(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
そのいずれの立体化学的異性体をも包含する、式（Ｉ）
【化１】
0005612611.tif 000124
［式中、
Ｒ１はヒドロキシＣ１〜６アルキルもしくはＣ２〜６アルケニルであり；ただし、Ｒ１置換基はインドール部分の６もしくは７位に位置し；
Ｒ２は水素もしくはＣ１〜４アルキルであり；
Ｚは
【化２】
0005612611.tif 000125
から選択される基であり；
Ｒ３は水素もしくはヒドロキシＣ１〜４アルキルであり；
Ｒ４はヒドロキシもしくはＣ１〜４アルキルオキシであり；
Ｒ５は水素もしくはＣ１〜４アルキルであり；または
Ｒ４およびＲ５は一緒になってオキソを形成する］
の化合物、その製薬学的に許容しうる塩もしくはその溶媒和物。
【請求項２】
化合物が以下の式
【化３】
0005612611.tif 000126
を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がヒドロキシＣ１〜６アルキルである請求項１もしくは２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２がＣ１〜４アルキルである請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｚが式（ｚ−１）の基である請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｚが式（ｚ−２）の基である請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ４がヒドロキシルであり、そしてＲ５が水素である請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ４がヒドロキシルであり、そしてＲ５がＣ１〜４アルキルである請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
化合物が式
【化４】
0005612611.tif 000127
を有しそして８．５９ｍｇ／ｍｌの濃度でクロロホルム中２０℃の温度および１ｄｍのセル経路長でナトリウムのＤ線の波長（５８９ｎｍ）の光で測定される左旋性回転を有する鏡像異性体である請求項１に記載の化合物；またはその製薬学的に許容しうる塩もしくはその溶媒和物。
【請求項１０】
化合物が式
【化５】
0005612611.tif 000128
を有しそして１０．３３ｍｇ／ｍｌの濃度でメタノール中２０℃の温度および１ｄｍのセル経路長でナトリウムのＤ線の波長（５８９ｎｍ）の光で測定される右旋性回転を有する鏡像異性体である請求項１に記載の化合物；またはその製薬学的に許容しうる塩もしくはその溶媒和物。
【請求項１１】
薬剤としての使用のための請求項１〜１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】
製薬学的に許容しうる担体および有効成分として請求項１〜１０のいずれかに記載の化合物の治療的に有効な量を含んでなる製薬学的組成物。
【請求項１３】
癌の処置用の薬剤の製造のための請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１４】
１種もしくはそれ以上の抗癌剤および請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物の組み合わせ物を含んでなる製品。
【請求項１５】
ａ）反応不活性溶媒中で、式（ＩＩ）の中間体をＷ１が適当な脱離基である式（ＩＩＩ）の中間体と反応させること
【化６】
0005612611.tif 000129
Ｒ１、Ｒ２およびＺは請求項１において定義した通りである；
を特徴とする請求項１に記載の化合物の製造方法。
【請求項１６】
適当な還元剤および適当な溶媒の存在下で、式（ＩＶ）の対応するカルボニル誘導体を還元すること
【化７】
0005612611.tif 000130
Ｒ２およびＺは請求項１において定義した通りである；
を特徴とする請求項１に記載の化合物の製造方法。
【請求項１７】
適当な還元剤および適当な溶媒の存在下で、Ｒｘが−Ｃ１〜３アルキルＣ（＝Ｏ）ＯＣ１〜４アルキルを表す式（Ｖ）の対応するエステル誘導体を還元すること
【化８】
0005612611.tif 000131
Ｒ２およびＺは請求項１において定義した通りである；
を特徴とする請求項１に記載の化合物の製造方法。
【請求項１８】
適当な溶媒の存在下で適当な塩基で式（ＶＩ）の中間体を加水分解すること
【化９】
0005612611.tif 000132
Ｒ２およびＺは請求項１において定義した通りである；
を特徴とする請求項１に記載の化合物の製造方法。
【請求項１９】
式（Ｉ）の化合物を、酸での処理により治療的に有効な無毒の酸付加塩に、もしくは塩基での処理により治療的に有効な無毒の塩基付加塩に転化すること、または逆に、アルカリでの処理により酸付加塩形態を遊離塩基に転化すること、または酸での処理により塩基付加塩を遊離酸に転化すること
を特徴とする請求項１に記載の化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗癌剤として働くインドール化合物および該化合物を含有する組成物に関する。さらに、本発明は、開示される化合物の製造方法、それらを含んでなる組成物および特に癌の処置のために、例えば薬剤として、それらを使用する方法を提供する。
【０００２】
本願は、引用することにより本明細書に組み込まれる欧州特許出願第０９１５２０８９．０の優先権を主張する。いかなる理論にも拘束されることなしに、ＭＤＭ２およびｐ５３は腫瘍細胞生物学における重要な要素でありそして細胞傷害もしくはストレスへの細胞応答において重要な役割を有するが、そして本発明の化合物はｐ５３の発現を増加するが、それらは、本発明の化合物がそれらの実証された強力な前臨床抗腫瘍活性を誘発する主要な分子標的ではないかもしれないと思われると現在考えられている。初期の観察は、これらの化合物の観察される前臨床抗腫瘍活性の裏付けとしてＤＮＡ合成および／もしくは複製ストレス反応への直接的もしくは間接的効果を示唆する。本発明の化合物はまた、ｐ５３を欠いているか、機能性ｐ５３を欠いているか、もしくは突然変異体ｐ５３を有する腫瘍細胞においても抗増殖効果を示し、そしてさらにそれらは化学療法および放射線療法に発癌性細胞を感受性にすることができる。
【０００３】
ｐ５３は、細胞増殖と細胞成長停止／アポトーシスとの間のバランスの調節において極めて重要な役割を果たす腫瘍抑制タンパク質である。正常条件下でｐ５３の半減期は非常に短く、そして結果として細胞におけるｐ５３のレベルは低い。しかしながら、細胞ＤＮＡ損傷もしくは細胞ストレス（例えば、癌遺伝子活性化、テロメア浸食、低酸素）に応答して、ｐ５３のレベルは増加する。ｐ５３レベルのこの増加は、細胞を成長停止もしくはアポトーシスのプロセスのいずれかに導く多数の遺伝子の転写の活性化をもたらす。従って、ｐ５３の重要な機能は、損傷を受けた細胞の無制御な増殖を防ぎ、従って、癌の発症から生物を守ることである。「ＭＤＭ２」（マウスダブルマイニュート（Ｍｕｒｉｎｅ  Ｄｏｕｂｌｅ  Ｍｉｎｕｔｅ）２）という用語は、ｍｄｍ２遺伝子の発現の結果として得られるタンパク質を意味するために本明細書において用いる。この用語の意味の範囲内で、ＭＤＭ２にはｍｄｍ２によりコードされる全てのタンパク質、その突然変異体、その選択的スプライスタンパク質およびそのリン酸化タンパク質が包含される。さらに、本明細書において用いる場合、「ＭＤＭ２」という用語にはＭＤＭ２アナログ、例えば、ＭＤＭ４としても知られているＭＤＭＸ、ならびに他の動物のＭＤＭ２ホモログおよびアナログ、例えばヒトモホログＨＤＭ２もしくはヒトアナログＨＤＭＸが包含される。ＭＤＭ２は、ｐ５３機能の重要な負の調節因子である。それは、ｐ５３のアミノ末端トランス活性化ドメインに結合することにより負の自己調節ループを形成し、従って、ＭＤＭ２は転写を活性化するｐ５３の能力を抑制し且つｐ５３をタンパク質分解の標的にする。正常条件下で、この調節ループはｐ５３の低いレベルを維持することに関与している。
【背景技術】
【０００４】
特許文献１は、とりわけ、５−ＨＴ受容体アンタゴニストとして置換されたフェニルアミノカルボニルインドリル誘導体を記述する。
【０００５】
特許文献２は、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）の阻害剤としてそして血管新生疾患の処置において有用なアントラニル酸アミドを記述する。
【０００６】
特許文献３は、アルツハイマー病の処置のためのカルボキシアミド誘導体を提供する。特許文献４は、ヒト免疫不全ウイルスおよびネコ免疫不全ウイルスを処置するためのケモカイン受容体ＣＸＣＲ４もしくはＣＣＲ５モジュレーターとして有用な三環式ｔｅｒｔ−
アミン誘導体を開示する。
【０００７】
特許文献５は、５−ＨＴ６受容体のアンタゴニストとしてＮ−（２−アリールエチル）ベンジルアミンを開示する。特許文献６は、ＭＤＭ２とｐ５３との間の相互作用の阻害剤としてピペラジン−４−フェニル誘導体を提供する。特許文献７は、ｐ５３ファミリーのタンパク質の立体配座安定性を回復するための三環式化合物を提供する。特許文献８は、ＭＤＭ２とｐ５３との間の相互作用のようなタンパク質間の相互作用を抑制する化合物を提供する。特許文献９は、置換された１，４−ベンゾジアゼピンおよびＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤としてのその使用を記述する。特許文献１０は、ｐ５３様ペプチドとＭＤＭ２タンパク質との相互作用を抑制しそして抗増殖活性を有するシス−２，４，５−トリフェニル−イミダゾロンを提供する。
【０００８】
特許文献１１は、ＭＤＭ２に結合しそして癌治療において用いることができるビスアリールスルホンアミド化合物を開示する。
【０００９】
特許文献１２、特許文献１３、特許文献１４、特許文献１５、特許文献１６および特許文献１７は、ＭＤＭ２とｐ５３との間の相互作用の阻害剤を開示する。
【００１０】
腫瘍細胞成長に対して強力な抑制効果を有し、広い安全性プロフィールを有し、そして好ましくない副作用がより少ない有効な小分子の必要性がある。
【００１１】
本発明の化合物は優れたインビトロ活性および優れたインビボ抗腫瘍効果を示す。それらはｐ４５０酵素に対して低い親和性を有し、それは有害な薬剤−薬剤相互作用のリスクを減らし、より広い安全域を可能にする。さらに、本発明の化合物は低い薬剤誘発性神経学的作用を有し、そして改善された心臓血管プロフィールを有し、それは化合物の用量制限毒性に好ましい影響を与えることができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】ＪＰ１１１３０７５０明細書
【特許文献２】ＥＰ１１２９０７４明細書
【特許文献３】ＷＯ０１／４２２２４明細書
【特許文献４】ＥＰ１３１７４４３明細書
【特許文献５】ＥＰ１３７９２３９明細書
【特許文献６】ＷＯ００／１５３５７明細書
【特許文献７】ＥＰ１１３７４１８明細書
【特許文献８】ＷＯ０３／０４０４０２明細書
【特許文献９】ＥＰ１４４３９３７明細書
【特許文献１０】ＥＰ１４５８３８０明細書
【特許文献１１】ＥＰ１５１９９３２明細書
【特許文献１２】ＷＯ２００６／０３２６３１明細書
【特許文献１３】ＷＯ２００７／１０７５４３明細書
【特許文献１４】ＷＯ２００７／１０７５４５明細書
【特許文献１５】ＷＯ２００９／０１９２７４明細書
【特許文献１６】ＷＯ２００９／０３７３０８明細書
【特許文献１７】ＷＯ２００９／０３７３４３明細書
【発明の概要】
【００１３】
発明の記述
本発明は癌を処置するための化合物、組成物および方法を提供する。さらに、本発明の
化合物および組成物は化学療法および放射線療法の効果を高めることにおいて有用である。
【００１４】
本発明は、そのいずれの立体化学的異性体をも包含する、式（Ｉ）
【００１５】
【化１】
0005612611.tif 000002
【００１６】
［式中、
Ｒ１はヒドロキシＣ１〜６アルキルもしくはＣ２〜６アルケニルであり；ただし、Ｒ１置換基はインドール部分の６もしくは７位に位置し；
Ｒ２は水素もしくはＣ１〜４アルキルであり；
Ｚは
【００１７】
【化２】
0005612611.tif 000003
【００１８】
から選択される基であり；
Ｒ３は水素もしくはヒドロキシＣ１〜４アルキルであり；
Ｒ４はヒドロキシもしくはＣ１〜４アルキルオキシであり；
Ｒ５は水素もしくはＣ１〜４アルキルであり；または
Ｒ４およびＲ５は一緒になってオキソを形成する］
の化合物、その製薬学的に許容しうる塩もしくはその溶媒和物に関する。
【００１９】
式（Ｉ）の化合物はまた、それらの互変異性体において存在することもできる。そのような形態は、上記の式において明白に示されないが、本発明の範囲内に包含されるものとする。
【００２０】
本発明はまた、癌を処置するための薬剤の製造のための式（Ｉ）の化合物の使用にそして癌の処置における使用のための式（Ｉ）の化合物にも関する。
【００２１】
前述の定義および以下において使用する多数の用語を以下に説明する。これらの用語は、そのようなものとしてもしくは合成語において使用することもある。
【００２２】
基もしくは基の一部としてのＣ１〜４アルキルは、メチル、エチル、プロピル、１−メチルエチル、ブチルのような１〜４個の炭素原子を有する直鎖状もしくは分枝鎖状飽和炭化水素基を定義し；基もしくは基の一部としてのＣ１〜６アルキルは、Ｃ１〜４アルキルについて定義した基およびペンチル、ヘキシル、２−メチルブチルなどのような１〜６個
の炭素原子を有する直鎖状もしくは分枝鎖状飽和炭化水素基を定義する。Ｃ２〜６アルケニルは、例えば、エテニル、２−プロペニル、３−ブテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、３−メチル−２−ブテニルなどのような、二重結合を含有しそして２〜６個の炭素原子を有する直鎖状および分枝鎖状炭化水素基を定義する。
【００２３】
環系に置換基から引かれる線は、該結合が適当な環原子のいずれかに結合し得ることを示す。
【００２４】
治療用途には、式（Ｉ）の化合物の塩は、対イオンが製薬学的に許容しうるものである。しかしながら、製薬学的に許容できない酸および塩基の塩もまた、例えば、製薬学的に許容しうる化合物の製造もしくは精製において、用途を見出し得る。全ての塩は、製薬学的に許容しうるかもしくはそうでないにしても、本発明の範囲内に包含される。
【００２５】
上記もしくは下記のような製薬学的に許容しうる塩は、式（Ｉ）の化合物が形成することのできる治療的に有効な無毒の酸付加塩形態を含んでなるものとする。後者は、塩基形態を無機酸、例えばハロゲン化水素酸、例えば塩酸、臭化水素酸など；硫酸；硝酸；リン酸など；または有機酸、例えば酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、２−ヒドロキシプロパン酸、２−オキソプロパン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、２−ヒドロキシ−１，２，３−プロパントリカルボン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−メチルベンゼンスルホン酸、シクロヘキサンスルホン酸、２−ヒドロキシ安息香酸、４−アミノ−２−ヒドロキシ安息香酸などのような適切な酸で処理することにより都合よく得ることができる。逆に、該塩形態はアルカリでの処理により遊離塩基形態に転化することができる。
【００２６】
酸性プロトンを含有する式（Ｉ）の化合物は、適切な有機および無機塩基での処理によりそれらの治療的に有効な無毒の金属もしくはアミン付加塩形態に転化することができる。上記もしくは下記のような製薬学的に許容しうる塩はまた、式（Ｉ）の化合物が形成することのできる治療的に有効な無毒の金属もしくはアミン付加塩形態（塩基付加塩形態）も含んでなるものとする。適切な塩基付加塩形態は、例えば、アンモニウム塩、アルカリおよびアルカリ土類金属塩、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム塩など、有機塩基、例えば第一級、第二級および第三級脂肪族および芳香族アミン、例えばメチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、４つのブチルアミン異性体、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ジエタノールアミン、ジプロピルアミン、ジイソプロピルアミン、ジ−ｎ−ブチルアミン、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、キヌクリジン、ピリジン、キノリンおよびイソキノリンとの塩、ベンザチン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール、ヒドラバミン塩、ならびに例えばアルギニン、リシンなどのようなアミノ酸との塩を含んでなる。
【００２７】
逆に、該塩形態は酸での処理により遊離酸形態に転化することができる。
【００２８】
塩という用語はまた、式（Ｉ）の化合物の塩基性窒素と例えば場合により置換されていてもよいハロゲン化Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン化アリール、ハロゲン化Ｃ１〜６アルキルカルボニル、ハロゲン化アリールカルボニルもしくはハロゲン化アリールＣ１〜６アルキル、例えばヨウ化メチルもしくはヨウ化ベンジルのような適切な四級化剤との間の反応により式（Ｉ）の化合物が形成することのできる第四級アンモニウム塩（第四級アミン）も含んでなり、ここで、アリールは非置換のもしくは置換されたフェニルを表す。例えばトリフルオロメタンスルホン酸Ｃ１〜６アルキル、メタンスルホン酸Ｃ１〜６アルキルおよびｐ−トルエンスルホン酸Ｃ１〜６アルキルのような、優れた脱離基を有する他の反応物質もまた用いることができる。第四級アミンは正に荷電した窒素を有する。製薬学的に
許容しうる対イオンには、クロロ、ブロモ、ヨード、トリフルオロアセテート、アセテート、トリフラート、サルフェート、スルホネートが包含される。最適な対イオンは、イオン交換樹脂を用いて導入することができる。
【００２９】
好ましくは、塩という用語は製薬学的に許容しうる酸付加塩形態および製薬学的に許容しうる金属もしくはアミン付加塩形態を意味する。
【００３０】
溶媒和物という用語は、式（Ｉ）の化合物が形成することができる水和物および溶媒付加形態、ならびにその塩を含んでなる。そのような形態の例は、例えば水和物、アルコラートなどである。
【００３１】
式（Ｉ）の化合物のいくつかおよびそれらの塩、ならびに溶媒和物は１個もしくはそれ以上のキラリティー中心を含有しそして立体化学的異性体として存在し得ることが理解される。
【００３２】
「式（Ｉ）の化合物の立体化学的異性体」という用語は、上記に用いる場合、式（Ｉ）の化合物およびそれらの製薬学的に許容しうる塩もしくは生理学的に機能性の誘導体が有し得る、同じ順序の結合により結合している同じ原子で構成されているが互いに交換できない異なる３次元構造を有する全ての可能な化合物を定義する。他に記載されないかもしくは示されない限り、化合物の化学表示は全ての可能な立体化学的異性体の混合物、ならびに他の異性体（１つもしくは複数）を実質的に含まない、すなわち、５０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、さらにより好ましくは５％未満、さらに好ましくは２％未満そして最も好ましくは１％未満と関連する、式（Ｉ）の個々の異性体およびそれらの塩もしくは溶媒和物の各々を意味する。従って、式（Ｉ）の化合物が例えばＲと特定される場合、これは、該化合物がＳ異性体を実質的に含まないことを意味する。もしくは式（Ｉ）の化合物が例えばＥと特定される場合、これは、該化合物がＺ異性体を実質的に含まないことを意味する。特に、立体中心はＲ−もしくはＳ−立体配置を有することができ；２価の環状の（部分的に）飽和した基上の置換基は、シス−もしくはトランス−立体配置のいずれかを有することができる。二重結合を含む化合物は、該二重結合でＥ（反対側）もしくはＺ（同じ側）−立体化学を有することができる。シス、トランス、Ｒ、Ｓ、ＥおよびＺという用語は当業者に周知である。式（Ｉ）の化合物の立体化学的異性体は、明らかに本発明の範囲内に包含されるものとする。
【００３３】
特に興味深いのは、立体化学的に純粋な式（Ｉ）の化合物である。
【００３４】
ＣＡＳ命名法の慣例に従って、既知の絶対立体配置の２個の立体中心が分子に存在する場合、最も低い番号が付けられたキラル中心、基準中心（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｃｅｎｔｅｒ）にＲもしくはＳ記述子が指定される（カーン−インゴールド−プレローグ順位付け規則に基づく）。第二の立体中心の立体配置は相対的記述子［Ｒ＊，Ｒ＊］もしくは［Ｒ＊，Ｓ＊］を用いて示され、ここで、Ｒ＊はいつも基準中心として特定され、そして［Ｒ＊，Ｒ＊］は同じキラリティーを有する中心を示し、そして［Ｒ＊，Ｓ＊］は異なるキラリティーの中心を示す。例えば、分子における最も低い番号が付けられたキラル中心がＳ立体配置を有し、そして第二の中心がＲである場合、立体記述子はＳ−［Ｒ＊，Ｓ＊］と特定される。「α」および「β」が用いられる場合：最も低い環番号を有する環系における不斉炭素原子上の最優先置換基の位置は、任意に常に、環系により決定される平均平面の「α」位にある。基準原子上の最優先置換基の位置に対する環系における他の不斉炭素原子上の最優先置換基の位置は、それが環系により決定される平均平面の同じ側にある場合には「α」と、もしくはそれが環系により決定される平均平面の反対側にある場合には「β」と命名される。
【００３５】
シスおよびトランスという用語は、本明細書において用いる場合、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ命名法（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９７０，３５（９），２８４９−２８６７）に従うものであり、そして環部分上の置換基の位置を示す。
【００３６】
式（Ｉ）の化合物は、当該技術分野で既知の分割方法に従って相互から分離することができる鏡像異性体のラセミ混合物の形態において合成することができる。式（Ｉ）のラセミ化合物は、適当なキラル酸との反応により対応するジアステレオマー塩形態に転化することができる。該ジアステレオマー塩形態を次に例えば選択的もしくは分別結晶化により分離し、そして鏡像異性体をアルカリによりそれから遊離させる。式（Ｉ）の化合物の鏡像異性体を分離する代わりの方法には、キラル固定相を用いる液体クロマトグラフィーが含まれる。該純粋な立体化学的異性体はまた、反応が立体特異的に起こるならば、適切な出発物質の対応する純粋な立体化学的異性体から得ることもできる。好ましくは、特定の立体異性体が所望される場合、該化合物は立体特異的製造方法により合成される。これらの方法は、鏡像異性的に純粋な出発物質を都合よく用いる。
【００３７】
本発明にはまた、本発明の化合物に存在する原子の任意の同位体も包含されるものとする。例えば、水素の同位体にはトリチウムおよび重水素が包含され、そして炭素の同位体にはＣ−１３およびＣ−１４が包含される。
【００３８】
以下に用いる場合はいつでも、「式（Ｉ）の化合物」もしくは「本発明の化合物」という用語にはまた、製薬学的に許容しうる塩、特に酸もしくは塩基（金属もしくはアミン）付加塩、全ての立体異性体、溶媒和物および全ての多形結晶形態もしくは非晶形も包含されるものとする。
【００３９】
置換基は多数の定義のリストから各々独立して選択できることを上記にもしくは下記に用いる場合はいつでも、化学的に可能である全ての可能な組み合わせが意図される。
【００４０】
本発明の興味深い態様は、Ｒ１置換基がインドール部分の７位に位置する式（Ｉ）の化合物である。従って、以下の式
【００４１】
【化３】
0005612611.tif 000004
【００４２】
を有する化合物。
【００４３】
本発明の興味深い態様は、Ｒ１置換基がインドール部分の６位に位置する式（Ｉ）の化合物である。従って、以下の式
【００４４】
【化４】
0005612611.tif 000005
【００４５】
を有する化合物。
【００４６】
本発明の興味深い態様は、Ｒ１がヒドロキシＣ１〜６アルキル、特に−ＣＨ２−ＯＨ、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＯＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨＯＨ−ＣＨ３、さらに特に−Ｃ（ＣＨ３）２−ＯＨである式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物である。
【００４７】
本発明の興味深い態様は、Ｒ１がＣ２〜６アルケニル、特に−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２である式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物である。
【００４８】
本発明の興味深い態様は、Ｒ２が水素である式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物または上記に示した通りのその興味深い態様である。
【００４９】
本発明の興味深い態様は、Ｒ２がＣ１〜４アルキル、特にメチルである式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物または可能な場合はいつでも、上記に示した通りのその興味深い態様である。
【００５０】
本発明の興味深い態様は、Ｒ３が水素を表す式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物または可能な場合はいつでも、上記に示した通りのその興味深い態様である。
【００５１】
本発明の興味深い態様は、Ｒ３がヒドロキシＣ１〜４アルキル、特に−ＣＨ２−ＯＨを表す式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物または可能な場合はいつでも、上記に示した通りのその興味深い態様である。
【００５２】
本発明の興味深い態様は、Ｒ４がヒドロキシを表す式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物または可能な場合はいつでも、上記に示した通りのその興味深い態様である。
【００５３】
本発明の興味深い態様は、Ｒ４がＣ１〜４アルキルオキシ、特にメトキシを表す式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物または可能な場合はいつでも、上記に示した通りのその興味深い態様である。
【００５４】
本発明の興味深い態様は、Ｒ５が水素を表す式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物または可能な場合はいつでも、上記に示した通りのその興味深い態様である。
【００５５】
本発明の興味深い態様は、Ｒ５がＣ１〜４アルキル、特にメチルを表す式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物または可能な場合はいつでも、上記に示した通りのその興味深い態様である。
【００５６】
本発明の興味深い態様は、Ｒ４およびＲ５が一緒になってオキソを形成する式（Ｉ）、
（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物または可能な場合はいつでも、上記に示した通りのその興味深い態様である。
【００５７】
本発明の興味深い態様は、Ｒ４がヒドロキシルであり、そしてＲ５が水素である式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物または可能な場合はいつでも、上記に示した通りのその興味深い態様である。
【００５８】
本発明の興味深い態様は、Ｒ４がヒドロキシルであり、そしてＲ５がＣ１〜４アルキル、特にメチルである式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物または可能な場合はいつでも、上記に示した通りのその興味深い態様である。
【００５９】
本発明の興味深い態様は、Ｒ４がＣ１〜４アルキルオキシであり、そしてＲ５が水素である式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物または可能な場合はいつでも、上記に示した通りのその興味深い態様である。
【００６０】
本発明の興味深い態様は、Ｚが式（ｚ−１）の基である式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物または可能な場合はいつでも、上記に示した通りのその興味深い態様である。
【００６１】
本発明の興味深い態様は、Ｚが式（ｚ−２）の基である式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物または可能な場合はいつでも、上記に示した通りのその興味深い態様である。
【００６２】
上記に示した興味深い態様の全ての可能な組み合わせは、本発明の範囲内に包含されると考えられる。
【００６３】
本発明の興味深い態様は、Ｒ１が−ＣＨ２−ＯＨ、−Ｃ（ＣＨ３）２−ＯＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨＯＨ−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ２もしくはＣ（ＣＨ３）＝ＣＨ２であり；Ｒ２が水素もしくはメチルであり；Ｒ３が水素もしくは−ＣＨ２−ＯＨであり；Ｒ４がヒドロキシもしくはメチルオキシであり；Ｒ５が水素もしくはメチルであるか、またはＲ４およびＲ５が一緒になってオキソを形成する式（Ｉ）、（Ｉ−ａ）もしくは（Ｉ−ｂ）の化合物である。
【００６４】
好ましくは、上記に示した興味深い態様の化合物は立体化学的に純粋である。
【００６５】
本発明の好ましい化合物は、そのいずれの立体化学的異性体をも包含する
【００６６】
【化５】
0005612611.tif 000006
【００６７】
【化６】
0005612611.tif 000007
【００６８】
【化７】
0005612611.tif 000008
【００６９】
；その製薬学的に許容しうる塩もしくはその溶媒和物よりなる群から選択される。（＊は相対立体化学を意味する）
本発明の好ましい化合物は、その任意の立体化学的異性体を包含する
【００７０】
【化８】
0005612611.tif 000009
【００７１】
【化９】
0005612611.tif 000010
【００７２】
；その製薬学的に許容しうる塩もしくはその溶媒和物よりなる群から選択される。
【００７３】
本発明の好ましい化合物は、以下の式
【００７４】
【化１０】
0005612611.tif 000011
【００７５】
を有する化合物、その製薬学的に許容しうる塩もしくはその溶媒和物である。
【００７６】
本発明の好ましい化合物は、そのいずれの立体化学的異性体をも包含する、以下の式
【００７７】
【化１１】
0005612611.tif 000012
【００７８】
を有する化合物；その製薬学的に許容しうる塩もしくはその溶媒和物である。
【００７９】
本発明の好ましい化合物は、以下の式
【００８０】
【化１２】
0005612611.tif 000013
【００８１】
を有しそして８．５９ｍｇ／ｍｌの濃度でクロロホルム中２０℃の温度および１ｄｍのセル経路長でナトリウムのＤ線の波長（５８９ｎｍ）の光で測定される左旋性回転を有する鏡像異性体；またはその製薬学的に許容しうる塩もしくはその溶媒和物である。
【００８２】
本発明の好ましい化合物は、以下の式
【００８３】
【化１３】
0005612611.tif 000014
【００８４】
を有しそして１０．３３ｍｇ／ｍｌの濃度でメタノール中２０℃の温度および１ｄｍのセル経路長でナトリウムのＤ線の波長（５８９ｎｍ）の光で測定される右旋性回転を有する鏡像異性体；またはその製薬学的に許容しうる塩もしくはその溶媒和物である。
【００８５】
本発明の好ましい化合物は、以下の式
【００８６】
【化１４】
0005612611.tif 000015
【００８７】
を有しそして１０．７４ｍｇ／ｍｌの濃度でメタノール中２０℃の温度および１ｄｍのセル経路長でナトリウムのＤ線の波長（５８９ｎｍ）の光で測定される左旋性回転を有する鏡像異性体；またはその製薬学的に許容しうる塩もしくはその溶媒和物である。
【００８８】
式（Ｉ）の化合物、それらの製薬学的に許容しうる塩およびその立体化学的異性体は、常法において製造することができる。出発物質および中間体のいくつかは既知の化合物であり、そして市販されているかもしくは当該技術分野において一般に既知であるような通常の反応方法に従って製造することができる。これに関してＷＯ２００６／０３２６３１に記載の合成方法にも言及される。
【００８９】
多数のそのような製造方法は以下にさらに詳細に記述される。式（Ｉ）の最終化合物を得るための他の方法は実施例に記述される。
【００９０】
一般に、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）の中間体をＷ１が例えばハロ、例えばフルオロ、クロロ、ブロモもしくはヨード、またはスルホニルオキシ基、例えばメチルスルホニルオキシ、４−メチルフェニルスルホニルオキシなどのような適当な脱離基である式（ＩＩＩ）の中間体と反応させることにより製造することができる。該反応は、例えばアルコール、例えばメタノール、エタノール、２−メトキシ−エタノール、プロパノール、ブタノールなど；エーテル、例えば、好ましくは例えばＨＣｌ、１，１’−オキシビスプロパンなどのような適当な酸の存在下における１，４−ジオキサン；ケトン、例えば４−メチル−２−ペンタノン；もしくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ニトロベンゼン、アセトニトリルなどのような反応不活性溶媒中で行うことができる。例えばアルカリもしくはアルカリ土類金属炭酸塩もしくは炭酸水素塩または有機塩基、例えばＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、炭酸ナトリウムもしくは炭酸カリウムのような適切
な塩基の添加は、反応の経過中に遊離される酸を捕捉するために利用することができる。少量の適切な金属ヨウ化物、例えばヨウ化ナトリウムもしくはカリウムは、反応を促進するために加えることができる。攪拌は、反応の速度を上げることができる。反応は室温と反応混合物の還流温度との間である温度で都合良く実施することができ、そして所望に応じて、反応は上昇した圧力で実施することができる。
【００９１】
【化１５】
0005612611.tif 000016
【００９２】
上記の反応において、Ｒ１が−Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）２である式（ＩＩ）の中間体は、Ｒ１が−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２である式（Ｉ）の対応する最終化合物をもたらすことができる。
【００９３】
式（ＩＩ）の中間体と式（ＩＩＩ）の中間体との上記の反応はまた、例えばＰｄ（ｄｂａ）２（ビス［（１，２，４，５−η）−１，５−ジフェニル−１，４−ペンタジエン−３−オン］−パラジウム）のような適当な触媒、例えばＢＩＮＡＰ（２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル）のような適当なリガンド、例えばナトリウム第三級（ｔｅｒｔｉａｉｒ）ブトキシドのような適当な塩基および例えばトルエンのような適当な溶媒の存在下で行うこともできる。
【００９４】
Ｒ１がヒドロキシＣ１〜４アルキルを表す式（Ｉ）の化合物（該化合物は式（Ｉ−１）により表される）もまた、例えばＮａＢＨ４のような適当な還元剤および例えばアルコール、例えばメタノールなどのような適当な溶媒の存在下で式（ＩＶ）の対応するカルボニル誘導体を還元することにより製造することができる。
【００９５】
【化１６】
0005612611.tif 000017
【００９６】
式（Ｉ−１）の化合物はまた、例えばＬｉＡｌＨ４のような適当な還元剤および例えばテトラヒドロフランのような適当な溶媒の存在下で、Ｒｘが−Ｃ１〜３アルキルＣ（＝Ｏ）ＯＣ１〜４アルキルを表す式（Ｖ）の対応するエステル誘導体を還元することにより製造することもできる。
【００９７】
【化１７】
0005612611.tif 000018
【００９８】
Ｒ１がヒドロキシＣ１〜４アルキルを表しそして該ヒドロキシＣ１〜４アルキルがインドール部分の７位に置かれる式（Ｉ−１）の化合物（該化合物は式（Ｉ−１−ａ）により表される）もまた、例えば水酸化ナトリウムのような適当な塩基および例えばテトラヒドロフランもしくはアルコール、例えばエタノールなどのような適当な溶媒での式（ＶＩ）の中間体の加水分解により製造することができる。
【００９９】
【化１８】
0005612611.tif 000019
【０１００】
式（Ｉ）の化合物はまた、当該技術分野で既知の反応もしくは官能基転化によって相互に転化することもできる。
【０１０１】
式（Ｉ）の化合物はまた、例えばアルコール、例えば２−プロパノール、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテルのような適当な溶媒中で、例えば塩酸のような適切な酸との反応により製薬学的に許容しうる酸付加塩に転化することもできる。
【０１０２】
中間体および出発物質のいくつかは既知の化合物であり、そして市販されている可能性があるかもしくは当該技術分野で既知の方法に従って製造することができる。
【０１０３】
一般に、式（ＩＩ）の中間体は、例えばアルコール、例えばメタノールもしくはエタノールなどのような適当な溶媒の存在下で、例えばラネーニッケル；または例えばテトラヒドロフランのような適当な溶媒の存在下で、チオフェン溶液および五酸化バナジウムのような適当な触媒毒の存在下で、活性炭上白金のような適当な金属触媒の存在下で式（ＶＩＩ）の中間体を水素化することにより製造することができる。
【０１０４】
【化１９】
0005612611.tif 000020
【０１０５】
式（ＶＩＩ）の中間体は、例えばＮ，Ｎ−ジメチルスルホキシドのような適当な溶媒の存在下で、Ｗ２が例えばハロ原子、例えばクロロ、ブロモ、フルオロなどのような適当な脱離基を表す式（ＩＸ）の中間体と式（ＶＩＩＩ）の中間体を反応させることにより製造することができる。例えばアルカリもしくはアルカリ土類金属炭酸塩もしくは炭酸水素塩または有機塩基、例えばＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムもしくは炭酸カリウムのような適切な塩基の添加は、反応の経過中に遊離される酸を捕捉するために利用することができる。
【０１０６】
【化２０】
0005612611.tif 000021
【０１０７】
式（ＶＩＩＩ）の中間体は、例えばアルコール、例えばメタノールなどのような適当な溶媒の存在下でラネーニッケルおよびＮＨ３の存在下で式（Ｘ）の対応する中間体から製造することができる。
【０１０８】
【化２１】
0005612611.tif 000022
【０１０９】
Ｒ１がヒドロキシＣ１〜４アルキル、例えば−ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ３）を表す式（Ｘ）の中間体（該中間体は式（Ｘ−ａ）により表される）は、例えばテトラヒドロフランのような適当な溶媒の存在下でＣＨ３ＭｇＣｌとの反応により式（ＸＩ）の中間体から製造することができる。
【０１１０】
【化２２】
0005612611.tif 000023
【０１１１】
同じ反応は、ヒドロキシＣ１〜４アルキルの他の代替物を製造するために用いることができる。例えば、Ｒ１が−Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）２を表す中間体は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３を有する対応する中間体から製造することができる。
【０１１２】
式（ＸＩ）の中間体は、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような適当な溶媒の存在下でシアン化ナトリウムと式（ＸＩＩ）の中間体を反応させることにより製造することができる。
【０１１３】
【化２３】
0005612611.tif 000024
【０１１４】
あるいはまた、式（ＸＩ）の中間体は、デス−マーチンペルヨージナンおよび例えばジクロロメタンのような適当な溶媒の存在下で対応するヒドロキシルアナログからの酸化により製造することもできる。
【０１１５】
【化２４】
0005612611.tif 000025
【０１１６】
式（ＸＩＩ）の中間体は、アルコール、例えばエタノールのような適当な溶媒の存在下で式（ＸＩＩＩ）の中間体をＣＨ３Ｉと反応させることにより製造することができる。
【０１１７】
【化２５】
0005612611.tif 000026
【０１１８】
式（ＸＩＩＩ）の中間体は、酢酸の存在下で式（ＸＩＶ）の中間体をエシェンモーザー塩と反応させることにより製造することができる。
【０１１９】
【化２６】
0005612611.tif 000027
【０１２０】
式（ＸＩＶ）の中間体は、例えばジクロロメタンのような適当な溶媒の存在下で、例えばＭｎＯ２のような適当な酸化剤の存在下で対応するヒドロキシルアナログを酸化することにより製造することができる。
【０１２１】
Ｚが式（ｚ−２）の基でありそしてＲ４がヒドロキシルである式（ＩＩＩ）の中間体（該中間体は式（ＩＩＩ−ａ）により表される）は、例えばアルコール、例えばメタノールのような適当な溶媒の存在下で、例えばＮａＢＨ４のような適当な還元剤で式（ＩＩＩ−ｂ）の中間体を還元することにより製造することができる。
【０１２２】
式（ＩＩＩ−ａ）の中間体は、水素化ナトリウムのような適当な塩基および例えばテトラヒドロフランのような適当な溶媒の存在下で、Ｃ１〜４アルキルヨージドとの反応により式（ＩＩＩ−ｃ）の中間体に転化することができる。式（ＩＩＩ−ｂ）の中間体は、例えばジクロロメタンのような適当な溶媒の存在下で、例えばＭｎＯ２のような適当な酸化剤との反応による式（ＩＩＩ−ａ）の中間体の酸化により製造することができる。式（ＩＩＩ−ｂ）の中間体は、例えばテトラヒドロフランのような適当な溶媒の存在下でＣ１〜４アルキルＭｇＣｌとの反応により式（ＩＩＩ−ｄ）の中間体に転化することができる。
【０１２３】
【化２７】
0005612611.tif 000028
【０１２４】
式（ＩＩＩ−ａ）の中間体はまた、メタノール／ＮＨ３の混合物中で式（ＸＶ）の中間体を攪拌することにより製造することもできる。所望に応じて、式（ＩＩＩ−ａ）の中間体は、無水酢酸およびピリジンの混合物中で攪拌することにより式（ＸＶ）の中間体に転化することができる。
【０１２５】
【化２８】
0005612611.tif 000029
【０１２６】
本明細書において式（ＩＩＩ−ａ−１）の中間体と呼ばれる中間体（ＩＩＩ−ａ）のＳ−鏡像異性体および本明細書において式（ＸＶ−ｂ）の中間体と呼ばれる式（ＸＶ）の中間体のＲ−鏡像異性体は、酢酸エテニルエステルのような適当な溶媒中で式（ＩＩＩ−ａ）の中間体のラセミ混合物にリパーゼカンジダアンタルチカＢを加えることにより製造することができる（スキーム１参照）。所望に応じて、式（ＸＶ−ｂ）の中間体は、ＭｅＯＨ／ＮＨ３中の反応により、本明細書において式（ＩＩＩ−ａ−２）の中間体と呼ばれる中間体（ＩＩＩ−ａ）のＲ鏡像異性体に転化することができる。
【０１２７】
ラセミ混合物から出発してこの方法によりｅｅ＞９９％および５８％の収率でそのアセテートにおける鏡像異性体の一方の転化が得られ、そして第二の鏡像異性体は４２％の収率においてｅｅ＞９９％で単離される。
【０１２８】
鏡像異性体過剰率（ｅｅ）という用語は、立体化学における当業者に周知である。（＋）および（−）鏡像異性体の混合物について、Ｆ（＋）およびＦ（−）（ここで、Ｆ（＋）＋Ｆ（−）＝１）のモルもしくは重量分率として与えられる組成で、Ｆ（＊）の鏡像異性体過剰率はＦ（＋）−Ｆ（−）として、そして鏡像異性体過剰率パーセントは１００＊［Ｆ（＋）−Ｆ（−）］として定義される。
【０１２９】
【化２９】
0005612611.tif 000030
【０１３０】
あるいはまた、本明細書において式（ＩＩＩ−ａ−２）の中間体と呼ばれる中間体（ＩＩＩ−ａ）のＲ−鏡像異性体および本明細書において式（ＸＶ−ａ）の中間体と呼ばれる式（ＸＶ）の中間体のＳ−鏡像異性体は、水中で式（ＸＶ）の中間体のラセミ混合物にリパーゼカンジダアンタルチカＢを加えることにより製造することができる（スキーム２参照）。所望に応じて、中間体（ＸＶ−ａ）は、ＭｅＯＨ／ＮＨ３中の反応により中間体（ＩＩＩ−ａ−１）に転化することができる。
【０１３１】
【化３０】
0005612611.tif 000031
【０１３２】
あるいはまた、式（ＩＩＩ−ａ）の中間体は、キラルカラムクロマトグラフィーによりその鏡像異性体に分離することもできる。
【０１３３】
式（ＸＶ）の中間体は、無水酢酸中で式（ＸＶＩ）の中間体を攪拌することにより製造することができる。
【０１３４】
【化３１】
0005612611.tif 000032
【０１３５】
本明細書において式（ＸＶＩ−ａ）の中間体と呼ばれる、Ｗ１がクロロである式（ＸＶＩ）の中間体は、アセトニトリル中で式（ＸＶＩＩ）の中間体の溶液に塩化ベンジルトリエチルアンモニウムおよび塩化ナトリウムを加え、続いて濃塩酸を加えることにより製造することができる。
【０１３６】
【化３２】
0005612611.tif 000033
【０１３７】
式（ＸＶＩＩ）の中間体は、硫酸に発煙硝酸を加え、続いて６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン、１−オキシドを少しずつ加えることにより製造することができる。
【０１３８】
式（ＩＶ）の中間体は、式（ＩＩ）の中間体についての上記の反応プロトコルに従って製造することができる。
【０１３９】
式（Ｖ）の中間体は、例えば塩酸のような適当な酸および例えばアセトニトリルのような適当な溶媒の存在下で、Ｐが例えば−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ（ＣＨ３）３のような適当な保護基を表す式（ＸＶＩＩＩ）の中間体を脱保護することにより製造することができる。
【０１４０】
【化３３】
0005612611.tif 000034
【０１４１】
式（ＸＶＩＩＩ）の中間体は、例えばアルコール、例えばメタノール、エタノール、２−メトキシ−エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールなど；エーテル、例えば、好ましくは例えばＨＣｌ、１，１’−オキシビスプロパンなどのような適当な酸の存在下における１，４−ジオキサン；ケトン、例えば４−メチル−２−ペンタノン；もしくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ニトロベンゼン、アセトニトリルなどのような反応不活性溶媒の存在下で式（ＩＩＩ）の中間体と式（ＸＩＸ）の中間体を反応させることにより製造することができる。例えば、アルカリもしくはアルカリ土類金属炭酸塩もしくは炭酸水素塩または有機塩基、例えばＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、炭酸ナトリウムもしくは炭酸カリウムのような適切な塩基の添加は、反応の経過中に遊離される酸を捕捉するために利用することができる。少量の適切な金属ヨウ化物、例えばヨウ化ナトリウムもしくはカリウムは、反応を促進するために加えることができる。攪拌は、反応の速度を上げることができる。反応は室温と反応混合物の還流温度との間である温度で都合よく実施することができ、そして所望に応じて、反応は上昇した圧力で実施することができる。
【０１４２】
【化３４】
0005612611.tif 000035
【０１４３】
式（ＸＩＸ）の中間体は、式（ＩＩ）の中間体についての上記の反応プロトコルに従って製造することができる。
【０１４４】
式（ＶＩ）の中間体は、例えばトリフルオロ酢酸のような適当な酸および例えばジクロロメタンのような適当な溶媒の存在下で、Ｐが上記に定義した通りの適当な保護基を表しそしてＲｙが−Ｃ１〜４アルキル−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ３）２Ｃ（ＣＨ３）３を表す式（ＸＸ）の中間体を反応させることにより製造することができる。
【０１４５】
【化３５】
0005612611.tif 000036
【０１４６】
式（ＸＸ）の中間体は、例えばアルコール、例えばメタノール、エタノール、２−メトキシ−エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールなど；エーテル、例えば、好ましくは例えばＨＣｌ、１，１’−オキシビスプロパンなどのような適当な酸の存在下における１，４−ジオキサン；ケトン、例えば４−メチル−２−ペンタノン；もしくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ニトロベンゼン、アセトニトリルなどのような反応不活性溶媒の存在下で式（ＩＩＩ）の中間体と式（ＸＸＩ）の中間体を反応させることにより製造することができる。例えば、アルカリもしくはアルカリ土類金属炭酸塩または炭酸水素塩または有機塩基、例えばＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、炭酸ナトリウムもしくは炭酸カリウムのような適切な塩基の添加は、反応の経過中に遊離される酸を捕捉するために利用することができる。少量の適切な金属ヨウ化物、例えばヨウ化ナトリウムもしくはカリウムは、反応を促進するために加えることができる。攪拌は、反応の速度を上げることができる。反応は室温と反応混合物の還流温度との間である温度で都合よく実施することができ、そして所望に応じて、反応は上昇した圧力で実施することができる。
【０１４７】
【化３６】
0005612611.tif 000037
【０１４８】
式（ＸＸＩ）の中間体は、例えばラネーニッケルのような適当な触媒および例えばアルコール、例えばメタノールなどのような適当な溶媒の存在下で水素化により式（ＸＸＩＩ）の対応するニトロ中間体から製造することができる。
【０１４９】
【化３７】
0005612611.tif 000038
【０１５０】
Ｐが−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜４アルキルを表す式（ＸＸＩＩ）の中間体（該中間体は式（ＸＸＩＩ−ａ）により表される）は、例えばトリエチルアミンのような適当な塩基および例えば４−（ジメチル）アミノピリジンのような適当な溶媒の存在下で式（ＸＸＩＩＩ）の中間体をジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートと反応させることにより製造することができる。
【０１５１】
【化３８】
0005612611.tif 000039
【０１５２】
式（ＸＸＩＩＩ）の中間体は、例えば重炭酸ナトリウムのような適当な塩基および例えばＮ，Ｎ−ジメチルスルホキシドのような適当な溶媒の存在下で式（ＩＸ）の中間体と式（ＸＸＩＶ）の中間体を反応させることにより製造することができる。
【０１５３】
【化３９】
0005612611.tif 000040
【０１５４】
式（ＸＸＩＶ）の中間体は、例えばアルコール、例えばメタノールなどのような適当な溶媒の存在下で、例えばラネーニッケルのような適当な触媒の存在下で式（ＸＸＶ）の中間体をＮＨ３と反応させることにより製造することができる。
【０１５５】
【化４０】
0005612611.tif 000041
【０１５６】
式（ＸＸＶ）の中間体は、例えばイミダゾールのような適当な塩基および例えばテトラヒドロフランのような適当な溶媒の存在下で式（ＸＸＶＩ）の中間体をｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリドと反応させることにより製造することができる。
【０１５７】
【化４１】
0005612611.tif 000042
【０１５８】
式（ＸＸＶＩ）の中間体は、式（ＸＩ）の中間体についての上記の通り製造することができる。
【０１５９】
本発明における式（Ｉ）の化合物および中間体のいくつかは、不斉炭素原子を含有し得る。該化合物および該中間体の純粋な立体化学的異性体は、当該技術分野で既知の方法の適用により得ることができる。例えば、ジアステレオマーは、選択的結晶化もしくはクロマトグラフィー技術、例えば向流分配、液体クロマトグラフィーおよび同様の方法のような物理的方法により分離することができる。鏡像異性体は、ラセミ混合物から最初に該ラセミ混合物を例えばキラル酸のような適当な分割剤でジアステレオマー塩もしくは化合物の混合物に転化し；次にジアステレオマー塩もしくは化合物の該混合物を例えば選択的結晶化、超臨界流体クロマトグラフィーもしくはクロマトグラフィー技術、例えば液体クロマトグラフィーおよび同様の方法により物理的に分離し；そして最後に該分離したジアステレオマー塩もしくは化合物を対応する鏡像異性体に転化することにより得ることができる。純粋な立体化学的異性体はまた、介在反応が立体特異的に起こるならば、適切な中間体および出発物質の純粋な立体化学的異性体から得ることもできる。
【０１６０】
その任意の立体化学的異性体を包含する式（Ｉ）の化合物、その製薬学的に許容しうる塩もしくはその溶媒和物は、それらがｐ５３の発現を増加し、強力な抗増殖活性を示し、強力な抗腫瘍活性を示す点において有益な薬理学的特性を有する。
【０１６１】
上記に示した通り、本発明の化合物はＣ．１に記載のアッセイにおいてｐ５３の発現を増加する。この増加は、以下の作用機序：
−上流もしくは下流標的、例えばキナーゼとの相互作用、またはユビキチン化もしくはＳＵＭＯ修飾に関与する酵素活性、
−例えばそれをその機能的構造形態において維持することによるかもしくはミスフォールディングを防ぐことによる、ｐ５３タンパク質の直接的もしくは間接的安定化、
−ｐ５３発現もしくはｐ５３ファミリーメンバー、例えばｐ６３およびｐ７３の発現を高めること、
−例えばその転写活性を高めること（しかしこれに限定されるものではない）により、ｐ５３活性を増加することならびに／または
−ｐ５３シグナル伝達経路の遺伝子およびタンパク質、例えばｐ２１ｗａｆ１、ｃｉｐ１、ＭＩＣ−１（ＧＤＦ−１５）、ＰＩＧ−３、Ｂａｘ、Ｐｕｍａ、ＮｏｘａおよびＡＴＦ−３（しかしこれらに限定されるものではない）の発現を増加すること
の１つもしくはそれ以上により引き起こされる可能性があるが、これらに限定されるものではない。
【０１６２】
従って、本発明は、特に癌もしくは関連疾患の処置のための、腫瘍成長を抑制するための、ｐ５３の発現を増加するための、薬剤としての使用のための式（Ｉ）の化合物を開示する。
【０１６３】
さらに、本発明はまた、該化合物が式（Ｉ）の化合物である、ｐ５３の減少した発現によって媒介される疾患の処置のための、特に癌の処置のための薬剤の製造のための化合物の使用にも関する。
【０１６４】
「処置すること」もしくは「処置」という用語には、本明細書において用いる場合、動物、特にヒトにおける疾患および／もしくは症状の任意の処置が含まれ、そして（ｉ）疾患および／もしくは症状にかかりやすい可能性があるがそれにかかっているとまだ診断されていない患者において疾患および／もしくは症状が発症するのを防ぐこと；（ｉｉ）疾患および／もしくは症状を抑制すること、すなわち、その発症を止めること；（ｉｉｉ）疾患および／もしくは症状を軽減すること、すなわち、疾患および／もしくは症状の退行をもたらすことが包含される。
【０１６５】
「ｐ５３の減少した発現によって媒介される疾患」という用語では、アポトーシス、細胞死の誘導もしくは細胞周期の調節により抑制することができるか、その発症を止めることができるか、軽減することができるかもしくはその退行をもたらすことができる任意の好ましくないもしくは有害な症状が意図される。
【０１６６】
本発明はまた、そのような処置を必要とする患者、例えば哺乳類（およびさらに特にヒト）に、本発明の化合物の有効量を投与することにより、ｐ５３の減少した発現によって媒介される疾患を処置するための、特に癌を処置するための方法も提供する。
【０１６７】
本発明の化合物は腫瘍細胞において、たとえそのような細胞が機能的ｐ５３を欠いている場合でさえ、抗増殖効果を有することができる。さらに特に、本発明の化合物は野生型もしくは突然変異体ｐ５３を有する腫瘍においてそして／またはＭＤＭ２を過剰発現する腫瘍において抗増殖効果を有することができる。これらの化合物は、血管新生、腫瘍細胞
移動、浸潤もしくは転移に影響を及ぼし得る。
【０１６８】
従って、本発明はまた、そのような処置を必要とする患者、例えば哺乳類（およびさらに特にヒト）に、本発明の化合物の有効量を投与することにより腫瘍増殖を抑制する方法も提供する。
【０１６９】
本発明の化合物により抑制することができる成人および小児悪性腫瘍を包含する腫瘍の例には、小細胞肺癌および非小細胞肺癌（例えば腺癌）を包含する肺癌、膵臓癌、結腸癌（例えば結腸腺癌および結腸腺腫のような例えば結腸直腸癌）、食道癌、口腔扁平上皮癌、舌癌、胃癌、肝臓癌、鼻咽頭癌、リンパ系の造血腫瘍（例えば急性リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫）、非ホジキンリンパ腫（例えばマントル細胞リンパ腫）、ホジキン病、骨髄性白血病（例えば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）もしくは慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ））、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、濾胞性甲状腺癌、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、間葉由来の腫瘍、軟部組織肉腫、脂肪肉腫、消化管間質肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、間葉性軟骨肉腫、リンパ肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、黒色腫、奇形癌、神経芽細胞腫、脳腫瘍、髄芽腫、神経膠腫、皮膚の良性腫瘍（例えば角化棘細胞腫）、乳癌（例えば進行性乳癌）、腎臓癌、腎芽細胞腫、卵巣癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、膀胱癌、進行疾患およびホルモン抵抗性前立腺癌を包含する前立腺癌、精巣癌、骨肉腫、頭頸部癌、表皮癌、多発性骨髄腫（例えば難治性多発性骨髄腫）、中皮腫が包含されるがこれらに限定されるものではない。本発明の化合物で処置することができる特定の癌は、乳癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。
【０１７０】
本発明の化合物はまた、炎症症状の処置および予防に用いることもできる。
【０１７１】
従って、本発明はまた、そのような処置を必要とする患者、例えば哺乳類（およびさらに特にヒト）に、本発明の化合物の有効量を投与することによる炎症症状の処置および予防の方法も提供する。
【０１７２】
本発明の化合物はまた、自己免疫疾患および症状の処置に用いることもできる。「自己免疫疾患」という用語では、動物の免疫系が自己抗原に有害に反応する任意の疾患が意図される。「自己抗原」という用語では、動物の体内で通常見られる任意の抗原が意図される。代表的な自己免疫疾患には：橋本甲状腺炎、グレーブス病、多発性硬化症、悪性貧血、アジソン病、インシュリン依存性糖尿病、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥもしくはループス）、皮膚筋炎、クローン病、ウェゲナー肉芽腫、抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質症候群、２５疱疹状皮膚炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎、膜性糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、ランバート・イートン、筋無力症候群、重症筋無力症、水疱性類天疱瘡、多腺性内分泌障害、ライター病およびスティフ・マン症候群が包含されるがこれらに限定されるものではない。
【０１７３】
従って、本発明はまた、そのような処置を必要とする患者、例えば哺乳類（およびさらに特にヒト）に本発明の化合物の有効量を投与することによる自己免疫疾患および症状の処置の方法も提供する。
【０１７４】
本発明の化合物はまた、構造的に不安定なもしくはミスフォールディングしたタンパク質と関連する疾患の処置にも有用であることができる。構造的に不安定なもしくはミスフォールディングしたタンパク質と関連する疾患の例には：嚢胞性線維症（ＣＦＴＲ）、マルファン症候群（フィブリリン）、筋萎縮性側索硬化症（スーパーオキシドジムスターゼ）、壊血病（コラーゲン）、メープルシロップ尿症（アルファ−ケト酸デヒドロゲナーゼ複合体）、骨形成不全症（１型プロコラーゲンプロ−アルファ）、クロイツフェルト・ヤ
コブ病（プリオン）、アルツハイマー病（ベータ−アミロイド）、家族性アミロイドーシス（リゾチーム）、白内障（クリスタリン）、家族性高コレステロール血症（ＬＤＬ受容体）、αＩ−抗トリプシン欠乏症、テイ・サックス病（ベータ−ヘキソサミニダーゼ）、網膜色素変性症（ロドプシン）および妖精症（インシュリン受容体）が包含されるがこれらに限定されるものではない。
【０１７５】
従って、本発明はまた、そのような処置を必要とする患者、例えば哺乳類（およびさらに特にヒト）に本発明の化合物の有効量を投与することによる構造的に不安定なもしくはミスフォールディングしたタンパク質と関連する疾患の処置の方法も提供する。
【０１７６】
主題化合物は、それらの有用な薬理学的特性を考慮して、投与目的のために様々な製薬学的形態に調合することができる。
【０１７７】
本発明の製薬学的組成物を製造するために、有効成分として本発明の化合物の有効量を製薬学的に許容しうる担体とよく混合して合わせ、この担体は投与に所望される製剤の形態により多種多様な形態をとり得る。これらの製薬学的組成物は、好ましくは、経口、経直腸、経皮、もしくは非経口注射による投与に適当な望ましくは単位投与形態物においてである。例えば、経口用投与形態物における組成物を製造することにおいて、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤および液剤のような経口用液状製剤の場合には例えば水、グリコール、油、アルコールなどのような通常の製薬学的媒質のいずれかを：または散剤、丸剤、カプセル剤および錠剤の場合には澱粉、糖、カオリン、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などのような固形担体を用いることができる。
【０１７８】
錠剤およびカプセル剤は、それらの投与の容易さのために、最も都合のよい経口用投与単位形態物に相当し、この場合、固形の製薬学的担体が明らかに用いられる。非経口組成物では、例えば溶解性を促進するために、他の成分を含むことができるが、担体は通常は少なくとも大部分において滅菌水を含んでなる。例えば、注入可能な液剤を製造することができ、ここで、担体は食塩水溶液、グルコース溶液もしくは食塩水とグルコース溶液の混合物を含んでなる。注入可能な懸濁剤もまた製造することができ、この場合、適切な液状担体、沈殿防止剤などを用いることができる。経皮投与に適当な組成物において、担体は、場合によりわずかな割合の任意の性質の適当な添加剤と組み合わせて、場合により浸透促進剤および／もしくは適当な湿潤剤を含んでなってもよく、これらの添加剤は皮膚に重大な悪影響をもたらさない。該添加剤は、皮膚への投与を容易にすることができ、そして／もしくは所望の組成物を製造するために役立ち得る。これらの組成物は様々な方法において、例えば経皮パッチとして、スポットオンとして、軟膏として投与することができる。投与の容易さおよび投薬量の均一性のために投与単位形態物における上記の製薬学的組成物を調合することは特に有益である。投与単位形態物は、本明細書および本明細書の請求項において用いる場合、単位投薬量として適当な物理的に分離した単位をさし、各単位は、必要とされる製薬学的担体と会合して所望の治療効果をもたらすように計算された有効成分の所定量を含有する。そのような投与単位形態物の例は、錠剤（分割錠もしくはコート錠を包含する）、カプセル剤、丸剤、散剤パケット、カシェ剤、注入可能な液剤もしくは懸濁剤、茶さじ一杯分、大さじ一杯分など、およびその分離した倍量である。
【０１７９】
投与の容易さおよび投薬量の均一性のために投与単位形態物における上記の製薬学的組成物を調合することは特に有益である。投与単位形態物は、本明細書および本明細書の請求項において用いる場合、単位投薬量として適当な物理的に分離した単位をさし、各単位は、必要とされる製薬学的担体と会合して所望の治療効果をもたらすように計算された有効成分の所定量を含有する。そのような投与単位形態物の例は、錠剤（分割錠もしくはコート錠を包含する）、カプセル剤、丸剤、散剤パケット、カシェ剤、注入可能な液剤もしくは懸濁剤、茶さじ一杯分、大さじ一杯分など、およびその分離した倍量である。
【０１８０】
本発明の化合物は、アポトーシスを誘導するか、細胞死を誘導するかもしくは細胞周期を調節するために十分な量において投与される。
【０１８１】
従って、本発明の化合物は、ｐ５３の発現を増加するためにもしくはその抗腫瘍活性を働かせるために十分な量において投与される。
【０１８２】
当業者は、以下に提示する試験結果から有効量を容易に決定することができる。一般に、治療的に有効な量は０．００５ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、そして特に０．００５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であると考えられる。必要とされる用量を１日を通して適切な間隔で１、２、３、４もしくはそれ以上のサブ用量として投与することは適切であり得る。該サブ用量は、例えば単位投与形態物当たり０．５〜５００ｍｇ、特に１ｍｇ〜５００ｍｇ、さらに特に１０ｍｇ〜５００ｍｇの有効成分を含有する単位投与形態物として調合することができる。
【０１８３】
投与の方法により、製薬学的組成物は好ましくは０．０５〜９９重量％、より好ましくは０．１〜７０重量％、さらにより好ましくは０．１〜５０重量％の本発明の化合物および１〜９９．９５重量％、より好ましくは３０〜９９．９重量％、さらにより好ましくは５０〜９９．９重量％の製薬学的に許容しうる担体を含んでなり、全てのパーセンテージは組成物の総重量に基づく。
【０１８４】
本発明の別の態様として、特に薬剤としての使用のための、さらに特に癌もしくは関連疾患の処置における、別の抗癌剤と本発明の化合物との組み合わせが考えられる。
【０１８５】
上記の症状の処置のために、本発明の化合物は１つもしくはそれ以上の他の薬剤と、さらに特に他の抗癌剤もしくは癌治療におけるアジュバントと組み合わせて都合良く用いることができる。抗癌剤もしくはアジュバント（治療における支持剤）の例には：
−白金配位化合物、例えば場合によりアミホスチンと組み合わせたシスプラチン、カルボプラチンもしくはオキサリプラチン；
−タキサン化合物、例えばパクリタキセル、パクリタキセルタンパク質結合粒子（アブラキサンＴＭ）もしくはドセタキセル；
−カンプトテシン化合物のようなトポイソメラーゼＩ阻害剤、例えばイリノテカン、ＳＮ−３８、トポテカン、トポテカンｈｃｌ；
−抗腫瘍性エピポドフィロトキシンもしくはポドフィロトキシン誘導体のようなトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えばエトポシド、リン酸エトポシドもしくはテニポシド；
−抗腫瘍性ビンカアルカロイド、例えばビンブラスチン、ビンクリスチンもしくはビノレルビン；
−抗腫瘍性ヌクレオシド誘導体、例えば５−フルオロウラシル、ロイコボリン、ゲムシタビン、ゲムシタビンｈｃｌ、カペシタビン、クラドリビン、フルダラビン、ネララビン；
−ナイトロジェンマスタードもしくはニトロソウレアのようなアルキル化剤、例えばシクロホスファミド、クロラムブシル、カルムスチン、チオテパ、メファラン（メルファラン）、ロムスチン、アルトレタミン、ブスルファン、ダカルバジン、エストラムスチン、場合によりメスナと組み合わせたイホスファミド、ピポブロマン、プロカルバジン、ストレプトゾシン、テロゾロミド、ウラシル；
−抗腫瘍性アントラサイクリン誘導体、例えばダウノルビシン、場合によりデクスラゾキサンと組み合わせたドキソルビシン、ドキシル、イダルビシン、ミトキサントロン、エピルビシン、エピルビシンｈｃｌ、バルルビシン；
−ＩＧＦ−１受容体を標的とする分子、例えばピクロポドフィリン；
−テトラカルシン誘導体、例えばテトロカルシンＡ；
−グルココルチコイド（ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏiｄｅｎ）、例えばプレドニソン；
−抗体、例えばトラスツズマブ（ＨＥＲ２抗体）、リツキシマブ（ＣＤ２０抗体）、ゲムツズマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、セツキシマブ、ペルツズマブ、ベバシズマブ、アレムツズマブ、エクリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、ノフェツモマブ、パニツムマブ、トシツモマブ、ＣＮＴＯ３２８；
−エストロゲン受容体アンタゴニストもしくは選択的エストロゲン受容体モジュレーターもしくはエストロゲン合成の阻害剤、例えばタモキシフェン、フルベストラント、トレミフェン、ドロロキシフェン、ファスロデックス、ラロキシフェンもしくはレトロゾール；
−エキセメスタン、アナストロゾール、レトラゾール、テストラクトンおよびボロゾールのようなアロマターゼ阻害剤；
−レチノイド、ビタミンＤもしくはレチノイン酸およびレチノイン酸代謝遮断薬（ＲＡＭＢＡ）のような分化剤、例えばアキュテイン；
−ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばアザシチジンもしくはデシタビン；
−抗葉酸剤、例えばプレメトレキセド２ナトリウム；
−抗生物質、例えばアンチノマイシンＤ、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、ダクチノマイシン、カルミノマイシン、ダウノマイシン、レバミソール、プリカマイシン、ミトラマイシン；
−代謝拮抗剤、例えばクロファラビン、アミノプテリン、シトシンアラビノシドもしくはメトトレキセート、アザシチジン、シタラビン、フロクスウリジン、ペントスタチン、チオグアニン；
−Ｂｃｌ−２阻害剤のようなアポトーシス誘導剤および血管新生阻害剤、例えばＹＣ１３７、ＢＨ３１２、ＡＢＴ７３７、ゴシポール、ＨＡ１４−１、ＴＷ３７もしくはデカン酸；
−チューブリン結合剤、例えばコンブレスタチン、コルヒシンもしくはノコダゾール；
−キナーゼ阻害剤（例えばＥＧＦＲ（表皮成長因子受容体）阻害剤、ＭＴＫＩ（マルチターゲット型キナーゼ阻害剤）、ｍＴＯＲ阻害剤）、例えばフラボペリドール（ｆｌａｖｏｐｅｒｉｄｏｌ）、メシル酸イマチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ダサチニブ、ラパチニブ、２トシル酸ラパチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、マレイン酸スニチニブ、テムシロリムス；
−ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばチピファルニブ；
−ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、例えば酪酸ナトリウム、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、デプシペプチド（ＦＲ９０１２２８）、ＮＶＰ−ＬＡＱ８２４、Ｒ３０６４６５、ＪＮＪ−２６４８１５８５、トリコスタチンＡ、ボリノスタット；
−ユビキチン−プロテアソーム経路の阻害剤、例えばＰＳ−３４１、ＭＬＮ．４１もしくはボルテゾミブ；
−ヨンデリス；
−テロメラーゼ阻害剤、例えばテロメスタチン；
−マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、例えばバチマスタット、マリマスタット、プリノスタットおよびメタスタット；
−組換えインターロイキン、例えばアルデスロイキン、デニロイキンディフティトックス、インターフェロンアルファ２ａ、インターフェロンアルファ２ｂ、ペグインターフェロンアルファ２ｂ；
−ＭＡＰＫ阻害剤；
−レチノイド、例えばアリトレチノイン、ベキサロテン、トレチノイン；
−三酸化ヒ素；
−アスパラギナーゼ；
−ステロイド、例えばプロピオン酸ドロモスタノロン、酢酸メゲストロール、ナンドロロン（デカノエート、フェンプロピオネート）、デキサメタゾン；
−ゴナドトロピン放出ホルモンアゴニストもしくはアンタゴニスト、例えばアバレリクス、酢酸ゴセレリン、酢酸ヒストレリン、酢酸ロイプロリド；
−サリドマイド、レナリドミド；
−メルカプトプリン、ミトタン、パミドロネート、ペグアデマーゼ、ペグアスパラガーゼ、ラスブリカーゼ；
−ＢＨ３模倣物、例えばＡＢＴ−７３７；
−ＭＥＫ阻害剤、例えばＰＤ９８０５９、ＡＺＤ６２４４、ＣＩ−１０４０；
−コロニー刺激因子アナログ、例えばフィルグラスチム、ペグフィルグラスチム、サルグラモスチム；エリスロポエチンもしくはそのアナログ（例えばダルベポエチンアルファ）；インターロイキン１１；オプレルベキン；ゾレドロネート、ゾレドロン酸；フェンタニル；ビスホスホネート；パリフェルミン；
−ステロイドシトクロムＰ４５０  １７アルファ−ヒドロキシラーゼ−１７，２０−リアーゼ阻害剤（ＣＹＰ１７）、例えばアビラテロン、酢酸アビラテロン
が包含されるがこれらに限定されるものではない。
【０１８６】
上記の通り、本発明の化合物はまた放射線療法および化学療法に腫瘍細胞を感受性にすることにおいて治療的適応も有する。
【０１８７】
従って、本発明の化合物は「放射線増感剤」および／もしくは「化学療法増感剤（ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ）」として用いることができ、または別の「放射線増感剤」および／もしくは「化学療法増感剤」と組み合わせて与えることができる。
【０１８８】
「放射線増感剤」という用語は、本明細書において用いる場合、電離放射線への細胞の感受性を増加するためにそして／もしくは電離放射線で処置可能な疾患の処置を促進するために治療的に有効な量において動物に投与される分子、好ましくは低分子量分子として定義される。
【０１８９】
「化学療法増感剤」という用語は、本明細書において用いる場合、化学療法への細胞の感受性を増加するためにそして／もしくは化学療法で処置可能な疾患の処置を促進するために治療的に有効な量において動物に投与される分子、好ましくは低分子量分子として定義される。
【０１９０】
下記のものを包含する放射線増感剤の作用形態のいくつかの機序は文献において示唆されており：低酸素細胞放射線増感剤（例えば、２−ニトロイミダゾール化合物およびベンゾトリアジンジオキシド化合物）は低酸素下で酸素を模倣するかあるいはまた生体内還元剤のようにふるまい；非低酸素細胞放射線増感剤（例えばハロゲン化ピリミジン）はＤＮＡ塩基のアナログでありそして癌細胞のＤＮＡに優先的に入り、それによりＤＮＡ分子の放射線誘発分解を促進しそして／もしくは通常のＤＮＡ修復機序を妨げることができ；そして様々な他の潜在的作用機序が疾患の処置において放射線増感剤に仮定されている。
【０１９１】
多数の癌処置プロトコルは、現在、ｘ線の照射と併せて放射線増感剤を用いる。ｘ線活性化放射線増感剤の例には、以下のもの：メトロニダゾール、ミソニダゾール、デスメチルミソニダゾール、ピモニダゾール、エタニダゾール、ニモラゾール、マイトマイシンＣ、ＲＳＵ１０６９、ＳＲ４２３３、ＥＯ９、ＲＢ６１４５、ニコチンアミド、５−ブロモデオキシウリジン（ＢＵｄＲ）、５−ヨードデオキシウリジン（ＩＵｄＲ）、ブロモデオキシシチジン、フルオロデオキシウリジン（ＦｕｄＲ）、ヒドロキシウレア、シスプラチン、ならびにそれらの治療的に有効なアナログおよび誘導体が包含されるがこれらに限定されるものではない。
【０１９２】
癌の光線力学的療法（ＰＤＴ）は、増感剤の放射線活性化因子として可視光を用いる。
光線力学的放射線増感剤の例には、以下のもの：ヘマトポルフィリン誘導体、フォトフリン、ベンゾポルフィリン誘導体、スズエチオポルフィリン、フェオボルビド−ａ、バクテリオクロロフィル−ａ、ナフタロシアニン、フタロシアニン、亜鉛フタロシアニン、ならびにそれらの治療的に有効なアナログおよび誘導体が包含されるがこれらに限定されるものではない。
【０１９３】
放射線増感剤は、標的細胞への放射線増感剤の導入を促進する化合物；標的細胞への治療、栄養物および／もしくは酸素のフローを制御する化合物；追加の放射線と共にもしくはそれなしに腫瘍に作用する化学療法剤；または癌もしくは他の疾患を処置するための他の治療的に有効な化合物が包含されるがこれらに限定されるものではない、１つもしくはそれ以上の他の化合物の治療的に有効な量と併せて投与することができる。
【０１９４】
化学療法増感剤は、標的細胞への化学療法増感剤の導入を促進する化合物；標的細胞への治療、栄養物および／もしくは酸素のフローを制御する化合物；腫瘍に作用する化学療法剤または癌もしくは他の疾患を処置するための他の治療的に有効な化合物が包含されるがこれらに限定されるものではない、１つもしくはそれ以上の他の化合物の治療的に有効な量と併せて投与することができる。カルシウムアンタゴニスト、例えばベラパミルは、一般に認められる化学療法剤に耐性を示す腫瘍細胞において化学療法感受性を樹立するためにそして薬剤感受性悪性腫瘍においてそのような化合物の効能を強化するために抗癌剤との組み合わせにおいて有用であることが見出される。
【０１９５】
本発明の組み合わせの成分、すなわち、１つもしくはそれ以上の他の薬剤および本発明の化合物は、それらの有用な薬理学的特性を考慮して、投与目的のために様々な製薬学的形態に調合することができる。これらの成分は、個々の製薬学的組成物において別個にもしくは全ての成分を含有する単一の製薬学的組成物において調合することができる。
【０１９６】
従って、本発明はまた製薬学的担体と一緒に１つもしくはそれ以上の他の薬剤および本発明の化合物を含んでなる製薬学的組成物にも関する。
【０１９７】
本発明はさらに、腫瘍細胞の成長を抑制するための製薬学的組成物の製造における本発明の組み合わせの使用に関する。
【０１９８】
本発明はさらに、癌を患っている患者の処置における同時、別個もしくは逐次使用のための組み合わされた製剤として、第一の有効成分として本発明の化合物をそしてさらなる有効成分として１つもしくはそれ以上の抗癌剤を含有する製品に関する。
【０１９９】
１つもしくはそれ以上の他の薬剤および本発明の化合物は、同時に（例えば別個のもしくは単一の組成物において）またはいずれかの順に逐次投与することができる。後者の場合、２つもしくはそれ以上の化合物は、有益なもしくは相乗効果が得られることを保証するために十分である期間内にそして量および方法において投与される。投与の好ましい方法および順序ならびに組み合わせの各成分のそれぞれの投薬量および処方計画は、投与する特定の他の薬剤および本発明の化合物、それらの投与経路、処置する特定の腫瘍および処置する特定の宿主によって決まることが理解される。投与の最適な方法および順序ならびに投薬量および処方計画は、常法を用いてそして本明細書に提示する情報を考慮して当業者により容易に決定されることができる。
【０２００】
組み合わせとして与える場合に本発明の化合物および１つもしくはそれ以上の他の抗癌剤の重量比は、当業者により決定されることができる。該比率ならびに正確な投薬量および投与の頻度は、当業者に周知であるように、使用する本発明の特定の化合物および他の抗癌剤（１つもしくは複数）、処置する特定の症状、処置する症状の重症度、特定の患者
の年齢、体重、性別、食事、投与時期および一般的な身体状態、投与の形態ならびに個体が服用している可能性がある他の薬剤により決まる。さらに、有効毎日量は処置した患者の反応によりそして／もしくは本発明の化合物を処方する医師の評価により減らすかもしくは増やし得ることは明らかである。式（Ｉ）の本発明の化合物および別の抗癌剤の特定の重量比は、１／１０〜１０／１、さらに特に１／５〜５／１、なおさらに特に１／３〜３／１であることができる。
【０２０１】
白金配位化合物は、処置過程につき、体表面積の平方メートル当たり１〜５００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば５０〜４００ｍｇ／ｍ２の投薬量において、特にシスプラチンでは約７５ｍｇ／ｍ２の投薬量において、そしてカルボプラチンでは約３００ｍｇ／ｍ２の投薬量において都合良く投与される。
【０２０２】
タキサン化合物は、処置過程につき、体表面積の平方メートル当たり５０〜４００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば７５〜２５０ｍｇ／ｍ２の投薬量において、特にパクリタキセルでは約１７５〜２５０ｍｇ／ｍ２の投薬量において、そしてドセタキセルでは約７５〜１５０ｍｇ／ｍ２において都合良く投与される。
【０２０３】
カンプトテシン化合物は、処置過程につき、体表面積の平方メートル当たり０．１〜４００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば１〜３００ｍｇ／ｍ２の投薬量において、特にイリノテカンでは約１００〜３５０ｍｇ／ｍ２の投薬量において、そしてトポテカンでは約１〜２ｍｇ／ｍ２において都合良く投与される。
【０２０４】
抗腫瘍性ポドフィロトキシン誘導体は、処置過程につき、体表面積の平方メートル当たり３０〜３００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば５０〜２５０ｍｇ／ｍ２の投薬量において、特にエトポシドでは約３５〜１００ｍｇ／ｍ２の投薬量において、そしてテニポシドでは約５０〜２５０ｍｇ／ｍ２において都合良く投与される。
【０２０５】
抗腫瘍性ビンカアルカロイドは、処置過程につき、体表面積の平方メートル当たり２〜３０ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）の投薬量において、特にビンブラスチンでは約３〜１２ｍｇ／ｍ２の投薬量において、ビンクリスチンでは約１〜２ｍｇ／ｍ２の投薬量において、そしてビノレルビンでは約１０〜３０ｍｇ／ｍ２の投薬量において都合良く投与される。
【０２０６】
抗腫瘍性ヌクレオシド誘導体は、処置過程につき、体表面積の平方メートル当たり２００〜２５００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば７００〜１５００ｍｇ／ｍ２の投薬量において、特に５−ＦＵでは２００〜５００ｍｇ／ｍ２の投薬量において、ゲムシタビンでは約８００〜１２００ｍｇ／ｍ２の投薬量において、そしてカペシタビンでは約１０００〜２５００ｍｇ／ｍ２において都合良く投与される。
【０２０７】
ナイトロジェンマスタードもしくはニトロソウレアのようなアルキル化剤は、処置過程につき、体表面積の平方メートル当たり１００〜５００ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば１２０〜２００ｍｇ／ｍ２の投薬量において、特にシクロホスファミドでは約１００〜５００ｍｇ／ｍ２の投薬量において、クロラムブシルでは約０．１〜０．２ｍｇ／ｋｇの投薬量において、カルムスチンでは約１５０〜２００ｍｇ／ｍ２の投薬量において、そしてロムスチンでは約１００〜１５０ｍｇ／ｍ２の投薬量において都合良く投与される。
【０２０８】
抗腫瘍性アントラサイクリン誘導体は、処置過程につき、体表面積の平方メートル当たり１０〜７５ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、例えば１５〜６０ｍｇ／ｍ２の投薬量において、特にドキソルビシンでは約４０〜７５ｍｇ／ｍ２の投薬量において、ダウノルビシンでは約２５〜４５ｍｇ／ｍ２の投薬量において、そしてイダルビシンでは約１０〜１５ｍｇ／ｍ２の投薬量において都合良く投与される。
【０２０９】
抗エストロゲン剤は、特定の薬剤および処置する症状により毎日約１〜１００ｍｇの投薬量において都合良く投与される。タモキシフェンは、治療効果を達成しそして維持するために十分な期間にわたって治療を続けて、５〜５０ｍｇ、好ましくは１０〜２０ｍｇの投薬量において１日に２回都合良く経口投与される。トレミフェンは、治療効果を達成しそして維持するために十分な期間にわたって治療を続けて、１日に１回約６０ｍｇの投薬量において都合良く経口投与される。アナストロゾールは、１日に１回約１ｍｇの投薬量において都合良く経口投与される。ドロロキシフェンは、１日に１回約２０〜１００ｍｇの投薬量において都合良く経口投与される。ラロキシフェンは、１日に１回約６０ｍｇの投薬量において都合良く経口投与される。エキセメスタンは、１日に１回約２５ｍｇの投薬量において都合良く経口投与される。
【０２１０】
抗体は、体表面積の平方メートル当たり約１〜５ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）の投薬量において、もしくは異なる場合、当該技術分野において既知の通り都合良く投与される。トラスツズマブは、処置過程につき、体表面積の平方メートル当たり１〜５ｍｇ（ｍｇ／ｍ２）、特に２〜４ｍｇ／ｍ２の投薬量において都合良く投与される。これらの投薬量は、処置過程につき例えば１、２回もしくはそれ以上投与することができ、それは例えば７、１４、２１もしくは２８日ごとに繰り返すことができる。
【０２１１】
式（Ｉ）の化合物、製薬学的に許容しうる付加塩、特に製薬学的に許容しうる酸付加塩、およびその立体異性体は、標識化合物と他の分子、ペプチド、タンパク質、酵素もしくは受容体との間の複合体の形成を検出するかもしくは同定するためにそれらを使用することができる点において有益な診断特性を有することができる。
【０２１２】
検出もしくは同定方法は、放射性同位体、酵素、蛍光物質、発光物質などのような標識薬剤で標識される化合物を使用することができる。放射性同位体の例には、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３Ｈおよび１４Ｃが包含される。酵素は、通常、次に検出可能な反応を触媒する適切な基質の結合により検出可能にする。その例には、例えばベータ−ガラクトシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼおよびリンゴ酸デヒドロゲナーゼ、好ましくは西洋ワサビペルオキシダーゼが包含される。発光物質には、例えばルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、エクオリンおよびルシフェラーゼが包含される。
【０２１３】
生物学的サンプルは、体組織もしくは体液として定義することができる。体液の例は、脳脊髄液、血液、血漿、血清、尿、痰、唾液などである。
【０２１４】
以下の実施例は、本発明を説明する。
【実施例】
【０２１５】
実験の部
以下、「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドとして定義され、「ＤＣＭ」はジクロロメタンとして定義され、「ＤＩＰＥ」はジイソプロピルエーテルとして定義され、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドとして定義され、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルとして定義され、「ＥｔＯＨ」はエタノールとして定義され、「ＭｅＯＨ」はメタノールとして定義され、そして「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランとして定義される。
【０２１６】
Ａ．中間化合物の製造
実施例Ａ１
ａ）中間体１の製造
【０２１７】
【化４２】
0005612611.tif 000043
【０２１８】
ＤＣＭ（５０ｍｌ）中の４−クロロ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−７−オール（中間体３）［ＣＡＳ１２６０５３−１５−４］（５ｇ、１Ｅｑ、０．０２９ｍｏｌ）の溶液に酸化マンガン（３３．３１ｇ、１３Ｅｑ、０．３８３２ｍｏｌ）を少しずつ加えた。混合物を室温で２４時間攪拌し、そして次にセライト上で濾過した。溶媒を蒸発させ、３．２５ｇ（６６％）の中間体１を生成せしめた。
【０２１９】
ｂ）中間体２の製造
【０２２０】
【化４３】
0005612611.tif 000044
【０２２１】
Ｎ２フロー下で−５〜０℃でＴＨＦ（４ｍｌ）中の中間体１（０．２２０ｇ、１Ｅｑ、０．００１３ｍｏｌ）の溶液に塩化メチルマグネシウム（１．４７ｍｌ、３．２Ｅｑ、０．０００４ｍｏｌ）を滴下して加えた。反応物を室温で１．５時間攪拌した。０〜１０℃で、塩化アンモニウム（水中１０％）およびＥｔＯＡｃを加えた。混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出し、そして次に有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残留物（０．２１５ｇ）をシリカゲル上でカラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ５０／５０）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、０．１２０ｇ（５０％）の中間体２を生成せしめた。
【０２２２】
実施例Ａ２
ａ）中間体３の製造
【０２２３】
【化４４】
0005612611.tif 000045
【０２２４】
ＭｅＯＨ（８０ｍｌ）中の中間体１（７．７２ｇ、４６．０６ｍｍｏｌ）の溶液に５℃でテトラヒドロホウ酸ナトリウム（１．９２ｇ、５０．６７ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。反応混合物を室温で１晩にわたって攪拌し、そして次に水に注ぎ出した。混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機層を水およびＮａＣｌ溶液で洗浄し、分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を蒸発させ、６．３８ｇ（８１．７％）の中間体３（５０／５０混合物ＲＳ）を生成せしめた。この生成物を次の段階においてさらに精製せずに使用した。
【０２２５】
ｂ）中間体４の製造
【０２２６】
【化４５】
0005612611.tif 000046
【０２２７】
０℃でそしてＮ２雰囲気下で、ＴＨＦ（無水、３０ｍｌ）中の中間体３（３．００ｇ、１７．７０ｍｍｏｌ）の溶液に水素化ナトリウム（１．０６ｇ、４４．２２ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。反応物を０℃で１５分間攪拌した。次に０℃で、混合物にヨードメタン（１．６５ｍｌ、２６．５３ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応物を室温で１晩にわたって攪拌した。混合物を室温まで冷却し、そして冷水を滴下して加えた。混合物を１時間攪拌し、そして次にＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を蒸発させ、３．１０ｇ（９５．４％）の中間体４を生成せしめた。この生成物を次の段階においてさらに精製せずに使用した。
【０２２８】
実施例Ａ３
ａ）中間体５の製造
【０２２９】
【化４６】
0005612611.tif 000047
【０２３０】
酢酸（３００ｍｌ）中の１Ｈ−インドール−７−カルボン酸、メチルエステル（０．０９１ｍｏｌ）、エシェンモーザー塩（０．１ｍｏｌ）を６５℃で２時間加熱した。沈殿物を濾過して分離し、ＤＣＭおよび炭酸カリウム１０％に溶解した。炭酸カリウム（固体）を加え、そして混合物を室温で１時間攪拌し、そして次に抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を蒸発させ、１０ｇの中間体５を生成せしめた。
【０２３１】
ｂ）中間体６の製造
【０２３２】
【化４７】
0005612611.tif 000048
【０２３３】
ＥｔＯＨ（３００ｍｌ）中の中間体５（０．０４３ｍｏｌ）、ヨードメタン（０．０４７ｍｏｌ）を室温で一晩攪拌した。沈殿物を濾過して分離し、そして乾燥させ、８．３ｇの中間体６を生成せしめた。
【０２３４】
ｃ）中間体７の製造
【０２３５】
【化４８】
0005612611.tif 000049
【０２３６】
ＤＭＦ（１００ｍｌ）中の中間体６（０．０２３ｍｏｌ）、シアン化ナトリウム（０．０３ｍｏｌ）を１１０℃で２時間加熱した。反応混合物を氷水に注ぎ出し、１時間攪拌した。沈殿物を濾過して分離し、そしてＤＣＭに溶解した。溶液を抽出し、有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして蒸発させ、５．１ｇの中間体７を生成せしめた。
【０２３７】
ｄ）中間体８の製造
【０２３８】
【化４９】
0005612611.tif 000050
【０２３９】
Ｎ２フロー下で５℃でＴＨＦ（５０ｍｌ）中の中間体７（０．０１８ｍｏｌ）
の溶液に塩化メチルマグネシウム（０．０５８ｍｏｌ）を滴下して加えた。反応混合物を５℃で１時間攪拌した。塩化アンモニウム１０％を５℃で滴下して加えた。反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして蒸発させ、４ｇの中間体８を生成せしめた。
【０２４０】
ｅ）中間体９の製造
【０２４１】
【化５０】
0005612611.tif 000051
【０２４２】
ＭｅＯＨ／ＮＨ３（５０ｍｌ）中の中間体８（０．０１９ｍｏｌ）、ラネーニッケル（４ｇ）を室温で３バール下で２時間水素化した。反応混合物をセライト上で濾過し、ＤＣＭで洗浄し、そして濾液を蒸発させ、３．５ｇの中間体９を生成せしめた。
【０２４３】
ｆ）中間体１０の製造
【０２４４】
【化５１】
0005612611.tif 000052
【０２４５】
ＤＭＳＯ（１００ｍｌ）中の中間体９（０．０１６ｍｏｌ）、２−フルオロ−５−ニトロトルエン（０．０１８ｍｏｌ）、モノナトリウムカーボネートアニオン（０．０１９ｍｏｌ）の混合物を６０℃で一晩加熱した。混合物を室温まで冷却した。氷水を加え、ＤＣＭを加えた。反応混合物を抽出し、有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。残留物をシリカゲル上でカラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ６０／４０）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、２．８ｇの中間体１０を生成せしめた。
【０２４６】
ｇ）中間体１１の製造
【０２４７】
【化５２】
0005612611.tif 000053
【０２４８】
ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の中間体１０（０．００７９ｍｏｌ）、酸化バナジウム（０．０５ｇ）、ＤＩＰＥ（１ｍｌ）中のチオフェン（４％）溶液、Ｐｔ／Ｃ５％（１．３ｇ）を室温で大気圧で１晩にわたって水素化した。反応物を濾過し、そして溶媒を蒸発させ、中間体１１を生成せしめた。この生成物を次の段階においてさらに精製せずに使用した。
【０２４９】
以下の中間体は、方法Ａ３に従って製造する。
【０２５０】
【化５３】
0005612611.tif 000054
【０２５１】
実施例Ａ４
あるいはまた中間体７は下記の通り製造した。
【０２５２】
ａ）中間体１２の製造
【０２５３】
【化５４】
0005612611.tif 000055
【０２５４】
メチルベンゼン（６０ｍｌ）中の１Ｈ−インドール−７−カルボキシアルデヒド（３４．４４ｍｍｏｌ）の溶液に室温で１−（トリフェニルホスホルアニリデン）−２−プロパノン（３４．４ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。反応混合物を１００℃で３時間加熱し、そして次に室温まで冷却し、そして蒸発乾固させた。残留物（１７．４ｇ）をシリカ：２０〜４５μｍ（４５０ｇ）上でＨＰＬＣにより精製した（溶離剤９９．５／０．５  ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、４．３ｇの中間体１２を生成せしめた。
【０２５５】
ｂ）中間体１３の製造
【０２５６】
【化５５】
0005612611.tif 000056
【０２５７】
酢酸（１０ｍｌ）中の中間体１２（３．４ｍｍｏｌ）およびエシェンモーザー塩（３．８ｍｍｏｌ）を６５℃で２時間加熱した。沈殿物を濾過して分離し、ＤＣＭおよび炭酸カリウム１０％に溶解した。炭酸カリウム（固体）を加え、そして混合物を室温で１時間攪拌した。反応混合物を抽出し、有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を蒸発させ、０．７ｇの中間体１３を生成せしめた。
【０２５８】
ｃ）中間体１４の製造
【０２５９】
【化５６】
0005612611.tif 000057
【０２６０】
ＥｔＯＨ（３００ｍｌ）中の中間体１３（０．１３ｍｏｌ）、ヨードメタン（０．１４ｍｏｌ）を室温で２日間攪拌した。沈殿物を濾過して分離し、そして乾燥させ、４７ｇの
中間体１４を生成せしめた。
【０２６１】
ｄ）中間体１５の製造
【０２６２】
【化５７】
0005612611.tif 000058
【０２６３】
ＤＭＦ（４００ｍｌ）中の中間体１４（１３６．５ｍｍｏｌ）、シアン化ナトリウム（１７７．５ｍｍｏｌ）を室温で２時間攪拌した。水を加え、そして反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして蒸発させた。残留物を高速液体クロマトグラフィーにより精製した（不定形ＳｉＯＨ  ２０〜４５μｍ
１０００ｇ  ＭＡＴＲＥＸ）。移動相：シクロヘキサン７０％／ＥｔＯＡｃ３０％）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、１１．８ｇの中間体１５を生成せしめた。
【０２６４】
ｅ）中間体１６の製造
【０２６５】
【化５８】
0005612611.tif 000059
【０２６６】
ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の中間体１５（０．０２２ｍｏｌ）の溶液に塩化メチルマグネシウム（０．０７ｍｏｌ）を滴下して加えた。ＮＨ４Ｃｌ  １０％およびＥｔＯＡｃを加えた。反応混合物を抽出し、有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残留物（２．９ｇ）を高速液体クロマトグラフィーにより精製した（不定形ＳｉＯＨ  ２０〜４５μｍ  ４５０ｇＭＡＴＲＥＸ）。移動相：シクロヘキサン６０％／ＥｔＯＡｃ  ４０％）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、２ｇの中間体１６を生成せしめた。
【０２６７】
ｆ）中間体７の製造
【０２６８】
【化５９】
0005612611.tif 000060
【０２６９】
ＤＭＣ（２０ｍｌ）中の中間体１６（１０ｍｍｏｌ）の溶液にデス−マーチンペルヨージナン（２４．９ｍｌ）を室温で滴下して加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌し、次に氷水に注ぎ出し、セライト上で濾過し、そして濾液をＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を濃縮した。残留物（２．８ｇ）をシ
リカゲル上でカラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤  シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ６０／４０）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、０．８ｇの中間体７を生成せしめた。
【０２７０】
実施例Ａ５
あるいはまた中間体１５は下記の通り製造した。
【０２７１】
ａ）中間体１７の製造
【０２７２】
【化６０】
0005612611.tif 000061
【０２７３】
Ｎ２フロー下で５℃でＴＨＦ（５０ｍｌ）中の３−（シアノメチル）−１Ｈ−インドール−７−カルボン酸、メチルエステル（０．０１２ｍｏｌ、２．６ｇ）の溶液にテトラヒドロアルミン酸リチウム（０．０１８ｍｏｌ、０．６９ｇ）を少しずつ加えた。反応混合物を室温で３０分間攪拌した。水を５℃で滴下して加え、そして反応混合物をセライト上で濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、そして抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮し、２．４ｇの中間体１７を生成せしめた。
【０２７４】
ｂ）中間体１５の製造
【０２７５】
【化６１】
0005612611.tif 000062
【０２７６】
ＤＣＭ（１５ｍｌ）中の中間体１７（０．００８１ｍｏｌ）の溶液にデス−マーチンペルヨージナン（０．０１６ｍｏｌ）を５℃で滴下して加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応混合物をセライト上で濾過し、濾液を蒸発させた。残留物をカラムクロマトグラフィーによりシリカゲル上で精製した（溶離剤  シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ７０／３０）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、０．５ｇの中間体１５を生成せしめた。
【０２７７】
実施例Ａ６
中間体１８、１９および２０の製造
【０２７８】
【化６２】
0005612611.tif 000063
【０２７９】
酢酸エテニルエステル（５０ｍｌ）中の４−クロロ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−７−オール（５ｇ、０．０２９ｍｏｌ）およびリパーゼカンジダアンタルチカＢ（２．５ｇ）の混合物を室温で４時間攪拌した。反応混合物をセライト上で濾過した。セライトをＤＣＭで洗浄した。濾液の溶媒を蒸発させた。残留物（６．３ｇ）をシリカゲル上でカラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １００／０〜９８／２；１５〜４０μｍ）。２つの異なる生成物画分を集め、そして各生成物画分の溶媒を蒸発させ、２．１ｇの中間体１８（４２％；Ｓ−鏡像異性体）および３．６ｇの中間体１９（５８％；Ｒ−鏡像異性体）を生成せしめた。所望に応じて、中間体１９はＭｅＯＨ／ＮＨ３中の反応により中間体１８のＲ鏡像異性体に転化し、中間体２０を生成せしめることができる。
【０２８０】
あるいはまた中間体１８および２０は下記の通り製造した。
【０２８１】
ＭｅＯＨ（５０ｍｌ）中の中間体１（５．５０ｇ、３２．８２ｍｍｏｌ）の溶液にテトラヒドロホウ酸ナトリウム（１．３７ｇ、３６．１０ｍｍｏｌ）を５℃で少しずつ加えた。反応混合物を室温で１晩にわたって攪拌し、そして次に水に注ぎ出し、そして混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機層を水およびＮａＣｌ水溶液により洗浄し、分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残留物（４．４２ｇ）をＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ−Ｈ  ５μｍ  ２５０ｘ２０ｍｍ上でキラル超臨界流体クロマトグラフィーにより精製した。移動相：８５％ＣＯ２、１５％ＭｅＯＨ。
【０２８２】
純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、１．６２５ｇ（２９．２％）の化合物１８（Ｓ−鏡像異性体）（ＤＭＦ、２０℃、濃度０．３３ｗ／ｖ％、５８９ｎｍ：−７７．５８°）および１．６２０ｇ（２９．１％）の化合物２０（Ｒ−鏡像異性体）（ＤＭＦ、２０℃、濃度０．３３ｗ／ｖ％、５８９ｎｍ：＋７６．７４°）を生成せしめた。
【０２８３】
実施例Ａ７
中間体２１の製造
【０２８４】
【化６３】
0005612611.tif 000064
【０２８５】
５℃でジエチルエーテル（２０ｍｌ）中の７−［２−［［（１，１−ジメチルエチル）
ジメチルシリル］オキシ］エチル］−１Ｈ−インドール（０．００４７ｍｏｌ）に塩化オキサリル（０．００７９ｍｏｌ）を滴下して加えた。反応混合物を５℃で２時間攪拌した。ＮＨ４ＯＨ（濃、２０ｍｌ）を５℃で溶液に滴下して加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌した。水およびＥｔＯＡｃを加えた。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮し、１．８ｇの中間体２１を生成せしめた。
【０２８６】
中間体２２の製造
【０２８７】
【化６４】
0005612611.tif 000065
【０２８８】
５℃でＴＨＦ（５０ｍｌ）中の中間体２１（０．００５２ｍｏｌ）の溶液にテトラヒドロアルミン酸リチウム（０．０２１ｍｏｌ）を少しずつ加えた。混合物を還流で一晩攪拌し、次に氷浴上で５℃で冷却した。水を滴下して加えて過剰のテトラヒドロアルミン酸リチウムを注意深く加水分解した。混合物をセライト上で濾過して分離し、ＤＣＭで洗浄し、そして抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮し、０．６ｇの中間体２２を生成せしめた。
【０２８９】
実施例Ａ８
ａ）中間体２３の製造
【０２９０】
【化６５】
0005612611.tif 000066
【０２９１】
ジエチルエーテル（１０ｍｌ）中の４−（１Ｈ−インドール−７−イル）−３−ブテン−２−オン（２．７ｍｍｏｌ）の溶液に塩化オキサリル（２．９ｍｍｏｌ）を５℃で滴下して加えた。氷浴を取り除き、そして反応物を室温まで温めておいた（１．５時間）。沈殿物を濾過して分離し、そして乾燥させ、０．４９ｇの中間体２３を生成せしめた。
【０２９２】
ｂ）中間体２４の製造
【０２９３】
【化６６】
0005612611.tif 000067
【０２９４】
５℃でジエチルエーテル（１０ｍｌ）中の中間体２３（０．７２５ｍｍｏｌ）の溶液に水酸化アンモニウム（１０ｍｌ）を滴下して加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌した。沈殿物を濾過して分離し、そして乾燥させ、０．１１ｇの中間体２４を生成せしめた。
【０２９５】
ｃ）中間体２５の製造
【０２９６】
【化６７】
0005612611.tif 000068
【０２９７】
５℃でＴＨＦ（２０ｍｌ）中の中間体２４（７．９ｍｍｏｌ）の溶液にテトラヒドロアルミン酸リチウム（３９．５ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。混合物を８０℃で２時間攪拌し、次に氷浴上で５℃で冷却した。水を滴下して加えて過剰のテトラヒドロアルミン酸リチウムを注意深く加水分解した。混合物をセライト上で濾過して分離し、ＤＣＭで洗浄し、そして抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮し、１ｇの中間体２５を生成せしめた。
【０２９８】
ｄ）中間体２６の製造
【０２９９】
【化６８】
0005612611.tif 000069
【０３００】
ＤＭＳＯ（１０ｍｌ）中の中間体２５（４．３ｍｍｏｌ）、２−フルオロ−５−ニトロトルエン（４．７ｍｍｏｌ）、モノナトリウムカーボネートアニオン（５．１ｍｍｏｌ）の混合物を６０℃で一晩加熱した。混合物を室温まで冷却した。氷水を加え、ＤＣＭを加えた。反応混合物を抽出し、有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして蒸発させた。残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅｏＨ  ９７／３）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させた。残留物を高速液体クロマトグラフィーにより精製した（不定形ＳｉＯＨ  １５〜４０μｍ  ３００ｇＭＥＲＣＫ）。移動相（ＮＨ４ＯＨ  ０．１％−ジクロロメタン９９％−ＭｅＯＨ  １％）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、２００ｍｇの中間体２６を生成せしめた。
【０３０１】
ｅ）中間体２７の製造
【０３０２】
【化６９】
0005612611.tif 000070
【０３０３】
ＭｅＯＨ（５ｍｌ）中の中間体２６（０．３５ｍｍｏｌ）、ラネーニッケル（２００ｍｇ）の混合物を室温で大気圧下で水素化した。残留物をセライト上で濾過し、ＤＣＭで洗浄し、そして残留物を蒸発させ、０．１４ｇの中間体２７を生成せしめた。
【０３０４】
実施例Ａ９
ａ）中間体２８の製造
【０３０５】
【化７０】
0005612611.tif 000071
【０３０６】
室温でＴＨＦ（５ｍｌ）中の中間体１６（１６２ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）、イミダゾール（１４３ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）の溶液にｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（１９５ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌した。沈殿物を濾過して分離し、そしてＤＣＭで洗浄した。濾液を蒸発させた。残留物（３６５ｍｇ）をシリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィーにより精製した（１５〜４０μｍ、３０ｇ、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：１００／０〜９９／１）。純粋画分を集め、そして蒸発乾固させて１９０ｍｇの中間体２８を生成せしめた。
【０３０７】
ｂ）中間体２９の製造
【０３０８】
【化７１】
0005612611.tif 000072
【０３０９】
ＭｅＯＨ中のＮＨ３  ７Ｎ（１０ｍｌ）中の中間体２８（１９０ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、ラネーニッケル（０．７ｇ）を３バールのＨ２下で室温で４時間攪拌した。反応物をセライト上で濾過し、そしてセライトをＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９０／１０）で３回洗浄した。溶媒を蒸発させて１４７ｍｇの中間体２９を生成せしめた。
【０３１０】
ｃ）中間体３０の製造
【０３１１】
【化７２】
0005612611.tif 000073
【０３１２】
ＤＭＳＯ（２ｍｌ）中の中間体２９（１４７ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、１−フルオロ−２−メチル−４−ニトロ−ベンゼン（７８ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム塩（１：１）（８５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の混合物を６５℃で１晩にわたって加熱した。混合物を氷に注ぎ込み、そして１０分攪拌し、ＤＣＭを加え、そして混合物をＤＣＭで２回抽出した。有機層を水で洗浄し、次にＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残留物をシリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィーにより精製した（１５〜４０μｍ、３０ｇ、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ８５／１５）。純粋画分を集め、そして蒸発乾固させ、２００ｍｇの中間体３０を生成せしめた。
【０３１３】
ｄ）中間体３１の製造
【０３１４】
【化７３】
0005612611.tif 000074
【０３１５】
ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の中間体３０（２．８ｇ、６．１７ｍｍｏｌ）、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（８ｇ、３７ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．１５ｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．８９ｍｌ、１３．６ｍｍｏｌ）を６０℃で２４時間攪拌した。混合物を蒸発乾固させた。残留物（７．４ｇ）をシリカゲル（カートリッジ１５〜４０μｍ、９０ｇ）上で高速液体クロマトグラフィーにより精製した。移動相（シクロヘキサン５０％；ジクロロメタン５０％）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、３．３ｇの中間体３１を生成せしめた。
【０３１６】
ｅ）中間体３２の製造
【０３１７】
【化７４】
0005612611.tif 000075
【０３１８】
ＭｅＯＨ（１００ｍｌ）中の中間体３１（３．３ｇ、５ｍｍｏｌ）、ラネーニッケル（３ｇ）の混合物を２．５バールで２時間水素化した。残留物をセライト上で濾過し、ＤＣ
Ｍで洗浄し、そして残留物を蒸発させ、２．７ｇの中間体３２を生成せしめた。
【０３１９】
ｆ）中間体３３の製造
【０３２０】
【化７５】
0005612611.tif 000076
【０３２１】
アセトニトリル（２８ｍｌ）およびＥｔＯＨ（７ｍｌ）中の中間体３２（２．６ｇ、４．２ｍｍｏｌ）、４−クロロ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−７−オール（０．７８ｇ、４．６ｍｍｏｌ）、ＨＣｌ  ジオキサン中４Ｍ（０．２１ｍｌ、０．８ｍｍｏｌ）を６５℃で７２時間加熱した。室温まで冷却した後に、水および炭酸カリウム粉末を加え、そして混合物をＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして蒸発させた。残留物を高速液体クロマトグラフィーにより精製した（不定形ＳｉＯＨ  ２０〜４５μｍ、４５０ｇ  ＭＡＴＲＥＸ）。移動相（ＮＨ４ＯＨ  ０．５％；ジクロロメタン９５％；ＭｅＯＨ  ５％）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、２．３５ｇの中間体３３を生成せしめた。
【０３２２】
ｇ）中間体３４の製造
【０３２３】
【化７６】
0005612611.tif 000077
【０３２４】
ＤＣＭ（５０ｍｌ）中の室温で溶液における中間体３３（２．２ｇ、２．９ｍｍｏｌ）およびトリス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミン（４７ｍｇ、０．１４５ｍｍｏｌ）に酸化マンガン（ＩＶ）（４．３ｇ）を少しずつ加えた。混合物を室温で１８時間攪拌した。混合物をセライト上で濾過した。セライトをＤＣＭで洗浄し、そして溶媒を蒸発させ、１．８４ｇの中間体３４を生成せしめた。
【０３２５】
ｈ）中間体３５の製造
【０３２６】
【化７７】
0005612611.tif 000078
【０３２７】
トリフルオロ酢酸（１．２ｍｌ、１５．９ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（１０ｍｌ）中の中間体３４（１．２ｇ、１．６ｍｍｏｌ）を室温で２日間攪拌した。炭酸カリウム１０％を加え、そして混合物をＤＣＭで２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして蒸発させて０．８ｇの中間体３５を生成せしめ。次の段階にさらに精製せずに使用した。
【０３２８】
実施例Ａ１０
ａ）中間体３６の製造
【０３２９】
【化７８】
0005612611.tif 000079
【０３３０】
ＥｔＯＨ（５０ｍｌ）中の３−［（ジメチルアミノ）メチル］−１Ｈ−インドール−７−カルボン酸、メチルエステル（０．０２２ｍｏｌ）の溶液にヨードメタン（０．０２４ｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩攪拌し、次に真空中で濃縮乾固させ、５．６ｇ（６８％）の中間体３６を生成せしめた。
【０３３１】
ｂ）中間体３７の製造
【０３３２】
【化７９】
0005612611.tif 000080
【０３３３】
ＤＭＦ（６０ｍｌ）中の中間体３６（０．０１５ｍｏｌ）およびシアン化ナトリウム（０．０１９ｍｏｌ）の混合物を１００℃で２時間攪拌した。水を加えた。沈殿物を濾過した。濾液を蒸発させ、３．５ｇ（１００％）の中間体３７を生成せしめた。
【０３３４】
ｃ）中間体３８の製造
【０３３５】
【化８０】
0005612611.tif 000081
【０３３６】
ＭｅＯＨ／ＮＨ３（５０ｍｌ）中の中間体３７（０．０１６ｍｏｌ）およびラネーニッケル（３ｇ）の混合物を３バールの圧力下で室温で水素化し、次にセライト上で濾過した。濾液を蒸発させ、３．２ｇ（８９％）の中間体３８を生成せしめた。
【０３３７】
ｄ）中間体３９の製造
【０３３８】
【化８１】
0005612611.tif 000082
【０３３９】
中間体３８（０．００９２ｍｏｌ）、１−フルオロ−４−ニトロ−ベンゼン（０．０１ｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．０２３ｍｏｌ）の混合物を１８０℃で２時間攪拌した。水を加えた。混合物をＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残留物（２．６ｇ）をクロマシル上でカラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ６０／４０）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、１．４ｇ（４５％）の中間体３９を生成せしめた。
【０３４０】
ｅ）中間体４０の製造
【０３４１】
【化８２】
0005612611.tif 000083
【０３４２】
ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の中間体３９（０．０５ｍｏｌ）および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（少量）の混合物に無水ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（０．０１５ｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を室温で一晩攪拌した。混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残留物（４ｇ）をシリカゲル上でカラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ６０／４０）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、３．３ｇ（８２％）の中間体４０を生成せしめた。
【０３４３】
ｆ）中間体４１の製造
【０３４４】
【化８３】
0005612611.tif 000084
【０３４５】
ＭｅＯＨ（５０ｍｌ）中の中間体４０（０．００６１ｍｏｌ）およびラネーニッケル（３．３ｇ）の混合物を３バールの圧力下で室温で水素化し、次にセライト上で濾過した。セライトをＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９８／２）で洗浄した。濾液を蒸発させた。残留物（２．８ｇ）をシリカゲル上でカラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ７０／３０）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、１．３ｇ（４２％）の中間体４１を生成せしめた。
【０３４６】
ｇ）中間体４２の製造
【０３４７】
【化８４】
0005612611.tif 000085
【０３４８】
アセトニトリル（２０ｍｌ）中の中間体４１（０．００１８ｍｏｌ）、４−クロロ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−７−オール（０．３３ｇ）およびＨＣｌ／イソプロパノール（５滴）の混合物を６５℃で２４時間攪拌した。炭酸カリウム１０％を加えた。混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残留物（１．１ｇ）をシリカゲル上でカラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９５／５／０．１）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、０．０５４ｇの中間体４２を生成せしめた。
【０３４９】
ｈ）中間体４３の製造
【０３５０】
【化８５】
0005612611.tif 000086
【０３５１】
アセトニトリル（１０ｍｌ）中の中間体４２（０．０００９ｍｏｌ）およびＨＣｌ  ３Ｎ（０．００３９ｍｏｌ）の混合物を６５℃で３時間攪拌した。炭酸カリウム１０％を加えた。混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残留物（０．４ｇ、１００％）をジエチルエーテル／アセトニトリルから結晶化させた。沈殿物を濾過して分離し、そして乾燥させ、０．３ｇの中間体４３、融点１６４℃を生成せしめた。
【０３５２】
Ｂ．最終化合物の製造
実施例Ｂ１
化合物１の製造
【０３５３】
【化８６】
0005612611.tif 000087
【０３５４】
アセトニトリル（１０ｍｌ）中の中間体１１（１．００ｇ、３．０９２ｍｍｏｌ）、中間体２（０．４３７ｇ、２．３８１ｍｍｏｌ）、ＨＣｌ（０．１５５ｍｌ、０．６１８ｍｍｏｌ）を６５℃で５時間攪拌した。反応物を室温でまで冷却し、次に炭酸カリウム（水中１０％）で塩基性化し、ＤＣＭで３回抽出した。有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残留物（１．３７ｇ）をシリカ（５μｍ  １５０ｘ３０．０ｍｍ）上で順相により精製した。移動相（０％ＮＨ４ＯＨ、１００％ＤＣＭ、０％ＭｅＯＨ〜０．８％ＮＨ４ＯＨ、９２％ＤＣＭ、８％ＭｅＯＨの勾配）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させた。残留物（０．３５０ｇ）をアセトニトリルに室温で１週間溶解した。この生成物は結晶化し、そして濾過し、真空下で乾燥させ、３００ｍｇ（２０．８％）の化合物１、融点２０９℃を生成せしめた。
【０３５５】
実施例Ｂ２
化合物２および３の製造
【０３５６】
【化８７】
0005612611.tif 000088
【０３５７】
アセトニトリル（２０ｍｌ）中の中間体１１（０．００３１ｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．００２８ｍｏｌ）、４−ブロモピリジン塩酸塩（０．００３４ｍｏｌ）の溶液を６５℃で６時間加熱した。炭酸カリウム１０％およびＥｔＯＡｃを加えた。反応混合物を抽出し、有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。残留物（１．３ｇ）をシリカゲル上でカラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤９５／５／０．５  ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ）。２つの画分を集め、そ
して溶媒を蒸発させて６０ｍｇの化合物３および８０ｍｇのＦ２を生成せしめた。残留物Ｆ２（８０ｍｇ）を超臨界流体クロマトグラフィーにより精製した（ＡＭＩＮＯカラム１５０ｘ２１．２ｍｍ  溶離剤：ＭｅＯＨ／ＣＯ２  ３０／７０）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、４３ｍｇの化合物２を生成せしめた。
【０３５８】
実施例Ｂ３
化合物４の製造
【０３５９】
【化８８】
0005612611.tif 000089
【０３６０】
ＥｔＯＨ（２２ｍｌ）およびＴＨＦ（１０ｍｌ）中の中間体３５（０．８ｇ、１．７ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム３Ｎ（２．５７ｍｌ、２．５７ｍｍｏｌ）を室温で３０分間攪拌した。ＮＨ４Ｃｌ  １０％およびＤＣＭを加え、そして混合物をセライト上で濾過した。有機層をデカントし、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして蒸発させた。残留物を球状ＳｉＯＨ（１０μｍ  ６０ｇ  ＰｈａｒｍＰｒｅｐ  ＭＥＲＣＫ）上で順相により精製した。移動相（ＮＨ４ＯＨ  ０．１％、９５％ＤＣＭ、５％ＭｅＯＨ）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、２５０ｍｇの化合物４を生成せしめた。
【０３６１】
実施例Ｂ４
化合物５の製造
【０３６２】
【化８９】
0005612611.tif 000090
【０３６３】
５℃でＭｅＯＨ（５ｍｌ）中の中間体４９（０．４６ｍｍｏｌ）の溶液にテトラヒドロホウ酸ナトリウム（０．６９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌した。水を加え、反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして蒸発させた。残留物（０．１４ｇ）をアセトニトリル中で結晶化させ、沈殿物を濾過して分離し、そして乾燥させ、０．１ｇの化合物５を生成せしめた。
【０３６４】
実施例Ｂ５
化合物６の製造
【０３６５】
【化９０】
0005612611.tif 000091
【０３６６】
Ｎ２フロー下でＴＨＦ（４ｍｌ）中の中間体４３（０．０００２ｍｏｌ）の溶液にテトラヒドロアルミン酸リチウム（０．０００３ｍｏｌ）を５℃で少しずつ加えた。混合物を室温で２時間攪拌した。水を加えた。混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残留物（０．１８ｇ）をクロマシル上でカラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ  ９８／２／０．２〜８５／１５／１；３．５μｍ）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、０．０６６ｇ（７０％）の化合物６を生成せしめた。
【０３６７】
実施例Ｂ６
化合物７および８の製造
【０３６８】
【化９１】
0005612611.tif 000092
【０３６９】
アセトニトリル（１５ｍｌ）中の中間体４７（１．００ｇ、３．２３ｍｍｏｌ）、中間体４（０．６５３ｇ、３．５５ｍｍｏｌ）、ＨＣｌ／ジオキサン（０．２４２ｍｌ、０．９７ｍｍｏｌ）を７０℃で１晩にわたって攪拌した。反応混合物を室温まで冷却した。次に、水および炭酸カリウム（水中１０％）を加えた。混合物をＤＣＭで３回抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を蒸発させた。残留物をシリカゲル（カートリッジ１５〜４０μｍ  ３０ｇ）上で順相により精製した。移動相（９６％ＤＣＭ、４％ＭｅＯＨ）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、０．０９２ｇ（６．５％）の化合物７および０．０３０ｇ（２．０％）の化合物８を生成せしめた。
【０３７０】
実施例Ｂ７
化合物９の製造
【０３７１】
【化９２】
0005612611.tif 000093
【０３７２】
中間体２７（０．４１ｍｍｏｌ）および４−クロロ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ピリジン−７−オール（０．４６ｍｍｏｌ）を１２５℃で２時間加熱した。残留物をシリカゲル上でカラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤９０／１０／０．１  ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ）。純粋画分を集め、そして溶媒を蒸発させ、５８ｍｇの化合物９を生成せしめた。
【０３７３】
実施例Ｂ８
化合物２４および２５の製造
【０３７４】
【化９３】
0005612611.tif 000094
【０３７５】
反応は、Ｎ２雰囲気下で行った。
【０３７６】
トルエン（１００ｍｌ）中の中間体４７（１１．３１ｍｍｏｌ）、中間体４（１２．４４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｂａ）２（１．１３ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１．１３ｍｍｏｌ）およびｔＢｕＯＮａ（２２．６２ｍｍｏｌ）の混合物を還流で一晩攪拌した。混合物を濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、そして高速液体クロマトグラフィーにより精製した（カラムＳｙｎｅｒｇｉ  ５０＊２５０ｍｍ、１０μｍ；溶離剤：時間０分で１５％ＣＨ３ＣＮ〜時間２５分で４０％ＣＨ３ＣＮのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（０．１％トリフルオロ酢酸）勾配）。所望の画分を集め、そして溶媒を真空中で蒸発させた。残留物をＤＣＭで抽出し、水性ＮａＨＣＯ３で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして蒸発させて化合物８を生成せしめ（３．８ｇ、９８％の純度、６５％の収率）、それを超臨界流体クロマトグラフィーにより分離して（Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＪ、２０μｍ、２５０ｍｍ＊２０ｍｍ；超臨界ＣＯ２：イソプロパノール（０．０５％ジエチルアミン）、４０：６０  ｖ／ｖ、７０ｍｌ／分）２つの画分を生成せしめた；１０００．７９ｍｇ（１９％）の化合物２４、融点１１０．５〜１１１．６℃（ｅｅ％＝９９％、［α］Ｄ２０＝＋５．０３４°、（波長＝５８９、メタノール中２０℃、濃度１０．３３ｍｇ／ｍｌ）および９３９．１９ｍｇ（１８％）の化合物２５、融点１１１．４〜１１３．３℃（ｅｅ％＝９９％、［α］Ｄ２０＝−３．４４３°、（波長＝５８９、メタノール中２０℃、濃度１０．７４ｍｇ／ｍｌ）。
【０３７７】
実施例Ｂ９
化合物の製造
【０３７８】
【化９４】
0005612611.tif 000095
【０３７９】
反応は、Ｎ２雰囲気下で行った。
【０３８０】
トルエン（４０ｍｌ）中の中間体１１（９．２５ｍｍｏｌ）、中間体２（９．２５ｍｍｏｌ）、ｔＢｕＯＮａ（１８．５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｂａ）２（０．９３ｍｍｏｌ）およびＢＩＮＡＰ（０．９３ｍｍｏｌ）の混合物を加熱して還流させ、そして３時間攪拌した。得られる混合物を室温まで冷却し、そして濾過した。濾過を真空中で蒸発させ、そして残留物を高速液体クロマトグラフィーにより精製した（カラムＳｙｎｅｒｇｉ  ５０＊２５０ｍｍ、１０μｍ；溶離剤：時間０分で１０％ＣＨ３ＣＮ〜時間２５分で４０％ＣＨ３ＣＮのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（０．１％トリフルオロ酢酸）勾配）。所望の画分を集め、そしてｐＨ＞７に調整した。溶媒を濃縮し、そして酢酸エチル（３回１００ｍｌ）で抽出し、そして所望の有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、そして溶媒を真空中で蒸発させて２．５ｇ（５７％）の化合物１を生成せしめ、それを超臨界流体クロマトグラフィーにより分離して（ＡＤ２５０ｍｍ＊２０ｍｍ、２０μｍ；超臨界ＣＯ２：イソプロパノール（０．０５％ジエチルアミン）４０：６０  ｖ／ｖ、７０ｍｌ／分）２つの画分を生成せしめた。画分１（１ｇ）を高速液体クロマトグラフィーによりさらに精製して（カラムＳｙｎｅｒｇｉ  ５０＊２５０ｍｍ、１０μｍ；溶離剤：時間０分で１０％ＣＨ３ＣＮ〜時間２５分で４０％ＣＨ３ＣＮのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（０．１％トリフルオロ酢酸）勾配）０．８８ｇ（２０％）の化合物番号２６、融点１２２．３〜１２４℃（ｅｅ＝１００％）を生成せしめた。画分２（１ｇ）を高速液体クロマトグラフィーによりさらに精製して（カラムＳｙｎｅｒｇｉ  ５０＊２５０ｍｍ、１０μｍ；溶離剤：時間０分で１０％ＣＨ３ＣＮ〜時間２５分で４０％ＣＨ３ＣＮのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（０．１％トリフルオロ酢酸）勾配）０．９６ｇ（２２％）の化合物２７、融点１２１．４〜１２２．６℃（ｅｅ＝９９％）を生成せしめた。
【０３８１】
表１は、上記実施例の１つに従って製造した化合物を記載する。
【０３８２】
【表１】
0005612611.tif 000096
【０３８３】
【表２】
0005612611.tif 000097
【０３８４】
【表３】
0005612611.tif 000098
【０３８５】
化合物特性化
融点：
値はピーク値もしくは融解範囲のいずれかであり、そしてこの分析方法と一般に関連する実験不確実性で得られた。
【０３８６】
コフラー
化合物４については、融点は直線温度勾配を有する加熱平板、スライディングポインタおよび摂氏温度単位の温度目盛りからなるコフラーホットベンチで得られた。
【０３８７】
ＷＲＳ−２Ａ
化合物１１、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１については、融点はＳｈａｎｇｈａｉ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．Ｌｔｄから購入したＷＲＳ−２Ａ融点装置で決定した。融点は、０．２〜５．０℃／分の直線昇温速度で測定した。報告される値は融解範囲である。最高温度は３００℃であった。
【０３８８】
ＤＳＣ
化合物１については、融点はＤＳＣ（示差走査熱量測定）で決定した。融点は、１０℃／分の温度勾配で測定した。最高温度は３５０℃であった。値はピーク値である。
【０３８９】
ＬＣＭＳ
本発明の化合物のＬＣＭＳ−特性化には、以下の方法を使用した。
【０３９０】
一般的方法Ａ
ＨＰＬＣ測定は、脱気装置を有するクォータナリポンプ、オートサンプラー、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）および以下のそれぞれの方法において特定した通りのカラムを含んでなるＡｌｌｉａｎｃｅ  ＨＴ  ２７９５（Ｗａｔｅｒｓ）システムを用いて行い、カラムは３０℃の温度で保つ。カラムからのフローは、ＭＳ分光計に分けられた。ＭＳ検出器は、エレクトロスプレーイオン化源で設定された。キャピラリーニードル電圧は３ｋＶであり、そして供給源温度をＬＣＴ（Ｗａｔｅｒｓからの飛行時間ＺｓｐｒａｙＴＭ質量分析計）上で１００℃で維持した。窒素をネブライザーガスとして用いた。データ収集は、Ｗａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘデータシステムで行った。
【０３９１】
一般的方法Ｂ
ＬＣ測定は、脱気装置を有するバイナリポンプ、オートサンプラー、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）および以下のそれぞれの方法において特定した通りのカラムを含んでなるＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）Ａｃｑｕｉｔｙ（Ｗａｔｅｒｓ）システムを用いて行い、カラムを４０℃の温度で保つ。カラムからのフローは、ＭＳ検出器にもたらされた。ＭＳ検出器は、エレクトロスプレーイオン化源で設定された。キャピラリーニードル電圧は３ｋＶであり、そして供給源温度はＱｕａｔｔｒｏ（Ｗａｔｅｒｓからのトリプル四重極質量分析計）上で１３０℃で維持した。窒素をネブライザーガスとして用いた。データ収集は、Ｗａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘデータシステムで行った。
【０３９２】
一般的方法Ｃ
ＨＰＬＣ測定は、ポンプ、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）（使用した波長２２０ｎｍ）、カラムヒーターおよび以下のそれぞれの方法において特定した通りのカラムを含んでなるＡｇｉｌｅｎｔ  １１００モジュールを用いて行った。カラムからのフローは、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＭＳＤシリーズＧ１９４６ＣおよびＧ１９５６Ａに分けられた。ＭＳ検出器は、ＡＰＩ−ＥＳ（大気圧エレクトロスプレーイオン化）で設定された。質量スペクトルは、１００〜１０００を走査することにより得られた。キャピラリーニードル電圧はポジティブイオン化モードでは２５００Ｖであり、そしてネガティブイオン化モードでは３０００Ｖであった。フラグメンテーション電圧は５０Ｖであった。乾燥ガス温度は、１０ｌ／分の流速で３５０℃で維持した。
【０３９３】
方法１
一般的方法Ａに加えて：逆相ＨＰＬＣを１．０ｍｌ／分の流速でＸｔｅｒｒａ−ＭＳ  
Ｃ１８カラム（５μｍ、４．６ｘ１５０ｍｍ）上で実施した。２つの移動相（移動相Ａ：１００％の７ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：１００％アセトニトリル）を用いて８５％Ａ、１５％Ｂ（３分間保持する）から５分で２０％Ａ、８０％Ｂまでの勾配条件を行い２０％Ａおよび８０％Ｂで６分間保持し、そして初期条件で３分間再平衡化した。２０μｌの注入容量を用いた。コーン電圧はポジティブイオン化モードでは２０Ｖ、そしてネガティブイオン化モードでは２０Ｖであった。質量スペクトルは、０．０８秒の走査間遅延を用いて０．８秒で１００〜９００を走査することにより得られた。
【０３９４】
方法２
一般的方法Ｂに加えて：逆相ＵＰＬＣを０．３５ｍｌ／分の流速でＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ（架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッド）Ｃ１８カラム（１．７μｍ、２．１ｘ１００ｍｍ）上で実施した。２つの移動相（移動相Ａ：９５％の７ｍＭ酢酸アンモニウム／５％のアセトニトリル；移動相Ｂ：１００％のアセトニトリル）を用いて９０％Ａおよび１０％Ｂ（０．５分間保持する）から３．５分で８％Ａおよび９２％Ｂまでの勾配条件を行い、２分間保持し、そして０．５分で初期条件に戻し、１．５分間保持した。２μｌの注入容量を用いた。コーン電圧はポジティブおよびネガティブイオン化モードで２０Ｖであった。質量スペクトルは、０．１秒の走査間遅延を用いて０．２秒で１００〜１０００を走査することにより得られた。
【０３９５】
方法３
一般的方法Ｃに加えて：逆相ＨＰＬＣを０．８ｍｌ／分の流速でＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＱ、５０ｘ２．０ｍｍ  ５μｍカラム上で実施した。２つの移動相（移動相Ａ：０．１％のＴＦＡを有する水；移動相Ｂ：０．０５％のＴＦＡを有するアセトニトリル）を使用した。最初に、９０％Ａおよび１０％Ｂを０．８分間保持した。次に、勾配を３．７分で２０％Ａおよび８０％Ｂまで適用し、そして３分間保持した。２μｌの典型的な注入容量を使用した。オーブン温度は５０℃であった。（ＭＳ極性：プラス）。
【０３９６】
【表４】
0005612611.tif 000099
【０３９７】
旋光度
旋光度は、偏光計を用いて測定した。［α］Ｄ２０は、２０℃の温度でナトリウムのＤ線の波長（５８９ｎｍ）の光で測定される旋光度を示す。セル経路長は１ｄｍである。実測値の後に旋光度を測定するために使用した溶液の濃度および溶媒を記載する。
【０３９８】
【表５】
0005612611.tif 000100
【０３９９】
Ｃ．薬理学的実施例
Ａ２７８０細胞においてｐ５３を維持する本発明の化合物の能力は、ｐ５３酵素結合免疫吸着アッセイで測定した。ｐ５３アッセイは、２つのポリクローナル抗体を用いる「サンドイッチ」酵素免疫アッセイである。ｐ５３タンパク質に特異的なポリクローナル抗体は、プラスチックウェルの表面上に固定化されている。アッセイするサンプルに存在する任意のｐ５３は、捕獲抗体に結合する。ビオチニル化された検出ポリクローナル抗体もまたｐ５３タンパク質を認識し、そして捕獲抗体によって保持されている任意のｐ５３に結合する。検出抗体には、次に、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ストレプトアビジンが結合する。西洋ワサビペルオキシダーゼは、発色基質ｏ−フェニレンジアミンの転化を触媒し、その強度はプレートに結合したｐ５３タンパク質の量に比例する。着色反応生成物は、分光光度計を用いて定量される。定量は、精製された組換えＨＩＳ標識ｐ５３タンパク質の既知の濃度を用いた標準曲線の構築により成し遂げられる（実施例Ｃ．１．参照）。
【０４００】
Ｃ１．ｐ５３  ＥＬＩＳＡ
Ａ２７８０細胞（ＡＴＣＣ）は、５％ＣＯ２を有する加湿インキュベーターにおいて３７℃で１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、２ｍＭのＬ−グルタミンおよびゲンタマイシンを補足したＲＰＭＩ  １６４０中で培養した。
【０４０１】
Ａ２７８０細胞を９６ウェルプレートにウェル当たり２０．０００細胞で接種し、２４時間培養し、そして加湿インキュベーターにおいて３７℃で１６時間化合物で処理した。インキュベーション後に、細胞をリン酸緩衝食塩水で１回洗浄し、そしてウェル当たり３０μｌの低塩ＲＩＰＡバッファー（２０ｍＭトリス、ｐＨ７．０、０．５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１％Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ４０、０．５％ＤＯＣ、０．０５％ＳＤＳ、１ｍＭ  ＰＭＳＦ、１μｇ／ｍｌアプロチニンおよび０．５μ／ｍｌロイペプチン）を加えた。プレートを３０分間氷上に置いて溶解を完了した。下記のサンドイッチＥＬＩＳＡを用いることによりｐ５３タンパク質を溶解物において検出した。
【０４０２】
高結合ポリスチレンＥＩＡ／ＲＩＡ  ９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ９０１８）をコーティングバッファー（０．１Ｍ  ＮａＨＣＯ３  ｐＨ８．２）、ウェル当たり５０
μｌ中１μｇ／ｍｌの濃度で捕獲抗体ｐＡｂ１８０１（Ａｂｃａｍ  ａｂ２８−１００）でコーティングした。抗体を４℃で一晩接着させた。コーティングしたプレートをリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）／０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０で１回洗浄し、そして室温で２時間のインキュベーション期間にわたって、３００μｌのブロッキングバッファー（ＰＢＳ、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））を加えた。３〜２００ｎｇ／ｍｌにわたる精製された組換えＨＩＳ標識ｐ５３タンパク質の希釈物をブロッキングバッファーにおいて作製し、そして基準として使用した。
【０４０３】
プレートをＰＢＳ／０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０で２回洗浄し、そしてブロッキングバッファーもしくは基準を８０μｌ／ウェルで加えた。基準には、２０μｌの溶解バッファーを加えた。サンプルは２０μｌの溶解物／ウェルで他のウェルに加えた。４℃で一晩のインキュベーション後に、プレートをＰＢＳ／０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０で２回洗浄した。ブロッキングバッファー中１μｇ／ｍｌの濃度の１００μｌの二次ポリクローナル抗体ｐ５３（ＦＬ−３９３）（Ｔｅｂｕｂｉｏ、ｓｃ−６２４３）のアリコートを各ウェルに加え、そして室温で２時間吸着させた。プレートをＰＢＳ／０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０で３回洗浄した。ＰＢＳ／１％ＢＳＡ中０．０４μｇ／ｍｌの検出抗体抗ウサギＨＲＰ（ｓｃ−２００４、Ｔｅｂｕｂｉｏ）を加え、そして室温で１時間インキュベーションした。プレートをＰＢＳ／０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０で３回洗浄し、そして１００μｌの基質バッファーを加えた（基質バッファーは、Ｓｉｇｍａからの１０ｍｇ  ｏ−フェニレンジアミン（ＯＰＤ）１錠および１２５μｌの３％Ｈ２Ｏ２を２５ｍｌのＯＰＤバッファー：３５ｍＭクエン酸、６６ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、ｐＨ５．６に加えることにより使用直前に調製した）。５〜１０分後に、ウェル当たり５０μｌの停止バッファー（１Ｍ  Ｈ２ＳＯ４）を加えることにより呈色反応を止めた。Ｂｉｏｒａｄマイクロプレートリーダーを用いて４９０／６５５ｎｍの二波長の吸光度を測定し、そして次に結果を分析した。
【０４０４】
各実験について、コントロール（薬剤を含有しない）およびブランクインキュベーション（細胞もしくは薬剤を含有しない）を並行して行った。ブランク値を全てのコントロールおよびサンプル値から引いた。各サンプルについて、ｐ５３の値（吸光度単位における）は、コントロールに存在するｐ５３の値のパーセンテージとして表した。１４０％より高い維持パーセンテージは有意であると定義した。本明細書において試験化合物の効果は、コントロールに存在するｐ５３の値の少なくとも１４０％を与える最低用量として表される（ＬＡＤ）（表４参照）。
【０４０５】
実験のあるものにおいて、アッセイは３８４ウェル培養プレートに適用し、そしてそれらにおいて使用した。
【０４０６】
【表６】
0005612611.tif 000101
【０４０７】
Ｃ．２  増殖アッセイ
ヒトＡ２７８０卵巣癌細胞は、Ｔ．Ｃ．Ｈａｍｉｌｔｏｎ博士（Ｆｏｘ  Ｃｈａｓｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｒｅ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ、Ｕ．Ｓ．Ａ．）の好意により提供を受けた。細胞は、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、５０μｇ／ｍｌゲンタマイシンおよび１０％ウシ胎仔血清を補足したＲＰＭＩ  １６４０培地中で培養した。
【０４０８】
アラマーブルーアッセイにおいて使用した試薬
レザズリンは、Ａｌｄｒｉｃｈから購入した（製品番号１９９３０３）。フェロシアン化カリウム、フェリシアン化カリウム、ＫＨ２ＰＯ４およびＫ２ＨＰＯ４は、Ｓｉｇｍａから購入した（それぞれ、製品番号Ｐ９３８７、Ｐ８１３１、Ｐ５６５５およびＰ８２８１）。
【０４０９】
リン酸カリウムバッファー０．１Ｍ（ＰＰＢ）は、下記の通り調製した：２．７２グラムのＫＨ２ＰＯ４および１３．８６グラムのＫ２ＨＰＯ４を５００ｍｌのミリ−Ｑ  Ｈ２Ｏに溶解し、ｐＨをｐＨ７．４に調整し、そしてミリ−Ｑ  Ｈ２Ｏで容量を１リットルにし；バッファーを濾過滅菌し、そして室温で保存した。レザズリンストック溶液（ＰＰＢ
−Ａ）は、４５ｍｇのレザズリンを１５ｍｌのＰＢＳに溶解することにより新たに調製した。３０ｍＭのフェリシアン化カリウム（ＰＰＢ−Ｂ）は、０．９８７グラムのフェリシアン化カリウムを１００ｍｌのＰＰＢに溶解することにより調製した。３０ｍＭのフェロシアン化カリウム（ＰＰＢ−Ｃ）は、１．２６６グラムのフェロシアン化カリウムを１００ｍｌのＰＰＢに溶解することにより調製した。
【０４１０】
ＰＰＢ−Ａ、ＰＰＢ−ＢおよびＰＰＢ−Ｃの混合物は、等容量のそれぞれの溶液を混合することにより調製した。レザズリン作業溶液（本明細書において「アラマーブルー」溶液と称する）は、該混合物２０ｘ（ｖｏｌ／ｖｏｌ）をＰＰＢにおいて希釈しそして濾過滅菌することにより調製し；アラマーブルー溶液は４℃で最大２週間保持することができた。
【０４１１】
アラマーブルーアッセイの方法
３８４ウェルプレートにおける実験には、４５μｌの培養培地において、ファルコン３８４ウェル培養プレート（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍｅｒｅｌｂｅｋｅ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）、透明底を有する黒色に細胞を５ｘ１０３細胞／ｍｌの密度で接種した。細胞をプラスチックに２４ｈｒ接着させた。試験化合物をあらかじめ希釈し（培養培地において１／５０）、そして５μｌのあらかじめ希釈した化合物をウェルに加えた。４日のインキュベーション後に、１０μｌのアラマーブルー溶液を各ウェルに加え、そして細胞を３７℃で５ｈｒ（Ａ２７８０）さらにインキュベーションした。蛍光プレートリーダー（Ｆｌｕｏｒｓｋａｎ、Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ、５４０ｎｍの励起および５９０ｎｍの発光）で各ウェルについて蛍光強度を測定した。
【０４１２】
抗増殖活性は、コントロール（未処理の細胞）に対する処理条件における残留生存細胞のパーセンテージとして計算した。実験内で、各実験条件の結果は３つの反復ウェルの平均である。適切な場合、完全な濃度反応曲線を定めるために実験を反復した。適切な場合、ＩＣ５０値（コントロールの５０％まで細胞増殖を減らすために必要な薬剤の濃度）は、等級化（ｇｒａｄｅｄ）データのプロビット解析を用いて計算した（Ｆｉｎｎｅｙ，Ｄ．Ｊ．，Ｐｒｏｂｉｔ  Ａｎａｌｙｓｅｓ，２ｎｄ  Ｅｄ．Ｃｈａｐｔｅｒ  １０，Ｇｒａｄｅｄ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  １９６２）。本明細書において、試験化合物の効果はｐＩＣ５０（ＩＣ５０値（Ｍ）の負の対数値）として表される（表５Ａを参照）。
【０４１３】
【表７】
0005612611.tif 000102
【０４１４】
化合物はまた、上記のプロトコルに従うが他の細胞系：結腸直腸癌細胞系ＨＣＴ１１６、非小細胞肺癌細胞系Ｈ１２９９、ヒト前立腺癌細胞系ＤＵ１４５を用いても試験した。結果を表５Ｂに報告する。
【０４１５】
【表８】
0005612611.tif 000103
【０４１６】
Ｃ３．Ｐ４５０アッセイ
ＣＹＰ  Ｐ４５０（エシェリキア・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）発現）タンパク質（３Ａ４、２Ｄ６、２Ｃ９、１Ａ２および２Ｃ１９）は、それらの特異的基質を蛍光分子に転化する１２。蛍光分子は、蛍光プレートリーダーを用いて測定される。酵素反応を阻害する化合物は、蛍光シグナルの減少をもたらす。
【０４１７】
それぞれのｃＤＮＡ発現シトクロムＰ４５０アイソザイムにより媒介される転化
【０４１８】
【表９】
0005612611.tif 000104
【０４１９】
略語：
ＣＥＣ：７−エトキシ−３−シアノクマリン；ＣＨＣ：３−シアノ−７−ヒドロキシクマリン、
ＭＦＣ：７−メトキシ−４−トリフルオロメチルクマリン；７−ＨＦＣ：７−ヒドロキシ−トリフルオロメチルクマリン、
ＣＥＣ：７−エトキシ−３−シアノクマリン；ＣＨＣ：３−シアノ−７−ヒドロキシクマリン、
ＡＭＭＣ：３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｎ−メチルアミノ）エチル］−７−メトキシ−４−メチルクマリン；
ＡＨＭＣ：３−［２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル］−７−ヒドロキシ−４−メチルクマリン塩酸塩、
ＢＦＣ：７−ベンジルオキシ−トリフルオロメチルクマリン；
ＤＢＦ：ジベンジルフルオレセイン、７−ＢＱ：ベンジルオキシキノリン。
【０４２０】
補因子ミックス：（ＣＹＰ  ２Ｄ６を除く全てのＣＹＰ酵素用）
【０４２１】
【表１０】
0005612611.tif 000105
【０４２２】
略語：Ｇ−６−Ｐ：グルコース−６−リン酸；Ｇ−６−Ｐ−ＤＨ：グルコース−６−リン酸−デヒドロゲナーゼ。
【０４２３】
補因子ミックス：（ＣＹＰ  ２Ｄ６用）
【０４２４】
【表１１】
0005612611.tif 000106
【０４２５】
ＣＹＰ  Ｐ４５０酵素溶液：
【０４２６】
【表１２】
0005612611.tif 000107
【０４２７】
全てのこれらのＣＹＰ酵素は、０．０１Ｍ  Ｎａ−Ｋ−リン酸バッファー＋１．１５％ＫＣｌに溶解し、そして使用するまで氷上で維持した。ＣＹＰ  Ｐ４５０酵素は−８０℃で保存した。
【０４２８】
化合物および対照阻害剤希釈：
化合物および対照阻害剤は、ＤＭＳＯ中の５ｍＭ溶液として部署に送られた。アセトニトリルを用いた連続希釈により５．１０−４Ｍの希釈標準溶液を作製した。最終化合物濃度は一次スクリーニングには１０−５Ｍであり、そして最終溶媒濃度は２％であった。１０−５Ｍの濃度での一次スクリーニングの後に、選択した強力な阻害剤のＩＣ５０値を３．１０−９〜１０−５Ｍの濃度範囲で試験した。一次スクリーニングにおいて、全ての化合物は三重反復で試験した。対照阻害剤は、１０−９〜１０−４Ｍの濃度範囲で試験した。
【０４２９】
対照阻害剤：
【０４３０】
【表１３】
0005612611.tif 000108
【０４３１】
基質溶液：
【０４３２】
【表１４】
0005612611.tif 000109
【０４３３】
基質ストック溶液はアセトニトリルに溶解し、そして−２０℃で保存した。最終希釈標準溶液は０．１Ｍ  Ｎａ−Ｋ−リン酸バッファーｐＨ７．４に溶解し、そしてこの溶液はアッセイを開始する前にいつも新たに調製した。
【０４３４】
データ解析
プレート調製、データ連結、データ解析、結果検証および承認ならびにデータアップロードは、Ｌｅｘｉｓ−Ｌａｐｌａｃｅソフトウェア（Ｌａｐｌａｃｅ−ＤＬＭ−ＲＶＡＭ）により半自動的に行った。
【０４３５】
計算に使用した式は：
％活性＝（１００／（平均ポジティブコントロール−平均ネガティブコントロール）ｘ（平均サンプル−平均ネガティブコントロール）
％抑制＝１００−％活性
である。
【０４３６】
計算すると、ＩＣ５０値は、コントロール軸の５０％との交点に基づいて、ＲＶＡＭにおけるグラフ外挿により自動的にもたらされた。
【０４３７】
方法
アッセイは、黒色９６ウェルＣｏｓｔａｒプレートにおいて行った。ウェル当たりアッセイは：４０μｌのＣＹＰ  Ｐ４５０酵素溶液（ネガティブコントロールサンプルでは酵素なしの４０μｌの０．１Ｍ  Ｎａ−Ｋ−リン酸バッファーｐＨ７．４を加えた）；４０μｌの補因子ミックス；２μｌの化合物もしくはネガティブコントロールサンプルには対照阻害剤もしくはポジティブコントロールサンプルには溶媒を含んでなる。振盪インキュベーターにおいて３７℃で５分のプレインキュベーション後に、２０μｌの基質溶液を加えた。プレートを３７℃で１０分（ＣＹＰ３Ａ４／ＤＢＦ）、１５分（ＣＹＰ１Ａ２）、３０分（ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ３Ａ４／ＢＦＣおよびＣＹＰ３Ａ４／７−ＢＱおよびＣＹＰ２Ｃ１９）および４５分（ＣＹＰ２Ｄ６）間インキュベーションした。２００μｌのアセトニトリルの添加により反応を止めた。ＣＹＰ３Ａ４／ＤＢＦでは、２００μｌの２Ｍ
ＮａＯＨの添加により反応を止めた。ＣＹＰ３Ａ４／７−ＢＱでは、４０μｌのトリス／アセトニトリル（１：５）（Ｖ：Ｖ）の添加により反応を止め、続いて２０００ｒｐｍで１０分遠心分離した。蛍光シグナルは、蛍光Ｖｉｃｔｏｒ２（Ｗａｌｌａｃ）もしくはＦｌｕｏｒｏｓｋａｎ（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）リーダーにより検出した。異なる酵素およびそれらの特異的基質の励起および発光波長を表６に記載する。
【０４３８】
【表１５】
0005612611.tif 000110
【０４３９】
参考文献
［１］Ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ  Ｐｌａｔｅ  Ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ，Ｄｒｕｇ−Ｍｅｔａｂｏｌｉｚｉｎｇ  Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｓ
Ｐ４５０
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｌ．Ｃｒｅｓｐｉ，Ｖａｕｇｈｎ  Ｐ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｂｒｕｃｅ  Ｗ．Ｐｅｎｍａｎ（Ｇｅｎｔｅｓｔ）
Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２４８，１８８−１９０（１９９７）Ａｒｔｉｃｌｅ  ｎｏ  ＡＢ９７２１４５
［２］Ｎｏｖｅｌ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐ４５０  ａｓｓａｙｓ
Ｖ．Ｐ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｊ．Ａｃｋｅｒｍａｎｎ，Ｄ．Ｍ．Ｓｔｒｅｓｓｅｒ，Ｃ．Ｌ．Ｃｒｅｓｐｉ
Ｇｅｎｔｅｓｔ  Ｉｎｔｅｒｎｅｔ  ｓｉｔｅ．
【０４４０】
表７は、先行技術の化合物と比較した場合の７つの試験において試験した本発明の化合物（化合物番号１８、２０、９、１４および４）のデータを示す。上記の通り５つのＰ４５０酵素を、それらの１つは３つの異なる基質に対して試験した（従って、合計７つの試験）。表７において何回のＰ４５０試験で化合物がＩＣ５０＜１．００Ｅ−０６で抑制活性を示したかが示される。
【０４４１】
【表１６】
0005612611.tif 000111
【０４４２】
【表１７】
0005612611.tif 000112
【０４４３】
【表１８】
0005612611.tif 000113
【０４４４】
Ｃ．４．マウスにおけるＲｏ−４−１２８４拮抗作用３，４，５
試験は、Ｃｏｌｐａｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９７５）３により記述される方法の改変である。オスＮＭＲＩマウス（２２±３ｇ）をｍａｃｒｏｌｏｎ観察ケージ（ＬｘＷｘＨ：１１ｘ１２ｘ１７ｃｍ；ｎ＝ケージ当たり３匹）において飼育した。試験化合物投与の直前の実験の開始時に、安定な読み取りが得られるまで食道に３ｃｍの一定の深さまで電気式温度計（Ｃｏｍａｒｋ）の感熱性探針（１．０ｍｍ直径）を挿入することによりマウスの初期体温を０．１℃の精度で測定した。右眼瞳孔径を目盛り付き顕微鏡で測定し、そして１／２４ｍｍ単位で表した。試験化合物投与後１５分で、マウスにＲｏ−４−１２８４（１０ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．）を投与した。Ｒｏ−４−１２８４は、分泌小胞を迅速に枯渇させる３，４、レセルピン様小胞モノアミン輸送（ＶＭＡＴ−２）阻害剤である。投与後１５、３０および６０分で、マウスを眼瞼開口（０、１、２、３、４、５）および自発運動（−１、０、１、２、３）について評点した。６０分間隔で、顕在行動の評点直後に、右眼瞳孔径および食道温度を再び測定した。激しくにおいをかぐこと、咀嚼、立ち上がり、充血、立毛、唾液分泌、振戦、痙攣および死亡のような異常現象を記載した（後者の現象はまた、Ｒｏ−４−１２８４投与前に起こる場合にも記載した）。薬剤誘発性作用の基準：下垂の逆転（ｒｅｖｅｒｓａｌ）：１５、３０もしくは６０分で眼瞼開口スコア＞１（それぞれ、２．７、０．５および０％偽陽性コントロール；ｎ＞３５０）；衰弱の誘発：１５、３０もしくは６０分で運動についてスコア−１（コントロールにおいて決して観察されない）；運動低下の逆転：１５、３０および６０分で運動についてスコア＞０（それぞれ、２．２、０．８および０％偽陽性コントロール）；縮瞳の逆転：６０分で瞳孔径＞５単位（０．８％偽陽性）；低体温の増強：温度低下（１ｈの時間間隔にわたって）＞９．０℃（１．４％偽陽性）；低体温の逆転：温度低下＜３．０℃（１．８％偽陽性）。
【０４４５】
標準的な方法に従って、皮下もしくは経口投与後１５分でＲｏ−４−１２８４を注入し、そして１５分後に観察が始まる。投与は最初３匹の動物に与える。３匹の動物のうち少なくとも２匹が観察の少なくとも１つについて活性を示す場合、化合物は活性と見なされる。他の場合、化合物は特定の時間−経路−用量処方計画で不活性と見なされ、そして終了したと分類される。
【０４４６】
化合物番号２０、１８、１、２７、２４、２５、３１、３０、７、２９、２８、２６および１７は、経口投与後に８０ｍｇ／ｋｇの濃度で３匹の動物で各々試験し、そしてそれらは縮瞳の逆転、下垂の逆転、運動低下の逆転に対して活性を示さなかった。化合物４は４０ｍｇ／ｋｇで試験しただけであり、そして縮瞳の逆転、下垂の逆転、運動低下の逆転に対して活性を示さなかった。
【０４４７】
ＥＰ１８０９６２２の化合物もまた同じ試験において試験し、そして結果を以下の表８
に示す。
【０４４８】
【表１９】
0005612611.tif 000114
【０４４９】
参考文献
［３］Ｃｏｌｐａｅｒｔ，Ｆ．Ｃ．，Ｌｅｎａｅｒｔｓ，Ｆ．Ｍ．，Ｎｉｅｍｅｇｅｅｒｓ，Ｃ．Ｊ．Ｅ．，Ｊａｎｓｓｅｎ，Ｐ．Ａ．Ｊ．：“Ａ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ  ｏｎ  Ｒｏ−４−１２８４  ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．”，Ａｒｃｈ．  Ｉｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎ．２１５  ４０−９０（１９７５）．
［４］Ｃｏｌｚｉ，Ａ．，Ｄ’Ａｇｏｓｔｉｎｉ，Ｒ．，Ｃｅｓｕｒａ，Ａ．Ｍ．，Ｂｏｒｒｏｎｉ，Ｅ．，Ｄａ  Ｐｒａｄａ，Ｍ．：“Ｍｏｎｏａｍｉｎｅ  ｏｘｉｄａｓｅ−Ａ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ｒａｔ  ｃａｕｄａｔｕｓ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｔｈａｔ  ａｎ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ｌｅｖｅｌ  ｏｆ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｄｉｓｐｌａｃｅｓ  ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｍｏｎｏａｍｉｎｅ  ｏｘｉｄａｓｅ−Ａ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．”，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２６５  １０３−１１１（１９９３）．
［５］Ｆｉｌｉｎｇｅｒ，Ｅ．Ｊ．：“Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａ  ｒｅｓｅｒｐｉｎｅ−
ｌｉｋｅ  ａｇｅｎｔ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ａｎｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ
ｏｆ  ［３Ｈ］ＮＡ  ｉｎ  ｃｅｌｌ  ｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  ｔｅｒｍｉｎａｌｓ．”，Ｇｅｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２５  １０３９−１０４３（１９９４）．
【０４５０】
Ｃ．５  パッチクランプ試験−ＨＥＫ２９３細胞におけるＨＥＲＧに媒介されるＫ＋電流の抑制
実験は、ＨＥＲＧカリウムチャンネルを安定に発現するＨＥＫ２９３細胞を用いて行った。細胞は、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清、１％Ｌ−グルタミン−ペニシリン−ストレプトマイシン溶液、１％非必須アミノ酸（１００ｘ）、１％ピルビン酸ナトリウム（１００ｍＭ）および０．８％ジェネティシン（５０ｍｇ／ｍｌ）を補足したＭＥＭ培地中培養フラスコにおいて３７℃および５％ＣＯ２で培養した。使用前に５ｍｌのＬ−グルタミン−ペニシリン−ストレプトマイシンを欠くＭＥＭ培地において細胞を継代培養した。自動化パッチクランプシステムＰａｔｃｈＸｐｒｅｓｓ  ７０００Ａ（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）における使用のために細胞を採取して単細胞の細胞懸濁液を得た。細胞外溶液は：１５０ＮａＣｌ、４ＫＣｌ、１ＭｇＣｌ２、１．８ＣａＣｌ２、１０ＨＥＰＥＳ、５グルコース（ＮａＯＨでｐＨ７．４）を含有した（ｍＭ）。ピペット溶液は：１２０ＫＣｌ、１０ＨＥＰＥＳ、５ＥＧＴＡ、４ＡＴＰ−Ｍｇ２、２ＭｇＣｌ２、０．５ＣａＣｌ２（ＫＯＨでｐＨ７．２）を含有した（ｍＭ）。パッチクランプ実験は電圧固定モードで行い、そしてＰａｔｃｈＸｐｒｅｓｓ  ７０００Ａシステム（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を利用した自動化パッチクランプアッセイで全細胞電流を記録した。Ｍｕｌｔｉｃｌａｍｐ増幅器により電流シグナルを増幅しそしてデジタル化し、ＰａｔｃｈＸｐｒｅｓｓ，ＤａｔａＸｐｒｅｓｓソフトウェアおよびＩｇｏｒ５．０（Ｗａｖｅｍｅｔｒｉｃｓ）を用いることにより保存しそして解析した。
【０４５１】
保持電位は−８０ｍＶであった。ＨＥＲＧ電流（Ｋ＋選択的外向き電流）は、＋６０ｍＶに２秒脱分極後に−４０ｍＶで最大テール電流として決定した。パルス循環速度は１５ｓであった。各試験パルスの前に保持電位から−６０ｍＶまでの短パルス（０．５ｓ）を与えて（直線）漏洩電流を決定した。全細胞配置および安定性期間を確立した後に、賦形剤を５分間、続いて１０−７Ｍ、３ｘ１０−７Ｍおよび３ｘ１０−６Ｍの濃度を増加することにより試験物質を適用した。試験物質の各濃度は２回適用した。各濃度の効果は、３連続電圧パルスの平均電流として５分後に決定した。阻止の程度を決定するために残留電流を賦形剤前処理と比較した。データ（表９）は、コントロール（コントロールは１００％である）と比較した抑制パーセンテージの平均値（可能な場合、±平均の標準誤差（ＳＥＭ））として示される（ｎ＝実験の数）。
【０４５２】
【表２０】
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【０４５３】
【表２１】
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【０４５４】
【表２２】
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【０４５５】
【表２３】
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【０４５６】
【表２４】
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【０４５７】
【表２５】
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【０４５８】
【表２６】
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【０４５９】
【表２７】
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【０４６０】
驚くべきことに、本発明の化合物は、Ｐ４５０酵素に対する低い親和性およびインビボ薬剤誘発性神経学的作用がないことおよび低い心臓血管作用と組み合わされる、優れたインビトロ活性を示す。
【０４６１】
Ｃ．６．インビボ抗腫瘍効果
インビボ抗腫瘍活性は、下記の通り試験することができる：
【０４６２】
ＮＣＩ基準参考文献：
Ｂｉｓｓｅｒｙ，Ｍ−Ｃ．，ａｎｄ  Ｃｈａｂｏｔ，Ｇ．Ｇ．Ｈｉｓｔｏｒｙ  ａｎｄ  ｎｅｗ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ  ｕｓｅｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．Ｂｕｌｌ．Ｃａｎｃｅｒ．１９９１，７８：５８７−６０２。
【０４６３】
動物モデル：
免疫不全（無胸腺）オスＮＭＲＩヌード（Ｎｕ／Ｎｕ）マウス（Ｊａｎｖｉｅｒ，Ｆｒａｎｃｅから入手した２０〜２５ｇ）をこれらの研究に使用した。初期体重は約２３〜３４ｇであった。全ての動物は、餌および水ヘの自由なアクセスを有してＳＰＦ「フルバリア」条件下で維持した。マウスは、Ｔｅｃｈｎｉｐｌａｓｔタイプ−３  ＩＶＣケージにおいて１９〜２２℃の温度および３５〜４０％の湿度で１２ｈの明暗サイクル（０６：００ｈに明かりをつける）下で集団飼育した。マウスには標準的な研究用の餌を与えた。全ての実験は欧州共同体理事会指令（８６／６０９／ＥＥＣ）に従って実施し、そして地方倫理委員会により承認されなければならなかった。樹立した腫瘍異種移植片モデル（腫瘍体積〜２００ｍｍ３）には、処置群当たり５匹のマウスで、腫瘍体積に従ってマウスを任意抽出した。
【０４６４】
試験系：
ヒトＵ８７神経膠腫腫瘍細胞系は、４４歳の女性白人患者由来であった。２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、２．０ｍＭピルビン酸ナトリウム、２５ユニット／ｍｌペニシリン／２５μｇ／ｍｌストレプトマイシンおよび１０％ウシ胎仔血清を補足したＤＭＥＭ培地中、加湿大気（５％ＣＯ２、９５％空気）において３７℃で細胞を培養した。細胞は細胞単層培養として維持し、以下の方法を用いてＴ１７５フラスコ当たり３ｘ１０６細胞で週に２回継代した。簡潔に言えば、細胞をＰＢＳ（Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋なしの）で洗浄し、その後で細胞フラスコにトリプシン−ＥＤＴＡを加えた。細胞の剥離後に完全培地の添加によりトリプシン−ＥＤＴＡを不活性化した。次に、細胞懸濁液を５０ｍｌのファルコンチューブに移し、そして１２００ｒｐｍで３分間遠心分離した。培地を吸引し、細胞を適切な容量の完全培地に再懸濁した。細胞を血球計算盤において計数し、そして０．２５％トリパンブルー排除によりそれらの生存能力を評価した。次に、新鮮培地を含有する新しいＴ１７５培養フラスコ（１つもしくは複数）もしくはローラーボトルのいずれかに適切な容量の
細胞懸濁液を加えた。Ｕ８７腫瘍細胞の大スケールアップ培養には、マウスの接種の１週前に適切な数のローラーボトルに０．５〜１ｘ１０７細胞を接種した。この期間中に培地を２回交換し、最後の交換は細胞注入の前日であった。遠心分離後に、細胞を冷（４℃）無血清培地に再懸濁したことを除いて、細胞を上記の通り集めた。マウスに２００μｌの容量において合計１ｘ１０７細胞を鼠径部に注入した。
【０４６５】
研究設計：
ヒトＵ８７神経膠腫細胞を０日（Ｄ０）にオスＮＭＲＩヌードマウスの鼠径部に直接注入した（１ｘ１０７細胞／２００μｌ／動物）。７〜１０日（細胞バッチ間の腫瘍取得／成長によって異なり得る）に腫瘍体積がおおよそ平均２００ｍｍ３に到達すると、処置群当たり５匹のマウスで、腫瘍体積に従ってマウスを任意抽出した。次に、５日間１０ｍｇ／ｋｇ体重の容量において投与する強制飼養（ｐ．ｏ．）により賦形剤（１０％ＨＰ−β−ＣＤ）もしくは試験化合物（２０ｍｇ／ｋｇ）を含有する賦形剤のいずれかでマウスを毎日１回（ＱＤ）処置した。特定の腫瘍測定は６日（５回目の投与後２４時間）にそして次に再び１０日に行った。２０００ｍｍ３の体積に到達する時間（ＴＴＲ２０００）を記録することができるように腫瘍再成長（投与を停止した後）をモニターした。これは、腫瘍成長への薬剤作用の期間に関する追加情報を与える。一般に、腫瘍サイズおよび体重を週に２回測定し、処置の期間にわたって毒性の臨床兆候についてマウスを毎日モニターした。毒性の臨床兆候には、持続的食欲不振もしくは脱水、姿勢、瀕死、昏睡、低体温および／もしくは努力性呼吸が包含された（がこれらに限定されるものではない）（実験新生物における動物の保護に関するＵＫＣＣＣＲガイドラインに従う（実験新生物における動物の保護に関するＵＫＣＣＣＲ（英国癌研究調整委員会）ガイドライン（１９９７年７月）；およびＷｏｒｋｍａｎ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．ＵＫＣＣＣＲ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．１９９８，７７：１−１０）。
【０４６６】
データ解析：
各個々の動物について、体重および腫瘍サイズ［一般に認められている式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（ａｘｂ２／２）を用いて；ここで、「ａ」はカリパス測定により決定した場合の腫瘍の長さを表し、そして「ｂ」は幅を表す］を研究を通して週に２回モニターした。初期体重の１５％より大きい持続的体重減少は臨床毒性と見なし、該動物を研究から除き、そして殺した。腫瘍成長の時間経過は中央値として表すか、もしくは処置開始日の初期腫瘍体積に正規化しそして平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として表すことができる（群当たり５匹の動物）。あらかじめ樹立した腫瘍について、相対腫瘍体積を各マウスについて計算し（処置腫瘍体積／０日の腫瘍体積）そして各処置群について平均±ＳＥＭとして表すことができる。統計的有意性は、ウイルコクソン−マン−ホイットニー解析（ウイルコクソン順位和検定）から片側ｐ値により示され、そしてｐ＜０．０５は統計的に有意であると考えられる。６および１０日（１日＝処置の開始、いったんマウスが任意抽出されそして適切な処置群に割り当てられている）にＮＣＩ基準を用いて、最終相対腫瘍体積に基づいて処置／コントロール（Ｔ／Ｃ）比を計算する。Ｔ／Ｃ比の有効基準は４２％である。
【０４６７】
【表２８】
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【０４６８】
Ｄ．組成物実施例：フィルムコート錠
錠剤コアの製造
１００ｇの式（Ｉ）の化合物、５７０ｇのラクトースおよび２００ｇの澱粉の混合物をよく混合し、そしてその後に約２００ｍｌの水中５ｇのドデシル硫酸ナトリウムおよび１０ｇのポリビニルピロリドンの溶液で湿らせる。湿った粉末混合物をふるいにかけ、乾燥させ、そして再びふるいにかける。次に、１００ｇの微晶質セルロースおよび１５ｇの水素化植物油を加える。全体をよく混合し、そして錠剤に圧縮し、各々１０ｍｇの式（Ｉ）の化合物を含んでなる１０．０００個の錠剤を生成せしめる。
【０４６９】
コーティング
７５ｍｌの変性エタノール中１０ｇのメチルセルロースの溶液に１５０ｍｌのジクロロメタン中５ｇのエチルセルロースの溶液を加える。次に、７５ｍｌのジクロロメタンおよび２．５ｍｌの１，２，３−プロパントリオールを加え、１０ｇのポリエチレングリコールを融解し、そして７５ｍｌのジクロロメタンに溶解する。後者の溶液を前者に加え、そして次に２．５ｇのオクタデカン酸マグネシウム、５ｇのポリビニルピロリドンおよび３０ｍｌの濃縮色懸濁液を加え、そして全体を均質化する。このようにして得られる混合物で錠剤コアをコーティング装置においてコーティングする。