(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物のリンパ系の領域における原発又は転移癌の画像を得る方法であって、
（ａ）ＭＲ造影剤が予め血管内注射された哺乳動物において、選択されたリンパ系の領域のＴ１加重ＭＲ画像を得て；及び
（ｂ）工程（ａ）で得られた画像と、ＭＲ造影剤が血管内注射される前に撮像された、該哺乳動物における選択されたリンパ系の領域のＴ１加重ＭＲ画像とを比較する
ことを含み、ここで、ＭＲ造影剤は、ＭＳ−３２５又はその医薬として許容される塩であり、工程（ａ）で得られた画像における該リンパ系の少なくとも一部の領域におけるシグナル強度は、ＭＲ造影剤が血管内注射される前に撮像された画像における該領域のシグナル強度と比較して高く、ここで、該リンパ系の少なくとも一部の領域に原発又は転移癌が存在する場合、工程（ａ）で得られた画像における該領域において、原発又は転移癌のシグナル強度が低い、前記方法。
【請求項２】
（ａ）における領域の脂肪抑制のＴ１加重ＭＲ画像を得ることをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該領域の２以上の２Ｄ画像面が、原発又は転移癌の画像を得るために使用される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記領域が、１以上のリンパ節、血管、導管、チャネル又はそれらの組合せである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記１以上のリンパ節、血管、導管、チャネル又はそれらの組合せが、該哺乳動物の腸骨、腰部、又は鼠径部の領域に位置する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記１以上のリンパ節、血管、導管、チャネル又はそれらの組合せが、該哺乳動物の膝窩領域に位置する、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記１以上のリンパ節、血管、導管、チャネル又はそれらの組合せが、該哺乳動物の腋窩領域に位置する、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記１以上のリンパ節、血管、導管、チャネル又はそれらの組合せが、該哺乳動物の腸間膜領域に位置する、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記１以上のリンパ節、血管、導管、チャネル又はそれらの組合せが、該哺乳動物の頸部及び／又は首領域に位置する、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
前記１以上のリンパ節、血管、導管、チャネル又はそれらの組合せが、該哺乳動物の胸部領域に位置する、請求項５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、その全態様が参照により本明細書中に援用される、２００６年８月１７日に出願された米国仮特許出願第６０／８３８，４８８号の出願日に関する３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９の利益を主張する。
【０００２】
技術分野
本発明は、原発癌及び転移癌などの疾患を診断するためのリンパ節及びリンパ管の撮像を含むリンパ系の撮像に関する。
【背景技術】
【０００３】
大部分の癌、例えば、乳癌、肺癌、頭部及び頸部癌、膀胱癌、腎臓癌、皮膚癌、直腸癌、及び前立腺癌の診断及び段階分けは、多くの場合、リンパ組織の摘出及び病理学的な試験を必要とする。例えば、乳癌を有する約６５％の女性は、原発性の癌の近隣領域にあるリンパ節に広がる（転移している）癌を有する。健康診断及び診断的撮像手段は、癌がリンパ節に転移したかどうかを決定するには当てにならず、局所リンパ節の外科的除去は、多くの場合、急性な癌の段階分けに必要とされる。癌性リンパ節を有するこれらの患者に対して、全身化学療法、放射線療法及び／又は外科的処置は、現在、局所性疾患の制御に必要とされる。
【０００４】
リンパ節は、特に、それらの大きさによって特徴付けられる。結節領域に対する標準的なサイズ基準と比較して、巨大化したリンパ節は、多くの場合、腫瘍浸潤の結果であると想定される。しかしながら、多くの場合、正常サイズの節に小さな腫瘍堆積があり、巨大化した節の３０％を超えるものは腫瘍を含まず、炎症の結果として、単に巨大化される。他の形態学的な特徴、例えば、結節の形状、位置、節の数などが考慮されるが、診断的精度は、典型的には、低い。このようにして、炎症及び関連した生理学、例えばリンパ節の良性過形成とは区別される癌のより具体的な同定が必要である。
【０００５】
酸化鉄の超小型調製物は、静脈ＭＲリンパ節画像のためのＭＲ造影剤として適切であることが示されている1-4。これらのＵＳＰＩＯ、例えば、ＡＭＩ−２２７（Ｃｏｍｂｉｄｅｘ（登録商標）、Ｓｉｎｅｒｅｍ（登録商標））は、長期の血漿循環時間を有する。これらの粒子は、一般に、マクロファージによって取り込まれ、リンパ系を通じてリンパ節に輸送される。ひとたび粒子がリンパ節に蓄積されると、高い鉄含有量は、強力なＴ２＊感受性作用に至り、これは、Ｔ２加重画像上で正常なリンパ節を暗く見せるようにする。リンパ節は腫瘍細胞を含む場合、ＵＳＰＩＯは、同じ程度まで取り込まれない。したがって、転移は、正常なリンパ節と比較して明るく見え、診断精度は、この造影剤の使用により大幅に改善される。しかしながら、このアプローチの１つの欠点は、ＵＳＰＩＯの注入前に撮像され、注入後の２４〜３６時間で再度撮像されることを患者に要求することであり、不便であり、良好な患者のコンプライアンスを得られない場合がある。また、各時間での患者の位置決めは必然的に困難であるため、２セットの画像を同時に記録することは困難な場合がある。
【０００６】
別のアプローチは、リンパ管造影の核医学技術と同種の、ＭＲＩ造影剤を間質に投与することである。動物モデルを用いたいくつかのレポートがあり、ガドリニム錯体は間質的に組織に注射される5-21。次に、ガドリニム錯体は、リンパ系に流出され、胸管を通じて鎖骨下動脈に排出されることによって、血液循環に戻るまで、リンパ節からリンパ節に移送する。この方法論は、Ｔ１加重ＭＲ画像上では、リンパ管及び正常なリンパ節を明るくするように見える。節への腫瘍浸潤がある場合、腫瘍は、画像上では（暗い）間隙として見え、即ち、増加しない。間質注射は、原発腫瘍のセンチネルリンパ種を同定するのに有用である。しかしながら、リンパ節の一般的な撮像に対して、制限された分布の欠点を被る。これは、ガドリニム錯体は、排出経路に沿ってリンパ節を増加するだけであるためである。さらに、原発腫瘍の位置に依存して、対象とするリンパ節を増加する領域に間質的に投与することも困難である場合がある。
【０００７】
２つの他のＭＲアプローチがレポートされている。１つは、ガドリニム錯体をグルコース含有ポリマーに複合化することを伴う22；しかしながら、リンパ節中の局在化はゆっくりである（約２４時間）。別のアプローチは、ガドリニム錯体含有ペルフルオロカーボンを利用した23。リンパ節は、ウサギモデルにおいて、ｉ．ｖ．後の１５分で増加し、腫瘍を有するリンパ節は、正常な節とは区別され得る。
【０００８】
リンパ節を迅速かつ全身的に撮像することがで；癌の存在及び転移癌を同定可能である；炎症とは異なる癌／転移疾患とを区別する診断を提供することができる方法の必要性が残されている。このような薬剤は、診断外科的なリンパ節の除去及びそれに付随する合併症に対する必要性の減少において、有意な臨床的影響を有することができる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本開示は、リン酸ジエステル部分を含み、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）などの血漿タンパク質に結合し得るものなどのある種のＭＲ造影剤は、リンパ系の撮像に有用であるという知見に関する。造影剤の使用は、多くの癌の良好な診断、段階分け、及びその後の治療、並びに他のリンパ系疾患、例えば寄生虫感染及びキャッスルマン病の診断及び治療を可能にする。最後に、造影剤の使用は、炎症、感染、又はリンパ節の良性過形成とは区別される癌／転移疾患の診断を可能にする。
【００１０】
他に特定がなければ、本明細書において使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明が関係する当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似又は同等の方法及び材料は、本発明の実施又は試験に用いることができ、適切な方法及び材料は、下記に記載されている。本明細書において言及される全ての刊行物、特許出願、特許、他の参考文献は、参照により、全体として本明細書に援用される。不一致の場合、定義を含む本明細書が調節する。さらに、材料、方法、及び実施例は、例示だけであり、限定することを意図していない。
【００１１】
本発明の他の特徴及び利点は、下記に詳述される記載及び特許請求の範囲とは明確に相違する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１Ａ、Ｂ、及びＣは、Ｔ１加重勾配エコーシークエンスを用いて、同じ動物における、Ｇｄ−ＤＴＰＡの０．２ｍｍｏｌ／ｋｇの静脈注射後の５分（Ａ）、ＭＳ−３２５の０．０５ｍｍｏｌ／ｋｇの静脈注射後の１５分（Ｂ）で得られるウサギにおける転移性腸骨リンパ節（矢印）の撮像を示す。同じリンパ節のヘマトキシリン−エオシン染色した組織学的切片（Ｃ）（Ｍ：転移）も示されている。
【図２】図２Ａ、Ｂ、及びＣは、Ｔ１加重勾配エコーシークエンスを用いて、同じ動物における、Ｇｄ−ＤＴＰＡの０．２ｍｍｏｌ／ｋｇの静脈注射後の５分（Ａ）、ＭＳ−３２５の０．０５ｍｍｏｌ／ｋｇの静脈注射後の１５分（Ｂ）で得られるウサギにおける転移性腸骨リンパ節（矢印）の撮像を示す。同じリンパ節のヘマトキシリン−エオシン染色した組織学的切片（Ｃ）（Ｍ：転移）も示されている。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
定義
一般に、用語「アリール」は、０〜４個のヘテロ原子を含んでもよい５−及び６−員の単環芳香族基を含む基を含み、例えば、ベンゼン、フェニル、ピロール、フラン、チオフェン、チアゾール、イソチアゾール、イミダゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、及びピリミジンなどが挙げられる。さらに、用語「アリール」には多環式アリール基が含まれ、例えば、三環式、二環式、例えば、ナフタレン、ベンゾキサゾール、ベンゾジオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾチオフェン、メチレンジオキシフェニル、キノリン、イソキノリン、ナフリジン、インドール、ベンゾフラン、プリン、ベンゾフラン、デアザプリン、又はインドリジンは挙げられる。環構造にヘテロ原子を有するアリール基はまた、「アリール複素環」、「複素環」、「ヘテロアリール」、又は「ヘテロ芳香族基」とも称されてもよい。アリール基は、１以上の環位置に置換基で置換されてもよい。
【００１４】
本出願の目的のために、「ＤＴＰＡ」は、ジエチレントリアミンから構成される下部構造を含む化合物を指し、ここで、２つの第１級アミンは、各々、２つのアセチル基に共有結合され、第２級アミンは、下記の式：
【００１５】
【化１】
0005563299.tif 000002
【００１６】
（式中、
Ｘは、金属カチオンを統合することができるヘテロ原子の電子供与基であり、好ましくはＯ-、ＯＨ、ＮＨ2、ＯＰＯ32-、またはＮＨＲ、またはＯＲ（ここで、Ｒは、任意の脂肪族基である）である）
に従って共有結合された１つのアセチル基を有する。各Ｘ基は、ｔｅｒｔ−ブトキシ（ｔＢｕ）である場合、この構造を「ＤＴＰＥ」（エステルについて「Ｅ」）と称してもよい。
【００１７】
本出願の目的のために、「ＤＯＴＡ」は、１，４，７，１１−テトラアザシクロドデカンで構成される下部構造を含む化合物を指し、ここで、該アミンは、各々、下記の式：
【００１８】
【化２】
0005563299.tif 000003
【００１９】
（式中、Ｘは、上記で定義されている）
に従って共有結合された１つのアセチル基を有する。
【００２０】
本出願の目的のために、「ＮＯＴＡ」は、１，４，７−トリアザシクロノナンで構成される下部構造を含む化合物を指し、ここで、該アミンは、各々、下記の式：
【００２１】
【化３】
0005563299.tif 000004
【００２２】
（式中、Ｘは、上記で定義される）
に従って共有結合された１つのアセチル基を有する。
【００２３】
本出願の目的のために、「ＤＯ３Ａ」は、１，４，７，１１−テトラアザシクロドデカンで構成される下部構造を含む化合物を指し、ここで、４個のアミンのうち３個は、各々、共有結合された１つのアセチル基を有し、他の多民は、下記の式：
【００２４】
【化４】
0005563299.tif 000005
【００２５】
（式中、Ｘは、上記で定義され、Ｒ1は、無電荷の化学部分、好ましくは水素、任意の脂肪族、アルキル基、又はシクロアルキル基、及び無電荷のその誘導体である）
に従って中性電荷を有する置換基を有する。好ましい錯体「ＨＰ」−ＤＯＡ３は、Ｒ1＝−ＣＨ2（ＣＨＯＨ）ＣＨ3を有する。
【００２６】
上記の４つの構造の各々において、指示されたエチレン類の炭素原子は、「骨格」炭素と呼ばれてもよい。記号「ｂｂＤＴＰＡ」は、ＤＴＰＡに対する化学結合の位置を指すために使用することができる（「骨格」については「ｂｂ」）。本明細書中で使用するとき、ｂｂ（ＣＯ）ＤＴＰＡ−Ｇｄは、ＤＴＰＡのエチレン骨格炭素原子に結合されたＣ＝Ｏ部分を意味する。
【００２７】
用語「キレートリガンド」、「キレート（ｃｈｅｌａｔｉｎｇ）部分」、及び「キレート（ｃｈｅｌａｔｅ）剤」は、金属イオンを統合することができる任意の多座リガンドを指すために用いられてもよく、ＤＴＰＡ（及びＤＴＰＥ）、ＤＯＴＡ、ＤＯ３Ａ、又はＮＯＴＡ分子、あるいは任意の他の適切な多座キレート剤が含まれ、それらは、金属イオンを統合するか又は直接的に若しくは保護基の除去後にそうすることができるものであり、あるいは適切な保護基の有無に関わらない試薬であり、造影剤の合成に用いられ、最終的な金属複合体の金属イオンを最終的には統合する実質的に全ての原子を含む。用語「錯体」は、実際の金属−リガンド複合体を指し、多座リガンドが、医療に有用な金属イオンに最終的には統合されることが利用される。
【００２８】
用語「特定の結合アフィニティー」とは、本明細書中で使用するとき、他の成分より大きな程度まで特定の生物学的成分によって採取され、保持され、又は結合される造影剤の能力をいう。この性質を有する造影剤は、「標的」成分に対して「標的化される」と言われる。この性質を欠損している造影剤は、「非特異的」又は「非標的化」された試薬であると言われる。この標的に対する結合基の特定の結合アフィニティーは、平衡解離定数「Ｋｄ」に基づいて表される。
【００２９】
用語「緩和能」とは、本明細書中で使用するとき、常磁性イオン又は造影剤のミリモラー（ｍＭ）濃度当たりのＭＲＩ量１／Ｔ１又は１／Ｔ２のいずれかの増加を意味し、この量は、造影剤が常磁性イオンの多重度を含む場合に異なっていてもよく、ここで、Ｔ１は、縦又はスピン格子、緩和時間であり、Ｔ２は、横又はスピン−スピン緩和時間であり、この緩和時間は、水のプロトン、又は水以外の分子に見られるプロトンを含む、他の撮像若しくは分光の核である。緩和能は、ｍＭ-1ｓ-1の単位で表される。
【００３０】
リンパ系を撮像する方法
一般に、リンパ系のＭＲ撮像のための方法が提供される。この方法は、多数の理由、例えば、癌の段階分け、癌の診断、リンパ系疾患の診断又は段階分け（例えば、感染）、生検の誘導、外科的計画、及び治療観察に有用である。さらに、この方法により、癌（例えば、リンパ節における腫瘍）及び正常なリンパ組織、脂肪、及び／又は炎症を起こしたリンパ組織との間を区別することができる。
【００３１】
この方法のいくつかの態様では、哺乳動物のリンパ系（例えば、１つの節又は節の集合）の全て又は領域の１以上の撮像が、本明細書に記載されている造影剤の投与前に得られる。造影剤は、哺乳動物に血管内に、例えば、哺乳動物の動脈又は静脈内に注射され、哺乳動物のリンパ系の全ての又は領域が撮像される。リンパ系の領域は、１以上のリンパ節、血管、管、チャネル、またはそれらの組み合わせを含むことができ、哺乳動物の体内、例えば、哺乳動物の腸骨、腰部、鼠径、頸部、腋窩、膝窩、頸部及び／又は首、腸間膜、又は胸部領域のいずれかの見出すことができる。
【００３２】
哺乳動物は、ヒト、ネコ、イヌ、うま、ウシ、ヒツジ、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、又はサルであり得る。典型的には、哺乳動物は、ヒト、例えば、ヒト患者である。ある種の場合において、撮像されるべきリンパ系の領域は、例えば、哺乳動物がある種の生体領域の癌が疑われるか又はそうであると診断された場合には、予め選択される。例えば、乳癌が疑われるか又はそうであると診断されたヒトに対しては、腋窩又は鎖骨リンパ系が予め選択され得る；あるいは、前立腺癌が疑われるか又はそうであると診断されたヒトに対しては、骨盤又は鼠径リンパ系が予め選択され得る。当業者は、特定の診断又は疑わしい疾患与えるように予め選択する適切な領域を理解する。
【００３３】
リンパ系及びその領域は、造影剤の注射後の任意の時間、例えば、注射後の１分〜２４時間、又は、例えば、注射後の５分、１０分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、３時間、４時間、８時間、１２時間、１６時間、若しくは２０時間の間の任意の時間で撮像され得る。ある場合には、リンパ系又はその領域は、注射後の約５分〜２時間の時間で撮像される。
【００３４】
この方法は、ＭＲ造影剤の使用を用い、典型的には、正常なリンパ組織を増大し、癌性腫瘍又は脂肪組織を増大しない。本方法の使用に対するある種のＭＲ造影剤は、リン酸ジエステル部分、血漿タンパク質結合部分、及び常磁性金属錯体、又は医薬として許容されるその塩を含み、ここで、該造影剤は、本明細書にさらに記載されるように、血漿タンパク質に結合することができる。本方法の使用に対する他の造影剤は、下記：
【００３５】
【化５】
0005563299.tif 000006
【００３６】
及び
【００３７】
【化６】
0005563299.tif 000007
【００３８】
から選択される血液貯蔵造影剤を含む。
【００３９】
この方法に採用される造影剤は、典型的には、Ｔ１加重の撮像シークエンスを用いて効果的である。当業者に周知である多くのＴ１加重シークエンスが存在する。これらは、限定されないが、短いＴＲを有するスピンエコーシークエンス、反転回復調製シークエンス、損なわれた勾配回収エコーシークエンスを含む。
【００４０】
癌などの疾患又は転移性癌性疾患の診断及び／又は段階分けは、リンパ系の領域におけるＭＲ撮像シグナル強度の評価に基づくことができる。この評価は、同じである（例えば、内部領域比較、所定の節内のシグナル強度比較）、又は異なっている（例えば、領域間比較、例えば、複数の節のシグナル強度比較）領域からのシグナル強度を有する領域におけるシグナル強度の比較を含むことができる。この評価は、造影剤おおｙ日関連した撮像の前及び／又はその後に行うことができる。この評価は、造影剤投与前に取得した撮像と比較して、造影剤の投与後に、所定領域（例えば、節）のシグナル強度がどのように変化するか（例えば、絶対量又は百分率の変化）の分析を含むことができる。例えば、いくつかの態様では、リンパ節に存在する腫瘍又は転移癌は、正常な組織（例えば、同じ節又は異なる節における正常な組織）と比較して、造影剤の投与後に低強度を示す。この低強度は、造影剤が腫瘍に取り込まれないので、結果を生じるように主張されない。節は、造影剤投与前に獲得された撮像で等強度を出現してもよいが、リンパ節内に存在する腫瘍は、造影剤の投与後に、他には「明るい」節に存在する「暗点」であり得る。
【００４１】
さらに、いくつかのリンパ節は、「脂肪門（ｈｉｌｕｍ）」と呼ばれる節内の脂肪の領域を含む。脂肪は、典型的には、本発明に記載されている造影剤を用いて増加しない。脂肪は、脂肪抑制技術を用いて、追加の撮像を獲得することによって、腫瘍及び／又は正常組織を区別することができる。当業者に周知である水と脂肪プロトンとの間の共鳴振動数の差に依存するいくつかの脂肪抑制技術が存在する24。例えば、脂肪シグナルは飽和され得る。Ｔ１加重撮像に関して、脂肪は、脂肪飽和がないと明るく見え、同じ撮像が脂肪飽和とともに撮像されると、暗く見える。正常な節組織のシグナル強度は、これらの２つのスキャンでは変化しない。
【００４２】
したがって、リンパ系の領域における原発又は転移癌の有無を測定する方法には下記が含まれる：
（ａ）場合により、撮像するために哺乳動物の該リンパ系の領域（例えば、節又は節の集合）を事前に選択し；
（ｂ）場合により、該領域のＴ１加重ＭＲ画像を得て；
（ｃ）ＭＲ造影剤、例えば、上記で検討される血液貯蔵造影剤、又はリン酸ジエステル部分を含む造影剤、ＰＰＢＭ、及び常磁性金属錯体、又はその医薬として許容される塩を用いて哺乳動物に血管内注射し、ここで、該造影剤は、血漿タンパク質に結合することができ；
（ｄ）該リンパ系の領域のＴ１加重ＭＲ画像を得て、ここで、原発又は転移癌の有無の測定は上記で検討したリンパ系の該領域におけるシグナル強度の評価に基づく。いくつかの態様では、シグナル強度は、（ｄ）の画像と、（ｂ）の造影剤前の画像とを比較することによって評価することができ、ここで、正常なリンパ節は、造影剤後にポジティブなシグナルの増加を示すが、腫瘍は有意な増加を示さない。
【００４３】
いくつかの態様では、この方法は、さらに、（ｅ）場合により、（ｄ）において同じ領域の脂肪抑制Ｔ１加重ＭＲ画像を得ることを含むことができる。（ｅ）の画像と（ｄ）の画像とのシグナル強度の差は、腫瘍又は正常組織よりはむしろ脂肪の存在に起因する。
【００４４】
いくつかの態様では、リンパ系の領域の２以上の２Ｄ画像図は、原発又は転移癌の有無を測定するために調べられてもよい。
【００４５】
同じ方法は、哺乳動物のリンパ節の生検を誘導するために使用することができる。この方法は、下記を含むことができる：
（ａ）場合により、撮像するために哺乳動物の該リンパ系の領域（例えば、節又は節の集合）を事前に選択し；
（ｂ）場合により、該領域のＴ１加重ＭＲ画像を得て；
（ｃ）ＭＲ造影剤、例えば、上記で検討される血液貯蔵造影剤、又はリン酸ジエステル部分を含む造影剤、ＰＰＢＭ、及び常磁性金属錯体、又はその医薬として許容される塩を用いて哺乳動物に血管内注射し、ここで、該造影剤は、血漿タンパク質に結合することができ；
（ｄ）該リンパ系の領域のＴ１加重ＭＲ画像を得て、ここで、原発又は転移癌の有無の測定は上記で検討したリンパ系の該領域におけるシグナル強度の評価に基づき；
（ｅ）例えば、単独で又は（ｂ）のＭＲ画像と比較して、（ｄ）のＭＲ画像における該領域のシグナル強度の評価に基づいて、生検のために適切な位置（例えば、低強度領域）を決定する。この方法は、さらに、（ｆ）場合により、（ｄ）の同じ領域の脂肪抑制Ｔ１加重ＭＲ画像を得ることを含む。（ｆ）の画像と（ｄ）の画像との間のシグナル強度の差は、腫瘍又は正常な組織よりはむしろ脂肪の存在に起因する。
【００４６】
この方法によって提供される情報に基づいて、当業者は、癌の診断後に必要とされるリンパ系の外科の程度を誘導し、決定する方法；癌に関連したリンパ節切除を誘導する方法；リンパ系における癌の化学療法又は放射線照射の有効性を観察する方法；癌送達を観察する方法；癌を段階分けするための方法を同様に行うことができる。
【００４７】
本開示はまた、原発癌及び／又は転移癌と、リンパ節及び／又はリンパ管（即ち、リンパ節炎）、リンパ系の他の非癌性疾患、例えば、キャッスルマン病としても知られているリンパ節の良性過形成とを区別する方法を提供する。リンパ節は、しばしば、ＣＴ又はＭＲ画像上でそれらのサイズによって特徴付けられる。解剖領域に依存して、節は、それらが所定のサイズ基準を超える場合に巨大化したと考えられる。例えば、縦隔において、１．０ｃｍを超える短軸を有するリンパ節は巨大化したと考えられる25。この巨大化は、炎症の場合において、腫瘍浸潤、又は、例えば免疫細胞活性の存在に起因する場合がある。したがって、本開示は、癌性腫瘍を含むリンパ節と、正常なリンパ節又は良性の巨大化したリンパ節（例えば、炎症又は良性過形成に起因する）とを区別する方法を提供する。この方法は、下記を含むことができる。
（ａ）場合により、撮像するために哺乳動物の該リンパ系の少なくとも１つの節（例えば、節又は節の集合）を事前に選択し；いくつかの態様では、少なくとも１つの節は、場合により、事前のＣＴ又はＭＲＩスキャンによる解剖領域に対する所定のサイズ基準を超えることが事前に測定されていてもよく；
（ｂ）場合により、該少なくとも１つ節のＴ１加重ＭＲ画像を得て；
（ｃ）ＭＲ造影剤、例えば、上記で検討される血液貯蔵造影剤、又はリン酸ジエステル部分を含む造影剤、ＰＰＢＭ、及び常磁性金属錯体、又はその医薬として許容される塩を用いて哺乳動物に血管内注射し、ここで、該造影剤は、血漿タンパク質に結合することができ；
（ｄ）該少なくとも１つの節のＴ１加重ＭＲ画像を得て、ここで、癌性腫瘍を含む節と、良性の巨大化したリンパ節又は正常なリンパ節との区別が、該少なくとも１つの節のシグナル強度及び／又はサイズの評価に基づいている。例えば、少なくとも１つの節が工程（ｄ）において、相対的に均一な増加を示す場合、少なくとも１つの節は、正常又は良性の反応性として特徴付けることができる。このような場合、この方法は、場合により、その解剖領域に対する所定のサイズ基準と比較して、少なくとも１つのリンパ節のサイズ（例えば、（ｂ）及び／又は（ｄ）のＭＲ画像）を測定することを含む。このサイズが所定のサイズ基準を超える場合、少なくとも１つのリンパ節は、良性反応性（例えば、良性過形成又は炎症に起因した巨大化）として特徴付けることができる。他の場合には、少なくとも１つの節は、工程（ｄ）において非均一な増加を示す場合、例えば、節内の低強度領域が存在した場合、この方法は、このような低強度領域が腫瘍の存在又は脂肪の存在に起因するかどうかを測定することを含むことができる。このような態様では、脂肪抑制Ｔ１加重ＭＲ画像（ｅ）を獲得することができ、
（ｅ）（ｄ）における少なくとも１つの節の脂肪抑制Ｔ１加重ＭＲ画像を得る。この８ｅ）画像と（ｄ）の画像との間のシグナル強度の差は、腫瘍ではなく脂肪の存在に起因する。
【００４８】
本方法はまた、哺乳動物のリンパ系の領域における象皮病（寄生虫感染）の有無を測定するために有用である。この方法は、下記を含む：
（ａ）場合により、撮像するために哺乳動物の該リンパ系の領域（例えば、節又は節の集合）を事前に選択し；
（ｂ）場合により、該領域のＴ１加重ＭＲ画像を得て；
（ｃ）ＭＲ造影剤、例えば、上記で検討される血液貯蔵造影剤、又はリン酸ジエステル部分を含む造影剤、及び常磁性金属錯体、又はその医薬として許容される塩を用いて哺乳動物に血管内注射し、ここで、該造影剤は、血漿タンパク質に結合することができ；
（ｄ）該リンパ系の領域のＴ１加重ＭＲ画像を得て、ここで、象皮病の有無の測定が、リンパ系の領域におけるシグナル強度の評価に基づく。
【００４９】
方法における使用のための造影剤
本方法における使用のためのある種のＭＲ造影剤は、リン酸ジエステル部分及び常磁性金属錯体［Ｃｈｅｌ］を含むことができ、血漿タンパク質に結合することができる。このような造影剤はまた、血漿タンパク質への結合を促進する血漿タンパク質結合部分（ＰＰＢＭ）を含む。リン酸ジエステル部分は、直接的に又はリンカーを介して、錯体に共有結合することができ、及び／又は直接的に又はリンカーを介して血漿タンパク質結合部分に供給結合することができる。
【００５０】
ＨＳＡは、血清における高濃度（約０．６ｍＭ）で存在し、適度に高いアフィニティーで豊富な分子に結合するため、それは、造影剤に対して好ましい標的血漿タンパク質である；米国特許第６，６７６，９２９号、ＷＯ９６／２３５２６を参照されたい。他の有用な血漿タンパク質は、フィブリノーゲン、フィブリン、アルファ酸糖タンパク質、グロブリン、リポタンパク質を含む。
【００５１】
血漿タンパク質への結合に関して、広範囲な疎水性又は両親媒性物資は、ＰＰＢＭとして用いてもよく、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アルカリル、及びアラルキル基が挙げられ、これらの基は、場合により、１〜５個のアルキル、アリール、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アルコキシ、ヒドロキシ、及びハロ基で置換されてもよい。本明細書中で使用するとき、用語「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「シクロアルキル」、及び「ヘテロシクリル」は、１〜３個の二重結合及び／又は三重結合を含むことができる不飽和誘導体を含むことが意図される。さらに、本明細書中で使用するとき、アルキル及びヘテロアルキル基は、直線状又は分岐状であってもよい。
【００５２】
ある種の態様では、ＰＰＢＭは、１以上のアルキル（例えば、メチル、エチル、ｔ−ブチル）、アリール（例えば、フェニル）、アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシ）又はヒドロキシル基で場合により置換された直線状又は分岐状のアルキル基；１羽状のアルキル（例えば、メチル、エチル、ｔ−ブチル）、アリール（例えば、フェニル）、アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシ）又はヒドロキシル基で場合により置換されたシクロアルキル基（例えば、シクロペンチル、シクロヘキシル）；又は１以上のアルキル（例えば、メチル、エチル、ｔ−ブチル）、アリール（例えば、フェニル）、アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシ）又はヒドロキシル基で場合により置換されたアリール基（例えば、フェニル）から選択され得る。
【００５３】
常磁性金属錯体は、ＭＲ画像に有用な任意の錯体であり得て、例えば、限定されないが、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＤＯ３Ａ、及びＮＯＴＡが含まれる。
【００５４】
ＭＲＩに好ましい金属イオンは、原子番号２１〜２９、３９〜４７、又は５７〜８３を有す得る金属イオンが含まれ、より好ましくは、原子番号２１〜２９、４２、４４、又は５７〜８３を有する金属イオンの常磁性形態がである。特に好ましい常磁性金属イオンは、Ｇｄ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩ及びＩＩＩ）、Ｃｒ（ＩＩＩ）、Ｃｕ（ＩＩ）、Ｄｙ（ＩＩＩ）、Ｔｂ（ＩＩＩ及びＩＶ）、Ｈｏ（ＩＩＩ）、Ｅｒ（ＩＩＩ）、Ｐｒ（ＩＩＩ）及びＥｕ（ＩＩ及びＩＩＩ）からなる群から選択される。Ｇｄ（ＩＩＩ）が特に有用である。本明細書中で使用するとき、用語「Ｇｄ」は、金属ガドリウムのイオン形態を与えることが意味されることに留意されたい；このようなイオン形態は、ＧＤ（ＩＩＩ）、ＧＤ３＋、ガドなどとして記載することができ、意図されたイオン形態における相違はない。
【００５５】
いくつかの態様では、造影剤は、下記の構造：
［Ｃｈｅｌ］−［Ｌm−｛ＢＨＥＭ−ＰＰＢＭ｝p］q
を有することができ、又はその医薬として許容される塩若しくは誘導体であり得て、式中、ｍ、ｐ、及びｑは、独立して、１〜５のであり；
ここで、該［Ｃｈｅｌ］は、
【００５６】
【化７】
0005563299.tif 000008
【００５７】
及び
【００５８】
【化８】
0005563299.tif 000009
【００５９】
からなる群から選択される常磁性金属錯体であり、ここで、少なくとも１つのＲ1−Ｒ11は、−［Ｌm−｛ＢＨＥＭ−ＰＰＢＭ｝P］であり、−［Ｌm−｛ＢＨＥＭ−ＰＰＢＭ｝P］でないＲ1−Ｒ11は、水素及びＣ１−Ｃ４アルキルから選択され；
Ｒ12、Ｒ13、及びＲ14は、同じであるか又は異なっていてもよく、Ｏ-、及びＮＨ2からなる群から選択され；
Ｒ15は、Ｈ、ＣＨ2ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3、ヒドロキシアルキル、又はＣＨ2ＣＯＲ12であり；
Ｍは、Ｇｄ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩＩ）、Ｃｒ（ＩＩＩ）、Ｃｕ（ＩＩ）、Ｄｙ（ＩＩＩ）、Ｔｂ（ＩＩＩ）、Ｈｏ（ＩＩＩ）、Ｅｒ（ＩＩＩ）、及びＥｕ（ＩＩＩ）からなる群から選択される常磁性金属イオンであり；
Ｌは、後述されるリンカーであり；
ＢＨＥＭは、リン酸ジエステル部分であり；
ＰＰＢＭは、前述されるように、血漿タンパク質結合部分である。
【００６０】
いくつかの態様では、ｍ、ｐ、及びｑは、各々、１である。
いくつかの態様では、Ｒ1−11基のたった１つは、−［Ｌm−｛ＢＨＥＭ−ＰＰＢＭ｝P］であり、−［Ｌm−｛ＢＨＥＭ−ＰＰＢＭ｝P］でないＲ1−Ｒ11基は、水素である。
【００６１】
いくつかの態様では、Ｒ12、Ｒ13、及びＲ14は、Ｏ-である。
いくつかの態様では、Ｒ15は、Ｈである。
いくつかの態様では、Ｌは、−（ＣＨ2）n−であり、ここで、ｎは、１〜５である。
【００６２】
いくつかの態様では、ＰＰＢＭは、１〜２５個の炭素原子を有するアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、アルカリル、及びアラルキル基から選択され、ここで、該基は、場合により、１〜５個のアルキル、アリール、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アルコキシ、ヒドロキシル、及びハロ基で置換されてもよい。
【００６３】
いくつかの態様では、ＰＰＢＭは、場合により、１以上のアルキル、アリール、アルコキシ又はヒドロキシル基で置換された直線状又は分岐状のアルキル基；場合により、１以上のアルキル、アリール、アルコキシ又はヒドロキシル基で置換されたシクロアルキル基；場合により、１以上のアルキル、アリール、アルコキシ又はヒドロキシル基で置換されたアリール基からなる群から選択される。
【００６４】
いくつかの好ましいリン酸ジエステル含有造影剤は、下記の構造を有するものを含む。
【００６５】
【化９】
0005563299.tif 000010
（ＭＳ−３１５と呼ばれる）
【００６６】
【化１０】
0005563299.tif 000011
（式中、Ｐｈ＝フェニル、ＭＳ−３２５と呼ばれる）
【００６７】
【化１１】
0005563299.tif 000012
（式中、Ｐｈ＝フェニル、ＭＳ３１７と呼ばれる）
【００６８】
【化１２】
0005563299.tif 000013
（ＭＳ−３２２と呼ばれる）
【００６９】
【化１３】
0005563299.tif 000014
（式中、Ｐｈ＝フェニル、ＭＳ−３２３と呼ばれる）
【００７０】
【化１４】
0005563299.tif 000015
（式中、Ｍｅ＝メチル、ＭＳ−３２８と呼ばれる）
【００７１】
【化１５】
0005563299.tif 000016
（式中、Ｐｈ＝フェニル、ＭＳ−３２６と呼ばれる）；及び
【００７２】
【化１６】
0005563299.tif 000017
（式中、Ｐｈ＝フェニル、ＭＳ−３２７と呼ばれる）。
【００７３】
上記の造影剤は、さらん、本明細書に参照により援用される米国特許第６，６７６，９２９号に記載されている。
【００７４】
本方法における使用のための他の造影剤は、下記から選択される血液貯蔵造影剤を含む：
【００７５】
【化１７】
0005563299.tif 000018
【００７６】
【化１８】
0005563299.tif 000019
【００７７】
【化１９】
0005563299.tif 000020
【００７８】
【化２０】
0005563299.tif 000021
【００７９】
リンカー部分
リン酸ジエステル部分、錯体、及び血漿タンパク質結合部分は、直接的に互いに結合されてよい。あるいは、それらは、リンカーＬを介して接続されてもよい。このリンカーは、アルキル基（１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の炭素原子）を有するメチレン鎖）であってもよく、又は、例えば、酸素、窒素、硫黄、及びリンなどのヘテロ原子を含んでもよい。リンカーは、ＰＥＧ（ポリエチレン）領域を含んでもよい。リンカーは、直線状又は分岐状の鎖であり得て、あるいはフェニル環、非芳香族炭環式若しくは複素環式環、二重若しくは三重結合などの構造的要因を含むことができる。リンカー部分は、複数の官能基を含むことができ、１以上の錯体、リン酸ジエステル部分、又はＰＰＢＭ部分に結合され得る。好ましいリンカーは、１〜５個の−ＣＨ2−基、例えば、−（ＣＨ2）n−（ここで、ｎは、１〜５であり得る）を有するアルキル基を含む。
【００８０】
造影剤の特性
本発明の造影剤は、ヒト血清アルブミンなどの血漿タンパク質標的に結合することができる。例えば、少なくとも１０％（例えば、少なくとも５０％、８０％、９０％、９２％、９４％、又は９６％）の造影剤が、薬物及び標的の生理学的に関連した濃度で所望の標的に結合することができる。ＨＳＡなどの標的への造影剤の結合の程度は、多様な平衡結合法によって評価され得る。例えば、ＨＳＡへの結合は、限外ろ過によって測定され得る。結合された造影剤の濃度は、初期に存在する全体の標的基濃度と結合アッセイ後の未結合の標的基濃度との間の鎖として測定される。結合された画分は、全体の標的基の濃度で割った結合された標的基の濃度である。
【００８１】
本発明の化合物は、良好な画像解像度をもたらすことができる、標的結合（例えば、ＨＳＡへの）結果として高い緩和能を提示することができる。結合による緩和能の増加は、典型的には、１．５倍以上（例えば、緩和能の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０倍の増加）である。緩和能が７〜８倍、９〜１０倍、又はさらには１０倍を超えて増加した標的か造影剤が特に有用である。典型的には、緩和能は、ＮＭＲ分光計を用いて測定される。２０ＭＨｚ及び３７℃でのＭＲＩ造影剤の好ましい緩和能は、常磁性金属イオンあたり少なくとも１０ｍＭ−１ｓ−１（例えば、常磁性金属イオンあたり少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、又は６０ｍＭ−１ｓ−１）である。２０ＭＨｚ及び３７℃での６０ｍＭ−１ｓ−１より大きな緩和能を有する造影剤が特に有用である。
【００８２】
ＭＲ技術
本明細書の開示に従って調製された造影剤は、従来のＭＲＩ造影剤と同じやり方で使用することができ、願、並びにリンパ系感染、炎症、及び障害（例えば、キャッスルマン病）の診断及び段階分けに有用である。本明細書中に記載されるように、現在記載されている血漿タンパク質標的化された造影剤は、他の造影剤と比較して、リンパ節取り込みの増加を示すことができる。さらに、腫瘍を含む（癌性）リンパ組織は、正常（例えば、正常な）又は良性の巨大化した（例えば、感染した）リンパ組織と比較して低強度のように見える。リンパ系による血漿タンパク質標的化された造影剤の取り込み特性は、ＭＲＩを用いて、リンパ系シグナルの相対的な増加（例えば、シグナル強度）を観察することで示すことができる。
【００８３】
リンパ組織（例えば、節）の領域を撮像する場合、ある種のＭＲ技術及びパルスシークエンスは、癌性組織と比較して、正常なリンパ組織の造影を強めるために好ましい場合がある。これらの技術には、限定されないが、Ｔ１加重撮像、例えば、浸潤−回復調製、又は飽和−回収調製、又は損なわれた勾配回収されたエコー、又はスピンエコーシークエンスが含まれ、増大した正常（又は良性反応性）リンパ組織と腫瘍との間の対比を増加する。Ｔ２技術の調製法はまた、有用であることが分かる場合がある。最終的に、磁化移動技術のための調製はまた、本発明の薬剤を用いて対比を改善することができる。
【００８４】
医薬組成物
造影剤は、日常的な手法に従って、医薬組成物として製剤化することができる。本明細書中で使用するとき、本発明の化合物は、医薬として許容されるその塩又は誘導体を含むことができる。「医薬として許容される」とは、化合物又は組成物が、許容されない副作用なしに動物に投与され得ることを意味する。「医薬として許容される誘導体」は、本発明の化合物の任意の医薬として許容される塩、エステル、エステルの塩、又は他の誘導体を意味し、レシピエントへの投与により、本発明の化合物又はその活性な代謝物若しくは残基を（直接的又は間接的に）提供することができる。本発明の化合物の医薬として許容される塩は、当該技術分野において知られている医薬として許容される無機及び有機酸及び塩から誘導される対イオンを含む。
【００８５】
本発明の医薬組成物は、静脈又は動脈内投与によって、非経口的に投与され得る。投与が静脈内であるとき、医薬組成物は、ボーラスとして、時間的に分離された２以上の投薬として、又は定常若しくは非線形流動注入として与えられてもよい。
【００８６】
典型的には、投与のための組成物は、無菌の等張水性バッファー中の溶液である。必要に応じて、この組成物はまた、可溶化剤、安定化剤、及び注入部位での痛みを緩和するためのリドカインなどの局所麻酔剤を含んでもよい。一般に、成分は、例えばキットにおいては、別々に供給され、又は単一の剤形では一緒に混合され、例えば、凍結乾燥された粉末又は水を含まない濃縮物として混合される。組成物は、活性単位に含まれる活性剤の量を指示するアンプル又はサシェなどの、密封してシールされた容器に保存されてもよい。組成物は、注入によって投与される場合、無菌の医薬グレードの「注入用の水」、生理食塩水、又は他の適切な静脈液体を含む注射ボトルを用いて分注されてもよい。組成物が注入によって投与される場合、注入用の滅菌水又は生理食塩水のアンプルが提供されてもよく、その結果、成分が投与前に混合されてもよい。本発明の医薬組成物は、本発明の化合物及び医薬として許容されるその塩を含み、任意の医薬として許容される成分、賦形剤、担体、アジュバント又はビヒクルを伴う。
【００８７】
造影剤は、好ましくは、注入可能な組成物の形態で患者に投与される。造影剤を投与する方法は、好ましくは、静脈内又は動脈内である。前述されるように、静脈内投与が好ましい。本発明の医薬組成物は、ヒトを含む哺乳動物に、他の診断薬又は治療薬と類似したやり方で投与することができる。投与されるべき投薬量、投与の様式は、患者の年齢、体重、性別、及び状態、並びに遺伝因子を含む種々の因子に依存し、最終的には、本明細書に記載されるように、様々な投薬量の実験的測定、その後の撮像後に医療関係者によって決定される。一般に、診断的感度又は治療効率に必要とされる投薬量は、約０．００１〜５０，０００μｇ／ｋｇ、好ましくは０．０１〜２５．０μｇ／ｋｇ宿主体重の範囲である。最適な投薬量は、本明細書の開示に従って実験的に測定される。
【実施例】
【００８８】
実施例１−ＭＳ−３２５の１回の静脈注射後のＶＸ２腫瘍ウサギモデルにおけるリンパ節転移の検出：Ｇｄ−ＤＴＰＡとの比較
目的：
本試験の目的は、細胞外の非血漿タンパク質標的化造影剤Ｇｄ−ＤＴＰＡと比較した造影剤ＭＳ−３２５の静脈注射後のリンパ節増大とリンパ節転移の検出を示すことである。
【００８９】
材料及び方法：
動物モデル：
全ての実験プロトコールは、動物実験を統制する利用可能な規則に従って行われた。
【００９０】
ＶＸ２腫瘍を有するウサギ：
ニュージーランドの白ウサギ（３〜４ｋｇ、ｎ＝６）は、ＶＸ２癌種細胞の２〜３片（１×１ｍｍ）を大腿部に筋内接種され、腸骨リンパ節に転移を生じさせた。撮像実験は、腫瘍細胞の注射後の３〜６週で行った。
【００９１】
ＭＲ画像：
ＭＲシステム：ヘッドスキャナー（Ａｌｌｅｇｒａ，１．５Ｔｅｓｌａ；Ｓｉｅｍｅｎｓ  ＡＧ，Ｅｒｌａｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｔ１加重シークエンス（３Ｄ−ｖｉｂｅ，ＴＲ／ＴＥ  ３．７４／１．７１ｍｓ，α２０°，スライス厚１ｍｍ）。
造影剤：Ｇｄ−ＤＴＰＡ（０．２ｍｍｏｌ  Ｇｄ／ｋｇ），ＭＳ−３２５（０．０５ｍｍｏｌ  Ｇｄ／ｋｇ）。
画像：腸骨リンパ節におけるリンパ系造影効果の個人内比較
第１日：Ｇｄ−ＤＴＰＡ（５〜１２０分ｐ．ｉ．）
第２日：ＭＳ−３２５（５〜１２０分ｐ．ｉ．）
【００９２】
分析：
ＭＴ画像の技術的成功及び質の評価、並びにリンパ節転移の検出。
組織学：Ｈ／Ｅ染色後の顕微鏡試験；ＭＲ結果との相関。
【００９３】
結果：
ＶＸ２腫瘍を有するウサギのＭＲ画像は、ＭＳ−３２５の静脈内注入後の５〜３０分で機能性リンパ節組織における迅速かつ強力なシグナル増加を表した。転移組織は、リンパ節転移の優れた描写をもたらす僅かな増大のみを示した。対照的に、Ｇｄ−ＤＴＰＡは、全リンパ節の僅かであり、異質な増大だけを誘導し、機能性及び転移組織の有効な差異を可能にしない。
【００９４】
図１及び２は、Ｇｄ−ＤＴＰＡの０．２ｍｍｏｌ  Ｇｄ／ｋｇ体重又はＭＳ−３２５の０．０５ｍｍｏｌ  Ｇｄ／ｋｇ体重の静脈内注入後の５〜１５分で、転移性腸骨リンパ節（矢印）の典型的なコロナＭＲ画像を示す。明るく、均質な増大は、ＭＳ−３２５の注入後の機能性リンパ節組織に示され、一方、転移は暗いままである。リンパ節転移の検出は可能であり、切開され、組織学的に染色された節の顕微鏡試験によって検証された。
【００９５】
実施例２−ＭＳ−３２５の１回の静脈内注入後の良性の巨大化したリンパ節の増大
目的：
この試験の目的は、造影剤ＭＳ−３２５の静脈内注入後の巨大化した膝窩リンパ節のリンパ節増大を示すことであった。
【００９６】
材料及び方法：
動物モデル：
全ての実験プロトコールは、動物実験を規制している利用可能な規則に従って行った。
雌性モルモット（３７０〜４５０ｇ、ｎ＝３）は、第６日で、大腿部及び下肢の筋内に卵黄エマルジョン（０．１ｍＬ）によって刺激されたそれらのリンパ節を有した。ＭＳ−３２５（０．０５ｍｍｏｌ／ｋｇ）をｉ．ｖ．ボーラスとして投与された。
【００９７】
ＭＲ画像：
ＭＲシステム：ヘッドスキャナー（Ａｌｌｅｇｒａ，１．５Ｔｅｓｌａ；Ｓｉｅｍｅｎｓ  ＡＧ，Ｅｒｌａｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｔ１加重シークエンス（Ｔ１−ＴＳＥ，ＴＲ／ＴＥ  ６６６／１２ｍｓ，スライス厚１．１ｍｍ，捕捉時間３：４９）。
【００９８】
画像及び分析：造影剤投与前、並びに注入後の１、１５、３０、６０、９０、１２０、及び２４４０分で動物を撮像した。百分率シグナル強度増大は、膝窩リンパ節及び周辺筋肉において計算された。リンパ節と周辺筋肉との間のシグナル強度の比率も測定した。
【００９９】
【表１】
0005563299.tif 000022
【０１００】
結果：
刺激された（増大された）リンパ節を有するモルモットのＭＲ画像は、ＭＳ−３２５（０．０５ｍｍｏｌ／ｋｇ）の注射後の節のポジティブ及び持続的な増大を示した。リンパ節と周辺筋肉との間の造影が増加した。２４時間後、シグナル及び造影は基底レベルに戻った。
【０１０１】
【化２１】
0005563299.tif 000023
【０１０２】
参考文献
【化２２】
0005563299.tif 000024
【０１０３】
【化２３】
0005563299.tif 000025
【０１０４】
【化２４】
0005563299.tif 000026
【０１０５】
本発明の多数の態様が記載されている。それにも関わらず、種々の変更は、本発明の精神及び範囲から逸脱することなしになされてもよいことは理解される。したがって、他の態様は、下記の特許請求の範囲内にある。
【図１】
0005563299.tif 000027
【図２】
0005563299.tif 000028