(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
臨床上有効量の（１Ｓ，３Ｓ）−１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸を含有する、セロトニン再取り込みを阻害することにより改善する疾患又は状態を治療又は予防するための医薬品。
【請求項２】
トリプトファンを含有する培地において（１Ｓ，３Ｓ）−１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸生産能を有する乳酸菌又はその加工品を含有する、セロトニン再取り込みを阻害することにより改善する疾患又は状態を治療又は予防するための医薬品。
【請求項３】
トリプトファンを含有する培地において（１Ｓ，３Ｓ）−１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸生産能を有する乳酸菌の培養上清又はその加工品を含有する、セロトニン再取り込みを阻害することにより改善する疾患又は状態を治療又は予防するための医薬品。
【請求項４】
有効量の（１Ｓ，３Ｓ）−１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸を含有する、セロトニン再取り込みを阻害することにより改善する疾患又は状態を治療又は予防するための剤。
【請求項５】
トリプトファンを含有する培地において（１Ｓ，３Ｓ）−１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸生産能を有する乳酸菌又はその加工品を含有する、セロトニン再取り込みを阻害することにより改善する疾患又は状態を治療又は予防するための剤。
【請求項６】
トリプトファンを含有する培地において（１Ｓ，３Ｓ）−１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸生産能を有する乳酸菌の培養上清又はその加工品を含有する、セロトニン再取り込みを阻害することにより改善する疾患又は状態を治療又は予防するための剤。
【請求項７】
医薬品又は食品として許容される添加剤をさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬品又は剤。
【請求項８】
前記乳酸菌が、ストレプトコッカス属（Streptococcus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ペディオコッカス属（Pediococcus）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）、テトラジェノコッカス属（Tetragenococcus）、ウェイセラ属（Weissella）、エンテロコッカス属（Enterococcus）、メリスコッカス属（Melissococcus）、ラクトコッカス属（Lactococcus）、カルノバクテリウム属（Carnobacterium）、バゴコッカス属（Vagococcus）、アトポビウム属（Atopobium）、ラクトスフェアエラ属（Lactosphaera）、オエノコッカス属（Oenococcus）、アビトロフィア属（Abiotrophia）、パララクトバシルス属（Paralactobacillus）、グラヌリカテラ属（Granulicatella）、アトポバクター属（Atopobactor）、アルカリバクテリウム属（Alkalibacterium）、又はオルセネラ属（Olsenella）に属する、請求項２、３、５、及び６のいずれか１項に記載の医薬品又は剤。
【請求項９】
前記乳酸菌が、ラクトバチルス・プランタラム又はラクトバチルス・ブレビスに属する、請求項２、３、５、６、及び８のいずれか１項に記載の医薬品又は剤。
【請求項１０】
セロトニン再取り込みを阻害することにより改善する疾患又は状態が、うつ病である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬品又は剤。
【請求項１１】
セロトニン再取り込みを阻害することにより改善する疾患又は状態が、うつ病の合併症である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬品又は剤。
【請求項１２】
セロトニン再取り込みを阻害することにより改善する疾患又は状態が、学習意欲の減退である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬品又は剤。
【請求項１３】
（１Ｓ，３Ｓ）−１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸生産能を有する乳酸菌をトリプトファンを含有する培地で培養する工程を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬品又は剤の製造方法。
【請求項１４】
（１Ｓ，３Ｓ）−１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸のみを有効成分として含むセロトニン再取り込み阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、（１Ｓ，３Ｓ）−１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸（（1S,3S）-1-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid）を有効成分とするセロトニントランスポーター阻害活性を有する、うつ病、またはその合併症の予防または治療用組成物、または学習意欲改善用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
うつ病は大きな社会問題となっている。米国における調査では、うつ病性障害の生涯有病率は女性が２６％、男性が１２％と見積もられている (非特許文献１)。また、日本においても大規模な調査が行われ、生涯有病率は１４％であると報告されている。また、うつ病の患者のうち８４％に合併症がみられ、６１％にその他の精神疾患がみられ、３０％に人格障害がみられ、５８％に身体疾患の合併がみられると報告されている(非特許文献２)。【０００３】
うつ病の一般的な症状としては、憂鬱気分、無気力、うつ的考え方、希死念慮、焦燥感、不眠、食欲低下、性欲低下、身体不調等、多岐に及ぶ。病的に重い抑うつは大うつ病と呼ばれる。大うつ病に関しては、初発４０週まではかなり急速に回復する場合が多いが、それ以降は回復が頭打ちであるという実験データが報告されている。大うつ病の患者を２０年間追跡調査した結果では、１５〜１９％の患者に就労困難などの慢性的な残遺症状が残るという報告がある(非特許文献３)。【０００４】
うつ病の原因としては様々な説が提唱されている。最も初期に提唱され、いまだに有力な仮説は、脳内におけるモノアミン機能の低下がうつ病に関連するという説である（脳内モノアミン仮説とよばれる）。これは、モノアミンの細胞内再取り込みを遮断することにより脳内のモノアミン機能を強化する作用を有する三環系抗うつ薬が、うつ病の緩解に対して効果を有することから提唱される説である。【０００５】
現在では、脳内モノアミンの一種であるセロトニンの機能に特に関心が集まっており、セロトニン神経細胞体に存在するセロトニン−１受容体の感作を生じさせ前シナプス細胞からの遊離セロトニン量を増加させることにより抗うつ作用がもたらされるという仮説が有力視されている(非特許文献４)。この考え方は古典的な脳内モノアミン仮説と基本的に同一の考え方である。うつ病は、いずれにしろ、脳内におけるセロトニン機能の低下に原因があると考えられている。【０００６】
うつ病に対する薬剤治療としては、まず、三環系抗うつ薬であるイミプラミンと、モノアミン酸化酵素阻害薬が約４０年前に開発されている。これらの薬物の持つ特性の一つであるシナプス間隙におけるセロトニンやノルアドレナリンの増加作用が抗うつ効果の中心であるという考え方に基づき、これらの後にも多くの抗うつ薬が開発されている。近年では、セロトニントランスポーターによるこれらモノアミンの再取り込みをより選択的に阻害する、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）とセロトニン／ノルエピネフリン再取り込み阻害薬（ＳＮＲＩ）が臨床の場で使用され始めている。日本において現在認可されている抗うつ薬は、三環系・四環系抗うつ薬、ＳＳＲＩ、ＳＮＲＩなど１７種類にのぼっている(非特許文献５)。【０００７】
これらの抗うつ薬はうつ病以外にも様々な病態に対する効能を有し、医薬品医療機器総合機構の示す各医薬品の添付文章によれば、例えばＳＳＲＩであるマレイン酸フルボキサミンは強迫性障害及び社会不安障害に対して効能を有し、ＳＳＲＩである塩酸パロキセチンはパニック障害及び強迫性障害に対して効能を有し、ＳＳＲＩである塩酸セルトラリンはパニック障害に対して効能を有する。また、三環系のＳＮＲＩである塩酸アミトリプチリンは夜尿症に対して効能を有する。【０００８】
一方で、これらの抗うつ薬には副作用が存在することが報告されている。例えばＳＳＲＩにおいては吐き気、頭痛、神経過敏等が挙げられており、ＳＮＲＩにおいては振戦、頻脈、勃起・射精障害等が挙げられている。複数の種類の抗うつ薬を投与した場合においては、単剤投与に比べ副作用が増える例が複数報告されている(非特許文献６)。【０００９】
抗うつ薬は服用を中止した場合、離脱症状が発生する場合があるという報告もある。三環系・四環系抗うつ薬の離脱症状としては、無気力、嘔吐及び頭痛などの不安や焦燥を伴うような消化器症状や身体的不快感；不眠及び多夢などの睡眠障害；アカガシア及びパーキンソン症状などの運動障害；躁状態に移行するような行動の活性化；不整脈などが報告されている。これらの症状は、不整脈を除いて、ＳＳＲＩの離脱症状でも同様に認められる(非特許文献７)。ＳＳＲＩに特徴的な離脱症状としては、平衡感覚の障害、感覚異常、及び攻撃的・衝動的行動などが報告されている(非特許文献８）。【００１０】
以上のように、現在広く使用されている抗うつ薬には副作用があることが報告されており、これら抗うつ薬の代わりに適用できる食経験のある安全な食品素材及び食品成分の開発が期待されている。抗うつ作用を有する食品由来の組成物としては、ローヤルゼリー由来の組成物（特許文献１）や、ホップエキスを主成分とする組成物（特許文献２）の報告がある。【００１１】
１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸（1-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid（ＭＴＣＡ））は、レモン、グレープフルーツ、オレンジ、マンダリン等の果物や（非特許文献９）、ビール、ワインや（非特許文献１０）、しょうゆ（非特許文献１１）等に含有される化合物であり、（１Ｓ，３Ｓ）及び（１R，３S）の２種類のジアステレオマーが知られている。ＭＴＣＡは、トリプトファンとアセトアルデヒドの存在下で非発酵的に生成することが知られており、特に（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ（（１Ｓ，３Ｓ）−２，３，４，９−テトラヒドロ−１−メチル−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］−インドール−３−カルボン酸ともいう）はS.cerevisiaeによる発酵で生成することが知られている（非特許文献１２）。また、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡは、抗酸化作用を有することが知られており、γクリスタリンのＦｅＣｌ3を用いたフェントン反応による自己重合反応を防ぐことが知られており、γクリスタリンの光重合反応を防ぐことが知られている（非特許文献１３）。また、カルボリン化合物であるピノリン（６−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン）（Pinoline 、6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydro-beta-carboline）は、モノアミン酸化酵素Ａの活性を阻害し、また脳内におけるセロトニンの取り込みを阻害するとの記載がある。（非特許文献14）。また、ピノリンは、ラットを用いた強制水泳試験においてラットの不動時間を短縮することが報告されており、これは三環系の抗うつ薬と同様の作用であると報告されている（非特許文献15）。【００１２】
しかしながら、ＭＴＣＡのセロトニン取り込み阻害作用や、抗うつ効果、学習意欲改善効果に関してはまったく知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】特開２００４−１３１４０７号公報
【特許文献２】特開２００２−５８４５０号公報
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】APA : Am J Psychiatry 157(Suppl 4):1-20,2000
【非特許文献２】Pincus HA, et al : Arch Gen Psychiatry 56:442-449,1999
【非特許文献３】野村総一郎:平成13年度厚生労働省,災害科学に関する委託研究報告書,2001
【非特許文献４】野村総一:別冊  日本臨床 精神医学症候群I 38:236-239,2003
【非特許文献５】田中輝明ら:別冊  日本臨床 精神医学症候群I 38:362-365,2003
【非特許文献６】山脇成人ら:別冊  日本臨床 精神医学症候群I 38:370-373,2003
【非特許文献７】Tamam L, et al : Adv Ther 19:17-26,2002
【非特許文献８】Haddad P : J Psychopharmacol 12:305-313,1996
【非特許文献９】T. Herraiz : J. Agric. Food Chem, 47 4883-4887,1999
【非特許文献１０】T. Herraiz : J. Agric. Food Chem, 44 3057-3065,1996
【非特許文献１１】Shuichi M, et al : Biosci. Biotechnol. Biochem, 69 2232-2235,2005
【非特許文献１２】Tomas H, et al : J. Agric. Food Chem, 41 959-964,1993
【非特許文献１３】Koteppa P, et al : J. Biol. Chem, 275 2455-2462,2000
【非特許文献１４】Pаhkla R, et al : Pharmacol Toxicol, 80 122-126,1997
【非特許文献１５】Pаhkla R, et al : Pharmacol Research, 34 73-78,1996
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
従来、うつ病またはその合併症の予防または治療薬、及び学習意欲改善薬は、その効果と、低副作用及び高安全性とを両立することが困難であった。また、医薬品の合成には多段階のプロセスを経る必要があり高コストとなることが課題であった。これらのことから、食品由来の物質から簡便なプロセスで得られる抗うつ活性物質ならびに学習意欲改善物質が強く求められている。本発明の課題は、効果的で安全性の高い、うつ病またはその合併症の予防または治療用の医薬品又は食品、ならびに学習意欲改善用の医薬品又は食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を行い、乳酸菌の培養上清から（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを単離・同定した。次いで、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡがin vitroの抗うつ効果の指標であるセロトニントランスポーター阻害活性を有することを発見した。【００１７】
さらに（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡの抗うつ効果を評価するため、オープンスペーススイミングにおいて意欲が低下した状態のマウスを作成し、そのマウスを用いて（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ投与時のモリス型水迷路試験における逃避台への到達時間（逃避潜時ともいう）の短縮効果を調べることにより、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡの抗うつ効果を判定した。その結果、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡには逃避台への到達時間の短縮効果があり、当該物質に抗うつ効果があることを確認した。また、モリス型水迷路試験においては、空間認識に基づく学習により逃避台への到達時間が短縮することから、本発明における逃避台への到達時間の短縮効果は、オープンスペーススイミングにおいて低下した学習意欲の改善効果とも考えられ、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡには、学習意欲改善効果があることも確認した。【００１８】
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
１．臨床上有効量の（１Ｓ，３Ｓ）−１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸を含有する、セロトニン再取り込みを阻害することにより改善する疾患又は状態を治療又は予防するための医薬品又は飲食品。
２．（１Ｓ，３Ｓ）−１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸生産能を有する微生物又はその加工品を含有する、セロトニン再取り込みを阻害することにより改善する疾患又は状態を治療又は予防するための医薬品又は飲食品。
３．（１Ｓ，３Ｓ）−１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸生産能を有する微生物の培養上清又はその加工品を含有する、セロトニン再取り込みを阻害することにより改善する疾患又は状態を治療又は予防するための医薬品又は飲食品。
４．医薬又は食品として許容される添加剤をさらに含む、上記１〜４のいずれかに記載の医薬品又は飲食品。
５．前記微生物が乳酸菌である、上記２又は３に記載の医薬品又は飲食品。
６．前記乳酸菌が、ストレプトコッカス属（Streptococcus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ペディオコッカス属（Pediococcus）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）、テトラジェノコッカス属（Tetragenococcus）、ウェイセラ属（Weissella）、エンテロコッカス属（Enterococcus）、メリスコッカス属（Melissococcus）、ラクトコッカス属（Lactococcus）、カルノバクテリウム属（Carnobacterium）、バゴコッカス属（Vagococcus）、アトポビウム属（Atopobium）、ラクトスフェアエラ属（Lactosphaera）、オエノコッカス属（Oenococcus）、アビトロフィア属（Abiotrophia）、パララクトバシルス属（Paralactobacillus）、グラヌリカテラ属（Granulicatella）、アトポバクター属（Atopobactor）、アルカリバクテリウム属（Alkalibacterium）、又はオルセネラ属（Olsenella）に属する、上記５に記載の医薬品又は飲食品。
７．前記微生物が、ラクトバチルス・プランタラム又はラクトバチルス・ブレビスに属する、上記２又は３に記載の医薬品又は飲食品。
８．セロトニン再取り込みを阻害することにより改善する疾患又は状態が、うつ病である、上記１〜３のいずれかに記載の医薬品又は飲食品。
９．セロトニン再取り込みを阻害することにより改善する疾患又は状態が、うつ病の合併症である、上記１〜３のいずれかに記載の医薬品又は飲食品。
１０．セロトニン再取り込みを阻害することにより改善する疾患又は状態が、学習意欲の減退である、上記１〜３のいずれかに記載の医薬品又は飲食品。
１１．（１Ｓ，３Ｓ）−１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸生産能を有する微生物を培地で培養する工程を含む、上記1〜３のいずれかに記載の医薬品又は飲食品の製造方法。
１２．（１Ｓ，３Ｓ）−１−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸からなるセロトニン再取り込み阻害剤。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、抗うつ効果ならびに学習意欲改善効果を有する医薬品又は飲食品が提供される。本発明の医薬品又は飲食品中の有効成分として用いられる（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡは、食品中に存在することが知られているため、他の同種の活性を有する化合物、例えば、非特許文献１４に記載の脳内物質であるピノリン（６−メトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン）などに比べて、安全性が極めて高く、副作用などへの懸念も少ないといえる。また、本発明の医薬品又は飲食品は簡便に製造できるという利点も有する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】乳酸菌培養上清から得られた画分（Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ Ｃ−３０画分）の質量分析結果
【図２】オープンスペーススイミングとモリス型水迷路試験を組合わせた行動科学的薬理試験における、単回投与での（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡの抗うつ効果ならびに学習意欲改善効果
【図３】オープンスペーススイミングとモリス型水迷路試験を組合わせた行動科学的薬理試験における、継続投与での（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡの抗うつ効果ならびに学習意欲改善効果
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明の医薬品又は飲食品は、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを有効成分として含む。本発明で用いる（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡは、次式：
【００２２】
【化１】
0005400779.tif 000002
で表される化合物である。（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを含む医薬品又は飲食品（本明細書では単に「組成物」ともいう。）は、セロトニントランスポーター阻害活性を有し、うつ病又はその合併症の処置、学習意欲改善、強迫性障害、社会不安障害パニック障害、夜尿症等に対し有効である。
【００２３】
（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡは、合成したものを使用してもよいし、試薬として市販されているものを使用してもよい。試薬としては、例えば、和光純薬工業株式会社から（１Ｓ，３Ｓ）−２，３，４，９−テトラヒドロ−１−メチル−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］−インドール−３−カルボン酸として市販されている。また、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡは、乳酸菌の培養上清；レモン、グレープフルーツ、オレンジ、マンダリン等の果物；ビール、ワイン、しょうゆなどの食品素材から抽出したものを使用してもよい。
【００２４】
（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを高度に有する食品を製造する場合、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを、食品中で生成させてもよいし、食品中に外部から添加してもよい。（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを食品中で生成させる場合には、食品中にトリプトファンとアセトアルデヒドを加え、数日間静置させ、場合によっては８０℃程度に加熱することにより、食品中に（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを非発酵的に生成させることができる。あるいは、以下に説明するように、発酵により生成させることもできる。
【００２５】
また、本発明者らは、後述の実施例に記載の通り、乳酸菌（Lactobacillus plantarumＳＡＭ２４４６株（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０４３８））培養後の培地上清中に（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡが含まれることも発見した。
【００２６】
上記の食品素材や培養上清等から（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを分画する際には、該食品素材等をそのまま分画操作に付してもよいし、あるいは、分画操作に先立って凍結乾燥や有機溶媒を用いた液々分配抽出等を行い、該素材中の（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを濃縮してもよい。分画操作としては、いずれの手法を用いてもよいが、例えば、限外ろ過処理などで粗分画を行った後に逆相カラムなどを用いて分画することができる。上記の液々分配抽出、限外ろ過処理、及び逆相カラム処理は、当業者に一般に用いられる方法で行うことができる。
【００２７】
上記方法により（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡが得られたことの確認は、例えばＭＳスペクトルやＮＭＲスペクトルを測定することにより行うことができる。
【００２８】
本発明の組成物に含まれる（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡは、例えば塩酸塩のような薬学的に許容される塩の形態で使用してもよく、体内で（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡとなるような塩（プロドラッグ）の形で使用してもよい。また、一定量の（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡが含まれていればよいため、ラセミ体を用いてもよい。
【００２９】
本発明はまた、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ生産能を有する微生物又はその加工品、あるいは該微生物の培養上清又はその加工品を含有する、前記の医薬組成物又は飲食物を提供する。
【００３０】
本明細書中において、「（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ生産能を有する微生物」とは、有効な条件で培養したときに（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを生産する微生物をいう。ここでいう有効な条件は、当業者であれば適宜決定できる。微生物の（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ生産能は、微生物（微生物自体、微生物の乾燥物、微生物の培養液、微生物の抽出物等も含む）を、例えば、液体クロマトグラフィー法（ＬＣ）、質量分析法（ＭＳ）、核磁気共鳴法（ＮＭＲ）などを用いて定法に従って分析した場合に、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ等が検出されることで確認できる。このような生産能を有する微生物には、培養条件（培地の組成、培養時の温度条件、培養時のｐＨ条件、培養密度等）を適宜調製した場合に（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ生産能を有するようになる微生物も含む。
【００３１】
上記の微生物は天然から採取したものでもよく、また、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ生産能を有するよう設計された変異体及び／又は組換え体でもよい。このような変異体及び／又は組換え体は、同組成の培地を用いて培養したときに野性株と比べて（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡの生産能が高くなるよう意図して設計されたものが含まれる。
【００３２】
このような（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ生産能を有する微生物は、例えば、乳酸菌、酵母、枯草菌等であり得る。乳酸菌としては、例えば、ストレプトコッカス属（Streptococcus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ペディオコッカス属（Pediococcus）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）、テトラジェノコッカス属（Tetragenococcus）、ウェイセラ属（Weissella）、エンテロコッカス属（Enterococcus）、メリスコッカス属（Melissococcus）、ラクトコッカス属（Lactococcus）、カルノバクテリウム属（Carnobacterium）、バゴコッカス属（Vagococcus）、アトポビウム属（Atopobium）、ラクトスフェアエラ属（Lactosphaera）、オエノコッカス属（Oenococcus）、アビトロフィア属（Abiotrophia）、パララクトバシルス属（Paralactobacillus）、グラヌリカテラ属（Granulicatella）、アトポバクター属（Atopobactor）、アルカリバクテリウム属（Alkalibacterium）、又はオルセネラ属（Olsenella）に属する微生物が挙げられ；酵母としては、例えば、カンジタ属（Candida）又はサッカロマイセス属（Saccharomyces）に属する微生物が挙げられ；枯草菌としては、バシルス・スブチルス（B. subtilis）が挙げられる。
【００３３】
特に好ましい微生物は、ラクトバチルス・プランタラム（Lactobacillus plantarum）（より特定すれば、ラクトバチルス・プランタラムＳＡＭ２４４６株（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０４３８））及びラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）（より特定すれば、ラクトバチルス・ブレビスＳＡＭ２４４７株（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０４３９））に属する乳酸菌である。
【００３４】
ラクトバチルス・プランタラムＳＡＭ２４４６株及びラクトバチルス・ブレビスＳＡＭ２４４７株は、いずれも独立行政法人産業技術総合研究所、特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６）に２００５年１０月２６日付にて受領され国際寄託されており、それぞれにＦＥＲＭ  ＢＰ−１０４３８及びＦＥＲＭ  ＢＰ−１０４３９の受託番号が付与されている。ラクトバチルス・プランタラムＳＡＭ２４４６株（ＦＥＲＭＢＰ−１０４３８）の菌学的性質を表１に、ラクトバチルス・ブレビスＳＡＭ２４４７株（ＦＥＲＭＢＰ−１０４３９）の菌学的性質を表２に示す。
【００３５】
【表１】
0005400779.tif 000003
【００３６】
【表２】
0005400779.tif 000004
本発明はまた、前記の（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ生産能を有する微生物を培地で培養する工程を含む、医薬品又は飲食品の製造方法を提供する。該微生物の培養は、適当な培地に微生物を接種し、微生物の種類に応じて当業者に公知の手法で微生物を培養することにより行うことができる。
【００３７】
微生物が乳酸菌である場合の培養の例を以下に述べる。培地としては、例えば寒天培地及び／又は液体培地を用いることができる。培地には、炭素源及び窒素源を所望の濃度で添加し、さらに、必要に応じて、無機イオン、ビタミン類等の微量栄養源を添加する。より簡便には、例えばＭＲＳ培地などの市販の培地を用い、これに必要に応じてさらに添加物を加えて用いることができる。培地を調製した後、適当な酸又は塩基を用いてｐＨを６．０〜７．０の範囲に調製し、オートクレーブ等を用いて滅菌することができる。
【００３８】
また、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡの産生量を増強する目的で、例えば適量のトリプトファンとアセトアルデヒドを培地中に添加してもよい。
【００３９】
その後、乳酸菌を培地に接種し、培養温度１０℃〜４５℃にて、通常１〜２日間、振とう培養、静置培養、又はタンク中での工業的培養などを行い、培地中で微生物を増殖させる。培養条件は、用いる微生物によって異なるが、例えばLactobacillus plantarumを用いる場合には、ｐＨ６．５前後のＭＲＳ培地を用い、３７℃前後で、１日間、静置培養することができる。このように培養した微生物を、所望により遠心分離し、さらに必要に応じて濾過し、培養上清を得ることができる。
【００４０】
（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡは、後述の実施例から明らかなように、セロトニントランスポーター阻害活性を有し、さらに抗うつ効果、学習意欲改善効果を有する。本明細書中において、疾患又は状態を処置するとは、該疾患又は状態の悪化を防ぐこと、該疾患又は状態を改善すること、並びに該疾患又は状態を予防することを含む。
【００４１】
本発明の組成物は、臨床上有効量の（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを含む。臨床上有効量とは、抗うつ効果や学習意欲改善効果等を発揮するために臨床上有効な量である。（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡの投与量に特に上限は存在しないが、経済性を考慮すれば一般に１００ｍｇ／ｋｇを超えない程度の量が好ましい。
【００４２】
本発明の組成物がその効果を充分に発揮するためには、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを１回服用当たり１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ (好ましくは２μｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは４μｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ)、より具体的には、ヒト成人を対象とする場合、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを１回服用当たり６０μｇ〜６０００ｍｇ（好ましくは１２０μｇ〜３０００ｍｇ、より好ましくは２４０μｇ〜１５００ｍｇ）含有することが望ましい。
【００４３】
本発明の組成物には、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを含む食品素材などの原料、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ産生能を有する微生物、該微生物の培養上清、ならびに該微生物を含む培養物自体などをそのまま含有させてもよいし、あるいは、これらを抽出・分画操作に付し、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを単離・精製したものを含有させてもよい。また、これらを通常の殺菌処理に付したものを用いてもよいし、減圧濃縮及び凍結乾燥などにより濃縮物や乾燥粉体等へと加工した加工品を含有させてもよい。乾燥粉体化に際しては、デキストリン、高分子澱粉加水分解物、又は高分子ペプチドなどの慣用的な賦形剤を用いて乾燥粉体化してもよい。本発明の組成物は、作業性及び保存性の観点からは、粉末化することが好ましい。
【００４４】
本発明の組成物は、目的に応じて飲食品（食品、飲料、調味料、アルコール飲料、機能性食品等を含む）及び医薬品の形態にできる。
【００４５】
本発明に適する飲食品としては、飴、トローチ、ガム、ヨーグルト、アイスクリーム、プディング、ゼリー、水ようかん、アルコール飲料、コーヒー飲料、ジュース、果実飲料、炭酸飲料、清涼水飲料、牛乳、乳清飲料、乳酸菌飲料など、様々なものをあげることができる。これら飲食品は常法に従って製造することができる。
【００４６】
これらの飲食品には、必要に応じて各種添加剤を配合してもよい。具体的には、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェノール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤などの、食品原料として通常使用されているものを常法に従って配合することができる。
【００４７】
また、本発明の医薬品を調製する際には、必要に応じて各種添加剤を配合し、常法に従い各種剤形へと調製することができる。例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、エキス剤等の経口医薬品；あるいは、軟膏、眼軟膏、ローション、クリーム、貼付剤、坐剤、点眼薬、点鼻薬、注射剤等の非経口医薬品とすることができる。使用する添加剤には特に制限はなく、通常用いられているものを使用することができる。例えば、デンプン、乳糖、白糖、マンニトール、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩等の固形担体；蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール等のアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等の液体担体；各種の動植物油、白色ワセリン、パラフィン、ロウ類等の油性担体等を使用することができる。
【００４８】
本発明の組成物は、有効成分である（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡに加えて、所望により、抗うつ効果などが知られる他の有効成分をさらに含んでいてもよい。このような他の有効成分は、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡとの併用に際し、安全なものでなければならない。
【００４９】
例えば、本発明の組成物は、ＳＳＲＩ及びＳＮＲＩなどの抗うつ剤、抗不安剤、及びセントジョーンズワートなど、当業者に公知の物質を１又は複数組合せて含むことができる。
【００５０】
さらに、本発明の組成物が（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ生産能を有する微生物又はその加工品、あるいはその培養上清又は加工品を含有する場合には、該微生物由来の上記抗うつ効果等が知られる物質を含んでいてもよい。
【００５１】
なお、本発明の医薬品又は飲食品は、その包装などに、その具体的な用途（例えば、抗うつのため、うつ病の合併症予防のため、学習意欲改善のため、健康維持のためなど）及び／又はその具体的な用い方（例えば、摂取量、摂取回数、及び摂取方法など）を表示してもよい。
【００５２】
以下、実施例に基づいて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００５３】
以下の実施例では、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡのセロトニントランスポーター阻害活性を求めた。また、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡのマウスに対する抗うつ効果及び学習意欲改善効果を調べた。さらに、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを含有する医薬品及び飲食品を製造した。
【実施例１】
【００５４】
乳酸菌培養上清中の（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡの単離・同定
（１）乳酸菌の培養
市販のＭＲＳ培地（Difco製）５５ｇを水１Lに溶解し、１規定の塩酸、または１規定の水酸化ナトリウム溶液でｐHをｐＨ６．５に調製してオートクレーブ殺菌を行った。ここに、乳酸菌（Lactobacillus plantarum ＳＡＭ２４４６株（ＦＥＲＭ ＡＢＰ−１０４３８））を接種し、培養温度３７℃にて１日間、静置培養を行った。得られた培養物を、８０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、得られた遠心上清を０．４５μｍの孔径を有するフィルターで濾過して培養上清１Ｌを得た。【００５５】
（２）乳酸菌培養上清の限外ろ過
得られた培養上清２３５ｍＬを、限外ろ過膜（分子量１００００カット、アミコン−ＹＭ１０、ミリポア製）に通過させ、通過した画分を限外ろ過画分（１６５ｍＬ）とした。【００５６】
（３）Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ Ｃ−３０−ＵＧ−５を用いたクロマトグラフィーにおける（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡのピークの確認
限外ろ過画分中に（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡが含まれることを、分析用カラムＤｅｖｅｌｏｓｉｌ Ｃ−３０−ＵＧ−５（１５０ｍｍ ｘ ４．６ｍｍ）（野村化学製）を用いて、以下の測定条件で確認した。移動相として、次の２種類の溶液を用いた：０．１％ギ酸を含む蒸留水（Ｂｕｆ．Ａ）、０．１％ギ酸を含む８０％アセトニトリル／２０％蒸留水（Ｂｕｆ．Ｂ）。移動相の流速を１ｍＬ／分とし、以下のグラジエント条件を用いて溶出させた：１０％ Ｂｕｆ．Ｂ／９０％ Ｂｕｆ．Ａをイソクラティックで８．３分、１０％ Ｂｕｆ．Ｂ／９０％ Ｂｕｆ．Ａから１６％ Ｂｕｆ．Ｂ／８４％ Ｂｕｆ．Ａへとリニアグラジエントで１９．９２分、１６％ Ｂｕｆ．Ｂ／８４％ Ｂｕｆ．Ａから１００％ Ｂｕｆ．Ｂへとリニアグラジエントで１．６６分、１００％ Ｂｕｆ．Ｂをイソクラティックで４．９８分。限外ろ過画分は、Ｂｕｆ．Ａを用いて２倍希釈したものを２００μＬ注入した。検出は２１５ｎｍとした。保持時間１７分付近に（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡに相当するピークが検出された。【００５７】
（４）ＣＨＰ２０Ｐ（三菱化学製）クロマトグラフィーを用いた粗精製
予め２．５ＬのＢｕｆ．Ａにて平衡化した三菱化学社製カラムＣＨＰ２０Ｐ（５００ｍＬ）に、（２）で得られた限外ろ過画分１６５ｍＬを負荷し、次いで７５０ｍＬのＢｕｆ．Ａ、５００ｍＬの１０％ Ｂｕｆ．Ｂ／９０％ Ｂｕｆ．Ａ、及び５００ｍＬの２０％ Ｂｕｆ．Ｂ／８０％ Ｂｕｆ．Ａを順次用いて、流速３００ｍＬ／時にて溶出させた。２０％ Ｂｕｆ．Ｂ／８０％ Ｂｕｆ．Ａでの溶出の際に、５０ｍＬずつ分取した。得られたフラクションを（３）の方法に従って分析したところ、５〜７番目のフラクションに（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡのピークが検出されたことから、５〜７番目のフラクションを（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを含む画分として回収し、ＣＨＰ２０Ｐ画分とした。得られたＣＨＰ２０Ｐ画分の用量は１５０ｍＬであり、凍結乾燥後の重量は１３３ｍｇであった。【００５８】
（５）Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ Ｃ−３０−ＵＧ−５クロマトグラフィーを用いた精製・分析・同定
分析試料として、（４）で得られたＣＨＰ２０Ｐ画分の凍結乾燥物１０ｍｇをＢｕｆ．Ａに溶解したもの２０００μＬを用いた。分析用カラムはＤｅｖｅｌｏｓｉｌ Ｃ−３０−ＵＧ−５（２００ｍｍ ｘ ２０ｍｍ）（野村化学製）を用いた。流速は２．５ｍＬ／分とし、以下のグラジエント条件を用いて溶出を行った：５％ Ｂｕｆ．Ｂ／９５％ Ｂｕｆ．Ａをイソクラティックに４２．４８分、５％ Ｂｕｆ．Ｂ／９５％ Ｂｕｆ．Ａから３０％ Ｂｕｆ．Ｂ／７０％ Ｂｕｆ．Ａへとリニアグラジエントに１２７．４４分、１００％ Ｂｕｆ．Ｂをイソクラティックに４２．４８分。検出は２１５ｎｍとした。保持時間８４〜９０分付近に検出されるピークをＤｅｖｅｌｏｓｉｌＣ−３０画分とした。この操作を１０回繰り返し、合計１００ｍｇのＣＨＰ２０Ｐ画分から３．４ｍｇのＤｅｖｅｌｏｓｉｌＣ−３０画分を得た。得られたＤｅｖｅｌｏｓｉｌ Ｃ−３０画分を（３）に従って分析したところ、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡに相当するピークが確認された。次いで、このＤｅｖｅｌｏｓｉｌＣ−３０画分を構造解析用試料としてＮＭＲ及びＭＳ解析に付したところ、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡが含まれることが確認された。ＤｅｖｅｌｏｓｉｌＣ−３０画分のＭＳ解析結果を図１に示す。
実施例  2
【実施例２】
【００５９】
（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡのセロトニントランスポーター阻害効果の確認
市販の（１Ｓ，３Ｓ）−２，３，４，９−テトラヒドロ−１−メチル−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］−インドール−３−カルボン酸試薬（和光純薬製）を被検物質（（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ）として用い、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡのセロトニントランスポーター阻害効果を、Masahiko T, et al : Europian Journal of Pharmacology 368 277-283,1999に記載の方法を用いて調べた。
（１）細胞ホモジェネートの調製
ヒトのセロトニントランスポーターのｃＤＮＡを組み込んだ分泌ベクターｐＲｃ／ＣＭＶをＣＨＯ細胞にリン酸カルシウム法によりトランスフェクトさせた。次いでこのＣＨＯ細胞を、１５０ｍｍのペトリ皿中の１７．５ｍｌダルベッコ変法イーグル培地（Dulbecco's Modified Eagles's Medium、Mediatech製）（０．１ｍＭ ＭＥＭ用非必須アミノ酸溶液（Noｎ-Essential Amino Acid Solution For MEM、Mediatech製）、５％（Ｖ／Ｖ）ウシ胎児血清（Fetal Clone Bovine serum product、Hyclone Laboratories製）、及び１Ｕ／μＬ ペニシリン／ストレプトマイシン溶液（Mediatech製）を含む）にて培養した。尚、培養は１０％ＣＯ2及び９０％ａｉｒの環境下で、温度３７℃、及び湿度１００％にて行った。
次いで、細胞ホモジェネート調製のため、培地を吸引除去した。細胞を４ｍＬの改変Ｐｕｃｋ’ｓ Ｄ１液 (溶液１)で洗浄した後、溶液１及び１００ｍM ＥＧＴＡ（エチレングリコール−ビス（β−アミノエチルエーテル）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ酢酸）１０ｍＬを加えて３７℃で５分間インキュベートした。その後、ラバースパチュラーを用いて細胞を剥離・回収して遠心管に移し、４℃で５分間、１１０ ｘ ｇで遠心した。得られたペレットを５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１２０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、及び０．１％ＢＳＡを含む溶液（溶液２）に懸濁させ、ポリトロン（Brinkmann Instruments製）でｓｅｔｔｉｎｇ６で１０秒ホモジェナイズした。得られたホモジェネートを４℃で１０分間、３５６００ ｘ ｇで遠心した。得られたペレットを等容の溶液２に懸濁させ再度４℃で１０分間、３５６００ ｘ ｇで遠心した。遠心上清を除去し、得られたペレットを溶液２に懸濁させ、細胞ホモジェネートとし、アッセイまで−８０℃で保存した。得られた細胞ホモジェネートのタンパク質濃度を、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を標準としてＬｏｗｒｙ法で測定した。
（２）アッセイ
次いで、９６穴マイクロプレートに、生理食塩水に溶解した（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ 溶液（１００μｇ／ｍＬ）２５μＬと、２ｎＭの［3Ｈ］イミプラミンを含有した溶液２（２２５μＬ）とを添加し、ここに、（１）で得られた細胞ホモジェネート（タンパク質量１５μｇ）を加えて、２２℃で６０分間インキュベートした。なお、このアッセイに用いたイミプラミンとは、セロトニントランスポーターに結合することにより、セロトニントランスポーターによるセロトニンの再取り込みを阻害する作用が知られる、三環系抗うつ薬の一種である。コントロールとして、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを含まないものについても同様にインキュベートした。細胞ホモジェネートへの［3Ｈ］イミプラミンの非特異的結合は、１０μＭイミプラミンを用いて調べた。【００６０】
インキュベートの後、試料を、予め０．３％ＰＥＩに浸したガラスファイバーフィルター（ＧＦ／Ｇ、 Packard製）を内蔵した９６穴セルハーベスター（Unifilter、Packard製）を用いて迅速にろ過し、次いで、氷冷した５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）及び１５０ｍＭＮａＣｌを用いて数回洗浄し、未結合の［3Ｈ］イミプラミンを除去した。洗浄後のガラスファイバーフィルターを乾燥し、次いで、シンチレーションカクテル（Microscint ０、Packard製）を加えて、シンチレーションカウンター（Topcount、Packard製）で試料の放射活性を測定することにより、［3Ｈ］イミプラミンの細胞ホモジェネートへの結合量を測定した。
【００６１】
本アッセイにおいて、コントロールにおける［3Ｈ］イミプラミンの細胞ホモジェネートへの特異的結合量を１００としたとき、１００μｇ／ｍＬの（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡサンプルでは、細胞ホモジェネートへの特異的結合量が６９にとどまることが判った。この結果は、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡが、イミプラミンのセロトニントランスポーターへの結合を競合的に阻害することを示唆しており、したがって、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡがイミプラミンと同様にセロトニントランスポーターに結合することを示唆している。（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡがセロトニントランスポーターに結合するならば、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡにもイミプラミンと同様のセロトニントランスポーター阻害作用（すなわち、セロトニン再取り込み阻害作用）があることが推認される。
【実施例３】
【００６２】
（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡのマウスを用いた行動科学的薬理試験による抗うつ効果及び学習意欲改善効果の評価
被験体
実験経験のない雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス９０匹を被験体とした。被験体は、実験開始時に平均約１２週齢で、平均体重は２４．９ｇ（ＳＤ＝３．３０）であった。被験体は、室温２３℃、湿度５０〜６０%の動物飼育室内においてアクリル製ケージで飼育した。動物飼育室内は、明期と暗期が１２時間サイクル(明期: 午前８時〜午後８時)で交替するように設定した。本実験は、毎日明期の同じ時間帯に実施した。餌として乾燥固形飼料（日本農産工業株式会社製ラボＭＲ）を与えた。食餌・給水制限は行わなかった。【００６３】
被験体は、３群に分けられ、それぞれ、ｎｏＯＳ−Ｖｅｈｉｃｌｅ群（正常マウス群）（ｎ＝１０）、ＯＳ−（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ投与群（ｎ＝１０）、およびＯＳ−Ｖｅｈｉｃｌｅ群（うつマウス群）（ｎ＝１０）と命名した。【００６４】
実験装置
内径９５ｃｍ、深さ３５ｃｍの円形プールを用いた。プールは、高さ１２０ｃｍ、幅１５０ｃｍの白色の衝立で四方を囲まれていた。逃避台は、直径１１．５ｃｍ、厚さ０．５ｃｍの円盤に台座を取り付けたもので、高さは２１ｃｍであった。逃避台は、後述するＰｈａｓｅ ２においてのみプール内に設置した。設置位置は、円形の水面を均等に４分割した扇形の象限（Ｑｕａｄｒａｎｔ １〜４）内いずれかの中央部とし、被験体毎に定めた。水位は逃避台の表面上約０．５ｃｍとなる点とした。逃避台の縁とプールの内壁との最短距離は２０ｃｍとした。水は酸化チタンで白濁させ、水温を２４±１℃に維持した。被験体が逃避台位置を記憶するための装置外手掛かりとして利用し得る刺激を、プールの周囲から極力取り去った。実験時には、実験装置の設置区画外から蛍光灯により照明し、水面上の照度は約２４０ｌｕｘであった。【００６５】
実験
Ｐｈａｓｅ １：オープンスペース水泳処置期（Ｄａｙ １〜５） 
ｎｏＯＳ−Ｖｅｈｉｃｌｅ群を除く２群の被験体全てに対し、１日５分間のオープンスペース水泳処置（ＯＳ）を５日間連続で与えた。被験体を、プールの壁際から投入し、自由に遊泳させた。遊泳の様子は、プールの水面上約２ｍの位置に設置したビデオカメラによって撮影し、行動追跡・解析用ビデオトラッキングシステムを用いて、プールの水面上に仮定した４分象限（Ｑｕａｄｒａｎｔ １〜４）それぞれへの滞在時間と遊泳距離について解析した。【００６６】
Ｐｈａｓｅ ２：水迷路学習訓練期（Ｄａｙ ６〜１５） 
ＯＳ−（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ投与群の被験体には、体重１ｋｇあたり２０ｍｇの（１Ｓ，３Ｓ）−２，３，４，９−テトラヒドロ−１−メチル−１Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］−インドール−３−カルボン酸（和光純薬製）（（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ）を、１０ｍＬの水溶液として、先端にシリコンボール（直径２ｍｍ）が取り付けられたテフロン（登録商標）製フィーディングチューブ（太さ１．２ｍｍ、長さ３８ｍｍ）を用いて、水迷路学習訓練を行う６０分前に毎日経口投与した。（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡの水溶液を作成する際には蒸留水を用いた。ｎｏＯＳ−Ｖｅｈｉｃｌｅ群及びＯＳ−Ｖｅｈｉｃｌｅ群の被験体には、同様の方法で蒸留水を投与した。各試行では、被験体を、プールの仮想の４分象限（Ｑｕａｄｒａｎｔ １〜４）のいずれかの壁際から、ランダムな順序で、頭を壁面に向けてプールへ投入し、逃避台に両前肢が接触するまでの時間を逃避台への到達時間（逃避潜時ともいう）として計測した。被験体が逃避台に載ると、１０秒間そこに留めて、再度同様の方法でプールへ投入した。この試行は１日に５回繰り返した。プールへ投入後６０秒以内に被験体が逃避台に到達しない場合は、実験者が被験体を逃避台の上へ誘導し、そこに１０秒間留めて、再度試行を繰り返した。この場合、逃避潜時は６０秒として記録し、失敗試行と定義した。試行間間隔は３０秒とした。水迷路学習訓練は１０日間連続で行った。【００６７】
結果
ｎｏＯＳ−Ｖｅｈｉｃｌｅ群（正常マウス群）、ＯＳ−（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ投与群、及びＯＳ−Ｖｅｈｉｃｌｅ群（うつマウス群）における１日目の平均逃避潜時（秒、５回の試行の平均値）を図２に示す。ＯＳ−Ｖｅｈｉｃｌｅ群（うつマウス群）では平均逃避潜時が５２．６秒であったのに対し、ＯＳ−（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ投与群では４２．７秒であった。なお、ｎｏＯＳ−Ｖｅｈｉｃｌｅ群（正常マウス群）では４４．１秒であった（図２）。この結果は、ＯＳ−（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ投与群では、投与１日目から、ＯＳ−Ｖｅｈｉｃｌｅ群（うつマウス群）に比べ逃避台への到達時間が短縮することを示している。これにより、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡの単回投与における抗うつ作用ならびに学習意欲改善作用が確認された。【００６８】
また、投与１０日目までの各日における平均逃避潜時の推移を図３に示す。期間の間中、ＯＳ−（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ投与群はＯＳ−Ｖｅｈｉｃｌｅ群（うつマウス群）に比べ逃避台への到達時間が有意に短縮する効果が確認された（図３）。これにより、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡの継続投与における抗うつ作用ならびに学習意欲改善作用が確認された。
【実施例４】
【００６９】
製造例１：（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを含有する医薬品錠剤：
（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ２０ｇを、乳糖２７８．７ｇおよびステアリン酸マグネシウム１．３ｇとともに混合し、単発式打錠機にて打錠することにより、直径１０ｍｍ、重量３００ｍｇの錠剤を製造した。【００７０】
製造例２：（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを含有する顆粒剤：
（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡ ２０ｇを、乳糖２７８．７ｇおよびステアリン酸マグネシウム１．３ｇを加え、圧縮、粉砕、整粒し、篩別して２０〜５０メッシュの顆粒剤を得た。
【実施例５】
【００７１】
製造例３：（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを含有する飲食物
以下の表３〜表８に記載の配合に従って、（１Ｓ，３Ｓ）−ＭＴＣＡを含有する各種食品を常法により製造した。【００７２】
【表３】
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【００７３】
【表４】
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【００７４】
【表５】
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【００７５】
【表６】
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【００７６】
【表７】
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【００７７】
【表８】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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