(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
セイヨウサンザシ抽出物を有効成分として含有する、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）δのリガンド剤。
【請求項２】
抽出物が、アルコール又はアルコール水溶液抽出物である、請求項１に記載のリガンド剤。
【請求項３】
アルコールが、エタノールである、請求項２に記載のリガンド剤。
【請求項４】
抽出物が熱水抽出物である、請求項１に記載のリガンド剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体が関連する疾患の予防及び／又は治療に有効なペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）のリガンド剤に関する。さらに本発明は、上記疾患の予防及び／又は治療のための医薬組成物及び／又は飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＰＰＡＲ）は、脂質及び糖代謝を維持する遺伝子群の発現制御を担う核内受容体ファミリーに属するリガンド依存的に転写を制御する因子であり、ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲγ、ＰＰＡＲδ（ＰＰＡＲβ）の３種のサブタイプの存在が知られている。【０００３】
ＰＰＡＲαは主に肝臓、心筋などに発現して脂質代謝を調節しており、特に肝臓において高発現が認められている。ＰＰＡＲαのリガンドとしては、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、アラキドン酸などの脂肪酸類や、ベザフィブレートやクロフィブレート等のフィブラート系抗高脂血症薬などの合成化合物が知られ、肝臓のＰＰＡＲαを活性化して脂質代謝を促進することにより血中の脂質低下作用を示すことが知られている（非特許文献１，２）。
【０００４】
ＰＰＡＲγは主に脂肪組織に発現し、小型脂肪細胞の分化に関与し、またインスリン抵抗性を惹起するＴＮＦαや遊離脂肪酸の産生や分泌が亢進している肥大脂肪細胞のアポトーシスを誘導することで、インスリン抵抗性を改善し、血糖値低下作用などを有している。ＰＰＡＲγのリガンドとしては、α−リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などの不飽和脂肪酸や、トログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン等のチアゾリジン系糖尿病治療薬などの合成化合物が知られ、肥大脂肪細胞の過形成を抑制し、インスリン感受性の小型脂肪細胞を増加させることでインスリン抵抗性を改善し、血糖値を低下させることが知られている（非特許文献１，２）。【０００５】
ＰＰＡＲδは組織普遍的に発現しているため、機能予測が難しく、その生理的作用が明らかでなかったが、最近になり、骨格筋細胞に高発現していること、更には、骨格筋細胞や脂肪組織において、脂肪酸代謝関連の遺伝子の発現に関与し、脂肪酸代謝を促進させる機能を有していることが明らかとなっている。また、ＰＰＡＲδリガンドは肥満マウスモデルの高脂肪食負荷による体重増加を抑制する他に、インスリン抵抗性の改善効果を示すことも分かっている。また、骨格筋にＰＰＡＲδを過剰発現させたトランスジェニックマウスでは高脂肪食負荷による肥満やインスリン抵抗性が生じにくく、脂肪細胞が小型化することも明らかとなっている（非特許文献１）。【０００６】
ＰＰＡＲδのリガンドとしては、ジホモ−γ−リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸などの多価不飽和脂肪酸類、プロスタグランジンＡ１やプロスタグランジンＤ２などのエイコサノイド類、半合成プロスタグランジンのカルバサイクリンなどが報告されている（非特許文献２）。【０００７】
その他、ＰＰＡＲリガンドとして、没食子酸エステル、ガロイルタンニン類、ケルセチン類、フラボン、イソフラボン、カテキン、エピカテキンなどのポリフェノール類が報告されている（特許文献１）。
【特許文献１】特開２００２−８０３６２号公報
【特許文献２】特開２００３−９５９６８号公報
【特許文献３】特開２００６−４２８１６号公報
【特許文献４】特開２００３−２６６９４号公報
【特許文献５】特開２００５−８５７２号公報
【特許文献６】特開２００６−１６３３０号公報
【特許文献７】特開２００５−１２６４０５号公報
【特許文献８】特開２００６−２０６０６号公報
【特許文献９】特開２００６−２３０２２５号公報
【特許文献１０】特開２００６−２２０９５号公報
【特許文献１１】特開２００６−５２０８０４号公報
【特許文献１２】ＷＯ９７／２８１４９
【非特許文献１】日本臨床 , ２００５年，６３巻  ５５７〜５８３項
【非特許文献２】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００年，４３巻，５２７〜５５０頁
【非特許文献３】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ，２００６年，７７巻，２７１〜２７９頁
【非特許文献４】Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ．  Ｒｅｓ．，２００７年，２１巻，３９１〜３９４頁
【非特許文献５】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５４，３３５−３４１（２００６）
【非特許文献６】Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００５年，３７巻，２７０〜２７５頁、
【非特許文献７】Ｅｘｐ．  Ｂｉｏｌ．  Ｍｅｄ．，  ２００５年，２３０巻，２２５〜２３４頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
上記のように、ＰＰＡＲリガンド（本明細書中、「ＰＰＡＲのリガンド剤」とも表記する）は、脂質代謝や糖代謝を亢進させることにより、肥満及び肥満に伴うインスリン抵抗性、更には高脂血症、高血圧、糖尿病改善などを予防及び／又は改善することが期待される。しかし、既存のＰＰＡＲリガンドは、医薬品の長期投与による副作用などが危惧される他、食品由来のポリフェノール類などは、十分なＰＰＡＲリガンド作用（本明細書中、「リガンド活性」とも表記する）が得られず、ＰＰＡＲリガンド剤としての効力が必ずしも満足いくものではなかった。【０００９】
本発明の目的は、安全で、優れたＰＰＡＲリガンド作用を有するＰＰＡＲリガンド剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、長期摂取しても安全で副作用の少ないＰＰＡＲリガンドを得るべく、各種植物の抽出物からＰＰＡＲリガンドを鋭意探索した結果、優れたＰＰＡＲリガンド作用を有する特定の食用植物の抽出物を得ることに成功した。そして、そのリガンド作用の特性が、溶媒の種類等により異なることを見出し、本発明を完成した。【００１１】
本発明は、好ましい態様として下記の態様を含む。
［態様１］
以下の植物：
ノコギリヤシ、エゾウコギ、アサイ、カルダモン、アンゼリカ、グァバ、コクシリ、ナツグミ、センキュウ、アサ、セイヨウニワトコ、セキガイチャ、チャボトケイソウ、サクナ、アニス、セイヨウニンジンボク、アシュワガンダ、ギョリュウモドキ、セイヨウサンザシ、アマ、アギタケ、ハリエンジュ、マンシュウウコギ
から選択される１種又は２種以上の植物抽出物を有効成分として含有する、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）のリガンド剤。
［態様２］
ＰＰＡＲが、ＰＰＡＲδである、態様１に記載のリガンド剤。
［態様３］
植物が、セイヨウニワトコ、セキガイチャ、チャボトケイソウ、サクナ、アニス、セイヨウニンジンボク、アシュワガンダ、ギョリュウモドキ、セイヨウサンザシ、アマ、アギタケ、ハリエンジュ、マンシュウウコギ
から選択される１種又は２種以上である態様１又は２に記載のリガンド剤。
［態様４］
抽出物が、アルコール又はアルコール水溶液抽出物である、態様１〜３のいずれか１態様に記載のリガンド剤。
［態様５］
アルコールが、エタノールである、態様４に記載のリガンド剤。
［態様６］
植物が、アマ、アギタケ、マンシュウウコギ、アサから選択される１種又は２種以上である態様１又は２に記載のリガンド剤。
［態様７］
抽出物が熱水抽出物である、態様１、２又は６に記載のリガンド剤。
［態様８］
以下の植物：
ノコギリヤシ、エゾウコギ、アサイ、カルダモン、アンゼリカ、グァバ、コクシリ、ナツグミ、センキュウ、アサ、セイヨウニワトコ、セキガイチャ、チャボトケイソウ、サクナ、アニス、セイヨウニンジンボク、アシュワガンダ、ギョリュウモドキ、セイヨウサンザシ、アマ、アギタケ、ハリエンジュ、マンシュウウコギ
から選択される１種又は２種以上の植物抽出物と、薬学上許容される添加剤とを含有する、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体が関連する疾患の予防及び／又は治療のために用いる医薬組成物。
［態様９］
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体が関連する疾患が、肥満、高脂血症、高血圧、糖尿病から選択される１種又は２種以上の疾患である、態様８に記載の医薬組成物。
［態様１０］
以下の植物：
ノコギリヤシ、エゾウコギ、アサイ、カルダモン、アンゼリカ、グァバ、コクシリ、ナツグミ、センキュウ、アサ、セイヨウニワトコ、セキガイチャ、チャボトケイソウ、サクナ、アニス、セイヨウニンジンボク、アシュワガンダ、ギョリュウモドキ、セイヨウサンザシ、アマ、アギタケ、ハリエンジュ、マンシュウウコギ
から選択される１種又は２種以上の植物抽出物と、飲食物として許容される添加剤とを含有する、飲食品。
［態様１１］
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体が関連する疾患の予防及び／又は改善のために用いる、態様１０に記載の飲食品。
［態様１２］
セイヨウニワトコ、アニス、セイヨウサンザシ及びセキガイチャ、からなる群から選択される１種又は２種以上の植物抽出物を有効成分として含有する、抗肥満剤。
［態様１３］
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体が関連する疾患を、予防及び／又は治療するための方法であって、当該予防及び／又は治療を必要とする個体に、
以下の植物：
ノコギリヤシ、エゾウコギ、アサイ、カルダモン、アンゼリカ、グァバ、コクシリ、ナツグミ、センキュウ、アサ、セイヨウニワトコ、セキガイチャ、チャボトケイソウ、サクナ、アニス、セイヨウニンジンボク、アシュワガンダ、ギョリュウモドキ、セイヨウサンザシ、アマ、アギタケ、ハリエンジュ、マンシュウウコギ
から選択される１種又は２種以上の植物抽出物を含有する医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
［態様１４］
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体が関連する疾患の予防及び／又は治療のために用いる医薬組成物の製造のための使用であって、
以下の植物：
ノコギリヤシ、エゾウコギ、アサイ、カルダモン、アンゼリカ、グァバ、コクシリ、ナツグミ、センキュウ、アサ、セイヨウニワトコ、セキガイチャ、チャボトケイソウ、サクナ、アニス、セイヨウニンジンボク、アシュワガンダ、ギョリュウモドキ、セイヨウサンザシ、アマ、アギタケ、ハリエンジュ、マンシュウウコギ
から選択される１種又は２種以上の植物抽出物を含む前記医薬組成物の製造のための使用。
［態様１５］
肥満を予防及び／又は治療するための方法であって、当該予防及び／又は治療を必要とする個体に、セイヨウニワトコ、アニス、セイヨウサンザシ及びセキガイチャからなる群から選択される１種又は２種以上の植物抽出物を含有する、抗肥満剤を投与することを含む、前記方法。
［態様１６］
肥満を予防及び／又は治療のために用いる抗肥満剤の製造のための使用であって、セイヨウニワトコ、アニス、セイヨウサンザシ及びセキガイチャからなる群から選択される１種又は２種以上の植物抽出物を含む前記抗肥満剤の製造のための使用。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によると、優れたＰＰＡＲリガンド剤、及びそれを有効成分として含有する組成物（医薬組成物、飲食品）が提供される。【００１３】
本発明のリガンド剤の有効成分である植物抽出物は、天然由来の食物として摂取されており、安全性が高いので、長期摂取が可能である。したがって、経口用組成物として日常的に摂取して、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体が関連する疾患、例えば、肥満、高脂血症、高血圧、糖尿病等の予防用組成物として利用することができる。また、長期に渡る治療及び改善が必要な上記疾患の治療用及び改善用組成物としても利用することができる。
［発明を実施するための形態］
Ｉ．ＰＰＡＲリガンド剤
本発明は、特定の植物抽出物を有効成分として含有する、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）のリガンド剤及び／又は抗肥満剤に関する。【００１４】
（植物抽出物）
本発明のリガンド剤の原料となる植物は、以下の２３種類の植物のグループから選択される１種又は２種以上の食用植物である。【００１５】
（１）セイヨウニワトコ（Ｓａｍｂｕｃｕｓ  ｎｉｇｒａ）；
（２）セキガイチャ（Ａｄｉｎａｎｄｒａ  ｎｉｔｉｄａ）；
（３）チャボトケイソウ（Ｐａｓｓｉｆｌｏｒａ  ｉｎｃａｒｎａｔａ）；
（４）サクナ（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ）；
（５）アニス（Ｐｉｍｐｉｎｅｌｌａ  ａｎｉｓｕｍ）；
（６）セイヨウニンジンボク（Ｖｉｔｅｘ  ａｇｎｕｓ−ｃａｓｔｕｓ）；
（７）アシュワガンダ（Ｗｉｔｈａｎｉａ  ｓｏｍｎｉｆｅｒａ）；
（８）ギョリュウモドキ（Ｃａｌｌｕｎａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）；
（９）セイヨウサンザシ（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ  ｍｏｎｏｇｙｎａ）；
（１０）アマ（Ｌｉｎｕｍ  ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ）；
（１１）アギタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｆｅｒｕｌａｅ）；
（１２）ハリエンジュ（Ｒｏｂｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａ）；
（１３）マンシュウウコギ（Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ  ｓｅｓｓｉｌｉｆｌｏｒｕｓ）；
（１４）アサ（Ｃａｎｎａｂｉｓ  ｓａｔｉｖａ）；
（１５）カルダモン（Ｅｌｅｔｔａｒｉａ  ｃａｒｄａｍｏｍｕｍ）；
（１６）アンゼリカ（Ａｎｇｅｌｉｃａ  ａｒｃｈａｎｇｅｌｉｃａ）；
（１７）グァバ（Ｐｓｉｄｉｕｍ  ｇｕａｊａｖａ）；
（１８）コクシリ（Ｐｒｕｍｕｓ  ｓｐｉｎｏｓａ）；
（１９）ノコギリヤシ（Ｓｅｒｅｎｏａ  ｒｅｐｅｎｓ）；
（２０）ナツグミ（Ｅｌｅａｇｎｕｓ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）；
（２１）センキュウ（Ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ  ｃｈｕａｘｉｏｎｇ）；
（２２）エゾウコギ（Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ  ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ）及び
（２３）アサイ（Ｅｕｔｅｒｐｅ  ｏｌｅｒａｃｅａ、又はＥ．  ｅｄｕｌｉｓ）。【００１６】
以下、各植物について説明する。【００１７】
（１）セイヨウニワトコ：スイカズラ科の植物であり、本発明においては好ましくは花を用いる。セイヨウニワトコの花は別名をエルダーフラワーとも言われ、ヨーロッパでは古くから用いられているハーブであり、風邪や咽喉炎、関節炎などの改善に有効であることが知られている。また歯周病の初期炎症の抑制効果についての報告がある（非特許文献３）。しかし、セイヨウニワトコの溶媒抽出物が、ＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００１８】
（２）セキガイチャ（石崖茶）：ツバキ科の植物であり、本発明においては好ましくは葉を用いる。セキガイチャは中国南部、広西荘族自治区特産の茶で、消炎、解毒作用があり、咽喉炎や口腔炎に良いとされ、降圧効果や癌予防効果があるとされている。しかし、セキガイチャの溶媒抽出物が、ＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００１９】
（３）チャボトケイソウ：トケイソウ科の植物であり、本発明においては好ましくは地上部を用いる。チャボトケイソウの地上部はパッションフラワーといわれ、ヨーロッパでは神経不安や不眠症に用いられるハーブである。チャボトケイソウ（パッションフラワー）を含む数種のポリフェノール素材を１種以上とニンニク素材を含む循環器疾患予防組成物が知られている（特許文献２）。また、ダイエットによる精神的ストレス軽減作用を目的とした食物繊維を含有するダイエット食品が開示され、その中にはパッションフラワーが配合されたダイエット食品が記載されている（特許文献３）。しかしいずれの文献も、チャボトケイソウ単独の生理作用に関する言及はなく、チャボトケイソウの溶媒抽出物がＰＰＡＲリガンド剤であることは示唆も開示もない。【００２０】
（４）サクナ：和名をボタンボウフウともいい、セリ科の植物であり、本発明においては好ましくは地上部を用いる。特許文献４には、サクナの乾燥粉末又は抽出物が二糖類分解酵素阻害活性を有し、抗糖尿病や抗肥満に有効であるとの記載があるが、サクナの溶媒抽出物がＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００２１】
（５）アニス：セリ科の植物であり、本発明においては好ましくは種子を用いる。アニスの種子は芳香性のハーブとして飲料や焼き菓子、ハーブティーなどに使用され、民間療法薬として利尿、消化不良や気管支炎などに用いられている。しかし、アニスの溶媒抽出物が、ＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００２２】
（６）セイヨウニンジンボク：クマツヅラ科の植物であり、本発明においては好ましくは果実を用いる。ヨーロッパではセイヨウニンジンボクの果実はスパイスとして、また、月経不順、月経前緊張症に民間療法薬として用いられてきた。また、エタノール抽出物に含まれるフラボノイド類の抗酸化活性に関する報告（非特許文献４）がある。しかし、セイヨウニンジンボクの溶媒抽出物が、ＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００２３】
（７）アシュワガンダ：ナス科の植物であり、本発明においては好ましくは根を用いる。アシュワガンダの葉や根はインドの伝統医療アーユルヴェーダでは長寿の薬サラヤンとして古くから用いられている。滋養強壮、強精、抗不安、抗欝、リュウマチなどの関節炎の緩和などの効能が知られている。しかし、アシュワガンダの溶媒抽出物が、ＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００２４】
（８）ギョリュウモドキ：ツツジ科の植物であり、本発明においては好ましくは花を用いる。ヨーロッパではギョリュウモドキの花は尿路感染予防、利尿、関節炎、不眠症、呼吸器疾患などに効果のあるハーブとして用いられ、葉・茎も同様の効果を有する健康茶として用いられている。特許文献５にはリパーゼ阻害による脂肪吸収阻害剤として抗肥満やニキビ改善の効果が開示されているが、これはＰＰＡＲリガンド剤としての脂質代謝改善効果とは異なる作用であり、ギョリュウモドキの溶媒抽出物が、ＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００２５】
（９）セイヨウサンザシ：バラ科の植物であり、本発明においては好ましくは果実を用いる。ヨーロッパではセイヨウサンザシの花、葉、果実は心臓病のハーブとして用いられ、特に果実は動脈硬化症や腎臓病に効果のあるハーブとして用いられる。しかし、セイヨウサンザシの溶媒抽出物が、ＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００２６】
（１０）アマ：アマ科の植物であり、好ましくは種子を用いる。アマ種子はω３脂肪酸を多く含み、血中のコレステロール低下作用が知られ、また、アマ種子を摂取しているフィンランドでは前立腺癌や乳癌などのホルモン感受性癌の罹患率が低いことが疫学的に知られている。上述のとおり、脂肪酸がＰＰＡＲリガンド剤であることは知られているが、アマの溶媒抽出物がＰＰＡＲリガンド剤であることは、具体的に開示されておらず、示唆もされていない。【００２７】
（１１）アギタケ：シメジ科の植物であり、本発明においては好ましくは子実体を用いる。免疫を高める抗腫瘍効果や膵臓機能を上げて糖尿病に有効であることが知られている。しかし、アギタケの溶媒抽出物が、ＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００２８】
（１２）ハリエンジュ：ニセアカシアとも呼ばれるマメ科の植物であり、本発明においては好ましくは花を用いる。漢方薬としては花が下血、喀血に用いられる。特許文献６にはプロアントシアニジンを有効成分とする脂質燃焼促進剤に関する素材としてニセアカシアの果実が開示されているが、好ましい使用部位は異なり、また、ＰＰＡＲリガンド剤としての示唆も開示もない。【００２９】
（１３）マンシュウウコギ：ウコギ科の植物であり、本発明においては好ましくは葉を用いる。マンシュウウコギの根皮は漢方薬の五加皮として抗炎症、鎮痛、強壮に用いられ、葉は食用、健康茶として用いられている。非特許文献５には、マンシュウウコギの葉のサポニンが膵臓リパーゼを阻害することによる抗肥満効果に関する報告がなされているが、これはＰＰＡＲリガンド剤としての脂質代謝改善効果とは異なる作用であり、マンシュウウコギの溶媒抽出物が、ＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００３０】
（１４）アサ：アサ科の植物であり、好ましくは種子を用いる。アサの葉や花冠に含まれる向神経性物質カンナビノイドが神経系に作用して食欲やエネルギー代謝に関与するという報告（非特許文献６及び７）があるが、アサの実（種子）が脂質代謝を亢進することは知られておらず、また、アサの溶媒抽出物がＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００３１】
（１５）カルダモン：ショウガ科の植物であり、本発明においては好ましくは種子を用いる。カルダモンの種子は、スパイスとして用いられる。特許文献７に、水溶性ガラクトマンナン及び食品乳化剤、酵母粉末、ビタミンＢ類を配合したことを特徴とする肥満防止剤が開示され、その中にカルダモンの製油を配合するとの記載があるが、この特許は水溶性ガラクトマンナンによる胃の膨満感食事制限とグルコースと脂肪の吸収の低下、遅延させることによって肥満を防止することが主な作用で、精油の配合により体内の代謝を促進させるとの記載はあるが、証明はされておらず、カルダモンの溶媒抽出物がＰＰＡＲリガンド剤として作用することは示唆も開示もされていない。【００３２】
（１６）アンゼリカ：セリ科の植物であり、本発明においては好ましくは根を用いる。アンゼリカの根はヨーロッパでは食欲不振、消化不良、膨満感などの症状に用いられるハーブである。アンゼリカについては高血圧、貧血、糖尿、神経痛、利尿、疲労回復、血栓形成予防などの効能が知られているが、ＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００３３】
（１７）グァバ：フトモモ科の植物であり、好ましくは未成熟果実を用いる。特許文献８及び９に、グァバ茶の肥満防止及び改善作用に関する開示がある。しかし、その作用は特許文献８では炭水化物、脂肪の消化酵素阻害による脂肪、澱粉、糖分の吸収をコントロールすることにあり、特許文献９では糖質消化酵素の阻害効果による糖の吸収抑制であり、グァバの未成熟果実が脂質代謝を亢進することは知られておらず、また、グァバの溶媒抽出物がＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００３４】
（１８）コクシリ（黒刺李）：本発明においては好ましくは果実を用いる。コクシリの果実はヨーロッパではハーブティーとして、また、口腔や咽頭粘膜の炎症に民間療法薬として用いられる。しかし、コクシリの溶媒抽出物がＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００３５】
（１９）ノコギリヤシ：ヤシ科の植物であり、本発明においては好ましくは果実を用いる。ノコギリヤシの果実には抗アンドロゲン作用があり、前立腺障害に効果があることが知られている。しかし、ノコギリヤシの溶媒抽出物がＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００３６】
（２０）ナツグミ：グミ科の植物であり、本発明においては好ましくは果実を用いる。ナツグミの果実は漢方ではモクハンゲ（木半夏）と称し、打撲傷やリウマチによる関節痛の治療に用いられる。しかし、ナツグミの溶媒抽出物がＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００３７】
（２１）センキュウ：セリ科の植物であり、本発明においては好ましくは地上部を用いる。同植物の根茎は漢方でセンキュウとして強壮、鎮静、鎮痛薬として用いられる。しかし、センキュウの溶媒抽出物がＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００３８】
（２２）エゾウコギ：ウコギ科の植物であり、本発明においては好ましくは根皮を用いる。根皮は五加皮として抗炎症、鎮痛、強壮に用いられており、葉は抗ストレス作用を有し健康茶として用いられている。特許文献１０にはエゾウコギの葉のサポニンのリパーゼ阻害活性による脂質吸収阻害、抗肥満、高脂血改善効果などについて開示されているが、エゾウコギの根皮が脂質代謝を亢進することは知られておらず、また、エゾウコギの溶媒抽出物がＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００３９】
（２３）アサイ：和名をワカバキャベツといい、ヤシ科の植物であり、本発明においては好ましくは果実を用いる。果実には抗酸化作用を有するポリフェノールや、アミノ酸や必須脂肪酸も多く含んでおり、抗酸化作用を有するジュカラ及びアサイ果実ベースの健康補助食品に関する知見（特許文献１１）はあるが、脂質代謝や肥満の予防、改善に関する記載はなされていない。また、アサイの溶媒抽出物がＰＰＡＲリガンド剤であることは全く知られていない。【００４０】
本発明で使用する植物の植物抽出物における各々の植物体の使用部位は、上述した部位が好ましいが、これに制限されるものではなく、蕾、花、果実、果皮、種子、葉、枝、幹、樹皮、根、根皮、地上部、全草などの全ての部位を使用することができる。また、上述の好ましい部位に加えて、上記の全ての部位から選択される１種又は２種以上を併用しても用いてもよい。【００４１】
原料となる植物体は、生又は乾燥したものを用いることができ、必要により、粉砕、細切、粉末化等の加工をして用いることができる。また、生薬として入手可能なものはそれを利用してもよい。【００４２】
植物抽出物は、これら各種の抽出部位から溶媒を用いて直接抽出することで得られるものの他、水蒸気蒸留や、超臨界抽出技術を用いた二酸化炭素抽出、さらには圧搾処理を施した後に得られる圧搾液（搾汁）及び／又は残渣に溶媒を加えて抽出することで得られるもの、前記の圧搾液そのものも、本発明の植物抽出物の定義に含まれる。【００４３】
また、本発明者らは、上記の２３種類の植物のアルコール水溶液による抽出物を得、これに酢酸エチル、ｎ−ブタノール又は水を加えて液層分配して得られる酢酸エチル分画物、ブタノール分画物及び水分画物においても、一つ又はそれ以上の分画物に優れたＰＰＡＲリガンド活性があることを確認している。本発明の植物抽出物には、このような溶媒抽出物の分画物も含まれる。【００４４】
本発明の植物抽出物は、必要に応じ、カラムクロマトグラフィー等でその活性成分を分画精製してもよい。【００４５】
（抽出方法）
本発明においては、上述の植物抽出物やその精製物を使用することができる。これらは単独で用いてもよく、二種以上を混合して用いてもよい。【００４６】
植物抽出物を得るために用いる抽出溶媒としては、特に限定されないが、水、炭素数が１ないし４の低級アルコール（例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等）、液状多価アルコール（例えば１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（例えばアセトン、メチルエチルケトン）、エステル類（例えば酢酸エチル、酢酸ブチル等）などが挙げられる。これらは単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
【００４７】
原料植物として、（１）セイヨウニワトコ（特に花）、（２）セキガイチャ（特に葉）、（３）チャボトケイソウ（特に地上部）、（４）サクナ（特に地上部）、（５）アニス（特に種子）、（６）セイヨウニンジンボク（特に果実）、（７）アシュワガンダ（特に根）、（８）ギョリュウモドキ（特に花）、（９）セイヨウサンザシ（特に果実）、（１０）アマ（特に種子）、（１１）アギタケ（特に子実体）、（１２）ハリエンジュ（特に花）、（１３）マンシュウウコギ（特に葉）を用いる場合は、溶媒としてアルコール、特に低級アルコール又はその水溶液を用いることが好ましい。【００４８】
溶媒としてアルコール又はその水溶液を用いる場合、アルコールの濃度は所望するリガンド作用により適宜選択すればよい。通常、抽出溶媒中におけるアルコールの濃度は、約１０〜１００容量％、好ましくは約１０〜７０容量％である。本発明のリガンド剤は、医薬組成物又は飲食品等の経口用組成物として好適に利用されるものであることから、安全性の観点からは、アルコールとしてエタノールを用いることが好ましい。【００４９】
さらに、原料植物として、（１０）アマ（特に種子）、（１１）アギタケ（特に子実体）、（１３）マンシュウウコギ（特に葉）を用いる場合は、上記アルコール又はアルコール水溶液の他、溶媒として熱水を用いることも好ましい態様である。また、原料植物として、（１４）アサ（特に種子）を用いる場合にも、溶媒として熱水を用いることが好ましい。本明細書でいう熱水とは、具体的には５０〜１００℃、より好ましくは５０〜８５℃の水をいう。【００５０】
上記の溶媒、すなわち熱水、アルコール又はアルコール水溶液には、本発明の特徴とするＰＰＡＲリガンド作用や抽出効率が大きく損なわない範囲であれば、任意の他の成分が含まれていてもよい。【００５１】
抽出方法としては、特に限定されるものではなく、溶媒を上記植物原料と接触させることにより行われる。具体的には、溶媒中に原料を浸漬させて静置保存してもよいし、攪拌や加熱還流やなど、抽出様式は公知手段に従い、所望に応じて適宜設定することができる。抽出温度は、特に制限されるものではなく、溶媒の温度に応じて適宜設定すればよいが、操作上の観点から、溶媒の沸点以下であることが好ましい。また、必要に応じて、加圧や減圧等の条件を設定することもできる。【００５２】
抽出時間は、用いる植物原料の種類や抽出溶媒の種類及び使用量等により適宜設定すればよい。具体的には、溶媒としてアルコール又はアルコール水溶液を用いる場合、その使用量は、通常、原料１重量部に対して１〜１０００倍、好ましくは１〜１００倍、さらに好ましくは1〜１０倍であり、抽出時間は、通常、約１０分〜１ヶ月程度、好ましくは１０分〜７日程度である。また、溶媒として熱水を用いる場合、その使用量は、通常、原料１重量部に対して１〜１０００倍、好ましくは１〜１００倍、さらに好ましくは1〜１０倍であり、抽出時間は、通常、約１０分〜７日程度、好ましくは１０分〜１日程度、さらに好ましくは１０分〜１時間程度である。
【００５３】
本発明の植物抽出物は、上記の抽出操作の後、抽出残渣を分離して抽出液の形態とする。この分離手段としては、公知の方法を用いることができ、例えば濾過、遠心分離などが挙げられる。本発明においては、上記抽出液のまま使用してもよいし、必要に応じて抽出液の濃縮物又は乾燥物（濃縮乾固物）として使用してもよく、輸送の簡便性等の観点からは、濃縮物又は乾燥物とすることが好ましい。濃縮は常圧又は減圧下で行うことができ、濃縮によって濃縮液の容積を約１０〜５０容量％、好ましくは約１０〜３０容量％に減少させるのがよい。乾固物は、ＰＰＡＲリガンド活性成分を含む抽出液から溶媒を好ましくは減圧下で乾燥させることによって得られる。【００５４】
上述のとおり、本発明の植物抽出物には、上記植物原料に溶媒を接触して得られる抽出物の分画物（例えば、酢酸エチル分画物、ブタノール分画物、水分画物）も含まれる。この分画物は、通常、植物原料のアルコール又はアルコール水溶液による抽出物から液層分配して得られる。液層分配の方法としては、特に制限されるものではなく、公知の方法を用いることができる。【００５５】
（ＰＰＡＲリガンド剤及び抗肥満剤）
本発明のＰＰＡＲリガンド剤及び抗肥満剤は、上述のとおり、ノコギリヤシ、エゾウコギ、アサイ、カルダモン、アンゼリカ、グァバ、コクシリ、ナツグミ、センキュウ、アサ、セイヨウニワトコ、セキガイチャ、チャボトケイソウ、サクナ、アニス、セイヨウニンジンボク、アシュワガンダ、ギョリュウモドキ、セイヨウサンザシ、アマ、アギタケ、ハリエンジュ、マンシュウウコギから選択される１種又は２種以上の植物の溶媒抽出物を有効成分として含有する。【００５６】
ここで、本明細書中におけるＰＰＡＲリガンド剤とは、ＰＰＡＲリガンド結合領域に結合する能力、すなわちＰＰＡＲリガンド作用を有するものの総称をいう。リガンド剤はアゴニストでもアンタゴニストであってもよいが、好ましくはアゴニストである。【００５７】
本発明のＰＰＡＲリガンド剤は、インスリン抵抗性、高脂血症、糖尿病、高血圧及び肥満などの生活習慣病に関わる各種遺伝子の発現を正又は負に制御することができる。前記各種遺伝子とは、例えば、アシルＣｏＡオキシダーゼ、中鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ、長鎖アシルＣｏＡ合成酵素、脂肪酸結合タンパク質、リポ蛋白リパーゼ、アポリポタンパク質、脱共役タンパク質などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。【００５８】
ＰＰＡＲリガンド活性は、例えば、ＰＰＡＲリガンド結合領域とＧＡＬ４との融合タンパクに対する結合をルシフェラーゼの発現で表現するレポーターアッセイ（Ｃｅｌｌ，１９９５年，８３巻，８０３〜８１２頁）や、ＰＰＡＲリガンド結合領域を含むタンパクを用いたコンペティション・バインディング・アッセイ（Ｃｅｌｌ，１９９５年，８３巻，８１３〜８１９頁）などにより測定することができる。これらのアッセイにおいて、サンプルの活性は一般に溶媒対照と比較して、溶媒対照より高い活性を示すサンプルを「ＰＰＡＲリガンド活性あり」と評価する。本発明においては、溶媒対照に比較して１．３倍以上の活性を示したものを「ＰＰＡＲリガンド活性あり」と評価している。【００５９】
本発明のＰＰＡＲリガンド剤は、ＰＰＡＲα、γ、δの内、少なくとも１種以上のＰＰＡＲに対し、リガンド作用を有していればよい。後述の実施例でも示されるように、本発明のＰＰＡＲリガンド剤は、特に、ＰＰＡＲδのリガンド剤として有用である。【００６０】
本発明で使用しうる２３種類の植物由来の抽出物はいずれも少なくともＰＰＡＲδサブタイプに対してリガンド活性を有するので、上記のＰＰＡＲδのリガンド剤として有用である。本明細書の［背景技術］の項目に記載したとおり、ＰＰＡＲδの生理的作用が明らかかになったのは、最近のことである。ＰＰＡＲδについては、ＰＰＡＲδを活性化できるアゴニストには、ＨＤＬコレステロ−ル上昇作用、それによる動脈硬化進展抑制やその治療、脂質低下剤や血糖降下剤としての応用が期待される。しかしながら、十分な活性を有し臨床応用されているものは知られていない。したがって、本発明のＰＰＡＲのリガンド剤は、ＰＰＡＲδアゴニストとして、特に血中脂質低下剤や抗肥満剤として有望視されるものである。【００６１】
さらに、後述の実施例で明確にされたように、αサブタイプ及びγサブタイプのＰＰＡＲに対しては由来する植物の種類に応じて、リガンド活性を有する場合と有しない場合がある。具体的には、カルダモンの水分画物、アマの酢酸エチル分画物及びｎ−ブタノール分画物はＰＰＡＲα活性を示した（実施例２）。また、エゾコウギ、ナツグミ、アサ、セイヨウニワトコ、セキガイチャ、アニス及びギョリュウモドキの酢酸エチル分画物、並びにセキガイチャのｎ−ブタノール分画物はＰＰＡＲγ活性を示した（実施例４）。本発明の開示により、当業者は必要に応じ使用する植物材料を選択することにより、所望のリガンド剤を調製することが可能である。好ましくは、ＰＰＡＲδとＰＰＡＲγの双方にリガンド活性を示す。【００６２】
また、実施例６に後述するとおり、本発明の抗肥満剤をマウスに１６日間投与したところ、体重増加の抑制、体脂肪蓄積の抑制、血中中性脂肪濃度の低下作用が認められた。従って、本発明の抗肥満剤は、体重増加抑制剤、体脂肪蓄積抑制剤、血中中性脂肪低下剤などとしても使用することができる。本発明の抗肥満剤は、好ましくは、セイヨウニワトコ、アニス、セイヨウサンザシ及びセキガイチャからなる群から選択される１種又は２種以上の植物抽出物を含有する。【００６３】
具体的には、投与を受けない対照群の試験終了時の体重を１００％とした場合、セイヨウニワトコ抽出物投与群（３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）では約９２％、アニス抽出物投与群（１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）では約９３％、セイヨウサンザシ抽出物投与群（１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）では約９４％、セキガイチャ抽出物投与群（１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）では約６９％程度に体重増加が抑制された。また、投与を受けない対照群の試験終了時の体脂肪量を１００％とした場合、セイヨウニワトコ抽出物投与群（３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）では約８１％、アニス抽出物投与群（１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）では約８８％、セイヨウサンザシ抽出物投与群（１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）では約８０％、セキガイチャ抽出物投与群（１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）では約８８％程度に体脂肪の蓄積が抑制された。さらには、投与を受けない対照群の試験終了時の血中中性脂肪濃度を１００％とした場合、セイヨウニワトコ抽出物投与群（３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）では約８０％、アニス抽出物投与群（１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）では約８７％、セキガイチャ抽出物投与群（１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）では約６３％程度に中性脂肪濃度が低減された。【００６４】
さらにまた、本発明の抗肥満剤は、本発明の植物抽出物を投与された生体の血中の遊離脂肪酸濃度を変化させうる。血中の遊離脂肪酸濃度が増加することは、脂肪細胞に蓄えられていた中性脂肪もしくは血中の中性脂肪が分解されて血中に遊離し、エネルギー源となることを意味する。限定されるわけではないが、セイヨウニワトコ、アニス及びセイヨウサンザシからの抽出物を含む抗肥満剤の場合に、血中の遊離脂肪酸濃度が増加の効果が得られる。血中の遊離脂肪酸濃度が減少することは、遊離した脂肪酸が肝臓などに取り込まれ更に燃焼が亢進している状況で、血液中の濃度が下がった状態を意味する。限定されるわけではないが、セキガイチャからの抽出物を含む抗肥満剤の場合に、血中の遊離脂肪酸濃度が減少の効果が得られる。【００６５】
ＩＩ．医薬用組成物及び飲食品
本発明において、種々の植物由来の抽出物よりＰＰＡＲリガンド剤を調製することが可能となった。本発明は、このＰＰＡＲリガンド剤と、薬学上許容される添加剤や飲食可能な添加剤とを含有する医薬組成物や飲食品も提供する（総称して、「本発明の組成物」という表記することもある）。本発明の組成物は、ＰＰＡＲの生体内分布や生理活性に応じて、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体が関連する疾患の予防及び／又は治療のために用いることができる。具体的には、本発明の組成物は、肥満、高脂血症、高血圧、高血糖、インスリン抵抗性、糖尿病の予防又は改善に有効である。【００６６】
本発明において、肥満の予防とは、内臓肥満を含み、日本肥満学会が肥満・肥満症の指導マニュアル第２ 版（２００１年７月発行） にて、肥満又は肥満症であると定義している状態になるのを防ぐ又は遅らせることを指す。また、肥満の改善とは、上記学会が肥満症又は肥満であると定義している状態から、上記学会が正常域と定義している状態に近づけることを指す。【００６７】
本発明において、高脂血症の予防とは、日本動脈硬化学会が動脈硬化性疾患診療ガイドライン（２００２年９月発行） にて定義している高脂血症の状態又は境界域の状態になるのを防ぐ又は遅らせることを指す。また、高脂血の改善とは、上記に示す高脂血症の状態又は境界域の状態から、上記ガイドラインにて正常域と定義している状態に近づけることを指す。【００６８】
本発明において、インスリン抵抗性とは、肝臓・脂肪細胞・骨格筋で、インスリンの主な作用である糖の吸収促進作用が弱っている状態を指す。インスリン抵抗性の予防とは、ＳＳＰＧ（steady-state plasma glucose）法などによるインスリン抵抗性の指標となる値がより悪化するのを防ぐ又は遅らせることを指す。インスリン抵抗性の改善とは、上記のインスリン抵抗性の指標となる値をより改善することを指す。  本発明において、糖尿病の予防とは、日本糖尿病学会が糖尿病治療ガイド２００２−２００３（２００２年５月発行）にて定義している糖尿病の状態又は境界域の状態になるのを防ぐ又は遅らせることを指す。また、糖尿病の改善とは、上記の糖尿病の状態又は境界域の状態から、上記ガイドにて正常域と定義している状態に近づけることを指す。【００６９】
本発明の組成物は、その形態を限定されず、例えば、健康食品、栄養補助食品、栄養機能食品、特定保健用食品などの飲食品及び医薬品として使用することができる。【００７０】
本発明の飲食品は、上述の２３種類の植物抽出物の１種又は２種以上と、飲食物として許容される添加剤とを含有する。ここで添加剤とは、飲食品に通常用いられる添加剤であり、例えば、ビタミンE、ビタミンC等のビタミン類、糖類、賦形剤、崩壊剤、結合剤、潤沢剤、乳化剤、緊張化剤(等張化剤)、緩衝剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化剤、抗酸化剤、着色剤、矯味剤、香料、凝固剤、pH調整剤、増粘剤、エキス粉末、生薬、無機塩等が挙げられるが、本発明のリガンド剤の所望の効果を損なわない限り、これらに限定されない。特に本発明の飲食物がサプリメントである場合、例えば、ビタミンE、ビタミンC等のビタミン類、サプリメントを調製する時に通常配合される乳化剤、緊張化剤(等張化剤)、緩衝剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化剤、抗酸化剤等を適宜配合することができる。【００７１】
飲食品としては、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類、アイスクリーム、氷菓などの冷菓類、茶、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料、うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類、蒲鉾、竹輪、はんぺんなどの練り製品、ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料、マーガリン、バター、サラダ油などの油脂類、パン、ハム、スープ、レトルト食品、冷凍食品など、すべての飲食品に使用することができる。当該抽出物の摂取量は、特に限定されるものではないが、ＰＰＡＲリガンド活性、更には肥満及び肥満に伴い発症するインスリン抵抗性、高脂血、高血圧、糖尿病を予防及び／又は改善を期待して摂取する場合、その摂取量は当該抽出物として成人一人一日当たり０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１〜３００ｍｇ／ｋｇ体重である、さらに好ましくは２〜２０ｍｇ／ｋｇ体重である。【００７２】
本発明の医薬組成物は、上述の２３種類の植物抽出物の１種又は２種以上と、薬学上許容される添加剤とを含有する。ここでいう添加剤としては、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などが例示される。医薬組成物の形態は特に限定されず、例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、注射剤、座薬、貼付剤などが挙げられるが、特に経口用組成物としての形態が好ましい。経口用組成物の場合、当該抽出物の摂取量は、特に限定されるものではないが、ＰＰＡＲリガンド活性、更には肥満及び肥満に伴い発症するインスリン抵抗性、高脂血、高血圧、糖尿病を予防及び／又は改善を期待して摂取する場合、その投与量は当該抽出物として成人一人一日当たり０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．１〜３００ｍｇ／ｋｇ体重、さらに好ましくは２〜２０ｍｇ／ｋｇ体重となるよう、一回又は数回に分けて投与する。当業者は、患者の状態（年齢、性別、症状など）、及び投与態様等を考慮し、適宜投与量を決定することができる。【００７３】
「予防及び／又は治療方法」、並びに「医薬組成物の製造のための使用」
本発明はまた、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体が関連する疾患を、予防及び／又は治療するための方法であって、当該予防及び／又は治療を必要とする個体に、本発明の植物抽出物を含有する医薬組成物を投与することを含む、前記方法を提供する。【００７４】
本発明はさらに、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体が関連する疾患の予防及び／又は治療のために用いる医薬組成物の製造のための、本発明の植物抽出物の使用を提供する。【００７５】
本発明はまた、肥満を予防及び／又は治療するための方法であって、当該予防及び／又は治療を必要とする個体に、本発明の植物抽出物を含有する、抗肥満剤を投与することを含む、前記方法を提供する。【００７６】
本発明はさらにまた、本発明の植物抽出物の、肥満を予防及び／又は治療のために用いる抗肥満剤の製造のための使用を提供する。【００７７】
本発明の「予防及び／又は治療方法」、並びに「医薬組成物の製造のための使用」について、投与態様、投与量等については、「医薬組成物」に関して上述した通りである。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】図１は、セイヨウニワトコ抽出物投与時の体重推移を示す。白菱形は、抽出物を投与しない対照、四角は、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与、三角は、３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与の結果である。
【図２】図２は、セイヨウニワトコ投与時の体脂肪量を示す。白棒は、抽出物を投与しない対照、横縞棒は、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与、濃黒棒は、３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与の結果である。
【図３】図３は、セイヨウニワトコ投与時の血中遊離脂肪酸濃度を示す。白棒は、抽出物を投与しない対照、横縞棒は、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与、濃黒棒は、３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与の結果である。＊＊Ｐ＜０．０１  対対照
【図４】図４は、セイヨウニワトコ投与時の血中中性脂肪濃度を示す。白棒は、抽出物を投与しない対照、横縞棒は、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与、濃黒棒は、３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与の結果である。
【図５】図５は、アニス抽出物投与時の体重推移を示す。白菱形は、抽出物を投与しない対照、黒四角は、１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与の結果である。
【図６】図６は、アニス投与時の体脂肪量を示す。白棒は、抽出物を投与しない対照、黒棒は、１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与の結果である。
【図７】図７は、アニス投与時の血中遊離脂肪酸濃度を示す。白棒は、抽出物を投与しない対照、黒棒は、１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与の結果である。＊＊Ｐ＜０．０１
【図８】図８は、アニス投与時の血中中性脂肪濃度を示す。白棒は、抽出物を投与しない対照、黒棒は、１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与の結果である。
【図９】図９は、セイヨウサンザシ抽出物投与時の体重推移を示す。丸は、抽出物を投与しない対照、四角は、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与、菱形は、３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与、三角は、１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与の結果である。
【図１０】図１０は、セイヨウサンザシ投与時の体脂肪量を示す。白棒は、抽出物を投与しない対照、薄黒棒は、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与、横縞棒は、３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与、黒棒は、１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与の結果である。
【図１１】図１１は、セイヨウサンザシ投与時の血中遊離脂肪酸濃度を示す。白棒は、抽出物を投与しない対照、薄黒棒は、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与、横縞棒は、３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与、黒棒は、１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与の結果である。＊＊Ｐ＜０．０１  対対照
【図１２】図１２は、セキガイチャ抽出物投与時の体重推移を示す。白菱形は、抽出物を投与しない対照、黒四角は、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与の結果である。
【図１３】図１３は、セキガイチャ投与時の体脂肪量を示す。白棒は、抽出物を投与しない対照、黒棒は、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与の結果である。
【図１４】図１４は、セキガイチャ投与時の血中遊離脂肪酸濃度を示す。白棒は、抽出物を投与しない対照、黒棒は、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与の結果である。＊＊Ｐ＜０．０１
【図１５】図１５は、セキガイチャ投与時の血中中性脂肪濃度を示す。白棒は、抽出物を投与しない対照、黒棒は、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与の結果である。
【実施例】
【００７９】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。【００８０】
植物材料
本明細書中の実施例において使用した植物と、その使用部位を表１に示す。サンプル調製においては、各植物の使用部位の乾燥粉砕物を使用した。破砕には（株）トーショー製錠剤粉砕機ＴＳ−１０Ｍ型もしくは（株）吉田製作所製ウィレー型粉砕機１０２９−ＪＡＳ型を用いた。【００８１】
【表１】
0005563824.tif 000002
【００８２】
※１  「果汁粉末」は、生の果実を搾汁して得られた果汁を凍結乾燥して得られた粉末である。
※２  「地上部」とは、茎葉部、花を含む場合もある。
サンプル調製例１
表１に示す植物の破砕物１ｇをそれぞれ７０容量％エタノール、１０ｍｌ（１０（Ｗ／Ｖ）倍量）に浸し、室温下、１日１回攪拌操作を加えて７日間抽出し、濾過して抽出液を得た。抽出液５ｍｌを濃縮後、凍結乾燥し抽出物を得た。抽出物を蒸留水、１ｍｌに溶解又は懸濁させ、水飽和酢酸エチル、３ｍｌを加えて攪拌、遠心分離後、分離した酢酸エチル層を採取した。さらに水層に水飽和ｎ−ブタノール、１ｍｌを加えて攪拌、遠心分離後、ｎ−ブタノール層と水層に分離した。得られた酢酸エチル層、ｎ−ブタノール層及び水層を濃縮後、凍結乾燥し、酢酸エチル分画物、ｎ−ブタノール分画物及び水分画物を得た。【００８３】
サンプル調製例２
セイヨウニワトコ、セキガイチャ、チャボトケイソウ、サクナ、アニス、セイヨウニンジンボク、アシュワガンダ、ギョリュウモドキ、セイヨウサンザシ、アマ、アギタケ、ハリエンジュ、マンシュウウコギの破砕物を、それぞれ表１に示す重量の１０（Ｗ／Ｖ）倍量の７０容量％エタノールに浸し、室温下、１日１回攪拌操作を加えて７日間抽出し、濾過して抽出液を得た。抽出液を濃縮後、凍結乾燥しエタノール抽出物を得た。【００８４】
サンプル調製例３
アマ、アギタケ、マンシュウウコギ、アサの破砕物を、それぞれ表１に示す重量の２０（Ｗ／Ｖ）倍量の蒸留水を加え、１０分毎に攪拌操作を加えながら、８０℃で３０分間抽出を行なった。抽出液を水で冷却した後、３０００ｒｐｍ、１０分間遠心して得られた上清を濾過した。濾液を凍結乾燥し、熱水抽出物を得た。【００８５】
実施例１  ＰＰＡＲδリガンド活性の測定
サンプル調製例１で得られた各植物の酢酸エチル分画物、ｎ−ブタノール分画物、水分画物について、下記に示す方法を用いてＰＰＡＲδリガンド活性を測定した。【００８６】
ＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝臓癌由来の培養細胞）を９６穴培養プレートに１ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように播種し、３７℃、５％ＣＯ２条件下で２４時間培養した。培地には、１０％ＦＢＳ（ウシ胎仔血清；Ｅｑｕｉｔｅｃｈ−Ｂｉｏ社）、０．３ｇ／Ｌ  Ｌ−Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ（日水製薬）を含むＲＰＭＩ１６４０（日水製薬）を用いた。その細胞をＯＰＴＩ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ社）で洗浄した後、ｐＢＩＮＤ／ＧＡＬ４：：ｍＰＰＡＲδとｐＧ５ｌｕｃ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を用いてトランスフェクションした。なお、ｐＢＩＮＤ／ＧＡＬ４：：ｍＰＰＡＲδは、酵母由来転写因子ＧＡＬ４融合タンパク発現プラスミドであるｐＢＩＮＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）にマウスＰＰＡＲδ遺伝子を挿入したプラスミドであり、ｐＧ５ｌｕｃはルシフェラーゼ遺伝子の上流にＧＡＬ４の応答配列（ＵＡＳ）を５回組み込んだレポーター・プラスミドである（Ｃｅｌｌ，１９９５年，８３巻，８０３〜８１２頁などに記載の方法で作成可能）。【００８７】
トランスフェクションの約２４時間後、植物抽出物を含む培地に交換し、２４時間培養した。溶媒対照にはＤＭＳＯを用い、培地に１／１００量添加した。細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ−）で洗浄した後、細胞溶解液（Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｌｙｓｉｓ  Ｒｅａｇｅｎｔ：Ｐｒｏｍｅｇａ社）で細胞を溶解させ、Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を添加してマルチラベルカウンター（Ｗａｌｌａｃ社）にてルシフェラーゼの発光強度を測定した。また、ＰＰＡＲδの合成アゴニストであるＬ−１６５０４１（Ｓｉｇｍａ社  濃度２５μＭ）をポジティブコントロールとして用いた。リガンド活性の評価は、コントロール（溶媒対照）の発光強度に対するサンプルの発光強度の比をサンプルのＰＰＡＲδリガンド活性発光度比とし、１．３以上を示したものについて、ＰＰＡＲδのリガンド活性があると判断した。活性測定に供したサンプル濃度（培地中のサンプル濃度）と、リガンド活性（発光度比）を表２に示す。【００８８】
【表２】
0005563824.tif 000003
【００８９】
実施例２  ＰＰＡＲαリガンド活性の測定
実施例１に記載の方法のうち、融合タンパク発現プラスミドとして、ｐＢＩＮＤ／ＧＡＬ４：：ｍＰＰＡＲδの代わりに、ｐＢＩＮＤ／ＧＡＬ４：：ｍＰＰＡＲαを用いる以外は、実施例１と同様に実施し、ＰＰＡＲαリガンド活性の測定を行った。なお、ｐＢＩＮＤ／ＧＡＬ４：：ｍＰＰＡＲαとは、ｐＢＩＮＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）にマウスＰＰＡＲα遺伝子を挿入したプラスミドである。また、ＰＰＡＲαの合成アゴニストであるＷＹ−１４６４３（Ｓｉｇｍａ社  濃度２５μＭ）をポジティブコントロールとして用いた。活性測定に供したサンプル濃度（培地中のサンプル濃度）と、リガンド活性（発光度比）を表３に示す。【００９０】
【表３】
0005563824.tif 000004
【００９１】
実施例３  ＰＰＡＲγリガンド活性の測定
ＰＰＡＲγリガンド活性測定用ＣＨＯ細胞を以下の方法で取得した。【００９２】
ＰＰＡＲレポータープラスミド（ｐＰＰＲＥ−Ｌｕｃ）は、ＳＶ４０プロモーター遺伝子、蛍ルシフェラーゼ遺伝子を含むレポータープラスミド  ｐＧＬ３（Ｐｒｏｍｅｇａ社）のＳＶ４０プロモーター遺伝子の上流にＰＰＡＲ応答配列（ＰＰＲＥ）を３回組み込んだレポータープラスミドである。ＰＰＡＲγ発現プラスミド（ｐＫＤ−ｒＰＰＡＲγ）はＳＶ４０プロモーターによる哺乳類細胞用発現プラスミドにラットＰＰＡＲγ遺伝子を組み込んだプラスミドである。ｐＰＰＲＥ−ＬｕｃとｐＫＤ−ｒＰＰＡＲγを、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（Ｉｎｖｉｔｏｒｇｅｎ社）を用いてＣＨＯ（ｄｈｆｒ−）細胞（チャイニーズハムスター卵巣由来細胞ジヒドロ葉酸還元酵素欠損株）にコトランスフェクションした。チミジンをほとんど含有しない透析ウシ胎児血清（ＧＩＢＣＯ社）を含むＤ−ＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ社）で細胞を培養することにより、ｐＰＰＲＥ−ＬｕｃとｐＫＤ−ｒＰＰＡＲγを保持する安定形質転換株（ＣＨＯ／ＰＰＡＲγ／ＰＰＲＥ）を取得した。【００９３】
上記細胞を９６穴培養プレートに１ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように播種し、３７℃、５％ＣＯ２条件下で２４時間培養した。培地には、１０％ＦＢＳ（ウシ胎仔血清；Ｅｑｕｉｔｅｃｈ−Ｂｉｏ社）、０．３ｇ／Ｌ  Ｌ−Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ（日水製薬）、１０ｍｌ／Ｌ  ＭＥＭ用非必須アミノ酸溶液（大日本住友製薬）を含むＤＭＥＭ（日水製薬）を用いた。２４時間培養後、植物抽出物を含む培地に交換し、２４時間培養した。溶媒対照にはＤＭＳＯを用い、培地に１／１００量添加した。細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ−）で洗浄した後、細胞溶解液（Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｌｙｓｉｓ  Ｒｅａｇｅｎｔ：Ｐｒｏｍｅｇａ社）で細胞を溶解させ、Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を添加してマルチラベルカウンター（Ｗａｌｌａｃ社）にてルシフェラーゼの発光強度を測定した。また、ＰＰＡＲγの合成アゴニストであるＣｉｇｌｉｔｉｚｏｎｅ（Ｓｉｇｍａ社  濃度２５μＭ）をポジティブコントロールとして用いた。活性測定に供したサンプル濃度（培地中のサンプル濃度）と、リガンド活性（発光度比）を表４に示す。【００９４】
【表４】
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【００９５】
実施例４  エタノール抽出物のＰＰＡＲδリガンド活性の測定
サンプル調製例２で得られた各植物のエタノール抽出物のＰＰＡＲδリガンド活性を、実施例１に記載の方法で測定した。活性測定に供したサンプル濃度（培地中のサンプル濃度）と、リガンド活性（発光度比）を表５に示す。【００９６】
【表５】
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【００９７】
実施例５  熱水抽出物のＰＰＡＲδリガンド活性の測定
サンプル調製例３で得られた各植物の熱水抽出物のＰＰＡＲδリガンド活性を、実施例１に記載の方法で測定した。活性測定に供したサンプル濃度（培地中のサンプル濃度）と、リガンド活性（発光度比）を表６に示す。【００９８】
【表６】
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【００９９】
以上実施例１〜５の通り、各植物抽出物において、ＰＰＡＲのリガンド活性が認められた。具体的には以下の通りである。【０１００】
（１）セイヨウニワトコにおいては、酢酸エチル分画物にＰＰＡＲδ及びＰＰＡＲγのリガンド活性が、またｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、更にはエタノール抽出物にＰＰＡＲδ活性が認められた。【０１０１】
（２）セキガイチャにおいては、酢酸エチル分画物にＰＰＡＲδ及びＰＰＡＲγのリガンド活性が、またｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδ及びＰＰＡＲγのリガンド活性が、更にはエタノール抽出物にＰＰＡＲδ活性が認められた。【０１０２】
（３）チャボトケイソウにおいては、ｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、またエタノール抽出物にＰＰＡＲδ活性が認められた。【０１０３】
（４）サクナにおいては、ｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、またエタノール抽出物にＰＰＡＲδ活性が認められた。【０１０４】
（５）アニスにおいては、酢酸エチル分画物にＰＰＡＲγのリガンド活性が、またｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、更にはエタノール抽出物にＰＰＡＲδ活性が認められた。【０１０５】
（６）セイヨウニンジンボクにおいては、ｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、またエタノール抽出物にＰＰＡＲδ活性が認められた。【０１０６】
（７）アシュワガンダにおいては、水分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、またエタノール抽出物にＰＰＡＲδ活性が認められた。【０１０７】
（８）ギョリュウモドキにおいては、酢酸エチル分画物にＰＰＡＲδ及びＰＰＡＲγのリガンド活性が、また水分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、更にはエタノール抽出物にＰＰＡＲδ活性が認められた。【０１０８】
（９）セイヨウサンザシにおいては、水分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、またエタノール抽出物にＰＰＡＲδ活性が認められた。【０１０９】
（１０）アマにおいては、酢酸エチル分画物にＰＰＡＲαのリガンド活性が、またｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲαのリガンド活性が、また水分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、更にはエタノール抽出物にＰＰＡＲδ活性が、更には熱水抽出物にＰＰＡＲδ活性が認められた。【０１１０】
（１１）アギタケにおいては、水分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、またエタノール抽出物にＰＰＡＲδ活性が、更には熱水抽出物にＰＰＡＲδ活性が認められた。【０１１１】
（１２）ハリエンジュにおいては、水分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、またエタノール抽出物にＰＰＡＲδ活性が認められた。【０１１２】
（１３）マンシュウウコギにおいては、水分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、またエタノール抽出物にＰＰＡＲδ活性が、更には熱水抽出物にＰＰＡＲδ活性が認められた。【０１１３】
（１４）アサにおいては、酢酸エチル分画物にＰＰＡＲγのリガンド活性が、またｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、更に水分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、更には熱水抽出物にＰＰＡＲδ活性が認められた。【０１１４】
（１５）カルダモンにおいては、酢酸エチル分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、またｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、更に水分画物にＰＰＡＲαのリガンド活性が認められた。【０１１５】
（１６）アンゼリカにおいては、ｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が認められた。【０１１６】
（１７）グァバにおいては、ｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が認められた。【０１１７】
（１８）コクシリにおいては、ｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が認められた。【０１１８】
（１９）ノコギリヤシにおいては、ｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、また水分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が認められた。【０１１９】
（２０）ナツグミにおいては、酢酸エチル分画物にＰＰＡＲγのリガンド活性が、またｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が認められた。【０１２０】
（２１）センキュウにおいては、ｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が認められた。【０１２１】
（２２）エゾウコギにおいては、酢酸エチル分画物にＰＰＡＲγのリガンド活性が、またｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、更に水分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が認められた。【０１２２】
（２３）アサイにおいては、ｎ−ブタノール分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が、また水分画物にＰＰＡＲδのリガンド活性が認められた。【０１２３】
実施例６  抗肥満作用の検証
（試験方法）
セイヨウニワトコ、セキガイチャ、アニス、セイヨウサンザシの各植物抽出物の抗肥満作用を、以下に示す方法により検証した。動物は、ｄｄＹマウス、雄性、６週齢（紀和実験動物）用い、１週間標準飼料（ＣＥ‐２（日本クレア）にて馴化飼育した後、サンプルを投与した。サンプル投与は、サンプル調製例２と同様の方法で調整したセイヨウニワトコ、セキガイチャ、アニス、セイヨウサンザシの各植物抽出物を３％アラビアゴムを含む精製水に懸濁させ、後述する投与量を１日１回午前中に、１７日間のうち合計１２回強制経口投与した。また、コントロール群には３％アラビアゴムのみを含む精製水を投与した。サンプル投与期間中の飼料には、４５ｋｃａｌ％の脂肪分を含有するリサーチダイエット社の高脂肪食（Ｄ１２４５１）を用い、試験期間中の摂水は自由とした。
【０１２４】
解剖前日である投与開始１６日目に実験動物用Ｘ線ＣＴ装置（Ｌａｔｈｅｔａ  ＬＣＴ−１００・アロカ株式会社）を用いて体脂肪量を測定した。解剖当日は投与を行わず、マウスを４時間絶食させた後に、エーテル麻酔下で腹大静脈から全身血を採取し、遠心後に血漿を得て、−８０℃に保存した。後日、血中の中性脂肪、遊離脂肪酸を自動分析装置（日立７０７０・株式会社  日立製作所）を用いて測定した。【０１２５】
６−１  セイヨウニワトコ
（結果）
セイヨウニワトコ抽出物を１００、３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（投与液量は１０ｍＬ／ｋｇ）となるように投与したときの試験期間中の体重の推移を図１に、投与１６日目の体脂肪量、試験終了時の血中遊離脂肪酸濃度及び血中中性脂肪濃度をそれぞれ図２、図３、図４に示す。【０１２６】
図１−４に示されるように、セイヨウニワトコ抽出物は用量依存的に体重増加と体脂肪蓄積を抑制した。また、血中遊離脂肪酸のレベルは有意に上昇させ、一方で、中性脂肪のレベルを低下させた。【０１２７】
６−２  アニス
（結果）
アニス抽出物を１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（投与液量は１０ｍＬ／ｋｇ）となるように投与したときの試験期間中の体重の推移を図５に、投与１６日目の体脂肪量、試験終了時の血中遊離脂肪酸濃度及び血中中性脂肪濃度をそれぞれ図６、図７、図８に示す。【０１２８】
図５−８に示されるように、アニス抽出物の投与により体重増加、体脂肪蓄積が抑制された。また、血中遊離脂肪酸のレベルを有意に上げた一方で、中性脂肪のレベルを低下させた。【０１２９】
６−３  セイヨウサンザシ
（結果）
セイヨウサンザシ抽出物を１００、３００、１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（投与液量は１０ｍＬ／ｋｇ）となるように投与したときの試験期間中の体重の推移を図９に、投与１６日目の体脂肪量を図１０に、試験終了時の血中遊離脂肪酸濃度の測定結果を図１１に示す。【０１３０】
図９−１１に示されるように、セイヨウサンザシ抽出物は用量依存的に体重増加と体脂肪蓄積を抑制した。また、血中遊離脂肪酸濃度を用量依存的に有意に増加させた。【０１３１】
６−４  セキガイチャ
（結果）
セキガイチャ抽出物を１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（投与液量は１０ｍＬ／ｋｇ）となるように投与したときの試験期間中の体重の推移を図１２に、投与１６日目の体脂肪量、験終了時の血中遊離脂肪酸濃度及び血中中性脂肪濃度をそれぞれ図１３、図１４、図１５に示す。【０１３２】
セキガイチャ抽出物の投与により有意な体重増加抑制が認められ、体脂肪蓄積量も抑制された。また、遊離脂肪酸のレベルは有意に低下し、中性脂肪のレベルも低下した。
【図１】
0005563824.tif 000008
【図２】
0005563824.tif 000009
【図３】
0005563824.tif 000010
【図４】
0005563824.tif 000011
【図５】
0005563824.tif 000012
【図６】
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【図７】
0005563824.tif 000014
【図８】
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【図９】
0005563824.tif 000016
【図１０】
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【図１１】
0005563824.tif 000018
【図１２】
0005563824.tif 000019
【図１３】
0005563824.tif 000020
【図１４】
0005563824.tif 000021
【図１５】
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