(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号：７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、配列番号：８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、および１つもしくはそれ以上のヒト抗体から得られる定常領域を含んでなる、単離されたＩＬ−６抗体または抗体フラグメントであって、ヒトＩＬ−６を中和し且つ５．７×１０-11Ｍの親和性（Ｋd）でＩＬ−６と結合する、上記単離されたＩＬ−６抗体または抗体フラグメント。
【請求項２】
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が各々配列番号：１、配列番号２および配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が各々配列番号：４、配列番号：５および配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および１つもしくはそれ以上のヒト抗体から得られる定常領域を含んでなる、単離されたＩＬ−６抗体または抗体フラグメントであって、ヒトＩＬ−６を中和し且つ５．７×１０−１１Ｍの親和性（Ｋｄ）でＩＬ−６と結合する、上記単離されたＩＬ−６抗体または抗体フラグメント。
【請求項３】
活性が、ＳＫＷ６．４細胞からのＩｇＭミュー分泌の阻害、ＩＬ−６媒介ＭＣＰ−１生産の阻害、ＴＨＰ−１ヒト単球性白血病細胞におけるＩＬ−６シグナル伝達の阻害、ＩＬ−６誘発性血清アミロイドの阻害、ＨｅｐＧ２細胞からの生成、およびｒｈＩＬ−６誘発性細胞増殖の阻害よりなる群から選択される少なくとも一つである、請求項１に記載の抗体またはフラグメント。
【請求項４】
請求項１または２に記載の単離されたＩＬ−６抗体または抗体フラグメントおよび担体または希釈剤を含んでなる、癌または免疫系障害を調節するための方法において使用するための、ＩＬ−６抗体組成物または抗体フラグメント組成物。
【請求項５】
請求項１または２に記載の単離されたＩＬ−６抗体または抗体フラグメントおよび担体または希釈剤を含んでなる組成物であって、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ剤、筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔剤、鎮静剤、局所麻酔剤、神経筋遮断薬、抗菌薬、乾癬治療薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、糖尿病関連薬、ミネラル、栄養、甲状腺薬、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止痢薬、鎮咳薬、制吐薬、抗潰瘍薬、下剤、抗凝血剤、エリスロポエチン、フィルグラスチム、サルグラモスチム（ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）、免疫化薬、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様筋調節薬、アルキル化剤、代謝拮抗剤、分裂抑制剤、放射性医薬品、抗欝薬、抗躁病薬、抗精神病薬、抗不安薬、睡眠薬、交感神経刺激薬、興奮剤、ドネペジル、タクリン、喘息薬、ベータアゴニスト、吸入用ステロイド、ロイコトリエンインヒビター、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンもしくは類似物、ドルナーゼアルファ、サイトカインおよびサイトカインアンタゴニストから選択される少なくとも１つの化合物またはタンパク質を更に含んでなる、上記組成物。
【請求項６】
請求項２に記載のＩＬ−６抗体または抗体フラグメントの免疫調節有効量を含んでなる、細胞、組織、臓器もしくは動物における免疫障害もしくは疾患を処置するための方法において使用するための医薬。
【請求項７】
有効量が該細胞、組織、臓器もしくは動物のキログラム当たり０．００１−５０ｍｇである、請求項６に記載の医薬。
【請求項８】
請求項２に記載のＩＬ−６抗体または抗体フラグメントの有効量を含んでなる、細胞、組織、臓器もしくは動物における癌性疾患または症状を調節するための方法において使用するための医薬。
【請求項９】
有効量が該細胞、組織、臓器もしくは動物のキログラム当たり０．０１−１００ｍｇである、請求項８に記載の医薬。
【請求項１０】
請求項２に記載のＩＬ−６抗体または抗体フラグメント、および少なくとも１つの滅菌水、滅菌緩衝水、および少なくとも１つの水性希釈剤中のフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム、アルキルパラベン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、もしくはその混合物よりなる群から選択される防腐剤、を含んでなる製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、少なくとも一つのインターロイキン−６（ＩＬ−６、インターフェロンβ２としても知られている）タンパク質もしくはそのフラグメントに特異的な、特定の部分もしくは変異体を包含する抗体、ならびにそのような抗ＩＬ−６抗体をコードする核酸、相補的な核酸、ベクター、宿主細胞、ならびに治療製剤、投与および装置を包含するその製造および使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、多数の異なる細胞タイプにより生産される向炎症サイトカインである。インビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）において、刺激された単球、繊維芽細胞、および内皮細胞は、ＩＬ−６の主要な供給源である。マクロファージ、ＴおよびＢリンパ球、顆粒球、角化細胞、マスト細胞、骨芽細胞、軟骨細胞、グリア細胞、および平滑筋細胞のような他の細胞もまた、刺激後にＩＬ−６を生産する（非特許文献１および非特許文献２）。いくつかの腫瘍細胞もまたＩＬ−６を生産し（非特許文献３）、そして最近ではＩＬ−６は、前立腺癌進行の予後因子であることが示された（非特許文献４）。ＩＬ−６生産はＩＬ−６自体により調節することができ、そして細胞タイプにより、ＩＬ−６はそれ自体の合成を刺激もしくは抑制することができる。
【０００３】
ＩＬ−６は、マイトジェン活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞、末梢単球、およびある種の腫瘍上に発現されるＩＬ−６受容体に結合することができる（非特許文献５）。ＩＬ−６受容体は、少なくとも２つの異なる成分を有し、そしてＩＬ−６結合をもたらすｇｐ８０と呼ばれるアルファ鎖およびシグナル伝達に必要とされるｇｐ１３０と称するβ鎖からなる（非特許文献６および非特許文献７）。ＩＬ−６、ＬＩＦ、オンコスタチンＭ、ＩＬ−１１、ＣＮＴＦ、およびＣＴ−１を含むサイトカインファミリーは全て、それらのコグネイト受容体に結合した後にｇｐ１３０を介してシグナルを伝える。さらに、ＩＬ−６サイトカインファミリーの全てのメンバーは、急性期タンパク質の肝臓発現を誘導することができる（非特許文献８）。
【０００４】
ＩＬ−６の少なくとも２つの主要な生物学的機能がある：急性期タンパク質の媒介ならびに分化および活性化因子として作用すること（非特許文献９および非特許文献７）。急性期タンパク質は、免疫応答を調節し、炎症を媒介し、そして組織リモデリングにおいて役割を果たすことが知られている。分化および活性化因子として、ＩＬ−６はＢ細胞を分化しそして抗体を分泌するように誘導し、Ｔ細胞を細胞傷害性Ｔ細胞に分化するように誘導し、細胞シグナル伝達因子を活性化し、そして造血を促進する（非特許文献５）。ＩＬ−６は、多数の重要な身体機能およびプロセスに深く関与している。結果として、骨代謝、腫瘍性トランスフォーメーション、ならびに免疫および炎症反応を包含する生理的プロセスは、抗体を用いてインビボにおけるＩＬ−６の生物学的活性の操作により増強、抑制、もしくは阻止することができる（非特許文献６）。
【０００５】
ＩＬ−６は多数の経路に関与するが、ＩＬ−６ノックアウトマウスは正常な表現型を有し、生存でき、繁殖力があり、そしてこれらの動物は組織損傷に対してわずかに減少した数のＴ細胞および減少した急性期タンパク質応答を示す（非特許文献１０）。対照的に、ＩＬ−６を過剰発現するトランスジェニックマウスは、神経変性、星状細胞増加、脳の脈管形成のような神経系の疾患を発症し、そしてこれらのマウスは血液脳関門を生じない（非特許文献１１）。
【０００６】
最近の研究により、ＩＬ−６に対するＭａｂは前立腺腫瘍（非特許文献１２および非特
許文献１３）および腎癌（非特許文献１４）のインビボ増殖を抑制できることが示されている。腫瘍増殖に対する直接効果に加えて、ＩＬ−６生産を阻止することはまた、化学的感受性にし（ｃｈｅｍｏ−ｓｅｎｓｉｔｉｚｅ）、そして細胞傷害効能を高めることもできる（非特許文献３）。総合的に、文献は、ＩＬ−６活性を阻止することが骨分解、腫瘍増殖および癌悪液質を抑制できることを我々に教示する。
【０００７】
非ヒトポリクローナル（例えば、抗血清）もしくはモノクローナル抗体（Ｍａｂ）およびそのフラグメント（例えば、そのタンパク質分解消化生成物）を用いる受動免疫療法は、様々な疾患の処置として開発されている有望な治療薬である。しかしながら、非ヒト部分からなる抗体は、ヒトに投与した場合に免疫応答を引き出すことが知られている。この免疫応答は、反復抗体投与を治療に不適切にすることが多く、そして免疫複合体により媒介される循環からの抗体のクリアランスをもたらし、従って、患者への治療利益を減じる可能性がある。非ヒト部分からなる抗体の投与を繰り返すことに起因し得る症状の例は、血清病およびアナフィラキシーである。
【０００８】
これらおよび他の問題を回避しようとして、キメラ化および「ヒト化」を包含する多数の方法が、抗体／そのフラグメントの免疫原性を減らすために推進されている。これらの方法は、減少した免疫原性を有する抗体を製造している。これらの抗体は実質的にヒト由来のものであり、相補性決定領域（ＣＤＲ）およびＣＤＲ構造に影響を与えるある種のフレームワーク残基のみが非ヒト由来のものである。従って、新規なヒトもしくはヒト化モノクローナル抗体は、免疫療法用途に単独でもしくは既存の分子と組み合わせて特に有用である。
【０００９】
従って、これらの問題の１つもしくはそれ以上を克服するＩＬ−６に対する高い親和性の中和キメラもしくはヒト抗体またはそのフラグメント、ならびにＩＬ−６に関連する症状を予防、処置、改善、もしくは診断することにおける使用のための既知の抗体もしくはそのフラグメントより優れた改善を提供する必要性がある。
【００１０】
ハイブリドーマ細胞系から生産されるＩＬ−６に対するマウスモノクローナル抗体は、例えば特許文献１において既知である。特許文献２は、マウスモノクローナル抗体ＳＫ２から得られるヒトＩＬ−６に対する作り変えたヒト抗体を開示し、ここで、マウス抗体ＳＫ２の可変領域からの相補性決定領域（ＣＤＲ）は、ヒト抗体の可変領域に移植され、そしてヒト抗体の定常領域に連結される。
【００１１】
他のマウスモノクローナル抗体は、中和する、すなわち、受容体結合を妨げる、もしくは中和しないと記述され、分類されている（非特許文献１５）。抗体のこの組の中で、ＩＬ−６に対する中和モノクローナル抗体は２群に分けられ；そしてＩＬ−６分子上の推定エピトープをＳｉｔｅ  ＩおよびＳｉｔｅ  ＩＩと称することができる。Ｓｉｔｅ  Ｉは、ｇｐ８０（ＩＬ６Ｒ）への結合を妨げ、従って、ｇｐ１３０活性化を阻止する。Ｓｉｔｅ  Ｉエピトープは、ＩＬ−６分子のアミノ末端およびカルボキシ末端部分の両方の領域を含んでなるとさらに特性化された。Ｓｉｔｅ  ＩＩ結合物（ｂｉｎｄｅｒ）は、ｇｐ１３０活性化を妨げ、従って、シグナル伝達に関与する構造エピトープを認識することができる。
【００１２】
ＩＬ−６に対する高い親和性を有し、Ｓｉｔｅ  Ｉエピトープに結合する、ＣＬＢ−６／８もしくはＣＬＢ−８と呼ばれるマウスＩＬ−６モノクローナル抗体は既知であるが（非特許文献１５）、この抗体の抗原結合ドメイン（ＣＤＲ領域）は不明である。しかしながら、上記のように、マウス抗体はヒトにおいて非常に免疫原性であり、それ故、その治療価値は限定される。従って、高い親和性および都合のよい製薬学的プロフィールを示すＩＬ−６に対する抗体の継続する必要性がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】米国特許５，６１８，７００明細書
【特許文献２】米国特許５，８５６，１３５明細書
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．，Ｂｌｏｏｄ  ７４：１−１０（１９８９）
【非特許文献２】Ｋｕｒｉｈａｒａ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４４：４２２６−４２３０（１９９０）
【非特許文献３】Ｓｍｉｔｈ，Ｐ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ａｎｄ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １２：３３−４０（２００１）
【非特許文献４】Ｎａｋａｓｈｉｍａ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６：２７０２−２７０６（２０００）
【非特許文献５】Ｉｓｈｉｍｉ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４５：３２９７−３３０３（１９９０）
【非特許文献６】Ａｄｅｂａｎｊｏ，Ｏ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １４２：１３４７−１３５６（１９９８）
【非特許文献７】Ｐｏｌｉ，Ｖ．ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  １３：１１８９−１１９６（１９９４）
【非特許文献８】Ｂｅｌｌｉｄｏ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ９７：４３１−４３７（１９９６）
【非特許文献９】Ａｖｖｉｓｔｉ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂａｉｌｌｉｅｒｅｓ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ８：８１５−８２９（１９９５）
【非特許文献１０】Ｋｏｐｆ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ａｎｄ  ａｃｕｔｅ−ｐｈａｓｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ，Ｎａｔｕｒｅ；３６８（６４６９）：３３９−４２，１９９４
【非特許文献１１】Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｍｉｃｅ  ｂｙ  Ｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ＰＮＡＳ  ９０：１００６１−１００６５．１９９３
【非特許文献１２】Ｓｍｉｔｈ，Ｐ．Ｃ．ａｎｄ  Ｋｅｌｌｅｒ，Ｅ．Ｔ．，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  印刷中
【非特許文献１３】Ｏｋａｍｏｔｏ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５７：１４１−１４６（１９９７）
【非特許文献１４】Ｗｅｉｓｓｇｌａｓ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｕｒｏｌｏｇｙ  １５３：５５４−５５７（１９９５）
【非特許文献１５】Ｂｒａｋｅｎｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９０）（１４５：５６１）
【発明の概要】
【００１５】
［発明の要約］
本発明は、当該技術分野において既知であるものと組み合わせて、本明細書において記述しそして可能にするように、高親和性ＣＬＢ−８抗ＩＬ−６抗体から得られる少なくとも一つの抗原結合領域を有する単離されたキメラ、ヒト化および／もしくはＣＤＲ移植抗ＩＬ−６抗体、ならびにそれに関連する抗ＩＬ−６抗体組成物、コードするもしくは相補的な核酸、ベクター、宿主細胞、組成物、製剤、装置、トランスジェニック動物、トランスジェニック植物、ならびにその製造および使用方法を提供する。本発明の抗体は、高い
親和性でヒトＩＬ−６を特異的に中和する。
【００１６】
本発明は、本明細書に記述するような少なくとも一つの単離されたヒト−マウスキメラ、ヒト化もしくはＣＤＲ移植抗ＩＬ−６  ＣＬＢ−８抗体（「ｃＣＬＢ−８抗体」）を提供する。本発明のｃＣＬＢ−８抗体には、本発明の抗体に導入することができる、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、またはその任意の部分と組み合わせて、マウスＣＬＢ−８モノクローナル抗体から得られる、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも一つの相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはそのリガンド結合部分を含んでなる任意のタンパク質もしくはペプチド分子が包含される。一つの態様として、本発明は、２本の軽鎖および２本の重鎖を含んでなる抗ＩＬ−６キメラ抗体に関し、これらの鎖の各々は、ヒト定常領域の少なくとも一部およびヒトＩＬ−６に対する特異性を有するマウスＣＬＢ８モノクローナル抗体から得られる可変領域（ｖ）の少なくとも一部を含んでなり、該抗体は、抗体ｃＣＬＢ−８のように、ヒトＩＬ−６の阻害および／もしくは中和エピトープに高い親和性で結合する。本発明にはまた、重鎖定常、連結、多様性もしくは可変領域、または軽鎖定常、連結もしくは可変領域のような、抗体鎖の１つもしくはそれ以上の部分のような、そのような抗体のフラグメントもしくは誘導体も包含される。
【００１７】
抗体は、マウスＣＬＢ−８モノクローナル抗体から得られる少なくとも一つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、重鎖もしくは軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３）の少なくとも一つの特定の部分、および／あるいは少なくとも一つの定常もしくは可変フレームワーク領域またはその任意の部分を含んでなることができる。抗体アミノ酸配列はさらに場合により、本明細書に記述するようなもしくは当該技術分野において既知であるような少なくとも一つの特定の置換、挿入もしくは欠失を含んでなることができる。
【００１８】
本発明の好ましい抗体には、抗ＩＬ−６マウスＣＬＢ−８、キメラ抗ＩＬ−６  ＣＬＢ−８、もしくは実質的に同じ結合特性を有する抗体、ならびにそのフラグメントおよび領域のヒトＩＬ−６への結合をインビボにおいて競合的に阻害するキメラ、ヒト化および／もしくはＣＤＲ移植抗体が包含される。
【００１９】
本発明の好ましい抗体は、Ｂｒａｃｋｅｎｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．（上記）によって記述されているようなＳｉｔｅ  Ｉエピトープに含まれる、ＣＬＢ−８およびｃＣＬＢ−８により認識されるエピトープに結合するものである。競合的阻害によりモノクローナル抗体の特異性および親和性を決定する好ましい方法は、本願に引用することにより本明細書に組み込まれる、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ  ａｌ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８に見出すことができる。本発明の少なくとも一つの抗体は、ＣＬＢ−８モノクローナル抗体が結合する、ヒトＩＬ−６タンパク質、サブユニット、フラグメント、部分もしくはその任意の組み合わせに特異的な少なくとも一つの特定のエピトープに結合する。該エピトープは、ＣＬＢ−８抗体が結合する少なくとも一つの抗体結合領域を含んでなることができ、このエピトープは、好ましくは、ヒトＩＬ−６タンパク質の少なくとも一つの機能性、細胞外、可溶性、親水性、外部もしくは細胞質ドメイン、またはその任意の部分のようなしかしこれらに限定されるものではない、その少なくとも一つの部分の少なくとも１〜５個のアミノ酸を含んでなる。
【００２０】
一つの態様として、本発明は、配列番号：７もしくは８およびそれらをコードする核酸配列（配列番号：１５もしくは１６）を含んでなる少なくとも一つの可変領域を含んでなる、少なくとも一つの単離された哺乳類抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体を提供する。
【００２１】
別の態様として、本発明は、（ｉ）配列番号：１、２および３の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列ならびにそれらをコードする核酸配列（配列番号：９〜１１）の全て；もしくは（ｉｉ）配列番号：４、５および６の軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列ならびにそれらをコードする核酸配列（配列番号：１２〜１４）の全てのいずれかを含んでなる、少なくとも一つの単離された哺乳類抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体を提供する。
【００２２】
別の態様として、本発明は、配列番号：１、２、３、４、５、もしくは６の少なくとも一つのアミノ酸配列ならびにそれらをコードする核酸配列（配列番号：９〜１４）を有する少なくとも一つの重鎖もしくは軽鎖ＣＤＲを含んでなる、少なくとも一つの単離された哺乳類抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体を提供する。
【００２３】
別の態様として、本発明は、少なくとも一つのヒトＣＤＲを含んでなる、少なくとも一つの単離された哺乳類キメラ、ヒト化もしくはＣＤＲ移植抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体を提供し、ここで、該抗体は、ＣＬＢ−８抗体が結合するヒトＩＬ−６のエピトープの少なくとも１〜３個のアミノ酸を含んでなる少なくとも一つのエピトープに特異的に結合する。
【００２４】
少なくとも一つの抗体は、場合によりさらに、少なくとも１０−９Ｍ、好ましくは少なくとも１０−１０Ｍの親和性（Ｋｄ）でＩＬ−６に結合し、そして／もしくは少なくとも一つのＩＬ−６タンパク質の少なくとも一つの活性を実質的に中和する。好ましい態様として、抗体は少なくとも１ｘ１０−１１Ｍ、好ましくは５ｘ１０−１１Ｍの親和性（Ｋｄ）でＩＬ−６に結合し、ヒトＩＬ−６を中和する。
【００２５】
本発明は、一つの態様として、その少なくとも一つの特定の配列、ドメイン、部分もしくは変異体を含んでなる、上記の特定の抗ＩＬ−６抗体をコードするポリヌクレオチドを含んでなるか、それに相補的な、もしくはハイブリダイズする単離された核酸分子を提供する。本発明はさらに、該抗ＩＬ−６抗体核酸分子を含んでなる組み換えベクター、そのような核酸および／もしくは組み換えベクターを含有する宿主細胞、ならびにそのような抗体核酸、ベクターおよび／もしくは宿主細胞を製造および／もしくは使用する方法を提供する。従って、本発明は、少なくとも一つの単離された哺乳類抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体をコードする単離された核酸；単離された核酸を含んでなる単離された核酸ベクター、および／または単離された核酸を含んでなる原核もしくは真核宿主細胞を含んでなる。宿主細胞は、場合により、ＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１、ＣＨＯ、ＢＳＣ−１、Ｈｅｐ  Ｇ２、６５３、ＳＰ２／０、２９３、ＨｅＬａ、骨髄腫、もしくはリンパ腫細胞、またはその任意の誘導体、不死化もしくはトランスフォームした細胞から選択される少なくとも一つであることができる。また提供するのは、ＩＬ−６抗体が検出可能なもしくは回収可能な量で発現されるように、インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）、インビボもしくはｉｎ  ｓｉｔｕにおける条件下で抗体をコードする核酸を翻訳することを含んでなる、少なくとも一つの抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体を製造する方法である。
【００２６】
本発明はさらに、本発明の少なくとも一つのｃＣＬＢ−８  抗ＩＬ−６抗体に対する少なくとも一つのＩＬ−６抗イディオタイプ抗体を提供する。抗イディオタイプ抗体には、本発明の抗体に対する抗イディオタイプ抗体に導入することができる、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも一つの相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはそのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、またはその任意の部分のようなしかしこれらに限定されるものではない、免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含んでなる分子を含有する任意のタンパク質もしくはペプチドが包含される。本発明の抗イディオタイプ抗体は、ヒト、マウス、ウサギ、げっ歯類、霊長類などのようなしかしこれらに限定されるものではない任意の哺乳類を包含することができ、もしくはそれ
らから得ることができる。
【００２７】
本発明は、一つの態様として、その少なくとも一つの特定の配列、ドメイン、部分もしくは変異体を含んでなる、少なくとも一つのＩＬ−６抗イディオタイプ抗体をコードするポリヌクレオチドを含んでなるか、それに相補的な、もしくはハイブリダイズする単離された核酸分子を提供する。本発明はさらに、該ＩＬ−６抗イディオタイプ抗体をコードする核酸分子を含んでなる組み換えベクター、そのような核酸および／もしくは組み換えベクターを含有する宿主細胞、ならびにそのような抗イディオタイプ抗体核酸、ベクターおよび／もしくは宿主細胞を製造および／もしくは使用する方法を提供する。
【００２８】
本発明はまた、少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体が検出可能なおよび／もしくは回収可能な量で発現される条件下で本明細書に記述するような宿主細胞を培養することを含んでなる、少なくとも一つの上記の抗ＩＬ−６抗体、もしくはＩＬ−６抗イディオタイプ抗体を宿主細胞において発現する少なくとも一つの方法も提供する。
【００２９】
また提供するのは、抗体を回収可能な量で発現することができるトランスジェニック動物またはトランスジェニック植物もしくは植物細胞を提供することを含んでなる、本発明の少なくとも一つの単離された抗ＩＬ−６抗体を製造する方法である。本発明においてさらに提供するのは、上記の方法により製造される少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体である。
【００３０】
本発明はまた、（ａ）本明細書に記述するような単離された抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体をコードする核酸および／もしくは抗体；ならびに（ｂ）適当な担体もしくは希釈剤を含んでなる少なくとも一つの組成物も提供する。担体もしくは希釈剤は、場合により、既知の担体もしくは希釈剤に従って、製薬学的に許容しうることができる。組成物は場合によりさらに、少なくとも一つのさらなる化合物、タンパク質もしくは組成物を含んでなることができる。
【００３１】
本発明はさらに、当該技術分野において既知であるようにそして／もしくは本明細書に記述するように、細胞、組織、臓器、動物もしくは患者における少なくとも一つのＩＬ−６関連症状をそして／または関連症状の前に、後に、もしくは間に調節もしくは処置するために治療的に有効な量を投与する、少なくとも一つの抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体方法もしくは組成物を提供する。従って、本発明は、本発明の少なくとも一つの単離された抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体の有効量を含んでなる組成物を細胞、組織、臓器もしくは動物と接触させることもしくはそれに投与することを含んでなる、細胞、組織、臓器もしくは動物におけるＩＬ−６関連症状を診断もしくは処置する方法を提供する。該方法は、場合によりさらに、細胞、組織、臓器もしくは動物のキログラム当たり０．００１〜５０ｍｇの有効量を用いることを含んでなることができる。該方法は、場合によりさらに、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内（ｉｎｔｒａｃａｐｓｕｌａｒ）、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、嚢内（ｉｎｔｒａｖｅｓｉｃａｌ）、ボーラス、膣、直腸、口腔内、舌下、鼻腔内、もしくは経皮から選択される少なくとも一つの形態により接触させることもしくは投与することを用いることを含んでなることができる。該方法は、場合によりさらに、抗体接触もしくは投与の前に、同時に、もしくは後に、検出可能な標識もしくはレポーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ剤、筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔剤、鎮静剤、局所麻酔剤、神経筋遮断薬、抗菌薬、乾癬治療薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化薬、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗欝薬、抗
精神病薬、興奮剤、喘息薬、ベータアゴニスト、吸入用ステロイド、エピネフリンもしくはその類似物、細胞毒性薬もしくは他の抗癌剤、メトトレキセートのような代謝拮抗剤、増殖抑制剤、サイトカイン、またはサイトカインアンタゴニストの少なくとも一つから選択される少なくとも一つの化合物もしくはタンパク質の有効量を含んでなる少なくとも一つの組成物を投与することを含んでなることができる。
【００３２】
本発明はさらに、当該技術分野において既知であるようにそして／もしくは本明細書に記述するように、細胞、組織、臓器、動物もしくは患者における少なくとも一つのＩＬ−６関連症状をそして／または関連症状の前に、後に、もしくは間に診断する少なくとも一つの抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体方法を提供する。
【００３３】
本発明はまた、本発明の、少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体の診断用の少なくとも一つの組成物、装置および／もしくは送達の方法も提供する。
【００３４】
また提供するのは、少なくとも一つの単離されたキメラ、ヒトもしくはヒト化抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体および少なくとも一つの製薬学的に許容しうる担体もしくは希釈剤を含んでなる組成物である。組成物は、場合によりさらに、検出可能な標識もしくはレポーター、細胞毒性薬もしくは他の抗癌剤、メトトレキセートのような代謝拮抗剤、増殖抑制剤、サイトカイン、またはサイトカインアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ剤、筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＴＨＥ）、鎮痛剤、麻酔剤、鎮静剤、局所麻酔剤、神経筋遮断薬、抗菌薬、乾癬治療薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫化薬、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬品、抗欝薬、抗精神病薬、興奮剤、喘息薬、ベータアゴニスト、吸入用ステロイド、エピネフリもしくは類似物の少なくとも一つから選択される少なくとも一つの化合物もしくはタンパク質の有効量を含んでなることができる。
【００３５】
また提供するのは、本発明の少なくとも一つの単離された哺乳類抗ＩＬ−６抗体を含んでなる医療装置であり、ここで、該装置は少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体を非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、嚢内、ボーラス、膣、直腸、口腔内、舌下、鼻腔内、もしくは経皮から選択される少なくとも一つの形態により接触させることもしくは投与することに適している。
【００３６】
また提供するのは、包装材料および本発明の少なくとも一つの単離された哺乳類抗ＩＬ−６抗体の溶液もしくは凍結乾燥形態を含んでなる容器を含んでなる、ヒト製薬学的もしくは診断用途の製品である。該製品は、場合により、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、嚢内、ボーラス、膣、直腸、口腔内、舌下、鼻腔内、もしくは経皮送達装置もしくは系の成分として該容器を有することを含んでなることができる。
【００３７】
本発明はさらに、本明細書に記述する任意の発明を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】ヒト組み換えＩＬ−６へのｃＣＬＢ８の結合を示すグラフ。
【図２】ｃＣＬＢ８によるＳＫＷ６．４細胞からのＩＬ−６媒介ＩｇＭミュー分泌の阻害を示すグラフ。
【図３】ｃＣＬＢ８によるＩＬ−６媒介ＭＣＰ−１生産の阻害を示すグラフ。
【図４】ＴＨＰ−１ヒト単球性白血病細胞におけるＩＬ−６シグナル伝達のｃＣＬＢ８阻害を示すウェスタンブロットの像。
【図５】ＨｅｐＧ２細胞からのＩＬ−６誘発性血清アミロイドＡ生産のｃＣＬＢ８による阻害を示すグラフ。
【図６】ｒｈＩＬ−６誘発性細胞増殖を中和するｃＣＬＢ８の能力を示すグラフ。
【図７】抗ヒトおよび抗マウスＩＬ−６抗体の両方で処置したヒト腫瘍保有マウスにおけるホスト体重減少の相対的減少を示すグラフ。
【図８Ａ】Ｃ４３３Ａの血清阻害研究プロフィールを示すグラフ。
【図８Ｂ】Ｃ４３４Ａの血清阻害研究プロフィールを示すグラフ。
【図８Ｃ】Ｃ４３５Ａの血清阻害研究プロフィールを示すグラフ。
【図８Ｄ】Ｃ４３６Ａの血清阻害研究プロフィールを示すグラフ。
【図８Ｅ】Ｃ４３７Ａの血清阻害研究プロフィールを示すグラフ。
【図８Ｆ】Ｃ４３８Ａの血清阻害研究プロフィールを示すグラフ。
【図８Ｇ】Ｃ４３９Ａの血清阻害研究プロフィールを示すグラフ。
【図９】抗ｉｄ  ＭａｂによるヒトＩＬ−６へのｃＣＬＢ８結合の阻害を示すグラフ。
【図１０】ヒトＩＬ−６にあらかじめ結合したｃＣＬＢ−８への抗ｉｄ結合を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
［発明の詳細な記述］
引用
本明細書に引用する全ての公開もしくは特許は、それらが本発明の時点での最新技術を示すとしてそして／もしくは本発明の説明および使用可能性を提供するために引用することにより全部が本明細書に組み込まれる。公開は、任意の科学的もしくは特許公開、または全ての記録、電子もしくは印刷形式を包含する任意のメディア形式で利用可能な任意の他の情報をさす。以下の参考文献は、引用することにより全部が本明細書に組み込まれる：Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ（１９８７−２００１）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ（１９９４−２００１）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ（１９９７−２００１）。
【００４０】
アミノ酸コード
本発明の抗ＩＬ−６抗体を構成するアミノ酸は、略記されることが多い。アミノ酸名称は、当該技術分野において汎用的であるようにアミノ酸をその１文字コード、その３文字コード、名称、もしくは３ヌクレオチドコドン（１つもしくは複数）で指定することにより示すことができる（Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９４を参照）。
【００４１】
定義
本明細書において用いる場合、「抗インターロイキン−６  ｃＣＬＢ−８抗体」、「抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体」、「抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体部分」、もしくは「抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体フラグメント」および／または「抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体変異体」などには、本発明の抗体に導入することができる、非マウス由来の、好ましくはヒト由来の重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域、またはその任意の部分と組み合わせてマウスＣＬＢ−８モノクローナル抗体から得られる重鎖もしくは軽鎖の少なくとも一つの相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはそのリガンド結合部分を含有する、免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含んでなる分子を含有する任意のタンパク質もしくはペプチドが包含される。そのような抗体は、インビトロ、ｉｎ  ｓｉｔｕおよび／もしくはインビボにおいて、少なくとも一つのＩＬ−６活性もしくは結合、またはＩＬ−６受容体活性もしくは結合を調節、減少、拮抗、軽減、改善、阻止、抑制、阻害および／もしくは妨害することができる。限定されない例として、本発明の適当な抗ＩＬ−６抗体、特定の部分もしくは変異体は、ＣＬＢ−８モノクローナル抗体により認識されるヒトＩＬ−６の阻害および／もしくは中和エピトープに高い親和性で結合することができる。適当な抗ＩＬ−６抗体、特定の部分、もしくは変異体はまた、場合により、ＲＮＡ、ＤＮＡもしくはタンパク質合成、ＩＬ−６放出、ＩＬ−６受容体シグナル伝達、膜ＩＬ−６切断、ＩＬ−６活性、ＩＬ−６生産および／もしくは合成のようなしかしこれらに限定されるものではない、ＩＬ−６活性もしくは機能の少なくとも一つに影響を及ぼすこともできる。
【００４２】
「抗体」という用語にはさらに、ＣＬＢ−８モノクローナル抗体から得られる少なくとも一つのＣＤＲを各々含有する；一本鎖抗体およびそのフラグメントを包含する、抗体模倣物を包含するあるいは抗体またはその特定のフラグメントもしくは部分の構造および／もしくは機能に類似する抗体の部分を含んでなる、抗体、その消化フラグメント、特定の部分および変異体を包含するものとする。機能性フラグメントには、哺乳類ＩＬ−６に結合する抗原結合フラグメントが包含される。例えば、Ｆａｂ（例えば、パパイン消化による）、Ｆａｂ’（例えば、ペプシン消化および部分還元による）およびＦ（ａｂ’）２（例えば、ペプシン消化による）、ｆａｃｂ（例えば、プラスミン消化による）、ｐＦｃ’（例えば、ペプシンもしくはプラスミン消化による）、Ｆｄ（例えば、ペプシン消化、部分還元および再集合による）、ＦｖもしくはｓｃＦｖ（例えば、分子生物学技術による）フラグメントが包含されるがこれらに限定されるものではない、ＩＬ−６もしくはその一部に結合することができる抗体フラグメントは、本発明により包含される（例えば、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，上記を参照）。
【００４３】
そのようなフラグメントは、当該技術分野において既知であるようにそして／もしくは本明細書に記述するように、酵素切断、合成もしくは組み換え技術により製造することができる。抗体はまた、１個もしくはそれ以上の終止コドンが天然の終止部位の上流に導入されている抗体遺伝子を用いて様々な切断形態で製造することもできる。例えば、Ｆ（ａｂ’）２重鎖部分をコードする組み合わせ遺伝子をは、重鎖のＣＨ１ドメインおよび／もしくはヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含むように設計することができる。抗体の様々な部分は、従来の技術により化学的に一緒に連結することができ、もしくは遺伝子工学技術を用いて連続するタンパク質として製造することができる。
【００４４】
本明細書において用いる場合、「キメラ」抗体もしくは「ヒト化」抗体もしくは「ＣＤＲ移植」には、非マウス、好ましくはヒト抗体から得られる１つもしくはそれ以上のタンパク質もしくはペプチドと本明細書に記述するマウスＣＤＲとの任意の組み合わせが包含される。本発明によれば、ヒトＩＬ−６に結合することができるマウスＣＬＢ−８抗体からＣＤＲが得られ、そして１つもしくはそれ以上のヒト抗体から少なくとも一部、もしくは抗体の残りが得られるキメラもしくはヒト化抗体が提供される。従って、抗体のヒト部
分には、ヒトにおいて実質的に非免疫原性であるフレームワーク、ＣＬ、ＣＨドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）、ヒンジ（ＶＬ、ＶＨ）領域を包含することができる。ヒト抗体から得られる抗体の領域は、ヒト抗体と１００％の同一性を有する必要はない。好ましい態様として、免疫原性が無視できる程度であるようにできるだけ多くのヒトアミノ酸残基が保持されるが、ヒト残基は、同時に抗体のヒト化を最大にしながらＣＤＲにより形成される抗原結合部位をサポートするために必要に応じて改変することができる。そのような変化もしくは変異は、場合によりそして好ましくは、未改変の抗体に対してヒトもしくは他の種における免疫原性を保持するかもしくは減少する。ヒト化抗体は、機能的に再編成したヒト免疫グロブリン（例えば、重鎖および／もしくは軽鎖）遺伝子を発現することができる非ヒト動物または原核もしくは真核細胞により製造できることが指摘される。さらに、抗体が一本鎖抗体である場合、それは、天然のヒト抗体に存在しないリンカーペプチドを含んでなることができる。例えば、Ｆｖは、重鎖の可変領域および軽鎖の可変領域を連結する、２〜約８個のグリシンもしくは他のアミノ酸残基のようなリンカーペプチドを含んでなることができる。そのようなリンカーペプチドは、ヒト由来のものであるとみなされる。
【００４５】
本発明の抗体
本発明によれば、抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体は、可変領域もしくはＣＤＲが、ヒトＩＬ−６に結合しそしてその機能を阻害することができるマウスＣＬＢ−８抗体から得られ、そして抗体のフレームワークおよび定常領域が１つもしくはそれ以上のヒト抗体から得られる抗体を含んでなる。マウスＣＬＢ−８抗体から得られる可変領域もしくはＣＤＲは、キメラ抗体がＩＬ−６に結合しそして阻害する能力を維持する限りは置換、挿入および欠失を包含するありとあらゆる改変が意図されるが、好ましくは、マウスＣＬＢ−８抗体の可変領域もしくはＣＤＲと約９０％〜約１００％の同一性を有する。ヒト抗体から得られるキメラ、ヒト化もしくはＣＤＲ移植抗体の領域は、ヒト抗体と１００％の同一性を有する必要はない。好ましい態様として、免疫原性が無視しうる程度であるようにできるだけ多くのヒトアミノ酸残基が保持されるが、ヒト残基、特にフレームワーク領域の残基は、必要に応じてそして本発明に従って以下に教示するように置換される。本明細書に開示するそのような改変は、同時に抗体のヒト化を最大にしながらＣＤＲにより形成される抗原結合部位をサポートするのに必要である。
【００４６】
ヒトＩＬ−６に対するＣＬＢ−８マウスモノクローナル抗体は、当該技術分野において既知であるが（Ｂｒａｋｅｎｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ，上記）、この抗体のＣＤＲ領域はこれまで開示されていない。本発明は、初めて、ＣＬＢ−８マウスモノクローナル抗体のＣＤＲ領域から得られるキメラ、ヒト化もしくはＣＤＲ移植抗体およびそのような抗体を製造する方法を開示する。本発明によれば、マウスＣＬＢ−８重鎖のｃＤＮＡ（配列番号：１５）および重鎖のアミノ酸配列（配列番号：７）が実施例２で提供される。マウスＣＬＢ−８軽鎖のｃＤＮＡおよび推定アミノ酸配列（配列番号：８）もまた実施例２において提供される（配列番号１６）。重鎖および軽鎖可変領域の各々は、抗原結合部位を形成するように組み合わさる３個のＣＤＲを含有する。３個のＣＤＲは、ＣＤＲをサポートするように主として機能する４個のＦＲ領域によって取り囲まれる。重鎖および軽鎖の可変領域の配列内のＣＤＲの配列は、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，４ｔｈ  ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｕ．Ｓ．Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．におけるＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）によるコンピューターを使ったアラインメントにより、もしくは例えばＬｅｖｉｔｔ（１９８３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６８：５９５により記述されているようなＥＮＣＡＤプログラムを利用する、可変領域の分子モデリングにより同定することができる。
【００４７】
好ましい態様として、ＣＤＲはマウスモノクローナル抗体ＣＬＢ−８から得られる。好ましい重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：
ＣＤＲ１      ＳＦＡＭＳ                          （配列番号：１）
ＣＤＲ２      ＥＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＴＶＴＧ  （配列番号：２）
ＣＤＲ３      ＧＬＷＧＹＹＡＬＤＹ                （配列番号：３）
好ましい軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：
ＣＤＲ１      ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＹ                （配列番号：４）
ＣＤＲ２      ＤＴＳＮＬＡＳ                      （配列番号：５）
ＣＤＲ３      ＱＱＷＳＧＹＰＹＴ                  （配列番号：６）
【００４８】
マウスＣＬＢ−８抗体のＣＤＲの配列は、ＣＤＲ移植抗体がヒトＩＬ−６に結合しそして阻害する能力を維持する範囲で挿入、置換および欠失により改変することができる。当業者は、以下に記述する機能アッセイを行うことによりこの活性の維持を確かめることができる。ＣＤＲは、例えば、配列番号：１〜６のＣＤＲに約５０％〜約１００％の相同性を有することができる。好ましい態様として、ＣＤＲは配列番号：１〜６のＣＤＲに約８０％〜約１００％の相同性を有する。より好ましい態様として、ＣＤＲは配列番号：１〜６のＣＤＲに約９０％〜約１００％の相同性を有する。最も好ましい態様として、ＣＤＲは配列番号：１〜６のＣＤＲに約１００％の相同性を有する。
【００４９】
あるいはまた、実施例２において示すようなマウスＣＬＢ−８抗体の全重鎖可変領域および軽鎖可変領域（配列番号：７および８）は、本発明のキメラｃＣＬＢ−８抗体を生成せしめるためにヒト定常およびフレームワーク領域と組み合わせることができる。
【００５０】
本発明のキメラ抗体、フラグメントおよび領域の定常（Ｃ）領域をコードするヒト遺伝子は、既知の方法により、ヒト胎児肝臓ライブラリーから得ることができる。ヒトＣ領域遺伝子は、ヒト免疫グロブリンを発現しそして生産するものを包含する任意のヒト細胞から得ることができる。ヒトＣＨ領域は、ガンマ、μ、α、δ、ε、ならびにＧ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４のような、そのサブタイプを包含する、ヒトＨ鎖の既知のクラスもしくはアイソタイプのいずれかから得ることができる。Ｈ鎖アイソタイプは、抗体の様々なエフェクター機能をもたらすので、ＣＨ領域の選択は、補体結合、もしくは抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）における活性のような、所望のエフェクター機能により導かれる。好ましくは、ＣＨ領域はガンマ１（ＩｇＧ１）から得られる。
【００５１】
ヒトＣＬ領域は、ヒトＬ鎖アイソタイプ、カッパもしくはラムダのいずれか、好ましくはカッパから得ることができる。
【００５２】
ヒト免疫グロブリンＣ領域をコードする遺伝子は、標準的なクローニング技術（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ，ｅｄｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８７−１９９３））によりヒト細胞から得られる。ヒトＣ領域遺伝子は、Ｌ鎖の２つのクラス、Ｈ鎖の５つのクラスおよびそのサブクラスに相当する遺伝子を含有する既知のクローンから容易に入手可能である。Ｆ（ａｂ１）２およびＦａｂのようなキメラ抗体フラグメントは、適切に切断されるキメラＨ鎖遺伝子を設計することにより製造することができる。例えば、Ｆ（ａｂ１）２フラグメントのＨ鎖部分をコードするキメラ遺伝子は、Ｈ鎖のＣＨ１ドメインおよびヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列、続いて切断分子をもたらす翻訳終止コドンを含む。
【００５３】
一般に、一例として、本発明のキメラ抗体、フラグメントおよび領域は、ＣＬＢ−８抗
ＩＬ−６特異的抗体のＨおよびＬ鎖抗原結合領域をコードするＤＮＡセグメントをクローン化し、そしてこれらのＤＮＡセグメントをＣＨおよびＣＬ領域をコードするＤＮＡセグメントにそれぞれ連結してキメラ免疫グロブリンをコードする遺伝子を生成せしめることにより製造する。
【００５４】
従って、好ましい態様として、ヒトＣ領域の少なくとも一部をコードする第二のＤＮＡセグメントに連結された、連結（Ｊ）セグメントを有する機能的に再編成したＶ領域のような、非ヒト由来の少なくとも抗原結合領域をコードする第一のＤＮＡセグメントを含んでなる融合キメラ遺伝子を作製する。
【００５５】
マウスＣＬＢ−８抗体の可変領域の配列は、キメラ抗体がＩＬ−６に結合しそして阻害する能力を維持する範囲で挿入、置換および欠失により改変することができる。当業者は、以下に記述する機能アッセイを行うことによりこの活性の維持を確かめることができる。可変領域は、例えば、配列番号：７〜８の可変領域に約５０％〜約１００％の相同性を有することができる。好ましい態様として、可変領域は配列番号：７〜８の可変領域に約８０％〜約１００％の相同性を有する。より好ましい態様として、可変領域は配列番号：７〜８の可変領域に約９０％〜約１００％の相同性を有する。最も好ましい態様として、可変領域は配列番号：７〜８の可変領域に約１００％の相同性を有する。
【００５６】
便宜上、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．の付番スキームを本明細書に採用している。本発明の配列を標準的なＫａｂａｔ付番配列に従わせるために必要に応じて残基を小文字番号もしくはハイフンにより示す。
【００５７】
本発明によれば、ＣＬＢ−８抗体のＣＤＲ領域をヒト領域と組み合わせるＣＤＲ移植もしくはヒト化抗体の場合、親抗体、例えばＣＬＢ−８に固有であるＦＲ領域において残基を保持することができる。他の抗体のヒト化において重要であることが示されている残基もまた保持することができる。前述のガイドラインには、同時に抗体のヒト化を最大にしながらＣＤＲにより形成される抗原結合部位をサポートするのに必要な範囲で従う。
【００５８】
マウスモノクローナル抗体ＣＬＢ−８およびヒト抗体から得られる代表的な重鎖可変領域のアミノ酸配列を以下の実施例２において示す。
【００５９】
マウスモノクローナル抗体ＣＬＢ−８およびヒト抗体から得られる代表的なキメラ軽鎖可変領域のアミノ酸配列もまた実施例２において示す。
【００６０】
マウスＣＬＢ−８抗体からの可変領域を含有するキメラ抗体は、ＩＬ−６への結合においてマウスモノクローナル抗体ＣＬＢ−８と同程度に有効であることが本発明によって示されている。
【００６１】
非ヒトもしくはヒト抗体を工学設計もしくはヒト化する方法を使用することができ、そしてそれらは当該技術分野において周知である。一般に、ヒト化もしくは工学設計した抗体は、非ヒト、例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類もしくは他の哺乳類（しかしこれらに限定されるものではない）である供給源からの１個もしくはそれ以上のアミノ酸残基を有する。これらのヒトアミノ酸残基は、「インポート（ｉｍｐｏｒｔ）」残基と呼ばれることが多く、これらは典型的には既知のヒト配列の「インポート」可変、定常もしくは他のドメインから取られる。既知のヒトＩｇ配列は、例えば、各々引用することにより全部が本明細書に組み込まれる、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ；ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｂｃａｍ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ；ｗ
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【００６２】
そのようなインポート配列は、当該技術分野において既知であるように、免疫原性を減らすか、または結合、親和性、オン率（ｏｎ−ｒａｔｅ）、オフ率（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）、アビディティー、特異性、半減期、もしくは任意の他の適当な特性を下げるか、高めるかもしくは改変するために用いることができる。一般に、非ヒトもしくはヒトＣＤＲ配列の一部もしくは全部は維持され、一方、可変および定常領域の非ヒト配列はヒトもしくは他のアミノ酸で置換される。抗体はまた、場合により、抗原に対する高い親和性および他の都合のよい生物学的性質を保持してヒト化することもできる。この目的を果たすために、ヒト化抗体は、場合により、親およびヒト化配列の３次元モデルを用いて親配列および様々な概念的ヒト化生成物の解析のプロセスにより製造することができる。３次元免疫グロブリンモデルは市販されており、そして当業者によく知られている。選択した候補免疫グロブリン配列の有望な３次元配座構造を例示しそして表示するコンピュータープログラムは利用可能である。これらの表示の検討は、候補免疫グロブリン配列の機能における残
基の有望な役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基の分析を可能にする。このようにして、標的抗原（１つもしくは複数）に対する増大した親和性のような所望の抗体特性が得られるように共通およびインポート配列からＦＲ残基を選択しそして組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に影響を及ぼすことに直接そして最も実質的に関与する。本発明の抗体のヒト化もしくは工学設計は、その中に引用される参考文献を含む、各々引用することにより全部が本明細書に組み込まれる、Ｗｉｎｔｅｒ（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４（１９８８）；Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７），Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１／２６２３（１９９３），米国特許：第５７２３３２３号，第５９７６８６２号，第５８２４５１４号，第５８１７４８３号，第５８１４４７６号，第５７６３１９２号，第５７２３３２３号，第５７６６８８６号，第５７１４３５２号，第６２０４０２３号，第６１８０３７０号，第５６９３７６２号，第５５３０１０１号，第５５８５０８９号，第５２２５５３９号，第４８１６５６７号，ＰＣＴ／：ＵＳ９８／１６２８０，ＵＳ９６／１８９７８，ＵＳ９１／０９６３０，ＵＳ９１／０５９３９，ＵＳ９４／０１２３４，ＧＢ８９／０１３３４，ＧＢ９１／０１１３４，ＧＢ９２／０１７５５；ＷＯ９０／１４４４３，ＷＯ９０／１４４２４，ＷＯ９０／１４４３０，ＥＰ  ２２９２４６に記述されているもののようなしかしこれらに限定されるものではない任意の既知の方法を用いて行うことができる。
【００６３】
本発明のキメラ抗体のヒト定常領域は、任意のクラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤなど）もしくはアイソタイプのものであることができ、そしてカッパもしくはラムダ軽鎖を含んでなることができる。一つの態様として、ヒト定常領域はＩｇＧ重鎖もしくは特定のフラグメント、例えば、アイソタイプ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４の少なくとも一つを含んでなる。別の態様として、抗ヒトＩＬ−６ヒト抗体は、ＩｇＧ１重鎖およびＩｇＧ１  Ｋ軽鎖を含んでなる。本発明の単離された抗ＩＬ−６抗体は、任意の適当なポリヌクレオチドによりコードされる本明細書に開示する抗体アミノ酸配列も同様に含んでなる。好ましくは、抗体もしくは抗原結合フラグメントはヒトＩＬ−６に結合し、そしてそれにより該タンパク質の少なくとも一つの生物学的活性を部分的にもしくは実質的に中和する。ｃＣＬＢ−８抗体、またはその特定の部分もしくは変異体は、少なくとも一つのＩＬ−６タンパク質もしくはフラグメントの少なくとも一つの生物学的活性を部分的にもしくは好ましくは実質的に中和し、そしてそれによりＩＬ−６受容体へのＩＬ−６の結合によってまたは他のＩＬ−６依存性もしくは媒介メカニズムによって媒介される活性を阻害する。本明細書において用いる場合、「中和抗体」という用語は、ＩＬ−６依存性活性をアッセイにより約２０〜１２０％、好ましくは少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％もしくはそれ以上阻害することができる抗体をさす。ＩＬ−６依存性活性を阻害する抗ＩＬ−６抗体の能力は、好ましくは、本明細書に記述するようにそして／もしくは当該技術分野において既知であるように、少なくとも一つの適当なＩＬ−６タンパク質もしくは受容体アッセイにより評価する。
【００６４】
本発明の少なくとも一つの抗体は、ＣＬＢ−８抗体が結合する少なくとも一つのＩＬ−６タンパク質、サブユニット、フラグメント、部分もしくはその任意の組み合わせに特異的な少なくとも一つの特定のエピトープに結合する。少なくとも一つのエピトープは、該タンパク質の少なくとも一つの部分を含んでなる少なくとも一つの抗体結合領域を含んで
なることができ、このエピトープは、好ましくは、該タンパク質の少なくとも一つの細胞外、可溶性、親水性、外部もしくは細胞質部分を含んでなる。一般に、本発明のヒト抗体もしくは抗原結合フラグメントは、配列番号１、２および３の少なくとも一つのヒト相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）もしくは少なくとも一つの重鎖可変領域の変異体ならびに少なくとも一つのヒト相補性決定領域（ＣＤＲ４、ＣＤＲ５およびＣＤＲ６）（配列番号４、５および６）もしくは少なくとも一つの軽鎖可変領域の変異体を含んでなる抗原結合領域を含んでなる。限定されない例として、抗体もしくは抗原結合部分もしくは変異体は、配列番号：３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、および／もしくは配列番号：６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３の少なくとも一つを含んでなることができる。特定の態様として、抗体もしくは抗原結合フラグメントは、対応するＣＤＲ１、２および／もしくは３のアミノ酸配列（例えば、配列番号：１、２、および／もしくは３）を有する少なくとも一つの重鎖ＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３）の少なくとも一部を含んでなる抗原結合領域を有することができる。別の特定の態様として、抗体もしくは抗原結合部分もしくは変異体は、対応するＣＤＲ４、５および／もしくは６のアミノ酸配列（例えば、配列番号：４、５、および／もしくは６）を有する少なくとも一つの軽鎖ＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲ４、ＣＤＲ５および／もしくは６）の少なくとも一部を含んでなる抗原結合領域を有することができる。好ましい態様として、抗体もしくは抗原結合フラグメントの３個の重鎖ＣＤＲおよび３個の軽鎖ＣＤＲは、本明細書に記述するように、ｍＡｂ  ｃＣＬＢ−８、キメラ抗ＩＬ−６  Ｍａｂの少なくとも一つの対応するＣＤＲのアミノ酸配列を有する。そのような抗体は、従来の技術を用いて抗体の様々な部分（例えば、ＣＤＲ、フレームワーク）を一緒に化学的に連結することにより、組み換えＤＮＡ技術の従来の技術を用いて抗体をコードする（すなわち、１つもしくはそれ以上の）核酸分子を製造しそして発現させることにより、または任意の他の適当な方法を用いることおよび本発明のポリペプチドの発現をもたらす可能な重複コドンのいずれか、例えば、配列番号１５もしくは１６を用いることにより製造することができる。
【００６５】
ヒトＩＬ−６に結合しそして特定の重鎖もしくは軽鎖可変領域もしくはＣＤＲ領域を含んでなる抗体は、当該技術分野において既知であるようにそして／もしくは本明細書に記述するように、ファージディスプレイ（Ｋａｔｓｕｂｅ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ，１（５）：８６３−８６８（１９９８））もしくはトランスジェニック動物を用いる方法のような、適当な方法を用いて製造することができる。例えば、抗体、特定の部分もしくは変異体は、適当な宿主細胞においてコードする核酸もしくはその一部を用いて発現させることができる。
【００６６】
記述するように、本発明はまた、本明細書に記述するアミノ酸配列と実質的に同じである配列中のアミノ酸を含んでなる抗体、抗原結合フラグメント、免疫グロブリン鎖およびＣＤＲにも関する。そのような抗ＩＬ−６抗体は、本明細書において特定するように、天然の突然変異もしくはヒト操作のいずれかから、１個もしくはそれ以上のアミノ酸置換、欠失もしくは付加を含むことができる。好ましくは、そのような抗体もしくは抗原結合フラグメントおよびそのような鎖もしくはＣＤＲを含んでなる抗体は、高い親和性（例えば、約１０−９Ｍ以下のＫＤ）でヒトＩＬ−６に結合することができる。本明細書に記述する配列と実質的に同じであるアミノ酸配列には、保存的アミノ酸置換、ならびにアミノ酸欠失および／もしくは挿入を含んでなる配列が包含される。保存的アミノ酸置換は、第一のアミノ酸のものと同様である化学的および／もしくは物理的性質（例えば、電荷、構造、極性、疎水性／親水性）を有する第二のアミノ酸による第一のアミノ酸の置換をさす。保存的置換には、あるアミノ酸の以下のグループ内の別のものによる置換が包含される：リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）およびヒスチジン（Ｈ）；アスパルテート（Ｄ）およびグルタメート（Ｅ）；アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、チロシン（Ｙ）、Ｋ、Ｒ、Ｈ、ＤおよびＥ；アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、
ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）およびグリシン（Ｇ）；Ｆ、ＷおよびＹ；Ｃ、ＳおよびＴ。
【００６７】
もちろん、当業者が行うアミノ酸置換の数は、上記のものを包含する多数の因子により決まる。一般的に言えば、任意の既定の抗ＩＬ−６抗体、フラグメントもしくは変異体のアミノ酸置換、挿入もしくは欠失の数は、本明細書に特定するように、１〜３０またはその中の任意の範囲もしくは値のような、４０、３０、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１より多くない。
【００６８】
機能にとって必須である本発明の抗ＩＬ−６抗体におけるアミノ酸は、部位特異的突然変異誘発もしくはアラニンスキャニング突然変異誘発（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，上記，８，１５章；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５（１９８９））のような、当該技術分野において既知である方法により同定することができる。後者の方法は、分子におけるあらゆる残基で単一のアラニン突然変異を導入する。次に、得られる突然変異体分子を少なくとも一つのＩＬ−６中和活性のようなしかしこれに限定されるものではない生物学的活性に関して試験する。抗体結合にとって重要である部位はまた、結晶化、核磁気共鳴もしくは光親和性ラベリングのような構造解析により同定することもできる（Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４（１９９２）およびｄｅ  Ｖｏｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５５：３０６−３１２（１９９２））。
【００６９】
本発明の抗ＩＬ−６抗体は、配列番号：１、２、３、４、５、６の少なくとも一つの連続したアミノ酸の５個〜全てから選択される少なくとも一つの部分、配列もしくは組み合わせを含むことができるが、これらに限定されるものではない。
【００７０】
抗ＩＬ−６抗体はさらに、場合により、配列番号：７、８の少なくとも一つの連続したアミノ酸の７０〜１００％の少なくとも一つのポリペプチドを含んでなることができる。
【００７１】
一つの態様として、免疫グロブリン鎖もしくはその一部（例えば、可変領域、ＣＤＲ）のアミノ酸配列は、配列番号：７、８の少なくとも一つの対応する鎖のアミノ酸配列に対して約７０〜１００％の同一性（例えば、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００またはその中の任意の範囲もしくは値）を有する。例えば、軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：８の配列と比較することができ、もしくは重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号：７と比較することができる。好ましくは、７０〜１００％のアミノ酸同一性（すなわち、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００またはその中の任意の範囲もしくは値）は、当該技術分野において既知であるように、適当なコンピューターアルゴリズムを用いて決定する。
【００７２】
典型的な重鎖および軽鎖可変領域配列を配列番号：７、８に提供する。本発明の抗体、もしくはその特定の変異体は、本発明の抗体からの任意の数の連続するアミノ酸残基を含んでなることができ、ここで、この数は、抗ＩＬ−６抗体における連続する残基の数の１０〜１００％よりなる整数の群から選択される。場合により、連続するアミノ酸のこのサブ配列は、長さが少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０もしくはそれ以上のアミノ酸、またはその中の任意の範囲もしくは値である。さらに、そのようなサブ配列の数は、少なくと
も２、３、４もしくは５のような、１〜２０よりなる群から選択される任意の整数であることができる。
【００７３】
当業者が認識するように、本発明には、本発明の少なくとも一つの生物学的に活性の抗体が包含される。生物学的に活性の抗体は、天然の（非合成の）、内因性もしくは関連するそして既知の抗体のものの少なくとも２０％、３０％、もしくは４０％、そして好ましくは少なくとも５０％、６０％、もしくは７０％、そして最も好ましくは少なくとも８０％、９０％、もしくは９５％〜１０００％の比活性を有する。酵素活性および基質特異性の指標をアッセイおよび定量する方法は、当業者に周知である。
【００７４】
別の態様として、本発明は、有機部分の共有結合により改変される、本明細書に記述するようなヒト抗体および抗原結合フラグメントに関する。そのような改変は、改善された薬物動態学的性質（例えば、増大したインビボ血清半減期）を有する抗体もしくは抗原結合フラグメントを製造することができる。有機部分は、線状もしくは分枝状の親水性ポリマー基、脂肪酸基、もしくは脂肪酸エステル基であることができる。特定の態様として、親水性ポリマー基は、約８００〜約１２０，０００ダルトンの分子量を有することができ、そしてポリアルカングリコール（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ））、炭水化物ポリマー、アミノ酸ポリマーもしくはポリビニルピロリドンであることができ、そして脂肪酸もしくは脂肪酸エステル基は、約８〜約４０個の炭素原子を含んでなることができる。
【００７５】
本発明の改変された抗体および抗原結合フラグメントは、抗体に直接的もしくは間接的に共有結合している１つもしくはそれ以上の有機部分を含んでなることができる。本発明の抗体もしくは抗原結合フラグメントに結合している各有機部分は、独立して、親水性ポリマー基、脂肪酸基もしくは脂肪酸エステル基であることができる。本明細書において用いる場合、「脂肪酸」という用語には、モノカルボン酸およびジカルボン酸が包含される。「親水性ポリマー基」は、該用語を本明細書において用いる場合、オクタンにおけるより水において可溶性である有機ポリマーをさす。例えば、ポリリシンは、オクタンにおけるより水において可溶性である。従って、ポリリシンの共有結合により改変される抗体は、本発明によって包含される。本発明の抗体を改変するのに適当な親水性ポリマーは、線状もしくは分枝状であることができ、そして例えば、ポリアルカングリコール（例えば、ＰＥＧ、モノメトキシ−ポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、ＰＰＧなど）、炭水化物（例えば、デキストラン、セルロース、オリゴ糖、多糖など）、親水性アミノ酸のポリマー（例えば、ポリリシン、ポリアルギニン、ポリアスパルテートなど）、ポリアルカンオキシド（例えば、ポリエチレンオキシド、ポリプロピレンオキシドなど）およびポリビニルピロリドンが包含される。好ましくは、本発明の抗体を改変する親水性ポリマーは、別個の分子存在として約８００〜約１５０，０００ダルトンの分子量を有する。例えば、ＰＥＧ５０００およびＰＥＧ２０，０００（ここで、下付き文字は、ダルトン単位のポリマーの平均分子量である）を用いることができる。親水性ポリマー基は、１〜約６個のアルキル、脂肪酸もしくは脂肪酸エステル基で置換することができる。脂肪酸もしくは脂肪酸エステル基で置換される親水性ポリマーは、適当な方法を用いることにより製造することができる。例えば、アミン基を含んでなるポリマーは、脂肪酸もしくは脂肪酸エステルのカルボキシレートに連結することができ、そして脂肪酸もしくは脂肪酸エステル上の活性化カルボキシレート（例えば、Ｎ，Ｎ−カルボニルジイミダゾールで活性化する）は、ポリマー上のヒドロキシル基に連結することができる。
【００７６】
本発明の抗体を改変するのに適当な脂肪酸および脂肪酸エステルは、飽和していることができ、または１つもしくはそれ以上の単位の不飽和を含有することができる。本発明の抗体を改変するのに適当な脂肪酸には、例えば、ｎ−ドデカノエート（Ｃ１２、ラウレート）、ｎ−テトラデカノエート（Ｃ１４、ミリステート）、ｎ−オクタデカノエート（Ｃ
１８、ステアレート）、ｎ−エイコサノエート（Ｃ２０、アラキデート）、ｎ−ドコサノエート（Ｃ２２、ベヘネート）、ｎ−トリアコンタノエート（Ｃ３０）、ｎ−テトラコンタノエート（ｎ−ｔｅｔｒａｃｏｎｔａｎｏａｔｅ）（Ｃ４０）、シス−Δ９−オクタデカノエート（Ｃ１８、オレエート）、全てのシス−Δ５，８，１１，１４−エイコサテトラエノエート（Ｃ２０、アラキドネート）、オクタン二酸、テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、ドコサン二酸などが包含される。適当な脂肪酸エステルには、線状もしくは分枝状の低級アルキル基を含んでなるジカルボン酸のモノエステルが包含される。低級アルキル基は、１〜約１２個、好ましくは１〜約６個の炭素原子を含んでなることができる。
【００７７】
改変されたヒト抗体および抗原結合フラグメントは、１つもしくはそれ以上の改変剤との反応によるような、適当な方法を用いて製造することができる。「改変剤」は、該用語を本明細書において用いる場合、活性化基を含んでなる適当な有機基（例えば、親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）をさす。「活性化基」は、適切な条件下で、第二の化学基と反応し、それにより改変剤と第二の化学基との間で共有結合を形成することができる化学部分もしくは官能基である。例えば、アミン反応性活性化基には、トシレート、メシレート、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨード）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＮＨＳ）などのような求電子基が包含される。チオールと反応することができる活性化基には、例えば、マレイミド、ヨードアセチル、アクリロリル、ピリジルジスルフィド、５−チオール−２−ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ−チオール）などが包含される。アルデヒド官能基は、アミンもしくはヒドラジンを含有する分子に連結することができ、そしてアジド基は３価のリン基と反応してホスホルアミデートもしくはホスホルイミド結合を形成することができる。分子に活性化基を導入する適当な方法は、当該技術分野において既知である（例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９６）を参照）。活性化基は、有機基（例えば、親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）に直接、もしくはリンカー部分、例えば２価のＣ１〜Ｃ１２基（ここで、１個もしくはそれ以上の炭素原子は、酸素、窒素もしくは硫黄のようなヘテロ原子で置換することができる）を介して結合することができる。適当なリンカー部分には、例えば、テトラエチレングリコール、−（ＣＨ２）３−、−ＮＨ−（ＣＨ２）６−ＮＨ−、−（ＣＨ２）２−ＮＨ−および−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ−ＮＨ−が包含される。リンカー部分を含んでなる改変剤は、例えば、モノ−Ｂｏｃ−アルキルジアミン（例えば、モノ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、モノ−Ｂｏｃ−ジアミノヘキサン）を１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で脂肪酸と反応させて遊離アミンと脂肪酸カルボキシレートとの間でアミド結合を生成せしめることにより製造することができる。Ｂｏｃ保護基をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）での処理により生成物から除去して第一級アミンを露出することができ、それを記述されているように別のカルボキシレートに連結することができ、もしくは無水マレイン酸と反応させそして得られる生成物を環化して脂肪酸の活性化マレイミド誘導体を生成せしめることができる（例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９２／１６２２１を参照、この全教示は、引用することにより本明細書に組み込まれる）。
【００７８】
本発明の改変された抗体は、ヒト抗体もしくは抗原結合フラグメントを改変剤と反応させることにより製造することができる。例えば、有機部分は、アミン反応性改変剤、例えばＰＥＧのＮＨＳエステルを用いることにより非部位特異的に抗体に結合することができる。改変されたヒト抗体もしくは抗原結合フラグメントはまた、抗体もしくは抗原結合フラグメントのジスルフィド結合（例えば、鎖内ジスルフィド結合）を還元することにより製造することもできる。還元した抗体もしくは抗原結合フラグメントは、次に、チオール反応性改変剤と反応させて本発明の改変された抗体を生成せしめることができる。本発明の抗体の特定の部位に結合している有機部分を含んでなる改変されたヒト抗体および抗原結合フラグメントは、逆タンパク質分解（Ｆｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕ
ｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，３：１４７−１５３（１９９２）；Ｗｅｒｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，５：４１１−４１７（１９９４）；Ｋｕｍａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．６（１０）：２２３３−２２４１（１９９７）；Ｉｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２４（１）：５９−６８（１９９６）；Ｃａｐｅｌｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，５６（４）：４５６−４６３（１９９７））、およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９６）に記述されている方法のような適当な方法を用いて製造することができる。
【００７９】
本発明の抗体は、広範囲の親和性（ＫＤ）でヒトＩＬ−６に結合することができる。好ましい態様として、本発明の少なくとも一つのヒトｍＡｂは、場合により、高い親和性でヒトＩＬ−６に結合することができる。例えば、ｍＡｂは、０．１〜９．９（またはその中の任意の範囲もしくは値）Ｘ１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０、１０−１１、１０−１２、１０−１３またはその中の任意の範囲もしくは値のようなしかしこれらに限定されるものではない、約１０−７Ｍ以下のＫＤでヒトＩＬ−６に結合することができる。
【００８０】
抗原に対する抗体の親和性もしくはアビディティーは、任意の適当な方法を用いて実験的に決定することができる。（例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ，ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９８４）；Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９９２）；および本明細書に記述する方法を参照。）特定の抗体−抗原相互作用の測定される親和性は、異なる条件下（例えば、塩濃度、ｐＨ）で測定する場合に異なり得る。従って、親和性および他の抗原結合パラメーター（例えば、ＫＤ、Ｋａ、Ｋｄ）の測定は、好ましくは、抗体および抗原の標準化溶液、ならびに本明細書に記述するバッファーのような標準化バッファーで行う。
【００８１】
本発明の方法および組成物において有用な抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体は、ＩＬ−６への高親和性結合および場合によりそして好ましくは低い毒性を有することを特徴とする。特に、可変領域、定常領域およびフレームワークのような個々の成分が、個々にそして／もしくは集合的に、場合によりそして好ましくは低い免疫原性を有する、本発明の抗体、特定のフラグメントもしくは変異体は、本発明において有用である。本発明に用いることができる抗体は、場合により、症状の測定可能な軽減および低いそして／もしくは許容しうる毒性で長期間にわたって患者を処置できることを特徴とする。低いもしくは許容しうる免疫原性および／もしくは高い親和性、ならびに他の適当な性質は、得られる治療結果に寄与することができる。「低い免疫原性」は、処置する患者の約７５％未満、もしくは好ましくは約５０％未満において有意なＨＡＨＡ、ＨＡＣＡもしくはＨＡＭＡ応答を引き起こすこと、および／または処置する患者において低い力価をもたらすこと（二重抗原酵素免疫アッセイで測定する約３００未満、好ましくは約１００未満）（Ｅｌｌｉｏｔｔ
ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  ３４４：１１２５−１１２７（１９９４）、引用することにより全部が本明細書に組み込まれる）と本明細書において定義する。
【００８２】
ｃＣＬＢ８を他のＩＬ−６特異的抗体ＣＬＢ．ＩＬ−６／１４およびＣＬＢ．ＩＬ−６／１６と比較すると、抗体親和性およびエピトープ特異性の異なる特徴を認めることができる。ＩＬ−６に結合し、そして通常はＩＬ−６とその受容体との間の相互作用を妨げる抗体、ｃＣＬＢ８は、ＩＬ−６依存性７ＴＤ１細胞増殖バイオアッセイおよびＩＬ−６受容体へのＩＬ−６結合のＬｕｍｉｎｅｘに基づくアッセイの両方において例示されるよう
にＩＬ−６機能のほぼ１００％を阻害することができる。対照的に、ＩＬ−６に結合するが、ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複合体とｇｐ１３０シグナル伝達成分との間の相互作用を立体的に妨げることにより中和する抗体、ＣＬＢ．ＩＬ−６／１６は、結合したビオチン−ＩＬ−６の６２％のみを阻害することができる。最後に、ＣＬＢ．ＩＬ−６／１４におけるように、ＩＬ−６に結合するが、その生物学的活性を妨げない抗体は、固相ｓＩＬ−６Ｒ／ｇｐ８０に結合するビオチン−ＩＬ−６の阻害を示さない。
【００８３】
少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル、ヒト化、抗体である二重特異性、ヘテロ特異性、ヘテロコンジュゲート（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）もしくは同様の抗体もまた用いることができる。本発明の場合、結合特異性の一方は少なくとも一つのＩＬ−６タンパク質に対してであり、もう一方は任意の他の抗原に対してである。二重特異性抗体を製造する方法は、当該技術分野において既知である。従来、二重特異性抗体の組み換え生産は、２本の重鎖が異なる特異性を有する、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の共発現に基づく（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖の任意の組み合わせのために、これらのハイブリドーマ（クアドローマ（ｑｕａｄｒｏｍａ））は、１０種の異なる抗体分子の潜在的混合物を生成し、これらのうち１種のみが正しい二重特異性構造を有する。通常はアフィニティークロマトグラフィー工程によって行われる、正しい分子の精製は、かなり面倒であり、そして生成物収量は低い。同様の方法は、例えば、各々引用することにより全部が本明細書に組み込まれる、ＷＯ９３／０８８２９、米国特許第６２１０６６８号、第６１９３９６７号、第６１３２９９２号、第６１０６８３３号、第６０６０２８５号、第６０３７４５３号、第６０１０９０２号、第５９８９５３０号、第５９５９０８４号、第５９５９０８３号、第５９３２４４８号、第５８３３９８５号、第５８２１３３３号、第５８０７７０６号、第５６４３７５９号、第５６０１８１９号、第５５８２９９６号、第５４９６５４９号、第４６７６９８０号、ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／００３７３、ＥＰ０３０８９、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０（１９８６）に開示されている。
【００８４】
核酸分子
配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８の少なくとも一つの連続するアミノ酸の少なくとも７０〜１００％をコードするヌクレオチド配列、その特定のフラグメント、変異体もしくは共通配列、またはこれらの配列の少なくとも一つを含んでなる寄託したベクターのような、本明細書に提供する情報を用いて、少なくとも一つのｃＣＬＢ−８抗ＩＬ−６抗体をコードする本発明の核酸分子を本明細書に記述するかもしくは当該技術分野において既知であるような方法を用いて得ることができる。
【００８５】
本発明の核酸分子は、ｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡもしくは任意の他の形態のようなＲＮＡの形態、またはクローニングにより得られるかもしくは合成的に製造されるｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡが包含されるがこれらに限定されるものではないＤＮＡの形態、またはその任意の組み合わせであることができる。ＤＮＡは３本鎖、２本鎖もしくは１本鎖、またはその任意の組み合わせであることができる。ＤＮＡもしくはＲＮＡの少なくとも１つの鎖の任意の部分は、センス鎖としても知られているコーディング鎖であることができ、またはそれはアンチセンス鎖とも呼ばれる非コーディング鎖であることができる。
【００８６】
本発明の単離された核酸分子には、場合により１個もしくはそれ以上のイントロンを有する、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、例えば、少なくとも一つの重鎖（例えば、配列番号：１〜３）もしくは軽鎖（例えば、配列番号：４〜６）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３のような少なくとも一つのＣＤＲの少なくとも一つの特定の部分（しかしこれらに限定されるものではない）を含んでなる核酸分子；抗ＩＬ−６抗体
もしくは可変領域のコーディング配列（例えば、配列番号：１５もしくは１６）を含んでなる核酸分子；および上記のものと実質的に異なるが、本明細書に記述するようにそして／もしくは当該技術分野において既知であるように遺伝暗号の縮重のために少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体をなおコードするヌクレオチド配列を含んでなる核酸分子を包含することができる。もちろん、遺伝暗号は当該技術分野において周知である。従って、本発明の特定の抗ＩＬ−６抗体をコードするそのような縮重核酸変異体を作製することは当業者にとって日常的である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，上記を参照、そしてそのような核酸変異体は本発明に包含される。本発明の単離された核酸分子の限定されない例には、それぞれ、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、ＬＣ  ＣＤＲ３、ＨＣ可変領域およびＬＣ可変領域をコードする核酸の限定されない例に対応する；配列番号：９〜１６が包含される。
【００８７】
本明細書において示すように、抗ＩＬ−６抗体をコードする核酸を含んでなる本発明の核酸分子には、それだけで、抗体フラグメントのアミノ酸配列をコードするもの；全抗体もしくはその一部のコーディング配列；抗体、フラグメントもしくは部分のコーディング配列、ならびに転写、スプライシングおよびポリアデニル化シグナルを包含するｍＲＮＡプロセシング（例えば、リボソーム結合およびｍＲＮＡの安定性）において役割を果たす転写され翻訳されない配列のような、非コーディング５’および３’配列が包含されるがこれらに限定されるものではない、追加の非コーディング配列と一緒に、少なくとも一つのイントロンのような、上記の追加のコーディング配列の有無で、少なくとも一つのシグナルリーダーもしくは融合ペプチドのコーディング配列のような追加の配列；追加の機能を与えるもののような、追加のアミノ酸をコードする追加のコーディング配列を含むことができるが、これらに限定されるものではない。従って、抗体をコードする配列は、抗体フラグメントもしくは部分を含んでなる融合した抗体の精製を容易にするペプチドをコードする配列のような、マーカー配列に融合させることができる。
【００８８】
本明細書に記述するようなポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするポリヌクレオチド
本発明は、本明細書に開示するポリヌクレオチドに選択的ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする単離された核酸を提供する。従って、本態様のポリヌクレオチドは、そのようなポリヌクレオチドを含んでなる核酸を単離、検出および／もしくは定量するのに用いることができる。例えば、本発明のポリヌクレオチドは、寄託ライブラリーにおける部分もしくは全長クローンを同定、単離、もしくは増幅するのに用いることができる。ある態様として、ポリヌクレオチドは、単離された、またはそうでなければヒトもしくは哺乳類核酸ライブラリーからのｃＤＮＡに相補的なゲノムもしくはｃＤＮＡ配列である。
【００８９】
好ましくは、ｃＤＮＡライブラリーは、少なくとも８０％の全長配列、好ましくは少なくとも８５％もしくは９０％の全長配列、そしてより好ましくは少なくとも９５％の全長配列を含んでなる。ｃＤＮＡライブラリーは、稀な配列の表示を上げるために標準化することができる。低いもしくは中程度のストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件は、典型的にしかし限定的ではなく、相補的配列に対する減少した配列同一性を有する配列で用いられる。中程度および高いストリンジェンシー条件は、場合により、より大きい同一性の配列に用いることができる。低いストリンジェンシー条件は、約７０％の配列同一性を有する配列の選択的ハイブリダイゼーションを可能にし、そしてオーソロガスもしくはパラロガス配列を同定するために用いることができる。
【００９０】
場合により、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書に記述するポリヌクレオチドによりコードされる抗体の少なくとも一部をコードする。本発明のポリヌクレオチドには、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドへの選択的ハイブリダイゼーションに用いるこ
とができる核酸配列が包含される。例えば、各々引用することにより全部が本明細書に組み込まされる、Ａｕｓｕｂｅｌ  上記；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，上記を参照。
【００９１】
核酸の構築
本発明の単離された核酸は、当該技術分野において周知であるように、（ａ）組み換え法、（ｂ）合成技術、（ｃ）精製技術、もしくはその組み合わせを用いて製造することができる。
【００９２】
核酸は、本発明のポリヌクレオチドに加えて配列を都合よく含んでなることができる。例えば、ポリヌクレオチドの単離に役立つように１個もしくはそれ以上のエンドヌクレアーゼ制限部位を含んでなるマルチクローニング部位を核酸に挿入することができる。また、本発明の翻訳されたポリヌクレオチドの単離に役立つように翻訳可能な配列を挿入することができる。例えば、ヘキサ−ヒスチジンマーカー配列は、本発明のタンパク質を精製するために都合の良い手段を提供する。コーディング配列を除く本発明の核酸は、場合により、本発明のポリヌクレオチドのクローニングおよび／もしくは発現用のベクター、アダプター、もしくはリンカーである。
【００９３】
そのようなクローニングおよび／もしくは発現配列に、クローニングおよび／もしくは発現におけるそれらの機能を最適化するために、ポリヌクレオチドの単離に役立つように、または細胞へのポリヌクレオチドの導入を高めるために追加の配列を加えることができる。クローニングベクター、発現ベクター、アダプター、およびリンカーの使用は、当該技術分野において周知である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，上記；もしくはＳａｍｂｒｏｏｋ，上記を参照）。
【００９４】
核酸を構築するための組み換え法
ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、もしくはその任意の組み合わせのような、本発明の単離された核酸組成物は、当業者に既知である任意の数のクローニング方法論を用いて生物学的供給源から得ることができる。ある態様として、ストリンジェントな条件下で、本発明のポリヌクレオチドに選択的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブを、ｃＤＮＡもしくはゲノムＤＮＡライブラリーにおける所望の配列を同定するために用いる。ＲＮＡの単離、ならびにｃＤＮＡおよびゲノムライブラリーの構築は、当業者に周知である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，上記；もしくはＳａｍｂｒｏｏｋ，上記を参照）。
【００９５】
核酸スクリーニングおよび単離方法
ｃＤＮＡもしくはゲノムライブラリーは、本明細書に開示するもののような、本発明のポリヌクレオチドの配列に基づくプローブを用いてスクリーニングすることができる。プローブは、同じもしくは異なる生物体における相同遺伝子を単離するためにゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡ配列とハイブリダイズするように用いることができる。当業者は、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーの様々な程度をアッセイに用いることができ；そしてハイブリダイゼーションもしくは洗浄媒質のいずれかがストリンジェントであることができることを認識する。ハイブリダイゼーションの条件がストリンジェントになるにつれて、二本鎖形成が起こるためにはプローブと標的との間の相補性の程度が大きくなければならない。ストリンジェンシーの程度は、温度、イオン強度、ｐＨおよびホルムアミドのような部分的に変性する溶媒の存在の１つもしくはそれ以上により制御することができる。例えば、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、例えば、０％〜５０％の範囲内のホルムアミドの濃度の操作によって反応物質溶液の極性を変えることにより都合よく変えられる。検出可能な結合に必要な相補性（配列同一性）の程度は、ハイブリダイゼーション媒質および／もしくは洗浄媒質のストリンジェンシーにより異なる。相補性の程度は、最適には１００％、もしくは７０〜１００％、またはその中の任意の範囲もしくは値である。しかしながら、プローブおよびプライマーにおけるわずかな配列変異は、
ハイブリダイゼーションおよび／もしくは洗浄媒質のストリンジェンシーを下げることにより補正することができると理解されるべきである。
【００９６】
ＲＮＡもしくはＤＮＡの増幅の方法は当該技術分野において周知であり、そして本明細書に提示する教示およびガイダンスに基づいて、過度の実験なしに本発明に従って用いることができる。
【００９７】
ＤＮＡもしくはＲＮＡ増幅の既知の方法には、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および関連増幅プロセス（例えば、Ｍｕｌｌｉｓ，ｅｔ  ａｌ．への米国特許第４，６８３，１９５号、第４，６８３，２０２号、第４，８００，１５９号、第４，９６５，１８８号；Ｔａｂｏｒ，ｅｔ  ａｌへの第４，７９５，６９９号および第４，９２１，７９４号；Ｉｎｎｉｓへの第５，１４２，０３３号；Ｗｉｌｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．への第５，１２２，４６４号；Ｉｎｎｉｓへの第５，０９１，３１０号；Ｇｙｌｌｅｎｓｔｅｎ，ｅｔ  ａｌへの第５，０６６，５８４号；Ｇｅｌｆａｎｄ，ｅｔ  ａｌへの第４，８８９，８１８号；Ｓｉｌｖｅｒ，ｅｔ  ａｌへの第４，９９４，３７０号；Ｂｉｓｗａｓへの第４，７６６，０６７号；Ｒｉｎｇｏｌｄへの第４，６５６，１３４号を参照）ならびに二本鎖ＤＮＡ合成の鋳型として標的配列に対するアンチセンスＲＮＡを用いるＲＮＡ媒介増幅（Ｍａｌｅｋ，ｅｔ  ａｌへの米国特許第５，１３０，２３８号、商標名ＮＡＳＢＡを有する）が包含されるが、これらに限定されるものではなく、これらの参考文献の全内容は、引用することにより本明細書に組み込まれる（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，上記；もしくはＳａｍｂｒｏｏｋ，上記を参照）。
【００９８】
例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術は、ゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡライブラリーから直接本発明のポリヌクレオチドおよび関連遺伝子の配列を増幅するために用いることができる。ＰＣＲおよび他のインビトロ増幅方法はまた、例えば、発現されるタンパク質をコードする核酸配列をクローン化するため、サンプルにおける所望のｍＲＮＡの存在を検出するためのプローブとして使用する核酸を製造するため、核酸塩基配列決定のため、もしくは他の目的のために有用であることもできる。インビトロ増幅方法に当業者を導くのに十分な技術の例は、Ｂｅｒｇｅｒ，上記、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，上記、およびＡｕｓｕｂｅｌ，上記、ならびにＭｕｌｌｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，米国特許第４，６８３，２０２号（１９８７）；およびＩｎｎｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ（１９９０）に見出される。ゲノムＰＣＲ増幅用の市販されているキットは、当該技術分野において既知である。例えば、Ａｄｖａｎｔａｇｅ−ＧＣ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＰＣＲキット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を参照。さらに、例えば、Ｔ４遺伝子３２タンパク質（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）は、長いＰＣＲ生成物の収量を高めるために用いることができる。
【００９９】
核酸を構築するための合成方法
本発明の単離された核酸はまた、既知の方法（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，上記を参照）による直接化学合成により製造することもできる。化学合成は、一般に、一本鎖オリゴヌクレオチドを生成し、これを相補的配列とのハイブリダイゼーションにより、もしくは鋳型として一本鎖を用いるＤＮＡポリメラーゼでの重合により二本鎖ＤＮＡに転化することができる。当業者は、ＤＮＡの化学合成は約１００塩基もしくはそれ以上の配列に限定され得るが、より長い配列を短い配列の連結により得ることができることを認識する。
【０１００】
組み換え発現カセット
本発明はさらに、本発明の核酸を含んでなる組み換え発現カセットを提供する。本発明
の核酸配列、例えば、本発明の抗体をコードするｃＤＮＡもしくはゲノム配列は、少なくとも一つの所望の宿主細胞に導入することができる組み換え発現カセットを構築するために用いることができる。組み換え発現カセットは、典型的に、意図する宿主細胞におけるポリヌクレオチドの転写を導く転写開始調節配列に操作可能に連結された本発明のポリヌクレオチドを含んでなる。異種および非異種（すなわち、内因性）プロモーターの両方を本発明の核酸の発現を導くために用いることができる。
【０１０１】
ある態様として、プロモーター、エンハンサー、もしくは他の要素として働く単離された核酸を、本発明のポリヌクレオチドの発現をアップもしくはダウンレギュレーションするように本発明のポリヌクレオチドの非異種形態の適切な位置（上流、下流もしくはイントロン中）に導入することができる。例えば、内因性プロモーターを突然変異、欠失および／もしくは置換によりインビボもしくはインビトロにおいて改変することができる。
【０１０２】
ベクターおよび宿主細胞
本発明はまた、当該技術分野において周知であるような、本発明の単離された核酸分子を含むベクター、組み換えベクターで遺伝子操作される宿主細胞、および組み換え技術による少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体の生産にも関する。例えば、各々引用することにより全部が本明細書に組み込まれる、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，上記；Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，上記を参照。
【０１０３】
ポリヌクレオチドは、場合により、宿主における増殖の選択可能なマーカーを含有するベクターに連結することができる。一般に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈殿のような沈殿において、もしくは荷電脂質との複合体において導入される。ベクターがウイルスである場合、それを適切なパッケージング細胞系を用いてインビトロにおいてパッケージングし、そして次に宿主細胞に形質導入することができる。
【０１０４】
ＤＮＡインサートは、適切なプロモーターに操作可能に連結されるべきである。発現構築物はさらに、転写開始、終結の部位および転写される領域中に翻訳のためのリボソーム結合部位を含有する。構築物により発現される成熟転写産物のコーディング部分は、好ましくは、最初に翻訳開始および翻訳されるｍＲＮＡの末端に適切に位置する終止コドン（例えば、ＵＡＡ、ＵＧＡもしくはＵＡＧ）を含み、哺乳類もしくは真核細胞発現にはＵＡＡおよびＵＡＧが好ましい。
【０１０５】
発現ベクターは、好ましくはしかし場合により、少なくとも一つの選択可能なマーカーを含む。そのようなマーカーには、例えば、真核細胞培養物ではメトトレキセート（ＭＴＸ）、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ、米国特許第４，３９９，２１６号；第４，６３４，６６５号；第４，６５６，１３４号；第４，９５６，２８８号；第５，１４９，６３６号；第５，１７９，０１７号）、アンピシリン、ネオマイシン（Ｇ４１８）、ミコフェノール酸、もしくはグルタミン合成酵素（ＧＳ、米国特許第５，１２２，４６４号；第５，７７０，３５９号；第５，８２７，７３９号）耐性、ならびにエシェリキア・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）および他の細菌もしくは原核生物における培養ではテトラサイクリンもしくはアンピシリン耐性遺伝子が包含されるが、これらに限定されるものではない（上記の特許は、引用することにより全部が本明細書に組み込まれる）。上記の宿主細胞の適切な培養培地および条件は、当該技術分野において既知である。適当なベクターは、当業者に容易に明らかである。宿主細胞へのベクター構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン脂質媒介トランスフェクション、電気穿孔、形質導入、感染もしくは他の既知の方法によりもたらすことができる。そのような方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，上記、１−４および１６−１８章；Ａｕｓｕｂｅｌ，上記、１、９、１３、１５、１６章のような、当該技術分野において記述されている。
【０１０６】
本発明の少なくとも一つの抗体は、融合タンパク質のような改変された形態で発現することができ、そして分泌シグナルだけでなく、追加の異種の機能性領域も含むことができる。例えば、追加のアミノ酸、特に荷電したアミノ酸の領域は、精製中、もしくはその後の処理および保存中に、宿主細胞における安定性およびおよび持続性を高めるために抗体のＮ末端に付加することができる。ペプチド部分もまた、精製を容易にするために本発明の抗体に付加することができる。そのような領域は、抗体もしくはその少なくとも一つのフラグメントの最終調製の前に除去することができる。そのような方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，上記、１７．２９−１７．４２および１８．１−１８．７４章；Ａｕｓｕｂｅｌ，上記、１６、１７および１８章のような、多数の標準的な実験室マニュアルに記述されている。
【０１０７】
当業者は、本発明のタンパク質をコードする核酸の発現に利用可能な多数の発現系に通じている。
【０１０８】
あるいはまた、本発明の核酸は、本発明の抗体をコードする内因性ＤＮＡを含有する宿主細胞中で作動させることにより（操作により）宿主細胞において発現することができる。そのような方法は、例えば、引用することにより全部が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５８０，７３４号、第５，６４１，６７０号、第５，７３３，７４６号、および第５，７３３，７６１号に記述されているように、当該技術分野において周知である。
【０１０９】
抗体、その特定の部分もしくは変異体の生産に有用な細胞培養物の実例は、哺乳類細胞である。哺乳類細胞系は、哺乳類細胞懸濁液もしくはバイオリアクターもまた用いることができるが、細胞の単層の形態であることが多い。完全なグリコシル化タンパク質を発現することができる多数の適当な宿主細胞系が当該技術分野において開発されており、そしてＣＯＳ−１（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５０）、ＣＯＳ−７（例えば、ＡＴＣＣ
ＣＲＬ−１６５１）、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１０）、ＣＨＯ（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６１０）およびＢＳＣ−１（例えば、ＡＴＣＣ
ＣＲＬ−２６）細胞系、Ｃｏｓ−７細胞、ＣＨＯ細胞、ｈｅｐ  Ｇ２細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、ＳＰ２／０−Ａｇ１４、２９３細胞、ＨｅＬａ細胞などが包含され、これらは、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）から容易に入手できる。好ましい宿主細胞には、骨髄腫およびリンパ腫細胞のようなリンパ球系由来の細胞が包含される。特に好ましい宿主細胞は、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１５８０）およびＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１８５１）である。特に好ましい態様として、組み換え細胞はＰ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３もしくはＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞である。
【０１１０】
これらの細胞の発現ベクターは、以下の発現制御配列、例えば、複製起点；プロモーター（例えば、後期もしくは初期ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶプロモーター（米国特許第５，１６８，０６２号；第５，３８５，８３９号）、ＨＳＶ  ｔｋプロモーター、ｐｇｋ（ホスホグリセリン酸キナーゼ）プロモーター、ＥＦ−１アルファプロモーター（米国特許第５，２６６，４９１号）、少なくとも一つのヒト免疫グロブリンプロモーター）；エンハンサー、ならびに／もしくはリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位（例えば、ＳＶ４０ラージＴ  ＡｇポリＡ付加部位）のようなプロセシング情報部位、および転写ターミネーター配列（しかしこれらに限定されるものではない）の一つもしくはそれ以上を含むことができる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，上記；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，上記を参照。本発明の核酸もしくはタンパク質の生産に有用な他の細胞は既知であり、そして／あるいは例えばＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉ
ｎｅｓ  ａｎｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ）または他の既知のもしくは商業的供給源から入手できる。
【０１１１】
真核宿主細胞を用いる場合、典型的に、ポリアデニル化もしくは転写ターミネーター配列をベクターに導入する。ターミネーター配列の例は、ウシ成長ホルモン遺伝子からのポリアデニル化配列である。転写産物の正確なスプライシングのための配列もまた含むことができる。スプライシング配列の例は、ＳＶ４０からのＶＰ１イントロンである（Ｓｐｒａｇｕｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４５：７７３−７８１（１９８３））。さらに、当該技術分野において既知であるように、宿主細胞における複製を制御する遺伝子配列をベクターに導入することができる。
【０１１２】
抗体の生産
本発明の少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体は、場合により、当該技術分野において周知であるように、細胞系、混合細胞系、不死化細胞系もしくは不死化細胞のクローン集団により生産することができる。例えば、各々引用することにより全部が本明細書に組み込まれる、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ（１９８７−２００１）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ（１９９４−２００１）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ（１９９７−２００１）を参照。
【０１１３】
一つの方法として、ハイブリドーマは、適当な不死細胞系（例えば、Ｓｐ２／０、ＳＰ２／０−ＡＧ１４、ＮＳＯ、ＮＳ１、ＮＳ２、ＡＥ−１、Ｌ．５、＞２４３、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、Ｓｐ２  ＳＡ３、Ｓｐ２  ＭＡＩ、ＳＰ２  ＳＳ１、ＳＰ２  ＳＡ５、Ｕ９３７、ＭＬＡ  １４４、ＡＣＴ  ＩＶ、ＭＯＬＴ４、ＤＡ−１、ＪＵＲＫＡＴ、ＷＥＨＩ、Ｋ−５６２、ＣＯＳ、ＲＡＪＩ、ＮＩＨ  ３Ｔ３、ＨＬ−６０、ＭＬＡ  １４４、ＮＡＭＡＩＷＡ、ＮＥＵＲＯ  ２Ａなどのようなしかしこれらに限定されるものではない骨髄腫細胞系、もしくはヘテロ骨髄腫、その融合生成物、またはそれから得られる任意の細胞もしくは融合細胞、または当該技術分野において既知であるような任意の他の適当な細胞系、例えば、ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ、ｗｗｗ．ｌｉｆｅｔｅｃｈ．ｃｏｍ．などを参照）を単離されたもしくはクローン化された脾臓、末梢血、リンパ、扁桃、または他の免疫もしくはＢ細胞含有細胞、あるいは内因性もしくは異種の核酸のいずれかとして、組み換えもしくは内因性の、ウイルス、細菌、藻類、原核生物、両生類、昆虫、爬虫類、魚類、哺乳類、げっ歯類、ウマ、ヒツジ（ｏｖｉｎｅ）、ヤギ、ヒツジ（ｓｈｅｅｐ）、霊長類、真核生物の、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｒＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡもしくはＲＮＡ、葉緑体ＤＮＡもしくはＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、一本鎖、二本鎖もしくは三本鎖、ハイブリダイズしたなどまたはその任意の組み合わせとして、重鎖もしくは軽鎖定常もしくは可変もしくはフレームワークもしくはＣＤＲ配列を発現する任意の他の細胞のようなしかしこれらに限定されるものではない抗体産生細胞と融合させることにより作製する。例えば、引用することにより全部が本明細書に組み込まれる、Ａｕｓｕｂｅｌ，上記、およびＣｏｌｌｉｇａｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，上記、２章を参照。
【０１１４】
任意の他の適当な宿主細胞もまた、本発明の抗体、その特定のフラグメントもしくは変異体をコードする異種もしくは内因性核酸を発現するのに用いることができる。融合した細胞（ハイブリドーマ）もしくは組み換え細胞は、選択的培養条件もしくは他の適当な既知の方法を用いて単離し、そして限界希釈もしくは細胞選別、または他の既知の方法によりクローン化することができる。所望の特異性を有する抗体を生産する細胞は、適当なアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）により選択することができる。
【０１１５】
本発明の抗体はまた、ヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジなどのような、それらのミルク中にそのような抗体を生産するトランスジェニック動物もしくは哺乳類を提供するように少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体をコードする核酸を用いて生産することもできる。そのような動物は、既知の方法を用いて提供することができる。例えば、米国特許第５，８２７，６９０号；第５，８４９，９９２号；第４，８７３，３１６号；第５，８４９，９９２号；第５，９９４，６１６号、第５，５６５，３６２号；第５，３０４，４８９号など（しかし、これらに限定されるものではない）を参照、これらの各々は、引用することにより全部が本明細書に組み込まれる。
【０１１６】
本発明の抗体はさらに、そのような抗体、特定の部分もしくは変異体を植物の部分においてもしくはそれから培養する細胞において生産するトランスジェニック植物および培養植物細胞（例えば、タバコおよびトウモロコシ、しかしこれらに限定されるものではない）を提供するように少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体をコードする核酸を用いて生産することができる。限定されない例として、組み換えタンパク質を発現するトランスジェニックタバコ葉は、例えば、誘導性プロモーターを用いて、大量の組み換えタンパク質を提供するために成功裡に用いられている。例えば、Ｃｒａｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４０：９５−１１８（１９９９）およびその中に引用される参考文献を参照。また、トランスジェニックトウモロコシは、他の組み換え系において生産されるかもしくは自然源から精製されるものと同等の生物学的活性を有して、商業生産レベルで哺乳類タンパク質を発現するために用いられている。例えば、Ｈｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４６４：１２７−１４７（１９９９）およびその中に引用される参考文献を参照。抗体はまた、タバコ種子およびジャガイモ塊茎を包含する、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ’ｓ）のような抗体フラグメントを含むトランスジェニック植物種子から大量に生産されている。例えば、Ｃｏｎｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８：１０１−１０９（１９９８）およびその中に引用される参考文献を参照。従って、本発明の抗体はまた、既知の方法に従って、トランスジェニック植物を用いて生産することもできる。例えば、Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３０：９９−１０８（Ｏｃｔ．，１９９９）、Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５２２−７（１９９５）；Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０９：３４１−６（１９９５）；Ｗｈｉｔｅｌａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２２：９４０−９４４（１９９４）；およびその中に引用される参考文献も参照。しかしこれらに限定されるものではない。上記の参考文献の各々は、引用することにより全部が本明細書に組み込まれる。
【０１１７】
抗体の精製
抗ＩＬ−６抗体は、プロテインＡ精製、硫酸アンモニウムもしくはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンもしくは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーが包含されるがこれらに限定されるものではない周知の方法により組み換え細胞培養物から回収し、精製することができる。高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）もまた、精製に用いることができる。例えば、各々引用することにより全部が本明細書に組み込まれる、Ｃｏ
ｌｌｉｇａｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、もしくはＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ，（１９９７−２００１）、例えば、１、４、６、８、９、１０章を参照。
【０１１８】
本発明の抗体には、天然で精製される生成物、化学合成法の生成物、ならびに例えば、酵母、高等植物、昆虫および哺乳類細胞を包含する真核生物宿主から組み換え技術により生産される生成物が包含される。組み換え生産方法に用いる宿主により、本発明の抗体はグリコシル化されることができ、もしくはグリコシル化されないことができ、グリコシル化されるのが好ましい。そのような方法は、全て引用することにより全部が本明細書に組み込まれる、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，上記、１７．３７−１７．４２節；Ａｕｓｕｂｅｌ，上記、１０、１２、１３、１６、１８および２０章、Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，上記、１２−１４章のような、多数の標準的な実験室マニュアルに記述されている。
【０１１９】
哺乳類細胞におけるＩＬ−６抗体のクローニングおよび発現
典型的な哺乳類発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開始を媒介する少なくとも一つのプロモーター要素、抗体コーディング配列、ならびに転写の終結および転写産物のポリアデニル化に必要なシグナルを含有する。追加の要素には、エンハンサー、コザック配列ならびにＲＮＡスプライシングの供与および受容部位が隣接する介在配列が包含される。非常に効率のよい転写は、ＳＶ４０からの初期および後期プロモーター、レトロウイルス、例えば、ＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩからの長い末端反復（ｌＴＲ）ならびにサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターで得ることができる。しかしながら、細胞要素もまた用いることができる（例えば、ヒトアクチンプロモーター）。本発明を実施することに使用する適当な発現ベクターには、例えば、ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ、ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｆｆ、ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｎ、ＰＬＸＳＮ、もしくはｐＬＮＣＸ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／−）、ｐｃＤＮＡ／Ｚｅｏ（＋／−）もしくはｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｙｇｏ（＋／−）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＰＳＶＬおよびＰＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、ｐＲＳＶｃａｔ（ＡＴＣＣ  ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ  ３７１４６）およびｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ  ６７１０９）のようなベクターが包含される。用いることができる哺乳類宿主細胞には、ヒトＨｅｌａ  ２９３、Ｈ９およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ１、Ｃｏｓ７およびＣＶ１、ウズラＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞ならびにチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が包含される。
【０１２０】
あるいはまた、遺伝子は、染色体に組み込まれた遺伝子を含有する安定な細胞系において発現することができる。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン、もしくはハイグロマイシンのような選択可能なマーカーとの共トランスフェクションは、トランスフェクションした細胞の同定および単離を可能にする。
【０１２１】
トランスフェクションした遺伝子はまた、大量のコードする抗体を発現するために増幅することもできる。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸還元酵素）マーカーは、数百もしくは数千コピーさえの対象の遺伝子を保有する細胞系を開発するのに有用である。別の有用な選択マーカーは、酵素グルタミン合成酵素（ＧＳ）（Ｍｕｒｐｈｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２２７：２７７−２７９（１９９１）；Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６９−１７５（１９９２））である。これらのマーカーを用いて、哺乳類細胞を選択培地において培養し、そして最も高い耐性を有する細胞を選択する。これらの細胞系は、染色体に組み込まれた増幅遺伝子（１つもしくは複数）を含有する。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）およびＮＳＯ細胞は、抗体の
生産に使用されることが多い。
【０１２２】
発現ベクターｐＣ１およびｐＣ４は、ラウス肉腫ウイルスの強力なプロモーター（ＬＴＲ）（Ｃｕｌｌｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４７（１９８５））に加えてＣＭＶ−エンハンサーのフラグメント（Ｂｏｓｈａｒｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ４１：５２１−５３０（１９８５））を含有する。例えば、制限酵素切断部位ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩおよびＡｓｐ７１８を有する、マルチクローニング部位は、対象の遺伝子のクローニングを容易にする。これらのベクターはさらに、ラットプレプロインシュリン遺伝子の３’イントロン、ポリアデニル化および終結シグナルを含有する。
【０１２３】
ＣＨＯ細胞におけるクローニングおよび発現
ベクターｐＣ４をＩＬ−６抗体の発現に用いる。プラスミドｐＣ４は、プラスミドｐＳＶ２−ｄｆｈｒ（ＡＴＣＣ受託番号３７１４６）の誘導体である。該プラスミドは、ＳＶ４０初期プロモーターの制御下のマウスＤＨＦＲ遺伝子を含有する。これらのプラスミドでトランスフェクションするジヒドロ葉酸活性を欠いているチャイニーズハムスター卵巣細胞もしくは他の細胞は、化学療法剤メトトレキセートを補足した選択培地（例えば、アルファマイナスＭＥＭ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）において細胞を培養することにより選択することができる。メトトレキセート（ＭＴＸ）に耐性の細胞におけるＤＨＦＲ遺伝子の増幅は、十分に立証されている（例えば、Ｆ．Ｗ．Ａｌｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：１３５７−１３７０（１９７８）；Ｊ．Ｌ．Ｈａｍｌｉｎ  ａｎｄ  Ｃ．Ｍａ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １０９７：１０７−１４３（１９９０）；およびＭ．Ｊ．Ｐａｇｅ  ａｎｄ  Ｍ．Ａ．Ｓｙｄｅｎｈａｍ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：６４−６８（１９９１）を参照）。増加する濃度のＭＴＸにおいて培養した細胞は、ＤＨＦＲ遺伝子の増幅の結果として、標的酵素ＤＨＦＲを過剰生産することにより薬剤に対する耐性を生じる。第二の遺伝子をＤＨＦＲ遺伝子に連結する場合、それは通常共増幅され、そして過剰発現される。この方法は、１，０００コピーより多くの増幅遺伝子（１つもしくは複数）を保有する細胞系を開発するのに使用できることが当該技術分野において既知である。次に、メトトレキセートを中止すると、宿主細胞の１つもしくはそれ以上の染色体に組み込まれた増幅遺伝子を含有する細胞系が得られる。
【０１２４】
プラスミドｐＣ４は、対象の遺伝子を発現するためにラウス肉腫ウイルスの長い末端反復（ＬＴＲ）の強力なプロモーター（Ｃｕｌｌｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４７（１９８５））に加えてヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の前初期遺伝子のエンハンサーから単離されたフラグメント（Ｂｏｓｈａｒｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ４１：５２１−５３０（１９８５））を含有する。プロモーターの下流には、遺伝子の組み込みを可能にするＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８制限酵素切断部位がある。これらのクローニング部位の後ろにプラスミドは、ラットプレプロインシュリン遺伝子の３’イントロンおよびポリアデニル化部位を含有する。他の高い効率のプロモーター、例えば、ヒトβ−アクチンプロモーター、ＳＶ４０初期もしくは後期プロモーターまたは他のレトロウイルス、例えば、ＨＩＶおよびＨＴＬＶＩからの長い末端反復もまた発現に用いることができる。ＣｌｏｎｔｅｃｈのＴｅｔ−ＯｆｆおよびＴｅｔ−Ｏｎ遺伝子発現系および同様の系は、ＩＬ−６を哺乳類細胞において調節して発現するために用いることができる（Ｍ．Ｇｏｓｓｅｎ，ａｎｄ  Ｈ．Ｂｕｊａｒｄ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：５５４７−５５５１（１９９２））。ｍＲＮＡのポリアデニル化には、例えばヒト成長ホルモンもしくはグロビン遺伝子からの他のシグナルを同様に用いることができる。染色体に組み込まれた対象の遺伝子を保有する安定な細胞系はまた、ｇｐｔ、Ｇ４１８もしくはハイグロマイシンのような選択可能なマーカーと共トランスフェクションして選択することもできる。最初は１種より多く
の選択可能なマーカー、例えばＧ４１８に加えてメトトレキセートを用いることが好都合である。
【０１２５】
当該技術分野において既知である方法により、プラスミドｐＣ４を制限酵素で消化し、そして次にウシ腸ホスファターゼを用いて脱リン酸する。次に、ベクターを１％アガロースゲルから単離する。
【０１２６】
既知の方法工程に従って、例えば、本発明のＩＬ−６抗体のＨＣおよびＬＣ可変領域に対応する、配列番号：７および８に提示するような、完全なＩＬ−６抗体をコードするＤＮＡ配列を用いる。適当なヒト定常領域（すなわち、ＨＣおよびＬＣ領域）をコードする単離された核酸もまた、この構築物に用いる。
【０１２７】
単離された可変および定常領域をコードするＤＮＡおよび脱リン酸したベクターを次にＴ４  ＤＮＡリガーゼで連結する。次に、エシェリキア・コリＨＢ１０１もしくはＸＬ−１  Ｂｌｕｅ細胞を形質転換し、そして例えば、制限酵素分析を用いて、プラスミドｐＣ４に挿入されたフラグメントを含有する細菌を同定する。
【０１２８】
活性のＤＨＦＲ遺伝子を欠いているチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞をトランスフェクションに用いる。５μｇの発現プラスミドｐＣ４をリポフェクチンを用いて０．５μｇのプラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏと共トランスフェクションする。プラスミドｐＳＶ２ｎｅｏは、優性の選択可能なマーカー、Ｇ４１８を包含する一群の抗生物質に対する耐性を与える酵素をコードするＴｎ５からのｎｅｏ遺伝子を含有する。１μｇ／ｍｌのＧ４１８を補足したアルファマイナスＭＥＭに細胞を接種する。２日後に、細胞をトリプシン消化し、そして１０、２５、もしくは５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキセートに加えて１μｇ／ｍｌのＧ４１８を補足したアルファマイナスＭＥＭにおいてハイブリドーマクローニングプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に接種する。約１０〜１４日後に単一クローンをトリプシン消化し、そして次に異なる濃度のメトトレキセート（５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を用いて６ウェルのペトリ皿もしくは１０ｍｌのフラスコに接種する。次に、最も高い濃度のメトトレキセートで増殖するクローンをさらに高い濃度のメトトレキセート（１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ）を含有する新しい６ウェルプレートに移す。１００〜２００ｍＭの濃度で増殖するクローンが得られるまで同じ手順を繰り返す。所望の遺伝子産物の発現は、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットによりもしくは逆相ＨＰＬＣ分析により分析する。
【０１２９】
抗ＩＬ−６抗体組成物に対する抗イディオタイプ抗体
モノクローナルもしくはキメラ抗ＩＬ−６抗体に加えて、本発明はまた、本発明のそのような抗体に特異的な抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体にも関する。抗Ｉｄ抗体は、別の抗体の抗原結合領域と一般に関連する独特な決定基を認識する抗体である。抗Ｉｄは、Ｉｄ抗体の供給源と同じ種および遺伝子型の動物（例えばマウス系統）を抗体もしくはそのＣＤＲ含有領域で免疫感作することにより製造することができる。免疫感作した動物は、免疫抗体のイディオタイプ決定基を認識しそして応答し、抗Ｉｄ抗体を生産する。抗Ｉｄ抗体はまた、さらに別の動物における免疫応答を誘導するために「免疫原」として用い、いわゆる抗抗Ｉｄ抗体を生産することもできる。
【０１３０】
抗ＩＬ−６抗体組成物
本発明はまた、天然に存在しない組成物、混合物もしくは形態で提供される本明細書に記述するようなそして／もしくは当該技術分野において既知であるような、その少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つもしくはそれ以上の抗ＩＬ−６抗体を含んでなる少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体組成物も提供する。そのような組成物は、配列番号：１、２、３、４、５、６、７、８の
連続するアミノ酸の７０〜１００％、またはその特定のフラグメント、ドメインもしくは変異体よりなる群から選択される抗ＩＬ−６抗体アミノ酸配列の、少なくとも一つもしくは二つの全長、Ｃおよび／もしくはＮ末端欠失変異体、ドメイン、フラグメント、または特定の変異体を含んでなる天然に存在しない組成物を含んでなる。好ましい抗ＩＬ−６抗体組成物は、配列番号：１、２、３、４、５、６の７０〜１００％、またはその特定のフラグメント、ドメインもしくは変異体の抗ＩＬ−６抗体配列の少なくとも一つのＣＤＲもしくはＬＢＲ含有部分として少なくとも一つもしくは二つの全長、フラグメント、ドメインもしくは変異体を含む。さらに好ましい組成物は、配列番号：１、２、３、４、５、６の７０〜１００％、またはその特定のフラグメント、ドメインもしくは変異体の少なくとも一つを４０〜９９％含んでなる。そのような組成物パーセンテージは、当該技術分野において既知であるようにもしくは本明細書に記述するように、液体もしくは乾燥溶液、混合物、懸濁液、乳濁液もしくはコロイドとしての重量、容量、濃度、モル濃度、または重量モル濃度による。
【０１３１】
本発明の抗ＩＬ−６抗体組成物はさらに、場合により少なくとも一つのＴＮＦアンタゴニスト（例えば、ＴＮＦ抗体もしくはフラグメント、可溶性ＴＮＦ受容体もしくはフラグメント、その融合タンパク質、または小分子ＴＮＦアンタゴニスト、しかしこれらに限定されるものではない）、抗リウマチ剤（例えば、メトトレキセート、オーラノフィン、金チオグルコース、アザチオプリン、エタネルセプト、金チオリンゴ酸ナトリウム、硫酸ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、スルファサラジン）、筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔剤、鎮静剤、局所麻酔剤、神経筋遮断薬、抗菌剤（例えば、アミノグリコシド、抗真菌剤、抗寄生虫剤、抗ウイルス薬、カルバペネム、セファロスポリン、フルオロキノロン（ｆｌｕｒｏｒｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラサイクリン、別の抗菌剤）、乾癬治療薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、糖尿病関連薬、ミネラル、栄養、甲状腺薬、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止痢薬、鎮咳薬、制吐薬、抗潰瘍薬、下剤、抗凝血剤、エリスロポエチン（例えば、エポエチンアルファ）、フィルグラスチム（例えば、Ｇ−ＣＳＦ，Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）、サルグラモスチム（ＧＭ−ＣＳＦ，Ｌｅｕｋｉｎｅ）、免疫化薬、免疫グロブリン、免疫抑制薬（例えば、バシリキシマブ、サイクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン補充薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様筋調節薬、アルキル化剤、代謝拮抗剤、分裂抑制剤、放射性医薬品、抗欝薬、抗躁病薬、抗精神病薬、抗不安薬、睡眠薬、交感神経刺激薬、興奮剤、ドネペジル、タクリン、喘息薬、ベータアゴニスト、吸入用ステロイド、ロイコトリエンインヒビター、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンもしくは類似物、ドルナーゼアルファ（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ）、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストから選択される少なくとも一つをさらに含んでなる、そのような調節、処置もしくは治療を必要とする細胞、組織、臓器、動物もしくは患者に対する少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体を含んでなる組成物もしくは製薬学的組成物の任意の適当なそして有効な量の少なくとも一つを含んでなることができる。そのようなサイトカインの限定されない例には、ＩＬ−１〜ＩＬ−２３のいずれかが包含されるが、これらに限定されるものではない。適当な投薬量は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴ（２０００）；ＰＤＲ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｔａｒａｓｃｏｎ  Ｐｏｃｋｅｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ
２０００，Ｄｅｌｕｘｅ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔａｒａｓｃｏｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｌｏｍａ  Ｌｉｎｄａ，ＣＡ（２０００）を参照、これらの参考文献の各々は、引用することにより全部が本明細書に組み込まれる。
【０１３２】
そのような抗癌もしくは抗感染薬はまた、本発明の少なくとも一つの抗体と会合、結合、共調合もしくは共投与する毒素分子を含むこともできる。毒素は、場合により、病的細
胞もしくは組織を選択的に殺すように作用することができる。病的細胞は、癌もしくは他の細胞であることができる。そのような毒素は、例えば、リシン、ジフテリア毒素、毒液毒素、もしくは細菌毒素の少なくとも一つから選択される、毒素の少なくとも一つの機能性細胞毒性ドメインを含んでなる精製されたもしくは組み換えの毒素もしくは毒素フラグメントであることができるが、これらに限定されるものではない。毒素という用語にはまた、死をもたらすことができる、毒素ショックを包含する、ヒトおよび他の哺乳類における任意の病的症状を引き起こすことができる任意の天然に存在するか、突然変異体もしくは組み換えの細菌もしくはウイルスにより生産される内毒素および外毒素の両方も包含される。そのような毒素には、腸管毒素原性大腸菌易熱性エンテロトキシン（ＬＴ）、耐熱性エンテロトキシン（ＳＴ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）細胞毒素、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）エンテロトキシン、毒素性ショック症候群毒素−１（ＴＳＳＴ−１）、スタヒロコッカスエンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）、Ｂ（ＳＥＢ）、もしくはＣ（ＳＥＣ）、ストレプトコッカスエンテロトキシンなどを包含することができるが、これらに限定されるものではない。そのような細菌には、腸管毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、腸管出血性大腸菌の種の株（例えば、血清型Ｏ１５７：Ｈ７の株）、スタヒロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種（例えば、スタヒロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、スタヒロコッカス・ピオゲネス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ））、シゲラ種（例えば、シゲラ・ディセンテリエ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｓｅ）、シゲラ・フレックスネリ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ
ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、シゲラ・ボイディ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｂｏｙｄｉｉ）、およびシゲラ・ソンネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｏｎｎｅｉ））、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種（例えば、サルモネラ・チフィ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ）、サルモネラ・コレラスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｃｈｏｌｅｒａｓｕｉｓ）、サルモネラ・エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ））、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）種（例えば、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、クロストリジウム・ジフィシール（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｉｃｉｌｅ）、クロストリジウム・ボツリヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ））、カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種（カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）、カンピロバクター・フィタス（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｆｅｔｕｓ））、ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）種（例えば、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ））、アエロモナス種（例えば、アエロモナス・ソブリア（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓｏｂｒｉａ）、アエロモナス・ヒドロフィラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）、アエロモナス・キャビエ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｃａｖｉａｅ））、プレイソモナス・シゲロイデス（Ｐｌｅｉｓｏｍｏｎａｓ  ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ）、エルジニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏｓ）種（例えば、ビブリオ・コレラ（Ｖｉｂｒｉｏｓ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、ビブリオ・パラヘモリチカス（Ｖｉｂｒｉｏｓ
ｐａｒａｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、シュードモナス・アエルギノーザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、およびストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）が包含されるが、これらに限定されるものではない。例えば、Ｓｔｅｉｎ，ｅｄ．，ＩＮＴＥＲＮＡＬ  ＭＥＤＩＣＩＮＥ，３ｒｄ  ｅｄ．，ｐｐ１−１３，Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，Ｂｏｓｔｏｎ，（１９９０）；Ｅｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎｓ：Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ，２ｄ．Ｅｄ．，ｐｐ２３９−２５４，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｂｏｏｋ
Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１）；Ｍａｎｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，３ｄ．Ｅｄ．，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９０）；Ｂｅｒｋｏｗ  ｅｔ  ａｌ，ｅｄｓ．，Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ，
１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，１９９２；Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７６：１２１−１３４（１９９１）；Ｍａｒｒａｃｋ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４８：７０５−７１１（１９９０）を参照、これらの参考文献の内容は、引用することにより全部が本明細書に組み込まれる。
【０１３３】
本発明の抗ＩＬ−６抗体化合物、組成物もしくは組み合わせはさらに、希釈剤、結合剤、安定剤、バッファー、塩、脂肪親和性溶媒、防腐剤、アジュバントなどのようなしかしこれらに限定されるものではない任意の適当な助剤の少なくとも一つを含んでなることができる。製薬学的に許容しうる助剤が好ましい。Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）１９９０のような、しかしこれに限定されるものではない、そのような滅菌溶液を調製する限定されない例および方法は、当該技術分野において周知である。当該技術分野において周知であるようにもしくは本明細書に記述するように、抗ＩＬ−６抗体、フラグメントもしくは変異体組成物の投与の形態、可溶性および／もしくは安定性に適当な製薬学的に許容しうる担体を日常的に選択することができる。
【０１３４】
本発明の組成物において有用な製薬学的賦形剤および添加剤には、単独でまたは１−９９．９９重量もしくは容量％で組み合わせてを含んでなる、単独でもしくは組み合わせて存在することができる、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、および炭水化物（例えば、単糖、二糖、三糖、四糖およびオリゴ糖；アルジトール、アルドン酸、エステル化糖などのような誘導化糖；ならびに多糖もしくは糖ポリマーを包含する糖）が包含されるが、これらに限定されるものではない。典型的なタンパク質賦形剤には、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、組み換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）のような血清アルブミン、ゼラチン、カゼインなどが包含される。緩衝能力においても機能することができる代表的なアミノ酸／抗体成分には、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテームなどが包含される。一つの好ましいアミノ酸は、グリシンである。
【０１３５】
本発明における使用に適当な炭水化物賦形剤には、例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボースなどのような単糖；ラクトース、ショ糖、トレハロース、セロビオースなどのような二糖；ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、澱粉などのような多糖；およびマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトール）、ミオイノシトールなどのようなアルジトールが包含される。本発明における使用に好ましい炭水化物賦形剤は、マンニトール、トレハロース、およびラフィノースである。
【０１３６】
抗ＩＬ−６抗体組成物はまた、バッファーもしくはｐＨ調整剤を含むこともでき；典型的には、バッファーは、有機酸もしくは塩基から調製される塩である。代表的なバッファーには、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、もしくはフタル酸の塩のような有機酸塩；トリス、トロメタミン塩酸塩、もしくはリン酸バッファーが包含される。本発明における使用に好ましいバッファーは、クエン酸塩のような有機酸塩である。
【０１３７】
さらに、本発明の抗ＩＬ−６抗体組成物は、ポリビニルピロリドン、フィコール（ポリマー糖）、デキストレート（ｄｅｘｔｒａｔｅ）（例えば、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンのようなシクロデキストリン）、ポリエチレングリコール、着香料、抗菌剤、甘味料、酸化防止剤、帯電防止剤、界面活性剤（例えば、「ＴＷＥＥＮ  ２０
」および「ＴＷＥＥＮ  ８０」のようなポリソルベート）、脂質（例えば、リン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えば、コレステロール）、およびキレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）のようなポリマー賦形剤／添加剤を含むことができる。
【０１３８】
本発明の抗ＩＬ−６抗体、部分もしくは変異体組成物における使用に適当なこれらおよび追加の既知の製薬学的賦形剤および／もしくは添加剤は、例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，１９ｔｈ  ｅｄ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５）および“Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ”，５２ｎｄ  ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮＪ（１９９８）（これらの開示は、引用することにより全部が本明細書に組み込まれる）に記載されているように、当該技術分野において既知である。好ましい担体もしくは賦形剤材料は、炭水化物（例えば、糖類およびアルジトール）およびバッファー（例えばクエン酸塩）もしくはポリマー剤である。
【０１３９】
製剤
上記のように、本発明は、製薬学的に許容しうる製剤において少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体を含んでなる、好ましくは食塩水もしくは選択した塩を有するリン酸バッファーである安定製剤、ならびに保存剤を含有する保存溶液および製剤ならびに製薬学的もしくは獣医学的用途に適当な複用保存製剤を提供する。保存製剤は、水性希釈剤中に少なくとも一つの既知のもしくは場合により少なくとも一つのフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば、６水和物）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、もしくはその混合物よりなる群から選択される防腐剤を含有する。０．００１〜５％、あるいは０．００１、０．００３、０．００５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８，０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６，１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．３、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、またはその中の任意の範囲もしくは値のようなしかしこれらに限定されるものではないその中の任意の範囲もしくは値のような、任意の適当な濃度もしくは混合物を当該技術分野において既知であるように用いることができる。限定されない例には、保存剤なし、０．１〜２％のｍ−クレゾール（例えば、０．２、０．３、０．４、０．５、０．９、１．０％）、０．１〜３％のベンジルアルコール（例えば、０．５、０．９、１．１、１．５、１．９、２．０、２．５％）、０．００１〜０．５％のチメロサール（例えば、０．００５、０．０１）、０．００１〜２．０％のフェノール（例えば、０．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、１．０％）、０．０００５〜１．０％のアルキルパラベン（１つもしくは複数）（例えば、０．０００７５、０．０００９、０．００１、０．００２、０．００５、０．００７５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０５、０．０７５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７５、０．９、１．０％）などが包含される。
【０１４０】
上記のように、本発明は、包装材料ならびに場合により水性希釈剤中に、所定のバッファーおよび／もしくは防腐剤を有する少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体の溶液を含んでなる少なくとも一つのバイアルを含んでなる製品を提供し、ここで、該包装材料は、そのような溶液を１、２、３、４、５、６、９、１２、１８、２０、２４、３０、３６、４０、４８、５４、６０、６６、７２時間もしくはそれ以上の期間にわたって保持できることを示すラベルを含んでなる。本発明はさらに、包装材料、凍結乾燥した少なくとも一つの抗
ＩＬ−６抗体を含んでなる第一のバイアル、および所定のバッファーもしくは防腐剤の水性希釈剤を含んでなる第二のバイアルを含んでなる製品を含んでなり、ここで、該包装材料は、２４時間もしくはそれ以上の期間にわたって保持することができる溶液を形成するために水性希釈剤において少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体を再構成するように患者に指示するラベルを含んでなる。
【０１４１】
本発明に従って用いる少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体は、本明細書に記述するようにもしくは当該技術分野において既知であるように、哺乳類細胞もしくはトランスジェニック調製物からを包含する、組み換え手段により製造することができ、または他の生物学的供給源から精製することができる。
【０１４２】
本発明の製品における少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体の範囲は、より低いおよびより高い濃度が実施可能であるが、再構成の際に、湿潤／乾燥系（ｗｅｔ／ｄｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ）における場合、約１．０μｇ／ｍｌ〜約１０００ｍｇ／ｍｌの濃度をもたらす量を包含し、そして意図する送達媒体に依存し、例えば、溶液製剤は、経皮パッチ、肺、経粘膜、または浸透もしくはマイクロポンプ法と異なる。
【０１４３】
好ましくは、水性希釈剤は、場合により、製薬学的に許容しうる防腐剤をさらに含んでなる。好ましい防腐剤には、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、もしくはその混合物よりなる群から選択されるものが包含される。製剤に用いる防腐剤の濃度は、抗菌効果をもたらすのに十分な濃度である。そのような濃度は、選択する防腐剤により決まり、そして当業者により容易に決定される。
【０１４４】
他の賦形剤、例えば、等張剤、バッファー、酸化防止剤、防腐剤エンハンサーを場合によりそして好ましくは希釈剤に加えることができる。グリセリンのような等張剤は、既知の濃度で一般的に用いられる。、好ましくは、生理的に許容されるバッファーを、より一層のｐＨ制御を与えるために加える。製剤は、約ｐＨ４〜約ｐＨ１０のような広範囲のｐＨ、および約ｐＨ５〜約ｐＨ９の好ましい範囲、および約６．０〜約８．０の最も好ましい範囲に及ぶことができる。好ましくは、本発明の製剤は約６．８〜約７．８の間のｐＨを有する。好ましいバッファーには、リン酸バッファー、最も好ましくはリン酸ナトリウム、特にリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が包含される。
【０１４５】
場合により、Ｔｗｅｅｎ  ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、Ｔｗｅｅｎ  ４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、Ｔｗｅｅｎ  ８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８（ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー）、およびＰＥＧ（ポリエチレングリコール）あるいはポリソルベート２０もしくは８０またはポロキサマー１８４もしくは１８８、ＰｌｕｒｏｎｉｃＲポリル、他のブロックコポリマーのような非イオン性界面活性剤のような製薬学的に許容しうる可溶化剤、ならびにＥＤＴＡおよびＥＧＴＡのようなキレート剤のような他の添加剤を凝集を減らすために製剤もしくは組成物に加えることができる。これらの添加剤は、製剤を投与するためにポンプもしくはプラスチック容器を用いる場合に特に有用である。製薬学的に許容しうる界面活性剤の存在は、タンパク質が凝集する傾向を軽減する。
【０１４６】
本発明の製剤は、少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体およびフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサールもしくはその混合物よりなる群
から選択される防腐剤を水性希釈剤において混合することを含んでなる方法により製造することができる。水性希釈剤において少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体および防腐剤を混合することは、従来の溶解および混合方法を用いて実施する。適当な製剤を製造するために、例えば、緩衝溶液中の少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体の測定量を、所望の濃度のタンパク質および防腐剤を与えるのに十分な量で緩衝溶液中の所望の防腐剤と合わせる。この方法の変形は、当業者により認識される。例えば、成分を加える順序、追加の添加剤を用いるかどうか、製剤を調製する温度およびｐＨは全て、使用する投与の濃度および手段に対して最適化することができる因子である。
【０１４７】
請求する製剤は、清澄溶液として、もしくは水性希釈剤中に、水、防腐剤および／もしくは賦形剤、好ましくはリン酸バッファーおよび／もしくは食塩水および選択した塩を含有する第二のバイアルで再構成する凍結乾燥した少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体のバイアルを含んでなるデュアルバイアルとして患者に提供することができる。単一溶液バイアルもしくは再構成を必要とするデュアルバイアルのいずれも複数回再使用することができ、そして単一もしくは複数サイクルの患者処置に十分であることができ、従って、現在利用可能なものより都合のよい処置処方計画を提供することができる。
【０１４８】
本発明の請求する製品は、即時〜２４時間もしくはそれ以上の期間にわたる投与に有用である。従って、現在請求する製品は、患者に有意な利点を与える。本発明の製剤は、場合により、約２〜約４０℃の温度で安全に保存し、そして長期間にわたってタンパク質の生物学的活性を保持することができ、従って、溶液を６、１２、１８、２４、３６、４８、７２、もしくは９６時間またはそれ以上の期間にわたって保持しそして／もしくは使用できることを示す包装ラベルを可能にする。保存希釈剤を用いる場合、そのようなラベルは、１〜１２ヶ月、半年、１年半、および／もしくは２年までの使用を含むことができる。
【０１４９】
本発明における少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体の溶液は、少なくとも一つの抗体を水性希釈剤において混合することを含んでなる方法により製造することができる。混合は、従来の溶解および混合方法を用いて実施する。適当な希釈液を調製するために、例えば、水もしくはバッファー中の少なくとも一つの抗体の測定量を、所望の濃度のタンパク質および場合により防腐剤もしくはバッファーを与えるのに十分な量で合わせる。この方法の変形は、当業者により認識される。例えば、成分を加える順序、追加の添加剤を使用するかどうか、製剤を調製する温度およびｐＨは全て、用いる投与の濃度および手段に対して最適化することができる因子である。
【０１５０】
請求する製品は、清澄溶液として、もしくは水性希釈剤を含有する第二のバイアルで再構成する凍結乾燥した少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体のバイアルを含んでなるデュアルバイアルとして患者に提供することができる。単一溶液バイアルもしくは再構成を必要とするデュアルバイアルのいずれも複数回再使用することができ、そして単一もしくは複数サイクルの患者処置に十分であることができ、従って、現在利用可能なものより都合のよい処置処方計画を提供する。
【０１５１】
請求する製品は、清澄溶液もしくは水性希釈剤を含有する第二のバイアルで再構成する凍結乾燥した少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体のバイアルを含んでなるデュアルバイアルを薬局、診療所、もしくは他のそのような機関および設備に提供することにより患者に間接的に提供することができる。この場合の清澄溶液は、１リットルまでもしくはさらに大きいサイズであることができ、大きい容器を提供することができ、それから少なくとも一つの抗体溶液のより少ない量をより小さいバイアルに移すために１回もしくは複数回取り出し、そして薬局もしくは診療所によってそれらの顧客および／もしくは患者に提供することができる。
【０１５２】
これらの単一バイアル系を含んでなる認められている装置には、例えば、Ｂｅｃｔｏｎ
Ｄｉｃｋｅｎｓｅｎ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ｗｗｗ．ｂｅｃｔｏｎｄｉｃｋｅｎｓｏｎ．ｃｏｍ）、Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ（Ｂｕｒｇｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，ｗｗｗ．ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ．ｃｏｍ；Ｂｉｏｊｅｃｔ，Ｐｏｒｔｌａｎｄ，Ｏｒｅｇｏｎ（ｗｗｗ．ｂｉｏｊｅｃｔ．ｃｏｍ）；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｗｅｓｔｏｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ（Ｐｅｔｅｒｂｏｒｏｕｇｈ，ＵＫ，ｗｗｗ．ｗｅｓｔｏｎ−ｍｅｄｉｃａｌ．ｃｏｍ），Ｍｅｄｉ−Ｊｅｃｔ  Ｃｏｒｐ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ｗｗｗ．ｍｅｄｉｊｅｃｔ．ｃｏｍ）により製造もしくは開発されるような、ＢＤ  Ｐｅｎｓ、ＢＤ  ＡｕｔｏｊｅｃｔｏｒＲ、ＨｕｍａｊｅｃｔＲ、ＮｏｖｏＰｅｎＲ、Ｂ−ＤＲＰｅｎ、ＡｕｔｏＰｅｎＲ、およびＯｐｔｉＰｅｎＲ、ＧｅｎｏｔｒｏｐｉｎＰｅｎＲ、Ｇｅｎｏｔｒｏｎｏｒｍ  ＰｅｎＲ、Ｈｕｍａｔｒｏ  ＰｅｎＲ、Ｒｅｃｏ−ＰｅｎＲ、Ｒｏｆｅｒｏｎ  ＰｅｎＲ、ＢｉｏｊｅｃｔｏｒＲ、ｉｊｅｃｔＲ、Ｊ−ｔｉｐ  Ｎｅｅｄｌｅ−Ｆｒｅｅ  ＩｎｊｅｃｔｏｒＲ、ＩｎｔｒａｊｅｃｔＲ、Ｍｅｄｉ−ＪｅｃｔＲのような溶液の送達用のペンインジェクター装置が包含される。デュアルバイアル系を含んでなる認められている装置には、ＨｕｍａｔｒｏｎＰｅｎＲのような再構成した溶液の送達用のカートリッジにおいて凍結溶解した薬剤を再構成するペンインジェクター系が包含される。
【０１５３】
現在請求する製品には、包装材料が含まれる。包装材料は、規制機関により要求される情報に加えて、製品を使用する条件を提供する。本発明の包装材料は、２バイアルの湿潤／乾燥製品では少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体を水性希釈剤において再構成して溶液を形成しそして該溶液を２〜２４時間もしくはそれ以上の期間にわたって使用する使用説明書を患者に提供する。単一バイアルの溶液製品では、ラベルはそのような溶液を２〜２４時間もしくはそれ以上の期間にわたって使用できることを示す。現在請求する製品は、ヒト製薬学的製品用途に有用である。
【０１５４】
本発明の製剤は、少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体および選択したバッファー、好ましくは食塩水もしくは選択した塩を含有するリン酸バッファーを混合することを含んでなる方法により製造することができる。少なくとも一つの抗体およびバッファーを水性希釈剤において混合することは、従来の溶解および混合方法を用いて実施する。適当な製剤を調製するために、例えば、水もしくはバッファー中の少なくとも一つの抗体の測定量を、所望の濃度のタンパク質およびバッファーを与えるのに十分な量で水中の所望の緩衝剤と合わせる。この方法の変形は、当業者により認識される。例えば、成分を加える順序、追加の添加剤を使用するかどうか，製剤を調製する温度およびｐＨは全て、用いる投与の濃度および手段に対して最適化することができる因子である。
【０１５５】
請求する安定もしくは保存製剤は、清澄溶液として、もしくは水性希釈剤中に防腐剤もしくはバッファーおよび賦形剤を含有する第二のバイアルで再構成する凍結乾燥した少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体のバイアルを含んでなるデュアルバイアルとして患者に提供することができる。単一溶液バイアルもしくは再構成を必要とするデュアルバイアルのいずれも複数回再使用することができ、そして単一もしくは複数サイクルの患者処置に十分であることができ、従って、現在利用可能なものより都合のよい処置処方計画を提供する。
【０１５６】
本明細書に記述する安定もしくは保存製剤もしくは溶液のいずれかにおける少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体は、当該技術分野において周知であるように、ＳＣもしくはＩＭ注射；経皮、肺、経粘膜、埋め込み、浸透ポンプ、カートリッジ、マイクロポンプ、もしくは当業者により認識される他の手段を包含する様々な送達方法によって本発明に従って患者に投与することができる。
【０１５７】
治療用途
ＩＬ−６は、その多面的活性のために、様々な疾患の病状に関与する。従って、ＩＬ−６に対する高い親和性の中和キメラもしくはヒト抗体は、癌、悪液質、ＳＬＥ、関節リウマチ、骨粗しょう症、脳外傷、脳浮腫、鬱病、およびＣＨＦのようなＩＬ−６関連疾患において用いることが望ましい。ｃＣＬＢ８またはキメラもしくはヒト化を包含するこのｍＡｂの任意の誘導体、またはフラグメントは、骨痛を軽減すること、黒色腫、腎臓癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌および多発性骨髄腫のような腫瘍の増殖を抑制すること、リンパ増殖性疾患およびＩＬ−６が関与している他の疾患において用いることができる。この抗体は、単一の作用因子としてもしくは他の治療薬剤と組み合わせて用いることができる。さらに、このＭａｂは化学感受性増強物質（ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ）として用いることができ、それにより細胞毒性薬の治療効能を上げることができる。この抗体は放射線感受性増強物質として用いることができ、それにより放射線の効能を高めることができる。それはまた、Ｉｌ−２、ＩＬ−１２および／もしくはＩＦＮアルファのような他の腫瘍免疫調節剤と組み合わせて用いることもできる。
【０１５８】
従って、本発明はまた、本発明の少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体を用いて、当該技術分野において既知であるようにもしくは本明細書に記述するように、細胞、組織、臓器、動物、もしくは患者における少なくとも一つのＩＬ−６関連疾患を調節もしくは処置する方法も提供する。
【０１５９】
ＩＬ−６は、悪性細胞のアポトーシスの抑制を伴う自己分泌もしくは傍分泌機序によって多発性骨髄腫（ＭＭ）における悪性形質細胞の増殖、分化および生存を高めることが知られている。ＭＭは不治の悪性形質細胞疾患であり、ここで、ＩＬ−６を阻止することは、有効な治療であると主張されている（Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｙｅｌｏｍａ：Ｎｅｗ  Ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ：１４７−１６５，２０００）。ＩＬ−６はまた、基底細胞癌における腫瘍形成効果も有し、ここで、ＩＬ−６でトランスフェクションした細胞は、アポトーシスを抑制することおよび活発に促進することの両方により増加した腫瘍増殖速度を示した（Ｊｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂａｓａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  ｉｎｃｒｅｓｅｓ  ａｎｔｉ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃ  ｐｏｔｅｎｃｙ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．２  ｐｐ．１９８−２０８，２００１）。ＩＬ−６はまた、ｍｄｒ１遺伝子発現（ｍｄｒ１およびメタロチオネイン経路）を誘導することにより化学療法に対する乳癌細胞の耐性も促進する（Ｃｏｎｚｅ  ｅｔ  ａｌ，Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  Ｃａｕｓｅｓ  Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｅｒ  Ｒｅｓ  ６１：８８５１−８８５８，２００１）。
【０１６０】
腫瘍細胞生存および疾患の進行を媒介するＩＬ−６の能力は、インビトロおよびインビボの両方における腫瘍増殖に対する抗ＩＬ−６  ｍＡｂの阻害効果により確かめられた。ＩＬ−６の遮断は、インビトロにおいてヒト脳腫瘍（グリア芽腫）の増殖を抑制できることが報告された（Ｇｏｓｗａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｕｔｏｃｒｉｎｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  Ｕ８７ＭＧ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  ７１：１８３７−１８４５，１９９８）。同じ方法を用いて、マウスＣＬＢ８抗ＩＬ−６抗体の注入は、ヒト腫瘍を保有するマウスの生存を延長することが示された（Ｍａｕｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ：
ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＩＬ−６．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ；３０（７）：２０６５−７３，２０００）。また、ｍＣＬＢ８抗ＩＬ−６抗体は、ヌードマウスにおいてヒト腎臓癌腫瘍の増殖を退縮し、そして血清カルシウム濃度を減少することも報告された（Ｗｅｉｓｇｌａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｙｐｅｒｃａｌｃｅｍｉａ
ｉｎ  ｒｅｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ  ｉｎｔｏ  ｎｕｄｅ  ｍｉｃｅ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １３８（５）：１８７９−８．，１９９５）。ＣＬＢ−８抗体はまた、マウスにおける定着したヒト耐ホルモン性前立腺腫瘍異種移植片も退縮した（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．２００１）。抗インターロイキン−６モノクローナル抗体は、ヌードマウスにおけるヒト前立腺癌異種移植片の退縮を誘導する（Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｋｅｌｌｅｒ，Ｐｒｏｓｔａｔｅ；４８（１）：４７−５３）。
【０１６１】
ＩＬ−６はまた、悪性腫瘍の予後因子およびマーカーであることもできる。腎細胞癌（ＲＣＣ）において、高レベルのＩＬ−６は、腫瘍転移とそして最終的には不良な予後および短い生存に相関関係があると報告された（Ｊｅａｎ−Ｙｖｅｓ  Ｂｌａｙ  ｅｔ  ａｌ．１９９２）。さらに、ＲＣＣにおいて、高い血清ＩＬ−６は、ＩＬ−２治療に対する乏しい反応と関連し（Ｆｕｍａｇａｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．１９９９）Ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｓｅｒｕｍ  ｍａｒｋｅｒｓ  ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ
ｔｏ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ８０（３−４）：４０７−１１、そしてＩＬ−２関連毒性の程度と相関関係がある（Ｃａｐｕｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．２００１）Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅａｒｌｙ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２−ｂａｓｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ；２６（８）：７９７−８０８。
【０１６２】
ＩＬ−６の高いレベルはまた、乳癌における不良な予後および転移性疾患の存在とも相関関係がある（Ｋｕｒｅｂａｙａｓｈｉ  ２０００およびＢｅｎｏｙ  ２００２）Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ；７（２）：１２４−９．Ｓｅｒｕｍ
ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６，ｐｌａｓｍａ  ＶＥＧＦ，ｓｅｒｕｍ  ＶＥＧＦ，ａｎｄ  ＶＥＧＦ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｌｏａｄ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｃｌｉｎ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ；２（４）３１１−５）。
【０１６３】
ＩＬ−６は、無力症／悪液質および骨吸収のような癌関連病的状態における原因因子であると仮定される。腫瘍誘発性悪液質（Ｃａｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２０００）および骨吸収（その後の高カルシウム血症）（Ｓａｎｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．１９９９）は、ＩＬ−６ノックアウトマウスにおいて減少されることが見出された。癌関連鬱病、および脳腫瘍に続発する脳浮腫もまた、高レベルのＩＬ−６と関連している（Ｍｕｓｓｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００１）。本発明のｃＣＬＢ８抗ＩＬ−６抗体はまた、ヌードマウスにおけるヒト黒色腫およびヒト前立腺癌誘発性悪液質も抑制した。
【０１６４】
抗ＩＬ−６作用因子での臨床経験
ＩＬ−６に対するモノクローナル抗体を用いるいくつかの臨床試験は、形質細胞白血病、多発性骨髄腫、Ｂリンパ増殖性疾患、関節リウマチ、腎臓癌、およびエイズ関連リンパ腫を包含する多数の疾患において行われている。
【０１６５】
進行したステージの多発性骨髄腫にかかっている難治性患者の処置のための本発明の抗
ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体でのフェーズＩ用量増加研究（Ｎ＝１２）は、疾病安定化を有する患者があることを示した。処置の中止の後、Ｍタンパク質レベルの増加の加速があり、治療の中止後の疾病リバウンドを示唆した。抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体は、遊離の循環するＩＬ−６を阻害した。最も重要なことには、毒性（２人の大量に前処置した患者における一過性血小板減少を除いて）もしくはアレルギー反応は認められなかった。Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）は、全ての患者において検出レベル未満に減少した。抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体は、１７．８日の長い循環半減期を示し、そして認められるヒト抗キメラ抗体（ＨＡＣＡ）免疫応答（ｖａｎ  Ｚａａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９８）はなかった。ＣＮＴＯ  ３２８の投与は、血圧、脈拍数、体温、ヘモグロビン、肝機能および腎機能の変化を引き起こさなかった。２人の大量に前処置した患者における一過性血小板減少を除いて、毒性もしくはアレルギー反応は認められず、そして認められるヒト抗キメラ抗体（ＨＡＣＡ）免疫応答はなかった。３人の患者は、治療中に感染に関連する合併症を発症し、しかしながら、感染性合併症は末期の多発性骨髄腫において一般的であり、そして主要な死亡原因であるので、抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体との可能性がある関連はないと思われる。さらに、３人の患者は全て、抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体の存在下でさえそれらの感染に応答することができ、抗ＩＬ−６治療は感染中にＩＬ−６を阻止できないことを示唆した。治療に関連する死亡者は報告されなかった。要するに、この研究からの結果は、抗ＩＬ−６  ｃＣＬＢ−８抗体が多発性骨髄腫患者において安全であったことを示唆する。
【０１６６】
従って、本発明は、多発性骨髄腫、白血病、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞、Ｔ細胞もしくはＦＡＢ  ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、リンパ腫、ホジキン病、悪性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、結腸直腸癌、腎細胞癌、膵癌、前立腺細胞癌、鼻咽頭癌、悪性組織球増殖症、腫瘍随伴症候群／悪性高カルシウム血症、充実性腫瘍、腺癌、肉腫、悪性黒色腫、血管腫、転移性疾患、癌関連骨吸収、癌関連骨痛；癌転移の抑制；癌悪液質の改善；およびメサンギウム増殖性糸球体腎炎などのような炎症性疾患の処置の少なくとも一つが包含されるがこれらに限定されるものではない、細胞、組織、臓器、動物もしくは患者における少なくとも一つの悪性疾患を調節もしくは処置する方法を提供する。そのような方法は、場合により、そのようなＩＬ−６抗体の投与の前に、同時にもしくは後に投与することにより、放射線療法、抗血管新生剤、化学療法剤、ファルネシルトランスフェラーゼインヒビターなどと組み合わせて用いることができる。
【０１６７】
本発明はまた、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全身型若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、胃潰瘍、血清反応陰性関節症、変形性関節症、炎症性腸疾患、潰瘍性結腸炎、全身性エリテマトーデス、抗リン脂質症候群、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、特発性肺線維症、全身性脈管炎／ヴェーゲナー肉芽腫症、サルコイドーシス、精巣炎／精管切除術を戻す処置、アレルギー性／アトピー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性結膜炎、過敏性肺炎、移植、臓器移植拒絶反応、移植片対宿主疾患、全身性炎症反応症候群、敗血症症候群、グラム陽性敗血症、グラム陰性敗血症、培養陰性敗血症、真菌敗血症、好中球減少熱、尿路性敗血症、髄膜炎菌血症、外傷／出血、熱傷、電離放射線の暴露、急性膵炎、成人呼吸窮迫症候群、関節リウマチ、アルコール性肝炎、慢性炎症性病状、サルコイドーシス、クローン病、鎌状赤血球貧血、糖尿病、ネフローゼ、アトピー性疾患、超過敏反応、アレルギー性鼻炎、花粉症、通年性鼻炎、結膜炎、子宮内膜症、喘息、蕁麻疹、全身アナフィラキシー、皮膚炎、悪性貧血、溶血性疾患、血小板減少症、任意の臓器もしくは組織の移植片拒絶反応、腎臓移植拒絶反応、心臓移植拒絶反応、肝臓移植拒絶反応、膵臓移植拒絶反応、肺移植拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反応、皮膚同種移植片拒絶反応、軟骨移植拒絶反応、骨移植片拒絶反応、小腸移植拒絶反応、胎児胸腺移植片拒絶反応、副甲状腺移植拒絶反応、任
意の臓器もしくは組織の異種移植片拒絶反応、同種移植片拒絶反応、抗受容体超過敏反応、グレーブス病、レーノー病、Ｂ型インシュリン抵抗性糖尿病、喘息、重症筋無力症、抗体媒介性細胞傷害、ＩＩＩ型超過敏反応、全身性エリテマトーデス、ＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、臓器肥大症、内分泌障害、単クローン性免疫グロブリン血症、および皮膚変化症候群）、多発性神経障害、臓器肥大症、内分泌障害、単クローン性免疫グロブリン血症、皮膚変化症候群、抗リン脂質症候群、天疱瘡、強皮症、混合結合組織病、特発性アジソン病、糖尿病、慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、白斑、脈管炎、心筋梗塞心術後症候群、ＩＶ型過敏症、接触皮膚炎、過敏性肺炎、同種移植片拒絶反応、細胞内生物体による肉芽腫、薬物過敏、代謝性／特発性、ウィルソン病、ヘマクロマトーシス、アルファ−１−アンチトリプシン欠損症、糖尿病性網膜症、橋本甲状腺炎、骨粗しょう症、視床下部−下垂体−副腎軸評価、原発性胆汁性肝硬変、甲状腺炎、脳脊髄炎、悪液質、嚢胞性線維症、新生児慢性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、家族性血球貪食性リンパ組織球増多症、皮膚病変、乾癬、脱毛、ネフローゼ症候群、腎炎、糸球体腎炎、急性腎不全、血液透析、尿毒症、毒性、子癇前症、ｏｋｔ３療法、抗ｃｄ３療法、サイトカイン療法、化学療法、放射線療法（例えば、無力症、貧血、悪液質などが包含されるがこれらに限定されるものではない）、慢性サリチル酸中毒、睡眠時無呼吸、肥満症、心不全、副鼻腔炎、炎症性腸疾患などの少なくとも一つが包含されるがこれらに限定されるものではない細胞、組織、臓器、動物、もしくは患者における少なくとも一つのＩＬ−６媒介免疫関連疾患を調節もしくは処置する方法も提供する。例えば、各々引用することにより全部が組み込まれる、Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ，１２ｔｈ−１７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎｓ，Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒａｈｗａｙ，ＮＪ（１９７２，１９７７，１９８２，１９８７，１９９２，１９９９），Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，Ｃｏｎｎ．（１９９８，２０００）を参照。
【０１６８】
本発明はまた、急性もしくは慢性の細菌感染、細菌、ウイルスおよび真菌感染を包含する急性および慢性の寄生性もしくは感染性プロセス、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、髄膜炎、肝炎（Ａ、ＢもしくはＣなど）、敗血症性関節炎、腹膜炎、肺炎、喉頭蓋炎、エシェリキア・コリＯ１５７：ｈ７、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解性血小板減少性紫斑症、マラリア、デング出血熱、リーシュマニア症、ハンセン病、毒素性ショック症候群、連鎖球菌性筋炎、ガス壊疽、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、ニューモシスティス・カリニ（ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）肺炎、骨盤内炎症性疾患、精巣炎／精巣上体炎、レジオネラ菌、ライム病、インフルエンザ、エプスタイン・バーウイルス、ウイルス関連血球貪食性症候群、ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎などの少なくとも一つが包含されるがこれらに限定されるものではない細胞、組織、臓器、動物もしくは患者における少なくとも一つの感染症を調節もしくは／処置する方法も提供する。
【０１６９】
そのような方法のいずれも、場合により、少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体を含んでなる少なくとも一つの組成物もしくは製薬学的組成物の有効量をそのような調節、処置もしくは治療を必要とする細胞、組織、臓器、動物もしくは患者に投与することを含んでなることができる。抗ＩＬ−６治療での処置の適応症は、本願に引用することにより本明細書に組み込まれる以下の参考文献に開示されている：Ｖａｎ  Ｓｎｉｃｋ，“Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６：Ａｎ  Ｏｖｅｒｖｉｅｗ，”Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８：２５３−２７８（１９９０）；Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ
Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ．Ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｉｎｓｕｌｉｎ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｄｉａ
ｂｅｔｅｓ  ｉｎ  ＮＯＤ／Ｗｅｈｉ  Ｍｉｃｅ，”Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８７：７３９−７４２（１９９１）；Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ａ
Ｐａｔｉｅｎｔ  ｗｉｔｈ  Ｐｌａｓｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ，”Ｂｌｏｏｄ，７８（５）：１１９８−１２０４（１９９１）；Ｓｔａｒｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉ−ＩＬ−６  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｌｅｔｈａｌ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｌｅｔｈａｌ  Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ−ａｌｐｈａ．Ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ，”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４５（１２）：４１８５−４１９１（１９９０）；Ｓｔｒａｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃａｃｈｅｘｉａ，”Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８９：１６８１−１６８４（１９９２）。
【０１７０】
本発明の任意の方法は、少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体を含んでなる組成物もしくは製薬学的組成物の有効量をそのような調節、処置もしくは治療を必要とする細胞、組織、臓器、動物もしくは患者に投与することを含んでなることができる。そのような方法は、場合により、そのような免疫疾患もしくは悪性疾患を処置するための共投与もしくは組み合わせ治療をさらに含んでなることができ、ここで、該少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体、その特定の部分もしくは変異体の投与は、前に、同時に、そして／もしくは後に、少なくとも一つのＴＮＦアンタゴニスト（例えば、ＴＮＦ抗体もしくはフラグメント、可溶性ＴＮＦ受容体もしくはフラグメント、その融合タンパク質、または小分子ＴＮＦアンタゴニスト、しかしこれらに限定されるものではない）、ＩＬ−１８抗体もしくはフラグメント、小分子ＩＬ−１８アンタゴニストまたはＩＬ−１８受容体結合タンパク質、ＩＬ−１抗体（ＩＬ−１アルファおよびＩＬ−１ベータの両方を包含する）もしくはフラグメント、可溶性ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗リウマチ剤（例えば、メトトレキセート、オーラノフィン、金チオグルコース、アザチオプリン、エタネルセプト、金チオリンゴ酸ナトリウム、硫酸ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、スルファサラジン）、放射線療法、抗血管新生剤、化学療法剤、サリドマイド、筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔剤、鎮静剤、局所麻酔剤、神経筋遮断薬、抗菌剤（例えば、アミノグリコシド、抗真菌剤、抗寄生虫剤、抗ウイルス薬、カルバペネム、セファロスポリン、フルオロキノロン、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド、テトラサイクリン、別の抗菌剤）、乾癬治療薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、糖尿病関連薬、ミネラル、栄養、甲状腺薬、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、エリスロポエチン（例えば、エポエチンアルファ）、フィルグラスチム（例えば、Ｇ−ＣＳＦ，Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）、サルグラモスチム（ＧＭ−ＣＳＦ，Ｌｅｕｋｉｎｅ）、免疫化薬、免疫グロブリン、免疫抑制薬（例えば、バシリキシマブ、サイクロスポリン、ダクリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン補充薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様筋調節薬、アルキル化剤、代謝拮抗剤、分裂抑制剤、放射性医薬品、抗欝薬、抗躁病薬、抗精神病薬、抗不安薬、睡眠薬、交感神経刺激薬、興奮剤、ドネペジル、タクリン、喘息薬、ベータアゴニスト、吸入用ステロイド、ロイコトリエンインヒビター、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンもしくは類似物、ドルナーゼアルファ（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ）、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニストから選択される少なくとも一つを投与することをさらに含んでなる。適当な投薬量は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴ（２０００）；ＰＤＲ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｔａｒａｓｃｏｎ  Ｐｏｃｋｅｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ  ２０００，Ｄｅｌｕｘｅ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔａｒ��ｓｃｏｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｌｏｍａ  Ｌｉｎｄａ，ＣＡ（２０００）を参照、これらの参考文献の各々は、引用することにより全部が本明細書に組
み込まれる。
【０１７１】
（本発明の少なくとも一つの抗体、その特定の部分および変異体をさらに含んでなる）本発明の組成物、組み合わせ治療、共投与、装置および／もしくは方法に適当なＴＮＦアンタゴニストには、抗ＴＮＦ抗体、その抗原結合フラグメント、およびＴＮＦに特異的に結合する受容体分子；サリドマイド、テニダップ、ホスホジエステラーゼインヒビター（例えば、ペントキシフィリンおよびロリプラム）、Ａ２ｂアデノシン受容体アゴニストおよびＡ２ｂアデノシン受容体エンハンサーのような、ＴＮＦ合成、ＴＮＦ放出もしくは標的細胞へのその作用を阻止および／もしくは阻害する化合物；マイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼインヒビターのような、ＴＮＦ受容体シグナル伝達を阻止および／もしくは阻害する化合物；メタロプロテイナーゼインヒビターのような、膜ＴＮＦ切断を阻止および／もしくは阻害する化合物；アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）インヒビター（例えば、カプトプリル）のような、ＴＮＦ活性を阻止および／もしくは阻害する化合物；ならびにＭＡＰキナーゼインヒビターのような、ＴＮＦ生産および／もしくは合成を阻止および／もしくは阻害する化合物が包含されるが、これらに限定されるものではない。
【０１７２】
治療処置
本発明の任意の方法は、少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体を含んでなる組成物もしくは製薬学的組成物の有効量をそのような調節、処置もしくは治療を必要とする細胞、組織、臓器、動物もしくは患者に投与することを含んでなる、ＩＬ−６媒介疾患を処置する方法を含んでなることができる。そのような方法は、場合により、そのような免疫疾患を処置するための共投与もしくは組み合わせ治療をさらに含んでなることができ、ここで、該少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体、その特定の部分もしくは変異体の投与は、前に、同時に、そして／もしくは後に、上記のような少なくとも一つの作用因子を投与することをさらに含んでなる。
【０１７３】
典型的には、病的症状の処置は、組成物に含まれるものの比活性により、平均して、用量につき患者のキログラム当たり少なくとも約０．０１〜５００ミリグラムの少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体、好ましくは単一もしくは複数投与につき患者のキログラム当たり少なくとも約０．１〜１００ミリグラムの抗体の範囲に合計でなる少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体組成物の有効量もしくは投薬量を投与することによりもたらされる。あるいはまた、有効血清濃度は、単一もしくは複数投与につき０．１〜５０００μｇ／ｍｌの血清濃度を含んでなることができる。適当な投薬量は医師に既知であり、そしてもちろん特定の疾患状態、投与する組成物の比活性、および処置を受けている特定の患者により決まる。ある例として、所望の治療量を得るために、反復投与、すなわち、特定のモニター量もしくは定量の反復個別投与を与えることが必要である可能性があり、ここで、該個別投与は、所望の日量もしくは効果が得られるまで繰り返される。
【０１７４】
好ましい用量には、場合により、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９および／もしくは１００〜５００ｍｇ／ｋｇ／投与、またはその任意の範囲、値もしくは割合、あるいは単一もしくは複数投与当たり０．１、０．５、０．９、１．０、１．１、１．２、１．５、１．９、２．０、２．５、２．９、
３．０、３．５、３．９、４．０、４．５、４．９、５．０、５．５、５．９、６．０、６．５、６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、１２、１２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１４．０、１４．５、１４．９、１５、１５．５、１５．９、１６、１６．５、１６．９、１７、１７．５、１７．９、１８、１８．５、１８．９、１９、１９．５、１９．９、２０、２０．５、２０．９、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９６、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、および／もしくは５０００μｇ／ｍｌの血清濃度、またはその任意の範囲、値もしくは割合を得ることを包含することができる。
【０１７５】
あるいはまた、投与する投薬量は、特定の作用因子の薬力学的特性、ならびにその投与形態および経路；レシピエントの年齢、健康、および体重；症状の性質および程度、併用処置の種類、処置の頻度、ならびに所望の効果のような既知の因子により異なることができる。通常、有効成分の投薬量は、体重のキログラム当たり約０．１〜１００ミリグラムであることができる。通常は、投与につきもしくは持続放出形態においてキログラム当たり０．１〜５０、そして好ましくは０．１〜１０ミリグラムが、所望の結果を得るために有効である。
【０１７６】
限定されない例として、ヒトもしくは動物の処置は、単一の、注入もしくは反復用量を用いて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、もしくは４０日の少なくとも一つ、あるいはまたもしくはさらに、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、もしくは５２週の少なくとも一つ、あるいはまたもしくはさらに、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０年の少なくとも一つ、またはその任意の組み合わせに、一日当たり、０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００ｍｇ／ｋｇのような、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの本発明の少なくとも一つの抗体の１回限りのもしくは定期的投薬量として提供することができる。
【０１７７】
内部投与に適当な剤形（組成物）は、一般に、ユニットもしくは容器当たり約０．１ミリグラム〜約５００ミリグラムの有効成分を含有する。これらの製薬学的組成物において、有効成分は、通常、組成物の総重量に基づき約０．５〜９９．９９９重量％の量で存在する。
【０１７８】
非経口製剤および投与
非経口投与には、抗体は、製薬学的に許容しうる非経口賦形剤と会合した、もしくは別個に提供する液剤、懸濁剤、乳剤もしくは凍結乾燥した散剤として調合することができる。そのような賦形剤の例は、水、食塩水、リンガー溶液、デキストロース溶液、および１〜１０％のヒト血清アルブミンである。リポソームおよび不揮発性油のような非水性の賦形剤もまた用いることができる。賦形剤もしくは凍結乾燥した散剤は、等張性（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール）および化学的安定性（例えば、バッファーおよび防腐剤）を維持する添加剤を含有することができる。製剤は、既知のもしくは適当な技術により
滅菌する。
【０１７９】
適当な製薬学的担体は、この分野の標準的な参考テキストであるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａ．Ｏｓｏｌの最新版に記述されている。
【０１８０】
非経口投与用の製剤は、一般的な賦形剤として滅菌水もしくは食塩水、ポリエチレングリコールのようなポリアルキレングリコール、植物由来の油、水素化ナフタレンなどを含有することができる。注入用の水性もしくは油性懸濁剤は、既知の方法に従って、適切な乳化剤もしくは加湿剤（ｈｕｍｉｄｉｆｉｅｒ）および沈殿防止剤を用いることにより製造することができる。注入剤は、水溶液または溶媒中の滅菌した注入可能な溶液もしくは懸濁液のような無毒の非経口的に投与可能な希釈剤であることができる。使用可能な賦形剤もしくは溶媒として、水、リンガー溶液、等張食塩水などが認められ；通常の溶媒、もしくは懸濁溶媒として、滅菌した不揮発性油を用いることができる。これらの目的のために、天然もしくは合成もしくは半合成の脂肪油もしくは脂肪酸；天然もしくは合成もしくは半合成のモノ−もしくはジ−もしくはトリグリセリドを包含する、任意の種類の不揮発性油および脂肪酸を用いることができる。非経口投与は当該技術分野において既知であり、そして通常の注入手段、米国特許第５，８５１，１９８号に記述されているようなガス加圧無針（ｇａｓ  ｐｒｅｓｓｕｒｅｄ  ｎｅｅｄｌｅ−ｌｅｓｓ）注入装置、および引用することにより全部が本明細書に組み込まれる米国特許第５，８３９，４４６号に記述されているようなレーザー穿孔器装置が包含されるが、これらに限定されるものではない。
【０１８１】
別の送達
本発明はさらに、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内（ｉｎｔｒａｃａｐｓｕｌａｒ）、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊椎内、滑液包内、胸内、子宮内、嚢内（ｉｎｔｒａｖｅｓｉｃａｌ）、ボーラス、膣、直腸、口腔内、舌下、鼻腔内、もしくは経皮手段による少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体の投与に関する。少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体組成物は、特に液体の液剤もしくは懸濁剤の形態で非経口（皮下、筋肉内もしくは静脈内）または任意の他の投与の使用のために；クリームおよび座薬のようなしかしこれらに限定されるものではない特に半固体形態で膣もしくは直腸投与における使用のために；錠剤もしくはカプセル剤の形態のようなしかしこれらに限定されるものではない口腔内、もしくは舌下投与のために；あるいは散剤、点鼻薬もしくはエアロゾルまたはある種の作用因子の形態のようなしかしこれらに限定されるものではない鼻腔内に；あるいはまた皮膚構造を改変するためもしくは経皮パッチにおける薬剤濃度を上げるために（Ｊｕｎｇｉｎｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．“Ｄｒｕｇ  Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ”；Ｈｓｉｅｈ，Ｄ．Ｓ．，Ｅｄｓ．，ｐｐ．５９−９０（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９９４、引用することにより全部が本明細書に組み込まれる）ジメチルスルホキシドのような化学エンハンサーを有する、あるいは皮膚上へのタンパク質およびペプチドを含有する製剤の使用（ＷＯ  ９８／５３８４７）、または電気穿孔のような一時的輸送経路を作り出すためもしくはイオン導入のような皮膚を通した荷電薬剤の移動性を上げるための電場の使用、または超音波導入（米国特許第４，３０９，９８９号および第４，７６７，４０２号）のような超音波の使用を可能にする酸化剤を有するゲル、軟膏、ローション、懸濁剤もしくはパッチ送達系のようなしかしこれらに限定されるものではない経皮に製造することができる（上記の公開および特許は、引用することにより全部が本明細書に組み込まれる）。
【０１８２】
肺／鼻腔投与
肺投与には、好ましくは、少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体組成物を肺もしくは洞の下気道に到達するのに有効な粒子サイズで送達する。本発明によれば、少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体は、吸入による治療薬の投与用に当該技術分野において既知である様々な吸入もしくは点鼻装置のいずれかにより送達することができる。患者の洞腔（ｓｉｎｕｓ  ｃａｖｉｔｙ）もしくは肺胞にエアロゾル化した製剤を置くことができるこれらの装置には、定量吸入器、ネブライザー、ドライパウダー発生器、スプレーなどが包含される。抗体の肺もしくは鼻腔投与を導くのに適当な他の装置もまた、当該技術分野において既知である。全てのそのような装置は、エアロゾルで抗体を施薬する投与に適当な製剤のものを用いることができる。そのようなエアロゾルは、溶液（水性および非水性の両方）もしくは固体粒子のいずれかを含んでなることができる。ＶｅｎｔｏｌｉｎＲ定量吸入器のような定量吸入器は、典型的には、噴射ガスを使用し、そして吸気中の作動を必要とする（例えば、ＷＯ  ９４／１６９７０、ＷＯ  ９８／３５８８８を参照）。ＴｕｒｂｕｈａｌｅｒＴＭ（Ａｓｔｒａ）、ＲｏｔａｈａｌｅｒＲ（Ｇｌａｘｏ）、ＤｉｓｋｕｓＲ（Ｇｌａｘｏ）、ＳｐｉｒｏｓＴＭ吸入器（Ｄｕｒａ）、Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにより市販される装置、およびＳｐｉｎｈａｌｅｒＲパウダー吸入器（Ｆｉｓｏｎｓ）のようなドライパウダー吸入器は、混合パウダーの呼吸作動を用いる（ＵＳ  ４６６８２１８  Ａｓｔｒａ，ＥＰ  ２３７５０７  Ａｓｔｒａ，ＷＯ  ９７／２５０８６  Ｇｌａｘｏ，ＷＯ  ９４／０８５５２  Ｄｕｒａ，ＵＳ  ５４５８１３５  Ｉｎｈａｌｅ，ＷＯ
９４／０６４９８  Ｆｉｓｏｎｓ、引用することにより全部が本明細書に組み込まれる）。ＡＥＲｘＴＭ  Ａｒａｄｉｇｍ、ＵｌｔｒａｖｅｎｔＲネブライザー（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ）、およびＡｃｏｒｎ  ＩＩＲネブライザー（Ｍａｒｑｕｅｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）（ＵＳ  ５４０４８７１  Ａｒａｄｉｇｍ，ＷＯ  ９７／２２３７６）（上記の参考文献は引用することにより全部が本明細書に組み込まれる）のようなネブライザーは、溶液からエアロゾルを生成し、一方、定量吸入器、ドライパウダー吸入器などは、小粒子エアロゾルを生成する。市販されている吸入装置のこれらの特定の例は、本発明の実施に適当な特定の装置の代表であるものとし、そして本発明の範囲を限定するものではない。好ましくは、少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体を含んでなる組成物は、ドライパウダー吸入器もしくはスプレーにより送達する。本発明の少なくとも一つの抗体を投与するための吸入装置のいくつかの望ましい特徴がある。例えば、吸入装置による送達は、都合よく信頼性があり、再現可能であり、そして正確である。吸入装置は、場合により、十分に呼吸が可能であるように、例えば約１０μｍ未満、好ましくは約１〜５μｍの小乾燥粒子を送達することができる。
【０１８３】
スプレーとしてのＩＬ−６抗体組成物の投与
ＩＬ−６抗体組成物タンパク質を含むスプレーは、少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体の懸濁液もしくは溶液を圧力下でノズルを通して押し出すことにより製造することができる。ノズルのサイズおよび構造、適用圧力、ならびに液体供給速度は、所望の出力および粒子サイズを得るために選択することができる。例えば、毛細管もしくはノズル送りと接続した電場によりエレクトロスプレーを製造することができる。都合よく、スプレーにより送達する少なくとも一つのＩＬ−６抗体組成物タンパク質の粒子は、約１０μｍ未満、好ましくは約１μｍ〜約５μｍの範囲、そして最も好ましくは約２μｍ〜約３μｍの粒子サイズを有する。
【０１８４】
スプレーでの使用に適当な少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体組成物タンパク質の製剤は、典型的には、約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇの少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体組成物タンパク質／ｍｌ溶液もしくはｍｇ／ｇｍ、またはその中の任意の範囲もしくは値、例えば、．１、．２、．３、．４、．５、．６、．７、．８、．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００ｍｇ／ｍｌもしくはｍｇ／ｇｍ（しかし、これらに限
定されるものではない）の濃度で水溶液の抗体組成物タンパク質を含む。製剤は、賦形剤、バッファー、等張剤、防腐剤、界面活性剤、および好ましくは亜鉛のような作用因子を含むことができる。製剤はまた、バッファー、還元剤、バルクタンパク質（ｂｕｌｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、もしくは炭水化物のような、抗体組成物タンパク質の安定化のための賦形剤もしくは作用因子を含むこともできる。抗体組成物タンパク質を調合することにおいて有用なバルクタンパク質には、アルブミン、プロタミンなどが包含される。抗体組成物タンパク質を調合することにおいて有用な典型的な炭水化物には、ショ糖、マンニトール、ラクトース、トレハロース、グルコースなどが包含される。抗体組成物タンパク質製剤はまた界面活性剤を含むこともでき、これはエアロゾルを形成する際に溶液の噴霧化により引き起こされる抗体組成物タンパク質の表面誘起凝集を減らすかもしくは防ぐことができる。ポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコール、ならびにポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルのような様々な通常の界面活性剤を用いることができる。量は一般に、製剤の０．００１〜１４重量％の間である。本発明の目的のために特に好ましい界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０などである。ＩＬ−６抗体、または特定の部分もしくは変異体のようなタンパク質の調合用に当該技術分野において既知である追加の作用因子もまた、製剤に含むことができる。
【０１８５】
ネブライザーによるＩＬ−６抗体組成物の投与
抗体組成物タンパク質は、ジェットネブライザーもしくは超音波ネブライザーのようなネブライザーにより投与することができる。典型的には、ジェットネブライザーでは、開口部を通して高速空気ジェットを作り出すために圧縮空気源を用いる。気体がノズルを越えて広がるにつれて、低圧領域が生み出され、それは液体リザーバーに接続されている毛細管を通して抗体組成物タンパク質の溶液を引き出す。毛細管からの液体の流れは、それが管から抜け出るにつれて不安定なフィラメントおよび小滴に剪断され、エアロゾルを生み出す。既定のジェットネブライザーから所望の性能特性を得るために一連の構造、流速、およびバッフルタイプを用いることができる。超音波ネブライザーでは、典型的には圧電変換器を使用して、振動の、機械的エネルギーを生み出すために高周波電気エネルギーを用いる。このエネルギーは、直接もしくはカップリング流動体を通して抗体組成物タンパク質の製剤に伝達され、抗体組成物タンパク質を含むエアロゾルを生み出す。都合よく、ネブライザーにより送達する抗体組成物タンパク質の粒子は、約１０μｍ未満、好ましくは約１μｍ〜約５μｍの範囲、そして最も好ましくは約２μｍ〜約３μｍの粒子サイズを有する。
【０１８６】
ジェットもしくは超音波のいずれかのネブライザーでの使用に適当な少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体の製剤は、典型的に、溶液のｍｌ当たり約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇの少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体タンパク質の濃度を含む。製剤は、賦形剤、バッファー、等張剤、防腐剤、界面活性剤、および好ましくは亜鉛のような作用因子を含むことができる。製剤はまた、バッファー、還元剤、バルクタンパク質、もしくは炭水化物のような、少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体組成物タンパク質の安定化のための賦形剤もしくは作用因子を含むこともできる。少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体組成物タンパク質を調合することにおいて有用なバルクタンパク質には、アルブミン、プロタミンなどが包含される。少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体を調合することにおいて有用な典型的な炭水化物には、ショ糖、マンニトール、ラクトース、トレハロース、グルコースなどが包含される。少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体製剤はまた界面活性剤を含むこともでき、これはエアロゾルを形成する際に溶液の噴霧化により引き起こされる少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体の表面誘起凝集を減らすかもしくは防ぐことができる。ポリオキシエチレン脂肪酸エステルおよびアルコール、ならびにポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルのような様々な通常の界面活性剤を用いることができる。量は一般に、製剤の０．００１〜４重量％の間である。本発明の目的のために特に好ましい界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビ
タンモノオレエート、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０などである。抗体タンパク質のようなタンパク質の調合用に当該技術分野において既知である追加の作用因子もまた、製剤に含むことができる。
【０１８７】
定量吸入器によるＩＬ−６抗体組成物の投与
定量吸入器（ＭＤＩ）において、噴射剤、少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体、および任意の賦形剤もしくは他の添加剤を、液化圧縮ガスを含む混合物として容器に含有する。絞り弁の作動により、好ましくは、約１０μｍ未満、好ましくは約１μｍ〜約５μｍ、そして最も好ましくは約２μｍ〜約３μｍのサイズ範囲の粒子を含有する、エアロゾルとして混合物が放出される。所望のエアロゾル粒子サイズは、ジェット切削（ｊｅｔ−ｍｉｌｌｉｎｇ）、噴霧乾燥、臨界点凝縮などを包含する、当業者に既知である様々な方法により製造される抗体組成物タンパク質の製剤を用いることにより得ることができる。好ましい定量吸入器には、３ＭもしくはＧｌａｘｏにより製造されそしてヒドロフルオロカーボン噴射剤を用いるものが包含される。
【０１８８】
定量吸入器装置での使用のための少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体の製剤には、一般に、非水性媒質中の懸濁液として、例えば、界面活性剤を用いて噴射剤に懸濁した少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体を含有する微粉化散剤が包含される。噴射剤は、トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノールおよび１，１，１，２−テトラフルオロエタン、ＨＦＡ−１３４ａ（ヒドロフルオロアルカン−１３４ａ）、ＨＦＡ−２２７（ヒドロフルオロアルカン−２２７）などを包含する、クロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルオロカーボン、もしくは炭水化物のような、この目的のために用いる任意の通常の物質であることができる。好ましくは、噴射剤はヒドロフルオロカーボンである。界面活性剤は、噴射剤における懸濁液として少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体を安定させるため、化学分解から有効成分を守るためなどに選択することができる。適当な界面活性剤には、ソルビタントリオレエート、ダイズレシチン、オレイン酸などが包含される。ある場合には、エタノールのような溶媒を用いる溶液エアロゾルが好ましい。タンパク質のようなタンパク質の調合用に当該技術分野において既知である追加の作用因子もまた、製剤に含むことができる。
【０１８９】
本発明の方法は、本明細書に記述されていない装置による少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体組成物の肺投与により実施できることを当業者は認識する。
【０１９０】
経口製剤および投与
経口投与用の製剤は、腸壁の透過性を人工的に上げるために添加剤（例えば、レゾルシノールならびにポリオキシエチレンオレイルエーテルおよびｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテルのような非イオン性界面活性剤）の共投与、ならびに酵素分解を阻止するために酵素インヒビター（膵臓トリプシンインヒビター、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＦＦ）およびトラシロール（ｔｒａｓｙｌｏｌ））の共投与に依存する。経口投与用の固体タイプ剤形の有効成分化合物は、ショ糖、ラクトース、セルロース、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、マルチトール、デキストラン、澱粉、寒天、アルギネート、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントゴム、アラビアゴム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成もしくは半合成のポリマー、およびグリセリドを包含する、少なくとも一つの添加剤と混合することができる。これらの剤形はまた、他のタイプ（１つもしくは複数）の添加剤、例えば、不活性希釈剤、ステアリン酸マグネシウム、パラベンのような潤滑剤、ソルビン酸、アスコルビン酸、アルファ−トコフェロールのような防腐剤、システインのような酸化防止剤、崩壊剤、結合剤、増粘剤、緩衝剤、甘味料、着香料、香料などを含有することもできる。
【０１９１】
錠剤および丸剤は、腸溶性製剤にさらに加工することができる。経口投与用の液体製剤
には、医療用に許容される乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、懸濁剤および液剤製剤が包含される。これらの製剤は、該分野において通常用いられる不活性希釈剤、例えば水を含有することができる。リポソームもまた、インシュリンおよびヘパリンの薬剤送達系として記述されている（米国特許第４，２３９，７５４号）。さらに最近では、混合アミノ酸の人工ポリマーの小球体（プロテイノイド）が医薬品を送達するために用いられている（米国特許第４，９２５，６７３号）。さらに、米国特許第５，８７９，６８１号および米国特許第５，８７１，５７３号に記述されている担体化合物は、生物学的に有効な作用因子を経口的に送達するために用いられ、当該技術分野において既知である。
【０１９２】
粘膜製剤および投与
粘膜面を通した吸収には、少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体を投与する組成物および方法は、乳剤粒子の粘膜接着を成し遂げることにより粘膜面を通した吸収を促進する、複数のサブミクロン粒子、粘膜接着性高分子、生物活性ペプチド、および水性連続相を含んでなる乳剤を含む（米国特許第５，５１４，６７０号）。本発明の乳剤の使用に適当な粘膜面には、角膜、結膜、口腔内、舌下、鼻腔内、膣、肺、胃、腸、および直腸投与経路を包含することができる。膣もしくは直腸投与用の製剤、例えば座薬は、賦形剤として例えばポリアルキレングリコール、ワセリン、ココアバターなどを含有することができる。鼻腔内投与用の製剤は固体であることができ、そして賦形剤として例えばラクトースを含有することができ、または点鼻薬の水性もしくは油性溶液であることができる。口腔内投与では、賦形剤には糖、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、糊化済澱粉などが包含される（米国特許第５，８４９，６９５号）。
【０１９３】
経皮製剤および投与
経皮投与には、少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体をリポソームもしくはポリマーナノ粒子、微粒子、マイクロカプセル、または小球体（他に記載されない限りまとめて微粒子と称する）に封入する。ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびそのコポリマーのようなポリヒドロキシ酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、およびポリホスファゼンのような合成ポリマー、ならびにコラーゲン、ポリアミノ酸、アルブミンおよび他のタンパク質、アルギネートおよび他の多糖のような天然ポリマー、ならびにその組み合わせでできている微粒子を包含する、多数の適当な手段が既知である（米国特許第５，８１４，５９９号）。
【０１９４】
長期投与および製剤
本発明の化合物を被験体に長期間にわたって、例えば単一投与から１週〜１年の期間にわたって送達することが望ましいことがあり得る。様々な持続放出、持続性薬剤もしくは埋め込み剤形を利用することができる。例えば、剤形は、体液において低い程度の溶解性を有する化合物の製薬学的に許容しうる無毒の塩、例えば、（ａ）リン酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、タンニン酸、パモン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンモノもしくはジスルホン酸、ポリガラクツロン酸などのような多塩基酸との酸付加塩；（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウムなどのような多価金属陽イオン、または例えばＮ，Ｎ’−ジベンジル−エチレンジアミンもしくはエチレンジアミンから形成される有機陽イオンとの塩；あるいは（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組み合わせ、例えばタンニン酸亜鉛塩を含有することができる。さらに、本発明の化合物もしくは好ましくは今記述したもののような比較的不溶性の塩は、ゲル、例えば、注入のために適当な、例えばゴマ油を有するモノステアリン酸アルミニウムゲルに調合することができる。特に好ましい塩は、亜鉛塩、タンニン酸亜鉛塩、パモン酸塩などである。注入用の持続放出持続性製剤の別のタイプは、例えば米国特許第３，７７３，９１９号に記述されているようなポリ乳酸／ポリグリコール酸ポリマーのようなゆっくり分解する無毒の非抗原性ポリマーに分散もしくは封入した化合物もしくは塩を含有する。化合物、もしくは好ましくは上記のもののような比較的不溶性の塩はまた、特に動物における使用のために、コレステロールマトリックスシラスティックペレッ
トに調合することもできる。追加の持続放出、持続性製剤もしくは埋め込み製剤、例えば、気体もしくは液体リポソームは、文献において既知である（米国特許第５，７７０，２２２号および“Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ”，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．，１９７８）。
【０１９５】
略語
ＢＳＡ−ウシ血清アルブミン
ＥＩＡ−酵素免疫アッセイ
ＦＢＳ−ウシ胎仔血清
Ｈ２Ｏ２−過酸化水素
ＨＲＰ−西洋ワサビペルオキシダーゼ
Ｉｇ−免疫グロブリン
ＩＬ−６−インターロイキン−６
ＩＰ−腹腔内
ＩＶ−静脈内
Ｍａｂ−モノクローナル抗体
ＯＤ−光学密度
ＯＰＤ−ｏ−フェニレンジアミン２塩酸塩
ＰＥＧ−ポリエチレングリコール
ＰＳＡ−ペニシリン、ストレプトマイシン、アンフォテリシン
ＲＴ−室温
ＳＱ−皮下
ｖ／ｖ−容量／容量
ｗ／ｖ−重量／容量
【実施例】
【０１９６】
実施例１  マウスＣＬＢ８  Ｍａｂの作製
免疫
マウスＣＬＢ−ＩＬ６−８抗体を生じるハイブリドーマは、報告されているように（Ｂｒａｃｋｅｎｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９０）１４５：５６１−５６８）Ｄｒ．Ｌｕｃｉｅｎ  Ａａｒｄｅｎの研究所、Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ  Ｒｅｓ  Ｃｒｏｓｓ  Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｓｅ（ＣＬＢ）において行われた融合から得られた。
【０１９７】
ＣＬＢの特定病原体未感染育種ストックから得られる８週齢のメスＢａｌｂ／ｃマウスに完全フロインドアジュバントに乳化した１０μｇの精製された組み換えインターロイキン−６（ｒＩＬ−６）（ＣＬＢ）を筋肉内（ＩＭ）に免疫感作した。不完全フロインドアジュバント中の各々１０μｇのｒＩＬ−６での３回のその後のＩＭ注射は、４〜８週の間隔で実施した。
【０１９８】
細胞融合
最後のＩＭブースター注射の４日後に、マウスを殺し；脾臓を取り出し、そして細かく刻んだ。単一細胞懸濁液を周囲アール緩衝塩溶液において得た。細胞を洗浄し、そして計数した。融合は、イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）中４２％（ｗ／ｖ）のポリエチレングリコールの存在下で１：３の比率の生存脾臓細胞：マウス骨髄腫細胞（Ｓｐ２／０−Ａｇ１４）で実施した。非Ｉｇ分泌融合相手Ｓｐ２／０は、ＣＬＢで維持される細胞バンクから樹立した。融合の後、細胞を５％のウシ胎仔血清、５０μＭのペニシリン／ストレプトマイシン、５ｘ１０−５Ｍの２−メルカプトエタノール（２−ＭＥ）およびＨＡＴ（６ｘ１０−４Ｍのヒポキサンチン、６．５ｘ１０−７Ｍのアミノプテリン、６．４ｘ
１０−５Ｍのチミジン）を補足したＩＭＤＭに再懸濁した。融合直後のこれらのハイブリドーマの増殖はＩＬ−６に依存し、従って、１００Ｕ／ｍＬの精製されたマウスＩＬ−６（Ｖａｎ  Ｓｍｉｃｋ，Ｂｒｕｓｓｅｌｓ）を選択培地に加えた。次に、融合細胞を１ｘ１０５細胞／１００μＬウェルで９６ウェルプレートに分配した。
【０１９９】
マウス抗ＩＬ−６ハイブリドーマの一次特性化
抗ＩＬ−６分泌ハイブリッドは、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）および放射免疫測定法（ＲＩＡ）により選択した（Ｂｒａｃｋｅｎｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）１４５：５６１−５６８）。
【０２００】
ヒトＩＬ−６に特異的なモノクローナル抗体をスクリーニングするのに固相ＥＬＩＳＡを用いた。精製されたｒＩＬ−６（０．５μｇ／ｍＬ）を平底プレート（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）上に１００μＬ／ウェルでリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で室温で一晩被覆した。プレートをＰＢＳ、０．０２％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ  ２０（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ）で洗浄し、そして０．２％のゼラチンを補足したＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（ＰＴＧ）における培養上清の１：２希釈物と周囲温度で２時間インキュベーションした。洗浄した後、プレートをＰＴＧ中の西洋ワサビペルオキシダーゼ結合モノクローナルラット抗マウスカッパ軽鎖２２６（Ｅｉｎｓｔｅｉｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＮＹ）（２μｇ／ｍＬ）と１時間インキュベーションした。プレートを洗浄し、そして結合したペルオキシダーゼを０．１Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５中の１００μＬ／ウェルの３，５，３，５，テトラメチルベンジジン／０．００３％過酸化水素で検出した。呈色反応を２Ｍ  Ｈ２ＳＯ４で止め、そしてプレートをＴｉｔｅｒｔｅｋ，Ｍｕｌｔｉｓｃａｎ読み取り装置で４５０ｎＭで読み取った。正のＯＤをもたらすウェルを選択した。
【０２０１】
固相ＲＩＡもまた、抗ＩＬ−６ハイブリドーマをスクリーニングするのに用いた。ヤギ抗マウスＩｇ抗体を臭化シアン活性化セファロースＣＬ−４Ｂ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に連結した。セファロースを洗浄し、そしてＰＢＳ、０．１％  Ｔｗｅｅｎ  ２０、０．１％アジ化ナトリウムに１０ｍｇ／ｍＬで再懸濁した。ハイブリドーマ上清を６時間絶えず混合しながら約２０，０００カウント／分の１２５ヨウ素−ｒＩＬ−６（ＣＬＢ）の存在下でセファロースビーズに加えた。ビーズをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ中でよく洗浄し、そしてガンマカウンターにおいて計数した。最も高い比活性をもたらすウェルを選択した。
【０２０２】
両方のアッセイ系において陽性であったハイブリドーマを樹立し、そして２ｘ１０−５Ｍの２−ＭＥおよび５％のＦＢＳを補足したＩＭＤＭ（完全ＩＭＤＭ）における限界希釈で２回サブクローン化した。ＩＬ−６非依存性サブクローンＣＬＢ−ＩＬ６−８を選択し、そして完全ＩＭＤＭにおいて維持した。ストック培養物は、Ｖｅｒｏ７６標的細胞上での培養における４日後に間接的ヘキスト染色を用いてマイコプラズマに関して陰性反応が出た。Ｉｎｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｌｉｎｅ  ＩｍｍｕｎｏＡｓｓａｙ（ＩＮＮＯ−ＬＩＡ）マウスモノクローナル抗体アイソタイプキットによる上清のアイソタイプ決定は、単一のマウスアイソタイプＩｇＧ１カッパをもたらした。このアイソタイプ決定は、捕獲ＥＩＡによって確かめられた。
【０２０３】
マウスハイブリドーマおよび細胞系をこのようにして製造し、ＣＬＢＩＬ−６／８をＣＬＢ８と称した。これを下記のようにキメラ化し、そしてさらに特性化した。
【０２０４】
実施例２：キメラ化および塩基配列決定
ｃＣＬＢ８可変領域遺伝子のクローニングおよび発現
ヒトＩＬ−６に特異的なマウスモノクローナル抗体を分泌するマウスハイブリドーマＣ１４３ＡからゲノムＤＮＡを単離した。
【０２０５】
軽鎖用には、ＤＮＡを制限エンドヌクレアーゼＨｉｎｄＩＩＩで消化し、そして０．８％のアガロースゲルによる電気泳動に供した。約３．４Ｋｂの長さのＤＮＡフラグメントを含有するゲルの部分を切り出し、そしてＤＮＡを溶出した。フラグメントをベクター８ｃｈａｒｏｎ２７に連結し、そしてバクテリオファージ粒子にパッケージングした。
【０２０６】
重鎖用には、ＤＮＡを制限エンドヌクレアーゼＥｃｏＲＩで消化し、そして０．８％のアガロースゲルによる電気泳動に供した。約３．６Ｋｂの長さのＤＮＡフラグメントを含有するゲルの部分を切り出し、そしてＤＮＡを溶出した。フラグメントをベクター８ｇｔ１０に連結し、そしてバクテリオファージ粒子にパッケージングした。
【０２０７】
重鎖および軽鎖バクテリオファージライブラリーの両方をエシェリキア・コリ上で平板培養し、そして一晩培養した．プラークをニトロセルロースフィルターに移し，そしてマウスＪκ（軽鎖）もしくはマウスＪＨ配列に対応する３２Ｐで標識したＤＮＡフラグメントで調べた。陽性プラークを同定し、そしてプラーク精製した。ファージＤＮＡを単離し、そしてＨｉｎｄＩＩＩ（軽鎖）もしくはＥｃｏＲＩ（重鎖）インサートを単離し、そして免疫グロブリン発現ベクターにクローン化した。
【０２０８】
重鎖および軽鎖発現プラスミドをＳＰ２／０細胞を共トランスフェクションするために用い、そしてミコフェノール酸選択を適用した。キメラ抗体を生産する個々のクローンを同定し、そして単一クローン性を保証するためおよびいっそう高い生産体を生成せしめるためにサブクローン化した。
【０２０９】
個々の細胞系から精製された抗体をＩＬ−６依存性Ｂ９細胞増殖アッセイにおいて中和能力に関して試験した。該抗体を本願の全体にわたってキメラＣＬＢ８もしくはｃＣＬＢ８と称する。
【０２１０】
【化１】
0005583095.tif 000002
【０２１１】
【化２】
0005583095.tif 000003
【０２１２】
実施例３．固相ＥＩＡによるヒトＩＬ−６へのｃＣＬＢ８の結合の測定
ヒトＩＬ−６へのｃＣＬＢ８  Ｍａｂの結合特性を評価するために固相ＥＩＡを用いた。簡潔に言えば、プレートをＰＢＳ中１μｇ／ｍＬの組み換えヒトＩＬ−６（ＲＤＩ）で４℃で一晩被覆した。０．０２％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含有する０．１５Ｍの食塩水において洗浄した後、ウェルをＰＢＳ中１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ、２００μＬ／ウェルでＲＴで１時間ブロックした。精製された抗体を５μｇ／ｍＬの出発濃度から２倍連続希釈物において３７℃で１時間インキュベーションした。プレートを洗浄し、そして次に１％  ＢＳＡ−ＰＢＳに１：２０，０００希釈した５０μＬ／ウェルのＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｔａｇｏ）でＲＴで１時間調べた。プレートを再び洗浄し、そして１００μＬ／ウェルのクエン酸−リン酸基質溶液（０．１Ｍクエン酸および０．２Ｍリン酸ナトリウム、０．０１％  Ｈ２Ｏ２および１ｍｇ／ｍＬ  ＯＰＤ）をＲＴで１５分間加えた。次に、停止溶液（４Ｎ硫酸）を２５μＬ／ウェルで加え、そして４９０ｎｍでの吸収を自動プレート光度計を用いて定量した。図１は、ｃＣＬＢ８が濃度依存的に組み換えヒトＩＬ−
６に結合することを示すＯＤ４９０ｎｍとして測定されるＩＬ−６へのｃＣＬＢ８結合を示す。
【０２１３】
実施例４．インビトロ中和アッセイ
ｃＣＬＢ８によるＩＬ−６の遮断は、ＩｇＭおよびＭＣＰ−１の分泌を阻害する。
【０２１４】
キメラモノクローナル抗体ｃＣＬＢ８を、ヒトＩｇＭおよびケモカインＭＣＰ−１のＩＬ６誘発性分泌に対するその中和生物活性を測定するために２種の簡単なバイオアッセイ形式で評価した。２種のヒト細胞系をこれらの研究において用いた。ＳＫＷ６．４細胞系は、ＥＢＶでトランスフォームしたバーキットＢ細胞リンパ腫から最初に得られ、そしてＩＬ６に応答して可溶性ＩｇＭを分泌する。Ｕ９３７細胞系は、単芽球性で、単球分化することが決定されており、そしてびまん性組織球性リンパ腫にかかっている患者から最初に単離された。Ｕ９３７細胞は、ＩＬ６に応答してＭＣＰ−１を分泌する。これらの特定の生物活性は、ＥＩＡ形式を用いて容易にモニターすることができるので、これらのｃＣＬＢ８阻害を評価した。アッセイの前に、細胞を一晩血清不足にし、そして次にＩＬ６または様々な濃度の抗体もしくは陰性コントロール抗体とプレインキュベーションしたＩＬ６と翌日のみ培養した。７２時間のインキュベーションの終わりに上清を集め、そしてＩｇＭ特異的およびＭＣＰ−１特異的ＥＩＡにおいて用いた。図２および３に示すような結果は、ｃＣＬＢ８がインビトロにおいてＩｇＭおよびＭＣＰ−１のＩＬ６媒介分泌を有意に阻害することを示す。
【０２１５】
図２によって示す実験では、ＥＩＡプレートを１０ｍＭの炭酸バッファー、ｐＨ９．６中のヤギ抗ヒトＩｇＭ（Ｆｃ５μフラグメント特異的）で４℃で一晩被覆した。プレートを０．０２％  ｖ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ２０を有する０．１５Ｍの食塩水で洗浄し、そしてＰＢＳ／１％  ｗ／ｖ  ＢＳＡで１時間ブロックした。細胞培養上清を連続２倍希釈で加えた。インキュベーションおよびその後の０．０２％  Ｔｗｅｅｎ、０．１５Ｍ食塩水での洗浄の後、プレートをＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＭ（μ鎖特異的）で調べた。次にＯＰＤ基質を加え、そして着色の後、ＯＤを４９０ｎｍで読み取った。データは、ｃＣＬＢ８はＩｇＭミュー分泌を阻害するが、アイソタイプがマッチする陰性コントロールキメラｍＡＢはそうでないことを示す。
【０２１６】
図３によって示す実験では、ＥＩＡプレートを１０ｍＭの炭酸バッファー、ｐＨ９．６中のヤギ抗ヒトＭＣＰ−１で４℃で一晩被覆した。プレートを０．０２％  ｖ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ２０を有する０．１５Ｍの食塩水で洗浄し、そしてＰＢＳ／１％  ｗ／ｖ  ＢＳＡで１時間ブロックした。細胞培養上清を連続２倍希釈で加えた。２時間のインキュベーションおよびその後の０．０２％  Ｔｗｅｅｎ、０．１５Ｍ食塩水での洗浄の後、プレートを製造業者の使用説明書のようにビオチニル化抗ヒトＭＣＰ−１で調べた。プレートを再び洗浄し、そしてＨＲＰ標識ストレプトアビジンを１時間加えた。着色をＴＭＢ基質で行った。ＯＤを４５０で読み取った。データは、ｃＣＬＢ８はＩＬ−６媒介ＭＣＰ−１生産を阻害するが、ｃＫ９３１はそうでないことを示す。
【０２１７】
ＳＴＡＴ３のＩＬ６媒介リン酸化の中和
ＩＬ６受容体は、８０ｋＤの結合サブユニット、ＩＬ６Ｒαおよびシグナル伝達サブユニット、ｇｐ１３０からなる。ＩＬ６はＩＬ６Ｒαサブユニットに結合し、そしてＩＬ６Ｒαとｇｐ１３０との会合を起こし、高親和性受容体およびシグナル伝達をもたらす。ＩＬ６Ｒαはまた、可溶性形態でも存在する。ＩＬ６は可溶性ＩＬ６Ｒ（ｓＩＬ６Ｒ）に結合することができ、そして複合体はｇｐ１３０を発現する細胞に作用することができる。ＩＬ６は、ＳＴＡＴ３を活性化することが示されている。ｃＣＬＢ８によるＳＴＡＴ３リン酸化の阻害を示すためにヒト急性単球性白血病細胞系、ＴＨＰ−１を用いた。細胞を（ＩＬ６＋ｓＩＬ６Ｒ）＋／−ｃＣＬＢ８もしくは陰性コントロールとしての無関係の抗体
（Ｋ９３１）で刺激した。細胞ライセートを抗ＳＴＡＴ３で免疫沈降し、サンプルを７．５％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で分離し、そしてＨｙｂｏｎｄ−Ｐ膜に移し、その後に抗ホスホチロシン−ＨＲＰを用いてウェスタンブロッティングを続けた。検出にはＥＣＬｐｌｕｓを用いた。
【０２１８】
図４に示すデータは、ｃＣＬＢ８がそれをａ）ｓＩＬ６Ｒの添加の前にｒｈＩＬ６に結合させる、ｂ）ｒｈＩＬ６の添加の前にｓＩＬ６Ｒに結合させる場合に、もしくはｃ）ｒｈＩＬ６をｃＣＬＢ８および細胞の添加の前にｓＩＬ６Ｒに結合させる場合にＳＴＡＴ３のリン酸化を阻害できることを示す。ＴＨＰ−１細胞を血清なしの培地において１６時間インキュベーションし、フラスコからはがし、そして０．５ｍｌの培地に再懸濁した。レーン２〜６、ＩＬ６を＋／−抗体で１５分間インキュベーションし、次にｓＩＬ６Ｒを加え、そして１５分間インキュベーションした。細胞を加え、そしてさらに１５分インキュベーションした。レーン７、ＩＬ６をｓＩＬ６Ｒと１５分間インキュベーションし、次にＣＬＢ−ＩＬ６を加え、そして１５分間インキュベーションした。細胞を加え、そしてさらに１５分インキュベーションした。サンプルを抗ＳＴＡＴ３［１μｇ／ｍｌ］で免疫沈降し、Ｌａｅｍｍｌｉサンプルバッファーに再懸濁し、７．５％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で分離し、そしてＨｙｂｏｎｄ−Ｐに移した。膜を抗ホスホチロシン−ＨＲＰとインキュベーションした。
【０２１９】
ｃＣＬＢ８は血清アミロイド生産を阻害する。
【０２２０】
ＩＬ−１βは、ヒトＩＬ−６の存在下でＨｅｐＧ２ヒト肝臓癌細胞からの血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）生産の強力な誘導因子である（Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０：２９３−９（１９９２））。従って、ｃＣＬＢ８  Ｍａｂをこれらの細胞からのＩＬ−１β／ＩＬ−６誘発性ＳＡＡ生産を阻害する能力に関してアッセイした。簡潔に言えば、ＨｅｐＧ２細胞を２．２５ｘ１０５／ウェルで２４時間接種した。ＩＬ−６（１００ｎｇ／ｍｌ，ＲＤＩ）およびＩＬ−６ｓＲ（２００ｎｇ／ｍｌ，Ｓ＆Ｄ）を３０分間プレインキュベーションし、そしてＩＬ−１β（１ｎｇ／ｍｌ，Ｒ＆Ｄ）と混合した。ｃＣＬＢ８  Ｍａｂおよび陰性アイソタイプコントロールＭａｂ（ｃＳＦ２５）を連続希釈し、そして次に上記の混合物とさらに３０分間プレインキュベーションした。
【０２２１】
図５に示す実験結果では、ｃＣＬＢ８もしくはｃＳＦ２５（アイソタイプのマッチする無関係のＭａｂ）の連続希釈物をＩＬ−６ｓＲおよびＩＬ−１βとプレインキュベーションし、そして次にＨｅｐＧ２細胞と２４時間培養した。次に、細胞上清をＥＬＩＳＡにより血清アミロイドＡ生産レベルに関して分析した。（ヒトＳＡＡ  ＥＬＩＳＡキット，Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ，製造業者の使用説明書に従って行う）。エラーバーは、反復二重サンプルのＳＥＭを示す。図５のデータは、ｃＣＬＢ８がＨｅｐＧ２細胞からのＩＬ−１β／ＩＬ−６誘発性ＳＡＡ生産を用量依存的に阻害できたことを示す。
【０２２２】
ｃＣＬＢ８  ＭａｂによるＩＬ−６誘発性細胞増殖の阻害
マウスＢ骨髄腫細胞系、７ＴＤ１は、ＩＬ−６の存在下で増殖するように誘導される。ＩＬ−６の活性を中和するｃＣＬＢ８  Ｍａｂの能力を示すために、該細胞を１０％のＦＢＳおよび０．５ｎｇ／ｍＬの組み換えヒトＩＬ−６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含有するＩＭＤＭにおいて、そしてｃＣＬＢ８  Ｍａｂもしくは陰性コントロールＭａｂ  １７−１Ａの連続希釈物と３７℃で７２時間インキュベーションした。細胞増殖は、細胞数と直接相関関係がある発光ＡＴＰアッセイ（ＡＴＰＬｉｔｅ，Ｐａｃｋａｒｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）により測定した。
【０２２３】
図６に示すデータは、ＩＬ−６が７ＴＤ１細胞の増殖を劇的に刺激し、そしてｃＣＬＢ
８がこの細胞増殖を７．２ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０で濃度依存的に阻害したことを示す。エラーバーは、二重反復サンプルのＳＥＭを示す。＊は、ｒＩＬ−６なしの細胞の増殖を示す。
【０２２４】
実施例５：エピトープマッピング
ＣＬＢ８を含むいくつかの中和抗ＩＬ−６  Ｍａｂのエピトープは、Ｂｒａｋｅｎｈｏｆｆ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４５：５６１−５６８に記述されているようなヒトＩＬ−６突然変異体タンパク質への抗体結合を用いて特性化されている。アミノおよびカルボキシル末端欠失突然変異体を製造し、そしてＩＬ−６に対する抗体の一団を抗体競合実験により分析した。競合研究に基づいて中和Ｍａｂは２群（ＩおよびＩＩ）に分類された。この方法において、既定のＭａｂのエピトープに含まれる残基は、抗原性タンパク質の対応する部位特異的単一アミノ酸置換変異体をそれが認識できないことにより区別される。ＣＬＢ．ＩＬ−６／８は、ヒトＩＬ−６分子上の部位Ｉにマッピングされ、それは分子のカルボキシル末端に近接するアミノ酸Ｇｌｎ２９〜Ｌｅｕ３４からなる。さらなる研究（Ｋａｌａｉ，Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２４９，６９０−７００（１９９７））により、ＣＬＢ．ＩＬ−６／８はＩＬ−６Ｒ（ｇｐ８０）へのＩＬ−６の結合にとって重要なアミノ酸残基を認識することが示された。また、これらの研究により、そのエピトープがＩＬ−６分子のＡＢループおよびＤヘリックス領域の両方の末端を含むことも示された。
【０２２５】
実施例６：インビボ特性化
抗ヒトＩＬ−６（ｃＣＬＢ８）および抗マウスＩＬ−６マウスＭａｂでの処置は癌悪液質を遅らせる。
【０２２６】
ヒト黒色腫細胞（Ａ３７５Ｓ２）をメスのヌードマウスに接種し、そしてＭａｂ治療を同じ日に開始した。抗体は、１０ｍｇ／ｋｇ（２ｘ／週）の用量で腹腔内に注射し、そしてＣ５７（抗ＣＭＶ）をコントロールｍＡｂとして用いた。組み合わせた遮断を生み出すためにｃＣＬＢ８（抗ヒトＩＬ−６）およびＭＰ５２０Ｆ３（マウスＩＬ−６に対するＭａｂ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）の組み合わせを用い、コントロール抗体Ｃ５７処置動物と比較してヒト黒色腫腫瘍を保有する動物の体重減少を有意に抑制した（図７）。抗体治療は、腫瘍増殖もしくは最終腫瘍重量に影響を及ぼさなかった。これらの結果は、ＩＬ６が腫瘍により誘発される動物の体重減少に関与し、そしてＩＬ−６の遮断がこのモデルにおける癌悪液質を遅らせることができることを示す。
【０２２７】
図７．ヒトおよびマウスＩＬ６（抗ＩＬ６  ｍＡｂ  ｃＣＬＢ８およびＭＰ５２０Ｆ３）の組み合わせた遮断は、動物の体重減少の有意な抑制をもたらす。Ｙ軸上の修正された動物の体重減少は、（研究の終了時の動物体重−腫瘍重量）−研究の開始時の動物体重である。各バーは、少なくとも１４匹の動物／群からのデータの平均であり、そしてエラーバーは標準偏差を示す。両側ｔ検定解析により、抗ＩＬ−６群はｐ＝０．００７で体重減少を有意に抑制することが示された。
【０２２８】
実施例７：親和性測定
ＢＩＡｃｏｒｅ  ２０００，センサーチップＣＭ−５（チップ上の金表面をカルボキシメチル化デキストランマトリックスで被覆する）、ＨＢＳ（ｐＨ７．４で０．１５ＭのＮａＣｌ、３．４ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％の界面活性剤Ｐ２０を有する１０ｍＭのＨＥＰＥＳ）、アミンカップリング試薬（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−メチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）および１ＭエタノールアミンＨＣＬは、ＢＩＡｃｏｒｅから入手し、そして製造業者の使用説明書に従って調製した。抗ヒトＦｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗ヒトＩｇＧ，Ｆｃ□，Ｃａｔ＃１０９−００５−０９８，Ｌｏｔ＃４８６４６）は、Ｊａｃｋｓｏ
ｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈから購入した。
【０２２９】
５ｍｌの０．１５Ｍ塩化ナトリウム、０．０１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２中のキメラＣＬＢ８（Ｌｏｔ＃ＰＤ１Ｆ０３）ＩｇＧモノクローナル抗体は、Ｃｅｎｔｏｃｏｒによって製造された。組み換えヒトＩＬ−６（Ｌｏｔ＃Ａｌ１９７１１１）は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓから購入した。
【０２３０】
抗ヒトＦｃ（１．８ｍｇ／ｍｌ）をＮａＯＡｃバッファー（１０ｍＭ、ｐＨ４．８）において５０μｇ／ｍｌの濃度に希釈し、そしてＢＩＡｃｏｒｅ  ｓｙｓｔｅｍｓマニュアルに記述されているような製造業者のアミンカップリング化学を用いてＣＭ−５センサーチップのカルボキシメチル化デキストランマトリックスに連結した。１００００ＲＵを目標にする表面調製ウィザードを用いて、センサー表面上のカルボキシル基を最初にＮＨＳ／ＥＤＣで活性化し、続いて抗ヒトＦｃを加えた。残存する活性化基を１Ｍエタノールアミンの注入によりブロックした。フローセルの各々を個々に連結した。これらの条件を用いて、７５５４〜９５７１共鳴単位（ＲＵ）の抗ヒトＦｃを含有する４つのフローセル表面を調製した。予備実験において、１００ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４／０．０５％  ＣＨＡＰＳの３回の注入（３０μｌ／分で１５μｌ）は、結合した免疫グロブリンを効率よく取り除き、そして固定化した抗ヒトＦｃの結合能力を維持すると決定された。
【０２３１】
２つの実験をＢＩＡｃｏｒｅ  ２０００上で２５℃および３０μＬ／分の流速で行った。ｃＣＬＢ８を５μｇ／ｍｌでＨＢＳに溶解した。被検体、ＩＬ−６をＨＢＳに０．２５、０．１２５、０．０６２、０．０３１、および０．０１５μｇ／ｍｌで溶解した。指定量の抗体をそのそれぞれのフローセル上に流し、続いて３０μｌ／分で３０μｌの各ＩＬ−６濃度（結合相）および連続した８００秒のバッファーの流れ（解離相）を注入した。チップの表面は、１００ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４／０．０５％  ＣＨＡＰＳでの各々１５μｌの３回の逐次注入により再生させた。ＨＢＳの注入は、分析のバルク屈折率の除去の基準（ブランクセンソグラム（ｓｅｎｓｏｇｒａｍ））となる。ＢＩＡａｎａｌｙｓｉｓ  ３．０における１：１モデルを用いて、ローカルフィット（ｌｏｃａｌ  ｆｉｔ）を解離（Ｋｄ，［ｓ−１］）および結合（ｋａ，［Ｍ−１ｓ−１］）の両方に行い、そして解離定数（ＫＤ，［Ｍ］）を計算した（ｋｄ／ｋａ）。
【０２３２】
分析は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎバージョン３．０を用いて行った。速度定数は、相互作用メカニズムのモデルから得られる速度式に実験の曲線を適合させることによりセンソグラムデータから得た。ローカルＲＵｍａｘフィットで１：１結合モデルを用いる大域解析によりｋａ、ｋｄ、ｋＤを決定した（表１）。
【０２３３】
【表１】
0005583095.tif 000004
【０２３４】
実施例８：抗イディオタイプ抗体
ｃＣＬＢ８の有効なアッセイ系（免疫組織化学および血清検出）の開発は、抗イディオタイプ抗体の使用を必要とする。従って、血清検出および免疫組織化学アッセイにおける薬物動態学プローブとして利用することができるｃＣＬＢ８に対する抗イディオタイプ抗体を作製するためにＢａｌｂ／ｃマウスをｃＣＬＢ８で免疫感作する。
【０２３５】
免疫
６〜７週の年齢の５匹のＢａｌｂ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を５０μｇのＩＰおよび２５μｇのＳＣで与えるｃＣＬＢ８（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，ＰＤ１Ｆ０３）で１２週の期間にわたって免疫感作した。各マウスにＩＰおよびＳＣ注射を与えた。注射は、免疫処方計画の全体にわたって２週間隔であった。ＩＰ投与する注射材料は、等容量のフロイントアジュバント（Ｓｉｇｍａ）で乳化した。最初のＩＰ注射は、２００μｌの総容量で完全フロイントアジュバントを利用した。その後のＩＰ注射は、不完全フロイントアジュバントを含有した。ＳＣ投与する注射材料は、ＰＢＳに希釈し、そして１００μｌ／部位で２つの注入部位間で分けた。マウスから０、２１、４７、および７７日に血液を抜き取った。血液収集は、麻酔したマウスに後眼窩穿刺により行い、そしてｃＣＬＢ８固相ＥＩＡによる力価決定用に血清を集めた。免疫プロトコルの終了の３週後に、マウス＃１に１２５μｌのＰＢＳに希釈した１００μｇのｃＣＬＢ８の最終ＩＶブースター注射を与えた。
【０２３６】
マウスｃＣＬＢ８抗イディオタイプモノクローナル抗体の作製
ｃＣＬＢ８で免疫感作したＢａｌｂ／ｃマウス脾臓を利用する１つの融合は、ＥＩＡによってｃＣＬＢ８に特異的な７種の抗ｉｄ抗体の同定をもたらした。７種の抗ｉｄ抗体は、Ｃ２０７Ａ、Ｃ１２８Ａ、Ｃ１６８Ｊ、Ｃ１１６Ｊ、Ｃ３００Ａ、およびＣ３０１Ａのような他のマウス／ヒトキメラ抗体に結合しないことが示された。７種の抗体のうち６種はアイソタイプＩｇＧ１κのものであり、そして一つの抗体はＩｇＧ２ｂκであった。表１は、融合の結果を要約する。１：８００の最大血清力価は、４７日後のマウスにおいて得られ、そして免疫の期間の全体にわたって一定のままであったことに注目すべきである。
【０２３７】
アイソタイピング
抗体のアイソタイプ決定は、ディップスティック形式のマウスモノクローナル抗体アイソタイピングキット（Ｌｉｋｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて実施した。希釈バッファー、ハイブリドーマ上清、およびラット抗マウスコンジュゲートの混合物を様々な捕獲マウス抗体アイソタイプで前もって被覆したスティックを含有するチューブにおいて振盪しながらＲＴで一晩インキュベーションした。スティックをチューブから取り除き、ｄＨ２Ｏにおいて穏やかにすすぎ、そしてアイソタイプを決定した。
【０２３８】
【表２】
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【０２３９】
血清阻害アッセイ
ｃＣＬＢ８に結合する７種の抗ｉｄ抗体の能力へのプールした正常ヒト血清（ＮＨＳ）の影響を決定した。５０μｇ／ｍｌから開始する抗ｉｄ  Ｍａｂの２倍希釈物を０％、０．５％、５％、および５０％のＮＨＳの存在下で３７℃で３０分間インキュベーションした。混合物をｃＣＬＢ８被覆プレートに移し、そして３７℃で３０分間インキュベーションした。プレートを洗浄し、次にヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ  ＊ＨＲＰで調べた。抗ｉｄ
Ｍａｂのいずれも、ｃＣＬＢ８に結合するのを０％および０．５％のＮＨＳにより妨げられなかった。３種のＭａｂ（Ｃ４３３Ａ、Ｃ４３５Ａ、およびＣ４３７Ａ）は、５％のＮＨＳにより部分的結合阻害を示した。Ｃ４３４ＡおよびＣ４３６Ａを除いて全て、５０％のＮＨＳ濃度により有意に影響を受けた（図８Ａ〜Ｇ）。
【０２４０】
抗ｉｄ  ＭａｂによるＨｕＩＬ−６へのｃＣＬＢ８結合の阻害
ＨｕＩＬ−６へのｃＣＬＢ８結合を阻害する７種の抗ｉｄ抗体の能力を評価した。以前のＥＩＡ研究により、ｃＣＬＢ８はＨｕＩＬ−６被覆プレートに非常に弱く結合することが示されている。６〜２５倍の過剰の濃度の２種のＭａｂ（Ｃ４３５ＡおよびＣ４３７Ａ）は、ＨｕＩＬ−６へのｃＣＬＢ８結合の実質的に完全な阻害を示した。Ｃ４３４Ａは、２５倍過剰でのみｃＣＬＢ８の阻害効果を示した。ＨｕＩＬ−６へのｃＣＬＢ８の結合を阻害することに最も優れた２種の抗体は、Ｃ４３６ＡおよびＣ４３９Ａであった。これら２種の抗体は、３〜２５倍の過剰濃度範囲にわたってｃＣＬＢ８結合を完全に阻害することができた。Ｃ４３３ＡおよびＣ４３８Ａは、阻害活性を示さなかった（図９）。このアッセイは、予備研究で得られた結果を裏付けた。
【０２４１】
ＨｕＩＬ−６にあらかじめ結合したｃＣＬＢ８への抗ｉｄ結合
ＨｕＩＬ−６にあらかじめ結合したｃＣＬＢ８に結合する７種の抗ｉｄ抗体の能力を調べた。１０μｇ／ｍｌのｃＣＬＢ８をＨｕＩＬ−６プレート上で３７℃で３０分間インキュベーションした。プレートをすすぎ、次に１０μｇ／ｍｌから開始する抗ｉｄ  Ｍａｂの３倍希釈物と３７℃で３０分間インキュベーションした。プレートを洗浄し、次にヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ  ＊ＨＲＰで調べた。予備研究におけるように、Ｃ４３６ＡおよびＣ４３８Ａは、ＨｕＩＬ−６に前もって結合したｃＣＬＢ８に結合することができる唯一
の抗体であった。図１０は、ＨｕＩＬ−６にあらかじめ結合したｃＣＬＢ８に対する７種の抗ｉｄ抗体の結合能力を示す。
【０２４２】
要約すると、７種のモノクローナル抗イディオタイプ抗体が、マウス骨髄腫細胞とキメラ抗ヒトＩＬ−６抗体（ｃＣＬＢ８）で免疫感作したＢａｌｂ／ｃマウスからの脾臓細胞との融合から製造された。これらの抗ｉｄ抗体のうち５種（Ｃ４３４Ａ、Ｃ４３５Ａ、Ｃ４３６Ａ、Ｃ４３７Ａ、およびＣ４３９Ａ）は、ＨｕＩＬ−６へのｃＣＬＢ８結合を阻害することができた。２種の抗体（Ｃ４３６ＡおよびＣ４３８Ａ）は、ＨｕＩＬ−６にあらかじめ結合したｃＣＬＢ８に結合する能力を保有し、そして２種の抗体（Ｃ４３４ＡおよびＣ４３６Ａ）は、試験したＮＨＳのいずれの濃度によってもｃＣＬＢ８に結合することに実質的に影響を受けなかった。これらのｃＣＬＢ８抗イディオタイプ抗体の幅広い結合プロフィールは、それらのいくつかを血清検出および免疫組織化学アッセイにおける薬物動態学プローブとして用いる有力候補にする。
【０２４３】
本発明は、前述の説明および実施例に特に記述されているようなものとは別のやり方で実施できることが明らかである。
【０２４４】
本発明の多数の改変および変形は、上記の教示に照らして可能であり、従って、添付の請求項の範囲内である。
【０２４５】
以下に本発明の主な特徴と態様を列挙する。
【０２４６】
１．抗ＩＬ−６マウスモノクローナル抗体ＣＬＢ−８から得られる少なくとも一つの重鎖もしくは軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）および１つもしくはそれ以上のヒト抗体から得られる定常領域を含んでなるヒトＩＬ−６を阻害することができるキメラ、ヒト化もしくはＣＤＲ移植抗体もしくは抗体フラグメント。
【０２４７】
２．配列番号７もしくは８を含んでなる少なくとも一つの重鎖もしくは軽鎖可変領域を含んでなる１．に記載のＩＬ−６抗体。
【０２４８】
３．抗ＩＬ−６マウスＣＬＢ−８もしくはそれと実質的に同じ結合特性を有する抗体のヒトＩＬ−６への結合をインビボにおいて競合的に阻害する１．に記載の抗体。
【０２４９】
４．少なくとも１０−９Ｍの親和性（Ｋｄ）でＩＬ−６に結合する１．に記載のＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体。
【０２５０】
５．少なくとも１０−１１Ｍの親和性（Ｋｄ）でＩＬ−６に結合する１．に記載のＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体。
【０２５１】
６．少なくとも１０−１２Ｍの親和性（Ｋｄ）で結合する１．に記載のＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体。
【０２５２】
７．該抗体が抗ＩＬ−６マウスモノクローナル抗体ＣＬＢ−８から得られる少なくとも一つの重鎖もしくは軽鎖可変領域および１つもしくはそれ以上のヒト抗体から得られる定常領域を含んでなるキメラ抗体である、１．に記載のＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体。
【０２５３】
８．少なくとも一つのＩＬ−６の少なくとも一つの活性を実質的に中和する７．に記載のＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体。
【０２５４】
９．該活性が、ＳＫＷ６．４細胞からのＩｇＭミュー分泌の阻害、ＩＬ−６媒介ＭＣＰ−１生産の阻害、ＴＨＰ−１ヒト単球性白血病細胞におけるＩＬ−６シグナル伝達の阻害、ＨｅｐＧ２細胞からのＩＬ−６誘発性血清アミロイドＡ生産の阻害、およびｒｈＩＬ−６誘発性細胞増殖の阻害よりなる群から選択される少なくとも一つである、８．に記載のＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体。
【０２５５】
１０．配列番号：１、２、３、４、５、６の少なくとも一つの連続したヌクレオチドの少なくとも９０〜１００％に対応するかもしくは相補的な少なくとも一つの相補性決定領域（ＣＤＲ）をコードする配列を含んでなるキメラ、ヒト化もしくはＣＤＲ移植抗体またはその特定の部分もしくは変異体をコードする核酸にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするか、もしくは少なくとも９５％の同一性を有する核酸を含んでなる、単離されたＩＬ−６抗体をコードする核酸。
【０２５６】
１１．該核酸が配列番号：１、２、３、４、５、６の少なくとも一つの連続したヌクレオチドの少なくとも９０〜１００％に対応するかもしくは相補的な少なくとも一つの相補性決定領域（ＣＤＲ）をコードする配列を含んでなる、１０．に記載の単離されたＩＬ−６抗体をコードする核酸。
【０２５７】
１２．配列番号７もしくは８を含んでなる少なくとも一つの可変領域を有する少なくとも一つの抗ＩＬ−６抗体をコードする１０．に記載の単離された核酸。
【０２５８】
１３．１１．もしくは１２．に記載の核酸によりコードされる単離された抗体または特定の部分もしくは変異体を含んでなる、単離されたＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体。
【０２５９】
１４．１０．に記載の単離された核酸および担体もしくは希釈剤を含んでなる、ＩＬ−６抗体をコードする核酸組成物。
【０２６０】
１５．１０．に記載の核酸を含んでなる抗体ベクター。
【０２６１】
１６．該ベクターが、後期もしくは初期ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ  ｔｋプロモーター、ｐｇｋ（ホスホグリセリン酸キナーゼ）プロモーター、ヒト免疫グロブリンプロモーターもしくはＥＦ−１アルファプロモーターよりなる群から選択される少なくとも一つのプロモーターを含んでなる１５．に記載の抗体ベクター。
【０２６２】
１７．該ベクターが、メトトレキセート（ＭＴＸ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）、ネオマイシン（Ｇ４１８）、もしくはグルタミン合成酵素（ＧＳ）の少なくとも一つから選択される少なくとも一つの選択遺伝子もしくはその一部を含んでなる１５．に記載の抗体ベクター。
【０２６３】
１８．１０．に記載の単離された核酸を含んでなる宿主細胞。
【０２６４】
１９．該宿主細胞が、ＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１、ＣＨＯ、ＢＳＣ−１、Ｈｅｐ  Ｇ２、６５３、ＳＰ２／０、２９３、ＨｅＬａ、骨髄腫、もしくはリンパ腫細胞、またはその任意の誘導体、不死化もしくはトランスフォームした細胞から選択される少なくとも一つである１８．に記載の宿主細胞。
【０２６５】
２０．ＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体が検出可能なもしくは回収可能な量で発現されるように、インビトロ、インビボもしくはｉｎ  ｓｉｔｕにおける条件下で、１０．に記載の核酸もしくはストリンジェントな条件下でそれにハイブリダイズする内因
性核酸を翻訳することを含んでなる、少なくとも一つのＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体を製造する方法。
【０２６６】
２１．１．に記載の単離されたＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体、および担体もしくは希釈剤を含んでなる、ＩＬ−６抗体組成物または特定の部分もしくは変異体の組成物。
【０２６７】
２２．ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ剤、筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔剤、鎮静剤、局所麻酔剤、神経筋遮断薬、抗菌薬、乾癬治療薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、糖尿病関連薬、ミネラル、栄養、甲状腺薬、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止痢薬、鎮咳薬、制吐薬、抗潰瘍薬、下剤、抗凝血剤、エリスロポエチン、フィルグラスチム、サルグラモスチム（ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）、免疫化薬、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様筋調節薬、アルキル化剤、代謝拮抗剤、分裂抑制剤、放射性医薬品、抗欝薬、抗躁病薬、抗精神病薬、抗不安薬、睡眠薬、交感神経刺激薬、興奮剤、ドネペジル、タクリン、喘息薬、ベータアゴニスト、吸入用ステロイド、ロイコトリエンインヒビター、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンもしくは類似物、ドルナーゼアルファ、サイトカイン、サイトカインアンタゴニストの少なくとも一つから選択される少なくとも一つの化合物もしくはタンパク質をさらに含んでなる２１．に記載の組成物。
【０２６８】
２３．１．に記載の少なくとも一つのＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体の少なくとも一つの選択される免疫調節有効量を細胞、組織、臓器もしくは動物と接触させることもしくはそれに投与することを含んでなる、細胞、組織、臓器もしくは動物における免疫障害もしくは疾患を処置する方法。
【０２６９】
２４．該動物が霊長類である２３．に記載の方法。
【０２７０】
２５．該霊長類がサルもしくはヒトである２４．に記載の方法。
【０２７１】
２６．該免疫障害が、関節リウマチ／血清反応陰性関節症、変形性関節症、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、特発性肺線維症、全身性脈管炎／ヴェーゲナー肉芽腫症、サルコイドーシス、精巣炎／精管切除術を戻す処置、アレルギー性／アトピー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性結膜炎、過敏性肺炎、移植、臓器移植拒絶反応、移植片対宿主疾患、全身性炎症反応症候群、敗血症症候群、グラム陽性敗血症、グラム陰性敗血症、培養陰性敗血症、真菌敗血症、好中球減少熱（ｎｅｕｔｒｏｐｅｉｃ  ｆｅｖｅｒ）、尿路性敗血症、髄膜炎菌血症、外傷／出血、熱傷、電離放射線の暴露、急性膵炎、成人呼吸窮迫症候群、全身性エリテマトーデスおよび関節リウマチ、アルコール性肝炎、慢性炎症性病状、サルコイドーシス、クローン病、鎌状赤血球貧血、糖尿病、ネフローゼ、アトピー性疾患、超過敏反応、アレルギー性鼻炎、花粉症、通年性鼻炎、結膜炎、喘息、蕁麻疹、全身アナフィラキシー、皮膚炎、悪性貧血、溶血性疾患、血小板減少症、任意の臓器もしくは組織の移植片拒絶反応、腎臓移植拒絶反応、心臓移植拒絶反応、肝臓移植拒絶反応、膵臓移植拒絶反応、肺移植拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反応、皮膚同種移植片拒絶反応、軟骨移植拒絶反応、骨移植片拒絶反応、小腸移植拒絶反応、胎児胸腺移植片拒絶反応、副甲状腺移植拒絶反応、任意の臓器もしくは組織の異種移植片拒絶反応、同種移植片拒絶反応、抗受容体超過敏反応、グレーブス病、レーノー病、Ｂ型インシュリン抵抗性糖尿病、喘息、重症筋無力症、抗体媒介性細胞傷害、ＩＩＩ型超過敏反応、全身性エリテマトーデス、天疱瘡、強皮症、混合結合組織病、特発性アジソン病、糖尿病、慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、白斑、脈管炎、心筋梗塞心術後症候群、ＩＶ型過敏症、接触皮膚炎、
過敏性肺炎、同種移植片拒絶反応、細胞内生物体による肉芽腫、薬物過敏、代謝性／特発性、ウィルソン病、ヘマクロマトーシス（ｈｅｍａｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ）、アルファ−１−アンチトリプシン欠損症、糖尿病、橋本甲状腺炎、骨粗しょう症、視床下部−下垂体−副腎軸評価、原発性胆汁性肝硬変、甲状腺炎、脳脊髄炎、悪液質、嚢胞性線維症、家族性血球貪食性（ｈｅｍａｔｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ）リンパ組織球増多症、皮膚病変、乾癬、脱毛、ネフローゼ症候群、腎炎、血液透析、尿毒症、毒性、ｏｋｔ３療法、抗ｃｄ３療法、サイトカイン療法、化学療法、放射線療法（例えば、無力症、貧血、悪液質などが包含されるがこれらに限定されるものではない）、慢性サリチル酸中毒から選択される少なくとも一つである２５．に記載の方法。
【０２７２】
２７．該有効量が、該細胞、組織、臓器もしくは動物のキログラム当たり０．００１〜５０ｍｇである２３．に記載の方法。
【０２７３】
２８．該有効量が、該細胞、組織、臓器もしくは動物のキログラム当たり０．０００１〜５０ｍｇである２３．に記載の方法。
【０２７４】
２９．１．に記載の少なくとも一つのＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体の選択される感染調節有効量を細胞、組織、臓器もしくは動物と接触させることもしくはそれに投与することを含んでなる、細胞、組織、臓器もしくは動物における少なくとも癌性疾患もしくは症状を調節する方法。
【０２７５】
３０．該動物が霊長類である２９．に記載の方法。
【０２７６】
３１．該霊長類がサルもしくはヒトである３０．に記載の方法。
【０２７７】
３２．該感染性もしくは癌性の疾患もしくは症状が、白血病、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞、Ｔ細胞もしくはＦＡＢ  ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、リンパ腫、ホジキン病、悪性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、結腸直腸癌、膵癌、腎細胞癌、前立腺細胞癌、鼻咽頭癌、悪性組織球増殖症、腫瘍随伴症候群／悪性高カルシウム血症、充実性腫瘍、腺癌、肉腫、および悪性黒色腫から選択される少なくとも一つである２９．に記載の方法。
【０２７８】
３３．該有効量が、該細胞、組織、臓器もしくは動物のキログラム当たり０．０１〜１００ｍｇである２３．に記載の方法。
【０２７９】
３４．該接触させることもしくは該投与することが、静脈内、筋肉内、ボーラス、皮下、呼吸器、吸入、膣、直腸、口腔内、舌下、鼻腔内、もしくは経皮から選択される少なくとも一つの形態による２３．〜３３．のいずれかに記載の方法。
【０２８０】
３５．該（１）接触させることもしくは投与することの前に、同時にもしくは後に、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ剤、筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔剤、鎮静剤、局所麻酔剤、神経筋遮断薬、抗菌薬、乾癬治療薬、コルチコステロイド、タンパク同化ステロイド、糖尿病関連薬、ミネラル、栄養、甲状腺薬、ビタミン、カルシウム関連ホルモン、止痢薬、鎮咳薬、制吐薬、抗潰瘍薬、下剤、抗凝血剤、エリスロポエチン、フィルグラスチム、サルグラモスチム、免疫化薬、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、エストロゲン受容体モジュレーター、散瞳薬、毛様筋調節薬、アルキル化剤、代謝拮抗剤、分裂抑制剤、放射性医薬品、抗欝薬、抗躁病薬、抗精神病薬、抗不安薬、睡眠薬、交感神経刺激薬、興奮剤、ドネペジル
、タクリン、喘息薬、ベータアゴニスト、吸入用ステロイド、ロイコトリエンインヒビター、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフリンもしくは類似物、ドルナーゼアルファ、サイトカイン、サイトカインアンタゴニストの少なくとも一つから選択される少なくとも一つの化合物もしくはタンパク質の治療的に有効な量を含んでなる少なくとも一つの組成物を投与することをさらに含んでなる２３．〜３３．のいずれかに記載の方法。
【０２８１】
３６．１．に記載の少なくとも一つのＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体を含んでなる医療装置であって、該少なくとも一つのＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体を静脈内、筋肉内、ボーラス、皮下、呼吸器、吸入、膣、直腸、口腔内、舌下、鼻腔内、もしくは経皮から選択される少なくとも一つの様式により接触させることもしくは投与することに適当な装置。
【０２８２】
３７．１．に記載のＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体と同じエピトープもしくは抗原性領域に結合するヒト抗体またはその特定の部分もしくは変異体。
【０２８３】
３８．１．に記載の少なくとも一つのＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体、ならびに滅菌水、滅菌緩衝水から選択される少なくとも一つ、または水性希釈剤中のフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム、アルキルパラベン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、もしくはその混合物よりなる群から選択される少なくとも一つの防腐剤を含んでなる製剤。
【０２８４】
３９．ＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体の濃度が約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌである３８．の製剤。
【０２８５】
４０．等張剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃｉｔｙ  ａｇｅｎｔ）をさらに含んでなる３９．の製剤。
【０２８６】
４１．生理的に許容しうるバッファーをさらに含んでなる３９．の製剤。
【０２８７】
４２．第一の容器中の凍結乾燥形態の１．に記載の少なくとも一つのＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体、ならびに滅菌水、滅菌緩衝水、または水性希釈剤中のフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム、アルキルパラベン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、もしくはその混合物よりなる群から選択される少なくとも一つの防腐剤を含んでなる任意の第二の容器を含んでなる製剤。
【０２８８】
４３．ＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体の濃度が、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５００ｍｇ／ｍｌの濃度に再構成される４２．の製剤。
【０２８９】
４４．等張剤をさらに含んでなる４２．の製剤。
【０２９０】
４５．生理的に許容しうるバッファーをさらに含んでなる４２．の製剤。
【０２９１】
４６．３８．に記載の製剤を処置を必要とする患者に投与することを含んでなる、少なくとも一つのＩＬ−６媒介症状を処置する方法。
【０２９２】
４７．４２．に記載の製剤を処置を必要とする患者に投与することを含んでなる、少なく
とも一つのＩＬ−６媒介症状を処置する方法。
【０２９３】
４８．包装材料および１．に記載の少なくとも一つのＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体の溶液もしくは凍結乾燥形態を含んでなる容器を含んでなるヒト製薬学的用途の製品。
【０２９４】
４９．該容器が、複用投与用のストッパーを有するガラスもしくはプラスチック容器である４９．の製品。
【０２９５】
５０．該容器が、穴をあけそして静脈内、筋肉内、ボーラス、腹腔内、皮下、呼吸器、吸入、鼻、膣、直腸、口腔内、舌下、鼻腔内、皮下、もしくは経皮に用いることができるブリスター包装である４９．の製品。
【０２９６】
５１．該容器が、静脈内、筋肉内、ボーラス、腹腔内、皮下、呼吸器、吸入、鼻、膣、直腸、口腔内、舌下、鼻腔内、皮下、もしくは経皮送達装置もしくは系の成分である４９．の製品。
【０２９７】
５２．該容器が、静脈内、筋肉内、ボーラス、腹腔内、皮下、呼吸器、吸入、鼻、膣、直腸、口腔内、舌下、鼻腔内、皮下、もしくは経皮用のインジェクターもしくはペンインジェクター装置もしくは系の成分である４９．の製品。
【０２９８】
５３．１．に記載の少なくとも一つのＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体を食塩水もしくは塩を含有する少なくとも一つのバッファーにおいて混合することを含んでなる、少なくとも一つのＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体の製剤を製造する方法。
【０２９９】
５４．１．に記載の少なくとも一つのＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体を製造する方法であって、該抗体または特定の部分もしくは変異体を回収可能な量で発現することができる宿主細胞またはトランスジェニック動物またはトランスジェニック植物もしくは植物細胞を準備することを含んでなる方法。
【０３００】
５５．該宿主細胞が哺乳類細胞、植物細胞もしくは酵母細胞である５４．に記載の方法。
【０３０１】
５６．該トランスジェニック動物が哺乳類である５４．に記載の方法。
【０３０２】
５７．該トランスジェニック哺乳動物が、ヤギ、ウシ、ヒツジ、ウマ、および非ヒト霊長類から選択される５６．に記載の方法。
【０３０３】
５８．１．に記載の少なくとも一つの抗体を発現するトランスジェニック動物もしくは植物。
【０３０４】
５９．５４．に記載の方法により製造される少なくとも一つのＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体。
【０３０５】
６０．ヒトＩＬ−６のアミノ酸Ｇｌｎ２９〜Ｌｅｕ３４の少なくとも１〜３個を含んでなる少なくとも一つのエピトープに特異的に結合する、マウス可変領域およびヒト定常領域を含んでなる単離されたＩＬ−６キメラ、ヒト化もしくはＣＤＲ移植抗体または特定の部分もしくは変異体。
【０３０６】
６１．少なくとも１０−９Ｍの親和性でＩＬ−６に結合する６０．に記載のＩＬ−６抗体
または特定の部分もしくは変異体。
【０３０７】
６２．少なくとも１０−１１Ｍの親和性でＩＬ−６に結合する６０．に記載のＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体。
【０３０８】
６３．少なくとも１０−１２Ｍの親和性で結合する６０．に記載のＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体。
【０３０９】
６４．少なくとも一つのＩＬ−６の少なくとも一つの活性を実質的に中和する、６０．に記載のＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体。
【０３１０】
６５．該活性が、ＩＬ−６誘発性ＩＦＮ−ガンマ分泌の阻害、ＬＡＫ細胞細胞傷害の阻害、ＩＦＮガンマｍＲＮＡ転写の阻害、細胞内ＩＦＮガンマＣＤ３＋細胞、およびＣＤ９５発現の阻害よりなる群から選択される少なくとも一つである、６４．に記載のＩＬ−６抗体または特定の部分もしくは変異体。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図８Ｇ】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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