の形態をとるか、あるいは、使用前に水または他の適当なビークルで構成するための乾燥製剤として提供され得る。このような液体製剤は、懸濁剤(例えばソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素化食用油脂)；乳化剤(例えばレシチンまたはアラビアゴム)；非水性ビークル(例えばアーモンド油、油性エステル、エチルアルコールまたは分画された植物油)；および保存料(例えばメチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸)などの薬学的に許容される添加剤と共に、慣用の方法によって製造される。製剤は、適切な場合は、所望により緩衝性塩、風味剤、着色料、および甘味料を含む。
【０１３８】
組成物は、注射、例えばボラス注射または連続注入による非経腸投与のために製剤化される。注射用製剤は、例えばアンプル中で単位投与形で、または多回投与用容器中で、保存料を添加してまたは添加せずに提供される。組成物は、油性または水性ビークル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンなどの形態をとり、懸濁剤、安定剤および／または分散剤などの製剤化剤を含んでもよい。あるいは、有効成分は、使用前に、適当なビークル、例えば滅菌処理されたパイロジェンを含まない水で構成するための粉末の形態である。一般的に、水、適当な油、食塩水、水性ブドウ糖(グルコース)、および関連する糖溶液およびグリコール、例えばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールは、非経腸溶液に適当な担体である。非経腸投与のための溶液は、例えば、有効成分の水溶性塩、適当な安定剤、必要であれば緩衝物質を含む。抗酸化剤、例えば重硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸の何れか単独またはその組み合わせが、適当な安定剤である。また、クエン酸およびその塩、ならびにエチレンジアミンテトラ酢酸ナトリウム(ＥＤＴＡ)が所望により用いられる。さらに、非経腸溶液は、所望により、保存料、例えば塩化ベンザルコニウム、メチル−またはプロピル−パラベンおよびクロロブタノールを含む。適当な薬学的担体は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, David B. Troy, ed., Lippicott Williams & Wilkins (2005)(言及することによって、少なくとも薬学的担体および組成物に関する物質についての全てが組み込まれている)に記載されている。
【０１３９】
組成物は、所望によりデポー製剤として製剤化される。このような長時間作用製剤は、所望により埋め込みによって投与される。従って、例えば、組成物は、適当なポリマー物質または疎水性物質(例えば許容される油中のエマルジョンとして)またはイオン交換樹脂と共に、あるいは溶解性の低い誘導体として、例えば溶解性の低い塩として製剤化される。組成物は、手術用インプラントと同時にまたはその後に、インプラントに適用されるか、またはインプラントと共に包埋される。
【０１４０】
さらに、作用の持続時間を制御するために、標準的な薬学的方法が用いられる。これらは、制御放出製剤および適切な巨大分子、例えばポリマー、ポリエステル、ポリアミノ酸、ポリビニル、ポリビニル、ピロリドン、エチレンビニルアセテート、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたは硫酸プロタミンを含む。巨大分子の濃度および組み込み方法は、制御放出のために調節される。所望により、該剤は、ポリマー物質、例えばポリエステル、ポリアミノ酸、ヒドロゲル、ポリ(乳酸)またはエチレンビニルアセテートのコポリマーの粒子に組み込まれる。組み込みに加えて、これらの剤は、所望によりミクロカプセル中に本化合物を捕捉するために用いられる。
【０１４１】
本明細書に記載された方法に使用するための組成物は、所望により持続性および／または時間指定放出製剤として製剤化される。このような持続性および／または時間指定放出製剤は、当業者に周知の持続性放出手段または送達デバイスによって製造される。本組成物は、例えば、望ましい放出プロファイルを変化させた割合で提供するために、ヒドロプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、ゲル、透過膜、浸透系、多層コーティング、ミクロ粒子、リポソーム、マイクロスフェアまたはそれらの組み合わせを用いて、１種以上の有効成分の遅延または持続性放出を提供するために用いられる。適当な持続性放出製剤は、本明細書に記載された組成物で使用するために選択される。従って、持続性放出に適合させた錠剤、カプセル剤、ジェルカップ、カプレット、散剤などであってこれらに限定されない経口投与に適当な１回単位投与形が用いられる。
【０１４２】
組成物は、所望により制御放出系によって送達される。例えば、組成物は、静脈内注入、埋め込み可能な浸透圧ポンプ、リポソームまたは他の投与方法を用いて投与される。制御放出系は、標的近くに置かれる。
【０１４３】
所望により、組成物を局所的に、すなわち処置を必要とする領域に投与することが望ましい。例えば本組成物は、長い骨の骨髄へ注射することによって投与される。例えば、手術の間の局所注入、局所適用(例えば手術後の創傷被覆材と組み合わせて)、注射、カテーテル、坐剤またはインプラントによって、局所投与が達成される。インプラントは、多孔性、非多孔性、またはゼラチン状物質のものであり、膜、例えばシラスティック膜、繊維を含む。
【０１４４】
本明細書に記載された医薬組成物は、個別の治療有効成分としてまたは複数の治療有効成分の組み合わせ剤で、複数の医薬を併用するのに利用可能な何れかの慣用の方法によって投与される。それらは、所望により単独で投与されるが、一般的に、選択された投与経路および製薬上の常法に基づいて選択された薬学的担体と共に投与される。
【０１４５】
本明細書に記載された化合物は、薬学的に許容される塩および誘導体を含む薬学的に許容される形態で提供される。用語薬学的に許容される形態は、一般的に安全で、比較的毒性がなく、生物学的またはその他の点でのぞましくないことがない、本明細書で記載された化合物を含む組成物を言う。これらの組成物は、所望により、用いられる投与量および濃度で、それに曝露される細胞または対象に非毒性である薬学的に許容される担体または安定剤を含む。生理学的に許容される担体の例は、緩衝液、例えばリン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、例えば他の有機酸；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量(約１０残基未満)ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン；ブドウ糖、マンノースまたはデキストリンを含む単糖類、二糖類および他の炭水化物；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖アルコール、例えばマンニトールまたはソルビトール；塩形成カウンターイオン、例えばナトリウム；および／または非イオン性界面活性剤、例えばTWEEN(商標)(Uniqema, United Kingdom)、ポリエチレン グリコール(ＰＥＧ)およびPLURONICS(商標)(BASF, Germany)を含む。
【０１４６】
用語薬学的に許容される酸の塩および誘導体は、生物学的有効性および記載された性質を保持し、かつ生物学的またはその他の点で望ましくないことがない、本明細書で記載された式Ｉの化合物の塩および誘導体を言う。薬学的に許容される塩は、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など、ならびに有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などと形成されるものである。
【０１４７】
式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩またはエステルを含む組成物の化学的安定性は、当業者に既知の方法によって高められる。例えば、ポリエトキシ化ソルビトールのアルカン酸エステル(ポリソルベート類)を、式Ｉの化合物を含む組成物に、化合物の化学的安定性を高めるのに有効な量で加える。
【０１４８】
細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータは、所望により、ヒトでの使用における投与量範囲を公式化するのに用いられる。このような化合物の投与量は、好ましくは、毒性がほとんどないまたは全くない循環濃度の範囲内とされる。投与量は、この範囲内で、用いられる投与形および利用される投与経路に応じて変化する。提供される方法に使用される何れの化合物においても、治療有効量は、当初、細胞培養アッセイから算出される。
【０１４９】
本明細書に記載された１種以上の成分を充填した１つ以上の容器を含むパックまたはキットが本発明で提供される。このようなキットは、必要な場合または望ましい場合、所望により溶液および緩衝液を含む。キットは、所望により、上で記載された方法によって得た増加させた幹細胞の集団を含むか、または、増加させたＨＳＣの集団を得るための容器または組成物を含んでもよい。特に、本発明は、ex vivoで造血幹細胞を増加させるためのキットであって、本発明の概要で定義された化合物、および当該化合物のＨＳＣ増加方法における使用のための説明書、および、所望により、１種以上のサイトカインまたは増殖因子、または上で記載された造血幹細胞増殖のための培地を含むキットを提供する。キットは、さらに、細胞の生産をモニターするための抗体、例えば抗ＣＤ３４、抗ＣＤ１３３、抗ＣＤ３８、抗ＣＤ４５ＲＡおよび／または抗Ｔｈｙ１抗体を含んでもよい。一つの具体的態様において、このようなキットは、さらに、ＩＬ６、ＦＬＴ３−Ｌ、ＳＣＦおよびＴＰＯからなる群から選択される１種以上のサイトカインまたは増殖因子を含む。所望により、このようなパックまたはキットは、使用のための説明書を伴う。
【０１５０】
また、対象においてＨＳＣを増加させるために有効量の本発明の化合物を提供するためのキットであって、キット中の総投与回数分の本発明の化合物が対象においてＨＳＣを増加させるのに十分に有効な量に等しい、一定期間に亘って使用するための１回分以上の投与量の化合物を含むキットを提供する。該期間は、約１日から数日または数週または数ヶ月である。従って、該期間は、少なくとも約５日、６日、７日、８日、１０日、１２日、１４日、２０日、２１日、３０日または６０日以上であるか、または１日〜９０日の何れかの日数である。
【０１５１】
本発明の化合物を合成する方法
本発明はまた、本発明の化合物を製造する方法を含む。記載された反応において、最終生成物中で、ヒドロキシ、アミノ、イミノ、チオまたはカルボキシ基などの反応性官能基が望ましいとき、反応において望ましくない関与を避けるために、これらの基を保護することが必要であり得る。慣用の保護基は、標準的な方法に従って用いられ得る。例えば、T.W. Greene and P. G. M. Wuts in “Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley and Sons, 1991を参照のこと。
【０１５２】
下記の反応スキーム１〜５は、本発明の化合物の製造を詳述している。当業者は、下記に詳述した方法による導入の後、基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＬ１の何れかを、望ましい最終の式Ｉの化合物に到達するために、所望によりさらに既知の変換を行い得ると認識するであろう。
【０１５３】
式Ｉの化合物は、下記の反応スキーム１に従って製造され得る。
反応スキーム１
【化６】
0005390626.tif 000007
ここで、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は、本発明の概要の式Ｉで定義した通りであり、式ＩのＬは、反応スキーム中で−ＮＨ−Ｌ１−として定義され、例えば−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)０−３− (ここで、Ｒ５ａは水素であり、−(ＣＨ２)０−３−がＬ１である。)と等価である。
【０１５４】
式Ｉの化合物は、式(２)の化合物を、式(３)の化合物と、適当な触媒(例えばＰｄ２(ｄｂａ)３など)の存在下、適当なリガンド(例えば塩化 １,３−ビス(２,４,６−トリメチルフェニル)イミダゾリウム)、適当な塩基(例えばＣｓ２ＣＯ３など)および適切な溶媒(例えば１,４−ジオキサン)の存在下、約８０℃から１００℃の温度で、２時間から約４８時間反応させることによって製造され得る。式(２)の化合物は、式(４)の化合物を、僅かに過剰量の式(５)のアミン化合物と、適切な溶媒(例えばイソプロパノール)中、約室温から約８０℃の温度で反応させることによって製造され得る。式(４)の化合物は、式(６)の化合物を、Ｘ１が塩素、臭素、ヨウ素またはスルホネートエステルである適当なアルキル化剤(７)で、適当な塩基(例えば水素化ナトリウムまたは炭酸カリウム)の存在下、適当な溶媒(例えばＤＭＦ)中、約０℃から約８０℃の温度で、アルキル化することによって製造され得る。あるいは、この反応は、ミツノブ条件下、適当なアルコールＲ４−ＯＨを用いて、適当なホスフィン(例えばトリフェニルホスフィン)およびアゾジカルボキシレート(例えばジエチルアゾジカルボキシレート)の存在下、不活性溶媒中、例えばＴＨＦまたはトルエン中、約０℃から約室温の温度で行われ得る。
【０１５５】
Ｇ１がＣＲ３であり、他の全てのＧ基がＮである式Iaの化合物はまた、下記の反応スキーム２の通りに進めることによって製造され得る。
反応スキーム２
【化７】
0005390626.tif 000008
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、本発明の概要の式Ｉで定義した通りであり、式ＩのＬは、反応スキーム中で−ＮＨ−Ｌ１−として定義され、例えば−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)０−３− (ここで、Ｒ５ａが水素であり、−(ＣＨ２)０−３−がＬ１である。)と等価である。
【０１５６】
式Ｉの化合物は、式(８)の化合物を、式(５)のアミン化合物と、適切な溶媒(例えばイソプロパノール)中、約室温から約１００℃の温度で反応させることによって製造され得る。式(８)の化合物は、式(９)の化合物を、式(３)の化合物と、適当な触媒(例えばＰｄ(Ｐｈ３Ｐ)４、Ｐｄ２(ｄｂａ)３など)の存在下、所望により適切なリガンド(例えば塩化 １,３−ビス(２,４,６−トリメチルフェニル)イミダゾリウム)、適当な塩基(例えばＣｓ２ＣＯ３など)および適切な溶媒(例えば１,４−ジオキサン)の存在下、約８０℃から１００℃の温度で、２時間から約４８時間反応させることによって製造され得る。式(９)の化合物は、式(１０)の化合物を、ジヨードメタン、ヨウ化銅(I)および亜硝酸アルキル(例えば亜硝酸イソアミル)の混合物と、所望により不活性溶媒の存在下、約５０℃から１００℃の温度で反応させることによって製造され得る。式(１０)の化合物は、式(１１)の化合物を、Ｘ１が塩素、臭素、ヨウ素またはスルホネートエステルである適当なアルキル化剤(７)で、適当な塩基(例えば水素化ナトリウムまたは炭酸カリウム)の存在下、適当な溶媒(例えばＤＭＦ)中、約０℃から約８０℃の温度で、アルキル化することによって製造され得る。あるいは、反応は、ミツノブ条件下、適当なアルコールＲ４−ＯＨを用いて、適当なホスフィン(例えばトリフェニルホスフィン)およびアゾジカルボキシレート(例えばジエチルアゾジカルボキシレート)の存在下、不活性溶媒中、例えばＴＨＦまたはトルエン中、約０℃から約室温の温度で行う。
【０１５７】
Ｒ１がＮ結合ヘテロシクリルまたはＮ結合ヘテロアリールである式Ｉの化合物のサブセットである式IIの化合物は、下記の反応スキーム３に詳述した通りに製造され得る。
反応スキーム３
【化８】
0005390626.tif 000009
ここで、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は、本発明の概要の式Ｉで定義した通りであり、式ＩのＬは、−ＮＨ−Ｌ１−として定義され、例えば−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)０−３− (ここで、Ｒ５ａは水素であり、−(ＣＨ２)０−３−はＬ１である。)と等価である。式IIの化合物は、過剰量の環状アミンまたはＮＨを有するヘテロ環(例えば置換ピラゾール、置換イミダゾールなど)の存在下、約５０℃から約２５０℃の温度で、約１時間から約２４時間、所望により塩基、例えば水素化ナトリウムまたはＤＢＵの存在下、式(２)の化合物を式(20)の化合物と反応させることによって製造され得る。
【０１５８】
Ｇ１がＣＲ３であり、他の全てのＧ基がＮである式(１０)の化合物はまた、下記の反応スキーム４の通りに進めることによって製造され得る。
反応スキーム４
【化９】
0005390626.tif 000010
ここで、Ｒ３およびＲ４は、本発明の概要の式Ｉで定義した通りである。式(１０)の化合物は、J. Med. Chem, 1972, 456, and J. Med. Chem., 1992, 4180に記載された手順に従って製造され得る。式(２１)のオルトエステル化合物を、式(２２)の化合物と、所望により酸、例えば酢酸の存在下、約室温から約１５０℃の温度で、約１時間から約２４時間反応させた。式(２２)の化合物は、式(２３)の化合物を、式(２４)の第１級アミン化合物と、所望により酸、例えばｐＴＳＡ、または、塩基、例えばトリエチルアミンもしくはＤＢＵの存在下、約５０℃から約２００℃の温度で反応させることによって製造され得る。
【０１５９】
式IVの化合物は、下記の反応スキーム５に詳述した通りに製造され得る。
反応スキーム５
【化１０】
0005390626.tif 000011
ここで、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、Ｒ１およびＲ２は、本発明の概要の式Ｉで定義した通りであり、式ＩのＬは、−ＮＨ−Ｌ１−として定義され、例えば−ＮＲ５ａ(ＣＨ２)０−３− (ここで、Ｒ５ａは水素であり、−(ＣＨ２)０−３−はＬ１である。)と等価である。Ｒ２０およびＲ２１は、水素およびＣ１−４アルキルから独立して選択される。Ｒ２１が水素である式IVの化合物は、式IIIの化合物から、適当な還元剤、例えば水素化リチウムアルミニウムまたは水素化ジイソブチルアルミニウムで、適当な溶媒中、例えばＴＨＦまたはトルエン中、約−７８℃から約５０℃の温度で処理することによって製造され得る。反応の完了には０.５時間から約１６時間かかる。Ｒ２１が低級アルキルである式IVの化合物は、式IIIの化合物を、アルキル リチウムまたはグリニャール試薬で、適当な溶媒中、例えばエーテルまたはテトラヒドロフラン中、約−７８℃から約５０℃の温度で処理することによって製造され得る。反応の完了には０.５時間から約１６時間かかる。
式Ｉの化合物の合成の詳細な例は、下記の実施例で見出され得る。
【０１６０】
本発明の化合物を合成するための追加的方法
本発明の化合物は、遊離塩基形の本化合物を薬学的に許容される無機酸または有機酸と反応させることによって、薬学的に許容される酸付加塩として製造され得る。あるいは、本発明の化合物の薬学的に許容される塩基付加塩は、遊離酸形の本化合物を、薬学的に許容される無機塩基または有機塩基と反応させることによって製造され得る。あるいは、塩形の本発明の化合物は、出発物質または中間体の塩を用いて製造され得る。
【０１６１】
例えば、塩形の４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(下記の実施例１)を、次の通り合成した。
【０１６２】
メシル酸塩：４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール遊離塩基(０.６０ｇ；１.４０mmol)を、１２mlのアセトンに５０℃で溶解する。メタンスルホン酸(０.１３７ｇ；１.４０mmol)を滴下する。結晶化が素早く起こる。白色の懸濁液を約３０分かけて室温まで冷却する。スラリーを室温で１８時間撹拌し、濾過する。固体をアセトン(６ml)で３回に分けて洗浄し、最初に５０℃／約１０mbarで約３時間、次いで８０℃／約１０mbarで約１６時間乾燥する。この物質は、約２３３℃の融点を有し、融解エンタルピーは９８Ｊ／ｇである。生じた物質は、乾燥後０.２％の減少を示した。相対湿度(８０％ｒｈ)に２４時間暴露した後、水の取り込みを熱重量分析によって算出した。０.４％の水の取り込みを観察した。
【０１６３】
他の態様において、本発明は、実施例１の化合物のメシル酸塩を提供する。さらなる態様において、本発明は、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：6.4、6.7、18.3、18.6、26.9を含む；さらなる態様において、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：6.4、6.7、10.3、12.9、16.4、18.3、25.8、26.5、26.9を含む、実施例１の化合物のメシル酸塩を提供する。
【０１６４】
また、さらなる態様において、本発明は、本願の図３に示した粉末Ｘ線回折パターンを有する実施例１の化合物のメシル酸塩を提供する。
【０１６５】
トシル酸塩：４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール遊離塩基(０.６０ｇ；１.４０mmol)を５０℃で１２mlに溶解する。アセトン(１.２ml)中のパラ−トルエンスルホン酸一水和物(０.２７１ｇ；１.４０mmol)の溶液を滴下する。５０℃で溶液に種晶を加えると、素早く結晶化が起こる。懸濁液を約３０分かけて室温まで冷却し、約１８時間撹拌する。濾過後、固体をアセトン(６ml)で３回に分けて洗浄し、最初に５０℃／約１０mbarで約３時間、次いで８０℃／約１０mbarで約１６時間乾燥する。この物質は約２３３℃の融点を融し、融解エンタルピーは８８Ｊ／ｇである。生じた物質は乾燥後０.２％の減少を示した。相対湿度(８０％ｒｈ)に２４時間暴露した後、水の取り込みを熱重量分析によって算出した。０.４％の水の取り込みを観察した。
【０１６６】
他の態様において、本発明は、実施例１の化合物のトシル酸塩を提供する。さらなる態様において、本発明は、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：6.2、13.3、16.7、19.5、25.4を含む；さらなる態様において、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：6.2、7.6、12.4、13.3、15.1、16.7、17.7、19.5、20.2、24.6、24.9、25.4、25.6を含む、実施例１の化合物のトシル酸塩を提供する。
【０１６７】
また、さらなる態様において、本発明は、本願の図４に示した粉末Ｘ線回折パターンを有する実施例１の化合物のトシル酸塩を提供する。
【０１６８】
硫酸塩：４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール遊離塩基(０.６０ｇ；１.４０mmol)を、１０mlのアセトンおよび１mlの水に約５５℃で溶解する。１mlの水中の硫酸(０.２８０ｇ；２.７９mmol)の溶液を滴下する。結晶化が素早く起こる。懸濁液を約３０分間かけて室温まで冷却し、約１８時間撹拌し、濾過する。フィルターケーキを６mlのアセトンで３回に分けて洗浄し、最初に５０℃／約１０mbarで約３時間、８０℃／約１０mbarで約１６時間乾燥した。この物質は約２２４℃の融点を有し、融解エンタルピーは９１Ｊ／ｇである。生じた物質は乾燥後０.０５％未満の減少を示した。相対湿度(８０％ｒｈ)に２４時間暴露した後、水の取り込みを熱重量分析によって算出した。０.２％の水の取り込みを観察した。
【０１６９】
他の態様において、本発明は、実施例１の化合物の硫酸塩を提供する。さらなる態様において、本発明は、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：6.5、6.8、10.7、13.5、26.4、27.6を含む；さらなる態様において、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：6.5、6.8、10.7、13.1、13.5、18.6、18.8、20.8、26.4、27.1、27.6を含む実施例１の化合物の硫酸塩を提供する。
【０１７０】
また、さらなる態様において、本発明は、本願の図６に示した粉末Ｘ線回折パターンを有する実施例１の化合物の硫酸塩を提供する。
【０１７１】
エシル酸塩：４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール遊離塩基(０.６０ｇ；１.４０mmol)を、１２mlのアセトンに５０℃で溶解する。エタンスルホン酸(０.１５５ｇ；１.４０mmol)を滴下する。結晶化が素早く起こる。得られた白色の懸濁液を約３０分かけて室温まで冷却する。懸濁液を室温で約１８時間撹拌し、濾過する。固体を６mlのアセトンで３回に分けて洗浄し、最初に５０℃／約１０mbarで約３時間、次いで８０℃／約１０mbarで約１６時間乾燥した。この物質は約２３１℃の融点を有し、融解エンタルピーは７６Ｊ／ｇである。生じた物質は乾燥後０.６％の減少を示した。相対湿度(８０％ｒｈ)に２４時間暴露した後、水の取り込みを熱重量分析によって算出した。０.０５％の水の取り込みを観察した。
【０１７２】
他の態様において、本発明は、実施例１の化合物のエシル酸塩を提供する。さらなる態様において、本発明は、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：6.3、9.9、18.4、25.3、26.1を含む；さらなる態様において、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：6.3、9.9、17.1、17.9、18.4、19.0、22.0、25.3、26.1、27.1を含む、実施例１の化合物のエシル酸塩を提供する。
【０１７３】
また、さらなる態様において、本発明は、本願の図８に示した粉末Ｘ線回折パターンを有する実施例の化合物のエシル酸塩を提供する。
【０１７４】
臭化水素酸塩：４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール遊離塩基(０.６０ｇ；１.４０mmol)を、６mlのＤＭＦに６５℃で溶解する。４８％の臭化水素酸(０.２３５ｇ；１.４０mmol)を滴下する。溶液を約３０分かけて室温まで冷却する。種晶を５５℃で加え、結晶化がゆっくりと起こる。懸濁液を室温で約１８時間撹拌し、濾過する。固体を４mlのＤＭＦ／水  １：１で、そして６mlの水で洗浄する。塩は、最初に５０℃／約１０mbarで約３時間、次いで８０℃／約１０mbarで約１６時間乾燥する。この物質は、約２８５℃の融点を有し、融解エンタルピーは１１９Ｊ／ｇである。生じた物質は、乾燥後１.０％の減少を示した。相対湿度(８０％ｒｈ)に２４時間暴露した後、水の取り込みを熱重量分析によって算出した。水の取り込みは観察されなかった。
【０１７５】
他の態様において、本発明は、実施例１の化合物の臭化水素酸塩を提供する。さらなる態様において、本発明は、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：7.0、25.9、26.8、27.9を含む；さらなる態様において、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：7.0、11.4、13.3、21.4、23.4、25.9、26.4、26.8、27.9を含む、実施例１の臭化水素酸塩を提供する。
【０１７６】
また、さらなる態様において、本発明は、本願の図９に示した粉末Ｘ線回折パターンを有する実施例１の化合物の臭化水素酸塩を提供する。
【０１７７】
オロト酸塩：４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール遊離塩基(０.６０ｇ；１.４０mmol)およびオロト酸(０.２２２ｇ；１.４０mmol)を７.８mlのＮＭＰ(１−メチル−２−ピロリドン)に８５℃で溶解する。溶液を６０℃に冷却し、６mlの水を約５分かけて滴下した。得られた白色の懸濁液を約３０分かけて室温まで冷却し、１８時間撹拌する。濾過後、フィルターケーキを４mlのＮＭＰ／水  １：１で２回に分けて、６mlの水で３回に分けて洗浄する。固体を５０℃／約１０mbarで約３時間、次いで８０℃／約１０mbarで約１６時間乾燥する。この物質は約２４０℃の融点を有し、融解エンタルピーは１３０Ｊ／ｇである。生じた物質は、乾燥後０.０５％未満の減少を示した。相対湿度(８０％ｒｈ)に２４時間暴露した後、水の取り込みを熱重量分析によって算出した。１.７％の水の取り込みを観察した。
【０１７８】
他の態様において、本発明は、実施例１の化合物のオロト酸塩を提供する。さらなる態様において、本発明は、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：7.1、16.3、19.2、23.5、25.6、26.9を含む；さらなる態様において、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：7.1、14.4、16.3、18.6、19.2、21.7、23.0、23.5、25.6、26.9、28.7を含む実施例１の化合物のオロト酸塩を提供する。
【０１７９】
また、さらなる態様において、本発明は、本願の図１０に示された粉末Ｘ線回折パターンを有する実施例１の化合物のオロト酸塩を提供する。
【０１８０】
ヘミフマル酸：４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール遊離塩基(０.６０ｇ；１.４０mmol)を、１８mlのメタノールに６５℃で溶解する。フマル酸(０.１６４ｇ；１.４０mmol)および６mlのメタノールを加える。溶液を約３０分かけて室温まで冷却する。いくらかの種晶を６０℃で加えると、結晶化がゆっくりと起こる。懸濁液を室温で１８時間撹拌し、濾過する。固体を６mlのメタノールで３回に分けて洗浄し、最初に５０℃／約１０mbarで約３時間、次いで８０℃／約１０mbarで約１６時間乾燥する。この物質は約２３２℃の融点を有し、融解エンタルピーは８３Ｊ／ｇである。生じた物質は、乾燥後０.０５％未満の減少を示した。相対湿度(８０％ｒｈ)に２４時間暴露した後、水の取り込みを熱重量分析によって算出した。０.３％の水の取り込みを観察した。
【０１８１】
他の態様において、本発明は、実施例１の化合物のヘミフマル酸塩を提供する。さらなる態様において、本発明は、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：7.2、8.7、14.4、15.8、17.4、19.0、23.7を含む；さらなる態様において、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：7.2、8.7、10.8、14.4、15.8、17.4、17.8、19.0、20.1、23.7、27.5を含む、実施例１の化合物のヘミフマル酸塩を提供する。
【０１８２】
また、さらなる態様において、本発明は、本願の図１１に示した粉末Ｘ線回折パターンを有する実施例１の化合物のヘミフマル酸塩を提供する。
【０１８３】
ベシル酸塩：４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール遊離塩基(０.６０ｇ；１.４０mmol)を、１２mlのアセトンに５０℃で溶解する。１.２mlのアセトン中のベンゼンスルホン酸(０.２２５ｇ；２.７９mmol)の溶液を滴下する。種晶を４８℃で加えると、結晶化がゆっくりと起こる。懸濁液を約３０分かけて室温まで冷却する。スラリーを室温で約１８時間撹拌し、濾過する。この塩を６mlのアセトンで、３回に分けて洗浄し、最初に５０℃／約１０mbarで約３時間、次いで８０℃／約１０mbarで約１６時間乾燥する。この物質は、約２１９℃の融点を有し、融解エンタルピーは９２Ｊ／ｇである。生じた物質は、乾燥後０.３％の減少を示した。相対湿度(８０％ｒｈ)に２４時間暴露した後、水の取り込みを熱重量分析によって算出した。約０.０５％の水の取り込みを観察した。
【０１８４】
他の態様において、実施例１の化合物のベシル酸塩を提供する。さらなる態様において、本発明は、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：6.2、7.7、17.7、25.5を含む；さらなる態様において、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：6.2、7.7、15.2、16.7、17.1、17.7、19.8、20.2、24.9、25.2、25.5を含む実施例１の化合物のベシル酸塩を提供する。
【０１８５】
また、さらなる態様において、本発明は、本願の図７に示した粉末Ｘ線回折パターンを有する実施例１の化合物のベシル酸塩を提供する。
【０１８６】
ナパジシル酸塩：４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール遊離塩基(０.６０ｇ；１.４０mmol)および０.２５９ｇの１,５−ナフタレンスルホン酸(０.７０mmol)を９mlのＤＭＦに８７℃で溶解する。透明な溶液を約３０分かけて室温まで冷却する。種晶を６５℃で加えると、結晶化がゆっくりと起こる。懸濁液を室温で約１８時間撹拌し、濾過する。固体を４mlのＤＭＦ／水  １：１で２回に分けて、６mlの水で３回に分けて洗浄する。この塩を、最初に５０℃／約１０mbarで約３時間、次いで８０℃／約１０mbarで約１６時間乾燥する。この物質を約３０４℃の融点を有し、融解エンタルピーは８３Ｊ／ｇである。１０７℃で水の喪失によるブロードな吸熱現象が観察される。生じた物質は、乾燥後６.１％の減少を示した。相対湿度(８０％ｒｈ)に２４時間暴露した後、水の取り込みを熱重量分析によって算出した。０.０５％の水の取り込みを観察した。
【０１８７】
他の態様において、本発明は、実施例１の化合物のナパジシル酸塩を提供する。さらなる態様において、本発明は、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：6.4、9.6、13.1、15.7、16.1、26.0を含む；さらなる態様において、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：9.6、13.1、15.7、16.1、16.4、20.4、20.9、23.7、26.0、26.9を含む実施例１の化合物のナパジシル酸塩を提供する。
【０１８８】
また、さらなる態様において、本発明は、本願の図１２に示した粉末Ｘ線回折パターンを有する実施例１の化合物のナパジシル酸塩を提供する。
【０１８９】
塩酸塩：４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール遊離塩基(０.６０ｇ；１.４０mmol)を１２mlのアセトンに５５℃で溶解する。３７％の塩酸(０.１３８ｇ；１.４０mmol)を滴下する。結晶化が素早く起こる。白色の懸濁液を約３０分かけて室温まで冷却し、１８時間撹拌する。濾過後、固体を６mlのアセトンで３回に分けて洗浄し、最初に５０℃／約１０mbarで約３時間、次いで８０℃／約１０mbarで約１６時間乾燥する。この物質は、約１６２℃で−１３.８Ｊ／ｇのエンタルピーで発熱現象を示す。この現象は、より安定な形態への固体の変換に寄与する。発熱現象が約２５９℃で見られ、融解エンタルピーは９９.７Ｊ／ｇである。生じた物質は乾燥後０.６％の減少を示した。相対湿度(８０％ｒｈ)で２４時間暴露後の水の取り込みを熱重量分析によって算出した。０.３％の水の取り込みを観察した。
【０１９０】
他の態様において、本発明は、実施例１の化合物の塩酸塩を提供する。さらなる態様において、本発明は、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：6.1、7.0、19.8、26.1を含む；さらなる態様において、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：6.1、7.0、18.1、19.8、24.7、26.1、27.0、27.7を含む、実施例１の化合物の塩酸塩を提供する。
【０１９１】
また、さらなる態様において、本発明は、本願の図５に示した粉末Ｘ線回折パターンを有する実施例１の化合物の塩酸塩を提供する。
【０１９２】
遊離酸または遊離塩基の形態の本発明の化合物は、それぞれ対応する塩基付加塩または酸付加塩から製造され得る。例えば、酸付加塩の形態の本発明の化合物は、適当な塩基(例えば水酸化アンモニウム溶液、水酸化ナトリウムなど)で処理することによって対応する遊離塩基に変換され得る。塩基付加塩の形態の本発明の化合物は、適当な酸(例えば塩酸など)で処理することによって、対応する遊離酸に変換され得る。実施例１の化合物の硝酸塩は、当業者に既知の方法を用いて合成され得る。粉末Ｘ線回折パターンを、本願の図２に開示している。
【０１９３】
酸化されていない形態の本発明の化合物は、本発明の化合物のＮ−オキシドから、還元剤(例えば硫黄、二酸化硫黄、トリフェニルホスフィン、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素ナトリウム、三塩化リン、三臭化リンなど)で、適当な不活性有機溶媒(例えばアセトニトリル、エタノール、水性ジオキサンなど)中、０〜８０℃で処理することによって製造され得る。
【０１９４】
本発明の化合物のプロドラッグ誘導体は、当業者に既知の方法によって製造され得る(例えば、さらなる詳細については、Saulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985を参照のこと。)。例えば、適切なプロドラッグは、誘導体化されていない本発明の化合物を、適当なカルバミル化剤(例えば１,１−アシルオキシアルキルカルバノクロリデート、パラ−ニトロフェニル カーボネートなど)と反応させることによって製造され得る。
【０１９５】
本発明の化合物の保護誘導体は、当業者に既知の方法によって合成され得る。保護基の付加および除去に応用可能な詳細な記載は、T. W. Greene, “Protecting Groups in Organic Chemistry”, 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999で見出され得る。
【０１９６】
本発明の化合物は、好都合には、溶媒和物(例えば水和物)として製造され得るか、あるいは本発明の工程の間で形成され得る。本発明の化合物の水和物は、好都合には、有機溶媒に、例えばジオキシン、テトラヒドロフランまたはメタノールを用いる水性／有機溶媒混合物から再結晶することによって製造され得る。
【０１９７】
本発明の化合物は、本化合物のラセミ混合物を光学的に活性な分割剤と反応させ、１対のジアステレオアイソマー化合物を形成して、該ジアステレオマーを分離し、光学的に純粋なエナンチオマーを回収することによって、個々の立体異性体として製造され得る。本発明の化合物の共有結合性ジアステレオマー誘導体を用いてエナンチオマーの分離が行われる場合は、分離可能な複合体が好ましい(例えば結晶性ジアステレオマー塩)。ジアステレオマーは、固有の物理学的性質を有し(例えば融点、沸点、溶解度、反応性など)、これらの相違点を利用することによって容易に分離され得る。ジアステレオマーは、クロマトグラフィーによって、あるいは、好ましくは溶解度の違いに基づく分離／分割法によって分離され得る。ラセミ化を起こさない何らかの実用的な方法によって、分割剤を伴って光学的に純粋なエナンチオマーが回収される。ラセミ混合物からの化合物の立体異性体の分離に適用可能な方法のより詳細な記載は、Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, “Enantiomers, Racemates and Resolutions”, John Wiley And Sons, Inc., 1981で見出され得る。本発明の化合物はまた、キラルクロマトグラフィー法を使用することによって、特にキラルの固定相を用いたＨＰＬＣまたはＳＦＣクロマトグラフィーの使用によって、個別の立体異性体として製造され得る。
【０１９８】
本願に添附された粉末Ｘ線回折スペクトルは、Bruker D8 Vario透過型装置を用いて、ＣｕＫα照射(３０kV, ４０mA)、スキャン範囲２°〜４０°(２θ値)、ステップ時間９０.３秒で得られた。実施例１の非晶質物質の示差走査熱量測定(ＤＳＣ)は、Perkin Elmer DSC7装置を用いて、４０℃/分の加熱速度で行った。
【０１９９】
要約すると、式Ｉの化合物は、次に示す工程を含む工程によって合成され得る。
(ａ) 反応スキーム１〜５の工程；および
(ｂ) 所望により本発明の化合物を薬学的に許容される塩に変換すること；
(ｃ) 所望により塩形の本発明の化合物を非塩形に変換すること；
(ｄ) 所望により酸化されていない形態の本発明の化合物を薬学的に許容されるＮ−オキシドに変換すること；
(ｅ) 所望により本発明の化合物のＮ−オキシドを酸化されない形態に変換すること；
(ｆ) 所望により異性体混合物から本発明の化合物の個別の異性体を分離すること；
(ｇ) 所望により誘導体化されていない本発明の化合物を薬学的に許容されるプロドラッグ誘導体に変換すること；
(ｈ) 所望により本発明の化合物のプロドラッグ誘導体を誘導体化されていない形態に変換すること。
【０２００】
出発物質の製造が特に記載されていない場合、該化合物は既知であるか、あるいは、当技術分野で既知の方法または以下の実施例で開示された方法と類似した方法で製造され得る。
【０２０１】
当業者は、上記の変換は、本発明の化合物の製造方法の単なる代表例であり、他の周知の方法も同様に用いられ得ることを認識するであろう。
【０２０２】
実施例
本発明は、本発明による式Ｉの化合物(実施例)の製造を説明している下記の実施例によって、さらに例示されるが、これらによって限定されない。
【実施例】
【０２０３】
実施例１
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール
【化１１】
0005390626.tif 000012
【０２０４】
２,６−ジクロロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン(ｂ)の合成：
無水ＤＭＦ(５.０ml)に溶解した２,６−ジクロロ−９Ｈ−プリン(ａ)(６.０mmol)に、水素化ナトリウム(７.８mmol)を、撹拌しながら、室温で２時間かけてゆっくりと加えた。２−ヨードプロパンを加え、混合物を１６時間撹拌した。混合物を濃縮した。残渣をヘキサン／ＥｔＯＡｃ(２０：１から３：１)で溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、表題化合物を白色の固体として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.15 (s, 1H), 4.91 (m, 1H), 1.63 (d, 6H)。
【０２０５】
４−(２−(２−クロロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(ｃ)の合成：
２,６−ジクロロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン(１.１mmol)を、ｉ−ＰｒＯＨ(６ml)に溶解したチラミン(１.１６mmol)と混合し、混合物を一夜撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣をヘキサン／ＥｔＯＡｃ(５：１から１：２)で溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、表題化合物を白色の固体として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 9.21 (br, 1H), 8.49 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.10 (d, 2H), 6.73 (d, 2H), 4.87 (m, 1H), 4.03 (t, 2H), 3.01 (t, 2H), 1.68 (d, 6H);
HRMS (EI) C16H18ClN5Oについての計算値 (M + H+) 332.1273, 実測値 332.1278。
【０２０６】
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(ｄ)の合成：
火炎乾燥したシュレンクフラスコに、４−(２−(２−クロロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(０.６２mmol)、チアナフテン−３−ボロン酸(０.９４mmol)、Ｐｄ２(ｄｂａ)３(０.０６２mmol)、Ｃｓ２ＣＯ３(１.２５mmol)および塩化 １,３−ビス(２,４,６−トリメチルフェニル)イミダゾリウム(０.１２５mmol)を入れた。フラスコを排気し、Ｎ２を充填し、無水１,４−ジオキサン(２ml)を加えた。フラスコを密封し、反応混合物を８０℃で２４時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ(２０：１から１：４)で溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって直接精製し、表題化合物を黄色がかった固体として得た。
【０２０７】
あるいは、実施例１の合成を、次の通り行ってもよい。
２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−６−クロロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン(ｂ)の合成：
丸底フラスコに、６−クロロ−２−ヨード−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン(実施例１５ｃで製造, ３.３１ｇ, ０.０１０３mol)、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イルボロン酸(２.７４ｇ, ０.０１５４mol)およびテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(０)(１.１９ｇ, ０.０１０３mol)を入れた。この混合物に、トルエン(８０ml)、エタノール(２５ml)および炭酸ナトリウム水溶液(２Ｍ, ２１ml)を加えた。フラスコを密封し、反応混合物を９０℃で１時間撹拌した。水を冷却した混合物に加え、これを酢酸エチルで抽出した。有機フラクションを合わせて、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中２０〜５０％  ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、表題化合物を固体として得た。これを１：１  メタノール／水から再結晶した。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.15 (d, 1H), 8.85 (s, 2H), 8.17 (d, 1H), 7.62 (t, 1H), 7.53 (t, 1H), 5.06 (m, 1H), 1.71 (d, 6H);
MS m/z 329.0 (M + 1)。
【０２０８】
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(ｃ)の合成：
２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−６−クロロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン(２.２ｇ, ０.００６７mol)を、圧力管中で、無水２−プロパノール(７０ml)に懸濁した。チラミン(１.０１ｇ, ０.００７４mol)を加えた。管を密封し、８５℃で１６時間加熱した。さらにチラミン(０.５０ｇ, ０.００３７mol)を加え、混合物を８５℃で４８時間加熱した。反応物を濃縮した。重炭酸ナトリウム水溶液を残渣に加え、これをＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中５０〜８５％  ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、固体を得た。固体をメタノールで磨砕し、表題化合物を灰白色の固体として得た。
【０２０９】
あるいは、実施例１の合成を、次の通り行ってもよい。
２,６−ジクロロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン(ｂ)の合成：
無水ＤＭＦ(５.０Ｌ)に溶解した２,６−ジクロロ−９Ｈ−プリン(ａ)(９９８ｇ, ５.２８mol)に、水素化ナトリウム(６０％分散, ２５４ｇ, ６.３５mol)を、撹拌しながら、１０℃で１時間かけて加えた。２−ヨードプロパン(１５９５ｇ)を加え、混合物を室温で２４時間撹拌した。水(５.０Ｌ)を加え、得られた固体沈殿物を集めて、水(５００ml)およびヘプタン(２×２.５Ｌ)で洗浄した。粗製の固体を酢酸イソプロピル(２.１Ｌ)から再結晶し、表題化合物を固体として得た。
【０２１０】
４−(２−(２−クロロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(ｃ)の合成：
２,６−ジクロロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン(５００ｇ)を、一度に、チラミン(５９３ｇ)、トリエチルアミン(２６２ｇ)およびｉ−ＰｒＯＨ(５.０Ｌ)の混合物に撹拌しながら５０℃で加えた。その温度で混合物を４時間撹拌し、次いで反応混合物を濃縮した。残渣を酢酸イソプロピル(６.０Ｌ)に溶かし、２０％  クエン酸溶液(２.０Ｌ)で、そして水(２.０Ｌ)で洗浄した。有機層を濃縮乾固し、次いでエタノール(２.０Ｌ)に溶かし、再度濃縮乾固した。粗製の固体をエタノール(３.２Ｌ)から結晶化し、表題化合物を固体として得た。
【０２１１】
４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(ｄ)の合成：
４−(２−(２−クロロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(９５０ｇ)、チアナフテン−３−ボロン酸(５６１ｇ)、ジクロロビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)(１０.１ｇ)、炭酸カリウム(７９１ｇ)、水(３.２５Ｌ)およびＤＭＡ(３.２５Ｌ)の混合物を、窒素雰囲気下、１０分間撹拌した。次いで撹拌混合物を７０℃で１４時間加熱した。酢酸エチル(６.５Ｌ)および水(３.２５Ｌ)を加え、混合物をセライト(１２５ｇ)で５０℃で濾過し、酢酸エチル(１.０Ｌ)で濯いだ。層を分離し、水層を５０℃でさらなる酢酸エチル(７.５Ｌ)で抽出した。合わせた有機層を水(３×２.５Ｌ)で洗浄し、次いで約２.５Ｌの溶媒を蒸留して除去した。テトラヒドロフラン(２.５Ｌ)およびシリカ結合チオシリカゲル(２００ｇ)を加えた。混合物を７０℃で１６時間撹拌し、次いで濾過し、酢酸エチル(１.０Ｌ)でパッドを洗浄した。合わせた濾液を大気圧で濃縮し、約５Ｌの体積まで濃縮して、次いで混合物を冷却した。得られた固体を集めて、酢酸エチル(２×１.０Ｌ)で洗浄し、表題化合物を得た。
【０２１２】
実施例１の化合物を、トルエン／エタノール混合物を用いて再結晶し、室温でＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄した。
【０２１３】
他の態様において、本発明は、形態Ａの結晶形の実施例１の化合物を提供し、ここで、形態Ａは、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：12.1、16.9、18.9、21.3を含み；さらなる態様において、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：12.1、15.9、16.9、17.3、18.9、21.3、22.1、23.6、24.4、27.3を含む。
【０２１４】
また、さらなる態様において、本発明は、下記の粉末Ｘ線回折ピーク(２θ°)：9.0、12.1、13.0、13.1、13.6、14.4、14.7、15.1、15.9、16.9、17.3、17.7、18.0、18.9、19.0、20.1、21.3、22.1、22.3、22.6、22.8、23.4、23.6、24.4、25.3、26.3、26.5、27.3、27.8、28.2、29.5、29.7、30.4、30.7、31.0、31.4、32.2、32.8、33.3、34.3、35.5、36.4、37.5、38.4、39.0、39.4を含む形態Ａの固体形態として実施例１の化合物を提供する。
【０２１５】
形態Ａの実施例１の化合物の粉末Ｘ線回折パターンを、本願の図１に示す。非晶質の実施例１の化合物は、化合物を融解するまで加熱し、焼きなまし(annealing)／冷却することによって、ＤＳＣ(示差走査熱量測定)のるつぼ中でそのまま合成した。冷却サイクル時にガラス転移が観察されたが、再加熱サイクル時に約７０〜７５℃でかなり特徴的な事象がある。ＤＳＣパターンを本願の図１３に示す。
【０２１６】
実施例１５
４−(２−(ピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール
【化１２】
0005390626.tif 000013
【０２１７】
２−アミノ−６−クロロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン(ｂ)の合成：
水素化ナトリウム(１.５ｇ, 鉱物油中６０％分散, ３８mmol)を、少しずつ、１０分かけて、無水ＤＭＦ(５０ml)中の２−アミノ−６−クロロ−９Ｈ−プリン(５.３４ｇ, ３１.５mmol)の懸濁液に、撹拌しながら、室温で加えた。４５分後、混合物を氷浴で冷却し、２−ヨードプロパンを加えた。冷却浴を除去し、撹拌した混合物を１６時間かけて室温まで温めた。混合物を氷で冷却し、水を加えた。混合物を濃縮し、残渣を熱酢酸エチルで処理した。冷却した混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残渣を、ヘキサン中０〜５０％  ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、表題化合物を固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.83(s, 1H), 5.17(s, 2H), 4.71-4.66(m, 1H), 1.57(d, 6H)。
MS m/z 212.1 (M + 1)。
【０２１８】
６−クロロ−２−ヨード−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン(ｃ)の合成：
６−クロロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−２−アミン(２.６８ｇ, １２.７mmol)を、ＴＨＦ(６４ml)に室温で溶解した。ヨウ素(１.６１ｇ, ６.２５mmol)、ＣＨ２Ｉ２(１０.６ml)およびＣｕＩ(１.２７ｇ, ６.６６mmol)を加えた。混合物を室温で５分間撹拌した。亜硝酸イソペンチル(５.３３ml)を加えた。反応混合物を４５分間還流し、室温まで冷却した。飽和重炭酸ナトリウム水溶液を加え、混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた有機相を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中０〜３０％  酢酸エチルで溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、表題化合物を固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09(s, 1H), 4.95-4.88(m, 1H), 1.65(d, 6H)。
MS m/z 323.0 (M + 1)。
【０２１９】
６−クロロ−２−(ピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン(ｄ)の合成：
丸底フラスコに、６−クロロ−２−ヨード−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン(１.２ｇ, ３.７mmol)、ピリジン−３−ボロン酸 １,３−プロパンジオール環状エステル(０.９１ｇ, ５.６mmol)およびテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(０)(４３０mg, ０.３７mmol)を入れた。この混合物に、トルエン(６０ml)、エタノール(６ml)および炭酸ナトリウム水溶液(２Ｍ, １５ml)を加えた。フラスコを密封し、反応混合物を８０℃で４時間撹拌した。水を冷却した混合物に加え、これを酢酸エチル(５０ml×３)で抽出した。有機フラクションを合わせて、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣を、ヘキサン中３０〜７０％  ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、表題化合物を固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.60(d, 1H), 8.90-8.87(m, 1H), 8.68(s, 1H), 8.67(d, 1H), 7.63-7.60(m, 1H), 5.12-5.05(m, 1H), 1.74(d, 6H)。
MS m/z 274.1 (M + 1)。
【０２２０】
４−(２−(ピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(ｅ)の合成：
６−クロロ−９−イソプロピル−２−(ピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン(３００mg, １.１mmol)を、圧力管中で、無水２−プロパノール(４０ml)に懸濁した。チラミン(３００mg, ２.２mmol)を加えた。管を密封し、８５℃で１６時間加熱した。反応物を濃縮し、残渣を、ヘキサン中０〜７０％  ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、表題化合物を固体として得た。
【０２２１】
実施例１２３
４−(２−(９−イソプロピル−２−(２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール
【化１３】
0005390626.tif 000014
マイクロ波反応管に、４−(２−(２−クロロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(３０mg, ０.０９１mmol)、２−メチル−１Ｈ−イミダゾール(５９mg, ０.７３mmol)および０.５mlのＮＭＰを入れた。密封した管を、マイクロ波照射下、２４０℃で２時間加熱した。反応混合物を逆相ＨＰＬＣによって精製し(Ｃ１８カラム, ＡＣＮ−Ｈ２Ｏ  ０.０５％ＴＦＡで溶出)、表題化合物を灰白色の固体として得た。
【０２２２】
実施例１２８
４−(２−(２−(５−クロロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール
【化１４】
0005390626.tif 000015
【０２２３】
４−(２−(２−ヨード−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(ｂ)の合成：
６−クロロ−２−ヨード−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン(ａ)(１.０ｇ, ３.１mmol)、チラミン(０.６４ｇ, ４.６５mmol)、トリエチルアミン(０.６３ｇ, ６.２mmol)および２−プロパノール(３０ml)の混合物を、８５℃で２時間加熱した。反応混合物を濃縮し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液を加えた。混合物を酢酸エチル(５０ml×３)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し(溶出液：ヘキサン中２５〜７５％  酢酸エチル)、表題化合物を固体として得た。
MS m/z 424.1 (M + 1)。
【０２２４】
４−(２−(２−(５−クロロピリジン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(ｃ)の合成：
実施例１５ｄの手順に従って、４−(２−(２−ヨード−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(ｂ)を、５−クロロピリジン−３−イルボロン酸と反応させた。粗生成物を逆相ＨＰＬＣによって精製し(Ｃ１８カラム, ＡＣＮ−Ｈ２Ｏ  ０.０５％ＴＦＡで溶出)、表題化合物を灰白色の固体として得た。
【０２２５】
実施例１３４
４−(２−(６−(５−フルオロピリジン−３−イル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール
【化１５】
0005390626.tif 000016
【０２２６】
４−(２−(６−クロロ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール(ｂ)の合成：
実施例１２８ｂの手順に従って、４,６−ジクロロ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン(US 3399196)(ａ)(０.１８４ｇ, ０.７９５mmol)をチラミンと反応させた。粗製の残渣を、シリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(溶出液：ヘキサン中２５〜７５％  酢酸エチル)、表題化合物を固体として得た。
MS m/z 332.1 (M + 1)。
【０２２７】
４−(２−(６−(５−フルオロピリジン−３−イル)−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール(ｃ)の合成：
実施例１５ｄの手順に従って、４−(２−(６−クロロ−１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール(ｂ)を、５−フルオロピリジン−３−イルボロン酸と反応させた。粗製の残渣を、逆相ＨＰＬＣによって精製し(Ｃ１８カラム, ＡＣＮ−Ｈ２Ｏ  ０.０５％ＴＦＡで溶出)、表題化合物を灰白色の固体として得た。
【０２２８】
実施例１４１
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−７−イソプロピル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール
【化１６】
0005390626.tif 000017
【０２２９】
２,４−ジクロロ−７−イソプロピル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン(ｂ)の合成：
実施例１５ｂの手順に従って、２,４−ジクロロ−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン(０.５ｇ, ２.６７mmol)を、２−ヨードプロパンと反応させた。粗製の残渣をシリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(溶出液：ヘキサン中１５〜２５％  酢酸エチル)、表題化合物を固体として得た。
MS m/z 230.2 (M + 1)。
【０２３０】
４−(２−(２−クロロ−７−イソプロピル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール(ｃ)の合成：
実施例１２８ｂの手順に従って、２,４−ジクロロ−７−イソプロピル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン(ｂ)(０.２７８ｇ, １.２１mmol)をチラミンと反応させた。粗製の残渣を、シリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(溶出液：ヘキサン中２５〜７５％  酢酸エチル)、表題化合物を固体として得た。
MS m/z 331.1 (M + 1)。
【０２３１】
４−(２−(２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−７−イソプロピル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール(ｄ)の合成：
実施例１５ｄの手順に従って、４−(２−(２−クロロ−７−イソプロピル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール(２０mg, ０.０６mmol)を、５−フルオロピリジン−３−イルボロン酸と反応させた。粗製の残渣を逆相ＨＰＬＣによって精製し(Ｃ１８カラム, ＡＣＮ−Ｈ２Ｏ  ０.０５％ＴＦＡで溶出)、表題化合物を灰白色の固体として得た。
【０２３２】
実施例１５３
(Ｒ)−４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール
【化１７】
0005390626.tif 000018
【０２３３】
(Ｒ)−２,６−ジクロロ−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン(ｂ)の合成：
無水ＴＨＦ(３０ml)中の２,６−ジクロロ−９Ｈ−プリン(４００mg, ２.１２mmol)、(Ｓ)−テトラヒドロフラン−３−オール(８８mg, ２.５mmol)およびトリフェニルホスフィン(１.０ｇ, ３.８mmol)の溶液を、−７８℃で、ジイソプロピル アゾジカルボキシレート(８５６mg, ４.２３mmol)で処理した。反応物を室温まで温め、１６時間撹拌した。飽和重炭酸ナトリウム水溶液を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせて、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣をシリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(溶出液：ヘキサン中１０〜８０％  酢酸エチル)、トリフェニルホスホキシドが混入した表題化合物からなる白色固体を得た。
MS m/z 258.0 (M + 1)。
【０２３４】
(Ｒ)−４−(２−(２−クロロ−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(ｃ)の合成：
実施例１２８ｂの手順に従って、(Ｒ)−２,６−ジクロロ−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン(ｂ)をチラミンと反応させた。粗製の反応混合物を逆相分取ＨＰＬＣによって精製した。
MS m/z 360.1 (M + 1)。
【０２３５】
(Ｒ)−４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノールの合成：
実施例１５ｄの手順に従って、(Ｒ)−４−(２−(２−クロロ−９−(テトラヒドロフラン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(ｃ)を、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イルボロン酸(２２.３mg, ０.１２５mmol)と反応させた。粗製の残渣を逆相分取ＨＰＬＣによって精製し、表題化合物を灰白色の固体として得た。
【０２３６】
実施例１５７
２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オール
【化１８】
0005390626.tif 000019
【０２３７】
２−(２,６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン酸メチル(ｂ)の合成：
無水ＤＭＦ(１００ml)中の、２,６−ジクロロ−９Ｈ−プリン(５.０ｇ, ２６.５mmol)、２−ブロモプロパン酸メチル(５.３ｇ, ３１.７mmol)および炭酸カリウム(１１.０ｇ, ７９.４mmol)の混合物を、１００℃で１５時間加熱した。飽和重炭酸ナトリウム水溶液を加え、反応物を酢酸エチル(１５０ml×３)で抽出した。有機層を合わせて、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣をシリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(溶出液：ヘキサン中１０〜８０％  酢酸エチル)、表題化合物を白色の固体として得た。
MS m/z 275.0 (M + 1)。
【０２３８】
２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン酸メチル(ｃ)の合成：
２−(２,６−ジクロロ−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン酸メチル(ｂ)(６００mg, ２.２mmol)、トリプタミン(４２０mg, ２.６mmol)および２−プロパノール(３０ml)の混合物を、密封管中、８５℃で１６時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、濃縮した。残渣をシリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(溶出液：ヘキサン中１０〜８０％  酢酸エチル)、表題化合物を白色の固体として得た。
MS m/z 360.1 (M + 1)。
【０２３９】
２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン酸メチル(ｄ)の合成：
１５０mlの圧力管に、２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン酸メチル(ｃ)(３００mg, ０.７５mmol)、５−フルオロピリジン−３−イルボロン酸(１５９mg, １.１mmol)、テトラキス(トリフェニルホスフィン)−パラジウム(０)(８７mg, ０.０７５mmol)、Ｋ３ＰＯ４(６３８mg, ３.０mmol)および無水ジオキサン(１５ml)を入れた。圧力管に窒素を吹き付け、密封し、反応混合物を撹拌しながら１３０℃で６時間加熱した。水を冷却した混合物に加え、混合物を酢酸エチル(５０ml×３)で抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣をシリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(溶出液：ヘキサン中１０〜８０％  酢酸エチル)、少量のトリフェニルホスフィン オキシドが混入した表題化合物を得た。
MS m/z 460.1 (M + 1)。
【０２４０】
２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オールの合成：
水素化リチウムアルミニウム(２３０mg, ６.１mmol)を、無水ＴＨＦ(１５ml)中の２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン酸メチル(２８２mg, ０.６１mmol)の０℃の溶液に少しずつ加えた。反応混合物を撹拌しながら２時間かけて室温まで温め、水を注意深く加えた。混合物をＥｔＯＡｃ(５０ml×３)で抽出した。有機フラクションを合わせて、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し(ジクロロメタン中０〜５％  溶媒Ｂ；溶媒Ｂ＝メタノール中２Ｍ  アンモニア)、一部精製した表題生成物を得た。これをさらに分取ＴＬＣによって精製し(ジクロロメタン中５％  溶媒Ｂ)、表題化合物を白色の固体として得た。
【０２４１】
実施例１５７Ｒおよび１５７Ｓ
(Ｒ)−２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オール
および(Ｓ)−２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オール
【化１９】
0005390626.tif 000020
(Ｒ／Ｓ)−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オールを、２１×２５０mm Ｌｕｘ−セルロース−２(Phenomenex) キラルカラムの分取キラルＨＰＬＣを用いて個々のエナンチオマーに分離した。メタノール中３mg/mlのラセミ化合物の溶液を調製し、インジェクション当たり０.５mlの溶液で、カラムに負荷した。８５／７.５／７.５  ヘキサン／エタノール／メタノールで、流速２０ml／分で２５分間カラムを溶出した。ピーク１および２はそれぞれ２０分および２２.５分で溶出した。分析的クロマトグラフィーを、９０／５／５  ヘキサン／エタノール／メタノールで、１ml／分で２０分で溶出する４.６×１００mm Ｌｕｘ−セルロース−２(Phenomenex) キラルカラムで行った。ピーク１および２は、それぞれ１７.４５分および１８.１４分で溶出した。
【０２４２】
実施例１５７Ｒ
(Ｒ)−２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オール
【化２０】
0005390626.tif 000021
【０２４３】
(Ｒ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−(１−(ベンジルオキシ)プロパン−２−イル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン(ｂ)の合成：
実施例１５３ｂ(反応物として２,６−ジクロロ−９Ｈ−プリンおよび(Ｓ)−１−(ベンジルオキシ)プロパン−２−オールを使用)、実施例１５３ｃ(反応物としてトリプタミンを使用)および実施例１５３ｄ(反応物として５−フルオロピリジン−３−イルボロン酸を使用)の手順を連続して行い、表題化合物を得た。
【０２４４】
(Ｒ)−２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オール(ｃ)の合成：
ＤＣＭ(１０ml)中の(Ｒ)−Ｎ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−９−(１−(ベンジルオキシ)プロパン−２−イル)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−６−アミン(ｂ)(０.１５ｇ, ０.２９mmol)の溶液を、ＤＣＭ(１０ml)中のＢＣｌ３(１Ｍ, ２.９ml, ２.９mmol)で、−７８℃で２時間処理した。１Ｎ  水酸化ナトリウム水溶液を加え、混合物をＤＣＭで抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し(溶出液：ＤＣＭ中５％  ＭｅＯＨ)、表題化合物を得た。
MS m/z 432.2 (M + 1)。
【０２４５】
実施例１５７Ｓ
(Ｓ)−２−(６−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチルアミノ)−２−(５−フルオロピリジン−３−イル)−９Ｈ−プリン−９−イル)プロパン−１−オール
【化２１】
0005390626.tif 000022
(Ｓ)−１−(ベンジルオキシ)プロパン−２−オールの代わりに(Ｒ)−１−(ベンジルオキシ)プロパン−２−オールを用いる以外、実施例１５７Ｒの手順に従って、表題化合物を製造した。
MS m/z 432.2 (M + 1)。
【０２４６】
実施例１６１
４−(２−(６−(５−フルオロピリジン−３−イル)−１−イソプロピル−１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]ピリジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール
【化２２】
0005390626.tif 000023
【０２４７】
４,６−ジクロロ−１−イソプロピル−１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]ピリジン(ｂ)の合成：
実施例１５ｂの手順に従って、４,６−ジクロロ−１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]ピリジン(J. Het. Chem. 1965, 196-201)(０.１９ｇ, １.０mmol)を、２−ヨードプロパンと反応させた。残渣をシリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(溶出液：ヘキサン中２５〜３５％  酢酸エチル)、表題化合物を固体として得た。
MS m/z 230.2 (M + 1)。
【０２４８】
４−(２−(６−クロロ−１−イソプロピル−１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]ピリジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール(ｃ)の合成：
４,６−ジクロロ−１−イソプロピル−１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]ピリジン(ｂ)(４０mg, ０.１７mmol)、チラミン(１２０mg, ０.８６mmol)および２−ブタノール(２ml)の混合物を、マイクロ波照射下、１４０℃で８時間加熱した。混合物を濃縮し、残渣を逆相ＨＰＬＣによって精製し(Ｃ１８カラム, ＡＣＮ−Ｈ２Ｏ  ０.０５％ＴＦＡで溶出)、表題化合物を灰白色の固体として得た。
MS m/z 331.1 (M + 1)。
【０２４９】
４−(２−(６−(５−フルオロピリジン−３−イル)−１−イソプロピル−１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]ピリジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール(ｄ)の合成：
５mlのマイクロ波用反応バイアルに、４−(２−(６−クロロ−１−イソプロピル−１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]ピリジン−４−イルアミノ)エチル)フェノール(ｃ)(１７mg, ０.０５１mmol)、５−フルオロピリジン−３−イルボロン酸(７２mg, ０.５１mmol)およびテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(０)(３６mg, ０.０３１mmol)を入れた。この混合物に、トルエン(１ml)、エタノール(０.５ml)および炭酸ナトリウム水溶液(２Ｍ, ０.５ml)を加えた。バイアルを密封し、反応混合物を、マイクロ波照射下、１４０℃で２時間撹拌した。水を冷却した混合物に加えた。これを酢酸エチル(５ml×３)で抽出した。有機フラクションを合わせて、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣を逆相ＨＰＬＣによって精製し(Ｃ１８カラム, ＡＣＮ−Ｈ２Ｏ  ０.０５％ＴＦＡで溶出)、表題化合物を灰白色の固体として得た。
【０２５０】
実施例１７７
４−(２−(５−(５−フルオロピリジン−３−イル)−３−イソプロピル−３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン−７−イルアミノ)エチル)フェノール
【化２３】
0005390626.tif 000024
【０２５１】
５,７−ジクロロ−３−イソプロピル−３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン(ｂ)の合成：
実施例１５ｂの手順に従って、５,７−ジクロロ−３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン(J. Med. Chem., 2007, 50, 828-834)(０.１１８ｇ, ０.６２４mmol)を、２−ヨードプロパンと反応させた。粗製の生成物の混合物を、シリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(溶出液：ヘキサン中２５〜３５％  酢酸エチル)、表題化合物(主要物)および異性体生成物の混合物を固体として得た。
MS m/z 230.2 (M + 1)。
【０２５２】
４−(２−(５−クロロ−３−イソプロピル−３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン−７−イルアミノ)エチル)フェノール(ｃ)の合成：
５,７−ジクロロ−３−イソプロピル−３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン(ｂ)(４０mg, ０.１７mmol)、チラミン(１２０mg, ０.８７mmol)および２−プロパノール(２ml)を含む生成物の混合物を、密封バイアル中、１４０℃で７２時間加熱した。混合物を濃縮し、残渣を分取ＴＬＣによって精製し(溶出液  １：２  ヘキサン／酢酸エチル)、表題化合物を灰白色の固体として得た。
MS m/z 331.1 (M + 1)。
【０２５３】
４−(２−(５−(５−フルオロピリジン−３−イル)−３−イソプロピル−３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン−７−イルアミノ)エチル)フェノール(ｄ)の合成：
実施例１６１ｄの手順に従って、４−(２−(５−クロロ−３−イソプロピル−３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジン−７−イルアミノ)エチル)フェノール(ｃ)(１５mg, ０.０４７mmol)を、５−フルオロピリジン−３−イルボロン酸と反応させた。粗製の残渣を分取ＴＬＣで精製し(溶出液  １：１  ヘキサン／酢酸エチル)、表題化合物を灰白色の固体として得た。
【０２５４】
適切な出発物質を用いて、上記の実施例で記載された手順を繰り返すことによって、表１に示した式Ｉの化合物が得られる。
表１
【表１】
0005390626.tif 000025
【０２５５】
【表２】
0005390626.tif 000026
【０２５６】
【表３】
0005390626.tif 000027
【０２５７】
【表４】
0005390626.tif 000028
【０２５８】
【表５】
0005390626.tif 000029
【０２５９】
【表６】
0005390626.tif 000030
【０２６０】
【表７】
0005390626.tif 000031
【０２６１】
【表８】
0005390626.tif 000032
【０２６２】
【表９】
0005390626.tif 000033
【０２６３】
【表１０】
0005390626.tif 000034
【０２６４】
【表１１】
0005390626.tif 000035
【０２６５】
【表１２】
0005390626.tif 000036
【０２６６】
【表１３】
0005390626.tif 000037
【０２６７】
【表１４】
0005390626.tif 000038
【０２６８】
【表１５】
0005390626.tif 000039
【０２６９】
【表１６】
0005390626.tif 000040
【０２７０】
【表１７】
0005390626.tif 000041
【０２７１】
【表１８】
0005390626.tif 000042
【０２７２】
【表１９】
0005390626.tif 000043
【０２７３】
【表２０】
0005390626.tif 000044
【０２７４】
【表２１】
0005390626.tif 000045
【０２７５】
【表２２】
0005390626.tif 000046
【０２７６】
【表２３】
0005390626.tif 000047
【０２７７】
【表２４】
0005390626.tif 000048
【０２７８】
【表２５】
0005390626.tif 000049
【０２７９】
【表２６】
0005390626.tif 000050
【０２８０】
【表２７】
0005390626.tif 000051
【０２８１】
【表２８】
0005390626.tif 000052
【０２８２】
【表２９】
0005390626.tif 000053
【０２８３】
【表３０】
0005390626.tif 000054
【０２８４】
【表３１】
0005390626.tif 000055
【０２８５】
【表３２】
0005390626.tif 000056
【０２８６】
【表３３】
0005390626.tif 000057
【０２８７】
本発明の化合物に関連した親和性プローブ化合物もまた、下記の実施例で記載された通りに製造され得る。
【０２８８】
実施例２１０
３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−５−イル ６−(５−((３ａＳ,４Ｓ,６ａＲ)−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ[３,４−ｄ]イミダゾール−４−イル)ペンタンアミド)ヘキサノエート
【化２４】
0005390626.tif 000058
【０２８９】
３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−５−イル ６−アミノヘキサノエート(ｅ)の合成：
ＤＣＭ(２０ml)中の３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−５−イル ６−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)ヘキサノエート(ａ)(８０mg, ０.１１７mmol)の溶液に、ＴＦＡ(５ml)を加えた。反応物を室温で３時間撹拌した。それを濃縮した。炭酸ナトリウム水溶液を加え、混合物をＤＣＭで抽出した。有機フラクションを合わせて、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、油状物として生成物を得た。
MS m/z 582.2 (M + 1)。
【０２９０】
３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−５−イル ６−(５−((３ａＳ,４Ｓ,６ａＲ)−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ[３,４−ｄ]イミダゾール−４−イル)ペンタンアミド)ヘキサノエートの合成：
ＤＭＦ(１ml)中の、(＋)−ビオチン(３５mg, ０.１４mmol)およびＥｔ３Ｎ(３６mg, ０.３５mmol)の溶液に、ＨＡＴＵ(９０mg, ０.２４mmol)を加えた。混合物を１０分間撹拌し、ＤＭＦ(１ml)中の(３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−５−イル ６−アミノヘキサノエート(ｂ)(６８mg, ０.１２mmol)の溶液に加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、濃縮した。残渣を逆相ＨＰＬＣによって精製し(Ｃ１８カラム, ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ  ０.０５％ＴＦＡで溶出)、表題化合物を灰白色の固体として得た。実施例２１０は、％ＣＤ３４＋アッセイで、２.１μＭのＥＣ５０値を示した。
【０２９１】
実施例２１１
３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−５−イル ６−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)ヘキサノエート
【化２５】
0005390626.tif 000059
【０２９２】
２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−６−クロロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン(ｂ)の合成：
実施例１５ｄの手順に従って、６−クロロ−２−ヨード−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン(３.３１ｇ, ０.０１０３mol)を、ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イルボロン酸と反応させた。粗生成物をシリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(ヘキサン中２０〜５０％  酢酸エチル)、表題化合物を固体として得た。
MS m/z 329.0 (M + 1).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.15 (d, 1H), 8.85 (s, 2H), 8.17 (d, 1H), 7.62 (t, 1H), 7.53 (t, 1H), 5.06 (m, 1H), 1.71 (d, 6H)。
【０２９３】
３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−５−オール(ｃ)の合成：
実施例１５ｅの手順に従って、２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−６−クロロ−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン(ｂ)(８０mg, ０.２４３mmol)をセロトニンと反応させた。反応混合物を濃縮し、重炭酸ナトリウム水溶液を加えた。混合物を酢酸エチルで抽出した。有機フラクションを合わせて、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣をシリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(溶出液：ＤＣＭ中０〜５％  ＭｅＯＨ)、表題化合物を灰白色の固体として得た。
MS m/z 469.2 (M + 1)。
【０２９４】
３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−５−イル ６−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)ヘキサノエート(ｄ)の合成：
ＤＭＦ(３ml)中の、３−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)−１Ｈ−インドール−５−オール(５５.５mg, ０.１１９mmol)および６−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ)ヘキサン酸(３０mg, ０.１１３mmol)の溶液に、Ｅｔ３Ｎ(２４mg, ０.２３７mmol)およびＨＡＴＵ(９０mg, ０.２３７mmol)を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌し、濃縮した。水を加え、反応混合物を酢酸エチルで抽出した。有機フラクションを合わせて、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣をシリカゲルのクロマトグラフィーによって精製し(溶出液：ＤＣＭ中０〜５％  ＭｅＯＨ)、表題化合物を灰白色の固体として得た。
【０２９５】
適切な出発物質を用いて、上記の実施例で記載された手順を繰り返すことによって、表２に示した親和性プローブが得られる。
表２
【表３４】
0005390626.tif 000060
【０２９６】
【表３５】
0005390626.tif 000061
【０２９７】
【表３６】
0005390626.tif 000062
【０２９８】
アッセイ
造血幹細胞(ＨＳＣ)の増加を促進する本発明の化合物の活性を評価するために下記のアッセイを用いる。
【０２９９】
一次成人ＣＤ３４＋ヒト造血幹細胞(ＨＳＣ)を培養し、ＨＳＣの増加を促進する本発明の化合物を同定するためにスクリーニングする。望ましい表現型(ＣＤ３４発現)の存在について細胞を分析する。本発明の化合物はＨＳＣの増加を用量依存的に促進する。
【０３００】
培養培地：  ＳｔｅｍＳｐａｎ ＳＦＥＭ培地は無血清培地(StemCell Technologies, Vancouver, BC)であり、下記のヒト組み換えサイトカインを添加した：ビークル(ＤＭＳＯ)または本発明の化合物と共に、トロンボポエチン、インターロイキン−６、Ｆｌｔ−３リガンドおよび幹細胞因子(全てR&D Systems, Minneapolis, MNより購入)を、それぞれ最終濃度５０ng/ml。
【０３０１】
ヒト細胞培養：  新しい正常なドナー由来のヒトの白血球泳動(leukophoresed)したＧ−ＣＳＦ固定化末梢血、成人骨髄由来ＣＤ３４＋細胞および冷凍保存したヒト臍帯血ＣＤ３４＋細胞を、AllCells (Berkeley, CA)から購入する。ヒトＣＤ３４＋細胞を、磁気細胞選別(MACS, Direct CD34 Progenitor Cell Isolation Kit, Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)を用いて、白血球泳動したＧ−ＣＳＦ固定化末梢血から富化し、冷凍保存する。フローサイトメトリーで確認したＣＤ３４＋細胞純度は９０％より高い。解凍後、トリパンブルー排除法によって試験した細胞生存率は７０％より高い。解凍した細胞を遠心分離し、ＳｔｅｍＳｐａｎ培地で再度懸濁した後、すぐに培養するために等分する。細胞を、１０４細胞/mlで、３８４ウェルプレート(Greiner Bio-One, Monroe, North Carolina)に、ウェル当たり５０μｌの培地と共に７日間播く。７日毎に細胞をより大きなウェルプレートに移して、新しい培地を加え、１０４〜５×１０５細胞/mlの細胞密度を維持する。３７℃、５％  ＣＯ２で細胞を培養した。移植のために、７５cm2のフラスコ中で細胞を培養した後、細胞をマウスに移植した。１μＭの濃度で、４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(表１の化合物１；実施例１)、４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−ｓｅｃ−ブチル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(表１の化合物２)、およびＮ−(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)−２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン(表１の化合物９)はそれぞれ、ビークルと比較して、１０００個のｍＰＢ ＣＤ３４＋ ＨＳＣに由来するＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞の数を、２１日後に１０倍以上増加させる。本発明の化合物を用量応答フォーマット(１ｎＭから１０μＭ)で分析し、５０％の細胞において望ましい効果が生じた有効濃度(ＥＣ５０)を測定した。本発明の化合物は、ＣＤ３４＋細胞の総数および／または百分率を増加させ、１０μＭ未満のＥＣ５０を有した。結果は、上の表１および実施例で示している。
【０３０２】
培養物におけるコロニー形成単位(ＣＦＵ−Ｃ)アッセイ：  単核細胞を臍帯血１mL当たり１０００個で５週間培養したものと、ｍＰＢを３週間培養したものと、ＣＢ １ml当たり１００個の細胞を３週間培養したものと、ｍＰＢを１週間培養したものを、MethoCult SF H4436、Iscove's MDM中にメチルセルロースを含み血清を含まないメチルセルロース培地、ウシ血清アルブミン、２−メルカプトエタノール、Ｌ−グルタミン、ヒト移植(鉄飽和)組み換えヒトインシュリンおよび組み換えヒトサイトカイン：幹細胞因子、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−６、Ｇ−ＣＳＦおよびエリスロポエチン(StemCell Technologies)に加えた。該MethoCultに、下記のヒト組み換えサイトカイン：トロンボポエチンおよびＦｌｔ−３リガンド(R&D Systems)を、最終濃度５０ng/mlで加える。撹拌後、混合物を３つの３５mm皿に分ける。皿を３７℃、空気中５％  ＣＯ２の加湿雰囲気で１４日間インキュベートする。インキュベーション期間終了後、倍率４０倍の倒立顕微鏡で骨髄および赤血球のコロニーを計数する。増加培養物のＣＦＵ−Ｃ含量を下記の通り計算する：３つの皿当たりの計数したコロニーの数×総単核細胞数／投入細胞数。１週目までに、培養体積(ml)当たりの細胞数をかけることによって総単核細胞数を決定する。１週目から、継代の数も考慮する。１μＭの濃度の４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(表１の化合物１；実施例１)で処置した培養物は、ｍＰＢ ＣＤ３４＋細胞の培養２１日後で、ビークルと比較して、コロニー形成細胞の数において１０倍より大きい増加を生じた。５週間の培養物から採取した、１μＭの濃度の４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(表１の化合物１；実施例１)で処置した１×１０３個のＣＢ ＣＤ３４＋細胞を用いて、コントロールと比較して、コロニー形成単位において、＞１０倍の増加を示した。４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(表１の化合物１；実施例１)で処置した細胞は、赤血球のコロニーにおいて＞１０倍の増加、顆粒球／マクロファージのコロニーにおいて＞１０倍の増加、マクロファージのコロニーにおいて＞１０倍の増加と関連する、より混合したコロニーを生じた。４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(表１の化合物１；実施例１)で処置した細胞はまた、顆粒球／赤血球／単球／マクロファージの混合コロニーを生じ、これは非処置細胞に由来するコロニーでは観察されない。
【０３０３】
敷石領域形成細胞(Cobblestone area-forming cell)(ＣＡＦＣ)アッセイ：  ＦＢＭＤ−１間質細胞を、２５cm2フラスコ中で維持して、１／３コンフルエンス後にトリプシン処理する。この非形質転換株が加齢し、その結果、後の段階でＣＡＦＣ増殖を支持する能力を徐々に喪失するため、全てのフィーダーを２０継代未満で用いる。９６ウェルプレート中でＣＡＦＣ増殖を支持するために、１×１０３個の間質細胞をウェル毎に播種する。培養は、１０％  ウシ胎児血清(ＦＣＳ)、２.５％  ウマ血清(ＨＳ)、１％  Ｌ−グルタミン、１％  ペニシリン−ストレプトマイシンおよび１×１０−５Ｍ  ヒドロコルチゾンを加えたIscove's培地中で、３７℃で、空気中５％  ＣＯ２の加湿雰囲気中に維持する。間質層がコンフルエントに至った後、ビークルまたは本発明の化合物と共に５日間培養したＣＤ３４＋ ＨＳＣと共にそれらを播種する。ＭＮＣを８個の１：３連続希釈液(２５,０００細胞／ウェルで開始)で、それぞれの細胞用量について１０ウェルで加える。間質細胞の真下の少なくとも５個の細胞の少なくとも１相の暗造血クローン(敷石領域)を有するウェルでの希釈物を４週目に測定する。１μＭの試験濃度で、４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(表１の化合物１；実施例１)は、ＤＭＳＯのみで処置されたコントロール培養物と比較して、ｍＰＢ ＣＤ３４＋ ＨＳＣに由来する敷石領域形成細胞の数を培養５日後で２倍より大きく増加させる刺激をする。
【０３０４】
表面抗原分析：  細胞を色素媒体(ＦＢＳ(２％)およびＥＤＴＡ(２ｍＭ)を含むハンクス平衡塩溶液)で洗浄し、示された一次結合抗体で染色する(４℃で３０分間)。細胞を先に記載した緩衝液で洗浄し、BD LSR IIフローサイトメーター(Becton Dickinson, San Jose, CA)を用いて分析する。細胞を、４８８nmのアルゴンおよび６３３nmのＨｅＮｅレーザービームを励起のための光源として用いて１０００細胞／秒までの速度で通過させる。１０４細胞の放出を、対数増幅を用いて測定し、FlowJo ソフトウェア(TreeStar Inc. Ashland, OR)を用いて分析する。一次結合アイソタイプコントロール抗体で染色された細胞を用いて、バックグラウンドの蛍光を測定する。
【０３０５】
ＣＤ３４＋細胞サブセットの測定：  等分した細胞培養物から、ＣＤ３４＋細胞サブセットの百分率を測定する。ＣＤ３４＋Ｔｈｙ１.１＋、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ３４＋ＣＤ３８−、ＣＤ１３３＋ＣＤ３８−およびＣＤ３４＋ＣＤ１３３＋細胞を測定するために、細胞をＡＰＣ抗Ｔｈｙ１.１、ＰｅｒＣＰ抗ＣＤ３４、ＰＥＣｙ７抗ＣＤ４５ＲＡ、ＦＩＴＣ抗ＣＤ３８およびＰＥ抗ＣＤ１３３で染色した。ＣＤ３４、ＣＤ３８、Ｔｈｙ１.１およびＣＤ４５ＲＡに対する抗体をBecton Dickinsonから購入し、ＣＤ１３３に対する抗体をMiltenyi Biotecから購入した。これらのサブセットのＦＡＣＳ分析結果は、全集団の百分率として得られる。培養物における細胞の各集団の絶対数は、細胞の総数に各集団の百分率を掛けて計算される。ＣＢ ＣＤ３４＋細胞で開始して５週目には、培養物中の細胞の総数は、１μＭの４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(表１の化合物１；実施例１)で処置された細胞において、コントロール培養物と比較して平均値で２倍より多く増加している。より重要なことは、＜１０％のビークル培養細胞と比較して、＞５０％の４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(表１の化合物１；実施例１)培養細胞がＣＤ３４＋であり、コントロールと比較して１０倍より多くＣＤ３４＋細胞が増加し、投入細胞量と比較して１０,０００倍より多く増加している。さらに、１μＭの４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(表１の化合物１；実施例１)の存在下で、ＣＤ３４＋副集団の百分率および総数の双方が増加し、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ３４＋ＣＤ３８−、ＣＤ１３３＋ＣＤ３８−およびＣＤ３４＋ＣＤ１３３＋は、各サブセットについて、正味３０倍より多く増加している。
【０３０６】
ヒトＣＤ３４＋細胞のＮＯＤ.ＣＢ１７−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄマウス(ＮＯＤ／ＳＣＩＤ)への移植：  ＣＤ３４＋細胞およびその培養された子孫のin vivoでの再増殖能力を評価するために、非培養ＣＤ３４＋、または、ビークルまたは試験化合物と共に培養されて４日後(ｍＰＢ)もしくは２１日後(ＣＢ)のＣＤ３４＋細胞の子孫を、致死量以下で照射した(３.０Gy)８〜１０週齢のＮＯＤ／ＳＣＩＤ (ｍＰＢ ＨＳＣ試験について)またはＮＯＤ／ＳＣＩＤｇｃ−／− (ＣＢ ＨＳＣ試験について)マウスに、後眼窩経路を介して静脈内注射した。生着をモニターするために、血液を週１回後眼窩を介して取り、赤血球分解溶液(Qiagen, Valencia, CA)で処理して赤血球を除き、染色媒体で洗浄し、フローサイトメトリーによって分析した。血中の抗ヒトＣＤ４５＋細胞の検出によって生着を測定した。移植後１０週目にマウスを屠殺する；ＢＭを大腿骨および脛骨の双方から集める。ＢＭ細胞を染色媒体中で洗浄し、抗ヒト抗体で染色する。インキュベーション後、懸濁液を赤血球溶解溶液(Qiagen, Valencia, CA)で処理し、赤血球を除去し、染色媒体で洗浄し、前記の通り、フローサイトメトリーによって分析する。１μＭの濃度の４−(２−(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル)フェノール(表１の化合物１；実施例１)と共に培養したｍＰＢおよびＣＢ由来ＨＳＣの双方が、生着後１０週目のヒト細胞の百分率において統計学的に著しく増加した。
【０３０７】
標的の同定
本発明の化合物が未分化状態のＨＳＣを増加させるメカニズムを同定するために、実施例１および実施例１より活性の低い(〜２０倍)アナログ(２−(ベンゾ[ｂ]チオフェン−３−イル)−Ｎ−(３−(３,５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)プロピル)−９−イソプロピル−９Ｈ−プリン−６−アミン)で２４時間処置されたｍＰＢ由来ＣＤ３４＋細胞のゲノムワイド転写プロファイリングを行った。分析した＞５０,０００のプローブのセットのうち、５遺伝子のみが実施例１による処置で３倍以上上方制御され、大部分が不活性なアナログによって幾らか誘発された。さらに、５遺伝子が、１μＭの実施例１による処置後、＞７０％まで下方制御された。不活性なアナログによって、全てが用量依存的に下方制御されるが著しい影響は受けない。実施例１による処置によって最も大きく抑制された２遺伝子(チトクロムＰ４５０ １Ｂ１ [ＣＹＰ１Ｂ１]およびアリール炭化水素受容体受容体[ＡＨＲＲ])は、アリール炭化水素受容体(ＡＨＲ)によって転写的に制御される。従って、本発明の化合物は、ＡＨＲシグナル伝達のアンタゴニストとして作用し得る。
【０３０８】
さらに、ｍＰＢ由来ＣＤ３４＋細胞において、ｑＰＣＲによる２,３,７,８−テトラクロロジベンゾ−ｐ−ジオキシン(ＴＣＤＤ, ジオキシン)介在ＣＹＰ１Ｂ１ ｍＲＮＡ発現を実施例１が遮断する能力を測定した。ＴＣＤＤ(３ｎＭ)による処置は、ビークルコントロール(０.０１％  トルエン)と比較して、ＣＹＰ１Ｂ１ ｍＲＮＡレベルを４.５倍増加させた。この増加は実施例１によって用量依存的に阻害され、このことは、本発明の化合物が、ＡＨＲシグナル伝達に拮抗し得ることを示している。ＡＨＲ転写における実施例１の効果を測定するために、ジオキシン誘発ＡＨＲ依存性ルシフェラーゼ受容体遺伝子アッセイを阻害する実施例１の能力を試験した。ヒトＡＨＲ発現細胞で用いた場合、実施例１(１μＭ)の含有は、ジオキシン誘発ＡＨＲ依存性転写を完全に阻止した。実施例１のタイトレーションにより、ＥＣ５０が１２７ｎＭであることが明らかとなり、実施例１が強力なＡＨＲアンタゴニストであることが証明された。興味深いことに、実施例１はマウスの細胞ではジオキシン誘発転写を弱く阻害するのみであり、ラットの細胞では活性が全くなかった。このことは、実施例１が、優先的にヒトＡＨＲを阻害することを示唆している。このことは、マウスＨＳＣに対して実施例１の活性がないことと相関しており、実施例１の種選択性を説明できる。結局、実施例１は、マウスまたはラットの細胞に対しては弱いアゴニスト活性しかなく、ヒト細胞においてＡＨＲ依存性転写を誘発しない。
【０３０９】
ＨＳＣにおけるＡＨＲシグナル伝達の役割をさらに調べるために、他の２つのＡＨＲアンタゴニスト(α−ナフトフラボンおよびCH-223191)を試験した。ｍＰＢ由来ＣＤ３４＋細胞を７日間培養したとき、双方の化合物がＣＤ３４＋細胞の数において用量依存的増加を起こした：１μＭのCH223191の含有はＣＤ３４＋細胞を２.２倍増加させ；０.７５μＭのα−ナフトフラボンはＣＤ３４＋細胞を１.９倍増加させ、一方、０.７５μＭの実施例１はＣＤ３４＋細胞総数を３.４倍増加させた。実施例１誘発ＨＳＣ増加におけるＡＨＲの直接の役割を示すために、ヒトＣＢ由来ＣＤ３４＋  ＨＳＣを、ＧＦＰまたはコントロールウイルスを共発現させたｓｈＲＮＡ標的ＡＨＲを含むレンチウイルス粒子で処置した。形質導入後４８時間、ＣＤ３４＋ＧＦＰ＋細胞を細胞分類することによって精製され、ＡＨＲレベルをｑＰＣＲによって測定した。ＡＨＲ標的ｓｈＲＮＡは、形質導入後にＡＨＲ発現の減少を起こした(ｓｈ１１１で８１％およびｓｈ２４２で５１％)。これらの減少は、ＧＦＰがない細胞またはコントロールウイルスで形質導入した細胞では見られなかった。ＡＨＲ発現が減少したＣＢ由来ＣＤ３４＋細胞は、ＣＤ３４＋発現が持続した実施例１処置細胞と類似の表現型を示す。これらのデータは、本発明の化合物によるＡＨＲ活性の阻害が、ＨＳＣのev vivoでの増加を促進するのに十分であることを示している。
【０３１０】
ヒト新生児臍帯血からのＨＳＣを増加させる方法
用いられる培養培地は、下記の組み換えヒトサイトカイン：ＴＰＯ、ＩＬ６、Ｆｌｔ３リガンドおよびＳＣＦをそれぞれ最終濃度５０ng/mlでを加えたStemSpan SFEM (StemCell Technologies, カタログ番号09650)である。培養培地は使用する日に新しく調製する。
【０３１１】
培地での化合物希釈：  １０,０００倍濃度の本発明の化合物を希釈のために用いる。化合物の培養培地への添加は２工程で行う。第１工程は、１：１００希釈(１.５mlのエッペンドルフチューブ[USA Scientific, カタログ番号1615-5500]中、１０μｌの１０,０００倍濃度を９９０μｌの完全培養培地(サイトカインを含む)で希釈)であり、培養培地中１００倍濃度の化合物溶液を得る。第２工程は、細胞培養を開始するために用いられる培養培地での１：１００希釈である。培養物の体積は臍帯血(ＣＢ) ＣＤ３４＋細胞導入量に応じて変わる。例えば１×１０６個のＣＢ ＣＤ３４＋細胞を２０mlの培地(５×１０４細胞/mL)に播く。この場合、２００μｌの１００×実施例１の溶液を、５０mlの円錐チューブ(Becton Dickinson, カタログ番号352098)中で、２０mlの培地に加え、最終濃度とする(表３参照)。
【０３１２】
細胞培養開始：  精製ヒトＣＢ ＣＤ３４＋細胞をex vivo増加試験に用いる。解凍後、トリパンブルー排除によって試験した細胞生存率は、５０％より高い。解凍した細胞を培養培地(サイトカインも、本発明の化合物、例えば実施例１も含まない)で５倍希釈し、３００ｇで２５℃で８分間遠心分離する。上清を吸引した後、ペレットを適切な体積の培養培地(５×１０４細胞/ml, 表３)で再度懸濁した後、すぐに培養するために、ＡＦＣバック(表５)に注入する(２２ゲージの針, Air-Tite products；２０mlのシリンジ, BD カタログ番号309661)。細胞を３７℃で５％  ＣＯ２中で培養する。
【０３１３】
細胞培養物への培地の添加：  ８０mlまでの培地体積については、上記の手順(培地での化合物希釈)を用いる。８０mlより多い培地体積については、第１の１：１００希釈を１０mlの円錐チューブ(Corning, カタログ番号430052, 表４)中で行う。第２工程は、滅菌処理した容器中(BD Falcon, カタログ番号354015)、培養培地での１：１００希釈であり、これをＡＦＣバッグ(２２ゲージの針, Air-Tite products；６０mlのシリンジ, BD カタログ番号309653)に加える。
【０３１４】
表３
臍帯血由来ＣＤ３４＋細胞の増加を開始させるための実施例１希釈
【表３７】
0005390626.tif 000063
【０３１５】
表４
増加させる臍帯血由来ＣＤ３４＋細胞に培地を添加するための実施例１希釈
【表３８】
0005390626.tif 000064
【０３１６】
表５
American Fluoroseal Corporation バッグのための体積制限
【表３９】
0005390626.tif 000065
【０３１７】
自家移植片移植の患者由来の動員された末梢血細胞から出発して、同じプロトコルを用い得る。
【０３１８】
増加させたＨＳＣを有する細胞集団を含む、輸液として静脈内投与に適切な組成物もまた調製され得る。輸液のための細胞を調製するために、培養細胞を３００ｇで１０分間遠心分離することによってペレットにして、１０６〜１０８細胞/mlの濃度で、５％  ＨＳＡ(Baxter)からなる輸液緩衝液に再度懸濁される。
【０３１９】
本明細書に記載された実施例および態様は、例示の目的のみのためのものであり、それを踏まえた様々な修飾または変更が当業者に示唆されており、添附の請求の範囲の範囲内に含まれると解される。本明細書で引用された全ての刊行物、特許、特許明細書は、言及することによって、全ての目的について、本明細書に組み込まれる。
【図１】
0005390626.tif 000075
【図２】
0005390626.tif 000076
【図３】
0005390626.tif 000077
【図４】
0005390626.tif 000078
【図５】
0005390626.tif 000079
【図６】
0005390626.tif 000080
【図７】
0005390626.tif 000081
【図８】
0005390626.tif 000082
【図９】
0005390626.tif 000083
【図１０】
0005390626.tif 000084
【図１１】
0005390626.tif 000085
【図１２】
0005390626.tif 000086
【図１３】
0005390626.tif 000087