(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式ＸＩ：
0005399904.tif 000140
を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩：
式中、
Ｒ１、Ｒ５、およびＲ７は、独立して、Ｈまたは置換されてもよいアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、または複素環であり；
Ｒ９は、６−クロロ基および５−フルオロ基を示し、
Ｒ１０が、水素であり、かつ
Ｒ１１が、３位にヒドロキシル基を含まないジヒドロキシアルキル基である。
【請求項２】
Ｒ１が、置換されてもよいアリールまたはヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ５が、Ｃ３−１８アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
0005399904.tif 000141
から成る群より選択される化合物。
【請求項５】
0005399904.tif 000142
である、化合物。
【請求項６】
0005399904.tif 000143
から成る群より選択される化合物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
【請求項８】
動物における障害を治療、改善、または予防するための薬学的組成物であって、治療上有効量の請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
【請求項９】
追加の薬剤をさらに含む、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記追加の薬剤が、化学療法剤である、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記追加の薬剤が、放射線である、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記障害が、過剰増殖性疾患である、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
過剰増殖性疾患が、癌である、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
動物において、機能的ｐ５３またはｐ５３関連タンパク質の発現を特徴とする過剰増殖性疾患を治療、改善、または予防するための薬学的組成物であって、治療上有効量の請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
【請求項１５】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物を含む、医薬に使用するためのキット。
【請求項１６】
前記化合物を動物に投与するための説明書をさらに含む、請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
追加の薬剤をさらに含む、請求項１５に記載のキット。
【請求項１８】
前記追加の薬剤が、化学療法剤である、請求項１７に記載のキット。
【請求項１９】
前記説明書が、前記化合物を過剰増殖性疾患を有する動物に投与するためのものである、請求項１６に記載のキット。
【請求項２０】
前記過剰増殖性疾患が癌である、請求項１９に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００６年８月３０日に申請された、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国仮特許出願第６０／８４１，１５０号に対して優先権を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、医療品化学の分野にある。特に、本発明は、ｐ５３とＭＤＭ２との間の相互作用のアンタゴニストとして機能する小分子、ならびに癌およびその他の疾患の治療のための、その治療学的使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
関連技術
侵襲性の癌細胞表現型は、細胞内シグナル伝達経路の脱制御につながる、種々の遺伝的および後成的な変化の結果である（Ｐｏｎｄｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ４１１：３３６（２００１）（非特許文献１））。しかしながら、すべての癌細胞の共通点は、アポトーシスプログラムの実行への不適応であり、正常なアポトーシス機構における欠陥に起因する適切なアポトーシス欠損は、癌の特質である（Ｌｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ２１：４８５（２０００）（非特許文献２））。従って、正常なアポトーシス機構における欠陥に起因して癌細胞がアポトーシスプログラムを実行することが出来ないことは、多くの場合、化学療法、放射線療法、または免疫療法誘導性のアポトーシスへの耐性の増加に関連する。アポトーシスの欠陥に起因する、現在の治療プロトコルへの異なる起源のヒト癌の原発性または後天性の耐性は、現在の癌療法における主要な問題である（Ｌｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ２１：４８５（２０００）（非特許文献２）；Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ４０７：８１０（２０００）（非特許文献３））。従って、癌患者の生存率および生活の質を改善するための、新規分子標的特異的抗癌療法を設計および開発することに向けた現在および将来の努力は、アポトーシスへの癌細胞の耐性を特異的に標的化する戦略を含まなくてはならない。この点に関して、癌細胞において直接的にアポトーシスを阻害する際に中心的役割を果たす決定的な負の調節因子を標的化することは、新規の抗癌薬物設計のための非常に前途有望な治療戦略を表す。
【０００４】
ｐ５３腫瘍抑制遺伝子は、細胞周期の進行およびアポトーシスを制御する際に、中心的な役割を果たす（Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４０８：３０７（２０００）（非特許文献４））。その腫瘍抑制遺伝子活性は、腫瘍細胞を根絶させるように刺激され得るので、これは抗癌薬物設計のための魅力的な治療標的である（Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４０８：３０７（２０００）（非特許文献４）；Ｃｈｅｎｅ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ３：１０２（２００３）（非特許文献５））。ｐ５３の活性を刺激することに対する新規アプローチは、非ペプチド小分子阻害剤を使用した、タンパク質ＭＤＭ２との相互作用の阻害によるものである（Ｃｈｅｎｅ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ３：１０２（２００３）（非特許文献５）；Ｖａｓｓｉｌｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０３：８４４（２００４）（非特許文献６））。ＭＤＭ２およびｐ５３は、自己調節フィードバックループの一部である（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．７：１１２６（１９９３）（非特許文献７））。ＭＤＭ２は、ｐ５３およびＭＤＭ２によって転写活性化され、次には、少なくとも３つのメカニズムによって、ｐ５３活性を阻害する（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．７：１１２６（１９９３）（非特許文献７））。第１に、ＭＤＭ２タンパク質は、ｐ５３トランス活性化ドメインに直接的に結合し、それによって、Ｐ５３媒介性トランス活性化を阻害する。第２に、ＭＤＭ２タンパク質は、核外移行シグナル配列を含み、そしてｐ５３への結合に際して、ｐ５３の核外移行を誘導し、ｐ５３が標的化されたＤＮＡに結合することを妨害する。第３に、ＭＤＭ２タンパク質は、Ｅ３ユビキチンリガーゼであり、ｐ５３への結合に際して、ｐ５３の分解を促進することが可能である。それゆえに、ｐ５３活性の強力な内因性細胞阻害剤として機能することによって、ＭＤＭ２は、ｐ５３媒介性アポトーシス、細胞周期停止およびＤＮＡ修復を効率的に阻害する。それゆえに、ＭＤＭ２に結合し、ＭＤＭ２とｐ５３との間の相互作用を遮断する小分子阻害剤は、機能的ｐ５３を有する細胞におけるｐ５３の活性を促進し、細胞周期停止、アポトーシス、またはＤＮＡ修復等のｐ５３媒介性細胞効果を刺激することが出来る（Ｃｈｅｎｅ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ３：１０２（２００３）（非特許文献５）；Ｖａｓｓｉｌｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０３：８４４（２００４）（非特許文献６））。
【０００５】
高親和性ペプチドを用いた阻害剤は、過去において上手く設計されてきたが（Ｇａｒｃｉａ−Ｅｃｈｅｖｅｒｒｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ  ４３：３２０５（２０００）（非特許文献８））、これらの阻害剤は、その乏しい細胞透過性およびインビボ生物学的利用能ゆえに、薬らしい分子ではない。製薬業界による集中的な取り組みにも関わらず、ハイスループットスクリーニング戦略は、強力な非ペプチド小分子阻害剤を同定する際に非常に限られた効果しか有さなかった。従って、ｐ５３−ＭＤＭ２相互作用の非ペプチド性で薬物のような小分子阻害剤の必要性が存在する。
【０００６】
ｐ５３−ＭＤＭ２相互作用を標的とする非ペプチド小分子阻害剤の設計は、抗癌薬物設計のための魅力的な戦略として、現在、追及されている（Ｃｈｅｎｅ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ３：１０２（２００３）（非特許文献５）；Ｖａｓｓｉｌｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０３：８４４（２００４）（非特許文献６））。この相互作用の構造的基礎は、X線結晶学によって確立されてきた（Ｋｕｓｓｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４：９４８（１９９６）（非特許文献９））。結晶構造は、ｐ５３とＭＤＭ２との間の相互作用が、ｐ５３からの３つの疎水性残基（Ｐｈｅｌ９、Ｔｒｐ２３およびＬｅｕ２６）およびＭＤＭ２における小さな深い疎水性間隙によって主に媒介されることを示す。この疎水性間隙は、ｐ５３−ＭＤＭ２相互作用を破壊することが出来る小分子阻害剤を設計するための理想的な部位である（Ｃｈｅｎｅ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ３：１０２（２００３）（非特許文献５））。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｐｏｎｄｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ４１１：３３６（２００１）
【非特許文献２】Ｌｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ２１：４８５（２０００）
【非特許文献３】Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ４０７：８１０（２０００）
【非特許文献４】Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４０８：３０７（２０００）
【非特許文献５】Ｃｈｅｎｅ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ３：１０２（２００３）
【非特許文献６】Ｖａｓｓｉｌｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０３：８４４（２００４）
【非特許文献７】Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．７：１１２６（１９９３）
【非特許文献８】Ｇａｒｃｉａ−Ｅｃｈｅｖｅｒｒｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ  ４３：３２０５（２０００）
【非特許文献９】Ｋｕｓｓｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４：９４８（１９９６）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
遺伝的損傷またはアポトーシスの誘導因子への曝露（抗癌剤および放射線等）に反応して、癌細胞またはそれらの支持細胞がアポトーシスを受けることが出来ないことは癌の発生および進行の主要な要因であることが、一般的に受け入れられている。癌細胞またはそれらの支持細胞（例えば、腫瘍血管系における新生血管細胞）におけるアポトーシスの誘導は、今日、市販されている、または実施されている実質的にすべての有効な癌治療薬または放射線療法について、作用の普遍的なメカニズムであると考えられている。細胞がアポトーシスを受けることが出来ないことの１つの理由は、多くの場合において、機能的ｐ５３を含む腫瘍細胞におけるｐ５３に対するＭＤＭ２の阻害作用に起因する、ｐ５３の腫瘍抑制遺伝子活性の減少である。ｐ５３活性の阻害は、アポトーシス経路における変化と細胞周期の調節を生じる。
【０００９】
本発明は、ｐ５３またはｐ５３関連タンパク質とＭＤＭ２またはＭＤＭ２関連タンパク質（例えば、ＭＤＭＸ）との間の相互作用を阻害することによる、治療上有効量の、ｐ５３およびｐ５３関連タンパク質（例えば、ｐ６３、ｐ７３）の機能を増加させる薬物（例えば、小分子）への、癌に罹患している動物の曝露は、癌細胞または支持細胞の増殖を完全に阻害し、および／または、癌治療薬もしくは放射線療法の細胞死誘導活性に対する感受性をこのような集団での細胞に、より付与することを想定する。特に、本発明の阻害剤は、通常はｐ５３の分解を促進するｐ５３−ＭＤＭ２相互作用を干渉することによって、ｐ５３の半減期を延長する可能性がある。本発明は、ｐ５３またはｐ５３関連タンパク質とＭＤＭ２およびＭＤＭ２関連タンパク質との間の相互作用の阻害剤が、癌細胞において、細胞増殖阻害、アポトーシスおよび／または細胞周期停止を誘導するための単独療法として投与される場合、または、単独で癌治療薬または放射線療法のみを用いて治療された動物において、対応する細胞の割合を比較して、アポトーシスプログラムを実行することに対する感受性をより大きな割合の癌細胞または支持細胞に付与するために、他の細胞死誘導性もしくは細胞周期を破壊する癌治療薬または放射線療法（組み合わせ療法）等の、追加の薬剤との時間的関係で投与される場合に、複数の癌の種類の治療のための、満たされていない必要性を満たすことを意図する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の一部の実施形態では、治療上有効量の本発明の化合物および一連の抗癌剤または放射線を用いた動物の組み合わせ治療は、かかる動物において、化合物または抗癌薬物／放射線で単独治療した動物と比較して、より大きな腫瘍反応および臨床的利益を生じる。言い換えれば、化合物は、すべての細胞のアポトーシスの閾値を低下させるので、抗癌薬物／放射線のアポトーシス誘導活性に反応するアポトーシスプログラムを上手く実行する細胞の割合が増加する。または、本発明の化合物は、より低い、それゆえより毒性が低く耐容性である用量の抗癌剤および／または放射線の投与が、抗癌剤／放射線単独の従来の用量と同様の腫瘍応答／臨床的利益を生じさせることを可能にするために使用されるであろう。すべての許可された抗癌薬物および放射線の治療のための用量は公知であるので、本発明は、それらと本発明の化合物の種々の組み合わせを意図する。さらに、本発明の化合物は、ｐ５３およびｐ５３関連タンパク質のプロアポトーシスおよび／または細胞周期阻害活性を刺激することにより、少なくとも部分的に作用する可能性があるので、治療上有効量の化合物への癌細胞および支持細胞の曝露は、抗癌剤または放射線療法へ反応するアポトーシスプログラムを実行するための細胞の試みと一致するように、時間的に関連付けられるべきである。従って、ある実施形態では、一定の時間的関係と結び付けて本発明の組成物を投与するステップは、とりわけ有効な治療的手法を提供する。
【００１１】
本発明の他の実施形態では、ｐ５３またはｐ５３関連タンパク質とＭＤＭ２およびＭＤＭ２関連タンパク質との間の相互作用の阻害剤は、場合によっては、細胞周期停止を誘導する阻害剤の能力によって、一定の化学療法剤および放射線の毒性効果から正常（例えば、過剰増殖性ではない）細胞を保護する可能性がある。特には、本発明の阻害剤は、変異型または欠失型のｐ５３を含む癌細胞に対しては効果を有さない一方、野生型ｐ５３を含む細胞において細胞周期停止を引き起こす可能性がある。この差別的保護効果は、化学療法剤のより高用量の使用もしくはより長い治療、またはかかる治療の毒性副作用を増加させない治療を可能にすることによって、より効果的な癌の治療を可能にし得る。
【００１２】
本発明は、ｐ５３またはｐ５３関連タンパク質とＭＤＭ２またはＭＤＭ２関連タンパク質との間の相互作用を阻害するため、ならびにアポトーシスおよび／または細胞周期停止の誘導因子に対する細胞の感受性を増加させるために有用な化合物に関する。特定の一実施形態では、化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグは、式Ｉ：
0005399904.tif 000002
を有し、
式中、
Ｘは、ＣＨ、Ｏ、Ｎ、またはＳであって、ＸがＯまたはＳである場合、Ｒ８は存在せず、
Ｙは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ’であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、独立して、Ｈまたは置換されてもよいアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、複素環、ＣＯ２Ｒ’、ＯＣＯＲ’、ＣＯＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’’ＣＯＲ’、ＮＲ’ＳＯ２Ｒ’’、ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’、（Ｃ＝ＮＲ’）ＮＲ’’Ｒ’’’、もしくはＮＲ’Ｒ’’であり、または
Ｒ７は、Ｒ５またはＲ６の１つを伴い、アリール、シクロアルキル、もしくは複素環基を形成し、Ｒ８は、Ｈまたは置換されてもよいアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、複素環、ＣＯ２Ｒ’、ＯＣＯＲ’、ＣＯＮＲ’Ｒ’’、ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’、もしくは（Ｃ＝ＮＲ’）ＮＲ’’Ｒ’’’であり、
Ｒ９は、６−クロロ基および５−フルオロ基を表し、かつ
各Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は、独立して、Ｈまたは置換されてもよいアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、もしくは複素環であり、または
Ｒ’およびＲ’’、またはＲ’’およびＲ’’’は、環を形成し、
Ｒ３およびＲ４の１つは、ＣＯＮＲＲ’であり、ＲおよびＲ’の１つは、置換されてもよいシクロアルキル−アルキル基もしくはモノシクロ−ヘテロシクロアルキル基またはアルキル基の３位にヒドロキシル基を含まないジヒドロキシアルキルアミノ基である。
【００１３】
本発明は、ｐ５３またはｐ５３関連タンパク質とＭＤＭ２またはＭＤＭ２関連タンパク質との間の相互作用の阻害剤である、式Ｉによって表される化合物に関連する。本発明は、機能的ｐ５３またはｐ５３関連タンパク質を含む細胞における細胞周期停止および／またはアポトーシスを誘導するための本発明の化合物の使用に関する。本発明は、さらに、アポトーシスおよび／または細胞周期停止の誘導因子等の追加の薬剤に対して細胞を感作させるため、ならびに化学療法剤を用いる治療の前の細胞周期停止の誘導を介する正常細胞の化学防御のための本発明の化合物の使用に関する。一実施形態では、本発明は、細胞を本発明の化合物と接触させるステップを含む、化学療法剤または化学療法治療に対する耐性を正常細胞に付与する方法に関する。一実施形態では、本発明は、過剰増殖性疾患を有する動物における正常細胞を化学療法剤または化学療法治療の毒性副作用から保護する方法に関し、本方法は、本発明の化合物を前記動物に投与するステップを含む。特定の実施形態では、本発明は、本発明の化合物を、化学療法を受ける動物へ投与するステップにより、化学療法剤の正常な非癌性細胞への投与によって引き起こされる障害、副作用、または状態の治療、改善、または予防を対象とする。化学療法によって引き起こされるかかる障害および状態の例としては、粘膜炎、口内炎、口内乾燥症、胃腸障害、および脱毛症が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１４】
本発明の化合物は、アポトーシス性細胞死の誘導に対して反応性であるもの等の障害、例えば、癌等の過剰増殖性疾患を含むアポトーシスの調節不全を特徴とする障害の治療、改善、または予防に有用である。ある実施形態では、化合物は、癌療法に対する耐性を特徴とする癌（例えば、化学療法剤耐性、放射線耐性、ホルモン耐性等である癌細胞）を治療、改善、または予防するために使用することが出来る。他の実施形態では、化合物は、機能的ｐ５３またはｐ５３関連タンパク質の発現を特徴とする過剰増殖性疾患を治療するために使用することが出来る。他の実施形態では、本発明は、正常（例えば、過剰増殖性ではない）細胞を、これらの細胞における化学療法剤および細胞周期停止の誘導による治療の毒性副作用から保護するための、本発明の化合物の使用に関する。
【００１５】
本発明は、細胞にアポトーシスを誘導するため、または細胞をアポトーシスの誘導因子に対して感作させるために、治療上有効量の式Ｉの化合物を含む薬学的組成物を提供する。
【００１６】
本発明は、式Ｉの化合物と化合物を動物へ投与するための説明書とを含むキットをさらに提供する。キットは、他の治療剤、例えば、抗癌剤またはアポトーシス調節剤を任意に含むことが出来る。
【００１７】
本発明は、さらに、式Ｉの化合物を作製する方法を提供する。
[請求項101]
下記式Iを有する化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ:
0005399904.tif 000003
式中、Xは、CH、O、N、またはSであって、Xが、OまたはSである場合、R8は、存在せず、
Yは、O、S、またはNR'であり、
R1、R2、R3、R4、R5、R6、およびR7は、独立して、Hまたは置換されてもよいアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、複素環、CO2R'、OCOR'、CONR'R''、NR''COR'、NR'SO2R''、SO2NR'R''、(C=NR')NR''R'''、もしくはNR'R''であり、あるいは、
R7は、R5またはR6の1つとともに、アリール、シクロアルキル、または複素環基を形成し、
R8は、Hまたは置換されてもよいアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、複素環、CO2R'、OCOR'、CONR'R''、SO2NR'R''、もしくは(C=NR')NR''R'''であり、
R9は、6-クロロ基および5-フルオロ基を示し、かつ
各R'、R''およびR'''は、独立して、Hまたは置換されてもよいアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、もしくは複素環であり、あるいは、
R'およびR''、またはR''およびR'''は、環を形成し、
R3およびR4の1つは、CONRR'であり、RおよびR'の1つは、置換されてもよいシクロアルキル-アルキル基もしくはモノシクロ-ヘテロシクロアルキル基、または前記アルキル基の3位にヒドロキシル基を含まないジヒドロキシアルキルアミノ基である。
[請求項102]
式IIまたは式III:
0005399904.tif 000004
を有する、請求項101に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
[請求項103]
式IV:
0005399904.tif 000005
を有する、請求項101に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
[請求項104]
式Vまたは式VI:
0005399904.tif 000006
を有する、請求項103に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
[請求項105]
式VII:
0005399904.tif 000007
を有する、請求項101に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
[請求項106]
式VIIIまたは式IX:
0005399904.tif 000008
を有する、請求項105に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
[請求項107]
R1およびR2の1つが、置換されてもよいアリールまたはヘテロアリールである、請求項101に記載の化合物。
[請求項108]
R1およびR2の1つが、シクロアルキル、直鎖もしくは分岐鎖のアルキル、アミドまたはエステルである、請求項101に記載の化合物。
[請求項109]
R5およびR6の1つが、C3-18アルキル、アリール、またはヘテロアリールである、請求項101に記載の化合物。
[請求項110]
式X:
0005399904.tif 000009
を有する化合物であって、
式中、
R10が、水素であり、
R11が、置換されてもよいシクロアルキル-アルキル基もしくはモノシクロ-ヘテロシクロアルキル基、または前記アルキル基の3位にヒドロキシル基を含まないジヒドロキシアルキルアミノ基であり、
あるいはR10およびR11が、一緒になって、置換されてもよいモノシクロ-ヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項101に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
[請求項111]
式XI〜XXVI:
0005399904.tif 000010
の1つを有する、請求項110に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
[請求項112]
式XXVIIまたは式XXVIII:
0005399904.tif 000011
を有する化合物であって、
式中、
R10が、水素であり、かつ
R11が、置換されてもよいシクロアルキル-アルキル基もしくはモノシクロ-ヘテロシクロアルキル基、または前記アルキル基の3位にヒドロキシル基を含まないジヒドロキシアルキルアミノ基であり、
あるいはR10およびR11が、一緒になって、置換されてもよいモノシクロ-ヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項101に記載の化合物、または薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
[請求項113]
式XLVIII:
0005399904.tif 000012
を有する、請求項101に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
[請求項114]
式XLIX〜LXIV:
0005399904.tif 000013
の1つを有する、請求項113に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
[請求項115]
式LXV:
0005399904.tif 000014
を有する化合物であって、
式中、
R10が、水素であり、かつ
R11が、置換されてもよいシクロアルキル-アルキル基もしくはモノシクロ-ヘテロシクロアルキル基、または前記アルキル基の3位にヒドロキシル基を含まないジヒドロキシアルキルアミノ基であり、
あるいはR10およびR11が、一緒になって、置換されてもよいモノシクロ-ヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項101に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
[請求項116]
式LXVIおよびLXVII:
0005399904.tif 000015
の1つを有する、請求項115に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ。
[請求項117]
0005399904.tif 000016
0005399904.tif 000017
0005399904.tif 000018
0005399904.tif 000019
0005399904.tif 000020
0005399904.tif 000021
0005399904.tif 000022
0005399904.tif 000023
0005399904.tif 000024
0005399904.tif 000025
0005399904.tif 000026
0005399904.tif 000027
0005399904.tif 000028
0005399904.tif 000029
0005399904.tif 000030
0005399904.tif 000031
から成る群より選択される、請求項101に記載の化合物。
[請求項118]
0005399904.tif 000032
0005399904.tif 000033
0005399904.tif 000034
から成る群より選択される化合物。
[請求項119]
0005399904.tif 000035
である、請求項101に記載の化合物。
[請求項120]
請求項101または118の化合物および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
[請求項121]
細胞において、細胞の増殖および/もしくは分裂を阻害する、アポトーシスを誘導する、ならびに/または細胞周期停止を誘導する方法であって、前記細胞を請求項101または118に記載の化合物と接触させるステップを含む、方法。
[請求項122]
追加の薬剤に対する感受性を細胞に付与する方法であって、細胞を請求項101または118に記載の化合物と接触させるステップを含む、方法。
[請求項123]
前記細胞を追加の薬剤と接触させるステップをさらに含む、請求項122に記載の方法。
[請求項124]
前記追加の薬剤が、化学療法剤である、請求項123に記載の方法。
[請求項125]
前記追加の薬剤が、放射線である、請求項123に記載の方法。
[請求項126]
動物における障害を治療、改善、または予防する方法であって、治療上有効量の請求項101または118に記載の化合物を前記動物に投与するステップを含む、方法。
[請求項127]
追加の薬剤を投与するステップをさらに含む、請求項126に記載の方法。
[請求項128]
前記追加の薬剤が、化学療法剤である、請求項127に記載の方法。
[請求項129]
前記追加の薬剤が、放射線である、請求項127に記載の方法。
[請求項130]
前記障害が、過剰増殖性疾患である、請求項126に記載の方法。
[請求項131]
過剰増殖性疾患が、癌である、請求項130に記載の方法。
[請求項132]
請求項101に記載の化合物が、前記追加の薬剤の前に投与される、請求項127に記載の方法。
[請求項133]
請求項101に記載の化合物が、前記追加の薬剤の後に投与される、請求項127に記載の方法。
[請求項134]
請求項101に記載の化合物が、前記追加の薬剤と同時に投与される、請求項127に記載の方法。
[請求項135]
細胞におけるp53またはp53関連タンパク質とMDM2またはMDM2関連タンパク質との間の相互作用を阻害する方法であって、前記細胞を請求項101または118に記載の化合物に曝露するステップを含む、方法。
[請求項136]
機能的p53またはp53関連タンパク質を含む過剰増殖性細胞の増殖を阻害する方法であって、細胞を請求項101または118に記載の化合物に曝露するステップを含む、方法。
[請求項137]
動物において、機能的p53またはp53関連タンパク質の発現を特徴とする過剰増殖性疾患を治療、改善、または予防する方法であって、治療上有効量の請求項101または118に記載の化合物を前記動物に投与するステップを含む、方法。
[請求項138]
化学療法剤または化学療法治療に対する耐性を正常細胞に付与する方法であって、細胞を請求項101または118に記載の化合物と接触させるステップを含む、方法。
[請求項139]
前記正常細胞が、野生型p53を含む、請求項138に記載の方法。
[請求項140]
過剰増殖性疾患を伴う動物における正常細胞を化学療法剤または化学療法治療の毒性副作用から保護する方法であって、請求項101または118に記載の化合物を前記動物に投与するステップを含む、方法。
[請求項141]
前記正常細胞が、野生型p53を含む、請求項140に記載の方法。
[請求項142]
前記過剰増殖性疾患が、癌である、請求項140に記載の方法。
[請求項143]
前記癌が、p53の変異または欠失を含む、請求項142に記載の方法。
[請求項144]
化学療法剤の投与または化学療法治療によって引き起こされる障害または状態を治療、改善、または予防するための方法であって、請求項101または118に記載の化合物を、化学療法剤または化学療法治療を受けている動物に同時投与するステップを含む、方法。
[請求項145]
前記障害または状態が、粘膜炎、口内炎、口内乾燥症、胃腸障害、または脱毛症である、請求項144に記載の方法。
[請求項146]
請求項101または118に記載の化合物が、前記化学療法剤の投与または治療の前に、前記動物に投与される、請求項144に記載の方法。
[請求項147]
請求項101または118に記載の化合物を含む、キット。
[請求項148]
前記化合物を動物に投与するための説明書をさらに含む、請求項147に記載のキット。
[請求項149]
追加の薬剤をさらに含む、請求項147に記載のキット。
[請求項150]
前記追加の薬剤が、化学療法剤である、請求項149に記載のキット。
[請求項151]
前記説明書が、前記化合物を過剰増殖性疾患を有する動物に投与するためのものである、請求項148に記載のキット。
[請求項152]
前記過剰増殖性疾患が癌である、請求項151に記載のキット。
[請求項153]
0005399904.tif 000036
から成る群より選択される、請求項101に記載の化合物。
[請求項154]
0005399904.tif 000037
0005399904.tif 000038
0005399904.tif 000039
から成る群より選択される、化合物。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
発明の詳細な説明
本発明は、ｐ５３またはｐ５３関連タンパク質とＭＤＭ２またはＭＤＭ２関連タンパク質との相互作用の阻害剤として機能する、式Ｉによって表される化合物に関する。ＭＤＭ２またはＭＤＭ２関連タンパク質のｐ５３またはｐ５３関連タンパク質に対する負の効果を阻害することにより、これらの化合物は、アポトーシスおよび／または細胞周期停止の誘導因子に対して細胞を感作させ、一部の例では、それら自体がアポトーシスおよび／または細胞周期停止を誘導する。それゆえ、本発明は、単独で、または、追加の薬剤、例えば、アポトーシスの誘導因子または細胞周期破壊因子等と組み合わせて、細胞を式Ｉの化合物と接触させるステップを含む、アポトーシスおよび／または細胞周期停止の誘導因子に対して細胞を感作させる方法、ならびに細胞においてアポトーシスおよび／または細胞周期停止を誘導する方法に関する。さらに本発明は、式Ｉの化合物および追加の薬剤、例えば、アポトーシスの誘導因子を動物へ投与するステップを含む、アポトーシスの誘導に反応性である障害等、動物における障害を治療、改善、または予防する方法に関する。このような障害としては、アポトーシスの調節不全を特徴とするもの、および機能的ｐ５３またはｐ５３関連タンパク質を発現する細胞の増殖を特徴とするものが挙げられる。他の実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物を動物へ投与するステップを含む、動物における正常（例えば、過剰増殖性ではない）細胞を、化学療法剤および治療の毒性副作用から保護する方法に関する。
【００１９】
「抗癌剤」および「抗癌薬物」という用語は、本明細書で使用されるとき、癌等の過剰増殖性疾患の治療において（例えば、哺乳類において）使用される、任意の治療剤（例えば、化学療法化合物および／または分子治療化合物）、アンチセンス療法、放射線療法、または外科的介入を示す。
【００２０】
「プロドラッグ」という用語は、本明細書で使用されるとき、プロドラッグを活性な薬物に遊離または転換するために（例えば、酵素的に、生理学的に、機械的に、電磁的に）、標的の生理系の中で生体内変換（例えば、自発的または酵素的のいずれか）を必要とする親「薬物」分子の薬理学的に不活性な誘導体を示す。プロドラッグは、安定性、毒性、特異性の欠如、または生物学的利用能の制限に関連する問題を克服するように設計される。例示的なプロドラッグは、活性薬物分子それ自体および化学マスキング基（例えば、薬物の活性を可逆的に抑制する基）を含む。あるプロドラッグは、代謝条件下で切断可能な基を有する化合物のバリエーションまたは誘導体である。例示的なプロドラッグは、生理学的条件下で加溶媒分解を受ける場合、または酵素的分解もしくは他の生化学的転換（例えば、リン酸化、水素化、脱水素化、グリコシル化）を受ける場合、インビボまたはインビトロで、薬学的に活性になる。プロドラッグは、多くの場合、哺乳動物生物体において溶解性、組織適合性、または遅延放出の利点を提供する。（例えば、Ｂｕｎｄｇａｒｄ，Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，ｐｐ．７−９，２１−２４，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ（１９８５）；およびＳｉｌｖｅｒｍａｎ，Ｔｈｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｃｔｉｏｎ，ｐｐ．３５２−４０１，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９２）を参照のこと）。一般的なプロドラッグは、適したアルコール（例えば、低級アルカノール）と親酸の反応によって調製されたエステル、アミンと親の酸化合物の反応によって調製されたアミド、または反応してアシル化塩基誘導体を形成する塩基性基（例えば、低級アルキルアミド）等の酸誘導体を含む。
【００２１】
「薬学的に許容される塩」という用語は、本明細書で使用されるとき、標的動物（例えば、哺乳動物）において生理学的に許容される、本発明の化合物の任意の塩（例えば、酸または塩基との反応によって得られる）を示す。本発明の化合物の塩は、無機または有機の酸および塩基から誘導されてもよい。酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、スルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼルスルホン酸等が挙げられるが、これらに限定されない。シュウ酸等の他の酸は、それ自体は、薬学的に許容されないが、本発明の化合物およびそれらの薬学的に許容される酸付加塩を得る際の中間体として有用な塩の調製において使用してもよい。
【００２２】
塩基の例としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）水酸化物、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）水酸化物、アンモニア、およびＷはＣ１−４アルキルである、式ＮＷ４＋の化合物等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２３】
塩の例としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホナート、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、フルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パルモエート、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、ウンデカン酸塩等が挙げられるが、これらに限定されない。塩の他の例としては、Ｎａ＋、ＮＨ４＋、およびＮＷ４＋（Ｗは、Ｃ１−４アルキル基である）等の適したカチオンと化合物を形成する本発明の化合物のアニオンが挙げられる。治療用途のために、本発明の化合物の塩は、薬学的に許容されるものであることが想定される。しかしながら、薬学的に許容されない酸および塩基の塩もまた、例えば、薬学的に許容される化合物の調製または精製において用途を見出す可能性がある。
【００２４】
「治療上有効量」という用語は、本明細書で使用されるとき、１つまたは複数の障害の徴候の改善を結果として生じ、または障害の進行を予防し、または障害の後退を引き起こすのに十分である治療剤の量を示す。例えば、癌の治療に関しては、一実施形態では、治療上有効量は、腫瘍増殖の速度を減少させ、腫瘍塊を減少させ、転移の数を減少させ、腫瘍の進行までの時間を増加させ、または生存時間を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも１００％増加させる治療剤の量を示す。
【００２５】
「感作」および「感作する」という用語は、本明細書で使用されるとき、第１の薬剤（例えば、式Ｉの化合物）の投与を通して、第２の薬剤の生物学的効果（例えば、細胞分裂、細胞成長、増殖、侵襲、血管形成、壊死、またはアポトーシスを含むが、これらに限定されない細胞機能の１つの側面の促進または遅延）に対して、動物または動物内の細胞をより感受性またはより反応性にすることを示す。標的細胞に対する第１の薬剤の感作効果は、第１の薬剤の投与ありおよびなしでの、第２の薬剤の投与に際して観察される、意図される生物学的効果（例えば、細胞成長、増殖、侵襲、血管形成、またはアポトーシスを含むがこれらに限定されない細胞機能の１つの側面の促進または遅延）における相違として計測され得る。感作された細胞の反応は、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも３５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、少なくとも４００％、少なくとも４５０％、または少なくとも５００％、第１の薬剤の非存在下での反応を超えて、増加され得る。
【００２６】
「アポトーシスの調節不全」という用語は、本明細書で使用されるとき、アポトーシスを介して細胞が細胞死を受ける能力の任意の異常（例えば、素因）を示す。アポトーシスの調節不全は、種々の状態と関連するか、またはそれらによって誘導され、その非限定的な例としては、自己免疫障害（例えば、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、移植片対宿主病、重症筋無力症、またはシェーグレン症候群）、慢性炎症状態（例えば、乾癬、喘息またはクローン病）、過剰増殖性障害（例えば、腫瘍、Ｂ細胞リンパ腫、またはＴ細胞リンパ腫）、ウイルス感染（例えば、ヘルペス、パピローマ、またはＨＩＶ）、ならびに変形性関節症およびアテローム性動脈硬化症等の他の状態が挙げられる。調節不全が、ウイルス感染によって誘導されるか、またはそれに関連する場合、ウイルス感染は、調節不全が起こる時点またはそれが観察される時点で検出されるか、または検出されない可能性があるといことに注目すべきである。つまりは、ウイルス誘導性調節不全は、ウイルス感染の徴候が消失した後でも起こりうる。
【００２７】
「機能的ｐ５３」という用語は、本明細書で使用されるとき、正常レベル、高レベル、または低レベルで発現される野生型Ｐ５３、および少なくとも５％の野生型のｐ５３の活性、例えば少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、またはそれ以上の野生型活性を保持している変異型Ｐ５３を示す。
【００２８】
「ｐ５３関連タンパク質」という用語は、本明細書で使用されるとき、ｐ５３と少なくとも２５％の配列相同性を有し、腫瘍抑制遺伝子活性を有し、かつＭＤＭ２またはＭＤＭ２関連タンパク質との相互作用によって阻害されるタンパク質を示す。ｐ５３関連タンパク質の例としては、ｐ６３およびｐ７３が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
「ＭＤＭ２関連タンパク質」という用語は、本明細書で使用されるとき、ＭＤＭ２と少なくとも２５％の配列相同性を有し、かつｐ５３またはｐ５３関連タンパク質と相互作用するタンパク質を示す。ＭＤＭ２関連タンパク質の例としては、ＭＤＭＸおよびＨＤＭ２が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
「過剰増殖性疾患」という用語は、本明細書で使用されるとき、動物における増殖している細胞の局在化した集団が、正常な増殖の通常の制限によっては支配されない任意の状態を示す。過剰増殖性障害の例としては、腫瘍、新生物、リンパ腫等が挙げられる。新生物は、侵襲または転移をしない場合に良性といわれ、これらのいずれかをする場合に悪性といわれる。「転移性」細胞とは、細胞が、隣接している身体構造に侵潤しかつ破壊し得ることを意味する。過形成は、構造または機能における有意な変化を伴わない、組織または器官中の細胞数の増加を含む、細胞増殖の種類である。化生は、ある型の完全に分化した細胞が別の型の分化した細胞にとって代わる、制御された細胞増殖の種類である。
【００３１】
活性化リンパ系細胞の病理学的増殖は、多くの場合、自己免疫障害または慢性炎症状態を結果として生じる。本明細書で使用されるとき、「自己免疫障害」という用語は、生物体自体の分子、細胞または組織を認識する抗体または免疫細胞を、その生物体が産生する任意の状態を示す。自己免疫障害の非限定的な例としては、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、バージャー病またはＩｇＡ腎症、セリアックスプルー、慢性疲労症候群、クローン病、皮膚筋炎、線維筋痛、移植片対宿主病、グレーブス病、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少性紫斑病、扁平苔癬、多発性硬化症、重症筋無力症、乾癬、リウマチ熱、関節リウマチ、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、１型糖尿病、潰瘍性大腸炎、白斑等が挙げられる。
【００３２】
「新生物疾患」という用語は、本明細書で使用されるとき、良性（非癌性）または悪性（癌性）のいずれかである細胞の任意の異常な増殖を示す。
【００３３】
「正常細胞」という用語は、本明細書で使用されるとき、異常な増殖または分裂を行わない細胞を示す。正常細胞は、非癌性であり、任意の過剰増殖性疾患または障害の一部ではない。
【００３４】
「抗腫瘍薬」という用語は、本明細書で使用されるとき、標的とされる（例えば、悪性の）新生物の増殖、成長、または伝播を遅延させる任意の化合物を示す。
【００３５】
「予防する」「予防すること」および「予防」という用語は、本明細書で使用されるとき、動物における病理学的細胞（例えば、過剰増殖性細胞または新生細胞）の発生の減少を示す。予防は、例えば、被験体における病理学的細胞が完全に存在しない、完全な状態であってもよい。予防は、被験体における病理学的細胞の発生が、本発明がない場合に発生しうる状態よりも少ないような部分的な状態でもよい。
【００３６】
「アポトーシス調節剤」という用語は、本明細書で使用されるとき、アポトーシスを調節する（例えば、阻害、減少、増加、促進する）ことに関与する薬剤を示す。アポトーシス調節剤の例としては、Ｆａｓ／ＣＤ９５、ＴＲＡＭＰ、ＴＮＦ  ＲＩ、ＤＲ１、ＤＲ２、ＤＲ３、ＤＲ４、ＤＲ５、ＤＲ６、ＦＡＤＤ、およびＲＩＰ等の、これらに限定されない、デスドメインを含むタンパク質が挙げられる。他のアポトーシス調節剤の例としては、ＴＮＦα、Ｆａｓリガンド、Ｆａｓ／ＣＤ９５および他のＴＮＦファミリー受容体に対する抗体、ＴＲＡＩＬ（Ａｐｏ２リガンドまたはＡｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬとしても知られる）、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１またはＴＲＡＩＬ−Ｒ２に対する抗体、Ｂｃｌ−２、ｐ５３、ＢＡＸ、ＢＡＤ、Ａｋｔ、ＣＡＤ、ＰＩ３キナーゼ、ＰＰ１、およびカスパーゼタンパク質が挙げられるがこれらに限定されない。調節剤は、ＴＮＦファミリー受容体およびＴＮＦファミリーリガンドのアゴニストおよびアンタゴニストを広範に含む。アポトーシス調節剤は、可溶性または膜結合性（例えば、リガンドまたは受容体）であってもよい。アポトーシス調節剤は、ＴＮＦまたはＴＮＦ関連リガンド、特に、ＴＲＡＭＰリガンド、Ｆａｓ／ＣＤ９５リガンド、ＴＮＦＲ−１リガンドまたはＴＲＡＩＬ等のアポトーシスの誘導因子であるものを含む。
【００３７】
本発明の一側面では、ｐ５３とＭＤＭ２との間の相互作用の阻害剤は、下記式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグである：
0005399904.tif 000040
式中、
Ｘは、ＣＨ、Ｏ、Ｎ、またはＳであって、ＸがＯまたはＳである場合、Ｒ８は存在せず、
ＹはＯ、Ｓ、またはＮＲ’であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、独立してＨまたは置換されてもよいアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、複素環、ＣＯ２Ｒ’、ＯＣＯＲ’、ＣＯＮＲ’Ｒ’’、ＮＲ’’ＣＯＲ’、ＮＲ’ＳＯ２Ｒ’’、ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’、（Ｃ＝ＮＲ’）ＮＲ’’Ｒ’’’、もしくはＮＲ’Ｒ’’であり、または、
Ｒ７は、Ｒ５またはＲ６の１つとともにアリール、シクロアルキル、または複素環基を形成し、
Ｒ８は、Ｈまたは置換されてもよいアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、複素環、ＣＯ２Ｒ’、ＯＣＯＲ’、ＣＯＮＲ’Ｒ’’、ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’、もしくは（Ｃ＝ＮＲ’）ＮＲ’’Ｒ’’’であり、
Ｒ９は、６−クロロおよび５−フルオロ基を表し、かつ
各Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は、独立して、Ｈまたは置換されてもよいアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリールもしくは複素環であり、または、
Ｒ’およびＲ’’、またはＲ’’およびＲ’’’は、環を形成し、
式中、Ｒ３およびＲ４の１つは、ＣＯＮＲＲ’であり、ＲおよびＲ’の１つは、置換されてもよいシクロアルキル−アルキルもしくはモノシクロ−ヘテロシクロアルキル基、またはアルキル基の３位にヒドロキシル基を含まないジヒドロキシアルキルアミノ基である。
【００３８】
より特定の実施形態では、式ＩのＲ１およびＲ２の１つは、置換または非置換アリール（例えば、フェニル）、置換または非置換ヘテロアリール、シクロアルキル、直鎖または分岐鎖アルキル、アミドまたはエステルである。
【００３９】
別の実施形態では、Ｒ５およびＲ６の１つは、Ｃ３−Ｉ８アルキル基、例えば、プロピル、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、シクロペンチル、ノルボルニル、またはアダマンチル、または５員もしくは６員のアリールもしくはヘテロアリール基である。
【００４０】
別の実施形態では、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグは、式ＩＩまたは式ＩＩＩ:
0005399904.tif 000041
に示される立体化学構造を有する。
【００４１】
一実施形態では、式Ｉの化合物は、式ＩＶ:
0005399904.tif 000042
を有し、式中、Ｒ１〜Ｒ９およびＹは、上に定義した通りである。
【００４２】
別の実施形態では、式ＩＶの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグは、式Ｖまたは式ＶＩ:
0005399904.tif 000043
に示される立体化学構造を有する。
【００４３】
一実施形態では、式Ｉの化合物は、式ＶＩＩ:
0005399904.tif 000044
を有し、式中、Ｒ１〜Ｒ９は、上に定義した通りである。
【００４４】
別の実施形態では、式ＶＩＩの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグは、式ＶＩＩＩまたは式ＩＸ:
0005399904.tif 000045
に示される立体化学構造を有する。
【００４５】
一実施形態では、式Ｉの化合物は、式Ｘ:
0005399904.tif 000046
を有し、
式中、
Ｒ１、Ｒ５、Ｒ７およびＲ９は上に定義され、
Ｒ１０は、Ｈであり、
Ｒ１１は、置換されてもよいシクロアルキル−アルキルもしくはモノシクロ−ヘテロシクロアルキル基、またはアルキル基の３位にヒドロキシル基を含まないジヒドロキシアルキルアミノ基であり、
またはＲ１０およびＲ１１は、一緒になって、置換されてもよいモノシクロ−ヘテロシクロアルキル基を形成する。
【００４６】
置換シクロアルキル−アルキル基の例としては、１つまたは複数のヒドロキシル基によってさらに置換される、本明細書で以下に記載される、シクロアルキル基によって置換されるＣ１−６アルキルが挙げられる。ヘテロシクロアルキル基の例としては、本明細書で以下に記載されるモノシクロ−ヘテロシクロアルキル基によって置換されるＣ１−６アルキルが挙げられる。
【００４７】
シクロアルキル−アルキル基の特定例としては、２−（３−ヒドロキシシクロペンチル）エチルアミノ基、および３−（３−ヒドロキシシクロペンチル）プロピルアミノ基が挙げられる。それぞれのヒドロキシル基は、ＲまたはＳの配置のいずれかを有してもよい。
【００４８】
置換ヘテロシクロアルキル基の特定例としては、２−（ｌ−モルホリニル）エチルアミノ基および３−（ｌ−モルホリニル）プロピルアミノ基が挙げられる。
【００４９】
ジヒドロキシアルキルアミノ基の特定例としては、ＲおよびＳの４，５−ジヒドロキシペンチルアミノ基、および４−ヒドロキシ−３−（メチルヒドロキシ）ブチルアミノ基が挙げられる。
【００５０】
ヒドロキシル基がアルキル基の３位に存在しない場合、化合物は、その調製中に、改良された安定性を示すということが、予想される。任意の特定の理論に限定されることなく、改良された安定性は、アミドのアミノ基を置換する可能性のある求核３−ヒドロキシル基が存在しない、つまり環を含む６員のエステルを形成することによって生じる可能性がある。３−ヒドロキシ基を含まないジヒドロキシアルキル基は、かかる反応に関与せず、より安定になり、より高い収率で作製出来るということが考えられる。
【００５１】
さらなる実施形態では、式Ｉの化合物は、式ＸＩ〜ＸＸＶＩ：
0005399904.tif 000047
の１つを有し、
式中、Ｒ１、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、上に定義される通りである。
【００５２】
別の実施形態では、式Ｉの化合物は、式ＸＸＶＩＩおよびＸＸＶＩＩＩ：
0005399904.tif 000048
の１つを有し、
式中、Ｒ１、Ｒ５、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１０、およびＲ１１は、上に定義される通りである。
【００５３】
別の実施形態では、式Ｉの化合物は、式ＸＬＶＩＩＩ：
0005399904.tif 000049
を有し、
式中、
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ９は、上に定義される通りである。
【００５４】
さらなる実施形態では、式Ｉの化合物は、式ＸＬＩＸ〜ＬＸＩＶ：
0005399904.tif 000050
の１つを有し、
式中、
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ９は、上に定義される通りである。
【００５５】
さらなる実施形態では、式Ｉの化合物は、式ＬＸＶ：
0005399904.tif 000051
を有し、
式中、
Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、Ｒ１０、およびＲ１１は、上に定義される通りである。
【００５６】
さらなる実施形態では、式Ｉの化合物は、式ＬＸＶＩおよびＬＸＶＩＩ：
0005399904.tif 000052
の１つを有し、
式中、
Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、Ｒ１０、およびＲ１１は、上に定義される通りである。
【００５７】
本発明の特定の実施形態としては、以下の化合物：
0005399904.tif 000053
0005399904.tif 000054
0005399904.tif 000055
0005399904.tif 000056
0005399904.tif 000057
0005399904.tif 000058
0005399904.tif 000059
0005399904.tif 000060
0005399904.tif 000061
0005399904.tif 000062
0005399904.tif 000063
0005399904.tif 000064
0005399904.tif 000065
0005399904.tif 000066
0005399904.tif 000067
0005399904.tif 000068
のいずれか１つが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５８】
本発明の別の特定の実施形態としては、以下の化合物：
0005399904.tif 000069
0005399904.tif 000070
0005399904.tif 000071
0005399904.tif 000072
0005399904.tif 000073
のいずれか１つが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５９】
有用なアルキル基は、直鎖または分岐鎖のＣ１−１８アルキル基、とりわけメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、３−ペンチル、アダマンチル、ノルボルニル、および３−ヘキシル基を含む。
【００６０】
有用なアルケニル基は、直鎖または分岐鎖のＣ２−１８アルキル基、とりわけエテニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、およびヘキセニルを含む。
【００６１】
有用なアルキニル基は、Ｃ２−１８アルキニル基、とりわけエチニル、プロピニル、ブチニル、および２−ブチニル基である。
【００６２】
有用なシクロアルキル基は、Ｃ３−８シクロアルキルである。典型的なシクロアルキル基は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルを含む。
【００６３】
有用なアリール基は、Ｃ６−１４アリール、とりわけフェニル、ナフチル、フェナントレニル、アントラセニル、インデニル、アズレニル、ビフェニル、ビフェニレニル、およびフルオレニル基を含む。
【００６４】
有用なヘテロアリール基は、チエニル、ベンゾ［ｂ］チエニル、ナフト［２，３−ｂ］チエニル、チアントレニル、フリル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサンテニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリル、インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、イソキノリル、キノリル、フタルジニル、ナフチリジニル、キノザリニル、シンノリニル、プテリジニル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナンスリジニル、アクリジニル、ペリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、イソチアゾリル、フェノチアジニル、イソオキサゾリル、フラザニル、フェノキサジニル、１，４−ジヒドロキノキサリン−２，３−ジオン、７−アミノイソクマリン、ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、１，２−ベンゾイソオキサゾール−３−イル、ベンズイミダゾリル、２−オキシインドリル、および２−オキソベンズイミダゾリルを含む。ヘテロアリール基が環に窒素原子を含む場合、かかる窒素原子は、Ｎ−オキシド、例えば、ピリジルＮ−オキシド、ピラジニルＮ−オキシド、ピリミジニルＮ−オキシド等の形態であってもよい。
【００６５】
有用な複素環基は、テトラヒドロフラニル、ピラニル、ピペリジニル（ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｙｌ）、ピペリジニル（ｐｉｐｅｒｉｚｉｎｙｌ）、ピロリジニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、モルホリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル等の単環式複素環基を含む。多環式複素環基は、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、クロマニル、イソクロマニル、テトロノイル、テトラヒドロイソキノリニル基と、さらに、例えば、置換されてもよい５，６−ジヒドロ−８Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−Ａ］ピラジニル基等のヘテロアリール環で融合される複素環基を含む。
【００６６】
任意の置換基は、１つもしくは複数のアルキル；ハロ；ハロアルキル；シクロアルキル；１つもしくは複数の低級アルキル、低級アルコキシ、メチレンジオシキ、ハロ、ハロアルキル、アミノスルホニル、アリール、またはヘテロアリール基で置換されてもよいアリール；１つもしくは複数の低級アルキル、低級アルコキシ、メチレンジオシキ、ハロ、ハロアルキル、アミノスルホニル、アリール、またはヘテロアリール基で置換されてもよいアリールオキシ；アラルキル；１つもしくは複数の低級アルキル、低級アルコキシ、メチレンジオシキ、ハロ、ハロアルキル、アミノスルホニル、アリール、またはヘテロアリール基で置換されてもよいヘテロアリール；１つもしくは複数の低級アルキル、低級アルコキシ、メチレンジオシキ、ハロ、ハロアルキル、アミノスルホニル、アリール、またはヘテロアリール基で置換されてもよいヘテロアリールオキシ；アルコキシ；アルキルチオ；アリールチオ；アミド；アミノ；アミノアルキル、アルキルアミノ、アシルオキシ；１つもしくは複数の低級アルキル、低級アルコキシ、メチレンジオシキ、ハロ、ハロアルキル、アミノスルホニル、アリール、またはヘテロアリール基で置換されてもよいアリールアシルオキシ；１つもしくは複数の低級アルキル、低級アルコキシ、メチレンジオシキ、ハロ、ハロアルキル、アミノスルホニル、アリール、またはヘテロアリール基で置換されてもよいジフェニルフォスフィニルオキシ；１つもしくは複数の低級アルキル、低級アルコキシ、メチレンジオシキ、ハロ、ハロアルキル、アミノスルホニル、アリール、ヘテロアリール、アミノ酸置換スルホニル、またはアミノ酸誘導体置換スルホニル基で置換されてもよいヘテロシクロ；１つもしくは複数の低級アルキル、低級アルコキシ、メチレンジオシキ、ハロ、ハロアルキル、アミノスルホニル、アリール、またはヘテロアリール基で置換されてもよいヘテロシクロアシル；１つもしくは複数の低級アルキル、低級アルコキシ、メチレンジオシキ、ハロ、ハロアルキル、アミノスルホニル、アリール、またはヘテロアリール基で置換されてもよいヘテロシクロアルコキシ；１つもしくは複数の低級アルキル、低級アルコキシ、メチレンジオシキ、ハロ、ハロアルキル、アミノスルホニル、アリール、またはヘテロアリール基で置換されてもよい部分的に不飽和のヘテロシクロアルキル；または１つもしくは複数の低級アルキル、低級アルコキシ、メチレンジオシキ、ハロ、ハロアルキル、アミノスルホニル、アリール、またはヘテロアリール基で置換されてもよい部分的に不飽和のヘテロシクロアルキルオキシを含む。
【００６７】
本発明のある化合物は、光学異性体を含む立体異性体として存在してもよい。本発明は、純粋な個々の立体異性体調製物と各々の濃縮調製物の両方、および、かかる立体異性体のラセミ混合物と当業者に周知の方法に従って分離され得る個々のエナンチオマーの両方のすべての立体異性体を含む。
【００６８】
本発明の化合物およびプロセスは、本発明の化合物を調製することの出来る方法を例証する以下の合成スキームと結び付けるとより良好に理解されるであろう。出発物質は、商業的供給源から得るか、または当業者に周知の十分に確立されている文献の方法によって調製することができる。上に定義される化合物が、以下に示される合成における適切な試薬および薬剤の置換によって合成され得るということは、当業者によって、容易に理解されるであろう。
【００６９】
式Ｘの一般構造を有する化合物は、主要段階として、不斉１，３−双極性環化付加を使用することによって合成される（スキーム１）。
スキーム１
0005399904.tif 000074
【００７０】
試薬および条件：ａ）ＣＨ２Ｃｌ２−ＣＨ３ＣＮ、ＫＦ−Ａｌ２Ｏ３、マイクロ波、またはメタノール、ピペリジン還流；ｂ）４Åモレキュラーシーブ、トルエン、７０℃；ｃ）アミン、室温；ｄ）Ｐｂ（ＯＡｃ）４、ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ（１：１）、０℃、またはアンモニウムセリウム（ＩＶ）硝酸塩（ＣＡＮ）、ＣＨ３ＣＮ、Ｋ２ＣＯ３、室温。
【００７１】
式ＬＸＶを有する化合物は、式Ｘの調製と同様の方法（スキーム５）によって調製される。
スキーム５
0005399904.tif 000075
【００７２】
試薬および条件：ａ）ＣＨ２Ｃｌ２−ＣＨ３ＣＮ、ＫＦ−Ａｌ２Ｏ３、マイクロ波、またはメタノール、ピペリジン還流；ｂ）４Åモレキュラーシーブ、トルエン、７０℃；ｃ）アミン、室温；ｄ）Ｐｂ（ＯＡｃ）４、ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ（１：１）、０℃、またはアンモニウムセリウム（ＩＶ）硝酸塩（ＣＡＮ）、ＣＨ３ＣＮ、Ｋ２ＣＯ３、室温。
【００７３】
本発明の一側面は、ＭＤＭ２阻害剤化合物を調製する方法に関する。一実施形態では、本発明は、式Ｘを有する化合物を調製する方法に関し、本方法は、
ａ）式１の化合物を式２の化合物と、例えば、溶媒または溶媒の混合物（例えば、ＣＨ２Ｃｌ２およびＣＨ３ＣＮ）中で、触媒（例えば、ＫＦ−Ａｌ２Ｏ３）の存在下または適した溶媒中の塩基の存在下でマイクロ波で、式３の化合物を形成するために、縮合させるステップと、
0005399904.tif 000076
ｂ）式３の化合物を式４の化合物および式５の化合物と、例えば、非極性溶媒（例えば、トルエン）中で、脱水剤（例えば、４Åモレキュラーシーブ）の存在下で、上昇温度（例えば、約７０℃）で、式６の化合物を形成するために、縮合するステップと、
0005399904.tif 000077
ｃ）式６の化合物を、酸化剤（例えば、Ｐｂ（ＯＡｃ）４、硝酸アンモニウムセリウム）でに、溶媒または溶媒の混合物（例えば、ＣＨ２Ｃｌ２およびＭｅＯＨ、ＣＨ３ＣＮ）中で、適した温度（例えば、約０℃または室温）で、式Ｘ：
0005399904.tif 000078
の化合物を形成するために、処理するステップと
を含む。
【００７４】
別の実施形態では、本発明は、式ＬＸＶを有する化合物を調製する方法に関し、本方法は、
ａ）式１６の化合物を、式２の化合物と、例えば、溶媒または溶媒の混合物（例えば、ＣＨ２Ｃｌ２およびＣＨ３ＣＮ）中で、触媒（例えば、ＫＦ−Ａｌ２Ｏ３）の存在下でまたは適した溶媒中の塩基の存在下で、マイクロ波で、式１７の化合物を形成するために、縮合するステップと、
0005399904.tif 000079
ｂ）式１７の化合物を式４の化合物および式５の化合物と、例えば、非極性溶媒（例えば、トルエン）中で、脱水剤（例えば、４Åモレキュラーシーブ）の存在下で、上昇温度（例えば、約７０℃）で、式１８の化合物を形成するために、縮合するステップと、
0005399904.tif 000080
ｃ）式１８の化合物を酸化剤（例えば、Ｐｂ（ＯＡｃ）４、硝酸アンモニウムセリウム）で、溶媒または溶媒の混合物（例えば、ＣＨ２Ｃｌ２およびＭｅＯＨ、ＣＨ３ＣＮ）中で、適した温度（例えば、約０℃または室温）で、式ＬＸＶ：
0005399904.tif 000081
の化合物を形成するために、処理するステップと
を含み、
式中、Ｒ１、Ｒ５、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、上に定義される通りである。
【００７５】
本発明の一つの重要な側面は、式Ｉの化合物は、細胞周期停止および／またはアポトーシスを誘導し、さらに、単独でまたは追加のアポトーシス誘導シグナルに反応してのいずれかで、細胞周期停止および／またはアポトーシスの誘導を強化することである。それゆえに、これらの化合物は、細胞周期停止および／またはアポトーシスの誘導に対して、かかる誘導刺激に耐性がある細胞を含む細胞を感作することが想定される。本発明の、ｐ５３またはｐ５３関連タンパク質とＭＤＭ２またはＭＤＭ２関連タンパク質との間の相互作用の阻害剤は、アポトーシスの誘導によって治療、改善、または予防され得る任意の障害において、アポトーシスを誘導するために使用することが出来る。一実施形態では、阻害剤は、機能的ｐ５３またはｐ５３関連タンパク質を含む細胞においてアポトーシスを誘導するために使用することが出来る。
【００７６】
別の実施形態では、本発明は、１つまたは複数のアポトーシス調節剤と結合するアポトーシス結合状態を調整することに関係する。アポトーシス調節剤の例としては、Ｆａｓ／ＣＤ９５、ＴＲＡＭＰ、ＴＮＦ  ＲＩ、ＤＲ１、ＤＲ２、ＤＲ３、ＤＲ４、ＤＲ５、ＤＲ６、ＦＡＤＤ、ＲＩＰ、ＴＮＦα、Ｆａｓリガンド、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１またはＴＲＡＩＬ−Ｒ２に対する抗体、Ｂｃｌ−２、ｐ５３、ＢＡＸ、ＢＡＤ、Ａｋｔ、ＣＡＤ、ＰＩ３キナーゼ、ＰＰ１、およびカスパーゼタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。アポトーシスの開始、決定、および分解相に関与する他の薬剤もまた含まれる。アポトーシス調節剤の例としては、その活性、存在、または濃度の変化により、被験体におけるアポトーシスを調節することの出来る薬剤が挙げられる。アポトーシス調節剤は、ＴＮＦまたはＴＮＦ関連リガンド、特にＴＲＡＭＰリガンド、Ｆａｓ／ＣＤ９５リガンド、ＴＮＦＲ−１リガンド、またはＴＲＡＩＬ等、アポトーシスの誘導因子であるものを含む。
【００７７】
ある実施形態では、本発明の組成物および方法は、動物（例えば、ヒトおよび獣医学的動物を含むがこれらに限定されない、哺乳動物被験体）における疾患を有する細胞、組織、器官、または病理学的状態および／または疾患状態を治療するために使用される。これに関して、種々の疾患および病理は、本発明の方法および組成物を使用する治療または予防に適用出来る。これらの疾患および状態の非限定的な例のリストとしては、乳癌、前立腺癌、リンパ腫、皮膚癌、膵臓癌、結腸癌、メラノーマ、悪性メラノーマ、卵巣癌、脳腫瘍、原発性脳腫瘍、頭頸部癌、神経膠腫、膠芽細胞腫、肝臓癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌腫、乳房癌腫、卵巣癌腫、肺癌腫、小細胞肺癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌腫、精巣癌腫、膀胱癌腫、膵臓癌腫、胃癌腫、結腸癌腫、前立腺癌腫、泌尿生殖器癌腫、甲状腺癌腫、食道癌腫、骨髄腫、多発性骨髄腫、副腎癌腫、腎細胞癌腫、子宮内膜癌腫、副腎皮質癌腫、悪性膵島細胞腫、悪性カルチノイド癌腫、絨毛癌、菌状息肉腫、悪性高カルシウム血症、頸部過形成、白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性顆粒球性白血病、ヘアリー細胞白血病、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、カポジ肉腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、軟部組織肉腫、骨肉腫、原発性マクログロブリン血症、および網膜芽細胞腫等、ＴおよびＢ細胞媒介性自己免疫疾患、炎症性疾患、感染、過剰増殖性疾患、ＡＩＤＳ、変性状態、血管疾患等が挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態では、治療される癌細胞は、転移性である。他の実施形態では、治療される癌細胞は、抗癌剤に対して耐性を有する。
【００７８】
ある実施形態では、本発明の組成物および方法での治療に適した感染は、ウイルス、細菌、真菌、マイコプラズマ、プリオン等によって引き起こされる感染を含むが、これらに限定されない。
【００７９】
本発明のある実施形態は、有効量の式Ｉの化合物および少なくとも１つの追加の治療剤（化学療法な抗腫瘍薬、アポトーシス調節剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および抗炎症剤を含むが、これらに限定されない）を投与する方法、および／または治療技術（例えば、外科的介入および／または放射線療法）を提供する。
【００８０】
多数の適した抗癌剤が、本発明の方法における使用のために想定される。実際、本発明は、アポトーシスを誘導する薬剤、ポリヌクレオチド（例えば、アンチセンス、リボザイム、ｓｉＲＮＡ）、ポリペプチド（例えば、酵素および抗体）、生物学的模倣剤（例えば、ゴシポールまたはＢＨ３模倣剤）、Ｂａｘ等Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質と結合（例えば、オリゴマー形成または複合体形成）する薬剤、アルカロイド、アルキル化剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗物質、ホルモン、プラチナ化合物、モノクローナルまたはポリクローナル抗体（例えば、抗癌薬物、毒素、デフェンシンと結合体化された抗体）、毒素、放射性核種、生物学的反応修飾物質（例えば、インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−α）およびインターロイキン（例えば、ＩＬ−２））、養子免疫療法薬剤、造血成長因子、腫瘍細胞分化を誘導する薬剤（例えば、オールトランス型レチノイン酸）、遺伝子治療試薬（例えば、アンチセンス療法試薬およびヌクレオチド）、腫瘍ワクチン、血管形成阻害剤、プロテオソーム阻害剤、ＮＦ−ＫＢ調節因子、抗ＣＤＫ化合物、ＨＤＡＣ阻害剤等、多数の抗癌剤の投与を想定するが、これらに限定されない。開示される化合物と併用投与するのに適した化学療法化合物および抗癌療法の多数の他の例は、当業者に公知である。
【００８１】
ある実施形態では、抗癌剤は、アポトーシスを誘導または刺激する薬剤を含む。アポトーシスを誘導する薬剤は、放射線（例えば、Ｘ線、ガンマ線、ＵＶ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）関連因子（例えば、ＴＮＦファミリー受容体タンパク質、ＴＮＦファミリーリガンド、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１またはＴＲＡＩＬ−Ｒ２に対する抗体）、キナーゼ阻害剤（例えば、上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）キナーゼ阻害剤、血管増殖因子受容体（ＶＧＦＲ）キナーゼ阻害剤、線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）キナーゼ阻害剤、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）キナーゼ阻害剤、およびＢｃｒ−Ａｂｌキナーゼ阻害剤（ＧＬＥＥＶＥＣ等））、アンチセンス分子、抗体（例えば、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ、ＲＩＴＵＸＡＮ、ＺＥＶＡＬＩＮ、およびＡＶＡＳＴＩＮ）、抗エストロゲン（例えば、ラロキシフェンおよびタモキシフェン）、抗アンドロゲン（例えば、フルタミド、ビカルタミド、フィナステリド、アミノグルテタミド、ケトコナゾールおよびコルチコステロイド）、シクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ−２）阻害剤（例えば、セレコキシブ、メロキシカム、ＮＳ−３９８、および非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ））、抗炎症薬（例えば、ブタゾリジン、ＤＥＣＡＤＲＯＮ、ＤＥＬＴＡＳＯＮＥ、デキサメサゾン、デキサメサゾンインテンソール、ＤＥＸＯＮＥ、ＨＥＸＡＤＲＯＬ、ヒドロキシクロロキン、ＭＥＴＩＣＯＲＴＥＮ、ＯＲＡＤＥＸＯＮ、ＯＲＡＳＯＮＥ、オキシフェンブタゾン、ＰＥＤＩＡＰＲＥＤ、フェニルブタゾン、ＰＬＡＱＵＥＮＩＬ、プレドニゾロン、プレドニゾン、ＰＲＥＬＯＮＥ、およびＴＡＮＤＥＡＲＩＬ）、および癌化学治療薬（例えば、イリノテカン（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ）、ＣＰＴ−１１、フルダラビン（ＦＬＵＤＡＲＡ）、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、デキサメサゾン、ミトキサントロン、ＭＹＬＯＴＡＲＧ、ＶＰ−１６、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、５−ＦＵ、ドキソルビシン、ゲムシタビン、ボルテゾミブ、ゲフィチニブ、ベバシズマブ、ＴＡＸＯＴＥＲＥまたはＴＡＸＯＬ）、細胞内シグナル伝達分子、セラミドおよびサイトカイン、スタウロスポリン等を含むが、これらに限定されない。
【００８２】
さらに他の実施形態では、本発明の組成物および方法は、式Ｉの化合物、ならびにアルキル化剤、代謝拮抗物質、および天然物（例えば、ハーブおよび他の植物および／または動物由来の化合物）から選択される少なくとも１つの抗過剰増殖性または抗腫瘍性の薬剤を提供する。
【００８３】
本発明の組成物および方法での使用に適したアルキル化剤は、１）ナイトロジェンマスタード（例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン（Ｌ−サルコリシン）、およびクロラムブシル）、２）エチレンイミンおよびメチルメラミン（例えば、ヘキサメチルメラミンおよびチオテパ）、３）スルホン酸アルキル（例えば、ブスルファン）、４）ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（メチルＣＣＮＵ）、およびストレプトゾシン（ストレプトゾトシン））、および５）トリアゼン（例えば、ダカルバジン（ＤＴＩＣ；ジメチルトリアゼノイミド−アゾレカルボキサミド）を含むが、これらに限定されない。
【００８４】
ある実施形態では、本発明の組成物および方法での使用に適した代謝拮抗物質は、１）葉酸類似体（例えば、メトトレキサート（アメトプテリン））、２）ピリミジン類似体（例えば、フルオロウラシル（５−フルオロウラシル；５−ＦＵ）、フロクスウリジン（フルオロデオキシウリジン；ＦｕｄＲ）、およびシタラビン（シトシンアラビノシド））、および３）プリン類似体（例えば、メルカプトプリン（６−メルカプトプリン；６−ＭＰ）、チオグアニン（６−チオグアニン；ＴＧ）、およびペントスタチン（２’−デオキシコフォルマイシン））を含むが、これらに限定されない。
【００８５】
またさらなる実施形態では、本発明の組成物および方法での使用に適した化学療法剤は、１）ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン（ＶＬＢ）、ビンクリスチン）、２）エピポドフィロトキシン（例えば、エトポシドおよびテニポシド）、３）抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン（ダウノマイシン、ルビドマイシン）、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、およびマイトマイシン（マイトマイシンＣ））、４）酵素（例えば、Ｌ−アスパラギナーゼ）、５）生物学的反応修飾物質（例えば、インターフェロン−アルファ）、６）プラチナ配位錯体（例えば、シスプラチン（ｃｉｓ−ＤＤＰ）およびカルボプラチン）、７）アントラセネジオン（例えば、ミトキサントロン）、８）置換尿素（例えば、ヒドロキシ尿素）、９）メチルヒドラジン誘導体（例えば、プロカルバジン（Ｎ−メチルヒドラジン；ＭＩＨ））、１０）副腎皮質抑制剤（例えば、ミトタン（ｏ，ｐ’−ＤＤＤ）およびアミノグルテチミド）、１１）副腎皮質ステロイド（例えば、プレドニゾン）、１２）プロゲスチン（例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、および酢酸メゲストロール）、１３）エストロゲン（例えば、ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオール）、１４）抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン）、１５）アンドロゲン（例えば、プロピオン酸テストステロンおよびフルオキシメステロン）、１６）抗アンドロゲン（例えば、フルタミド）、および１７）ゴナドトロピン放出ホルモン類似体（例えば、ロイプロリド）を含むが、これらに限定されない。
【００８６】
癌療法の状況において日常的に使用される任意の腫瘍崩壊性薬剤が、本発明の組成物および方法における使用を見出す。例えば、米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）は、米国における使用のために認可された腫瘍崩壊性薬剤の処方を維持する。米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆ．Ｄ．Ａ．）に対応する国際的な機関が同様の処方を維持する。表１は、米国における使用のために認可された例示的な抗腫瘍薬のリストを提供する。当業者は、すべての米国で許可された化学療法薬に対して必要とされる「製品ラベル」が、例示的な薬剤に対し、認可された適応症、投薬情報、毒性データ等を記載するということを認識するであろう。
【００８７】
【表１】
0005399904.tif 000082
0005399904.tif 000083
0005399904.tif 000084
0005399904.tif 000085
0005399904.tif 000086
0005399904.tif 000087
0005399904.tif 000088
【００８８】
抗癌剤は、抗癌活性を有することが同定されているが、米国食品医薬品局もしくは他の対応する機関によって現在認可されていないか、または新規用途のための評価を受けている化合物をさらに含む。例としては、３−ＡＰ、１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート、１７ＡＡＧ、８５２Ａ、ＡＢＩ−００７、ＡＢＲ−２１７６２０、ＡＢＴ−７５１、ＡＤＩ−ＰＥＧ２０、ＡＥ−９４１、ＡＧ−０１３７３６、ＡＧＲＯ１００、アラノシン、ＡＭＧ７０６、抗体Ｇ２５０、アンチネオプラストン、ＡＰ２３５７３、アパジキオン（apaziquone）、ＡＰＣ８０１５、アチプリモッド、ＡＴＮ−１６１、アトラセンテン、アザシチジン、ＢＢ−１０９０１、ＢＣＸ−１７７７、ベバシズマブ、ＢＧ００００１、ビカルタミド、ＢＭＳ２４７５５０、ボルテゾミブ、ブリオスタチン−１、ブセレリン、カルシトリオール、ＣＣＩ−７７９、ＣＤＢ−２９１４、セフィキシム、セツキシマブ、ＣＧ００７０、シレンジチド、クロファラビン、コンブレタスタチンＡ４ホスフェート、ＣＰ−６７５，２０６、ＣＰ−７２４，７１４、ＣｐＧ７９０９、クルクミン、デシタビン、ＤＥＮＳＰＭ、ドキセルカルシフェロール、Ｅ７０７０、Ｅ７３８９、エクテイナシジン７４３、エファプロキシラール、エフロニチン、ＥＫＢ−５６９、エンザスタウリン、エーロチニブ、エキシスリンド、フェンレチニド、フラボピリドール、フルダラビン、フルタミド、フォテムスチン、ＦＲ９０１２２８、Ｇ１７ＤＴ、ガリキシマブ、ゲフィチニブ、ゲニステイン、グルフォスファミド、ＧＴＩ−２０４０、ヒストレリン、ＨＫＩ−２７２、ホモハリングトニン、ＨＳＰＰＣ−９６、ｈｕｌ４．１８−インターロイキン−２融合タンパク質、ＨｕＭａｘ−ＣＤ４、イロプロスト、イミキモド、インフリキシマブ、インターロイキン−１２、ＩＰＩ−５０４、イロフルベン、イキサベピロン、ラパチニブ、レナリドミド、レスタウルチニブ、ロイプロリド、ＬＭＢ−９イムノトキシン、ロナファルニブ、ルニリキシマブ、マフォスファミド、ＭＢ０７１３３、ＭＤＸ−０１０、ＭＬＮ２７０４、モノクローナル抗体３Ｆ８、モノクローナル抗体Ｊ５９１、モテキサフィン、ＭＳ−２７５、ＭＶＡ−ＭＵＣｌ−ＩＬ２、ニルタミド、ニトロカンプトテシン、ノラトレキセド二塩酸塩、ノルバデックス、ＮＳ−９、Ｏ６−ベンジルグアニン、オブリメルセンナトリウム、ＯＮＹＸ−０１５、オレゴボマブ、ＯＳＩ−７７４、パニツムマブ、パラプラチン、ＰＤ−０３２５９０１、ペメトレキセド、ＰＨＹ９０６、ピオグリタゾン、ピルフェニドン、ピキサントロン、ＰＳ−３４１、ＰＳＣ８３３、ＰＸＤ１０１、ピラゾロアクリジン、Ｒ１１５７７７、ＲＡＤ００１、ランピルナーゼ、レベッカマイシン類似体、ｒｈｕアンジオスタチンタンパク質、ｒｈｕＭａｂ２Ｃ４、ロシグリタゾン、ルビテカン、Ｓ−１、Ｓ−８１８４、サトラプラチン、ＳＢ−，１５９９２、ＳＧＮ−００１０、ＳＧＮ−４０、ソラフェニブ、ＳＲ３１７４７Ａ、ＳＴ１５７１、ＳＵ０１１２４８、スベロイルアニリドヒデロキサム酸、スラミン、タラボスタット、タラムパネル、タリクイダール、テムシロリムス、ＴＧＦａ−ＰＥ３８イムノトキシン、サリドマイド、タ��マルファシン、チピファニブ、チラパザミン、ＴＬＫ２８６、トラベクテジン、グルクロン酸トリメトレキサート、ＴｒｏＶａｘ、ＵＣＮ−Ｉ、バルプロ酸、ビンフルニン、ＶＮＰ４０１０１Ｍ、ボロシキシマブ、ボリノスタット、ＶＸ−６８０、ＺＤ１８３９、ＺＤ６４７４、ジロイトンおよびゾスクイダール三塩酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８９】
抗癌剤および他の治療剤のより詳細な説明のために、当業者は、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  ＲｅｆｅｒｅｎｃｅおよびＧｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎの「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」ｔｅｎｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄｓ．Ｈａｒｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２を含むが、これらに限定されない多数のマニュアルを参照する。
【００９０】
本発明は、放射線療法とともに式Ｉの化合物を投与する方法を提供する。本発明は、動物への放射線の治療線量を照射するために使用される、種類、量、または照射および投与の系によって制限されない。例えば、動物は、光子放射線療法、粒子ビーム放射線療法、他の種類の放射線療法、およびこれらの組み合わせを受けることが可能である。ある実施形態では、放射線は、線形加速器を使用して動物に照射される。さらに他の実施形態では、放射線は、ガンマナイフを使用して、照射される。
【００９１】
放射線源は、動物に対して外部または内部であってもよい。外部放射線療法は、最も一般的であり、例えば、線形加速器を使用して皮膚を通して腫瘍部位に、高エネルギーな放射線のビームを向けることを含む。放射線のビームが腫瘍部位に集中する一方で、正常な健康組織への曝露を回避することはほぼ不可能である。しかしながら、外部放射線は、通常、動物によって十分に許容される。内部放射線療法は、腫瘍部位で、またはその近位で、身体の内部にビーズ、ワイヤ、ペレット、カプセル、粒子等の放射線放出源を移植することを含み、これは癌細胞を特異的に標的にする照射系の使用を含む（例えば、癌細胞結合リガンドに付着された粒子を使用する）。かかる移植は、治療後に除去することが出来、または身体中に不活性状態で放置することが出来る。内部放射線療法の種類は、近接照射療法、組織内照射、腔内照射、放射免疫療法等を含むが、これらに限定されない。
【００９２】
動物は、任意で、放射線増感剤（例えば、メトロニダゾール、ミソニダゾール、動脈内Ｂｕｄｒ、静脈内ヨードデオキシウリジン（ＩｕｄＲ）、ニトロイミダゾール、５−置換−４−ニトロイミダゾール、２Ｈ−イソインドレジオン、［［（２−ブロモエチル）−アミノ］メチル］−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−エタノール、ニトロアニリン誘導体、ＤＮＡ−アフィニック低酸素症選択的細胞毒、ハロゲン化ＤＮＡリガンド、１，２，４ベンゾトリアジンオキシド、２−ニトロイミダゾール誘導体、フッ素含有ニトロアゾール誘導体、ベンズアミド、ニコチンアミド、アクリジン−インターカレーター、５−チオトレトラゾール誘導体、３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール、４，５−ジニトロイミダゾール誘導体、ヒドロキシル化テキサフィリン、シスプラチン、マイトマイシン、チリパザミン、ニトロソ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサート、フルオロウラシル、ブレオマイシン、ビンクリスチン、カルボプラチン、エピルビシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンデシン、エトポシド、パクリタキセル、熱（温熱療法）等）、放射線防御剤（例えば、システアミン、アミノアルキル二水素ホスホロチオエート、アミフォスチン（ＷＲ２７２１）、ＩＬ−１、ＩＬ−６等）を受けることが可能である。放射線増感剤は、腫瘍細胞の殺傷を増強する。放射線防御剤は、健康な組織を放射線の有害な影響から保護する。
【００９３】
放射線の線量が、許容されない負の副作用なく、動物によって許容される限り、任意の種類の放射線を、動物に投与することが出来る。適した種類の放射線療法は、例えば、電離（電磁）放射線療法（例えば、Ｘ線またはガンマ線）または粒子ビーム放射線療法（例えば、線形高エネルギー放射線）を含む。電離放射線は、電離、すなわち、電子の獲得または損失を産生するのに十分なエネルギーを有する粒子または光子を含む放射線として定義される（例えば、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第５，７７０，５８１号に記載されるように）。放射線の効果は、臨床医によって、少なくとも部分的に制御することが出来る。一実施形態では、放射線の線量は、最大の標的細胞曝露および毒性の減少のために分割される。
【００９４】
一実施形態では、動物に投与される放射線の全体の線量は、約０．０１グレイ（Ｇｙ）〜約１００Ｇｙである。別の実施形態では、約１０Ｇｙ〜約６５Ｇｙ（例えば、約１５Ｇｙ、２０Ｇｙ、２５Ｇｙ、３０Ｇｙ、３５Ｇｙ、４０Ｇｙ、４５Ｇｙ、５０Ｇｙ、５５Ｇｙ、または６０Ｇｙ）が治療中に投与される。ある実施形態では、放射線の全線量は、１日の間に投与され得るが、全体の線量は、理想的には、数日間に分割されて投与される。望ましくは、放射線療法は、少なくとも約３日間、例えば、少なくとも５、７、１０、１４、１７、２１、２５、２８、３２、３５、３８、４２、４６、５２、または５６日間（約１〜８週間）の間に投与される。従って、放射線の１日の線量は、およそ１〜５Ｇｙ（例えば、約１Ｇｙ、１．５Ｇｙ、１．８Ｇｙ、２Ｇｙ、２．５Ｇｙ、２．８Ｇｙ、３Ｇｙ、３．２Ｇｙ、３．５Ｇｙ、３．８Ｇｙ、４Ｇｙ、４．２Ｇｙ、または４．５Ｇｙ）、または１〜２Ｇｙ（例えば、１．５〜２Ｇｙ）を含むであろう。放射線の１日の線量は、標的とされた細胞の破壊を誘導するのに十分である。一定期間に渡って引き伸ばされた場合、一実施形態では、放射線は、毎日投与されず、それにより、動物が休養することが可能になり、療法の効果が実現する。例えば、放射線は、望ましくは、治療の各週に対して５日間連続で投与され、２日間投与されず、それにより、１週間につき２日間の休養を可能にする。しかしながら、放射線は、動物の反応性および任意の潜在的な副作用に応じて、１日／週、２日／週、３日／週、４日／週、５日／週、６日／週、または７日すべて／週、投与され得る。放射線療法は、療法期間の任意の時点で開始され得る。一実施形態では、放射線は、１週目または２週目に開始され、療法期間の残りの期間に投与され得る。例えば、放射線は、例えば、固形腫瘍を治療するための６週間を含む療法期間のうち１〜６週目または２〜６週目に投与される。または、放射線は、５週間を含む療法期間のうち１〜５週目または２〜５週目に投与される。しかし、これらの例示的な放射線療法投与スケジュールは、本発明を限定することを意図しない。
【００９５】
抗微生物治療剤もまた、本発明において治療剤として使用することが可能である。微生物の機能を破壊し、阻害し、または他の方法で弱める任意の薬剤、さらに、かかる活性を有すると考えられる任意の薬剤を使用することが可能である。抗菌性薬剤は、単独でまたは組み合わせて使用される、天然および合成抗生物質、抗体、阻害タンパク質（例えば、デフェンシン）、アンチセンス核酸、膜破壊剤等を含むが、これらに限定されない。実際に、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤等を含むが、これらに限定されない任意の種類の抗生剤を使用してもよい。
【００９６】
本発明のある実施形態では、式Ｉの化合物および１つまたは複数の治療剤または抗癌剤が、異なる周期で、異なる期間で、異なる濃度で、異なる投与経路によって等の１つまたは複数の条件下で、動物に投与される。ある実施形態では、化合物は、治療剤または抗癌剤の前、例えば、治療剤または抗癌剤の投与の、０．５、１、２、３、４、５、１０、１２、もしくは１８時間前、１、２、３、４、５、もしくは６日前、または１、２、３、もしくは４週間前に投与される。ある実施形態では、化合物は、治療剤または抗癌剤の後、例えば、抗癌剤の投与の、０．５、１、２、３、４、５、１０、１２、もしくは１８時間後、１、２、３、４、５、もしくは６日間後、または１、２、３、もしくは４週間後に投与される。ある実施形態では、化合物および治療剤または抗癌剤は、同時であるが異なるスケジュールで投与され、例えば、化合物は毎日投与される一方で、治療剤または抗癌剤は、１週間毎に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、または４週間毎に１回で投与される。他の実施形態では、化合物は、１週間に１回投与される一方で、治療剤または抗癌剤は、毎日、１週間毎に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、または４週間毎に１回で投与される。
【００９７】
本発明の範囲内の組成物は、本発明の化合物が、その意図する目的を達成するために有効である量で含まれる、すべての組成物を含む。個々の必要性が変化する一方で、各成分の有効量の最適範囲の決定は、当業者の範囲内である。典型的には、化合物は、哺乳動物へ、例えば、ヒトに、経口的に、１日当たり、アポトーシスの誘導に応答する障害について治療される哺乳動物の体重の０．００２５〜５０ｍｇ／ｋｇの用量、または等量のその薬学的に許容される塩で、投与することが可能である。一実施形態では、かかる障害を治療、改善、予防するために、約０．０１〜約２５ｍｇ／ｋｇが経口投与される。筋肉内注射に関して、用量は、一般的には、経口用量の約半分である。例えば、適した筋肉内用量は、約０．００２５〜約２５ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇになるであろう。
【００９８】
経口単位用量は、約０．０１〜約１０００ｍｇ、例えば、約０．１〜約１００ｍｇの化合物を含んでもよい。単位用量は、それぞれが、約０．１〜約１０ｍｇ、都合良くは、約０．２５〜５０ｍｇの化合物またはその溶媒和物を含む、１つまたは複数の錠剤またはカプセルとして、毎日１回または複数回投与することが可能である。
【００９９】
局所製剤では、化合物は、担体の１グラム当たり約０．０１〜１００ｍｇの濃度で存在することが可能である。一実施形態では、化合物は、約０．０７〜１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば、約０．１〜０．５ｍｇ／ｍｌの濃度で、および一実施形態では、約０．４ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【０１００】
未加工の化学物質としての化合物を投与することに加えて、本発明の化合物は、薬学的に使用され得る調製物への化合物の加工を容易にする、賦形剤および補助剤を含む、適した薬学的に許容される担体を含む薬学的調製物の一部として投与することが可能である。調製物、特に、経口的または局所的に投与することができ、錠剤、糖衣錠、遅延放出トローチおよびカプセル、マウスリンスおよびマウスウォッシュ、ゲル、液体懸濁液、ヘアリンス、ヘアゲル、シャンプー等の投与の１つの種類のために使用され得るこれらの調製物、およびさらには、坐剤等の経直腸的に投与され得る調製物は、静脈内注入、注射による、局所的または経口的な投与に適した溶液と同様に、約０．０１〜９９パーセント、一実施形態では約０．２５〜７５パーセントの活性化合物を、賦形剤とともに含む。
【０１０１】
本発明の薬学的組成物は、本発明の化合物の有益な効果を経験する可能性がある任意の動物に投与することが可能である。かかる動物で最も注目されるのは、哺乳動物、例えば、ヒトであるが、本発明は、そのように限定されることを意図しない。他の動物には、獣医学的な動物（ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ等）が含まれる。
【０１０２】
該化合物およびその薬学的組成物は、それらの意図する目的を達成する任意の手段によって投与することが可能である。例えば、投与は、非経口的、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、経皮的、口腔、くも膜下腔内、頭蓋内、鼻腔内または局所的な経路によるものであることが可能である。代替的に、または同時に、投与は、経口経路によるものであることが可能である。投与される投薬量は、受け手の年齢、健康、体重、同時に行われる治療の種類、もしあれば、治療の頻度、および望まれる効果の性質によって異なるであろう。
【０１０３】
本発明の薬学的調製物は、それ自体が周知である様式で、例えば、従来の混合、顆粒化、糖衣作製、溶解、または凍結乾燥の加工で製造される。従って、経口使用のための薬学的調製物は、活性化合物を固形賦形剤と組み合わせること、任意で結果として生じる混合物を粉砕すること、および適した補助剤を加えた後、所望に応じてまたは必要に応じて、錠剤または糖衣錠のコアを得るために、顆粒の混合物を加工することによって、得ることが出来る。
【０１０４】
適した賦形剤は、特に、サッカリド、例えば、ラクトースまたはスクロース、マンニトールまたはソルビトール、セルロース調製物および／またはリン酸カルシウム、例えば、リン酸三カルシウムまたはリン酸水素カルシウム、等の充填剤、さらには、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドンを使用するデンプンペースト等の結合剤である。所望に応じて、上述のデンプン、さらにはカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤を加えることが可能である。補助剤は、とりわけ、流動調節剤および滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸カルシウム等のシリカ、タルク、ステアリン酸またはその塩、および／またはポリエチレングリコールである。糖衣錠コアは、適したコーティングを提供され、所望に応じて、それらは、胃液に対して抵抗性がある。本目的において、濃縮サッカリド溶液を使用することが可能であり、それらは、任意で、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタン、ラッカー溶液および適した有機溶媒または溶媒混合物を含むことが可能である。胃液に対して抵抗性があるコーティングを産生するために、フタル酸アセチルセルロースまたはフタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース等の、適したセルロース調製物の溶液が使用される。染料または色素は、例えば、同定のため、または活性化合物用量の組み合わせを特徴付けるために、錠剤または糖衣錠コーティングに加えてもよい。
【０１０５】
経口的に使用され得る他の薬学的調製物は、ゼラチン製の押し込み型カプセル、さらには、ゼラチン製およびグリセロールまたはソルビトール等の可逆剤製のソフト密封カプセルを含む。押し込み型カプセルは、ラクトース等の充填材、デンプン等の結合剤、および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウム等の滑剤、ならびに、任意で安定剤と混合することが可能である顆粒の形態で、活性化合物を含むことが出来る。ソフトカプセルでは、活性化合物は、一実施形態では、脂肪油または液体パラフィン等の適した液体で溶解または懸濁される。さらには、安定剤を加えることが可能である。
【０１０６】
経直腸的に使用され得る可能な薬学的調製物は、例えば、１つまたは複数の活性化合物と坐剤基剤の組み合わせからなる坐剤を含む。適した坐剤基剤は、例えば、天然または合成トリグリセリド、またはパラフィン炭化水素である。さらには、活性化合物と基剤との組み合わせからなるゼラチン直腸カプセルを使用することもさらに可能である。可能な基剤材料は、例えば、液体トリグリセリド、ポリエチレングリコール、またはパラフィン炭化水素を含む。
【０１０７】
非経口的投与のための適した製剤は、水溶性の形態での活性化合物の水溶液、例えば、水溶性塩およびアルカリ溶液を含む。さらには、適切な油性注射懸濁液としての活性化合物の懸濁液を投与することが可能である。適した親油性溶媒または媒体は、脂肪油、例えば、ゴマ油、または合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルまたはトリグリセリドまたはポリエチレングリコール４００を含む。水性注射懸濁液は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、および／またはデキストランを含む、懸濁液の粘性を増加させる物質を含むことが可能である。任意で、懸濁液は、安定剤をさらに含むことが可能である。
【０１０８】
本発明の局所用組成物は、一実施形態では、適切な担体の選択によって、オイル、クリーム、ローション、軟膏等として製剤化する。適した担体は、植物油または鉱油、白色ワセリン（白色ソフトパラフィン）、分岐鎖脂肪またはオイル、動物脂肪および高分子量アルコール（Ｃ１２より大きい）を含む。担体は、活性成分が可溶性であるものであってよい。所望に応じて、乳化剤、安定剤、保湿剤、および抗酸化剤もまた、色または香りを付与する薬剤と同様に含まれてもよい。加えて、経皮的浸透促進剤が、これらの局所製剤において利用され得る。かかる促進剤の例は、米国特許第３，９８９，８１６号および第４，４４４，７６２号において見ることが出来る。
【０１０９】
クリームは、鉱油、自己乳化蜜蝋および水の混合液から製剤化することが出来、この混合液中で、アーモンド油等の少量の油で溶解された活性成分が混合される。かかるクリームの典型例は、水約４０に対し、蜜蝋約２０、鉱油約４０、およびアーモンド油約１を含むものである。
【０１１０】
軟膏は、アーモンド油等の植物油中の活性成分の溶液を温めたソフトパラフィンと混合しその混合物を冷却することにより、製剤化することが出来る。かかる軟膏の典型例は、約３０重量％のアーモンド油および約７０重量％の白色ソフトパラフィンを含むものである。
【０１１１】
ローションは、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール等の適した高分子量アルコール中に、活性成分を溶解することによって、好都合に調製することが可能である。
【０１１２】
以下の実施例は、本発明の方法および組成物の例示であって、限定するものではない。通常、臨床的療法に含まれ、かつ当業者に明白である種々の条件およびパラメータの他の適した改変および適合は、本発明の精神および範囲内である。
【０１１３】
実施例１
６−クロロ−４’−（３−クロロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（３，４−ジヒドロキシ−ブチル）−アミド
0005399904.tif 000089
【０１１４】
実施例２
６−クロロ−４’−（３−クロロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（２，３−ジヒドロキシ−プロピル）−アミド
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【０１１５】
実施例３
６−クロロ−４’−（３−クロロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（３，５−ジヒドロキシ−ペンチル）−アミド
0005399904.tif 000091
【０１１６】
実施例４
６−クロロ−４’−（３−クロロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸［２−（３−ヒドロキシ−シクロペンチル）−エチル］−アミド
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【０１１７】
実施例５
６−クロロ−４’−（３−クロロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸［２−（３−ヒドロキシ−シクロペンチル）−エチル］−アミド
0005399904.tif 000093
【０１１８】
実施例６
６−クロロ−４’−（３−クロロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸［２−（３−ヒドロキシ−シクロペンチル）−エチル］−アミド
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【０１１９】
実施例７
６−クロロ−４’−（３−クロロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸［２−（３−ヒドロキシ−シクロペンチル）−エチル］−アミド
0005399904.tif 000095
【０１２０】
実施例８
６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（４，５−ジヒドロキシ−ペンチル）−アミド
0005399904.tif 000096
【０１２１】
実施例９
６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（３−モルホリン−４−イル−プロピル）−アミド
0005399904.tif 000097
【０１２２】
実施例１０
６−クロロ−４’−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチル−ブチル）−アミド
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【０１２３】
実施例１１
0005399904.tif 000099
【０１２４】
実施例１２
６−クロロ−４’−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（３，４−ジヒドロキシ−ブチル）−アミド
（ＭＩ−４１９）
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【０１２５】
実施例１３
６−クロロ−４’−（３−クロロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド
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【０１２６】
実施例１４
６−クロロ−４’−（３−クロロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（３−モルホリン−４−イル−プロピル）−アミド
0005399904.tif 000102
【０１２７】
実施例１５
６−クロロ−４’−（３−クロロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（４，５−ジヒドロキシ−ペンチル）−アミド
0005399904.tif 000103
【０１２８】
実施例１６
６−クロロ−４’−（３−クロロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチル−ブチル）−アミド
0005399904.tif 000104
【０１２９】
実施例１７
（２’Ｒ，３Ｓ，３’’Ｓ，４’Ｒ，５’Ｒ）６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（３，４−ジヒドロキシ−ブチル）−アミド
（ＭＩ−３１９）
0005399904.tif 000105
【０１３０】
実施例１８
0005399904.tif 000106
【０１３１】
実施例１９
６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−２’−シクロペンチルメチル−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（３，４−ジヒドロキシ−ブチル）−アミド
（ＭＤＭ２−３１９−１）
0005399904.tif 000107
【０１３２】
実施例２０
0005399904.tif 000108
【０１３３】
実施例２１
0005399904.tif 000109
【０１３４】
実施例２２
６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−２’−シクロヘキシル−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（３，４−ジヒドロキシ−ブチル）−アミド
（ＭＤＭ２−３１９−４）
0005399904.tif 000110
【０１３５】
実施例２３
0005399904.tif 000111
【０１３６】
実施例２４
６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸［２−（３−ヒドロキシ−シクロペンチル）−エチル］−アミド
（ＭＤＭ２−３１９−６）
0005399904.tif 000112
【０１３７】
実施例２５
0005399904.tif 000113
【０１３８】
実施例２６
６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−２’−シクロペンチル−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（３，４−ジヒドロキシ−ブチル）−アミド
（ＭＩ−３１９−８）
0005399904.tif 000114
【０１３９】
実施例２７
６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−５’−（４−メチル−ピペラジン−１−カルボニル）−１Ｈ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−２−オン
（ＭＩ−３１９−９）
0005399904.tif 000115
【０１４０】
実施例２８
0005399904.tif 000116
【０１４１】
実施例２９
0005399904.tif 000117
【０１４２】
実施例３０
0005399904.tif 000118
【０１４３】
実施例３１
0005399904.tif 000119
【０１４４】
実施例３２
１’−アセチル−６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（３，４−ジヒドロキシ−ブチル）−アミド
（ＭＩ−３１９−１３）
0005399904.tif 000120
【０１４５】
実施例３３
６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１’−オキシ−１，２，４’，５’−テトラヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロール］−５’−カルボン酸（３，４−ジヒドロキシ−ブチル）−アミド
（ＭＩ−３１９−１４）
0005399904.tif 000121
【０１４６】
実施例３４
｛［６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボニル］−アミノ｝−酢酸
（ＭＩ−３１９−１５）
0005399904.tif 000122
【０１４７】
実施例３５
0005399904.tif 000123
【０１４８】
実施例３６
６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（２−イミダゾル−１−イル−エチル）−アミド
（ＭＩ−３１９−１７）
0005399904.tif 000124
【０１４９】
実施例３７
７−｛［６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボニル］−アミノ｝−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタン酸
（ＭＩ−３１９−１８）
0005399904.tif 000125
【０１５０】
実施例３８
６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（２，３，４−トリヒドロキシ−ブチル）−アミド
（ＭＩ−３１９−１９）
0005399904.tif 000126
【０１５１】
実施例３９
６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（２−グアニジノ−エチル）−アミド
（ＭＩ−３１９−２０）
0005399904.tif 000127
【０１５２】
実施例４０
0005399904.tif 000128
【０１５３】
実施例４１
６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−５−フルオロ−２’−（２−メチル−プロペニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（３，４−ジヒドロキシ−ブチル）−アミド
0005399904.tif 000129
【０１５４】
実施例４２
６−クロロ−４’−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−２’−（２，２−ジメチル−プロピル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−スピロ［インドール−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボン酸（２−ウレイド−エチル）−アミド
0005399904.tif 000130
【０１５５】
実施例４３
（２’Ｒ，３Ｓ，４’Ｒ，５’Ｒ）−６−クロロ−Ｎ−（（Ｓ）−３，４−ジヒドロキシブチル）−５−フルオロ−４’−（３−フルオロフェニル）−２’−ネオペンチル−２−オキソスピロ［インドリン−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボキサミド
（ＭＩ−５１９−１）
0005399904.tif 000131
【０１５６】
実施例４４
（２’Ｒ，３Ｓ，４’Ｓ，５’Ｒ）−６−クロロ−４’−（２，３−ジフルオロフェニル）−Ｎ−（（Ｓ）−３，４−ジヒドロキシブチル）−５−フルオロ−２’−ネオペンチル−２−オキソスピロ［インドリン−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボキサミド
（ＭＩ−５１９−２）
0005399904.tif 000132
【０１５７】
実施例４５
（２’Ｒ，３Ｓ，４’Ｒ，５’Ｒ）−６−クロロ−４’−（３，４−ジフルオロフェニル）−Ｎ−（（Ｓ）−３，４−ジヒドロキシブチル）−５−フルオロ−２’−ネオペンチル−２−オキソスピロ［インドリン−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボキサミド
（ＭＩ−５１９−３）
0005399904.tif 000133
【０１５８】
実施例４６
（２’Ｒ，３Ｓ，４’Ｓ，５’Ｒ）−６−クロロ−４’−（２，５−ジフルオロフェニル）−Ｎ−（（Ｓ）−３，４−ジヒドロキシブチル）−５−フルオロ−２’−ネオペンチル−２−オキソスピロ［インドリン−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボキサミド
（ＭＩ−５１９−５）
0005399904.tif 000134
【０１５９】
実施例４７
（２’Ｒ，３Ｓ，４’Ｓ，５’Ｒ）−６−クロロ−Ｎ−（（Ｓ）−３，４−ジヒドロキシブチル）−５−フルオロ−４’−（２−フルオロフェニル）−２’−ネオペンチル−２−オキソスピロ［インドリン−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボキサミド
（ＭＩ−５１９−６）
0005399904.tif 000135
【０１６０】
実施例４８
（２’Ｒ，３Ｓ，４’Ｒ，５’Ｒ）−６−クロロ−Ｎ−（（Ｓ）−３，４−ジヒドロキシブチル）−５−フルオロ−４’−（４−フルオロフェニル）−２’−ネオペンチル−２−オキソスピロ［インドリン−３，３’−ピロリジン］−５’−カルボキサミド
（ＭＩ−５１９−７）
0005399904.tif 000136
【０１６１】
実施例４９
細胞増殖阻害
ペプチド系阻害剤に対する非ペプチド小分子阻害剤の１つの大きな利点は、その優れた細胞透過性である。ｐ５３−ＭＤＭ２相互作用の強力な非ペプチド阻害剤は、野生型形態のｐ５３とともにｐ５３の活性の刺激を通じて、癌細胞において細胞の増殖および分裂の阻害に有効であろうということが予測される。さらに、それらは、ｐ５３の損失または突然変異したｐ５３の非機能的形態のいずれかを伴い、癌細胞では選択性を有するということが予測される。これらの予測を検査するため、細胞増殖アッセイがヒト前立腺癌ＬＮＣａＰ（ｐ５３野生型）およびＰＣ−３（ｐ５３ヌル）細胞株を使用して、開発された。本発明の化合物の毒性作用が検査された。
【０１６２】
細胞を、９６ウェル平底細胞培養プレートに、３〜４×１０３細胞／ウェルの密度で播種し、４日間化合物の存在下でインキュベートした。化合物の濃度を増加させる処理の後、細胞増殖阻害の速度を、ＷＳＴ−８（２−（２−メトキシ−４−ニトロフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウムモノナトリウム塩（Ｄｏｊｉｎｄｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）を使用して決定した。ＷＳＴ−８を、１０％の最終濃度で各ウェルに加え、プレート３７℃で２〜３時間、インキュベートした。試料の吸光度をプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ−ＴＥＣＡＮ  ＵＬＴＲＡ）で４５０ｎｍで測定した。細胞増殖を５０％阻害した化合物の濃度（ＩＣ５０）を、未処理の細胞の吸光度を化合物で処理された細胞と比較することによって計算した。表２に示されるように、本発明の化合物では、ｐ５３陽性ＬＮＣａＰ細胞における細胞増殖の阻害の効果が、ｐ５３陰性ＰＣ３細胞と比較して約５倍〜約５０倍高かった。
【０１６３】
本発明の化合物を、ＨＣＴ１１６（野生型Ｐ５３）およびＨＴ−２９（変異型Ｐ５３）結腸癌細胞株に対して、同様に検査した。表２に示されるように、検査された化合物の大部分は、ｐ５３陽性ＨＣＴ１１６細胞における細胞増殖阻害に関して、ｐ５３陰性ＨＣＴ１１６細胞と比較してより高い効力を表し、効力の最も大きな差は約２５倍であった。
【０１６４】
正常細胞も野生型ｐ５３を有するため、新規な抗癌薬物としてのｐ５３−ＭＤＭ２相互作用の阻害剤を開発することに関して見込まれる問題は、それらが、非選択性でありかつ癌細胞を殺傷するのと同様に正常な細胞を破壊する活性を有する可能性があるということである。化合物は、野生型ｐ５３を伴う、正常なヒト前立腺上皮細胞（ＰｒＥＣ）において評価され、癌細胞に対して良好な選択性を示すかどうかが確認されるであろう。
【０１６５】
【表２】
0005399904.tif 000137
0005399904.tif 000138
0005399904.tif 000139
Ｋｉの計算：ＭＤＭ２［１０ｎＭ］；Ｆ−６［１ｎＭ］；新規試料ＭＤＭ２タンパク質：
Ｋｄ：０．８８±０．４１ｎＭ（双曲型方程式；１ｎＭ６Ｆを用いる）
Ｋｄ：２．２２±０．９３ｎＭ（Ｋｌｏｔｚプロット；１ｎＭ６Ｆを用いる）
【０１６６】
実施例５０
Ｐ５３およびその標的遺伝子産物ＭＤＭ２およびＰ２１の発現に対するＭＤＭ２阻害剤の効果
癌細胞を、検査化合物または０．１％ＤＭＳＯで２４時間処理する。細胞をトリプシン処理によって収集し、冷リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で洗浄する。細胞を、２ｍＭオルトバナジウム酸ナトリウム、１ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリドおよびプロステアーゼインヒビターカクテル（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を含む氷冷溶解緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）、２５ｍＭフッ化ナトリウム、１％ＮＰ−４０および０．１％ＳＤＳ）で３０分間溶解する。次に、細胞抽出物を、４℃にて、１２，０００×ｇで１０分間遠心分離して、精製溶解物を得る。タンパク質を、バイオラッドの色素によって見積もる。３５μｇタンパク質を含む細胞溶解物を、４〜２０％のトリス−グリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）上で分離し、ポリ（ビニリデンジフルオリド）膜に転写する。転写膜上のタンパク質免疫検出を、抗ｐ５３（Ａｂ−６，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）、抗ＭＤＭ２（ＳＭＰ１４，Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ）および抗ｐ２１（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）マウスモノクローナル抗体を使用して実施する。β−アクチンに対する抗体（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を、タンパク質負荷を評価するために使用する。ＲＫＯ（野生型ｐ５３）およびＨＴ−２９（変異型ｐ５３）結腸癌細胞株を、本発明の化合物で２４時間処理する場合、化合物はｐ５３およびその標的遺伝子産物の蓄積を、野生型ｐ５３を発現するＲＫＯ細胞においてのみ誘導するということが予想される。
【０１６７】
実施例５１
ＭＤＭ２阻害剤によって誘導される細胞死およびアポトーシス
ＲＫＯ（野生型ｐ５３）およびＨＴ−２９（変異型ｐ５３）結腸癌細胞株ならびにＣＣＤ−１８Ｃｏ正常結腸線維芽細胞を、６ウェルペトリディッシュ中で、４日間、本発明の化合物の用量を増加させながら処理する。トリパンブルー色素排除アッセイを実施し、細胞死を誘導する阻害剤の能力を決定する。処理の４日後、浮遊細胞および接着細胞を収集し、０．２％のトリパンブルー溶液（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で染色する。各処理を、三連で実施し、少なくとも１００個の細胞が計数される。青く染色された細胞、または形態学的に健常ではない細胞を死滅細胞として点数付けする。アポトーシスを評価するため、検査阻害剤有りまたは無しで処理された細胞におけるサブ二倍体ＤＮＡ含有量を、ヨウ化プロジウム（ＰＩ）染色で分析する。冷ＰＢＳで１回洗浄した後、細胞を、−２０℃で１日間７０％エタノールに固定する。エタノール固定細胞を、それから、ＰＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳ中に５０μｇ／ｍｌのヨウ化プロジウム（ＰＩ）および１００μｇ／ｍｌのＲＮＡｓｅ  Ａを含む染色溶液で、２０分間、暗室にて室温で染色する。細胞の獲得およびサブ二倍体のＤＮＡ含有量の分析を、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェアを使用して、フローサイトメトリーによって実施する。野生型ｐ５３を発現する癌細胞のみが、化合物の投与に反応してアポトーシスを受けるということが予想される。
【０１６８】
実施例５２
結腸癌細胞の細胞周期進行に対するＭＤＭ２阻害剤の効果
細胞周期進行を、ＲＫＯ（野生型ｐ５３）およびＨＴ−２９（変異型ｐ５３）結腸癌細胞株ならびにＣＣＤ−１８Ｃｏ正常結腸線維芽細胞において、ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の取り込み、その後のＦＩＴＣ標識抗ＢｒｄＵ抗体を用いる染色によりＳ期の細胞を決定することによって、および製造業者（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）の指示書に従い、７−アミノアクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）を用いる染色により全体のＤＮＡ含有量を決定することによって、評価する。端的には、癌および正常細胞を、１晩のインキュベーションの後に、検査化合物有りまたは無しで、２２時間処理し、続いて、１０μＭのＢｒｄＵを用いてさらに２時間のインキュベーションを行う。細胞を収集し、固定し、ＦＩＴＣ標識抗ＢｒｄＵおよび７−ＡＡＤで染色する。細胞周期の分布を、フローサイトメトリーによって分析する。細胞を獲得し、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してデータを分析する。本発明の化合物は、両方とも野生型ｐ５３を発現する、ＲＫＯ癌細胞およびＣＣＤ−１８Ｃｏ正常結腸線維芽細胞においてＳ期の用量依存的な欠失を誘導するであろうということが予想される。化合物は、変異型ｐ５３を発現するＨＴ−２９細胞の細胞周期進行に対しては大きな効果は有さないであろうということがさらに予想される。
【０１６９】
実施例５３
ＭＤＭ２阻害剤を用いる化学療法からの正常細胞の保護
ＰｒＥＣ正常前立腺上皮細胞を、６ウェルプレートに播種し、本発明の化合物で２４時間インキュベートし、それから１μＭのＴＡＸＯＬ（パクリタキセル）を２日間加える。トリパンブルーは、細胞の生存度を決定するために使用される。データから、正常前立腺上皮細胞が本発明の化合物で前処理される場合に、細胞はＴＡＸＯＬから保護されることを示すことが予想される。
【０１７０】
ここで本発明を十分に説明してきたが、本発明は、広範かつ等価な範囲の条件、処方、および他のパラメータの中で、本発明またはその任意の実施形態の範囲に影響することなく、実施可能であるということが、当業者によって理解されるであろう。本明細書に引用されるすべての特許、特許出願、および刊行物は、それらの全体が参照により完全に本明細書に組み込まれる。