(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ２０を発現する癌を治療するための組合せ医薬組成物であり、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と、プロテアソーム阻害剤とを組み合わせて含有し、当該ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であり、当該ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域のオリゴ糖の少なくとも４０％以上がフコシル化されていないことを特徴とし；当該ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体が、配列番号３〜配列番号１９からなる群から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列、及び配列番号２０の軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を有することを特徴とし；そして当該プロテアソーム阻害剤がボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）である、組合せ医薬組成物。
【請求項２】
Ｕ２６６細胞（ヒトプラズマミエローマ)を使用するＣｅｌｌ−Ｂａｓｅｄ  Ａｓｓａｙにおいて、前記プロテアソーム阻害剤のプロテアソーム阻害活性のＩＣ５０が５μＭ以下であることを特徴とする、請求項１に記載の組合せ医薬組成物。
【請求項３】
１つ以上の追加的な他の細胞傷害剤、化学治療剤若しくは抗癌剤、又はそれらの薬剤の作用を亢進する化合物と併用されることを特徴とする、請求項１又は２のいずれか１項に記載の組合せ医薬組成物。
【請求項４】
前記ＣＤ２０を発現する癌が、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組合せ医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロテアソーム阻害剤と組み合わせて、癌、特にＣＤ２０を発現する癌を治療する医薬を生産するための、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ２０分子（ヒトＢリンパ球限定分化抗原又はＢｐ３５とも称される）は、プレＢ細胞及び成熟Ｂリンパ球上に発現する、分子量約３５ｋＤａの疎水性膜貫通タンパク質である（Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６４（１９）  （１９８９）  １１２８２−１１２８７，  ａｎｄ  Ｅｉｎｆｉｅｌｄ，  Ｄ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ７（３）  （１９８８）  ７１１−７１７）。ＣＤ２０は、末梢血又はリンパ系器官に存在する９０％以上のＢ細胞表面に認められ、発生初期のプレＢ細胞から形質細胞に至るまで発現が維持される。ＣＤ２０は正常細胞及び悪性Ｂ細胞のいずれにも存在する。特に、ＣＤ２０は、９０％以上のＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）において発現している（Ａｎｄｅｒｓｏｎ，  Ｋ．Ｃ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  ６３（６）  （１９８４）  １４２４−１４３３）が、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常形質細胞、又は他の正常組織には発現していない（Ｔｅｄｄｅｒ，  Ｔ．Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３５（２）  （１９８５）  ９７３−９７９）。
【０００３】
ＣＤ２０のカルボキシル末端の８５アミノ酸は、細胞質内に位置する。この領域の長さは、それぞれ３、３、２８、１５、及び１６アミノ酸の相対的に短い細胞質内領域を有する、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＧ重鎖又は組織適合性抗原クラスＩＩ又はβ鎖糖の他のＢ細胞特異的表面構造の場合と対照的である（Ｋｏｍａｒｏｍｙ，  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  ＮＡＲ  １１  （１９８３）  ６７７５−６７８５）。カルボキシル末端の最後の６１アミノ酸中２１個が酸性残基である一方、塩基性のものは僅か２個に過ぎず、これはこの領域が強力な正味の負電荷を有することを示唆する。ＧｅｎＢａｎｋ受入番号は、ＮＰ−６９０６０５である。ＣＤ２０は、Ｂ細胞の活性化及び分化プロセスの早期段階に関与し得て（Ｔｅｄｄｅｒ，  Ｔ．Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６  Ｉｓｓｕｅ  ８  （１９８６）  ８８１−８８７）、カルシウムイオンチャンネルとして機能し得ると考えられている（Ｔｅｄｄｅｒ，  Ｔ．Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １４Ｄ  （１９９０）  １９５）。
【０００４】
ＣＤ２０に対する結合様式及び生物学的活性が顕著に異なる２つの種類の抗ＣＤ２０抗体が存在する（Ｃｒａｇｇ，  Ｍ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １０３（２００４）  ２７３８−２７４３；及びＣｒａｇｇ，  Ｍ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ，  １０１  （２００３）  １０４５−１０５２）。例えばリツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）等のタイプＩ抗体は補体誘導性細胞傷害に関与するのに対して、例えばトシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）Ｂ１、１１Ｂ８、ＡＴ８０又はＢ−Ｌｙ１抗体等のＩＩ型抗体は、カスパーゼ依存性アポトーシス及び付随的なホスファチジルセリン露出（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ）を介して標的細胞の死滅を効果的に誘導する。
【０００５】
Ｉ型及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体が共有する共通の性質を、表１にまとめる。
【０００６】
【表１】
0005469073.tif 000002
【０００７】
多触媒性プロテアーゼ複合体とも称される２６Ｓプロテアソームは、多くの種類の真核細胞の細胞質及び核のいずれにも認められる、非常に分子量の大きい複合体である。該プロテアソームは、２０Ｓの触媒コア及び２つの１９Ｓの制御キャップから構成される。１９Ｓ制御キャップは、２０Ｓのバレル型複合体の各末端に認められ、中心触媒コアへの基質の侵入を制御する。該１９Ｓキャップは、８．５ｋＤａのポリペプチドユビキチン分子が複数付加されることにより分解の標的となった基質の認識に一定の役割を果たす（例えば、Ｃｏｕｘ，  Ｏ．，  Ｔａｎａｋａ，  Ｋ．  ａｎｄ  Ｇｏｌｄｂｅｒｇ，  Ａ．，  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ６５  （１９９６）  ８０１−８４７；  Ｖｏｇｅｓ，  Ｄ．，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ６８  （１９９９）  １０１５−６８  ａｎｄ  Ｋｉｓｓｅｌｅｖ，  Ａ．Ｌ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  Ｖｏｌ．  ８（８）  （２００１）  ７３９−７５８に概説されている）。基質からのユビキチン分子の除去を促進した後、１９Ｓキャップは、その基質が中心触媒コアに侵入できるように、基質タンパク質のアンフォールディングを促進する。
【０００８】
前記２６Ｓプロテアソームは、進化的に高度に保存されており、研究されている全ての真核細胞において見出され、そして組織ホモジネート中の全タンパク質の１．０％を占める場合がある。該プロテアソームは、細胞の細胞質及び核のいずれにも見出されており、これら両方の構造において機能的な役割を果たすことが示唆される（Ｔａｎａｋａ，  Ｋ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  １３９  （１９８９）  ３４−４１；  Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０  （１９９３）  ９９−１０３）。
【０００９】
プロテアソームの初期の研究では、５つの異なるタンパク質分解活性が描写され、それぞれが複合体の別個の構造に関連することが示された（ＷｉＩｋ，  Ｓ．，  ａｎｄ  Ｏｒｌｏｗｓｋｉ，  Ｍ．，  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  ３５  （１９８０）  １１７２−１１８２；  Ｗｉｌｋ，  Ｓ．，  ａｎｄ  Ｏｒｌｏｗｓｋｉ，  Ｍ．，  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  ４０  （１９８３）  ８４２−８４９；  Ｏｒｌｏｗｓｋｉ，  Ｍ．，  ａｎｄ  Ｗｉｌｋ，  Ｓ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍ  １０１  （１９８１）  ８１４−８２２）。３つの主要な活性は、特異性においてキモトリプシン、ペプシン及びぺプチジルグルタミルペプチダーゼと類似する。記載されている他の２つの活性は、分岐鎖アミノ酸のカルボキシル側のペプチド結合及び短鎖中性アミノ酸の間のペプチド結合を開裂する活性を示す（Ｏｒｌｏｗｓｋｉ，  Ｍ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２９  （１９９０）  １０２８９−２９７）。
【００１０】
プロテアソームが、細胞分裂、抗原プロセシング、及び例えば癌タンパク質、転写因子及びサイクリン等の短命の制御タンパク質の分解等の様々な細胞機能に必要なタンパク質分解経路に関与する、主要なリソソーム外タンパク質分解系であることは現在では周知である（Ｃｉｅｃｈａｎｏｖｅｒ，  Ａ．，  Ｃｅｌｌ  ７９  （１９９４）  １３−２１；  Ｐａｌｏｍｂｅｌｌ，  ＶＪ．，  Ｒａｎｄｏ，  ＯＪ．，  Ｇｏｌｄｂｅｒｇ，  Ａ．Ｌ．ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ，  Ｔ．，  Ｃｅｌｌ  ７８  （１９９４）  ７７３−７８５）。プロテアソームは細胞周期の進行過程におけるサイクリンの秩序立った分解に中心的役割を果たすことから、細胞分裂に一定の役割を果たしている。続いて、研究により、酵母プロテアソームサブユニットの１３個の遺伝子中１２個の内いずれか１個が狂うことにより、細胞分裂の停止、又はタンパク質分解の不調が起こることが実証され、このことから、プロテアソームは細胞増殖においても一定の役割を果たすことが示唆される（Ｆｕｊｉｗａｒａ，  Ｔ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６５  （１９９０）  １６６０４−  １６１３；  Ｂｅｙｎｏｎ，  Ｉｎｔ．  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ  Ｎｅｗｓ  Ｌｅｔｔｅｒ，  Ｊａｎｕａｒｙ，  １−２  （１９９４））。従って、プロテアソームの阻害は、癌等の細胞分裂の異常に起因する疾患の治療に有用な場合がある。
【００１１】
ユビキチンにより誘導されるプロテアソームのタンパク質分解がＮＦｋＢの活性化に重要な役割を果たすという知見は、プロテアソームに対する阻害剤の使用により臨床的に活用され得る。ＮＦｋＢの活性型の形成には、プロテアソームにより誘導されるタンパク質分解によるＮＦｋＢの不活性前駆体であるｐ１０５を必要とする。
【００１２】
加えて、プロセシングを経たＮＦｋＢ（ｐ６５／ｐ５０）は、阻害タンパク質のＩｋＢと結合した不活性複合体として細胞質内に維持される。様々な刺激が、プロテアソームにより誘導されるＩｋＢの分解を引き起こすシグナリング経路が発動することにより、ＮＦｋＢを活性化する。サイトカイン合成の刺激の後の異常なＮＦｋＢ活性化は、様々な炎症性又は感染性−２疾患において観察されている。ＮＦｋＢの活性化は、血管新生及び接着分子の増殖にも必須であり、ゆえに、プロテアソーム阻害は、血管系に関連する疾患の治療にも用途を有し得る。
【００１３】
様々なプロテアソーム阻害剤として、例えば、Ｋｉｓｓｅｌｅｖ，  Ａ．Ｌ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  Ｖｏｌ．  ８  （８）  （２００１）  ７３９−７５８、ＷＯ  ２００４／００４７４９及びＪｏａｚｅｉｒｏ，  Ｃ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６６  （１６）  （２００６）  ７８４０−７８４２に記載のものは、いずれも２６Ｓプロテアソーム活性を阻害する能力を有する。それらのプロテアソーム阻害剤は、とりわけ、例えばペプチドアルデヒド（ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｌｄｅｈｙｄｅ）（例えばＭＧ１３２、ＭＧ１１５、ＣＥＰ−１６１５又はＰＳＩ）、ペプチドボロネート（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｂｏｒｏｎａｔｅ）（例えばボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）（ＰＳ−３４１）又はＤＦＬＢ）、ペプチドエポキシケトン（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｅｐｏｘｙｋｅｔｏｎｅ）（例えばエポキソミシン（ｅｐｏｘｏｍｉｃｉｎ）、ジハイドロエポネミシンｄｉｈｙｄｒｏｅｐｏｎｅｍｙｃｉｎ）、又はエポキソミシン誘導体ＰＲ−１７１）、又はペプチドビニルスルホン（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｖｉｎｙｌ  ｓｕｌｆｏｎｅ）（例えばＮＬＶＳ）等のペプチド誘導体、並びに例えばサリノスポラミドＡ（ｓａｌｉｎｏｓｐｏｒａｍｉｄｅ  Ａ）（ＮＰＩ−００５２）、サリノスポラミドＡ誘導体、ラクタシスチン（ｌａｃｔａｃｙｓｔｉｎ）又はラクタシスチン誘導体（例えばｃｌａｓｔｏ−ラクタシスチン−Ｌ−ラクトン（オムラリド（ｏｍｕｒａｌｉｄｅ））又はＰＳ−５１９）等を含む（Ｋｉｓｓｅｌｅｖ，  Ａ．Ｌ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  Ｖｏｌ．  ８  （８）  （２００１）  ７３９−７５８、ＷＯ  ２００４／００４７４９及びＪｏａｚｅｉｒｏ，  Ｃ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６６（１６）  （２００６）  ７８４０−７８４２に記載されている）。
【００１４】
Ｓｍｏｌｅｗｓｋｉ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３０  （２００６）  １５２１−１５２９には、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体であるボルテゾミブ及びリツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）のインビトロでの追加的な細胞傷害作用が記載されている。Ｗａｎｇ，  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｅｕｋｅｍｉａ，  ２２  （２００８）  １７９−１８５には、インビトロ及び１つのマントル細胞リンパ腫異種移植モデルでの、ボルテゾミブ、リツキシマブ、及びシクロホスファミドの３つの組合せの効果が記載されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は、プロテアソーム阻害剤と組み合わせて、ＣＤ２０を発現する癌を治療する医薬を生産するための、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の使用を含む。
【００１６】
本発明は更に、プロテアソーム阻害剤と組み合わせて、ＣＤ２０を発現する癌に苦しむ患者を治療する医薬を生産するための、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の使用を含む。
【００１７】
好ましくは、前記プロテアソーム阻害剤の抗プロテアソーム阻害活性のＩＣ５０は、５μＭ未満である。
【００１８】
好ましくは、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．  ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０に結合する能力は、リツキシマブと比較して０．３倍から０．６倍であり、より好ましくは０．３５倍から０．５５倍であり、なおもより好ましくは０．４倍から０．５倍である。
【００１９】
好ましくは、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
【００２０】
好ましくは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）は増大する。
【００２１】
好ましくは、前記プロテアソーム阻害剤は、ペプチドアルデヒド、ペプチドボロネート、ペプチドエポキシケトン、又はサリノスポラミドＡからなる群から選択される。
【００２２】
発明の詳細な説明
「抗体」という用語は、完全な抗体に限定されず、本発明の特徴的性質が保持される限りにおける、ヒト抗体、ヒト化抗体、及びモノクローナル抗体、キメラ抗体又は組換え抗体等の遺伝子組換え抗体、並びにそれらの抗体のフラグメント等の、様々な形態の抗体を含む。本明細書中で使用されるとき、「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一のアミノ酸組成物の抗体分子の調製物を指す。従って、「ヒトモノクローナル抗体」は、ヒト生殖系列イムノグロブリン配列由来の可変領域及び定常領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体を指す。一つの態様において、前記ヒトモノクローナル抗体は、ヒト重鎖トランス遺伝子及びヒト軽鎖トランス遺伝子を含むゲノムを有する、遺伝子組換えマウス等の非ヒト動物から取得したＢ細胞と融合した不死化細胞を含む、ハイブリドーマにより生産される。
【００２３】
好ましくは、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、モノクローナル抗体である。
【００２４】
「キメラ抗体」という用語は、通常組換えＤＮＡ技術により調製される、１つの供給源又は種類に由来する可変領域、即ち結合領域、及び可変領域の供給源と異なる供給源又は種類に由来する少なくとも一部分の定常領域を含む、モノクローナル抗体である。マウス可変領域及びヒト定常領域を含むキメラ抗体は、特に好ましい。そのようなマウス／ヒトキメラ抗体は、マウスイムノグロブリン可変領域をコードするＤＮＡ断片及びヒトイムノグロブリン定常領域をコードするＤＮＡ断片を含むイムノグロブリン遺伝子の発現産物である。本発明に包含される「キメラ抗体」の他の形態は、元の抗体からクラス又はサブクラスが変更又は変化したものである。そのような「キメラ」抗体は、「クラススイッチ抗体」とも称される。キメラ抗体を生産する方法は、現在当該技術分野で周知である既存の組換えＤＮＡ及び遺伝子トランスフェクション技術を含む。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  Ｓ．Ｌ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８１  （１９８４）  ６８５１−６８５５；  ＵＳ  ５，２０２，２３８及びＵＳ  ５，２０４，２４４を参照されたい。
【００２５】
「ヒト化抗体」という用語は、フレームワーク又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）が、元のイムノグロブリンと比較して異なる特異性を有するイムノグロブリンのＣＤＲを含むように改変された抗体を意味する。好ましい態様において、マウスＣＤＲがヒト抗体のフレームワーク領域中に移植され、「ヒト化抗体」が調製される。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，  Ｌ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２  （１９８８）  ３２３−３２７；及びＮｅｕｂｅｒｇｅｒ，  Ｍ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３１４  （１９８５）  ２６８−２７０を参照されたい。特に好ましいＣＤＲは、上記キメラ抗体及び二機能性抗体が認識する抗原を認識する配列を表すものに対応する。
【００２６】
本明細書中で使用されるとき、「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系列イムノグロブリン配列由来の可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことが意図される。ヒト抗体は、当該技術分野で周知である（ｖａｎ  Ｄｉｊｋ，  Ｍ．Ａ．，  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，  Ｊ．Ｇ．，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｌ．  ５  （２００１）  ３６８−３７４）。そのような技術に基づいて、広範な標的に対するヒト抗体が生産され得る。ヒト抗体の例としては、例えばＫｅｌｌｅｒｍａｎｎ，  Ｓ．  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １３  （２００２）  ５９３−５９７に記載される。
【００２７】
本明細書中で使用されるとき、「組換えヒト抗体」という用語は、ヒトイムノグロブリン遺伝子を組み込んだ動物に由来するＮＳＯ細胞又はＣＨＯ細胞等の宿主細胞から単離した抗体、又は宿主細胞にトランスフェクションした組換え発現ベクターを使用して発現した抗体等の、組換え技術を使用して調製、発現、生産、又は単離した、全てのヒト抗体を含むことが意図される。そのようなヒト抗体は、再構成された形態のヒト生殖系列イムノグロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する。本発明の組換えヒト抗体は、インビボ体細胞超変異に付されたものである。故に、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、これらに関するものであるが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しない場合がある。
【００２８】
本明細書中で使用されるとき、「特異的な結合」又は「特異的に結合する」という語は、ＣＤ２０抗原と特異的に結合する抗体を指す。好ましくは、結合親和性のＫＤ値は、１０−８ｍｏｌ／ｌ未満、好ましくは１０−９ｍｏｌ／ｌ未満（例えば１０−１０ｍｏｌ／ｌ）、より好ましくは、ＫＤ値は１０−１０ｍｏｌ／ｌ未満（例えば１０−１２ｍｏｌ／ｌ）である。結合親和性は、ＣＤ２０発現細胞に対するＳｃａｔｃｈａｒｄプロット解析（例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標））等の、標準的な結合アッセイを用いて決定される。
【００２９】
本明細書中で使用されるとき、「核酸分子」という用語は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含むことが意図される。核酸分子は単鎖又は二重鎖のいずれであってもよいが、好ましくは二重鎖ＤＮＡである。
【００３０】
「定常ドメイン」は、抗原に対する結合に直接関与しないが、エフェクター作用（ＡＤＣＣ、補体結合、及びＣＤＣ）に関与する。
【００３１】
本明細書中で使用されるとき、「可変領域」（軽鎖（ＶＬ）の可変領域、重鎖（ＶＨ）の可変領域）は、抗原と抗体との結合に直接関与する軽鎖と重鎖のペアのそれぞれを意味する。ヒト可変軽鎖及び重鎖のドメインは、同一の一般構造を有し、そして各ドメインは、配列が高度に保存された４つのフレームワーク（ＦＲ）領域、及びそれらを連結する３つの「超可変領域」（又は相補性決定領域、ＣＤＲ）を含む。フレームワーク領域はｂ−シート立体構造を採用し、そしてＣＤＲは、該ｂ−シート構造を連結するループを形成し得る。各鎖中のＣＤＲは、フレームワーク領域により三次元構造を維持し、そしてもう１つの鎖と一緒になって抗原結合部位を形成する。抗体重鎖及び軽鎖ＣＤＲ３領域は、本発明の抗体の結合特異性／親和性において特に重要な役割を果たし、そのため、本発明の更なる目的を提供する。
【００３２】
本明細書中で使用されるとき、「超可変領域」又は「抗体の抗原結合部分」という用語は、抗原結合に関与する、抗体のアミノ酸残基を指す。該超可変領域は、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」のアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」又は「ＦＲ」領域は、本明細書中で定義される超可変領域を除く可変ドメイン領域である。従って、抗体の軽鎖及び重鎖は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＦＲｌ、ＣＤＲｌ、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４ドメインを含む。特に、重鎖のＣＤＲ３は、抗原結合に最も寄与が大きい領域である。ＣＤＲ及びＦＲ領域は、Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  ５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ．  （１９９１））の標準的な定義、及び／又は「超可変ループ」からの残基に従い決定される。
【００３３】
「ＣＤ２０」及び「ＣＤ２０抗原」という用語は本明細書中で互換的に使用され、細胞により天然に発現される、又はＣＤ２０遺伝子をトランスフェクションした細胞により発現されるヒトＣＤ２０の任意の変異体、アイソフォーム及び種ホモログを含む。本発明の抗体のＣＤ２０抗原への結合は、ＣＤ２０の不活性化による、ＣＤ２０発現細胞（例えば腫瘍細胞）の殺傷を誘導する。ＣＤ２０発現細胞の殺傷は、１つ以上の以下のプロセス：細胞死／アポトーシス誘導、ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣにより生じ得る。
【００３４】
当該技術分野で認識されているように、ＣＤ２０の同意語には、Ｂ−リンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂ−リンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ−１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５、及びＬＦ５が含まれる。
【００３５】
本発明における「抗ＣＤ２０抗体」という用語は、ＣＤ２０抗原に特異的に結合する抗体である。抗ＣＤ２０抗体のＣＤ２０抗原への結合特性及び生物活性に依存して、Ｃｒａｇｇ，  Ｍ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １０３  （２００４）  ２７３８−２７４３；  ａｎｄ  Ｃｒａｇｇ，  Ｍ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １０１  （２００３）  １０４５−１０５２に従い、抗ＣＤ２０抗体は、２種類（Ｉ型及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）に区別できる。表２を参照されたい。
【００３６】
【表２】
0005469073.tif 000003
【００３７】
Ｉ型及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の一つの本質的特性は、それらの結合の様式である。故に、Ｉ型及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、Ｒａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．  ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０に対する結合能力をリツキシマブと比較した場合の比率により分類され得る。
【００３８】
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．  ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０に結合する能力は、リツキシマブと比較して０．３倍から０．６倍であり、より好ましくは０．３５倍から０．５５倍であり、なおもより好ましくは０．４倍から０．５倍である。そのようなＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の例としては、例えばトシツモマブ（Ｂ１  ＩｇＧ２ａ）、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体ＩｇＧ１（ＷＯ  ２００５／０４４８５９に開示されるキメラヒト化ＩｇＧ１抗体）、１１Ｂ８  ＩｇＧ１（ＷＯ  ２００４／０３５６０７に開示される）、及びＡＴ８０  ＩｇＧ１等が含まれる。好ましくは、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（ＷＯ  ２００５／０４４８５９に開示される）と同一のエピトープに結合するモノクローナル抗体である。
【００３９】
ＩＩ型抗体とは対照的に、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．  ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０に結合する能力は、リツキシマブと比較して０．８倍から１．２倍であり、より好ましくは０．８倍から１．２倍であり、なおもより好ましくは０．９倍から１．１倍である。そのようなＩ型抗ＣＤ２０抗体の例としては、例えばリツキシマブ、１Ｆ５  ＩｇＧ２ａ（ＥＣＡＣＣ、ハイブリドーマ；  Ｐｒｅｓｓ，  Ｏ．Ｗ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  ６９／２  （１９８７）  ５８４−５９１）、ＨＩ４７  ＩｇＧ３  （ＥＣＡＣＣハイブリドーマ）、２Ｃ６  ＩｇＧｌ（ＷＯ  ２００５／１０３０８１に開示される）、２Ｆ２  ＩｇＧｌ（ＷＯ  ２００４／０３５６０７及びＷＯ  ２００５／１０３０８１に開示される）及び２Ｈ７  ＩｇＧｌ  （ＷＯ  ２００４／０５６３１２に開示される）等が含まれる。
【００４０】
「抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．  ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０に対する結合能力をリツキシマブと比較した場合の比率」は、実施例２に記載したように、Ｃｙ５をコンジュゲートした抗ＣＤ２０抗体及びＣｙ５をコンジュゲートしたリツキシマブ、並びにＲａｊｉ細胞を用いてＦＡＣＳＡｒｒａｙ  （Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）にかけ、免疫蛍光測定を行う（平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定する）ことにより決定される。計算は、以下のように行う。
【００４１】
【化１】
0005469073.tif 000004
【００４２】
ＭＦＩは、平均蛍光強度である。「Ｃｙ５標識率」は、本明細書中で使用されるとき、抗体分子数中のＣｙ５標識された分子の数の割合を意味する。
【００４３】
典型的には、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較した前記第二の抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−  Ｎｏ．  ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０に対する結合能力の比率が、０．３倍から０．６倍であり、より好ましくは０．３５倍から０．５５倍であり、なおもより好ましくは０．４倍から０．５倍である。
【００４４】
好ましい態様において、前記ＩＩ型抗体ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）が増大している。
【００４５】
「抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）が増大した抗体」とは、本明細書において、当業者に知られる任意の適切な方法により判定した場合にＡＤＣＣの増大を示す抗体を意味する。許容されるインビトロＡＤＣＣアッセイの一つは、以下のものである。
【００４６】
（１）本アッセイでは、前記抗体の抗原結合領域により認識される標的抗原を発現することが知られている標的細胞を使用する。
【００４７】
（２）本アッセイでは、エフェクター細胞として、無作為に選択した健康なドナーの血液から単離した、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する。
【００４８】
（３）本アッセイは、以下のプロトコルに従い実行される。
（ｉ）標準的な密度遠心分離の手順を使用してＰＢＭＣを単離し、これを５ｘ１０６細胞／ｍｌの濃度でＲＰＭＩ細胞培養培地に懸濁する。
（ｉｉ）標準的な組織培養手法により標的細胞を培養し、生存率が９０％以上の指数関数的増殖期に回収し、ＲＰＭＩ細胞培養培地中で洗浄し、１００マイクロキュリーの５１Ｃｒで標識し、細胞培養培地で２回洗浄し、それから１０５細胞／ｍｌの濃度で細胞培養培地に懸濁する。
（ｉｉｉ）上記１００マイクロリットルの最終的な標的細胞懸濁物を、９６ウェルのマイクロタイタープレートの各ウェルに移す。
（ｉｖ）前記抗体を細胞培養培地で４０００ｎｇ／ｍ〜ｌ０．０４ｎｇ／ｍｌの濃度に連続希釈し、得られた抗体溶液５０マイクロリットルを９６ウェルマイクロタイタープレート中の標的細胞に添加する。試験は上記全ての抗体濃度範囲について、３回行う。
（ｖ）最高放出（ＭＲ）対照において、標識された標的細胞を含むプレート中の更なる３つのウェルに、上記抗体溶液（ｉｖで挙げたもの）に代えて、２％（ＶＮ）非イオン性界面活性剤（Ｎｏｎｉｄｅｔ，  Ｓｉｇｍａ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ）の水性溶液を添加する。
（ｖｉ）自然放出（ＳＰ）対照において、標識された標的細胞を含むプレート中の更なる３つのウェルに、上記抗体溶液（ｉｖで挙げたもの）に代えて、５０μｌのＲＰＭＩ細胞培養培地を添加する。
（ｖｉｉ）それから、上記９６ウェルマイクロタイタープレートを５０ｘｇで１分間遠心分離し、１時間４℃でインキュベーションする。
（ｖｉｉｉ）エフェクター：標的細胞の比率が２５：１となるように各ウェルに前記ＰＢＭＣ懸濁液（ｉで挙げたもの）を５０マイクロリットル添加して、このプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター中に４時間置く。
（ｉｘ）各ウェルから細胞を含まない上澄を回収し、そして、ガンマカウンターを使用して、実験的に放出された放射能（ＥＲ）を定量する。
（ｘ）特定の細胞溶解のパーセンテージは、各抗体濃度について、（ＥＲ−ＭＲ）／（ＭＲ−ＳＲ）の式に従い計算された。ここでＥＲは、各抗体濃度において定量（ｉｘに挙げたもの）された平均放射能であり、ＭＲは、ＭＲ対照（ｖに挙げたもの）において定量（ｉｘに挙げたもの）された平均放射能であり、そしてＳＲは、ＳＲ対照（ｖｉに挙げたもの）において定量（ｉｘに挙げたもの）された平均放射能である。
【００４９】
（４）「ＡＤＣＣの増大」は、上記の試験が行われた抗体濃度範囲内で観察される、特定の細胞溶解の最高パーセンテージの増大、及び／又は上記の試験が行われた抗体濃度範囲内で観察される、特定の細胞溶解の最高パーセンテージの半分に達するのに必要な抗体濃度の減少のいずれかとして定義される。ＡＤＣＣの増大は、上記アッセイを用いて測定され、同一の抗体により仲介され、この抗体が同一の種類の宿主細胞により生産され、この生産が当業者に知られる同一の標準的な生産、増殖、製剤化及び保存手段を使用して行われるものであるが、前記抗体が、ＧｎＴＩＩＩを過剰発現するように改変した宿主細胞により生産されたものではないＡＤＣＣと比較したものである。
【００５０】
前記「ＡＤＣＣの増大」は、前記抗体の糖操作（ｇｌｙｃｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）により達成される場合があり、これは、Ｕｍａｎａ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １７  （１９９９）  １７６−１８０及びＵＳ  ６，６０２，６８４に記載されるところの、オリゴ糖類成分の操作による、モノクローナル抗体の前記自然の細胞誘導性エフェクター作用の亢進を意味する。
【００５１】
「補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）」という用語は、補体存在下での本発明の抗体による、ヒト標的腫瘍細胞の溶解を指す。好ましくは、ＣＤＣは、補体存在下での本発明の抗ＣＤ２０抗体を用いた、ＣＤ２０発現細胞の調製物の処理により測定される。ＣＤＣは、抗体が、１００ｎＭの濃度で４時間後に腫瘍細胞を２０％以上溶解（細胞死）させるか否かにより見出される。このアッセイは、好ましくは、５１Ｃｒ又はＥｕ標識腫瘍細胞が用いられ、放出されたＣｒ又はＥｕを測定することにより行われる。対照として、抗体を含まずに補体と腫瘍標的細胞をインキュベーションすることが含まれる。
【００５２】
典型的には、ＩｇＧ１アイソタイプのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、特徴的なＣＤＣ特性を示す。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＣＤＣは（ＩｇＧ１アイソタイプであるとする）、ＩｇＧ１アイソタイプのＩ型抗体と比較して低下する。好ましくは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプ抗体である。
【００５３】
前記「リツキシマブ」抗体（参照抗体；Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例）は、ヒトＣＤ２０抗原に対する、遺伝子改変キメラヒトガンマ１マウス定常ドメイン含有モノクローナル抗体である。このキメラ抗体は、ヒトガンマ１定常ドメインを含み、１９９８年４月１７日に特許され、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに提供された、ＵＳ  ５，７３６，１３７（Ａｎｄｅｒｓｅｎ，  Ｋ．Ｃ．，  ｅｔ．  ａｌ．）の「Ｃ２Ｂ８」という名称で特定されている。リツキシマブは、再発した、又は屈折している、低悪性度又は濾胞性の、ＣＤ２０陽性の、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の患者の治療用に認可されている。活性研究のインビトロでのメカニズムは、リツキシマブがヒト補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を呈することを示している（Ｒｅｆｆ，  Ｍ．Ｅ．，  ｅｔ．  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  ８３（２）  （１９９４）  ４３５−４４５）。加えて、リツキシマブは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定するアッセイにおいて、顕著な活性を呈する。
【００５４】
「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」という用語は、ＷＯ  ２００５／０４４８５９及びＷＯ  ２００７／０３１８７５に開示されるヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体を指す。これらの抗体は、マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体のＢ−Ｌｙ１（マウス重鎖の可変領域（ＶＨ）：配列番号１；マウス軽鎖の可変領域（ＶＬ）：配列番号２−Ｐｏｐｐｅｍａ，  Ｓ．  ａｎｄ  Ｖｉｓｓｅｒ，  Ｌ．，  Ｂｉｏｔｅｓｔ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ３  （１９８７）  １３１−１３９を参照されたい）を、ＩｇＧ１由来のヒト定常ドメインを用いてキメラ化し、それからヒト化することにより取得された（ＷＯ  ２００５／０４４８５９及びＷＯ  ２００７／０３１８７５を参照されたい）。これらの「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、ＷＯ  ２００５／  ０４４８５９及びＷＯ  ２００７／０３１８７５に詳細に開示されている。
【００５５】
好ましくは、前記「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号３〜配列番号２０の群から選択される重鎖の可変領域（ＶＨ）を有する（ＷＯ  ２００５／０４４８５９及びＷＯ  ２００７／０３１８７５における、Ｂ−ＨＨ２〜Ｂ−ＨＨ９及びＢ−ＨＬ８〜Ｂ−ＨＬ１７）。特に好ましいのは、配列番号３、４、７、９、１１、１３及び１５である（ＷＯ  ２００５／０４４８５９及びＷＯ  ２００７／０３１８７５における、Ｂ−ＨＨ２、ＢＨＨ−３、Ｂ−ＨＨ６、Ｂ−ＨＨ８、Ｂ−ＨＬ８、Ｂ−ＨＬ１１及びＢ−ＨＬ１３）。好ましくは、「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１」は、配列番号２０の様々な軽鎖の可変領域（ＶＬ）を有する（ＷＯ  ２００５／０４４８５９及びＷＯ  ２００７／０３１８７５のＢ−ＫＶｌ）。更に、前記ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、好ましくはＩｇＧ１抗体である。好ましくは、そのようなヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、ＷＯ  ２００５／０４４８５９、ＷＯ  ２００４／０６５５４０、ＷＯ  ２００７／０３１８７５、Ｕｍａｎａ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １７  （１９９９）  １７６−１８０及びＷＯ  ９９／１５４３４２に記載の手順に従い、Ｆｃ領域において糖操作（ＧＥ）されている。そのような糖操作されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、Ｆｃ領域においてグリコシル化のパターンが変化しており、好ましくは、フコース残基のレベルが低下している。好ましくは、Ｆｃ領域のオリゴ糖類の少なくとも４０％以上（一つの態様では４０％〜６０％、もう一つの態様では少なくとも５０％、そしてなおももう一つの態様では少なくとも７０％以上）がフコシル化されていない。更に、Ｆｃ領域のオリゴ糖類は、好ましくは２つに分岐している。
【００５６】
前記オリゴ糖類部分は、物理的安定性、プロテアーゼ分解耐性、免疫系との相互作用、薬物動態及び特定の生物活性を含む、治療用糖タンパク質の効果に関する特性に顕著に影響し得る。そのような特性は、オリゴ糖類の存否のみならず、そのオリゴ糖類の特定の構造にも依存し得る。オリゴ糖類構造と糖タンパク質の機能との間の関連性において、ある程度の一般化が図られている。例えば、所定のオリゴ糖類構造は、特定の糖結合タンパク質との相互作用を通じての、血流からの糖タンパク質の迅速な排除を仲介し、一方他のものは、抗体に結合され、好ましくない免疫応答を引き起こす（Ｊｅｎｋｉｎｓ，  Ｎ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １４  （１９９６）  ９７５−  ８１）。
【００５７】
哺乳類細胞は、治療用糖タンパク質生産のための好ましい宿主である。なぜならそれらは、ヒトへの応用に最も適合する形態でタンパク質をグリコシル化することが可能だからである（Ｃｕｍｍｉｎｇ，  Ｄ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  １  （１９９１）  １１５−３０；  Ｊｅｎｋｉｎｓ，  Ｎ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １４  （１９９６）  ９７５−８１）。細菌はタンパク質を殆どグリコシル化せず、酵母、糸状菌類、昆虫及び植物等の他の種類の一般的な宿主と同様に、血流からの迅速な排除、好ましくない免疫相互作用、及び特定のケースにおいて、生物活性の低下に関与するグリコシル化パターンを生じる。哺乳類細胞の中で、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞は、最近２０年間に最も一般的に使用されている。これらの細胞は、適切なグリコシル化をもたらすのに加え、遺伝的に安定で、生産性の高いクローン細胞系の構成的な生産を可能とする。これらは、単純なバイオリアクター中で、無血清培地を使用して、高密度で培養することが可能で、安全かつ再現可能なバイオプロセスを開発することが出来る。他の一般的に使用される動物細胞として、新生仔ハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、ＳＮＯ−及びＳＰ２／０−マウスミエローマ細胞が含まれる。より最近では、トランスジェニック動物由来の生産物も試験されている（Ｊｅｎｋｉｎｓ，  Ｎ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １４  （１９９６）  ９７５−９８１）。
【００５８】
全ての抗体は、重鎖定常領域の保存部位に糖構造を含み、各アイソタイプは、様々な配列のＮ結合型等構造を有し、これらはタンパク質の集合、分泌又は機能的活性に様々に影響する（Ｗｒｉｇｈｔ，  Ａ．  ａｎｄ  Ｍｏｎｉｓｏｎ，  Ｓ．  Ｌ．，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  １５  （１９９７）  ２６−３２）。典型的には、特定のグリコシル化部位において結合したコアオリゴ糖類構造の不均一なプロセシングのため、モノクローナル抗体であっても複数の糖形態が存在する。同様に、細胞株の間で抗体のグリコシル化において大幅な相異が示されており、更に、所定の細胞株の中でも、異なる培養条件下で増殖したものは、僅かな相異が生じる（Ｌｉｆｅｌｙ，  Ｍ．  Ｒ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ５（８）  （１９９５）  ８１３−２２）。
【００５９】
単純な生産プロセスを維持し、顕著な好ましくない副作用を回避しつつ、生産物の効力を増大させる一つの方法は、Ｕｍａｎａ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １７  （１９９９）  １７６−１８０及びＵＳ  ６，６０２，６８４に記載されるように、オリゴ糖類部分を操作することにより、モノクローナル抗体の、天然の、細胞誘導性のエフェクター作用を亢進することである。癌免疫両方において最も一般的に使用される抗体であるＩｇＧ１型抗体は、各ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７において、保存されたＮ結合型グリコシル化部位を有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７に結合する２つの複雑な２つに分岐したオリゴ糖類は、ＣＨ２ドメインの間に埋め込まれ、ポリペプチドバックボーンとの広範な接触を形成し、そしてそれらの存在は、抗体が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）等のエフェクター作用を仲介するのに必須である（Ｌｉｆｅｌｙ，  Ｍ．  Ｒ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ５  （１９９５）  ８１３−８２２；  Ｊｅｆｆｅｒｉｓ，  Ｒ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  １６３  （１９９８）  ５９−７６；  Ｗｒｉｇｈｔ，  Ａ．  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  Ｓ．  Ｌ．，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １５  （１９９７）  ２６−３２）。
【００６０】
２つに分岐したオリゴ糖類の形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（ｌ，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ１１１（ＧｎＴＩＩＩ７ｙ）の、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における過剰発現が、操作されたＣＨＯ細胞により生産される、抗神経芽細胞腫キメラモノクローナル抗体（ｃｈＣＨ７）のインビトロＡＤＣＣ活性を顕著に増大させることが、既に示されている（Ｕｍａｎａ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １７  （１９９９）  １７６−１８０；及びＷＯ  ９９／１５４３４２を参照されたい。これらは全て、本明細書中で参照により援用される）。前記抗体ｃｈＣＥ７は、高い腫瘍親和性及び特異性を有するが、ＧｎＴＩＩＩ酵素を欠く標準的な産業用細胞株において生産されたものは、臨床的に有用な能力を殆ど有さない、非コンジュゲートモノクローナル抗体の大きなクラスに属する（Ｕｍａｎａ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １７  （１９９９）  １７６−１８０）。この研究は、定常領域（Ｆｃ）に結合した、２つに分岐した非フコシル化オリゴ多糖類を含む、２つに分岐したオリゴ多糖類の割合の増大を引き起こす、ＧｎＴＩＩＩを発現するように、抗体生産細胞を操作することにより、天然に存在する抗体において認められるレベルを超えて、ＡＤＣＣ活性の大幅な増大が達成されることを最初に示したものである。
【００６１】
「プロテアソーム」という用語は、例えばＣｏｕｘ，  Ｏ．，  Ｔａｎａｋａ，  Ｋ．  ａｎｄ  Ｇｏｌｄｂｅｒｇ，  Ａ．，  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ６５  （１９９６）  ８０１−８４７；  Ｖｏｇｅｓ，  Ｄ．，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ６８  （１９９９）  １０１５−６８又はＫｉｓｓｅｌｅｖ，  Ａ．Ｌ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  Ｖｏｌ．  ８  （８）  （２００１）  ７３９−７５８等に記載される、２６Ｓのプロテアソームを指す。
【００６２】
本明細書中で使用されるとき、「プロテアソーム阻害剤」という用語は、前記２６Ｓプロテアソームの活性を阻害する薬剤を指す。そのようなプロテアソーム阻害剤は、とりわけ、例えばペプチドアルデヒド（例えばＭＧ１３２、ＭＧｌ１５、ＣＥＰ−１６１５、ＰＳＩ、又はイムノプロテアソーム特異的阻害剤ＩＰＳＩ−ＯＯｌ（Ｃｂｚ−ＬｎＬ−ＣＨＯ＝Ｎ−カルボベンジロキシ−ロイシル−ノルロイシナル、ＵＳ２００６／０２４１０５６を参照されたい））、ペプチドボロネート（例えばボルテゾミブ（ＰＳ−３４１）又はＤＦＬＢ）、ペプチドエポキシケトン（例えばエポキシミシン、ジヒドロエポネマイシン、又はエポキソミシン誘導体カルフィルゾニブ（ＰＲ−１７１））、又はペプチドビニルスルホネート（例えばＮＬＶＳ）、並びに非ペプチド誘導体、例えばサリノスポラミドＡ（ＮＰＩ−００５２）、サリノスポラミドＡ誘導体、ラクタシスチン又はラクタシスチン誘導体（例えばｃｌａｓｔｏ−ラクタシスチン−Ｌ−ラクトン（オムラリド（ｏｍｕｒａｌｉｄｅ）又はＰＳ−５１９）を含む。異なる種類及び構造の前記プロテアソーム阻害剤が、例えばＫｉｓｓｅｌｅｖ，  Ａ．Ｌ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  Ｖｏｌ．  ８  （８）  （２００１）  ７３９−７５８、ＷＯ  ２００４／００４７４９及びＪｏａｚｅｉｒｏ，  Ｃ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６６（１６）  （２００６）  ７８４０−７８４２）、Ｋａｎａｇａｓａｂａｐｈｙ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ  ８  （２００７）  ４４７−５１、Ａｄａｍｓ，  Ｊ．，  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ４  （２００４）  ３４９−３６０及びＵＳ  ２００６／０２４１０５６等に記載される。
【００６３】
好ましくは、そのようなプロテアソーム阻害剤は、ペプチドアルデヒド（好ましくはＮ−カルボベンジロキシ−ロイシル−ノルロイシナル（ＩＰＳＩ−００１））、ペプチドボロネート（好ましくはボルテゾミブ（ＰＳ−３４１））、ペプチドエポキシケトン（好ましくはエポキソミシン誘導体カルフィルゾミブ（ＰＲ−１７１））、又はサリノスポラミドＡ（ＮＰＩ−００５２）から選択される。より好ましくは、そのようなプロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ（ＰＳ−３４１）、カルフィルゾミブ（ＰＲ−１７１）、サリノスポラミドＡ（ＮＰＩ−００５２）又はＮ−カルボベンジロキシ−ロイシル−ノルロイシナル（ＩＰＳＩ−００１）から選択される。
【００６４】
好ましい態様において、プロテアソーム阻害剤は、ペプチドアルデヒド（好ましくはＮ−カルボベンジロキシ−ロイシル−ノルロイシナル（ＩＰＳＩ−００１））、ペプチドボロネート（好ましくはボルテゾミブ（ＰＳ−３４１））、又はペプチドエポキシケトンから選択されるペプチド誘導体である。もう一つの好ましい態様において、プロテアソーム阻害剤は、ペプチドボロネート（好ましくはボルテゾミブ（ＰＳ−３４１）；例えばＡｄａｍｓ，  Ｊ．，  Ｃｕｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．  ６  （２００２）  ４９３−５００及びＵＳ  ５，７８０，４５４を参照されたい）。
【００６５】
好ましくは、プロテアソーム阻害剤の抗プロテアソーム阻害活性のＩＣ５０は５μＭ以下であり、より好ましくは１μＭ以下である。プロテアソーム阻害剤を特定し、及びその抗プロテアソーム阻害活性のＩＣ５０を判定（連続希釈及び非線形曲線フィッティング（ＸＬｆＶｔソフトウェア（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｌｔｄ．，  Ｇｕｉｌｆｏｒｄ，  Ｓｕｒｒｅｙ，  ＵＫ）による）するためのＣｅｌｌ−Ｂａｓｅｄ  Ａｓｓａｙは、Ｍｏｒａｖｅｃ，  Ｒ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ  Ｎｏｔｅｓ  １５  （２００６）に記載されており、Ｐｒｏｍｅｇａ製Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ−Ｇｌｏ（商標）Ｃｅｌｌ−Ｂａｓｅｄ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ及びＵ２６６細胞（ヒトプラズマミエローマ）を用いる。この「添加混合測定（ａｄｄ−ｍｉｘ−ｍｅａｓｕｒｅ）」は、培養細胞中のプロテアソームに関するキモトリプシン様プロテアーゼ活性を測定する。
【００６６】
ＩＰＳＩ−００１（Ｃｂｚ−ＬｎＬ−ＣＨＯ＝Ｎ−カルボベンジロキシ−ロイシル−ノルロイシナル）に加えて、以下のＵＳ  ２００６／０２４１０５６のペプチド誘導体も、好ましいプロテアソーム誘導体である：Ｎ−カルボベンジロキシ−ホモフェニルアラニル−フェニルアニラル、Ｎ−カルボベンジロキシ−ロイシル−フェニルアニラル、Ｎ−カルボベンジロキシ−アラニル−フェニルアニラル、Ｎ−カルボベンジロキシ−グリシル−プロピル−アラニル−フェニルアニラル、Ｎ−カルボベンジロキシ−グリシル−プロピル−フェニルアラニル−フェニルアニラル、Ｎ−カルボベンジロキシ−グリシル−フェニルアラニル−フェニルアニラル、Ｎ−カルボベンジロキシ−ロイシル−ノルロイシンボロン酸、Ｎ−カルボベンジロキシ−フェニルアラニル−フェニルアラニンボロン酸、Ｎ−カルボベンジロキシ−ホモフェニルアラニル−フェニルアラニンボロン酸、Ｎ−カルボベンジロキシ−ロイシル−フェニルアラニンボロン酸、Ｎ−カルボベンジロキシ−グリシル−プロピル−アラニル−フェニルアラニンボロン酸、Ｎ−カルボベンジロキシ−グリシル−プロピル−フェニルアラニル−フェニルアラニンボロン酸、Ｎ−カルボベンジロキシ−ロイシル−ロイシル−フェニルアラニンボロン酸、Ｎ−カルボベンジロキシ−グリシル−フェニルアラニル−フェニルアラニンボロン酸、Ｎ−カルボベンジロキシ−ロイシル−ノルロイシンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジロキシ−フェニルアラニル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジロキシ−ホモフェニルアラニル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジロキシ−ロイシル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジロキシ−アラニル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジロキシ−グリシル−プロピル−アラニル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジロキシ−グリシル−プロピル−フェニルアラニル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジロキシ−ロイシル−ロイシル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジロキシ−グリシル−フェニルアラニル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジロキシ−ロイシル−ノルロイシンエポキシケトン、Ｎ−カルボベンジロキシ−フェニルアラニル−フェニルアラニンエポキシケトン、Ｎ−カルボベンジロキシ−ホモフェニルアラニル−フェニルアラニンエポキシケトン、Ｎ−カルボベンジロキシ−ロイシル−フェニルアラニンエポキシケトン、Ｎ−カルボベンジロキシ−アラニル−フェニルアラニンエポキシケトン、Ｎ−カルボベンジロキシ−グリシル−プロピル−アラニル−フェニルアラニンエポキシケトン、Ｎ−カルボベンジロキシ−グリシル−プロピル−フェニルアラニル−フェニルアラニンエポキシケトン、Ｎ−カルボベンジロキシ−ロイシル−ロイシル−フェニルアラニンエポキシケトン、及びＮ−カルボベンジロキシ−グリシル−フェニルアラニル−フェニルアラニンエポキシケトンが挙げられる。
【００６７】
「ＣＤ２０の発現」という用語は、細胞（好ましくはＴ細胞又はＢ細胞の表面に、より好ましくは該Ｂ細胞が腫瘍又は癌のそれぞれに由来し、好ましくは非固体腫瘍に由来する）において、ＣＤ２０を顕著なレベルで発現することを意図する。「ＣＤ２０を発現する癌」は、当該技術分野で知られている標準的なアッセイにより判定され得る。例えば、ＣＤ２０抗原発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）検出、ＦＡＣＳ、又は関連するｍＲＮＡのＰＣＲに基づく検出を使用して測定される。
【００６８】
本明細書中で、「ＣＤ２０を発現する癌」は、その中の癌細胞がＣＤ２０抗原の発現を示す全ての癌を指す。そのようなＣＤ２０を発現する癌は、例えば、リンパ腫、リンパ性白血病、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬ）、細気管支肺胞肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚がん、頭頸部癌、皮膚又は眼球内メラノーマ、子宮癌、卵巣がん、直腸癌、肛門部の癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、結腸癌、乳癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜の癌、頸部の癌、膣の癌、外陰部の癌、ホジキン症、食道の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、向上線の癌、副甲状腺の癌、副腎腺の癌、軟部組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、前立腺癌、膀胱の癌、腎臓又は尿管の癌、腎細胞癌、腎盂の癌、中皮腫、肝細胞腫、胆管癌、中枢神経系（ＣＮＳ）、の腫瘍、脊髄腫瘍、脳幹グリオーマ、多形性膠芽腫、星状細胞腫、神経鞘腫、上衣腫、髄芽細胞腫、髄膜腫、扁平上皮癌、下垂体線種、上記癌のいずれかの難治性のもの、又は上記癌の１つ以上の組合せであってもよい。
【００６９】
好ましくは、本明細書中でしようされるとき、ＣＤ２０を発現する癌は、リンパ腫（好ましくはＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））及びリンパ性白血病を指す。そのようなリンパ腫及びリンパ性白血病には、例えば
ａ）濾胞性リンパ腫、ｂ）小型非分割細胞リンパ腫／Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫（風土性Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫、散発性Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫及び非Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫を含む）、ｃ）辺縁帯リンパ腫（節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（粘膜関連リンパ組織リンパ腫、ＭＡＬＴ）、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫及び脾臓辺縁帯リンパ腫）、ｄ）マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ｅ）大細胞リンパ腫（Ｂ細胞びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、びまん性混合型細胞リンパ腫、免疫細胞リンパ腫、縦隔原発Ｂ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫−肺Ｂ細胞リンパ腫を含む）、ｆ）有毛細胞白血病、ｇ）リンパ性白血病、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ｈ）急性リンパ製白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小型リンパ性白血病（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ性白血病、ｉ）形質細胞腫瘍、形質細胞骨髄腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、ｊ）ホジキン症が含まれる。
【００７０】
より好ましくは、前記ＣＤ２０を発現する癌は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。特に、前記ＣＤ２０を発現する癌は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ製白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病、Ｂ細胞びまん性大型細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫有毛細胞白血病、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、辺縁帯リンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ＨＩＶ関連リンパ腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、又は原発性ＣＮＳリンパ腫である。
【００７１】
例えば癌等に適用されるとき、「治療の方法」、又はこれと同じ意味の用語は、患者の癌細胞の数を減少させ、又は消滅させるように、又は癌の症状を緩和するように設計された活動の手順又は過程を指す。癌又は他の増殖疾患を「治療する方法」は、癌細胞又は他の疾患が実際に消滅し、細胞又は疾患の数が実際に減少し、又は癌又は他の疾患の症状が実際に緩和され得るものであることを必ずしも要しない。癌を治療する方法は、通常、成功率が低くても実行され得るが、そうした方法は、患者の病歴及び余命を鑑みて、現状では、総合的な利益をもたらすものとみなされる。
【００７２】
「共投与」又は「共投与する」という用語は、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び前記プロテアソーム阻害剤を、単一の製剤として、又は２つの個別の製剤として投与することを指す。該共投与は、同時に又は連続して投与され得て、好ましくは、両方の（又は全ての有効成分が、それらの生物活性を同時に発揮させる期間が存在する。前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び前記プロテアソーム阻害剤は、同時に又は連続的（持続的な注入（一つは抗体であり、もう一つはプロテアソーム阻害剤である；又はプロテアソーム阻害剤は経口投与される）による血管内（ｉ．ｖ．）投与等）に共投与される。両方の治療剤を連続的に共投与するとき、投与は、個別の２つの投与を同日に行うか、第１の投与を１日目に行い、第２の投与を２日〜７日目に、好ましくは２日〜４日目に行う。従って、「連続的に」という用語は、第１の抗体の投与後７日、好ましくは第１の抗体の投与後４日以内を指し；「同時に」という用語は、同時であることを意味する。前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び前記プロテアソーム阻害剤の維持用量（ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｄｏｓｅ）に関する「共投与」という用語は、治療サイクルがいずれの薬物にも適している場合（例えば毎週等）に、該維持用量が、両方とも同時に共投与され得ることを意味する。あるいは、プロテアソーム阻害剤が、例えば１日〜３日毎に投与され、そしてＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は毎週投与される。あるいは、連続して１日〜数日以内に、維持用量が共投与される。
【００７３】
研究者、獣医、医師又は他の臨床医により想定されている、組織、系、動物又はヒトの生物学的又は医学的応答を補助し得る各化合物又は組合せの量である、「治療的に有効な量」（又は単純に「有効量」の抗体が患者に投与されることは、自明である。
【００７４】
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び前記プロテアソーム阻害剤の共投与の量並びに共投与のタイミングは、治療を受ける患者のタイプ（種、性別、年齢、体重等）及び状態、並びに治療される疾患又は症状の重症度に依存する。前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び前記プロテアソーム阻害剤は、適切には、患者に１回又は数日間共投与される。疾患の種類及び重症度によるが、前期ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は１μｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）、そして前記プロテアソーム阻害剤１μｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）が、患者に対する両薬物を共投与するのに最初の候補となる用量である。血管内投与を行う場合、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び前記プロテアソーム阻害剤の最初の注入時間は、その後の注入時間よりも長くなり、例えば（最初の注入が良好な耐容性を示す場合は）最初の注入が約９０分で、その後の注入が約３０分である。
【００７５】
前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の好ましい用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。故に、患者に対して、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ又は３０ｍｇ／ｋｇの用量が（又はそれらの任意の組合せが）１回以上共投与される。前記プロテアソーム阻害剤の好ましい用量は、ボルテゾミブにおいて、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０．０ｍｇ／ｋｇの範囲内である。タイプ（種、性別、年齢、体重等）及び健康状態、並びに抗ＩＩ型ＣＤ２０抗体及びプロテアソーム阻害剤の種類に依存して、前記抗ＣＤ２０抗体の用量及び投与スケジュールは、プロテアソーム阻害剤の用量と相異し得る。例えば、前記抗ＣＤ２０抗体を、例えば１〜３週間毎に投与され得て、及び前記プロテアソーム阻害剤を、毎日又は２〜１０日毎に投与され得る。最初の含有量を多くして、その後用量を少なくして１回以上投与され得る。
【００７６】
好ましい態様において、前記医薬は、ＣＤ２０を発現する癌に苦しむ患者において、転移又は更なる拡散を防止又は低下させるのに有用である。該医薬は、そのような患者の生存の継続を増大させ、そのような患者の無増悪生存を増大させ、応答の継続を増大させるのに有用であり、その結果、生存の継続、無増悪生存、応答率又は応答の継続により測定される、治療を受ける患者の統計的に有意かつ臨床的に有意義な改善がもたらされる。好ましい態様において、該医薬は、一群の患者の応答率を増大させるのに有用である。
【００７７】
本発明に関連して、ＣＤ２０を発現する癌に対して、ＩＩ型抗ＣＤ２０  抗体及びプロテアソーム阻害剤の組合せ治療において、追加的な他の細胞傷害性薬剤、化学治療剤若しくは抗癌剤、又はそのような薬剤の効果を亢進させる化合物（例えばサイトカイン）が使用され得る。そのような分子は、適切には、意図される目的を果たすのに有効な量が、組合せ中に存在する。好ましくは、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及びプロテアソーム阻害剤の組合せ治療は、そのような追加的な細胞傷害性薬剤、化学治療剤若しくは抗癌剤、又はそのような薬剤の効果を亢進させる化合物を無くして使用される。
【００７８】
そのような薬剤として、例えば：アルキル化剤又アルキル化作用を有する薬剤、例えばシクロホスファミド（ＣＴＸ；例えばＣｙｔｏｘａｎ（登録商標））、クロラムブシル（ＣＨＬ；  例えば．  ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチンＣｉｓＰ；  例えば．  ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、ブスルファン（例えば．  ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、メルファラン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ストラプトゾトシン、トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、及びマイトマイシンＣ等；代謝拮抗薬、例えばメトトレキサート（ＭＴＸ）、エトポシド（ＶＰ１６；  例えば．  ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、６−メルカプトプリン（６ＭＰ）、６−チオグアニン（６−ＴＧ）、シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）（Ａｒａ−Ｃ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（例えば．  Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、及びダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）（ＤＴＩＣ）等；抗生物質、例えばアクチノマイシンＤ，ドキソルビシン（ＤＸＲ；  例えば．  ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン等；アルカロイド、例えばビンクリスチン（ＶＣＲ）、ビンブラスチン等のビンカアルカロイド等；並びに他の抗腫瘍剤、例えばパクリタキセル（例えば．  ｔａｘｏｌ（登録商標））及びパクリタキセル誘導体、細胞増殖抑制剤、グルココルチコイド、例えばデキサメタゾン（ＤＥＸ；  例えば．  ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））及びコルチコステロイド、例えばプレドニソン、ヌクレオシド酵素阻害剤、例えばヒドロキシウレア、アミノ酸除去酵素、例えばアスパラギナーゼ、ロイコボリン及び他の葉酸誘導体、及び同様に、様々な抗腫瘍剤が含まれる。また、以下の薬剤：アンリホスチン（例えば．  ｅｔｈｙｏｌ（登録商標））、ダクチノマイシン、メクロレタミン（ニトロジェンマスタード）、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ドキソルビシンリポ（例えば．  ｄｏｘｉｌ（登録商標））、ゲムシタビン（例えば．  ｇｅｍｚａｒ（登録商標））、ダウノルビシンリポ（例えば．  ｄａｕｎｏｘｏｍｅ（登録商標））、プロカルバジン、マイトマイシン、ドセタキセル（例えば．  ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、アルデスロイキン、カルボプラチン、オキサリプラチン、クラドリビン、カンムトセシン、ＣＰＴ１１（イリノテカン、１０−ヒドロキシ７−エチル−カンプトセシン（ＳＮ３８）、フロクスウリジン、フルダラビン、イホスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロンベータ、インターフェロンアルファ、ミトキサントロン、トポテカン、ロイプロリド、メガストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペガスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、クロラムブシルも、補助的な薬剤として使用され得る。好ましくは、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０  抗体及びプロテアソーム阻害剤の組合せ治療は、そのような追加的な薬剤を無くして使用される。
【００７９】
化学治療レジメンにおいて、上記細胞傷害性薬剤及び抗腫瘍薬剤、並びにタンパク質キナーゼ阻害剤の如き抗増殖標的特異的抗癌薬物は、一般的に癌治療の分野でよく特徴付けられており、本明細書中でのこれらの使用は、耐容性及び有効性のモニタリング、並びに投与ルート及び用量の調整と同様に、幾らかの調整が必要な検討事項に該当する。例えば、細胞傷害性薬剤の実際の用量は、組織培養手法を用いて決定される、患者の培養細胞の応答に依存して変化し得る。一般に、該用量は、追加的な他の薬剤を無くして使用される量と比較して減少する。
【００８０】
有効な細胞傷害剤の典型的な用量は、製造者により推奨される範囲内であり得て、インビトロ応答又は動物モデルにおける応答により指示される用量は、濃度又は量が一桁近く低下する場合がある。故に、実際の用量は、医師の判断、患者の容態、及び初代培養悪性細胞又は組織培養した組織試料のインビトロ応答性、又は適切な動物モデルにおいて観察された応答に基づく治療方法の有効性に依存し得る。
【００８１】
本発明に関連して、ＣＤ２０を発現する癌を治療するためのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及びプロテアソーム阻害剤に加えて、有効な量の電離放射線及び／又は放射線医薬品が使用され得る。放射線の供給源は、治療される患者の外部又は内部のいずれであってもよい。該供給源が患者の外部であるとき、該治療は、外照射療法（ＥＢＲＴ）として知られる。該供給源が患者の内部であるとき、該治療は、小線源療法（ＢＴ）として知られる。本発明に関連して使用される放射性原子は、限定されないが、ラジウム、セシウム１３７、イリジウム１９２、アメリシウム２４１、近１９８、コバルト５７、銅６７、テクネチウム９９、ヨウ素１２３、ヨウ素１３１、及びインジウム１１１を含む群から選択され得る。そのような放射性同位体で前記抗体を標識することも出来る。好ましくは、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０  抗体及びプロテアソーム阻害剤の組合せ治療は、そのような電離放射線を無くして使用される。
【００８２】
放射線治療は、手術不可能な、又は摘出不可能な腫瘍及び／又は腫瘍転移を制御する、標準的な処置である。放射線治療と化学治療とを組み合わせたとき、結果は改善されていた。放射線治療は、標的領域に高用量で放射線を照射することにより、腫瘍組織及び正常組織にいずれにおいても、分裂可能な細胞を死滅させるという原理に基づいている。放射線量レジメンは、一般に、放射線吸収量（Ｇｙ）、時間及び分割（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ）の観点から定義づけられ、そして腫瘍学者により注意深く定義されなければならない。患者が受ける放射線の量は様々な条件に依存し得るが、２つの最も重要なものは、身体の重要な構造又は器官との関係における腫瘍の位置、及び腫瘍進行の程度である。放射線治療を受けている患者を治療する典型的な方法は、週５日、単一日常線量（ｓｉｎｇｌｅ  ｄａｉｌｙ  ｆｒａｃｔｉｏｎ）約１．８〜２．０Ｇｙで患者に照射される、合計の線量が１０〜８０Ｇｙになる、１〜６週間の期間にわたる治療スケジュールであり得る。本発明の好ましい態様において、ヒト患者の腫瘍が本発明の組合せ治療及び放射線を用いて治療されるとき、相乗効果が存在する。言い換えると、本発明の組合せを含む薬剤を用いた腫瘍増殖の阻害は、放射線、任意で追加的な化学治療剤又は抗癌剤と組み合わせられたとき、亢進する。補助的な照射治療のパラメーターは、例えば、ＷＯ  ９９／６００２３に含まれる。
【００８３】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、既知の方法に従い、ボーラスとして血管内投与により、又は長時間の注入により、筋肉内、大脳脊髄内（ｉｎｔｒａｃｅｒｏｂｒｏｓｐｉｎａｌ）、皮下、関節内、滑液包内、又はクモ膜下腔内経路により、患者に投与される。好ましくは、前記抗体は、血管内又は皮下投与される。
【００８４】
プロテアソーム阻害剤は、既知の方法に従い、例えばボーラスとして血管内投与により、又は長時間の注入により、筋肉内、腹腔内、大脳脊髄内、皮下、関節内、滑液包内、クモ膜下腔内、若しくは経口経路により、患者に投与される。好ましくは、前記プロテアソーム阻害剤は、血管内、皮下又は経口投与される。
【００８５】
本発明は、ＣＤ２０を発現する癌に苦しむ患者に対する組合せ治療のための、ＩＩ型抗ＣＤ２０  抗体及びプロテアソーム阻害剤を含むキットを更に含む。好ましい態様において、前記キットの容器には、更に医薬として許容される担体が含まれる。前記キットには、滅菌希釈剤が更に含まれ得て、これは好ましくは別の追加的な容器に保存される。前記キットには、ＣＤ２０を発現する癌疾患、好ましくはＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に対する組合せ療法としての使用方法に関する印刷された指示を含む、添付文書を更に含み得る。
【００８６】
「添付文書」とは、治療用製品の包装に習慣的に含まれる指示を意味し、これは、そのような治療用製品の使用に関する表示、用法、用量、投与、禁忌及び／又は危険についての情報を含み得る。
【００８７】
好ましい態様において、製品の容器の品目には、更に、医薬として許容される担体が含まれる。製品の品目には、更に滅菌希釈剤が含まれ、これは好ましくは別の追加的な容器に保存される。
【００８８】
本明細書中で使用荒れるとき、「医薬として許容される担体」は、医薬の投与に適した溶媒、分散培地、被覆剤、抗細菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤を含む任意の及び全ての材料、並びに、医薬の投与に適した他の材料及び化合物を含むことが意図される。任意の既知の培地又は薬剤が有効成分に適合しないものでない限り、本発明の組成物にそれを使用することが意図される。また、追加的な有効成分も、前記組成物に包含されてもよい。
【００８９】
医薬組成物：
医薬組成物は、本発明のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び／又はプロテアソーム阻害剤を、医薬として許容される無機又は有機担体で加工することにより取得され得る。ラクトース、コーンスターチ又はそれらの誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩等が使用され得て、そのような担体により、錠剤、被覆錠剤、ドラジェ及び硬ゼラチンカプセルが成形される。軟ゼラチンカプセルに適した担体は、例えば、植物油、蝋、脂肪、半固形及び液体ポリオール等である。有効成分の性質によっては担体が不要な場合もあるが、軟ゼラチンカプセルの場合においては通常必要となる。溶液及びシロップの生産に適した担体は、例えば、水、ポリオール、グリセロール、植物油等である。懸濁物に適した担体は、例えば、天然又は硬化油、蝋、脂肪、半液体又は液体ポリオール等である。
【００９０】
更に、前記医薬組成物は、保存料、可溶化剤、安定化剤、保湿剤、乳化剤、甘味料、着色剤、香料、浸透圧を変化させるための塩、緩衝剤、マスキング剤又は抗酸化剤を含み得る。また、それらは、更なる他の治療的に有益な物質を含み得る。
【００９１】
本発明の一つの態様は、特にＣＤ２０を発現する癌に使用する、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び前記プロテアソーム阻害剤のいずれも含む医薬組成物である。
【００９２】
前記医薬組成物は、１つ以上の医薬として許容される担体を更に含み得る。
【００９３】
更に、本発明は、（ｉ）有効な第一の量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、及び（ｉｉ）有効な第二の量のプロテアソーム阻害剤を含む、特に癌において使用される医薬組成物を提供する。そのような組成物は、任意で医薬として許容される担体及び／又は賦形剤を含む。
【００９４】
親油性製剤又は水溶液の形態で、所望の純度の抗体と、任意の医薬として許容される担体、賦形剤又は安定化剤とを混合することにより（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｏｓｏｌ，  Ａ．  Ｅｄ．  （１９８０））、本発明における、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を単独で使用する医薬組成物は、保存用に調製される。許容される担体、賦形剤、又は安定化剤は、採用される用量及び濃度で対象に毒性を有さず、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存料（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメチオミウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチル若しくはプロピルパラベン；；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ‐クレゾール）；低分子量（薬１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又はイムノグロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリシン；グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む、単糖類、二糖類、及び他の糖類；キレート剤、例えばＥＤＡＴ；糖、例えばスクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；金属複合体（例えばＺｎ−タンパク質複合体）；並びに／又は非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
【００９５】
プロテアソーム阻害剤単独の医薬組成物は、それらの医薬的特性に依存し、例えば、ボルテゾミブ等の小さな化合物の製剤の一例を以下示す。
【００９６】
【表３】
0005469073.tif 000005
【００９７】
製造手順：
１．項目１、２、３及び４を混合し、精製水と共に顆粒化する。
２．上記顆粒を５０℃で乾燥する。
３．上記顆粒を適切な製粉装置に通す。
４．項目５を添加し、３分間混合し；適切な圧縮機で圧縮する。
【００９８】
【表４】
0005469073.tif 000006
【００９９】
製造手順
１．項目１、２及び３を適切な混合機中で３０分間混合する。
２．項目４及び５を添加し、３分間混合する。
３．適切なカプセル中に充填する。
【０１００】
本発明の更なる態様において、本発明の医薬組成物は、好ましくは、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及び前記プロテアソーム阻害剤が個別に製剤化されている。
【０１０１】
また、コロイド薬剤輸送系（例えば、リポソーム、アルブミン微小球、微小エマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）における、又は大型エマルジョンにおける、コアセルベーション技術、又は異種間（ｉｎｔｅｒｒａｃｉａｌ）ポリマー化、例えばヒドロキシメチルセルロースにより調製される微小カプセル、又はゼラチン−微小カプセル、及びポリ（メチルメタクリレート）微小カプセル中に、有効成分が封入され得る。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｏｓｏｌ，  Ａ．  Ｅｄ．  （１９８０）に記載されている。
【０１０２】
徐放性調製物が調製され得る。徐放性調製物の適切な例として、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは、例えばフィルム又は微小カプセル等の固体の形態をとる。徐放性マトリックスの適切な例として、ポリエステル、ヒドロゲル（例えばポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（ＵＳ  ３，７７３，９１９）、Ｌ−グルタミン酸及びガンマ−エチル−Ｌ−グルタミンのコポリマー、非分解性エリレンビニルアセテート、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドからなる注射用マイクロスフェア）等の分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、並びにポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０１０３】
インビボ投与に使用されるべき製剤は、滅菌されなければならない。これは、滅菌濾過膜を通して濾過することにより、容易に達成される。
【０１０４】
更に、本発明は、癌の治療を必要とする患者に、（ｉ）有効な第一の量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体；及び（ｉｉ）有効な第二の量のプロテアソーム阻害剤が投与される、癌を治療する方法を提供する。
【０１０５】
更に、本発明は、癌の治療を必要とする患者に、（ｉ）有効な第一の量のＩＩ型抗ＣＤ２０抗体；及び（ｉｉ）有効な第二の量のプロテアソーム阻害剤が投与される、癌を治療する方法を提供する。
【０１０６】
本明細書中で使用されるとき、「患者」という用語は、何らかの目的でＩＩ型抗ＣＤ２０抗体による治療を必要とするヒト（例えばＣＤ２０を発現する癌に苦しむ患者）を指し、より好ましくは、癌、又は前癌症状又は病態の処置を要するヒトを指す。しかしながら、「患者」という用語は、非ヒト動物、好ましくはイヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ及び非ヒト霊長類を指す場合もある。
【０１０７】
更に、本発明は、ＣＤ２０を発現する癌に苦しむ患者を治療するために、プロテアソーム阻害剤と組み合わせる、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を更に含む。
【０１０８】
更に、本発明は、ＣＤ２０を発現する癌に使用される、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及びプロテアソーム阻害剤を含む。
【０１０９】
更に、本発明は、ＣＤ２０を発現する癌に苦しむ患者の治療に使用される、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体及びプロテアソーム阻害剤を含む。
【０１１０】
好ましくは、前記プロテアソーム阻害剤の抗プロテアソーム阻害活性のＩＣ５０は、５μＭ以下である。好ましくは、そのようなプロテアソーム阻害剤は、ペプチドアルデヒド（好ましくはＮ−カルボベンジロキシ−ロイシル−ノルロイシナル（ＩＰＳＩ−００１））、ペプチドボロネート（好ましくはボルテゾミブ（ＰＳ−３４１））、ペプチドエポキシケトン（好ましくはエポキソミシン誘導体カルフィルゾミブ（ＰＲ−１７１））、又はサリノスポラミドＡ（ＮＰＩ−００５２）から選択される。より好ましくは、そのようなプロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ（ＰＳ−３４１）、カルフィルゾミブ（ＰＲ−１７１）、サリノスポラミドＡ（ＮＰＩ−００５２）又はＮ−カルボベンジロキシ−ロイシル−ノルロイシナル（ＩＰＳＩ−００１）から選択される。
【０１１１】
好ましくは、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体がＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．  ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０に結合する能力は、リツキシマブと比較して０．３倍から０．６倍であり、より好ましくは０．３５倍から０．５５倍であり、なおもより好ましくは０．４倍から０．５倍である。
【０１１２】
好ましくは、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
【０１１３】
好ましくは、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）が増大している。
【０１１４】
好ましくは、前記ＣＤ２０を発現する癌は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。
【０１１５】
好ましくは、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、モノクローナル抗体である。
【０１１６】
以下の実施例、配列表、及び図は、本発明の理解を補助するために提供されるものであり、本発明の実際の範囲は、添付されている特許請求の範囲に記載されている。本発明の精神から逸脱すること無く、記載されている手順の改変がなされ得ることを理解されたい。
【０１１７】
配列表
配列番号１
マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ−Ｌｙ１の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列を表す。
【０１１８】
配列番号２
マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ−Ｌｙ１の軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を表す。
【０１１９】
配列番号３〜１９
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ２〜Ｂ−ＨＨ９、Ｂ−ＨＬ８、及びＢ−ＨＬ１０〜Ｂ−ＨＬ１７）の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列を表す。
【０１２０】
配列番号２０
ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体Ｂ−ＫＶ１の軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を表す。
【図面の簡単な説明】
【０１２１】
【図１】Ｒａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．  ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０に対する結合能力の比率がリツキシマブの０．４４倍であるＩＩ型抗ＣＤ２０抗体（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ）及びプロテアソーム阻害剤（ボルテゾミブ）を組み合わせた治療の、ＳＵ−ＤＨＬ−４  ＤＬＢＣＬ  Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に対する抗主要活性を表す。Ｙ軸上に腫瘍体積［ｍｍ３］  ＋／−  ＩＱＲの中央値がプロットされ；ｘ軸上には、腫瘍細胞注入後の日数がプロットされる。凡例：Ａ）ビヒクル（円）、Ｂ）ヒト化Ｂ−Ｌｙ１週１回（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ）１０ｍｇ／ｋｇ（四角形）、Ｃ）プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ週１回１ｍｇ／ｋｇ（三角形）及びＤ）  ヒト化Ｂ−Ｌｙ１週１回（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ）１０ｍｇ／ｋｇプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（週１回１ｍｇ／ｋｇ）の共投与（十字）。
【０１２２】
【図２】Ｒａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．  ＣＣＬ−８６）上のＩ型抗ＣＤ２０抗体（Ｃｙ５−リツキシマブ＝白棒）及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体（  Ｃｙ５−ヒト化Ｂ−Ｌｙ１  Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ＝黒棒）の平均蛍光強度；リツキシマブと比較した、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体（リツキシマブ）及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ）の結合能力の比率を表す。
【０１２３】
【図３】Ｚ１３８ヒト化非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に対する、２つのＩＩ型ＣＤ２０抗体の処置の抗腫瘍活性を表す。両抗体は；１）Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１糖操作（ＧＥ）Ｂ−Ｌｙ１抗ＣＤ２０抗体及び２）  Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１野生型（ｗｔ、非糖操作）Ｂ−Ｌｙ１抗ＣＤ２０抗体である。Ｙ軸上に腫瘍体積［ｍｍ３］の平均値がプロットされ；ｘ軸上には、腫瘍細胞注入後の日数がプロットされる。凡例：Ａ）ビヒクル（円）、Ｂ）ヒト化Ｂ−Ｌｙ１  ＧＥ（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ）週１回３０ｍｇ／ｋｇ（三角形）及びＣ）ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｂ−Ｌｙ１  ｗｔ（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶｌ  ｗｔ）３０ｍｇ／ｋｇ（十字）。
【実施例】
【０１２４】
実施例１
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ）及びプロテアソーム阻害剤（ボルテゾミブ）の組合せ治療の抗腫瘍活性
試験に用いる試薬
ＧｌｙｃＡｒｔ，  Ｓｃｈｌｉｅｒｅｎ，  ＳｗｉｔｚｅｒｌａｎｄのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の（＝ヒト化Ｂ−Ｌｙ１、糖操作Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１、ＷＯ  ２００５／０４４８５９及びＷＯ  ２００７／０３１８７５を参照されたい）を、ストック溶液として準備した（ｃ＝９．４ｍｇ／ｍｌ）。
【０１２５】
抗体緩衝液は、ヒスチジン、トレハロース、及びポリソルベート２０を含んでいた。注入の前に、抗体溶液をストック溶液からＰＢＳで適宜希釈した。
【０１２６】
プロテアソーム阻害剤のボルテゾミブは、Ｊａｎｓｓｅｎ−Ｃｉｌａｇ  ＧｍｂＨ，  Ｎｅｕｓｓ，  Ｇｅｒｍａｎｙから臨床製剤として購入した。希釈は、再構築したストック溶液から調整した。
【０１２７】
細胞株及び培養条件
ＤＳＭＺ，  Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇから、ＳＵ−ＤＨＬ−４ヒト非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）細胞（Ｃｈａｎｇ，  Ｈ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．  ８  （１９９２）  １２９−３６）を提供して頂いた。腫瘍細胞を、水蒸気で飽和した３７℃５％の空気中の、１０％ウシ胎仔血清（ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ａｕｓｔｒｉａ）及び２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ培地（ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ａｕｓｔｒｉａ）でルーチンに培養した。パッセージ５を、移植に使用した。
【０１２８】
動物
到着時に４〜５週齢の雌ＳＣＩＤベージュマウス（Ｂｏｍｈｏｌｔｇａｒｄ，  Ｒｙ，  Ｄｅｎｍａｒｋから購入）を、誓約したガイドライン（ＧＶ−Ｓｏｌａｓ；  Ｆｅｌａｓａ；  ＴｉｅｒｓｃｈＧ）に従い、１２時間照明／１２時間暗黒の日周の特別な無菌条件下で維持した。実験プロトコルは、地方自治体により査読及び認可された。到着後、環境に慣らすために、動物を１週間動物施設の隔離区画中で維持して、それから観察に付した。定期的に、継続的な健康状態のモニタリングを行った。栄養食及び水（ｐＨ２．５〜３に酸性化したもの）を、不断給餌により供給した。
【０１２９】
モニタリング
動物の臨床的症状及び副作用の判定が、日常的に管理された。実験全体をモニタリングするために、動物の体重を週２回記録し、病期分類の後、キャリパーにより腫瘍体積を測定した。
【０１３０】
動物の処置
ランダムに決定した細胞移植の２２日後、動物の処置を開始した。ヒト化ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥを単一で、又は組み合わせて投与される群、及び対応するビヒクルの投与を受ける群に、ｉ．ｖ．  ｑ７ｄにより、研究の２２日、２９日、３６日、及び４３日目に、１０ｍｇ／ｋｇの指示用量で処理した。プロテアソーム阻害剤のボルテゾミブを、ｉ．ｐ．により、週１回、２３日、２９日及び３７日目に与えた。
【０１３１】
インビボ腫瘍増殖阻害実験
ビヒクル対照による処置を受けた腫瘍を担持する動物は、全身腫瘍組織量により、処置開始後１５日で排除しなければならなかった。毎週週１回行われたＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ（１０  ｍｇ／ｋｇ）による動物の処置は、対照と比較して、１４日間（ＴＧＩ  ８７％）、異種移植物の増殖を顕著に阻害した。しかしながら、ＳＵ−ＤＨＬ−４異種移植物は、毎週の抗体処理にもかかわらず、持続的に進行した。一方、プロテアソーム阻害剤のボルテゾミブによる単一薬剤処理を週１回１ｍｇ／ｋｇで行った場合、活性は僅かで、腫瘍はコントロールに近いレベルで進行的に増殖した。いずれの化合物も単一の薬剤としては活性が低いにもかかわらず、組み合わせた場合、ＳＵ−ＤＨＬ−４リンパ腫異種移植物は寛解した。週１回のＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ（１０ｍｇ／ｋｇ）及びプロテアソーム阻害剤のボルテゾミブによる毎週の処理は、最初の週の内にリンパ腫の縮小を引き起こし、その後の組合せ治療の期間中に、９個のＳＵ−ＤＨＬ−４腫瘍中４個が、完全な腫瘍の寛解を示し、再発は認められなかった。
【０１３２】
実施例２
リツキシマブと比較しての、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．  ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０に対する結合能力の比率の決定
Ｒａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．  ＣＣＬ−８６）を、１０％ＦＣＳ  Ｇｉｂｃｏ，  Ｃａｔ．−  Ｎｏ．１０５００−０６４）を含むＲＰＭＩ−１６４０培地（ＰａｎＢｉｏｔｅｃｈ  ＧｍｂＨ，  Ｃａｔ．−Ｎｏ．  ＰＯ４−１８５００）中で維持した。取扱説明書に従い、Ｃｙ５  Ｍｏｎｏ  ＮＨＳエステル（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，  Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  Ｎｏ．  ＰＡ  １５１０１）を使用して、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１（ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）及びリツキシマブを標識した。Ｃｙ５−コンジュゲートリツキシマブの標識率は、抗体あたりＣｙ５分子２．０個であった。Ｃｙ５−コンジュゲートＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１の標識率は、抗体あたりＣｙ５分子２．２個であった。両抗体の結合能力及び様式を決定及び比較するために、Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫株Ｒａｊｉ（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．  ＣＣＬ−８６）を用いる直接免疫蛍光により（Ｃｙ５−コンジュゲートリツキシマブ及びＣｙ５−コンジュゲートＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１の滴定により）、結合曲線を作成した。Ｃｙ５−コンジュゲートリツキシマブ及びＣｙ５−コンジュゲートＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１それぞれについて、ＥＣ５０（最大強度の５０％）として平均蛍光強度（ＭＦＩ）を解析した。試料あたり５ｘ１０５の細胞を、４℃で３０分間染色した。その後、細胞を培養培地で洗浄した。死細胞を排除するために、プロビジウムヨーダイド（ＰＩ）染色を使用した。ＦＡＣＳＡｒｒａｙ  （Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して測定を実行し、Ｒｅｄ−ＡのＦａｒ  Ｒｅｄ  Ａ及びＣｙ５でプロビジウムヨーダイド（ＰＩ）を測定した。図２は、Ｃｙ５−コンジュゲートリツキシマブ（白棒）及びＣｙ５−コンジュゲートＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１（黒棒）の、ＥＣ５０（最大強度の５０％）において結合する平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。
【０１３３】
Ｒａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．  ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０に対する結合能力の比率は、以下の式に従い求める。
【０１３４】
【化２】
0005469073.tif 000007
【０１３５】
従って、典型的なＩＩ型抗ＣＤ２０抗体としてのＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１の結合能力は、リツキシマブと比較して低下している。
【０１３６】
実施例３
ＳＣＩＤマウス中のＺ１３８  ＭＣＬ異種移植物に対する、糖操作（ＧＥ）及び非糖操作（野生型、ｗｔ）抗ＣＤ２０抗体（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ及びｗｔ）の類似の抗腫瘍活性
試験に用いる試薬
ＧｌｙｃＡｒｔ，  Ｓｃｈｌｉｅｒｅｎ，  ＳｗｉｔｚｅｒｌａｎｄのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１（糖操作（ＧＥ）及び野生型（ｗｔ））を、ストック溶液として準備した（ｃ＝９．４  ｍｇ／ｍｌ及び１２．５  ｍｇ／ｍｌ）。抗体緩衝液は、ヒスチジン、トレハロース、及びポリソルベート２０を含んでいた。
【０１３７】
注入の前に、抗体溶液をストック溶液からＰＢＳで適宜希釈した。
【０１３８】
プロテアソーム阻害剤のボルテゾミブは、Ｊａｎｓｓｅｎ−Ｃｉｌａｇ  ＧｍｂＨ，  Ｎｅｕｓｓ，  Ｇｅｒｍａｎｙから臨床製剤として購入した。希釈は、再構築したストック溶液から調整した。
【０１３９】
細胞株及び培養条件
Ｚ１３８Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）細胞は、元々Ｇｌｙｃａｒｔから取得した（マントル細胞リンパ腫−ＭＣＬ）。腫瘍細胞を、水蒸気で飽和した３７℃５％の空気中の、１０％ウシ胎仔血清（ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ａｕｓｔｒｉａ）及び２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを添加したＤＭＥＭ培地（ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ａｕｓｔｒｉａ）でルーチンに培養した。パッセージ２を、移植に使用した。
【０１４０】
動物
到着時に４〜５週齢の雌ＳＣＩＤベージュマウス（Ｂｏｍｈｏｌｔｇａｒｄ，  Ｒｙ，  Ｄｅｎｍａｒｋから購入）を、誓約したガイドライン（ＧＶ−Ｓｏｌａｓ；  Ｆｅｌａｓａ；  ＴｉｅｒｓｃｈＧ）に従い、１２時間照明／１２時間暗黒の日周の特別な無菌条件下で維持した。実験プロトコルは、地方自治体により査読及び認可された。到着後、環境に慣らすために、動物を１週間動物施設の隔離区画中で維持して、それから観察に付した。定期的に、継続的な健康状態のモニタリングを行った。栄養食及び水（ｐＨ２．５〜３に酸性化したもの）を、不断給餌により供給した。
【０１４１】
モニタリング
動物の臨床的症状及び副作用の判定が、日常的に管理された。実験全体をモニタリングするために、動物の体重を週２回記録し、病期分類の開始時に、キャリパーにより腫瘍体積を測定した。
【０１４２】
動物の処置
ランダムに決定したｓ．ｃ．細胞移植の１４日後、動物の処置を開始した。ヒト化ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ及びｗｔ）を投与される群、及び対応するビヒクルの投与を受ける群に、ｉ．ｖ．  ｑ７ｄにより、研究の１４日、２０日、２７日、及び３４日目に、１０ｍｇ／ｋｇの指示用量で処理した。
【０１４３】
インビボ腫瘍増殖阻害実験
ビヒクル対照による処置を受けた腫瘍を担持する動物は、全身腫瘍組織量により、処置開始後１９日で排除しなければならなかった１０ｍｇ／ｋｇの用量で毎週ｗｔ又は糖操作Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥ及びｗｔ）により動物を処置したところ、処置直後から異種移植物の増殖が阻害された。対照を処分した時点で、全ての腫瘍が縮小しており、その後、殆どのＺ１３８腫瘍異種移植物は、完全な寛解を示した。この異種移植モデルにおいて、抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１のｗｔと糖操作との間に、顕著な差は観察されなかった。これはおそらく、マウスのＮＫ細胞上に正しいＦｃ受容体が発現しておらず、更にＳＣＩＤベージュマウスは、重度の三重免疫不全のために、ＮＫ誘導性ＡＤＣＣが機能しないことによると考えられる。従って、ＳＣＩＤベージュマウスにおけるｓ．ｃ．異種移植モデルは、糖操作により修飾された抗体を用いたヒトのＡＤＣＣにより誘導される効果を模倣するのに適切ではない。
【図１】
0005469073.tif 000008
【図２】
0005469073.tif 000009
【図３】
0005469073.tif 000010
【配列表】
0005469073000001.app