(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウスバサイシンメタノール抽出物のヘキサン分画物を有効成分として含む、ヤマトシロアリ（Ｒｅｔｉｃｕｌｔｉｔｅｒｍｅｓ  ｓｐｅｒａｔｕｓ）の防虫または殺虫用組成物。  
【請求項２】
請求項１の組成物を直接噴霧法、塗布法、薫蒸法、芳香処理法または包装法で文化財に処理する工程を含む文化財保存方法。
【請求項３】
前記文化財が、有機質文化財であることを特徴とする、請求項２に記載の文化財保存方法。
【請求項４】
前記有機質文化財が、木材類、紙類または繊維類であることを特徴とする、請求項３に記載の文化財保存方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウスバサイシン（Ａｓａｒｕｍ  ｓｉｅｂｏｌｄｉｉ）抽出物またはその分画物を有効成分として含む、白蟻防虫または殺虫用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
私たちの身近にある文化財は、材質上、金属、石材、木材、紙類及び繊維質などに区分することができ、その材質特性と保存条件、期間によって多様な損傷が起きて文化財の寿命が短縮される。大部分の文化財は、現在まで原型を維持しながら降雨、風、太陽光線などによる自然環境的風化現象と管理者及び観覧者等の無分別な人為的な行為によって破損されているのが実情である。そして、材質が有機質である紙類、繊維質、木材のような文化財は、昆虫及び微生物による生物学的被害が付加されることによって無機質文化財に比べて保存の面で細心な注意と管理が求められる。
【０００３】
特に、文化財の生物被害の中で、虫食いは文化財自体の材質が営養分であるため、昆虫によって蚕食されて損失する。一旦被害が発生した場合、被害程度が激甚であり発生頻度が散発的であるので、屋内外に所在している文化財を保存管理するにおいて加害昆虫の防除は、日常化されている予防方法でありかつ非常に重要な処理方法である。
【０００４】
一般的に材質が木材及び紙類、繊維質である文化財に危害をあたえる昆虫は、白蟻目（Ｉｓｏｐｔｅｒａ）、甲虫目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）、シミ目（Ｔｈｙｓａｎｕｒａ）、ゴキブリ目（Ｂｌａｔｔａｒｉａ）、蜂目（Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ）、噛虫目（Ｐｓｏｃｏｐｔｅｒａ）などの６目が存在し、その中で白蟻目と甲虫目による加害度が非常に大きい方である。
【０００５】
白蟻（Ｒｅｔｉｃｕｌｉｔｅｒｍｅｓ  ｓｐｅｒａｔｕｓ）は、社会生活をする昆虫であって女王蟻が階級分化を通じて集団を成し、１ヶ所で３０年以上にわたって定着して生活しながら人間に被害を与える害虫である。白蟻は、全世界各地域で伐採された木や家屋内部の木材、電信柱、木造橋、鉄道の枕木及び甚だしくは農作物に対する被害が報告されていて、国内の場合にも慶尚南道の海印寺などの国宝級文化財に対する被害等が知られるようになった。
【０００６】
ウスバサイシン（Ａｓａｒｕｍ  ｓｉｅｂｏｌｄｉｉ）は、ウマノスズクサ科（Ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉａｃｅａｅ）に属する多年生植物であり、ケイリンサイシン（Ａｓａｒｕｍ  ｈｅｔｅｒｏｔｒｏｐｏｉｄｅｓ  Ｆ．Ｍａｅｋａｗａ  ｖａｒ．ｍａｎｄｓｈｕｒｉｃｕｍ  Ｆ．Ｍａｅｋａｗａ）またはウスバサイシン／シノニム（Ａｓａｒｕｍ  ｓｉｅｂｏｌｄｉｉ  ｖａｒ．ｓｅｏｕｌｅｎｓｉｓ）の根を薬用にする。ウスバサイシンの成分としては、メチルオイゲノール（ｍｅｔｈｙｌｅｕｇｅｎｏｌ）、シネオール（ｃｉｎｅｏｌ）、リモネン（エステラゴ−ル）［ｌｉｍｏｎｅｎｅ（Ｅｓｔｒａｇｏｌｅ）］、ユカボン（アズレン）［ｅｕｃａｒｖｏｎｅ（ａｚｕｌｅｎｅ）］、エレミシン（ｅｌｅｍｉｃｉｎ）、カクオール（ｋａｋｕｏｌ）、γ−アサロン（γ−ａｓａｒｏｎｅ）、アシルケトン（ａｃｙｌｋｅｔｏｎｅ）などを含むことが報告されていて、ウスバサイシンの抽出物は、解熱、鎮静、鎮痛、抗炎症、抗菌作用などを示すと報告されている。
【０００７】
一般的に文化財に対する昆虫被害を防止するためには、第一に周期的な文化財の保存管理が必須であり、二番目に昆虫被害の発見時に加害昆虫の生理及び習性、生態などを解明して、「どんな種類の昆虫か」を確認しなければならないし、三番目に文化財材質に損傷を与えない範囲内で昆虫の種類による適切な防除方法を選択適用することによって、文化財の昆虫被害を最小限に減らすことができると思慮される。
【０００８】
しかし、最近になって環境に対する問題が台頭してきており、世界的に今まで使用されてきたメチルブロマイドの使用に対して、漸次的に使用量を減少させ、結局、使用を禁止する方案が協議されて、その代替物質の必要性が高まってきている。代替防除物質は、環境に安定的で人畜に影響を及ぼさず、防除効果が高いことが求められていて、それを捜すための努力が切実に求められている。
【０００９】
一方、特許文献１は、石菖蒲（岩菖蒲）を含む混合植物抽出物が殺虫効果があることを開示していて、特許文献２は、硫黄、絹雲母及び発酵黒ニンニク混合物が殺虫効果があることを開示していて、特許文献３は、シアノスルホキシミン化合物が殺虫効果があることを開示しているが、ウスバサイシン抽出物の白蟻に対する防虫または殺虫効果に対しては報告されたことがない。
【００１０】
そこで、本発明者等は、環境及び人畜に安全で効果的に白蟻を防除する方法を研究した結果、ウスバサイシン抽出物またはその分画物が文化財加害害虫である白蟻に対して優秀な防虫または殺虫効果を示すことを確認して本発明を完成した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】韓国出願番号１０−２００１−００２６１７９号明細書
【特許文献２】韓国出願番号１０−２００７−００３３３４４号明細書
【特許文献３】韓国出願番号１０−２０１０−７０１３１４６号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の目的は、ウスバサイシン抽出物または分画物を有効成分として含む白蟻科昆虫の防虫または殺虫用組成物を提供することである。
【００１３】
本発明の他の目的は、本発明の組成物を直接噴霧法、塗布法、薫蒸法、芳香処理法または包装法で文化財に処理する工程を含む文化財保存方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
前記目的を達成するために、本発明はウスバサイシン抽出物（Ａｓａｒｕｍ  ｓｉｅｂｏｌｄｉｉ）を有効成分として含む白蟻科（Ｒｅｔｉｃｕｌｉｔｅｒｍｅｓ  ｓｐｅｒａｔｕｓ）昆虫の防虫または殺虫用組成物を提供する。
【００１５】
また、本発明はウスバサイシン抽出物の有機溶媒分画物を有効成分として含む白蟻科昆虫の防虫または殺虫用組成物を提供する。
【００１６】
同時に、本発明は本発明の組成物を直接噴霧法、塗布法、薫蒸法、芳香処理法または包装法で文化財に処理する工程を含む文化財保存方法を提供する。
【発明の効果】
【００１７】
本発明のウスバサイシン抽出物またはその有機溶媒分画物は、木造建築物及び文化財に大きな害を与える白蟻に対して優秀な防虫または殺虫効果を示すので、木造建築物及び文化財に損傷を与えずに人畜に影響を及ぼさないで安全かつ環境にやさしい白蟻防虫または殺虫用組成物として有用に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、ウスバサイシン抽出物を白蟻に適用させた殺虫率を示した図である。
【図２】図２は、ウスバサイシンメタノール分画物を白蟻に適用させた殺虫率を示した図である。
【図３】図３は、ウスバサイシンメチレンクロライド分画物を白蟻に適用させた殺虫率を示した図である。
【図４】図４は、ウスバサイシンエチルアセテート分画物を白蟻に適用させた殺虫率を示した図である。
【図５】図５は、ウスバサイシン抽出物をヘキサン分画を経ずにメチレンクロライドにすぐ分画した分画物を白蟻に適用させた殺虫率を示した図である。
【図６】図６は、ウスバサイシン抽出物を経口投与した後、雄ラットの体重変化を確認した図である。
【図７】図７は、ウスバサイシン抽出物を経口投与した後、雌ラットの体重変化を確認した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明を詳しく説明する。
【００２０】
本発明は、ウスバサイシン抽出物を有効成分として含む白蟻科昆虫の防虫または殺虫用組成物を提供する。
【００２１】
前記ウスバサイシン抽出物は、下記の工程を含む製造方法によって製造することが好ましいがこれに限定されない。
１）ウスバサイシンに抽出溶媒を加えて抽出する工程と、
２）工程１）の抽出物をろ過する工程、及び
３）工程２）のろ過した抽出物を高圧濃縮した後に乾燥する工程。
【００２２】
前記方法において、工程１）のウスバサイシンは、栽培したものまたは市販のものなどを制限なしに使用することができる。
【００２３】
前記ウスバサイシンは、葉、幹または根を用いることが好ましく、幹または根を用いることがより好ましく、根を用いることが最も好ましいが、これに限定されない。
【００２４】
前記抽出溶媒は、水、アルコールまたはそれらの混合物を用いることが好ましい。前記アルコールとしては、Ｃ１〜Ｃ２の低級アルコールを用いることが好ましく、低級アルコールでは、エタノールまたはメタノールを用いることが好ましい。抽出方法では、振蘯抽出、ソックスレー抽出または還流抽出を用いることが好ましいが、これに限定されない。乾燥したウスバサイシン分量の１〜１０倍の前記抽出溶媒をウスバサイシンに添加して抽出することが好ましい。抽出温度は、３０〜１００℃であることが好ましいがこれに限定されない。また、抽出時間は１０〜４８時間であることが好ましく、１５〜３０時間であることがさらに好ましいがこれに限定されない。同時に、抽出回数は３〜５回であることが好ましく、３回反復して抽出することがさらに好ましいがこれに限定されるのではない。
【００２５】
前記方法において、工程３）の高圧濃縮は真空遠心濃縮機、真空減圧濃縮機または真空回転蒸発機を用いることが好ましいが、これに限定されない。また、乾燥は減圧乾燥、真空乾燥、沸騰乾燥、噴霧乾燥または凍結乾燥することが好ましいが、これに限定されない。
【００２６】
前記白蟻科の昆虫は、ムカシシロアリ（Ｍａｓｔｏｔｅｒｍｉｔｉｄａｅ）、オオシロアリ（Ｔｅｒｍｏｐｓｉｄａｅ）、レイビシロアリ（Ｋａｌｏｔｅｒｍｉｔｉｄａｅ）、ホデテルミチデ（Ｈｏｄｅｔｅｒｍｉｔｉｄａｅ）、白蟻科（Ｒｈｉｎｏｔｅｒｍｉｔｉｄａｅ）、テルミチデ（Ｔｅｒｍｉｔｉｄａｅ）科であることが好ましく、白蟻科（ｒｈｉｎｏｔｅｒｍｉｔｉｄａｅ）であることがより好ましく、ヤマトシロアリ（Ｒｅｔｉｃｕｌｔｉｔｅｒｍｅｓ  ｓｐｅｒａｔｕｓ）またはヤマトシロアリキュウシュウエンシスモリモト（Ｒ．ｓｐｅｒａｔｕｓ  ｋｙｕｓｈｕｅｎｓｉｓ  Ｍｏｒｉｍｏｔｏ）であることがさらに好ましく、ヤマトシロアリであることが最も好ましいが、これに限定されない。
【００２７】
また、本発明は、ウスバサイシン抽出物の有機溶媒分画物を有効成分として含む白蟻科（Ｒｅｔｉｃｕｌｉｔｅｒｍｅｓ  ｓｐｅｒａｔｕｓ）昆虫の防虫または殺虫用組成物を提供する。
【００２８】
前記ウスバサイシン抽出物の分画物は、下記の工程を含む製造方法によって製造されることが好ましいが、これに限定されない。
１）ウスバサイシンに抽出溶媒を加えて抽出する工程と、
２）工程１）の抽出物を冷却後にろ過する工程、及び
３）工程２）のろ過した抽出物を高圧濃縮後に乾燥する工程、及び
４）工程３）乾燥した抽出物を有機溶媒を加えて分画物を製造する工程。
【００２９】
前記方法において、工程１）のウスバサイシンは、栽培されたものまたは市販のものなどを制限なしに使用することができる。
【００３０】
前記方法において、工程４）の有機溶媒は、ヘキサン（ｎ−ｈｅｘａｎｅ）、ジクロロメタン及びエチルアセテートであることが好ましく、エチルアセテートであることがさらに好ましいがこれに限定されない。
【００３１】
前記方法において、工程４）の分画物は、メタノール抽出物を蒸留水に懸濁して同量のヘキサン（ｎ−ｈｅｘａｎｅ）を混合した後、分液ロートに入れて分画してヘキサン層を分離除去した後、残った水層に同量のメチレンクロライドを混合した後、メチレンクロライド層を分離除去した後、残った水層に再び同量のエチルアセテートを混合して分画した後、エチルアセテート層を分離濃縮した後に凍結乾燥してエチルアセテート分画を製造することが好ましい。
【００３２】
前記分画物は、前記ウスバサイシン抽出物から分画過程を１〜５回、好ましくは３回反復して得ることができ、分画後に減圧濃縮することが好ましいがこれに限定されない。
【００３３】
本発明の具体的な実施例で、本発明者等はウスバサイシンメタノール抽出物、ウスバサイシンヘキサン分画物、ウスバサイシンメチレンクロライド及びウスバサイシンエチルアセテート分画物をそれぞれ製造した。
【００３４】
本発明の具体的な実施例で、本発明者等はウスバサイシンメタノール抽出物の白蟻に対する殺虫効果を確認した結果、ウスバサイシンメタノール抽出物は２４時間と４８時間経過後には大きな殺虫活性を示さなかったが、７２時間後に殺虫活性が急激に高くなることを確認した。また、少量の０．００４ｇ／ｍｌでも６８．３％の殺虫率が示され、それ以上の濃度では８０％に達する殺虫率が示された。そして残りの生き残った個体も、ほとんど活動が不可能な程度のノックダウン（ｋｎｏｃｋ  ｄｏｗｎ）になり、白蟻に対する殺虫効果が優れていることを確認することができた（図１参照）。
【００３５】
本発明の具体的な実施例で、本発明者等はウスバサイシンヘキサン抽出物の白蟻に対する殺虫効果を確認した結果、ウスバサイシンヘキサン分画物の殺虫活性は、濃度が高いほど２４時間後から優れた殺虫活性を確認することができた。０．００５ｇ／ｍｌでも８０％以上の殺虫効果が示され、４８時間後にはほとんど１００％に達する殺虫活性を示した。しかし、０．００４ｇ／ｍｌの濃度では急激に殺虫活性が低くなり、４０％以下の殺虫活性が示されて殺虫物質の開発に相応しい濃度は、０．００４ｇ／ｍｌから０．００５ｇ／ｍｌの濃度が適正水準であることを確認した（図２参照）。
【００３６】
本発明の具体的な実施例で、本発明者等はウスバサイシンメチレンクロライド分画物及びウスバサイシンエチルアセテート分画物の白蟻に対する殺虫効果を確認した結果、ウスバサイシンメチレンクロライド分画物及びエチルアセテート分画物は、すべての濃度で殺虫効果がほとんどなかったため、ウスバサイシンの主要殺虫活性物質は、最初に分画を実施したヘキサン層ですべて分画されたことを確認した（図３ないし図５参照）。
【００３７】
本発明の具体的な実施例で、本発明者等はウスバサイシンの毒性が及ぼす影響を確認するために、ウスバサイシン抽出物を経口投与した後、一般症状、体重変化及び剖検を行なった結果、本発明のウスバサイシンは経口投与時の毒性がない安全な物質であることを確認した（図６及び図７参照）。
【００３８】
したがって、本発明のウスバサイシン抽出物またはその有機溶媒分画物は、木造建築物及び文化財に大きな被害を与える白蟻に対して優れた防虫または殺虫効果を示すので、木造建築物及び文化財に損傷を与えずに人畜に影響を及ぼさないで安全かつ環境にやさしい白蟻防虫または殺虫用組成物として有用に用いることができる。
【００３９】
また、本発明は、本発明の組成物を直接噴霧法、塗布法、薫蒸法、芳香処理法または包装法で文化財に処理する工程を含む文化財保存方法を提供する。
【００４０】
前記本発明の組成物は、ウスバサイシンメタノール抽出物、ウスバサイシンヘキサン分画物、ウスバサイシンメチレンクロライド分画物及びウスバサイシンエチルアセテート分画物であることが好ましく、ウスバサイシンメタノール抽出物及びウスバサイシンヘキサン分画物がより好ましく、ウスバサイシンメタノール抽出物及びウスバサイシンヘキサン分画物それぞれを０．００１〜０．００８ｇ／ｍｌの濃度で７０％エタノール溶液に希釈したものが最も好ましいが、これに限定されない。
【００４１】
前記文化財は、有機質文化財であり得、前記有機質の文化財は、木材類、紙類または繊維類で、もっと好ましくは木材文化財であり、前記文化財に適用するための本発明の防虫または殺虫用組成物は、抽出された揮発性抽出物を純粋にまたは使用に相応しい濃度に希釈して用いることができる。前記防虫または殺虫用組成物を文化財に適用するための手段としては、直接噴霧法、塗布法、薫蒸法、芳香処理法、防虫または殺虫用組成物が塗布された包装紙で包装する方法などがあるが、これらに限定されない。また、本発明の防虫または殺虫用組成物を文化財に適用するための剤形としては、直接噴霧のためのエアゾール、薫蒸処理や芳香処理するためのチンキ剤、液剤、徐放性剤形のためのゲルマトリックスなどを挙げることができるが、これらに限定されない。
【００４２】
本発明の防虫または殺虫用組成物の文化財適用有効量は、含まれた成分と適用手段によって異なるが、例えば芳香処理法では空気中の濃度が一般的に５０ｍｌ／ｍ３以上、好ましくは１２５ｍｌ／ｍ３以上になるように調節する。
【００４３】
本発明のウスバサイシン抽出物またはその有機溶媒分画物は、木造建築物及び文化財に大きな被害を与える白蟻に対して、安全で環境にやさしい防虫または殺虫効果を示すので、木造建築物及び文化財を保存する方法として有用に用いることができる。
本開示は下記の実施形態を含む。
＜１＞  ウスバサイシン抽出物（Ａｓａｒｕｍ  ｓｉｅｂｏｌｄｉｉ）を有効成分として含む白蟻科（Ｒｅｔｉｃｕｌｉｔｅｒｍｅｓ  ｓｐｅｒａｔｕｓ）昆虫の防虫または殺虫用組成物。
＜２＞  前記白蟻科昆虫が、ヤマトシロアリ（Ｒｅｔｉｃｕｌｔｉｔｅｒｍｅｓ  ｓｐｅｒａｔｕｓ）またはヤマトシロアリキュウシュウエンシスモリモト（Ｒ．ｓｐｅｒａｔｕｓ  ｋｙｕｓｈｕｅｎｓｉｓ  Ｍｏｒｉｍｏｔｏ）であることを特徴とする、＜１＞に記載の防虫または殺虫用組成物。
＜３＞  前記白蟻科昆虫が、ヤマトシロアリであることを特徴とする、＜１＞に記載の防虫または殺虫用組成物。
＜４＞  前記ウスバサイシン抽出物が、メタノール、エタノール、水またはこれらの混合溶媒抽出物であることを特徴とする、＜１＞に記載の防虫または殺虫用組成物。
＜５＞  前記ウスバサイシン抽出物が、メタノール抽出物であることを特徴とする、＜１＞に記載の防虫または殺虫用組成物。
＜６＞  ウスバサイシン抽出物の有機溶媒分画物を有効成分として含む、白蟻科昆虫の防虫または殺虫用組成物。
＜７＞  前記有機分画物が、ヘキサン分画物であることを特徴とする、＜６＞に記載の防虫または殺虫用組成物。
＜８＞  ＜１＞の組成物を直接噴霧法、塗布法、薫蒸法、芳香処理法または包装法で文化財に処理する工程を含む文化財保存方法。
＜９＞  ＜６＞の組成物を直接噴霧法、塗布法、薫蒸法、芳香処理法または包装法で文化財に処理する工程を含む文化財保存方法。
＜１０＞  前記文化財が、有機質文化財であることを特徴とする、＜８＞または＜９＞に記載の文化財保存方法。
＜１１＞  前記有機質文化財が、木材類、紙類または繊維類であることを特徴とする、＜１０＞に記載の文化財保存方法。
【００４４】
以下、本発明を実施例及び実験例によって詳しく説明する。
【００４５】
ただし、下記の実施例及び実験例は本発明を例示するだけのものであって、本発明の内容が下記の実施例及び実験例に限定されるのではない。
【００４６】
＜実施例１＞ウスバサイシン（Ａｓａｒｕｍ  ｓｉｅｂｏｌｄｉｉ）メタノール抽出物の製造
ウスバサイシンを市中で販売中の漢方薬商で購入して、葉は除去して陰干しした後、５０ｌ容量のプラスチック筒に陰干ししたウスバサイシン７．５ｋｇを入れてメタノール２０ｌをいっぱいに満たした後、常温で一週間程度浸けておいた後に、ろ過紙（Ａｄｖａｎｔｅｃ  Ｎｏ．２）を用いてろ過した後、真空遠心濃縮機（ＥＹＥＬＡ、ＭＶ−１００／日本）に容量２ｌのガラス容器に入れて真空濃縮させてメタノールを除去し、その結果、ウスバサイシンメタノール抽出物３００ｇを得た。
【００４７】
＜実施例２＞ウスバサイシン分画物の製造
ウスバサイシン分画物を製造するために、溶媒別極性差を用いて溶媒分画を実施した。
【００４８】
具体的に、前記＜実施例１＞で濃縮したウスバサイシンメタノール抽出物溶液を１次蒸留水に１：１の割合で混合して懸濁させた後、分別ロート（Ｄｕｒａｎ  ２ｌ）にｎ−ヘキサンと懸濁させた溶液を１：１の割合で混合して振った後、５分程度後に分離した分別ロートの上層液を集めて真空遠心濃縮機に入れてヘキサンを除去した。前記と同一な方法をさらに２回実施してヘキサン分画物を得た。前記ヘキサン分画物を分画して残った水と混じった抽出物は、再び１：１の割合で１次蒸留水と混合して分別ロートに入れて、メチレンクロライドを１：１の割合で混合してヘキサン分画と同じ方法で分画を実施して、ウスバサイシンメチレンクロライド分画物を得た。ただし、メチレンクロライドは、下層部溶液を取って真空遠心濃縮機で除去した。その後、残った抽出物をヘキサン分画と同じ方法でエチルアセテートと混合してウスバサイシンエチルアセテート分画物を得た。
【００４９】
＜実施例３＞ウスバサイシン抽出物またはその分画物を有効成分として含む組成物の製造
ウスバサイシン抽出物またはその分画物を有効成分として含む組成物を製造するために、前記＜実施例１＞または＜実施例２＞で得たウスバサイシンメタノール抽出物、ヘキサン分画物、メチレンクロライド分画物、エチルアセテート分画物及びヘキサン分画を経ないメチレンクロライド分画物をそれぞれ０．００１〜０．００８ｇ／ｍｌの濃度で７０％エタノール溶液に希釈して、ウスバサイシン抽出物またはその分画物を有効成分として含む組成物を製造した。
【００５０】
＜実験例１＞ウスバサイシン抽出物またはその分画物の殺虫活性測定
＜１−１＞白蟻の飼育
ウスバサイシン抽出物またはその分画物の殺虫活性を測定するために、木造建築物及び文化財に大きな被害を与える白蟻を対象に実験を進行するために、白蟻を採集した後、飼育した。
【００５１】
具体的に白蟻科（Ｒｅｔｉｃｕｌｉｔｅｒｍｅｓ  ｓｐｅｒａｔｕｓ）昆虫は、野外で採集した個体群を利用し、大田広域市儒城区道龍洞花峰山で採取して室内で累代飼育したもので、個体の中で木造建築物に直接的に被害を及ぼす働き蟻を選別して使用した。
【００５２】
＜１−２＞ウスバサイシン抽出物またはその分画物の殺虫効果確認
ウスバサイシン抽出物またはその分画物の殺虫効果を確認するために、ペトリ皿（直径  ５５ｍｍ、ＳＰＬ）のふたにフィルターペーパー（５５ｍｍ、Ｈｙｕｎｄａｉ  ｍｉｃｒｏ）を両面テープを用いて付着させた後、マイクロピペットを用いて前記＜実施例１＞及び＜実施例２＞で製造したウスバサイシン抽出物またはその分画物それぞれ２５０μｌをフィルターペーパーに振り撤いた後、３０分間陰干しした。その後、乾燥に弱い白蟻の特性を勘案してペトリ皿の底に１次蒸留水で濡らしたフィルターペーパーを敷いた後、フィルターペーパーの上に働き蟻２０匹を乗せて１反復とした。実験は、濃度別に２０匹ずつ  合計３回反復し、対照群には７０％エタノールを使用した。同時に、白蟻はタバコシバンムシに比べて予備実験で相対的にずっと低い濃度でも殺虫活性を示したので非常に薄い濃度で実験を行なった。
【００５３】
その結果、図１に示したようにウスバサイシンメタノール抽出物は、２４時間と４８時間経過後には大きな殺虫活性を示さなかったが、７２時間後に殺虫活性が急激に高くなることを確認した。また、少量の０．００４ｇ／ｍｌでも６８．３％の殺虫率が示され、それ以上の濃度では８０％に達する殺虫率が示された。そして、残りの生き残った個体もほとんど活動が不可能な程度にノックダウン（ｋｎｏｃｋ  ｄｏｗｎ）していて、白蟻に対する殺虫効果が優れていることを確認することができた（図１）。
【００５４】
また、図２に示したように、ウスバサイシンヘキサン分画物の殺虫活性は、濃度が高いほど２４時間後から優れた殺虫活性を確認することができた。０．００５ｇ／ｍｌでも８０％以上の殺虫効果を示し、４８時間後にはほとんど１００％に達する殺虫活性を示した。しかし、０．００４ｇ／ｍｌの濃度では急激に殺虫活性が低くなって、４０％以下の殺虫活性が示されたので殺虫物質開発の濃度は、０．００４ｇ／ｍｌから０．００５ｇ／ｍｌの濃度が適正水準であることを確認した（図２）。
【００５５】
また、図３及び図４に示したように、ウスバサイシンメチレンクロライド分画物及びエチルアセテート分画物は、すべての濃度で殺虫効果がほとんどなかったので、ウスバサイシンの主要殺虫活性物質は、最初に分画を実施したヘキサン層にすべて分画されたことを確認した（図３及び図４）。
【００５６】
＜１−３＞ウスバサイシンヘキサン分画を経ないメクルレンクルロライド分画物の殺虫効果確認
ヘキサン分画を経た後のメチレンクロライド分画物で殺虫効果がほとんどなかったので、殺虫成分がメチレンクロライド分画層では分画されないのかどうかを調べるために、前記＜実施例２＞と同一な方法を用いてウスバサイシンのメタノール抽出物をヘキサン分画を経ないで直ちにメチレンクロライドで分画を実施した。
【００５７】
その結果、図５に示したようにヘキサン分画を経ない本発明のメチレンクロライド分画物は、ウスバサイシンヘキサン分画物と類似の殺虫効果を示すことを確認した。また、前記実験例＜１−２＞で確認したように、ウスバサイシンヘキサン分画物の場合、２４時間後に非常にすぐれた殺虫効果が示され、０．００５ｇ／ｍｌで４８時間後にほとんど１００％の殺虫効果が出た一方、ヘキサン分画を経ない本発明のメチレンクロライド分画物は、４８時間経過後に殺虫効果が良いことが示され、０．００５ｇ／ｍｌの濃度で４８時間後に８３．３％の殺虫効果が示されることを確認した。したがって、ヘキサン分画を経た後にメチレンクロライドで分画をしなくても、すぐにメチレンクロライドで分画をしても殺虫活性成分が分画されることを確認した（図５）。
【００５８】
＜実験例２＞ウスバサイシン殺虫活性物質の経口投与毒性試験
ウスバサイシンの毒性が及ぼす影響を評価するために、ラットを用いて経口投与時に示される毒性反応を観察して概略の致死量（概略のＬＤ５０）を求めるために試験を実施した。具体的には、ウスバサイシン抽出物を０．２ｇ／ｍｌの濃度で１次蒸留水に希釈して（株）バイオテクステックに依頼した結果を使用した。
【００５９】
＜２−１＞試験物質の調剤
試験物質は、電子秤（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、ドイツ）で秤量して調剤ビンに入れて、賦形剤（Ｃｈｏｏｎｇｗａｅ  Ｐｈａｒｍａ  Ｃｏｒｐ．,韓国）を一部入れてボルテックスミキサーで懸濁させて、賦形剤を加えて規定濃度に調剤した。
【００６０】
＜２−２＞試験動物の準備
試験対象動物は、ラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）に投与した。ラットは、医薬品などの安全性試験に広く用いられていて、比較する基礎資料が豊富であるため選択した。入手時は、雄２６匹、５週齢、体重９０〜１５０ｇ／雌２６匹、５週齢、体重８０〜１４０ｇ、投与時には、６週齢、雄と雌各２０匹のラットを選別して試験対象に使用した。
【００６１】
＜２−３＞検疫順化
搬入時に動物の外観検査を実施して、電子秤で体重を測定した。６日間の順化期間中に毎日１回一般症状を観察し、順化期間終了日に体重を測定して、一般症状及び体重変化を確認して動物の健康状態を評価した。前記評価の結果、異常動物はＣＯ２ガスを吸入させて安楽死させた。
【００６２】
＜２−４＞個体及び飼育箱の識別
順化期間中には入手時に動物の尾に赤色油性ペンを用いて個体表示をし、飼育箱には検疫順化期間中、個体識別カードを付着した。観察期間中には群分離時に動物の尾に青色油性ペンを用いて個体表示をし、飼育箱には色個体識別カードを付着した。
【００６３】
＜２−５＞群分離
群分離は、一般症状及び体重増加に異常がない動物の中から順化終了日（群分離日）に実施した。群分離日の平均体重に近い雄と雌各３０匹を選抜した後、各群の平均体重が均等になるように無作為に雄と雌各６群、群当たり５匹に群分離した。
【００６４】
＜２−６＞投与
試験物質の経口露出時の安全性を評価するため、経口経路を選択した。投与液量は下記の表１に示したように１０ｍｌ／ｋｇにして、個体別投与液量は節食後（投与当日）の体重を基準に算出した。経口投与用ゾンデ（ｓｏｎｄｅ）を付着した使い捨て注射器（３ｍｌ）を用いての胃内に単回強制投与した。すべての動物は、投与前に約１６時間以上、飲水は自由摂取させながら絶食させて投与約４時間後に飼料を与えた。
【００６５】
【表１】
0005484512.tif 000002
【００６６】
＜２−７＞観察及び検査
投与当日に投与後３０分までは少なくとも１回以上、１、２、４、及び６時間目に一般状態（毒性兆候の種類、発現時期、回復時期など）及び死亡の有無を観察した。投与後１日から１４日までは、毎日１回一般症状を観察した。観察期間中の死亡動物は、発見時の体重を測定した後、剖検を実施することを原則として直ちに剖検が不可能な場合は冷蔵保管後、２４時間以内に部検した。体重は、投与当日（投与の前）、投与後１、３、７日及び１４日（剖検日）に測定し、観察期間終了後、すべての生存動物に対してＣＯ２ガスを吸入させて肺大動脈から血を抜いて安楽死させて剖検を実施した。剖検時に肉眼所見が観察された臓器組織に対して必要だと判断された場合、組織検査を実施した。
【００６７】
＜２−８＞結果
＜２−８−１＞死亡例の確認
ウスバサイシン抽出物の毒性試験を行なって死亡例を確認した。
【００６８】
その結果、観察期間中に、雄４，０００ｍｇ／ｋｇ投与群で投与後４時間に１例、投与後１日に２例、５，０００ｍｇ／ｋｇ投与群で投与後６時間に１例が死亡した。雌２，０００ｍｇ／ｋｇ及び４，０００ｍｇ／ｋｇ投与群で投与後６時間に各１例、３，０００ｍｇ／ｋｇ投与群で投与後１日に２例、５，０００ｍｇ／ｋｇ投与群で投与後１日に２例、投与後３日に１例が死亡したことを確認した。
【００６９】
＜２−８−２＞一般症状確認
ウスバサイシン抽出物を濃度別に経口投与した後、一般症状を確認した。
【００７０】
その結果、雄と雌１，０００ｍｇ／ｋｇ投与群で投与後６時間に不規則呼吸が各２例で観察されたが、投与後１日から一般症状の異常は観察されなかった。
【００７１】
２，０００ｍｇ／ｋｇ投与群の雄では、投与当日に不規則呼吸、流涙（ｌａｃｒｉｍａｔｉｏｎ）または流涎（ｓａｌｉｖａｔｉｏｎ）が５例で観察され、投与後１日に３例で不規則呼吸が観察されたが、投与後２日から一般症状の異常は観察されなかった。雌では、投与当日に流涎、振戦（ｔｒｅｍｏｒ）、不規則呼吸、自発運動の減少または流涙が観察された後、１例で投与後６時間に腹臥位の状態で死亡した。投与後１日に不規則呼吸が４例、便量の減少が１例で観察されたが、投与後２日から一般症状の異常は観察されなかった。死亡した１例では、投与後２時間から６時間まで不規則呼吸、流涎、振戦、自発運動の減少または流れ涙が観察された後、腹臥位状態で死亡した。
【００７２】
雄と雌３，０００ｍｇ／ｋｇ投与群で投与当日に５例で不規則呼吸、流涙、流涎、自発運動の減少または振戦が観察された。投与後１日に雄で不規則呼吸４例、飼料摂取量の減少、自発運動の減少、便量の減少、流涎及び下腹部汚染が１例、投与後２日に不規則呼吸が２例で観察されたが、投与後３日から一般症状の異常は観察されなかった。雌では投与後１日及び２日に不規則呼吸、便量の減少、下腹部汚染、飼料摂取量の減少、自発運動の減少、流涙または口の周囲の汚染が観察された。死亡した２例では投与後１日に流涙、流涎及び横臥位の状態で死亡した。
【００７３】
雄と雌４，０００ｍｇ／ｋｇ投与群で投与当日に不規則呼吸、流涙、流涎、自発運動の減少または振戦が観察された。投与後１日及び２日に不規則呼吸、飼料摂取量の減少または便量の減少が観察されたが、投与後３日から一般症状の異常は観察されなかった。死亡個体では不規則呼吸、流涙、流涎、自発運動の減少、振戦または腹臥位が観察された後、投与後４及び６時間に各１例が死亡し、投与後１日に２例では流涙、流涎または腹臥位観察された後、死亡した。
【００７４】
雄と雌５，０００ｍｇ／ｋｇ投与群で投与当日に不規則呼吸、流涙、流涎、自発運動の減少または振戦が観察された。投与後１日から５日まで不規則呼吸、飼料摂取量の減少、便量の減少、下腹部汚染または口の周囲汚染が観察されたが、投与後６日から一般症状の異常は観察されなかった。死亡した個体では、投与後６時間に不規則呼吸、流涙、流涎または腹臥位の状態で雄１例、投与後１日に流涙及び横臥位の状態で雌１例、投与後３日に飼料摂取量の減少、便量の減少、流涙、流涎または自発運動の消失が観察された後、下腹部汚染、口の周囲汚染及び横臥位状態で１例が死亡した。
【００７５】
＜２−８−３＞体重変化確認
ウスバサイシン抽出物を濃度別に経口投与した後、体重変化を確認した。
【００７６】
その結果、図６及び図７に示したように、雄の試験物質３，０００及び５，０００ｍｇ／ｋｇ投与群で、投与後１日及び３日に対照群と比較して有意性ある体重減少が観察された。観察期間中、雌の試験物質投与群で対照群と比較して有意性ある体重変化は示されないことを確認した（図６及び図７）。
【００７７】
＜２−８−４＞剖検所見
ウスバサイシン抽出物を濃度別に経口投与した後、生存個体に対する剖検の結果、雄と雌の試験物質投与群で肉眼的に異常な所見は観察されなかった。また、死亡個体に対する剖検結果、雌の試験物質５，０００ｍｇ／ｋｇ投与群の１例の腺胃で黒白の病巣が観察された。
【図１】
0005484512.tif 000003
【図２】
0005484512.tif 000004
【図３】
0005484512.tif 000005
【図４】
0005484512.tif 000006
【図５】
0005484512.tif 000007
【図６】
0005484512.tif 000008
【図７】
0005484512.tif 000009