(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１または１．１：
【化１】
0005621071.tif 000053
［式中、
Ｒはヒドロキシル含有癌化学療法薬であり；
Ｒ１は水素、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＣ５−Ｃ２２アルキルであり；
Ｒ２はＣ５−Ｃ２２アルキルであり；
ＹはＯまたはＳから選択され；
ＺはＯであり；
ＱはＯであり；そして、
ＴはＯである］
で示される酸に不安定で親油性の分子複合体（ＡＬＬＭＣ）、およびそれらの単離されたエナンチオマー、ジアステレオマーもしくはそれらの混合物、
あるいはそれらの医薬的に許容される塩。
【請求項２】
式１ａまたは式１ｂ
【化２】
0005621071.tif 000054
［式中、
Ｒがヒドロキシル含有癌化学療法薬（ＨＢＣＣＡ）であり；
Ｒ１が水素、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＣ５−Ｃ２２アルキルであり；そして、
Ｒ２がＣ５−Ｃ２２アルキルである］
を含有する、請求項１に記載の酸に不安定で親油性の分子複合体。
【請求項３】
該ヒドロキシル含有癌化学療法薬が、タキサン、アベオ−タキサン、カンプトテシン、エポチロン、ククルビタシン、クアシノイド、アントラサイクリン、ならびにそれらのアナログおよび誘導体からなる群から選択される、請求項１に記載の酸に不安定で親油性の分子複合体。
【請求項４】
該ヒドロキシル含有癌化学療法薬が、アクラルビシン、カンプトテシン、マソプロコール、パクリタキセル、ペントスタチン、アムルビシン、クラドリビン、シタラビン、ドセタキセル、酢酸エリプチニウム、エピルビシン、エトポシド、フォルメスタン、フルベストラント、ゲムシタビン、イダルビシン、ピラルビシン、トポテカン、バルルビシンおよびビンブラスチンからなる群から選択される、請求項１に記載の酸に不安定で親油性の分子複合体。
【請求項５】
該複合体が、以下の化合物：
【化３】
0005621071.tif 000055
【化４】
0005621071.tif 000056
【化５】
0005621071.tif 000057
【化６】
0005621071.tif 000058
【化７】
0005621071.tif 000059
【化８】
0005621071.tif 000060
【化９】
0005621071.tif 000061
（式中、−ＡＬＬ１、−ＡＬＬ２、−ＡＬＬ３および−ＡＬＬ４は、各々、独立して、水素、または
【化１０】
0005621071.tif 000062
によって示される酸に不安定で親油性の基であるが、ただし、−ＡＬＬ１、−ＡＬＬ２、−ＡＬＬ３および−ＡＬＬ４のうちの少なくとも１つは酸に不安定で親油性の基である）
から選択される、請求項１に記載の酸に不安定で親油性の分子複合体。
【請求項６】
ａ）治療上有効な量の単一のジアステレオマーの形態の請求項１に記載の化合物；およびｂ）医薬的に許容される賦形剤を含有する、医薬組成物。
【請求項７】
治療上有効な量の請求項１に記載の化合物および医薬的に許容される賦形剤を含有する、癌の処置が必要な患者における該処置のための医薬組成物。
【請求項８】
該癌が、白血病、神経芽腫、膠芽腫、子宮頚癌、結腸直腸癌、膵癌、腎癌およびメラノーマからなる群から選択される、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
該癌が、肺がん、乳癌、前立腺癌、卵巣癌および頭頚部癌からなる群から選択される、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
該医薬組成物が、癌細胞が示す耐性の程度を、非複合ヒドロキシル含有癌化学療法薬と比較して少なくとも１０％〜５０％低下させる、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
患者への癌化学療法薬の投与に付随する化学療法の副作用を低減するかまたは除去するための医薬組成物であって、治療上有効な量の、式１または１．１：
【化１１】
0005621071.tif 000063
［式中、
Ｒはヒドロキシル含有癌化学療法薬であり；
Ｒ１は水素、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＣ５−Ｃ２２アルキルであり；
Ｒ２はＣ５−Ｃ２２アルキルであり；
ＹはＯであり；
ＺはＯであり；
ＱはＯであり；そして、
ＴはＯである］
で示される酸に不安定で親油性の分子複合体、およびそれらの単離されたエナンチオマー、ジアステレオマーもしくはそれらの混合物を含有する、該医薬組成物。
【請求項１２】
該医薬組成物が、患者の癌細胞においてより高濃度の癌化学療法薬を供する、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
該医薬組成物が、非複合癌化学療法薬の患者への投与と比べた場合、癌細胞中に、少なくとも５％、１０％、２０％または少なくとも５０％の差でより高濃度の癌化学療法薬を送達する、請求項１２に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、2011年6月6日に出願された米国仮特許出願第61/493,827号および2011年6月13日に出願された米国仮特許出願第61/496,367号の利益を主張し、引用によりその全般が本明細書に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、概して、患者の処置に用いるための化合物および方法に関する。より具体的には、本発明は、癌の処置で用いるための分子複合体に関する。とりわけ、本発明は、酸に不安定で親油性の複合体、その製造において有用な方法および中間体、ならびに、それを用いて患者を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
現在、様々な癌の処置のために、多くの抗癌剤が市場に出ている。例えば、パクリタキセルおよびドセタキセルは乳癌および卵巣癌の処置に用いられる2つの有望な抗癌剤であり、様々な他の癌（例えば、皮膚癌、肺癌、頭頸部癌）の処置において期待できる。他の有望な化学療法薬が、これらおよび他の癌の処置のために開発および試験されている。化合物、例えば、パクリタキセル、ドセタキセルおよび他のタキサン、カンプトテシン、エポチロン、ならびにクアシノイド、さらには癌の処置において有効性を示す他の化合物にかなり関心がもたれる。特に関心がもたれるのは、in vitroおよびin vivoでの抗癌活性が実証されている天然の薬物およびその合成アナログである。
【０００４】
しかしながら、多くの同定された抗癌化合物は、化学療法レジメンでのそれらの使用に関する多くの困難を示す。癌の処置における該化学療法薬の使用に関する主要な問題は、正常で健全な組織に悪影響を及ぼさずに癌組織を標的とすることの難しさである。例えば、パクリタキセルは、有糸分裂および細胞分裂プロセス（正常細胞より癌細胞においてより頻繁に生じる）を妨害することにより、その抗腫瘍活性を発揮する。それにもかかわらず、化学療法処置中の患者は、正常で健全な細胞における有糸分裂の妨害に関連した様々な有害作用を経験しうる。
【０００５】
身体内の他の細胞を害せずに選択的に癌細胞を殺傷することができる標的癌療法は、癌の臨床的処置における大きな改善を示しうる。抗体を用いた標的薬剤の報告が1958年以降の文献に見られる。癌細胞への選択的送達のための抗体への結合による標的薬剤は、抗体のサイズが大きい(MW = 125〜150キロダルトン)ために固形腫瘍へ比較的に浸透できないことに起因して、成功に限度があった。
【０００６】
別の戦略は、標的化ベクターとして、より小さい標的化リガンドおよびペプチド（腫瘍細胞に特有であるか腫瘍細胞で過剰発現している特定の受容体を認識する）を使用すること含む。該コンストラクトは分子量が2〜6キロダルトンであり、固形腫瘍の至る所に容易に浸透することができる。
【０００７】
従って、癌の処置レジメンでの化学療法薬を用いた癌細胞の直接的な標的化における使用のための新規化合物および方法を開発することが、非常に望ましいものでありうる。同様に、このことによって、中毒性副作用の低減または除去、標的部位への薬物のより効率的な送達、ならびに、投与薬物の用量の低減とその結果としての健全な細胞に対する毒性の低減および化学療法レジメンの費用の低減がもたらされ得る。
【０００８】
関心のもたれる１つの特定のアプローチは、腫瘍の分子に結合させた抗癌薬物部分の使用である。例えば、特許文献１（Safavyによる）は、腫瘍細胞表面受容体に結合することができる受容体リガンドペプチドに結合したタキサン部分の形成および使用について考察している。Safavyは、とりわけ、該受容体リガンドペプチドが、ボンベシン/ガストリン-放出ペプチド(BBN/GRP)受容体-認識ペプチド(BBN [7-l3])、ソマトスタチン受容体-認識ペプチド、上皮増殖因子受容体-認識ペプチド、モノクローナル抗体または受容体認識糖鎖（receptor-recognizing carbohydrate）であるかもしれないことを示唆している。
【０００９】
これらの薬物分子複合体を合成することの1つの重要な側面は、これら2つのユニットを、複合体（とりわけ、体循環中では安定であるが、いったん癌細胞に内部移行するかまたは局所的に酸性の腫瘍環境中に集まると細胞傷害性薬物を放出する複合体）に望ましい特徴および生物学的活性を提供するリンカーと結合させることである。そのような薬物は、正常な組織に対して低い毒性を示すことが期待されうる。得られた複合体はまた、標的組織に到達するまで十分に安定であり、従って正常で健全な組織に対する毒性を低減するとともに、標的化効果を最大にするはずである。
【００１０】
血液脳関門(BBB)は、脳を体循環から隔離する特殊化した物理的および酵素的バリアである。BBBの物理的な部分は、複雑な体系の密着結合で配置した内皮細胞で構成されており、いずれの重要な傍細胞輸送を阻害する。BBBは、脂溶性、分子サイズおよび電荷に基づいて物質のトランスサイトーシスを選択的に判別する拡散制限として機能するので、脳へのドラッグデリバリーに関する問題を引き起こす。BBBを横切るドラッグデリバリーは、高濃度の薬物流出トランスポーター(例えば、P-糖タンパク質、多剤耐性タンパク質、乳癌耐性タンパク質)の存在に起因して、さらに解決が難しい。これらのトランスポーターは、薬物分子を、それらが脳へと通過しないうちに内皮細胞の細胞質から活発に除去する。
【００１１】
悪性脳腫瘍の処置におけるドラッグデリバリーに現在用いられている方法は、概して、非特異的かつ非効率的である。脳の疾患を処置する場合に考慮すべきさらなる問題は、ビヒクル中の薬物の腫瘍または罹患組織を越える拡散である。脳への薬物のそのような送達のために現在用いられているビヒクルのサイズならびに他の生理的特徴は、大抵、薬剤が患部組織を通過して効率的に拡散するのを妨害する。効率的に薬剤が拡散しないことは、処置の有効性に影響する。
【００１２】
ペプチドは、ドラッグデリバリーのビヒクルとして用いることができると期待されて、脳へのドラッグデリバリーのための担体分子として広く研究されてきた。しかしながら、ペプチドはその限られた生物学的利用能に起因する問題を有する。該分子の生物学的利用能を増大するための方法が集中的に探求されているにもかかわらず、せいぜいわずかな成功がもたらされたのみであった。
【００１３】
細胞の増殖および成長の増大が癌の特徴である。細胞増殖の増大は細胞コレステロールの高い代謝回転に関連している。膜合成および成長のためにコレステロールを必要としている細胞は、血漿低密度リポタンパク質(LDL)（血中のコレステロールの主要なトランスポーター）の受容体媒介エンドサイトーシスによってか、あるいはde novo合成によって、コレステロールを獲得しうる。
【００１４】
LDLは、LDL受容体(LDLR)として知られる受容体によって細胞に取り込まれる;LDLは受容体とともにエンドサイトーシスにより細胞内に取り込まれて、エンドソームに輸送される。該エンドソームが酸性になり、LDLからLDL受容体が遊離され;該LDL受容体は、LDL粒子のさらなる取り込みに関与することができる表面へと再循環する。様々な組織中の腫瘍は血漿LDLが枯渇するまでLDLに対する高い要求を示すことを示唆する一連の証拠がある。癌細胞へのLDLの取り込みの増大は、これら腫瘍におけるLDL受容体(LDLR)の増大に起因すると考えられる。多数のLDLRを発現すると知られているいくつかの腫瘍には、ある種の白血病、肺腫瘍、直腸結腸腫瘍および卵巣癌が含まれる。
【００１５】
正常および悪性の脳組織の比較研究によって、LDLRは悪性のおよび/または急速に増殖している脳細胞および組織に関連している傾向が高いことが示された。いくつかの研究によって、急速に増殖している脳細胞（例えば初期発生および活発に増殖する脳腫瘍において見られるもの）は、それらのコレステロールに対する要求性の増大に起因してLDLRの発現の増加を示すことが示唆されている。
【００１６】
問題を有していて効率的に処置できない悪性脳腫瘍（brain cancer）の中に、多形膠芽腫(GBM)がある。この壊滅的な脳腫瘍は100％致死性である。さらに、全ての原発性悪性脳腫瘍関連死の85％以上がGBMに起因している。現在の療法は、神経系外科手術、放射線療法および化学療法を含む多様なアプローチに依存している。これらのアプローチを用いて最大限努力しても、該腫瘍に苦しむ患者の生存期間をわずかに増大させるのみであった。
【００１７】
最も悪性度が高い神経膠腫であるGBMは、制御不能で活発な細胞増殖、および通常の療法に対して全般的な抵抗性を有することにより特徴付けられる。培養下のGBM細胞は、多数の低密度リポタンパク質受容体(LDLR)を有する。この受容体は神経細胞および正常なグリア細胞にはほとんど存在しないことから、治療薬（例えば、細胞傷害性薬物（cytotoxins）または放射性医薬品）の送達のための理想的な標的となる。既存療法を改善するためまたは新しい療法を開発するための試みは成功しておらず、悪性神経膠腫に対する処置の成果はせいぜいごくわずかである（生存期間中央値は約10か月）。
【００１８】
LDL受容体をほとんど有しない正常な脳細胞とは異なって、培養下のGBM細胞は、それらの表面に多数のLDL受容体を有する。他の癌は、癌組織の性質が高増殖性であること、ならびにコレステロール代謝回転の必要性に起因して、LDLRの発現も高い可能性が高い。このことは、該LDL受容体が、LDL粒子を介した抗腫瘍薬の送達のための、GBMおよび他の悪性腫瘍における有望な特有の分子標的であることを示唆している。
【００１９】
Maranhaoらは、LDEと称されるコレステロール-リッチなマイクロエマルションまたはナノ粒子製剤が、血流内への注入後に癌組織に集中することを実証した（非特許文献１）。LDEに結合したパクリタキセル親油性誘導体の細胞傷害性、薬物動態、動物に対する毒性および治療効果を、市販のパクリタキセルと比較した。その結果、LDE-オレイン酸パクリタキセルは安定であることが示された。複合体中の該薬物の細胞増殖阻害活性は、市販のパクリタキセルの細胞増殖阻害活性（該市販の製剤で用いられるビヒクルであるクレモフォールELの細胞傷害性に起因する）に比べて減衰していた。Maranhaoらは、LDE-オレイン酸パクリタキセルは安定な複合体であり、パクリタキセルと比べて、毒性がかなり低減されていてかつ活性が高められている（それによって臨床的使用における治療指数の向上がもたらされうる）ことを示した。
【００２０】
それらのLDL受容体過剰発現およびその結果としての体循環からのLDL粒子の高取り込みを介した、癌組織への化学療法化合物の選択的および特異的送達の大きな可能性をとらえるには、該癌化学療法薬は高い親油性を有することが必要とされる（LDL粒子の脂質コア中に捕捉されたままにすることで血漿中へ拡散しないようにし、正常な組織が該薬物に曝露されることによる中毒性副作用を引き起こさないようにするため）。さらに、エンドソームの酸性環境へのLDL受容体媒介取り込みを介してLDL粒子がその化学療法薬ペイロードとともに癌細胞に入るとすぐに、該LDL受容体は該LDL粒子から切り離されて細胞表面へと再循環され、該LDL粒子はその脂質内容物およびその親油性の化学療法薬をエンドソームの酵素および酸性環境へと放出する。LDL粒子の脂質コア内に十分に保持されるように本質的に十分に親油性である癌化学療法薬はほとんどない。このことは、正常な体循環での高い安定性およびLDL粒子の脂質コア中での高い保持率を有するけれどもエンドソームの酸性環境においては活性な化学療法薬を容易に放出する癌化学療法薬の、適切な親油性誘導体に対する必要性を生じさせる。本発明の化合物はこの必要性に対処するものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２１】
【特許文献１】米国特許第6,191,290号
【非特許文献】
【００２２】
【非特許文献１】D. G. Rodrigues, D. A. Maria, D. C. Fernandes, C. J. Valduga, R. D. Couto, O. C. Ibanez and R. C. Maranhao.  Improvement of paclitaxel therapeutic index by derivatization and association to a cholesterol-rich microemulsion: in vitro and in vivo studies.  Cancer Chemotherapy and Pharmacology 55: 565-576 (2005)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
本発明は、概して、患者の処置に用いるための化合物および方法に関する。より具体的には、本発明は、癌の処置で用いるための分子複合体に関する。とりわけ、本発明は、酸に不安定で親油性の複合体、その製造において有用な方法および中間体、ならびに、それを用いて患者を処置する方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
定義:
本明細書で用いる用語「アルキル」は、単独かまたは組み合わされて、1〜22個の炭素原子を有する適宜置換された直鎖または分枝鎖アルキルラジカル(例えば、C1-C22アルキルまたはC1-22アルキル)を言う。アルキルラジカルの例としては、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、tert-アミル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルなどが挙げられる。ある特定の実施態様において、該アルキル基（例えばC1-C22アルキルまたはC5-C22アルキル）はまた、該アルキル基中に1つ以上の二重結合を含んでもよく、この場合はまたC1-C22アルケニルまたはC5-C22アルケニル基においても言及されうる。
【００２５】
用語「アルケニル」は、単独かまたは組み合わされて、1つ以上の炭素-炭素二重結合を有していて、2〜約22個の炭素原子を有する、適宜置換された直鎖または分枝鎖の炭化水素ラジカルを言う。アルケニルラジカルの例としては、エテニル、プロペニル、1,4-ブタジエニルなどが挙げられる。
【００２６】
用語「アルコキシ」はアルキルエーテルラジカルを言い、ここで、該用語アルキルは上記の通り定義される。アルコキシラジカルの例としては、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、イソプロポキシ、n-ブトキシ、イソ-ブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシなどが挙げられる。
【００２７】
用語「ジアステレオマー」は、2個以上の不斉炭素原子を有する化合物において生じる4個以上の異性体のいずれの群を言う。互いの立体異性体であるがエナンチオマーではない化合物を、ジアステレオマーと称する。
【００２８】
本明細書で用いるフレーズ「保護基」は、潜在的な反応性官能基を望ましくない化学変換から保護する一時的な置換基を意味する。該保護基の例としては、カルボン酸のエステル、アルコールのシリルエーテル、ならびに、アルデヒドおよびケトンの、各々、アセタールおよびケタールが挙げられる。保護基の化学的性質（chemistry）は概説されている(Greene, T. W.; Wuts, P. G. M. Protective Groups in Organic Synthesis, 4th ed.; Wiley: New York, 2007)。ヒドロキシル基の保護のためのシリル基の例としては、TBDMS(tert-ブチルジメチルシリル)、NDMS(2-ノルボルニルジメチルシリル)、TMS(トリメチルシリル)およびTES(トリエチルシリル)が挙げられる。NH-保護基の例としては、ベンジルオキシカルボニル、t-ブトキシカルボニルおよびトリフェニルメチルが挙げられる。
【００２９】
用語「タキサン」、「タキサン誘導体」および「タキサンアナログ」などは、互換的に用いられ、タイヘイヨウイチイ（Taxus brevifolia, the Pacific yew）から直接もしくは半合成的に得られる抗腫瘍薬のクラスに関連する化合物を意味する。該タキサンの例としては、パクリタキセルおよびドセタキセルならびにそれらの天然誘導体およびそれらの合成もしくは半合成誘導体が挙げられる。
【００３０】
本明細書で用いる「医薬的に許容される賦形剤」または「医薬的に許容される塩」は、医薬的に許容されていて目的の薬理活性を提供する、賦形剤または本明細書に記載の化合物の塩を意味する。これらの賦形剤および塩としては、無機酸（例えば塩酸、臭化水素酸、リン酸など）を用いて形成された酸付加塩が挙げられる。該塩はまた、有機酸（例えば酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、グリコール酸、乳酸、コハク酸、リンゴ酸、クエン酸、安息香酸など）を用いて形成されうる。
【００３１】
「治療上有効な量」は、本明細書に記載の生物学的効果のいずれかを引き出す薬物量を意味する。
【００３２】
（発明の概要）
一実施態様において、ヒドロキシル含有癌化学療法薬(HBCCA)（hydroxyl-bearing cancer chemotherapeutic agent）の分子複合体の新しい有用な組成物を提供する。別の実施態様において、癌の処置において用いるための、癌化学療法薬の酸に不安定で親油性の分子複合体の組成物を提供する。別の実施態様において、癌の処置における使用のための分子複合体（例えば、酸に不安定で親油性のプロドラッグ複合体）の製造において用いるための中間体化合物を提供する。別の実施態様において、酸に不安定で親油性の薬物複合体の製造のための効率的な方法を提供する。別の実施態様において、化学療法薬を患者に投与するための方法であって、癌患者が通常経験する副作用を低減するかまたは実質的に除去する方法を提供する。別の実施態様において、患者の癌細胞中に化学療法薬を集中させるための方法を提供する。
【００３３】
一実施態様において、式1、1.1または式2:
【化１】
0005621071.tif 000002
（式中:Rはヒドロキシル含有癌化学療法薬であり;式1または1.1について、R1は水素、C1-C4アルキルまたはC5-C22アルキルであり;R2はC5-C22アルキルであり;YはO、NR'またはSから選択され、ここでR'は水素またはC1-C6アルキルであり;ZはOまたはSであり;QはOまたはSであり;そして、TはOまたはSであり;式2について:R2はC1-C22アルキルであり;TはOまたはSであり;そして、Xは、水素か、あるいはメシレート、スルホネートおよびハロゲン(Cl、BrおよびI)からなる群から選択される脱離基である］
で示される酸に不安定で親油性の分子複合体(ALLMC)（acid labile lipophilic molecular conjugate）、ならびにそれらの単離されたエナンチオマー、ジアステレオマーもしくはそれらの混合物、またはそれらの医薬的に許容される塩を提供する。化合物1.1は、純粋なシン異性体、純粋なアンチ異性体、およびシン異性体とアンチ異性体の混合物、ならびにそれらのジアステレオマーを含む。
【００３４】
別の実施態様において、式1または1.1（式中:Rはヒドロキシル含有癌化学療法薬であり;R1は水素、C1-C4アルキルまたはC5-C22アルキルであり;R2はC5-C22アルキルであり;YはOまたはSであり;ZはOであり;QはOであり;そして、TはOである）により示される、上記の酸に不安定で親油性の分子複合体を提供する。酸に不安定で親油性の分子複合体の一態様は、式2（式中:R2はC5-C22アルキルであり;TはOであり;そして、Xは水素であるか、あるいはCl、BrおよびIからなる群から選択される）で示される。別のバリエーションにおいて、R2はC9-C22である。上記の酸に不安定で親油性の分子複合体の別の一態様は、式1a、1bまたは式2a:
【化２】
0005621071.tif 000003
（式中:Rはヒドロキシル含有癌化学療法薬(HBCCA)であり;
式1aまたは1bについて、R1は水素、C1-C4アルキルまたはC5-C22アルキルであり;そして、R2はC5-C22アルキルであり;ならびに、
式2aについて:R2はC1-C22アルキルであり;そして、Xは水素であるか、あるいはCl、BrおよびIからなる群から選択される）を含む。式1aもしくは1bのカーボネート(すなわち、-OC(O)O-)である化合物の一つのバリエーションにおいて、該化合物は、対応する式1aのスルホネート(すなわち、-OS(O)O-)である（ここで、カーボネート基はスルホネート基で置き換えられている）。該化合物1bは、純粋なシン異性体、純粋なアンチ異性体、およびシン異性体とアンチ異性体の混合物、ならびにそれらのジアステレオマーを含む。
【００３５】
式1、2、1aおよび2aの化合物の別のバリエーションにおいて、R1は水素、C1-C4アルキル、またはC5-C22アルキルであり、R2は、不飽和脂肪酸の炭素残基（例えば、エイコセン酸のC19残基(シス異性体、トランス異性体および異性体の混合物を含む)、オレイン酸のC17残基およびエライジン酸のC17残基からなる群から選択される炭素残基）である。本明細書で用いる、脂肪酸の「炭素残基」(例えば、C17残基、C19残基など)は、脂肪酸の炭素鎖（カルボキシル炭素を除く）を意味する。
【００３６】
上記の酸に不安定で親油性の分子複合体の別の態様において、該ヒドロキシル含有癌化学療法薬は、タキサン、アベオ-タキサン、カンプトテシン、エポチロン、ククルビタシン、クアシノイド、アントラサイクリン、ならびにそれらのアナログおよび誘導体からなる群から選択される。上記の酸に不安定で親油性の分子複合体の別の態様において、該ヒドロキシル含有癌化学療法薬は、アクラルビシン、カンプトテシン、マソプロコール、パクリタキセル、ペントスタチン、アムルビシン、クラドリビン、シタラビン、ドセタキセル、ゲムシタビン、酢酸エリプチニウム（elliptinium acetate）、エピルビシン、エトポシド、フォルメスタン、フルベストラント、イダルビシン、ピラルビシン、トポテカン、バルルビシンおよびビンブラスチンからなる群から選択される。上記の酸に不安定で親油性の分子複合体の別の態様において、該複合体は、図18、19または20の化合物から選択される。一つのバリエーションにおいて、基-ALL1、-ALL2、-ALL3...〜-ALLnのうちの1つのみが-ALL基であって、その他は水素である。別のバリエーションにおいて、基-ALL1、-ALL2、-ALL3...〜-ALLnのうちの2つが-ALL基である。
【００３７】
別の実施態様において、a)単一のジアステレオマーの形態の治療上有効な量の上記の化合物;およびb)医薬的に許容される賦形剤を含有する医薬組成物を提供する。別の態様において、該医薬組成物は、経口投与に適応しているか;または非経口投与に適応した液体製剤である。別の実施態様において、該組成物は、経口的、非経口的、腹腔内、静脈内、動脈内、経皮的、筋肉内、直腸内、鼻腔内、リポソーム的、皮下および髄腔内からなる群から選択される経路による投与に適応している。別の実施態様において、患者における癌の処置のための方法であって、治療上有効な量の上記化合物または組成物のいずれかの化合物または組成物を、該処置を必要としている患者に投与することを含む方法を提供する。該方法の一態様において、該癌は、白血病、神経芽腫、膠芽腫、子宮頚癌、結腸直腸癌、膵癌、腎癌およびメラノーマからなる群から選択される。該方法の別の態様において、該癌は、肺癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌および頭頸部癌からなる群から選択される。該方法の別の態様において、該方法は、癌細胞が示す耐性の程度を、非複合ヒドロキシル含有癌化学療法薬と比べた場合、少なくとも10％、20％、30％、40％、または少なくとも50％低下させる。
【００３８】
別の実施態様において、患者への癌化学療法薬の投与に付随する化学療法の副作用を低減するかまたは実質的に除去する方法であって、治療上有効な量の、式1、1.1または式2:
【化３】
0005621071.tif 000004
（式中:Rは、ヒドロキシル含有癌化学療法薬であり;式1または1.1について:R1は水素、C1-C4アルキルまたはC5-C22アルキルであり;R2はC5-C22アルキルであり;YはO、NR'またはSから選択され、ここで、R'は水素またはC1-C6アルキルであり;ZはOまたはSであり;QはOまたはSであり;そして、TはOまたはSであり;式2について:R2はC1-C22アルキルであり;TはOまたはSであり;そして、Xは、水素か、あるいはメシレート、スルホネートおよびハロゲン(Cl、BrおよびI)からなる群から選択される脱離基である）で示される酸に不安定で親油性の分子複合体、およびそれらの単離されたエナンチオマー、ジアステレオマーもしくはそれらの混合物を患者に投与することを含む、該方法を提供する。化合物1.1は、純粋なシン異性体、純粋なアンチ異性体、およびシン異性体とアンチ異性体の混合物、ならびにそれらのジアステレオマーを含む。上記の一つのバリエーションにおいて、R2はC9-C22アルキルである。一態様において、該方法は、患者の癌細胞中の癌化学療法薬の濃度をより高くする。別の態様において、該方法は、癌細胞中により高い（非複合癌化学療法薬の患者への投与と比べた場合、少なくとも5％、10％、20％、30％、40％または少なくとも50％の差で）濃度の癌化学療法薬を送達する。
【００３９】
別の実施態様において、式3aまたは3b:
【化４】
0005621071.tif 000005
（式中:R1は水素、C1-C4アルキルまたはC5-C22アルキルであり;R2はC5-C22アルキルであり;YはO、NR'またはSから選択され、ここでR'は水素またはC1-C6アルキルであり;ZはOまたはSから選択され;QはOまたはSであり;そして、TはOまたはSである）で示される化合物を提供する。該化合物の一態様において、R1は水素またはC1-C4アルキルであり;R2はC5-C22アルキルであり;YはOまたはSであり;ZはOであり;QはOであり;そして、TはOである。式3aまたは3bで示される活性化合物がヒドロキシル含有癌化学療法薬(HBCCA)と縮合する場合、該活性化合物を用いて酸に不安定で親油性の複合体を製造してもよい。本明細書に記載の通り、該HBCCAは一般的に、例えば式1、1a、1b、1.1、2および2a中において、残基または基“R”で示され、酸に不安定で親油性の分子複合体を形成するように該HBCCAがカップリングされない場合、該HBCCAは1つ以上のヒドロキシル(-OH)基により官能化されてもよいので、該HBCCAは一般的に式“R-OH”を有するものとしても示されてもよい。同様に、酸に不安定で親油性の分子複合体を形成するためにHBCCAと縮合されうる酸に不安定で親油性の基(すなわち、活性化合物の“-ALL”基)は、一般的に、“R-O-ALL”で示される。従って、2個以上の-ALL基がHBCCA基と縮合または結合している場合、各-ALL基は、独立して、-ALL1、-ALL2、-ALL3...〜-ALLnで示されうる（ここで、nは該癌化学療法薬上の利用可能なヒドロキシル基（-ALL基と縮合または結合してもよい）の数である）。式1および2の化合物の例として、例えば、指定のHBCCAおよび-ALL基を以下に示す。
【化５】
0005621071.tif 000006
【００４０】
酸に不安定で親油性の分子複合体(ALLMC)（ここで、該HBCCA基は2個の-ALL基を有するパクリタキセルである）の例を以下に示す。
【化６】
0005621071.tif 000007
【００４１】
パクリタキセルの酸に不安定な分子複合体の上記の代表的な例において、該-ALL1および-ALL2の各々は、独立して、水素または本明細書に定義する-ALL基である。1個以上のヒドロキシル基（隔絶された（inaccessible）ヒドロキシル基）を有するHBCCA基について、そこで該酸に不安定で親油性の基を形成することができない場合、-ALL基として表される基は水素である。
【００４２】
別の実施態様において、癌患者の処置において用いるための酸に不安定で親油性の分子複合体の製造方法を提供する。一態様において、該方法は、式4の化合物を形成するための、アルデヒドまたはケトンを用いたソルケタール(2,2-ジメチル-4-ヒドロキシメチル-1,3-ジオキソラン)のトランス-ケタール化を含む。化合物4を酸ハロゲン化物(ここで、Xはハロゲン化物である)と縮合させて式3の化合物を形成してもよい。式3の化合物の一つのバリエーションにおいて、該p-ニトロフェノキシ基は、脱離基（例えば、2-ハロ-フェノキシ、2,4-ハロ-フェノキシ、2,4,6-トリハロ-フェノキシ、2,6-ジハロ-フェノキシ（ここで、ハロは、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードからなる群から選択される））で置き換えられていてよい。
【００４３】
3とHBCCA(R-OH)との縮合によって、癌化学療法化合物1（式中、R、R1およびR2は本明細書で定義される通りである）の酸に不安定で親油性の分子複合体が得られる。
【化７】
0005621071.tif 000008
【００４４】
別の実施態様において、式2aの化合物を形成するためのHBCCAとエノールエーテルもしくはビニルエーテルとの縮合反応を含む、式2aの化合物の製造方法を提供する。
【化８】
0005621071.tif 000009
（式中、R-OHは該HBCCAであり、R3はC2-C23アルキルであり、そして、Xは水素またはCl、BrもしくはIから選択されるハロゲンである。）
【００４５】
別の実施態様において、LDL粒子に類似しているナノ粒子脂肪乳剤または「擬似LDL粒子」中にて本願の酸に不安定で親油性の分子複合体を用いて、患者の選択された標的細胞中に、癌化学療法薬を集中させるための方法を提供する。別の実施態様において、該方法は、選択された用量の治療上有効な量の酸に不安定で親油性の癌化学療法薬の分子複合体（擬似LDL粒子の脂質コア中に溶解させた）を患者に投与することを含む。
【００４６】
また、上記の実施態様、態様およびバリエーションには、アミノ酸の塩（例えばアルギニン酸塩など）、グルコン酸塩、およびガラクツロン酸塩も含まれる。本発明の化合物のいくつかは、内部塩（inner salt）または双性イオンを形成してもよい。ある特定の本発明の化合物は、非溶媒和形態ならびに溶媒和形態（水和物形態を含む）で存在することができ、本発明の範囲内であるものと意図される。ある特定の上記の化合物はまた、1つ以上の固相もしくは結晶相または多形で存在してもよく、該多形もしくは該多形の混合物の可変性の生物学的活性もまた、本発明の範囲内に含まれる。また、医薬的に許容される賦形剤および治療上有効な量の少なくとも1つの本発明の化合物を含有する医薬組成物も提供する。
【００４７】
本発明の化合物またはその誘導体の医薬組成物は、非経口投与用の液剤または凍結乾燥粉末として製剤化されてもよい。粉末は、使用の前に、適切な希釈剤または他の医薬的に許容される担体を加えることによって再構成されうる。該液体製剤は、一般的に、緩衝された等張の溶液である。適切な希釈剤の例は、通常の等張生理食塩水、水中または緩衝されたナトリウム溶液もしくは酢酸アンモニウム溶液中の5％ブドウ糖である。該製剤は、非経口投与に特に適しているが、経口投与に用いてもよい。また、賦形剤（例えば、ポリビニルピロリジノン、ゼラチン、ヒドロキシセルロース、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウム、またはクエン酸ナトリウム）を加えてもよい。別法として、これらの化合物を、カプセル剤化、錠剤化してもよいか、あるいは経口投与用の乳剤またはシロップ剤として製造してもよい。医薬的に許容される固体または液体担体を、組成物を強化または安定化させるためか、あるいは組成物の製造を容易にするために加えてもよい。液体担体としては、シロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、グリセリン、生理食塩水、アルコールまたは水が挙げられる。固体担体としては、デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム、二水和物、白土（terra alba）、ステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸、タルク、ペクチン、アラビアゴム、寒天、またはゼラチンが挙げられる。該担体は、徐放性物質（例えば、単独かまたはワックスと一緒の、モノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリル）を含んでよい。固体担体の量は変化するが、好ましくは、用量単位あたり約20 mg〜約1 gであろう。該医薬製剤は、錠剤形態については、必要に応じて、製粉、混合、顆粒化、および圧縮;あるいは、硬ゼラチンカプセル剤形態については、製粉、混合、および充填に関する薬学の通常の技法に従って、製造される。液体担体が用いられる場合、該製剤は、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤、または水性もしくは非水性懸濁剤の形態であろう。そのような液体製剤は、経口で直接投与されうるか、軟ゼラチンカプセルに充填されうる。これらの投与方法の各々に適した製剤は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, A. Gennaro, ed., 20th edition, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa 中に見いだされうる。
【００４８】
本発明のこれらおよび他の目的は、添付の図面と一緒に、以下に詳細に記載された本発明の実施態様例を考慮することによって、より容易に評価および理解されるであろう。本願全体にわたって引用された全ての文献は、引用によってその全般が本明細書に援用される。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】マウス血漿に添加した場合のART273の安定性のグラフを示す。
【図２】ラット血漿に添加した場合のART273の安定性のグラフを示す。
【図３】ヒト血漿に添加した場合のART273の安定性のグラフを示す。
【図４】マウス血漿に添加した場合のART488の安定性のグラフを示す。
【図５】ラット血漿に添加した場合のART488の安定性のグラフを示す。
【図６】ヒト血漿に添加した場合のART488の安定性のグラフを示す。
【図７】マウス血漿に添加した場合のLiposyn（登録商標）中のART488の安定性のグラフを示す。
【図８】ヒト血漿に添加した場合のLiposyn（登録商標）中のART488の安定性のグラフを示す。
【図９】マウス血漿に添加した場合のART198の安定性のグラフを示す。
【図１０】ラット血漿に添加した場合のART198の安定性のグラフを示す。
【図１１】ヒト血漿に添加した場合のART198の安定性のグラフを示す。
【図１２】マウス血漿に添加した場合のART489の安定性のグラフを示す。
【図１３】ラット血漿に添加した場合のART489の安定性のグラフを示す。
【図１４】ヒト血漿に添加した場合のART489の安定性のグラフを示す。
【図１５】マウス血漿に添加した場合のLiposyn（登録商標）中のART489の安定性のグラフを示す。
【図１６】ヒト血漿に添加した場合のLiposyn（登録商標）中のART489の安定性のグラフを示す。
【図１７】ヒト血漿に添加した場合のART467の安定性のグラフを示す。
【図１８】代表的な酸に不安定で親油性の分子複合体を示す。
【図１９】代表的な酸に不安定で親油性の分子複合体を示す。
【図２０】代表的な酸に不安定で親油性の分子複合体を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
（実施態様例の詳細な説明）
本発明の化合物の製造のために以下の方法が用いられうる。これらの化合物の製造において用いた出発物質および試薬は、商業的供給源（例えば、Aldrich Chemical Company (Milwaukee, Wis.)、Bachem (Torrance, Calif.)、Sigma (St. Louis, Mo.)）から入手可能か、あるいは、Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, vols. 1-17, John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1991; Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, vols. 1-5 and supps., Elsevier Science Publishers, 1989; Organic Reactions, vols. 1-40, John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1991; March J.: Advanced Organic Chemistry, 4th ed., John Wiley and Sons, New York, N.Y.;およびLarock: Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, New York, 1989などの文献に記載の方法に従って、当業者に周知の方法によって製造されるかのいずれかである。
【００５１】
場合によって、保護基を導入し、最終的に除去してもよい。アミノ、ヒドロキシ、およびカルボキシ基に適した保護基は、Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, Second Edition, John Wiley and Sons, New York, 1991に記載されている。標準的な有機化学反応は、いくつかの異なる試薬（例えば、Larock: Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, New York, 1989に記載のもの）を用いることによって、達成され得る。
【００５２】
癌化学療法薬の酸に不安定で親油性の分子複合体の合成のための一般的な方法
活性化された中間体化合物の形成:
癌化学療法薬の酸に不安定で親油性の分子複合体を形成するための使用に適した化合物は、本明細書に記載の一般的な方法に従って製造されうる。一態様において、酸触媒および有機溶媒の存在下において、ソルケタールをアルキルアルデヒドまたはジアルキルケトンと反応させて、各々、アルデヒドソルケタール(アセタール)誘導体またはケトンソルケタール(ケタール)誘導体を形成する。本方法に従って、5員および6員の環状アセタールを製造してもよく、そして、クロマトグラフィーによって実質的に純粋な形態で単離してもよい。一態様において、該溶媒はトルエンであり、該反応は、高温（例えば、約60〜80℃）にて実施される。その後、該アセタールまたはケタールのソルケタール誘導体を、塩基触媒の存在下において酸ハロゲン化物（例えば、クロロギ酸4-ニトロフェニル）と反応させることによって活性化させて、対応する活性化された誘導体（例えば、式3の4-ニトロフェニル炭酸中間体化合物）を形成させる。一態様において、該4-ニトロフェニル炭酸中間体をHBCCAと縮合させて酸に不安定で親油性の分子複合体を得てもよい。
【化９】
0005621071.tif 000010
【００５３】
別の態様において、ソルケタールを、まず、塩基触媒の存在下において酸ハロゲン化物（例えば、クロロギ酸4-ニトロフェニル）と反応させてソルケタールニトロカーボネートを得て、続いてそれを、酸触媒および有機溶媒の存在下においてアルキルアルデヒドまたはジアルキルケトンと反応させて、各々、式3のアルデヒドソルケタール(アセタール)誘導体またはケトンソルケタール(ケタール)誘導体を得る。一態様において、該溶媒はトルエンであり、該反応は室温で実施される。一態様において、該4-ニトロフェニル炭酸中間体をHBCCAと縮合させて、対応する酸に不安定で親油性の分子複合体を得てもよい。
【化１０】
0005621071.tif 000011
【００５４】
別の態様において、アルコール（例えばステアリルアルコール）を、遷移金属触媒（例えば、[Ir(cod)Cl]2）および塩基添加物（base additive）（例えば、Na2CO3）の存在下において酢酸ビニルと反応させて、対応するビニルエーテルを得る。一態様において、該溶媒はトルエンであり、該反応は100℃で実施される。一態様において、該ビニルエーテル誘導体をHBCCAと縮合させて、対応する酸に不安定で親油性の分子複合体を得てもよい。
【化１１】
0005621071.tif 000012
【００５５】
別の癌化学療法薬の酸に不安定で親油性の分子複合体の合成のための一般的な方法:
一実施態様において、該HBCCAを、塩基（例えば、触媒量のN,N-ジメチル-4-アミノピリジン(DMAP)およびピリジン）の存在下において、有機溶媒（例えば、ジクロロメタン(DCM)）中で、室温(RT)にて、4-ニトロフェニル炭酸化合物と反応させて、目的の酸に不安定で親油性の分子複合体を得てもよい。
【化１２】
0005621071.tif 000013
【００５６】
下記のスキームに示す通り、活性化された酸に不安定で親油性の分子複合体中間体の初期合成は、ソルケタールを対応する天然脂肪酸由来のアルデヒドで処理した後にクロロギ酸4-ニトロフェニルと反応させることによって得られた。
【化１３】
0005621071.tif 000014
スキーム:親油性のカーボネート分子複合体中間体の合成:初期アプローチ
【００５７】
しかしながら、この方法は、5および6員の複合体ならびにそれらの対応するシン/アンチ異性体の形成をもたらす。5および6員のアセタールの両方ともが親油性複合体前駆体としての役割を果たすことができたが、3組の位置異性体および立体異性体を該アセタール形成工程において単離した。一実施態様において、目的のアセタールを、クロマトグラフィーによって実質的に純粋な形態で単離してもよい。該5員アセタールの製造についての別の反応順序を以下に示す。この経路は、該5員アセタールを提供し、そして、様々な候補化学療法薬の親油性複合体を得る方法を提供する。活性化されたカーボネート中間体を、該ヒドロキシル含有癌化学療法薬でさらに処理して、関心の持たれる対応する酸に不安定で親油性の分子複合体プロドラッグを得る。
【化１４】
0005621071.tif 000015
スキーム:親油性のカーボネート分子複合体中間体およびプロドラッグの合成:改変アプローチ
【００５８】
別の癌化学療法薬の酸に不安定で親油性の分子複合体を、DCM中のハロゲン化剤（例えばNXS（例えばN-ブロモスクシンイミド(NBS)）の存在下において、HBCCAをアルキルビニルエーテルと反応させることによって得てもよい。一態様において、該反応体を低温（例えば約-78℃）にて溶液中で合わせて、該反応液を撹拌して、ゆっくりと室温まで昇温させる。
【化１５】
0005621071.tif 000016
【００５９】
他の癌化学療法薬の酸に不安定で親油性の分子複合体を、酸触媒（例えば、ピリジニウム パラ-トルエンスルホネート(PPTS)）の存在下において、HBCCAを高級アルキルビニルエーテル(天然の脂肪酸由来)と反応させることによって得てもよい。一態様において、該反応体を室温にて溶液中で合わせて、対応する酸に不安定で親油性のアセタールプロドラッグを合成する。
【化１６】
0005621071.tif 000017
【００６０】
酸に不安定で親油性の複合体の形成:
方法A:式3の4-ニトロフェニル炭酸-ソルケタール複合体(0.21 mmol)／無水(anh.)ジクロロメタン(1 ml)溶液を、無水ジクロロメタン(2 ml)中のHBCCA(0.2 mmol)およびDMAP(0.3 mmol)の溶液に加え、該反応混合液を室温で窒素雰囲気(N2)下において撹拌した。該反応の進行をTLC/HPLCによってモニターし、完了後、該反応混合液を、塩化メチレン(DCM)で希釈し、NH4Cl(s)、水および食塩水で洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、エバポレートした。該粗残渣を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー(SGFC)によって精製して、複合体化プロドラッグを得た。
【００６１】
方法B:無水DCM(8 mL, 0.025M)中のアルキルビニルエーテル(1.2 mmol, 6当量)およびHBCCA(0.2 mmol, 1当量)の溶液に、NBS(1 mmol, 5当量)を、-15℃にてN2下において加えた。該反応混合液を-15℃〜0℃で撹拌し、該反応の進行をTLC/HPLCによってモニターした。完了後、該反応混合液をDCMで希釈し、該反応混合液をNaHCO3(飽和)、水および食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、エバポレートした。該粗残渣をSGFCにより精製して、複合体化プロドラッグを得た。
【００６２】
方法C:無水DCM(8 mL, 0.025M)中のアルキルビニルエーテル(1.2 mmol, 6当量)およびHBCCA(0.2 mmol, 1当量)の溶液に、PPTS(0.02 mmol, 10 mol％)を加え、該反応混合液を室温でN2下において撹拌した。該反応の進行をTLC/HPLCによってモニターした。完了後、該反応混合液をDCMで希釈し、該反応混合液をNaHCO3(飽和)、水および食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、エバポレートした。該粗残渣をSGFCにより精製して、複合体化プロドラッグを得た。
【００６３】
酸に不安定で親油性の複合体のキャラクタリゼーション:
酸に油安定で親油性の複合体を、HPLCおよび高分解能質量分析の組み合わせによってキャラクタライズした。各化合物について詳細を記載する。
【実施例】
【００６４】
ART 449の製造
ドコサヘキサエン酸アルコール（docosahexaenoic alcohol）の4-ニトロフェニル炭酸(0.5 g)／無水DCM溶液を、無水DCM(18 mL)中のART 273(0.522 g)およびDMAP(0.140 g)の溶液に、室温でN2下において加え、撹拌した。完了後、該反応液をDCMで希釈し、飽和塩化アンモニウム溶液(NH4Cl(s))、水および食塩水で洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、エバポレートした。該粗残渣をシリカゲルで精製して、ART 449を白色の固形物として得た。 -TOF MS: m/z 1003.4859 (M+CF3CO2)-
【化１７】
0005621071.tif 000018
【００６５】
ART 448の製造
5-ヘキセン-1-オールの4-ニトロフェニル炭酸(0.1 g)／無水DCM溶液を、無水DCM(5 mL)中のART 273(0.207 g)およびDMAP(0.051 g)の溶液に、室温でN2下において加えた。完了後、該反応液をDCMで希釈し、NH4Cl(s)、水および食塩水で洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、エバポレートした。該粗残渣をシリカゲルで精製して、ART 448を白色の固形物として得た。 -TOF MS: m/z 789.2928 (M+CF3CO2)-
【化１８】
0005621071.tif 000019
【００６６】
ART 473の製造
シクロヘキシルビニルエーテル(0.24 mL)を、無水DCM(5 mL)中のART 273(0.230 g)およびNBS(0.282 g)の溶液に、-78℃でN2下において加えた。完了後、該溶液をエバポレートし、該粗残渣をシリカゲルで精製して、ART 473を白色の固形物として得た。
【化１９】
0005621071.tif 000020
【００６７】
ART 471の製造
Tert-ブチルビニルエーテル(0.24 mL)を、無水DCM(5 mL)中のART 273(0.250 g)およびNBS(0.307 g)の溶液に、-78℃でN2下において加えた。完了後、該溶液をエバポレートし、該粗残渣をシリカゲルで精製して、ART 471を白色の固形物として得た。
【化２０】
0005621071.tif 000021
【００６８】
ART 472の製造
オクタデシルビニルエーテル(0.448 g)を、無水DCM(5 mL)中のART 273(0.208 g)およびNBS(0.255 g)の溶液に、-78℃でN2下において加えた。完了後、該溶液をエバポレートし、該粗残渣をシリカゲルで精製して、ART 472を白色の固形物として得た。
【化２１】
0005621071.tif 000022
【００６９】
ART 470の製造
エチルビニルエーテル(0.11 mL)を、無水DCM(5 mL)中のART 273(0.150 g)およびN-ブロモスクシンイミド(NBS, 0.170 g)の溶液に、-78℃でN2下において加えた。完了後、該溶液をエバポレートし、該粗残渣をシリカゲルで精製して、ART 470を白色の固形物として得た。
【化２２】
0005621071.tif 000023
【００７０】
ART 489の製造
オクタデシルソルケタール-4-ニトロフェニル炭酸(0.750 g)／無水DCM溶液を、無水DCM(30 mL)中のART 198(0.754 g)およびDMAP(0.238 g)の溶液に、室温でN2下において加えた。完了後、該反応液をDCMで希釈し、NH4Cl(s)、水および食塩水で洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、エバポレートした。該粗残渣をシリカゲルで精製して、ART 489を固形物として得た。 -TOF MS: m/z 1031.4645 (M+CF3CO2)-
【化２３】
0005621071.tif 000024
【００７１】
ART 488の製造
オクタデシルソルケタール-4-ニトロフェニル炭酸(0.53 g)／無水DCM溶液を、無水DCM(30 mL)中のART 273(0.507 g)およびDMAP(0.168 g)の溶液に、室温でN2下において加えた。完了後、該反応液をDCMで希釈し、NH4Cl(s)、水および食塩水で洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、エバポレートした。該粗残渣をシリカゲルで精製して、ART 488を固形物として得た。 -TOF MS: m/z 1003 4994 (M+CF3CO2)-
【化２４】
0005621071.tif 000025
【００７２】
ART 332の製造
ソルケタール-4-ニトロフェニル炭酸(1.1 g)／無水DCM溶液を、無水DCM(30 mL)中のART 273(1.30 g)およびDMAP(0.36 g)の溶液に、室温でN2下において加えた。完了後、該反応液をDCMで希釈し、NH4Cl(s)、水および食塩水で洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、エバポレートした。該粗残渣をシリカゲルで精製して、ART 332を白色の固形物として得た。 -TOF MS: m/z 947.4601 (M+CF3CO2)-
【化２５】
0005621071.tif 000026
【００７３】
ART 441の製造
DHA(0.2 g)、DCC(0.157 g)およびDMAP(0.006 g)を、ART 273(0.279 g)／無水DCM(10 mL)溶液に、室温でN2下において、連続的に加えた。完了後、該反応液をDCMで希釈し、NH4Cl(s)、水および食塩水で洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、エバポレートした。該粗残渣をシリカゲルで精製して、ART 441(0.2 g)を白色の固形物として得た。
【化２６】
0005621071.tif 000027
【００７４】
ART 467の製造
オクタデシルソルケタール-4-ニトロフェニル炭酸(1.75 g)／無水DCM溶液を、無水DCM(30 mL)中のパクリタキセル(2.59 g)およびDMAP(0.557 g)の溶液に、室温でN2下において加えた。完了後、該反応液をDCMで希釈し、NH4Cl(s)、水および食塩水で洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、エバポレートした。該粗残渣をシリカゲルで精製して、ART 467を白色の固形物として得た。 -TOF MS: m/z 1306.5445 (M+CF3CO2)-
【化２７】
0005621071.tif 000028
【００７５】
ART 151の製造
ART 151を、方法Aで概説した方法に従って製造した。 HPLC 保持時間 6.06, メソッド: タキサン複合体_MKG4 (C18カラム, MeOH/H2O/THF 95/3/2 〜100％MeOH 10分, 2分 100％MeOH, 230 nm, 1.5 ml/分, 30℃, 14分).  +TOF MS: m/z 1239.6523 [M+18] (M+NH4+)
【化２８】
0005621071.tif 000029
【００７６】
ART 152の製造
ART 152を、方法Bで概説した方法に従って製造した。 HPLC 保持時間 8.21, メソッド: タキサン複合体_MKG4 (C18カラム, MeOH/H2O/THF 95/3/2 〜100％MeOH 10分, 2分 100％MeOH, 230 nm, 1.5 ml/分, 30℃, 14分). +TOF MS: m/z 1228.5654 [M+1] (M+H+)
【化２９】
0005621071.tif 000030
【００７７】
ART 153の製造
ART 153を、方法Cで概説した方法に従って製造した。 HPLC 保持時間 7.05, メソッド: タキサン複合体_MKG4 (C18カラム, MeOH/H2O/THF 95/3/2 〜100％MeOH 10分, 2分 100％MeOH, 230 nm, 1.5 ml/分, 30℃, 14分).  +TOF MS: m/z 1150.6485 [M+1] (M+H+)
【化３０】
0005621071.tif 000031
【００７８】
ART 161を、方法Aで概説した方法に従って製造した。 HPLC 保持時間 4.88, メソッド: タキサン複合体_MKG6 (C18カラム, MeOH/H2O 95/5 〜100％MeOH 10分, 2分 100％MeOH, 230 nm, 1.5 ml/分, 30℃, 16分).  +TOF MS: m/z 1235.6276 [M+18] (M+NH4+)
【化３１】
0005621071.tif 000032
【００７９】
ART 207を、方法Aで概説した方法に従って製造した。 HPLC 保持時間 6.06, メソッド; タキサン複合体_MKG17 (Synergyカラム, ACN/H2O 60/40 〜100％ACN 10分, 2分 100％ACN, 230 nm, 1.5 ml/分, 30℃, 15分).  +TOF MS: m/z 1220.6156 [M+1]およびm/z 1237.6382 [M+18] (M+NH4+)
【化３２】
0005621071.tif 000033
【００８０】
ART 156を、方法Aで概説した方法に従って製造した。 HPLC 保持時間 6.2, メソッド: タキサン複合体_MKG4 (C18カラム, MeOH/H2O/THF 95/3/2 〜100％MeOH 10分, 2分 100％MeOH, 230 nm, 1.5 ml/分, 30℃, 14分).  +TOF MS: m/z 1176.6466 [M+1]およびm/z 1193.6730 [M+18] (M+NH4+)
【化３３】
0005621071.tif 000034
【００８１】
ART 162を、方法Aで概説した方法に従って製造した。  HPLC 保持時間 8.96, メソッド: タキサン複合体_MKG16 (Synergyカラム, MeOH/H2O 75/25 〜100％MeOH 10分, 2分 100％MeOH, 230 nm, 1.5 ml/分, 30℃, 15分).  +TOF MS: m/z 1189.6491 [M+18]およびm/z 1172.6224 [M+1] (M+H+)
【化３４】
0005621071.tif 000035
【００８２】
ART 208を、方法Aで概説した方法に従って製造した。 HPLC 保持時間 7.4, メソッド: タキサン複合体_MKG19 (Synergyカラム, ACN/H2O 50/50 3分, 80-100％ ACN/H2O 10分, 2分 100％ACN, 230 nm, 1.5 ml/分, 30℃, 15分).  +TOF MS: m/z 1174.6306 [M+1] (M+H+)
【化３５】
0005621071.tif 000036
【００８３】
ART 185を、方法Cで概説した方法に従って製造した。 HPLC 保持時間 6.42, メソッド: タキサン複合体_MKG15 (Synergyカラム, 70-100％ ACN/H2O 10分, 100％ ACN 2分, 230 nm, 1.5 ml/分, 30℃, 15分). +TOF MS:  m/z 1104.6648 [M+1] (M+H+) および m/z 1126.6447 [M+18] (M+NH4+)
【化３６】
0005621071.tif 000037
【００８４】
ART 137を、方法Cで概説した方法に従って製造した。  HPLC 保持時間 10.63, メソッド: タキサン (C18カラム, ACN/H2O 50/50 〜100％ACN 10分, 2分 100％ACNH, 230 nm, 1.5 ml/分, 30℃, 16分)
【化３７】
0005621071.tif 000038
【００８５】
ART 164を、方法Aで概説した方法に従って製造した。HPLC 保持時間 7.73, メソッド: タキサン複合体_MKG6 (C18カラム, MeOH/H2O 95/5 〜100％MeOH 10分, 2分 100％MeOH, 230 nm, 1.5 ml/分, 30℃, 16分).  +TOF MS: m/z 1255.7506 [M+18] (M+NH4+)
【化３８】
0005621071.tif 000039
【００８６】
ART 163を、方法Aで概説した方法に従って製造した。 HPLC 保持時間 7.56, メソッド: タキサン複合体_MKG6 (C18カラム, MeOH/H2O 95/5 〜100％MeOH 10分, 2分 100％MeOH, 230 nm, 1.5 ml/分, 30℃, 16分).  +TOF MS: m/z 1251.7233 [M+18] (M+NH4+)
【化３９】
0005621071.tif 000040
【００８７】
ART 209を、方法Aで概説した方法に従って製造した。 HPLC 保持時間 9.6, メソッド: タキサン複合体_MKG18 (Synergyカラム, ACN/H2O 80/20 10分, 100％ACN 2分, 230 nm, 1.5 ml/分, 30℃, 15分). +TOF MS: m/z 1253.7505 [M+18] (M+NH4+)
【化４０】
0005621071.tif 000041
【００８８】
特定の化合物の細胞傷害性:
SK-N-AS細胞を用いたMTS増殖アッセイ
第1日目:SK-N-AS細胞を、96ウェル組織培養プレート（Falcon）（試験する各薬剤に対して1つのプレート）において、適切な増殖培地中に5x103個／ウェル（100 μL中）で播種した。カラム1はブランク（培地を含むが細胞は含まない）であった。該プレートを、5％CO2中において37℃で終夜インキュベートして、付着させた。
【００８９】
第2日目:培地中に希釈した薬物を、0.005 nM〜10 μMの濃度で該細胞に加えた（4つ複製）。48〜72時間の薬物曝露後、MTS剤を全てのウェルに加え、CellTiter 96（登録商標） AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay (MTS)（Promega）に従って細胞型に応じて、1〜6時間インキュベートした(37℃, 5％CO2)。プレートをBio-Tek Synergy HT Multi-detection microtiter plate readerを用いて490ナノメートルの波長で処理し、データをKC4V.3ソフトウェアで処理した。薬物濃度対吸光度のデータプロットをプロットし、50％阻害(IC50)をもたらす濃度を各試験化合物について推定した。
【００９０】
表1に要約される通り、SK-N-AS細胞株における各試験化合物についてのIC50値を決定した。候補化合物の結果をタキサンクラスの中の臨床上意義のある標準と比較できるように、臨床上の対照薬物（clinical comparator drug）であるパクリタキセルを該実験に含めた。
表1: SK-N-ASにおけるIC50(nM)値
【表１】
0005621071.tif 000042
【００９１】
対を成すMDR+およびMDR-細胞株を用いたMTT増殖アッセイ
酸に不安定で親油性の分子複合体の細胞傷害性に関する第二の評価を試みた。これらの実験の目的は、多剤耐性細胞およびそれらの親の感受性株における該複合体の毒性を比較して、これらの化合物のサブセットが親の感受性細胞株で見られるものと同様のレベルの毒性を薬剤耐性株において示すという仮説を検証することであった。
【００９２】
MTT-ベースの細胞傷害性アッセイを、ヒト癌細胞株および対を成す多剤耐性を示す亜株（subline）を用いて実施した。これらの細胞株には、子宮肉腫細胞株であるMES-SA、およびそのドキソルビシン-耐性亜株であるMES-SA/Dx5が含まれた。W. G. Harker, F. R. MacKintosh, and B. I. Sikic.  Development and characterization of a human sarcoma cell line, MES-SA, sensitive to multiple drugs.  Cancer Research 43: 4943-4950 (1983); W. G. Harker and B. I. Sikic.  Multidrug (pleiotropic) resistance in doxorubicin-selected variants of the human sarcoma cell line MES-SA. Cancer Research 45: 4091 4096 (1985)を参照。
【００９３】
MES-SA/Dx5は、いくつかの化学療法薬（ビンブラスチン、パクリタキセル、コルヒチン、ビンクリスチン、エトポシド、ダクチノマイシン、ミトキサントロンおよびダウノルビシンを含む）に対する著しい交差耐性、ならびにマイトマイシンCおよびメルファランに対する中程度の交差耐性を示す。しかしながら、ブレオマイシン、シスプラチン、カルムスチン、5-フルオロウラシルまたはメトトレキサートに対する耐性は認められない。MES-SA/Dx5細胞は、高レベルのABCB1(MDR1) mRNAおよびその遺伝子産物であるP-糖タンパク質を発現する。MES-SAおよびMES-SA/Dx5は、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関(ATCC, Manassas, VA)から購入した。
【００９４】
試験した第二の細胞セット（CCRF-CEMまたはCEMのみ）は、急性リンパ性白血病を有する患者の血液由来であった。G. E. Foley, H. Lazarus, S. Farber, B. G. Uzman, B. A. Boone, and R. E. McCarthy.  Continuous culture of human lymphoblasts from peripheral blood of a child with acute leulemia.  Cancer 18: 522-529 (1965). 最大100 ng/mlのビンブラスチンまで耐性を有するように亜株CEM/VLB100が開発された。W. T. Beck, T. J. Mueller, and L. R. Tanzer.  Altered surface membrane glycoproteins in Vinca alkaloid-resistant human leukemic lymphoblasts.  Cancer Research 39: 2070-2076 (1979).  薬物耐性はMDR1遺伝子の過剰発現によって獲得される。しかしながら、CEM亜株である指定されたCEM/VM-1-5における耐性は「非定型（atypical）」である。  M. K. Danks, J. C. Yalowich, and W. T. Beck.  Atypical multiple drug resistance in a human leukemic cell line selected for resistance to teniposide (VM-26).  Cancer Research 47: 1297-1301 (1987).  「古典的な」多剤耐性表現型に含まれる該クラスの薬物は、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、エピポドフィロトキシンおよび抗生物質である。しかしながら、CEM/VM-1-5細胞は、エトポシド、アントラサイクリンおよびミトキサントロンに対して耐性および交差耐性を示すにもかかわらず、ビンカアルカロイドに対して感受性を保持している。Danks, M. K.; Schmidt, C. A.; Cirtain, M. C.; Suttle, D. P.; Beck, W. T., Altered catalytic activity of and DNA cleavage by DNA topoisomerase II from human leukemic cells selected for resistance to VM-26.  Biochemistry 1988, 27, 8861-8869.  CEM/VM-1-5細胞における耐性はABCC1(MRP1)遺伝子の過剰発現によってもたらされる。CEM、CEM/VLB100およびCEM/VM-1-5細胞は、Dr. WT Beck（イリノイ大学, シカゴ）から得た。
表2:対を成す細胞株における試験濃度の概要
【表２】
0005621071.tif 000043
【表３】
0005621071.tif 000044
データはIC50値(nM)として表される。
1耐性株のIC50を感受性MES-SA細胞のIC50で割ることによって算出した。
2耐性株のIC50を感受性CEM細胞のIC50で割ることによって算出した。
HTLはヒトT-リンパ芽球（Human T-Lymphoblastoid）を意味し;Hsはヒト肉腫を意味する。
【００９５】
酸に不安定で親油性の分子複合体で観察された細胞傷害性は、それらが、潜在的な化学療法薬としての有用性を保持するためにそれらに要求される抗癌活性を依然として有していることを実証する。耐性細胞株により示される見かけ上の耐性度が、酸に不安定で親油性の分子複合体に対して20〜50％まで低減されていることは、特に注目すべきである。これは予期せぬ結果であった。
【００９６】
血漿中における酸に不安定で親油性の分子複合体の安定性:
血漿中における酸に不安定で親油性の分子複合体の加水分解に対する安定性を評価して、それらが全身循環中へ活性癌化学療法薬を放出することによって一般的なオフターゲット毒性(「副作用」)を引き起こす可能性を決定した。該複合体を、マウス、ラットおよびヒト由来の血漿とともにインキュベートした。
【００９７】
HPLCグレードのメタノール（Fisher (Fair lawn, NJ, USA)製）.  Part No: A452-4 (074833).  HPLCブレードの水（Fisher (Fair lawn, NJ, USA)製）.  Part No: W5-4 (073352).  薬物未処置（Drug-free）のマウス、ラットおよびヒトの血漿を、Innovative Research Inc. (Southfield, MI, USA)から購入した。  Liposyn（登録商標） I.V. Fat Emulsion from Hospira, Inc. (Lake Forest, Illinois).
【００９８】
血漿インキュベーションの準備:
各薬物(ART 198、ART 273、ART 488およびART 489)を、マウス、ラットおよびヒトの血漿を、10 μg/mlの濃度で個々に、3組ずつ調製し、1分間ボルテックスし、37℃にて振盪速度 75／分で、水浴中に設置した。サンプルを、0、15、30、45、60、75、90、105、120、135、150、165、180、210、240、300、360および480分の時点で取り出した。
【００９９】
血漿におけるART 198、ART 273、ART 488およびART 489分析のための分析メソッド:
該化合物のクロマトグラフ分離を、Waters Acquity UPLC（商標）において、BEH C18カラム(1.7 μm, 2.1 × 50 mm)を用いて、実施した。移動相はメタノール:0.1％ギ酸(80:20)で構成されていた。流速は0.3 ml/分であって;サンプル注入量は5 μLであった（結果として3分のランタイム）。
【０１００】
MS計測手段は、Waters Micromass Quattro Micro（商標）トリプル四重極システム(Manchester, UK)で構成されていた。該MSシステムを、MassLynxソフトウェアの4.0版によって制御した。イオン化を、陽性の（positive）エレクトロスプレーイオン化モードにおいて実施した。MS/MS条件は以下の通りであった: キャピラリー電圧 3.02 kV; コーン電圧 50 v; エクストラクタ電圧 5 v; および、RFレンズ電圧 0.5 v。イオン源（source）温度および脱溶媒和温度は、各々、100℃および400℃であって、脱溶媒和ガス流量およびコーンガス流量は、各々、400および30 L/hrであった。
【０１０１】
選択イオン検出法(SIM)で用いたART 198の選択された質量電荷(m/z)比のトランジションは:ART 198について617 (M+K)+、ART 273について589 (M+K)+、ART 488について913 (M+Na)+、およびART 489について957 (M+Na)+であった。滞留時間を200 msecに設定した。標準液（メタノール中に調製されていてシリンジポンプにより流速20 μL/分で送達される）を直接導入することによって、MS条件を最適化した。
【０１０２】
血漿サンプルの調製:
100 μLのサンプルを、各々、0、15、30、45、60、75、90、105、120、135、150、165、180、210、240、300、360および480分の時点で採取し、該反応をメタノールで終了させた。別の一連の実験において、該酸に不安定で親油性の分子複合体を、少量のエタノール中に溶解させ、脂肪乳剤(Liposyn（登録商標）)中に希釈し、マウスおよびヒトの血漿に加えた後、インキュベートし、該複合体の加水分解を同様に測定した。採取した100 μLの血漿サンプル（薬物を含む）を、処理のために別個のEppendorfマイクロ遠心チューブに入れた。メタノール(200 μL)を加えて、タンパク質沈殿法を用いて薬物を抽出した。その後、該マイクロチューブを10分間ボルテックス混合し、10,000 rpmの速度で15分間、遠心分離した(Eppendorf 5415C centrifuge)。上清を集め、分析の前に、0.45 μmフィルター(Waters 13mm GHP 0.45 μm)を用いて濾過した。
【０１０３】
盲験のマウス、ラットおよびヒトの血漿サンプルのUPLC/MS/MS分析によって、ART 198、ART 273、ART 488またはART 489の定量化への内因性のピーク干渉はないことが示された。
【０１０４】
加重線形最小二乗(1/x)回帰を、数学的モデルとして用いた。該化合物に対する係数(r)は、0.9925〜0.9999の範囲であった。校正範囲を、決定する予定であるサンプルの予想される濃度に従って、選択した。最終校正範囲は、10-12,500 ng/mLであって、定量化の下限は10 ng/mLであった。
【０１０５】
同時再現性および再現性バイアス(％)は、低濃度での±20％および他の濃度レベルで±15％の許容限界の範囲内である（評価した全ての濃度で5％未満のRSDである）。
【０１０６】
該メソッドの平均回収率は、血漿からの試験薬物の3つの異なる濃度にて、86.22〜99.83％の範囲であった。これらの結果は、異なる濃度レベルでの抽出回収における差に関連性はないことを示唆した。
ART 467およびパクリタキセルのインキュベーション:
210.6 μg/mlのART 467のストック溶液からの0.2 mlのアリコートを、3.8 mlのヒト血漿（15分間(37℃)プレインキュベートした）に添加し、振盪式（reciprocating）水浴において37℃にてインキュベートした。サンプルを、0、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12および24時間にて取り出した。
【０１０７】
ART 467およびパクリタキセルのための分析メソッド(液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析):
クロマトグラフ分離を、バイナリポンプ、オートサンプラー、デガッサー（degasser）およびカラムオーブンから成るACQUITY UPLC 液体クロマトグラフ(Waters Corporation, Milford, MA, USA)を用いて行った。メタノール-アセトニトリル(50: 50, v/v)の移動相を、流速 0.4 ml/分でポンピングして、25℃に維持されたACQUITY UPLC BEH C18カラム(1.7 μm, 2.1 × 50 mm i.d., Waters Corporation)を通した。10 μlのサンプルを注入し、ランタイムは3.0分であった。LC溶出（elute）を、エレクトロスプレーイオン化(ESI)イオン源を備えたESCiトリプル四重極質量分析計に直接接続した。該四重極（quadrapole）を陽イオンモードで操作した。多重反応モニタリング(MRM)モードを、MassLynx version 4.1 ソフトウェアを使用する定量化において用いた。m/z 876.2、307.9;882.2、313.9;および1216.5、647.8の質量トランジションを、各々、パクリタキセルNa+付加物、l3C6-パクリタキセル付加物およびART 467付加物について最適化した（滞留時間は0.5 sであった）。窒素を噴霧ガス(30 l/h)および脱溶媒和ガス(300 1/h)（250℃の脱溶媒和温度で）として用い、アルゴンを衝突ガスとして用いた。キャピラリー電圧を3.5 kVに設定し、コーン電圧を90 Vに設定した。該イオン源（source）温度を100℃に設定した。
【０１０８】
血漿サンプルの調製:
異なる期間(0、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12および24時間)にて、サンプルの200 μlのアリコートを採取し、すぐに1.3 mlの冷TBMEに加えた後、20 μlの内部標準ストック溶液(メタノール中の80.7 μg/ml)を加えた。各チューブを約2分間ボルテックス混合した後、13000 rpmで10分間遠心分離した。得られた上清の1.0 mlを別のチューブに移し、窒素気流下において35℃で乾燥させた。各乾燥残渣を200 μlのメタノールで再構成し、0.5分間ボルテックスした。13000 rpmで10分間遠心分離した後、該上清をHPLCオートサンプラーバイアルに移し、各サンプルの10 μlのアリコートをLC-MS-MSに注入した。
【０１０９】
サンプルを様々な時間にて集め、癌化学療法薬の酸に不安定で親油性の分子複合体の残存率を、該複合体の加水分解から放出された化学療法薬の割合とともに、決定した。該結果を、表形式および図表で示す。
【０１１０】
血漿中の非複合ART 273の安定性:
マウス、ラットおよびヒトの血漿中における非複合ART 273の固有の安定性を決定した。いずれの特定の動態モデルに関係なく、マウス、ラットおよびヒトの血漿中において、各々、最初のART 273の約30％、54％、および67％が480分後に残存することが認められる。下記表4および図1〜3参照。
表4: 37℃での血漿中におけるART 273の安定性
【表４】
0005621071.tif 000045
【０１１１】
血漿中におけるART 273複合体であるART 488の安定性
マウス、ラットおよびヒトの血漿におけるART 273複合体であるART 488の固有の安定性を決定した。いずれの特定の動態モデルに関係なく、マウス、ラットおよびヒトの血漿において、各々、最初のART 488の約36％、33％、および44％が480分後に残存することが認められる。また、いずれの特定の動態モデルに関係なく、最初のART 488の36％、32％、および37％とおおよそ同等であるART 273の形成が、各々、マウス、ラットおよびヒトの血漿において480分後に存在することが認められる。下記表5および図4〜6参照。
表5: 37℃での血漿中におけるART 488の安定性
【表５】
0005621071.tif 000046
【０１１２】
脂肪乳剤に加えられた場合の、血漿中におけるART 273複合体であるART 488の安定性:
マウスおよびヒトの血漿における、ART 273複合体であるART 488の固有の安定性を決定した。いずれの特定の動態モデルに関係なく、マウスおよびヒトの血漿において、各々、最初のART 488の約89％および88％が480分後に残存することが認められる。下記表6および図7〜8参照。
表6: 脂肪乳剤に加えられた場合の、37℃での血漿中におけるART 488の安定性
【表６】
0005621071.tif 000047
a ND = 検出されず
【０１１３】
血漿中における非複合ART 198の安定性:
マウス、ラットおよびヒトの血漿における非複合ART 198の固有の安定性を決定した。いずれの特定の動態モデルに関係なく、マウス、ラットおよびヒトの血漿において、各々、最初のART 198の約26％、30％、および34％が480分後に残存することが認められる。下記表7および図9〜11参照。
表7: 37℃での血漿中におけるART 198の安定性
【表７】
0005621071.tif 000048
【０１１４】
血漿中におけるART 198複合体であるART 489の安定性:
マウス、ラットおよびヒトの血漿におけるART 198複合体であるART 489の固有の安定性を決定した。いずれの特定の動態モデルに関係なく、マウス、ラットおよびヒトの血漿において、各々、最初のART 489の約34％、34％、および66％が480分後に残存することが認められる。また、いずれの特定の動態モデルに関係なく、マウス、ラットおよびヒトの血漿において、各々、最初のART 489の約35％、32％、および20％に等しいART 198が480分後に存在していることが認められる。下記表8および図12〜14参照。
表8: 37℃での血漿中におけるART 489の安定性
【表８】
0005621071.tif 000049
【０１１５】
脂肪乳剤に加えられた場合の、血漿中におけるART 198複合体であるART 489の安定性:
マウスおよびヒトの血漿におけるART 198複合体であるART 489の固有の安定性を決定した。いずれの特定の動態モデルに関係なく、マウスおよびヒトの血漿において、各々、最初のART 489の約73％および77％が480分後に残存していることが認められる。下記表9および図15〜16参照。
表9: 脂肪乳剤に加えられた場合の、37℃での血漿中におけるART 489の安定性
【表９】
0005621071.tif 000050
【０１１６】
血漿中における、パクリタキセル複合体であるART 467の安定性:
ヒト血漿中におけるパクリタキセル複合体であるART 467の固有の安定性を決定した。いずれの特定の動態モデルに関係なく、ヒト血漿において、最初のART 467の約41％が1440分後に残存していることが認められる。また、いずれの特定の動態モデルに関係なく、ヒト血漿中において、最初のART 467の約16％に等しいパクリタキセルが1440分後に存在していることが認められる。下記表10および図17参照。
表10: 37℃でのヒト血漿中におけるART 467の安定性
【表１０】
0005621071.tif 000051
【０１１７】
酸に不安定で親油性の分子複合体であるART 488およびART 489を血漿への添加前に脂肪乳剤に溶解させると、血漿媒体による加水分解に対する該複合体の安定性が著しく増強した(表11に要約した)。該酸に不安定で親油性の分子複合体が脂肪乳剤内にとどまり、インキュベーションの血漿中（phase）に「漏出」しなかったことは、複合体からの遊離薬物の放出がないことから明らかである。検出可能な濃度の遊離薬物は該インキュベーションにおいて観察され得なかった（ここで、該複合体を最初に脂肪乳剤に溶解させた後、インキュベーション培地に加えた）(表6および表9を参照)。
表11: 脂肪乳剤へ組み入れることによる薬物の安定化
【表１１】
0005621071.tif 000052
a NP = 実験を実施せず
【０１１８】
マウスにおける酸に不安定で親油性の分子複合体の最大耐用量(MTD)の推定:
ART 198および273のストック溶液ならびにそれらの各々の酸に不安定で親油性の分子複合体(各々、ART 489およびART 488)をエタノール中に調製した後、脂肪乳剤(イントラリピッド)中に希釈し、マウスに様々な用量（ミリグラム／キログラムで）で静脈内注射した。該動物を、毒性の徴候および/または死亡について、30日間毎日観察した。MTDを、投与されたマウスが全30日の観察期間生存した場合の用量として定義した。
【０１１９】
ART 198のMTDは、4.0+/-1.0 mg/kgであると決定され;ART 273のMTDは1.0+/-0.5 mg/kgであると決定され;ART 489のMTDは3.1+/-1.0 mg/kgであると決定され;そしてART 488のMTDは4.0+/-0.5 mg/kgであると決定された。
【０１２０】
ART 198およびその酸に不安定で親油性の分子複合体であるART 489において同様のMTDが認められたこと、あるいはART 273の場合において、約1 mg/kg（ART 273について）から約4 mg/kg（その酸に不安定で親油性の分子複合体であるART 488について）へとMTDが増大したことは、それらの観察されたin vitro 細胞傷害性を考慮すると驚くべきことである。in vitro 細胞傷害性評価において、ART 273の酸に不安定で親油性の分子複合体は、ART 273よりもほぼ1桁分(10X)強力であることがルーチン的に観察されている。MTDの決定結果によって、癌化学療法薬の酸に不安定で親油性の分子複合体は、毒性が低減されていることから、患者の処置においてより有用でありうることが示唆される。
【図１】
0005621071.tif 000064
【図２】
0005621071.tif 000065
【図３】
0005621071.tif 000066
【図４】
0005621071.tif 000067
【図５】
0005621071.tif 000068
【図６】
0005621071.tif 000069
【図７】
0005621071.tif 000070
【図８】
0005621071.tif 000071
【図９】
0005621071.tif 000072
【図１０】
0005621071.tif 000073
【図１１】
0005621071.tif 000074
【図１２】
0005621071.tif 000075
【図１３】
0005621071.tif 000076
【図１４】
0005621071.tif 000077
【図１５】
0005621071.tif 000078
【図１６】
0005621071.tif 000079
【図１７】
0005621071.tif 000080
【図１８】
0005621071.tif 000081
【図１９】
0005621071.tif 000082
【図２０】
0005621071.tif 000083