(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）ＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと、
（２）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
（３）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列に記載のアミノ酸配列に１個若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、それぞれＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと同じ糖鎖認識特異性を有するタンパク質と、
（４）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を示すアミノ酸配列からなり、かつ、それぞれＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと同じ糖鎖認識特異性を有するタンパク質と、
からなるグループから選択される１種類又は２種類以上のタンパク質である、レクチンを含むことを特徴とする虫歯予防剤。
【請求項２】
請求項１に記載の虫歯予防剤を含むことを特徴とする、医薬品組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の虫歯予防剤を含むことを特徴とする、歯磨き剤。
【請求項４】
請求項１に記載の虫歯予防剤を含むことを特徴とする、口内洗浄剤。
【請求項５】
（１）ＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと、
（２）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質と、
（３）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列に記載のアミノ酸配列に１個若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、それぞれＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと同じ糖鎖認識特異性を有するタンパク質と、
（４）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を示すアミノ酸配列からなり、かつ、それぞれＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと同じ糖鎖認識特異性を有するタンパク質と、
からなるグループから選択される１種類又は２種類以上のタンパク質である、レクチンの虫歯予防用医薬品組成物の製造のための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レクチンを含む虫歯予防剤、特に、口腔内のプラーク又はバイオフィルムへの付着及び増殖を抑制する効果を有するレクチンを含む虫歯予防剤と、該虫歯予防剤を含む、医薬品組成物、食品組成物、歯磨き剤及び口内洗浄剤とに関する。
【背景技術】
【０００２】
口腔細菌は、口腔内のプラーク又はバイオフィルムに付着して増殖し、齲蝕すなわち虫歯や歯槽膿漏その他の歯周病を引き起こす。前記プラーク又はバイオフィルムは、唾液由来の生体高分子が歯の表面に付着してペリクルという皮膜を形成し、該ペリクルに口腔細菌が付着することにより成長する。したがって虫歯や歯周病の予防のためにはペリクルへの口腔細菌の付着を抑制又は阻止する必要がある。エリスリトール、キシリトール等の糖アルコール類には虫歯抑制効果があることが知られているが、糖アルコールは口腔細菌の代謝によりう蝕の原因となる乳酸を産生しないために虫歯が出来にくくなるものであり、口腔細菌の付着の抑制や阻止には関与しない。【０００３】
口腔細菌がペリクルや他の口腔細菌の菌体に付着する際には、口腔細菌の産生する糖鎖結合タンパク質レクチンが関与していると考えられる。つまり、ペリクルに滞積した唾液由来の生体高分子、すなわち、多糖類又は糖タンパク質と口腔細菌レクチンとが糖鎖特異的な結合を行うことにより、ペリクルに口腔細菌が付着すると考えられる。すると、外部から口腔細菌のレクチンと競合するレクチンを口腔内に投与することによって、ペリクルの糖鎖への口腔細菌のレクチンの結合を阻害すれば、口腔細菌のバイオフィルムへの付着及び増殖を抑制又は阻害して、虫歯や歯周病のような口腔細菌による感染症を予防することができる。【０００４】
実際にこのような発想に基づいて、口腔細菌とペリクルとの結合を阻害するレクチンが非特許文献１ないし３に報告されている。これらの文献で報告されたレクチンには、植物由来のグルコース・マンノース認識レクチンや、藻類由来のムチン認識レクチンがある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｔｅｉｘｅｉｒａ，  Ｅ．Ｈ．ら、Ｊ  Ａｐｐｌ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、１０１：  １１１−６  （２００６）．
【非特許文献２】Ｔｅｉｘｅｉｒａ，  Ｅ．Ｈ．ら、Ｊ  Ａｐｐｌ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、１０３：  １００１−６  （２００７）．
【非特許文献３】Ｉｓｌａｍ，Ｂ．ら、Ｊ  Ａｐｐｌ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、１０６：  １６８２−９  （２００９）．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、Ｃｏｎ  Ａ（コンカナバリンＡ）のようなグルコース・マンノース認識レクチンは、ほ乳類のリンパ球の幼若化反応を誘発することが知られており、免疫系に影響を与えるおそれがある。また、ヒトの唾液成分は人種、食物等によって変化することが知られている。そこで、日本食をとって生活する日本人の唾液由来の生体高分子と口腔細菌、特に、虫歯の原因とされるストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｕｔａｎｓ、以下、「ミュータンス菌」という。）との結合を抑制又は阻害する活性のあるレクチンを含む虫歯予防剤を開発する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、レクチンを含むことを特徴とする虫歯予防剤を提供する。【０００８】
本発明の虫歯予防剤において、前記レクチンはＦｕｃα１−６ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃα１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａｌｙｌα２−３ｌａｃｔｏｓｅ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａｌｙｌ−Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａｌｙｌα２−３Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｇａｌ及びＧａｌＮＡｃからなるグループから選択される少なくとも１種類の糖鎖を認識する場合がある。【０００９】
本発明の虫歯予防剤において、前記レクチンは、（１）ＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと、（２）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質と、（３）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列に記載のアミノ酸配列に１個若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、それぞれＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと同じ糖鎖認識特異性を有するタンパク質と、（４）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列と８０％以上の相同性を示すアミノ酸配列からなり、かつ、それぞれＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと同じ糖鎖認識特異性を有するタンパク質と、（５）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列をエンコードするヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってエンコードされるアミノ酸配列からなり、かつ、それぞれＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと同じ糖鎖認識特異性を有するタンパク質と、からなるグループから選択される１種類又は２種類以上のタンパク質の場合がある。【００１０】
本発明の虫歯予防剤において、前記レクチンは、シアル酸を認識する場合がある。【００１１】
本発明の虫歯予防剤において、前記レクチンは、ＡＣＧ、ＭＡＨ及びＪａｃａｌｉｎからなるグループから選択される場合がある。【００１２】
本発明の虫歯予防剤において、前記レクチンは、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ及びＲＣＡ−Ｉからなるグループから選択される場合がある。【００１３】
本発明の虫歯予防剤において、前記レクチンは、マンノース又はＮアセチルグルコサミンを認識する場合がある。【００１４】
本発明の虫歯予防剤において、前記レクチンは、ＧＲＦＴの場合がある。【００１５】
本発明は、本発明の虫歯予防剤を含む医薬品組成物を提供する。【００１６】
本発明は、本発明の虫歯予防剤を含む食品組成物を提供する。【００１７】
本発明は、本発明の虫歯予防剤を含む歯磨き剤を提供する。【００１８】
本発明は、本発明の虫歯予防剤を含む口内洗浄剤を提供する。【００１９】
本発明は、レクチンを含む虫歯予防剤を口腔内に投与するステップを含む、虫歯の予防方法を提供する。【００２０】
本発明の虫歯の予防方法において、前記レクチンは、Ｆｕｃα１−６ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃα１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａｌｙｌα２−３ｌａｃｔｏｓｅ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａｌｙｌ−Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａｌｙｌα２−３Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｇａｌ及びＧａｌＮＡｃからなるグループから選択される少なくとも１種類の糖鎖を認識する場合がある。【００２１】
本発明の虫歯の予防方法において、前記レクチンは、（１）ＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと、（２）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質と、（３）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列に記載のアミノ酸配列に１個若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、それぞれＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと同じ糖鎖認識特異性を有するタンパク質と、（４）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列と８０％以上の相同性を示すアミノ酸配列からなり、かつ、それぞれＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと同じ糖鎖認識特異性を有するタンパク質と、（５）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列をエンコードするヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってエンコードされるアミノ酸配列からなり、かつ、それぞれＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと同じ糖鎖認識特異性を有するタンパク質と、からなるグループから選択される１種類又は２種類以上のタンパク質の場合がある。【００２２】
本発明の虫歯の予防方法において、前記レクチンはシアル酸を認識する場合がある。【００２３】
本発明の虫歯の予防方法において、前記レクチンは、ＡＣＧ、ＭＡＨ及びＪａｃａｌｉｎからなるグループから選択される場合がある。【００２４】
本発明の虫歯の予防方法において、前記レクチンは、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ及びＲＣＡ−Ｉからなるグループから選択される場合がある。【００２５】
本発明の虫歯の予防方法において、前記レクチンは、マンノース又はＮアセチルグルコサミンを認識する場合がある。【００２６】
本発明の虫歯の予防方法において、前記レクチンは、ＧＲＦＴの場合がある。【００２７】
本発明は、レクチンの虫歯予防用医薬品組成物の製造のための使用を提供する。【００２８】
本発明の虫歯予防用医薬品組成物の製造のための使用において、前記レクチンは、Ｆｕｃα１−６ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃα１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａｌｙｌα２−３ｌａｃｔｏｓｅ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａｌｙｌ−Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａｌｙｌα２−３Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｇａｌ及びＧａｌＮＡｃからなるグループから選択される少なくとも１種類の糖鎖を認識する場合がある。【００２９】
本発明の虫歯予防用医薬品組成物の製造のための使用において、（１）ＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと、（２）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質と、（３）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列に記載のアミノ酸配列に１個若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、それぞれＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと同じ糖鎖認識特異性を有するタンパク質と、（４）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列と８０％以上の相同性を示すアミノ酸配列からなり、かつ、それぞれＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと同じ糖鎖認識特異性を有するタンパク質と、（５）配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列をエンコードするヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってエンコードされるアミノ酸配列からなり、かつ、それぞれＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉと同じ糖鎖認識特異性を有するタンパク質と、からなるグループから選択される１種類又は２種類以上のタンパク質の場合がある。【００３０】
本発明の虫歯予防用医薬品組成物の製造のための使用において、前記レクチンはシアル酸を認識する場合がある。【００３１】
本発明の虫歯予防用医薬品組成物の製造のための使用において、前記レクチンは、ＡＣＧ、ＭＡＨ及びＪａｃａｌｉｎからなるグループから選択される場合がある。【００３２】
本発明の虫歯予防用医薬品組成物の製造のための使用において、前記レクチンは、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ及びＲＣＡ−Ｉからなるグループから選択される場合がある。【００３３】
本発明の虫歯予防用医薬品組成物の製造のための使用において、前記レクチンは、マンノース又はＮアセチルグルコサミンを認識する場合がある。【００３４】
本発明の虫歯予防用医薬品組成物の製造のための使用において、前記レクチンはＧＲＦＴの場合がある。【００３５】
本発明のレクチンは、ヤナギマツタケ由来のＡＣＧ（Ａｇｒｏｃｙｂｅ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ  ｇａｌｅｃｔｉｎ）と、アミヒラタケ由来のＰＳＬ１α（Ｐｏｌｙｐｏｒｕｓ  ｓｑｕａｍｏｓｕｓ  ｌｅｃｔｉｎ  １  ａｌｐｈａ）と、ムジナタケ由来のＰＶＬ（Ｐｓａｔｈｙｒｅｌｌａ  ｖｅｌｕｔｉｎａ  ｌｅｃｔｉｎ）と、ラッパズイセン由来のＮＰＬ（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ  ｐｓｅｕｄｏｎａｒｃｉｓｓｕｓ  ｌｅｃｔｉｎ）と、ヒイロチャワンタケ由来のＡＡＬ（Ａｌｅｕｒｉａ  ａｕｒａｎｔｉａ  ｌｅｃｔｉｎ）と、マッシュルーム由来のＡＢＡ（Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｂｉｓｐｏｒｕｓ  ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）と、ヒモゲイトウ由来のＡＣＡ（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｃａｕｄａｔｕｓ  ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）と、ムラサキソシンカ由来のＢＰＬ（Ｂａｕｈｉｎｉａ  ｐｕｒｐｕｒｅａ  ｌｅｃｔｉｎ）と、ジャックフルーツ（Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）由来のＪａｃａｌｉｎと、ヒマ由来のＲＣＡ−Ｉ（Ｒｉｃｉｎｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ  ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ−Ｉ）と、イヌエンジュ由来のＭＡＨ（Ｍａａｃｋｉａ  ａｍｕｒｅｎｓｉｓ  ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）と、紅藻（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓｉａ  ｓｐ．）由来のＧＲＦＴとを含むが、これらに限定されない。【００３６】
本発明のレクチンが認識する糖鎖は、Ｓｉａｌｙｌα２−６Ｇａｌ、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ、ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｍａｎ、Ｎｅｕ５Ａｃ２−３Ｇａｌ１−４ＧｌｃＮＡｃ１−２Ｍａｎ１−６（Ｎｅｕ５Ａｃ２−３／６（Ｎｅｕ５Ａｃ−２−３Ｇａｌ１−４）ＧｌｃＮＡｃ１−４（Ｎｅｕ５Ａｃ２−３／６Ｇａｌ１−４ＧｌｃＮＡｃ１−２）Ｍａｎ１−３）Ｍａｎ、Ｍａｎα１−６Ｍａｎ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａｌｙｌ−Ｇａｌβ１−３  ＧａｌＮＡｃ、Ｆｕｃα１−６ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃα１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａｌｙｌα２−３ｌａｃｔｏｓｅ、Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｍａｎｎｏｓｅ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｓｉａｌｙｌ−Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｓｉａｌｙｌα２−３Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ、Ｇａｌ、ＧａｌＮＡｃを含むが、これらに限定されない。【００３７】
本発明のレクチンのうち、ＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＡＣＧ、ＢＰＬ、ＧＲＦＴ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＭＡＨ及びＲＣＡ−Ｉのアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１ないし９に記載される。【００３８】
本発明のタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列からなるレクチンと同じ糖鎖認識特異性を有することを条件として、配列番号１ないし９に記載のアミノ酸配列に１個若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたものであってもよい。ここで、前記欠失、置換又は付加されるアミノ酸の数は、糖鎖の特異性認識に関与するドメイン以外の部位であれば１０個又は１１個以上であってもかまわない。前記欠失、置換又は付加されるアミノ酸の数は、１、２、３、４、５、６、７、８又は９の場合がある。【００３９】
本明細書においてアミノ酸配列の相同性は、本発明のアミノ酸配列と、比較対象のアミノ酸配列との間で配列が一致するアミノ酸残基の数が最も多くなるように整列させて、配列が一致するアミノ酸残基の数の合計を本発明のアミノ酸配列のアミノ酸残基の総数で割った商の百分率で表される。本発明のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列の相同性は、当業者に周知の配列整列プログラムＣＬＵＳＴＡＬＷを使用することにより算出することができる。【００４０】
本発明のタンパク質のアミノ酸配列の相同性は、それぞれ相同性が１００％のアミノ酸配列からなるレクチンと同じ糖鎖認識特異性を有することを条件として、８０％以上の場合があり、８５％以上が好ましく、９０％以上がより好ましく、９５％以上がさらに好ましい。【００４１】
本明細書において「ストリンジェントな条件」とは、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｊ．及びＲｕｓｓｅｌｌ、Ｄ．Ｗ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（２００１）に説明されるサザンブロット法で以下の実験条件で行うことを指す。比較対象のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドをアガロース電気泳動によりバンドを形成させた上で毛管現象又は電気泳動によりニトロセルロースフィルターその他の固相に不動化する。６×  ＳＳＣ及び０．２％  ＳＤＳからなる溶液で前洗浄する。本発明のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドを放射性同位元素その他の標識物質で標識したプローブと前記固相に不動化された比較対象のポリヌクレオチドとの間のハイブリダイゼーション反応を６×  ＳＳＣ及び０．２％  ＳＤＳからなる溶液中で６５°Ｃ、終夜行う。その後前記固相を１×  ＳＳＣ及び０．１％  ＳＤＳからなる溶液中で６５°Ｃ、各３０分ずつ２回洗浄し、０．２×  ＳＳＣ及び０．１％  ＳＤＳからなる溶液中で６５°Ｃ、各３０分ずつ２回洗浄する。最後に前記固相に残存するプローブの量を前記標識物質の定量により決定する。本明細書において「ストリンジェントな条件」でハイブリダイゼーションをするとは、比較対象のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドを不動化した固相に残存するプローブの量が、本発明のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドを不動化した陽性対照実験の固相に残存するプローブの量の少なくとも２５％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも７５％以上であることを指す。【００４２】
以下の実施例で説明するとおり、本発明のレクチンが共通して認識する糖鎖は、ＧａｌＮＡｃ又はＧａｌ  β  １−３  ＧａｌＮＡｃである。唾液に含まれる糖蛋白質のムチンはセリン／スレオニンにＧａｌＮＡｃが結合した糖鎖（Ｔｎ抗原）か、Ｇａｌ  β  １−３  ＧａｌＮＡｃ  が結合した糖鎖（Ｔ抗原）かが糖鎖の基本骨格となっている。本明細書の実施例の結果から、ミュータンス菌はムチンのＴｎ抗原又はＴ抗原を認識して唾液に結合していることが示唆された。Ｔｎ抗原又はＴ抗原を認識するレクチンには本発明の実施例で用いた他に以下のものが知られている。
ＨＳＬ  （Ｈｏｌｏｔｈｕｒｉａ  ｓｃａｂｒａ  ｌｅｃｔｉｎ）  由来生物種：ハネジナマコ
ＡＶＬ（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｖｉｒｉｄｉｓ  ｌｅｃｔｉｎ）由来生物種：ホナガイヌビ
ＡＡｌｔＬ  （Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ａｌｔｉｌｉｓ  ｌｅｃｔｉｎ）由来生物種：パンノキ
ＡＨＡ（Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｈｉｒｓｕｔａ  ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）由来生物種：インド産パンノキ属樹木
ＡＬＡ（Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｌａｋｏｏｃｈａ  ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）由来生物種：ラクチパンノキ
ＡＰＡ（Ａｂｒｕｓ  ｐｒｅｃａｔｏｒｉｕｓ  ａｇｇｌｉｔｉｎｉｎ）由来生物種：トウアズキ
ＡＬＬ（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｌｅｕｃｏｃａｒｐｕｓ  ｌｅｃｔｉｎ）由来生物種：ヒユ属植物
ＣＢＬ（Ｃｌａｒｉａｓ  ｂａｔｒａｃｈｕｓ  ｌｅｃｔｉｎ）由来生物種：インド産ナマズ
ＳＳＬ（Ｓａｌｖｉａ  ｓｃｌａｒｅａ  ｌｅｃｔｉｎ）由来植物：クラリセージ
ＡＲＡ  （Ａｇｒｏｐｙｒｕｍ  ｒｅｐｅｎｓ  ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）由来生物種：シバムギ
ＬＤｅｌＬ  （Ｌａｃｔａｒｉｕｓ  ｄｅｌｉｃｉｏｓｕｓ  ｌｅｃｔｉｎ）由来生物種：チチタケ属食用キノコ
ＬＤｅｔＬ  （Ｌａｃｔａｒｉｕｓ  ｄｅｔｅｒｒｉｍｕｓ  ｌｅｃｔｉｎ）由来生物種：アカハツモドキ
ＶＧＡ  （Ｖｉｃｉａ  ｇｒａｍｉｎｅａ  ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）由来生物種：ソラマメ属植物
ＭＬＬ  （Ｍｏｌｕｃｃｅｌｌａ  ｌａｅｖｉｓ  ｌｅｃｔｉｎ）由来生物種：カイガラサルビア【００４３】
本発明の虫歯予防剤に含まれるレクチンは、以上に説明された由来生物種の個体、組織、細胞又はその一部から精製されたタンパク質か、組換えＤＮＡ技術によってさまざまな宿主で発現され精製されたタンパク質か、あるいは、前記由来生物種の個体、組織、細胞又はその一部か、その部分精製標品かであって、口腔内に投与されると腔内硬組織への口腔細菌、特に、ミュータンス菌の付着及び増殖を抑制又は阻害する作用を発揮するのに十分な活性を有するものかの場合がある。すなわち、前記レクチンは由来生物種の個体、組織、細胞又はその一部そのもの、あるいは、その加工物として利用される場合がある。【００４４】
本発明の医薬品組成物は、口腔内硬組織への口腔細菌、特に、ミュータンス菌の付着及び増殖を抑制又は阻害するための全ての医薬品を含み、本発明のレクチンが口腔細菌と唾液由来の生体高分子との結合を抑制又は阻害する活性を実質的に損なわないことを条件として、他のいかなる成分を含むものであってもかまわない。【００４５】
本発明の食品組成物は、本発明のレクチンが口腔細菌と唾液由来の生体高分子との結合を抑制又は阻害する活性を実質的に損なわないことを条件として、他のいかなる成分を含むものであってもかまわない。本発明の食品組成物は、エリスリトール、キシリトール等の糖アルコール類を含む場合がある。【００４６】
本発明の歯磨き剤又は口内洗浄剤は、本発明のレクチンが口腔細菌と唾液由来の生体高分子との結合を抑制又は阻害する活性を実質的に損なわないことを条件として、他のいかなる成分を含むものであってもかまわない。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】ミュータンス菌の付着及び増殖に対するレクチンによる抑制効果を示す棒グラフ。
【図２】レクチンによるミュータンス菌の増殖抑制効果を示す顕微鏡写真。
【図３】ミュータンス菌の付着及び増殖に対するシアル酸認識レクチンによる抑制効果を示す棒グラフ。
【図４】異なる被験者由来の唾液でコーティングされた基質上でのミュータンス菌の増殖に対するレクチンによる抑制効果を示す棒グラフ。
【図５】異なる被験者由来の唾液でコーティングされた基質上でのミュータンス菌の増殖に対するレクチンによる抑制効果を示す棒グラフ。
【図６】異なる被験者由来の唾液でコーティングされた基質上でのミュータンス菌の増殖に対するレクチンによる抑制効果を示す棒グラフ。
【図７】異なる被験者由来の唾液でコーティングされた基質上でのミュータンス菌の増殖に対するレクチンによる抑制効果を示す棒グラフ。
【図８】図４−７の同一条件ごとの吸光度の測定値の平均から算出された同一条件ごとの抑制指数をプロットした棒グラフ。
【図９】３種類のマルチバレントビオチン化糖ポリマーとミュータンス菌との相互作用を示す棒グラフ。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。
【実施例１】
【００４９】
ミュータンス菌の付着及び増殖に対するレクチンによる抑制効果の検討
マルチプレート（平底、９６穴、ポリスチレン製、Ｎｕｎｃ社  マルチソープ４６７１４０）に歯磨き後２時間のヒト唾液又はＢＳＡ（ウシ血清アルブミン、１００μｇ／ｍＬをＰＢＳに溶解）を１００μＬ添加して、３７℃で２時間コーティングを行った。その後前記マルチプレートをＰＢＳで洗浄し、１００μｇ／ｍＬのレクチンを１００μＬ添加して３７℃で１時間インキュベーションした。用いたレクチンは、ＡＣＧ（Ａｇｒｏｃｙｂｅ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ  ｇａｌｅｃｔｉｎ）、ＯＡＡ（Ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉａ  ａｇａｒｄｈｉｉ  ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）、ＭＶＬ（Ｍｉｃｒｏｃｙｓｔｉｓ  ｖｉｒｉｄｉｓ  ｌｅｃｔｉｎ）、ＧＲＦＴ（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓｉｎ）、ＥＰＬ（Ｅｎｔｅｒｏｍｏｒｐｈａ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａ  ｌｅｃｔｉｎ）、Ｃｏｎ  Ａ（Ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎ  Ａ）、ＧＮＡ（Ｇａｌａｎｔｈｕｓ  ｎｉｖａｌｉｓ  ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）、ＮＰＬ（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ  ｐｓｅｕｄｏｎａｒｃｉｓｓｕｓ  ｌｅｃｔｉｎ）、ＰＮＡ（Ｐｅａｎｕｔ  ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）、ＡＡＬ（Ａｌｅｕｒｉａ  ａｕｒａｎｔｉａ  Ｌｅｃｔｉｎ）、ＰＨＡ−Ｌ（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ  ｌｅｕｃｏａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）及びＲＣＡ（Ｒｉｃｉｎｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ  ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）であった。その後前記マルチプレートをＰＢＳで洗浄し、１００μＬのＰＢＳ中の５×１０7個のミュータンス菌を各ウェルに添加して３７℃で終夜培養した。前記プレートをＰＢＳで洗浄し、０．２５％のグルタルアルデヒド／ＰＢＳを１００μＬ添加して室温で３０分固定した。その後ＰＢＳで洗浄し、２．３％のクリスタルバイオレット（グラム染色用）を１００μＬ添加して室温で１時間染色した。その後流水で洗浄し、エタノールを１００μＬ添加して室温で１時間色素を溶出した。菌体数の定量は、プレートリーダーを用いて各ウェルのエタノール液中の色素濃度を吸光波長５７０ｎｍで測定することによって実施された。【００５０】
結果
図１は、ミュータンス菌の付着及び増殖に対するレクチンによる抑制効果を示す棒グラフである。図１では同一条件ごとに２回重複して実験を行った。唾液によるコーティングを行わなかったウェル（ｓａｌｉｖａ−）と、ミュータンス菌を添加しなかったウェル（Ｓｔ．  ｍｕｔａｎｓ−）とは有意な吸光度を示さなかった。唾液によるコーティングを行ったが、レクチンによるインキュベーションを行わなかったウェル（ｌｅｃｔｉｎ−）の吸光度は０．１０であった。唾液のかわりにＢＳＡによるインキュベーションを行ったウェル（ＢＳＡ）の吸光度は、ｌｅｃｔｉｎ−の半分の０．０５であった。レクチンのうち、ＭＶＬ及びＥＰＬによるインキュベーションを行ったウェルの吸光度は０．１５を超えており、ＯＡＡ、Ｃｏｎ  Ａ、ＰＮＡ、ＰＨＡ−Ｌ及びＲＣＡによるインキュベーションを行ったウェルの吸光度はほぼ０．１０であり、ＧＲＦＴ、ＧＮＡ及びＡＡＬによるインキュベーションを行ったウェルの吸光度は０．０５と０．１０の間であったが、ＡＣＧ及びＮＰＬによるインキュベーションを行ったウェルの吸光度は０．０５未満であった。これらの結果から、唾液によるコーティングよるミュータンス菌のウェル基質への付着及び増殖の促進はＢＳＡによって部分的に阻害された。そこで、ミュータンス菌のウェル基質への付着には非特異的な吸着の寄与が無視できないことが明らかになった。しかし、ＡＣＧ及びＮＰＬはミュータンス菌の付着及び増殖をＢＳＡより強力に抑制した。そこで、ＡＣＧ及びＮＰＬはミュータンス菌の付着及び増殖を特異的に阻害する可能性が高いと考えられた。【００５１】
図２は、本実施例のそれぞれの条件を示す表と、各条件でのミュータンス菌の増殖を顕微鏡で観察した結果を示す顕微鏡写真とである。陽性対照条件（ｌｅｃｔｉｎ−）のウェルでは、ミュータンス菌が基質表面に拡がってコロニーを形成した。しかし、唾液によるコーティングを行わなかった条件（ｓａｌｉｖａ−）と、ＡＣＧによるインキュベーションを行った条件（ＡＣＧ）と、ＮＰＬによるインキュベーションを行った条件（ＮＰＬ）とでは、ミュータンス菌はほとんど基質上にみられなかった。以上の形態学的な観察結果は吸光度による定量的な測定結果（図１）に対応していた。
【実施例２】
【００５２】
ミュータンス菌の付着及び増殖に対する他のシアル酸認識レクチンによる抑制効果の検討
実施例１の結果から、レクチンＡＣＧ及びＮＰＬは虫歯菌のプラーク・バイオフィルム形成を抑制する効果が期待できる。これらのうちＡＣＧはシアル酸認識レクチンに属する。そこで、ＡＣＧの他、ＰＳＬ１α（Ｐｏｌｙｐｏｒｕｓ  ｓｑｕａｍｏｓｕｓ  ｌｅｃｔｉｎ  １  ａｌｐｈａ）、ＰＶＬ（Ｐｓａｔｈｙｒｅｌｌａ  ｖｅｌｕｔｉｎａ  ｌｅｃｔｉｎ）、ＭＡＬ（Ｍａａｃｋｉａ  ａｍｕｒｅｎｓｉｓ  ｌｅｕｃｏａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）、ＭＡＨ（Ｍａａｃｋｉａ  ａｍｕｒｅｎｓｉｓ  ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）とＳＳＡ（Ｓａｍｂｕｃｕｓ  ｓｉｅｂｏｌｄｉａｎａ  ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）、ＳＮＡ（Ｓａｍｂｕｃｕｓ  ｎｉｇｒａ  ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）、ＬＦＡ（Ｌｉｍａｘ  ｆｌａｖｕｓ  ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）及びＷＧＡ（Ｗｈｅａｔ  ｇｅｒｍ  ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）というシアル酸認識レクチンについて、実施例１と同じ手順でミュータンス菌の付着及び増殖に対する抑制効果を検討した。【００５３】
結果
図３は、ミュータンス菌の付着及び増殖に対するシアル酸認識レクチンによる抑制効果を示す棒グラフである。図３では同一条件ごとに２回重複して実験を行った。ミュータンス菌を添加しなかったウェル（Ｓｔ．  ｍｕｔａｎｓ−）は有意な吸光度を示さなかった。唾液によるコーティングを行ったが、レクチンによるインキュベーションを行わなかったウェル（ｌｅｃｔｉｎ−）の吸光度は０．４５であった。今回検討されたシアル酸認識レクチンのうち、ＭＡＨ、ＳＳＡ、ＳＮＡ、ＬＦＡ及びＷＧＡはほぼ唾液によるコーティングを行ったが、レクチンによるインキュベーションを行わなかったウェル（ｌｅｃｔｉｎ−）に近い吸光度であり、ミュータンス菌の付着及び増殖を抑制する効果がほとんど認められなかった。しかし、ＰＳＬ１α及びＰＶＬについてはＡＣＧに近い吸光度であり、ミュータンス菌の付着及び増殖を抑制する効果が認められた。【００５４】
今回ミュータンス菌の付着及び増殖を抑制する効果が認められたレクチンが認識する糖鎖を表１に示す。【００５５】
【表１】
0005558362.tif 000002
【実施例３】
【００５６】
拡大スクリーニング
本実施例では、実施例１又は２とは異なる４名の被験者由来のヒト唾液でコーティングされた基質へのミュータンス菌の増殖に対する７０種類のレクチンの効果を調べた。【００５７】
マイクロプレート（Ｎｕｎｃ社、マルチソープ４６７１４０）の各ウェルに歯磨き後３時間の唾液１００μＬを添加し、３７°Ｃ、２時間コーティングを行った。その後、前記マイクロプレートをＰＢＳで洗浄し、ＴＢＳ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２）で１００μｇ／ｍＬに希釈されたレクチン又はＢＳＡ１００μＬを各ウェルに添加して、３７°Ｃ、１時間反応させた。その後、ＰＢＳで洗浄し、１００μＬのＰＢＳ中の５×１０７個のミュータンス菌（ＡＴＣＣ２５１７５）を３７°Ｃ、終夜培養した。菌をＰＢＳで洗浄し、０．２５％  グルタルアルデヒド／ＰＢＳを１００μＬ添加して室温で３０分固定した。その後ＰＢＳで洗浄し、２．３％  クリスタルバイオレットを１００μＬ添加して、室温で１時間染色した。その後流水で洗浄し、エタノールを１００μＬ添加して室温で１時間色素を溶出した。菌体数の定量は、プレートリーダーを用いて各ウェルのエタノール液中の色素濃度を吸光波長５７０ｎｍで測定することによって実施された。【００５８】
用いたレクチンは以下のとおりであった。天然レクチンは、ＥＹ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製のＡＡＡ、ＡＰＰ、ＢＤＡ、ＣＡ、ＣＡＡ、ＣＳＡ、ＤＢＡ、ＤＳＡ、ＥＣＡ、ＧＮＡ、ＧＳ−ＩＩ、ＨＰＡ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＬＡＡ、ＬＢＡ、ＬＦＡ、Ｌｏｔｕｓ、ＮＰＡ、ＰＮＡ、ＰＳＡ、ＰＴＡ−Ｇａｌ、ＰＴＡ−ＧａｌＮＡｃ、ＰＷＭ、ＳＨＡ、ＳＪＡ、ＳＮＡ、ＳＴＡ、ＴＫＡ、ＴＬ、ＵＤＡ、ＵＥＡ−Ｉ、ＵＥＡ−ＩＩ、ＶＦＡ、ＷＧＡ及びＲＣＡ−Ｉと、Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製のＡＣＡ、ＢＰＬ、ＥＥＬ、ＧＮＬ、ＤＳＬ−ＩＩ、ＨＨＬ、ＭＡＬ、ＮＰＬ、ＰＨＡ−Ｅ４、ＰＴＬ−Ｉ、ＰＴＬ−ＩＩ、ＳｃＷＧＡ、ＷＦＬ及びＭＡＨと、生化学工業株式会社製のＡＡＬ、ＡＢＡ、Ｃｏｎ  Ａ、ＳＢＡ、ＳＳＡ、ＴＪＡ−Ｉ、ＴＪＡ−ＩＩとであった。組換えレクチンは、ｒＡＣＧ及びｒＧＲＦＴで、これらはグライエンス社内で調製された。【００５９】
結果
図４−７はそれぞれ異なる被験者由来の唾液でコーティングされた基質上でのミュータンス菌の増殖に対するレクチンによる抑制効果を示す棒グラフである。いずれも同一条件ごとに２回重複して実験を行った。各図の左端から４本の棒グラフは対照実験の結果で、左端から順にレクチン−、ミュータンス菌−及び唾液−（ウェルのみ）と、レクチン−、ミュータンス菌＋及び唾液−（ミュータンス菌のみ）と、レクチン−、ミュータンス菌−及び唾液＋（唾液のみ）と、レクチン−、ミュータンス菌＋及び唾液＋（唾液＋ミュータンス菌（レクチン無しの陽性対照））という４種類の条件であった。唾液によるコーティングを行わなかったウェルと、ミュータンス菌を添加しなかったウェルとは、有意なミュータンス菌の増殖を示さなかった。唾液によるコーティングを行ったが、レクチンによるインキュベーションを行わなかったウェルと、唾液のかわりにＢＳＡによるインキュベーションを行ったウェル（ＢＳＡ）とでは、ミュータンス菌の増殖が認められた。図４−７に示すとおり、唾液を適用した被験者ごとにミュータンス菌の増殖を抑制するレクチンの種類及び抑制効果の程度に差が見られた。また、ＢＳＡによるミュータンス菌の増殖抑制効果の程度も、被検者ごとに異なっていた。【００６０】
図８は、図４−７の同一条件ごとの吸光度の測定値の平均Ａｘと、同一被験者ごとの唾液によるコーティングを行わなかったウェルの吸光度の測定値の平均Ａｎと、同一被験者ごとの唾液によるコーティングを行ったが、レクチンによるインキュベーションを行わなかったウェルの吸光度の測定値の平均Ａｐとから、同一条件ごとの抑制指数Ｉｘを以下の式を用いて算出してプロットした棒グラフである。
Ｉｘ＝１００×（Ａｘ−Ａｎ）／（Ａｐ−Ａｎ）【００６１】
図８に示すとおり、調べたレクチンのうちＡＡＬ、ＡＢＡ、ＡＣＡ、ＢＰＬ、Ｊａｃａｌｉｎ、ＲＣＡ−Ｉ、ＭＡＨ、ＡＣＧ及びＧＲＦＴについては、ミュータンス菌の増殖を抑制する効果が認められた。【００６２】
本実施例に用いたレクチンが認識する糖鎖を表２に示す。【００６３】
【表２】
0005558362.tif 000003
【実施例４】
【００６４】
合成糖鎖とミュータンス菌との相互作用
本実施例では、固相に吸着された合成糖鎖とミュータンス菌との結合を表面プラズモン効果によって測定して、ミュータンス菌と糖鎖との特異的な相互作用を定量的に解析した。【００６５】
以下の４種類のマルチバレントビオチン化糖ポリマー（ＧｌｙｃｏＴｅｃｈ社）を用いた。
ＨＯＣＨ２（ＨＯＣＨ）４ＣＨ２ＮＨ−ＰＡＡ−ｂｉｏｔｉｎ  （対照）
Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−ＰＡＡ−ｂｉｏｔｉｎ  （Ｃｏｒｅ１）
ＧｌｃＮＡｃβ１−３ＧａｌＮＡｃα−ＰＡＡ−ｂｉｏｔｉｎ  （Ｃｏｒｅ３）
Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−ＰＡＡ−ｂｉｏｔｉｎ  （Ｓｉａｌｙｌ  Ｔ）【００６６】
前記マルチバレントビオチン化糖ポリマーはそれぞれＰＢＳで５０μｇ／ｍＬに希釈され、１０°Ｃのビアコア社製センサーチップ（ＢＲ−１０００−３２）に１０μＬ／分の流速でローディングされ、Ｂｉａｃｏｒｅ２０００で約１０００ＲＵの測定値に達するまでセンサー基板表面に固相化された。【００６７】
ミュータンス菌は、Ｔｏｄｄ−Ｈｅｗｉｔｔ  Ｂｒｏｔｈで３７°Ｃ、終夜培養され、１，０００×ｇ、１０分間の遠心により上清除去後、等量のＰＢＳに懸濁された。同様の操作を２度繰り返して洗浄した後、６６０ｎｍでの吸光度を測定した。測定した吸光度を基に、ミュータンス菌はＰＢＳでＯＤ６６０＝０．０５又は０．１に希釈され、ミュータンス菌サンプル液が調製された。前記サンプル液は、密封され、２５°Ｃで５時間保温された後測定に供された。前記マルチバレントビオチン化糖ポリマーが固相化されたセンサーチップに１０μＬ／分の流速で４０μＬの前記サンプル液が添加され、ＰＢＳを１０μＬ／分の流速で１分間流してセンサー基板表面をリンスした後、Ｂｉａｃｏｒｅ２０００で測定した。図１０は、Ｃｏｒｅ１、Ｃｏｒｅ３及びＳｉａｌｙｌ  Ｔのポリマーにミュータンス菌サンプル液を添加してリンスした後の測定値から、対照ポリマーにミュータンス菌サンプル液を添加してリンスした後の測定値を差し引いた値を示す棒グラフである。【００６８】
結果
図９に示すとおり、Ｃｏｒｅ１ポリマーは他のポリマーより格段に強くミュータンス菌と相互作用した。そこで、唾液由来の糖鎖のうちガラクトースを末端に含む糖鎖はミュータンス菌の基質への付着に関与することが実証された。したがって、本発明のレクチンを含む虫歯予防剤と、該虫歯予防剤を用いる虫歯予防方法とは、唾液由来の糖鎖、特に、ガラクトースを末端に含む糖鎖とミュータンス菌との相互作用を阻害すると考えられる。
【図１】
0005558362.tif 000004
【図２】
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【図３】
0005558362.tif 000006
【図４】
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【図５】
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【図６】
0005558362.tif 000009
【図７】
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【図８】
0005558362.tif 000011
【図９】
0005558362.tif 000012
【配列表】
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