(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚潰瘍を有するか、または皮膚潰瘍を発症するリスクのある対象における皮膚潰瘍を治療および／または予防する製剤を製造するための、１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）−アミノカルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、若しくはＳＢ４８０８４８またはそれらの薬学的に許容可能な塩を有する薬学的組成物の使用。
【請求項２】
皮膚潰瘍を有するか、または皮膚潰瘍を発症するリスクのある対象における皮膚潰瘍を治療および／または予防する製剤を製造するための、Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）アセトアミド、またはその薬学的に許容可能な塩を有する薬学的組成物の使用。
【請求項３】
皮膚潰瘍を有するか、または皮膚潰瘍を発症するリスクのある対象における皮膚潰瘍を治療および／または予防する製剤を製造するための、Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、またはその薬学的に許容可能な塩を有する薬学的組成物の使用。
【請求項４】
皮膚潰瘍を有するか、または皮膚潰瘍を発症するリスクのある対象における皮膚潰瘍を治療および／または予防する製剤を製造するための、メチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエート、またはそれらの薬学的に許容可能な塩を有する薬学的組成物の使用。
【請求項５】
前記対象は追加の治療薬が投与されるものである、請求項１〜４のいずれか１つに記載の使用。
【請求項６】
前記追加の治療薬が、抗菌治療、抗寄生虫治療、抗肥満症治療、糖尿病治療、循環器疾患治療、腎不全治療、血管炎治療、静脈不全治療、動脈不全治療、癌治療、免疫抑制剤治療、免疫不全治療、ステロイド治療および熱傷治療からなる群から選択されるものである、請求項５記載の使用。
【請求項７】
前記対象は標準的な創傷ケア管理が適用されるものである、請求項１〜４のいずれか１つに記載の使用。
【請求項８】
前記対象は生物工学によって作られた皮膚代替物を有するものである、請求項１〜４のいずれか１つに記載の使用。
【請求項９】
前記対象が哺乳動物である、請求項１〜８のいずれか１つに記載の使用。
【請求項１０】
前記哺乳動物がヒトである、請求項９記載の使用。
【請求項１１】
危険因子が、以前に皮膚潰瘍の症状を発症したこと、糖尿病を有すること、寝たきりであるか、または車椅子生活であること、及び血管炎に罹患していること、からなる群から選択されるものである、請求項１〜１０のいずれか１つに記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の実施形態は、Ｌｐ−ＰＬＡ２タンパク質の発現および／または活性を阻害する薬剤を用いた、皮膚潰瘍の治療および／または予防のための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血小板活性化因子アセチル加水分解酵素（ＰＡＦアセチル加水分解酵素）としても当該分野で既に公知である、リポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２（Ｌｐ−ＰＬＡ２）は、リポタンパク質の脂質またはリン脂質の加水分解に関与するホスホリパーゼＡ２酵素のスーパーファミリーのメンバーである。リポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２は、損傷に対する全身性の炎症性反応において主要な役割を果たすいくつかの細胞（例えば、リンパ球、単球、マクロファージ、Ｔリンパ球およびマスト細胞が挙げられる）によって分泌される。
【０００３】
ＬＤＬがその酸化型に変換される際、Ｌｐ−ＰＬＡ２は、酸化的に修飾されたホスファチジルコリンのｓｎ−２エステルを加水分解することにより、リゾホスファチジルコリンおよび酸化的に修飾された脂肪酸を生成することに関与する。Ｌｐ−ＰＬＡ２は、酸化型ＬＤＬに関連する切断型リン脂質のｓｎ２位置を加水分解する。結果として、２つの炎症細胞ホーミングメディエーター（非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）およびＬＹＳＯ  ＰＣ）が生成される。ＮＥＦＡとＬＹＳＯ  ＰＣとの両方が、循環単球に対する化学誘引物質であり、マクロファージの活性化に関与し、酸化ストレスならびにＴリンパ球の機能的反応および即時型反応への作用を増大する。Ｌｐ−ＰＬＡ２は、ヒトおよびブタにおいて、リポタンパク質Ｂを介してＬＤＬ分子に結合し、動脈壁において、酸化型ＬＤＬは、Ｌｐ−ＰＬＡ２による加水分解を受けやすい。
【０００４】
Ｌｐ−ＰＬＡ２作用のこれらの両方の生成物が、循環単球に対する強力な化学誘引物質である。また、この酵素は、初期のアテローム性動脈硬化症に関連する特徴的な「脂肪線条」を引き起こす、動脈におけるコレステロールエステル負荷細胞の蓄積に関与すると考えられており、Ｌｐ−ＰＬＡ２酵素の阻害は、この脂肪線条の形成の予防（リゾホスファチジルコリンの形成の阻害による）に有用であり、アテローム性動脈硬化症の治療に有用である。
【０００５】
さらに、Ｌｐ−ＰＬＡ２は、ＬＤＬ酸化において直接的な役割を果たすと提唱されている。これは、酸化プロセス全体に寄与し、かつ酸化プロセス全体を増強する、Ｌｐ−ＰＬＡ２作用のポリ不飽和脂肪酸由来の過酸化脂質生成物に起因する。この概念と一致して、Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬は、ＬＤＬ酸化を阻害する。従って、Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬は、酵素活性および／または活性化された炎症性反応とともに、脂質の過酸化に関与する任意の障害（例えば、アテローム性動脈硬化症および糖尿病などの状態に加えて、関節リウマチ、心筋梗塞および再灌流損傷などの他の状態）において全般的な実用性を有する。
【０００６】
皮膚は、ヒトの身体において最も大きい器官である。皮膚が身体を覆うものであり、すべての器官の中で最も大きい表面積を有するとみられるので、上記のことは、外表面について当てはまる。さらに、皮膚が、任意の単一の内部器官よりも重く、体重の約１５パーセントを占めるので、上記のことは、重量についても当てはまる。平均的な成人の場合、皮膚は、１．５〜２．０平方メートルの表面積を有し、そのほとんどが、２〜３ｍｍの厚さである。皮膚の平均平方インチは、６５０個の汗腺、２０個の血管、６０，０００個のメラノサイトおよび１０００を超える神経終末を保持している。
【０００７】
器官として、皮膚は、その下に存在する筋肉および器官を保護する多層の上皮組織：表皮、真皮および皮下組織で構成されている外皮系である。周りの環境との境界面として、皮膚は、病原体からの保護において、感染に対する防水層および障壁層を提供することによって、最も重要な役割を果たす。皮膚の他の主要な機能は、断熱および温度制御、感覚ならびにビタミンＤおよびＢの合成である。尿素の微量の排出、ならびに酸素および医薬の吸収もまた、皮膚を介して達成される。したがって、皮膚は、身体の最も重要な部分の１つであると考えられる。
【０００８】
皮膚の完全性が損なわれると（例えば、擦過傷または切創）、多層の上皮層が不連続となるので、皮膚の保護機能が局所的に失われる。ヒトの身体は、上皮の不連続性を塞ぐことを主な目的とした限局性の創傷治癒反応を誘発し、病原体の侵入を防ぐ。創傷治癒反応は、創傷への血流の増加、多数の免疫細胞（食作用性マクロファージ）の動員、ならびに任意の病原体および細胞残屑を除去する炎症性反応、創傷部位への線維芽細胞の動員、ならびに細胞外マトリックスの分泌、ならびに真皮（ｄｅｒｍａｌ）層および表皮層を再生することによる創傷の封鎖を含む。
【０００９】
時折、この創傷治癒反応は、様々な病状および／または繰り返される外傷、ならびにそれらの組み合わせに起因して、損なわれるか、または妨害され、その創傷は、皮膚において傷の開いたただれ（ｏｐｅｎ  ｓｏｒｅ）または潰瘍として残る。この傷の開いたただれは、周囲に存在する病原体による感染に弱い。皮膚潰瘍は、感染および異常な炎症から拡大し得る。膿（死滅した免疫細胞、皮膚細胞および感染体）は、皮膚潰瘍の腔に蓄積することにより、膿瘍を形成する。身体の大部分における膿瘍は、めったにそれら自体で治癒することはないので、最初に膿瘍が疑われた際の迅速な医学的配慮が必要と示される。
【００１０】
皮膚は、周囲環境中の任意の病原体に対する防御の最前線であるので、慢性潰瘍を有することは、即時的かつ積極的な治療を必要とする、非常に重篤かつ危険な医学的状況であり、時宜を得た様式でこの問題に取り組まないと、恐ろしい結果（例えば、壊疽、切断術による付属器の喪失、敗血症および死さえも）を招き得る。
【００１１】
慢性皮膚創傷は、糖尿病、循環の問題、癌、免疫系障害、神経性の障害を有する人々、または運動制限を有するがゆえに車椅子に拘束されているかもしくは寝たきりの人においてあまりにもありふれた問題である。運動制限は、損傷もしくは疾患または出生時欠損（例えば、脳性麻痺および二分脊椎）に起因する麻痺によるものであり得る。慢性皮膚潰瘍は、乗馬中の事故で麻痺になった有名俳優のＣｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｒｅｅｖｅの死亡の主要な要因である。皮膚潰瘍の有病率は、四肢麻痺患者において６０パーセント、および大??骨折のために入院中の高齢患者において６６パーセントもの高さであり得る（"Ｔｈｅ  Ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃａｒｅ  Ｐｏｌｉｃｙ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ"Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  Ｎｕｍｂｅｒ  ３，ＡＨＣＰＲ  Ｐｕｂ．Ｎｏ．９２−００４７を参照のこと）。糖尿病患者の場合、１５％が、その生存期間中、少なくとも１回、非常に感染しやすい皮膚潰瘍を発症する。実際に、１年間に行われる糖尿病性切断術の８５％において、潰瘍が先に生じている。Ｇｌｏｖｅｒ  Ｊ．Ｌ．，ｅｔ．ａｌ．，１９９７，Ａｄｖ．Ｗｏｕｎｄ  Ｃａｒｅ  １０：３３−３８。
米国単独において慢性皮膚潰瘍に罹患している人は、５００〜７００万人にのぼると推定されている（Ｐｅｔｒｉｅ  Ｎ，ｅｔ．ａｌ，２００３，Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｃｌｉｎｉｃｓ  ｏｆ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ  ８３（３）：１９４−９）。米国では、創傷の診断手技および外科的手技、医薬品、創傷閉鎖デバイス、ならびに病院および医師に対する代金を含む、慢性創傷の総直接コストは、毎年、推定２００億ドルに達する（Ｆｒｙｋｂｅｒｇ  Ｒ，ｅｔ．ａｌ．，２０００，Ｊ  Ｆｏｏｔ  Ａｎｋｌｅ  Ｓｕｒｇ  ３９（５  Ｓｕｐｐｌ）：１−６０；Ｈａｒｄｉｎｇ  Ｋ，ｅｔ．ａｌ．，２００２，ＢＭＪ  ３２４（７３３０）：１６０−３）。慢性創傷の間接的なコスト（例えば、労働時間の喪失および生活の質の悪化）は、この推定値に含められておらず、定量化するのは困難であるが、相当な額であると考えられ得る。
現在、慢性創傷の管理としては、薬物適用（例えば、抗細菌薬および抗真菌薬、組織プラスミノゲンアクチベーター（ｔＰＡ）などの血栓溶解剤または血栓粉砕剤）、圧縮包帯の使用、生物工学によって作られた皮膚代替物（Ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ａｌｌｏｇｒａｆｔｓ）、電気刺激、高度な薬物送達系（例えば、イオン導入に基づく経皮的送達系）、組織を修復する材料（例えば、血小板由来および自家の成長因子、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（Ｇ−Ｍ  ＣＳＦ）ならびにメソグリカン（ｍｅｓｏｇｌｙｃａｎ））の局所的な送達、陰圧創傷治療および超音波が挙げられる。しかしながら、感染の積極的な管理による、慢性皮膚潰瘍を治療する学際的なアプローチおよび慢性皮膚潰瘍の治癒を促進する学際的なアプローチならびに血液循環を改善する学際的なアプローチにもかかわらず、慢性皮膚潰瘍は、臨床上の主要な問題であり続けている。ほとんどの場合、医師は、初期に創傷がこれらの高度かつ高額な手技を必要とし得るか判定する方法を有していない。ゆえに、慢性皮膚潰瘍を発症する高リスク集団に入る人々における皮膚潰瘍の治療ならびに予防の新しい進歩がなおも必要とされている。さらに、リスクのある人々における皮膚潰瘍の再発性のエピソードの予防の新しい進歩も急務である。
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、以下のものがある（国際出願日以降国際段階で引用された文献及び他国に国内移行した際に引用された文献を含む）。
【先行技術文献】  
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】  米国特許第６１７７２５７号明細書
【特許文献２】  米国特許出願公開第２００７／００１５７７９号明細書
【特許文献３】  米国特許出願公開第２００７／００９２５２９号明細書
【特許文献４】  米国特許第６６４９６１９号明細書
【特許文献５】  米国特許第７１６９９２４号明細書
【特許文献６】  米国特許出願公開第２００４／００６３７５３号明細書
【特許文献７】  米国特許第６３８３２２０号明細書
【特許文献８】  米国特許出願公開第２００７／００７８２９０号明細書
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】  Ｃａｕｓｅｓ  ｏｆ  ｓｋｉｎ  ｕｌｃｅｒｓ，Ｍｅｄｉａｌ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ（ｈｔｔｐ：／／ｗｅｂ．ａｒｃｈｉｖｅ．ｏｒｇ／ｗｅｂ／２００７０４２５１６５６５９／ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｌｍ．ｎｌｈ．ｇｏｖ／ｍｅｄｌｉｎｅｐｌｕｓ／ｅｎｃｙ）２５  Ａｐｒｉｌ  ２００７（２５．０４．２００７）ｐａｇｅ［２−３］  ｒｅｔｒｉｅｖｅｄ  ｏｎ  １８  Ａｕｇｕｓｔ  ２００８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、対象における皮膚潰瘍を治療および／または予防する方法に関し、その方法は、その必要のある対象に、Ｌｐ−ＰＬＡ２タンパク質の活性および／または発現を阻害する薬剤を含む薬学的組成物を投与する工程を包含する。
【００１５】
本発明の一実施形態は、対象における皮膚潰瘍を治療および／または予防する方法であり、その方法は、前記対象が、皮膚潰瘍を有しているか、または皮膚潰瘍を有するリスクがあるか否かを判定する工程、および皮膚潰瘍を有するか、または皮膚潰瘍を発症するリスクのある対象に、Ｌｐ−ＰＬＡ２タンパク質の活性および／または発現を阻害する薬剤を含む薬学的組成物を投与する工程を包含する。
【００１６】
本発明の方法によって治療することができる皮膚潰瘍は、褥瘡性潰瘍、やけどによる潰瘍（ｓｃａｌｄ  ｕｌｃｅｒ）、凍傷による潰瘍（ｆｒｏｓｔｂｉｔｅ  ｕｌｃｅｒ）、血管性潰瘍、代謝性潰瘍（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｕｌｃｅｒ）、神経因性潰瘍、結合組織疾患に伴う潰瘍、医原性潰瘍、人為的（ｆａｃｔｉｔｉｏｕｓ）潰瘍、外傷性潰瘍、腫瘍性潰瘍、免疫学的疾患および免疫学的障害ならびに自己免疫疾患に伴う潰瘍、血液学的疾患に関連する潰瘍、白血球障害に関連する潰瘍、タンパク異常血症による（ｄｙｓｐｒｏｔｅｉｎａｅｍｉｃ）潰瘍、病原体による感染に起因する潰瘍、寄生生物による外寄生に起因する潰瘍、ならびに病因が不明の疾患および障害に伴う潰瘍からなる群から選択される。
【００１７】
皮膚潰瘍の発症に対する危険因子としては、皮膚潰瘍を引き起こす傾向がある疾患または障害または外傷に関連する皮膚潰瘍の以前のエピソードを有していること、高齢であること、寝たきりであること、車椅子生活であること、栄養不良状態、身体活動性を喪失していること、過剰にアルコールを使用していること、尿失禁、腸失禁；弱い皮膚、低知能、喫煙；糖尿病と診断されているか、または糖尿病を有すること、高血圧、高レベルのホモシステイン、過体重であること、静脈瘤の家族歴；血管炎に罹患していること、血液凝固障害と診断されていること、長時間、静止する必要のある職業についていること、鎌状細胞貧血を有すること、臭化物含有薬剤を摂取していること、ヒドロキシ尿素に基づいた化学療法を受けていること、腎不全、ハンセン病、熱傷犠牲者であること、および凍傷が挙げられる。
【００１８】
一実施形態において、対象は、少なくとも１つの危険因子を有する。別の実施形態において、対象は、少なくとも２つの危険因子を有する。
【００１９】
一実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２のタンパク質活性を阻害する薬剤は、小分子、核酸、核酸アナログ、タンパク質、抗体、ペプチド、アプタマーまたはそれらの変異体もしくはフラグメントである。
【００２０】
いくつかの実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２のタンパク質活性を阻害する薬剤は、小分子であり、例えば、Ｌｐ−ＰＬＡ２タンパク質の可逆的阻害薬または不可逆的阻害薬である小分子であるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、そのような小分子は、ピリミジオンベースの化合物である。いくつかの実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２の小分子阻害薬は、例えば、１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）−アミノカルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン（ＳＢ４８０８４８としても知られる）またはその塩であるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２の小分子阻害薬は、例えば、Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドまたはその塩であるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２の小分子阻害薬は、例えば、Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド；またはその塩であるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２の小分子阻害薬は、例えば、メチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］−アセチル｝｛４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエートまたはその塩であるが、これらに限定されない。
【００２１】
阻害薬の他の形態としては、ＲＮＡｉ薬剤である核酸薬剤（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡまたはリボザイム）またはその変形例が挙げられる。
【００２２】
一実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２のタンパク質活性を阻害する薬剤は、追加の治療薬とともに対象に投与され得る。これらの追加の治療薬は、抗菌治療、抗寄生虫治療、抗肥満症治療、糖尿病治療、循環器疾患治療、腎不全治療、血管炎治療、静脈不全治療、動脈不全治療、癌治療、免疫抑制剤治療、免疫不全治療、ステロイド治療、熱傷治療および精神療法からなる群から選択される。
【００２３】
更に別の実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２のタンパク質活性を阻害する薬剤は、追加の治療薬および標準的な創傷治癒管理とともに対象に投与される。
【００２４】
別の実施形態では、Ｌｐ−ＰＬＡ２のタンパク質活性を阻害する薬剤は、生物工学によって作られた皮膚代替物とともに対象に投与される。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬であるＳＢ４８０８４８で治療された糖尿病／高コレステロール血症（ＤＭ／ＨＣ）ブタおよびＬｐ−ＰＬＡ２阻害薬で治療されていないＤＭ／ＨＣブタにおける、膿瘍（潰瘍中の膿の蓄積）の発症および潰瘍治療の時系列（日）である。コントロール非治療群には２１頭のＤＭ／ＨＣブタＩが存在し、治療された実験ＳＢ４８０８４８群には２２頭のＤＭ／ＨＣブタが存在した。ブタ＃９４８および＃９６３は、Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬で治療された。これらのブタは、阻害薬治療開始の前に膿瘍を発症していた。それらの膿瘍を治療したところ、それらは、平均１〜２週間以内に治癒した。１日１用量のＳＢ４８０８４８阻害薬治療を開始した後は、さらに膿瘍を発症しなかった。ブタ＃９７５、＃１０２４、＃９４９、＃９４７、＃１００７および＃１５は、Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬のＳＢ４８０８４８で治療されなかった。これらのすべてのブタが、膿瘍を発症し、２頭のブタが、再発性膿瘍を発症し、１頭のブタが、２ヶ月以上継続する慢性潰瘍化となった。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明の実施形態は、ＤＭ／ＨＣブタが、Ｌｐ−ＰＬＡ２酵素を阻害する薬剤にて治療した場合に、いかなる皮膚潰瘍も発症しないという発見に基づく。ＤＭ／ＨＣブタモデルは、表現型的に、高リスクのヒト糖尿病患者と多くの類似点を示す。重要な類似点の１つは、ヒトの糖尿病性感染症において最もよく単離される微生物であるブドウ球菌属が原因の皮膚膿瘍（感染した皮膚潰瘍）を発症する傾向である。ヒト糖尿病患者は、合併症（例えば、ニューロパシー、末梢血管の病状および調節されていない高血糖に関連することが多い不良な治癒）の結果として、足潰瘍を非常に起こしやすい。上記のブタが、６ヶ月間にわたってＬｐ−ＰＬＡ２酵素阻害薬のＳＢ４８０８４８で治療されるとき、それらのブタは、いかなる皮膚膿瘍も発症しなかった。さらに、治療の開始時に活性な皮膚膿瘍を有するブタは、いったん最初の膿瘍が治癒すると、皮膚膿瘍を有しないままで、それらのブタは、皮膚膿瘍の再発性のエピソードを起こさなかったことが観察された。
【００２７】
したがって、本発明の一実施形態は、Ｌｐ−ＰＬＡ２タンパク質の発現および／または活性を阻害することによる、皮膚潰瘍の治療の必要のある対象の皮膚潰瘍の治療に関する。本発明の別の実施形態は、以前に皮膚潰瘍を経験したことのある対象における皮膚潰瘍の予防を包含し、その予防は、Ｌｐ−ＰＬＡ２タンパク質の発現および／または活性を阻害する工程を含む。別の実施形態では、本発明は、Ｌｐ−ＰＬＡ２タンパク質の発現および／または活性を阻害することによる、皮膚潰瘍を発症するリスクのある対象における皮膚潰瘍の予防を包含する。
【００２８】
定義
本明細書中において別段定義されない限り、本願に関連して使用される科学用語および専門用語は、当業者が通常理解している意味を有するものとする。さらに、文脈によって別段必要とされない限り、単数形の用語は、複数のものを含むものとし、および複数形の用語は、単数のものを含むものとする。
【００２９】
用語「皮膚潰瘍」とは、本明細書中で使用される場合、表皮が存在しない、皮膚上の開いたただれのことを指す。その下に存在する真皮または皮下組織は、露出しており、目で見えることがある。周囲の皮膚は、赤くなり、炎症していることがある。任意の種類の炎症性プロセスの基本的な症状および徴候は、発赤、熱感、腫脹、疼痛および機能喪失である。そのような開いたただれは、病原体（例えば、細菌、真菌およびウイルス）に感染しやすい。進行した症例では、そのただれは、流動性の膿を滲出していることがある。膿（死滅した免疫細胞、皮膚細胞、細胞流体および感染体）は、皮膚潰瘍の腔に蓄積して、膿瘍を形成する。
【００３０】
用語「疾患」または「障害」は、本明細書中で交換可能に使用され、それらは、身体または器官の一部の状態の任意の変調のことを指し、機能の発揮を遮るか、もしくは邪魔し、そして／または罹患している人、またはある人に接触した者に対して症状（例えば、不快、機能不全、窮迫または死さえも）を引き起こす。疾患または障害は、ジステンパー、病的な状態、病気、病弊、障害、病、疾病、愁訴、体調不良または見せかけにも関し得る。
【００３１】
用語「薬剤」とは、通常は細胞内に存在しないか、または細胞に投与されるレベルでは存在しない任意の実体のことを指す。薬剤は：化学物質；小分子；核酸配列；核酸アナログ；タンパク質；ペプチド；アプタマー；抗体；またはそれらのフラグメントを含む群から選択され得る。核酸配列は、ＲＮＡまたはＤＮＡであり得、一本鎖または二本鎖であり得、そして、目的のタンパク質をコードする核酸、オリゴヌクレオチド、核酸アナログ、例えば、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）、偽相補性ＰＮＡ（ｐｃ−ＰＮＡ）、ロックト（ｌｏｃｋｅｄ）核酸（ＬＮＡ）などを含む群から選択され得る。そのような核酸配列としては、例えば、転写抑制因子、アンチセンス分子、リボザイムとして作用するタンパク質をコードする核酸配列、低分子の阻害性核酸配列（例えば、ＲＮＡｉ、ｓｈＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡｉ（ｍＲＮＡｉ）、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどであるが、これらに限定されない）が挙げられるが、これらに限定されない。タンパク質および／もしくはペプチドまたはそれらのフラグメントは、目的の任意のタンパク質であり得、例えば：変異されたタンパク質；治療用のタンパク質および切断型タンパク質であるが、これらに限定されず、ここで、そのタンパク質は、通常は細胞内に存在しないか、または低濃度で発現されるものである。タンパク質は；変異されたタンパク質、遺伝的に操作されたタンパク質、ペプチド、合成ペプチド、組換えタンパク質、キメラタンパク質、抗体、ミディボディ（ｍｉｄｉｂｏｄｉｅｓ）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｉｅｓ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）、ヒト化タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、修飾されたタンパク質およびそれらのフラグメントを含む群からも選択され得る。あるいは、薬剤は、細胞内に核酸配列を導入し、そしてその細胞内にＬｐ−ＰＬＡ２の核酸阻害薬および／またはタンパク質阻害薬が生成される転写の結果として、細胞内に存在し得る。いくつかの実施形態において、薬剤は、任意の化学物質、実体または部分であり、例えば、合成の非タンパク質性の実体および天然に存在する非タンパク質性の実体が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、薬剤は、ある化学部分を有する小分子である。例えば、化学部分としては、マクロライド、レプトマイシンおよびそれらの関連の天然物またはアナログをはじめとした、非置換アルキル部分もしくは置換アルキル部分、芳香族部分またはヘテロシクリル部分が挙げられる。薬剤は、所望の活性および／もしくは特性を有すると知られているものであり得るか、または多種多様な化合物のライブラリーから選択され得る。
【００３２】
用語「阻害する」は、それがｐＬ−ＰＬＡ２のタンパク質もしくはポリペプチドまたはそれらの変異体もしくはホモログの発現または活性に関するように本明細書中で使用されるとき、必ずしも、発現および／または活性の完全な阻害を意味しない。むしろ、それらのタンパク質、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの発現または活性は、所望の効果をもたらすのに十分な程度に、および／または所望の効果をもたらすのに十分な時間にわたって、阻害する。特に、Ｌｐ−ＰＬＡ２の阻害は、Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害についてのアッセイを用いて（例えば、本明細書中に開示されるようなＬｐ−ＰＬＡ２タンパク質についてのバイオアッセイの使用が挙げられるがこれらに限定されない）測定され得る。Ｌｐ−ＰＬＡ２を阻害する薬剤は、Ｌｐ−ＰＬＡ２タンパク質および／またはＬｐ−ＰＬＡ２機能を少なくとも１０％阻害する薬剤である。いくつかの実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２の阻害薬は、Ｌｐ−ＰＬＡ２タンパク質またはＬｐ−ＰＬＡ２の発現を少なくとも１０％阻害する薬剤である。
【００３３】
本明細書中で使用されるとき、用語「Ｌｐ−ＰＬＡ２」とは、本明細書中に開示されるような方法によって阻害されるタンパク質標的のことを指す。Ｌｐ−ＰＬＡ２は、Ｌｐ−ＰＬＡ２および血小板活性化因子アセチル加水分解酵素（ＰＡＦアセチル加水分解酵素）として当該分野で既に公知でもある、リポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２と交換可能に使用される。ヒトＬｐ−ＰＬＡ２は、アクセッションＮｏ：Ｕ２０１５７（配列番号：１）またはＲｅｆ  Ｓｅｑ  ＩＤ：ＮＭ＿００５０８４（配列番号：２）に対応する核酸によってコードされるか、またはそしてヒトＬｐ−ＰＬＡ２は、米国特許出願５，９８１，２５２（その全体が本明細書中で明示的に参照により援用される）中に開示されている、アクセッションＮｏ：ＮＰ＿００５０７５（配列番号：３）に対応するタンパク質配列に相当する。
【００３４】
本明細書中で使用される場合、ＲＮＡｉ分子、例えば、ｓｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡの活性に関する「遺伝子サイレンシング」または「遺伝子サイレンシングされた」とは、ｍｉＲＮＡまたはＲＮＡ干渉分子が存在しない細胞において見られる、標的遺伝子に対する細胞内のｍＲＮＡレベルの少なくとも約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％、約１００％のｍＲＮＡレベルの低下のことを指す。１つの好ましい実施形態では、ｍＲＮＡレベルは、少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％、約１００％低下する。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、用語「ＲＮＡｉ」とは、任意のタイプの干渉ＲＮＡのことを指し、例えば、ｓｉＲＮＡｉ、ｓｈＲＮＡｉ、内因性マイクロＲＮＡおよび人工マイクロＲＮＡが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、ＲＮＡｉは、そのＲＮＡの下流のプロセシングのメカニズムに関係なく、ｓｉＲＮＡとして以前に同定された配列を含む（すなわち、ｓｉＲＮＡは、ｍＲＮＡの切断をもたらすインビボにおけるプロセシングの特定の方法を有すると考えられるが、そのような配列は、本明細書中に記載される隣接配列の状況においてベクター内に組み込まれ得る）。
【００３６】
本明細書中で使用される場合、「ｓｉＲＮＡ」とは、二本鎖ＲＮＡを形成する核酸のことを指し、その二本鎖ＲＮＡが、標的遺伝子、例えば、Ｌｐ−ＰＬＡ２と同じ細胞内に存在するか、または発現されるとき、そのｓｉＲＮＡは、遺伝子または標的遺伝子の発現を減少させるか、または阻害する能力を有する。その二本鎖ＲＮＡであるｓｉＲＮＡは、相補鎖によって形成され得る。一実施形態において、ｓｉＲＮＡとは、二本鎖ｓｉＲＮＡを形成し得る核酸のことを指す。ｓｉＲＮＡの配列は、完全長の標的遺伝子またはその部分配列に相当し得る。典型的には、ｓｉＲＮＡは、少なくとも約１５〜５０ヌクレオチド長である（例えば、二本鎖ｓｉＲＮＡの各相補配列は、約１５〜５０ヌクレオチド長であり、二本鎖ｓｉＲＮＡは、約１５〜５０塩基対長、好ましくは、約１９〜３０塩基ヌクレオチド、好ましくは、約２０〜２５ヌクレオチド長、例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０ヌクレオチド長である）。
【００３７】
本明細書中で使用される場合、「ｓｈＲＮＡ」または「低分子ヘアピンＲＮＡ」（ステムループとも呼ばれる）は、ｓｉＲＮＡの１つのタイプである。一実施形態において、これらのｓｈＲＮＡは、短い（例えば、約１９〜約２５ヌクレオチドの）アンチセンス鎖に続いて、約５〜約９ヌクレオチドのヌクレオチドループ、および類似のセンス鎖から構成される。あるいは、そのセンス鎖は、ヌクレオチドループ構造の前に置かれ得、アンチセンス鎖がそれに続き得る。
【００３８】
用語「マイクロＲＮＡ」または「ｍｉＲＮＡ」は、本明細書中で交換可能に使用され、これは、内因性ＲＮＡであり、それらのいくつかは、タンパク質をコードする遺伝子の発現を転写後のレベルにおいて制御すると知られている。内因性マイクロＲＮＡは、ｍＲＮＡの生産的利用を調節することができるゲノム内に天然に存在する低分子ＲＮＡである。人工マイクロＲＮＡなる用語は、ｍＲＮＡの生産的利用を調節することができる、内因性マイクロＲＮＡ以外の任意のタイプのＲＮＡ配列を包含する。マイクロＲＮＡ配列は、刊行物（例えば、Ｌｉｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  &  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１７，ｐ．９９１−１００８（２００３），Ｌｉｍ  ｅｔ  ａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９９，１５４０（２００３），Ｌｅｅ  ａｎｄ  Ａｍｂｒｏｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９４，８６２（２００１），Ｌａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９４，８５８−８６１（２００１），Ｌａｇｏｓ−Ｑｕｉｎｔａｎａ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１２，７３５−７３９（２００２），Ｌａｇｏｓ  Ｑｕｉｎｔａｎａ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２９４，８５３−８５７（２００１）およびＬａｇｏｓ−Ｑｕｉｎｔａｎａ  ｅｔ  ａｌ，ＲＮＡ，９，１７５−１７９（２００３）（これらは参照により援用される））に記載されている。複数のマイクロＲＮＡもまた、前駆体分子内に組み込まれ得る。さらに、ｍｉＲＮＡ様のステムループが、ｍｉＲＮＡ経路およびまたはＲＮＡｉ経路を介して内在性遺伝子の発現を調節する目的で、人工ｍｉＲＮＡｓおよび短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を送達するビヒクルとして細胞内で発現され得る。
【００３９】
本明細書中で使用される場合、「二本鎖ＲＮＡ」または「ｄｓＲＮＡ」とは、２本の鎖を含むＲＮＡ分子のことを指す。二本鎖分子は、それ自体に対して折りたたまれて二本鎖構造を形成する単一のＲＮＡ分子を含むものを包含する。例えば、プレ−ｍｉＲＮＡ（Ｂａｒｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．２００４．Ｃｅｌｌ  １１６：２８１−２９７）と呼ばれる、一本鎖ｍｉＲＮＡを送達する前駆体分子のステムループ構造は、ｄｓＲＮＡ分子を含む。
【００４０】
用語「対象」と、「個体」と、「患者」とは、本明細書中で交換可能に使用され、それらは、本発明に記載の薬学的組成物を用いる、予防的な治療をはじめとした治療が提供される動物、例えば、ヒトのことを指す。用語「対象」とは、本明細書中で使用されるとき、ヒトおよび非ヒト動物のことを指す。用語「非ヒト動物」と「非ヒト哺乳動物」とは、本明細書中で交換可能に使用され、それらには、すべての脊椎動物、例えば、哺乳動物（例えば、非ヒト霊長類（特に、高等霊長類）、ヒツジ、イヌ、げっ歯類（例えば、マウスまたはラット）、モルモット、ヤギ、ブタ、ネコ、ウサギ、ウシおよび非哺乳動物（例えば、ニワトリ、両生類、爬虫類）など）が包含される。一実施形態において、対象は、ヒトである。別の実施形態では、対象は、疾患モデルとしての実験動物または代理の動物である。
【００４１】
本明細書中で使用される用語「遺伝子」は、転写制御配列および／もしくは翻訳制御配列ならびに／またはコード領域ならびに／または非翻訳配列（例えば、イントロン、５’−および３’−非翻訳配列ならびに制御配列）を含むゲノム遺伝子であり得る。遺伝子のコード領域は、アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列または機能性ＲＮＡ（例えば、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、触媒性ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡおよびアンチセンスＲＮＡ）であり得る。遺伝子は、それに連結された５’−または３’非翻訳配列を任意に含むコード領域（例えば、エキソンおよびｍｉＲＮＡ）に対応するｍＲＮＡまたはｃＤＮＡでもあり得る。遺伝子はまた、コード領域および／またはその遺伝子に連結された５’−もしくは３’−非翻訳配列の全部または一部を含む、インビトロにおいて産生される、増幅された核酸分子でもあり得る。
【００４２】
本明細書中で使用される用語「核酸」または「オリゴヌクレオチド」または「ポリヌクレオチド」は、共に共有結合された少なくとも２つのヌクレオチドのことを意味する。当業者が認識するように、一本鎖の描写は、相補鎖の配列も定義する。それゆえ、核酸は、描写される一本鎖の相補鎖も包含する。また、当業者が認識するように、核酸の多くの変異体が、所与の核酸と同じ目的で使用され得る。それゆえ、核酸は、実質的に同一の核酸およびその相補体も包含する。また、当業者が認識するように、一本鎖は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で標的配列にハイブリダイズし得るプローブに対するプローブを提供する。ゆえに、核酸は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするプローブも包含する。
【００４３】
核酸は、一本鎖もしくは二本鎖であり得るか、または二本鎖配列と一本鎖配列との両方の部分を含み得る。核酸は、ＤＮＡ、ゲノムＤＮＡとｃＤＮＡの両方、ＲＮＡまたはハイブリッドであり得、ここで、核酸は、デオキシリボ−ヌクレオチドとリボ−ヌクレオチドとの組み合わせ、ならびにウラシル、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、キサンチンヒポキサンチン、イソシトシンおよびイソグアニンを含む塩基の組み合わせを含み得る。核酸は、化学合成法または組換え法によって得ることができる。
【００４４】
核酸は、一般に、ホスホジエステル結合を含むが、少なくとも１つの異なる結合、例えば、ホスホルアミデート結合、ホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合またはＯ−メチルホスホロアミダイト結合ならびにペプチド核酸骨格およびペプチド核酸結合を有し得る核酸アナログが包含され得る。他のアナログ核酸は、米国特許第５，２３５，０３３号および同第５、０３４，５０６号（これらは、参照により援用される）に記載されているものをはじめとした、正の骨格；非イオン性骨格および非リボース骨格を有するものを包含する。１つ以上の天然に存在しないヌクレオチドまたは修飾ヌクレオチドを含む核酸もまた、核酸の１つの定義の中に含められる。修飾ヌクレオチドアナログは、例えば、核酸分子の５’末端および／または３’末端に位置し得る。ヌクレオチドアナログの代表的な例は、糖修飾リボヌクレオチドまたは骨格修飾リボヌクレオチドから選択され得る。しかしながら、核酸塩基修飾リボヌクレオチド、すなわち天然に存在する核酸塩基の代わりに天然に存在しない核酸塩基を含むリボヌクレオチド（例えば、５位において修飾されているウリジンまたはシチジン、例えば、５−（２−アミノ）プロピルウリジン、５−ブロモウリジン；８位において修飾されているアデノシンおよびグアノシン、例えば、８−ブロモグアノシン；デアザヌクレオチド、例えば、７デアザ−アデノシン；Ｏ−およびＮ−アルキル化ヌクレオチド、例えば、Ｎ６−メチルアデノシンもまた、適当であることに注意されるべきである。２’ＯＨ−基は、Ｈ、ＯＲ、Ｒ、ハロ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２またはＣＮから選択される群によって置換され得、ここで、Ｒは、Ｃ−Ｃ６アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり、ハロは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。種々の理由のために、例えば、生理学的環境において、またはバイオチップ上のプローブとして、そのような分子の安定性を増大させるため、および半減期を延長するために、リボース−リン酸骨格の修飾が行われ得る。天然に存在する核酸とアナログとの混合物が作製され得る；あるいは、様々な核酸アナログの混合物および天然に存在する核酸とアナログとの混合物が作製され得る。
【００４５】
本明細書中で使用される用語「ベクター」とは、複製起点を含んでいる核酸配列のことを指す。ベクターは、プラスミド、バクテリオファージ、細菌人工染色体または酵母人工染色体であり得る。ベクターは、ＤＮＡベクターまたはＲＮＡベクターであり得る。ベクターは、自己複製型の染色体外ベクターまたは宿主ゲノム内に組み込まれるベクターのいずれかであり得る。
【００４６】
本明細書中で使用される場合、用語「治療する」は、皮膚潰瘍に関連する状態、疾患または障害の少なくとも１つの有害作用または症状の減少または軽減が包含される。
【００４７】
治療は、Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬で治療されたときに、病変または潰瘍の重症度の臨床的に許容されているスケールの分類において、少なくとも１つのステージまたはレベルの改善が達成される場合に、一般に「有効である」と考えられる。あるいは、またはさらに、治療後の、皮膚病変のサイズ（面積および／または深さ）の少なくとも２５％の縮小が、「有効な」治療であると考えられる。
【００４８】
予防の有効性は、Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬を用いた治療を開始した後に、皮膚病変を発症するリスクのある対象の皮膚を評価することによってモニターされる。リスクのある個体に皮膚病変が存在しないことは、「有効な」予防の徴候と考えられる。同様に、個体が、皮膚病変の履歴を有する場合、新しい病変が存在しないこと、または任意の新しい病変の発生頻度もしくは重症度の、例えば５０％以上の減少さえもが、本明細書中に記載される方法による皮膚潰瘍の「有効な」予防を示す。
【００４９】
用語「有効量」とは、本明細書中で使用される場合、本明細書中で定義されるような「有効な」治療をもたらす、薬学的組成物の治療薬の量のことを指す。有効量はまた、本明細書中で使用されるとき、上記疾患の症状の発症を予防するか、もしくは遅延させるか、疾患の症状の経過を変化させる（例えば、その疾患の症状の進行の遅延であるがこれに限定されない）か、または疾患の症状を逆転させるのに十分な量のことも包含し得る。
【００５０】
本明細書中で使用される用語「投与する」と「導入する」とは、交換可能に使用され、それらは、所望の部位において、本明細書中で開示されるようなＬｐ−ＰＬＡ２を阻害する薬剤の少なくとも部分的な局在化をもたらす方法または経路によって、その薬剤を対象内に留置することを指す。本発明の化合物は、対象において有効な治療をもたらす任意の適切な経路によって投与され得る。
【００５１】
用語「ベクター」は、「プラスミド」と交換可能に使用され、それらは、それらに連結されている別の核酸を運搬することができる核酸分子のことを指す。作動可能に連結されている遺伝子および／または核酸配列の発現を指示することができるベクターは、本明細書中で「発現ベクター」と称される。一般に、組換えＤＮＡの手法において有用な発現ベクターは、それらのベクター形態で、染色体に結合されない環状の二本鎖ＤＮＡループのことを指す「プラスミド」の形態であることが多い。他の発現ベクター（例えば、プラスミド、エピソーム、バクテリオファージまたはウイルスベクターであるがこれらに限定されない）が、本発明の様々な実施形態において使用され得、そのようなベクターは、宿主のゲノム内に組み込まれ得るか、または特定の細胞内で自律的に複製し得る。等価な機能を果たす、当業者に公知の他の形態の発現ベクターもまた使用され得る。発現ベクターは、ＤＮＡをコードする、安定な発現用の発現ベクターまたは一過性の発現用の発現ベクターを包含する。
【００５２】
冠詞「ａ」および「ａｎ」は、１つまたは１つより多い（すなわち、少なくとも１つの）、その冠詞の文法上の対象のことを指すために本明細書中で使用される。例としては、「エレメント（ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つのエレメントまたは１つより多いエレメントのことを意味する。
【００５３】
本明細書中で使用されるとき、「医原性」とは、医師の取り組み、様式または治療によって患者において誘導されることを意味する。例えば、ある特定の疾患または障害に対する薬物治療によって誘導される。
【００５４】
Ｌｐ−ＰＬＡ２：一般的な情報
Ｌｐ−ＰＬＡ２は、当該分野において、Ｌｐ−ＰＬＡ２、ＬＤＬ−ＰＬＡ２、リポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２、ＰＬＡ２Ｇ７、ホスホリパーゼＡ２（ＶＩＩ群）または血小板活性化因子アセチル加水分解酵素（ＰＡＦアセチル加水分解酵素またはＰＡＦＡＨ）という別名でも呼ばれている。ヒトＬｐ−ＰＬＡ２は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮｏ：Ｕ２０１５７（配列番号：１）またはＲｅｆ  Ｓｅｑ  ＩＤ：ＮＭ＿００５０８４（配列番号：２）に対応する核酸によってコードされ、ヒトＬｐ−ＰＬＡ２は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮｏ：ＮＰ＿００５０７５（配列番号：３）（米国特許第５，９８１，２５２号（その全体が本明細書中で明示的に参照により援用される）に開示されている）に対応するタンパク質配列に相当する。
【００５５】
ホスホリパーゼＡ２酵素リポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２（Ｌｐ−ＰＬＡ２）、その配列、単離および精製、その酵素をコードする単離された核酸、ならびにその酵素をコードするＤＮＡで形質転換された組換え宿主細胞は、ＷＯ９５／００６４９（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ｐｌｃ）（その全体が、本明細書中で明示的に参照により援用される）に開示されている。同じグループからのその後の刊行物では、この酵素がさらに説明されており（Ｔｅｗ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓ  Ｂｉｏｌ  １９９６：１６；５９１−９）、ここで、それは、ＬＤＬ  ＰＬＡ２と称され、後の特許出願（ＷＯ９５／０９９２１，Ｉｃｏｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）およびＮａｔｕｒｅにおける関連刊行物（Ｔｊｏｅｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ，ｖｏｌ  ３７４，６  Ａｐｒｉｌ  １９９５，５４９）では、Ｌｐ−ＰＬＡ２と本質的に同じ配列を有する酵素ＰＡＦ−ＡＨが報告されている。
【００５６】
Ｌｐ−ＰＬＡ２は、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）からその酸化型への変換中に、ホスファチジルコリンからリゾホスファチジルコリンへの変換に関与することが示されている。この酵素は、酸化型ホスファチジルコリンのｓｎ−２エステルを加水分解することにより、リゾホスファチジルコリンおよび酸化的に修飾された脂肪酸を生成すると知られている。Ｌｐ−ＰＬＡ２作用の両方の生成物が、リゾホスファチジルコリンと生物学的に活性であり、それらは、特に、単球の走化性および内皮機能不全の誘導（その両方が動脈壁内における単球由来のマクロファージ蓄積を促進する）をはじめとした、その作用の原因とされるいくつかのアテローム生成促進的（ｐｒｏａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃ）活性を有する。
【００５７】
Ｌｐ−ＰＬＡ２を阻害する薬剤
いくつかの実施形態において、本発明は、Ｌｐ−ＰＬＡ２の阻害に関する。いくつかの実施形態において、阻害は、Ｌｐ−ＰＬＡ２をコードする核酸転写物の阻害、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の阻害である。代替の実施形態では、Ｌｐ−ＰＬＡ２の阻害は、Ｌｐ−ＰＬＡ２の発現の阻害および／あるいはＬｐ−ＰＬＡ２の遺伝子産物、例えば、Ｌｐ−ＰＬＡ２のポリペプチドもしくはタンパク質またはそれらのアイソフォームの活性の阻害である。本明細書中で使用されるとき、用語「遺伝子産物」とは、遺伝子から転写されたＲＮＡ、または遺伝子によってコードされたか、もしくはＲＮＡから翻訳されたポリペプチドのことを指す。
【００５８】
いくつかの実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２の阻害は、薬剤によるものである。任意の薬剤（例えば、核酸、核酸アナログ、ペプチド、ファージ、ファージミド、ポリペプチド、ペプチド模倣物、リボソーム、アプタマー、抗体、有機小分子もしくは有機大分子、または無機小分子もしくは無機大分子、あるいはそれらの任意の組み合わせであるが、これらに限定されない）を使用することができる。いくつかの実施形態において、本発明の方法において有用な薬剤としては、Ｌｐ−ＰＬＡ発現の阻害薬として機能する薬剤、例えば、Ｌｐ−ＰＬＡをコードするｍＲＮＡの阻害薬が挙げられる。
【００５９】
本明細書中に開示されるような方法において有用な薬剤は、遺伝子発現も阻害し得る（すなわち、その遺伝子の発現を抑制および／または抑止し得る）。そのような薬剤は、当該分野において「遺伝子サイレンサー」と呼ばれ、通常、当業者に公知である。例としては、ＲＮＡ、ＤＮＡまたは核酸アナログに対する核酸配列が挙げられるがこれらに限定されず、例は、一本鎖または二本鎖であり得、目的のタンパク質をコードする核酸、オリゴヌクレオチド、核酸、核酸アナログ（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、偽相補性ＰＮＡ（ｐｃ−ＰＮＡ）、ロックト核酸（ＬＮＡ）およびそれらの誘導体などであるがこれらに限定されない）を含む群から選択され得る。核酸薬剤としてはまた、例えば、転写抑制因子、アンチセンス分子、リボザイムとして作用するタンパク質をコードする核酸配列、短い阻害性核酸配列（例えば、ＲＮＡｉ、ｓｈＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡｉ（ｍｉＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどであるがこれらに限定されない）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６０】
本明細書中で使用されるとき、Ｌｐ−ＰＬＡ２発現の阻害薬および／またはＬｐ−ＰＬＡ２タンパク質機能の阻害として本方法において有用な薬剤は、任意のタイプの実体、例えば、化学物質、核酸配列、核酸アナログ、タンパク質、ペプチドまたはそれらのフラグメントであり得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本薬剤は、任意の化学物質、実体または部分であり、それらとしては、合成の非タンパク質性実体および天然に存在する非タンパク質性実体が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、本薬剤は、ある化学部分を有する小分子である。例えば、いくつかの実施形態において、その化学部分は、本明細書中に開示されるようなピリミジオンベースの化合物である。
【００６１】
代替の実施形態では、本明細書中に開示されるような方法において有用な薬剤は、タンパク質および／もしくはペプチドまたはそれらのフラグメントであり、それらは、Ｌｐ−ＰＬＡ２の遺伝子発現またＬｐ−ＰＬＡ２タンパク質の機能を阻害する。そのような薬剤としては、例えば、タンパク質変異体、変異されたタンパク質、治療用タンパク質、切断型タンパク質およびタンパク質フラグメントが挙げられるが、これらに限定されない。タンパク質薬剤はまた、変異されたタンパク質、遺伝的に操作されたタンパク質、ペプチド、合成ペプチド、組換えタンパク質、キメラタンパク質、抗体、ミディボディ、ミニボディ、トリアボディ、ヒト化タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、修飾されたタンパク質およびそれらのフラグメントを含む群から選択され得る。
【００６２】
あるいは、本明細書中に開示されるような方法においてＬｐ−ＰＬＡ２の阻害薬として有用な薬剤は、化学物質、小分子、大分子または実体もしくは部分（例えば、合成の非タンパク質性実体および天然に存在する非タンパク質性実体が挙げられるがこれらに限定されない）であり得る。ある特定の実施形態では、本薬剤は、本明細書中に開示されるような化学部分を有する小分子である。
【００６３】
小分子
いくつかの実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２を阻害する薬剤が、小分子である。Ｌｐ−ＰＬＡ２の不可逆的阻害薬または可逆的阻害薬は、本発明の方法において使用され得る。
【００６４】
Ｌｐ−ＰＬＡ２の不可逆的阻害薬は、国際公開第ＷＯ９６／１３４８４号、第ＷＯ９６／１９４５１号、第ＷＯ９７／０２２４２号、第ＷＯ９７／２１７６７５号、第ＷＯ９７／２１７６７６号、第ＷＯ９７／４１０９８号および第ＷＯ９７／４１０９９号（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ｐｌｃ）（これらの全体が明示的に本明細書中で参照により援用され、これらは、とりわけ、酵素Ｌｐ−ＰＬＡ２の阻害薬である４つのチオニル／スルフィニル／スルホニルアゼチジノン化合物の様々なシリーズを開示している）に開示されている。これらは、不可逆的なアシル化阻害薬である（Ｔｅｗ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３７，１００８７，１９９８）。
【００６５】
ヒトにおいて有効なＬｐ−ＰＬＡ２阻害薬は、一般に、当業者に知られており、それらには、評価を受けている最中のもの、例えば、前臨床評価および臨床評価（第ＩＩ相臨床試験を含む）を受けている最中のものが含まれる。多くの出願が、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍおよびその後継のＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅによって出願され、公開されている。それらに譲渡されている関連の公開された出願のリストは、国際公開第ＷＯ０１／６０８０５号、第ＷＯ０２／３０９０４号、第ＷＯ０３／０１６２８７号、第ＷＯ００／６６５６７号、第ＷＯ０３／０４２２１８号、第ＷＯ０３／０４２２０６号、第ＷＯ０３／０４２１７９号、第ＷＯ０３／０４１７１２号、第ＷＯ０３／０８６４００号、第ＷＯ０３／０８７０８８号、第ＷＯ０２／３０９１１号、第ＷＯ９９／２４４２０号、第ＷＯ００／６６５６６号、第ＷＯ００／６８２０８号、第ＷＯ００／１０９８０号および第ＷＯ２００５／０２１００２号であり、これらの全体が、本明細書中で明示的に参照により援用される。さらに、米国仮出願第６０／８２９，３２８号および第６０／８２９，３２７号（両方ともが２００６年１０月１３日付けに出願されており、それらの全体もまた本明細書中で明示的に参照により援用される）を参照する。
【００６６】
本明細書中に開示されるような方法において有用な他のＬｐ−ＰＬＡ２阻害薬は、公開されている特許出願、例えば、ＷＯ２００６０６３７９１−Ａ１、ＷＯ２００６０６３８１１−Ａ１、ＷＯ２００６０６３８１２−Ａ１、ＷＯ２００６０６３８１３−Ａ１（すべてＢａｙｅｒ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅの名義）；およびＫｏｒｅａ  Ｒｅｓ．Ｉｎｓｔ．Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  &  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙに譲渡されているＵＳ２００６１０６０１７−Ａ１（これらの全体が本明細書中で明示的に参照により援用される）に記載されている。Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬はまた、公知の薬剤も含み、例えば、それらとしては、スタチンと、ナイアシン（ｗｗｗ．ｇｅｎｅｎｇｎｅｗｓ．ｃｏｍ／ｎｅｗｓ／ｂｎｉｔｅｍ．ａｓｐｘ？ｎａｍｅ＝６７２４５６８を参照のこと）およびフェノフィブラート（ｗｗｗ．ｇｅｎｅｎｇｎｅｗｓ．ｃｏｍ／ｎｅｗｓ／ｂｎｉｔｅｍ．ａｓｐｘ？ｎａｍｅ＝１４８１７７５６&ｔａｘｉｄ＝１９を参照のこと）との使用が挙げられるがこれらに限定されない。
【００６７】
上の段落に示された出願のすべてが、本明細書中で参照により援用される。これらの文書において開示されている化合物のいずれかまたはすべてが、皮膚潰瘍の予防または治療に有用であると考えられている。本明細書中に記載され、実施例において例示される、糖尿病性皮膚潰瘍のブタモデルを当業者が使用することにより、開示される化合物または他のＬｐ−ＰＬＡ２の阻害薬、例えば、抗体、小分子またはＲＮＡｉのいずれが、本明細書中において特許請求されるように、皮膚潰瘍の治療または予防に有効であるかを判定することができる。
【００６８】
特定の実施形態では、米国特許第６，６４９，６１９号および同第７，１５３，８６１号（それらの全体が、本明細書中で明示的に参照により援用される）（および国際出願ＷＯ０１／６０８０５）および米国特許第７，１６９，９２４号（その全体が本明細書中で参照により援用される）（および国際特許出願ＷＯ０２／３０９１１）に開示されているようなＬｐ−ＰＬＡ２阻害薬は、本明細書中に開示される方法において、皮膚潰瘍を予防または治療するために有用である。いくつかの実施形態では、米国公開番号２００５／００３３０５２Ａ１（その全体が、本明細書中で参照により援用される）および国際公開第ＷＯ０２／３０９０４号、第ＷＯ０３／０４２２１８号、第ＷＯ０３／０４２２０６号、第ＷＯ０３／０４２１７９号、第ＷＯ０３／０４１７１２号、第ＷＯ０３／０８６４００号および第ＷＯ０３／８７０８８号において開示されているようなＬｐ−ＰＬＡ２阻害薬が、可逆的なＬｐ−ＰＬＡ２阻害薬である。
【００６９】
式（Ｉ）  米国特許第６，６４９，６１９号および同第７，１５３，８６１号（それらの全体が本明細書中で参照により援用され、これらの開示はその全体が、この文書内に示されているかのように本明細書中で援用される）をもたらした国際出願ＷＯ０１／６０８０５に開示されている可逆的なＬｐ−ＰＬＡ２阻害薬の一群を使用することができる。目的の化合物のより狭い群は、国際公開第ＷＯ０１／６０８０５号に記載され、米国特許第６，６４９，６１９号および同第７，１５３，８６１号において特許請求されている式（Ｉ）の化合物、すなわち、
【００７０】
【化１】
0005437996.tif 000002
【００７１】
であり、
式中、
ＲａおよびＲｂは、それらが結合しているピリミジン環炭素原子と一緒になって、縮合５員炭素環を形成し、
Ｒ２は、１〜３個のフッ素原子によって置換されるフェニルであり、
Ｒ３は、ＮＲ８Ｒ９によって置換される、メチルまたはＣ（１−３）アルキルであるか、または
Ｒ３は、ＨｅｔＣ（０  ２）アルキルであり、ここで、Ｈｅｔは、Ｎを有する５〜７員のヘテロシクリル環であり、Ｎは、非置換であるか、またはＣ（１  ６）アルキルによって置換され、
Ｒ４およびＲ５は、一緒になって、４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル部分を形成し、
同じであり得るかまたは異なり得るＲ８およびＲ９は、水素またはＣ（１  ６）アルキル）からなる群から選択され、
Ｘは、Ｓまたはその薬学的に許容可能な塩である。
【００７２】
以下の化合物はなおもより興味深く、それらのすべてが、化学式（Ｉ）の範囲内に入り、上で述べた出願および特許において開示されている。
【００７３】
本明細書中に記載されているブタの研究において使用される１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）−アミノカルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、
１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）−アミノカルボニルメチル）−２−（２，３−ジフルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、
１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）アミノ−カルボニルメチル）−２−（３，４−ジフルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、
１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）アミノ−カルボニルメチル）−２−（２，３，４−トリフルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、
１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）アミノ−カルボニルメチル）−２−（２−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、
１−（Ｎ−メチル−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）アミノカルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、
１−（Ｎ−（２−（１−ピペリジノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）アミノ−カルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、
１−（Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）アミノ−カルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、
１−（Ｎ−（２−エチルアミノ−２−メチルプロピル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）−アミノカルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、
Ｎ−（２−ｔｅｒｔ−ブチルアミノエチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）アミノ−カルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、
１−（Ｎ−（１−メチルピペリジン−４−イル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）−アミノカルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、
１−（Ｎ−（１−イソプロピルピペリジン−４−イル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）−アミノカルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、
１−（Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）−アミノカルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、
１−（Ｎ−（２−（エチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）−アミノカルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン；またはこれらの化合物の薬学的に許容可能な塩。
【００７４】
これらの化合物を調製するための方法は、記載した文献に開示されている。
【００７５】
１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）−アミノカルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オンを作製するための第２のプロセスは、国際公開第ＷＯ０３／０１６２８７号（米国特許公開番号第２００５００１４７９３Ａ１号）（その全体が本明細書中で参照により援用される）に見られる。
【００７６】
化学式（ＩＩ）
本発明の方法を行うのに有用である化合物のさらなる群は、国際公開第ＷＯ０２／３０９１１号に開示されており、米国特許第７，１６９，９２４号は、この国際出願に対応する。両方ともの全体が本明細書中で援用される。化学式（ＩＩ）として本明細書中で表される場合における一般式は、以下のとおりであり、
【００７７】
【化２】
0005437996.tif 000003
【００７８】
式中、
Ｒ１は、Ｃ（１−６）アルキル、Ｃ（１−６）アルコキシ、Ｃ（１−６）アルキルチオ、ヒドロキシ、ハロゲン、ＣＮおよびモノフルオロからペルフルオロ−Ｃ（１  ４）アルキルから選択される、同じであり得るかまたは異なり得る１、２、３または４個の置換基によって任意に置換されるアリール基であり、
Ｒ２は、ハロゲン、Ｃ（１  ３）アルキル、Ｃ（１  ３）アルコキシ、ヒドロキシＣ（１  ３）アルキル、Ｃ（１  ３）アルキルチオ、Ｃ（１  ３）アルキルスルフィニル、アミノＣ（１−３）アルキル、モノ−またはジ−Ｃ（１−３）アルキルアミノＣ（１−３）アルキル、Ｃ（１  ３）アルキルカルボニルアミノＣ（１−３）アルキル、Ｃ（１  ３）アルコキシＣ（１  ３）アルキルカルボニルアミノＣ（１−３）アルキル、Ｃ（１  ３）アルキルスルホニルアミノＣ（１−３）アルキル、Ｃ（１  ３）アルキルカルボキシ、Ｃ（１  ３）アルキルカルボキシＣ（１  ３）アルキルであり、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、Ｃ（１−３）アルキルまたはヒドロキシＣ（１−３）アルキルであるか、または
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合しているピリミドン環炭素原子と一緒になって、縮合５または６員炭素環を形成するか、または
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合しているピリミドン環炭素原子と一緒になって、ハロゲン、Ｃ（１  ４）アルキル、シアノ、Ｃ（１−６）アルコキシ、Ｃ（１−６）アルキルチオまたはモノフルオロからペルフルオロ−Ｃ（１−４）アルキルから選択される、同じであり得るかまたは異なり得る１、２、３または４個の置換基によって任意に置換される縮合ベンゾまたはヘテロアリール環を形成し、
Ｒ４は、水素、非置換であり得るか、またはヒドロキシ、ハロゲン、ＯＲ７、ＣＯＲ７、カルボキシ、ＣＯＯＲ７、ＣＯＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ７ＣＯＲ８、モノ−もしくはジ（ヒドロキシＣ（１  ６）アルキル）アミノおよびＮヒドロキシＣ（１−６）アルキル−Ｎ  Ｃ（１−６）アルキルアミノから選択される１、２もしくは３個の置換基によって置換され得るＣ（１−６）アルキルであるか；または
Ｒ４は、Ｈｅｔ−Ｃ（０−４）アルキルであり、ここで、Ｈｅｔは、Ｎおよび任意にＯまたはＳを含む５〜７員のヘテロシクリル環であり、Ｎは、ＣＯＲ７、ＣＯＯＲ７、ＣＯＮＲ９Ｒ１０、またはヒドロキシ、ハロゲン、ＯＲ７、ＣＯＲ７、カルボキシ、ＣＯＯＲ７、ＣＯＮＲ９Ｒ１０もしくはＮＲ９Ｒ１０から選択される１、２もしくは３個の置換基によって任意に置換されるＣ（１  ６）アルキルによって置換され得（例えば、ピペリジン−４−イル、ピロリジン−３−イル）、
Ｒ５は、Ｃ（１−６）アルキル、Ｃ（１−６）アルコキシ、Ｃ（１  ６）アルキルチオ、アリールＣ（１−６）アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、ＣＮ、ＣＯＲ７、カルボキシ、ＣＯＯＲ７、ＮＲ７ＣＯＲ８、ＣＯＮＲ９Ｒ１０、ＳＯ２ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ７ＳＯ２Ｒ８、ＮＲ９Ｒ１０、モノフルオロからペルフルオロ−Ｃ（１  ４）アルキルおよびモノフルオロからペルフルオロ−Ｃ（１  ４）アルコキシから選択される、同じであり得るかまたは異なり得る１、２、３または４個の置換基によって任意に置換される、アリールまたはヘテロアリール環であり、
Ｒ６は、Ｃ（１−１８）アルキル、Ｃ（１−１８）アルコキシ、Ｃ（１  ６）アルキルチオ、Ｃ（１  ６）アルキルスルホニル、アリールＣ（１−６）アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、ＣＮ、ＣＯＲ７、カルボキシ、ＣＯＯＲ７、ＣＯＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ７ＣＯＲ８、ＳＯ２ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ７ＳＯ２Ｒ８、ＮＲ９Ｒ１０、モノフルオロからペルフルオロ−Ｃ（１  ４）アルキルおよびモノフルオロからペルフルオロ−Ｃ（１  ４）アルコキシまたはＣ（５−１０）アルキルから選択される、同じであり得るかまたは異なり得る１、２、３または４個の置換基によって任意にさらに置換される、アリールまたはヘテロアリール環であり、
Ｒ７は、水素またはＣ（１−１２）アルキル、例えばＣ（１−４）アルキル（例えば、メチルまたはエチル）であり、
Ｒ８は、水素、ＯＣ（１−６）アルキルまたはＣ（１−１２）アルキル、例えばＣ（１−４）アルキル（例えば、メチルまたはエチル）であり、
同じであり得るかまたは異なり得るＲ９およびＲ１０は、各々、水素またはＣ（１  １２）アルキルから選択されるか、またはＲ９およびＲ１０は、それらが結合している窒素と一緒になって、酸素、窒素および硫黄から選択される１つ以上のさらなるヘテロ原子を任意に含み、かつ、ヒドロキシ、オキソ、Ｃ（１−４）アルキル、Ｃ（１−４）アルキルカルボキシ、アリール、例えば、フェニルまたはアラルキル、例えば、ベンジルから選択される１または２個の置換基によって任意に置換される、５〜７員環、例えば、モルホリンまたはピペラジンを形成し、さらに
Ｘは、メチルおよびエチルから選択される１、２または３個の置換基によって任意に置換されるＣ（２−４）アルキレン、またはＣＨ＝ＣＨである。
【００７９】
化学式（ＩＩ）のすべての塩も同様に、本治療方法において使用され得る。
【００８０】
国際公開第ＷＯ０２／３０９１１号において化学式（Ｉ）として述べられている、本明細書中の化学式（ＩＩ）の化合物が特に目的とするものであり、ここで、Ｒ１は、ハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、トリフルオロメチルまたはＣ１−Ｃ６アルコキシから選択される、同じであり得るかまたは異なり得る１、２、３または４個の置換基によって任意に置換されるフェニル基であり得る。より詳細には、フェニルは、非置換であるか、または１、２、３もしくは４個のハロゲン置換基、特に、１〜３個のフルオロ基、最も特に、２，３−ジフルオロ、２，４−ジフルオロまたは４−フルオロによって置換される。
【００８１】
本明細書中の式（ＩＩ）のさらなる実施形態は、Ｙが、−ＣＨ２ＣＨ２−であるものである。
【００８２】
さらに、Ｒ２が、初期状態での水素であるか、またはハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、モノフルオロからペルフルオロ−Ｃ１−Ｃ４アルキル、モノフルオロからペルフルオロＣ１−Ｃ４６アルコキシもしくはＣ１−Ｃ６アルコキシ、特に、モノフルオロからペルフルオロ−Ｃ１−Ｃ４アルキル、モノフルオロからペルフルオロ−Ｃ１−Ｃ４アルコキシもしくはＣ１−Ｃ６アルコキシである、式（ＩＩ）の化合物が特に興味深い。Ｒ２が、水素以外であり、（Ｒ２）ｎにおけるｎが、１、２または３であり、置換パターンが、メタおよび／またはパラ、特にパラ、すなわち４位置換基である、式（ＩＩ）の化合物が特に興味深い。Ｒ２が４−トリフルオロメチルまたは４−トリフルオロメトキシである化合物もまた参照のこと。
【００８３】
Ｒ３およびＲ４は、同じであるかまたは異なっていても良く、それらは、メチル、エチル、ｎ−プロピルまたはｎ−ブチルである。特に興味深いのは、本明細書中の式（ＩＩ）の化合物であり、ここで、Ｒ３およびＲ４は、同じであり、かつ、メチルまたはエチルであり；メチルが、特に目的とするものである。
【００８４】
Ｒ５は、水素、直鎖または分枝鎖であるＣ（１−６）アルキルであり得る。メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルまたはｎ−ヘキシルが特に興味深い。
【００８５】
さらなるサブグループの化合物が、本明細書中の式（ＩＩ）の化合物内に入ると認識され、式中、
Ｒ１は、２，３ジフルオロによって置換されるフェニルであり、
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合しているピリミジン環炭素原子と一緒になって、縮合５員シクロペンテニル環を形成し、
Ｒ４は、２−（ジエチルアミノ）エチルであり、
Ｒ５は、フェニルであり、
Ｒ６は、４位でトリフルオロメチルによって置換されるフェニルまたは５位においてトリフルオロメチルによって置換されるチエン−２−イルであり、さらに
Ｘは、（ＣＨ２）２である。
【００８６】
目的とする本明細書中の化学式（ＩＩ）の特定の化合物は、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−エチルアミノ−２−メチル−プロピル）−２−（２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ｔ−ブチルアミノエチル）−２−（２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチル−ピペリジン−４−イル）−２−（２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−（２−（２−（４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−（２−（２−（４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−（２−（２−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
（＋／−）−Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−（２フェニル−プロピル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−（２−（２−（２，４−ジフルオロフェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート；
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−（２−（２−（２，５−ジフルオロフェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−（２−（２−（３，４−ジフルオロフェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−（２−（２−（２−フルオロフェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−（２−（２−（３−フルオロフェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−（２−（２−（３−クロロフェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−（２−（２−（４−クロロフェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−（２−（２−（４−メチルフェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−（２−（２−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−（２−（２−（４−メトキシフェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−（２−（２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）−エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
もしくは重酒石酸塩のいずれかの遊離塩基または別の薬学的に許容可能な塩である。
【００８７】
さらに目的とするものは、国際公開第ＷＯ０２／３０９０４号に開示されている化学式（ＩＩＩ）の化合物、
【００８８】
【化３】
0005437996.tif 000004
【００８９】
またはその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
Ｒ１は、Ｃ（１−６）アルキル、Ｃ（１−６）アルコキシ、Ｃ（１−６）アルキルチオ、ヒドロキシ、ハロゲン、ＣＮ、モノフルオロからペルフルオロ−Ｃ（１  ４）アルキル、モノフルオロからペルフルオロ−Ｃ（１  ４）アルコキシアリールおよびアリールＣ（１  ４）アルキルから選択される、同じであり得るかまたは異なり得る１、２、３または４個の置換基によって任意に置換されるアリール基であり、
Ｒ２は、ハロゲン、Ｃ（１  ３）アルキル、Ｃ（１  ３）アルコキシ、ヒドロキシＣ（１  ３）アルキル、Ｃ（１  ３）アルキルチオ、Ｃ（１  ３）アルキルスルフィニル、アミノＣ（１−３）アルキル、モノ−またはジ−Ｃ（１−３）アルキルアミノＣ（１−３）アルキル、Ｃ（１  ３）アルキルカルボニルアミノＣ（１−３）アルキル、Ｃ（１  ３）アルコキシＣ（１  ３）アルキルカルボニルアミノＣ（１−３）アルキル、Ｃ（１  ３）アルキルスルホニルアミノＣ（１−３）アルキル、Ｃ（１  ３）アルキルカルボキシ、Ｃ（１  ３）アルキルカルボキシＣ（１  ３）アルキルであり、さらに
Ｒ３は、水素、ハロゲン、Ｃ（１−３）アルキルまたはヒドロキシＣ（１−３）アルキルであるか、または
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合しているピリドン環炭素原子と一緒になって、縮合５または６員の炭素環を形成するか、または
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合しているピリドン環炭素原子と一緒になって、ハロゲン、Ｃ（１  ４）アルキル、シアノ、Ｃ（１−３）アルコキシＣ（１−３）アルキル、Ｃ（１  ４）アルコキシもしくはＣ（１  ４）アルキルチオまたはモノフルオロからペルフルオロ−Ｃ（１−４）アルキルから選択される、同じであり得るかまたは異なり得る１、２、３または４個の置換基によって任意に置換される、縮合ベンゾ環または縮合ヘテロアリール環を形成し、
Ｒ４は、水素、非置換であり得るか、またはヒドロキシ、ハロゲン、ＯＲ７、ＣＯＲ７、カルボキシ、ＣＯＯＲ７、ＣＯＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ７ＣＯＲ８、モノ−もしくはジ（ヒドロキシＣ（１  ６）アルキル）アミノおよびＮヒドロキシＣ（１−６）アルキル−Ｎ  Ｃ（１−６）アルキルアミノから選択される１、２もしくは３個の置換基によって置換され得るＣ（１−６）アルキルであるか、または
Ｒ４は、Ｈｅｔ−Ｃ（０−４）アルキルであり、ここで、Ｈｅｔは、Ｎおよび任意にＯまたはＳを含む５〜７員のヘテロシクリル環であり、ここで、Ｎは、ＣＯＲ７、ＣＯＯＲ７、ＣＯＮＲ９Ｒ１０、またはヒドロキシ、ハロゲン、ＯＲ７、ＣＯＲ７、カルボキシ、ＣＯＯＲ７、ＣＯＮＲ９Ｒ１０もしくはＮＲ９Ｒ１０から選択される１、２もしくは３個の置換基によって任意に置換されるＣ（１  ６）アルキルによって置換され得（例えば、ピペリジン−４−イル、ピロリジン−３−イル）、
Ｒ５は、Ｃ（１−６）アルキル、Ｃ（１−６）アルコキシ、Ｃ（１  ６）アルキルチオ、アリールＣ（１−６）アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、ＣＮ、ＣＯＲ７、カルボキシ、ＣＯＯＲ７、ＮＲ７ＣＯＲ８、ＣＯＮＲ９Ｒ１０、ＳＯ２ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ７ＳＯ２Ｒ８、ＮＲ９Ｒ１０、モノフルオロからペルフルオロ−Ｃ（１  ４）アルキルおよびモノフルオロからペルフルオロ−Ｃ（１  ４）アルコキシから選択される、同じであり得るかまたは異なり得る１、２、３または４個の置換基によって任意に置換される、アリールまたはヘテロアリール環であり；
Ｒ６は、Ｃ（１−６）アルキル、Ｃ（１−６）アルコキシ、Ｃ（１  ６）アルキルチオ、Ｃ（１  ６）アルキルスルホニル、アリールＣ（１−６）アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、ＣＮ、ＣＯＲ７、カルボキシ、ＣＯＯＲ７、ＣＯＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ７ＣＯＲ８、ＳＯ２ＮＲ９Ｒ１０、ＮＲ７ＳＯ２Ｒ８、ＮＲ９Ｒ１０、モノフルオロからペルフルオロ−Ｃ（１  ４）アルキルおよびモノフルオロからペルフルオロ−Ｃ（１  ４）アルコキシまたはＣ（５−１０）アルキルから選択される、同じであり得るかまたは異なり得る１、２、３または４個の置換基によって任意にさらに置換される、アリールまたはヘテロアリール環であり、
Ｒ７およびＲ８は、独立して、水素またはＣ（１−１２）アルキル、例えば、Ｃ（１−４）アルキル（例えば、メチルまたはエチル）であり、
同じであり得るかまたは異なり得るＲ９およびＲ１０は、各々、水素もしくはＣ（１  １２）アルキルから選択されるか、またはＲ９およびＲ１０は、それらが結合している窒素と一緒になって、酸素、窒素および硫黄から選択される１つ以上のさらなるヘテロ原子を任意に含み、かつ、ヒドロキシ、オキソ、Ｃ（１−４）アルキル、Ｃ（１−４）アルキルカルボキシ、アリール、例えば、フェニルまたはアラルキル、例えば、ベンジルから選択される１または２個の置換基によって任意に置換される５〜７員環、例えば、モルホリンまたはピペラジンを形成し；そして
Ｘは、Ｃ（２−４）アルキレン基（メチルおよびエチルから選択される１、２または３個の置換基によって任意に置換される）、ＣＨ＝ＣＨ、（ＣＨ２）ｎＳまたは（ＣＨ２）ｎＯ（ここで、ｎは、１、２または３である）である。
【００９０】
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合しているピリドン環炭素原子と一緒になって、ハロゲン、Ｃ（１  ４）アルキル、シアノ、Ｃ（１  ４）アルコキシまたはＣ（１  ４）アルキルチオまたはモノフルオロからペルフルオロ−Ｃ（１−４）アルキルから選択される、同じであり得るかまたは異なり得る１、２、３または４個の置換基によって任意に置換される、縮合ベンゾ環または縮合ヘテロアリール環を形成する、式（ＩＩＩ）の化合物が特に興味深い。好ましくは、Ｒ１は、ハロゲン、Ｃ（１−６）アルキル、トリフルオロメチル、Ｃ（１−６）アルコキシ、好ましくは、１〜３フルオロ、より好ましくは、２，３−ジフルオロによって任意に置換されるフェニルである。Ｒ４の代表的な例としては、メチル、イソプロピル、１−（２−メトキシエチル）、１−（２−ヒドロキシエチル）、ｔ−ブトキシカルボニルまたはエトキシカルボニルメチルによって、１位で置換されるピペリジン−４−イル；アミノエチルによって２位で置換されるエチル；１−エチルピペリジニルメチル；ピペリジン−４−イル；３−ジエチルアミノプロピル；４−ピロリジン−１−イルブチルおよび１−エチルピロリジン−３−イルが挙げられる。好ましくは、Ｒ４は、１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル、１−メチルピペリジン−４−イルまたは１−エチルピロリジン−３−イルである。Ｒ５の代表的な例としては、フェニルおよびピリジルが挙げられる。好ましくは、Ｒ５は、フェニルである。Ｒ６の代表的な例としては、ハロゲンによって任意に置換されるフェニルまたはトリフルオロメチル、好ましくは、４位におけるもの、およびヘキシルが挙げられる。好ましくは、Ｒ６は、トリフルオロメチルによって４位で置換されるフェニルである。Ｒ６のさらなる代表的な例としては、１個以上のＣ（１−３）アルキルによって置換されるフェニルが挙げられる。好ましくは、Ｒ６は、エチルによって４位で置換されるフェニルである。好ましくは、Ｒ５およびＲ６は、一緒になって、４−（フェニル）フェニル置換基または２−（フェニル）ピリジニル置換基を形成し、ここで、離れたフェニル環は、好ましくは、４位において、ハロゲンまたはトリフルオロメチルによって任意に置換され得る。好ましくは、Ｘは、Ｃ（２−４）アルキレン、より好ましくは、Ｃ（２−３）アルキレン、最も好ましくは、（ＣＨ２）２またはＣＨ２Ｓである。
【００９１】
上記の化学式（ＩＩＩ）を含む化合物の群には、
Ｒ１が、２，３−ジフルオロによって置換されるフェニルであり、
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合しているピリドン環炭素原子と一緒になって、縮合ベンゾ環または縮合ピリド環を形成し、
Ｒ４が、１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イルであり、
Ｒ５およびＲ６が、一緒になって、４−（フェニル）フェニル置換基を形成し、ここで、離れたフェニル環は、好ましくは４位において、トリフルオロメチルによって置換され、さらに
Ｘが、ＣＨ２Ｓまたは（ＣＨ２）２である、サブグループの化合物が含まれると認識される。
【００９２】
特に目的とする化合物は、以下の式（ＩＩＩ）の化合物であり、それらは、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−５，６−トリメチレン−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、
Ｎ−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−エチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［５−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−２−メチル−７−オキソ−７Ｈ−チアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−４−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
（±）−Ｎ−（１−エチルピロリジン−３−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
（±）−Ｎ−（１−エチルピロリジン−３−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド二塩酸塩、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドモノパラトルエンスルホネート、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド一塩酸塩、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド二塩酸塩、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（４−フルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（４−フルオロベンジルチオ）−４−オキソ−５，６−トリメチレン−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−５，６−トリメチレン−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（４−フルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（３，４−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２−フルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（３−クロロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル）］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル）］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ピロリジン−１−イルエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−イソプロピルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ピペリジン−１−イルエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−７−フルオロ−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−５−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−２−メチル−７−オキソ−７Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−４−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−５，６−ジメチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−５−エチル−４−オキソ−４Ｈ−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−チエノ［３，４−ｂ］ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ピロリジン−１−イルエチル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［６−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−２−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−７−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−イソプロピルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イルメチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（３−ジエチルアミノプロピル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（４−ピロリジン−１−イルブチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（３−ジエチルアミノプロピル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（４−ピロリジン−１−イルブチル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［５−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−７−オキソ−７Ｈ−チエノ−［３，２−ｂ］ピリジン−４−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［５−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−２−メチル−７−オキソ−７Ｈ−チアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−４−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−エチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−エチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−イソプロピルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−イソプロピルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エトキシカルボニルメチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−イソプロピルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（３’，４’−ジメチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−（ｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（３’，４’−ジフルオロビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［６−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−チエノ−［２，３ｂ］ピリジン−７−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３，４−トリフルオロフェニルエチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［６−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−２−メチル−４−オキソ−２，４−ジヒドロ−ピラゾロ［３，４ｂ］ピリジン−７−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［６−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−２−エチル−４−オキソ−２，４−ジヒドロピラゾロ［３，４ｂ］ピリジン−７−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［６−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−２−イソプロピル−４−オキソ−２，４−ジヒドロピラゾロ［３，４ｂ］ピリジン−７−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−エチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−イソプロピルピペリジン−４−イル）−２−［５−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−２−メチル−７−オキソ−７Ｈ−チアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−４−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イル−メチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［５−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−２−メチル−７−オキソ−７Ｈ−チアゾロ［４，５−ｂ］−ピリジン−４−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−５，６−トリメチレン−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−５，６−トリメチレン−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−５，６−トリメチレン−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−イソプロピルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−５，６−トリメチレン−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［５−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−２−メチル−７−オキソ−２，７−ジヒドロピラゾロ［４，３ｂ］ピリジン−４−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［５−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−１−メチル−７−オキソ−１，７−ジヒドロピラゾロ［４，３ｂ］ピリジン−４−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−５，６−トリメチレン−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−７−メチル−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−７−メチル−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−７−メチル−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−イソプロピルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−７−メチル−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−７−メチル−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−５，６−トリメチレン−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−５，６−トリメチレン−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−イソプロピルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−５，６−トリメチレン−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−５，６−トリメチレン−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−５，６−テトラメチレン−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−クロロビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−クロロビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−クロロビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−クロロビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−イソプロピルピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−クロロビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［６−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−２−メチル−４−オキソ−４Ｈ−ピラゾロ−［３，４−ｂ］ピリジン−７−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（１−（ｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、
Ｎ−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−［６−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−２−（２−メトキシエチル）−４−オキソ−４Ｈ−ピラゾロ−［３，４−ｂ］ピリジン−７−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［４−オキソ−２−（２−（２，３，４−トリフルオロフェニル）エチル）−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，４−ジフルオロ−フェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イル−メチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（３−フルオロ−フェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−５，６−トリメチレン−ピリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イル−メチル）−アセトアミドビタルトレート、
Ｎ−（ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−［１，８］ナフチリジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イル−メチル）−アセトアミドトリフルオロアセテート、
Ｎ−（２−エチルアミノエチル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、
Ｎ−（２−エチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミド、
Ｎ−（１−（２−ヒドロキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロ−メチルビフェニル−４−イルメチル）−アセトアミドビタルトレート、もしくはそれらの遊離塩基、または別の薬学的に許容可能な塩。
【００９３】
化学式（ＩＶ）
また、化学式（ＩＶ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を目的としており、
【００９４】
【化４】
0005437996.tif 000005
【００９５】
式中、
Ｒ１は、非置換であるか、またはＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキルチオ、アリールＣ１−Ｃ６アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、ＣＮ、ＣＯＲ６、ＣＯＯＲ６、ＮＲ６ＣＯＲ７、ＣＯＮＲ８Ｒ９、ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、ＮＲ６ＳＯ２Ｒ７、ＮＲ８Ｒ９、ハロＣ１−Ｃ４アルキルおよびハロＣ１−Ｃ４アルコキシからなる群から選択される、同じであり得るかまたは異なり得る１、２、３もしくは４個の置換基によって置換される、アリール基であり、
Ｗは、ＣＨであり、かつ、Ｘは、Ｎであるか、またはＷは、Ｎであり、かつＸは、ＣＨであるか、ＷおよびＸは、両方ともＣＨであるか、またはＷおよびＸは、Ｎであり、
Ｙは、Ｃ２−Ｃ４アルキルであり、
［２９１］Ｒ２は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキルチオ、アリールＣ１−Ｃ６アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、ＣＮ、ＣＯＲ６、カルボキシ、ＣＯＯＲ６、ＮＲ６ＣＯＲ７、ＣＯＮＲ８Ｒ９、ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、ＮＲ６ＳＯ２Ｒ７、ＮＲ８Ｒ９、モノフルオロからペルフルオロ−Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはモノフルオロからペルフルオロ−Ｃ１−Ｃ６アルコキシであり、
ｎは、０〜５であり、
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、
Ｒ４は、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、
Ｒ５は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、ハロＣ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルＣ１−Ｃ４アルキル、Ｃ５−Ｃ８シクロアルケニル、Ｃ５−Ｃ８シクロアルケニルＣ１−Ｃ４アルキル、３〜８員のヘテロシクロアルキル、３〜８員のヘテロシクロアルキルＣ１−Ｃ４アルキル、Ｃ６−Ｃ１４アリール、Ｃ６−Ｃ１４アリールＣ１−Ｃ１０アルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールＣ１−Ｃ１０アルキルであり；ここで、各基は、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキルチオ、アリールＣ１−Ｃ６アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、ＣＮ、ＮＲ８Ｒ９またはハロＣ１−Ｃ４アルコキシである、同じ基および／または異なる基によって１回以上、任意に存在し、
Ｒ６およびＲ７は、独立して、水素またはＣ１−Ｃ１０アルキルであり；
Ｒ８およびＲ９は、同じであるかまたは異なり、そして、それらは、水素またはＣ１−Ｃ１０アルキルであるか、またはＲ９およびＲ１０は、それらが結合している窒素と一緒になって、酸素、窒素および硫黄から選択される１つ以上のさらなるヘテロ原子を任意に含み、かつヒドロキシ、オキソ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルカルボキシ、アリールおよびアリールＣ１−Ｃ４アルキルからなる群から選択される１または２個の置換基によって任意に置換される、５〜７員環を形成する。
【００９６】
定義される任意の置換基および／またはそれらの列挙されたラジカルを式（ＩＶ）の範囲から排除する意図はないが、以下のＲ基および関連ラジカルが、特に興味深い：
Ｒ１に関して、Ｒ１は、ハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、トリフルオロメチルまたはＣ１−Ｃ６アルコキシから選択される、同じであり得るかまたは異なり得る１、２、３または４個の置換基によって任意に置換されるフェニル基であり得る。より詳細には、フェニルは、非置換であるか、または１、２、３もしくは４個のハロゲン置換基、特に、１〜３個のフルオロ基、最も特に、２，３−ジフルオロ、２，４−ジフルオロもしくは４−フルオロによって置換される。
【００９７】
式（Ｉ）のさらなる実施形態は、Ｙが、−ＣＨ２ＣＨ２−であるものである。
【００９８】
本発明は、Ｒ２が、初期状態での水素であるか、またはハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、モノフルオロからペルフルオロ−Ｃ１−Ｃ４アルキル、モノフルオロからペルフルオロＣ１−Ｃ４６アルコキシまたはＣ１−Ｃ６アルコキシ；特に、モノフルオロからペルフルオロ−Ｃ１−Ｃ４アルキル、モノフルオロからペルフルオロ−Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたはＣ１−Ｃ６アルコキシである、式（Ｉ）の化合物もまた提供する。Ｒ２が、水素以外であり、（Ｒ２）ｎにおけるｎが、１、２または３であり、置換パターンが、メタおよび／またはパラ、特に、パラ、すなわち、４位置換基である、化合物が特に興味深い。例示的な化合物としては、Ｒ２が４−トリフルオロメチルまたは４−トリフルオロメトキシである化合物が挙げられる。
【００９９】
Ｒ３およびＲ４は、同じであり得るかまたは異なり得、それらは、メチル、エチル、ｎ−プロピルまたはｎ−ブチルである。Ｒ３およびＲ４が、同じであり、かつ、メチルまたはエチルであり；メチルが特に興味深い、式（Ｉ）の化合物が特に興味深い。
【０１００】
Ｒ５は、水素、直鎖または分枝鎖のＣ（１−６）アルキルであり得る。メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルまたはｎ−ヘキシルが特に興味深い。
【０１０１】
本明細書中の上に記載された化合物のいずれもが、結晶型または非結晶型として調製され得、結晶型である場合は、例えば、水和物として溶媒和され得る。本発明は、その範囲の中に、化学量論溶媒和化合物（例えば、水和物）を包含する。
【０１０２】
本明細書中に記載される化合物のある特定のものは、１つ以上のキラル原子を含み得るか、または別途、２つのエナンチオマーとして存在することができる。本明細書中に記載されるような方法において有用な化合物は、エナンチオマーの混合物、ならびに精製されたエナンチオマーまたは鏡像異性的に濃縮された混合物を包含する。式（Ｉ）〜（ＩＶ）によって表される化合物の個別の異性体、ならびに任意の全体的または部分的に平衡化したそれらの混合物もまた本発明の範囲内に包含される。本発明はまた、特許請求される化合物の個別の異性体を、その異性体（１つ以上のキラル中心が反転されている）との混合物として包含する。また、特許請求される化合物の任意の互変異性体および互変異性体の混合物が、式（Ｉ）〜（ＩＶ）の化合物の範囲内に包含されると理解される。様々な異性体の形態において、従来の方法によって他の異性体から１つの異性体が分離され得るか、もしくは分割され得るか、あるいは任意の所与の異性体を、従来の合成方法または立体特異的合成もしくは不斉合成によって、得ることができる。
【０１０３】
式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）および（ＩＶ）の化合物の合成
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物を調製するための方法は、特許文献に公開されている。例えば、式（Ｉ）を作製するための方法は、ＷＯ０１／６０８０５およびＷＯ０３／０１６２８７に見られる。式（ＩＩ）の化合物を作製するための方法は、ＷＯ０２／３０９１１に提示されている。そして、式（ＩＩＩ）の化合物を作製するための方法は、ＷＯ０２／３０９０４に見られる。この文書は、米国仮出願６０／８２９，３２８および６０／８２９，３２７（これらは、本明細書中で明示的に参照により援用される）から複写された方法である式（ＩＶ）の化合物を作製するための方法を提供している。
【０１０４】
合成のいくつかの実施例を下記に提供する。本明細書中の例における化合物のいくつかの総称的な群を区別するために、化学式（Ｉ）に関するものは、「合成方法の実施例（Ｉ）−１」以下参照、式（ＩＩ）については「合成方法の例（ＩＩ）−１」以下参照、式（ＩＩＩ）については「合成方法の実施例（ＩＩＩ）−１以下参照、および化学式（Ｉ）については「合成方法の実施例（ＩＶ）−１、以下参照として名称が付けられる。
【０１０５】
化学式（Ｉ）の合成
化学式（Ｉ）の化合物は、国際公開第ＷＯ０１／６０８０５号に開示されているようなプロセススキームＩによって調製される。
【０１０６】
【化５】
0005437996.tif 000006
【０１０７】
ここで、
Ｌ３は、Ｃ（１−６）アルキル基、例えばメチルであり；
Ｒ１５は、Ｃ（１  ６）アルキル基、例えばエチルまたはｔ−ブチルであり、そして
Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、ｎ、Ｘ、ＹおよびＺは、ＷＯ０１／６０８０５において定義されているとおりである。
【０１０８】
目的の化学式（Ｉ）の化合物を作製するための典型的な反応を以下に示す。
【０１０９】
合成方法の実施例（Ｉ）−１（ａ）
１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）アミノカルボニル−メチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン
【化６】
0005437996.tif 000007
【０１１０】
国際特許公開第ＷＯ０１／６０８０５号の中間体Ｂ６９（８７．１ｇ，０．２６ｍｏｌ．）をジクロロメタン（２．９リットル）に懸濁した。１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（３５．２ｇ，０．２６ｍｏｌ．）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（９９．７ｇ，０．５２ｍｏｌ．）を加え、その懸濁液を４５分間撹拌したところ、その時間までに完全な溶液が得られた。ＷＯ０１／６０８０５の中間体Ａ３０（９１．２ｇ，０．２６ｍｏｌ．）を、ジクロロメタン（１００ｍｌ）中の溶液として５分間にわたって加え、その溶液を４時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム溶液：水混合物（１：１、１リットル）を加え、その溶液を１０分間撹拌した。有機相を分離し、飽和塩化アンモニウム：水混合物（１：１、１リットル）で抽出したところ、抽出物は、ｐＨ６だった。有機相を分離し、酢酸（１０ｍｌ）を含む水（１リットル）で抽出したところ、抽出物は、ｐＨ５だった。ジクロロメタン層を分離し、飽和炭酸ナトリウム溶液：水：飽和ブライン混合物（１：３：０．２、１リットル），ｐＨ１０．５で抽出し、次いで、飽和ブライン：水混合物（１：１、１リットル）で抽出した。その茶色溶液を、脱色炭（ｄｅｃｏｌｏｕｒｉｓｉｎｇ  ｃｈａｒｃｏａｌ）（３５ｇ）の存在下において無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去することにより、暗褐色泡沫状物を得た。その泡沫状物を酢酸イソプロピル（１００ｍｌ）に溶解し、溶媒を真空中で除去した。暗褐色の粘着性の残渣を、沸騰している酢酸イソプロピル（５００ｍｌ）に溶解し、室温まで冷却し、藩種し（ｓｅｅｄｅｄ）、そして一晩撹拌した。生成された蒼白色のクリーム状の固体を濾過して取り出し、酢酸イソプロピル（１００ｍｌ）で洗浄した。その固体を焼結物内で１時間吸引乾燥し（ｓｕｃｋｅｄ  ｄｒｙ）、次いで、酢酸イソプロピル（４００ｍｌ）から再結晶させた。一晩撹拌した後、形成された固体を濾過して取り出し、酢酸イソプロピル（８０ｍｌ）で洗浄し、真空中で乾燥させることにより、表題化合物を得た。１１０ｇ，６３．５％収率。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣ１３，ｃａ  １．９：１  回転異性体混合物）δ０．９９（６Ｈ，ｔ），２．１０（２Ｈ，ｍ），２．５０（４Ｈ，ｑ），２．５８／２．６２（２Ｈ，２  ｘ  ｔ），２．７０／２．８２（２Ｈ，２  ｘ  ｔ），２．８６（２Ｈ，ｔ），３．２８／３．５８（２Ｈ，２  ｘ  ｔ），４．４５／４．５２（２Ｈ，２  ｘ  ｓ），４．６８／４．７０（２Ｈ，２  ｘ  ｓ），４．９３（２Ｈ，ｓ），６．９５（２Ｈ，ｍ），７．３１（２Ｈ，ｄ），７．３１／７．３７（２Ｈ，２  ｘ  ｍ），７．４８／７．５２（２Ｈ，ｄ），７．６５（２Ｈ，ｍ），７．７２（２Ｈ，ｍ）；ＭＳ（ＡＰＣＩ）（Ｍ＋Ｈ）＋６６７；ｍｐ  １２５℃（ＤＳＣ−ａｓｓｙｍｅｔｒｉｃ  ｅｎｄｏｔｈｅｒｍによる）。
【０１１１】
合成方法の実施例（Ｉ）−１（ｂ）
１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）アミノカルボニル−メチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オンビタルトレート
国際公開第ＷＯ０１／６０８０５号における実施例１の方法によって、ＷＯ０１／６０８０５における中間体Ａ３０およびＢ６９から調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，ｃａ  １：１  回転異性体混合物）０．９２／０．９９（６Ｈ，２ｘ  ｔ），１．９９（２Ｈ，ｍ），２．５４（６Ｈ，ｍ），２．６８／２．７４（４Ｈ，ｍ），３．３６（２Ｈ，ｍ），４．２１（２Ｈ，ｓ），４．３７／４．４４（２Ｈ，２ｘ  ｓ），４，６３／４．７４（２Ｈ，２ｘ  ｓ），４，８９／５．１３（２Ｈ，２ｘ  ｓ），７．０８／７．１４（２Ｈ，２ｘ  ｍ），７．３６−７．５０（４Ｈ，ｍ），７．６４／７．７０（２Ｈ，２ｘ  ｄ），７．８３（４Ｈ，ｍ）；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）測定値（Ｍ＋１）＝６６７；Ｃ３６Ｈ３８Ｆ４Ｎ４Ｏ２Ｓは、６６６を必要とする。
【０１１２】
合成方法の実施例（Ｉ）−１（ｃ）
１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）アミノカルボニル−メチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン塩酸塩
実施例（Ｉ）−１（ａ）からの遊離塩基（３．００ｇ，０．００４５ｍｏｌ）を撹拌しながら、イソプロパノール（３０ｍｌ）に懸濁し、４５℃に温めることにより、透明の溶液を得た。次いで、その溶液を周囲温度まで冷却し、濃塩酸（０．４０ｍｌ，０．０４５ｍｏｌ）を加えた。次いで、得られたスラリーを周囲温度で３５分間撹拌した後、３５分間０℃まで冷却した。次いで、そのスラリーを濾過し、イソプロパノール（１０ｍｌ）で洗浄した後、ヘプタン（３０ｍｌ）で洗浄し、その後、真空下で乾燥させることにより、表題化合物を白色固体として得た（３．００ｇ，９５%）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）δ１．３８（６Ｈ，ｔ），２．０８（２Ｈ，ｍ），２．８２（２Ｈ，ｔ），２．９９（２Ｈ，ｔ），３．１９（４Ｈ，ｍ），３．３５（２Ｈ，ｍ），３．９７（２Ｈ，ｓ），４．４２（２Ｈ，ｓ），４．８１（２Ｈ，ｓ），４．９９（２Ｈ，ｓ），６．８７（２Ｈ，ｔ），７．２６（２Ｈ，ｔ），７．３３（２Ｈ，ｄ），７．４１（２Ｈ，ｄ），７．５３（２Ｈ，ｄ），７．７１（２Ｈ，ｄ），１１．９１（１Ｈ，ｓ）。
【０１１３】
化学式（ＩＩ）の合成
化学式（ＩＩ）の化合物、ならびに上で命名された化合物に対する中間体および最終生成物の例の作製方法の説明は、公開されている国際公開番号第ＷＯ０２／３０９１１号（本明細書中で参照により援用される）に見られる。本発明において有用な化合物を作製するための最後の工程の方法が、実施例（ＩＩ）−１である。
【０１１４】
合成方法の例（ＩＩ）−１
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）アセトアミドビタルトレート
【化７】
0005437996.tif 000008
【０１１５】
ジクロロメタン（１０ｍｌ）中の、Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｎ’−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）−エタン−１，２−ジアミン（ＷＯ０２／３０９１１における中間体Ｄ４）（０．５０ｇ，１．４４ｍｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（０．５６ｇ，１．４５ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（０．１２ｇ）および２−（２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）−エチル］−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル）−酢酸（ＷＯ０２／３０９１１における中間体Ｃ１）（０．４８ｇ，１．４４ｍｍｏｌ）の溶液を周囲温度で一晩撹拌し、次いで、ジクロロメタン（３０ｍｌ）で希釈し、重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、そして蒸発させた。その残渣をクロマトグラフィ（１０ｇシリカカートリッジ、酢酸エチル−アセトン）で精製することにより、表題化合物を黄色泡沫状物（遊離塩基）として得た（０．５０ｇ，５２％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，回転異性体混合物）δ０．８３−０．８９（６Ｈ，ｍ），１．９８（２Ｈ，ｍ），２．４０（４Ｈ，ｍ），２．４５−２．８２（１０Ｈ，ｍ），３．０２（２Ｈ，ｍ），４．６４／４．７５（２Ｈ，２ｘ  ｓ），４．９６／５．１９（２Ｈ，２ｘ  ｓ），７．１１−７．４０（５Ｈ，ｍ），７．６５（２Ｈ，ｍ），７．８４（４Ｈ，ｍ）；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）測定値（Ｍ＋１）＝６６７。
【０１１６】
３７Ｈ３９Ｆ５Ｎ４Ｏ２は、６６６を必要とする。
【０１１７】
ｄ−酒石酸（０．０９ｇ，０．６０ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍｌ）中の上記遊離塩基（０．４０ｇ，０．６０ｍｍｏｌ）の溶液に撹拌しながら加えた。得られた溶液を蒸発させることにより、その塩を得た（０．４９ｇ）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，回転異性体混合物）δ０．８５−０．９７（６Ｈ，ｍ），１．９１−２．００（２Ｈ，ｍ），２．４０−２．４９（４Ｈ，ｍ），２．５４−２．８２（１０Ｈ，ｍ），３．０２−３．４６（２Ｈ，ｍ），４．２０（２Ｈ，ｓ），４．６４／４．７５（２Ｈ，２ｘ  ｓ），４．９７／５．１８（２Ｈ，２ｘ  ｓ），７．１１−７．４０（５Ｈ，ｍ），７．６５（２Ｈ，ｍ），７．８４（４Ｈ，ｍ）；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）測定値（Ｍ＋１）＝６６７；Ｃ３７Ｈ３９Ｆ５Ｎ４Ｏ２は、６６６を必要とする。
【０１１８】
この工程、あるいは国際公開第ＷＯ０２／３０９１１号に記載されている他の工程に従って、式（ＩＩ）の構造を有する上で命名された他の化合物を調製することができる。
【０１１９】
化学式（ＩＩＩ）の合成
化学式（ＩＩＩ）の化合物の全体的な合成は、国際公開第ＷＯ０２／３０９０４号に示されているような以下のスキームＩＩＩにおいて説明される。
【０１２０】
【化８】
0005437996.tif 000009
【０１２１】
このスキームを参照すると、エステル（ＩＶ）は、（ＶＩ）を用いて、（Ｖ）のＮ−１アルキル化によって通常調製され、ここで、Ｒ１１は、本明細書中の前で定義されたとおりであり、例えば、（ＶＩ）は、塩基、例えば、ＴＨＦ中のＢｕＬｉまたはＮ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）中の水素化ナトリウムの存在下における、ブロモ酢酸ｔ−ブチルまたはブロモ酢酸エチルである（工程ｃ）。
【０１２２】
Ｘが、ＣＨ２Ｓであるとき、低温でトリメチルスルホニウムヨージドを水素化ナトリウムで処理することによって生成されるジメチルオキソスルホニウムメチリドと（ＸＸ）を反応させることによって硫黄イリド（ＸＸＩＩ）を得て（工程ｑ）、それにより、重要な中間体（ＩＶ）を合成することができる。その後、ジイソプロピルアミンの存在下において（ＸＸＩＩ）を二硫化炭素で処理した後、Ｒ１ＣＨ２−Ｌ４（Ｌ４は、脱離基である）で処理することにより、中間体（ＩＶ）が得られる（工程ｒ）。
【０１２３】
あるいは、Ｘが、ＣＨ２Ｓであるとき、ピリジン（ＶＩＩＩ）またはピリジンＮ−オキシド（ＸＩＶ）のいずれか上の脱離基Ｌ２（例えば、Ｃｌ）を置換することによって、Ｒ１Ｘ置換基を導入することにより、２−置換ピリジン（ＶＩＩ）および（ＸＶ）を得ることができる（工程ｅ）。（ＶＩＩ）または（ＸＶ）を４−ピリドン（Ｖ）に変換するのは、４−酸素の脱保護（例えば、Ｒ１２＝アリルのとき、エタノール水溶液中の（Ｐｈ３Ｐ）３ＲｈＣｌを用いる）（工程ｄ）の後、（ＸＶＩ）に対して、酢酸中のＰｄ／Ｃの存在下において水素を用いてＮ−オキシド置換基を除去すること（工程ｋ）によって達成される。ピリジン（ＶＩＩＩ）またはピリジンＮ−オキシド（ＸＩＶ）は、工程（ｉ）、（ｈ）、（ｇ）、（ｆ）および（ｊ）：
（ｊ）ジクロロメタン中において、ｍ−クロロ過安息香酸で（ＶＩＩＩ）を処理する工程；
（ｆ）Ｒ１２ＯＨ（Ｘ）（Ｒ１２は、アリルである）およびＤＭＦ中の水素化ナトリウムで（ＩＸ）を処理する工程；
（ｇ）オキシ塩化リンで（ＸＩ）を処理する工程；
（ｈ）加熱しながらａｑＨＣｌで（ＸＩＩ）を処理する工程；
（ｉ）アルコール中のジ−低級アルキルマロネートおよびナトリウムアルコキシド（Ｒ１３は、Ｃ（１−６）アルキルであり、典型的には、Ｒ１３＝Ｅｔである）で（ＸＩＩＩ）を処理する工程；
によって調製され得、
Ｒ１−ＣＨ２ＳＨ（ＸＩＸ）は、典型的には、対応するアルキルブロミドＲ１−ＣＨ２Ｂｒから形成されるチオアセテートから調製される。
【０１２４】
あるいは、Ｘが、ＣＨ２Ｓであり、Ｒ２およびＲ３が、それらが結合しているピリドン環炭素原子と一緒になって、縮合ベンゾ環を形成するとき、中間体（ＩＶ）は、公知の出発物質から、工程（ｓ）、（ｃ）および（ｖ）：
（ｓ）低温でＭｅｌｄｒｕｍ酸（ＸＸＩＩＩ）を水素化ナトリウムで処理した後、フェニルイソチオシアネートと反応させ、続いて、Ｒ１ＣＨ２−Ｌ４で処理する工程；
（ｃ）本明細書中の前で述べたとおりの工程；
（ｖ）（ＸＸＶ）をトリフルオロ酢酸で処理する工程
によって合成され得る。
【０１２５】
Ｘが、アルキレンであるとき、工程（ｍ）および（ｈ）（中間体（ＸＶＩＩ）、（ＸＶＩＩＩ））または工程（ｎ）および（ｐ）（中間体（ＸＩＸ）、（ＸＸ）、（ＸＸＩ））を使用することが好ましく、ここで、
（ｈ）例えば（ＸＶＩＩ）Ｒ１４＝ＣｌをａｑＨＣｌおよびジオキサンで処理するか、または例えば工程（ｄ）の条件を用いて、Ｒ１４＝ＯＲ１２を脱保護することによって、４−置換ピリジンを４−ピリドンに変換する工程。
【０１２６】
（ｍ）２−メチルピリジン（ＸＶＩＩＩ）をＲ１−Ｙ−ＣＨ２−Ｌ４（ＸＶＩ）（Ｌ４は、脱離基およびＴＨＦ中のＢｕＬｉなどの強塩基）で処理することによって、２−アルキルピリジン（例えば、Ｘ＝ＹＣＨ２ＣＨ２である）を鎖伸長する工程。
【０１２７】
代替の経路では、ジフェニルエーテル中で加熱することによって、３−エステル基を中間体（ＸＩＸ）Ｒ１５＝Ｃ（１−６）アルキルから除去し（ここで、Ｒ１５＝ｔＢｕ（工程ｎ））；塩基（例えば、ＤＭＦ中のＮａＨまたはジクロロメタン中の１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン）で処理することによって、２，６−ジオキソ−１，３−オキサジン（ＸＸ）およびエステル（ＸＸＩ）から、中間体（ＸＩＸ）が形成される。
【０１２８】
公知の出発物質からの（ＸＸ）の合成は、工程（ｗ）および（ｃ）または工程（ｙ）および（ｃ）を介して達成され得、ここで、
（ｗ）（ＸＸＶＩＩ）をＴＨＦ中のアジドトリメチルシランで処理する工程、
（ｙ）（ＸＸＶＩ）をホスゲンで処理する工程、
（ｃ）本明細書中の前に記載したとおりの工程。
【０１２９】
さらなる詳細および式（ＩＩＩ）の化合物の作製方法に関する解説については、ＷＯ０２／３０９０４（本明細書中で参照により援用される）を参照のこと。
【０１３０】
合成方法の実施例（ＩＩＩ）−１
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）アセトアミド
【化９】
0005437996.tif 000010
【０１３１】
ジクロロメタンの代わりに溶媒としてＤＭＦを用いることを除いて、ＷＯ０２／３０９０４における実施例１の方法によって、上記遊離塩基を、中間体Ｅ１および中間体Ａ４２から調製した。１．９７ｇのこの材料を酢酸ｎ．ブチル（１０ｍｌ）から結晶化することにより、表題化合物を得た（１．３５ｇ）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．７−２．０５（４Ｈ，ｍ），２．０５−２．３（２Ｈ，２ｘｔ），２．５−２．６５（２Ｈ，ｍ），２．９５−３．１（２Ｈ，ｍ），３．３（３Ｈ，ｓ），３．４５−３．５５（２Ｈ，ｍ），３．９−４．０５＋４．４−４．５（１Ｈ，２ｘｍ），４．３７＋４．４８（２Ｈ，２ｘｓ），４．７１＋４．８７（２Ｈ，２ｘｂｒ  ｓ），５．３１＋５．６８（２Ｈ，２ｘｓ），６．４４＋６．５２（１Ｈ，２ｘｓ），６．９５−７．３（３Ｈ，ｍ），７．３５−７．８５（１１Ｈ，ｍ），８．２−８．３５（１Ｈ，ｍ）；ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）測定値（Ｍ＋１）７３６；Ｃ４０Ｈ３８Ｆ５Ｎ３Ｏ３Ｓは、７３５を必要とする。
【０１３２】
化学式（ＩＶ）の合成
以下のフローチャートには、本発明の化合物を作製するためのプロセスが説明されている。
【０１３３】
【化１０】
0005437996.tif 000011
【０１３４】
さらに、本読者であれば、このフローチャートに明確に記載されている中間体のいくつかを調製する際に有用であり得る化学について、公開されているＰＣＴ出願ＷＯ０３／０１６２８７について参照されたい。それらの化学は、それらがこの場合に有用な程度に、それが本明細書中ですべて明確に記載されるかのように本明細書中で参照により援用される。さらに、公開されている国際公開第ＷＯ０１／６０８０５号、第ＷＯ０２／３０９１１号、第ＷＯ０２／３０９０４号、第ＷＯ０３／０４２２１８号、第ＷＯ０３／０４２２０６号、第ＷＯ０３／０４１７１２号、第ＷＯ０３／０８６４００号および第ＷＯ０３／８７０８８号ならびに同時係属中の米国仮出願第６０／８２９，３２８号および第６０／８２９，３２７号（上述したいずれもが２００６年１０月１３日付け出願）中に明確に記載されている合成についても参照する。これらの公開されている国際出願および同時係属中の米国出願は、本読者が、前述の頁における経路におけるもの以外の中間体、試薬、溶媒、時間、温度などを用いることによって化学式（ＩＶ）の化合物を調製したいと望む程度のものに関する有用なガイダンスを提供するものである。これらの出願における化学が、本化合物を作製するために適切である限り、それらの材料は、本明細書中で参照により援用される。
【０１３５】
中間体（ＩＶ）−Ａ１｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミン
【０１３６】
【化１１】
0005437996.tif 000012
【０１３７】
この化合物の調製は、中間体Ｄ７として国際公開第ＷＯ０２／３０９１１号に記載されている。
【０１３８】
中間体（ＩＶ）−Ａ２（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）アミン塩酸塩
【０１３９】
【化１２】
0005437996.tif 000013
【０１４０】
エタノール（２０００ｍｌ）および濃塩酸（１００ｍｌ）中の、４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニルカルボニトリル（４’−トリフルオロメチルアナログであるＷＯ０２／３０９１１の中間体Ｄ６について記載されている方法と類似の方法によって｛４−［（トリフルオロメチル）オキシ］フェニル｝ボロン酸から調製されるもの）（６６．６ｇ）の溶液を、還元が完了するまで、２５ｐｓｉにおいてＰｅａｒｌｍａｎ触媒（１０ｇ）で水素化した。触媒をセライトで濾過することによって除去し、次いで、溶媒を真空中で除去することにより、所望の生成物を得た。
【０１４１】
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．２１２分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝２５１．０。
【０１４２】
化学式（ＩＶ）を作製するための中間体
中間体（ＩＶ）−Ａ３
２−メチル−２−（４−オキソ−１−ピペリジニル）プロパン酸メチル
【０１４３】
【化１３】
0005437996.tif 000014
【０１４４】
２−ブロモ−２−メチルプロパノン酸メチル（８０．８７ｍｌ，５当量）と、４−ピペリドン塩酸塩一水和物（１９．６ｇ，１当量）と、アセトニトリル（２００ｍｌ）と、炭酸カリウム（６９．１ｇ，４当量）との混合物を、機械的に撹拌しながら、１７．５時間にわたって窒素下で加熱還流し、次いで、氷浴中で冷却した後、ジエチルエーテル（１００ｍｌ）を加えた。セライトで濾過した後、フラッシュクロマトグラフィ（シリカ，ヘキサン中の１０〜５０％酢酸エチル）に供し、生成物の画分を蒸発させることにより、所望の生成物を黄色油状物として得た（１４．２８ｇ）。
【０１４５】
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．４１（６Ｈ，ｓ），２．４７（４Ｈ，ｍ），２．８８（４Ｈ，ｍ），３．７３（３Ｈ，ｓ）．
中間体（ＩＶ）−Ａ４
２−メチル−２−（４−オキソ−１−ピペリジニル）プロパン酸エチル
【０１４６】
【化１４】
0005437996.tif 000015
【０１４７】
２−ブロモ−２−メチルプロパン酸エチル（４８．３ｍｌ，５当量）と、４−ピペリドン塩酸塩一水和物（１００ｇ，１当量）と、アセトニトリル（１２１６ｍｌ）と、炭酸カリウム（３５３ｇ，４当量）との混合物を、機械的に撹拌しながら、２０時間にわたって窒素下で加熱還流し、次いで、氷浴中で冷却した後、ジエチルエーテル（約１４００ｍｌ）を加えた。その混合物をセライトで濾過し、真空中で蒸発させ、次いで、過剰量のブロモエステルを蒸留して除去した（５０℃の蒸留器ヘッド温度／１０Ｔｏｒｒ）。フラッシュクロマトグラフィ（シリカ，ヘキサン中の５〜３０％酢酸エチル）に供し、生成物の画分を蒸発させることにより、粗生成物を黄色油状物として得た。いくらか残存しているブロモエステル夾雑物を除去するために、これを酢酸エチルと２Ｍ塩酸水溶液との間で分配させた。有機層を廃棄し、水層を、塩化ナトリウムで飽和された炭酸ナトリウムで塩基性化し、酢酸エチルで抽出した。乾燥させ、有機抽出物を蒸発させることにより、所望の生成物を黄色油状物として得た（５４．７ｇ）。
【０１４８】
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．２７（３Ｈ，ｔ），１．４０（６Ｈ，ｓ），２．４７（４Ｈ，ｍ），２．９０（４Ｈ，ｍ），４．２０（２Ｈ，ｑ）。
【０１４９】
中間体（ＩＶ）−Ａ５
１，１−ジメチルエチル２−メチル−２−（４−オキソ−１−ピペリジニル）プロパノエート
【０１５０】
【化１５】
0005437996.tif 000016
【０１５１】
１，１−ジメチルエチル２−ブロモ−２−メチルプロパノエート（８．０ｇ，１．１当量）と、４−ピペリドン塩酸塩（５．０ｇ，１当量）と、アセトン（５０ｍｌ）と、炭酸カリウム（１３．０ｇ，３当量）との混合物を、撹拌しながら２４時間にわたって加熱還流し、次いで、濾過し、その濾液を蒸発させた。粗残渣を精製することなく、次の工程で使用した。
【０１５２】
ＥＳ＋ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ−ｔＢｕ］＋＝１８６．１。
【０１５３】
中間体（ＩＶ）−Ｂ１
メチル２−メチル−２−［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］プロパノエート
【０１５４】
【化１６】
0005437996.tif 000017
【０１５５】
メチル２−メチル−２−（４−オキソ−１−ピペリジニル）プロパノエート（中間体Ａ３）（１４．２８ｇ，１当量）と、｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミン（中間体Ａ１）（１９．６ｇ，０．８５当量）と、ＤＣＥ（３００ｍｌ）と、酢酸（３．８ｍｌ，０．９０当量）と、トリアセトキシホウ水素化ナトリウム（２０．７ｇ，１．２５当量）との混合物を、室温、窒素下において１７．５時間にわたって撹拌した。炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ溶液，過剰量）を加え、４時間にわたって撹拌し、次いで、その混合物をジエチルエーテルとＴＨＦとの混合物で抽出した。有機抽出物を水およびブラインで逆洗し、硫酸ナトリウムで乾燥し、シリカゲルのパッドで濾過し、それをＤＣＭ中の２．５％メタノールですすいだ。真空中で蒸発させた後、粗生成物をエーテル／ヘキサンから結晶化させ、最後に氷浴温度において、それを乾燥させた後、白色固体を得た（２０．９ｇ）。
【０１５６】
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．０７０分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３５．２
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）δ１．１５−１．３２（８Ｈ，ｍ），１．７５−１８７（２Ｈ，ｍ），１．９７−２．１２（２Ｈ，ｍ），２．２７−２．４０（１Ｈ，ｍ），２．７７−２．９０（２Ｈ，ｍ），３．６０（３Ｈ，ｓ），３．７６（２Ｈ，ｓ），７．４６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０３Ｈｚ），７．６７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２８Ｈｚ），７．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ），７．８８（２Ｈ，ｄ，８．０３Ｈｚ）。
【０１５７】
中間体（ＩＶ）−Ｂ２
２−メチル−２−［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］プロパン酸エチル
【０１５８】
【化１７】
0005437996.tif 000018
【０１５９】
２−メチル−２−（４−オキソ−１−ピペリジニル）プロパン酸エチル（中間体Ａ４）（２５．６ｇ，１．２当量）と、｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミン（中間体Ａ１）（３１．１ｇ，１．０当量）と、ＤＣＥ（４００ｍｌ）と、酢酸（６．３ｍｌ，１．１当量）との混合物を、窒素下、室温において撹拌した。トリアセトキシホウ水素化ナトリウム（３３．５ｇ，１．５当量）を加え、撹拌を１９時間にわたって続けた。炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ溶液、過剰量）を加え、１．５時間にわたって撹拌し、次いで、その混合物をジエチルエーテルとＴＨＦとの混合物で抽出した。その有機抽出物を水およびブラインで逆洗し、シリカゲルのパッドで濾過し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして真空中で蒸発させた。所望の生成物を白色固体として得て（４４．２ｇ）、それをさらに精製することなく使用した。
【０１６０】
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．１９４分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４４９．３
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）δ１．０６−１．３２（１１Ｈ，ｍ），１．７４−１．８９（２Ｈ，ｍ），１．９９−２．１４（２Ｈ，ｍ），２．２５−２．３９（１Ｈ．ｍ），２．６９−２．８９（２Ｈ，ｍ），３．７５（２Ｈ，ｓ），４．０１−４．１２（２Ｈ，ｍ），７．４５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５５Ｈｚ），７．６７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８１Ｈｚ），７．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０６Ｈｚ），７．８８（２Ｈ．ｄ，Ｊ＝８．０６Ｈｚ）。
【０１６１】
中間体（ＩＶ）−Ｂ３
２−メチル−２−｛４−［（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）アミノ］−１−ピペリジニル｝プロパン酸エチル
【０１６２】
【化１８】
0005437996.tif 000019
【０１６３】
エチル２−メチル−２−（４−オキソ−１−ピペリジニル）プロパノエート（中間体Ａ４）（１．０９ｇ，１．２当量）と、（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）アミン塩酸塩（中間体Ａ２）（１．２８ｇ，１．０当量）と、ＤＣＥ（２１ｍｌ）と、酢酸（０．２７ｍｌ，１．１当量）との混合物を、窒素下、室温で撹拌した。トリアセトキシホウ水素化ナトリウム（１．４２ｇ，１．５当量）を加え、３時間にわたって撹拌を続けた。炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ溶液，過剰量）を加え、４５分間撹拌し、次いで、その混合物をジエチルエーテル／ＴＨＦと水との混合物で分配させた。有機抽出物を水およびブラインで逆洗し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で蒸発させた。所望の生成物を淡黄色固体として得て（２．１４ｇ）、それをさらに精製することなく使用した。
【０１６４】
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．２４４分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４６５．３。
【０１６５】
中間体（ＩＶ）−Ｂ４
１，１−ジメチルエチル２−メチル−２−［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］プロパノエート
【０１６６】
【化１９】
0005437996.tif 000020
【０１６７】
１，１−ジメチルエチル２−メチル−２−（４−オキソ−１−ピペリジニル）プロパノエート（中間体Ａ６）（３７０ｍｇ，１．２当量）と、｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミン（中間体Ａ１）（３９７ｍｇ，１当量）と、トリアセトキシホウ水素化ナトリウム（４００ｍｇ，１．５当量）と、ＤＣＭ（１０ｍｌ）と、酢酸（０．０７６ｍｌ，１当量）との混合物を併せ、ＬＣＭＳによってアミン出発物質の消失が確認されるまで（約１８時間）、室温で撹拌した。炭酸ナトリウム水溶液を加え、次いで、ＤＣＭで抽出した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮することにより、固体を得て（４２０ｍｇ）、それをさらに精製することなく使用した。
【０１６８】
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．２４分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７７．３。
【０１６９】
中間体（ＩＶ）−Ｃ１
［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］酢酸
【０１７０】
【化２０】
0005437996.tif 000021
【０１７１】
この化合物の調製は、中間体Ｃ４３としてＷＯ０２／３０９１１に記載されていた。
【０１７２】
中間体（ＩＶ）−Ｃ２
［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−１（４Ｈ）−イル］酢酸
【０１７３】
【化２１】
0005437996.tif 000022
【０１７４】
この化合物の調製は、中間体Ｅ２１としてＷＯ０２／３０９０４に記載されていた。
【０１７５】
中間体（ＩＶ）−Ｃ３
［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］酢酸
【０１７６】
【化２２】
0005437996.tif 000023
【０１７７】
この化合物の調製は、中間体Ｃ４５としてＷＯ０２／３０９１１に記載されていた。
【０１７８】
中間体（ＩＶ）−Ｃ４
エチル［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセテート
【０１７９】
【化２３】
0005437996.tif 000024
【０１８０】
エチル（２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（２Ｈ）−イル）アセテート（国際公開第ＷＯ０２／３０９１１号，中間体Ｂ５２）（４０．８ｇ，１．２当量）と、３−（２，４−ジフルオロフェニル）プロパンイミドアミド（ＷＯ０２／３０９１１の２，３−ジフルオロ異性体の中間体Ａ１〜Ａ３について記載されている方法と類似の方法によって作製されるもの）（３０．０ｇ，１当量）との混合物を、１５０℃の油浴内において２５分間にわたって融解し、次いで、水浴内で室温まで急冷した。クロマトグラフィ（シリカ、粗生成物をＤＣＭ中で充填し、ヘキサン中の５０〜１００％酢酸エチルで溶出）によって、所望の生成物を得た（４３．５６ｇ）。
【０１８１】
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．５２１分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７４．１
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．３１（３Ｈ，ｔ），３．１３（２Ｈ，ｍ），３．２６（２Ｈ，ｍ），４．２８（２Ｈ，ｑ），５．２７（２Ｈ，ｓ），６．８２（２Ｈ，ｍ），７．３４（１Ｈ，ｍ），７．５０（１Ｈ，ｍ），８．６５（１Ｈ，ｍ），８．７４（１Ｈ，ｍ）。
【０１８２】
中間体（ＩＶ）−Ｃ５
［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］酢酸
【０１８３】
【化２４】
0005437996.tif 000025
【０１８４】
この化合物の調製は、中間体Ｃ３５としてＷＯ０２／３０９１１に記載されていた。
【０１８５】
中間体（ＩＶ）−Ｃ５
［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］酢酸
【０１８６】
【化２５】
0005437996.tif 000026
【０１８７】
エチル［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセテート（中間体Ｃ１）（３２．７６ｇ，１当量）をエタノール（３５０ｍｌ）および水（７０ｍｌ）に溶解し、氷中で冷却し、次いで、水酸化リチウム水溶液（２Ｍ溶液，４３．４２ｍｌ，０．９９当量）を加えた。撹拌を室温において２時間にわたって続けた。その溶液を真空中で濃縮し、残渣を水（７００ｍｌ）および飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）に再溶解し、次いで、酢酸エチル（２００ｍｌ）で洗浄した。水層を、２Ｍ塩酸を用いてｐＨ２に酸性化し、沈殿物を濾過して取り出し、氷水（５０ｍｌ）で洗浄し、真空中で乾燥させる（５０℃，１６時間）ことにより、所望の生成物を得た（２３．２ｇ）。
【０１８８】
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）δ２．４−２．６（４Ｈ，ｍ），５．２４（２Ｈ，ｓ），７．０４（１Ｈ，ｍ），７．２２（１Ｈ，ｍ），７．４８（１Ｈ，ｍ），７．６０（１Ｈ，ｍ），８．４７（１Ｈ，ｍ），８．８４（１Ｈ，ｍ）。
【０１８９】
実施例（ＩＶ）−１
メチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエート２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（塩）
【０１９０】
【化２６】
0005437996.tif 000027
【０１９１】
［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］酢酸（中間体Ｃ１）（１００ｍｇ，１当量）と、メチル２−メチル−２−［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］プロパノエート（中間体Ｂ１）（１３０ｍｇ，１．０３当量）と、ＤＩＰＥＡ（０．１ｍｌ，３．６当量）と、アセトニトリル（２ｍｌ）と、ＨＡＴＵ（１３０ｍｇ，１．４当量）との混合物を、室温で１時間撹拌し、次いで、蒸発させ、アセトニトリルに再溶解した。逆相ＨＰＬＣによって精製する（調製方法Ａ）ことにより、メチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエートを得た（１２８ｍｇ）。
【０１９２】
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．６８６分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７６１．３
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．３３（３Ｈ，ｓ），１．３６（３Ｈ，ｓ），１．８３−２．０２（４Ｈ，ｍ），２．３６−２．４８（２Ｈ，ｍ），２．８７−２．９１（１Ｈ，ｍ），３．０６−３．０９（２Ｈ，ｍ），３．１６−３．２０（２Ｈ，ｍ），３．２６−３．２９（１Ｈ，ｍ），３．７１−３．７３（３Ｈ，ｍ），４．０２／４．５１（１Ｈ，２ｘ  ｂｒ  ｍ），４．７４（１Ｈ，ｓ），４．９２（１Ｈ，ｓ），５．１２（１Ｈ，ｓ），５．５６（１Ｈ，ｓ），７．００−７．１９（３Ｈ，ｍ），７．３２−７．３７（１Ｈ，ｍ），７．４８−７．６２（５Ｈ，ｍ），７．７２−７．８１（５Ｈ，ｍ），８．２２−８．２８（１Ｈ，ｍ）。
【０１９３】
Ｌ−酒石酸（１．６７５ｇ，１．０当量）を一度に加えることによって、遊離塩基を重酒石酸塩に変換し、室温で３０分間撹拌した。その溶液を真空中で濃縮することにより、室温において真空オーブン内で乾燥させたオフホワイトの粉末を得た。
【０１９４】
合成方法の実施例（ＩＶ）−２
メチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエート２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（塩）
【０１９５】
【化２７】
0005437996.tif 000028
【０１９６】
［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−１（４Ｈ）−イル］酢酸（中間体Ｃ２）（１００ｍｇ，１当量）と、カルボニルジイミダゾール（５０ｍｇ，１．０５当量）と、ジメチルアセトアミド（４ｍｌ）との混合物を、６０℃で３０分間撹拌し、次いで、メチル２−メチル−２−［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］プロパノエート（中間体Ｂ１）（１３２ｍｇ，１．０５当量）を加え、温度を２時間にわたって８０℃に上げた。さらにカルボニルジイミダゾール（０．５当量）を加え、１５時間にわたって８０℃で撹拌を続けた。冷却した後、粗混合物を逆相ＨＰＬＣに供する（調製方法Ａ）ことにより、メチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエートを得た（９９ｍｇ）。
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．８４５分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７６１．３
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．２８（３Ｈ，ｓ），１．３１（３Ｈ，ｓ），１．７３−２．０５（４Ｈ，ｍ），２．２５（１Ｈ，ｔ），２．３９−２．４６（１Ｈ，ｍ），２．９６−２．９９（１Ｈ，ｍ），３．００−３．１２（４Ｈ，ｍ），３．１９（１Ｈ，ｓ），３．６８−３．７３（３Ｈ，ｍ），４．１１／４．４１（１Ｈ，２ｘ  ｂｒ  ｍ），４．７３（１Ｈ，ｓ），４．９７（１Ｈ，ｓ），５．５１（１Ｈ，ｓ），６．２９−６．３４（１Ｈ，ｍ），７．０６−７．２０（２Ｈ，ｍ），７．３５−７．４１（１Ｈ，ｍ），７．４８−７．５８（２Ｈ，ｍ），７．６８−７．８４（６Ｈ，ｍ），８．６０−８．６８（１Ｈ，ｍ），８．８７−８．９１（１Ｈ，ｍ）。
【０１９７】
これを、合成方法の実施例（Ｉ）に記載された方法と類似の方法によって重酒石酸塩に変換した。
【０１９８】
合成方法の実施例（ＩＶ）−３
エチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエート２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（塩）
【０１９９】
【化２８】
0005437996.tif 000029
【０２００】
［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］酢酸（中間体Ｃ１）（１１５ｍｇ，１当量）と、エチル２−メチル−２［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］プロパノエート（中間体Ｂ２）（１５０ｍｇ，１当量）と、ＨＡＴＵ（１５１ｍｇ，１．２当量）と、ＤＭＦ（２．７ｍｌ）と、ＤＩＰＥＡ（０．１７ｍｌ，３当量）との混合物を、室温において５時間にわたって振盪した。その反応混合物を酢酸エチル／メタノールと重炭酸ナトリウム水溶液との間で分配させ、次いで、有機層をブラインで洗浄し、乾燥させた。フラッシュクロマトグラフィ（シリカ，ＤＣＭ中の３〜４％メタノール）によって、エチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエートを白色固体として得た（１９０ｍｇ）。
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．５５分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７７５．３
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．１８−１．４０（９Ｈ，ｍ），１．６１−２．０９（４Ｈ，ｍ），２．２２−２．４５（２Ｈ，ｍ），２．７５−２．８５（１Ｈ，ｍ），２．９０−３．３４（５Ｈ，ｍ），３．７１／４．６６（１Ｈ，２ｘ  ｍ），４．１２−４．２６（２Ｈ，ｍ），４．７０−４．８５（３Ｈ，ｍ），５．０８（１Ｈ，ｓ），６．８０−６．８８（１Ｈ，ｍ），６．９５−７．１３（３Ｈ，ｍ），７．２７−７．３３（１Ｈ，ｍ），７．３４−７．５２（３Ｈ，ｍ），７．５６−７．６２（１Ｈ，ｍ），７．６３−７．７７（４Ｈ，ｍ），８．２９−８．４４（２Ｈ，ｍ）。
【０２０１】
これを、合成方法の実施例（Ｉ）に記載された方法と類似の方法によって重酒石酸塩に変換した。
【０２０２】
合成方法の実施例（ＩＶ）−４
エチル２−｛４−［｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］アセチル｝（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）アミノ］−１−ピペリジニル｝−２−メチルプロパノエート２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（塩）
【０２０３】
【化２９】
0005437996.tif 000030
【０２０４】
［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］酢酸（中間体Ｃ１）（１２４ｍｇ，１．２当量）と、エチル２−メチル−２−｛４−［（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）アミノ］−１−ピペリジニル｝プロパノエート（中間体Ｂ３）（１３９ｍｇ，１当量）と、ＤＭＦ（１．２ｍｌ）と、ＤＩＰＥＡ（０．１６ｍｌ，３当量）との混合物を、室温において３０分間振盪し、次いで、ＨＡＴＵ（１７６ｍｇ，１．５当量）を加え、４時間にわたって振盪を続けた。逆相ＨＰＬＣ（調製方法Ｂ）によって、エチル２−｛４−［｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］アセチル｝（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）アミノ］−１−ピペリジニル｝−２−メチルプロパノエートを白色固体として得た（１７４ｍｇ）。
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．７７分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７９１．３
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）特性ピーク：δ１．２１−１．４２（９Ｈ，ｍ），１．５８−２．０８（４Ｈ，ｍ），２．２０−２．４８（２Ｈ，ｍ），２．７１−５．１（１３Ｈ，ｂｒ  ｍ），６．７９−６．８７（１Ｈ，ｄ），６．９２−７．１１（３Ｈ，ｍ），７．３０−７．４６（５Ｈ，ｍ），７．４８−７．６３（５Ｈ，ｍ），８．２６−８．４０（１Ｈ，ｍ）。
【０２０５】
これを、合成方法の実施例（Ｉ）に記載された方法と類似の方法によって重酒石酸塩に変換した。
【０２０６】
合成方法の実施例（ＩＶ）−５
メチル２−［４−（｛［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエート２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（塩）
【０２０７】
【化３０】
0005437996.tif 000031
【０２０８】
［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］酢酸（中間体Ｃ３）（１００ｍｇ，１当量）と、メチル２−メチル−２−［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］プロパノエート（中間体Ｂ１）（１３０ｍｇ，１．０３当量）と、ＤＩＰＥＡ（０．１ｍｌ，２当量）と、アセトニトリル（２ｍｌ）と、ＨＡＴＵ（１３０ｍｇ，１．４当量）との混合物を、室温において１時間撹拌し、次いで、蒸発させ、アセトニトリルに再溶解した。逆相ＨＰＬＣによる精製（調製方法Ｂ）によって、メチル２−［４−（｛［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエートを得た（１２６ｍｇ）。
【０２０９】
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．６９８分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７６１．３
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．３０（３Ｈ，ｓ），１．３４（３Ｈ  ｓ），１．８１−２．０３（４Ｈ，ｍ），２．２９−２．３５（１Ｈ，ｍ），２．３９−２．４５（１Ｈ，ｍ），２．８２−２．８７（１Ｈ，ｍ），３．００−３．１４（４Ｈ，ｍ），３．１９−３．２４（１Ｈ，ｍ），３．７０−３．７３（３Ｈ，ｍ），４．００／４．５１（１Ｈ，２ｘ  ｂｒ  ｍ），４．７４（１Ｈ，ｓ），４．９１（１Ｈ，ｓ），５．１０（１Ｈ，ｓ），５．５４（１Ｈ，ｓ），６．７７−６．８４（１Ｈ，ｍ），６．８７−６．９８（１Ｈ，ｍ），７．２８−７．４３（２Ｈ，ｍ），７．４８−７．６１（５Ｈ，ｍ），７．７３−７．８１（５Ｈ，ｍ），８．２３−８．２９（１Ｈ，ｍ）。
【０２１０】
これを、合成方法の実施例（Ｉ）に記載された方法と類似の方法によって重酒石酸塩に変換した。
【０２１１】
合成方法の実施例（ＩＶ）−６
エチル２−［４−（｛［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエート２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（塩）
【０２１２】
【化３１】
0005437996.tif 000032
【０２１３】
［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］酢酸（中間体Ｃ３）（１２０ｍｇ，１当量）と、エチル２−メチル−２−［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］プロパノエート（中間体Ｂ２）（２０４ｍｇ，１．３当量）と、ＤＭＦ（１．４ｍｌ）と、ＤＩＰＥＡ（０．１８３ｍｌ，３当量）との混合物を室温で振盪し、次いで、激しく振動させながらＨＡＴＵ（２０６ｍｇ，１．５当量）を加え、１．５時間にわたって振盪を続けた。さらに中間体Ｄ５（１２ｍｇ，０．１当量）を加え、次いで、振盪を２日間続けた。逆相ＨＰＬＣ（調製方法Ｂ）によって、エチル２−［４−（｛［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエートを白色固体として得た（１７３ｍｇ）。
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．７５１分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７７５．３
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（回転異性体の混合物）特性ピーク：１．２２−１．４７（９Ｈ，ｍ），１．６３−２．１０（４Ｈ，ｍ），２．１６−５．１１（１５Ｈ，ｂｒ  ｍ），６．７５−６．８８（２Ｈ，ｍ），７．１４−７．８０（１２Ｈ，ｍ），８．２６−８．４０（１Ｈ，ｍ）。
【０２１４】
これを、合成方法の例（Ｉ）に記載された方法と類似の方法によって重酒石酸塩に変換した。
【０２１５】
合成方法の実施例（ＩＶ）−７
エチル２−｛４−［｛［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］アセチル｝（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）アミノ］−１−ピペリジニル｝−２−メチルプロパノエート２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（塩）
【０２１６】
【化３２】
0005437996.tif 000033
【０２１７】
［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］酢酸（中間体Ｃ３）（１１４ｍｇ，１．１当量）と、エチル２−メチル−２−｛４−［（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）アミノ］−１−ピペリジニル｝プロパノエート（中間体Ｂ３）（１３９ｍｇ，１当量）と、ＤＭＦ（１．２ｍｌ）と、ＤＩＰＥＡ（０．１６ｍｌ，３当量）との混合物を、室温で振盪し、次いで、激しく振動させながらＨＡＴＵ（１７６ｍｇ，１．５当量）を加え、振盪を３０分間続けた。さらに中間体Ｄ５（２１ｍｇ，０．２当量）を加えた１時間後に、さらにＨＡＴＵ（２３ｍｇ，０．２当量）を加え、次いで、１８時間にわたって振盪を続けた。逆相ＨＰＬＣ（調製方法Ｂ）によって、エチル２−｛４−［｛［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］アセチル｝（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）アミノ］−１−ピペリジニル｝−２−メチルプロパノエートを白色固体として得た（１４９ｍｇ）。
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．７９３分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７９１．３
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）特性ピーク：δ１．２０−１．４５（９Ｈ，ｍ），１．５８−２．１２（４Ｈ，ｍ），２．１４−２．４８（２Ｈ，ｍ），２．６２０−５．１１（１１Ｈ，ｍ），６．５９−６．７２（１Ｈ，ｍ），６．７３−６．９０（２Ｈ，ｍ），７．１６−７．６４（１１Ｈ．ｍ），８．２５−８．４０（１Ｈ，ｍ）。
【０２１８】
これを、合成方法の実施例（ＩＩ）に記載された方法と類似の方法によって重酒石酸塩に変換した。
【０２１９】
合成方法の実施例（ＩＶ）−８
２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパン酸トリフルオロアセテート
【０２２０】
【化３３】
0005437996.tif 000034
【０２２１】
１，１−ジメチルエチル２−メチル−２−［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］プロパノエート（中間体Ｂ４）（１当量）と、［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−１（４Ｈ）−イル］酢酸（中間体Ｃ２）（１．２当量）と、ＤＩＰＥＡ（３当量）と、ＤＭＦ（１．０ｍｌ）との混合物を、室温で５分間撹拌する。ＨＡＴＵ（１．５当量）を一度に加え、さらに５分間撹拌する。粗反応混合物を濃縮し、アセトンで溶出されるシリカのプラグで濾過し、蒸発させることにより、粗１，１−ジメチルエチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエートを得る。
【０２２２】
そのプロパノエートを単離せずに、ＴＦＡとＤＣＭとの１：１混合物に溶解し、４時間にわたってＲＴで撹拌する。蒸発させ、分取ＨＰＬＣ（方法Ａ）によって、表題化合物を得る。
【０２２３】
従来の手段によって、他の塩を調製することができる。遊離塩基もまた、従来の手段によって調製することができる。
【０２２４】
合成方法の実施例（ＩＶ）−９
２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパン酸トリフルオロアセテート
【０２２５】
【化３４】
0005437996.tif 000035
【０２２６】
１，１−ジメチルエチル２−メチル−２−［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］プロパノエート（中間体Ｂ４）（１当量）と、［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］酢酸（中間体Ｃ１）（１．２当量）と、ＤＩＰＥＡ（３当量）と、ＤＭＦ（１．０ｍｌ）との混合物を、室温で５分間撹拌する。ＨＡＴＵ（１．５当量）を一度に加え、さらに５分間撹拌する。粗反応混合物を濃縮し、アセトンで溶出されるシリカのプラグで濾過し、蒸発させることにより、粗１，１−ジメチルエチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエートを得る。
【０２２７】
そのプロパノエートを単離せずに、ＴＦＡとＤＣＭとの１：１混合物に溶解し、４時間にわたってＲＴで撹拌する。蒸発させ、分取ＨＰＬＣ（方法Ａ）によって、表題化合物を得る。
【０２２８】
合成方法の実施例（ＩＶ）−１０
メチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］−アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエート
【０２２９】
【化３５】
0005437996.tif 000036
【０２３０】
［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］酢酸（中間体Ｄ１）（２０．７ｇ，１．３当量）と、メチル２−メチル−２−［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］プロパノエート（中間体Ｂ１）（２０．０ｇ，１．３当量）と、ＤＩＰＥＡ（２４．０ｍｌ，３当量）と、ＤＭＦ（１８４ｍｌ）との混合物を、機械的に撹拌し、次いで、ＨＡＴＵ（２７．１ｇ，１．５当量）を一度に加え、２時間にわたって撹拌を続けた。その反応混合物をジエチルエーテル／ＴＨＦ（１：１）と炭酸ナトリウム（１Ｍ，過剰量）との間で分配させた。有機層を水およびブラインで洗浄し、乾燥し、蒸発させた。３つのシリカカラム（１つ目、３：１ＥｔＯＡｃ／ヘキサン類；２つ目、ＤＣＭ中の２％ＭｅＯＨ；３つ目、１：１ＥｔＯＡｃ／ヘキサン類〜１００％ＥｔＯＡｃ）において連続的にクロマトグラフィを行った。生成物の画分を蒸発させることにより、所望の生成物をアモルファスな淡紅色固体として得た（２７．５ｇ）。
【０２３１】
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．７０２分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７６２．３。
【０２３２】
結晶化：メチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエート（８．０ｇ）とエタノール（２００ｍｌ）との混合物を、完全に溶解するまで温めた。その溶液を２４時間にわたって室温で磁気的に撹拌し、次いで、濾過し、７．５ｇの固体を回収した。これらの溶媒和結晶を約６３０Ｔｏｒｒで真空を保持するために窒素を抜いた６０℃の真空オーブンに２４時間にわたって入れることにより、非溶媒和結晶の表題化合物を得た（７．１５ｇ），ｍ．ｐ．１５０℃。
【０２３３】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．２５（３Ｈ，s），１．３０（３Ｈ，s），１．６３−１．９９（４Ｈ，ｍ），２．１６−２．２８（１Ｈ，ｍ），２．３−２．４３（１Ｈ，ｍ），２．８９−２．９８（１Ｈ，ｍ），２．９８−３．０８（２Ｈ，ｍ），３．１６−３．３０（３Ｈ，ｍ），３．６６−３．６９（３Ｈ，ｍ），４．０２／４．３８（１Ｈ，２ｘ  ｂｒ  ｍ），４．６９（１Ｈ，ｓ），４．８７（１Ｈ，ｓ），５．４／５．７３（２Ｈ，２ｘ  ｓ），６．９９−７．１９（３Ｈ，ｍ），７．２９−７．３５（１Ｈ，ｍ），７．５０−７．６１（３Ｈ，ｍ），７．６４−７．８２（５Ｈ，ｍ），８．４８−８．５７（１Ｈ，ｍ），８．８０−８．８９（１Ｈ，ｍ）下の図１参照。
【０２３４】
合成方法の実施例（ＩＶ）−１１
メチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］−アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエート２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（塩）
【０２３５】
【化３６】
0005437996.tif 000037
【０２３６】
メチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝−｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエート（８．５ｇ，１当量）をメタノール（１００ｍｌ）に懸濁し、固体が溶解するまで５０℃に温めた。Ｌ−酒石酸（１．６７５ｇ，１．０当量）を一度に加え、３０分間室温で撹拌した。その溶液を真空中で濃縮することにより、室温において真空オーブン内で乾燥させたオフホワイトの粉末を得た。
【０２３７】
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．６９７分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７６２．３
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）１．１７（３Ｈ，ｓ），１．２３（３Ｈ，ｓ），１．４７−１．９１（４Ｈ，ｍ），１．９８−２．４１（１Ｈ，ｍ），２．１６−２．３３（１Ｈ，ｍ），２．８０−３．２６（６Ｈ，ｍ），３．５０−３．６７（３Ｈ，ｍ），３．９５／４．１７（１Ｈ，２ｘ  ｂｒ  ｍ），４．６１（１Ｈ，ｓ），４．８５（１Ｈ，ｓ），５．３９／５．６９（２Ｈ，２ｘ  ｓ），７．０８−７．３９（４Ｈ，ｍ），７．５３−７．７０（３Ｈ，ｍ），７．７２−７．９７（５Ｈ，ｍ），８．４２−８．５４（１Ｈ，ｍ），８．８５−８．９５（１Ｈ，ｍ）。
【０２３８】
合成方法例（ＩＶ）−１２
エチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエート２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（塩）
【０２３９】
【化３７】
0005437996.tif 000038
【０２４０】
［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］酢酸（中間体Ｄ１）（１１６ｍｇ，１当量）と、エチル２−メチル−２−［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］−メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］プロパノエート（中間体Ｂ２）（１５０ｍｇ，１当量）と、ＨＡＴＵ（１５１ｍｇ，１．２当量）と、ＤＭＦ（２．７２ｍｌ）と、ＤＩＰＥＡ（０．１７ｍｌ，３当量）との混合物を、室温で３．２５時間にわたって振盪した。その反応混合物を酢酸エチル／メタノールと重炭酸ナトリウム水溶液との間で分配させ、有機層をブラインで洗浄し、乾燥し、活性炭（２５０ｍｇ）で処理した。フラッシュクロマトグラフィ（シリカ，ＤＣＭ中の３〜４％メタノール）によって、エチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエートを白色固体として得た（１７８ｍｇ）。
【０２４１】
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．５８分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７７６．３
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．２０−１．４０（９Ｈ，ｍ），１．５６−２．０２（４Ｈ，ｍ），２．１９−２．４４（２Ｈ，ｍ），２．８８−３．２０，（４Ｈ，ｍ），３．２２−３．４０（２Ｈ，ｍ），３．８１／４．５８（１Ｈ，２ｘ  ｍ），４．１１−４．２７（２Ｈ，ｍ），４．６９／４．８４（２Ｈ，２ｘ  ｓ），５．１７／５．４９（２Ｈ，２ｘ  ｓ），６．９５−７．１４（３Ｈ，ｍ），７．２５−７．３１（１Ｈ，ｍ），７．３８−７．５４（３Ｈ，ｍ），７．５４，７．６１（１Ｈ，ｍ），７．６２−７．７９（４Ｈ，ｍ），８．５７−８．７５（２Ｈ，ｍ）。
これを、合成方法の例（ＩＩ）に記載された方法と類似の方法によって重酒石酸塩に変換した。
【０２４２】
合成方法例（ＩＶ）−１３
エチル２−｛４−［｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）アミノ］−１−ピペリジニル｝−２−メチルプロパノエート２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（塩）
【０２４３】
【化３８】
0005437996.tif 000039
【０２４４】
［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］酢酸（中間体Ｄ１）（１１４ｍｇ，１．１当量）と、エチル２−メチル−２−｛４−［（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）アミノ］−１−ピペリジニル｝プロパノエート（中間体Ｂ４）（１３９ｍｇ，１当量）と、ＤＭＦ（１．２ｍｌ）と、ＤＩＰＥＡ（０．１６ｍｌ，３当量）との混合物を、室温で３０分間振盪し、次いで、ＨＡＴＵ（１７６ｍｇ，１．５当量）を加え、３時間にわたって振盪を続けた。逆相ＨＰＬＣ（調製方法Ｂ）によって、エチル２−｛４−［｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソ−１（４Ｈ）−キナゾリニル］アセチル｝（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）アミノ］−１−ピペリジニル｝−２−メチルプロパノエートを白色固体として得た（１６６ｍｇ）。
【０２４５】
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．８７分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７９２．３
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．１８−１．４２（９Ｈ，ｍ），１．５４−２．０４（４Ｈ，ｍ），２．１２−２．４６（２Ｈ，ｍ），２．８６−３．２１（４Ｈ，ｍ），３．２１−３．４１（２Ｈ，ｍ），３．７９／４．５７（１Ｈ，２ｘ  ｍ），４．１０−４．２７（２Ｈ，ｍ），４．６８（１Ｈ，ｓ），４．８２（１Ｈ，ｓ），５．１７（１Ｈ，ｓ），５．４７（１Ｈ，ｓ），６．９４−７．１６（３Ｈ，ｍ），７．２０−７．３６（３Ｈ，ｍ），７．３７−７．４８（３Ｈ，ｍ），７．４８−７．６１（３Ｈ，ｍ），８．５６−８．７６（２Ｈ，ｍ）。
【０２４６】
これを、合成方法の実施例（ＩＩ）に記載された方法と類似の方法によって重酒石酸塩に変換した。
【０２４７】
合成方法の実施例（ＩＶ）−１４
１−メチルエチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエート２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（塩）
【０２４８】
【化３９】
0005437996.tif 000040
【０２４９】
１−メチルエチル２−メチル−２−［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］プロパノエート（中間体Ｂ３）（４２０ｍｇ，１当量）と、［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］酢酸（中間体Ｄ１）（３００ｍｇ，１当量）と、ＨＡＴＵ（３９６ｍｇ，１．２当量）と、ＤＩＰＥＡ（０．２２ｍｌ，１．５当量）と、ＤＭＦ（３．０ｍｌ）との混合物を、室温で３０分間撹拌した。粗反応混合物を逆相ＨＰＬＣに直接適用する（調製方法Ａ）ことにより、１−メチルエチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエートを得た（１７１ｍｇ）。
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．８３７分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７９０．３
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ１．１６−１．３７（１２Ｈ，ｍ），１．６２−２．０１（４Ｈ，ｍ），２．２７−２．５５（２Ｈ，ｍ），２．９５−３．１２（３Ｈ，ｍ），３．１２−３．２９（３Ｈ，ｍ），４．０６／４．４０（１Ｈ，２ｘ  ｂｒ  ｍ），４．７１（１Ｈ，ｓ），４．８９（１Ｈ，ｓ），４．９２−５．０７（１Ｈ，ｍ），５．４３／５．７６（２Ｈ，２ｘ  ｓ），７．００−７．２１（３Ｈ，ｍ），７．２９−７．３８（１Ｈ，ｍ），７．４９−７．６５（３Ｈ，ｍ），７．６５−７．８７（５Ｈ，ｍ），８．４８−８．５８（１Ｈ，ｍ），８．８１−８．９０（１Ｈ，ｍ）。
【０２５０】
これを、合成方法の実施例（ＩＩ）に記載された方法と類似の方法によって重酒石酸塩に変換した。
【０２５１】
合成方法の実施例（ＩＶ）−１５
１−メチルエチル２−｛４−［｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）アミノ］−１−ピペリジニル｝−２−メチルプロパノエート２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（塩）
【０２５２】
【化４０】
0005437996.tif 000041
【０２５３】
１−メチルエチル２−メチル−２−｛４−［（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）−アミノ］−１−ピペリジニル｝プロパノエート（中間体Ｂ５）（８０ｍｇ，１当量）と、［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］酢酸（中間体Ｄ１）（６７ｍｇ，１当量）と、ＨＡＴＵ（４００ｍｇ，５当量）と、ＤＩＰＥＡ（０．２２ｍｌ，１．５当量）と、ＤＭＦ（２．０ｍｌ）との混合物を室温で３０分間撹拌した。粗反応混合物を逆相ＨＰＬＣに直接適用する（調製方法Ａ）ことにより、１−メチルエチル２−｛４−［｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）アミノ］−１−ピペリジニル｝−２−メチルプロパノエートを得た（２５ｍｇ）。
【０２５４】
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．９５２分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝８０６．４
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．０９−１．２５（１２Ｈ，ｍ），１．４７−１．９１（４Ｈ，ｍ），２．０５−２．２０（１Ｈ，ｍ），２．２１−２．３８（１Ｈ，ｍ），２．８７−３．０７（３Ｈ，ｍ），３．０８−３．２２（３Ｈ，ｍ），３．９５／４．１７（１Ｈ，２ｘ  ｂｒ  ｍ），４．５９（１Ｈ，ｓ），４．７５−４．９７（２Ｈ，ｍ），５．３８／５．６８（２Ｈ，２ｘ  ｓ），７．９０−７．２１（１Ｈ，ｍ），７．２１−７．３６（３Ｈ，ｍ），７．４２−７．５５（３Ｈ，ｍ），７．５５−７−６４（２Ｈ，ｍ），７．６６−７．７７（２Ｈ，ｍ），７．７７−７．８５（１Ｈ，ｍ），８．４３−８．５２（１Ｈ，ｍ），８．８６−８．９５（１Ｈ，ｍ）。
【０２５５】
これを、合成方法の実施例（ＩＩ）に記載された方法と類似の方法によって重酒石酸塩に変換した。
【０２５６】
合成方法の実施例（ＩＶ）−１６
メチル２−［４−（｛［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエート２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（塩）
【０２５７】
【化４１】
0005437996.tif 000042
【０２５８】
［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，４−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］酢酸（中間体Ｄ２）（１００ｍｇ，１当量）と、メチル２−メチル−２−［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝−アミノ）−１−ピペリジニル］プロパノエート（中間体Ｂ１）（１３０ｍｇ，１．０３当量）と、ＤＩＰＥＡ（０．１６ｍｌ，３当量）と、アセトニトリル（２ｍｌ）と、ＨＡＴＵ（１３０ｍｇ，１．２当量）との混合物を、室温で１時間にわたって撹拌し、次いで、蒸発させ、アセトニトリルに再溶解した。逆相ＨＰＬＣによる精製（調製方法Ｂ）によって、メチル２−［４−（｛［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエートを得た（１４５ｍｇ）。
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．７１６分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７６２．３
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．２７（３Ｈ，ｓ），１．３３（３Ｈ，ｓ），１．６９−１．９８（４Ｈ，ｍ），２．２２−２．２９（１Ｈ，ｍ），２．３６−２．４３（１Ｈ，ｍ），２．９６−３．０８（３Ｈ，ｍ），３．１３−３．２４（３Ｈ，ｍ），３．６９−３．７２（３Ｈ，ｍ），４．０４／４．４１（１Ｈ，２ｘ  ｂｒ  ｍ），４．７２（１Ｈ，ｓ），４．９１（１Ｈ，ｓ），５．４１／５．７３（２Ｈ，２ｘ  ｓ），６．８４−６．９７（２Ｈ，ｍ），７．３４−７．４４（２Ｈ，ｍ），７．５４−７．６３（３Ｈ，ｍ），７．６９−７．８３（５Ｈ，ｍ），８．５５−８．６０（１Ｈ，ｍ），８．８６−８．９１（１Ｈ，ｍ）。
【０２５９】
これを、合成方法の実施例（ＩＩ）に記載された方法と類似の方法によって重酒石酸塩に変換した。
【０２６０】
合成方法の実施例（ＩＶ）−１７
エチル２−［４−（｛［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエート２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（塩）
【０２６１】
【化４２】
0005437996.tif 000043
【０２６２】
［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，４−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］酢酸（中間体Ｄ２）（１２０ｍｇ，１当量）と、エチル２−メチル−２−［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］−メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］プロパノエート（中間体Ｂ２）（１９８ｍｇ，１．３当量）と、ＤＭＦ（１．４ｍｌ）と、ＤＩＰＥＡ（０．１７８ｍｌ，３当量）との混合物を、室温で１．５時間にわたって振盪し、次いで、激しく振動させながらＨＡＴＵ（２００ｍｇ，１．５当量）を加え、１．５時間にわたって振盪を続けた。さらに中間体Ｄ２（１２ｍｇ，０．１当量）を加え、次いで、振盪を２日間続けた。逆相ＨＰＬＣ（調製方法Ｂ）によって、エチル２−［４−（｛［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエートを白色固体として得た（１７０ｍｇ）。
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．８２７分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７７６．３
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）特性ピーク：δ１．１４−１．４３（９Ｈ，ｍ），１．５７−２．０５（４Ｈ，ｍ），２．１０−２．４６（２Ｈ，ｍ），２．８４−３．１１（３Ｈ，ｍ），３．１２−３．３４（３Ｈ，ｍ），３．６５／３．８５（１Ｈ，ｍ），４．０６−４．２７（２Ｈ，ｍ），４．６５／４．８５（２Ｈ，ｓ），５．１５／５．４５（２Ｈ，ｓ），６．６２−６．８９（２Ｈ，ｍ），７．１８−７．３４（１Ｈ，ｍ），７．３７−７．８２（９Ｈ，ｍ），８．５９−８．７７（２Ｈ，ｍ）。
【０２６３】
これを、合成方法の実施例（ＩＩ）に記載された方法と類似の方法によって重酒石酸塩に変換した。
【０２６４】
合成方法の実施例（ＩＶ）−１８
エチル２−｛４−［｛［２−［２−（２，４−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝（｛４’−［（トリフルオロメチル）オキシ］−４−ビフェニリル｝メチル）アミノ］−１−ピペリジニル｝−２−メチルプロパノエート２，３−ジヒドロキシブタンジオエート（塩）
【０２６５】
【化４３】
0005437996.tif 000044
【０２６６】
１，１−ジメチルエチル２−メチル−２−［４−（｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］プロパノエート（中間体Ｂ７）（１５０ｍｇ，１当量）と、［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］酢酸（中間体Ｄ１）（１３０ｍｇ，１．２当量）と、ＤＩＰＥＡ（０．１６４ｍｌ，３当量）と、ＤＭＦ（１．０ｍｌ）との混合物を、室温で５分間撹拌した。ＨＡＴＵ（１８０ｍｇ，１．５当量）を一度に加え、さらに５分間撹拌した。粗反応混合物を濃縮し、アセトンで溶出されるシリカのプラグで濾過し、蒸発させることにより、粗１，１−ジメチルエチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエートを得た。
【０２６７】
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．８２３分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝８０４．４。
【０２６８】
この中間体を単離せずに、ＴＦＡとＤＣＭとの１：１混合物に溶解し、４時間にわたってＲＴで撹拌した。蒸発させ、分取ＨＰＬＣ（方法Ａ）によって、所望の２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパン酸トリフルオロアセテートを得た（７０ｍｇ）。
【０２６９】
ＬＣＭＳ  Ｒｔ＝２．５５４分；ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝７４８．２
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）ｄ  １．４４（３Ｈ，ｓ），１．５１（３Ｈ，ｓ），１．７０−２．３０（４Ｈ，ｍ），２．４１−２．５６（２Ｈ，ｍ），２．９４−３．５４（６Ｈ，ｍ），４．４４−４．９５（３Ｈ，ｍ），５．４２／５．７６（２Ｈ，２ｘ  ｂｒ  ｓ），７．０７−７．３８（４Ｈ，ｍ），７．５４−７．７５（３Ｈ，ｍ），７．７６−７．９９（５Ｈ，ｍ），８．４２−８．５４（１Ｈ，ｍ），８．８５−８．９８（１Ｈ，ｍ）。
【０２７０】
従来の手段によって、他の塩を調製することができる。遊離塩基もまた、従来の手段によって調製することができる。
【０２７１】
いくつかの実施形態において、本明細書中に開示されるような方法において有用なＬｐ−ＰＬＡ２の阻害薬として有用な化合物は：
ピリミジノンベースの化合物であり、Ｌｐ−ＰＬＡ２の可逆的阻害薬であり、そして本明細書中の実施例において使用される、「ＳＢ４８０８４８」またはＵＳＡＮ名「ダラプラディブ（ｄａｒａｐｌａｄｉｂ）」とも称される、１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）−アミノカルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、
Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）アセトアミド、
Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）アセトアミド、および
メチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］−アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエートである。
【０２７２】
本明細書中の実施例において使用される、１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）−アミノカルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン、すなわちＡＫＡ  ＳＢ４８０８４８の薬学的に許容可能な塩；Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−２−［２−（２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル）−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−シクロペンタピリミジン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチル）アセトアミド；Ｎ−（１−（２−メトキシエチル）ピペリジン−４−イル）−２−［２−（２，３−ジフルオロベンジルチオ）−４−オキソ−４Ｈ−キノリン−１−イル］−Ｎ−（４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イルメチル）アセトアミド；およびメチル２−［４−（｛［２−［２−（２，３−ジフルオロフェニル）エチル］−４−オキソピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−１（４Ｈ）−イル］アセチル｝｛［４’−（トリフルオロメチル）−４−ビフェニリル］メチル｝アミノ）−１−ピペリジニル］−２−メチルプロパノエートもまた、本明細書中に開示されるような方法において使用するためのＬｐ−ＰＬＡ２の阻害薬として有用である。
【０２７３】
Ｌｐ−ＰＬＡ２の核酸阻害薬
いくつかの実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２を阻害する薬剤は、核酸である。Ｌｐ−ＰＬＡ２の核酸阻害薬は、例えば、ＲＮＡ干渉誘導分子（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｔＲＮＡ、ｓｈＲＮＡおよびそれらの修飾されたバージョンであるがこれらに限定されない）であるがこれに限定されず、ここで、そのＲＮＡ干渉分子は、Ｌｐ−ＰＬＡ２の遺伝子発現を停止させるものである。いくつかの実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２の核酸阻害薬は、アンチセンスオリゴ核酸または核酸アナログであり、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）、偽相補性ＰＮＡ（ｐｃ−ＰＮＡ）またはロックト核酸（ＬＮＡ）などであるが、これらに限定されない。代替の実施形態では、その核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡおよび核酸アナログ、例えば、ＰＮＡ、ｐｃＰＮＡおよびＬＮＡである。核酸は、一本鎖または二本鎖であり得、目的のタンパク質をコードする核酸、オリゴヌクレオチド、ＰＮＡなどを含む群から選択され得る。そのような核酸配列としては、例えば、転写抑制因子、アンチセンス分子、リボザイムとして作用するタンパク質をコードする核酸配列、低分子阻害性核酸配列（例えば、ＲＮＡｉ、ｓｈＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡｉ（ｍＲＮＡｉ）、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどであるが、これらに限定されない）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７４】
いくつかの実施形態において、真核細胞において内因的に見られるＲＮＡの一形態である一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）は、ＲＮＡｉ分子を形成するために使用され得る。細胞のｓｓＲＮＡ分子としては、メッセンジャーＲＮＡ（および前駆体のプレ−メッセンジャーＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ、核小体低分子ＲＮＡ、運搬ＲＮＡおよびリボソームＲＮＡが挙げられる。二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）は、サイズ依存的な免疫応答を誘導し、３０ｂｐより大きいｄｓＲＮＡは、インターフェロン応答を活性化し、それより短いｄｓＲＮＡは、ダイサー酵素の下流の、細胞の内因性ＲＮＡ干渉機構に送られる。
【０２７５】
Ｌｐ−ＰＬＡ２は、Ｌｐ−ＰＬＡ２ポリペプチドの発現の阻害によって、または当業者に通常知られている「遺伝子サイレンシング」法によって、減少し得る。
【０２７６】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、選択された標的ポリペプチドの発現を阻害するための強力なアプローチを提供する。ＲＮＡｉは、選択的分解のために、標的ポリペプチドをコードするメッセンジャーＲＮＡを標的化する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）二重鎖を使用する。遺伝子発現のｓｉＲＮＡ依存性転写後サイレンシングは、そのｓｉＲＮＡによってガイドされる部位において、標的メッセンジャーＲＮＡ分子を切断することを含む。
【０２７７】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、進化的に保存されたプロセスであり、ここで、標的遺伝子と同一であるか、または高度に類似である配列のＲＮＡの発現または導入によって、その標的化された遺伝子から転写されたメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の配列特異的な分解または配列特異的な転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）がもたらされる（Ｃｏｂｕｒｎ，Ｇ．ａｎｄ  Ｃｕｌｌｅｎ，Ｂ．（２００２）Ｊ．ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７６（１８）：９２２５を参照のこと）ことによって、標的遺伝子の発現が阻害される。一実施形態において、そのＲＮＡは、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）である。このプロセスは、植物、無脊椎動物および哺乳動物の細胞において報告されている。天然において、ＲＮＡｉは、ｄｓＲＮＡ特異的エンドヌクレアーゼのダイサーによって開始され、そのダイサーは、長いｄｓＲＮＡをｓｉＲＮＡと呼ばれる二本鎖フラグメントに前進的に切断することを促進する。ｓｉＲＮＡは、標的ｍＲＮＡを認識して切断するタンパク質複合体（「ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体」または「ＲＩＳＣ」と呼ばれる）に組み込まれる。ＲＮＡｉは、核酸分子、例えば、合成ｓｉＲＮＡまたはＲＮＡ干渉剤を導入することによっても開始され、それにより、標的遺伝子の発現を阻害または停止させ得る。本明細書中で使用されるとき、「標的遺伝子発現の阻害」は、ＲＮＡ干渉が誘導されていない状況と比べたときの、標的遺伝子または標的遺伝子によってコードされるタンパク質の、発現またはタンパク質活性またはレベルの任意の低下を包含する。その低下は、ＲＮＡ干渉剤によって標的化されていない、標的遺伝子の発現または標的遺伝子によってコードされるタンパク質の活性もしくはレベルと比べて、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％もしくは９９％またはそれ以上であり得る。
【０２７８】
本明細書中で「低分子干渉ＲＮＡ」とも呼ばれる「短い干渉ＲＮＡ」（ｓｉＲＮＡ）は、標的遺伝子の発現を阻害するように機能する（例えば、ＲＮＡｉによって）薬剤と定義される。ｓｉＲＮＡは、化学的に合成され得るか、インビトロにおける転写によって生成され得るか、または宿主細胞内で生成され得る。一実施形態において、ｓｉＲＮＡは、約１５〜約４０ヌクレオチド長、好ましくは、約１５〜約２８ヌクレオチド、より好ましくは、約１９〜約２５ヌクレオチド長、より好ましくは、約１９、２０、２１、２２または２３ヌクレオチド長の二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子であり、各鎖において、約０、１、２、３、４または５ヌクレオチドの長さを有する３’および／または５’オーバーハングを含み得る。そのオーバーハングの長さは、２本の鎖の間で独立しており、すなわち、一方の鎖におけるオーバーハングの長さは、第２の鎖におけるオーバーハングの長さに依存しない。好ましくは、ｓｉＲＮＡは、標的メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の分解または特異的な転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）によって、ＲＮＡ干渉を促進することができる。
【０２７９】
ｓｉＲＮＡは、低分子ヘアピン（ステムループとも呼ばれる）ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）も包含する。一実施形態において、これらのｓｈＲＮＡは、短い（例えば、約１９〜約２５ヌクレオチド）アンチセンス鎖に続いて、約５〜約９ヌクレオチドのヌクレオチドループおよび類似のセンス鎖から構成される。あるいは、センス鎖が、ヌクレオチドループ構造の前に存在し得て、アンチセンス鎖が、その後に続き得る。これらのｓｈＲＮＡは、プラスミド、レトロウイルスおよびレンチウイルスの中に含められ得、例えば、ｐｏｌ  ＩＩＩ  Ｕ６プロモーターまたは別のプロモーターから発現され得る（例えば、Ｓｔｅｗａｒｔ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）ＲＮＡ  Ａｐｒ；９（４）：４９３−５０１（その全体が本明細書中で参照により援用される）を参照のこと）。
【０２８０】
ＲＮＡ干渉剤の標的遺伝子または標的配列は、細胞の遺伝子またはゲノム配列、例えば、Ｌｐ−ＰＬＡ２配列であり得る。ｓｉＲＮＡは、標的遺伝子もしくはゲノム配列またはそれらのフラグメントと実質的に相同であり得る。この文脈において使用されるとき、用語「相同」は、その標的のＲＮＡ干渉をもたらすように、標的ｍＲＮＡまたはそのフラグメントと、実質的に同一、十分に相補的、または類似であると定義される。標的配列の発現の阻害または干渉に適したＲＮＡは、天然のＲＮＡ分子に加えて、ＲＮＡ誘導体およびＲＮＡアナログを包含する。好ましくは、ｓｉＲＮＡは、その標的と同一である。
【０２８１】
ｓｉＲＮＡは、好ましくは、ただ１つの配列を標的化する。ｓｉＲＮＡなどのＲＮＡ干渉剤の各々は、例えば、発現プロファイリングによって、潜在的なオフターゲット効果についてスクリーニングされ得る。そのような方法は、当業者に公知であり、例えば、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：６３５−６３７，２００３に記載されている。発現プロファイリングに加えて、配列データベース内の類似の配列に対する潜在的な標的配列をスクリーニングすることによっても、オフターゲット効果を有し得る潜在的な配列を同定することができる。例えば、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（同文献）によれば、１５またはおそらく１１個の連続的なヌクレオチドの配列同一性が、標的化されていない転写物のサイレンシングを指示するのに十分である。ゆえに、最初に、提案されたｓｉＲＮＡを、ＢＬＡＳＴなどの任意の公知の配列比較方法による配列同一性解析を用いてスクリーニングすることにより、潜在的なオフターゲットサイレンシングを回避することができる。
【０２８２】
ｓｉＲＮＡ分子は、ＲＮＡのみを含む分子に限定される必要はないが、例えば、化学的に修飾されたヌクレオチドおよび非ヌクレオチドをさらに含み、また、リボース糖分子が別の糖分子または類似の機能を果たす分子で置換されている分子も含む。さらに、ホスホロチオエート結合などのヌクレオチド残基間の非天然結合が使用され得る。例えば、ＲＮＡに見られる天然に存在するＤ−リボヌクレオシドの代わりにＤ−アラビノフラノシル構造を含むｓｉＲＮＡが、本発明に記載のＲＮＡｉ分子において使用され得る（米国特許第５，１７７，１９６号）。他の例としては、糖とヌクレオシドの複素環式の塩基との間にｏ−結合を含むＲＮＡ分子が挙げられ、その結合は、２’−Ｏ−メチルリボース、アラビノースおよび特にＤ−アラビノースを含むオリゴヌクレオチドに類似のオリゴヌクレオチド分子に、ヌクレアーゼ抵抗性および堅固な相補鎖結合を付与する（米国特許第５，１７７，１９６号）。
【０２８３】
ＲＮＡ鎖は、フルオロフォアなどのレポーター基の反応性官能基を用いて誘導体化され得る。特に有用な誘導体は、ＲＮＡ鎖の末端において、典型的には、センス鎖の３’末端において、修飾される。例えば、３’末端における２’−ヒドロキシルは、種々の基を用いて、容易かつ選択的に誘導体化され得る。
【０２８４】
他の有用なＲＮＡ誘導体は、修飾された炭水化物部分（例えば、２’Ｏ−アルキル化残基または２’−Ｏ−メチルリボシル誘導体および２’−Ｏ−フルオロリボシル誘導体）を有するヌクレオチドを組み込んでいるものである。ＲＮＡの塩基もまた、修飾され得る。標的配列の発現の阻害または干渉に有用な任意の修飾された塩基が使用され得る。例えば、５−ブロモウラシルおよび５−ヨードウラシルなどのハロゲン化された塩基が、組み込まれ得る。それらの塩基もまたアルキル化され得、例えば、グアノシン残基の代わりに７−メチルグアノシンが組み込まれ得る。首尾よく阻害をもたらす非天然の塩基もまた組み込まれ得る。
【０２８５】
最も好ましいｓｉＲＮＡ修飾としては、２’−デオキシ−２’−フルオロウリジンまたはロックト核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチド、およびホスホジエステル結合または様々な数のホスホロチオエート結合のいずれかを含むＲＮＡ二重鎖が挙げられる。そのような修飾は、当業者に公知であり、例えば、Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４２：７９６７−７９７５，２００３に記載されている。ｓｉＲＮＡ分子にとって有用な修飾のほとんどが、アンチセンスオリゴヌクレオチド技術に対して確立された化学を用いて導入され得る。好ましくは、修飾は、最小の２’−Ｏ−メチル修飾を含み、好ましくは、そのような修飾は排除される。修飾はまた、好ましくは、ｓｉＲＮＡの遊離５’−ヒドロキシル基の修飾を排除する。
【０２８６】
３’−末端もしくは５’−末端またはその両方に共有結合される様々な「テイル」を有するｓｉＲＮＡ分子およびｍｉＲＮＡ分子もまた、当該分野で公知であり、それらは、本発明の方法を用いて送達されるｓｉＲＮＡおよびｍｉＲＮＡ分子を安定化させるために使用され得る。一般的に言えば、ＲＮＡ分子の３’または５’末端に付着される様々な種類のレポーター基および脂肪親和性基である挿入基（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ）は、当業者に周知であり、本発明の方法に有用である。本発明に有用な修飾ＲＮＡ分子の調製に適用可能な、３’−コレステロールまたは３’−アクリジンで修飾されたオリゴヌクレオチドの合成の説明は、例えば、論文：Ｇａｍｐｅｒ，Ｈ．Ｂ．，Ｒｅｅｄ，Ｍ．Ｗ．，Ｃｏｘ，Ｔ．，Ｖｉｒｏｓｃｏ，Ｊ．Ｓ．，Ａｄａｍｓ，Ａ．Ｄ．，Ｇａｌｌ，Ａ．，Ｓｃｈｏｌｌｅｒ，Ｊ．Ｋ．，ａｎｄ  Ｍｅｙｅｒ，Ｒ．Ｂ．（１９９３）Ｆａｃｉｌｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｅｘｏｎｕｃｌｅａｓｅ  Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ３’−Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１  １４５−１５０；およびＲｅｅｄ，Ｍ．Ｗ．，Ａｄａｍｓ，Ａ．Ｄ．，Ｎｅｌｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．，ａｎｄ  Ｍｅｙｅｒ，Ｒ．Ｂ．，Ｊｒ．（１９９１）Ａｃｒｉｄｉｎｅ  ａｎｄ  Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ−Ｄｅｒｉｖａｔｉｚｅｄ  Ｓｏｌｉｄ  Ｓｕｐｐｏｒｔｓ  ｆｏｒ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ３’−Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．２  ２１７−２２５（１９９３）に見られる。
【０２８７】
Ｌｐ−ＰＬＡ２発現を標的化するために有用な他のｓｉＲＮＡは、容易に設計され、試験され得る。したがって、本明細書中に記載される方法に有用なｓｉＲＮＡとしては、Ｌｐ−ＰＬＡ２遺伝子と相同である、約１５〜約４０または約１５〜約２８ヌクレオチド長のｓｉＲＮＡ分子が挙げられる。好ましくは、Ｌｐ−ＰＬＡ２標的化ｓｉＲＮＡ分子は、約１９〜約２５ヌクレオチドの長さを有する。より好ましくは、Ｌｐ−ＰＬＡ２標的化ｓｉＲＮＡ分子は、約１９、２０、２１または２２ヌクレオチドの長さを有する。Ｌｐ−ＰＬＡ２標的化ｓｉＲＮＡ分子は、３’ヒドロキシル基も含み得る。Ｌｐ−ＰＬＡ２標的化ｓｉＲＮＡ分子は、一本鎖または二本鎖であり得；そのような分子は、平滑末端であり得るか、またはオーバーハング末端（例えば、５’、３’）を含み得る。特定の実施形態において、ＲＮＡ分子は、二本鎖であり、平滑末端であるか、またはオーバーハング末端を含む。
【０２８８】
一実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２標的化ＲＮＡ分子の少なくとも１本の鎖は、約０〜約６ヌクレオチド（例えば、ピリミジンヌクレオチド、プリンヌクレオチド）長の３’オーバーハングを有する。他の実施形態において、３’オーバーハングは、約１〜約５ヌクレオチド長、約１〜約３ヌクレオチド長および約２〜約４ヌクレオチド長である。一実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２標的化ＲＮＡ分子は、二本鎖であり、一方の鎖が、３’オーバーハングを有し、他方の鎖が、平滑末端であり得るか、またはオーバーハングを有し得る。Ｌｐ−ＰＬＡ２標的化ＲＮＡ分子が二本鎖であり、かつ両方の鎖が、オーバーハングを含む実施形態において、それらのオーバーハングの長さは、各鎖に対して、同じであり得るかまたは異なり得る。特定の実施形態において、本発明のＲＮＡは、対形成していて、ＲＮＡの両方の３’末端に約１〜約３、特に約２ヌクレオチドのオーバーハングを有する、約１９、２０、２１または２２ヌクレオチドを含む。一実施形態において、３’オーバーハングは、分解に対して安定化し得る。好ましい実施形態において、そのＲＮＡは、アデノシンヌクレオチドまたはグアノシンヌクレオチドなどのプリンヌクレオチドを含むことによって、安定化される。あるいは、修飾されたアナログによるピリミジンヌクレオチドの置換、例えば、２’−デオキシチミジンによるウリジン２ヌクレオチド３’オーバーハングの置換が許容され、これはＲＮＡｉの効率に影響しない。２’ヒドロキシルが存在しないことは、組織培養液中でのオーバーハングのヌクレアーゼ耐性を著しく増強する。
【０２８９】
Ｌｐ−ＰＬＡ２ｍＲＮＡは、ｓｉＲＮＡを使用して首尾よく標的化され、そのようなｓｉＲＮＡまたはそれらを調製するためのベクターは、例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから市販されている。いくつかの実施形態において、そのようなＬｐ−ＰＬＡ２ｓｉＲＮＡを用いたＬｐ−ＰＬＡ２タンパク質の発現および／またはノックダウンの評価は、市販のキット（例えば、ｄｉａＤｅｘｕｓ製のＰＬＡＣアッセイであるがこれに限定されない）を用いて測定され得る。他のものは、標的ｍＲＮＡの既知配列に基づいて当業者によって容易に調製され得る。不確かさを回避するために、ヒトＬｐ−ＰＬＡ２ｃＤＮＡの配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：Ｕ２０１５７（配列番号：１）またはＮＭ＿００５０８４（配列番号：２）として得る。Ｕ２０１５７における配列は、以下である（配列番号：１）。
【０２９０】
【化４４】
0005437996.tif 000045
【０２９１】
【化４５】
0005437996.tif 000046
【０２９２】
ｓｉＲＮＡ配列は、ＲＩＳＣへのｓｉＲＮＡのアンチセンス（ガイド）鎖の取り込みを最大にし、それによって、ＲＩＳＣが分解のためにヒトＬｐ−ＰＬＡ２ｍＲＮＡを標的化する能力を最大にするように、選択される。これは、アンチセンス鎖の５’末端において結合する、最低の自由エネルギーを有する配列についてスキャンすることによって、達成され得る。自由エネルギーが低いことによって、ｓｉＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖の５’末端の巻き戻しが増加し、それによって、確実に、そのアンチセンス鎖がＲＩＳＣに取り込まれて、ヒトＬｐ−ＰＬＡ２ｍＲＮＡの配列特異的切断が指示される。
【０２９３】
好ましい実施形態において、ｓｉＲＮＡまたは修飾されたｓｉＲＮＡは、薬学的に許容可能なキャリア中において送達される。リポソームなどのさらなるキャリア剤が、薬学的に許容可能なキャリアに加えられ得る。
【０２９４】
別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、薬学的に許容可能なキャリア中の、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）をコードするベクターを個体の器官内の細胞に送達することによって、送達される。そのｓｈＲＮＡは、転写後に細胞によって、例えばＬｐ−ＰＬＡ２を標的化することができるｓｉＲＮＡに変換される。一実施形態において、そのベクターは、テトラサイクリン誘導性ベクターなどの制御可能ベクターであり得る。
【０２９５】
一実施形態において、本明細書中に記載される方法において使用されるＲＮＡ干渉剤は、ベクターを使用することなく、静脈内注射、例えば、水力学的注射の後、インビボにおいて細胞によって能動的に取り込まれ、このことから、ＲＮＡ干渉剤、例えば、本発明の方法において使用されるｓｉＲＮＡの効率的なインビボ送達が説明される。
【０２９６】
本発明の方法において使用されるＲＮＡ干渉剤、例えば、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡを送達するための他のストラテジー（例えば、ベクター、例えば、プラスミドベクターまたはウイルスベクター、例えば、レンチウイルスベクターによる送達）もまた使用され得る。そのようなベクターは、例えば、Ｘｉａｏ−Ｆｅｎｇ  Ｑｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１００：１８３−１８８に記載されているように使用され得る。他の送達方法としては、ＲＮＡ干渉剤（例えば、本発明のｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ）を塩基性ペプチド（例えば、ＴＡＴペプチドのフラグメント）と結合体化もしくは混合することによって塩基性ペプチドを用いるか、陽イオン性脂質と混合するか、または粒子内に製剤化して、ＲＮＡ干渉剤を送達することが挙げられる。
【０２９７】
述べたように、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡなどのｄｓＲＮＡは、テトラサイクリン誘導性ベクターなどの誘導性ベクターを用いて送達され得る。例えば、ｐＴｅｔ−Ｏｎベクター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を用いる、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１００：５１０３−５１０６に記載されている方法が使用され得る。いくつかの実施形態において、ベクターは、プラスミドベクター、ウイルスベクター、または挿入配列および外来配列に適応し、かつ真核細胞内に導入するための他の任意の適当なビヒクルであり得る。そのベクターは、アゴニスト核酸分子またはアンタゴニスト核酸分子のＤＮＡ配列をＲＮＡに転写することを指示することができる発現ベクターであり得る。ウイルス発現ベクターは、例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ウシパピローマウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴に基づくベクターまたは上記のもののいずれかのハイブリッドウイルスを含む群から選択され得る。一実施形態において、そのベクターは、エピソーム性である。適当なエピソームベクターを使用することにより、高コピー数の染色体外ＤＮＡとして対象内にアンタゴニスト核酸分子を維持する手段が提供され、それにより、染色体への組み込みに関する潜在的な作用が排除される。
【０２９８】
本明細書中に開示されるような方法において有用なＲＮＡ干渉分子および核酸阻害薬は、ファージＲＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼおよびＤＮＡベースのベクターを用いて、Ｓ２細胞に由来するインビトロ系を介し、組換えダイサータンパク質またはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ胚可溶化物への曝露により、長い二本鎖ＲＮＡをプロセシングすることによって、直接的な化学合成などの任意の公知の手法を用いて生成され得る。細胞可溶化物の使用またはインビトロプロセシングは、その後にその可溶化物などから短い（例えば、約２１〜２３ヌクレオチドの）ｓｉＲＮＡを単離することをさらに含み得る。化学合成は、通常、２本の一本鎖ＲＮＡオリゴマーを作製することによって開始され、その後、その２本の一本鎖オリゴマーを二本鎖ＲＮＡにアニーリングする。他の例としては、ｓｉＲＮＡの化学合成および酵素的合成を教示しているＷＯ９９／３２６１９およびＷＯ０１／６８８３６に開示されている方法が挙げられる。さらに、特異的なｓｉＲＮＡを設計および製造するための数多くの商業サービスが利用可能である（例えば、ＱＩＡＧＥＮ  Ｉｎｃ．、Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡおよびＡＭＢＩＯＮ  Ｉｎｃ．、Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸを参照のこと）。
【０２９９】
いくつかの実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡの発現および／またはＬｐ−ＰＬＡ２タンパク質の活性を阻害する薬剤は、タンパク質またはポリペプチドまたはＲＮＡｉ剤である。そのような実施形態において、例えば、天然に存在するプロモーターを全体的または部分的に異種プロモーターの全部または一部で置換することによって、そのような薬剤の発現を増大させるために細胞が改変され得（例えば、相同組換えによって）、その結果、その細胞は、Ｌｐ−ＰＬＡ２の天然の阻害薬、例えば、Ｌｐ−ＰＬＡ２のタンパク質阻害薬またはｍｉＲＮＡ阻害薬を高レベルで発現する。その異種プロモーターは、それが、その薬剤をコードする所望の核酸に作動可能に連結されるような様式で挿入される。例えば、Ｔｒａｎｓｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ，Ｉｎｃ．によるＰＣＴ国際公報Ｎｏ．ＷＯ９４／１２６５０、Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｓｙｓ，Ｉｎｃ．によるＰＣＴ国際公報Ｎｏ．ＷＯ９２／２０８０８およびＡｐｐｌｉｅｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＳｙｓｔｅｍｓによるＰＣＴ国際公報Ｎｏ．ＷＯ９１／０９９５５を参照のこと。また、内在性遺伝子の制御配列が相同組換えによって置換され得る場合、細胞は、誘導性調節エレメントの支配下において、上記薬剤を含む内在性遺伝子を発現するように操作され得る。遺伝子活性化の手法は、Ｃｈａｐｐｅｌに対する米国特許第５，２７２，０７１号；Ｓｈｅｒｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．に対する米国特許第５，５７８，４６１号；Ｓｅｌｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．によるＰＣＴ／ＵＳ９２／０９６２７（ＷＯ９３／０９２２２）；およびＳｋｏｕｌｔｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．によるＰＣＴ／ＵＳ９０／０６４３６（ＷＯ９１／０６６６７）に記載されている。上記薬剤は、ｍｉＲＮＡの発現に適した培養条件下において、形質転換された宿主細胞を培養することによって調製され得る。次いで、その結果として発現された薬剤は、ゲル濾過クロマトグラフィおよびイオン交換クロマトグラフィなどの公知の精製プロセスを用いて、そのような培養物から（すなわち、培養液または細胞抽出物から）精製され得る。Ｌｐ−ＰＬＡ２のペプチド薬剤阻害薬または核酸薬剤阻害薬の精製は、そのタンパク質に結合する薬剤を含むアフィニティーカラム；コンカナバリンＡ−アガロース、ヘパリン−ｔｏｙｏｐｅａｒｌＴＭまたはＣｉｂａｃｒｏｍ  ｂｌｕｅ  ３ＧＡセファロースのような親和性樹脂に対する１つ以上のカラム工程；フェニルエーテル、ブチルエーテルまたはプロピルエーテルのような樹脂を用いる疎水性相互作用クロマトグラフィを含む１つ以上の工程；イムノアフィニティクロマトグラフィまたは相補ｃＤＮＡアフィニティクロマトグラフィが挙げられ得る。
【０３００】
一実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２の核酸阻害薬は、合成的に、例えば、当業者に公知の任意の合成方法によって核酸を化学的に合成することによって、得ることができる。次いで、Ｌｐ−ＰＬＡ２の合成された核酸阻害薬は、当該分野で公知の任意の方法によって精製され得る。核酸を化学合成するための方法としては、ホスホトリエステル、ホスフェートもしくはホスホルアミダイト化学および固相技術を用いるか、またはデオキシヌクレオシドＨ−ホスホネート中間体（Ｂｈｏｎｇｌｅに対する米国特許第５，７０５，６２９号を参照のこと）を介する、インビトロ化学合成が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３０１】
いくつかの状況において、例えば、高いヌクレアーゼ安定性が望まれる場合、核酸アナログおよび／または修飾ヌクレオシド間結合を有する核酸が、好ましい場合がある。修飾ヌクレオシド間結合を含む核酸もまた、当該分野で周知の試薬および方法を用いて合成することができる。例えば、ホスホネートホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホルアミデートメトキシエチルホスホルアミデート、ホルムアセタール、チオホルムアセタール、ジイソプロピルシリル、アセトアミデート、カルバメート、ジメチレン−スルフィド（−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２）、ジインエチレン−スルホキシド（−ＣＨ２−ＳＯ−ＣＨ２）、ジメチレンスルホン（−ＣＨ２−ＳＯ２−ＣＨ２）、２’−Ｏ−アルキルおよび２’−デオキシ−２’−フルオロ’ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む核酸を合成する方法は、当該分野で周知である（Ｕｈｌｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９０：５４３−５８４；Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３１：３３５およびこれらの中で引用されている参考文献を参照のこと）。Ｃｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．に対する米国特許第５，６１４，６１７号および同第５，２２３，６１８号、Ａｃｅｖｅｄｏ，ｅｔ  ａｌ．に対する同第５，７１４，６０６号、Ｃｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．に対する同第５，３７８，８２５号、Ｂｕｈｒ，ｅｔ  ａｌ．に対する同第５，６７２，６９７号および同第５，４６６，７８６号、Ｃｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．に対する同第５，７７７，０９２号、ＤｅＭｅｓｍａｃｋｅｒ，ｅｔ  ａｌ．に対する同第５，６０２，２４０号、Ｃｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．に対する同第５，６１０，２８９号、ならびにＷａｎｇに対する同第５，８５８，９８８号もまた、ヌクレアーゼ安定性および細胞取り込みを高めるための核酸アナログについて記載している。
【０３０２】
ｓｈＲＮＡ分子を含む合成ｓｉＲＮＡ分子は、当業者に公知のいくつかの手法を用いて得ることができる。例えば、そのｓｉＲＮＡ分子は、当該分野で公知の方法を用いて（例えば、適切に保護されたリボヌクレオシドホスホルアミダイトおよび従来のＤＮＡ／ＲＮＡ合成装置を用いて）、化学的に合成され得るか、または組換え的に生成され得る（例えば、Ｅｌｂａｓｈｉｒ，Ｓ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ  ４１１：４９４−４９８；Ｅｌｂａｓｈｉｒ，Ｓ．Ｍ．，Ｗ．Ｌｅｎｄｅｃｋｅｌ  ａｎｄ  Ｔ．Ｔｕｓｃｈｌ（２００１）Ｇｅｎｅｓ  &  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １５：１８８−２００；Ｈａｒｂｏｒｔｈ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １１４：４５５７−４５６５；Ｍａｓｔｅｒｓ，Ｊ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ９８：８０１２−８０１７；およびＴｕｓｃｈｌ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｇｅｎｅｓ  &  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １３：３１９１−３１９７を参照のこと）。あるいは、いくつかの商業的なＲＮＡ合成供給業者が利用可能であり、その業者としては、Ｐｒｏｌｉｇｏ（Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｌａｆａｙｅｔｔｅ，ＣＯ，ＵＳＡ）、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ｐｅｒｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡの一部門）、Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，ＶＡ，ＵＳＡ）、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（Ａｓｈｌａｎｄ，ＭＡ，ＵＳＡ）およびＣｒｕａｃｈｅｍ（Ｇｌａｓｇｏｗ，ＵＫ）が挙げられるがこれらに限定されない。また、ｓｉＲＮＡ分子を合成することは過度に困難でなく、ｓｉＲＮＡ分子は、ＲＮＡｉに適した品質で容易に提供される。さらに、ｄｓＲＮＡは、プラスミドベクター、レトロウイルスおよびレンチウイルスによってコードされるステムループ構造として発現され得る（Ｐａｄｄｉｓｏｎ，Ｐ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１６：９４８−９５８；ＭｃＭａｎｕｓ，Ｍ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）ＲＮＡ  ８：８４２−８５０；Ｐａｕｌ，Ｃ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：５０５−５０８；Ｍｉｙａｇｉｓｈｉ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：４９７−５００；Ｓｕｉ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ  ９９：５５１５−５５２０；Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２：２４３；Ｌｅｅ，Ｎ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：５００−５０５；Ｙｕ，Ｊ．Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ  ９９：６０４７−６０５２；Ｚｅｎｇ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  ９：１３２７−１３３３；Ｒｕｂｉｎｓｏｎ，Ｄ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３３：４０１−４０６；Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｓ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（２００３）ＲＮＡ  ９：４９３−５０１）。これらのベクターは、一般に、ｄｓＲＮＡの上流にｐｏｌＩＩＩプロモーターを有し、センスＲＮＡ鎖およびアンチセンスＲＮＡ鎖を別々に、および／またはヘアピン構造として、発現し得る。ダイサーは、細胞内において、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を有効なｓｉＲＮＡにプロセシングする。
【０３０３】
本発明のｓｉＲＮＡ分子の標的化領域は、開始コドンの約２５〜５０ヌクレオチド下流、約５０〜７５ヌクレオチド下流または約７５〜１００ヌクレオチド下流から始まる所与の標的遺伝子配列、例えば、Ｌｐ−ＰＬＡ２コード配列から選択され得る。ヌクレオチド配列は、５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲならびに開始コドン付近の領域を含み得る。本発明のｓｉＲＮＡ分子を設計する１つの方法は、２３ヌクレオチド配列モチーフＡＡ（Ｎ１９）ＴＴ（ここで、Ｎは、任意のヌクレオチドであり得る）を同定する工程、および少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％または７５％のＧ／Ｃ含有量を有するヒットを選択する工程を含む。上記配列の「ＴＴ」部分は、任意である。あるいは、そのような配列が見つからない場合、モチーフＮＡ（Ｎ２１）（ここで、Ｎは、任意のヌクレオチドであり得る）を用いて検索を広げることができる。この状況において、センスｓｉＲＮＡの３’末端がＴＴに変換されることにより、センス３’オーバーハングおよびアンチセンス３’オーバーハングの配列組成に関して対称的な二重鎖の生成が可能になり得る。次いで、そのアンチセンスｓｉＲＮＡ分子が、上記２３ヌクレオチド配列モチーフの１位〜２１位のヌクレオチドに対する相補体として合成され得る。対称的な３’ＴＴオーバーハングを使用することは、確実に、低分子干渉リボ核タンパク質粒子（ｓｉＲＮＰ）が、センス標的ＲＮＡ切断ｓｉＲＮＰとアンチセンス標的ＲＮＡ切断ｓｉＲＮＰとがほぼ等しい比で形成されるという点で有利であり得る（Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）前出およびＥｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．２００１前出）。配列データベース（例えば、ＮＣＢＩ、ＢＬＡＳＴ、ＤｅｒｗｅｎｔおよびＧｅｎＳｅｑが挙げられるがこれらに限定されない）の解析ならびにＯｌｉｇｏｅｎｇｉｎｅ（登録商標）などの市販のオリゴ合成ソフトウェアを使用することによってもまた、確実にただ１つの遺伝子を標的化する、ＥＳＴライブラリーに対するｓｉＲＮＡ配列を選択することができる。
【０３０４】
ＲＮＡ干渉剤の送達：ＲＮＡ干渉剤、例えば、ｓｉＲＮＡまたはＲＮＡ干渉剤を含むベクターを標的細胞（例えば、中枢神経系および末梢神経系における細胞の場合、脳の細胞または他の所望の標的細胞）に送達する方法は、例えば、（ｉ）ＲＮＡ干渉剤、例えば、ｓｉＲＮＡを含む組成物を注射する工程、または（ｉｉ）細胞、例えば、脳の細胞を、ＲＮＡ干渉剤、例えば、ｓｉＲＮＡを含む組成物と直接接触させる工程を包含し得る。一実施形態において、本ＲＮＡ干渉剤は、Ｌｐ−ＰＬＡ２を発現するリンパ球を作製する骨髄を標的化し得る。別の実施形態では、ＲＮＡ干渉剤、例えば、ｓｉＲＮＡは、例えば、水力学的注射またはカテーテル法を介して、任意の血管（例えば、静脈、動脈、細静脈または小動脈）内に直接注射され得る。なおも別の実施形態では、ＲＮＡ干渉剤は、皮膚潰瘍の部位に局所的に直接、注射または適用され得る。
【０３０５】
投与は、単回注射または２回以上の注射によるものであり得る。ＲＮＡ干渉剤は、薬学的に許容可能なキャリア中において送達される。１つ以上のＲＮＡ干渉剤を同時に使用することができる。ＲＮＡ干渉剤、例えば、Ｌｐ−ＰＬＡ２ｍＲＮＡを標的化するｓｉＲＮＡは、単独で、または他のＲＮＡ干渉剤、例えば、ｓｉＲＮＡ、例えば、他の細胞遺伝子に対するｓｉＲＮＡと併用して、送達され得る。Ｌｐ−ＰＬＡ２ｓｉＲＮＡはまた、神経変性疾患または神経変性障害を治療または予防するために使用される他の医薬品と併用して投与され得る。
【０３０６】
一実施形態において、ＲＮＡ干渉を用いて特定の細胞が標的化され、それにより、ＲＮＡ干渉の非特異的な標的化によって引き起こされるＲＮＡ干渉の潜在的な副作用が限定される。その方法は、例えば、細胞に効率的にＲＮＡ干渉を送達するために使用される細胞標的化部分およびＲＮＡ干渉結合部分を含む複合体または融合分子を使用し得る。例えば、抗体−プロタミン融合タンパク質は、ｓｉＲＮＡと混合されると、そのｓｉＲＮＡに結合し、その抗体によって認識される抗原を発現している細胞にそのｓｉＲＮＡを選択的に送達し、その結果、その抗原を発現している細胞においてのみ遺伝子発現のサイレンシングがもたらされる。ｓｉＲＮＡまたはＲＮＡ干渉誘導分子に結合する部分は、タンパク質または核酸結合ドメインまたはタンパク質のフラグメントであり、その結合部分は、標的化部分の一部と融合される。標的化部分の位置は、その構築物のカルボキシル末端もしくはアミノ末端のいずれか、または融合タンパク質の中央に存在し得る。
【０３０７】
ウイルス媒介性送達メカニズムもまた、Ｘｉａ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２０（１０）：１００６）に記載されているように、インビトロおよびインビボにおいてｓｉＲＮＡを細胞に送達するために使用され得る。プラスミドまたはウイルスに媒介されるｓｈＲＮＡの送達メカニズムもまた、Ｒｕｂｉｎｓｏｎ，Ｄ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（（２００３）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３３：４０１−４０６）およびＳｔｅｗａｒｔ，Ｓ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（（２００３）ＲＮＡ  ９：４９３−５０１）に記載されていようにインビトロおよびインビボにおいてｓｈＲＮＡを細胞に送達するために使用され得る。
【０３０８】
ＲＮＡ干渉剤、例えば、ｓｉＲＮＡはまた、脈管または脈管外の循環、血液またはリンパ系、および脳脊髄液を介して、細胞内に導入され得る。
【０３０９】
特定のＲＮＡ干渉剤の用量は、特定の標的遺伝子のＲＮＡ干渉、例えば、翻訳後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）をもたらすことにより、標的遺伝子発現の阻害または標的遺伝子によってコードされるタンパク質の活性もしくはレベルの阻害に導くのに必要な量である。
【０３１０】
ＲＮＡｉ分子は、その標的配列に完全にマッチする必要がないことも知られている。しかしながら、好ましくは、ｓｉＲＮＡのアンチセンス（ガイド）鎖の５’部分および中央部分は、標的核酸配列に対して完全に相補的である。
【０３１１】
したがって、本発明においてＬｐ−ＰＬＡ２の核酸阻害薬として機能するＲＮＡｉ分子は、例えば、短い一時（ｓｈｏｒｔ−ｔｅｍｐｏｒａｌ）ＲＮＡ（ｓｔＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）（例えば、Ｂａｕｌｃｏｍｂｅ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９７：２００２−２００３，２００２を参照のこと）をはじめとした、非修飾二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡ分子および修飾二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡ分子であるが、これらに限定されない。ｄｓＲＮＡ分子、例えば、ｓｉＲＮＡは、３’オーバーハング、好ましくは、３’ＵＵまたは３’ＴＴオーバーハングも含み得る。一実施形態において、本発明のｓｉＲＮＡ分子は、約３０〜４０塩基、約４０〜５０塩基、約５０塩基より大きいか、またはそれ以上のｓｓＲＮＡを含むＲＮＡ分子を包含しない。一実施形態において、本発明のｓｉＲＮＡ分子は、その長さの約２５％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超が二本鎖である。いくつかの実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２の核酸阻害薬は、Ｌｐ−ＰＬＡ２ｍＲＮＡに結合し、そしてＬｐ−ＰＬＡ２ｍＲＮＡの発現を阻害する、任意の薬剤であり、ここで、Ｌｐ−ＰＬＡ２ｍＲＮＡまたは配列番号：１もしくは２によってコードされる核酸の転写の生成物の発現が阻害される。
【０３１２】
本発明の別の実施形態では、Ｌｐ−ＰＬＡ２を阻害する薬剤は、ＲＮＡ転写物を切断し、それによって、野生型タンパク質の生成を妨害することができる、触媒性の核酸構築物、例えば、リボザイムである。リボザイムは、リボザイム触媒性部位に隣接する、標的に相補的な２つの配列領域によって、特定の配列を標的化し、それとアニーリングする。結合した後、そのリボザイムは、部位特異的様式で標的を切断する。本明細書中に記載される遺伝子産物の配列、例えば、Ｌｐ−ＰＬＡ２またはそのホモログもしくは変異体切断のための配列を特異的に認識し、切断するリボザイムの設計および試験は、当業者に周知の手法によって達成され得る（例えば、Ｌｌｅｂｅｒ  ａｎｄ  Ｓｔｒａｕｓｓ，（１９９５）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １５：５４０．５５１（この開示は本明細書中で参照により援用される））。
【０３１３】
Ｌｐ−ＰＬＡ２のタンパク質およびペプチド阻害薬
いくつかの実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２を阻害する薬剤は、タンパク質および／もしくはペプチド阻害薬またはＬｐ−ＰＬＡ２の阻害薬のフラグメントであり、例えば、変異されたタンパク質；治療用のタンパク質および組換えタンパク質であるが、これらに限定されない。タンパク質およびペプチド阻害薬としてはまた、例えば、変異されたタンパク質、遺伝子改変タンパク質、ペプチド、合成ペプチド、組換えタンパク質、キメラタンパク質、抗体、ヒト化タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、修飾タンパク質およびそれらのフラグメントが挙げられ得る。
【０３１４】
いくつかの実施形態において、Ｌｐ−ＰＬＡ２を阻害する薬剤は、Ｌｐ−ＰＬＡ２のドミナントネガティブ変異体、例えば、Ｌｐ−ＰＬＡ２の非機能性的変異体である。
【０３１５】
抗体
いくつかの実施形態において、本発明の方法において有用な遺伝子および／または遺伝子産物の阻害薬としては、例えば、モノクローナル抗体、キメラ抗体ヒト化抗体および組換え抗体を含む抗体、ならびにそれらの抗原結合フラグメントが挙げられる。いくつかの実施形態において、中和抗体は、Ｌｐ−ＰＬＡ２酵素の阻害薬として使用され得る。抗体は、抗原で免疫することによってウサギまたはマウスなどの動物において容易に惹起される。免疫されたマウスは、ハイブリドーマ製造用のＢ細胞の供給源を得るために特に有用であり、その細胞は、その後、培養されて、大量のモノクローナル抗体を産生する。
【０３１６】
本発明の一実施形態において、本明細書中において同定される遺伝子産物に対する阻害薬は、抗体分子または抗体分子のエピトープ結合部分などであり得る。抗体は、多岐にわたる標的抗原およびハプテンに対して、高い結合アビディティーおよび独特の特異性を提供する。本発明の実施において有用なモノクローナル抗体には、抗体全体およびそのフラグメントが包含され、モノクローナル抗体は、従来の手法（例えば、ハイブリドーマ合成、組換えＤＮＡ技術およびタンパク質合成）に従って作製される。
【０３１７】
有用なモノクローナル抗体およびフラグメントは、任意の種（ヒトを含む）由来であり得るか、または２つ以上の種からの配列を使用するキメラタンパク質として形成され得る。ヒトモノクローナル抗体または「ヒト化」マウス抗体もまた、本発明に従って使用される。例えば、マウスモノクローナル抗体は、マウスＦｖ領域（すなわち、抗原結合部位を含む）またはその相補性決定領域をコードするヌクレオチド配列を、ヒト定常ドメイン領域およびＦｃ領域をコードするヌクレオチド配列とともに遺伝的に組み換えることによって「ヒト化」され得る。ヒト化された標的部分は、宿主レシピエントにおいてその抗体またはポリペプチドの免疫反応性を低下させると認識され、そして、欧州特許出願番号０，４１１，８９３Ａ２に開示されている様式と同様の様式で、半減期が延長され、有害な免疫反応の可能性を低下させることが可能である。マウスモノクローナル抗体は、好ましくは、ヒト化型で使用されるべきである。抗原結合活性は、抗体の可変部分（Ｆｖ）の軽鎖および重鎖上に位置する（各々３つ）６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸の配列および立体配座によって決定される。短いペプチドスペーサー配列を介して接続された、軽鎖の可変領域（ＶＬ）および重鎖の可変領域（ＶＨ）から構成される、２５ｋＤａの一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子が、現在までに開発されている最も小さい抗体フラグメントである。ｓｃＦｖに対する遺伝子を含む繊維状ファージの表面上にｓｃＦｖ分子をディスプレイする手法が開発されている。多岐にわたる抗原特異性を有するｓｃＦｖ分子が、単一の大きなｓｃＦｖ−ファージライブラリーのプール中に存在し得る。本発明の方法において有用な高親和性モノクローナル抗体およびそのキメラ誘導体のいくつかの例は、欧州特許出願ＥＰ１８６，８３３；ＰＣＴ特許出願ＷＯ９２／１６５５３；および米国特許第６，０９０，９２３号に記載されている。
【０３１８】
キメラ抗体は、異なる動物種由来の２つ以上のセグメントまたは部分を特徴とする免疫グロブリン分子である。一般に、キメラ抗体の可変領域は、マウスモノクローナル抗体などの非ヒト哺乳動物抗体に由来し、免疫グロブリン定常領域は、ヒト免疫グロブリン分子に由来する。好ましくは、両方の領域およびその組み合わせは、日常的に測定されるとき、免疫原性が低い。
【０３１９】
ｓｃＦｖ分子の１つの制限は、標的抗原と一価で相互作用することである。標的抗原へのｓｃＦｖの結合を改善する最も簡単な方法の１つは、多量体を作製して、その機能親和性を増加させることである。ダイアボディ、トリアボディおよびテトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）を形成する同一のｓｃＦｖ分子の会合は、いくつかの同一のＦｖモジュールを含み得る。ゆえに、これらの試薬は、多価であるが、単一特異的である。２つの異なるｓｃＦｖ分子（各々が、異なる親Ｉｇ由来のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む）の会合は、完全に機能性の二重特異性ダイアボディを形成する。二重特異性ｓｃＦｖの独特の実用性は、２つの（隣接する）表面エピトープを介して同じ標的分子上の２つの部位に同時に結合することである。これらの試薬は、単一のｓｃＦｖまたはＦａｂフラグメントよりも著しいアビディティーの利点を獲得している。例えば、ミニ抗体（ｍｉｎｉａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、二量体ミニ抗体、ミニボディ、（ｓｃＦｖ）２、ダイアボディおよびトリアボディをはじめとした、いくつかの多価ｓｃＦｖベース構造が、設計されている。これらの分子は、ある範囲の結合価（２〜４個の結合部位）、サイズ（５０〜１２０ｋＤａ）、可撓性および生成の容易さを包含する。一本鎖Ｆｖ抗体フラグメント（ｓｃＦｖ）は、主に、ＶＨドメインおよびＶＬドメインが少なくとも１２残基のポリペプチドリンカーによって接続されている単量体である。すべての条件下において１２および２５アミノ酸長のリンカーを有するモノマーｓｃＦｖは、熱力学的に安定である。非共有結合性のダイアボディ分子およびトリアボディ分子は、設計が容易であり、単一のｓｃＦｖ分子の可変重鎖および可変軽鎖を接続するペプチドリンカーを短くすることによって生成される。ｓｃＦｖ二量体は、高度の可撓性をもたらす両親媒性らせん体によって接続されており、ミニ抗体構造は、二重らせんを介して接続された２つのミニ抗体（４つのｓｃＦｖ分子）を含む二量体の二重特異性（ＤｉＢｉ）ミニ抗体を作製するように改変され得る。遺伝子融合型またはジスルフィド結合型のｓｃＦｖ二量体は、中程度の可撓性を提供し、Ｃ末端のＧｌｙ４Ｃｙｓ配列を付加する直接のクローニング技術によって作製される。ｓｃＦｖ−ＣＨ３ミニボディは、直接（ＬＤミニボディ）か、または非常に可撓性のヒンジ領域（Ｆｌｅｘミニボディ）を介して、ＩｇＧ  ＣＨ３ドメインに結合された２つのｓｃＦｖ分子を含む。これらの二価の構築物は、約８０ｋＤａの分子量を有し、抗原に有意に結合することができる。Ｆｌｅｘミニボディは、マウスにおいて目覚ましい腫瘍局在化を示す。二重特異的多量体および三重特異的多量体は、異なるｓｃＦｖ分子の会合によって形成され得る。Ｆａｂまたは一本鎖Ｆｖ抗体フラグメント（ｓｃＦｖ）フラグメントが、二量体、三量体またはそれより大きい集合体に複合体化されるとき、機能的親和性の増加が達成される。一価のｓｃＦｖおよびＦａｂフラグメントに対して多価ｓｃＦｖの最も重要な利点は、標的抗原に対する機能的結合親和性（アビディティー）の獲得である。高アビディティーであるためには、ｓｃＦｖ多量体が、別個の標的抗原に同時に結合することができることが���要である。ｓｃＦｖモノマーと比較してｓｃＦｖダイアボディにおける機能的親和性の獲得は、有意であり、それは、主に解離速度の低下において見られ、これは、２つ以上の標的抗原に対する複数の結合および１つのＦｖが解離するときの再結合に起因する。そのようなｓｃＦｖ分子が、多量体に会合するとき、それらは、単一の標的抗原に対する高アビディティーまたは様々な標的抗原に対する複数の特異性のいずれかを有するように設計され得る。抗原に対する複数の結合は、Ｆｖモジュールの正確なアラインメントおよび配向に依存する。多価ｓｃＦｖ標的の完全なアビディティーのためには、抗原結合部位は、同じ方向を向かなければならない。複数の結合が立体的に可能でない場合、機能的な親和性の明らかな獲得は、再結合の増加の作用に起因する可能性があり、その再結合は、拡散速度および抗原濃度に依存する。抗体の特性を改善する部分と結合体化された抗体もまた、本発明のために企図される。例えば、インビボにおいて半減期を延長するＰＥＧとの抗体結合体が、本発明のために使用され得る。免疫ライブラリーは、天然の動物もしくは患者または免疫された動物もしくは患者のＢリンパ球由来の可変抗体フラグメントをコードする遺伝子をＰＣＲ増幅に供することによって、調製される。免疫グロブリン遺伝子または免疫グロブリン遺伝子ファミリーに対して特異的なオリゴヌクレオチドの組み合わせが使用される。免疫グロブリン生殖系列遺伝子を使用することにより、半合成抗体レパートリーを調製することができ、可変フラグメントの相補性決定領域は、縮重プライマーを用いるＰＣＲによって増幅される。これらのシングルポット（ｓｉｎｇｌｅ−ｐｏｔ）ライブラリーは、多数の抗原に対する抗体フラグメントが、１つの単一ライブラリーから単離され得るという利点を有する。ファージディスプレイ技術は、抗体フラグメントの親和性を高めるために使用され得、新しいライブラリーは、ランダムなコドンベースの突然変異誘発もしくは部位特異的突然変異誘発、個別のドメインの鎖と天然のレパートリー由来のフラグメントとのシャフリング、または、細菌のミューテーター株の使用によって、すでに存在している抗体フラグメントから調製される。
【０３２０】
あるいは、ＳＣＩＤ−ｈｕマウス、例えば、Ｇｅｎｐｈａｒｍによって開発されたモデルが、抗体またはそのフラグメントを生成するために使用され得る。一実施形態において、多価相互作用の効果を利用することによって作製される、ペプタボディ（ｐｅｐｔａｂｏｄｙ）と呼ばれる新しいタイプの高アビディティー結合分子が企図される。短いペプチドリガンドを、軟骨オリゴマー基質タンパク質のコイルドコイルアセンブリドメインと、半剛体のヒンジ領域を介して融合することにより、五量体の多価結合分子が得られた。本発明の好ましい実施形態において、リガンドおよび／またはキメラ阻害薬は、例えば、抗リガンド抗体（Ａｂ）と特異的な標的に対するＡｂとの化学結合によって生成される二重特異性抗体を使用することによって、組織または腫瘍に特異的な標的を標的化することができる。化学結合体の制限を回避するために、抗体の分子結合体を、細胞表面分子におけるリガンドおよび／またはキメラ阻害薬に対する組換え二重特異性一本鎖Ａｂの作製のために使用することができる。あるいは、標的化部分に付着された２つ以上の活性な薬剤およびまたは阻害薬が投与され得、各結合体としては、標的化部分、例えば、異なる抗体が挙げられる。各抗体は、異なる標的部位エピトープ（同じか、または異なる標的部位抗原と関連する）と反応性である。薬剤が付着された様々な抗体が、所望の標的部位において付加的に蓄積する。抗体ベースまたは非抗体ベースの標的化部分を使用することにより、リガンドまたは阻害薬を標的部位に送達することができる。好ましくは、制御されていない抗原または疾患関連の抗原に対する天然の結合剤が、この目的で使用される。
【０３２１】
Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬を同定するためのバイオアッセイ：
Ｌｐ−ＰＬＡ２タンパク質の阻害についてのスクリーニング
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、皮膚潰瘍を治療するためのＬｐ−ＰＬＡ２の阻害薬の使用に関する。必要であれば、Ｌｐ−ＰＬＡ２タンパク質を阻害する薬剤は、米国特許第５，９８１，２５２号（その全体が本明細書中で参照により援用される）に開示されているようなバイオアッセイを用いて評価される。１つのそのようなアッセイは、組換えＬｐ−ＰＬＡ２タンパク質に対するその薬剤の効果を試験する。１つのアッセイでは、例えば、組換えＬｐ−ＰＬＡ２を、亜鉛キレート化カラム、ブルーセファロースアフィニティークロマトグラフィおよび陰イオン交換カラムを用いて、バキュロウイルス感染Ｓｆ９細胞から均質に精製する。精製および限外濾過の後、その酵素を４℃において６ｍｇ／ｍｌで保存する。アッセイ緩衝液は、室温においてＴｒｉｓ−ＨＣｌ（５０ｍＭ）、ＮａＣｌ（１５０ｍＭ）および１ｍＭ  ＣＨＡＰＳ、ｐＨ７．４を含む。活性は、３８４ウェルマイクロタイタープレートを用いる蛍光プレートリーダーを使用して、基質としてＮ−（（６−（２，４−ジニトロフェニル）アミノ）ヘキサノイル）−２−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−ペンタノイル）−１−ヘキサデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、トリエチルアンモニウム塩（ＰＥＤ６、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓカタログ参照番号Ｄ−２３７３９）の加水分解時の５３５ｎｍにおける発光の増加によって測定される。反応は、総容積１０マイクロリットルにおいて酵素（重量に対して約４００ｐＭ、最終濃度）および基質（５μＭ、最終濃度）を阻害薬に加えることによって開始される。
【０３２２】
【化４６】
0005437996.tif 000047
【０３２３】
本明細書中に開示されるような化合物、例えば、合成の実施例と表題が付けられている項に開示されているような化合物を試験したところ、０．１〜１０ｎＭの範囲のＩＣ５０値を有することが見いだされた。
【０３２４】
皮膚潰瘍
皮膚潰瘍は、皮膚における傷の開いたただれである。皮膚潰瘍は、種々の事象（例えば、外傷、熱もしくは低温度への曝露（熱傷および凍傷）、血液循環に関連する問題、擦傷、または腐食性材料への曝露による刺激）によって引き起こされ得る。褥瘡性潰瘍または褥瘡としても知られる圧迫潰瘍は、長時間にわたる圧迫のために血液の供給が減少している身体の領域において発症する皮膚潰瘍である；これらは、ベッドもしくは椅子に拘束されている人または硬い装具もしくはギプス包帯を装着しなければならない人において生じ得る。皮膚潰瘍は、感染性になり得、重篤な健康状態の結果をもたらし得る。皮膚潰瘍を引き起こし得る他の健康状態としては、口腔内潰瘍（口内糜爛）、慢性静脈不全、糖尿病、感染症および末梢血管疾患が挙げられる。皮膚潰瘍は、一般に、治癒を妨害する、炎症、感染症および／または病状によって維持され、炎症性組織からはがれ落ちることを伴うことが多い。
【０３２５】
多くの原因に関係なく、皮膚潰瘍は、以下の特徴：（１）皮膚領域の完全性の喪失、（２）細菌、真菌またはウイルスによるその部位の二次感染、（３）患者の全般的な虚弱、および（４）治癒の遅延を特徴とする。分類体系を使用することにより、潰瘍の重症度および深さが伝えられる。良好になっている変化または悪化している変化を伝えることは、簡単な方法である。
【０３２６】
Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ分類ステージ１〜６は、以下の範囲に及ぶ。
【０３２７】
ステージ１：皮膚が赤い。下にある組織が軟らかい。発赤は、軽く押さえると消える。
【０３２８】
ステージ２：該当領域周辺の皮膚に発赤、腫脹および硬化がみとめられる。時折、水疱形成がみとめられる。時折、表面の皮膚が喪失している。
【０３２９】
ステージ３：皮膚が、壊死性になっている。皮膚の下の脂肪が露出していることがある。その皮膚は、そのすべての層にわたって喪失していることがある。
【０３３０】
ステージ４：脂肪がより多く喪失していて、下の筋肉までより多くの皮膚の壊死がみとめられる。
【０３３１】
ステージ５：脂肪の喪失および下の筋肉の壊死が継続している。
【０３３２】
ステージ６：骨の破壊が、骨の炎症、すなわち骨髄炎（骨の感染症）にまで進行している骨皮質の侵食から始まっている。関節のセプシス、病的な骨折または全身性の身体の感染症、敗血症がみとめられることがある。
【０３３３】
別の皮膚潰瘍分類は、圧迫潰瘍の重症度を評価するためにＮａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｕｌｃｅｒ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｐａｎｅｌ（ＮＰＵＡＰ）によって開発された、治癒についての圧迫潰瘍スケール（Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｕｌｃｅｒ  Ｓｃａｌｅ  ｆｏｒ  Ｈｅａｌｉｎｇ）（ＰＵＳＨ  Ｔｏｏｌ）である。これは、圧迫潰瘍の状態の経時的な変化をモニターするための、迅速で信頼性の高いツールとして使用されている。使用するための、第１工程は、圧迫潰瘍を観察し、測定することである。次いで、その潰瘍を、（１）表面積、（２）滲出液が滲出している膿、および（３）創傷組織のタイプに関して分類する。分類された潰瘍の重症度には、スコアが与えられる。例えば、カテゴリー３の創傷組織のタイプでは：スコア４−壊死性組織（焼痂）：創傷床または潰瘍端にしっかりと癒着していて、周囲の皮膚よりも硬いかまたは軟らかいことがある、黒色、茶色または褐色の組織；スコア３−脱落組織：紐状物または厚い凝集塊として潰瘍床に癒着しているか、または粘液性である、黄色または白色の組織；スコア２−肉芽化組織：光沢があり、湿性で顆粒状の外観を有する、淡紅色または鮮紅色（ｂｅｅｆｙ  ｒｅｄ）の組織；スコア１−上皮組織：表面の潰瘍について、潰瘍表面の縁からか、または潰瘍表面上の島として、成長している新しい淡紅色または光沢のある組織（皮膚）；およびスコア０−閉じている／新しく表面が形成されている：創傷は、上皮（新しい皮膚）で完全に覆われている。次いで、これらの潰瘍の特徴の各々に対するサブスコアを記録する。最後に、サブスコアを合算することにより、総スコアを得る。総スコアが小さいほど、潰瘍が良好である。経時的に測定された総スコアを比較することにより、圧迫潰瘍の治癒における改善または悪化の指標がもたらされる。それゆえ、総スコアが徐々に小さくなっていく傾向は、潰瘍が治癒しているという良好な指標である。ＰＵＳＨツールバージョン３．０は、ｗｗｗ．ｎｐｕａｐ．ｏｒｇ／ｐｕｓｈ３−０．ｈｔｍ．において入手可能であり得る。
【０３３４】
圧迫潰瘍のＮＰＵＡＰ病期分類は、以下のとおりである：
【０３３５】
ステージ１−押さえて白くならない無傷の皮膚の紅斑がみとめられる。これは、皮膚潰瘍形成の病変の前触れであることがある。
【０３３６】
ステージ２−表皮、真皮またはその両方を含む部分的な皮膚の喪失がみとめられる。潰瘍は、表面的であり、浅い中心を有する擦過傷、疱疹または創傷として存在する。
【０３３７】
ステージ３−これは、全体的な厚い皮膚の喪失である。これは、下にある筋膜に向かって下方に広がっていることがある（が筋膜を通過していない）皮下組織に対する損傷または皮下組織の壊死を含み得る。その潰瘍は、隣接する無傷の組織を蝕んでいるかまたは蝕んでいない、深いクレーターとして存在する。
【０３３８】
ステージ４−ここでは、広範な破壊、組織ネクローシスまたは筋肉、骨もしくは支持構造に対する損傷を伴う全体的な厚い皮膚の喪失がみとめられる。腱および関節も、露出しているか、または関わっていることがある。このステージにおける潰瘍に関連する、蝕まれている管および／または洞管がみとめられることがある。
【０３３９】
第３の潰瘍分類は、糖尿病性足潰瘍形成の重症度を評価するためのＷａｇｎｅｒ分類である。
【０３４０】
グレード０−以前に治癒した潰瘍瘢痕、前潰瘍性（ｐｒｅ−ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ）病変と時折呼ばれる圧迫の領域を有する皮膚、または無防備な点に圧力を加える骨の変形の存在。
【０３４１】
グレード１−Ａ−創傷が、部分的または完全な厚さの皮膚が関与する、表面におけるものであるが、腱、被膜または骨を含まない。
【０３４２】
グレード１−Ｂ−上記のように、創傷が、部分的または完全な厚さの皮膚が関与する表面におけるものであるが、腱、被膜または骨を含まない；しかしながら、その創傷は、感染している。この創傷の定義は、下にある構造が関与しない表面の感染を意味する。創傷が、著しい化膿または波動（ｆｌｕｃｔｕａｎｃｅ）の徴候を示す場合、感染のより高いグレードの分類が受けるさらなる調査が望ましい。
グレード１−Ｃ−上記のとおりであるが、脈管が損なわれている。
グレード１−Ｄ−上記のとおりであるが、虚血を伴う。虚血は、脈管が損なわれる１タイプであるので、これらの２つのグレード間の区別は、困難であることが多い。
グレード２−Ａ−腱または靭帯を露出しているが、骨は露出していない、皮下組織までの貫通。
グレード２−Ｂ−腱または靭帯および関節嚢さえも含むが、骨は含まない、深部組織までの貫通。
グレード２−Ｃ−上記２Ｂのとおりであるが、虚血を含む。
グレード２−Ｄ−上記２Ｃのとおりであるが、感染を含む。
グレード３−Ａ−骨にまで到達する（ｐｒｏｂｅｓ  ｔｏ  ｂｏｎｅ）が、局所的な感染の徴候も全身性の感染の徴候も示さない創傷。
グレード３−Ｂ−骨にまで到達し、感染している創傷。
グレード３−Ｃ−骨にまで到達し、感染しており、虚血性である創傷。
グレード３−Ｄ−活動性の感染、虚血性の組織および露出した骨を特徴とする骨にまで到達している創傷。
グレード４−足の前部の壊疽。
グレード５−足全体の壊疽。
【０３４３】
糖尿病性潰瘍のＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ分類を以下に示す。
【０３４４】
【表Ａ】
0005437996.tif 000048
【０３４５】
皮膚潰瘍の原因
皮膚潰瘍は、多くの疾患、障害および外傷に直接または間接的に起因し得、しばしば、疾患、障害および外傷の合併から生じ得る。皮膚潰瘍の原因は、脈管性（静脈性、動脈性、リンパ性、血管炎）、神経障害性（例えば、糖尿病、二分脊椎、ハンセン病）、代謝性（例えば、糖尿病、痛風）、結合組織疾患（例えば、関節リウマチ、強皮症、全身性エリテマトーデス）、血液学的疾患（赤血球障害（例えば、鎌状細胞疾患）；白血球障害（例えば、白血病）；血小板障害（例えば、血小板増加症）、免疫学的（例えば、自己免疫疾患および他の炎症性障害：関節リウマチ、強皮症、全身性エリテマトーデス；異常な免疫応答：壊疽性膿皮症）、タンパク異常血症（例えば、クリオグロブリン血症、アミロイドーシス）、免疫不全（例えば、ＨＩＶ、免疫抑制治療）、腫瘍性（例えば、基底細胞癌、扁平上皮癌、転移性疾患）、感染性（細菌、真菌、ウイルス）、寄生虫感染（皮膚リーシュマニア症）、皮下脂肪組織炎（例えば、リポイド類壊死症−光沢のある萎縮性病変が脚に生じる、糖尿病に合併することが多い状態）、外傷性（例えば、圧迫潰瘍、照射損傷）、医原性（例えば、薬物／薬剤）、人為的（例えば、自傷（ｓｅｌｆ  ｈａｒｍ）、「人工皮膚炎」および精神疾病）ならびに病因が不明の疾患および障害（例えば、サルコイドーシス−すべての罹患組織における非乾酪性類上皮細胞結節の存在を特徴する、ほとんどすべての器官または組織が関与する慢性で進行性かつ全身性の肉芽腫性の細網症）（Ｇｒｅｙ，Ｊ．Ｅ．，ｅｔ．ａｌ．，２００６，ＢＭＪ  ３３２：２８５−２８８）であり得る。
【０３４６】
静脈性潰瘍は、閉塞性の血管または静脈性疾患によって引き起こされ、それらは、脚の静脈に血液を貯留させる足全体の不十分な血流に起因する。そして、静脈および毛細血管における圧力が高くなる。圧力が高いと、血管から周囲組織に体液が漏出し、腫脹が生じる。最終的には、その腫脹が、毛細血管から組織への酸素および栄養分の移動を妨害する。組織が酸素および栄養分を欠乏し、漏出する体液がそれらに圧力をかけるので、その組織は、損傷する。結果として、静脈性潰瘍が形成し得る。静脈性潰瘍は、脚の静脈が損傷を受けた後の下肢において主に発症する。これらの潰瘍は、皮膚の中に深く入り込み得る。
【０３４７】
脚の静脈に血液を貯留させる任意の障害が、静脈性潰瘍を引き起こし得る。拡張蛇行静脈、または血餅によって阻止される静脈（深部静脈血栓症）が損傷されることによって、血液が貯留し得る。脚の静脈に対するそのような損傷は、慢性静脈不全と呼ばれる。例としては、うっ血性心不全、肥満症、腎不全、抗リン脂質−抗体症候群、皮斑様血管障害（ｌｉｖｅｄｏｉｄ  ｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ）、静脈うっ滞、小血管閉塞動脈疾患、Ｉ型クリオグロブリン血症またはワルデンシュトレームマクログロブリン血症およびクリッペル・トレノーネイ・ウェーバー症候群が挙げられるが、これらに限定されると解釈されるべきでない。
【０３４８】
静脈性潰瘍は、高齢者において比較的よく見られる。静脈性潰瘍は、容易に感染性になる。たまに、静脈性潰瘍が長時間持続する場合、その縁において皮膚癌が発症する。静脈性潰瘍になりやすい領域は、足および脚であり、それは、下にある血管の機能不全が原因である。外傷が繰り返されることが原因で、皮膚は、崩壊するか、または治癒しない。爪の圧迫でさえも、爪下の潰瘍形成を引き起こし得る。これらは、損傷が治癒する可能性が非常に低い糖尿病患者において、最も頻繁に見られる。
【０３４９】
血管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）（複数形：血管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｄｅｓ））は、白血球の遊走およびその結果として生じる損傷に起因する血管壁の炎症を特徴とする疾患の一群である。体内の最も大きい血管（大動脈）から皮膚における最も小さい血管（毛細血管）までのすべてのサイズの血管が、罹患し得る。罹患する血管のサイズは、特定のタイプの血管炎によって多様である。損傷を受けた血管は、組織の虚血に続いて組織壊死をもたらす。
【０３５０】
皮膚潰瘍をもたらし得る血管炎の例としては、ウェゲナー肉芽腫症、結節性多発性動脈炎、クリオグロブリン血症性（混合）血管炎、高安動脈炎および白血球破砕性血管炎が挙げられる。
【０３５１】
慢性非治癒性皮膚潰瘍は、いくつかの癌：基底細胞癌−脚の潰瘍（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ＴＪ，ｅｔ．ａｌ．１９９１，Ｊ  Ａｍ  Ａｃａｄ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｊｕｌ；２５（１  Ｐｔ  １）：４７−９；Ｃｏｎｄｅ−Ｔａｂｏａｄａ  Ａ，ｅｔ．ａｌ．２００６  Ｊ  Ｅｕｒ  Ａｃａｄ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｖｅｎｅｒｅｏｌ．Ｍａｒ；２０（３）：３５９）、リンパ腫−血管中心性Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞Ｔ細胞リンパ腫および菌状息肉腫水疱症、皮膚白血病およびランゲルハンス細胞組織球増殖症において観察されている。
【０３５２】
様々な病原体による皮膚感染症もまた皮膚潰瘍を引き起こし得る。例としては、深在性真菌感染症：スポロトリクム症、アスペルギルス症、クリプトコックス症、接合真菌症、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍａｒｎｅｆｆｅｉ感染；２型単純ヘルペスウイルス、皮膚結核および皮膚アメーバ症が挙げられる。
【０３５３】
皮膚リーシュマニア症は、スナバエが咬傷し、その咬傷部位に寄生生物のＬｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａまたはＬｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｍａｊｏｒが沈積することによって引き起こされる皮膚潰瘍である。Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａは、主に都市部に見られるが、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｍａｊｏｒは、乾燥した砂漠地帯に見られる。
【０３５４】
真性糖尿病は、高血糖症（高血糖）を特徴とする代謝障害である。糖尿病は、多くの合併症を引き起こし得、そのうち、神経損傷（ニューロパシー）（いくつかの種類がある）、微小血管の損傷および不十分な治癒は、脚および足における皮膚潰瘍の発症に頻繁に関与する。足の底面は、特に、糖尿病患者において皮膚潰瘍になりやすい。
【０３５５】
慢性的に高い血糖値は、血管の損傷をもたらす。糖尿病では、その結果として生じる問題は、「微小血管の疾患」（小血管に対する損傷に起因）および「大血管の疾患」（動脈に対する損傷に起因）に分類される。
【０３５６】
脚から始まるが、潜在的に他の神経、後にしばしば指および手における、通常「グローブおよびストッキング」分布の、異常な感覚および感覚の低下である糖尿病性ニューロパシー。これは、損傷を受けた血管と組み合わされると、糖尿病性の足をもたらし得る。
【０３５７】
ニューロパシーと動脈性疾患との合併に起因することが多い糖尿病性の足は、皮膚潰瘍および感染、重篤な場合では、ネクローシスおよび壊疽を引き起こし得る。それは、先進国世界における成人の通常のつま先およびまたは脚の切断術の最も一般的な原因である。
【０３５８】
創傷、特に脚の創傷の不良な治癒は、切断術を必要とし得る壊疽（先進国世界における成人の非外傷性切断術の主な原因）をもたらし得る。糖尿病の適切な治療ならびに血圧の管理および生活要因（例えば）を強く重要視することによって、上述のほとんどの合併症のリスクプロファイルが改善され得る（Ｎａｔｈａｎ  ＤＭ，ｅｔ．ａｌ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００５；３５３：２６４３−５３．ＰＭＩＤ  １６３７１６３０）。
【０３５９】
自分自身が原因の皮膚潰瘍は、精神疾病（例えば、うつ、ミュンヒハウゼン症候群および人工的（ｆａｃｔｉｔｉａｌ）（人為的）障害）の発生において生じ得る。人工的障害を有する人々は、人工皮膚炎を経験し、それらの人々は、任意の方法によって自分自身の皮膚を傷つけている。そのような人々は：指の爪またはナイフもしくは他の鋭利器具で引っ掻くこと；火（例えば、タバコ、マッチまたはろうそく）で皮膚をやけどさせること；漂白剤などの腐食性の化学物質で皮膚をやけどさせることによって自身の皮膚を傷つけることがある。それらの人々は、自分自身がその損傷を引き起こしていることに気づいているかもしれないし、気づいていないかもしれないが、彼らは、典型的には、意図的に損傷を与えられることを拒む。
【０３６０】
皮膚潰瘍形成は、ある特定の薬物にも関連し得る（医原性の潰瘍）（例えば、ヒドロキシ尿素誘発性潰瘍形成（ヒドロキシ尿素は、抗代謝産物と呼ばれる、化学療法薬物の一般的な群に属する）、臭素疹（抗痙攣剤中の臭化物に対する過敏症に起因するざ瘡様または肉芽腫性の発疹）および薬物誘発性狼瘡）。それは、慢性骨髄性白血病および鎌状赤血球貧血などの血液障害を治療するために使用される。
【０３６１】
いくつかの炎症性障害が、皮膚潰瘍に関連する。例えば：皮膚クローン病、潰瘍性リポイド類壊死症、壊疽性膿皮症、全身性エリテマトーデスおよび水疱性モルフェア（Ｂｕｌｌｏｕｓ  ｍｏｒｐｈｅａ）。
【０３６２】
皮膚潰瘍形成は、外部の組織損傷（外傷）（例えば、接触性外陰炎（外陰炎は、女性の外生殖器（外陰部）の炎症である）、二次感染をもたらす注射による薬物乱用、ロクソスセレス症（ドクイトグモ（ｂｒｏｗｎ  ｒｅｃｌｕｓｅ  ｓｐｉｄｅｒ）の咬傷）、壊疽性膿皮症においてしばしば見られるようなパテルギー（皮膚外傷後の炎症性反応の誘導）、およびすべての外傷関連皮膚潰瘍形成の医学的に非常に有意な圧迫潰瘍）にも関連し得る。高熱（熱傷）および超低温への曝露（凍傷）もまた、皮膚潰瘍形成をもたらし得る。
【０３６３】
褥瘡または褥瘡性潰瘍としても知られる圧迫潰瘍は、体重を移動させずに１つの位置に長時間にわたって居続けるときに破壊される皮膚の領域である。これは、車椅子を使用している場合、または短い時間であったとしても（例えば、外科術後または損傷後に）寝たきりである場合によく起きる。皮膚に対する一定の圧力が、その領域への血液の供給を減少させ、ベッドなどの抵抗性表面の摩擦が、血流が減少している領域を刺激し、そして、影響を受けた組織が死滅する。
【０３６４】
圧迫潰瘍は、皮膚の発赤として始まるが、次第に悪化して、疱疹、次いで、傷の開いたただれを形成し、最終的にはクレーターを形成する。圧迫潰瘍の最も一般的な場所は、骨ばっている隆起の上であり、ここは、肘、踵、尻、足首、肩、背中、および頭の後ろ側のような、筋肉および脂肪による当てものがあまりない部分である。
【０３６５】
動くことができない患者は、長時間にわたって同じ腹臥位で放置されるとき、褥瘡を形成しやすい。そのような皮膚潰瘍を発症するリスクのある患者の例としては、糖尿病患者、対麻痺、四肢麻痺、高齢者、可動性および／または協調のハンディキャップを有する個体（例えば、神経性欠損、例えば、脳性麻痺および二分脊椎を有する個体、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）および多発性硬化症（ＭＳ）などの神経筋の疾患を有する個体、強皮症などの自己免疫疾患を有する個体、ならびに熱傷の犠牲者）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０３６６】
皮膚潰瘍が関与する疾患および障害の治療
血管炎の現在の治療は、ステロイド（例えば、メチルプレドニゾロン、コルチゾンおよびシクロホスファミド）を用いて炎症を標的化するものである。シクロホスファミドおよびアザチオプリンなどの免疫抑制剤もまた投与され得る。さらに、免疫抑制剤は、炎症性疾患の治療に使用される。
【０３６７】
ペントキシフィリンは、静脈性皮膚潰瘍に対する標準的な薬剤である。経口ペントキシフィリンは、加圧下着を用いる標準的な治療との併用において、静脈性皮膚潰瘍の治癒を改善するために使用される。ペントキシフィリンは、血液の粘度または「粘性」を低下させることにより、血液循環を改善する。ペントキシフィリンは、身体における炎症も減少させ、これは、同様に潰瘍の治癒を助け得る。
【０３６８】
１型糖尿病の治療では、インスリンが使用され、２型糖尿病では、経口抗糖尿病薬または経口血糖降下薬が使用される。それらの薬物は、一般に、血液中のグルコースレベルを低下させることによって働く。
【０３６９】
スルホニル尿素は、初めて広く使用された経口血糖降下薬である。これらは、膵ベータ細胞のＫＡＴＰチャネルに対する直接的な作用によってインスリン放出の引き金を引く、インスリン分泌促進剤である。分泌促進物質は、別の物質を分泌させる物質である。スルホニル尿素は、インスリンの内因性の放出を刺激することによって働くので、ＩＩ型糖尿病においてのみ有用である。スルホニル尿素の例としては：トルブタミド（オリナーゼ（Ｏｒｉｎａｓｅ））；アセトヘキサミド（ジメロール（Ｄｙｍｅｌｏｒ））；トラザミド（トリナーゼ（Ｔｏｌｉｎａｓｅ））；クロルプロパミド（ジアビネス（Ｄｉａｂｉｎｅｓｅ））；グリピジド（グルコトロール（Ｇｌｕｃｏｔｒｏｌ））；グリブリド（ジアベタ（Ｄｉａｂｅｔａ）、ミクロナーゼ（Ｍｉｃｒｏｎａｓｅ）、グリナーゼ（Ｇｌｙｎａｓｅ））；グリメピリド（アマリル（Ａｍａｒｙｌ））；グリクラジド（ジアミクロン（Ｄｉａｍｉｃｒｏｎ））が挙げられるがこれらに限定されない。
【０３７０】
アミリンアナログ、例えば、プラムリンタイド（Ｐｒａｍｌｉｎｔｉｄｅ）；ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−４）阻害薬（ビルダグリプチン、シタグリプチン）；インクレチン擬態（ｍｉｍｅｔｉｃ）ＧＬＰアナログ、例えば、エキセンディン（Ｅｘｅｎｄｉｎ）−４；アルファグルコシダーゼ阻害薬−ミグリトール（ｍｉｇｌｉｔｏｌ）（グリセット（Ｇｌｙｓｅｔ））およびアカルボース（プレコース（Ｐｒｅｃｏｓｅ）／グルコバイ（Ｇｌｕｃｏｂａｙ））；ビグアナイド−メトホルミン（グルコファージ（Ｇｌｕｃｏｐｈａｇｅ））；メグリチニド（Ｍｅｇｌｉｔｉｎｉｄｅｓ）−レパグリニド（プランジン（Ｐｒａｎｄｉｎ））およびナテグリニド（スターリックス（Ｓｔａｒｌｉｘ））；ＰＰＡＲα／γリガンド（ムラグリタザール（ｍｕｒａｇｌｉｔａｚａｒ）、テサグリタザル（ｔｅｓａｇｌｉｔａｚａｒ）およびチアゾリジンジオン−ロシグリタゾン（アバンジア（Ａｖａｎｄｉａ））、ピオグリタゾン（アクトス（Ａｃｔｏｓ））およびトログリタゾン（レズリン（Ｒｅｚｕｌｉｎ）））；ＳＧＬＴ（ナトリウム依存性グルコーストランスポーター１）阻害薬；およびＦＢＰアーゼ（フルクトース１，６−ビスホスファターゼ）阻害薬（Ｌｅｂｏｖｉｔｚ  ＨＥ．Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｌｌｉｔｕｓ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ．Ａｌｅｘａｎｄｒｉａ：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，２００４を参照のこと）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０３７１】
基底細胞癌に対する治療法としては、光線力学的療法が挙げられる（この腫瘍は、クリーム（例えば、メトビックス（Ｍｅｔｖｉｘ））またはローション中の光感作性化学物質で治療されて、数時間後に光に曝露される。表在性基底細胞癌の最大８５％が、局所用イミキモドクリーム、寒冷療法（凍結）および放射線治療（Ｘ線治療）を用いて治癒し、これは、優れた化粧品の結果である。
【０３７２】
皮膚リーシュマニア症に対する標準的な治療は、五価アンチモンである。他の薬剤としては、アンホテリシンＢ（フンギソン（Ｆｕｎｇｉｚｏｎｅ））（五価アンチモンが失敗した場合にとっておく）、イセチオン酸ペンタミジン（Ｐｅｎｔａｍ  ３００）および局所用パロモマイシンが挙げられる。
【０３７３】
圧迫潰瘍のケアおよび治療は、Ｂｒｉｌｌｈａｒｔ  Ｂ．Ｒｅｈａｂｉｌ  Ｎｕｒｓ．２００５；３０（３）：８５−９１；ｄｅ  Ｌａａｔ  ＥＨ，ｅｔ．ａｌ．，．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｒｓ．２００５；１４（４）：４６４−４７２；およびＣｏｌｅ  Ｌ  ａｎｄ  Ｎｅｓｂｉｔｔ  Ｃ．Ｏｓｔｏｍｙ  Ｗｏｕｎｄ  Ｍａｎａｇｅ．２００４；５０（１１）：３２−４０に見られる。
【０３７４】
本発明の一実施形態は、皮膚潰瘍の治療および／または予防の必要な人々におけるその治療および／または予防を包含し、それは、抗菌治療、抗寄生虫治療、抗肥満症治療、糖尿病治療、循環器疾患治療、腎不全治療、血管炎治療、静脈不全治療、動脈不全治療、癌治療、免疫抑制剤治療、免疫不全治療、ステロイド治療および精神療法と組み合わせて、Ｌｐ−ＰＬＡ２タンパク質の活性および／または発現を阻害することを包含する。
【０３７５】
本発明の一実施形態は、寝たきりであるか、または車椅子生活である人々における圧迫潰瘍の治療および／または予防を包含し、それは、Ｌｐ−ＰＬＡ２タンパク質の活性および／または発現を阻害することを包含する。
【０３７６】
本発明の一実施形態は、熱傷または凍傷を有する人々における皮膚潰瘍の治療および／または予防を包含し、それは、Ｌｐ−ＰＬＡ２タンパク質の活性および／または発現を阻害することを包含する。
【０３７７】
皮膚潰瘍の治療
皮膚潰瘍管理としては、薬剤（例えば、抗細菌薬、抗真菌薬、抗寄生生物薬および抗ウイルス薬、血栓溶解剤または凝血防止剤（例えば、組織プラスミノゲンアクチベーター（ｔＰＡ）、圧縮包帯の使用、生物工学によって作られた皮膚代替物（例えば、培養された上皮性同種移植片−Ａｐｌｉｇｒａｆ）、電気刺激、高度な薬物送達系（例えば、イオン導入に基づく経皮的送達系）、組織修復を促進する材料（例えば、血小板由来および自家の成長因子、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（Ｇ−Ｍ  ＣＳＦ）ならびにメソグリカン）の局所的な送達、陰圧創傷治療および超音波が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３７８】
本発明の一実施形態は、皮膚潰瘍を有する対象における皮膚潰瘍の治療であり、それは、創傷管理と組み合わせてＬｐ−ＰＬＡ２タンパク質の活性および／または発現を阻害することを包含し、その創傷管理としては、抗病原体薬剤、血栓溶解剤、圧縮包帯の使用、生物工学によって作られた皮膚代替物、電気刺激、高度な薬物送達系、組織修復促進治療の局所的な送達、陰圧創傷治療および超音波が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３７９】
皮膚潰瘍の発症についての危険因子
本発明の一実施形態は、皮膚潰瘍を発症するリスクのある人々における皮膚潰瘍の予防である。誰が皮膚潰瘍を発症するリスクがあるのかについて判断するには、皮膚潰瘍形成に関与し得る危険因子を同定する必要がある。
【０３８０】
皮膚潰瘍は、たくさんの疾患、障害および外傷ならびにそれらの組み合わせによって引き起こされ得るので、皮膚潰瘍を発症するリスクを増加させるいくつかの因子が存在する。これらの因子としては、前出に開示されているような疾患または障害または外傷に関連する皮膚潰瘍のエピソードを以前に有していること、高齢であること、補助なく身体の一部を動かすことができないこと（例えば、脊髄損傷後もしくは脳損傷後、または神経筋疾患（多発性硬化症のような）を有している場合の、寝たきりであることまたは車椅子生活であること）、栄養不良状態（特に、タンパク質不足）、身体活動性の喪失、過剰なアルコールの使用、身体の領域が前出に開示されているような適切な血流を受け取ることが妨害されている糖尿病などの慢性状態を有していること；尿失禁または腸失禁（皮膚の破壊をもたらし得る皮膚過敏を引き起こし得る、長時間にわたる皮膚付近の水分）、もろい皮膚、アルツハイマー病などの状態による精神障害（その患者は、圧迫潰瘍を適切に予防または治療することができないかもしれない）、喫煙、糖尿病と診断されていること、高血圧および／または高レベルのホモシステイン、過体重であること（理想体重よりも３０パーセントを超える体重）、拡張蛇行静脈（特に、大腿の内側を上向きに流れる伏在静脈において血流が逆流し得る場合）の家族歴、血液が凝固しすぎる傾向にある凝固能亢進性の状態または血栓形成傾向などの血液凝固障害と診断されていること、長い時間静止する必要のある職業についていること、鎌状細胞貧血を有すること、抗痙攣治療のための臭化カリウムなどの臭化物含有薬剤を摂取していること、ならびに腎不全が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３８１】
圧迫潰瘍の予測および予防に対する完全なガイドは、Ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃａｒｅ  Ｐｏｌｉｃｙ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＡＨＣＰＲ）よるＣｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  Ｎｕｍｂｅｒ  ３，１９９２，ＡＨＣＰＲ  Ｐｕｂ．Ｎｏ．９２−００４７に見られる。
【０３８２】
１つの危険因子を有することは、ある対象が、皮膚潰瘍を発症し、ゆえにＬｐ−ＰＬＡ２タンパク質の活性および／または発現を阻害する薬剤で治療されることを意味しないが、危険因子の組み合わせを有することは、その対象がその対象の生涯において最終的に少なくとも１つの皮膚潰瘍を発症し得る確率を確実に上昇させる。２つ以上または３つ以上の危険因子の組み合わせを有する対象は、本明細書中に開示される方法による治療および／または予防に対する候補として医師によって考慮されるべきである。例えば、高齢であり、糖尿病であり、かつ知能が低下している対象、または肥満であり、運動不能である対象は、各々が、本明細書中に開示されるような治療に対する候補である。
【０３８３】
しかしながら、それぞれの危険因子を有する対象において皮膚潰瘍が生じる可能性が最も高い危険因子がいくつか存在し、それらは、単独で非常に良好な指標である。これらは、「高リスク」因子と考えられる。これらとしては、糖尿病、血管炎、ハンセン病、寝たきりであることまたは車椅子生活であること、熱傷または凍傷、ヒドロキシ尿素に基づく化学療法を受けていること、および疾患／障害に関連する皮膚潰瘍の既往歴が挙げられる。非常に有意な危険因子は、糖尿病、血管炎（自己免疫疾患）、アテローム性動脈硬化症、皮膚の一部に一定の圧力がかかる、寝たきりであること、および車椅子生活であることである。これらの因子を有する対象は、本明細書中に開示される本方法による治療および／または予防に対する候補として医師によって考慮されるべきである。
【０３８４】
組成物の製剤
本明細書中に開示されるようなＬｐ−ＰＬＡ２を阻害する化合物、例えば、薬剤は、薬物として使用され得るか、または本明細書中に開示される有用性の１つ以上を有する薬学的組成物を製剤化するために使用され得る。それらは、インビトロにおいて培養液中の細胞に投与され得るか、インビボにおいて身体内の細胞に投与され得るか、または後に同じ個体または別の個体の身体に戻され得る細胞に個体の外で、エキソビボで投与され得る。そのような細胞は、脱凝集され得るか、または固体組織として提供され得る。
【０３８５】
本明細書中に開示されるようなＬｐ−ＰＬＡ２を阻害する化合物、例えば、薬剤は、薬物または他の薬学的組成物を作製するために使用され得る。薬学的に許容可能なキャリアをさらに含むＬｐ−ＰＬＡ２を阻害する薬剤および組成物を個体に送達するのに有用な成分をさらに含む組成物の使用は、当該分野で公知である。本明細書中に開示されるような薬剤にそのようなキャリアおよび他の成分を加えることは、十分に当業者のレベル内である。
【０３８６】
薬学的組成物は、血液脳関門の通過または内皮との直接の接触に適応された製剤として投与され得る。いくつかの実施形態において、その組成物は、全身性送達に適応された製剤として投与され得る。いくつかの実施形態において、その組成物は、特定の器官（例えば、肝臓、脾臓、骨髄および皮膚であるがこれらに限定されない）への送達に適応された製剤として投与され得る。
【０３８７】
あるいは、薬学的組成物は、細胞の培養液にエキソビボで加えられ得る。活性な化合物に加えて、そのような組成物は、薬学的に許容可能な許容可能なキャリア、ならびに投与を促進すること、および／または取り込みを増大させることが知られている他の成分（例えば、食塩水、ジメチルスルホキシド、脂質、ポリマー、親和性に基づいた細胞特異的標的化系）を含み得る。本組成物は、ゲル、スポンジまたは他の透過性マトリックス（例えば、ペレットまたはディスクとして形成されたもの）の中に組み込まれ得、持続性の局所的な放出のために内皮の近位に留置される。本組成物は、単回投与で、または様々な回数で投与される反復投与で、投与され得る。
【０３８８】
薬学的組成物は、公知の任意の経路によって投与され得る。例として、本組成物は、粘膜、肺、局所的または他の局在的もしくは全身性の経路（例えば、経腸的および非経口）によって投与され得る。句「非経口投与」および「非経口的に投与される」は、本明細書中で使用されるとき、通常注射による、経腸的投与以外および局所的投与以外の投与の様式のことを意味し、それらとしては、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、脳（心）室内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管的、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、髄腔内、脳脊髄内および胸骨内の注射、注入および他の注射または注入の手法が挙げられるがこれらに限定されない。句「全身性投与」、「全身性に投与される」、「末梢性投与」および「末梢性に投与される」は、本明細書中で使用されるとき、動物の系に入り、代謝および他の同様のプロセスに供されるような、本明細書中に開示されるような薬剤の投与、例えば、皮下投与を意味する。
【０３８９】
語句「薬学的に許容可能な」は、過剰な毒性、刺激、アレルギー性反応、または妥当な利益／リスク比と釣り合った他の問題もしくは合併症なしに、人間および動物の組織と接触させて使用するのに適している、正しい医学的判断の範囲内の化合物、材料、組成物および／または剤形のことを指すために本明細書中で使用される。
【０３９０】
語句「薬学的に許容可能なキャリア」は、本明細書中で使用されるとき、１つの器官または身体の一部から別の器官または身体の一部に対象の薬剤を運ぶか、または輸送するのに関与する、薬学的に許容可能な材料、組成物またはビヒクル（例えば、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒または封入材料）のことを意味する。各キャリアは、その製剤の他の成分と適合性であるという意味において「許容可能」でなければならず、例えば、そのキャリアは、治療の際にその薬剤の影響を低下させない。換言すれば、キャリアは、薬学的に不活性である。
【０３９１】
投薬の量およびタイミング、製剤ならびに投与の経路の適当な選択は、皮膚病変またはそのリスクを有する対象において好ましい反応を達成し（すなわち、有効性）、そして過度の毒性またはそれに対する他の害を回避する（すなわち、安全性）という目標を用いて行われ得る。それゆえ、「有効な」とは、所望の効果を達成する条件の日常的な操作を含むそのような選択のことを指す。
【０３９２】
１日に１回、短い時間にわたって個体に投与される製剤のボーラスは、簡便な投薬スケジュールである。あるいは、有効な１日量は、投与の目的で反復投与に、例えば、１日あたり２〜１２回の投薬に分けることができる。個体において、化合物またはその誘導体の一過性または持続性の濃度を達成し、そして所望の治療的な反応または保護をもたらすためには、薬学的組成物中の活性成分の投薬量レベルもまた変動し得る。しかし、所望の治療効果を達成するために必要なレベルよりも低いレベルの用量から開始し、そして所望の効果が達成されるまで投薬量を徐々に増加させていくこともまた、当該分野の技術範囲内である。
【０３９３】
投与されるＬｐ−ＰＬＡ２を阻害する薬剤の量は、当業者に公知の因子（例えば、化合物の生物活性およびバイオアベイラビリティ（例えば、体内での半減期、安定性および代謝）；化合物の化学特性（例えば、分子量、疎水性および溶解性）；投与の経路ならびにスケジューリングなどに依存する。任意の特定の個体に対して達成される特定の投薬量レベルが、年齢、性別、健康状態、病歴、体重、１つ以上の他の薬物との併用、および疾患の重症度をはじめとした種々の因子に依存し得ることもまた、理解されるだろう。
【０３９４】
いくつかの実施形態において、本明細書中に開示されるようなＬｐ−ＰＬＡ２を阻害する薬剤は、他の薬剤、例えば、皮膚潰瘍を予防および／もしくは治療する治療薬、または皮膚潰瘍に関連する疾患および障害を治療するために使用される治療薬と併用され得る。例えば、薬剤は、ペントキシフィリン（静脈性皮膚潰瘍）およびスルホニル尿素（糖尿病）の使用を包含する。
【０３９５】
したがって、Ｌｐ−ＰＬＡ２を阻害する１つ以上の薬剤と、１つ以上の他の医学的手技との併用治療が、実施され得る。
【０３９６】
さらに、治療は、Ｌｐ−ＰＬＡ２の発現または活性を阻害する複数の薬剤も含み得る。例えば、他の薬剤は、ナイアシン（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｎｇｎｅｗｓ．ｃｏｍ／ｎｅｗｓ／ｂｎｉｔｅｍ．ａｓｐｘ？ｎａｍｅ＝６７２４５６８を参照のこと）およびフェノフィブラート（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｎｇｎｅｗｓ．ｃｏｍ／ｎｅｗｓ／ｂｎｉｔｅｍ．ａｓｐｘ？ｎａｍｅ＝１４８１７７５６&ｔａｘｉｄ＝１９を参照のこと）とともにスタチンを使用することを包含する。
【０３９７】
対象に投与される量は、好ましくは、その投与に起因する利点にまさる有毒作用を誘導しない量である。さらなる目的は、ケアの認識されている基準と比較して、個体における上記疾患の症状の数を減少させること、重症度を低下させること、および／またはそれに苦しんでいることをあるいは緩和することである。
【０３９８】
現在の規制に従った化合物の作製は、行政機関（例えば、米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ））による優良試験所基準（ｇｏｏｄ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｐｒａｃｔｉｃｅｓ）（ＧＬＰ）および優良製造規範（ｇｏｏｄ  ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ｐｒａｃｔｉｃｅｓ）（ＧＭＰ）に規制されている。これは、ＱＡ／ＱＣを維持ならびにモニターする正確かつ完全な記録を義務づけている。機関および施設のパネルによる患者プロトコルの監視もまた、インフォームドコンセントが得られること；生成物の安全性、生物活性、適切な投薬量および有効性が段階的に研究されること；結果が統計学的に有意であること；ならびに倫理的なガイドラインに従っていることを確実にするために、構想されている。動物モデルを使用するプロトコルならびに毒性のある化学物質の使用および規制の遵守の同様の監視が、義務づけられている。
【０３９９】
Ｌｐ−ＰＬＡ２の発現および／または活性を阻害することを目的とした、投薬、製剤、投薬量、レジメン、および結果を解析するための方法は、多様であり得る。したがって、最小および最大の有効投薬量は、投与の方法に応じて変動する。皮膚病変の症状または重症度の抑制は、特定の投薬量の範囲内で生じ得るが、しかしながら、それは、その投薬を受ける生物、投与経路、Ｌｐ−ＰＬＡ２を阻害する薬剤が他の共刺激分子と組み合わされて投与されるか否か、およびＬｐ−ＰＬＡ２投与の阻害薬の特定のレジメンに応じて、変動する。例えば、通常、局所的投与または経鼻投与は、経口、経腸的、直腸または膣の投与よりも必要な投薬量が少ない。
【０４００】
本発明とともに使用するための経口または経腸用の製剤の場合、当該分野で周知の固体キャリアを使用する従来の手順に従って、錠剤が製剤化され得る。本発明の方法とともに使用される経口製剤に使用されるカプセルは、ゼラチンまたはセルロース誘導体などの任意の薬学的に許容可能な材料から作製され得る。経口的に投与される剤形に対する徐放性経口送達系および／または腸溶コーティング（例えば、１９８７年１１月３日発行の米国特許第４，７０４，２９５号、"Ｅｎｔｅｒｉｃ  Ｆｉｌｍ−Ｃｏａｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ"；１９８５年１２月３日発行の米国特許第４，５５６，５５２号、"Ｅｎｔｅｒｉｃ  Ｆｉｌｍ−Ｃｏａｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ"；１９８２年１月５日発行の米国特許第４，３０９，４０４号、"Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ"；および１９８２年１月５日発行の米国特許第４，３０９，４０６号、"Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ"に記載されているもの）もまた企図される。
【０４０１】
固体キャリアの例としては、デンプン、糖、ベントナイト、シリカおよび他の一般に使用されているキャリアが挙げられる。本発明の製剤において使用され得るキャリアおよび希釈剤のさらなる非限定的な例としては、食塩水、シロップ剤、デキストロースおよび水が挙げられる。
【０４０２】
腸溶コーティングされた製剤
本明細書中に開示されるような式（Ｉ）〜（ＩＶ）と同等のもののＬｐ−ＰＬＡ２の阻害薬に対する小さい化学物質を投与するための製剤に関して、特に有用な一実施形態は、腸溶性ポリマーのおおいを有する、Ｌｐ−ＰＬＡ阻害薬を含む錠剤の製剤である。そのような調製物の例は、ＷＯ２００５／０２１００２に見られる。その中心部に存在する活性な材料は、微粒子化された形態または可溶化された形態で存在し得る。その中心部は、活性な材料に加えて、圧縮錠剤の分野における従来の添加物を含み得る。そのような錠剤における適切な添加物は、希釈剤（例えば、無水ラクトース、ラクトース一水和物、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、リン酸二カルシウムまたはそれらの混合物）；結合剤（例えば、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピル−セルロース、ポリビニルピロリドン、アルファ化デンプンもしくはアラビアゴムまたはそれらの混合物）；崩壊剤（例えば、微結晶性セルロース（結合剤と崩壊剤の両方の機能を満たす）架橋ポリビニルピロリドン、ナトリウムデンプングリコレート、クロスカルメロースナトリウムまたはそれらの混合物）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸）、流動促進剤（ｇｌｉｄａｎｔｓ）または流動補助剤（ｆｌｏｗ  ａｉｄｓ）（例えば、コロイドケイ酸、タルクまたはデンプン）および安定剤（例えば、乾燥アモルファスシリカ、着色剤、香料など）を含み得る。好ましくは、本錠剤は、希釈剤としてラクトースを含む。結合剤が存在するとき、その結合剤は、好ましくは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースである。好ましくは、本錠剤は、潤滑剤としてステアリン酸マグネシウムを含む。好ましくは、本錠剤は、崩壊剤としてクロスカルメロースナトリウムを含む。好ましくは、本錠剤は、微結晶性セルロースを含む。
【０４０３】
希釈剤は、中心部の１０〜８０重量％の範囲で存在し得る。潤滑剤は、中心部の０．２５〜２重量％の範囲で存在し得る。崩壊剤は、中心部の１〜１０重量％の範囲で存在し得る。微結晶性セルロースは、存在する場合、中心部の１０〜８０重量％の範囲で存在し得る。
【０４０４】
活性成分は、好ましくは、中心部の１０〜５０重量％、より好ましくは、中心部の１５〜３５重量％を構成する（遊離塩基等価物として計算する）。その中心部は、任意の治療的に適当な投薬レベルの活性成分を含み得るが、好ましくは、活性成分の遊離塩基として、最大１５０ｍｇを含む。特に好ましくは、その中心部は、活性成分の遊離塩基として、２０、３０、４０、５０、６０、８０または１００ｍｇを含む。活性成分は、遊離塩基として存在してもよいし、任意の薬学的に許容可能な塩として存在してもよい。活性成分が塩として存在する場合、その重量は、錠剤が、塩の遊離塩基として計算される所望の量の活性成分を含むように調整される。好ましくは、活性成分は、塩酸塩として存在する。
【０４０５】
中心部は、圧縮混合物から作製され得る。その成分は、直接圧縮されてもよいし、圧縮の前に造粒されてもよい。そのような顆粒剤は、当該分野で公知のような従来の造粒プロセスによって形成され得る。代替の実施形態では、顆粒剤は、腸溶性のおおいで個別にコーティングされ得、次いで、標準的なカプセルのおおいの中に封入され得る。
【０４０６】
中心部は、腸溶性ポリマーを含むおおいによって囲まれる。腸溶性ポリマーの例は、セルロースアセテートフタレート、セルロースアセテートスクシネート、メチルセルロースフタレート、エチルヒドロキシセルロースフタレート、ポリビニルアセテートフタレート、ポリビニルブチレートアセテート、酢酸ビニル−無水マレイン酸共重合体、スチレン−マレイン酸モノ−エステル共重合体、メチルアクリレート−メタクリル酸共重合体またはメタクリレート−メタクリル酸−オクチルアクリレート共重合体である。これらは、単独で使用され得るか、または組み合わされて使用され得るか、または上で述べたもの以外の他のポリマーと一緒に使用され得る。そのおおいは、生体内で分解されないし、可溶化されない、不溶性物質（例えば、エチルセルロースなどのアルキルセルロース誘導体、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体などの架橋ポリマー、デキストランなどのヒドロキシル基を有する多糖、二官能性架橋剤（例えば、エピクロロヒドリン、ジクロロヒドリンまたは１，２−、３，４−ジエポキシブタン）で処理されるセルロース誘導体）も含み得る。そのおおいは、デンプンおよび／またはデキストリンも含み得る。
【０４０７】
好ましい腸溶コーティング材料は、単独で使用されるか、または可塑剤とともに使用される、市販のＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）腸溶性ポリマー（例えば、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＳおよびＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＮＥ）である。そのようなコーティングは、通常、液体の媒質を使用して適用され、可塑剤の性質は、その媒質が水性であるか、非水性であるかに依存する。水性の媒質とともに使用するための可塑剤としては、プロピレングリコール、クエン酸トリエチル、クエン酸アセチルトリエチルまたはＣｉｔｒｏｆｌｅｘ（登録商標）またはＣｉｔｒｏｆｌｅｘ（登録商標）Ａ２が挙げられる。非水性の可塑剤としては、これら、ならびにフタル酸ジエチルおよびフタル酸ジブチルならびにセバシン酸ジブチルが挙げられる。好ましい可塑剤は、クエン酸トリエチルである。含められる可塑剤の量は、当業者には明らかであろう。
【０４０８】
上記のおおいは、粘着防止剤（例えば、タルク、シリカまたはモノステアリン酸グリセリル）も含み得る。好ましくは、粘着防止剤は、モノステアリン酸グリセリルである。典型的には、上記のおおいは、およそ５〜２５ｗｔ％の可塑剤および最大およそ５０ｗｔ％の粘着防止剤、好ましくは、１〜１０ｗｔ．％の粘着防止剤を含み得る。
【０４０９】
所望であれば、ポリマーの水性懸濁液を形成するのを補助するために、界面活性物質を含めることができる。可能性のある界面活性物質の多くの例は、当業者に公知である。界面活性物質の好ましい例は、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０またはラウリル硫酸ナトリウムである。界面活性物質は、存在する場合、そのおおいの０．１〜１０％、好ましくは、０．２〜５％、特に好ましくは、０．５〜２％を構成し得る。
【０４１０】
一実施形態において、中心部と腸溶コーティングとの間にシールコートが含められる。シールコートは、中心部に存在する任意のアルカリ性の成分によって生じ得る化学的な攻撃から腸溶性のおおいを保護するために使用され得るコーティング材料である。そのシールコートは、滑らかな表面も提供することによって、腸溶性のおおいの接着を容易にし得る。当業者は、適当なコーティングを承知しているだろう。好ましくは、シールコートは、Ｏｐａｄｒｙコーティングから作製され、特に好ましくは、Ｏｐａｄｒｙ  Ｗｈｉｔｅ  ＯＹ−Ｓ−２８８７６である。
【０４１１】
一実施形態において、薬学的に活性な成分は、１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）アミノカルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オンまたはその塩である。
【０４１２】
ＷＯ２００５／０２１００２に記載されているような、そのような腸溶コーティングされた製剤の１つの例は、塩酸塩として、様々な量の１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）アミノカルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オン（この例において「活性な」と呼ばれる）を含む。
【０４１３】
その例では、ラクトース一水和物、微結晶性セルロース、活性成分、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよび半分のクロスカルメロースナトリウムを、１０リットルのＦｉｅｌｄｅｒ高剪断ブレンダー（任意の適当な高剪断が使用され得る）の中にふるい入れ、５分間、３００ｒｐｍでチョッパーを除いて混合した。次いで、その混合物を、混合し続けながら約７５０ｍｌの水を加えることによって顆粒化した。その顆粒をＧｌａｔｔ３／５流動床乾燥機において乾燥し、ＣｏｍｉｌによってＰｈａｒｍａｔｅｃ  ５リットル容器ブレンダー中にふるい入れ、次いで、上記混合物＋残りのクロスカルメロースナトリウム中に与えられた任意の無水ラクトースと、２０ｒｐｍで５分間、混合した。ステアリン酸マグネシウムをそのブレンダー内にふるい入れ、混合プロセスを１０ｒｐｍでさらに１分間、続けた。なめらかになった混合物を、９．５ｍｍの球形の通常の凸面の穿孔器に取り付けられたＲｉｖａ  Ｐｉｃｃｏｌｌａ回転式錠剤圧縮機を用いて圧縮した（任意の適当な錠剤圧縮機が使用され得る）。上記シールコートおよびその後の腸溶性コートは、コーティングポリマーの製造業者によって推奨されているようなコーティングプロセスに対するパラメータを用いて、Ｍａｎｅｓｔｙ１０塗工機において、コート成分の水性懸濁液を噴霧することによって、適用される（また、任意の適当な塗工機が使用され得る）。
【０４１４】
この種類の他の腸溶コーティング調製物は、これらの材料またはその等価物を用いて、当業者によって調製され得る。
【０４１５】
局所的適用
本発明は、皮膚潰瘍のために、局所的適用において使用され得る。そのような組成物としては、溶液、懸濁液、ローション、ゲル、クリーム、軟膏、エマルジョン、皮膚パッチなどが挙げられる。それらの調製のための方法に加えて、これらの剤形のすべてが、薬学および美容の分野において周知である。ＨＡＲＲＹ’Ｓ  ＣＯＭＳＥＴＩＣＯＬＯＧＹ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，７ｔｈ  ｅｄ．１９８２）；ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，１８ｔｈ  ｅｄ．１９９０）。典型的には、そのような局所的製剤は、適当なビヒクルとの混合において０．００１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲で活性成分を含む。他の望ましい成分としては、保存剤、共溶媒、粘度増強剤（ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ  ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）、キャリアなどが挙げられる。キャリア自体またはキャリアに溶解された成分は、保湿、清浄、創傷治癒促進または抗炎症をはじめとした、それ自体の姑息的または治療的な特性を有し得る。この適用方法のＬｐ−ＰＬＡ２阻害薬は、治療有効量の、コルチコステロイドなどの抗炎症剤、殺真菌薬、抗生物質、保湿剤または創傷治癒促進化合物（例えば、血小板由来および自家の成長因子、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（Ｇ−Ｍ  ＣＳＦ）およびメソグリカン）と混合され得る。
【０４１６】
浸透促進剤は、例えば、界面活性剤；ある特定の有機溶媒（例えば、ジ−メチルスルホキシドおよび他のスルホキシド、ジメチル−アセトアミドならびにピロリドン）；複素環式のアミンのある特定のアミド、グリコール（例えば、プロピレングリコール）；炭酸プロピレン；オレイン酸；アルキルアミンおよび誘導体；様々な陽イオン性、陰イオン性、非イオン性および両性の界面活性剤；などであり得る。
【０４１７】
適当な軟膏基剤は、例えば、ワセリン、パラフィン、ポリエチレン、天然の水素化トリグリセリドもしくは合成トリグリセリド、ポリエチレングリコール、マクロゴール、カーボワックス、セルロースおよびその誘導体、高分散酸化ケイ素、ベントナイト、デンプン、アミロペクチン（ａｍｙｌｏｐｅｃｔｉｃ）およびその誘導体、アルギネート、トラガント、ポリアクリル酸、ポリビニルアルコールならびに／またはポリオリルビニルピロリドン（ｐｏｌｙｏｒｙｌｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ）を含む。適当な乳化剤は、例えば、セチルステアリルアルコール、セチルエステルアルコール、ラウリル硫酸ナトリウム、セチル硫酸ナトリウム、ステアリル硫酸ナトリウム、ソルビタンエステル、ポリソルベートおよびポリオキシエチレングリセリドアルコールエーテルである。適当な安定化剤の例は、エタノール、イソプロパノール、ソルビン酸、パラベン（４−ヒドロキシ安息香酸）、パラベンエステル（４−ヒドロキシ安息香酸エステル）、メチルパラベン、プロピルパラベン、ヘキサクロロフェン、臭化ベンザルコニウム、塩化セチルピリジニウムおよびアスコルビン酸である。適当な促進剤（浸透促進剤、吸収促進剤なども含む）は、例えば、イソプロピルミリステート、ジメチルスルホキシド、２−ピロリドン、１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン、１，２−プロピレングリコール、オレイン酸、ラウリル硫酸ナトリウム、尿素、サリチル酸、ヒアルロニダーゼ、オレイルアルコールおよびエチレングリコールである。
【０４１８】
本発明において利用される活性成分のための投与レジメンは、治療される疾病または状態に依存し、患者の体重および年齢、ならびに患者の個別の状態、そして適用可能な技術および最良の技術の状況によって決定される。
【０４１９】
薬理学的に有効な量の局所的投与は、当該分野で周知の経皮的送達系を利用し得る。経皮的送達系の調製物は、米国特許第４６２６５３９号、同第４，４０５，６１６号、同第４，４１６，８８６号、同第４６５５７６６号およびＳｔａｎｌｅｙ  Ｓｃｈｅｉｎｄｌｉｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ  ４：３０８−３１２，（２００４）に記載されている。
【０４２０】
イオン導入送達系もまた、経皮的送達系とともに当業者によって利用され得る。そのような適用の例は、Ｋａｚｕｈｉｒｏ  Ａ，ｅｔ．ａｌ．，"Ｉｏｎｔｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  ｏｆ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｄｅｖｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅｓ"Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｆｅｄ  Ｗｏｒｌｄ  Ｃｏｎｇ．２００２：６２：２７に見られる。
【０４２１】
治療の有効性：
用語「治療」とは、皮膚潰瘍の治療に関して、傷の開いたただれが清浄になる（膿が存在しない）ような、傷の開いたただれにおける感染の調節および根絶のことを指す。この用語は、傷の開いたただれのサイズの縮小およびその開いている状態が最終的に完全に閉じることによって評価されるような、傷の開いたただれが徐々に治癒することも指す。また、この用語は、局所的な炎症、ひりひりすること、触れることに対して痛みがあること、および潰瘍の周囲領域における発赤の減少も包含する。治療は、潰瘍が経時的に大きくなっていかないことも意味する。
【０４２２】
予防の方法（例えば、再発の発生を予防するか、または減少させること）もまた、治療と考えられる。
【０４２３】
治療の有効性は、本明細書中に記載された標準的なスケールのうちのいずれか１つまたは皮膚潰瘍重症度の測定について臨床的に許容されている別の基準を用いてモニターされ得る。したがって、Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ分類（ステージ１〜６）、ＰＵＳＨ  ＴｏｏｌおよびＮＰＵＡＰ評価ならびに／またはＷａｇｎｅｒ分類スケールの各々が使用され得る。治療は一般に、Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬で治療されたときに、少なくとも１つのステージまたは分類レベルの改善が達成される場合に、「有効」であると考えられる。あるいは、またはさらに、治療後の皮膚病変のサイズ（面積および／または深さ）の少なくとも２５％の減少が、「有効な」治療と考えられる。
【０４２４】
予防の有効性は、Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬での治療を開始した後に、皮膚病変を発症するリスクのある対象の皮膚を評価することによってモニターされる。リスクのある個体に皮膚病変が存在しないことは、「有効な」予防の徴候と考えられる。同様に、個体が、皮膚病変の履歴を有する場合、新しい病変が存在しないこと、または治療前の発生頻度もしくは重症度と比べて、任意の新しい病変の発生頻度もしくは重症度の例えば５０％以上の減少さえもが、本明細書中に記載された方法によって皮膚潰瘍の「有効な」予防を示す。
【０４２５】
本発明は、本明細書中に記載された特定の方法、プロトコルおよび試薬などに限定されないこと、ならびにそれらは変更し得ることが理解されるべきである。本明細書中で使用される用語は、特定の実施形態のみを説明する目的のものであり、特許請求の範囲によってのみ定義される本発明の範囲を限定する意図はない。
【０４２６】
操作例におけるもの、または別途示されるものを除いて、本明細書中で使用される成分の量または反応条件を表現するすべての数字は、すべての場合において、用語「約」によって修飾されると理解されるべきである。用語「約」は、パーセンテージに関連して使用されるとき、±１％を意味し得る。
【０４２７】
実施例
本明細書中に示される実施例は、Ｌｐ−ＰＬＡ２の阻害によって、皮膚潰瘍（例えば、糖尿病性皮膚潰瘍が挙げられるがこれに限定されない）を予防および／または治療するための方法および組成物に関する。本願全体を通して、様々な刊行物が参照される。本発明が属する分野の状況をより完全に説明するために、それらの刊行物およびそれらの刊行物中で引用されている参考文献のすべての開示の全体が、本願中に本明細書によって参照により援用される。以下の実施例は、本発明に対する特許請求の範囲を限定すると意図されず、むしろある特定の実施形態の説明であると意図される。例示される方法における、当業者が思いつく任意のバリエーションは、本発明の範囲内に入ると意図される。
【０４２８】
動物モデル：ヒト様糖尿病およびヒト様アテローム性動脈硬化症を模倣している、糖尿病／糖尿病性高コレステロール血症ブタモデル（ＤＭ／ＨＣ）を開発した。体重が２５〜３０ｋｇで約４カ月齢の農場のブタを、１２５ｍｇ／ｋｇのストレプトゾトシン（Ｓｉｃｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）の単回の静脈内注射によって、糖尿病性にした。１〜２週間安定化させた後、高レベルの血漿グルコース（>１５０ｍｇ／ｄｌ）を有する動物に、表１に示されるようなアテローム生成的（高脂肪）食（Ａｎｉｍａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ，Ｑｕａｋｅｒｔｏｗｎ，ＰＡ）を与えることにより、約２５０〜８００ｍｇ／ｄｌというコレステロールレベルを達成した。コレステロールレベルの維持を表２に示されるような方法によって測定した。
【０４２９】
【表１】
0005437996.tif 000049
【０４３０】
０．５％コレステロール食の場合、上記の成分は、０．５％コレステロールおよび２０％ラード以外同様である。上記動物は、３〜５齢の去勢雄のヨークシャーブタであり、Ａｒｃｈｅｒ  Ｆａｒｍｓ，Ｄａｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＭＤから入手した。これらの食餌は、Ａｎｉｍａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｖｉｓｉｏｎｓ，ＬＬＣ，Ｑｕａｋｅｒｔｏｗｎ，ＰＡ  ＵＳＡによって調製されたものである。
【０４３１】
１〜２日目に、動物に通常の固形飼料を与えた後、３〜１４日目には、動物に０．５％コレステロール、２％ラードの食餌を与え、１４日目に、コレステロールレベルを測定し、コレステロールが<３００ｍｇ／ｄｌである場合、その食餌を２％コレステロール、１０％ラードまで増加させるようにしかるべく調整した。ＤＭ／ＨＣを誘導した後、コレステロールレベルが３００〜８００ｍｇ／ｄｌに安定するまで、コレステロールを測定し、コレステロールが安定した後、コレステロールを月に１回測定した。最初の安定化期の後にコレステロールレベルが安定しない場合、その動物の食餌を最初の２週間の測定スケジュールに戻した。総コレステロール、ＬＤＬ、ＨＤＬ、ＶＬＤＬおよびトリグリセリドのレベルを含むコレステロールレベルを月に１回測定した。安定したコレステロールレベルのための動物の食餌の調整は、表２に示される概要に従って決定した。
【０４３２】
【表２−１】
0005437996.tif 000050
【０４３３】
【表２−２】
0005437996.tif 000051
【０４３４】
【表２−３】
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【０４３５】
コレステロールを２５０〜８００ｍｇ／ｄｌに安定化させた１ヶ月後、動物を２つの実験群、すなわち治療を行わないＤＭ／ＨＣ（高血糖症および高コレステロール血症）群および治療群（１−（Ｎ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）−Ｎ−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）ベンジル）−アミノカルボニルメチル）−２−（４−フルオロベンジル）チオ−５，６−トリメチレンピリミジン−４−オンとも呼ばれるＳＢ−４８０８４８の１０ｍｇ／ｋｇ／日）に無作為化した。次いで、コントロール動物において薬物が見られないことを確実にするために、それらの動物を２つの別々の部屋に入れた（一方の部屋にコントロール動物を入れ、他方の部屋に治療動物を入れた）。それらの動物を１日２回視覚的に調べ、皮膚膿瘍、特に、脚および足の皮膚膿瘍に対する視覚的な検査は、８〜１０時間間隔で行った。膿瘍とみなされるには、最小の膿瘍サイズを、その周囲の１ｍｍの発赤とした。膿瘍を検出したら、治療を適用した。治療は、膿瘍のサイズおよび深さの評価、死滅した組織および細胞の膿瘍の排出および清浄、Ｂｅｔａｄｉｎｅでの洗浄、乾燥および滅菌された包帯剤で包帯すること、そして抗生物質の経口レジメンを包含する。傷の開いたただれにおける感染が清浄になり（膿がなくなり）、サイズが縮むことによってその傷の開いたただれが治癒し、開いていた状態が完全に閉じるまで、治療を毎日適用した。その膿瘍の培養を行うことにより、その感染に関与している病原体を確定した。それらの動物をその後の６ヶ月間、研究中として残しておき、６ヶ月後に屠殺し、直ちに組織を回収した。この動物プロトコルは、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａによって承認されている。
【０４３６】
２つの糖尿病／高コレステロール血症群を評価した：１．ＤＭ／ＨＣ群および２．Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬を投与されるＤＭ／ＨＣ動物。この実験には：コントロール群（ＤＭ／ＨＣ群−２１頭のブタ）および実験群（Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬を投与されるＤＭ／ＨＣ動物−２２頭のブタ）が含められた。さらに、実験動物の血中コレステロールレベルを３００〜８００ｍｇ／ｄｌに維持した（この範囲は、より良好な試験モデルを提供するために決定された）。すべての動物の血中コレステロールレベルを表４に示されるように隔月でモニターし、表２に示されるようにしかるべく食餌の脂肪含有量について調整した。コレステロールおよびラードのパーセントは、それぞれ０．５〜２％および１０〜２５％の範囲であり、その範囲内のコレステロール濃度およびラード濃度を含んだ食餌をすべての動物に与えた。６ヶ月間の実験期間にわたってＤＭ／ＨＣ動物において同定され、治療された脚の膿瘍の時系列を図１に示す。脚の膿瘍の発生の要約は、表４にみられる。
【０４３７】
統計的妥当性に対する最小限の要件を正しいとするために選択される動物の数は、以下のとおり１実験あたり２群の動物：１．コントロール群（ｎ＝２１）；糖尿病および高脂血症；２．表３に示されるように１０ｍｇ／ｋｇのＬｐ−ＰＬＡ２阻害薬を投与された、糖尿病、高脂血症の実験群（ｎ＝２２）だった。
【０４３８】
体重が２５〜３５ｋｇの範囲の、国内の農場のブタであるヨークシャー雄豚（Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅ  ｂｏａｒｓ）を地元の農場から購入し、獣医師の保護のもとに屋内の囲いの中に収容した。それらのブタを、研究の開始日の３〜５日前に去勢した。１用量のストレプトゾシン（１２５ｍｇ／ｋｇ）を３０分間にわたってＩＶ注入することによって被験ブタを糖尿病にした。動物が糖尿病にならない場合は、２回目の投薬（５０ｍｇ／ｋｇ）を行った。初期の低血糖症を発症する可能性を回避するために、最初の２回の食餌に２０ｇのグルコース粉末を加えた。最初の１４日間は毎日、その後は１週間に１回、食餌を与える前に血糖計（ｇｌｕｃｏｍｅｔｅｒ）を用いて血糖を測定した。
【０４３９】
被験動物をコントロール動物とは別個に収容することにより、汚食症に起因する薬物の動物間の移動を回避した。すべての動物に、水を自由に摂取できるようにしながら、アテローム生成的食餌を１日２回与えた。このあつらえた食餌には、０．５および２％のコレステロール、ならびに１０および２５％ラードが含まれており、それらの成分は表１に示されている。
【０４４０】
【表３】
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【０４４１】
【表４】
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【０４４２】
１日１回の投薬を２９日目に開始し、その時点から、各被験動物には、１０ｍｇ／ｋｇという１日量のＳＢ−４８０８４８を与えた（ドッグフード中のボーラス等価物として与えた）。
【０４４３】
膿瘍の培養物から、ブドウ球菌属が、感染の原因となる主な病原体であることが示された。この病原体は、ヒトの糖尿病性感染症において単離される最も一般的な細菌でもある。
【０４４４】
ＤＭ／ＨＣブタモデルは、皮膚膿瘍の発症、形成、治療および予防に対するＬｐ−ＰＬＡ２阻害薬の効果を研究するための理想的なモデルだった。このことは、これらのブタが、高リスクのヒト糖尿病患者と表現型的に多くの類似点（例えば、糖尿病性の足潰瘍または膿瘍を発症する傾向）を共有するという理由からである。
【０４４５】
Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬で治療された２２頭のＤＭ／ＨＣブタのうち、たった２頭のブタ（ブタ＃９４８および＃９６３）が、目に見える膿瘍を足に有した。各々のブタが、１つの膿瘍を有した。これらのブタは、Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬治療を開始する前に膿瘍を発症した（図１）。それらの膿瘍は、治療されて、平均１〜２週間以内に治癒した。１日１用量の阻害薬の治療を開始した後は、さらに膿瘍を発症しなかった。Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬で治療された残りの２０頭のブタについては、６ヶ月間の治療期間にわたっていかなる膿瘍も発症しなかった。
【０４４６】
Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬で治療されなかった２１頭のＤＭ／ＨＣブタ（コントロール群）のうち、６頭のブタ（ブタ＃９７５、＃１０２４、＃９４９、＃９４７、＃１００７および＃１５）が膿瘍を発症した。これらのブタのすべてが、膿瘍を発症し、２頭のブタが、再発性膿瘍を発症し（先の膿瘍が治癒した後に新しい膿瘍を発症し）、１頭のブタが、>２ヶ月継続する慢性潰瘍化（積極的な創傷ケアにもかかわらず、治癒しない膿瘍）となった。
【０４４７】
理論に拘束されるつもりはないが、Ｌｐ−ＰＬＡ２酵素の阻害によって全身性炎症が減少し、その結果、皮膚感染のリスクが低下すると提唱される。
【０４４８】
まとめると、上記のデータから、Ｌｐ−ＰＬＡ２酵素の阻害は、糖尿病患者における、膿瘍形成の予防に有効であり得、再発性の膿瘍形成の予防に有効であり得、慢性膿瘍発症の予防にも有効であり得ることが示唆される。
【０４４９】
さらに、上記の研究期間中、Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬を投与された動物が、外部刺激に対してより応答性であること、ケージ内での活動の増加を示したこと、ならびにコントロール動物と比べて食餌を与えられることおよび手渡しされることに対してより警戒して反応する傾向が観察された。また、血清グルコースレベルと血清コレステロールレベルが似ているにもかかわらず、Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬で治療された動物は、コントロール動物と比べて、それぞれ２６．９ｋｇおよび３０．３ｋｇという体重のベースラインから体重の増加を示した（６２．５ｋｇ  対  コントロール動物に対して５０．９ｋｇ）。より病的な動物（すなわち、コントロール動物）が食べない限り、Ｌｐ−ＰＬＡ２阻害薬を投与された動物の体重は、それらの動物の全般的な生活の満足度を直接反映する。Ｌｐ−ＰＬＡ２の阻害による炎症の阻害は、全身性炎症の状況において、より大きな生活の満足度および健康をもたらすことが観察された。
【０４５０】
本明細書中および本明細書全体を通じて引用される参考文献は、本明細書中で参照により援用される。
【図１】
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