(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
４０℃未満の温度において、繊維の色変性を生じさせるのに充分な時間及び条件下において、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させるステップを含み、前記伝達物質がシリンゴニトリルであることを特徴とする繊維処理方法。
【請求項２】
前記色変性が、色の薄色化、色の変化、色合いの変化、再沈着／裏面染色の低減、及び、漂白から選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記温度が２０℃以上４０℃未満であることを特徴とする請求項１に記載の繊維処理方法。
【請求項４】
前記温度が２０℃乃至３０℃であることを特徴とする請求項１に記載の繊維処理方法。
【請求項５】
前記繊維が藍染めされたデニムであることを特徴とする請求項１に記載の繊維処理方法。
【請求項６】
前記繊維が硫黄染めされたデニムであることを特徴とする請求項１に記載の繊維処理方法。
【請求項７】
前記繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させるステップの前に又は同時に、前記デニムを糊抜き及び／又はストーンウォッシュすることを特徴とする請求項１に記載の繊維処理方法。
【請求項８】
ストーンウォッシュするステップと、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させる前記ステップとを、同じ槽内で実行することを特徴とする請求項１に記載の繊維処理方法。
【請求項９】
繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させる前記ステップと同時に又は連続して、繊維をセルラーゼ酵素に接触させるステップをさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の繊維処理方法。
【請求項１０】
繊維をセルラーゼ酵素に接触させる前記ステップと、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させる前記ステップとを連続して実行し、かつ、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させる前記ステップの前に、繊維をセルラーゼ酵素に接触させる前記ステップを実行することを特徴とする請求項９に記載の繊維処理方法。
【請求項１１】
繊維をセルラーゼ酵素に接触させる前記ステップと繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させる前記ステップとの間に槽を排水することなく、繊維をセルラーゼ酵素に接触させる前記ステップと、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させる前記ステップとを、同一槽内において連続して実行することを特徴とする請求項１０に記載の繊維処理方法。
【請求項１２】
繊維をセルラーゼ酵素に接触させる前記ステップと、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質に接触させる前記ステップとを、４０℃未満の温度において実行することを特徴とする請求項９乃至１１のいずれか１項に記載の繊維処理方法。
【請求項１３】
前記ラッカーゼが微生物のラッカーゼであることを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ラッカーゼがセレナ(Cerrena)種に由来することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ラッカーゼがセレナユニカラー(C.
unicolor)に由来することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ラッカーゼがセレナユニカラー(C.
unicolor)に由来するラッカーゼＤであることを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ラッカーゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ラッカーゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ラッカーゼが、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ラッカーゼが、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ラッカーゼが、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記温度が２０℃乃至３５℃であることを特徴とする請求項１乃至２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記温度が２０℃乃至２３℃であることを特徴とする請求項１乃至２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記温度が水道水の外界温度であることを特徴とする請求項１乃至２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
使用準備済組成物中に前記ラッカーゼ酵素と前記伝達物質とを一緒に提供することを特徴とする請求項１乃至２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ラッカーゼ酵素及び伝達物質を固体形態で提供することを特徴とする請求項１乃至２４のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権
本出願は、２００８年１２月２４日に提出された米国仮特許出願第６１／１４０，７２４号、２００９年２月２４日に提出された第６１／１５４，８８２号、及び、２００９年８月２７日に提出された第６１／２３７，５３２号に対する優先権を主張する。各文献は言及することによってそっくりそのまま組み込まれている。
【０００２】
本発明の系、組成物及び方法は、ラッカーゼ酵素及びそのようなラッカーゼ酵素をコードする核酸配列に関する。ラッカーゼ酵素は、デニム生地の色を変性するための改善された方法において伝達物質と一緒に使用することができる。
【背景技術】
【０００３】
ラッカーゼは、酸素の存在下において優れた酸化剤であることがわかっている銅含有フェノール酸化酵素である。ラッカーゼは、微生物、菌類及び高等生物にみられる。ラッカーゼ酵素は、パルプ及び紙の漂白、パルプ廃液の処理、脱インク、工業用の色除去、洗濯用洗剤中の漂白、口腔ケア歯白色化剤、及び、重合及び酸化反応のための触媒又は促進剤を含む多数の用途に使用される。
【０００４】
ラッカーゼは、洗剤産業、紙パルプ産業、繊維産業及び食品産業を含む多数の産業における種々の用途に使用可能である。ある用途において、フェノール酸化酵素は、洗剤洗浄中に衣服から食物汚れなどの染みを除去する補助として使用される。ほとんどのラッカーゼは、中性又はアルカリ性のｐＨにおいて不活性であるが、酸性のｐＨ領域においてｐＨ最適条件を示す。
【０００５】
ラッカーゼは、ジーニイアスペルギルス(genii Aspergillus)、ニューロスポラ(Neurospora)、ポドスポラ(Podospora)、ボトリティス(Botrytis)、プルロタス(Pleurotus)、フォルネス(Fornes)、フレビア(Phlebia)、トラメテス（Trametes）、ポリポラス（Polyporus）、スタキボトリス、リゾクトニア（Rhizoctonia）、ビポラリス（Bipolaris）、クルブラリア（Curvularia）、アメロスポリウム（Amerosporium）、レンチヌス(Lentinus)、ミセリオプトラ（Myceliophtora）、コプリナス（Coprinus）、チエラビア（Thielavia）、セレナ（Cerrena）、ストレプトミセス（Streptomyces）及びメラノカルパス（Melanocarpus）の種を含む種々の菌類によって作られることがわかっている。しかしながら、各種用途において様々な性能特性を有するラッカーゼの必要性がなお存在する。
【０００６】
多数の用途のために、促進剤としても知られている伝達物質の使用によってラッカーゼの酸化能力を向上させることができる。ラッカーゼ及び伝達物質を含む系は、当業界においてラッカーゼ伝達物質系（ＬＭＳ）として知られている。ラッカーゼの作用を活性化又は開始させるために同じ化合物を使用することができる。
【０００７】
ラッカーゼ伝達物質系において使用するためのいくつかの既知の伝達物質が存在する。これらには、ＨＢＴ（ｌ−ヒドロキシベンゾトリアゾール）、ＡＢＴＳ［２、２’―アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルフィン酸）］、ＮＨＡ（Ｎ−ヒドロキシアセトアニリド）、ＮＥＩＡＡ（Ｎ−アセチル−Ｎ−フェニルヒドキシルアミン）、ＨＢＴＯ（３−ヒドロキシ１，２，３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オン）及びＶＩＯ（ビオルル酸）が含まれる。さらに、伝達物質として有用であることがわかっているＮＨ−ＯＨ基又はＮ−Ｏ基を含むいくつかの化合物が存在する。
【０００８】
官能基及び置換基は、伝達物質の能力に大きく影響する。同じクラスの化合物内でさえ、置換基は、基質に対するラッカーゼ特異性を変化させることができ、それによって、伝達物質の能力を大幅に上昇又は低下させる。さらに、伝達物質は、ある特定の用途に有効であるが、他の用途には適さない可能性がある。現行の伝達物質についての他の欠点は、使用中に重合する傾向があることである。したがって、特定の用途のために効率的な伝達物質を発見する必要がある。そのような用途の１つは繊維の漂白であり、伝達物質が過度に高価又は危険でないことも重要である。ラッカーゼ伝達物質系の他の用途を以下に与える。
【０００９】
低温におけるラッカーゼの使用の方法は、例えば、処理槽を加熱するためのエネルギー投入量を減らすことができる繊維処理方法において、省エネルギーの点で利益を与える。ラッカーゼ酵素を低温における酵素漂白のような用途において使用する方法を開発することが望ましい。
【発明の概要】
【００１０】
ラッカーゼを含む酵素的酸化の系、組成物及び方法を説明する。一態様において、４０℃未満の温度において、繊維の色変性を生じさせるのに充分な時間及び条件下で繊維をラッカーゼ酵素及び選択的に伝達物質と接触させるステップを含む繊維処理方法を提供する。いくつかの実施形態においては、色変性は、色の薄色化、色の変化、色合いの変化、再沈着／裏面染色の低減、及び、漂白から選択される。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃以上４０℃未満である。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃乃至約３５℃である。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃乃至約３０℃である。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃乃至約２３℃である。いくつかの実施形態においては温度が、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃又は３５℃である。いくつかの実施形態においては温度が水道水の外界温度である。
【００１１】
いくつかの実施形態においては繊維が藍染めされたデニムである。いくつかの実施形態においては繊維が硫黄染めされたデニムである。いくつかの実施形態において、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップの前に又は接触させるステップと同時に、デニムを糊抜され及び／又はストーンウォッシュする。いくつかの実施形態においては、ストーンウォッシュするステップと、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップとを、同じ槽内で行う。
【００１２】
いくつかの実施形態において、この方法は、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップと同時に又は連続して、繊維をセルラーゼ酵素に接触させるステップをさらに含む。いくつかの実施形態においては、繊維をセルラーゼ酵素と接触させるステップと、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップとを連続して実行し、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップの前に、繊維をセルラーゼ酵素と接触させるステップを実行する。いくつかの実施形態においては、繊維をセルラーゼ酵素と接触させるステップ、及び、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップを、繊維をセルラーゼ酵素と接触させるステップと繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップとの間に槽を排水することなく、同じ槽内において連続して実行する。
【００１３】
いくつかの実施形態においては、繊維をセルラーゼ酵素と接触させるステップ、及び、繊維をラッカーゼ酵素及び伝達物質と接触させるステップを、４０℃未満の温度において実行する。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃以上４０℃未満である。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃乃至約３５℃である。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃乃至約３０℃である。いくつかの実施形態においては温度が約２０℃乃至約２３℃である。いくつかの実施形態においては温度が、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃又は３５℃である。いくつかの実施形態においては温度が水道水の外界温度である。
【００１４】
いくつかの実施形態において、セルラーゼ酵素がラッカーゼ酵素と相乗的に作用することによって、さらに大きい程度の繊維の色の薄色化、色の変化、色合いの変化、再沈着／裏面染色の低減、及び／又は、漂白を有する繊維を生産する。いくつかの実施形態においては、セルラーゼ酵素がラッカーゼ酵素と相加的に作用することによって、セルラーゼが含まれない同じ方法と比較して、さらに大きな程度の繊維の色の薄色化、色の変化、色合いの変化、再沈着／裏面染色の低減、及び／又は、漂白を有する繊維を生産する。
【００１５】
いくつかの実施形態において、ラッカーゼが微生物によるラッカーゼである。いくつかの実施形態において、ラッカーゼがセレナ(Cerrena)種に由来する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼがセレナユニカラー(Cerrena unicolor)に由来する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼがセレナユニカラーに由来するラッカーゼＤである。
【００１６】
いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％又は少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する。
【００１７】
いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有する。
【００１８】
いくつかの実施形態において、使用準備済組成物中にラッカーゼ酵素と伝達物質とを一緒に提供する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼ酵素と伝達物質とを固体形態で提供する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼ酵素と伝達物質とを顆粒として提供する。特定の実施形態においては伝達物質がシリンゴニトリルである。
【００１９】
他の一態様において、ラッカーゼ、そのようなラッカーゼをコードする核酸配列、並びに、ラッカーゼを発現するためのベクター及びホスト細胞を提供する。繊維処理のようなエネルギー投入量の低減が望まれる方法において、低温においてラッカーゼを使用することができる。いくつかの実施形態において、ラッカーゼ酵素は、配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８若しくは２０のいずれかに記載のアミノ酸配列を含むか、該アミノ配列からなるか、若しくは、該アミノ配列から本質的になるものであるか、又は、配列番号：２、４、６、８、１２、１４、１６、１８、１９又は２０のいずれかに対して少なくとも約６０％、６５％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は９９．５％同一のアミノ酸配列を有するものである。特定の実施形態において、ラッカーゼは、配列番号１９又は配列番号２０に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は９９．５％同一のアミノ酸配列を有する。さらなる特定の実施形態において、ラッカーゼは、配列番号１９又は配列番号２０のアミノ酸配列を有する。そのようなポリペプチドがラッカーゼ酵素活性を有することが好ましく、その活性は、例えば、本明細書に記載されている分析を用いて測定することができる。
【００２０】
他の一態様において、前述のアミノ酸配列のいずれかを含むか、該アミノ酸配列から本質的になるか、又は、該アミノ酸配列からなるラッカーゼ酵素を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、この組成物は、溶液中において組成物のｐＨを約５．５乃至約６．５に維持するための緩衝系をさらに含む。いくつかの実施形態において、この組成物は、伝達物質をさらに含む。この伝達物質は、例えば、アセトシリンゴン、シリングアルデヒド、シリングアミド、メチルシリングアミド、２−ヒドロキシエチルシリングアミド、シリンガ酸メチル、ジメチルシリングアミド、シリンガ酸(shrine acid)、４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾニトリル（シリンゴニトリル）から選択され得る。一実施形態において、伝達物質は、４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾニトリルである。いくつかの実施形態において、この組成物は固体形態である。いくつかの実施形態において、ラッカーゼ酵素と伝達物質とは、使用準備済組成物中に一緒に提供される。いくつかの実施形態において、ラッカーゼ酵素及び伝達物質が固体形態で提供される。いくつかの実施形態において、ラッカーゼ酵素及び伝達物質が顆粒として提供される。特定の実施形態においては伝達物質がシリンゴニトリルである。
【００２１】
いくつかの実施形態において、ラッカーゼ酵素は、約５乃至約７のｐＨ、約２０℃乃至約３０℃の温度、約５：１乃至約１０：１の液比、及び、約１５分乃至約６０分の時間で使用される。
【００２２】
本発明の系、組成物及び方法のこれらの及び他の態様及び実施形態は、明細書及び添付図面によって明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、実施例１に記載されているように、様々な温度においてラッカーゼ酵素を用いてストーンウォッシュしたデニムにおける色を変化させる効果を示している。
【００２４】
【図２】図２は、実施例２に記載されているように、ストーンウォッシュしたデニムの色の変化に対するラッカーゼ及び伝達物質の比率の影響を示している。
【００２５】
【図３】図３は、実施例３において記載されているように、「使用準備済」ラッカーゼ組成物を用いてストーンウォッシュしたデニムの色の変化に対する温度の影響を示している。
【００２６】
【図４】図４は、実施例３に記載されているように、ストーンウォッシュしたデニムに対するラッカーゼ酵素の色を変化させる能力に対する温度の影響を示している。
【００２７】
【図５】図５は、実施例４−６に記載されているように、ラッカーゼによって媒介される色変性と組み合わせたセルラーゼ処理の効果を示している。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
ラッカーゼを含む酵素的酸化の系、組成物及び方法を記載する。これらの系、組成物及び方法は、例えば、色変性に影響を与えるための繊維の低温処理に有用である。そのような処理は、従来の繊維処理技術より少ないエネルギーを使用し、環境によりやさしい化学試薬を含む。これらの系、組成物及び方法の様々な態様及び実施形態を記載する。
【００２９】
定義
別段の定めがない限り、ここで使用されている技術及び科学用語のすべては、当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。「Singleton et al., DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY, 2D ED., John Wiley and Sons, New York (1994), and Hale and Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY, Harper Perennial, N.Y. (1991)」は、本明細書において使用される用語の多数の一般的な辞書を提供する。さらなる明確性のために以下の用語を定義する。
【００３０】
本明細書において用いられているように、「酵素」という用語は、化学反応を触媒するタンパクを意味する。酵素の触媒現象の機能は、その「酵素活性」又は「活性」を構成する。酵素は、一般に、触媒する反応の種類に従って、例えば、フェノールの酸化、ペプチド結合の加水分解、ヌクレオチドの結合などに分類される。
【００３１】
本明細書において用いられているように、「基質」という用語は、生成物を生成するように酵素がその触媒能力を発揮する対象となる物質（例えば化合物）を意味する。
【００３２】
本明細書において用いられているように、「ラッカーゼ」は、４個の電子の伝達プロセスにおいて酸素を水に同時に還元すると共に、１個の電子を除去することによって、フェノール、ポリフェノール及びアニリンの酸化を触媒する複数銅含有酸化酵素（ＥＣ１．１０．３．２）である。
【００３３】
本明細書において用いられているように、「変異体」タンパクは、少数のアミノ酸置換、挿入及び／又は欠失によって親／基準タンパクとは異なる関連タンパク及び誘導体タンパクを包含する。いくつかの実施形態において、異なるアミノ酸残基の数は、約１、２、３、４、５、１０、２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０のいずれかである。いくつかの実施形態において、変異体は、約１個乃至約１０個のアミノ酸残基が異なる。いくつかの実施形態において、変異体タンパクは、親／基準タンパクに対して少なくとも約３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は９９．５％のアミノ酸配列同一性を有する。
【００３４】
本明細書において用いられているように、「類似配列」という用語は、親／基準タンパク中の配列と類似した機能、三次元構造、及び／又は、保存残基を提供するタンパク中のポリペプチド配列を意味する。例えば、αヘリックス又はβシート構造を含む構造領域において、類似配列中の置換アミノ酸残基は、同じ構造的特徴を維持する。いくつかの実施形態において、類似配列は、変異体が由来した親タンパクと同様の又は向上した機能を示す変異体タンパクを与える。
【００３５】
本明細書において用いられているように、「相同タンパク(homologous protein)」又は「同族体(homolog)」は、基準タンパク（例えば、異なる源に由来するラッカーゼ酵素）と同様の機能（例えば、酵素活性）及び／又は構造を有するタンパク（例えば、ラッカーゼ酵素）を意味する。同族体は、進化論的に関連する種又は無関係な種に由来するものであってもよい。いくつかの実施形態において、同族体は、基準タンパクに類似した四次、三次及び／又は一次構造を有し、それによって、非相同タンパクに由来する配列による部分又は断片の置換と比較して、基準タンパクの構造及び／又は機能の破壊を低減しながら、同族体に由来する類似の部分又は断片による基準タンパク中の部分又は断片の置換を潜在的に可能にする。
【００３６】
本明細書において用いられているように、「野生型」タンパク、「天然」タンパク及び「天然に存在する」タンパクは、自然界にみられるものである。「野生型の配列」という用語は、自然界にみられる又は天然に存在するアミノ酸又は核酸配列を意味する。いくつかの実施形態において、野生型配列は、タンパクエンジニアリング事業（例えば変異体タンパクの生産）の出発点である。
【００３７】
本明細書において用いられているように、「シグナル配列」は、タンパクのＮ末端部分に結合したアミノ酸の配列を意味し、細胞からタンパクの成熟形態を分泌することを容易にする。細胞外タンパクの成熟形態は、分泌プロセス中に開裂されるシグナル配列を欠いている。
【００３８】
本明細書において用いられているように、「培養」という用語は、対象のポリペプチドを発現させるために、液体、半固体又は固体の培地において適切な条件下で微生物細胞の集団を培養することを意味する。当業界において知られているように、いくつかの実施形態において培養を管内又は反応器内で実行する。
【００３９】
本明細書において用いられているように、「誘導体」という用語は、Ｎ末端及びＣ末端のいずれか又は両方への１つ以上のアミノ酸の付加、アミノ酸配列中の１つ又は複数の異なる位置における１つ以上のアミノ酸残基の置換、タンパクの一端部若しくは両端部における又はアミノ酸配列中の１つ以上の位置における１つ以上のアミノ酸残基の欠失、及び／又は、アミノ酸配列中の１つ以上の部位における１つ以上のアミノ酸の挿入によって、親／基準タンパクに由来するタンパクを意味する。タンパク誘導体の調製は、多くの場合、天然タンパクをコードするＤＮＡ塩基配列を修飾すること、適切な宿主へのそのＤＮＡ塩基配列の導入、及び、修飾されたＤＮＡ塩基配列を発現させて誘導体タンパクを作ることによって達成される。
【００４０】
本明細書において用いられているように、「発現」という用語は、遺伝子の核酸配列に基づいてポリペプチドが生産されるプロセスを意味する。このプロセスは転写及び翻訳の両方を含む。
【００４１】
本明細書において用いられているように、「発現ベクター」という用語は、宿主においてコード配列を発現させることができる１つ又はそれ以上の適切な制御配列に作用可能な状態で結合されたＤＮＡコード配列（例えば遺伝子配列）を含むＤＮＡ構築物を意味する。そのような制御配列は、転写を達成するためにプロモータ、そのような転写を制御するための選択的なオペレーター配列、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、並びに、転写及び翻訳の停止を制御する配列を含む。ベクターは、プラスミド、ファージ粒子又は単に潜在的ゲノム挿入物であってもよい。適切な宿主に導入されると、ベクターは、宿主ゲノムから独立して複製及び機能することができ、又は、いくつかの例においてはゲノム自体に統合することもできる。
【００４２】
本明細書において用いられているように、「宿主細胞」という用語は、ポリペプチド生産用の組み換え発現ベクターをトランスフェクトすることができるか、トランスフォームすることができるか、又は、ポリペプチドの発現のために他の方法で導入することができる細胞又は細胞系を意味する。宿主細胞には、単一の宿主細胞の子孫が含まれ、その子孫は、天然の、偶発的な、又は、意図的な突然変異のせいで、（形態において又は全ゲノムＤＮＡ補体において）親細胞と必ずしも同一でない可能性がある。宿主細胞は細菌性又は真菌性であってもよい。宿主細胞には、発現ベクターによってインビボにおいてトランスフェクト又はトランスフォームされた細胞が含まれる。
【００４３】
本明細書において用いられているように、細胞に核酸配列を挿入するという文脈における「導入」という用語は、「トランスフェクション」、「トランスフォーメーション」及び「トランスダクション」を包含し、真核生物又は原核細胞中への核酸配列の組み込みであって、その核酸配列が、細胞のゲノム（例えば、染色体、プラスミド、色素体又はミトコンドリアＤＮＡ）に組み込まれるか、独立したレプリコンに変換されるか、又は、一時的に発現される組み込みを意味する。
【００４４】
本明細書において用いられているように、「洗浄組成物」及び「洗浄調合物」は、生地、皿、コンタクトレンズ、毛髪（シャンプー）、肌（石鹸及びクリーム）、歯（口内洗浄液、練り歯磨き）、並びに、他の固体及び表面のような、洗浄しようとする部材から望まれない化合物を除去するために使用することができる組成物を意味する。この用語は、組成物が組成物中で使用される酵素に適合する限り、特定の種類の望ましい洗浄組成物及び生成物の形態（例えば液体、ゲル、顆粒又はスプレーの組成物）のために選択されるあらゆる物質／化合物を包含する。洗浄組成物材料の具体的選択は、洗浄しようとする表面、部材又は生地と、使用中の洗浄条件に対する組成物の望ましい形態とを考慮することによって容易になされる。
【００４５】
この用語は、物及び／又は表面を洗浄、漂白、消毒及び／又は殺菌するのに適したあらゆる組成物をさらに意味する。この用語は、以下に限定されるものではないが、界面活性剤組成物（例えば、液体及び／又は固体の洗濯用洗剤、並びに、きめ細かい生地の洗剤；ガラス、木材、セラミック及び金属のカウンタートップ、並びに、窓などのための硬表面洗浄調合物；カーペットクリーナー；オーブンクリーナー；生地脱臭剤；生地柔軟剤；並びに、繊維及び洗濯前染み抜き、及び、皿洗剤）を含むことが意図されている。
【００４６】
実際に、「洗浄組成物」及び「洗浄調合物」という用語は、（別段の定めがない限り）粒状又は粉末形態の万能洗剤又は重質洗剤、特に洗浄洗剤；液体、ゲル又はペースト形態の万能洗剤、特にいわゆる重質液体（ＨＤＬ）タイプ；きめ細かい生地用の液体洗剤；食器洗い洗剤又は軽質食器洗い洗剤、特に高発泡タイプ；家庭及び企業の使用のための様々な錠剤、顆粒、液体、及び、洗浄補助援助のタイプを含む食器洗浄機用洗剤；抗菌性手洗いタイプ、洗浄石鹸(cleaning bar)、口内洗浄液、義歯クリーナ、自動車シャンプー又はカーペットシャンプー、浴室洗剤を含む液体の洗浄剤及び殺菌剤；ヘアシャンプー及びヘアリンス；シャワー用ジェル及び泡風呂及び金属クリーナー；並びに、漂白添加剤及び「しみ取りスティック（stain-stick）」若しくは前処理タイプのような洗浄補助剤を包含する。
【００４７】
本明細書において用いられているように、「界面活性剤組成物」及び「洗剤調合物」という用語は、汚染された物の洗浄のための洗浄媒体中における使用が意図された混合物について使用される。いくつかの実施形態において、この用語は、生地及び／又は衣服を洗濯するもの（例えば「洗濯用洗剤」）について使用される。代替実施形態において、この用語は、皿、刃物などを洗浄するために使用されるもの（例えば「食器用洗剤」）のような他の洗剤を意味する。酵素に加えて、「界面活性剤組成物」及び「洗浄調合物」は、界面活性剤、ビルダ、漂白剤、漂白剤促進剤、青味剤及び蛍光染料、固化防止剤、マスキング剤、酵素活性剤、酸化防止剤、並びに、可溶化剤を含む洗剤を包含する。
【００４８】
本明細書において用いられているように、「洗剤安定性」というフレーズは、界面活性剤組成物における酵素の安定性、並びに、選択的には、付随する基質又は伝達物質の安定性を意味する。いくつかの実施形態においてはこの安定性を洗剤の使用中に評価するが、他の実施形態において、この用語は、保存中の界面活性剤組成物の安定性を意味する。
【００４９】
本明細書において用いられているように、「硬表面洗浄組成物」という用語は、床、壁、タイル、ステンレススチール管（例えば発酵槽）、浴槽及びキッチン据え付け設備などのような硬い表面を洗浄するための界面活性剤組成物を意味する。そのような組成物は、以下に限定されるものではないが、固体、液体、乳剤などを含む任意の形態で提供可能である。
【００５０】
本明細書において用いられているように、「皿洗浄組成物」という用語は、以下に限定されるものではないが、粒状及び液体の形態を含む、皿を洗浄するための組成物のすべての形態を意味する。
【００５１】
本明細書において用いられているように、「消毒」という用語は、真菌、細菌、胞子などを含む微生物の除去又は致死を意味する。
【００５２】
本明細書において用いられているように、「生地洗浄組成物」という用語は、以下に限定されるものではないが、顆粒、液体及び固体の形態を含む、生地を洗浄するための界面活性剤組成物の形態を意味する。
【００５３】
本明細書において用いられているように、「ポリヌクレオチド」、「核酸」及び「オリゴヌクレオチド」という用語は、一本鎖又は複数鎖（例えば、一本鎖、二本鎖、三重螺旋など）であるかに関わらず、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、並びに／又は、（修飾されたヌクレオチド若しくは塩基又はそれらの類似体を含む）デオキシリボヌクレオチド若しくはリボヌクレオチドの類似体若しくは修飾された形態を含む任意の長さ及び任意の三次元構造のヌクレオチドの重合体の形態を意味するように互いに区別なく使用される。遺伝子コードが退化しているので、特定のアミノ酸をコードするために１つよりも多いコドンを使用してもよい。使用条件下においてポリヌクレオチドが所望の機能を保持する限り、ヌクレアーゼ耐性を増大させる修飾（例えば、デオキシ、２’−Ｏ−Ｍｅ、ホスホロチオエートなど）を含む、任意の種類の修飾されたヌクレオチド又はヌクレオチド類似体を使用することができる。検出又は補足の目的のために、例えば、放射性ラベル若しくは非放射性ラベル、又は、アンカー（例えば、ビオチン）などのラベルを組み込むこともできる。ポリヌクレオチドという用語は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）も包含する。ポリヌクレオチドは、天然に存在するものであってもよいし又は天然に存在しないものであってもよい。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分が割り込んだものであってもよい。１つ又はそれ以上のリン酸ジエステル結合を代替連結基によって置換することができる。例えば、リン酸塩は、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオアート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオアート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ又はＣＨ２（「ホルムアセタル」）によって置換されてもよい。ここで、Ｒ又はＲ’は、それぞれ、独立して、Ｈ、又は、選択的にエーテル（−Ｏ−）結合、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル若しくはアラルキル(araldyl）を含む置換された若しくは置換されていないアルキル（炭素数１乃至２０）である。ポリヌクレオチド中のすべての結合が同じである必要はない。ポリヌクレオチドは、直鎖状若しくは環状であってもよいし、又は、直鎖部分と環状部分との組み合わせで構成されていてもよい。
【００５４】
本明細書において用いられているように、「ポリペプチド」、「タンパク」及び「ペプチド」という用語は、アミノ酸（すなわち、アミノ酸残基）を含む成分を意味する。アミノ酸残基を表す従来の１文字又は３文字のコードを使用する。ポリペプチドは、直鎖若しくは分岐であってもよいし、修飾されたアミノ酸を含んでいてもよいし、また、アミノ酸でないものが割り込だものであってもよい。この用語は、自然に、又は、例えば、ジスルフィド結合形成、糖鎖形成、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は、ラベリング成分との結合のような他の操作若しくは修飾のような介在によって、修飾されたアミノ酸重合体も包含する。その定義には、例えば、１つ又はそれ以上のアミノ酸の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）、及び、当業界において知られている他の修飾を含むポリペプチドも含まれる。
【００５５】
本明細書において用いられているように、「プライマー」という用語は、天然に存在するものであるか又は合成されたものであるかに関わらず、例えば、精製された制限断片のように、適切な温度及び適切なｐＨにおいて、ヌクレオチド及びポリメラーゼの存在下において相補的な核酸と共にインキュベートされたときに、核酸合成の開始点として機能することができるオリゴヌクレオチドを意味する。プライマーは、好ましくは一本鎖であるが、代替的に二本鎖であってもよい。二本鎖である場合、プライマーは、伸張生成物を調製するために使用される前に、最初にその鎖を分離するように処理される。プライマーはオリゴデオキシリボヌクレオチドであることが好ましい。プライマーの正確な長さは、温度、プライマーの由来、及び、使用する方法を含む多くの要因に応じて変わるであろう。
【００５６】
本明細書において用いられているように、「回収された」、「分離された」、「精製された」及び「分離された」という用語は、天然状態において付随する又は異種発現の結果として付随する少なくとも１つの成分から除去された材料（例えばタンパク、核酸又は細胞）を意味する。
【００５７】
本明細書において用いられているように、「繊維」という用語は、ファイバー、毛糸、生地、衣服及び不織生地の材料を意味する。この用語は、天然材料及び合成材料（例えば、製造されたもの）、並びに、天然物と合成物との混合物から作られた繊維を包含する。「繊維」という用語は、処理されていない若しくは処理されたファイバーの両方、毛糸、織った若しくは編んだ生地、不織生地、並びに、衣服を意味する。いくつかの実施形態において、繊維はセルロースを含む。
【００５８】
本明細書において用いられているように、「処理を必要とする繊維」というフレーズは、所望の効果を生じさせるために、糊抜き、研磨、漂白及び／又はバイオ研磨する必要がある繊維を意味する。
【００５９】
本明細書において用いられているように、「色変性を必要とする繊維」というフレーズは、色に関して変化させる必要がある繊維を意味する。これらの繊維は、他の処理に既に供されたものであってもよいし、まだ供されていないものであってもよい。同様に、これらの繊維は、後処理を必要とするものであってもよいし、必要としないものであってもよい。
【００６０】
本明細書において用いられているように、「生地」という用語は、線維及び／又は糸の製造された集成体であって、厚さに対して相対的に大きい表面積と、該集成体に有用な機械強度を与えるのに充分な凝集力とを有する集成体を意味する。
【００６１】
本明細書において用いられているように、「色変性」という用語は、まとめて繊維材料と呼ばれる線維、毛糸、生地、衣服又は不織生地の材料に付随する色の彩度、飽和度、強度、輝度、及び／又は、色調における変化を意味する。理論に拘束されるものではないが、色変性は、繊維材料に付随する発色基の変性に起因するものであり、それによってその外観を変化させることが提唱されている。発色基は、繊維を製造するために使用される材料に自然に付随するもの（例えば、綿の白色）であってもよいし、又は、染色若しくは印刷のような特殊な仕上剤に付随するものであってもよい。色変性は、発色基が付着した材料に対する化学的修飾を包含するのみでなく、発色基に対する化学的修飾も包含する。色変性の例には、退色させること、漂白すること、色合いを変えることが含まれる。藍染めされたデニムに対する特別な色変性は、「ヴィンテージ外観」に退色させることであり、それは、新たに染色されたデニムほど強くない青色／紫色の色調、及び、新たに染色されたデニムよりくすんだ灰色の外観を有する。
【００６２】
本明細書において用いられているように、「漂白」という用語は、より薄い色を作るために、線維、毛糸、生地、衣服又は不織生地の材料のような繊維材料を処理するプロセスを意味する。この用語は、例えば、繊維処理用途の文脈におけるより明るい又はより白い繊維の生産、及び、例えば、洗浄用途の文脈における汚れの色の軽減も包含する。
【００６３】
本明細書において用いられているように、「糊(size)」及び「糊付けする(sizing)」という用語は、繊維工業において糸の耐摩耗性及び強度を増大させることによって製織性能を向上させるために用いられる化合物を意味する。糊は、通常、デンプン又はデンプン用化合物から作られる。
【００６４】
本明細書において用いられているように、「糊抜き(desize)」及び「糊抜きする(desizing)」という用語は、通常は特殊な仕上剤、染料又は漂白剤を塗生地する前に、繊維から糊（通常はデンプン）を排除／除去するプロセスを意味する。
【００６５】
本明細書において用いられているように、「糊抜き酵素(desizing enzyme)」という用語は、糊を除去するために使用される酵素を意味する。典型的な酵素は、アミラーゼ、セルラーゼ及びマンナナーゼである。
【００６６】
本明細書において用いられているように、「同一性％」という用語は、本明細書に記載されているようなラッカーゼをコードする核酸配列と他の核酸配列との間の核酸配列の同一性のレベル、又は、本明細書に記載されているようなラッカーゼ酵素と他のアミノ酸配列との間のアミノ酸配列の同一性のレベルを意味する。配列比較は、従来の配列比較プログラムを使用して実行することができる。核酸及びアミノ酸の配列同一性の典型的なレベルは、以下に限定されるものではないが、本明細書に記載されているように、規定の配列（例えば、ラッカーゼのためのコード配列又はラッカーゼのアミノ酸配列）に対して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは、少なくとも９９％、又は、それを超える配列同一性を含む。
【００６７】
２つの配列間の同一性を決定するために使用することができる典型的なコンピュータプログラムは、以下に限定されるものではないが、<www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST>においてインターネット上で公的に利用可能な、例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ、並びに、ＴＢＬＡＳＴＸ、ＢＬＡＳＴＰ及びＴＢＬＡＳＴＮなどのＢＬＡＳＴプログラムの組み合わせを含む。また、「Altschul, et al., 1990」及び「Altschul, et al., 1997」を参照されたい。
【００６８】
配列検索は、通常、与えられた核酸配列をＧｅｎＢａｎｋ  ＤＮＡ塩基配列及び他の公のデータベースの核酸配列と比較して評価するときは、ＢＬＡＳＴＮプログラムを使用して行う。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、ＧｅｎＢａｎｋタンパク配列及び他の公のデータベースのアミノ酸配列に対して、すべてのリーディングフレームに翻訳される核酸配列を検索するのに好まれる。ＢＬＡＳＴＮ及びＢＬＡＳＴＸの両方は、１１．０のオープンギャップペナルティ及び１．０の拡張ギャップペナルティのデフォルトパラメーターを使用して実行され、ＢＬＯＳＵＭ−６２マトリクスを利用する（例えば、Altschul, et al., 1997を参照されたい。）
【００６９】
２つ以上の配列間の「同一性％」を決定するために選択した複数の配列の配列比較は、例えば、１０．０のオープンギャップペナルティ、０．１の拡張ギャップペナルティ及びＢＬＯＳＵＭ３０シミラリティマトリックスを含むデフォルトパラメーターで動作させたＭａｃＶｅｃｔｏｒバージョン６．５のＣＬＵＳＴＡＬ−Ｗプログラムを使用して実行することができる。
【００７０】
本明細書において用いられているように、「化学伝達物質」及び「伝達物質」という用語は、酸化酵素活性を示す酵素（例えばラッカーゼ）と第２基質又は電子供与体と間で電子を輸送するための酸化還元伝達物質として機能する化合物を意味するように互いに区別なく使用される。そのような化学伝達物質は、当業界において「エンハンサー(enhancers)」及び「アクセラレ−タ(accelerator)」としても知られている。
【００７１】
本明細書において用いられているように、繊維材料が存在する槽に関する「排水する(draining)」又は「落とす(dropping)」という用語は、槽中に存在する溶媒及び試薬を完全に又は部分的に放出すること／空にすることを意味する。槽を排水するステップは、通常、ある工程段階において存在する溶媒及び試薬が後の工程段階を妨げないようにするために、工程段階の間に実行される。脱水は、そのような溶媒及び試薬をさらに除去するための１つ又はそれ以上のすすぎステップを伴うものであってもよい。
【００７２】
本明細書において用いられているように、「第２基質」及び「電子供与体」という用語は、酸化酵素活性を示す酵素によって電子を与えることができる及び受け取ることができる染料、色素（例えば藍）、発色基（例えば、ポリフェノール、アントシアニン、若しくは、カロチノイド）又は他の第２基質を意味するように相互に区別なく使用される。
【００７３】
以下の略語／頭字語は、別段の定めがない限り以下の意味を有する。
ＥＣ              酵素委員会
ＥＤＴＡ          エチレンジアミン四酢酸
ｋＤａ            キロダルトン
ＭＷ              分子量
ｗ／ｖ            重量／体積
ｗ／ｗ            重量／重量
ｖ／ｖ            体積／体積
ｗｔ％            重量パーセント
℃                摂氏温度
Ｈ２Ｏ             水
ｄＨ２０又はＤＩ   脱イオン水
ｄＩＨ２Ｏ         脱イオン水、ミリＱ濾過
ｇ又はｇｍ        グラム
μｇ              マイクログラム
ｍｇ              ミリグラム
ｋｇ              キログラム
μＬ及びμｌ      マイクロリットル
ｍＬ及びｍｌ      ミリリットル
ｍｍ              ミリメートル
μｍ              マイクロメートル
Ｍ                モル
ｍＭ              ミリモル
μＭ              マイクロモル
Ｕ                ユニット
ｓｅｃ及び”      秒
ｍｉｎ及び’      分
ｈｒ              時間
ｅｑ．            当量
Ｎ                ノーマル
ＲＴＵ            使用準備済(ready-to-use)
Ｕ                単位
ｏｗｇ            物の重量に対して(on weight of goods)
ＣＩＥ            国際照明委員会(International Commission on Illumination)
【００７４】
数値範囲は、その範囲を定義する数を含む。文脈から明示的に明らかにされていない限り、単数形の冠詞「１つの(a)」、「１つの(an)」及び「その(the)」は、複数の指示対象を含む。別段の定めがない限り、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の標準的な方向で記載されており、また、ポリヌクレオチドは、５’から３’の標準的な方向で記載されている。本発明の組成物及び方法の実施又は試験において均等な方法及び材料を使用することができるので、記載されている特定の方法論、プロトコル及び試薬が限定されるように意図されていないことは理解されるに違いない。読者を助けるために明細書を複数の章に分けているが、限定するものとして章の見出しを解釈してはならず、ある章における記載を別の章に適用することができる。本明細書において引用されているすべての刊行物は、言及することによって明示的に組み込まれている。
【００７５】
ラッカーゼ及びラッカーゼ関連酵素
酵素的酸化の系、組成物及び方法は、本明細書においてまとめて「ラッカーゼ」又は「ラッカーゼ酵素」と呼ばれるラッカーゼ又はラッカーゼ関連酵素の１つ又はそれ以上を含む。そのようなラッカーゼは、生化学及び分子生物学の国際連合の命名法委員会(Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology)(IUBMB)による、ＥＣ１．１０．３．２に包含されるあらゆるラッカーゼ酵素を包含する。微生物及び植物に由来するラッカーゼ酵素は、当業界において知られている。微生物のラッカーゼ酵素は、細菌又は真菌（糸状菌及び酵母菌を含む）に由来するものであってもよい。好適な例には、アスペルギルス(Aspergillus)、ニューロスポラ(Neurospora)(例えば、Ｎ．クラッサ(N. crassa))、ポドスポラ(Podospora)、ボトリティス(Botrytis)、コリビア(Collybia)、セレナ(Cerrena)(例えば、ユニカラー)、スタキボトリス(Stachybotrys)、パヌス(Panus)（例えばＰ．ルディス）、チエラビア(Thielavia)、フォメス(Fomes)、レンチヌス(Lentinus)、プルーロタス(Pleurotus)、トラメテス(Trametes)（例えば、Ｔ．ビロッサ(T. villosa)及びＴ．ベルシカラー(T. versicolor)）、リゾクトニア(Rhizoctonia)（例えばＲ．ソラニ(R.solani)、コプリナス（Coprinus）（例えばＣ．プリカティリス(C.plicatilis）、Ｃ．シネレウス(C. cinereus)）、ムジナタケ(Psatyrella)、ミセリオフトラ（例えばＭ．サーモンヒラ(thermonhila)）、シタリディウム(Schytalidium)、フレビア(Phlebia)（例えばＰ．ラディタ(radita)（ＷＯ92／01046）、若しくはコリオルス(Coriolus)（例えばＣ．ヒルスタス(hirsutus)（JP2238885)）、スポンジペリス(Spongipellis)、ポリポラス(Polyporus)、セリポリオプシス  サブベルミスポラ(Ceriporiopsis subvermispora)、ガノデルマ  ツノダエ(Ganoderma tsunodae)、並びに、トリコデルマ(Trichoderma)の種から由来する又は由来し得るラッカーゼが含まれる。
【００７６】
ラッカーゼは、ラッカーゼをコードするヌクレオチド配列を含む組み換えＤＮＡベクターでトランスフォームされた宿主細胞を培養することによって生産することができる。ＤＮＡベクターには、培地中におけるラッカーゼの発現を可能にし、また、その培養液からラッカーゼを選択的に回収できるようにするヌクレオチド配列がさらに含まれていてもよい。
【００７７】
ラッカーゼ酵素をコードするポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを、適切な宿主細胞内にトランスフォームすることができる。宿主細胞は、糸状菌細胞のような真菌細胞であってもよく、その例は、以下に限定されないが、トリコデルマ［例えば、Ｔ．リーゼイ（従来、Ｔ．ロンギブラキアツム(longibrachiatum)として分類され、また、現在、ハイポクレアジェコリナ(Hypocrea jecorina)としても知られている）、Ｔ．ビリデ(Viride)、Ｔ．コニンジ(koningii)及びＴ．ハルジアヌム(harzianum)］、アスペルギルス(Aspergillus)（例えば、Ａ．ニガー(A. niger)、Ａ．ニデュランス(A. nidulans)、Ａ．オリザエ(A. oryzae)及びＡ．アワモリ(A. awamori)）、ペニシリウム(Penicillium)、フミコラ(Humicola)(例えば、Ｈ．インソレンズ(H. insolens)及びＨ．グリシー(H.grisea))、フザリウム(Fusarium)（例えばＦ．グラミナム(F. Graminum)及びＦ．ベネナツム(F.venenatum)）、ニューロスポラ(Neurospora)、ボタンタケ(Hypocrea)、並びに、ケカビ(Mucor)の種を包含する。ラッカーゼ酵素の発現用の宿主細胞は、セレナ(Cerrena)（例えば、Ｃ．ユニカラー）の一種に由来するものであってもよい。真菌細胞は、当業界において知られている技術を使用して、細胞壁の再生を後に伴う、原形質体形成及び原形質体のトランスフォーメーションを含むプロセスによってトランスフォームすることができる。
【００７８】
代替的に、宿主生物は、バチルス［例えば、Ｂ．サブチリス、Ｂ．リケニホルミス、Ｂ．レンタス、Ｂ．（ナウゲオバシラス）ステアロサーモフィラス、及び、Ｂ．ブレビス］、シュードモナスストレプトミセス（例えば、Ｓ．コエリカラー、Ｓ．リビダンス）、又は、大腸菌のような細菌の一種に由来するものであってもよい。細菌細胞のトランスフォーメーションは、例えば、「Maniatis, T. et al., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual," Cold Spring Harbor, 1982」に記載されているように、従来の方法に従って実行することができる。適切なＤＮＡ塩基配列のスクリーニング及びベクターの構築もまた、標準的手順（上記参照）によって実行可能である。
【００７９】
トランスフォームされた宿主細胞を培養するために使用される培地は、宿主細胞を培養するのに適した従来のあらゆる培地であり得る。いくつかの実施形態において、発現された酵素は、培地中に分泌され、その培地から公知の手順に従って回収することができる。ラッカーゼは、例えば、米国特許公開公報第２００８／０１９６１７３号に記載されているような培地から回収することができる。いくつかの実施形態において、酵素は、細胞内で発現され、細胞膜の破壊後に回収される。
【００８０】
特定の実施形態において、発現宿主は、ＣＢＨ１プロモータ及びターミネータの制御下にラッカーゼコード領域を有するトリコデルマリーゼイであってもよい（例えば、米国特許第５，８６１，２７１号参照）。発現ベクターは、例えば、米国特許第７，４１３，８８７号に開示されているような、ｐＴｒｅｘ３ｇであってもよい。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、米国特許公開公報第２００８／０１９６１７３号又は第２００９／０２２１０３０号に記載されているように発現される。
【００８１】
以下のラッカーゼ遺伝子及びラッカーゼは、米国公開公報第２００８／０１９６１７３号に記載されている。
Ａ．ＣＢＳ１１５．０７５株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＡ１遺伝子
ポリヌクレオチド配列（配列番号１）：
ATGAGCTCAA AGCTACTTGC TCTTATCACT GTCGCTCTCG TCTTGCCACT  50
AGGCACCGAC GCCGGCATCG GTCCTGTTAC CGACTTGCGC ATCACCAACC  100
AGGATATCGC TCCAGATGGC TTCACCCGAC CAGCGGTACT AGCTGGGGGC  150
ACATTCCCTG GAGCACTTAT TACCGGTCAG AAGGTATGGG AGATCAACTT  200
GGTTGAATAG AGAAATAAAA GTGACAACAA ATCCTTATAG GGAGACAGCT  250
TCCAAATCAA TGTCATCGAC GAGCTTACCG ATGCCAGCAT GTTGACCCAG  300
ACATCCATTG TGAGTATAAT TTAGGTCCGC TCTTCTGGCT ATCCTTTCTA  350
ACTCTTACCG TCTAGCATTG GCACGGCTTC TTTCAGAAGG GATCTGCGTG  400
GGCCGATGGT CCTGCCTTCG TTACTCAATG CCCTATCGTC ACCGGAAATT  450
CCTTCCTGTA CGACTTTGAT GTTCCCGACC AACCTGGTAC TTTCTGGTAC  500
CATAGTCACT TGTCTACTCA ATATTGCGAT GGTCTTCGTG GCCCGTTCGT  550
TGTATACGAT CCAAAGGATC CTAATAAACG GTTGTACGAC ATTGACAATG  600
GTATGTGCAT CATCATAGAG ATATAATTCA TGCAGCTACT GACCGTGACT  650
GATGCTGCCA GATCATACGG TTATTACCCT GGCAGACTGG TACCACGTTC  700
TCGCAAGAAC TGTTGTCGGA GTCGCGTAAG TACAGTCTCA CTTATAGTGG  750
TCTTCTTACT CATTTTGACA TAGGACACCC GACGCAACCT TGATCAACGG  800
TTTGGGCCGT TCTCCAGACG GGCCAGCAGA TGCTGAGTTG GCTGTCATCA  850
ACGTTAAACG CGGCAAACGG TATGTTATTG AACTCCCGAT TTCTCCATAC  900
ACAGTGAAAT GACTGTCTGG TCTAGTTATC GATTTCGTCT GGTCTCCATC  950
TCATGTGACC CTAATTACAT CTTTTCTATC GACAACCATT CTATGACTGT  1000
CATCGAAGTC GATGGTGTCA ACACCCAATC CCTGACCGTC GATTCTATTC  1050
AAATCTTCGC AGGCCAACGA TACTCGTTCG TCGTAAGTCT CTTTGCACGA  1100
TTACTGCTTC TTTGTCCATT CTCTGACCTG TTTAAACAGC TCCATGCCAA  1150
CCGTCCTGAA AACAACTATT GGATCAGGGC CAAACCTAAT ATCGGTACGG  1200
ATACTACCAC AGACAACGGC ATGAACTCTG CCATTCTGCG ATACAACGGC  1250
GCACCTGTTG CGGAACCGCA AACTGTTCAA TCTCCCAGTC TCACCCCTTT  1300
GCTCGAACAG AACCTTCGCC CTCTCGTGTA CACTCCTGTG GTATGTTTCA  1350
AAGCGTTGTA ATTTGATTGT GGTCATTCTA ACGTTACTGC GTTTGCATAG  1400
CCTGGAAACC CTACGCCTGG CGGCGCCGAT ATTGTCCATA CTCTTGACTT  1450
GAGTTTTGTG CGGAGTCAAC ATTCGTAAAG ATAAGAGTGT TTCTAATTTC  1500
TTCAATAATA GGATGCTGGT CGCTTCAGTA TCAACGGTGC CTCGTTCCTT  1550
GATCCTACCG TCCCCGTTCT CCTGCAAATT CTCAGCGGCA CGCAGAATGC  1600
ACAAGATCTA CTCCCTCCTG GAAGTGTGAT TCCTCTCGAA TTAGGCAAGG  1650
TCGTCGAATT AGTCATACCT GCAGGTGTCG TCGGTGGACC TCATCCGTTC  1700
CATCTCCATG GGGTACGTAA CCCGAACTTA TAACAGTCTT GGACTTACCC  1750
GCTGACAAGT GCATAGCATA ACTTCTGGGT CGTGCGAAGT GCCGGAACCG  1800
ACCAGTACAA CTTTAACGAT GCCATTCTCC GAGACGTCGT CAGTATAGGA  1850
GGAACCGGGG ATCAAGTCAC CATTCGTTTC GTGGTATGTT TCATTCTTGT  1900
GGATGTATGT GCTCTAGGAT ACTAACCGGC TTGCGCGTAT AGACCGATAA  1950
CCCCGGACCG TGGTTCCTCC ATTGCCATAT CGACTGGCAC TTGGAAGCGG  2000
GTCTCGCTAT CGTATTTGCA GAGGGAATTG AAAATACTGC TGCGTCTAAT  2050
TTAACCCCCC GTACGCGGTT TCCCTCACAT CCTGGAGCTA AGCAGCTTAC  2100
TAACATACAT TTGCAGAGGC TTGGGATGAG CTTTGCCCGA AGTATAACGC  2150
GCTCAGCGCA CAAAAGAAGG TTGCATCTAA GAAAGGCACT GCCATCTAAT  2200
TTTTGTAACA AACAAGGAGG GTCTCTTGTA CTTTTATTGG GATTTCTTTC  2250
TTGGGGTTTA TTGTTAAACT TGACTCTACT ATGTTTGGAA GACGAAAGGG  2300
GCTCGCGCAT TTATATACTA TCTCTCTTGG CATCACCTGC AGCTCAATCC  2350
TTCAACCACC TAA                                                2363
翻訳されたタンパク配列（配列番号２）：
MSSKLLALIT VALVLPLGTD AGIGPVTDLR ITNQDIAPDG FTRPAVLAGG  50
TFPGALITGQ KGDSFQINVI DELTDASMLT QTSIHWHGFF QKGSAWADGP  100
AFVTQCPIVT GNSFLYDFDV PDQPGTFWYH SHLSTQYCDG LRGPFVVYDP  150
KDPNKRLYDI DNDHTVITLA DWYHVLARTV VGVATPDATL INGLGRSPDG  200
PADAELAVIN VKRGKRYRFR LVSISCDPNY IFSIDNHSMT VIEVDGVNTQ  250
SLTVDSIQIF AGQRYSFVLH ANRPENNYWI RAKPNIGTDT TTDSGMNSAI  300
LRYNGAPVAE PQTVQSPSLT PLLEQNLRPL VYTPVPGNPT PGGADIVHTL  350
DLSFDAGRFS INGASFLDPT VPVLLQILSG TQNAQDLLPP GSVIPLELGK  400
VVELVIPAGV VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GTDQYNFNDA ILRDVVSIGG  450
TGDQVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIE NTAASNLTPQ  500
AWDELCPKYN ALSAQKKLNP STT                                   523
Ｂ．ＣＢＳ１５４．２９株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＡ２遺伝子
ポリヌクレオチド配列（配列番号３）：
ATGAGCTCAA AGCTACTTGC TCTTATTACT GTCGCTCTCG TCTTGCCACT  50
AGGCACTGAC GCCGGCATCG GTCCTGTTAC CGACTTGCGC ATCACCAACC  100
AGGATATCGC TCCAGATGGC TTCACCCGAC CAGCTGTACT GGCTGGGGGC  150
ACATTCCCCG GAGCACTGAT TACCGGTCAG AAGGTATGGG AGATCGATTT  200
CGTTGAATAG AGAAATACAA CTGAAAACAA ATTCTTATAG GGAGACAGCT  250
TCCAAATCAA TGTCATCGAC GAGCTTACCG ATGCCAGCAT GTTGACCCAG  300
ACATCCATTG TGAGTATAAT ATGGGTCCGC TCTTCTAGCT ATCCTTTCTA  350
ACTCTTACCC TCTAGCATTG GCACGGCTTC TTTCAGAAGG GATCTGCGTG  400
GGCCGATGGT CCTGCCTTCG TTACTCAATG TCCTATCGTC ACCGGAAATT  450
CCTTCCTGTA CGACTTTGAT GTCCCCGACC AACCTGGTAC TTTCTGGTAC  500
CATAGTCACT TGTCTACTCA ATATTGCGAT GGTCTTCGGG GCCCGTTCGT  550
TGTATACGAT CCAAAGGATC CTAATAAACG GTTGTACGAC ATTGACAATG  600
GTATGTGCAT CATCATAAAA ATATAATTCA TGCAGCTACT GACCGCGACT  650
GATGCTGCCA GATCATACGG TTATTACCCT GGCAGACTGG TACCACGTTC  700
TCGCACGAAC TGTTGTCGGA GTCGCGTAAG TACAGTCTGA CTTATAGTGG  750
TCTTCTTACT CATTTTGACA TAGGACACCC GACGCAACCT TGATCAACGG  800
TTTGGGCCGT TCTCCAGACG GGCCAGCAGA TGCTGAGTTG GCTGTCATCA  850
ACGTTAAACG CGGCAAACGG TATGTCATTG AACTCCCGAT TTCTCCATTC  900
ACATTGAAAT GACTGTCTGG TCTAGTTATC GATTCCGTCT GGTCTCCATC  950
TCATGTGACC CTAATTACAT CTTTTCTATC GACAACCATT CTATGACTGT  1000
CATCGAAGTC GATGGTGTCA ACACCCAATC CCTGACCGTC GATTCTATCC  1050
AAATCTTCGC AGGCCAACGC TACTCGTTCG TCGTAAGTCT CTTTGAATGG  1100
TTGGTGCTTT TTCTGTCCAT TCTCTAACCT GTTTATACAG CTCCATGCCA  1150
ACCGTCCTGA AAACAACTAT TGGATCAGGG CCAAACCTAA TATCGGTACG  1200
GATACTACCA CAGACAACGG CATGAACTCT GCCATTCTGC GATACAACGG  1250
CGCACCTGTT GCGGAACCGC AAACTGTTCA ATCTCCCAGT CTCACCCCTT  1300
TGCTCGAACA GAACCTTCGC CCTCTCGTGT ACACTCCTGT GGTATGTTTC  1350
AAAGCGTTGT AATTTGATTG TGGTCATTCT AACGTTACTG CCTTTGCACA  1400
GCCTGGAAAT CCTACGCCTG GCGGGGCCGA TATTGTCCAT ACTCTTGACT  1450
TGAGTTTTGT GCGGAGTCAA CATTCGTAAA GATAAGAGTG TTTCTAATTT  1500
CTTCAATAAT AGGATGCTGG TCGCTTCAGT ATCAACGGTG CCTCGTTCCT  1550
TGATCCTACC GTCCCTGTTC TCCTGCAAAT TCTCAGCGGC ACGCAGAATG  1600
CACAAGATCT ACTCCCTCCT GGAAGTGTGA TTCCTCTCGA ATTAGGCAAG  1650
GTCGTCGAAT TAGTCATACC TGCAGGTGTT GTCGGTGGAC CTCATCCGTT  1700
CCATCTCCAT GGGGTACGTA ACCCGAACTT ATAACAGTCT TGGACTTACC  1750
CGCTGACAAG TGTATAGCAT AACTTCTGGG TCGTGCGAAG TGCCGGAACC  1800
GACCAGTACA ACTTTAACGA TGCCATTCTC CGAGACGTCG TCAGTATAGG  1850
AGGAACCGAG GATCAAGTCA CCATTCGATT CGTGGTATAT ACTTCATTCT  1900
TGTGGATGTA TGTGCTCTAG GATACTAACT GGCTTGCGCG TATAGACCGA  1950
TAACCCCGGA CCGTGGTTCC TCCATTGCCA TATCGACTGG CACTTGGAAG  2000
CGGGTCTCGC TATCGTATTT GCAGAGGGAA TTGAAAATAC TGCTGCGTCT  2050
AATCCAACCC CCCGTATGCG GTTTCCCACA CATTCTGAAT CTAAGCAGCT  2100
TACTAATATA CATTTGCAGA GGCTTGGGAT GAGCTTTGCC CGAAGTATAA  2150
CGCGCTCAAC GCACAAAAGA AGGTTGCATC TAAGAAAGGC ACTGCCATCT  2200
AATCCTTGTA ACAAACAAGG AGGGTCTCTT GTACTTTTAT TGGGATTTAT  2250
TTCTTGGGGT TTATTGTTCA ACTTGATTCT ACTATGTTTG GAAGTAGCGA  2300
TTACGAAAGG GGCTTGCGCA TTTATATACC ATCTTTCTTG GCACCACCTG  2350
CAGCTCAATC CTTCAACCAC CTAA                              2374
翻訳されたタンパク配列（配列番号４）：
MSSKLLALIT VALVLPLGTD AGIGPVTDLR ITNQDIAPDG FTRPAVLAGG  50
TFPGALITGQ KGDSFQINVI DELTDASMLT QTSIHWHGFF QKGSAWADGP  100
AFVTQCPIVT GNSFLYDFDV PDQPGTFWYH SHLSTQYCDG LRGPFVVYDP  150
KDPNKRLYDI DNDHTVITLA DWYHVLARTV VGVATPDATL INGLGRSPDG  200
PADAELAVIN VKRGKRYRFR LVSISCDPNY IFSIDNHSMT VIEVDGVNTQ  250
SLTVDSIQIF AGQRYSFVLH ANRPENNYWI RAKPNIGTDT TTDNGMNSAI  300
LRYNGAPVAE PQTVQSPSLT PLLEQNLRPL VYTPVPGNPT PGGADIVHTL  350
DLSFDAGRFS INGASFLDPT VPVLLQILSG TQNAQDLLPP GSVIPLELGK  400
VVELVIPAGV VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GTDQYNFNDA ILRDVVSIGG  450
TEDQVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIE NTAASNPTPQ  500
AWDELCPKYN ALNAQKKLNP STT                                   523
Ｃ．ＣＢＳ１１５．０７５株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＢ１遺伝子
ポリヌクレオチド配列（配列番号５）：
ATGTCTCTTC TTCGTAGCTT GACCTCCCTC ATCGTACTAG TCATTGGTGC  50
ATTTGCTGCA ATCGGTCCAG TCACTGACCT ACATATAGTG AACCAGAATC  100
TCGACCCAGA TGGTTTCAAC CGCCCCACTG TACTCGCAGG TGGTACTTTC  150
CCCGGTCCTC TGATTCGTGG TAACAAGGTA CGCTTCATAA CCGCCCTCCG  200
TAGACGTAGG CTTCGGCTGA CATGACCATC ATCTGTAGGG AGATAACTTT  250
AAAATTAATG TGATTGACGA CTTGACAGAG CACAGTATGC TCAAGGCTAC  300
GTCCATCGTA AGTCCCTGAT TAACGTTTCA CCTGGTCATA TCGCTCAACG  350
TCTCGAAGCA CTGGCATGGG TTCTTCCAGA AGGGAACCAA CTGGGCCGAT  400
GGCCCCGCCT TTGTCACCCA ATGTCCTATC ACATCAGGAA ACGCCTTCCT  450
GTATGATTTC AACGTTCCGG ACCAAGCTGG TACTTTCTGG TACCACAGCC  500
ATCTCTCTAC ACAGTATTGT GACGGTCTTC GTGGTGCCTT TGTCGTCTAT  550
GATCCTAATG ATCCCAACAA GCAACTCTAT GATGTTGATA ACGGCAAGTT  600
CCTTGCATAT TTCATTTCTA TCATATCCTC ACCTGTATTG GCACAGAAAG  650
CACCGTGATT ACCTTGGCTG ATTGGTATCA TGCCCTTGCT CAGACTGTCA  700
CTGGTGTCGC GTGAGTGACA AATGGCCCTC AATTGTTCAC ATATTTTCCT  750
GATTATCATA TGATAGAGTA TCTGATGCAA CGTTGATCAA CGGATTGGGA  800
CGTTCGGCCA CCGGCCCCGC AAATGCCCCT CTGGCGGTCA TCAGTGTCGA  850
GCGGAATAAG AGGTCAGTTC CATAATTATG ATTATTTCCC GCGTTACTTC  900
CTAACAATTA TTTTTGTATC CCTCCACAGA TATCGTTTCC GATTGGTTTC  950
TATTTCTTGC GACCCTAACT TTATTTTCTC AATTGACCAC CACCCAATGA  1000
CCGTAATTGA GATGGACGGT GTTAATACCC AATCTATGAC CGTAGATTCG  1050
ATCCAAATAT TCGCAGGTCA ACGATATTCA TTTGTCGTAG GTTATTATAA  1100
ACTGCCCACC GATCATCTCT CACGTAACTG TTATAGATGC AAGCCAACCA  1150
ACCAGTTGGA AATTATTGGA TCCGCGCTAA ACCTAATGTT GGGAACACAA  1200
CTTTCCTTGG AGGCCTGAAC TCCGCTATAT TACGATATGT GGGAGCCCCT  1250
GACCAAGAAC CGACCACTGA CCAAACACCC AACTCTACAC CGCTCGTTGA  1300
GGCGAACCTA CGACCCCTCG TCTATACTCC TGTGGTATGT TGTTCTCGTT  1350
ACATATACCA AACCTAATAT GAAGACTGAA CGGATCTACT AGCCGGGACA  1400
GCCATTCCCT GGCGGTGCTG ATATCGTCAA GAACTTAGCT TTGGGTTTCG  1450
TACGTGTATT TCACTTCCCT TTTGGCAGTA ACTGAGGTGG AATGTATATA  1500
GAATGCCGGG CGTTTCACAA TCAATGGAGC GTCCCTCACA CCTCCTACAG  1550
TCCCTGTACT ACTCCAGATC CTCAGTGGTA CTCACAATGC ACAGGATCTT  1600
CTCCCAGCAG GAAGCGTGAT CGAACTTGAA CAGAATAAAG TTGTCGAAAT  1650
CGTTTTGCCC GCTGCGGGCG CCGTTGGCGG TCCTCATCCT TTTCACTTAC  1700
ATGGTGTAAG TATCAGACGT CCTCATGCCC ATATTGCTCC GAACCTTACA  1750
CACCTGATTT CAGCACAATT TCTGGGTGGT TCGTAGCGCC GGTCAAACCA  1800
CATACAATTT CAATGATGCT CCTATCCGTG ATGTTGTCAG TATTGGCGGT  1850
GCAAACGATC AAGTCACGAT CCGATTTGTG GTATGTATCT CGTGCCTTGC  1900
ATTCATTCCA CGAGTAATGA TCCTTACACT TCGGGTTCTC AGACCGATAA  1950
CCCTGGCCCA TGGTTCCTTC ACTGTCACAT TGACTGGCAT TTGGAGGCTG  2000
GGTTCGCTGT AGTCTTTGCG GAGGGAATCA ATGGTACTGC AGCTGCTAAT  2050
CCAGTCCCAG GTAAGACTCT CGCTGCTTTG CGTAATATCT ATGAATTTAA  2100
ATCATATCAA TTTGCAGCGG CTTGGAATCA ATTGTGCCCA TTGTATGATG  2150
CCTTGAGCCC AGGTGATACA TGA                                   2173
翻訳されたタンパク配列（配列番号６）：
MSLLRSLTSL IVLVIGAFAA IGPVTDLHIV NQNLDPDGFN RPTVLAGGTF  50
PGPLIRGNKG DNFKINVIDD LTEHSMLKAT SIHWHGFFQK GTNWADGPAF  100
VTQCPITSGN AFLYDFNVPD QAGTFWYHSH LSTQYCDGLR GAFVVYDPND  150
PNKQLYDVDN GNTVITLADW YHALAQTVTG VAVSDATLIN GLGRSATGPA  200
NAPLAVISVE RNKRYRFRLV SISCDPNFIF SIDHHPMTVI EMDGVNTQSM  250
TVDSIQIFAG QRYSFVMQAN QPVGNYWIRA KPNVGNTTFL GGLNSAILRY  300
VGAPDQEPTT DQTPNSTPLV EANLRPLVYT PVPGQPFPGG ADIVKNLALG  350
FNAGRFTING ASLTPPTVPV LLQILSGTHN AQDLLPAGSV IELEQNKVVE  400
IVLPAAGAVG GPHPFHLHGH NFWVVRSAGQ TTYNFNDAPI RDVVSIGGAN  450
DQVTIRFVTD NPGPWFLHCH IDWHLEAGFA VVFAEGINGT AAANPVPAAW  500
NQLCPLYDAL SPGDT                                             515
Ｄ．ＣＢＳ１５４．２９株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＢ２遺伝子
ポリヌクレオチド配列（配列番号７）：
CACCGCGATG TCTCTTCTTC GTAGCTTGAC CTCCCTCATC GTACTAGCCA  50
CTGGTGCATT TGCTGCAATC GGTCCAGTCA CCGACCTACA TATAGTGAAC  100
CAGAATCTCG CCCCAGATGG TTTAAACCGC CCCACTGTAC TCGCAGGTGG  150
TACTTTCCCC GGTCCTCTGA TTCGTGGTAA CAAGGTACGC TTCATAACCG  200
CCCTCCGTAG ACGTAGGCTT CGGCTGACAT GACCATCATC TGTAGGGAGA  250
TAACTTTAAA ATTAATGTGA TTGACGACTT GACAGAACAC AGTATGCTCA  300
AGGCTACGTC CATTGTAAGT CCCTGATTAA CGTTTCACCT GGTCATATCG  350
CTCAACGTCT CGAAGCACTG GCATGGGTTC TTCCAGAAGG GAACCAACTG  400
GGCCGATGGC CCCGCCTTTG TCACCCAATG TCCTATCACA TCAGGAAACG  450
CCTTCTTGTA TGATTTCAAC GTTCCGGACC AAGCTGGTAC TTTCTGGTAC  500
CACAGCCATC TCTCYACACA GTATTGTGAC GGTCTTCGTG GTGCCTTTGT  550
CGTCTATGAT CCTAATGATC CCAACAAGCA ACTCTATGAT GTTGATAACG  600
GCAAGTCCCT TGCATATTTC AGTTCTATCA TATCCTCACC TGTATTGGCA  650
CAGAAAGCAC CGTGATTACC TTGGCTGATT GGTATCATGC CCTTGCTCAG  700
ACTGTCACTG GTGTCGCGTG AGTGACAAAT GGCCCTTAAT TGTTCACATA  750
TTTTCCTGAT TATCATATGA TAGAGTATCT GATGCAACGT TGATCAACGG  800
ATTGGGACGT TCGGCCACCG GCCCCGCAAA TGCCCCTCTG GCGGTCATCA  850
GTGTCGAGCG GAATAAGAGG TCAGTTCCAT AATTATGATT ATTTCCCGCG  900
TTACTTCCTA ACGATTATTT TTGTATCCCT CCACAGATAT CGTTTCCGAT  950
TGGTTTCTAT TTCTTGCGAC CCTAACTTTA TTTTCTCAAT TGACCACCAC  1000
CCAATGACCG TAATTGAGAT GGACGGTGTT AATACCCAAT CTATGACCGT  1050
AGATTCGATC CAAATATTCG CAGGTCAACG ATATTCATTT GTCGTAGGTT  1100
ATTATAAACT GCCCACCGAT CATCTCTCAC GTAACTGTTA TAGATGCAAG  1150
CCAACCAACC AGTTGGAAAT TATTGGATCC GYGCTAAACC TAATGTTGGG  1200
AACACAACTT TCCTTGGAGG CCTGAACTCC GCTATATTAC GATATGTGGG  1250
AGCCCCTGAC CAAGAACCGA CCACTGACCA AACACCCAAC TCTACACCGC  1300
TCGTCGAGGC GAACCTACGT CCCCTCGTCT ATACTCCTGT GGTATGTTGT  1350
TCTCGTTACA TATACCAAAC CTAATATGAG GACTGAACGG ATCTACTAGC  1400
CGGGACAGCC ATTCCCTGGC GGTGCTGATA TCGTCAAGAA CTTAGCTTTG  1450
GGTTTCGTAC GTGTATTTCA CTTCCCTTTT GGCAGTAACT GAGGTGGAAT  1500
GTATATAGAA TGCCGGGCGT TTCACAATCA ATGGAACATC CTTCACACCT  1550
CCTACAGTCC CTGTACTACT CCAGATCCTC AGTGGTACTC ACAATGCACA  1600
GGATCTTCTT CCAGCAGGAA GCGTGATCGA ACTTGAACAG AATAAAGTTG  1650
TCGAAATCGT TCTGCCCGCT GCGGGCGCCG TTGGCGGTCC TCATCCTTTC  1700
CACTTACATG GTGTAAGTAT CAGACGTCCT CATGCCTATA TTGCTCCGAA  1750
CCTTACACAC CTGATTTCAG CACAATTTCT GGGTGGTTCG TAGCGCCGGT  1800
CAAACCACAT ACAATTTCAA TGATGCTCCT ATCCGTGATG TTGTCAGTAT  1850
TGGCGGTGCA AACGATCAAG TCACGATCCG ATTTGTGGTA TGTATCTCGT  1900
GCCTTGCATT CATTCCACGA GTAATGATCC TTACACTTCG GGTTCTCAGA  1950
CCGATAACCC TGGCCCATGG TTCCTTCACT GTCACATTGA CTGGCATTTG  2000
GAGGCTGGGT TCGCTGTAGT CTTTGCGGAG GGAATCAATG GCACTGCAGC  2050
TGCTAATCCA GTCCCAGGTA AGACTCTCGC TGCTTTGCGT AATATCTATG  2100
AATTTAAAGC ATATCAATTT GCAGCGGCTT GGAATCAATT GTGCCCGTTG  2150
TATGATGCCT TGAGCCCAGG TGATACATGA TTACTCGTAG CTGTGCTTTC  2200
TTATACATAT TCTATGGGTA TATCGGAGTA GCTGTACTAT AGTATGTACT  2250
ATACTAGGTG GGATATGYTG ATGTTGATTT ATATAATTTT GTTTGAAGAG  2300
TGACTTTATC GACTTGGGAT TTAGCCGAGT ACATACTGAT CTCTCACTAC  2350
AGGCTTGTTT TGTCTTTGGG CGCTTACTCA ACAGTTGACT GTTTTTGCTA  2400
TTACGCATTG AACCGCATTC CGGTCYGACT CGTGTCCTCT ACTGTGACTT  2450
GTATTGGCAT TCTAGCACAT ATGTCTCTTA CCTATAGGAA CAATATGTCT  2500
CAACACTGTT CCAAAACCTG CGTAAACCAA ATATCGTCCA TCAGATCAGA  2550
TCATTAACAG TGCCGCACTA ACCTAATACA CTGGCARGGA CTGTGGAAAT  2600
CCCTATAAAT GACCTCTAGA CCGTGAGGTC ATTGCAAGGT CGCTCTCCTT  2650
GTCAAGATGA CCC                                                2663
翻訳されたタンパク配列（配列番号８）：
MSLLRSLTSL IVLATGAFAA IGPVTDLHIV NQNLAPDGLN RPTVLAGGTF  50
PGPLIRGNKG DNFKINVIDD LTEHSMLKAT SIHWHGFFQK GTNWADGPAF  100
VTQCPITSGN AFLYDFNVPD QAGTFWYHSH LSTQYCDGLR GAFVVYDPND  150
PNKQLYDVDN GNTVITLADW YHALAQTVTG VAVSDATLIN GLGRSATGPA  200
NAPLAVISVE RNKRYRFRLV SISCDPNFIF SIDHHPMTVI EMDGVNTQSM  250
TVDSIQIFAG QRYSFVMQAN QPVGNYWIRA KPNVGNTTFL GGLNSAILRY  300
VGAPDQEPTT DQTPNSTPLV EANLRPLVYT PVPGQPFPGG ADIVKNLALG  350
FNAGRFTING TSFTPPTVPV LLQILSGTHN AQDLLPAGSV IELEQNKVVE  400
IVLPAAGAVG GPHPFHLHGH NFWVVRSAGQ TTYNFNDAPI RDVVSIGGAN  450
DQVTIRFVTD NPGPWFLHCH IDWHLEAGFA VVFAEGINGT AAANPVPAAW  500
NQLCPLYDAL SPGDT                                             515
Ｅ．ＡＴＣＣ２００１３株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＢ３遺伝子（一部）
ポリヌクレオチド配列（配列番号：９）：
GTGGGGGCGG ATCCCTAACT GTTTCGAATC GGCACCGAAG TATGCAGGTG  50
TGACGGAGAT GAGGCGTTTT TTCATCTTCC ACTGCAGTAT AAAATGTCTC  100
AGGTAACGTC CAGCTTTTTG TACCAGAGCT ACCTCCAAAT ACCTTTACTC  150
GCAAAGGTTT CGCGATGTCT CTTCTTCGTA GCTTGACCTC CCTCATCGTA  200
CTAGCCACTG GTGCATTTGC TGCAATCGGT CCAGTCACTG ACCTACATAT  250
AGTGAACCAG AATCTCGCCC CAGATGGTTT CAACCGCCCC ACTGTACTCG  300
CAGGTGGTAC TTTCCCCGGT CCTCTGATTC GTGGTAACAA GGTACGCTTC  350
ATAACCGCCC TCCGTAGACG TAGGCTTCGG CTGACATGAC CATCATCTGT  400
AGGGAGATAA CTTTAAAATT AATGTGATTG ACGACTTGAC AGAACACAGT  450
ATGCTCAAGG CCACGTCCAT TGTAAGTCCC TGATTAACGT TTCACCTGGT  500
CATATCGCTC AACGTCTCGA AGCACTGGCA TGGGTTCTTC CAGAAGGGAA  550
CCAACTGGGC CGATGGCCCC GCCTTTGTCA CCCAATGTCC TATCACATCA  600
GGAAACTCCT TCCTGTATGA TTTCAACGTT CCGGACCAAG CTGGTACTTT  650
CTGGTACCAC AGCCATCTCT CTACACAGTA TTGTGACGGT CTTCGTGGTG  700
CCTTTGTCGT CTATGATCCT AATGATCCCA ACAAGCAACT CTATGATGTT  750
GATAACGGCA AGTCCCTTGC ATATTTCATT TCTATCATAT CCTCACCTGT  800
ATTGGCACAG AAAGCACCGT GATTACCTTG GCTGATTGGT ATCATGCCCT  850
TGCTCAGACT GTCACTGGTG TCGCGTGAGT GACAAATGGC CCTCAATTGT  900
TCACATATTT TCCTGATTAT CATATGATAG AGTATCTGAT GCAACGTTGA  950
TCAACGGATT GGGACGTTCG GCCACCGGCC CCGCAAATGC CCCTCTGGCG  1000
GTCATCAGTG TCGAGCGGAA TAAGAGGTCA GTTCCATAAT TATGATTATT  1050
TCCCGCGTTA CTTCCTAACA ATTATTCTTG TATCCCTCCA CAGATATCGC  1100
TTCCGATTGG TGTCTATTTC TTGCGACCCT AACTTTATTT TCTCAATTGA  1150
TCACCACCCA ATGACCGTAA TTGAGATGGA CGGTGTTAAT ACCCAATCTA  1200
TGACCGTAGA TTCGATCCAA ATATTCGCAG GTCAACGATA TTCATTTGTC  1250
GTAGGTTATT ATAAACTGCC CACCGATCAT CTCTCACGTA ACTGTTATAG  1300
ATGCAAGCCA ACCAACCRGT TGGAAATTAT TGGATCC                  1337
翻訳されたタンパク配列（配列番号１０）：
MSLLRSLTSL IVLATGAFAA IGPVTDLHIV NQNLAPDGFN RPTVLAGGTF  50
PGPLIRGNKG DNFKINVIDD LTEHSMLKAT SIHWHGFFQK GTNWADGPAF  100
VTQCPITSGN SFLYDFNVPD QAGTFWYHSH LSTQYCDGLR GAFVVYDPND  150
PNKQLYDVDN GKTVITLADW YHALAQTVTG VAVSDATLIN GLGRSATGPA  200
NAPLAVISVE RNKRYRFRLV SISCDPNFIF SIDHHPMTVI EMDGVNTQSM  250
TVDSIQIFAG QRYSFVMQAN QPVGNYWI                          278
Ｆ．ＣＢＳ１５４．２９株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＣ遺伝子（一部）
ポリヌクレオチド配列（配列番号１１）：
TGCAATCGGA CCGGTBGCTG ACCTTCACAT TACGGACGAT ACCATTGCCC  50
CCGATGGTTT CTCTCGTCCT GCTGTTCTCG CTGGCGGGGG TTTCCCTGGC  100
CCTCTCATCA CCGGAAACAA GGTAATGCCT AATGGTTGCG TCTTTGTTGG  150
TGCTCTCATT CATCCACGAC ATTTTGTACC AGGGCGACGC CTTTAAACTC  200
AATGTCATCG ATGAACTAAC GGACGCATCC ATGCTGAAGY CGACTTCCAT  250
CGTAAGTCTC GCTGTATTGC TCCTTGAGCC ATTTCATTGA CTATAACTAC  300
AACCAGCACT GGCATGGATT CTTCCAAAAG GGTACTAATT GGGCAGATGG  350
TCCCGCTTTT GTGAACCAAT GCCCCATCAC CACGGGAAAC TCCTTCTTGT  400
ACGACTTCCA GGTTCCTGAT CAAGCTGGTA AGCATGAGAT TACACTAGGA  450
AAGTTTAATT TAATAACTAT TCAATCAGGA ACCTACTGGT ATCATAGTCA  500
TTTGTCTACG CAATACTGTG ATGGTCTCAG AGGTGCATTC GTTGTCTACG  550
ACCCTTCAGA TCCTCACAAG GATCTCTACG ACGTCGACGA CGGTGAGCTT  600
TGCTTTTTTC ATTGGTATCC ATTATCGCTC ACGTGTCATT ACTGCGCCAC  650
AGAAAGTACC GTCATCACTT TGGCTGATTG GTATCATACT TTGGCTCGTC  700
AGATTGTTGG CGTTGCGTGA GTAGTCTTGT ACCGACTGAA ACATATTCCA  750
GTTGCTGACT TCCCCACAGC ATTTCTGATA CTACCTTGAT AAACGGTTTG  800
GGCCGCAATA CCAATGGTCC GGCTGATGCT GCTCTTGCTG TGATCAATGT  850
TGACGCTGGC AAACGGTGTG TCCAGATTAC TATACTCCCC ATGACGTCTC  900
AATGCTGATG TGTACTACTT CCAGGTACCG TTTCCGTCTT GTTTCCATAT  950
CCTGTGACCC CAATTGGGTA TTCTCGATTG ACAACCATGA CTTTACGGTC  1000
ATTGAAGTCG ATGGTGTTAA CAGTCAACCT CTCAACGTCG ATTCTGTTCA  1050
GATCTTCGCC GGACAACGTT ACTCGTTCGT                           1080
翻訳されたタンパク配列（配列番号１２）：
AIGPVADLHI TDDTIAPDGF SRPAVLAGGG FPGPLITGNK GDAFKLNVID  50
ELTDASMLKX TSIHWHGFFQ KGTNWADGPA FVNQCPITTG NSFLYDFQVP  100
DQAGTYWYHS HLSTQYCDGL RGAFVVYDPS DPHKDLYDVD DESTVITLAD  150
WYHTLARQIV GVAISDTTLI NGLGRNTNGP ADAALAVINV DAGKRYRFRL  200
VSISCDPNWV FSIDNHDFTV IEVDGVNSQP LNVDSVQIFA GQRYSF      246
Ｇ．ＣＢＳ１５４．２９株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＤ１遺伝子
ポリヌクレオチド配列（配列番号１３）：
GATTCTAATA GACCAGGCAT ACCAAGAGAT CTACAGGTTG ACAGACCATT  50
CTTCTAGGCG GCATTTATGC TGTAGCGTCA GAAATTATCT CTCCATTTGT  100
ATCCCACAGG TCCTGTAATA ACACGGAGAC AGTCCAAACT GGGATGCCTT  150
TTTTCTCAAC TATGGGCGCA CATAGTCTGG ACGATGGTAT ATAAGACGAT  200
GGTATGAGAC CCATGAAGTC AGAACACTTT TGCTCTCTGA CATTTCATGG  250
TTCACACTCT CGAGATGGGA TTGAACTCGG CTATTACATC GCTTGCTATC  300
TTAGCTCTGT CAGTCGGAAG CTATGCTGCA ATTGGGCCCG TGGCCGACAT  350
ACACATTGTC AACAAAGACC TTGCTCCAGA TGGCGTACAA CGTCCAACCG  400
TGCTTGCCGG AGGCACTTTT CCTGGGACGT TGATCACCGG TCAGAAAGTA  450
AGGGATATTA GTTTGCGTCA AAGAGCCAAC CAAAACTAAC CGTCCCGTAC  500
TATAGGGTGA CAACTTCCAG CTCAATGTCA TCGATGATCT TACCGACGAT  550
CGGATGTTGA CGCCAACTTC CATTGTGAGC CTATTATTGT ATGATTTATC  600
CGAATAGTTT CGCAGTCTGA TCATTGGATC TCTATCGCTA GCATTGGCAC  650
GGTTTCTTCC AGAAGGGAAC CGCTTGGGCC GACGGTCCCG CCTTCGTAAC  700
TCAGTGCCCT ATAATAGCAG ATAACTCTTT TCTGTATGAC TTCGACGTCC  750
CAGACCAAGC TGGTACTTTC TGGTATCATA GTCATCTATC CACTCAGTAC  800
TGTGACGGTT TACGTGGTGC CTTCGTTGTG TACGATCCTA ACGATCCTCA  850
CAAAGACCTA TACGATGTTG ATGACGGTGG GTTCCAAATA TTTGTTCTGC  900
AGACATTGTA TTGACGGTGT TCATTATAAT TTCAGAGAGC ACCGTGATTA  950
CCCTTGCGGA TTGGTACCAT GTTCTCGCCC AGACCGTTGT CGGCGCTGCG  1000
TGAGTAACAC ATACACGCGC TCCGGCACAC TGATACTAAT TTTTTTTTAT  1050
TGTAGCACTC CTGATTCTAC CTTGATCAAC GGGTTAGGCC GTTCACAGAC  1100
CGGACCCGCT GATGCTGAGC TGGCTGTTAT CAGCGTTGAA CATAACAAAC  1150
GGTATGTCAT CTCTACCCAG TATCTTCTCT CCTGCTCTAA TTCGCTGTTT  1200
CACCATAGAT ACCGTTTCCG TTTGGTTTCG ATTTCGTGCG ACCCCAACTT  1250
TACCTTCTCC GTTGATGGTC ATAATATGAC TGTCATCGAA GTCGATGGTG  1300
TCAACACACG ACCCCTGACC GTTGACTCTA TTCAAATCTT CGCCGGACAG  1350
AGGTATTCCT TTGTCGTAAG TTAATCGATA TATTCTCCTT ATTACCCCTG  1400
TGTAATTGAT GTCAATAGCT CAATGCTAAC CAACCCGAAG ACAATTACTG  1450
GATCCGTGCT ATGCCAAACA TCGGTAGAAA TACAACAACA CTGGACGGAA  1500
AGAATGCCGC TATCCTTCGA TACAAGAATG CTTCTGTAGA AGAGCCCAAG  1550
ACCGTTGGGG GCCCCGCTCA ATCCCCGTTG AATGAAGCGG ACCTGCGTCC  1600
ACTCGTACCT GCTCCTGTGG TATGTCTTGT CGCGCTGTTC CATCGCTATT  1650
TCATATTAAC GTTTTGTTTT TGTCAAGCCT GGAAACGCTG TTCCAGGTGG  1700
CGCAGACATC AATCACAGGC TTAACTTAAC TTTCGTACGT ACACCTGGTT  1750
GAAACATTAT ATTTCCAGTC TAACCTCTCT TGTAGAGTAA CGGCCTCTTC  1800
AGCATCAACA ACGCCTCCTT CACTAATCCT TCGGTCCCCG CCTTATTACA  1850
AATTCTGAGC GGTGCTCAGA ACGCTCAAGA TTTACTTCCA ACGGGTAGTT  1900
ACATTGGCCT TGAACTAGGC AAGGTTGTGG AGCTCGTTAT ACCTCCTCTG  1950
GCAGTTGGAG GACCGCACCC TTTCCATCTT CATGGCGTAA GCATACCACA  2000
CTCCCGCAGC CAGAATGACG CAAACTAATC ATGATATGCA GCACAATTTC  2050
TGGGTCGTCC GTAGTGCAGG TAGCGATGAG TATAACTTTG ACGATGCTAT  2100
CCTCAGGGAC GTCGTRAGCA TTGGAGCGGG GACTGATGAA GTCACAATCC  2150
GTTTCGTGGT ATGTCTCACC CCTCGCATTT TGAGACGCAA GAGCTGATAT  2200
ATTTTAACAT AGACCGACAA TCCGGGCCCG TGGTTCCTCC ATTGCCATAT  2250
TGATTGGCAT TTGGAGGCAG GCCTTGCCAT CGTCTTCGCT GAGGGCATCA  2300
ATCAGACCGC TGCAGCCAAC CCAACACCCC GTACGTGACA CTGAGGGTTT  2350
CTTTATAGTG CTGGATTACT GAATCGAGAT TTCTCCACAG AAGCATGGGA  2400
TGAGCTTTGC CCCAAATATA ACGGGTTGAG TGCGAGCCAG AAGGTCAAGC  2450
CTAAGAAAGG AACTGCTATT TAAACGTGGT CCTAGACTAC GGGCATATAA  2500
GTATTCGGGT AGCGCGTGTG AGCAATGTTC CGATACACGT AGATTCATCA  2550
CCGGACACGC TGGGACAATT TGTGTATAAT GGCTAGTAAC GTATCTGAGT  2600
TCTGGTGTGT AGTTCAAAGA GACAGCCCTT CCTGAGACAG CCCTTCCTGA  2650
GACAGCCCTT CCTGAGACGT GACCTCCGTA GTCTGCACAC GATACTYCTA  2700
AATACGTATG GCAAGATGAC AAAGAGGAGG ATGTGAGTTA CTACGAACAG  2750
AAATAGTGCC CGGCCTCGGA GAGATGTTCT TGAATATGGG ACTGGGACCA  2800
ACATCCGGA                                                      2809
翻訳されたタンパク配列（配列番号１４）：
MGLNSAITSL AILALSVGSY AAIGPVADIH IVNKDLAPDG VQRPTVLAGG  50
TFPGTLITGQ KGDNFQLNVI DDLTDDRMLT PTSIHWHGFF QKGTAWADGP  100
AFVTQCPIIA DNSFLYDFDV PDQAGTFWYH SHLSTQYCDG LRGAFVVYDP  150
NDPHKDLYDV DDGGTVITLA DWYHVLAQTV VGAATPDSTL INGLGRSQTG  200
PADAELAVIS VEHNKRYRFR LVSISCDPNF TFSVDGHNMT VIEVDGVNTR  250
PLTVDSIQIF AGQRYSFVLN ANQPEDNYWI RAMPNIGRNT TTLDGKNAAI  300
LRYKNASVEE PKTVGGPAQS PLNEADLRPL VPAPVPGNAV PGGADINHRL  350
NLTFSNGLFS INNASFTNPS VPALLQILSG AQNAQDLLPT GSYIGLELGK  400
VVELVIPPLA VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GSDEYNFDDA ILRDVVSIGA  450
GTDEVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIN QTAAANPTPQ  500
AWDELCPKYN GLSASQKVKP KKGTAI                                526
Ｈ．ＣＢＳ１１５．０７５株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＤ２遺伝子
ポリヌクレオチド配列（配列番号１５）：
GATCTGGACG ATGGTATATA AGACGATGGT ATGAGACCCA TGAAGTCTGA  50
ACACTTTTGC TCTCTGACAT TTCATGGTTC ATACTCTCGA GATGGGATTG  100
AACTCGGCTA TTACATCGCT TGCTATCTTA GCTCTGTCAG TCGGAAGCTA  150
TGCTGCAATT GGGCCCGTGG CCGACATACA CATTGTCAAC AAAGACCTTG  200
CTCCAGATGG TGTACAACGT CCAACCGTGC TCGCCGGAGG CACTTTTCCT  250
GGGACGTTGA TCACCGGTCA GAAAGTAAGG AATATTAGTT TGCGTCAAAG  300
AGCCAACCAA AATTAACCGT CCCGTCCCAT AGGGTGACAA CTTCCAGCTC  350
AATGTCATTG ATGATCTTAC CGACGATCGG ATGTTGACAC CAACTTCCAT  400
TGTGAGCCTA TTATTGTATG ATTTATCCGT ATAGTTTCTC AGTCTGATCA  450
TTGGCTCTCT ATCGCTAGCA TTGGCACGGT TTCTTCCAGA AGGGAACCGC  500
TTGGGCCGAC GGTCCCGCCT TCGTAACTCA GTGCCCTATA ATAGCAGATA  550
ACTCTTTTCT GTATGACTTC GACGTCCCCG ACCAAGCTGG TACTTTCTGG  600
TATCATAGTC ATCTATCCAC TCAGTACTGT GACGGTTTAC GTGGTGCCTT  650
CGTTGTGTAC GATCCTAACG ATCCTCACAA AGACCTATAC GATGTTGATG  700
ACGGTGGGTT CCAAATACTT GACCAAGAAA CATTATATTG ATAGTATCCA  750
CTCTGATTTT CAGAGAGCAC CGTGATTACC CTTGCGGATT GGTACCATGT  800
TCTCGCCCAG ACCGTTGTCG GCGCTGCGTG AGTAACACAT ACACGCGCTC  850
CGGCACACTG ATACTAATTT TTTATTGTAG CACTCCTGAT TCTACCTTGA  900
TCAACGGGTT AGGCCGTTCA CAGACCGGAC CCGCTGATGC TGAGCTGGCT  950
GTTATCAGCG TTGAACATAA CAAACGGTAT GTCATCTCTA CCCATTATCT  1000
TCTCTCCTGC TTTAATTCGC TGTTTCACCA TAGATACCGA TTCCGTTTGG  1050
TTTCGATTTC GTGCGACCCC AACTTTACCT TCTCCGTTGA TGGTCATAAT  1100
ATGACTGTCA TCGAAGTCGA CGGTGTCAAC ACACGACCCC TGACCGTTGA  1150
CTCTATTCAA ATCTTCGCCG GACAGAGGTA TTCCTTTGTC GTAAGTTAAT  1200
CGATATATTC TCCCTATTAC CCCTGTGTAA TTGATGTCAA CAGCTCAATG  1250
CTAACCAACC CGACGACAAT TACTGGATCC GTGCTATGCC AAACATCGGT  1300
AGAAATACAA CAACACTGGA CGGAAAGAAT GCCGCTATCC TTCGATACAA  1350
GAATGCTTCT GTAGAAGAGC CCAAGACCGT TGGGGGCCCC GCTCAATCCC  1400
CGTTGAATGA AGCGGACCTG CGTCCACTCG TACCTGCTCC TGTGGTATGT  1450
CTTGTCGTGC TGTTCCATCG CTATTTCATA TTAACGTTTT GTTTTTGTCA  1500
AGCCTGGAAA CGCTGTTCCA GGTGGCGCAG ACATCAATCA CAGGCTTAAC  1550
TTAACTTTCG TACGTACACC TGGTTGAAAC ATTATATTTC CAGTCTAACC  1600
TCTTGTAGAG TAACGGCCTT TTCAGCATCA ACAACGCCTC CTTCACTAAT  1650
CCTTCGGTCC CCGCCTTATT ACAAATTCTG AGCGGTGCTC AGAACGCTCA  1700
AGATTTACTT CCAACGGGTA GTTACATTGG CCTTGAACTA GGCAAGGTTG  1750
TGGAGCTCGT TATACCTCCT CTGGCAGTTG GAGGACCGCA CCCTTTCCAT  1800
CTTCATGGCG TAAGCATACC ACACTCCCGC AGCCAGAATG ACGCAAACTA  1850
ATCATGATAT GCAGCACAAT TTCTGGGTCG TCCGTAGTGC AGGTAGCGAT  1900
GAGTATAACT TTGACGATGC TATCCTCAGG GACGTCGTGA GCATTGGAGC  1950
GGGGACTGAT GAAGTCACAA TCCGTTTCGT GGTATGTCTC ACCCCTCGCA  2000
TTTTGAGACG CAAGAGCTGA TATATTTTAA CATAGACCGA CAATCCGGGC  2050
CCGTGGTTCC TCCATTGCCA TATTGATTGG CATTTGGAGG CAGGCCTTGC  2100
CATCGTCTTC GCTGAGGGCA TCAATCAGAC CGCTGCAGCC AACCCAACAC  2150
CCCGTACGTG ACACTGAGGG TTTCTTTATA GTGCTGGATT ACTGAATCGA  2200
GATTTCTCCA CAGAAGCATG GGATGAGCTT TGCCCCAAAT ATAACGGGTT  2250
GAGTGCGAGC CAGAAGGTCA AGCCTAAGAA AGGAACTGCT ATTTAAACG   2299
翻訳されたタンパク配列（配列番号１６）：
MGLNSAITSL AILALSVGSY AAIGPVADIH IVNKDLAPDG VQRPTVLAGG  50
TFPGTLITGQ KGDNFQLNVI DDLTDDRMLT PTSIHWHGFF QKGTAWADGP  100
AFVTQCPIIA DNSFLYDFDV PDQAGTFWYH SHLSTQYCDG LRGAFVVYDP  150
NDPHKDLYDV DDGGTVITLA DWYHVLAQTV VGAATPDSTL INGLGRSQTG  200
PADAELAVIS VEHNKRYRFR LVSISCDPNF TFSVDGHNMT VIEVDGVNTR  250
PLTVDSIQIF AGQRYSFVLN ANQPDDNYWI RAMPNIGRNT TTLDGKNAAI  300
LRYKNASVEE PKTVGGPAQS PLNEADLRPL VPAPVPGNAV PGGADINHRL  350
NLTFSNGLFS INNASFTNPS VPALLQILSG AQNAQDLLPT GSYIGLELGK  400
VVELVIPPLA VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GSDEYNFDDA ILRDVVSIGA  450
GTDEVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIN QTAAANPTPQ  500
AWDELCPKYN GLSASQKVKP KKGTAI                                526
Ｉ．ＣＢＳ１５４．２９株に由来するセレナ(Cerrena)ラッカーゼＥ遺伝子（一部）
ポリヌクレオチド配列（配列番号１７）：
TGCAATCGGA CCGGTGGCCG ACCTCAAGAT CGTAAACCGA GACATTGCAC  50
CTGACGGTTT TATTCGTCCC GCCGTTCTCG CTGGAGGGTC GTTCCCTGGT  100
CCTCTCATTA CAGGGCAGAA AGTACGTTAC GCTATCTCGG TGCTTTGGCT  150
TAATTAAACT ATTTGACTTT GTGTTCTCTT AGGGGAACGA GTTCAAAATC  200
AATGTAGTCA ATCAACTGAC CGATGGTTCT ATGTTAAAAT CCACCTCAAT  250
CGTAAGCAGA ATGAGCCCTT TGCATCTCGT TTTATTGTTA ATGCGCCCAC  300
TATAGCATTG GCATGGATTC TTCCAGAAGG GAACAAACTG GGCAGACGGT  350
CCTGCGTTCG TGAACCAATG TCCAATCGCC ACGAACAATT CGTTCTTGTA  400
TCAGTTTACC TCACAGGAAC AGCCAGGTGA GTATGAGATG GAGTTCATCC  450
GAGCATGAAC TGATTTATTT GGAACCTAGG CACATTTTGG TACCATAGTC  500
ATCTTTCCAC ACAATACTGC GATGGTTTGC GAGGGCCACT CGTGGTGTAT  550
GACCCACAAG ACCCGCATGC TGTTCTCTAC GACGTCGACG ATGGTTCGTA  600
CTTCGCATAT CCACGCTCGC TTTCATACAA TGTAAACTTT GTTCCTCCAG  650
AAAGTACAAT CATCACGCTC GCGGATTGGT ATCATACCTT GGCTCGGCAA  700
GTGAAAGGCC CAGCGTAAGG CACTTTAGTG TTTCCTCATA GTCCAAGAAA  750
TTCTAACACG CCTTCTTCAT CAGGGTTCCT GGTACGACCT TGATCAACGG  800
GTTGGGGCGT CACAACAATG GTCCTCTAGA TGCTGAACTA GCGGTGATCA  850
GTGTTCAAGC CGGCAAACGG CAAGTTCAAT TCACACTTTT CACTCTGTAC  900
CTTCTTCCTG ACATTCTTTT CTTGTAGTTA CCGCTTCCGC CTGATTTCAA  950
TTTCATGCGA TCCCAACTAC GTATTCTCCA TTGATGGCCA TGATATGACT  1000
GTCATCGAAG TGGATAGTGT TAACAGTCAA CCTCTCAAGG TAGATTCTAT  1050
CCAAATATTT GCAGGTCAGA GATATTCGTT CGTGGTGAGT CAGATCAGGG  1100
CATATCCTTT TGTCGATACG TCATTGACCA TATAATGCTA CAAGCTGAAT  1150
GCCAACCAAC CAG                                                1163
翻訳されたタンパク配列（配列番号１８）：
AIGPVADLKI VNRDIAPDGF IRPAVLAGGS FPGPLITGQK GNEFKINVVN  50
QLTDGSMLKS TSIHWHGFFQ KGTNWADGPA FVNQCPIATN NSFLYQFTSQ  100
EQPGTFWYHS HLSTQYCDGL RGPLVVYDPQ DPHAVLYDVD DESTIITLAD  150
WYHTLARQVK GPAVPGTTLI NGLGRHNNGP LDAELAVISV QAGKRQVQFT  200
LFTLYRFRLI SISCDPNYVF SIDGHDMTVI EVDSVNSQPL KVDSIQIFAG  250
QRYSFVLNAN QP                                                 262
以下のアミノ酸配列（配列番号１９：シグナル配列はイタリック体）を有するラッカーゼＤ酵素は、本明細書に記載されている方法において使用可能である。
MGLNSAITSL AILALSVGSY AAIGPVADLH IVNKDLAPDG VQRPTVLAGG  50
TFPGTLITGQ KGDNFQLNVI DDLTDDRMLT PTSIHWHGFF QKGTAWADGP  100
AFVTQCPIIA DNSFLYDFDV PDQAGTFWYH SHLSTQYCDG LRGAFVVYDP  150
NDPHKDLYDV DDGGTVITLA DWYHVLAQTV VGAATPDSTL INGLGRSQTG  200
PADAELAVIS VEHNKRYRFR LVSISCDPNF TFSVDGHNMT VIEVDGVNTR  250
PLTVDSIQIF AGQRYSFVLN ANQPEDNYWI RAMPNIGRNT TTLDGKNAAI  300
LRYKNASVEE PKTVGGPAQS PLNEADLRPL VPAPVPGNAV PGGADINHRL  350
NLTFSNGLFS INNASFTNPS VPALLQILSG AQNAQDLLPT GSYIGLELGK  400
VVELVIPPLA VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GSDEYNFDDA ILRDVVSIGA  450
GTDEVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIN QTAAANPTPQ  500
AWDELCPKYN GLSASQKVKP KKGTAI                                526
このポリペプチドの処理された成熟形態は、以下のとおりである（配列番号２０）。
AIGPVADLHIVNKDLAPDGVQRPTVLAGGTFPGTLITGQKGDNFQLNVIDDLTDDRMLTPTSIHWHGFFQKGTAWADGPAFVTQCPIIADNSFLYDFDVPDQAGTFWYHSHLSTQYCDGLRGAFVVYDPNDPHKDLYDVDDGGTVITLADWYHVLAQTVVGAATPDSTLINGLGRSQTGPADAELAVISVEHNKRYRFRLVSISCDPNFTFSVDGHNMTVIEVDGVNTRPLTVDSIQIFAGQRYSFVLNANQPEDNYWIRAMPNIGRNTTTLDGKNAAILRYKNASVEEPKTVGGPAQSPLNEADLRPLVPAPVPGNAVPGGADINHRLNLTFSNGLFSINNASFTNPSVPALLQILSGAQNAQDLLPTGSYIGLELGKVVELVIPPLAVGGPHPFHLHGHNFWVVRSAGSDEYNFDDAILRDVVSIGAGTDEVTIRFVTDNPGPWFLHCHIDWHLEAGLAIVFAEGINQTAAANPTPQAWDELCPKYNGLSASQKVKPKKGTAI
【００８２】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物及び方法において使用するのに適したラッカーゼ酵素は、細胞からの完全長ポリペプチドの分泌を導くために使用することができるシグナル配列を欠く成熟ポリペプチドである。適切な成熟ポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９、及び、配列番号２０からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは、少なくとも９９％、又は、それを超えるアミノ酸配列同一性を有していてもよい。本明細書に記載されている分析及び手順を使用して決定したときに、そのようなポリペプチドが、酵素的ラッカーゼ活性を有することが好ましい。
【００８３】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物及び方法において使用するのに適したラッカーゼ酵素は、完全長の又は成熟した親／基準配列に比べると切断されたものである。そのような切断されたペプチドは、完全長の又は成熟したポリペプチド配列のタンパク分解によって、又は、切断されたペプチドをコードするようにポリヌクレオチドを設計することによって生成され得る。典型的なポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９及び配列番号２０からなる群より選択されるアミノ酸配列と比較して、アミノ及び／又はカルボキシル末端において切断されたものである。切断部分は、少数（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個）のアミノ酸残基であってもよいし、又は、構造ドメイン又は機能ドメインの全体であってもよい。適切な切断されたペプチドは、上記参照アミノ酸配列の１つ又はそれ以上の対応部分に対して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは、少なくとも９９％、又は、それを超えるアミノ酸配列の同一性を有していてもよい。好ましくは、本明細書に記載されている分析及び手順を使用して決定されるように、そのようなポリペプチドは、酵素的ラッカーゼ活性を有する。
【００８４】
伝達物質
いくつかの実施形態において、酵素的酸化の系、組成物及び方法は、ラッカーゼ酵素の活性を増強する化学伝達物質剤の１つ又はそれ以上をさらに含む。伝達物質（エンハンサ又はアクセラレータとも呼ばれる）は、酸化酵素活性を示す酵素と、染料、色素（例えば藍）、発色基（例えば、色のついた汚れの中の、例えば、ポリフェノール、アントシアニン又はカロチノイド）、又は、他の第２基質若しくは電子供与体と間で有効に電子を輸送するための酸化還元伝達物質として作用する化学物質である。
【００８５】
いくつかの実施形態において、化学伝達物質は、例えば、ＰＣＴ出願ＷＯ９５／０１４２６及びＷＯ９６／１２８４５に記載されているように、フェノール化合物、例えば、シリンガ酸メチル、又は、関連化合物である。伝達物質は、例えば、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、ビオルル酸、Ｎ−ヒドロキシアセトアニリドのようなＮ−ヒドロキシ化合物、Ｎ−オキシム化合物又はＮ−オキシド化合物であってもよい。伝達物質は、例えば、フェノチアジン−１０−プロピオネートのようなフェノキサジン／フェノチアジン化合物でもあってもよい。伝達物質は、２，２’−アジノビス−（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸でもあり得る。他の化学伝達物質は、例えば、ＰＣＴ出願ＷＯ９５／０１４２６に開示されている化合物（この化合物は、ラッカーゼ活性を増大させることがわかっている）のように、当業界において周知である。伝達物質は、アセトシリンゴン、シリンガ酸メチル、シリンガ酸エチル、シリンガ酸プロピル、シリンガ酸ブチル、シリンガ酸ヘキシル又はシリンガ酸オクチルであってもよい。
【００８６】
いくつかの実施形態において、伝達物質は、例えば、４−（Ｎ−メチルカルボキシアミド）−２，６−ジメトキシフェノール、４−［Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）カルボキシアミド］−２，６−ジメトキシフェノール）、又は、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキシアミド）−２，６−ジメトキシフェノールのような、４−シアノ−２，６−ジメトキシフェノール、４−カルボキシアミド−２，６−ジメトキシフェノール、又は、これらのＮ置換誘導体である。
【００８７】
いくつかの実施形態において、伝達物質は、下記式：
0005422670.tif 000002
（ここで、Ａは、−Ｒ、−Ｄ、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｄ、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−Ｄ、−ＣＨ＝Ｎ−Ｄ、−Ｎ＝Ｎ−Ｄ、又は、−Ｎ＝ＣＨ−Ｄなどの基であり、Ｄは、−ＣＯ−Ｅ、−ＳＯ２−Ｅ、−ＣＮ、−ＮＸＹ、及び、−Ｎ＋ＸＹＺからなる群より選択され、Ｅは、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｒ、−ＯＲ、又は、−ＮＸＹであり、Ｘ、Ｙ及びＺは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ及び−Ｒから独立して選択され；Ｒは、Ｃ１−Ｃ１６アルキル、好ましくはＣ１−Ｃ８アルキルであり、該アルキルは、飽和又は不飽和のいずれであってもよく、分岐又は非分岐のいずれであってもよく、また、選択的にカルボキシ基、スルフォ基又はアミノ基で置換されていてもよく；Ｂ及びＣは、ＣｍＨ２ｍ＋１（１≦ｍ≦５）から独立して選択される）によって表される。
【００８８】
いくつかの実施形態において、上記式中のＡは、−ＣＮ又は−ＣＯ−Ｅであり、ここで、Ｅは、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｒ、−ＯＲ、又は、−ＮＸＹであり、Ｘ及びＹは、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ及び−Ｒから独立して選択され、Ｒは、Ｃ１−Ｃ１６アルキル、好ましくはＣ１−Ｃ８アルキルであり、該アルキルは、飽和又は不飽和のいずれであってもよく、分岐又は非分岐のいずれであってもよく、また、選択的にカルボキシ基、スルフォ基又はアミノ基で置換されていてもよく；Ｂ及びＣは、ＣｍＨ２ｍ＋１（１≦ｍ≦５）から独立して選択される。いくつかの実施形態において、伝達物質は、４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾニトリル（「シリンゴニトリル」又は「ＳＮ」とも呼ばれる）である。
【００８９】
上記式において、Ａは、示されているようにパラ位に位置するのに代えて、水酸基に対してメタに位置してもよいことに留意されたい。
【００９０】
繊維処理のような用途のために、伝達物質は、デニム１グラム当たり約０．００５μモル乃至約１０００μモル、デニム１グラム当たり約０．０５μモル乃至約５００μモル、デニム１グラム当たり約０．１μモル乃至約１００μモル、デニム１グラム当たり約１μモル乃至約５０μモル、又は、デニム１グラム当たり約２μモル乃至約２０μモルの濃度で存在していてもよい。
【００９１】
伝達物質は、ＰＣＴ出願ＷＯ９７／１１２１７及びＷＯ９６／１２８４５並びに米国特許第５，７５２，９８０号に開示されているような当業者に知られている方法によって調製することができる。他の適切な伝達物質は、例えば、米国特許公開公報第２００８／０１８９８７１号に記載されている。
【００９２】
使用の方法
本発明の系及び組成物は、酵素的ラッカーゼ活性が有用であるか又は望ましい用途において使用することができる。これらの中でも、用途／方法は、基材の色変性であり、その基材は、繊維に関連するものであってもよい。いくつかの実施形態において、そのような方法は、例えば約４０℃以下のような低温において適切な基質と共にラッカーゼ酵素をインキュベートするステップを含む。いくつかの実施形態において、温度は、約２０℃と約４０℃との間である。いくつかの実施形態において、温度は、約２０℃と約３５℃との間である。いくつかの実施形態において、温度は、約２０℃、約２５℃、約３０℃又は約３５℃である。いくつかの実施形態において、温度は、例えば、約２０℃乃至約２３℃のような、水道水の外界温度である。温度は、狭い範囲内に維持されてもよいし、又は、系及び組成物の性能に著しく影響することなく変動するようにしてもよい。
【００９３】
この方法は、本明細書に記載されている１つ又はそれ以上のラッカーゼの使用を意図する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、Ｃ．ユニカラーのようなセレナ(Cerrena)種に由来する。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、本明細書に記載されているＣ．ユニカラーラッカーゼ酵素のいずれかのアミノ酸配列、又は、本明細書に記載されているＣ．ユニカラーラッカーゼ酵素のいずれかに対して、少なくとも約３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は、９９．５％もの同一性を有し、かつ、ラッカーゼ酵素活性を有するアミノ酸配列を含むか、それらのアミノ酸配列からなるか、又は、それらのアミノ酸配列から本質的になる。
【００９４】
いくつかの実施形態において、例えば、この系及び方法は、例えば、線維、毛糸、生地、又は、完成品の衣服を含む繊維製品の色を変化させるための方法のような、繊維処理方法において使用される。一般に、この方法は、例えば、色の変化、着色の変化、脱色、漂白、退色、及び／又は、再沈着／裏面染色の低減から選択される少なくとも１つ（すなわち、１つ又はそれ以上）の測定可能な効果をもたらすのに充分な時間及び条件下において、繊維をラッカーゼ及び伝達物質に接触させるステップを含む。いくつかの実施形態において、この方法は、染色されたデニム製品に「ヴィンテージ外観」を与えるために使用される。藍染めされたデニムの場合において、ヴィンテージ外観は、新たに染めたデニムより弱い青色／紫色の色調、及び、新たに染めたデニムより抑制された灰色の外観を有する。硫黄染めされたデニムの場合において、ヴィンテージ外観は、次亜塩素酸塩処理によって生じ得る茶色の色合いを伴わずに、色が退色している。従って、ラッカーゼを用いて得られる色変性の態様を「漂白」作用として特徴付けることができるが、この言葉は、ラッカーゼの使用によって可能な色変性を完全に表すものではない。
【００９５】
色変性のために提供される繊維は、セルロース繊維であってもよいし、又は、セルロース繊維と合成繊維との混合物であってもよい。いくつかの実施形態において、繊維は、藍及び／又は硫黄をベースとした染料で染色されたデニムである。特定の実施形態において、繊維は、藍で染色され、また、ラッカーゼ酵素及び伝達物質は、藍をイサチンに酸化させるために使用される。デニムを、ラッカーゼ酵素による色変性の前に、選択的に糊抜き及び／又はストーンウォッシュすることができる。
【００９６】
一般に、繊維処理方法において同じ程度の摩耗を与えると仮定すると、デニムの強度は、より低い温度と比較して、より高温度においてさらに低下する。本発明の方法は、従来の方法と比較してより低い温度において実施可能であるので、従来の方法と比較して、処理中の繊維に対するダメージを軽減するという長所を有する。さらに、ラッカーゼ酵素は、一般に、処理中にセルロース織物繊維との反応によってその強度を低下させることがない。従って、いくつかの実施形態において、本発明の方法は、従来の方法と比較してデニムの物理的強度に影響せず、また、従来の方法と比較して物理的強度の低下が小さい。デニムが伸張デニム（例えばエラステーン、スパンデックス）で構成されている場合、本発明の方法は、従来の方法と比較して生地の伸張性能に影響せず、また、伸張性能の低下を小さくする。
【００９７】
いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、少なくとも１つの他の酵素と組み合わされて繊維処理方法において使用される。そのような処理を同時に行う場合は、本明細書に記載されているような低温において酵素処理を実行することができる。その処理が連続的である場合には、本明細書に記載されているような低温においてラッカーゼを使用することができ、また、選択的に低温において他の酵素も使用することができる。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、セルラーゼ酵素と組み合わされて同時に又は連続して使用される。一実施形態においては、繊維を、ラッカーゼ及びセルラーゼと同時に接触させる。他の一実施形態においては、繊維を、ラッカーゼ及びセルラーゼと連続的に接触させる。一実施形態において、繊維を、まず、「ストーンウォッシュ」を達成するためにセルラーゼに接触させ、次に、色変性に影響を与えるためにラッカーゼに接触させる。他の一実施形態においては、繊維を、まずラッカーゼに、その後にセルラーゼに接触させる。セルラーゼ処理とラッカーゼ処理とが連続する場合には、２つの処理ステップを同じ槽内において、かつ、２つの処理の間に槽を排水することなく実行することができる。そのような方法を「単一槽」方法と呼ぶ。
【００９８】
適切なセルラーゼは、例えば、フミコラ(Humicola)、サーモミセス(Thermomyces)、バチルス(Bacillus)、トリコデルマ(Trichoderma)、フザリウム(Fusarium)、ミセリオフトラ(Myceliophthora)、ファネロカエテ(Phanerochaete)、イルペックス(Irpex)、スキタリジウム(Scytalidium)、シゾフィラム(Schizophyllum)、ペニシリウム(Penicillium)、アスペルギルス(Aspergillus)、又は、ジオトリクム(Geotricum)の種のような、セルロース分解酵素を生産できることが知られた微生物に由来するものであってもよい。セルロース分解酵素の生産に有能な既知の種は、フミコラインソレンズ(Humicola insolens)、フザリウムオキシスポルム(Fusarium oxysporum)、又は、トリコデルマリーゼイ(Trichoderma reesei)を含む。適切なセルラーゼの非限定的な例は、米国特許第４，４３５，３０７号；欧州特許出願第０４９５２５７号；ＰＣＴ特許出願番号ＷＯ９１／１７２４４；及び、欧州特許出願番号ＥＰ−Ａ２−２７１００４に開示されており、これらのすべてはここで言及することによって組み込まれている。
【００９９】
いくつかの実施形態において、セルラーゼを使用した酵素的な「ストーンウォッシュ」、アリルエステラーゼを使用した漂白、及び、ラッカーゼを使用した色修飾は、包括的な酵素繊維処理系を提供するために、組み合わされてもよい。そのような系は、繊維処理装置によって、従来の繊維処理化学物質を使用する必要性を伴わずに、様々な仕上げ加工を有する繊維を生産することを可能にする。
【０１００】
ラッカーゼは、処理の態様、処理、仕上げ、研磨、又は、線維の生産などを一般に含む繊維製造の他の態様において使用することもできる。染色されたデニムの色を変性することに加えて、染色された廃棄物（藍染めされた廃棄物を含む）の脱色において、生地染色において、汚れを繊維漂白において、線維変性において；改良された線維又は生地の特性などの実現において、ラッカーゼを使用することもできる。
【０１０１】
さらなる実施形態においては、本発明の系及び組成物を、羊毛の色を変化させる方法において使用することもできる。例えば、欧州特許番号ＥＰ０５０４００５は、羊毛を染色するためにラッカーゼを使用することができることを開示する。ラッカーゼは、皮革工業においても使用することができる。例えば、ラッカーゼは、以下に限定されないが、皮の脱毛、石灰処理、酵解、及び／又は、なめし革法を含む動物皮の処理において使用することができる。
【０１０２】
本発明の系及び組成物は、パルプ又は紙製作品の色を変性する方法において使用することもできる。そのような方法は、色変性を必要とするパルプ又は紙の製品を、本明細書に記載されているようなラッカーゼに、色変性が生じるのに充分な時間及び条件下において接触させるステップを含む。特定の実施形態において、色変性が漂白である。
【０１０３】
本発明の系及び組成物は、毛髪の色を変性するための方法において使用することもできる。ラッカーゼは、毛髪染色剤に有用であると報告されている（例えば、ＷＯ９５／３３８３６、ＷＯ９５／３３８３７参照）。そのような方法は、変性しようとする色を有する毛髪を、毛髪の色を変化させるのに適した時間及び条件下において、ラッカーゼに接触させるステップを含む。
【０１０４】
本発明の系及び組成物を廃水処理の分野において使用することもできる。例えば、ラッカーゼは、有色化合物の脱色において、フェノール成分の解毒において、抗微生物活性のために（例えば、水リサイクルにおいて）、バイオレメディエーションなどにおいて使用可能である。
【０１０５】
本発明の系及び組成物は、高分子量の凝集体の解重合、廃紙の脱インキ、芳香族化合物の重合、ラジカルによって媒介される重合及び架橋反応（例えば、ペイント、コーティング、生体材料）、染料の活性化、並びに、有機化合物の連結においても使用可能である。
【０１０６】
本発明の系及び組成物は、洗浄組成物若しくはその成分として、又は、洗浄方法における使用のための洗剤としても使用可能である。例えば、ラッカーゼは、衣類又は生地のような洗濯物の洗浄、処理又は手入れにおいて、家庭用の硬表面の洗浄において；食器洗機用途を含む皿の手入れにおいて；並びに、石鹸の固体及び液体、並びに／又は、合成界面活性剤の棒及び液体として使用可能である。本明細書に示されている酵素は、例えば、汚れの除去／脱色において、及び／又は、匂いの除去、及び／又は、浄化などに有用であり得る。ラッカーゼ伝達物質は、ラッカーゼ酵素と別に又はラッカーゼ酵素と共に、浄化剤及び抗生剤（例えば、木材保護、洗剤）として使用することができる。
【０１０７】
ラッカーゼは、パーソナルケア分野の他の態様において使用することができる。例えば、ラッカーゼは、香水のような人間のための身体用製品、並びに、人間のためのスキンケア、毛髪ケア、口腔ケア、身体の洗浄及び防臭及び／又は制汗剤のための製品の調製において使用することができる。ラッカーゼは、例えば、毛髪の染色及び／又は脱色、爪の染色及び／又は漂白において；皮膚の染色及び／又は漂白；表面改質（例えばカップリング試薬として）；抗生剤として；臭気除去において；歯の白色化など；に有用であり得る。ラッカーゼは、コンタクトレンズ洗浄の分野において使用可能である。ラッカーゼは、例えば、コンタクトレンズの洗浄、保管、殺菌及び／又は保存において使用可能である。
【０１０８】
ラッカーゼは、バイオ材料の分野において使用可能である。例えば、ラッカーゼは、様々な有機反応のための生体触媒として；及び／又は、生体高分子に関連して；パッケージングに関連して；接着剤に関連して；表面改質（活性化及びカップリング剤）において；第一級アルコールの生産において；バイオセンサー及び／又は有機合成に関連して；使用することができる。ラッカーゼは、酸素を電子受容体として使用して、種々の化学構造を有する多様な有色化合物を酸化することができる。
【０１０９】
本発明の系及び組成物は、リグノセルロース含有材料からのリグニンの除去（例えば、パルプの脱リグニン）、リグノセルロース含有材料の漂白（すなわち、再生紙の酵素による脱インキ）、及び／又は、紙若しくはセルロースの製造から発生する廃水の処理に使用することもできる。このようなプロセスは、フェノール芳香族酸化還元化合物及び／又は非フェノール芳香族酸化還元化合物に加えて、非芳香族酸化還元剤を添加又は計量供給することに組み合わせて、ラッカーゼ酵素を使用することができ、リグニンのフェノール単位及び非フェノール単位は、これらのフェノール芳香族化合物及び／又は非フェノール芳香族化合物の作用によって直接的に酸化され、又は、リグニンは、これらの化合物の酸化作用によって生産された他のフェノール類及び／又は非フェノール類によって酸化される。
【０１１０】
ラッカーゼは、パルプ及び紙に関係する他の態様において使用することができる。例えば、ラッカーゼは、木材、竹及び穀物の稲わらのような原料からの紙パルプ及び毛羽パルプの製造；印刷及び筆記のための紙及びボードの製造、パッキング、衛生用途及び他の技術的用途；紙及びボードを作成する目的のためのアセテート繊維のリサイクル；パルプ若しくは紙の工場、並びに、紙、パルプ若しくは毛羽の製造に特に専念する他の設備によって生じて処理される廃棄物の処理において使用することができる。ラッカーゼは、例えば、木材処理において；パルプ漂白において；木材線維変性において；ＭＤＦ製作のためのバイオ接着剤（リグニン活性剤）において；紙特性を改良するために；インク除去において；紙の染色において；接着剤（例えば、削片板又は繊維板のためのリグニンをベースとした接着剤）などにおいて；有用であり得る。
【０１１１】
ラッカーゼは、飼料の分野において使用することができる。例えば、ラッカーゼは、ニワトリ、ウシ、ブタ、魚及びペットのようなあらゆる種類の動物用飼料の栄養的価値を高めるために飼料添加物として単独で又は飼料添加物の一部として；及び／又は、飼料原料として適切な材料／製品を生産するために植物性材料及び食品工業副産物を加工するための加工助剤として、使用することができる。
【０１１２】
ラッカーゼは、デンプン処理の分野において使用することができる。例えば、ラッカーゼは、デンプン及び／又は穀類を含む基質を、グルコース（デキストロース）シロップ、フルクトースシロップ若しくは他のシロップ、アルコール（飲料又は燃料）又は糖に加工する際に使用することができる。そのようなデンプン処理は、基質の液化、糖化、異性化及び脱分岐のような処理ステップを含んでいてもよい。
【０１１３】
ラッカーゼは、食品の分野において使用することができる。ラッカーゼは、例えば、その調製、処理において、又は、人間消費のための、黄色脂肪、お茶をベースとした飲料、調理用製品、パン及び冷凍食品のような食品中の有効成分として使用することができる。ラッカーゼは、例えば、パン改良剤として、食品保存において、脱酸素剤などとして使用することができる。ラッカーゼは、種々の食品（例えば、肉）又は飼料の微生物的負荷の軽減又は除去のために使用することができる。
【０１１４】
本明細書に記載されているラッカーゼのための方法又は使用のあらゆるものは、低温、例えば、約４０℃未満の温度、例えば、約４０℃未満、約３７℃未満、約３５℃未満、約３２℃未満、約３０℃未満、約２７℃未満、約２５℃未満、約２２℃未満において実施することができる。典型的な温度範囲は、約２０℃以上約４０℃未満である。典型的な温度は、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃又は３５℃である。いくつかの実施形態において、温度は、室温又は水道水の外界温度、例えば、約２０℃乃至約２３℃である。
【０１１５】
本明細書に記載されているラッカーゼのための方法又は使用のあらゆるものは、本明細書に記載されているラッカーゼ酵素のいずれか、例えば、セレナユニカラー(Cerrena unicolor)に由来するラッカーゼを使用して実施することができる。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、約０．００５ｍｇ／リットル乃至約５０００ｍｇ／リットル、約０．０５ｍｇ／リットル乃至約５００ｍｇ／リットル、約０．１ｍｇ／リットル乃至約１００ｍｇ／リットル、又は、約０．５ｍｇ／リットル乃至約１０ｍｇ／リットルの濃度で使用される。いくつかのデニム処理実施形態において、ラッカーゼは、デニム１ｋｇ当たり約０．００５ｍｇ乃至約５０００ｍｇ、デニム１ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ乃至約５００ｍｇ、デニム１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ乃至約１００ｍｇ、又は、デニム１ｋｇ当たり約０．５ｍｇ乃至約１０ｍｇの濃度で使用される。いくつかの実施形態において、ラッカーゼは、約５乃至約７、約５．５乃至約６．５、約５乃至約６、又は、約６のｐＨにおいて使用される。典型的なｐＨは、おおよそ、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９及び７．０である。
【０１１６】
使用準備済の組成物及びキット
上述したように、本発明の組成物は、１つ又はそれ以上のラッカーゼを含み、さらに、選択的に１つ又はそれ以上の伝達物質を含む。いくつかの実施形態において、この組成物は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、又は、これらの変異体若しくは断片から選択されるアミノ酸配列を含む、該アミノ酸配列からなる、又は、該アミノ酸配列から本質的になるポリペプチドを含む。特定の実施形態において、この組成物は、配列番号１９及び２０又はこれらの変異体若しくは断片から選択されるアミノ酸配列を含む、該アミノ酸配列からなる、又は、該アミノ酸配列から本質的になるポリペプチドを含む。好ましくは、そのようなポリペプチドが酵素のラッカーゼ活性を有する。その活性は、本明細書に記載されている分析及び手順を使用して測定することができる。
【０１１７】
ラッカーゼ酵素及び伝達物質を含む、ラッカーゼ酵素及び伝達物質からなる、又は、ラッカーゼ酵素及び伝達物質から本質的になる「使用準備済」（ＲＴＵ）組成物の形態でそのような組成物を提供することもできる。いくつかの実施形態において、伝達物質は、アセトシリンゴン、シリングアルデヒド、シリングアミド、メチルシリングアミド、２−ヒドロキシエチルシリングアミド、シリンガ酸メチル、シリンゴニトリル、ジメチルシリンガアミド、及び、シリンガ酸から選択される。一実施形態において、伝達物質は、シリンゴニトリル（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾニトリル）である。このＲＴＵ組成物は、この組成物が溶液中に存在する場合には、ｐＨ緩衝を提供するための１つ又はそれ以上の化合物をさらに含んでいてもよい。例えば、いくつかの実施形態において、この組成物は、緩衝系としてモノナトリウムリン酸塩及びアジピン酸を含む。ＲＴＵ組成物は、保存及び輸送の容易さのために、固体の顆粒形態であってもよい。その後、この組成物は、例えば、説明されているような使用のための水溶液を提供するために水で希釈される。ＲＴＵ組成物は、分散剤、界面活性剤、遮断薬、ポリマー、及び、保存剤のような任意の数のさらなる試薬を含んでいてもよい。
【０１１８】
以下の実施例は、系、組成物及び方法を説明するために提供されるものであり、どのようにも限定的なものとして解釈してはならない。他の態様及び実施形態は、明細書を参照した当業者に明らかになるであろう。
【０１１９】
実施例
実施例において以下の酵素命名法を使用する。
0005422670.tif 000003
実施例１−ストーンウォッシュされたデニムのラッカーゼによる色変性に対する温度の影響
【０１２０】
酵素
この試験においては、セレナユニカラーに由来する顆粒状のラッカーゼＤ酵素（３８，０００Ｕ／ｇ）を使用した。１ラッカーゼ単位は、ラッカーゼ酵素がＡＢＴＳ（２，２’−アジノビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−スルフォナート））をその対応する安定なカチオンラジカル、ＡＢＴＳ＋に酸化する能力に基づいた分析の条件下において、１ｎｍｏｌのＡＢＴＳ基質を酸化するラッカーゼ活性の量として定義される。ラジカルの蓄積は、ＡＢＴＳを濃緑色にし、また、４２０ｎｍにおける吸収度を増大させる。色生成は、ラッカーゼ活性に比例しており、ラッカーゼ基準に対してモニターする。
伝達物質
【０１２１】
Punjab Chemicals & Crop Protection Limited(ムンバイ、インド)から４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンゾニトリル（シリンゴニトリル、ＳＮ）を購入した。
手順
【０１２２】
約３ｋｇ（合計）の重さの１２本のデニムの脚を、Ｕｎｉｍａｃ  ＵＦ５０洗浄機内で以下の条件において糊抜きした。
・０．５ｇ／ｌ（１５ｇ）のOPTISIZE（登録商標）１６０アミラーゼ（１５ｇ）(Genencor)及び０．５ｇ／ｌの非イオンの界面活性剤［例えば、Rucogen BFA(Rudolf Chemie)又はUltravon RW(Huntsman)］を用いた１０：１の液比における５０℃での１５分間の糊抜き
・３０：１の液比における５分間にわたる２回の冷水すすぎ
【０１２３】
糊抜きの後に、このデニムを、以下の条件下においてＵｎｉｍａｃ  ＵＦ５０洗浄機内でストーンウォッシュした。
・１０：１の液比における５分間の冷水すすぎ
・１ｋｇの軽石、ｐＨ４．５（１ｇ／ｌのトリクエン酸ナトリウム二水和物及び１ｇ／ｌのクエン酸一水和物）、及び、１．２ｇ／ｌのINDIAGE（登録商標）２ＸＬセルラーゼ(Genencor)を用いた１０：１の液比における５５℃での６０分間のストーンウォッシュ
・３０：１の液比における５分間にわたる２回の冷水すすぎ
【０１２４】
ストーンウォッシュ後に、以下のプロセスに従って、Ｕｎｉｍａｃ  ＵＦ５０洗浄機内においてラッカーゼ処理を実施した。
（ｉ）ｐＨ６のＣ．ユニカラーのラッカーゼＤ及びシリンゴニトリル（０．７ｇ／ｌのモノナトリウムリン酸塩及び０．１７ｇ／ｌのアジピン酸）、並びに、４０℃、３０℃又は２３℃の温度
（ｉｉ）ｐＨ４．８のNOVOPRIME(登録商標)Base268及びNOVOPRIME(登録商標)F258（０．２９ｇ／ｌのモノナトリウムリン酸塩及び０．５６ｇ／ｌのアジピン酸）、並びに、４０℃又は３０℃の温度
・３０：１の液比における５分間の２回の冷水すすぎ
デニムの脚の評価
【０１２５】
Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ試験色空間において、Minolta Chromameter CR 310を用いたラッカーゼ処理の後にデニムの脚の「漂白」として報告された色変性の量を評価した。ＣＩＥＬＵＶ色空間としても知られているＣＩＥ色空間系は、１９７６年に国際照明委員会（ＣＩＥ）に採用されたものであり、以下のように算出される値Ｌ＊、ｕ＊及びｖ＊を含む。
0005422670.tif 000004
ここで、
Ｙ：三刺激値Ｙ（三刺激値Ｙ１０を使用することもできる）
ｕ’、ｖ’：ＣＩＥ１９７６ＵＣＳダイアグラムから得た色度座標
Ｙ０、ｕ’０、ｖ’０：完全反射拡散器の三刺激値Ｙ（又はＹ１０）及び色度座標ｕ’、ｖ’
【０１２６】
それぞれのデニムの脚について８回の測定値を得て、１２本の脚（合計９６個の測定値）の結果を平均した。その結果を表１及び表２並びに図１に示す。
表１
0005422670.tif 000005
表２
0005422670.tif 000006
【０１２７】
この結果は、ストーンウォッシュされたデニムの色変化に影響を与えることにおけるＣ．ユニカラーのラッカーゼ及びシリンゴニトリルの有効性を示している。
実施例２−ラッカーゼの効果：ストーンウォッシュされたデニムの色変性に対する伝達物質比率
手順
【０１２８】
実施例１に記載されているように、約３ｋｇ（合計）の重さの１２本のデニムの脚を糊抜き及びストーンウォッシュした。ストーンウォッシュの後に、以下のプロセスに従ってＵｎｉｍａｃ  ＵＦ５０洗浄機内でラッカーゼ処理を実施した。
・Ｃ．ユニカラーのラッカーゼＤ及びシリンゴニトリル、１０：１の液比において３０分間、４０℃においてｐＨ６（０．７ｇ／ｌのモノナトリウムリン酸塩及び０．１７ｇ／ｌのアジピン酸）
・３０：１の液比において５分間にわたる２回の冷水すすぎ
デニムの脚の評価
【０１２９】
実施例１に記載されているようにデニムの脚の色変性を評価した。その結果を表３及び図２に示す。
表３
0005422670.tif 000007
【０１３０】
この結果は、伝達物質に対するラッカーゼ酵素の比率を操作することによって、色変性を変化させることができることを示している。
実施例３−ストーンウォッシュされたデニムに対する、ラッカーゼと伝達物質とを含む組成物の色変性性能に対する温度の影響
【０１３１】
低温におけるラッカーゼによる色変性性能を調べるために、表４に示されているように「使用準備済」（ＲＴＵ）組成物を調製した。モノナトリウムリン酸塩及びアジピン酸は、以下に記載されているような使用の用途において、約ｐＨ６の緩衝機能を提供する。
表４
0005422670.tif 000008
手順
【０１３２】
実施例１に記載されているように、約３ｋｇ（合計）の重さの１２本のデニムの脚を糊抜き及びストーンウォッシュした。ストーンウォッシュの後に、以下のプロセスに従って、Ｕｎｉｍａｃ  ＵＦ５０洗浄機内でラッカーゼ処理を実施した。
・３０分間１０：１の液比において３０℃において又は流入スチームなし（すなわち、２１℃乃至２２℃の温度）で、表５及び表６に記載されている濃度及び温度において、上記ＲＴＵラッカーゼ組成物又はDENILITE(登録商標)IIＳ(Novozymes)を用いる
・３０：１の液比において５分間の２回の冷水すすぎ
デニムの脚の評価
【０１３３】
実施例１に記載されているようにデニムの脚の色変性を評価した。この結果を表５及び表６並びに図３及び図４に示す。
表５
0005422670.tif 000009
表６
0005422670.tif 000010
【０１３４】
これらの結果は、Ｃ．ユニカラーラッカーゼＲＴＵ組成物は、従来の市販のラッカーゼ組成物と比較して、低温においてより優れた色変性を提供することを示している。
実施例４−３０℃においてワンステップストーンウォッシュ及び色変性
【０１３５】
実施例１に記載されているように約３ｋｇ（合計）の重さの１２本のデニムの脚をＵｎｉｍａｃ  ＵＦ５０洗浄機内で糊抜きした。
【０１３６】
糊抜きの後に、このデニムを、以下の条件下においてＵｎｉｍａｃ  ＵＦ５０洗浄機内でストーンウォッシュ及び漂白した。
・３０分間、３０℃で、１０：１の液比において、ｐＨ６において、（ｉ）物に対して０．４重量％のINDIAGE(登録商標)Super GXセルラーゼ(Genencor)＋実施例３（すなわち、「ストーンウォッシュ＋漂白の１ステップ」）に記載されている、物に対して３重量％のＲＴＵラッカーゼ組成物、又は、（ｉｉ）INDIAGE（登録商標）Super GXセルラーゼのみ（すなわち、「ストーンウォッシュ」のみ）
・３０：１の液比において５分間にわたる２回の冷水すすぎ。軽石を使用しなかった。これらの結果を表７及び図５に示す。
表７
0005422670.tif 000011
【０１３７】
これらの結果は、ラッカーゼとセルラーゼとを同時に使用して色変性を達成することができることを示している。
実施例５−３０℃における２ステップのストーンウォッシュ及び色変性
【０１３８】
実施例１に記載されているように、Ｕｎｉｍａｃ  ＵＦ５０洗浄機内で約３ｋｇ（合計）の重さの１２本のデニムの脚を糊抜きした。
【０１３９】
糊抜きの後に、デニムは、以下の条件下において、Ｕｎｉｍａｃ  ＵＦ５０洗浄機内でストーンウォッシュした。
・３０分間、１０：１の液比において、３０℃で、ｐＨ５．５において、物に対して０．４重量％のINDIAGE(登録商標)Super GXセルラーゼ(Genencor)
【０１４０】
ストーンウォッシュの後に、このデニムを、以下の条件下においてＵｎｉｍａｃ  ＵＦ５０洗浄機内で漂白した。
・３０分間、１０：１の液比において、３０℃で、ｐＨ６において、物に対して３重量％の、実施例３に記載されているＲＴＵラッカーゼ組成物
・３０：１の液比において５分間にわたる２回の冷水すすぎ。軽石を使用しなかった。
【０１４１】
これらの結果を表８及び図５に示す。ストーンウォッシュと色変性との２ステップによる結果を、実施例４に記載されているストーンウォッシュのみの結果と比較した。
表８
0005422670.tif 000012
【０１４２】
これらの結果は、ラッカーゼ処理による色変性がストーンウォッシュの後に達成可能であることを示している。
実施例６−ストーンウォッシュを用いない３０℃におけるデニムのラッカーゼによる色変性
【０１４３】
実施例１に記載されているように、Ｕｎｉｍａｃ  ＵＦ５０洗浄機内で約３ｋｇ（合計）の重さの１２本のデニムの脚を糊抜きした。
【０１４４】
糊抜きの後に、そのデニムを、以下の条件下においてＵｎｉｍａｃ  ＵＦ５０洗浄機内で漂白した。
・３０分間、１０：１の液比において、３０℃で、ｐＨ６において、物に対して３重量％の、実施例３に記載のＲＴＵラッカーゼ組成物
・３０：１の液比において５分間にわたる２回の冷水すすぎ。軽石を使用しなかった。
【０１４５】
これらの結果を表９及び図５に示す。実施例４に記載されているように、色変性の結果を、ストーンウォッシュのみの結果と比較した。
表９
0005422670.tif 000013
【０１４６】
これらの結果は、ストーンウォッシュを伴わないラッカーゼ処理によって生じる色変性の程度がストーンウォッシュのみより高いことを示している。
実施例７−軽石を含まない単一槽中のプロセスにおけるセルラーゼ及びラッカーゼによるストーンウォッシュ及び色変性
【０１４７】
この実施例は、単一槽のプロセスにおいてラッカーゼ及びセルラーゼを使用して有効なストーンウォッシュ及び色変性が得られることを示している。
酵素
【０１４８】
PRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT 100ラッカーゼ（バッチＮｏ．７８０９１３６１６、６，２９２ＧＬａｃＵ／ｇ）。
手順
【０１４９】
出発物質は、重さ約３ｋｇの糊抜きしたデニム（バラスト＋評価用の２脚）であった。
【０１５０】
このデニムを、以下の条件下において、Ｒｅｎｚａｃｃｉ  ＬＸ  ２２洗浄機内でストーンウォッシュした。
・４０分間、５０℃、１０：１の液比、ｐＨ６．５、物に対して０．４重量％のINDIAGE(登録商標)Neutra Ｌセルラーゼ（バッチＮｏ．４０１０５３５８００１、活性５１９７ＮＰＣＮＵ／ｇ）(Genencor)。
・ストーンウォッシュした後に、１本の脚を取り出して、評価のために乾燥した。
・ストーンウォッシュの後に、槽を排出（すなわち、排水）することなく、以下の条件下において第２のデニムの脚を色変性に供した。
・４０分間、４０℃、１０：１の液比、及び、物に対して１％重量の使用準備済み（ＲＴＵ）のPRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT 100。
・３分間にわたる２回の冷水すすぎ。
・デニムを工業用ドライヤーで乾燥した。
デニムの脚の評価
【０１５１】
ラッカーゼ処理の後及びセルラーゼ処理の後に、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ試験色空間においてMinolta Chromameter CR 310を用いて、デニムの脚に対する色変性及びストーンウォッシュを評価した。各脚について６回の測定値を得て、結果を平均化した。
【０１５２】
これらの結果を表１０にまとめる。単一槽中におけるセルラーゼとラッカーゼとの連続的な（すなわち、２ステップの）添加によって得られた色変性の程度は、実施例４のようにセルラーゼとラッカーゼとを同時に添加することによって得られた程度より大きかった。
表１０
0005422670.tif 000014
【０１５３】
これらの結果は、単一浴槽におけるセルラーゼとラッカーゼとの連続的な（すなわち、２ステップ）の添加によって得られた色変性の程度が、実施例４のようにセルラーゼとラッカーゼとを同時に添加することによって得られた程度より大きいことを示している。
実施例８−ラッカーゼ及び軽石を用いた色変性
【０１５４】
この実施例は、単一槽プロセスにおいて軽石とラッカーゼ伝達物質系とを使用して、有効なストーンウォッシュ及び色変性を得ることができることを示している。
酵素
【０１５５】
PRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT 100ラッカーゼ（バッチ７８０９１３６１６０番、６，２９２のＧＬａｃＵ／ｇ）。
手順
【０１５６】
実施例１に記載されているように、重さ約３ｋｇ（合計）の１２本のデニムの脚を、Ｕｎｉｍａｃ  ＵＦ５０洗浄機内で糊抜きした。
【０１５７】
糊抜きの後に、このデニムを、以下の条件下においてＵｎｉｍａｃ  ＵＦ５０洗浄機内でストーンウォッシュした。
・３０分間、３０℃、１０：１の液比、３ｋｇの軽石、３％のPRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT100(Genencor)を用いた。水中で石のみを用いてブランク／コントロールを実施した。
・３０：１の液比において５分間にわたる２回の冷水すすぎ。
デニムの脚の評価
【０１５８】
先のように、ラッカーゼ処理の後及びストーンウォッシュ処理の後に、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ試験色空間においてMinolta Chromameter CR 310を用いて、デニムの脚に対する色変性を評価した。各脚の外側で得た８回の測定値の平均を漂白レベルとして報告した。各脚の内側で得た４回の測定値の平均を裏面染色レベルとして報告した。
【０１５９】
これらの結果を表１１及び表１２にまとめる。
表１１
0005422670.tif 000015
表１２
0005422670.tif 000016
【０１６０】
これらの結果は、軽石が存在していても、ラッカーゼ処理が、色変性を提供し、裏面染色の低減／除去をさらに示すことを示している。
実施例９−硫黄染色された衣服のストーンウォッシュ及び色変性
【０１６１】
試験用の衣服は、硫黄のカーキーブラウン染料で染色された１００％綿綾織物生地でできていた。以下の条件下において、２５ｋｇのベリーウォッシャー（３６ｒｐｍ）において約７ｋｇ（合計）の重さの２１着の衣服をストーンウォッシュした。
・４５分間、５５℃、１８：１の液比、ｐＨ４．５、１ｇ／ｌのINDIAGE(登録商標)２ＸＬ
・１２：１の液比で３分間の１回の冷水すすぎ。軽石を使用しなかった。
・洗浄した後に、評価のために衣服を乾燥した。
・以下の条件下において上記のようにストーンウォッシュした３着の衣服（合計約１ｋｇ）をPRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT 100で処理した。
・１５分間、３０分間又は４５分間、５０：１の液比、４０℃、及び、１ｇ／ｌ、２ｇ／ｌ又は３ｇ／ｌのPRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT 100。ブランク／コントロールは、水のみで１５分間、３０分間又は４５分間にわたって洗浄した衣服を用いて実施した。
・３分間の１回の冷水すすぎ。
・デニムを工業用ドライヤーで乾燥させた。
デニムの脚の評価
【０１６２】
ラッカーゼ処理後及びストーンウォッシュ処理後に、上述されているように、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ試験空間においてMinolta Chromameter CR 310を用いて、硫黄染色された衣服の色変性及びストーンウォッシュを評価した。各衣服について１０回の測定値を得て、結果を平均化した。
【０１６３】
これらの結果を表１３にまとめる。
表１３
0005422670.tif 000017
【０１６４】
これらの結果は、色空間のａ値及びｂ値が、未処理及びブランクの生地と比較して著しく変化することを示している。衣服の色合いに対する変性は目視によって確認される。
実施例１０−ストーンウォッシュを伴わない硫黄染色された衣服の色変性
【０１６５】
硫黄のカーキーブラウン染料で染色された約１ｋｇ（合計）の重さの１００％綿綾織物生地でできた３着の衣服を、以下の条件下において、５ｋｇのビリーウォッシャーにおいて（３６ｒｐｍ）処理した。
・１５分間、３０分間又は４５分間、４０：１の液比、４０℃、及び、１ｇ／ｌ、２ｇ／ｌ又は３ｇ／ｌのPRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT 100。ブランク／コントロールは、水のみで１５分間、３０分間又は４５分間にわたって洗浄した衣服を用いて実施した。
・３分間の１回の冷水すすぎ。
・工業用ドライヤーでデニムを乾燥させた。
デニムの脚の評価
【０１６６】
ラッカーゼ処理後及びストーンウォッシュ処理後に、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ試験色空間においてMinolta Chromameter CR 310を用いて、硫黄染色された衣服に対する色変性及びストーンウォッシュを評価した。各衣服について、１０回の測定値を得て、結果を平均化した。
【０１６７】
これらの結果を表１４にまとめる。
表１４
0005422670.tif 000018
【０１６８】
これらの結果は、色空間のａ値及びｂ値が、未処理及びブランクの生地と比較して著しく変化することを示している。衣服の色合いに対する変性は目視によって確認される。
実施例１１−界面活性剤及び軽石の存在下における単一槽プロセス中のセルラーゼ及びラッカーゼによるストーンウォッシュ及び漂白の性能
酵素
【０１６９】
PRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT 100ラッカーゼ（バッチＮｏ．７８０９１３６１６、６，２９２ＧＬａｃＵ／ｇ）
手順
【０１７０】
純粋な藍で染色された重さ１０ｋｇ（合計）の１２着のデニム衣服を、以下の条件下でTupesaフロントローディングマシン（３６ｒｐｍ）において糊抜きした。
・１０分間、４０℃、１０：１の液比、ｐＨ７、並びに、０．５ｇ／ｌの潤滑剤、０．２ｇ／ｌの分散剤（非イオン性界面活性剤）、及び、０．２ｇ／ｌのポリエステル遮断薬（非イオン性の親水性コポリマー）。
【０１７１】
糊抜きの後に、そのデニムを、以下の条件下でストーンウォッシュした。
・３０分間、４７℃、５：１の液比、ｐＨ６、７ｋｇの軽石、物に対して４重量％のINDIAGE(登録商標)Super GXセルラーゼ(Genencor)を用いる。評価のために１着の衣服を取り出した。
・ストーンウォッシュの後に、槽を排水（下垂）することなく、以下の条件下においてデニムを漂白した。
・３０分間、５：１の液比、４７℃、及び、物に対して２重量％の使用準備済（ＲＴＵ）PRIMAGREEN(登録商標)EcoFade LT100
・１：５０の液比における２分間にわたる２回の冷水すすぎ。
・デニムを工業用ドライヤーで乾燥させた。
デニムの脚の評価
【０１７２】
ラッカーゼ処理の後及びセルラーゼ処理の後に、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ試験色空間においてMinolta Chromameter CR 310を用いて、デニムに対する色変性及びストーンウォッシュを評価した。各脚について８回の測定値を得て、結果を平均化した。
【０１７３】
これらの結果を表１５にまとめる。
表１５
0005422670.tif 000019
【０１７４】
これらの結果は、軽石及び界面活性剤の存在下におけるラッカーゼ処理によって色変性が生じることを示している。
【０１７５】
本明細書に記載されている態様、実施形態及び実施例は、説明のみを目的とする。様々な変形は、当業者に明らかであり、この出願の精神及び範囲並びに添付されている特許請求の範囲の範囲内に包含される。本明細書において引用された刊行物及び特許文献のすべては、ここで言及することによってそれらの全体がそのまま組み込まれている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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