(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＨＳＰ６０に向けられる少なくとも１つのヒトＴｒ１細胞集団を含有する薬剤であって、前記Ｔｒ１細胞は、静止状態でＣＤ４＋ＣＤ２５−ＦｏｘＰ３−の表現型を有する（ただし、静止状態でＬＡＧ３＋の表現型を有するＴｒ１細胞を除く。）、薬剤。
【請求項２】
１つ以上の薬学的に許容される担体と組み合わせられる、ヒトＨＳＰ６０に向けられる少なくとも１つのヒトＴｒ１細胞集団を含有する医薬組成物であって、前記Ｔｒ１細胞は、静止状態でＣＤ４＋ＣＤ２５−ＦｏｘＰ３−の表現型を有する（ただし、静止状態でＬＡＧ３＋の表現型を有するＴｒ１細胞を除く。）、医薬組成物。
【請求項３】
前記ヒトＴｒ１細胞集団がヒトＴｒ１クローン集団である、請求項１に記載の薬剤または請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
炎症性自己免疫病態を治療するための、請求項１乃至請求項３のいずれか一項に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項５】
前記炎症性自己免疫病態が関節炎の病態である、請求項４に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項６】
前記炎症性自己免疫性が多発性硬化症の病態である、請求項４に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項７】
前記炎症性自己免疫病態が腸炎の病態である、請求項４に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項８】
前記炎症性自己免疫病態が血管炎である、請求項４に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項９】
前記炎症性自己免疫病態が喘息である、請求項４に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項１０】
前記炎症性自己免疫病態が移植片拒絶反応または移植片対宿主病である、請求項４に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項１１】
前記炎症性自己免疫病態が胆管の炎症病態である、請求項４に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項１２】
その必要がある対象に投与する薬剤または医薬組成物が、前記対象の細胞に自己由来するヒトＴｒ１細胞含む、請求項４乃至請求項１１のいずれか一項に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項１３】
１０４／ｋｇ〜１０９／ｋｇのＴｒ１細胞を、その必要がある対象に投与する、請求項４乃至請求項１２のいずれか一項に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項１４】
有効量の前記薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することが、炎症性自己免疫病態を治療するために使用される１つ以上の治療薬と組み合わせることである、請求項４乃至請求項１３のいずれか一項に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項１５】
有効量の前記薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することが、コルチコイド、ＴＮＦ遮断薬、抗インターロイキン、抗Ｂリンパ球、抗共刺激分子、免疫寛容薬、抗補体タンパク質、Ｔ細胞シグナル伝達分子の阻害薬、細胞遊走の阻害薬、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、アザチオプリン、メトトレキサート、シクロスポリン、ミノサイクリン、およびＤペニシラミンの群から選択される１つ以上の治療薬と組み合わせることである、関節炎の病態を治療するための請求項１４に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項１６】
有効量の前記薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することが、インターフェロンβ、グラチラマー酢酸塩、ミトキサントロン、シクロホスファミド、メトトレキサート、アザチオプリン、またはナタリズマブの群から選択される１つ以上の治療薬と組み合わせることである、多発性硬化症の病態を治療するための請求項１４に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項１７】
有効量の前記薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することが、ＴＮＦ遮断薬、ナタリズマブ、抗ＩＬ−１、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１２、抗ＩＬ−１７および抗ＩＬ−２３；ＩＬ−１受容体拮抗薬の類似物（アナキンラ）；メサラジン、スルファサラジン、オルサラジン、バルサラジドのような５アミノサリチル酸および類似物；プレドニゾン、ブデソニド、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、ベドメタゾン、チキソコルトールのようなコルチコイドの群から選択される１つ以上の治療薬と組み合わせることである、腸炎の病態を治療するための請求項１４に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項１８】
有効量の前記薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することが、スタチン、アスピリン、血液凝固薬、クマジンおよびコルチコイド、アザチオプリン、メトトレキサート、シクロホスファミド、抗Ｂリンパ球抗体、抗ＴＮＦα抗体、および抗胸腺細胞グロブリンの群から選択される１つ以上の治療薬と組み合わせることである、血管炎を治療するための請求項１４に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項１９】
有効量の前記薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することが、短時間作用型の、選択的β２アドレナリン受容体作動薬、レバルブテロール、テルブタリン、およびビトルテロール、並びに他のアドレナリン作動薬、抗コリン薬、および吸入用糖質コルチコイドの群から選択される１つ以上の治療薬と組み合わせることである、喘息を治療するための請求項１４に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項２０】
有効量の前記薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することが、カルシニューリン阻害薬、ｍＴＯＲ阻害薬、抗増殖阻害薬、ＣＤ２５に対するモノクローナル抗体、または抗胸腺細胞グロブリンおよび抗リンパ球グロブリンの製剤の群から選択される、１つ以上の治療薬と組み合わせることである、移植片対宿主病および移植片拒絶反応を治療するための請求項１４に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項２１】
有効量の前記薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することが、ウルソデオキシコール酸の群から選択される、１つ以上の治療薬と組み合わせることである、原発性胆汁性肝硬変および原発性硬化性胆管炎のような、胆管または肝臓の自己免疫性炎症を治療するための請求項１４に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項２２】
有効量の前記薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することが、炎症性自己免疫病態に関与するとして知られている抗原に向けられる、少なくとも１つのＴｒ１細胞集団またはクローンを含有する１つ以上の薬剤または医薬組成物と組み合わせることである、請求項４乃至請求項１３のいずれか一項に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項２３】
有効量の前記薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することが、ＩＩ型コラーゲン、ＨＣｇｐ３９、およびそれらの混合物から選択される関節関連の抗原に向けられる少なくとも１つのＴｒ１細胞集団またはクローンを含有する１つ以上の薬剤または医薬組成物を組み合わせて行われる、関節炎の病態を治療するための請求項２２に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項２４】
有効量の前記薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することが、ミエリン塩基性タンパク質、プロテオリピドタンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質、およびそれらの混合物から選択される多発性硬化症関連の抗原に向けられる少なくとも１つのＴｒ１細胞集団またはクローンを含有する１つ以上の薬剤または医薬組成物を組み合わせて行われる、多発性硬化症の病態を治療するための請求項２２に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項２５】
有効量の前記薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することが、卵白アルブミン、カゼイン、βラクトグロブリン、ダイズタンパク質、グリアジン、ピーナッツ、およびそれらの混合物から選択されるヒトの一般的な食餌に由来する食品抗原に向けられる少なくとも１つのＴｒ１細胞集団またはクローンを含有する１つ以上の薬剤または医薬組成物を組み合わせて行われる、腸炎の病態を治療するための請求項２２に記載の薬剤または医薬組成物。
【請求項２６】
その必要がある対象の炎症性自己免疫病態を治療するための薬剤または医薬組成物であって、前記薬剤または医薬組成物は、
―ヒトＨＳＰ６０に向けられるＴｒ１細胞を取得するステップであって、前記Ｔｒ１細胞を前記対象の血液試料から取得する前記ステップと、
―ヒトＨＳＰ６０に向けられる前記Ｔｒ１細胞をクローニングするステップと、
―先のステップで取得したＴｒ１クローンをさらに拡大するステップと、
によって得られるＴｒ１クローンを包含し、前記薬剤または医薬組成物は、静脈内注射により前記対象に注射されることを特徴とし、前記Ｔｒ１細胞は、静止状態でＣＤ４＋ＣＤ２５−ＦｏｘＰ３−の表現型を有する、薬剤または医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症性自己免疫病態（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）の治療分野に関する。本発明は、特に、ヒトの熱ショックタンパク質に向けられる（ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ）ヒトＴｒ１細胞を含有する薬剤を使用して、炎症性自己免疫病態および免疫関連疾患を治療するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症性自己免疫疾患は、世界中の何百万もの人々に発症しており、寿命および生活の質には壊滅的な影響を与え得る。
【０００３】
ヒトにおける炎症性自己免疫疾患を治療するための既存療法は、ステロイド剤または細胞障害性薬剤に媒介されるような、非特異的な免疫抑制に基づく。最近の戦略は、ＴＮＦおよびＩＬ−１に関わるような、いくつかの炎症促進性サイトカイン経路の遮蔽を含む。しかし、炎症促進過程を逆戻りさせたり、または疾患を治療したりする戦略はない。治療を中断すると、炎症の再活性化が何ヶ月か以内に生じ、そのため免疫抑制剤を用いた生涯にわたる治療が生じる。これは必然的に深刻な副作用をもたらす。
【０００４】
従って、炎症性自己免疫疾患のための新規の治療が必要である。
【０００５】
さまざまな研究により、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、特にＨＳＰ６０およびＨＳＰ７０が、炎症性自己免疫疾患の調節に関与する一群の自己抗原を構築することが実証されてきた。
【０００６】
炎症性自己免疫疾患を治療するＨＳＰを標的とする治療法は、従って、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）溶解物、ＨＳＰ６０由来のペプチド、またはＨＳＰ６０、ＨＳＰ７０、もしくはＨＳＰ９０もしくはそれらの断片をコードする核酸配列を含有するＤＮＡワクチンの使用を用いた免疫化などが提案されてきた。
【０００７】
本発明では、出願人は、ヒトＨＳＰに向けられるＴｒ１細胞の使用に基づく、炎症性自己免疫病態のための別の治療法を提供することを目的とする。
【０００８】
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第６７４６６７０号
【特許文献２】国際公開第０２／０９２７９３号
【特許文献３】国際公開第２００７／０１０４０６号
【特許文献４】国際公開第２００５／０００３４４号
【特許文献５】国際公開第２００６／１０８８８２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、ヒトＨＳＰに向けられる少なくとも１つのヒトＴｒ１細胞集団を含有する薬剤である。本発明の別の目的は、１つ以上の薬学的に許容される担体と組み合わせられる、ヒトＨＳＰに向けられる少なくとも１つのヒトＴｒ１細胞集団を含有する医薬組成物である。
【００１１】
本発明の別の目的は、炎症性自己免疫病態を治療するための、薬剤または医薬組成物の調製に、ヒトＨＳＰに向けられる少なくとも１つのヒトＴｒ１細胞集団を含有する組成物を使用することである。
【００１２】
本発明の実施形態によれば、前記炎症性自己免疫病態は関節炎の病態、好ましくは関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、および若年性突発性関節炎である。別の実施形態によれば、前記炎症性自己免疫病態は、多発性硬化症の病態である。別の実施形態によれば、前記炎症性自己免疫病態は腸炎の病態、好ましくはクローン病および潰瘍性大腸炎である。別の実施形態によれば、前記炎症性自己免疫病態は血管炎、好ましくはウェゲナー病および粥状動脈硬化症である。別の実施形態によれば、前記炎症性自己免疫病態は喘息である。別の実施形態によれば、前記炎症性自己免疫病態は、移植片拒絶または移植片対宿主病である。別の実施形態によれば、前記炎症性自己免疫病態は胆管の炎症病態、好ましくは原発性胆汁性肝硬変および原発性硬化性胆管炎である。
【００１３】
別の実施形態によれば、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することとは、炎症性自己免疫病態を治療するために使用される、１つ以上の治療薬と組み合わせることである。
【００１４】
別の実施形態によれば、有効量の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することとは、炎症性自己免疫病態に関与するとして知られている抗原に向けられる、少なくとも１つのＴｒ１細胞集団またはクローンを含有する、１つ以上の薬剤または医薬組成物と組み合わせることである。
【００１５】
本発明の別の目的は、その必要がある対象における炎症性自己免疫病態を治療するための工程であり、前記工程は、
―ヒトＨＳＰに向けられるＴｒ１細胞を取得するステップであって、前記Ｔｒ１細胞を前記対象の血液試料から取得する前記ステップと、
―ヒトＨＳＰに向けられる前記Ｔｒ１細胞をクローニングするステップと、
―先のステップで取得したＴｒ１クローンをさらに拡大（ｅｘｐａｎｄ）するステップと、
―そうして取得したＴｒ１クローンを、好ましくは静脈内注射により前記対象に注射するステップと、を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】ＨＳＰ６０活性化後におけるＴｒ１クローンの特異的ＩＬ−１０産生を示す図である。  図１は、特異的抗原ＨＳＰ６０の存在下において、Ｔｒ１細胞クローンによるＩＬ−１０産生の特異的増加を表す。照射した自己抗原提示細胞の存在下において、ＨＳＰ６０の有る場合と無い場合でクローンを活性化させた。４８時間後、ＥＬＩＳＡによりＩＬ−１０産生を測定した。
【図２】ＨＳＰ６０特異的Ｔｒ１クローンのサイトカイン分泌プロファイルを示す図である。  抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８のモノクローナル抗体で活性化させた細胞の４８時間後の上清から、ＨＳＰ６０特異的Ｔｒ１細胞クローンのＩＬ−１０、ＩＬ−４、およびＩＦＮγの分泌を測定した。
【図３】ＨＳＰ６０Ｔｒ１クローンのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抑制活性を示す図である。  自己ＣＤ４＋Ｔリンパ球増殖における、上清の抑制作用を調べることにより、ＨＳＰ６０Ｔｒ１クローンの抑制活性を評価した。活性化させたＴｒ１クローンの上清の存在下又は非存在下で、抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８モノクローナル抗体およびインターロイキン２を使用して、ＣＤ４＋Ｔリンパ球を活性化させた。自己ＣＤ４＋Ｔ細胞の細胞増殖を５日後に測定した。結果は、ＣＤ４＋Ｔリンパ球へのＴｒ１細胞の上清の添加によりＴ細胞増殖が抑制されることを示している。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
定義
本明細書で使用される「Ｔｒ１細胞」という用語は、静止状態（ａｔ  ｒｅｓｔ）でＣＤ４＋ＣＤ２５−ＦｏｘＰ３−の表現型を有し、活性化されると高レベルのＩＬ−１０および有意なレベルのＴＧＦ−βを分泌できる細胞を言う。Ｔｒ１細胞は、独特なサイトカインプロファイルにより一部特徴付けられる。これらは、高レベルのＩＬ−１０、有意なレベルのＴＧＦ−β、および中間レベルのＩＦＮ−γを産生するが、ＩＬ−４またはＩＬ−２はほとんど、もしくは全く産生しない。サイトカイン産生は典型的に、抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８抗体またはインターロイキン２、ＰＭＡ＋イオノマイシンのような、Ｔリンパ球のポリクローナル活性化因子を用いて活性化した後の細胞の培養物において評価される。代替的に、サイトカイン産生は、抗原提示細胞により提示される特異的Ｔ細胞抗原を用いて活性化した後の細胞の培養物において評価される。高レベルのＩＬ−１０とは、少なくとも約５００ｐｇ／ｍｌ、典型的には約１０００、２０００、４０００、６０００、８０００、１万、１万２０００、１万４０００、１万６０００、１万８０００、もしくは２万ｐｇ／ｍｌ、またはそれを上回る量に相当する。有意なレベルのＴＧＦ−βとは、少なくとも約１００ｐｇ／ｍｌ、典型的には約２００、３００、４００、６００、８００、もしくは１０００ｐｇ／ｍｌ、またはそれを上回る量に相当する。中間レベルのＩＦＮ−γとは、０ｐｇ／ｍｌ〜少なくとも４００ｐｇ／ｍｌの間、典型的には約６００、８００、１０００、１２００、１４００、１６００、１８００、もしくは２０００ｐｇ／ｍｌまたはそれを上回る量を含む濃度に相当する。ＩＬ−４またはＩＬ−２がほとんど、もしくは全くないとは、約５００ｐｇ／ｍｌ未満、好ましくは約２５０、１００、７５、もしくは５０ｐｇ／ｍｌまたはそれより少ない量に相当する。
【００１８】
本明細書で使用される「抗原」という用語は、本発明の細胞が調節するように使用されるため、または本発明の任意の方法の使用のためのタンパク質またはペプチドを言う。一実施形態では、「抗原」という用語は、目的の抗原と配列相同性、もしくは目的の抗原と構造的相同性、またはそれらの組み合わせを共有する、合成由来の分子または天然由来の分子を言い得る。一実施形態では、抗原はミメトープであり得る。抗原の「断片」とは、より短いペプチドのような、抗原の任意のサブセットを言う。抗原の「変異体」とは、抗原全体またはその断片のどちらかに実質的に類似する分子を言う。変異体の抗原は、当技術分野で周知の方法を使用して、変異体のペプチドを直接化学合成することにより、便利に調製され得る。
【００１９】
本明細書で使用される「対象」という用語は、ヒトを言う。
【００２０】
本明細書で使用される「有効量」という用語は、有益な、または所望の臨床結果（例えば、臨床的病態の改善）を生じさせるに十分な量を言う。
【００２１】
本明細書で使用される「クローン」または「クローン集団」という用語は、唯一の分化細胞に由来する分化細胞の集団を言う。
【００２２】
本明細書で使用される「治療」または「治療する」という用語は、通常、治療される個体の自然経過を変えようとする臨床的介入を言い、臨床病理の過程中に行われ得る。望ましい効果とは、症状を軽減させ、いかなる直接的もしくは間接的な疾患の病理学的事象も抑制、減少、または阻害し、疾患進行率を低下させ、疾患の状態を改善もしくは緩和させ、寛解もしくは改善された予後を生じさせることを含むが、これらに限定されるものではない。本発明の文脈においては、それは自己免疫病態の臨床症状における任意の改善を言い、また、患者の健康における任意の改善を言う。
【００２３】
本明細書で使用される「自己免疫疾患」という用語は、自己抗原に向けられる免疫反応を言う。
【００２４】
本発明
本発明は、その必要がある対象における炎症性自己免疫病態を治療するための方法に関し、ヒトＨＳＰに向けられる少なくとも１つのヒトＴｒ１細胞集団を含有する組成物を前記対象に投与することを含む。
【００２５】
本発明の別の目的は、ヒトＨＳＰに向けられる少なくとも１つのヒトＴｒ１細胞集団を含有する薬剤を提供することである。
【００２６】
本発明はまた、１つ以上の薬学的に許容される担体と組み合わせる、ヒトＨＳＰに向けられる少なくとも１つのヒトＴｒ１細胞集団を含有する医薬組成物を提供することを目的とする。
【００２７】
本発明によれば、「ヒトＴｒ１細胞集団」とは、本明細書の定義において先に説明したＴｒ１細胞に相当し、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞もしくはＦｏｘＰ３＋制御性Ｔ細胞（天然または従来のＴｒｅｇ）、ＴＧＦ−β分泌Ｔｈ３細胞、または制御性ＮＫＴ細胞を含まない。
【００２８】
本発明によれば、「ヒトＨＳＰ」という用語は、ヒトＨＳＰ１０、ＨＳＰ４０、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、およびＨＳＰ１００のファミリー、それらの断片および混合物を言う。 
【００２９】
本発明の好ましい実施形態では、前記Ｔｒ１細胞はＨＳＰ６０、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、それらの断片および混合物に向けられる。
【００３０】
本発明のより好ましい実施形態では、前記Ｔｒ１細胞は、ＨＳＰ６０およびその断片に向けられる。
【００３１】
理論に拘束されることを望まないが、出願人は、注射されたヒトＨＳＰに向けられるＴｒ１細胞集団がＨＳＰによりｉｎ  ｖｉｖｏで活性化され、当該ＨＳＰの発現が炎症性自己免疫病態において上方制御されることを想定する。ＨＳＰ特異的Ｔｒ１細胞の前記活性化によりＩＬ−１０の産生につながり、ＣＤ４＋Ｔ細胞を抑制することができる。
【００３２】
本発明の一実施形態では、ヒトＴｒ１細胞は：
ａ）対象から前駆細胞集団を単離するステップと、
ｂ）ＩＬ−１０の存在下で、前記前駆細胞を培養することにより樹状細胞集団を取得するステップと、
ｃ）ヒトＨＳＰの存在下で、ステップｂ）の細胞を、前記対象から単離したＣＤ４＋Ｔリンパ球集団と接触させ、前記抗原に向けられるＣＤ４＋Ｔ細胞をＴｒ１細胞集団に分化させるステップと、
ｄ）ステップｃ)のＴｒ１細胞集団を回収するステップと、により取得され得る。 
ステップｂ）では、ＩＬ−１０は、培地中に５０〜２５０Ｕ／ｍｌ、好ましくは１００Ｕ／ｍｌ存在する。Ｔｒ１細胞を取得するための前記方法は、Ｗａｋｋａｃｈら（Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００３  Ｍａｙ；１８（５）：６０５−１７）に説明されている。
【００３３】
前記方法はまた、デキサメタゾンおよびビタミンＤ３、またはステップｂ）のＤＣの代わりに、寛容化もしくは未熟ＤＣを使用して実行してもよい。
【００３４】
本発明の別の実施形態では、ヒトＴｒ１細胞は：
ａ）対象から単離したヒトＨＳＰに向けられるＣＤ４＋Ｔ細胞集団を、適切な量のＩＦＮ−αを用いた培地で培養するステップと、
ｂ）Ｔｒ１細胞集団を回収するステップと、により取得され得る。
【００３５】
ＩＦＮ−αは、好ましくは５ｎｇ／ｍｌで培地に存在する。ステップａ）では、培地は適切な量のＩＬ−１０、好ましくは１００Ｕ／ｍｌをさらに含有し得る。
ステップｂ）では、Ｔｒ１細胞集団は、増殖ができるようにＩＬ−１５を含有する培地で培養され、ＩＬ−１５は培地中、好ましくは５ｎｇ／ｍｌである。Ｔｒ１細胞を取得するための前記方法は、米国特許第６７４６６７０号に説明されている。
【００３６】
本発明のさらに別の実施形態では、ヒトＴｒ１細胞は、
ａ）人工抗原提示細胞により提示されたヒトＨＳＰの存在下で、ＣＤ４＋Ｔ細胞集団をｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化させるステップと、
ｂ）少なくとも１０％のＴｒ１細胞を含有する活性化させたＣＤ４＋Ｔ細胞を回収するステップと、により取得され得る。
【００３７】
好ましくは、人工抗原提示細胞は、ＨＬＡ  ＩＩ系分子およびヒトＬＦＡ−３分子を発現し、共刺激分子Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−Ｈ１、ＣＤ４０、ＣＤ２３、およびＩＣＡＭ−１を発現しない。
【００３８】
Ｔｒ１細胞を取得するための前記工程は、国際公開第０２／０９２７９３号に説明されている。
【００３９】
本発明のさらに別の実施形態では、ヒトＴｒ１細胞は、
ａ）ヒトＨＳＰおよび適切な量のＩＬ−１０の存在下で、ＣＤ４＋Ｔ細胞集団をｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化させるステップと、
ｂ）Ｔｒ１細胞集団を回収するステップと、により取得され得る。
【００４０】
好ましくは、ＩＬ−１０は培地中、１００Ｕ／ｍｌで存在する。前記方法は、Ｇｒｏｕｘら（Ｎａｔｕｒｅ  １９９７，３８９（６６５２）：７３７−４２）に説明されている。
【００４１】
本発明のさらに別の実施形態では、ヒトＴｒ１細胞は、
ａ）ヒトＨＳＰを用いて、白血球集団または末梢血単核球（ＰＢＭＣ）集団を刺激するステップと、
ｂ）刺激した集団から、ヒトＨＳＰ−特異的Ｔｒ１細胞集団を回収するステップと、
ｃ）前記ヒトＨＳＰ−特異的Ｔｒ１細胞集団を随意に拡大するステップと、により取得され得る。
【００４２】
白血球は、その重要性、その分布、その数、その寿命、およびその可能性により特徴付けられる数種類の細胞を包含する。これらの種類は以下の通りである：多核白血球または顆粒白血球であり、その中には好酸球性、好中球性、および好塩基球性の白血球、並びに単核細胞、または末梢血単核球（ＰＢＭＣ）が見出され、これは巨大な白血球であり、免疫システム（リンパ球および単球）の主要な細胞型にある。白血球またはＰＢＭＣは、当技術分野で公知の、任意の方法により末梢血液から分離することができる。有利には、ＰＢＭＣの分離には遠心分離、好ましくは密度勾配遠心分離、好ましくは非連続的な密度勾配遠心分離が使用され得る。代替手段は特異的モノクローナル抗体の使用である。ある実施形態では、ＰＢＭＣは典型的に、標準的な手順を使用して、フィコール・ハイパックの手段により全血産物から単離される。別の実施形態では、ＰＢＭＣは、白血球除去の手段により回収される。
【００４３】
前記方法は、国際公開第２００７／０１０４０６号に説明されている。
【００４４】
さらに別の実施形態では、ヒトＴｒ１細胞は、
ａ）白血球集団または末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）集団を、ヒトＨＳＰの存在下で間葉系幹細胞を用いて培養するステップと、
ｂ）Ｔｒ１細胞集団を回収するステップと、により取得し得る。
【００４５】
前記方法はまた、ＰＢＭＣまたは白血球の代わりに、ナイーブＴ細胞またはメモリーＴ細胞を用いて実行することもできる。
【００４６】
そうして取得したＴｒ１細胞集団は、インターロイキン−２およびインターロイキン−４のようなサイトカインの存在下で、培養によりさらに拡大し得る。代替的に、インターロイキン−１５およびインターロイキン−１３もまた、Ｔｒ１細胞の拡大培養に使用し得る。
【００４７】
先に説明した方法では、ヒトＴｒ１細胞は、国際公開第２００５／０００３４４号に説明される同定方法により特徴付けられ得る。Ｔｒ１細胞の前記同定方法は、ＣＤ４分子、並びにＣＤ１８および／またはＣＤ１１ａ、およびＣＤ４９ｂを含有する群の分子をコードする遺伝子の発現産物の、同時存在性を検出することに基づく。Ｔｒ１細胞は、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、または前記マーカーに対する抗体を用いた免疫親和性の方法により、同定および／または精製できる。
【００４８】
Ｔｒ１細胞はまた、フローサイトメトリーまたは電磁ビーズを使用して、ポジティブ選択またはネガティブ選択により濃縮することができる。そのような方法はまた、国際公開第２００５／０００３４４号に説明されている。
【００４９】
本発明の別の実施形態では、関節関連の抗原に向けられるＴｒ１細胞は、国際公開第２００６／１０８８８２号に説明されている、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける方法により拡大され得る。前記方法は、：
ａ）３５℃より下の温度Ｔ１、培地Ｍｆにおいて、昆虫フィーダー細胞のようなフィーダー細胞を培養するステップであって、前記温度Ｔ１によりフィーダー細胞の増殖が可能となり、前記フィーダー細胞が次の細胞表面タンパク質：
―ＣＤ３／ＴＣＲ複合体、
―ＣＤ２８タンパク質、
―ＩＬ−２受容体、
―ＣＤ２タンパク質、および
―ＩＬ−４受容体
と相互作用する因子を発現するステップと、
ｂ）ステップａ）で取得した、その培地Ｍｆから除去した、またはその培地Ｍｆ以外のフィーダー細胞を、培地Ｍｐに包含されたＴｒ１細胞集団と接触させるステップであって、前記培地Ｍｐが、Ｔｒ１細胞集団、フィーダー細胞、および培地Ｍｐを包含する混合物を取得するために、ステップａ）で記載した因子を最初から包含していない前記ステップと、
ｃ）ステップｂ）で取得した混合物を、少なくとも３５℃の温度Ｔ２で培養するステップであって、Ｔｒ１細胞集団が増殖し、フィーダー細胞が増殖しないように前記温度を選択する前記ステップと、
ｄ）そのように拡大したＴｒ１細胞集団を回収するステップと、を含む。
【００５０】
先に言及した細胞表面タンパク質と相互作用する因子の例は：
―修飾された抗ＣＤ３抗体であって、ＣＤ３重鎖の抗ＣＤ３細胞質内ドメインが膜貫通ドメインと置換された、前記修飾された抗ＣＤ３抗体と、
―ＣＤ８０またはＣＤ８６タンパク質と、
―フィーダー細胞から分泌されたＩＬ−２と、
―ＣＤ５８タンパク質と、
―ＩＬ−４およびＩＬ−１３を含有する群から選択されるインターロイキンと、を含む。
【００５１】
本発明の好ましい実施形態では、ヒトＨＳＰに向けられる前記Ｔｒ１細胞は、Ｔ細胞をクローニングするための従来の方法を使用してクローニングしてよい。
【００５２】
本発明の好ましい実施形態では、ヒトＨＳＰに向けられる少なくとも１つのヒトＴｒ１細胞集団、またはヒトＨＳＰに向けられるヒトＴｒ１細胞の少なくとも１つのクローンを含有する組成物は、保存のために凍結されてよい。
【００５３】
好ましい実施形態によれば、前記ヒトＴｒ１細胞集団はヒトＴｒ１クローン集団である。
【００５４】
本明細書における薬学的に許容される有用な担体は、従来の担体である。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｏｓｏｌ，  Ａ．  Ｅｄ．  （１９８０）では、本発明の組成物の医薬品送達のための適した組成物および製剤を説明している。一般的に、担体の特質は、用いられる投与方法によって決まる。例えば、非経口的な製剤は、ビヒクルとして、水、生理食塩水、平衡塩類溶液、水溶性ブドウ糖、ゴマ油、グリセリン、エタノール、それらの組み合わせなどのような、薬学的および生理学的に許容される液体を含んだ注射液を通常は含む。担体および組成物は無菌にすることができ、製剤は投与方法に適合する。生物学的に中性の担体に加え、投与される医薬組成物は、湿潤剤または乳化剤、保存剤、およびｐＨ緩衝剤など、例えば酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウラートのような無毒性の補助物質を少量包含することができる。組成物は溶液、懸濁液、および乳剤にできる。
【００５５】
本発明は、炎症性自己免疫病態を治療するために、本明細書で先に説明した薬剤または医薬組成物の調製に、ヒトＨＳＰに向けられる少なくとも１つのヒトＴｒ１細胞集団を使用することに関する。
【００５６】
本発明の一目的は、炎症性自己免疫病態を治療するか、または炎症性自己免疫病態の治療において使用する、本明細書で先に説明した薬剤または医薬組成物である。
【００５７】
炎症性自己免疫病態は：自己免疫性（橋本病の）甲状腺炎、甲状腺機能亢進症（グレーブス病）、自己免疫性副腎不全（アジソン病）、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性精巣炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性溶血性貧血、発作性寒冷ヘモグロビン尿症、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性好中球減少症、悪性貧血、真性赤血球貧血、自己免疫性凝固障害、重症筋無力症、自己免疫性多発神経炎、多発性硬化症、天疱瘡および他の水疱症、リウマチ性心炎、グッドパスチャー症候群、開心術後症候群、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群（Ｓｊｏｒｇｅｎ‘ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、多発性筋炎、皮膚筋炎、強皮症、炎症性腸疾患：クローン病、潰瘍性大腸炎；慢性閉塞性肺疾患、慢性炎症性疾患、セリアック病、血管炎、ウェゲナー病、チャーグ・ストラウス症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、循環器疾患、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、若年性突発性関節炎、多発性皮膚筋炎（ｐｏｌｙｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）、敗血症性ショック、宿主対移植片病、移植片対宿主病、喘息、鼻炎、乾癬、ガンに伴う悪液質、湿疹、白斑、ライター症候群、川崎病、特発性血小板減少性紫斑病、ギランバレー症候群、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、粥状動脈硬化症、ナルコレプシーを含むがこれらに限定されるものではない。
【００５８】
好ましい実施形態では、本発明は、糖尿病ではない炎症性自己免疫病態を治療するために、本明細書で先に説明した薬剤または医薬組成物の調製に、ヒトＨＳＰに向けられる少なくとも１つのヒトＴｒ１細胞集団を使用することに関する。
【００５９】
好ましくは、前記炎症性自己免疫疾患は、クローン病および潰瘍性大腸炎のような腸炎の病態；関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、および若年性突発性関節炎のような関節炎の病態；多発性硬化症、ウェゲナー病、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、喘息、移植片拒絶反応（宿主対移植片病）、移植片対宿主病を含む群から選択される。
【００６０】
より好ましくは、前記炎症性自己免疫疾患は、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、喘息、および移植片拒絶反応または移植片対宿主病の群から選択される。
【００６１】
好ましい実施形態では、本発明は、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、および若年性突発性関節炎のような関節炎を治療するための薬剤または医薬組成物の調製に、本明細書で先に説明した組成物を使用することに関する。
【００６２】
別の好ましい実施形態では、本発明は、多発性硬化症を治療するための薬剤または医薬組成物の調製に、本明細書で先に説明した組成物を使用することに関する。
【００６３】
別の好ましい実施形態では、本発明は、腸炎の病態を治療するための、好ましくはクローン病および潰瘍性大腸炎を治療する薬剤または医薬組成物の調製に、本明細書で先に説明した組成物を使用することに関する。
【００６４】
別の好ましい実施形態では、本発明は、ウェゲナー病および粥状動脈硬化症のような血管炎を治療するための薬剤または医薬組成物の調製に、本明細書で先に説明した組成物を使用することに関する。
【００６５】
別の好ましい実施形態では、本発明は、原発性胆汁性肝硬変および原発性硬化性胆管炎のような、胆管または肝臓の自己免疫性炎症を治療するための薬剤または医薬組成物の調製に、本明細書で先に説明した組成物を使用することに関する。
【００６６】
別の好ましい実施形態では、本発明は、宿主対移植片病および移植片対宿主病のような移植関連疾患を治療するための薬剤または医薬組成物の調製に、本明細書で先に説明した組成物を使用することに関する。
【００６７】
別の好ましい実施形態では、本発明は、喘息を治療するための薬剤または医薬組成物の調製に、本明細書で先に説明した組成物を使用することに関する。
【００６８】
本発明の目的はまた、その必要がある対象における炎症性自己免疫病態を治療するための方法であって、本明細書で先に説明した有効量の薬剤または医薬組成物を投与することを含む。
【００６９】
組成物は、非経口的な、筋肉内、静脈内、腹腔内への注射、鼻腔内吸入、肺内吸入、皮内、関節内、くも膜下腔内への注射用に製剤され得る。
【００７０】
好ましくは、本発明の薬剤または医薬組成物は、筋肉内、腹腔内、静脈内への注射により、または患者のリンパ節への直接注射、より好ましくは静脈内注射により投与され得る。
【００７１】
炎症性自己免疫病態の治療において有効な、ヒトＨＳＰに向けられるＴｒ１細胞の量は炎症の特性によって決まり、標準の臨床技術によって決定することができる。製剤に用いられる的確な量は、投与経路、および疾患または障害の重篤度によって決まるであろうし、医師の判断および各個人の環境に応じて決定されるべきである。有効用量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験システムから導かれる用量反応曲線から推定することができる。
【００７２】
本発明の一実施形態では、１０４／ｋｇ〜１０９／ｋｇの細胞を対象に投与する。好ましくは、１０５／ｋｇ〜１０７／ｋｇの細胞、より好ましくは、約１０６／ｋｇの細胞を対象に投与する。
【００７３】
本発明の一実施形態では、対象は、対象の臨床状態の低下によりフレアーアップが起こったとき、薬剤を投与される。
【００７４】
本発明の一実施形態では、対象は、本発明の薬剤または医薬組成物を１回投与される。
【００７５】
本発明の第二実施形態では、対象は、本発明の薬剤または医薬組成物を月に１回投与される。
【００７６】
本発明の第三実施形態では、対象は、本発明の薬剤または医薬組成物を３ヶ月に１回投与される。
【００７７】
本発明の第四実施形態では、対象は、本発明の薬剤または医薬組成物を一年に１回から２回投与される。
【００７８】
本発明の別の実施形態では、その必要がある対象に投与する薬剤または医薬組成物は、前記対象の細胞が自己由来であるヒトＴｒ１細胞を含む。
【００７９】
これは、Ｔｒ１細胞がその由来する対象に投与されるか、またはＴｒ１細胞の産生のために使用する前駆体がＴｒ１細胞を投与する対象に由来することを意味する。
【００８０】
本発明はまた、その必要がある対象の炎症性自己免疫病態を治療するための工程に関し、前記工程は：
―前記対象の血液試料を採取するステップと、
―ヒトＨＳＰに向けられるＴｒ１細胞を取得するステップと、
―ヒトＨＳＰに向けられる前記Ｔｒ１細胞をクローニングするステップと、
―先のステップで取得したＴｒ１クローンをさらに拡大するステップと、
―そうして取得したＴｒ１クローンを前記対象に、好ましくは静脈内注射により注射するステップと、を含む。
【００８１】
好ましくは、ヒトＨＳＰに向けられるＴｒ１クローンのクローニングおよび拡大は、以下の方法：
ａ）３５℃より下の温度Ｔ１、培地Ｍｆで、昆虫フィーダー細胞のようなフィーダー細胞を培養するステップであって、前記温度Ｔ１によりフィーダー細胞の増殖が可能となり、前記フィーダー細胞が次の細胞表面タンパク質：
―ＣＤ３／ＴＣＲ複合体、
―ＣＤ２８タンパク質、
―ＩＬ−２受容体、
―ＣＤ２タンパク質、
―ＩＬ−４受容体
と相互作用する因子を発現するステップと、
ｂ）ステップａ）で取得した、その培地Ｍｆから除去した、またはその培地Ｍｆ以外のフィーダー細胞を、培地Ｍｐに包含されたＴｒ１細胞集団と接触させるステップであって、前記培地Ｍｐが、Ｔｒ１細胞集団、フィーダー細胞、および培地Ｍｐを包含する混合物を取得するために、ステップａ）で記載した因子を最初から包含していない前記ステップと、
ｃ）ステップｂ）で取得した混合物を、少なくとも３５℃の温度Ｔ２で培養するステップであって、Ｔｒ１細胞集団が増殖し、フィーダー細胞が増殖しないように前記温度を選択する前記ステップと、
ｄ）そのように拡大されたＴｒ１細胞集団を回収するステップと、を用いて実行される。
【００８２】
先に言及した細胞表面タンパク質と相互作用する因子の例は：
―修飾された抗ＣＤ３抗体であって、ＣＤ３重鎖の抗ＣＤ３細胞質内ドメインが膜貫通ドメインと置換された、前記修飾された抗ＣＤ３抗体と、
―ＣＤ８０またはＣＤ８６タンパク質と、
―フィーダー細胞から分泌されたＩＬ−２と、
―ＣＤ５８タンパク質と、
―ＩＬ−４およびＩＬ−１３を含有する群から選択されるインターロイキンと、を含む。
【００８３】
本発明の別の実施形態では、炎症性自己免疫病態を治療するための工程は、本明細書で後に説明するような１つ以上の治療薬との組み合わせ投与、および／または、本明細書で後に説明するような炎症性自己免疫病態に関与するとして知られている抗原に向けられる、少なくとも１つのヒトＴｒ１細胞集団を含有する、有効量の薬剤または医薬組成物の組み合わせ投与のような追加ステップを含む。
【００８４】
本発明の別の実施形態では、その必要がある対象の炎症性自己免疫病態を治療するための方法は、炎症性自己免疫病態を治療するために使用される１つ以上の治療薬と組み合わせて、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することを含む。
【００８５】
本発明は、炎症性自己免疫病態を治療するために、本発明の医薬組成物または薬剤を使用することに関し、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することとは、炎症性自己免疫病態を治療するために使用される１つ以上の治療薬と組み合わせることである。
【００８６】
関節炎の炎症病態を治療するために一般に使用される治療薬の例は以下が挙げられる：
―コルチコイド（プレドニゾン）、
―インフリキシマブ、アダリムマブ、エタネルセプトのようなＴＮＦ遮断薬；
―アナキンラ、ＡＭＧ１０８、イグラチモド、アクテムラのような抗インターロイキン
―リツキシマブ、エピラツズマブのような抗Ｂリンパ球；
―アバタセプト、ベリムマブのような抗−共刺激分子；
―ＬＪＰ３９４またはＴＶ−４７１０のような免疫寛容薬（Ｂリンパ球表面のＤＮＡ受容体に向けられる合成分子）；
―エクリズマブのような抗補体タンパク質；
―ＣＰ６９０５５０のようなＴ細胞シグナル伝達分子の阻害薬
―ケモカイン受容体の拮抗薬（マラビロク、ＩＮＣＢ３２８４）のような、細胞遊走の阻害薬、
―レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、アザチオプリン、メトトレキサート、シクロスポリン、ミノサイクリン、Ｄペニシラミン、
―メトトレキサート＋スルファサラジン、メトトレキサート＋ヒドロキシクロロキン、メトトレキサート＋アザチオプリン、メトトレキサート＋インフリキシマブ、メトトレキサート＋レフルノミド、メトトレキサート＋エタネルセプト、シクロスポリン＋ヒドロキシクロロキン、シクロスポリン＋メトトレキサート、メトトレキサート＋スルファサラジン＋ヒドロキシクロロキン、のようなそれらの併用療法。
【００８７】
本発明の好ましい実施形態では、その必要がある対象における関節炎の炎症病態を治療するための方法は、コルチコイド、ＴＮＦ遮断薬、抗インターロイキン、抗Ｂリンパ球、抗−共刺激分子、免疫寛容薬、抗補体タンパク質、Ｔ細胞シグナル伝達分子の阻害薬、細胞遊走の阻害薬、メトトレキサート、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、アザチオプリン、メトトレキサート、シクロスポリン、ミノサイクリン、Ｄペニシラミンの群から選択される、１つ以上の治療薬と組み合わせて、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することを含む。
【００８８】
本発明は、その必要がある対象において、炎症性関節炎の病態を治療するために、本発明の医薬組成物または薬剤を使用することに関し、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することとは、コルチコイド、ＴＮＦ遮断薬、抗インターロイキン、抗Ｂリンパ球、抗−共刺激分子、免疫寛容薬、抗補体タンパク質、Ｔ細胞シグナル伝達分子の阻害薬、細胞遊走の阻害薬、メトトレキサート、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、アザチオプリン、メトトレキサート、シクロスポリン、ミノサイクリン、Ｄペニシラミンの群から選択される、１つ以上の治療薬と組み合わせることである。
【００８９】
多発性硬化症を治療するために一般に使用される治療薬の例は以下が挙げられる：
―インターフェロン、例えばヒトインターフェロンβ−１ａ（例えばＡＶＯＮＥＸ（登録商標）またはＲｅｂｉｆ（登録商標））およびインターフェロンβ−１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標））；１７位で置換されたヒトインターフェロンβ（Ｂｅｒｌｅｘ／Ｃｈｉｒｏｎ）；
―グラチラマー酢酸塩（コポリマー１、Ｃｏｐ−１とも呼ばれる；ＣＯＰＡＸＯＮＥ（商標）；（Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；および誘導体、
―フマル酸、例えばフマル酸ジメチル（例えばＦｕｍａｄｅｒｍ（登録商標））；
―Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）または別の抗ＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブとオーバーラップするエピトープと競合または結合する抗体；
―ミトキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標）、Ｌｅｄｅｒｌｅ）；
―化学療法薬、例えばクラドリビン（ｃｌａｂｒｉｂｉｎｅ）（ＬＥＵＳＴＡＴＩＮ（登録商標））、アザチオプリン（ＩＭＵＲＡＮ（登録商標））、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、シクロスポリン−Ａ、メトトレキサート、４−アミノピリジン、およびチザニジン；
―コルチコステロイド、例えばメチルプレドニゾロン（ＭＥＤＲＯＮＥ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）、プレドニゾン；
―免疫グロブリン、例えばＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）；ＣＴＬＡ４  Ｉｇ；アレムツズマブ（ＭａｂＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、またはダクリズマブ（ＣＤ２５と結合する抗体）；
―スタチン；
―静注用免疫グロブリンＧ（ＩｇＧＩＶ）
―ナタリズマブ（タイサブリ）抗インテグリンα４抗体
―経口用ＣＣケモカイン受容体1拮抗薬ＢＸ４７１（ＺＫ８１１７５２）、
―ＦＴＹ７２０（フィンゴリモド）、
―ヒトサイトカインまたは増殖因子、例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＥＭＡＰ−II、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦの抗体または拮抗薬
―ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０のような細胞表面分子またはそれらのリガンドに対する抗体、
―ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）、例えばホスホジエステラーゼ阻害薬、アデノシン作用薬、抗血栓薬、補体阻害薬、アドレナリン作動薬、本明細書で説明される炎症誘発性サイトカインによるシグナル伝達に干渉する薬剤、ＩＬ−Ｉβ変換酵素阻害薬（例えばＶｘ７４０）、抗Ｐ７ｓ、ＰＳＧＬ、ＴＡＣＥ阻害薬、キナーゼ阻害剤のようなＴ細胞シグナル伝達阻害薬、メタロプロテアーゼ（ｍｅｔａｌ  ｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）阻害薬、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、
―アマンタジン、バクロフェン、パパベリン、メクリジン、ヒドロキシジン、スルファメトキサゾール、シプロフロキサシン、ドクサート、ペモリン、ダントロレン、デスモプレシン、デキサメタゾン、トルテロジン、フェニトイン、オキシブチニン、ビサコジル、ベンラファクシン、アミトリプチリン、メテナミン、クロナゼパム、イソニアジド、バルデナフィル、ニトロフラントイン、サイリウム親水性ムチロイド、アルプロスタジル、ガバペンチン、ノルトリプチリン、パロキセチン、プロパンテリン臭化物、モダフィニル、フルオキセチン、フェナゾピリジン、メチルプレドニゾロン、カルバマゼピン、イミプラミン、ジアゼパム、シルデナフィル、ブプロピオン、およびセルトラリン。
現在のところ使用される併用療法の例は：
―グラチラマー酢酸塩およびアルブテロール、
―グラチラマー酢酸塩およびミノサイクリン、
―インターフェロンβ１ａおよびミコフェノール酸モフェチル、
―ＢＨＴ−３００９およびアトルバスタチン。
【００９０】
本発明の好ましい実施形態では、その必要がある対象における多発性硬化症を治療するための方法は、インターフェロンβ、グラチラマー酢酸塩、ミトキサントロン、シクロホスファミド、メトトレキサート、アザチオプリン、またはナタリズマブの群における１つ以上の治療薬と組み合わせて、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することを含む。
【００９１】
本発明は、多発性硬化症を治療するための本発明の医薬組成物または薬剤を使用することに関し、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することとは、インターフェロンβ、グラチラマー酢酸塩、ミトキサントロン、シクロホスファミド、メトトレキサート、アザチオプリン、またはナタリズマブの群における１つ以上の治療薬と組み合わせることである。
【００９２】
腸炎の病態を治療するために一般に使用される治療薬の例は以下が挙げられる：
―ヒトサイトカインまたは増殖因子に対する抗体または拮抗薬であって、特にインフリキシマブ、アダリムマブ、抗ＩＬ−１、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１２、抗ＩＬ−１７、および抗ＩＬ−２３のような抗ＴＮＦ抗体または拮抗薬；ＩＬ−１受容体拮抗薬の類似物（アナキンラ）、およびエタネルセプトのようなＴＮＦ遮断薬、
―抗α４インテグリン（ナタリズマブ）、ＣＤ２、ＣＤ３（ビジリズマブ）、抗ＣＣＲ９、抗ＬＦＡ１、および抗ＩＣＡＭ１のような細胞表面分子に対する抗体；
―メサラジン、スルファサラジン（ｓｕｌｆａｚａｌｉｎｅ）、オルサラジン、バルサラジドのような５アミノサリチル酸および類似物；
―プレドニゾン、ブデソニド、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、ベドメタゾン（ｂｅｄｏｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、チキソコルトールのようなコルチコイド；
―サッカロマイセス・ブラウディのようなプロバイオティクス、
―メトトレキサート、サリドマイド、レフルノミド、並びにアザチオプリンおよび６−メルカプトプリンのようなプリン類似物。
【００９３】
本発明の好ましい実施形態では、その必要がある対象における腸炎の病態を治療するための方法は、抗ＴＮＦまたはＴＮＦ遮断薬、ナタリズマブ、抗ＩＬ−１、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１２、抗ＩＬ−１７、および抗ＩＬ−２３；ＩＬ−１受容体拮抗薬の類似物（アナキンラ）；メサラジン、スルファサラジン、オルサラジン、バルサラジドのような５アミノサリチル酸および類似物；プレドニゾン、ブデソニド、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、ベドメタゾン、チキソコルトールのようなコルチコイドの群から選択される１つ以上の治療薬と組み合わせて、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物の前記対象への投与を含む。
【００９４】
本発明は、その必要がある対象における腸炎の病態を治療するために、本発明の医薬組成物または薬剤を使用することに関し、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することとは、抗ＴＮＦまたはＴＮＦ遮断薬、ナタリズマブ、抗ＩＬ−１、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１２、抗ＩＬ−１７、および抗ＩＬ−２３；ＩＬ−１受容体拮抗薬の類似物（アナキンラ）；メサラジン、スルファサラジン、オルサラジン、バルサラジドのような５アミノサリチル酸および類似物；プレドニゾン、ブデソニド、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、ベドメタゾン、チキソコルトールのようなコルチコイドの群から選択される１つ以上の治療薬と組み合わせることである。
【００９５】
粥状動脈硬化症およびウェゲナー病のような血管炎を治療するために一般に使用される治療薬は、粥状動脈硬化症のためのスタチン、アスピリン、ヘパリンおよびクマジンのような血液凝固薬、また、ウェゲナー病のためのコルチコイド、アザチオプリン、メトトレキサート、シクロホスファミド、抗Ｂリンパ球抗体（リツキシマブ）、抗ＴＮＦ抗体（エタネルセプト、レミケード）および抗胸腺細胞グロブリンである。
【００９６】
本発明の好ましい実施形態では、その必要がある対象における粥状動脈硬化症およびウェゲナー病のような血管炎を治療するための方法は、粥状動脈硬化症のためには、スタチン、アスピリン、ヘパリンおよびクマジンのような血液凝固薬、また、ウェゲナー病のためには、コルチコイド、アザチオプリン、メトトレキサート、シクロホスファミド、抗Ｂリンパ球抗体（リツキシマブ）、ＴＮＦ遮断薬（エタネルセプト、レミケード）および抗胸腺細胞グロブリンと組み合わせて、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することを含む。
【００９７】
本発明は、その必要がある対象における粥状動脈硬化症およびウェゲナー病のような血管炎を治療するために、本発明の医薬組成物または薬剤を使用することに関し、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することとは、粥状動脈硬化症のためには、スタチン、アスピリン、ヘパリンおよびクマジンのような血液凝固薬、また、ウェゲナー病のためには、コルチコイド、アザチオプリン、メトトレキサート、シクロホスファミド、抗Ｂリンパ球抗体（リツキシマブ）、ＴＮＦ遮断薬（エタネルセプト、レミケード）および抗胸腺細胞グロブリンを組み合わせることである。
【００９８】
原発性胆汁性肝硬変および原発性硬化性胆管炎のような、胆管または肝臓の自己免疫性炎症を治療するために一般に使用される治療薬は、ウルソデオキシコール酸（ウルソジオール）である。
【００９９】
本発明の好ましい実施形態では、その必要がある対象における原発性胆汁性肝硬変および原発性硬化性胆管炎のような、胆管または肝臓の自己免疫性炎症を治療するための方法は、ウルソデオキシコール酸（ウルソジオール）と組み合わせて、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することを含む。
【０１００】
本発明は、その必要がある対象における原発性胆汁性肝硬変および原発性硬化性胆管炎のような、胆管または肝臓の自己免疫性炎症を治療するために、本発明の医薬組成物または薬剤を使用することに関し、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することとは、ウルソデオキシコール酸（ウルソジオール）と組み合わせることである。
【０１０１】
移植片拒絶反応（宿主対移植片病または移植片対宿主病）に関連する炎症を治療するために一般に使用される治療薬は、カルシニューリン阻害薬（シクロスポリン、タクロリムス）、ｍＴＯＲ阻害剤（シロリムス、エベロリムス）、抗増殖阻害薬（アザチオプリン、ミコフェノール酸）、ＣＤ２５に対するモノクローナル抗体（ダクルジマブ、バシリキシマブ）、または抗胸腺細胞グロブリンおよび抗リンパ球グロブリンの製剤である。
【０１０２】
本発明の好ましい実施形態では、その必要がある対象における移植片拒絶反応（宿主対移植片病または移植片対宿主病）に関連する炎症を治療するための方法は、カルシニューリン阻害薬（シクロスポリン、タクロリムス）、ｍＴＯＲ阻害剤（シロリムス、エベロリムス）、抗増殖阻害薬（アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸）、ＣＤ２５に対するモノクローナル抗体（ダクルジマブ、バシリキシマブ）、または抗胸腺細胞グロブリンおよび抗リンパ球グロブリンの製剤と組み合わせて、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象へ投与することを含む。
【０１０３】
本発明は、その必要がある対象における移植片拒絶反応（宿主対移植片病または移植片対宿主病）に関連する炎症を治療するために、本発明の医薬組成物または薬剤を使用することに関し、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することとは、カルシニューリン阻害薬（シクロスポリン、タクロリムス）、ｍＴＯＲ阻害剤（シロリムス、エベロリムス）、抗増殖阻害薬（アザチオプリン、ミコフェノール酸）、ＣＤ２５に対するモノクローナル抗体（ダクルジマブ、バシリキシマブ）、または抗胸腺細胞グロブリンおよび抗リンパ球グロブリンの製剤と組み合わせることである。
【０１０４】
喘息を治療するために一般に使用される治療薬は、サルブタモール（アルブテロール  ＵＳＡＮ）、レバルブテロール、テルブタリン、およびビトルテロールのような短時間作用型の、選択的β２アドレナリン受容体作動薬、並びに吸入用エピネフリンおよびエフェドリン錠剤のような他のアドレナリン作動薬、イプラトロピウム臭化物、吸入用糖質コルチコイドのような抗コリン薬である。
【０１０５】
本発明の好ましい実施形態では、その必要がある対象における喘息を治療するための方法は、サルブタモール（アルブテロール  ＵＳＡＮ）、レバルブテロール、テルブタリン、およびビトルテロールのような短時間作用型の、選択的β２アドレナリン受容体作動薬、並びに吸入用エピネフリンおよびエフェドリン錠剤のような他のアドレナリン作動薬、イプラトロピウム臭化物、吸入用糖質コルチコイドのような抗コリン薬と組み合わせて、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することを含む。
【０１０６】
本発明は、その必要がある対象における喘息を治療するために、本発明の医薬組成物または薬剤を使用することに関し、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することとは、サルブタモール（アルブテロール  ＵＳＡＮ）、レバルブテロール、テルブタリン、およびビトルテロールのような短時間作用型の、選択的β２アドレナリン受容体作動薬、並びに吸入用エピネフリンおよびエフェドリン錠剤のような他のアドレナリン作動薬、イプラトロピウム臭化物、吸入用糖質コルチコイドのような抗コリン薬と組み合わせることである。
【０１０７】
本発明の別の実施形態では、その必要がある対象の炎症性自己免疫病態を治療するための方法は、炎症性自己免疫病態に関与するとして知られている抗原に向けられる、少なくとも１つのヒトＴｒ１細胞集団を含有する１つ以上の薬剤または医薬組成物と組み合わせて、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することを含む。
【０１０８】
本発明は、本発明の医薬組成物または薬剤を使用することに関し、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することは、炎症性自己免疫病態に関与するとして知られている抗原に向けられる、少なくとも１つのヒトＴｒ１細胞集団を含有する１つ以上の薬剤または医薬組成物と組み合わせることである。
【０１０９】
関節リウマチ、強直性脊椎炎、若年性突発性関節炎、および乾癬性関節炎のような関節炎の病態を治療するために使用できる薬剤または医薬組成物の例は、関節関連の抗原に向けられる少なくとも１つのＴｒ１細胞集団またはクローンを含有する薬剤または医薬組成物である。前記関節関連の抗原は、例えばシトルリン置換した環状および直鎖状のフィラグリンペプチド、ＩＩ型コラーゲンペプチド、ヒト軟骨糖タンパク質３９（ＨＣｇｐ３９）ペプチド、不均一核内リボ核酸タンパク質（ｈｎＲＮＰ）Ａ２ペプチド、ｈｎＲＮＰ  Ｂ１、ｈｎＲＮＰ  Ｄ、Ｒｏ６０／５２、ＢｉＰ、ケラチン、ビメンチン、フィブリノーゲン、カルジオリピン、Ｉ型、III型、ＩＶ型、およびＶ型コラーゲンペプチド、アネキシンＶ、グルコース６リン酸イソメラーゼ（ＧＰＩ）、アセチル−カルパスタチン、ピルビン酸脱水素酵素（ＰＤＨ）、アルドラーゼ、トポイソメラーゼＩ、ｓｎＲＮＰ、ＰＡＲＰ、Ｓｃｌ−７０、Ｓｃｌ−１００、陰イオン性ホスファチジルセリン、中性に荷電したホスファチジルエタノールアミンおよびホスファチジルコリンを含むリン脂質抗原、マトリックスメタロプロテアーゼ、フィブリン、アグリカン、並びにそれらの断片、変異体、および混合物である。
【０１１０】
好ましい実施形態では、前記ヒトＴｒ１細胞集団またはクローンは、ＩＩ型コラーゲン、ＨＣｇｐ３９、それらの断片および変異体から選択される関節関連の抗原に向けられる。
【０１１１】
本発明の好ましい実施形態では、その必要がある対象における関節炎の病態を治療するための方法は、関節関連の抗原、好ましくはＩＩ型コラーゲン、ＨＣｇｐ３９、それらの断片、変異体、および混合物に向けられる、少なくとも１つのＴｒ１細胞集団またはクローンを含有する、有効量の薬剤または医薬組成物と組み合わせて、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することを含む。
【０１１２】
本発明は、その必要がある対象における関節炎の病態を治療するために、本発明の医薬組成物または薬剤を使用することに関し、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することとは、関節関連の抗原、好ましくはＩＩ型コラーゲン、ＨＣｇｐ３９、それらの断片、変異体、および混合物に向けられる、少なくとも１つのＴｒ１細胞集団またはクローンを含有する、有効量の薬剤または医薬組成物と組み合わせることである。
【０１１３】
多発性硬化症の病態を治療するために使用できる薬剤または医薬組成物の例は、多発性硬化症関連の抗原に向けられる少なくとも１つのＴｒ１細胞集団またはクローンを含有する薬剤または医薬組成物である。前記多発性硬化症関連の抗原は、例えばミエリン塩基性タンパク質、ミエリン関連糖タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質、プロテオリピドタンパク質、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴタンパク質、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質（単数および複数）、ＮＯＧＯ  Ａ、糖タンパク質  Ｐｏ、末梢性ミエリンタンパク質２２，２’３’−環状ヌクレオチド３’−ホスホジエステラーゼ、並びにそれらの断片、変異体、および混合物である。
【０１１４】
好ましい実施形態では、前記ヒトＴｒ１細胞集団またはクローンは、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、およびミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（ＭＯＧ）、並びにそれらの断片、変異体、および混合物の中から選択される多発性硬化症関連の抗原に向けられる。
【０１１５】
本発明の好ましい実施形態では、その必要がある対象における多発性硬化症の病態を治療するための方法は、多発性硬化症関連の抗原、好ましくはミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、およびミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（ＭＯＧ）、並びにそれらの断片、変異体、および混合物に向けられる、少なくとも１つのＴｒ１細胞集団またはクローンを含有する、有効量の薬剤または医薬組成物と組み合わせて、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することを含む。
【０１１６】
本発明は、その必要がある対象における多発性硬化症の病態を治療するために、本発明の医薬組成物または薬剤を使用することに関し、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することとは、多発性硬化症関連の抗原、好ましくはミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、およびミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（ＭＯＧ）、並びにそれらの断片、変異体、および混合物に向けられる、少なくとも１つのＴｒ１細胞集団またはクローンを含有する、有効量の薬剤または医薬組成物と組み合わせることである。
【０１１７】
クローン病および潰瘍性大腸炎のような、腸炎の病態を治療するために使用できる薬剤または医薬組成物の例は、一般的なヒトの食餌に由来する食品抗原に向けられる、少なくとも１つのＴｒ１細胞集団またはクローンを含有する薬剤または医薬組成物である。前記一般的なヒトの食餌に由来する食品抗原は、例えばウシ抗原、Ｃａ−結合ＳｌＯＯ、αラクトアルブミン、ラクトグロブリン、ウシ血清アルブミン、免疫グロブリンまたはカゼイン、タイセイヨウサケ抗原、ニワトリ抗原、卵白アルブミン、Ａｇ２２、コンアルブミン、リゾチームまたはニワトリ血清アルブミン、エビ抗原、コムギ抗原、セロリ抗原、ニンジン抗原、リンゴ抗原、リンゴ脂質移転タンパク質、リンゴプロフィリン、セイヨウナシ抗原、イソフラボン還元酵素、アボカド抗原、アンズ抗原、モモ抗原、ダイズ豆抗原、ピーナッツ、並びにそれらの断片、変異体、および混合物である。
【０１１８】
好ましい実施形態では、前記ヒトＴｒ１細胞集団またはクローンは、卵白アルブミン、カゼイン、βラクトグロブリン、ダイズタンパク質、グリアジン、ピーナッツ、並びにそれらの断片、変異体、および混合物の中から選択される、一般的なヒトの食餌に由来する食品抗原に向けられる。
【０１１９】
本発明の好ましい実施形態では、その必要がある対象における腸炎の病態を治療するための方法は、一般的なヒトの食餌に由来する食品抗原、好ましくは卵白アルブミン、カゼイン、βラクトグロブリン、ダイズタンパク質、グリアジン、ピーナッツ、並びにそれらの断片、変異体、および混合物に向けられる、少なくとも１つのＴｒ１細胞集団またはクローンを含有する、有効量の薬剤または医薬組成物と組み合わせて、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することを含む。
【０１２０】
本発明は、その必要がある対象における腸炎の病態を治療するために、本発明の医薬組成物または薬剤を使用することに関し、有効量の本発明の薬剤または医薬組成物を前記対象に投与することとは、一般的なヒトの食餌に由来する食品抗原、好ましくは卵白アルブミン、カゼイン、βラクトグロブリン、ダイズタンパク質、グリアジン、ピーナッツ、並びにそれらの断片、変異体、および混合物に向けられる、少なくとも１つのＴｒ１細胞集団またはクローンを含有する、有効量の薬剤または医薬組成物と組み合わせることである。
【０１２１】
（実施例）
以下の説明では、詳細なプロトコルが与えられていない全ての実験は、標準的なプロトコルに従って行っている。
【０１２２】
本発明の好ましい実施形態を実証するために以下の実施例が含まれる。当業者には、発明者により見出された技術を示している実施例で開示される技術が、本発明の実施において十分に機能し、従ってその実施のための好ましい様式を構築していると考え得ることが理解されるべきである。しかし、本開示を踏まえると、当業者は、開示される特定の実施形態において多くの変更を成すことができ、また、本発明の精神および範囲から逸脱することなく同様の結果または類似の結果をさらに得られることを理解すべきである。
【０１２３】
（実験手順）
Ｔｒ１細胞の単離
健常な患者から血液試料を採取し、密度勾配遠心分離法により白血球を分離した。次いで、この抗原に向けられるＴｒ１細胞の特異的増殖を誘導するために、ヒトＨＳＰ６０の存在下で細胞を培養した。培養の１３日後、限界希釈法により細胞集団をクローニングした。次いで、ヒトＨＳＰ６０に対するそれらの特異性、および特徴的なＴｒ１サイトカイン産生プロファイルについてクローンを評価した。
【０１２４】
サイトカイン分析
抗原特異性の判定のため、抗原提示細胞（４．１０５）の存在下、および特異的抗原（ＨＳＰ６０）の存在下または非存在下で刺激した、Ｔｒ１細胞クローンの４８時間後の上清についてサンドイッチＥＬＩＳＡを行った。サイトカイン産生プロファイルの決定のため、抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８モノクローナル抗体でＨＳＰ６０  Ｔｒ１細胞クローンを刺激し、４８時間後に上清を収集した。抗ＩＬ−４（１１Ｂ１１）、抗ＩＬ−１０（２Ａ５）、抗ＩＦＮγ（ＸＧＭ１．２）、ビオチン抗ＩＬ−４（２４Ｇ２）、抗ＩＬ−１０（ＳＸＣ１）、抗ＩＦＮγ（Ｒ４−６Ａ２）（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用してＥＬＩＳＡを行った。
【０１２５】
抑制研究
抑制研究のため、活性化したＨＳＰ６０特異的Ｔｒ１クローン由来の上清の有る場合と無い場合で、自己ＣＤ４陽性Ｔリンパ球を共培養した。抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８モノクローナル抗体、およびインターロイキン２を用いて培養物を刺激した。５日後、ＲｏｃｈｅのＷＳＴ−１増殖キットを使用して細胞増殖の全体を評価した。
【０１２６】
結果
図１は、抗原の存在または非存在下で、ＨＳＰ６０に特異的な４つの別々のＴｒ１細胞集団のＩＬ−１０産生を示す。結果は、ＨＳＰ６０の刺激がＩＬ−１０の産生の増加を誘発することを示す。これらの結果は、ＨＳＰ６０に対する細胞集団の特異性を実証する。
【０１２７】
ＨＳＰ６０に特異的なこれらのＴｒ１細胞集団のサイトカイン分泌プロファイルをさらに判定するため、抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８モノクローナル抗体の存在下で細胞を刺激した。ＩＬ−４、ＩＬ−１０、およびＩＦＮγの産生を測定するため、４８時間後の上清についてＥＬＩＳＡを行った。図２は、これらのＨＳＰ６０特異的集団について観測されたサイトカイン分泌プロファイルが、Ｔｒ１サイトカイン分泌プロファイル、すなわちＩＬ−１０の高い産生、ＩＦＮγの産生、およびＩＬ−４の無産生と一致することを示す。
【０１２８】
次いで、これらＨＳＰ６０  Ｔｒ１集団の抑制活性を評価した。活性化したＨＳＰ６０特異的Ｔｒ１クローンの上清の有る場合と無い場合で、自己ＣＤ４陽性Ｔリンパ球を共培養した。刺激の５日後、細胞増殖を測定した。図３は、４つのＴｒ１集団の上清の結果を示し、これらＴｒ１細胞の抑制活性を裏付ける。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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