(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ミリントニア・ホルテンシス（Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎｉａ  ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）の抽出物を含有し、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを有することを特徴とする抗炎症剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物抽出物を含有する抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤、並びに、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを利用した皮膚外用剤及び飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、スーパーオキサイド〔即ち、酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン（・Ｏ２−）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、一重項酸素（１Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）〕等がある。このような活性酸素は食細胞の殺菌機構にとって必須であり、ウイルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしている。
しかし、前記活性酸素の過剰な生成は生体内の膜及び組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。生体内で生産され、他の活性酸素の出発物質ともなっているスーパーオキサイドは、通常、細胞内に含まれているスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）の触媒作用により逐次消去されている。しかし、スーパーオキサイドの産生が過剰な場合、あるいはＳＯＤの作用が低下している場合には、スーパーオキサイドの消去が不十分になってスーパーオキサイド濃度が高くなる。このことが、関節リウマチ、ベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、シミ、ソバカス、しわ、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性、皮膚の老化などを起こす原因の一つであると考えられている。
これらの中でも、皮膚は紫外線等の環境因子の刺激を直接受けるため、スーパーオキサイドが生成し易い器官であるから、スーパーオキサイド濃度の上昇により、例えば、コラーゲン等の生体組織を分解、変性、又は架橋したり、また油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成して、皮膚のしわを形成したり、皮膚の弾力性低下等の老化、炎症、肌の色素沈着を引き起こすという問題がある（非特許文献１参照）。
そこで、活性酸素消去物質、ラジカル消去物質、過酸化水素消去物質等を安全性の点で有利な天然物から得る試みがなされており、アブラナ科ブラシカ属植物の抽出物（特許文献１参照）、ベンケイソウ科リュウキュウベンケイ属植物の抽出物（特許文献２参照）、タマコチョウの抽出物（特許文献３参照）、スイオウの抽出物（特許文献４参照）、などに有効性が確認されている。
【０００３】
また、炎症性の疾患、例えば接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因及び発症機構は多種多様である。その原因として、例えば、一酸化窒素（ＮＯ）産生、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生、ヒアルロニダーゼ活性、ヘキソサミニダーゼ（ヒスタミン）遊離、血小板凝集、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性によるものなどが知られている。
【０００４】
前記一酸化窒素（ＮＯ）は、大気汚染、酸性雨等の要因となる窒素酸化物である。また、近年、一酸化窒素（ＮＯ）は、血管内皮由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）、神経伝達物質、生体防御における微生物、腫瘍細胞の障害因子等、生体内で多彩な機能を示す生理活性物質であることが報告されている。生理活性物質としては、マクロファージから産生される一酸化窒素が細菌及びウイルスの感染を防御することが知られている。しかし、前記マクロファージから産生される一酸化窒素が大量に生合成されると、生体にとって無毒ではなく、自己組織の破壊を引き起こし、炎症の悪化、リューマチ、糖尿病等の病態の原因となることがある。また、大量に生合成された一酸化窒素が血管平滑筋の弛緩と過剰な透過性の増大をもたらし、著しい血圧の低下によってエンドトキシン・ショックを引き起こすこともある。
このような炎症性疾患において、一酸化窒素（ＮＯ）の過剰な産生を抑制することが重要となる。このような一酸化窒素の産生抑制作用を有する生薬としては、例えば、ローズマリー抽出液、カルノソール、カルノシン酸、コーヒー豆の抽出液、サクラダソウ抽出液、オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽出液、イヌノイバラの抽出液、センキュウ抽出液、トウニン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液、アカブドウ抽出液（特許文献５参照）、唐独活、タラ根皮、和続断、車前子、遠子、茜草根、半枝連、槐花、花椒（非特許文献２参照）、などが報告されている。
【０００５】
前記ＴＮＦ−αは、腫瘍を壊死させる因子として見出されたが、最近では腫瘍に対してだけでなく、正常細胞の機能を調節するメディエーター的な役割を担うサイトカインであると考えられている。ＴＮＦ−αは炎症の初発から終息までの過程において重要な役割を担っているが、その持続的かつ過剰な産生は、皮膚を含めた組織の障害を引き起こし、全身的には発熱やカケクシアの原因となり、炎症の悪化を引き起こす。そのような炎症としては、例えば、関節リューマチ、変形性関節症などの慢性炎症性疾患が代表的である。したがって、病的な炎症においてはＴＮＦ−αの過剰な産生を抑制することが重要となる。このようなＴＮＦ−α産生抑制剤としては、例えば、シソ抽出液（非特許文献３参照）、ヒガンバナ科アルカロイドのリコリン及びリコリシジノール（非特許文献４参照）、などが挙げられる。
【０００６】
体組織への親和性を保つヒアルロン酸塩は、含水系の中では紫外線、酵素等によって分解され、分子量の低下に伴って保水効果も減少する。また、ヒアルロン酸は細胞間組織として存在し、血管透過性とも関与している。更に、ヒアルロニダーゼは肥満細胞中にあって活性化により、肥満細胞からの脱顆粒に関与していると考えられている。したがってヒアルロン酸の加水分解酵素であるヒアルロニダーゼの活性を阻害することにより、ヒアルロン酸の安定化をはかり、肥満細胞からの種々のケミカルメディエーターの放出を防止し、抗炎症が期待できる。
このようなヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有する生薬としては、例えば、オスベッキア属植物の抽出物（特許文献６参照）、藤茶抽出物（特許文献７参照）、ローズマリー、タイム抽出物及びメリッサ抽出物（特許文献８参照）などが報告されている。
【０００７】
前記ヒスタミン遊離は、肥満細胞内のヒスタミンが細胞外に遊離する現象であり、遊離されたヒスタミンが炎症反応を引き起こす。このため、ヒスタミン遊離を阻害乃至抑制する物質によりアレルギー性疾患、炎症性疾患を予防乃至治療する試みがなされている。このようなヒスタミン遊離抑制剤として、例えばトラニラスト、クロモグリク酸ナトリウム、バイカリン、バイカレイン、塩酸プロメタジンなどが用いられてきた。しかし、これらの物質はいずれも副作用があり、安全性の点で問題があった。
【０００８】
血小板凝集は、アラキドン酸カスケードのホスホリパーゼＡ２の活性化を招き、それによりロイコトリエンＢ及びプロスタグランジンＥ２等が放出されて起炎物質となる。このため、血小板の凝集を阻害乃至抑制する物質によりアレルギー疾患性疾患、炎症性疾患を予防乃至治療する試みがなされている。このような血小板凝集抑制作用を有する生薬の抽出物としては、例えば、カナリウム属に属する植物の抽出物（特許文献９参照）、コウサンフウ抽出物（特許文献１０参照）、藤茶抽出物（特許文献１１参照）、などが報告されている。
【０００９】
また炎症は、発赤、浮腫、発熱、痛み、機能障害などの症状を示す複雑な反応である。微視的に見ると、血漿漏出を起こす血管反応、白血球の浸潤、炎症性細胞による組織破壊などの共通する反応からなり、発熱反応や痛覚過敏など中枢神経系が関与する全身の反応も引き起こす場合がある。このような炎症の個々の反応にはプロスタグランジンが重要な役割を果たしており、この炎症時におけるプロスタグランジンの産生には、主として誘導型のシクロオキシゲナーゼであるシクロオキシゲナーゼ−２の関与が明らかとなっている。
このため、炎症反応の防止及び予防を図る目的で、アスピリンに代表される多くのシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤が用いられている（非特許文献５参照）。また、植物由来のシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤としては、マンゴスチン果皮抽出物中のα−マンゴスチン及びγ−マンゴスチンが知られている（特許文献１２参照）。また、前記シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有する化合物としては、２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オン、その塩、又はその水和物が知られている（特許文献１３参照）。
【００１０】
また、皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、皮膚線維芽細胞、及び、これらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲンやエラスチン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては、これら皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより、水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
ところが、紫外線（ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂ）の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄、過酸化水素との接触等の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、コラーゲンやエラスチン等の細胞外マトリックスの産生量が減少すると共に、架橋による弾力低下を起こす。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるため、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。
このように皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲンやエラスチン等の真皮マトリックス成分の減少乃至変性が関与していることが知られている。
【００１１】
エラスターゼは皮膚の真皮に存在するエラスチンの加水分解酵素であるが、エラスターゼは、紫外線暴露や老化により過剰発現することがあり、エラスターゼによりエラスチンが変性・破壊されると、皮膚の弾力性が低下すると考えられている。
【００１２】
また近年、真皮マトリックス成分の減少乃至変性を誘導する因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ類（以下、「ＭＭＰｓ」と称することもある）と呼ばれるタンパク質分解酵素群が挙げられる。
前記ＭＭＰｓは、その一次構造と基質特異性の違いから、（１）コラゲナーゼ群（ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８及びＭＭＰ−１３）、（２）ゼラチナーゼ群（ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９）、（３）ストロメライシン群（ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−１０）、（４）膜結合型マトリックスメタロプロテアーゼ群（ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、及びＭＭＰ−１７）、（５）その他（ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−１１、及びＭＭＰ−１２）の５つのグループに分類されている（特許文献１４参照）。
前記ＭＭＰｓの中でも、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−１４は、皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるＩ型コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲンを分解する酵素として知られている。また、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少乃至変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の大きな要因であると考えられる。
【００１３】
また角層は、表皮角化細胞が終末分化して形成された角質細胞と、細胞間を埋める細胞間脂質から形成される。セラミドを主成分とする細胞間脂質は、ラメラ構造を形成することにより、角層バリア機能を担っている。一方、角質細胞は、ケラチン線維を主成分とし、膜の裏打ち蛋白であるコーニファイドエンベロープ（角質肥厚膜、以下「ＣＥ」と略す。）という疎水的で強靭な細胞膜様構造物に覆われている。ＣＥは、表皮角化細胞の分化に従って細胞内で産生されるインボルクリン、ロリクリンなど複数のＣＥ前駆体蛋白質が、酵素トランスグルタミナーゼ−１により架橋され、不溶化して形成され、このＣＥが皮膚のバリア機能に密接に関与している。さらに、その一部にはセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角層バリア機能及び皮膚の水分保持機能の基礎が形成される。
【００１４】
しかしながら、加齢、乾燥、紫外線（ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂ）などの影響によりターンオーバー速度に異常が生じると、ラメラ構造の乱れやＣＥが不完全な状態で形成された、いわゆる不全角化が誘発され、角質細胞や細胞間脂質の構造に異常が生じ、角層の水分保持機能及びバリア機能は低下する。このことが肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状につながると考えられる。また、乾癬やアトピー性皮膚炎の患者では、バリア機能が低下した皮疹部で未熟なＣＥが高頻度に観察され、ＣＥが正しく形成されることが皮膚のバリア機能に非常に重要であると考えられている（非特許文献６参照）。
【００１５】
また、毛髪は、成長期、退行期及び休止期からなる周期的なヘアサイクル（毛周期）に従って成長及び脱落を繰り返している。このヘアサイクルのうち、休止期から成長期にかけての新たな毛包が形成されるステージが、発毛に最も重要であると考えられており、このステージにおける毛包上皮系細胞の増殖乃至分化に重要な役割を果たしているのが、毛乳頭細胞であると考えられている。毛乳頭細胞は、毛根近傍にある外毛根鞘細胞とマトリックス細胞とからなる毛包上皮系細胞の内側にあって、基底膜に包まれている毛根の根幹部分に位置する細胞であり、毛包上皮系細胞に働きかけてその増殖を促進する等、毛包上皮系細胞の増殖乃至分化及び毛髪の形成において重要な役割を担っている（非特許文献７参照）。前記毛乳頭細胞は、毛包上皮系細胞の増殖乃至分化及び毛髪の形成において最も重要な役割を果たしており、培養毛乳頭細胞に対象物質を接触させて、その細胞の増殖活性の有無及び／又は強弱を特定することで、その対象物質の育毛効果を検定する方法が提案されている（特許文献１５参照）。このような毛乳頭細胞増殖促進作用を有する生薬として、例えば、オウギ抽出物、オウレン抽出物、クマノギク抽出物等が知られている（特許文献１６及び特許文献１７参照）。
【００１６】
また多くのステロイドホルモンは産生臓器から分泌された分子型で受容体と結合してその作用を発現するが、アンドロゲンと総称される男性ホルモンの場合、例えば、テストステロンは標的臓器の細胞内に入ってテストステロン５α−レダクターゼにより５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）に還元されてから受容体と結合し、アンドロゲンとしての作用を発現する。
【００１７】
前記アンドロゲンは重要なホルモンであるが、それが過度に作用すると、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等のさまざまな好ましくない症状を誘発する。そこで、従来、これらの各種症状を改善するために過剰のアンドロゲンの作用を抑制する方法、具体的には、テストステロンを活性型５α−ＤＨＴに還元するテストステロン５α−レダクターゼの作用を阻害することにより、活性な５α−ＤＨＴが生じるのを抑制する方法や、テストステロンから生じた５α−ＤＨＴが受容体と結合するのを阻害することによりアンドロゲン活性を発現させない方法が提案されている。
このような５α−ＤＨＴとその受容体との結合を阻害する作用を有する植物抽出物としては、例えば、マジト及びカチュアの少なくともいずれかの抽出物などが知られている（特許文献１８参照）。
【００１８】
しかしながら、現在までのところ、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、皮膚外用剤及び飲食品に広く使用可能な抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤は未だ提供されておらず、その速やかな提供が強く求められているのが現状である。
【００１９】
【特許文献１】特開２００３−８１８４８号公報
【特許文献２】特開２００５−２９４８３号公報
【特許文献３】特開２００６−３２１７３０号公報
【特許文献４】特開２００７−８９０２号公報
【特許文献５】特開２００２−８７９７５号公報
【特許文献６】特開２００３−５５２４２号公報
【特許文献７】特開２００３−１２５３２号公報
【特許文献８】特開平８−３３３２６７号公報
【特許文献９】特開２００２−５３４７８号公報
【特許文献１０】特開２００２−５３４７７号公報
【特許文献１１】特開２００１−９７８７３号公報
【特許文献１２】特開２００２−４７１８０号公報
【特許文献１３】特開２０００−１６９３５号公報
【特許文献１４】特開２０００−３４４６７２号公報
【特許文献１５】特開平１０−２２９９７８号公報
【特許文献１６】特開平９−２０８４３１号公報
【特許文献１７】特開平１１−１２１３４号公報
【特許文献１８】特開２００２−２４１２９７号公報
【非特許文献１】「フレグランスジャーナル」臨時増刊Ｎｏ．１４、ｐ１５６、１９９５年
【非特許文献２】「和漢医薬学雑誌」，Ｖｏｌ．１５，ｐ．３０２−３０３，１９９８年発行
【非特許文献３】「炎症」１９９３年，Ｖｏｌ.１３，Ｎｏ．４，ｐ.３３７〜３４０
【非特許文献４】「薬学雑誌」２００１年，Ｖｏｌ.１２１，Ｎｏ．２，p.１６７〜１７１
【非特許文献５】薬理学アトラス（Ｐ１８４）、福原武彦監訳、文光堂
【非特許文献６】Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  １２：５９１−６０１（２００３）
【非特許文献７】「Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ」，１９９２年，第８巻，ｐ.５６−６１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れた抗酸化作用を有し、かつ安全性の高い抗酸化剤、優れた抗炎症作用を有し、かつ安全性の高い抗炎症剤、優れた抗老化作用を有し、かつ安全性の高い抗老化剤、及び、優れた育毛作用を有し、かつ安全性の高い育毛剤、並びに、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを利用した皮膚外用剤及び飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意検討を行ったところ、ミリントニア・ホルテンシス（Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎｉａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）、リーア・マクロフィラ（Ｌｅｅａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ）、コダリオカリクス・モトリウス（Ｃｏｄａｒｉｏｃａｌｙｘ ｍｏｔｏｒｉｕｓ）、マルティニア・アンヌア（Ｍａｒｔｙｎｉａ ａｎｎｕａ）、ピットスポルム・ナパウレンセ（Ｐｉｔｔｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｐａｕｌｅｎｓｅ）、ヘスペレトゥサ・クレヌラータ（Ｈｅｓｐｅｒｅｔｈｕｓａ ｃｒｅｎｕｌａｔａ）、プテロスペルムム・ディベルシフォリウム（Ｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍｕｍｕ ｄｉｖｅｒｓｉｆｏｌｉｕｍ）、グレウィア・エリオカルパ（Ｇｒｅｗｉａ ｅｒｉｏｃａｒｐａ）、ツンベルギア・ラウリフォリア（Ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａ ｌａｕｒｉｆｏｌｉａ）、及びプレムナ・インテグリフォリア（Ｐｒｅｍｎａ ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）の各植物抽出物が、優れた抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、及び育毛作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００２２】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  ミリントニア・ホルテンシス（Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎｉａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）の抽出物、リーア・マクロフィラ（Ｌｅｅａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ）の抽出物、コダリオカリクス・モトリウス（Ｃｏｄａｒｉｏｃａｌｙｘ ｍｏｔｏｒｉｕｓ）の抽出物、マルティニア・アンヌア（Ｍａｒｔｙｎｉａ ａｎｎｕａ）の抽出物、ピットスポルム・ナパウレンセ（Ｐｉｔｔｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｐａｕｌｅｎｓｅ）の抽出物、ヘスペレトゥサ・クレヌラータ（Ｈｅｓｐｅｒｅｔｈｕｓａ ｃｒｅｎｕｌａｔａ）の抽出物、プテロスペルムム・ディベルシフォリウム（Ｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍｕｍｕ ｄｉｖｅｒｓｉｆｏｌｉｕｍ）の抽出物、グレウィア・エリオカルパ（Ｇｒｅｗｉａ ｅｒｉｏｃａｒｐａ）の抽出物、ツンベルギア・ラウリフォリア（Ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａ ｌａｕｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物、及びプレムナ・インテグリフォリア（Ｐｒｅｍｎａ ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とする抗酸化剤である。
＜２＞  スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用、一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有する前記＜１＞に記載の抗酸化剤である。
＜３＞  ミリントニア・ホルテンシス（Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎｉａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）の抽出物、リーア・マクロフィラ（Ｌｅｅａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ）の抽出物、コダリオカリクス・モトリウス（Ｃｏｄａｒｉｏｃａｌｙｘ ｍｏｔｏｒｉｕｓ）の抽出物、マルティニア・アンヌア（Ｍａｒｔｙｎｉａ ａｎｎｕａ）の抽出物、ピットスポルム・ナパウレンセ（Ｐｉｔｔｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｐａｕｌｅｎｓｅ）の抽出物、ヘスペレトゥサ・クレヌラータ（Ｈｅｓｐｅｒｅｔｈｕｓａ ｃｒｅｎｕｌａｔａ）の抽出物、プテロスペルムム・ディベルシフォリウム（Ｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍｕｍｕ ｄｉｖｅｒｓｉｆｏｌｉｕｍ）の抽出物、グレウィア・エリオカルパ（Ｇｒｅｗｉａ ｅｒｉｏｃａｒｐａ）の抽出物、ツンベルギア・ラウリフォリア（Ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａ ｌａｕｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物、及びプレムナ・インテグリフォリア（Ｐｒｅｍｎａ ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とする抗炎症剤である。
＜４＞  一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、血小板凝集抑制作用、及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用の少なくともいずれかを有する前記＜３＞に記載の抗炎症剤である。
＜５＞  ミリントニア・ホルテンシス（Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎｉａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）の抽出物、リーア・マクロフィラ（Ｌｅｅａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ）の抽出物、コダリオカリクス・モトリウス（Ｃｏｄａｒｉｏｃａｌｙｘ ｍｏｔｏｒｉｕｓ）の抽出物、マルティニア・アンヌア（Ｍａｒｔｙｎｉａ ａｎｎｕａ）の抽出物、ピットスポルム・ナパウレンセ（Ｐｉｔｔｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｐａｕｌｅｎｓｅ）の抽出物、ヘスペレトゥサ・クレヌラータ（Ｈｅｓｐｅｒｅｔｈｕｓａ ｃｒｅｎｕｌａｔａ）の抽出物、プテロスペルムム・ディベルシフォリウム（Ｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍｕｍｕ ｄｉｖｅｒｓｉｆｏｌｉｕｍ）の抽出物、グレウィア・エリオカルパ（Ｇｒｅｗｉａ ｅｒｉｏｃａｒｐａ）の抽出物、ツンベルギア・ラウリフォリア（Ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａ ｌａｕｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物、及びプレムナ・インテグリフォリア（Ｐｒｅｍｎａ ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とする抗老化剤である。
＜６＞  エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用、及び過酸化水素に対するダメージ抑制作用の少なくともいずれかを有する前記＜５＞に記載の抗老化剤である。
＜７＞  ミリントニア・ホルテンシス（Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎｉａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）の抽出物、リーア・マクロフィラ（Ｌｅｅａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ）の抽出物、コダリオカリクス・モトリウス（Ｃｏｄａｒｉｏｃａｌｙｘ ｍｏｔｏｒｉｕｓ）の抽出物、マルティニア・アンヌア（Ｍａｒｔｙｎｉａ ａｎｎｕａ）の抽出物、ピットスポルム・ナパウレンセ（Ｐｉｔｔｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｐａｕｌｅｎｓｅ）の抽出物、ヘスペレトゥサ・クレヌラータ（Ｈｅｓｐｅｒｅｔｈｕｓａ ｃｒｅｎｕｌａｔａ）の抽出物、プテロスペルムム・ディベルシフォリウム（Ｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍｕｍｕ ｄｉｖｅｒｓｉｆｏｌｉｕｍ）の抽出物、グレウィア・エリオカルパ（Ｇｒｅｗｉａ ｅｒｉｏｃａｒｐａ）の抽出物、ツンベルギア・ラウリフォリア（Ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａ ｌａｕｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物、及びプレムナ・インテグリフォリア（Ｐｒｅｍｎａ ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物から選択される少なくとも１種を含有することを特徴とする育毛剤である。
＜８＞  アンドロゲンレセプター拮抗作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有する前記＜７＞に記載の育毛剤である。
＜９＞  前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抗酸化剤、前記＜３＞から＜４＞のいずれかに記載の抗炎症剤、前記＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の抗老化剤、及び前記＜７＞から＜８＞のいずれかに記載の育毛剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする皮膚外用剤である。
＜１０＞  前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抗酸化剤、前記＜３＞から＜４＞のいずれかに記載の抗炎症剤、前記＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の抗老化剤、及び前記＜７＞から＜８＞のいずれかに記載の育毛剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする飲食品である。
【発明の効果】
【００２３】
本発明によると、従来における諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた抗酸化作用を有し、かつ安全性の高い抗酸化剤、優れた抗炎症作用を有し、かつ安全性の高い抗炎症剤、優れた抗老化作用を有し、かつ安全性の高い抗老化剤、及び、優れた育毛作用を有し、かつ安全性の高い育毛剤、並びに、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを利用した皮膚外用剤及び飲食品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
（抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤）
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤は、ミリントニア・ホルテンシス（Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎｉａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）の抽出物、リーア・マクロフィラ（Ｌｅｅａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ）の抽出物、コダリオカリクス・モトリウス（Ｃｏｄａｒｉｏｃａｌｙｘ ｍｏｔｏｒｉｕｓ）の抽出物、マルティニア・アンヌア（Ｍａｒｔｙｎｉａ ａｎｎｕａ）の抽出物、ピットスポルム・ナパウレンセ（Ｐｉｔｔｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｐａｕｌｅｎｓｅ）の抽出物、ヘスペレトゥサ・クレヌラータ（Ｈｅｓｐｅｒｅｔｈｕｓａ ｃｒｅｎｕｌａｔａ）の抽出物、プテロスペルムム・ディベルシフォリウム（Ｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍｕｍｕ ｄｉｖｅｒｓｉｆｏｌｉｕｍ）の抽出物、グレウィア・エリオカルパ（Ｇｒｅｗｉａ ｅｒｉｏｃａｒｐａ）の抽出物、ツンベルギア・ラウリフォリア（Ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａ ｌａｕｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物、及びプレムナ・インテグリフォリア（Ｐｒｅｍｎａ ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物から選択される少なくとも１種を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
【００２５】
前記抗酸化剤は、スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用、一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかに基づく抗酸化作用を有するものである。
前記抗炎症剤は、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、血小板凝集抑制作用、及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用の少なくともいずれかに基づく抗炎症作用を有するものである。
前記抗老化剤は、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用、及び過酸化水素に対するダメージ抑制作用の少なくともいずれかに基づく抗老化作用を有するものである。
前記育毛剤は、アンドロゲンレセプター拮抗作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかに基づく育毛作用を有するものである。
前記ミリントニア・ホルテンシス（Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎｉａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）、リーア・マクロフィラ（Ｌｅｅａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ）、コダリオカリクス・モトリウス（Ｃｏｄａｒｉｏｃａｌｙｘ ｍｏｔｏｒｉｕｓ）、マルティニア・アンヌア（Ｍａｒｔｙｎｉａ ａｎｎｕａ）、ピットスポルム・ナパウレンセ（Ｐｉｔｔｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｐａｕｌｅｎｓｅ）、ヘスペレトゥサ・クレヌラータ（Ｈｅｓｐｅｒｅｔｈｕｓａ ｃｒｅｎｕｌａｔａ）、プテロスペルムム・ディベルシフォリウム（Ｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍｕｍｕ ｄｉｖｅｒｓｉｆｏｌｉｕｍ）、グレウィア・エリオカルパ（Ｇｒｅｗｉａ ｅｒｉｏｃａｒｐａ）、ツンベルギア・ラウリフォリア（Ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａ ｌａｕｒｉｆｏｌｉａ）、及びプレムナ・インテグリフォリア（Ｐｒｅｍｎａ ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）（本明細書中において、単に「植物」と総称することがある）の各抽出物が含有する、抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、及び育毛作用を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記各植物抽出物がこのような優れた作用を有し、抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤として有用であることは、従来には全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
【００２６】
前記ミリントニア・ホルテンシス（Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎｉａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）は、姉妹樹（シマイジュ）やコルクノウゼンとしても知られるノウゼンカズラ科の植物であり、タイ、中国、インド、スリランカ等に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記ミリントニア・ホルテンシスの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、樹皮、根が好ましい。
前記リーア・マクロフィラ（Ｌｅｅａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ）は、ウドノキ科の植物であり、東南アジア〜アフリカ、中国、インドに分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記リーア・マクロフィラの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が好ましい。
前記コダリオカリクス・モトリウス（Ｃｏｄａｒｉｏｃａｌｙｘ ｍｏｔｏｒｉｕｓ）は、舞萩（マイハギ）としても知られるマメ科の植物であり、東南アジアから中国南部に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記コダリオカリクス・モトリウスの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉、茎が好ましい。
前記マルティニア・アンヌア（Ｍａｒｔｙｎｉａ ａｎｎｕａ）は、マーティニアとしても知られるマーティニア科の植物であり、中央アメリカからカリブ海沿岸地域に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記マルティニア・アンヌアの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉、茎、根が好ましい。
前記ピットスポルム・ナパウレンセ（Ｐｉｔｔｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｐａｕｌｅｎｓｅ）は、トベラ科の植物であり、南、東南アジア等のアジア・太平洋地域からアフリカにかけて分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記ピットスポルム・ナパウレンセの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、樹皮が好ましい。
前記ヘスペレトゥサ・クレヌラータ（Ｈｅｓｐｅｒｅｔｈｕｓａ ｃｒｅｎｕｌａｔａ）は、柑果子としても知られるミカン科の植物であり、北部インド、ミャンマー、中国南部、タイに分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記ヘスペレトゥサ・クレヌラータの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、茎、葉が好ましい。
前記プテロスペルムム・ディベルシフォリウム（Ｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍｕｍｕ ｄｉｖｅｒｓｉｆｏｌｉｕｍ）は、アオギリ科の植物であり、東南アジアに分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記プテロスペルムム・ディベルシフォリウムの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉、茎が好ましい。
前記グレウィア・エリオカルパ（Ｇｒｅｗｉａ ｅｒｉｏｃａｒｐａ）は、大葉捕魚木としても知られるシナノキ科の植物であり、台湾、中国、東南アジア、インドに分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記グレウィア・エリオカルパの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉、樹皮が好ましい。
前記ツンベルギア・ラウリフォリア（Ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａ ｌａｕｒｉｆｏｌｉａ）は、ローレルカズラとしても知られるキツネノマゴ科の植物であり、ミャンマーからマレー半島が原産地であり、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記ツンベルギア・ラウリフォリアの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、樹皮が好ましい。
前記プレムナ・インテグリフォリア（Ｐｒｅｍｎａ ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）は、タイワンウオクサギとしても知られるクマツヅラ科の植物であり、中国南部、東南アジア、インドに分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記プレムナ・インテグリフォリアの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、樹皮が好ましい。
【００２７】
抽出原料である前記各植物は、例えば、乾燥した後に、そのままの状態で又は粗砕機等を用いて粉砕した状態で、溶媒抽出に供することができる。中でも、前記抽出原料としては、採取後ただちに乾燥し、粉砕したものが好ましい。前記乾燥は、例えば、天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記各植物は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、前記各植物の極性溶媒による抽出処理を、効率よく行うことができる。
【００２８】
前記各植物の抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法を利用することによって、容易に得ることができる。また、前記各植物の抽出物としては、市販品を使用してもよい。なお、前記各植物の抽出物には、前記各植物の抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００２９】
前記抽出に用いる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又は、これらの混合溶媒を、室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。前記各植物に含まれる抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、及び育毛作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって、容易に抽出することができる。
【００３０】
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００３１】
前記抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、該親水性有機溶媒と水との混合溶媒なども用いることができる。なお、前記水と前記親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する際には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜４０質量部を混合したものを使用することが好ましい。また、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部を混合したものを使用することが好ましい。
【００３２】
抽出原料である前記各植物から、抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、及び育毛作用を有する抽出物を抽出するにあたって、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、前記各抽出原料を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜４時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物を得ることができる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０〜９５℃にて１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０〜８０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤の有効成分として用いることができる。
【００３３】
抽出により得られる前記各植物の抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。なお、得られる前記各植物の抽出液は、そのままでも抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、常法を利用することができ、また、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、抽出原料である前記各植物は特有の匂いと味を有している場合があり、そのため、前記各植物の抽出物に対しては、生理活性の低下を招かない範囲で、脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、例えば皮膚化粧料に添加する場合などには大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製は、具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００３４】
以上のようにして得られる前記各植物の抽出物は、スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用、一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用、並びに、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、血小板凝集抑制作用、及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用、並びに、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用、及び過酸化水素に対するダメージ抑制作用、並びに、アンドロゲンレセプター拮抗作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有し、これらの作用に基づき、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤の有効成分として好適に利用可能なものである。
なお、前記各植物の抽出物は、前記した各作用に基づき、スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用剤、一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制剤、過酸化水素消去剤、及びラジカル消去剤、並びに、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制剤、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制剤、ヒアルロニダーゼ活性阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤、血小板凝集抑制剤、及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害剤、並びに、エラスターゼ活性阻害剤、ＭＭＰ−１活性阻害剤、皮膚線維芽細胞増殖促進剤、表皮角化細胞増殖促進剤、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用剤、及び過酸化水素に対するダメージ抑制剤、並びに、アンドロゲンレセプター拮抗剤、及び毛乳頭細胞増殖促進剤としても、それぞれ好適に利用可能である。
【００３５】
本発明の抗酸化剤における抗酸化作用は、スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用、一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。これらの中でも、前記抗酸化剤は、ラジカル消去作用を少なくとも有していることが好ましい。
本発明の抗炎症剤における抗炎症作用は、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、血小板凝集抑制作用、及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。これらの中でも、前記抗炎症剤は、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、及びヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を少なくとも有していることが好ましい。
本発明の抗老化剤における抗老化作用は、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用、及び過酸化水素に対するダメージ抑制作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。これらの中でも、前記抗老化剤は、ＭＭＰ−１活性阻害作用を少なくとも有していることが好ましい。
本発明の育毛剤における育毛作用は、アンドロゲンレセプター拮抗作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。これらの中でも、前記育毛剤は、毛乳頭細胞増殖促進作用を少なくとも有していることが好ましい。
【００３６】
前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤中の前記各植物の抽出物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、また、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤は、前記各植物の抽出物そのものであってもよい。
また、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤中、前記各植物の抽出物は、いずれか１種のみが含まれていてもよいし、２種以上が含まれていてもよい。前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤中に２種以上の植物抽出物が含まれる場合の、各々の含有量比としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００３７】
また、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤中に含まれ得る、前記各植物の抽出物以外のその他の成分としても、本発明の効果を損なわない範囲内であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記各植物の抽出物を所望の濃度に希釈等するための、生理食塩液などが挙げられる。また、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤中の前記その他の成分の含有量にも、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
また、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤は、必要に応じて製剤化することにより、粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
【００３８】
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤は、優れた抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、及び育毛作用を有すると共に、安全性に優れるため、例えば、後述する本発明の皮膚外用剤、本発明の飲食品などへの利用に好適である。
【００３９】
（皮膚外用剤）
本発明の皮膚外用剤は、前記した本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
ここで、前記皮膚外用剤とは、皮膚に適用される各種の薬剤を意味し、その区分としては特に制限されるものではなく、例えば、皮膚化粧料、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものである。
前記皮膚外用剤は、前記各植物の抽出物を、その活性を妨げないように任意の皮膚外用剤に配合したものであってもよいし、前記各植物の抽出物を主成分とした皮膚外用剤であってもよい。また、前記皮膚外用剤は、前記各植物の抽出物そのものであってもよい。
【００４０】
前記皮膚外用剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、美容液、ローション、ファンデーション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、石鹸、ボディシャンプー、アストリンゼント、ヘアトニック、ヘアローション、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンスなどが挙げられる。
【００４１】
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、皮膚外用剤を製造するにあたって通常用いられる成分、例えば、収斂剤、殺菌、抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、抗老化剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料などが挙げられる。
【００４２】
前記皮膚外用剤中の、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤の含有量としては、特に制限はなく、皮膚外用剤の種類などに応じて適宜選択することができるが、例えば、前記各植物の抽出物の量として、０．０００１〜１０質量％が好ましく、０．００１〜５質量％がより好ましい。
【００４３】
（飲食品）
本発明の飲食品は、前記した本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
ここで、前記飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。
前記飲食品は、前記各植物の抽出物を、その活性を妨げないように任意の飲食物に配合したものであってもよいし、前記各植物の抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。また、前記飲食品は、前記各植物の抽出物そのものであってもよい。
【００４４】
前記飲食品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；種々の形態の健康食品や栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられる。
【００４５】
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、飲食品を製造するにあたって通常用いられる、補助的原料又は添加物などが挙げられる。
前記補助的原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤などが挙げられる。
【００４６】
前記飲食品中の、前記抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、育毛剤の含有量としては、対象となる飲食品の種類に応じて異なり、一概には規定することができないが、例えば、飲食品本来の味を損なわない範囲で任意の飲食物に配合することを目的とする場合には、有効成分である前記各植物の抽出物の量として、０．００１質量％〜５０質量％が好ましく、０．０１質量％〜２０質量％がより好ましい。また、例えば、前記各植物の抽出物を主成分とする顆粒、錠剤、カプセル形態等の栄養補助飲食品を製造することを目的とする場合には、有効成分である前記各植物の抽出物の量として、０．０１質量％〜１００質量％が好ましく、５質量％〜１００質量％がより好ましい。
【００４７】
（効果）
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤、並びに、皮膚外用剤及び飲食品は、日常的に使用することが可能であり、有効成分である前記各植物の抽出物の働きによって、抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、及び育毛作用を、極めて効果的に発揮させることができるものである。
【００４８】
なお、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤、並びに、皮膚外用剤及び飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、その作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することも可能である。また、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤、並びに、皮膚外用剤及び飲食品は、天然由来の前記各植物の抽出物を有効成分としたものであり、安全性に優れる点でも、有利である。
【実施例】
【００４９】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００５０】
（製造例１）
−各植物の水抽出物の製造−
下記表１に示す各植物の粉砕物に、質量比で１０倍量の水を加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の水を加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、各植物の水抽出物（凍結乾燥品）を得た。
【００５１】
（製造例２）
−各植物の５０質量％エタノール抽出物の製造−
下記表１に示す各植物の粉砕物に、質量比で１０倍量の５０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の５０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、各植物の５０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。
なお、後述する各実施例では、本製造例２で得られた各植物の５０質量％エタノール抽出物を被験試料として用い、試験を行った。得られた各植物の５０質量％エタノール抽出物の「抽出率」、及び得られた各植物の５０質量％エタノール抽出物の「抽出物Ｎｏ．」を、下記表１に示す。
【００５２】
（製造例３）
−各植物の８０質量％エタノール抽出物の製造−
下記表１に示す各植物の粉砕物に、質量比で１０倍量（質量比）の８０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の８０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、各植物の８０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。
【００５３】
【表１】
0005534654.tif 000002
【００５４】
（実施例１：スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用を試験した。
【００５５】
試験管に０．０５ｍｏｌ／Ｌの炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ１０．２）２．４ｍＬ、２ｍｍｏｌ／Ｌのキサンチン０．１ｍＬ、３ｍｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡを０．１ｍＬ、５０μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）０．１ｍＬ、及び０．７５ｍｍｏｌ／Ｌのニトロブルーテトラゾリウム０．１ｍＬを加えた。これに各被験試料溶液０．１ｍＬを添加し、２５℃で１０分間放置した。
次に、キサンチンオキシダーゼ溶液０．１ｍＬを加え、素早く攪拌し、２５℃で２０分間反応した。その後、６ｍｍｏｌ／Ｌの塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させ、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
ＳＯＤ様作用（スーパーオキサイド消去率（％））の計算方法は以下のとおりである。
スーパーオキサイド消去率（％）＝｛１−（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）｝×１００
Ｓｔ：被験試料溶液の波長５６０ｎｍにおける吸光度
Ｓｂ：被験試料溶液ブランクの波長５６０ｎｍにおける吸光度
Ｃｔ：コントロール溶液の波長５６０ｎｍにおける吸光度
Ｃｂ：コントロール溶液ブランクの波長５６０ｎｍにおける吸光度
【００５６】
結果を表２に示す。なお、抽出物Ｎｏ．１−２、４−１、４−２、５、６−１、６−２、７−２は試料濃度１００μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．１−１、２、７−１、８−１、８−２、９、１０は試料濃度２５μｇ／ｍＬで使用した。
【００５７】
【表２】
0005534654.tif 000003
【００５８】
（実施例２：一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用を試験した。
【００５９】
透明サンプル瓶（ガラス製）１０ｍＬに２質量％の赤血球懸濁液５ｍＬ、ＰＢＳ（−）５ｍＬ、又は各被験試料溶液を含むＰＢＳ（−）５ｍＬ、及び１０ｍｍｏｌ／Ｌのヘマトポルフィリン−２０ｍｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム溶液０．０１ｍＬを加え、よく混和した。この反応溶液をメリーゴーランド上で、１５Ｗハロゲンランプで３５分間均一に光を照射して１Ｏ２を発生させ、赤血球を溶血させた。
反応終了後、反応溶液１ｍＬを採取し、ＰＢＳ（−）２ｍＬを加え、よく混和した。遠心分離（１６６０×ｇ、５分、４℃）した後、上清の波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。対照として反応溶液１ｍＬに精製水２ｍＬを加え、完全に赤血球を溶血させた混合液を作製した。この混合液の波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用の計算方法は以下のとおりである。
膜脂質の過酸化抑制率（％）＝（１−Ｂ／Ａ）×１００
Ａ：完全溶血液の波長５４０ｎｍにおける吸光度
Ｂ：反応溶液の上清の波長５４０ｎｍにおける吸光度
【００６０】
結果を表３に示す。なお、抽出物Ｎｏ．１−１、１−２、２、４−２、６−１、７−１，９、１０は試料濃度２００μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．４−１は試料濃度１００μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．７−２、８−２は試料濃度５０μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．８−１は試料濃度２５μｇ／ｍＬで使用した。
【００６１】
【表３】
0005534654.tif 000004
【００６２】
（実施例３：過酸化水素消去作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により過酸化水素消去作用を試験した。
【００６３】
１．５ｍｍｏｌ／Ｌの過酸化水素溶液１０μＬに、各被験試料溶液１０μＬを加え、３７℃で２０分間反応した後、発色溶液〔１００μｍｏｌ／ＬのＤＡ−６４、０．５質量％のトライトンＸ−１００含有０．１ｍｏｌ／ＬのＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）１００ｍＬに１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬのペルオキシダーゼ１ｍＬを添加〕２．９８ｍＬを添加し、３７℃で５分間反応した。反応終了後、波長７２７ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
過酸化水素消去作用の計算方法は以下のとおりである。
過酸化水素消去率（％）＝｛１−（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）｝×１００
Ｓｔ：被験試料溶液の波長７２７ｎｍにおける吸光度
Ｓｂ：被験試料溶液ブランクの波長７２７ｎｍにおける吸光度
Ｃｔ：コントロール溶液の波長７２７ｎｍにおける吸光度
Ｃｂ：コントロール溶液ブランクの波長７２７ｎｍにおける吸光度
【００６４】
結果を表４に示す。なお、抽出物Ｎｏ．１−１、１−２、２、３、４−１は試料濃度１００μｇ／ｍＬで使用した。
【００６５】
【表４】
0005534654.tif 000005
【００６６】
（実施例４：ラジカル消去作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験法により非常に安定なラジカルである１，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ  ｒａｄｉｃａｌ（ＤＰＰＨ）を使用してラジカル消去作用を試験した。
【００６７】
１５０μｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨエタノール溶液３ｍＬに各被験試料溶液３ｍＬを加え、直ちに容器を密栓して振り混ぜ、３０分間静置した後、波長５２０ｎｍの吸光を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
ＤＰＰＨラジカル消去作用の計算方法は以下のとおりである。
ＤＰＰＨラジカル消去率（％）＝｛Ｃ−（Ｓｔ−Ｓｂ）｝／Ｃ×１００
Ｓｔ：被験試料溶液の波長５２０ｎｍにおける吸光度
Ｓｂ：被験試料溶液ブランクの波長５２０ｎｍにおける吸光度
Ｃ：コントロール溶液の波長５２０ｎｍにおける吸光度
【００６８】
結果を表５に示す。なお、抽出物Ｎｏ．１−１、１−２、２、３、４−１、４−２、５、６−１、６−２は試料濃度２００μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．７−１、７−２、８−１、８−２、９、１０は試料濃度５０μｇ／ｍＬで使用した。
【００６９】
【表５】
0005534654.tif 000006
【００７０】
実施例１〜４の結果から、ミリントニア・ホルテンシス（Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎｉａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）の抽出物、リーア・マクロフィラ（Ｌｅｅａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ）の抽出物、コダリオカリクス・モトリウス（Ｃｏｄａｒｉｏｃａｌｙｘ ｍｏｔｏｒｉｕｓ）の抽出物、マルティニア・アンヌア（Ｍａｒｔｙｎｉａ ａｎｎｕａ）の抽出物、ピットスポルム・ナパウレンセ（Ｐｉｔｔｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｐａｕｌｅｎｓｅ）の抽出物、ヘスペレトゥサ・クレヌラータ（Ｈｅｓｐｅｒｅｔｈｕｓａ ｃｒｅｎｕｌａｔａ）の抽出物、プテロスペルムム・ディベルシフォリウム（Ｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍｕｍｕ ｄｉｖｅｒｓｉｆｏｌｉｕｍ）の抽出物、グレウィア・エリオカルパ（Ｇｒｅｗｉａ ｅｒｉｏｃａｒｐａ）の抽出物、ツンベルギア・ラウリフォリア（Ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａ ｌａｕｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物、及びプレムナ・インテグリフォリア（Ｐｒｅｍｎａ ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物は、スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）様作用、一重項酸素による膜脂質の過酸化抑制作用、過酸化水素消去作用、及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有することが確認され、これらの各植物抽出物が、抗酸化剤の有効成分として、好適に利用可能であることが示唆された。
【００７１】
（実施例５：一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を試験した。
【００７２】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を、１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を３．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるように１０％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、終濃度２質量％のＤＭＳＯを含む１０質量％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで溶解した被験試料溶液を各穴に１００μＬ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ．ｃｏｌｉ  ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社製）を１００μＬ加え、４８時間培養した。ＮＯ産生量は亜硝酸イオン（ＮＯ２−）量を指標に測定した。培養終了後、各穴の培養液に、同量のグリス試薬（１質量％のスルファニルアミド、０．１質量％のＮ−１−ｎａｐｈｔｈｙｌ  ｅｔｈｙｌｅｎｄｉａｍｉｎｅ  ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｐｒｉｄｅ  ｉｎ  ５質量％のリン酸溶液）を添加し、１０分間室温にて反応した。反応後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。
ＮＯ産生抑制作用の計算方法は以下のとおりである。
ＮＯ産生抑制率（％）＝{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}×１００
Ａ：被験試料添加、ＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
Ｂ：被験試料添加、ＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
Ｃ：コントロールのＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
Ｄ：コントロールのＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度
【００７３】
結果を表６に示す。なお、抽出物Ｎｏ．１−１、１−２、２、３，４−１、４−２、５、７−１、８−１、９、１０は試料濃度２００μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．６−１、７−２、８−２は試料濃度５０μｇ／ｍＬで使用した。
【００７４】
【表６】
0005534654.tif 000007
【００７５】
（実施例６：腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用を試験した。
【００７６】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、終濃度２％ＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに１００μＬ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ．ｃｏｌｉ  ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社）を１００μＬ加え、２４時間培養した。培養終了後、各ｗｅｌｌの培養上清中のＴＮＦ−α量をサンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。
ＴＮＦ−α産生抑制作用の計算方法は以下のとおりである。
ＴＮＦ−α産生抑制率（％）＝｛（Ｂ−Ａ）／Ｂ｝×１００
Ａ：被験試料添加時のＴＮＦ−α量
Ｂ：被験試料無添加時のＴＮＦ−α量
【００７７】
結果を表７に示す。なお、抽出物Ｎｏ．１−１、２、４−１、４−２、５、６−１、６−２、７−１、７−２、８−１、９、１０は試料濃度１２．５μｇ／ｍＬで使用した。
【００７８】
【表７】
0005534654.tif 000008
【００７９】
（実施例７：ヒアルロニダーゼ活性阻害作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりヒアルロニダーゼ活性阻害作用を試験した。
【００８０】
被験試料を溶解した０．１ｍｏｌ／Ｌ  酢酸緩衝液（ｐＨ３．５）０．２ｍＬに、ヒアルロニダーゼ溶液（ＴｙｐｅＩＶ−Ｓ（ｆｒｏｍ  ｂｏｖｉｎｅ  ｔｅｓｔｉｓ；ＳＩＧＭＡ  ４００  ＮＦ  ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）０．１ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応した。さらに、活性化剤として２．５ｍｍｏｌ／Ｌ  塩化カルシウム０．２ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応した。これに０．４ｍｇ／ｍＬ  ヒアルロン酸カリウム溶液（ｆｒｏｍ  ｒｏｂｓｔｅｒ  ｃｏｍｂ）０．５ｍＬを加え、３７℃で４０分間反応した。その後、０．４ｍｏｌ／Ｌ  水酸化ナトリウム０．２ｍＬを加えて反応を止め冷却した後、各反応溶液にホウ酸溶液０．２ｍＬを加え、３分間煮沸した。氷冷後、ｐ−ＤＡＢＡ試薬６ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応した。その後、波長５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
ヒアルロニダーゼ活性阻害作用の計算方法は以下のとおりである。
ヒアルロニダーゼ活性阻害率（％）＝｛１−（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）｝×１００
Ｓｔ：被験試料溶液の波長５８５ｎｍにおける吸光度
Ｓｂ：被験試料溶液ブランクの波長５８５ｎｍにおける吸光度
Ｃｔ：コントロール溶液の波長５８５ｎｍにおける吸光度
Ｃｂ：コントロール溶液ブランクの波長５８５ｎｍにおける吸光度
【００８１】
結果を表８に示す。なお、抽出物Ｎｏ．５、７−１、７−２、８−１、８−２、９、１０は試料濃度４００μｇ／ｍＬで使用した。
【００８２】
【表８】
0005534654.tif 000009
【００８３】
（実施例８：ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を試験した。
【００８４】
ラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）を１５％ＦＢＳ添加Ｓ−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を４．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に培地で希釈し、ＤＮＰ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＩｇＥが終濃度０．５μｇ／ｍＬとなるよう添加した後、９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、Ｓｉｒａｇａｎｉａｎ緩衝液５００μＬにて洗浄を２回行った。次に、同緩衝液３０μＬ、及び、同緩衝液にて調製した被験試料１０μＬを加え、３７℃にて１０分静置した。その後１００ｎｇ／ｍＬ  ＤＮＰ−ＢＳＡ溶液１０μＬを加え、３７℃にて１５分静置し、ヘキソサミニダーゼを遊離させた。その後、９６ｗｅｌｌプレートを氷上に静置することにより遊離を停止した。各ｗｅｌｌの細胞上清１０μＬ及び１ｍｍｏｌ／Ｌ  ｐ−ＮＡＧ（ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  Ｎ−ａｃｅｔｙｌ  β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄｅ）溶液１０μＬを、新たな９６ｗｅｌｌプレートに添加し、３７℃、１時間反応させた。反応終了後、各ｗｅｌｌに０．１ｍｏｌ／Ｌ  Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３  ２５０μＬを加え、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。また、空試験として、細胞上清１０μＬ及び０．１ｍｏｌ／Ｌ  Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３  ２５０μＬ混合液の波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定し、補正した。
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用の計算方法は以下のとおりである。
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝｛１−（Ｂ−Ｃ）／Ａ｝×１００
Ａ：被験試料無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度
Ｂ：被験試料添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度
Ｃ：被験試料添加，ｐ−ＮＡＧ無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度
【００８５】
結果を表９に示す。なお、抽出物Ｎｏ．１−１、１−２、２、３，４−１、４−２、５、６−１、６−２、７−１、７−２、８−１、８−２、９、１０は試料濃度４００μｇ／ｍＬで使用した。
【００８６】
【表９】
0005534654.tif 000010
【００８７】
（実施例９：血小板凝集抑制作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により血小板凝集抑制作用を試験した。
【００８８】
まず、ヘパリンナトリウム注射液（日本薬局方）を１／１０量加えて採血したウサギの血液を遠心分離（１８０×ｇ、１０分、室温）して、血小板浮遊液（Ｐｌａｔｅｌｅｔ  Ｒｉｃｈ  Ｐｌａｓｍａ；Ｐ．Ｒ．Ｐ．）を得た。
次に、血小板浮遊液（Ｐ．Ｒ．Ｐ．）２２３μＬに２００ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム溶液１μＬを加え、３７℃で１分間反応した。これに被験試料溶液１μＬを加え、更に２分間反応し、撹拌子を入れて１分間撹拌した後、コラーゲン溶液を２５μＬ添加して、３７℃で１０分間の血小板凝集率を測定した。別に、コントロールとして被験試料溶液の代わりに被験試料溶液の溶媒を添加した以外は、上記と同様に操作して血小板凝集率を測定した。
血小板凝集抑制作用の計算方法は以下のとおりである。
血小板凝集抑制率（％）＝〔（Ａ−Ｂ）／Ａ〕×１００
Ａ：コントロールの血小板凝集率
Ｂ：被験試料溶液添加時の血小板凝集率
【００８９】
結果を表１０に示す。なお、抽出物Ｎｏ．１−１、１−２、２、５、６−１，７−１、７−２、８−１、８−２、９は試料濃度４００μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．３は試料濃度２００μｇ／ｍＬで使用した。
【００９０】
【表１０】
0005534654.tif 000011
【００９１】
（実施例１０：シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用を試験した。
【００９２】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、１８時間培養した。培養終了後、既に存在するＣＯＸ−１及び少量発現しているＣＯＸ−２をアセチル化し失活させるため、培地を５００μｍｏｌ／Ｌ  アスピリン含有培地に交換し４時間培養した。細胞をＰＢＳ（−）で３回洗浄し、終濃度０．５％ＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに１００μＬ添加した後、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ．ｃｏｌｉ  ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社）を１００μＬ添加し、１６時間培養した。培養終了後、各ｗｅｌｌの培養上清中のプロスタグランジンＥ２量をＰＧＥ２  ＥＩＡ  Ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）を用いて定量した。
ＣＯＸ−２活性阻害作用の計算方法は以下のとおりである。
ＣＯＸ−２活性阻害率（％）＝｛１−（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｃ）｝×１００
Ａ：被験試料添加・ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量
Ｂ：被験試料無添加・ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量
Ｃ：被験試料無添加・ＬＰＳ無刺激時のプロスタグランジンＥ２量
【００９３】
結果を表１１に示す。なお、抽出物Ｎｏ．２、４−１は試料濃度２００μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．４−２は試料濃度５０μｇ／ｍＬで使用した。
【００９４】
【表１１】
0005534654.tif 000012
【００９５】
実施例５〜１０の結果から、ミリントニア・ホルテンシス（Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎｉａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）の抽出物、リーア・マクロフィラ（Ｌｅｅａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ）の抽出物、コダリオカリクス・モトリウス（Ｃｏｄａｒｉｏｃａｌｙｘ ｍｏｔｏｒｉｕｓ）の抽出物、マルティニア・アンヌア（Ｍａｒｔｙｎｉａ ａｎｎｕａ）の抽出物、ピットスポルム・ナパウレンセ（Ｐｉｔｔｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｐａｕｌｅｎｓｅ）の抽出物、ヘスペレトゥサ・クレヌラータ（Ｈｅｓｐｅｒｅｔｈｕｓａ ｃｒｅｎｕｌａｔａ）の抽出物、プテロスペルムム・ディベルシフォリウム（Ｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍｕｍｕ ｄｉｖｅｒｓｉｆｏｌｉｕｍ）の抽出物、グレウィア・エリオカルパ（Ｇｒｅｗｉａ ｅｒｉｏｃａｒｐａ）の抽出物、ツンベルギア・ラウリフォリア（Ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａ ｌａｕｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物、及びプレムナ・インテグリフォリア（Ｐｒｅｍｎａ ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物は、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、血小板凝集抑制作用、及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用の少なくともいずれかを有することが確認され、これらの各植物抽出物が、抗炎症剤の有効成分として、好適に利用可能であることが示唆された。
【００９６】
（実施例１１：エラスターゼ活性阻害作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりエラスターゼ活性阻害作用を試験した。
【００９７】
９６ｗｅｌｌプレートにて、０．２ｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ緩衝液（ｐＨ８．０）で調製した被験試料５０μＬ及び２０μｇ／ｍＬ  エラスターゼ・タイプIII溶液５０μＬを混合した。その後、上記緩衝液にて調製した０．４５１４ｍｇ／ｍＬ  Ｎ−ＳＵＣＣＩＮＹＬ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ｐ−ＮＩＴＲＯＡＮＩＬＩＤＥ  １００μＬを添加して、２５℃にて１５分反応させた。反応終了後、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
エラスターゼ活性阻害作用の計算方法は以下のとおりである。
エラスターゼ活性阻害率（％）＝｛１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）｝×１００
Ａ：被験試料無添加、酵素添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度
Ｂ：被験試料無添加、酵素無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度
Ｃ：被験試料添加、酵素添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度
Ｄ：被験試料添加、酵素無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度
【００９８】
結果を表１２に示す。なお、抽出物Ｎｏ．２、４−２、７−１、７−２、８−１は試料濃度４００μｇ／ｍＬで使用した。
【００９９】
【表１２】
0005534654.tif 000013
【０１００】
（実施例１２：ＭＭＰ−１活性阻害作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりＭＭＰ−１活性阻害作用を試験した。
【０１０１】
試験方法としては、Ｗｕｎｓｃｈ  ａｎｄ  Ｈｅｉｄｒｉｃｈ法を一部改変した方法を使用した。即ち、蓋付試験管にて、２０ｍｍｏｌ／ｍＬ  塩化カルシウム含有０．１ｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１）に溶解した被験試料５０μＬ、ＭＭＰ−１（ＣＯＬＬＡＧＥＮＡＳＥ  Ｔｙｐｅ  ＩＶ  ｆｒｏｍ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ（Ｓｉｇｍａ社））溶液５０μＬ、及びＰｚ−ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｐｚ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＨ（ＢＡＣＨＥＭ  Ｆｅｉｎｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ  ＡＧ社））溶液４００μＬを混合し、３７℃にて３０分反応させた後、２５ｍｍｏｌ／Ｌ  クエン酸溶液１ｍＬを加え反応を停止した。その後、酢酸エチル５ｍＬを加え、激しく振とうした。これを遠心（１６００×ｇ、１０分）し、酢酸エチル層の波長３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
ＭＭＰ−１活性阻害作用の計算方法は以下のとおりである。
ＭＭＰ−１活性阻害率（％）＝｛１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）｝×１００
Ａ：被験試料無添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度
Ｂ：被験試料無添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度
Ｃ：被験試料添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度
Ｄ：被験試料添加、酵素無添加での３２０ｎｍにおける吸光度
【０１０２】
結果を表１３に示す。なお、抽出物Ｎｏ．１−１、１−２、２、３、４−１、４−２、５、６−１、６−２、７−１、７−２、８−１、８−２、９、１０は試料濃度４００μｇ／ｍＬで使用した。
【０１０３】
【表１３】
0005534654.tif 000014
【０１０４】
（実施例１３：皮膚線維芽細胞増殖促進作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により皮膚線維芽細胞増殖促進作用を試験した。
【０１０５】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を７．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで希釈した後、９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに１００μＬ添加し、３日間培養した。皮膚線維芽細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、各ｗｅｌｌから１００μＬずつ培地を抜き、終濃度５ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴを各ｗｅｌｌに２０μＬずつ添加した。４．５時間培養した後に、１０％ＳＤＳを溶解した０．０１ｍｏｌ／Ｌ  塩酸溶液を各ｗｅｌｌに１００μＬずつ添加し、一晩培養した後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
皮膚線維芽細胞増殖促進作用の計算方法は以下のとおりである。
皮膚線維芽細胞増殖促進率（％）＝（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）×１００
Ｓｔ：被験試料を添加した細胞での吸光度
Ｓｂ：被験試料を添加した空試験の吸光度
Ｃｔ：被験試料を添加しない細胞での吸光度
Ｃｂ：被験試料を添加しない空試験の吸光度
【０１０６】
結果を表１４に示す。なお、抽出物Ｎｏ．２、４−１、４−２、９、１０は試料濃度４００μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．３は試料濃度２００μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．５、７−１は試料濃度１００μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．７−２、８−１、８−２は試料濃度５０μｇ／ｍＬで使用した。
【０１０７】
【表１４】
0005534654.tif 000015
【０１０８】
（実施例１４：表皮角化細胞増殖促進作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により表皮角化細胞増殖促進作用を試験した。
【０１０９】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度にＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、コラーゲンコートした９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに１００μＬ添加し、３日間培養した。表皮角化細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴを各ｗｅｌｌに１００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。
表皮角化細胞増殖促進作用の計算方法は以下のとおりである。
表皮角化細胞増殖促進率（％）＝Ｓｔ／Ｃｔ×１００
Ｓｔ：被験試料を添加した細胞での吸光度
Ｃｔ：被験試料を添加しない細胞での吸光度
【０１１０】
結果を表１５に示す。なお、抽出物Ｎｏ．１−１は試料濃度１２．５μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．１−２は試料濃度３．１２５μｇ／ｍＬで使用した。
【０１１１】
【表１５】
0005534654.tif 000016
【０１１２】
（実施例１５：ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりＵＶ−Ｂダメージからの回復作用を試験した。
【０１１３】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞をα−ＭＥＭを用いて２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、４８ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌあたり２００μＬずつ播種した。２４時間培養後、培地を１００μＬのＰＢＳ（−）へ交換し、１．０Ｊ／ｃｍ２のＵＶ−Ｂを照射した。照射後、直ちに、ＰＢＳ（−）を抜き、１０％ＦＢＳ含有Ｄ−ＭＥＭに溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに４００μＬ添加し、２４時間培養した。紫外線ＵＶ−Ｂダメージからの回復効果は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで溶解したＭＴＴを各ｗｅｌｌに２００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様に細胞播種した後、ＵＶ−Ｂを照射しない細胞、及び細胞播種後ＵＶ−Ｂを照射し被験試料を添加しない細胞についても同様に測定し、それぞれ非照射群と照射群とした。
ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用の計算方法は以下のとおりである。
ＵＶ−Ｂダメージ回復率（％）＝｛（Ｎｔ−Ｃ）−（Ｎｔ−Ｓａ）｝／（Ｎｔ−Ｃ）×１００
Ｎｔ：ＵＶ−Ｂを照射しない細胞での吸光度
Ｃ：ＵＶ−Ｂを照射し被験試料を添加しない細胞での吸光度
Ｓａ：ＵＶ−Ｂを照射し被験試料を添加した細胞での吸光度
【０１１４】
結果を表１６に示す。なお、抽出物Ｎｏ．１−１、２、３、４−１、４−２、５、７−１、７−２、８−１、８−２、９、１０は試料濃度１００μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．６−２は試料濃度６．２５μｇ／ｍＬで使用した。
【０１１５】
【表１６】
0005534654.tif 000017
【０１１６】
（実施例１６：過酸化水素に対するダメージ抑制作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により過酸化水素に対するダメージ抑制作用を試験した。
【０１１７】
ヒト正常新生児皮膚繊維芽細胞（ＮＢＩＲＧＢ）をα−ＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ  ＢＬＲ社製品，ｐＨ７．２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるようにα−ＭＥＭ培地を用いて希釈した後、４８穴プレートに播種し１穴当たり２００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、１％  ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで溶解した被験試料を各穴に２００μＬ添加し、２４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、４００μＬのＰＢＳ（−）で洗浄した。洗浄後、ハンクス緩衝液に溶解した過酸化水素（１ｍｍｏｌ／Ｌ）、あるいは、ハンクス緩衝液のみを各穴に２００μＬ添加し、２時間培養した。培養後、４００μＬのＰＢＳ（−）で洗浄し、終濃度０．０５  ｍｇ／ｍＬで１％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭに溶解したニュートラルレッドを各穴に２００μＬ添加した。２．５時間培養した後、ニュートラルレッド溶液を捨て、エタノール・酢酸溶液（エタノール：酢酸：水＝５０：１：４９）を各穴に２００μＬ添加し、色素を抽出した。抽出後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。
過酸化水素に対するダメージ抑制作用の計算方法は以下のとおりである。
過酸化水素ダメージ抑制率（％）＝｛１−（Ｃ−Ａ）／（Ｃ−Ｂ）｝×１００
Ａ：過酸化水素処理・被験試料処理の吸光度、
Ｂ：過酸化水素処理・被験試料無処理の吸光度、
Ｃ：過酸化水素無処理・被験試料無処理の吸光度
【０１１８】
結果を表１７に示す。なお、抽出物Ｎｏ．２、４−１、７−１、７−２，８−１、８−２、９は試料濃度４００μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．４−２、５、６−２は試料濃度１００μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．６−１は試料濃度２５μｇ／ｍＬで使用した。
【０１１９】
【表１７】
0005534654.tif 000018
【０１２０】
実施例１１〜１６の結果から、ミリントニア・ホルテンシス（Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎｉａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）の抽出物、リーア・マクロフィラ（Ｌｅｅａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ）の抽出物、コダリオカリクス・モトリウス（Ｃｏｄａｒｉｏｃａｌｙｘ ｍｏｔｏｒｉｕｓ）の抽出物、マルティニア・アンヌア（Ｍａｒｔｙｎｉａ ａｎｎｕａ）の抽出物、ピットスポルム・ナパウレンセ（Ｐｉｔｔｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｐａｕｌｅｎｓｅ）の抽出物、ヘスペレトゥサ・クレヌラータ（Ｈｅｓｐｅｒｅｔｈｕｓａ ｃｒｅｎｕｌａｔａ）の抽出物、プテロスペルムム・ディベルシフォリウム（Ｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍｕｍｕ ｄｉｖｅｒｓｉｆｏｌｉｕｍ）の抽出物、グレウィア・エリオカルパ（Ｇｒｅｗｉａ ｅｒｉｏｃａｒｐａ）の抽出物、ツンベルギア・ラウリフォリア（Ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａ ｌａｕｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物、及びプレムナ・インテグリフォリア（Ｐｒｅｍｎａ ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物は、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＵＶ−Ｂダメージからの回復作用、及び過酸化水素に対するダメージ抑制作用の少なくともいずれかを有することが確認され、これらの各植物抽出物が、抗老化剤の有効成分として、好適に利用可能であることが示唆された。
【０１２１】
（実施例１７：アンドロゲンレセプター拮抗作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法によりアンドロゲンレセプター拮抗作用を試験した。
【０１２２】
まず、マウス自然発生乳がん（シオノギ癌、ＳＣ１１５）よりクローニングされたＳＣ−３細胞を２％のＤＣＣ−ＦＢＳ、及び１０−８ｍｏｌ／Ｌのテストステロン含有ＭＥＭ（ＭＥＭ／２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に活性炭処理ＦＢＳ含有ＭＥＭ（ＭＥＭ／２）で希釈し、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、１０−９ｍｏｌ／Ｌのジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）を含む０．５質量％のＢＳＡ含有Ｈａｍ  Ｆ１２＋ＭＥＭ（ＨＭＢ）に溶解した被験試料溶液を１００μＬ添加し、４８時間培養した。その後、終濃度０．４ｇ／ｍＬで活性炭処理ＦＢＳ含有ＭＥＭ／２に溶解したＭＴＴを各穴に１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。空試験として、ＨＭＢのみで培養した細胞を、陽性対照として１０−９ｍｏｌ／ＬのＤＨＴのみを含有したＨＭＢで培養した細胞を用い、同様の方法で試験を行って補正した。
アンドロゲンレセプター拮抗作用の計算方法は以下のとおりである。
アンドロゲンレセプター拮抗率（％）＝［１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）］×１００
Ａ：ＤＨＴ添加、試料溶液無添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度
Ｂ：ＤＨＴ無添加、試料溶液無添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度
Ｃ：ＤＨＴ添加、試料溶液添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度
Ｄ：ＤＨＴ無添加、試料溶液添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度
【０１２３】
結果を表１８に示す。なお、抽出物Ｎｏ．１−１、１−２、２、３、４−１、４−２、５、６−２、７−１、８−１、９、１０は試料濃度５０μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．６−１、７−２は試料濃度１２．５μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．８−２は試料濃度３．１３μｇ／ｍＬで使用した。
【０１２４】
【表１８】
0005534654.tif 000019
【０１２５】
（実施例１８：毛乳頭細胞増殖促進作用試験）
前記各植物抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により毛乳頭細胞増殖促進作用を試験した。
【０１２６】
正常ヒト毛乳頭細胞（ＴＯＹＯＢＯ社製、ＣＡ６０２０５）を含有した毛乳頭細胞増殖培地（ＴＯＹＯＢＯ社製、ＴＰＧＭ−２５０）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコＭＥＭ（ＤＭＥＭ）を用いて２．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、コラーゲンコートした９６穴マイクロプレートに１穴当り１００μＬ播種し、３日間培養した。培養後、培地を抜き、無血清ダルベッコＭＥＭ（ＤＭＥＭ）に溶解した各被験試料溶液を各穴に２００μＬ添加し、更に４日間培養した。毛乳頭細胞増殖促進作用はＭＴＴアッセイを用いて測定した。具体的には、培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで無血清のＤＭＥＭに溶解したＭＴＴ〔３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  Ｂｒｏｍｉｄｅ〕を各穴に１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
毛乳頭細胞増殖促進作用の計算方法は以下のとおりである。
毛乳頭細胞増殖促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
Ａ：被験試料溶液添加時の吸光度
Ｂ：被験試料溶液無添加時の吸光度
【０１２７】
結果を表１９に示す。なお、抽出物Ｎｏ．１−１、２、４−１、４−２、５、６−２、７−１、７−２、８−１、８−２、９、１０は試料濃度２５μｇ／ｍＬで使用した。抽出物Ｎｏ．３、６−１は試料濃度６．２５μｇ／ｍＬで使用した。
【０１２８】
【表１９】
0005534654.tif 000020
【０１２９】
実施例１７〜１８の結果から、ミリントニア・ホルテンシス（Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎｉａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）の抽出物、リーア・マクロフィラ（Ｌｅｅａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ）の抽出物、コダリオカリクス・モトリウス（Ｃｏｄａｒｉｏｃａｌｙｘ ｍｏｔｏｒｉｕｓ）の抽出物、マルティニア・アンヌア（Ｍａｒｔｙｎｉａ ａｎｎｕａ）の抽出物、ピットスポルム・ナパウレンセ（Ｐｉｔｔｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｐａｕｌｅｎｓｅ）の抽出物、ヘスペレトゥサ・クレヌラータ（Ｈｅｓｐｅｒｅｔｈｕｓａ ｃｒｅｎｕｌａｔａ）の抽出物、プテロスペルムム・ディベルシフォリウム（Ｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍｕｍｕ ｄｉｖｅｒｓｉｆｏｌｉｕｍ）の抽出物、グレウィア・エリオカルパ（Ｇｒｅｗｉａ ｅｒｉｏｃａｒｐａ）の抽出物、ツンベルギア・ラウリフォリア（Ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａ ｌａｕｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物、及びプレムナ・インテグリフォリア（Ｐｒｅｍｎａ ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）の抽出物は、アンドロゲンレセプター拮抗作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有することが確認され、これらの各植物抽出物が、育毛剤の有効成分として、好適に利用可能であることが示唆された。
【０１３０】
（配合例１）
−乳液−
下記組成に従い、乳液を常法により製造した。
・ミリントニア・ホルテンシス（Ｍｉｌｌｉｎｇｔｏｎｉａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ  Ｌ．ｆ．）の樹皮の５０質量％エタノール抽出物（抽出物Ｎｏ．１−１）・・・０．１０ｇ
・ホホバオイル・・・４．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．５０ｇ
・オリーブオイル・・・２．００ｇ
・スクワラン・・・２．００ｇ
・セタノール・・・２．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・黄杞エキス・・・０．１０ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１０ｇ
・イチョウ葉エキス・・・０．１０ｇ
・コンキオリン・・・０．１０ｇ
・オウバクエキス・・・０．１０ｇ
・カツミレエキス・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計１００．００ｇ）
【０１３１】
（配合例２）
−化粧水−
下記組成に従い、化粧水を常法により製造した。
・リーア・マクロフィラ（Ｌｅｅａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ  Ｒｏｘｂ．）の葉の５０質量％エタノール抽出物（抽出物Ｎｏ．２）・・・０．１０ｇ
・グリセリン・・・３．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・クエン酸・・・０．１０ｇ
・クエン酸ソーダ・・・０．１０ｇ
・油溶性甘草エキス・・・０．１０ｇ
・海藻エキス・・・０．１０ｇ
・クジンエキス・・・０．１０ｇ
・キシロビオースミクスチャー・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【０１３２】
（配合例３）
−クリーム−
下記組成に従い、クリームを常法により製造した。
・コダリオカリクス・モトリウス（Ｃｏｄａｒｉｏｃａｌｙｘ ｍｏｔｏｒｉｕｓ（Ｈｏｕｔ．）Ｈ．Ｏｈａｓｈｉ）の葉と茎の５０質量％エタノール抽出物（抽出物Ｎｏ．３）・・・０．１０ｇ
・スクワラン・・・１０．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・６．００ｇ
・流動パラフィン・・・５．００ｇ
・サラシミツロウ・・・４．００ｇ
・セタノール・・・３．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・３．００ｇ
・ラノリン・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．５０ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・１．５０ｇ
・ステアリン酸・・・１．００ｇ
・酵母抽出液・・・０．１０ｇ
・シソ抽出液・・・０．１０ｇ
・シナノキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ジユ抽出液・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．１０ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【０１３３】
（配合例４）
−パック−
下記組成に従い、パックを常法により製造した。
・マルティニア・アンヌア（Ｍａｒｔｙｎｉａ ａｎｎｕａ  Ｌ．）の葉と茎の５０質量％エタノール抽出物（抽出物Ｎｏ．４−１）・・・０．２０ｇ
・ポリビニルアルコール・・・１５．００ｇ
・エタノール・・・１０．００ｇ
・プロピレングリコール・・・７．００ｇ
・ポリエチレングリコール・・・３．００ｇ
・セージ抽出液・・・０．１０ｇ
・トウキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ニンジン抽出液・・・０．１０ｇ
・パラオキシ安息香酸エチル・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【０１３４】
（配合例５）
−ヘアトニック−
下記組成に従い、ヘアトニックを常法により製造した。
・塩酸ピリドキシン・・・０．１ｇ
・レゾルシン・・・０．０１ｇ
・Ｄ−パントテニルアルコール・・・０．１ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１ｇ
・ｌ−メントール・・・０．０５ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・４．０ｇ
・ニンジンエキス・・・０．５ｇ
・エタノール・・・２５．０ｇ
・プテロスペルムム・ディベルシフォリウム（Ｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍｕｍｕ ｄｉｖｅｒｓｉｆｏｌｉｕｍ  Ｂｌ．）の葉の５０質量％エタノール抽出物（抽出物Ｎｏ．７−１）・・・０．２ｇ
・香料・・・適量
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【０１３５】
（配合例６）
−シャンプー−
下記組成に従い、シャンプーを常法により製造した。
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム・・・３０．０ｇ
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸アンモニウム・・・２０．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン・・・６．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸モジエタノールアミド・・・４．０ｇ
・ジステアリン酸エチレングリコール・・・２．０ｇ
・防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）・・・０．１５ｇ
・グレウィア・エリオカルパ（Ｇｒｅｗｉａ ｅｒｉｏｃａｒｐａ  Ｊｕｓｓ．）の葉の５０質量％エタノール抽出物（抽出物Ｎｏ．８−１）・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・０．０１ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【０１３６】
（配合例７）
−リンス−
下記組成に従い、リンスを常法により製造した。
・塩化ステアリルトリメチルアンモニウム・・・１．５ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル・・・１．０ｇ
・セチルアルコール・・・２．０ｇ
・オクチルドデカノール・・・１．０ｇ
・カチオン化セルロース・・・０．５ｇ
・プロピレングリコール・・・５．０ｇ
・ツンベルギア・ラウリフォリア（Ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａ ｌａｕｒｉｆｏｌｉａ）の樹皮の５０質量％エタノール抽出物（抽出物Ｎｏ．９）・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【０１３７】
（配合例８）
−錠剤状栄養補助食品−
下記の混合物を打錠して、錠剤状栄養補助食品を製造した。
・ピットスポルム・ナパウレンセ（Ｐｉｔｔｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｐａｕｌｅｎｓｅ））の樹皮の５０質量％エタノール抽出物（抽出物Ｎｏ．５）・・・３０ｇ
・粉糖（ショ糖）・・・１７８ｇ
・ソルビット・・・１０ｇ
・グリセリン脂肪酸エステル・・・１２ｇ
【０１３８】
（配合例９）
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、顆粒状栄養補助食品を製造した。
・ヘスペレトゥサ・クレヌラータ（Ｈｅｓｐｅｒｅｔｈｕｓａ ｃｒｅｎｕｌａｔａ）の茎の５０質量％エタノール抽出物（抽出物Ｎｏ．６−１）・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
【産業上の利用可能性】
【０１３９】
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを配合した皮膚外用剤は、優れた抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、及び育毛作用の少なくともいずれかを有し、かつ安全性にも優れているので、例えば、軟膏、クリーム、乳液、美容液、ローション、ファンデーション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、石鹸、ボディシャンプー、アストリンゼント、ヘアトニック、ヘアローション、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンスなどに好適に利用可能である。
また、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、抗老化剤、及び育毛剤の少なくともいずれかを配合した飲食品は、経口摂取によっても優れた抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用、及び育毛作用の少なくともいずれかを有し、かつ安全性にも優れているので、例えば、健康食品、栄養補助食品などに好適に利用可能である。