(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
0005400153.tif 000059
〔式中、
Ｒ１は、式
【化２】
0005400153.tif 000060
［式中、
＊は、複素環への結合部位であり、
Ｒ６は、ピリド−２−イルである
｛ここで、ピリド−２−イルは、１個ないし２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノカルボニル、トリフルオロメチルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルおよびＣ３−Ｃ６−シクロアルキルカルボニルからなる群から各々独立して選択される
（ここで、アルキル、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アルキルアミノカルボニルおよびシクロアルキルカルボニルは、１個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、トリフルオロメチルおよびＣ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択される）｝］
の基であり、
Ｒ２は、フェニルであり
｛ここで、フェニルは、１個ないし３個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシメチル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノメチル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルスルホニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルスルホニルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノスルホニル、フェニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、ピロリジニルメチル、ピペリジニルメチル、モルホリニルメチルおよびピペラジニルメチルからなる群から各々独立して選択される
（ここで、フェニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、ピロリジニルメチル、ピペリジニルメチル、モルホリニルメチルおよびピペラジニルメチルは、１個ないし３個の置換基により各々置換されていてもよく、ここで、置換基は、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシおよびＣ１−Ｃ４−アルキルからなる群から各々独立して選択される）｝、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはシクロプロピルであり、
Ｒ４は、水素、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはシクロプロピルであり、
かつ、
Ｒ５は、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルまたは５員または６員の複素環カルボニルであるか
｛ここで、複素環カルボニルは、１個ないし３個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択され、
そして、
ここで、アルキルアミノカルボニルは、１個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ヒドロキシル、アミノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノおよび５員または６員の複素環からなる群から選択される
（ここで、複素環は、１個ないし２個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択される）｝、
または、
Ｒ４は、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルまたは５員または６員の複素環カルボニルであり
｛ここで、複素環カルボニルは、１個ないし３個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択され、
そして、
ここで、アルキルアミノカルボニルは、１個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ヒドロキシル、アミノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノおよび５員または６員の複素環からなる群から選択される
（ここで、複素環は、１個ないし２個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択される）｝、
かつ、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはシクロプロピルである〕
の化合物またはその塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つ。
【請求項２】
式中、
Ｒ１が、式
【化３】
0005400153.tif 000061
［式中、
＊は、複素環への結合部位であり、
Ｒ６は、ピリド−２−イルである
｛ここで、ピリド−２−イルは、１個ないし２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノカルボニル、トリフルオロメチルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルおよびＣ３−Ｃ６−シクロアルキルカルボニルからなる群から各々独立して選択される
（ここで、アルキル、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アルキルアミノカルボニルおよびシクロアルキルカルボニルは、１個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、トリフルオロメチルおよびＣ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択される）｝］
の基であり、
Ｒ２が、フェニルであり
（ここで、フェニルは、１個ないし３個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、塩素、フッ素、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、メチルおよびメトキシからなる群から各々独立して選択される）、
Ｒ３が水素であり、
Ｒ４が水素であり、
かつ、
Ｒ５が、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルまたは５員または６員の複素環カルボニルであるか
｛ここで、複素環カルボニルは、１個ないし３個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択され、
そして、
ここで、アルキルアミノカルボニルは、１個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ヒドロキシル、アミノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノおよび５員または６員の複素環からなる群から選択される
（ここで、複素環は、１個ないし２個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択される）｝、
または、
Ｒ４がトリフルオロメチルであり、
かつ、
Ｒ５がシアノである、
請求項１に記載の化合物またはその塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つ。
【請求項３】
式中、
Ｒ１が、式
【化４】
0005400153.tif 000062
｛式中、
＊は、複素環への結合部位であり、
Ｒ６は、ピリド−２−イルである
（ここで、ピリド−２−イルは、１個ないし２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、シアノ、ニトロ、アミノ、トリフルオロメチルカルボニル、エチルカルボニルおよびメチルカルボニルからなる群から各々独立して選択される）｝
の基であり、
Ｒ２がフェニルであり
（ここで、フェニルは、１個または２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、塩素、フッ素、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、メチルおよびメトキシからなる群から各々独立して選択される）、
Ｒ３が水素であり、
Ｒ４が水素であり、
かつ、
Ｒ５が、シアノ、トリフルオロメチル、ヒドロキシカルボニル、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ２−アルキルアミノカルボニル、ピペラジニルカルボニル、ピペリジニルカルボニルまたはモルホリニルカルボニルであるか
｛ここで、ピペラジニルカルボニル、ピペリジニルカルボニルおよびモルホリニルカルボニルは、１個ないし３個の置換基により各々置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲンおよびＣ１−Ｃ４−アルキルからなる群から各々独立して選択され、
そして、
アルキルアミノカルボニルは、１個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ピペラジニル、ピペリジニルおよびモルホリニルからなる群から選択される
（ここで、ピペラジニル、ピペリジニルおよびモルホリニルは、１個ないし２個の置換基により各々置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲンおよびＣ１−Ｃ４−アルキルからなる群から各々独立して選択される）｝、
または、
Ｒ４がトリフルオロメチルであり、
かつ、
Ｒ５がシアノである、
請求項１および請求項２のいずれかに記載の化合物またはその塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つ。
【請求項４】
式中、
Ｒ１が、式
【化５】
0005400153.tif 000063
｛式中、
＊は、複素環への結合部位であり、
Ｒ６は、式
【化６】
0005400153.tif 000064
（式中、
＃は、ＮＨへの結合部位であり、
Ｌはシアノであり、
かつ、
Ｍは水素であるか、
または、
Ｌは、シアノ、ニトロまたはトリフルオロメチルカルボニルであり、
かつ、
Ｍはアミノである）
の基である｝
の基であり、
Ｒ２が、フェニルであり
（ここで、フェニルは、１個または２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、塩素、フッ素およびメトキシからなる群から各々独立して選択される）、
Ｒ３が水素であり、
Ｒ４が水素であり、
かつ、
Ｒ５が、シアノ、ヒドロキシカルボニル、メトキシカルボニル、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、ピペラジニルカルボニルまたはピペリジニルカルボニルであるか
｛ここで、ピペラジニルカルボニルおよびピペリジニルカルボニルは、１個または２個の置換基により各々置換されており、ここで、置換基は、ハロゲンおよびＣ１−Ｃ４−アルキルからなる群から各々独立して選択され、
そして、
ここで、メチルアミノカルボニルおよびジメチルアミノカルボニルは、１個のピペリジニル置換基により置換されている
（ここで、ピペリジニルは、１個ないし２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、ハロゲンおよびＣ１−Ｃ４−アルキルからなる群から各々独立して選択される）｝、
または、
Ｒ４がトリフルオロメチルであり、
かつ、
Ｒ５がシアノである、
請求項１、請求項２および請求項３のいずれかに記載の化合物またはその塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つ。
【請求項５】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその塩、その溶媒和物もしくはその塩の溶媒和物の１つの製造方法であって、
［Ａ］式
【化７】
0005400153.tif 000065
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、各々請求項１に記載の通りであり、
そして、Ｘ１は、ハロゲンである）
の化合物を、式
【化８】
0005400153.tif 000066
（式中、Ｒ１は請求項１に記載の通りである）
の化合物と反応させる、
または、
［Ｂ］式
【化９】
0005400153.tif 000067
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、各々請求項１に記載の通りである）
の化合物を、式
【化１０】
0005400153.tif 000068
［式中、Ｒ５ａは、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノまたは５員ないし６員の複素環である
｛ここで、複素環は、１個ないし３個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択され、
そして、
ここで、アルキルアミノは、１個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ヒドロキシル、アミノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノおよび５員または６員の複素環からなる群から選択される
（ここで、複素環は、１個ないし２個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択される）｝］
の化合物と反応させ、式
【化１１】
0005400153.tif 000069
の化合物を得る、
のいずれかを特徴とする方法。
【請求項６】
疾患の処置および／または予防のための、請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するための、請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項８】
血液疾患の処置および／または予防用の医薬を製造するための、請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項９】
請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の化合物を、不活性かつ非毒性の医薬的に適する補助剤と共に含む医薬。
【請求項１０】
血液疾患の処置および／または予防用の請求項９に記載の医薬。
【請求項１１】
骨髄および／または末梢血に由来する成人造血幹細胞の効率的な生体外増殖のための、かつ／または、臍帯血由来の胚性幹細胞の生体外増殖のための、請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１２】
骨髄および／または末梢血に由来する成人造血幹細胞の生体外増殖のための、かつ／または、臍帯血由来の胚性幹細胞の生体外増殖のための方法であって、請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の化合物の有効量を添加することを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、置換ピリジン類およびそれらの製造方法、並びに、疾患の、特に血液疾患の、好ましくは白血球減少症および好中球減少症の処置および／または予防用の医薬を製造するためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）は、セリン／スレオニンキナーゼのファミリーに属する。特異的基質には、細胞骨格タンパク質および転写因子が含まれる。２つのアイソフォーム、ＧＳＫ３αおよびＧＳＫ３βが今日までに同定された（Woodgett JR., Trends Biochem. Sci. (1991), 16(5), 177-81）。両アイソフォームは、主として休止している非増殖細胞において、恒常的に活性である。
【０００３】
ＧＳＫ３βは、Wnt/Wingless シグナル伝達経路において、中心的に重要である。この経路は、最も重要な、進化的に保存されているシグナル伝達系の１つである。Wnt シグナルは、胚発生における非常に初期のパターン形成過程を制御し、それらは、中胚葉の形成および多くの器官を誘導し、そして、幹細胞の増殖および分化を制御する（Wodarz A., Nusse R., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. (1998), 14, 59-88; Kirstetter et al., Nat Immunol. (2006), 7(10), 1048-56)。Wnt シグナル伝達経路の細胞内区画化があり、これが幅広い様々な異なる過程の制御を可能にしている。Wnt カスケードの内で、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３は、構造分子のアキシン（axin）、腫瘍抑制タンパク質ＡＰＣおよび転写補因子β−カテニンを含む多タンパク質複合体の一部を形成する。β−カテニンは、ＧＳＫ３βの最も重要な基質である。このＧＳＫ３βに媒介されるリン酸化の結果は、β−カテニンのプロテアソーム分解である。ＧＳＫ３活性の阻害は、細胞内のβ−カテニンの蓄積を導き、続いて細胞核への移行を伴う。そこで、β−カテニンは、転写複合体の補因子として作用し、かくして所定の標的遺伝子の発現を部分的に担う。
【０００４】
放射線療法または化学療法は、癌の制御への標準的アプローチのうちにある。両形態の療法は、それらの標的細胞に関して非特異的であり、即ち、腫瘍細胞のみならず、形質転換していない増殖している細胞も影響を受ける。これらの形質転換していない増殖している細胞には、とりわけ、発達して好中球の顆粒球になる造血性前駆細胞も含まれる。好中球数の顕著な減少は、好中球減少症と呼ばれる。化学療法または放射線療法に誘導される好中球減少症の臨床的結果は、感染への易罹患性の上昇である。好中球減少症が実質的であれば、罹患率の上昇があり、いくつかの状況では、療法の死亡率の上昇もある（O'Brien et al., British Journal of Cancer (2006), 95, 1632-1636）。
【０００５】
ＧＳＫ３活性の阻害は、造血幹細胞の増殖および分化の速度の上昇を導き、従って、治療により誘導される好中球減少に関して、治療介入に利用できる。
【０００６】
ＷＯ９９／６５８９７およびＷＯ０２／２０４９５は、とりわけ、ピリジン類を、糖尿病、癌および中枢神経系の障害の処置用のグリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）阻害剤として記載している。ＷＯ２００３／０４９７３９は、ピリミジン類を、糖尿病、癌および中枢神経系の障害の処置用のグリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）阻害剤として記載している。
【発明の概要】
【０００７】
従って、本発明の目的は、ヒトおよび動物の血液疾患、好ましくは好中球減少症の処置用のＧＳＫ３β阻害剤としての新規化合物を提供することである。
【０００８】
本発明は、式
【化１】
0005400153.tif 000002
〔式中、
Ｒ１は、式
【化２】
0005400153.tif 000003
［式中、
＊は、複素環への結合部位であり、
Ｒ６は、ピリド−２−イル、ピリミド−２−イル、２−アミノピリミド−４−イル、２−シクロプロピルアミノピリミド−４−イル、２−メチルアミノピリミド−４−イル、２−エチルアミノピリミド−４−イル、１,３−チアゾール−２−イル、１,３−チアゾール−４−イルまたは１,２−ピラゾール−５−イルである
｛ここで、ピリド−２−イル、ピリミド−２−イル、１,３−チアゾール−２−イルおよび１,３−チアゾール−４−イルは、１個ないし２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノカルボニル、トリフルオロメチルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルおよびＣ３Ｃ６−シクロアルキルカルボニルからなる群から各々独立して選択され
（ここで、アルキル、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アルキルアミノカルボニルおよびシクロアルキルカルボニルは、１個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、トリフルオロメチルおよびＣ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択される）、
そして、
ここで、２−アミノピリミド−４−イル、２−シクロプロピルアミノピリミド−４−イル、２−メチルアミノピリミド−４−イル、２−エチルアミノピリミド−４−イルおよび１,２−ピラゾール−５−イルは、１個ないし２個の置換基により各々置換されていてもよく、ここで、置換基は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノカルボニル、トリフルオロメチルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルおよびＣ３−Ｃ６−シクロアルキルカルボニルからなる群から各々独立して選択される｝］
の基であり、
【０００９】
Ｒ２は、フェニルであり
｛ここで、フェニルは、１個ないし３個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ヒドロキシル、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシメチル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノメチル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルスルホニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルスルホニルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノスルホニル、フェニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、ピロリジニルメチル、ピペリジニルメチル、モルホリニルメチルおよびピペラジニルメチルからなる群から各々独立して選択される
（ここで、フェニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、ピロリジニルメチル、ピペリジニルメチル、モルホリニルメチルおよびピペラジニルメチルは、１個ないし３個の置換基により各々置換されていてもよく、ここで、置換基は、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシおよびＣ１−Ｃ４−アルキルからなる群から各々独立して選択される）｝、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはシクロプロピルであり、
Ｒ４は、水素、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはシクロプロピルであり、
かつ、
Ｒ５は、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルまたは５員または６員の複素環カルボニルであるか
｛ここで、複素環カルボニルは、１個ないし３個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択され、
そして、
ここで、アルキルアミノカルボニルは、１個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ヒドロキシル、アミノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノおよび５員または６員の複素環からなる群から選択される
（ここで、複素環は、１個ないし２個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択される）｝、
または、
Ｒ４は、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルまたは５員または６員の複素環カルボニルであり
｛ここで、複素環カルボニルは、１個ないし３個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択され、
そして、
ここで、アルキルアミノカルボニルは、１個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ヒドロキシル、アミノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノおよび５員または６員の複素環からなる群から選択される
（ここで、複素環は、１個ないし２個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択される）｝、
かつ、
Ｒ５は、水素、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはシクロプロピルである〕
の化合物、並びにそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の化合物は、式（Ｉ）の化合物並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、並びに、式（Ｉ）に包含され、実施例として後述する化合物並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である（式（Ｉ）に包含され、後述する化合物が、既に塩、溶媒和物および塩の溶媒和物ではない限り）。
【００１１】
本発明の化合物は、それらの構造によって、立体異性体（エナンチオマー、ジアステレオマー）で存在し得る。従って、本発明は、エナンチオマーまたはジアステレオマーおよびそれらの各々の混合物を包含する。立体異性体的に均一な構成分は、かかるエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの混合物から、既知方法で単離できる。
本発明の化合物が互変異性体で存在できるならば、本発明は全ての互変異性体を包含する。
【００１２】
本発明に関して、好ましい塩は、本発明の化合物の生理的に許容し得る塩である。本発明は、それら自体は医薬適用に適さないが、例えば、本発明の化合物の単離または精製に使用できる塩も含む。
【００１３】
本発明の化合物の生理的に許容し得る塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩が含まれる。
【００１４】
本発明の化合物の生理的に許容し得る塩には、常套の塩基の塩が含まれ、好ましい例は、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩およびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩およびマグネシウム塩）およびアンモニアまたは１個ないし１６個の炭素原子を有する有機アミン類（好ましい例は、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リジン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルピペリジンおよびコリンである）から誘導されるアンモニウム塩である。
【００１５】
本発明に関して、溶媒和物は、固体または液体状態で溶媒分子との配位により錯体を形成する本発明の化合物の形態を表す。水和物は、配位が水とのものである、溶媒和物の特別な形態である。
【００１６】
さらに、本発明は、本発明の化合物のプロドラッグも包含する。用語「プロドラッグ」は、それら自体は生物学的に活性であっても不活性であってもよいが、それらの体内残存中に、本発明の化合物に（例えば代謝的または加水分解的に）変換される化合物を包含する。
【００１７】
本発明に関して、断りの無い限り、置換基は以下の通りに定義される：
アルキル自体、並びに、アルコキシ、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、アルキルスルホニル、アルキルスルホニルアミノおよびアルキルアミノスルホニル中の「アルコ（Alk）」および「アルキル」は、１個ないし４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキルラジカルであり、好ましい例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルである。
【００１８】
例えば、そして好ましくは、アルコキシは、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシである。
【００１９】
アルキルアミノは、１個または２個の（独立して選択される）アルキル置換基を有するアルキルアミノラジカルであり、好ましい例は、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ｔｅｒｔ−ブチルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノおよびＮ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−メチルアミノである。Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノは、例えば、１個ないし４個の炭素原子を有するモノアルキルアミノラジカル、または、アルキル置換基１個につき各場合で１個ないし４個の炭素原子を有するジアルキルアミノラジカルである。
【００２０】
例えば、そして好ましくは、アルキルカルボニルは、メチルカルボニル、エチルカルボニル、ｎ−プロピルカルボニル、イソプロピルカルボニル、ｎ−ブチルカルボニルおよびｔｅｒｔ−ブチルカルボニルである。
【００２１】
例えば、そして好ましくは、アルコキシカルボニルは、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ｎ−ブトキシカルボニルおよびｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである。
【００２２】
アルキルアミノカルボニルは、１個または２個の（独立して選択される）アルキル置換基を有するアルキルアミノカルボニルラジカル、例えば、そして好ましくは、メチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル、ｎ−プロピルアミノカルボニル、イソプロピルアミノカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチルアミノカルボニル、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノカルボニル、Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノカルボニル、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノカルボニル、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノカルボニル、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノカルボニルおよびＮ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−メチルアミノカルボニルである。Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルは、例えば、１個ないし４個の炭素原子を有するモノアルキルアミノカルボニルラジカル、または、アルキル置換基１個につき各場合で１個ないし４個の炭素原子を有するジアルキルアミノカルボニルラジカルである。
【００２３】
例えば、そして好ましくは、アルキルカルボニルアミノは、メチルカルボニルアミノ、エチルカルボニルアミノ、ｎ−プロピルカルボニルアミノ、イソプロピルカルボニルアミノ、ｎ−ブチルカルボニルアミノおよびｔｅｒｔ−ブチルカルボニルアミノである。
【００２４】
例えば、そして好ましくは、アルキルスルホニルは、メチルスルホニル、エチルスルホニル、ｎ−プロピルスルホニル、イソプロピルスルホニル、ｎ−ブチルスルホニルおよびｔｅｒｔ−ブチルスルホニルである。
【００２５】
アルキルアミノスルホニルは、１個または２個の（独立して選択される）アルキル置換基を有するアルキルアミノスルホニルラジカル、例えば、そして好ましくは、メチルアミノスルホニル、エチルアミノスルホニル、ｎ−プロピルアミノスルホニル、イソプロピルアミノスルホニル、ｔｅｒｔ−ブチルアミノスルホニル、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノスルホニル、Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノスルホニル、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノスルホニル、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノスルホニル、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノスルホニルおよびＮ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−メチルアミノスルホニルである。Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノスルホニルは、例えば、１個ないし４個の炭素原子を有するモノアルキルアミノスルホニルラジカル、または、アルキル置換基１個につき各場合で１個ないし４個の炭素原子を有するジアルキルアミノスルホニルラジカルである。
【００２６】
例えば、そして好ましくは、アルキルスルホニルアミノは、メチルスルホニルアミノ、エチルスルホニルアミノ、ｎ−プロピルスルホニルアミノ、イソプロピルスルホニルアミノ、ｎ−ブチルスルホニルアミノおよびｔｅｒｔ−ブチルスルホニルアミノである。
【００２７】
シクロアルキルは、一般的に３個ないし６個の炭素原子を有する単環式シクロアルキル基である；シクロアルキルの好ましい例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが含まれる。
【００２８】
複素環は、５個または６個の環内原子、および、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２の群から３個まで、好ましくは２個までのヘテロ原子および／またはヘテロ基を有する単環式複素環式ラジカルであり、ここで、窒素原子は、また、Ｎ−オキシドを形成してもよい。複素環ラジカルは、飽和または部分不飽和であり得る。好ましいのは、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から２個までのヘテロ原子を有する５員または６員の単環式飽和複素環ラジカル、例えば、そして好ましくは、ピロリジン−２−イル、ピロリジン−３−イル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピラニル、ピペリジン−１−イル、ピペリジン−２−イル、ピペリジン−３−イル、ピペリジン−４−イル、チオピラニル、モルホリン−１−イル、モルホリン−２−イル、モルホリン−３−イル、ピペラジン−１−イル、ピペラジン−２−イルである。
ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素、好ましくはフッ素および塩素である。
【００２９】
Ｒ１であり得る基の式において、＊の印しを付けた線の末端は炭素原子またはＣＨ２基を表さず、Ｒ１が結合している原子への結合の一部である。
Ｒ６であり得る基の式において、＃の印しを付けた線の末端は炭素原子またはＣＨ２基を表さず、Ｒ６が結合している原子への結合の一部である。
【００３０】
好ましいのは、式中、
Ｒ１が、式
【化３】
0005400153.tif 000004
［式中、
＊は、複素環への結合部位であり、
Ｒ６は、ピリド−２−イル、ピリミド−２−イル、２−アミノピリミド−４−イル、２−シクロプロピルアミノピリミド−４−イル、２−メチルアミノピリミド−４−イル、２−エチルアミノピリミド−４−イル、１,３−チアゾール−２−イル、１,３−チアゾール−４−イルまたは１,２−ピラゾール−５−イルである
｛ここで、ピリド−２−イル、ピリミド−２−イル、１,３−チアゾール−２−イルおよび１,３−チアゾール−４−イルは、１個ないし２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノカルボニル、トリフルオロメチルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルおよびＣ３−Ｃ６−シクロアルキルカルボニルからなる群から各々独立して選択され
（ここで、アルキル、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アルキルアミノカルボニルおよびシクロアルキルカルボニルは、１個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、トリフルオロメチルおよびＣ３−Ｃ６−シクロアルキルからなる群から選択される）｝
そして、
ここで、２−アミノピリミド−４−イル、２−シクロプロピルアミノピリミド−４−イル、２−メチルアミノピリミド−４−イル、２−エチルアミノピリミド−４−イルおよび１,２−ピラゾール−５−イルは、１個または２個の置換基により各々置換されていてもよく、ここで、置換基は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、アミノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アミノカルボニル、トリフルオロメチルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルおよびＣ３−Ｃ６−シクロアルキルカルボニルからなる群から各々独立して選択される｝］
の基であり、
【００３１】
Ｒ２が、フェニルであり
（ここで、フェニルは、１個ないし３個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、塩素、フッ素、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、メチルおよびメトキシからなる群から各々独立して選択される）、
Ｒ３が水素であり、
Ｒ４が水素であり、
かつ、
Ｒ５が、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルまたは５員または６員の複素環カルボニルであるか
｛ここで、複素環カルボニルは、１個ないし３個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択され、
そして、
ここで、アルキルアミノカルボニルは、１個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ヒドロキシル、アミノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノおよび５員または６員の複素環からなる群から選択される
（ここで、複素環は、１個ないし２個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択される）｝、
または、
Ｒ４がトリフルオロメチルであり、
かつ、
Ｒ５がシアノである、
式（Ｉ）の化合物並びにそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物である。
【００３２】
好ましいのは、また、式中、
Ｒ１が、式
【化４】
0005400153.tif 000005
｛式中、
＊は、複素環への結合部位であり、
Ｒ６は、ピリド−２−イルまたは１,３−チアゾール−２−イルである
（ここで、ピリド−２−イルおよび１,３−チアゾール−２−イルは、１個ないし２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、シアノ、ニトロ、アミノ、トリフルオロメチルカルボニル、エチルカルボニルおよびメチルカルボニルからなる群から各々独立して選択される）｝
の基であり、
Ｒ２がフェニルであり
（ここで、フェニルは、１個または２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、塩素、フッ素、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、メチルおよびメトキシからなる群から各々独立して選択される）、
Ｒ３が水素であり、
Ｒ４が水素であり、
かつ、
Ｒ５が、シアノ、トリフルオロメチル、ヒドロキシカルボニル、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、Ｃ１−Ｃ２−アルキルアミノカルボニル、ピペラジニルカルボニル、ピペリジニルカルボニルまたはモルホリニルカルボニルであるか
｛ここで、ピペラジニルカルボニル、ピペリジニルカルボニルおよびモルホリニルカルボニルは、１個ないし３個の置換基により各々置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲンおよびＣ１−Ｃ４−アルキルからなる群から各々独立して選択され、
そして、
アルキルアミノカルボニルは、１個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ピペラジニル、ピペリジニルおよびモルホリニルからなる群から選択される
（ここで、ピペラジニル、ピペリジニルおよびモルホリニルは、１個または２個の置換基により各々置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲンおよびＣ１−Ｃ４−アルキルからなる群から各々独立して選択される）｝、
または、
Ｒ４がトリフルオロメチルであり、
かつ、
Ｒ５がシアノである、
式（Ｉ）の化合物並びにそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物である。
【００３３】
特に好ましいのは、式中、
Ｒ１が、式
【化５】
0005400153.tif 000006
｛式中、
＊は、複素環への結合部位であり、
Ｒ６は、式
【化６】
0005400153.tif 000007
（式中、
＃は、ＮＨへの結合部位であり、
Ｌは、シアノ、ニトロまたはトリフルオロメチルカルボニルであり、
Ｍは、水素またはアミノである）
の基である｝
の基であり、
Ｒ２が、フェニルであり
（ここで、フェニルは、１個または２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、塩素、フッ素およびメトキシからなる群から各々独立して選択される）、
Ｒ３が、水素であり、
Ｒ４が、水素であり、
かつ、
Ｒ５が、シアノ、ヒドロキシカルボニル、メトキシカルボニル、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、ピペラジニルカルボニルまたはピペリジニルカルボニルであるか
｛ここで、ピペラジニルカルボニルおよびピペリジニルカルボニルは、１個ないし２個の置換基により各々置換されており、ここで、置換基は、ハロゲンおよびＣ１−Ｃ４−アルキルからなる群から各々独立して選択され、
そして、
ここで、メチルアミノカルボニルおよびジメチルアミノカルボニルは、１個のピペリジニル置換基により置換されている
（ここで、ピペリジニルは、１個ないし２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、ハロゲンおよびＣ１−Ｃ４−アルキルからなる群から各々独立して選択される）｝、
または、
Ｒ４が、トリフルオロメチルであり、
かつ、
Ｒ５がシアノである、
式（Ｉ）の化合物並びにそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物である。
【００３４】
特に好ましいのは、式中、
Ｒ１が、式
【化７】
0005400153.tif 000008
｛式中、
＊は、複素環への結合部位であり、
Ｒ６は、式
【化８】
0005400153.tif 000009
（式中、
＃は、ＮＨへの結合部位であり、
Ｌはシアノであり、
かつ、
Ｍは水素であるか、
または、
Ｌは、シアノ、ニトロまたはトリフルオロメチルカルボニルであり、
かつ、
Ｍはアミノである）
の基である｝
の基であり、
Ｒ２が、フェニルであり
（ここで、フェニルは、１個または２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、塩素、フッ素およびメトキシからなる群から各々独立して選択される）、
Ｒ３が水素であり、
Ｒ４が水素であり、
かつ、
Ｒ５が、シアノ、ヒドロキシカルボニル、メトキシカルボニル、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、ピペラジニルカルボニルまたはピペリジニルカルボニルであるか
｛ここで、ピペラジニルカルボニルおよびピペリジニルカルボニルは、１個または２個の置換基により各々置換されており、ここで、置換基は、ハロゲンおよびＣ１−Ｃ４−アルキルからなる群から各々独立して選択され、
そして、
ここで、メチルアミノカルボニルおよびジメチルアミノカルボニルは、１個のピペリジニル置換基により置換されている
（ここで、ピペリジニルは、１個ないし２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、ハロゲンおよびＣ１−Ｃ４−アルキルからなる群から各々独立して選択される）｝、
または、
Ｒ４がトリフルオロメチルであり、
かつ、
Ｒ５がシアノである、
式（Ｉ）の化合物並びにそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物である。
【００３５】
好ましいのは、また、式中、Ｒ１が、式
【化９】
0005400153.tif 000010
（ここで、＊は、複素環への結合部位である）
の基である、式（Ｉ）の化合物である。
【００３６】
好ましいのは、また、
Ｒ６が、ピリド−２−イルまたは１,３−チアゾール−２−イルである
（ここで、ピリド−２−イルおよび１,３−チアゾール−２−イルは、１個ないし２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、シアノ、ニトロ、アミノ、トリフルオロメチルカルボニル、エチルカルボニルおよびメチルカルボニルからなる群から各々独立して選択される）、
式（Ｉ）の化合物である。
【００３７】
好ましいのは、また、式中、
Ｒ６が、式
【化１０】
0005400153.tif 000011
（ここで、＃は、ＮＨへの結合部位であり、
Ｌは、シアノ、ニトロまたはトリフルオロメチルであり、
Ｍは、水素またはアミノである）
の基である、式（Ｉ）の化合物である。
【００３８】
好ましいのは、また、式中、Ｒ６が５−シアノピリド−２−イルである、式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、式中、Ｒ６が５−トリフルオロメチルカルボニル−６−アミノピリド−２−イルである、式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、式中、Ｒ２がフェニル（ここで、フェニルは１個または２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、塩素、フッ素およびメトキシからなる群から各々独立して選択される）である、式（Ｉ）の化合物である。
好ましいのは、また、Ｒ３が水素である式（Ｉ）の化合物である。
【００３９】
好ましいのは、また、式中、
Ｒ４が水素であり、
かつ、
Ｒ５が、シアノ、ヒドロキシカルボニル、メトキシカルボニル、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、ピペラジニルカルボニルまたはピペリジニルカルボニルであるか
｛ここで、ピペラジニルカルボニルおよびピペリジニルカルボニルは、１個または２個の置換基により各々置換されており、ここで、置換基は、ハロゲンおよびＣ１−Ｃ４−アルキルからなる群から各々独立して選択され、
そして、
ここで、メチルアミノカルボニルおよびジメチルアミノカルボニルは、１個のピペリジニル置換基により置換されている
（ここで、ピペリジニルは、１個または２個の置換基により置換されており、ここで、置換基は、ハロゲンおよびＣ１−Ｃ４−アルキルからなる群から各々独立して選択される）｝、
または、
Ｒ４が、トリフルオロメチルであり、
かつ、
Ｒ５がシアノである、
式（Ｉ）の化合物である。
【００４０】
本発明は、さらに、式（Ｉ）の化合物、またはそれらの塩、それらの溶媒和物およびそれらの塩の溶媒和物の製造方法を提供し、その方法では、
［Ａ］式
【化１１】
0005400153.tif 000012
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、各々上記の通りであり、
そして、Ｘ１は、ハロゲン、好ましくは塩素またはフッ素である）
の化合物を、式
【化１２】
0005400153.tif 000013
（式中、Ｒ１は上記の通りである）
の化合物と反応させるか、
または、
【００４１】
［Ｂ］式
【化１３】
0005400153.tif 000014
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、各々上記の通りである）
の化合物を、式
【化１４】
0005400153.tif 000015
［式中、Ｒ５ａは、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノまたは５員ないし６員の複素環である
｛ここで、複素環は、１個ないし３個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択され、
そして、
ここで、アルキルアミノは、１個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、ヒドロキシル、アミノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノおよび５員または６員の複素環からなる群から選択される
（ここで、複素環は、１個ないし２個の置換基により置換されていてもよく、ここで、置換基は、オキソ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ４−アルコキシカルボニルおよびＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルからなる群から各々独立して選択される）｝］
の化合物と反応させ、式
【化１５】
0005400153.tif 000016
の化合物を得る。
【００４２】
式（Ｉａ）および（Ｉｂ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物の一部である。
方法［Ａ］による反応は、一般的に、不活性溶媒中、場合により塩基の存在下、場合によりマイクロ波中、好ましくは５０℃ないし２００℃の温度範囲で、標準気圧ないし５ｂａｒで実施する。
【００４３】
塩基は、例えば、アルカリ金属炭酸塩、例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウムまたは炭酸セシウム、または、有機塩基、例えばトリアルキルアミン類、例えば、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、４−ジメチルアミノピリジンまたはジイソプロピルエチルアミン、または、他の塩基、例えば、水素化ナトリウムまたはカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドである；好ましいのは、ジイソプロピルエチルアミンまたは水素化ナトリウムである。
【００４４】
不活性溶媒は、例えば、ハロ炭化水素、例えば、塩化メチレンまたはトリクロロメタン、アルコール、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノールまたはイソプロパノール、または、エーテル、例えば、ジオキサンまたはテトラヒドロフラン、または、他の溶媒、例えばジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミドまたはＮ−メチルピロリドン、またはこれらの溶媒の混合物であり、好ましいのはＮ−メチルピロリドンまたはジメチルスルホキシドである。
【００４５】
式（ＩＩ）の化合物は公知であり、対応する出発化合物から既知方法により合成できるか、または、実施例の部（実施例１６Ａおよび１７Ａ）に記載の方法と同様に、または、W. Yang et al., Organic Letters 2003, 5, 17, 3131 と同様に製造できる。
式（ＩＩＩ）の化合物は公知であり、対応する出発化合物から既知方法により合成できるか、または、実施例の部（実施例１Ａないし１５Ａ）に記載の方法と同様に製造できる。
【００４６】
方法［Ｂ］による反応は、一般的に、不活性溶媒中、脱水剤の存在下、場合により塩基の存在下、好ましくは室温ないし溶媒の還流の温度範囲で、標準気圧で実施する。
【００４７】
不活性溶媒は、例えば、ハロ炭化水素、例えば、塩化メチレン、トリクロロメタンまたは１,２−ジクロロエタン、エーテル、例えばジオキサン、テトラヒドロフランまたは１,２−ジメトキシエタン、または、他の溶媒、例えばアセトン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、２−ブタノンまたはアセトニトリルである。これらの溶媒の混合物を使用することが、同等に可能である。好ましいのは、ジメチルホルムアミドである。
【００４８】
これに関して適する脱水剤は、例えば、Ｎ,Ｎ'−ジエチル−、Ｎ,Ｎ'−ジプロピル−、Ｎ,Ｎ'−ジイソプロピル−、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−（３−ジメチルアミノイソプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、Ｎ−シクロヘキシルカルボジイミド−Ｎ'−プロピルオキシメチルポリスチレン（ＰＳ−カルボジイミド）などのカルボジイミド類、カルボニルジイミダゾールなどのカルボニル化合物、２−エチル−５−フェニル−１,２−オキサゾリウム３−サルフェートもしくは２−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルイソオキサゾリウムパークロレートなどの１,２−オキサゾリウム化合物、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１,２−ジヒドロキノリンなどのアシルアミノ化合物、または、プロパンホスホン酸無水物、または、イソブチルクロロホルメート、または、ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホリルクロリドまたはベンゾトリアゾリルオキシトリ（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、２−（２−オキソ−１−（２Ｈ）−ピリジル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＰＴＵ）またはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、または、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）またはベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）またはＮ−ヒドロキシスクシンイミド、またはこれらの塩基との混合物である。
【００４９】
塩基は、例えば、アルカリ金属炭酸塩、例えば炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウム、または、炭酸水素ナトリウムまたは炭酸水素カリウム、または、有機塩基、例えばトリアルキルアミン、例えば、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、４−ジメチルアミノピリジンまたはジイソプロピルエチルアミンである；好ましいのは、ジイソプロピルエチルアミンである。
【００５０】
好ましいのは、ジイソプロピルエチルアミンの存在下でＨＡＴＵを用いて縮合を実施することである。
【００５１】
式（Ｉａ）の化合物は、方法［Ａ］に従って製造できる。反応中に、メチルまたはエチルエステルの形態でカルボン酸を保護し、それを、最後の段階で塩基、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウムまたは水酸化リチウムにより加水分解し、式（Ｉａ）の化合物を製造する。
【００５２】
出発化合物および式（Ｉ）の化合物の製造は、下記の合成スキームにより例示説明できる。
スキーム１：
【化１６】
0005400153.tif 000017
【００５３】
スキーム２：
【化１７】
0005400153.tif 000018
【００５４】
本発明による化合物は、予想できない有用な薬理的および薬物動態的効果のスペクトルを有する。
従って、それらは、ヒトおよび動物の疾患の処置および／または予防用の医薬としての使用に適する。
本発明は、さらに、障害、好ましくは血液疾患、特に白血球減少症および好中球減少症の処置および／または予防のための、本発明の化合物の使用を提供する。
【００５５】
従って、本発明の化合物は、神経変性障害、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、統合失調症、変性症、認知症、うつ病；攻撃性、脳血管性虚血、睡眠障害、ハンチントン舞踏病、神経外傷性障害、例えば、卒中；２型真性糖尿病および関連障害、例えば、代謝症候群または肥満症、１型真性糖尿病、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、糸球体腎炎、高カルシウム血症、高血糖症、高脂血症、グルコース・ガラクトース吸収不良症、全般的な内分泌の機能不全、例えば、膵臓炎；血液疾患、例えば、後天性および先天性好中球減少症、薬剤に誘導される好中球減少症、寄生生物に誘導される好中球減少症、化学療法に誘導される好中球減少症、顆粒球減少症、後天性および先天性白血球減少症、後天性および先天性貧血、溶血性貧血、鎌状赤血球性貧血、後天性および先天性血小板減少症、白血球機能不全、血液凝固の障害、移植片対宿主反応；癌、例えば、乳癌、結腸腫瘍、胃腸腫瘍、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、肝臓腫瘍、膵臓腫瘍、皮膚腫瘍、骨髄腫瘍、白血病、例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、ＭＬＬ白血病、前立腺腫瘍、肺癌、腎臓腫瘍；喘息、進行性の不完全に可逆性の気道の閉塞、肺炎、肺機能不全；炎症性障害、例えば、多発性硬化症、リウマチ性関節炎などの自己免疫疾患、グラム陰性およびグラム陽性細菌による感染、ウイルス感染、例えばカンジダ・アルビカンスによる真菌感染、ＨＩＶ感染およびＨＩＶに関連する感染、Ａ、ＢおよびＣ型肝炎、寄生虫感染；マラリア；脱毛；精子運動能の低下；創傷治癒；緑内障；骨粗鬆症、骨髄障害、骨および関節の障害；心血管障害、例えば、心臓の欠陥、心不全、心臓の線維症、心不整脈、心筋梗塞、薬物または物質に誘導される心毒性、アテローム性動脈硬化症、高血圧；敗血症；炎症性障害；尋常性天疱瘡の予防および／または処置に適する。
【００５６】
本発明の化合物は、神経変性障害、例えば、アルツハイマー病および統合失調症、２型糖尿病および関連障害、癌、白血球減少症および／または好中球減少症の予防および／または処置に特に適する。
本発明の化合物は、白血球減少症および／または好中球減少症の予防および／または処置に特に適する。
【００５７】
本発明の化合物は、さらに、骨髄および／または末梢血に由来する成人造血幹細胞の効率的な生体外増殖のために、かつ／または、臍帯血由来の胚性幹細胞の生体外増殖のために、使用することもできる。
本発明の化合物は、さらに、胚性および／または成体肝細胞の生体外増殖のために、そして、胚性および／または成体肝細胞の生体外分化のために、使用することもできる。
【００５８】
かくして増やした細胞を、次いで、骨髄破壊的治療により誘導される血球減少の削減のために、または、治療的移植方法の枠組み内で、または、血液系の障害、例えば、白血病のために、または、遺伝子治療のために増殖後に遺伝子操作された細胞と共に、使用することができる。
【００５９】
本発明は、さらに、障害、特に上述の障害の処置および／または予防のための本発明の化合物の使用を提供する。
本発明は、さらに、障害、特に上述の障害の処置および／または予防用の医薬を製造するための、本発明の化合物の使用を提供する。
本発明は、さらに、治療的に有効な量の本発明の化合物を使用する、障害、特に上述の障害の処置および／または予防方法を提供する。
【００６０】
本発明は、さらに、特に上述の障害の処置および／または予防のための、本発明の化合物および１種またはそれ以上のさらなる有効成分を含む医薬を提供する。適する有効成分の組合せの好ましい例には、以下のものが含まれる：
本発明の化合物の臨床使用される化学療法剤との組合せは、様々な腫瘍性疾患の処置結果の有意な改善を導き得る。化学療法剤は、腫瘍細胞の分裂速度を抑制し、かつ／または、固形腫瘍の新血管新生を防止する物質である。これらには、タキサン類、例えば、パクリタキセルまたはドセタキセル、腫瘍細胞の有糸分裂を阻害する物質、例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンまたはビノレルビンの群からの物質が含まれる。白金誘導体のクラスからの物質、例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチンまたはロバプラチン（lobaplatin）。化学療法剤には、さらに、アルキル化剤のクラスからの物質、例えば、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトジン（streptozin）、ダカルバジンまたはテモゾロミドが含まれる。化学療法剤には、また、抗代謝剤、例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体またはアデノシンデアミナーゼ阻害剤も含まれる。このクラスの物質には、とりわけ、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、ペントスタチンおよびゲムシタビンが含まれる。化学療法剤として使用されるのは、また、酵素、抗腫瘍性抗体およびリンホカインを含む天然物またはそれらの誘導体である。これらには、例えば、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、アラ−Ｖ（ara-V）、パクリタキセル、ミトラマイシン、マイトマイシン−Ｃ、Ｌ−アスパラギナーゼ、インターフェロン類（例えば、ＩＦＮ−アルファ）およびエトポシドが含まれる。抗増殖および／または抗血管形成効果を有する他の化学療法剤は、とりわけ、ソラフェニブ、スニチニブ、ボルテゾミブ、ＤＡＳＴ阻害剤（ＢＡＹ７３−４５０６）、ＺＫ−エポチロンである。
【００６１】
本発明は、さらに、有効量の本発明の化合物を添加することを特徴とする、骨髄および／または末梢血に由来する成人造血幹細胞の生体外増殖、および／または、臍帯血由来の胚性幹細胞の生体外増殖の方法を提供する。
【００６２】
本発明の化合物は、全身的および／または局所的に作用し得る。この目的で、それらは、適する方法で、例えば、経口で、非経腸で、肺に、鼻腔に、舌下に、舌に、頬側に、直腸に、皮膚に、経皮で、結膜に、もしくは、耳の経路で、または、インプラントもしくはステントとして、投与できる。
【００６３】
本発明の化合物は、これらの投与経路に適する投与形で投与できる。
経口投与に適する投与形は、先行技術に準じて機能し、本発明の化合物を、迅速に、かつ／または、改変された様式で送達し、本発明の化合物を結晶形および／または無定形および／または溶解形で含有する投与形、例えば、錠剤（非被覆または被覆錠剤、例えば、腸溶性被覆、または、不溶であるか、もしくは遅れて溶解し、本発明の化合物の放出を制御する被覆を有するもの）、口中で迅速に崩壊する錠剤、または、フィルム／オブラート、フィルム／凍結乾燥剤、カプセル剤（例えば、ハードまたはソフトゼラチンカプセル剤）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール剤または液剤である。
【００６４】
非経腸投与は、吸収段階を避けて（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内経路により）、または、吸収を含めて（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内経路により）、達成できる。非経腸投与に適する投与形には、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤または滅菌散剤の形態の、注射および点滴用製剤が含まれる。
【００６５】
経口投与が好ましい。
他の投与経路に適する投与形は、例えば、吸入用医薬形（散剤吸入器、噴霧器を含む）、点鼻薬、液またはスプレー；舌に、舌下に、または頬側に投与するための錠剤、フィルム／オブラートまたはカプセル剤、坐剤、耳または眼用製剤、膣用カプセル剤、水性懸濁剤（ローション、振盪混合物）、親油性懸濁剤、軟膏、クリーム、経皮治療システム（例えばパッチ）、ミルク、ペースト、フォーム、散布用粉末剤（dusting powder）、インプラントまたはステントである。
【００６６】
本発明の化合物は、上述の投与形に変換できる。これは、不活性、非毒性の、医薬的に適する補助剤と混合することにより、既知方法で行える。これらの補助剤には、担体（例えば結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば液体ポリエチレングリコール類）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えばアルブミン）、安定化剤（例えばアスコルビン酸などの抗酸化剤）、着色料（例えば酸化鉄などの無機色素）および香味および／または臭気の矯正剤が含まれる。
【００６７】
本発明は、さらに、少なくとも１種の本発明の化合物を、好ましくは１種またはそれ以上の不活性、非毒性、医薬的に適する補助剤と共に含む医薬、および上述の目的のためのそれらの使用を提供する。
【００６８】
非経腸投与の場合、一般的に、２４時間につき約５ないし１５００ｍｇの量を投与するのが、有効な結果を達成するために有利であると見出された。経口投与の場合、その量は、２４時間につき約５ないし２０００ｍｇである。
【００６９】
それにも拘わらず、特に体重、投与経路、有効成分に対する個体の挙動、製剤の性質および投与を行う時間または間隔に応じて、上述の量から逸脱することが必要な場合があり得る。
【００７０】
以下の試験および実施例における百分率は、断りの無い限り、重量パーセントである；部は、重量部である。液体／液体溶液の溶媒比、希釈比および濃度のデータは、各場合で体積を基準とする。表記「ｗ／ｖ」は、「重量／体積」を意味する。例えば、「１０％ｗ／ｖ」は、溶液または懸濁液１００ｍｌが物質１０ｇを含むことを意味する。
【実施例】
【００７１】
Ａ）実施例
略号：
【表１】
0005400153.tif 000019
【００７２】
ＬＣ−ＭＳの方法：
方法１：装置: HPLC Agilent series 1100 を備えた Micromass Quattro LCZ；カラム：Phenomenex Synergi 2.5 μ MAX-RP 100A Mercury 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→０.１分９０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.０分５％Ａ→４.１分９０％Ａ；流速：２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２０８−４００ｎｍ。
【００７３】
方法２：ＭＳ装置タイプ：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：Warters Alliance 2795；カラム：Merck Chromolith SpeedROD RP-18e 100 mm x 4.6 mm；溶離剤Ａ：水＋５０％ギ酸５００μｌ／ｌ；溶離剤Ｂ：アセトニトリル＋５０％ギ酸５００μｌ／ｌ；グラジエント：０.０分１０％Ｂ→７.０分９５％Ｂ→９.０分９５％Ｂ；オーブン：３５℃；流速：０.０分１.０ｍｌ／分→７.０分２.０ｍｌ／分→９.０分２.０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ
【００７４】
方法３：ＭＳ装置タイプ：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：HP 1100 Series; UV DAD；カラム：Phenomenex Gemini 3μ 30 mm x 3.00 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分、２.５分／３.０分／４.５分.２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００７５】
方法４：装置：HPLC Agilent Series 1100 を備えた Micromass Platform LCZ；カラム：Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分１００％Ａ→０.２分１００％Ａ→２.９分３０％Ａ→３.１分１０％Ａ→５.５分１０％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.８ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００７６】
方法５：ＭＳ装置タイプ：Warters ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：Warters Alliance 2795；カラム：Phenomenex Onyx Monolithic C18, 100 mm x 3 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２分６５％Ａ→４.５分５％Ａ→６分５％Ａ；流速：２ｍｌ／分；オーブン：４０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００７７】
方法６：ＭＳ装置タイプ：Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：Warters Alliance 2795；カラム：Phenomenex Synergi 2.5 μ MAX-RP 100A Mercury 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→０.１分９０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.０分５％Ａ→４.０１分９０％Ａ；流速：２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００７８】
方法７：装置：HPLC Agilent series 1100 を備えた Micromass Quattro LCZ；カラム：Phenomenex Onyx Monolithic C18, 100 mm x 3 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２分６５％Ａ→４.５分５％Ａ→６分５％Ａ；流速：２ｍｌ／分；オーブン：４０℃；ＵＶ検出：２０８−４００ｎｍ。
【００７９】
方法８：装置：Warters UPLC Acquity を備えた Micromass QuattroPremier；カラム：Thermo Hypersil GOLD 1.9 μ 50 mm x 1 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分１００％Ａ→０.１分１００％Ａ→１.５分１０％Ａ→２.２分１０％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.３３ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００８０】
方法９：装置：HPLC Agilent series 1100 を備えた Micromass Quattro Micro MS；カラム：Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分１００％Ａ→３.０分１０％Ａ→４.０分１０％Ａ→４.０１分１００％Ａ→５.００分１００％Ａ；流速：０.０分／３.０分／４.０分／４.０１分２.５ｍｌ／分、５.００分２ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００８１】
方法１０：分取ＨＰＬＣ：カラム：Reprosil C18；グラジエント：アセトニトリル／水、０.１％塩酸を含む。−
方法１１：分取ＨＰＬＣ：カラム：Reprosil C18；グラジエント：アセトニトリル／水、０.１％トリフルオロ酢酸を含む。
【００８２】
方法１２：装置：Waters ACQUITY SQD UPLC System；カラム：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ, 50 mm x 1 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋９９％ギ酸０.２５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋９９％ギ酸０.２５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→１.２分５％Ａ→２.０分５％Ａ；流速：０.４０ｍｌ／分；オーブン：５０℃；ＵＶ検出：２１０−４００ｎｍ。
方法１３：分取ＨＰＬＣ：カラム：Reprosil C18；グラジエント：アセトニトリル／水。
【００８３】
使用したマイクロ波反応器は、EmrysTM Optimizerタイプのシングルモードの装置であった。
【００８４】
出発化合物
実施例１Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル（６−クロロピリジン−２−イル）カルバメート
【化１８】
0005400153.tif 000020
２−クロロ−５−アミノピリジン２３.４ｇ（１８１.８ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ１５０ｍｌとアルゴン下で混合し、０℃に冷却した。ＴＨＦ１５０ｍｌに溶解したナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド７３.３ｇ（４００ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート４３.６５ｇ（２００ｍｍｏｌ）を、滴下して添加した。１５分後、冷却浴を除去し、混合物を室温でさらに１５分間撹拌した。ＴＨＦを回転蒸発により除去し、残渣を混合し、酢酸エチルおよび０.５Ｎ塩酸で抽出した。有機相を除去し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーターで濃縮した。反応混合物をシリカゲルでクロマトグラフィーした（溶離剤：ジクロロメタン／メタノール１００％→１００：３）。生成物３６.５４ｇ（理論値の８８％）を固体形で得た。
LCMS (方法 3): Rt = 2.41 分. (m/z = 175 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 10.11 (s, 1H), 7.78 (d, 2H), 7.1 (t, 1H), 1.47 (s, 9H).
【００８５】
実施例２Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル（６−クロロ−３−ホルミルピリジン−２−イル）カルバメート
【化１９】
0005400153.tif 000021
反応器具をベークアウトし、アルゴン下で反応を実施し、撹拌した。ｔｅｒｔ−ブチル（６−クロロピリジン−２−イル）カルバメート（実施例１Ａ）１５ｇ（６５.６ｍｍｏｌ）および１,２−ビス（ジメチルアミノ）エタン１９ｇ（１６４ｍｍｏｌ）を、先ず、ＴＨＦ２７０ｍｌに加え、−７８℃に冷却した。ブチルリチウム（１.６Ｎ）１０２.５ｍｌ（１６４ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。滴下による添加の終了後、反応を徐々に−１０℃に温め、−１０℃で２時間維持した。次いで、それを再度−７８℃に冷却し、ＤＭＦ１０ｍｌ（１３１ｍｍｏｌ）を添加した。反応を徐々に室温に温め、反応混合物を酢酸エチル１ｌおよび１Ｎ塩酸３５０ｍｌに添加し、混合物を１５分間撹拌し、有機相を除去した。それを水および飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーターで濃縮した。残渣をジエチルエーテルと混合し、固体を吸引濾過し、乾燥させた。生成物１２.３ｇ（理論値の７３％）を固体形で得た。
LCMS (方法 3): Rt = 2.19 分. (m/z = 255 (M+H)-).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 10.37 (s, 1H), 9.83 (s, 1H), 8.2 (d, 1H), 7.42 (d, 1H), 1.46 (s, 9H).
【００８６】
実施例３Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル｛６−クロロ−３−［（ヒドロキシイミノ）メチル］ピリジン−２−イル｝カルバメート
【化２０】
0005400153.tif 000022
ｔｅｒｔ−ブチル（６−クロロ−３−ホルミルピリジン−２−イル）カルバメート（実施例２Ａ）１５.４５ｇ（６０.２ｍｍｏｌ）を、先ず、エタノール７５０ｍｌに添加し、水２２５ｍｌおよび酢酸ナトリウム９.３８ｇ（１２０.４ｍｍｏｌ）の溶液と混合し、５分間撹拌した。水２２５ｍｌおよびヒドロキシルアミン塩酸塩８.３６ｇ（１１４.４ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、混合物を室温で４時間撹拌した。２０℃で、反応混合物をロータリーエバポレーターで濃縮した。残渣を酢酸エチルに取り、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で２回、飽和塩化ナトリウム溶液で１回洗浄した。有機相を除去し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、２０℃で、ロータリーエバポレーターで濃縮した。生成物１５.５ｇ（理論値の８０％）を固体形で得た。
LCMS (方法 3): Rt = 2.08 分. (m/z = 270 (M+H)-).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 11.71 (s, 1H), 9.91 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.02 (d, 1H), 7.3 (d, 1H), 1.49 (s, 9H).
【００８７】
実施例４Ａ
２−アミノ−６−クロロピリジン−３−カルボアルデヒドオキシム塩酸塩
【化２１】
0005400153.tif 000023
ｔｅｒｔ−ブチル｛６−クロロ−３−［（ヒドロキシイミノ）メチル］ピリジン−２−イル｝カルバメート（実施例３Ａ）１５.５ｇ（５７ｍｍｏｌ）を、ジオキサン中の４Ｎ塩化水素２８５ｍｌに溶解し、さらに３０分間撹拌した。反応混合物を半量に濃縮し、同量のジエチルエーテルを添加した。反応混合物をさらに２０分間撹拌し、生成物を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄した。生成物１１ｇ（理論値の９４％）を固体形で得た。
LCMS (方法 6): Rt = 1.09 分. (m/z = 172 (M+H)+)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.27 (s, 1H), 7.61 (d, 1H), 6.65 (d, 1H).
【００８８】
実施例５Ａ
２−アミノ−６−クロロピリジン−３−カルボニトリル
【化２２】
0005400153.tif 000024
２−アミノ−６−クロロピリジン−３−カルボアルデヒドオキシム塩酸塩（実施例４Ａ）１１.１５ｇ（５３.６ｍｍｏｌ）を、先ず、ジオキサンに加え、ピリジン１３ｍｌ（１６１ｍｍｏｌ）と混合し、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸無水物８.３ｍｌ（５８.９５ｍｍｏｌ）を添加し、反応を室温に温め、次いで、６０℃で２時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルと炭酸水素ナトリウム溶液の混合物に取った。有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーターで濃縮した。残渣を３：１ジクロロメタン：ジエチルエーテルに懸濁し、固体を吸引濾過し、乾燥させた。生成物５.５６ｇ（理論値の６６％）を固体形で得た。
LCMS (方法 6): Rt = 1.0 分. (m/z = 154 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 7.91 (d, 1H), 7.38 (s, 2H), 6.69 (d, 1H).
【００８９】
実施例６Ａ
４−（トリフルオロアセチル）モルホリン
【化２３】
0005400153.tif 000025
モルホリン１５ｇ（１７２ｍｍｏｌ）を、先ず、ジクロロメタン７５０ｍｌに加え、トリフルオロ酢酸無水物２９ｍｌ（２０６ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１１９ｍｌ（６８８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温に温め、室温でさらに３時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチルに取り、炭酸水素ナトリウム水溶液、１Ｎ塩酸および再度炭酸水素ナトリウム水溶液で連続的に洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーターで濃縮した。生成物２８ｇ（理論値の８８％）を油状物として得た。
LCMS (方法 9): Rt = 1.22 分. (m/z = 184 (M+H)+)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 3.65 (m, 2H), 3.56 (m, 2H).
【００９０】
実施例７Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル（６−クロロ−３−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル）カルバメート
【化２４】
0005400153.tif 000026
ｔｅｒｔ−ブチル（６−クロロピリジン−２−イル）カルバメート（実施例１Ａ）８ｇ（３５ｍｍｏｌ）を、先ず、ＴＨＦ１００ｍｌに加え、−５０℃に冷却した。ブチルリチウム（１.６Ｎ）５５ｍｌ（８７ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。滴下による添加の終了後、反応を徐々に−１０℃に温め、０℃で２時間撹拌した。続いて、混合物を再度−４０℃に冷却し、ＴＨＦ４ｍｌに溶解した４−（トリフルオロアセチル）モルホリン（実施例６Ａ）１２.８ｇ（７０ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を−４０℃で１時間撹拌し、次いで、−４０℃で酢酸エチル１ｌおよび塩化アンモニウム溶液３５０ｍｌに注ぎ、抽出した。有機相を除去し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、ロータリーエバポレーターで濃縮した。反応混合物をシリカゲルでクロマトグラフィーした（溶離剤：シクロヘキサン／酢酸エチル１０：１）。生成物９ｇ（理論値の７９％）を油状物として得た。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 10.96 (s, 1H), 7.99 (d, 1H), 7.4 (d, 1H), 1.43 (s, 9H).
【００９１】
実施例８Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル３−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−カルボキシレート
【化２５】
0005400153.tif 000027
ｔｅｒｔ−ブチル３−アミノピペリジン−１−カルボキシレート１.０ｇ（４.９９ｍｍｏｌ）および６−クロロピリジン−３−カルボニトリル１.３８３ｇ（９.９９ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン１.２９ｇ（９.９９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ４０ｍｌに懸濁し、マイクロ波反応器中で４５分間１４０℃に加熱した。クーゲルロール蒸留により混合物から実質的にＤＭＳＯをなくし、水と混合し、沈殿した固体を濾過した。高真空下で乾燥させた後、生成物２.２４ｇ（理論値の４６％）を得た。
LCMS (方法 3): Rt = 2.23 分. (m/z = 303 (M+H)+).
【００９２】
実施例９Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル３−［（６−アミノ−５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−カルボキシレート
【化２６】
0005400153.tif 000028
ｔｅｒｔ−ブチル３−アミノピペリジン−１−カルボキシレート２.１５ｇ（１０.７ｍｍｏｌ）、２−アミノ−６−クロロピリジン−３−カルボニトリル（実施例５Ａ）１.５０ｇ（９.７７ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン１.８９ｇ（１４.７ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ６ｍｌに懸濁し、マイクロ波反応器中で８時間１３０℃に加熱した。反応混合物を酢酸エチル（１００ｍｌ）および水（４０ｍｌ）で希釈し、有機相を除去し、飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでクロマトグラフィーした（溶離剤：シクロヘキサン／酢酸エチル４：１から１：１へ）。生成物２.０４ｇ（理論値の６０％）を固体形で単離した。
LCMS (方法 6): Rt = 1.69 分. (m/z = 318 (M+H)+)
【００９３】
実施例１０Ａ
６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−カルボニトリル塩酸塩
【化２７】
0005400153.tif 000029
ｔｅｒｔ−ブチル３−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−カルボキシレート（実施例８Ａ）２.２４ｇ（７.４ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（４Ｍ）中の塩酸溶液４.３ｍｌに溶解し、室温で３時間撹拌した。反応の完了時に、溶媒を完全に除去した。生成物１.７４ｇ（理論値の９０％）を固体形で得た。
LCMS (方法 8): Rt = 0.27 分. (m/z = 203 (M+H)+)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 9.13 (m, 1H), 9.0 (m, 1H), 8.44 (d, 1H), 7.89 (m, 1H), 7.74 (dd, 1H), 6.63 (d, 1H), 5.58 (s, br), 4.19 (s, br, 1H), 3.57 (s, 1H), 3.34 (d, 1H), 3.14 (d, 1H), 2.88 (m, 1H), 2.7-2.81 (m, 1H), 1.82-2.0 (m, 2H), 1.63-1.79 (m, 1H), 1.48-1.59 (m, 1H).
【００９４】
実施例１１Ａ
２−アミノ−６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−カルボニトリル塩酸塩
【化２８】
0005400153.tif 000030
ｔｅｒｔ−ブチル３−［（６−アミノ−５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−カルボキシレート（実施例９Ａ）２.００ｇ（６.３ｍｍｏｌ）を、ジオキサン中の塩酸溶液（４Ｍ）４０ｍｌに溶解し、室温で２時間撹拌した。反応の完了時に、溶媒を半量に濃縮し、ジエチルエーテル２０ｍｌを添加した。沈殿を濾過し、乾燥させた。生成物１.８０ｇ（理論値の１００％）を固体形で得た。
LCMS (方法 8): Rt = 0.25 分. (m/z = 218 (M+H)+)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 9.38 (br m, 1H), 8.97 (br m, 1H), 8.25 (br m, 1H), 7.53 (m, 1H), 7.40 (br s, 2H), 6.01 (d, 1H), 4.16 (br m, 1H), 3.34 (br m, 1H), 3.10 (m, 1H), 2.89 (m, 2H), 2.00-1.84 (m, 2H), 1.73 (m, 1H), 1.55 (m, 1H).
【００９５】
実施例１２Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル３−（｛６−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル｝アミノ）ピペリジン−１−カルボキシレート
【化２９】
0005400153.tif 000031
ｔｅｒｔ−ブチル３−アミノピペリジン−１−カルボキシレート５６１ｍｇ（２.８ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル［６−クロロ−３−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］カルバメート（実施例７Ａ）７００ｍｇ（２.１６ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン０.５６ｍｌ（３.２３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ１４ｍｌに懸濁し、マイクロ波反応器中で４５分間９０℃に加熱した。反応混合物を酢酸エチル（１００ｍｌ）で希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３ｘ４０ｍｌ）で洗浄し、次いで、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（４０ｍｌ）で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルでクロマトグラフィーした（溶離剤：シクロヘキサン／酢酸エチル５：１から１：１へ）。生成物６７０ｍｇ（理論値の６３％）を単離した。
LCMS (方法 6): Rt = 2.70 分. (m/z = 489 (M+H)+)
【００９６】
実施例１３Ａ
１−［２−アミノ−６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−イル］−２,２,２−トリフルオロエタノン塩酸塩
【化３０】
0005400153.tif 000032
ｔｅｒｔ−ブチル３−（｛６−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル｝アミノ）ピペリジン−１−カルボキシレート（実施例１２Ａ）６７０ｍｇ（１.３７ｍｍｏｌ）を、ジオキサン中の塩酸溶液（４Ｍ）２５ｍｌに溶解し、室温で２０時間撹拌した。反応の完了時に、反応混合物をジエチルエーテル（１００ｍｌ）で希釈し、沈殿を完全に濾過し、ジエチルエーテル（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させた。生成物２８６ｍｇ（理論値の６４％）を固体形で得た。
LCMS (方法 6): Rt = 0.81 分. (m/z = 289 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 9.26 (br s, 1H), 9.07 (br s, 1H), 8.8.34 (br s, 1H), 7.59 (d, 1H), 6.22 (br, 2H), 6.03 (d, 1H), 4.25 (br m, 1H), 3.36 (m, 1H), 3.13 (m, 1H), 2.93 (m, 2H), 2.00-1.85 (m, 2H), 1.73 (m, 1H), 1.56 (m, 1H).
【００９７】
実施例１４Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル３−［（６−アミノ−５−ニトロピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−カルボキシレート
【化３１】
0005400153.tif 000033
ｔｅｒｔ−ブチル３−アミノピペリジン−１−カルボキシレート５００ｍｇ（２.１１ｍｍｏｌ）、２−アミノ−６−クロロ−３−ニトロピリジン７７２ｍｇ（４.２２ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン１.０５ｍｌ（６.３４ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ１８ｍｌに懸濁し、マイクロ波反応器中で４５分間１２０℃に加熱した。反応混合物を分取逆相ＨＰＬＣ（方法１３）により精製した。生成物６００ｍｇ（理論値の８１％）を固体形で単離した。
LCMS (方法 6): Rt = 1.77 分. (m/z = 338 (M+H)+)
【００９８】
実施例１５Ａ
３−ニトロ−Ｎ６−（ピペリジン−３−イル）ピリジン−２,６−ジアミン塩酸塩
【化３２】
0005400153.tif 000034
ｔｅｒｔ−ブチル３−［（６−アミノ−５−ニトロピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−カルボキシレート（実施例１４Ａ）６１０ｍｇ（１.６２ｍｍｏｌ）を、ジオキサン中の塩酸溶液（４Ｍ）４０ｍｌに溶解し、室温で３０分間撹拌した。反応の完了時に、溶媒を完全に除去した。粗生成物６６２ｍｇを得た。
LCMS (方法 4): Rt = 0.86 分. (m/z = 238 (M+H)+)
【００９９】
実施例１６Ａ
メチル２−クロロ−６−（２,４−ジクロロフェニル）ピリジン−３−カルボキシレート
【化３３】
0005400153.tif 000035
メチル２,６−ジクロロピリジン−３−カルボキシレート６ｇ（２９.１２ｍｍｏｌ）、２,４−ジクロロフェニルボロン酸５.５６ｇ（２９.１２ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム１２.０７ｇ（８７.４ｍｍｏｌ）および、次いで、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）１.６８ｇ（１.４６ｍｍｏｌ）を、先ず、脱気したＴＨＦ１２０ｍｌに加え、混合物を還流条件下で、アルゴン雰囲気下で１６時間加熱した。水３００ｍｌおよび酢酸エチル５００ｍｌを添加した。相を分離し、溶媒を除去した後、残渣をシリカゲルでクロマトグラフィーした（シクロヘキサン／酢酸エチル６：１）。生成物２.５ｇ（理論値の２７％）を固体形で単離した。
LCMS (方法 6): Rt = 2.41 分. (m/z = 316 (M+H)+)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.38 (d, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.60 (dd, 1H), 3.92 (s, 3H).
【０１００】
実施例１７Ａ
メチル２−クロロ−６−（２−メトキシフェニル）ピリジン−３−カルボキシレート
【化３４】
0005400153.tif 000036
２−クロロ−６−（２−メトキシフェニル）ピリジン−３−カルボン酸５００ｍｇ（１.９０ｍｍｏｌ）を、先ず、メタノール２０ｍｌおよびトルエン８ｍｌの混合物に加え、ヘキサン中の２モル濃度トリメチルシリルジアゾメタン溶液８ｍｌ（１６ｍｍｏｌ）と混合した。混合物を室温で１５時間撹拌し、次いで、酢酸１ｍｌを添加した。溶媒を減圧下で完全に除去し、得られた固体をさらに精製せずに使用した。生成物５０２ｍｇ（理論値の８７％）を得た。
LCMS (方法 8): Rt = 1.27 分. (m/z = 278 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.29 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.81 (dd, 1H), 7.50 (dt, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.11 (t, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.88 (s, 3H).
【０１０１】
実施例
実施例１
２−｛３−［（６−アミノ−５−ニトロピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−イル｝−６−（４−クロロフェニル）ピリジン−３−カルボニトリル
【化３５】
0005400153.tif 000037
２−クロロ−６−（４−クロロフェニル）ピリジン−３−カルボニトリル７０.４ｍｇ（０.２７ｍｍｏｌ）、３−ニトロ−Ｎ６−（ピペリジン−３−イル）ピリジン−２,６−ジアミン塩酸塩（実施例１５Ａ）１００ｍｇ（０.３２ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０.１８７ｍｌ（１.０８ｍｍｏｌ）を、先ず、ＤＭＳＯ３ｍｌに加えた。混合物をマイクロ波中、１４０℃で３０分間加熱した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（方法１３）により精製した。生成物９９ｍｇ（理論値の７４％）を固体形で得た。
LCMS (方法 8): Rt = 1.45 分. (m/z = 450 (M+H)+)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.13 (d, 2H), 8.09 (d, 2H), 7.89-7.98 (m, 2H), 7.66 (br s, 1H), 7.51 (ψt, 3H), 5.95 (d, 1H), 4.12-4.28 (m, 2H), 3.97-4.06 (m, 1H), 3.36-3.49 (m, 2H), 1.9-2.1 (m, 2H), 1.55-1.77 (m, 2H).
【０１０２】
２−｛３−［（６−アミノ−５−ニトロピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−イル｝−６−（４−クロロフェニル）ピリジン−３−カルボニトリル（実施例１）のエナンチオマー分離を、以下の条件下で実施した：
実施例１のサンプル（７８ｍｇ）をメタノール８ｍｌ、アセトニトリル８ｍｌおよびｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル１５ｍｌに溶解し、Daicel Chiralpak IA, 5μm, 250 mm x 20 mm カラムでクロマトグラフィーした（流速：１５ｍｌ／分；２２０ｎｍで検出；注入量：５００μｌ；溶離剤：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル：メタノール（９０：１０）、温度：３０℃）。２つの画分を単離した：
実施例Ｅｎｔ−Ａ−１：生成物３７ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間４.３１分、比旋光度：［α］２０５８９＝−１１３.０°（ｃ＝０.４７５ｇ／エタノール１００ｍｌ）
実施例Ｅｎｔ−Ｂ−１：生成物３３ｍｇを＞９８％ｅｅで単離した。
保持時間４.６６分
【０１０３】
実施例２
２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（２,４−ジクロロフェニル）ピリジン−３−カルボニトリル
【化３６】
0005400153.tif 000038
２−クロロ−６−（２,４−ジクロロフェニル）ピリジン−３−カルボニトリル２９.５ｍｇ（０.１ｍｍｏｌ）、１−［２−アミノ−６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−イル］−２,２,２−トリフルオロエタノン塩酸塩（実施例１３Ａ）３０ｍｇ（０.１ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０.０９ｍｌ（０.５２ｍｍｏｌ）を、先ず、ＤＭＳＯ１ｍｌに加えた。混合物を１２０℃で、マイクロ波中、３０分間加熱した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（方法１３）で精製した。生成物３５ｍｇ（理論値の６３％）を固体形で得た。
LCMS (方法 3): Rt = 3.13 分. (m/z = 535 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.50 (br s, 2H), 8.16 (d, 1H), 7.97 (d, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.45-7.53 (m, 2H), 7.18 (d, 1H), 5.96 (d, 1H), 4.12-4.25 (m, 2H), 3.99-4.09 (m, 1H), 3.2-3.37 (m, 2H), 1.87-2.08 (m, 2H), 1.5-1.74 (m, 2H).
【０１０４】
２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（２,４−ジクロロフェニル）ピリジン−３−カルボニトリル（実施例２）のエナンチオマー分離を、以下の条件下で実施した：
実施例２のサンプル（１９０ｍｇ）を、２−プロパノール１０ｍｌに溶解し、Daicel Chiralpak AS-H, 5μm, 250 mm x 20 mm カラムを使用してクロマトグラフィーした（流速：１５ｍｌ／分；２２０ｎｍで検出；注入量：１０００μｌ；溶離剤：イソヘキサン：２−プロパノール（５０：５０）、温度：４０℃）。２つの画分を単離した：
実施例Ｅｎｔ−Ａ−２：生成物７３ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間６.０９分
実施例Ｅｎｔ−Ｂ−２：生成物１１０ｍｇを、＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間１３.３８分
【０１０５】
実施例３
２−｛３−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−イル｝−６−（４−フルオロフェニル）ピリジン−３−カルボニトリル
【化３７】
0005400153.tif 000039
２−クロロ−６−（４−フルオロフェニル）ピリジン−３−カルボニトリル６０ｍｇ（０.２６ｍｍｏｌ）、６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−カルボニトリル塩酸塩（実施例１０Ａ）７７ｍｇ（０.３１ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０.２２５ｍｌ（１.２９ｍｍｏｌ）を、先ず、ＤＭＳＯ２ｍｌに加えた。混合物を１２０℃で、マイクロ波中、３０分間加熱した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（方法１３）で精製した。生成物９９ｍｇ（理論値の５０％）を固体形で得た。
LCMS (方法 8): Rt = 1.40 分. (m/z = 399 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.38 (d, 1H), 8.15 (d, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.09 (d, 1H), 7.6-7.68 (m, 2H), 7.46 (d, 1H), 7.32 (ψt, 2H), 6.56 (d, 1H), 4.26 (dd, 1H), 4.01-4.14 (m, 2H), 3.33-3.47 (m, 2H), 2.0-2.08 (m, 1H), 1.88-1.97 (m, 1H), 1.55-1.75 (m, 2H).
【０１０６】
実施例４
２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（４−フルオロフェニル）ピリジン−３−カルボニトリル
【化３８】
0005400153.tif 000040
２−クロロ−６−（４−フルオロフェニル）ピリジン−３−カルボニトリル５５ｍｇ（０.２４ｍｍｏｌ）、１−［２−アミノ−６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−イル］−２,２,２−トリフルオロエタノン塩酸塩（実施例１３Ａ）８３ｍｇ（０.２８ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０.２０６ｍｌ（１.１８ｍｍｏｌ）を、先ず、ＤＭＳＯ２ｍｌに加えた。混合物を１２０℃で、マイクロ波中で３０分間加熱した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（方法１３）で精製した。生成物７２ｍｇ（理論値の５４％）を固体形で得た。
LCMS (方法 8): Rt = 1.52 分. (m/z = 485 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.28 (br s, 1H), 7.86-7.94 (m, 3H), 7.74 (d, 1H), 7.37 (br s, 1H), 7.22-7.30 (m, 2H), 7.05 (t, 2H), 5.74 (d, 1H), 4.02 (m, 1H), 3.93 (d, 1H), 3.76-3.85 (m, 1H), 3.14-3.25 (m, 2H), 1.78-1.86 (m, 1H), 1.67-1.77 (m, 1H), 1.32-1.55 (m, 2H).
【０１０７】
実施例５
２−アミノ−６−（｛１−［３−シアノ−６−（４−フルオロフェニル）ピリジン−２−イル］ピペリジン−３−イル｝アミノ）ピリジン−３−カルボニトリル
【化３９】
0005400153.tif 000041
２−クロロ−６−（４−フルオロフェニル）ピリジン−３−カルボニトリル５５ｍｇ（０.２４ｍｍｏｌ）、２−アミノ−６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−カルボニトリル塩酸塩（実施例１１Ａ）７４ｍｇ（０.２８ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０.２０６ｍｌ（１.１８ｍｍｏｌ）を、先ず、ＤＭＳＯ２ｍｌに加えた。混合物を１２０℃で、マイクロ波中で３０分間加熱した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（方法１３）により精製した。生成物４７ｍｇ（理論値の４８％）を固体形で得た。
LCMS (方法 3): Rt = 2.64 分. (m/z = 414 (M+H)+)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.09-8.17 (m, 3H), 7.47 (d, 1H), 7.26-7.36 (m, 3H), 7.14 (br s, 1H), 6.26 (s, 1H), 5.80 (d, 1H), 4.25 (d, 1H), 4.01-4.12 (m, 2H), 3.17-3.28 (m, 2H), 1.97-2.05 (m, 1H), 1.86-1.96 (m, 1H), 1.62-1.75 (m, 1H), 1.49-1.61 (m, 1H). 
【０１０８】
実施例６
２−アミノ−６−（｛１−［３−シアノ−６−（２,４−ジクロロフェニル）ピリジン−２−イル］ピペリジン−３−イル｝アミノ）ピリジン−３−カルボニトリル
【化４０】
0005400153.tif 000042
２−クロロ−６−（２,４−ジクロロフェニル）ピリジン−３−カルボニトリル５５ｍｇ（０.１９ｍｍｏｌ）、２−アミノ−６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−カルボニトリル塩酸塩（実施例１１Ａ）６０.９ｍｇ（０.２３ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０.１６９ｍｌ（０.９７ｍｍｏｌ）を、先ず、ＤＭＳＯ２ｍｌに加えた。混合物を１２０℃で、マイクロ波中で３０分間加熱した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（方法１３）により精製した。生成物３０ｍｇ（理論値の３３％）を固体形で得た。
LCMS (方法 3): Rt = 2.90 分. (m/z = 464 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.14 (d, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.54 (dd, 1H), 7.23 (d, 1H), 7.16 (d, 1H), 7.10 (br s, 1H), 6.22 (br s, 2H), 5.79 (d, 1H), 4.28 (d, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.91-4.03 (m, 1H), 3.22 (t, 1H), 3.05 (t, 1H), 1.95-2.04 (m, 1H), 1.82-1.92 (m, 1H), 1.6-1.71 (m, 1H), 1.46-1.58 (m, 1H). 
【０１０９】
２−アミノ−６−（｛１−［３−シアノ−６−（２,４−ジクロロフェニル）ピリジン−２−イル］ピペリジン−３−イル｝アミノ）ピリジン−３−カルボニトリル（実施例６）のエナンチオマー分離を、以下の条件下で実施した：
実施例６のサンプル（６３ｍｇ）を、エタノール５ｍｌに溶解し、Daicel Chiralpak AS-H, 5μm, 250 mm x 20 mm カラムを使用してクロマトグラフィーした（流速：１５ｍｌ／分；２２０ｎｍで検出；注入量：２０００μｌ；溶離剤：イソヘキサン：エタノール（５０：５０）、温度：４０℃）。２つの画分を単離した：
実施例Ｅｎｔ−Ａ−６：生成物２５ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間７.３３分
実施例Ｅｎｔ−Ｂ−６：生成物２５ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間１５.６分
【０１１０】
実施例７
２−｛３−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−イル｝−６−（２,４−ジクロロフェニル）ピリジン−３−カルボニトリル
【化４１】
0005400153.tif 000043
２−クロロ−６−（２,４−ジクロロフェニル）ピリジン−３−カルボニトリル６０ｍｇ（０.２１ｍｍｏｌ）、６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−カルボニトリル塩酸塩（実施例１０Ａ）６３ｍｇ（０.２５ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０.１８４ｍｌ（１.０６ｍｍｏｌ）を、先ず、ＤＭＳＯ２ｍｌに加えた。混合物を１２０℃で、マイクロ波中で３０分間加熱した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（方法１３）で精製した。生成物６１ｍｇ（理論値の６４％）を固体形で得た。
LCMS (方法 3): Rt = 3.00 分. (m/z = 449 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.32 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.74 (d, 1H), 7.52-7.63 (m, 4H), 7.13 (d, 1H), 6.54 (d, 1H), 4.20 (d, 1H), 3.98-4.08 (m, 2H), 3.32-3.42 (m, 2H), 1.98-2.06 (m, 1H), 1.86-1.95 (m, 1H), 1.55-1.73 (m, 2H). 
【０１１１】
実施例８
メチル２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（２,４−ジクロロフェニル）ピリジン−３−カルボキシレート塩酸塩
【化４２】
0005400153.tif 000044
メチル２−クロロ−６−（２,４−ジクロロフェニル）ピリジン−３−カルボキシレート（実施例１６Ａ）２５５ｍｇ（０.５３３ｍｍｏｌ）、１−［２−アミノ−６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−イル］−２,２,２−トリフルオロエタノン塩酸塩（実施例１３Ａ）２５９ｍｇ（０.７９９ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０.５６ｍｌ（３.２ｍｍｏｌ）を、先ず、ＤＭＳＯ４.５ｍｌに加えた。混合物を１４０℃で、マイクロ波中で４５分間加熱した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（方法１０）で精製した。生成物２８ｍｇ（理論値の８％）を固体形で得た。
LCMS (方法 6): Rt = 2.87 分. (m/z = 568 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.50 (br s, 1H), 8.0 (d, 1H), 7.89 (d, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.45-7.56 (m, 2H), 7.10 (d, 1H), 5.94 (d, 1H), 4.15 (m, 1H), 3.9-4.0 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.58 (m, 1H), 2.96 (dd, 2H), 1.96-2.08 (m, 1H), 1.75-1.86 (m, 1H), 1.57-1.72 (m, 1H), 1.43-1.56 (m, 1H).
【０１１２】
実施例９
２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（２,４−ジクロロフェニル）ピリジン−３−カルボン酸塩酸塩
【化４３】
0005400153.tif 000045
メチル２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（２,４−ジクロロフェニル）ピリジン−３−カルボキシレート塩酸塩（実施例８）２２０ｍｇ（０.３６ｍｍｏｌ）を、１,２−ジメトキシエタン１０ｍｌに溶解し、水４.４ｍｌを添加した。次いで、水酸化ナトリウム４３ｍｇ（１.１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。後処理に、２Ｎ塩酸３５ｍｌを添加し、形成された沈殿を吸引濾過した。生成物１８０ｍｇ（理論値の７５％）を固体形で得た。
LCMS (方法 6): Rt = 2.42 分. (m/z = 554 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ =13.1 (br s, 1H), 8.50 (br s, 1H), 8.02 (d, 1H), 7.9-7.96 (m, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.62-7.70 (m, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.47-7.55 (m, 2H), 7.11 (d, 1H), 5.95 (d, 1H), 4.11-4.24 (m, 1H), 4.00 (d, 1H), 3.66-3.75 (m, 1H), 2.90 (dd, 2H), 1.98-2.07 (m, 1H), 1.75-1.85 (m, 1H), 1.59-1.74 (m, 1H), 1.42-1.55 (m, 1H).
【０１１３】
実施例１０
メチル２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（２−メトキシフェニル）ピリジン−３−カルボキシレート塩酸塩
【化４４】
0005400153.tif 000046
実施例８の製造と同様に、メチル２−クロロ−６−（２−メトキシフェニル）ピリジン−３−カルボキシレート（実施例１７Ａ）２５５ｍｇ（０.８４ｍｍｏｌ）および１−［２−アミノ−６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−イル］−２,２,２−トリフルオロエタノン塩酸塩（実施例１３Ａ）２９９ｍｇ（０.９２ｍｍｏｌ）を使用して、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（方法１０）により精製した後に、生成物２７５ｍｇ（理論値の５８％）を固体形で得た。
LCMS (方法 6): Rt = 2.62 分. (m/z = 530 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.51 (br s, 1H), 7.9-8.0 (m, 2H), 7.77 (d, 1H), 7.55-7.71 (m, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.39 (t, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.13 (d, 1H), 7.0 (t, 1H), 5.95 (d, 1H), 4.19 (m, 1H), 3.91-3.98 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.55-3.65 (m, 1H), 3.49 (s, 3H), 2.96 (t, 2H), 1.98-2.05 (m, 1H), 1.78-1.85 (m, 1H), 1.6-1.71 (m, 1H), 1.44-1.56 (m, 1H).
【０１１４】
実施例１１
２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（２−メトキシフェニル）ピリジン−３−カルボン酸塩酸塩
【化４５】
0005400153.tif 000047
実施例９の製造と同様に、メチル２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（２−メトキシフェニル）ピリジン−３−カルボキシレート塩酸塩（実施例１０）２３５ｍｇ（０.４２ｍｍｏｌ）を使用して、水酸化ナトリウムを用いる加水分解により、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（方法１０）で精製した後に、生成物２０７ｍｇ（理論値の９７％）を固体形で得た。
LCMS (方法 8): Rt = 1.28 分. (m/z = 516 (M+H)+)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ =13.1 (s, br, 1H), 8.51 (s, br, 1H), 7.98 (d, 2H), 7.92 (d, 1H), 7.78 (dd, 1H), 7.68 (s, br, 1H), 7.51 (m, 1H), 7.35-7.44 (m, 2H), 7.13 (d, 1H), 7.02 (t, 1H), 5.95 (d, 1H), 4.20 (m, 1H), 3.94 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.69 (m, 1H), 2.87-2.98 (m, 2H), 1.98-2.07 (m, 1H), 1.76-1.85 (m, 1H), 1.6-1.75 (m, 1H), 1.42-1.54 (m, 1H).
【０１１５】
アミドカップリングのための一般的な実験の説明：
特定のアミン０.１１７ｍｍｏｌを、先ず、ＤＭＦ３ｍｌに加え、ＨＡＴＵ０.１２５ｍｍｏｌ、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０.２５ｍｍｏｌおよび酸（実施例９および実施例１１）０.０８３ｍｍｏｌと連続的に混合する。混合物を室温で１６時間撹拌した。分取ＨＰＬＣ（方法１３）による精製後、生成物を固体形で得た。
【０１１６】
アミドカップリングのための一般的な実験の説明を使用して、以下の化合物を製造した：
【表２】
0005400153.tif 000048
【０１１７】
【表３】
0005400153.tif 000049
【０１１８】
１−［２−アミノ−６−（｛１−［６−（２−メトキシフェニル）−３−｛［４−（プロパン−２−イル）ピペラジン−１−イル］カルボニル｝ピリジン−２−イル］ピペリジン−３−イル｝アミノ）ピリジン−３−イル］−２,２,２−トリフルオロエタノン（実施例１２）のエナンチオマー分離を、以下の条件下で実施した：
実施例１２のサンプル（２４ｍｇ）を、２−プロパノール２ｍｌに溶解し、Daicel Chiralpak AD-H, 5μm, 250 mm x 20 mm カラムを使用してクロマトグラフィーした（流速：１５ｍｌ／分；２２０ｎｍで検出；注入量：５００μｌ；溶離剤：イソヘキサン：０.２％ジエチルアミンを含む２−プロパノール、（６０：４０）、温度：３０℃）。２つの画分を単離した：
実施例Ｅｎｔ−Ａ−１２：生成物１５ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間５.２６分、比旋光度：［α］２０５８９＝−１７３.７°（ｃ＝０.３７ｇ／エタノール１００ｍｌ）
実施例Ｅｎｔ−Ｂ−１２：生成物９ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間６.３０分
【０１１９】
２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（２−メトキシフェニル）−Ｎ−｛［１−（プロパン−２−イル）ピペリジン−４−イル］メチル｝ピリジン−３−カルボキサミド（実施例１３）のエナンチオマー分離を、以下の条件下で実施した：
実施例１３のサンプル（２８ｍｇ）を、エタノール１ｍｌに溶解し、Daicel Chiralpak AD-H, 5μm, 250 mm x 20 mm カラムを使用してクロマトグラフィーした（流速：１５ｍｌ／分；２２０ｎｍで検出；注入量：５００μｌ；溶離剤：イソヘキサン：０.２％ジエチルアミンを含むエタノール（６０：４０）、温度：３０℃）。２つの画分を単離した：
実施例Ｅｎｔ−Ａ−１３：生成物６ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間４.５７分
実施例Ｅｎｔ−Ｂ−１３：生成物１２ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間６.６６分、比旋光度：［α］２０５８９＝−１０３.７°（ｃ＝０.３７５ｇ／エタノール１００ｍｌ）
【０１２０】
１−｛２−アミノ−６−［（１−｛３−［（４,４−ジフルオロピペリジン−１−イル）カルボニル］−６−（２−メトキシフェニル）ピリジン−２−イル｝ピペリジン−３−イル）アミノ］ピリジン−３−イル｝−２,２,２−トリフルオロエタノン（実施例１４）のエナンチオマー分離を、以下の条件下で実施した：
実施例１４のサンプル（２８ｍｇ）を、２−プロパノール２ｍｌに溶解し、Daicel Chiralpak AD-H, 5μm, 250 mm x 20 mm カラム（流速：１５ｍｌ／分；２２０ｎｍで検出；注入量：５００μｌ；溶離剤：イソヘキサン：０.２％ジエチルアミンを含む２−プロパノール（６０：４０）、温度：３０℃）でクロマトグラフィーした。２つの画分を単離した：
実施例Ｅｎｔ−Ａ−１４：生成物１５ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間５.９６分、比旋光度：［α］２０５８９＝−１６６.７°（ｃ＝０.３８ｇ／エタノール１００ｍｌ）
実施例Ｅｎｔ−Ｂ−１４：生成物１１ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間７.２５分
【０１２１】
実施例２０
２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（２−クロロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル
【化４６】
0005400153.tif 000050
２−クロロ−６−（２−クロロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル７０ｍｇ（０.２２１ｍｍｏｌ）、１−［２−アミノ−６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−イル］−２,２,２−トリフルオロエタノン塩酸塩（実施例１３Ａ）６５ｍｇ（０.２２１ｍｍｏｌ）およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン０.１９２ｍｌ（１.１ｍｍｏｌ）を、先ず、ＤＭＳＯ２ｍｌに加えた。反応混合物をマイクロ波反応器中、１２０℃で３０分間照射した。反応混合物を分取ＨＰＬＣ（方法１３）で精製した。これにより、生成物８６ｍｇ（理論値の６８％）を得た。
LCMS (方法 6): Rt = 2.84 分. (m/z = 569 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.49 (br s, 1H), 7.90 (d, 1H), 7.69 (dd, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.42-7.58 (m, 5H), 5.91 (d, 1H), 4.11-4.22 (m, 2H), 3.92-4.01 (m, 1H), 3.48-3.64 (m, 2H), 1.96-2.09 (m, 2H), 1.58-1.75 (m, 2H).
【０１２２】
２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（２−クロロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル（実施例２０）のエナンチオマー分離を、以下の条件下で実施した：
実施例２０のサンプル（７５ｍｇ）を、エタノール２ｍｌに溶解し、Daicel Chiralpak AS-H, 5μm, 250 mm x 20 mm カラム（流速：１５ｍｌ／分；２２０ｎｍで検出；注入量：１０００μｌ；溶離剤：イソヘキサン：エタノール（７０：３０）、温度：４０℃）を使用してクロマトグラフィーした。２つの画分を単離した：
実施例Ｅｎｔ−Ａ−２０：生成物２８ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間４.２３分、比旋光度：［α］２０５８９＝＋３１８.４°（ｃ＝０.６２２ｇ／エタノール１００ｍｌ）
実施例Ｅｎｔ−Ｂ−２０：生成物４６ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間６.３４分
【０１２３】
実施例２１
２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（４−フルオロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル
【化４７】
0005400153.tif 000051
実施例２０の製造と同様に、２−クロロ−６−（４−フルオロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル６０ｍｇ（０.２ｍｍｏｌ）および１−［２−アミノ−６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−イル］−２,２,２−トリフルオロエタノン塩酸塩（実施例１３Ａ）７０.４ｍｇ（０.２４ｍｍｏｌ）を使用して、分取ＨＰＬＣ（方法１３）による分離の後に、生成物９２ｍｇ（理論値の８３％）を固体形で得た。
LCMS (方法 8): Rt = 1.61 分. (m/z = 553 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.50 (br s, 1H), 8.20-8.28 (m, 2H), 7.90 (d, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.58 (br s, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.30 (ψt, 2H), 5.90 (d, 1H), 4.17-4.28 (m, 1H), 4.07 (d, 1H), 3.88-3.97 (m, 1H), 3.75-3.83 (m, 1H), 3.59-3.68 (m, 1H), 1.97-2.09 (m, 2H), 1.62-1.77 (m, 2H).
【０１２４】
２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（４−フルオロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル（実施例２１）のエナンチオマー分離を、以下の条件下で実施した：
実施例２１のサンプル（８４ｍｇ）を、イソヘキサン：エタノール（４：１）２０ｍｌに溶解し、Daicel Chiralpak AS-H, 5μm, 250 mm x 20 mm カラム（流速：２０ｍｌ／分；２３０ｎｍで検出；注入量：２００００μｌ；溶離剤：イソヘキサン：エタノール（８０：２０）、温度：２４℃）を使用してクロマトグラフィーした。２つの画分を単離した：
実施例Ｅｎｔ−Ａ−２１：生成物３９ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間４.５２分、比旋光度：［α］２０５８９＝＋３２７.６°（ｃ＝０.５９０５ｇ／エタノール１００ｍｌ）
実施例Ｅｎｔ−Ｂ−２１：生成物２４ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間６.６２分
【０１２５】
実施例２２
２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（３−クロロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル
【化４８】
0005400153.tif 000052
実施例２０の製造と同様に、２−クロロ−６−（３−クロロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル６０ｍｇ（０.１９ｍｍｏｌ）および１−［２−アミノ−６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−イル］−２,２,２−トリフルオロエタノン塩酸塩（実施例１３Ａ）６６.８ｍｇ（０.２３ｍｍｏｌ）を使用して、分取ＨＰＬＣ（方法１３）による分離の後に、生成物９６ｍｇ（理論値の８９％）を固体形で得た。
LCMS (方法 8): Rt = 1.67 分. (m/z = 569 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.49 (br s, 1H), 8.23 (t, 1H), 8.13 (d, 1H), 7.90 (d, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.56 (br s, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.46 (m, 1H), 5.89 (d, 1H), 4.22 (m, 1H), 4.13 (d, 1H), 3.9-3.99 (m, 1H), 3.72 (dd, 1H), 3.58-3.67 (m, 1H), 2.0-2.12 (m, 2H), 1.61-1.78 (m, 2H).
【０１２６】
２−（３−｛［６−アミノ−５−（トリフルオロアセチル）ピリジン−２−イル］アミノ｝ピペリジン−１−イル）−６−（３−クロロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル（実施例２２）のエナンチオマー分離を、以下の条件下で実施した：
実施例２２のサンプル（８３ｍｇ）を、イソヘキサン：エタノール（４：１）２０ｍｌに溶解し、Daicel Chiralpak AS-H, 5μm, 250 mm x 20 mm カラム（流速：２０ｍｌ／分；２３０ｎｍで検出；注入量：４５００μｌ；溶離剤：イソヘキサン：エタノール（８０：２０）、温度：２４℃）を使用してクロマトグラフィーした。２つの画分を単離した：
実施例Ｅｎｔ−Ａ−２２：生成物２６ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間４.５４分、比旋光度：［α］２０５８９＝＋３２８.２°（ｃ＝０.４６４５ｇ／エタノール１００ｍｌ）
実施例Ｅｎｔ−Ｂ−２２：生成物４２ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間７.１５分
【０１２７】
実施例２３
６−（２−クロロフェニル）−２−｛３−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−イル｝−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル
【化４９】
0005400153.tif 000053
実施例２０の製造と同様に、２−クロロ−６−（２−クロロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル６０ｍｇ（０.１９ｍｍｏｌ）および６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−カルボニトリル塩酸塩（実施例１０Ａ）４７ｍｇ（０.１９ｍｍｏｌ）を使用して、分取ＨＰＬＣ（方法１３）による分離の後、生成物６１ｍｇ（理論値の６７％）を固体形で得た。
LCMS (方法 8): Rt = 1.53 分. (m/z = 483 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.31 (d, 1H), 7.67 (dd, 1H), 7.45-7.64 (m, 6H), 6.51 (d, 1H), 4.15 (d, 1H), 3.91-4.07 (m, 2H), 3.52-3.65 (m, 2H), 1.94-2.07 (m, 2H), 1.61-1.75 (m, 2H).
【０１２８】
実施例２４
２−｛３−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−イル｝−６−（４−フルオロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル
【化５０】
0005400153.tif 000054
実施例２０の製造と同様に、２−クロロ−６−（４−フルオロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル６０ｍｇ（０.２ｍｍｏｌ）および６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−カルボニトリル塩酸塩（実施例１０Ａ）５９.５ｍｇ（０.２４ｍｍｏｌ）を使用して、分取ＨＰＬＣ（方法１３）による分離の後に、生成物６１ｍｇ（理論値の６６％）を固体形で得た。
LCMS (方法 8): Rt = 1.5 分. (m/z = 467 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.38 (d, 1H), 8.23-8.29 (m, 2H), 7.76 (s, 1H), 7.57-7.65 (m, 2H), 7.36 (ψt, 2H), 6.52 (d, 1H), 4.19 (dd, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.93-4.01 (m, 1H), 3.57-3.71 (m, 2H), 1.92-2.09 (m, 2H), 1.61-1.78 (m, 2H).
【０１２９】
実施例２５
６−（４−クロロフェニル）−２−｛３−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−イル｝−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル
【化５１】
0005400153.tif 000055
実施例２０の製造と同様に、２−クロロ−６−（４−クロロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル６０ｍｇ（０.１９ｍｍｏｌ）および６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−カルボニトリル塩酸塩（実施例１０Ａ）５６ｍｇ（０.２３ｍｍｏｌ）を使用して、分取ＨＰＬＣ（方法１３）による分離の後に、生成物４６ｍｇ（理論値の５０％）を固体形で得た。
LCMS (方法 8): Rt = 1.57 分. (m/z = 483 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.38 (d, 1H), 8.21 (d, 2H), 7.78 (s, 1H), 7.55-7.65 (m, 4H), 6.52 (d, 1H), 4.18 (d, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.92-4.01 (m, 1H), 3.59-3.72 (m, 2H), 1.96-2.09 (m, 2H), 1.63-1.76 (m, 2H).
【０１３０】
実施例２６
２−｛３−［（６−アミノ−５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−イル｝−６−（２−クロロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル
【化５２】
0005400153.tif 000056
実施例２０の製造と同様に、２−クロロ−６−（２−クロロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル６０ｍｇ（０.１９ｍｍｏｌ）および２−アミノ−６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−カルボニトリル塩酸塩（実施例１１Ａ）４９.５ｍｇ（０.１９ｍｍｏｌ）を使用して、分取ＨＰＬＣ（方法１３）による分離の後に、生成物９４ｍｇ（理論値の９９％）を固体形で得た。
LCMS (方法 3): Rt = 2.87 分. (m/z = 498 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 7.69 (dd, 1H), 7.61 (dd, 1H), 7.54 (dd, 1H), 7.45-7.52 (m, 2H), 7.22 (d, 1H), 7.10 (br s, 1H), 6.21 (s, 2H), 5.75-5.8 (m, 1H), 4.24 (d, 1H), 3.91-4.10 (m, 2H), 3.33-3.45 (m, 2H), 1.9-2.05 (m, 2H), 1.5-1.73 (m, 2H).
【０１３１】
２−｛３−［（６−アミノ−５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−イル｝−６−（２−クロロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル（実施例２６）のエナンチオマー分離を、以下の条件下で実施した：
実施例２６のサンプル（８３ｍｇ）をイソヘキサン：エタノール（３：２）２０ｍｌに溶解し、Daicel Chiralpak AS-H, 5μm, 250 mm x 20 mm カラム（流速：２０ｍｌ／分；２３０ｎｍで検出；注入量：４５００μｌ；溶離剤：イソヘキサン：エタノール（７０：３０）、温度：２４℃）を使用してクロマトグラフィーした。２つの画分を単離した：
実施例Ｅｎｔ−Ａ−２６：生成物２６ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間７.９７分、比旋光度：［α］２０５８９＝＋２０８°（ｃ＝０.２３０ｇ／エタノール１００ｍｌ）
実施例Ｅｎｔ−Ｂ−２６：生成物２６ｍｇを＞９９％ｅｅで単離した。
保持時間１３.５７分
【０１３２】
実施例２７
２−｛３−［（６−アミノ−５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］ピペリジン−１−イル｝−６−（４−フルオロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル
【化５３】
0005400153.tif 000057
実施例２０の製造と同様に、２−クロロ−６−（４−フルオロフェニル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−カルボニトリル６０ｍｇ（０.２ｍｍｏｌ）および２−アミノ−６−（ピペリジン−３−イルアミノ）ピリジン−３−カルボニトリル塩酸塩（実施例１１Ａ）６２.６ｍｇ（０.２４ｍｍｏｌ）を使用して、分取ＨＰＬＣ（方法１３）による分離の後に、生成物９０ｍｇ（理論値の９４％）を固体形で得た。
LCMS (方法 3): Rt = 2.83 分. (m/z = 482 (M+H)+).
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ = 8.21-8.28 (m, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.35 (ψt, 2H), 7.27 (d, 1H), 7.12 (d, 1H), 6.25 (br s, 2H), 5.77 (d, 2H), 4.19 (d, 1H), 3.98-4.1 (d, 2H), 3.42-3.58 (m, 2H), 1.92-2.07 (m, 2H), 1.56-1.78 (m, 2H).
【０１３３】
Ｂ）生理的効力の評価
本発明の化合物の血液疾患の処置に対する適合性を、以下のアッセイ系で立証できる：
インビトロアッセイ
活性物質の阻害活性を、生化学的アッセイで測定する。この目的で必要とされる成分を、透明な底を有する黒色の３８４ウェルマイクロタイタープレート中で混合する（Greinerより、カタログ番号781092）。３８４ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに必要な成分は、５ｎＭ ＧＳＫ３β（Upstateより、カタログ番号 14-306）、４０μＭ ＧＳＫ３β基質ＧＳＭ（配列H-RRRPASVPPSPSLSRHS-(pS)-HQRR、Upstateより、カタログ番号 2-533）、３０μＭニコチンアミドアデニンジヌクレオチドＮＡＤＨ（Roche Diagnostics、カタログ番号 10107735）、５０μＭアデノシン三リン酸ＡＴＰ（Sigmaより、カタログ番号 A7966）、２ｍＭホスホエノールピルビン酸（Rocheより、カタログ番号128112）、並びに、約１Ｕ／ｍｌのピルビン酸キナーゼおよび約１Ｕ／ｍｌの乳酸デヒドロゲナーゼであり、これらは、保存調製物（Rocheより、カタログ番号10737291001、３.２ｍＭ硫酸アンモニウム溶液ｐＨ６中の、約４５０Ｕ／ｍｌのピルビン酸キナーゼ活性、約４５０Ｕ／ｍｌの乳酸デヒドロゲナーゼ活性を有する懸濁液）中に一緒に存在する。１ユニットのピルビン酸キナーゼは、ｐＨ７.６および３７℃で、毎分１μｍｏｌのホスホエノールピルビン酸をピルビン酸塩に変換し、１ユニットの乳酸デヒドロゲナーゼは、ｐＨ７.５および３７℃で、毎分１μｍｏｌのピルビン酸塩を酪酸塩に還元する。必要とされる反応バッファー（その中で生化学反応が進行する）は、５０ｍＭ Trizma 塩酸塩トリスＨＣｌ ｐＨ：７.５（Sigmaより、カタログ番号 T3253）、５ｍＭ塩化マグネシウムＭｇＣｌ２（Sigmaより、カタログ番号 M8266）、０.２ｍＭ ＤＬ−ジチオスレイトールＤＴＴ（Sigmaより、カタログ番号 D9779）、２ｍＭエチレンジアミンエーテルテトラ酢酸ＥＤＴＡ（Sigmaより、カタログ番号 E6758）、０.０１％ Triton X-100 (Sigmaより、カタログ番号 T8787）および０.０５％ウシ血清アルブミンＢＳＡ（Sigmaより、カタログ番号 B4287）からなる。
【０１３４】
活性物質をジメチルスルホキシドＤＭＳＯ（Sigmaより、カタログ番号 D8418）に１０ｍＭの濃度で溶解する。活性物質を、１０μＭ、１μＭ、０.１μＭ、０.０１μＭ、０.００１μＭ、０.０００１μＭ、０.００００１μＭ、０.０００００１μＭの連続的濃度で、生化学反応の混合物に添加する。対照として、物質の代わりにジメチルスルホキシドを最終濃度０.１％で添加する。
【０１３５】
反応を、３０℃で２時間インキュベートし、次いで、得られる蛍光を、Tecan Safire-XFLUOR4 装置、バージョン V4.50 (シリアルナンバー 12901300283）で、以下の仕様で測定する：測定様式−下方から測定される蛍光、励起波長３４０ｎｍ、発光波長４６５ｎｍ、励起スリット幅５ｎｍ、発光スリット幅５ｎｍ、利得モード１２０、遅延０μｓ、測定毎の閃光回数３、積分時間４０μｓ。
【０１３６】
ＧＳＫ３β活性を蛍光ユニットで測定し、阻害されていないキナーゼの値を１００％とし、完全に阻害されているキナーゼの値を０％とする。活性物質の活性を、これらの０％および１００％との関連で算出する。
【０１３７】
表Ａは、上記のアッセイで測定したＩＣ５０値を示す。
表Ａ
【表４】
0005400153.tif 000058
【０１３８】
ＧＳＫ３β阻害剤を試験するためのＣＤ３４＋増殖アッセイ
成人造血幹細胞は、膜結合タンパク質の特異的発現を特徴とする。これらの表面マーカーは、それらの分子量によって適当な番号を与えられている。このクラスには、また、ＣＤ３４と呼ばれる分子も含まれ、これは、成人造血幹細胞の同定、特徴解析および単離に役立つ。これらの幹細胞は、骨髄、末梢血または臍帯血から単離され得る。これらの細胞の生存能はインビトロの培養中で限られているが、培養培地への様々な添加物により、増殖および分化の刺激を受け得る。ＣＤ３４陽性細胞は、ここで、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３の活性に対する物質の影響を試験するために使用される。この目的で、第１段階で、分画遠心段階により単核細胞を臍帯血から単離する。
【０１３９】
この目的で、臍帯血をリン酸緩衝食塩水で１：４に希釈する。５０ｍｌの遠心管に、１７ｍｌの Ficoll (密度 1.077、Ficoll Paque Plus; Pharmacia, カタログ番号 17-1440-02）を入れる。１：４に希釈した臍帯血３０ｍｌをその上に重ね、次いで４００ｘｇ、室温で、３０分間遠心分離する。この間、遠心機のブレーキはかけない。遠心分離により、単核細胞は相間に集まる。後者を３０ｍｌのピペットで取り出し、新しい５０ｍｌの遠心容器に移し、次いで、体積をリン酸緩衝食塩水で３０ｍｌにする。これらの細胞を、３００ｘｇで、ブレーキをかけて、室温で１０分間遠心分離する。上清を廃棄し、得られる細胞ペレットをリン酸緩衝食塩水３０ｍｌに再懸濁する。これらの細胞を、再度、２００ｘｇで、ブレーキをかけて、２０℃で１５分間遠心分離する。
【０１４０】
濃縮した単核細胞からＣＤ３４陽性細胞を単離するために、細胞１ｘ１０８個／ＭＡＣＳバッファー（０.５％エンドトキシン不含ウシ血清アルブミンを含むリン酸緩衝食塩水）３００μｌの濃度で再懸濁する。ＦＣＲブロッキング試薬（Miltenyi Biotec, カタログ番号 130-046-702）１００μｌおよびＣＤ３４マイクロビーズ（Miltenyi Biotec, カタログ番号 130-046-702）１００μｌを添加する。この懸濁液を４℃で３０分間インキュベートする。次いで細胞を２０倍の体積のＭＡＣＳバッファーで希釈し、３００ｘｇで１０分間遠心分離する。上清を廃棄し、細胞をＭＡＣＳバッファー５００μｌに再懸濁する。かくして処理した細胞をＬＳカラム（Miltenyi Biotec, カタログ番号 130-042-401）に載せ、Midi MACS マグネット (Miltenyi Biotec, カタログ番号 130-042-303）を使用して精製する。
【０１４１】
Neubauer チャンバーを使用して細胞を計数することにより、ＣＤ３４陽性細胞の数を決定する。蛍光励起細胞分取法を使用する標準的プロトコールにより、細胞の純度を決定する（Becton Dickinson, BD FACSTM Sample Prep Assistant SPAII Upgrade Kit, カタログ番号 337642)。
【０１４２】
ＧＳＫ３活性の調節の影響を測定するために、ＣＤ３４陽性細胞を９６ウェルのマイクロタイタープレート中、３７℃および５％二酸化炭素で７日間インキュベートし、次いで細胞数に基づいて増殖速度を測定する。
【０１４３】
この目的で、５０００個のＣＤ３４陽性細胞を、９６個のＵ底ウェルのマイクロタイタープレート（Greiner Bio-One, カタログ番号 650 180）の各ウェル中で、１００μｌのＩＭＤＭ培地（Life Technology, カタログ番号 12440-046）、１０％ウシ胎児血清（Life Technology, カタログ番号 10082-139）および２０ｎｇ／ｍｌの幹細胞因子（R&D, カタログ番号 255-SC-010）に取る。加えて、細胞を、また、ジメチルスルホキシド（Sigma Aldrich, カタログ番号 D5879-1L）に溶解した様々な濃度の物質と混合する。これは、各場合で上述の細胞数５０００個のＣＤ３４陽性細胞／ウェルを有する４個のウェルに１０μｍｏｌを、４個のウェルに５μｍｏｌを、４個のウェルに２.５μｍｏｌを、４個のウェルに１.２５μｍｏｌを、４個のウェルに０.６２５μｍｏｌを、４個のウェルに０.３１２５μｍｏｌを、４個のウェルに０.１５６μｍｏｌを、４個のウェルに０.０７８μｍｏｌを、そして対照として４個のウェルに最終濃度０.１％のジメチルスルホキシドを供給することにより行う。
【０１４４】
かくして処理したこれらの細胞を、細胞培養インキュベーター中、３７℃および５％二酸化炭素で７日間インキュベートする。Neubauer 計数チャンバーを使用して細胞を再度計数することにより増殖速度を決定し、幹細胞因子のみを与えられた細胞を１００％値と設定し、全ての他の値をこの値に関連付ける。
【０１４５】
インビボアッセイ
本発明の化合物のインビボ効果は、体重１８−２２ｇの６週齢のオスのＣ５７ＢＬ／６マウス（Charles River, Sulzfeld, Germany）を使用して試験する。これらの動物をこの種にふさわしく、１２時間の明暗サイクルで、一定の気候条件下、水およびマウス用飼料を自由に摂らせて飼育する。使用する化学療法剤の濃縮物を、製造業者の指示に従い、腹部の尾側３分の１での腹腔内（ｉ.ｐ.）注射により、動物に投与する。同じ方法を本発明に関連する物質に適用する。パスツールピペットを使用して、血液サンプルを後眼窩静脈叢から取る。フローサイトメトリーシステムを使用して、好中球の顆粒球の数を完全に自動的に決定する。
【０１４６】
ＣＹＰ阻害試験
物質がヒトにおいてＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ３Ａ４を阻害する能力を、ＣＹＰアイソフォーム特異的代謝産物を形成する標準基質（下記参照）の存在下で、酵素供給源としてプールしたヒト肝臓ミクロソームを用いることにより調べる。阻害効果を、６つの異なる濃度（１.５、３.１、６.３、１２.５、２５および５０μＭ）の試験化合物で試験し、試験化合物の非存在下における標準基質のＣＹＰアイソフォーム特異的代謝産物形成の程度と比較し、対応するＩＣ５０値を算出する。単一のＣＹＰアイソフォームを特異的に阻害する標準阻害剤は、得られた結果の対照として役立つ。
【０１４７】
手順：
ワークステーション（Tecan、Genesis、クライルシャイム、ドイツ国）において、ヒト肝臓ミクロソームとフェナセチン、アモジアキン、ジクロフェナク、デキストロメトルファンまたはミダゾラムのインキュベーションを、各場合で６つの異なる濃度の試験化合物（可能性のある阻害剤として）の存在下で実施する。標準インキュベーション混合物は、総体積２００μｌ中に、１.３ｍＭのＮＡＤＰ、３.３ｍＭのＭｇＣｌ２×６Ｈ２Ｏ、３.３ｍＭのグルコース６−リン酸、グルコース６−リン酸デヒドロゲナーゼ（０.４Ｕ／ｍｌ）および１００ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ７.４）を含む。好ましくは、試験化合物をアセトニトリルに溶解する。９６ウェルプレートを、所定の期間にわたり、３７℃で、プールしたヒト肝臓ミクロソームとインキュベートする。適切な内部標準を含むアセトニトリル１００μｌを添加することにより、反応を停止させる。沈殿したタンパク質を遠心分離により除去し、上清を合わせ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析する。
【０１４８】
溶解度の測定
必要とされる試薬：
・ＰＢＳバッファーｐＨ６.５：６１.８６ｇの塩化ナトリウムｐ.ａ.（例えば Merck から、製品番号1.06404.1000）、３９.５４ｇのリン酸二水素ナトリウムｐ.ａ.（例えば Merck から、製品番号1.06346.1000）および８３.３５ｇの１Ｎ水酸化ナトリウム溶液（例えば Bernd Kraft GmbH から、製品番号01030.4000）を秤量して１ｌの標準フラスコへ入れ、印しまで水を加え、混合物を約１時間撹拌する。この溶液５００ｍｌを５ｌの標準フラスコに加え、印しまで水を加える。１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨを６.５に調節する。
・ジメチルスルホキシド（例えば Baker から、製品番号7157.2500）
・蒸留水
・Chromasolv アセトニトリル（例えば Riedel-de Haenから、製品番号34851）
・５０％ギ酸ｐ.ａ.（例えば Fluka から、製品番号09676）
【０１４９】
出発溶液の調製
少なくとも１.５ｍｇの試験物質を正確に秤量し、スクリューキャップおよびセプタムを取り付けた広口１０ｍｍスクリューＶ型バイアル（Glastechnik Graefenroda GmbH から、製品番号 8004-WM-H/V 15μ）に入れ、ジメチルスルホキシドを５０ｍｇ／ｍｌの濃度まで加え、バイアルを３０分間ボルテックスする。
【０１５０】
較正溶液の調製：
必要なピペット操作工程は、１.２ｍｌの９６ウェルの深型ウェルプレート (DWP)（例えば、HJ-Bioanalytik GmbH、製品番号850289）中で、液体操作ロボットを使用して実施する。使用する溶媒は、Chromasolv アセトニトリル／蒸留水８：２の混合物である。
【０１５１】
較正溶液用出発溶液（原液）の調製：８３３μｌの溶媒混合物を、出発溶液（濃度＝６００μｇ／ｍｌ）１０μｌに加え、混合物をホモジネートする。各試験物質から、２つの１：１００希釈液を別々のＤＷＰに調製し、次いでこれらをホモジネートする。１：１００希釈液の一方を較正溶液の調製に使用し；第２の希釈液をＭＳ／ＭＳパラメーターの最適化に使用する。
【０１５２】
較正溶液５（６００ｎｇ／ｍｌ）：２７０μｌの溶媒混合物を３０μｌの原液に加え、混合物をホモジネートする。
較正溶液４（６０ｎｇ／ｍｌ）２７０μｌの溶媒混合物を３０μｌの較正溶液５に加え、混合物をホモジネートする。
較正溶液３（１２ｎｇ／ｍｌ）：４００μｌの溶媒混合物を１００μｌの較正溶液４に加え、混合物をホモジネートする。
較正溶液２（１.２ｎｇ／ｍｌ）：２７０μｌの溶媒混合物を３０μｌの較正溶液３に加え、混合物をホモジネートする。
較正溶液１（０.６ｎｇ／ｍｌ）：１５０μｌの溶媒混合物を１５０μｌの較正溶液２に加え、混合物をホモジネートする。
【０１５３】
試料溶液の調製：
必要なピペット操作工程を、１.２ｍｌの９６ウェルＤＷＰ（例えば、HJ-Bioanalytik GmbH、製品番号850289）で、液体操作ロボットを利用して実施する。
１０００μｌのＰＢＳバッファーｐＨ６.５を、１０.１μｌの原液に加える。
【０１５４】
手順：
必要なピペット操作工程を、１.２ｍｌの９６ウェルＤＷＰ（例えば、HJ-Bioanalytik GmbH、製品番号850289）で、液体操作ロボットを利用して実施する。
温度調節可能なシェーカー（例えば、Eppendorf Thermomixer comfort、製品番号5355000.011）を用いて、かくして調製した試料溶液を２０℃および１４００ｒｐｍで２４時間振盪する。これらの溶液の各々から１８０μｌを取り出し、Beckman Polyallomer 遠心分離管（製品番号343621）に移す。これらの溶液を約２２３０００×ｇで１時間遠心分離する（例えば、Beckman Optima L-90K Ultracentrifuge、42.2 Ti 型ローター、４２０００ｒｐｍ）。各試料溶液から１００μｌの上清を取り出し、ＰＢＳバッファー６.５で１：１０および１：１０００に希釈する。
【０１５５】
分析：
試料をＨＰＬＣ／ＭＳ−ＭＳにより分析する。試験化合物を、５点較正曲線を利用して定量する。溶解度をｍｇ／ｌで表す。分析順序：１）ブランク（溶媒混合物）；２）較正溶液０.６ｎｇ／ｍｌ；３）較正溶液１.２ｎｇ／ｍｌ；４）較正溶液１２ｎｇ／ｍｌ；５）較正溶液６０ｎｇ／ｍｌ；６）較正溶液６００ｎｇ／ｍｌ；７）ブランク（溶媒混合物）；８）試料溶液１：１０００；７）試料溶液１：１０。
【０１５６】
ＨＰＬＣ／ＭＳ−ＭＳの方法
ＨＰＬＣ：Agilent 1100、定量ポンプ（G1311A）、オートサンプラー CTC HTS PAL、脱気装置（G1322A）およびカラムサーモスタット（G1316A）；カラム：Oasis HLB 20 mm x 2.1 mm、25μ；温度：４０℃；溶離剤Ａ：水＋０.５ｍｌのギ酸／ｌ；溶離剤Ｂ：アセトニトリル＋０.５ｍｌのギ酸／ｌ；流速：２.５ｍｌ／分；停止時間１.５分；勾配：０分９５％Ａ、５％Ｂ；勾配：０−０.５分５％Ａ、９５％Ｂ；０.５−０.８４分５％Ａ、９５％Ｂ；勾配：０.８４−０.８５分９５％Ａ、５％Ｂ；０.８５−１.５分９５％Ａ、５％Ｂ。
ＭＳ／ＭＳ：WATERS Quattro Micro Tandem MS/MS；Z-Spray API インターフェース；ＨＰＬＣ−ＭＳインレットスプリッター１：２０；ＥＳＩモードで分析。
各試験物質について、装置のパラメーターは、MassLynx/QuanOptimize ソフトウェアを利用して、上記の原液（第２の１：１００希釈液）の注入により自動的に最適化される。
【０１５７】
Ｃ）医薬組成物の実施例
本発明の物質は、以下の通りに医薬製剤に変換できる：
錠剤：
組成：
実施例１の化合物１００ｍｇ、ラクトース（一水和物）５０ｍｇ、トウモロコシデンプン５０ｍｇ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ２５）（ドイツ国、BASFより）１０ｍｇおよびステアリン酸マグネシウム２ｍｇ。
錠剤重量２１２ｍｇ。直径８ｍｍ、曲率半径１２ｍｍ。
製造：
実施例１の化合物、ラクトースおよびデンプンの混合物を、５％ＰＶＰ水溶液（ｍ／ｍ）で造粒する。顆粒を乾燥させ、次いで、ステアリン酸マグネシウムと５分間混合する。この混合物を常套の打錠機で打錠する（錠剤の形状は上記参照）。
【０１５８】
経口懸濁剤：
組成：
実施例１の化合物１０００ｍｇ、エタノール（９６％）１０００ｍｇ、Rhodigel (キサンタンゴム) (米国、FMCより）４００ｍｇおよび水９９ｇ。
本発明の化合物１００ｍｇの単回用量は、経口懸濁剤１０ｍｌに相当する。
製造：
Rhodigel をエタノールに懸濁し、実施例１の化合物を懸濁液に添加する。撹拌しながら水を添加する。Rhodigel が膨潤し終えるまで、混合物を約６時間撹拌する。
【０１５９】
静脈内投与できる液剤：
組成：
実施例１の化合物１ｍｇ、ポリエチレングリコール４００ １５ｇおよび注射用水２５０ｇ。
製造：
実施例１の化合物を、ポリエチレングリコール４００と共に、水中で撹拌することにより溶解する。溶液を濾過滅菌し（孔の直径０.２２μｍ）、無菌条件下で、加熱滅菌した点滴瓶に分配する。後者を点滴ストッパーおよびクリンプキャップで密封する。