(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉ
【化１６】
0005620376.tif 000033
のクエン酸塩またはその水和物。
【請求項２】
結晶であることを特徴とする、請求項１に記載の塩または水和物。
【請求項３】
４．４８オングストローム、３．１２オングストロームおよび６．０５オングストローム、±０．１°である、Ｘ線粉末回折パターンから得られる面間隔スペクトル吸収バンドを特徴とする、請求項２に記載の塩。
【請求項４】
１９．８１°、２８．６３°および１４．６４°、±０．１°である、Ｘ線粉末回折パターンから得られる回折角２θ吸収バンドを特徴とする、請求項２に記載の塩。
【請求項５】
部分的にまたは完全に水和されていることを特徴とする、請求項２に記載の水和物。
【請求項６】
無水であることを特徴とする、請求項２に記載の塩。
【請求項７】
治療有効量の、請求項１〜６のいずれか１項に記載の塩または水和物および薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項８】
追加の治療薬をさらに含む、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記追加の治療薬が抗ＨＩＶ剤である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記医薬組成物が単位剤形である、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記単位剤形が錠剤である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
治療有効量の、請求項１〜６のいずれか１項に記載の塩または水和物を、薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤と組み合わせることによって調製される、医薬組成物。
【請求項１３】
ＨＩＶ感染を処置または予防的に阻止するための組成物であって、請求項１〜６のいずれか１項に記載の塩または水和物を含む組成物。
【請求項１４】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の塩または水和物の使用であって、ＨＩＶ感染を処置または予防的に阻止する薬物を製造するための、使用。
【請求項１５】
前記塩または水和物が請求項７〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物の形態で存在する、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
下記式ＩＩ
【化１７】
0005620376.tif 000034
のコハク酸塩またはその水和物。
【請求項１７】
結晶であることを特徴とする、請求項１６に記載の塩または水和物。
【請求項１８】
３．５７オングストローム、４．８０オングストロームおよび４．９９オングストローム、±０．１°である、Ｘ線粉末回折パターンから得られる面間隔スペクトル吸収バンドを特徴とする、請求項１７に記載の塩。
【請求項１９】
２４．９１°、１８．４６°および１７．７６°、±０．１°である、Ｘ線粉末回折パターンから得られる回折角２θ吸収バンドを特徴とする、請求項１７に記載の塩。
【請求項２０】
治療有効量の、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の塩または水和物および薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項２１】
追加の活性成分をさらに含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
治療有効量の、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の塩または水和物を、薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤と組み合わせることによって調製される、医薬組成物。
【請求項２３】
ＨＩＶ感染を処置または予防的に阻止するための組成物であって、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の塩または水和物を含む、組成物。
【請求項２４】
下記式ＩＩＩ
【化１８】
0005620376.tif 000035
のマロン酸塩またはその水和物。
【請求項２５】
結晶であることを特徴とする、請求項２４に記載の塩または水和物。
【請求項２６】
４．９９、５．９３および４．７２オングストローム、±０．１°である、Ｘ線粉末回折パターンから得られる面間隔スペクトル吸収バンドを特徴とする、請求項２５に記載の塩。
【請求項２７】
１７．７６°、１４．９２°および１８．８０°、±０．１°である、Ｘ線粉末回折パターンから得られる回折角２θ吸収バンドを特徴とする、請求項２５に記載の塩。
【請求項２８】
治療有効量の、請求項２４〜２７のいずれか１項に記載の塩または水和物および薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項２９】
追加の活性成分をさらに含む、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
治療有効量の、請求項２４〜２７のいずれか１項に記載の塩または水和物を、薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤と組み合わせることによって調製される、医薬組成物。
【請求項３１】
ＨＩＶ感染を処置または予防的に阻止するための組成物であって、請求項２４〜２７のいずれか１項に記載の塩または水和物を含む、組成物。
【請求項３２】
請求項７〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物の形態で存在する、請求項１３に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は全般的には抗ウイルス活性を持つ化合物の塩に関し、さらに詳しくは抗ＨＩＶ特性を持つ化合物の塩に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ：ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ）は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、すなわち、ヒトにおいて免疫系を弱め、生命を脅かす日和見感染症を呈するようになる状態を引き起こす恐れがあるレトロウイルスである。ＨＩＶの阻害剤は、哺乳動物のＨＩＶ感染の処置（たとえば、ＨＩＶによる感染の確立および進行の抑制および制限）のほか、ＨＩＶの診断アッセイにも有用である。現在販売されているＨＩＶの阻害剤の有用性には、毒性および他の副作用によりある程度限界がある。このため、新しいＨＩＶ治療薬が求められている。
【０００３】
治療薬の医薬製剤は、治療薬を、それを必要としている患者に再現性よく、確実に送達しなければならない。こうした送達の確実性は、安定で可溶性の固体形態の治療薬を医薬組成物に組み込むことで少なくともある程度達成することができる。さらに、所望の固体形態の治療薬の合成は、技術的および経済的に実現可能なものである必要があり、大規模な商業生産に好適である必要もある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
インビボおよびインビトロでＨＩＶウイルスの複製を阻止し、ヒトに投与した際に、抑制された望ましくない副作用を有する逆転写酵素阻害剤として、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートがある。エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの構造を下記式Ｐに示す：
【０００５】
【化１】
0005620376.tif 000002
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートは、単離、精製、長時間の保存、および医薬組成物としての製剤化が困難な低融点、非晶質の固体である。エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートはまた、酸と塩を形成できる弱塩基でもある。したがって、一態様では、本発明は、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの遊離塩基形よりも物理的により安定で、かつ単離および製剤化しやすい、この化合物の安定な塩を提供する。
【０００６】
本発明の塩は、たとえば、ＡＩＤＳを引き起こすヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２株）に感染したヒト患者の処置に有用である。本発明の塩はまた、たとえば、ＨＩＶまたはＨＩＶ関連障害を処置する薬物の調製にも有用である。さらに、本発明の塩は、たとえば、インビトロでのＨＩＶウイルスの複製の阻害にも有用であり、したがって、他の逆転写酵素阻害剤を特定する、あるいはＨＩＶ逆転写酵素およびその阻害の作用機序を調べる対照化合物として生物学的アッセイで使用することもできる。
【０００７】
このため、一態様では、本発明は、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩、コハク酸塩およびマロン酸塩およびこれらの塩を製造する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明の塩は無水であり、他の実施形態では本発明の塩は少なくとも部分的に水和されている。いくつかの実施形態では、本発明の塩は結晶形として存在する。
【０００８】
したがって、本発明は、式Ｐの化合物のクエン酸塩、コハク酸塩およびマロン酸塩のほか、それらの水和物も含む。本発明の水和物は、部分的に水和した状態（たとえば、半水和物）でも、または完全に水和した状態（たとえば、一水和物）でもよい。本発明はまた、無水または本質的に無水状態の本塩も含む。同様に、本発明の塩およびその水和物は、非晶質状態および結晶状態のほか、非晶質特性と結晶特性とを共に含む状態も含む。本明細書で使用する場合、「結晶」とは、秩序だった長距離分子構造を持つ材料を意味する。これに対し、「非晶質」材料は長距離秩序を有さない。結晶材料は一般に同じ物質の非晶質形態より熱力学的に安定していることが理解される。このため、明らかな例外がわずかにあるものの、医薬品用途では一般に結晶材料を使用することが好ましい。本発明の化合物の結晶化度の程度の指標は、たとえば、ＤＳＣおよびＸＲＰＤ（吸収バンド（ピーク）の鋭さで確認できる。ピークが鋭いほど、結晶化度の程度が高くなる。これに対し、ピーク幅が広いほど、結晶化度の程度は低くなる。
【０００９】
本明細書の実施例１２に詳細に記載するように、特定の実施形態では、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩は、面間隔スペクトルが４．４８、３．１２および６．０５オングストロームのＸ線粉末回折パターンから得られる吸収バンドにより特徴付けられ；エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのコハク酸塩は、面間隔スペクトルが３．５７、４．８０および４．９９オングストロームのＸ線粉末回折パターンから得られる吸収バンドにより特徴付けられ；エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのマロン酸塩は、面間隔スペクトルが４．９９、５．９３および４．７２オングストロームのＸ線粉末回折パターンから得られる吸収バンドにより特徴付けられる。別の特定の実施形態では、本発明は、融点が１４２℃〜１５０℃である、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩を提供する。
【００１０】
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートは、プロトン性溶媒と反応して分解されるアミデートプロドラッグである。反応の速度は、ｐＨおよび温度に依存する。したがって、アミデートプロドラッグと、各々がプロドラッグとの反応（たとえば、プロドラッグのアミデート部分との反応）が可能な求核部分を含むクエン酸、コハク酸および／またはマロン酸との間で安定な塩が形成されることは、驚くべきかつ予想外の結果である。
【００１１】
別の態様では、本発明は、各々が治療有効量の本発明の塩および薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤を含む医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物はまた、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗真菌薬または抗癌剤など別の治療薬をさらに含んでもよい。本発明の医薬組成物は、錠剤またはカプセル剤などの単位剤形の形態でもよい。単位剤形は典型的には、本発明の塩の有効１日用量を、それを必要としているヒトに与える。本発明の塩の有効１日用量は典型的には１０ｍｇ〜３０ｍｇなどのように１ｍｇ〜１００ｍｇである。
【００１２】
別の態様では、本発明は、本発明のクエン酸塩、コハク酸塩およびマロン酸塩を製造する方法を提供する。したがって、たとえば、本発明は、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩の調製プロセスであって、好適な溶媒（たとえば、アセトニトリル）中の約１当量のエチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの遊離塩基を、約１当量から約１．２当量のクエン酸と約５５℃〜約７５℃の範囲の温度で接触させるステップを含むプロセスを提供する。
【００１３】
本発明はまた、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのコハク酸塩を調製するプロセスであって、好適な溶媒（たとえば、２−ブタノン）中の約１当量のエチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの遊離塩基を、約１当量から約１．２当量のコハク酸と約６０℃〜約７０℃の範囲の温度で接触させてエチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのコハク酸塩を形成するステップを含むプロセスを提供する。
【００１４】
さらに、本発明は、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのマロン酸塩の調製プロセスであって、好適な溶媒（たとえば、２−ブタノン）中の約１当量のエチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの遊離塩基を、約１当量から約１．２当量のマロン酸と約５０℃〜約７０℃の範囲の温度で接触させてエチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのマロン酸塩を形成するステップを含むプロセスを提供する。
【００１５】
さらなる態様では、本発明は、ＡＩＤＳを処置または予防的に阻止する方法であって、ＡＩＤＳに罹患しているヒトに治療有効量の本発明の塩またはその水和物を投与するステップを含む方法を提供する。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
下記式Ｉ
【化１６】
0005620376.tif 000003
のクエン酸塩またはその水和物。
（項目２）
結晶であることを特徴とする、項目１に記載の塩または水和物。
（項目３）
４．４８オングストローム、３．１２オングストロームおよび６．０５オングストロームと同一または本質的に同一である、Ｘ線粉末回折パターンから得られる面間隔スペクトル吸収バンドを特徴とする、項目２に記載の塩。
（項目４）
１９．８１°、２８．６３°および１４．６４°と同一または本質的に同一である、Ｘ線粉末回折パターンから得られる回折角２θ吸収バンドを特徴とする、項目２に記載の塩。
（項目５）
部分的にまたは完全に水和されていることを特徴とする、項目２に記載の水和物。
（項目６）
無水または本質的に無水であることを特徴とする、項目２に記載の塩。
（項目７）
治療有効量の、項目１〜６のいずれか１項に記載の塩または水和物および薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤を含む、医薬組成物。
（項目８）
追加の治療薬をさらに含む、項目７に記載の医薬組成物。
（項目９）
前記追加の治療薬が抗ＨＩＶ剤である、項目８に記載の医薬組成物。
（項目１０）
前記医薬組成物が単位剤形である、項目７に記載の医薬組成物。
（項目１１）
前記単位剤形が錠剤である、項目１０に記載の医薬組成物。
（項目１２）
治療有効量の、項目１〜６のいずれか１項に記載の塩または水和物を薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤と組み合わせて調製される、医薬組成物。
（項目１３）
項目１〜６のいずれか１項に記載の塩または水和物の使用であって、ＨＩＶ感染を処置または予防的に阻止するための、使用。
（項目１４）
項目１〜６のいずれか１項に記載の塩または水和物の使用であって、ＨＩＶ感染を処置または予防的に阻止する薬物を製造するための、使用。
（項目１５）
前記塩または水和物が項目７〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物の形態で存在する、項目１３〜１４のいずれか１項に記載の使用。
（項目１６）
下記式ＩＩ
【化１７】
0005620376.tif 000004
のコハク酸塩またはその水和物。
（項目１７）
結晶であることを特徴とする、項目１６に記載の塩または水和物。
（項目１８）
３．５７オングストローム、４．８０オングストロームおよび４．９９オングストロームと同一または本質的に同一である、Ｘ線粉末回折パターンから得られる面間隔スペクトル吸収バンドを特徴とする、項目１７に記載の塩。
（項目１９）
２４．９１°、１８．４６°および１７．７６°と同一または本質的に同一である、Ｘ線粉末回折パターンから得られる回折角２θ吸収バンドを特徴とする、項目１７に記載の塩。
（項目２０）
治療有効量の、項目１６〜１９のいずれか１項に記載の塩または水和物および薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤を含む、医薬組成物。
（項目２１）
追加の活性成分をさらに含む、項目２０に記載の医薬組成物。
（項目２２）
治療有効量の、項目１６〜１９のいずれか１項に記載の塩または水和物を薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤と組み合わせて調製される、医薬組成物。
（項目２３）
項目１６〜１９のいずれか１項に記載の塩または水和物の使用であって、ＨＩＶ感染を処置または予防的に阻止するための、使用。
（項目２４）
下記式ＩＩＩ
【化１８】
0005620376.tif 000005
のマロン酸塩またはその水和物。
（項目２５）
結晶であることを特徴とする、項目２４に記載の塩または水和物。
（項目２６）
４．９９、５．９３および４．７２オングストロームと同一または本質的に同一である、Ｘ線粉末回折パターンから得られる面間隔スペクトル吸収バンドを特徴とする、項目２５に記載の塩。
（項目２７）
１７．７６°、１４．９２°および１８．８０°と同一または本質的に同一である、Ｘ線粉末回折パターンから得られる回折角２θ吸収バンドを特徴とする、項目２５に記載の塩。
（項目２８）
治療有効量の、項目２４〜２７のいずれか１項に記載の塩または水和物および薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤を含む、医薬組成物。
（項目２９）
追加の活性成分をさらに含む、項目２８に記載の医薬組成物。
（項目３０）
治療有効量の、項目２４〜２７のいずれか１項に記載の塩または水和物を薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤と組み合わせて調製される、医薬組成物。
（項目３１）
項目２４〜２７のいずれか１項に記載の塩または水和物の使用であって、ＨＩＶ感染を処置または予防的に阻止するための、使用。
（項目３２）
特許請求の範囲に記載するような組成物または方法。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのマロン酸塩の特徴的な示差走査熱量測定（ＤＳＣ）のトレースを示す。
【図２】エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのコハク酸塩の特徴的なＤＳＣのトレースを示す。
【図３】エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩の特徴的なＤＳＣのトレースを示す。
【図４】エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのマロン酸塩の特徴的なＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【図５】エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのコハク酸塩の特徴的なＸＲＰＤパターンを示す。
【図６】エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩の特徴的なＸＲＰＤパターンを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本明細書で商品名を使用する場合、出願人らは、商品名の製品および商品名の製品の医薬活性成分（単数または複数）を独立に含むことを意図している。
【００１８】
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの塩。
【００１９】
一態様では、本発明は、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩、コハク酸塩およびマロン酸塩を提供する。
【００２０】
クエン酸塩を以下の式Ｉに示す。
【００２１】
【化２】
0005620376.tif 000006
コハク酸塩を以下の式ＩＩに示す。
【００２２】
【化３】
0005620376.tif 000007
マロン酸塩を以下の式ＩＩＩに示す。
【００２３】
【化４】
0005620376.tif 000008
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの合成方法については、本明細書の実施例１に記載する。エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのマロン酸塩、コハク酸塩およびクエン酸塩の製造方法についてはそれぞれ、本明細書の実施例３、４および５に記載する。前述の塩の物理的性質の一部を本明細書の実施例６に記載し、たとえば、４０℃および相対湿度７５％で保存する場合、これらの塩の各々が物理的に安定であることを示す。
【００２４】
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩、コハク酸塩およびマロン酸塩は、たとえば、インビトロおよびインビボでのＨＩＶの複製を阻害するのに有用である。この点で、本明細書の実施例８で詳細に説明しているように、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートは、人体で代謝されて親化合物となり、その後体内でリン酸化されてＨＩＶの複製を阻害する活性代謝物を提供するプロドラッグである。本発明の実施例８は、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの方が、親化合物よりＨＩＶウイルスを保有する細胞である白血球中の活性代謝物の蓄積を増加させることを示す。さらに、本発明の実施例９は、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートが、インビトロアッセイで評価したとき、親化合物より作用の強い抗ＨＩＶ剤であることを示すことをインビトロデータを提示する。加えて、本明細書の実施例１０は、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩を含む錠剤は、ビーグル犬の血流に対して、この薬物に、経口投与される液体の薬剤調製物と同様の薬物動態を提供することを示すデータを提供する。したがって、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩は、物理的および化学的に安定な組成物であり、これを生体に経口投与すれば親化合物より効果的な抗ＨＩＶ薬であるエチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートを治療有効量で与えることができる。
【００２５】
医薬組成物
別の態様では、本発明は、治療有効量の１種または複数種の本発明の塩および薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤を含む、医薬製剤とも呼ばれる医薬組成物を提供する。
【００２６】
本発明の塩は単独投与することもできるが、典型的には医薬組成物として投与する方が好ましい。本発明の医薬組成物は、通常の慣行に従って選択される従来のキャリアおよび賦形剤と共に製剤化する。キャリア（単数または複数）は、製剤の他の成分と適合性があり、その被投与者に生理的に無害であるという意味で「許容可能」でなければならない。錠剤は、こうした成分を賦形剤、流動促進剤、充填剤、バインダーなどとして含む。水性製剤は、無菌形態で調製するものであり、経口投与以外の送達を意図している場合、一般に等張である。どの製剤も任意に、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（Ｒ．Ｃ．Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，５ｔｈ  ｅｄ．，２００６）に記載されているような賦形剤を含む。賦形剤は、アスコルビン酸および他の酸化防止剤、ＥＤＴＡなどのキレート化剤、デキストリン、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース、などの炭水化物、ステアリン酸などを含む。製剤のｐＨは約３〜約１１の幅があるが、通常は約７〜１０である。
【００２７】
本製剤は、単位剤形（たとえば、錠剤）で提供されると都合がよい場合があり、薬学の技術分野において周知のどのような方法で調製してもよい。技法および製剤の全般については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）に掲載されている。こうした方法は、１種または複数種の副成分を構成するキャリアに活性成分を会合させるステップを含む。一般に、製剤は、液体キャリアもしくは微粉化した固体キャリアまたはその両方に活性成分を均一かつ密接に会合させ、その後必要に応じて、その生成物を成形することにより調製する。
【００２８】
活性成分を含む医薬製剤は、意図した投与方法に好適であればどのような形態であってもよい。たとえば経口用に使用する場合、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性もしくは油性懸濁剤、分散性散剤もしくは顆粒剤、エマルジョン、硬もしくは軟カプセル剤、シロップ剤またはエリキシル剤を調製すればよい。経口使用を意図した組成物は、医薬組成物製造の技術分野で公知のどのような方法に従って調製してもよく、そうした組成物は、食味のよい調製物を提供するため甘味剤、着香剤、着色剤および保存剤などの１種または複数種の薬を含んでいてもよい。錠剤の製造に好適な薬学的に許容される無毒の賦形剤との混合物中に活性成分を含む錠剤は、許容可能である。こうした賦形剤は、たとえば、炭酸カルシウムもしくは炭酸ナトリウム、ラクトース、ラクトース一水和物、クロスカルメロースナトリウム、ポビドン、リン酸カルシウムもしくはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈液；トウモロコシデンプンまたはアルギン酸などの造粒剤および崩壊剤；セルロース、微結晶性セルロース、デンプン、ゼラチンまたはアカシアなどの結合剤；およびステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクなどの滑沢剤（ｌｕｂｒｉｃａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）であってもよい。錠剤はコーティングされていなくてもよいし、あるいは胃腸管での崩壊および吸着を遅延させることにより、より長時間にわたり作用を持続させるマイクロカプセル化など既知の技法によりコーティングされていてもよい。たとえば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を単独で、またはワックスと共に使用してもよい。
【００２９】
また、経口用の製剤は、活性成分が不活性な固体状の希釈剤、たとえばリン酸カルシウムまたはカオリンなどと混合された硬質ゼラチンカプセルとして提供してもよいし、あるいは活性成分が水またはピーナッツ油、流動パラフィンまたはオリーブ油などの油媒体と混合された軟質ゼラチンカプセルとして提供してもよい。
【００３０】
本発明の塩の水性懸濁剤は、水性懸濁剤の製造に好適な賦形剤との混合物中に活性材料を含む。こうした賦形剤として、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガントゴムおよびゴムアカシアなどの懸濁化剤、および天然ホスファチド（たとえば、レシチン）、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（たとえば、ステアリン酸ポリオキシエチレン）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（たとえば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、エチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとの縮合生成物（たとえば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート）などの分散剤または湿潤剤を挙げることができる。水性懸濁剤は、エチルまたはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシ−ベンゾアートなどの１種または複数種の防腐剤、１種または複数種の着色剤、１種または複数種の着香剤、およびスクロースまたはサッカリンなどの１種または複数種の甘味剤を含んでいてもよい。
【００３１】
油性懸濁液は、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油またはヤシ油などの植物油、あるいは流動パラフィンなどの鉱油に活性成分を懸濁することにより製剤化することができる。経口懸濁液は、蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールなどの糊料をさらに含んでもよい。食味のよい経口用調製物を提供するため、上述したような甘味剤、および着香剤を加えてもよい。こうした組成物は、アスコルビン酸などの酸化防止剤を加えて保存してもよい。
【００３２】
水を加えて水性懸濁液を調製するのに好適な本発明の分散性散剤および顆粒剤は、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤および１種または複数種の防腐剤との混合物として活性成分を提供する。好適な分散剤または湿潤剤、および懸濁化剤として、上記に開示したものが挙げられる。追加の賦形剤、たとえば甘味剤、香味料および着色剤が存在してもよい。
【００３３】
本発明の医薬組成物は、水中油型エマルジョンの形態であってもよい。油相は、オリーブ油またはラッカセイ油などの植物油、流動パラフィンなどの鉱油、またはこれらの混合物としてもよい。好適な乳化剤として、ゴムアカシアおよびトラガントゴムなどの天然ゴム、大豆レシチンなどの天然ホスファチド、ソルビタンモノオレアートなどの脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導されるエステルまたは部分エステル、およびポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートなど、こうした部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物であってもよい。エマルジョンはまた、甘味剤および着香剤を含んでもよい。シロップ剤およびエリキシル剤は、グリセロール、ソルビトールまたはスクロースなどの甘味剤と共に製剤化してもよい。こうした製剤はまた、粘滑薬、防腐剤、香味料または着色剤を含んでいてもよい。
【００３４】
本発明の医薬組成物は、注射用無菌水性または油性懸濁剤など注射用無菌調製物の形態であってもよい。こうした懸濁剤は、上述してきた好適な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して従来技術に従って製剤化することができる。注射用無菌調製物はまた、１，３−ブタン−ジオール溶液など非経口的に許容される無毒の希釈剤または溶媒中の注射用無菌液剤または懸濁剤であってもよいし、あるいは凍結乾燥粉末として調製してもよい。使用してもよい許容されるビヒクルおよび溶媒として水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、溶媒または懸濁媒体として無菌の不揮発性油を慣習的に使用する場合がある。このため、合成のモノまたはジグリセリドなど、どのような不揮発性油を使用してもよい。さらに、注射剤の調製の際には、オレイン酸などの脂肪酸も同様に使用してもよい。
【００３５】
キャリア材料と組み合わせて単一剤形を形成してもよい活性成分の量は、たとえば、個々の投与モードによって異なる。たとえば、ヒトへの経口投与を意図した徐放性製剤は、適切な都合のよい量のキャリア材料と配合された活性材料を約１〜１０００ｍｇ含んでいてもよく、その量は全組成物の約５〜約９５％（重量：重量）の幅があってもよい。
【００３６】
眼への投与に好適な製剤として、活性成分を好適なキャリア、特に活性成分については水性溶媒に溶解または懸濁した点眼薬がある。
【００３７】
口の局所投与に好適な製剤として、スクロースおよびアカシアまたはトラガントなど風味を付けた基剤に活性成分を含ませたロゼンジ；ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシアなどの不活性な基剤に活性成分を含ませた香錠；および好適な液体キャリア中に活性成分を含む含嗽剤がある。
【００３８】
直腸投与用の製剤は、たとえばカカオバターまたはサリチラートを含む好適な基剤もちいた坐剤として提供してもよい。
【００３９】
肺内または鼻腔投与に好適な製剤は、粒度が、たとえば０．１〜５００ミクロン（０．５、１、３０ミクロン、３５ミクロンなどのミクロン単位で大きくなる０．１〜５００ミクロンの範囲の粒度を含む）であり、肺胞嚢に達するように鼻腔からの急速吸入または口からの吸入により投与される。好適な製剤として、活性成分の水性または油性液剤がある。エアロゾルまたは乾燥粉末の投与に好適な製剤は、従来の方法に従って調製することができ、ＨＩＶ活性に関連する状態の処置または予防にこれまで使用された化合物など他の治療薬と共に送達してもよい。
【００４０】
膣内投与に好適な製剤は、活性成分に加えて当該技術分野において適切であることが公知のキャリアを含むペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、泡またはスプレー製剤として提供することができる。
【００４１】
非経口投与に好適な製剤として、酸化防止剤、緩衝液、静菌薬、および製剤を意図される被投与者の血液と等張にする溶質を含んでもよい水性および非水性の無菌注射液；および懸濁化剤および糊料を含んでもよい水性および非水性の無菌懸濁液がある。
【００４２】
本製剤は、単位用量または複数用量容器、たとえば密封アンプルおよびバイアルに入れて提供され、使用の直前に無菌の液体キャリア、たとえば注射用水を加えることのみを必要とする凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）状態で保存できる。必要に応じて調合される注射液および懸濁剤は、前述したような無菌の散剤、顆粒剤および錠剤から調製される。好ましい単位用量製剤は、活性成分の１日用量または１日当たり数回の分割用量またはその適切な一部を含むものである。したがって、たとえば、本発明の塩の１日用量は、単一の錠剤で提供しても、あるいは複数の錠剤（たとえば、２または３錠）で提供してもよい。
【００４３】
本発明の製剤は、具体的に上述した成分に加えて、対象となる製剤の種類を考慮して当該技術分野において慣用される他の薬を含んでもよいことを理解すべきであり、たとえば経口投与に好適なものとして、着香剤がある。
【００４４】
活性成分の放出制御を行い投与頻度を減らしたり、活性成分の薬物動態プロファイルまたは毒性プロファイルを改善したりする医薬製剤も本発明の範囲内にある。したがって、本発明はまた、持続放出または制御放出用に製剤化された、１種または複数種の本発明の塩を含む医薬組成物も提供する。
【００４５】
本発明の塩の有効用量は、たとえば、塩が予防的に使用されているかどうか（典型的には同じ塩を治療に使用するのと比べて必要とされる用量は少ない）、送達方法、および医薬製剤によって左右され、従来の用量漸増試験により臨床医が決定する。有効用量は、１日約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重から１日約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲と予想できる。典型的には、１日約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重である。より典型的には、１日約．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ体重である。より典型的には、１日約．０５〜約０．５ｍｇ／ｋｇ体重である。たとえば、体重約７０ｋｇの成人ヒトの１日用量は典型的には、１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは５ｍｇ〜５００ｍｇの範囲であり、単一用量の形態とっても、あるいは複数用量の形態とってもよい。一例として、１日１回投与される単一用量製剤における本発明の塩の用量は、１日用量３０ｍｇまたは１日用量６０ｍｇなど３０ｍｇ〜６０ｍｇのように１ｍｇ〜１００ｍｇの範囲であればよい。
【００４６】
併用療法
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩、コハク酸塩およびマロン酸塩は各々、ＡＩＤＳおよび／またはＡＩＤＳに罹患しているヒト被験者に現れる１つまたは複数の他の疾患（たとえば、細菌および／または真菌感染、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎などの他のウイルス感染、またはカポジ肉腫などの癌）の処置または予防のため他の治療薬と組み合わせて使用してもよい。１種または複数種の本発明の塩と追加の治療薬（単数または複数）を一緒に製剤化（たとえば、錠剤中で一緒に製剤化）してもよい。
【００４７】
そうした追加の治療薬の例として、ウイルス感染、寄生虫感染もしくは細菌感染またはそれと関連する状態の処置または予防、あるいは腫瘍またはそれと関係する状態の処置に有効な薬があり、３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ジドブジン、ＡＺＴ）、２’−デオキシ−３’−チアシチジン（３ＴＣ）、２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロアデノシン（Ｄ４Ａ）、２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロチミジン（Ｄ４Ｔ）、カルボビル（炭素環式２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドログアノシン）、３’−アジド−２’，３’−ジデオキシウリジン、５−フルオロチミジン、（Ｅ）−５−（２−ブロモビニル）−２’−デオキシウリジン（ＢＶＤＵ）、２−クロロデオキシアデノシン、２−デオキシコホルマイシン、５−フルオロウラシル、５−フルオロウリジン、５−フルオロ−２’−デオキシウリジン、５−トリフルオロメチル−２’−デオキシウリジン、６−アザウリジン、５−フルオロオロト酸、メトトレキサート、トリアセチルウリジン、１−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−アラビノシル）−５−ヨードシチジン（ＦＩＡＣ）、テトラヒドロ−イミダゾ（４，５，１−ｊｋ）−（１，４）−ベンゾジアゼピン−２（１Ｈ）−チオン（ＴＩＢＯ）、２’−ノル−サイクリックＧＭＰ、６−メトキシプリンアラビノシド（ａｒａ−Ｍ）、６−メトキシプリンアラビノシド２’−Ｏ−吉草酸；シトシンアラビノシド（ａｒａ−Ｃ）、２’，３’−ジデオキシシチジン（ｄｄＣ）、２’，３’−ジデオキシアデノシン（ｄｄＡ）および２’，３’−ジデオキシイノシン（ｄｄＩ）などの２’，３’−ジデオキシヌクレオシド；アシクロビル、ペンシクロビル、ファムシクロビル、ガンシクロビル、ＨＰＭＰＣ、ＰＭＥＡ、ＰＭＥＧ、ＰＭＰＡ、ＰＭＰＤＡＰ、ＦＰＭＰＡ、ＨＰＭＰＡ、ＨＰＭＰＤＡＰ、（２Ｒ，５Ｒ）−９−＞テトラヒドロ−５−（ホスホノメトキシ）−２−フラニルアデニン、（２Ｒ，５Ｒ）−１−＞テトラヒドロ−５−（ホスホノメトキシ）−２−フラニルチミンなどの非環状ヌクレオシド；リバビリン（アデニンアラビノシド）、２−チオ−６−アザウリジン、ツベルシジン、アウリントリカルボン酸、３−デアザネオプラノシン、ネオプラノシン、リマンチジン、アダマンチンおよびホスカルネット（ホスホノギ酸三ナトリウム）などの他の抗ウイルス薬；殺菌性のフルオロキノロン（シプロフロキサシン、ペフロキサシンなど）などの抗菌薬；殺菌性のアミノグリコシド系抗生物質（ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、アミカシンおよび同種のもの）；β−ラクタマーゼ阻害剤（セファロスポリン、ペニシリンなど）；テトラサイクリン、イソニアジド、リファンピン、セフォペラゾン、クライスロマイシンおよびアジスロマイシンなどの他の抗菌剤、ペンタミジン（１，５−ビス（４’−アミノフェノキシ）ペンタン）、９−デアザ−イノシン、スルファメトキサゾール、スルファジアジン、キナピラミン、キニーネ、フルコナゾール、ケトコナゾール、イトラコナゾール、アムホテリシンＢ、５−フルオロシトシン、クロトリマゾール、ヘキサデシルホスホコリンおよびニスタチンなどの抗寄生虫剤または抗真菌薬；プロベニシ��などの腎排泄阻害剤；ジピリダモール、ジラゼプおよびニトロベンジルチオイノシンなどのヌクレオシド輸送阻害剤、ＦＫ５０６、シクロスポリンＡ、チモシンα−１などの免疫調節剤；ＴＮＦおよびＴＧＦ−βなどのサイトカイン；ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−βおよびＩＦＮ−γなどのインターフェロン；様々なインターロイキンなどのインターロイキン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦなどのマクロファージ／顆粒球コロニー刺激因子、抗ＴＮＦ抗体、抗インターロイキン抗体、可溶性インターロイキン受容体、プロテインキナーゼＣ阻害剤などのサイトカインアンタゴニストなどが挙げられる。
【００４８】
本発明の塩と組み合わせることができ、かつＨＩＶに対する活性を持つ好適な活性治療薬または成分の例として、１）ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、たとえば、アンプレナビル、アタザナビル、ホスアンプレナビル、インジナビル、ロピナビル、リトナビル、ロピナビル＋リトナビル、ネルフィナビル、サキナビル、チプラナビル、ブレカナビル、ダルナビル、ＴＭＣ−１２６、ＴＭＣ−１１４、モゼナビル（ＤＭＰ−４５０）、ＪＥ−２１４７（ＡＧ１７７６）、ＡＧ１８５９、ＤＧ３５、Ｌ−７５６４２３、ＲＯ０３３４６４９、ＫＮＩ−２７２、ＤＰＣ−６８１、ＤＰＣ−６８４およびＧＷ６４０３８５Ｘ、ＤＧ１７、ＰＰＬ−１００、２）非ヌクレオシド系のＨＩＶ逆転写酵素阻害剤、たとえば、カプラビリン、エミビリン、デラビリジン、エファビレンツ、ネビラピン、（＋）カラノリドＡ、エトラビリン、ＧＷ５６３４、ＤＰＣ−０８３、ＤＰＣ−９６１、ＤＰＣ−９６３、ＭＩＶ−１５０およびＴＭＣ−１２０、ＴＭＣ−２７８（リルピビリン）、エファビレンツ、ＢＩＬＲ  ３５５  ＢＳ、ＶＲＸ  ８４０７７３、ＵＫ−４５３，０６１、ＲＤＥＡ８０６、３）ヌクレオシド系のＨＩＶ逆転写酵素阻害剤、たとえば、ジドブジン、エムトリシタビン、ジダノシン、スタブジン、ザルシタビン、ラミブジン、アバカビル、アムドキソビル、エルブシタビン、アロブジン、ＭＩＶ−２１０、ラシビル（−ＦＴＣ）、Ｄ−ｄ４ＦＣ、エムトリシタビン、ホスファジド、ホジブジンチドキシル、ホサルブジンチドキシル、アプリシチビン（ＡＶＸ７５４）、アムドキソビル、ＫＰ−１４６１、アバカビル＋ラミブジン、アバカビル＋ラミブジン＋ジドブジン、ジドブジン＋ラミブジン、４）ヌクレオチド系のＨＩＶ逆転写酵素阻害剤、たとえば、テノホビル、フマル酸テノホビルジソプロキシル＋エムトリシタビン、フマル酸テノホビルジソプロキシル＋エムトリシタビン＋エファビレンツおよびアデホビル、５）ＨＩＶインテグラーゼ阻害剤、たとえば、クルクミン、クルクミンの誘導体、チコリ酸、チコリ酸の誘導体、３，５−ジカフェオイルキナ酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸の誘導体、アウリントリカルボン酸、アウリントリカルボン酸の誘導体、カフェ酸フェネチルエステル、カフェ酸フェネチルエステルの誘導体、チロホスチン、チロホスチンの誘導体、ケルセチン、ケルセチンの誘導体、Ｓ−１３６０、ジンテビル（ＡＲ−１７７）、Ｌ−８７０８１２およびＬ−８７０８１０、ＭＫ−０５１８（ラルテグラビル）、ＢＭＳ−７０７０３５、ＭＫ−２０４８、ＢＡ−０１１、ＢＭＳ−５３８１５８、ＧＳＫ３６４７３５Ｃ、６）ｇｐ４１阻害剤、たとえば、エンフビルチド、シフビルチド、ＦＢ００６Ｍ、ＴＲＩ−１１４４、ＳＰＣ３、ＤＥＳ６、Ｌｏｃｕｓ  ｇｐ４１、ＣｏｖＸおよびＲＥＰ９、７）ＣＸＣＲ４阻害剤、たとえば、ＡＭＤ−０７０、８）エントリー阻害剤、たとえば、ＳＰ０１Ａ、ＴＮＸ−３５５、９）ｇｐ１２０阻害剤、たとえば、ＢＭＳ−４８８０４３およびＢｌｏｃｋＡｉｄｅ／ＣＲ、１０）Ｇ６ＰＤおよびＮＡＤＨ−オキシダーゼ阻害剤、たとえば、イムニチン、１０）ＣＣＲ５阻害剤、たとえば、アプラビロック、ビクリビロック、ＩＮＣＢ９４７１、ＰＲＯ−１４０、ＩＮＣＢ���５０５０、ＰＦ−２３２７９８、ＣＣＲ５ｍＡｂ００４およびマラビロック、１１）インターフェロン、たとえば、ペグ化ｒＩＦＮ−α  ２ｂ、ペグ化ｒＩＦＮ−α  ２ａ、ｒＩＦＮ−α  ２ｂ、ＩＦＮ  α−２ｂ  ＸＬ、ｒＩＦＮ−α  ２ａ、コンセンサスＩＦＮ  α、インファーゲン、レビフ、ロクテロン、ＡＶＩ−００５、ＰＥＧ−インファーゲン、ペグ化ＩＦＮ−β、経口インターフェロンα、フエロン、レアフェロン、インターマックスα、ｒ−ＩＦＮ−β、インファーゲン＋アクティミューン、ＤＵＲＯＳを含むＩＦＮ−ωおよびアルブフェロン、１２）リバビリンアナログ、たとえば、レベトール、コペガス、レボビリン、ＶＸ−４９７およびビラミジン（タリバビリン）１３）ＮＳ５ａ阻害剤、たとえば、Ａ−８３１およびＡ−６８９、１４）ＮＳ５ｂポリメラーゼ阻害剤、たとえば、ＮＭ−２８３、バロピシタビン、Ｒ１６２６、ＰＳＩ−６１３０（Ｒ１６５６）、ＨＩＶ−７９６、ＢＩＬＢ  １９４１、ＭＫ−０６０８、ＮＭ−１０７、Ｒ７１２８、ＶＣＨ−７５９、ＰＦ−８６８５５４、ＧＳＫ６２５４３３およびＸＴＬ−２１２５、１５）ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤、たとえば、ＳＣＨ−５０３０３４（ＳＣＨ−７）、ＶＸ−９５０（テラプレビル）、ＩＴＭＮ−１９１およびＢＩＬＮ−２０６５、１６）α−グルコシダーゼ１阻害剤、たとえば、ＭＸ−３２５３（セルゴシビル）およびＵＴ−２３１Ｂ、１７）肝保護剤、たとえば、ＩＤＮ−６５５６、ＭＥ３７３８、ＭｉｔｏＱおよびＬＢ−８４４５１、１８）非ヌクレオシド系ＨＩＶの阻害剤、たとえば、ベンゾイミダゾール誘導体、ベンゾ−１，２，４−チアジアジン誘導体およびフェニルアラニン誘導体、１９）ＨＩＶ処置用の他の薬剤、たとえば、ザダキシン、ニタゾキサニド（アリネア）、ＢＩＶＮ−４０１（ビロスタット）、ＤＥＢＩＯ−０２５、ＶＧＸ−４１０Ｃ、ＥＭＺ−７０２、ＡＶＩ  ４０６５、バビツキシマブ、オグルファニド、ＰＹＮ−１７、ＫＰＥ０２００３００２、アクチロン（ＣＰＧ−１０１０１）、ＫＲＮ−７０００、シバシル、ＧＩ−５００５、ＡＮＡ−９７５（イサトリビン）、ＸＴＬ−６８６５、ＡＮＡ  ９７１、ＮＯＶ−２０５、タルバシン、ＥＨＣ−１８およびＮＩＭ８１１、１９）薬物動態改善剤、たとえば、ＢＡＳ−１００およびＳＰＩ４５２、２０）ＲＮＡｓｅＨ阻害剤、たとえば、ＯＤＮ−９３およびＯＤＮ−１１２、２１）他の抗ＨＩＶ薬、たとえば、ＶＧＶ−１、ＰＡ−４５７（ベビリマット）、アンプリゲン、ＨＲＧ２１４、シトリン、ポリムン、ＶＧＸ−４１０、ＫＤ２４７、ＡＭＺ  ００２６、ＣＹＴ  ９９００７、Ａ−２２１ＨＩＶ、ＢＡＹ  ５０−４７９８、ＭＤＸ０１０（イプリムマブ）、ＰＢＳ１１９、ＡＬＧ８８９およびＰＡ−１０５００４０が挙げられる。
【００４９】
さらに一例として、以下のリストに、本発明の塩と組み合わせることができる例示的なＨＩＶ抗ウイルス薬と、その対応する米国特許番号を開示する。
【００５０】
例示的なＨＩＶ抗ウイルス薬および特許番号
ザイアジェン（硫酸アバカビル、米国特許第５，０３４，３９４号）
エプジコム（硫酸アバカビル／ラミブジン、米国特許第５，０３４，３９４号）
ヘプセラ（アデホビルジピボキシル、米国特許第４，７２４，２３３号）
アゲネラーゼ（アンプレナビル、米国特許第５，６４６，１８０号）
レイアタッツ（硫酸アタザナビル、米国特許第５，８４９，９１１号）
レスクリプター（メシル酸デラビルジン、米国特許第５，５６３，１４２号）
ハイビッド（ジデオキシシチジン；ザルシタビン、米国特許第５，０２８，５９５号）
ヴァイデックス（ジデオキシイノシン；ジダノシン、米国特許第４，８６１，７５９号）
サスティバ（エファビレンツ、米国特許第５，５１９，０２１号）
エムトリバ（エムトリシタビン、米国特許第６，６４２，２４５号）
レクシヴァ（ホスアンプレナビルカルシウム、米国特許第６，４３６，９８９号）
ビルジン；トリアプテン；ホスカビル（ホスカルネットナトリウム、米国特許第６，４７６，００９号）
クリキシバン（硫酸インジナビル、米国特許第５，４１３，９９９号）
エピビル（ラミブジン、米国特許第５，０４７，４０７号）
コンビビル（ラミブジン／ジドブジン、米国特許第４，７２４，２３２号）
アルビラン（ロピナビル）
カレトラ（ロピナビル／リトナビル、米国特許第５，５４１，２０６号）
ビラセプト（メシル酸ネルフィナビル、米国特許第５，４８４，９２６号）
ビラミューン（ネビラピン、米国特許第５，３６６，９７２号）
ノルビル（リトナビル、米国特許第５，５４１，２０６号）
インビラーゼ；フォルトバーゼ（メシル酸サキナビル、米国特許第５，１９６，４３８号）
ゼリット（スタブジン、米国特許第４，９７８，６５５号）
ツルバダ（フマル酸テノホビルジソプロキシル／エムトリシタビン、米国特許第５，２１０，０８５号）
アプティバス（チプラナビル）
レトロビル（ジドブジン；アジドチミジン、米国特許第４，７２４，２３２号）
ＨＩＶの阻害方法
さらなる態様では、本発明は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を処置する方法であって、各方法が、ＡＩＤＳに罹患しているヒトに治療有効量の本発明の塩または本発明の塩の水和物を投与するステップを含む方法を提供する。ＡＩＤＳの処置は、ＡＩＤＳの少なくとも１つの症状の軽減および／またはこの疾患の進行の遅延または予防を含む。典型的には、治療有効量の塩を、見出し「医薬組成物」に記載する医薬組成物の形態でヒトに投与する。典型的には、たとえば錠剤の形態で医薬組成物を経口投与する。本発明の１種または複数種の塩またはその水和物の治療上有効な１日用量の例は、１０ｍｇ〜３０ｍｇなど１ｍｇ〜１００ｍｇである。本発明の塩については、たとえば人体内の水性媒体中で解離すると有効量、たとえば１０ｍｇまたは３０ｍｇまたは６０ｍｇなどの遊離塩基になる一定量の塩を含む１つまたは複数の錠剤の形態で毎日投与してもよい。
【００５１】
投与経路
本発明の１種または複数種の塩は、処置対象の状態に適した任意の経路で投与する。好適な経路としては、経口、直腸、経鼻、局所（頬および舌下など）、経膣および非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、髄膜内および硬膜外）などが挙げられる。好ましい経路は、たとえば、被投与者の状態によって変わる場合があることが理解される。本発明の塩の利点は経口で生物学的に利用可能であり、経口で投与できることにある。
【実施例】
【００５２】
実施例および例示的な実施形態：
開示内容の全体を参照によって本明細書に援用する国際公開第２００６／１１０１５７号、特にｐ．１６７−１７４も参照されたい。
【００５３】
（実施例１）
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの合成。
【００５４】
【化５】
0005620376.tif 000009
２−デオキシ−２−フルオロ−３，５−ジ−Ｏ−ベンゾイル−ａ−Ｄ−アラビノフラノシルブロミド（２）
Ｔａｎｎ  ｅｔ．ａｌ．，ＪＯＣ，１９８５，Ｖｏｌ．５０  ｐｇ．３６４４およびＨｏｗｅｌｌ  ｅｔ．ａｌ．，ＪＯＣ，１９８８，Ｖｏｌ．５３，ｐｇ．８５に開示された合成スキームに従って化合物（２）を合成した。
【００５５】
ＤａｖｏｓまたはＣＭＳ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓから市販されている１．３．５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−２−デオキシ−２−フルオロ−α−Ｄ−アラビノフラノース（１）（１２０ｇ、２５８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１Ｌ）中の溶液に３３％ＨＢｒ／酢酸（８０ｍＬ）を加えた。この混合物を室温で１６時間撹拌し、氷水で冷却し、ＮａＨＣＯ３（１５０ｇ／１．５Ｌ溶液）で１〜２時間かけてゆっくりと中和した。
【００５６】
ＣＨ２Ｃｌ２層を分離し、減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解させ、酸がなくなるまでＮａＨＣＯ３で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して生成物２を黄色油として得た（約１１５ｇ）。
【００５７】
【化６】
0005620376.tif 000010
２−デオキシ−２−フルオロ−３，５−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−アラビノフラノシル−９Ｈ−６−クロロプリン（３）
Ｍａ  ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，Ｖｏｌ．４０，ｐｇ．２７５０；Ｍａｒｑｕｅｚ  ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９０，Ｖｏｌ．３３，ｐｇ．９７８；Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ  ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９２，Ｖｏｌ．５７，ｐｇ．１８０８およびＫａｚｉｍｉｅｒｃｚｕｋ  ｅｔ．ａｌ．，ＪＡＣＳ，１９８４，Ｖｏｌ．１０６，ｐｇ．６３７９に開示された合成スキームに従って化合物（３）を合成した。
【００５８】
ＮａＨ（１４ｇ、６０％）のアセトニトリル（９００ｍＬ）懸濁液に、６−クロロプリン（５２．６ｇ）を３回に分けて加えた。この混合物を室温で１．５時間撹拌した。２（２５８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（３００ｍＬ）を滴下して加えた。得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。反応を酢酸（３．５ｍＬ）でクエンチし、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２と水に分配した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２、次いでＥｔＯＨ（全体で約１：２）で処理し、所望の生成物３を黄色がかった固体として析出させた（８３ｇ、１から６５％）。
【００５９】
【化７】
0005620376.tif 000011
２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル−６−メトキシアデニン（４）
０℃の３（８３ｇ、１６７ｍｍｏｌ）のメタノール（１Ｌ）懸濁液に、ＮａＯＭｅ（２５％ｗｔ、７６ｍＬ）を加えた。この混合物を室温で２時間撹拌してから、酢酸（約１１ｍＬ、ｐＨ＝７）でクエンチした。この混合物を減圧下で濃縮し、得られた残渣をヘキサンと水（約５００ｍＬのヘキサンおよび３００ｍＬの水）に分配した。水層を分離し、有機層を再度水（約  ３００ｍＬ）と混合した。水画分を合わせ、減圧下で約１００ｍＬまで濃縮した。析出したこの生成物４を、濾過により集めた（４２ｇ、８８％）。
【００６０】
【化８】
0005620376.tif 000012
２−デオキシ−２−フルオロ−５−カルボキシ−β−Ｄ−アラビノフラノシル−６−メトキシアデニン（５）
Ｍｏｓｓ  ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９６３，ｐｇ．１１４９に開示された合成スキームに従って化合物（５）を合成した。
【００６１】
Ｐｔ／Ｃ（水スラリーとして１０％、１５ｇ（２０〜３０％モル当量））とＮａＨＣＯ３（１．５ｇ、１７．９４ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（５００ｍＬ）中の混合物をＨ２下、６５℃で０．５時間撹拌した。次いでこの反応混合物を放冷し、真空下に置き、Ｎ２で数回フラッシュして全Ｈ２を除去した。次いで化合物４（５．１ｇ、１７．９４ｍｍｏｌ）を室温で加えた。ＬＣ−ＭＳで反応の終了を確認するまで（典型的には２４〜７２時間）、この反応混合物をＯ２（バルーン）下６５℃で撹拌した。この混合物を室温まで冷却し、濾過した。このＰｔ／ＣをＨ２Ｏで十分に洗浄した。合わせた濾液を約３０ｍＬまで濃縮し、ＨＣｌ（４Ｎ）を０℃で加えて酸性化（ｐＨ４）した。黒い固体を析出させ、濾過により集めた。この粗生成物を最少量のメタノールに溶解させ、シリカゲルパッドで濾過（メタノールで溶出）した。濾液を濃縮し、水から結晶化させて化合物５（２．５ｇ）をオフホワイトの固体として得た。
【００６２】
【化９】
0005620376.tif 000013
（２’Ｒ，３’Ｓ，４’Ｒ，５’Ｒ）−６−メトキシ−９−［テトラヒドロ４−ヨード−３−フルオロ−５−（ジエトキシホスフィニル）メトキシ−２−フラニル］プリン（６）
Ｚｅｍｌｉｃｋａ  ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．，Ｓｏｃ．，１９７２，Ｖｏｌ．９４，ｐｇ．３２１３に開示された合成スキームに従って化合物（６）を合成した。
【００６３】
５（２２ｇ、７３．７７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４００ｍＬ）溶液に、ＤＭＦジネオペンチルアセタール（１５０ｍＬ、５３８ｍｍｏｌ）およびメタンスルホン酸（９．５ｍＬ、１４６．６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を８０〜９３℃（内部温度）で３０分間撹拌してから、室温まで冷却し、減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチルと水に分配した。有機相を分離し、ＮａＨＣＯ３、続いてブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣およびジエチル（ヒドロキシメチル）ホスホナート（３３ｍＬ、２２５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍＬ）に溶解させ、−４０℃まで冷却した。ＣＨ２Ｃ１２（１００ｍＬ）中の一臭化ヨウ素（３０．５ｇ、１．１ｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた。この混合物を−２０〜−５℃で６時間撹拌した。次いで反応をＮａＨＣＯ３およびＮａ２Ｓ２Ｏ３でクエンチした。有機相を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して生成物６を得た（６ｇ、１５．３％）。
【００６４】
６を調製する別の手順
５（２．０ｇ、６．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４５ｍＬ）溶液をＮ２下トリフェニルホスフィン（２．３ｇ、８．７ｍｍｏｌ）で処理した。ジイソプロピルアゾジカルボキシラート（１．８ｇ、８．７ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。得られた混合物を室温で１時間撹拌してから、減圧下で濃縮乾固した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）に溶解させ、次いでジエチル（ヒドロキシメチル）ホスホナート（４．５ｇ、２７ｍｍｏｌ）で処理した。この混合物を−６０℃まで冷却してから、一臭化ヨウ素２ｇ、９．６ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２中の冷たい溶液（１０ｍｌ）を加えた。この反応混合物を−１０℃まで加温し、次いで−１０℃に１時間保温した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和水性ＮａＨＣＯ３、次いで水性チオ硫酸ナトリウムで洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮乾固した。反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（２５％酢酸エチルを含むＣＨ２Ｃｌ２、その後３％メタノールを含むＣＨ２Ｃｌ２に切り換えて溶出）で精製して生成物６を得た（０．９ｇ、３３％）。
【００６５】
【化１０】
0005620376.tif 000014
（２’Ｒ，５’Ｒ）−６−メトキシ−９−［３−フルオロ−２，５−ジヒドロ−５−（ジエトキシホスフィニル）メトキシ−２−フラニル］プリン（７）
化合物６（６ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）の酢酸（２．５ｍＬ）およびメタノール（５０ｍＬ）中の溶液に、ＮａＣｌＯ（１０〜１３％）（５０ｍＬ）を滴下して加えた。次いでこの反応混合物を０．５時間撹拌し、減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチルで処理し、次いで濾過して固体を除去した。濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製して生成物７を得た（４ｇ、８８％）。
【００６６】
【化１１】
0005620376.tif 000015
（２’Ｒ，５’Ｒ）−９−（３−フルオロ−２，５−ジヒドロ−５−ホスホノメトキシ−２−フラニル）アデニン二ナトリウム塩（８）
化合物７（２．３ｇ、５．７ｍｍｏｌ）のメタノール（６ｍＬ）溶液を水酸化アンモニウム（２８〜３０％）（６０ｍＬ）と混合した。得られた混合物を１２０℃で４時間撹拌し、冷却してから減圧下で濃縮した。残渣を真空下で１２時間乾燥させた。残渣をＤＭＦ（４０ｍＬ）に溶解させ、ブロモトリメチルシラン（３．５ｍＬ）を加えた。この混合物を室温で１６時間撹拌してから、減圧下で濃縮した。残渣を水性ＮａＨＣＯ３（水１００ｍＬ中に２．３ｇ）に溶解させた。この溶液を蒸発させ、残渣をＣ−１８（４０μｍ）カラムで精製し、水で溶出した。水性画分を凍結乾燥して二ナトリウム塩８を得た（１．２２ｇ、５７％）。
【００６７】
【化１２】
0005620376.tif 000016
モノアミデート調製物の例（９）
二ナトリウム塩８（２５ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−Ａｌａ−Ｏ−シクロブチルエステルヒドロクロリド（２４ｍｇ、２当量、０．１３３ｍｍｏｌ）およびフェノール（３１ｍｇ、０．３３３ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（１ｍＬ）中で混合した。トリエチルアミン（１１１μＬ、０．７９９ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を窒素下６０℃で撹拌した。セパレートフラスコ中で２’−アルドリチオール（１２２ｍｇ、０．４６６ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（１０３ｍｇ、０．４６６ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（０．５ｍＬ）に溶解させ、得られた黄色溶液を１５〜２０分間撹拌した。次いでこの溶液を８の溶液に一度に加えた。合わせた混合物を窒素下６０℃で１６時間撹拌して黄色から淡褐色の透明な溶液を得た。次いでこの混合物を減圧下で濃縮した。得られた油をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、シリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃ１２中０〜５％ＭｅＯＨの線形勾配で溶出）により精製して油を得た。得られた油をアセトニトリルおよび水に溶解させ、分取ＨＰＬＣ（線形勾配、水中５〜９５％アセトニトリル）により精製した。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥してモノアミデート９を白色粉末として得た。
【００６８】
【化１３】
0005620376.tif 000017
ビスアミデート調製物の例（１０）
二ナトリウム塩８（１２ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−Ａｌａ−Ｏ−ｎ−Ｐｒエステルヒドロクロリド（３２ｍｇ、６当量、０．１９２ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（１ｍＬ）中で混合した。トリエチルアミン（５３μＬ、０．３８４ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を窒素下６０℃で撹拌した。セパレートフラスコ中で２’−アルドリチオール（５９ｍｇ、０．２２４ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（４９ｍｇ、０．２２４ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（０．５ｍＬ）に溶解させ、得られた黄色溶液を１５〜２０分間撹拌した。次いでこの溶液を８の溶液に一度加えた。合わせた混合物を窒素下６０℃で１６時間撹拌して黄色から淡褐色の透明な溶液を得た。次いでこの混合物を減圧下で濃縮した。得られた油をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、シリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜５％ＭｅＯＨの線形勾配で溶出）により精製して油を得た。得られた油をアセトニトリルおよび水に溶解させ、分取ＨＰＬＣ（線形勾配、水中５〜９５％アセトニトリル）により精製した。純粋な画分を合わせ、凍結乾燥してビスアミデートを白色粉末として得た。
【００６９】
【化１４】
0005620376.tif 000018
モノアミデート調製物の例（１１）
化合物８（１．５ｇ、４ｍｍｏｌ）をエチルアラニンエステルＨＣｌ塩（１．２３ｇ、８ｍｍｏｌ）およびフェノール（１．８８ｇ、２０ｍｍｏｌ）と混合した。無水ピリジン（３５ｍＬ）、続いてＴＥＡ（６．７ｍＬ、４８ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を窒素下６０℃で１５〜２０分間撹拌した。セパレートフラスコ中で２’−アルドリチオール（７．３ｇ）を、無水ピリジン（５ｍＬ）中のトリフェニルホスフィン（６．２ｇ）と混合し、得られた混合物を１０〜１５分間撹拌して透明な淡黄色の溶液を得た。次いでこの溶液を上記の混合物に加え、６０℃で一晩撹拌した。この混合物を減圧下で濃縮してピリジンを除去した。得られた残渣を酢酸エチルに溶解させ、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２×）、次いで飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過してから減圧下で濃縮した。得られた油をジクロロメタンに溶解させ、乾燥ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈカラム、４０ｇに充填し、１０分かけてジクロロメタン中０〜５％メタノールの線形勾配、その後７〜１０分間、ジクロロメタン中５％メタノールで溶出した。所望の生成物を含む画分を合わせ、減圧下で濃縮して泡状物質を得た。泡状物質をアセトニトリルに溶解させ、分取ＨＰＬＣにより精製して１１を得た（０．９５ｇ）。
【００７０】
１１（９５０ｍｇ）を少量のアセトニトリルに溶解させ、室温で一晩放置した。固体を濾過により集め、少量のアセトニトリルで洗浄した。濾液を真空下で濃縮し、次いで緩衝液Ａ、アセトニトリル中２％エタノールで平衡化したＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＳ−Ｈカラムに充填した。緩衝液Ａで１７分間１０ｍＬ／分として異性体Ａ、１２を溶出した。その後緩衝液Ｂ、アセトニトリル中５０％メタノールを用いて８分かけてカラムから異性体Ｂ、１３を別に溶出した。溶媒をすべて除去してから別々にアセトニトリルおよび水に再び溶解させた。このサンプルを別々に凍結乾燥した（質量−３４８ｍｇ）。異性体１２を以下に示す
【００７１】
【化１５】
0005620376.tif 000019
（実施例２）
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの塩形のスクリーニング
以下の酸をスクリーニングしてエチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの好適な結晶塩を形成するかどうかを判定した：鉱酸（ＨＸ、式中、Ｘ＝ハロゲンである；Ｈ３ＰＯ４）；有機スルホン酸（ＲＳＯ３Ｈ、式中、Ｒ＝Ｍｅ、Ｅｔ、Ｐｈ、（＋）−カンファー−１０−スルホン酸；ナフタレン−２−スルホン酸；ナフタレン−１，５−ジスルホン酸）；モノカルボン酸（ＲＣＯ２Ｈ、式中、Ｒ＝Ｈ、Ｍｅ、Ｅｔ、Ｐｈ、トランス−ＰｈＣＨ＝ＣＨ、Ｃｌ２ＣＨ、ＰｈＣＯＮＨＣＨ２）およびジカルボン酸（マロン酸、コハク酸、フマル酸、アジピン酸、シュウ酸、マレイン酸）。
【００７２】
前述の酸の３つを使用してエチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートと混合したところ固体を得た：トリフルオロ酢酸、マロン酸およびコハク酸。トリフルオロ酢酸は薬学的に許容されないと思われる。
【００７３】
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートは、酸性または塩基性条件下、プロトン性溶媒中で分解されるアミデートプロドラッグである。このため、求核部分を含む可能性がある酸は、初回のスクリーニングに含めなかった。
【００７４】
続いて、クエン酸、グリコール酸、（Ｓ）−（＋）−乳酸、サリチル酸、（Ｓ）−（−）−リンゴ酸、（Ｓ）−（＋）−マンデル酸および（Ｓ）−（＋）−グルタミン酸を評価した。意外にもエチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートはクエン酸と安定な結晶塩を形成した。クエン酸はヒドロキシル基を含むため、これは予想外の結果であった。ヒドロキシル基は、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのアミデート部分に求核試薬として作用することができ、これと反応を起こして、フェノールまたはアラニンエチルエステルを脱離してエチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートとクエン酸のヒドロキシル基との間で共有結合が形成される可能性がある。
【００７５】
（実施例３）
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのマロン酸塩の合成
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの遊離塩基形を温かい２−ブタノン（１５部）に溶解させ、撹拌しながらマロン酸（０．２６部）を加えて溶液を形成した。この溶液にヘプタン（５部）を加え、約５℃までゆっくりと冷却し、集めて、冷たい２−ブタノン／ヘプタンでリンスした。この結果、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのマロン酸塩が生成され、収率は約８０％であった。
【００７６】
マロン酸塩のＮＭＲスペクトルは、以下の特徴を持っていた：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ−ｄ）ｐｐｍ＝８．２７（ｓ，１Ｈ），８．２６（ｓ，１Ｈ），７．３２−７．２０（ｍ，３Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），６．７８（ｍ，１Ｈ），５．８８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），５．７８（ｓ，１Ｈ），４．１７（ｍ，２Ｈ），４．１５−４．０７（ｍ，３Ｈ），３．８５（ｄｄ，Ｊ＝８．０，８．０，１Ｈ），３．３８（ｓ，２Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．２３（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）
３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ−ｄ）ｐｐｍ＝２０．６４（ｓ）
１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＩＴＲＩＬＥ−ｄ３）ｐｐｍ＝−１３５．１９（ｓ）
（実施例４）
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのコハク酸塩の合成。
【００７７】
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの遊離塩基形を温かい２−ブタノン（１５部）に溶解させ、撹拌しながらコハク酸（０．２８部）を加えて溶液を形成した。この溶液を約５℃までゆっくりと冷却し、集めて、冷たい２−ブタノンでリンスすることにより、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのコハク酸塩を収率８０％で得た。
【００７８】
コハク酸塩のＮＭＲスペクトルは以下の特徴を持っていた：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＩＴＲＩＬＥ−ｄ３）ｐｐｍ＝８．２６（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｄｄ，Ｊ＝７．６，７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．７８（ｍ，１Ｈ），６．１７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．８９（ｍ，２Ｈ），４．１２−３．９５（重なった多重線，６  Ｈ），２．５３（ｓ，４Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝６．８，３Ｈ），１．１８（ｔ，Ｊ＝７．２，３Ｈ）．
３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ−ｄ３）ｐｐｍ＝２１．６０（ｓ）
１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ−ｄ３）ｐｐｍ＝−１３５．１９（ｓ）。
【００７９】
（実施例５）
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩の合成。
【００８０】
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの遊離塩基形（約３０ｇ）を熱いアセトニトリル（１６部）に溶解させ、撹拌しながらクエン酸（０．３８部）を加えた。得られた溶液を約５℃までゆっくりと冷却し、集めて、冷たいアセトニトリルでリンスし、乾燥させてエチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩を収率約８４％で得た。
【００８１】
クエン酸塩のＮＭＲスペクトルは以下の特徴を持っていた：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）ｐｐｍ＝８．２０（ｓ，２Ｈ），７．４５（２Ｈ，ｂｒ  ｓ），７．２９（ｄｄ，Ｊ＝７．６，７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．１３（ｄｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｊ＝７．２Ｈｚ  １Ｈ），７．１２（ｄｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｊ＝８．０Ｈｚ  ２Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．１４（ｓ，１Ｈ），５．９７（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．７８（ｄｄ，Ｊ＝１２．２，１０．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｍ，１Ｈ），４．０２（ｍ，２Ｈ），３．９８（ｍ，１Ｈ），３．８９（ｍ，１Ｈ），２．７６（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．６６（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，２Ｈ），１．１６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）．
３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）ｐｐｍ＝２２．２９（ｓ）
１９Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＩＴＲＩＬＥ−ｄ３）ｐｐｍ＝−１３３．８８（ｓ）
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ：５０７．１５６１；Ｃ２１Ｈ２４ＦＮ６Ｏ６Ｐに対する計算値：５０７．１５５７．
Ｃ２１Ｈ２４ＦＮ６Ｏ６Ｐに対する元素分析の計算値：Ｃ：４６．４２；Ｈ：４．６２；Ｎ：１２．０３；Ｐ：４．４３；Ｆ：２．７２；実測値：Ｃ：４５．８３；Ｈ：４．７４；Ｎ：１１．８１；Ｐ：４．４５；Ｆ：２．８０。
【００８２】
（実施例６）
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの塩の物理化学的特性
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのマロン酸塩、コハク酸塩およびクエン酸塩の代表的なバッチを調製した。これら塩の融点を測定して、融点が高いと安定性レベルが高いことを示す安定性の大まかな目安とする。表１に示すように、クエン酸塩の融点が最も高かった。さらに、３つの塩各々の融解熱（ΔＨ（融解））を表１に示す。クエン酸塩の融解熱が最も高いことから、他の２つの塩より固体の結晶化度の程度が高いことが示唆される。
【００８３】
【表１】
0005620376.tif 000020
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの遊離塩基形は４０℃および７５％相対湿度（ＲＨ：ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｈｕｍｉｄｉｔｙ）の開放条件で保存する場合、非晶質で吸湿性があり、化学的に不安定である。表２に示すように、対応するコハク酸塩、マロン酸塩およびクエン酸塩は室温で数日間相対湿度９２％にさらしても吸湿性がなかった。
【００８４】
【表２】
0005620376.tif 000021
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの遊離塩基、コハク酸塩、マロン酸塩およびクエン酸塩の固体の化学的安定性を４０℃および７５％相対湿度の開放条件で調べた。表３に示すように、クエン酸塩は、コハク酸塩およびマロン酸塩に比べて優れた化学的安定性を示した。
【００８５】
【表３】
0005620376.tif 000022
（実施例７）
１０ｍｇおよび３０ｍｇのエチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナート遊離塩基に相当する量を提供する錠剤の組成
ローラー圧縮法によりエチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩を１０ｍｇおよび３０ｍｇの錠剤に製剤化した。最初に活性成分、無水ラクトース、微結晶性セルロースおよびクロスカルメロースナトリウムをブレンドし、次いでこの混合物をステアリン酸マグネシウムの総量の３分の１で流動性をよくしてから、ローラー圧縮、続いて粉砕を行った。得られた顆粒をステアリン酸マグネシウムの残量で流動性をよくし、錠剤に圧縮した。
【００８６】
表４は、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩を含み、かつクエン酸塩が水性媒体中で解離すると、この化合物の１０ｍｇあるいは３０ｍｇの遊離塩基形を与える錠剤の組成を示す。
【００８７】
【表４】
0005620376.tif 000023
（実施例８）
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナート  （プロドラッグ）または親化合物をリンパ球へ投与した後の活性代謝物のリンパ球への負荷の比較。
【００８８】
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートはプロドラッグであり、人体内で加水分解され、以下「親化合物」という加水分解生成物を与える。親化合物は人体内でリン酸化され、逆転写酵素の活性を阻害する生物活性のあるリン酸化生成物（以下「活性代謝物」）を与える。
【００８９】
プロドラッグおよび親化合物の細胞内代謝の特徴付けを行うため、１μＭのプロドラッグあるいは１００μＭの親化合物のいずれかで２時間、６時間および２４時間リンパ球細胞を処理した。製造者の手順に従いＦｉｃｏｌｌ  Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）中で遠心分離により末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ：ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌ）をヒトバフィーコート（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｂａｎｋ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）から単離した。３〜４人の別々のドナーから単離したＰＢＭＣを、実験の開始前に２０％ウシ胎仔血清および抗生物質を含むＲＰＭ１−１６４０培地で維持するか（休止状態）、またはインターロイキン２（２０単位／ｍＬ、Ｒｏｃｈｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）およびフィトヘマグルチニンＰＨＡ−Ｐ（１μｇ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａ）の存在下で３〜４日間活性化した。
【００９０】
ヒト形質転換ＣＣＲＦ−ＣＥＭ  Ｔ細胞をアメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手し、１０％ＦＢＳおよび抗生物質を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地で培養した。細胞のアリコート（２〜３×１０６細胞）を各時点で採取し、カウントし、遠心分離によりペレット状にし、最初の処理培地０．５ｍＬに再懸濁し、０．５ｍＬのＮｙｏｓｉｌ  Ｍ２５油に積層した。このサンプルを微量遠心機にて２０秒間最高速度で遠心した（約８００×ｇ）。培地の最上層を除去し、油層を０．８ｍＬのリン酸塩緩衝生理食塩水で２回洗浄した。洗浄緩衝液および油層を慎重に取り除き、この細胞ペレットを０．５ｍＬの７０％メタノールに再懸濁し、一晩−７０℃でインキュベートして細胞溶解を促進した。細胞ライセートを遠心し、上清を集め、真空乾燥させ、内部標準として［５−（６−アミノ−プリン−９−イル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−イルオキシメチル］−ホスホン酸のジホスファート（活性代謝物の非フッ素化アナログ）を含む１０μＬのテトラブチル酢酸アンモニウムに再懸濁した。
【００９１】
一過性イオンペア高速液体クロマトグラフィー／陽イオンエレクトロスプレータンデム質量分析法（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）を使用して細胞内ヌクレオチドを定量した。その方法については、非環式ホスホナートヌクレオチドアナログであるアデホビル、そのリン酸化代謝物および天然ヌクレオチドに関して記載された方法を改変した（Ｖｅｌａ，Ｊ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ａｎａｌｏｇ  ａｄｅｆｏｖｉｒ，ｉｔｓ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ａｎａｂｏｌｉｔｅｓ  ａｎｄ  ２’−ｄｅｏｘｙａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｙ  ｉｏｎ−ｐａｉｒｉｎｇ  ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ｂ  Ａｎａｌ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．，ｖｏｌ．８４８，２００７，ｐｐ  ３３５−３４３）。未処理細胞からの抽出物を使用してすべての分析物について検量線および精度管理サンプルを作製した。７点検量線は全般的に０．０３〜２０ｐｍｏｌ／百万細胞の範囲であり、すべての分析物でｒ２が０．９９を超える直線性を示した。全分析物の定量下限は０．０５〜０．１ｐｍｏｌ／百万細胞の範囲であった。各分析ランの開始時および終了時に低濃度および高濃度の精度管理サンプル（典型的にはそれぞれ０．２および１０ｐｍｏｌ／百万細胞）を各分析物で実施して確度および精度が２０％以内であることを確認した。
【００９２】
リンパ球と親化合物とのインキュベーション後に観察される代謝物の非常に少ない細胞内蓄積の正確な分析を容易にするように親化合物をプロドラッグ（１μＭ）より１００倍高い濃度（１００μＭ）でインキュベートした。表５に示すように、プロドラッグはＣＥＭ−ＣＣＲＦ、休止ＰＢＭＣおよび活性化ＰＢＭＣとのインキュベーション後、親化合物と比較して活性代謝物のレベルがそれぞれ７６倍、２９０倍および１４０倍高かった。活性代謝物のレベルは、１μＭのプロドラッグまたは１００μＭの親化合物とのインキュベーション後の細胞外の濃度を基準に較正した。
【００９３】
【表５】
0005620376.tif 000024
（実施例９）
プロドラッグおよび親化合物の抗ＨＩＶ活性の比較。
「プロドラッグ」および「親化合物」という用語は実施例８に示す意味を持つ。
【００９４】
ＭＴ−２細胞を、抗生物質および１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ：ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地で維持した。ＭＴ−２細胞にＨＩＶ−１  ＩＩＩＢを感染多重度（ｍｏｉ：ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）０．０１で感染させ、被検化合物の希釈系列を含む９６ウェルプレートに２０，０００細胞／ウェルの密度で加えた。５日間のインキュベーション後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＧｌｏＴＭ細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して、ウイルスによる細胞変性効果を判定し、ウイルス複製が十分に抑制されたサンプルのシグナルから未処理対照のシグナルを差し引いた値に対する割合で表した。ウイルスに誘発される細胞変性効果を５０％阻害する各薬剤の濃度（ＥＣ５０）は非線形回帰により決定した。野生型の対照ウイルスと同時に、ＮＲＴＩ耐性変異体に対する活性も判定し、ＥＣ５０の倍率変化を算出した。
【００９５】
Ｆｉｃｏｌｌ  Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ中で遠心分離によりドナーバフィーコートからヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離し、２０％ＦＢＳ、抗生物質、インターロイキン−２（２０単位／ｍＬ）およびフィトヘマグルチニンＰＨＡ−Ｐ（１μ／ｍＬ）を含むＲＰＭＩ−１６４０培地で４〜５日間活性化した。活性化ＰＢＭＣにＨＩＶ−１  ＢａＬを３時間感染させ、洗浄し、９６ウェルプレート（２５０，０００細胞／ウェル）に播種し、希釈系列の被検化合物と５日間インキュベートし、この時点で細胞上清を集め、ウイルスの産生を、市販のＨＩＶ−１  ｐ２４  ＥＬＩＳＡ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｍｉａｍｉ，ＦＬ）により判定した。ｐ２４抗原の産生を５０％阻害する各薬剤の濃度（ＥＣ５０）は、回帰分析により決定した。
【００９６】
ＭＴ−２およびＨＩＶ−１を感染させ刺激したＰＢＭＣにおいてプロモエティの添加が抗ＨＩＶ活性に与える作用を評価した。表６に示すように、ＭＴ−２および活性化ＰＢＭＣにおいてプロドラッグは、親化合物よりそれぞれ７１倍、２，３００倍作用が強かった。
【００９７】
【表６】
0005620376.tif 000025
（実施例１０）
錠剤形態でビーグル犬に投与後の、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩の経口バイオアベイラビリティー
投与群は、実験に使ったことのある雄のビーグル犬３頭から構成された。用量の投与前一晩、および投与後最大４時間この動物を絶食させた。イヌには、プロドラッグのクエン酸塩４１．３８ｍｇを含む錠剤１錠（１錠当たり３０ｍｇのプロドラッグを含む）を投与した。錠剤の組成は、重量比でプロドラッグのクエン酸塩１３．７９％、無水ラクトース６６％、微結晶性セルロース１５．２１％、クロスカメロースナトリウム３．５％およびステアリン酸マグネシウム１．５％であった。血漿サンプルを、投与前（０時間）、および０．０８３時間、０．２５時間、０．５０時間、１．０時間、２．０時間、４．０時間、８．０時間、１２時間、２４時間に採取した。血液サンプルを、ＥＤＴＡ−Ｋ３を含むＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（商標）チューブに集めた。血液サンプルを４℃で遠心して血漿を分離した。最初に１００μｌの各血漿サンプルのアリコートを、２００ｎＭの内部標準を含む３００μｌの８０％アセトニトリル／水で希釈した。タンパク質沈殿物の遠心分離後、上清１００μｌを取り除き分析に使用した。プロドラッグを投与していない動物のイヌ血漿を用いて検量線および精度管理サンプルを作製した。サンプルは、ある程度性能が確認された、液体クロマトグラフィーと三連四重極質量分析法とを連結した方法より解析した。
【００９８】
錠剤としてプロドラッグのクエン酸塩を投与すると、プロドラッグおよびプロドラッグ由来の親化合物が急速に吸収された。表７にまとめたように、投与後に血漿がプロドラッグおよび親化合物に曝露されることが観察された。未変化のプロドラッグの経口バイオアベイラビリティーは１１．４％であった。こうした結果は、溶液製剤のプロドラッグの経口投与後に観察されるものと著しく異なるものではなく、プロドラッグおよびその代謝物を体循環に送達する、プロドラッグのクエン酸塩を含む錠剤の有効性を示すものである。
【００９９】
【表７】
0005620376.tif 000026
（実施例１１）
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩、マロン酸塩およびコハク酸塩の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）。
【０１００】
示差走査熱量測定は、温度および材料中の熱転移に伴う熱流量を正確に測定する。エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの本発明の塩のＤＳＣのトレースは、走査速度５℃  ｍｉｎ−１でＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｎｅｗ  Ｃａｓｔｌｅ，ＤＥ）ＤＳＣ  ２０１０を使用して作成した。図１は、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのマロン酸塩の特徴的なＤＳＣのトレースを示す。ＤＳＣサーモグラムから、マロン酸塩の融点（１２０．４３℃、ΔＨｆ＝７３．７２Ｊ／ｇ）に相当する単一の吸熱、それに続くマロン酸塩の分解に相当する単一の発熱が明らかになった。
【０１０１】
図２は、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのコハク酸塩の特徴的なＤＳＣのトレースを示す。ＧＳ−９１３１のコハク酸塩のＤＳＣサーモグラムから、融点（１３７．４４℃、ΔＨｆ＝６６．１８Ｊ／ｇ）に相当する単一の吸熱、それに続くこの塩の分解に相当する単一の発熱が明らかになった。
【０１０２】
図３は、エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩の特徴的なＤＳＣのトレースを示す。クエン酸塩のＤＳＣサーモグラムから、クエン酸塩の融点（１４９．４１℃、ΔＨｆ＝８５．７２Ｊ／ｇ）に相当する単一の吸熱、それに続く分解に相当する単一の発熱が明らかになった。
【０１０３】
クエン酸塩は、マロン酸塩およびコハク酸塩より融解熱が極めて大きく、固体の結晶化度の程度が高いことが示唆される。
【０１０４】
（実施例１２）
エチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートのクエン酸塩、マロン酸塩およびコハク酸塩のＸ線回折（ＸＲＤ：Ｘ−Ｒａｙ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ）解析。
【０１０５】
２つの方法を用いてエチルＮ−［（Ｓ）（｛［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２，５−ジヒドロフラン−２−イル］オキシ｝メチル）フェノキシホスフィノイル］−Ｌ−アラニナートの本発明の塩のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを作成した。最初の方法では、以下の特性を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ  ＸＲＤ６０００装置を使用した：Ｃｕ  Ｘ線管、２．２ＫＷ、ＮＦ（ノーマルフォーカス）；グラファイト湾曲モノクロメーター；垂直ゴニオメーター、半径１８５ｍｍ；発散スリット：０．５°、１．０°、０．０５ｍｍ；ソーラースリット：０．０５°、１°、２°；受光スリット：０．１５ｍｍ、０．３ｍｍ；シンチレーション検出器（ＮａＩ）ＨＶ５００−１２００。
【０１０６】
第２の方法では、以下の特性を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ  ＸＲＤ６０００装置を使用した：ＣｕターゲットＸ線管、３５ｋｖ、電流４０ｍａ；連続走査、モノクロメーター、発散スリット、１°；ソーラースリット  １°、受光スリット  ０．３ｍｍ。
【０１０７】
マロン酸塩およびコハク酸塩のＸＲＰＤデータは方法１により取得した。クエン酸塩のＸＲＰＤデータは方法２により取得した。
【０１０８】
当然のことながら、実験の偏差によりＸＲＰＤ吸収バンド（ピーク）の情報が若干変化する場合がある。このため、本特許で報告される、本発明の塩のＸＲＰＤパターンから得られた数字は、試験の反復時に得られる数字と同一か、あるいは本質的に同一となる。この文脈において「本質的に同一」とは、典型的なピーク位置および強度のばらつきが考慮されることを意味する（ばらつきは通常どのような分析手法でも考慮されると考えられるため）。たとえば、当業者であれば、ピーク位置が装置間である程度ばらつきを示すことを理解するであろう。たとえば、２θのピーク位置は典型的には０．１°もずれる。さらに、当業者であれば、相対ピーク強度も結晶化度の程度、好ましい配向、調製サンプルの表面および当該技術分野において公知の他の要因によってばらつきを示すことを理解するであろう。したがって、相対ピーク強度は定性的指標に過ぎないとみなすべきである。
【０１０９】
図４は、マロン酸塩の特徴的なＸＲＰＤパターンを示す。このマロン酸塩の結晶形を決める主要な特徴的ピークを表８Ａおよび８Ｂに示す。
【０１１０】
【表８Ａ】
0005620376.tif 000027
【０１１１】
【表８Ｂ】
0005620376.tif 000028
図５は、コハク酸塩の特徴的なＸＲＰＤパターンを示す。このコハク酸塩の結晶形を決める主要な特徴的ピークを表９Ａおよび９Ｂに示す。
【０１１２】
【表９Ａ】
0005620376.tif 000029
【０１１３】
【表９Ｂ】
0005620376.tif 000030
図６は、クエン酸塩の特徴的なＸＲＰＤパターンを示す。このクエン酸塩の結晶形を決める主要な特徴的ピークを表１０Ａおよび１０Ｂに示す。
【０１１４】
【表１０Ａ】
0005620376.tif 000031
【０１１５】
【表１０Ｂ】
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上記に引用した文献および特許はすべて、参照によってその引用箇所を本明細書に明示的に援用する。上記に引用した著作物で具体的に引用したセクションまたはページは、参照によって個々に援用する。本発明は、当業者が以下の特許請求の範囲の主題を製造および使用できるよう十分詳細に記載されており、以下の特許請求の範囲にある種の変形を施すことも可能であるが、そうした変形も依然として本発明の範囲および精神内にあるも意図している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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