(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ステビオシドを精製する方法であって、
ステビア植物由来の抽出物を含む原料ステビオシド混合物と水性有機溶媒とを混合してステビオシド溶液を形成する工程であって、前記水性有機溶媒が５重量％から２５重量％の量の水及び少なくとも一種類の有機溶媒を含む工程と、
単一の結晶化工程でステビオシド溶液から乾燥ベースで９５重量％を超えるステビオシドを含む純度のステビオシド組成物を結晶化する工程と、
を含み、
前記原料ステビオシドが、乾燥ベースで純度が６０重量％から８５重量％のステビオシドを含み、
前記少なくとも一種類の有機溶媒が、アセトン、アセトニトリル、メタノール、エタノール、１−プロパノール、イソプロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、イソブタノール、及びこれらの混合物からなる群から選択される、
方法。
【請求項２】
前記単一の結晶化工程内のステビオシド溶液が、撹拌されるか、又は撹拌されない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも一種類の有機溶媒が、メタノール、エタノール、１−プロパノール、イソプロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、及びイソブタノールからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記有機溶媒又は水性有機溶媒及び原料ステビオシド混合物が、原料ステビオシド１部に対して水性有機溶媒が４から１０部の重量比でステビオシド溶液内に存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記有機溶媒又は水性有機溶媒及び前記原料ステビオシド混合物が、原料ステビオシド１部に対して有機溶媒又は水性有機溶媒が３から５部の重量比でステビオシド溶液内に存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
水性有機溶媒が、１０重量％から２５重量％の量の水を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記原料ステビオシド混合物が、純度が７０重量％から８５重量％のステビオシドを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記方法が、室温で実行される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ステビオシド組成物が、乾燥ベースで９７重量％のステビオシドより高い純度のステビオシドを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ステビオシド組成物が、乾燥ベースで９８重量％のステビオシドより高い純度のステビオシドを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記ステビオシド組成物が、乾燥ベースで９９重量％のステビオシドより高い純度のステビオシドを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも一種類の有機溶媒がエタノールである、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、ステビオシドの多形及び無定形形態並びにステビオシドの多形及び無定形形態を調製する方法に関する。より詳細には、本発明は、向上した溶解速度を有するステビオシドの多形及び無定形形態に関する。
【背景技術】
【０００２】
ステビオシドは、下記の化学構造を有する高甘味度ジテルペノイド配糖体甘味料である。
【化１】
0005400766.tif 000002
ステビオシドは、他のステビオル配糖体と共に、日本、シンガポール、台湾、マレーシア、韓国、中国、イスラエル、インド、ブラジル、オーストラリア、及びパラグアイで商業的に栽培されている甘葉ステビア植物（「ステビア」）から単離及び抽出される。ステビオシドは、多くの高甘味度甘味料より優れた官能及び知覚特性を備えた代替ノンカロリー甘味料である。ステビアの処理された形態は、砂糖の７０倍から４００倍の甘味度がある。しかし、ステビオシドの室温で約１．２５ｇ／Ｌという低い水溶性（米国特許第４，０８２，８５８号）のために、ステビオシドの使用は困難になっている。従って、向上した溶解速度を有するステビオシドの多形及び無定形形態を開発することが望ましい。
【０００３】
米国特許第５，９６２，６７８号に、純度９１．６％のステビオシドを得るための無水メタノール溶液を用いたステビオシドの再結晶化が開示されている。メタノール水で再結晶化を何回も繰り返すことで、ステビオシドの純度を９９％以上に増加させることができる。米国特許公開第２００７／００８２１０３号に、メタノールから、さらに９０％のエタノールによる再結晶化でステビオシドを精製する方法が開示され、原料ステビオシド（６４．６％）からの２段階の再結晶化によって純度が９９％を超えるステビオシドを大量に形成することができると主張している。しかし、これらの先行技術の方法は、単一の再結晶化工程だけで実質的に純粋なステビオシド組成物を提供しない。従って、簡単な経済的な結晶化方法を用いてステビオシドを精製する方法を開発することが望ましい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の例示的実施形態は、ステビオシドの多形及び無定形形態とステビオシドの多形及び無定形形態を製造する方法とを提供することで上記の必要性に取り組む。
【０００５】
本発明の例示的実施形態は、実質的に純粋なステビオシド、ステビオシドの多形及び無定形形態、ステビオシドを精製する方法、並びにステビオシドの多形及び無定形形態を製造する方法を提供することで上記の必要性に取り組む。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
特定の実施形態では、ステビオシドを精製する方法は簡単な結晶化を含む。一実施形態では、ステビオシドを精製する方法は、原料ステビオシドと有機溶媒又は水性有機溶媒とを結合させてステビオシド溶液を形成する工程であって、水性有機溶液が約５重量％から約２５重量％の量の水を含む工程と、単一の工程で原料ステビオシド溶液から乾燥ベースで約９５重量％を超える純度の実質的に純粋なステビオシドを結晶化する工程とを含む。
【０００７】
別の特定の実施形態では、ステビオシドの様々な多形及び無定形形態とステビオシドの様々な多形及び無定形形態を調製する方法とが提供される。本発明の他の目的、特徴、及び利点は、以下の詳細な説明、図面、及び特許請求の範囲から明らかになろう。別段の定義がない限り、本明細書で使用するすべての技術及び科学用語並びに略語は、本発明が関連する通常の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。本明細書に記載するのと同様又は均等の方法及び組成物を本発明を実施する際に使用することができるが、適切な方法及び組成物の記述にあたってそのようないかなる方法及び組成物も本明細書に記載する本発明を限定することは意図していない。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】本発明のある実施形態による散乱角２θに対する散乱強度を示す線図上での３つのステビオシドの多形体である形態１、２Ａ及び２Ｂを比較する粉末ｘ線回折走査を示す図である。
【図２】本発明のある実施形態による散乱角２θに対する散乱強度を示す線図上でのステビオシドの多形体の粉末ｘ線回折走査を示す図である。
【図３】本発明のある実施形態による散乱角２θに対する散乱強度を示す線図上でのステビオシドの多形体の粉末ｘ線回折走査を示す図である。
【図４】本発明のある実施形態による散乱角２θに対する散乱強度を示す線図上でのステビオシドの多形体の粉末ｘ線回折走査を示す図である。
【図５】本発明のある実施形態による散乱角２θに対する散乱強度を示す線図上でのステビオシドの無定形形態の粉末ｘ線回折走査を示す図である。
【図６】本発明のある実施形態によるステビオシドを精製する方法の概略図である。
【図７】本発明のある実施形態によるステビオシド多形及び無定形形態の形成及び変換の概略図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
ステビオシドは、一般に手ごろなコストで入手可能な天然高甘味度甘味料である。しかし、ステビオシドは、一般に口から摂取可能な組成物内に組み込むことを困難にする比較的低い溶解性を有する。本発明の実施形態は、向上した溶解速度を有するステビオシドの多形及び無定形形態と向上した溶解速度を有するステビオシドの多形及び無定形形態を製造する方法とを提供することで上記の必要性に取り組む。
【００１０】
簡単に説明すると、本発明の例示的実施形態は、ステビオシドの多形及び／又は無定形形態を形成する方法とそれによって生成される多形及び無定形形態とを提供する。特定の実施形態では、実質的に純粋なステビオシドの組成物は、１つ又は複数のステビオシドの多形体を含む。本発明の別の例示的実施形態は、ステビオシドの無定形形態及びステビオシドの無定形形態を調製する方法を包含する。さらに別の実施形態では、多形体の１つの形態を多形体の別の形態又は無定形形態に変換する方法が提供される。本発明の例示的実施形態について以下に詳述し、図１〜図５に示す。
【００１１】
本明細書で使用する「実質的に純粋なステビオシド」という用語は、乾燥ベースで少なくとも約８０重量％のステビオシドを含むステビオシド組成物を指す。別の態様では、実質的に純粋なステビオシド組成物は、乾燥ベースで少なくとも約８５重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、又は少なくとも約９８重量％のステビオシドを含む。
【００１２】
本明細書で使用する「純度」という用語は、ステビオシド組成物内に生の又は精製された形態で存在するステビオシドの重量パーセントを表す。一実施形態では、ステビオシド組成物は、特定の純度のステビオシドを含み、組成物の残りは他のステビオシド配糖体の混合物又はステビオシドではない任意の成分を含む。組成物の純度は、当業者には周知の方法を用いて測定することができる。そのような１つの方法は、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を含む。当業者であれば、試料内の水分が純度測定の精度に影響する場合があることを理解されたい。従って、組成物は、実質的に乾燥していることが特に望ましい。本明細書で使用する実質的に乾燥した組成物は、最大約１０重量％の水分を含む。
【００１３】
本明細書で使用する「実質的に純粋な形態」という用語は、少なくとも約８０重量％のステビオシドの特定の多形又は無定形形態を含むステビオシド組成物を指す。別の態様では、ステビオシド組成物の実質的に純粋な形態は、少なくとも約８５重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、又は少なくとも約９８重量％の特定のステビオシドの多形又は無定形形態を含む。
【００１４】
ステビオシドの多形及び無定形形態
以下に記載する精製方法を用いて、形態１：ステビオシド水和物と形態２：ステビオシド溶解和物（メタノール溶解和物２Ａ及びエタノール溶解和物２Ｂ）とを含むステビオシドの少なくとも２つの異なる多形形態を製造することができることが発見されている。以下に記載する方法（図示せず）によってステビオシドの第３の多形形態、すなわち、無水ステビオシドも製造することができる。当業者であれば、有機溶媒又は水性有機溶媒と本明細書に記載する精製工程の温度が実質的に純粋なステビオシド組成物内に作成される多形体に影響する場合があることは理解することができるだろう。
【００１５】
多形性は、物質が結晶格子において分子の異なる構成及び／又はconformation（配座）を有する２つ以上の結晶状態として存在できる能力として定義される。有機化合物の約３０％が多形性を示すと考えられている（Ｚｅｌｌ他、テトラヘドロン  ５６（３６）６６０３−１６（２０００））。多形性は、医薬品、顔料及び染料、甘味料、爆薬、及び農業用化学物質の配合の際に重要である。多形性によって、濃度、融点、及び溶解速度などの物理的特性が変化する場合がある。
【００１６】
ステビオシドの多形体は、当業者には周知の技術である粉末ｘ線回折（ＸＲＰＤ）を用いた試料の分析によって同定された。図１〜図４は、散乱角２θに対する散乱強度を描画することで作成される実質的に純粋なステビオシドの多形形態のＸＲＰＤ走査を示す図である。試料は、ＣｕＫα放射を使用する島津製ＸＲＤ−６０００ｘ線粉末回折計を用いてＸＲＰＤで分析された。この装置は、長精密焦点ｘ線管を備えていた。管の電圧及びアンペアは、それぞれ４０ｋＶ及び４０ｍＡに設定されていた。発散及び散乱スリットは、１°に設定され、受光スリットは、０．１５ｍｍに設定されていた。回折放射は、ＮａＩシンチレーション検出器によって検出された。２．５から４０°２θの３°／秒（０．４秒／０．０２°刻み）でのθ−２θの連続走査が使用された。シリコン標準を分析して装置のアライメントが検査された。データが収集されＸＲＤ−６００００ｖ．４．１を用いて分析された。各パターンは、反射の解像度を表し、試料が結晶材料から構成されていることを示す。
【００１７】
図１は、メタノール、エタノール、又は水を含む溶液を使用する下記の精製方法を用いて調製されるステビオシドの多形形態の代表的なパターンを示す。特定の実施形態では、形態１、２Ａ、又は２Ｂにそれぞれ対応する図２、図３、又は図４のｘ線回折パターンと実質的に同様のｘ線回折パターンを有するステビオシドの多形体が提供される。別の特定の実施形態では、図２、図３、又は図４と実質的に同様のｘ線回折パターンを有する２つ以上のステビオシド多形体の混合物が提供される。
【００１８】
上記の少なくとも３つのステビオシドの多形形態に加えて、本明細書では、図５と実質的に同様のｘ線回折パターンを有するステビオシドの無定形形態も提供される。ステビオシドの無定形形態は、無定形である組成物を同定する幅が広い無定形ハローを有する。本明細書で使用する無定形とは、非結晶固体材料を指す。ステビオシドの無定形形態は、ステビオシドの多形形態と比較して溶解速度が向上しているために特に望ましい。甘味料組成物の溶解速度が、その非限定的な例が、チューインガム、焼菓子類、及び飲料を含む固体及び液体甘味付与可能な組成物を配合する際に重要であることは当業者には周知である。
【００１９】
また、本明細書では、上記のステビオシドの多形及び無定形形態の組合せも提供される。従って、当業者であれば、本明細書で実施されるステビオシド組成物を変性してステビオシド組成物の所望の品質（すなわち、溶解速度など）に応じて少なくとも１つのステビオシドの多形及び／又は無定形形態の所望の混合物を得ることができることを理解されたい。例えば、ある実施形態では、ステビオシド組成物は、約１重量％から約１００重量％の範囲の、約２５重量％より大きい、約５０重量％より大きい、又は約７５重量％より大きい量のステビオシドの特定の多形又は無定形形態を含むことができる。別の実施形態では、約８０重量％より大きい、約８５重量％より大きい、約９０重量％より大きい、約９５重量％より大きい、又は約９８重量％より大きい量の実質的に純粋な形態のステビオシドの多形又は無定形形態が提供される。
【００２０】
本明細書で提供されるステビオシドの多形及び無定形形態は、また、２００６年６月１９日出願の米国仮特許出願第６０／８０５，２１６号及び２００７年２月１２日出願の第６０／８８９，３１８号に開示された実質的に純粋なレバウディオシドＡの多形及び／又は無定形形態と組み合わせて所望の特性（例えば、甘さ、溶解速度など）を有する甘味料組成物を得ることができる。例えば、特定の実施形態では、レバウディオシドＡ水和物とステビオシド水和物とを組み合わせることができる。別の実施形態では、レバウディオシドＡ溶解和物とステビオシド溶解和物とを組み合わせることができる。それ故、レバウディオシドＡの多形及び無定形形態の任意の組合せを本明細書で提供されるステビオシドの多形及び無定形形態の任意の組合せと組み合わせることができる。
【００２１】
ステビオシドの精製方法
本発明の実施形態は、また、ステビオシドを精製して実質的に純粋なステビオシド又はステビオシドの実質的に純粋な形態の多形又は無定形形態を得る方法を提供する。ある実施形態によれば、純度が約４０重量％から約９５重量％の、約６０重量％から約８５重量％の、又は約７０重量％から約８５重量％のステビオシドを含む原料ステビオシド生成物が市販されている。ステビア植物から抽出された生の形態の原料ステビオシドは、本明細書にその開示の全体を参照として組み込むものとする、２００６年６月１９日出願の米国仮特許出願第６０／８０５，２１６号及び２００７年２月１２日出願の第６０／８８９，３１８号に開示された方法と類似の方法で再結晶化によって精製することができることが想定される。
【００２２】
図６に示す特定の実施形態では、ステビオシドを精製する方法１１０は、原料ステビオシド１１２を水性有機溶液又は有機溶媒１１６と組み合わせる工程１１４によって原料ステビオシド溶液１１８を調製する工程を含む。本明細書で使用する水性有機溶液１１６は、少なくとも一種類の有機溶媒とオプションとして水の混合物を含む。有機溶媒の非限定的な例としては、アルコール、アセトン、及びアセトニトリルが挙げられる。本明細書で使用するアルコールは、少なくとも１つのヒドロキシル部分に付着した任意の直鎖状、分岐状、又は環状、置換又は非置換のアルキル、アルケニル、又はＣ１−Ｃ５アルキニル基を指す。アルコール類の非限定的な例としては、エタノール、メタノール、イソプロパノール、１−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、イソブタノール、及びペンタノールを含む。
【００２３】
当業者であれば、水性有機溶液１１６内の水の量は、所望の生成量と純度とに応じて調整することができることを理解することができるだろう。特定の実施形態では、水性有機溶液１１６は、約５重量％から約２５重量％の量の水と少なくとも一種類の有機溶媒とを含むことができ、別の実施形態では、水性有機溶液１１６は、約５重量％から約２０重量％の量、約５重量％から約１５重量％の量、約５重量％から約１０重量％の量、又は約８重量％の量の水を含むことができる。
【００２４】
特定の実施形態では、原料ステビオシド溶液１１８は、重量比が原料ステビオシド約１に対して有機溶媒又は水性有機溶液が約１０部から約４部の範囲の有機溶媒又は水性有機溶液１１６と原料ステビオシド１１２とを含む。別の例示的実施形態では、原料ステビオシド溶液１１４は、重量比が原料ステビオシド約１部に対して有機溶媒又は水性有機溶媒が約５部から約３部の範囲の有機溶媒又は水性有機溶液１１６と原料ステビオシド１１２とを含む。
【００２５】
ステビオシドを精製する方法１１０は、原料ステビオシド溶液１１８を約２０℃から約８０℃、約３０℃から約７５℃、約４０℃から約７０℃の温度範囲、又はその間の任意の他の温度範囲まで加熱する工程１２０をさらに含むことができる。別の実施形態では、原料ステビオシド溶液１１８は、約１分間から約８時間加熱される（１２０）。
【００２６】
ステビオシドを精製する方法１１０は、原料ステビオシド溶液１１８を冷却する工程１２２をさらに含むことができる。特定の実施形態では、原料ステビオシド溶液１１８は、約４℃から約２５℃の温度まで冷却される（１２２）。別の特定の実施形態では、原料ステビオシド溶液１１８は、約０．５時間から約７２時間冷却される（１２２）。
【００２７】
特定の実施形態では、原料ステビオシド溶液１１８が冷却されると、実質的に純粋なステビオシド組成物１２４が水性有機溶液又は有機溶媒１１６内で結晶化する（１２６）。実質的に純粋なステビオシド組成物１２４は、乾燥ベースで約８０重量％より大きい、約８５重量％より大きい、約９０重量％より大きい、約９５重量％より大きい、約９７重量％より大きい、約９８重量％より大きい、又は約９９重量％より大きい純度レベルのステビオシドを含んでいてもよい。
【００２８】
ステビオシドを精製する方法１１０は、オプションとして、ステビオシドの結晶化を促進して実質的に純粋なステビオシド組成物１２４を形成するのに十分な量の実質的に純粋なステビオシドの結晶１３０を原料ステビオシド溶液１１８に散布する工程１２８をさらに含むことができる。実質的に純粋なステビオシド１２４の結晶化を促進するのに十分な量のステビオシドは、原料ステビオシド溶液１１８内に存在するステビオシドの約０．０００１重量％から約１重量％の量を含み、別の実施形態では、原料ステビオシド溶液１１８内に存在するステビオシドの約０．０１重量％から約１重量％の量を含む。原料ステビオシド溶液１１８を散布するのに適当な温度１２８は、約１８℃から約３５℃の範囲内の温度を含む。
【００２９】
別の実施形態では、ステビオシドを精製する方法１１０は、オプションとして、実質的に純粋なステビオシド組成物１２４を分離する工程１３２と洗浄する工程１３４とをさらに含む。実質的に純粋なステビオシド組成物１２４は、遠心力を利用し、これらに限定はされないが、垂直及び水平穿孔バスケット遠心機、固形ボウル遠心機、デキャンタ遠心機、ピーラー型遠心機、プッシャー型遠心機、ハインケル型遠心機、ディスクスタック遠心機及びサイクロン分離を含む様々な固体−液体分離技術によって、水性有機溶液又は有機溶媒１１６から分離することができる（１３２）。さらに、分離は、これらに限定はされないが、ベルト、ドラム、ナッチェ型、リーフ、プレート、ローゼンムント型、スパークラー型、及びバッグフィルタの使用並びにフィルタプレスを含む圧力、真空及び重力ろ過方法のいずれかによって拡張することができる。ステビオシド固体−液体分離装置の動作は、連続的、半連続的又はバッチモードであってもよい。実質的に純粋なステビオシド組成物１２４は、様々な水性有機溶媒１３６とその混合物とを用いて分離装置上で洗浄することができる（１３４）。実質的に純粋なステビオシド組成物１２４は、これらに限定はされないが、窒素及びアルゴンを含む任意の種類のガスを用いて分離装置上で部分的又は完全に乾燥させて残留液体溶媒を蒸発させることができる。実質的に純粋なステビオシド組成物１２４は、固体を溶解するか、又は固体形態を維持することで液体、気体又は機械的手段を用いて分離装置から自動的に又は手動で取り除くことができる。
【００３０】
さらに別の例示的実施形態では、ステビオシドを精製する方法１１０は、実質的に純粋なステビオシド組成物１２４を乾燥させる工程１３８をさらに含む。実質的に純粋なステビオシド組成物１２４を乾燥させる（１３８）のに適した方法は当業者には周知であり、これらに限定はされないが、回転真空乾燥機、流体床乾燥機、回転トンネル乾燥機、プレート乾燥機、トレイ乾燥機、Ｎａｕｔａ型乾燥機、噴霧乾燥機、フラッシュ乾燥機、ミクロン乾燥機、皿乾燥機、高速及び低速パドル乾燥機及びマイクロ波乾燥機の使用を含む。例示的実施形態では、実質的に純粋なステビオシド組成物１２４は、窒素又はアルゴンパージを用いて乾燥され（１３８）、約４０℃から約６０℃の範囲の温度で約１時間から約１００時間かけて残留溶媒１３６が除去される。
【００３１】
さらに精製を望む場合、本明細書に記載するステビオシドを精製する方法１１０を繰り返してもよく、又はカラムクロマトグラフィ（図示せず）などの代替の精製方法を用いて実質的に純粋なステビオシド組成物１２４をさらに精製してもよい。
【００３２】
ステビオシドの多形及び無定形形態を調製する方法
上記の精製方法及び下記の精製方法を用いてステビオシドの様々な多形及び無定形形態が得られることが発見されている。当業者であれば、本明細書に記載する水性有機溶液及び精製工程の温度の両方が実質的に純粋なステビオシド組成物内に存在可能な結果として得られる多形及び無定形形態に影響を与える可能性があることを理解することができるだろう。
【００３３】
さらに、当業者であれば、ステビオシドのある多形又は無定形形態をステビオシドの別の多形又は無定形形態に変換することができる（図７）ことを理解することができるだろう（図７）。
【００３４】
例えば、ほぼ室温で約２〜約１６時間、無水溶媒内で形態１をスラリーにするか、又はほぼ還流温度で約０．５から約３時間の間、無水溶媒内で形態１をスラリーにすることで形態１を形態２に変換することができる。ほぼ室温で約１６時間、又はほぼ還流温度で約２から約３時間水中の多形体をスラリーにすることで形態２を形態１に変換することができる。形態２は乾燥工程中に形態１に変換することができるが、乾燥温度を約７０℃以上に上げるか又は実質的に純粋なステビオシド組成物の乾燥時間を長くするとステビオシドが分解する場合がある。形態２は、水を追加して形態１に変換することができる。無水形態は、無水有機溶液から形態１又は形態２を析出させることで作成することができる。形態１及び形態２は、無定形形態を生成する下記の方法のいずれかにより形態３に変換することができる。
【００３５】
ステビオシドの初期結晶化の間に、又は当業者には周知の方法を用いて任意の個々の多形体又は多形体の組合せから直接、無定形形態を得ることができる。さらに、原料ステビオシド組成物又は当業者には周知の精製技術を用いて得た実質的に純粋なステビオシド組成物から無定形形態を得ることもできる。ステビオシドの無定形形態を調製する方法の非限定的な例としては、ステビオシド組成物のボールミル粉砕、析出、凍結乾燥、低温粉砕及び噴霧乾燥が挙げられる。
【００３６】
特定の実施形態では、無定形形態は、ステビオシド組成物の溶液を噴霧乾燥することでステビオシド組成物から調製することができる。簡単に説明すると、噴霧乾燥では、一般に窒素／空気の一定の流れの助けにより溶液を霧状にして液滴噴霧にするノズル噴霧器内に供給ポンプを通してステビオシド溶液を供給することが必要である。水分は、乾燥チャンバ内の管理された温度条件と空気流条件の下で液滴から蒸発し、無定形ステビオシドの乾燥した微粒子が形成される。無定形ステビオシドの純度は、ステビオシド溶液の純度に依存する。
【００３７】
別の特定の実施形態では、ステビオシドの非無定形形態をミル粉砕することでステビオシド組成物から無定形形態を調製することができる。ミル粉砕は、ステビオシドの結晶形態を無定形形態に変換するエネルギーの局所領域を生成すると信ずる機械的な工程である。例示的なミル粉砕技術は、ボールミル粉砕又はエアジェットミル粉砕を含み、両方の技術とも当業者には周知である。簡単に説明すると、ステビオシドの非無定形形態は、無定形ステビオシドを形成するのに有効な期間と速度でミル粉砕される。これらのパラメータは、当業者が決定することができる。通常のミル粉砕期間は約１５分から約２時間の範囲内であるが、別の期間を採用してもよい。
【００３８】
さらに本発明について、いかなる場合もその範囲を限定しないものと解釈される以下の実施例によって例示する。逆に、当業者であれば、本明細書の記載を読めば、本発明の精神及び／又は特許請求の範囲から逸脱することなく、様々な他の実施形態、変形形態、及びその均等物を思い付くことができることをはっきりと理解することができるだろう。別段の指定がない限り、パーセンテージ（％）は重量％である。
【００３９】
下記に得られるステビオシド組成物の純度は、ＨＰＬＣを用いて決定された。ＨＰＬＣ分析を実行する方法は当業者には周知である。簡単に説明すると、ＨＰＬＣ分析は、ＺＯＲＢＡＸ  ＮＨ２カラム（１５０×４．６ｍｍ、５μｍ）を用いて３０℃の温度で実行された。移動相は、流量が１．５ｍＬ／分の緩衝液２０％とアセトニトリル８０％の溶液を含んでいた。各々の試料の１２μＬが重ねて噴射され、試料は、２６０ｎｍ（１００ｎｍの帯域幅）を基準として２１０ｎｍ（４ｎｍの帯域幅）でＵＶ検出器を用いて分析された。ＨＰＬＣ分析では、４０から６０分の実行時間が必要であった。
【００４０】
０．１２５ｇの酢酸アンモニウムと１２５μＬの氷酢酸とを１リットルの水に溶解させることで、０．０１２５％の酢酸と０．０１２５％の酢酸アンモニウムの緩衝液が調製された。移動相が、緩衝液をアセトニトリルと混合して調製され、４．５±０．５分のステビオシド保持時間が達成された。最初、これは、約２０％の緩衝液（緩衝液２００ｍＬとアセトニトリル８００ｍＬ）であった。アセトニトリルの量を１から２％だけ増やすことで、ステビオシドの保持時間は約１分だけ増加した。
【００４１】
アセトニトリル７５０ｍＬと緩衝液２５０ｍＬを混合することで希釈液が調製された。１２．５±０．５ｍｇ（ほぼ０．１ｍｇまで記録）のステビオシド標準液を５ｍＬの希釈液で希釈することで、ステビオシド標準液が調製され、約２５００ｍｇ／Ｌ標準液（ストックＡ）の標準液を得た（水分及び純度を補正）。次に、ステビオシド標準液は、１ｍＬのストックＡを用いて１０ｍＬの希釈液に希釈されて２５０ｇ／ｍＬ標準液（ストックＢ）を生成した。各標準液は、２．５から５．０ｍｇ／Ｌの範囲の最終濃度に希釈された。標準液が調製されるたびにカール−フィッシャー分析によって含水率が測定され、分析証明書による溶媒純度に基づいて補正が実行された。
【００４２】
下記の表は、ステビオシド及び他のステビオル配糖体の保持時間（ＲＴ）のガイドラインを示す。しかし、当業者であれば、保持時間（ＲＴ）は、必要に応じて変更できることを理解することができるだろう。
【表１】
0005400766.tif 000003
【００４３】
下記に得られたステビオシド組成物についてもカール−フィッシャー分析が実行されて、Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＤＬ３９  Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定装置を用いて含水率が決定された。約１１〜５６ｍｇの試料が約３．５〜３．７ｇの乾燥ハイドラナール−クーロマットＡＤに溶解した。結果として得られた溶液の約０．９〜１．０ｇがハイドラナール−クーロマットＡＤを含むＫＦ滴定容器に入れられ、１０秒間混合されて確実に溶解された。試料は、電気化学酸化によってヨウ素を生成する発生電極によって滴定された：２Ｉ−→Ｉ２＋２ｅ。実験は３回繰り返されて再現性が確認された。
【００４４】
３種類のステビオシド多形及びステビオシド無定形形態の材料特性を下記の表にまとめた。
【表２】
0005400766.tif 000004
【００４５】
実施例Ａ
市販の試料源から原料ステビオシドが得られた。乾燥ベース（含水率３．９２％）でＨＰＬＣを用いて不純物（７６．８％のステビオシド、８．２４％のレバウディオシドＡ、２．３８％のステビオルビオシド、０．１０９％のレバウディオシドＤ、４．１３３％のその他のステビオル配糖体、０．２９３％のレバウディオシドＢ、２．３８％のステビオルビオシド）が同定され、定量化された。
【００４６】
原料ステビオシド（７６％、１ｇ）が３０．０ｍＬのメタノール（９９％）内に懸濁され、１０分間連続で撹拌されて４５℃まで加温された。原料が完全に溶解して溶液が透明になるまで、水が液滴（約２．５ｍＬ）として添加された。透明な溶液が高温状態でろ過され、室温になるまで一晩冷却された。析出された固体はろ過され、メタノール（２×３〜４ｍＬ，９９％）で洗浄され、真空オーブン内で減圧下（２０ｍｍ）にて５０℃で３〜４時間乾燥され、乾燥ベース（含水率２．６３％）で０．５８８ｇの精製ステビオシド（ＨＰＬＣにより＞９５％）が生成された。図３に示すＸＲＰＤの結果は、結晶化ステビオシドが異なる結晶形態であったことを示す。
【００４７】
実施例Ｂ
市販の試料源から原料ステビオシド（７６％、５ｇ）が得られ、１００ｍＬのエタノール（９９．９６％）内に懸濁され、６９℃まで加温された。ステビオシドは５分以内に溶解した。溶液をさらに１０分間沸騰させて、２日間室温になるまで冷却された。結晶化ステビオシドはろ過され、真空オーブン内で減圧下（２０ｍｍ）にて４８〜５０℃で３．５時間乾燥され、乾燥ベース（含水率３．５５％）で純粋な結晶化ステビオシド（ＨＰＬＣにより＞９７．０％）の７３．００％の収率が得られた。図４に示すＸＲＰＤの結果は、結晶化ステビオシドが実施例Ａと別の結晶形態であったことを示す。
【００４８】
実施例Ｃ
実施例Ｂから得られたステビオシド（＞９７％、２ｇ）は、溶液を１分間４４℃で撹拌することで１００ｍＬの水に溶解した。溶液は、室温になるまで１日間冷却された。析出物はろ過され、真空オーブン内で減圧下（２０ｍｍ）にて６０℃で２４時間乾燥され、乾燥ベース（含水率５．３３％）で結晶化ステビオシド（ＨＰＬＣにより＞９７．０％）の９５％の収率が得られた。図２に示すＸＲＰＤの結果は、結晶化ステビオシドが実施例Ａ又はＢのものとは別の結晶形態であったことを示す。
【００４９】
実施例Ｄ
５．０ｇの結晶化ステビオシドを２００ｍＬの水溶液内に溶解させて透明になるまで４０〜５０℃まで加熱することで、実施例Ｂから得た結晶化ステビオシドから濃溶液が調製された。高温の透明な溶液は、Ｌａｂ−Ｐｌａｎｔ製の乾燥機ＳＤ−０４装置（英国西ヨークシャー、Ｌａｂ−Ｐｌａｎｔ  Ｌｔｄ．）で噴霧乾燥された。溶液は、供給ポンプを通してノズル噴霧器内に供給され、ノズル噴霧器は、窒素／空気の一定の流れの助けにより溶液を霧状にして液滴噴霧にした。水分は、乾燥チャンバ内の管理された温度条件（約９０から約９７℃）及び空気流条件の下で液滴から蒸発し、乾燥した微粒子が形成された。この乾燥粉末は、乾燥チャンバから連続的に排出され、清潔な乾燥した収集びん内に収集された。乾燥ベース（含水率３．２０％）で純粋なステビオシド（ＨＰＬＣにより＞９７％）の９８％収率が得られた。図５に示すＸＲＰＤの結果は、ステビオシドが無定形形態であったことを示す。
【００５０】
以上、本発明の特定の実施形態に関して本発明について詳細に説明してきたが、上記説明を理解すれば、当業者であればこれらの実施形態の代替形態、変形形態、及び均等物を容易に思い付くことができることを理解されたい。従って、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲及びその均等物に関して評価されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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