(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉｄの化合物：
【化１】
0005599385.tif 000031
（Ｉｄ）
［式中
Ｒ１は、−ＮＲ４Ｒ５である；
Ｒ２は、水素およびＣ１-６アルキルからなる群から選択される；
Ｒ４およびＲ５は、水素およびＣ１-６アルキルからなる群から各々独立して選択される；
Ｒ６は、Ｈである；
Ｌは、Ｃ１-６アルキレンおよびＣ２-６アルケニレンからなる群から選択されるリンカーである；
各々Ｒ８は、独立してＣ１−６アルキルである］、
またはその塩もしくは水和物。
【請求項２】
Ｌが、エチレンおよびエテニレンからなる群から選択される、請求項１記載の化合物、またはその塩もしくは水和物。
【請求項３】
化合物が、
【化２】
0005599385.tif 000032
【化３】
0005599385.tif 000033
からなる群から選択される、請求項１記載の化合物、またはその塩もしくは水和物。
【請求項４】
化合物が
【化４】
0005599385.tif 000034
である、請求項１記載の化合物、またはその塩もしくは水和物。
【請求項５】
塩形態が、パモエート、クロライド、ブロミド、スクシネート、マレエートおよびアセテートからなる群から選択される対イオンを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物、またはその塩もしくは水和物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその塩もしくは水和物、および医薬許容し得る賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項７】
化合物が、
【化５】
0005599385.tif 000035
【化６】
0005599385.tif 000036
および
【化７】
0005599385.tif 000037
からなる群から選択される、請求項６記載の組成物。
【請求項８】
該組成物が局所、注射または経口投与に適切である、請求項６または７記載の組成物。
【請求項９】
治療上有効量の請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその塩もしくは水和物を、抗アンドロゲンおよび黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニストからなる群より選択される治療上有効量の化合物と組合せて含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互関係
本出願は、２００８年４月２４日に提出したＵＳＳＮ６１/０４７,５５９の優先権主張を請求するものであり、その全てを参照して本明細書に組み込む。
【０００２】
連邦政府による資金提供を受けた研究開発のもとで成された発明の権利の記載
適用なし
【０００３】
シーケンスリスト、表、またはコンパクトディスクにて提出されたコンピュータープログラムリスト等の参照
適用なし
【背景技術】
【０００４】
本発明の背景
（ｉ）前立腺癌(ＰＣａ)は、男性における癌罹患率および死亡率の主要要因であり、該アンドロゲンレセプター(ＡＲ)は第一の治療標的である。初期のＰＣａでは、抗アンドロゲン治療(ＡＡＴ)は、最も一般的かつ効果的である。これは、１以上のＧｎＲＨアゴニスト(下垂体のシグナル伝達経路を抑制する)、アロマターゼ阻害剤(アンドロゲン産生を低下させる)、および競合的ＡＲアンタゴニスト(ＡＲを直接遮断する)、例えばヒドロキシ-フルタミド(ＯＨ−Ｆ)またはビカルタミド(ＢｉＣ)の組合せから構成される。この方法は、通常、数年間作用するが、時間と共にアンドロゲン枯渇条件下において、腫瘍細胞は継続成長のためのメカニズムを誘起させる。大部分の再発性またはホルモン不応性の前立腺癌(ＨＲＰＣ)療法はそれでもなおＡＲ媒介性のシグナル伝達経路に依存する。これには、ＡＲタンパク質発現レベルの上方調節、他のホルモン(アンタゴニストを包含する)への応答におけるその活性を増加させるＡＲの突然変異の獲得、またはＡＲ活性を増加させるコアクチベータータンパク質の上方調節を挙げることができる。即ち、ＡＲ活性を遮断するための新規アプローチにより、ＡＡＴの有効性を有意に拡張または増強させることができると思われる。これは、良好な競合的アンタゴニストを構成できる可能性があり、また製薬会社は既にこのアプローチに注力している。これは、新規抗アンドロゲンが、原発性および再発性のＰＣａ双方の処置において相当な有用性を有することを暗示するものである。かかる抗アンドロゲンは、ＡＲに直接結合する競合的アンタゴニストではないかもしれず、またことによるとＡＲシグナル伝達経路の下方事象を阻害することにより作用できるかもしれない。従って、新規かつ強力な抗アンドロゲンが必要である。驚くべきことに、本発明は、かかる必要性およびその他の必要性を満たす。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（本発明の要旨）
一実施態様において、本発明は、式Ｉの化合物：
【化１】
0005599385.tif 000002
（Ｉ）
[式中、各々Ｒ１は、独立して水素、Ｃ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニル、Ｃ２-６アルキニル、Ｃ１-６アルコキシ、-ＯＲ４、-ＳＲ４、ＮＲ４Ｒ５、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールである。Ｒ２は、水素、Ｃ１-６アルキル、Ｃ１-６アルキル-ＯＨ、Ｃ２-６アルケニルまたはＣ２-６アルキニルである。Ｒ３は、所望により１〜３つのＲ６基により置換されたシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールである。Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、水素、Ｃ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニルまたはＣ２-６アルキニルである。あるいは、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、５〜７員環および１〜３個のヘテロ原子（各々独立してＮ、ＯまたはＳ）を有する複素環を形成する。各々Ｒ６は、独立してＨ、Ｃ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニル、Ｃ２-６アルキニルまたはＣ１-６アルコキシである。Ｌは、Ｃ１-６アルキレン、Ｃ２-６アルケニレン、Ｃ２-６アルキニレンまたはＣ３-６シクロアルキレンであるリンカーである。Ｘは、-Ｎ(Ｒ７)-、６-１０員環を有するアリール環、ならびに５〜６員環および１〜３個のヘテロ原子（各々独立してＮ、ＯまたはＳ）を有するヘテロアリール環であって、該アリールおよび該ヘテロアリール環は、所望により１〜３つのＲ８基により各々置換される。Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニルまたはＣ２-６アルキニルである。各々Ｒ８は、独立してＨ、Ｃ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニル、Ｃ２-６アルキニルまたはＣ１-６アルコキシである。］を提供する。式Ｉの化合物には、その塩、水和物およびプロドラッグを包含する。
【０００６】
第二の実施態様において、本発明は、式ＩＩの化合物：
【化２】
0005599385.tif 000003
（ＩＩ）
[式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｘ およびＬは、上記規定したとおりである；Ｒ２’は、電子対、水素、Ｃ１-６アルキル、Ｃ１-６アルキル-ＯＨ、Ｃ２-６アルケニルまたはＣ２-６アルキニルであり；およびＹは、ＯまたはＳである]を提供する。式ＩＩの化合物には、その塩、水和物およびプロドラッグが含まれる。
【０００７】
第三の実施態様において、本発明は、式Ｉの化合物および医薬許容し得る賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。
【０００８】
第四の実施態様において、本発明は、かかる処置の必要な患者に、治療上有効量の式Ｉの化合物または式ＩＩを投与することにより、アンドロゲンレセプターを阻害する方法を提供する。
【０００９】
第五の実施態様において、本発明は、テトラヒドロピルビニウム(ＴＨＰ)およびその誘導体、ベンゾオキサゾール化合物およびその誘導体を提供する。
【００１０】
第六の実施態様において、本発明は、テトラヒドロピルビニウム(ＴＨＰ)およびその誘導体、ベンゾオキサゾール化合物およびその誘導体を用いる方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】化合物スクリーニング方法。ＡＲ構造変化を有する新規阻害剤を、ＦＲＥＴにより構造変化を測定するために従前使用されてきたＣＦＰＮ末端およびＹＦＰＣ-末端タグ化ＡＲベクターを安定に発現するＨＥＫ−２９３(ＡＴＣＣ ＣＲＬ １５７３)から得た細胞系を作出することにより見出した。Ｃ−ＡＲ−Ｙを、ＬＡＰＣ４またはＨＥＫ２９３細胞系にて安定に発現した；同時に、ＨＥＫ２９３細胞を、ＭＭＴＶ−ルシフェラーゼと共にネイティブＡＲにてトランスフェクトした。細胞を、１０nＭ ジヒドロテストステロン(ＤＨＴ)および１０４０ ＦＤＡ承認薬の一つの存在または非存在下で培養した。該スクリーンを、各条件の下で２回行い、両方の試験において活性を有する上位５０の化合物を選抜した。該上位化合物の各々を、用量応答試験により詳細に評価し、「有効な」化合物を全てのアッセイにわたり比較した。この有効なヒットは、各スクリーニングのために最初に同定したヒットのおおよそ４０％を占める。
【図２】ヒットの分析。１０４０ ＦＤＡ承認薬を、３つの異なるアッセイ、即ちＭＭＴＶ−ルシフェラーゼを発現するＨＥＫ２９３細胞を用いる転写を基にしたアッセイ、ＨＥＫ２９３/Ｃ-ＡＲ−Ｙ安定細胞とＬＡＰＣ４/Ｃ-ＡＲ−Ｙ安定細胞とを用いる構造を基にしたアッセイにて試験した。いくつかの化合物は、ＡＲの構造変化に対する転写生成量に影響を与えた。ＬＡＰＣ４細胞は、試験化合物に対して感受性が最も低かった。カットオフ値を平均(ＤＨＴのみを用いて処理した細胞の複数のリプリケートにより決定した)から５−６の間の標準偏差(ＳＤ)に設定した場合に、この転写アッセイに対して高い選択性(＜５０ヒット)が認められた。同様の選択性を、３−４の間のＳＤにてＨＥＫ２９３/Ｃ-ＡＲ−Ｙ細胞に対して認めたが、ＬＡＰＣ４/Ｃ-ＡＲ−Ｙ細胞では、かかる効果を平均から２−３の間のＳＤで観察した。このスクリーニングで使用した転写アッセイは、Ｚ−ファクター＝０.６を示し、これに対してＬＡＰＣ４ ＦＲＥＴ アッセイについては０.６、ならびにＨＥＫ ２９３ ＦＲＥＴ アッセイについては０.５を示した(Zhang、J.H.、T.D. Chung、and K.R. Oldenburg、A Simple Statistical Parameter for Use in Evaluation and Validation of High Throughput Screening Assay. J Biomol Screen、1999．4(2): p.67-73)。
【図３】図３．一次スクリーンにおけるヒットの特徴。（Ａ）一次アッセイにおいて評点したヒットを、２回の読み取り値の平均に基づいた有効性に従ってランク付けを行い、各アッセイから得た上位５０個を、別の２つと比較した。各ケースにおいて、いくつかの化合物はアッセイ間で共通しており、大部分のヒットは特定の系に特有であった。(Ｂ)有効なヒットを、使用した元のアッセイにおいて詳細な用量応答により決定し、薬理効果を提示した化合物のみを計測した。次いで、これらのヒットを、用量応答を用いて別のスクリーニングアッセイと交差比較した。この二次分析では、いずれか一つのアッセイから得た大多数のヒットは、別のアッセイ系においても有効であった。
【図４】図４. ピルビニウムパモエート(ＰＰ)は、塩化ピルビニウム(ＰＣｌ)に対して同じ応答性を示した。アニオン交換を使用して、該パモエート塩を塩化物イオンで置換した。得られる化合物、即ちＰＣｌは、ＬＡＰＣ４細胞においてＰＳＡレポーター活性を阻害する際に、親化合物に対する同一の用量応答を示した。
【図５】図５.ＰＰおよびＨＨは、競合的アンタゴニストとは異なりＤＨＴ誘発性遺伝子発現を阻害する。ＰＳＡルシフェラーゼ・レポーターにより一過的にトランスフェクトしたＬＮＣａＰ細胞をＯＨ−Ｆ、ＰＰおよびＨＨに暴露した。ＤＨＴを漸増した。ＯＨ−Ｆは、競合的アンタゴニストと一致する改変したＤＨＴ用量応答をもたらすが、ＰＰおよびＨＨは非競合的アンタゴニストと一致するパターンを示した。
【図６】ＰＰおよびＨＨは、アンドロゲン誘導性の細胞増殖を阻害する。ＰＰ、ＨＨ、およびＢｉＣを、その能力について、いくつかの培養した細胞系：ＬＮＣａＰ、ＬＡＰＣ４、ＬＮ-ＡＲ(アンドロゲン独立成長を示す系統)、およびＨＥＫ２９３細胞においてアンドロゲン依存型および独立型の成長を阻害することを比較した。ＰＰおよびＨＨは、ＬＮＣａＰ細胞において増殖阻害特性を各々示したが、ＨＨはＬＡＰＣ４細胞において有効ではなかった。いずれの化合物も、ＨＥＫ２９３細胞の非特異的成長阻害を示さなかった。重要な点は、ＰＰが「ホルモン不応性」のＬＮ-ＡＲ細胞の成長を阻害したことである。アスタリスク(＊)＝ｐ＜．００５.
【図７】図７．ＰＰはマウスの前立腺サイズを相乗的に低下させる。９匹の雄マウスのコホートを、４週間、ＢｉＣ(１００mg/kg)のＰＯ経管栄養、ＰＰ(１mg/kg)のＩＰ注射、または組合せにより処置した。ポジティブコントロールとして、９匹のマウスを、４週間去勢により処置した。前立腺を収集して湿重量を決定した。ＰＰ単独では、前立腺サイズを有意に低下しなかった。ＢｉＣ処置は、前立腺を３５％重量低下させ、ＰＰ：ＢｉＣの組合せは６３重量％(ｐ＜．０００５、ｔ検定)低下させた。これは、ＰＰの相乗効果を示唆している。コントロール（cntrl）：非処理マウス；ＢｉＣ：ビカルタミド；ＰＰ：ピルビニウムパモエート；キャスト(cast)：去勢処置。エラーバーは平均値の標準偏差(Ｓ.Ｅ.Ｍ.)を示す。
【図８】図８．ＰＰは、前立腺中のアンドロゲン依存性遺伝子発現を抑制し、ＢｉＣ活性を増強する。全ＲＮＡをインビボでのＰＰを試験するために使用した９匹のマウスのコホートの前立腺から抽出した。ｑＲＴ−ＰＣＲを行い、５匹のアンドロゲン誘導性遺伝子の遺伝子発現レベルを評価した。遺伝子発現レベルを、ＲＰＬ１９、アンドロゲン非応答性遺伝子との比較にて表した。ＰＰは、全ての症例において遺伝子発現を有意に抑制し、一つの例外(ＴＭＰＲＳＳ２)を除いて、各処置単独により最大に抑制することができるＢｉＣの効果を増強した。コントロール：非処置；ＢｉＣ：ビカルタミド；ＰＰ：ピルビニウムパモエート；キャスト(cast）：去勢処置。
【図９】図９．アンドロゲンレセプターの阻害剤。
【図１０】図１０．アンドロゲンレセプターの阻害剤。
【図１１】図１１．ＢｉＣ、ＰＰ、ＴＨＰ＋ＢｉＣ、または去勢による処置後の前立腺湿重量の変化。
【図１２】図１２．ＴＨＰ、ＢｉＣ、ＴＨＰ＋ＢｉＣ、または去勢による処置の後のマウスの背部前立腺の組織学。
【図１３】図１３．アンドロゲン調節遺伝子 ＴＭＰＲＳＳ２ プロバスチン、およびｆｋｂｐ５１の定量的ＰＣＲ。
【図１４】図１４．ＬＡＰＣ４細胞におけるＡＲ転写に対するＴＨＰの有効性。
【図１５】図１５．ＬＡＰＣ４細胞におけるＡＲ転写に対するＴＨＰ+ＢｉＣの相乗効果。
【図１６】図１６．ＬＡＰＣ４細胞におけるＰＳＡ-ルシフェラーゼＡＲ−反応性プロモーターに対するＴＨＰおよびＳＨＰの有効性。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（本発明の詳細な説明）
ＩＩ．序論
本発明は、治療上有効量の式Ｉの化合物:
【化３】
0005599385.tif 000004
(Ｉ)
または、式ＩＩの化合物：
【化４】
0005599385.tif 000005
(ＩＩ)
を、かかる処置の必要な患者に投与することを含む、アンドロゲンレセプターを阻害する方法を提供する。
【００１３】
本発明の化合物は、アンドロゲンレセプターのフォールディングを阻害する、即ちレセプター活性化を阻害すると考えられる。本発明の化合物を使用して、アンドロゲンレセプターのフォールディングに関与するあらゆる疾患を処置することができる。かかる処置が必要な患者とは、多くの場合、前立腺癌、とりわけ原発性およびホルモン不応性の前立腺癌、卵巣癌、肝細胞癌、尋常性座瘡、子宮内膜症、黒色表皮症、多毛症、乳癌、性的早熟、多嚢胞性卵巣症候群、良性前立腺過形成、脱毛症(例えば、アンドロゲン依存性脱毛症)、多毛症および性異常/性的倒錯に罹患している。
【００１４】
本発明の化合物を使用して、他の核性レセプターを阻害し、関連する疾患状態を処置することができる。ＰＰＡＲγのレセプター活性化を本発明の化合物を用いて阻害でき、これにより疾患状態、例えば、インスリン耐性、糖尿病および脂肪異栄養症、とりわけコレステロール疾患などを処置することができる。本発明の化合物は、エストロゲンレセプターαおよびβ、例えば、乳癌、大腸癌、卵巣癌および子宮内膜癌、ならびに代謝調節に関連した疾患状態を処置する際に有用である。本発明の化合物により処置することができる他の疾患状態には、甲状腺ホルモンレセプターと関連した疾患、例えば、甲状腺および心臓疾患が挙げられる。かかる化合物を使用して、グルココルチコイドレセプターの阻害を増加させることもでき、これを様々な疾患の免疫抑制に使用できる。本発明の化合物は、妊娠の中断をひきおこすプロゲステロンレセプターを阻害することもできる。
【００１５】
ＩＩＩ．定義
本明細書において使用したとおり、「投与する」とは、経口投与、座剤としての投与、局所接触投与（topical contact）、非経口投与、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、病巣内投与、経鼻投与または皮下投与、髄腔内投与、または遅延放出型装置、例えば患者へのミニ浸透圧ポンプの移植をいう。
【００１６】
本明細書において使用したとおり、用語「アルキル」とは、提示した炭素原子の数を有する、直鎖または分枝鎖の飽和脂肪族基をいう。例えば、Ｃ１-Ｃ６アルキルには、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、イソ−プロピル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチルなどを含むが、これらに限定するものではない。
【００１７】
有機基または化合物に関して上記および後記に示した用語「低級」とは、７以下の、好ましくは４以下の、および(分枝された)１または２個の炭素原子により分枝され得るか、または分枝され得ない化合物またはラジカルを規定する。
【００１８】
アルキルおよびヘテロアルキル基(とりわけ、アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、およびヘテロシクロアルケニルといわれる基を含む)としての置換基は、次の基：０〜(２ｍ’＋１)（式中、ｍ’は、かかる基中の炭素原子の総数である）の範囲にある数にて、Ｒ'、-ＯＲ'、＝Ｏ、＝ＮＲ'、＝Ｎ-ＯＲ'、-ＮＲ'Ｒ''、-ＳＲ'、-ハロゲン、-ＳiＲ'Ｒ''Ｒ'''、ＯＣ(Ｏ)Ｒ'、-Ｃ(Ｏ)Ｒ'、-ＣＯ２Ｒ'、-ＣＯＮＲ'Ｒ''、-ＯＣ(Ｏ)ＮＲ'Ｒ''、-ＮＲ''Ｃ(Ｏ)Ｒ'、-ＮＲ'-Ｃ(Ｏ)ＮＲ''Ｒ'''、-ＮＲ''Ｃ(Ｏ)２Ｒ'、ＮＲＣ(ＮＲ'Ｒ'')＝ＮＲ'''、-ＮＨ-Ｃ(ＮＨ２)＝ＮＨ、-ＮＲ'Ｃ(ＮＨ２)＝ＮＨ、-ＮＨ-Ｃ(ＮＨ２)＝ＮＲ'、-Ｓ(Ｏ)Ｒ'、-Ｓ(Ｏ)２Ｒ'、-Ｓ(Ｏ)２ＮＲ'Ｒ''、-ＣＮおよび-ＮＯ、２から選択される様々な基であってよい。Ｒ'、Ｒ''およびＲ'''は、各々独立して水素、非置換(Ｃ１-Ｃ８)アルキルおよびヘテロアルキル、非置換アリール、１-３個のハロゲンにより置換されたアリール、非置換アルキル、アルコキシまたはチオアルコキシ基、またはアリール-(Ｃ１-Ｃ４)アルキル基をいう。Ｒ'およびＲ''が同一の窒素原子と結合した場合、それらは、窒素原子と共に５、６、または７員環を形成できる。例えば、-ＮＲ'Ｒ''には、１-ピロリジニルおよび４-モルホリニルが含まれることを意味する。置換基に関する上記議論から、当業者は、置換されたアルキルとは、例えばハロアルキル(例えば、-ＣＦ３および-ＣＨ２ＣＦ３)およびアシル(例えば、-Ｃ(Ｏ)ＣＨ３、-Ｃ(Ｏ)ＣＦ３、-Ｃ(Ｏ)ＣＨ２ＯＣＨ３)などの基を含むと理解される。好ましくは、置換されたアルキルおよびヘテロアルキル基は１〜４個の置換基；より好ましくは、１、２または３つの置換基を有する。本発明により好ましくかつ意図される特例は、パーハロアルキル基(例えば、ペンタフルオロエチルなど)である。
【００１９】
あるいは、Ｒ'、Ｒ''、Ｒ'''およびＲ''''は、各々好ましくは独立して水素、置換または非置換のヘテロアルキル、置換または非置換のアリール、例えば、１-３つのハロゲンにより置換されたアリール、置換または非置換のアルキル、アルコキシまたはチオアルコキシ基、またはアリールアルキル基である。本発明の化合物には、１以上のＲ基が含まれる場合、例えば、Ｒ基の各々は、１以上のＲ'、Ｒ''、Ｒ'''およびＲ''''の基が存在する場合に各々Ｒ'、Ｒ''、Ｒ'''およびＲ''''基から独立して選択される。Ｒ'およびＲ''が同一の窒素原子に結合する場合には、それらは窒素原子と一緒になり５、６、または７員環を形成できる。例えば、-ＮＲ'Ｒ''には、１-ピロリジニルおよび４-モルホリニルが挙げられるが、これらに限定するものではない。
【００２０】
本明細書において使用したとおり、用語「アルキレン」は、少なくとも２つの他の基を連結するアルキル基、すなわち１〜６個の炭素原子による二価の炭化水素基をいう。アルキルに関して、該アルキレン基は直鎖であるか、または分枝であり得る。例えば、直鎖アルキレンは、-(ＣＨ２)n-（式中、ｎは、１、２、３、４、５または６である）の二価の基であり得る。アルキレン基には、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレンおよびヘキシレンが挙げられるが、これらに限定するものではない。同様に、「アルケニレン」、「アルキニレン」および「シクロアルキレン」は、アルケニル、アルキニルおよびシクロアルキル（範囲内を参照されたい)の二価の基である。
【００２１】
本明細書において使用したとおり、用語「アルケニル」とは、少なくとも１つの炭素-炭素二重結合を有する２〜６個の炭素原子の直鎖または分枝鎖炭化水素をいう。アルケニル基の例示には、ビニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、ブタジエニル、ペンテニルまたはヘキサジエニルを含むが、これらに限定されない。
【００２２】
本明細書において使用したとおり、用語「アルキニル」とは、少なくとも１つの炭素-炭素三重結合を有する２〜６個の炭素の直鎖または分枝鎖炭化水素をいう。アルキニル基の例示には、アセチレン、プロピニルまたはブチニルを含むが、これらに限定するものではない。
【００２３】
本明細書において使用したとおり、用語「アルコキシ」とは、酸素原子を包含するアルキル、例えば、メトキシ、エトキシなどをいう。「ハロ置換アルコキシ」とは、アルコキシとして定義されるとおりであるが、ここでこの中の数個または全ての水素原子がハロゲン原子により置換されている。例えば、ハロ置換アルコキシには、トリフルオロメトキシなどが含まれる。
【００２４】
本明細書において使用したとおり、用語「シクロアルキル」とは、飽和または一部不飽和の単環式、縮合二環式、あるいは３〜１２個の環原子(即ち、環員；すなわち、原子が直接結合して、該環骨格を形成する、例えばシクロヘキシル基中の６つの炭素)または提示した原子の数を併せて含有する架橋多環式環をいう。例えば、Ｃ３-８シクロアルキルには、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロオクチルまでが挙げられる。
【００２５】
本明細書において使用したとおり、用語「ヘテロシクロアルキル」とは、３員環〜約２０員環および１〜約５つのヘテロ原子、例えばＮ、ＯおよびＳを有する環系をいう。別のヘテロ原子もまた有用であり得て、とりわけＢ、Ａｌ、ＳｉおよびＰを含むが、これに限定するものではない。該ヘテロ原子はまた酸化されてもよく、例えばＳ(Ｏ)-およびＳ(Ｏ)２であるが、これに限定するものではない。例えば、ヘテロシクロアルキルには、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、モルホリノ、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、インドリニル、キヌクリジニルおよび１,４-ジオキサ-８-アザ-スピロ[４.５]デカ-８-イルが挙げられるが、これらに限定するものではない。
【００２６】
本明細書において使用したとおり、用語「アリール」とは、単環式または縮合二環式、三環式またはそれ以上、６〜１６個の環炭素原子を併せて含有する芳香環をいう。例えば、アリールは、フェニル、ベンジルまたはナフチル、好ましくはフェニルであり得る。「アリーレン」は、アリール基から得られる二価の基を意味する。アリール基は、アルキル、アルコキシ、アリール、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、アミノ、アミノ-アルキル、トリフルオロメチル、アルキレンジオキシ、およびオキシ-Ｃ２-Ｃ３-アルキレン；または１-または２-ナフチル；または１-または２-フェナントレニルから選択される１、２または３つの基により１、２または３置換され得る。「アルキレンジオキシ」は、２つの隣接するフェニルの炭素原子と結合した二価の置換基であり、例えばメチレンジオキシまたはエチレンジオキシである。「オキシ-Ｃ２-Ｃ３-アルキレン」は、またフェニルの２つの隣接する炭素原子と結合した二価の置換基、例えば、オキシエチレンまたはオキシプロピレンである。オキシ-Ｃ２-Ｃ３-アルキレン-フェニルの例示は、２,３-ジヒドロベンゾフラン-５-イルである。
【００２７】
好ましいアリール基には、ナフチル、フェニル、あるいはアルコキシ、フェニル、ハロゲン、アルキル、またはトリフルオロメチルにより一または二置換されたフェニル；より好ましくは、フェニル、あるいはアルコキシ、ハロゲンまたはトリフルオロメチルにより一または二置換されたフェニル;ならびにフェニルが挙げられる。
【００２８】
Ｒとしての置換フェニル基の例示は、例えば、４-クロロフェン-１-イル、３,４-ジクロロフェン-１-イル、４-メトキシフェン-１-イル、４-メチルフェン-１-イル、４-アミノメチルフェン-１-イル、４-メトキシエチルアミノメチルフェン-１-イル、４-ヒドロキシエチルアミノメチルフェン-１-イル、４-ヒドロキシエチル-(メチル)-アミノメチルフェン-１-イル、３-アミノメチルフェン-１-イル、４-Ｎ-アセチルアミノメチルフェン-１-イル、４-アミノフェン-１-イル、３-アミノフェン-１-イル、２-アミノフェン-１-イル、４-フェニル-フェン-１-イル、４-(イミダゾール-１-イル)-フェン-イル、４-(イミダゾール-１-イルメチル)-フェン-１-イル、４-(ホルホリン-１-イル)-フェン-１-イル、４-(ホルホリン-１-イルメチル)-フェン-１-イル、４-(２-メトキシエチルアミノメチル)-フェン-１-イルおよび４-(ピロリジン-１-イルメチル)-フェン-１-イル、４-(チオフェニル)-フェン-１-イル、４-(３-チオフェニル)-フェン-１-イル、４-(４-メチルピペラジン-１-イル)-フェン-１-イル、および４-(ピペリジニル)-フェニルおよび４-(ピリジニル)-フェニルである。
【００２９】
同様に、アリールおよびへテロアリール基としての他の置換基は、変更され、また芳香環系での０〜全数の広い価数の範囲にて、−ハロゲン、-ＯＲ'、-ＯＣ(Ｏ)Ｒ'、-ＮＲ'Ｒ''、-ＳＲ'、-Ｒ'、-ＣＮ、-ＮＯ２、-ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮＲ'Ｒ''、Ｃ(Ｏ)Ｒ'、-ＯＣ(Ｏ)ＮＲ'Ｒ''、-ＮＲ''Ｃ(Ｏ)Ｒ'、-ＮＲ''Ｃ(Ｏ)２Ｒ'、-ＮＲ'-Ｃ(Ｏ)ＮＲ''Ｒ'''、ＮＨＣ(ＮＨ２)＝ＮＨ、-ＮＲ'Ｃ(ＮＨ２)＝ＮＨ、-ＮＨ-Ｃ(ＮＨ２)＝ＮＲ'、-Ｓ(Ｏ)Ｒ'、-Ｓ(Ｏ)２Ｒ'、Ｓ(Ｏ)２ＮＲ'Ｒ''、-Ｎ３、-ＣＨ(Ｐｈ)２、パーフルオロ(Ｃ１-Ｃ４)アルコキシ、ならびにパーフルオロ(Ｃ１-Ｃ４)アルキルから選択される；ならびに、式中Ｒ'、Ｒ''およびＲ'''は、水素、(Ｃ１−Ｃ８)アルキルおよびヘテロアルキル、非置換アリールおよびへテロアリール、(非置換アリール)-(Ｃ１-Ｃ４)アルキル、および(非置換アリール)オキシ-(Ｃ１-Ｃ４)アルキルから独立して選択される。
【００３０】
アリールまたはヘテロアリール環の隣接した原子での２つの置換基は、所望により式-Ｔ−Ｃ(Ｏ)-(ＣＨ２)q-Ｕ-（式中、ＴおよびＵは、独立して-ＮＨ-、-Ｏ-、-ＣＨ２-または単結合、およびｑは０〜２の整数である）の置換基により置換されてもよく、あるいは、アリールまたはヘテロアリール環の隣接する原子での２つの置換基は、所望により式−Ａ−(ＣＨ２)r-Ｂ−（式中、ＡおよびＢは独立して-ＣＨ２-、-Ｏ-、-ＮＨ-、-Ｓ-、-Ｓ(Ｏ)-、-Ｓ(Ｏ)２-、-Ｓ(Ｏ)２ＮＲ'-または単結合であり、ｒは１〜３の整数である）の置換基により置換されてもよい。そのように形成されたこの新規環の単結合の一つは、所望により二重結合により置換されてもよい。あるいは、アリールまたはヘテロアリール環の隣接する原子上の該置換基の２つは、所望により式−(ＣＨ２)s-Ｘ-(ＣＨ２)t-の置換基（式中、ｓおよびｔは、独立して０〜３の整数であり、Ｘは-Ｏ-、-ＮＲ'-、-Ｓ-、-Ｓ(Ｏ)-、-Ｓ(Ｏ)２-、または-Ｓ(Ｏ)２ＮＲ'-である）により置換されてもよい。-ＮＲ'-および-Ｓ(Ｏ)２ＮＲ'-における置換基Ｒ'は、水素または非置換(Ｃ１-Ｃ６)アルキルから選択される。
【００３１】
本明細書において使用したとおり、用語「ヘテロアリール」は、単環式または縮合二環式または５〜１６個の環原子（ここで、１〜４個の環原子は、ヘテロ原子、即ち各Ｎ、ＯまたはＳである）を一緒に含有する三環式芳香環(即ち、環員；即ち、原子が直接連結して環の骨格を形成する、例えば、２-ピリジル基中の５個の炭素と１個の窒素)をいう。例えば、ヘテロアリールには、ピリジル、インドリル、インダゾリル、キノキサリニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、フラニル、ピロリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チエニル、あるいはアルキル、ニトロ、またはハロゲンにより置換されたその他の基（特に、一または二置換された基）が挙げられる。ピリジルは、２-、３-または４-ピリジル、有利には２-または３-ピリジルを表す。チエニルは、２-または３-チエニルを表す。キノリニルは、好ましくは２-、３-または４-キノリニルを表す。イソキノリニルは、好ましくは１-、３-または４-イソキノリニルを表す。ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニルは、好ましくは３-ベンゾピラニルまたは３-ベンゾチオピラニルを各々表す。チアゾリルは、好ましくは２-または４-チアゾリルを表し、最も好ましくは４-チアゾリルを表す。トリアゾリルは、好ましくは１-、２-または５-(１,２,４-トリアゾリル)を表す。テトラゾリルは、好ましくは５-テトラゾリルを表す。
【００３２】
好ましくは、ヘテロアリールは、ピリジル、インドリル、キノリニル、ピロリル、チアゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チエニル、フラニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフラニル、イソキノリニル、ベンゾチエニル、オキサゾリル、インダゾリル、あるいはアルキル、ニトロ、またはハロゲンにより置換された基（特に、一または二置換された基）のいずれかが挙げられる。
【００３３】
本明細書において使用したとおり、用語「アンドロゲンレセプター」は、アンドロゲン、例えば、テストステロンおよびジヒドロテストステロンを特異的に結合する核性レセプタースーパーファミリーの細胞内ステロイドレセプターをいう。
【００３４】
本明細書において使用したとおり、用語「抗アンドロゲン」は、身体における正常な反応組織に対して、アンドロゲン、即ち男性ホルモンの生物学的効果を予防または阻害することができるホルモンレセプターアンタゴニスト化合物の一群をいう。抗アンドロゲンは、通常、好適なレセプターをブロックし、細胞内レセプター上で結合部位に競合し、そしてアンドロゲンシグナル伝達経路を妨害することにより作用する。式ＩおよびＩＩの化合物に加えて、抗アンドロゲンには、クマリン、ビカルタミド、フルタミド、ヒドロキシフルタミド、ニルタミド、スピオノラクトン、酢酸シプロテロン、ケトコナゾール、フィナステリド、デュタステライド、ハルマン、ノルハルマン、ハルミン、ハルマリン、テトラヒドロハルミン、ハルモール、ハルマロール、エチルハルモール、ｎ−ブチルハルモールおよび他のβ−カルボリン誘導体が含まれるが、これらに限定されない。
【００３５】
抗アンドロゲンは、重度の男性性疾患、例えば、性行動異常(過剰な性的欲求)および性的逸脱、特に性的倒錯を処置するため、さらに前立腺癌において抗腫瘍剤、苦痛緩和剤、アジュバントまたはネオアジュバンドホルモン療法として使用するために適応されることが多い。抗アンドロゲンは、良性前立腺過形成(前立腺肥大)、尋常性座瘡、アンドロゲン性の脱毛症(男性型のはげ頭)、および多毛症(過剰な毛髪の成長)の処置にも使用され得る。抗アンドロゲンは、性転換治療を受けている性転換女性の場合に男性化を防止または無効とする目的で、時には男性用避妊薬（male contraceptive agent）として使用されることもあり、そしてテストステロン低下に関連する症候、例えば去勢後のホットフラッシュを防止するために使用される。抗アンドロゲンにより処理できるその他の症状は、前立腺癌、とりわけ原発性およびホルモン不応性前立腺癌、卵巣癌、肝細胞 癌、尋常性座瘡、子宮内膜症、黒色表皮症、多毛症、乳癌、性的早熟、多嚢胞性卵巣症候群、良性前立腺過形成、脱毛症(例えば、アンドロゲン依存性脱毛症)、多毛症および性行動異常/性的倒錯である。
【００３６】
本明細書において使用したとおり、用語「活性薬剤の組合せ」とは、少なくとも２以上の活性薬剤の組合せをいう。
【００３７】
本明細書において使用したとおり、用語「対イオン」とは、電気的な中性を維持するためにイオン種を随伴するイオンをいう。対イオンは、原子状態であってもよく、例えば、フッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物、または金属性対イオンであってもよい。対イオンは、分子であってもよい、例えば、酢酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩およびエンボン酸塩(パモエート)である。対イオンは、正または負に電荷を帯びていてもよい。本発明の対イオンは負に電荷を帯びている。さらに、対イオンは、１、例えば２以上の電荷を持ち得る。当業者には、その他の対イオンが本発明において有用であることは理解されよう。
【００３８】
本明細書において使用したとおり、用語「ホルモン療法」とは、医療処置においてホルモンを使用することをいい、さらにホルモン産生の阻害、例えばホルモンに対する直接的な競合剤、例えば抗アンドロゲンの使用をいう。
【００３９】
本明細書において使用したとおり、用語「水和物」とは、少なくとも１つの水分子と錯体を形成する化合物をいう。本発明の化合物は、１〜１０の水分子と錯体化することができる。
【００４０】
本明細書において使用したとおり、用語「阻害する」とは、特定の作用または機能を、部分的または全体的に防止する化合物あるいは部分的または全体的に阻害する方法をいう。
【００４１】
本明細書において使用したとおり、用語「ＬnＲＨアゴニスト」とは、黄体形成放出ホルモンレセプターと結合する化合物または生物学的分子をいう。
【００４２】
本明細書において使用したとおり、用語「必要のある患者」とは、前立腺癌、多嚢胞性卵巣症候群、良性前立腺過形成、脱毛症および多毛症に罹患している患者をいう。必要のある患者が罹患している他の症状には、卵巣癌、肝細胞癌、尋常性座瘡、子宮内膜症、黒色表皮症、多毛症、乳癌、性的早熟および性行動異常/性的倒錯を含むが、これらに限定するものではない。抗アンドロゲンにより処置できる他の症状に罹患している患者も、本発明の方法により処置できる。本発明の方法を用いて処置できる患者は、動物、例えば哺乳動物、霊長類(例えば、ヒト)、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウスなどを含むが、これに限定するものではない。特定の実施態様において、該患者はヒトである。
【００４３】
本明細書において使用したとおり、用語「プロドラッグ」とは、該プロドラッグが哺乳類対象に投与された場合に、本発明の方法に関する活性薬剤を放出できる共有結合した担体をいう。活性成分の放出はインビボでおこる。プロドラッグを、当業者には既知の技術により製造することができる。これらの技術は、一般的に所定の化合物中の好適な官能基を修飾する。しかし、これらの修飾された官能基は、通常の操作によるかまたはインビボにて元々の官能基を生成する。本発明の活性薬剤のプロドラッグには、プロドラッグ中でヒドロキシ基、アミジノ基、グアニジノ基、アミノ基、カルボキシル基または類似の基が修飾されたものも含む。
【００４４】
本明細書において使用したとおり、用語「塩」とは、本発明の方法において使用した化合物の酸または塩基性塩をいう。医薬上許容される塩の代表的な例は、無機酸(塩酸、臭化水素酸、リン酸など)の塩、有機酸(酢酸、プロピオン酸、グルタミン酸、クエン酸など)の塩、４級アンモニウム(ヨウ化メチル、ヨウ化エチルなど)塩である。該医薬上許容される塩とは非毒性であると理解されよう。適切な医薬上許容される塩に対するさらなる情報は、「Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985」に見出すことができ、またこれを引用して本明細書の一部に組み込む。
【００４５】
本発明の塩基性化合物の医薬上許容される塩は、酸、例えば無機酸、有機カルボン酸および有機スルホン酸、とりわけ塩酸、メタンスルホン酸、マレイン酸と共に形成した塩であり、塩基性基（例えば、ピリジル）を提供して、該構造の一部を構成することもできる。
【００４６】
該化合物の中性形態を、該塩を塩基または酸と接触させることにより、また従来方法において親化合物を単離することにより生成させることができる。該化合物の親形態は、特定の物理的特性、例えば極性溶媒中の溶解性において様々な塩形態とは異なるが、一方で該塩は本発明の目的のためには本化合物の親形態と等価である。
【００４７】
本明細書において使用したとおり、「治療上有効な量または用量」または「治療上十分な量または用量」または「有効なまたは十分な量または用量」とは、治療効果をもたらす一回用量をいい、そのために投与される量をいう。正確な用量は、処置の目的により変化し、良く知られた技術を用いて当業者により確認できる(例えば、Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3、1992); Lloyd, The Art、Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Pickar, Dosage Calculations (1999); and Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, 2003, Gennaro、Ed., Lippincott, Williams & Wilkins)を参照されたい。感作細胞では、治療上有効な用量は、非感作細胞のための従来の治療上有効な用量よりも低いことがおおい。
【００４８】
本明細書において使用したとおり、「処置する」、「処置すること」および「処置」とは、処置における成功に関するあらゆる兆候、あるいは損傷、病理学、症状、または症候(例えば、痛み)、とりわけあらゆる主観的または客観的パラメーターの改善、例えば軽減；緩和；症候の減退または患者に対する該兆候、損傷、病理学または症状をより許容できる状態とすること；兆候または症状の頻度または持続を低下させること；または、ある状況において、症状または兆候の発症を予防することをいう。兆候の処置または改善は、任意の主観的または客観的パラメーター、例えば健康診断の結果を基にしてもよい。
【００４９】
ＩＩＩ．アンドロゲンレセプターを阻害する方法
（ｉ）本発明は、かかる処置の必要な患者に、治療上有効量の式Ｉ、式ＩＩの化合物または図９および図１０に示した化合物を投与することにより、アンドロゲンレセプターを阻害する方法を提供する。本発明の方法において有用な化合物は、式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物を含む：
【化５】
0005599385.tif 000006
（Ｉ）
【化６】
0005599385.tif 000007
(ＩＩ)
［式中、各々Ｒ１は、独立して水素、Ｃ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニル、Ｃ２-６アルキニル、Ｃ１-６アルコキシ、-ＯＲ４、-ＳＲ４、ＮＲ４Ｒ５、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールである。
Ｒ２は、水素、Ｃ１-６アルキル、Ｃ１-６アルキル-ＯＨ、Ｃ２-６アルケニルまたはＣ２-６アルキニルである。Ｒ２’は、電子対、水素、Ｃ１-６アルキル、Ｃ１-６アルキル-ＯＨ、Ｃ２-６アルケニルまたはＣ２-６アルキニルである。Ｒ３は、所望により１〜３つのＲ６基により置換されていてもよいシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールである。Ｒ４およびＲ５は、各々独立して水素、Ｃ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニルまたはＣ２-６アルキニルである。あるいは、Ｒ４およびＲ５は、それらが結合する窒素と一緒になって、５〜７員環および１〜３個のヘテロ原子、即ち各々独立してＮ、ＯまたはＳを有する複素環を形成する。Ｒ６は、各々独立してＨ、Ｃ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニル、Ｃ２-６アルキニルまたはＣ１-６アルコキシである。Ｌは、Ｃ１-６アルキレン、Ｃ２-６アルケニレン、Ｃ２-６アルキニレンまたはＣ３-６シクロアルキレンのリンカーである。Ｘは、-Ｎ(Ｒ７)-、６-１０員環を有するアリール環、ならびに５〜６員環および１〜３個のヘテロ原子、即ち各々独立してＮ、ＯまたはＳを有するヘテロアリール環であり、ここで該アリールおよび該ヘテロアリール環は、所望により各々１〜３つのＲ８基により置換される。Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニルまたはＣ２-６アルキニルである。各々Ｒ８は、独立してＨ、Ｃ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニル、Ｃ２-６アルキニルまたはＣ１-６アルコキシである。Ｙは、ＯまたはＳである。式ＩおよびＩＩの化合物には、その塩、水和物およびプロドラッグが含まれる。式Ｉの化合物を投与することで、該方法により、アンドロゲンレセプターが阻害される。
【００５０】
式ＩおよびＩＩの化合物のうちのいくつかの化合物は、既に知られている。式ＩおよびＩＩのその他の化合物は、新規化合物である。式ＩおよびＩＩの化合物は、他の抗アンドロゲン化合物、例えば、クマリン、ビカルタミド、フルタミド、ヒドロキシフルタミド、ニルタミド、スピオノラクトン、酢酸シプロテロン、ケトコナゾール、フィナステリド、デュタステライド、ハルマン、ハルミン、ハルマリン、テトラヒドロハルミン、ハルモール、ハルマロール、ハルミン酸、ハルミン酸メチルエステル、ハルミリン酸（harmilinic acid）、ハルマンアミド、アセチルノルハルミン、エチルハルモール、n-ブチルハルモールおよび他のβ−カルボリン誘導体と組合せることもできる。
【００５１】
本発明の化合物は、アンドロゲンレセプターのホールディングを阻害すると考えられる、即ちレセプター活性化を阻害すると考えられる。かかる処置が必要な患者は、前立腺癌、とりわけ、原発性およびホルモン不応性前立腺癌、卵巣癌、肝細胞癌、尋常性座瘡、子宮内膜症、黒色表皮症、多毛症、乳癌、性的早熟、多嚢胞性卵巣症候群、良性前立腺過形成、脱毛症(例えば、アンドロゲン依存性脱毛症)、多毛症および性行動異常/性的倒錯に罹患していることがおおい。他の疾患の症状は、本発明の方法を用いて処置することができる。
【００５２】
本発明の化合物は、アンドロゲンレセプターのホールディングを阻害すると考えられる、即ち、レセプター活性化を阻害すると考えられる。かかる処置が必要な患者は、前立腺癌、とりわけ原発性およびホルモン不応性前立腺癌、卵巣癌、肝細胞 癌、尋常性座瘡、子宮内膜症、黒色表皮症、多毛症、乳癌、性的早熟、多嚢胞性卵巣症候群、良性前立腺過形成、脱毛症(例えば、アンドロゲン依存性脱毛症)、多毛症および性行動異常/性的倒錯に罹患していることがおおい。他の疾患状態は、本発明の方法を用いて処置することができる。
【００５３】
別の実施態様において、本発明の方法は、本発明の化合物または組成物の局所投与により脱毛症を処置する。
【００５４】
別の実施態様において、式Ｉおよび式ＩＩの化合物は、ホルモン療法のための化合物が抗アンドロゲンまたはＬnＲＨアゴニストである場合に、ホルモン療法と共に投与される。いくつかの実施態様において、該化合物は別々に投与される。別の実施態様において、該化合物は混合される。いくつかの別の実施態様において、該化合物は同時に投与される。さらに別の実施態様において、該化合物は、様々な時点で投与される。
【００５５】
いくつかの別の実施態様において、式Ｉおよび式ＩＩの化合物は、治療上有効量のドセタキセル(タキソール)、パクリタキセル(タキソテール)、ビカルタミド、フルタミド、ヒドロキシフルタミド、ニルタミド、スピオノラクトン、酢酸シプロテロン、ケトコナゾール、フィナステライドまたはデュタステライドと組合せて投与される。別の実施態様において、式Ｉおよび式ＩＩの化合物は、治療上有効な量のクマリンと組み合わせて投与される。
【００５６】
ＩＶ．アンドロゲンレセプターを阻害するための化合物
本発明において有用な化合物は、アンドロゲンレセプターを阻害するものである。有用な化合物は、下記に例示したアッセイ方法を用いて同定され得る。これらの化合物は、市販購入し得るか、または当業者には既知の方法を用いて合成され得る。
【００５７】
いくつかの実施態様において、本発明の方法において有用な化合物は、式Ｉの化合物を含む：
【化７】
0005599385.tif 000008
(Ｉ)
［式中、各々Ｒ１は、独立して水素、Ｃ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニル、Ｃ２-６アルキニル、Ｃ１-６アルコキシ、-ＯＲ４、-ＳＲ４、ＮＲ４Ｒ５、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールである。Ｒ２は、水素、Ｃ１-６アルキル、Ｃ１-６アルキル-ＯＨ、Ｃ２-６アルケニルまたはＣ２-６アルキニルである。Ｒ３は、所望により１〜３つのＲ６基により置換された、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールである。Ｒ４およびＲ５は、各々独立して水素、Ｃ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニルまたはＣ２-６アルキニルである。あるいは、Ｒ４およびＲ５は、それらに結合する窒素と一緒になって、５〜７員環および１〜３個のヘテロ原子、即ち各々独立してＮ、ＯまたはＳを有する複素環を形成する。各々Ｒ６は、独立してＨ、Ｃ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニル、Ｃ２-６アルキニルまたはＣ１-６アルコキシである。Ｌは、Ｃ１-６アルキレン、Ｃ２-６アルケニレン、Ｃ２-６アルキニレンまたはＣ３-６シクロアルキレンのリンカーである。Ｘは、-Ｎ(Ｒ７)-、６-１０員環を有するアリール環、ならびに５〜６員環および１〜３個のヘテロ原子、即ち各々独立してＮ、ＯまたはＳを有するヘテロアリール環であり、ここで該アリールおよび該ヘテロアリール環は、各々所望により１〜３つのＲ８基により置換される。Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニルまたはＣ２-６アルキニルである。各々Ｒ８は、独立してＨ、Ｃ１-６アルキル、Ｃ２-６アルケニル、Ｃ２-６アルキニルまたはＣ１-６アルコキシである。式Ｉの化合物には、その塩、水和物およびプロドラッグが含まれる。 
【００５８】
いくつかの実施態様において、Ｌはエチレン、エテニレンまたはシクロプロピレンである。
【００５９】
いくつかの別の実施態様において、本発明の化合物は、式Ｉａの化合物を含む：
【化８】
0005599385.tif 000009
(Ｉａ)。
【００６０】
別の実施態様において、Ｘはヘテロアリールである。さらに別の実施態様において、Ｘはピロールである。さらに別の実施態様において、Ｘはアリールである。さらにまた別の実施態様において、該化合物は、下記の化合物であり得る：
【化９】
0005599385.tif 000010
または
【化１０】
0005599385.tif 000011
【００６１】
別の実施態様において、本発明の化合物は、下記式の化合物を含む：
【化１１】
0005599385.tif 000012
［式中、Ｒ１は、-ＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４およびＲ５がそれらに結合する窒素原子と一緒になって、５〜７員環および１〜３個のヘテロ原子、即ち各々独立してＮ、ＯまたはＳを有する複素環を形成するようなものである。Ｒ３はアリールである。Ｘはヘテロアリールである。
【００６２】
いくつかの実施態様において、本発明の化合物は式Ｉｂの化合物を含む：
【化１２】
0005599385.tif 000013
【００６３】
別の実施態様において、式Ｉｂの化合物は次のものである：
【化１３】
0005599385.tif 000014
。
【００６４】
いくつかの別の実施態様において、本発明の化合物は、式Ｉｃの化合物を含む：
【化１４】
0005599385.tif 000015
(Ｉｃ)。
【００６５】
別の実施態様において、本発明の化合物は、式Ｉｄの化合物を含む：
【化１５】
0005599385.tif 000016
（Ｉｄ)。
【００６６】
別の実施態様において、式Ｉの化合物の塩形態は、パモエート、クロライド、ブロミド、スクシネート、マレエートまたはアセテートの対イオンを含む。
【００６７】
別の実施態様において、本発明の方法において有用な化合物は、式ＩＩの化合物を含む：
【化１６】
0005599385.tif 000017
（ＩＩ）
［式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、ＸおよびＬは、上記に規定したとおりである；Ｒ２’は、電子対、水素、Ｃ１-６アルキル、Ｃ１-６アルキル-ＯＨ、Ｃ２-６アルケニルまたはＣ２-６アルキニルである；ならびにＹは、ＯまたはＳである。式ＩＩの化合物は、その塩、水和物およびプロドラッグを含む。
【００６８】
いくつかの実施態様において、式ＩＩの化合物は下記のものを含む：
【化１７】
0005599385.tif 000018
［式中、Ｘはアリールまたはヘテロアリールである。別の実施態様において、該化合物は、下記の式を示す：
【化１８】
0005599385.tif 000019
【００６９】
いくつかの別の実施態様において、Ｒ１およびＲ３は双方アリールであり、Ｒ１およびＲ３は双方Ｃ１-６アルキルである。さらに別の実施態様において、化合物は下記のものである：
【化１９】
0005599385.tif 000020
。
【００７０】
Ｖ．アンドロゲンレセプターを阻害するための製剤
本発明の化合物は、当業者には既知の多様な方法で製剤され得る。医薬上許容し得る担体は、投与される特定の組成物により、ならびに該組成物を投与するために使用した特定の方法によりある程度決定される。従って、本発明の医薬組成物の好適な広範囲の様々な製剤が存在する(例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th ed., 2003, 上掲を参照されたい)。例えば、本発明の化合物を、広範で多様な経口、注射用および局所投薬形態にて製造および投与することができる。本発明の化合物を、非経口投薬形態にて製造および投与することもできる。従って、本発明の化合物は、注射により投与してもよく、即ち静脈内で、筋肉注射で、皮内に、皮下に、十二指腸内、または腹腔内に投与してもよい。また、本明細書に記載した化合物は、吸入により投与してもよく、例えば経鼻投与することができる。さらに、本発明の化合物は、経皮的にまたは局所的に、例えば、液体またはゲル形態にて、またはパッチとして投与することができる。
【００７１】
従って、本発明はまた、医薬上許容し得る担体または賦形剤ならびに本発明の１以上の化合物を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様において、本化合物は、以下のいずれかであり得る：
【化２０】
0005599385.tif 000021
【化２１】
0005599385.tif 000022
【化２２】
0005599385.tif 000023
【００７２】
別の実施態様において、化合物は下記のものであり得る:
【化２３】
0005599385.tif 000024
。
【００７３】
投与のために好適な製剤は、（ａ）液体溶液、例えば、希釈剤、例えば、水、生理食塩水またはＰＥＧ４００に懸濁された有効量の本発明の化合物；（ｂ）所定量の活性成分を、液体、固体、顆粒またはゼラチンとして液体、固体、顆粒またはゼラチンとして各々含有するカプセル、サシュ、デポーまたは錠剤；（ｃ）好適な液体中の懸濁液；(ｄ）好適なエマルジョン；ならびに（ｅ）パッチを構成できる。医薬形態には、１以上のラクトース、シュクロース、マンニトール、ソルビトール、リン酸カルシウム、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、微晶質セルロース、ゼラチン、コロイド状シリコンジオキシド、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、および他の賦形剤、着色剤、充填剤、結合剤、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存剤、香味剤、染料、崩壊剤、ならびに医薬上相溶し得る担体を含むことができる。ロゼンジ形態には、風味剤中、例えばシュクロース中に活性成分を含むことができ、ならびに不活性基剤（例えば、ゼラチンおよびグリセリンまたはシュクロースおよびアカシアエマルジョン、ゲルなど）中に活性成分を含み、該活性成分に加えて当分野では既知の担体を含有するトローチも含むことができる。
【００７４】
医薬製剤は、好ましくは単回投薬形態である。かかる形態において、該製剤は、好適な量の活性成分を含有する単回投与量に分割される。該単回投薬形態は、包装調製物、個別の量の製剤を含有する包装物、例えば、包装錠剤、カプセル、およびバイアルまたはアンプル中の粉末であってもよい。また、単回投薬形態は、カプセル剤、錠剤、カシュ、またはロゼンジ自体であってもよい、あるいは、包装形態にてこれらのいずれか一つの好適な数をふくんでもよい。該組成物はまた、必要であれば、他の混合可能な治療薬を含有してもよい。好ましい医薬製剤を徐放性処方にて本発明の化合物を送達できる。
【００７５】
医薬製剤は、通常、ヒトおよび非ヒト哺乳動物をふくめた哺乳動物に送達される。本方法を用いて処置される非ヒト哺乳動物には、屋内飼育動物(すなわち、イヌ、ネコ、ネズミ、齧歯類、およびウサギ)および屋外飼育動物(ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ)が含まれる。
【００７６】
癌治療のために、本発明の製剤は、治療上有効量の抗アンドロゲンまたはＬnＲＨアゴニストと組合せて式ＩまたはＩＩの化合物を含み得る。抗アンドロゲンは、上記のとおり、クマリン、ビカルタミド、フルタミド、ヒドロキシフルタミド、ニルタミド、スピオノラクトン、酢酸シプロテロン、ケトコナゾール、フィナステリド、デュタステライド、ハルマン、ノルハルマン、ハルミン、ハルマリン、テトラヒドロハルミン、ハルモール、ハルマロール、エチルハルモール、n-ブチルハルモールおよび他のβ−カルボリン誘導体を含むが、これらに限定するものではない。
【００７７】
本発明の方法を行う際に、医薬組成物を、単独または他の治療用または診断用薬と組み合わせて使用できる。本発明の併用プロトコールにて使用された別の抗癌薬を、別個に製剤するか、または１以上の併用プロトコールにて使用された抗癌薬を、例えば混合して一緒に製剤してもよい。
【００７８】
本発明の製剤は、式ＩおよびＩＩの化合物の組合せをふくむことができる。また、別の治療薬または診断薬も、例えば上記に示したように、式ＩおよびＩＩの化合物の組成物と組み合わせて製剤することができる。
【００７９】
ＶＩ．アンドロゲンレセプターを阻害するための投与
本発明の化合物は、必要な頻度に応じて、とりわけ時間単位、日数単位、週単位または月単位で投与され得る。本発明の医療方法に利用した化合物を、１日あたり約０.０００１mg/kg〜約１０００mg/kgの開始投与量にて投与される。約０.０１mg/kg〜約５００mg/kg、または約０.１mg/kg〜約２００mg/kg、または約１mg/kg〜約１００ mg/kg、または約１０mg/kg〜約５０mg/kgの一日の用量範囲を使用できる。しかし、投与量を、患者の要件、処置される症状の重症度、および用いる化合物により変更してもよい。例えば、投与量を、特定の患者における診断された疾患の型および段階を考慮して実験的に決定することができる。本発明の内容において患者に投与した用量は、時間中、患者における治療応答に対して効果を発揮するのに十分であるべきである。また、用量の範囲(size)も、特定の患者にける特定の化合物の投与と同時におこるあらゆる副作用の存在、性質、および程度により決定される。特定の状況について好適な用量の決定は、医師の技術範囲内にある。一般的に、処置は、この化合物の至適用量未満であるより少量の投与量にて開始される。その後、該投与量を、環境の下で至適効果が達成されるまで、少量ずつ増加させる。好都合には、一日の全投与量を分割してもよく、必要であれば一日の間に少量ずつ投与されてもよい。該用量は、医師により決定されたとおり毎日または隔日投与されてもよい。また、該用量は、より長い時間(週、月または年)にわたって、定期的または継続的基準により、例えば、皮下カプセル剤、サッシュまたはデポー、またはパッチを使用して提供される。
【００８０】
医薬組成物は、多様な方法、例えば、局所的、非経口的、静脈内、皮内的、筋肉注射、経大腸（colonically）、経腸的にまたは腹腔内にて患者に投与される。好ましくは、該医薬組成物を、非経口的、局所的、静脈内、筋肉注射または経口的に投与される。
【００８１】
本発明の方法を実施する際に、該医薬組成物を、単独、あるいは他の治療薬または診断薬を組み合わせて用い得る。併用プロトコールにて使用される別の抗癌薬を、別々に投与するか、または併用プロトコールにて使用される１以上の抗癌薬を、一緒に（例えば、混合して）投与することができる。１以上の抗癌剤を別々に投与する場合、各薬物の投与時期およびスケジュールを変更できる。他の治療または診断薬を、式ＩおよびＩＩの化合物と同時に、別々に、または異なる時点で投与してもよい。
【００８２】
式ＩおよびＩＩの化合物はまた、任意の好適な組合せにて投与され得る。別の治療薬または診断薬を、式ＩおよびＩＩの組合せと共に組み合わせて投与できる。
【００８３】
本発明の化合物をホルモン療法により投与できる。ホルモン療法のための化合物には、抗アンドロゲンおよびＬnＲＨアゴニストを含むが、これらに限定するものではない。
【００８４】
臨床試験において、多くの創傷、腫瘍サイズ、および腫瘍増殖速度を、Ｘ線撮影、断層撮影法、ならびに可能な腫瘍量の直接測定により追跡することができる。抗腫瘍効果もまた、分子生物学および生化学技術、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＰＣＲ、ウェスタンブロッティング、または免疫細胞化学を用いて測定することができる。
【００８５】
単回用量として必要な組成物の医薬上有効な量は、投与経路、処置する癌のタイプ、および患者の身体的特徴に依存する。該用量は、所望の効果を達成するために改変できるが、それは医薬分野の当業者には認識されるであろう身体表面積、体重、食事、同時投薬およびその他の因子のようなかかる因子に拠る。
【００８６】
前記は、例えば、疾患タイプおよび等級、患者の年齢、健康状態および性別、組合せて使用される特定の薬物、投与の経路および頻度、および複数の薬物の組合せを用いる実験的および臨床的知見に基づいて拡張または変更できる一般的なガイドラインである。
【実施例】
【００８７】
ＶＩＩ．実施例
実施例１：化合物の製造
本発明の方法において有用な化合物を、下記方法に従って製造できる。ピルビニウムパモエートは、MP Biochemicals(Solon, Ohio)から購入できる。ハルモールＨＣlは、Sigama(St. Louis, Missouri)から購入できる。
【００８８】
{２-[２-(２,５-ジメチル-１-フェニル-１Ｈ-ピロール-３-イル)-ビニル]-１-メチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-キノリン-６-イル}-ジメチル-アミン
【化２４】
0005599385.tif 000025
【００８９】
６-ジメチルアミノ-２-[２-(２,５-ジメチル-１-フェニル-１Ｈ-ピロール-３-イル)-ビニル]-１-メチル-キノリニウム, パモエート塩(ピルビニウムパモエート、５００ mg、０.４３４ mmol)を、室温で攪拌しながらＥｔＯＨ(１０ml)に溶解した。水素化ホウ素ナトリウム (６７.５ mg、１.７４ mmol)を一部添加した。該反応の完了がＬＣ-ＭＳ分析により判定されるまで攪拌を３.５時間継続した。該反応混合物を、水(１０ml)で処理して、3回ジクロロメタンで抽出した。ジクロロメタン層を併合し、乾燥させ(硫酸ナトリウム)、濾過して、濃縮した。該残留物(３９４ mg)を、１２のカラム容量のヘキサン中０-２５％ 酢酸エチルのグラジエントを用いる高性能フラッシュクロマトグラフィー(Biotage ２５＋Ｍ、シリカカートリッジ)により精製して、{２-[２-(２,５-ジメチル-１-フェニル-１Ｈ-ピロール-３-イル)-ビニル]-１-メチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-キノリン-６-イル}-ジメチル-アミンを黄橙色油状物として得た。収量：１５０ mg (４５％). １Ｈ ＮＭＲ: (４００ＭＨz、ＣＤＣｌ３) １.９０ (m, １Ｈ)、１.９４ (s, ３Ｈ)、１.９７、(s, ３Ｈ)、２.０９ (m, １Ｈ)、２.７２-２.８０ (m, ２Ｈ)、２.７９ (s, ６Ｈ)、２.８３ (s, ３Ｈ)、３.７４ (m, １Ｈ)、５.７８ (dd, J＝８ Ｈz,１６ Ｈz,１Ｈ)、６.０８ (s、１Ｈ)、６.３８ (d、J ＝ １６ Ｈz,１Ｈ)、６.５６ (m, ２Ｈ)、６.６５ (m, １Ｈ)、７.１３ (m, ２Ｈ)、７.３８ (m, ３Ｈ) ＥＳＩ−ＭＳ(m/z): [Ｍ+Ｈ]+ ＝３８６.
【００９０】
ジメチル-１-フェニル-１Ｈ-ピロール-３-イル)-エチル]-１-メチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-キノリン-６-イル}-ジメチル-アミン
【化２５】
0005599385.tif 000026
{２-[２-(２,５-ジメチル-１-フェニル-１Ｈ-ピロール-３-イル)-ビニル]-１-メチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-キノリン-６-イル}-ジメチル-アミン(２５ mg、０.０６５ mmol)を、メタノール(４ml)に溶解し、１０％ Ｐｄ／Ｃ(１３mg)と併用した。該混合物を、水素ガス(バルーン)大気中で２時間攪拌するか、またはＬＣ-ＭＳ分析による判断に従って該反応が完了するまで攪拌した。該反応混合物を、次いでセライトを通して濾過し、追加のメタノールで洗浄し、濾液を濃縮し、油状物を得た。粗製残渣(２７ mg)を、分取ＨＰＬＣにより精製し、トリフルオロ酢酸(ＴＦＡ)塩として表題化合物{２-[２-(２,５-ジメチル-１-フェニル-１Ｈ-ピロール-３-イル)-エチル]-１-メチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-キノリン-６-イル}-ジメチル-アミンを得た。収量：２３ mg (７０％). １Ｈ ＮＭＲ: (４００ＭＨz、ＣＤＣｌ３) １.５９ (m, １Ｈ)、１.８５-２.０３ (m, ３Ｈ)、１.９１ (s, ３Ｈ)、１.９７ (s, ３Ｈ)、２.３３-２.５２ (m, ２Ｈ)、２.６７-２.９２ (m, ２Ｈ)、２.９４ (s, ３Ｈ)、３.１１ (s, ６Ｈ)、３.３６-３.４２ (m, １Ｈ)、５.７８ (s、１Ｈ)、６.５３ (d、J ＝ ８Ｈz、１Ｈ)、１.８３ (m, １Ｈ)、７.０８-７.３９ (m, ３Ｈ)、７.３２-７.４６ (m, ３Ｈ) ＥＳＩ−ＭＳ(m/z): [Ｍ+Ｈ]+ ＝ ３８８.
【００９１】
実施例２：新規ＡＲアンタゴニストのためのスクリーニング
以下のアッセイは、アンドロゲン-レセプターアンタゴニストである化合物を同定する方法を提供するものである。
【００９２】
ＮＩＮＤＳにより作成されたライブラリーをスクリーニングした。ライブラリーは、１０４０ ＦＤＡ承認薬および天然の生成物から構成される。各一次スクリーニングから化合物を選択および比較するための基本的なストラテジーを確立した(図１)。
【００９３】
転写アッセイを、ＭＭＴＶ−ルシフェラーゼ、ＳＶ４０-レニラ・ルシフェラーゼ、およびネイティブＡＲをコードするプラスミドを用いて１０ｃｍプレートのＨＥＫ２９３細胞をトランスフェクトすることにより行った。これらの細胞が有用であるのは、前立腺から得た細胞の限られたトランスフェクション効率がこのアッセイの変動を増加させることが理由である。ＦＲＥＴアッセイを、ＣＦＰ−ＡＲ−ＹＦＰ融合タンパク質：ＨＥＫ２９３/Ｃ-ＡＲ−ＹおよびＬＡＰＣ４/Ｃ−ＡＲ−Ｙを各々安定に発現する２つの独立した細胞系を用いて行った。ＬＡＰＣ４細胞は、前立腺から得た細胞系統である((Klein, K.A., et al., Progression of metastatic human prostate cancer to androgen independence in immunodeficient SCID mice. Nat Med, 1997. 3(4): p.402-8)。ＦＲＥＴとは、ヒトアンドロゲンレセプターのアミノおよびカルボキシル末端に融合した蛍光青緑色と黄色の蛍光タンパク質誘導体(ＣＦＰ、ＹＦＰ)間の蛍光共鳴エネルギー移動である。リガンドが該レセプターを活性化させる場合に、ＣＦＰおよびＹＦＰを近接近にて架橋する構造変化がおこり、ＦＲＥＴが生じる。この分光学的変化は蛍光プレートリーダーを用いて検出される。
【００９４】
転写アッセイのために、トランスフェクトした細胞を、１０μＭの試験化合物と共に９６ウェルディッシュに播種する前に集めた。各プレートには、「非ＤＨＴ」および「非処置」コントロール、ならびに１μＭ ＯＨ−Ｆを含むポジティブコントロールが含まれる。ＦＲＥＴアッセイのために、細胞を１０μＭの試験化合物と共に９６-ウェルプレートに直接播種した。細胞および化合物の移動は液体処理ロボットにより行った。細胞を、１０nＭ ＤＨＴおよび試験化合物の存在下にて２４時間培養した。２４時間後に、ＦＰＲ(ＦＲＥＴアッセイ)にて計測するために、細胞を凍結融解(転写アッセイ)により分解するか、または４％パラホルムアルデヒドに固定した。各化合物を、一次スクリーニングにおいて２回試験した。
【００９５】
該化合物を、抗アンドロゲン効果に基づいて分類した。さらなる分析について選択されるためには、試験化合物は、リプリケート両方において作用すべきであり、かつ各ケースにおいて、ＤＨＴ単独により処置されたサンプル平均からの少なくとも１つの標準偏差まで該シグナルを低下させなければならない。これにより、一回目の試験時に強力な応答を示し、２回目には示さないという状況が排除された。最終的に、レニラ・ルシフェラーゼ(基質特異性に基づいてホタルルシフェラーゼとは区別される)について特異的に試験された転写アッセイについては、細胞毒性の証拠は存在しなかったはずであり、また２つの標準偏差以下にこのシグナルを低下した化合物が排除された。ＦＲＥＴアッセイのために、毒性化合物は、元々のＣＦＰおよびＹＦＰシグナルに対するそれらの効果から容易に検出され、２つの標準偏差以下にこのシグナルを低下させた化合物が排除された。
【００９６】
一次スクリーニングからのヒットの分析。図２は、スクリーニングの結果を示す。該データは、各アッセイ系が有効性に従って化合物を分類できたことを明確に示す。ヒットを、様々なストリンジェンシーを用いて分類して、各アッセイに対して限定したヒット数を選択するのに必要とされる平均からの偏差の程度を決定する。構造アッセイは、ＨＥＫ２９３またはＬＡＰＣ４細胞を使用した場合に、低いストリンジェンシーを用いて高い選択性を達成したが、転写を基にしたアッセイでは、同じ選択性を達成するためにはより高いストリンジェンシーが必要であった。従って、構造アッセイでは、非特異的な細胞変動(perturbation)に対する感受性は低いが、多くの化合物は転写応答を変動させることができた。
【００９７】
各々一次アッセイにおいて同定した上位５０の化合物を、その後別の２種のアッセイにおいて試験した。別の分析には含まれなかった各アッセイにおける上位のヒットは、ライブラリー(ヒドロキシ-フルタミド、ニルタミド、シプロテロン、および酢酸シプロテロン)から既知の全ての抗アンドロゲン、ならびにμモル濃度でＡＲと交差反応を示す特定のステロイドホルモンであった。ベン図により、一次アッセイ間である程度重複することが示される：一つのアッセイにて評点したヒットのおおよそ２０-３０％を、別のアッセイで評点した(図３）。
【００９８】
「有効な」ヒットを決定するために、この上位５０種の化合物を、それらを検出した元々のアッセイにおける漸増試験により再度試験して、古典的な用量応答パターンを示した化合物のみを選択した。各アッセイからの有効なヒットを他のアッセイにおける活性について比較した場合、より高い割合(おおよそ５５-８２％)の化合物が、一次スクリーニングよりも少なくとももう１つの別のアッセイにおいてポジティブと評点された。いくつかの化合物(３)は、全ての３つのアッセイにおいてポジティブと評点された。これは、各スクリーニング方法は、交差アッセイから有効性により化合物を同定するための可能性を示すという考えと一致するが、新たな側面を創薬に加え得るかもしれない。重要なことは、この少ない有効なヒット数のうち、ＨＥＫ２９３ ＦＲＥＴアッセイにて１つの化合物、ＬＡＰＣ４ ＦＲＥＴアッセイにて３つの化合物は、最初のＨＥＫ２９３ 一次転写アッセイの選択基準を満たさなかったが、その後の精査分析によってＡＲ媒介性の転写阻害を示したということを見出したことである。従って、ＦＲＥＴアッセイにより、転写アッセイ単独と比べて創薬を補強させることができる。
【００９９】
新規抗アンドロゲンの同定。ストリンジェントスクリーニングプロトコールをクリアしたいくつかのリード化合物、および以前に認識されていなかった抗アンドロゲン活性を有する３つのクラス：クマリン、例えば、ワルファリン、スコポレチン、およびエスクリン；ハルモール塩酸塩、天然生成物(ＨＨ)；ならびにＦＤＡ承認の抗蠕虫剤、ピルビニウムパモエート(ＰＰ)など。
【０１００】
内性のＡＲ活性に対してピルビニウムおよびハルモールの有効性を評価するために、各化合物を、内性のＡＲを発現する２つの前立腺癌から得た細胞系統であるＬＡＰＣ４(Klein, K.A., et al., Progression of metastatic human prostate cancer to androgen independence in immunodeficient SCID mice. Nat Med, 1997. 3(4): p. 402-8）およびＬＮＣａＰ(Horoszewicz, J.S., et al., The LNCaP cell line- a new model for studies on human prostatic carcinoma. Prog Clin Biol Res, 1980. 37: p. 115-32)）における用量応答アッセイにて試験した。ＬＡＰＣ４細胞は、野生型ＡＲを発現するが、一方ホルモン不応答性のＰＣａから得られるＬＮＣａＰ細胞は、多様なリガンド、とりわけアンタゴニストヒドロキシ-フルタミド(ＯＨ−Ｆ)に反応性となる変異（Ｔ８７７Ａ)を有するＡＲを発現する。細胞を、２種のレポータープラスミド、ＰＳＡルシフェラーゼ構築体(アンドロゲン反応性)と、内部標準としてＳＶ４０-レニラ・ルシフェラーゼ構築体とを用いて形質転換した。次の日に、細胞を分けて、薬物を３nＭ ＤＨＴの存在下で添加した。ルシフェラーゼ生成を次の日に測定した(Dual luciferase kit、Promega)。
【０１０１】
構造アッセイまたは転写レポーターアッセイのいずれかで、ＤＨＴの非存在下において１０uＭを超える用量でさえアンドロゲン活性を示す化合物はなかった。ＰＰおよびＨＨは、レポーター転写阻害時に競合的アンタゴニストであるＯＨ−Ｆおよびビカルタミド(ＢｉＣ)よりも効果がさらに高かったため（表１)、これらの化合物の抗アンドロゲン特徴をさらに試験した。ＰＰおよびＨＨの双方は、ＢｉＣよりも遙かに優れた効果でＤＨＴ-応答性遺伝子発現を阻害した(表１)。ピルビニウムのパモエート塩が、転写阻害を媒介する可能性を排除するために、アニオン交換(Dowex)を使用して、パモエートを塩化物イオンに置き換えた。塩化ピルビニウムは、ピルビニウムパモエートと実に同じ効果であった(図４)。
【０１０２】
表１. 新規抗アンドロゲンのためのスクリーニングにて同定した様々な化合物のＩＣ５０
【表１】
0005599385.tif 000027
ＰＰ＝ピルビニウムパモエート；ＨＨ＝ハルモール塩酸塩；ＯＨ−Ｆ＝ヒドロキシ-フルタミド；ＢｉＣ＝ビカルタミド。ｎｄ＝データなし
【０１０３】
実施例３：アンドロゲンレセプターの阻害に対するアッセイ
このアッセイは、実施例２にて同定した化合物が、内性アンドロゲンレセプター遺伝子発現を阻害し、かつ競合的アンタゴニストではないことを下記に示す。
【０１０４】
リード化合物の効果が、内性のＡＲ制御性遺伝子発現に対して実際に有効であることを確認するために、定量的なＲＴ−ＰＣＲ(ｑＲＴ−ＰＣＲ)を使用して、ＬＡＰＣ４およびＬＮＣａＰ細胞中のアンドロゲン反応性遺伝子の厳選した数に対する効果をモニターした。ＬＡＰＣ４およびＬＮＣａＰ細胞を、阻害剤を含むか、または含まないチャコール・ストリップド培地(charcoal-stripped media)中で３nＭ ＤＨＴの存在および非存在にて増殖させた。ＲＮＡを、ＲＮＡイージキット(Qiagen)を用いて収集し、逆転写した(MMLV-RT, Invitrogen)。リアル−タイムＰＣＲを、検出染料としてＳＹＢＲ緑色および参照染料としてＲoxを用いて７３００ リアル・タイム・ＰＣＲ系(Applied BiosysteＭs)にて実施した。アンドロゲン反応性遺伝子のカリクレイン３またはＰＳＡ(ＫＬＫ３)[Cleutjens, K.B., et al., Two androgen response regions cooperate in steroid hormone regulated activity of the prostate-specific antigen promoter. J Biol Chem, 1996. 271(11): p. 6379-88；Nelson, P.S., et al., The program of androgen-responsive genes in neoplastic prostate epithelium. Proc Natl Acad Sci U S A, 2002. 99(18): p. 11890-5］、メタロプロテイナーゼ１６(ＭＭＰ１６)(Nelson, P.S., et al., The program of androgen-responsive genes in neoplastic prostate epithelium. Proc Natl Acad Sci U S A, 2002. 99(18): p.11890-5)、膜貫通プロテアーゼセリン２(ＴＭＰＲＳＳ２)(Nelson, P.S., et al., The program of androgen-responsive genes in neoplastic prostate epithelium. Proc Natl Acad Sci U S A, 2002. 99(18): p. 11890-5; Aronin, N., et al., Are there multiple pathways in the pathogenesis of Huntington's disease? Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B: Biological Sciences, 1999. 354(1386): p. 995-1003; Vaarala, M.H., et al., Expression of transmembrane serine protease TMPRSS2 in mouse and human tissues. J Pathol, 2001. 193(1): p. 134-40)、ＦＫ５０６結合イムノフィリン５１(ＦＫＢＰ５１)(Nelson, P.S., et al., The program of androgen-responsive genes in neoplastic prostate epithelium. Proc Natl Acad Sci U S A, 2002. 99(18):p.11890-5; Amler, L.C., et al., Dysregulated expression of androgen-responsive and nonresponsive genes in the androgen-independent prostate cancer xenograft model CWR22-R1., Cancer Res, 2000. 60(21): p. 6134-41; Velasco, A.M., et al., Identification and validation of novel androgen-regulated genes in prostate cancer. Endocrinology, 2004. 145(8): p. 3913-24; Magee, J.A., et al., Direct, androgen receptor-mediated regulation of the FKBP5 gene via a distal enhancer element. Endocrinology, 2006. 147(1): p. 590-8)、Ｇタンパク質共役受容体ＲＤＣ１ホモログ、またはケモカインオーファン受容体１(ＲＤＣ−１)(Nelson, P.S., et al., The program of androgen-responsive genes in neoplastic prostate epithelium. Proc Natl Acad Sci U S A, 2002. 99(18): p. 11890-5)、ＮＫホメオボックスファミリーメンバー３(Ｎｋｘ３.１）(Nelson, P.S., et al., The program of androgen-responsive genes in neoplastic prostate epithelium. Proc Natl Acad Sci U S A, 2002. 99(18): p. 11890-5; Bieberich, C.J., et al., Prostate-specific and androgen-dependent expression of a novel homeobox gene. J Biol Chem, 1996. 271(50): p. 31779-82; Aboody-Guterman, K.S., et al., Green fluorescent protein as a reporter for retrovirus and helper virus-free HSV-1 amplicon vector-mediated gene transfer into neural cells in culture and in vivo. Neuroreport, 1997. 8(17): p. 3801-8)を、ハウスキーピング・リボゾーマル遺伝子(ＲＰＬ１９)の転写に対して全て正規化した。全てのサンプルを３回行い、それぞれに正規化した。ＫＬＫ３、Ｎｋｘ３.１、ＴＭＰＲＳＳ２、およびＦＫＢＰ５１は、ＤＨＴによる処置により全て誘導されたが、この誘導はＢｉＣ、ＰＰおよびＨＨにより種々に阻害された。同様に、ＭＭＰ−１６およびＲＤＣ−１は、ＤＨＴによる処置により抑制されたが、この抑制は、全てのＡＲ阻害剤により種々の程度まで上昇された。表２は、各細胞タイプの３または４の独立したｑＲＴ−ＰＣＲ実験から得た結果を要約したものである。ＬＮＣａＰ、Ｎｋｘ３.およびＴＭＰＲＳＳ２においてＤＨＴにより誘導されることが知られる２つの遺伝子は、ＬＡＰＣ４細胞中で顕著に誘導されなかった。ＰＰおよびＨＨの双方は、いくつかのアンドロゲン反応性遺伝子の発現を少なくともＢｉＣと同等の効率で迅速に抑制することが観察された(表２)。
【０１０５】
表２. ＰＰおよびＨＨは、内性ＡＲにより媒介される遺伝子発現を各々阻害する。ＰＰおよびＨＨの双方は、ＢｉＣに匹敵するか、またはＢｉＣよりも優れた様式でアンドロゲン誘導性遺伝子誘導を低下させた。アンドロゲン抑制性遺伝子の評価(下部に示した）から、該阻害剤は各々発現を活性化したことが示された。
【０１０６】
【表２】
0005599385.tif 000028
【０１０７】
ＰＰおよびＨＨは、非競合的アンタゴニストである。ＰＰおよびＨＨがＡＲの競合的または非競合的アンタゴニストとして作用するかどうかを決定するための第一ステップとして、ＰＳＡルシフェラーゼ・レポーターにより一過的に形質転換されたＬＮＣａＰ細胞内でＤＨＴを漸増させ、各阻害剤の中程度の用量により処理した。ＤＨＴはＯＨ−Ｆの阻害効果をこえて、最大の活性化をもたらす。これに対して、ＰＰおよびＨＨの双方は、ＤＨＴの最終濃度が非常に高いにかかわらず(図５)、最大のＤＨＴ誘発性活性化を阻害した。これは非競合的アンタゴニストとしての活性と一致した。
【０１０８】
実施例４. ＰＰ、ＨＨおよびＢｉＣの相乗作用
アンドロゲンレセプター アンタゴニストとしてのＰＰ、ＨＨおよびＢｉＣを使用する際の相乗効果の存在を、下記の方法を用いて確認した。
【０１０９】
リード化合物およびＢｉＣとの間の相乗効果が存在することを、ＬＡＰＣ４およびＬＮＣａＰ細胞を用いて試験した。様々な組合せでＰＳＡ-ルシフェラーゼにより形質転換したＬＮＣａＰおよびＬＡＰＣ４細胞に添加した場合、ＰＰおよびＨＨの双方は、各化合物と互いに、そしてＢｉＣ(表３)とも相乗効果を示した。相乗効果とは、Chou ら(Chou, T.C. and P. Talalay, Quantitative analysis of dose-effects relationships: the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors. Adv Enzyme Regul, 1984. 22: p.27-55)により記述された包括的仮定を用いて、１未満の組合せインデックスとして規定できる。ＰＰ、ＨＨおよびＢｉＣの間の相乗効果は、それらが異なるメカニズムにより作用することを示す。
【０１１０】
表３. ＰＰ、ＨＨおよびＢｉＣ間の相乗効果。用量応答曲線を、所定の細胞型(ＬＮＣａＰまたはＬＡＰＣ４)においてＰＳＡ-ルシフェラーゼからの転写物を活性化するように３nＭ ＤＨＴを用いて、所定の比率の阻害剤を用いて行った。予測ＩＣ５０値を、この組合せにて示した第一の薬剤について報告する。組合せインデックスは、Chou ら(1984)；１未満の数字は相乗効果を示す；に基づく「相乗効果」に関する計算した測定値である。
【表３】
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【０１１１】
実施例５：ＰＰおよびＨＨによる増殖阻害
下記に示した方法を用いて、ＰＰおよびＨＨが細胞培養中のＬＡＰＣ４およびＬＮＣａＰ細胞のアンドロゲン依存性増殖、ならびに「アンドロゲン独立型」前立腺癌のモデルであるＡＲを過剰発現するＬＮ-ＡＲ細胞のアンドロゲン独立型増殖に影響するかどうかを決定した。
【０１１２】
ＬＮ-ＡＲ細胞を、ＬＮＣａＰ細胞中に高発現ＡＲベクターをレトロウイルス感染させて作出し、この親の系統とは異なり、細胞培養中でアンドロゲンが独立して増殖する(Chen, C.D., et al., Molecular determinants of resistance to antiandrogen therapy. Nat Med, 2004.10(1):p.33-9)。ＨＥＫ２９３細胞をコントロールとして使用した。細胞を、それらを分ける前にチャコール・ストリップ培地に２日間移し、４８ウェルプレート中でおおよそ２０,０００細胞/ウェルの密度にて４連で培養した。翌日、３nＭ ＤＨＴを含むかまたは含まない培地を、ＰＰ(１００nＭ)、ＨＨ(１００nＭ)、またはＢｉＣ(１μＭ）と共に含むかまたは含まずに細胞に添加した。培地を、単一の調整物を用いて毎日交換して、一定の化合物濃度を確実にする。増殖を、各ウェル中の細胞のＤＮＡ含量を測定することにより決定した。隔日、４枚のウェル中の細胞を、１００％冷メタノールに固定し、次いでＰＢＳ中の０.２ng/ml ４',６-ジアミド-２-フェニルインドール(DAPI)を用いて５分間室温で染色を行った。この細胞を、ＰＢＳで１回洗浄し、その後３６５/４３９励起/放出波長を用いて蛍光プレートリーダー上で読み取った。ＬＡＰＣ４およびＬＮＣａＰ細胞は、ＤＨＴの存在下でより大量に増殖したが、ＬＮ-ＡＲ細胞は、ＤＨＴの存在下および非存在下にて増殖した。ＰＰは、７日間後に全ての４つの細胞系の増殖を阻害することができる唯一の化合物であったが、ＨＨおよびＢｉＣは唯一ＬＮＣａＰ細胞の増殖を有意に阻害しただけであった。コントロールＨＥＫ２９３細胞は、任意の化合物による有意な影響を受けなかった、これはそれらが非特異的増殖阻害効果は持たないことを示唆している。ＰＰおよびＨＨは、ＢｉＣに加えて、アンドロゲン誘導性増殖を阻止するように少なくとも作用した(図６)。
【０１１３】
実施例６：マウスにおける化合物の薬物動態および毒性
マウスにおいてＰＰおよびＨＨの抗アンドロゲン活性を、下記に示した方法を用いて決定した。
【０１１４】
野生型ＦＶＢマウスは、ＰＰまたはＨＨいずれか単回の腹腔内注射を投与された。血清サンプルを所定の時間間隔にて得て、この薬物レベルを質量分析により決定した。これらの結果から、ＨＨが迅速に排出されたことが示された。ＰＰは、好適な治療となり得ることを示す長期の半減期を示した(表４)。ＰＰの毒性を、０.１〜１０mg/kgの様々な用量範囲を用いて試験した。１０ mg/kgは毒性であったが、このマウスは５mg/kgに耐用性であった。
【０１１５】
表４.ＰＰとＨＨの薬物動態。マウスは、５ mg/kgのＰＰまたはＨＨの単回ＩＰ注射またはＰＯ投薬を受容した。血清サンプルを、所定の時点で採取し、血液レベルを質量分光分析により測定した。
【０１１６】
【表４】
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【０１１７】
ＰＰはインビボでＢｉＣと相乗作用を示し、前立腺萎縮をもたらす。ポジティブコントロールとして、１つのコホートを、組織回復前に４週間去勢した。１つのコホートを非処理とし、他のコホートを、１mg/kg ＰＰ、１００ mg/kgＢｉＣ、またはＰＰ/ビカルタミド(ＢｉＣ)いずれかの組合せにより処置した。動物を、５回／週間で４週間の間処理した。試験期間終了時に、動物を屠殺し、前立腺組織を秤量した。秤量後、該組織を、病理学的および遺伝子的試験のために半分に分けた。ＢｉＣ処置により、前立腺組織サイズは３５％(ｐ＜．００３)まで低下した。ＰＰ：ＢｉＣによる処置により、ＢｉＣ単独(Ｐ＜．０００５)の効果に対し、高度に有意であった６３％までさらに低下した。ＰＰ単独は、統計学的に有意な効果を示さなかった(図７)。
【０１１８】
ＰＰはインビボでＢｉＣと共に相乗作用を示し、アンドロゲン-依存性前立腺遺伝子発現を阻害する。前立腺においてアンドロゲン依存性遺伝子発現に対するＰＰおよびＰＰ:ＢｉＣの効果を評価するために、全ＲＮＡを、インビボの試験において単離した前立腺の半分から調製した。ＲＴ−ＰＣＲを行い、遺伝子発現を、完全にアンドロゲン非反応性である内因性の前立腺遺伝子であるＲＰＬ１９と比べて決定した(E.Bolton, K.R.Y amamoto:非公開データ)。マウス前立腺葉の全体に発現した５つのアンドロゲン反応性遺伝子を評価した。各ケースにおいて、ＰＰおよびＢｉＣは遺伝子発現を有意に低下させたが、その組合せは卓越していたということを観察した。殆どの場合において、この組合せは、去勢された動物のものに近かった(図８)。先の実験をまとめると、ＰＰは、抗アンドロゲン効果を発揮し、インビボでは抗アンドロゲンとしてＢｉＣと共に相乗効果を示す。
【０１１９】
実施例７：マウス前立腺に対してのＰＰ、ＴＨＰ、およびＢｉＣの効果
１０匹のＦＶＢ雄マウス(１２wk)を、ビヒクル、１mg/kg ピルビニウムパモエート(ＰＰ)、１００ mg/kg ビカルタミド (ＢｉＣ)、２mg/kg ＴＨＰ、２０ mg/kg、または２ mg/kg ＴＨＰおよび１００ mg/kg ＢｉＣの組合せにより、５週間の間、毎日、Ｍ−Ｆ投薬により処理した。マウスのコホートをポジティブコントロールとして去勢した。
【０１２０】
ＢｉＣ、ＰＰ、ＴＨＰ＋ＢｉＣ、または去勢による処置は、前立腺湿重量の有意な(分散分析による)低下をもたらした。２０ mg/kg ＴＨＰは、前立腺に関して異常な乳白色の所見をもたらしたが、しかし全体の湿重量に変化はなかった(図１１)。
【０１２１】
ＴＨＰまたはＢｉＣ単独により処置したマウスは、背部前立腺(組織学的試験により)ならびに他の前立腺葉部（lobes）にて軽度の萎縮を示したが、この２つの組合せは、去勢により生じた萎縮に類似する重度の萎縮をもたらした(図１２)。
【０１２２】
定量的ＰＣＲについて、ＲＮＡを、マウス前立腺から単離して、逆転写した。いくつかのアンドロゲン制御遺伝子の発現、そのサブセットを示すが(図１３)、これを、ＱＰＣＲを用い、そしてハウスキーピング遺伝子ＲＰＬ１９の発現に対して正規化することにより決定した。２mg/kgのＴＨＰ処置は軽度の効果を示したが、２０mg/kg ＴＨＰの処置は、前立腺において多くのアンドロゲン調節化遺伝子の転写を有意に低下した。
【０１２３】
実施例８：ＬＡＰＣ４細胞中のＡＲ転写に対してＴＨＰ、ＴＨＰ:ＢｉＣ、およびＳＨＰの有効性
ＬＡＰＣ４細胞、即ち元々のアンドロゲンレセプターを発現する前立腺癌細胞系統を、ＰＳＡルシフェラーゼ・レポーターおよびＣＭＶ−レニラ・ルシフェラーゼコントロールにより形質転換した。図１４に示したように、細胞を、ＤＨＴおよびテトラヒドロピルビニウム(ＴＨＰ)の増加量を用いて処理した。正規化したルシフェラーゼ活性を決定したが、これはテトラヒドロピルビニウムによるアンドロゲンレセプター媒介性の転写に関する強力な阻害を示すものである。
【０１２４】
別の実験において、細胞を、ＤＨＴまたは１:３０のテトラヒドロピルビニウム/ビカルタミドの組合せの漸増により処理して、相乗効果を試験した。２つの薬剤の組合せは相加効果により予測した転写阻害を超えており、アンドロゲンレセプターの相乗的阻害を示す(図１５)。
【０１２５】
第二の別の実験において、ＰＳＡ-ルシフェラーゼＡＲ−応答プロモーターに対するＳＨＰおよびＴＨＰの活性を決定した(図１６)。
【０１２６】
前記発明は、明瞭な理解を目的とした説明および例示により、ある程度詳しく記載されるが、当業者には特定の変更および改変が添付の請求項の範囲の範囲内で実施され得るということを理解されよう。さらに、本明細書において提供された引用文献は、個々の引用文献を参照して組み込まんだ場合と同様に出典明示により本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１３−３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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