(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造を有する化合物を合成する方法であって、
【化１】
0005484668.tif 000080
但し、ＲはＨである。
（ａ）（ｉ）下記構造を有する化合物（ここでＰＭＢはｐ−メトキシベンジルを表す）をエポキシ化剤と反応し、エポキシドを形成すること、
【化２】
0005484668.tif 000081
（ii）ステップ（ａ）（ｉ）で形成されたエポキシドを、Ｒ４ＮＦ（但し、各Ｒは独立に同じであるか、又は異なっており、直鎖又は分岐鎖のアルキル、アラルキル又はアリール基である。）で開裂し、フルオロアルコールを形成すること、
（iii）ステップ（ａ）（ii）で形成されたフルオロアルコールを、非求核性塩基及び式Ｃ６Ｈ５ＣＨ２Ｘ（但し、ＸはＢｒ、Ｃｌ、Ｉ又はＦである。）を有する有機ハライドを用いてアルキル化し、下式を有する化合物（ここでＰＭＢはｐ−メトキシベンジルを表す）を形成すること、
【化３】
0005484668.tif 000082
（ｂ）下記構造を有する化合物（ここでＴＩＰＳはトリイソプロピルシリルを表す）をエポキシ化剤で処理し、エポキシドを形成すること、
【化４】
0005484668.tif 000083
（ｃ）ステップ（ｂ）で形成されたエポキシドを下記構造を有する化合物とカップリングし、
【化５】
0005484668.tif 000084
下記構造を有する化合物（ここでＴＩＰＳはトリイソプロピルシリルを表す）を形成すること、
【化６】
0005484668.tif 000085
（ｄ）（ｉ）ステップ（ｃ）で形成された化合物を、非求核性塩基及び式Ｃ６Ｈ５ＣＨ２Ｘ（但し、Ｘは、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｉ又はＦである。）を有する有機ハライドでアルキル化すること、及び
（ii）ステップ（ｄ）（ｉ）で形成された化合物を、Ｒ４ＮＦ（但し、各Ｒは独立に同じであるか、又は異なっており、直鎖又は分岐鎖のアルキル、アラルキル又はアリール基である。）で脱シリル化すること、
（iii）ステップ（ｄ）（ii）で形成された化合物を、金属アルコキシドで処理し、脱保護された二糖を形成すること、
（iv）ステップ（ｄ）（iii）で形成された二糖を、アルキル化し、選択的に脱保護された下記構造を有する二糖を形成すること、
【化７】
0005484668.tif 000086
（ｅ）（ｉ）ステップ（ｄ）（iv）で形成された選択的に脱保護された二糖を、ステップ（ａ）（iii）で形成された化合物とカップリングし、保護された三糖を形成すること、及び
（ii）ステップ（ｅ）（ｉ）で形成された保護された三糖を、脱保護し、下記構造を有する三糖を形成すること、
【化８】
0005484668.tif 000087
但し、ＲはＨである。
を具備した方法。
【請求項２】
下記構造を有する三糖セラミドを合成するための方法であって、
【化９】
0005484668.tif 000088
（ａ）請求項１に記載の方法のステップ（ａ）〜（ｅ）（ｉ）を行うことにより、下記構造を有する保護された三糖を合成すること、
【化１０】
0005484668.tif 000089
但し、ＲはＰＭＢ（ｐ−メトキシベンジル）である。
（ｂ）（ｉ）ステップ（ａ）で形成された三糖を、エポキシ化剤と反応し、三糖エポキシドを形成すること、及び
（ii）ステップ（ｂ）（ｉ）で形成された三糖エポキシドを、下記構造を有する化合物と反応し、
【化１１】
0005484668.tif 000090
下記構造を有する保護された三糖セラミド（ここでＰＭＢはｐ−メトキシベンジルを表す）を形成すること、
【化１２】
0005484668.tif 000091
（ｃ）（ｉ）ステップ（ｂ）（ii）で形成されたセラミドをアシル化すること、及び
（ii）ステップ（ｃ）（ｉ）で形成された化合物を選択的に脱保護し、三糖セラミドを形成すること、
を具備した方法。
【請求項３】
下記構造を有する六糖セラミドを合成する方法であって、
【化１３】
0005484668.tif 000092
（ａ）請求項１に記載の方法のステップ（ａ）〜（ｅ）（ｉｉ）を行うことにより、下記構造を有する化合物を合成すること、
【化１４】
0005484668.tif 000093
但し、ＲはＨである。
（ｂ）下記構造を有する化合物（ここでＴＩＰＳはトリイソプロピルシリルを表す）を、
【化１５】
0005484668.tif 000094
ステップ（ａ）で形成された化合物とカップリングし、下記構造を有する化合物（ここでＴＩＰＳはトリイソプロピルシリルを表す）を形成すること、
【化１６】
0005484668.tif 000095
（ｃ）（ｉ）ステップ（ｂ）で形成された化合物をエポキシ化剤と反応し、六糖エポキシドを形成すること、及び、
（ii）六糖エポキシドを、下記構造を有するスズエーテルと反応し、
【化１７】
0005484668.tif 000096
六糖アルコールを形成すること、
（ｄ）ステップ（ｃ）（ii）で形成された六糖アルコールを、アシル化し、下記構造を有する六糖アセテート（ここでＴＩＰＳはトリイソプロピルシリルを表す）を形成すること、
【化１８】
0005484668.tif 000097
（ｅ）ステップ（ｄ）で形成された六糖アセテートを、パルミチン酸無水物の存在下で還元的にアシル化し、六糖セラミドを形成すること、
（ｆ）六糖セラミドを脱シリル化し、部分的に脱保護された六糖セラミドを形成すること、
（ｇ）（ｉ）部分的に脱保護された六糖セラミドを還元し、脱保護された六糖セラミドアセテートを形成すること、
（ii）脱保護された六糖セラミドアセテートをアシル化し、六糖セラミドパーアセテートを形成すること、及び
（ｈ）六糖セラミドパーアセテートをケン化し、六糖セラミドを形成すること、
を具備した方法。
【請求項４】
下記構造を有する六糖セラミドを合成する方法であって、
【化１９】
0005484668.tif 000098
（ａ）請求項２に記載の方法のステップ（ａ）〜（ｃ）（ｉｉ）を行うことにより、下記構造を有する化合物を合成すること、
【化２０】
0005484668.tif 000099
（ｂ）下記構造を有する化合物（ここでＴＩＰＳはトリイソプロピルシリルを表す）を、
【化２１】
0005484668.tif 000100
ステップ（ａ）で形成された化合物とカップリングし、下記構造を有する六糖（ここでＴＩＰＳはトリイソプロピルシリルを表す）を形成すること、
【化２２】
0005484668.tif 000101
及び
（ｃ）（ｉ）ステップ（ｂ）で形成された六糖を、パルミチン酸無水物の存在下で還元し、パルミトイルアミドを形成すること、
（ii）パルミトイルアミドを、Ｒ４ＮＦ（但し、各Ｒは独立に、同じであるか、又は異なっており、直鎖又は分岐鎖のアルキル、アラルキル又はアリール基である。）で脱シリル化し、部分的に脱保護された六糖を形成すること、
（iii）ステップ（ｃ）（ii）で形成された六糖を脱保護し、脱保護された六糖を形成すること、
（iv）ステップ（ｃ）（iii）で形成された六糖を、アシル化し、六糖セラミドパーアセテートを形成すること、
（ｖ）六糖セラミドパーアセテートをケン化し、六糖セラミドを形成すること、
を具備した方法。
【請求項５】
下記構造を有する六糖（ここでＴＩＰＳはトリイソプロピルシリルを表す）を合成する方法であって、
【化２３】
0005484668.tif 000102
（ａ）請求項１に記載の方法のステップ（ｂ）〜（ｄ）（ｉｖ）を行うことにより、下記構造を有する化合物を合成すること、
【化２４】
0005484668.tif 000103
（ｂ）下記構造を有する化合物（ここでＴＩＰＳはトリイソプロピルシリルを表す）を、
【化２５】
0005484668.tif 000104
下記構造を有する化合物（ここでＴＩＰＳはトリイソプロピルシリルを表す）とカップリングし、
【化２６】
0005484668.tif 000105
下記構造を有する化合物（ここでＴＩＰＳはトリイソプロピルシリルを表す）を形成すること、
【化２７】
0005484668.tif 000106
（ｃ）（ｉ）ステップ（ｂ）で形成された化合物をアシル化すること、及び
（ii）ステップ（ｃ）（ｉ）で形成された化合物をエポキシ化剤と反応し、下記構造を有するエポキシド（ここでＴＩＰＳはトリイソプロピルシリルを表す）を形成すること、
【化２８】
0005484668.tif 000107
（ｄ）（ｉ）該エポキシドを、Ｒ４ＮＦ（但し、各Ｒは独立に同じであるか、又は異なっており、直鎖又は分岐鎖のアルキル、アラルキル又はアリール基である。）で処理すること、及び
（ii）ステップ（ｄ）（ｉ）で形成された化合物を、アルキル化し、下記構造を有する化合物（ここでＴＩＰＳはトリイソプロピルシリルを表す）を形成すること、
【化２９】
0005484668.tif 000108
但し、ＲはＨ又はアシルである。
（ｅ）ステップ（ｄ）（ii）で形成された化合物を、ステップ（ａ）で形成された化合物とカップリングし六糖を形成すること、
を具備した方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
本出願の全体にわたって、種々の文献を、本文中でかっこ内に引用した。これらの刊行物の開示は、本発明の属する分野の状態をより完全に開示するために参照文献として全体を本出願の一部となす。
【０００２】
生物系の生体構造物質として、及びエネルギー貯蔵ユニットとしての炭水化物の機能は、良く認識されている。対照的に、生物学的プロセスに関連したシグナル分子としての炭水化物の役割はごく最近認識された（M.L. Phillips, E. Nudelman, F.C.A. Gaeta, M. Perez, A.K. Singhal, S. Hakomori, J.C. Paulsen, Science, 1990, 250, 1130; M.J. Polley, M.L. Phillips, E. Wagner, E. nudelman, A.K. Sighal, S. Hakomori, J.C. Paulsen, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, 88, 6224; T. Taki. Y. Hirabayashi, H. Ishikawa, S. Kon, Y. Tanaka, M. Matsumoto, J. Biol. Chem., 1986, 261, 3075; Y. Hirabayashi, A. Hyogo, T. Nakao, K. Tsuchiya, Y, Suzuki, M. Matsumoto, K. Kon, S. Ando, ibid., 1990, 265, 8144; O. Hindsgaul, T. Norberg, J. Le Pendu, R.U. Lemieux, Carbohydr. Res., 1982, 109, 109; U. Spohr, R.U. Lemieux, ibid., 1988, 174, 211）。細胞相互作用を媒介する際に炭水化物が関与する範囲を解明することは、当今の生物医学的研究における調査の重要な分野となっている。詳細な生体構造情報を有する炭水化物分子は、遊離して存在するよりも複合糖鎖（例えば糖タンパク及び糖脂質）として存在する傾向がある。均一な形態で該複合体を単離することにしばしば付随する複雑さ、及び天然に存在するこれら複合体から完全な炭水化物を回収する際の困難性がある場合、合成によるアプローチの適用が明白になる（グリコシル化の最近の総説として、Paulsen, H., Angew. Chemie Int. Ed. Engl., 1982, 21, 155; Schmidt, R.R., Angew. Chemie Int . Ed. Engl., 1986, 25, 212; Schmidt, R.R., Comprehensive Organic Synthesis, 第６巻、１（２）章、Pergamon Press, Oxford, 1991; Schmidt, R.R.,「炭水化物、医療化学における合成法と応用（Carbohydrates, Synthetic Method and Applications in Medical Chemistry）」パートＩ、４章、VCH Publishers, Weinheim, New York, 1992を参照。グリコシド合成におけるグリコシルドナーとしてのグリカールの使用については、Lemieux R.U., Can. J. Chem., 1964, 42, 1417; Lemieux. R.U., Faser-Raid, B., Can. J. Chem., 1965, 43, 1460; Lemieux, R.U., Morgan, A.R., Can. J. Chem., 1965, 43, 2190; Thiem, J., Karl. H., Schwentner, J., Synthesis, 1978, 696; Thiem. J. Ossowski, P., Carbohydr. Chem., 1984, 3, 287; Thiem, J., Prahst, A., Went, T., Libigs. Ann. Chem., 1986, 1044; Thiem, J., in Trends in Synthetic Carbohydrate Chemistry, Horton, D., Hawkins, L.D., McGarvvey, G.L., 編、ＡＣＳシンポジウムシリーズ  ＃３８６、米国化学会、Washington, D.C. 1989, ８章、を参照。）。
【０００３】
糖タンパク及び糖脂質双方に含まれる血液型物質の炭水化物ドメインは、赤血球、上皮細胞及び種々の分泌物に分布している。これらの系の初期の焦点は血液型の特異性を決定する際のこれらの中心的な役割に集中した（R.R. Race及びR. Sanger, ヒトの血液型（Blood Groups in Man）、第６版、Blackwell, Oxford, 1975）。しかし、このような決定子は、細胞接着及び結合現象に広範囲に関係していることが認識されている（例えば、M.L. Phillips, E. Nudelman, F.C.A. Gaeta, M. Perez, A.K. Singhal, S. Hakomori, J.C. Paulsen, Science, 1990, 250, 1130を参照。）。更に、複合体形成した形態で、血液型物質に関連した集合体は、種々の腫瘍の攻撃に対するマーカーとして働く（K.O. Lloyd, Am. J. Clinical Path., 1987, 87, 129; K.O. Loiyd, Cancer Biol., 1991, 2, 421）。炭水化物ベースの腫瘍抗原因子は、薬物輸送又は理想的には免疫治療における供給源として診断レベルでの応用が見出される（Toyokuni, T., Dean, B., Cai, S., Boivin, D., Hakomori, S.,及びSinghal, A.K., J. Am. Chem. Soc., 1994, 116, 395; Dranoff, G., Jaffee, E., Lazenby, A., Golumbek, P., Levitsky, H., Brose, K., Jackson, V., Hamada, H., Paardoll, D., Mulligan, R., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 3539; Tao, M-H., Levy, R., Nature, 1993, 362, 755; Boon, T., Int. J. Cancer, 1993, 54, 177; Livingston, P.O., Curr. Opin. Immunol., 1984, 2, 103; K.Shigeta, et al., J. Biol. Chem., 1987, 262, 1358）。
【０００４】
本発明は、オリゴ糖合成のための新規な戦略及びプロトコールを提供する。目的は、相対的に複雑なドメインが高立体特異的に組み立てられ得るようにこのような構築を簡略化することである。複合糖鎖合成における主要な進歩には、高収斂性（convergence）の達成と保護基の操作に関連した負荷を軽減することが要求される。他の要求は、キャリアータンパク又は脂質との複合体形成に対して適切な準備を行い、炭水化物決定子を誘導することである（Bernstein, M.A.及びHall, L.D., Carbohydr. Res., 1980, 78, C1; Lemieux, R.U., Chem., Soc., Rev., 1978, 7, 423; R.U. Lemieux, et, al., J. Am. Chem. Soc., 1975, 97, 4076）。これは、合成により誘導された炭水化物が、生物学的な応用に適したキャリアーに取り込まれる場合に、決定的な条件となる。
【０００５】
ガン細胞に対して選択的な、又は理想的には特異的な抗原は、活性な免疫性を惹起するのに有用であることが示されうる（Hakomori, S., Cancer Res., 1985, 45, 2405-2414; Feizi, T., Cancer Surveys, 1985, 4, 245-269）。新規な炭水化物パターンは、しばしば、形質転換された細胞によって、細胞表面糖タンパクとして、又は膜アンカー糖脂質として提供される。特に、抗体産生を刺激する、よく選別された合成複合糖質は、癌（これは、これらの細胞表面に等価な構造タイプを提供する。）に対する活性な免疫性を付与しうる（Dennis, J., Oxford Glycosystems Glyconews Second, 1992; Lioyd, K.O.,ワクチンを用いた癌の特異的免疫療法（Specific Immunotherapy of Cancer with Vaccines）, 1993, New York Academy of Sciences,内の pp.50-58）。治療を成功させるための可能性は、標的細胞に対する抗原をより限定することによって改善される。スフィンゴ糖脂質は、Hakomori及び共同研究者によって乳ガン細胞系ＭＣＦ−７から単離され、モノクローナル抗体ＭＢｒ１によって免疫学的に特徴づけられた（Bremer, E.G. et al., J. Biol. Chem., 1984, 259, 14773-14777; Menard, S, et al., Cancer Res., 1983, 43, 1295-1300）。新規なスフィンゴ糖脂質構造１ｂ（図８）が、メチル化及び酵素分解プロトコールに基づいて、この乳房腫瘍関連抗原に対して提案された。決定的ではないが、提案された構造と一致した１Ｈ−ＮＭＲスペクトルが、微量の単離された抗原から得られた。提案された構造の個々のセクターは未知ではないが、完全な構造が乳ガン系の研究に基づいて初めて開示された。ＭＢｒ１は、正常なヒト乳腺細胞及び卵巣ガン細胞系にも結合することに注意すべきである。従って、完全体としての１ｂは形質転換された乳房細胞に制限されないようである。この他に、１ｂのより小さなサブセクションは、抗体認識及び結合能力を十分に有する。（１ｂのＤＥＦフラグメントの合成が報告されており、ＭＢｒ１と結合することが示されている。Lay, L.; Nicotra, F.; Panza, L.; Russo, G., Helv. Chim. Acta, 1994, 77, 509-514）
本明細書で説明される方法によって製造される化合物は、ヒト乳房腫瘍細胞と免疫反応性のＭＢｒ１抗体を誘導することができるワクチンとして補助的治療に有効な抗原である。このような補助的治療は、乳ガンの再発の割合を減少させ、手術後の生存率を増加させる可能性を有する。ＡＪＣＣステージIIIメラノーマに対して外科的に治療された１２２人の患者であって、メラノーマ分化抗原ＧＭ２（ＭＢｒ１を好む他の腫瘍抗原は、細胞表面の炭水化物である。）から調製されたワクチンで治療された者に関し、臨床試験で、免疫処理に先立って抗体を欠く患者において疾患を起こさない期間の非常に有意な増加を示した（P.O. Livingston, et al., J. Clin Oncol., 12, 1036 (1994)）。
【０００６】
本発明は、１ｂを大量に合成する方法、並びにより小さな糖脂質よりも免疫原性の高いオリゴ糖鎖の人工的なタンパク質複合体を合成する方法を提供する。抗原には、Ｂ及びＣ部分の間のα−結合、並びにβ−結合した環Ｄgal-NAc残基を含めた新規な特徴的配列が含まれる（フコース残基を欠く関連した構造（ＳＳＥＡ−３）の合成に対しては、Ogawa, T., Tetrahedron Lett.., 1988, 29, 5681-5684を参照。）。本発明は、（ｉ）１ｂの全合成、（ii）Hakomoriの抗原が実際に１ｂに対応することの厳密な証明、及び（iii）１ｂの生物複合体形成しうる変形体の合成を提供する。合成の簡潔性は、グリカール組立法の効率（これは、スルホンアミドグリコシル化のための強力な方法によって増大される。）によってもたらされる（例えば、１４ｂ〜１５ｂの変換を参照。図１０）。
【発明の概要】
【０００７】
本出願は、１９９４年３月１５日に提出された米国出願番号０８／２１３，０５３の一部継続出願であり、該出願の内容は参照文献として本出願の一部をなす。
【０００８】
本発明は、米国立衛生研究所からの補助金ＧＭ−１５２４０−０２、ＧＭ−１６２９１−０１、及びＡＩ−１６９４３による政府の補助でなされた。従って、米国政府は本発明に一定の権利を有する。
【０００９】
本発明は、下記構造を有する化合物を合成する方法を提供する。
【化４２】
0005484668.tif 000002
【００１０】
但し、ＲはＨである。
【００１１】
本発明はまた、下記構造を有する三糖セラミドを合成する方法を提供する。
【化４３】
0005484668.tif 000003
【００１２】
更に、本発明は、下記構造を有するメルカプト三糖（mercaptotrisaccharide）を合成する方法を提供する。
【化４４】
0005484668.tif 000004
【００１３】
本発明はまた、下記構造を有する六糖セラミドを合成する方法を提供する。
【化４５】
0005484668.tif 000005
【００１５】
本発明はまた、下記構造を有するアリル六糖を合成する方法を提供する。
【化４７】
0005484668.tif 000006
【００１６】
本発明は、下記構造を有する六糖を合成する方法を提供する。
【化４８】
0005484668.tif 000007
【００１７】
更に、本発明は、下記構造を有する化合物を提供する。
【化４９】
0005484668.tif 000008
【００１８】
但し、ｎは約０から約９の間の整数である。
【００１９】
本発明はまた、下記構造を有する化合物を提供する。
【化５０】
0005484668.tif 000009
【００２０】
但し、ｎは約０から約９の間の整数である。
【００２１】
本発明はまた、下記構造を有する化合物を提供する。
【化５１】
0005484668.tif 000010
【００２２】
但し、ｎは約０から約９の間の整数である。
【発明の詳細な説明】
【００２３】
本発明は、以下の構造を有する化合物を提供する。
【化５２】
0005484668.tif 000011
【００２４】
但し、Ａは、（ｉ）ω−アミノ基又はω−（Ｃ＝Ｏ）−基を有するアミノ酸、（ii）ペプチドのアミノ酸残基であって、該残基がω−アミノ基又はω−（Ｃ＝Ｏ）−基を有するもの、及び（iii）タンパク質のアミノ酸残基であって、該残基がω−アミノ基又はω−（Ｃ＝Ｏ）−基を有するものよりなる群から選択される。Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＮＨ２又はＮＨＲ４（但し、Ｒ４はＳＯ２Ｐｈ、直鎖又は分岐鎖のアルキル又はアシル基、又はアリール基である。）である。Ｍは下記構造を有する。
【化５３】
0005484668.tif 000012
【００２５】
ｎは０から１８の整数であり、ｎが１より大きい場合、各Ｍは独立に同じであるか又は異なっている。ｐは、０又は１の何れかである。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は、独立に同じであるか又は異なっており、Ｈ又はＯＨであるが、同じ炭素に結合したＲ２及びＲ３が双方ともＯＨとはならず、同じ炭素に結合したＲ５及びＲｓが双方ともＯＨとはならないという条件が付く。炭素原子と酸素原子の間の波線は各々炭素原子でのＲ又はＳ配置を表す。Ｘ及びＹは独立に、同じであるか又は異なっており、Ｈ２又はＯである。ｋは１よりも大きい整数であるか、又は１に等しいが、Ａがω−アミノ基又はω−（Ｃ＝Ｏ）−基を有するアミノ酸である場合、ｋは１に等しいという条件が付く。
【００２６】
一態様では、本発明は、Ａがリジン又はリジン残基である上記化合物を提供する。
【００２７】
もう一つの態様では、本発明は、Ａがグルタミン酸又はグルタミン酸残基である上記化合物を提供する。
【００２８】
もう一つの態様では、本発明は、Ａがアスパラギン酸又はアスパラギン酸残基である上記化合物を提供する。
【００２９】
本発明はまた、Ａが球状タンパク質のアミノ酸残基である上に開示した化合物を提供する。一態様では、本発明は、球状タンパク質がウシ血清アルブミン及びヒト血清アルブミンよりなる群から選択される上記化合物を提供する。
【００３０】
一態様では、本発明は、ｋが１である上記化合物を提供する。
【００３１】
もう一つの態様では、本発明は、ｎ及びｐが双方とも０に等しい上記化合物を提供する。
【００３２】
本発明は、下記構造を有する化合物を提供する。
【化５４】
0005484668.tif 000013
【００３３】
但し、Ｒ１はＨ、ＯＨ、ＮＨ２又はＮＨＲ４（但し、Ｒ４はＳＯ２Ｐｈ、直鎖又は分岐鎖のアルキル又はアシル基、又はアリール基である。）である。Ｍは、下記構造を有する。
【化５５】
0005484668.tif 000014
【００３４】
ｎは、０から１８の整数であり、ｎが１より大きい場合、各Ｍは独立に、同じであるか又は異なっている。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５及びＲ６は独立に、同じであるか、異なっており、Ｈ又はＯＨであるが、同じ炭素に結合したＲ２及びＲ３が双方ともＯＨとはならず、同じ炭素に結合したＲ５及びＲ６が双方ともＯＨとなることはないという条件が付く。炭素原子と酸素原子の間の波線は、炭素原子でのＲ又はＳ配置を表す。Ｒ７は置換されたアリル基又は無置換アリル基である。
【００３５】
本発明は、下記構造を有する化合物を提供する。
【化５６】
0005484668.tif 000015
【００３６】
但し、ｎは１から１８の整数である。ＲはＨ又は直鎖又は分岐鎖のアシル基である。Ｒ１はＨ、ＯＨ、ＮＨ２又はＮＨＲ４（但し、Ｒ４はＳＯ２Ｐｈ、直鎖又は分岐鎖のアルキル又はアシル基、又はアリール基である。）である。Ｒ２は、置換されたアリル基又は無置換アリル基である。
【００３７】
一態様では、本発明はｎが１である化合物を提供する。
【００３８】
本発明は、更に、下記構造を有する化合物を提供する。
【化５７】
0005484668.tif 000016
【００３９】
但し、ＲはＨ又は直鎖又は分岐鎖のアシル基である。Ｒ１はＨ、ＯＨ、ＮＨ２又はＮＨＲ４（但し、Ｒ４はＳＯ２Ｐｈ、直鎖又は分岐鎖のアルキル又はアシル基、又はアリール基である。）である。Ｒ２は置換されたアリル又は無置換アリルである。
【００４０】
本発明は、下記構造を有する化合物を提供する。
【化５８】
0005484668.tif 000017
【００４１】
但し、ＲはＨ又は直鎖又は分岐鎖のアシル基である。Ｒ１はＨ、ＯＨ、ＮＨ２又はＮＨＲ４（但し、Ｒ４はＳＯ２Ｐｈ、直鎖又は分岐鎖のアルキル又はアシル基、又はアリール基である。）である。Ｒ２は置換されたアリル又は無置換アリルである。ｎは１から１８の整数である。
【００４２】
一態様では、本発明は、ｎが１である化合物を提供する。
【００４３】
本発明は下記構造を有する化合物を提供する。
【化５９】
0005484668.tif 000018
【００４４】
但し、ＲはＨ又は直鎖若しくは分岐鎖のアシル基である。
【００４５】
本発明はまた、下記構造を有する化合物を合成する方法を提供する。
【化６０】
0005484668.tif 000019
【００４６】
但し、Ｒは置換されたアリル基又は置換アリル基である。
【００４７】
該方法は、（ａ）下記構造の化合物を合成すること、
【化６１】
0005484668.tif 000020
【００４８】
但し、Ｒはトリアルキルシリル、アリールジアルキルシリル、アルキルジアリールシリル又はトリアリールシリル基である。
【００４９】
（ｂ）ステップ（ａ）の化合物を下記構造の化合物と、適切な条件下で反応し、
【化６２】
0005484668.tif 000021
【００５０】
下記構造を有する化合物を形成すること、
【化６３】
0005484668.tif 000022
【００５１】
但し、Ｒはトリアルキルシリル、アリールジアルキルシリル、アルキルジアリールシリル又はトリアリールシリル基である。
【００５２】
（ｃ）ステップ（ｂ）で形成された化合物を下記構造を有する化合物と、適切な条件下で反応し、
【化６４】
0005484668.tif 000023
【００５３】
下記構造を有する化合物を形成すること、
【化６５】
0005484668.tif 000024
【００５４】
但し、Ｒはトリアルキルシリル、アリールジアルキルシリル、アルキルジアリールシリル又はトリアリールシリル基である。
【００５５】
（ｄ）ステップ（ｃ）で形成された化合物を適切な条件下で脱保護し、再度保護して下記構造を有する化合物を形成すること、
【化６６】
0005484668.tif 000025
【００５６】
但し、ＲはＴＩＰＳである。
【００５７】
（ｅ）ステップ（ｄ）で形成された化合物を適切な条件下でヨードスルホンアミド化し、下記構造を有する化合物を形成すること、
【化６７】
0005484668.tif 000026
【００５８】
（ｆ）ステップ（ｅ）で形成された化合物を下記構造を有する化合物と適切な条件下で反応し、
【化６８】
0005484668.tif 000027
【００５９】
下記構造を有する化合物を形成すること、
【化６９】
0005484668.tif 000028
【００６０】
但し、ＲはＨである。
【００６１】
（ｇ）ステップ（ｆ）で形成された化合物を適切な条件下で脱保護し、パーアセチル化して下記構造を有する化合物を形成すること、
【化７０】
0005484668.tif 000029
【００６２】
（ｈ）ステップ（ｇ）で形成された化合物を適切な条件下でエポキシド化し、そのエポキシドを形成し、適切な条件下で該エポキシドを反応して下記構造を有する化合物を形成すること、及び、
【化７１】
0005484668.tif 000030
【００６３】
但し、Ｒは置換されたアリル基又は無置換アリル基である。
【００６４】
（ｉ）ステップ（ｈ）で形成された化合物を適切な条件下で処理し、下記構造を有する化合物を形成すること、
【化７２】
0005484668.tif 000031
【００６５】
但し、Ｒは置換されたアリル基又は無置換アリル基である。
【００６６】
のステップを具備した方法である。上記方法において、種々の反応及び処理に必要な適切な条件は、以下の実験の詳細の部に見出しうる。しかし、示された特定の試薬及び溶媒、並びに反応又は処理に必要な特定の条件は、当業者に周知の他の適切な試薬、溶媒及び条件に置き換えうる。
【００６７】
アリル化合物は、アミン又はカルボン酸側鎖を介してペプチド又はタンパク質に結合される。本発明を実施する場合、生物複合体（bioconjugate）はBarnstein及びHallのプロトコールに従って製造される（Carbohydr. Res. 1980, 78, C1）。
【００６８】
アリル基はオゾン化され、アルデヒド及びカルボン酸の何れかを形成し、これは末端アミンと縮合され、それぞれイミン又はアミドを形成する。イミンは、水素化ホウ素ナトリウムでアミンに還元される。この他には、アルデヒドは、当分野で公知の手順を用いて還元的にアミノ化され、アミンを形成する。このアミンは側鎖末端カルボン酸と反応され、アミド複合体を形成する。
【００６９】
本発明は、治療に効果的な量の上記化合物及び薬学的に許容しうる担体を含有する薬学的組成物を提供する。
【００７０】
薬学的に許容しうる担体は、当業者に周知であり、これらには、０．０１〜０．１Ｍ、好ましくは０．０５Ｍのリン酸バッファー又は０．８％食塩水が含まれるが、これらに限定されない。加えて、このような薬学的に許容しうる担体は、水性若しくは非水性溶液、懸濁液、及びエマルジョンでありうる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物油、及びオレイン酸エチルのような注射可能な有機エステルである。水性担体には、食塩水及び緩衝媒体を含めた、水、アルコール性／水性溶液、エマルジョン又は懸濁液が含まれる。非経口ビヒクル（vehicles）には、塩化ナトリウム溶液、リンガーデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸化されたリンガー又は固定オイルが含まれる。静脈内ビヒクルには、液体及び栄養補給剤、リンガーデキストロース等をベースとするもののような電解質補給剤等が含まれる。防腐剤及び他の添加物も存在しうる。これは例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、不活性ガス等である。
【００７１】
本発明は、更に、ヘリコバクターピロリ（Helicobacter pylori）により起こる疾患に悩まされている患者を治療するための方法であって、治療に効果的な量の上記薬学的組成物を患者に投与し、これによって該疾患に悩まされている患者を治療することを具備した方法を提供する。
【００７２】
一態様では、本発明は、胃潰瘍又は十二指腸潰瘍に悩まされている患者を治療する方法を提供する。
【００７３】
もう一つの態様では、本発明は、胃部アデノカルチノーマに悩まされている患者を治療する方法を提供する。
【００７４】
加えて、本発明は、患者の胃上皮ヘのヘリコバクターピロリの接着を阻害する方法であって、患者の胃上皮ヘのヘリコバクターピロリの接着を阻害するのに効果的な、上記化合物の所定量を患者に投与することを具備した方法を提供する。
【００７５】
本発明はまた、下記構造を有する化合物を合成する方法を提供する。
【化７３】
0005484668.tif 000032
【００７６】
但し、ＲはＨである。
【００７７】
該方法は、（ａ）（ｉ）下記構造を有する化合物を適切な条件下でエポキシ化剤と反応し、エポキシドを形成すること、
【化７４】
0005484668.tif 000033
【００７８】
（ii）ステップ（ａ）（ｉ）で形成されたエポキシドを適切な条件下で、Ｒ４ＮＦ（但し、各Ｒは独立に、同じであるか、又は異なっており、直鎖又は分岐鎖のアルキル、アラルキル又はアリール基である。）で開裂し、フルオロアルコールを形成すること、及び（iii）ステップ（ａ）（ii）で形成されたフルオロアルコールを適切な条件下で、非求核性塩基及び式Ｃ６Ｈ５ＣＨ２Ｘ（但し、ＸはＢｒ、Ｃｌ、Ｉ又はＦである。）を有する有機ハライドでアルキル化し、下記構造を有する化合物を形成すること、
【化７５】
0005484668.tif 000034
【００７９】
（ｂ）（ｉ）下記構造を有する化合物を合成すること、
【化７６】
0005484668.tif 000035
【００８０】
（ｃ）（ｉ）ステップ（ｂ）で形成された化合物を適切な条件下でエポキシ化剤で処理し、エポキシドを形成すること、及び（ii）ステップ（ｃ）（ｉ）で形成されたエポキシドを下記構造を有する化合物と、
【化７７】
0005484668.tif 000036
【００８１】
適切な条件下でカップリングし、下記構造を有する化合物を形成すること、
【化７８】
0005484668.tif 000037
【００８２】
（ｄ）（ｉ）ステップ（ｃ）（ii）で形成された化合物を適切な条件下で非求核性塩基及び式Ｃ６Ｈ５ＣＨ２Ｘ（但し、ＸはＢｒ、Ｃｌ、Ｉ又はＦである。）を有する有機ハライドでアルキル化すること、及び（ii）ステップ（ｄ）（ｉ）で形成された化合物を適切な条件下で、Ｒ４ＮＦ（但し、各Ｒは独立に同じであるか、又は異なっており、直鎖又は分岐鎖のアルキル、アラルキル又はアリール基である。）で脱シリル化すること、（iii）ステップ（ｄ）（ii）で形成された化合物を適切な条件下で金属アルコキシドで処理し、脱保護された二糖を形成すること、及び（iv）ステップ（ｄ）（iii）で形成された二糖を適切な条件下でアルキル化し、下記構造を有する選択的に脱保護された二糖を形成すること、
【化７９】
0005484668.tif 000038
【００８３】
（ｅ）ステップ（ｄ）（iv）で形成された選択的に脱保護された二糖を適切な条件下で、ステップ（ａ）（iii）で形成された化合物とカップリングし、保護された三糖を形成すること、及び（ii）ステップ（ｅ）（ｉ）で形成された保護された三糖を適切な条件下で脱保護し、下記構造を有する三糖を形成すること、
【化８０】
0005484668.tif 000039
【００８４】
但し、ＲはＨである。
【００８５】
を具備する。ステップ（ａ）において、反応（ｉ）は、過酢酸、ｍ−クロロ安息香酸、トリフルオロ酢酸、及び過酸化水素を含めた種々のエポキシ化剤を用いて行われうる。好ましい試薬は、３，３−ジメチルジオキシランである。ジクロロメタンのような非求核性の不活性溶媒を使用する。反応（ａ）（ii）は、エーテル系溶媒を含めた溶媒の範囲、好ましくはテトラヒドロフラン中でテトラブチルアンモニウムフルオライドを含めた有機アンモニウムフルオライド塩を用いて行われうる。ステップ（iii）は、ＤＭＦのような非求核性溶媒中、水素化ナトリウムのような非求核性塩基を用いて行われうる。ステップ（ｂ）において、示された化合物は、本明細書で開示されるように調製されうる。ステップ（ｃ）（ｉ）は、ジクロロメタンのような非求核性の不活性溶媒中において、過酢酸、ｍ−クロロ安息香酸、トリフルオロ酢酸、及び過酸化水素を含めた種々のエポキシ化剤を用いて行われうるが、３，３−ジメチルジオキシランが好ましい。カップリングステップ（ｃ）（ii）は、ＴＨＦのような不活性溶媒中、塩化亜鉛のような金属触媒を用いて行われうる。ステップ（ｄ）（ｉ）は、ＤＭＦのような非求核性溶媒中、水素化ナトリウムのような非求核性塩基を用いて行われうる。ステップ（ｄ）（ii）において、脱シリル化は、エーテル系溶媒を含めた溶媒の範囲、好ましくはテトラヒドロフラン中、テトラブチルアンモニウムフルオライドを含めた有機アンモニウムフルオライドを用いて行われる。炭酸エステルは、メタノールのようなアルコール性媒体中、ナトリウムメトキシドのような金属アルコキシドを用いて開裂される。ステップ（ｄ）（iv）は、ベンゼンのような不活性溶媒中、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムブロマイドのような有機アンモニウムブロマイドの存在下において、（ｎ−Ｂｕ３Ｓｎ）２Ｏのような金属酸化物を用いて選択的に行われる。ステップ（ｅ）は、モレキュラーシーブを含む、エーテルのような溶媒中において、ＳｎＣｌ２のようなハロゲン化金属塩の存在下、過塩素酸銀及び２，６−ジ−ｔ−ブチルピリジンの存在下で行われるカップリングである。ＰＭＢの酸化的除去は、ＤＤＱのような酸化剤を用いて、不活性溶媒系（これは、好ましくは不均一系、例えば水／ジクロロメタンでありうる。）で行われうる。
【００８６】
本発明はまた、以下の構造を有する三糖セラミドを合成する方法を提供する。
【化８１】
0005484668.tif 000040
【００８７】
該方法は、（ａ）下記構造を有する三糖を合成すること、
【化８２】
0005484668.tif 000041
【００８８】
但し、ＲはＰＭＢである。
【００８９】
（ｂ）（ｉ）ステップ（ａ）で形成された三糖を適切な条件下でエポキシ化剤と反応し、三糖エポキシドを形成すること、及び（ii）ステップ（ｂ）（ｉ）で形成された三糖エポキシドを適切な条件下で下記構造を有する化合物と反応し、
【化８３】
0005484668.tif 000042
【００９０】
下記構造を有する保護された三糖セラミドを形成すること、
【化８４】
0005484668.tif 000043
【００９１】
（ｃ）（ｉ）ステップ（ｂ）（ii）で形成されたセラミドを適切な条件下でアルキル化すること、及び（ii）ステップ（ｃ）（ｉ）で形成された化合物を適切な条件下で選択的に脱保護し、三糖セラミドを形成すること、を具備する。
【００９２】
ステップ（ａ）において、三糖は本明細書に開示された方法で合成されうる。ステップ（ｂ）（ｉ）は、ジクロロメタンのような非求核性の不活性溶媒中、過酢酸、ｍ−クロロ安息香酸、トリフルオロ酢酸、及び過酸化水素を含めた種々のエポキシ化剤、好ましくは３，３−ジメチルジオキシランを用いて行われる。カップリングステップ（ｂ）（ii）は、ＴＨＦのような不活性溶媒中、セラミド前駆体のトリブチルスズエーテル及び塩化亜鉛のような金属触媒を用いて行われうる。ステップ（ｃ）（ｉ）において、アシル化は、ジクロロメタンのような不活性有機溶媒中、トリエチルアミン及びＤＭＡＰの存在下、直鎖又は分岐鎖のアルキル無水物、好ましくは無水酢酸、又はハライドを用いて行われる。ＰＭＢ保護基は、酸化的に、好ましくは先に説明したように除去される。
【００９３】
本発明は、更に、下記構造を有するメルカプト三糖を合成する方法を提供する。
【化８５】
0005484668.tif 000044
【００９４】
該方法は、（ａ）（ｉ）下記構造を有する化合物を合成すること、
【化８６】
0005484668.tif 000045
【００９５】
（ii）ステップ（ａ）（ｉ）の化合物を適切な条件下で下記構造を有する化合物とカップリングし、
【化８７】
0005484668.tif 000046
【００９６】
下記構造を有する二糖を形成すること、
【化８８】
0005484668.tif 000047
【００９７】
（ｂ）ステップ（ａ）（ii）で形成された二糖を適切な条件下で下記構造を有する化合物とカップリングし、
【化８９】
0005484668.tif 000048
【００９８】
下記構造を有する三糖を形成すること、
【化９０】
0005484668.tif 000049
【００９９】
（ｃ）ステップ（ｂ）で形成された三糖を適切な条件下でヨードスルホンアミド化し、下記構造を有するヨードスルホンアミドを形成すること、及び
【化９１】
0005484668.tif 000050
【０１００】
（ｄ）ステップ（ｃ）で形成されたヨードスルホンアミドを適切な条件下でチオラートと反応し、メルカプト三糖を形成することを具備する。
【０１０１】
ステップ（ａ）（ii）は、ステップ（ａ）（ｉ）の化合物（これは、本明細書で説明した方法で得ることができる。）を、ジクロロメタンのような非求核性の不活性溶媒中において過酢酸、ｍ−クロロ安息香酸、トリフルオロ酢酸及び過酸化水素を含めた種々のエポキシ化剤、好ましくは３，３−ジメチルオキシランと反応し、次いでステップ（ａ）（ii）のジオール単糖とカップリンすることによって行われる。ステップ（ａ）（ii）は、ＴＨＦのような不活性溶媒中、塩化亜鉛のような金属触媒を使用して行われうる。フルオロ糖（fluorosugar）とのカップリングは、モレキュラーシーブを含んだエーテルのような溶媒中、ＳｎＣｌ２のようなハロゲン化金属塩の存在下、過塩素酸銀及び２，６−ジ−ｔ−ブチルピリジンの存在においてステップ（ｂ）で行われる。ステップ（ｃ）は、モレキュラーシーブの存在下、Ｉ（coll）２パークロレート及びＰｈＳＯ２ＮＨ２を用いて行われる。ステップ（ｄ）はＤＭＦのような不活性溶媒中、アルキルチオール及びＬｉＨＭＤＳのような塩基を用いて行われる。
【０１０２】
本発明はまた、下記構造を有する六糖セラミドを合成する方法を提供する。
【化９２】
0005484668.tif 000051
【０１０３】
この方法は、（ａ）下記構造を有する化合物を適切な条件下で、
【化９３】
0005484668.tif 000052
【０１０４】
下記構造を有する化合物とカップリングし、
【化９４】
0005484668.tif 000053
【０１０５】
下記構造を有する化合物を形成すること、
【化９５】
0005484668.tif 000054
【０１０６】
（ｂ）ステップ（ａ）で形成された化合物を適切な条件下でエポキシ化剤と反応し、六糖エポキシドを形成すること、及び（ii）六糖エポキシドを適切な条件下で下記構造を有するスズエーテルと反応し、
【化９６】
0005484668.tif 000055
【０１０７】
六糖アルコールを形成すること、（ｃ）ステップ（ｂ）（ii）で形成された六糖アルコールを適切な条件下でアシル化し、下記構造を有する六糖アセテートを形成すること、
【化９７】
0005484668.tif 000056
【０１０８】
（ｄ）ステップ（ｃ）で形成された六糖アセテートを適切な条件下、パルミチン酸無水物の存在下で還元的にアシル化し、六糖セラミドを形成すること、（ｅ）六糖セラミドを適切な条件下で脱シリル化し、部分的に脱保護して、部分的に脱保護された六糖セラミドを形成すること、（ｆ）（ｉ）部分的に脱保護された六糖セラミドを適切な条件下で還元し、脱保護された六糖セラミドアセテートを形成すること、及び（ii）脱保護された六糖セラミドアセテートを適切な条件下でアシル化し、六糖セラミドパーアセテートを形成すること、及び（ｇ）六糖セラミドパーアセテートを適切な条件下でケン化し、六糖セラミドを形成すること、を具備する。
【０１０９】
ステップ（ａ）は、不活性溶媒中、モレキュラーシーブの存在下、メチルトリフレートのようなトリフレートエステルを用いて行われる。ステップ（ｂ）（ｉ）は、ジクロロメタンのような不活性溶媒中、過酢酸、ｍ−クロロ安息香酸、トリフルオロ酢酸、及び過酸化水素を含めた種々のエポキシ化剤、好ましくは３，３−ジメチルオキシランを用いて行われる。ステップ（ｂ）（ii）は、ＴＨＦのような不活性溶媒中、Ｚｎトリフレートのような金属塩の存在下においてセラミド前駆体のスズエーテル、好ましくはトリ−ｎ−ブチルスズエーテルを用いて行われる。ステップ（ｃ）はトリエチルアミン及びＤＭＡＰのような塩基の存在下で無水酢酸を用いて行われる。ステップ（ｄ）は、酢酸エチルのような不活性溶媒中、パルミチン酸無水物の存在下で、リンドラー触媒のような貴金属触媒及び水素ガスを用いて行われる。脱シリル化ステップ（ｅ）は、ＴＨＦ中でテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオライドのような有機アンモニウムフルオライドを用いて行われる。炭酸エステルは、メタノールのようなアルコール中、ＮａＯＭｅのような金属アルコキシドを用いて開裂される。ステップ（ｆ）（ｉ）において、還元は、液体アンモニア及びＴＨＦのような不活性溶媒中、リチウム又はナトリウムのような金属を用いて行われる。ステップ（ｆ）（ii）は、ジクロロメタンのような不活性溶媒中、Ｅｔ３Ｎ及びＤＭＡＰのような塩基の存在下で無水酢酸を使用して行われる。パーアセテートは、メタノールのようなアルコール中、ナトリウムメトキシドのような金属アルコキシドを用いてケン化される。
【０１１０】
本発明はまた、下記構造を有する六糖セラミドを合成する方法を提供する。
【化９８】
0005484668.tif 000057
【０１１１】
該方法は、（ａ）下記構造を有する化合物を適切な条件下で、
【化９９】
0005484668.tif 000058
【０１１２】
下記構造を有する化合物とカップリングし、
【化１００】
0005484668.tif 000059
【０１１３】
下記構造を有する六糖を形成すること、
【化１０１】
0005484668.tif 000060
【０１１４】
及び（ｂ）（ｉ）ステップ（ａ）で形成された六糖を、パルミチン酸無水物の存在下、適切な条件下で還元し、パルミトイルアミドを形成すること、（ii）適切な条件下でパルミトイルアミドをＲ４ＮＦ（各Ｒは独立に同じであるか、又は異なっており、直鎖又は分岐鎖のアルキル、アラルキル又はアリール基である。）で脱シリル化し、部分的に脱保護された六糖を形成すること、（iii）ステップ（ｂ）（ii）で形成された六糖を適切な条件下で脱保護し、脱保護された六糖を形成すること、（iv）ステップ（ｂ）（iii）で形成された六糖を適切な条件下でアシル化し、六糖セラミドパーアセテートを形成すること、及び（ｖ）六糖セラミドパーアセテートを適切な条件下でケン化し、六糖セラミドを形成することを具備する。
【０１１５】
ステップ（ａ）は、不活性溶媒中、モレキュラーシーブの存在下でメチルトリフレートのようなトリフレートエステルを用いて行われる。ステップ（ｂ）（ｉ）は、酢酸エチルのような不活性溶媒中、パルミチン酸無水物の存在下、リンドラー触媒のような貴金属触媒及び水素ガスを用いて行われる。ステップ（ｂ）（ii）は、ＴＨＦ中でテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオライドのような有機アンモニウムフルオライド塩を用いて行われる。ステップ（ｂ）（iii）において、還元は、液体アンモニア及びＴＨＦのような不活性溶媒中でリチウム又はナトリウムのような金属を用いて行われる、ステップ（ｂ）（iv）は、ジクロロメタンのような不活性溶媒中、Ｅｔ３Ｎ及びＤＭＡＰのような塩基の存在下で無水酢酸を用いて行われる。ステップ（ｖ）において、パーアセテートカーボネートは、メタノールのようなアルコール中、ナトリウムメトキシドのような金属アルコキシドを用いてケン化される。
【０１１６】
本発明はまた、下記構造を有するアリル六糖を合成する方法を提供する。
【化１０２】
0005484668.tif 000061
【０１１７】
該方法は、（ａ）下記構造を有する化合物を、適切な条件下で
【化１０３】
0005484668.tif 000062
【０１１８】
下記構造を有する化合物とカップリングし、
【化１０４】
0005484668.tif 000063
【０１１９】
但し、ＲはＨである。
【０１２０】
下記構造を有する六糖を形成すること、
【化１０５】
0005484668.tif 000064
【０１２１】
（ｂ）（ｉ）ステップ（ａ）で形成された化合物を適切な条件下でＲ４ＮＦ（但し、各Ｒは、独立に同じであるか、又は異なっており、直鎖又は分岐鎖のアルキル、アラルキル又はアリール基である。）で脱シリル化し、部分的に脱保護された六糖を形成すること、（ii）ステップ（ｂ）（ｉ）で形成された六糖を適切な条件下で脱保護すること、及び（iii）ステップ（ｂ）（ii）で形成された化合物を適切な条件下でパーアシル化し、下記構造を有する六糖パーアセテートを形成すること、
【化１０６】
0005484668.tif 000065
【０１２２】
（ｃ）（ｉ）ステップ（ｂ）（iii）で形成された六糖パーアセテートを適切な条件下でエポキシ化剤と反応し、六糖エポキシドパーアセテートを形成すること、（ii）ステップ（ｃ）（ｉ）で形成された六糖エポキシドパーアセテートを適切な条件下でアリルアルコールと処理し、アリル六糖パーアセテートを形成すること、及び（iii）アリル六糖パーアセテートを適切な条件下でケン化し、アリル六糖を形成すること、を具備する。
【０１２３】
ステップ（ａ）は、不活性溶媒中、モレキュラーシーブの存在下、メチルトリフレートのようなトリフレートエステルを用いて行われる。ステップ（ｂ）（ｉ）は、ＴＨＦ中、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオライド塩のような有機アンモニウムフルオライド塩を用いて行われる。ステップ（ｂ）（ii）は、メタノールのようなアルコール中、ナトリウムメトキシドのような金属アルコキシドを用いて行われ、次いで、液体アンモニア及びＴＨＦのような不活性溶媒中、リチウム、好ましくはナトリウムのような金属を用いて還元が行われる。ステップ（ｂ）（iii）は、ジクロロメタンのような不活性溶媒中、Ｅｔ３Ｎ及びＤＭＡＰのような塩基の存在下で無水酢酸を用いて行われる。ステップ（ｃ）（ｉ）は、ジクロロメタンのような非求核性の不活性溶媒中、過酢酸、ｍ−クロロ安息香酸、トリフルオロ酢酸、過酸化水素を含めた種々のエポキシ化剤、好ましくは３，３−ジメチルオキシランを用いて行われる。ステップ（ｃ）（ii）は、不活性溶媒中、アリルアルコールを用いて行われる、ステップ（ｃ）（iii）では、パーアセテートカーボネートは、メタノールのようなアルコール中、ナトリウムメトキシドのような金属アルコキシドを用いてケン化される。
【０１２４】
本発明は、下記構造を有する六糖を合成する方法を提供する。この方法は、
【化１０７】
0005484668.tif 000066
【０１２５】
（ａ）下記構造を有する化合物を適切な条件下で
【化１０８】
0005484668.tif 000067
【０１２６】
下記構造を有する化合物とカップリングし、
【化１０９】
0005484668.tif 000068
【０１２７】
下記構造を有する化合物を形成すること、
【化１１０】
0005484668.tif 000069
【０１２８】
（ｂ）（ｉ）ステップ（ａ）で形成された化合物を適切な条件下で、アシル化すること、及び（ii）ステップ（ｂ）（ｉ）で形成された化合物を適切な条件下でエポキシ化剤と反応し、下記構造を有するエポキシドを形成すること、
【化１１１】
0005484668.tif 000070
【０１２９】
（ｃ）（ｉ）エポキシドを適切な条件下でＲ４ＮＦ（但し、各Ｒは、独立に同じであるか、異なっており、直鎖又は分岐鎖のアルキル、アラルキル又はアリール基である。）で処理すること、及び（ii）ステップ（ｃ）（ｉ）で形成された化合物を適切な条件下でアルキル化し、下記構造を有する化合物を形成すること、
【化１１２】
0005484668.tif 000071
【０１３０】
但し、ＲはＨ又はアシルである。
【０１３１】
（ｄ）ステップ（ｃ）（ii）で形成された化合物を適切な条件下で下記構造を有する化合物とカップリングし、六糖を形成すること、を具備する。
【化１１３】
0005484668.tif 000072
【０１３２】
ステップ（ａ）は、不活性溶媒中、テトラフルオロホウ酸銀のような金属触媒を用いて行われる。ステップ（ｂ）（ｉ）は、ジクロロメタンのような不活性溶媒中、Ｅｔ３Ｎ及びＤＭＡＰのような塩基の存在下で無水酢酸を用いて行われる。ステップ（ｂ）（ii）は、ジクロロメタンのような非求核性の不活性溶媒中、過酢酸、ｍ−クロロ安息香酸、トリフルオロ酢酸、及び過酸化水素を含めた種々のエポキシ化剤、好ましくは３，３−ジメチルオキシランを用いて行われる。ステップ（ｃ）（ｉ）は、ＴＨＦ中、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオライドのような有機アンモニウムフルオライド塩を用いて行われる。ステップ（ｃ）（ii）は、不活性溶媒中、水素化ナトリウムのような非求核性塩基を用いて行われる。ステップ（ｄ）は、ジ−ｔ−ブチルピリジンのような不活性溶媒中で過塩素酸銀の存在下、二塩化スズのような金属塩触媒を用いて行われる。更なる変換は、保護された生成物、又はタンパク質若しくは他のキャリアーとの複合体を与える。
【０１３３】
本発明は更に、下記構造を有する化合物を提供する。
【化１１４】
0005484668.tif 000073
【０１３４】
但し、ｎは約０から約９の間の整数である。
【０１３５】
示されたアリルグリコシドは、本明細書で示したグリカールカップリング法を使用して製造され、これは、本明細書中で開示した一般的な反応を用いて、又は当分野で標準的な方法によりタンパク質キャリアーに結合されうる。例えば、アリルグリコシドは、本明細書に開示された化合物９ｂを適切に保護された８ｂとカップリングし、次いで１２ｂとカップリングし、更にアリルアルコールとカップリングして一連の適切な脱保護をすることによって製造されうる。
【０１３６】
本発明はまた、下記構造を有する化合物を提供する。
【化１１５】
0005484668.tif 000074
【０１３７】
但し、ｎは約０から約９の間の整数である。
【０１３８】
示されたアリルグリコシドは、本明細書で示したグリカールカップリング法、アリル化及び一連の脱保護を用いて製造され（図１２参照）、これは、本明細書中で開示した一般的な反応を用いて、又は当分野で標準的な方法によりタンパク質キャリアーに結合されうる。
【０１３９】
本発明はまた、下記構造を有する化合物を提供する。
【化１１６】
0005484668.tif 000075
【０１４０】
但し、ｎは約０から約９の間の整数である。
【０１４１】
示されたアリルグリコシドは、本明細書で示したグリカールカップリング法を用いて製造され、これは、本明細書中で開示した一般的な反応を用いて、又は当分野で標準的な方法によりタンパク質キャリアーに結合されうる。
【０１４２】
当業者によれば、種々の糖水酸基に対して保護基の組み合わせを変化することは、本発明の範囲内にある。
【０１４３】
本発明は、ヒト患者に抗体を誘導する方法であって、該抗体がヒト乳房腫瘍細胞と免疫反応し、該方法が、下記構造を有する化合物の所定量を単独で、又は抗体を誘導するのに効果的な、適切な免疫学的アジュバントに結合して該患者に投与することを具備した方法を提供する。
【化１１７】
0005484668.tif 000076
【０１４４】
一態様では、本発明は、誘導される抗体がＭＢｒ１抗体である方法を提供する。もう一つの態様では、本発明は、患者が臨床的に回復中である場合の方法、又は、患者が外科手術によって治療されている場合には、一部の切除されていない患部の発達を制限する方法を提供する。もう一つの態様では、本発明は、アジュバントがタンパク質キャリアー、バクテリア又はリポソームである方法を提供する。更にもう一つの態様では、本発明は、アジュバントがカルメット−ゲラン杆菌（ＢＣＧ）である方法を提供する。
【０１４５】
本発明は、患者内の乳ガンの再発を防止する方法であって、上に示された化合物を、単独で、又は適切な免疫学的キャリアー、アジュバント又はビヒクルに結合して患者にワクチン接種することを具備した方法を提供する。
【０１４６】
本発明はまた、患者に抗体を誘導する方法であって、該抗体がヒト乳房腫瘍細胞と免疫反応性であり、該方法が、下記構造を有する化合物の所定量を患者に、単独で、又は抗体を誘導するのに効果的な、適切な免疫学的アジュバントに結合して投与することを具備した方法を提供する。
【化１１８】
0005484668.tif 000077
【０１４７】
但し、ｎは約０から約９の間の整数である。
【０１４８】
一態様では、本発明は、誘導される抗体がＭＢｒ１抗体である方法を提供する。もう一つの態様では、本発明は、患者が臨床的に回復中である場合の方法、又は、患者が外科手術によって治療されている場合には、一部の切除されていない患部の発達を制限する方法を提供する。もう一つの態様では、本発明は、アジュバントがタンパク質キャリアー、バクテリア又はリポソームである方法を提供する。更にもう一つの態様では、本発明は、アジュバントがカルメット−ゲラン杆菌である方法を提供する。
【０１４９】
本発明は、患者内の乳ガンの再発を防止する方法であって、上に示された化合物を、単独で、又は適切な免疫学的キャリアー、アジュバント又はビヒクルに結合して患者にワクチン接種することを具備した方法を提供する。
【０１５０】
本発明はまた、患者に抗体を誘導する方法であって、該抗体がヒト乳房腫瘍細胞と免疫反応性であり、該方法が、下記構造を有する化合物の所定量を患者に、単独で、又は抗体を誘導するのに効果的な、適切な免疫学的アジュバントに結合して投与することを具備した方法を提供する。
【化１１９】
0005484668.tif 000078
【０１５１】
但し、ｎは約０から約９の間の整数である。
【０１５２】
一態様では、本発明は、誘導される抗体がＭＢｒ１抗体である方法を提供する。もう一つの態様では、本発明は、患者が臨床的に回復中である場合の方法、又は、患者が外科手術によって治療されている場合には、一部の切除されていない患部の発達を制限する方法を提供する。もう一つの態様では、本発明は、アジュバントがタンパク質キャリアー、バクテリア又はリポソームである方法を提供する。更にもう一つの態様では、本発明は、アジュバントがカルメット−ゲラン杆菌である方法を提供する。
【０１５３】
本発明はまた、患者内の乳ガンの再発を防止する方法であって、上に示された化合物を、単独で、又は適切な免疫学的キャリアー、アジュバント又はビヒクルに結合して患者にワクチン接種することを具備した方法を提供する。
【０１５４】
加えて、本発明は、患者に抗体を誘導する方法であって、該抗体がヒト乳房腫瘍細胞と免疫反応性であり、該方法が、下記構造を有する化合物の所定量を患者に、単独で、又は抗体を誘導するのに効果的な、適切な免疫学的アジュバントに結合して投与することを具備した方法を提供する。
【化１２０】
0005484668.tif 000079
【０１５５】
但し、ｎは約０から約９の間の整数である。
【０１５６】
一態様では、本発明は、誘導される抗体がＭＢｒ１抗体である方法を提供する。もう一つの態様では、本発明は、患者が臨床的に回復中である場合の方法、又は、患者が外科手術によって治療されている場合には、一部の切除されていない患部の発達を制限する方法を提供する。もう一つの態様では、本発明は、アジュバントがタンパク質キャリアー、バクテリア又はリポソームである方法を提供する。更にもう一つの態様では、本発明は、アジュバントがカルメット−ゲラン杆菌である方法を提供する。
【０１５７】
本発明はまた、患者内の乳ガンの再発を防止する方法であって、先に示された化合物を、単独で、又は適切な免疫学的キャリアー、アジュバント又はビヒクルに結合して患者にワクチン接種することを具備した方法を提供する。
【実施例】
【０１５８】
実験の詳細
一般的手順
全ての空気に敏感な反応及び湿気に敏感な反応は、特に示さない限り、アルゴン雰囲気下、炎で乾燥した装置中で行った。空気に敏感な液体及び溶液は、シリンジ又はカニューレを介して移し替えた。可能な場合には、反応を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）でモニターした。大まかな溶媒の除去は、Buchiロータリーエバポレーターで、アスピレータによる減圧下で行い、少量の溶媒は、真空ポンプにより０．１〜０．５mmHgで除去した。
【０１５９】
融点（ｍｐ）は矯正されておらず、エレクトロサーマルシリーズＩＡ９１００デジタル融点測定器を用い、軟質ガラスキャピラリー管で行った。
【０１６０】
赤外吸収スペクトル（ＩＲ）は、パーキン−エルマー１６００シリーズ、フーリエー変換装置を用いて記録した。サンプルは、特に断らない限り、ＮａＣｌプレート上にそのまま（neat）のフィルムとして調製した。吸収バンドは、波数（cm-1）で記録した。関連した帰属可能なバンドのみを報告した。
【０１６１】
プロトン核磁気共鳴（1Ｈ  ＮＭＲ）スペクトルは、ブルッカーＡＭＸ−４００スペクトロメーターを用い、４００ＭＨｚで測定した。ケミカルシフトは、テトラメチルシラン（ＴＭＳ；δ＝０ppm）からの低磁場をppmで記載した。多重度は通常の方式で略記した。即ち、ｓ＝一重線、ｄ＝二重戦、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｍ＝多重線、ｂｒ＝幅広である。
【０１６２】
炭素核磁気共鳴（１３Ｃ  ＮＭＲ）スペクトルは、ブルッカーＡＭＸ−４００スペクトロメーターを用い、複合パルスデカップリングをしながら１００ＭＨｚで測定した。サンプルは1Ｈ  ＮＭＲスペクトルと同様に調製し、ケミカルシフトは、ＴＭＳ（０ppm）に比して記載した。残留ＣＨＣｌ３を内部標準（δ＝７７．０ppm）として使用した。
【０１６３】
全ての高分解能質量分析スペクトル（ＨＲＭＳ）分析は、内部標準としてパーフルオロケロセン（ＰＦＫ）を用い、JEOL JMX-DX 303HF質量分析計で電子衝撃イオン化法（ＥＩ）により測定した。低分解能質量スペクトル（ＭＳ）は、Delsi-Nermag R-10-10質量分析計で、電子衝撃イオン化法（ＥＩ）又は示されたキャリアーガス（アンモニア又はメタン）を用いる化学イオン化法（ＣＩ）で測定した。ガスクロマトグラフィー／質量スペクトル（ＧＣＭＳ）に対しては、キャリアーガスとしてヘリウムを用い、ＤＢ−５を融解させたキャピラリーカラム（３０m、０．２５mm厚さ）を使用した。典型的な条件は、６０〜２５０℃、４０℃／分の温度プログラムを使用した。
【０１６４】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、プレコーティングされたガラスプレート（シリカゲル６０、０．２５mm厚さ）を用いて行った。視覚化は、２５４nmのＵＶランプを用いての発光、又はアニスアルデヒド染色液（３．５ml酢酸中の９．２mlのｐ−アニスアルデヒド、１２．５mlの濃硫酸及び３３８mlの９５％エタノール（ＥｔＯＨ））への浸漬と着色のための加熱により行った。
【０１６５】
フラッシュシリカゲルクロマトグラフィーは、標準のプロトコールに従って行った。
【０１６６】
特に断らない限り、全ての溶媒及び試薬は、市販品のグレードであり、以下に示す以外、購入したまま使用した。以下の溶媒は、かっこ内に示した乾燥方法を用いて、アルゴン下で蒸留した：ＣＨ２Ｃｌ２（ＣａＨ２）；ＴＨＦ（Ｎａ／ケチル）；Ｅｔ２Ｏ（Ｎａ／ケチル）；ジイソプロピルアミン（ＣａＨ２）。
【０１６７】
略語
ＯＴｆ                トリフレート
ＴＬＣ                薄層クロマトグラフィー
ＥｔＯＡｃ            酢酸エチル
ＴＩＰＳ              トリイソプロピルシリル
ＰＭＢ                ｐ−メトキシベンジル
Ｂｎ                  ベンジル
Ａｃ                  アセテート
ｈｅｘ                ヘキサン
ＴＨＦ                テトラヒドロフラン
ｃｏｌｌ              コリジン
ＬｉＨＭＤＳ          リチウム  ヘキサメチルジシラジド
ＤＭＦ                Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＡＰ              ２−ジメチルアミノピリジン
ＤＤＱ                ２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン
ＴＡＢＦ              テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオライド
Ｍ．Ｓ．              モレキュラーシーブ
ｒ．ｔ．              室温
ｒ．ｂ．              丸底フラスコ
例１
ポリマーに結合されたグリカール１８の調製
ポリマーに結合されたガラクタール７（５００mg；S.J. Danishefsky, et al., J. Am. Chem. Soc., 1992, 8331）を１００mlのポリマーフラスコに置き、減圧下に乾燥した。Ｎ２下、０℃に冷却し、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２０ml）及び新たに調製したMurray溶液（３０ml；R.W. Murray and R. Jeyaraman, J. Org. Chem. 1985, 2847）を加えた。０℃で〜９０分攪拌した後、溶液をＮ２の圧力を用いて濾過した。酸化の手順を繰り返した。得られた７のエポキシドを真空ラインに、乾燥するまで〜３時間保持した。グルカール１９の溶液（８mlの乾燥ＴＨＦ中１．０ｇ）を加え、混合物を−２３℃（ドライアイス−ＣＣｌ４）でで冷却した。ＺｎＣｌ２のＴＨＦ溶液（０．８ml、１．０Ｍ）を加えた。混合物をゆっくりｒ．ｔ．に暖め（〜２時間以上）、次いで一夜ｒ．ｔ．で攪拌した。ポリマーに結合したグルカール１８を３×２０mlのＴＨＦで軽く洗浄し、真空ラインで乾燥した。
【０１６８】
ポリマーに結合された四糖２０の調製
ポリマーに結合されたグルカール１８及びＳｎ（ＯＴｆ）２（０．０８ｇ、１．９２mmol）を混合し、減圧下に乾燥した。Ｎ２下で０℃に冷却し、ジ−ｔ−ブチルピリジン（１．７ml、７．５７mmol）を含む、フコシルドナー１０の２０ml乾燥ＴＨＦ溶液を加えた。混合物をゆっくりｒ．ｔ．に暖め、一夜攪拌した。ポリマーを２×２０mlの乾燥ＴＨＦ、２×２０mlの乾燥ジオキサン、２０mlのＤＭＳＯ、及び２×２０mlのＴＨＦで洗浄した。得られたポリマーに結合した四糖２０を真空ラインに保持し、乾燥した。
【０１６９】
四糖グリカール２１の調製
ポリマーに結合された四糖２０（５０mg）を２mlのＴＨＦ中で攪拌し、各０．２mlの、ＴＢＡＦ及びＡｃＯＨのＴＨＦ１．０Ｍ溶液で処理した。混合物を一夜４０℃で攪拌した。ポリマーを３×５mlのＴＨＦで洗浄した。合わせた洗浄液を濃縮し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーにかけ（２：１  ＥｔＯＡｃ：ｈｅｘ）、無色のゴム状物として四糖グリカール２１を得た。収量９．０mg。
【０１７０】
例２
ジオール１８’の調製
ガラクタール７’（０．１００ｇ；０．３０４mmol）の５ml乾燥ＣＨ２Ｃｌ２溶液を、０℃、Ｎ２雰囲気下で、１０mlのMurray溶液（新たに調製したもの）で処理し、０℃で４０分攪拌した。ＴＬＣ（１；１  ＥｔＯＡｃ：ｈｅｘ）では、７’の痕跡は全く示されなかった。溶媒を、乾燥Ｎ２気流を用いて蒸発させた。残渣としての７’のエポキシドを真空ラインに〜２時間保持した。Ｎ２雰囲気下でエポキシドにグルカール誘導体３’（０．１５０ｇ、０．４９６mmol）の３ml乾燥ＴＨＦ溶液を加えた。−７８℃に冷却し、ＺｎＣｌ２の１．０ＭＥｔ２Ｏ溶液（０．５０ml、０．５０mmol）を加えた。混合物をゆっくりｒ．ｔ．に暖め（〜２時間以上）、一夜攪拌した。ＴＬＣ（１：１  ＥｔＯＡｃ：ｈｅｘ）は、反応が完結したことを示した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ml）を加え、次いで混合物をＥｔＯＡｃ（３×２０ml）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥した。シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（１：３  ＥｔＯＡｃ：ｈｅｘ）で、無色の固体としてジオール１８’を得た。収量：１７３mg（８９％）。［α]D２３  −９．８°（ｃ＝１．０、ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０１７１】
四糖２２の調製
ジオール１８’（８６mg、０．１３３mmol）及びフコシルドナー１０（０．２９０ｇ、０．６６５mmol）を、ベンゼンを用いて、共沸して乾燥した。この混合物を０．６５mlのジ−ｔ−ブチルピリジンと共に３mlの乾燥ＴＨＦに溶解し、次いで、カニューレを介してＳｎ（ＯＴｆ）２（０．３０ｇ、０．７２mmol）及び４ÅのＭＳ（５００mg）を含有するフラスコに、０℃、Ｎ２雰囲気下で加えた。混合物を０℃で、〜７時間攪拌した。ＴＬＣ（１：３  ＥｔＯＡｃ：ｈｅｘ）によりジオール１８’の痕跡は全く示されなかった。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ml）とＥｔＯＡｃ（２×１００ml）の間に分配した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥した。有機層をＥｔＯＡｃを用いてシリカを通して濾過し、粗生物を得た。該粗生物を、次にシリカのクロマトグラフィー（１：９  ＥｔＯＡｃ：ｈｅｘ）で精製し、四糖２２を得た。収量：１７０mg（８６％）。
【０１７２】
ヨードスルホンアミド２３の調製
手順１
四糖グリカール２２（１２０mg、８１．１mmol）及びＰｈＳＯ２ＮＨ２（２０mg、０．１３mmol）をベンゼンを用いて共沸により乾燥した。４ÅのＭＳ（０．２ｇ）を加えた（グローブバッグ）。Ｎ２下で０℃に冷却した後、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１．０ml）を加えた。混合物を、炎で乾燥したセライト及び４ÅのＭＳのプラグを通し、カニューレを介して、Ｉ（coll）２ＣｌＯ４の溶液（１００mgのＡｇ（coll）２ＣｌＯ４、５mlのコリジン、及び６０mgのＩ２から１mlの乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中で調製した。）で処理した。混合物を０℃で４０分攪拌した。ＴＬＣ（１：４  ＥｔＯＡｃ：ｈｅｘ）により、主成分としてヨードスルホンアミド２３が示された。混合物を、セライトを通して濾過し、これをＥｔ２Ｏで軽く洗浄した。有機層を、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液、飽和ＣｕＳＯ４水溶液、食塩水で抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。シリカのカラムクロマトグラフィー（１：４  ＥｔＯＡｃ：ｈｅｘ）により、無色の固体としてヨードスルホンアミド２３を得た。収量：１１５mg（８０％）。
【０１７３】
手順２
四糖グリカール２２（２００mg、０．１３５mmol）、ＰｈＳＯ２ＮＨ２（４２mg、０．２７mmol）、及び２００mgの粉末状４ÅＭＳの２．０ml乾燥ＣＨ２Ｃｌ２溶液を、０℃、Ｎ２雰囲気下で、Ｉ（coll）２ＣｌＯ４（１２０mgのＡｇ（coll）２ＣｌＯ４及び６７mgのＩ２から１mlの乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中で調製した。）と処理した。混合物を０℃（ホイルを用いて光から保護した。）３０分攪拌した。ＴＬＣ（１：２  ＥｔＯＡｃ：ｈｅｘ）により、若干のグリカールと共に、主にヨードスルホンアミドが示された。０℃で更に〜１時間後、ＴＬＣでは、観測しうる改善は見られなかった。混合物を、セライトを通して濾過し、これをＥｔ２Ｏで洗浄し、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液、飽和ＣｕＳＯ４水溶液、食塩水で抽出した後、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥した。シリカのカラムクロマトグラフィー（１：３  ＥｔＯＡｃ：ｈｅｘ）で、無色固体として２３を得た。
【０１７４】
収量：１６５mg（６９％）。［α]D２３＝−８５．７°（ｃ＝１．０、ＣＨ２Ｃｌ２）。
【０１７５】
六糖２５の調製
ヨードスルホンアミド２３（６０mg、３４mmol）を３５mlのｒ．ｂ．中で、２００mgの粉末状４ÅＭＳ（グローブバッグ）で処理した。Ｎ２下で、このフラスコに保護されたラクタール２４のＴＨＦ溶液（１．５ml）を加えた。混合物を−７８℃に冷却し、ＡｇＢＦ４（４０mg、０．２０６mmol）の０．２５ml乾燥ＴＨＦ溶液を加えた。混合物を攪拌し、ゆっくり一夜ｒ．ｔ．に暖めた。混合物を４５℃に暖め、〜３５時間攪拌した。ＴＬＣでは、微量のヨードスルホンアミドのみが示された。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（５ml）を加え、混合物を３×１０mlのＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥した。シリカのカラムクロマトグラフィー（１：３  ＥｔＯＡｃ：ｈｅｘ）により、無色の油状物として２５を得た。収量：４２mg（５５％）
［α]D２３＝−３３．８°（ｃ２．０、ＣＨ２Ｃｌ２）
六糖２５ａの調製
六糖２５（５５mg、２４．４mmol）の〜１．５mlＴＨＦ溶液を、０℃でＴＢＡＦ（０．２５ml、１．０ＭＴＨＦ溶液、０．２５mmol）で処理し、ｒ．ｔ．で一夜攪拌した。ＴＬＣ（１：９  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）により、２５ａと、より極性の低い物質の３：１混合物が示された。追加の１．０ＭＴＢＡＦ（０．１０ml）を加え、混合物をｒ．ｔ．で一夜攪拌した。ＴＬＣは、反応が完結したことを示した。溶媒を、Ｎ２の気流を用いて除去した。シリカのクロマトグラフィー（１：１９  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）で、〜１：２の、２種類の化合物に相当する混合物を得た。該２種類の混合物は、２，４−環状カーボネート基が存在するか、存在しないかのみが異なる。粗収量：２種類の生成物の全重量として３５mg。粗製混合物は、そのまま次の反応に使用した。
【０１７６】
パーアセチル化された六糖２６の調製
六糖２５ａ（３６mg）の０．２５ml乾燥ＴＨＦ溶液を、〜８mlの明るい青色のＮａ／ＮＨ３溶液に、−７８℃（ドライアイス浴）、Ｎ２雰囲気下でカニューレを介して加えた。ドライアイス浴を除去した後、混合物を還流したＮＨ３（ドライアイスコンデンサー）中で１５分攪拌した。２mlの乾燥ＭｅＯＨを（ゆっくり！）加えた後、得られた混合物を、Ｎ２気流を吹き込んでＮＨ３を除去しながら攪拌した。ＭｅＯＨ溶液をDowex 50 X8 [H+]でｐＨが〜８から９になるまで処理し、次いで、濾過した。樹脂をＭｅＯＨで洗浄した。残渣を濃縮し、真空ラインに保持して乾燥した。Ｎ２雰囲気下で、残渣を１mlの乾燥ピリジン及び０．５mlのＡｃ２Ｏで処理し、一夜ｒ．ｔ．で撹拌した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）で、六糖２６が主要成分であることが示された。濃縮し、残渣をシリカのカラムクロマトグラフィー（１：４  ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ）で精製した。
【０１７７】
六糖１７の調製
六糖２６（１０．０mg、６．３mmol）を０℃、Ｎ２下で０．５mlの乾燥ＣＨ２Ｃｌ２で処理した。ジオキシラン溶液（０．２０ml）を加え、混合物を０℃で〜４０分攪拌した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）では、痕跡量の２６も示されなかった。溶媒をＮ２気流で蒸発させた。エポキシドを真空ラインで〜２時間乾燥した。エポキシドを、Ｎ２雰囲気下で０．５mlのアリルアルコール（塩基性アルミナを通して乾燥させたもの）及び０．５ml乾燥ＴＨＦで処理した。−７８℃に冷却し、乾燥Ｅｔ２Ｏ中の１．０ＭのＺｎＣｌ２（１０ml）を加えた。ゆっくりｒ．ｔ．に暖めた後、混合物を一夜攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５ml）を加え、混合物を３×５mlのＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、油状物になるまで濃縮した。該油状物を真空ラインで〜２時間乾燥した。残渣を、ピリジン：Ａｃ２Ｏ（２：１、１．５ml）で一夜攪拌しながら処理した。溶媒を除去し、残渣をシリカのカラムクロマトグラフィー（１：４  ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ）で精製し、無色の固体として六糖１７を得た。収量：５．５mg。
【０１７８】
結果と考察
複合体形成可能な形態での、ルイスＹ血液型決定子の高収斂合成
Ｌｅｙ決定子の構築は、図２に示されるように、ラクタール（１ａ）から開始される（W.N. Haworth, E.L. Hirst., M.M.T. Plant, R.J.W.Reynolds, J. Chem. Soc., 1930, 2644）。両一級水酸基を、これらのＴＢＤＰＳエーテルとして標準的な条件下で保護し、３’及び４’ヒドロキシ官能基は、環状カーボネートとして一つの基で保護される２ａ。２つのα−結合したフコース残基の立体特異的な導入によって四糖グリカール３ａが、一段階で、５１％の収率で得られる。使用されるドナーは、公知のフルオロ糖５ａ（S.J. Danishefsky, J. Oriyama, D.A. Griffith, C-H. Wong, D.P. Dumas, J. Am. Chem. Soc., 1992, 114, 8329）であり、Mukaiyamaのオリジナルの条件を修飾して調製した（T. Mukaiyama, Y. Murai, S. Shoda, Chem. Lett., 1981, 431）。グリカール３ａは、グルコース残基のＮ−アセチル官能基を欠くＬｅｙハプテンに相当する。次に、問題は、この基、並びにガラクトーススペーサーモジュールを導入することである。
【０１７９】
先に開発された方法論（D.A. Griffith, S.J. Danishefsky, "On the Sulfonamidoglycosilation of Glycals. A Route to Origosaccharides With 2-Amidohexose Subynits+", J. Am. Chem. Soc., 1990, 112, 5811）は、これらの目的を達成するのに適していることが判明した。グリカール３ａをヨードニウムジコリジンパークロレート及びベンゼンスルホンアミドと処理し、ヨードスルホンアミド４ａを得る。テトラフルオロホウ酸銀の存在下、ガラクタール（９ａ）の３−スタニルエーテルを用いるアザグリコシル化（S.J. Danishefsky, K. Koseki, D.A. Griffith, J. Gervay, J.M. Peterson, F.E. McDonald, T. Oriyama, J. Am. Chem. Soc., 1992, 114, 8331）で五糖グリカール６ａを図３に示すように７５％の収率で得た。６ａが得られれば、一連のアザグリコシル化を繰り返すか、該グリカールをそのエポキシドとして活性化し、更にグリコシル化を続けることができる。Ｌｅｙハプテンが複合体形成可能な形態に変形できることを示すためには、アリルグリコシドの形成が重要である。スルホンアミド基を目的のアセトアミド基に変換する可能性を示した。グリカール６ａを示されたように二段階で脱保護する。パーアセチル化してアセトアミドグリカール７ａを得た。ジメチルジオキシランで該グリカールをそのエポキシドに活性化し（R.L. Halcomb, S.J. Danishefsky, J. Am. Chem. Soc., 1989, 111, 6661）、次いで塩化亜鉛の存在下においてアリルアルコールでエポキシドを開環し、所望のパーアセチル化されたβ−アリル五糖が得られる。該五糖を、メトキシドを作用させて脱アセチル化し、標的のＬｅｙハプテンをそのβ−アリルグリコシド８ａとして得た。（８ａ：[α]D -72.7°(c.1 MeOH); IR(薄層フィルム) 3350, 2940, 2900, 2830, 1650, 1550, 1365, 1300, 1155, 1070, 1030; 1H NMR(400 MHz, CD3OD)δ5.95(m, 1H), 5.32(d, J=17.25 Hz, 1H), 5.14-5.19(m, 2H), 5.04(d, J=3.83 Hz, 1H), 5.02(d, J=3.50 Hz, 1H). 4.68(d, J=8.15 Hz, 2H), 4.51(d, J=5.70 Hz, 1H) 3.40-4.38(m, 27H). 1.96(s, 3H), 1.23(m, 6H); HRMS(FAB) cald for C35H56NO24Na 900.3325 found 900.3310）。
【０１８０】
８ａのオゾン化によって誘導されるアルデヒドは、Bernstein及びHallの方法でキャリアータンパクと複合体形成されうる。
【０１８１】
この合成は、公知のＬｅｙ決定子への最も直接的なルートである（O. Hindsgaul, T. Norberg, J. Le Pendu, R.U. Lemieux, Carbohydr. Res. 1982, 109, 109; U. Spohr, R.U. Lemieux, ibid, 1988, 174, 211；以前の合成に対しては、J.C. Jacquinet, P. Sinay, J. Org. Chem., 1977, 42, 720; S. Nilsson, H. Lohn, T. Norberg, Glycoconjugate J. 1989, 6, 21; R.R. Schmidt, a. Topfer, Tetrahedron Lett. 1991, 32, 3353; W. Kinzy, A. Low, Carbohydrate. Res. 1993, 245, 193を参照）。この方法は、各ステップで立体特異的であり、これは、ドナーとアクセプターの双方としてグリカールが幅広く利用可能であることを示しており、１，２−グリカールエポキシド及び推定されるこれらのＮ−スルホニルアジリジン対照物を利用することができる。この方法は、多数の類似体の製造を可能にし、複合体形成の戦略のバリエーションを広げることができる。
【０１８２】
３ａ及び６ａの合成を以下に示す。
【０１８３】
３ａ：２．００ｇ（２．４７mmol）のラクタールカーボネート２ａに、４．４４ｇ（９．８６mmol）のフコシルフルオライド５ａを加えた。混合物を５回ベンゼンで共沸し、２時間高真空下に置いた。アルゴン雰囲気下で、２．７７ml（１２．３３mmol）のジ−ｔ−ブチルピリジン及び１６mlの乾燥エーテルを加えた。２．０ｇの新たに活性化した４Ａモレキュラーシーブを加え、混合物を１時間室温で攪拌した。アルゴンのグローブバック中で、２．３４ｇ（１２．３３mmol）の塩化第一スズ（ＳｎＣｌ２）及び２．５６ｇ（１２．３３mmol）の過塩素酸銀（ＡｇＣｌＯ４）を加えた。フラスコに還流冷却器を付け、反応物を７２時間還流させた。反応を、５mlの飽和重炭酸塩で停止させ、セライトのバッドを通して濾過した。５０mlの酢酸エチルで希釈し、飽和重炭酸塩で２回、飽和硫酸銅で２回、及び飽和食塩水で２回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。２０％酢酸エチル／ヘキサンでフラッシュクロマトグラフィーにかけ、２．１０ｇ（５１％）の白色発泡体の３ａを得た。
【０１８４】
3a: [α]D-78.9(c.555, CHCl3); IR(薄層フィルム) 3040, 3000, 2905, 2860, 2830, 1820, 1800, 1710, 1635, 1585, 1570, 1480, 1460, 1440, 1415, 1370, 1350, 1300, 1260, 1205, 1145, 1100, 950, 735, 695, 1H NMR(400MHz, CDCl3)δ8.09(d, J=8.12 Hz, 2H), 8.00(d, J=8.26 Hz, 2H) 7.66(m, 4H), 7.59(d= J=6.74 Hz, 4H), 7.56(t, J=7.27 Hz, 1H), 7.30-7.50(m, 22H) 7.16-7.26(m, 10H) 7.09(m, 2H), 6.99(t, J=7.59 Hz, 2H) 6.89(t, J=7.97 Hz, 1H), 6.43(d, J=6.08 Hz, 1H), 5.46(bs, 1H), 5.38(bs, iH), 5.35(d, J=3.42 Hz, 1H), 4.89(d, J=11.35 Hz, 1H), 4.75-4.80(m, 4H), 4.72(d, J=5.88 Hz, 2H), 4.69(d, J=4.27 Hz, 2H), 4.36-4.55(m, 5H), 4.28(q, J=6.51 Hz, 1H), 4.17(bd, J=5.46 Hz, 1H), 3.90-4.00(m, 6H), 3.85(d, J=2.99 Hz, 1H), 3.82(d, J=2.89 Hz, 1H), 3.56-3.78(m, 4H), 1.07(m, 24H); HRMS(FAB): calcd for C99H106O20Si2Na 1694.6740 found 1694.6787.
６ａ：２３０mg（０．１２mmol）のヨードスルホンアミド４ａを、乾燥ベンゼンで５回共沸し、高真空下に２時間置いた。１５等量のスズエステル９ａ（５６１mg（１．８０mmol）の６ａ−ＴＩＰＳ−ガラクタール及び６７３μｌ（１．３２mmol）のビス（トリブチルスズ）オキシドの８０mlベンゼン溶液から、新たに活性化した４Ａモレキュラーシーブを備えたDean-Starkトラップを用いて水を一夜共沸して除くことによって調製した。）の２．４mlのＴＨＦ溶液を加えた。この溶液にアルゴン雰囲気下、攪拌しながら２００mgの新たに活性化した４Ａモレキュラーシーブを加えた。室温で１時間攪拌した。−７８℃に溶液を冷却し、カニューレを介して、１８７mg（０．９６mmol）のテトラフルオロホウ酸銀の２．４mlＴＨＦ溶液を加えた。１５時間以上かけて室温に暖め、明るい黄色に変わった反応物に２mlの飽和重炭酸塩を加えて反応を停止させた。反応混合物をセライトのパッドを通して分液ロートに濾過した。セライトのパッドを酢酸エチルで徹底的に洗浄した。有機層を飽和重炭酸塩で２回、及び飽和食塩水で２回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥した。濃縮し、２５％酢酸エチル／ヘキサンでクロマトグラフィーにかけ、１９３mg（７５％）の白色発泡体６ａを得た。
【０１８５】
6a: [α]D-126.4°(c, 505, CHCl3), IR(薄層フィルム) 3500, 3040, 3000, 2905, 2840, 1820, 1800, 1705, 1635, 1590, 1440, 1410, 1255, 1195, 1100, 1080, 1035, 815, 730, 695; 1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ8.09(app t, 4H), 7.08-7.65(m, 46H), 6.90(t, J=7.65 Hz, 3H), 6.76(d, J=6.91 Hz, 2H), 6.12(d, J=6.59 Hz, 1H), 5.50(bs 1H), 5.45(bs 1H), 5.28(app t, 2H), 3.03-4.91(m, 36H), 1.09(m, 45H); LRMS (FAB): cald for C120H141NO26SSi3Na 2153 found 2153.
固体支持体上での複雑に分岐したオリゴ糖ドメインの組立のための戦略：生物複合体形成可能な形態でのルイスｂドメインの簡潔な合成への応用
Ｌｅｂ（タイプ１）ドメインの組立は、ラクタールを便利な出発物質として使用するＬｅｙ（タイプ２）標的よりも相対的にかなり困難な仕事である。タイプ１決定子の場合、ラクタールは有効な出発物質ではない。Ｌｅｂ系の合成では、ポリマーをベースとしたオリゴ糖構築方法を適用する機会があった（S.J. Danishefsky, K.F. McCLure, J.T. Randolph, R.B. Ruggeri, Science 1993, 260, 1307）。この戦略は、図４にまとめてある。この戦略では、ポリマーに結合されたグリカール１を１，２−アンヒドロ誘導体２の直接の変換を経て糖供与用に活性化する。２と受容体であるグリカール３の反応で４が得られる。直接のエポキシ化と受容体３との反応を繰り返す。この方法の自己管理性及び合成の最後での簡単な「１回の」精製は、有用な特性である。
【０１８６】
本発明は、ポリマー結合法の重要な追加の側面を開示する。このロジックは図５に示されている。各グリコシル化で、唯一のＣ２水酸基が生じる、原則的には（及び実際には、以下を参照）、この水酸基は、溶液ベースのドナーとの反応で糖受容体として機能しうる。支持体にまだ保持されている５のグリカール結合は、更に伸長されうる。この方法では、Ｃ２での分岐は保護基の使い分けの要求を最小限にしながら達成される（複雑なサポニンの合成でのこの戦略の応用に対して、J.T. Randolph, S.J. Danishefsky, J. Am. Chem. Soc., 1993, 115, 8473を参照）。
【０１８７】
原則的には、この分岐は、伸長する鎖の何れの位置でも実行することができる。このような伸長に対しては、伸長するドメインの「ポリマー側」（非還元末端）上に生じる全ての先に生じた水酸基をふさぐ必要があるであろう。従って、ポリマーに結合されたオリゴ糖は、適切な場合には、ドナー又はアクセプターとして供される。
【０１８８】
糖鎖を小さな単位に分割する際に最初に払われた努力によって、四糖グリカール６を同定した。これは最終目的としてのＨ−タイプの血液型特異性に結びつく。ポリマーに支持されたガラクタール７（ポリマー支持体として、刊行物に記載された手順を用いて機能化された１％ジビニルベンゼンで架橋されたポリスチレンを使用した：T-H. Chan, W.-Q. Huang, J. Chem,. Soc., Chem. Commun. 1985, 909; M.J. Farrall. J.M.J. Frechet, J. Org. Chem., 1976, 41, 3877）を３，３−ジメチルジオキシラン（R.W. Murray, R. Jeyaraman, J. Org. Chem. 1985, 50, 2847）の溶液と反応し、対応する１，２−アンヒドロ糖グリコシルドナーを得る。これを、ＺｎＣｌ２の存在下、グルカール誘導体８の溶液で処理し、９（R.L. Halcomb, S.J. Danishefsky, J. Am. Chem. Soc. 1989, 111, 6661）を得る。このポリマーに結合された二糖は、Ｓｎ（ＯＴｆ）２の存在下におけるフコシルフルオライド１０（K.C. Nicoloau, C.W. Hummel, Y. Iwabuchi, J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 3126）の溶液との処理で、グリコシルアクセプターとして作用し、１１を与える。テトラブチルアンモニウムフルオライド（ＴＢＡＦ）を用いて、支持体から三糖グリカールを回収し、７から５０％の全収率で１２を得た。
【０１８９】
次に、ポリマーから回収された三糖は更なる合成に使用することができる。この目的に対しては、化合物１２をＴＩＰＳＣｌとの反応でシリルエーテル１３に変換する。該シリルエーテルをＰｈＳＯ２ＮＨ２の存在下、Ｉ（coll）２ＣｌＯ４を作用させてヨードスルホンアミド誘導体１４に変換した。ＡｇＢＦ４の存在下での１４とグリカールスズエステル誘導体１５との反応で、１６を７７％の収率で得た（D.A. Griffith, S.J. Danishefsky, J. Am. Chem. Soc. 1990, 112, 5811）。四糖グリカール１６を脱保護し、パーアセチル化して、６を得た（S.J. Danishefsky, K. Koseki, D.A. Griffith, J. Gervay, J.M. Peterson, F.E.  MsDonald, T. Oriyama, J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 8331）。
【０１９０】
このように、連続したポリマー−ベース及び溶液−ベースの方法によって、完全なＨ−タイプの決定子の合成を達成した。次の標的は、より複雑なＬｅｂ六糖１７でる。方法は、図６に示したような手順に従った。ポリマーに結合されたガラクタール７を、３，３−ジメチルジオキシランでエポキシ化し、次いで、グルカール誘導体１９と反応し１８に変換する。次に、二糖ジオールををＳｎ（ＯＴｆ）２の存在下でフコシルドナー１０を用いてビスフコシル化し、２０を得る。ＴＢＡＦで支持体から回収し、２１を得た。これは、７から４０％の全収率で得られた。化合物２１を、ＴＩＰＳＣｌと反応し、２２を得た。
【０１９１】
Ｉ（coll）２ＣｌＯ４とＰｈＳＯ２ＮＨ２を用いて、２２から得られるヨードスルホンアミド２３を、ＡｇＢＦ４の存在下でラクタール誘導体２４と反応し、六糖グリカール２５を５５％の収率で得た。２５の脱保護は２段階で達成され（シリルエーテルを除去するためのＴＢＡＦと、これに続く、芳香族保護基を除去するためのＮａ／ＮＨ３還元）、粗生成物をパーアセチル化し、２６を５１％の全収率で得た。化合物２６を、１，２−アンヒドロ糖誘導体を経て、アリルグリコシド１７に変換した。これは、Bernstein及びHallの方法でタンパク質と引き続きカップリングするために、オゾン分解でアルデヒド（Ｒ＝ＣＨ２ＣＨＯ）に活性化しうる。
【０１９２】
要するに、本発明は、生物認識に重要な分岐パターンを含む、複雑な炭水化物ドメインの合成のための固体支持体グリカール組立法に拡張される。特に、ヒト胃上皮組織へのH. pyloriの結合に対する決定子が、保護基の操作の一部の複雑さを十分に回避しながら簡単に、立体特異的に形成される。
【０１９３】
実験手順：
６：1H NMR(400 MHz, CDCl3); δ6.39(d, 1H, J=6.2 Hz, H1ガラクタール), 5.65(d, 1H, J=8.9 Hz, NHAc), 5.35(d, 1H, J=3.8 Hz), 5.33(m, 1H), 5.29(d, 1H, J=2.6 Hz), 5.27(d, 1H, J=3.1 Hz), 5.17-5.09(m, 2H), 4.97-4.90(m, 2H), 4.81(dd, 1H, J=3 Hz, J=6.1 Hz, H2ガラクタール), 4.75(d, 1H, J=8.0 Hz), 4.52(m, 1H), 4.48(dd, 1H, J=12.0 Hz), 4.44-4.06(m, 8H), 3.88-3.77(m, 4H), 3.61(m, 1H), 2.18-1.97(m, 33H, COCH3), 1.18(d, 3H, J=6.5 Hz, CH3フコース); 13C NMR(CDCl3): δ170.80, 170.77, 170.72, 170.67, 170.62, 170.34, 170.21, 170.09, 170.01, 169.99, 169.65, 144.92(C1ガラクタール), 100.22, 98.83, 98.58, 95.55, 74.48, 73.38, 73.13, 73.06, 71.48, 71.01, 70.68, 67.97, 67.42, 67.18, 67.05, 65.94, 64.83, 62.35, 62.22, 60.88, 60.37, 54.21, 23.23, 22.15, 20.85, 20.82, 20.79, 20.76, 20.65, 20.61, 20.57, 15.51, (C6フコース); IR(薄層フィルム): 3368.7(NH), 2965.6, 2934.6, 1746.5(C=O), 1537.5, 1435.9, 1371.3, 1228.5, 1065.0, 1046.0; [α]D23=-51.1°(c 1.8, CH2Cl2); HRMS(FAB); calcd. for C46H63NNaO28: m/z=1100.3434, found 1100.3436.
２１：ポリマー結合されたガラクタール７（０．８５mmolグリカール／ｇを導入）を、フリット化した吹き出し口を備えた丸底フラスコに置き、これをＣＨ２Ｃｌ２にＮ２下で懸濁し、０℃に冷却し、次いで３，３−ジメチルジオキシランの溶液で処理した。この混合物を、０℃で４０分（テフロン（登録商標）でコートした磁気撹拌棒で）攪拌し、この後、可溶物をフリット化した吹き出し口を介して（Ｎ２圧）で濾過して除いた。ポリマーに結合された１，２−アンヒドロ糖を、次の段階用に物質を乾燥するため、数時間排気（約０．１Torr）した。この物質を再度Ｎ２下に置き、次いで１９（ＴＨＦ中、０．５Ｍ溶液として〜１０モル等量）で処理した。この懸濁液を−４０℃に冷却し、ＺｎＣｌ２（ＴＨＦ中、１．０Ｍ溶液として〜２モル等量）で処理した。反応混合物をゆっくりｒｔまで暖め（約２時間以上）、次いで更に３〜４時間攪拌した。可溶物を濾過により除き、ポリマー１８をＴＨＦで数回洗浄し、次いで減圧下に乾燥した。化合物１８に、グローブバッグ中で、固体状のＳｎ（ＯＴｆ）２（〜等モル量）を加え、混合物をＮ２下に置き、０℃に冷却し、その後１０（ＴＨＦ中、０．２Ｍ溶液として、〜５モル等量）及びジ−tert−ブチルピリジン（〜８モル等量）で処理した。この懸濁液をｒｔまで暖め、８〜１０時間攪拌した。混合物を無水ＴＨＦ（２回）、ジオキサン（２回）、再度ＴＨＦで軽く洗浄し、次いで減圧下に乾燥した。化合物２０（１００mg）をＴＨＦに懸濁し、ＡｃＯＨとＴＢＡＦの１：３混合物（ＴＢＡＦ中、〜０．２Ｍ、〜１０モル等量）で処理し、混合物を４０℃で１８時間攪拌した。ポリマーをＴＨＦ（３回）で軽く洗浄し、洗浄液を合わせ、濃縮し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（１：１ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）で精製した。化合物２１（１８mg）を無色固体として得た（７から４０％の全収率）。
【０１９４】
1H NMR(400 MHz, CDCl3): δ7.40-7.25(m, 30H, Ar H), 6.18(d, 1H, J=6.0 Hz, H1 , グルカール), 5.26(d, 1H, J=3.5 Hz, H1フコース), 5.09(d, 1H, J=3.7 Hz, H1フコース), 4.96(t, 2H, J=10.8 Hz, PhCH2), (4.90-4.56(m, 13H), 4.43(m, 1H), 4.15-4.06(m, 4H), 3.97(dt, 1H, J=8.3 Hz, J=2.4 Hz), 3.87-3.65(m, 10H), 3.64(d, 1H), 3.57(d, 1H), 2.69(br, 1H, OH), 2.52(br, 1H, OH), 1.11(d, 3H, J=7.0 Hz, CH3フコース), 1.09(d, 3H, J=7.0 Hz, CH3フコース); 13C NMR(CDCl3); δ153.37(C=O), 145.75(C1グルカール), 138.60, 138.52, 138.19, 137.61, 128.55, 128.52, 128.44, 128.24, 128.16, 128.07, 127.62, 127.56, 127.45, 98.71, 98.38, 97.65, 97.34, 79.26, 78.87, 78.67, 78.01, 77.79, 77.65, 76.37, 76.10, 74.92, 74.40, 74.16, 73.95, 72.86, 72.64, 72.53, 67.43, 67.29, 61.31, 60.90, 16.65(C6フコース), 16.53(C6フコース); IR(薄層フィルム): 3467.0(OH), 3029.6, 2923.6, 1807.2(C=O), 1647.3, 1496.0, 1453.5, 1358.1, 1240.2, 1095.6, 1049.2, 738.5, 697.2; [α]D23=-82.5°(c 0.4, CH2Cl2); HRMS(FAB); calcd. for C67H74NaO18: m/z=1189.4772, found 1189.4757.
２５：２３（６０mg、３４μmol）及び粉末状の４Ａモレキュラーシーブ（２００mg）の混合物へ、Ｎ２下でカニューレを介して２４（０．２１mmol）の無水ＴＨＦ（１．５ml）溶液を加えた。この攪拌懸濁液を、−７８℃に冷却し、次いでＡｇＢＦ４（０．２１mmol）の０．２５ml無水ＴＨＦ溶液で処理した。この混合物を攪拌し、ゆっくりと一夜ｒｔに暖めた。明るい黄色になった懸濁液を、攪拌しながらＴＬＣ（２．５  ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）で２３の痕跡が全く示されなくなるまで更に３６時間加熱した。この混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ（５ml）で処理し、次いでＥｔＯＡｃ（３×１０ml）で抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィ（１：３  ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）で精製し、無色の油状物として２５（４２mg、５５％）を得た。
【０１９５】
1H NMR(400 MHz, アセトン-d6): δ8.17(d, 2H, J=7.3 Hz, PhSO2), 7.50-7.20(m, 33H, ArH), 6.52(d, 1H, J=10.5 Hz, NH), 6.30(dd, 1H, J=6.0 Hz, H1グルカール), 5.35-5.32(m, 2H), 5.25(d, 1H, J=7.9 Hz), 5.15(m, 2H), 4.99-4.92(m, 3H), 4.86-4.52(m, 14H), 4.45(dd, 1H, J=7.91 Hz, J=2.4 Hz), 4.32-4.23(m, 3H), 4.22(dd, 1H), 4.17(d, 1H, J=10.1 Hz), 4.08-3.84(m, 18H), 3.79-3.73(m, 2H), 3.66(m, 1H), 3.55(t, 1H, J=6 Hz), 3.50(dd, 1H, J=9.7 Hz), 1.33(d, 3H, J=6.5 Hz, CH3フコース), 1.31(d, 3H, J=6.4 Hz, CH3フコース), 1.20-0.98(m, 84H, 3x Si(i-Pr)3); 13C NMR(アセトン-d6), 145.66(C=O), 132.72, 131.48, 131.45, 131.28, 131.16, 130.77, 130.48, 121.31, 120.11, 119.86, 119.78, 119.25, 95.63, 94.70, 91.37, 89.64, 89.31, 86.52, 73.38, 72.24, 71.00, 70.71, 70.37, 69.80, 69.59, 69.06, 68.23, 67.92, 67.38, 67.10, 66.49, 65.67, 65.33, 64.60, 64.34, 64.03, 63.45, 63.30, 59.46, 58.83, 58.37, 54.45, 53.32, 49.86, 19.67(C6フコース), 18.42(C6フコース), 9.55, 9.48, 9.45, 9.31, 9.23, 3.82, 3.70, 3.64; IR(薄層フィルム): 3491.9(OH), 3030.1, 2941.2, 2865.5, 1835.8, 1819.5, 1649.8, 1496.2, 1462.3, 1349.9, 1245.5, 1155.2, 1095.1, 1049.4, 882.2, 734.8, 692.0; [α]D23=33.8°(c 2.0, CH2Cl2); HRMS(FAB): calcd for 12C12013CH179NNaO29SSi4: m/z=2278.1292, found 2278.1296.
１７： 1H-NMR(400 MHz, CD3OD): δ6.00(m, 1H, J=5.6 Hz, CH2CH=CH2), 5.37(dd, 1H, J=1.6 Hz, J=7.3 Hz, CH2CH=CH2), 5.20(dd, 1H, J=1.6 Hz, J=9.5 Hz, CH2CH=CH2), 5.18(d, 1H, J=3.9 Hz, H1フコース), 5.10(d, 1H, J=3.8 Hz, H1フコース), 4.64(d, 1H, J=6.9 Hz), 4.45(d, 1H, J=7.4 Hz), 4.43-4.23(m, 2H), 4.27(dd, 1H, J=9.3 Hz, J=10.6 Hz), 4.23-4.11(m, 2H), 4.02-3.29(m, 31H), 2.06(s, 3H, NAc), 1.31(d, 3H, J=6.6 Hz, CH3フコース, 1.29(d, 3H, J=6.6 Hz, CH3フコース); 13C NMR(CD3OD): δ173.2(C=O), 135.73(CH2CH=CH2), 105.13, 103.30, 102.49, 101.62, 99.63, 96.86, 80.79, 80.67, 78.44, 76.67, 76.49, 75.89, 74.80, 74.59, 73.94, 73.61, 73.40, 71.55, 71.38, 71.16, 70.42, 70.26, 70.14, 67.77, 67.30, 67.21, 62.79, 62.34, 61.99, 55.54, 22.97 (NAc), 16.65(2 C's, C6フコース); IR(薄層フィルム): 3376.6 (OH), 2924.2, 1652.5(C=O), 1383.1, 1032.4; [α]D23=-12.8°(c 0.25, MeOH); HRMS(FAB): calcd. for C41H69NNaO29: m/z=1062.3853, found 1062.3837.
ヒト乳房腫瘍関連抗原の合成に応用されるグリカール組立法
本発明は、六糖の収斂的合成であって、２つの三糖ドメインがカップリングに容易に反応しうる形態で効果的に組み立てられたものを提供する。ＡＢＣ三糖の合成を図８に示す。この三糖のα−結合は、確立された条件（Gordon, D.M.; Danishefsky, S.J., Carbohydrate Res., 1990, 206, 361-366）を用いて、フルオロ糖ドナー４ｂを使用して形成されうる。適切な二糖アクセプターの調製は、５ｂ（Danishefsky, S.J.; Behar, V.; Randolph, J.T.; Lloyd, K.O., J. Am. Chem. Soc., 1995, 0000）から開始される。５ｂ自身は、グリカールのカップリングから得られる。ベンジル化と、次の脱シリル化、カーボネートの除去、及び選択的なジベンジル化で二糖６ｂが得られる。このようにして得られたアクセプターを、修飾されたMukaiyamaの条件（Mukaiyama, T.; Murai, Y.; Shoda, S., Chem.Lett., 1981, 431-433）を使用してフルオロ糖４ｂと反応し、三糖グリカール７ｂを得た。ＰＭＢエーテルを脱保護し、ＡＢＣ三糖８ｂを得た。これを適切なＤＥＦ三糖ドナーとのカップリングに使用した。
【０１９６】
ＤＥＦ三糖の合成を図９に示した。ガラクタール９ｂのエポキシ化とアクセプター１０ｂとの標準のカップリング（Halcomb, R.L.; Danishefsky, S.J., J. Am. Chem. Soc., 1989, 111, 6661-6666）で位置選択的に二糖１１ｂを得た。フルオロ−フコース１２ｂを使用したフコシル化（Dejter-Juszynski, M.; Flowers, H.M., Carbohydr. Res., 1973, 28, 61）で、５：１の比のモノグリコシル化位置異性体を得た。主異性体は所望の三糖１３ｂであった。この物質を、標準的な条件下で処理し、トランス−ジアキシャルヨードスルホンアミド１４ｂを得た。
【０１９７】
１４ｂのようなヨードスルホンアミドを用いるＡＢＣ三糖受容体との直接のカップリング（Griffeth, D.A.; Danishefsky, S.J., J. Am. Chem. Soc., 1990, 112, 5811-5819; Danishefsky, S.J.,; McDonald, F.E.; Oriyama, T., J. Am. Chem. Soc., 1992, 114, 8331-8333）はうまくいかず、三糖中に異なったドナー官能基を導入した。実際には、ヨードスルホンアミド１４ｂを過剰のリチウムエタンチオレートで処理し、エチルチオグリコシド１５ｂを得た（図１０）。本発明者らにより確立された先例により、１５ｂから所望のβ−結合した生成物を与える、スルホンアミドの関与を予想することができる（Griffith, D.A., Ph.D.学位論文、エール大学、１９９２年）。ドナー１５ｂを、アクセプター８ｂの存在下でＭｅＯＴｆと処理すると、１０：１の六糖異性体混合物が得られた。主生成物１６ｂが７０〜８５％の収率で得られた。
【０１９８】
セラミドの結合と、最終生成物の取得は、１６ｂのエポキシ化と、引き続きのＺｎ（ＯＴｆ）２で促進されるスズエーテル１７ｂとの反応で開始される（Liu, K.K.-C.; Danishefsky, S.J., J. Am. Chem. Soc., 1993, 115, 4933-4934）。このセラミドカップリングの収率は低いが、この反応が三糖７ｂで行われた場合、対応する生成物が６６％の収率で得られた。次にこの物質を使用して１８ｂを得た。アセチル化の後、セラミド側鎖を、パルミチン酸無水物の存在下でＨ２下においてリンドラー触媒を用いてアジド官能基を還元し、１８ｂを得た。脱シリル化とケン化を行った後、金属を溶解しての脱保護を行い、ＭｅＯＨで反応を停止した。粗製混合物をパーアセチル化し、次いでケン化することでグリコスフィンゴリピッド１ｂを得た。アノメリックプロトンのケミカルシフト及びカップリング定数のみが天然物に対して報告されている。合成した１ｂのスペクトルはこのデータと完全に一致した。更に、この生成物を精密質量分析、並びに１Ｈ及び１３Ｃ  ＮＭＲで特徴づけた。合成した物質はまた、モノクローナル抗体ＭＢｒ１に結合することが示された。
【０１９９】
加えて、本発明は対応するアリルグリコシドを提供する（図１１）。上記のような１６ｂの脱保護、及びアセチル化で、六糖グリカールのパーアセテートを得た。エポキシ化、アリルアルコールとの反応、及びケン化でアリルグリコシド１９ｂを得た。
【０２００】
Ｌｅ決定子の場合と同様に、１９ｂのアリル基のオゾン分解を、タンパク質のリジン残基への還元的カップリングに向けた段階として行った。
【０２０１】
３ｂの合成：
３−Ｏ−（４−メトキシベンジル）−Ｄ−ガラクタール
Ｄ−ガラクタール（２ｂ）（３．７０ｇ、２５．３mmol）及びジブチルスズオキシド（６．３０ｇ、１．０等量）の乾燥ベンゼン（１５０ml）懸濁液を、水を共沸により除去しながら、２時間還流下に加熱した。反応物を冷却し、ＰＭＢＣｌ（３．８０ml、１．１等量）及びテトラブチルアンモニウムブロマイド（９．１０ｇ、１．１等量）で処理し、４時間還流した。反応物をシリカカラムを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（４：１）で溶出した。生成物を含むフラクションを濃縮し、残渣をヘキサンで粉末化し、４．５０ｇ（６７％）の生成物を白色の結晶性固体として得た。
【０２０２】
mp(ヘキサン), 117-118°C; (a)23= -23.0°(CHCI3, c=1.1); IR(KBr) 3313(br), 1645, 1513, 1228, 1082, 821 cm-1 1H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ7.28(2H, d, J=8.4 Hz), 6.89(2H, d, J=8.4 Hz), 6.44(1H, dd, J=6.4 Hz), 4.70(1H, dt J=6.3, 1.9 Hz), 4.59-4.52(2H, ABq, J=11.4 Hz), 4.20-4.18(1H, m), 4.04-3.97(1H, m), 3.90-3.82(2H, m), 3.81(3H, s), 2.73(1H, d, J=3.1 Hz, C4-OH), 2.54(1H, dd, J=8.2, 4.2 Hz, C6-OH); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ159.46, 145.02, 142.05, 129.46, 113.95, 99.36, 76.12, 70.17, 70.14, 63.65, 62.74, 55.26; LRMS(NH3) 284(M+ NH4)+, 266(M)+, 249.
４，６−ジ−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ−（４−メトキシベンジル）−Ｄ−ガラクタール（３ｂ）
３−Ｏ−（４−メトキシベンジル）−Ｄ−ガラクタール（２．２８ｇ、８．５６mmol）及び臭化ベンジル（３．７５ml、３．６８mol等量。新たに塩基性アルミナを通したもの）のＤＭＦ（３０ml）溶液を、Ｎ２下、０℃でＮａＨ（１．３７ｇ、４．０mol等量）で二回分けて処理した。反応物を０．５時間０℃で、更にｒｔで１時間攪拌した。反応物を５０ｇの砕いた氷に注意深くあけ、１００mlの水で希釈し、次いでＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１、１００ml×３）で抽出した。有機抽出物を水（１００ml×２）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。１５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンでフラッシュクロマトグラフィーにかけ、３．５８ｇ（９４％）の表題化合物を透明な液体として得た。
【０２０３】
[α]23D=-48.2°(CHCI3, c=0.85); IR(neat) 3030, 2867, 1645, 1613, 1513, 1247, 1092, 821, 736 cm-1; 1H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ7.34-7.23(12H, m), 4.62(1H, d, J=12.0 Hz), 4.59-4.51(2H, ABq, J=11.7 Hz), 4.50-4.39(2H, ABq, J=11.9 Hz); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) δ159.04, 143.99, 138.30, 137.90, 130.43, 128.26, 128.20, 128.03, 127.77, 127.57, 127.56, 113.67, 100.00, 75.58, 73.28, 73.17, 71.13, 70.42, 70.28, 68.35, 55.15; LRMS(NH3) 464(M+ NH4+, 100), 326(18), 309(48), 253(17)。
【０２０４】
４ｂの合成
ガラクタール３ｂ（３．２０ｇ、７．１７mmol）のＣＨ２Ｃｌ２溶液を、Ｎ２下、０℃でジメチルジオキシラン（０．０９Ｍ、８０ml）で処理し、全てのガラクタールが消費されるまで（０．５〜１時間、ＴＬＣ  ヘキサン中３０％のＥｔＯＡｃ）攪拌した。揮発成分を乾燥Ｎ２の気流で０℃において除去した。残渣を３０mlの乾燥ＴＨＦにＮ２下、０℃で溶解し、ＴＢＡＦ（３６ml、モレキュラーシーブ上で保存したもの）で処理し、次いで周囲温度で２０時間攪拌した。暗褐色の溶液を、シリカのパッド（〜４cmの深さ）を通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（２００ml）で洗浄した。濾液を水（２００ml×３）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濃縮した。残渣を３０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン（５０ml）に再溶解し、シリカの短いカラム（１０cm d×４cm h）を通して濾過し、同じ溶媒系（１Ｌ）で洗浄した。濾液を濃縮し、２．５９ｇのフルオロヒドリンを＞９０％の純度で得た。残渣を、Ｎ２下、０℃で乾燥ＤＭＦ（３０ml）に溶解し、臭化ベンジル（９５８μｌ、１．５等量、塩基性アルミナを通して新たに濾過したもの）で、最後にＮａＨ（３２２mg、６０％懸濁物、１．５等量）で処理し、０℃で３０分、ｒｔで３０分攪拌した。反応物を１００ｇの氷にあけて、反応を停止し、１：１  ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（１５０ml×２）で抽出した。有機抽出物を水（１５０ml×２）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、減圧下に濃縮した。１０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンでフラッシュクロマトグラフィーにかけ、２．００ｇ（４９％）の表題化合物を黄色がかった液体として得た。
【０２０５】
[α]23D= +15.3°(CHCl3, c=0.85); IR (CHCl3フィルム) 2916, 1612, 1513, 1248, 1103, 1056, 734cm-1; 1H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ7.35-7.24(17H, m), 6.84(2H, d, J=8.4 Hz), 5.15(1H, dd, J=53.2, 7.0 Hz), 4.92(1Hz, d, J=11.6 Hz), 4.48-4.74(2H, ABq, J=11.8 Hz), 3.96-3.89(1H, m), 3.86 (1H, br s), (3H, s), 3.65-3.56(3H, m), 3.51(1H, dd, J=9.8, 2.8 Hz); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ159.22, 138.33, 138.11, 137.62, 130.16, 129.19, 128.40, 128.29, 128.21, 128.04(2C), 127.90, 127.81, 127.69, 127.59, 113.77, 110.20(d, J=214 Hz), 80.60(d, J=11.3 Hz), 79.00(d, J=20.5 Hz), 74.92, 74.52, 73.59(d, J=5.0 Hz), 73.54, 72.99, 72.70, 68.34, 55.20; LRHS(NH3) 454(M + NH4+, 100)。
【０２０６】
６ｂの合成
ＴＩＰＳ−カーボネートガラクタール５ｂ（Danishefsky, S.J.; Behar, V.; Randolph, J.T.; Lloyd, K., J. Am. Chem. Soc., 1995, 0000）（４．２８ｇ、５．６２mmol）のＴＨＦ（２５ml）−ＭｅＯＨ（５ml）溶液をＴＢＡＦ溶液（１．０Ｍ、６．７５ml、１．２等量）で処理した。６時間後、追加のＴＢＡＦ（４ml）を加え、更に３時間攪拌した。反応物を濃縮し、４：１  ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで直接にクロマトグラフィーにかけ、２．２０ｇのトリオールを得た。環状カーボネートの残りの混合物及び混合カーボネートを、ＭｅＯＨ中でＭｅＯＮａ（１．０ml、２５ｗｔ％）で加水分解し、クロマトグラフィーで精製した。全収量は３．０２ｇ（９３％）であった。この物質を直接ジベンジル化のステップに使用した。
【０２０７】
1H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ7.35-7.24(15H, m), 6.43(1H, d, J=6.3 Hz), 4.87(1H, dd, J=6.3, 3.4 Hz), 4.84(1H, d, J=11.4 Hz), 4.63(2H, 明確な s), 4.61(1H, d, J=11.4 Hz), 4.53-4.47(3H, m), 4.19-4.16(3H, m), 3.87-3.84(2H, m), 3.78-3.66(3H, m), 3.46(2H, 明確な d, J=4.6 Hz), 3.29(1H, t, J=5.5 Hz), 3.08(1H, br), 2.73(2H, br); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) δ144.70, 138.41, 138.22, 137.83, 128.45, 128.33(2C), 128.12, 127.84, 127.73, 127.64, 127.57, 102.28, 99.74, 78.99, 76.03, 74.64, 74.07, 73.24(2C), 73.17, 72.64, 70.20, 69.10, 67.79, 62.15.
上記のようにして得たトリオールグリカール（２．９５ｇ、５．１mmol）、ジブチルスズオキシド（１．３３ｇ、１．０５等量）及びビストリブチルスズオキシド（１．６９ml、０．６５等量）の乾燥ベンゼン（５０ml）混合物をＮ２下で、水を共沸により除去しながら、５時間還流した。反応物を沸点以下に冷却し、臭化ベンジル（２．４３ml、４．０モル等量）及びテトラブチルアンモニウムブロマイド（３．２９ｇ、２．０等量）で処理した。ベンゼン１０mlを蒸留で除き、反応物を１６時間還流した。反応物を直接にシリカカラムに導入し、１５〜２０％のＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出して、３．４８ｇ（９０％）の生成物６ｂを透明な油状物として得た。
【０２０８】
[α]23D= -3.3°(CHCl3, c=0.87); IR(CHCl3フィルム) 2867, 1652, 1454, 1364, 1097, 736cm-1; 1H-MNR(400 MHz, CDCl3) δ7.35-7.21(25H, m), 6.45(1H, d, J=6.2 Hz), 4.88(1H, dd, J=6.2, 3.9 Hz), 4.83(1H, d, J=10.9 Hz), 4.69(2H, 明確な s), 4.68(1H, d, J=10.9 Hz), 4.59(2H, 明確な s), 4.55(1H, d, J=7.8 Hz), 4.49(2H, 明確な s), 4.47(2H, 明確な s), 4.29(1H, dd, J=9.6, 5.8 Hz), 4.18(1H, t, J=4.4 Hz), 4.13 (1H, m), 3.99(1H, br s), 3.85(1H, dd, J=10.6, 6.4 Hz), 3.75-3.60(4H, m), 3.47-3.41(2H, m); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) δ144.43, 138.64, 138.42, 137.99, 137.84, 137.80, 128.40, 128.34, 128.26, 128.23, 128.18, 128.15, 127.82, 127.75, 127.69, 127.67, 127.65, 127.55, 127.51, 127.46, 127.31102.56, 99.56, 80.57, 78.69, 75.72, 75.10, 73.57, 73.32, 72.94, 72.28, 71.94, 70.12, 68.90, 67.85, 66.62; LRMS(NH3) 776(M + NH4+, 100)。
【０２０９】
７ｂの合成
ラクタール６ｂ（１．３２ｇ、１．７４mmol、１．０等量）及びフルオロ糖４ｂ（１．４９ｇ、２．６０mmol、１．５等量）をエーテル中で混合し、濃縮した。この混合物を、乾燥ベンゼン（２５ml×２）でエバポレーションして乾燥し、真空中で２時間乾燥し、次いでグローブバッグ中でジ−ｔ−ブチルピリジン（３８９uL、１．０等量）で処理し、窒素雰囲気下で乾燥エーテル（１８ml）に溶解した。別の５０mlフラスコに、４Ａ  Ｍ．Ｓ．（４．０ｇ）を入れ、減圧下に炎で乾燥し、室温に冷却した。無水過塩素酸銀（３６０mg、１．０等量）及びＳｎＣｌ２（３２９mg、１．０等量）をグローブバッグ中で加え、窒素でフラッシュした。塩混合物を水浴中に置き、糖の溶液を、両方に先端を設けた針を通して導入し、混合物を２分間超音波にかけた。反応物をアルミニウムホイルでラップし、４５時間ｒｔで攪拌した。濾液（２００ml）を希ＮａＨＣＯ３（１００ml×２）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濃縮した。１５〜２０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンでフラッシュクロマトグラフィーにかけ、三糖（１．１０７ｇ、４９％）と不純なラクタールを得た。三糖部分を２％エーテル−塩化メチレンで再度クロマトグラフィーにかけ、８７９mg（３９％）の所望のα−生成物及び１９５mg（８．６％）のβ−生成物を得た。不純物を含むラクタールのフラクションを３〜４％のエーテル−塩化メチレンで再度クロマトグラフィーにかけ、４７９mg（３６％）の純粋なラクタールを得た。回収された出発物質を基にして７７％のカップリング（６１％のα−生成物）収率であった。
【０２１０】
[α]23D=+41.8°(CHCl3, c=1.8); IR(CHCl3フィルム) 2867, 1648, 1513, 1496, 1453, 1364, 1248, 1097, 735 cm-1; 1H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ7.33-7.12(42H, m) 6.83(2H, d, J=8.4 Hz), 6.45(1H, d, J=6.0 Hz), 5.03(1H, d, J=2.3 Hz), 4.91-4.76(6H, m), 4.68-4.40(12H, m), 4.23-3.97 (11H, m), 3.86-3.82(1H, dd, J=2.3 Hz), 3.76(3H, s), 3.69-3.64(2H, m), 3.53(1H, t, J=8.7 Hz), 3.47-3.43(1H, m), 3.40-3.36(1H, m), 3.34-3.31(1H, dd, J=9.9, 2.8 Hz), 3.22(1H, dd, J=8.3, 4.8 Hz); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) δ158.93, 144.59, 138.98, 138.84, 138.78, 138.64, 138.58, 138.06, 138.02(2C), 130.82, 129.04, 128.33, 128.24, 128.21, 128.15, 128.08, 128.05, 127.83, 127.81, 127.72, 127.64, 127.58, 127.55, 127.50, 127.44, 127.41, 127.36, 127.33, 127.31, 113.65, 103.02, 100.39, 100.01, 80.93, 78.93, 78.70, 76.53, 76.11, 75.14, 74.84, 74.79, 74.35, 73.91, 73.59, 73.36, 73.15, 73.10, 72.98, 72.15, 72.10, 71.99, 70.55, 69.25, 67.92(2C), 67.69, 55.19。
【０２１１】
８ｂの合成
ＰＭＢ−三糖（３７mg、０．０２８mmol）のＣＨ２Ｃｌ２（１ml）溶液を０℃に冷却した。この反応物を、シリカカラムに直接導入し、２０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出して所望の生成物を２８mg（８４％）得た。
【０２１２】
[α]23D= +45.6°(CHCl3, c=1.78); IR(CHCl3フィルム) 2866, 1648, 1496, 1453, 1248, 1097, 735 cm-1; 1H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ7.36-7.15(40H, M), 6.43(1H, d, J=6.2 Hz), 5.09, (1H, d, J=3.3 Hz), 4.85(1H, dd, J=6.2, 3.6 Hz), 4.83-4.65(5H, m), 4.61-4.41(9H, m), 4.29-4.08(8H, m), 4.02(1H, d, J=2.6 Hz), 3.97(1H, d, J=2.2 Hz), 3.93(1H, t, J=8.4 Hz), 3.86-3.78(2H, m), 3.67-3.61(2H, m), 3.53(1H, dd, J=8.5, 4.8 Hz); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) δ144.38, 138.78, 138.62, 138.47, (2C), 138.20, 138.00, 137.88, (2C, 128.31, 128.29, 128.23, 128.19 , 128.16, 128.05, 127.88, 127.83, 127.62, 127.57, 127.49, 127.45, 127.43, 127.41, 127.37, 127.32, 127.23, 102.68, 99.89, 99.34, 80.82, 78.72, 77.49, 77.10, 75.88, 75.13, 75.03, 74.23, 73.62, 73.05, 73.01, (3C), 72.62, 72.19 (2C), 70.46, 69.66, 68.92, 67.85, 67.74, 67.54。
【０２１３】
１１ｂの合成
グリカール９ｂ（４．３２ｇ、３．１４mmol）をＣＨ２Ｃｌ２（２０ml）に溶解し、０℃に冷却した。次に、これを０℃でジメチルジオキシラン（２１９ml、〜３．１４mmol）と処理した。エポキシ化は、約１時間で完結し、次に反応混合物を乾燥Ｎ２の気流を用いて乾燥するまで濃縮した。残渣を、ベンゼン（２０ml）で一回更に共沸し、真空ラインに０℃で３０分置き、その後、ＴＨＦ（６０ml）に溶解し、−７８℃に冷却した。上記溶液に、カニューレを介して、共沸により乾燥させたガラクタール１０ｂ（３．３２ｇ、１０．９５mmol、２０mlＴＨＦ）、次いでＺｎＣｌ２（２６．３ml、１．０Ｍエーテル溶液）を加えた。反応混合物を室温まで暖め、一夜攪拌した。飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（４０ml）で処理した後、反応混合物を濃縮し、エーテル（５００ml）で抽出した。有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（１：４  ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）で精製し、６．２０ｇの１１ｂを白色の発泡体として得た（８７．４％）。
【０２１４】
IR(CHl3フィルム) xyz cm-1; 1H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ6.45(1H, dd, J=6.4, 1.6 Hz), 4,85(1H, dd, J=6.4, 2.0 Hz), 4.72-4.68(2H, m), 4.65(1H, dd, J=7.2 Hz), 4.55(1H, m), 4.21(1H, m), 4.08(1H, dd, J=9.6, 5.6 Hz), 3.96-3.82(6H, m), 3.33(1H, d, J=3.2 Hz, OH), 3.27(1H, d, J=2.8 Hz, OH), 1.16-1.04(42H, m); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) δ154.45, 145.75, 99.14, 98.27, 77.83, 76.59, 74.27, 72.04, 71.62, 70.86, 64.52, 62.57, 61.60, 17.84, 11.78, 11.77.; LRMS(NH3) 664(M + NH4+, 100), 647(M +1 +, 5), 422(21), 380(25)。
【０２１５】
１３ｂの合成
二糖１１ｂ（２．６４ｇ、４．０８mmol）を共沸により３回乾燥し、２，６−ジ−tert−ブチルピリジンを含有するＴＨＦ（２０ml）中でフルオロフコース１２ｂ（１．６４ｇ、３．７７mmol）、モレキュラーシーブ（４Ａ、４．０ｇ）と混合した。この溶液を、カニューレを介して、ＡｇＣｌＯ４（１．５６ｇ、７．５４mmol）、ＳｎＣｌ２（１．４３ｇ、７．５４mmol）及びモレキュラーシーブ（４Ａ、４．０ｇ）のＴＨＦ（１５ml）溶液を含むフラスコに−４０℃で加えた。反応混合物を−４０℃で３０分攪拌し、次いで、フルオロフコースが消失するまで５℃で３４時間攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ３（４０ml）で、５℃において処理した後、混合物をＥｔＯＡｃ（７００ml）で抽出した。有機層を飽和ＮａＣｌで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、１．９３ｇの所望の三糖グリカール１３ｂ（使用したフルオロフコースを基準にして４８％）を得、微量の他のモノフコシル生成物のみを含む５００mgの二糖を回収した。
【０２１６】
１５ｂの合成
共沸により乾燥した、グリカール１３ｂ（１．１１ｇ、１．０５mmol）及びベンゼンスルホンアミド（０．８２ｇ、５．２４mmol）の混合物をＴＨＦ（２０ml）にモレキュラーシーブ（４Ａ、２．６ｇ）と共に溶解した。この混合物を−４０℃に冷却し、次いで、Ｉ２（０．５４ｇ、２．０９mmol）とＡｇ（sym-coll）２ＣＯｌ４（０．９８６ｇ、２．２９mmol）のＴＨＦ（２０ml）溶液を、Ｉ２の茶色が消失するまで室温で約３０分攪拌して、in situで調製したＩ（sym-coll）２ＣＯｌ４にカニューレを介して加えた。混合物を１時間以内に０℃まで暖め、更に１時間攪拌した。飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液で反応を停止した後、混合物を濾過し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ml）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＣｕＳＯ４（１００ml）、飽和ＮａＣｌ（１００ml×２）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）した。濃縮後、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（１：４  ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）で精製し、９８１mgの無色油状物を、所望のα−トランス−ジアキシャルヨードスルホンアミド及びそのシス異性体との２１混合物として得た。次に、ヨードスルホンアミド混合物を、エタンチオール（２２６．３mg、３．６４mmol）及びリチウムヘキサメチルジシリルアジド（１．４６ml、１．４６mmol）のＤＭＦ（１０ml）溶液を含むフラスコに−４０℃で攪拌しながら加えた。反応混合物を−４０℃で一夜攪拌し、次いで飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で反応を停止し、エーテル（３×１００ml）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）した。濃縮後、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（３：９７  ＥｔＯＡｃ−ＣＨＣｌ２）で精製し、４３８mgの１５ｂ（３３％）及び３３３mgのそのままのシスヨードスルホンアミドを得た。
【０２１７】
１６ｂの合成
アクセプターである三糖８ｂ（９２mg、０．０７７mmol、１．０等量）、チオグリコシド１５ｂ（１９８mg、２．０等量）、及び新たに活性化した４Å−ＭＳ（５６０mg）の混合物を、Ｎ２下、ｒｔでＣＨ２Ｃｌ２−Ｅｔ２Ｏ（１：２、３．９ml）に懸濁し、１０分間攪拌した。反応物を０℃に冷却し、次いでメチルトリフレート（５２．４uL、６．０等量）で処理した。反応物を０℃で４．５時間、更に１５℃に暖めながら１．５時間攪拌した。反応をＴＥＡ（１．０ml）で停止させ、反応物をシリカのパッドを通して濾過し、Ｅｔ２Ｏで軽く洗浄した。濾液（７０ml）を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ml×２）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。粗生成物をＨＰＬＣ（ヘキサン中１７％のＥｔＯＡｃ、１５ml／分、２６０nmＵＶ検出）で精製し、１５８mg（８５％）の所望の生成物及び２７．７mgのα−結合した副生成物（約５５％純度）を得た。
【０２１８】
保持時間 = 22min; [α]23D =-13.3°(CHCl3, c=1.4); IR(CHCl3フィルム) 2940, 2865, 1792, 1652, 1454, 1161, 1101, 734 cm-1; 1H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ7.8(2H, m), 7.38-7.06(58H, m), 6.43(1H, d, J=6.1 Hz), 5.15(1H, br s), 5.07(1H, d, J=3.6 Hz), 5.03(1H, d, J=3.6 Hz), 4.99(1H, d, J=11.6 Hz), 4.89-4.61(12H, m), 4.54-4.46(4H, m), 4.42(2H, app s), 4.38(1H, d, J=11.9 Hz), 4.34-4.26(3H, m), 4.21-4.18(4H, m), 4.13-4.03(7H, m), 3.98-3.76(14H, m), 3.70-3.61(4H, m), 3.46-3.27(7H, m), 2.84(1H, OH), 1.16(3H, d, J=6.4 Hz), 1.13-1.02(42H, m); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ155.35, 144.55, 140.78, 138.99, 138.75, 138.68, xxx, 138.54, 138.43, 138.13, 138.03, 137.94, 137.82, 132.31, 128.81, 128.52, xxx, 128.38, 128.36, 128.27, 128.24, 128.20, 128.16, 128.02, 127.93, 127.72, 127.66, 127.58, 127.48, 127.43, 127.37, 127.20, 103.41, 102.75, 99.79, 99.55, 98.29, 97.76, 80.49, 80.39, 79.09, 78.91, 78.25, 77.68, xxx, 76.51, 75.88, 75.09, 74.99, 74.91, 74.73, 74.15, 74.02, 73.92, 73.52, 73.19, 73.10, 72.94, 72.67, 72.25, 72.07, 71.76, 71.56, 71.33, 70.33, 69.45, 69.32, 68.48, 68.08, 67.86, 67.75, 61.97, 61.60, 56.14, 17.99, 17.96, 17.95, 17.92, 16.75, 11.86; HRMS(FAB) calcd for C138H169NO30SSi2Na (M+Na) 2432.0920, found 2432.0970。
【０２１９】
１９ｂの合成
六糖グリカール１６ｂ（８５mg、０．０３５mmol）のＴＨＦ（６ml）溶液を、Ｎ２下、ｒｔにおいてＴＢＡＦ（１．０Ｍ、３５３uL、１０等量）で処理した。ｒｔで３８時間後、反応物を約１mlまで濃縮し、次いで、ＥｔＯＡｃ（６０ml）に溶解し、水（３０ml×２）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。ＣＨ２Ｃｌ２中４％のＭｅＯＨでフラッシュクロマトグラフィーにかけ、７０．０mg（９８％）の脱シリル−脱カーボネート生成物を得た。
【０２２０】
[α]23D= 1.8°(CHCl3フィルム) 2868, 1652, 1455, 1157, 1094, 735 cm-1; 1H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ7.80(2H, d, J=7.4 Hz), 7.47(2H, d, J=7.2 Hz), 7.37-6.95(56H, m), 6.45(1H, d, J=6.3 Hz), 5.86(1H, br s), 5.35(1H, d, J=11.6 Hz), 5.30(1H, D, J=2.8 Hz), 4.95 (1H, d, J=11.3 Hz), 4.89(1H, d, J=3.5 11z), 4.8644.67(9H, m), 4.54-4.39(9H, m), 4.34(1H, dd, J=10.4, 2.8 Hz), 4.26-4.06(9H, m), 3.98-3.45(23H, m), 3.41(1H, d, J=10.0 Hz), 3.29-3.20(5H, m), 0.73(3H, d, J=6.3 Hz); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) δ144.87, 142.49, 139.49, 139.11, 138.87, 138.63, 138.54, 138.37, 138.00, 137.98, 137.97, 137.18, 131.64, 128.74, 128.52, 128.43, 128.33, 128.28, 128.25, 128.21, 128.02, 127.99, 127.97, 127.80, 127074, 127.67, 127.63, 127.61, 127.54, 127.53, 127.50, 127.44, 127.33, 127.31, 127.02, 126.86, 103.39, 102.78, 100.75, 100.09, 99.80, 99.75, 81.42, 80.64, 78.98, 78.86, 77.82, 77.40, 77.26, 76.26, 75.16, 75.09, 75.07, 74.95, 74.69, 74.30, 73.58, 73.17, 73.11, 72.71, 72.67, 72.65, 72.55, 72.36, 72.18, 69.65, 69.53, 68.54, 68.18, 68.08, 67.85, 67.79, 67.21, 54.95, 16.60。
【０２２１】
Ｎ２下、−７８℃で、液体アンモニア（約８ml）に金属ナトリウム（９５ｍｇ）を加え、２分間攪拌した。この青色の溶液に、上記の六糖グリカール（７０mg、３３．８umol）の乾燥ＴＨＦ（２ml）溶液を加えた。７８℃で４５分後、反応を無水メタノール（４ml）で停止した。ほとんどのアンモニアを窒素の気流で除去し（最終容積は約４mlであった。）、反応物を約１０mlのメタノールで希釈した。この溶液に、Dowex 50-X8（８９０mg、洗浄し、乾燥したもの）を加え、５分攪拌した。この溶液を濾過し、メタノールで軽く洗浄し、最後にアンモニアを含むメタノール（５ml）で洗浄し、濾液を減圧下に濃縮した。残渣及びＤＭＡＰ（２．４mg）をＮ２下に置き、ＤＭＦ（１．０ml）、ＴＨＦ（１．０ml）及びＴＥＡ（１．０ml）に懸濁し、次いでＡｃ２Ｏ（０．３ml）で処理した。２０時間後（ＥｔＯＡｃでＴＬＣ分析した。）、反応物を水（４０ml）にあけ、ＥｔＯＡｃ（４０ml×２）で抽出し、希ＮａＨＣＯ３（３０ml）、水（３０ml）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。ＣＨ２Ｃｌ２中８０％のＥｔＯＡｃでフラッシュクロマトグラフィーにかけ、５２．０mg（９３％）の生成物を白色の発泡体として得た。
【０２２２】
mp 132-134°C; [α]23D=+4.7°(CHCl3, c=1.4); IR(CHCl3フィルム) 1742, 1652, 1371, 1227, 1069 cm-1; 1H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ6.68(1H, d, J=6.8 Hz), 6.42(1H, d, J=6.0 Hz), 5.58(1H, d, J=3.2 Hz), 5.47(1H, d, J=3.4 Hz), 5.40-5.37(2H, m), 5.29(1H, dd, J=10.9, 3.1 Hz), 5.25-5.15(5H, m) 5.06(1H, dd, J= 11.2, 3.3 Hz), 5.02(1H, d, J=3.6 Hz), 4.99-4.92(2H, m), 4.84-4.81(2H, m), 4.67(1H, d, J=7.8 Hz), 4.56-4.51(2H, m), 4.45-4.38(3H, m), 4.29(1H, dd, J=10.6, 3.4 Hz), 4.22-3.95(13H, m, 3.90-3.77(3H, m), 2.19-1.92(51H, m), 1.15(3H, d, J=6.4 Hz); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3) δ172.40, 171.45, 170.84, 170.54, 170.52, 170.48, 170.45, 170.40, 170.39, 170.34, 170.23, 169.99, 169.82, 169.74, 169.36, 169.00, 145.43, 102.01, 101.17, 98.83, (2C), 98.45, 94.24, 75.65, 74.95, 73.98, 73.64, 73.49, 72.32, 71.84, 71.53, 71.44, 70.81, 70.74, 70.66, 70.12, 69.77, 68.97, 68.71, 68.67, 68.02, 67.97, 67.88, 67.60, 67.35, 64.43, 61.88, 61.81, 61.42, 61.29, 61.04, 56.18, 23.06, 21.02, 20.81, 20.76, 20.68, 20.64, 20.62, 20.58, 20.57, 20.55, 20.49, 20.43, 15.88。
【０２２３】
上記のパーアセチル六糖グリカール（５２mg）を２分割（２２mgと３０mg）した。次に、六糖グリカール（２２．０mg、１３．４umol）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２ml）溶液を、Ｎ２下、０℃でアリルアルコール（５ml）で処理した。この混合物を室温で１５時間攪拌した。過剰のアリルアルコールを減圧下に除去した。他のバッチ（３０mg）を同様に処理した。粗生物物を合わせ、８５％  ＥｔＯＡｃ−ＣＨ２Ｃｌ２でクロマトグラフィーにかけ、３５．８mg（６６％）の低極性生成物、及び１５．７mg（２９％）のより極性な生成物を得た。３３．２mg（１９umol）の低極性物質をＮ２下で、無水メタノール（１４ml）に溶解し、ＭｅＯＮａのメタノール溶液（１６５uL、２５重量％）で処理した。６時間後、反応物をDowex 50-X8（２００mg、洗浄し、乾燥したもの）で中和し、濾過し、濃縮して表題化合物１９ｂを定量的な収率で得た。
【０２２４】
mp 204-206°(dec); [α]23D- +5.5°(MeOH, c=0.67); IR(MeOHフィルム) 3356(br), 2923, 1658, 1374, 1071 cm-1; 1H-NMR(400 MHz, CD3OD) δ5.99-5.93(1H, m), 5.24(1H, d, J=3.8 Hz), 5.18-5.14(1H, m), 4.93(1H, d, J=3.9 Hz), 4.56-4.54(2H, m), 4.42-4.06(10H, m), 3.99(1H, s), 3.91-3.47(26H, m), 3.41-3.37(1H, m), 3.27(1H, t, J=8.8 Hz), 2.01(3H, s), 1.24(3H, d, J=6.5 Hz); 13C-NMR (100 MHz, CD3OD, 対照 =δ49.05) δ174.55, 135.73, 117.57, 105.48, 105.42, 103.94, 103.26, 102.79, 101.08, 81.21, 80.67, 80.05, 79.20, 78.09, 76.79, 76.56, 76.48, 76.44, 76.41, 75.54, 74.86, 74.68, 73.57, 72.63, 72.50, 71.57, 71.16, 70.64, 70.41, 69.68, 68.16, 62.67, 62.64, 62.57, 61.96, 61.63, 53.11, 23.58, 16.78。
【０２２５】
構造体１ｂの予備合成の目的で、セラミド前駆体をＡＢＣ三糖に結合した（スキーム５）。７ｂのエポキシ化、次いでＺｎ（ＯＴｆ）２で促進されるセラミド前駆体１７ｂ（そのトリブチルスズエーテルとして）との反応で、２０ｂを得た。アセチル化及びＰＭＢの除去を円滑に行い、２１ｂを得た。これを適切なＤＥＦ三糖ドナーとのカップリングに供した。
【０２２６】
三糖１５ｂを、アクセプター２１ｂの存在下でＭｅＯＴｆで処理すると、六糖異性体の４：１混合物を得た。主生成物２２ｂを５０％の収率で得た。
【０２２７】
Ｈ２雰囲気下、パルミチン酸無水物の存在下でリンドラー触媒を用いてアジド官能基を還元してセラミド側鎖を構築し、１８ｂを直接に得た。脱シリル化に続いて、金属を溶解してのスルホンアミド及びベンジル基の脱保護を行い、ＭｅＯＨで反応を停止し、カーボネートとアセテート基を除去した。粗製混合物をパーアセチル化して７８％の収量でパーアセチル化した六糖を得た。ＮａＯＭｅを用いたこの物質のケン化で天然物１ｂを９６％の収率で得た。１ｂのアノメリックプロトンのカップリング定数及びケミカルシフトは、報告されているデータと一致した。加えて、生成物を精密質量分析、並びに１Ｈ及び１３Ｃ  ＮＭＲで特徴づけた。
【０２２８】
２０ｂの合成
ベンジル化されたセラミド前駆体（４７５mg、１．１４mmol）を４mlのＰｈＨに溶解した。ビス（トリブチルスズ）エーテル（０．２９ml、０．３４ｇ、０．５７mmol）を加え、反応容器（Dean-Starkトラップを備えたもの）を還流するように加熱した。３時間後、反応物を冷却し、Ｎ２の気流下で濃縮した。別のフラスコに、グリカール７ｂを１ml無水ＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、得られた溶液を０℃に冷却し、３，３−ジメチルジオキシラン（２．８ml、０．２５mmol、０．０９Ｍアセトン溶液）の溶液を加えた。４５分後、この溶液をＮ２の気流下、次いで減圧下で濃縮した。スズエーテルを１mlの無水ＴＨＦに溶解し、Ｚｎ（ＯＴｆ）２（１７０mg、０．４６８mmol）の１mlＴＨＦ混合物に−７８℃でカニューレを介して加えた（１×０．５mlのＴＨＦで洗浄）。反応物を１２時間かけて室温まで暖め、次いで蒸留水で反応を停止した。水層をＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機層を合わせ、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（３：１  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、３×１６cm、シリカゲル）にかけ、２６５mg（６６％）の標的化合物２０ｂを得た。
【０２２９】
1H NMR(CDCl3) δ7.43-7.15(m, 45H), 7.03(d, J=8.6 Hz, 2H), 6.79(d, J=8.6 Hz, 2H), 5.76(dt, J=6.7, 15.4 Hz, 1H), 5.43(dd, J=8.5, 15.4 Hz, 1H), 5.07(d, J=3.5 Hz, 1H), 5.05(d, J=12.0 Hz, 1H), 4.90(d, J=12.9 Hz, 2H), 4.83-4.77(m, 3H), 4.69(d, J=12.0 Hz, 1H), 4.61(d, J=11.9 Hz, 1H), 4.54-4.45 (m, 3H), 4.42-4.25(m, 7H), 4.18-4.05(m, 6H), 4.01-3.91(m, 4H), 3.83(dd, J=4.4, 10.6 Hz, 1H), 3.79(s, 3H), 3.71-3.65(m, 4H), 3.57-3.32(m, 7H), 3.20(m, 1H), 2.29(bs, 1H), 2.11(bq, J=6.7 Hz, 2H), 1.42-1.29(m, 22H), 0.91(t, J=6.6 Hz, 3H); 13C NMR(CDCl3) δ158.8, 139.1, 139.0, 138.7, 138.6, 138.34, 138.29, 138.2, 138.1, 130.8, 128.7, 128.55, 128.50, 128.4, 128.33, 128.28, 128.26, 128.12, 128.06, 127.84, 127.76, 127.7, 127.64, 127.60, 127.5, 127.45, 127.36, 125.8, 113.5, 102.7, 100.6, 81.9, 81.5, 79.4, 77.4, 77.0, 76.7, 76.6, 76.4, 75.5, 74.9, 74.7, 74.4, 73.9, 73.3, 73.2, 73.11, 73.06, 72.3, 72.1, 70.0, 69.4, 68.7, 68.1, 67.9, 67.7, 64.2, 55.2, 32.4, 31.9, 29.70, 29.65, 29.5, 29.4, 29.2, 29.0, 22.7, 14.2; IR(薄層フィルム) 3447, 3062, 3029, 2923, 2853, 2099, 1612, 1586, 1514, 1496, 1454, 1364 cm-1; [α]23D +25.0(c 0.70)。
【０２３０】
２１ｂの合成
上記の三糖（２５６mg、０．１４７mmol）を２mlの無水ＣＨ２Ｃｌ２に溶解した。トリエチルアミン（０．１０５ml、７６mg、０．７５３mmol）、ＤＭＡＰ（２mg、０．０２mmol）及び無水酢酸（０．０４２ml、４５mg、０．４４５mmol）を順次加えた。反応物を１時間攪拌し、次いで飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で反応を停止した。抽出物を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（４：１  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、２×１６cm、シリカゲル）で精製し、２３５mg（９０％）の所望の化合物を得た。
【０２３１】
1H NMR (CDCl3) δ7.42-7.17(m, 45H), 7.03(d, J=8.6 Hz, 2H), 6.81(d, J=8.6 Hz, 2H), 5.75(dt, J=6.7, 15.4 Hz, 1H), 5.43(dd, J=8.6, 15.4 Hz, 1H), 5.07(d, J=3.4, 1H), 4.99-4.90(m, 4H), 4.85(d, J=11.3 Hz, 2H), 4.77(d, J=11.9 Hz, 1H), 4.76(d, J=12.4 Hz, 1H), 4.70(d, J=12.0 Hz, 1H), 4.62(d, J=11.7 Hz, 1H), 4.57-4.52(m, 3H), 4.49-4.34(m, 7H), 4.30(d, J=11.8 Hz, 1H), 4.25(d, J=11.8 Hz, 1H), 4.14-4.06(m, 7H), 4.01-3.95(m, 2H), 3.91(dd, J=5.6, 8.6 Hz, 1H), 3.85(dd, J=4.3, 11.1, Hz, 1H), 3.80(s, 3H), 3.74(d, J=9.8 Hz, 1H), 3.69(dd, 7.7, 9.9 Hz, 1H), 3.63-3.51(m, 5H), 3.43-3.34(m, 3H), 3.22(dd, J=4.6, 8.2 Hz, 1H), 2.12(dd, J=6.8, 13.6, 2H), 1.87(s, 3H), 1.43-1.30(m, 22H), 0.93,(t, J=6.6 Hz, 3H); 13C NMR(CDCl3) δ169.3, 158.8, 139.1, 139.0, 138.69, 138.65, 138.6, 138.31, 138.26, 138.2, 138.1, 138.0, 130.8, 128.8, 128.6, 128.41, 128.35, 128.30, 128.28, 128.14, 128.0, 127.9, 127.8, 127.64, 127.60, 127.58, 127.51, 127.47, 127.38, 126.0, 113.5, 102.7, 100.8, 1006, 81.5, 79.9, 79.5, 79.4, 79.3, 77.4, 77.1, 76.8, 75.5, 75.3, 74.9, 74.5, 74.2, 73.9, 73.2, 73.1, 73.0, 72.4, 72.2, 72.1, 70.2, 69.4, 68.1, 68.0, 67.9, 67.5, 63.8, 55,2, 32.4, 32.0, 29.72, 29.67, 29.5, 29.4, 29.2, 29.1, 22.7, 20.9, 14.2; IR(薄層フィルム) 3028, 2923, 2852, 2098, 1751, 1611, 1513, 1496, 1453, 1365, 1232 cm-1; [α]23D +20.3(c 0.45)。
【０２３２】
上述のようにして得た三糖（２３０mg、０．１２９mmol）を、４mlのＣＨ２Ｃｌ２に溶解した。蒸留水（１ml）を加え、混合物を０℃に冷却した。ＤＤＱ（３５mg、０．１５mmol）を加え、反応物を１時間攪拌した。反応を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を加えて停止した。水層をＣＨ２Ｃｌ２で３回抽出した。有機層を合わせ、洗浄して、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（４：１  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、２×１６cm、シリカ）で１８２mg（８５％）の標的化合物２１ｂを得た。
【０２３３】
1H NMR(CDCl3) δ7.38-7.13(m, 45H), 5.73(dt, J=6.7, 15.4 Hz, 1H), 5.41(dd, J=8.6, 15.4 Hz, 1H), 5.09(d, J=3.2 Hz, 1H), 4.98(d, J=12.5 Hz, 1H), 4.95(dd, J=8.0, 9.2 Hz, 1H), 4.87(d, J=11.2 Hz, 1H), 4.80(d, J=11.3 Hz, 1H), 4.77(d, J=10.9 Hz, 1H), 4.70(d, J=11.4 Hz, 1H), 4.65-4.50(m, 6H), 4.45-4.42(m, 3H), 4.38-4.34(m, 3H), 4.28(bs, 2H), 4.15(d, J=11.7 Hz, 1H), 4.11(d, J=11.8 Hz, 1H), 4.08-4.01(m, 3H, 3.98-3.94(m, 3H), 3.88(dd, J=5.5, 8.5 Hz, 1H), 3.82(dd, J=4.3, 7.0 Hz, 1H), 3.77(dd, J=3.1, 10.1 Hz, 1H), 3.70(d, J=9.8 Hz, 1H), 3.64-3.51(m, 5H), 3.46(dd, J=5.4, 9.4, 1H), 3.39(m, 1H), 3.34-3.30(m, 2H), 3.21(dd, J=4.7, 8.4 Hz, 1H), 2.09(m, 2H), 1.90(s, 3H), 1.84(d, J=5.1 Hz, 1H), 1.41-1.27(m, 22H), 0.90(t, J=6.5 Hz, 3H); 13C NMR(CDCl3) δ169.3, 165.9, 139.3, 138.7, 138.6, 138.5, 138.3, 138.2, 138.1, 138.0, 128.5, 128.4, 128.32, 128.27, 128.25, 128.17, 128.00, 127.94, 127.91, 127.8, 127.75, 127.70, 127.67, 127.61, 127.55, 127.49, 127.45, 127.21, 125.9, 107.8, 102.6, 100.8, 99.4, 81.4, 80.6, 79.3, 77.5, 77.3, 77.0, 76.9, 76.7, 75.5, 75.3, 75.2, 74.3, 73.2, 73.1, 73.0, 72.9, 72.3, 72.1, 70.1, 70.0, 69.1, 68.1, 68.0, 67.8, 67.4, 63.8, 32.4, 31.9, 29.7, 29.6, 29.5, 29.4, 29.2, 29.1, 22.7, 20.9, 14.1; IR(薄層フィルム) 3570, 3087, 3062, 3029, 2924, 2853 2099, 1950, 1873, 1752, 1496, 1453, 1366, 1231 cm-1; [α]23D +17.6(c 1.40)。
【０２３４】
２２ｂの合成
チオグリコシド１５ｂ（１８８mg、０．１５１mmol）及びアクセプター２１ｂ（１２５mg、０．０７５１mmol）をベンゼンにより２回共沸で乾燥した。次に、この混合物を２．６mlの無水エーテル及び１．３mlのＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、この溶液に５００mgの４Åモレキュラーシーブを加えた。この混合物を１時間攪拌し、次いで０℃に冷却し、ＭｅＯＴｆ（０．０５１ml、７４mg、０．４５mmol）を加えた。反応物を９時間０℃で攪拌した。次に、トリエチルアミン（１ml）を加え、シリカのプラグを通して濾過し、Ｅｔ２Ｏで洗浄した。濾液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。分取ＨＰＬＣ（８５：１５  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、１０８mg（５０％）の標的化合物２２ｂを得た。反応物のｂ／ａ比は４：１であった。
【０２３５】
1H NMR(CDCl3) δ7.75(d, J=7.2 Hz, 2H), 7.46-7.05(m, 63H), 5.75(dt, J=6.8, 15.2 Hz, 1H0, 5.43(dd, J=8.6, 15.5 Hz, 1H), 5.13(m, 2H), 5.09(d, 3.6 Hz, 1H), 5.05(d, J=11.6 Hz, 1H), 5.00(d, J=11.5 Hz, 1H), 4.94-4.86(m, 5H), 4.83-4.65(m, 14H), 4.59(d, 11.7 Hz, 2H), 4.53-4.43(m, 6H), 4.39-4.31(m, 4H), 4.23(d, J=11.9 Hz, 1H), 4.18(d, J=11.9 Hz, 1H), 4.15-4.08(m, 2H), 4.05-3.57(m, 31H), 3.54(d, J=9.1 Hz, 1H), 3.49-3.45(m, 2H), 3.38(m, 1H), 3.31-3.23(m, 3H), 2.92-2.89(m, 2H), 2.75(bt, 6.0 H, H), 2.12(bq, J=6.9 Hz, 2H), 1.85(s, 3H), 1.20-1.09(m, 42H), 0.92(t, J=6.6 Hz, 3H); 13C NMR (CDCl3) δ169.1, 165.9, 155.5, 140.9, 139.2, 139.0, 138.8, 138.64, 138.59, 138.47, 138.43, 138.3, 138.2, 138.10, 138.07, 138.0, 132.1, 129.1, 128.69, 128.65, 128.56, 128.43, 128.40, 128.36, 128.35, 128.26, 128.17, 128.12, 128.08, 127.97, 127.77, 127.66, 127.64, 127.60, 127.54, 127.49, 127.45, 127.41, 127.3, 126.0, 103.0, 102.7, 100.8, 99.7, 99.2, 98.0, 81.2, 80.6, 79.5, 79.2, 79.0, 78.3, 77.7, 76.8, 76.5, 75.5, 75.3, 75.1, 75.03, 74.97, 74.91, 74.87, 74.0, 73.2, 73.10, 73.07, 72.98, 72.93, 72.6, 72.3, 72.1, 72.0, 71.32, 71.25, 70.2, 69.4, 69.32, 69.25, 68.1, 67.9, 67.5, 68.3, 62.1, 62.0, 56.1, 32.4, 31.9, 29.71, 29.68, 29.66, 29.48, 29.38, 29.2, 29.1, 22.7, 20.7, 18.13, 18.11, 18.01, 17.98, 16.9, 14.2, 11.9; IR(薄層フィルム) 3344, 3030, 2924, 2864, 2101, 1789, 1754, 1496, 1453, 1366, 1232 cm-1。
【０２３６】
１８ｂの合成
六糖２２ｂ（６６mg、０．０２３mmol）を１mlのＥｔＯＡｃに溶解した。リンドラー触媒（６６mg）を加え、次いでパルミチン酸無水物（２３mg、０．０４６mmol）を加えた。この系を減圧下でパージし、次いで１atmのＨ２下に置いた。２４時間後、反応物をシリカゲルのプラグを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、濃縮した。分取ＨＰＬＣ（４：１  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、６４mg（９０％）の所望の生成物１８ｂを得た。
【０２３７】
1H NMR(CDCl3) δ7.72(d, J=7.2 Hz, 2H), 7.42-7.02(m, 63H), 5.65(d, J=9.1 Hz, 1H), 5.62(dt, J=6.6, 15.3 Hz, 1H), 5.31(dd, J=8.6, 15.3 Hz, 1H), 5.10(m, 2H), 5.05(d, J=3.6 Hz, 1H), 5.02(d, J=11.5 Hz, 1H), 4.96(d, J=11.4 Hz, 1H), 4.90-4.62(m, 13H), 4.57-4.38(m, 8H), 4.32-4.26(m, 3H), 4.21-4.07(m, 9H), 4.01-3.41(m, 31H), 3.30(m, 1H), 3.23(m, 3H), 2.20(m, 4H), 1.82(s, 3H), 1.52(bm, 2H), 1.32-1.19(m, 53H), 1.15-1.08(m, 42H), 0.88(t, J=6.8 Hz, 6H); IR(薄層フィルム) 3531, 3346, 3063, 3030, 2924, 2854, 1790, 1748, 1674, 1496, 1454, 1365, 1236 cm-1; [α]23D -17.9 (c 0.65)。
【０２３８】
１ｂの合成
上記のようにして得た六糖（２０mg、０．００６５mmol）を０．５mlのＴＨＦに溶解した。テトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０ＭＴＨＦ溶液、０．０５０ml、０．０５０mmol）を加え、反応物を２時間攪拌した。この溶液をシリカのプラグを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで抽出し、濃縮した。残渣を１mlの無水ＭｅＯＨに溶解し、ＮａＯＭｅ（１０mg、０．１９mmol）を加えた。反応物を３時間攪拌し、４０mgのDowex-50樹脂で中和し、濾過し、濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（１．５×４cm、１０〜４０uシリカゲル、９５：５  ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）で１６．５mg（９４％）の所望の化合物を得た。
【０２３９】
1H NMR(CDCl3) δ7.78(d, J=7.6 Hz, 2H), 7.46(d, J=7.4 Hz, 2H), 7.41-6.97(m, 61H), 6.02(d, J=9.1 Hz, 1H), 5.76(bs, 1H), 5.67(dt, J=6.6, 15.3 Hz, 1H), 5.37-5.30(m, 2H), 5.19(d, J=2.6 Hz, 1H), 4.96(d, J=11.3 Hz, 1H), 4.93(d, J=3.4 Hz, 1H), 4.90-4.83(m, 3H), 4.78-4.66(m, 7H), 4.56(d, J=11.1 Hz, 1H), 4.53(d, J=10.2 Hz, 1H), 4.47-4.32(m, 5H), 4.28-4.06(m, 14H), 4.01-3.13(m, 36H), 2.73(bt, 1H), 2.61(bs, 1H), 2.54(bs, 1H), (2.05(m, 4H), 1.50 (m, 2H), 1.38-1.23(m, 46H), 0.88(t, J=6.6 Hz, 6H), 0.78(d, 6.3 Hz, 3H); 13C NMR(CDCl3) δ173.4, 142.4, 139.5, 139.0, 138.7, 138.5, 138.33, 138.26, 138.14, 138.09, 137.9, 137.2, 137.1, 131.6, 129.0, 128.8, 128.54, 128.47, 128.37, 128.32, 128.27, 128.22, 128.17, 128.14, 128.05, 127.99, 127.79, 127.73, 127.68, 127.63, 127.59, 127.49, 127.46, 127.37, 127.32, 126.98, 126.58, 104.1, 102.83, 102.76, 100.3, 100.2, 82.1, 81.5, 81.2, 79.6, 79.2, 79.0, 78.0, 77.3, 77.0, 76.7, 75.6, 75.3, 75.1, 75.0, 74.8, 74.6, 73.5, 73.4, 73.2, 73.0, 72.7, 72.6, 71.9, 70.1, 69.6, 68.5, 68.2, 68.0, 67.5, 62.4, 61.9, 54.8, 52.3, 36.9, 32.3, 31.9, 29.71, 29.67, 29.54, 29.50, 29.43, 29.37, 29.28, 29.20, 25.7, 22.7, 16.7, 14.1; IR(薄層フィルム) 3424, 3062, 3023, 2923, 2852, 1641, 1530, 1496, 1453, 1362, 1325 cm-1; [α]23D -3.2(c 0.83)。
【０２４０】
フラスコにドライアイスコンデンサーを取り付け、４mlのＮＨ３を充填した。ナトリウム（１８mg、０．７８mol）を加え、得られた青色溶液に、２９mgの上記六糖（０．０１０mmol）を加えた。反応物を−７８℃で４５分攪拌した。反応を、ＭｅＯＨ（３ml）を添加して停止した。窒素を溶液上から吹き付け、ＮＨ３を蒸発させた。反応物を１７０mgのDowex-50樹脂で中和し、濾過し、濃縮した。得られた残渣を、１mlの４：１  ＴＨＦ／ＤＭＦに溶解した。トリエチルアミン（０．５ml）を加え、次いでＤＭＡＰ（３mg）及び無水酢酸（０．２００ml）を加えた。２時間後、反応物を減圧下に濃縮した。フラッシュカラム（１．５×５cm、１０〜４０mシリカ、９：１  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製し、１８mg（７８％）のパーアセテートを得た。この六糖のサンプル（１５mg、０．００６５mmol）を０．５mlの無水ＭｅＯＨに溶解し、ＮａＯＭｅ溶液（３０％ＭｅＯＨ溶液、０．０１０ml、０．０５mmol）を加えた。この溶液を２時間攪拌し、９mgのDowex-50樹脂で中和し、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（１．５×４cm、Ｃ−１８逆相シリカ、ＭｅＯＨ）で精製し、９．６mgの天然物１を得た。スペクトルデータは、Hakomoriらによって報告されたものと一致した。
【０２４１】
生物学的結果
ＭＢＲ１六糖を、以下に示すような天然の「Ｂ」型及び非天然の「Ａ」型の２形態で調製した。
【０２４２】
天然型の構造（「β」）は、以下の通りである。
【０２４３】
Fuca1→GalB1→3GalNAcB1→3Galα1→4GlB1→4GcB1→1Cer
非天然型の構造「α」は、以下の通りである
Fucα1→2GalB1→3GalNAcα1→3Galα1→4GalB1→1Cer
双方ともモノクローナル抗体（ｍＡｂ）ＭＢｒ１との免疫反応性の試験を促進するためにセラミドに結合されている。
【０２４４】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により、２つの調製物は、同じ単一のバンドとして移動した。免疫ＴＬＣ（Ritter, G., et al., Cancer Res. 50, 1403-10 (1990)参照）は、両形態ともＭＢｒ１モノクローナル抗体と特異的に反応することを示したが、β−型は１０倍以上強く反応したことを示した（比較染色は、１／１０の抗原の量を示した。）。ｍＡｂＭＢｒ１とβ型構造の高レベルの反応性を、フローサイトメトリー阻害アッセイを用いて確認した。ｍＡｂＭＢｒ１とＭＣＦ−７のような乳ガン細胞系との反応性は、８μｇ／mlのβ結合した調製物で９８％阻害されたが、８μｇのα−結合した調製物では６％のみ阻害された。ＧＤ３ガングリオシド（負の対照）は全てにおいて阻害を示さなかった。
【図面の簡単な説明】
【０２４５】
【図１】図１は、ネオ糖タンパクに導かれるグリカールの組立を示す。
【図２】図２は、４ａの合成を示す。試薬：ａ）TBDPSCL、イミダゾール／ＤＭＦ、８４％；ｂ）カルボニルジイミダゾール、触媒量のイミダゾール、ＴＨＦ（６５％）；ｃ）５ａ、ジ−tert−ブチルピリジン、ＡｇＣｌＯ４、ＳｎＣｌ２、エーテル（５１％）；ＰｈＳＯ２ＮＨ２、１（sym-coll）２ＣｌＯ４（９４％）。
【図３】図３は、８ａの合成を示す。試薬：ａ）９ａ、ＡｇＢＦ４、４Ａモレキュラーシーブ、ＴＨＦ（７５％）；ｂ）ｉ．ＴＢＡＦ、ＴＨＦ；ii．Ｎａ／ＮＨ３；iii．Ａｃ２Ｏ、ｐｙｒ．；ｃ）ｉ．３，３−ジメチオキシラン；アリルアルコール、ＺｎＣｌ２（７２％）；ii．ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ（定量的）。
【図４】図４は、グリカール組立法を用いたオリゴ糖鎖の固相合成のための戦略を示す。
【図５】図５は、複雑な炭水化物の１，２−分岐パターンを組み立てるための固相支持体法の応用を示す。
【図６】図６は、Ｈ−タイプ２の血液型に特異性を有する四糖の合成を示す。試薬：（ａ）１．３，３−ジメチルジオキシラン、ＣＨ２Ｃｌ２；２．８、ＺｎＣｌ２、ＴＨＦ；（ｂ）１０、Ｓｎ（ＯＴｆ）２、ジ−tert−ブチルピリジン、ＴＨＦ；（ｃ）ＴＢＡＦ、ＡｃＯＨ、ＴＨＦ；（ｄ）ＴＩＰＳＣｌ、イミダゾール、ＤＭＦ；（ｅ）Ｉ（coll）２ＣｌＯ４、ＰｈＳＯ２ＮＨ２、ＣＨ２Ｃｌ２；（ｆ）１５、ＡｇＢＦ４、４Ａ  Ｍ．Ｓ．、ＴＨＦ、（ｇ）１．ＴＢＡＦ、ＡｃＯＨ、ＴＨＦ；２．Ｎａ／ＮＨ３；Ａｃ２Ｏ、ピリジン。
【図７ａ】図７ａ及び７ｂは、生物複合体形成可能な形態のＬｅｂ六糖の合成を示す。試薬：（ａ）１．３，３−ジメチルジオキシラン、ＣＨ２Ｃｌ２；２．１９、ＺｎＣｌ２、ＴＨＦ；（ｂ）１０、Ｓｎ（ＯＴｆ）２、ジ−tert−ブチルピリジン、ＴＨＦ；（ｃ）ＴＢＡＦ、ＡｃＯＨ、ＴＨＦ；（ｄ）ＴＩＰＳＣｌ、イミダゾール、ＤＭＦ；（ｅ）Ｉ（coll）２ＣｌＯ４、ＰｈＳＯ２ＮＨ２、ＣＨ２Ｃｌ２；（ｆ）２４、ＡｇＢＦ４、４Ａ  Ｍ．Ｓ．、ＴＨＦ、（ｇ）１．ＴＢＡＦ、ＡｃＯＨ、ＴＨＦ；２．Ｎａ／ＮＨ３；Ａｃ２Ｏ、ピリジン；（ｈ）１．３，３−ジメチルジオキシラン、ＣＨ２Ｃｌ２；２．アリルアルコール、ＺｎＣｌ２；ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ。
【図７ｂ】図７ａ及び７ｂは、生物複合体形成可能な形態のＬｅｂ六糖の合成を示す。試薬：（ａ）１．３，３−ジメチルジオキシラン、ＣＨ２Ｃｌ２；２．１９、ＺｎＣｌ２、ＴＨＦ；（ｂ）１０、Ｓｎ（ＯＴｆ）２、ジ−tert−ブチルピリジン、ＴＨＦ；（ｃ）ＴＢＡＦ、ＡｃＯＨ、ＴＨＦ；（ｄ）ＴＩＰＳＣｌ、イミダゾール、ＤＭＦ；（ｅ）Ｉ（coll）２ＣｌＯ４、ＰｈＳＯ２ＮＨ２、ＣＨ２Ｃｌ２；（ｆ）２４、ＡｇＢＦ４、４Ａ  Ｍ．Ｓ．、ＴＨＦ、（ｇ）１．ＴＢＡＦ、ＡｃＯＨ、ＴＨＦ；２．Ｎａ／ＮＨ３；Ａｃ２Ｏ、ピリジン；（ｈ）１．３，３−ジメチルジオキシラン、ＣＨ２Ｃｌ２；２．アリルアルコール、ＺｎＣｌ２；ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ。
【図８】図８は、ＭＢｒ１抗原の構造及び三糖中間体の反応経路を示す。試薬：ａ．ｎ−Ｂｕ２ＳｎＯ、ＰＭＢＣｌ、ＴＢＡＢｒ、ＰｈＨ、７０％；ｂ．ＮａＨ、ＢｎＢｒ、ＤＭＦ、９５％；ｃ．（ｉ）３，３−ジメチルジオキシラン、ＣＨ２Ｃｌ２；（ii）ＴＢＡＦ、ＴＨＦ；（iii）ＮａＨ、ＢｎＢｒ、ＤＭＦ、４０％（３ステップ）；ｄ．ＮａＨ、ＢｎＢｒ、ＤＭＦ、８０％；ｅ．（ｉ）ＴＢＡＦ、ＴＨＦ；（ii）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、９３％（２ステップ）；ｆ．（ｎ−Ｂｕ３Ｓｎ）２Ｏ、ＢｎＢｒ、ＴＢＡＢｒ、ＰｈＨ、９０％；ｇ．ＳｎＣｌ２、ＡｇＣｌＯ４、２，６−ジ−tert−ブチルピリジン、４Åモレキュラーシーブ、Ｅｔ２Ｏ、４０％α（４．５：１α：β）；ｈ．ＤＤＱ、ＣＨ２ＣＩ２、Ｈ２Ｏ、８４％。
【図９】図９は、六糖ＭＢｒ１抗原への反応経路を示す。試薬：ａ．ＥｔＳＨ、ＬｉＨＭＤＳ、ＤＭＦ、７５％。Ｂ．８ｂ（０．５等量）、ＭｅＯＴｆ、４Åモレキュラーシーブ、７０〜８５％  Ｂ、（１０：１  Ｂ  α）；ｃ．（ｉ）３，３−ジメチルジオキシラン、ＣＨ２Ｃｌ２、（ii）１７ｂ（５等量）、Ｚｎ（ＯＴｆ）２、２０％；ｄ．Ａｃ２Ｏ、Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＡＰ、ＣＨ２Ｃｌ２、９５％；ｅ．リンドラー触媒、Ｈ２、パルミチン酸無水物、ＥｔＯＡｃ、９０％；ｆ．（ｉ）ＴＢＡＦ、ＴＨＦ；（ii）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、９４％；ｇ．（ｉ）Ｎａ、ＮＨ３、ＴＨＦ；（ii）Ａｃ２Ｏ、Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＡＰ、ＣＨ２Ｃｌ２、８０％；ｈ．ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、定量的。
【図１０】図１０（ａ）は、三糖中間体への反応経路を示す。試薬：ａ．（ｉ）３，３−ジメチルジオキシラン、ＣＨ２ＣＩ２；（ii）１０ａ、ＺｎＣｌ２、ＴＨＦ、８７％；ｂ．ＳｎＣｌ２、ＡｇＣｌＯ４、Ｅｔ２Ｏ、４７％；ｃ．Ｉ（coll）２ＣｌＯ４、ＰｈＳＯ２ＮＨ２、４Åモレキュラーシーブ、４７％。図１０（ｂ）は、アリルグリコシドへの反応経路を示す。試薬：ａ．ＴＢＡＦ、ＴＨＦ、９４％；ｂ．（ｉ）Ｎａ、ＮＨ３、ＴＨＦ；（ii）Ａｃ２Ｏ、Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＡＰ、ＴＨＦ、ＤＭＦ、８５％；ｃ．（ｉ）３，３−ジメチルジオキシラン、ＣＨ２Ｃｌ２、（ii）アリルアルコール、６５％（＋２９％のα−マンノ異性体）；ｄ．ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、定量的。
【図１１】図１１は、六糖抗原ＭＢｒ１を製造するための中間体への反応経路を示す。
【図１２】図１２は、４＋２合成アプローチによる六糖抗原ＭＢｒ１への反応経路を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７ａ】
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【図７ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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