(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）：
【化１】
0005521788.tif 000014
（式中、Ｒ1及びＲ2は−ＯＨ又は
【化２】
0005521788.tif 000015
を示す。ただし、Ｒ1とＲ2とは同一ではない。）
で示されるレスベラトロール重合化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
請求項１に記載のレスベラトロール重合化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有する抗癌剤。
【請求項３】
請求項１に記載のレスベラトロール重合化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有する抗酸化剤。
【請求項４】
請求項１に記載のレスベラトロール重合化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有する抗菌剤。
【請求項５】
請求項１に記載のレスベラトロール重合化合物及びその薬学的に許容可能な塩からなる群より選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする食品、医薬品、医薬部外品または化粧品。
【請求項６】
レスベラトロールを加熱下でアルカリ処理する工程を有する、請求項１に記載のレスベラトロール重合化合物又はその薬学的に許容可能な塩の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なレスベラトロール重合化合物又はその薬学的に許容可能な塩、その製造方法、並びに該レスベラトロール重合化合物等を含有する食品、医薬品、医薬部外品または化粧品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ブドウ果皮に含有されるスチルベン誘導体であるレスベラトロールについて、画期的な研究成果が明らかにされつつある。レスベラトロールは本来ブドウが病原菌から自己を守るファイトアレキシンとして存在する抗菌作用を有する化合物であり赤系、白系を問わずブドウ果皮に含まれることが知られている。最近の研究で、レスベラトロールは哺乳動物に対しても有用な効果を有していることが明らかになりつつある。いわゆる「フレンチパラドックス」と言われる赤ワインの有用な生理効果は、レスベラトロールの抗酸化能を始めとして各種の生理活性機能が一因であるとされている。さらに、レスベラトロールには多くの疾病に効果があることが明らかにされつつあり（非特許文献１）、その一つにレスベラトロールは強い抗癌作用を有することが明らかにされた（非特許文献２）。しかしながら、レスベラトロールを含有する食可能な植物は極めて限られており、ブドウや落花生等に限られている。ブドウ中でも特にブドウ果皮に多く含まれているが、それでもその含有量は極めて低く、５０〜１００μｇ／ｇ程度といわれている（非特許文献２）。
【０００３】
そこで、食品中のレスベラトロール濃度を高める取り組みもされており、紫外線照射によりレスベラトロール濃度を高めた後にレスベラトロール含有抽出物を得て、その抽出物を食品に添加した食品が提案されている（特許文献１）。また、レスベラトロールの腸管吸収効率を高めるための技術として、腸管吸収促進剤の提案もなされている（特許文献２）。このようにレスベラトロールは、抗癌作用、抗酸化作用、抗菌作用等極めて優れた性質を有する化合物であるが、希少成分であるが故に、高コストな商品となってしまい、サプリメント等で販売はされているものの今現在では十分に社会に浸透しているとは言いがたい。
【０００４】
一方、レスベラトロールの誘導体として、天然にはレスベラトロールの重合体、例えばε−ビニフェリン（二量体）、α−ビニフェリン（三量体）、バチカノールＣ（四量体）等が数々報告されているが、いずれもレスベラトロールと同様に天然の希少成分であり、十分量に供給されることは困難である。
【０００５】
そこで、医薬品分野では、化学合成によりレスベラトロールの作用機序を参考にした新規化合物を作製する試みもある（非特許文献３）が、これらは主に医薬品としての開発対象物であり、安全性の面から未だに多くの課題が残されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００５−１４３３７７号公報
【特許文献２】特開２００９−１７３５７０号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Drug Discovery, 5, 493-506(2006)
【非特許文献２】Science. Vol. 275(10) 218-220 (1997)
【非特許文献３】Nature. Vol. 450(29)712-716(2007)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者らは、レスベラトロールに関する前記の状況を鑑みて、より強力な生理活性を有するレスベラトロール誘導体の探索と、その製造方法を確立すべく鋭意検討した結果、意外にもレスベラトロールをアルカリ条件下で加熱処理するという簡便且つ安全な方法により、レスベラトロール及び公知のレスベラトロール誘導体に比べて優れた生理活性を有する新規なレスベラトロール重合化合物を製造することに成功し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
したがって、本発明は、レスベラトロールより強力な生理活性を有する新規なレスベラトロール重合化合物を提供し、さらに該レスベラトロール重合化合物を、効率よく、安全に生成する方法を提供することを目的とする。
また、本発明は、前記レスベラトロール重合化合物を含有することを特徴とする抗癌剤、抗酸化剤、抗菌剤、さらには食品、医薬品、医薬部外品または化粧品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の要旨は、
〔１〕
式（１）：
【００１１】
【化１】
0005521788.tif 000002
【００１２】
（式中、Ｒ1及びＲ2は−ＯＨ又は
【００１３】
【化２】
0005521788.tif 000003
【００１４】
を示す。ただし、Ｒ1とＲ2とは同一ではない。）
で示されるレスベラトロール重合化合物又はその薬学的に許容可能な塩（以下、レスベラトロール重合化合物類と略す）、
〔２〕前記〔１〕に記載のレスベラトロール重合化合物類を１種以上含有する抗癌剤、
〔３〕前記〔１〕に記載のレスベラトロール重合化合物類を１種以上含有する抗酸化剤、
〔４〕前記〔１〕に記載のレスベラトロール重合化合物類を１種以上含有する抗菌剤、
〔５〕前記〔１〕に記載のレスベラトロール重合化合物類を１種以上含有することを特徴とする食品、医薬品、医薬部外品または化粧品、
〔６〕レスベラトロールを加熱下でアルカリ処理する工程を有する、前記〔１〕に記載のレスベラトロール重合化合物類の製造方法、
に関する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のレスベラトロール重合化合物類は、従来のレスベラトロールと比べて、抗癌活性、抗酸化活性、抗菌活性等の生理活性に優れていることから、新規な抗癌活性剤、抗酸化剤、抗菌剤として有用である。
また、本発明のレスベラトロール重合化合物類は、前記のような生理活性に優れることに加えて、安全性にも優れることから、食品、医薬品、医薬部外品または化粧品に配合することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、実施例１で得られたクロマトグラムを示す。主要な化合物のピークをＲ１〜Ｒ５で示している。
【図２】図２は、実施例２のＤＰＰＨラジカル消去法により得られた結果を示すグラフである。  図２について、縦軸はＤＰＰＨラジカル残存率であり、横軸はそれぞれの試料の濃度を示している。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明は、レスベラトロールの二量体であり、式（１）：
【００１８】
【化３】
0005521788.tif 000004
【００１９】
（式中、Ｒ1及びＲ2は−ＯＨ又は
【００２０】
【化４】
0005521788.tif 000005
【００２１】
を示す。ただし、Ｒ1とＲ2とは同一ではない。）
で示されるレスベラトロール重合化合物又はその薬学的に許容可能な塩である。
【００２２】
前記レスベラトロール重合体化合物において、炭素−炭素２重結合は、トランスまたはシスであってよく、シス体とトランス体との混合物を含む。
【００２３】
前記レスベラトロール重合化合物の薬学的に許容可能な塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩； マグネシウム塩、カルシウム塩、バリウム塩等のアルカリ土類金属塩； アルミニウム塩；アルミニウムヒドロキシド塩等の金属ヒドロキシド塩； アルキルアミン塩、ジアルキルアミン塩、トリアルキルアミン塩、アルキレンジアミン塩、シクロアルキルアミン塩、アリールアミン塩、アラルキルアミン塩、複素環式アミン塩等のアミン塩； α−アミノ酸塩、ω−アミノ酸塩等のアミノ酸塩；ペプチド塩又はそれらから誘導される第１級、第２級、第３級若しくは第４級アミン塩等が挙げられる。これらの薬理的に許容し得る塩は、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
【００２５】
以上のような構造を有する本発明のレスベラトロール重合化合物類は、当該分野で周知の方法に従って化学合成することも可能ではあるが、反応工程が複雑であり、有害な試薬や工程を必要とする。また、化学合成では不純物を除去するという安全性の観点から、レスベラトロール重合化合物類の精製を徹底する必要もあり、工業的には不向きな方法である。
【００２６】
そこで、本発明者らは、化学合成以外の方法を鋭意検討した結果、レスベラトロールを加熱下でアルカリ処理することで、有害な試薬や工程を必要とせずに、レスベラトロール重合化合物類を効率的で安全に製造することができることを見出した。以下に、本発明の製造方法について具体的に説明する。
【００２７】
本発明の製造方法では、前駆体としてレスベラトロールを用いる。レスベラトロールにはトランス体とシス体の構造異性体が存在するが、加熱や紫外線によってトランス体とシス体の変換が一部生じる。したがって、レスベラトロールとしては、トランス体でもシス体でも、あるいはトランス体とシス体の混合物であってもよい。レスベラトロールは、ブドウ果皮から抽出・精製した天然由来のものであっても、化学合成された純度の高い化成品であっても良い。天然由来のレスベラトロールを用いる場合は、完全に精製されたものである必要はなく、その後の所望の反応が進み最終的に本発明のレスベラトロール重合化合物類が得られるから、混合物であっても問題ない。また、レスベラトロールには、塩、エーテル、エステル等の誘導体もあるが、本発明の製造方法では、これらの誘導体も原料として使用することができる。
ただし、回収率の観点からは、レスベラトロール換算で５重量％以上含有された混合物が原料として望ましい。
【００２８】
まず、レスベラトロールの純品、あるいはレスベラトロール含有混合物を、適切な溶媒に溶解させる。この際、溶媒が水のみであればレスベラトロールの溶解度が著しく低いために、水と有機溶媒の混液や、有機溶媒のみに溶解させればよい。水と有機溶媒の配合比や、有機溶媒の種類に特に制限はなく、レスベラトロールが十分に溶解すれば良い。中でも、メタノールやエタノールのみの溶媒や、水とメタノール、水とエタノールの混液を使用することが、安全性やコスト面から好ましい。最終的な精製を十分に適用せずに食品に使用する場合には、安全性や法規面からエタノールや含水エタノールの使用が望ましい。得られるレスベラトロール含有溶液中のレスベラトロールの濃度に制限はない。濃度が高いほど、溶媒使用量が少ない等のメリットもあるため、濃度は各々の溶媒に対しレスベラトロールが飽和する濃度近辺が好ましい。また、レスベラトロールは前記溶液中において反応前に完全に溶解していなくともよい。
【００２９】
次に、前記レスベラトロール含有溶液のｐＨをアルカリ性となるように調整する。調整方法として、例えば、レスベラトロール含有溶液を調製した後にアルカリ化剤を添加しｐＨを調整しても良いし、前述のレスベラトロール含有溶液の調製時に前もって溶媒のｐＨを調整しておいても良い。レスベラトロール含有溶液の反応開始時のｐＨは８．０以上であれば、効率的に後述の反応が進むので好ましく、ｐＨ１３．０を越えると反応と同時に、他の反応や目的化合物の分解も一方で生じるために最終的なレスベラトロール重合化合物類の回収量が低下する。したがって、反応開始時のｐＨは８．０〜１３．０が望ましい。
【００３０】
前記アルカリ化剤としては、特に制限はないが、安全性、効率及びコスト面からは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸水素ナトリウムが望ましい。反応時のｐＨ変化を極力抑える場合が生じた際には、緩衝溶液を用いても良いが、必ずしも必要な手法ではない。
【００３１】
次に、アルカリ性に調整されたレスベラトロール含有溶液を加熱する。この加熱により、レスベラトロール重合化合物類の生成反応を行う。反応を効率的に進ませるために、レスベラトロール含有溶液の加熱温度は１１０℃以上に調整することが好ましい。また、使用する溶媒の沸点から考え、加圧加温が望ましい。例えば、開放容器にレスベラトロール含有溶液を入れ、溶媒の沸点を超える高温で前記容器を加温する、密閉容器にレスベラトロール含有溶液を入れ前記容器を加温する、レトルト装置やオートクレーブを用いて加圧加温する等、少なくとも部分的に溶液温度が１１０℃以上に達するように加熱することが好ましい。回収効率面から、溶液温度が均一に１２０℃〜１８０℃になることが、さらに好ましい。加熱時間も加熱温度と同様に限られたものではなく、効率的に目的の反応が進行する時間条件とすればよい。特に、加熱時間は加熱温度との兼ね合いによるものであり、加熱温度に応じた加熱時間にすることが望ましい。例えば、１３０℃付近で加熱する場合は、５分〜６０分の加熱時間が望ましい。また、加熱は、一度でも良いし、複数回に分けて繰り返し加熱しても良い。複数回に分けて加熱する場合、溶媒を新たに追加して行うことが好ましい。
【００３２】
前記加熱によるレスベラトロール重合化合物類の生成反応の終了は、例えば、ＨＰＬＣによる成分分析により生成量を確認して判断すればよい。
【００３３】
得られる反応液中には、本発明のレスベラトロール重合化合物として、式（２）：
【００３４】
【化５】
0005521788.tif 000006
【００３５】
で表される化合物１および式（３）：
【００３６】
【化６】
0005521788.tif 000007
【００３７】
で表される化合物２が混合した状態で存在する。安全な原料のみを用いた工程で得られた場合には、前記混合物の状態で使用することが可能である。例えば、天然由来のレスベラトロールを含水エタノール溶媒に溶解し、水酸化ナトリウムや炭酸水素ナトリウムでアルカリ性となるようにｐＨ調整を行い、加熱反応させた場合には、混合物として食品原料の一つとして使用が可能である。
【００３８】
また、風味面での改良やさらなる高機能化を望む場合は、前記反応液を濃縮してレスベラトロール重合化合物の濃度を高める、あるいは前記反応液を精製しレスベラトロール重合化合物の純品を得ることができる。濃縮、精製は、公知の方法で実施可能である。例えば、クロロホルム、酢酸エチル、エタノール、メタノール等の溶媒抽出法や炭酸ガスによる超臨界抽出法等で抽出してレスベラトロール重合化合物を濃縮できる。また、カラムクロマトグラフィーを利用して濃縮や精製を施すことも可能である。再結晶法や限外ろ過膜等の膜処理法も適用可能である。
【００３９】
前記式（２）で表される化合物１及び式（３）で表される化合物２を分離して回収する場合には、カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ等を用いてもよい。
【００４０】
前記濃縮物や精製物を、必要に応じて、減圧乾燥や凍結乾燥して溶媒除去することで、粉末状のレスベラトロール重合化合物を得ることができる。
【００４１】
また、得られたレスベラトロール重合化合物は、必要に応じて、当該分野で公知の方法により、レスベラトロール重合化合物の塩としたり、レスベラトロール重合化合物のヒドロキシ基をエーテル化またはエステル化してもよい。
【００４２】
以上のようにして得られる本発明のレスベラトロール重合化合物類はいずれも、レスベラトロールや公知のレスベラトロール重合化合物に比べて、極めて優れた抗癌活性、抗酸化活性および抗菌活性を有する。したがって、レスベラトロール重合化合物類を有効成分として含有する抗酸化剤、抗癌剤および抗菌剤を提供することができる。
【００４３】
前記抗酸化剤、抗癌剤および抗菌剤では、前記式（２）で表される化合物１及び式（３）で表される化合物２のいずれかを単独に含有しても良く、双方を共に含有しても良い。また、他の有効成分と組み合わせて含有しても良い。
【００４４】
前記の２種の化合物は、その生理活性や物理化学的性質が類似したものであるから、いずれも同等の用途や使用量で用いることができる。
【００４５】
なお、本発明で得られた該化合物が持つさらなる効果効能は、得られた生理活性データより類推できる範囲で使用できる。
【００４６】
原料であるレスベラトロールの安全性が確認されており、公知のレスベラトロール重合化合物についても安全性が確認されていることから、本発明のレスベラトロール重合化合物の安全性も同様に優れたものである。
【００４７】
また、本発明のレスベラトロール重合化合物類は、前記のような生理活性を奏することから、食品、医薬品、医薬部外品または化粧品等に配合して使用することができる。
【００４８】
前記食品としては、例えば、飲料、アルコール飲料、ゼリー、菓子等、どのような形態でもよく、菓子類の中でも、その容量等から保存や携帯に優れた、ハードキャンディ、ソフトキャンディ、グミキャンディ、タブレット等が挙げられるが、特に限定はない。また、レスベラトロールの効果増強という面からは、該化合物をワインに添加することで、ワインの健康機能効果をさらに増強した新規なワインとすることもできる。嗜好性と健康機能効果の双方を持ち合わせた飲食品は、社会ニーズの非常に高い分野であり、これに応えることが可能である。また、食品には、機能性食品、健康食品、健康志向食品等も含まれる。
【００４９】
前記医薬品としては、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、細粒剤、顆粒剤等の固形製剤、水剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、ゲル剤等が挙げられる。錠剤、丸剤、顆粒剤、顆粒を含有するカプセル剤の顆粒は、必要により、ショ糖等の糖類、マルチトール等の糖アルコールで糖衣を施したり、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等でコーティングを施したりすることもできる。または胃溶性若しくは腸溶性物質のフィルムで被覆してもよい。また、製剤の溶解性を向上させるために、公知の可溶化処理を施すこともできる。常法に基づいて、注射剤、点滴剤に配合して使用してもよい。
【００５０】
医薬部外品としては、口腔に用いられる医薬部外品、例えば、歯磨き、マウスウオッシュ、マウスリンスや、感染症予防等を目的とした滋養強壮系ドリンク剤等が挙げられる。
【００５１】
前記化粧品としては、ローション、乳液、クリーム、パック剤、仕上げ化粧品、頭髪用化粧品、洗顔剤、浴剤、制汗剤等が挙げられる。これらの化粧品では、抗酸化効果から美容効果が期待され、抗菌効果から防菌の目的で利用することができる。
【００５２】
本発明のレスベラトロール重合化合物類を用いて食品、医薬品、医薬部外品または化粧品を調製する場合、本発明の効果が損なわれない範囲内で食品、医薬品、医薬部外品または化粧品に通常用いられる成分を適宜任意に配合することができる。
例えば、食品の場合には、水、アルコール、澱粉室、蛋白質、繊維質、糖質、脂質、ビタミン、ミネラル、着香料、着色料、甘味料、調味料、安定剤、防腐剤のような食品に通常配合される原料または素材と組み合わせることができる。
化粧品または医薬部外品の場合には、主剤、基材、界面活性剤、起泡剤、湿潤剤、増粘剤、透明剤、着香料、着色料、安定剤、防腐剤、殺菌剤等組み合わせることができる。化粧品の場合には、常法に基づいて、液状、軟膏状あるいはスプレー噴射可能な最終形態等にすることができる。これらの化粧品には、用途に応じ他の成分を配合することができる。例えば乳液の場合は、プロピレングリコール等の親水性基剤、ワセリン，ミツロウ等の疎水性基剤、エチルアルコール等のアルコール類、脂肪酸モノグリセライド類、ソルビタン脂肪酸エステル類等の乳化剤、顔料、香料、その他必要に応じて、目的に応じた栄養剤、保湿剤あるいは紫外線防止剤等を配合することができる。
医薬品または医薬部外品の場合には、担体、賦形剤、希釈剤、安定剤と組み合わせることができる。
特に、本発明のレスベラトロール重合化合物類の生理活性分野を考慮すると、癌予防・癌治療、生活習慣病、感染症予防・治療等の健康維持増進、さらには疾病治癒分野において用いることが好ましい。
また、食品や化粧品等の酸化防止や微生物汚染防止等の品質管理分野において用いることも好適である。
【００５３】
本発明のレスベラトロール重合化合物類を食品に添加する場合には、該食品中に対して、通常は０．００１〜２０重量％添加することが好ましい。
【００５４】
本発明のレスベラトロール重合化合物類を医薬用途で使用する場合、例えば、その摂取量は、所望の改善、治療又は予防効果が得られるような量であれば特に制限されず、通常その態様、患者の年齢、性別、体質その他の条件、疾患の種類並びにその程度等に応じて適宜選択される。１日当たり約０．１ｍｇ〜１，０００ｍｇ程度とするのがよく、これを１日に１〜４回に分けて摂取することができる。
【００５５】
本発明のレスベラトロール重合化合物類を医薬部外品に添加する場合には、該医薬部外品中に、通常０．００１〜３０重量％添加するのが好ましい。
【００５６】
また、本発明のレスベラトロール重合化合物類を化粧品として使用する場合には、化粧品中に０．１ｐｐｍ〜２０００ｐｐｍの濃度となるようにするとよい。
【００５７】
また、前記本発明のレスベラトロール重合化合物類は、安全性に優れたものであるので、ヒトに対してだけでなく、例えば、非ヒト動物、例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー等の哺乳類、鳥類、両生類、爬虫類等の治療剤または飼料に配合してもよい。飼料としては、例えばヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ニワトリ等に用いる家畜用飼料、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、ウナギ、タイ、ハマチ、エビ等に用いる魚介類用飼料、イヌ、ネコ、小鳥、リス等に用いるペットフードが挙げられる。
【００５８】
次に、本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、本発明はかかる実施例にのみ限定されるものではない。
【実施例】
【００５９】
（実施例１：レスベラトロール重合化合物の生成方法）
トランス−レスベラトロール（東京化成）７００ｍｇをエタノール１４ｍｌに溶解し、２．５％ＮａＨＣＯ3水溶液を１４ｍｌ加えて、レスベラトロール含有溶液（ｐＨ９．９）を得た。このレスベラトロール含有溶液をオートクレーブ（ＳＡＮＹＯ  ＬＡＢＯ  ＡＵＴＯＣＬＡＶＥ）にて１３０℃、２０分間加熱した。次いで、１回目のオートクレーブ処理にて得られた反応溶液に、エタノール１４ｍｌと５．０％ＮａＨＣＯ3水溶液を１４ｍｌ加え、再度、オートクレーブ（ＳＡＮＹＯ  ＬＡＢＯ  ＡＵＴＯＣＬＡＶＥ）にて１３０℃、２０分間加熱した。得られた反応溶液のうち１ｍＬをメタノールにて５０ｍｌにメスアップし、このうちの１０μｌをＨＰＬＣにより分析した。
【００６０】
ＨＰＬＣ分析は以下条件にて行った。
カラム：逆相用カラム「Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ（登録商標）Ｃ−３０−ＵＧ−５」（４．６ｍｍｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）
移動相：Ａ・・・Ｈ2Ｏ（０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）），  Ｂ・・・アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ
注入：１０μｌ
検出：２５４ｎｍ
勾配（容量％）：８０％Ａ／２０％Ｂから２０％Ａ／８０％Ｂまで３０分間、２０％Ａ／８０％Ｂから１００％Ｂまで５分間、１００％Ｂで１０分間（全て直線）
【００６１】
得られたクロマトグラムを図１に示す。主要な化合物のピークをＲ１〜Ｒ５で示した。
【００６２】
（実施例２：レスベラトロール重合化合物の単離・構造決定）
実施例１で得られた反応物から上記化合物Ｒ３およびＲ４とを分取ＨＰＬＣにより精製した。単離精製した化合物Ｒ３とＲ４の乾燥物は、いずれも淡褐色粉末となった。
【００６３】
次いで、化合物Ｒ３およびＲ４の分子量を高分解能FAB-MS（Fast Atom Bombardment-Mass Spectrometry）にてそれぞれ測定したところ、それぞれの測定値は439.4803および439.4765であり、理論値との比較から、以下の分子式を得た。
理論値C28H23O5(M+H)+ ：439.4792
分子式Ｃ28Ｈ22Ｏ5
【００６４】
次に、化合物Ｒ３とＲ４をぞれぞれ核磁気共鳴（ＮＭＲ）測定に供し、１Ｈ−ＮＭＲ、１３C−NMR及び各種２次元NMRデータの解析から化合物Ｒ３は式（２）で表される化合物１、化合物Ｒ４は式（３）で表される化合物２の構造であることを確認した。式（２）で表される化合物１、式（３）で表される化合物２は本発明の方法で効率的に生成できることが示された。
【００６５】
ＮＭＲ測定値について、化合物１を
【００６６】
【化７】
0005521788.tif 000008
【００６７】
、化合物２を
【化８】
0005521788.tif 000009
【００６８】
として、それぞれの1H核磁気共鳴スペクトル、13C核磁気共鳴スペクトルを表１に示す。
値はδ、ｐｐｍで、溶媒はDMSO−ｄ6で測定した。
【００６９】
【表１】
0005521788.tif 000010
【００７０】
また、前記化合物１および化合物２の物理化学的性状は同じであり、以下のようになった。
（性状）
淡褐色粉末
（溶解性）
水：難溶
メタノール：溶解
エタノール：溶解
DMSO：溶解
クロロホルム：難溶
酢酸エチル：難溶
【００７１】
＜化合物１および化合物２の生理活性＞
以下の実施例３〜５では、各化合物の生理活性として、（１）抗癌評価系の一つである細胞増殖抑制作用試験、（２）抗酸化能評価試験および（３）抗菌活性評価試験について示す。
【００７２】
（実施例３：抗癌作用）
次に癌細胞に対する各化合物の効果を見るため、ＨＬ−６０細胞（Human  promyelocytic  leokemiacells：ヒト骨髄球性白血病細胞）を用いた癌細胞増殖抑制作用について試験した。
【００７３】
細胞の培養としては、高栄養培地ＲＰＭＩ−１６９０（ＳＩＧＭＡ  Ｒ０８８３）に、４ｍＭグルタミン（Ｌ−Glutamine  ＳＩＧＭＡ  Ｇ８５４０−１００Ｇ）、１０％ＦＢＳ（Foetal Bovine Serum Biological industries  ０４−００１−１Ａ）を添加したものを培養液とし、継代培養を行った。試験は細胞培養用９６ウェルプレート（corning  ３５９５）を用いた。試験当日にＨＬ−６０細胞を５×１０5ｃｅｌｌ／ｍｌとなるように細胞数を調整し、９６ウェルプレートに、１ウェルあたり１００μｌずつ播種した。
【００７４】
試料は、ｔｒａｎｓ−レスベラトロール（東京化成）、天然のレスベラトロール二量体であるε−ビニフェリン（和光純薬）、本発明品である化合物１および化合物２の４種類を用いた。試料調製については、各々の化合物をＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド、和光純薬  ０４６−２１９８１）にて溶解し、ＨＬ−６０細胞の培養液中の最終濃度がそれぞれ１０μＭ、３０μＭ、１００μＭ、および３００μＭとなるように調整し、試験を開始した。
【００７５】
細胞増殖抑制効果の検出はcell  counting  kit−８（ＤＯＪＩＮＤＯ  ３４７−０７６２１）を用いて検出を行った。試験開始より２４時間後、各ウェルにcell  counting  kit−８の検出液を１０μｌ添加し、よく攪拌した。その後遮光反応を行い、プレートリーダー（ＢＩＯ−ＲＡＤ  Ｍｏｄｅｌ  ６８０）を用いて４５０ｎｍにて吸光度の測定を行い、得られたデータを処理した。細胞生存率とは、ＤＭＳＯを添加した培養液にて処理を受けた細胞の生存細胞数を１００％とし、各化合物の濃度下における細胞の生存細胞数を相対値として算出した値である。各試料濃度と細胞生存率の関係から、細胞増殖を５０％抑制する濃度ＩＣ50（５０％阻害濃度：half maximal inhibitory concentration）を求めた。結果を表２に示す。
【００７６】
表２の結果より、化合物１および化合物２は、いずれもレスベラトロールとε−ビニフェリンよりもＩＣ50が顕著に低く、すなわち化合物１および化合物２は、ＨＬ−６０細胞の増殖を抑制する効果が、従来のレスベラトロールやε−ビニフェリンより高いことが明らかになった。なお、３０μＭにおける細胞増殖抑制効果について、Ｔｕｋｅｙ  ＨＳＤ（ｈｏｎｅｓｔｌｙ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）検定を行った結果、化合物１および化合物２は、共にレスベラトロールに対し有意な増殖抑制効果を有しており、ε−ビニフェリンに対しても有意な増殖抑制効果を有していた。
【００７７】
【表２】
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【００７８】
（実施例４：抗酸化作用）
化合物１および化合物２の抗酸化効果の試験を行った。試験はＤＰＰＨ（1,1-ジフェニル-2-ピクリルヒドラジル：1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl）ラジカル消去法を採用し行った。以下手法について挙げる。
ＤＰＰＨラジカル消去法の主な実験方法については、「食品機能研究法」（株式会社光琳発行、篠原和毅、鈴木建夫、上野川修一編著、２０００年）に記載の手法を参考に試験を進めた。試料は化合物１、化合物２、レスベラトロールを用い、最終濃度が３０μＭ〜１０００μＭの範囲内の４点で調整を行った。また、ＤＰＰＨ反応液については４００μＭ  DPPH（ＳＩＧＭＡ  Ｄ９１３２）、５０ｍＭ  ＭＥＳ（２−モルホノエタンスルホン酸（2-Morpholinoethanesulphonic acid）  ＤＯＪＩＮＤＯ  ３４５−０１６２５）、７５％ＥｔＯＨとなるように調整した。反応は９６ウェルプレート（アズワン  １−６７７６−０３）にて行い、試料とＤＰＰＨ反応液を１００μｌずつ入れ、混合、遮光静置を２０分間行い、プレートリーダーにて５２０ｎｍにおける各吸光度を測定した。
【００７９】
得られた結果を図２に示す。化合物１および化合物２はレスベラトロールよりラジカル残存率が低く、すなわちレスベラトロールよりも高い抗酸化作用を有していた。表３に、各化合物のＩＣ50を示した。ＩＣ50とはＤＰＰＨラジカルを５０％消去する能力を有するとみなされる各試料の濃度である。化合物１および化合物２はレスベラトロールと比較して、強い抗酸化活性を有することがわかる。
【００８０】
【表３】
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【００８１】
（実施例５：抗菌作用）
化合物１および２の抗菌作用の確認を目的とし、ペーパーディスク法による検定を行った。ペーパーディスク法は試験物質の各阻止円を作成することにより、試験物質の抗菌活性を簡易に調べることのできる公知の手法である。
【００８２】
菌体は独立法人製品評価技術基盤機構ＮＢＲＣより購入した枯草菌（Bacillus subtilis NBRC 3134）を用いて行った。菌体の立ち上げ、培養方法はＮＢＲＣ指定の培養液であるＮｏ．７０２を調整して使用した。培養は３７℃にて行った。
【００８３】
ペーパーディスク法の実験方法（（寒天）培養液、培養方法、試験準備、試験方法）はBSAC標準化ディスク感受性試験法（第８版）（以下、BSAC standardized disc susceptibility testing method）に従い行った。
【００８４】
試料は、レスベラトロール、化合物１、化合物２を用い、それぞれＤＭＳＯを用いて５０ｍＭ、１０ｍＭ、５ｍＭおよび１ｍＭとなるように調整した。また、ポジティブコントロールは医薬品として使用される抗菌成分のクロラムフェニコール（Chloramphenicol  和光純薬  ０３６−１０５７１）をＤＭＳＯに溶解し調整し、ネガティブコントロールはＤＭＳＯを用いた。
このように調整した試料をペーパーディスクに浸し、枯草菌を播種した寒天培地の上に配置し、培養を行い、２４時間後、阻止円の測定を行った。結果を表４に示す。なお、クロラムフェニコールによる阻止円の大きさから本実施例の信頼性は確認している。
【００８５】
【表４】
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【００８６】
表４に示した結果から、化合物１および化合物２はレスベラトロールよりも低濃度で充分な大きさの阻止円を得ることができ、すなわち、化合物１および化合物２はレスベラトロールよりもはるかに強力な抗菌活性を有することが示された。
【００８７】
（実施例６：化合物１および化合物２含有固形物の調製）
合成吸着剤ＨＰ−２０（三菱化学社製）を充填したカラムを用い、エタノール濃度を段階的に上昇させたエタノール水溶液を通液し精製する常法により、グレープスキンエキスパウダー（マリーンバイオ株式会社製）２５０ｇから、２０ｇのレスベラトロールを得た。得られたレスベラトロール２０ｇをエタノール４００ｍｌに溶解し、２．５％ＮａＨＣＯ3水溶液を４００ｍｌ加えて、レスベラトロール含有溶液（ｐＨ９．９）を得た。このレスベラトロール含有溶液をオートクレーブ（ＳＡＮＹＯ  ＬＡＢＯ  ＡＵＴＯＣＬＡＶＥ）にて１３０℃、２０分間加熱した。次いで、１回目のオートクレーブ処理にて得られた反応溶液に、エタノール４００ｍｌと５．０％ＮａＨＣＯ3水溶液を４００ｍｌ加え、再度、オートクレーブ（ＳＡＮＹＯ  ＬＡＢＯ  ＡＵＴＯＣＬＡＶＥ）にて１３０℃、２０分間加熱した。最終的に得られた反応溶液を減圧加熱させて乾固し、これをエタノールにより熱時還流し、次いで得られた反応混合物に含まれる不溶物をろ過により除去した後、ろ液を減圧加熱にて乾固させ、固形物を１５ｇ得た。得られた固形物（以下「化合物１および化合物２含有固形物」という）中の化合物１含量は１．９ｇ、化合物２は０．９ｇであった。必要に応じてこの作業を繰り返した。
【００８８】
（実施例７：レスベラトロール重合化合物を含有する食品）
実施例６で得た化合物１および化合物２含有固形物を１０ｇあらかじめ１００ｍＬのエタノールに溶解させ、これに砂糖５００ｇ、水飴４００ｇを混合溶解し、生クリーム１００ｇ、バター２０ｇ、練乳７０ｇ、乳化剤１．０ｇを混合した後、真空釜にて−５５０mmＨｇ減圧させ、１１５℃の条件下で濃縮し、水分値３．０重量％のミルクハードキャンディを得た。本品は、菓子として食べ易いものであることはもちろん、感染症治癒・予防、癌治癒・予防、生活習慣病治癒・予防、美容効果を期待した保健機能食品としても利用できる。
【００８９】
（実施例８：化合物１および化合物２の調製）
レスベラトロール２０ｇ（東京化成）をエタノール４００ｍｌに溶解し、２．５％ＮａＨＣＯ3水溶液を４００ｍｌ加えて、レスベラトロール含有溶液（ｐＨ９．９）を得た。このレスベラトロール含有溶液をオートクレーブ（ＳＡＮＹＯ  ＬＡＢＯ  ＡＵＴＯＣＬＡＶＥ）にて１３０℃、２０分間加熱した。次いで、１回目のオートクレーブ処理にて得られた反応溶液に、エタノール４００ｍｌと５．０％ＮａＨＣＯ3水溶液を４００ｍｌ加え、再度、オートクレーブ（ＳＡＮＹＯ  ＬＡＢＯ  ＡＵＴＯＣＬＡＶＥ）にて１３０℃、２０分間加熱した。最終的に得られた反応溶液を減圧加熱させて乾固し、これをエタノールにより熱時還流し、次いで得られた反応混合物に含まれる不溶物をろ過により除去した後、ろ液を減圧加熱にて乾固させ、固形物を１５ｇ得た。続いてこの固形物から、分取ＨＰＬＣ（カラム：ＯＤＳ  Ｃ１８）を用いて化合物１及び化合物２を精製した。化合物１は１．６ｇ、化合物２は０．８ｇ得られた。必要に応じてこの作業を繰り返した。
【００９０】
（実施例９：レスベラトロール重合化合物を含有する医薬品）
実施例８の方法で得た化合物１をエタノールに溶解し、これを微結晶セルロースに吸着させた後に、減圧乾燥させた。これを常法に従い、打錠品を得た。処方は、化合物１を１０重量部、コーンスターチ２３重量部、乳糖１２重量部、カルボキシメチルセルロース８重量部、微結晶セルロース３２重量部、ポリビニルピロリドン４重量部、ステアリン酸マグネシウム３重量部、タルク８重量部の通りである。本打錠品は、感染症治癒、癌治癒、生活習慣病治癒を目的とする医薬品として、さらに美容目的の医薬品としても有効に利用できる。
【００９１】
（実施例１０：レスベラトロール重合化合物を含有する医薬部外品）
実施例８の方法で得た化合物１  １ｇおよび化合物２  ０．２ｇを１０ｍｌのエタノールに溶解し、タウリン２０ｇ、ビタミンＢ１硝酸塩０．１２ｇ、安息香酸ナトリウム０．６ｇ、クエン酸４ｇ、砂糖６０ｇ、ポリビニルピロリドン１０ｇを全て精製水に溶解させ１０００ｍｌにメスアップした。なお、ｐＨは希塩酸を用いて３．２に調整した。得られた溶液１０００ｍｌのうち５０ｍｌをガラス瓶に充填し、８０℃で３０分滅菌して、医薬部外品であるドリンク剤を完成させた。本ドリンク剤は、栄養補給の目的に加えて、感染症等の疾患にかかりにくくすることを目的とする医薬部外品として有効に利用できる。
【００９２】
（実施例１１：レスベラトロール重合化合物を含有する化粧品）
テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット１重量部、ポリオキシエチレンステアリルエーテル０．５重量部、親油型モノステアリン酸グリセリン１重量部、ピルビン酸０．５重量部、ステアリルアルコール０．５重量部、アボガド油１重量部、実施例８の方法で得た化合物１の０．１重量部を、常法に従って溶解させ、これに、乳酸ナトリウム１重量部、プロピレングリコール５重量部、カルボキシビニルポリマー０．１重量部、ごく少量の香料および精製水８９．３重量部を加え、ホモゲナイザーにかけ乳化し、乳液を得た。本乳液は、美肌効果、日焼け止め効果をもつ化粧品としてだけでなく、皮膚感染症予防効果をもつ薬用化粧品として有効に利用できる。
【図１】
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【図２】
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