(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
基質の低侵襲性検査および／またはマイクロ・サンプリング検査のための、少なくとも１つの金属ガイドから構成されるシステムを備えた分析デバイスであって、
前記金属ガイドは、穿孔するための先端部Ｅａと前記金属ガイドを操作することが意図された別の先端部Ｅｍとを有し、
前記先端部Ｅａは、その表面が、前記基質に特異な少なくとも１つの反応性基が直接結合される、少なくとも一連の凹所を前記表面内で画定するように構成され、
前記反応性基は、前記凹所内に配置されることを特徴とする、分析デバイス。
【請求項２】
前記先端部Ｅａのレベルで着脱可能な保護システムをさらに備える、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
前記着脱可能な保護システムが可撓性のカテーテルである、請求項２に記載のデバイス。
【請求項４】
前記少なくとも１つの金属ガイドが内部を摺動できる内側開口部を有する医療用具をさらに備える、請求項１乃至３のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項５】
前記医療用具が、経壁的吸引針、および／または脈管内のナビゲーション・システムを含む内視鏡からなる群から選択される、請求項４に記載のデバイス。
【請求項６】
前記経壁的吸引針が経皮的または経粘膜的吸引針である、請求項５に記載のデバイス。
【請求項７】
前記少なくとも１つの金属ガイドが直径が０．３から３．５ｍｍ、長さが５×１０−２から２ｍの、１つもしくは複数の可撓性の中実の金属バットおよび／または１つもしくは複数の中空の剛体金属バットからなる群から選択される、請求項１乃至６のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項８】
前記少なくとも１つの金属ガイドが、その長手方向の少なくとも一部分にある視覚表示システムと連動する、請求項１乃至７のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項９】
前記視覚表示システムが光ファイバーである、請求項８に記載のデバイス。
【請求項１０】
前記少なくとも１つの金属ガイドが、全体としてまたは部分的に、ステンレス鋼、チタン・ベース、ニッケル・ベース、コバルトベースの合金またはそれらの混合物からなる群から選択される合金から構成される、請求項１乃至９のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１１】
前記金属ガイドが、全体としてまたは部分的に、チタン・ニッケル合金から構成される、請求項１０に記載のデバイス。
【請求項１２】
前記少なくとも１つの金属ガイドが、前記先端部Ｅａを除いて、厚さが２×１０−３から１μｍの保護ポリマー層で被覆される、請求項１乃至１１のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの反応性基が、癌、炎症、感染、移植片拒絶反応または神経変性の病理の基質に特異または抗原に特異である、請求項１乃至１２のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１４】
基質に特異な前記少なくとも１つの反応性基が、フラグメントＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖから構成される群から選択される抗体または抗体フラグメントである、請求項１乃至１３のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１５】
請求項１乃至１４のいずれか一項に記載のデバイスを含む、癌、炎症、感染、移植片拒絶反応、またはアルツハイマー病、パーキンソン病もしくは筋萎縮性側索硬化症その他の神経変性の病理診断用ツール。
【請求項１６】
前記ツールが、内視鏡中に挿入された可撓性のカテーテル中に挿入された少なくとも１つの金属ガイドを備える、請求項１５に記載の病理診断用ツール。
【請求項１７】
前記ツールが、経壁的吸引針から構成され、可撓性のカテーテル中に挿入される少なくとも１つの金属ガイドを含む、請求項１５に記載の病理診断用ツール。
【請求項１８】
前記少なくとも１つの金属ガイドおよび可撓性のカテーテルが、機能化した前記金属ガイドの先端部Ｅａをミクロ分析および／またはマイクロ・サンプリング位置に接触して配置するように協働する、請求項１７に記載の病理診断用ツール。
【請求項１９】
経壁的ルートが、経粘膜的および経皮的なルートからなる群から選択される、請求項１６乃至１８のいずれか一項に記載の病理診断用ツール。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの金属ガイドが、その長手方向の少なくとも一部分にある光ファイバーと連動する、請求項１６乃至１９のいずれか一項に記載の病理診断用ツール。
【請求項２１】
組織または器官に存在する基質を生体外で検出する方法であって、
ａ）請求項１乃至１４のいずれか一項に記載のデバイスの機能化された先端部Ｅａを、その先端部Ｅａが検査する前記組織または器官と接触しているときに、前記基質に特異な少なくとも１つの検出剤を含む溶液で培養するステップと、
ｂ）前記基質を検出するステップと
を含むことを特徴とする、方法。
【請求項２２】
前記ステップａ）の前記少なくとも１つの検出剤が、前記基質に特異な、場合によってはマークした抗体である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ステップａ）の前記検出剤の特異な少なくとも１つの検出剤を含む溶液中の前記先端部Ｅａの培養のステップａ’）が、前記ステップａ）とｂ）の間にはさまれる、請求項２１または２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ステップａ’）の前記少なくとも１つの検出剤が、前記ステップａ）の前記検出剤に特異なマークした抗体である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
洗浄ステップが前記ステップａ）に続く、請求項２１または２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
洗浄ステップが、前記ステップａ）および／または前記ステップａ’）に続く、請求項２３または２４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経壁的検査デバイスの機能化、その機能化したデバイスを使用した基質の生体外分析の方法、および患者の癌、感染、炎症、神経変性疾患または移植片拒絶反応の診断のためのツールの製造のための上記デバイスの使用法に関する。
【背景技術】
【０００２】
検査または生体内治療デバイスは、現在の技術で知られている。こうしたデバイスは、内視鏡タイプの剛体チューブ、または可撓性のチューブから構成されたカテーテルの形状をしており、特に自然の経路または管によって生体に挿入され、器官または特定の組織に到達させることができる。これらのデバイスにより、特に血餅をなくすこと、または光ファイバーと連動するときは、消化管としての系の状態、もしくは結腸としての器官の状態の視覚化および生体内管理が可能になる。次に、こうしたデバイスの使用により生じる患者の外傷は、最小限に抑えられているが、今も改善されつつある段階である。しかし、これらのデバイスで患者の器官または組織を分析することが常に可能なわけではない。血液循環もしくは自然の経路と比較すると前記組織または器官にアクセスしにくいこと、または前記器官もしくは組織の細胞の細かい分析に頼ることなしでは信頼できる診断の実行が難しいことから、このように不可能になることがある。このような場合には、一般に、現在の技術で今までは、特に細針（ＦＮＡすなわち＜＜細針吸引（Ｆｉｎｅ  ｎｅｅｄｌｅ  ａｓｐｉｒａｔｉｏｎ）＞＞：Ｅｎｇｅｌｓｔｅｉｎら、Ｂｒ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．、７：２１０〜２１３頁、１９９４年；Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓら、Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、４２：７３５〜７４０頁、２０００年；Ａｒｉｇａら、Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．、１８４：４１０〜４１３頁、２００２年；Ｐｅｒｅｚ−Ｇｕｉｌｌｅｒｍｏら、Ｄｉａｇｎ．Ｃｙｔｏｐａｔｈｏｌ．、３２：３１５〜３２０頁、２００５年；Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｅｓｐａｒｒａｃｈら、Ａｒｃｈ．Ｂｒｏｎｃｏｎｅｏｍｏｌ．、４３：２１９〜２２４頁、２００７年）によって、これらの組織もしくは器官の、またはより細かくそれらを構成する細胞の１つの形態を生体外で管理するために、前記組織または器官のフラグメントのサンプリング（生検）が使用されている。さらに、特定の数のマーカーの発現状態を分析することも可能であり、それらのマーカーの発現は、特異な病理学的状態（特に癌、炎症、感染、神経変性疾患または移植片拒絶反応）と関係している。
【０００３】
しかし、これらの異なる方法は、生検のサンプリングまたは細胞の吸引によって外傷を伴い、これは、前記組織または器官に対して、したがって患者に対して重大な影響を与えることがある。それにより、患者の生体は、特に特定の器官（脳、膵臓、肝臓または肺）に関して、サンプリングに続く出血または瘢痕のせいで、非常に苦しめられることがある。
【０００４】
したがって、患者に与える外傷を限定しながら、特に、具体的には癌、炎症、感染または神経変性疾患など、異なる病理と連動するマーカーの発現と比較して、信頼できる正確な診断を実行できるようにする新しい検査の方法体系の特定が今なお必要とされている。
【０００５】
ＥＰ１３５８４８１の特許に、分析または生体内の治療のデバイスが記載されており、そのデバイスは、（ｉ）蛍光信号の分析以外のものによる基質の検査のマイクロ・システムと、（ｉｉ）一方の先端部に前記マイクロ・システムが固定され、もう一方の先端部は前記マイクロ・システムの制御が意図される、可撓性のバット（ｂｕｔｔ）と、（ｉｉｉ）前記可撓性のバットが内部を摺動できる内側開口部を有する医療用具と、（ｉｖ）基質のレベルで着脱可能な、マイクロ・システムの保護の摺動システムと、（ｖ）前記マイクロ・システムのレベルの組織または細胞の引裂きシステムであって、最終的に、生物学的または化学的製品の局注のために、治療のための生検を実行するように、感覚受容体（触覚、視覚、物理化学または数値情報科学）による遠隔制御によってモニタリングするデバイスから選択される１つまたは複数のデバイスと連動する、引裂きシステムとを備える。
【０００６】
血管の侵襲および組織または細胞の引裂きを可能にするために、マイクロ・システムは、好ましくは遠位位置で、この機能を保証する、より剛体の別のシステムと連動する。
【０００７】
しかし、生体内検査デバイスの場合は、その検査デバイスは、より多くの場合、脈管内のまたは腔内の経路を使用して目標の器官または組織に向けられる。次いで、マイクロ・システムを引裂きシステムに結合すると、記載したデバイスの先端部で直径が無視できない程度増大する。そのとき、そのデバイスは、血液循環経路を変えずに同時に目標位置に正確に向けるには、使用が複雑過ぎることが明らかである。同時に、複数の要素を結合すると、器官または組織を穿孔可能にするのに必要な剛性を得ることに関して、デバイスの全体的な可撓性、したがって正確な案内を行うことに支障をきたす。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許ＥＰ１３５８４８１
【特許文献２】国際特許出願ＷＯ０３／００６９４８
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｅｎｇｅｌｓｔｅｉｎら、Ｂｒ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．、７：２１０〜２１３頁、１９９４年
【非特許文献２】Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓら、Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、４２：７３５〜７４０頁、２０００年
【非特許文献３】Ａｒｉｇａら、Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．、１８４：４１０〜４１３頁、２００２年
【非特許文献４】Ｐｅｒｅｚ−Ｇｕｉｌｌｅｒｍｏら、Ｄｉａｇｎ．Ｃｙｔｏｐａｔｈｏｌ．、３２：３１５〜３２０頁、２００５年
【非特許文献５】Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｅｓｐａｒｒａｃｈら、Ａｒｃｈ．Ｂｒｏｎｃｏｎｅｏｍｏｌ．、４３：２１９〜２２４頁、２００７年
【非特許文献６】Ｘｉｅら、Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＆  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｈｙｓｉｃｓ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｂ−ｂｅａｍ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ａｎｄ  Ａｔｏｍｓ、２１１（３）：３６３〜３６８頁、２００３年
【非特許文献７】ＥＳＰＩＮＡら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、ｖｏｌ．２９０、１２１〜１３３頁、２００４年
【非特許文献８】ＷＩＴＴＳＴＯＣＫ  ａｎｄ  ＳＣＨＵＨＭＡＮＮ、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．、ｖｏｌ．６９、５０５９〜５０６６頁、１９９７年
【非特許文献９】ＤＵＰＯＮＴ−ＦＩＬＬＩＡＲＤら、Ａｎａｌ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．、ｖｏｌ．４４９、４５〜５０頁、２００１年
【非特許文献１０】Ｄｕｆｆｙ  Ｍ．Ｊ．、Ｓｈｅｒｉｎｇ  Ｓ．、Ｓｈｅｒｒｙ  Ｆ．、ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ  Ｅ．、Ｏ’Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｎ．、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｒｋｅｒｓ、２０００年１０月〜１２月；１５（４）：３３０〜３頁
【非特許文献１１】Ｋａｏｈｓｉｕｎｇ  Ｊ．、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．、１９９９年９月；１５（９）：５２０〜８頁
【非特許文献１２】Ｓｏｌｅｔｏｒｍｏｓ  Ｇ．、Ｎｉｅｌｓｅｎ  Ｄ．、Ｓｃｈｉｏｌｅｒ  Ｖ．、Ｍｏｕｒｉｄｓｅｎ  Ｈ．、Ｄｏｍｂｅｒｎｏｗｓｋｙ  Ｐ．、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、２００４年３月；４０（４）：４８１〜６頁
【非特許文献１３】Ｇｉｖｅｎ  Ｍ．、Ｓｃｏｔｔ  Ｍ．、Ｍｃ  Ｇｒａｔｈ  Ｊ．Ｐ．、Ｇｉｖｅｎ  Ｈ．Ｆ．、Ｂｒｅａｓｔ、２０００年１０月；９（５）：２７７〜８０頁
【非特許文献１４】Ｆｅｈｍ  Ｔ．、Ｊａｇｅｒ  Ｗ．、Ｋｒａｍｅｒ  Ｓ．、Ｓｏｈｎ  Ｃ．、Ｓｏｌｏｍａｙｅｒ  Ｅ．、Ｗａｌｌｗｉｅｎｅｒ  Ｄ．、Ｇｅｂａｕｅｒ  Ｇ．、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４年５月〜６月；２４（３ｂ）：１９８７〜９２頁
【非特許文献１５】Ｐｌａｔｅｔ  Ｎ．、Ｃａｔｈｉａｒｄ  Ａ．Ｍ．、Ｇｌｅｉｚｅｓ  Ｍ．、Ｇａｒｃｉａ  Ｍ．、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．、２００４年７月；５１（１）：５５〜６７頁
【非特許文献１６】Ｄｕｆｆｙ  Ｍ．Ｊ．、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、２００５年３月；５１（３）：４９４〜５０３頁．Ｅｐｕｂ２００５年１月６日
【非特許文献１７】Ｓｃｈｌｕｔｅｒ  Ｃ．、Ｄｕｃｈｒｏｗ  Ｍ．、Ｗｏｈｌｅｎｂｅｒｇ  Ｃ．、Ｂｅｃｋｅｒ  Ｍ．Ｈ．、Ｋｅｙ  Ｇ．、Ｆｌａｄ  Ｈ．Ｄ．、Ｇｅｒｄｅｓ  Ｊ．、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９３年１１月；１２３（３）：５１３〜２２頁
【非特許文献１８】Ｄｕｆｆｙ  Ｍ．Ｊ．、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．、２００１年６月；３８（３）：２２５〜６２頁
【非特許文献１９】Ｍｏｓｓ  Ｅ．Ｌ．、Ｈｏｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ  Ｊ．、Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  Ｔ．Ｍ．、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．、２００５年３月；５８（３）：３０８〜１２頁
【非特許文献２０】Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ  Ｐ．、Ｍａｔｅｏｓ  Ｓ．、Ｔｅｌｌｏ  Ｅ．、Ｌｏｐｅｚ−Ｂｕｅｎｏ  Ｍ．Ｊ．、Ｇａｒｒｉｄｏ  Ｎ．、Ｇａｓｐａｒ  Ｍ．Ｊ．、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｇｙｎ．Ｏｎｃｏｌ．、２００３年；２４（１）：６０〜２頁
【非特許文献２１】Ｇｒａｙ  Ｍ．Ａ．、Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．、２００５年；５１（３−４）：１２７〜３３頁
【非特許文献２２】Ｂｉｒｔｌｅ  Ａ．Ｊ．、Ｆｒｅｅｍａｎ  Ａ．、Ｍａｓｔｅｒｓ  Ｊ．Ｒ．、Ｐａｙｎｅ  Ｈ．Ａ．、Ｈａｒｌａｎｄ  Ｓ．Ｊ．、ＢＪＵ  Ｉｎｔ．、２００５年８月；９６（３）：３０３〜７頁
【非特許文献２３】Ｄｕｆｆｙ  Ｍ．Ｊ．、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、２００１年４月；４７（４）：６２４〜３０頁
【非特許文献２４】Ｄｕｆｆｙ  Ｍ．Ｊ．、ｖａｎ  Ｄａｌｅｎ  Ａ．、Ｈａｇｌｕｎｄ  Ｃ．、Ｈａｎｓｓｏｎ  Ｌ．、Ｋｌａｐｄｏｒ  Ｒ．、Ｌａｍｅｒｚ  Ｒ．、Ｎｉｌｓｓｏｎ  ０．、Ｓｔｕｒｇｅｏｎ  Ｃ．、Ｔｏｐｏｌｃａｎ  ０．、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、２００３年４月；３９（６）：７１８〜２７頁
【非特許文献２５】Ｃｏｂａｎ  Ｅ．、Ｓａｍｕｒ  Ｍ．、Ｂｏｚｃｕｋ  Ｈ．、Ｏｚｄｏｇａｎ  Ｍ．、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｒｋｅｒｓ、２００３年７月〜９月；１８（３）：１７７〜８１頁
【非特許文献２６】Ｃｈｕｎｇ  Ｍ．Ｈ．、Ｇｕｐｔａ  Ｒ．Ｋ．、Ｂｉｌｃｈｉｋ  ＡＪ、Ｙｅ  Ｗ、Ｙｅｅ  Ｒ．、Ｍｏｒｔｏｎ  Ｄ．Ｌ．、Ｃｕｒｒ．Ｓｕｒｇ．、２００２年３月〜４月；５９（２）：１９４〜１９８頁
【非特許文献２７】Ｌｏｕｈｉｍｏ  Ｊ．、Ａｌｆｔｈａｎ  Ｈ．、Ｓｔｅｎｍａｎ  Ｕ．Ｈ．、Ｈａｇｌｕｎｄ  Ｃ．、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、２００４年；６６（２）：１２６〜３１頁
【非特許文献２８】ＣＯＣＫＲＵＭら、Ｌａｂ  Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ、ＢＴｉ、２００５年１０月、１９〜２１頁
【非特許文献２９】ＲＯＵＳＳＯＵＬＩＥＲＥＳら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、ｖｏｌ．１１１（２０）、２６３６〜２６４４頁、２００５年
【非特許文献３０】Ｗａｌｄｅｍａｒ  Ｇ．、Ｄｕｂｏｉｓ  Ｂ．、Ｅｍｒｅ  Ｍ．ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．、２００７年、１４、１〜２６頁
【非特許文献３１】Ｄｕｂｏｉｓ  Ｂ．、Ｆｅｌｄｍａｎｎ  Ｈ．Ｈ．、Ｊａｃｏｖａ  Ｃ．、Ｄｅｋｏｓｋｙ  Ｓ．Ｔ．ら、Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ．２００７年、６、７３４〜７４６頁
【非特許文献３２】Ｋｒｏｌａｋ−Ｓａｌｍｏｎ  Ｐ．ら「Ｖｅｒｓ  ｕｎ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｑｕｅ  ｂｉｏｌｏｇｉｑｕｅ  ｄｅ  ｌａ  ｍａｌａｄｉｅ  ｄ’Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｅｔ  ｄｅｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ  ａｐｐａｒｅｎｔｅｓ」、Ｌａ  Ｒｅｖｕｅ  ｄｅ  ｍｅｄｅｃｉｎｅ  ｉｎｔｅｒｎｅ（２００８）、ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｊ．  ｒｅｖｍｅｄ．２００８．０１．０２９．
【非特許文献３３】Ｌｅｅ  Ｊ．Ｍ．ら、Ｃｌｉｎ．  Ｃｈｅｍ．、２００８年、５４、１６１７〜１６２３頁
【非特許文献３４】Ｍｏｌｌｅｎｈａｕｅｒ  Ｂ．、Ｃｕｌｌｅｎ  Ｖ．、Ｋｈａｎ  Ｉ．、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、２００８年、２１３、３１５〜３２５頁
【非特許文献３５】Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ＆  ｈｅａｌｔｈ／ｄｉｓｅａｓｅｓ、２００９年２月
【非特許文献３６】ＲＥＴＴＩＧら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、ｖｏｌ．８５、３１１０頁、１９８８年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
以下の重要な調査に続いて、発明者は現在、金属製ガイドを備えるデバイスを開発しようとしており、その金属製ガイドの一方の穿孔用先端部に、反応性基、特に、試験する基質の特異な抗体または抗体フラグメントが直接結合され、もう一方の先端部は、挿入位置から前記基質のミクロ分析および／またはマイクロ・サンプリングの位置への、前記ガイドの運転が意図される。前記ガイドを、着脱可能な保護システム、例えば、可撓性のカテーテル中に挿入することができ、そのとき、これらの組織、器官または細胞を構成する、試験する基質のミクロ分析および／またはマイクロ・サンプリングの位置に対して、前記ガイドの機能化された先端部を保護することが可能になる。
【００１１】
本発明は、ガイド上にいくつかのスポット、例えば凹所を画定するように、ガイドの表面を構成することであり、それらの凹所に、反応性基が配置されて生化学的作用が起きる。電気化学的侵食およびレーザーが続くレーザー・リソグラフィによる、集束イオン・ビーム（ＦＩＢすなわち＜＜Ｆｏｃｕｓｅｄ  Ｉｏｎ  ｂｅａｍ＞＞：Ｘｉｅら、Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＆  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｈｙｓｉｃｓ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｂ−ｂｅａｍ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ａｎｄ  Ａｔｏｍｓ、２１１（３）：３６３〜３６８頁、２００３年）によるリソグラフィなど、異なる方法によって前記凹所を実現することができる。
【００１２】
あるいは、前記ガイド上にいくつかのスポット、例えば少なくとも１つの溝を画定するように、金属製ガイドを構成することができ、それらの溝には、線形、円形、またはリボンの形態の、少なくとも１つの小型化したバイオチップが共同で連動し、そこに反応性基が配置されて生化学的反応が起きる。ガイドの表面構成によって形成されるスポット、例えば凹所は、ガイドの表面に起伏を形成しないが、溝または空所を形成する。したがって、ガイドの表面の構成によって形成されたスポットは、ガイドの直径を増大させることはない。
【００１３】
有利なことに、ガイドの表面構成によって形成されたスポットは、ガイドの表面に位置し、これは、これらのスポットが流体、組織および細胞と直接接触することを意味する。
【００１４】
さらに、前記デバイスを、前記金属製ガイドが内部を摺動できる内側開口部を有する医療用具中に、特に、経壁的な針穿刺、特に経皮的または経粘膜的な針穿刺、または脈管系のナビゲーションを含む内視鏡で挿入することができる。
【００１５】
さらに、前記デバイスは、光ファイバーと連動することができるか、または前記デバイスの金属製ガイドの代わりに光ファイバーを使用することができる。その光ファイバーの穿孔用先端部が金属製リングと連動し、そのリングに反応性基、特に試験する基質に特異な抗体または抗体フラグメントが直接結合され、したがって、診断に必要な、最終的には予後の評価に必要な要素の生体内の捕捉を考慮して、細かいインサイチュの視覚化が可能になる。光ファイバーの特性は、画像をマークし、インサイチュの視覚化からデバイスを設定するために使用される。
【００１６】
本発明によるデバイスは、その単純化の故に、低侵襲性のままでありながら、可撓性または弾性が従来技術のデバイスと比較して改善される。そのため、腔内の経路、特に脈管内の経路による、または経壁的経路、特に経皮的または経粘膜的な経路による検査のために、デバイスをさらに効率的に使用することができる。さらに、本発明によるデバイスは、先端部が特異な試薬に結合した金属製ガイドを使用するので、機能化した先端部において、組織または器官を効率的に穿孔するのに十分な剛体である。最後に、本発明によるデバイスの先端部での直径は、血液循環または自然の空所中での単純化したナビゲーションを可能にし、具体的には、デバイスが穿孔しなければならない組織または器官のレベルで、外傷を最小限に抑えるのに十分に微弱なものである。
【００１７】
したがって、さらに、デバイスを引き抜いた後で、免疫酵素の定量として標準的な方法によって、または例えば中実のサポート［ＥＬＩＳＡ技術、タンパク質チップ（ＥＳＰＩＮＡら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、ｖｏｌ．２９０、１２１〜１３３頁、２００４年）］上の免疫螢光法によって、本発明によるデバイスの先端部で、したがってミクロ分析および／またはマイクロ・サンプリング位置（器官または組織）のレベルで、（１つまたは複数の）前記特異な基質の存在および相対濃度を、生体外で特定することが可能である。
【００１８】
最後に、金属製ガイドの性質によって、そのデバイスは画像信号（動脈撮影、超音波検査、スキャン、ＭＲＩなど）が改良されている。この特性により、目標組織または器官への介入の時に、本発明によるデバイスの無線誘導を大幅に単純化することができる。細かいインサイチュの視覚化を可能にする画像をマークするために、前記デバイスを光ファイバーと結合することについても同様である。
【００１９】
したがって、本発明の第１の目的は、前記基質の検査および／またはマイクロ・サンプリングの低侵襲性のシステムを備えることを特徴とする、基質の分析のためのデバイスであり、前記システムは、少なくとも１つの金属製ガイドから構成され、その金属製ガイドの先端部Ｅａには、少なくとも一連の凹所が設けられ、それらの凹所には、前記基質の特異な少なくとも１つの反応性基が直接結合され、前記機能化した先端部Ｅａは、穿孔し、もう一方の先端部Ｅｍは、前記金属製ガイドを運転し、最終的に吸引システムと連動することが意図される。
【００２０】
有利なことに、先端部Ｅａの表面を、少なくとも一連の凹所を画定するように構成することができ、それらの凹所に、前記基質の特異な少なくとも１つの反応性基が直接結合され、前記先端部Ｅａが穿孔する。
【００２１】
患者に生じる外傷が弱いので、本発明によるデバイスにより、いくつかのマイクロ分析またはマイクロ・サンプリング（例えば、前立腺内のステージで実行される分析および／またはサンプリング）を規則的な間隔で患者に実行することが可能になる。したがって、診断に加えて、前記分析および／または連続するサンプリングによって、患者の癌、炎症、感染、神経変性疾患、または器官の良好なグラフトの保持の進展をフォローすることが可能になる。
【００２２】
有利には、機能化した先端部Ｅａは、長さ約０．５から２ｃｍであり、少なくとも一連の１から２５個の凹所、好ましくは２×２５の凹所を有し、平均直径が約３０から８０μｍ、好ましくは約４０から６０μｍであり、非常に好ましい直径が約５０μｍであり、深さが約２０から３０μｍ、好ましくは２５μｍであってよく、前記凹所は、互いに約６０から１２０μｍ離間している。好ましくは、それらの凹所は壁が滑らかであるかまたは粗く、形状が卵形または円形であり、底部が平坦なまたはくぼんでいる。
【００２３】
有利には、機能化した先端部は、できるだけ上昇した、いくつかの凹所を呈することができる。それらのいくつかの凹所は、金属製ガイドが組織または器官を穿孔するのに十分剛体であるようなものである。この実施形態では、機能化した先端部の平均直径は、約０．３から３．５ｍｍ、好ましくは約０．３５ｍｍでよい。有利には、金属製ガイドは、凹所を形成するために、長さ０．５から２ｃｍ、好ましくは１ｃｍに構成することができる。有利には、凹所の直径は、約３０から８０μｍ、好ましくは約３０から６０μｍ、例えば３５μｍでよい。有利には、凹所の深さは、約２０から３０μｍ、好ましくは約２５μｍでよい。凹所の間隔は、２０から１２０μｍ、好ましくは２５μｍでよい。
【００２４】
有利には、機能化した端部Ｅａは、円筒形、平面、またはらせんの形態、または流体、組織および細胞と接触する凹所の表面積を増大するように修正した形態でよい。
【００２５】
本発明によるデバイスの特定の実施形態によれば、前記デバイスはさらに、機能化した先端部Ｅａにおいて着脱可能な保護システムを備える。
【００２６】
本発明によるデバイスの特定の実施形態によれば、前記デバイスはさらに、前記少なくとも１つの金属製ガイドが内部を摺動できる内側開口部を有する医療用具を備える。
【００２７】
ここに「金属製ガイド」とは、例えば、直径０．２から３．５ｍｍ、長さ５×１０−２から２ｍの、中実で柔軟な金属製バットまたは中空の剛体金属製バットを意味し、その金属製バットは、血管、小型の空所中に、または器官もしくは組織を通して挿入することができ、それにより、挿入位置からインサイチュのミクロ分析、および／または、マイクロ・サンプリングの位置に向けることが可能になる。
【００２８】
具体的には、中実で可撓性の金属製バットを光ファイバーから構成することができ、その光ファイバーの先端部Ｅａに、少なくとも一連の凹所を備える金属製リングが連動し、その金属製リングに、前記基質の特異な少なくとも１つの反応性基が直接結合され、前記機能化した先端部Ｅａが穿孔する。
【００２９】
有利には、前記金属製リングは、幅約０．５から２ｃｍであり、少なくとも一連の１から２５箇所の凹所、好ましくは２×２５箇所の凹所を呈することができる。それらの凹所は、平均直径約３０から８０μｍ、好ましくは約３０または４０から６０μｍ、さらに好ましくは約５０μｍまたは３５μｍ、深さ約２０から３０μｍ、好ましくは２５μｍであり、前記凹所は、約２０から１２０μｍ、例えば約６０から１２０μｍ互いに離間している。好ましくは、それらの凹所は壁が滑らかであるかまたは粗く、形状が卵形または円形であり、底部が平坦なまたはくぼんでいる。
【００３０】
「金属製ガイド」は、さらに、全てまたは一部が合金から構成された、中実または中空の、剛体または可撓性のバットを意味し、その合金の可撓性、剛性、酸化および免疫原性の特性は、生物、具体的には動物、さらに具体的にはヒトにおけるこうした使用に関して安定性がある。こうした生体適合性の合金は、一般的な知識によって当業者が容易に識別でき、それらには、とりわけ酸化されない鋼、チタン・ベースの合金、ニッケル、コバルト、またはそれらの混合物が含まれる。
【００３１】
本発明者は、チタン・ニッケル合金ベースのガイド（ニチノール合金）が、脈管内または腔内の経路で効率的に使用でき、また、外傷を最小限に抑えながら組織または器官を効率的に穿孔する先端部における全体的な可撓性および剛性の点で、何らかの特に興味深い特性を呈することを示そうとしている（前記組織または器官のレベルでの穿孔のサイズは、例えば０．０５から０．５ｍｍ２程度、好ましくは０．０７ｍｍ２程度である）。
【００３２】
有利には、金属製ガイドは、チタンおよびニッケル合金ベース、好ましくはニチノール・ベースのガイド（Ｅｕｒｏｆｌｅｘ協会によって販売されている金属製ガイド）である。
【００３３】
機能化した先端部Ｅａを除いて、前記金属製ガイドを、深さ約０．１から５１μｍの、親水性ポリマー、好ましくは、ヒドロゲルで、または多孔質の保護ポリマー層で被覆することができる。有利には、保護ポリマーは、フィルム状のパリレン、ＴｉＯ２、またはＯｐｔｏＤｅｘ（登録商標）（Ａｒｒａｙｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、より好ましくはフィルム状のパリレンから構成される。
【００３４】
金属製ガイドが内部に挿入される着脱可能な保護システムは、複数の形態、とりわけ単純に当業者によって決定することができる可撓性のカテーテルの形態、例えば脈管内、腔内、経壁的、とりわけ経皮的な経路のために使用可能な形態をとることができる。
【００３５】
前記着脱可能な保護システムを、とりわけ、心臓、脳、肺、膵臓、腎臓および肝臓の管に到達するように、脈管内の経路によって挿入することができる。
【００３６】
腔内のアクセス、とりわけ内視鏡によって、経粘膜的経路による口腔、肛門、尿生殖器および呼吸器の経路、またはＥＮＴによって、あるいは、経皮的経路による皮膚のレベルでの穿刺によって、前記着脱可能な保護システムを挿入して、例えば乳腺、とりわけ腎臓に、関節中、脊柱管中、肝臓、肺または腎臓には腰椎穿刺または経壁的に、さらに、とりわけ消化管に対しては経粘膜的な経路によって到達させることができる。
【００３７】
そのため、本発明者は、本発明によるデバイスが、脈管内、腔内または経壁的経路によって、とりわけ通常使用される経粘膜的または経皮的に、通常到達が難しい組織または器官に到達可能であることを証明している。
【００３８】
より一般的には、本発明者は、先端部が概して可撓性かつ剛性という特有の特徴により、本発明によるデバイスが、経壁的（経皮的、経粘膜的）、脈管内のまたは腔内の経路によって、（肝臓および膵臓を含む）口腔咽頭から直腸までの消化器系、（膀胱、腎臓、前立腺、精巣、卵巣および乳腺を含む）泌尿生殖器系、（肺を含む）気管気管支系、（耳および上咽頭を含む）ＥＮＴ系、（滑液腔を含む）骨関節、内分泌系、脳神経系または外皮系の一部である何らかの器官および組織に到達およびそれを穿孔可能であり、次いで、それにより、必要な病理学上の診断の実現が可能であり、その後、（ＦＮＡとも称される）細針吸引による細胞のサンプリングを含む生検、のみならず、経肝的生検のような深い積極的な穿刺の実現が可能であることを証明している。
【００３９】
有利には、金属ガイドが内部に挿入される前記着脱可能な保護システムは、脈管内または腔内の送達のために適合化された可撓性のカテーテルの形態のものである。
【００４０】
そのため、本発明によるデバイスは、具体的には、例えば、動脈および静脈、心血管、前立腺、乳腺、膵臓、腎臓、心筋、中枢神経系ならびにそれらの空所または導管、脳または肝臓において検査を実行し得るように形成される。
【００４１】
本発明によるデバイスの第１の特定の実施形態によれば、金属ガイドが内部に挿入される着脱可能な保護システムは、それ自体が内視鏡に挿入される。そのため、本発明によるデバイスは、具体的には、腔内の送達のために適合化される。
【００４２】
そのため、本発明によるデバイスは、具体的には、例えば、気管気管支系（とりわけ、肺）、（肝臓および膵臓を含む）咽頭から直腸までの消化器系、泌尿生殖系（とりわけ、膀胱、腎臓、前立腺、精巣、卵巣および乳腺）、眼系（涙管）、耳鼻咽喉系（とりわけ、耳および鼻咽腔）、骨関節系または中枢神経系の、より具体的には脊柱内の送達による検査、または乳管内の送達によって乳腺の検査を実行し得るように形成される。
【００４３】
本発明によるデバイスの第２の特定の実施形態によれば、経壁的吸引細針、より具体的には、経皮的または経粘膜的吸引針から構成される金属ガイドを、着脱可能な保護システム、例えば、可撓性のカテーテル中に挿入することができる。そのため、本発明によるデバイスは、具体的には、特定の経皮的または経粘膜的な送達のために適合化される。
【００４４】
そのため、本発明によるデバイスは、具体的には、例えば、外皮（皮膚、頭皮など）、乳房、腎臓、肺、肝臓、筋肉、骨筋肉または骨関節系、中枢もしくは末梢神経系または内分泌腺（より具体的には、甲状腺、副甲状腺、副腎、精巣、乳腺または卵巣）に関して検査を実行し得るように形成される。
【００４５】
本発明によるデバイスの機能化した先端部Ｅａに関しては、少なくとも一連の凹所を備え、それらの凹所に、試験する基質に特異な反応性基が直接結合される。
【００４６】
ここに「特異な反応性基」とは、例えば、検出する核酸配列に相補的な核酸配列［ＤＮＡ（アンプリコン、遺伝子のフラグメント、ＥＳＴ、ＳＮＰ）またはＮＲＡ］、および検出する抗体に特異な抗原、または検出する抗原に特異な抗体もしくは抗体フラグメント、好ましくは抗体または抗体フラグメントを意味する。
【００４７】
有利なことに、前記特異な反応性基は、増大または縮小する範囲に従って本発明によるデバイスの機能化した先端部の微小な凹所に配置される。当業者は、一般的な知識およびルーチンの実験を使用して、基質に関する反応性基の親和性に応じて前記範囲を容易に判断することができる。例えば、反応性基の範囲は、試薬、より具体的には、基質に対する親和性を有する抗体、より具体的には１０−９程度の抗原に関して、５０から５００μｇ／ｍｌ、好ましくは１０から１００μｇ／ｍｌ程度のものである。
【００４８】
「抗体」は、好ましくは、生体、哺乳動物、より具体的にはヒトの免疫グロブリン、より好ましくはＩｇＧを意味する。
【００４９】
「抗体フラグメント」は、抗原の特異な固定を維持できる抗体フラグメントを意味する。フラグメントＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２またはＦｖを、こうした抗体フラグメントの例として挙げることができる。
【００５０】
試薬、より具体的にはタンパク質を金属サポート上に一旦結合する方法は、当業者によく知られている。アミノ酸の化学反応性が低いので、こうした方法は、通常、酸化の仕組みによって、またはリンク分子、最も多くの場合ポリマーの少なくとも１つの層で金属サポートを被覆することによる金属表面の活性化を必要とする（ポリマーは、例えばチオール基、カルボン酸、および／またはアミンを有することができる）。こうした方法の例として、自己組織化単分子膜（ＳＡＭ、ｓｅｌｆ−ａｓｓｅｍｂｌｅｄ  ｍｏｎｏｌａｙｅｒ）、より具体的にはアルカンチオール（ＷＩＴＴＳＴＯＣＫ  ａｎｄ  ＳＣＨＵＨＭＡＮＮ、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．、ｖｏｌ．６９、５０５９〜５０６６頁、１９９７年；および国際特許出願ＷＯ０３／００６９４８参照）またはピロール（ビオチン化ピロールの電気化学的重合；ＤＵＰＯＮＴ−ＦＩＬＬＩＡＲＤら、Ａｎａｌ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．、ｖｏｌ．４４９、４５〜５０頁、２００１年）中に組織化された機能分子の金属サポート上への吸着を挙げることができる。
【００５１】
抗体または抗体フラグメントをこの機能分子の層に結合することは、（アルカンチオールの遊離チオール基の間のジスルフィド架橋のような）共有結合、または（ピロール／ビオチン複合体のポリマー層のビオチンと、ストレプタビジン／抗体複合体または抗体／ストレプタビジン・フラグメントのストレプタビジンとの間のストレプタビジン−ビオチン結合のような）非共有結合を意味する。
【００５２】
第１の好ましい実施形態によれば、本発明によるデバイスは、少なくとも金属ガイドを含み、その金属ガイドのＥａ先端部が、少なくとも１つの反応性基、好ましくは、癌、より具体的には乳癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸癌、腹腔内癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、膵臓癌、中枢もしくは末梢神経系または内分泌腺（より具体的には、甲状腺、精巣または卵巣）の癌のマーカー（抗原）に特異な抗体または抗体フラグメントに結合される。
【００５３】
乳癌のマーカーの例としては、マーカーＣＡ１５−３（癌関連抗原（Ｃａｒｃｉｎｏｍａ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ａｎｔｉｇｅｎ）１５−３；Ｄｕｆｆｙ  Ｍ．Ｊ．、Ｓｈｅｒｉｎｇ  Ｓ．、Ｓｈｅｒｒｙ  Ｆ．、ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ  Ｅ．、Ｏ’Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｎ．、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｒｋｅｒｓ、２０００年１０月〜１２月；１５（４）：３３０〜３頁）、ＣＡ２７−２９（癌関連抗原（Ｃａｒｃｉｎｏｍａ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ａｎｔｉｇｅｎ）２７−２９；Ｋａｏｈｓｉｕｎｇ  Ｊ．、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．、１９９９年９月；１５（９）：５２０〜８頁）、ＣＥＡ（癌胎児抗原（Ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ）；Ｓｏｌｅｔｏｒｍｏｓ  Ｇ．、Ｎｉｅｌｓｅｎ  Ｄ．、Ｓｃｈｉｏｌｅｒ  Ｖ．、Ｍｏｕｒｉｄｓｅｎ  Ｈ．、Ｄｏｍｂｅｒｎｏｗｓｋｙ  Ｐ．、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、２００４年３月；４０（４）：４８１〜６頁）、ＴＰＡ（組織ポリペプチド抗原（Ｔｉｓｓｕｅ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ））、ＴＰＳ（組織ポリペプチド特異抗原（Ｔｉｓｓｕｅ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ）；Ｇｉｖｅｎ  Ｍ．、Ｓｃｏｔｔ  Ｍ．、Ｍｃ  Ｇｒａｔｈ  Ｊ．Ｐ．、Ｇｉｖｅｎ  Ｈ．Ｆ．、Ｂｒｅａｓｔ、２０００年１０月；９（５）：２７７〜８０頁）、ＨＥＲ２（Ｆｅｈｍ  Ｔ．、Ｊａｇｅｒ  Ｗ．、Ｋｒａｍｅｒ  Ｓ．、Ｓｏｈｎ  Ｃ．、Ｓｏｌｏｍａｙｅｒ  Ｅ．、Ｗａｌｌｗｉｅｎｅｒ  Ｄ．、Ｇｅｂａｕｅｒ  Ｇ．、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４年５月〜６月；２４（３ｂ）：１９８７〜９２頁）、ＥＲ（エストロゲン受容体（Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）；Ｐｌａｔｅｔ  Ｎ．、Ｃａｔｈｉａｒｄ  Ａ．Ｍ．、Ｇｌｅｉｚｅｓ  Ｍ．、Ｇａｒｃｉａ  Ｍ．、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．、２００４年７月；５１（１）：５５〜６７頁）、ＰＲ（プロゲステロン受容体（Ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）；Ｄｕｆｆｙ  Ｍ．Ｊ．、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、２００５年３月；５１（３）：４９４〜５０３頁．Ｅｐｕｂ２００５年１月６日）、Ｋｉ−６７（抗体Ｋｉ−６７の細胞増殖関連抗原（ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｋｉ−６７）；Ｓｃｈｌｕｔｅｒ  Ｃ．、Ｄｕｃｈｒｏｗ  Ｍ．、Ｗｏｈｌｅｎｂｅｒｇ  Ｃ．、Ｂｅｃｋｅｒ  Ｍ．Ｈ．、Ｋｅｙ  Ｇ．、Ｆｌａｄ  Ｈ．Ｄ．、Ｇｅｒｄｅｓ  Ｊ．、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９３年１１月；１２３（３）：５１３〜２２頁）、およびＵＰＡ（ウロキナーゼプラスミノゲン活性化因子（Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ  Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  Ａｃｔｉｖａｔｏｒ）；Ｄｕｆｆｙ  Ｍ．Ｊ．、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．、２００１年６月；３８（３）：２２５〜６２頁）を挙げることができる。
【００５４】
卵巣癌のマーカーの例としては、マーカーＣＡ１２５（癌抗原  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ａｎｔｉｇｅｎ  １２５）；Ｍｏｓｓ  Ｅ．Ｌ．、Ｈｏｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ  Ｊ．、Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  Ｔ．Ｍ．、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．、２００５年３月；５８（３）：３０８〜１２頁）、ＣＡ１５−３、およびＣＥＡ（Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ  Ｐ．、Ｍａｔｅｏｓ  Ｓ．、Ｔｅｌｌｏ  Ｅ．、Ｌｏｐｅｚ−Ｂｕｅｎｏ  Ｍ．Ｊ．、Ｇａｒｒｉｄｏ  Ｎ．、Ｇａｓｐａｒ  Ｍ．Ｊ．、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｇｙｎ．Ｏｎｃｏｌ．、２００３年；２４（１）：６０〜２頁）を挙げることができる。
【００５５】
前立腺癌のマーカーの例としては、マーカーＰＳＡ（前立腺特異抗原（Ｐｒｏｓｔａｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ）；Ｇｒａｙ  Ｍ．Ａ．、Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．、２００５年；５１（３−４）：１２７〜３３頁）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原（Ｐｒｏｓｔａｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ））、およびＡＲ（アンドロゲン受容体（Ａｎｄｒｏｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）；Ｂｉｒｔｌｅ  Ａ．Ｊ．、Ｆｒｅｅｍａｎ  Ａ．、Ｍａｓｔｅｒｓ  Ｊ．Ｒ．、Ｐａｙｎｅ  Ｈ．Ａ．、Ｈａｒｌａｎｄ  Ｓ．Ｊ．、ＢＪＵ  Ｉｎｔ．、２００５年８月；９６（３）：３０３〜７頁）を挙げることができる。
【００５６】
結腸癌のマーカーの例としては、マーカーＣＥＡ（Ｄｕｆｆｙ  Ｍ．Ｊ．、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、２００１年４月；４７（４）：６２４〜３０頁）、ＣＡ１９−９（癌抗原１９−９）、ＣＡ２４２（癌抗原２４２）、ＣＡ７２−４（癌抗原７２−４）、ＴＰＡ、ＴＰＳ（Ｄｕｆｆｙ  Ｍ．Ｊ．、ｖａｎ  Ｄａｌｅｎ  Ａ．、Ｈａｇｌｕｎｄ  Ｃ．、Ｈａｎｓｓｏｎ  Ｌ．、Ｋｌａｐｄｏｒ  Ｒ．、Ｌａｍｅｒｚ  Ｒ．、Ｎｉｌｓｓｏｎ  ０．、Ｓｔｕｒｇｅｏｎ  Ｃ．、Ｔｏｐｏｌｃａｎ  ０．、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、２００３年４月；３９（６）：７１８〜２７頁）を挙げることができる。
【００５７】
腹腔内癌のマーカーの例としては、マーカーＣＥＡまたはＣＡ１９−９（Ｃｏｂａｎ  Ｅ．、Ｓａｍｕｒ  Ｍ．、Ｂｏｚｃｕｋ  Ｈ．、Ｏｚｄｏｇａｎ  Ｍ．、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｒｋｅｒｓ、２００３年７月〜９月；１８（３）：１７７〜８１頁）を挙げることができる。
【００５８】
膵臓癌のマーカーの例としては、マーカーＴＡ９０−ＩＣ（９０−ｋＤａ免疫原性腫瘍関連抗原（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ  Ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ａｎｔｉｇｅｎ））、ＣＡ−１９−９（Ｃｈｕｎｇ  Ｍ．Ｈ．、Ｇｕｐｔａ  Ｒ．Ｋ．、Ｂｉｌｃｈｉｋ  ＡＪ、Ｙｅ  Ｗ、Ｙｅｅ  Ｒ．、Ｍｏｒｔｏｎ  Ｄ．Ｌ．、Ｃｕｒｒ．Ｓｕｒｇ．、２００２年３月〜４月；５９（２）：１９４〜１９８頁）、ＴＰＳ、ＨＣＧベータ（ＨＣＧベータ、ヒト絨毛膜性生殖腺刺激ホルモン・ベータ（Ｈｕｍａｎ  Ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ  Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ  ｂｅｔａ））、ＣＡ７２−４、ＣＥＡ、ＣＡ１９−９、ＣＡ２４２（Ｌｏｕｈｉｍｏ  Ｊ．、Ａｌｆｔｈａｎ  Ｈ．、Ｓｔｅｎｍａｎ  Ｕ．Ｈ．、Ｈａｇｌｕｎｄ  Ｃ．、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、２００４年；６６（２）：１２６〜３１頁）を挙げることができる。
【００５９】
肝臓癌のマーカーの例としては、アルファフェト・プロテイン・マーカーを挙げることができる。
【００６０】
肺癌のマーカーとしては、マーカーＣｙｆｒａＡ４１（サイトケラチン・フラグメント４１（Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ４１））、ＳＣＣ（扁平上皮癌抗原（Ｓｑｕａｍｏｕｓ  Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ａｎｔｉｇｅｎ））、ＡＣＥ（アンギオテンシン変換酵素（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ  Ｅｎｚｙｍｅ））、ＣＡ１９−９、ＣＡ１２５、ＮＳＥ（ニューロン特異性エノラーゼ（Ｎｅｕｒｏｎ  Ｓｐａｃｉｆｉｃ  Ｅｎｏｌａｓｅ））、クロモグラニンＡ、ＣＹＦＲＡ２１−１（サイトケラチン・フラグメント２１−１）、ＣＡ１５−３を挙げることができる。
【００６１】
第２の好ましい実施形態によれば、本発明によるデバイスは、少なくとも１つの金属ガイドを含み、その金属ガイドのＥａ先端部が、少なくとも１つの試薬、好ましくは、炎症、より具体的には関節リウマチの特異のマーカーに特異の抗体または抗体フラグメントに結合される。
【００６２】
関節リウマチのマーカーの例として、より具体的には、ＩＬ−１β、ＩＬ−ｉＲα、ＩＬ−２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ１０、ＩＬ１２ｐ４０Ｐ７０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ｌｅ  ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＩＦＮγ、ｌｅ  ＧＭ−ＣＳＦ、ｌｅ  ＭＩＰ−１、ＩＰ−１０、ＭＩＧ、Ｅｏｔａｘｉｎｅ、ＲＡＮＴＥＳおよびＭＣＰ−１（ＣＯＣＫＲＵＭら、Ｌａｂ  Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ、ＢＴｉ、２００５年１０月、１９〜２１頁）を挙げることができる。
【００６３】
第３の好ましい実施形態によれば、本発明によるデバイスは、少なくとも１つの金属ガイドを備え、その金属ガイドのＥａ先端部が、少なくとも１つの試薬、好ましくは感染、より具体的には、ウイルス、細菌、または寄生虫感染の特異なマーカーに特異な、好ましくは抗体または抗体フラグメントに結合される。
【００６４】
多くの感染マーカーが当業者に知られており、これにより、所与の感染と関連する１つまたは複数の特異なマーカーを非常に簡単に特定することができる。
【００６５】
第４の好ましい実施形態によれば、本発明によるデバイスは、少なくとも１つの金属ガイドを含み、それらの金属ガイドのＥａ先端部が、少なくとも試薬、好ましくは、移植片拒絶反応の特異なマーカーに特異な抗体または抗体フラグメントに結合される。
【００６６】
移植片拒絶反応の多数のマーカーが当業者に知られている。その例として、心臓移植の場合のＭＩＰ−１βおよびＶＥ−カドヘリン（ＲＯＵＳＳＯＵＬＩＥＲＥＳら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、ｖｏｌ．１１１（２０）、２６３６〜２６４４頁、２００５年）を挙げることができる。
【００６７】
上述した特異なマーカーに関しては、当業者は、一般的な知識を以て、過度な実験なしに、本発明によるデバイスで使用できる抗体または特異な抗体フラグメントを簡単に特定することができる。こうした抗体の例としては、ＴＥＢＵまたはＡＸＸＯＲＡで入手可能な抗体を挙げることができる。当業者はまた、よく知られた免疫処置方法を使用してこうした抗体を得ることもできる。
【００６８】
同様に、当業者は、本発明によるデバイスで使用できる、適応可能な特異な核酸を特定することができる。
【００６９】
第５の好ましい実施形態によれば、本発明によるデバイスは、少なくとも１つの金属ガイドを含み、その金属ガイドのＥａ先端部が、網羅的なリストではないが、例えば、アルツハイマー病（ＭＡ）、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＳＬＡ）などの神経変性の病理の特異なマーカーまたは１組の特異なマーカーに特異な、少なくとも１つの試薬、好ましくは抗体または抗体フラグメントに結合される。
【００７０】
いくつかのマーカーが知られており、こうした病理の研究のために当業者によって使用されている。その例として、心神喪失または心神喪失前の条件に関しては、総タンパク質Ｔａｕ（ＭＡＰＴ微小管結合タンパク質Ｔａｕ）、アミロイド・ペプチドＡＢＥＴＡ１−４２、リン酸化タンパク質Ｔａｕ（ｐ．Ｔａｕリン酸化１２８）が、例えば、Ｗａｌｄｅｍａｒ  Ｇ．、Ｄｕｂｏｉｓ  Ｂ．、Ｅｍｒｅ  Ｍ．ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．、２００７年、１４、１〜２６頁；Ｄｕｂｏｉｓ  Ｂ．、Ｆｅｌｄｍａｎｎ  Ｈ．Ｈ．、Ｊａｃｏｖａ  Ｃ．、Ｄｅｋｏｓｋｙ  Ｓ．Ｔ．ら、Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ．２００７年、６、７３４〜７４６頁；Ｋｒｏｌａｋ−Ｓａｌｍｏｎ  Ｐ．ら「Ｖｅｒｓ  ｕｎ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｑｕｅ  ｂｉｏｌｏｇｉｑｕｅ  ｄｅ  ｌａ  ｍａｌａｄｉｅ  ｄ’Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｅｔ  ｄｅｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ  ａｐｐａｒｅｎｔｅｓ」、Ｌａ  Ｒｅｖｕｅ  ｄｅ  ｍｅｄｅｃｉｎｅ  ｉｎｔｅｒｎｅ（２００８）、ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｊ．  ｒｅｖｍｅｄ．２００８．０１．０２９．に記載されている。これらのマーカーを、ＥＬＩＳＡ．ＩＮＮＯＴＥＳＴ  Ｂ−Ａｍｙｌｏｉｄ  ｔｙｐｅ  （１−４２），ＩＮＮＯＴＥＳＴ  ｈＴＡＵＡｇ、ＩＮＮＯＴＥＳＴ  ＰＨＯＳＰＨＯＴＡＵ（１８１ｐ）；Ｉｎｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ、Ｇｈｅｎｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍの抗原−抗体技術によって判断することができる。
【００７１】
他のマーカーも、脳の悪化状態、より具体的には、例えば、参考文献、Ｌｅｅ  Ｊ．Ｍ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、２００８年、５４、１６１７〜１６２３頁に記載される、ビシニン様タンパク質（ＶＬＰ６、またはＶＩＬＩＰ−１、またはＶＳＮＬ）の悪化状態を試験することを可能にする。本発明を実施しながらこれらのマーカーを使用することができる。
【００７２】
パーキンソン病および多系統（シヌクレオパシー）萎縮症に関して、マーカー・アルファ−シヌクレイン（Ｍｏｌｌｅｎｈａｕｅｒ  Ｂ．、Ｃｕｌｌｅｎ  Ｖ．、Ｋｈａｎ  Ｉ．、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、２００８年、２１３、３１５〜３２５頁）を挙げることができる。
【００７３】
最後に、本発明の範囲内で使用することができる、中枢神経系（ＳＮＣ）に関する影響に特異でないマーカーが存在する。これらは、タンパク質ＧＦＡＰ、ミエリン、ニューロペプチドおよび神経伝達物質など、ＳＮＣから発生するタンパク質である。より具体的には、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ＆  ｈｅａｌｔｈ／ｄｉｓｅａｓｅｓ、２００９年２月による文書に記載されている、タンパク質ＢＮＤＦ（脳由来神経栄養因子（ｂｒａｉｎ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ）も特に興味深い。さらに、免疫応答タンパク質、例えばＩｇＧ、アルブミン、補体タンパク質、反応性タンパク質Ｃ、ならびに例えば、トランスフェリン、ハプトグロビン、セルロプラスミン、リゾチーム、エノラーゼなどの炎症タンパク質を、本発明を実施するために使用することができる。
【００７４】
本発明のどの実施形態でも、いくつかの異なるマーカー、すなわち様々な病理のマーカーを、同じ金属ガイドの凹所に配置することができる。次いで、マーカーを、様々なマーカーが互いに作用しないようにいくつかの凹所に配置することができる。
【００７５】
有利なことに、本発明によるデバイス、または少なくとも、分析する基質に接触する、機能化した終端部分は、１０−６程度の無菌保証レベル（ＳＡＬ（Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ  Ａｓｓｕｒａｎｃｅ  Ｌｅｖｅｌ））を示す。この無菌レベルに達するように様々な代替の溶液を考えることができる。検出する基質に特異な反応性基がないようにデバイスを滅菌し、次いで無菌条件下で反応性基を追加する可能性がある。反応性基を追加した後でデバイスを滅菌する別の可能性があり、これは滅菌技術の使用を必要とし、前記反応性基の活性を大幅には低下させない（例えば、エチレンオキシドまたは放射線を使用した滅菌）。
【００７６】
本発明の第２の目的は、組織または器官に存在する基質の生体外の検出方法であって、
ａ）本発明によるデバイスの機能化したＥａ先端部を、前記先端部が試験する前記組織または器官と接触しているときに、前記基質に特異な少なくとも１つの検出剤を含む溶液で培養するステップと、
ｂ）前記基質を検出するステップとを含むことを特徴とする方法である。
【００７７】
培養ステップは、溶液中の検出剤、より具体的には抗体が、具体的には基質（マーカー、抗原、抗体など）、より具体的には、任意選択でデバイスの端部に存在する抗原に固定されるに十分な時間の間に実行することができる。当業者は、一般的な知識およびルーチンの実験により、溶液中の検出剤、より具体的には、基質の抗体、より具体的には抗原の、親和性に応じたこの培養時間を簡単に判断することができる。この培養時間はまた、培養中の溶液の温度に応じて変わる。例として、培養時間は、１分から２時間程度、好ましくは５分から１時間、具体的には好ましくは１０から３０分、温度は２０℃（室温）から３７℃である。
【００７８】
有利には、溶液中の検出剤は、本発明によるデバイスの機能化した先端部に結合された特異な試薬とは異なる。
【００７９】
好ましくは、検出剤は抗体である。
【００８０】
有利には、溶液中の抗体、および本発明によるデバイスの機能化した先端部に結合した抗体は、それぞれ多クローン抗体であり、好ましくは、前記抗体は互いに同一である。
【００８１】
有利には、溶液中の抗体、および本発明によるデバイスの機能化した先端部に結合した抗体は、それぞれ単クローン抗体であり、好ましくは、前記抗体は互いに異なる。
【００８２】
有利には、溶液中の抗体は、マークされ、より具体的には、酵素、例えばペルオキシダーゼまたはアルカリ性ホスファターゼに結合される。
【００８３】
本発明による方法の第１の特定の実施形態によれば、この方法はさらに、ステップａ）とｂ）の間にはさまれる、ステップａ）の検出剤に特異な少なくとも１つの検出剤を含む溶液中で前記先端部を培養するステップａ’）を含む。
【００８４】
当業者は、本発明による方法に適合化された抗体を一般的な知識を以て簡単に特定することができる。その例として、この第２のステップで、具体的には、特定する基質（マーカー、抗原、抗体など）に対するマウス免疫グロブリンがステップａ）で使用される場合に、抗体、具体的には、マウス免疫グロブリンを認識する抗体を使用することが可能である。
【００８５】
本発明による方法の第２の特定の実施形態によれば、本発明による方法は、培養ステップａ）、および場合によってはステップａ’）の後に洗浄ステップを含み、この洗浄ステップにより具体的にはマーカー（抗原）に固定されていない抗体をなくすことが可能になる。
【００８６】
こうした洗浄ステップのプロトコルもまた、一般的な知識に属し、ルーチンの実験によって容易に判断することができる。例えば、こうしたステップは、特異な抗原に関する溶液中の抗体の親和性に応じて、ＴＲＩＴＯＮ  Ｘ１００（登録商標）またはＴＷＥＥＮ  ２０（登録商標）など、ある程度重要な濃度の洗剤（０．０５から１％）を含む溶液を用いて実行される。
【００８７】
検出ステップは、作用、より具体的にはステップａ）、または任意選択でステップａ’）で使用される抗体に結合した酵素の作用を証明することによって実行される。
【００８８】
この検出ステップのために使用されるプロトコルは、使用されるマーカー、より具体的には使用される酵素、例えば、ペルオキシダーゼおよびアルカリ性ホスファターゼに応じて変わるが、そのことは、当業者の一般的な知識に属することである。
【００８９】
この検出ステップにより、デバイスの機能化した先端部に固定された特異な基質の（例えば抗原の）量、最終的に、ミクロ分析および／またはマイクロ・サンプリングが実行された、器官または組織のレベルに存在する特異な基質の量を導き出すことが可能になる。
【００９０】
最後に、本発明による方法を実行するために使用できる様々な反応性基は、当業者によく知られており、より具体的には、免疫酵素法または免疫螢光法の定量技術で、例えば中実のサポート上で使用される試薬を含む［ＥＬＩＳＡ技術、タンパク質チップ（上述のＥＳＰＩＮＡら、２００４年）］。
【００９１】
本発明の第３の目的は、患者の癌、炎症、感染、移植片拒絶反応または神経変性の病理を診断することが意図されたツールを製造するために、本発明によるデバイスを使用することである。
【００９２】
本発明の特定の実施形態によれば、前記診断ツールは、少なくとも金属ガイドを含むことができ、その金属ガイドは可撓性のカテーテル中に挿入され、そのカテーテルは内視鏡中に挿入される。
【００９３】
本発明の別の特定の実施形態によれば、前記診断ツールは、経壁的吸引針、より具体的には経皮的または経粘膜的な吸引針にある、少なくとも１つの金属ガイドを含むことができ、それらの吸引針を、着脱可能な保護システム、例えば可撓性のカテーテル中に挿入できる。さらに、着脱可能な保護システムおよび金属ガイドは、前記ガイドの機能化したＥａ先端部がミクロ分析および／またはマイクロ・サンプリングの位置に接触可能になるように協働する。
【００９４】
本発明のこれらの２つの特定の実施形態では、前記少なくとも１つの金属ガイドは、特定および配置の点から、光ファイバーの長さの少なくとも一部分と連動することができる。
【００９５】
有利には、前記診断用具は、腔内のルートを通して送り込まれる。
【００９６】
したがって、前記ツールにより、（肝臓および膵臓を含む）咽頭から直腸までの消化器系で、（膀胱、尿道、腎臓、前立腺を含む）泌尿生殖系、（肺を含む）気管気管支系、（耳および鼻咽腔を含む）ＯＲＬ系、ならびに（滑液腔を含む）骨関節系のミクロ分析および／またはマイクロ・サンプリングを実行することが可能になる。
【００９７】
好ましくは、前記診断ツールは、経壁的ルートによって、より具体的には、経粘膜的または経皮的ルートを通して送り込まれる。
【００９８】
こうした診断ツールにより、通常使用される腔内または脈管内のルートを通して到達させることが難しい組織または器官を分析することも可能になる。こうした診断ツールにより、皮膚、精巣、前立腺、卵巣、乳腺、また腎臓および肝臓、末梢神経系ならびに中枢神経系、より具体的には、脊柱内ルート、ならびに内分泌系（例えば甲状腺）のレベルで、経壁的ルートを使用してミクロ分析および／またはマイクロ・サンプリングを実行することも可能になる。
【００９９】
本明細書の以下の実施例により本発明を例証することが可能であるが、これらの例は、あくまで非限定的な例として挙げられているものである。
【図面の簡単な説明】
【０１００】
【図１】金属ガイドを構成する様々な可能性を示す。
【図２】ＦＩＢによって作られた様々な穴の走査電子顕微鏡写真を示す（エッチングの非均一性から生じる重大な表面粗さを観察することができる）。
【図３】フッ素支援のフライス技術のシャドーイング効果の説明および観察を示す。
【図４】微細成形動作の進行を示す。
【図５】（ａ）光学顕微鏡によって観察される半球状の穴、（ｂ）走査電子顕微鏡によってニチノールを使用したガイド上に観察される連続した穴、（ｃ）空所の細部、（ｄ）ガイドの表面粗さと空所中の表面粗さの比較を示す。
【図６】電気化学的ポリッシング処理後の、図５と同じ半球状の穴を示す走査電子顕微鏡写真を示す。
【図７】一次単クローン抗体（ＡｃＭ１）による免疫捕捉、および二次単クローン抗体（ＡｃＭ２）での抗原ＡＣＥの表出に関する、本発明のデバイスの図を示す。
【図８】捕捉抗体５９１０によるＥＬＩＳＡの結果、および抗体５９０９による表出（抗原ＡＣＥ陽性血清によって得られた吸着）を示す。
【図９】捕捉抗体５９１０によるＥＬＩＳＡの結果、および５９０９抗原による表出（抗原ＡＣＥ陰性血清によって得られた吸着）を示す。
【図１０】捕捉抗体５９０５によるＥＬＩＳＡの結果、および抗体５９０９による表出（抗原ＡＣＥ陽性血清によって得られた吸着）を示す。
【図１１】捕捉抗体５９０５によるＥＬＩＳＡの結果、および抗体５９０９による表出（抗原ＡＣＥ陰性血清によって得られた吸着）を示す。
【図１２】捕捉抗体５９１０の剛体プラスチック・バットによるＥＬＩＳＡの結果、および抗体５９０９による表出（陽性抗原ＡＣＥ血清によって得られた吸着）を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１０１】
各添付図面は、使用する方法の感度および特異性の代表例を示すものである。
【０１０２】
[実施例１]  ニチノール・ベースの金属ガイドの用意、およびその作用
ニチノール・ベースの金属ガイド（Ｅｕｒｏｆｌｅｘ）の表面は、位置、例えば凹所を画定するように構成され、それらの凹所では、反応性基が配置され、生化学的作用が起きる（図１）。
【０１０３】
前記「凹所」は、例えば、電気化学的エッチングおよびレーザー・アブレーションの前のレーザー・リソグラフィによる、集束イオン・ビーム・リソグラフィ（ＦＩＢ、Ｘｉｅら、Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＆  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｈｙｓｉｃｓ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｂ−ｂｅａｍ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ａｎｄ  Ａｔｏｍｓ、２１１（３）：３６３〜３６８頁、２００３年）など、様々な方法を使用して得ることができる。
【０１０４】
ＦＩＢ技術を使用して、機械がイオン・ビームを作り出し、そのイオン・ビームが、構成しなければならない表面に集束される。イオン・ビームの機械的な作用の下で、表面の材料の原子が、その表面から除かれる。適度な時間、エッチング・リーダー８μｍ３ｓ−１、ビーム電流２０ｎＡで、ＦＩＢ技術によって直径２０μｍの穴を形成することができる。図２に、直径５、２０および４０μｍ、深さ１０および２０μｍの穴を示す。エッチング中に粉末材料を再堆積するので、穴の底部の表面は粗い。エッチング速度は、ビーム電流２０ｎＡで、直径４０μｍの円形領域で２００ｎｍ  ｍｉｎ−１と測定された。その結果、エッチング速度は０．２μｍ３  ｎＣ−１（約５μｍ３  ｓ−１）ということになり、これは、直径２０μｍ、深さ２０μｍの穴を作製するための加工時間２０分に相当する。表面粗さを改善するために、フッ素（ＸｅＦ２）支援のフライス技術を用いた。次いで、非常に低い表面粗さが得られたが、ＸｅＦ２がエッチング・ビームの軸に正確に沿っていなかったので、シャドーイング効果が確認された（図３）。
【０１０５】
レーザー・リソグラフィ技術および電気化学的エッチングは、第１のステップで、表面をポリマー層で被覆することから構成される。第２のステップでは、ポリマー層が、レーザー・アブレーションを使用して機械加工される。第３のステップでは、その表面は、ポリマー層に設けられた開口部を通して、等方性電気化学的エッチングを使用してエッチングされる（図４）。図５に、ニチノール・ベースの金属ガイドの様々な構成試験の結果を示す。
【０１０６】
さらに、生体内で使用されるニチノール・ベースの金属ガイドは、通常、天然のＮｉＴｉ酸化物層を生体適合性のＴｉＯ２層に置換する電気化学的ポリッシングによって加工される。穴を有する機械加工されたガイドは、穴の構成（図６）に対するこの方法の影響を推測するために、この方法を受けなければならない。
【０１０７】
ニチノール・ベースのガイドの表面上に空所を設けるための別の手法としては、レーザー・アブレーションを使用することが挙げられる。短レーザーの衝撃を利用すると、熱の発生によって周りの金属に影響を及ぼすことのない、金属の局所の蒸着が可能になる。記録された最も小さい寸法は２０μｍ程度である。
【０１０８】
本明細書で上述された３つの方法により凹所を作製することが可能である場合は、電気化学的エッチング方法が最良の結果を出した。
【０１０９】
〔実施例２〕特定の器官への金属ガイドの生体内の挿入後の外傷
これらの実験の場合は、金属マイクロ・ガイド（ＭＴＩ  ０．０１２’’  Ｓｉｌｖｅｒ  ｓｐｅｅｄ）を使用し、前記金属ガイドをマイクロ・カテーテル中に挿入した。
【０１１０】
そのデバイスを、脈管内のルートを通して（大腿動脈を介して）、吸引のレベルで、次いでスカルパのレベルから腎臓まで、全身麻酔下でピッグ中に導入した。このガイドを、動脈撮影による大腿動脈中で、前記デバイスを追従させて供給した。
【０１１１】
デバイスは、腎臓の入口に配置されるときに、動脈内の侵襲によって腎臓中に導入される。組織中へのこうした穿通は、深さ数ミリメートルであり、前記デバイスを約１０分間そこに維持した。
【０１１２】
最後に、デバイスを取り除いた。
【０１１３】
動物を安楽死させ、それらの腎臓を、本発明によるデバイスの穿通後の状況を推定するためにサンプリングした。
【０１１４】
その結果、腎臓に侵襲と関連する重大な出血がないことが示された。留意される最も重大な損傷は、侵襲位置のレベルの寸法３×１ｍｍであった。
【０１１５】
したがって、本発明によるデバイスにより、非常にわずかな侵襲性でありながら器官へのアクセスを有することが可能になる。
【０１１６】
〔実施例３〕肝臓へのデバイスの挿入後の微小外傷
金属マイクロ・ガイド（ＭＴＩ  ０．０１２’’  Ｓｉｌｖｅｒ  ｓｐｅｅｄ）を使用した。その金属マイクロ・ガイドを、実施例１とは異なるファイバー・スコープ中に配置した。
【０１１７】
そのデバイスを、動脈内ナビゲーションを通して（大腿動脈を介して）、吸引のレベルで、次いでスカルパのレベルから肝臓まで、全身麻酔下でピッグ中に導入した。この案内は、動脈撮影による大腿動脈中での前記デバイスの制御によって行った。
【０１１８】
デバイスを、肝臓の近くに配置するときにこの器官中に導入した。組織中へのこの穿通は、深さ数ミリメートルであり、前記デバイスを約１０分間そこに維持した。
【０１１９】
最後に、デバイスを取り除いた。
【０１２０】
前述のように、手術した肝臓のサンプリングにより、手術が器官に与える悪影響を推定することが可能になった。
【０１２１】
肉眼で見えない損傷を、肝臓の表面に見ることができた。切開時に、被膜下面の寸法１．５×０．４ｃｍおよび１．８×０．５ｃｍの２つの実質内出血性の結節の存在を見ることができた。組織構造的に、他の顕著な異常なしに、洞様血管、門脈細静脈および中心小葉の静脈のうっ血を含む全ての面で肝臓の構造が維持される。
【０１２２】
結論
結果として、出血性の損傷が最小限であることが示され、実質細胞の破壊なしに、毛細血管および中心小葉の静脈の単純なうっ血を有する、２つの軽微な微小損傷を見ることができた。
【０１２３】
したがって、金属ガイドの利用により、軽微な外傷、場合よっては、生検の結果生じるより概して小さい外傷にすることが可能になる。
【０１２４】
〔実施例４〕中実のサポート上で抗原ＡＣＥの生体外の免疫捕捉および検出を可能にするデバイスの概念および生産のためのパラメータの考察
このデバイスは、抗原ＡＣＥを示すことを可能にするＥＬＩＳＡ技術の原理を使用する。この抗原上の異なるエピトープを認識する２つの単クローン抗体を、捕捉（ＡｃＭ１）および抗原ＡＣＥの表出（ＡｃＭ２）のために使用した。同じアイソトープ（ＩｇＧ１）を有するこれらの単クローン抗体は、ビオチンに結合した単クローン抗体、およびストレプトアビジン・ペルオキシダーゼ複合体を使用して、ＡＣＥ抗原の表出を行った（図７）。
【０１２５】
２つのタイプのサポート、ＥＬＩＳＡ用プレートまたは剛体プラスチック・バットを使用した。
【０１２６】
ＥＬＩＳＡ用プレート（Ｇｒｅｉｇｅｒ）
炭酸塩／重炭酸塩の緩衝液で（１／５０００および１／１２８０００に）希釈した、１００μｌの抗原ＡＣＥに対する単クローン抗体（クローン５９１０またはクローン５９０５、マウスで産生されＭｅｄｉｘ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌによって市販されている）を各ウェルに配置し、プレートを３７℃で１時間配置した。炭酸塩／重炭酸塩の対照溶液によって抗体を置換することによって１つの陰性対照が得られた。
【０１２７】
ウェル１箇所当たり２５０μｌのＰＢＳで３回洗浄した後で、プレートのフリー・サイトを、３％ＰＢＳ−ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）２００ｍｌで、３７℃で２時間飽和した。
【０１２８】
次いで、０．５％ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２５０μｌでウェルを３回洗浄し、その後、ＰＢＳ  Ｔｗｅｅｎで１／１０、１／１００、１／１，０００以内に希釈した抗原ＡＣＥ陽性血清をウェル１箇所当たり１００μｌ添加し、プレートを３７℃で１時間培養した。
【０１２９】
ウェル１箇所当たり２５０μｌのＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎでの３回の洗浄を実行し、その後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで１／５００以内にビオチン化した、抗原ＡＣＥに対する単クローン抗体（クローン５９０９、マウスで産生されＭｅｄｉｘ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌによって市販され、一定の親和性および認識したエピトープによって、以前の使用した捕捉抗体とは異なる）をウェル１箇所当たり１００μｌ添加し、プレートをやはり３７℃で１時間培養した。
【０１３０】
ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎを使用して３回洗浄した後で、ペルオキシダーゼに結合した、１／２０００以内に希釈した１００μｌのストレプトアビジン複合体を、各ウェルに添加し、３７℃で１時間培養した。
【０１３１】
ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した後で、クエン酸−リン酸対照（ｐＨ５）に基質（Ｈ２Ｏ２）とクロモゲン（ＯＰＤ、Ｓｉｇｍａ）の混合物をウェル１箇所当たり２００μｌ添加することによって、表出が行われた。
【０１３２】
同時に、抗原（ＡＣＥ量５ＩＵ／ｍｌ未満の陰性対照）として「正常な」患者の血清を使用して、同じ作業を行った。
【０１３３】
そのとき、ウェル１箇所当たり１Ｍ硫酸を５０μｌ添加することによって、反応を止めた。吸着は、プレート・リーダー上で４９２ｎｍで読み取った（参照：ＥＬＸ．８００ＵＶ）。
【０１３４】
免疫捕捉のための単クローン抗体５９１０（１／５００以内に、その後１／１２８０００まで１／２ずつ段階的に希釈した）を使用して得られた結果、およびビオチン化単クローン抗体５９０９による表出を、抗原ＡＣＥ陽性血清の場合を図８に、抗原ＡＣＥ陰性血清の場合を図９に示す。
【０１３５】
免疫捕捉のための単クローン抗体５９０５（１／１００、１／２００、１／５００以内に、その後１／３２０００まで１／２ずつ段階的に希釈した）を使用して得られた結果、およびビオチン化単クローン抗体５９０９を使用した表出を、抗原ＡＣＥ陽性血清の場合を図１０に、抗原ＡＣＥ陰性血清の場合を図１１に示す。
図８から図１１の見出し：
たて座標：４９２ｎｍでの吸着（ＤＯ）
よこ座標：捕捉抗体（５９１０または５９０５）の希釈
◆ＡＣＥ陽性血清の１／１０以内の希釈液
■ＡＣＥ陽性血清の１／１００以内の希釈液
△ＡＣＥ陽性血清の１／１０００以内の希釈液
×＝血清なし
【０１３６】
結果として、捕捉単クローン抗体を１／５００以内で使用したときに、１／１０以内の抗原ＡＣＥ陽性血清が０．５より高い吸着（ＤＯ）をもたらす（図８）ことが示される。同じ条件下で、抗原ＡＣＥ陰性血清は０．１５未満のＤＯをもたらす（図９）。
【０１３７】
しかし、捕捉単クローン抗体５９１０と検出単クローン抗体５９０９の結合（図８および図９）より、捕捉単クローン抗体５９０５と検出単クローン抗体５９０９の結合（図１０および図１１）でより良い結果が得られたことに留意されたい。実際のところ、１／１０以内に希釈した抗原ＡＣＥ陽性血清の場合にＤＯが１である（図１０）ことを述べたが、抗原ＡＣＥ陰性血清が同じ条件下で０．１のＤＯをもたらす（図１１）。これらの結果を、様々な希釈液の捕捉単クローン抗体５９１０を使用して確認した（データは示さない）。
【０１３８】
従来の剛体のサポート
第１のステップでは、長さが２から３ｃｍ、直径が０．５から１ｍｍのバットの形態の剛体プラスチック・サポートを作動させた。
【０１３９】
第２のステップで、このように作動させたサポートを、１ｍｌの溶血マイクロ・チューブ（Ｆｉｓｈｅｒ）に配置し、抗原ＡＣＥに対する単クローン抗体（クローン５９１０、マウスで産生されＭｅｄｉｘ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌによって市販されている）で機能化し、３７℃で１時間、炭酸塩／重炭酸塩（２５０μｌ／チューブ）対照で１／５０、１／１００、１／２５０、１／５００以内に希釈した。単クローン抗体を炭酸塩／重炭酸塩対照に代えることによって陰性対照を行った。固定および洗浄の後に、＋４℃の温度で１晩、３％ＰＢＳ−ＢＳＡ５００μｌで飽和が得られた。
【０１４０】
次いで、１／１０、１／１００以内にＰＢＳまたは「健康な」対象（抗原ＡＣＥ陰性対照）からの血清で、３７℃で１時間、同じ希釈液で希釈した抗原ＡＣＥ陽性血清２５０μｌでサポートを培養した。
【０１４１】
１ｍｇ／ｍｌ以内の抗原ＡＣＥに対する単クローン抗体（クローン５９０９、マウスで産生されＭｅｄｉｘ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌによって市販されており、一定の親和性および承認されたエピトープにより精製したクローン５９１０とは異なる）を、０．１Ｍホウ酸塩の対照、ｐＨ８．８に対して４℃で１晩透析した。次いで、１０ｍｇ／ｍｌＤＭＳＯビオチン溶液を５０μｇ／ｍｇの抗体に添加した。室温で４時間培養した後で、攪拌下で、２０μｌ／２５０μｇの量のビオチンに１Ｍ塩化アンモニウムを添加し、得られた溶液を室温で再度１分培養した。反応が止まる際に、マークした抗体をＰＢＳに対して２４時間、＋４℃で透析し、このマークした抗体を−２０℃でアリコートとして維持した。
【０１４２】
ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した後で、サポートを、２５０μｌのビオチン化抗体５９０９で培養し、３７℃で１時間、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで１／５００以内に希釈した。
【０１４３】
ビオチンの検出（６−ビオチンアミドカプロイルアミドカプロン酸およびＮ−ヒドロキシこはく酸イミドのエステル、Ｓｉｇｍａ）を、３７℃で１時間、ＰＢＳで１／２０００以内に希釈したストレプトアビジン−ペルオキシダーゼ複合体（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して証明した。
【０１４４】
クエン酸−リン酸対照（ｐＨ５）にチューブ当たり７５０μｌの基質（Ｈ２Ｏ２）とクロモゲン（ＯＰＤ、Ｓｉｇｍａ）の混合物を添加することによって、酵素の作用の表出を実行した。
【０１４５】
次いで、１Ｍ硫酸を添加することによって反応を止めた。吸着は４９２ｎｍで読み取った。
【０１４６】
プラスチック製バットのＥＬＩＳＡの結果を図１２に示す。
図１２の見出し：
たて座標：４９２ｎｍでの吸着（ＤＯ）
よこ座標：捕捉抗体５９１０の希釈
◆抗原ＡＣＥの１／１０以内の希釈液
■抗原ＡＣＥの１／１００以内の希釈液
△陰性対照１／１０以内の希釈液
×陰性対照１／１００以内の希釈液
【０１４７】
概して、結果は、抗原ＡＣＥ陰性血清で得られたものより、抗原ＡＣＥ陽性血清の場合にＤＯが７から１０倍高いことを示す。
【０１４８】
１／５０または１／１００以内に希釈した捕捉単クローン抗体５９１０が固定された剛体プラスチック・サポートで最良の結果が得られた。
【０１４９】
単クローン抗体５９０９の検出希釈液が１／５００以内であるときに、検出した最良の抗原ＡＣＥ濃度は、１／１００、すなわち６ＩＵ／ｍｌ（「正常」と考えられる割合に近い：５ＩＵ／ｍｌ未満）以内に希釈した患者の血清に相当する。
【０１５０】
プラスチック・サポートを使用することにより、上述のプロトコルによる機能化された金属バット上の免疫捕捉プロセスの特異性および感度を確証することが可能になる。
【０１５１】
結論
生体外免疫捕捉および表出技術による抗原ＡＣＥの検出のために得られた良好な結果は、「機能化したバット」デバイスの評価を確証し、そのため、生体外の表出の後の生体内での抗原ＡＣＥの捕捉が可能になる。
【０１５２】
〔実施例５〕例えば、イメージング技術、より具体的には放射線技術の制御下における、乳房腫瘍のマーカーＡＣＥの発現の特定
特許出願ＰＣＴ  ＷＯ０３／００６９４８に記載されているプロトコルによれば、第１のステップで、アルカンチオール層が、第１のステップで、ニチノール・ベースの金属ガイド（Ｅｕｒｏｆｌｅｘ）の端部のうち一方に吸着される。第２のステップでは、この層の遊離チオール官能基により、抗原ＡＣＥに対する単クローン抗体でジスルフィド架橋を形成することが可能になる。
【０１５３】
次いで、得られた金属製ガイドを、動物またはヒトで使用するように適合された生検針に導入する。
【０１５４】
乳癌を患う患者から取り除いた後に、こうしたデバイスを使用して、手術する腫瘍（乳腺腫瘍）に即座の解剖病理学的検査を行う。代替の溶液によれば、医療倫理条件が存在するときは、乳癌を患う患者に局所または全身麻酔下で乳房に微小切開を行う。抗原ＡＣＥに対する抗体に結合した金属ガイドが挿入される針は、腫瘍中に導入されるか、または微小切開によって、次いで、画像、より具体的にはエコーグラフによって、ガイドの前進を追従しながら腫瘍まで案内される。
【０１５５】
次いで、前記低侵襲性の案内システムにより、抗原ＡＣＥに対する抗体に結合された金属ガイドの端部を取り出すことが可能になる。次いで、金属ガイドの端部を、腫瘍中に（穿孔によって）数ミリメートル程度の深さで導入する。任意選択で腫瘍によって発現される抗原ＡＣＥによって免疫捕捉が可能になる１０分程度の待ち時間の後で、デバイスが取り除かれる。
【０１５６】
マイクロ・サンプリングは検体の生体内の免疫捕捉に限定され、生検を必要としない。
【０１５７】
最後に、デバイスを取り除き、次いで、マーカーＡＣＥのＥＬＩＳＡ定量法を、マーカーＡＣＥに対する単クローン抗体を有するデバイスの端部で実行し、そのマーカーＡＣＥは、抗原ＡＣＥに関する一定の親和性、および識別されたエピトープによって捕捉抗体と区別し、ビオチンに結合する。
【０１５８】
ストレプトアビジン−ペルオキシダーゼ複合体を使用することによる酵素の作用の表出により、腫瘍によるマーカーＡＣＥの発現、およびそれに応じて患者に最良の治療を与えるために使用する治療を調整することが可能になる。
【０１５９】
〔実施例６〕皮膚癌
特許出願ＰＣＴ  ＷＯ０３／００６９４８に記載されているプロトコルによれば、アルカンチオールの層は、第１のステップで、ニチノール・ベースの金属ガイド（Ｅｕｒｏｆｌｅｘ）の端部に吸着されている。第２のステップでは、この層の遊離チオール官能基により、ＦＡＰマーカーに対する単クローン抗体（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ−ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔａｉｎ；ＲＥＴＴＩＧら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、ｖｏｌ．８５、３１１０頁、１９８８年）でのジスルフィド架橋の形成が可能になる。
【０１６０】
次いで、従来のまたは即座の解剖病理学的検査のために、得られた金属ガイドを、医療倫理条件が存在するときは動物またはヒトの皮膚腫瘍のレベルで、またはそのアブレーションの後には皮膚癌を患う患者の皮膚腫瘍のレベルで導入する。
【０１６１】
マイクロ・サンプリングは生体内の免疫捕捉に限定され、特定の生検を必要としない。
【０１６２】
最後に、デバイスを取り除き、ペルオキシダーゼに結合したマーカーＦＡＢに対する単クローン抗体で、デバイス端部にＦＡＢマーカーのＥＬＩＳＡ定量法を実行する。
【０１６３】
ペルオキシダーゼの活性の表出により、腫瘍によるマーカーＦＡＰの発現を導き出し、それに応じて、患者に最良の治療を施すために使用する治療法を調整することが可能になる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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