(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｈＧＨ、ショ糖、グリシン、及びリン酸緩衝剤を含む経皮パッチ製剤であって、該リン酸緩衝剤が製剤のｐＨを５から９の範囲に維持し、かつ製剤がマンニトールを含有せず、ｈＧＨ、ショ糖、及びグリシンの濃度比（ｍｇ/ｍｌ）が０．８５：０．８０：０．２６から０．８５：１．２０：０．４０の範囲である、上記経皮パッチ製剤。
【請求項２】
ｈＧＨが、１０ｍｇ／ｍｌから２５５ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で存在する、請求項１に記載の経皮パッチ製剤。
【請求項３】
製剤中のｈＧＨ濃度が２０ｍｇ／ｍｌから１２０ｍｇ／ｍｌである、請求項１に記載の経皮パッチ製剤。
【請求項４】
ショ糖が、１１ｍｇ／ｍｌから３００ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で存在する、請求項１に記載の経皮パッチ製剤。
【請求項５】
ショ糖が、２２ｍｇ／ｍｌから２００ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で存在する、請求項１に記載の経皮パッチ製剤。
【請求項６】
グリシンが、３ｍｇ／ｍｌから９９ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で製剤に存在する、請求項１に記載の経皮パッチ製剤。
【請求項７】
グリシンが、６ｍｇ／ｍｌから６６ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で製剤に存在する、請求項１に記載の経皮パッチ製剤。
【請求項８】
緩衝剤が、６から８の製剤のｐＨを得るための十分量で存在する、請求項１に記載の経皮パッチ製剤。
【請求項９】
３０ｍＭリン酸緩衝剤中にｈＧＨ、ショ糖、及びグリシンを含む経皮パッチ製剤であって、ｈＧＨ、ショ糖、及びグリシンの濃度比（ｍｇ／ｍｌ）が０．８５：０．８：０．２６から０．８５：１．２０：０．４０である経皮パッチ製剤。
【請求項１０】
経皮パッチ製剤のｐＨが、６から８である、請求項９に記載の経皮パッチ製剤。
【請求項１１】
賦形剤溶液を形成するためにショ糖及びグリシンをリン酸緩衝剤に溶解するステップと、
１０ｍｇ／ｍｌから２５２ｍｇ／ｍｌのｈＧＨ濃度を有するｈＧＨ製剤を得るためにｈＧＨを賦形剤溶液に溶解するステップと、
溶解を促進するために十分な時間ｈＧＨ製剤を保存するステップと
を含むｈＧＨの経皮製剤を調製するための方法であって、製剤のｐＨが６から８である上記方法。
【請求項１２】
保存後にｈＧＨの任意の未溶解粒子を除去することを更に含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ショ糖１００ｍｇ／ｍｌ及びグリシン３３ｍｇ／ｍｌの製剤濃度並びに最終製剤のｐＨ７．５±０．５を得るように３０ｍＭリン酸緩衝剤にショ糖及びグリシンを溶解することによって賦形剤溶液を形成するステップと、
８５〜１００ｍｇ／ｍｌのｈＧＨ最終濃度を得るようにｈＧＨを賦形剤溶液に溶解するステップと、
溶解を促進するためにｈＧＨ溶液を保存するステップと、
場合によりｈＧＨの任意の未溶解粒子を除去するステップと
を含むｈＧＨの経皮製剤を調製するための方法。
【請求項１４】
ｈＧＨ、ショ糖、グリシン、及び製剤のｐＨを６から８の範囲に維持するための十分量のリン酸緩衝剤の製剤を含む経皮パッチであって、温度４℃での６カ月間の保存後に、パッチが脱アミド化した、酸化した、切断した及び／又は短縮したｈＧＨタンパク質を０．５重量％から１３重量％の量で、及び凝集タンパク質を０．０１重量％から６重量％の量で含み、かつ製剤がマンニトールを含まない上記経皮パッチ。
【請求項１５】
温度４℃での６カ月間の保存後に、経皮パッチ製剤が脱アミド化した、酸化した、切断した及び／又は短縮したｈＧＨタンパク質を２重量％から１０重量％の量で含む、請求項１４に記載の経皮パッチ。
【請求項１６】
温度４℃での６カ月間の保存後に、経皮パッチ製剤が凝集タンパク質を０．２重量％から４重量％の量で含む、請求項１４に記載の経皮パッチ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、本明細書に参照として援用する米国仮出願番号６０／７３３００５号（出願日２００５年１１月２日）及び６０／７３９２８８号（出願日２００５年１１月２２日）の権利を請求する。
【０００２】
本発明は、経皮パッチにおける使用のためのヒト成長ホルモン製剤及びその調製方法を包含する。
【背景技術】
【０００３】
ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）は、ヒト下垂体から分泌されるホルモンである。それは１９１アミノ酸からなり、分子量は約２２０００である。ｈＧＨは、一般にこのホルモンが欠乏している人に、骨格、結合組織、筋肉、肝臓、腸及び腎臓などの器官系の成長を促進するために投与される。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ｈＧＨは、皮下注射を通じての医薬投与用に処方されてきた。米国特許第５０９６８８５号参照。これらのｈＧＨ製剤は、一般に糖、界面活性剤、保存剤及び塩類などの種々の賦形剤を含んでいる。しかし、皮下注射はしばしば痛みを伴いコンプライアンスに乏しい。したがって、このような不利益を省いた代替送達法が望まれる。
【０００５】
経皮パッチは、皮下注射の代替として無痛で、より簡便で、針を使用しないプラットフォームを提供する。本発明は、経皮パッチを使用する投与のためのｈＧＨの製剤及び前記ｈＧＨ製剤の調製方法を包含する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の一実施形態は、ｈＧＨ、少なくとも１種の糖、１種のアミノ酸又はポリオール、及び緩衝剤を含む経皮パッチ製剤であって、緩衝剤が製剤のｐＨを約５から約９の範囲に維持し、かつ製剤がグリシンとマンニトールの両方は含有しない経皮パッチ製剤を包含する。典型的にはｈＧＨは、約１０ｍｇ／ｍｌから２５５ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で含まれることができ、好ましくは、製剤中のｈＧＨ濃度は約２０ｍｇ／ｍｌから約１７０ｍｇ／ｍｌであることができる。
【０００７】
経皮パッチ製剤において糖は、ブドウ糖、果糖、ショ糖又はトレハロースであることができ、好ましくは糖は、ショ糖又はトレハロースであることができる。典型的には糖は、約１１ｍｇ／ｍｌから３００ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で含まれることができ、好ましくは、糖は約２２ｍｇ／ｍｌから約２００ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で含まれる。
【０００８】
経皮パッチ製剤においてポリオールは、マンニトール又はグリセリンであることができる。ポリオールは、約５ｍｇ／ｍｌから１５０ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で製剤に含まれることができ、好ましくはポリオールは、約１０ｍｇ／ｍｌから約１００ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で含まれることができる。
【０００９】
経皮パッチ製剤においてアミノ酸は、グリシンであることができる。アミノ酸は、約３ｍｇ／ｍｌから約９９ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で、好ましくは約６ｍｇ／ｍｌから約６６ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で含まれることができる。
【００１０】
経皮パッチ製剤において緩衝剤は、リン酸緩衝剤又はクエン酸緩衝剤であることができる。緩衝剤は、製剤のｐＨ約６から８を得るための十分量で含まれることができる。
【００１１】
本発明の他の実施形態は、ｈＧＨ、ショ糖及びグリシンを３０ｍＭリン酸緩衝液中に含む経皮パッチ製剤であって、ｈＧＨ、ショ糖及びグリシンの濃度比（ｍｇ／ｍｌ）が約８５：１００：３３から約１００：１２０：４０である経皮パッチ製剤を包含する。典型的には経皮パッチ製剤のｐＨは、約６から約８である。
【００１２】
本発明の更に他の実施形態は、２０ｍＭクエン酸緩衝液中に溶解したｈＧＨ、トレハロース及びマンニトールを含む経皮パッチ製剤であって、ｈＧＨ、トレハロース及びマンニトールの濃度比（ｍｇ／ｍｌ）が約８５：１００：５０から約１００：１２０：６０であり、かつｐＨが約６から８である経皮パッチ製剤を包含する。
【００１３】
本発明の一実施形態は、賦形剤溶液を形成するために少なくとも１種の糖及び少なくとも１種のポリオール又はアミノ酸を緩衝液に溶解するステップと、約１０ｍｇ／ｍｌから２５５ｍｇ／ｍｌのｈＧＨ濃度を有するｈＧＨ製剤を得るためにｈＧＨを賦形剤溶液に溶解するステップと、溶解を促進するために十分な時間ｈＧＨ製剤を保存するステップとを含むｈＧＨの経皮製剤を調製するための方法を包含し、前記製剤のｐＨは約６から８である。場合により方法は、保存後にｈＧＨの任意の未溶解粒子を除去することを更に含むことができる。
【００１４】
本発明の他の実施形態は、ショ糖約１００ｍｇ／ｍｌ及びグリシン約３３ｍｇ／ｍｌの製剤濃度並びに最終製剤のｐＨ約７．５±０．５を得るように３０ｍＭリン酸緩衝液にショ糖及びグリシンを溶解することによって賦形剤溶液を作製するステップと、約８５〜１００ｍｇ／ｍｌのｈＧＨ最終濃度を得るようにｈＧＨを賦形剤溶液に溶解するステップと、溶解を促進するためにｈＧＨ溶液を保存するステップと、場合によりｈＧＨの任意の未溶解粒子を除去するステップとを含むｈＧＨの経皮製剤を調製するための方法を包含する。
【００１５】
本発明の更に他の実施形態は、ｈＧＨ、少なくとも１種の糖、少なくとも１種のポリオール及び製剤のｐＨを約６から約８の範囲に維持するための十分量の緩衝剤の製剤を含む経皮パッチであって、温度約４℃での６カ月間の保存後に、パッチが関連ｈＧＨタンパク質を約０．５重量％から約１３重量％の量で及び凝集タンパク質を約０．０１重量％から約６重量％の量で含み、かつ製剤がグリシンとマンニトールの両方は含まない経皮パッチを包含する。好ましくは、温度約４℃での６カ月間の保存後に経皮パッチ製剤は、関連タンパク質を約２重量％から１０重量％の量で含む。好ましくは、温度約４℃での６カ月間の保存後に経皮パッチは、凝集タンパク質を約０．２重量％から４重量％の量で含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明は、経皮パッチにおける使用のためのｈＧＨ製剤及びその調製方法を包含する。製剤がパッチ製造で使用するために設計されていることからｈＧＨ製剤は、パッチの形態で患者に投与される場合に本発明の製剤が望ましい結果を得るための十分な薬物動態学的プロフィールを達成する程度の、ｈＧＨの高濃度溶液として調製される。
【００１７】
本発明の製剤は、ｈＧＨ、少なくとも１種の糖、少なくとも１種のポリオール又はアミノ酸、及び緩衝剤を含み、緩衝剤は製剤のｐＨを約６から約８の範囲に維持し、かつ製剤はグリシンとマンニトールの両方は含有しない。
【００１８】
製剤に使用するｈＧＨは、商業的供給源から容易に入手できる。例えば、ｈＧＨは、Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｌｔｄ．（イスラエル）又はＢｒｅｓａＧｅｎ  Ｌｔｄ．（オーストラリア）から入手できる。ｈＧＨは、米国特許第５７６３２１５号に記載の通りにも得ることができる。本明細書で使用する用語「ｈＧＨ」又は「ヒト成長ホルモン」は、Ｍｅｔ−ｈＧＨ（１９２アミノ酸）などの例えば全長配列中の１つ又は複数のアミノ酸が異なっている、生物学的に活性なヒト成長ホルモン等価物も含む。更に使用される前記用語は、アミノ酸が置換、欠失及び挿入されたｈＧＨの変異体又は翻訳後修飾物も含んでいる。典型的にはｈＧＨは、約１０ｍｇ／ｍｌから２５５ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で製剤に含まれる。好ましくは、製剤のｈＧＨ濃度は約２０ｍｇ／ｍｌから約１７０ｍｇ／ｍｌであり、より好ましくは製剤のｈＧＨ濃度は約３０ｍｇ／ｍｌから約１２０ｍｇ／ｍｌである。
【００１９】
糖は、薬学的に許容される任意の糖であることができる。糖は、単糖、二糖及び多糖を非限定的に含む。好ましい糖は、ブドウ糖、果糖、ショ糖、トレハロース、乳糖、麦芽糖、ガラクトース、ソルビトール又はキシリトールを含む。好ましくは糖は、ショ糖又はトレハロースである。典型的には糖は、約１１ｍｇ／ｍｌから３００ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で製剤に含まれる。好ましくは、製剤中の糖濃度は約２２ｍｇ／ｍｌから約２００ｍｇ／ｍｌであり、より好ましくは製剤中の糖濃度は約３０ｍｇ／ｍｌから約１２０ｍｇ／ｍｌである。
【００２０】
ポリオールは、薬学的に許容される任意のポリオールであることができる。ポリオールは、マンニトール、グリセリン、ポリエチレングリコール、又はα−ヒドロ−オメガ−ヒドロキシポリ（オキシエチレン）ポリ（オキシプロピレン）ポリ（オキシエチレン）ブロックコポリマーなどのブロックコポリマーを非限定的に含む。好ましくはポリオールは、マンニトールを含む。典型的には、ポリオールは、約５ｍｇ／ｍｌから１５０ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で製剤に含まれる。好ましくは製剤中のポリオール濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌから約１００ｍｇ／ｍｌであり、より好ましくは製剤中のポリオール濃度は、約１５ｍｇ／ｍｌから約７０ｍｇ／ｍｌである。
【００２１】
アミノ酸は、薬学的に許容される任意のアミノ酸であることができる。アミノ酸は、グリシン又はヒスチジンを非限定的に含む。好ましいアミノ酸はグリシンである。典型的にはアミノ酸は、約３ｍｇ／ｍｌから約９９ｍｇ／ｍｌの製剤中濃度を得るための十分量で製剤中に含まれる。好ましくはアミノ酸製剤濃度は、約６ｍｇ／ｍｌから６６ｍｇ／ｍｌであり、より好ましくはアミノ酸の製剤濃度は、約１０ｍｇ／ｍｌから５０ｍｇ／ｍｌである。
【００２２】
緩衝剤は、望ましいｐＨを維持し、かつ生理学的に適合可能な任意の緩衝剤であることができる。一般的な当業者は実験をほとんど又は全くせずに容易に望ましいｐＨを得るために必要な緩衝剤の種類及び量を決定することができる。好ましくは緩衝剤は、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、リン酸−酢酸緩衝剤、クエン酸−リン酸緩衝剤又はコハク酸緩衝剤である。緩衝剤は、製剤のｐＨ約５から９、好ましくは約６から８、より好ましくは約６．５から７．５を得るための十分量で含まれるべきである。
【００２３】
好ましい一実施形態において製剤は、３０ｍＭリン酸緩衝液中にｈＧＨ、ショ糖及びグリシンを含み、本明細書においてｈＧＨ製剤Ｉと定義する。ｈＧＨ製剤Ｉにおいて、ｈＧＨ、ショ糖及びグリシンの濃度比（ｍｇ／ｍｌ）は、それぞれ約０．８５：０．８０：０．２６から約０．８５：１．２０：０．４０であり、好ましくは、０．８５：１．００：０．３３である。ｈＧＨ製剤ＩのｐＨは、約６から約８である。
【００２４】
他の好ましい実施形態において製剤は、２０ｍＭクエン酸緩衝液に溶解したｈＧＨ、トレハロース及びマンニトールを含み、本明細書においてｈＧＨ製剤ＩＩと定義する。ｈＧＨ製剤ＩＩにおいて、ｈＧＨ、トレハロース及びマンニトールの濃度比（ｍｇ／ｍｌ）はそれぞれ約０．８５：０．８：０．４から約０．８５：１．２０：０．６０であり、好ましくはそれぞれ０．８５：１．００：０．５０である。ｈＧＨ製剤ＩＩのｐＨは、約６から８である。
【００２５】
本発明は製剤を調製する方法を包含する。ｈＧＨの経皮製剤を調製するための方法は、賦形剤溶液を形成するために少なくとも１種の糖及び少なくとも１種のポリオール又はアミノ酸を緩衝液に溶解するステップと、約１０ｍｇ／ｍｌから２５５ｍｇ／ｍｌのｈＧＨ濃度を有するｈＧＨ製剤を得るためにｈＧＨを賦形剤溶液に溶解するステップと、溶解を促進するために十分な時間ｈＧＨ製剤を保存するステップとを含み、前記製剤のｐＨは約６から８であり、かつ前記製剤はグリシンとマンニトールの両方は含有しない。場合により方法は、ｈＧＨの未溶解粒子を除去することを更に含むことができる。典型的には、ｈＧＨ製剤用に前記で開示した濃度を得るための十分量でｈＧＨ、糖、ポリオール、アミノ酸及び緩衝剤を添加する。
【００２６】
当業者に周知の方法を使用して、当業者は実験をほとんど又は全くせずに製剤を溶解、混合、保存するため及び必要に応じてｈＧＨの未溶解粒子を除去するための方法を容易に決定することができる。
【００２７】
ｈＧＨ製剤Ｉを調製する好ましい一方法は、ショ糖約１００ｍｇ／ｍｌ及びグリシン約３３ｍｇ／ｍｌの最終濃度並びに最終製剤のｐＨ約７．５±０．５を得るように３０ｍＭリン酸緩衝液にショ糖及びグリシンを溶解することを含む。次いで、約８５〜１００ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得るようにｈＧＨを前記溶液に溶解する。溶解を促進するために、処方したｈＧＨ溶液を保存する。好ましくは溶液を温度５±３℃で一晩保存する。次いで、当業者に既知の任意の方法によって溶液から未溶解粒子を除去する。好ましくは未溶解粒子は、ろ過又は遠心分離によって除去する。
【００２８】
ｈＧＨ製剤ＩＩを調製する好ましい一方法は、トレハロース約１００ｍｇ／ｍｌ及びマンニトール約５０ｍｇ／ｍｌの最終濃度並びに最終製剤のｐＨ約６．７±０．５を得るように２０ｍＭクエン酸緩衝液にトレハロース及びマンニトールを溶解することを含む。次いで、約８５〜１００ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得るようにｈＧＨを前記溶液に溶解する。溶解を促進するために、処方したｈＧＨ溶液を保存する。好ましくは製剤を温度５±３℃で一晩保存する。次いで、当業者に既知の任意の方法によって溶液から未溶解粒子を除去する。好ましくは未溶解粒子は、ろ過又は遠心分離によって除去する。
【００２９】
本発明の更に他の実施形態は、本発明の製剤を含む経皮パッチ及び前記経皮パッチの作製方法を包含する。
【００３０】
典型的には経皮パッチは、ｈＧＨ、少なくとも１種の糖、少なくとも１種のポリオール又はグリシン、及び製剤のｐＨを約６から約８の範囲に維持するための十分量の緩衝剤の製剤であって、温度約４℃から室温での６カ月間の保存後に、パッチが関連ｈＧＨタンパク質を約４重量％から約１３重量％の量で及び凝集タンパク質を約０．１重量％から約６重量％の量で含む製剤を含む。本明細書において使用する用語「凝集タンパク質」は、二量体を形成している少なくとも２分子の付加物及び高分子量の他の不純物の付加物を意味する。本明細書において使用する用語「関連タンパク質」は、他に定義する場合を除いて脱アミド化形態、酸化形態、並びに転位置した、切断した及び短縮したタンパク質などの他の不純物を意味する。
【００３１】
好ましくは、温度約４℃での６カ月間の保存後に経皮パッチ製剤は、関連タンパク質を約０．５重量％から１３重量％の量で、より好ましくは、約２重量％から１０重量％の量で含む。好ましくは、温度約４℃での６カ月間の保存後に経皮パッチは、凝集タンパク質を約０．０１重量％から６重量％の量で、より好ましくは約０．２重量％から４重量％の量で含む。
【００３２】
本発明の製剤は、ｈＧＨの種々の投与量を有するパッチを調製するために使用することができる。プリンティング及びパッチ技術は米国特許第６６８９７８９号、５９８５３１１号、５９４８４３３号、５７５０１３８号及び５００８１１０号に一般に記載されており、本明細書に参照として援用する。好ましくはパッチは、本明細書に参照として援用する米国公報第２００４／１３７０４４号に開示のプリンティング及びパッチ製造技術を使用して調製する。パッチ上のｈＧＨの用量密度は、１ｃｍ２当たりｈＧＨ０．０１〜１．６ｍｇからである。
【００３３】
一実施形態において本発明のｈＧＨ製剤は、高周波を使用して皮膚にミクロチャネルを導入するＶｉａｄｅｒｍデバイスを使用して投与される。デバイスは、特に米国特許第６７０８０６０号に記載されている。ミクロチャネルの生成に続いて薬物製剤を含むパッチを皮膚に貼付する。
【００３４】
パッチの安定性は、保存条件及び保存期間を決定するために典型的に検討する。外観、同一性、純度及び量を他の試験と共に各パッチについて検討することができる。すべてのパッチは、ｈＧＨについてのＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ（ＥＰ  ５．０（２００５））又はＵＳ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ（ＵＳＰ  ２８（２００５））による仕様書を満たしていなければならない。本発明の製剤は、パッチ上にプリントされた場合は著しく安定であり、ブタにおいて皮下注射と同様のＰＫプロフィールを得ることが示されている。ｈＧＨの市販の製剤の使用は、パッチ上にプリントできる用量に関して制限があり、したがって血液中のｈＧＨが十分なレベルにならない。
【００３５】
本発明を、前記製剤及び方法を詳細に記載する以下の非限定的な実施例を参照することにより更に定義する。材料及び方法の両方について本発明の範囲から逸脱すること無く様々な変更を実施できることは、当業者に明らかである。
【実施例】
【００３６】
（実施例１）ｈＧＨ製剤Ｉの調製
ショ糖及びグリシンを含有するリン酸緩衝液の賦形剤溶液は、ショ糖１００ｍｇ／ｍｌ及びグリシン３３ｍｇ／ｍｌの最終濃度となるように、３０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ６にショ糖及びグリシンを溶解することによって調製した。次いで、ｈＧＨを賦形剤溶液に８５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解した。溶解を促進するために、処方したｈＧＨ溶液を５±３℃で一晩置いた。次いで、３９４０ｇで５分間、２回遠心分離することによって未溶解粒子を除去した。製剤成分の最終濃度は、ｈＧＨ、ショ糖、及びグリシンのそれぞれについて８５：１００：３３ｍｇ／ｍｌとした。最終製剤のｐＨは７．５±０．５であった。
【００３７】
（実施例２）ｈＧＨ製剤ＩＩの調製
トレハロース及びマンニトールを含有するクエン酸緩衝液の賦形剤溶液は、トレハロース８５ｍｇ／ｍｌ及びマンニトール５０ｍｇ／ｍｌの最終濃度となるように２０ｍＭクエン酸緩衝液ｐＨ４にトレハロース及びマンニトールを溶解することによって調製した。次いで、ｈＧＨを賦形剤溶液に８５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解した。溶解を促進するために、処方したｈＧＨ製剤溶液を４℃で一晩置いた。次いで、３９４０ｇで５分間、２回遠心分離することによって未溶解粒子を除去した。製剤成分の最終濃度は、ｈＧＨ、トレハロース、及びマンニトールのそれぞれについて８５：１００：５０ｍｇ／ｍｌとした。最終製剤のｐＨは６．７±０．５であった。
【００３８】
（実施例３）試験用パッチの調製
試験用パッチをｈＧＨ製剤Ｉ及びＩＩで調製した。試験用パッチは、米国公報第２００４／０１３７０４４号に開示のプリンティング及びパッチ製造技術並びにＢＬＦ２０８０  ｐｒｉｎｔｉｎｇ  ｌｉｎｅｒ（Ｄｏｗ）を使用して作製した。試験用パッチは、ＭＡＸＮＣ装置を使用して１．４ｃｍ２の大きさで１ｍｇの用量（パッチ５ｃｍ２当たり４ｍｇに相当）で作製した。プリントした各パッチをｈｉｓｔｏｓｅｔｔｅフレームに個包装した。プリントしたコアを含む各ｈｉｓｔｏｓｅｔｔｅを、シリカゲル及びアルゴンと共に密封した積層アルミニウム袋に包装した。
【００３９】
（実施例４）検証用パッチの調製
検証用パッチをｈＧＨ製剤Ｉ及びＩＩの様々な用量から調製した。検証用パッチは、米国公報第２００４／０１３７０４４号に開示のプリンティング及びパッチ製造技術並びにＢＬＦ２０８０（Ｄｏｗ）ｐｒｉｎｔｉｎｇ  ｌｉｎｅｒを使用して作製した。検証用パッチは、ＢｉｏＤｏｔ  ＡＤ  ３２００装置を使用して５ｃｍ２の大きさで２及び６ｍｇの用量で作製した。米国仮出願第６０／６８９７６３号の権利を請求するＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＩＬ２００６／０００６７９に記載のパッチ構造設計を使用した。パッチ構成要素は、以下の経皮ライナー：３Ｍ−９７３３フォームテープ、３Ｍ−９８７７二重コート医療用テープ、３Ｍ−９９０７Ｗ不織布基材テープ及び３Ｍ−Ｓｃｏｔｃｈｐａｋ９７４２剥離紙を含んでいた。各パッチを個包装し、シリカゲル及びアルゴンと共に積層アルミニウム袋に密封した。
【００４０】
（実施例５）製剤の安定性
【表１−１】
0005522939.tif 000002
【表１−２】
0005522939.tif 000003
【００４１】
ｈＧＨ製剤Ｉ及びＩＩで作製したパッチの安定性を、室温で１、２、３及び６カ月間の保存並びに５±３℃で３及び６カ月間の保存について測定した。パッチは、１．４ｃｍ２パッチにパッチ１枚当たりｈＧＨを１ｍｇ含んでいた。安定性試験は、３回反復で実施した。安定性試験の結果を表２に示す。試験用パッチは、外観及び同一性試験の全てに適合した。表２、３ａ及び３ｂにおいて以下の定義、ＲＴ＝「室温」、ＮＰ＝「実施せず」、ＬＴ＝「未満」、ＮＭＴ＝「以下」及びＮＤ＝「測定せず」を使用した。
【表２】
0005522939.tif 000004
【００４２】
ｈＧＨ製剤Ｉ及びＩＩから作製した検証用パッチの安定性を、室温で１、２及び３カ月間の保存並びに５±３℃で３カ月間の保存について測定した。検証用パッチは、５．０ｃｍ２パッチにパッチ１枚当たりｈＧＨを２及び６ｍｇ含んでいた。安定性試験は、５回反復で実施した。安定性試験の結果を表３ａ及び３ｂに示す。検証用パッチは、外観、純度及び同一性試験の全てに適合した。
【表３】
0005522939.tif 000005
【表４】
0005522939.tif 000006
【００４３】
表２、３ａ及び３ｂに示す通り、試験用パッチ及び本発明の製剤（ｈＧＨ製剤Ｉ及びＩＩ）を使用して作製した検証用パッチの両方は良好な安定性を保持していた。試験用パッチは、室温及び５±３℃の両方で最短でも６カ月間間安定であった。試験用及び検証用パッチ両方の純度試験の結果は、表１の許容範囲を満たした。加えて、ｈＧＨ製剤Ｉ及びＩＩで作製した検証用パッチの０カ月時の生物学的活性試験は、プリントしたタンパク質の良好な効力を示した（ラベル表示の約１００％）。
【００４４】
５．０ｃｍ２パッチ上にｈＧＨ４ｍｇの用量でｈＧＨ製剤Ｉから作製したパッチのブタにおける薬物動態学的特性を、ｈＧＨ０．４ｍｇの皮下注射のそれと比較した。重要な薬物動態学的特性は、曲線より下の面積（ＡＵＣ）及びバイオアベイラビリティーを含む。１ｃｍ２当たりのミクロチャネル数及び電極アレイの大きさは、パッチに関連して変更した。
【００４５】
（実施例６）ブタにおける薬物動態学試験
薬物動態学試験を、１０〜１５Ｋｇの白色、雄、ブタについて以下の手順を使用して実施した。ブタの皮膚適用部位を、部位を湿潤化し、かつブタのミクロシャネル数（約７０％）をヒトで観察されるパーセンテージ（＞９０％）に増加させるために３０分間塩水で処置した。次いで、ＶｉａＤｅｒｍをポジティブフィードバック設定を使用して適用した。デバイスは、脊椎に近い背部領域に適用し、パッチで覆った。ブタは、開始操作、カニュ−レ挿入及びパッチ適用後１時間は全身麻酔下とし、以後の試験は覚醒下とした。パッチの投与後、定期的に血液を頸動脈カニューレからプラズマチューブへ抜き採った。パッチを１２時間後に取り除いた。ｈＧＨの血漿レベルの分析をＥＬＩＳＡ  ＤＳＬ  １０−１９００  ｔｅｓｔによって実施した。ｈＧＨ（Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ）０．４ｍｇの皮下注射をバイオアベイラビリティーの算出のためにポジティブコントロール群として使用した。
【００４６】
パッチ及び皮下注射のｈＧＨ血漿レベルを図１に記載する。ｈＧＨ製剤Ｉで作製されたパッチ及び注射の、ＡＵＣ及びバイオアベイラビリティーパラメーターを表４に記載する。１ｃｍ２当たり１５０、３００及び４５０のマイクロチャネル数（ＭＣＳ）及び直径６０〜８０μｍの電極アレイをｈＧＨ（Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ）０．４ｍｇの皮下注射（ＳＣ）と比較した。
【表５】
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【００４７】
図１に示す通りｈＧＨの最高血漿レベルは、注射で投与した場合は約１時間で、及び経皮パッチで投与した場合は約３〜４時間で得られる。パッチによるｈＧＨの投与に関して図１は、多数のミクロチャネルを使用すればｈＧＨの経皮送達が高くなることを示している。表４は、電極アレイの大きさを増大させるとバイオアベイラビリティーの増大に効果があることを示している。例えば、表４は、１ｃｍ２当たり３００ミクロチャネルのパッチと直径８０μｍの電極アレイは、１ｃｍ２当たり４５０ミクロチャネルのパッチと直径６０μｍの電極アレイと同様のバイオアベイラビリティーを示すことを示している（１４％対１６％）。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】図１は、本発明の製剤を使用する経皮パッチのブタにおける薬物送達プロフィールを注射用投与形態と比較して示すグラフである。
【図１】
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