(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
垂盆草の全草、水、低級脂肪族アルコールもしくは低級脂肪族アルコールの含水物により垂盆草を抽出して得られる抽出液、又は前記抽出液を濃縮して得られる抽出エキスに含まれる化合物であって、
下記の構造式（１）で表わされるメガスチグマン化合物：
【化１】
0005620629.tif 000015
下記の構造式（３）で表わされるメガスチグマン化合物：
【化２】
0005620629.tif 000016
下記の構造式（４）で表わされるメガスチグマン化合物：
【化３】
0005620629.tif 000017
下記の構造式（７）で表わされるフラボノイド化合物：
【化４】
0005620629.tif 000018
、及び下記の構造式（９）で表わされるフラボノイド化合物：
【化５】
0005620629.tif 000019
からなる群の中から選ばれる化合物を有効成分として含むことを特徴とする脂肪代謝改善剤。
【請求項２】
請求項１に記載の脂肪代謝改善剤を含有し、前記構造式（１）、（３）、（４）、（７）及び（９）からなる群の中から選ばれる構造式で表される化合物を、１回の投与量中に０．００１〜１ｇ含有することを特徴とするヒト又は動物用の医薬。
【請求項３】
請求項１に記載の脂肪代謝改善剤を含有し、前記構造式（１）、（３）、（４）、（７）及び（９）からなる群の中から選ばれる構造式で表される化合物を、０．０００１〜２．０質量％含有することを特徴とする食品。
【請求項４】
垂盆草の全草、水、低級脂肪族アルコールもしくは低級脂肪族アルコールの含水物により垂盆草を抽出して得られる抽出液、又は前記抽出液を濃縮して得られる抽出エキスに含まれる化合物であって、
下記の構造式（１）：
【化６】
0005620629.tif 000020
で表されるメガスチグマン化合物、
下記の構造式（２）：
【化７】
0005620629.tif 000021
で表されるメガスチグマン化合物、
下記の構造式（３）：
【化８】
0005620629.tif 000022
で表されるメガスチグマン化合物、
下記の構造式（４）：
【化９】
0005620629.tif 000023
で表されるメガスチグマン化合物、
下記の構造式（５）：
【化１０】
0005620629.tif 000024
で表されるメガスチグマン化合物、
下記の構造式（７）：
【化１１】
0005620629.tif 000025
で表されるフラボノイド化合物、
下記の構造式（８）：
【化１２】
0005620629.tif 000026
で表されるフラボノイド化合物、又は
下記の構造式（９）：
【化１３】
0005620629.tif 000027
で表されるフラボノイド化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ベンケイソウ科（Ｃｒａｓｓｕｌａｃｅａｅ）植物である垂盆草、その抽出物もしくは抽出エキス、又はこれらから得られるメガスチグマン化合物又はフラボノイド化合物を含有する脂肪代謝改善剤、及びその脂肪代謝改善剤を含有する医薬や食品に関する。本発明は、さらに、垂盆草、その抽出物又は抽出エキスから得られる新規メガスチグマン化合物及びフラボノイド化合物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
垂盆草（学名：Ｓｅｄｕｍ  ｓａｒｍｅｎｔｏｓｕｍ  Ｂｇｅ．）は、多年生多肉質草本で、高さは１０〜２０ｃｍ、茎は淡紅色で、枝は細く、斜めに伸び、ほふくし、花序に近いところにまた根が生じやすい。中国の遼寧、河北、河南、山東、山西、陜西、四川、浙江、江蘇、安徽、江西、湖北、広西、雲南、貴州省などに分布し、その山間部の山肌の傾斜面もしくは岩石上に自生している。垂盆草は和名をツルマンネングサと称し、またその全草は漢薬“石指甲（セキシコウ）”と称され、「清熱する、腫れを消す、解毒する、の効能がある」等とされている（非特許文献１）。しかしながら従来は、垂盆草に関する詳細な含有成分の探索等の科学的研究はあまり実施されていなかった。このような背景のもと、本発明者らは垂盆草含有成分の解明研究を行い、これまでに種々のメガスチグマン化合物、フラボノイド化合物及びその他の化合物を垂盆草より単離した（非特許文献２〜５）。
【非特許文献１】上海科学技術出版社編、中薬大辞典、小学館、１９８５、ｐｐ．１４２７−１４２８
【非特許文献２】Ｙｏｓｈｉｋａｗａ  Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．  Ｎａｔ．  Ｐｒｏｄ．，７０，５７５−５８３（２００７）
【非特許文献３】Ｍｏｒｉｋａｗａ  Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．，５５，４３５−４４１（２００７）
【非特許文献４】Ｚｈａｎｇ  Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，７１，１５６５−１５７６（２００７）
【非特許文献５】Ｎｉｎｏｍｉｙａ  Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．，５５，１１８５−１１９１（２００７）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、垂盆草に関する詳細な含有成分の探索、及びその薬剤としての作用についての研究に基づいてなされたもので、垂盆草より得られ、脂肪代謝改善作用を有する薬剤（脂肪代謝改善剤）を提供することを目的とする。本発明は、又、この脂肪代謝改善剤を含有するヒト又は動物用医薬、及び、この脂肪代謝改善剤を含有する食品を提供することを目的とする。本発明は、さらに、垂盆草より得ることができる新規メガスチグマン及びフラボノイド化合物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者は、垂盆草の全草や、垂盆草を水や低級脂肪族アルコール等により抽出して得られた抽出液、又は当該抽出液を濃縮して得られる抽出エキスについて、脂肪代謝改善剤としての活性評価の指標として、ヒト肝がん由来細胞であるＨｅｐＧ２細胞を用いた細胞内脂肪代謝促進作用を検討した。その結果、垂盆草の全草、その抽出液、抽出エキスが、脂肪代謝改善作用を示すことを見出し、以下に示す態様の発明を完成した。
【０００５】
即ち、本発明は、その第１の態様として、垂盆草の全草、水、低級脂肪族アルコールもしくは低級脂肪族アルコールの含水物により垂盆草を抽出して得られる抽出液、又は前記抽出液を濃縮して得られる抽出エキス、を有効成分として含むことを特徴とする脂肪代謝改善剤（請求項１）を提供する。
【０００６】
本発明者は、さらに、前記の抽出液又は抽出エキスを分離、精製し、含有成分の詳細な探索等を行うとともに、この分離、精製により得られた化合物について、ヒト肝がん由来細胞であるＨｅｐＧ２細胞を用いた細胞内脂肪代謝促進作用を検討したところ、いくつかの化合物がこの脂肪代謝改善作用を示すことを見出し、以下に示す態様の発明を完成した。
【０００７】
即ち本発明は、その第２の態様として、
下記の構造式（１）で表わされるメガスチグマン化合物：
【０００８】
【化１】
0005620629.tif 000002
下記の構造式（３）で表わされるメガスチグマン化合物：
【０００９】
【化２】
0005620629.tif 000003
下記の構造式（４）で表わされるメガスチグマン化合物：
【００１０】
【化３】
0005620629.tif 000004
下記の構造式（７）で表わされるフラボノイド化合物：
【００１１】
【化４】
0005620629.tif 000005
、及び下記の構造式（９）で表わされるフラボノイド化合物：
【００１２】
【化５】
0005620629.tif 000006
からなる群の中から選ばれる化合物を有効成分として含むことを特徴とする脂肪代謝改善剤（請求項２）を提供する。
【００１３】
前記の第１の態様及び第２の態様の脂肪代謝改善剤は、脂肪代謝改善作用を有するため、これを含有させることにより、脂肪代謝改善作用を有する医薬や健康食品等を得ることができる。即ち、本発明は、その第３の態様として、前記の第１の態様及び第２の態様の脂肪代謝改善剤を含有することを特徴とするヒト又は動物用の医薬（請求項３）を提供する。又、その第４の態様として、前記の第１の態様及び第２の態様の脂肪代謝改善剤を含有することを特徴とする食品（請求項４）を提供する。
【００１４】
本発明者は、さらに又、前記の抽出液又は抽出エキスを分離、精製して得られた含有成分の中に、いくつかの新規なメガスチグマン化合物及びフラボノイド化合物が含まれていることを見いだした。これらの新規化合物には、前記構造式（１）、（３）、（４）、（７）又は（９）で表わされる化合物が含まれ、又残余の化合物もその構造の類似性から、脂肪代謝改善作用を有するものと推測される。
【００１５】
即ち、本発明は、その第５の態様として、
構造式（１）で表わされるメガスチグマン化合物（請求項５）、
下記の構造式（２）で表わされるメガスチグマン化合物（請求項６）：
【００１６】
【化６】
0005620629.tif 000007
【００１７】
構造式（３）で表わされるメガスチグマン化合物（請求項７）、
構造式（４）で表わされるメガスチグマン化合物（請求項８）、
下記の構造式（５）で表わされるメガスチグマン化合物（請求項９）：
【００１８】
【化７】
0005620629.tif 000008
下記の構造式（６）で表わされるメガスチグマン化合物（請求項１０）：
【００１９】
【化８】
0005620629.tif 000009
【００２０】
構造式（７）で表わされるフラボノイド化合物（請求項１１）、
下記の構造式（８）で表わされるフラボノイド化合物（請求項１２）：
【００２１】
【化９】
0005620629.tif 000010
【００２２】
及び、構造式（９）で表わされるフラボノイド化合物（請求項１３）を提供する。
【発明の効果】
【００２３】
本発明の第１の態様、即ち、垂盆草の全草、その水、低級脂肪族アルコールもしくはその含水物により抽出して得られる抽出液または当該抽出液を濃縮して得られる抽出エキスを有効成分として含有する脂肪代謝改善剤、又は、第２の態様、即ち、構造式（１）、（３）もしくは（４）で表されるメガスチグマン化合物、又は構造式（７）もしくは（９）で表されるフラボノイド化合物を有効成分として含有する脂肪代謝改善剤は、ヒト肝がん由来細胞であるＨｅｐＧ２細胞を用いた細胞内脂肪代謝促進作用を示し、脂肪代謝改善剤としての優れた活性を有する。この脂肪代謝改善剤を含有させた医薬や食品（本発明の第３の態様、第４の態様）は、優れた脂肪代謝改善効果を示す医薬又は食品である。さらに、本発明の第５の態様の新規なメガスチグマン化合物及びフラボノイド化合物は、前記のような脂肪代謝改善作用を有するものであり、脂肪代謝改善剤として使用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
次に、本発明を実施するための最良の形態につき説明するが、本発明の範囲はこの実施の形態のみに限定されるものではない。
【００２５】
本発明の第１の態様の脂肪代謝改善剤としては、垂盆草の全草を用いたものを例示することができる。垂盆草の全草を用いる場合は、垂盆草の全草をそのまま用いることができるし、又は、粉砕、破砕、切断、すりつぶしなどによる形状変化を行ったもの、もしくは、乾燥などの調製を実施したものを用いることもできる。
【００２６】
本発明の第１の態様の脂肪代謝改善剤としては、又、垂盆草を、水、低級脂肪族アルコールもしくは低級脂肪族アルコールの含水物により抽出して得られる抽出液、又はその抽出エキスを用いたものも例示することができる。
【００２７】
この抽出液は、垂盆草の全草をそのまま、水、低級脂肪族アルコール及び低級脂肪族アルコールの含水物より選ばれる抽出溶媒により、抽出して得ることもできるが、垂盆草の全草を、粉砕、破砕、切断、すりつぶしなどによる形状変化を行ったものを用いて抽出する方法が、抽出効率の面で好ましい。
【００２８】
抽出溶媒として用いられるアルコールとしては、炭素数１〜４の低級アルコール類が挙げられ、具体的には、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎブタノール、イソブタノール、ｔ−ブタノール又はこれらの混液が挙げられる。抽出溶媒としては、好ましくはこれらのアルコール、又はこれらのアルコールに３０容量％までの水を含有する含水アルコールが用いられる。前記のアルコールの中でもメタノール又はエタノールが好ましい。これらの抽出溶媒は、抽出材料に対して、１〜５０倍（重量）程度、好ましくは１０〜３０倍程度用いられる。
【００２９】
抽出温度は、室温〜溶媒の沸点の間で任意に設定できるが、例えば５０℃〜抽出溶媒の沸点の温度で、振盪下もしくは非振盪下または還流下に、前記の抽出材料、即ち、垂盆草の全草、又は、それを粉砕、破砕、切断、すりつぶしなどによる形状変化を行ったもの等を、前記の抽出溶媒に浸漬することによって行うのが適当である。
【００３０】
好ましい抽出時間は、抽出温度や抽出の際の振盪の有無等により変動し、特に限定されない。例えば、抽出材料を振盪下に浸漬する場合には、３０分間〜１０時間程度行うのが適当であり、非振盪下に浸漬する場合には、１時間〜２０日間程度行うのが適当である。又、抽出溶媒の還流下に抽出するときは、３０分間〜数時間加熱還流するのが好ましい。なお、５０℃より低い温度で浸漬して抽出することも可能であるが、その場合には、前記の時間よりも長時間浸漬するのが好ましい。抽出操作は、同一材料について１回だけ行ってもよいが、複数回、例えば２〜５回程度繰り返すのが好ましい。
【００３１】
前記の抽出工程により得られた抽出液には垂盆草の含有成分が溶出されている。本発明の脂肪代謝改善剤には、このようにして得られた抽出液をそのまま加えてもよいが、前記抽出液を濃縮して抽出エキスにして脂肪代謝改善剤としてもよい。濃縮は、低温で減圧下に行うのが好ましい。なお、濃縮する前に濾過して濾液を濃縮してもよい。抽出エキスは、濃縮したままの状態で脂肪代謝改善剤として用いることができるが、また、濃縮は乾固するまで行ってもよく、粉末状又は凍結乾燥品等として用いてもよい。濃縮する方法、粉末状及び凍結乾燥品とする方法は、当該分野での公知の方法を用いることができる。
【００３２】
このようにして得られる抽出液又は抽出エキスを、精製処理に付し、含有される各成分に分離することができる。そして、分離された成分中には、脂肪代謝改善作用を有する化合物が含まれており、これらも脂肪代謝改善剤として用いることができる（本発明の第２の態様）。
【００３３】
精製処理は、例えば、クロマトグラフ法、イオン交換樹脂を使用する溶離法、溶媒による分配抽出等を単独、又は組み合わせて採用することができる。クロマトグラフ法としては、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、遠心液体クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を挙げることができ、これらのいずれか、又はそれらを組み合わせで行う方法が挙げられる。この際の担体、溶出溶媒等の精製条件は、各種クロマトグラフィーに対応して適宣選択することができる。
【００３４】
抽出液又は抽出エキスを、精製処理に付し、各成分に分離することにより、前記の構造式（１）〜（９）のいずれかで表される新規化合物を得ることができ、それぞれ以下に示すように命名した。
【００３５】
構造式（１）の化合物：セダモシドＫ（Ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｋ）
構造式（２）の化合物：セダモシドＬ（Ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｌ）
構造式（３）の化合物：セダモシドＭ（Ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｍ）
構造式（４）の化合物：セダモシドＮ（Ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｎ）
構造式（５）の化合物：セダモシドＯ（Ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｏ）
構造式（６）の化合物：セダモシドＪ（Ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｊ）
構造式（７）の化合物：サルメノシドＶ（Ｓａｒｍｅｎｏｓｉｄｅ  Ｖ）
構造式（８）の化合物：サルメノシドＶＩ（Ｓａｒｍｅｎｏｓｉｄｅ  ＶＩ）
構造式（９）の化合物：サルメノシドＶＩＩ（Ｓａｒｍｅｎｏｓｉｄｅ  ＶＩＩ）
【００３６】
前記のように、垂盆草の全草、水、低級脂肪族アルコールもしくは低級脂肪族アルコールの含水物により垂盆草を抽出して得られる抽出液、前記抽出液を濃縮して得られる抽出エキス、及び、前記構造式（１）、（３）又は（４）で表わされる新規メガスチグマン化合物、構造式（７）又は（９）で表わされる新規フラボノイド化合物は、脂肪代謝改善剤としての活性評価の指標として実施したヒト肝がん由来細胞であるＨｅｐＧ２細胞を用いた細胞内脂肪代謝促進作用試験において、活性が見出された。
【００３７】
この脂肪代謝改善試験は、ヒト肝がん由来細胞であるＨｅｐＧ２細胞を用い、高濃度グルコースを含む培地にて培養し細胞内に脂肪を蓄積させた後、低濃度グルコース含有培地へ交換するとともに被検サンプルを添加し、培養後の細胞内トリグリセリド残存量を脂肪代謝の指標として評価したものである。これにより、肝細胞における脂肪代謝促進作用の高い検体は、肝臓における脂肪代謝を改善すると判断される。従って、垂盆草の全草、水、低級脂肪族アルコールもしくは低級脂肪族アルコールの含水物により垂盆草を抽出して得られる抽出液、前記抽出液を濃縮して得られる抽出エキス、及び、前記構造式（１）、（３）又は（４）で表わされる新規メガスチグマン化合物、構造式（７）又は（９）で表わされる新規フラボノイド化合物は、脂肪代謝改善剤として用いることができる。
【００３８】
さらに、この本発明の脂肪代謝改善剤は、医薬や食品に適用することができ、この脂肪代謝改善剤を含有させることにより優れた脂肪代謝改善効果を有する医薬や食品を製造することができる。
【００３９】
例えば、垂盆草の全草、水、低級脂肪族アルコールもしくは低級脂肪族アルコールの含水物により垂盆草を抽出して得られる抽出液、前記抽出液を濃縮して得られる抽出エキス、前記構造式（１）、（３）もしくは（４）で表わされる新規メガスチグマン化合物、又は構造式（７）もしくは（９）で表わされる新規フラボノイド化合物を、そのままの状態で又は適当な媒体で希釈して、医薬品等の製造分野における公知の方法により、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤又は液剤等の種々の形態にして、医薬品として使用することができる。
【００４０】
これらの形態においては、適当な媒体を添加してもよい。適当な媒体としては、医薬的に許容される賦形剤、例えば結合剤（例えばシロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガント又はポリビニルピロリドン）、充填剤（例えば乳糖、砂糖、トウモロコシ澱粉、リン酸カルシウム、ソルビトール又はグリシン）、錠剤用滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール又はシリカ）、崩壊剤（例えば馬鈴薯澱粉）又は湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）等が挙げられる。
【００４１】
錠剤とする場合は、通常の製薬における周知の方法でコートしてもよい。液体製剤とする場合は、例えば水性又は油性の懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップ又はエリキシルの形態であってもよい。又、使用前に水や他の適切な賦形剤と混合する乾燥製品として提供してもよい。
【００４２】
こうした液体製剤は、通常の添加剤、例えば、ソルビトール、シロップ、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン水添加食用脂等の懸濁化剤、レシチン、ソルビタンモノオレエート、アラビアゴム等の乳化剤（食用脂を含んでもよい）、アーモンド油、分画ココヤシ油又はグリセリン、プロピレングリコールやエチレングリコールのような油性エステル等の非水性賦形剤、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピル又はソルビン酸等の保存剤、を含んでもよく、さらに所望により着色剤又は香料等を含んでもよい。
【００４３】
垂盆草の全草、水、低級脂肪族アルコールもしくは低級脂肪族アルコールの含水物により垂盆草を抽出して得られる抽出液、前記抽出液を濃縮して得られる抽出エキス、前記構造式（１）、（３）もしくは（４）で表わされる新規メガスチグマン化合物、又は構造式（７）もしくは（９）で表わされる新規フラボノイド化合物は、それぞれ単独で、又は混合物として食品に含有させ、食品に脂肪代謝改善効果を与えることができる。ここで言う食品には健康食品も含まれる。
【００４４】
ここで健康食品とは、通常の食品よりも積極的な意味で、保健、健康維持・増進等を目的とした食品を意味する。食品又は健康食品の形態としては、例えば、液体又は半固形、固形の製品、具体的には散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤又は液剤等のほか、クッキー、せんべい、ゼリー、ようかん、ヨーグルト、まんじゅう等の菓子類、清涼飲料、お茶類、栄養飲料、スープ等の形態が挙げられる。これらの食品の製造工程において、あるいは最終製品に、前記の抽出物、抽出エキス、及び／又は化合物を混合又は塗布、噴霧などにより添加して、健康食品とすることができる。
【００４５】
本発明の医薬又は食品における、前記抽出液、抽出エキス、前記構造式（１）、（３）もしくは（４）で表わされる新規メガスチグマン化合物、又は構造式（７）もしくは（９）で表わされる新規フラボノイド化合物の使用量は、濃縮、精製の程度、活性の強さ等、使用目的、対象疾患や自覚症状の程度、使用者の体重、年齢等によって適宣調整される。例えば、医薬として成人について使用する場合は、１回の投与毎に、抽出液又は抽出エキスでは、１ｍｇ〜２０ｇ程度の範囲で使用し、この範囲内で精製度や水分含量等に応じて調整することが適当な場合が多い。又、前記化合物を使用する場合は、１ｍｇ〜１ｇ程度が適当な場合が多い。
【００４６】
又、健康食品として使用する場合は、食品の味や外観に悪影響を及ぼさない量、例えば、対象となる食品１ｋｇに対して、前記の抽出液又は抽出エキス、前記構造式（１）、（３）もしくは（４）で表わされる新規メガスチグマン化合物、又は構造式（７）もしくは（９）で表わされる新規フラボノイド化合物を、１ｍｇ〜２０ｇ程度の範囲で添加することが適当な場合が多い。
【００４７】
なお、前記構造式（２）、（５）もしくは（６）で表わされる新規メガスチグマン化合物、又は構造式（８）で表わされる新規フラボノイド化合物も、その構造の類似性から、前記構造式（１）、（３）もしくは（４）で表わされる新規メガスチグマン化合物、又は構造式（７）もしくは（９）で表わされる新規フラボノイド化合物と同様に、脂肪代謝改善効果を有し、脂肪代謝改善剤として用いることができ、又、ヒトや動物の医薬品や、健康食品等の食品に添加して、脂肪代謝改善効果を有する医薬品や食品を製造することができると考えられる。
【実施例】
【００４８】
以下、実施例により、本発明をさらに具体的に説明するが、実施例は本発明の範囲を限定するものではない。なお、以下の実施例では、特に記載がない限り、以下の各種溶媒、濾紙、クロマトグラフィー用担体及びＨＰＬＣカラムを用いた。
【００４９】
［溶媒］
メタノール：ナカライテスク社製、一級
クロロホルム：ナカライテスク社製、一級
ＨＰＬＣ用メタノール：関東化学社製、特級
ＨＰＬＣ用アセトニトリル：関東化学社製、特級
【００５０】
［濾紙］  アドバンテック社製：Ｎｏ．２
【００５１】
［クロマトグラフィー用担体］
順相シリカゲルカラムクロマトグラフ用担体：富士シリシア社製、ＢＷ−２００、１５０〜３００メッシュ
逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフ用担体：富士シリシア社製、Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ  ＯＤＳ１０２０Ｔ、１００〜２００メッシュ
多孔質ポリマーカラムクロマトグラフ用担体：日本練水社製、ダイアイオンＨＰ−２０及びファルマシア社製、セファデックスＬＨ−２０
【００５２】
［ＨＰＬＣカラム］
ＹＭＣ社製、ＹＭＣ  Ｐａｃｋ−ＯＤＳ−Ａ、２０ｍｍ（ｉ．ｄ．）×２５０ｍｍ
【００５３】
実施例１  垂盆草全草の熱水抽出エキスの調製
新鮮な垂盆草の全草８００ｋｇを粉砕し、これに約１０倍量の水（８０００Ｌ）を加え、加熱還流下１時間抽出した。抽出後、ひだ折り濾紙で濾過した後、ロータリーエバポレーターを用いて減圧下に、抽出液より溶媒を留去して、垂盆草（ツルマンネングサ）の熱水抽出エキス１０ｋｇ（乾燥原料からの収率１．２５％）を得た。
【００５４】
実施例２  熱水抽出エキスの分離及び精製
前記の熱水抽出エキス（１９５０ｇ）に約１０倍量のメタノール（２０Ｌ）を加え、加熱還流下３時間抽出した。抽出後、ひだ折り濾紙で濾過した後、抽出残渣に再度メタノール（５０Ｌ）を加え、３時間加熱還流し、同様に濾過作業を行った。合計３回の抽出を行い、その抽出液をあわせ、ロータリーエバポレーターを用いて、減圧下に溶媒を留去して、垂盆草のメタノール可溶性画分８８７．５ｇ（原料からの収率０．５７％）を得た。
【００５５】
実施例３  メタノール可溶性画分の調製
前記メタノール可溶性画分（３９８．６ｇ）を、多孔質ポリマーカラムカラムクロマトグラフィー（ダイアイオンＨＰ−２０：４．０ｋｇ，移動相：水→メタノール）で順次溶出し、水溶出部（３０５．０ｇ）及びメタノール溶出部（９３．６ｇ）を得た。
【００５６】
実施例４  メタノール溶出部の分離及び精製
前記メタノール溶出部（７２．０ｇ）を、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（２．０ｋｇ、移動相：クロロホルム／メタノール／水（１０／３／０．５、下層→７／３／１,下層）→メタノール）で順次溶出し、溶出画分１（１２．１ｇ）、２（１９．２ｇ）、３（１０．４ｇ）、４（８．７ｇ）、５（１６．３ｇ）を得た。
【００５７】
実施例５
このうち、溶出画分１（１２．１ｇ）について、逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（３００ｇ，移動相：メタノール／水（５／９５→１０／９０→２０／８０→３０／７０→５０／５０→７０／３０）→メタノール）、多孔質ポリマーカラムカラムクロマトグラフィー（セファデックスＬＨ−２０：１５０ｇ，移動相：クロロホルム／メタノール（５０／５０））及びＨＰＬＣ（移動相：メタノール／水（４２／５８））にて分離、精製し、セダモシドＭ（ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｍ，２１．３ｍｇ，０．００００４％）を得た。
【００５８】
実施例６
溶出画分２（１９．２ｇ）について、逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（６００ｇ，移動相：メタノール／水（２０／８０→３０／７０→４０／６０→７０／３０）→メタノール）、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１００ｇ，移動相：クロロホルム→クロロホルム／メタノール（５０／１→２０／１→１０／１）→クロロホルム／メタノール／水（２０／３／１，下層）→メタノール）もしくは多孔質ポリマーカラムカラムクロマトグラフィー（セファデックスＬＨ−２０：１５０ｇ，移動相：クロロホルム／メタノール（５０／５０））、及びＨＰＬＣ（移動相：メタノール／水（３２／６８又は４０／６０）又はアセトニトリル／メタノール／水（１０／８／８２又は２０／８／７２））にて分離、精製し、化合物セダモシドＫ（ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｋ，２５．４ｍｇ，０．００００５％）、セダモシドＬ（ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｌ，１２．３ｍｇ，０．００００２％）、セダモシドＭ（ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｍ，３２．９ｍｇ，０．００００６％）、セダモシドＮ（ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｎ，９．２ｍｇ，０．００００２％）、セダモシドＯ（ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｏ，８．１ｍｇ，０．００００２％）及びセダモシドＪ（ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｊ，２．５ｍｇ，０．００００１％）を得た。
【００５９】
実施例７
溶出画分３（１０．４ｇ）について、逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（２４０ｇ，移動相：メタノール／水（１０／９０→２０／８０→３０／７０→４０／６０）→メタノール）、多孔質ポリマーカラムカラムクロマトグラフィー（セファデックスＬＨ−２０：１５０ｇ，移動相：クロロホルム／メタノール（５０／５０））及びＨＰＬＣ（移動相：メタノール／水（４０／６０））にて分離、精製し、サルメノシドＶ（ｓａｒｍｅｎｏｓｉｄｅ  Ｖ，１６．４ｍｇ，０．００００３％）、サルメノシドＶＩ（ｓａｒｍｅｎｏｓｉｄｅ  ＶＩ，２７．７ｍｇ，０．００００５％）及びサルメノシドＶＩＩ（ｓａｒｍｅｎｏｓｉｄｅ  ＶＩＩ，１２．８ｍｇ，０．００００２％）を得た。
【００６０】
実施例８
溶出画分４（８．７ｇ）について、逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（２４０ｇ，移動相：メタノール／水（１０／９０→２０／８０→３０／７０→４０／６０→５０／５０）→メタノール）、多孔質ポリマーカラムカラムクロマトグラフィー（セファデックスＬＨ−２０：１５０ｇ，移動相：クロロホルム／メタノール（５０／５０））及びＨＰＬＣ（移動相：メタノール／水（３５／６５））にて分離、精製し、サルメノシドＶＩ（ｓａｒｍｅｎｏｓｉｄｅ  ＶＩ，２１．２ｍｇ，０．００００４％）を得た。
【００６１】
前記の実施例で得られた構造式（１）〜（９）で示される化合物についての、質量分析、赤外吸収スペクトル、核磁気共鳴スペクトル等の測定により得られた結果を以下に示す。なお、以下の１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲによる構造解析に用いたナンバリングは、次式に基づいている。
【００６２】
［構造式（１）〜（６）の化合物について］
【００６３】
【化１０】
0005620629.tif 000011
【００６４】
［構造式（７）〜（９）の化合物について］
【００６５】
【化１１】
0005620629.tif 000012
【００６６】
セダモシドＫ（Ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｋ：構造式（１）の化合物）の物性測定値
・性状：  不定形粉末
・旋光度：［α］Ｄ２５：  ＋４０．０°（ｃ＝１．３５，ＭｅＯＨ）
・紫外吸収スペクトル［ＭｅＯＨ，ｎｍ，（ｌｏｇ  ε）］：２４１（４．０６）
・円二色性スペクトル（ＭｅＯＨ，ｎｍ，Δε）：２４２（＋２．９２），２８３（０．０２），３１９（＋０．３７）
・高分解能質量分析（Ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ＥＩ−ＭＳ）：
理論値  Ｃ１９Ｈ３０Ｏ８  （Ｍ＋）  ：  ３８６．１９４０
実測値                          ：  ３８６．１９３６
・赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ，ｃｍ１）：  ３３８９，１６５３，１０７６，１０３６
・質量分析ＥＩ−ＭＳ：  ｍ／ｚ  ３８６  （Ｍ＋，３），３６８（６），２０６（８６），１９０（９２），１７８（１３），１４８（１００）
・核磁気共鳴スペクトル：
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ
0.95,1.06(3H each, both s,11,12−H3),1.43,1.95(1H each, both m,7β,7α−H),1.61(1H,ddd,J=4.0,13.1,13.4Hz,8α−H),2.15(1H,m,8β−H),2.19,2.25(1H each, both d, J=15.6Hz,2α,2β−H),2.23(1H,m,6−H),2.37(1H,d,J=13.9Hz,13α−H),2.70(1H,dd,J=2.1,13.9Hz,13β−H),3.22(1H,dd,J=7.7,9.2Hz,2'−H),3.25(1H,m,5'−H),3.26(1H,dd,J=8.6,8.6Hz,4'−H),3.36(1H,m,3'−H),3.39,3.78(1H each, both d, J=10.7Hz,10−H2),[3.65(1H,dd,J=5.5,11.4Hz),3.83(1H,dd,J=1.8,11.4Hz),6'−H2],4.25(1H,d,J=7.6Hz,1'−H),5.83(1H,br s,4−H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δＣ
35.8(C−1),51.6(C−2),202.5(C−3),125.5(C−4),165.7(C−5),49.3(C−6),24.5(C−7),35.2(C−8),74.5(C−9),74.5(C−10),24.3(C−11),28.9(C−12),46.1(C−13),104.9(C−1'),75.2(C−2'),78.0(C−3'),71.6(C−4'),77.9(C−5'),62.7(C−6')
【００６７】
セダモシドＬ（Ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｌ：構造式（２）の化合物）の物性測定値
・性状：  不定形粉末
・旋光度：［α］Ｄ２５：  ＋３９．６°（ｃ＝１．９０，ＭｅＯＨ）
・紫外吸収スペクトル［ＭｅＯＨ，ｎｍ，（ｌｏｇ  ε）］：２４１（４．１０）
・円二色性スペクトル（ＭｅＯＨ，ｎｍ，Δε）：２３９（＋２．３５），２７８（０．０５），３２１（＋０．４２）
・高分解能質量分析（Ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ＥＩ−ＭＳ）：
理論値  Ｃ１９Ｈ３０Ｏ８  （Ｍ＋）  ：  ３８６．１９４０
実測値                          ：  ３８６．１９３４
・赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ，ｃｍ１）：  ３３８９，１６５３，１０７６，１０３７
・質量分析ＥＩ−ＭＳ：  ｍ／ｚ  ３８６  （Ｍ＋，１），３６８（９），２０６（８５），１９０（１００），１７８（１２），１４８（４）
・核磁気共鳴スペクトル：
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ
0.98,1.07(3H each, both s,11,12−H3),1.78,1.89(1H each, both m,7β,7α−H),1.74,1.81(1H each, both m,8α,8β−H),2.19,2.26(1H each, both d, J=15.6Hz,2α,2β−H),2.19(1H,m,6−H),2.48(1H,d,J=14.6Hz,13α−H),2.54(1H,dd,J=1.9,14.6Hz,13β−H),3.23(1H,dd,J=7.7,9.2Hz,2'−H),3.28(2H,m,4',5'−H),3.36(1H,m,3'−H),3.40,3.83(1H each, both d, J=10.1Hz,10−H2),[3.65(1H,dd,J=5.5,11.9Hz),3.87(1H,dd,J=1.8,11.9Hz),6'−H2],4.29(1H,d,J=7.7Hz,1'−H),5.83(1H,br s,4−H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δＣ
35.7(C−1),51.3(C−2),202.5(C−3),125.6(C−4),167.1(C−5),50.0(C−6),23.7(C−7),34.1(C−8),74.6(C−9),79.0(C−10),24.6(C−11),28.9(C−12),46.1(C−13),105.0(C−1'),75.2(C−2'),77.9(C−3'),71.6(C−4'),78.0(C−5'),62.7(C−6')
【００６８】
セダモシドＭ（Ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｍ：構造式（３）の化合物）の物性測定値
・性状：  不定形粉末
・旋光度：［α］Ｄ２７：  ６３．７°（ｃ＝１．００，ＭｅＯＨ）
・紫外吸収スペクトル［ＭｅＯＨ，ｎｍ，（ｌｏｇ  ε）］：２９０（４．１２）
・円二色性スペクトル（ＭｅＯＨ，ｎｍ，Δε）：２８３（２．６３）
・高分解能質量分析（Ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ＦＡＢ−ＭＳ）：
理論値  Ｃ１９Ｈ２８Ｏ７Ｎａ  （Ｍ＋Ｎａ）＋  ：  ３９１．１７３３
実測値                                  ：  ３９１．１７３８
・赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ，ｃｍ１）：  ３６４９，１６５３，１５７６，１０７６
・質量分析
ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ＦＡＢ−ＭＳ：  ｍ／ｚ  ３９１  （Ｍ＋Ｎａ）＋
・核磁気共鳴スペクトル：
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ
0.88,1.15(3H each, both s,11,12−H3),1.45,2.05(1H each, both m,7β,7α−H),2.17(1H,dd,J=0.9,16.2Hz,2β−H),2.30,2.40(1H each. both m,8β,8α−H),2.44(1H,d,J=16.2Hz,2α−H),2.50(1H,m,6−H),3.23(1H,m,2'−H),3.26(1H,m,5'−H),3.28(1H,m,4'−H),3.36(1H,m,3'−H),[3.66(1H,dd,J=5.5,11.9Hz),3.86(1H,dd,J=2.1,11.9Hz),6'−H2],4.22,4.43(1H each, both d,J=14.7Hz,10−H2),4.29(1H,d,J=7.7Hz,1'−H),5.79(1H,br s,4−H),6.45(1H,s,13−H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δＣ
37.3(C−1),54.7(C−2),202.8(C−3),123.8(C−4),159.7(C−5),46.9(C−6),23.4(C−7),28.2(C−8),151.8(C−9),72.7(C−10),20.3(C−11),29.0(C−12),126.5(C−13),104.0(C−1'),75.1(C−2'),78.1(C−3'),71.6(C−4'),78.0(C−5'),62.8(C−6')
【００６９】
セダモシドＮ（Ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｎ：構造式（４）の化合物）の物性測定値
・性状：  不定形粉末
・旋光度：［α］Ｄ２５：  ２７．６°（ｃ＝０．７０，ＭｅＯＨ）
・円二色性スペクトル（ＭｅＯＨ，ｎｍ，Δε）：２８２（０．７６），３１７（＋０．０２）
・高分解能質量分析（Ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ＥＩ−ＭＳ）：
理論値  Ｃ１９Ｈ３２Ｏ８  （Ｍ＋）  ：  ３８８．２０９７
実測値                          ：  ３８８．２０９９
・赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ，ｃｍ１）：  ３３８９，１７０８，１０７６，１０３５
・質量分析ＥＩ−ＭＳ：  ｍ／ｚ  ３８８  （Ｍ＋，４），２２６（４５），２０８（９６），１９５（６０），１５１（１００）
・核磁気共鳴スペクトル：
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ
0.97,1.05(3H each, both s,11,12−H3),1.10(3H,s,13−H3),1.64,1.71(1H each, both m,8α,8β−H),1.77(2H,m,7−H2),1.80(1H,m,6−H),1.88,2.43(1H each, both d, J=17.4Hz,2α,2β−H),2.09,2.83(1H each, both d, J=17.7Hz,4α,4β−H),3.23(1H,dd,J=7.7,9.2Hz,2'−H),3.27(2H,m,4',5'−H),3.35(1H,dd,J=9.2,9.2Hz,3'−H),3.48,4.04(1H each, both d, J=10.5Hz,10−H2),[3.65(1H,dd,J=5.8,11.9Hz),3.86(1H,dd,J=1.5,11.9Hz),6'−H2],4.22(1H,d,J=7.7Hz,1'−H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δＣ
34.7(C−1),48.8(C−2),217.3(C−3),46.8(C−4),48.8(C−5),56.9(C−6),26.7(C−7),34.7(C−8),84.8(C−9),75.3(C−10),28.3(C−11),30.4(C−12),29.5(C−13),105.0(C−1'),75.1(C−2'),78.0(C−3'),71.7(C−4'),78.1(C−5'),62.8(C−6')
【００７０】
セダモシドＯ（Ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｏ：構造式（５）の化合物）の物性測定値
・性状：  不定形粉末
・旋光度：［α］Ｄ２５：  ３６．９°（ｃ＝０．４１，ＭｅＯＨ）
・高分解能質量分析（Ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ＥＩ−ＭＳ）：
理論値  Ｃ１９Ｈ３２Ｏ８  （Ｍ＋）  ：  ３８８．２０９７
実測値                          ：  ３８８．２１０２
・赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ，ｃｍ１）：  ３３８９，１３８５，１０７５，１０４５
・質量分析ＥＩ−ＭＳ：  ｍ／ｚ  ３８８  （Ｍ＋，１），３７０（２），２２６（２１），２０９（１００），１９１（７７）
・核磁気共鳴スペクトル：
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ
0.96,0.97(3H each, both s,11,12−H3),1.21(3H,s,13−H3),1.29(1H,dd,J=5.8,12.8Hz,2α−H),1.59(ddd, J=8.0,12.5,14.1Hz,8α−H),1.66(1H,dd,J=8.6,10.4Hz,6−H),1.74(1H,dd,J=7.7,14.1Hz,8β−H),1.81,2.01(1H each, both m,7α,7β−H),1.87(1H,dd,J=12.8,12.8Hz,2β−H),3.22(1H,dd,J=7.7,9.2Hz,2'−H),3.28(2H,m,4',5'−H),3.37(1H,dd,J=9.2,9.2Hz,3'−H),3.76,4.19(1H each, both d, J=11.0Hz,10−H2),3.77(1H,ddd,J=0.4,5.8,12.8Hz,3−H),[3.66(1H,ddd,J=1.2,4.3,11.9Hz),3.87(1H,dd,J=1.8,11.9Hz),6'−H2],4.33(1H,d,J=7.7Hz,1'−H),4.69(1H,d,J=4.0Hz,4−H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δＣ
35.4(C−1),36.5(C−2),67.7(C−3),83.5(C−4),50.1(C−5),55.4(C−6),28.3(C−7),34.4(C−8),97.4(C−9),71.3(C−10),28.6(C−11),30.5(C−12),20.7(C−13),104.8(C−1'),75.3(C−2'),78.1(C−3'),71.8(C−4'),78.1(C−5'),62.9(C−6')
【００７１】
セダモシドＪ（Ｓｅｄｕｍｏｓｉｄｅ  Ｊ：構造式（６）の化合物）の物性測定値
・性状：  不定形粉末
・旋光度：［α］Ｄ２１：  ＋２２．９°（ｃ＝０．０６，ＭｅＯＨ）
・円二色性スペクトル（ＭｅＯＨ，ｎｍ，Δε）：２９０（＋０．０５）
・高分解能質量分析（Ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ＦＡＢ−ＭＳ）：
理論値  Ｃ２５Ｈ４４Ｏ１１Ｎａ  （Ｍ＋Ｎａ）＋  ：  ５４３．２７８１
実測値                                    ：  ５４３．２７８６
・赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ，ｃｍ１）：  ３３８９，１７０６，１０６７，１０４７
・質量分析
ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ＦＡＢ−ＭＳ：  ｍ／ｚ  ５４３  （Ｍ＋Ｎａ）＋
・核磁気共鳴スペクトル：
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ
0.77,1.07(3H each, both s,11,12−H3),1.09(3H,d,J=6.1Hz,13−H3),1.14(1H,m,6−H),1.20(3H,d,J=6.1Hz,10−H3),1.20,1.64(1H each, both m,7−H2),1.26(3H,d,J=6.1Hz,6''−H3),1.65,1.72(1H each, both m,8−H2),1.96(1H,dd,J=2.5,13.2Hz,2β−H),2,19(1H,dd,J=12.2,12.2Hz,4α−H),2.22(1H,ddd,J=2.5,4.9,12.2Hz,4β−H),2,39(1H,d,J=13.2Hz,2α−H),3.14(1H,dd,J=7.3,8.6Hz,2'−H),3.23(1H,dd,J=8.5,8.5Hz,4'−H),3.32(1H,m,3'−H),3.36(1H,m,4''−H),3.38(1H,m,5'−H),[3.57(1H,dd,J=6.1,11.0Hz),3.97(1H,dd,J=2.5,11.0Hz),6''−H2],3.64(1H,m,5''−H),3.66(1H,m,3''−H),3.79(1H,m,9−H),3.81(1H,m,2''−H),4.30(1H,d,J=7.3Hz,1'−H), 4.74(1H,br s,1''−H)
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δＣ
40.5(C−1),57.2(C−2),214.6(C−3),50.9(C−4),37.7(C−5),53.7(C−6),26.0(C−7),40.4(C−8),76.5(C−9),20.1(C−10),21.3(C−11),30.4(C−12),21.6(C−13),102.5(C−1'),75.2(C−2'),78.2(C−3'),72.0(C−4'),76.9(C−5'),68.6(C−6'),102.4(C−1''),72.3(C−2''),72.5(C−3''),74.0(C−4''),69.8(C−5''),18.2(C−6'')
【００７２】
サルメノシドＶ（Ｓａｒｍｅｎｏｓｉｄｅ  Ｖ：構造式（７）の化合物）の物性測定値
・性状：  不定形黄色粉末
・旋光度：［α］Ｄ２６：  ＋３０．２°（ｃ＝０．７８，ＭｅＯＨ）
・紫外吸収スペクトル［ＭｅＯＨ，ｎｍ，（ｌｏｇ  ε）］：２５５（４．２９），３５５（４．１３）
・高分解能質量分析（Ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ＦＡＢ−ＭＳ）：
理論値  Ｃ３０Ｈ３４Ｏ１８Ｎａ  （Ｍ＋Ｎａ）＋  ：  ７０５．１６４３
実測値                                    ：  ７０５．１６４０
・赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ，ｃｍ１）：  ３３８９，１７１８，１６５３，１６０３，１５５８，１４５６，１０７５
・質量分析
ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ＦＡＢ−ＭＳ：  ｍ／ｚ  ７０５  （Ｍ＋Ｎａ）＋
・核磁気共鳴スペクトル：
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ
1.74(3H,s,6''−OAc),3.87(3H,s,3'−OCH3),5.08(1H,d, J=7.5Hz,1'''−H),5.45(1H,d,J=7.6Hz,1''−H),6.48,6.84(1H each,  both br s,6,8−H),6.93(1H,d,J=8.4Hz,5'−H),7.59(1H,dd,J=2.4,8.4Hz,6'−H),7.86(1H,d,J=2.4Hz,2'−H),12.57(1H,br s,5−OH)
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δＣ
156.8(C−2),133.2(C−3),177.4(C−4),160.1(C−5),99.3(C−6),162.8(C−7),94.6(C−8),155.9(C−9),105.5(C−10),120.7(C−1'),113.2(C−2'),146.8(C−3'),149.6(C−4'),115.1(C−5'),122.4(C−6'),100.9(C−1''),74.1(C−2''),76.3(C−3''),69.7(C−4''),73.8(C−5''),62.5(C−6''),99.8(C−1'''),73.0(C−2'''),76.0(C−3'''),69.5(C−4'''),77.1(C−5'''),60.5(C−6'''),55.6(OCH3),20.0,169.8(OAc)
【００７３】
サルメノシドＶＩ（Ｓａｒｍｅｎｏｓｉｄｅ  ＶＩ：構造式（８）の化合物）の物性測定値
・性状：  不定形黄色粉末
・旋光度：［α］Ｄ２７：  ＋１４０．３°（ｃ＝１．１５，ＭｅＯＨ）
・紫外吸収スペクトル［ＭｅＯＨ，ｎｍ，（ｌｏｇ  ε）］：２５８（４．０８），２７４（４．０８），３４４（３．９４）
・高分解能質量分析（Ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ＦＡＢ−ＭＳ）：
理論値  Ｃ２８Ｈ３２Ｏ１７Ｎａ  （Ｍ＋Ｎａ）＋  ：  ６６３．１５３７
実測値                                    ：  ６６３．１５４２
・赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ，ｃｍ１）：  ３３８９，１６５３，１６０９，１５４１，１４５８，１０５９
・質量分析
ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ＦＡＢ−ＭＳ：  ｍ／ｚ  ６６３  （Ｍ＋Ｎａ）＋
・核磁気共鳴スペクトル：
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ
1.13(3H,d,J=6.2Hz,6'''−H3),3.85(3H,s,3'−OCH3),5.51(1H,d,J=1.4Hz,1'''−H),5.57(1H,d,J=7.6Hz,1''−H),6.62(1H,br s,6−H),6.94(1H,d,J=8.3Hz,5'−H),7.64(1H,dd,J=2.1,8.3Hz,6'−H),7.99(1H,d,J=2.1Hz,2'−H),12.03(1H,br s,5−OH)
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δＣ
156.6(C−2),132.9(C−3),177.8(C−4),152.0(C−5),98.7(C−6),150.4(C−7),126.9(C−8),144.4(C−9),105.4(C−10),121.1(C−1'),113.4(C−2'),146.8(C−3'),149.4(C−4'),115.1(C−5'),122.4(C−6'),100.6(C−1''),74.2(C−2'''),76.3(C−3''),69.8(C−4''),77.3(C−5''),60.5(C−6''),99.1(C−1'''),69.7(C−2'''),69.9(C−3'''),71.6(C−4'''),69.7(C−5'''),17.8(C−6'''),55.5(OCH3)
【００７４】
サルメノシドＶＩＩ（Ｓａｒｍｅｎｏｓｉｄｅ  ＶＩＩ：構造式（９）の化合物）の物性測定値
・性状：  不定形黄色粉末
・旋光度：［α］Ｄ２７：  −９．０°（ｃ＝０．５４，ＭｅＯＨ）
・紫外吸収スペクトル［ＭｅＯＨ，ｎｍ，（ｌｏｇ  ε）］：２５７（４．２２），３５８（４．０５）
・高分解能質量分析（Ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ＦＡＢ−ＭＳ）：
理論値  Ｃ３１Ｈ３６Ｏ１９Ｎａ  （Ｍ＋Ｎａ）＋  ：  ７３５．１７４８
実測値                                      ：  ７３５．１７５２
・赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ，ｃｍ１）：  ３４２０，１７２０，１６５３，１６０１，１５５９，１４５６，１０７１
・質量分析
ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ＦＡＢ−ＭＳ：  ｍ／ｚ  ７３５  （Ｍ＋Ｎａ）＋
・核磁気共鳴スペクトル：
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ
1.74(3H,s,OAc),3.87.3.87(3H each, both s,8,3'−OCH3),5.08(1H,d,J=7.6Hz,1'''−H),5.45(1H,d,J=7.6Hz,1''−H),6.68(1H,br s,6−H),6.96(1H,d,J=8.3Hz,5'−H),7.60(1H,dd,J=2.0,8.3Hz,6'−H),7.90(1H,d,J=2.0Hz,2'−H),12.28(1H,br s,5−OH)
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δＣ
156.5(C−2),133.1(C−3),177.6(C−4),155.6(C−5),98.5(C−6),156.0(C−7),128.9(C−8),147.9(C−9),105.1(C−10),120.8(C−1'),113.1(C−2'),146.8(C−3'),149.8(C−4'),115.3(C−5'),122.2(C−6'),101.1(C−1''),74.1(C−2''),76.5(C−3''),69.7(C−4''),73.8(C−5''),62.6(C−6''),100.2(C−1'''),73.0(C−2'''),76.0(C−3'''),69.5(C−4'''),77.1(C−5'''),60.5(C−6'''),55.4,61.2(OCH3),20.0,169.7(OAc)
【００７５】
実施例９  ＨｅｐＧ２細胞を用いた脂肪代謝促進作用試験
実施例３で得られたメタノール溶出部、水溶出部、実施例５で得られたセダモシドＭ（構造式（３）の化合物）、実施例６で得られたセダモシドＫ（構造式（１）の化合物）、セダモシドＮ（構造式（４）の化合物）、実施例７で得られたサルメノシドＶ（構造式（７）の化合物）、サルメノシドＶＩＩ（構造式（９）の化合物）について、脂肪代謝改善作用の指標として、ＨｅｐＧ２細胞を用いた細胞内脂肪代謝促進作用試験を実施した。試験方法を以下に示す。
【００７６】
大日本住友製薬社より購入したヒト肝がん由来ＨｅｐＧ２細胞を用いた。培地はｍｉｎｉｍｕｍ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｍｅｄｉｕｍ  Ｅａｇｌｅ（ＭＥＭ，シグマ−アルドリッチ社）に１０％（ｖ／ｖ）ｆａｔａｌ  ｃａｌｆ  ｓｅｒｕｍ（ＦＣＳ）及び１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬペニシリンＧ、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン及び０．１ｍＭ非必須アミノ酸（インビトロジェン社）を添加して使用した。細胞の培養は、７５ｃｍ２培養フラスコ（ファルコン社）中で行い、５％ＣＯ２雰囲気下３７℃にて行った。継代操作は，培養した細胞をダルベッコＰＢＳ（−）（日水製薬社）で洗浄した後、０．０２％（ｗ／ｖ）トリプシン（ディフコ社）及び０．０５％（ｗ／ｖ）ＥＤＴＡ・２Ｎａ（同人化学社）を含むＰＢＳ（−）により剥離して、定法に従い行った。
【００７７】
ＨｅｐＧ２細胞を１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ（２００μＬ／ｗｅｌｌ）の細胞密度で４８穴培養プレート（住友ベークライト社）に播種して実験を行った。培養１日後、被験サンプルを含む高濃度グルコース（４５００ｍｇ／Ｌ）含有ＤＭＥＭ（２００μＬ／ｗｅｌｌ）に培地交換して計６日間（２日に１回培地を交換）培養した。高濃度グルコース含有ＤＭＥＭによる培養終了後、被験サンプルを添加した低濃度グルコース（１０００ｍｇ／Ｌ）含有ＤＭＥＭ（２００μＬ／ｗｅｌｌ）に培地交換して、さらに２０時間培養した。
【００７８】
培養期間終了後、培養上清を除去、次いで蒸留水（１００μＬ／ｗｅｌｌ）を加え、超音波破砕機にて細胞を破砕した後、培養プレートを遠心分離（３０００ｒｐｍ，１０ｍｉｎ，ｒ．ｔ．）に付し細胞破砕液を得た。得られた細胞破砕液の中性脂肪濃度及びタンパク質濃度は、それぞれ市販キットであるトリグリセリドＥテストワコー（和光純薬工業社）及びＢＣＡｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（Ｐｉｅｒｃｅ社）を使用して定量した。尚、定量結果については、タンパク質あたりの中性脂肪量（下表のＴＧ／Ｐｒｏｔｅｉｎ）で算出し、対照群に対する相対値（％  ｏｆ  ｃｏｎｔｒｏｌ）として表した。
【００７９】
【表１】
0005620629.tif 000013
【００８０】
【表２】
0005620629.tif 000014
【００８１】
前記表１及び表２中の値は、平均値±標準誤差（Ｎ＝４）で表記し、末尾の符号「＊」および「＊＊」は、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定で検定した対照との有意差：ｐが０．０５および０．０１未満であったことを表す。
【００８２】
表１及び表２の結果より、垂盆草の全草の熱水抽出エキスのメタノール可溶性画分を、多孔質ポリマーカラム（ダイアイオンＨＰ−２０）を通じて調製したメタノール溶出部及び水溶出部、及び構造式（１）、（３）、（４）、（７）及び（９）で表される化合物は、ＨｅｐＧ２細胞を用いた脂肪代謝促進作用試験において有意な脂肪代謝改善作用あるいは脂肪代謝改善傾向を有することがわかる。また、脂肪代謝促進作用試験において有意な脂肪代謝改善作用あるいは脂肪代謝改善傾向を有した化合物に構造類似の、構造式（２）、（５）及び（６）で表されるメガスチグマン化合物、構造式（８）で表されるフラボノイド化合物についても、同様の作用を有すると推定される。
【００８３】
とりわけ、構造式（１）のセダモシドＫ及び構造式（３）のセダモシドＬは、市販抗高脂血症薬であるＰＰＡＲ−γアゴニストのクロフィブレートよりも強力な脂肪代謝改善効果を有することが判明した。