(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療上有効な最初の１回分用量のダルババンシン、治療上有効なその後の１以上の回数分の用量のダルババンシン、および医薬上許容される担体を含有する、細菌感染の治療を要するヒトにおいて細菌感染を治療するための医薬であって、当該医薬は静脈内投与されるものであり、各１回分用量のダルババンシンが５ないし１０日間隔で投与され、前記最初の１回分用量が５００ｍｇないし５０００ｍｇであり、前記最初の１回分用量が前記その後の各１回分用量の少なくとも２倍である、医薬。
【請求項２】
前記最初の１回分用量のダルババンシンと、その後の１回分用量のダルババンシンとを含む、請求項１記載の医薬。
【請求項３】
ダルババンシンの投与をはさむことなく、前記最初の１回分用量のダルババンシンの１週間後に前記その後の１回分用量のダルババンシンが投与される、請求項２記載の医薬。
【請求項４】
前記最初の１回分用量のダルババンシンと、その後の複数回分用量のダルババンシンとを含む、請求項１記載の医薬。
【請求項５】
ダルババンシンの投与をはさむことなく、前記その後の複数回分用量のダルババンシンが１週間間隔で投与される、請求項４記載の医薬。
【請求項６】
細菌感染が皮膚および軟組織感染である、請求項１記載の医薬。
【請求項７】
前記最初の１回分用量が１５００ｍｇである、請求項１記載の医薬。
【請求項８】
前記最初の１回分用量が１０００ｍｇである、請求項１記載の医薬。
【請求項９】
前記最初の１回分用量が８００ｍｇである、請求項１記載の医薬。
【請求項１０】
前記最初の１回分用量が５００ｍｇである、請求項１記載の医薬。
【請求項１１】
前記その後の各１回分用量が４００ｍｇないし１０００ｍｇである、請求項１記載の医薬。
【請求項１２】
前記その後の各１回分用量が５００ｍｇである、請求項１記載の医薬。
【請求項１３】
前記その後の各１回分用量が４００ｍｇである、請求項１記載の医薬。
【請求項１４】
前記その後の各１回分用量が２５０ｍｇである、請求項１記載の医薬。
【請求項１５】
前記その後の各１回分用量が２００ｍｇである、請求項１記載の医薬。
【請求項１６】
前記最初の１回分用量が１０００ｍｇであり、および前記その後の各１回分用量が２５０ｍｇである、請求項１記載の医薬。
【請求項１７】
治療上有効な最初の１回分用量のダルババンシン、治療上有効なその後の１以上の回数分の用量のダルババンシン、および医薬上許容される担体を含有する、細菌感染の治療を要するヒトにおいて細菌感染を治療するための医薬であって、当該医薬は静脈内投与されるものであり、各１回分用量のダルババンシンが１週間間隔で投与され、前記最初の１回分用量が１０００ｍｇであり、前記その後の各１回分用量が５００ｍｇである、医薬。
【請求項１８】
前記最初の１回分用量のダルババンシンと、その後の１回分用量のダルババンシンとを含む、請求項１７記載の医薬。
【請求項１９】
ダルババンシンの投与をはさむことなく、前記最初の１回分用量のダルババンシンの１週間後に前記その後の１回分用量のダルババンシンが投与される、請求項１８記載の医薬。
【請求項２０】
前記最初の１回分用量のダルババンシンと、その後の複数回分用量のダルババンシンとを含む、請求項１７記載の医薬。
【請求項２１】
ダルババンシンの投与をはさむことなく、前記その後の複数回分用量のダルババンシンが１週間間隔で投与される、請求項２０記載の医薬。
【請求項２２】
細菌感染が皮膚および軟組織感染である、請求項１７記載の医薬。
【請求項２３】
治療上有効な最初の１回分用量のダルババンシン、治療上有効なその後の１以上の回数分の用量のダルババンシン、および医薬上許容される担体を含有する、細菌感染の治療を要するヒトにおいて細菌感染を治療するための医薬キットであって、当該医薬キットは、前記ダルババンシンの静脈内投与のためのものであり、各１回分用量のダルババンシンが５ないし１０日間隔で投与され、前記最初の１回分用量が５００ｍｇないし５０００ｍｇであり、前記その後の各１回分用量が２５０ｍｇないし２５００ｍｇであり、前記最初の１回分用量が前記その後の各１回分用量の少なくとも２倍である、医薬キット。
【請求項２４】
前記最初の１回分用量のダルババンシンと、その後の１回分用量のダルババンシンとを含む、請求項２３記載の医薬キット。
【請求項２５】
ダルババンシンの投与をはさむことなく、前記最初の１回分用量のダルババンシンの１週間後に前記その後の１回分用量のダルババンシンが投与される、請求項２４記載の医薬キット。
【請求項２６】
前記最初の１回分用量のダルババンシンと、その後の複数回分用量のダルババンシンとを含む、請求項２３記載の医薬キット。
【請求項２７】
ダルババンシンの投与をはさむことなく、前記その後の複数回分用量のダルババンシンが１週間間隔で投与される、請求項２６記載の医薬キット。
【請求項２８】
細菌感染が皮膚および軟組織感染である、請求項２３記載の医薬キット。
【請求項２９】
細菌感染が合併症を伴う皮膚および軟組織感染である、請求項２８記載の医薬キット。
【請求項３０】
細菌感染が合併症を伴わない皮膚および軟組織感染である、請求項２８記載の医薬キット。
【請求項３１】
前記最初の１回分用量が１５００ｍｇである、請求項２３記載の医薬キット。
【請求項３２】
前記最初の１回分用量が１０００ｍｇである、請求項２３記載の医薬キット。
【請求項３３】
前記最初の１回分用量が８００ｍｇである、請求項２３記載の医薬キット。
【請求項３４】
前記最初の１回分用量が５００ｍｇである、請求項２３記載の医薬キット。
【請求項３５】
前記その後の各１回分用量が４００ｍｇないし１０００ｍｇである、請求項２３記載の医薬キット。
【請求項３６】
前記その後の各１回分用量が５００ｍｇである、請求項２３記載の医薬キット。
【請求項３７】
前記その後の各１回分用量が４００ｍｇである、請求項２３記載の医薬キット。
【請求項３８】
前記その後の各１回分用量が２５０ｍｇである、請求項２３記載の医薬キット。
【請求項３９】
前記その後の各１回分用量が２００ｍｇである、請求項２３記載の医薬キット。
【請求項４０】
前記最初の１回分用量が１０００ｍｇであり、および前記その後の各１回分用量が２５０ｍｇである、請求項２３記載の医薬キット。
【請求項４１】
治療上有効な最初の１回分用量のダルババンシン、治療上有効なその後の１以上の回数分の用量のダルババンシン、および医薬上許容される担体を含有する、細菌感染の治療を要するヒトにおいて細菌感染を治療するための医薬であって、当該医薬は静脈内投与されるものであり、各１回分用量のダルババンシンが５ないし１０日間隔で投与され、前記最初の１回分用量が２００ｍｇないし１５００ｍｇであり、前記その後の各１回分用量が２００ｍｇないし１５００ｍｇであり、前記最初の１回分用量が前記その後の各１回分用量の少なくとも２倍である、医薬。
【請求項４２】
前記最初の１回分用量のダルババンシンと、その後の１回分用量のダルババンシンとを含む、請求項４１記載の医薬。
【請求項４３】
ダルババンシンの投与をはさむことなく、前記最初の１回分用量のダルババンシンの１週間後に前記その後の１回分用量のダルババンシンが投与される、請求項４２記載の医薬。
【請求項４４】
前記最初の１回分用量のダルババンシンと、その後の複数回分用量のダルババンシンとを含む、請求項４１記載の医薬。
【請求項４５】
ダルババンシンの投与をはさむことなく、前記その後の複数回分用量のダルババンシンが１週間間隔で投与される、請求項４４記載の医薬。
【請求項４６】
細菌感染が皮膚および軟組織感染である、請求項４１記載の医薬。
【請求項４７】
細菌感染が合併症を伴う皮膚および軟組織感染である、請求項４６記載の医薬。
【請求項４８】
細菌感染が合併症を伴わない皮膚および軟組織感染である、請求項４６記載の医薬。
【請求項４９】
前記最初の１回分用量が１５００ｍｇである、請求項４１記載の医薬。
【請求項５０】
前記最初の１回分用量が１０００ｍｇである、請求項４１記載の医薬。
【請求項５１】
前記最初の１回分用量が８００ｍｇである、請求項４１記載の医薬。
【請求項５２】
前記最初の１回分用量が５００ｍｇである、請求項４１記載の医薬。
【請求項５３】
前記その後の各１回分用量が４００ｍｇないし１０００ｍｇである、請求項４１記載の医薬。
【請求項５４】
前記その後の各１回分用量が５００ｍｇである、請求項４１記載の医薬。
【請求項５５】
前記その後の各１回分用量が４００ｍｇである、請求項４１記載の医薬。
【請求項５６】
前記その後の各１回分用量が２５０ｍｇである、請求項４１記載の医薬。
【請求項５７】
前記その後の各１回分用量が２００ｍｇである、請求項４１記載の医薬。
【請求項５８】
前記最初の１回分用量が１０００ｍｇであり、および前記その後の各１回分用量が２５０ｍｇである、請求項４１記載の医薬。
【請求項５９】
ダルババンシンを含む医薬であって、当該医薬は静脈内投与され、そして細菌感染の治療を要するヒトにおいて細菌感染を治療するための方法において用いるためのものであり、当該方法が、治療上有効な最初の１回分用量のダルババンシン、及び治療上有効なその後の１以上の回数分の用量のダルババンシンを、当該ヒトに対して投与することを含み、各１回分用量のダルババンシンが５ないし１０日間隔で投与され、前記最初の１回分用量が５００ｍｇないし５０００ｍｇであり、前記最初の１回分用量が前記その後の各１回分用量の少なくとも２倍である、医薬。
【請求項６０】
ダルババンシンを含む医薬であって、当該医薬は静脈内投与され、そして細菌感染の治療を要するヒトにおいて細菌感染を治療するための方法において用いるためのものであり、当該方法が、治療上有効な最初の１回分用量のダルババンシン、及び治療上有効なその後の１以上の回数分の用量のダルババンシンを、当該ヒトに対して投与することを含み、各１回分用量のダルババンシンが５ないし１０日間隔で投与され、前記最初の１回分用量が２００ｍｇないし１５００ｍｇであり、前記その後の各１回分用量が２００ｍｇないし１５００ｍｇであり、前記最初の１回分用量が前記その後の各１回分用量の少なくとも２倍である、医薬。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本願は、ダルババンシン組成物ならびに細菌感染の治療方法におけるかかる組成物の使用方法に関する。
【０００２】
関連出願の相互参照
本願は、２００２年１１月１８日出願の米国仮出願第６０／４２７６５４号、２００３年７月８日出願の米国仮出願第６０／４８５６９４号、２００３年８月１３日出願の米国仮出願第６０／４９５０４８号、および２００３年８０００月１９日出願の米国仮出願第６０／４９６４８３号の利益を主張し、これらすべての開示を本明細書に一体化させる。
【０００３】
発明の背景
U.S. Center for Disease Control and Preventionによれば、院内血流感染は米国における死因の最たるものである。毎年市米国において７００万人の中央動脈カテーテル挿入患者（ＣＶＣｓ）の約５％が少なくとも１回は血流感染の関連している（１年に約３５００００人）。カテーテルに関連した血流感染は、細菌が静脈カテーテルを通して血流に侵入したときに起こり、致命的となりうるものである。
【０００４】
皮膚および軟組織感染（ＳＳＴＩｓ）はありふれた医学的症状であり、しばしば外傷または手術の結果生じるものである。スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）およびストレプトマイセス・ピオゲネス（Streptomyces pyogenes）は深組織感染患者から最も頻繁に単離される病原菌であるが、健康な皮膚に見出されるそれらを包含する病原性生物もまた感染を引き起こしうる。多くのＳＳＴＩｓは症状が軽度ないし中度であり、経口抗微生物剤および局所洗浄でうまく処置可能である。対照的に、元々存在する危険因子（例えば、血管損傷、糖尿病）を有する患者に頻繁に発症するより重症または合併した感染ならびに／あるいは処置困難または多剤耐性細菌により引き起こされる感染は、強力な静脈内抗微生物療法および攻撃的な外科的壊死組織切除法を必要とする可能性がある。
【０００５】
スタフィロコッカスは臨床上および治療上問題であり、１９６０年代はじめから院内感染との関わりが増加している。コアグラーゼ陽性（coagulase-positive）種メチシリン耐性（methicillin-resistant）スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）（ＭＲＳＡ）は地域社会および院内感染の両方において長い間問題となっており、数種のコアグラーゼ陰性スタフィロコッカスがヒトの日和見感染病原体として認識されており、特に、意図的なケアユニットにおける重症患者の治療において問題である；臨床的に問題となるもう１つの主な病因は、世界の多くの部分において単離されることが多くなっているペニシリン耐性（penicillin resistant）ストレプトコッカス・ニューモニアエ（Streptococcus pneumoniae）株である。
【０００６】
糖ペプチド抗生物質であるバンコマイシンおよびテイコプラニンは、他剤耐性グラム陽性病原体、特にＭＲＳＡ、コアグラーゼ陰性シタフィロコッカス（ＣｏＮＳ）およびエンテロコッカス（enterococci）により引き起こされる重症の院内感染に対して使用されている。バンコマイシンおよびテイコプラニンはＭＲＳＡにより引き起こされる感染に使用されており、最近まで、すべての単離体は等しく感受性を有していた。しかしながら、テイコプラニンならびにバンコマイシンに対して中程度の感受性または耐性を有するスタフィロコッカス・アウレウス株の単離が現在報告されることが多くなっている。耐性の機構により「ＶａｎＡ」、「ＶａｎＢ」または「ＶａｎＣ」に分類される多くのバンコマイシン耐性株が報告されている。したがって、別の治療選択肢が必要である。
【０００７】
テイコプラニンは、大部分のグラム陽性細菌に対して、少なくともバンコマイシンと同程度に活性があり、副作用を引き起こすことが少ないと思われている。いずれの治療形態も、完全な回復を望むのであれば少なくとも１日１回の投与を必要とする。現在、これらの病原菌のいくつかにより引き起こされる重症の感染に対する治療選択肢は極めて限られている。バンコマイシンに対して生じてくるグラム陽性病原体の耐性に対して、有効性の向上した新たな抗生物質の利用が非常に望まれている。
【０００８】
さらに、患者の快適さを向上させるには、現在用いられている療法よりも頻繁でない投与規則、例えば、静脈内または筋肉内の抗生物質投与が望まれるであろう。非経口手段による１日複数回の抗生物質投与が必要であるために入院が必要となり、外来患者に対してより回数の少ない投与を行うことが有利である。
【０００９】
より回数の少ない投与が抗生物質投与規則に望ましい特徴であるが、処置すべき患者における重大な副作用を引き起こすことにより処置を危険なものにすることなく大量の１回分用量を投与できるには、投与された抗生物質の「ファーマシューティカル・ウィンドウ（pharmaceutical window）」、すなわち毒性プロファイルが十分に許容されるものでなくてはならない。さらに、抗生物質が適切なファーマシューティカル・ウィンドウを示す場合でさえ、抗生物質が適切な半減期を示して所望投与間隔において治療有効性を維持する場合にのみ、より回数の少ない投与が可能である。抗生物質の血清中での半減期は、インビボでの薬剤の寿命、ならびに血清レベルが細菌を殺すのに有効な最小のレベルに到達する場合の投与後の時間の両方を決定する。抗生物質の第１回投与後の血清中の最小レベルは、インビボにおいて細菌を殺す抗生物質の最小レベルを保持するように投与されるべきさらなる用量を決定する。
【００１０】
上記のことに鑑みると、１種またはそれ以上の抗生物質耐性細菌株、特にＭＲＳＡに対して活性のある抗生物質であって、５〜７日またはそれより長い期間に１回の間隔で投与しうる抗生物質は商業的に価値があり、当該分野において長い間感じられていた必要性を満足するものであろう。
【００１１】
発明の概要
本発明は、ダルババンシンを用いる、細菌感染の治療または予防のための組成物、方法およびキットを提供する。驚くべきことに、ダルババンシンの安定化処方は、５〜７日またはそれ以上の期間に約１回の治療規則を可能にするファーマシューティカル・ウィンドウならびに長い半減期を示し、その一方でインビボにおいて抗細菌特性を保持することが示された。
【００１２】
したがって、１の態様において、少なくとも５日間個体においてダルババンシンの治療上または予防上有効な血漿レベルを提供するに十分な量のダルババンシンの１回分用量、安定化剤、および医薬上許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
【００１３】
一般的には、本発明の医薬組成物は、医薬上許容される水性処方のごとき個体への投与のための医薬上許容される形態に処方される。好ましくは、かかる医薬組成物は非経口投与、例えば静脈内または筋肉内経路により投与される。したがって、この好ましい具体例において、典型的にはこれらの医薬組成物は滅菌されたものである。
【００１４】
いくつかの具体例において、ダルババンシンの１回分用量は乾燥粉末（例えば、凍結乾燥）形態で提供され、個体への投与前に、滅菌水性処方のごとき医薬上許容される担体中に復元される。１の具体例において、医薬上許容される担体は水中５％ブドウ糖を包含する。本発明の医薬組成物を、細菌感染の治療または予防を必要とするヒトのごとき哺乳動物に投与してもよい。いくつかの具体例において、医薬組成物は、グラム陰性細菌に対して有効な（例えば、殺菌性の）抗生物質および／またはダルババンシンが有効でないグラム陽性種、例えばＶａｎＡバンコマイシン耐性細菌株に対して有効な抗生物質のごとき、ダルババンシンでない少なくとも１種の抗生物質を含んでいてもよい。
【００１５】
１種またはそれ以上の安定化剤を用いて、個体の投与する前の乾燥粉末（例えば、凍結乾燥）処方および／または水性処方として保存される間の１種またはそれ以上のダルババンシン成分の分解を抑制する。時間が経つと、分解により、あまり活性のないおよび／または不活性な組成物の望ましくない処方が生じ、それはインビボにおける副作用の影響を潜在的に引き起こしうる。好ましい安定化剤は、糖類または糖アルコールのごとき非イオン性成分、例えば単糖、二糖または多糖、あるいはそれらの誘導体、例えば、マンニトール、乳糖、ショ糖、ソルビトール、グリセロール、セルロース、トレハロース、マルトース、またはブドウ糖、あるいはそれらの混合物を包含する。
【００１６】
もう１つの態様において、少なくとも５日間個体においてダルババンシンの治療上有効な血漿レベルを提供するに十分な量のダルババンシンの１回分用量、および医薬上許容される担体を含む、細菌感染の治療を必要とする個体における細菌感染の治療方法が提供される。一般的には、ダルババンシンの治療上有効量の血漿レベルは血漿１リットルあたり少なくとも約４ｍｇのダルババンシンである。１の具体例において、投与されるダルババンシンの用量は、臨床的に有効で、かつテイコプラニンおよびバンコマイシンのごとき薬剤での標準的なケアと比較して副作用が減じられる量である。
【００１７】
ダルババンシンを１回分としてあるいは複数回分にわけて投与してもよい。いくつかの具体例において、約１００ｍｇないし約４０００ｍｇ、例えば３０００ｍｇのダルババンシンの１回分用量を投与する。種々の具体例において、１回分のダルババンシンの用量は少なくとも約０．１、０．２５、０．５、１、１．５、２、２．５または３グラムのいずれかを含んでいてもよい。
【００１８】
他の具体例において、５日ないし１０日の間隔を置いて２回投与してもよい。１回目の用量は約５００ないし約５０００ｍｇのダルババンシンであってもよく、２回目の用量は約２５０ｍｇないし２５００ｍｇのダルババンシンであってもよい。しばしば、１回目の用量は、２回目の用量に含まれるダルババンシン量の約１．５ないし約３倍、頻繁には少なくとも約２倍の量を含む。例えば、１回目の用量は約１０００ｍｇのダルババンシンであってもよく、２回目の用量は約５００ｍｇのダルババンシンであってもよい。２つの用量が投与される方法において、２回目の投与前の個体血漿中のダルババンシンの最小レベルは、一般的には、血漿１リットル中少なくとも約４ｍｇ、しばしば少なくとも約１０ｍｇ、頻繁には少なくとも約２０ｍｇ、より頻繁には少なくとも約３０ｍｇ、さらにより頻繁には少なくとも４０ｍｇのダルババンシンである。
【００１９】
しばしば、本発明の方法は非経口投与、例えば、静脈投与を包含する。いくつかの具体例において、投与は、少なくとも３０分またはそれ以上かけて投与が行われるように投与速度を制御した静脈投与である。
【００２０】
本発明の方法を用いて、例えば、スタフィロコッカス・アウレウスまたはストレプトコッカス・ピオゲネスによる皮膚および軟組織感染のごときグラム陽性細菌感染症を処置してもよい。いくつかの具体例において、感染症はペニシリン耐性および／または多剤耐性である。
【００２１】
もう１つの態様において、細菌感染の予防方法が提供され、該方法は、少なくとも１日間、３日間、５日間、１週間、または１０日間もしくはそれ以上の間、個体において予防的に有効なダルババンシンの血漿レベルを提供するに十分な量の少なくとも１の１回分用量のダルババンシンおよび医薬上許容される担体を投与することを含む。ダルババンシンの用量は、例えば、約１００ｍｇないし約１００００ｍｇであってもよい。いくつかの具体例において、ダルババンシンを、医学的処置または入院の前、それらの期間中、または後に投与する。
【００２２】
本発明の治療または予防方法は、ダルババンシンでない少なくとも１種の抗生物質、好ましくはグラム陽性細菌に対して有効な抗生物質および／またはダルババンシンが有効でないグラム陰性株、例えばＶａｎＡ株に対して有効な抗生物質の投与を包含してもよい。
【００２３】
もう１つの態様において、個体において少なくとも約５日間の治療上有効なダルババンシン血漿レベルあるいは少なくとも約１日間の予防上有効なダルババンシン血漿レベルを提供するに十分な量の少なくとも１の１回分用量のダルババンシン、ならびに細菌感染の治療または予防方法に使用するための説明書を含むキットが提供される。キットは、２の１回分用量を含んでいてもよく、第１のダルババンシン用量が第２のダルババンシン用量の１．５ないし３倍、しばしば少なくとも約２倍であってもよい。キットはダルババンシンでない抗生物質、好ましくはグラム陰性細菌に対して有効な抗生物質を含んでいてもよい。
【００２４】
１の具体例において、乾燥粉末（例えば、凍結乾燥）ダルババンシン組成物を入れた第１の容器およびダルババンシン組成物と混合される前もって決められた量の生理学的に許容される水溶液を入れた第２の容器を含むキットが提供される。好ましくは、かかる溶液は滅菌水溶液である。１の具体例において、キットは、ダルババンシン組成物を個体に投与するためのデリバリー手段、例えば、シリンジまたは静脈投与手段を含む。
【００２５】
発明の詳細な記述
本発明は、ダルババンシンの改良された投与規則および新規組成物、ならびに抗生物質耐性細菌感染の改良された処置方法を提供する。詳細には、本発明は、１種またはそれ以上の抗生物質に耐性のある株、例えばＭＲＳＡに対して活性のあるダルババンシン組成物を提供し、それは５〜７日あるいはそれより長い時間に１回の投与規則にて投与されうる。
【００２６】
学術文献においてＢＩ３９７またはＶＥＲ００１とも呼ばれているダルババンシンは、半合成糖ペプチド混合物であり、その特性は米国特許第５６０６０３６号、第５７５０５０９号および第５９３５２３８号に報告されている。
【００２７】
本明細書の用語「ダルババンシン」は、以下に説明するような「Ａ０」、「Ａ１」、「Ｂ０」、「Ｂ１」、「Ｃ０」および「Ｃ１」と呼ばれる１種またはそれ以上の、好ましくは２種またはそれ以上の、密接に関連したホモログ、あるいはそれらの単量体、多量体（すなわち、二量体またはより高次の多量体）、互変異性体、エステル、溶媒和物、または医薬上許容される塩を含有する組成物をいう。本明細書の用語「二量体」または「多量体」は、ホモ二量体またはホモ多量体、すなわち、同じダルババンシンホモログの単量体から構成される二量体または多量体、あるいはヘテロ二量体またはヘテロ多量体、すなわち、異なる少なくとも２種のダルババンシンホモログの単量体から構成される二量体または多量体をいう。ダルババンシンは、しばしば、「ＭＡＧ」、すなわち以下に説明する非相同変種を包含する。個々に、ダルババンシンホモログおよびＭＡＧは本明細書において、時々、「ダルババンシン成分」と呼ばれる。
【００２８】
ダルババンシンは、Malabarba and Donadio (1999) Drugs of the Future 42(8):839-846に記載されたように、天然糖ペプチド複合体Ａ−４０９２６の化学修飾により調製される。ダルババンシンの主要成分は因子Ｂ０であり、複合体全体の７５％よりも多くを占める。
【００２９】
ダルババンシン組成物中に存在する各成分の量は、例えば、ダルババンシン前駆体である天然糖ペプチド複合体Ａ−４０９２６の製造に用いられる発酵条件（例えば、米国特許第５８４３６７９号参照）、発酵ブロスからＡ−４０９２６を回収するのに用いられる条件、Ａ−４０９２６の糖部分のカルボキシル基を選択的にエステル化するのに用いられる化学反応、ペプチジルカルボキシル基をアミド化するのに用いられる条件、Ｎ−アシルアミノグルクロン酸官能基のカルボキシル基のエステルをケン化するのに用いられる条件、合成混合物からダルババンシンを回収するのに用いられる条件等を包含する種々の因子により決定される。
【００３０】
好ましい具体例において、ダルババンシン組成物は、少なくとも約８０ないし約９８重量％のＢ０成分を含む。特に好ましい具体例において、ダルババンシン組成物は下記の量のＢ０を含む。
【表１】
0005519090.tif 000002
1  各範囲はＭＡＧを含むダルババンシン組成物中に存在するダルババンシン全成分に対するＢ０のモル％を示す
【００３１】
数種のダルババンシン成分の化学構造を下式Ｉに示す：
【化１】
0005519090.tif 000003
【表２】
0005519090.tif 000004
【００３２】
上記ダルババンシン成分のずべてが多くのグラム陽性細菌に対する殺菌活性を有する。しかしながら、「ＭＡＧ」と称される１の非相同ダルババンシン成分は、他の成分には存在するアシルグルコロナミン部分を欠き、インビボおよびインビトロの両方において他のダルババンシン成分よりも殺細菌活性が低い。ＭＡＧは１またはそれ以上の他のダルババンシン成分の分解産物であると考えられる。したがって、好ましい具体例において、ダルババンシン中のＭＡＧの量は、ＭＡＧを含めて存在するすべてのダルババンシン成分の４、３．５、３、２．５、２、１．５、１または０．５モルパーセント未満である。
【００３３】
ダルババンシンは、ペプチドグリカンのＤ−アラニル−Ｄ−アラニン−終結前駆体に結合することにより細菌細胞壁の生合成を阻害すると考えられている。ダルババンシンの二量体またはより高次の多量体は、親油性側鎖と細菌の細胞質膜との相互作用により、さらに抗細菌特性を有する可能性がある。例えば、Malabarba and Ciabatti, et al. (2001) Current Medical chemistry 8:1759-1773参照。ダルババンシン多量体に関するさらなる研究は、代理人処理番号３４２３１−２００５２．００であり本願と同時出願の「細菌感染の治療のためのダルババンシン組成物」と題された米国出願第１０／ 中に見出され、その開示を参照により本明細書に記載されているものとする。
【００３４】
インビトロにおいて、非臨床的および臨床的なデータは、ダルババンシンがＭＲＳＡおよびＣｏＮＳならびにすべてのストレプトコッカスおよび非ＶａｎＡエンテロコッカス種（バンコマイシンにほとんど感受性でない、あるいは耐性のＶａｎＢおよびＶａｎＣ表現型を包含）により引き起こされる重症のグラム陽性感染症の処置に有益であることを示している。
【００３５】
ダルババンシンは、インビトロにおいてスタフィロコッカス（いくつかのテイコプラニン耐性株を包含）に対して、テイコプラニンおよびバンコマイシンよりも活性がある。ダルババンシンは、ペニシリン耐性株を包含するストレプトコッカスに対して、テイコプラニンまたはバンコマイシンよりも良好な活性を有する。ダルババンシンは、インビボおよびインビトロにおいて、大部分の薬剤耐性株を包含する多くのグラム陽性細菌に対して活性がある。
【００３６】
典型的には、ダルババンシンはダルババンシン組成物として個体に投与される。本明細書の用語「ダルババンシン組成物」または「ダルババンシン処方」は上で定義したダルババンシンおよび１またはそれ以上の他の非ダルババンシン成分、例えば医薬上許容される担体、安定化剤、バッファーまたは他の類似の成分のごとき成分を含む組成物、典型的には、医薬組成物をいう。
【００３７】
実施例１に示すように、ダルババンシンは１週間の投与間隔において有効である。かくして、他の処置オプションに対するダルババンシンの利点は、１週間に１回を基本としたこの抗生物質の投与が可能なことにより、患者のコンプライアンスを最大にし、非経口的抗生物質投与に関連する入院の必要性を潜在的に最小化し、あるいは入院期間を短縮させることである。投与頻度が少ないことは、しばしば通院による患者の治療を可能にし、かくして治療コストを削減する。さらに実施例１に示すように、１回目の投与から約１週間後のダルババンシンの２回目の投与は１回目の用量の約半分であるが、意外なことに、処置効果の有意な改善をもたらす。
【００３８】
使用方法
細菌感染の処置が必要な個体へのダルババンシンの投与方法が提供される。処置は、予防、治療または治癒を包含しうる。方法は、治療上または予防上有効量の１またはそれ以上のダルババンシン１回分用量の投与を包含する。
【００３９】
本明細書の用語「治療上有効量」は、所望の治療結果（例えば、細菌感染の軽減または除去）を生じさせるであろうダルババンシンの量をいう。治療上有効量を１回またはそれ以上の回数で投与してもよい。「予防上有効量」は、例えば、医学的方法または入院により、あるいは細菌感染している個体の曝露されることにより細菌感染の可能性のある、あるいは細菌感染に接触する可能性のある個体に投与した場合、将来の細菌感染を予防し、あるいは症状の重さを軽減するに十分なダルババンシンの量をいう。一般的には、ダルババンシンは医薬上許容される担体中にて投与される。
【００４０】
ダルババンシンは、しばしば塩酸塩として投与され、それは水によく溶解する。
【００４１】
典型的には、ダルババンシンをダルババンシン処方として、個体に投与した場合に数日間、しばしば少なくとも約５日間、１週間、あるいは１０日間、治療的あるいは予防的に有効なダルババンシンの血漿レベルを提供するに十分なダルババンシン量を含む「１回分用量（unit dose）」として投与する。
【００４２】
本明細書の用語「個体」は、脊椎動物、典型的には哺乳動物、しばしばヒトをいう。
【００４３】
上記のダルババンシンのすべてのホモログは血漿中での長い半減期、しばしば９日またはそれ以上を示すが、ＭＡＧは他のホモログよりも短い半減期を有すると考えられる。長い半減期はバンコマイシンまたはテイコプラニンよりの長い投与間隔を可能にする。実施例１に記載するように、１週間に１回のダルババンシンの投与は細菌感染の制御に有効であり、バンコマイシンによく用いられる１日２回の投与スケジュールあるいはテイコプラニンに一般的に用いられる１日１回の投与スケジュールとは対照的である。ダルババンシンのより少ない投与頻度は、当該治療規則を用いた場合の特に改善された利便性および患者のコンプライアンスに関して、バンコマイシンおよびテイコプラニンよりも有意な処置優位性を提供する。驚くべきことに、高用量（すなわち、驚くほど高く長時間持続する血清レベル）を投与することができ、他の利用可能な処置オプションよりも少ない頻度とすることができる。ダルババンシンに適用可能な当該新規投与規則は向上した有効性をもたらす。なぜなら低頻度とするに必要な濃度において、ダルババンシンはインビボにおいて最小の副作用を示し、大きなファーマシューティカル・ウィンドウを確かなものとするからであり、さらに、全処置プロトコルに関して最小の殺細菌レベル以上にダルババンシンの血中レベルが維持され、長時間にわたるダルババンシンの血清半減期が確かなものとなるからである。大きなファーマシューティカル・ウィンドウと長い血清半減期の組み合わせは、ダルババンシンのより低い頻度での投与を可能にする。
【００４４】
さらに、好ましくは、ダルババンシンを、ダルババンシンの１またはそれ以上の成分の分解を抑制する安定化剤とともに処方する。１の好ましい具体例において、ダルババンシンを、マンニトール：ダルババンシンの重量割合を１：２として処方する。もう１つの好ましい具体例において、ダルババンシンを、マンニトール：ラクトース：ダルババンシンの重量割合を１：１：４として処方する。
【００４５】
いくつかの具体例において、ダルババンシン処方を、治療上有効な（すなわち、殺殺菌性の）血漿薬剤レベルを数日間、しばしば少なくとも約５日間ないし約１０日間、しばしば少なくとも約１週間提供する用量にて投与する。一般的には、少なくとも５日間、約４ｍｇ／ｌの最小殺細菌濃度あるいはそれ以上にダルババンシンを血漿中に維持する。しばしば、少なくとも約１週間またはそれ以上、少なくとも約５ｍｇ／ｌ、しばしば少なくとも約１０ｍｇ／ｌ、しばしば少なくとも約２０ｍｇ／ｌ、しばしば少なくとも約３０ｍｇ／ｌ、しばしば少なくとも約４０ｍｇ／ｌの血漿レベルにダルババンシンを維持する。液体クロマトグラフィー、質量スペクトル分析、または微生物学的バイオアッセイのごとき当該分野でよく知られた方法によりダルババンシンの血漿レベルを測定してもよい。血漿中のダルババンシンの定量方法の一例を実施例５に示す。
【００４６】
ダルババンシン血漿レベルの上限は、一般的には、処置される患者の集団における許容されない悪影響を抑制する用量により決定される。
【００４７】
ダルババンシン組成物を１回であるいは複数回で投与してもよい。１回で投与する場合、好ましくはダルババンシン組成物は、少なくとも５日間、好ましくは少なくとも７日間、より好ましくは少なくとも１０日間、インビボにおいて抗生物質特性を発揮するに十分な量のダルババンシンを含むように処方される。
【００４８】
複数回投与を用いる場合、ダルババンシンを２週間またはそれ以上にわたり毎週投与することができる。１の具体例において、少なくとも２回、しばしば約５ないし約１０日の間隔を置いて２回、よりしばしば２週間にわたり１週間に１回ダルババンシンを投与する。実施例１に示すように、かかる投与規則により、慣用的な抗生物質処置プロトコルに優る有意な利点が提供される。
【００４９】
ダルババンシン組成物を２日またはそれ以上あるいは少なくとも１週間の間隔で複数回投与し、あるいは２週間に１回またはそれ以上投与してもよく、その後、２週間または１ヶ月に１回投与してもよい。いくつかの具体例において、２、３、４、５、６週間またはそれ以上にわたりダルババンシンを１週間に１回投与する。
【００５０】
最も有利には、毎日の投与は必要でない。なぜならより高用量で低頻度の投与を用いるからである。１回または複数回の用量は、例えば、約０．１ないし約５グラムの範囲であってもよい。約０．１ないし約４グラム、例えば約３グラムの１回分を種々の感染の処置のために投与してもよい。複数回投与する場合、例えば、毎週投与する場合には、各回の用量は、例えば約０．２５ないし約５．０グラムの範囲であってもよい。
【００５１】
感染を処置するために１回投与が行われる具体例において、用量は、例えば、約０．１グラムないし約５グラム、または約０．５ないし約４グラム、または約１ないし約３．５グラム、または約２ないし約３グラム、例えば約３グラムであってもよい。いくつかの具体例において、約１、１．５、２、２．５または３グラムの１回分を、細菌感染の処置のために投与する。予防のために１回投与される具体例に関して、その用量は、例えば、約０．１ないし約０．３グラム、または約０．１ないし約１グラム、例えば、約０．５または約０．２５グラムであってもよい。
【００５２】
複数回投与を含む投与スキームにおいて、個々の用量は同じであっても、異なっていてもよい。いくつかの具体例において、最初により高用量を投与し、すなわち、例えばその後の１回またはそれ以上の用量の約１．５ないし３倍の用量である。例えば、最初の用量が約０．５グラムないし約５グラムであり、２回目の用量が約０．２５グラムないし約２．５グラムであってもよく、最初の用量が約０．８ないし約２ｇであり、２回目の用量が約０．４ないし約１グラムであってもよく、あるいは最初の用量が約０．４ないし約３ｇであり、２回目の用量が約０．２ないし１．５ｇであってもよい。
【００５３】
いくつかの具体例において、少なくとも２つの用量が投与され、最初の用量は次の用量のダルババンシンの約２倍を含む。１の具体例において、最初の用量は約１グラムのダルババンシンを含み、次の用量は約０．５グラムを含む。もう１つの具体例において、最初の用量は約０．５グラムのダルババンシンを含み、次の用量は約０．２５グラムを含む。
【００５４】
いくつかの具体例において、等用量または異なる用量の２つのダルババンシン組成物を、２日またはそれ以上あるいは少なくとも約１週間の間隔で投与する。しばしば、約０．２ないし約１．５グラムのダルババンシンの２つの用量を約５ないし約１０日間隔で、より多くの場合において１週間間隔で投与する。１の具体例において、約１グラムのダルババンシンの最初の用量と、約０．５グラムのダルババンシンの第２の用量を、約１週間間隔で投与する。
【００５５】
複数回投与規則において、投与間隔は、例えば、約５ないし約１０日、しばしば約１週間であってもよい。投与回数は、例えば、１週間に２回、１週間に複数回であってもよい。投与間隔あるいは投与と投与との間の時間は、例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５またはそれ以上の日数であってもよい。投与回数は、例えば、１回、２回、３回４回、５回、６回またはそれ以上であってもよく、最初の用量以降の各用量を、選択された投与間隔をおいて投与する。
【００５６】
複数投与規則において、最初のダルババンシン投与後であって２回目の投与の直前の血漿中のダルババンシンの「最小レベル（trough level）」またはレベルは、しばしば、少なくとも約４ｍｇ／ｍｌである。好ましくは、約１週間のごとき投与間隔の終わりの最小レベルは少なくとも約２０ｍｇ／ｌ、より好ましくは少なくとも約３０ｍｇ／ｌ、さらにより好ましくは少なくとも約４０ｍｇ／ｌである。
【００５７】
ダルババンシンを非経口投与、例えば、筋肉内（ｉ．ｍ．）、静脈内（ｉ．ｖ．）、皮下（ｓ．ｃ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）または鞘内（ｉ．ｔ．）投与することができる。投与スケジュールおよび実際の投与量は、感染の性質および重さ、患者の年齢、体重および一般的健康状態、ならびに個々の患者のダルババンシンに対する耐性のような因子に左右されるが、健康のプロフェッショナルにより確認されうるであろう。１の具体例において、１グラムのダルババンシンの静脈内投与の１週間後に０．５グラムのダルババンシンを投与する。
【００５８】
血中濃度があまり急激に上昇しないように、あるいは沈殿が起こらないように、薬剤の患者への投与およびデリバリー、例えば静脈内投与を制御された速度で行うことができる。いくつかの具体例において、薬剤が血流中の内在蛋白と複合体を形成するように、適切な速度でダルババンシンを投与する。特定の理論に拘泥するつもりはないが、ヒト血清アルブミンのごとき内在蛋白はインビボにおいてダルババンシンホモログ単量体の１つまたは２つの分子とともに複合体を形成しうると考えられる。十分な量のダルババンシンが存在する場合、ダルババンシンホモログの２つまでの分子が内在蛋白に結合すると考えられ、さらに異なる結合部位におけるダルババンシンの別個のホモログ分子の結合によりこの複合体が形成されると考えられる。あるいはまた、二量体ダルババンシンは内在蛋白上の単一の結合部位に結合することもありうる。上で議論されたダルババンシン−内在蛋白複合体に関するさらなる検討は、「蛋白−ダルババンシン複合体を用いる細菌感染の治療方法」と題された同時出願の米国特許第１０／ 号（代理人整理番号３４２３１−２００５３．００）中に見出され、参照によりその開示を本明細書に記載されているものとする。
【００５９】
輸液期間は、例えば、約１分ないし約２時間であってもよい。用量が約０．５ないし約１グラムである場合には、例えば、約３０分の輸液期間を用いてもよい。制御された速度での静脈内投与は、インビトロでの生理学的ｐＨの溶液相において達成されるよりも大過剰の体内ダルババンシン濃度を生じさせうる。理論に拘泥するつもりはないが、このことは、ダルババンシンと血清アルブミンのごとき内在蛋白との複合体形成によるものであるかもしれず、血漿のダルババンシン吸収能を増大させうる。
【００６０】
インビトロまたはエクスビボにおけるダルババンシン複合体の形成は、より迅速な投与、例えば、少なくとも約１分、少なくとも約１０分または少なくとも約２０分の投与を可能にしうる。ヒト血清アルブミンおよび／または別の内在蛋白とダルババンシンを混合することにより、かかる複合体を得ることができ、そのことによりインビトロまたはエクスビボにおいて複合体を形成し、次いで、この複合体を処置すべき患者に投与することができる。あるいはまた、ヒト血清アルブミンまたは他の内在蛋白を自己ソースから得てもよく、あるいは当該蛋白の遺伝子を含むように修飾された微生物から発現させることにより得てもよい。
【００６１】
投与されるダルババンシン量は本明細書に開示されたいずれの量であってもよい。一般的には、ダルババンシン用量は、該薬剤が、長時間にわたり、しばしば少なくとも５日間、よりしばしば約１週間またはそれ以上にわたり治療上または予防上有効な（すなわち、殺細菌）血漿レベルを維持するように選択される。少なくとも約１週間（あるいは約５日ないし約１０日）にわたり殺細菌濃度を生じ、維持するダルババンシン用量の投与が好ましい。殺細菌濃度は、２４時間の期間にて、インビトロ実験の開始時に存在した細菌の少なくとも９９％を死滅させるに必要なダルババンシン濃度と定義される。典型的には、最小殺細菌ダルババンシン血漿濃度は約４ｍｇ／ｌである。
【００６２】
治療されうる徴候の例は、合併症を伴う、あるいは伴わない皮膚および軟組織の感染（ＳＳＴＩ）、血流感染（ＢＳＩ）、カテーテル関連血流感染（ＣＲＢＳＩ）、骨髄炎、補てつ関節感染、外科的予防法、心内膜炎、病因または施設でかかる肺炎、ニューモコッカスによる肺炎、熱性の好中球減少症の経験的処置、関節隙感染、およびデバイス感染（例えば、ペースメーカーおよび心臓内除細動装置）を包含する。スタフィロコッカス、ストレプトコッカス、ネイセリア、またはクロストリジウム属、特にスタフィロコッカス・アウレウス、スタフィロコッカス・エピダーミス、スタフィロコッカス・ヘモリティクス、ストレプトコッカス・ピオゲネス、グループＡおよびＣのストレプトコッカス、ネイセリア・ゴノロエアエ、またはクロストリジウム・ディフィシレの感染のごときグラム陽性または抗生物質耐性細菌による感染を処置してもよい。
【００６３】
本発明は、皮膚および軟組織の感染（ＳＳＴＩｓ）の処置方法を提供する。この処置により利益を受けうる患者は、深部または表面の感染を有していてもよい。例えば、大きい膿瘍、感染性潰瘍、大きい熱傷、または深部および拡張性の小胞炎のようなＳＳＴＩは、より深部の軟組織のものを包含し、そして／あるいはかなりの外科的介入を必要としうる。感染性の外科的創傷も治療しうる。
【００６４】
皮膚および皮膚構造の感染の臨床的徴候は、軽度の毛包炎から重度の壊死性筋膜炎まで様々である。罹病様式もまた様々で、施設においてかかる皮膚および皮膚構造の炎症を伴っており、しばしば作業療法またはリクレーション活動により生じる外傷の後に生じ、通常には、多種多様な病原体に関連している。病院においてかかる皮膚および皮膚構造の感染は、一般的には、外科的方法、とこずれ、およびカテーテル挿入に関連している。術後の感染は３番目に多い院内感染であり、the National Nosocomical Infection Surveillance System（ＮＮＩＳ）によればすべての院内感染の１７％にのぼる。最も頻繁な感染源は患者の内在フローラである。コアグラーゼ陰性スタフィロコッカスであるスタフィロコッカス・アウレウスおよびエンテロコッカスｓｐｐはＳＳＴＩｓから最も頻繁に単離される病原菌である。
【００６５】
ＳＳＴＩ感染の徴候は、紅斑、圧痛または疼痛、熱感または局所的温感、排膿または排出、浮腫または硬直、赤味を帯びること、あるいは波動性を包含する。本発明の方補での処置により利益を受けうる患者は、深部感染または合併症を伴う感染あるいは外科的介入を要する感染を有する患者、あるいは糖尿病または末梢血管疾患を有している患者を包含する。これらの感染は、しばしば、スタフィロコッカスまたはストレプトコッカス種、例えばスタフィロコッカス・アウレウスまたはストレプトコッカス・ピオゲネスのごときグラム陽性細菌により引き起こされる。皮膚または軟組織の細菌感染の処置方法は、上で論じた投与量および投与規則により治療上有効量のダルババンシンを、処置を要する個体に投与ことを包含する。いくつかの具体例において、しばしば約５ないし約１０日感覚で、より多くの場合には約１週間感覚で、ダルババンシン組成物を２回静脈内投与する。いくつかの具体例において、最初の用量は第２の用量の少なくとも２倍のダルババンシンを含む。１の具体例において、最初の用量は約１０００ｍｇであり、２回目の用量は約５００ｍｇである。
【００６６】
本発明は、細菌感染、例えば、スタフィロコッカス・アウレウスにより、あるいはネイセリアまたはクロストリジウム属の細菌により引き起こされる細菌感染の発生を予防的に防止する方法も提供する。本発明の予防方法において、例えば医学的方法により細菌感染にかかる疑いのある個体に予防上有効量のダルババンシンを投与する。しばしば、予防上有効な血漿レベルを少なくとも約１日間、少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、あるいは少なくとも約１週間またはそれ以上にわたり提供するに十分な量のダルババンシンを投与する。ダルババンシン組成物を、感染に対する予防段階として手術前または後に、例えば非経口的に、例えば筋肉内（ｉ．ｍ．）、静脈内（ｉ．ｖ．）、皮下（ｓ．ｃ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）または鞘内（ｉ．ｔ．）注射により投与してもよい。手術のごとき侵襲的な医学的方法あるいは感染防止のために病院のごとき医療ケア施設への入院の直前に、あるいは１日またはそれ以上あるいは約１週間またはそれ以上前またはそれらの後に、あるいはそれらを行っている間に、ダルババンシン組成物を投与してもよい。個体が細菌感染した個体に曝露される、あるいは曝露される可能性のある状況下を包含する、個体が細菌感染にかかりうる可能性のあるいずれの状況下においても予防方法を用いてよい。予防方法のために、ダルババンシン組成物を１回または２回またはそれ以上の回数で、等量または異なる量を、数日ないし約１週間の間隔で投与してもよい。１の具体例において、ダルババンシン組成物を、静脈内カテーテル挿入前または挿入と同時に投与して、血流関連感染を防止してもよい。
【００６７】
予防方法のために、上記投与スキームのいずれかに従って、ダルババンシン組成物を１回または複数回投与してもよい。しばしば、ダルババンシン組成物を、約０．１ないし約３グラム、あるいは約０．１ないし約１グラム、例えば、約０．２５グラムないし約０．５グラムを含有する１回分として投与する。１の具体例において、約０．２５グラムの１回分を、約２分間ないし約１時間、例えば約３０分かけて静脈内投与する。もう１つの具体例において、ダルババンシン組成物を、別の医薬（例えば、抗生物質）を同時に投与しつつ静脈内投与する。
【００６８】
上記治療方法または予防方法のいずれにおいても、ダルババンシン組成物を、少なくとも１の他の抗生物質とともに同時または逐次投与してもよい。いくつかの具体例において、ダルババンシンが効かない１またはそれ以上のグラム陰性細菌種および／またはグラム陽性細菌株に対して有効な（例えば、殺細菌性のある）少なくとも１の他の抗生物質を、ダルババンシンに加えて投与する。いくつかの具体例において、ダルババンシンおよび１またはそれ以上のグラム陰性細菌種および／またはグラム陽性細菌株に対して有効な（例えば、殺細菌性のある）少なくとも１の他の抗生物質を、ダルババンシン組成物中の混合物として投与する。
【００６９】
医薬組成物
本発明は、上で説明した方法によるダルババンシンの投与のために処方された医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、個体に投与された場合、数日間、しばしば少なくとも約３日間、少なくとも約５日間、あるいは少なくとも約１週間またはそれ以上にわたり、治療上または予防上有効なダルババンシン血漿レベルを提供するに十分な量のダルババンシンおよび医薬上許容される担体を含むダルババンシンの１回分用量の形態であってもよい。一般的には、治療上または予防上有効なダルババンシン血漿レベルは、血漿１リットルあたり少なくとも約４ｍｇである。上記方法のようなよく知られた方法によりダルババンシン血漿レベルを測定してもよい。
【００７０】
所望により、ダルババンシンを、個体への投与用の医薬上許容される形態としてもよく、所望により医薬上許容される無毒の塩としてもよい。
【００７１】
ダルババンシンの適切な塩の例は、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、チルフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、コハク酸、クエン酸、アスコルビン酸、乳酸、マレイン酸、グルタミン酸、ショウノウ酸、グルタル酸、グリコール酸、フタル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、安息香酸、ケイ皮酸、および同様の酸のごとき有機酸および無機酸との標準的な反応により得られる塩を包含する。ダルババンシンとともに塩を形成しうる塩基の代表例は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびバリウムのごときアルカリ金属およびアルカリ土類金属の水酸化物、アンモニア、ならびにメチルアミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミンおよびピコリンのごとき脂肪族、脂肪族環状または芳香族アミンを包含する（例えば、米国特許第５６０６０３６号参照）。
【００７２】
いくつかの具体例において、例えば静脈注射のような非経口投与に適した医薬上許容されるダルババンシンの水性処方が提供される。かかる水性処方の調製には、当該分野において知られた方法を用いてもよく、当該分野において通常使用されるいずれの医薬上許容される担体、希釈剤、賦形剤、または他の添加物を用いてもよい。１の具体例において、静脈注射用の医薬上許容される水性処方は５％ブドウ糖を含有する。
【００７３】
非経口用医薬組成物はダルババンシンおよび脱イオン水、生理食塩水、５％ブドウ糖、水混和性溶媒（例えば、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等）、非水性担体（例えば、トウモロコシ油、綿実油、ピーナッツ油およびゴマ油）、または他の通常使用される希釈剤のごとき生理学的に許容される希釈剤を含む。処方はさらにポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、または他の知られた安定化剤のごとき安定化剤、溶液を安定化させるバッファー（例えば、クエン酸バッファー、酢酸バッファー、およびリン酸バッファー）および／または抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム）を含む（例えば、米国特許第６１４３７３９号参照）。他の適切な医薬担体およびそれらの処方はE. W. Martinによる"Remington's Pharmaceutical Sciences"に記載されている。当該分野において知られているように、許容されうるレベル（例えば、粒子状物質不含）の粒子状物質を含み、非パイロジェン性（例えば、米国薬局方中の注射可能要件を満たすもの）であるように本発明の医薬調合物を調合してもよい。
【００７４】
１の具体例において、しばしば安定化剤または安定化剤の混合物を含む乾燥された（例えば、凍結乾燥された）ダルババンシンの一定用量を可溶化に十分な量の水、好ましくは脱イオン水に溶解させることにより医薬組成物が提供される。典型的には、可溶化に十分な量の水は約１０ｍＬであり、その結果ダルババンシン溶液のｐＨは３．０よりも高く、約３．５ないし４．５である。静脈投与用ドリップバッグに入量のごときさらなる量の希釈剤（しばしば５％ブドウ糖を含む）にその溶液を添加することによる希釈により、ダルババンシン溶液のｐＨは約５ないし５．５に上昇する。もう１つの具体例において、ドリップバッグ中のダルババンシン溶液のｐＨは約４．５である。さらなる量の水溶液は脱イオン水、あるいは脱イオンされ滅菌された水であってもよい。１の具体例において、水性希釈剤は５％ブドウ糖である。
【００７５】
非経口投与用医薬組成物を、ダルババンシンの殺細菌有効性が保持される条件下で、上記のごとく治療上または予防上有効量の１回分またはそれ以上のダルババンシンを含み、所望により賦形剤を含む滅菌バイアル中に作成してもよい。組成物は乾燥（例えば、凍結乾燥）粉末の形態であってもよい。使用前に生理学的に許容される希釈剤を添加し、患者への投与のためにシリンジを介して溶液を引き抜いてもよい。例えばｅ−ビームまたはガンマ線滅菌法、あるいは滅菌濾過を包含するいずれかの許容される手段により、上記医薬処方を滅菌してもよい。
【００７６】
非経口投与用の典型的な処方は、最終調合物１ｍｌあたり例えば約０．１ないし約１００ｍｇ、約０．５ないし約５０ｍｇ、約１ないし約１０ｍｇ、または約２ないし約４ｍｇのダルババンシンを含んでいてもよい。
【００７７】
いくつかの具体例において、本発明の医薬組成物は、ダルババンシンと１またはそれ以上のさらなる抗生物質との混合物を含む。混合物となった少なくとも１の非ダルババンシン抗生物質が好ましく、例えばアズスレオナムは１またはそれ以上のグラム陰性細菌種に対して有効であり、例えばイルネゾリドまたはダプトマイシンはダルババンシンが有効でない１またはそれ以上のグラム陽性細菌種に対して有効である。混合物は上記の医薬上許容される担体を含んでいてもよい。
【００７８】
いくつかの具体例において、本発明の医薬組成物は、ダルババンシンの１またはそれ以上の成分があまり活性のないあるいは不活性な物質に変質するのを抑制する１またはそれ以上の安定化物質、例えばＭＡＧを含む。本明細書の用語「安定化物質」または「安定化剤」は、組成物中のダルババンシンの１またはそれ以上の構成成分、例えばＢ０のレベルを安定化させる物質をいう。「安定化有効量」は、ダルババンシン組成物の１またはそれ以上の成分の長期安定性を促進するに十分な安定化剤の量をいう。いくつかの具体例において、安定化有効量は２またはそれ以上の安定化物質の混合物により提供され、その場合安定化物質は単独では安定化効果を提供するに十分な量で存在しないものである。
【００７９】
安定化剤の例は、例えば糖類、例えば単糖類、二糖類または多糖類、またはそれらの誘導体、糖アルコール類、またはポリオール類のごとき非イオン性物質を包含する。かかる安定化物質は、例えば、マンニトール、乳糖、ショ糖、ソルビトール、グリセロール、セルロース、トレハロース、マルトース、ラフィノース、またはそれらの混合物を包含する。
【００８０】
１の具体例において、医薬組成物は重量比１：２のマンニトール：ダルババンシンを含む。もう１つの具体例において、医薬組成物は重量比１：１：４のマンニトール：乳糖：ダルババンシンを含む。驚くべきことに、マンイトールと乳糖の組み合わせは、いずれかの物質単独よりも大きな安定化効果を生じる。しばしば、本発明の医薬組成物のｐＨは、例えば、約３ないし約５、例えば約３．５ないし約４．５である。
【００８１】
いくつかの具体例において、ＭＡＧの処方量を減少させるために１またはそれ以上の方法を用いてもよい。例えば、マンニトールのごとき安定化物質存在下におけるダルババンシンの凍結乾燥を用いて、得られるＭＳＧの量を減少させてもよい。
【００８２】
ダルババンシン組成物の保存は、安定性を増大させるために、しばしば周囲温度よりも低い温度、例えば約５℃で行われる。
【００８３】
改善された有効性および減少した副作用
高用量レベルでの毎週のダルババンシン投与（すなわち、驚くほど高く長期にわたる血清レベルをもたらす）は、本明細書の実施例により示されるように、毎日１回または毎日２〜４回投与される慣用的な抗生物質の低い用量の標準的な治療において観察されるのと同様あるいはそれよりも良好な安全性プロファイルを示す。ダルババンシンの驚くほど高い用量（すなわち、驚くほど高く長期にわたる血清レベルをもたらす）を、他の抗生物質よりも低頻度で投与してもよく、その場合、不利な副作用はなく、改善された有効性および患者のコンプライアンスを得ることが可能である。
【００８４】
実施例１に記載するように、ダルババンシンでの処置は不利なイベントの発生率が低い。重大で不利なイベントは、死に至らしめる用量で生じる不利な薬剤経験を包含し、生命を脅かすものであり、入院あるいは入院期間の延長を生じさせ、あるいは継続したまたは有意な無力感をもたらす。実施例１に記載されたフェイズＩＩの試験において、下痢、吐き気、高血糖症、手足の痛み、嘔吐、および便秘のごとき不利な反応の９０％は軽度ないし中度の重篤度である。実施例１の試験におけるダルババンシンの使用は、研究された薬剤処置に関連した重大な不利なイベントを生じさせなかった。
【００８５】
キット
本発明は、細菌感染の治療または予防方法において使用するキットも提供する。該キットは本発明の医薬組成物を含み、例えば、少なくとも１回分用量のダルババンシン、および細菌感染を治療または予防のための用法に関するヘルスケアプロバイダーへの情報を提供するための説明書を含む。説明書は印刷された形態あるいはフロッピーディスク、ＣＤ、またはＤＶＤのごとき電子媒体の形態、あるいはかかる情報を得ることのできるウェブサイトアドレスの形態として提供されうる。しばしば、１回分用量のダルババンシンは、個体に投与された場合に、ダルババンシンの治療上または予防上有効な血漿レベルが個体において少なくとも５日間維持されるような用量を含む。いくつかの具体例において、キットは、少なくとも５日間隔で、しばしば約１週間間隔で投与される２つの１回分用量を含み、しばしば、２回目の用量よりも約１．５ないし約３倍の１回目のダルババンシン用量を含む。しばしばダルババンシンは滅菌水性医薬組成物または乾燥粉末組成物中（例えば、凍結乾燥されて）に含まれる。
【００８６】
適当な包装が提供される。本明細書の用語「包装」は、システム中に慣例上使用される個体マトリックスまたは材料であり、個体への投与に適したダルババンシン組成物を保持しうるものをいう。かかる材料はガラスおよびプラスチック（例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、およびポリカーボネート）のビン、バイアル、紙、プラスチック、およびプラスチックホイル、ラミネートエンベロープ等を包含する。ｅ−ビーム滅菌法を用いる場合、包装は内容物の滅菌を可能にするに十分な低密度とすべきである。
【００８７】
キットは、例えばシリンジや静脈内投与用装置のようなダルババンシン投与用装置、および／または滅菌溶液、例えば乾燥粉末組成物（例えば、凍結乾燥されたもの）を投与用にするための５％ブドウ糖のごとき希釈剤を含んでいてもよい。
【００８８】
本発明のキットは、上記方法に記載されたようにダルババンシンとともに用いられるダルババンシン以外の非ダルババンシン抗生物質または非ダルババンシン抗生物質の混合物を含んでいてもよい。
【００８９】
下記実施例において、次の略号は以下の意味を有する。略号が定義されない場合には、それは一般的に受け入れられている意味を有する。
【表３】
0005519090.tif 000005
【００９０】
下記実施例は本発明を説明するものであって、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【００９１】
実施例１．皮膚深部および軟組織感染における１週間に１回のダルババンシンの有効性および安全性
このランダム化されコントロールされた研究は、ダルババンシンの２つの投与規則の安全性および有効性を評価するものであった。皮膚および皮膚深部構造を含む軟組織の感染（ＳＳＴＩ）を有する、あるいは外科的介入を必要とする成人患者を、３つの群にランダマイズした：研究アーム（study arm）１には１日目に１１００ｍｇのダルババンシンを静脈注射により与えた；研究アーム２には１日目の１ｇのダルババンシンＩＶそして８日目に５００ｍｇのダルババンシンＩＶを与えた；研究アーム３には「標準のケア（standard of care）」を与えた。臨床的および微生物学的応答ならびに不利なイベントを評価した。
【００９２】
分析のための集団
６２人の患者が研究に参加した。すべての患者に少なくとも１の試験医薬用量を与えた。安全性および有効性に関して４つの研究集団を評価し、それらの集団は以下のように定義された：治療意図（ＩＴＴ）集団は、研究医薬の少なくとも１の用量を与えられたすべての患者を包含した（すべてのランダム化されて研究対象）。微生物学的治療意図（ＭＩＴＴ）集団は、ベースラインにおいて培養により確認されたグラム陽性病原体を有するすべてのＩＴＴ患者であった。臨床的に評価可能な集団を、１）すべての研究エントリー基準を満たす者、２）経口ステップダウン療法（ケア群の標準に適用されただけ）を除き、４日目以降にグラム陽性感染に対する抗微生物剤療法を変更しなかった者、３）フォローアップ（ＦＵ）評価通院のために戻った者、および４）プロトコル承認されていない同時投与抗微生物剤を与えられなかった者と定義した（治療が失敗しない場合）。微生物学的に評価可能な集団は、ベースラインにおいて培養により確認されたグラム陽性病原体を有する臨床的に評価可能な患者の部分集合であった。
【００９３】
研究集団を表２に示す。
【表４】
0005519090.tif 000006
ITT - 治療意図
MITT - 培養により確認されたグラム陽性感染を有するＩＴＴ集団の部分集合
EOT - 治療終了時
FU - フォローアップ
【００９４】
対象のメジアン年齢は５０〜５５歳（１８〜８６歳の範囲）であった。治療アームを越えた年齢の明かな差はなかった。治療アームを越えた性差はあったが、全体として研究に同数の男女が参加した。患者集団は主に白人であった。これらの結果はＩＴＴおよび臨床的に評価可能な集団の両方と矛盾しなかった。
【００９５】
６２人の患者が参加し、研究アーム１には２０人、研究アーム２および３には各２１人参加した。標準のケアに関する最も通常のコンパレーターはクリンダマイシン、セフトリアクソン、バンコマイシンおよびセファゾリンであった。研究アーム３における治療の平均期間は１５日であった。
【００９６】
６２人のＩＴＴ患者のうち、６６％（ダルババンシン１回投与１４人、ダルババンシン２回投与１３人、標準のケア１４人）は、単離されたグラム陽性病原体の前治療を受けていた（ＭＩＴＴ集団）。最も通常の病原体はエス・アウレウス（S.aureus）であった。ベースラインにおける病原体の分布を表３に示す。
【表５】
0005519090.tif 000007
【００９７】
臨床的および微生物学的応答
患者の臨床的応答ならびに明らかになったあるいは推定された微生物学的応答を評価することにより３つの治療規則の有効性を決定した。第１の有効性のエンドポイントは、臨床的に評価可能な集団に関するフォローアップ来院時における臨床的応答であった。ＥＯＴおよびＦＵの両方に関する臨床的応答を、成功（治癒または改善）または失敗（決定されない結果を包含）に分類した。成功に分類された患者には、感染に対するさらなる抗細菌剤での全身的処置を受けた者であってはならない。失敗は、１またはそれ以上の局所あるいは全身的なＳＳＴＩの徴候の継続と定義され、その結果、ＳＳＴＩに対する新たなあるいはさらなる全身的な抗微生物剤治療が必要であった。
【００９８】
第２の有効性の変数である微生物学的結果を、微生物学的に明らかになったＳＳＴＩ（すなわち、少なくとも１の同定されたベースライン病原体）を有する患者の部分集合において評価した。ベースラインにおいて同定された各グラム陽性病原体に関して微生物学的応答を評価した（すなわち、根絶、根絶と推定、継続して存在、継続して存在と推定）。フォローアップ培養が行われなかった患者については、ベースライン病原体に関する微生物学的応答を、臨床的応答を基礎として推定した。ＥＯＴおよびＦＵ来院時の患者による微生物学的応答を、成功（すなわち、すべてのグラム陽性生物が根絶され、あるいは根絶したと推定される）または失敗（すなわち、少なくとも１のグラム陽性生物が継続して存在する、あるいは継続して存在していたと推定される、複数の病原体のうち部分的に根絶されたものがある）としてグレード分けした。ＥＯＴおよびＦＵの両方において、コロニー形成および重感染を評価した。ＦＵ来院時に、患者の細菌学的応答は再発をも包含し得た。
【００９９】
臨床的有効性
臨床的成功率を表４に示す。臨床的に評価可能な集団において、ダルババンシン１回投与の患者の６１．５％、ダルババンシン２回投与の患者の９４．１％、および標準のケア群の７６．２％の患者がＦＵ評価の時点で成功に分類された。ベースラインにおいて深部または合併症のＳＳＴＩに分類された患者に関する実地のサブ分析においても、ダルババンシン２回投与療法は、ダルババンシン１回投与療法（成功率５８．３％）および標準のケアの療法（７３．７％）と比較して、高い臨床的成功率（９３．８％）を示した。
【０１００】
ＥＯＴおよびＦＵ評価の両方における類似の成功率は、支持的なＩＴＴおよび微生物学的に評価可能な集団において見られ、ダルババンシン２回投与での治療後のより好ましい応答の傾向と矛盾しなかった（表３）。ＭＩＴＴ集団に関して、メチシリン耐性エス・アウレウス（ＭＲＳＡ）に関するＦＵ評価における臨床的成功率は、ダルババンシン１回投与の場合５０％（３／６）、ダルババンシン２回投与の場合８０％（４／５）、そして標準のケア規則で治療された患者の場合５０％（１／２）であった。
【表６】
0005519090.tif 000008
【０１０１】
微生物学的有効性
異なる病原体に関する異なる治療規則の成功率を表５に示す。微生物学的に評価可能な集団に関し、ＦＵ評価における根絶／推定上根絶の割合は、ダルババンシン１回投与の場合５８．３％（７／１２）、ダルババンシン２回投与の場合９２．３％（７／１２）、および標準のケア群の患者の場合７０．６％（１２／１７）であった。継続して存在した単離体に関し、ダルババンシンＭＩＣにおいては変化がなかった。ＦＵにおいて、エス・アウレウス根絶率は、ダルババンシン１回投与（５０％）および標準のケア（６０％）と比較すると、ダルババンシン２回投与の場合に高かった。ＭＩＴＴ集団に関して同様の知見が観察された。ダルババンシン２回投与によりＭＲＳＡ単離体の８０％が根絶された（表５）。
【表７】
0005519090.tif 000009
【０１０２】
微生物学的に評価可能な集団およびＭＩＴＴ集団に関し、ＥＯＴおよびＦＵにおける微生物学的成功率を表６にまとめる。比較可能な微生物学的成功率が、ダルババンシン２回投与で治療された患者および標準のケア規則で治療された患者の両方の来院時において報告された（６４％ないし７７％）が、ダルババンシン１回投与された患者の成功率はより低かった（＜４０％）。微生物学的に評価可能な集団におけるＥＯＴ／ＦＵ時点での微生物学的成功率は、臨床的応答の知見とパラレルな関係を有していた：ダルババンシン１回投与の場合３８．５％／２７．３％、ダルババンシン２回投与の場合７２．７％／７２．７％、標準のケアの療法の場合７１．４％／６４．３％。ＭＩＴＴ集団に関しても同様の知見が観察された（データ示さず）。
【表８】
0005519090.tif 000010
【０１０３】
薬物動力学的分析
ダルババンシン治療群にランダム化された患者に関し、ダルババンシン血漿濃度を調べるために８日目に５ｍｌの血液を採取した。８日目に５００ｍｇのダルババンシンを投与されるべきランダム化された患者から、２回目の投与直前に血液を得た。ダルババンシン１回投与群にランダム化された患者から１０日目および２４日目にさらに５ｍｌの血液試料を得、ダルババンシン２回投与群にランダム化された患者から２０日目および３４日目にさらに５ｍｌの血液試料を得た。
【０１０４】
有効性を確認されている液体クロマトグラフィーおよび質量スペクトル法を用いてダルババンシン血漿濃度を調べた。定量下限は結晶１ｍｌあたり５００ｎｇであった。
【０１０５】
１回投与規則による研究８、１０および２４日目の平均ダルババンシン濃度はそれぞれ３１．１±７．１、２５．２±４．８、および１０．２±３．５ｍｇ／ｌ（平均±ＳＤ）であった。２回投与規則による８（２回目の投与の前）、２０および３４日目のダルババンシン濃度はそれぞれ３０．４±８．２、２１．２±１０．０、および９．０±４．４ｍｇ／ｌであった。予想されたように、すべての患者は１回目の投与後の最初の１週間は２０ｍｇ／ｍｌよりも高いダルババンシン濃度を有しており、８日目に５００ｍｇＩＶをさらに投与した場合にさらに１週間にわたり２０ｍｇ／ｍｌより高いレベルが維持された。一般的には、最小殺細菌濃度は約４ないし１０ｍｇ／ｍｌである。
【０１０６】
安全性評価
研究薬剤を少なくとも１回投与された各患者（ＩＴＴ群）を、異常な臨床試験結果およびバイタルサインを含む不利なイベント（ＡＥ）のモニタリングにより薬剤安全性に関して評価した。重篤度（軽度、中度、重度、生命を脅かす程度）ならびに研究薬剤との関連性（関連性なし、関連性がありそうもない、関連している可能性あり、あるいはおそらく関連している）に関して研究者によりＡＥが評点付けされた。
【０１０７】
ＡＥデータのまとめを表７に示す。不利な反応の大部分（９０％）は軽度および中度と考えられた。すべての重度の不利な反応（５人の患者において８イベント）は研究薬剤での治療に関連していなかった。少なくとも１回の緊急治療を要するＡＥが報告されたすべての患者の約５９％（ダルババンシン１回投与では１９人、ダルババンシン２回投与では１６人、標準のケアでは２１人）が、研究者により研究薬剤と関連している可能性あり、あるいはおそらく関連していると分類されたイベントを経験した。特に、薬剤に関連したＡＥｓが、１１人（５５％）のダルババンシン１回投与患者において、１０人（４８％）のダルババンシン２回投与患者、および１２人（５７％）の標準のケアの患者において報告された。ダルババンシンおよび標準のケアの両方の治療群において最も頻繁に報告された薬剤関連ＡＥは下痢および吐き気であった。異なる治療群において観察されたＡＥｓのタイプを表８に示す。
【０１０８】
非ダルババンシン治療患者はＡＥのために未完のまま治療を中断した。標準のケア規則による２１人の患者うち３人（１４％）がＡＥのために未完のまま治療を中断し、その中には、１日目におそらく薬剤に関連したじんましんを発症した１人の患者および研究薬剤に関係のないＡＥを有していた２人の患者（P.aeruginosaとの重感染およびバンコマイシン耐性レベル上昇）が含まれていた。
【表９】
0005519090.tif 000011
【表１０】
0005519090.tif 000012
【０１０９】
議論
このオープン−ラベルランダム化されたフェーズＩＩの試験は、ダルババンシンがＳＳＴＩを有する成人の治療に有効であることを示す。参加した患者の大部分は深部または合併症のある感染を有し（＞９０％）、外科的介入を要する感染を有していた（〜７０％）が、約４５％は糖尿病も有していた。
【０１１０】
２回の毎週用量のダルババンシンは、ダルババンシン１回投与または標準のケア規則のいずれよりも数値的に高い臨床応答を有していた。ＩＴＴおよび臨床的に評価可能な集団両方からのデータは、２回の逐次の毎週用量のダルババンシンの投与規則（毎週１０００ｍｇ、５００ｍｇ）がＳＳＴＩｓの治療において有効であることを示唆する。標準のケアの群はメジアン期間１３日で治療された。フォローアップにおいて、ダルババンシン２回投与にて治療された臨床的に評価可能な患者の９４％が臨床的に成功と考えられたが、対照的に、標準のケア規則を施した患者の７６％およびダルババンシン１回投与を受けた患者の６１．５％が臨床的に成功と考えられた。
【０１１１】
エス・アウレウスはベースラインにおいて最も頻繁に単離される生物であった。この試験において、約８３％の患者がエス・アウレウスに感染しており、すべてのエス・アウレウス株の３８％がＭＲＳＡであった。大部分の感染（８０％）は単一の病原体により引き起こされた。ＭＲＳＡを含むグラム陽性単離体に対するダルババンシンのＭＩＣｓは０．０１６ないし０．２５ｍｇ／Ｌの範囲であった。
【０１１２】
微生物学的成功率は臨床的に評価可能な集団に関する臨床的応答に成功率とパラレルであった。混合されたすべての生物に関して、ダルババンシンを１週間おきに２回投与する規則での治療は、２週間目の治療前評価において、ダルババンシン１回投与（５８％）および標準のケア療法（７１％）よりも高い根絶率（９２％）を示した。結局、エス・アウレウス根絶はそれぞれ９０％、５０％および６０％の患者において観察された。ＭＩＴＴ集団に関しては、ＭＲＳＡの根絶率はダルババンシン２回投与の場合８０％であったのに対し、ダルババンシン１回投与および標準のケア療法ではいずれも５０％であった。
【０１１３】
１回投与および毎週２回投与により治療期間の終わり（それぞれ１０日目および２０日目）に得られたダルババンシン濃度は同様であり、２回目の１週間分の投与後における少量の薬剤の蓄積が示唆された。２回投与規則にて観察されたより高い臨床的成功率は時間依存性の殺菌を示唆するものであり、薬剤または薬剤への曝露の持続したレベルが、一週間間隔での２回のダルババンシン投与により提供された。１週間の投与間隔の終わりにおいて測定されたダルババンシン血漿レベルは、この試験において見出された病原体も含めて大部分のＳＳＴＩｓの原因である病原体に関して報告されているＭＩＣ９０よりも実質的に高かった（＜０．０３ないし０．５ｍｇ／ｍＬ）。これらのレベルは最小殺細菌濃度４ないし１０ｍｇ／ｍｌよりも高かった。
【０１１４】
不利な反応の全体的な割合はダルババンシン投与規則の群と標準のケアの群の両方に関して同様であった。胃腸の薬剤に関連した不利なイベント（すなわち、下痢および吐き気）は３つの治療群において最も普通に報告された。これらのイベントの大部分は中程度であり自己限定性であった。ダルババンシンにより治療された患者のうち、不利な反応のため早くに研究から離脱した者はなく、グリコペプチドに起因する重大な不利なイベントも報告されなかったが、標準のケア群の１４％は不利な効果のために離脱した。かくして、本発明の新規投与規則は標準的なケアと比較して不利な効果を減少させた。この試験で得られたデータからは、ダルババンシンがいずれかの程度の臨床的に有意な肝臓毒性または腎臓毒性を誘発したという証拠は見出されなかった。
【０１１５】
ダルババンシン２回投与規則は合併症を有するＳＳＴＩｓの患者の治療に有効であると思われる。両方の用量のダルババンシンともこの臨床試験において十分に耐えうるものであり、標準のケア群の不利なイベントのプロファイルと同様の不利なイベントのプロファイルを伴っていた。
【０１１６】
実施例２．健康対象におけるダルババンシンの薬物動力学および腎臓での排泄
この研究の第１の目的は、ダルババンシンの薬物動力学を特徴付けて、治療用量の薬剤を投与される健康対象における腎臓での排泄の程度を計算することであった。これはオープンラベルで比較ではない（open label, non-comparative）研究であった。
【０１１７】
研究薬剤での処置
年齢１８歳から６５歳までの健康な男性または女性の対象に、３０分かけて輸液することにより１０００ｍｇＩＶ用量のダルババンシンを１回投与した。
【０１１８】
女性１人および男性５人である６人の対象が投薬研究に参加し、研究のすべての段階を終えた。３人の対象は白人であり、３人の対象はアフリカ−アメリカ系であった。平均年齢は２９．８歳（２２歳から６３歳までの範囲）であった。平均身長は６８．６インチ（６３インチから７５インチの範囲）であり、平均体重は１７９．６ポンド（１４０ないし２４４ポンドの範囲）であった。
【０１１９】
薬物動力学
研究１、２、３、４、５、６、７、１４、２１、２８および４２日目に血液および尿（２４時間収集）を集めた。血液試料をヘパリン処理チューブ中に得て、遠心分離した。血漿を分離し、アッセイ時まで−２０℃で保存した。有効性が確認されているＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法を用いて血漿および尿試料をダルババンシンに関してアッセイした。尿および結晶に関するアッセイの定量の下限は５００ｎｇ／ｍＬであった。
【０１２０】
WinNonlinTMソフトウェア（Pharsight Corporation）を用いる非コンパートメント的方法によりダルババンシン薬物動力学パラメーターを評価した。観察されたデータからピーク濃度（Ｃｍａｘ）値を直接得た。結晶濃度−時間曲線下の面積（ＡＵＣ）を、線形台形ルール（linear trapezoidal rule）を用いて計算した。クリアランス（ＣＬ）を用量／ＡＵＣとして計算した。時間曲線対対数濃度の対数−直線部分の線形回帰により、除去半減期（elimination half life）（ｔ１／２）を評価し、第１モーメント曲線下の面積（ＡＵＭＣ）に用量をかけ、ＡＵＣで割ることにより、定常状態における分配体積（Ｖｓｓ）を計算した。尿中に排泄されたダルババンシン積算量を、尿排泄速度の積分として決定した（ＡＵＲＣ）。ＣＬＲまたは腎臓クリアランスを次の割合として計算した：ＣＬＲ＝ＡＵＲＣ／ＡＵＣ。
【０１２１】
すべての対象に関する時間に対するダルババンシンの血漿濃度を図１に示す。薬物動力学的パラメーターを表９に示す。濃度はすべての対象において同様であった。ピーク血漿濃度は約３００ｍｇ／Ｌであり、輸液直後に達成された。ダルババンシンは１０Ｌよりも多い見かけの分配体積を示し、細胞外液体中に十分に分配されたと考えられる。
【０１２２】
ダルババンシンは９〜１２日のｔ１／２でゆっくりと除去された。全薬剤クリアランスは０．０４３１±０．００７４Ｌ／時であった。変化せずに尿中に排泄された薬剤のフラクションは投与量の４２％と評価され、腎臓でのクリアランスは０．０１８Ｌ／時であると評価された。対象間の変動は少なく、変動係数はすべての薬物動力学的パラメーターにおいて２２％よりも小さかった。
【表１１】
0005519090.tif 000013
【０１２３】
安全性の評価
不利なイベントを記録し、重篤度および研究薬剤との関連性について評価した。研究室のデータ（化学パネル、差分ＣＢＣ、尿分析）を集め、ベースラインからの変化および範囲外の値を評価した。ＥＣＧ、身体検査およびバイタルサインを得て、ベースラインからの変化を評価した。
【０１２４】
この研究においてダルババンシンは十分に耐えられるものであった。この研究期間中に死亡した対象あるいは重大な不利なイベントの対象は報告されず、ＡＥのために研究完遂前に脱退した対象はいなかった。
【０１２５】
すべてのボランティアは少なくとも１のＡＥを報告し、すべて軽度であった。３人のボランティアは、研究投薬に関連している可能性のあるＡＥｓを報告した：１人の対象において上昇したＡＬＴ（４６ＩＵ／Ｌの値、正常の上限４０ＩＵ／Ｌ）；すべての対象において好酸球増加（０．５ｘ１０３／μＬの値、正常の上限０．４ｘ１０３／μＬ）、上昇したＬＤＨ（３０３ＩＵ／Ｌの値、正常の上限９０ＩＵ／Ｌ）、上昇したＡＬＴ（４６ＩＵ／Ｌの値、正常の上限４０ＩＵ／Ｌ）、上昇したＡＳＴ（４２ＩＵ／Ｌの値、正常の上限４０ＩＵ／Ｌ）；１人の対象において耳鳴り。
【０１２６】
ベースライン後の血液学的結果、化学的結果、バイタルサインおよびＥＣＧの結果には何の傾向も見られなかった。
【０１２７】
議論
ダルババンシン１０００ｍｇＩＶの１回投与は十分に耐えられるものであった。１０００ｍｇの１回静脈輸液後、４５ｍｇ／ｌよりも高いダルババンシン血漿濃度が少なくとも７日間維持された。これは殺細菌的であることが知られている濃度（４〜３２ｍｇ／ｌ）よりも高い。このことは、ダルババンシンの１週間に１回の投与規則での使用を支持する。尿での除去プロファイルは、腎臓での排泄が重要な除去経路であり、約４０％が尿中に排泄されることを示す。この知見は動物での観察結果と矛盾しない。腎臓経路のみが除去経路ではないので、ダルババンシンの用量調節は腎臓に障害のある患者において必要でないかもしれない。
【０１２８】
実施例３．等温滴定微小熱量測定を用いるダルババンシンの蛋白結合
蛋白へのダルババンシンの結合を、Microcal VP-ITC装置を用いて、２０ｍＭホスフェート、１５０ｍＭ ＮａＣｌ，ｐＨ７．４中、２５℃および３７℃にて等温滴定微小熱量測定（ＩＴＣ）により測定した。典型的な実験において、２５ｘ１０μｌの蛋白（約１５０μＭ）を、ダルババンシン溶液（約５μＭ）の入った熱量計セルに注入した。２８０ｎｍにおける吸光度を測定することにより、実際の蛋白およびダルババンシン濃度を決定した。対照実験は蛋白をバッファー（ダルババンシン不存在）に注入して、同一条件下での蛋白の希釈熱を調べることを含んでいた。比較のために、いくぶんかの必要な修飾を行って、テイコプラニンを用いて同様の実験を行った。
【０１２９】
下記の各蛋白を用いて、ダルババンシンで実験を行った：ヒトアルブミン；イヌアルブミン；ラットアルブミン；ウシアルブミン；およびヒトα−グリコプロテイン。ヒトアルブミンおよびα−グリコプロテインを用いてテイコプラニンを研究した。２つの異なる温度での結合アフィニティーの比較を表１０に示す。
【表１２】
0005519090.tif 000014
カッコ内の ± 誤差はフィッティングルーチン（fitting routine）から得られた標準偏差である。
【０１３０】
希釈熱に関する補正を行った後の総合熱効果（integrated heat effects）を、Microcal ORIGINソフトウェアパッケージを用いる単純な単一部位結合モデルを用いて非線形回帰により分析した。各注入物質に関する生データ（μｃａｌ／秒）を総合して、添加１回あたりの全熱効果を得て、次いで、注入物質の量で割って注入物質のｋｃａｌ／ｍｏｌｅを得た。同じ総合を対照希釈効果に適用し、これを実際の測定データから差し引いた。これにより、結合曲線の相違が提供され、結合の程度は全放出熱（あるいは吸収熱）に比例している。次いで、これを種々の標準結合モデルに関して非線形回帰法により分析した。最も単純なモデルは単純な非競争的結合平衡を仮定するものであり、３つのパラメーターを与える：
Ka (=1/Kdiss) は結合定数 (解離定数)である
ΔH = 結合エンタルピー (結合に関連するシグナルのサイズ)
N = 結合部位数 (結合モデルが正しいと仮定)
【０１３１】
非競争的結合と仮定して、Ｎは、試料中のすべての利用可能な結合部位を飽和させるのに必要な注入物質のモル数（相対数）である。ダルババンシンでの実験に関し、ダルババンシンは「試料」であり、蛋白（ＨＳＡ等）は「注入物質」である。これらの予備的な結果は、結合が比較的弱いこと、ダルババンシンの溶解度が低いので、結合化学量論（Ｎ）を明確に決定することは困難であることを示す。しかしながら、図２からわかるように、すべての場合において、データはＮ＜１でうまく適合する（すなわち、ダルババンシンに対して１個未満ないし１個の蛋白）。結果として、Ｎ＝０．５の値は、すべてのダルババンシンに結合するのは予想した蛋白のわずか半分のモル数の蛋白であることを意味する。言い換えると、１分子の蛋白は見かけ上２個のダルババンシン分子と結合する。ダルババンシンが１：１の割合で蛋白と結合する二量体を形成することがあり得る。結合化学量論モデリングの結果は、２個のダルババンシン分子が１個の蛋白分子に結合することを示唆し、それは１：１の結合を示すテイコプラニンとは異なる。
【０１３２】
表１１は、ヒト血清アルブミン（６ｘ１０−４Ｍ）およびα−グリコペプチド（１．５ｘ１０−５Ｍ）の生理学的濃度を仮定した場合の、１〜５００μＭの範囲の濃度の抗生物質の結合パーセント数を計算したものである。これを臨床的状態と関連づけるためには、ヒトにおけるダルババンシンのピーク濃度は３００ｍｇ／Ｌまたは１６５μＭである。
【表１３】
0005519090.tif 000015
ND= 計算せず
【０１３３】
これらの実験において、ヒト血清アルブミンに対するダルババンシンの結合は９８％を超える。結合割合は、選択されたダルババンシン濃度間でかなり一定であり、すなわち１〜５００μＭである。この範囲はヒトにおける治療濃度を包含する。α−グリコプロテインへのダルババンシンの結合はテイコプラニンのそれよりもはるかに強い。ダルババンシンは高い能力と異なる起源の血漿蛋白に対する低い親和性を示し、試験したすべての種由来の蛋白間で同様のＫａ値を有している。これらの結果は、ダルババンシンのユニークな薬物動力学的特性のいくつかを説明するのに役立つ。結合および２：１のダルババンシン：蛋白複合体の形成もまた、長い半減期およびほぼ細胞外水分体積である見かけの体積分布の説明となる。低い親和性は、遊離フラクションを用いた場合に化合物に関して期待される活性（１％付近）を大きく超える、観察されたインビボ活性を説明するのに役立つ。血漿蛋白に対する高い容量は、生理学的ｐＨにおける化合物の乏しい溶解度にもかかわらず達成された比較的高い血漿濃度を説明するのに役立つ。
【０１３４】
実施例４．ラットにおけるダルババンシンの薬物動力学的貢献および組織分布
２０ｍｇ／ｋｇの［３Ｈ］−ダルババンシンを１回静脈輸液されたラットにおいて２つの研究を行った。投与後７０日間にわたり排泄物および４０個の異なる組織を集め、薬剤に由来する放射活性の組織分布および薬物動力学を調べた。
【０１３５】
ＨＰＬＣにより精製された［３Ｈ］−ダルババンシンをこれらの研究に使用した。トリチウム交換により放射性標識薬剤を得て、ＨＰＬＣにより精製した。
【０１３６】
ラット物質収支の研究
オスのラットにおいて物質収支の研究を行って、ダルババンシン１回静脈（ＩＶ）輸液後のダルババンシンの排泄パターンを調べた。
【０１３７】
１５匹のオスのSprague-Dawleyラットに３Ｈ−ダルババンシン（２０ｍｇ／ｋｇ，１００μＣｉ／ラット）を１回ＩＶ投与した。投与後、尿および便を２４時間間隔で１４、３６、および７０日目まで集めた（最終収集時に３匹）。水およびメタノールでのケージ洗浄液も集めた。収集期間の終わりに死体を分析した。液体シンチレーション計数（ＬＳＣ）により全放射活性量に関してすべての試料を分析した。
【０１３８】
ラットに３Ｈ−ダルババンシンをＩＶ投与した後、薬剤に由来する放射活性が尿（排泄された放射活性の約２／３）および便（排泄された放射活性の約１／３）の両方に排泄された。投与された放射活性の約半分が１週間以内に除去され、そのことは約１週間の血漿ｔ１／２と一致した。投与後７０日目で、死体には投与量のわずか４．５％しが残存していなかった。無視できる放射活性がケージ洗浄液中に回収された。実質的に投与されたすべての放射活性が研究期間中に説明された（尿、便、ケージ洗浄液、およびトリチウム交換）。
【０１３９】
ラット定量的組織分布（ＱＴＤ）の研究
オスのラットにダルババンシンをＩＶ投与した後の組織分布を評価するために定量的組織分布の研究を行った。
【０１４０】
４１匹のオスのSprague-Dawleyラットに３Ｈ−ダルババンシン（２０ｍｇ／ｋｇ，１００μＣｉ／ラット）を１回ＩＶ投与した。投与後１２、２４、４８、７２、９６、１２０、１４４、１６８、３３６、８４０、１１７６および１６８０時間目にラット（各時点につき３匹）を安楽死させて、血液、血漿、および組織（死体を包含）を集めた。すべての試料をＬＳＣにより分析した。
【０１４１】
皮膚を含む組織中の薬剤由来の放射活性の濃度およびｔ１／２値は、血漿中で観察された値と比較した。投与１２時間以内に定量可能な濃度の薬剤由来の放射活性を有するダルババンシンがすべての組織に迅速かつ広く分布することがわかった。大部分の組織は投与２４時間以内に最大濃度（Ｃｍａｘ）に達した。５日後に回収された放射活性はいずれの組織においても投与量の５％未満であった。投与後７０日目までに、死体のみ投与放射活性の１％（２．３４％）を上回る放射活性を保持していた。かくして、ダルババンシンはどの単一組織、器官、または血液細胞コンパートメントにも蓄積しなかった。この健康な動物モデルにおいてＣＮＳ中の放射活性の濃度は低かったが、検出可能であった。ダルババンシンは、血漿中の濃度と同等またはそれ以上の薬剤由来の放射活性の濃度で皮膚に浸透することがわかった。薬剤由来の放射活性の血漿中対血液中の割合は時間経過しても比較的一定であり、１未満であった。
【０１４２】
ＱＴＤの研究の一部として、投与後３８４時間（１６日）にわたり胆管カニューレを挿入したラット（４匹）から胆汁試料を集めた。投与から３８４時間後に投与量のほぼ１１％が胆汁中に回収された。このことは、薬剤由来の放射活性の大部分が便中に見出されたことを示す。
【０１４３】
実施例５  ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる血漿中のダルババンシンの定量
【０１４４】
下記のような、血漿中のダルババンシンの定量的測定のためのＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法を開発した。
ダルババンシンの校正用標準および品質管理標準の調製
【０１４５】
ダルババンシンを脱イオン水に溶解させて１０００μｇ／ｍＬの溶液を調製することによってダルババンシンの原液を調製し、次いで脱イオン水で連続的に希釈して５００、５０および１０μｇ／ｍＬの溶液を調製した。
【０１４６】
ヒトの血漿を、上記のように調製した１０００μｇ／ｍＬのダルババンシンの原液の適切な量でスパイクすることによって、１００、６０、および４０μｇ／ｍＬのダルババンシン濃度の校正用標準を調製した。ヒトの血漿を、５００μｇ／ｍＬのダルババンシンの原液の適切な量でスパイクすることによって、２０および１０μｇ／ｍＬの濃度の校正用標準を調製し、ヒトの血漿を、１０μｇ／ｍＬの原液の適切な量でスパイクすることによって、０．５μｇ／ｍＬの校正用標準を調製した。
【０１４７】
ヒトの血漿を、上記のように調製した１０００μｇ／ｍＬのダルババンシンの原液の適切な量でスパイクすることによって、９０および３０μｇ／ｍＬのダルババンシンの品質管理標準を調製した。ヒトの血漿を、５０μｇ／ｍＬの溶液の適切な量でスパイクすることによって、１．５μｇ／ｍＬの品質管理標準を調製した。
内部標準使用溶液の調製
【０１４８】
内部標準のＢＩ−Ｋ００９８、これはＡ−４０９２６のジエチル−アミノ−プロピル−アミノ誘導体である、の３０μｇ／ｍＬの使用溶液を次のように調製した。約１０ｍｇのＢＩ−Ｋ００９８を、約１０ｍＬの移動相Ａ（８０％の１０ｍＭ  ギ酸アンモニウム／ギ酸、ｐＨ３（ｖ／ｖ）、１０％のアセトニトリル（ｖ／ｖ）、および１０％の２−プロパノール（ｖ／ｖ））に溶解させて、１０００μｇ／ｍＬの内部標準の原液を作製した。次いで、この原液（３００μＬ）を移動相Ａで１０ｍＬの量に希釈して、３０μｇ／ｍＬの内部標準溶液を作製した。
分析のためのサンプルの調製
【０１４９】
血漿中のダルババンシンの濃度を定量するためのサンプルを次のように調製した。上記のように調製した５０μｌの校正用標準または品質管理標準に、１００μＬの内部標準使用標準溶液を添加して混合した。この混合物を室温で五分間平衡化させ、次いで２５０μＬのアセトニトリルを添加した。次いで、この混合物をボルテックスで１０秒間撹拌し、次いでALC micro-centrifugette 4214で約１０，０００ｒｐｍにて１分間遠心分離した。上清をきれいな試験管に移し、Savant Speed-Vac Systemで、約４０℃にて蒸発乾固させた。次いで、サンプルを１５０μＬの移動相Ａに再懸濁させた。
分析方法
【０１５０】
分析のために上記のようにして調製した５０μＬのサンプルをPhenomenex Jupiter C18カラム（５０×２ｍｍ、Ｃ１８  ５μｍ  ３００  Ａ）内に注入し、０．３ｍＬ／ｍｉｎの流速の勾配ＨＰＬＣの条件下で分析した。この勾配の条件は：最初が８０％の移動相Ａ／２０％の移動相Ｂ（２０％の１０ｍＭ  ギ酸アンモニウム／ギ酸、ｐＨ３（ｖ／ｖ）、４０％のアセトニトリル（ｖ／ｖ）、４０％の２−プロパノール（ｖ／ｖ））；１分目に２０％の移動相Ａ／８０％の移動相Ｂ；２分目に２０％の移動相Ａ／８０％の移動相Ｂ；２．５分目に最初の条件に戻る、というものであった。
【０１５１】
このＨＰＬＣシステムを、陽イオン化モードで操作する、ターボイオンスプレーを伴うＰＥ  ＳＣＩＥＸ  ＡＰＩ−２０００三連四重極質量分析計と連結した。イオン源におけるスプレーを生じさせるために、空気を用いた。カーテンガスとして窒素を用いてプローブ温度を５００℃に設定した。コリジョンガスとして窒素を用いるマルチプルリアクションモニタリング（ＭＲＭ）を採用した。次のイオンの移行：ダルババンシンについて９０９．３Ｄａ→１４２９．３Ｄａ、および内部標準（ＢＩ−Ｋ００９８）について９２３．３Ｄａ→１４５７．３Ｄａをモニタリングすることによって、分析対象物を検出した。質量分析計の汚染を避けるために、最初の１分間において、およびクロマトグラフィーの実施開始から２．５分間において、ポストカラムの流れを迂回させた。
【０１５２】
データを収集し分析するためにSoftwafe Sample Control 1.4を用い、クロマトグラフィーでのピークと統計データの評価とを統合するためのソフトウェアのMacQuan 1.6を用いた。
校正曲線
【０１５３】
測定方法の直線性を、校正曲線を作成するための校正用標準を検定することによって評価した。血漿サンプル中のダルババンシンの濃度を、ダルババンシンと内部標準との間のピーク面積の比率を計算することによって測定した。
【０１５４】
０．５〜１００μｇのダルババンシン／ヒトの血漿１ｍＬという分析範囲の全体にわたるダルババンシンの濃度についての校正曲線を、（１／ｘの加重がかけられた）方程式ｙ＝Ａ＋Ｂｘを用いて作図した。ここで、Ａは曲線の切片を示し、Ｂは曲線の傾きを示し、ｘは校正用標準（μｇ／ｍＬ）のダルババンシンの濃度を示し、ｙは内部標準に対するダルババンシンのピーク面積の比率を示す。三種の異なる校正曲線を作図した。この結果から、ダルババンシン／内部標準の面積の比率およびダルババンシンの濃度は分析範囲の全体にわたって直線的に変化することが示された。定量の下限値（ＬＬＯＱ）は、１ｍＬのヒトの血漿あたり０．５μｇのダルババンシンであった。校正曲線についての傾きは再現性があり、それらの相関係数は０．９９９５より大きいものであった。
血漿中のダルババンシンの安定性
【０１５５】
血漿サンプル中のダルババンシンの安定性を、上記のように調製したヒトの血漿サンプルの、二種の異なる濃度、１．５および９０μｇ／ｍＬの品質管理標準を三回繰り返して分析することによってテストした。検出可能なダルババンシンの濃度は、凍結−融解処理を三サイクル行った後でも安定していた。処理されたサンプル中のダルババンシンの濃度は、室温にて２４時間後でも安定していた。０時間のサンプルに関して、ダルババンシンの濃度の低下は見られなかった。
実施例６  ダルババンシンの質量分析。
【０１５６】
溶液中のダルババンシンの多量体の性質を詳細に調べ、ダルババンシンの単量体に対するダルババンシンの多量体の集団の比率に影響を与える条件を、エレクトロスプレーイオン質量分析（ＥＳＩ−ＭＳ）によって決定した。
【０１５７】
三連四重極分析計であって、陽イオンモードで操作する、ターボイオンスプレー源を備えたApplied Biosystem API III+ 質量分析計を用いて実験を行った。最適条件を下記の表１２に記録する。
【表１４】
0005519090.tif 000016
溶液中のダルババンシン
【０１５８】
機器のパラメータを、８：２の水：イソプロパノール溶液に溶解した、０．１ｍｇ／ｍＬのダルババンシンを含むダルババンシン溶液に合わせた。この溶液を直接注入した後、溶液中のダルババンシンの、５００〜２０００ａｍｕの範囲のスペクトルを得た。図３に見られるように、得られたスペクトルから、ダルババンシンの多量体が存在することが示される。非限定的な例として、このスペクトルの一つの痕跡はＢ０のホモ多量体に起因し、このものは（２ｎＭ＋ｙ（＋３））のイオン種として存在する。ここで、ｎはホモ多量体の多重度を示す正の整数であり、たとえば、多量体がホモ二量体の場合はｎ＝１であり、多量体がホモ四量体の場合はｎ＝２であり、Ｍは単量体の質量を示し、ｙ＝ｎであり、＋３は３価の陽イオンの電荷を示す。具体的には、ｎ＝１、ｙ＝１、およびＭ＝Ｂ０の質量の場合、Ｂ０のホモ二量体が与えられる。このホモ二量体の種を、質量スペクトルにおいて（２Ｍ＋３）イオンの痕跡とする。
ダルババンシンの単量体に対する多量体の集団の比率に与えるダルババンシンの濃度の影響
【０１５９】
単量体に対する多量体の集団の比率に与えるダルババンシンの濃度の影響を、上記の条件を用いた質量分析によって評価した。ダルババンシン溶液を２０、４０、６０、および８０μｇ／ｍＬの濃度で直接注入することによってスペクトルを得た。図４に示されるように、ダルババンシンの濃度の関数として主なピークの強度を記録し、ダルババンシンの単量体に対する多量体の集団の比率を測定した。
【０１６０】
このデータから、ダルババンシンの単量体に対するダルババンシンの多量体の集団の比率が、上昇する濃度に伴って増加することが示される。このことは、個体に投与され得る薬剤の負荷能力が高いことを説明するのに役立ち得る。単量体の貯蔵物としての多量体の機能によって、より高濃度のサンプルが沈殿を生成させる傾向を弱めることができ、個体に投与できる濃度を上昇させることができる。多量体が存在することによって、ダルババンシンの用量の個体への迅速な投与も可能となり得る。
【０１６１】
ダルババンシンの単量体に対する多量体の集団の比率を測定する方法の非限定的な例が提供され、具体的には、図３に示されるように、イオンＡとイオンＢとの間のピークの強度の比率を測定することによる。ピークＡの強度をピークＢの強度で割ることで、ダルババンシンの単量体に対する多量体の集団の比率の一つの指標が与えられる。
ダルババンシンの単量体に対する多量体の集団の比率に与えるｐＨの影響
【０１６２】
ダルババンシンの単量体に対する多量体の集団の比率に与える溶液のｐＨの影響を、上記の機器の条件および次のｐＨ値の溶液：２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、および５．５にて評価した。ダルババンシンの単量体に対する多量体の集団の比率をそれぞれのｐＨ値で測定し、図５に見られるように、ｐＨに対してプロットした。ダルババンシンの単量体に対する多量体の集団の比率が、上昇するｐＨに伴って増加することが確定した。
【０１６３】
理論に制限されないとはいえ、イオン性基、たとえば第一のダルババンシンの単量体上のカルボキシル基が、逆に荷電したイオン、たとえば第二のダルババンシンの単量体上の第三窒素基のせいで形成されるイオン性相互作用によるダルババンシンの多量体の安定化に役立つと考えられる。このようなイオン性相互作用は、ｐＨに影響される可能性がある。ダルババンシンがより高いｐＨで多量体として存在する傾向が強くなることは、イオン性相互作用が多量体の安定化に重要であることを示すものと考えられる。とりわけ、特定の官能基、たとえばカルボキシル基はより低いｐＨ値においてプロトン化し得るので、恐らくは多量体の安定性に寄与するイオン性相互作用が妨害されることによって、ダルババンシンの多量体はより低いｐＨで不安定になると考えられる。
ダルババンシンの単量体に対する多量体の集団の比率に与える溶液のイオン強度の影響
【０１６４】
ダルババンシンの単量体に対する多量体の集団の比率に与える溶液のイオン強度の影響を、質量分析法によって測定した。Ultramark 1621、カフェインおよびＭＲＦＡ（Ｌ−メチオニル−アルギニル−フェニルアラニル−アルギニン）を用いてエレクトロスプレーモードで予め合わせて校正しておいたFinnigan LCQDecaイオントラップ装置で、エレクトロスプレーのポジティブモードにて、この質量スペクトルを得た。表１３に列挙した条件を用いてすべての質量スペクトルを記録した。詳細に調べたこのサンプルのパラメータを、表１４に列挙する。
【表１５】
0005519090.tif 000017
【表１６】
0005519090.tif 000018
【０１６５】
サンプルの水溶液をHarwardシリンジポンプによって１０μＬ／ｍｉｎで注入し、図６〜図８に見られるような質量スペクトルを得た。
【０１６６】
得られたスペクトルから、ダルババンシンの単量体に対する多量体の集団の比率がイオン強度に影響されることが示される。緩衝液の濃度の上昇が多量体の質量の痕跡の減少に対応することが分かったので、ダルババンシンの単量体に対する多量体の集団の比率が減少する。
【０１６７】
記載のように、イオン性相互作用はダルババンシンの多量体の安定性に重要であることが考えられる。上昇するイオン強度が、減少する多量体の質量の痕跡の強度と相関したという事実から、多量体の安定性におけるイオン性相互作用の機能が立証される。しかしながら、より高いイオン強度においてさえ多量体の質量の痕跡が存在するので、別の第二の相互作用が多量体の安定化に関与するのかもしれない。
【０１６８】
あらゆる理論に束縛されないとはいえ、疎水性相互作用がダルババンシンの多量体の種の安定化に重要であると考えられる。これらの非共有的なダルババンシンの多量体の安定化がイオン性相互作用だけによるものだった場合、イオン強度の上昇の結果、多量体の質量の種類の全てが失われることが予想されただろう。すなわち、溶液のイオン強度が上昇するのにつれて、多量体を安定化させるイオン性相互作用が、増加した溶液中のイオン集団によって崩壊させられ、そのイオン集団によって単量体がより容易に会合することが予想された。従って、溶液のイオン強度が多量体の単量体成分への解離を促進し、得られた質量スペクトルにはいずれの多量体の質量の痕跡も存在しないだろう。しかしながら、イオン強度が高い溶液（たとえば１００ｍＭのギ酸アンモニウム）においてさえ、ダルババンシンの多量体が存在することが、質量スペクトルにおいて認められている。従って、ダルババンシンの多量体は、疎水性相互作用によって少なくとも部分的に安定化させられたとみなされる。
構造が類似した化合物
【０１６９】
ダルババンシンの効果の改善は、多量体を形成する能力が、少なくとも部分的な原因であると考えられる。このユニークな特徴は、構造が極めて類似した化合物によってでさえ共有されていないと思われる。ダルババンシンと化学構造が類似する化合物が多量体を形成するその能力について、質量分析によって詳細に調べた。Ultramark 1621、カフェインおよびＭＲＦＡ（Ｌ−メチオニル−アルギニル−フェニルアラニル−アルギニン）を用いてエレクトロスプレーのモードに予め合わせて校正しておいたＦｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱＤｅｃａイオントラップ装置で、エレクトロスプレーのポジティブモードにて、この質量スペクトルを得た。表１５に列挙した条件を用いてすべての質量スペクトルを記録した。詳細に調べたサンプルのパラメータを、表１６に列挙する。サンプルの水溶液をＨａｒｗａｒｄシリンジポンプによって１０μＬ／ｍｉｎで注入し、図９および図１０に見られるような質量スペクトルを得た。
【表１７】
0005519090.tif 000019
【表１８】
0005519090.tif 000020
n.a.＝調整せず
【０１７０】
類似の糖ペプチド抗生物質（テイコプラニン）は、種々の濃度の溶液中で多量体性の複合体を示さない。このことは、構造が類似した化合物は溶液中で多量体の種を形成できないという指摘、およびこの現象はダルババンシンの活性において重要な機能を果たし得るという指摘を支持する。
実施例７  タンパク質−ダルババンシン複合体のマトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）型質量分析
【０１７１】
１０μＬのＨＳＡ、０．１５０ｍＭを１０μＬの（０．０７５ｍＭ、０．１５ｍＭ、０．３ｍＭおよび１．５ｍＭからの）ダルババンシン溶液と混合し、３７℃で６０分間インキュベートした。このサンプルを、ドライドドロップレットテクニックを用いる分析のために調製した。２００のレーザーショットによって生じたスペクトルを得て平均化した標準のウシ血清アルブミンを用いて、予め合わせて校正しておいたｔｏｆ質量分析計であるBRUKER FLEX IIIでスペクトルを得た。マトリックス：アセトニトリル／Ｈ２Ｏ（５０：５０）中で飽和したＤＨＢ−９（２，５−ジヒドロキシ安息香酸）が９部、アセトニトリル／Ｈ２Ｏ（５０：５０）中で飽和したシナピン酸が１部。０．５μＬのサンプル溶液および０．５μＬのマトリックス溶液を混合し、レーザーターゲット上に置いた。
【０１７２】
ダルババンシンは単量体としてタンパク質と結合する（１  ＨＳＡ＋１ダルババンシン）。タンパク質に対するダルババンシンの比率が非常に高い（１：２、１：１０）場合、タンパク質分子あたり２分子のダルババンシンを含む複合体の存在が観測できる。
実施例８  ヒトの血清アルブミン存在下でのダルババンシンのＮ，Ｎ’−ジアセチル−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａとの結合の等温滴定熱量測定
【０１７３】
ダルババンシンの細胞壁のターゲットのペプチドアナログである、Ｎ−Ｎ’−ジアセチル−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａとの、ダルババンシンの結合を、（６００μＭまでの）濃度範囲にわたるＨＳＡの存在下、２５℃にて、いくらかの３７℃での追加的な測定を含めて、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）によって詳細に調べた。ＨＳＡはダルババンシンの溶解性を高め、トリペプチドリガンドに対するその結合親和性を低下させた。結果を、バンコマイシンについての結果と比較した。観測された効果は、比較的低いＨＳＡ濃度にて頭打ちとなった。これは、リガンドの、溶液中で遊離しているダルババンシンとの結合、およびダルババンシン−ＨＳＡ複合体との（より弱い）結合の両方を可能とする非競合的な結合モデルと一致した。
【０１７４】
予備的な実験から、血清タンパク質が無い場合、ダルババンシンおよびバンコマイシンは、類似の結合特性：両者はＮ−Ｎ’−ジアセチル−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａに対して発熱性の結合を行うが、ジペプチド（Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ）またはＬｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−乳酸塩に対して結合した証拠は無いことを示すことが実証された。ダルババンシン／トリペプチド相互作用については、これらのデータはＫｄｉｓｓ＝１〜１０μＭでの温度依存的な結合と一致し、同じ条件下でのバンコマイシンと類似していた。ＨＳＡが存在する場合、ダルババンシンの溶解性は有意に上昇し、トリペプチドに対する結合親和性は、ＨＳＡによる抗生物質に対する競合的な結合または非競合的な結合と一致する様式で低下した。本実施例において記述された実験は、（ａ）異なる温度（２５および３７℃）および異なるＨＳＡ濃度でのダルババンシン／トリペプチドの測定の比較；（ｂ）観測された数を比較するための結合モデルを構築するための、これらのデータの使用を目的として設計された。
【０１７５】
ダルババンシンはBiosearch Italiaから供給を受けた。その他の試薬はＳｉｇｍａからのものであった：塩酸バンコマイシン（Sigma V-2002, fw1485.7）、Ｎ，Ｎ’−ジアセチル−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ（Sigma D-9904, fw372.4）、ヒトアルブミン（ＨＳＡ； Sigma A-3782; mw 69,366）。
【０１７６】
抗生物質およびペプチドを、ＨＳＡを含む緩衝水溶液（２０ｍＭリン酸Ｎａ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）に溶解させ、それぞれの実験の直前に緩やかに撹拌した。ペプチドの濃度を重量で測定した。ダルババンシンの濃度を、重量、またはモル吸光係数ε＝１２４３０（ダルババンシン、Ａ２８０１％＝６８．４２）、ε２８０＝６６９０（バンコマイシン）を利用するＵＶ吸光度のいずれかで測定した。ＨＳＡの濃度をＵＶ吸光度（ＨＳＡ、ε２８０＝３７，７００；  Ａ２８０１％＝５．４４）によって測定した。Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＵＶ−１６０ＡまたはＵＶ−１６０１分光光度計を用いて、１ｃｍの光路長の石英キュベット内で室温にてスペクトルを記録し、必要に応じて、吸光度を０．１〜１Ａの範囲とするために、サンプルを緩衝液で定量的に希釈した。
【０１７７】
Ｍｉｃｒｏｃａｌ  ＶＰ−ＩＴＣ装置を用いて、標準的な操作手順を採用して２５℃および３７℃にて等温滴定熱量測定を実施した。たとえば、Wisemanら、Anal. Biochem. (1989) 179, 131-137; Cooperら、Philos. Trans. R. Soc. Lond. Ser. A-Math. Phys. Eng. Sci. (1993) 345, 23-35; Cooper, A, Isothermal Titration Microcalorimetry in C. Jones, B. Mulloy and A. H. Thomas (ら編)、Microscopy, Optical Spectroscopy, and Macroscopic Techniques, Humana Press, Totowa, NJ, (1994) p137-150; Cooper, A., Microcalorimetry of Protein-protein Interactions in J. E. Ladbury and B. Z. Chowdhry (ら編); Biocalorimetry: Tne Applications of Calorimetry in the Biological Sciences, Wiley, (1998) p 103-111;およびCooper, A., Curr. Opin. Chem. Biol. (1999) 3, 557-563を参照すること。熱量計のセル内での泡の形成を抑えるために、添加前にサンプルの脱気を穏やかに行った。それぞれの実験は、通常、抗生物質溶液（約２０〜１００μＭ）を含む熱量計のセル（容積は約１．４ｍＬ）内に、２５×１０μＬのペプチド溶液（約１ｍＭ）を注入することを含んでいた。コントロールの実験では、ペプチドの希釈熱を測定するために、同一の条件下でリガンドを緩衝液に注入する必要があり、そしてこれらの値を、分析前の生の結合データを補正するために用いた。ダルババンシン／トリペプチドの結合実験を、それぞれの温度で数回繰り返した。標準的なMicrocal ORIGIN（商標）ソフトウェアを用いてＩＴＣの結合データを分析し、結合部位の見かけの数（Ｎ）、結合親和性（Ｋａｓｓ＝１／Ｋｄｉｓｓ）および結合エンタルピー（ΔＨ）を決定した。
【表１９−１】
0005519090.tif 000021
【表１９−２】
0005519090.tif 000022
【０１７８】
ＨＳＡが無い場合のトリペプチドのダルババンシンとの結合に関するＩＴＣ実験から、１０、２５、および３７℃での平均Ｋｄｉｓｓがそれぞれおよそ１．４、３．１、および８．４μＭである結合親和性についての矛盾がないデータが得られる（表１７）。結合は発熱性である。ここでの濃度の計算から、これらの条件下ではＮはほぼ０．５であることが示される。このことは、これらの条件下ではダルババンシン二量体あたりトリペプチド一分子が結合することと一致する。これらの結合親和性および結合エンタルピーは、同一の条件下でのバンコマイシンで観測される結合親和性および結合エンタルピーに匹敵する（表１７およびD. McPhail, A.Cooper, J. Chem. Soc.-Faraday Trans. (1997) 93, 2283-2289.）。ここでまた留意すべきことは、バンコマイシンは、より高濃度ではリガンドに誘導される二量体化が生じることである。
【０１７９】
ダルババンシン混合物にＨＳＡを添加すると、トリペプチドとダルババンシンとの間の見かけの結合親和性が低下するが、結合の発熱性は明らかにより強まる（表１７）。これについての２５℃でのＨＳＡの濃度依存性を図１１に示す。見かけのＫｄｉｓｓが最大で３５μＭ  ＨＳＡという（弱い）立ち上がりの後は、生理学的なレベル（６００μＭ）に近づくより高いＨＳＡ濃度に対して比較的一定であり続ける。高濃度のＨＳＡにおける頭打ちとなるレベルＫｄｉｓｓがほぼ３５μＭ）は、ＨＳＡが無い場合よりも約１０〜１２倍弱い結合親和性に相当する。類似の低下は３７℃で見られる。
【０１８０】
ＨＳＡの効果は、トリペプチドとの相互作用によるものではなかった。ＨＳＡが存在する場合のバンコマイシンのトリペプチドとの結合についてのコントロールのＩＴＣ実験から、ＨＳＡが無い場合に見られる結果に匹敵する結果が得られた（表１７を参照すること）。このことは、ペプチドおよび関連性が強い抗生物質、バンコマイシンのどちらも、溶液中のＨＳＡと相互作用しないことを示す。要するに、ＨＳＡがダルババンシン／トリペプチドの相互作用に与えるあらゆる影響は、ＨＳＡとダルババンシンとの間の相互作用が原因となるはずである。
【０１８１】
理論に束縛されるつもりはないとはいえ、上記のデータは非競合的な結合モデルと一致する。このモデルは、トリペプチドリガンド（Ｌ）が、遊離状態のダルババンシン（Ｄ）と、（親和性が異なるかもしれないが）ダルババンシン−ＨＳＡ複合体状態のものとの両方に結合することが可能であると仮定している。
D+L←→DL；  KL＝［D］［L］／［DL］
D+HSA←→D.HSA；  KHSA＝［D］［HSA］／［D.HSA］
D.HSA+L←→LD.HSA；  KLDHSA＝［D.HSA］［L］／［LD.HSA］
見かけの（観測された）リガンドの結合解離定数（非競合的）：
Kapp,L＝［すべてのD］［L］／［すべてのDL複合体］
＝（［D］＋［D.HSA］）［L］／（［DL］＋［LD.HSA］）
＝KL｛1＋［HSA］／KHSA｝／｛1＋［HSA］.KL／KHSA.KLDHSA｝
【０１８２】
このことから、Ｋａｐｐ，Ｌは、観測されたデータとよく一致する遊離のＨＳＡ濃度に双曲線的に依存することが示される（図１１）。［ＨＳＡ］が高い場合、これは漸近（頭打ちの）値に達する。
Ｋａｐｐ，Ｌ＝ＫＬＤＨＳＡ（大きい［ＨＳＡ］に対して）
【０１８３】
このことは、遊離のダルババンシンについては３μＭであることと比べると、ダルババンシンがＨＳＡと結合する場合のトリペプチドに対する結合親和性は約３５μＭであることを示唆する（２５℃の図）。
【０１８４】
ペプチドまたはタンパク質との相互作用において、ダルババンシンが単量体としてまたは二量体として振舞うのかどうかについて、さらなるメカニズムが示唆され得る。ダルババンシンを（これらの低濃度では１：１で結合することが明示されている）バンコマイシンと直接比較したことから、ダルババンシンについてのモル比がより小さい（Ｎがより小さい）場合、結合は完全であることが示される（図１２）。このことは、ダルババンシン：ペプチド複合体が２：１であることと一致する。
【０１８５】
しかしながら、ＨＳＡが存在する場合、見かけのＮ値が増加し（表１７）、この値は１：１の複合体形成にさらに一致し得る。理論に束縛されるつもりはないとはいえ、図１３に示されるモデル、このモデルはダルババンシンの単量体および二量体とトリペプチドリガンドおよびＨＳＡとの予想される相互作用を示す、はこれらの観測結果と一致する。図１３Ａは、溶液中では単量体−二量体の平衡状態として（大部分は二量体として）のダルババンシンであるが、ＨＳＡ上の二つの別個の部位へは単量体として結合するダルババンシンを表現している。このことは、血清タンパク質のダルババンシンへの結合についてＩＴＣによって観測される、Ｎ＝０．５の値と一致する（実施例３）。図１３Ｂは、溶液中ではダルババンシンの二量体に結合し、ＨＳＡに付着するダルババンシンの単量体に（より弱く）結合するリガンドを表現している。このことは、ダルババンシンがトリペプチドおよびＨＳＡの両者と、可変の見かけの化学量論で非競合的に結合することと一致する。
【０１８６】
要するに、本実施例から、ＨＳＡがダルババンシンのトリペプチドリガンドに対する、非競合的なメカニズムと一致する様式での結合親和性を低下させること、およびＨＳＡに結合するダルババンシンが、親和性が低下したにもかかわらず、トリペプチドリガンドと結合するその能力を保持することが示される。これらの結果も、ダルババンシンが溶液中で単量体−多量体の平衡状態にあり、ペプチドリガンドに対する多量体の強い親和性を有し、大部分が多量体であるモデルと一致する。ダルババンシンの単量体、遊離のものおよび血清アルブミンに結合したものの両者、も低下した親和性でペプチドと結合し得る。
実施例９  Ａ−４０９２６およびダルババンシンの調製
Ａ−４０９２６の調製
【０１８７】
Ａ−４０９２６、発酵によって生じる天然の糖ペプチド、をダルババンシンを生産するための出発物質とした。このものは、Nonomuria sp ATCC 39727によって、Ａ−４０９２６とそのアセチル誘導体との混合物として生産された（米国特許第４，９３５，２３８号およびB. Golstainら、Antimicrobial Agent and Chemotherapy, Dec. 1987, p.1961-1966を参照すること）。最初にこのアセチル誘導体を脱アセチル化してＡ−４０９２６とした。脱アセチル化後、下記のポリアミドでのカラムクロマトグラフィーによって、Ａ−４０９２６を精製した。次の記述は現在の生産方法の代表例である。ここで記録された量は、工業的な調製で通常作業する量の約１／４である。
Ａ−４０９２６の脱アシル化
【０１８８】
総量が約１ｇ／ＬのＡ−４０９２６およびそのアセチル誘導体を含む１０ｍ３の発酵ブロス（２３℃）を、撹拌しながら３０％のＮａＯＨでｐＨ１１．４に調整した。撹拌を６時間継続し、次いで、温度を１５℃に低下させ、そのブロスを精密ろ過にかけた（０．１２ｍ２のセラミック膜、０．１μのKoch Protosep IV Microfilter）。このプロセスの最後に２０〜２５ｍ３のろ液および４．５〜５ｍ３のろ過残渣（出発時の値の半分）を得るために、精密ろ過の間、絶えず水をろ過残渣に添加した。
【０１８９】
このろ液、このものはＡ−４０９２６を含んでいた、をＨＰＬＣで分析した。脱アセチル化を終えた時、ろ過された溶液のｐＨを（２０℃で保存した）３０％の硫酸でｐＨ７に調整した。本実施例において、６．６２ＫｇのＡ−４０９２６（２６８ｍｇ／Ｌ）を含む２５ｍ３のろ過されたブロスを得た。脱アセチル化の収率は６６．２％であった。このプロセスにおいて採用された時間および抽出量よりも長い時間および多量の抽出量で精密ろ過プロセスを実施すれば、収率は最大で９０％まで上昇することが可能である。
ポリアミドカラムでのＡ−４０９２６の精製
【０１９０】
抽出後、ろ過されたブロスに含まれるＡ−４０９２６を、ポリアミドカラムで下記のようにして精製した。この記述に記録された量は、工業的な調製で通常作業する量の約１／１０であり、現在の生産方法の代表例である。
【０１９１】
５００Ｌの（Macherey Nagelからの）ポリアミド樹脂ＳＣ６を脱塩水に懸濁させ、カラムに添加した。次いで、８００Ｌの水に４Ｋｇの炭酸ナトリウムを溶解させ、得られた溶液のｐＨを酢酸で調整して調製した少なくとも２ＢＶ（ベッドボリューム）の緩衝溶液でカラムを溶出することによって、この樹脂をｐＨ６〜６．５の状態とした。
【０１９２】
ろ過されたＡ−４０９２６のブロス（９０００Ｌ；分析値は０．２７５ｍｇ／Ｌ；Ａ−４０９２６は２４７５ｇ；ｐＨは６±０．２；温度は１０±３℃）を、１リットルの樹脂あたり約５ｇの活性にて、このカラム内に添加した（５〜８ｇ／Ｌという活性／樹脂の比率が通常用いられた）。このカラムを次の溶液で洗浄した：３ＢＶ（１５００Ｌ）のｐＨ６の溶液を、１５００Ｌの脱塩水に７．５Ｋｇの炭酸ナトリウムを溶解させ、ｐＨを酢酸で調整して調製した；４ＢＶ（２０００Ｌ）のｐＨ８の溶液を、２０００Ｌの脱塩水に１０Ｋｇの炭酸ナトリウムを溶解させ、ｐＨを酢酸で調整して調製した；１．５ＢＶ（７５０Ｌ）のｐＨ９の溶液を、７５０Ｌの脱塩水に４Ｋｇの炭酸ナトリウムを溶解させ、ｐＨを酢酸で調整して調製した。
【０１９３】
２０００Ｌの脱塩水に１０Ｋｇの炭酸ナトリウムを溶解させ、ｐＨを酢酸で調整して調製した４ＢＶ（２０００Ｌ）のｐＨ１０の緩衝溶液で溶出することによって、このカラムからＡ−４０９２６を回収した。精製Ａ−４０９２６（Ａ−４０９２６の濃度は０．５ｇ／Ｌを超え、主成分（Ｂ０＋Ｂ１）のＨＰＬＣでの面積％は８０％を超えている）を含む画分を集め、１ＮのＨＣｌで中和してＨＰＬＣで分析した。約２０００Ｌの最終の清澄な溶液を得た。
【０１９４】
精製のために用いた樹脂を、１．５ＢＶのイソプロパノール／５％のＮａＯＨの１：１混合物で再生し、次いで５ＢＶの脱塩水で洗浄した。
Ａ−４０９２６の濃縮
【０１９５】
このカラムに由来する溶液を希釈／濃縮工程にかけることを数回繰り返して、溶液中の無機塩類のほとんどを除去した。この溶液を、カットオフが２５０Ｄの膜を用いるナノろ過によって８０Ｌに濃縮し、８０Ｌの脱塩水で希釈し、ナノろ過によって出発時の量の（８０Ｌ）に再濃縮した。この操作を少なくとも５回繰り返した。最終溶液（８０Ｌ、ｐＨ７．５）のｐＨを２３％のＨＣｌでｐＨ６．３に調整した。次いで、この溶液を８０Ｌのアセトンで希釈し、そのｐＨを２３％のＨＣｌで再びｐＨ２．６に調整した。
脱色
【０１９６】
６８０ｇの木炭ＰＡ  ２００  Ｃ（約０．３ｇ／ｇ  Ａ−４０９２６）を、撹拌下上記の工程において得られた溶液（１６０Ｌ）に添加した。撹拌を室温で少なくとも３０分間継続し、次いで、約０．５〜０．６Ｋｇのろ過助剤（ＤＩＦ−ＢＯ）を添加した。この混合物を、フィルターカートリッジを通してろ過した。アセトンを１０％未満に減少させるために、得られた清澄な溶液を減圧下（４５℃）で濃縮した。最終量は約１００Ｌであった。次いで、そのｐＨをＮａＯＨ水溶液で６．７に調整し、Ａ−４０９２６の濃度が１００ｇ／Ｌ程度になるまで、通常のナノフィルターを用いて濃縮工程を継続した。２０Ｌの濃縮溶液を得た（Ａ−４０９２６  １８８４ｇ，  ９４．２ｇ／Ｌ）。
沈降および乾燥
【０１９７】
先の溶液を、撹拌下２０Ｌのアセトンで希釈し、そのｐＨを１０％のＨＣｌで５．１に調整した。この溶液に、追加の５倍量のアセトン（１００Ｌ）を添加してＡ−４０９２６の沈降を完結した。この時点での水の含量が１５％未満でなければ、追加のアセトンを添加した。２時間後、この懸濁液を遠心分離し、固形物を３×１０Ｌの新たなアセトンで洗浄した。母液を分析し、生成物が無いことを確認した後で廃棄した。
【０１９８】
固体のＡ−４０９２６をスタティックドライヤー内で減圧下、３０〜３５℃にて残りのアセトンが２％未満に、および水が１０％未満になるまで乾燥させた。次いで、生成物を５０メッシュの篩を通して篩い分けして、２．０８Ｋｇの精製Ａ−４０９２６（ＨＰＬＣ分析では８１．４％；水は６．２％；硫酸灰分は４．８％）を得た。カラムに添加した活性物から出発して、収率は６８．４％であった。
ダルババンシンの合成
【０１９９】
ダルババンシン（ＢＩ−３９７）を、Malabarba and Donadio (1999), Drugs of the Future, 24 (8): 839-846に記載されたような三工程の合成を経て天然の糖ペプチドＡ−４０９２６から調製した。具体的に言えば、最初にＡ−４０９２６をエステル化工程に付してＭＡを作製し、次いでこのものをアミド化工程に付してＭＡ−Ａ−１を作製した。次いで、最後の加水分解工程によってＭＡ−Ａ−１をダルババンシンに変換した。
エステル化工程（工程1）
【０２００】
次の記述は現在用いられている方法の代表例である。
９６％のＨ２ＳＯ４／ＭｅＯＨ（溶液Ａ）の調製
【０２０１】
メカニカルスターラーおよび温度計を備えた１５Ｌの丸底フラスコ内にて、２．２８Ｌの９６％のＨ２ＳＯ４（１ＫｇのＡ−４０９２６粉末あたり約３００ｍＬの９６％のＨ２ＳＯ４）を７．９ＬのＭｅＯＨに滴下した。外側で氷浴を用いて温度を０〜５℃の間に維持した。
反応の手法
【０２０２】
出発物質Ａ−４０９２６（７．６ｋｇ；バッチ０１９、分析値は８５．０９％；活性は６．４６ｋｇ；３．７３ｍｏｌ）を、１４０Ｌのガラスで裏打ちした反応容器内にてＭｅＯＨ（４６Ｌ）に懸濁させ、得られた懸濁液を０℃±２℃で冷却した。この温度で、懸濁液を、予め調製しておいた溶液Ａ（Ｈ２ＳＯ４／ＭｅＯＨ）で処理した。得られた溶液を０℃で２２〜２６時間撹拌すると同時に、この反応（１：１のアセトニトリル／水の混合物で１００倍に希釈した反応のアリコート）を二時間ごとのＨＰＬＣ分析によってモニタリングした。Ａ−４０９２６の残りが５％未満であり、ジエステルがＨＰＬＣでの面積％として１０％以下となった時、このエステル化が完了したものとみなした。
エステル（ＭＡ）の単離
【０２０３】
この反応が完結した時、この混合物を−５℃（＋／−２℃）で冷却し、温度を５℃未満に維持しながら同量の冷水（５４Ｌ）で希釈した。１０．２Ｌのトリエチルアミン（ＴＥＡ）をゆっくり添加して溶液のｐＨを５．５（＋／−０．２）に調整することによって、この生成物（ＭＡ）を沈降させた。撹拌を０〜２℃でさらに１時間継続した。次いで、得られた固形物を遠心分離にかけ、（１ＫｇのＡ−４０９２６あたり１０Ｌの）水で洗浄し、最後に予め１０〜１５℃に冷却しておいたＭｅＯＨ（１Ｋｇの出発時のＡ−４０９２６あたり３ＬのＭｅＯＨ）で洗浄した。水での洗浄を主に行って、ＭＡに由来する硫酸塩を除去した。
【０２０４】
母液および洗浄液を別々に分析し、１〜２％未満の活性しか含まれていない場合は廃棄した。残りの水が１０％未満となるまで、生成物を減圧（５０ｍｍＨｇ）下３５〜４０℃（外部の温度）で乾燥させた。７．６ＫｇのＭＡ（５．６３ｋｇの活性、３．２３ｍｏｌ）を茶色がかった粉末として得た。
【０２０５】
この分析から、次のＨＰＬＣでの面積％の値が示された：ＭＡは８９．８、Ａ−４０９２６は３．２、ジエステル誘導体は５．９。ＨＰＬＣ分析では７４．２％であり、活性は５．６３７Ｋｇ；３．２３ｍｏｌ；収率＝８６．５％。さらなる精製を行わずに、この物質を次の工程に用いた。
アミド化工程（工程2）
【０２０６】
次の記述は現在の生産方法の代表例である。
ＤＭＳＯ／ＨＣｌ混合物（溶液Ｂ）の調製
【０２０７】
ＤＭＳＯ（１．６Ｌ）をメカニカルスターラーおよび温度計を備えた１０Ｌの丸底フラスコ内に入れ、氷浴で１０℃未満に冷却した。次いで、この混合物の温度を２５℃未満に維持しつつ、３７％のＨＣｌ（１Ｌ）を撹拌下、ゆっくり添加した。
アミド化の手法（ＭＡ−Ａ−１の生成）
【０２０８】
出発物質のＭＡの５．９５ｋｇ（分析値は７６．３％、ＫＦは８．９％；２．６８ｍｏｌ）を、１９．２Ｌの１：１ＤＭＳＯ／ＭｅＯＨ混合物（１ＫｇのＭＡ粉末あたり約１．６ＬのＤＭＳＯおよび約１．６ＬのＭｅＯＨ）に撹拌下室温にてゆっくりと溶解させた。１時間の撹拌後、７０９ｍＬの３−（ジメチルアミノ）−プロピルアミン（ＤＭＥＰＡ、ＭＷ  １０２．１；密度＝０．８１２ｇ／ｍＬ；５．６３ｍｏｌ；出発時のＭＡの１ｍｏｌあたり１．９６ｍｏｌ）および３２５ｇの１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢＴ  Ｈ２Ｏ；ＭＷ  １５３．１；２．０４ｍｏｌ；出発時のＭＡの１ｍｏｌあたり０．７１ｍｏｌ）を反応混合物に添加した。完全な溶液が得られるまで撹拌を継続し、次いで、この混合物を約２．０Ｌの溶液Ｂ（ＤＭＳＯ／ＨＣｌ）をゆっくり添加することによって、ｐＨ３〜３．１に調整した（反応のアリコートを１０倍の水で希釈した後で測定した）。
【０２０９】
４．１Ｌの１：１ＤＭＳＯ／ＭｅＯＨ混合物に１．０３Ｋｇのジシクロヘキシルカルボジアミド（ＤＣＣ）（４．９９ｍｏｌ；ＭＷ  ２０６．３；１ｍｏｌのＭＡあたり１．７４ｍｏｌ）を溶解させて調製したＤＣＣ溶液を、撹拌した反応混合物に１０分間以内に添加した。撹拌を５時間継続し、次いで、残りのＭＡを５％未満に低下させてイソ尿素のレベルを４〜５％未満に維持するために、追加の５１．５ｇの固体のＤＣＣ（０．２５ｍｏｌ）を反応混合物に添加した。イソ尿素は、ダルババンシンと過剰のＤＣＣとのさらなる反応によって生じる副産物のグループの一つである。
【０２１０】
通常はさらに２時間（合計７時間）後に、この反応を完結させた。最後に、混合物を水（６０Ｌ）で希釈してＤＭＳＯ濃度を１５％（ｖ／ｖ）に低下させ、１ＮのＨＣｌ（０．８５Ｌ）でｐＨを２．３に調整して残りのＤＣＣを分解させた。
ＭＡ−Ａ−１のダルババンシンへの加水分解
【０２１１】
３０分後、この混合物を１５％のＮａＯＨ（８Ｌ）でｐＨ１２．０〜１２．１に調整した。１５％のＮａＯＨを少量添加して混合物をこのｐＨに維持しながら、撹拌を４時間継続した。この後、残りのＭＡ−Ａ−１はＨＰＬＣでの面積％として０．２％未満となった。
【０２１２】
次いで、この混合物を１ＮのＨＣｌ（１９Ｌ）でｐＨ３．０の酸性にし、懸濁液をろ過して形成されたジシクロヘキシル尿素を除去した。固体のケーキをフィルター上で脱塩水（２×２０Ｌ）で洗浄した。洗浄液およびろ液を一つにまとめ、ＨＰＬＣで分析する清澄な溶液を得た。２１．７４ｇ／Ｌのダルババンシンを含む１５２．８Ｌの溶液（すべての活性３３２２ｇ；１．８２８ｍｏｌ、収率＝６８．２％）を得た。
ダルババンシンの精製
【０２１３】
次の記述は現在の生産方法の代表例である。
【０２１４】
加水分解工程から得られ、３３２２ｇのダルババンシン活性を含む１５２．８Ｌの溶液を二部に分割し、それぞれのものを、４００Ｌのポリアミドを含む同一のクロマトグラフ用カラムで別個に精製した。これらの二つの精製操作において、活性／樹脂の比率はそれぞれ４．３および４．０ｇ／Ｌであった。
ポリアミドカラムの作製
【０２１５】
４００Ｌのポリアミド樹脂を含むガラスで裏打ちしたカラム（内径＝４０ｃｍ、ｈ＝３２０ｃｍ）を、樹脂の再生手法（下記を参照すること）にしたがって洗浄し、４ＬのＡｃＯＨで酸性にした２ＢＶ（８００Ｌ）の脱塩水（ｐＨ＝３．２）で調整した。
第一部の精製
【０２１６】
７６．４Ｌの出発溶液である第一部を、ＤＭＳＯの含量を５％（ｖ／ｖ）未満に低下させるためにＨ２Ｏ（５６Ｌ）で希釈し、１ＮのＨＣｌ（３．４Ｌ）でｐＨ２．７８の酸性にした。次いで、この溶液を１５０Ｌ／ｈの流速でカラム上に添加した。添加後、樹脂を次の溶液で洗浄した：ＡｃＯＨ（８Ｌ）で酸性にした４ＢＶ（１６００Ｌ）のＨ２Ｏ、ｐＨ＝３．２；５ＢＶ（２０００Ｌ）の０．１ＭのＡｃＯＮａ、ｐＨ＝８．２；ＡｃＯＨ（１Ｌ）で酸性にした１ＢＶ（４００Ｌ）のＨ２Ｏ、ｐＨ＝３．２。ダルババンシンを、ＡｃＯＨ（６Ｌ）で酸性にした４ＢＶ（２４００Ｌ）のＨ２Ｏ／ＭｅＯＨ（８：２）、ｐＨ＝３．４で溶出した。
【０２１７】
溶出工程の間、それぞれが５０〜６０Ｌの２２画分を集め、ＨＰＬＣで分析した。９〜２５の画分（ダルババンシンの濃度は０．５ｇ／Ｌを超え、（Ｂ０＋Ｂ１）のＨＰＬＣでの面積％は≧８０％である）をまとめて集め、１．５６Ｋｇのダルババンシンを含む９６９Ｌの溶液を得た（収率＝９３．９％）。次いで、この溶液をナノろ過で濃縮し、１．３８Ｋｇのダルババンシンを含む１２５．７Ｌの溶液を得た。１４５ｇの不純なダルババンシン（８．７％）を含む８５０Ｌのろ液を中和して廃棄した。
樹脂の再生
【０２１８】
再利用する前に、樹脂を次の溶液で洗浄した：酢酸（２．５ｍＬ／Ｌ）で酸性にした２．５ＢＶ（１０００Ｌ）の１：１ＭｅＯＨ／水；２．５ＢＶ（１０００Ｌ）の１：１の０．５％のＮａＯＨ／イソプロパノール；１０ＢＶ（４０００Ｌ）の脱塩水。次いで、この樹脂を、酢酸（２．５ｍＬ／Ｌ）で酸性にした１ＢＶ（８００Ｌ）の水で再平衡化した。
第二部の精製
【０２１９】
加水分解工程（７６．５Ｌ）に由来する第二部の出発溶液を、Ｈ２Ｏ（５６Ｌ）で希釈してＤＭＳＯの含量を５％（ｖ／ｖ）未満に低下させ、３．０Ｌの１ＮのＨＣｌでｐＨ２．８７の酸性とした。次いで、この部分を、第一部の精製にて既述したようにして精製した。集めた画分（量＝９７２Ｌ、ダルババンシンは１．５４Ｋｇ、収率＝９２．７％）をナノろ過によって濃縮し、１．４６Ｋｇの活性を有する１３３Ｌの溶液を得た。７３ｇのダルババンシン（４．３％）を含む８５０Ｌのろ液を廃棄した。
【０２２０】
二つの精製工程に由来する濃縮溶液を再び分析し、まとめて集めて２８４０ｇの精製ダルババンシンを含む２５８Ｌの溶液を得た。精製の収率は８６％であった。ＭＡから出発した全収率は５８．３％であった。
最終のポリアミドの再生
【０２２１】
第二の精製操作の後、ポリアミドを、ＡｃＯＨ（２．５Ｌ）で酸性にした２．５ＢＶの１：１のＭｅＯＨ−水、ｐＨ＝３．４；２．５ＢＶの１：１の０．５％のＮａＯＨ−イソプロパノール；１０ＢＶの脱塩水、を用いて再生した。
ダルババンシンの脱色および沈降
【０２２２】
１ｍｏｌのダルババンシンあたり１．５ｍｏｌの１ＮのＨＣｌ、および１グラムのダルババンシンあたり０．３ｇの木炭ＣＧ１（０．８５Ｋｇ、NORITより）を、上記で得られた２５８Ｌの溶液に添加した。この混合物を室温で少なくとも４５分間撹拌した。このｐＨは３．１であった。次いで、この懸濁液をSEITZ-SCHENKからのSUPRA DISC cartridge mod. SDP-EK1でろ過し、ケーキを５０Ｌの８：２のＨ２Ｏ／ＭｅＯＨで洗浄した。このろ液を分析し、カットオフが２５０ＤのＭＰＳ  ４４膜を用いるナノろ過によって再び濃縮した。１１９ｇ／Ｌのダルババンシン（ｐＨ４．１；ＭｅＯＨ１．９％、ＧＣ）を含む２１．３Ｌの濃縮溶液を得た。最後に、９０９ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌを添加してｐＨを２．６３に調整した。この値は、１．６５ｍｏｌ塩酸／ｍｏｌダルババンシンの塩化割合（salification ratio）に相当する。
【０２２３】
この溶液（２２．２Ｌ）を撹拌下、２００Ｌのアセトン中に注いだ。デカンテーション後に得られる固形物を遠心分離にかけ、１４Ｌの新たなアセトンで洗浄した。次いで、この生成物を減圧下（５０ｍｍＨｇ）、３５℃で乾燥させ、内部の温度が３０℃未満で１７時間維持した。乾燥プロセスの間、１Ｌの発熱物質を含まない水（＜２５０ＥＵ／ｍＬ）、それぞれ０．５Ｌに二分割し、その他の方法では除くことが難しい残りのアセトンを除去するために、三時間および五時間後にこの固形物上に噴霧した。次いで、この生成物を篩い分け（５０メッシュ）して、２５９２ｇのダルババンシン（ＨＰＬＣ分析では８２．４％；水（ＫＦ）１４％；Ｃｌ−３．０％）を得た。
実施例１０  Ａ−４０９２６およびダルババンシンを調製するための別の方法
【０２２４】
下記の方法は、Ａ−４０９２６およびダルババンシンの調製プロセスに用いることができる代替法である。
Ｘ４Ｄ−７ＨＰでのＡ−４０９２６の調製
脱アセチル化および菌糸体での精密ろ過
【０２２５】
Ａ−４０９２６（ｐＨ７）を含む１５０Ｌの発酵ブロスを適切な反応容器内で室温（２４℃）にて撹拌し、２．５ＮのＮａＯＨ溶液（２．５Ｌ）でｐＨ１１．５に調整した。撹拌を４時間続けた後、このブロスを１５％のＨＣｌでｐＨ１０．６に調整し、０．２ミクロンの膜を通して精密ろ過にかけた。４３９Ｌの清澄なろ液を集め、次いでカットオフが２５０ＤのＭＰＳ  ４４膜を用いるナノろ過で濃縮した。得られたＡ−４０９２６濃縮溶液（５８．６Ｌ；３．８９ｇ／Ｌ）をｐＨ６．４に調整し、使用時まで４℃で保存した。
カラムの調製と精製
【０２２６】
ＸＡＤ−７ＨＰ樹脂（８Ｌ）を１：１の水／メタノール溶液に懸濁させ、ろ過し、ぜん動ポンプを用いて適切なガラス製のカラム（内径１２ｃｍ）に充填した。
【０２２７】
次いで、この樹脂を水で洗浄し、１リットルの水につき５ｇの炭酸ナトリウムを溶解させ、そのｐＨを酢酸で調整して調製した６ＢＶのｐＨ６の緩衝化炭酸ナトリウム水溶液で平衡化した。
【０２２８】
１９４ｇのＡ−４０９２６を含む濃縮ブロスの一部をＸＡＤ−７ＨＰカラムに添加した。次いで、親水性の部分と存在する着色物質を除去するために、この樹脂を次の二種の緩衝溶液で、１／２ＢＶ／時間の流速にて洗浄した：３０％の水酸化ナトリウムでｐＨ５に調整した３ＢＶ（２４Ｌ）の０．５％酢酸水溶液；１Ｌの水あたり５ｍＬの酢酸を含む５ＢＶ（４０Ｌ）の水／アセトンの８：２混合物。
【０２２９】
Ａ−４０９２６を、１Ｌの水あたり５ｍＬの酢酸で酸性にした８ＢＶ（６４Ｌ）の１：１の水／アセトン混合物で最終的に溶出した。それぞれ４Ｌの１６画分を集めた。Ａ−４０９２６の濃度が０．５ｇ／Ｌより高い濃厚な画分（５〜１５）をまとめて集め、１６３．４ｇのＡ−４０９２６（４３Ｌ，  ３．８ｇ／Ｌ）を含む溶液を得た。このカラムの収率は８１．３％であった。０．２３ｇ／Ｌ（４５．３ｇ；２２．２％）の純度の低いＡ−４０９２６を含むその他の画分（２００Ｌ）を廃棄した。
【０２３０】
溶出後、樹脂を、６ＢＶ（５５Ｌ）の０．５％のＮａＯＨ／イソプロパノール（１：１）混合物を用いて再生し、最終的に、１０ＢＶの水で洗浄して中和した。
木炭処理
【０２３１】
集めた画分を３７％のＨＣｌ（７０ｍＬ）でｐＨ２．５に調整し、次いで５０ｇの木炭タイプＰＡ  ２００（１ｇのＡ−４０９２６あたり０．３ｇ）で脱色した。得られた懸濁液を室温で２時間撹拌し、次いでＫＳ  ５０フィルター（ｄ＝２５ｃｍ、時間＝２．５時間）を通してろ過し、４５．６Ｌの淡い黄色のＡ−４０９２６溶液（３．５ｇ／Ｌ；収率＝９６．４％）を得た。
濃縮
【０２３２】
脱色した溶液を３０％のＮａＯＨ（２３０ｍＬ）でｐＨ７に調整し、ナノろ過および限外ろ過によって濃縮した。これらの技術を用いることはＲｔ＝２〜４分間でＨＰＬＣクロマトグラムに検出される親水性物質を除去するために重要であった。ろ過残渣を出発時の量（４Ｌ）の１／１０に濃縮した場合、同量の水を添加して、得られた溶液を再び濃縮した。残りのアセトンを０．２５％に減少させるために、この濃縮／希釈工程を三回繰り返した。最終溶液（２．２Ｌ、１４６．３ｇのＡ−４０９２６、６６．５ｇ／Ｌ、収率＝９１．５％）をＨＰＬＣで分析した。精製の収率は７５．４％であった。
Ａ−４０９２６の結晶化
【０２３３】
Ａ−４０９２６溶液の一部の３００ｍＬ（１９．９ｇのＡ−４０９２６）を、実験室の規模の限外ろ過装置を用いてさらに１００ｍＬに濃縮し、次いで６０〜６５℃に加熱した。この溶液のｐＨを（３０％ＮａＯＨで）７に調整し、１ｍＬの濃縮溶液あたり１．２ｍＬの５：１のアセトン／イソプロパノール混合物を、この温度で滴下した。得られた混合物を放置して２０℃に冷却した。１．５時間後、得られた固形物をろ過し、フィルター上でアセトンで洗浄し、４０℃で１５時間かけて乾燥させた。２０．６ｇの生成物（ＨＰＬＣ分析では８２．０％；Ａ−４０９２６は１６．９ｇ）を得た。精製の収率は８４．９％であった。ろ過されたブロスから出発する全体の収率は約６４％であった。
ＣＧ−７１でのＡ−４０９２６の精製
カラムの調製
【０２３４】
ＣＧ−７１樹脂（３５０ｍＬ）をガラス製のカラム（内径＝４ｃｍ）内に注ぎ、水で洗浄した。５ｇの炭酸ナトリウムを水で溶解させて酢酸でｐＨ６として調製した３ＢＶの炭酸ナトリウム溶液で、この樹脂を平衡化した。１４．７ｇのＡ−４０９２６を含む２５０ｍＬの発酵ブロス（ｐＨ７）をこのカラム（樹脂１Ｌあたり４２ｇ）に添加した。この樹脂を次の三種の溶液で洗浄した：酢酸でｐＨ６に調整した１０５０ｍＬ（３ＢＶ）の炭酸ナトリウム水溶液（５ｇ／Ｌ）；酢酸でｐＨ８に調整した１７５０ｍＬ（５ＢＶ）の炭酸ナトリウム水溶液（５ｇ／Ｌ）；酢酸でｐＨ９に調整した３１５０ｍＬ（９ＢＶ）の炭酸ナトリウム水溶液（５ｇ／Ｌ）。
【０２３５】
次いで、１０ＢＶの脱塩水で活性部を溶出した。それぞれが５００ｍＬの２０画分を集めた。画分１２〜１５をまとめて集め、１１．７ｇのＡ−４０９２６（収率＝７９．６％）を含む２．２Ｌの精製溶液を得た。次いで、この溶液を限外ろ過で濃縮し、さらにこの濃縮溶液を脱塩水で希釈して再び限外ろ過を行った。得られた溶液を減圧下でさらに５０ｍＬに濃縮した。
Ａ−４０９２６の結晶化
【０２３６】
この濃縮溶液を６０℃で加熱し、撹拌下にて５：１のアセトン／ＩＰＡ混合物（６０ｍＬ）で処理した。次いで、この混合物を室温でゆっくりと冷却した。得られた固形物をろ過し、フィルター上でアセトンを用いて洗浄し、減圧下、３５℃で８０時間かけて乾燥させた。８．９ｇの精製Ａ−４０９２６（ＨＰＬＣ分析では８４．２％）を得た。全体の収率は５１％であった。
Ｎ−メチル−２−ピロリジン（ＮＭＰ）を溶媒として用いる、ダルババンシン合成における代替的アミド化工程
【０２３７】
ＭＡ混合物を１：１のＮＭＰ／ＭｅＯＨ混合物（６４ｍＬ）に撹拌しながら一部分ずつ添加した。撹拌を２０〜２５℃で完全な溶液となるまで継続し、次いでＤＭＥＰＡ（２．４２ｍＬ；１．９６ｍｏｌ／ｅｑＭＡ）およびＨＯＢＴ（１．０６ｇ；０．７１ｍｏｌ／ｅｑＭＡ）を添加した。反応混合物（水で１：１０に希釈したサンプルを確認した）のｐＨを、（５７．７ｍＬのＮＭＰで３４．０ｍＬの３７％のＨＣｌを溶解したものから予め調製しておいた）ＮＭＰ中の９．３７ｍＬの１５％ＨＣｌで、３．０に調整した。次いで、ＤＣＣ（３．１７ｇ；１．５７ｍｏｌ／ｅｑＭＡ）の１：１のＮＭＰ／ＭｅＯＨ溶液（１２．７ｍＬ）を撹拌下で添加した。この反応をＨＰＬＣでモニタリングした。約６時間後に、この反応が完結した（ＭＡ−Ａ−１は８８．９％、ＭＡは７．３％、ＩＳＯは３．７％）。この実験から、ＮＭＰは、アミド化反応のためのＤＭＳＯに代わる使いやすいものとなり得ることが示唆される。全体のプロセスは、この溶媒の変更に影響されなかった。そして得られた最終のダルババンシンは、その他のバッチと化学的に等価なものであった。
ダルババンシン調製の代替法：ワンポット手法
【０２３８】
１０ｇのＡ−４０９２６複合体（ＨＰＬＣ力価は８０．６６％、４．６ｍｍｏｌｅ）を１００ｍＬのガラス製反応容器内で、撹拌下、室温にて２４ｍＬのＭｅＯＨに懸濁させた。この混合物を０℃に冷却し、１６．４ｍＬのＭｅＯＨに４ｇのＨＣｌ（ｇ）を含む溶液を添加して、生成物の可溶化を完結した。次いで、撹拌をさらに２４時間継続しながら、温度そのまま２０℃に高めた。
【０２３９】
この後、４０ｍＬのＤＭＳＯおよび０．４ｇのＨＯＢＴを反応混合物に添加した。
【０２４０】
次いで、１，１−ジメチルアミン＝プロピルアミンを添加し、得られた反応混合物の（水でサンプルを９：１に希釈した後に測定した）ｐＨを３〜３．１の間に調整した。次いで、１．８ｇの固体のＤＣＣを添加し、撹拌をさらに１５時間継続した。この後、反応混合物を１Ｌのガラス製反応容器内に移し、８０ｍＬの水で希釈した。次いで、２４０ｍＬの１５％ＮａＯＨを添加してｐＨを１２とした。撹拌をさらに６０分間継続し、この混合物を２６０ｍＬの１５％の塩酸水溶液でｐＨ２．８の酸性にした。６．４ｇのダルババンシンを含む約８００ｍＬの最終の清澄な溶液を得た（収率＝７６％）。
【０２４１】
ＨＰＬＣ分析から、得られた生成物の特性は、その他の製造プロセスで得られたものと同等であることが示された。
【０２４２】
明瞭な理解のために、前記の発明を図解および実施例によっていくらか詳細に記述したが、当業者にとって、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、特定の変更および改変を実施し得ることは自明であろう。したがって、この記述は、添付の請求の範囲によって描写される、本発明の範囲を制限するものとみなすべきではない。
【０２４３】
本明細書に列挙した刊行物、特許および特許出願のすべては、すべての目的のために、および個々の刊行物、特許または特許出願のそれぞれが引用によってそのように組み込まれ具体的にかつ個別に示されるのとまるで同じ程度に、その全体が引用によって本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０２４４】
【図１】図１は、１０００ｍｇのダルババンシンを１回輸液した後の時間に対するダルババンシン血漿濃度を示す。
【図２】図２は、ダルババンシンのヒト血清アルブミンに対する結合に関する等温滴定熱量測定のデータ（上）およびダルババンシン：蛋白が２：１の結合モデルから決定された曲線に適合したデータをグラフで示したもの（下）である。
【図３】図３は、ダルババンシンのエレクトロスプレイイオン化質量スペクトルを示す。
【図４】図４は、ダルババンシン単量体対多量体の割合に対する、ダルババンシン濃度のグラフであり、ダルババンシン濃度の増加に伴ってダルババンシン単量体対多量体の割合が増加することを示す。
【図５】図５は、ダルババンシン単量体対多量体の割合に対する、ｐＨのグラフであり、ｐＨの増加に伴ってダルババンシン単量体対多量体の割合が増加することを示す。
【図６】図６は、ギ酸アンモニウム、ｐＨ５の溶液中の５ｍＭダルババンシンのエレクトロスプレイイオン化質量スペクトルを示す。
【図７】図７は、ギ酸アンモニウム、ｐＨ５の溶液中の５０ｍＭダルババンシンのエレクトロスプレイイオン化質量スペクトルを示す。
【図８】図８は、ギ酸アンモニウム、ｐＨ５の溶液中の１００ｍＭダルババンシンのエレクトロスプレイイオン化質量スペクトルを示す。
【図９】図９は、水中のテイコプラニン（５０μｇ／ｍｌ）のエレクトロスプレイイオン化質量スペクトルを示す。
【図１０】図１０は、水中のテイコプラニン（１００μｇ／ｍｌ）のエレクトロスプレイイオン化質量スペクトルを示す。
【図１１】図１１は、２６℃（ｐＨ７．４）におけるダルババンシン／トリ−ペプチド結合の見かけの解離定数に対するＨＳＡの影響を示す。
【図１２】図１２は、同じトリ−ペプチド溶液を用い、同一の条件下でのバンコマイシンおよびダルババンシンへのトリ−ペプチドの結合に関する等温熱量測定（ＩＴＣ）のデータを比較したものである。
【図１３】図１３Ａおよび１３Ｂは、ダルババンシン単量体および多量体（二量体を包含）とトリ−ペプチドリガンドおよびＨＳＡとの可能な相互作用を示す。図１３Ａは、溶液中で単量体−二量体平衡にあるダルババンシン、ＨＳＡ上の２つの別個の部位への単量体としての結合を示す。図１３Ｂは、溶液中でのダルババンシンに量体へのリガンド結合、ならびにＨＳＡに結合したダルババンシン単量体へのより弱い結合を示す。
【図１】
0005519090.tif 000023
【図２】
0005519090.tif 000024
【図３】
0005519090.tif 000025
【図４】
0005519090.tif 000026
【図５】
0005519090.tif 000027
【図６】
0005519090.tif 000028
【図７】
0005519090.tif 000029
【図８】
0005519090.tif 000030
【図９】
0005519090.tif 000031
【図１０】
0005519090.tif 000032
【図１１】
0005519090.tif 000033
【図１２】
0005519090.tif 000034
【図１３】
0005519090.tif 000035