(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）(SEQ ID NO:2)に従う化合物、またはその医薬的に許容できる塩：
(R2R3)-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-A35-A36-A37-R1
(I)
ここで:
A1はTyrであり;
A2はProであり;
A3はSerまたはAibであり;
A4はLysであり;
A5はProであり;
A6はAspまたはAibであり;
A7はAsnまたはAibであり;
A8はProであり;
A9はGlyまたはAibであり;
A10はGluまたはAibであり;
A11はAspまたはAibであり;
A12はAlaまたはAibであり;
A13はProであり;
A14はAlaまたはAibであり;
A15はGluまたはAibであり;
A16はAspまたはAibであり;
A17はMet、A6c、Aib、またはNleであり;
A18はAlaまたはAibであり;
A19はArgであり;
A20はTyrであり;
A21はTyrであり;
A22はSerまたはAibであり;
A23はAlaまたはAibであり;
A24はLeuまたはA6cであり;
A25はArgであり;
A26はHisであり;
A27はTyrであり;
A28はIleまたはA6cであり;
A29はAsnまたはAibであり;
A30はLeuまたはA6cであり;
A31はIle、A6c、またはLeuであり;
A32はThrまたはAibであり;
A33はArgであり;
A34は4Hypであり;
A35はArg、Apc、Lys、4NH2Phe、または4NH2CH2Pheであり;
A36はTyrまたはAicであり;
A37は欠失しており;
R1はOH、NH2、(C1-30)アルコキシ、またはNH-X6-CH2-X7であり、ここでX6は(C1-40)アルキルまたは(C2-40)アルケニルであり、X7はH、OH、CO2H、またはC(O)-NH2であり;
R2およびR3のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してH、(C1-30)アルキル、(C1-30)ヘテロアルキル、(C1-30)アシル、(C2-30)アルケニル、(C2-30)アルキニル、アリール(C1-30)アルキル、アリール(C1-30)アシル、置換された(C1-30)アルキル、置換された(C1-30)ヘテロアルキル、置換された(C2-30)アシル、置換された(C2-30)アルケニル、置換された(C2-30)アルキニル、置換されたアリール(C1-30)アルキル、および置換されたアリール(C1-30)アシルからなるグループから選択され;
ただし、R2が(C1-30)アシル、アリール(C1-30)アシル、置換された(C2-30)アシル、または置換されたアリール(C1-30)アシルである場合、R3はH、(C1-30)アルキル、(C1-30)ヘテロアルキル、(C2-30)アルケニル、(C2-30)アルキニル、アリール(C1-30)アルキル、置換された(C1-30)アルキル、置換された(C1-30)ヘテロアルキル、置換された(C2-30)アルケニル、置換された(C2-30)アルキニル、または置換されたアリール(C1-30)アルキルである。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物、ここで、前記化合物は次のものである：
[Aib10, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:3)
[Aib17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:4)
[Aib11,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:5)
[4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:6)
[Aib22, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:7)
[A6c31, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:8)
[A6c30, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:9)
[A6c28, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:10)
[Aib3, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:11)
[A6c24, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:12)
[Aib6, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:13)
[Aib18, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:14)
[Aib29, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:15)
[Aib32, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:16)
[Aib23, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:17)
[A6c17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:18)
[Aib11, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:19)
[Aib12, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:20)
[Aib14, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:21)
[Aib15, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:22)
[Aib16, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:23)
[Aib7, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:24)
[Aib9, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:25)
[Aib10,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:26)
[Aib15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:27)
[Aib11,15, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:28)
[Aib10,15, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:29)
[Aib11,15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:30)
[Aib12,15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:31)
[Aib10,15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:32) 
[Aib11,16, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:33)
[Aib10,16, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:34)
[Aib17, 4Hyp34, Apc35]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:36)
[Aib17, 4Hyp34, Aic36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:37)
[Aib17, 4Hyp34, 4NH2Phe35]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:38)もしくは
[Aib17, 4Hyp34, 4NH2CH2Phe35]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:39)
またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項３】
A35およびA36の間のペプチド結合が偽ペプチド結合により置き換えられている、請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項４】
A35-A36がLys-ψ(CH2-NH)TyrまたはLys-ψ(CH2-N(Ac))Tyrである、請求項３に記載の化合物、またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項５】
請求項４に記載の化合物、ここで、前記化合物は次のものである：
[Aib11,17, 4Hyp34, Lys35-ψ(CH2-N(Ac))Tyr36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:35)
[Aib17, 4Hyp34, Lys35-ψ(CH2-NH)Tyr36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:40)もしくは
[Aib11,17, 4Hyp34, Lys35-ψ(CH2-NH)Tyr36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:41)
またはその医薬的に許容できる塩。
【請求項６】
有効量の請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬的に許容できる塩を含む医薬組成物。
【請求項７】
さらに医薬的に許容できるキャリヤーを含む、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
心臓、血管または腎臓系に関係する、または関連する、神経ペプチドＹ−受容体結合により仲介される障害または疾患であって、血管痙攣、心不全、ショック、心肥大、血圧上昇、狭心症、心筋梗塞、心臓突然死、不整脈、末梢血管疾患、欠陥的な体液の流れ、異常な物質輸送、腎不全、交感神経活動の増大、脳梗塞、神経変性、てんかん、卒中、脳血管痙攣、脳出血(hemmorrhage)、抑うつ、不安、精神分裂病、痴呆、痛み、痛覚、異常な胃腸管の運動および分泌、様々な形のイレウス、尿失禁、クローン病、異常な飲料および食物摂取の障害、食欲不振、代謝障害、性的機能不全および繁殖障害、炎症と関係する障害または疾患、呼吸器疾患、喘息、気管支収縮、または黄体形成ホルモン(leutinizing hormone)、成長ホルモン、インスリン、もしくはプロラクチンの異常放出、高血圧、肥満、過食症(hyperphasia)、または大食症からなる群より選択される障害または疾患を処置するための請求項６もしくは請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記の神経ペプチドＹ受容体がＮＰＹ−Ｙ１受容体である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記の病気または疾患がＮＰＹ−Ｙ１受容体を発現する腫瘍である、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記の腫瘍が乳癌、卵巣癌、または神経グリア芽細胞腫である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経ペプチドＹの新規類似体、その同じ物を含む医薬組成物、その同じ物を含む医薬配合物、および神経ペプチドＹ−受容体結合により仲介される疾患または病気を処置する方法に関する。より詳細には、本発明は、神経ペプチドＹ２受容体亜型と比べて神経ペプチドＹ１受容体亜型に選択的に結合する、少なくとも１個の非天然アミノ酸置換、例えば３４位における４Ｈｙｐを有する神経ペプチドＹの新規類似体に関する。
【背景技術】
【０００２】
３６アミノ酸のペプチド神経伝達物質である神経ペプチドＹ（“ＮＰＹ”）は、膵臓のペプチドのファミリーの一員であり、膵臓ポリペプチドおよびペプチドＹＹとかなりの配列の相同性を共有している。ヒト神経ペプチドＹ（“ｈＮＰＹ”）は次の配列を有する：H-Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ ID NO:1)。ＮＰＹはブタの脳から発見され、単離されて配列決定され、それが神経組織から単離されたことならびにアミノおよびカルボキシ末端のアミノ酸両方としてチロシンが存在することにより“神経ペプチドＹ”と名付けられた。
【０００３】
ＮＰＹおよびそのペプチドのファミリーの他のメンバーは全て、β−ターンで連結されてヘアピン様ループを形成する、Ｎ末端のポリプロリンヘリックスおよび両親媒性α−ヘリックスからなる３次構造を特徴とし、それは時々“膵臓ポリペプチドフォールド”と呼ばれる。そのヘリックスは疎水性相互作用により一緒の状態を保たれている。アミド化されたＣ末端はヘアピンループから別の方向に突き出ている。
【０００４】
それの発見の後、ＮＰＹは中枢神経系において最も豊富なペプチドであり、皮質、脳幹、海馬、視床下部(hypotahlamus)、扁桃体、および視床を含む広範囲にわたる分布を有すること、ならびに抹消神経系において交感神経ニューロンおよび副腎クロム親和性細胞に存在することが確認された。
【０００５】
ＮＰＹは、それはシナプス顆粒の中に蓄えられ、電気的神経刺激で放出され、特定の受容体において作用するため、主な神経伝達物質の基準を満たしているようである。ＮＰＹが、他に頼らずに(in its own right)、おそらくＮＰＹが強力にアデニル酸シクラーゼの活性を阻害し、カルシウムの細胞内レベルの増大を誘導する脳において、重要なメッセンジャーであるのは明らかである。中枢へのＮＰＹの注入は、結果として血圧の変化、摂食の増大、脂肪貯蔵の増大、血糖およびインスリンの上昇、自発運動活性の減少、体温の低下、および強硬症をもたらす。
【０００６】
ＮＰＹは密接に関連する受容体のファミリーと相互作用するようである。これらの受容体は一般に、神経ペプチドＹおよび密接に関連するＰＹＹの異なる断片に結合する異なる組織および受容体の能力に基づいていくつかの亜型に分類される。Ｙ１受容体亜型（“ＮＰＹ−Ｙ１受容体”）は、主要な血管ＮＰＹ受容体であるようである。Ｙ２受容体亜型（“ＮＰＹ−Ｙ２受容体”）も血管平滑筋上で後シナプス側に(postjunctionally)存在している可能性がある。Ｙ３受容体亜型（“ＮＰＹ−Ｙ３受容体”）はＮＰＹ特異的であり、ＰＹＹには結合しないようである。この受容体は数ある領域の中でも副腎組織、髄質、心臓、および脳幹に存在しているらしい。神経ペプチドＹおよび神経ペプチドＹ受容体の総説に関して、例えばC. Wahlestedt and D. Reis, Annual Review of Pharmacology and Toxicology, 33:309-352 (1993)を参照。特許協力条約（“ＰＣＴ”）公開第ＷＯ９５／００１６１号は、肥満および心血管機能のような生物学的活動を制御するための一連のＮＰＹ拮抗薬および作動薬を記述している。
【０００７】
欧州特許第０７５９４４１号および米国特許第５，５７６，３３７号は神経ペプチドＹの過剰に関連する生理的障害を報告しており、それには次のものが含まれる：心臓、血管または腎臓系に関係する障害または疾患、例えば血管痙攣、心不全、ショック、心肥大、血圧上昇、狭心症、心筋梗塞、心臓突然死、不整脈、末梢血管疾患、および異常な腎臓の状態、例えば欠陥的な体液の流れ、異常な物質輸送、または腎不全；例えば冠動脈の外科的処置ならびに胃腸管における手術および外科的処置の間または後の交感神経活動の増大に関連する病気；脳の疾患ならびに中枢神経系に関連する疾患、例えば脳梗塞、神経変性、てんかん、卒中、ならびに卒中に関連する病気、脳血管痙攣および出血(hemmorrhage)、抑うつ、不安、精神分裂病、ならびに痴呆；痛みまたは痛覚に関連する病気；異常な胃腸管の運動および分泌に関連する疾患、例えば様々な形のイレウス、尿失禁、およびクローン病；異常な飲料および食物摂取の障害、例えば食欲不振および代謝障害；性的機能不全および繁殖障害に関連する疾患；炎症と関係する病気または障害；呼吸器疾患、例えば喘息ならびに喘息および気管支収縮に関連する病気；ならびに異常なホルモン放出、例えば黄体形成ホルモン(leutinizing hormone)、成長ホルモン、インスリン、およびプロラクチンに関連する疾患。
【０００８】
ＲｅｕｂｉによるＰＣＴ公開第ＷＯ０２／４３７７６号は、ＮＰＹ−Ｙ１受容体を発現する腫瘍、特に乳癌、卵巣癌(avarian cancer)および神経グリア芽細胞腫の診断または処置のための医薬組成物の調製のための、ＮＰＹ−Ｙ１受容体に結合する化合物の使用について報告している。
【０００９】
特定のＮＰＹ類似体およびそれらの使用を開示している非常に多くの特許および特許公報が存在し、例えば米国特許第５，０２６，６８５号、米国特許第５，３２８，８９９号、米国特許第６，５１１，９８４号、ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／４３７７６号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００７／０３９３１８号等。上記のことにも関わらず、向上した効力および／または選択性および／またはインビボもしくはインビトロでの特徴を有するＮＰＹ類似体に関する継続的な必要性が残っている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特許協力条約（“ＰＣＴ”）公開第ＷＯ９５／００１６１号
【特許文献２】欧州特許第０７５９４４１号
【特許文献３】米国特許第５，５７６，３３７号
【特許文献４】ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／４３７７６号
【特許文献５】米国特許第５，０２６，６８５号
【特許文献６】米国特許第５，３２８，８９９号
【特許文献７】米国特許第６，５１１，９８４号
【特許文献８】ＰＣＴ公開第ＷＯ２００７／０３９３１８号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】C. Wahlestedt and D. Reis, Annual Review of Pharmacology and Toxicology, 33:309-352 (1993)
【発明の概要】
【００１２】
１観点において、本発明は次の式（Ｉ）(SEQ ID NO:2)のｈＮＰＹのペプチド変種を提供し：
(R2R3)-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19-A20-A21-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-A35-A36-A37-R1
(I)
ここで:
A1はTyr、(X1,X2,X3,X4,X5)Phe、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A2はPro、3Hyp、シス-3Hyp、4Hyp、またはシス-4Hypであり;
A3はSer、Abu、Aib、Ala、Thr、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A4はLys、Arg、hArg、Dab、Dap、Orn、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A5はPro、3Hyp、シス-3Hyp、4Hyp、またはシス-4Hypであり;
A6はAsp、Aib、Asn、Gln、Glu、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A7はAsn、Aib、Gln、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A8はPro、3Hyp、シス-3Hyp、4Hyp、またはシス-4Hypであり;
A9はGly、Aib、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A10はGlu、Aib、Asn、Asp、Gln、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A11はAsp、Aib、Asn、Gln、Glu、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A12はAla、Abu、Aib、Nva、Val、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A13はPro、3Hyp、シス-3Hyp、4Hyp、またはシス-4Hypであり;
A14はAla、Abu、Aib、Nva、Val、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A15はGlu、Aib、Asn、Asp、Gln、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A16はAsp、Aib、Asn、Gln、Glu、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A17はMet、Acc、Aib、Cha、Ile、Leu、hLeu、Nle、Nva、Tle、Val、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A18はAla、Abu、Aib、Nva、Val、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A19はArg、hArg、Apc、Dab、Dap、Lys、Orn、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A20はTyr、(X1,X2,X3,X4,X5)Phe、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A21はTyr、(X1,X2,X3,X4,X5)Phe、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A22はSer、Abu、Aib、Ala、Thr、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A23はAla、Abu、Aib、Nva、Val、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A24はLeu、Acc、Cha、Ile、hLeu、Nle、Nva、Tle、Val、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A25はArg、hArg、Dab、Dap、Lys、Orn、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A26はHis、2Pal、3Pal、4Pal、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A27はTyr、(X1,X2,X3,X4,X5)Phe、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A28はIle、Acc、Cha、Leu、hLeu、Nle、Nva、Tle、Val、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A29はAsn、Aib、Gln、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A30はLeu、Acc、Cha、Ile、hLeu、Nle、Nva、Tle、Val、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A31はIle、Acc、Cha、Leu、hLeu、Nle、Nva、Tle、Val、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A32はThr、Aib、Ser、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A33はArg、hArg、Dab、Dap、Lys、Orn、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A34はGln、Asn、Dhp、3Hyp、シス-3Hyp、4Hyp、シス-4Hyp、Inp、Ktp、Nip、Oic、hPro、Tic、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A35はArg、Aic、Apc、hArg、Dab、Dap、Lys、Orn、NH2Phe、NH2CH2Phe、または
HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A36はTyr、Aic、(X1,X2,X3,X4,X5)Phe、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A37はHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり、または欠失しており;
R1はOH、NH2、(C1-30)アルコキシ、またはNH-X6-CH2-X7であり、ここでX6は(C1-40)アルキルまたは(C2-40)アルケニルであり、X7はH、OH、CO2H、またはC(O)-NH2であり;
R2およびR3のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してH、(C1-30)アルキル、(C1-30)ヘテロアルキル、(C1-30)アシル、(C2-30)アルケニル、(C2-30)アルキニル、アリール(C1-30)アルキル、アリール(C1-30)アシル、置換された(C1-30)アルキル、置換された(C1-30)ヘテロアルキル、置換された(C2-30)アシル、置換された(C2-30)アルケニル、置換された(C2-30)アルキニル、置換されたアリール(C1-30)アルキル、および置換されたアリール(C1-30)アシルからなるグループから選択され;
ただし、R2が(C1-30)アシル、アリール(C1-30)アシル、置換された(C2-30)アシル、または置換されたアリール(C1-30)アシルである場合、R3はH、(C1-30)アルキル、(C1-30)ヘテロアルキル、(C2-30)アルケニル、(C2-30)アルキニル、アリール(C1-30)アルキル、置換された(C1-30)アルキル、置換された(C1-30)ヘテロアルキル、置換された(C2-30)アルケニル、置換された(C2-30)アルキニル、または置換されたアリール(C1-30)アルキルであり;
R4およびR5のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してH、(C1-40)アルキル、(C1-40)ヘテロアルキル、(C1-40)アシル、(C2-40)アルケニル、(C2-40)アルキニル、アリール(C1-40)アルキル、アリール(C1-40)アシル、置換された(C1-40)アルキル、置換された(C1-40)ヘテロアルキル、置換された(C1-40)アシル、置換された(C2-40)アルケニル、置換された(C2-40)アルキニル、置換されたアリール(C1-40)アルキル、置換されたアリール(C1-40)アシル、(C1-40)アルキルスルホニル、またはC(NH)-NH2であり、ここでR4が(C1-40)アシル、アリール(C1-40)アシル、置換された(C1-40)アシル、置換されたアリール(C1-40)アシル、(C1-40)アルキルスルホニル、またはC(NH)-NH2である場合、R5はHまたは(C1-C40)アルキル、(C1-40)ヘテロアルキル、(C2-40)アルケニル、(C2-40)アルキニル、アリール(C1-40)アルキル、置換された(C1-40)アルキル、置換された(C1-40)ヘテロアルキル、置換された(C2-40)アルケニル、置換された(C2-40)アルキニル、または置換されたアリール(C1-40)アルキルであり;
nはそれぞれの出現に関して独立して1、2、3、4、または5であり;
X1、X2、X3、X4、およびX5のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してH、F、Cl、Br、I、(C1-10)アルキル、置換された(C1-10)アルキル、アリール、置換されたアリール、OH、CH2NH2、NH2、NO2、またはCNであり;
ただし、その化合物は少なくとも１個の非天然アミノ酸による置換を含む。
【００１３】
上記の式（Ｉ）に含まれる化合物の部分集合（ＩＡ）は下記のものである：
A1はTyrであり;
A2はProであり;
A3はSerまたはAibであり;
A4はLysであり;
A5はProであり;
A6はAspまたはAibであり;
A7はAsnまたはAibであり;
A8はProであり;
A9はGlyまたはAibであり;
A10はGluまたはAibであり;
A11はAspまたはAibであり;
A12はAlaまたはAibであり;
A13はProであり;
A14はAlaまたはAibであり;
A15はGluまたはAibであり;
A16はAspまたはAibであり;
A17はMet、A6c、Aib、またはNleであり;
A18はAlaまたはAibであり;
A19はArgであり;
A20はTyrであり;
A21はTyrであり;
A22はSerまたはAibであり;
A23はAlaまたはAibであり;
A24はLeuまたはA6cであり;
A25はArgであり;
A26はHisであり;
A27はTyrであり;
A28はIleまたはA6cであり;
A29はAsnまたはAibであり;
A30はLeuまたはA6cであり;
A31はIle、A6c、またはLeuであり;
A32はThrまたはAibであり;
A33はArgであり;
A34はDhp、4Hyp、Inp、Nip、hPro、Tic、またはHN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)であり;
A35はArg、Apc、Lys、4NH2Phe、または4NH2CH2Pheであり;
A36はTyrまたはAicであり;
A37は欠失しており;
R1はNH2であり;
R2およびR3のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してHまたは(C1-30)アシルであり;
ただし、R2が(C1-30)アシルである場合、R3はHであり;
R4およびR5のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してHまたは(C1-40)アシルであり;
nは4であり;そして
X1、X2、X3、X4、およびX5のそれぞれは、それぞれの出現に関して独立してH、CH2NH2、またはNH2である。
【００１４】
式（Ｉ）またはその部分集合（ＩＡ）において、A35およびA36の間のペプチド結合は偽ペプチド結合により置き換えられていてよく、ここでA35-A36はLys-ψ(CH2-NH)TyrまたはLys-ψ(CH2-N(Ac))Tyrであってよい。
【００１５】
式（Ｉ）またはその部分集合（ＩＡ）において、A34は好ましくは4Hypである。
式（Ｉ）またはその部分集合（ＩＡ）において、HN-CH((CH2)n-N(R4R5))-C(O)は好ましくはLys(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)である。
【００１６】
式（Ｉ）または部分集合（ＩＡ）の好ましい化合物は次のものである：
実施例１：  [Aib10, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:3)
実施例２：  [Aib17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:4)
実施例３：  [Aib11,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:5)
実施例４：  [4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:6)
実施例５：  [Aib22, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:7)
実施例６：  [A6c31, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:8)
実施例７：  [A6c30, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:9)
実施例８：  [A6c28, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:10)
実施例９：  [Aib3, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:11)
実施例１０：  [A6c24, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:12)
実施例１１：  [Aib6, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:13)
実施例１２：  [Aib18, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:14)
実施例１３：  [Aib29, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:15)
実施例１４：  [Aib32, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:16)
実施例１５：  [Aib23, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:17)
実施例１６：  [A6c17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:18)
実施例１７：  [Aib11, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:19)
実施例１８：  [Aib12, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:20)
実施例１９：  [Aib14, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:21)
実施例２０：  [Aib15, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:22)
実施例２１：  [Aib16, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:23)
実施例２２：  [Aib7, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:24)
実施例２３：  [Aib9, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:25)
実施例２４：  [Aib10,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:26)
実施例２５：  [Aib15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:27)
実施例２６：  [Aib11,15, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:28)
実施例２７：  [Aib10,15, Nle17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:29)
実施例２８：  [Aib11,15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:30)
実施例２９：  [Aib12,15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:31)
実施例３０：  [Aib10,15,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:32)
実施例３１：  [Aib11,16, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:33)
実施例３２：  [Aib10,16, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:34)
実施例３３：  [Aib11,17, 4Hyp34, Lys35-ψ(CH2-N(Ac))Tyr36]hNPY(1-36)-NH2; 
(SEQ ID NO:35)
実施例３４：  [Aib17, 4Hyp34, Apc35]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:36)
実施例３５：  [Aib17, 4Hyp34, Aic36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:37)
実施例３６：  [Aib17, 4Hyp34, 4NH2Phe35]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:38)
実施例３７：  [Aib17, 4Hyp34, 4NH2CH2Phe35]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:39)
実施例３８：  [Aib17, 4Hyp34, Lys35-ψ(CH2-NH)Tyr36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:40)
実施例３９：  [Aib11,17, 4Hyp34, Lys35-ψ(CH2-NH)Tyr36]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:41)
実施例４０：  [Nip34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:42)
実施例４１：  [Inp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:43)
実施例４２：  [Dhp34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:44)
実施例４３：  [hPro34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:45)
実施例４４：  [Tic34]hNPY(1-36)-NH2; (SEQ ID NO:46)および
実施例４５：  [Leu31, Lys34(Nε-C(O)-(CH2)12-CH3)]hNPY(1-36)-NH2(SEQ ID NO:47)。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本明細書で用いられる用語“アミノ酸”はあらゆる天然の、または非天然のアミノ酸を指し、それはα−アミノ酸、β−アミノ酸、またはγ−アミノ酸を含むがそれらに限定されず、別途示されない限りＤ−またはＬ−アミノ酸のどちらであってもよい。
【００１８】
Ｎ末端のアミノ酸を除いて、この開示における全てのアミノ酸の略語（例えばAla）は-NH-C(R)(R’)-CO-の構造を有しており、ここでRおよびR’はそれぞれ独立して水素またはアミノ酸の側鎖（例えば、Alaに関してはR = CH3およびR’ = H）であり、またはRおよびR’は繋がれて環系を形成していてよい。Ｎ末端アミノ酸に関しては、その略語は(R2R3)N-C(R)(R’)-CO-の構造を表し、ここでR2およびR3は上記の式（Ｉ）で定義された通りである。
【００１９】
この発明のペプチドは別の形式、例えば[Pro34]hNPY(1-36)-NH2 (SEQ ID NO:48)によっても表され、それはカッコの間に置かれた天然の配列から置換されたアミノ酸、例えばｈＮＰＹ中のGlnの代わりにProを有する。hNPY(1-36)-NH2 (SEQ ID NO:1)中の名称“NH2”はそのペプチドのＣ末端がアミド化されていることを示し、一方でhNPY(1-36)-OH (SEQ ID NO:49)は遊離酸型を示す。
【００２０】
下記の本出願において用いられる略語の一部のリストは参照を容易にするために提供するのであって、本明細書で定義されておらず本出願において用いられているあらゆる略語はそれらの認められた意味に反して用いられてはいない。
【００２１】
Abu    α-アミノ酪酸
Acc    1-アミノ-1-シクロ(C3-9)アルキルカルボン酸、ここで
A3cは1-アミノ-1-シクロプロパンカルボン酸を表す；
A4cは1-アミノ-1-シクロブタンカルボン酸を表す；
A5cは1-アミノ-1-シクロペンタンカルボン酸を表す；そして
A6cは1-アミノ-1-シクロヘキサンカルボン酸を表す；
Adc    10-アミノデカン酸
Ado    12-アミノドデカン酸
Ahp    7-アミノヘプタン酸
Ahx    6-アミノヘキサン酸
Aib    α-アミノイソ酪酸
Aic    2-アミノインダン-2-カルボン酸
AlaまたはA    アラニン
Anc    9-アミノノナン酸
Aoc    8-アミノオクタン酸
Apc    4-アミノ-4-カルボキシピペリジン、次の構造により表される:
【００２２】
【化１】
0005480301.tif 000002
【００２３】
ここで、平行な線
【００２４】
【化２】
0005480301.tif 000003
【００２５】
は、その部分の別の部分または配列への結合の点を示す。
Apn    5-アミノペンタン酸
ArgまたはR    アルギニン
hArg    ホモアルギニン
AsnまたはN    アスパラギン
AspまたはD    アスパラギン酸
Aun    11-アミノウンデカン酸
Cha    β-シクロヘキシルアラニン
CysまたはC    システイン
Dab    2,4-ジアミノ酪酸
Dap    2,3-ジアミノプロピオン酸
Dhp    3,4-デヒドロプロリン
Dmt    5,5-ジメチルチアゾリジン-4-カルボン酸
Gaba    4-アミノ酪酸
GlnまたはQ    グルタミン
GluまたはE    グルタミン酸
GlyまたはG    グリシン
HisまたはH    ヒスチジン
3Hyp    トランス-3-ヒドロキシ-L-プロリン、すなわち、(2S, 3S)-3-ヒドロキシピロリジン-2-カルボン酸
シス-3Hyp    シス-3-ヒドロキシ-L-プロリン、すなわち、(2S, 3R)-3-ヒドロキシピロリジン-2-カルボン酸
4Hyp    4-ヒドロキシプロリン、すなわち、(2S, 4R)-4-ヒドロキシピロリジン-2-カルボン酸
シス-4Hyp    シス-4-ヒドロキシ-L-プロリン、すなわち、(2S, 4S)-4-ヒドロキシピロリジン-2-カルボン酸
IleまたはI    イソロイシン
Inc    インドリン-2-カルボン酸
Inp    イソニペコチン酸
Ktp    4-ケトプロリン
LeuまたはL    ロイシン
hLeu    ホモロイシン
LysまたはK    リシン
MetまたはM    メチオニン
Nip    ニペコチン酸
Nle    ノルロイシン
Nε    括弧内の物がＬｙｓ側鎖のイプシロン−窒素に結合していることを示す
Nva    ノルバリン
Oic    オクタヒドロインドール-2-カルボン酸
Orn    オルニチン
2-Pal    β-(2-ピリジル)アラニン
3-Pal    β-(3-ピリジル)アラニン
4-Pal    β-(4-ピリジル)アラニン
PheまたはF    フェニルアラニン
hPhe    ホモフェニルアラニン
4NH2CH2Phe    4-アミノメチル-フェニルアラニン
4NH2Phe    4-アミノ-フェニルアラニン
ProまたはP    プロリン
hPro    ホモプロリン
Sar    サルコシンまたはN-メチルグリシン
SerまたはS    セリン
ThrまたはT    スレオニン
Tic  1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-3-カルボン酸
Tle    tert-ロイシン
ValまたはV    バリン
本明細書において用いられる特定の他の略語を次のように定義する：
Ac    アセチル
Aloc    アリルオキシカルボニル
Boc    tert-ブチルオキシカルボニル
Bhoc    ベンズヒドリルオキシカルボニル
BSA    ウシ血清アルブミン
Bzl    ベンジル
DCM    ジクロロメタン
Dde    1-(4,4-ジメチル-2,6-ジオキソシクロヘキサ-1-イリジン)エチル（1-(4,4-dimethyl-2,6-dioxocyclohex-1-ylidine)ethyl）
DIC    N,N-ジイソプロピルカルボジイミド
DIEA    ジイソプロピルエチルアミン
Dmab    4-{N-(1-(4,4-ジメチル-2,6-ジオキソシクロヘキシリデン)-3-メチルブチル)-アミノ}ベンジル
DMAP    4-(ジメチルアミノ)ピリジン
DMF    ジメチルホルムアミド
DNP    2,4-ジニトロフェニル
EMEM    イーグル最小必須培地
et    エチル
Fmoc    フルオレニルメチルオキシカルボニル
HATU    O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート
HBTU    2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート
cHex    シクロヘキシル
HOAT    O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート
HOBt    1-ヒドロキシ-ベンゾトリアゾール
HPLC    高速液体クロマトグラフィー
MBHA    4-メチルベンズヒドリルアミン
Mmt    4-メトキシトリチル
NMP    N-メチル-2-ピロリジノン
Pbf    2,2,4,6,7-ペンタメチルジヒドロベンゾフラン-5-スルホニル
tBu    tert-ブチル
TIS    トリイソプロピルシラン
TOS    トシル
Trt    トリチル
TFA    トリフルオロ酢酸
TFFH    テトラメチルフルオロホラミジニウム（tetramethylfluoroforamidinium）  ヘキサフルオロホスフェート
Lys-ψ(CH2-NH)Tyrは次の構造を有する：
【００２６】
【化３】
0005480301.tif 000004
【００２７】
。
ギリシャ文字プサイ“ψ”は本明細書においてペプチド結合が偽ペプチド結合により置き換えられていることを示すために用いられている。アミノ酸配列の名前において、用語ψの形式はA-ψ(X-X’)-Bであり、ここでAはそのカルボニル基が修飾されてＸになっているアミノアシル基であり、Bはそのα−アミノ基が修飾されてＸ’になっているアミノアシル基である。ＸおよびＸ’は例えばLys-ψ(CH2-NH)-Tyrのように結合により隔てられた一連の元素記号として示される。
【００２８】
“アルキル”は１個以上の炭素原子を含む炭化水素基を指し、ここで多数の炭素原子は、もし存在するならば、単結合によりつながっており、その例にはメチル、エチル、プロピル、およびブチルが含まれるが、それらに限定されない。アルキル炭化水素基は直鎖であってよく、または１個以上の分枝もしくは環式基を含んでいてよく、その例にはイソプロピルおよびtertブチルが含まれるが、それらに限定されない。
【００２９】
“置換されたアルキル”は、炭化水素基の１個以上の水素原子が、ハロゲン（すなわちフッ素、塩素、臭素およびヨウ素）、OH、CN、SH、NH2、NHCH3、NO2、１〜６個のハロゲンで置換された(C1-2)アルキル、CF3、OCH3、OCF3、および(CH2)0-4-COOHからなるグループから選択される１個以上の置換基で置き換えられているアルキルを指す。異なる態様において、１、２、３または４個の置換基が存在する。(CH2)0-4-COOHの存在は、結果としてアルキル酸の生成をもたらす。(CH2)0-4-COOHを含むアルキル酸の例には、2-ノルボルナン酢酸、tert-酪酸および3-シクロペンチルプロピオン酸が含まれるが、それらに限定されない。
【００３０】
“ヘテロアルキル”は、炭化水素基中の炭素原子の１個以上が次の原子または基：アミノ、アミド、O、S、N、およびカルボニルの内の１個以上で置き換えられているアルキルを指す。異なる態様において、１または２個のヘテロ原子が存在する。
【００３１】
“置換されたヘテロアルキル”は、炭化水素基の１個以上の水素原子が、ハロゲン（すなわちフッ素、塩素、臭素およびヨウ素）、OH、CN、SH、NH2、NHCH3、NO2、１〜６個のハロゲンで置換された(C1-2)アルキル、CF3、OCH3、OCF3、および(CH2)0-4-COOHからなるグループから選択される１個以上の置換基で置き換えられているヘテロアルキルを指す。異なる態様において、１、２、３または４個の置換基が存在する。
【００３２】
“アルケニル”は、２個以上の炭素で構成され、１個以上の炭素−炭素二重結合が存在する炭化水素基を指し、その例にはビニル、アリル、ブテニルおよびプロペニルが含まれるが、それらに限定されない。アルケニル炭化水素基は直鎖であってよく、または１個以上の分枝もしくは環式基を含んでいてよく、その例にはｔ−ブテニルに対するｎ−ブテニル、およびシクロペンテニルと比較したｎ−ペンテニルが含まれるが、それらに限定されない。
【００３３】
“置換されたアルケニル”は、１個以上の水素がハロゲン（すなわちフッ素、塩素、臭素およびヨウ素）、OH、CN、SH、NH2、NHCH3、NO2、１〜６個のハロゲンで置換された(C1-2)アルキル、CF3、OCH3、OCF3、および(CH2)0-4-COOHからなるグループから選択される１個以上の置換基で置き換えられているアルケニルを指す。異なる態様において、１、２、３または４個の置換基が存在する。
【００３４】
“アリール”は、共役パイ電子系を有する少なくとも１個の環を有し、２個までの共役した、または縮合した環系を含む、場合により置換された芳香族基を指す。アリールにはカルボキシルアリール(carboxylic aryl)、ヘテロ環式アリールおよびビアリール基が含まれるが、それらに限定されない。好ましくは、アリールは５または６員環である。ヘテロ環式アリールに関して好ましい原子には、硫黄、酸素および窒素の内の１種類以上が含まれるが、それらに限定されない。アリールの例には、フェニル、1-ナフチル、2-ナフチル、インドール、キノリン、2-イミダゾール、および9-アントラセンが含まれるが、それらに限定されない。アリールの置換基は、(C1-4)アルキル、(C1-4)アルコキシ、ハロゲン（すなわちフッ素、塩素、臭素およびヨウ素）、OH、CN、SH、NH2、NO2、１〜５個のハロゲンで置換された(C1-2)アルキル、CF3、OCF3、および(CH2)0-4-COOHからなるグループから選択される。異なる態様において、アリールは０、１、２、３または４個の置換基を含む。
【００３５】
“アルキルアリール”は、上記で定めたような“アリール”に結合した“アルキル”を指す。
用語“シクロアルキル”は、当業者に既知の示された炭素数のモノ−シクロアルキル基またはビ−シクロアルキル基を含むことを意図する。
【００３６】
用語“ヘテロ環”には１個以上のヘテロ原子、例えば酸素、窒素および硫黄を有する単環および二環系が含まれる。その環系は芳香族、例えばピリジン、インドール、キノリン、ピリミジン、チオフェン（チエニルとしても知られている）、フラン、ベンゾチオフェン、テトラゾール、ジヒドロインドール、インダゾール、Ｎ−ホルミルインドール、ベンズイミダゾール、チアゾール、およびチアジアゾールであってよい。その環系は非芳香族、例えばピロリジン、ピペリジン、モルホリン、および同様のものであってもよいが、それらに限定されない。
【００３７】
合成
この発明の化合物は本明細書の実施例で開示されている技法ならびに当技術で周知である技法を用いて製造することができ、それを用いて製造した。例えば、ＮＰＹ類似体のポリペプチド領域は化学的に、または生化学的に合成する、および／または修飾することができる。例えば、Stewart, J. M., et al., Solid Phase Synthesis, Pierce Chemical Co.、第２版(1984)を参照；核酸の細胞中への導入および核酸の発現を含む生化学的合成に関する技法の例に関しては、例えばSambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual、第２版、Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)を参照。
【００３８】
実施例は説明のために提供するのであって、本発明の範囲を限定することを意味するものでは決して無い。
【実施例】
【００３９】
実施例１：[Aib10, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2
表題のペプチドを、Ｆｍｏｃ化学を用いて組み立てた。ペプチドのＣ末端部分(残基18〜36)をＡＢＩ  ４３３Ａペプチド合成機(Applied Biosystems、米国カリフォルニア州フォスターシティ)上で、1.0 mmoleスケールで合成した。1.37 gの0.73 mmol / RinkアミドMBHA樹脂(Novabiochem、米国カリフォルニア州サンディエゴ)を含む反応容器を反応容器の中に置いた。次いでその樹脂を10 mlのNMPで15分間処理して樹脂を膨潤させた。ABI FastMoc 1.0（登録商標）プロトコルを用いてペプチドを生成した。
【００４０】
それぞれのサイクルは、20％ピペリジンを用いたＮ末端Fmocの脱保護(deblocking)およびそれに続く大規模な(extensive)NMP洗浄で構成されていた。次いでそれぞれのアミノ酸の予め包装された1.0 mmoleのカートリッジを0.45M HOBT/HBTU中で溶解させた。アミノ酸の溶解に十分な時間が充てられた後、それを自動的に活性化容器に移した。さらに２個の1.0 mmoleのアミノ酸カートリッジを溶解させて活性化容器に移し、カップリングの工程あたり合計３当量のアミノ酸を用いた。次いで、合計６当量のDIPEAのため、DIPEAの2M溶液3 mlを活性化容器に導入した。
【００４１】
次いでこの混合物全部を樹脂に導入し、１５分間混合させた。反応容器を空にし、NMPで洗浄し、次いで第２カップリング工程を続いて行った。第２カップリング工程の後、樹脂を再度完全に洗浄した。それぞれのアミノ酸を同様の方式で二重カップリングした。最初のTyr残基のカップリング工程の後、次の４つのカップリング工程のそれぞれ、およびそれぞれのArgのカップリング工程のため、樹脂を5 mlのキャッピング溶液(0.5M無水酢酸/ 0.13M DIPEA / 0.01M HOBT)でキャッピングしてあらゆるアセチル化されていない樹脂の部位を保護した。カップリング工程に関して次のアミノ酸カートリッジを用いた：サイクル1) Fmoc-Tyr(tBu)-OH; サイクル2) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；サイクル3) Fmoc-4Hyp-OH；サイクル4) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；サイクル5) Fmoc-Thr(tBu)-OH；サイクル6) Fmoc-Ile-OH；サイクル7) Fmoc-Leu-OH；サイクル8) Fmoc-Asn(Trt)-OH；サイクル9) Fmoc-Ile-OH；サイクル10) Fmoc-Tyr(tBu)-OH；サイクル11) Fmoc-His(Trt)-OH；サイクル12) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；サイクル13) Fmoc-Leu-OH；サイクル14) Fmoc-Ala-OH；サイクル15) Fmoc-Ser(tBu)-OH；サイクル16) Fmoc-Tyr(tBu)-OH；サイクル17) Fmoc-Tyr(tBu)-OH；サイクル18) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；およびサイクル19) Fmoc-Ala-OH。最後のカップリングサイクルの後、樹脂をNMPで洗浄し、続いて標準的なＮ末端Fmocの脱保護を行い、NMPで、続いてDCMで洗浄した。
【００４２】
ペプチドバックボーンのＣ末端部分(残基18〜36)の組み立ての後、樹脂の１０分の１(0.1 mmole)を用いてペプチドのＮ末端部分を構築し、残りは取っておいた。表題のペプチドのＮ末端部分(残基1〜17)を、Liberty Peptide Synthesizer (CEM、米国ノースキャロライナ州マシューズ)上で、0.1 mmoleスケールで、マイクロ波支援Fmoc化学を用いて構築した。前の合成からの樹脂を50 mlコニカルチューブに15 mlのDMFと共に入れ、合成機上の樹脂の位置上に装填した。次いでその樹脂を、自動化されたプロセスにより定量的に反応容器に移した。0.1 mmoleスケールでの合成のための標準的なLiberty合成プロトコルを用いた。このプロトコルには、DMF中の0.1M HOBTを含む20% ピペリジン7 mlを用いた最初の処理によるＮ末端のFmoc部分の脱保護が含まれている。その最初の脱保護の工程は、マイクロ波電力（４５ワット、最大温度７５℃）および窒素による泡立て（３秒間オン／７秒間オフ）を用いて３０秒間であった。次いで反応容器から液体を排出し(drained)、それが３分間の期間であったこと以外は第１の処理と同じである第２のピペリジン処理を行った。
【００４３】
次いで樹脂から液体を排出し、DMFで数回、完全に洗浄した。次いで、DMF中0.2Mストック溶液として調製された保護されたアミノ酸、Fmoc-Met-OHを添加し(2.5 ml、5当量)、続いて1.0 mlのDMF中0.45M (4.5当量)HBTUを添加した。これに続き0.5 mlのNMP中2M (10当量) DIPEAを添加した。カップリングの工程は、２０ワットのマイクロ波電力、７５℃の最大温度、および同程度の窒素による泡立てを用いて５分間行った。最初のカップリングの工程の後、反応容器から液体を排出して廃棄し、カップリングの工程を繰り返した。
【００４４】
次いでサイクル１と同様のサイクル２を開始した。全てのアミノ酸を同様にして導入し、シークエンス全体を通して二重カップリングの方法を用いた。残基9-10 (Gly-Aib)は、カップリングの工程のすぐ後にキャッピングの手順を含んでいた。キャッピングは、NMP中の0.015M HOBTを含む0.5M無水酢酸7 mlおよび2M DIPEA溶液2 mlの添加により、多段階マイクロ波プロトコルを用いて行った：５０ワットの電力で３０秒間（最大温度６５℃）、続いて３０秒間のマイクロ波電力オフ、続いて第２ラウンドの３０秒間のマイクロ波電力オン（５０ワット）、次いで再び３０秒間のマイクロ波電力無し。次いで樹脂から液体を排出し、DMFで完全に洗浄した。次のアミノ酸(Advanced Chemtech、米国ケンタッキー州ルイスビル)を用いた：サイクル20) Fmoc-Met-OH；サイクル21) Fmoc-Asp(OtBu)-OH；サイクル22) Fmoc-Glu(OtBu)-OH；サイクル23) Fmoc-Ala-OH；サイクル24) Fmoc-Pro-OH；サイクル25) Fmoc-Ala-OH；サイクル26) Fmoc-Asp(OtBu)-OH；サイクル27) Fmoc-Aib-OH；サイクル28) Fmoc-Gly-OH；サイクル29) Fmoc-Pro-OH；サイクル30) Fmoc-Asn(Trt)-OH；サイクル31) Fmoc-Asp(OtBu)-OH；サイクル32) Fmoc-Pro-OH；サイクル33) Fmoc-Lys(Boc)-OH；サイクル34) Fmoc-Ser(tBu)-OH；サイクル35) Fmoc-Pro-OH；サイクル36) Fmoc-Tyr(tBu)-OH。
【００４５】
一度ペプチドのバックボーンが完成したら、標準的なピペリジン処理を用いて、前に記述した標準的な脱保護の手順を用いてＮ末端のFmoc基を除去した。次いで樹脂をDMFで完全に洗浄し、次いで移動用の溶媒としてDMFを用いて50 mlコニカルチューブに戻した。
【００４６】
5 mlの次の試薬を用いた処理によりその樹脂を脱保護し、樹脂から切り離した：5% TIS、2%水、5% (w/v) DTT、および88% TFA、ならびに３．５時間混合させた。濾液を45 mlの冷無水エチルエーテルの中に集めた。沈殿物を冷却遠心機において3500 RPMで１０分間遠心分離してペレットにした。エーテルをデカントし、ペプチドを新しいエーテル中で再懸濁した。そのエーテルでの仕上げを合計２回行った。最後のエーテルでの洗浄の後、ペプチドを風乾させて残留したエーテルを除去した。ペプチドのペレットを8 mlのアセトニトリル、続いて8 mlの脱イオン水中で再懸濁し、完全に溶解させた。
【００４７】
次いでそのペプチド溶液を質量分析により分析した。エレクトロスプレーイオン化を用いた質量分析は4212.1の質量を含む主生成物を同定し、これは望まれる生成物と一致する。250 x 4.6 mm C18カラム(Phenomenex、米国カリフォルニア州トーランス)を用いる、３０分間にわたる2〜60%アセトニトリル(0.1% TFA)の勾配を用いる分析的HPLC分析は、45％の純度を有する主生成物を同定した。次いでその粗製のペプチドを、C18逆相カラムを備えた分取ＨＰＬＣ上で、10〜60%アセトニトリル(0.1% TFA)を用いて10 ml/分の流速で50分間かけて精製した。その精製された生成物を純度に関してＨＰＬＣにより(＞99%)、および質量分析により(4212.8ダルトン)分析し、その実測質量は予想される質量である4212.7と十分に一致していた。続いてそのペプチドを凍結乾燥させると39 mgの精製された生成物が得られ、これは9%の収率を表している。
【００４８】
実施例２：[Aib17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2
表題のペプチドを、Ｆｍｏｃ化学を用いて組み立てた。ペプチドのＣ末端部分(残基18〜36)をＡＢＩ  ４３３Ａペプチド合成機(Applied Biosystems、米国カリフォルニア州フォスターシティ)上で、1.0 mmoleスケールで合成した。1.37 gの0.73 mmol / RinkアミドMBHA樹脂(Novabiochem、米国カリフォルニア州サンディエゴ)を含む反応容器を反応容器の中に置いた。次いでその樹脂を10 mlのNMPで15分間処理して樹脂を膨潤させた。ABI FastMoc 1.0（登録商標）プロトコルを用いてペプチドを生成した。
【００４９】
それぞれのサイクルは、20％ピペリジンを用いたＮ末端Fmocの脱保護およびそれに続く大規模なNMP洗浄を含んでいた。次いでそれぞれのアミノ酸の予め包装された1.0 mmoleのカートリッジを0.45M HOBT/HBTU中で溶解させた。アミノ酸が溶解した後、それを自動的に活性化容器に移した。さらに２個の1.0 mmoleのアミノ酸カートリッジを溶解させて活性化容器に移し、カップリングの工程あたり合計３当量のアミノ酸を用いた。次いで、合計６当量のDIPEAのため、DIPEAの2M溶液3 mlを活性化容器に導入した。
【００５０】
次いでこの混合物全部を樹脂に導入し、１５分間混合させた。反応容器を空にし、NMPで洗浄し、次いで第２カップリング工程を続いて行った。第２カップリング工程の後、樹脂を再度完全に洗浄した。それぞれのアミノ酸を同様の方式で二重カップリングした。最初のTyr残基のカップリング工程の後、次の４つのカップリング工程のそれぞれ、およびそれぞれのArgのカップリング工程のため、樹脂を5 mlのキャッピング溶液(0.5M無水酢酸/ 0.13M DIPEA / 0.01M HOBT)でキャッピングしてあらゆるアセチル化されていない樹脂の部位を保護した。カップリング工程に関して次のアミノ酸カートリッジを用いた：サイクル1) Fmoc-Tyr(tBu)-OH；サイクル2) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；サイクル3) Fmoc-4Hyp-OH；サイクル4) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；サイクル5) Fmoc-Thr(tBu)-OH；サイクル6) Fmoc-Ile-OH；サイクル7) Fmoc-Leu-OH；サイクル8) Fmoc-Asn(Trt)-OH；サイクル9) Fmoc-Ile-OH；サイクル10) Fmoc-Tyr(tBu)-OH；サイクル11) Fmoc-His(Trt)-OH；サイクル12) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；サイクル13) Fmoc-Leu-OH；サイクル14) Fmoc-Ala-OH；サイクル15) Fmoc-Ser(tBu)-OH；サイクル16) Fmoc-Tyr(tBu)-OH；サイクル17) Fmoc-Tyr(tBu)-OH；サイクル18) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；およびサイクル19) Fmoc-Ala-OH。
【００５１】
最後のカップリングサイクルの後、樹脂をNMPで洗浄し、続いて標準的なＮ末端Fmocの脱保護を行い、NMPで、続いてDCMで洗浄した。ペプチドバックボーンのＣ末端部分(残基18〜36)の組み立ての後、樹脂の１０分の１(0.1 mmole)を用いてペプチドのＮ末端部分を構築し、残りを保存した。表題のペプチドのＮ末端部分(残基1〜17)を、Liberty Peptide Synthesizer (CEM、米国ノースキャロライナ州マシューズ)上で、0.1 mmoleスケールで、マイクロ波支援Fmoc化学を用いて構築した。前の合成からの樹脂を50 mlコニカルチューブに15 mlのDMFと共に入れ、合成機上の樹脂の位置上に装填した。次いでその樹脂を、自動化されたプロセスにより定量的に反応容器に移した。DMF中の0.1M HOBTを含む20% ピペリジン7 mlを用いた最初の処理によるＮ末端のFmoc部分の脱保護を含め、0.1 mmoleスケールでの合成のための標準的なLiberty合成プロトコルを用いた。その最初の脱保護の工程は、マイクロ波電力（４５ワット、最大温度７５℃）および窒素による泡立て（３秒間オン／７秒間オフ）を用いて３０秒間続いた。次いで反応容器から液体を排出し、第１の処理と同じ第２のピペリジン処理を３分間適用した。次いで樹脂から液体を排出し、DMFで数回、完全に洗浄した。次いで、DMF中0.2Mストック溶液として調製された保護されたアミノ酸、Fmoc-Aib-OHを添加し(2.5 ml、5当量)、続いて1.0 mlのDMF中0.45M (4.5当量)HBTUを添加した。これに続き0.5 mlのNMP中2M (10当量) DIPEAを添加した。カップリングの工程は、２０ワットのマイクロ波電力、７５℃の最大温度、および同程度の窒素による泡立てを用いて５分間行った。最初のカップリングの工程の後、反応容器から液体を排出して廃棄し、カップリングの工程を繰り返した。
【００５２】
次いでサイクル１と同様のサイクル２を開始した。全てのアミノ酸を同様にして導入し、シークエンス全体を通して二重カップリングの方法を用いた。残基16-17 (Asp-Aib)は、カップリングの工程のすぐ後にキャッピングの手順を含んでいた。キャッピングは、NMP中の0.015M HOBTを含む0.5M無水酢酸7 mlおよび2M DIPEA溶液2 mlの添加により、多段階マイクロ波プロトコルを用いて行った：５０ワットの電力で３０秒間（最大温度６５℃）、続いて３０秒間のマイクロ波電力オフ、続いて第２ラウンドの３０秒間のマイクロ波電力オン（５０ワット）、次いで再び３０秒間のマイクロ波電力無し。次いで樹脂から液体を排出し、DMFで完全に洗浄した。次のアミノ酸(Advanced Chemtech、米国ケンタッキー州ルイスビル)を用いた：サイクル20) Fmoc-Aib-OH；サイクル21) Fmoc-Asp(OtBu)-OH；サイクル22) Fmoc-Glu(OtBu)-OH；サイクル23) Fmoc-Ala-OH；サイクル24) Fmoc-Pro-OH；サイクル25) Fmoc-Ala-OH；サイクル26) Fmoc-Asp(OtBu)-OH；サイクル27) Fmoc-Glu(OtBu)-OH；サイクル28) Fmoc-Gly-OH；サイクル29) Fmoc-Pro-OH；サイクル30) Fmoc-Asn(Trt)-OH；サイクル31) Fmoc-Asp(OtBu)-OH；サイクル32) Fmoc-Pro-OH；サイクル33) Fmoc-Lys(Boc)-OH；サイクル34) Fmoc-Ser(tBu)-OH；サイクル35) Fmoc-Pro-OH；およびサイクル36) Fmoc-Tyr(tBu)-OH。
【００５３】
一度ペプチドのバックボーンが完成したら、標準的なピペリジン処理を用いて、前に記述した標準的な脱保護の手順を用いてＮ末端のFmoc基を除去した。次いで樹脂をDMFで完全に洗浄し、次いで移動用の溶媒としてDMFを用いて50 mlコニカルチューブに戻した。
【００５４】
5 mlの次の試薬を用いた処理によりその樹脂を脱保護し、樹脂から切り離した：5% TIS、2%水、5% (w/v) DTT、および88% TFA、ならびに３．５時間混合させた。濾液を45 mlの冷無水エチルエーテルの中に集めた。沈殿物を冷却遠心機において3500 RPMで１０分間遠心分離してペレットにした。エーテルをデカントし、ペプチドを新しいエーテル中で再懸濁した。そのエーテルでの仕上げを合計２回行った。最後のエーテルでの洗浄の後、ペプチドを風乾させて残留したエーテルを除去した。ペプチドのペレットを8 mlのアセトニトリル、続いて8 mlの脱イオン水中で再懸濁し、完全に溶解させた。
【００５５】
次いでそのペプチド溶液を質量分析により分析した。エレクトロスプレーイオン化を用いた質量分析は4210.8の質量を含む主生成物を同定し、これは望まれる生成物と一致する。250 x 4.6 mm C18カラム(Phenomenex、米国カリフォルニア州トーランス)を用いる、３０分間にわたる2〜60%アセトニトリル(0.1% TFA)の勾配を用いる分析的HPLC分析は、54％の純度を有する主生成物を同定した。次いでその粗製のペプチドを、C18逆相カラムを備えた分取ＨＰＬＣ上で、10〜60%アセトニトリル(0.1% TFA)を用いて10 ml/分の流速で50分間かけて精製した。その精製された生成物を純度に関してＨＰＬＣにより(＞99%)、および質量分析により(4210.6ダルトン)分析し、その実測質量は予想される質量である4210.6と一致していた。続いてそのペプチドを凍結乾燥させると53mgの精製された生成物が得られ、これは13%の収率を表している。
【００５６】
実施例３：[Aib11,17, 4Hyp34]hNPY(1-36)-NH2
表題のペプチドを、Ｆｍｏｃ化学を用いて組み立てた。ペプチドのＣ末端部分(残基18〜36)をＡＢＩ  ４３３Ａペプチド合成機(Applied Biosystems、米国カリフォルニア州フォスターシティ)上で、1.0 mmoleスケールで合成した。1.37 gの0.73 mmol / RinkアミドMBHA樹脂(Novabiochem、米国カリフォルニア州サンディエゴ)を含む反応容器を反応容器の中に置いた。次いでその樹脂を10 mlのNMPで15分間処理して樹脂を膨潤させた。ABI FastMoc 1.0（登録商標）プロトコルを用いてペプチドを生成した。
【００５７】
それぞれのサイクルは、20％ピペリジンを用いたＮ末端Fmocの脱保護およびそれに続く大規模なNMP洗浄で構成されていた。次いでそれぞれのアミノ酸の予め包装された1.0 mmoleのカートリッジを0.45M HOBT/HBTU中で溶解させた。アミノ酸が溶解した後、それを自動的に活性化容器に移した。さらに２個の1.0 mmoleのアミノ酸カートリッジを溶解させて活性化容器に移し、カップリングの工程あたり合計３当量のアミノ酸を用いた。次いで、合計６当量のDIPEAのため、DIPEAの2M溶液3 mlを活性化容器に導入した。
【００５８】
次いでこの混合物全部を樹脂に導入し、１５分間混合させた。反応容器を空にし、NMPで洗浄し、次いで第２カップリング工程を続いて行った。第２カップリング工程の後、樹脂を再度完全に洗浄した。それぞれのアミノ酸を同様の方式で二重カップリングした。最初のTyr残基のカップリング工程の後、次の４つのカップリング工程のそれぞれ、およびそれぞれのArgのカップリング工程のため、樹脂を5 mlのキャッピング溶液(0.5M無水酢酸/ 0.13M DIPEA / 0.01M HOBT)でキャッピングしてあらゆるアセチル化されていない樹脂の部位を保護した。カップリング工程に関して次のアミノ酸カートリッジを用いた：サイクル1) Fmoc-Tyr(tBu)-OH；サイクル2) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；サイクル3) Fmoc-4Hyp-OH；サイクル4) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；サイクル5) Fmoc-Thr(tBu)-OH；サイクル6) Fmoc-Ile-OH；サイクル7) Fmoc-Leu-OH；サイクル8) Fmoc-Asn(Trt)-OH；サイクル9) Fmoc-Ile-OH；サイクル10) Fmoc-Tyr(tBu)-OH；サイクル11) Fmoc-His(Trt)-OH；サイクル12) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；サイクル13) Fmoc-Leu-OH；サイクル14) Fmoc-Ala-OH；サイクル15) Fmoc-Ser(tBu)-OH；サイクル16) Fmoc-Tyr(tBu)-OH；サイクル17) Fmoc-Tyr(tBu)-OH；サイクル18) Fmoc-Arg(Pbf)-OH；およびサイクル19) Fmoc-Ala-OH。最後のカップリングサイクルの後、樹脂をNMPで洗浄し、標準的なＮ末端Fmocの脱保護により脱保護し、再度NMPで、続いてDCMで洗浄した。
【００５９】
ペプチドバックボーンのＣ末端部分(残基18〜36)の組み立ての後、樹脂の１０分の１(0.1 mmole)を用いてペプチドのＮ末端部分を構築し、残りは取っておいた。表題のペプチドのＮ末端部分(残基1〜17)を、Liberty Peptide Synthesizer (CEM、米国ノースキャロライナ州マシューズ)上で、0.1 mmoleスケールで、マイクロ波支援Fmoc化学を用いて構築した。前の合成からの樹脂を50 mlコニカルチューブに15 mlのDMFと共に入れ、合成機上の樹脂の位置上に装填した。次いでその樹脂を、自動化されたプロセスにより定量的に反応容器に移した。0.1 mmoleスケールでの合成のための標準的なLiberty合成プロトコルを用いた。このプロトコルには、DMF中の0.1M HOBTを含む20% ピペリジン7 mlを用いた最初の処理によるＮ末端のFmoc部分の脱保護が含まれている。その最初の脱保護の工程は、マイクロ波電力（４５ワット、最大温度７５℃）および窒素による泡立て（３秒間オン／７秒間オフ）を用いて３０秒間続いた。次いで反応容器から液体を排出し、それが３分間の期間であったこと以外は第１の処理と同じである第２のピペリジン処理を適用した。次いで樹脂から液体を排出し、DMFで数回、完全に洗浄した。次いで、DMF中0.2Mストック溶液として調製された保護されたアミノ酸、Fmoc-Aib-OHを添加し(2.5 ml、5当量)、続いて1.0 mlのDMF中0.45M (4.5当量)HBTUを添加した。これに続き0.5 mlのNMP中2M (10当量) DIPEAを添加した。カップリングの工程は、７５℃の最大温度における２０ワットのマイクロ波電力、および同程度の窒素による泡立てを用いて５分間行った。最初のカップリングの工程の後、反応容器から液体を排出して廃棄し、カップリングの工程を繰り返した。
【００６０】
次いでサイクル１と同様のサイクル２を開始した。全てのアミノ酸を同様にして導入し、プロセス全体を通して二重カップリングの方法を用いた。残基10-11および16-17(Glu-AibおよびAsp-Aib)は、それぞれのカップリングの工程のすぐ後にキャッピングの手順を含んでいた。キャッピングは、NMP中の0.015M HOBTを含む0.5M無水酢酸7 mlおよび2M DIPEA溶液2 mlの添加により、多段階マイクロ波プロトコルを用いて行った：５０ワットの電力で３０秒間（最大温度６５℃）、続いて３０秒間のマイクロ波電力オフ、続いて第２ラウンドの３０秒間のマイクロ波電力オン（５０ワット）、次いで再び３０秒間のマイクロ波電力無し。次いで樹脂から液体を排出し、DMFで完全に洗浄した。次のアミノ酸(Advanced Chemtech、米国ケンタッキー州ルイスビル)を用いた：サイクル20) Fmoc-Aib-OH；サイクル21) Fmoc-Asp(OtBu)-OH；サイクル22) Fmoc-Glu(OtBu)-OH；サイクル23) Fmoc-Ala-OH；サイクル24) Fmoc-Pro-OH；サイクル25) Fmoc-Ala-OH；サイクル26) Fmoc-Aib-OH；サイクル27) Fmoc-Glu(OtBu)-OH；サイクル28) Fmoc-Gly-OH；サイクル29) Fmoc-Pro-OH；サイクル30) Fmoc-Asn(Trt)-OH；サイクル31) Fmoc-Asp(OtBu)-OH；サイクル32) Fmoc-Pro-OH；サイクル33) Fmoc-Lys(Boc)-OH；サイクル34) Fmoc-Ser(tBu)-OH；サイクル35) Fmoc-Pro-OH；およびサイクル36) Fmoc-Tyr(tBu)-OH。
【００６１】
一度ペプチドのバックボーンが完成したら、標準的なピペリジン処理を用いて、前に記述した標準的な脱保護の手順を用いてＮ末端のFmoc基を除去した。次いで樹脂をDMFで完全に洗浄し、次いで移動用の溶媒としてDMFを用いて50 mlコニカルチューブに戻した。
【００６２】
5 mlの次の試薬を用いた処理によりその樹脂を脱保護し、樹脂から切り離した：5% TIS、2%水、5% (w/v) DTT、および88% TFA、ならびに３．５時間混合させた。濾液を45 mlの冷無水エチルエーテルの中に集めた。沈殿物を冷却遠心機において3500 RPMで１０分間遠心分離してペレットにした。エーテルをデカントし、ペプチドを新しいエーテル中で再懸濁した。そのエーテルでの仕上げを合計２回行った。最後のエーテルでの洗浄の後、ペプチドを風乾させて残留したエーテルを除去した。ペプチドのペレットを8 mlのアセトニトリル、続いて8 mlの脱イオン水中で再懸濁し、完全に溶解させた。
【００６３】
次いでそのペプチド溶液を質量分析により分析した。エレクトロスプレーイオン化を用いた質量分析は4180.7の質量を含む主生成物を同定し、これは望まれる生成物と一致する。250 x 4.6 mm C18カラム(Phenomenex、米国カリフォルニア州トーランス)を用いる、３０分間にわたる2〜60%アセトニトリル(0.1% TFA)の勾配を用いる分析的HPLC分析は、68％の純度を有する主生成物を同定した。次いでその粗製のペプチドを、C18逆相カラムを備えた分取ＨＰＬＣ上で、10〜60%アセトニトリル(0.1% TFA)を用いて10 ml/分の流速で50分間かけて精製した。その精製された生成物を純度に関してＨＰＬＣにより(＞99%)、および質量分析により(4180.5ダルトン)分析し、その実測質量は予想される質量である4180.6と一致していた。続いてそのペプチドを凍結乾燥させると53mgの精製された生成物が得られ、これは13%の収率を表している。
【００６４】
当業者は、本発明の他の化合物を、上記の実施例で開示された合成手順に類似した合成手順を用いて調製することができる。本明細書において例示されている化合物に関する物理的データを表１に示す。
【００６５】
表１
【００６６】
【表１−１】
0005480301.tif 000005
【００６７】
【表１−２】
0005480301.tif 000006
【００６８】
インビトロ放射リガンドNPY-Y1およびNPY-Y2受容体結合アッセイ
それぞれ(respectifully)NPY-Y1およびNPY-Y2受容体を発現する、ヒト神経芽細胞腫細胞株SK-N-MCおよびSK-N-BE2 (アメリカ培養細胞系統保存機関、米国メリーランド州ロックビル)を、10%ウシ胎児血清および5%ニワトリ胚抽出物を含むEMEM中で培養し、95%空気および5% CO2の加湿した雰囲気中で37℃で維持した。
【００６９】
インビトロNPY-Y1およびNPY-Y2放射リガンド結合アッセイのため、適切な細胞(NPY-Y1に関してSK-N-MC; NPY-Y2に関してSK-N-BE2)を収集し、20 mlの氷冷した50 mM Tris-HCl中でBrinkman Polytron (米国ニューヨーク州ウエストベリー)を用いてホモジナイズした(設定６、１５秒)。ホモジネートを遠心分離(39,000 g / 10分間)により２回洗浄し、最終的なペレットを、2.5 mM MgCl2、0.1 mg/mlバシトラシン(Sigma Chemical、米国ミズーリ州セントルイス)、および0.1% BSAを含む50 mM Tris-HCl中で再懸濁した。
【００７０】
アッセイのため、前記の懸濁液の分割量(aliquots) (0.4 ml)を、0.05 nM [125I]PYY (2200 Ci/mmol, Perkin-Elmer、マサチューセッツ州ボストン)と共に、0.05 mlの未標識の競合する試験ペプチド有りおよび無しで保温した。１００分間の保温(25 ℃)の後、結合した[125I]PYYを、予め0.3%ポリエチレンイミンに浸したGF/Cフィルター(Brandel、米国メリーランド州ゲーサーズバーグ)を通す急速濾過により、遊離のものから分離した。次いでそのフィルターを氷冷した50 mM Tris-HClの5 mlの分割量で３回洗浄し、フィルター上に捕えられた結合した放射活性をガンマ分光法(Wallac LKB、米国メリーランド州ゲーサーズバーグ)により計数した。特異的な結合を、結合した全[125I]PYYから1000 nM PYY (Bachem、米国カリフォルニア州トーランス)の存在下で結合した[125I]PYYを引いたものとして定義した。阻害定数(Ki)は、周知であるチェン・プルソフの等式(Cheng-Prusoff equation)および前記のデータを用いて算出し、それをNPY-Y1およびNPY-Y2に関する前記化合物の選択性と一緒に表２に示す。
【００７１】
実施例１〜３８および４０〜４５の化合物のそれぞれに対してすぐ前で記述した放射リガンドアッセイを行い、前記化合物のほぼ全てが100 nMより下のKiを有しており、同様に例示した化合物の一部はnMより下の範囲のKiの値を有していることが分かった。前記化合物のほぼ全てがNPY-Y2と比較してNPY-Y1に対して高度に選択的に結合することも分かった。
【００７２】
表２
【００７３】
【表２−１】
0005480301.tif 000007
【００７４】
【表２−２】
0005480301.tif 000008
【００７５】
投与
この発明のペプチドは、医薬的に許容できる塩類の形で提供することができる。そのような塩類の例には、有機酸（例えば酢酸、乳酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、またはパモ酸(pamoic acid)）、無機酸（例えば塩酸、硫酸、またはリン酸）およびポリマー性の酸（例えばタンニン酸、カルボキシメチルセルロース、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、またはポリ乳酸−ポリグリコール酸のコポリマー類）により形成される塩類が含まれるが、それらに限定されない。本発明のペプチドの塩を作る典型的な方法は当技術では周知であり、標準的な塩交換の方法により成し遂げることができる。従って、本発明のペプチドのTFA塩（TFA塩は分取HPLCを用いてTFAを含む緩衝溶液で溶離することによるペプチドの精製の結果得られる）は別の塩に、例えばそのペプチドを少量の0.25 N酢酸水溶液中で溶解することにより酢酸塩に変換することができる。得られた溶液をセミ分取(semi-prep)HPLCカラム(Zorbax, 300 SB, C-8)に適用する。そのカラムを、（１）0.1N酢酸アンモニウム水溶液で０．５時間、（２）0.25N酢酸水溶液で０．５時間、および（３）4 ml/分の流速における直線勾配(３０分間にわたる20%〜100%の溶液B）（溶液Aは0.25 N酢酸水溶液であり；溶液Bはアセトニトリル/水80：20中0.25 N酢酸である）を用いて溶離する。ペプチドを含む画分を集め、凍結乾燥させる。
【００７６】
この発明の組成物中の有効成分の用量は異なっていてよいが、有効成分の量は適切な剤形が得られるようなものである必要がある。選択される用量は、望まれる療法的作用に、投与経路に、および処置の期間に依存する。一般に、この発明の活性に関する有効な用量は1 x 10-7〜200 mg/kg/日、好ましくは1 x 10-4〜100 mg/kg/日の範囲であり、それは１回量として、または多数回の用量に分けて投与することができる。
【００７７】
この発明の化合物は、経口、非経口（例えば筋内、腹膜内、静脈内または皮下の注射、または埋め込み）、経鼻、膣内、直腸内、舌下、または局所的投与経路により投与することができ、それぞれの投与経路に適した剤形を提供するために医薬的に許容できるキャリヤーと共に配合することができる。
【００７８】
経口投与のための固体剤形には、カプセル、錠剤、丸剤、粉末および顆粒が含まれる。そのような固体剤形において、有効化合物は少なくとも１種類の不活性な医薬的に許容できるキャリヤー、例えばスクロース、ラクトースまたはデンプンと混合される。そのような剤形はそのような不活性な希釈剤以外の追加の物質、例えば潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムも含むことができ、それが通常の慣習である。カプセル、錠剤および丸剤の場合、その剤形は緩衝剤も含んでいてよい。錠剤および丸剤はさらに腸溶コーティングを用いて調製することができる。
【００７９】
経口投与のための液体剤形には、当技術で一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば水を含む、医薬的に許容できる乳濁液、溶液、懸濁液、シロップ、エリキシルおよび同様のものが含まれるが、それらに限定されない。そのような不活性な希釈剤の他に、組成物は補助剤、例えば湿潤剤、乳濁化および懸濁化剤、ならびに甘味料、香味料および香料も含むことができる。
【００８０】
非経口投与のためのこの発明に従う製剤には、無菌の水溶液または非水溶液、懸濁液、乳濁液および同様のものが含まれるが、それらに限定されない。非水性溶媒またはビヒクルの例には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油およびトウモロコシ油、ゼラチン、ならびに注射可能な有機エステル類、例えばオレイン酸エチルが含まれる。そのような剤形は補助剤、例えば保存、湿潤、乳濁化および分散剤も含んでいてよい。それらは例えば細菌を保持するフィルターを通す濾過により、組成物に滅菌剤を組み込むことにより、組成物を照射することにより、または組成物を加熱することにより滅菌されてよい。それらは、滅菌水または何らかの他の無菌の注射可能な媒体に使用の直前に溶解させることができる無菌の固体組成物の形で製造することもできる。
【００８１】
直腸内または膣内投与のための組成物は好ましくは坐剤であり、それは有効物質に加えて賦形剤、例えばカカオ脂(coca butter)または坐剤ワックスを含んでいてよい。
経鼻または舌下投与のための組成物も、当技術で周知の標準的な賦形剤を用いて調製される。
【００８２】
さらに、この発明の化合物は徐放性組成物、例えば下記の特許および特許出願において記述されている徐放性組成物で投与することができる。米国特許第５，６７２，６５９号は、生理活性薬剤およびポリエステルを含む徐放性組成物を教示する。米国特許第５，５９５，７６０号は、生理活性薬剤をゲル化可能な(gelable)形で含む徐放性組成物を教示する。米国特許第５，８２１，２２１号は、生理活性薬剤およびキトサンを含むポリマー性徐放性組成物を教示する。米国特許第５，９１６，８８３号は、生理活性薬剤およびシクロデキストリンを含む徐放性組成物を教示する。ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／３８５３６号は、生理活性薬剤の吸収性徐放性組成物を教示する。ＰＣＴ公開第ＷＯ００／０４９１６号は、療法薬、例えばペプチドを含む微粒子を水中油プロセスで作るためのプロセスを教示する。ＰＣＴ公開第ＷＯ００／０９１６６号は、療法薬、例えばペプチドおよびリン酸化ポリマーを含む複合体を教示する。ＰＣＴ公開第ＷＯ００／２５８２６号は、療法薬、例えばペプチドおよび重合可能ではないラクトンを有するポリマーを含む複合体を教示する。
【００８３】
別途定義しない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的な用語はこの発明が属する技術の当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。また、本明細書で言及された全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献をそれぞれそのまま本明細書に援用する。
【配列表】
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