(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式Ｉの化合物並びに薬学的に許容できるその塩、溶媒和物及びエステルプロドラッグから選択される化合物:
【化１】
0005449767.tif 000042
（式中、
Ｒ1はＣ1〜6アルキル及びシクロ（Ｃ3〜Ｃ6）アルキルよりなる群から選択され、ここで、Ｃ1〜6アルキルは、非置換であるか又は１個以上のハロ基で置換されており；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃ1〜6アルキル及びＣ2〜6アルケニルよりなる群から選択され、ここで、Ｃ1〜6アルキル及びＣ2〜6アルケニルは、非置換であるか又は１個以上のハロ基で置換され若しくはＣ1〜4アルキル、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＨ、ハロ、ＮＨ2、ＮＨＣ1〜4アルキル及びＮ（Ｃ1〜4アルキル）（Ｃ1〜4アルキル）から独立して選択される１〜４個の基で置換され；
Ｒ3は、ＯＨ及びハロよりなる群から選択され； 及び
Ｒ4は、両方ともＨであるか又は一緒になって＝ＣＨ2を形成するかのいずれかである。）であって、該エステルプロドラッグは、Ｒ2がＯＨ置換基を有する場合にはＲ2、Ｃ−３位のヒドロキシル基、Ｒ3がＯＨの場合にはＲ3及びそれらの組み合わせから選択されるヒドロキシル基をアシル化することによって形成されたものであり、しかも該エステルプロドラッグは、フェニルエステル、脂肪族（Ｃ8−Ｃ24）エステル、アシルオキシメチルエステル、カルバメート及びアミノ酸エステル並びにそれらの組み合わせから選択される、前記化合物。
【請求項２】
Ｒ1がＣＦ3、Ｃ（ＣＦ3）3、シクロプロピル及びｔ−ブチルから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ1がｔ−ブチルである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ2がＣＨ3、エチル及びアリルよりなる群から選択される、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ2がＣＨ3である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ3がＯＨ及びフルオルよりなる群から選択される、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ3がＯＨである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ4が一緒になってＣＨ2を形成している、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
前記オキシムのＣ＝Ｎ二重結合についての幾何学的配置がトランスである、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
次の相対立体配置：
【化２】
0005449767.tif 000043
を有する請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１】
Ｃ−２０での立体配置がＲである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
次の化合物：
【化３】
0005449767.tif 000044
【化４】
0005449767.tif 000045
【化５】
0005449767.tif 000046
よりなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記オキシムの二重結合がＥ配置の状態である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１４】
１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の異化を阻害することが有効な疾患を治療するための医薬組成物であって、請求項１〜１３のいずれかに記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項１５】
前記疾患が癌、皮膚科系疾患、副甲状腺疾患、免疫疾患及び骨疾患よりなる群から選択される、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記疾患が癌、乾癬、二次性副甲状腺機能亢進症及び骨粗鬆症よりなる群から選択される、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記疾患が癌である、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
ビタミンＤ受容体アゴニストの有効性を増大させるための医薬組成物であって、請求項１〜１３のいずれかに記載の化合物及びビタミンＤ受容体アゴニストを含む医薬組成物。
【請求項１９】
前記ビタミンＤ受容体アゴニストが１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（カルシトリオール）である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
癌、皮膚科系疾患、副甲状腺疾患、自己免疫疾患及び骨疾患の一つ以上から選択される疾患を治療するために使用される、請求項１８又は１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記疾患が癌、乾癬、副甲状腺機能亢進症、二次性副甲状腺機能亢進症及び骨粗鬆症よりなる群から選択される、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記疾患が癌である、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
癌、皮膚科系疾患、副甲状腺疾患、自己免疫疾患又は骨疾患を治療するための医薬組成物であって、請求項１〜１３のいずれかに記載の化合物と、癌、皮膚科系疾患、副甲状腺疾患、自己免疫疾患又は骨疾患を治療するための１種以上の治療剤との組み合わせを含む医薬組成物。
【請求項２４】
ビタミンＤ受容体アゴニストの投与が有効な疾患を治療するための医薬組成物であって、請求項１〜１３のいずれかに記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項２５】
ビタミンＤ受容体アゴニストの投与が有効な疾患が、癌、皮膚科系疾患、副甲状腺疾患、自己免疫疾患及び骨疾患よりなる群から選択される、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１〜１３のいずれかに記載の化合物と医薬上許容できるキャリアーとを含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＮＩＨ認可番号ＣＡ４４５３０に基づく政府支援でなされた。当該政府は、本発明における所定の権利を具備する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、酵素ＣＹＰ２４の選択的阻害を示し且つ低血漿カルシウム上昇性及び抗増殖性であるホルモンの１α，２５− ヒドロキシビタミンＤ3の新規なアナログ、これらのものを含有する医薬組成物及び診断用組成物、並びにそれらの医学的用途、特に癌、皮膚科疾患、骨疾患、上皮小体疾患、免疫学的疾患、創傷治癒及び骨粗鬆症の治療及び／又は予防に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ビタミンＤの代謝経路は、所定の段階で高度に調節され且つ副甲状腺ホルモンの分泌を制御する代謝産物を産生する生命維持に必要な内分泌系の一部である（Beckman，M.及びDeLuca，H.（1997）Methods in Enzymol. 282，200-223; Jones，G.，Strugnell，S.及びDeLuca，H.（1998）Physiol．Rev．78，1193-1231）。また、カルシトリオール（以下参照）としても知られている、ビタミンＤ経路で生成されるホルモンの１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3は、血中のホスフェートレベル及びカルシウムレベルを調節し（言い換えると、 骨量すなわち骨の状態を調節する）、且つ、肌における細胞分化及び免疫系に影響を与える（Armbrecht，H.J.，Okuda，K.，Wongsurawat，N.，Nemani，R.，Chen，M.及びBoltz，M.（1992）J．Steroid Biochem．Molec．Biol．43，1073-1081）。ビタミンＤ経路におけるシトクロムＰ４５０は、通常ビタミンＤ3の１、２５及び２４位でのヒドロキシル化によって官能基を導入する酵素である（Beckman，M.及びDeLuca，H.（1997）Methods in Enzymol．282，200-223）。
【化１】
0005449767.tif 000002
１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3は、ＣＹＰ２４として知られているミトコンドリアＰ４５０によって１α，２４，２５−トリヒドロキシ−Ｄ3に変換される（Bell，N.H.,（1998）J Bone Miner．Res．13,350-35211）。ＣＹＰ２４は１α，２５−ジヒドロキシ−Ｄ3によって誘導され、腎臓並びに他のビタミンＤ標的組織、例えば、上皮小体細胞、ケラチン生成細胞、骨芽細胞及び腸細胞中に見いだされる（Jones，G.，Strugnell，S.及びDeLuca，H.（1998）Physiol．Rev．78，1193-1231）。１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（1,２５−Ｄ3）は、正常細胞及び腫瘍細胞（例えば、前立腺癌細胞）に増殖抑制効果及び増殖調節効果を及ぼす際に重要な役割を果たす。１，２５−Ｄ3アナログを有効な薬剤として臨床上使用するには、増殖抑制活性と分化促進活性とが必要である。
【０００４】
完全に飽和したＤ環側鎖を有する１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3のオキシムエーテルアナログが米国特許第６，９８２，２５８号に記載されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
望ましい薬理学的活性を選択的に示すが、抗カルシウム血活性及び他の望ましくない活性を示さない１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の合成アナログに対する要望が引き続き存在している。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
発明の概略
酵素ＣＹＰ２４の選択的阻害、抗増殖活性を示し且つ血漿カルシウム上昇性の低い、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の新規な１６，２３−ジエン−２５−オキシムエーテルアナログを調製した。従って、本発明は、次式Ｉの化合物、薬学的に許容できるその塩、溶媒和物及びプロドラッグから選択される化合物を含む:
【化２】
0005449767.tif 000003
（式中、
Ｒ1はＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜6アルケニル、シクロ（Ｃ3〜Ｃ7）アルキル及びシクロ（Ｃ3〜Ｃ7）アルケニルよりなる群から選択され、ここで、Ｃ1〜6アルキル及びＣ2〜6アルケニル は、非置換であるか又は１個以上のハロ基で置換され若しくはＣ1〜4アルキル、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＣ1〜4アルキル及びＮ（Ｃ1〜4アルキル）（Ｃ1〜4アルキル）から独立して選択される１〜４個の基で置換されており、また、シクロ（Ｃ3〜Ｃ6）アルキル及びシクロ（Ｃ3〜Ｃ6）アルケニルは非置換であるか、又はＣ1〜4アルキル、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＨ、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ハロ、ＳＨ、ＳＣ1〜4アルキル、ＮＨ2、ＮＨＣ1〜4アルキル、Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）（Ｃ1〜4アルキル）、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣ1〜4アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ1〜4アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、ＯＣ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、ＳＯＣ1〜4アルキル、ＳＯ2Ｃ1〜4アルキル、ＳＯ2ＮＨＣ1〜4アルキル及びＳＯ2ＮＨ2から独立して選択される１〜５個の基で置換されており；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃ1〜6アルキル及びＣ2〜6アルケニルよりなる群から選択され、ここで、Ｃ1〜6アルキル及びＣ2〜6アルケニルは、非置換であるか又は１個以上のハロ基で置換され若しくはＣ1〜4アルキル、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＨ、ハロ、ＮＨ2、ＮＨＣ1〜4アルキル及びＮ（Ｃ1〜4アルキル）（Ｃ1〜4アルキル）から独立して選択される１〜４個の基で置換され；
Ｒ3は、ＯＨ、ＯＣ1〜6アルキル及びハロよりなる群から選択され； 及び
Ｒ4は、両方ともＨであるか又は一緒になって＝ＣＨ2を形成するかのいずれかである。）。
【０００７】
好適には、本発明の化合物は、天然１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の立体配置を有する。従って、ある実施形態では、本発明は、以下に示すように、式Ｉの化合物並びに薬学的に許容できるその塩、溶媒和物及びプロドラッグから選択される化合物を含む:
【化３】
0005449767.tif 000004
（式中、
Ｒ1〜Ｒ4は上に定義した通りである。）。ある実施形態では、本発明の化合物は、オキシム二重結合でＥ立体配置を有する。
【０００８】
本発明の別の態様によれば、本発明の化合物と薬学的に許容できるキャリア又は希釈剤とを含む医薬組成物が包含される。
【０００９】
１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3を代謝する酵素のＣＹＰ２４を選択的に調節することによって、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3のレベルも調節される。従って、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3レベルの調節が有効である疾患は、ＣＹＰ２４の修飾因子を使用して治療できる。ＣＹＰ２４に優先的に作用させることにより、他の酵素及び受容体との相互作用で生じる副作用が低減するであろう。従って、本発明は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3レベルの調節が有効である疾患の治療方法であって、本発明の化合物の有効量をその治療が必要な細胞又は動物に投与することを含むものを提供する。また、本発明は、本発明の化合物の、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3レベルの調節が有効な疾患を治療するための使用も包含する。さらに、本発明は、本発明の化合物の、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3レベルの調節が有効な疾患を治療するための医薬品を製造するための使用を包含する。
【００１０】
ＣＹＰ２４を抑制すると、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の異化反応が阻害されるが、これは、このホルモンの生物学的寿命を長くし、そのため、有効な疾患治療のためにこのホルモンを少量しか使用しないことが可能になる。このようなさらに少量の投与量は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（カルシトリオール）の医学的使用に関連した高カルシウム血毒性を回避し、又は少なくとも最小にする。従って、さらなる実施形態では、本発明は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の異性化反応を阻害することが有効な疾患の治療方法であって、本発明の化合物の有効量をその治療が必要な細胞又は動物に投与することを含むものを包含する。また、本発明は、本発明の化合物の、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の異性化反応の阻害が有効な疾患を治療するための使用も包含する。さらに、本発明は、本発明の化合物の、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の異性化反応の阻害が有効な疾患を治療するための医薬品を製造するための使用を包含する。
【００１１】
１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3レベルの調節が有効であり得る疾患としては、
（ｉ）副甲状腺では、副甲状腺機能亢進症及び副甲状腺機能低下症、偽性副甲状腺機能低下症及び二次性副甲状腺機能亢進症；
（ii）膵臓では糖尿病；
（iii）甲状腺では髄様癌；
（iv）肌では乾癬及び創傷治癒；
（ｖ）肺ではサルコイドーシス及び結核；
（vi）腎臓では慢性腎疾患、低リン酸血症性ビタミンＤ依存性クル病及びビタミンＤ依存性クル病；
（vii）骨では、抗けいれん治療、骨線維形成不全症、嚢胞性線維性骨炎、骨軟化症、骨粗鬆症、骨減少症、骨硬化症、腎性骨異栄養症及びクル病；
（viii）腸では、グルココルチコイドアンタゴニズム、突発性高カルシウム血症、吸収不良症候群、脂肪便及び熱帯性下痢
が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１２】
式Ｉの化合物又はその塩、溶媒和物若しくはプロドラッグは、単独で使用することやＣＹＰ２４活性を調節する他の薬剤と併用することができ、又は細胞増殖性疾患或いは１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3レベルの調節及び／又は１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の異化反応の阻害が有効な他の疾患のための他のタイプの治療と併用できる。好適には、式Ｉの化合物は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（カルシトリオール）又は別のビタミンＤ受容体アゴニストと共に投与される。従って、本発明は、ビタミンＤ受容体アゴニスト、好適には１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（カルシトリオール）の有効性を増大させる方法であって、本発明の化合物の有効量とビタミンＤ受容体アゴニスト、好適には１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（カルシトリオール）の有効量とを同時に投与することを含むものを包含する。さらに、本発明は、ビタミンＤ受容体アゴニスト、好適には１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（カルシトリオール）の有効性を増大させるための本発明の化合物の使用、及びビタミンＤ受容体アゴニスト、好適には１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（カルシトリオール）の有効性を増大させるための医薬品を製造するための本発明の化合物の使用を包含する。
【００１３】
本発明のさらなる態様によれば、本発明の化合物の有効量をその治療が必要な細胞又は動物に投与することを含む細胞増殖性疾患の治療方法が包含される。また、本発明は、本発明の化合物の、細胞増殖性疾患を治療するための使用を包含する。さらに、本発明は、本発明の化合物の、細胞増殖性疾患を治療するための医薬品、好適には細胞増殖を阻害するための医薬品を製造するための使用を包含する。
【００１４】
ある実施形態では、本発明は、癌細胞の増殖の阻害方法であって、本発明の化合物の有効量をその治療が必要な細胞又は動物に投与することを含むものも包含する。本発明は、本発明の化合物の、癌細胞の増殖を阻害するための使用も包含する。本発明は、さらに、本発明の化合物の、癌細胞の増殖を阻害するための医薬品を製造するための使用を包含する。
【００１５】
本発明の化合物による細胞増殖の阻害は、ＣＹＰ２４の阻害以外の機構でも達成できることに留意すべきである。
【００１６】
さらなる態様では、本発明は、ＣＹＰ２４活性を調節する、好適にはＣＹＰ２４活性を阻害することが有効な疾患の治療方法であって、本発明の化合物の有効量をその治療が必要な細胞又は動物に投与することを含むものを包含する。本発明は、本発明の化合物の、ＣＹＰ２４活性の調節、好適には阻害が有効な疾患を治療するための使用も包含する。本発明は、さらに、本発明の化合物の、ＣＹＰ２４活性の調節、好適には阻害が有効な疾患を治療するための医薬品を製造するための使用を包含する。
【００１７】
本発明の他の特徴及び利益は、次の詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、本発明の好ましい実施形態を示す詳細な説明及び具体例は、当業者であれば本発明の精神及び範囲内で当該詳細な説明から様々な変更及び改良をなすことは明らかであるため、単なる例示にすぎないことを理解すべきである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
発明の詳細な説明
Ｉ．定義
ここで使用するときに、用語「Ｃ1〜nアルキル」とは、１〜ｎ個の炭素原子を含有する直鎖及び／又は分岐鎖の飽和アルキル基を意味し、これには、（ｎに応じて）メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、２，２−ジメチルブチル、ｎ−ペンチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、ｎ−ヘキシルなどが包含される。
【００１９】
ここで使用するときに、用語「Ｃ2〜nアルケニル」とは、２〜ｎ個の炭素原子及び１又は２個の二重結合を有する直鎖及び／又は分岐鎖の不飽和アルキル基を意味し、これには、（ｎに応じて）ビニル、アリル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、２−メチル−１−ブテニル、２−メチル−１−ペンテニル、４−メチル−１−ペンテニル、４−メチル−２−ペンテニル、２−メチル−２−ペンテニル、４−メチル−１，３−ペンタジエニル、１−ヘキセニルなどが包含される。
【００２０】
ここで使用するときに、用語「シクロ（Ｃ3〜Ｃn）アルキル」とは、３〜ｎ個の炭素原子を含有する飽和環状アルキル基を意味し、これには、（ｎに応じて）シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル及びシクロヘプチルが包含される。
【００２１】
ここで使用するときに、用語「シクロ（Ｃ3〜Ｃ7）アルケニル」とは、３〜６個の炭素原子及び１個の二重結合を有する不飽和非芳香族環状アルケニル基を意味し、これには、シクロプロペニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニルが包含される。
【００２２】
ここで使用するときに、用語「ハロ」とは、ハロゲンを意味し、これには、クロル、フルオル、ブロム及びヨードが包含される。
【００２３】
ここで使用するときに、用語「溶媒和物」とは、本発明の化合物又は本発明の化合物の塩であって、その結晶格子内に好適な溶媒の分子が取り込まれたものを意味する。好適な溶媒は、投与量では生理的に許容できるものである。好適な溶媒の例は、エタノール、水などである。水が溶媒である場合には、その分子を「水和物」という。
【００２４】
ここで使用するときに、用語「本発明の化合物」とは、式Ｉの化合物並びにその塩、溶媒和物及びプロドラッグを意味する。
【００２５】
用語「薬学的に許容できる塩」とは、患者の治療に好適な又は患者の治療に適合する酸付加塩又は塩基付加塩を意味する。
【００２６】
ここで使用するときに、用語「薬学的に許容できる酸付加塩」とは、本発明の任意の塩基性化合物の任意の非毒性有機塩若しくは無機塩又はその中間体のいずれかを意味する。酸付加塩を形成できる本発明の塩基性化合物としては、例えば、Ｒ1及び／又はＲ2のＣ1〜6アルキル基が塩基の窒素を有する基、例えばＮＨ2及びＮＨＣ1〜4アルキルで置換されたものが挙げられる。好適な塩を形成させる無機酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸及び燐酸並びにオルト燐酸一水素ナトリウム及び硫酸水素カリウムのような金属塩が挙げられる。好適な塩を形成させる有機酸の例としては、モノ−、ジ−及びトリカルボン酸、例えば、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、琥珀酸、グルタル酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、安息香酸、フェニル酢酸、桂皮酸及びサリチル酸、並びにスルホン酸、例えば、ｐ−トルエンスルホン酸及びメタンスルホン酸が挙げられる。一酸の塩又は二酸の塩のいずれも形成でき、また、このような塩は、水和された形態、溶媒和された形態又は実質的に無水の形態のいずれかで存在することができる。一般に、本発明の化合物の酸付加塩は、水及び各種親水性有機溶媒に溶けやすく、また、それらの遊離塩基の形態と比較して融点が高いことが一般的に実証されている。適切な塩の選択は、当業者には周知であろう。薬学的ではないが許容できる他の酸付加塩、例えば蓚酸塩は、例えば、本発明の化合物の単離の際に、研究室での用途に又は薬学的に許容できる酸付加塩へのその後の転化のために使用できる。
【００２７】
ここで使用するときに、用語「薬学的に許容できる塩基付加塩」とは、本発明の任意の酸性化合物の任意の非毒性有機又は無機塩基付加塩又はその中間体のいずれかを意味する。塩基付加塩を形成させることができる本発明の酸性化合物としては、例えば、Ｒ1及び／又はＲ2のＣ1〜6アルキル基が酸の水素を有する基、例えば Ｃ（Ｏ）ＯＨで置換されたものが挙げられる。好適な塩を形成させる無機塩基の例としては、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム又は水酸化バリウムが挙げられる。好適な塩を形成させる有機塩基の例としては、脂肪族、脂環式又は芳香族有機アミン、例えば、メチルアミン、トリメチルアミン及びピコリン又はアンモニアが挙げられる。適切な塩の選択は、当業者には周知であろう。薬学的ではないが他の許容できる塩基付加塩は、例えば、本発明の化合物の単離の際に、研究室での用途に又は薬学的に許容できる酸付加塩へのその後の転化のために使用できる。
【００２８】
ここで使用するときに、ある種の薬剤の「有効量」又は「十分な量」という用語は、臨床結果を含めて有益な結果又は望ましい結果をもたらすのに十分な量のことであり、また、「有効量」自体は、それが適用されている状況に依存する。例えば、ＣＹＰ２４活性を調節する薬剤を投与する状況において、薬剤の有効量とは、例えば、該薬剤の投与なしに得られた応答と比較して、このようなＣＹＰ２４活性の調節を達成するのに十分な量のことである。
【００２９】
ここで使用するときに、「同時に投与」とは、２種の物質を被検体にこれらの物質が当該被検体内で双方とも生物学的に活性であるように同時に投与することを意味する。この投与について正確に言うと、これら２種の物質が共に存在する状況においては当該２種の物質のファーマコキネティックスに依存し、また、これらのファーマコキネティックスが好適な場合には、一方の物質を他方の物質の投与後２４時間以内に投与することを含むことができる。好適な投与計画の設計は、当業者にとっては日常的である。特定の実施形態では、２種の物質は、実質的に同時に、すなわち、互いに数分以内に投与され、又は両物質を含む単一組成物で投与されるであろう。
【００３０】
ここで使用するときに、また当該分野においてよく理解されているように、「治療」とは、臨床結果を含めて有益な結果又は望ましい結果を得るためのアプローチのことである。有益な臨床結果又は望ましい臨床結果としては、検査が可能であるか検査が不能であるかを問わず、一以上の症状又は状態の緩和又は改善、病気の広がりの低減、病状の安定化（すなわち悪化しない）、病気の蔓延の予防、病気の進行の遅延又は減速、病状の改善又は軽減及び緩解（部分的か全体的かを問わない）を挙げることができるが、これらに限定されない。また、「治療」とは、治療を受けなかった場合に予想される生存時間と比較して、生存時間を長くすることを意味することもできる。
【００３１】
病気又は疾患を「緩和」するとは、該疾患を治療しない場合と比較して、疾患又は病状の程度及び／又は望ましくない臨床症状が軽減すること、及び／又は進行の経時変化が緩やかになる又は長くなることを意味する。
【００３２】
ここで使用するときに、用語「調節する」には、機能又は活性（例えばＣＹＰ２４活性）の阻害又は抑制だけでなく、機能又は活性の向上も含まれる。
【００３３】
機能又は活性、例えばＣＹＰ２４活性を「阻害する」又は「抑制する」又は「低減させる」とは、目的とする条件又はパラメーターを除き他の部分では同一の条件と比較して、或いは別の条件と比較して、機能又は活性を減少させることである。
【００３４】
ここで使用するときに、用語「動物」には、ヒトを含む動物界の全ての構成員が含まれる。動物は、好ましくはヒトである。
【００３５】
ここで使用するときに、用語「細胞」には、複数の細胞が含まれる。
【００３６】
ある種の化合物の細胞への投与には、生体内、生体外及び試験管内治療が含まれる。
【００３７】
ここで使用するときに、用語「癌細胞」には、癌又は腫瘍性疾患の全ての形態が含まれる。
【００３８】
ここで使用するときに、用語「異化反応」とは、生物が所定の物質を分泌のための化合物に変換する代謝過程をいう。
【００３９】
ここで使用するときに、用語「１α，３β−立体配置」とは、Ｃ３位のＯＨ基とＲ3との相対的な立体配置であって、Ｒ3がその平面よりも上にあり、且つ、Ｃ３位のＯＨ基がその平面よりも下にあるものをいう。
【００４０】
II．本発明の化合物
酵素ＣＹＰ２４の選択的阻害、増殖抑制活性を示し且つ血漿カルシウム上昇性の低い新規な化合物を製造した。本発明の化合物それ自体は、癌のような細胞増殖性疾患を治療するのに有用である。
【００４１】
従って、本発明は、次式Ｉの化合物並びに薬学的に許容できるその塩、溶媒和物及びプロドラッグから選択される化合物:
【化４】
0005449767.tif 000005
（式中、
Ｒ1は、Ｃ1〜6アルキル、Ｃ2〜6アルケニル、シクロ（Ｃ3〜Ｃ7）アルキル及びシクロ（Ｃ3〜Ｃ7）アルケニルよりなる群から選択され、ここで、Ｃ1〜6アルキル及びＣ2〜6アルケニルは、非置換であるか又は１個以上のハロ基で置換され若しくはＣ1〜4アルキル、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＣ1〜4アルキル及びＮ（Ｃ1〜4アルキル）（Ｃ1〜4アルキル）から独立して選択される１〜４個の基で置換されており、しかも、シクロ（Ｃ3〜Ｃ6）アルキル及びシクロ（Ｃ3〜Ｃ7）アルケニルは非置換であるか又はＣ1〜4アルキル、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＨ、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ハロ、ＳＨ、ＳＣ1〜4アルキル、ＮＨ2、ＮＨＣ1〜4アルキル、Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）（Ｃ1〜4アルキル）、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣ1〜4アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ1〜4アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、ＯＣ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、ＳＯＣ1〜4アルキル、ＳＯ2Ｃ1〜4アルキル、ＳＯ2ＮＨＣ1〜4アルキル及びＳＯ2ＮＨ2から独立して選択される１〜５個の基で置換されており；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃ1〜6アルキル及びＣ2〜6アルケニルよりなる群から選択され、ここで、Ｃ1〜6アルキル及びＣ2〜6アルケニルは、非置換であるか又は１個以上のハロ基で置換され若しくはＣ1〜4アルキル、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＨ、ハロ、ＮＨ2、ＮＨＣ1〜4アルキル及びＮ（Ｃ1〜4アルキル）（Ｃ1〜4アルキル）から独立して選択される１〜４個の基で置換されており； 
Ｒ3は、ＯＨ、ＯＣ1〜6アルキル及びハロよりなる群から選択され；
Ｒ4は、両方ともＨであるか又は一緒になって＝ＣＨ2を形成するかのいずれかである。）
を提供する。
【００４２】
本発明は、式Ｉの化合物であって、式中、Ｒ1がＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜6アルケニル、シクロ（Ｃ3〜Ｃ7）アルキル及びシクロ（Ｃ3〜Ｃ7）アルケニルよりなる群から選択され、ここで、Ｃ1〜6アルキル及びＣ2〜6アルケニルが非置換であるか又は１個以上のハロ基で置換され若しくはＣ1〜4アルキル、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＣ1〜4アルキル及びＮ（Ｃ1〜4アルキル）（Ｃ1〜4アルキル）から独立して選択される１〜４個の基で置換されており、また、シクロ（Ｃ3〜Ｃ6）アルキル及びシクロ（Ｃ3〜Ｃ6）アルケニルが非置換であるか又はＣ1〜4アルキル、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＨ、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ハロ、ＳＨ、SＣ1〜4アルキル、ＮＨ2、ＮＨＣ1〜4アルキル、Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）（Ｃ1〜4アルキル）、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣ1〜4アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣ1〜4アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、ＯＣ（Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、ＳＯＣ1〜4アルキル、ＳＯ2Ｃ1〜4アルキル、ＳＯ2ＮＨＣ1〜4アルキル及びＳＯ2ＮＨ2から独立して選択される１〜５個の基で置換されているものを包含する。本発明の一実施形態では、Ｒ1は、Ｃ1〜4アルキル又はＣ3〜6シクロアルキルであり、ここで、Ｃ1〜4アルキルは、非置換であるか又は１個以上のハロ基で置換され若しくはＣ1〜4アルキル、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＨ、ハロ、ＮＨ2、ＮＨＣ1〜4アルキル及びＮ（Ｃ1〜4アルキル）（Ｃ1〜4アルキル）から独立して選択される１〜２個の基で置換されており、また、シクロ（Ｃ3〜Ｃ6）アルキルは非置換であるか又はＣ1〜4アルキル、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＨ、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ハロ、ＮＨ2、ＮＨＣ1〜4アルキル及びＮ（Ｃ1〜4アルキル）（Ｃ1〜4アルキル）から独立して選択される１〜２個の基で置換されている。さらなる実施形態では、Ｒ1はＣ1〜4アルキル又はＣ3〜5シクロアルキルであり、ここで、Ｃ1〜4アルキルは、非置換であるか又は１個以上のハロ基で置換され若しくはＣ1〜2アルキル、ＯＣ1〜2アルキル、ＯＨ、ハロ、ＮＨ2、ＮＨＣ1〜2アルキル及びＮ（Ｃ1〜2アルキル）（Ｃ1〜2アルキル）から独立して選択される１〜２個の基で置換されており、また、シクロ（Ｃ3〜Ｃ5）アルキルは、非置換であるか又はＣ1〜2アルキル、ＯＣ1〜2アルキル、ＯＨ、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ハロ、ＮＨ2、ＮＨＣ1〜2アルキル及びＮ（Ｃ1〜2アルキル）（Ｃ1〜2アルキル）から独立して選択される１〜２個の基で置換されている。さらなる実施形態では、Ｒ1はＣ1〜4アルキル又はＣ3〜5シクロアルキルであり、ここでＣ1〜4アルキルは、非置換であるか又は１個以上のハロ基で置換され若しくはＣＨ3、ＯＣＨ3、ＯＨ、ハロ、ＮＨ2、ＮＨＣＨ3及びＮ（ＣＨ3）2から選択される１個の基で置換されており、また、シクロ（Ｃ3〜Ｃ5）アルキルは、非置換であるか又はＣＨ3、ＯＣＨ3、ＯＨ、ハロ、ＮＨ2、ＮＨＣＨ3及びＮ（ＣＨ3）2から選択される１個の基で置換されている。さらなる実施形態では、Ｒ1は、ｔ−ブチル、シクロプロピル、ＣＦ3及びＣ（ＣＦ3）3から選択される。
【００４３】
本発明は、式Ｉの化合物であって、式中、Ｒ2がＨ、Ｃ1〜6アルキル及びＣ2〜6アルケニルよりなる群から選択され、ここで、Ｃ1〜6アルキル及びＣ2〜6アルケニルは非置換であるか又は１個以上のハロ基で置換され又はＣ1〜4アルキル、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＨ、ハロ、ＮＨ2、ＮＨＣ1〜4アルキル及びＮ（Ｃ1〜4アルキル）（Ｃ1〜4アルキル）から独立して選択される１〜４個の基で置換されたものを包含する。本発明の一実施形態では、Ｒ2はＨ及びＣ1〜4アルキルよりなる群から選択され、ここで、Ｃ1〜4アルキルは、非置換であるか又はＣ1〜4アルキル、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＨ、ハロ、ＮＨ2、ＮＨＣ1〜4アルキル及びＮ（Ｃ1〜4アルキル）（Ｃ1〜4アルキル）から独立して選択される１〜２個の基で置換されている。さらなる実施形態では、Ｒ2は、Ｈ及びＣ1〜4アルキルよりなる群から選択される。さらなる実施形態では、Ｒ2は、Ｈ、ＣＨ3、エチル及びアリルよりなる群から選択される。
【００４４】
式Ｉの化合物としては、Ｒ3がＯＨ、ＯＣ1〜6アルキル及びハロよりなる群から選択されるものが挙げられる。本発明の一実施形態では、Ｒ3はＯＨ、ＯＣＨ3及びフルオルよりなる群から選択される。さらなる実施形態では、Ｒ3はＯＨである。
【００４５】
また、本発明は、式Ｉの化合物であって、式中、Ｒ4が両方ともＨであるか又は一緒になって＝ＣＨ2を形成するかのいずれかであるものを包含する。本発明の一実施形態では、Ｒ4は＝ＣＨ2である。
【００４６】
式Ｉの化合物の全ては１個以上の不斉中心を有する。本発明に従う化合物が１個以上の不斉中心を有する場合には、これらはジアステレオマーとして存在し得る。このような異性体及びそれらの任意の割合の混合物の全てが本発明の範囲内に包含されることを理解すべきである。さらに、本発明は本発明の全ての幾何異性体に及ぶ。例えば、本発明の化合物に二重結合が存在する場合には、シス及びトランス（Ｚ及びＥとしても知られている）異性体のような幾何異性体が存在し得る。特に、本発明の化合物は、オキシム二重結合での幾何異性体として存在し得る。本発明は、Ｅ−オキシムとＺ−オキシムの両方（それらの混合物を含む）を包含する。本発明の化合物の立体配置は、好適には天然１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の立体配置である。従って、好適な実施形態では、本発明は、以下に示すような相対的立体配置を有する式Ｉの化合物並びに薬学的に許容できるその塩、水和物及びプロドラッグを提供する:
【化５】
0005449767.tif 000006
（式中、Ｒ1〜Ｒ4は、式Ｉについて上に定義した通りである。）。好適には、Ｃ−２０位での立体配置はＲである。好適には、オキシム二重結合での立体配置は主としてＥである。
【００４７】
式Ｉの化合物の相対的立体配置は、好適には上に示した通りであるが、このような式Ｉの化合物は、別の立体配置を有する式Ｉの化合物を所定量（例えば２０％未満、好ましくは１０％未満、より好ましくは５％未満）含有してもよいことを理解すべきである。例えば、天然型１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の１α，３β−立体配置を有する、上に示した式Ｉの化合物は、非天然型１β，３α−立体配置を有する式Ｉの化合物を２０％未満、好適には１０％未満、さらに好適には５％未満含有することができる。さらに、オキシム二重結合でＥ立体配置を有する式Ｉの化合物は、オキシム二重結合でＺ立体配置を有する式Ｉの化合物を３０％未満、好適には２０％未満、さらに好適には１０％未満含有することができる。
【００４８】
本発明の特定の実施形態では、式Ｉの化合物は、
【化６】
0005449767.tif 000007
【化７】
0005449767.tif 000008
【化８】
0005449767.tif 000009
並びに薬学的に許容できるその塩、溶媒和物及びプロドラッグから選択される。ある実施形態では、本発明の化合物はオキシム二重結合でＥ立体配置を有する。本発明のさらなる実施形態では、本発明の化合物は、上に示したように、（２０Ｒ）−Ｉ（ａ）又は（２０Ｓ）−Ｉ（ａ）、（２０Ｒ）−I（ｃ）又は（２０Ｓ）−I（ｃ）、（２０Ｒ）−I（ｅ）又は（２０Ｓ）−I（ｅ）、好適には（２０Ｒ）−Ｉ（ａ）、（２０Ｒ）−I（ｃ）又は２０（Ｒ）−I（ｅ）並びに薬学的に許容できるその塩、溶媒和物及びプロドラッグである。
【００４９】
III．本発明の化合物の製造方法
本発明の別の態様によれば、本発明の化合物は、当該分野において確立された方法と同様の方法によって製造できる。従って、本発明の化合物は、例えば、スキーム１に示した反応順序で製造できる。
【化９】
0005449767.tif 000010
【００５０】
従って、Ｒ1〜Ｒ4が上に定義したとおりである式Ｉの化合物は、Ｒ1及びＲ2が式Ｉにおいて定義した通りである式IIの化合物と、Ｒ3及びＲ4が式Ｉにおいて定義した通りである式IIIの試薬とを、標準的なホーナー・ワズワース・エモンズ（ＨＷＥ）カップリング条件下で反応させることによって製造できる（Ｐｏｓｎｅｒ，Ｇ．Ｈ．外，Ｊ  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ，．１９９７，６２，３２９９−３３１４参照）。従って、酸化ホスフィンIIIと強塩基、例えばｎ−ブチルリチウムのようなアルキルリチウムとを、不活性雰囲気及び溶媒、例えばテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中の無水条件下で、約−６０℃〜約−９０℃の範囲の温度で、好適には−７８℃で処理する。得られた中間体イリドに、無水条件を維持しつつ、ケトンIIをＴＨＦのような不活性溶媒に溶解させてなる冷却（好適には−７８℃の）溶液を添加する。標準的な化学物質を使用してどのような保護基も除去した後に（必要ならば）、式Ｉの化合物を得ることができる。
【００５１】
式IIのケトンであって、式中、Ｒ1及びＲ2が式Ｉにおいて定義される通りのものは、例えば、スキーム２に示すように製造できる：
【化１０】
0005449767.tif 000011
【００５２】
好適に保護された式IVの化合物であって、式中、Ｒ1及びＲ2が式Ｉにおいて定義される通りであり、且つ、ＰＧが適切な保護基であるものは、まず脱保護され、次いで酸化されてケトンIIが得られる。例えば、ＰＧがトリブチルシリルのようなトリアルキルシリルの場合には、脱保護は、式IVの化合物と弗化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）とをＴＨＦのような不活性溶媒中及び不活性雰囲気中において好適にはおよそ室温で反応させることによって達成できる。得られたアルコールの酸化は、例えば、二クロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ）又は任意の他の好適な酸化剤を使用して塩化メチレンのような不活性溶媒中において標準的な条件下で実行できる。
【００５３】
式IVの化合物であって、式中、Ｒ1及びＲ2が式Ｉにおいて定義される通りであり、且つ、ＰＧが適切な保護基であるものは、例えば、スキーム３に示すように製造できる： 
【化１１】
0005449767.tif 000012
【００５４】
式Ｖのホスホネートであって、式中、Ｒ1及びＲ2が式Ｉにおいて定義される通りのものを使用して、ＰＧが適切な保護基である式VIのアルデヒドと強塩基の存在下で反応させると、式IVのオレフィンを製造することができる。つまり、ホスホネートＶは、強塩基、例えばカリウムｔ−ブトキシドのようなカリウムアルコキシドと、不活性雰囲気及び溶媒、例えばＴＨＦ中での無水条件下で、約０℃の温度で処理される。得られた炭素陰イオンに、アルデヒドVIをＴＨＦのような不活性溶媒に溶解してなる冷却（好適には約０℃の）溶液を、無水条件を維持しつつ添加する。こうして式IVの化合物を得ることができる。
【００５５】
式Ｖの化合物であって、式中、Ｒ1及びＲ2が式Ｉにおいて定義される通りのものは、例えば、スキーム４の通りに製造できる：
【化１２】
0005449767.tif 000013
【００５６】
つまり、式Ｖの化合物であって、式中、Ｒ1及びＲ2が式Ｉにおいて定義される通りのものは、式VIIIの化合物又はその塩若しくは水和物であって式中Ｒ2が式Ｉにおいて定義される通りのものと、式VIIの試薬であって式中Ｒ1が式Ｉにおいて定義される通りのものとを、好適には非求核性アミンの存在下に０℃〜約４０℃の範囲の温度で、好適には室温で反応させることによって製造できる。該非求核性アミンは、任意の第三芳香族又は脂肪族アミン、例えばピリジンであることができ、且つ、好適には過剰量で存在する。ピリジンが非求核性アミンである場合には、これは、好適には化合物VIIからＶへの変換用の溶媒としても使用される。式ＶのＥ−オキシムアルキルエーテルが優先的に得られる。これは、対応するＺ−オキシムアルキルエーテル中に存在するであろう極めて不利な立体的過密のためである（Ｈａｗｋｅｓ，Ｇ．Ｅ．及びＨｅｒｗｉｇ，Ｋ．；Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｊ．Ｄ．Ｊ  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９７４，３９，１０１７−１０２８を参照）。Ｅ−及びＺ−オキシムは、標準的なクロマトグラフィー技術を使用して分離できる。
【００５７】
式VIIの化合物であって、式中、Ｒ1が式Ｉにおいて定義される通りのものは、例えば、スキーム５の通りに製造できる：
【化１３】
0005449767.tif 000014
【００５８】
従って、式VIIの化合物であって、式中、Ｒ1が式Ｉにおいて定義される通りのものは、式IXの塩化アシルとメチルホスホン酸ジメチルとを強塩基の存在下で反応させることによって製造できる。つまり、メチルホスホン酸ジメチルを、強塩基、例えばブチルリチウムのようなアルキルリチウムで、不活性雰囲気及び溶媒、例えばＴＨＦ中での無水条件下で、約−６０℃〜約−９０℃の範囲、好適には−７８℃で処理する。得られた中間体炭素陰イオンに、塩化アシルVIIIをＴＨＦのような不活性溶媒に溶解してなる冷却（好適には−７８℃の）溶液に無水条件を維持しつつ添加する。このようにして、式VIIの化合物を得る。式VIII及びIXの化合物は、いずれも市販されており、又は当該分野に知られている方法を使用して容易に製造される。式IIIの化合物であって、式中、Ｒ3及びＲ4が式Ｉにおいて定義した通りであるものの製造法は、当該分野において知られている。つまり、式IIIの化合物は、Ｐｏｓｎｅｒ，Ｇ．Ｈ．外Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９２，３５，３２８０−３２８７に記載された通りに製造できる。この内容は、参照によって援用するものとする。
【００５９】
鏡像異性的に純粋な式Ｉの化合物の製造は、鏡像異性的に純粋な式III及びVIの化合物を、それぞれスキーム１及び３に示された反応で使用することによって達成できる。スキーム１の反応において、典型的には１α，３βジアステレオマー及び１β，３αジアステレオマーの混合物が得られるが、ここで、１α，３βジアステレオマーが主生成物として得られる。これらのジアステレオマーは、クロマトグラフィーを使用して、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して分離できる。
【００６０】
場合によっては、上記の化学物質は、反応基、例えば置換基として結合した反応基による副反応を妨げるために、例えば保護基を使用して変性されなければならないかもしれない。これは、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」，ＭｃＯｍｉｅ，Ｊ．Ｆ．Ｗ．著，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，１９７３及びＧｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．及びＷｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，第３版，１９９９に記載されるような従来の保護基によって達成できる。
【００６１】
所望の化合物塩の形成は標準的な技術を使用して達成される。例えば、天然化合物を好適な溶媒中において酸又は塩基で処理し、そして形成した塩をろ過、抽出又は他の任意の好適な方法で単離する。
【００６２】
本発明の化合物の溶媒和物の形成は、該化合物及び溶媒和物に応じて変更されるであろう。一般に、溶媒和物は、適切な溶媒に該化合物を溶解させ、そして溶媒和物を冷却又は逆溶媒で単離することによって形成される。該溶媒和物は、通常、周囲条件下で乾燥又は共沸される。
【００６３】
式Ｉの化合物のプロドラッグは、利用可能なヒドロキシ、チオール、アミノ又はカルボキシル基と共に形成される従来のエステルであることができる。例えば、Ｃ−３位のＯＨ及び／又はＲ3でのＯＨは、塩基の存在下で及び随意に不活性溶媒中で活性化酸（例えば、ピリジン中で酸塩化物）を使用してアシル化できる。プロドラッグとして使用されてきたいくつかの一般的なエステルは、フェニルエステル、脂肪族（Ｃ8−Ｃ24）エステル、アシルオキシメチルエステル、カルバメート及びアミノ酸エステルである。
【００６４】
本発明は、本発明の化合物の放射性標識形態、例えば、その構造内に、3Ｈ、11Ｃ若しくは14Ｃ又は125Ｉ及び18Ｆのような放射性ハロゲンを取り入れることによって標識された本発明の化合物を包含する。本発明の放射性標識化合物は、当該分野において知られている標準的な方法を使用して製造できる。例えば、トリチウムは、標準的な技術を使用して、例えば好適な先駆物質を本発明の化合物にトリチウムガス及び触媒を使用して水素化することによって本発明の化合物に取り入れられることができる。別法として、放射性ヨードを含有する本発明の化合物は、対応するトリアルキル錫（好適にはトリメチル錫）誘導体から、標準的な沃素化条件、例えばジメチルホルムアミドのような好適な溶媒中においてクロラミン−Ｔの存在下で［125Ｉ］沃化ナトリウムを使用して製造できる。トリアルキル錫 化合物は、対応する非放射性ハロ化合物、好適にはヨード化合物から、標準的なパラジウム触媒スタンニル化条件、例えば、ジオキサンのような不活性溶媒中及び高温、好適には５０〜１００℃でテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）の存在下にヘキサメチル二錫を使用して製造できる。さらに、放射性弗素を含有する本発明の化合物は、例えば、Ｋ［I8Ｆ］／Ｋ２２２と、好適な脱離基、例えばトシル基（これは、18Ｆ陰イオンと置換され得る）を有する式Ｉの化合物のような好適な先駆物質化合物とを反応させることによって製造できる。
【００６５】
IV．用途
前述のように、新規な式Ｉの化合物を製造した。従って、本発明は、細胞増殖を調節するための治療方法及び組成物における本発明の化合物の使用、診断分析におけるそれらの使用並びに他の化学物質を製造する際の研究道具及び出発材料及び／又は中間体としてそれらの使用を含め、本発明の化合物の全ての使用を包含する。
【００６６】
カルシトリオールの異性化反応を阻害すると、このホルモンの生物学的寿命が長くなるため、これが少量であっても有効なヒト化学療法のために使用することが可能になる；このようなさらに少量の投与量は、カルシトリオールの医薬品として使用に関連した高カルシウム血毒性を回避し、又は少なくとも最小にするであろう。カルシトリオールが異化される（主としてＣ−２４ヒドロキシル化を介して）シトクロムＰ４５０酵素経路を選択的に阻害することは、このホルモンの寿命を長くするために重要な一方法である。従って、式Ｉの化合物について、試験管内で、カルシトリオールの２４−ヒドロキシル化に関与するＣＹＰ２４を特異的に阻害することができるかどうかを標準的なプロトコールを使用して試験した。抗真菌性ケトコナゾール、つまりヒト前立腺癌の化学療法のために臨床上使用されている薬剤（Ｔｒａｃｈｔｅｎｂｅｒｇ，Ｊ．外Ｊ．Ｕｒｏｌ．１９８４，Ｊ３２，６１−６３）をＣＹＰ２４の阻害のための対照基準として使用した。選択した式Ｉの化合物は、ＣＹＰ２４活性を阻害するにあたってケトコナゾールよりも強力であった。これらの化合物は、酵素ＣＹＰ２７Ａ１及びＣＹＰ２７Ｂ１の阻害をほとんど又は全く示さなかったが、これは、これらがＣＹＰ２４活性を選択的に阻害できることを示す。また、選択した式Ｉの化合物は、ＣＹＰ２４ｍＲＮＡの発現を誘導することも示された。
【００６７】
また、選択した式Ｉの化合物が乳癌（ＭＣＦ−７）、卵巣癌（ＯＶＣＡＲ−３）、頭頸部癌（ＳＣＣ−２５）、前立腺癌（ＬＮＣａＰ）及び膵臓癌（ＢｘＰＣ−３）株細胞において試験管内増殖抑制活性を有することも示された。また、標準的な高カルシウム血症アッセイ法において、選択した式Ｉの化合物は、これらのものを１週間にわたって毎日ラットに経口投与した後に、ラットの尿中カルシウムレベルを増加させなかった。同様の投与量では、カルシトリオールは、尿中カルシウムレベルを有意に増加させる。
【００６８】
式Ｉの化合物は、ＣＹＰ２４修飾因子であり、且つ、細胞増殖性疾患のような様々な病状の治療にあたって、ＣＹＰ２４活性を阻害することを含め、ＣＹＰ２４活性を調節する点で有用である。従って、本発明は、ＣＹＰ２４活性の調節が有効な疾患の治療方法であって、本発明の化合物の有効量をその治療が必要な細胞又は動物に投与することを含むものを包含する。さらなる態様では、本発明は、ＣＹＰ２４活性の阻害が有効な疾患の治療方法であって、本発明の化合物の有効量をその治療が必要な細胞又は動物に投与することを含むものを包含する。また、本発明は、本発明の化合物の、ＣＹＰ２４活性の調節、好適には阻害が有効な疾患を治療するための使用、及び本発明の化合物の、ＣＹＰ２４活性の調節、好適には阻害が有効な疾患を治療するための医薬品を製造するための使用も包含する。
【００６９】
１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3を代謝する酵素であるＣＹＰ２４を選択的に阻害することによって、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3のレベルが増加するであろう。そのため、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3のレベルを増加させるのが有効な疾患は、ＣＹＰ２４の修飾因子を使用して治療できる。ＣＹＰ２４に優先的に作用させることにより、他の酵素及び受容体との相互作用で生じる副作用が低減するであろう。従って、本発明は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3のレベルを増加させるのが有効な疾患の治療方法であって、本発明の化合物の有効量をその治療が必要な細胞又は動物に投与することを含むものを包含する。本発明は、本発明の化合物の、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3のレベルを増加させることが有効な疾患を治療するための使用も包含する。さらに、本発明は、式Ｉの化合物の、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3のレベルを増加させるのが有効な疾患を治療するための医薬品を製造するための使用を包含する。
【００７０】
ＣＹＰ２４の阻害は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の異化反応を阻害し、これによってこのホルモンの生物学的寿命が長くなり、しかもこのものを少量で有効な疾患治療のために使用することが可能になる。このようなさらに少量の投与量は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（カルシトリオール）の医学的使用に関連した高カルシウム血毒性を回避し、又は少なくとも最小にする。従って、ある実施形態では、本発明は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の異化反応を阻害することが有効な疾患の治療方法であって、本発明の化合物の有効量をその治療が必要な細胞又は動物に投与することを含むものを包含する。また、本発明は、本発明の化合物の、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の異化反応を阻害することが有効な疾患を治療するための使用も包含する。さらに、本発明は、式Ｉの化合物の、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の異化反応を阻害することが有効な疾患を治療するための医薬品の製造のための使用を包含する。
【００７１】
１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3のレベルの調節（阻害）が有効であると考えられる疾患としては、
（ｉ）副甲状腺では副甲状腺機能亢進症及び副甲状腺機能低下症、偽性副甲状腺機能低下症及び二次性副甲状腺機能亢進症；
（ii）膵臓では糖尿病；
（iii）甲状腺では髄様癌；
（iv）肌では乾癬及び創傷治癒；
（ｖ）肺ではサルコイドーシス及び結核；
（vi）腎臓では慢性腎疾患、低リン酸血症性ビタミンＤ依存性クル病及びビタミンＤ依存性クル病；
（vii）骨では、抗けいれん治療、骨線維形成不全症、嚢胞性線維性骨炎、骨軟化症、骨粗鬆症、骨減少症、骨硬化症、腎性骨異栄養症及びクル病；
（viii）腸では、グルココルチコイドアンタゴニズム、突発性高カルシウム血症、吸収不良症候群、脂肪便及び熱帯性下痢
が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７２】
一態様では、本発明は、細胞増殖の抑制方法であって、本発明の化合物の有効量をその治療が必要な細胞又は動物に投与することを含むものを包含する。好適には、本発明は、細胞増殖性疾患の治療方法であって、本発明の化合物の有効量をその治療が必要な細胞又は動物に投与することを含むものを包含する。また、本発明は、本発明の化合物の、細胞増殖性疾患を治療するための使用も包含する。本発明は、さらに、本発明の化合物の、細胞増殖性疾患を治療するための医薬品を製造するための使用を包含する。ここで使用するときに、用語「細胞増殖性疾患」とは、正常細胞ではなく異常細胞の増殖を阻害することが有効な任意の疾患又は病気をいう。異常細胞には、ある種の疾患又は病気の原因となる又はそれに関与するあらゆるタイプの細胞であって、その異常細胞の増殖を調節又は阻害して該疾患又は病気を治療することが望ましいものが含まれる。異常細胞の例としては、悪性又は癌性細胞並びに炎症状態で過剰増殖する細胞、例えば乾癬が挙げられる。本発明の実施形態では、該細胞増殖性疾患は癌、特に乳癌、前立腺癌、肺癌、結腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、頭部癌、頸部癌若しくは膵臓癌、カポジ肉腫又は白血病が挙げられる。
【００７３】
本発明の化合物は、単独で使用でき、或いはＣＹＰ２４活性を調節する他の薬剤と同時に又は１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3若しくはそのアナログのレベルの調節、好適には上昇及び／又は１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3若しくはそのアナログの異化反応の阻害が有効な疾患のための他のタイプの治療（ＣＹＰ２４を調節しても調節しなくてもよい）と同時に使用できる。好適には、本発明の化合物は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（カルシトリオール）、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3のアナログ又は他のビタミンＤ受容体アゴニストと同時に投与される。１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3又はそのアナログのようなビタミンＤ受容体アゴニストの異化反応を抑制すると、これらの治療剤の生物学的寿命又は有効性が長くなるため、有効なヒト化学療法のために該薬剤を少量しか使用しないことが可能になる；このようなさらに少量の投与量によって、これらの化合物の医学的な使用に関連した副作用、例えば高カルシウム血毒性が回避され又は少なくとも最小となるであろう。従って、本発明は、ビタミンＤ受容体アゴニストの有効性を増大させる方法であって、本発明の化合物の有効量と該ビタミンＤ受容体アゴニストの有効量とを同時に投与することを含むものを提供する。さらに本発明は、本発明の化合物の、ビタミンＤ受容体アゴニストの有効性を増大させるための使用、及び本発明の化合物の、ビタミンＤ受容体アゴニストの有効性を増大させるための医薬品を製造するための使用を提供する。本発明の一実施形態では、該ビタミンＤ受容体アゴニストは、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3又はそのアナログである。１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3のアナログとは、ビタミンＤ受容体アゴニストであり且つ１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3に類似する治療特性を示す化学修飾１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3アナログを意味する。このような化合物の例は、次の論文に見いだすことができる（それらの内容は参照によって援用するものとする）： Ｐｉｎｅｔｔｅ，Ｋ．Ｖ外「Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓ  ａ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔａｒｇｅｔ」，Ｍｉｎｉ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００３，３：１９３−  ２０４；Ｍａｔｈｉｅｕ，Ｃ．及びＡｄｏｒｉｎｉ，Ｌ．「Ｔｈｅ  Ｃｏｍｉｎｇ  ｏｆ  Ａｇｅ  ｏｆ  １，２５−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ3  Ａｎａｌｏｇｓ  ａｓ  Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  Ａｇｅｎｔｓ」，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ＭｏＩ．Ｍｅｄ．２００２，８：１７４−１７９；Ｃａｒｌｂｅｒｇ，Ｃ．「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ」，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ．２００３，８８：２７４−２８１；Ｓｔｅｉｎ，Ｍ．Ｓ．及びＷａｒｋ，Ｊ．Ｄ．「Ａｎ  ｕｐｄａｔｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ」，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ  ２００３，１２：８２５−８４０；Ｂｏｕｉｌｌｏｎ，Ｒ．外「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ  ｉｎ  ��ｈｅ  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ」  Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．１９９５，１６：２００−２５７；及びＮａｇｐａｌ，Ｓ．外「Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ  Ａｎａｌｏｇｓ：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  Ａｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，８：１６６１−１６７９。
【００７４】
本発明の化合物は、ＣＹＰ２４の調節以外の機構でも作用し得ることを理解すべきである。例えば、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3のアナログとしての本発明の化合物は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の固有活性のうちいくつかをも有する。例えば、本発明の化合物は、ＣＹＰ２４遺伝子の転写を活性化させることができることが示された（例１０参照）。また、本発明の化合物は、それらの副甲状腺ホルモンレベルの低下能力によって実証されるビタミンＤ受容体アゴニスト活性も有する。従って、本発明は、ビタミンＤ受容体アゴニストを投与することが有効な病気の治療方法であって、その治療が必要な患者に本発明の化合物の有効量を投与することを含むものも包含する。また、本発明は、本発明の化合物の、ビタミンＤ受容体アゴニストを投与することが有効な病気を治療するための使用、及びビタミンＤ受容体アゴニストを投与することが有効な病気を治療するための医薬品の製造のための使用を包含する。ビタミンＤ受容体アゴニストを投与することが有効な病気としては、例えば癌（乳癌、肺癌、前立腺癌、結腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、頭頸部癌、膵臓癌、カポジ肉腫及び白血病のような）、皮膚病変（例えば、乾癬及び創傷治癒）、上皮小体疾患（例えば、副甲状腺機能亢進症及び二次性副甲状腺機能亢進症）、免疫学的疾患及び骨疾患（例えば、骨粗鬆症）が挙げられる。
【００７５】
本発明の化合物と共に使用される又は当該化合物と同時に使用される治療は、疾患のタイプに基づけばよく、ＣＹＰ２４活性又はＶＤＲを特異的に標的とする必要はない。本発明の特定の態様では、本発明の化合物は、皮膚科疾患、骨疾患、上皮小体疾患、癌及び自己免疫疾患を治療するための他の療法及び治療剤と組み合わせて又はこれらと同時に使用できる。このような療法としては、次のものが挙げられるがこれらに限定されない：癌について：外科手術、放射線療法、化学療法及び生物療法；乾癬について：紫外線Ｂ照射療法、化学療法及び生物療法。
【００７６】
癌の他に、本発明の化合物は、異常細胞増殖を伴う他の病気を治療するのに有用である。本発明によって治療できる他の細胞増殖性疾患としては、炎症性疾患、アレルギー、自己免疫疾患、移植片拒絶、乾癬、再狭窄、アテローム硬化症及び細胞成長を抑制し、阻害し又は抑圧することが望ましい任意の他の疾患が挙げられる。本発明の化合物は、当業者に知られているアッセイ法及び技術を使用して、特定の細胞増殖性疾患におけるそれらの有効性について試験できる。例えば、次の文献は、様々な病気についてのアッセイ法を提供している：リウマチ性関節炎：「Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−１５−Ｓｉｍｕｌａｔｅｄ  ＴＮＦ−ａｌｐｈａ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｒｏｌｉｐｒａｍ」，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９９），１６３巻，８２３６頁，Ｃ．Ｓ．Ｋａｓｙａｐａ外；アレルギー：「Ａ  ｎｏｖｅｌ  Ｌｙｎ−Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｂｌｏｃｋｓ  Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，Ｓｕｒｖｉｖａｌ，ａｎｄ  Ａｉｒｗａｙ  ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ」，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９９），１６３巻，９３９頁，Ｔ．Ａｄａｃｈｉ外；乾癬：Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０００），１６５巻，２２４頁「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｂｙ  ＩＬ−１５：  ａ  ｎｅｗ  ｐａｒａｍｅｔｅｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｅｇｅｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ」，Ｒ．Ｕｃｈｅｒｔ；乾癬：Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ：  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０００），１２３巻，２７５頁，「Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｉｍｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｉｓｅａｓｅ」，Ａ．Ｈ．Ｅｎｋ；及び二次性副甲状腺機能亢進症：Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｄ．Ｍ．ａｎｄ  Ｓｃｏｔｔ，Ｌ．Ｊ．”Ｐａｒｉｃａｌｃｉｔｒｉｏｌ：  Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｉｔｓ  Ｕｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  Ｈｙｐｅｒｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｉｓｍ」，Ｄｒｕｇｓ，２００５，６５：５５９−５７６。
【００７７】
本発明の化合物は、ヒト患者への投与用の、生体内に投与するのに好適な生物学的に適合した形態の医薬組成物に処方される。従って、別の態様では、本発明は、本発明の化合物を好適な希釈剤又はキャリアとの混合物の状態で含む医薬組成物を提供する。
【００７８】
本発明の化合物を含有する組成物は、活性物質の有効量を薬学的に許容できる媒体との混合物の状態で混合させるような、患者に投与できる薬学的に許容できる組成物の公知の製造方法によって製造できる。好適な媒体は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（２００３，第２０版）及び１９９９年発行のＴｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ（米国薬局方）：Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ（ＵＳＰ  ２４  ＮＦ  １９）に記載されている。これに基づけば、これらの組成物としては、１種以上の薬学的に許容できる媒体又は希釈剤と一緒にされ、しかも好適なｐＨで且つ生理液と等浸透圧の緩衝液中に含有される該物質の溶液が挙げられるが、これに限定されない。
【００７９】
式Ｉの化合物は、遊離塩基の形態で、塩、溶媒和物の形態で、及び水和物として薬学的に使用できる。全ての形態が本発明の範囲内にある。酸及び塩基付加塩は、たとえ特定の塩それ自体が中間生成物程度でしか望まれない場合、例えば該塩が生成及び同定の目的でのみ形成される場合であっても、遊離塩基の形態の源として使用するために本発明の化合物により形成できる。従って、本発明の化合物により形成できる全ての塩は、本発明の範囲内にある。
【００８０】
本発明の方法に従い、説明した本発明の化合物を、選択された投与経路に応じた様々な形態で患者に投与することができるが、これは、当業者であれば理解するであろう。本発明の化合物は、例えば、経口投与、非経口投与、口腔投与、舌下投与、経鼻投与、直腸投与、パッチ、ポンプ又は経皮投与によって投与でき、それに応じて医薬組成物が処方できる。非経口投与としては、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、経上皮、経鼻、肺内、髄腔内、直腸内及び局所投与方式が挙げられる。非経口投与は、選択期間にわたる連続的な注入によることができる。
【００８１】
本発明の化合物は、例えば、不活性希釈剤又は吸収可能な食用カーダー（carder）と共に経口投与してもよいし、或いはハードシェル又はソフトシェルゼラチンカプセルに封入してもよいし、或いは錠剤に圧縮してもよいし、或いは食事の食品と共に直接取り入れてもよい。経口治療的な投与については、本発明の化合物を賦形剤と混合することができ、また、摂取可能な錠剤、口腔錠、トローチ、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエハーなどの形で使用できる。
【００８２】
また、本発明の化合物を非経口投与することもできる。本発明の化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースのような界面活性剤と好適に混合された水中で調製できる。また、分散液は、グリセリン、液体ポリエチレングリコール、ＤＭＳＯ及びそれらの混合物（アルコールを有する又はアルコールを有しない）中及び油中で製造できる。通常の保存及び使用条件下では、これらの製剤は、微生物の増殖を抑えるために防腐剤を含有する。当業者であれば、好適な処方物の製造方法が分かるであろう。好適な処方物の選択と製造のための慣用の手順及び成分は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（２００３年第２０版）及び１９９９年発行のＴｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ（ＵＳＰ  ２４  ＮＦ  １９）に記載されている。
【００８３】
注射の用途に好適な医薬品形態としては、滅菌水溶液又は分散液及び滅菌注射用溶液又は分散液の即時調製のための滅菌粉末が挙げられる。全ての場合において、この剤型は滅菌しなければならず、且つ、注射するのが容易な程度に流動的でなければならない。
【００８４】
経鼻投与用の組成物は、エーロゾル、液滴、ゲル及び粉末として処方するのが便利な場合が多い。エーロゾル処方物は、通常、活性物質を生理的に許容できる水性又は非水性溶媒中に溶解してなる溶液又は細かく分散してなる懸濁液を含み、且つ、通常は、噴霧装置で使用するためのカートリッジ又は補充容器の形をとることができる密閉容器内に滅菌状態で単回投与又は複数回投与量で与えられる。或いは、該密閉容器は、単回投与の鼻吸入器又は使用後の処分を目的とした絞り弁を備えたエーロゾル分注器のような単回分注装置であることができる。投薬形態がエーロゾル分注器を含む場合には、このものは、圧縮空気のような圧縮ガスであることができる噴霧剤又はフルオルクロル炭化水素のような有機噴霧剤を含有するであろう。また、エーロゾル投薬形態は、ポンプ−噴霧器の形をとることもできる。
【００８５】
口腔投与又は舌下投与に好適な組成物としては、活性成分が糖、アラビアガム、トラガカントガム又はゼラチン及びグリセリンのようなキャリアと共に処方された錠剤、口中錠及びトローチ剤が挙げられる。直腸投与用の組成物は、ココアバターのような座剤の慣用基材を含有する座剤の形態にあることが便利である。
【００８６】
本発明の化合物は、上記のように、所定の動物に単独で又は薬学的に許容できるキャリアと共に投与できるが、その割合は、該化合物の溶解性と化学的性質、選択される投与経路及び標準的な薬務によって決定される。
【００８７】
本発明の化合物の投与量は、該化合物の薬理学的特性、投与方式、受容者の年齢、健康及び体重、症状の性質と程度、治療の頻度及び、あるとすれば併用療法のタイプ、並びに治療すべき動物内での該化合物のクリアランス率といった多くの要因に応じて変更することができる。当業者であれば、上記要因に基づき好適な投与量を決定できる。本発明の化合物は、臨床反応により必要に応じて調節できる好適な投与量で病初に投与できる。短期間、例えば、３０分〜１時間以上の細胞の生体外治療については、長期生体内治療の場合よりも多い化合物の投与量を使用することができる。
【００８８】
本発明の化合物は、単独で又はＣＹＰ２４活性を調節する他の薬剤と同時に使用することや、細胞増殖性疾患或いは１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3レベルの調節及び／又は１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の異化反応の阻害に有効な他の疾患のための他のタイプの治療と併用したりすることができる。好適には、本発明の化合物は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（カルシトリオール）又は他のビタミンＤ受容体アゴニストと同時に投与される。ビタミンＤ受容体アゴニストの異性化反応を阻害すると生物学的寿命又はこれらの治療の有効性が長くなるので、有効なヒト化学療法のために該薬剤の少量しか使用しないことが可能になる；このようなさらに少量の投与量は、カルシトリオール又は他のビタミンＤ受容体アゴニストの医薬品として使用に関連した高カルシウム血毒性を回避し、又は少なくとも最小にするであろう。従って、本発明は、ビタミンＤ受容体アゴニスト、好適には１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（カルシトリオール）の有効性を増大させる方法であって、本発明の化合物の有効量とビタミンＤ受容体アゴニスト、好適には１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（カルシトリオール）の有効量とを同時に投与することを含むものを包含する。さらに、本発明は、本発明の化合物の、ビタミンＤ受容体アゴニスト、好適には１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（カルシトリオール）の有効性を増大させるための使用、及び、本発明の化合物の、ビタミンＤ受容体アゴニスト、好適には１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（カルシトリオール）の有効性を増大させるための医薬品を製造するための使用を包含する。
【００８９】
本発明のさらなる態様によれば、本発明の化合物は、皮膚科疾患、骨疾患、上皮小体疾患、免疫学的疾患、創傷治癒及び骨粗鬆症を治療するための他の療法及び治療剤と併用することやこれらと同時に使用することができる。
【００９０】
上記治療的使用の他に、本発明の化合物は、診断分析、スクリーニング検定に有用であり、また研究道具としても有用である。
【００９１】
診断分析においては、本発明の化合物は、細胞増殖性疾患を同定し又は検査する際に有用である場合が多い。このような実施形態では、本発明の化合物を放射性標識（上記したように）し、そして細胞集団と接触させることができる。細胞上での該放射性標識の存在によって、細胞増殖性疾患が示され得る。
【００９２】
スクリーニング検定では、本発明の化合物を使用して細胞増殖又はＣＹＰ２４活性を調節する他の化合物を同定することができる。研究道具としては、本発明の化合物を受容体結合分析及びＣＹＰ２４の局在を研究するためのアッセイ法で使用できる。このようなアッセイ法においても、該化合物を放射性標識することができる。
【実施例】
【００９３】
次の実施例は、本発明の例示であり、本発明を限定するものではない。
例
材料及び方法
特に示さない限り、全ての反応を超高純度アルゴン雰囲気下で撹拌したオーブン乾燥ガラス器具内で実施した。ＴＨＦを使用直前にＮａ／ベンゾフェノンケチルから蒸留した。オルガノリチウムを既知の方法に従って使用前に滴定した（Ｓｕｆｆｅｒｔ，Ｊ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８９，５４，５０９−５１０）。塩化メチレン（ＣＨ2Ｃｌ2）及びトリエチルアミン（Ｅｔ3Ｎ）を使用前に水酸化カルシウムから蒸留した。他の試薬の全ては、供給業者から受け取ったときに使用した。分析的ＴＬＣ分析は、予備被覆したガラス支持シリカゲルプレート（Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Ｆ254，２５０ｍｍの厚さ）上で実施し、そしてｐ−アニスアルデヒド又はＫＭｎＯ4染色で視覚化した。カラムクロマトグラフィーは、短経路シリカゲル（粒度＜２３０メッシュ）又はフラッシュシリカゲル（粒度２３０−４００メッシュ）を使用して実行した。予備プレートクロマトグラフィーは、Ａｎａｌｔｅｃｈ社製シリカゲル被覆ガラス予備プレート（５００−１０００μｍ）を使用して実施し、そしてＵＶによって分析した。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、２個の２５ｍＬ／ｍｉｎ分取ポンプヘッドを備えたレイニンＨＰＬＣシステムを使用し、Ｃ−１８結合シリカとして６０Åシリカゲル（8μｍ細孔寸法）で満たされたレイニンＤｙｎａｍａｘ  １０ｍｍ×２５０ｍｍ（半分取）カラム及び２６５ｎｍに設定されたレイニンＤｙｎａｍａｘＵＶ−Ｃデュアルビーム可変波長検出器を使用して実施した。収率は、純粋な生成物について報告しており（それらのクロマトグラフィー及び分光学的安定性に基づき＞９５％）、且つ、最適化していない。旋光度は、パーキン・エルマー１４１偏光計を使用してＮａラインで測定した。
【００９４】
核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、バリアンＸＬ−４００分光計で1Ｈについては４００ＭＨｚ、13Ｃについては１００ＭＨｚで操作して得た。化学シフトはｐｐｍ（δ）で報告し、且つ、ＣＤＣｌ3（1Ｈについては７．２６ｐｐｍ及び13Ｃについては７７．０ｐｐｍ）及びテトラメチルシラン（ＴＭＳ，1Ｈについては０．００ｐｐｍ ）を基準とする。紫外線（ＵＶ）スペクトルは、Ｃａｒｙ  Ｂｉｏ４００分光光度計を周囲温度で使用して得た。赤外線スペクトル（ＩＲ）のスペクトルは、パーキンエルマー１６００シリーズＦＴ−ＩＲ装置を使用して得た。吸収バンドは、波数（ｃｍ-1）で報告する。低分解能質量スペクトル及び高分解能質量スペクトル（ＬＲＭＳ及びＨＲＭＳ）は、オハイオ州立大学にある質量分析施設においてＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ＱＴＯＦ エレクトロスプレー質量分光計で電子衝突イオン化又は化学イオン化（ＥＩ又はＣＩ）により得た。
【００９５】
例１：化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ａ）の合成：
（ｉ）ケトンVII（ａ）（Ｒ1＝ＣＦ3）の調製
【化１４】
0005449767.tif 000015
メチルホスホン酸ジメチル（１０g，０．０８０６４ｍｏｌ）の４００ｍＬのＴＨＦ中撹拌溶液に窒素雰囲気下で−７８℃のｎ−ＢｕＬｉヘキサン溶液（７５．６ｍＬ，１．６Ｍ，０．１２０９６ｍｏｌ）を添加した。完全に添加した後に、該反応混合物を−７８℃で７５分間撹拌した。塩化トリフルオルアセチルIX（ａ）（２５．４ｇ、０．１２０９５２３ｍｏｌ）を１００ｍＬのＴＨＦに溶解させてなる溶液を−７８℃で添加した。完全に添加した後に、該反応混合物を−７８℃で９０分間撹拌し、次いで１００ｍＬの水に注いだ。ＴＨＦを減圧下で除去し、そして残留物をブラインで飽和させ、酢酸エチルで抽出した（１５０ｍＬ，１００ｍＬ）。混合された有機層を水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、そして真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル、ヘキサン）により精製してケトンVII（ａ）（Ｒ1＝ＣＦ3）（１０．６４ｇ，６０％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，２００ＭＨｚ）：δ３．８７（３Ｈ，ｓ）、３．８３（３Ｈ，ｓ）、２．４１（１Ｈ，ｓ）、２．８３（１Ｈ，ｓ）；質量（ｍ／ｚ）：２２１．０（Ｍ+，１００％）。
【００９６】
（ii）オキシムＶ（ａ）（Ｒ1＝ＣＦ3、Ｒ2＝ＣＨ3）の製造
【化１５】
0005449767.tif 000016
ケトンVII（ａ）（Ｒ1＝ＣＦ3）（５ｇ，０．０２２７２ｍｏｌ）を２０ｍＬのピリジンに溶解させ、そしてメトキシルアミン塩酸塩VIII（ａ）（２．２７７ｇ，０．０２７２７ｍｏｌ）を窒素雰囲気下で添加した。該反応混合物を室温で７日間撹拌した。反応の完了後に、水を添加し、そして酢酸エチルで抽出した（１５０ｍＬ，１００ｍＬ）。混合された有機層を水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、そして真空中で濃縮して、オキシムＶ（ａ）を得た（Ｒ1＝ＣＦ3、Ｒ2＝ＣＨ3）（３．６７ｇ，６５％）。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，２００ＭＨｚ）δ３．８４（３Ｈ，ｓ）、３．８２（３Ｈ，ｓ）、３．７９（３Ｈ，ｓ）、２．４４（１Ｈ，ｓ）、２．２４（１Ｈ，ｓ）；質量（ｍ／ｚ）：２５１．１（Ｍ+，１００％）。
【００９７】
（iii）ＣＤ環オキシムIV（ａ）（Ｒ1＝ＣＦ3、Ｒ2＝ＣＨ3、ＰＧ＝ＴＢＳ）の製造
【化１６】
0005449767.tif 000017
ＫＯｔＢｕ（０．４９９９ｇ，０．００４４６４ｍｏｌ）を１５ｍＬのＴＨＦ中に窒素雰囲気下で溶解させ、そして０℃に冷却した。ホスホン酸エステルＶ（ａ）（１．１１１ｇ，０．００４４６４ｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１０ｍＬ）を０℃で添加し、そしてこの黄色の溶液を３０分間撹拌した。次いで、ＣＤ環アルデヒドVI（ａ）（１ｇ，０．００２９７６ｍｏｌ）の１５ｍＬのＴＨＦ溶液を０℃で添加した。完全に添加した後に、氷浴を取り除き、そして該反応混合物を４時間室温で撹拌した。完全に転化させた後に、該反応混合物を７５ｍＬの水に注ぎ、そして酢酸エチルで抽出した（１００ｍＬ）。混合された有機層を水で洗浄し、乾燥させ、そして真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーで精製し、オキシムIV（ａ）（Ｒ1＝ＣＦ3、Ｒ2＝ＣＨ3、ＰＧ＝ＴＢＳ）（ｌ．ｌｇ，８０．４％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，２００ＭＨｚ）δ６．４３（２Ｈ，ｍ）、５．３１（１Ｈ，ｍ）、４．１２（１Ｈ，ｍ）、４．０１（３Ｈ，ｓ）、２．４５−１．２１（1２Ｈ，ｍ）、１．０７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ）、０．９４（１２Ｈ，ｍ）、０．０１（６Ｈ，ｓ）；質量（ｍ／ｚ）：４６０．１（Ｍ+，１００％）。
【００９８】
（iv）ＣＤ環ケトンII（ａ）（Ｒ1＝ＣＦ3、Ｒ2＝ＣＨ3）の製造
【化１７】
0005449767.tif 000018
ＴＢＡＦ溶液（３．１６ｍＬ，１ＭのＴＨＦ溶液）を滴下でオキシムIV（ａ）（Ｒ1＝ＣＦ3、Ｒ2−ＣＨ3、ＰＧ＝ＴＢＳ）（５８０ｍｇ，０．００１０２６ｍｏｌ）に添加し、そして室温で１０時間撹拌した。完全に転化させた後に、水７５ｍＬを添加し、そして酢酸エチルで抽出した（１５０ｍＬ，１００ｍＬ）。混合された有機層を水で洗浄し、乾燥させ、そして真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーで精製し、脱保護された生成物を得た（３２６ｍｇ，７８．８％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，２００ＭＨｚ）δ６．４１（２Ｈ，ｍ）、５．３７（１Ｈ，ｍ）、４．１４（１Ｈ，ｍ）、４．０１（３Ｈ，ｓ）、２．４５−１．１０（1２Ｈ，ｍ）、１．０２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ）、０．８０（３Ｈ，ｓ）；質量（ｍ／ｚ）：３４６．４（Ｍ+，１００％）。
【００９９】
脱保護生成物（２２０ｍｇ，０．０００６３ｍｏｌ）を１５ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2に溶解してなる溶液に、ＰＤＣ（５７５ｍｇ，０．００１５３ｍｏｌ）及びオーブン乾燥セライト（５００ｍｇ）を添加し、そしてこの混合物を１６時間撹拌したが、この間、該懸濁液の色は、橙色から茶色に変化した。Ｅｔ2Ｏを添加し、そしてこの混合物をセライトでろ過した。残留物をＥｔ2Ｏ（２×１００ｍＬ）で抽出し、そして混合された有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、揮発性物質を真空中で除去し、次いで残留物をカラムクロマトグラフィーで精製し、ＣＤ環ケトンII（ａ）（Ｒ1＝ＣＦ3、Ｒ2＝ＣＨ3）（１６５ｍｇ，７５．４％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，２００ＭＨｚ）δ６．４５（２Ｈ，ｍ）、５．３２（１Ｈ，ｍ）、４．０３（３Ｈ，ｓ）、２．８５（１Ｈ，ｍ）、２．５７−１．７５（１１Ｈ，ｍ）、１．６１−０．７５（６Ｈ，ｍ）；質量（ｍ／ｚ）：３４４．１（Ｍ+，１００％）。
【０１００】
（ｖ）化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ａ）の製造
【化１８】
0005449767.tif 000019
Ａ環の酸化ホスフィンIII（ａ）（Ｒ3＝ＯＴＢＳ，Ｒ4＝ＣＨ2，ＰＧ＝ＴＢＳ）（４４０ｍｇ，０．０００７４６ｍｏｌ）を５ｍＬのＴＨＦに撹拌してなる溶液にｎ−ＢｕＬｉのヘキサン溶液（１．６Ｍ，０．４６６ｍＬ，０．０００７４６ｍｏｌ）を−７８℃で添加し、この深紅色の溶液を２０分間撹拌した。次いで、ＣＤ環ケトンII（ａ）（Ｒ1＝ＣＦ3、Ｒ2＝ＣＨ3）（８０ｍｇ，０．０００２３３２ｍｏｌ）を４ｍＬのＴＨＦに溶解してなる溶液を−７８℃で添加した。該反応混合物を−７８℃で１時間撹拌した。完全に転化させた後に、１０ｍＬの２０％酒石酸Ｎａ−Ｋを添加し、次いで酢酸エチルで抽出した（２×７５ｍＬ）。混合された有機層を水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、そして真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーで精製し、ＴＢＳ保護化合物（２０Ｒ）− Ｉ（ａ）（１２０ｍｇ，７２．６％）を得た。
【化１９】
0005449767.tif 000020
ＴＢＡＦ溶液（０．２５４ｍＬ，ＴＨＦ中１Ｍ，０．００００２５４２ｍｏｌ）を滴下でＴＢＳ保護化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ａ）（６０ｍｇ，０．００００８４７ｍｏｌ）に添加し、そして室温で１０時間撹拌した。完全に転化させた後に、水（３０ｍＬ）を添加し、そして酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。混合された有機層を水で洗浄し、そしてＮａ2ＳＯ4で乾燥させた。最初に残留物をカラムクロマトグラフィーで精製し、その後分取ＨＰＬＣで精製して化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ａ）を得た（６ｍｇ）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，２００ＭＨｚ）δ６．４１（３Ｈ，ｍ）、６．１１（ＩＨ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ）、５．３４（２Ｈ，ｍ）、５．０１（１Ｈ，ｓ）、４．４６（１Ｈ，ｍ）、４．２２（１Ｈ，ｍ）、４．０５（３Ｈ，ｓ）、２．８１（１Ｈ，ｍ）、２．６２（１Ｈ，ｍ）、２．４５−１．４６（１５Ｈ，ｍ）、１．１２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ）、０．６８（３Ｈ，ｓ）；質量（ｍ／ｚ）：４８０．３（Ｍ+，２０％）；４６２．０（Ｍ+Ｈ2Ｏ，５０％）、１４８．９（１００％）。ＨＰＬＣ純度８９．６％（室温３４．４５７分）、Ｚｏｒｂａｘ−ＳＢ−Ｃ１８  １５０×４．６ｍｍ、３．５ミクロン、２６６ｎｍ、酢酸アンモニウム：水：メタノール：アセトニトリル（勾配）。
【０１０１】
例２：化合物（２０Ｒ）− I（ｃ）の合成
（ｉ）ケトンVII（Ｒ1＝シクロプロパン）の製造
【化２０】
0005449767.tif 000021
メチルホスホン酸ジメチル（１０ｇ，０．０８０６４ｍｏｌ）の４００ｍＬのＴＨＦ中の撹拌溶液に、窒素雰囲気下で−７８℃のｎ−ＢｕＬｉヘキサン溶液（７５．６ｍＬ，１．６Ｍ，０．１２０９６ｍｏｌ）を添加した。完全に添加した後に、該反応混合物を−７８℃で７５分間撹拌した。塩化シクロプロピルカルボニルIX（ｃ）（１２．６ｍＬ，０．１２０９６）を１００ｍＬのＴＨＦに溶解してなる溶液を−７８℃で添加した。完全に添加した後に、該反応混合物を−７８℃で９０分間撹拌し、次いで１００ｍＬの水に注いだ。ＴＨＦを減圧下で除去し、そして残留物をブラインで飽和させ、酢酸エチルで抽出した（１５０ｍＬ，１００ｍＬ）。混合された有機層を水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、そして真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル、ヘキサン）により精製し、ケトンVII（ｃ）（Ｒ1＝シクロプロパン）を黄色のオイルとして得た（７ｇ，４５．２％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，２００ＭＨｚ）δ３．８８（３Ｈ，ｓ）、３．８０（３Ｈ，ｓ）、３．２８（１Ｈ，ｓ）、３．１９（１Ｈ，ｓ）、２．１７（１Ｈ，ｍ）、１．１８−０．９３（４Ｈ，ｍ）；質量（ｍ／ｚ）：１９３．０（Ｍ+，１００％）。
【０１０２】
（ii）オキシムＶ（ｃ）（Ｒ1＝シクロプロパン，Ｒ2＝ＣＨ3）の製造
【化２１】
0005449767.tif 000022
ケトンVII（ｃ）（Ｒ1＝シクロプロパン）（５ｇ，０．０２６０４ｍｏｌ）を２０ｍＬのピリジンに溶解させ、そしてメトキシルアミン塩酸塩VIII（ａ）（２．５０１２５ｇ，０．０２９９ｍｏｌ）を窒素雰囲気下で添加した。該反応混合物を室温で７日間撹拌した。反応の完了後に、水を添加し、そして酢酸エチルで抽出した（１５０ｍＬ，１００ｍＬ）。混合された有機層を水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、そして真空中で濃縮して、オキシムＶ（ｃ）（Ｒ1＝シクロプロパン，Ｒ2＝ＣＨ3）（３．５ｇ  ６０．８％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，２００ＭＨｚ）δ３．８２（３Ｈ，ｓ）、３．８０（３Ｈ，ｓ）、３．７６（３Ｈ，ｓ）、３．１７（１Ｈ，ｓ）、２．９４（１Ｈ，ｓ）、１．６３（１Ｈ，ｍ）、０．９１（４Ｈ，ｍ）；質量（ｍ／ｚ）：２２１．９（Ｍ+，１００％）。
【０１０３】
（iii）ＣＤ環オキシムIV（ｃ）（Ｒ1＝シクロプロパン，Ｒ2＝ＣＨ3、ＰＧ＝ＴＢＳ）の製造
【化２２】
0005449767.tif 000023
ＫＯｔＢｕ（０．４９９９ｇ，０．００４４６４ｍｏｌ）を１５ｍＬのＴＨＦ中に窒素雰囲気下で溶解させ、そして０℃に冷却した。ホスホン酸エステルＶ（ｃ）（０．９８６６ｇ  ０．００４４６４ｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解してなる溶液を０℃で添加し、そしてこの黄色の溶液を３０分間撹拌した。次いで、ＣＤ環アルデヒドVI（ａ）（１ｇ，０．００２９７６ｍｏｌ）を１５ｍＬのＴＨＦに溶解してなる溶液を０℃で添加した。完全に添加した後に、氷浴を取り除き、そして該反応混合物を４時間室温で撹拌した。完全に転化させた後に、該反応混合物を７５ｍＬの水に注ぎ、そして酢酸エチルで抽出した（１００ｍＬ）。混合された有機層を水で洗浄し、乾燥させ、そして真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーで精製し、オキシムIV（ｃ）（Ｒ1＝シクロプロパン，Ｒ2＝ＣＨ3、ＰＧ＝ＴＢＳ）を得た（１ｇ，７８．７％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，２００ＭＨｚ）δ６．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ）、６．４１（１Ｈ，ｍ）、５．３１（１Ｈ，ｍ）、４．１５（１Ｈ，ｍ）、３．８２（３Ｈ，ｓ）、２．４５−１．２１（１２Ｈ，ｍ）、１．０７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ）、０．９４（１３Ｈ，ｍ）、０．７３（３Ｈ，ｍ）、０．０１（６Ｈ，ｓ）；質量（ｍ／ｚ）：４３２．１（Ｍ+，１００％）。
【０１０４】
（iv）ＣＤ環ケトンII（ｃ）（Ｒ1＝シクロプロパン，Ｒ2＝ＣＨ3）の製造
【化２３】
0005449767.tif 000024
ＴＢＡＦ溶液（３．４８ｍＬ，１ＭのＴＨＦ溶液）を滴下でオキシムIV（ｃ）（Ｒ1＝シクロプロパン，Ｒ2＝ＣＨ3、ＰＧ＝ＴＢＳ）（６００ｍｇ，０．００１３９２ｍｏｌ）に添加し、そして室温で１０時間撹拌した。完全に転化させた後に、水７５ｍＬを添加し、そして酢酸エチルで抽出した（１５０ｍＬ，１００ｍＬ）。混合された有機層を水で洗浄し、乾燥させ、そして真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーで精製し、脱保護された生成物を得た（３６０ｍｇ，８１．５％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，２００ＭＨｚ）δ６．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ）、６．３８（１Ｈ，ｍ）、５．３７（１Ｈ，ｍ）、４．１９（１Ｈ，ｍ）、３．８０（３Ｈ，ｓ）、２．４５−１．１０（１２Ｈ，ｍ）、１．０２（７Ｈ，ｍ）、０．８０（３Ｈ，ｍ）；質量（ｍ／ｚ）：３１８．１（Ｍ+，１００％）。この脱保護生成物（２４０ｍｇ，０．０００７５ｍｏｌ）を１５ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2に溶解してなる溶液に、ＰＤＣ（６８３．５ｍｇ，０．００１８１７ｍｏｌ）及びオーブン乾燥セライト（５００ｍｇ）を添加し、そしてこの混合物を１６時間撹拌したが、この間、該懸濁液の色は、橙色から茶色に変化した。Ｅｔ2Ｏを添加し、そしてこの混合物をセライトでろ過した。残留物をＥｔ2Ｏ（２×１００ｍＬ）で抽出し、そして混合された有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、揮発性物質を真空中で除去し、次いで残留物をカラムクロマトグラフィーで精製し、ＣＤ環ケトンII（ｃ）（Ｒ1＝シクロプロパン，Ｒ2＝ＣＨ3）を得た（２０２ｍｇ，８４．７％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，２００ＭＨｚ）δ６．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ）、６．３９（１Ｈ，ｍ）、５．３７（１Ｈ，ｍ）、３．８３（３Ｈ，ｓ）、２．８５（１Ｈ，ｍ）、２．５７−１．７５（１３Ｈ，ｍ）、１．６１−０．７５（９Ｈ，ｍ）；質量（ｍ／ｚ）：３１６．１（Ｍ+，１００％）。
【０１０５】
（ｖ）化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｃ）の製造
【化２４】
0005449767.tif 000025
Ａ環酸化ホスフィンIΙI（ａ）（Ｒ3＝ＯＴＢＳ，Ｒ4＝ＣＨ2，ＰＧ＝ＴＢＳ）（５５９．７ｍｇ，０．００１０１５ｍｏｌ）の５ｍＬのＴＨＦ撹拌溶液にｎ−ＢｕＬｉのヘキサン溶液（１．６Ｍ，０．６３４９ｍＬ，０．００１０１５ｍｏｌ）を−７８℃で添加し、この深紅色の溶液を２０分間撹拌した。次いで、ＣＤ環ケトンII（ｃ）（Ｒ1＝シクロプロパン，Ｒ2＝ＣＨ3）（１００ｍｇ，０．０００３１７４ｍｏｌ）を４ｍＬのＴＨＦに溶解してなる溶液を−７８℃で添加した。該反応混合物を−７８℃で１時間撹拌した。完全に転化させた後に、１０ｍＬの２０％酒石酸Ｎａ−Ｋを添加し、次いで酢酸エチルで抽出した（２×７５ｍＬ）。混合された有機層を水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、そして真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーで精製し、ＴＢＳ保護化合物（２０Ｒ）−I（ｃ）を得た（１６０ｍｇ，７４．２％）。
【化２５】
0005449767.tif 000026
ＴＢＡＦ溶液（０．３９７６ｍＬ，ＴＨＦ中１Ｍ，０．０００３９７６ｍｏｌ）を滴下でＴＢＳ保護化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｃ）（９０ｍｇ，０．０００１３２５ｍｏｌ）に添加し、そして室温で１０時間撹拌した。完全に転化させた後に、水（３０ｍＬ）を添加し、そして酢酸エチルで抽出した（２×５０ｍＬ）。混合された有機層を水で洗浄し、そしてＮａ2ＳＯ4で乾燥させた。最初に残留物をカラムクロマトグラフィーで精製し、その後分取ＨＰＬＣで精製して化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｃ）を得た（１４ｍｇ）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，２００ＭＨｚ）δ６．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ）、６．３９（２Ｈ，ｍ）、６．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ）、５．３４（２Ｈ，ｍ）、５．０２（１Ｈ，ｓ）、４．４４（１Ｈ，ｍ）、４．２３（１Ｈ，ｍ）、３．８２（３Ｈ，ｓ）、２．８１（１Ｈ，ｍ）、２．６２（１Ｈ，ｍ）、２．４５−１．４６（１５Ｈ，ｍ）、１．１２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ）、０．９３−０．８４（７Ｈ，ｍ）；質量（ｍ／ｚ）：４５２．３（Ｍ+，１００％）。ＨＰＬＣ純度９３．７６％（室温３２．０７４分）、Ｚｏｒｂａｘ−ＳＢ−Ｃ１８  １５０×４．６ｍｍ、３．５ミクロン、２２０ｎｍ、酢酸アンモニウム：水：メタノール：アセトニトリル（勾配）。
【０１０６】
例３：化合物Ｉ（ｅ）の合成
（ｉ）ケトンVII（ｅ）（Ｒ1＝ｔ−ブチル）の製造
【化２６】
0005449767.tif 000027
１００ｍＬの回収フラスコにメチルホスホン酸ジメチル（１．０ｇ，８．１ｍｍｏｌ）を装入し、そして４０ｍＬの蒸留ＴＨＦに溶解させた。この溶液を−７８℃に冷却し、そしてｎ−ブチルリチウム（１．６Ｍ溶液７．５ｍＬ，１２．０ｍｍｏｌ，１．５当量）をシリンジによって添加した。次いで、この混合物をこの温度で１時間撹拌させた。塩化ピバロイル（IX（ｅ）、Ｒ1＝ｔ−ブチル）（１．４５ｇ，１２．０ｍｍｏｌ，１．５当量）を１０ｍＬの蒸留ＴＨＦに溶解させ、−７８℃にまで冷却し、そしてこの混合物に１５分間にわたって添加した。この反応をＴＬＣで監視した。次いで、この混合物を酢酸エチルが入った分液漏斗に流し込み、そして酢酸エチルで抽出した（３×５０ｍＬ）。一緒にした抽出物を水（２×５０ｍＬ）、ブライン溶液（１×２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、そしてろ過した。このろ過液を真空内で濃縮して粗生成物を得た。この粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して（０〜１０％のメタノール／酢酸エチル）VIII（ｅ）（Ｒ1＝ｔ−ブチル）を得た（１．２ｇ，７０％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ３．８１（ｓ，３Ｈ）、３．８０（ｓ，３Ｈ）、３．１８（ｄ，２Ｈ，ＪCP＝２１．６Ｈｚ）、１．１８（ｓ，９Ｈ）；13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：δ２０７．３（ｄ，ＪCP＝２９．２Ｈｚ）、５２．９（ｄ，ＪCＰ＝２５．６Ｈｚ）、４５．３（ｄ，ＪCP＝１６．４Ｈｚ）、３５．６，３４．３，２５．９；ＨＲＭＳ：ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ8Ｈ17Ｏ4ＰＮａ+［Ｍ＋Ｎａ］：２３１．０７５６；ｆｏｕｎｄ：２３１．０７４７。
【０１０７】
（ii）オキシムＶ（ｅ）（Ｒ1＝ｔ−ブチル、Ｒ2＝ＣＨ3）の製造
【化２７】
0005449767.tif 000028
１０ｍLの回収フラスコにホスホネートVII（ｅ）（Ｒ1＝ｔ−ブチル）（０．２０ｇ，０．９６ｍｍｏｌ）を装入し、そして１．９ｍLの無水ピリジンに溶解させた。Ｏ−メチルヒドロキシルアミン塩酸塩（VIII（ａ）、Ｒ2＝ＣＨ3）（９６ｍｇ，１．１ｍｍｏｌ，１．１５当量）及び４Åの粉末モレキュラーシーブ（５００ｍｇ／ｍｍｏｌのケトン）をこの反応フラスコに添加し、この溶液を室温で４８時間にわたり撹拌し続けた。この反応をＴＬＣで監視した。次いで、この混合物をエーテルの入った分液漏斗に流し込み、そしてエーテル（３×２５ｍＬ）で抽出した。一緒にした抽出物を水（１×２５ｍＬ）、ブライン溶液（１×２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、そしてろ過した。このろ過液を真空内で濃縮して粗生成物を得、そして該生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して（１００％酢酸エチル）Ｖ（ｅ）を得た（０．１７６ｇ，７７％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ３．８０（ｓ，３Ｈ）、３．６９（ｓ，３Ｈ）、３．６７（ｓ，３Ｈ）、２．９０（ｄ，２Ｈ，ＪCP＝２４Ｈｚ）、１．１１（ｓ，９Ｈ）；13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：δ１５７．６（ｄ，ＪCP＝４２Ｈｚ）、６１．３，５２．６（ｄ，ＪCP＝２５．６Ｈｚ）、３６．９（ｄ，ＪCP＝８．４Ｈｚ）、２７．８，２４．８，２３．４；ＨＲＭＳ：ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ9Ｈ20Ｏ4ＰＮａ+［Ｍ＋Ｎａ］：２６０．１０２２；ｆｏｕｎｄ：２６０．１０１９。
【０１０８】
（iii）ＣＤ環オキシムIV（ｅ）（Ｒ1＝ｔ−ブチル、Ｒ2＝ＣＨ3）の製造
【化２８】
0005449767.tif 000029
１０ｍＬの回収フラスコにカリウムｔ−ブトキシド（９．０ｍｇ，０．０８２ｍｍｏｌ，１．１当量）を装入し、０．７ｍLの蒸留ＴＨＦに溶解させ、そして０℃に冷却した。オキシムＶ（ｅ）（Ｒ1＝ｔ−ブチル、Ｒ2＝ＣＨ3）（２０ｍｇ，０．０８２ｍｍｏｌ，１．１当量）を０．５ｍＬの蒸留ＴＨＦ溶液として添加した。この溶液を３０分間撹拌し続けた。次いで、１ｍＬの蒸留ＴＨＦ中のアルデヒドVＩ（ａ）（２５ｍｇ，０．０７４ｍｍｏｌ）を該反応混合物に数分間にわたってカニューレにより０℃で添加した。添加が完了した後に、この混合物を徐々に室温にまで温め、次いで約４時間撹拌した。ＴＬＣから、出発原料が完全に消費されたことが示された。この反応を５ｍＬの蒸留水の添加によって止め、次いで、酢酸エチルが入った分液漏斗に流し込んだ。この混合物を酢酸エチルで抽出した（３×１０ｍＬ）。一緒にした抽出物を水（１×１０ｍＬ）、ブライン溶液（１×１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、そしてろ過した。このろ過液を真空内で濃縮して粗生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜１０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して粘稠なオイルを得た。ポリプロピレンの小瓶にこのオイルを装入し（２０ｍｇ，０．０４５ｍｍｏｌ）、１．０ｍＬの無水アセトニトリルに溶解させた。この溶液に０．１８ｍＬのＨＦ（４．４ｍｍｏｌ，４９％水溶液，９８当量）をシリンジにより室温で添加し、次いで、この混合物を室温で１時間撹拌させた。ＴＬＣは、この反応が完了したことを示した。この反応混合物をエーテルで希釈し（２５ｍＬ）、ＮａＨＣＯ3の飽和溶液を二酸化炭素がもはや遊離しなくなるまで添加した。次いで、該反応混合物を酢酸エチルが入った分液漏斗に流し込み、そして酢酸エチルで抽出した（４×２５ｍＬ）。この一緒にした抽出物を水（１×２５ｍＬ）及びブライン溶液（１×２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、そしてろ過した。このろ過液を真空内で濃縮してＥ及びＺの２：１比の混合物としての粗生成物を得た。この粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製（０〜１０％酢酸エチル／ヘキサン）して８ｍｇの純粋なＥ異性体及び３ｍｇのＺ異性体を得た（全部で７４％）。［α］25D＝＋５．４（ｃ０．６７，ＣＨＣｌ3）1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ６．３６−６．２８（ｍ，ＩＨ）、５．９２（ｄ，ＩＨ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ）、５．３５−５．３４（ｍ，１Ｈ）、４．１８（ｂｒ，１Ｈ）、３．８２（ｓ，３Ｈ）、２．４２−２．１６（ｍ，４Ｈ）、２．０１−１．７１（ｍ，５Ｈ）、１．５８−１．３７（ｍ，４Ｈ）、１．１４（ｓ，９Ｈ）、１．０３（ｓ，３Ｈ）、１．０２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）；13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：δ１６０．５、１５９．３、１３９．９、１２０．６、１１９．８、６９．２、６１．５、５４．３、４６．４、４１．２、３６．９、３５．４、３３．９、３１．７、３０．２、２８．７、２１．８、１８．３、１７．８；ＩＲ（３４４３（ｍ）、２９５４（ｓ）、２９２８（ｓ）、２８６０（ｓ）、１４５７（ｍ）、１３６４（ｗ）、１１４３（ｗ）、１０５３（ｓ）、９９８（ｗ）、８９０（ｍ）ｃｍ-1；ＨＲＭＳ：ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ21Ｈ35ＮＯ2Ｎａ+［���＋Ｎａ］：３５６．２５５９；ｆｏｕｎｄ：３５６．２５４６。
【０１０９】
（iv）ＣＤ環ケトンII（ｅ）（Ｒ1＝ｔ−ブチル、Ｒ2＝ＣＨ3）の製造
【化２９】
0005449767.tif 000030
１０ｍＬの回収フラスコにＣＤ環オキシムIV（ｅ）（Ｒ1＝ｔ−ブチル、Ｒ2＝ＣＨ3）（１０ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）を装入し、０．６ｍＬの蒸留ＣＨ2Ｃｌ2に溶解させた。この溶液に二クロム酸ピリジニウム（２４ｍｇ，０．０７１ｍｍｏｌ，２．４当量）及び１５ｍｇのオーブン乾燥セライトを一部に室温で添加した。室温で１２時間撹拌した後に、ＴＬＣから、出発原料が完全に消費されたことが示された。この混合物をカラムクロマトグラフィーで直接精製（０〜１０％酢酸エチル／ヘキサン）してＣＤ環ケトンII（ｅ）（７．８ｍｇ，７９％）を得た。［α］25D＝＋１１．８（ｃ０．４，ＣＨＣｌ3）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ６．３４−６．２６（ｍ，１Ｈ）、５．８９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ）、５．３３−５．３２（ｍ，１Ｈ）、３．８２（ｓ，３Ｈ）、２．８６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４，１０．４Ｈｚ）、２．４８−２．３７（ｍ，２Ｈ）、２．３２−２．２０（ｍ，４Ｈ）、２．１６−１．８９（ｍ，４Ｈ）、１．８３−１．７８（ｍ，１Ｈ）、１．１４（ｓ，９Ｈ）、１．０８（ｓ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、０．８１（ｓ，３Ｈ）；13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：δ２１１．０、１６０．３、１５７．１、１３９．４、１２１．０、１２０．２、６３．１、６１．５、５３．８、４１．０、４０．５、３６．９、３４．４、３２．６、２８．６、２７．１、２４．０、２１．４、１７．２；ＩＲ：２９５４（ｓ）、２９３１（ｓ）、２８９５（ｓ）、１７１３（ｓ）、１４５４（ｍ）、１３７２（ｗ）、１２０２（ｗ）、１０５５（ｓ）、９７８（ｗ）ｃｍ-1；ＨＲＭＳ：ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ21Ｈ33ＮＯ2Ｎａ+［Ｍ＋Ｎａ］：３５４．２４０３；ｆｏｕｎｄ：３５４．２４２７。
【０１１０】
（ｖ）化合物Ｉ（ｅ）の製造
【化３０】
0005449767.tif 000031
１０ｍＬの回収フラスコに無水酸化ホスフィンIII（ａ）（Ｒ3＝Ｏ−トリブチルシリル（ＯＴＢＳ）、Ｒ4＝ＣＨ2）（４５ｍｇ，０．０７７ｍｍｏｌ，３．２当量）を装入し、蒸留ＴＨＦに溶解させ、そして−７８℃にまで冷却した。ｎ−ブチルリチウム（１．６Ｍヘキサン溶液の４８μＬ，０．０７７ｍｍｏｌ，３．２当量）をシリンジにより滴下で数分間にわたって添加し、深紅色を生じさせた。この溶液を１０分間撹拌し続けた。無水ＣＤ環ケトンII（ｅ）（Ｒ1＝ｔ−ブチル、Ｒ2＝ＣＨ3）（８ｍｇ，０．０２４ｍｍｏｌ）を１ｍＬの蒸留ＴＨＦに溶解させ、そして−７８℃にまで冷却した。次いで、この溶液を該反応混合物にカニューレで添加したところ、この赤色は持続した。この溶液を−７８℃で３時間撹拌し、この時点で−７８℃で５ｍＬのｐＨ７緩衝液を添加することによって反応を停止させ、次いで室温に戻した。次いで、この混合物を酢酸エチルが入った分液漏斗に流し込み、酢酸エチルで抽出した（３×２５ｍＬ）。一緒にした抽出物を水（１×２５ｍＬ）、ブライン溶液（１×２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、そしてろ過した。このろ過液を真空内で濃縮して粗生成物を得、そしてこれを分取ＴＬＣプレートで簡単に精製（１％のＥｔ3Ｎで緩衝化された０〜１０％酢酸エチル／ヘキサン）して粘稠なオイルを得た。
【化３１】
0005449767.tif 000032
１０ｍＬの回収フラスコにこのオイルを装入し、１．０ｍＬの蒸留ＴＨＦに溶解させ、そしてこの溶液に弗化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（１ＭのＴＨＦ溶液の２８μＬ，０．０２８ｍｍｏｌ）をシリンジにより室温で添加した。この混合物を暗所内で２４時間にわたり室温で撹拌したが、この時に、ＴＬＣは、この反応が完了したことを示した。この混合物をカラムクロマトグラフィーで直接精製（１％トリエチルアミンで緩衝化された９９％酢酸エチル）して４．３ｍｇ（全体で８１％，３９％）のＩ（ｅ）を得た。このアナログをさらにＨＰＬＣで精製（半分取（１×２５ｃｍ）Ｃｈｉｒａｃｅｌ  ＯＤ，２．５ｍＬ／分）（３〜１０％のイソプロピルアルコール／ヘキサン）して３．４ｍｇ（６７％，３２％全収率）を得た（このＨＰＬＣ精製物質を同一の分析で微量注入したところ、Ｉ（ｅ）が９９．９％を超える純度であることが分かった）。Ｉ（ｅ）の保持時間は１１．６分である。［α］25D＝−７．３（ｃ０．１４，ＣＨＣｌ3）；1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ６．３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ）、６．３４−６．２６（ｍ，１Ｈ）、６．１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ）、５．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ）、５．３４−５．３３（ｍ，２Ｈ）、５．０１−５．００（ｍ，１Ｈ）、４．４５（ｂｒ，１Ｈ）、４．２４（（ｂｒ，１Ｈ）、３．８２（ｓ，３Ｈ）、２．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８，１２．４Ｈｚ）、２．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ）、２．４３−２．１７（ｍ，７Ｈ）、２．０７−１．８８（ｍ，３Ｈ）、１．８０−１．６６（ｍ，４Ｈ）、１．１４（ｓ，９Ｈ）、１．０５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、０．７０（ｓ，３Ｈ）；13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，１００ＭＨｚ）：δ１６０．６、１５９．１、１４７．６、１４２．５、１３９．９、１３２．９、１２４．９、１２１．０、１１９．９、１１６．９、１１１．７、７０．７、６６．９、６１．５、５８．４、５０．１、４５．１、４２．８、４１．１、３６．９、３５．３、３２．７、２９．４、２８．７、２８．１、２３．６、２１．１、１６．９；ＩＲ（薄膜）３３７７（ｍ）、２９５４（ｓ）、２９１９（ｍ）、１４５４（ｍ）、１３６６（ｗ）、１２０２（ｗ）、１０４９（ｓ）、９６７（ｗ）、８８４（ｗ）ｃｍ-1；ＨＲＭＳ：ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ30Ｈ45ＮＯ3Ｎａ+［Ｍ＋Ｎａ］：４９０．３２９１；ｆｏｕｎｄ：４９０．３３０８；ＵＶ（ＭｅＯＨ）λmax２４０ｎｍ（ε１２，２７４）。１００μｇの試料を、３．４ｍｇのアナログを３．４ｍＬのＡＣＳ等級メチルアルコールに溶解させ、そしてこれを小瓶に１００μＬ溶液として分与することによって調製した。次いで、それぞれの小瓶の内容物を真空内で濃縮した。ＵＶスペクトルを、３ｍＬのＡＣＳ等級メチルアルコールに溶解されたＩ（ｅ）の１００μｇ試料のうちの一つを使用することによって得た。
【０１１１】
例４：ＣＹＰ２４酵素アッセイ
（ｉ）材料及び試薬：
3Ｈ−１ａ，２５（ＯＨ）2Ｄ3
イソプロパノールで戻された基質（１ｍＭ）
Ｖ７９−ＣＹＰ２４細胞
ハイグロマイシン及び５％ウシ胎仔血清が追加されたＤＭＥＭ培地
ＤＭＥＭ＋１％ＢＳＡ培地
ＤＰＰＤ
９６ウェルプレート
メタノール
ジクロロメタン
飽和ＫＣｌ：ＫＣｌ  ３０ｇ，Ｈ2Ｏ  ４００ｍＬ
ケトコナゾール。
【０１１２】
（ii）手順：
１．細胞懸濁液の調製
このアッセイの１日目に、Ｖ７９−ＣＹＰ２４細胞の単層を１×ＰＢＳ緩衝液で１回洗浄し、次いで室温（およそ２２℃）で５分間トリプシン処理した。１×ＰＢＳを添加した。細胞を管に集め、細胞を遠心分離し（５００×ｇ，５分）、そしてＤＭＥＭ＋１％ＢＳＡ培地に再懸濁した。細胞を計数し、そして密度を２百万／１ｍＬに調節した。
【０１１３】
２．細胞の平板培養
８０μＬの細胞懸濁液を９６ウェルプレートのうち適切に標識されたウェルに添加した。プレートを３７℃で４５分間にわたり５％のＣＯ2を含む加湿雰囲気中でインキュベートした。
【０１１４】
３．化合物の添加
１０μＬの阻害剤（１０-6〜１０-10Ｍ）を添加し、次いで、３５〜４０分後に、１０μＬの基質［3Ｈ−１β］−１ａ，２５（ＯＨ）2Ｄ3（２０ｎＭ）を３７℃で２時間にわたって５％のＣＯ2を含む加湿雰囲気中で添加した。阻害剤と基質の両方を、１％ＢＳＡ培地を加えたＤＭＥＭ中で調製した。
【０１１５】
４．脂質抽出及び計数
この反応を停止させるために２５０μＬのメタノールを添加し、そして混合した。１２５ｍＬのクロロメタンを添加し、塊を覆い、そしてボルテックスした。１２５ｍＬのジクロロメタンを再度添加し、１２５ｍＬの飽和ＫＣｌを添加し、そしてボルテックスした。３０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。水性画分の３つの１００μＬアリコートを２００μＬのシンチレーション流体と混合し、そしてその放射活性をシンチレーションカウンタを使用して測定した。
全ての値をバックグラウンドに対して正規化した。
【０１１６】
（iii）結果：
１．このアッセイにおいて、化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ａ）は、ＣＹＰ２４の阻害で４８７．５ｎＭのＩＣ50を有していた。
２．このアッセイにおいて、化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｃ）は、ＣＹＰ２４の阻害で８５．９ｎＭのＩＣ50を有していた。
３．このアッセイにおいて、化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）は、ＣＹＰ２４の阻害で２０．７ｎＭのＩＣ50を有していた。
【０１１７】
（iv）参照：
１．国際公開ＰＣＴ／ＣＡ０３／００６２０号パンフレット。
【０１１８】
例５：ＣＹＰ２７Ａ１酵素アッセイ
（ａ）手順：
次の論文に記載された通りである：
Dilworth F J, Black S M, Guo Y D, Miller W L, Jones G. Construction of a P450c27 fusion enzyme: a useful tool for analysis of vitamin D3 25-hydroxylase (1996) Biochem J 320:267-271
Sawada N, Sakaki T, Ohta M, Inouye K. Metabolism of vitamin D (3)by human CYP27A1 (2000) Biochem Biophys Res Commun 273(3):977-84
（Ｂ）結果：
このアッセイにおいて、化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）は、ＣＹＰ２７Ａ１の阻害で１０００ｎＭを超えるＩＣ50を有していた。
【０１１９】
例６：ＶＤＲ 結合分析
（ｉ）試薬及び材料：
１．ＶＤＲ  ９．４ｐｍｏｌ／μＬ（ヒト，組換え体，Ｂｉｏｍｏｌ）
２．［3Ｈ］−１，２５（ＯＨ）2Ｄ3のエタノール溶液
３．１，２５（ＯＨ）2Ｄ3のエタノール溶液
４．ＴＥＫ300
Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ５０ｍＭ
ＥＤＴＡ  １．５ｍＭ
ＫＣｌ  ３００ｍＭ
ｐＨを７．４に調整（２５℃）
５．ＴＥＤＫ300
ＴＥＫ300 
ＤＴＴ（ジチオトレイトール）  １０ｍＭ（ＭＷ１５４．２４）
６．Ｔｒｉｓ緩衝液
２２．５０ｇのＴｒｉｓ−ＨＣｌ
５００ｍＬのＨ2Ｏ
１３．２５ｇＴｒｉｓ塩基
５００ｍＬのＨ2Ｏ
４℃に保持
７．デキストラン−Ｔ７０（分子量７０，０００）ファルマシア
８．木炭（ｃａｒｂｏｎ  ｄｅｃｏｌｏｒｉｚｉｎｇ  ｎｅｕｔｒａｌ，ノリット）フィッシャー・サイエンティフィック
９．ゼラチン（Ｇ−２６２５，シグマ）。
【０１２０】
（ii）試薬調製：
１．木炭のデキストラン溶液
（１）Ｔｒｉｓ緩衝液
等量のＴｒｉｓ−ＨＣｌとＴｒｉｓ塩基とを混合した。
（２）ノリット脱色天然木炭  ２．０ｇ
Ｔｒｉｓ緩衝液        １５０ｍＬ
を撹拌した。
（３）デキストランＴ−７０  ０．２ｇ
Ｔｒｉｓ緩衝液        ５０ｍＬ
（４）懸濁されたデキストランを木炭溶液に撹拌しつつゆっくりと滴下した。冷蔵庫で一晩保持した。使用前３０分間、連続的に混合しつつ氷上で保存した。
２．ＴＥＫ300／ゼラチン溶液
５０ｍｇのブタゼラチン
５ｍＬのＴＥＤＫ300溶液
を加熱し、撹拌し、次いで４℃まで冷却した。
５ｍＬのＴＥＤＫ300溶液 
３．エタノール中での１，２５（ＯＨ）2Ｄ3及び試験化合物の調製：
１，２５（ＯＨ）2Ｄ3：１２５、２５０、５００、１０００、２０００、４０００ｐｇ／２５μＬ（ストック１０-5Ｍ／２５μＬ＝１０００００ｐｇ／２５μＬ）。
【０１２１】
【表１】
0005449767.tif 000033
【０１２２】
試験化合物：１２５００、２５０００、５００００、１０００００、２０００００及び４０００００ｐｇ／２５μＬ（４×１０-5Ｍ／２５μＬ＝４０００００ｐｇ／２５μＬ）。
４．ＶＤＲの希釈：
２．５ｍＬのＴＥＤＫ300／ゼラチン溶液（５００μＬ／管）中１μＬのストックＶＤＲ （氷上で保持）。
【０１２３】
（iii）手順：
１．反応の設定
次の図表に従って管を標識した（それぞれ三重反復）。
【表２】
0005449767.tif 000034
【０１２４】
これらの管の全てをボルテックスで混合し、そして室温で１時間インキュベートした。１０μＬの３Ｈ−１，２５（ＯＨ）2Ｄ3を添加した。希釈を行い、ボルテックスで混合し、そして室温で１時間インキュベートした。
２．試料の処理
添加前の３０分間、木炭／デキストラン溶液を連続的に混合しつつ氷上に置いた。１００μＬの木炭／デキストラン溶液をそれぞれの管に添加し、よく撹拌し、そして氷上で３０分間インキュベートした。２０００ｒｐｍで１０分間４℃で遠心分離した。
３．計数
水性上相の１００μＬを２４ウェルシンチレーション計数プレートにピペットで移し、１個のウェル当たり６００μＬのシンチレーション流体を添加し、蓋をし、そしてよく混合した。該プレートを、シンチレーションカウンタを使用して試料につき５分間計数した。
【０１２５】
（iv）計算：
ＶＤＲから［3Ｈ］−１，２５（ＯＨ）2Ｄ3を５０パーセント置き換えるための１，２５（ＯＨ）2Ｄ3の量を１，２５（ＯＨ）2Ｄ3のＢ50として計算した。他の化合物のＶＤＲ結合を、１，２５（ＯＨ）2Ｄ3について１の値を基準にしてＢ50として計算した。
【０１２６】
【表３】
0005449767.tif 000035
【０１２７】
【表４】
0005449767.tif 000036
【０１２８】
（ｖ）結果：
式（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）の化合物は、６０ｎＭのＢ50を有していた。
【０１２９】
（vi）参照：
１．Ross TK,Prahl JM,DeLuca H. Overproduction of rat 1,25-dihydroxy vitamin D3 receptor in insect cells using the baculovirus expression system. (1991) Proc Natl Acd Sci USA 88:6555-6559
２．Wecksler WR, Norman AW. An hydroxapatite batch assay for the quantitation of 1 alpha, 25-dihydroxy vitamin D3-receptor complexes (1979) Anal Biochem 92:314-323
【０１３０】
例７：ＤＢＰ結合分析（ヒト血漿）
（ａ）試薬：
１．Ｔｒｉｓ緩衝液：２２．５０ｇのＴｒｉｓ−ＨＣｌ
５００ｍＬのＨ2Ｏ
２．１３．２５ｇのＴｒｉｓ塩基
５００ｍＬのＨ2Ｏ
４℃に保持
３．デキストラン−Ｔ７０（分子量７０，０００）ファルマシア
４．木炭（ｃａｒｂｏｎ  ｄｅｃｏｌｏｒｉｚｉｎｇ  ｎｅｕｔｒａｌ，ノリット）フィッシャリー
５．ＤＢＰ（ビタミンＤ結合蛋白質）（ヒト血漿）
６．［3Ｈ］２５（ＯＨ）Ｄ3
７．ゼラチン（Ｇ−２６２５シグマ）
（Ｂ）試薬調製：
１．Ｔｒｉｓ緩衝液
等量の２種のＴｒｉｓ緩衝液を混合する。
２．デキストラン被覆木炭の溶液
（１）木炭溶液の調製
ノリット脱色天然木炭 ２．０ g
Ｔｒｉｓ緩衝液  １５０ｍＬ
を撹拌する。
（２）デキストラン溶液の調製
デキストランＴ−７０    ０．２ｇ
Ｔｒｉｓ緩衝液    ５０ｍＬ
（３）デキストラン被覆木炭溶液の調製
デキストラン溶液を木炭溶液に撹拌しつつゆっくりと滴下した。
冷蔵庫で一晩保存した。
使用前の３０分間、連続的に撹拌しながらこれを氷上で保持した。
この溶液は、２ヶ月にわたって４℃に保持できる。
３．Ｔｒｉｓ緩衝液／ゼラチン溶液
２５０ｍｇのブタゼラチン
５０ｍＬのＴｒｉｓ緩衝液
を加熱し、撹拌し、そして氷上で冷却した。
使用直前に調製した。
４．ＤＢＰ溶液
ヒト血漿をＴｒｉｓ緩衝液／ゼラチン溶液で１：５０００に希釈した。
５．基準２５（ＯＨ）Ｄ3の希釈
ストック    １００００ｐｇ／５０μＬ
エタノールで０、６２．５、１２５、２５０、５００、７５０、１０００、１００００ｐｇ／５０μＬに希釈した。
６．基準１，２５（ＯＨ）2Ｄ3の希釈
ストック  ２０００００ｐｇ／５０μＬ（１０-5Ｍ／５０μＬ）
エタノールで６２５０、１２５００、２５０００、５００００、１０００００、２０００００ｐｇ／５０μＬに希釈した。
７．試験化合物の希釈
ストック  ２０００００ｐｇ／５０μＬ（１０-3Ｍ）
エタノールで１２５００、２５０００、５００００、１０００００、２０００００及び４０００００ｐｇ／５０μＬに希釈した。
８．［3Ｈ−２６，２７］−２５（ＯＨ）2Ｄ3溶液
ストック溶液をＴｒｉｓ緩衝液２００００ＣＰＭ／５０μＬで希釈した。
（Ｃ）アッセイ
【表５】
0005449767.tif 000037
【０１３１】
（Ｄ）計算：
５０パーセントの［3Ｈ］−２５（ＯＨ）Ｄ3を置き換えるための２５（ＯＨ）Ｄ3の量を、２５（ＯＨ）Ｄ3のＤＢＰ結合に対するＢ50として計算した。他の化合物のＤＢＰ結合を、２５（ＯＨ）Ｄ3の１の値を基準にしてＢ50として計算した。
（Ｅ）２５（ＯＨ）Ｄ3の希釈：
【表６】
0005449767.tif 000038
【０１３２】
（Ｆ）１，２５（ＯＨ）Ｄ3の希釈：
【表７】
0005449767.tif 000039
【０１３３】
（Ｇ）試験化合物の希釈：
【表８】
0005449767.tif 000040
【０１３４】
（Ｈ）結果：このアッセイにおいて、式（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）の化合物は、＞３５００ｎＭのＢ50を示した。
（Ｉ）参照：
Bouillon R, van Baelen H,Moor PD. Comparative study of the affinity of the serum vitamin D -binding protein. (1980) J Steroid Biochem 13:1029- 44. 
Jones L,Byrnes B,Palma F, Segev D, Mazur E.Displacement potency of vitamin D2 analogue in competitive protein-binding assay for 25 -hydroxy vitamin D3,24,25-dihydroxyvitamin D3 and 1,25-dihydroxyvitamin D3 (1980) J Clin Endocrinol Metab 50:773-775
【０１３５】
例８：ＣＹＰ２４転写活性アッセイ
（ｉ）材料及び試薬：
イソプロパノールで戻した１ａ，２５（ＯＨ）2Ｄ3  １ｍＭ
イソプロパノールで戻した化合物（１ｍＭ）
Ｕ−９３７細胞
以下のものを追加したＲＰＭＩ：
ピルビン酸ナトリウム
非必須アミノ酸
ＨＥＰＥＳ
１０％ウシ胎仔血清
ホルボール１２−ミリステート−１３−アセテート（ＰＭＡ）
２４ウェルプレート
イソプロパノール
ＴＲＩｚｏｌ（商標）試薬（インビトロゲン）
クロロホルム
エタノール
ピロ炭酸ジエチル処理ｄＨ2Ｏ
サーモスクリプト（商標）ＲＴ−ＰＣＲシステムキット（インビトロゲン）
ヒトＣＹＰ２４のＴａｑＭａｎ（商標）プローブ（アプライド・バイオシステムズ・インコーポレイテッド）
ヒトＧＡＰＤＨのＴａｑＭａｎ（商標）プローブ（アプライド・バイオシステムズ・インコーポレイテッド）
ＴａｑＭａｎ（商標）ユニバーサルマスターミックスプローブ（アプライド・バイオシステムズ・インコーポレイテッド）。
【０１３６】
（ii）手順：
１．細胞培養、刺激及び平板培養
Ｕ−９３７細胞を４＋ＲＰＭＩ培地中で〜８０％コンフルエンスのレベルまで培養した。細胞を遠心分離によってペレット状にし、そして培地１ｍＬ当たり５×１０5個の細胞濃度にまで再懸濁した。Ｕ−９３７細胞を２０ｎｇ／ｍＬのＰＭＡ終濃度で処理した。２４ウェルプレートのそれぞれのウェルに、１ｍＬの細胞懸濁液を添加し、そして、細胞をこれらのウェルに付着させるために、３７℃で一晩、５％のＣＯ2を含む加湿雰囲気中でインキュベートした。
２．細胞処理及びＴＲＩｚｏｌ（商標）の添加
培地を１ｍＬの新鮮な４＋ＲＰＭＩと取り替えた。試験される化合物の１、１０及び１００μＭの作用溶液１μＬを添加した（三重反復で）。対照として、１μＬのイソプロパノールを三重反復で添加した。細胞を３７℃で６時間５％のＣＯ2を含む加湿雰囲気中でインキュベートし、該培地を吸引し、次いで１ｍＬのＴＲＩｚｏｌ（商標）試薬を添加した。ＴＲＩｚｏｌ（商標）を細胞溶解物と共に１．７ｍＬの微少遠心管に移し、そして−８０℃で保存した。
３．ＲＮＡの単離及びｃＤＮＡの合成
製造者の説明書（インビトロゲン社）に従って、１ｍＬのＴＲＩｚｏｌ（商標）から相分離、ＲＮＡ沈殿によって全ＲＮＡを単離し、そしてＲＮＡを洗浄した。ＲＮＡ濃度を、分光光度計を使用してそれぞれの試料の光学密度を２６０ｎｍの波長で測定して決定した。製造者の説明書（インビトロゲン社）に従って、１μｇのＲＮＡからサーモスクリプト（商標）ＲＴ−ＰＣＲシステムキットを使用してｃＤＮＡを合成した。さらに１８０μＬのｄＨ2Ｏをそれぞれの試料に添加し、−２０℃で保存した。
４．ＣＹＰ２４／ＧＡＰＤＨのリアルタイムＰＣＲ
それぞれの試料中に存在するＣＹＰ２４とＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの量を市販のＴａｑＭａｎ（商標）プローブ（アプライド・バイオシステムズ・インコーポレイテッド（米国カリフォルニア州フォスターシティ）社製）を使用して決定した。両方の遺伝子を、同じ２０μＬの反応において、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７０００配列検出システム（商標）（ＡＢＩ）を使用したＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ９６ウェル光学反応プレート及び５０回のサイクルを使用して検出した。比較ＣT法（ＡＢＩ）を使用してそれぞれの試料の相対誘導倍率を算出した。ＣＹＰ２４の発現を内在性コントロールＧＡＰＤＨの発現に基準化し、そしてそれぞれの試料の誘導レベルを１００％に設定された１００ｎＭカルシトリオールに対して比較した。
【０１３７】
（iii）結果：
（ｉ）式（２０Ｒ）−Ｉ（ａ）の化合物は、１００ｎＭでのカルシトリオールの活性に対して５４％の活性を示した。
（ii）式（２０Ｒ）−Ｉ（ｃ）の化合物は、１００ｎＭでのカルシトリオールの活性に対して３０％の活性を示した。
（iii）式（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）の化合物は、１００ｎＭでのカルシトリオールの活性に対して６５％の活性を示した。
【０１３８】
例９：ＭＣＦ−７細胞による［3Ｈ］−チミジン増殖アッセイ
（ｉ）材料及び方法：
ＭＣＦ−７細胞
ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸、ウシインスリン、ゲンタマイシン及び１０％ウシ胎仔血清（増殖培地）を追加したＭＥＭ
トリヨードチロニン、ヒドロコルチゾン、トランスフェリン、ウシインスリン及び５％ウシ胎仔血清を追加したＲＰＭＩ１６４０（増殖培地）
イソプロパノールで戻した化合物（１ｍＭ）
トリプシン：ＥＤＴＡ溶液
１×ＰＢＳ
７５ｃｍ2組織培養フラスコ
９６ウェル組織培養プレート
液体シンチレーション流体
９６ウェルフィルタープレート（ミリポア）
（ii）手順：
１．細胞懸濁液の調製
ＭＣＦ−７細胞が７０〜８０％のコンフルエントな状態となったときに、増殖培地を吸引した。該細胞を１×ＰＢＳで洗浄した。プレートからトリプシン−ＥＤＴＡでトリプシン処理し、組織培養フラスコから細胞を集め、遠心分離し（５００×ｇ，５分）、そして増殖培地に再懸濁した。
２．細胞の平板培養．
細胞を計数し、そして細胞密度を２５０００／ｍＬに調節した。ウェル当たり２００μＬを９６ウェルプレートに添加した。プレートを３７℃で２４時間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でインキュベートした。使用した培地を吸引し、そしてウェル当たり増殖培地で１７５μＬ置き換えた。
３．基質の添加
２５μＬの化合物（終濃度１０-7Ｍ、５×１０-8Ｍ、１０-8Ｍ、５×１０-9Ｍ、１０-10Ｍ又は０Ｍ）をそれぞれの指定されたウェルに添加した。プレートを３７℃で３日間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でインキュベートした。
４．3Ｈ−チミジンの取り込み
3Ｈ−チミジンをウェル当たり０．０２μＣｉで添加し、そして３７℃で６時間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でインキュベートした。
５．プレート採取
全ての培地を吸引し、そして細胞を１×ＰＢＳで洗浄した。細胞を３７℃で３０分間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でトリプシン処理した。細胞を９６ウェルフィルタープレート（ミリポア）にトムテック細胞ハーベスターを使用して製造者の説明書に従い集めた。
６．シンチレーション計数
ウェル当たり２５μＬのシンチレーション流体を添加した。該プレートをシンチレーションカウンタを使用して計数した。
結果：化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）はＭＣＦ−７細胞の増殖を阻害した。
【０１３９】
例１０：ＳＣＣ−２５細胞による［3Ｈ］−チミジン増殖アッセイ
（ｉ）材料及び方法：
ＳＣＣ−２５細胞
ヒドロコルチゾン及び５％ウシ胎仔血清を追加したＤＭＥＭ−Ｆ１２
イソプロパノールで戻された１α，２５（ＯＨ）2Ｄ3  １ｍＭ 
イソプロパノールで戻された基質（１ｍＭ）
トリプシン：ＥＤＴＡ溶液
１×ＰＢＳ
７５ｃｍ2組織培養フラスコ
９６ウェル組織培養プレート
液体シンチレーション流体
９６ウェルフィルタープレート（ミリポア）
（ii）手順：
１．細胞懸濁液の調製
ＳＣＣ−２５細胞が７０〜８０％コンフルエントの状態となったときに、該培地を吸引した。該細胞を１×ＰＢＳで洗浄した。プレートからトリプシン−ＥＤＴＡでトリプシン処理し、組織培養フラスコから細胞を集め、遠心分離し（５００×ｇ，５分）、そして培地に再懸濁した。
２．細胞の平板培養
細胞を計数し、そして細胞密度を１００００／ｍＬに調節した。ウェル当たり２００μＬを９６ウェルプレートに添加した。プレートを３７℃で２４時間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でインキュベートした。使用した培地を吸引し、そしてウェル当たり培地で１７５μＬ置き換えた。
３．基質の添加
２５μＬの化合物（終濃度１０-7Ｍ、５×１０-8Ｍ、１０-8Ｍ、５×１０-9Ｍ、１０-10Ｍ又は０Ｍ）をそれぞれの指定されたウェルに添加した。プレートを３７℃で３日間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でインキュベートした。
４．3Ｈ−チミジンの取り込み
3Ｈ−チミジンをウェル当たり０．０２μＣｉで添加し、そして３７℃で６時間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でインキュベートした。
５．プレート採取
全ての培地を吸引し、そして細胞を１×ＰＢＳで洗浄した。細胞を３７℃で３０分間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でトリプシン処理した。細胞を９６ウェルフィルタープレート（ミリポア）にトムテック細胞ハーベスターを使用して製造者の説明に従い集めた。
６．シンチレーション計数
ウェル当たり２５μＬのシンチレーション流体を添加した。該プレートをシンチレーションカウンタを使用して計数した。
結果：化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）はＳＣＣ−２５細胞の増殖を阻害した。
【０１４０】
例１１：ＬＮＣａＰ細胞による［3Ｈ］−チミジン増殖アッセイ
（ｉ）材料及び方法：
ＬＮＣａＰ細胞
１．５ｇ／Ｌの重炭酸ナトリウム、４．５ｇ／Ｌのグルコース、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ及び１．０ｍＭのピルビン酸ナトリウムを９０％；ウシ胎仔血清を１０％含むように調節された、２ｍＬのＬ−グルタミンを有するＲＰＭＩ１６４０培地
イソプロパノールで戻した１α，２５（ＯＨ）2Ｄ3  １ｍＭ
イソプロパノールで戻した基質（１ｍＭ）
トリプシン：ＥＤＴＡ溶液
７５ｃｍ2の組織培養フラスコ
９６ウェル組織培養プレート
液体シンチレーション流体
９６ウェルフィルタープレート（ミリポア）
（ii）手順：
１．細胞懸濁液の調製
ＬＮＣａＰ細胞が７０〜８０％コンフルエントの状態となったときに、該培地を吸引した。該細胞を１×ＰＢＳで洗浄した。プレートからトリプシン−ＥＤＴＡでトリプシン処理し、組織培養フラスコから細胞を集め、遠心分離し（５００×ｇ，５分）、そして培地に再懸濁した。
２．細胞の平板培養
細胞を計数し、そして細胞密度を２０００／ｍＬに調節した。ウェル当たり２００μＬを９６ウェルプレートに添加した。プレートを３７℃で２４時間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でインキュベートした。使用した培地を吸引し、そしてウェル当たり１７５μＬの培地で置き換えた。
３．基質の添加
２５μＬの化合物（終濃度１０-7Ｍ、５×１０-8Ｍ、１０-8Ｍ、５×１０-9Ｍ、１０-10Ｍ又は０Ｍ）をそれぞれの指定されたウェルに添加した。プレートを３７℃で３日間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でインキュベートした。
４．3Ｈ−チミジンの取り込み
3Ｈ−チミジンをウェル当たり０．０２μＣｉで添加し、そして３７℃で６時間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でインキュベートした。
５．プレート採取
全ての培地を吸引した。細胞を３７℃で３０分間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でトリプシン処理した。細胞を９６ウェルフィルタープレート（ミリポア）にトムテック細胞ハーベスターを使用して製造者の説明書に従い集めた。
６．シンチレーション計数
ウェル当たり２５μＬのシンチレーション流体を添加した。該プレートをシンチレーションカウンタを使用して計数した。
結果：化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）はＬＮＣａＰ細胞の増殖を阻害した。
【０１４１】
例１２：ＢｘＰＣ−３細胞による［3Ｈ］−チミジン増殖アッセイ
（ｉ）材料及び方法：
ＢｘＰＣ−３細胞
１．５ｇ／Ｌの重炭酸ナトリウム、４．５ｇ／Ｌのグルコース、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ及び１．０ｍＭのピルビン酸ナトリウムを９０％；ウシ胎仔血清を１０％含むように調節された、２ｍＭのＬ−グルタミンを有するＲＰＭＩ１６４０培地
イソプロパノールで戻した１α，２５（ＯＨ）2Ｄ3  １ｍＭ
イソプロパノールで戻した基質（１ｍＭ）
トリプシン：ＥＤＴＡ溶液
１×ＰＢＳ
７５ｃｍ2組織培養フラスコ
９６ウェル組織培養プレート
液体シンチレーション流体
９６ウェルフィルタープレート（ミリポア）
（ii）手順：
１．細胞懸濁液の調製
ＢｘＰＣ−３細胞が７０〜８０％コンフルエントの状態となったときに、該培地を吸引した。該細胞を１×ＰＢＳで洗浄した。プレートからトリプシン−ＥＤＴＡでトリプシン処理し、組織培養フラスコから細胞を集め、遠心分離し（５００×ｇ，５分）、そして培地に再懸濁した。
２．細胞の平板培養
細胞を計数し、そして細胞密度を２０００／ｍＬに調節した。ウェル当たり２００μＬを９６ウェルプレートに添加した。プレートを３７℃で２４時間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でインキュベートした。使用した培地を吸引し、そしてウェル当たり１７５μＬ培地で置き換えた。
３．基質の添加
２５μＬの化合物（終濃度１０-7Ｍ、５×１０-8Ｍ、１０-8Ｍ、５×１０-9Ｍ、１０-10Ｍ又は０Ｍ）をそれぞれの指定されたウェルに添加した。プレートを３７℃で３日間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でインキュベートした。
４．3Ｈ−チミジンの取り込み
3Ｈ−チミジンをウェル当たり０．０２μＣｉで添加し、そして３７℃で６時間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でインキュベートした。
５．プレート採取
全ての培地を吸引し、そして細胞を１×ＰＢＳで洗浄した。細胞を３７℃で３０分間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でトリプシン処理した。細胞を９６ウェルフィルタープレート（ミリポア）にトムテック細胞ハーベスターを使用して製造者の説明書に従い集めた。
６．シンチレーション計数
ウェル当たり２５μＬのシンチレーション流体を添加した。該プレートをシンチレーションカウンタを使用して計数した。
結果：化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）はＢｘＰＣ−３細胞の増殖を阻害した。
【０１４２】
例１３：ＯＶＣＡＲ−３細胞による［3Ｈ］−チミジン増殖アッセイ
（ｉ）材料及び方法：
ＯＶＣＡＲ−３細胞
１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１．０ｍＭのピルビン酸ナトリウム、０．０１ｍｇ／ｍＬのウシインスリン及び１０％のウシ胎仔血清を追加した、２ｍＭのＬ−グルタミンを有するＲＰＭＩ１６４０培地
イソプロパノールで戻した１α，２５（ＯＨ）2Ｄ3  １ｍＭ
イソプロパノールで戻した基質（１ｍＭ）
トリプシン：ＥＤＴＡ溶液
１×ＰＢＳ
７５ｃｍ2組織培養フラスコ
９６ウェル組織培養プレート
液体シンチレーション流体
９６ウェルフィルタープレート（ミリポア）
（ii）手順：
１．懸濁液の調製
ＯＶＣＡＲ−３細胞が〜５０％コンフルエントの状態になったときに、該培地を吸引した。細胞を１×ＰＢＳで洗浄した。トリプシン−ＥＤＴＡでトリプシン処理し、組織培養フラスコから細胞を集め、遠心分離（２００×ｇ，５分）し、そして培地に再懸濁した。
２．細胞の平板培養
細胞を計数し、そして細胞密度を１１．４×ｌ０3に調節して１７５μＬ（１ウェルにつき）中２０００個の細胞を与えた。細胞懸濁液を９６ウェルプレートにウェル当たり１７５μＬ（２０００個の細胞）で分与した。プレートを３７℃で２４時間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でインキュベートした。
基質の添加
２５μＬの化合物（終濃度１０-7Ｍ、５×１０-8Ｍ、１０-8Ｍ、５×１０-9Ｍ、１０-9Ｍ、１０-10Ｍ又は０Ｍ）をそれぞれの指定されたウェルに添加した。プレートを６日間にわたり培地及び薬剤を交換することなく３７℃で加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中においてインキュベートした。
３．［3Ｈ］−チミジンの取り込み
3Ｈ−チミジンをウェル当たり０．０２μＣｉで添加し、そして３７℃で６時間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でインキュベートした。
４．プレート採取
全ての培地を吸引し、そして細胞を１×ＰＢＳで洗浄した。細胞を３７℃で３０分間にわたり加湿雰囲気＋５％のＣＯ2中でトリプシン処理した。細胞を９６ウェルフィルタープレート（ミリポア）にトムテック細胞ハーベスターを使用して製造者の説明書に従い集めた。
５．シンチレーション計数
ウェル当たり２５μＬのシンチレーション流体を添加した。該プレートをシンチレーションカウンタを使用して計数した。
結果：化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ａ）、（２０Ｒ）−Ｉ（ｃ）及び（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）は、全て、ＯＶＣＡＲ−３細胞の増殖を阻害した。
【０１４３】
例１４：化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）のファーマコキネティックス
（ｉ）材料及び試薬：
化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）を生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）：プロピレングリコール：エタノール（５：３：２；ｖ／ｖ／ｖ）に溶解してなる処方物を２０ｍｇ／ｍＬの濃度で調製した。
（ii）手順：
９匹の雄のウィスターラット（１５０〜２００ｇ）を、本研究開始の８時間前から絶食させた。本研究の開始時に、これら９匹のラットは、１６ｍｇの化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）／  ｋｇ体重（Ｂ．Ｗ）を送達するように該投与用処方物の０．８ｍＬ／ｋｇＢ．Ｗ．の静脈内（ｉ，ｖ）注射を受けた。３匹の動物から血液を、投与後０分（１日目）、５分、１５分、３０分、６０分、１２０分、１８０分及び２４０分で集めた。それぞれの時点で、１ｍＬの血液を眼窩洞から使い捨てマイクロテイナー管で集めた。分離した血清試料を分析まで−８０℃の冷凍状態を維持した。
血清試料中の化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）の濃度を、高速液体クロマトグラフィー法を質量分析検出と共に使用して（ＬＣ  ＭＳ／ＭＳ）定量した。内部標準物を２００ｍＬの血清試料のアリコートに添加し、そして固相抽出（ＳＰＥ）を使用して抽出した。試料をＣ18-ＳＰＥカートリッジに通し、次いで化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）を通し、そして内部標準物を１ｍＬのメタノールで溶出させた。抽出物を窒素雰囲気下で乾燥状態まで蒸発させた。残留物を１００ｍＬのメタノール：水（８：２；ｖ／ｖ）で戻し、ＬＣ  ＭＳ／ＭＳで分析した。
（iii）結果：
化合物（２０Ｒ）−Ｉ（ｅ）の１６ｍｇ／ｋｇＢ．Ｗ．投与量の静脈内投与について算出した薬物動態学的パラメーターを以下の表にまとめている。曲線下面積（ＡＵＣ）をＴ＝０〜２４０まで算出した。最大濃度（Ｃmax）を平均血清濃度対時間プロフィールから決定した。排泄半減期（Ｔ1/2）を濃度対時間プロフィールの排出相から算出し、一次排泄動態と仮定した。
【０１４４】
【表９】
0005449767.tif 000041
【０１４５】
本発明を現時点で好ましい例であると考えられるものを参照しつつ説明してきたが、本発明は、これら開示した例に限定されないことを理解すべきである。それとは反対に、本発明は、添付した特許請求の範囲の精神及び範囲内に包含される様々な変更及び均等の範囲をカバーすることを意図する。
【０１４６】
上記刊行物、特許及び特許出願の全ては、それぞれ個々の刊行物、特許又は特許出願がそっくりそのまま参照によって援用されることを具体的且つ個別に示されたかのように、そっくりそのまま参照によって援用するものとする。本明細書におけるある用語が、参照によって援用された文献では異なる定義がなされていたことが分かった場合には、本明細書で与えたその用語は、その用語の代わりの定義としての意義を有する。